(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂと、
ｂ）ｐＨ５．５〜６．０のヒスチジン緩衝液と、
ｃ）界面活性剤と、
ｄ）溶液を等張にするために必要な量の等張化剤であって、スクロース、トレハロース又はマンニトールである等張化剤と
を含み、
前記抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂが、
ｉ）配列番号２の配列を含む軽鎖ポリペプチドと、
ｉｉ）配列番号１の配列を含む重鎖ポリペプチドと
を含む、抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの安定な溶液製剤。
【請求項２】
少なくとも８０ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む、請求項１に記載の安定な溶液製剤。
【請求項３】
少なくとも１００ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む、請求項２に記載の安定な溶液製剤。
【請求項４】
８０〜１２０ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む、請求項１に記載の安定な溶液製剤。
【請求項５】
約１００ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む、請求項４に記載の安定な溶液製剤。
【請求項６】
自己免疫疾患、炎症性疾患、または増殖性障害の治療において使用するための、請求項１〜５のいずれかに記載の安定な溶液製剤。
【請求項７】
年４回の皮下投与を含む乾癬を治療する方法に用いる医薬品の製造における、請求項４に記載の安定な溶液製剤の使用。
【請求項８】
皮下投与がシリンジ、自動注射器、注射器ペンまたは無針注射装置を用いる注射により行われる、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
界面活性剤がポリソルベート８０であり、等張化剤がスクロースである、請求項１に記載の安定な溶液製剤。
【請求項１０】
界面活性剤が０〜０．０５％（Ｗ／Ｖ）のポリソルベート８０であり、等張化剤が７％（Ｗ／Ｖ）スクロースである、請求項９の安定な溶液製剤。
【請求項１１】
自己免疫疾患、炎症性疾患、または増殖性障害を治療するための医薬品の製造における、請求項１〜５のいずれかに記載の安定な溶液製剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に、治療的抗体の高濃度溶液製剤、および様々な障害の治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン２３（ＩＬ−２３）は、２つのサブユニット、すなわちＩＬ−２３に固有のｐ１９、およびインターロイキン１２（ＩＬ−１２）と共有されるｐ４０から成るヘテロ二量体サイトカインである。ｐ１９サブユニットは、ＩＬ−６、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、およびＩＬ−１２のｐ３５サブユニットに構造的に関連している。ＩＬ−２３は、２つのサブユニット、すなわちＩＬ−２３受容体に固有のＩＬ−２３Ｒ、およびＩＬ−１２受容体と共有されるＩＬ−１２Ｒβ１を含むヘテロ二量体受容体に結合することによりシグナル伝達を媒介する。幾つかの初期の研究は、ｐ４０の遺伝的欠損（ｐ４０ノックアウトマウス；ｐ４０ＫＯマウス）の結果が、ｐ３５の欠損で（例えばｐ３５ＫＯマウスにおいて）観察されるものより重症であることを示した。これらの結果は、ＩＬ−２３の発見、およびｐ４０ＫＯがＩＬ−１２だけでなくＩＬ−２３の発現も妨げるという理解により最終的に説明された。例えば、Ｏｐｐｍａｎｎら（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：７１５〜７２５頁；Ｗｉｅｋｏｗｓｋｉら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：７５６３〜７５７０頁；Ｐａｒｈａｍら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：５６９９〜７０８頁；Ｆｒｕｃｈｔ（２００２）Ｓｃｉ  ＳＴＫＥ  ２００２、Ｅ１〜Ｅ３；Ｅｌｋｉｎｓら（２００２）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７０：１９３６〜１９４８頁参照。
【０００３】
ｐ４０ＫＯマウスの使用による近年の研究は、ＩＬ−２３およびＩＬ−１２の両方のブロックが様々な炎症性障害および自己免疫障害の有効な治療であることを示している。しかし、ｐ４０によるＩＬ−１２のブロックは、日和見微生物感染に対する感受性の増加または腫瘍リスクの増加などの望ましくない全身性の結果をもたらすようである。Ｂｏｗｍａｎら（２００６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１９：２４５頁；Ｌａｎｇｏｗｓｋｉら（２００６）Ｎａｔｕｒｅ  ４２２：４６１頁。したがって、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットの特異的ブロックが、ヒト疾患の治療において好ましい。その理由は、ＩＬ−２３のｐ１９サブユニットの特異的ブロックが、ＩＬ−１２の有益な活性（例えば感染との戦いおよび免疫監視における）を妨げることなく、ＩＬ−２３の病原性炎症活性を妨げるためである。
【０００４】
治療的抗体は、サイトカイン活性をブロックするのに使用することができる。抗体をインビボで治療的薬剤として使用する際の重大な制約が、抗体の免疫原性である。非ヒト種に由来するモノクローナル抗体に関して、ヒトにおける反復使用は、治療的抗体に対する免疫応答の発生をもたらす。このような免疫応答は、最小でも治療有効性の損失をもたらし、潜在的には致死的なアナフィラキシー応答をもたらす。したがって、ヒト化抗体または完全ヒト抗体などのヒトにおける低減した免疫原性の抗体が、ヒト被験者の治療には好ましい。ＩＬ−２３ｐ１９に対する例示的な治療的抗体は、米国特許出願公開第２００７／０００９５２６号明細書、および国際公開第２００７／０７６５２４号、同第２００７／０２４８４６号、同第２００７／１４７０１９号、および同第２００９／０４３９３３号パンフレットに開示されており、その開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれている。さらなるヒト化抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体は、国際特許公開第２００８／１０３４３２号および国際公開第２００８／１０３４７３号パンフレットとして公開された本発明の譲受人に譲渡された出願書、および本発明の譲受人に譲渡された米国特許出願公開第２００７／００４８３１５号明細書に開示されており、その開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０００５】
ヒトにおいて使用するための抗体薬は、その定常領域のアミノ酸配列、または可変領域内のそのフレームワーク配列が幾分異なり得るが、典型的にはＣＤＲ配列が最も劇的に異なる。同じタンパク質、同じポリペプチド、または潜在的には同じエピトープにも結合する抗体でさえ、全く異なるＣＤＲ配列を含み得る。ヒトにおいて使用するための治療的抗体も、ヒト生殖細胞系抗体配列、またはヒト化抗体の場合などの非ヒト（例えば齧歯類）生殖細胞系抗体配列から得ることができ、可能性があるＣＤＲ配列のさらなる多様性をもたらす。これらの配列の違いは、溶液中の異なる安定性、および溶液パラメーターに対する異なる反応性をもたらす。さらに、アミノ酸の配列における小さな変化または１個もしくは数個のアミノ酸残基における変化は、劇的に異なる抗体安定性および配列特異的分解経路に対する感受性をもたらす可能性がある。結果として、抗体安定性を最適化するのに必要な溶液条件を予測することは現在のところ不可能である。最適な溶液製剤を決定するために、各抗体が個々に試験されなければならない。Ｂｈａｍｂｈａｎｉら（２０１２）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１０１：１１２０頁。
【０００６】
抗体はまた、例えば、ホルモンおよびサイトカインなどの他の治療的タンパク質と比較して、比較的高分子量のタンパク質（約１５０，０００Ｄａ）でもある。結果として、所望のモル濃度の薬物を得るために、比較的高重量の抗体薬を投与することがしばしば必要である。さらに、抗体薬を皮下投与することがしばしば望ましい。その理由は、これが自己投与を可能にするためである。
【０００７】
自己投与は、投与、例えば静脈投与のために医療施設を訪れることに伴う時間および費用を回避する。皮下送達は、単回注射において注射部位で実際に送達され得る溶液の容量（一般に約１から１．５ｍｌ）により制限される。皮下自己投与は典型的には、患者が注射の前に薬物を再懸濁する必要を避けるために、凍結乾燥形態よりむしろ、薬物の液体溶液製剤を充填されたプレフィルドシリンジまたは自動注射器を用いて達成される。高用量の薬物を送達するために、この容量制限は、高濃度溶液製剤の開発を非常に重視する。しかし、このような高濃度の抗体は、高分子混み合い効果および増加したタンパク質−タンパク質相互作用を示し、乳光、自己結合、凝集、アンフォールディングおよび相分離などの物理的不安定性をもたらす。このような高濃度抗体溶液は、プレフィルドシリンジおよび自動注射器における注射可能性を低減する高い粘度（例えば＞１０センチポアズ）も示し得る。抗体薬は、有効性および一貫した投与を確保するために貯蔵中に安定でなければならず、そのため、どのような製剤が選択されようと高濃度、透明度および許容される粘度などの所望の特性を支持すること、すなわちまた、典型的な貯蔵条件下で許容される長期の保存期間にわたってこれらの特性および薬物の有効性を維持することが重要である。
【０００８】
結果として、ヒトＩＬ−２３ｐ１９に結合する抗体などの治療的抗体の安定な高濃度溶液製剤に対する必要性が存在する。このような安定な溶液製剤は好ましくは、自己投与用薬物を貯蔵するのに典型的な条件下で、すなわちシリンジ中冷蔵庫内温度で数ヶ月から数年にわたって安定性を示し、対応する薬物製品の長期の保存期間をもたらす。このような安定な高濃度溶液製剤は、自己投与による高濃度皮下注射のための抗体薬物の包装を可能にするであろう。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００７／０００９５２６号明細書
【特許文献２】国際公開第２００７／０７６５２４号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００７／０２４８４６号パンフレット
【特許文献４】国際公開第２００７／１４７０１９号パンフレット
【特許文献５】国際公開第２００９／０４３９３３号パンフレット
【特許文献６】国際公開第２００８／１０３４３２号パンフレット
【特許文献７】国際公開第２００８／１０３４７３号パンフレット
【特許文献８】米国特許出願公開第２００７／００４８３１５号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｏｐｐｍａｎｎら（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：７１５〜７２５頁
【非特許文献２】Ｗｉｅｋｏｗｓｋｉら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：７５６３〜７５７０頁
【非特許文献３】Ｐａｒｈａｍら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：５６９９〜７０８頁
【非特許文献４】Ｆｒｕｃｈｔ（２００２）Ｓｃｉ  ＳＴＫＥ  ２００２、Ｅ１〜Ｅ３
【非特許文献５】Ｅｌｋｉｎｓら（２００２）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７０：１９３６〜１９４８頁
【非特許文献６】Ｂｏｗｍａｎら（２００６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１９：２４５頁
【非特許文献７】Ｌａｎｇｏｗｓｋｉら（２００６）Ｎａｔｕｒｅ  ４２２：４６１頁
【非特許文献８】Ｂｈａｍｂｈａｎｉら（２０１２）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１０１：１１２０頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、ヒト化抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体１３Ｂ８−ｂ（「ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂ」）の高濃度溶液製剤を提供する。抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂは、配列番号２の配列と同一の２つの軽鎖、および配列番号１の配列と同一の２つの重鎖を含む。
【００１２】
１つの実施形態において、該溶液製剤は、ヒト化抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂ、ヒスチジン緩衝液ｐＨ６．０（±０．３）、スクロースおよびポリソルベート８０を含む。別の実施形態において、該溶液製剤は、ヒト化抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体１３Ｂ８−ｂ、約１０ｍＭヒスチジン緩衝液ｐＨ６．０（±０．３）、約７％スクロースおよび約０．０５％ポリソルベート８０を含む。さらなる実施形態において、該溶液製剤は、ヒト化抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体１３Ｂ８−ｂ、１０ｍＭヒスチジン緩衝液ｐＨ６．０（±０．３）、７％スクロースおよび０．０５％ポリソルベート８０を含む。
【００１３】
様々な実施形態において、本発明の溶液製剤は、少なくとも５０、８０、９０、１００、１１０または１２０ｍｇ／ｍｌ抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む。他の実施形態において、本発明の溶液製剤は、約８０〜１２０ｍｇ／ｍｌ抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂ、８０〜１２０ｍｇ／ｍｌ抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂ、約１００ｍｇ／ｍｌ抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂ、および１００ｍｇ／ｍｌ抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む。
【００１４】
別の態様において本発明は、炎症性疾患、自己免疫疾患、増殖性障害、癌、感染症（例えば、慢性感染を含む細菌、マイコバクテリア、ウイルスまたは真菌感染）、関節炎、乾癬、乾癬性関節炎、腱付着部炎、強直性脊椎炎、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患、多発性硬化症、ブドウ膜炎、移植片対宿主病、全身性エリテマトーデスならびに糖尿病を含むがこれらに限定されない障害を治療するために、本発明の抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの高濃度溶液製剤を使用する治療方法に関する。さらに別の態様において本発明は、これらの同じ障害の治療において使用するための抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの高濃度溶液製剤に関する。さらに別の態様において本発明は、これらの同じ障害の治療において使用するための医薬品の製造における抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの高濃度溶液製剤の使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１Ａ】ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤に対する最適な緩衝液およびｐＨ条件を決定するのに使用されたデータを示す図である。様々な１ｍｇ／ｍＬ抗体製剤に関する示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により決定したアンフォールディング温度、およびＲＰ−ＨＰＬＣにより測定した純度パーセントを示す。ＤＳＣの簡単な考察が、実施例２で提供される。
【図１Ｂ】ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤に対する最適な緩衝液およびｐＨ条件を決定するのに使用されたデータを示す図である。幾つかの異なる緩衝液（酢酸、クエン酸、リン酸およびトリス）に関するｐＨの関数としての、ＨＰ−ＳＥＣにより測定された単量体パーセントおよび遅い溶出ピークパーセントを示す。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図１Ｃ】ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤に対する最適な緩衝液およびｐＨ条件を決定するのに使用されたデータを示す図である。動的光散乱（ＤＬＳ）により測定された乳光（ＯＤ３５０）を含む、ｐＨの関数としての１０ｍＭクエン酸製剤の特性を示す図である。ＤＬＳの簡単な考察が、実施例４で提供される。
【図１Ｄ】ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤に対する最適な緩衝液およびｐＨ条件を決定するのに使用されたデータを示す図である。動的光散乱（ＤＬＳ）により測定された流体力学的サイズ（ｎｍ）分布を含む、ｐＨの関数としての１０ｍＭクエン酸製剤の特性を示す図である。ＤＬＳの簡単な考察が、実施例４で提供される。
【図１Ｅ】ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤に対する最適な緩衝液およびｐＨ条件を決定するのに使用されたデータを示す図である。ＤＳＣにより決定された融解温度を含む、ｐＨの関数としての１０ｍＭクエン酸製剤の特性を示す図である。ＤＳＣの簡単な考察が、実施例２で提供される。
【図１Ｆ】ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤に対する最適な緩衝液およびｐＨ条件を決定するのに使用されたデータを示す図である。高性能イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰ−ＩＥＸ）により決定された、経時的な遅い溶出ピークのパーセンテージを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図１Ｇ】ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤に対する最適な緩衝液およびｐＨ条件を決定するのに使用されたデータを示す図である。高性能イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰ−ＩＥＸ）により決定された、主要ピークのパーセンテージを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図１Ｈ】ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤に対する最適な緩衝液およびｐＨ条件を決定するのに使用されたデータを示す図である。異なるｐＨの幾つかの緩衝液中の低濃度抗体製剤（１ｍｇ／ｍｌ）に関する、動的光散乱（ＤＬＳ）により測定された乳光（ＯＤ３５０）を示す図である。ＤＬＳの簡単な考察が、実施例４で提供される。
【図１Ｉ】ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤に対する最適な緩衝液およびｐＨ条件を決定するのに使用されたデータを示す図である。異なるｐＨの幾つかの緩衝液中の低濃度抗体製剤（１ｍｇ／ｍｌ）に関する、動的光散乱（ＤＬＳ）により測定された流体力学的サイズ（ｎｍ）を示す図である。ＤＬＳの簡単な考察が、実施例４で提供される。
【図１Ｊ】ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤に対する最適な緩衝液およびｐＨ条件を決定するのに使用されたデータを示す図である。ＤＬＳにより決定されたより濃縮された抗体製剤（５０および１００ｍｇ／ｍｌ）に関する流体力学的サイズ（ｎｍ）分布を示す図である。ＤＬＳの簡単な考察が、実施例４で提供される。
【図１Ｋ】ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤に対する最適な緩衝液およびｐＨ条件を決定するのに使用されたデータを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣにより決定された、経時的な異なるｐＨの様々な緩衝液における遅い溶出ピークのパーセンテージを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図２Ａ】様々な賦形剤（１００ｍＭ  ＮａＣｌ、７％スクロース、７％トレハロースおよび６％マンニトール）を含有するｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの製剤に関する、ＤＳＣにより決定されたアンフォールディング温度を示す図である。ＤＳは原薬を指す。ＤＳＣの簡単な考察が、実施例２で提供される。
【図２Ｂ】様々な賦形剤（１００ｍＭ  ＮａＣｌ、７％スクロース、７％トレハロースおよび６％マンニトール）を含有するｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの製剤に関する、ＤＳＣにより決定された乳光の変化を示す図である。ＤＳは原薬を指す。ＤＳＣの簡単な考察が、実施例２で提供される。
【図３Ａ】界面活性剤（０．０５％ポリソルベート２０、０．０５％ポリソルベート８０、またはＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８）有りまたは無しの関数としての、撹拌５日前および５日後のＨＰ−ＳＥＣにより決定された抗体パーセントを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図３Ｂ】界面活性剤（０．０５％ポリソルベート２０、０．０５％ポリソルベート８０、またはＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８）有りまたは無しの関数としての、撹拌５日前および５日後のＨＰ−ＳＥＣにより決定された早い溶出ピークパーセントを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図３Ｃ】界面活性剤（０．０５％ポリソルベート２０、０．０５％ポリソルベート８０、またはＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８）有りまたは無しの関数としての、撹拌５日前および５日後の乳光を示す図である。界面活性剤無し（ＮＳ）試料の５日目の撹拌値は、実際は３を上回り、故に十分に測定限界を超えている。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図４Ａ】様々な条件下で貯蔵された場合の、１０ｍＭ緩衝液、７％スクロースおよび０．０５％ポリソルベート８０を含む酢酸抗体製剤およびヒスチジン抗体製剤の安定性を示す図である。試料は、２．０ｍｌガラスバイアル中１．５ｍｌ試料として貯蔵された。５℃（周囲相対湿度）またはＲＨ４条件下（４０℃、７５％相対湿度）で貯蔵された場合の、ＨＰ−ＳＥＣにより測定された単量体抗体のパーセンテージにより反映された、５０および１００ｍｇ／ｍｌ抗体調製物の安定性を示す。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図４Ｂ】様々な条件下で貯蔵された場合の、１０ｍＭ緩衝液、７％スクロースおよび０．０５％ポリソルベート８０を含む酢酸抗体製剤およびヒスチジン抗体製剤の安定性を示す図である。様々な貯蔵条件下、ＨＰ−ＳＥＣにより決定された、単量体パーセントのプロットを示す図である。「２５Ｈ」は、２５℃、６０％相対湿度での貯蔵を指す。縦座標（時間軸）が線形でないことに留意すべきである。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図４Ｃ】様々な条件下で貯蔵された場合の、１０ｍＭ緩衝液、７％スクロースおよび０．０５％ポリソルベート８０を含む酢酸抗体製剤およびヒスチジン抗体製剤の安定性を示す図である。様々な貯蔵条件下、ＨＰ−ＳＥＣにより決定された、ＨＭＷ種のプロットを示す図である。「２５Ｈ」は、２５℃、６０％相対湿度での貯蔵を指す。縦座標（時間軸）が線形でないことに留意すべきである。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図４Ｄ】様々な条件下で貯蔵された場合の、１０ｍＭ緩衝液、７％スクロースおよび０．０５％ポリソルベート８０を含む酢酸抗体製剤およびヒスチジン抗体製剤の安定性を示す図である。様々な貯蔵条件下、ＨＰ−ＳＥＣにより決定された、ＬＭＷ種のプロットを示す図である。「２５Ｈ」は、２５℃、６０％相対湿度での貯蔵を指す。縦座標（時間軸）が線形でないことに留意すべきである。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図４Ｅ】様々な条件下で貯蔵された場合の、１０ｍＭ緩衝液、７％スクロースおよび０．０５％ポリソルベート８０を含む酢酸抗体製剤およびヒスチジン抗体製剤の安定性を示す図である。主要ピークのパーセンテージを測定して抗体安定性をモニターするＨＰ−ＩＥＸ実験の結果のプロットを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図４Ｆ】様々な条件下で貯蔵された場合の、１０ｍＭ緩衝液、７％スクロースおよび０．０５％ポリソルベート８０を含む酢酸抗体製剤およびヒスチジン抗体製剤の安定性を示す図である。酸性バリアントのパーセンテージを測定して抗体安定性をモニターするＨＰ−ＩＥＸ実験の結果のプロットを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図４Ｇ】様々な条件下で貯蔵された場合の、１０ｍＭ緩衝液、７％スクロースおよび０．０５％ポリソルベート８０を含む酢酸抗体製剤およびヒスチジン抗体製剤の安定性を示す図である。５℃での貯蔵後の乳光のプロットを示す図である。
【図４Ｈ】様々な条件下で貯蔵された場合の、１０ｍＭ緩衝液、７％スクロースおよび０．０５％ポリソルベート８０を含む酢酸抗体製剤およびヒスチジン抗体製剤の安定性を示す図である。２５℃（２５Ｈ）での貯蔵後の乳光のプロットを示す図である。
【図４Ｉ】様々な条件下で貯蔵された場合の、１０ｍＭ緩衝液、７％スクロースおよび０．０５％ポリソルベート８０を含む酢酸抗体製剤およびヒスチジン抗体製剤の安定性を示す図である。４０℃（ＲＨ４）での貯蔵後の乳光のプロットを示す図である。
【図４Ｊ】ＲＨ４（４０℃、７５％相対湿度）および５℃での貯蔵後のペプチドマッピングにより測定された酸化を示す図である。ペプチドマッピングの簡単な考察が、実施例６で提供される。
【図４Ｋ】４０℃および５℃での貯蔵後のペプチドマッピングにより測定された酸化を示す図である。ペプチドマッピングの簡単な考察が、実施例６で提供される。
【図４Ｌ】様々な条件下で貯蔵された場合の、１０ｍＭ緩衝液、７％スクロースおよび０．０５％ポリソルベート８０を含む酢酸抗体製剤およびヒスチジン抗体製剤の安定性を示す図である。初回試料および５℃またはＲＨ４条件で４．５ヶ月貯蔵された試料に関する、酢酸製剤でのＤＳＣ実験からのアンフォールディングプロットを示す図である。ＤＳＣの簡単な考察が、実施例２で提供される。
【図４Ｍ】様々な条件下で貯蔵された場合の、１０ｍＭ緩衝液、７％スクロースおよび０．０５％ポリソルベート８０を含む酢酸抗体製剤およびヒスチジン抗体製剤の安定性を示す図である。初回試料および５℃またはＲＨ４条件で４．５ヶ月貯蔵された試料に関する、ヒスチジン製剤でのＤＳＣ実験からのアンフォールディングプロットを示す図である。ＤＳＣの簡単な考察が、実施例２で提供される。
【００１６】
１０ｍＭ酢酸製剤および１０ｍＭヒスチジン製剤の安定性は、ＨＰ−ＳＥＣにより測定された単量体パーセントおよび高分子量種パーセントとして測定された。安定性は、５℃（±３℃）、２５Ｈ（２５℃、６０％相対湿度）、またはＲＨ４（４０℃、７５％相対湿度）で貯蔵された試料について測定された。結果は、図４Ａおよび４Ｂで示されている。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図５Ａ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの３つの異なる調製物（ロットＡ、ＢおよびＣ）に関する、タンパク質濃度のプロットを示す図である。タンパク質濃度決定の簡単な考察が、実施例７で提供される。
【図５Ｂ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの３つの異なる調製物（ロットＡ、ＢおよびＣ）に関する、生物学的力価（細胞ベースの機能アッセイにより測定された）のプロットを示す図である。細胞ベースの機能アッセイの簡単な考察が、実施例８で提供される。
【図５Ｃ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの３つの異なる調製物（ロットＡ、ＢおよびＣ）に関する、生物学的力価（ＥＬＩＳＡにより測定された）のプロットを示す図である。ＥＬＩＳＡの簡単な考察が、実施例９で提供される。
【図５Ｄ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。酸性バリアントのパーセンテージを測定して抗体安定性をモニターするＨＰ−ＩＥＸ実験の結果のプロットを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図５Ｅ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。主要ピークのパーセンテージを測定して抗体安定性をモニターするＨＰ−ＩＥＸ実験の結果のプロットを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図５Ｆ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。主要ピーク後ピーク種のパーセンテージを測定して抗体安定性をモニターするＨＰ−ＩＥＸ実験の結果のプロットを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図５Ｇ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。塩基性バリアントのパーセンテージを測定して抗体安定性をモニターするＨＰ−ＩＥＸ実験の結果のプロットを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図５Ｈ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。ＨＰ−ＳＥＣにより測定された単量体パーセントを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図５Ｉ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。非還元ＣＥ−ＳＤＳによる主要ピークパーセント、または還元ＣＥ−ＳＤＳによる重鎖および軽鎖パーセントの測定による純度を示す図である。ＣＥ−ＳＤＳの簡単な考察が、実施例１０で提供される。
【図５Ｊ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。還元ＣＥ−ＳＤＳによる重鎖および軽鎖パーセントの測定による純度を示す図である。ＣＥ−ＳＤＳの簡単な考察が、実施例１０で提供される。
【図５Ｋ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。ＨＰ−ＳＥＣにより測定された、ＨＭＷ種パーセントを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図５Ｌ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。ＨＰ−ＳＥＣにより測定された、ＬＭＷ種パーセントを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図６Ａ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤（抗体ロットＡおよびＢ）に関するさらなる安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。ＥＬＩＳＡにより測定された生物学的力価のプロットである。ＥＬＩＳＡの簡単な考察が、実施例９で提供される。
【図６Ｂ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤（抗体ロットＡおよびＢ）に関するさらなる安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。細胞ベースの機能アッセイにより測定された生物学的力価のプロットである。細胞ベースの機能アッセイの簡単な考察が、実施例８で提供される。
【図６Ｃ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤（抗体ロットＡおよびＢ）に関するさらなる安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。様々な貯蔵条件下の、ＨＰ−ＳＥＣにより決定された、単量体パーセントのプロットを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図６Ｄ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤（抗体ロットＡおよびＢ）に関するさらなる安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。様々な貯蔵条件下の、ＨＰ−ＳＥＣにより決定された、ＨＭＷ種のプロットを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図６Ｅ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤（抗体ロットＡおよびＢ）に関するさらなる安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。様々な貯蔵条件下の、ＨＰ−ＳＥＣにより決定された、ＬＭＷ種のプロットを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図６Ｆ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤（抗体ロットＡおよびＢ）に関するさらなる安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。非還元ＣＥ−ＳＤＳによる主要ピークパーセントの測定による純度を示す図である。ＣＥ−ＳＤＳの簡単な考察が、実施例１０で提供される。
【図６Ｇ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤（抗体ロットＡおよびＢ）に関するさらなる安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。還元ＣＥ−ＳＤＳによる重鎖および軽鎖パーセントの測定による純度を示す図である。ＣＥ−ＳＤＳの簡単な考察が、実施例１０で提供される。
【図６Ｈ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤（抗体ロットＡおよびＢ）に関するさらなる安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。酸性バリアントのパーセンテージを測定して抗体安定性をモニターするＨＰ−ＩＥＸ実験の結果のプロットを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図６Ｉ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤（抗体ロットＡおよびＢ）に関するさらなる安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。主要ピークのパーセンテージを測定して抗体安定性をモニターするＨＰ−ＩＥＸ実験の結果のプロットを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図６Ｊ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤（抗体ロットＡおよびＢ）に関するさらなる安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。主要ピーク後ピーク種のパーセンテージを測定して抗体安定性をモニターするＨＰ−ＩＥＸ実験の結果のプロットを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図６Ｋ】３０ｍＬエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層Ｃｅｌｓｉｕｓ（登録商標）Ｐａｋバッグに原薬として貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤（抗体ロットＡおよびＢ）に関するさらなる安定性データを示す図である。データは、１０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）、７％スクロース、０．０５％ポリソルベート８０および抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを含む製剤について示されている。塩基性バリアントのパーセンテージを測定して抗体安定性をモニターするＨＰ−ＩＥＸ実験の結果のプロットを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図７Ａ】１００ｍｇ／ｍｌ抗体濃度および１．０ｍｌ充填容量で、プレフィルドシリンジ中単位用量での製剤として５℃（３℃）で貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。ｕｖ吸収により決定されたｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの４つの異なる調製物（ロットＤ、Ｅ、Ｆ、ＧおよびＨ）に関するタンパク質濃度のプロットである。タンパク質濃度決定の簡単な考察が、実施例７で提供される。
【図７Ｂ】１００ｍｇ／ｍｌ抗体濃度および１．０ｍｌ充填容量で、プレフィルドシリンジ中単位用量での製剤として５℃（３℃）で貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの４つの異なる調製物（ロットＥ、Ｆ、ＧおよびＨ）に関する、細胞ベースの機能アッセイにより測定された生物学的力価のプロットを示す図である。細胞ベースの機能アッセイの簡単な考察が、実施例８で提供される。
【図７Ｃ】１００ｍｇ／ｍｌ抗体濃度および１．０ｍｌ充填容量で、プレフィルドシリンジ中単位用量での製剤として５℃（３℃）で貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの４つの異なる調製物（ロットＥ、Ｆ、ＧおよびＨ）に関する、ＥＬＩＳＡにより測定された生物学的力価のプロットを示す図である。ＥＬＩＳＡの簡単な考察が、実施例９で提供される。
【図７Ｄ】１００ｍｇ／ｍｌ抗体濃度および１．０ｍｌ充填容量で、プレフィルドシリンジ中単位用量での製剤として５℃（３℃）で貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣにより決定された、ＨＭＷ種パーセントのプロットを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図７Ｅ】１００ｍｇ／ｍｌ抗体濃度および１．０ｍｌ充填容量で、プレフィルドシリンジ中単位用量での製剤として５℃（３℃）で貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣにより決定された、単量体パーセントのプロットを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図７Ｆ】１００ｍｇ／ｍｌ抗体濃度および１．０ｍｌ充填容量で、プレフィルドシリンジ中単位用量での製剤として５℃（３℃）で貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣにより決定された、ＬＭＷ種パーセントのプロットを示す図である。ＨＰ−ＳＥＣの簡単な考察が、実施例３で提供される。
【図７Ｇ】１００ｍｇ／ｍｌ抗体濃度および１．０ｍｌ充填容量で、プレフィルドシリンジ中単位用量での製剤として５℃（３℃）で貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。主要ピークのパーセンテージを測定して抗体安定性をモニターするＨＰ−ＩＥＸ実験の結果のプロットを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図７Ｈ】１００ｍｇ／ｍｌ抗体濃度および１．０ｍｌ充填容量で、プレフィルドシリンジ中単位用量での製剤として５℃（３℃）で貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。酸性バリアントのパーセンテージを測定して抗体安定性をモニターするＨＰ−ＩＥＸ実験の結果のプロットを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図７Ｉ】１００ｍｇ／ｍｌ抗体濃度および１．０ｍｌ充填容量で、プレフィルドシリンジ中単位用量での製剤として５℃（３℃）で貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。塩基性バリアントのパーセンテージを測定して抗体安定性をモニターするＨＰ−ＩＥＸ実験の結果のプロットを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図７Ｊ】１００ｍｇ／ｍｌ抗体濃度および１．０ｍｌ充填容量で、プレフィルドシリンジ中単位用量での製剤として５℃（３℃）で貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。主要ピーク後ピーク種のパーセンテージを測定して抗体安定性をモニターするＨＰ−ＩＥＸ実験の結果のプロットを示す図である。ＨＰ−ＩＥＸの簡単な考察が、実施例５で提供される。
【図７Ｋ】１００ｍｇ／ｍｌ抗体濃度および１．０ｍｌ充填容量で、プレフィルドシリンジ中単位用量での製剤として５℃（３℃）で貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。非還元ＣＥ−ＳＤＳによる主要ピークパーセントの測定による純度を示す図である。ＣＥ−ＳＤＳの簡単な考察が、実施例１０で提供される。
【図７Ｌ】１００ｍｇ／ｍｌ抗体濃度および１．０ｍｌ充填容量で、プレフィルドシリンジ中単位用量での製剤として５℃（３℃）で貯蔵された場合の、本発明の抗体製剤に関する安定性データを示す図である。還元ＣＥ−ＳＤＳによる重鎖および軽鎖パーセントの測定による純度を示す図である。ＣＥ−ＳＤＳの簡単な考察が、実施例１０で提供される。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
添付の特許請求の範囲を含む本明細書において使用されるとき、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」などの単数形の語は、文脈が特に明確に指示しない限り、それらの対応する複数の言及を含む。以下の表１０は、本出願において使用されている配列識別子のリストを提供する。特に指示のない限り、本明細書に言及されたタンパク質および被験者は、別の種ではなくヒトタンパク質およびヒト被験者である。本明細書において使用されるとき、「図Ｘ」は、個々の図ＸＡ〜ＸＺの全てを集合的に指す。
【００１８】
本明細書に引用された全ての参照は、個々の刊行物、データベースエントリー（例えばＧｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願、または特許が参照により組み込まれると具体的および個別に示される場合と同じ程度に、参照により組み込まれる。本明細書において参照の引用は、参照が関連する先行技術であることを認めるものではなく、またこれらの刊行物または書類の内容または日付に関していかなる承認を成すものではない。
【００１９】
Ｉ．定義
「増殖活性」は、例えば、正常な細胞分裂の他、癌、腫瘍、異形成、細胞形質転換、転移、および血管新生を促進する、これらに必要である、またはこれらと特異的に関連する活性を包含する。
【００２０】
本明細書において使用されるとき、「超可変領域」は、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメインにおける残基２４〜３４（ＣＤＲＬ１）、５０〜５６（ＣＤＲＬ２）および８９〜９７（ＣＤＲＬ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける残基３１〜３５（ＣＤＲＨ１）、５０〜５６（ＣＤＲＨ２）および９５〜１０２（（ＣＤＲＨ３）（Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．）、および／または「超可変ループ」由来の残基（すなわち、軽鎖可変ドメインにおける残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）および９６〜１０１（Ｈ３）（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７頁）を含む。本明細書において使用されるとき、用語「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、ＣＤＲ残基として本明細書に定義された超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を指す。上記の残基ナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに関し、必ずしも添付の配列表における配列ナンバリングに詳細に対応しない。
【００２１】
「免疫状態（ｉｍｍｕｎｅ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）」または「免疫障害」は、例えば、病理学的炎症、炎症性障害、および自己免疫障害または疾患を包含する。「免疫状態」はまた、免疫系による根絶に抵抗する感染、腫瘍、および癌を含む、感染、持続感染、ならびに癌、腫瘍および血管新生などの増殖性状態も指す。「癌性状態」は、例えば、癌、癌細胞、腫瘍、血管新生、および異形成などの前癌状態を含む。
【００２２】
「炎症性障害」は、病態が、例えば免疫系の細胞の数の変化、遊走率の変化、または活性化の変化から全体的または部分的に生じる障害または病理学的状態を意味する。免疫系の細胞には、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球もしくはマクロファージ、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、樹状細胞、ミクログリア、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球、好酸球、肥満細胞、または免疫と特異的に関連する任意の他の細胞（例えばサイトカイン産生内皮または上皮細胞）が含まれる。
【００２３】
本明細書において使用されるとき、濃度は、医薬製剤の製造においてこのような濃度と通常関連する範囲内で近似すると解釈されるべきである。具体的には、濃度は正確である必要はないが、ＧＭＰ条件下で製造された薬物に一般的に期待される許容差の範囲内で、記載された濃度と異なり得る。同様に、ｐＨ値は、ＧＭＰ条件下で製造され、典型的な貯蔵条件下で貯蔵された薬物に一般的に期待される許容差の範囲内で近似している。例えば、本発明のヒスチジン製剤は、６．０のｐＨを有すると言われるが、典型的な許容差はｐＨ６．０（±０．３）である。特に指示のない限り、パーセント濃度は重量／重量濃度である。
【００２４】
ＩＩ．高濃度溶液抗体製剤
典型的な治療的モノクローナル抗体は、４つのポリペプチド、すなわち２つの軽鎖（例えば２１４個のアミノ酸長）および２つの重鎖（例えば４４６個のアミノ酸長）から成る。各鎖は今度は、可変ドメインおよび定常ドメインから成る。抗ＩＬ−２３ｐ１９ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの可変ドメインは、軽鎖および重鎖に対しそれぞれ１０８個および１１６個のアミノ酸であり、定常ドメインは１０６個および３３０個のアミノ酸である。抗体のその標的に対する特異性は、いわゆる「超可変」領域または「相補性決定」領域（ＣＤＲ）（３つのＣＤＲが重鎖および軽鎖の各々の可変ドメインで見出されている）内にある配列により大部分が決定される。ＣＤＲは、異なる抗体間で長さが異なり得るが、ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂにおいてＣＤＲは、重鎖に４４個のアミノ酸、および軽鎖に２７個のアミノ酸を含む。ＣＤＲ残基は、異なる抗体間で高度に可変的であり、ヒト生殖細胞系配列（完全ヒト抗体の場合）、または非ヒト（例えば齧歯類）生殖細胞系配列に由来し得る。フレームワーク領域も、抗体によって著しく異なり得る。定常領域は、選択された抗体がラムダ（λ）またはカッパ（κ）軽鎖を有するかどうかに応じて、ならびに抗体のクラス（またはアイソタイプ）（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭ）およびサブクラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）に応じて異なるであろう。合計は、「超可変」領域中の７１個のアミノ酸を含む２２４個が可変ドメインにある約６５０個のアミノ酸から成り、クラス、サブクラス、および軽鎖定常ドメインにおいて定常ドメインが異なる、約１５０，０００Ｄａの抗体分子である。
【００２５】
本発明の抗体（抗ＩＬ−２３ｐ１９ｍＡｂ  ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂ）も、完全にヒトではなくヒト化されている点で、多くの近年開発された治療的抗体とは異なる。結果として、ＣＤＲ配列は、ヒト生殖細胞系配列ではなく非ヒト（この場合はマウス）生殖細胞系配列に由来する。該生殖細胞系配列は、体細胞超変異由来の変化は別として、抗体のＣＤＲ配列が由来する配列レパートリーを含み、結果として、マウス生殖細胞系で始まる得られたＣＤＲは、ヒト生殖細胞系から始まるものとは系統的に異なることが予期されるであろう。これは実際、異なる種の使用が、得られたＣＤＲ配列における潜在的多様性を増加させることから、抗体を産生させるのに異なる種の免疫系を使用する根拠となる。ＣＤＲは起源の種に応じて系統的に異なるという根本的な考えを反映して、ヒト生殖細胞系由来のＣＤＲ配列は、他の種に由来するものよりヒトにおいて少ない免疫原性になるであろうことに基づき、ヒト生殖細胞系配列の使用はしばしば正当化される。ＣＤＲ多様性の増加は、高親和性などの所望の特性を有する抗体を見出す可能性を高めるが、得られた抗体の安定な溶液製剤を開発する際に問題をさらに拡大する。
【００２６】
同じ抗原に結合する抗体でさえ、配列が劇的に異なる可能性があり、全く別個の抗原に対する抗体以上に必ずしも配列が密接に関連しない。例えば、本発明の抗体（ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂ）の可変ドメインは、別の抗ＩＬ−２３ｐ１９特異的抗体ＣＮＴＯ  １９５９（米国特許第７，９９３，６４５号明細書の配列番号１１６および１０６）と約５０から６０％配列同一性のみを共有する。ＣＮＴＯ  １９５９は、完全ヒト抗体である。低い配列類似性に基づき、該抗体の化学的特性、および故に変性に対するその感受性は、共有された標的にもかかわらず類似していると見なされ得ない。
【００２７】
上記に示されているように、抗体は、溶液中で様々な形態の分解および不安定性にさらされる、大きな高度に複雑なポリペプチド複合体である。抗体の配列の多様性、故に構造の多様性は、幅広い化学特性を生じさせる。抗原結合特異性における様々な配列特異的違いとは別に、抗体は、様々な分解経路、凝集、および沈殿に対する異なる感受性を示す。アミノ酸側鎖は、カルボキシ（Ｄ、Ｅ）、アミノ（Ｋ）、アミド（Ｎ、Ｑ）、ヒドロキシル（Ｓ、Ｔ、Ｙ）、スルフヒドリル（Ｃ）、チオエーテル（Ｍ）基などの反応基の有無、ならびにヒスチジン、フェニルアラニンおよびプロリン残基上の潜在的化学反応性部位の有無において異なる。抗原結合相互作用に直接関与するアミノ酸側鎖は、側鎖修飾による不活性化の明白な候補であるが、他の位置での分解も、ＣＤＲの立体配向（例えばフレームワーク残基の変化）、エフェクター機能（例えばＦｃ領域の変化−例えば、Ｌｉｕら（２００８）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４７：５０８８頁参照）、または自己結合／凝集といった要因に影響を与え得る。
【００２８】
抗体は、任意の数の潜在的分解経路の対象となる。抗体、特にＣＤＲにおけるメチオニン残基の酸化は、それが抗原結合を妨害する場合に問題となり得る。Ｐｅｒｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１頁；Ｌａｍら（１９９７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８６：１２５０頁。他の潜在的分解経路には、アスパラギン脱アミド化（Ｈａｒｒｉｓら（２００１）Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、Ｂ７５２：２３３頁）Ｖｌａｓａｋら（２００９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３９２：１４５頁）トリプトファン酸化（Ｗｅｉら（２００７）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７９：２７９７頁）、システイニル化（Ｂａｎｋｓら（２００８）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９７：７７５頁）、糖化（Ｂｒａｄｙら（２００７）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７９：９４０３頁）、ピログルタミン酸形成（Ｙｕら（２００６）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．４２：４５５頁）、ジスルフィドシャッフリング（Ｌｉｕら（２００８））Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３：２９２６６頁）、および加水分解（Ｄａｖａｇｎｉｎｏら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８５：１７７頁）が含まれる。ＩｏｎｅｓｃｕおよびＶｌａｓａｋ（２０１０）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．８２：３１９８頁に論じられている。Ｌｉｕら（２００８））Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９７：２４２６頁も参照。幾つかの潜在的分解経路は、特定のアミノ酸残基の存在だけでなく、周囲の配列にも依存する。脱アミド化およびイソアスパラギン酸形成は、（Ｃ末端からの）ＮまたはＤ残基後のペプチド結合の自発的分子内再配列から生じ、Ｎ−ＧおよびＤ−Ｇ配列は特に感受性である。ＲｅｉｓｓｎｅｒおよびＡｓｗａｄ（２００３）ＣＭＬＳ  Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．６０：１２８１頁。
【００２９】
抗体はまた、貯蔵中に配列依存的非酵素的断片化にもさらされる。ＶｌａｓａｋおよびＩｏｎｅｓｃｕ（２０１１）ｍＡｂｓ  ３：２５３頁。Ｄ、Ｇ．Ｓ．Ｔ、ＣまたはＮなどの反応性側鎖の存在は、ポリペプチド骨格を供給する分子内切断反応をもたらし得る。このような配列特異的加水分解反応は、典型的にはｐＨに大いに依存する。同上。抗体はまた、例えばＣＤＲが多数の疎水性残基を含む場合に、配列依存的凝集も受ける。Ｐｅｒｃｈｉａｃｃａら（２０１２）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｃｌｅｔｉｏｎ  ２５：５９１頁。凝集は、皮下投与のために高濃度で製剤化される必要がある抗体にとって特に問題であり、可溶性を高めるために荷電残基を付加して抗体配列を修飾するようにすらなっている。同上。
【００３０】
抗体での潜在的な配列特異的安定性問題の多様性を反映して、潜在的抗体製剤もまた多様である。幾つかの異なる変数が、新たな抗体ごとにカスタム最適化されなければならない。製剤は、例えば、抗体濃度、緩衝液、ｐＨ、界面活性剤の有無、等張化剤（イオン性または非イオン性）の有無、分子密集剤の有無において異なり得る。市販の治療的抗体は、リン酸緩衝液（例えばアダリムマブ）、リン酸／グリシン緩衝液（例えばバシリクスマブ（ｂａｓｉｌｉｘｕｍａｂ））、トリス緩衝液（例えばイピリムマブ）、ヒスチジン（例えばウステキヌマブ）、クエン酸ナトリウム（例えばリツキシマブ）中、ならびにｐＨ４．７（例えばセルトリズマブ）およびｐＨ５．２（例えばアダリムマブ）からｐＨ７．０〜７．４（例えばセツキシマブ）で、幅広い溶液製剤で販売されている。市販の治療的抗体はまた、エデト酸二ナトリウム（例えばアレムツズマブ）、マンニトール（例えばイピリムマブ）、ソルビトール（例えばゴリムマブ）、スクロース（例えばウステキヌマブ）、塩化ナトリウム（例えばリツキシマブ）、塩化カリウム（例えばアレムツズマブ）、およびトレハロース（例えばラニビズマブ）を含有していてもよい製剤（全て、０．００１％（例えばアビシクスマブ（ａｂｃｉｘｍａｂ））から０．１％（例えばアダリムマブ）の範囲のポリソルベート８０有り、無しの両方）でも入手可能である。
【００３１】
例示的な抗体製剤は、米国特許第７，６９１，３７９号（抗ＩＬ−９ｍＡｂ  ＭＥＤＩ−５２８）、第７，５９２，００４号（抗ＩＬ−２受容体、ダクリズマブ）、第７，７０５，１３２号（抗ＥＧＦＲ、パニツムマブ）、および第７，６３５，４７３号（抗Ａβ；バピネオズマブ）で見出される。さらなる例示的な抗体製剤は、米国特許出願第２０１０／０００２１４６１号（抗α４インテグリン、ナタリズマブ）、同第２００９／０１８１０２７号（抗ＩＬ−１２／ＩＬ−２３、ウステキヌマブ）、同第２００９／０１６２３５２号（抗ＣＤ２０、リツミクスマブ（ｒｉｔｕｍｉｘｍａｂ））、同第２００９／００６０９０６号（抗ＩＬ−１３）、同第２００８／０２８６２７０号（抗ＲＳＶ、パリビズマブ）、および同第２００６／００８８５２３号（抗Ｈｅｒ２、ペルツズマブ）で見出される。さらにさらなる製剤は、ＤａｕｇｈｅｒｔｙおよびＭｒｓｙｎ（２００６）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５８：６８６頁；Ｗａｎｇら（２００７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９６：１頁；およびＬａｍら（１９９７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８６：１２５０頁で記載されている。
【００３２】
抗体特異性の基礎である配列多様性は、免疫応答の核となる。この多様性は、得られた抗体の化学的多様性をもたらし、化学的多様性は幅広い潜在的分解経路をもたらす。これまでに開発された無数の抗体製剤は、製剤は最適安定性を確保するために特異的抗体ごとに個々に最適化されなければならないという事実を裏付けるものである。実際、今までにヒトにおいて使用するために承認されたありとあらゆる市販の治療的抗体は、固有の異なる製剤を有している。
【００３３】
ＩＩＩ．ヒト化抗ＩＬ−２３の生物学的活性
本発明の抗ＩＬ−２３ｐ１９ｍＡｂ  ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの溶液製剤は、ＩＬ−２３シグナル伝達の選択的拮抗作用が有益であると期待される障害の治療において使用を見出すであろう。皮膚、関節、ＣＮＳの炎症性障害、および増殖性障害は、類似した免疫応答を誘発し、故にＩＬ−２３ブロックは、全身性感染と戦う宿主の能力を含むことなく、これらの免疫媒介炎症性障害の阻害をもたらすはずである。ＩＬ−２３との拮抗は、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、乾癬、強直性脊椎炎、移植片対宿主病、アトピー性皮膚炎、ならびに様々な他の自己免疫障害および炎症性障害に関連した炎症を軽減するはずである。ＩＬ−２３阻害剤の使用は、増殖性障害、例えば癌、ならびに自己免疫障害、例えば多発性硬化症、Ｉ型糖尿病およびＳＬＥの阻害も提供するであろう。これらの様々な障害におけるＩＬ−２３の記載は、以下の公開されたＰＣＴ出願：国際公開第０４／０８１１９０号、同第０４／０７１５１７号、同第００／５３６３１号；および同第０１／１８０５１号パンフレットにおいて見出すことができる。ＩＬ−２３阻害剤はまた、細菌、マイコバクテリア、ウイルスおよび真菌感染などの慢性感染を含む感染の治療における使用も見出し得る。米国特許第８，２６３，０８０号明細書および国際公開第２００８／１５３６１０号パンフレット参照。
【００３４】
本発明の高濃度溶液製剤は、長期間貯蔵された場合に生物学的活性を保持する抗体を含む。本明細書において使用されるとき、用語「生物学的に活性」は、所望の抗原エピトープに結合でき、生物学的効果を直接的または間接的に発揮できる抗体または抗体断片を指す。典型的には、これらの効果は、ＩＬ−２３がその受容体に結合しないことから生じる。本明細書において使用されるとき、用語「特異的」は、標的抗原エピトープへの抗体の選択的結合を指す。抗体は、特定の条件下で、ＩＬ−２３への抗体の結合を無関係の抗原または抗原混合物への結合と比較して、結合の特異性についてテストすることができる。抗体が、無関係の抗原または抗原混合物への結合より少なくとも１０倍、および好ましくは５０倍多くＩＬ−２３に結合するならば、それは特異的であると考えられる。ＩＬ−１２に結合する抗体は、ＩＬ−２３特異的抗体ではない。ＩＬ−２３ｐ１９に「特異的に結合する」抗体は、ＩＬ−２３ｐ１９由来配列を含まないタンパク質に結合しない。すなわち、「特異性」は本明細書において使用されるときＩＬ−２３ｐ１９特異性に関し、当該タンパク質に存在し得るいずれの他の配列にも関しない。例えば、本明細書において使用されるとき、ＩＬ−２３ｐ１９に「特異的に結合する」抗体は典型的には、ＩＬ−２３ｐ１９およびＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドタグを含む融合タンパク質であるＦＬＡＧ（登録商標）−ｈＩＬ−２３ｐ１９に結合するであろうが、ＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドタグ単独に結合せず、またはＩＬ−２３ｐ１９以外のタンパク質に融合されている場合は結合しない。
【００３５】
本発明のＩＬ−２３特異的結合化合物は、腹腔マクロファージによるＩＬ−１βおよびＴＮＦの産生、ならびにＴＨ１７Ｔ細胞によるＩＬ−１７を含むがこれらに限定されないいずれの生物学的活性も阻害することができる。Ｌａｎｇｒｉｓｈら（２００４）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２０２：９６〜１０５頁参照。抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体はまた、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＣＣＬ７、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２２、ＣＣＲ１、およびＧＭ−ＣＳＦの遺伝子発現を阻害することもできるであろう。Ｌａｎｇｒｉｓｈら（２００５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１：２３３〜２４０頁参照。本発明のＩＬ−２３特異的結合化合物はまた、ＴＨ１７細胞の増殖または生存を増大させるＩＬ−２３の能力もブロックするであろう。ＣｕａおよびＫａｓｔｅｌｅｉｎ（２００６）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：５５７〜５５９頁。改変抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体の阻害活性は、炎症性障害、自己免疫障害、および増殖性障害の治療において有用であろう。このような障害の例は、国際公開第０４／０８１１９０号、同第０４／０７１５１７号、同第００／５３６３１号、および同第０１／１８０５１号パンフレットに記載されている。
【００３６】
本発明の高濃度溶液製剤は、例えば、Ｔｈ１７媒介疾患、自己免疫障害もしくは慢性炎症性障害、または癌などのＩＬ−２３またはＩＬ−２３ｐ１９の活性の上昇に関連した障害の治療または予防において使用するための、抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの貯蔵および送達に有用である。
【００３７】
ＩＶ．ヒト化抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体１３Ｂ８−ｂの溶液製剤
本発明は、配列番号２の配列と同一の２つの軽鎖、および配列番号１の配列と同一の２つの重鎖を含み、同時係属中の本発明の譲受人に譲渡された米国特許第８，２９３，８８３号（その開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれている）に開示された、抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの高濃度溶液製剤を提供する。ヒト化軽鎖１３Ｂ８配列（カッパ定常領域を有する）は配列番号２で提供され、軽鎖可変ドメインはその配列の残基１〜１０８を含む。ヒト化重鎖１３Ｂ８配列（γ１定常領域を有する）は配列番号１で提供され、重鎖可変ドメインはその配列の残基１〜１１６を含む。
【００３８】
重鎖および軽鎖配列（配列番号１および２）は、シグナル配列無しで提供される。例示的な重鎖および軽鎖シグナル配列は、それぞれ配列番号１２および１３で提供される。シグナル配列またはシグナル配列をコードする核酸配列は、宿主細胞から分泌するための前駆タンパク質を作製するのにそれぞれの抗体鎖のＮ末端に付加することができる。代替のシグナル配列も使用することができ、幾つかは「ＳＰｄｂ：ａ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ」  Ｃｈｏｏら（２００５）ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ６：２４９頁に見出すことができる。
【００３９】
親抗体１３Ｂ８を発現するハイブリドーマは、受託番号ＰＴＡ−７８０３の下、２００６年８月１７日、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ−マナッサス、バージニア、ＵＳＡ）にブダペスト条約に従って寄託された。親抗体１３Ｂ８とｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの関係は、譲受人に譲渡された米国特許第８，２９３，８８３号明細書に詳述されている。
【００４０】
本発明の溶液製剤は、５００〜２０００Ｌスケールのチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）培養細胞から調製された抗体１３Ｂ−８の、少なくとも８つの異なるロットを用いて開発された。
【００４１】
一連の最初の溶液条件が、本発明の溶液製剤について検討された。実験は、酢酸、クエン酸、ヒスチジン、トリスおよびリン酸などの様々な緩衝液を用いて、４．０から８．８の範囲のｐＨで行われた。スクロース、トレハロース、およびマンニトールなどの賦形剤がテストされ、様々な濃度（故にイオン強度）のＮａＣｌ、および界面活性剤ポリソルベート８０の包含も同様にテストされた。製剤は３５０ｎｍのＯ．Ｄ．を決定して乳光に基づきスクリーニングされた。凝集は、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）、動的光散乱（ＤＬＳ）および分析的超遠心分離（ＡＵＣ）により測定された。生物学的安定性は、高性能イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰ−ＩＥＸ）により測定され、熱安定性は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定された。
【００４２】
１ｍｇ／ｍＬ  ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂでの最初のプレフォーミュレーション実験は、逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）により測定された純度パーセントが約ｐＨ６．０まで増加し、次いでｐＨ８．８まで一定に保たれることを明らかにした。図１Ａ参照。しかし、抗体のアンフォールディング温度は、約ｐＨ５でピークに達した。図１Ａ参照。酢酸、クエン酸、リン酸およびトリス間の緩衝液種の比較は、ｐＨ５．５のクエン酸緩衝液が、最も高いパーセンテージの単量体、および最も低いパーセンテージの遅い溶出ピークをもたらすことを示した。図１Ｂ参照。最適な生化学的および生物物理学的安定性がｐＨ５．５のクエン酸緩衝液で観察されたが、抗体１ｍＬ当たり＞６５ｍｇまでのクエン酸緩衝液における抗体の濃度は、実質的な乳光を生じさせた（データ不図示）。乳光は、患者の承諾を減少させる可能性があるため望ましくなく、自己投与用に製剤化され得る薬物には特に懸念される、この乳光は、クエン酸緩衝液に希釈しｐＨを４．８に低下させると可逆性となり（図１Ｃ）、ｐＨの低下は流体力学的直径も減少させた（図１Ｄ）が、低溶融形態の割合の増加（図１Ｅ）、ＨＰ−ＳＥＣにより測定された遅い溶出ピークの経時的な蓄積増加（図１Ｆ）、およびＨＰ−ＩＥＸにより測定された主要ピークの経時的な減少（図１Ｇ）により反映されるように、ｐＨの低下はまた、溶液の熱安定性および生化学的安定性も低下させた。
【００４３】
熱安定性および生化学的安定性を低下させることなく乳光および自己結合を減少させる試みにおいて、ヒスチジンが次いで代替の緩衝液系として検討された。試料は１０ｍＭ酢酸（ｐＨ４．８および５．６）、１０ｍＭクエン酸（ｐＨ４．８および５．５および６．０）、および１０ｍＭヒスチジン（ｐＨ５．５および６．０）中で調製された。乳光および流体力学的直径は、それぞれＯＤ３５０およびＤＬＳにより決定された。図１Ｈおよび１Ｉ参照。酢酸またはヒスチジンのどちらかとのクエン酸の置き換えは、生化学的安定性を損なうことなく乳光を最小化し、自己結合を減少させた。より高い抗体濃度で（５０から１００ｍｇ／ｍｌ）、酢酸（ｐＨ５．５）およびヒスチジン（ｐＨ６．０）製剤は透明となり、クエン酸（ｐＨ５．５）で観察された流体力学的サイズの増加を有さなかった。図１Ｊ参照。低ｐＨ（４．８）クエン酸および酢酸製剤は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定された、ＲＨ４条件下（４０℃、７５％相対湿度）で貯蔵中の遅い溶出ピークの蓄積増加ももたらした。図１Ｋ参照。
【００４４】
様々な賦形剤（１００ｍＭ  ＮａＣｌ、７％スクロース、７％トレハロースおよび６％マンニトール）も、アンフォールディング温度（図２Ａ）および乳光（図２Ｂ）に対するその影響についてテストされた。７パーセントスクロースは、製剤を等張にし、乳光を減少させ、および熱安定性を高める（Ｔｍを高める）ために添加された。界面活性剤ポリソルベート２０（ＰＳ２０）、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）およびＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ−６８も、凝集（図３Ａおよび３Ｂ）および乳光（図３Ｃ）に対するその効果についてテストされた。ポリソルベート８０は、撹拌誘導性ストレスによる凝集を最小化するために添加された。
【００４５】
これらの結果は、好ましい緩衝液系の変化をもたらした。抗ＩＬ−２３は、クエン酸ｐＨ５．５およびｐＨ６．０において高濃度で自己結合および乳光を示した。酢酸（ｐＨ５．５）またはヒスチジン（ｐＨ６．０）とのクエン酸の置き換えは、熱安定性および生化学的安定性を損なうことなく乳光を最小化した。スクロース（７％）は、製剤を等張にするために添加された。スクロース（７％）はまた、乳光を減少させ、熱安定性を高め（Ｔｍを高め）、加速安定性試験中の単量体の損失パーセンテージを低下させた（データ不図示）。ポリソルベート８０（０．０５％）は、撹拌ストレスによる凝集を最小化するために添加された。
【００４６】
１０ｍＭヒスチジン（ｐＨ６．０）、７％スクロースおよび０．０５％ＰＳ−８０を含むヒスチジンベースの製剤は、ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの好ましい高濃度製剤として選択された。粘度、密度、オスモル濃度、および粒子を含む様々な溶液特性が、１０ｍＭヒスチジン（ｐＨ６．０）製剤について決定された。表１参照。観察された室温粘度（５．６５ｃＰ）は、プレフィルドシリンジおよび自動注射器での使用に許容される。
【表１】
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【００４７】
Ｖ．ヒト化抗ＩＬ−２３ｐ１９抗体１３Ｂ８−ｂの高濃度溶液製剤の安定性
本発明の選択された製剤の長期安定性は、様々な貯蔵条件下で３〜２４ヶ月貯蔵後に試験された。試料は、２ｍｌガラスバイアル（図４）、３０ｍｌバッグ（バルク貯蔵）（図５および６）、またはプレフィルドシリンジ（単回投与市販包装）（図７）中で、様々な温度および湿度レベルでインキュベートされた。試料は、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）、イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰ−ＩＥＸ）、ＳＤＳキャピラリー電気泳動（ＣＥ−ＳＤＳ、還元および非還元）、およびペプチドマッピングといった方法により、分解および凝集生成物の存在について分析された。抗体安定性は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定された。生物学的活性は、ＩＬ−２３結合ＥＬＩＳＡおよび細胞ベースの機能アッセイにより評価された。抗体濃度は、２８０ｎｍのＵＶ吸収により決定された。乳光は、３５０ｎｍ（ＯＤ３５０）で光学密度を測定して決定された。結果は図４〜７で提供されている。
【００４８】
第１セットの実験において、１．５ｍｌ試料は２．０ｍｌガラスバイアルに入れられ、様々な条件下で貯蔵後に分析された。結果は図４で示されている。典型的な冷蔵庫内条件に相当する５℃、周囲湿度で貯蔵された試料では、分解または凝集はほとんど観察されなかった。図４Ａ〜４Ｆ。試料分解に関する陽性対照として含まれたＲＨ４（４０℃、７５％相対湿度）などの加速分解条件は、第１時点（１ヶ月）ですぐに始まる単量体の予期された損失、ならびに分解および凝集生成物の増加を示した。図４Ａ〜４Ｆ。乳光は５℃で安定であった（図４Ｇ）が、２５℃および４０℃で増加した（図４Ｈおよび４Ｉ）。酸化は同様に５℃で最小であったが、ＲＨ４条件下、または４０℃で著しかった。図４Ｊおよび４Ｋ。これらの結果は、証明されたように（例えばＲＨ４結果）、実験は幾つかのアッセイにより分解を検出することができるが、典型的な冷蔵庫内条件下での貯蔵は、少なくとも約９ヶ月の貯蔵にわたって製品品質の低下をほとんどまたは全くもたらさないことを示している。
【００４９】
第２セットの実験において、試料は３０ｍｌエチレン−ビニル−アセテート（ＥＶＡ）流体接触層ＣＥＬＳＩＵＳ（登録商標）−Ｐａｋバッグ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、ゲッティンゲン、ドイツ）に入れられ、様々な条件下で貯蔵後に分析された。結果は図５および６で示されている。これらの実験は、典型的なバルク貯蔵条件下での原薬の安定性を評価するために主に設計された。
【００５０】
バルク貯蔵試料は、３つの冷凍条件下（−８０℃、−４５℃および−２０℃）で貯蔵され、および冷蔵された（２℃〜８℃）。代表的なデータは、５℃（±３℃）および−４５℃で最大１８ヶ月間貯蔵された試料に関して図５で提供されている。濃度のわずかな増加が１２ヶ月の貯蔵にわたって観察された（図５Ａ）。恐らく５℃試料における貯蔵バッグからの蒸発によるものであった。生物学的活性に関する有意な傾向はなく（図５Ｂおよび５Ｃ）、タンパク質関連不純物、分解生成物および凝集物は、特に−４５℃で冷凍貯蔵された試料に関して最大１８０ヶ月間、概ね仕様の範囲内であった（図５Ｄ〜５Ｌ）。
【００５１】
バルク貯蔵における安定性は、高温でも評価された。代表的なデータは、５℃（±３℃）、２５℃、２５Ｈ、４０℃およびＲＨ４で最大１２ヶ月間貯蔵された試料に関して図６で提供されている。冷蔵試料は、１２ヶ月にわたって安定な生物学的活性を示したのに対し、室温（２５℃）で貯蔵された試料は、生物学的力価の明白な増加（蒸発による正味濃度に起因する可能性がある効果）を実際に示した。図６Ａおよび６Ｂ。試料は５℃で貯蔵された場合、１２ヶ月にわたって安定であったが、タンパク質関連不純物、（分解生成物および凝集物）は、２５℃、２５Ｈで貯蔵された試料に関して経時的に増加し、４０℃、ＲＨ４（加速分解条件）で貯蔵された試料に関して劇的に増加した。図６Ｃ〜６Ｋ。
【００５２】
第３セットの実験において、１００ｍｇ／ｍｌ抗体製剤の１ｍｌ試料が、シリンジ（ＢＤ  Ｈｙｐａｋ  Ｐｈｙｓｉｏｌｉｓプレフィルドシリンジ）に入れられ、様々な条件下で貯蔵後に分析された。結果は、５℃（±３℃）、最大１２ヶ月間貯蔵された試料に関して図７で示されている。抗体濃度は、生物学的活性（図７Ｂおよび７Ｃ）と同じく本質的に不変のままであった（図７Ａ）。高分子量種、単量体パーセント、低分子量種、主要抗体ピークパーセント、酸性バリアント、塩基性バリアント、主要ピーク後ピーク種、主なＩｇＧ、ならびに重鎖および軽鎖のレベル（それぞれ図７Ｄ〜７Ｌ）は全て、少なくとも１２〜２４ヶ月にわたって本質的に安定なままであった。
【００５３】
図４〜７に示された長期安定性実験は、本発明のｈｕｍ１３Ｂ８−ｂのヒスチジン製剤が、バルク溶液中で冷凍されているまたはプレフィルドシリンジなどで冷蔵されているかを問わず、典型的な貯蔵条件下、高い抗体濃度で生物学的活性および物理的完全性の両方に関して安定であることを明らかにするものである。
【００５４】
ＲＨ４および２５Ｈなどの加速分解条件、ならびに他の昇温条件下で得られた結果は、抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの可能性がある分解生成物および経路を図示することが単に意図され、治療用途に意図された抗体の分解速度を反映しない。加速分解条件中に見出されたｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの主な分解経路には、ＣＥ−ＳＤＳにより観察された純度の損失、ＨＰ−ＳＥＣにより観察されたＨＭＷおよびＬＭＷ種の増加、ならびに単量体パーセンテージの減少が含まれる。さらに、ＨＰ−ＩＥＸは、酸性バリアントおよび主要ピーク後ピーク種の増加と、塩基性バリアントおよび主要ピークの減少を明らかにした。昇温でのｈｕｍ１３Ｂ８−ｂなどの抗体薬物の溶液製剤の延長貯蔵は、極めて可能性が低い。ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの長期貯蔵は、例えば、−４５℃で冷凍されたＣＥＬＳＩＵＳ（登録商標）Ｐａｋバッグで貯蔵される可能性がある。この条件下、品質特性は、少なくとも１８ヶ月間安定なままであることが予期される。ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの個々の用量を含有するプレフィルドシリンジまたは自動注射器は、約５℃（±３℃）で貯蔵される可能性があり、また少なくとも１８ヶ月間安定なままであることも予期される。
【００５５】
ＶＩ．用量および投与
本発明の高濃度溶液製剤は高用量皮下投与に特に適しているが、このような製剤は、他の方法で投与することもできる。投与の適切な経路には、例えば、経口、直腸、経粘膜、または腸管投与；筋肉内、皮内、髄内注射を含む非経口送達、およびくも膜下、直接脳室内、静脈内、腹腔内、鼻内、または眼内注射が含まれてもよい。
【００５６】
あるいは、例えば、免疫病理学により特徴付けられる関節炎関節または病原体誘導性病変にしばしばデポ製剤または持続放出製剤で抗体を直接注射することにより、全身性の方法ではなく局所方法で抗体を投与してもよい。さらに、例えば、免疫病理学により特徴付けられる関節炎関節または病原体誘導性病変を標的にする標的薬物送達系で、例えば組織特異的抗体で被覆されたリポソームで抗体を投与してもよい。リポソームは、罹患組織を標的とし、罹患組織により選択的に取り込まれるであろう。
【００５７】
皮下投与は、シリンジ、自動注射器、注射器ペンまたは無針注射装置を用いる注射により行うことができる。
【００５８】
本発明の高濃度溶液製剤は、高濃度の抗体を必要とする用途に特に有利であるが、高濃度が必要とされないまたは望ましくない状況において、製剤がより低い濃度で使用できない理由はない。抗体のより低い濃度は、送達され得る容量が実質的に１ｍｌを超える低用量皮下投与、または他の投与方法（静脈内投与など）に有用となり得る。このようなより低い濃度には、６０、５０、４０、３０、２５、２０、１５、１０、５、２、１ｍｇ／ｍｌまたはこれ以下が含まれ得る。
【００５９】
治療薬の投与計画の選択は、該実体の血清または組織代謝回転速度、症状のレベル、該実体の免疫原性、および生物学的マトリックスにおける標的細胞の利用可能性を含む幾つかの要因に依存する。好ましくは投与計画は、副作用の許容されるレベルと一致した患者に送達される治療薬の量を最大化させる。したがって、送達される生物学的製剤の量は、特定の実体および治療されている状態の重症度に一部依存する。抗体、サイトカイン、および小分子の適切な用量を選択する際の手引きが利用可能である。例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ、Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ、ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｂａｅｒｔら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１〜６０８頁；Ｍｉｌｇｒｏｍら（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６〜１９７３頁；Ｓｌａｍｏｎら（２００１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３〜７９２頁；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３〜６１９頁；Ｇｈｏｓｈら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４〜３２頁；Ｌｉｐｓｋｙら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４〜１６０２頁；Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２００３（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  第５７版）、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７、第５７版（２００２年１１月）参照。
【００６０】
適切な用量の決定は、例えば治療に影響を与えることが当技術分野で知られているもしくは疑われる、または治療に影響を与えることが予測されるパラメーターまたは因子を用いて、医師によりなされる。タンパク質の適切な投与量（「治療的に有効な量」）は、例えば、治療される状態、状態の重症度および経過、タンパク質が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴およびタンパク質に対する応答、使用されるタンパク質の種類、ならびに担当医師の判断に依存するであろう。幾つかの状況において、低い初期用量が選択され、投与量はその後、任意の負の副作用と比べて所望のまたは最適な治療効果が得られるまで少しずつ増加される。重要な診断尺度には、例えば炎症症状、または産生される炎症性サイトカインのレベルの診断尺度が含まれる。タンパク質は１回でまたは繰り返し患者に適切に投与される。タンパク質は、単独でまたは他の薬物もしくは療法と併用して投与されてもよい。
【００６１】
抗体は、連続注入により、または例えば１日、週に１〜７回、１週間、２週間、月１回、２ヶ月に１回、年４回、半年に１回または年１回の間隔での投与により提供することができる。好ましい投与プロトコルは、重大な望ましくない副作用を回避する最大用量または投与頻度を含むものである。合計週用量は、一般に少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ、０．２μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ体重であり、またはこれを超える。例えば、Ｙａｎｇら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９；４２７〜４３４頁；Ｈｅｒｏｌｄら（２００２）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６；１６９２〜１６９８頁；Ｌｉｕら（１９９９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７；４５１〜４５６頁；Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉら（２０００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２；１３３〜１４４頁参照。
【００６２】
ＶＩＩ．使用
本発明は、例えば中枢神経系、末梢神経系、および胃腸管の炎症性障害および状態、ならびに自己免疫障害および増殖性障害の治療において使用するための抗ヒトＩＬ−２３ｐ１９ｍＡｂ  ｈｕｍ１３Ｂ−ｂの高濃度溶液製剤を提供する。
【００６３】
本発明の製剤は、例えば、多発性硬化症（ＭＳ）（再発寛解型ＭＳ、一次性進行型ＭＳを含む）、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ａ．ｋ．ａ．ＡＬＳ；ルーゲーリック病）、虚血性脳損傷、プリオン病、およびＨＩＶ関連認知症、ならびに神経因性疼痛、外傷後神経障害、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、末梢多発性神経障害ならびに神経再生の治療において使用することができる。
【００６４】
本発明の製剤はまた、腸障害、例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、および過敏性腸症候群の治療において使用することもできる。本発明の製剤は、移植片対宿主病、乾癬、アトピー性皮膚炎、関節炎（関節リウマチ、変形性関節症、および乾癬性関節炎を含む）などの炎症性障害、全身性エリテマトーデスおよびＩ型糖尿病などの自己免疫障害、ならびに癌などの増殖性障害の治療において使用することもできる。例えば、国際公開第０４／０８１１９０号、同第０４／０７１５１７号、同第００／５３６３１号、および同第０１／１８０５１号パンフレット参照、
［実施例］
［実施例１］
溶液製剤
１つの実施形態において、本発明のｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの溶液製剤は、プレフィルドシリンジまたは自動注射器において１．０ｍＬ容量中１００ｍｇ／ｍＬ抗体溶液として提供される。１．０ｍＬ容量は、充填容量ではなく、全１．０ｍＬ用量の送達を確保するのに十分な過充填を含み得る抽出可能な容量である。本発明の製剤１．０ｍｌの例示的な処方は、表２で提供されている。１つの実施形態において、製剤バッチは、１５〜３０Ｌスケール、または約１５，０００〜３０，０００用量で調製される。
【表２】
0006266012.tif 000003
【００６５】
幾つかの実施形態において緩衝液成分（Ｌ−ヒスチジンおよびＬ−ヒスチジンＨＣｌ）の量は、ｐＨを約６．０に調整する必要があるため、表２にリストされた重量からわずかに逸脱している。詳細には、幾つかの実施形態において、ｐＨを約６．０の所望の値に調整するために、表２における量と比較して、酸性型または塩基性型のヒスチジンのどちらかが多少添加される。さらなる実施形態において、６．０に近いが６．０よりやや高いｐＨを得るために、表２のものに近似するＬ−ヒスチジンおよびＬ−ヒスチジンＨＣｌの量が添加され、得られた製剤のｐＨを約６．０に低下させるためにＨＣｌが次いで添加される。
【００６６】
［実施例２］
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
Ｖａｌｅｒｉａｎ−Ｐｌｏｔｎｉｋｏｖ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）が、本発明の製剤における抗体の熱安定性をモニターするのに使用された。ＤＳＣは、温度の制御された増減中にタンパク質で生じる熱変化を直接測定する。溶液中のタンパク質は、天然の（折り畳まれた）コンフォメーションとその変性（アンフォールド）状態の間で平衡状態にある。ＤＳＣは、タンパク質の５０％が変性される温度（熱転移中間点、Ｔｍ）を決定するのに使用される。より高いＴｍを有するタンパク質は、一般的により安定である。例えば、ＤＳＣ曲線は図１Ｅで提供されている。図１Ｅは、２つの転移、すなわちｐＨに応じておよそ６４〜７０℃で生じる第１の（Ｔｍ１）、およびおよそ８０℃で生じる第２の主な転移（Ｔｍ２）を示す。主な転移は、Ｆｃ断片のアンフォールディングと見なすことができる。主な転移に先立つ（すなわちより低い温度での）熱事象は、抗体（例えばＦａｂ）内の幾つかの他のドメインのアンフォールディングに起因する可能性があり、これは文献に記載されたＩｇＧ１抗体の予期された構造要素と一致する。Ｖｅｒｍｅｅｒ（２０００）Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．７８：３９４。
【００６７】
［実施例３］
高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰ−ＳＥＣ）
本発明のｈｕｍ１３Ｂ８−ｂ製剤における高分子量（ＨＭＷ）種、低分子量種（ＬＭＷ）、および単量体のパーセンテージは、ＨＰ−ＳＥＣにより検出された。テスト溶液が希釈され、サイズ排除カラム（ＹＭＣパックＤｉｏｌ−２００、細孔径２００Å、３００×８．０ｍｍ、５μｍまたは等量；ＹＭＣ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．、京都、日本）を用いてＨＰＬＣにより分離された。ピーク面積は、単量体パーセンテージ、ＨＭＷ種およびＬＭＷ種パーセンテージを決定するのに使用される。
【００６８】
ＳＥＣからの溶出ピークは、多角度レーザー光散乱を用いて特徴付けられた（ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ）。これは分子量を推定し、凝集をモニターするのに使用することができる。ＳＥＣカラム上の断片および凝集物から単量体ピークを分離後、試料を紫外線（ＵＶ）、ＭＡＬＬＳおよび屈折率（ＲＩ）検出器に通し、分析物濃度の計算とそれに続く分子量（ＭＷ）の推定を可能にする。散乱光の強度（ＭＡＬＬＳにより検出）は、タンパク質濃度（ＲＩにより決定）と分子量の積に比例する。ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳは、約１３８ｋＤの分子量を有する優勢な主要ピークを示す。ＳＥＣのクロマトグラフィー分離および光散乱検出の確度を考慮すると、これは、ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの単量体の計算された理論的分子量、およびまた質量分析を用いて検出されたｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの単量体の質量とかなりよく一致する。約３００ｋＤａの分子量を有する高分子量種（ＨＭＷ１）は、二量体種である可能性がある。全てのバッチで観察されない第２のＨＭＷピーク（ＨＭＷ２）は、三量体種に相当する約４６５ｋＤａの推定分子量を有する種を含有する。低分子量種（ＬＭＷ）は、１０８〜１１７ｋＤａのおよその分子量で検出され、断片化産物、例えばヒンジ断片化の産物である可能性がある。
【００６９】
［実施例４］
動的光散乱（ＤＬＳ）
動的光散乱（ＤＬＳ）は、溶液中０．５ｎｍから６μｍの範囲のモノクローナル抗体のサイズ分布プロファイルについて洞察を与えることができる手法である。モノクローナル抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂは、強度約９．５ｎｍ（および体積６．５ｎｍ）の平均流体力学的直径を示す。これは、他のモノクローナル抗体の値と一致する。より高いイオン強度製剤は、低イオン強度製剤より低い流体力学的直径を有する傾向があり、緩衝液およびｐＨなどの他の溶液パラメーターに影響され得る。図１Ｉおよび１Ｊ参照。本発明の製剤における抗体は、本質的に単分散性である。本発明の抗体の流体力学的直径は、抗体がより高いまたはより低いイオン強度の緩衝液に希釈される実験により証明されているように、可逆性である（データ不図示）。これらの結果は、被験者に投与される場合、流体力学的直径が注射部位の局所環境と平衡化されることを示唆している。
【００７０】
［実施例５］
高性能陽イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰ−ＩＥＸ）
ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの電荷バリアントは、試料中のタンパク質と樹脂に固定化された電荷の間の静電相互作用に依存するＨＰ−ＩＥＸにより検出された。正電荷ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂバリアントは、弱陽イオン交換カラム（Ｄｉｏｎｅｘ  ＰｒｏＰａｃ  ＷＣＸ−１０、４×２５０ｍｍまたは等量；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、バノックバーン、Ｉｌｌ．、ＵＳＡ）上の負電荷樹脂に結合され、ＨＰＬＣにより分離される。抗体は、ｐＨおよび塩濃度を高めること、該抗体バリアントの電荷を効果的に減少させること、およびそれを等価電荷のイオンと置換することにより溶出される。溶離液中のｈｕｍ１３Ｂ８−ｂおよびバリアントの存在は、ＵＶ検出により決定される。ピーク面積は、酸性バリアント、主要ピーク、主要ピーク後ピークおよび塩基性バリアントを決定するのに使用される。
【００７１】
２３分頃に溶出する主要ピーク前に検出された全ての種は、酸性バリアントと呼ばれるが、主要ピーク後ピークに溶出するものは塩基性バリアントと呼ばれる。酸性バリアントおよび酸性ピークの分析は、それらがＮまたはＣ末端修飾を有さないのに対し、主要ピークは、Ｃ末端の完全なリジン切断およびＮ末端の完全なピログルタミン酸形成を示すことを明らかにしている。主要ピークは、完全な生物学的活性を保持する。主要ピーク後ピークは、Ｃ末端の完全なリジン切断および限定されたプロリンαアミド化、Ｎ末端の完全なピログルタミン酸形成、Ｍｅｔ２５１およびＭｅｔ４２７の酸化を示し、ならびに結合ＥＬＩＳＡにより測定された力価の低下を示す。塩基性ピーク１は、Ｃ末端の完全なリジン切断および幾つかのプロリンαアミド化、ならびにＮ末端の完全なピログルタミン酸形成を示す。塩基性ピークが最も豊富な塩基性ピーク３は、Ｃ末端の完全なリジン切断およびＮ末端の不完全なピログルタミン酸形成を示す。塩基性バリアントは、Ｃ末端の完全なリジン切断および可変レベルのプロリンαアミド化、ならびにＮ末端の不完全から完全なピログルタミン酸形成を示す。電荷バリアントの大部分は生物学的活性を保持する。
【００７２】
［実施例６］
ペプチドマッピング
ペプチドマッピングは、ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの一次構造に関する情報を提供し、酸化が起きているかどうかを評価するのに使用することができる。配列包括度を高めるために、２つの異なる酵素的ペプチドマップを用いてｈｕｍ１３Ｂ８−ｂを特徴付けした。最初は、エンドプロテイナーゼＬｙｓ−Ｃ消化後のペプチドマッピングであった。ペプチドマップは、タンパク質を変性させる塩酸グアニジン、およびジスルフィド結合を還元する１，４−ジチオスレイトール（ＤＴＴ）でｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの試料を処理して得た。試料を次いでヨードアセトアミド（ＩＡＭ）で処理して、ＤＴＴ処理から生じた遊離チオールをアルキル化した。試料を次いでエンドプロテイナーゼＬｙｓ−Ｃで消化した。得られたペプチドの分析は、エレクトロスプレー質量分析に連結された逆相液体クロマトグラフィー（Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８、５μｍ、細孔径１３０Å、２．１×１５０ｍｍまたは等量；Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ミルフォード、マサチューセッツ、ＵＳＡ）を用いて行った。軽鎖（Ｌ）および重鎖（Ｈ）に由来するペプチド配列、ならびに質量分析を用いて検出されたその質量は、表３に示されている。保持時間は、９０分にわたるクロマトグラフィー中に２１４ｎｍの紫外線吸収により決定した。質量は、ＩＡＭアルキル化システイン残基当たり５７Ｄａの正味質量を添加して、システイン残基のアルキル化について補正した。ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する５個のペプチドは特に興味深い。ピログルタミン酸化Ｎ末端重鎖ペプチド、リジン切断Ｃ末端重鎖ペプチド、ならびに幾つかのメチオニン酸化および脱アミド化ペプチドなどの一般的な翻訳後修飾ペプチドも、同様に観察された。これらの修飾は、該分子のＣＤＲでは見出されない。日常的なペプチドマッピング実験は、質量分析を用いることなく行うことができ、観察されたピークの保持時間は、安定性（テスト）試料および対照（参照）試料などの試料を比較するのに使用することができる。
【００７３】
トリプシン消化を使用する第２のペプチドマッピング方法は、Ｌｙｓ−Ｃペプチドマップで十分に示されなかった重鎖の残基６４〜１２０に対する包括度を加えるために開発された。エンドプロテイナーゼＣと共有されるリジン残基の切断部位Ｃ末端に加えて、トリプシンはアルギニン残基のＣ末端も切断し（次の残基がＰでなければ）、一連のより小さなペプチドをもたらす。重鎖の残基６４〜１２０から生じるペプチドは、ＵＶ吸収検出および質量分析（ピークアノテーションのため）に連結された逆相液体クロマトグラフィーを用いて検出された。ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの関連トリプシンペプチド断片は表３に含まれている。
【表３】
0006266012.tif 000004
0006266012.tif 000005
【００７４】
［実施例７］
ＵＶ分光法によるタンパク質濃度
本発明の溶液製剤における抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂのタンパク質濃度は、ＵＶ分光法により決定される。決定は、トリプトファン、チロシンおよびシステイン残基のようなアミノ酸による２８０ｎｍのＵＶ光の吸収に基づく。２８０ｎｍの吸収は、３２０ｎｍの吸収を用いる光散乱について補正される。該方法は、水への試料の重量測定希釈（ｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ）、ならびに２８０ｎｍの吸収および３２０ｎｍの吸収を確立するためのＵＶスペクトルの記録を含む。これらの吸収値および１．４４ｍＬ  ｍｇ−１ｃｍ−１の実験的に決定された吸光係数は、ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂ濃度を計算するのに使用される。
【００７５】
［実施例８］
生物学的活性−細胞ベースの機能アッセイ
本発明の製剤におけるｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの、ヒトＩＬ−２３の生物学的活性をブロックする能力を評価するために、機能的細胞ベースのアッセイが開発された。このアッセイは、ＩＬ−２３応答性細胞系（キット２２５）においてＩＬ−２３誘導ＳＴＡＴ３活性化を阻害するｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの能力を評価する。ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂ基準材料およびテスト試料の連続希釈は、一定濃度のｈｕｍＩＬ−２３とインキュベートされ、その後キット２２５  ＩＬ−２３応答性細胞とインキュベートされる。ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂによるＳＴＡＴ３リン酸化の阻害は、ＳＴＡＴ３捕捉抗体および抗ｐ−ＳＴＡＴ３検出抗体ペアを用いたＥＬＩＳＡと、その後のペルオキシダーゼコンジュゲート抗ＩｇＧとのインキュベーションおよび化学発光基質の添加により、細胞溶解物において測定される。阻害応答曲線（「標準曲線」）は、ＩＣ５０値が最大応答の５０％を阻害する抗ＩＬ−２３の濃度を表す、非線形回帰４パラメーターロジスティックフィットを用いて生成される。テスト試料の相対力価は、標準曲線に対するテスト試料の阻害応答曲線の比較により評価され、基準のパーセントとして計算される。同じ試料の複数の複製物の相対力価値が、単一の報告可能な値−相対力価の幾何平均にまとめられる。
【００７６】
［実施例９］
生物学的活性−結合ＥＬＩＳＡ
本発明の製剤におけるｈｕｍ１３Ｂ８−ｂのヒトＩＬ−２３に対する親和性は、基準材料およびテスト試料の連続希釈が、ヒトＩＬ−２３サイトカインで被覆されたアッセイプレートに適用される平衡結合ＥＬＩＳＡにおいて評価される。このアッセイは例えば、様々な可能性のある治療製剤における生物学的活性の保持を評価するのに使用されてもよい。テスト試料の相対力価は、基準材料の用量応答曲線に対するテスト試料の用量応答曲線の比較により評価され、基準のパーセントとして計算される。
【００７７】
ＥＬＩＳＡは、当技術分野でよく知られた方法により行われる。簡単には、本発明の製剤におけるｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの連続希釈物が、ヒトＩＬ−２３タンパク質で以前に被覆されているマイクロタイタープレートのウェルに添加され、次いでブロックされる。インキュベーション期間後、ウェルは洗浄され、ペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）検出抗体試薬が添加される。ウェルは再び洗浄され、化学発光ペルオキシダーゼ基質が添加される。シグナルが化学発光により読み取られる。ＥＣ５０値が、最大ＩＬ−２３結合シグナルの５０％を得るのに必要とされる濃度を表す非線形回帰４パラメーターロジスティックフィットを用いて、シグモイド用量応答曲線が生成される。相対生物学的力価は、テスト試料で得られた結果を、参照試料で得られたシグナルレベルに基づく標準曲線と比較して計算される。結果は、参照抗体溶液と比較した生物学的力価パーセントとして示される。同じ試料の複数の複製物の相対力価値が、単一の報告可能な値−相対力価の幾何平均にまとめられる。
【００７８】
［実施例１０］
ＳＤＳキャピラリー電気泳動（ＣＥ−ＳＤＳ）
ドデシル硫酸ナトリウムを用いるキャピラリー電気泳動（ＣＥ−ＳＤＳ）は、サイズに基づきタンパク質を分離する。ＣＥ−ＳＤＳは、非還元条件下または還元条件下で行うことができる。還元ＣＥ−ＳＤＳは、分離された重鎖と軽鎖を互いから分解するのに対し、非還元ＣＥ−ＳＤＳは、試料中の他の種由来、およびまた試料中の他の可能性のある種由来のインタクトな抗体を分解する。例えば、Ｒｕｓｔａｎｄｉら（２００８）Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  ２９：３６１２頁参照。
【００７９】
非還元ＣＥ−ＳＤＳは、遊離システイン残基をアルキル化するためのＮ−エチルマレイミド、およびＳＤＳの存在下、抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの試料の熱変性を伴う。その後、試料は、分離にふるい分け選択性（ｓｉｅｖｉｎｇ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ）を提供する置換可能なＳＤＳポリマーマトリックスを含有するキャピラリー中で分離される。テスト試料における全てのピークが積分され、ピーク面積が、試料中の主要ＩｇＧ（インタクトな抗体）パーセンテージを決定するのに使用される。
【００８０】
還元ＣＥ−ＳＤＳは、ジスルフィド結合を還元するための２−メルカプトエタノール、およびＳＤＳの存在下、抗体ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂの試料の熱変性を伴う。その後、試料は、分離にふるい分け選択性を提供する置換可能なＳＤＳポリマーマトリックスを含有するキャピラリー中で分離される。テスト試料における全てのピークが積分され、ピーク面積が、ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂにおけるインタクトな重鎖および軽鎖パーセンテージを決定するのに使用される。
【００８１】
［実施例１１］
沈降速度分析的超遠心分離（ＳＶ−ＡＵＣ）
ＳＶ−ＡＵＣは、本発明の製剤におけるｈｕｍ１３Ｂ８−ｂ抗体の四次構造を調べるのに使用された。ＳＶ−ＡＵＣは、遠心力に応答して分子が沈降する速度を測定する。この沈降速度は、試料中に存在する分子の分子量に関する情報を提供する。ｈｕｍ１３Ｂ８−ｂはほとんどが、７．０Ｓの沈降係数（Ｓ２０，Ｗ）を有する１つの種として沈降する。この種は、約１５０ｋＤａの推定分子量を有し、該単量体の予期された分子量と一致する。巨大分子の水和および形状に依存する摩擦比は、ロット間で類似する。
【００８２】
［実施例１２］
抗体製剤の安定性の延長
さらなる長期安定性データが、本発明の抗体製剤に関して得られた。最大２４ヶ月の例示的安定性データが、ロットＥおよびＤに関する以下の表４〜９に示されている。
【表４】
0006266012.tif 000006
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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【表８】
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【表９】
0006266012.tif 000014
0006266012.tif 000015
【００８３】
表１０は配列表中の配列をリストする。
【表１０】
0006266012.tif 000016
【図１Ａ】
0006266012.tif 000017
【図１Ｂ】
0006266012.tif 000018
【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
0006266012.tif 000020
【図１Ｅ】
0006266012.tif 000021
【図１Ｆ】
0006266012.tif 000022
【図１Ｇ】
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【図１Ｈ】
0006266012.tif 000024
【図１Ｉ】
0006266012.tif 000025
【図１Ｊ】
0006266012.tif 000026
【図１Ｋ】
0006266012.tif 000027
【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図４Ｇ】
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【図４Ｈ】
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【図４Ｉ】
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【図４Ｊ】
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【図４Ｋ】
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【図４Ｌ】
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【図４Ｍ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
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【図５Ｈ】
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【図５Ｉ】
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【図５Ｊ】
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【図５Ｋ】
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【図５Ｌ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図６Ｇ】
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【図６Ｈ】
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【図６Ｉ】
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【図６Ｊ】
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【図６Ｋ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図７Ｇ】
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【図７Ｈ】
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【図７Ｉ】
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【図７Ｊ】
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【図７Ｋ】
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【図７Ｌ】
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【配列表】
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