(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）の治療有効量を含む、治療が必要な対象における中枢神経系（ＣＮＳ）障害の治療のための薬学的組成物であって、
前記プールヒトＩｇＧは対象の脳へ送達され、
前記脳への前記プールヒトＩｇＧの送達が、前記対象の鼻上皮へ直接、前記プールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む、前記組成物。
【請求項２】
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも４０％が、前記対象の前記鼻上皮に接触する、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも５０％が、前記対象の前記鼻上皮に接触する、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも６０％が、前記対象の前記鼻上皮に接触する、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記鼻上皮が、前記対象の嗅上皮である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記鼻上皮が、前記対象の、三叉神経終末に関連する鼻上皮である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記脳への前記プールヒトＩｇＧの送達が、前記対象の鼻腔上側３分の１に前記プールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも４０％が、前記対象の前記鼻腔上側３分の１に接触する、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも５０％が、前記対象の前記鼻腔上側３分の１に接触する、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも６０％が、前記対象の前記鼻腔上側３分の１に接触する、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記ＣＮＳ障害が、中枢神経系の神経変性障害、中枢神経系を主に冒す全身萎縮、錐体外路及び運動障害、中枢神経系の脱髄障害、中枢神経系の突発性または発作性障害、中枢神経系の麻痺症候群、中枢神経系の神経、神経根または神経叢の障害、器質性精神障害、精神活性物質の使用に起因する精神または行動障害、統合失調症性、統合失調型または妄想性障害、気分（感情）障害、神経症性、ストレス関連性または身体表現性障害、行動症候群、成人の人格または行動障害、心理発達障害、及び、幼児発病の行動障害または情動障害から選択される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記中枢神経系の前記神経変性障害が、アルツハイマー病である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記中枢神経系の前記神経変性障害が、パーキンソン病である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記中枢神経系の前記脱髄障害が、多発性硬化症である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記幼児発病の行動または情動障害が、溶連菌感染症関連小児自己免疫性精神神経疾患（ＰＡＮＤＡＳ）である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
前記幼児発病の行動または情動障害が、小児急性発症神経精神症候群（ＰＡＮＳ）である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記プールヒトＩｇＧの鼻腔内投与が、前記鼻上皮へ直接、前記プールヒトＩｇＧの液滴を投与することを含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
グリシン、ヒスチジンおよびプロリンからなる群より選択されるアミノ酸をさらに含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
（ａ）１０ｍｇ／ｍｌから２５０ｍｇ／ｍｌのプールヒトＩｇＧ、及び
（ｂ）５０ｍＭから５００ｍＭのグリシンを含み、
ｐＨが、４．０から７．５である
水性組成物である、請求項１から１８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
（ａ）１０ｍｇ／ｍｌから２５０ｍｇ／ｍｌのプールヒトＩｇＧ、及び
（ｂ）５０ｍＭから５００ｍＭのグリシンを含み、
ｐＨが、４．０から７．５である
水性組成物から調製される乾燥粉末組成物である、請求項１から１８のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
前記対象の体重１ｋｇあたり０．０８ｍｇから１００ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）が、前記対象へ鼻腔内投与される、請求項１から２０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
５０ｍｇから１０ｇの一定用量のプールヒトＩｇＧが前記対象へ鼻腔内投与される、請求項１から２０のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
少なくとも月２回、前記対象へプールヒトＩｇＧの一用量が鼻腔内投与される、請求項１から２２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
発明の背景
中枢神経系（ＣＮＳ）は、神経系のための処理センターである。ＣＮＳ障害は、脳、脊髄及び神経終末に悪影響を及ぼし、神経障害及び／または精神障害に至ることがある。ＣＮＳ障害は、遺伝、心的外傷、感染、自己免疫異常、構造的欠陥、腫瘍及び脳卒中によって引き起こされることがある。ある特定のＣＮＳ障害は、神経変性疾患として特徴づけられ、それの多くは、継承した遺伝病である。神経変性疾患の例は、ハンチントン舞踏病、ＡＬＳ、遺伝性痙性片麻痺、原発性側索硬化症、脊髄性筋萎縮、ケネディ病、アルツハイマー病、ポリグルタミンリピート病またはパーキンソン病を含む。ＣＮＳ障害、例えばパーキンソン病、ハンチントン舞踏病、及びアルツハイマー病などの脳の遺伝病の治療は、未解決の問題である。
【０００２】
アルツハイマー病は、記憶能力及び重大な思考能力を含む認知機能の段階的な消失を引き起こす、加齢性認知症の一般的な形態である。アルツハイマー病は、進行性記憶喪失及び認知能力の低下を発見することによって、臨床的に診断される。しかし、アルツハイマー病は、死後にのみ確証できる。
【０００３】
アルツハイマー病は、一つには医療の向上により高齢者が増加した先進国で、より一般的になっている。６０歳未満の人口では１％未満がアルツハイマー病を患うが、２５％から３３％の人が、８５歳までにアルツハイマー病の何らかの症状を示すようになると推測される。２０１２年の時点では、５４０万人のアメリカ人が、アルツハイマー病と診断された。世界中で寿命の延びが続くと、アルツハイマー病や他の加齢性認知症の有病率は、同様に増加し続けるに違いない。
【０００４】
アルツハイマー病は、典型的に、罹患者が３０から６０歳で現れるケースに言及する「早発性」、及び、６０歳後に初めて症状が現れる、より一般的な「遅発性」のいずれかに分類される。すべてのアルツハイマー病のケースの約１０％のみが家族性であるが、早発性アルツハイマー病は、アミロイド前駆体タンパク質（ａｐｐ）、プレセニリン１（ｐｓｅｎ１）及びプレセニリン２（ｐｓｅｎ２）遺伝子における変異とリンクしているのに対し、遅発性アルツハイマー病は、アポリポタンパク質Ｅ（ａｐｏＥ）遺伝子における変異とリンクしている（Ｅｒｔｅｋｉｎ−ＴａｎｅｒＮ．，Ｎｅｕｒｏｌ  Ｃｌｉｎ．，２５：６１１−６６７（２００７））。
【０００５】
組織病理学的に、この神経変性疾患は、大脳皮質内におけるアミロイドプラーク、神経原線維濃縮体、アミロイド血管症、及び顆粒空砲変性の形成によって特徴づけられる（Ｍｉｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｐａｔｈｏｌ  Ｌａｂ  Ｍｅｄ．，１１７：１３２−１４４（１９９３）；Ｐｅｒｌ ＤＰ，Ｎｅｕｒｏｌ  Ｃｌｉｎ．，１８：８４７−８６４（２０００））。アルツハイマー病の検死に特徴的なアミロイドプラークは、主に、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）から生じた小さなアミロイドβ（Ａβ）ペプチドの付着によって形成される。
【０００６】
現在まで、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）は、アルツハイマー病の治療のために、次の二つのタイプの薬物を承認している：ドネペジル（例えば、ＡＲＩＣＥＰＴ（登録商標））リバスチグミン（例えば、ＥＸＥＬＯＮ（登録商標））、ガランタミン（例えば、ＲＡＺＡＤＹＮＥ（登録商標））、及びタクリン（例えば、ＣＯＧＮＥＸ（登録商標））を含むコリンエステラーゼ阻害剤、及び、（多数の異なるブランド名で市販されている）ＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体阻害剤メマンチン。アルツハイマー病の治癒は確認されていないが、これらの治療法は、加齢性認知症（例えばアルツハイマー病）と診断された対象における記憶喪失、混乱、及び重大な思考能力の喪失などの認知症状を緩和するのに役立つ。２０１２年におけるアルツハイマー病及び関連加齢性認知症に対する保健出費が、合衆国単独で、合計２０００億ドルであると見積もられている（Ｆａｃｔｓｈｅｅｔ，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ'ｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｍａｒ ２０１２）。
【０００７】
これらの承認治療法に加えて、いくつかの研究は、プールされた静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）が、アルツハイマー病患者の症状の進行を遅らせるのに有効であることを示唆している（Ｄｏｄｅｌ  ＲＣ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，Ｏｃｔ；７５（１０）：１４７２−４（２００４）；Ｍａｇｇａ  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，Ｄｅｃ７；７：９０（１９９７）；Ｒｅｌｋｉｎ  ＮＲ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ，３０（１１）：１７２８−３６（２００８）；Ｐｕｌｉ  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｍａｙ ２９；９：１０５（２０１２））。
【０００８】
ヒト血漿からの免疫グロブリン生成物は、免疫不全の治療に、１９５２年に初めて使用された。最初は、血漿から単離させた免疫グロブリンアイソタイプＧ（ＩｇＧ）の筋肉内または皮下投与が、好まれた方法であった。しかし、後に、種々の病気に対する有効治療に必要な、ＩｇＧのより大量な投与を可能にするために、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）と呼ばれる静脈内投与可能なＩｇＧ生成物が開発された。通常、ＩＶＩＧは、複数の提供者、例えば、１００人または１０００人超の血液提供者の血漿からプールされた免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）免疫グロブリンを含む。これらの精製ＩｇＧ生成物は、主に、病状の三つの主要なカテゴリーにおける治療の際に使用される。（１）免疫不全。これは、低抗体レベルを特徴とする、Ｘ連鎖無γグロブリン血症、低γグロブリン血症（原発性免疫不全）及び後天性免疫不全状態（続発性免疫不全）。（２）炎症性疾患及び自己免疫疾患。（３）急性感染症。
【０００９】
具体的には、原発性免疫不全症のある多くの人々は、感染に耐えるために必要な抗体を欠いている。ある特定のケースでは、これらの欠損は、精製ＩｇＧの注入によって、一般に静脈内投与（すなわち、ＩＶＩＧ療法）によって補うことができる。その様式で、Ｘ連鎖無γグロブリン血症（ＸＬＡ）、分類不能型免疫不全症（ＣＶＩＤ）、高ＩｇＭ症候群（ＨＩＭ）、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、及び、いくつかのＩｇＧサブクラス欠損症を含む複数の原発性免疫不全症は、一般に治療される（Ｂｌａｅｓｅ  ａｎｄ  Ｗｉｎｋｅｌｓｔｅｉｎ，Ｊ．Ｐａｔｉｅｎｔ&Ｆａｍｉｌｙ  Ｈａｎｄ  ｂｏｏｋ  ｆｏｒ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｔｏｗｓｏｎ，ＭＤ：Ｉｍｍｕｎｅ  Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ；２００７）。
【００１０】
ＩｇＧ治療は、原発性免疫不全症を管理するのに非常に有効であり得るが、この療法は、疾患に対する治癒と言うよりもむしろ、単に、体内で生成されない抗体の一時的な補充である。したがって、患者は、ＩｇＧ療法の、典型的に１ヵ月につき約１回の繰返し投与に、一生依存することになる。この療法は、ＩｇＧ組成物の途切れることのない生産を大いに必要とする。しかし、組換えＤＮＡベクターのインビトロでの発現を通して生成される他の生物学的製剤とは異なり、ＩｇＧは、ヒト血液及び血漿の献血から分画されるものである。したがって、市販ＩｇＧのレベルは、血液及び血漿の献血による利用可能な供給量によって制限される。
【００１１】
ＩｇＧに対する需要の上昇には、ＩｇＧ治療の承認、ＩｇＧ療法が有効な、追加の適応症の特定、及び患者の診断とＩｇＧ処方の増加を含む複数の要因がある。特に、ＩｇＧの世界的な需要は、１９９０から２００９年に４倍超増加し、年率約７％から１０％増加し続けている（Ｒｏｂｅｒｔ  Ｐ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｏｌｉｃｙ  ａｎｄ  Ｌａｗ，１１（２００９）３５９−３６７）。例えば、オーストラリア国立血液機関は、オーストラリアにおけるＩｇＧの需要が、２０１０−２０１１会計年度に１１．１％成長したことを報告した（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ  Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ２０１０−２０１１）。
【００１２】
２００７年に、２，６５０万リットルの血漿が分画され、１リットルあたり２．８グラムの平均生成収率で、７５．２メートルトンのＩｇＧが生成されたことを報告している（上記Ｒｏｂｅｒｔ  Ｐ．）。この同じ報告では、２０１２年までに、世界的なＩｇＧ収率が、１リットルあたり約３．４３グラムまで向上することが期待できる、と推定している。しかし、今から２０１５年まで年率約７％から１４％と予測される、ＩｇＧの世界的な需要の連続的な増加があるため、世界的需要を満たすためには、ＩｇＧ収率の全体的な更なる改良が必要である。次の１０年間に渡るプールヒト免疫グロブリン（例えば、ＩＶＩＧ）の需要の増加を引き起こす可能性のある要因の一つが、アルツハイマー病の治療にＩｇＧが承認されるかどうかということである。これらの治療が主要な監督機関の承認を得るならば、ＩＶＩＧの需要が、追加で５％上昇すると推測されている（上記Ｒｏｂｅｒｔ  Ｐ．）。
【００１３】
免疫グロブリン生成物の利用可能な供給に対する世界的な需要の増加及び変動に一部起因して、オーストラリア及びイギリスを含む数カ国は、生成物不足の期間中、これらの生成物の供給を最も必要性の高い患者のために保護するよう需要管理計画を実施している。したがって、プール免疫グロブリンの需要の増加が世界的な製造生産高の増加を追い越し始めるとき、種々の適応症を治療するのに必要なプール免疫グロブリンＧの量を減少させる方法の開発は重要である。
【００１４】
プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）は、特定のメーカーにより、異なるプロセスによって製造されている。しかし、ほとんどの製造プロセスの由来は、Ｃｏｈｎ  ｅｔ  ａｌ．により血清及び血漿タンパク質の調製及び性質に関して発行された一連の重要文献の第四回目に記載されているものである（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９４６，６８（３）：４５９−４７５）。この文献は、血漿タンパク質のアルコール分画方法（方法６）を最初に説明したもので、ヒト血漿から、ＩｇＧの豊富な画分を単離させることを可能とする。
【００１５】
Ｃｏｈｎ手順は、最初に、アルコールでの分別沈澱によって比較的高い（９５％）純度でアルブミンを取得するために開発された。しかし、Ｏｎｃｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９４９，７１（２）：５４１−５５０）、Ｄｅｕｔｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９４６，１６４，１０９−１１８）、及びＫｉｓｔｌｅｒ  ａｎｄ  Ｎｉｔｓｃｈｍａｎｎ（ＶｏｘＳａｎｇ．，１９６２，７，４１４−４２４）によって、Ｃｏｈｎ法からの特定のタンパク質沈殿物（画分ＩＩ及び画分ＩＩ＋ＩＩＩ）が、高濃縮免疫グロブリン組成物の精製のための出発材料として使用できることが認識された。ＩｇＧ組成物の静脈内投与に必要な、より高い純度及び安全性を達成するために、複数の精製ステップ及び仕上げステップ（例えば、概して吸着またはすべての異なるクロマトグラフィーの技術、クロスフロー濾過など）が、アルコール分画ステップの後のＩｇＧ製造プロセスに加えられている。
【００１６】
現在のＩｇＧ製品は、典型的に、下流の処理のための出発材料として、Ｃｏｈｎ法６の画分ＩＩ＋ＩＩＩまたはＫｉｓｔｌｅｒ−Ｎｉｔｓｃｈｍａｎｎ沈殿物Ａに依存している。両画分は、２ステッププロセスによって形成され、このプロセスでは、フィブリノゲン及び第ＸＩＩＩ因子などのタンパク質が、低エタノール濃度（８〜１０％ｖ／ｖ）の高ｐＨ（７．２）で実行される最初の沈降ステップ（画分Ｉ沈降）によって除去され、その後、第二の沈降ステップにおいて、ＩｇＧは、画分Ｉ上澄みから、２０〜２５％（ｖ／ｖ）エタノールのｐＨ６．８で（画分ＩＩ＋ＩＩＩ）、または１９％（ｖ／ｖ）エタノールのｐＨ５．８５で（沈殿物Ａ）沈降されるが、アルブミン及びＡ１ＰＩの大部分は上澄み中に留まる。
【００１７】
これらの方法は、血漿由来の血液タンパク質を扱う全産業の基盤をなしているが、重篤な副作用の過度の発生なしに、川崎病、免疫性血小板減少性紫斑病及び原発性免疫不全症を含む複数の免疫関連疾患の慢性的治療に対して十分な高純度を持つＩｇＧ製剤を提供することは不可能であった。よって、例えばイオン交換クロマトグラフィー等の、種々の技術を用いる追加の方法が、より高純度のＩｇＧ調合物を提供するために開発された。Ｈｏｐｐｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｕｎｃｈ  Ｍｅｄ  Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ  １９６７（３４）：１７４９−１７５２）、Ｆａｌｋｓｖｅｄｅｎ（スウェーデン特許第３４８９４２号）、Ｆａｌｋｓｖｅｄｅｎ及びＬｕｎｄｂｌａｄ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｐｌａｓｍａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ  １９８０）は、この目的のためにイオン交換クロマトグラフィーを使用した最初の人たちである。
【００１８】
静脈内（ＩＶ）注入によってＩｇＧを投与することは、一般的である（Ｉｍｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  １（８２３２）：１２２８−３１（１９８１））。静脈内ＩｇＧ（ＩＶＩＧ）は、単独で、または他の組成物と組み合わせて投与してもよい。ＩＶＩＧは、２から７日間にわたって１日に１回、２から５時間かけて投与され、その後、１０から２１日毎に、または３から４週毎に投与されることが多い。そのような投与レジメンは、時間がかかり、多くの患者にとって不都合なものである。注入中、静かに座っていることの困難なアルツハイマー病患者のケースでは、患者を注入センターへ連れてくるのに、または注入を監督するのに介護者に頼らなければならず、この不都合は、さらに悪化することがある。
【００１９】
全身性ＩＶＩＧ投与は、有害な副作用を引き起こす可能性がある。ＩＶＩＧは、例えば、背中の痛み、頭痛、片頭痛、関節痛または筋肉痛、一般的な不快感、脚のこむら返り、発疹、注入部位の疼痛、蕁麻疹、めまい、異常な疲労またはけん怠または脱力感、寒気、熱、発汗、心拍数の上昇、血圧上昇、咳、顔の発赤、胃の不調、上部腹痛、及び嘔吐を引き起こすこともある。観察されているＩＶＩＧ投与後即時の副作用は、頭痛、潮紅、不調、胸部緊張、熱、寒気、筋痛、疲労、呼吸困難、背痛、吐き気、嘔吐、下痢、血圧変化、心頻拍及びアナフィラキシー反応を含む。Ｏｒｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｒｅｖ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２９（３）：１７３−８４（２００５）。
【００２０】
さらに、有害な副作用は、ＩＶＩＧメーカーによって異なることもある。ほとんどのメーカーの製剤は、再構成のための安定剤及び液体との組み合わせで、９０％から９９％の精製ＩｇＧを含む。Ｏｒａｎｇｅ  ｅｔ  ａｌ．２００６（Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７（４Ｓｕｐｐｌ．）：Ｓ５２５）；Ｖｏ  ｅｔ  ａｌ．２００６（Ｃｌｉｎ．Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１（４）：８４４）；Ｓｔｉｅｈｍ  ｅｔ  ａｌ．２００６（Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１４８（１）：６）。例えば、いくつかのメーカーは安定剤としてマルトースを使用するが、他のメーカーはショ糖またはアミノ酸を使用する。
【００２１】
異なる量のＩｇＡと、ＩＶＩＧ生成に使用される化学薬品の追加と共に、ＩＶＩＧ内のナトリウム及び糖含有量は、患者におけるＩＶＩＧブランドの許容度及び効能に影響を及ぼす可能性がある。具体的には、高齢患者は、ＩＶＩＧの有害な副作用のリスクを増大させる共存症で苦しむことが多い。例えば、腎臓障害、血管障害または糖尿病を患う対象は、ＩＶＩＧ投与後、腎不全及び血栓性事象のリスクも高くなる。その理由は、ＩＶＩＧ組成物が一般に高粘性であり、高濃度の糖及び塩を含むためである。
【００２２】
ＩＶＩＧには、また、カテーテルに関わる感染、すなわち、カテーテルまたは針が、対象の静脈または皮膚に刺さることによる感染のリスクがある。カテーテルに関わる感染の例としては、カテーテル部位の圧痛、発熱、炎症、排液、発赤、腫れ及び疼痛がある。したがって、時間、便宜及び有害な副作用の観点から、代替的投与様式は有益であろう。
【００２３】
ＩＶＩＧの全身投与の有害な副作用に加えて、血液脳関門を横切るＩＶＩＧの浸透は、予測できないことが示されている。このため、脳室内または髄腔内ＩｇＧが必要となる可能性がある。例えば、Ｈａｌｅｙらは、西ナイルウイルス脳炎が引き起こす髄膜炎の治療にＩＶＩＧを投与した。Ｈａｌｅｙらは、ＩＶＩＧの浸透が予測不可能であることを発見し、髄腔内または脳室内投与が必要であると仮定した。Ｈａｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．２００３（Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓｅａｓｅｓ３７：ｅ８８−９０）。
【００２４】
血液脳関門（ＢＢＢ）の理由で、ＣＮＳをＩＶ投与治療組成物で標的とすることは困難である。ＢＢＢは、有効なバリヤを提供し、末梢循環内へ静脈内投与された治療組成物のＣＮＳへのアクセスを阻止及び／または制限する。具体的には、ＢＢＢは、循環する血液から脳への、大部分の治療組成物、特に極性組成物の拡散を阻止する。
【００２５】
ＢＢＢを通る分子の流路を増大させるための、少なくとも三つの方法が開発されている。第一に、脂溶性薬剤や脂質膜包含極性薬剤などの親油性化合物が開発されている。分子量６００Ｄａ未満の親油性化合物は、ＢＢＢを通って拡散可能である。第二に、治療化合物は、可飽和トランスポーター系を通してＢＢＢを横切ることが可能なトランスポーター分子に結合できる。可飽和トランスポーター分子の例は、トランスフェリン、インシュリン、ＩＧＦ−１及びレプチンである。第三に、治療化合物は、ＢＢＢの、負電荷を持つ内皮表面に選択的に結合する正電荷を持つタンパク質などの、ポリカチオン性分子に治療化合物を結合させることによって、ＢＢＢを横切ることが可能である。Ｐａｔｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．２００３（Ｍｏｌ．Ｉｎｔｅｒｖ．３（２）：９０−１０５）；Ｐａｔｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．２００２（Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  １：１３１−１３９）。しかし、ＣＮＳへのアクセスを得るようＢＢＢを通る治療薬の送達を増大させるための、上記アプローチの各々には限界がある。そのような限界の一つは、上記アプローチが、例えば、血流への直接または間接的投与などの、全身性送達システムに依存することである。この場合は、体内の他の部分への、治療薬の非特定送達になり、有害な副作用の可能性を増大させることになる。
【００２６】
治療薬の鼻腔内投与は、ＢＢＢを回避し、送達のための局所的非侵襲法であるため、脳への治療薬送達方法として、ますます探究されるようになって来ている。さらに、鼻腔内投与は、従来の送達方法（例えば、静脈内、皮下、経口経粘膜、経口または経直腸投与）に優り、投与が単純である、急速な作用の発現を提供する、及び、初回通過代謝を回避する、という利点を提供する。不都合なことには、鼻腔内投与は、脳への小分子の輸送、及びある程度より小さなＦｃ融合タンパク質の輸送に有効であるとしか示されていない。例えば無傷の抗体などの、より大きな分子の送達については、まだ証明されていない。より大きなタンパク質を輸送することの困難性は、３．６Åを超える流体力学的半径を持つ球状分子を除外し易い嗅上皮内に存在する密着結合の限られた透過性によると思われている。（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ  ＢＲ，  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８８ Ｏｃｔ；８３（２）：１２９−４５）。
【００２７】
Ｆｒｅｙへの米国特許第５，６２４，８９８号は、神経細胞成長及び生存を促進する、または機能細胞の活性を増強する神経薬剤を、嗅覚神経路を介して脳へ輸送するための組成物及び方法を説明する。'８９８特許の神経薬剤は、循環系というよりもむしろ、神経系を介して脳へ輸送されるため、血液脳関門を横切ることができない潜在的治療薬は、脳の損傷神経細胞へ送達され得る。'８９８特許で説明される組成物は、嗅覚系内における薬剤の移送を促進する医薬担体及び／または添加物と組み合わせて、神経薬剤を含む。'８９８特許は、プールヒト免疫グロブリンの鼻腔内投与を教示していない。
【００２８】
ともにＢｅｎｔｚらによるＰＣＴ公報ＷＯ２００６／０９１３３２及びＷＯ２００９／０５８９５７は、抗体または抗体フラグメントにポリペプチドを融合させ、得られた融合タンパク質を鼻腔内投与することによる、脳へのポリペプチド製剤の送達方法を説明する。'３３２及び'９５７ＰＣＴ公報の実施例は、Ｆｃ融合「ミメティボディ」が、鼻腔内に投与されてもよいことを示唆するが、いずれの公報も、より大きな、無傷の抗体の送達を示していない。事実、'３３２ＰＣＴ公報の３年後に発表された'９５７ＰＣＴ公報は、「現在までに公表された送達試験においては、ＣＮＳへの鼻腔内送達効率は非常に低く、例えば、抗体及びそれらのフラグメント等の、巨大球状高分子の送達は実証されていない。」と述べている。'９５７ＰＣＴ公報は、中枢神経系への鼻腔内投与を改善する透過性増大剤（例えば、下記に説明の、膜流動化剤、密着結合変調剤、中間鎖長脂肪酸及び塩類及びそれらのエステル）を使用することにより、この問題を解決しようとしている。どちらのＰＣＴ公報も、プールヒト免疫グロブリンの鼻腔内投与を教示していない。
【００２９】
ＢａｒｓｔｏｗらによるＰＣＴ公報ＷＯ２００３／０２８６６８は、プール免疫グロブリンの食事性投与（すなわち、消化管への投与）による免疫介在疾患の治療を説明する。'６６８ＰＣＴ公報は、プール免疫グロブリン組成物の経鼻投与を開示するが、それは、組成物を消化管へ送達するという文脈である。'６６８ＰＣＴ公報は、鼻腔内投与を介しての、脳へのプールヒト免疫グロブリンの送達を教示していない。
【００３０】
ＡｄｊｅｉらによるＰＣＴ公報ＷＯ２００１／６０４２０は、肺への送達のための、免疫グロブリンを含むポリペプチド製剤のエアロゾル調合物を説明する。それらのエアロゾル化可能な組成物は、経口または経鼻吸入後、治療薬が患者の肺へ効果的に送達されるよう調製される。'４２０ＰＣＴ公報は、鼻腔内投与を介した脳への治療薬の送達を教示しない。
【００３１】
したがって、当該技術分野においては、ＣＮＳへの特異的標的指向化（例えば、主に脳への投与）を提供し、プール免疫グロブリンの全身分布を減少させ、そして投与に必要な治療有効投与量を減少させる、例えばアルツハイマー病などの中枢神経系障害の、プールヒト免疫グロブリンＧを用いる治療方法の必要性がある。
【発明の概要】
【００３２】
本開示は、プールヒト免疫グロブリンＧの鼻腔内投与を介する中枢神経系障害の治療方法及び治療組成物を提供することによって、これら及び他の問題に対する解決策を提供する。好都合にも、鼻腔内投与は、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過しなければならないという必要条件を回避して、脳へのプールＩｇＧの指向性送達を提供する。本明細書に示すように、鼻腔内投与は、脳への無傷ＩｇＧの送達を許容する。これは、治療に対する効率の向上をもたらすと共に、所望の効果を達成するために投与すべき必要ＩｇＧ用量を減少させる。プールヒトＩｇＧは、献血されたヒト血漿から単離されるため、プールＩｇＧは限られた資源である。本開示が提供するＩｇＧの有効用量の減少は、プールヒトＩｇＧの世界的な供給によって可能な、治療的潜在能力を効果的に増大する。さらに、本明細書に示すように、ＩｇＧの鼻腔内投与は、静脈内投与に起因する全身曝露をほぼ排除し、その治療の安全性プロファイルを改善する。最後に、驚くべきことに、透過性増大剤を使用しない鼻腔内投与の場合にＩｇＧが脳へ効率的に輸送されることが発見された。幾つかの透過性増大剤は、それ自体が神経刺激性作用を持つものである。
【００３３】
一つの態様において、本開示は、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物の治療有効量を対象の脳へ送達することを含む、治療が必要な対象における中枢神経系（ＣＮＳ）障害の治療方法を提供する。この方法における脳への組成物の送達は、対象の鼻腔の嗅上皮に直接組成物を鼻腔内投与することを含む。
【００３４】
別の態様においては、本開示は、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物の治療有効量を対象の脳へ送達することを含む、治療が必要な対象における中枢神経系（ＣＮＳ）障害の治療方法を提供する。この方法における脳への組成物の送達は、三叉神経終末に関連する対象の鼻上皮に組成物を鼻腔内投与することを含む。
【００３５】
別の態様においては、本開示は、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物の治療有効量を対象の脳へ送達することを含む、治療が必要な対象における中枢神経系（ＣＮＳ）障害の治療方法を提供する。この方法における脳への組成物の送達は、対象の鼻腔上側３分の１に組成物を鼻腔内投与することを含む。
【００３６】
別の態様においては、本開示は、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物の治療有効量を対象の脳へ送達することを含む、治療が必要な対象における中枢神経系（ＣＮＳ）障害の治療方法を提供する。この方法における脳への組成物の送達は、対象の一方または両方の上顎洞に組成物を鼻腔内投与することを含む。
【００３７】
上記説明の方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系の神経変性障害、中枢神経系を主に冒す全身萎縮、錐体外路及び運動障害、中枢神経系の脱髄障害、中枢神経系の突発性または発作性障害、中枢神経系の麻痺症候群、中枢神経系の神経、神経根または神経叢の障害、器質性精神障害、精神活性物質の使用に起因する精神または行動障害、統合失調症、統合失調型障害または妄想性障害、気分（感情）障害、神経症性、ストレス関連性または身体表現性障害、行動症候群、成人の人格または行動障害、心理発達障害、及び幼児発病の行動または情動障害からなる群から選択される。
【００３８】
上記説明の方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン舞踏病、脳性麻痺、双極性障害、統合失調症、及び小児急性発症神経精神症候群（ＰＡＮＳ）からなる群から選択される。
【００３９】
上記説明の方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、溶連菌感染症関連小児自己免疫性精神神経疾患（ＰＡＮＤＡＳ）、及び小児急性発症神経精神症候群（ＰＡＮＳ）からなる群から選択される。
【００４０】
上記説明の方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、アルツハイマー病、多発性硬化症及びパーキンソン病からなる群から選択される。
【００４１】
上記説明の方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、アルツハイマー病である。
【００４２】
上記説明の方法の一つの実施形態における組成物の鼻腔内投与は、非侵襲性鼻腔内送達デバイスの使用を含む。
【００４３】
上記説明の方法の一つの実施形態における組成物の鼻腔内投与は、鼻上皮に、三叉神経終末に関連する対象の鼻上皮に、または対象の鼻腔の上側３分の１に、直接、組成物の液滴を投与することを含む。
【００４４】
上記説明の方法の一つの実施形態における組成物の鼻腔内投与は、鼻上皮に、三叉神経終末に関連する対象の鼻上皮に、または対象の鼻腔の上側３分の１に、組成物のエアロゾルを指向性投与することを含む。
【００４５】
上記説明の方法の一つの実施形態における組成物のエアロゾルは、液体エアロゾルである。
【００４６】
上記方法の一つの実施形態における組成物のエアロゾルは、粉末エアロゾルである。
【００４７】
上記方法の一つの実施形態においては、対象に投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも４０％が、対象の鼻上皮に、対象の鼻腔嗅上皮に、三叉神経終末に関連する対象の鼻上皮に、対象の鼻腔の上側３分の１に、または対象の一方または両方の上顎洞に接触する。
【００４８】
上記方法の一つの実施形態においては、対象に投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも５０％が、対象の鼻腔嗅上皮に、三叉神経終末に関連する対象の鼻上皮に、対象の鼻腔の上側３分の１に、または対象の一方または両方の上顎洞に接触する。
【００４９】
上記方法の一つの実施形態においては、対象に投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも６０％が、対象の鼻腔嗅上皮に、三叉神経終末に関連する対象の鼻上皮に、対象の鼻腔の上側３分の１に、または対象の一方または両方の上顎洞に接触する。
【００５０】
上記方法の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、透過性増大剤を含まない。
【００５１】
上記方法の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、本質的に、プールヒトＩｇＧ及びアミノ酸からなる。
【００５２】
上記方法の一つの実施形態におけるアミノ酸は、グリシン、ヒスチジン及びプロリンからなる群から選択される。上記方法の特定の実施形態におけるアミノ酸は、グリシンである。
【００５３】
上記方法の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、水性組成物である。
【００５４】
上記方法の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、１０ｍｇ／ｍｌから２５０ｍｇ／ｍｌのプールヒトＩｇＧ及び５０ｍＭから５００ｍＭのグリシンを含む。
【００５５】
上記方法の一つの実施形態における組成物のｐＨは、４．０から６．０である。上記方法の別の実施形態における組成物のｐＨは、４．０から７．５である。上記方法の別の実施形態における組成物のｐＨは、６．０から７．５である。
【００５６】
上記方法の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、乾燥粉末組成物である。
【００５７】
上記方法の一つの実施形態における乾燥粉末組成物は、１０ｍｇ／ｍｌから２５０ｍｇ／ｍｌのプールヒトＩｇＧ及び５０ｍＭから５００ｍＭのグリシンを含む水溶液から調製される。
【００５８】
上記方法の一つの実施形態における乾燥粉末組成物は、４．０から６．０のｐＨを有する水溶液から調製される。上記方法の別の実施形態における組成物のｐＨは、４．０から７．５である。上記方法の別の実施形態における組成物のｐＨは、６．０から７．５である。
【００５９】
上記方法の一つの実施形態における方法は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり０．０８ｍｇから１００ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。上記方法の特定の実施形態における方法は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり０．２ｍｇから４０ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。上記方法の特定の実施形態における方法は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり５ｍｇから２０ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。上記方法の特定の実施形態における方法は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり５ｍｇから１０ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。上記方法の特定の実施形態における方法は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり１ｍｇから５ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。
【００６０】
上記方法の一つの実施形態における方法は、対象に、５０ｍｇから１０ｇの一定用量のプールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む。上記方法の特定の実施形態における方法は、対象に、１００ｍｇから５．０ｇの一定用量のプールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む。上記方法の特定の実施形態における方法は、対象に、５００ｍｇから２．５ｇの一定用量のプールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む。
【００６１】
上記方法の一つの実施形態における方法は、対象に、少なくとも月２回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。上記方法の特定の実施形態における方法は、対象に、少なくとも週１回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。上記方法の特定の実施形態における方法は、対象に、少なくとも週２回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。上記方法の特定の実施形態における方法は、対象に、少なくとも１日１回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。上記方法の特定の実施形態における方法は、対象に、少なくとも１日２回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。
【００６２】
上記方法の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、少なくとも０．１％の抗アミロイドβ  ＩｇＧを含む。
【００６３】
上記方法の一つの実施形態における方法は、さらに、治療が必要な対象に、ＣＮＳ障害に対する第二の療法を施すことを含む。
【００６４】
上記方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害に対する第二の療法は、コリンエステラーゼ阻害剤である。上記方法の特定の実施形態におけるコリンエステラーゼ阻害剤は、ドネペジル（例えば、ＡＲＩＣＥＰＴ（登録商標））、リバスチグミン（例えば、ＥＸＥＬＯＮ（登録商標））、ガランタミン（例えば、ＲＡＺＡＤＹＮＥ（登録商標））及びタクリン（例えば、ＣＯＧＮＥＸ（登録商標））からなる群から選択される。
【００６５】
上記方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害に対する第二の療法は、ＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体の阻害剤である。上記方法の特定の実施形態におけるＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体の阻害剤は、メマンチンである。
【００６６】
別の態様においては、本開示は、治療が必要な対象における鼻腔内投与による中枢神経系（ＣＮＳ）障害の治療のための、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物の使用を提供する。
【００６７】
上記使用のいくつかの実施形態においては、鼻腔内投与は、対象の鼻上皮への投与を含む。上記使用の他の実施形態においては、鼻腔内投与は、対象の鼻腔嗅上皮への投与を含む。上記使用の他の実施形態においては、鼻腔内投与は、三叉神経終末に関連する対象の鼻上皮への投与を含む。上記使用の他の実施形態においては、鼻腔内投与は、対象の鼻腔鼻上皮の上側３分の１への投与を含む。上記使用の、さらに他の実施形態においては、鼻腔内投与は、対象の一方または両方の上顎洞への投与を含む。
【００６８】
上記使用の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系の神経変性障害、中枢神経系を主に冒す全身萎縮、錐体外路及び運動障害、中枢神経系の脱髄障害、中枢神経系の突発性または発作性障害、中枢神経系の麻痺症候群、中枢神経系の神経、神経根または神経叢の障害、器質性精神障害、精神活性物質の使用に起因する精神または行動障害、統合失調症、統合失調型障害または妄想性障害、気分（感情）障害、神経症性、ストレス関連性または身体表現性障害、行動症候群、成人の人格または行動障害、心理発達障害、及び幼児発病の行動または情動障害からなる群から選択される。
【００６９】
上記使用の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン舞踏病、脳性麻痺、双極性障害、統合失調症、及び小児急性発症神経精神症候群（ＰＡＮＳ）からなる群から選択される。
【００７０】
上記使用の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、溶連菌感染症関連小児自己免疫性精神神経疾患（ＰＡＮＤＡＳ）、及び小児急性発症神経精神症候群（ＰＡＮＳ）からなる群から選択される。
【００７１】
上記使用の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、アルツハイマー病、多発性硬化症及びパーキンソン病からなる群から選択される。
【００７２】
上記使用の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、アルツハイマー病である。
【００７３】
上記使用の一つの実施形態における組成物の鼻腔内投与は、非侵襲性鼻腔内送達デバイスの使用を含む。
【００７４】
上記使用の一つの実施形態における組成物の鼻腔内投与は、鼻上皮に、三叉神経終末に関連する対象の鼻上皮に、または対象の鼻腔の上側３分の１に、直接、組成物の液滴を投与することを含む。
【００７５】
上記使用の一つの実施形態における組成物の鼻腔内投与は、鼻上皮に、三叉神経終末に関連する対象の鼻上皮に、または対象の鼻腔の上側３分の１に、組成物のエアロゾルを指向性投与することを含む。
【００７６】
上記使用の一つの実施形態における組成物のエアロゾルは、液体エアロゾルである。
【００７７】
上記使用の一つの実施形態における組成物のエアロゾルは、粉末エアロゾルである。
【００７８】
上記使用の一つの実施形態においては、対象に投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも４０％が、対象の鼻上皮に、対象の鼻腔嗅上皮に、三叉神経終末に関連する対象の鼻上皮に、対象の鼻腔の上側３分の１に、または対象の一方または両方の上顎洞に接触する。
【００７９】
上記使用の一つの実施形態においては、対象に投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも５０％が、対象の鼻上皮に、対象の鼻腔嗅上皮に、三叉神経終末に関連する対象の鼻上皮に、対象の鼻腔の上側３分の１に、または対象の一方または両方の上顎洞に接触する。
【００８０】
上記使用の一つの実施形態においては、対象に投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも６０％が、対象の鼻上皮に、対象の鼻腔嗅上皮に、三叉神経終末に関連する対象の鼻上皮に、対象の鼻腔の上側３分の１に、または対象の一方または両方の上顎洞に接触する。
【００８１】
上記使用の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、透過性増大剤を含まない。
【００８２】
上記使用の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、本質的に、プールヒトＩｇＧ及びアミノ酸からなる。
【００８３】
上記使用の一つの実施形態におけるアミノ酸は、グリシン、ヒスチジン及びプロリンからなる群から選択される。上記方法の特定の実施形態におけるアミノ酸は、グリシンである。
【００８４】
上記使用の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、水性組成物である。
【００８５】
上記使用の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、１０ｍｇ／ｍｌから２５０ｍｇ／ｍｌのプールヒトＩｇＧ及び５０ｍＭから５００ｍＭのグリシンを含む。
【００８６】
上記使用の一つの実施形態における組成物のｐＨは、４．０から６．０である。上記使用の別の実施形態における組成物のｐＨは、４．０から７．５である。上記方法の別の実施形態における組成物のｐＨは、６．０から７．５である。
【００８７】
上記使用の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、乾燥粉末組成物である。
【００８８】
上記使用の一つの実施形態における乾燥粉末組成物は、１０ｍｇ／ｍｌから２５０ｍｇ／ｍｌのプールヒトＩｇＧ及び５０ｍＭから５００ｍＭのグリシンを含む水溶液から調製される。
【００８９】
上記使用の一つの実施形態における乾燥粉末組成物は、４．０から６．０のｐＨを有する水溶液から調製される。上記使用の別の実施形態における組成物のｐＨは、４．０から７．５である。上記使用の別の実施形態における組成物のｐＨは、６．０から７．５である。
【００９０】
上記使用の一つの実施形態における使用は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり０．０８ｍｇから１００ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。上記使用の特定の実施形態における使用は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり０．２ｍｇから４０ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。上記使用の特定の実施形態における使用は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり５ｍｇから２０ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。上記使用の特定の実施形態における使用は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり５ｍｇから１０ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。上記使用の特定の実施形態における使用は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり１ｍｇから５ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。
【００９１】
上記使用の一つの実施形態における使用は、対象に、５０ｍｇから１０ｇの一定用量のプールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む。上記使用の特定の実施形態における使用は、対象に、１００ｍｇから５．０ｇの一定用量のプールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む。上記使用の特定の実施形態における使用は、対象に、５００ｍｇから２．５ｇの一定用量のプールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む。
【００９２】
上記使用の一つの実施形態における方法は、対象に、少なくとも月２回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。上記使用の特定の実施形態における方法は、対象に、少なくとも週１回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。上記使用の特定の実施形態における方法は、対象に、少なくとも週２回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。上記使用の特定の実施形態における方法は、対象に、少なくとも１日１回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。上記使用の特定の実施形態における方法は、対象に、少なくとも１日２回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。
【００９３】
上記使用の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、少なくとも０．１％の抗アミロイドβ  ＩｇＧを含む。
【００９４】
上記使用の一つの実施形態における方法は、さらに、治療が必要な対象に、ＣＮＳ障害に対する第二の療法を施すことを含む。
【００９５】
上記使用の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害に対する第二の療法は、コリンエステラーゼ阻害剤である。上記使用の特定の実施形態におけるコリンエステラーゼ阻害剤は、ドネペジル（例えば、ＡＲＩＣＥＰＴ（登録商標））、リバスチグミン（例えば、ＥＸＥＬＯＮ（登録商標））、ガランタミン（例えば、ＲＡＺＡＤＹＮＥ（登録商標））またはタクリン（例えば、ＣＯＧＮＥＸ（登録商標））からなる群から選択される。
【００９６】
上記使用の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害に対する第二の療法は、ＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体の阻害剤である。上記使用の特定の実施形態におけるＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体の阻害剤は、メマンチンである。
[本発明1001]
プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物の治療有効量を対象の脳へ送達することを含む、治療が必要な対象における中枢神経系（ＣＮＳ）障害の治療方法であって、
前記脳への前記組成物の送達が、前記対象の鼻上皮へ直接、前記組成物を鼻腔内投与することを含む、前記方法。
[本発明1002]
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも40％が、前記対象の前記鼻上皮に接触する、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも50％が、前記対象の前記鼻上皮に接触する、本発明1001の方法。
[本発明1004]
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも60％が、前記対象の前記鼻上皮に接触する、本発明1001の方法。
[本発明1005]
前記鼻上皮が、前記対象の嗅上皮である、本発明1001の方法。
[本発明1006]
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも40％が、前記対象の前記嗅上皮に接触する、本発明1005の方法。
[本発明1007]
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも50％が、前記対象の前記嗅上皮に接触する、本発明1005の方法。
[本発明1008]
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも60％が、前記対象の前記嗅上皮に接触する、本発明1005の方法。
[本発明1009]
前記鼻上皮が、前記対象の、三叉神経終末に関連する鼻上皮である、本発明1001の方法。
[本発明1010]
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも40％が、前記対象の、三叉神経終末に関連する前記鼻上皮に接触する、本発明1009の方法。
[本発明1011]
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも50％が、前記対象の、三叉神経終末に関連する前記鼻上皮に接触する、本発明1009の方法。
[本発明1012]
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも60％が、前記対象の、三叉神経終末に関連する前記鼻上皮に接触する、本発明1009の方法。
[本発明1013]
前記脳への前記組成物の送達が、前記対象の鼻腔上側3分の1に前記組成物を鼻腔内投与することを含む、本発明1001の方法。
[本発明1014]
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも40％が、前記対象の前記鼻腔上側3分の1に接触する、本発明1013の方法。
[本発明1015]
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも50％が、前記対象の前記鼻腔上側3分の1に接触する、本発明1013の方法。
[本発明1016]
前記対象へ投与される前記プールヒトＩｇＧの少なくとも60％が、前記対象の前記鼻腔上側3分の1に接触する、本発明1013の方法。
[本発明1017]
前記ＣＮＳ障害が、中枢神経系の神経変性障害である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1018]
前記中枢神経系の前記神経変性障害が、アルツハイマー病である、本発明1017の方法。
[本発明1019]
前記中枢神経系の前記神経変性障害が、パーキンソン病である、本発明1017の方法。
[本発明1020]
前記ＣＮＳ障害が、中枢神経系を主に冒す全身萎縮である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1021]
前記ＣＮＳ障害が、錐体外路障害及び運動障害である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1022]
前記ＣＮＳ障害が、中枢神経系の脱髄障害である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1023]
前記中枢神経系の前記脱髄障害が、多発性硬化症である、本発明1022の方法。
[本発明1024]
前記ＣＮＳ障害が、中枢神経系の突発性または発作性障害である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1025]
前記ＣＮＳ障害が、中枢神経系の麻痺症候群である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1026]
前記ＣＮＳ障害が、中枢神経系の神経障害、神経根障害、または神経叢障害である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1027]
前記ＣＮＳ障害が、器質性精神障害である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1028]
前記ＣＮＳ障害が、精神活性物質の使用に起因する精神障害または行動障害である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1029]
前記ＣＮＳ障害が、統合失調症、統合失調型障害、または妄想性障害である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1030]
前記ＣＮＳ障害が、気分（感情）障害である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1031]
前記ＣＮＳ障害が、神経症性、ストレス関連性、または身体表現性障害である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1032]
前記ＣＮＳ障害が、行動症候群である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1033]
前記ＣＮＳ障害が、成人の人格または行動障害である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1034]
前記ＣＮＳ障害が、心理発達障害である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1035]
前記ＣＮＳ障害が、幼児発病の行動または情動障害である、本発明1001から1016のいずれかの方法。
[本発明1036]
前記幼児発病の行動または情動障害が、溶連菌感染症関連小児自己免疫性精神神経疾患（ＰＡＮＤＡＳ）である、本発明1035の方法。
[本発明1037]
前記幼児発病の行動または情動障害が、小児急性発症神経精神症候群（ＰＡＮＳ）である、本発明1035の方法。
[本発明1038]
前記組成物の鼻腔内投与が、非侵襲性鼻腔内送達デバイスの使用を含む、本発明1001から1036のいずれかの方法。
[本発明1039]
前記組成物の鼻腔内投与が、前記鼻上皮へ直接、前記組成物の液滴を投与することを含む、本発明1001から1037のいずれかの方法。
[本発明1040]
前記組成物の鼻腔内投与が、前記鼻上皮へ前記組成物のエアロゾルを指向性投与することを含む、本発明1001から1037のいずれかの方法。
[本発明1041]
前記組成物の前記エアロゾルが、液体エアロゾルである、本発明1039の方法。
[本発明1042]
前記組成物の前記エアロゾルが、粉末エアロゾルである、本発明1039の方法。
[本発明1043]
プールヒトＩｇＧを含む前記組成物が、透過性増大剤を含まない、本発明1001から1041のいずれかの方法。
[本発明1044]
プールヒトＩｇＧを含む前記組成物が、本質的に、プールヒトＩｇＧ及びアミノ酸からなる、本発明1001から1042のいずれかの方法。
[本発明1045]
前記アミノ酸がグリシンである、本発明1043の方法。
[本発明1046]
前記アミノ酸がヒスチジンである、本発明1043の方法。
[本発明1047]
前記アミノ酸がプロリンである、本発明1043の方法。
[本発明1048]
プールヒトＩｇＧを含む前記組成物が、水性組成物である、本発明1001から1046のいずれかの方法。
[本発明1049]
前記組成物が、
（ａ）10ｍｇ／ｍｌから250ｍｇ／ｍｌのプールヒトＩｇＧ、及び
（ｂ）50ｍＭから500ｍＭのグリシン
を含む、本発明1047の方法。
[本発明1050]
前記組成物のｐＨが、4．0から7．5である、本発明1047または1048の方法。
[本発明1051]
前記組成物のｐＨが、4．0から6．0である、本発明1047または1048の方法。
[本発明1052]
前記組成物のｐＨが、6．0から7．5である、本発明1047または1048の方法。
[本発明1053]
プールヒトＩｇＧを含む前記組成物が、乾燥粉末組成物である、本発明1001から1046のいずれかの方法。
[本発明1054]
前記乾燥粉末組成物が、
（ａ）10ｍｇ／ｍｌから250ｍｇ／ｍｌのプールヒトＩｇＧ、及び
（ｂ）50ｍＭから500ｍＭのグリシン
を含む水溶液から調製される、本発明1052の方法。
[本発明1055]
前記乾燥粉末組成物が、4．0から7．5のｐＨを有する水溶液から調製される、本発明1052または1053の方法。
[本発明1056]
前記組成物のｐＨが、4．0から6．0である、本発明1052または1053の方法。
[本発明1057]
前記組成物のｐＨが、6．0から7．5である、本発明1052または1053の方法。
[本発明1058]
前記対象の体重1ｋｇあたり0．08ｍｇから100ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を、前記対象へ鼻腔内投与することを含む、本発明1001から1056のいずれかの方法。
[本発明1059]
前記対象の体重1ｋｇあたり0．2ｍｇから40ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を、前記対象へ鼻腔内投与することを含む、本発明1057の方法。
[本発明1060]
前記対象の体重1ｋｇあたり0．5ｍｇから20ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を、前記対象へ鼻腔内投与することを含む、本発明1057の方法。
[本発明1061]
前記対象の体重1ｋｇあたり0．5ｍｇから10ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を、前記対象へ鼻腔内投与することを含む、本発明1057の方法。
[本発明1062]
前記対象の体重1ｋｇあたり1ｍｇから5ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を、前記対象へ鼻腔内投与することを含む、本発明1057の方法。
[本発明1063]
50ｍｇから10ｇの一定用量のプールヒトＩｇＧを前記対象へ鼻腔内投与することを含む、本発明1001から1056のいずれかの方法。
[本発明1064]
100ｍｇから5ｇの一定用量のプールヒトＩｇＧを前記対象へ鼻腔内投与することを含む、本発明1062の方法。
[本発明1065]
500ｍｇから2．5ｇの一定用量のプールヒトＩｇＧを前記対象へ鼻腔内投与することを含む、本発明1062の方法。
[本発明1066]
少なくとも月2回、前記対象へプールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む、本発明1001から1064のいずれかの方法。
[本発明1067]
少なくとも週1回、前記対象へプールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む、本発明1065の方法。
[本発明1068]
少なくとも週2回、前記対象へプールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む、本発明1065の方法。
[本発明1069]
少なくとも1日1回、前記対象へプールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む、本発明1065の方法。
[本発明1070]
少なくとも1日2回、前記対象へプールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む、本発明1065の方法。
[本発明1071]
プールヒトＩｇＧを含む前記組成物が、少なくとも0．1％の抗アミロイドβ  ＩｇＧを含む、本発明1001から1040のいずれかの方法。
[本発明1072]
治療が必要な前記対象へ、前記ＣＮＳ障害に対する第二の療法を施すことをさらに含む、本発明1001から1070のいずれかの方法。
[本発明1073]
前記ＣＮＳ障害に対する前記第二の療法が、コリンエステラーゼ阻害剤である、本発明1071の方法。
[本発明1074]
前記コリンエステラーゼ阻害剤が、ドネペジルである、本発明1072の方法。
[本発明1075]
前記コリンエステラーゼ阻害剤が、リバスチグミンである、本発明1072の方法。
[本発明1076]
前記コリンエステラーゼ阻害剤が、ガランタミンである、本発明1072の方法。
[本発明1077]
前記コリンエステラーゼ阻害剤が、タクリンである、本発明1072の方法。
[本発明1078]
前記ＣＮＳ障害に対する前記第二の療法が、ＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体の阻害剤である、本発明1071の方法。
[本発明1079]
前記ＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体の阻害剤が、メマンチンである、本発明1077の方法。
【図面の簡単な説明】
【００９７】
【図１Ａ】実施例２で鼻腔内投与されたＩｇＧの生体内分布を評価するのに使用したラットの脳スライスを示す。図１Ａ〜１Ｆの６枚の２ｍｍスライス（視神経交叉に対して吻側３枚と尾側３枚）を取得した。
【図１Ｂ】実施例２で鼻腔内投与されたＩｇＧの生体内分布を評価するのに使用したラットの脳スライスを示す。図１Ａ〜１Ｆの６枚の２ｍｍスライス（視神経交叉に対して吻側３枚と尾側３枚）を取得した。
【図１Ｃ】実施例２で鼻腔内投与されたＩｇＧの生体内分布を評価するのに使用したラットの脳スライスを示す。図１Ａ〜１Ｆの６枚の２ｍｍスライス（視神経交叉に対して吻側３枚と尾側３枚）を取得した。
【図１Ｄ】実施例２で鼻腔内投与されたＩｇＧの生体内分布を評価するのに使用したラットの脳スライスを示す。図１Ａ〜１Ｆの６枚の２ｍｍスライス（視神経交叉に対して吻側３枚と尾側３枚）を取得した。
【図１Ｅ】実施例２で鼻腔内投与されたＩｇＧの生体内分布を評価するのに使用したラットの脳スライスを示す。図１Ａ〜１Ｆの６枚の２ｍｍスライス（視神経交叉に対して吻側３枚と尾側３枚）を取得した。
【図１Ｆ】実施例２で鼻腔内投与されたＩｇＧの生体内分布を評価するのに使用したラットの脳スライスを示す。図１Ａ〜１Ｆの６枚の２ｍｍスライス（視神経交叉に対して吻側３枚と尾側３枚）を取得した。
【図１Ｇ】正中線に沿って二分した脳を図示する。二分脳は、生体内分布分析のために、さらに、中脳、脳橋、髄質及び小脳に解剖される。
【図２Ａ】ＩｇＧ鼻腔内投与３０及び９０分後の平均脳組織１２５Ｉ−ＩｇＧ濃度（ｎＭ）の結果を図示する。図２Ａは、６．０ｍｇの用量に正規化された、液状タンパク質ＩｇＧ製剤投与３０（ｎ＝８）分後と９０（ｎ＝６）分後の脳組織１２５Ｉ−ＩｇＧ濃度（ｎＭ）の結果を図示する。
【図２Ｂ】ＩｇＧ鼻腔内投与３０及び９０分後の平均脳組織１２５Ｉ−ＩｇＧ濃度（ｎＭ）の結果を図示する。図２Ｂは、６．０ｍｇの用量に正規化された、固体微小球ＩｇＧ製剤投与３０（ｎ＝１２）分後と９０（ｎ＝６）分後の脳組織１２５Ｉ−ＩｇＧ濃度（ｎＭ）の結果を図示する。
【図３Ａ】皮質脳スライスに関するＩＨＣデータを図示する。各々のコホート（ＷＴ−生理食塩水、ＷＴ−高、ＴＧ−生理食塩水、ＴＧ−低、及びＴＧ−高、各々、チャート内に左から右へ図示）からの１２匹のマウスに対して、プラーク含有量を測定した。図３Ａは、βアミロイドプラークによって覆われるパーセント面積を示す。各マウスの皮質の四つのスライドを、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して分析した。データは、プラーク半径サイズ（マイクロメーター）による特定の範囲内に分布する。トランスジェニック治療群間の有意差を、グラフ内にｐ値でマークした。各値は、コホートに対する平均値±標準誤差として報告されている。
【図３Ｂ】皮質脳スライスに関するＩＨＣデータを図示する。各々のコホート（ＷＴ−生理食塩水、ＷＴ−高、ＴＧ−生理食塩水、ＴＧ−低、及びＴＧ−高、各々、チャート内に左から右へ図示）からの１２匹のマウスに対して、プラーク含有量を測定した。図３Ｂは、βアミロイドプラークの平均数を示す。各マウスの皮質の四つのスライドを、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して分析した。データは、プラーク半径サイズ（マイクロメーター）による特定の範囲内に分布する。トランスジェニック治療群間の有意差を、グラフ内にｐ値でマークした。各値は、コホートに対する平均値±標準誤差として報告されている。
【図３Ｃ】海馬脳スライスに関するＩＨＣデータを図示する。各々のコホート（ＷＴ−生理食塩水、ＷＴ−高、ＴＧ−生理食塩水、ＴＧ−低、及びＴＧ−高、各々、チャート内に左から右へ図示）からの１２匹のマウスに対して、プラーク含有量を測定した。図３Ｃは、βアミロイドプラークの平均数を示す。各マウスの海馬の四つのスライドを、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して分析した。データは、プラーク半径サイズ（マイクロメーター）による特定の範囲内に分布する。各値は、コホートに対する平均値±標準誤差として報告されている。
【図３Ｄ】海馬脳スライスに関するＩＨＣデータを図示する。各々のコホート（ＷＴ−生理食塩水、ＷＴ−高、ＴＧ−生理食塩水、ＴＧ−低、及びＴＧ−高、各々、チャート内に左から右へ図示）からの１２匹のマウスに対して、プラーク含有量を測定した。図３Ｄは、βアミロイドプラークによって覆われるパーセント面積を示す。各マウスの海馬の四つのスライドを、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して分析した。データは、プラーク半径サイズ（マイクロメーター）による特定の範囲内に分布する。各値は、コホートに対する平均値±標準誤差として報告されている。
【図３Ｅ】皮質脳スライス及び海馬脳スライスに関するＩＨＣデータを図示する。各々のコホート（ＷＴ−生理食塩水、ＷＴ−高、ＴＧ−生理食塩水、ＴＧ−低、及びＴＧ−高、各々、チャート内に左から右へ図示）からの１２匹のマウスに対して、プラーク含有量を測定した。図３Ｅは、老化ＴＧ２５７６トランスジェニックマウスの海馬及び皮質内のアミロイドプラークの免疫蛍光染色を示す（視野＝５．３ｍｍ）。免疫蛍光染色のために、マウスに対して、８ヵ月間に渡り週３回、生理食塩水、低用量ＩｇＧまたは高用量ＩｇＧを鼻腔内投与した。
【図４】ＩｇＧを鼻腔内投与したトランスジェニックマウス及び野生型マウスの生存率に対するカプラン・マイヤー曲線を示す。これらのマウスは、図３でプラーク分析に使用したマウスとは異なるコホートに属する。
【図５】実施例８において、ＣＮＳ送達を評価するのに使用した鼻腔内１２５Ｉ−ＩｇＧ処置ラットの、半分割された７枚の冠状脳スライスを示す。
【図６Ａ】鼻腔内送達のためにデザインされたデバイスを介してスプレーされたＩｇＧの無傷性を、非スプレー対照のものと比較した結果を示す。図６Ａは、スプレーＩｇＧ及び非スプレーＩｇＧ（対照）の、クーマシー染色された非還元ゲルを示す。
【図６Ｂ】鼻腔内送達のためにデザインされたデバイスを介してスプレーされたＩｇＧの無傷性を、非スプレー対照のものと比較した結果を示す。図６Ｂは、抗ＩｇＧ抗体でプローブされた還元ゲルのウエスタンブロットを示す。
【図７】ラットにおけるＩＮデバイス投与の、非常に有効な嗅上皮への標的指向化を実証する結果を示す。上部パネルは、ラットにおける、０．０１％フルオレセイントレーサーを混ぜた２５％ＩＶＩＧ溶液１５μｌをデバイス投与した後の、ＩＮ  ＩｇＧ沈着を示す。下部パネルは、点鼻剤を介して投与された、０．０１％フルオレセイントレーサーを混ぜた２５％ＩＶＩＧ溶液１５μｌ沈着後の、沈着パターンを示す。ＯＢ＝嗅球、ＯＥ＝嗅上皮、ＲＥ＝呼吸上皮、ＮＳ＝鼻孔。
【図８Ａ】低ＩｇＧ及び高ＩｇＧ鼻腔内治療群におけるアミロイド量の減少を示すデータを図示する。図８Ａは、総アミロイド面積（プラーク及び脈管系）を示す。
【図８Ｂ】低ＩｇＧ及び高ＩｇＧ鼻腔内治療群におけるアミロイド量の減少を示すデータを図示する。図８Ｂは、アミロイド沈着物（プラーク及び脈管系）の数（#）を示す。
【図８Ｃ】低ＩｇＧ及び高ＩｇＧ鼻腔内治療群におけるアミロイド量の減少を示すデータを図示する。図８Ｃは、全アミロイド沈着物の総強度（すなわち、合計強度）を示す。
【図９Ａ】プラーク量の減少の結果であるアミロイドの減少を示すデータを図示する。図９Ａは、総アミロイド面積（プラーク及び脈管系）を示す。
【図９Ｂ】プラーク量の減少の結果であるアミロイドの減少を示すデータを図示する。図９Ｂは、アミロイド沈着物（プラーク及び脈管系）の数（#）を示す。
【図９Ｃ】プラーク量の減少の結果であるアミロイドの減少を示すデータを図示する。図９Ｃは、全アミロイド沈着物の総強度（すなわち、合計強度）を示す。
【図１０Ａ】プラーク量の減少の結果としてアミロイドの減少が観察された（図９）とき、アミロイドの脈管成分が僅かに増加することが発見されたことを示すデータを図示する。図１０Ａは、脈管アミロイド面積を示す。
【図１０Ｂ】プラーク量の減少の結果としてアミロイドの減少が観察された（図９）とき、アミロイドの脈管成分が僅かに増加することが発見されたことを示すデータを図示する。図１０Ｂは、脈管沈着物の数（#）を示す。
【図１０Ｃ】プラーク量の減少の結果としてアミロイドの減少が観察された（図９）とき、アミロイドの脈管成分が僅かに増加することが発見されたことを示すデータを図示する。図１０Ｃは、脈管沈着物の総強度（すなわち、合計強度）を示す。
【図１１】総アミロイドに寄与する脈管及びプラークアミロイドの相対的な割合を示すデータを図示する。図１１Ａは、総アミロイドへの相対的なプラーク寄与を示す。図１１Ｂは、総アミロイドへの相対的な脈管寄与を示す。
【図１２Ａ】共焦点蛍光顕微鏡で捕えたコンゴレッド染色矢状切片を示す。図１２Ａは、５１２×５１２の解像度を持つ５枚の個々の１０×画像から作成したｚ−スタック最大強度投影画像を示す。群からの代表画像：閾値処理ありのＴｇ−生理食塩水、フル解像度、皮質及び海馬の部分（図１２Ａ）。
【図１２Ｂ】共焦点蛍光顕微鏡で捕えたコンゴレッド染色矢状切片を示す。図１２Ｂ〜図１２Ｆは、全組織切片を包含するよう、図１２Ａに示すような３０枚のｚ−スタック投影から（５％の重ね合わせで６×５の）タイル状に作成した単一の画像を示す。群からの代表画像：閾値処理なしのＴｇ−低（図１２Ｂ）。
【図１２Ｃ】共焦点蛍光顕微鏡で捕えたコンゴレッド染色矢状切片を示す。図１２Ｂ〜図１２Ｆは、全組織切片を包含するよう、図１２Ａに示すような３０枚のｚ−スタック投影から（５％の重ね合わせで６×５の）タイル状に作成した単一の画像を示す。群からの代表画像：閾値処理ありのＷＴ−生理食塩水（図１２Ｃ）。
【図１２Ｄ】共焦点蛍光顕微鏡で捕えたコンゴレッド染色矢状切片を示す。図１２Ｂ〜図１２Ｆは、全組織切片を包含するよう、図１２Ａに示すような３０枚のｚ−スタック投影から（５％の重ね合わせで６×５の）タイル状に作成した単一の画像を示す。群からの代表画像：閾値処理ありのＴｇ−生理食塩水（図１２Ｄ）。
【図１２Ｅ】共焦点蛍光顕微鏡で捕えたコンゴレッド染色矢状切片を示す。図１２Ｂ〜図１２Ｆは、全組織切片を包含するよう、図１２Ａに示すような３０枚のｚ−スタック投影から（５％の重ね合わせで６×５の）タイル状に作成した単一の画像を示す。群からの代表画像：閾値処理ありのＴｇ−低（図１２Ｅ）。
【図１２Ｆ】共焦点蛍光顕微鏡で捕えたコンゴレッド染色矢状切片を示す。図１２Ｂ〜図１２Ｆは、全組織切片を包含するよう、図１２Ａに示すような３０枚のｚ−スタック投影から（５％の重ね合わせで６×５の）タイル状に作成した単一の画像を示す。群からの代表画像：閾値処理ありのＴｇ−高（図１２Ｆ）。
【図１３】星状細胞マーカーＧＦＡＰ（図１３Ａ）及び小膠細胞マーカーＣＤ１１ｂ（図１３Ｂ）についての平均染色強度のデータを図示する。
【図１４】高用量のＩＮ  ＩｇＧで処置したＴｇ２５７６マウス脳からの、アミロイド（青）、ＧＦＡＰ（緑）及びＣＤ１１ｂ（赤）染色による画像例である。ＣＤ１１ｂ染色が、しばしば、アミロイドプラークを囲んでいるのが観察された。
【発明を実施するための形態】
【００９８】
序論
本開示は、対象の鼻腔上皮に直接、治療有効量のプールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を鼻腔内送達することによって対象における中枢神経系（ＣＮＳ）障害を治療するための方法及び組成物を提供する。特定の実施形態においては、プールヒトＩｇＧは、鼻腔嗅上皮に直接投与される。いくつかの実施形態においては、プールＩｇＧは、鼻腔の上側３分の１（例えば、下鼻甲介より上に）に送達される。いくつかの実施形態においては、プールＩｇＧは、鼻呼吸上皮への鼻腔内投与後、三叉神経を介して脳へ送達される。特定の実施形態においては、プールＩｇＧは、鼻呼吸上皮への鼻腔内投与後、上顎神経を介して脳へ送達される。他の実施形態においては、プールＩｇＧは、上顎洞への投与後、脳へ送達される。
【００９９】
いくつかの実施形態においては、プールヒトＩｇＧの鼻腔内投与を介しての、アルツハイマー病、多発性硬化症及びパーキンソン病の治療方法及び組成物が本明細書において提供される。他の実施形態における、本明細書において提供されるそれらの方法及び組成物は、限定せずに、以下の、当業者へ既知であるＣＮＳ障害の治療に有用である。中枢神経系の神経変性障害、中枢神経系を主に冒す全身萎縮、錐体外路及び運動障害、中枢神経系の脱髄障害、中枢神経系の突発性もしくは発作性障害、中枢神経系の麻痺症候群、中枢神経系の神経、神経根もしくは神経叢の障害、器質性精神障害、精神活性物質の使用に起因する精神もしくは行動障害、統合失調症、統合失調型障害もしくは妄想性障害、気分（感情）障害、神経症性、ストレス関連性もしくは身体表現性障害、行動症候群、成人の人格もしくは行動障害、心理発達障害、または幼児発病の行動もしくは情動障害。いくつかの実施形態におけるＣＮＳ障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン舞踏病、脳性麻痺、双極性障害、統合失調症、または小児急性発症神経精神症候群（ＰＡＮＳ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態におけるＣＮＳ障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、溶連菌感染症関連小児自己免疫性精神神経疾患（ＰＡＮＤＡＳ）、または小児急性発症神経精神症候群（ＰＡＮＳ）からなる群から選択される。
【０１００】
好都合にも、ＩｇＧの鼻腔内投与が、アルツハイマー病マウスモデルの体重及び生存時間を増大させたことが、本明細書中に示される。例えば、実施例６では、高（０．８ｇ／ｋｇ、２週毎に１回）あるいは低（０．４ｇ／ｋｇ、２週毎に１回）用量でのＩｇＧの鼻腔内投与が、ＴＧ２５７６マウスの生存期間を延長させたことが示される。この結果は、ＩｇＧの鼻腔内投与が、アルツハイマー病マウスモデルの生存期間を延長させることが可能であり、アルツハイマー病治療に有効であることを示す。
【０１０１】
さらに、ＩｇＧの鼻腔内投与は、アルツハイマー病マウスモデルの大脳皮質内のプラークを有意に減少させた。実施例４では、プールヒトＩｇＧ治療が、低（０．４ｍｇ／ｋｇ／２週、ｐ＝０．０１４）または高（０．８ｍｇ／ｋｇ／２週、ｐ＝０．０３７）投薬量の鼻腔内投与で、アルツハイマー病マウスモデルにおけるプラーク被覆パーセント面積を約２５％減少させたことを示す。これは、さらに、アルツハイマー病治療におけるＩｇＧ鼻腔内投与の有効性を示すものである。
【０１０２】
本明細書でさらに実証されるように、鼻腔内投与は、静脈内投与に比べ、プールヒトＩｇＧの脳への、より区別された送達になる。例えば、実施例９では、プールヒト免疫グロブリンＧの鼻腔内投与が、静脈内投与に比べ、血液曝露において６倍低かったことを示す。鼻腔内投与によって提供されるＩｇＧの低全身曝露は、ＩｇＧの全身曝露に関連する副作用のリスクを有利に減少させる。
【０１０３】
好都合にも、また、プールヒト免疫グロブリンＧは、透過性増大剤（下記の説明のように、例えば、膜流動化剤、密着結合変調剤、及び中間鎖長脂肪酸とそれらの塩及びエステル）なしでの鼻腔内投与後、脳へ効率的に送達されたこととも発見された。以前の報告は、嗅上皮を介してのバイオ治療薬（例えば、ミメティボディ及びＦｃ融合物）の効率的な輸送を達成するためには、透過性増大剤が必要であることを示唆した（ＷＯ２００９／０５８９５７）。しかし、本明細書に提供される実施例が示すように、プールヒトＩｇＧは、アミノ酸（例えば、グリシン）のみで調製された液体または乾燥粉末として鼻腔内投与されると、脳へ効率的に送達される。
【０１０４】
好都合にも、また、本明細書では、プールヒトＩｇＧの用量が、静脈内投与に比べ、鼻腔内投与されると、有意に削減可能であることを示す。例えば、実施例９では、嗅上皮へ直接鼻腔内送達されるプールヒトＩｇＧの低用量（０．００２ｇ／ｋｇのＩｇＧ）の投与が、プールヒトＩｇＧの１０倍の高用量（０．０２ｇ／ｋｇのＩｇＧ）の静脈内投与の場合と、脳の右及び左半球へ送達されるＩｇＧは実質的に同量になる（表７１及び表７２内の右及び左半球ＩｇＧ送達に対する補正ＡＵＣ値を比較）。投与に必要なプールヒトＩｇＧ量が１０分の１に減少したことは、プールヒトＩｇＧの供給量が限られているため高コストであることを考慮すると、重要である。
【０１０５】
上記の結果が、まとめると、鼻腔内投与プールヒトＩｇＧの低用量が、アルツハイマー病の治療に有効であることを示唆することは、鼻腔内投与を介して脳へ完全長の免疫グロブリンを送達することの困難さを考慮すると、驚くべきことである。第一に、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ）は、以前に鼻腔内投与されているが、発明者らは、鼻腔内投与を介しての脳への完全長抗体の送達を実証する報告のことは知らない。実際、完全長抗体の送達は、医学の分野に大変な困難を提起していると報告されている（Ｈａｒｍｓｅｎ  ＭＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００７，７７（１）：１３−２２、Ａｔｈｗａｌ  ＧＳ，Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｕｌｙ２００９；ＷＯ２００６／０９１３３２及びＷＯ２００９／０５８９５７）。これらの報告と一貫して、出願者は、抗体フラグメントが、鼻腔内投与後、完全長の免疫グロブリンに比べ、非常に容易に脳へ送達されることを発見した。例えば、実施例２では、平均で、鼻腔内投与後の脳組織におけるＦａｂ濃度が、鼻腔内投与後の完全長免疫グロブリン濃度よりも１９倍高いことを示す。完全長免疫グロブリンの脳への送達が非常に低度であることを考慮すると、プール免疫グロブリンの鼻腔内投与が、本明細書に示す有効な結果を提供することは、驚くべきことである。
【０１０６】
好都合にも、本明細書で開示されるプールヒトＩｇＧ組成物の鼻腔内送達は、対象の皮膚穿刺を必要とする静脈内投与、皮下投与及び筋肉内投与に比べ、非侵襲性手段によって達成できる。例えば、実施例３では、プールヒトＩｇＧが、点鼻または鼻内噴霧により脳へ効率的に送達できることを示す。
【０１０７】
プールヒトＩｇＧの鼻腔内投与のために本明細書が提供する方法及び組成物による別の利益は、患者コンプライアンスが改善されることである。静脈内ＩｇＧ（ＩＶＩＧ）治療は、医学的管理下における長時間の投与を必要とするため、通常、病院や医療施設で行われる。例えば、ＩＶＩＧの最初の投与は、２時間から５時間かけて行われ、２日から７日間連続で１日に１回、実行される。典型的に、病院で２時間から５時間に渡って投与されるフォローアップ用量も、治療される適応症及び投与レジメンに応じて、１週から４週毎に必要である。そのような投与レジメンは時間がかかるので、多くの患者にとって不都合である。これに比べ、鼻腔内投与は、自宅で医学的な管理なしに実行できる。また、鼻腔内投与は、静脈内投与に必要な数時間ではなく、必要な滴数やスプレー数に応じて、数分間ですばやく実行できる。したがって、治療は、より短時間で自宅で投与が行えるため、不便さがほぼない状態で、ＣＮＳ内に有効なレベルのＩｇＧを維持するために、より頻繁に、且つ、より低用量で処方できる。
【０１０８】
さらに、ＩＶＩＧ療法は、カテーテルの部位で不快さと感染が起こる可能性のあるカテーテル法を必要とする。ＩＶＩＧ溶液は、等張性を持たせる目的でしばしばナトリウム及びグルコースが高濃度であるので、既に糖尿病や高血圧の罹患率が高い高齢者層のリスクを増大させるものである。他方、鼻腔内投与は非侵襲性である。すなわち、全くカテーテルを使用せず、例えばカテーテル部位の感染や不快さ等の、侵襲的手順関連のリスクを伴わない。プールヒトＩｇＧ組成物の鼻腔内投与は、ＩＶ灌流を必要としないので、血中の塩またはグルコース濃度を全身的に上昇させることがないため、高齢者のための改善型手順である。
【０１０９】
したがって、プールヒトＩｇＧを投与するのに現在用いられている様式（例えば、静脈内、皮下及び筋肉内投与）に比べ、鼻腔内投与は、投与の容易さを向上させ、全体的な投与時間を減少させ、必要な病院訪問数を減少させ、及び、カテーテルベースの投与（例えば、ＩＶ投与）に関連するリスクを排除する。したがって、プールヒトＩｇＧの鼻腔内投与の実行は、患者コンプライアンスの改善に至る。
【０１１０】
定義
本明細書中で用いる用語「中枢神経系の障害」、「中枢神経系障害」及び「ＣＮＳ障害」等は、一般に、神経学的な及び／または精神医学的な症状を呈する対象の脊髄（例えば、脊髄症）あるいは脳（例えば、脳症）を冒す障害に言及する。ＣＮＳ障害は、多くの神経変性疾患（例えば、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、遺伝性痙性片麻痺、原発性側索硬化症、脊髄性筋萎縮、ケネディ病、アルツハイマー病、運動失調症、ハンチントン舞踏病、レビー小体病、ポリグルタミンリピート病及びパーキンソン病）及び精神障害（例えば、気分障害、統合失調症及び自閉症）を含む。運動失調症の非限定的な例としては、フリードライヒ運動失調症及び脊髄小脳失調症が挙げられる。特にこの適用に対しては、ＣＮＳ障害は、急性ウイルス性及び細菌性感染症から生じる障害を含まない。
【０１１１】
ＣＮＳ障害の非限定的な例としては、中枢神経系の神経変性障害、中枢神経系を主に冒す全身萎縮、錐体外路及び運動障害、中枢神経系の脱髄障害、中枢神経系の突発性または発作性障害、中枢神経系の麻痺症候群、中枢神経系の神経、神経根または神経叢の障害、器質性精神障害、精神活性物質の使用に起因する精神または行動障害、統合失調症性、統合失調型または妄想性障害、気分（感情）障害、神経症性、ストレス関連性または身体表現性障害、行動症候群、成人の人格または行動障害、心理発達障害、及び、幼児発病の行動障害または情動障害が挙げられる。（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＤＳＭ−ＩＶ）；Ｔｈｅ  Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，１０ｔｈ  ｒｅｖｉｓｉｏｎ（ＩＣＤ−１０），ＣｈａｐｔｅｒＶ）他の模範的なＣＮＳ障害については、以下の本明細書中に示す。
【０１１２】
神経変性ＣＮＳ障害は、典型的に、中枢神経系内の進行性機能障害及び／または細胞死によって特徴づけられる。多くの神経変性ＣＮＳ障害の特質は、例えばβアミロイド、タウ、αシヌクレイン及びＴＤＰ−４３等のミスフォールドタンパク質の、細胞内及び細胞外蓄積である。多くの神経変性疾患は、著しいミトコンドリア機能障害にも関連する。神経変性ＣＮＳ障害の一般的な例としては、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン舞踏病及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）が挙げられる。
【０１１３】
精神障害（精神病とも呼ぶ）は、一般に、失認及び気分失調症を呈する。精神障害は、一般に、どのように個人が感じる、行動する、考える、あるいは感知するかの組合せによって定義される。精神障害の分類のために十分に確立されたシステムとしては、すべての目的で参照により全内容が本明細書に援用されるＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｂｌｅｍｓ，１０ｔｈ  Ｒｅｖｉｓｉｏｎ（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，ｔｅｎｔｈ  ｒｅｖｉｓｉｏｎ（２０１０）、及び、すべての目的で参照により全内容が本明細書に援用されるＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ（ＤＳＭ−ＩＶ；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，ＤＳ−ＩＶ−ＴＲ（２０００）が挙げられる。精神障害の一般的な例としては、気分障害、統合失調症及び自閉症が挙げられる。
【０１１４】
本明細書中で用いる用語「プールヒト免疫グロブリンＧ」及び「プールヒトＩｇＧ」は、複数の提供者からの、例えば、１００人超または１０００人超の血液提供者からの血液や血漿から精製された多価免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物に言及する。典型的に、その組成物は、少なくとも８０％ＩｇＧ（ｗ／ｗ、例えば、総タンパク質重量に対するＩｇＧ重量）であり、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％ＩｇＧ（ｗ／ｗ）であることが好ましい。ある特定の実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、無傷ＩｇＧ免疫グロブリンを含む。他の実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、ＩｇＧフラグメント、例えば、トリプシンで無傷抗体を処理することによって調製したものを含む。ある特定の実施形態においては、本明細書に開示の治療に使用されるプールヒトＩｇＧ組成物は、自然修飾または合成修飾、例えば、翻訳後修飾及び／または化学修飾を含む。
【０１１５】
本明細書中で用いる用語「高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ」及び「高力価抗アミロイドβプールＩｇＧ」は、複数の提供者からの、例えば、１００人超または１０００人超の血液提供者からの血液や血漿から精製された多価免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物に言及する。その組成物は、１０００人超のランダムな個人からの血液や血漿から調製されたプールＩｇＧ組成物内の抗アミロイドβ免疫グロブリンの期待力価よりも大きな相対力価の抗アミロイドβ免疫グロブリンＧを持つ。市販の静脈内免疫グロブリンＧ（ＩＶＩＧ）製剤は、例えば、アミロイドβモノマー、アミロイドβフィブリル及び架橋アミロイドβタンパク質種（ＣＡＰＳ）等の、アミロイドβの種々のコンフォーマーのエピトープを特異的に識別するＩｇＧを含む。ＧＡＭＭＡＧＡＲＤ  ＬＩＱＵＩＤ（登録商標）（１０％免疫グロブリン注入液（ヒト）；Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）の市販製剤は、０．１％の抗アミロイドβフィブリルＩｇＧ、０．０４％の抗ＣＡＰＳ  ＩｇＧ、及び０．０２％の抗アミロイドβモノマーＩｇＧを含み、それらの各々が、それらの標的アミロイドβコンフォーマーに対して、４０ｎＭ、４０ｎＭ、及び３５０ｎＭのＥＣ５０親和性を持つと報告されている（すべての目的において参照により全内容が本明細書に援用されるＯ'Ｎｕａｌｌａｉｎ  Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００８ Ｎｏｖ２５；４７（４７）：１２２５４−６）。いくつかの実施形態においては、高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ組成物が、アミロイドβの一つまたは複数のコンフォーマーに対して特異的な高力価のＩｇＧを含む。他の実施形態における高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ組成物は、アミロイドβモノマー、アミロイドβフィブリル及び架橋アミロイドβタンパク質種（ＣＡＰＳ）に対して特異的な高力価のＩｇＧを含む。
【０１１６】
したがって、一つの実施形態における高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ組成物は、少なくとも０．１％の抗アミロイドβ  ＩｇＧ（例えば、いずれかのアミロイドβコンフォーマーに対する特異的親和性を持つ０．１％のＩｇＧ）を含む。別の実施形態における高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ組成物は、少なくとも０．２％の抗アミロイドβ  ＩｇＧを含む。さらに他の実施形態における高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ組成物は、少なくとも０．１５％、０．２％、０．２５％、０．３％、０．３５％、０．４％、０．４５％、０．５％、０．５５％、０．６％、０．６５％、０．７％、０．７５％、０．８％、０．８５％、０．９％、０．９５％、１．０％、１．５％、２．０％、２．５％、３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、５．０％または、それより多くの抗アミロイドβ  ＩｇＧを含む。
【０１１７】
一つの実施形態における高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ組成物は、少なくとも０．１％の抗アミロイドβフィブリルＩｇＧを含む。別の実施形態における高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ組成物は、少なくとも０．２％の抗アミロイドβフィブリルＩｇＧを含む。さらに他の実施形態における高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ組成物は、少なくとも０．１５％、０．２％、０．２５％、０．３％、０．３５％、０．４％、０．４５％、０．５％、０．５５％、０．６％、０．６５％、０．７％、０．７５％、０．８％、０．８５％、０．９％、０．９５％、１．０％、１．５％、２．０％、２．５％、３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、５．０％または、それより多くの抗アミロイドβフィブリルＩｇＧを含む。
【０１１８】
一つの実施形態における高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ組成物は、少なくとも０．０４％の抗ＣＡＰＳ  ＩｇＧを含む。別の実施形態における高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ組成物は、少なくとも０．０８％の抗ＣＡＰＳ  ＩｇＧを含む。さらに他の実施形態における高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ組成物は、少なくとも０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１％、０．１５％、０．２％、０．２５％、０．３％、０．３５％、０．４％、０．４５％、０．５％、０．５５％、０．６％、０．６５％、０．７％、０．７５％、０．８％、０．８５％、０．９％、０．９５％、１．０％、１．５％、２．０％、２．５％、３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、５．０％または、それより多くの抗ＣＡＰＳ  ＩｇＧを含む。
【０１１９】
一つの実施形態における高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ組成物は、少なくとも０．０２％の抗アミロイドβモノマーＩｇＧを含む。別の実施形態における高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ組成物は、少なくとも０．０４％の抗アミロイドβモノマーＩｇＧを含む。さらに他の実施形態における高力価抗アミロイドβプール免疫グロブリンＧ組成物は、少なくとも０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、０．１％、０．１５％、０．２％、０．２５％、０．３％、０．３５％、０．４％、０．４５％、０．５％、０．５５％、０．６％、０．６５％、０．７％、０．７５％、０．８％、０．８５％、０．９％、０．９５％、１．０％、１．５％、２．０％、２．５％、３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、５．０％または、それより多くの抗アミロイドβモノマーＩｇＧを含む。
【０１２０】
高力価抗アミロイドβプールＩｇＧは、複数の提供者、例えば、１００人超または１０００人超の血液提供者からの血液や血漿の標準規格プールから始めるプールＩｇＧ製造の標準的な方法によって調製でき、その後、抗アミロイドβ免疫グロブリンＧが富化される。標的特異的免疫グロブリンＧ分子の富化方法は、当該技術分野において既知である（すべての目的において参照により全内容が本明細書に援用される例えば、米国特許出願公開第２００４／０１０１９０９号を参照）。あるいは、高力価抗アミロイドβプールＩｇＧは、高相対力価の抗アミロイドβ免疫グロブリンＧを持つ少なくとも５０人、１００人、２００人、５００人または１０００人の提供者からの血液や血漿の富化プールから始めるプールＩｇＧ製造の標準的な方法によって、調製できる。静脈内投与のための標準ＩｇＧの製造に比べ、高度免疫ＩｇＧ製剤は、一般に、より小さなドナープールから調製される。血液や血漿のこれらの富化プールは、例えば、高相対力価の抗アミロイドβ免疫グロブリンＧを持つ血液や血漿の提供または提供者を選択的にプールすることによって、例えば、高力価の血液や血漿の提供または提供者の選択によって作成できる。あるいは、血液や血漿の富化プールは、低相対力価の抗アミロイドβ免疫グロブリンＧを持つ血液や血漿の提供または提供者をスクリーニングし、これらの提供または提供者を出発血液・血漿プールから除外することによって、例えば、低力価血液や血漿の提供または提供者のスクリーニングによって作成できる。
【０１２１】
本明細書中で用いる用語「無傷性」は、投与後の特定の時点において少なくとも部分的に分解されていない治療薬のパーセンテージを示す。一つの実施形態における無傷性は、特定の時点で未だに少なくとも部分的に分解されていない全投与用量の治療薬（すなわち、全身的無傷性）を表すものである。別の実施形態における無傷性は、少なくとも部分的に分解されていない、対象の特定部位、例えば脳または血流に存在する治療薬（すなわち、局所的無傷性）の程度を表す。一つの実施形態においては、投与免疫グロブリン（例えば、プールヒトＩｇＧ）の無傷性が、質量分析によって測定される。例えば、投与免疫グロブリンの無傷性は、質量分析により、対象からの生体試料または生体試料から抽出されたタンパク質を分析することによって測定される。いくつかの実施形態における投与免疫グロブリンの無傷性は、対象からの生体試料内に存在するタンパク質を、分子量、サイズまたは形状で分類することによって（例えば、電気泳動またはサイズ排除クロマトグラフィーによって）、そして試料内の投与免疫グロブリンのサイズ分布を判定することによって測定される。
【０１２２】
一つの実施形態においては、鼻腔内投与後の対象の脳内の免疫グロブリン（例えば、プールヒトＩｇＧ）の無傷性が、少なくとも４０％である。好適実施形態における鼻腔内投与後の対象の脳内の免疫グロブリン（例えば、プールヒトＩｇＧ）の無傷性は、少なくとも５０％であり、少なくとも６０％であることが好ましい。ある特定の実施形態における鼻腔内投与後の対象の脳内の免疫グロブリン（例えば、プールヒトＩｇＧ）の無傷性は、少なくとも３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、または、それより高いものである。
【０１２３】
本明細書中で用いる用語「鼻腔内投与」及び「鼻投与」は、組成物内の治療薬が、鼻内に位置する一種または複数種の上皮へ直接送達されるよう、対象の鼻腔へ治療組成物を投与することを意味する。ある特定の実施形態においては、液体製剤（例えば、水性製剤）、エアロゾル製剤、または乾燥粉末製剤を使用して鼻腔内投与が達成される。それらの各々は、外的推進型または（例えば、吸入による）自己推進型非侵襲性鼻送達デバイスによって、または一種もしくは複数種の鼻上皮（例えば、嗅上皮または鼻呼吸上皮）に直接塗布されるジェル、クリーム、軟膏、ローションまたはペーストとして投与される。
【０１２４】
本明細書中で用いる用語「鼻上皮」は、鼻腔の内部構造を覆う組織に言及する。用語、鼻上皮は、ヒトの鼻腔の下側３分の２に位置する鼻呼吸上皮とヒトの鼻腔の上側３分の１に位置する嗅上皮との両方を含む。
【０１２５】
本明細書中で用いる用語「嗅上皮」は、嗅覚に関わる鼻腔内の特殊な上皮組織に言及する。ヒトの嗅上皮は、鼻腔の上側３分の１に位置する。
【０１２６】
本明細書中で用いる用語「指向性投与」は、薬剤の第二の部位へのまたは全身的な分布と比べて、対象の第一の部位へ選択的に治療薬を送達するプロセスに言及する。例えば、一つの実施形態における治療薬の指向性投与では、非標的部位に送達された治療薬に対する標的部位に送達された治療薬の比率が、全身的な投与後あるいは非指向性投与後のその比率と比べて、少なくとも２倍の上昇に至る。他の実施形態における治療薬の指向性投与は、非標的部位に送達された治療薬に対する標的部位に送達された治療薬の比率が、全身的な投与後あるいは非指向性投与後のその比率と比べて、少なくとも３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、７５０倍、１０００倍の、または、それより大きな増加に至る。特定の実施形態では、薬剤の指向性投与が、薬剤の静脈内投与に対比される。例えば、一つの実施形態においては、治療薬が静脈内投与される場合に比べ、薬剤の指向性投与により（例えば、鼻腔内投与を介しての脳への送達によって）、血流内に存在する治療薬に対する標的部位に存在する治療薬の比率が、少なくとも２倍に増大される。
【０１２７】
本明細書中で用いる用語「非侵襲性鼻送達デバイス」は、対象の上皮を突き通すことなく、治療組成物（例えば、プールヒトＩｇＧ）を鼻腔へ送達可能な器具に言及する。非侵襲性鼻送達デバイスの非限定的な例は、推進型（例えば、加圧吸入器）及び非推進型（例えば、ポンプ型吸入器）エアロゾルまたはアトマイザーデバイス、粒子分散デバイス、噴霧器、及び、液体または粉末調合物の送達の加圧型嗅覚器送達デバイスを含む。
【０１２８】
用語「治療」または「療法」は、概して、所望の生理学的効果を得ることを意味する。その効果は、疾患またはその病状あるいは症状を完全に、または部分的に阻止するという観点での予防であってもよく、及び／または損傷、疾患あるいは病状の部分的あるいは完全な治癒、及び／または損傷、疾患あるいは病状に起因する有害作用の改善という観点での治療的なものであってもよく、疾患あるいは病態の発症を停止させることまたは退縮を引き起こすことを含む。治療は、発症の遅延、症状の改善、患者生存の改善、生存期間または率の増加、認知機能の改善などにも言及できる。治療の効果は、治療を受けない個人あるいは群に比較することができる。
【０１２９】
本明細書中で用いる用語「治療有効量または用量」あるいは「十分な／有効な量または用量」は、投与によって効果が生じる用量に言及する。正確な用量は治療の目的に依存するが、当業者は、既知の技術を用いて確認することが可能である（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１−３，１９９２）；Ｌｌｏｙｄ，Ｔｈｅ  Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）；Ｐｉｃｋａｒ，Ｄｏｓａｇｅ  Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００３，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ&Ｗｉｌｋｉｎｓを参照）。
【０１３０】
本明細書で使用する用語「用量」及び「投薬量」は、互換可能であり、投与毎に個人に与えられる有効成分の量を指す。その用量は、投与の頻度、個人の体格及び許容性、病状の重症度、副作用のリスク、及び、投与の経路を含む複数の要因に応じて異なる。当業者には明らかであるが、用量は、上記要因に応じて、あるいは治療の進展に基づき修正可能である。用語「剤形」は、医薬の特定の形態に言及し、投与の経路に依存する。例えば、剤形は、鼻腔内投与のために調製された液体または乾燥粉末であってもよい。
【０１３１】
本明細書中の「本質的に緩衝剤及びプールヒトＩｇＧからなる」治療組成物は、例えば、界面活性剤、緩衝剤、塩及び安定化剤などの、製造プロセス中に使用される残留レベルの化学物質を含んでもよい。また、最終的な組成物のｐＨを整える化学物質、例えば、酸（例えば、塩酸または酢酸）あるいは塩基（例えば、ナトリウムまたは水酸化カリウム）が寄与する対イオン、及び／または痕跡量の混入タンパク質を含んでもよい。
【０１３２】
本明細書中で用いる用語「透過性増大剤」は、鼻腔内投与のために調製された治療組成物の、鼻上皮を通してのバイオ治療薬（例えば、ミメティボディ及びＦｃ融合ポリペチド）の通過を促進する成分に言及する。透過性増大剤の非限定的な例は、膜流動化剤、密着結合変調剤、及び中間鎖長脂肪酸とそれらの塩及びエステルを含む。中間鎖長脂肪酸とそれらの塩及びエステルの非限定的な例は、モノ、ジ及びトリグリセリド（カプリル酸ナトリウム、カプリン酸ナトリウム、グリセリド（ＣＡＰＭＵＬ、ＧＥＬＵＣＩＲＥ４４／１４  ＰＥＧ３２ラウリン酸グリセリルＥＰ）等、脂質、ペグ化ペプチド、及びリポソームを含む。界面活性剤及び同様に作用する化合物も、透過性増大剤として使用できる。界面活性剤及び同様に作用する化合物の非限定的な例は、ポリソルベート−８０、ホスファチジルコリン、Ｎ−メチルピペラジン、サリチル酸ナトリウム、メリチン及びパルミトイルカルニチンクロリド（ＰＣＣ）を含む。本明細書に説明するプールヒト免疫グロブリンＧ組成物は、概して、透過性増大剤なしで鼻腔内投与のために調製される。
【０１３３】
本明細書中で用いる用語「乾燥粉末組成物」は、治療用プールヒトＩｇＧ調合物の凍結乾燥された、あるいはスプレー乾燥された形態に言及する。一つの実施形態における乾燥粉末組成物は、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれよりも少ない残留水分を含む。
【０１３４】
本明細書中で用いる「対照」は、実験群との比較のための基準、通常既知の基準に言及する。当業者は、特定の状況下で、どの対照が重要であるかを理解し、対照値との比較に基づき、データを分析することができる。対照は、また、データの有意性を判定するためにも重要である。例えば、複数の対照において特定のパラメータに対する値が広く異なる場合、テスト試料における相違は有意なものとはみなされない。
【０１３５】
本開示のより詳細な説明の前に理解すべきことは、本発明が、説明される特定の実施形態に限られることはなく、そのため、もちろん異なっても良い、ということである。また、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲のみによって限定されるため、本明細書中で用いる用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的とし、限定することを意図しないということも理解すべきである。
【０１３６】
本発明では、値の範囲が提供されている場合、その範囲の上限及び下限の間の、文脈が明確にそうではないと述べていない限り、下限値の単位の１０分の１までの各間の値が、また、その所定範囲内のいかなる他の所定値あるいは間の値が包含される、と理解すべきである。これらのより小さな範囲の上限及び下限は、より小さな範囲内に独立して含まれてもよいし、また、本発明内に包含されるが、所定範囲内の特別に排除される極限値の対象となる。所定範囲が極限値の一方または両方を含む場合、それらの包含される極限値のいずれか、または両方を除外する範囲も、本発明では包含される。
【０１３７】
そうでないと定義されない限り、本明細書中で用いるすべての技術的及び科学的な用語は、本発明が属する当該技術分野における当業者が一般に理解するのと同じ意味を持つ。本発明の実施またはテストの際に、本明細書に説明のものと類似あるいは等価ないずれの方法及び材料も使用できるが、代表的な例示的な方法及び材料を、今から説明する。
【０１３８】
注意すべきは、本明細書及び添付の特許請求の範囲で用いる単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確にそうではないと述べていない限り、複数形のものをも含むことである。さらに、請求項は、オプションの要素を除外して起草されている可能性があることにも注意すべきである。よって、この声明は、請求項要素の記述あるいは「否定的」限定の使用に関連して、「のみ」、「単独で」等の排他的な用語の使用のための先の記載としての役割を担うことを意図する。
【０１３９】
本開示を読めば当業者には明らかであるが、本明細書中に説明され図示される個々の実施形態の各々には、本発明の範囲または精神を逸脱することなく、他の複数の実施形態のいずれの特徴からも容易に切り離せる、あるいはいずれの特徴にも組み合わせることが可能な、別個の構成要素及び特徴がある。詳述されるいずれの方法も、詳述される事象の順序で、または論理的に可能ないかなる他の順序ででも実行できる。
【０１４０】
投与
鼻腔内（ＩＮ）投与は、非侵襲性であり、また、嗅覚系と脳とが直結されているため、脳へ薬剤を送達するのに有利な様式である。神経学的な疾患を治療するＩｇＧ鼻腔内投与（ＩＮＩＧ）は、特に有利である。その理由は、嗅覚系と脳との直結が、血液脳関門（ＢＢＢ）に関連する送達についての懸念を取り除き、薬剤に対する全身的な曝露が最小になるため、薬剤の副作用も最小になる。さらに、ＩＮ送達は、例えば、粉末、顆粒、溶液、軟膏、及びクリーム等の組成物を許容するため、静脈内投与及び筋肉内投与を不要にする。例えば、薬剤は、鼻腔内投与されると、鼻粘膜を通り嗅神経路に沿って輸送される。薬剤は、単独で投与できるし、鼻粘膜を通しての嗅神経路に沿った輸送を促進するよう、担体分子に結合させることもできる。薬剤は、吸収促進剤と組み合わせて投与することもできる。吸収促進剤は、鼻粘膜を通しての、また、嗅神経路に沿っての薬剤の吸収を促進する。さらに、嗅神経路全体に渡って薬剤輸送を容易にするよう、追加の分子を加えることもできる。
【０１４１】
ＩＮ投与は、三叉神経経路を介して脳へ治療薬を送達するために使用することもできる。具体的には、三叉神経経路を介してＩｇＧを送達するようＩＮ投与を使用できる。嗅神経及び三叉神経は、ＩＮ投与で高濃度の薬剤を受ける。その理由は、吸収力のある呼吸偽上皮及び嗅覚偽上皮には、三叉神経が分布しているためである。その結果、これらの神経は、脳内へ、及び他の器官へ薬剤を輸送できる。例えば、三叉神経枝は、上顎洞、脳幹、後脳、篩板、前脳（例えば、皮質及び間脳）、口腔顔面器官（例えば、歯、咬筋及び顎関節）、中脳、小脳、頸髄、胸髄及び腰髄へ、直接または間接的に到達する。したがって、ＩＮＩＧは、神経学的な疾患に到達し治療を行うよう、三叉神経経路全体に渡って輸送可能である。
【０１４２】
ある特定の実施形態における方法は、嗅神経及び／または三叉神経が分布する組織への、プールヒト免疫グロブリンの投与によるＣＮＳ障害の治療のために提供される。驚くべきことに、治療有効量のプールヒト免疫グロブリンが、鼻腔内投与により、ＣＮＳへ送達されることが発見された。例えば、本明細書に示すように、プールヒト免疫グロブリンの鼻腔内投与は、アルツハイマー病のげっ歯類モデルにおいて総アミロイドプラーク量を減少させるのに有効である。さらに、呼吸器系（肺、咽頭など）に比べ、鼻上皮を特異的に標的とすることによって、プールヒト免疫グロブリンによる全身的な曝露は減少する。
【０１４３】
本明細書で提供する方法を実践するために、多くのタイプの鼻腔内送達デバイスが使用できる。いくつかの実施形態における送達デバイスは、液体投与のための鼻腔内デバイスである。液体組成物（例えば、液体プールＩｇＧ組成物）の投与に有用なデバイスの非限定的な例は、蒸気デバイス（例えば、蒸気吸入器）、滴下デバイス（例えば、カテーテル、単一用量スポイト、マルチ用量スポイト及び単位用量ピペット）、機械式スプレーポンプデバイス（例えば、スクイーズボトル、マルチ用量測定用量スプレーポンプ及び単一あるいは二用量スプレーポンプ）、二方向スプレーポンプ（例えば、呼吸起動式鼻送達デバイス）、ガス駆動スプレーシステムあるいは噴霧器（例えば、従来型円周速度吸入器を含む単一またはマルチ用量ＨＦＡあるいは窒素推進駆動測定用量吸入器）、及び、電気駆動ネブライザーあるいはアトマイザー（例えば、脈動薄膜ネブライザー、機械式振動ネブライザー及び携帯機械式ネブライザー）を含む。いくつかの実施形態における送達デバイスは、粉末またはジェルの投与のための鼻腔内デバイスである。粉末組成物（例えば、凍結乾燥またはそれ以外の乾燥プールＩｇＧ組成物）の投与に有用なデバイスの非限定的な例は、機械式粉末噴霧器（例えば、手動式カプセルベース粉末スプレーデバイス及び手動式粉末スプレーデバイス、手動式ジェル送達デバイス）、呼吸起動式吸入器（例えば、単一あるいはマルチ用量鼻吸入器及びカプセル型単一あるいはマルチ用量鼻吸入器）、及び、吹入れ器（例えば、呼吸起動式鼻送達デバイス）を含む。いくつかの実施形態においては、プールヒト免疫グロブリンが、鼻腔の上側３分の１に位置する嗅覚野、特に嗅上皮に優先して投与される。嗅神経の線維は、鼻腔の上位３分の１に位置する嗅覚受容細胞の無髄軸索である。嗅覚受容細胞は、鼻腔内へ突出する毛髪状繊毛に覆われた隆起部を持つ双極ニューロンである。反対側では、これらの細胞からの軸索が凝集体に集まって、鼻の頂部で頭蓋腔に入る。一管の薄い軟膜に囲まれて、嗅神経は、ＣＳＦを含むクモ膜下腔を横切り、嗅球の下面に入る。プールヒト免疫グロブリンが鼻腔内へ投与されると、免疫グロブリンは、鼻粘膜を通り、嗅球とそれに相互接続する脳の領域内、例えば、海馬体、扁桃核、マイネルトの基底核、青斑核、脳幹などへ輸送される（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（２０１０）７（３）：８８４−８９３）。
【０１４４】
ある特定の実施形態においては、プールヒト免疫グロブリンが、三叉神経が分布する組織へ投与される。三叉神経は、哺乳動物（例えば、ヒト）の頭部の、顔皮及び頭皮、口腔組織と眼球を囲む組織を含む組織に神経を張り巡らす。三叉神経は、三つの主要枝、眼神経、上顎神経及び下顎神経を持つ。いくつかの実施形態においては、本明細書で提供する方法は、これらの三叉神経枝、すなわち三叉神経経路の一つまたは複数への、プールヒト免疫グロブリンの標的投与を含む。いくつかの実施形態においては、本明細書で提供する方法は、上顎洞へのプールヒト免疫グロブリンの標的投与を含む。それにより、三叉神経経路を通して、脳幹、後脳、篩板、前脳（例えば、皮質及び間脳）、中脳、小脳、頸髄、胸髄及び腰髄に到達させる。ある特定の実施形態においては、本明細書で提供する方法は、ＣＮＳ障害（例えば、アルツハイマー病）の治療のための、プールヒト免疫グロブリンの標的投与を含む。
【０１４５】
いくつかの実施形態におけるプールヒト免疫グロブリンは、三叉神経が分布する鼻組織、例えば、副鼻洞、鼻腔の下位３分の２及び鼻中隔を含む鼻組織に投与される。ある特定の実施形態におけるプールヒト免疫グロブリンは、鼻腔の下位３分の２及び／または鼻中隔へ向けられる。
【０１４６】
いくつかの実施形態におけるプールヒト免疫グロブリンは、個人の一方または両方の上顎洞へ投与される。上顎洞への投与のための方法及びデバイスは、当該技術分野において既知である。例えば、すべての目的において参照により全内容が本明細書に援用される米国特許出願公開第２０１１／０１５１３９３号を参照。
【０１４７】
上顎洞は、左右の上顎洞から成り、患者の鼻腔に流体連通している。各々の上顎洞は、上顎洞のオリフィスを介して、対応する鼻道に通じている。成人の上顎洞の最大容積は約４から１５ｍｌであるが、個々の副鼻洞が、この範囲外の容積を持つ可能性はある。
【０１４８】
鼻道から上顎洞の対応するオリフィスへ、そして最終的に対応する上顎洞への経路は、上顎洞のオリフィスへ至る鼻道内へデバイスが挿入されることを許容するので、プールヒト免疫グロブリンの少なくとも一つの有効な量または用量を、上顎洞内へ投与送達可能である。上顎洞への経路は屈曲しているため、以下のことが必要である。鼻孔を通過させること、下鼻甲介及び中鼻甲介間の領域を通って移動させること、半月裂孔内へ進ませること、上顎洞開口内へ上側に進行させること、上顎洞への小孔あるいは管の通過の繊毛作用に抵抗させること、及び、最終的に上顎洞それ自体の中へ移動させること。
【０１４９】
三叉神経が上顎洞を通っているため、上顎洞への送達後のプールヒト免疫グロブリンは、三叉神経に沿って、三叉神経が分布する器官へ移動する。この様式で、上顎洞の一方または両方へ投与されたプールヒトＩｇＧは、三叉神経を介して脳へ送達される。
【０１５０】
一つの実施形態においては、ＣＮＳ障害（例えば、アルツハイマー病）の治療のために本明細書で提供されるプールヒトＩｇＧ組成物が、液体製剤、例えば、水性製剤として鼻腔内投与される。例えば、一つの実施形態においては、頭を十分に後ろに傾け、点鼻剤を鼻孔内へ適用することによって、鼻腔内に点鼻剤が導入される。別の実施形態における点鼻剤は、鼻で吸い上げる。別の実施形態における点鼻剤は、アプリケータまたはチューブで鼻粘膜の上側３分の１へ適用される。別の実施形態における点鼻剤は、アプリケータまたはチューブで、対象の上顎洞の一方あるいは両方へ適用される。別の実施形態における液体製剤は、適切なデバイスに入れられて、鼻腔を通しての吸入のためにエアロゾル化されてもよい。例えば、一つの実施形態における治療薬は、プラスチックボトルアトマイザーに入れられる。特定の実施形態におけるアトマイザーは、スプレーの相当量を、鼻腔の上側３分の１の領域または部分（例えば、嗅上皮）へ向けることが可能なように有利に構成される。別の実施形態における液体製剤は、吸入器、例えば、測定用量吸入器（例えば、米国特許第６，７１５，４８５号を参照）を介して、エアロゾル化されて適用される。特定の実施形態における吸入器は、エアロゾルの相当量を、鼻腔の上側３分の１の領域または部分（例えば、嗅上皮）へ向けることが可能なように有利に構成される。ある特定の実施形態においては、相当量のプールヒト免疫グロブリンが、組成物の少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％に当たり、それが、鼻腔の上側３分の１の領域へ投与される（例えば、鼻上皮の上側３分の１へ投与される）。
【０１５１】
一つの実施形態においては、ＣＮＳ障害（例えば、アルツハイマー病）の治療のために本明細書で提供されるプールヒトＩｇＧ組成物が、乾燥粉末として鼻腔内投与される。乾燥粉末鼻送達デバイスは、当該技術分野において既知である。例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ１９９６／２２２８０２を参照。一つの実施形態においては、鼻腔内投与後のプールヒトＩｇＧが、鼻腔の上側３分の１に見られる嗅上皮全体で吸収される。別の実施形態においては、鼻腔内投与後のプールヒトＩｇＧが、鼻腔の下側３分の２内に位置する、三叉神経が分布している鼻呼吸上皮全体で吸収される。三叉神経は、また、顔及び頭の真皮の結合部、口腔粘膜及びある特定の領域にも分布しており、ＩｇＧの鼻腔内投与後の吸収は、これらの領域からも行われる。他の実施形態における鼻腔内投与後のプールヒトＩｇＧは、上顎洞上皮全体で吸収される。さらに他の実施形態では、プールヒトＩｇＧは、これらの鼻上皮の一つを超える全体で吸収されてもよく、その後、対象の脳へ送達される。
【０１５２】
本明細書書中では、投与が、治療コースの規則的な、あるいは不規則な頻度で行われてもよい単一の事象として言及されているが、単一の投与が複数の投与を含んでもよい。この点に関しては、プールヒトＩｇＧの単一の投薬量が、投与のために、二つ以上の物理的組成物へ分割されてもよい。例えば、２００ｇ／ｌのＩｇＧで調製された液体組成物の場合、２００ｍｇ用量のプールヒトＩｇＧは、各々が２５０μｌの体積を持つ４滴で、５０ｋｇの対象へ投与されてもよい（４ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ）。同様に、単一投薬量のプールヒトＩｇＧを含む乾燥粉末組成物は、例えば、別個の２回以上の吹き付けで投与されてもよい。いくつかの実施形態においては、プールヒトＩｇＧは、１回または複数回の吹き付けまたはスプレーで（例えば、右鼻孔への１回または複数回の吹き付けと左鼻孔への１回または複数回の吹き付けで）、個人の各鼻孔内へ投与される。
【０１５３】
ある特定の実施形態においては、ＣＮＳ障害を治療するための本明細書で説明される方法は、非侵襲性鼻腔内送達デバイスを介してのプールヒトＩｇＧの鼻腔内投与を含む。一つの実施形態における非侵襲性鼻腔内送達デバイスは、非推進型エアロゾルまたはアトマイザーデバイス、推進型エアロゾルまたはアトマイザーデバイス、非推進ポンプ型デバイス、粒子分散デバイス、ネブライザーデバイス、または加圧型嗅覚器送達デバイスである。
【０１５４】
一つの実施形態における非侵襲性鼻腔内送達デバイスは、対象の鼻腔へ、プールヒトＩｇＧ組成物の液滴を送達する。特定の実施形態における非侵襲性鼻腔内送達デバイスは、対象の鼻上皮へ直接、プールヒトＩｇＧの液滴を送達する。より特定の実施形態における非侵襲性鼻腔内送達デバイスは、対象の嗅上皮へ直接、プールヒトＩｇＧの液滴を送達する。一つの実施形態における液滴は、対象の頭を後ろに傾けて対象の鼻孔内へ投与される。別の実施形態における液滴は、非侵襲性鼻腔内送達デバイスの先端を対象の鼻孔内へ挿入し、対象の鼻腔内へ液滴を噴出させる、あるいはスプレーすることによって投与される。
【０１５５】
別の実施形態における非侵襲性鼻腔内送達デバイスは、対象の鼻腔へ、プールヒトＩｇＧ組成物の液体または粉末エアロゾルを送達する。特定の実施形態における非侵襲性鼻腔内送達デバイスは、対象の鼻上皮へ直接、プールヒトＩｇＧの液体または粉末エアロゾルを送達する。より特定の実施形態における非侵襲性鼻腔内送達デバイスは、対象の嗅上皮へ直接、プールヒトＩｇＧの液体または粉末エアロゾルを送達する。
【０１５６】
別の実施形態における非侵襲性鼻腔内送達デバイスは、対象の鼻腔へ、プールヒトＩｇＧ組成物の乾燥粉末組成物を送達する。特定の実施形態における非侵襲性鼻腔内送達デバイスは、対象の鼻上皮へ直接、プールヒトＩｇＧの乾燥粉末組成物を送達する。より特定の実施形態における非侵襲性鼻腔内送達デバイスは、対象の嗅上皮へ直接、プールヒトＩｇＧの乾燥粉末組成物を送達する。
【０１５７】
別の実施形態における非侵襲性鼻腔内送達デバイスは、対象の鼻腔へ、プールヒトＩｇＧ組成物の徐放性組成物または放出制御組成物を送達する。特定の実施形態における徐放性組成物は、プールヒトＩｇＧの乾燥粉末組成物を含む。いくつかの実施形態における徐放性組成物は、ジェル、ペースト、ヒドロゲル、クリーム、ローション、薄膜であるか、または鼻上皮の少なくとも一部（例えば、嗅上皮の全体または一部、三叉神経終末に関連する鼻上皮の全体または一部、鼻上皮の上側３分の１の全体または一部、鼻上皮の下側３分の１の全体または一部、あるいは鼻上顎上皮の全体または一部）を覆う類似形態物である。
【０１５８】
一つの実施形態における鼻腔内デバイスは、単一使用の、使い捨て可能なデバイスである。別の実施形態における鼻腔内デバイスは、マルチまたは繰り返し使用デバイスである。ある特定の実施形態における単一使用またはマルチ使用デバイスは、予め測定される。ある特定の実施形態における単一使用またはマルチ使用デバイスは、予め充填される。ある特定の実施形態におけるマルチまたは繰り返し使用デバイスは、再充填可能である。ある特定の実施形態におけるデバイスは、プールヒトＩｇＧ組成物をデバイスのチャンバー内へ挿入することによって再充填される。他の実施形態においては、プールヒトＩｇＧ組成物を保持するようデザインされたマルチまたは繰り返し使用デバイスのチャンバーは、新しい予め充填されたチャンバーで置き換えられる。
【０１５９】
ある特定の実施形態におけるプールヒト免疫グロブリン組成物は、加圧型鼻送達（ＰＮＤ）デバイスによって投与される。一つの実施形態におけるＰＮＤデバイスは、鼻腔へ液体ＩｇＧ組成物を送達するために使用できる。一つの実施形態におけるＰＮＤデバイスは、鼻腔へ粉末ＩｇＧ組成物を送達するために使用できる。一つの実施形態におけるＰＮＤデバイスは、一つの鼻孔内へＩｇＧ組成物を投与する。一つの実施形態における強制デバイスは、両鼻孔内へＩｇＧ組成物を投与する。
【０１６０】
いくつかの実施形態におけるＰＮＤデバイスは、鼻腔の特定の上皮、部位及び／または器官へ、液体または粉末ＩｇＧ組成物を送達するよう構成される。例えば、一つの実施形態におけるＰＮＤデバイスは、上鼻腔へＩｇＧ組成物を送達するよう構成される。一つの実施形態におけるＰＮＤデバイスは、鼻腔嗅上皮へＩｇＧ組成物を送達するよう構成される。一つの実施形態におけるＰＮＤデバイスは、鼻上皮の下側３分の２へＩｇＧ組成物を送達するよう構成される。一つの実施形態におけるＰＮＤデバイスは、三叉神経終末に関連する鼻上皮へ、ＩｇＧ組成物を送達するよう構成される。一つの実施形態におけるＰＮＤデバイスは、鼻上顎洞上皮へＩｇＧ組成物を送達するよう構成される。
【０１６１】
特定の送達プロフィールを達成するための加圧型送達デバイスの構成方法は、本分野で既知である。例えば、一つの実施形態においては、加圧型鼻送達デバイスが、ストリーム、スプレー、吹き付け等を生じるよう構成されるという特徴を持つ。例えば、一つの実施形態においては、鼻上皮の上側３分の１への投与を達成するために、デバイスが、強力な集中ストリーム、スプレー、吹き付けなどを生じるよう構成される。一つの実施形態における強力な集中ストリームは、鼻内へ投与される治療組成物（例えば、プールヒトＩｇＧ）のストリームに、円周及び／または軸方向の速度を与えることによって生成される。別の実施形態においては、鼻上皮の大部分（例えば、鼻上皮の全体または下側３分の２）への投与を達成するために、デバイスは、散在性の、及び／または、より弱いストリーム、スプレー、吹き付け等を生じるよう構成される。いくつかの実施形態における送達デバイスの先端は、対象の鼻孔に挿入されたときに所望の鼻腔内部位へ、ストリーム、スプレー、吹き付け等を物理的に誘導するよう構成される。例えば、標的上皮にストリーム、スプレー、吹き付け等を「向ける」ために、送達デバイスの先端にねじれまたは曲げを導入してもよい。いくつかの実施形態におけるデバイスの送達パターンは、デバイスが、治療薬（例えば、プールヒトＩｇＧ）を鼻内の特定の上皮、器官または部位へ指向させる特異的な構成になるよう調節可能である。ある特定の実施形態におけるプールヒト免疫グロブリン組成物は、呼吸作動式技術デバイスによって投与される。ある特定の実施形態における呼吸作動式技術は、投与中、陽圧を提供する。ある特定の実施形態における陽圧は、狭い鼻道を拡張する。ある特定の実施形態における鼻道の拡張は、ＣＮＳへの、本明細書に説明する液体または粉末プールヒト免疫グロブリン組成物の信頼性が高い送達を可能にする。いくつかの実施形態におけるデバイスへの呼気が、鼻内へ薬剤（例えば、プールヒトＩｇＧ）を推進すると同時に、軟口蓋を閉じるため、喉及び／または肺内への薬剤の沈着を減少させる。一つの実施形態における呼吸作動式技術デバイスは、一つの鼻孔内へ、本明細書に説明するＩｇＧ組成物を投与する。一つの実施形態における呼吸作動式技術デバイスは、二つの鼻孔内へ、本明細書に説明するＩｇＧ組成物を投与する。
【０１６２】
市販鼻腔内送達デバイスの非限定的な例は、ＥＱＵＡＤＥＬ（登録商標）鼻スプレーポンプ（Ａｐｔａｒ  Ｐｈａｒｍａ）、Ｓｏｌｏｖｅｎｔ乾燥粉末デバイス（ＢＤ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、Ｕｎｉｄｏｓｅ鼻薬送達デバイス（Ｃｏｎｓｏｒｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＰＬＣ）、ＮａｓｏＮｅｂ（登録商標）鼻ネブライザー（ＭｅｄＩｎｖｅｎｔ、ＬＬＣ）、ＶｅｒｉＤｏｓｅｒ（登録商標）鼻送達デバイス（Ｍｙｓｔｉｃ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＶＲｘ２（商標）鼻送達デバイス（Ｍｙｓｔｉｃ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＤｉｒｅｃｔＨａｌｅｒ（商標）鼻デバイス（Ｄｉｒｅｃｔ−Ｈａｌｅｒ  Ａ／Ｓ）、ＴｒｉＶｉａｒ（商標）単一使用単位用量乾燥粉末吸入器（Ｔｒｉｍｅｌ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＳｉｎｕＳｔａｒ（商標）エアロゾル送達システム（Ｐａｒｉ  ＵＳＡ）、エアロポンプ（Ａｅｒｏ  Ｐｕｍｐ  ＧｍｂＨ）、Ｆｉｔ−Ｌｉｚｅｒ（商標）鼻送達デバイス（Ｓｈｉｎ  Ｎｉｐｐｏｎ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＬＭＡ  ＭＡＤ  Ｎａｓａｌ（商標）デバイス（ＬＭＡ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ｉｎｃ．）、Ｃｏｍｐｌｅｏ鼻腔内バイオ接着ジェル送達システム（Ｔｒｉｍｅｌ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、インペルの加圧型嗅覚送達（ＰＯＤ）デバイス（Ｉｍｐｅｌ  Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａ）、ＶｉａＮａｓｅ（商標）エレクトロニックアトマイザー（Ｋｕｒｖｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）、ＯｐｔｉＮｏｓｅ粉末送達デバイス（ＯｐｔｉＮｏｓｅ  ＵＳ  Ｉｎｃ．）、及び、ＯｐｔｉＮｏｓｅ液体送達デバイス（ＯｐｔｉＮｏｓｅ  ＵＳ  Ｉｎｃ．）を含む。
【０１６３】
一つの実施形態においては、本明細書に説明する鼻腔内デバイスは、嗅部へ、測定ＩｇＧ用量の１０％〜２０％を送達可能である。一つの実施形態においては、本明細書に説明する鼻腔内デバイスは、嗅部へ、測定ＩｇＧ用量の２０％〜３０％を送達可能である。一つの実施形態においては、本明細書に説明する鼻腔内デバイスは、嗅部へ、測定ＩｇＧ用量の５％〜２０％を送達可能である。一つの実施形態においては、本明細書に説明する鼻腔内デバイスは、嗅部へ、測定ＩｇＧ用量の３０％〜４０％を送達可能である。一つの実施形態においては、本明細書に説明する鼻腔内デバイスは、嗅部へ、測定ＩｇＧ用量の４０％〜５０％を送達可能である。一つの実施形態においては、本明細書に説明する鼻腔内デバイスは、嗅部へ、測定ＩｇＧ用量の６０％〜７０％を送達可能である。一つの実施形態においては、本明細書に説明する鼻腔内デバイスは、嗅部へ、測定ＩｇＧ用量の６０％〜８０％を送達可能である。一つの実施形態においては、本明細書に説明する鼻腔内デバイスは、嗅部へ、測定ＩｇＧ用量の７０％〜８０％を送達可能である。一つの実施形態においては、本明細書に説明する鼻腔内デバイスは、嗅部へ、測定ＩｇＧ用量の８０％〜９０％を送達可能である。一つの実施形態においては、本明細書に説明する鼻腔内デバイスは、嗅部へ、測定ＩｇＧ用量の６０％〜８０％を送達可能である。
【０１６４】
ある特定の実施形態におけるプールヒト免疫グロブリン組成物は、一用量または複数用量において、上記説明の鼻腔内デバイスによって投与される。一つの実施形態においては、一用量を超えるものが、交互の鼻孔内に、鼻腔内デバイスによって投与される。一つの実施形態においては、一用量を超えるものが、１日の異なる時点で、鼻腔内デバイスによって投与される。ある特定の実施形態における一用量を超えるものは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０以上の用量である。ある特定の実施形態においては、一用量を超えるものが、１日の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０以上の時点で、鼻腔内デバイスによって投与される。
【０１６５】
ある特定の実施形態におけるプールヒト免疫グロブリン組成物は、上記説明の鼻腔内デバイスによって、初期用量で、または用量のセットで投与され、その後、繰り返し維持量で投与される。ある特定の実施形態における初期用量は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０以上の用量である。
【０１６６】
別の実施形態においては、プールヒトＩｇＧを含むジェル、クリーム、軟膏、ローションまたはペーストが、例えば、塗布棒または綿棒を使用して、鼻上皮へ適用される。特定の実施形態では、プールヒトＩｇＧを含むジェル、クリーム、軟膏、ローションまたはペーストが、対象の鼻上皮へ直接適用される。より特定の実施形態においては、プールヒトＩｇＧを含むジェル、クリーム、軟膏、ローションまたはペーストが、対象の嗅上皮へ直接適用される。
【０１６７】
ある特定の実施形態においては、組成物内に存在する治療薬の相当な画分が、一種または複数種の鼻上皮へ直接送達される。ある特定の実施形態においては、組成物内に存在する治療薬の少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％が、鼻上皮へ直接送達される。特定の実施形態においては、組成物内に存在する治療薬の相当な画分が、嗅上皮へ直接送達される。より特定の実施形態においては、組成物内に存在する治療薬の少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％が、嗅上皮へ直接送達される。別の特定実施形態においては、組成物内に存在する治療薬の相当な画分は、三叉神経が分布する鼻上皮へ直接送達される。より特定の実施形態においては、組成物内に存在する治療薬の少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％が、三叉神経が分布する鼻上皮へ直接送達される。
【０１６８】
いくつかの実施形態においては、別の治療との併用療法として対象へ、プールヒトＩｇＧを投与できる。別の治療とは、例えば、中枢神経系の障害（例えば、アルツハイマー病、加齢性認知症、パーキンソン病または多発性硬化症）に対するものである。例えば、併用療法は、例えば、アルツハイマー病などの中枢神経系の障害がある、あるいは発症のリスクがある対象（例えば、ヒト患者）へ、治療的な利益を提供する一つまたは複数の追加の薬剤を対象へ投与することを含むことができる。いくつかの実施形態においては、プールヒトＩｇＧ及び一つまたは複数の追加の薬剤が、同時に投与される。他の実施形態においては、プールヒトＩｇＧが時間内に第一に投与され、一つまたは複数の追加の薬剤が時間内に第二に投与される。いくつかの実施形態においては、一つまたは複数の追加の薬剤が時間内に第一に投与され、そして、プールヒトＩｇＧが時間内に第二に投与される。
【０１６９】
プールヒトＩｇＧは、先に施された、あるいは現在施されている療法を置き換える、または補強することができる。例えば、プールヒトＩｇＧでの治療後すぐに、一つまたは複数の追加の薬剤の投与を、止めることができる、あるいは減少させることができる、例えば、より低レベルで投与できる。他の実施形態においては、先の療法の投与が維持される。いくつかの実施形態においては、ポリクローナルＩｇＧのレベルが、治療効果を提供するのに十分なレベルに到達するまで、先の療法が維持される。二つの療法は、組合せで投与できる。
【０１７０】
一つの実施形態においては、例えば、アルツハイマー病などの、中枢神経系の障害に対して第一の療法を受けているヒトが、それからプールヒトＩｇＧでの治療を受けても、同量の、あるいは減量された第一の療法を受け続ける。別の実施形態においては、第一の療法による治療が、しばらくプールヒトＩｇＧ治療と重なるが、その後、第一の療法による治療は停止される。
【０１７１】
特定の実施形態では、プールヒトＩｇＧが、例えば、アルツハイマー病などの加齢性認知症の治療と組み合わせて投与されてもよい。ある特定の実施形態においては、プールヒトＩｇＧと同時投与される加齢性認知症の治療は、コリンエステラーゼ阻害剤（例えば、ＡＲＩＣＥＰＴ（ドネペジル））、ＥＸＥＬＯＮ（リバスチグミン）、ＲＡＺＡＤＹＮＥ（ガランタミン）、あるいはＣＯＧＮＥＸ（タクリン）、またはＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体の阻害剤（例えば、メマンチン）の投与である。
【０１７２】
更なる実施形態における第二の療法は、レボドパ（Ｌ−ＤＯＰＡ）である。第二の療法は、ドーパミン作用薬でもよい。ドーパミン作用薬の非限定的な例は、ブロモクリプチン、ペルゴリド、プラミペキソール、ロピニロール、ピリベジル、カベルゴリン、アポモルヒネ及びリスリドを含む。第二の療法は、ＭＡＯ−Ｂ阻害剤でもよい。ＭＡＯ−Ｂ阻害剤の非限定的な例は、セレジリン及びラサギリン（ｒａｓｇｉｌｉｎｅ）である。付加的な第二の療法は、アマンタジン（ａｍａｎｔａｉｎｅ）、コリン抑制性組成物、クロザピン、モダフィニル及び非ステロイド性抗炎症薬を含むことができる。
【０１７３】
更なる実施形態における第二の療法は、ＣＡＭＰＡＴＨ（アレムツズマブ）、ＺＥＮＡＰＸ（ダクリズマブ）、リツキシマブ、ジルコチド、ＢＨＴ−３００９、クラドリビン、フマル酸ジメチル、エストリオール、ラキニモド、ペグ化インターフェロン−β−１ａ、ミノサイクリン、スタチン、テムシロリムス、テリフルノミド及び低用量ナルテクソン（ｎａｌｔｅｘｏｎｅ）である。
【０１７４】
ある特定の実施形態における第二の療法は、精神療法である。精神療法の非限定的な例は、心理社会的干渉、行動干渉、回想療法、確認療法、支持的精神療法、知覚統合、シミュレーション存在療法、認知再訓練、及び、芸術、音楽、ペット、運動、及びレクリエーション活動などの刺激作用を指向する療法である。
【０１７５】
さらに、二つ以上の第二の療法を、治療用鼻腔内ＩｇＧと組み合わせることができる。例えば、治療用鼻腔内ＩｇＧは、メマンチン及びドネペジルと組み合わせることができる。
【０１７６】
投与
中枢神経系（ＣＮＳ）の障害の治療のための静脈内免疫グロブリンＧ（ＩＶＩＧ）の使用は、現在調査中である（Ａｗａｄ  ｅｔ  ａｌ．２０１１（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，９：４１７４２８；Ｐｏｈｌ  ｅｔ  ａｌ．２０１２（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｏｐｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１４：２６４−２７５）；Ｋｒａｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．２０１２（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．ｏｆ  Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１６：２０６−２０８）；Ｅｌｏｖａａｒａ  ｅｔ  ａｌ．２０１１（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３４（２）：８４−８９）；Ｐｅｒｌｍｕｔｔｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．１９９９（Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，３５４：１１５３−１１５８）；Ｓｎｉｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００３（Ｊ．ｏｆ  Ｃｈｉｌｄ  ａｎｄ  Ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔ  Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１３（ｓｕｐｐ１）：Ｓ８１−Ｓ８８）。これらの試験における対象は、０．４ｇ／ｋｇ体重から２．０ｇ／ｋｇ体重のＩＶＩＧ投薬量で投与される。具体的には、ＩＶＩＧでのＣＮＳ障害の治療レジメンは、１日に１回、５日間連続で投与される０．４ｇ／ｋｇ体重ＩＶＩＧから、１日に１回、２日間連続で投与される２．０ｇ／ｋｇ体重ＩＶＩＧまでの範囲に及ぶ。これらのＩＶＩＧ治療レジメンには、複数のバリエーションがある。例えば、ＩＶＩＧ治療レジメンは、１日に２回投与される１．０ｇ／ｋｇ体重ＩＶＩＧ（１日につき全量２．０ｇ／ｋｇ体重のＩＶＩＧ）であってもよい。最初の２日から５日のＩＶＩＧ投薬量の後、０．４ｇ／ｋｇから０．５ｇ／ｋｇ体重のＩＶＩＧの範囲の維持量を続けることもできる。プールヒトＩｇＧの限られた供給、そのことに関連する高コストの理由で、これらの治療の大規模な実施は、もし主要な規制団体に承認されるならば、問題を含むと予想される。
【０１７７】
ヒトアルツハイマー病の治験におけるＩｇＧの典型的な静脈内投与は、２週毎に、２００ｍｇ／ｋｇから４００ｍｇ／ｋｇの範囲である。好都合にも、発明者は、静脈内投与後の脳内で観察されるプールヒトＩｇＧのレベルが、鼻腔内投与によっても達成できることを発見した。例えば、実施例３に示すが、プールヒトＩｇＧ（０．０２ｇ／ｋｇ  ＩｇＧ）の滴（ＩＮ１）または嗅上皮へ直接送達される液体スプレー（ＩＮ３）としての鼻腔内投与は、プールヒトＩｇＧ（０．０２ｇ／ｋｇ  ＩｇＧ）の静脈内投与の場合と、脳の左右半球へ送達されるＩｇＧは実質的に同一量という結果になる（表６９、表７１及び表７２内の、左右半球ＩｇＧ送達に対する補正ＡＵＣ値を比較）。有意に、１０倍低い濃度（０．００２ｇ／ｋｇのＩｇＧ）でのＩｇＧ液滴の鼻腔内投与は、大脳皮質への無傷ＩｇＧの送達に至った（表７０を参照）。プールヒトＩｇＧの供給量が限られるため高コストであることを考慮すると、投与に必要なプールヒトＩｇＧ量におけるどのような減少も重要である。
【０１７８】
したがって、ある特定の実施形態においては、本明細書で提供するＣＮＳ障害の治療方法は、体重１ｋｇあたり約０．０５ｍｇのプールヒトＩｇＧ（ｍｇ／ｋｇ  ＩｇＧ）から約５００ｍｇ／ｋｇのＩｇＧを単一投薬量で鼻腔内投与することを含む。
【０１７９】
ある特定の実施形態においては、本明細書で提供するＣＮＳ障害の治療方法は、低用量のプールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む。一つの実施形態における低用量のプールヒトＩｇＧは、約０．０５ｍｇ／ｋｇのＩｇＧから約１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧである。特定の実施形態における低用量のプールヒトＩｇＧは、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．０７ｍｇ／ｋｇ０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０９ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．２０ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．３０ｍｇ／ｋｇ、０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．４０ｍｇ／ｋｇ、０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．５０ｍｇ／ｋｇ、０．５５ｍｇ／ｋｇ、０．６０ｍｇ／ｋｇ、０．６５ｍｇ／ｋｇ、０．７０ｍｇ／ｋｇ、０．７５ｍｇ／ｋｇ、０．８０ｍｇ／ｋｇ、０．８５ｍｇ／ｋｇ、０．９０ｍｇ／ｋｇ、０．９５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、または１０．０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧである。さらに他の実施形態における低用量のプールヒトＩｇＧは、０．１ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇから８ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇから８ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇから８ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇから８ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇから８ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇから６ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇから６ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇから６ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇから６ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇから６ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇから４ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇから４ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇから４ｍｇ／ｋｇのＩｇＧである。
【０１８０】
ある特定の実施形態においては、本明細書で提供するＣＮＳ障害の治療方法は、中間用量のプールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む。一つの実施形態における中間用量のプールヒトＩｇＧは、約１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧから約１００ｍｇ／ｋｇのＩｇＧである。特定の実施形態においては、中間用量のプールヒトＩｇＧは、約１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２１ｍｇ／ｋｇ、２２ｍｇ／ｋｇ、２３ｍｇ／ｋｇ、２４ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２６ｍｇ／ｋｇ、２７ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、２９ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３１ｍｇ／ｋｇ、３２ｍｇ／ｋｇ、３３ｍｇ／ｋｇ、３４ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、３６ｍｇ／ｋｇ、３７ｍｇ／ｋｇ、３８ｍｇ／ｋｇ、３９ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４１ｍｇ／ｋｇ、４２ｍｇ／ｋｇ、４３ｍｇ／ｋｇ、４４ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、４６ｍｇ／ｋｇ、４７ｍｇ／ｋｇ、４８ｍｇ／ｋｇ、４９ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００ｍｇ／ｋｇのＩｇＧである。さらに他の実施形態では、中間用量のプールヒトＩｇＧは、１０ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇから７５ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇから７５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇから７５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇから２５ｍｇ／ｋｇのＩｇＧである。
【０１８１】
いくつかの実施形態においては、本明細書で提供するＣＮＳ障害の治療方法は、高用量のプールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む。一つの実施形態における高用量のプールヒトＩｇＧは、約１００ｍｇ／ｋｇのＩｇＧから約４００ｍｇ／ｋｇのＩｇＧである。特定の実施形態における高用量のプールヒトＩｇＧは、約１００ｍｇ／ｋｇ、１１０、１２０ｍｇ／ｋｇ、１３０ｍｇ／ｋｇ、１４０ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２２５ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、２７５ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３２５ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、３７５ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、あるいはそれを超える量である。さらに他の実施形態における高用量のプールヒトＩｇＧは、１００ｍｇ／ｋｇから４００ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇから４００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇから４００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇから４００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇから４００ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇから４００ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇから３００ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇから３００ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇから３００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇから３００ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇから２００ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇから２００ｍｇ／ｋｇ、または１００ｍｇ／ｋｇから１５０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧである。
【０１８２】
いくつかの実施形態においては、対象の体重に関係なく、プールヒトＩｇＧが一定の投薬量で投与される。理論に縛られることなく、静脈内投与と違って、脳内のＩｇＧの最終濃度は、薬剤が鼻から脳へ直接移動するため、鼻腔内投与の場合、全体重から独立しているはずである。したがって、体重に影響されない鼻腔内プールヒトＩｇＧの標準用量は、個人対象への投与プロセスを単純化することが可能である。
【０１８３】
したがって、一つの実施形態においては、本明細書に説明する方法は、約５０ｍｇから約１０ｇのプールヒトＩｇＧの一定用量を鼻腔内投与することを含む。いくつかの実施形態における一定用量のＩｇＧは、約５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１．０ｇ、１．２５ｇ、１．５ｇ、１．７５ｇ、２．０ｇ、２．５ｇ、３．０ｇ、３．５ｇ、４．０ｇ、４．５ｇ、５．０ｇ、５．５ｇ、６．０ｇ、６．５ｇ、７．０ｇ、７．５ｇ、８．０ｇ、８．５ｇ、９．０ｇ、９．５ｇ、１０．０ｇ、あるいはそれを超える量のＩｇＧである。他の実施形態においては、本明細書に説明する方法は、５０ｍｇから５ｇ、１００ｍｇから５ｇ、２５０ｍｇから５ｇ、５００ｍｇから５ｇ、７５０ｍｇから５ｇ、１ｇから５ｇ、２．５ｇから５ｇ、５０ｍｇから２．５ｇ、１００ｍｇから２．５ｇ、２５０ｍｇから２．５ｇ、５００ｍｇから２．５ｇ、７５０ｍｇから２．５ｇ、１ｇから２．５ｇ、５０ｍｇから１ｇ、１００ｍｇから１ｇ、２５０ｍｇから１ｇ、５００ｍｇから１ｇ、７５０ｍｇから１ｇ、５０ｍｇから５００ｍｇ、１００ｍｇから５００ｍｇ、２５０ｍｇから５００ｍｇ、５０ｍｇから２５０ｍｇ、１００ｍｇから２５０ｍｇ、または５０ｍｇから１００ｍｇのプールヒトＩｇＧの鼻腔内投与を含む。
【０１８４】
治療されているＣＮＳ障害及び対象の障害の進行に応じて、本明細書に説明するプールヒトＩｇＧ組成物は、毎日数回から毎月数回までの頻度で、対象へ鼻腔内投与される。例えば、進行の初期にＣＮＳ障害と診断された対象は、単に低投薬量及び／または低投薬頻度を必要とする可能性があり、また、進行の後期にＣＮＳ障害と診断された対象は、高用量及び／または高投薬頻度を必要とする可能性がある。さらに別の実施形態では、ＣＮＳ障害を発症する見込みの高い対象に対しては、予防療法として、または、ＣＮＳ障害に関連する症状の発現を遅らせるために、低用量及び／または低投与頻度を処方してもよい。例えば、家族に加齢性認知症（例えば、アルツハイマー病）の病歴を持つ対象には、加齢性認知症に関連する症状の発現を遅らせるために、プールヒトＩｇＧを低投薬量及び／または低頻度で鼻腔内投与してもよい。熟練した医師は、ＣＮＳ障害を有すると診断されたまたは発症する見込みが高いと診断された対象に対して、適切な投薬量及び投与頻度を容易に決めることができる。
【０１８５】
一つの実施形態においては、対象の特定のＣＮＳ障害の進行が頻繁な投与を必要とする場合、中枢神経系の障害を治療するための本明細書で提供する方法は、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物を、対象へ少なくとも週に１回投与することを含む。他の実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物を、対象へ少なくとも週に２、３、４、５または６回投与することを含む。さらに別の実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物を、対象へ少なくとも１日に１回投与することを含む。他の実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物を、対象へ少なくとも１日に２回、３回、４回、５回、または、それより頻繁に投与することを含む。特定の実施形態におけるＣＮＳ障害は、加齢性認知症、パーキンソン病または多発性硬化症である。より特定の実施形態におけるＣＮＳ障害は、アルツハイマー病である。
【０１８６】
別の実施形態においては、対象の特定のＣＮＳ障害の進行がより少ない頻度の投与を必要とする場合、中枢神経系の障害を治療するための本明細書で提供する方法は、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物を、対象へ少なくとも月に１回投与することを含む。他の実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物を、対象へ少なくとも月に２回、３回、４回、５回、６回、または、それより頻繁に投与することを含む。さらに別の実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物を、対象へ少なくとも１日に１回投与することを含む。他の実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物を、対象へ少なくとも１日に２回、３回、４回、５回、または、それより頻繁に投与することを含む。特定の実施形態におけるＣＮＳ障害は、加齢性認知症、パーキンソン病または多発性硬化症である。より特定の実施形態におけるＣＮＳ障害は、アルツハイマー病である。
【０１８７】
ある特定の実施形態においては、組成物を、月に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０または３１回投与してもよい。組成物は、月内に等間隔の日数を空けて、例えば、各月の一日と十五日に投与できる。あるいは、組成物は、区間投与で、月の初め、月末または中央日に投与できる。例えば、組成物は、月の一日、一日〜二日、一日〜三日、一日〜四日、一日〜五日、一日〜六日、または一日〜七日にのみ投与できる。類似の投与スキームは、月の中央日または月末に向けて実施できる。
【０１８８】
ある特定の実施形態における投与は、投与日間で変化してもよい。例えば、投与の第一日に、対象は１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧを受け、そして投与の第二日に、対象は２０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧを受けることができる。同様に、１日に二用量以上の鼻腔内ＩｇＧ投与を受ける対象は、二つの異なる用量を受けることができる。例えば、その日の第一の用量が１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧで、そして、その日の第二の用量が５ｍｇ／ｋｇのＩｇＧであってもよい。
【０１８９】
ある特定の実施形態においては、ＣＮＳ障害の治療のための本明細書で提供する方法は、０．０５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇのプールヒト免疫グロブリンを、それを毎日必要とする対象へ鼻腔内投与することを含む。他の実施形態においては、ＣＮＳ障害の治療のための本明細書で提供する方法は、表１及び表２に示すバリエーション１から８１６の中から選択された投薬量及び頻度の組合せで、プールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む。
【０１９０】
（表１）プールヒトＩｇＧの鼻腔内投与によるＣＮＳ障害の治療方法のための投薬量及び頻度の模範的な組合せ
0006379113.tif 000002
0006379113.tif 000003
0006379113.tif 000004
＊Ｖａｒ．＝バリエーション
【０１９１】
（表２）プールヒトＩｇＧの鼻腔内投与によるＣＮＳ障害の治療方法のための投薬量及び頻度の模範的な組合せ
0006379113.tif 000005
0006379113.tif 000006
0006379113.tif 000007
＊Ｖａｒ．＝バリエーション
【０１９２】
調合物
本明細書に説明するプールヒト免疫グロブリンＧの医薬組成物は、当該技術分野において既知であり日常的に実践されている方法に従って調製できる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，２０ｔｈ  ｅｄ．，２０００及びＳｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９７８を参照。医薬組成物は、ＧＭＰ条件下で製造されることが好ましい。典型的に、プールヒトＩｇＧ製剤の治療的に有効な用量または効果のある用量が、本明細書に説明する医薬組成物に用いられる。医薬組成物は、当業者に既知である従来の方法によって、剤形へ調製できる。投与レジメンは、最も望ましい反応（例えば、治療反応）を提供するよう調整される。例えば、単一のボーラスが投与されてもよい、複数の別個の用量が経時的に投与されてもよい、あるいは用量は、治療状況の緊急性に比例させて、減少させても、増加させてもよい。投与の容易さ及び投薬量の均一性のために、投薬量単位の形態で非経口組成物を調製することは有利であり得る。本明細書で用いる単位投与形態は、治療対象のための一体型剤形に適した物理的に別個なユニットに言及する。各々のユニットは、必要な医薬担体と関わって所望の治療効果を生じるよう計算された、予め定めた量の活性化合物を含む。
【０１９３】
実際の投薬量レベルは、特定の患者に対して患者に有毒でない所望の治療反応を達成するのに有効な量の有効成分を取得できるよう、変化に富む。医師は、所望の治療効果を達成するのに必要なレベルよりも低い用量の医薬組成物から開始し、所望の効果が得られるまで、徐々に投薬量を増加させることができる。概して、有効量は、治療すべき特定の疾患または病状、その重症度、患者の生理学的な状態、他の投与薬物、及び治療が予防的か、あるいは治療的かを含む、多くの異なる要因に応じて変化する。
【０１９４】
一つの実施形態においては、鼻腔内投与のために調製されるプールヒトＩｇＧの治療組成物は、透過性増大剤を含まない。透過性増大剤は、粘液を含む粘膜及び鼻上皮を通して、分子の輸送を促進する。吸収促進剤の非限定的な例は、粘膜付着剤、繊毛搏動阻害剤、粘液流動化剤、膜流動化剤及び密着結合変調剤を含む。特定の非限定的な例は、胆汁酸塩、リン脂質、グリチルレチン酸ナトリウム、カプリン酸ナトリウム、酒石酸アンモニウム、γアミノレブリン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸及びオキザロ酢酸を含む。
【０１９５】
プールヒトＩｇＧに加えて、本明細書で提供される医薬組成物は、一つまたは複数の安定化剤を含む。特定の実施形態における安定化剤は、鼻腔内投与に適切な緩衝剤である。本明細書で提供されるプールヒトＩｇＧ組成物を調製するのに適切な緩衝剤の非限定的な例は、アミノ酸（例えば、グリシン、ヒスチジンまたはプロリン）、塩（例えば、クエン酸塩、リン酸塩、酢酸塩、グルタミン酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、グルコン酸塩、リンゴ酸塩、コハク酸塩、蟻酸塩、プロピオン酸塩または炭酸塩）、または、適切なｐＨに調整されたそれらの任意の組合せを含む。一般に、緩衝剤は、長期間調合物内の適切なｐＨを維持するのに十分である。特定の実施形態における緩衝剤は、４から７．５のｐＨを維持するのに十分である。特定の実施形態における緩衝剤は、約４．０、または約４．５、または約５．０、または約５．５、または約６．０、または約６．５、または約７．０、または約７．５のｐＨを維持するのに十分である。
【０１９６】
特定の実施形態では、鼻腔内投与によるＣＮＳ障害の治療のための、本明細書に説明するプールヒトＩｇＧ組成物は、安定化させる量のアミノ酸を含む。ある特定の実施形態における安定化アミノ酸量は、約２５ｍＭから約５００ｍＭである。
【０１９７】
特定の実施形態では、本明細書で提供されるプールヒトＩｇＧ組成物内に使用される安定化剤は、アミノ酸である。アミノ酸の非限定的な例は、イソロイシン、アラニン、ロイシン、アスパラギン、リシン、アスパラギン酸、メチオニン、システイン、フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニン、グルタミン、トリプトファン、グリシン、バリン、プロリン、セレノシステイン、セリン、チロシン、アルギニン、ヒスチジン、オルニチン、タウリン、それらの組合せ等を含む。一つの実施形態における安定化アミノ酸は、アルギニン、ヒスチジン、リシン、セリン、プロリン、グリシン、アラニン、スレオニン及びそれらの組合せを含む。好適実施形態におけるアミノ酸は、グリシンである。別の好適実施形態におけるアミノ酸は、プロリンである。さらに別の実施形態におけるアミノ酸は、ヒスチジンである。
【０１９８】
本明細書で提供される組成物を安定させる目的のために、典型的に、緩衝剤（例えば、グリシン、ヒスチジンまたはプロリン）が、５ｍＭから０．７５Ｍの濃度で、調合物へ（または乾燥粉末組成物が調製される元の溶液へ）加えられる。一つの実施形態においては、少なくとも１００ｍＭの緩衝剤が調合物へ加えられる。別の実施形態においては、少なくとも２００ｍＭの緩衝剤が調合物へ加えられる。さらに別の実施形態では、少なくとも２５０ｍＭの緩衝剤が調合物へ加えられる。さらに他の実施形態における本明細書で提供される調合物は、少なくとも２５ｍＭ、５０ｍＭ、７５ｍＭ、１００ｍＭ、１５０ｍＭ、２００ｍＭ、２５０ｍＭ、３００ｍＭ、３５０ｍＭ、４００ｍＭ、４５０ｍＭ、５００ｍＭ、５５０ｍＭ、６００ｍＭ、６５０ｍＭ、７００ｍＭ、７５０ｍＭまたはより濃度の高い緩衝剤を含む。特定の実施形態における緩衝剤は、グリシンである。
【０１９９】
一つの実施形態における調合物内（または乾燥粉末組成物が調製される元の溶液内）の緩衝剤（例えば、グリシン、ヒスチジンまたはプロリン）の濃度は、およそ５ｍＭから５００ｍＭである。ある特定の実施形態における調合物内の緩衝剤の濃度は、約５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、５０ｍＭ、７５ｍＭ、１００ｍＭ、１２５ｍＭ、１５０ｍＭ、１７５ｍＭ、２００ｍＭ、２２５ｍＭ、２５０ｍＭ、２７５ｍＭ、３００ｍＭ、３２５ｍＭ、３５０ｍＭ、３７５ｍＭ、４００ｍＭ、４２５ｍＭ、４５０ｍＭ、４７５ｍＭ、５００ｍＭあるいは、より高いものである。特定の実施形態における緩衝剤は、グリシンである。
【０２００】
さらに他の実施形態における調合物内（または乾燥粉末組成物が調製される元の溶液内）の緩衝剤（例えば、グリシン、ヒスチジンまたはプロリン）の濃度は、５０ｍＭから５００ｍＭ、１００ｍＭから５００ｍＭ、２００ｍＭから５００ｍＭ、２５０ｍＭから５００ｍＭ、３００ｍＭから５００ｍＭ、５０ｍＭから３００ｍＭ、１００ｍＭから３００ｍＭ、２００ｍＭから３００ｍＭ、または２２５ｍＭから２７５ｍＭである。さらに他の実施形態における本明細書で提供される調合物内の緩衝剤（例えば、グリシン、ヒスチジンまたはプロリン）の濃度は、２５０±５０ｍＭ、２５０±４０ｍＭ、２５０±３０ｍＭ、２５０±２５ｍＭ、２５０±２０ｍＭ、２５０±１５ｍＭ、２５０±１０ｍＭ、２５０±５ｍＭまたは２５０ｍＭである。
【０２０１】
いくつかの実施形態におけるプールヒト免疫グロブリンは、１００ｍＭから４００ｍＭの間のヒスチジンとともに、アルカリ金属陽イオンが１０ｍＭを超えない状態に、及び、５．０から７．０のｐＨに調製される。
【０２０２】
プールヒト免疫グロブリン・ヒスチジン調合物のいくつかの実施形態では、ヒスチジンの濃度は、５ｍＭから５００ｍＭである。別の実施形態における調合物内のヒスチジン濃度は、１００ｍＭから４００ｍＭである。別の実施形態における調合物内のヒスチジン濃度は、２００ｍＭから３００ｍＭである。別の実施形態における調合物内のヒスチジン濃度は、２２５ｍＭから２７５ｍＭである。別の実施形態における調合物内のヒスチジン濃度は、２４０ｍＭから２６０ｍＭである。ある特定の実施形態におけるヒスチジン濃度は、２５０ｍＭである。特定の他の実施形態における調合物内のヒスチジン濃度は、５±０．５ｍＭ、１０±１ｍＭ、１５±１．５ｍＭ、２０±２ｍＭ、２５±２．５ｍＭ、５０±５ｍＭ、７５±７．５ｍＭ、１００±１０ｍＭ、１２５±１２．５ｍＭ、１５０±１５ｍＭ、１７５±１７．５ｍＭ、２００±２０ｍＭ、２２５±２２．５ｍＭ、２５０±２５ｍＭ、２７５±２７．５ｍＭ、３００±３０ｍＭ、３２５±３２．５ｍＭ、３５０±３５ｍＭ、３７５±３７．５ｍＭ、４００±４０ｍＭ、４２５±４２．５ｍＭ、４５０±４５ｍＭ、４７５±４７．５ｍＭ、５００±５０ｍＭまたは、それより高いものである。さらに他の実施形態における調合物内のヒスチジン濃度は、５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、５０ｍＭ、７５ｍＭ、１００ｍＭ、１２５ｍＭ、１５０ｍＭ、１７５ｍＭ、２００ｍＭ、２２５ｍＭ、２５０ｍＭ、２７５ｍＭ、３００ｍＭ、３２５ｍＭ、３５０ｍＭ、３７５ｍＭ、４００ｍＭ、４２５ｍＭ、４５０ｍＭ、４７５ｍＭ、５００ｍＭまたは、それより高いものである。
【０２０３】
プールヒト免疫グロブリン・ヒスチジン調合物のいくつかの実施形態では、ヒスチジン調合物のｐＨは、４．０から７．５である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、４．０から６．０である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、４．０から４．５である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、４．５から５．０である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、４．０から５．５である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、４．０から６．５である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、４．０から７．０である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、４．５から６．０である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、４．５から６．５である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、４．５から７．０である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、４．５から７．５である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、５．５から７．０である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、６．０から７．０である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、６．５から７．０である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、５．０から６．５である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、５．０から７．０である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、５．５から６．５である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、６．０から６．５である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、５．０から６．０である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、５．５から６．０である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、５．０から５．５である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、７．０から７．５である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、６．０から７．５である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、５．５から７．５である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、５．０から７．５である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、５．０±０．２、５．１±０．２、５．２±０．２、５．３±０．２、５．４±０．２、５．５±０．２、５．６±０．２、５．７±０．２、５．８±０．２、５．９±０．２、６．０±０．２、６．１±０．２、６．２±０．２、６．３±０．２、６．４±０．２、６．５±０．２、６．６±０．２、６．７±０．２、６．８±０．２、６．９±０．２、または７．０±０．２である。いくつかの実施形態におけるヒスチジン調合物のｐＨは、５．０±０．１、５．１±０．１、５．２±０．１、５．３±０．１、５．４±０．１、５．５±０．１、５．６±０．１、５．７±０．１、５．８±０．１、５．９±０．１、６．０±０．１、６．１±０．１、６．２±０．１、６．３±０．１、６．４±０．１、６．５±０．１、６．６±０．１、６．７±０．１、６．８±０．１、６．９±０．１、または７．０±０．１である。
【０２０４】
一つの実施形態においては、鼻腔内投与によるＣＮＳ障害の治療のための、本明細書に説明するプールヒトＩｇＧ組成物は、約４．０から約７．０のｐＨに調製される。特定の実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、約４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．７、６．８、６．９または７．０のｐＨに調製される。他の実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、４．０から６．５、４．０から６．０、４．０から５．５、４．０から５．０、４．０から４．５、４．５から６．５、４．５から６．０、４．５から５．５、４．５から５．０のｐＨに調製される。さらに他の実施形態におけるプールヒトＩｇＧ組成物は、４．８±０．５、４．８±０．４、４．８±０．３、４．８±０．２、４．８±０．１または約４．８のｐＨに調製される。
【０２０５】
一つの実施形態においては、鼻腔内投与のために調製されたプールヒトＩｇＧの液体組成物が、ＣＮＳ障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病及び多発性硬化症）の治療に提供される。特定の実施形態における液体組成物は、水性組成物である。特定の実施形態では、本明細書で提供される鼻腔内投与のために調製された水性治療組成物は、本質的に緩衝剤及びプールヒトＩｇＧからなる。
【０２０６】
一つの実施形態においては、鼻腔内投与のために調製された液体組成物は、１リットルあたり約１．０ｇのプールヒトＩｇＧ（ｇ／ｌのＩｇＧ）から約２５０ｇ／ｌのＩｇＧを含む。他の実施形態における鼻腔内投与のために調製された液体組成物は、約１ｇ／ｌ、２ｇ／ｌ、３ｇ／ｌ、４ｇ／ｌ、５ｇ／ｌ、６ｇ／ｌ、７ｇ／ｌ、８ｇ／ｌ、９ｇ／ｌ、１０ｇ／ｌ、１２．５ｇ／ｌ、１５ｇ／ｌ、１７．５ｇ／ｌ、２０ｇ／ｌ、２５ｇ／ｌ、３０ｇ／ｌ、３５ｇ／ｌ、４０ｇ／ｌ、４５ｇ／ｌ、５０ｇ／ｌ、５５ｇ／ｌ、６０ｇ／ｌ、６５ｇ／ｌ、７０ｇ／ｌ、７５ｇ／ｌ、８０ｇ／ｌ、８５ｇ／ｌ、９０ｇ／ｌ、９５ｇ／ｌ、１００ｇ／ｌ、１１０ｇ／ｌ、１２０ｇ／ｌ、１３０ｇ／ｌ、１４０ｇ／ｌ、１５０ｇ／ｌ、１６０ｇ／ｌ、１７０ｇ／ｌ、１８０ｇ／ｌ、１９０ｇ／ｌ、２００ｇ／ｌ、２１０ｇ／ｌ、２２０ｇ／ｌ、２３０ｇ／ｌ、２４０ｇ／ｌ、２５０ｇ／ｌまたは、それより高い濃度のプールヒトＩｇＧを含む。ある特定の実施形態における鼻腔内投与のために調製された液体組成物は、５．０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、１０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、２０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、３０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、４０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、５０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、６０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、７０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、８０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、９０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、１００ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、１２５ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、１５０ｇから２５０ｇ／ｌ、１７５ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、２００ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌのＩｇＧを含む。
【０２０７】
ある特定の実施形態においては、本明細書で提供するＣＮＳ障害の治療方法は、低濃度のプールヒトＩｇＧを含む液体組成物を鼻腔内投与することを含む。一つの実施形態における低濃度のプールヒトＩｇＧは、１．０ｇ／ｌから１００ｇ／ｌ、５．０ｇ／ｌから１００ｇ／ｌ、１０ｇ／ｌから１００ｇ／ｌ、２０ｇ／ｌから１００ｇ／ｌ、３０ｇ／ｌから１００ｇ／ｌ、４０ｇ／ｌから１００ｇ／ｌ、５０ｇ／ｌから１００ｇ／ｌ、６０ｇ／ｌから１００ｇ／ｌ、７０ｇ／ｌから１００ｇ／ｌ、７５ｇ／ｌから１００ｇ／ｌ、８０ｇ／ｌから１００ｇ／ｌ、１．０ｇ／ｌから５０ｇ／ｌ、５．０ｇ／ｌから５０ｇ／ｌ、１０ｇ／ｌから５０ｇ／ｌ、２０ｇ／ｌから５０ｇ／ｌ、３０ｇ／ｌから５０ｇ／ｌ、または４０ｇ／ｌから５０ｇ／ｌのＩｇＧを含む。
【０２０８】
ある特定の実施形態においては、本明細書で提供するＣＮＳ障害の治療方法は、中間濃度のプールヒトＩｇＧを含む液体組成物を鼻腔内投与することを含む。一つの実施形態における中間濃度のプールヒトＩｇＧは、７５ｇ／ｌから２００ｇ／ｌ、１００ｇ／ｌから２００ｇ／ｌ、１１０ｇ／ｌから２００ｇ／ｌ、１２０ｇ／ｌから２００ｇ／ｌ、１３０ｇ／ｌから２００ｇ／ｌ、１４０ｇ／ｌから２００ｇ／ｌ、１５０ｇ／ｌから２００ｇ／ｌ、１６０ｇ／ｌから２００ｇ／ｌ、１７０ｇ／ｌから２００ｇ／ｌ、１７５ｇ／ｌから２００ｇ／ｌ、１８０ｇ／ｌから２００ｇ／ｌ、７５ｇ／ｌから１５０ｇ／ｌ、１００ｇ／ｌから１５０ｇ／ｌ、１１０ｇ／ｌから１５０ｇ／ｌ、１２０ｇ／ｌから１５０ｇ／ｌ、１３０ｇ／ｌから１５０ｇ／ｌ、または１４０ｇ／ｌから１５０ｇ／ｌのＩｇＧを含む。
【０２０９】
ある特定の実施形態における本明細書で提供するＣＮＳ障害の治療方法は、高濃度のプールヒトＩｇＧを含む液体組成物を鼻腔内投与することを含む。一つの実施形態における高濃度のプールヒトＩｇＧは、１７５ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、２００ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、２１０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、２２０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、２３０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌ、または２４０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌのＩｇＧを含む。
【０２１０】
特定の実施形態においては、鼻腔内投与のために調製されたプールヒトＩｇＧの液体組成物は、本質的に１００ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌのプールヒトＩｇＧ及び１５０ｍＭから３５０ｍＭのグリシンからなる。
【０２１１】
別の特定の実施形態においては、鼻腔内投与のために調製されたプールヒトＩｇＧの液体組成物は、本質的に１５０ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌのプールヒトＩｇＧ及び２００ｍＭから３００ｍＭのグリシンからなる。
【０２１２】
さらに別の特定の実施形態では、鼻腔内投与のために調製されたプールヒトＩｇＧの液体組成物は、本質的に２００ｇ／ｌから２５０ｇ／ｌのプールヒトＩｇＧ及び２５０±２５ｍＭのグリシンからなる。
【０２１３】
ある特定の実施形態においては、本明細書で提供される鼻腔内投与のために調製されたプールヒトＩｇＧの液体組成物は、さらに、湿潤剤を含む。湿潤剤の非限定的な例は、グリセリン、多糖類及びポリエチレングリコールを含む。
【０２１４】
ある特定の実施形態においては、本明細書で提供される鼻腔内投与のために調製されたプールヒトＩｇＧの液体組成物は、さらに、組成物の流動性を増加させる薬剤を含む。水性組成物の流動性を増加させる薬剤の非限定的な例は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒアルロン酸、ゼラチン、アルギン、カラゲナン、カルボマー、ガラクトマンナン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルデキストランナトリウム及びキサンタンを含む。
【０２１５】
一つの実施形態においては、鼻腔内投与のために調製されたプールヒトＩｇＧの乾燥粉末組成物が、ＣＮＳ障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病及び多発性硬化症）の治療に提供される。特定の実施形態においては、本明細書で提供される鼻腔内投与のために調製された乾燥粉末治療組成物は、本質的に緩衝剤及びプールヒトＩｇＧからなる。
【０２１６】
一つの実施形態においては、鼻腔内投与のために調製されたプールヒトＩｇＧの乾燥粉末組成物は、さらに充填剤を含む。充填剤の非限定的な例は、オキシエチレン無水マレイン酸コポリマー、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン・ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、カリウムまたはアンモニウムを含むポリアクリラート、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリビニルアルコール、ポリビニルアセテート、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、セルロース（セルロース、微結晶性セルロース及びαセルロースを含む）、セルロース誘導体（メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及びエチルヒドロキシエチルセルロースを含む）、デキストリン（α、βまたはγシクロデキストリン及びジメチルβシクロデキストリンを含む）、デンプン（ヒドロキシエチルデンプン、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルデンプンを含む）、多糖類（デキストラン、デキストリン及びアルギン酸、ヒアルロン酸及びペクチン酸を含む）、炭水化物（例えばマンニトール、グルコース、乳糖、フルクトース、ショ糖及びアミロース）、タンパク質（カゼイン、ゼラチン、キチン及びキトサンを含む）、ガム（例えばアラビアゴム、キサンタンガム、トラガカントガム及びグルコマンナン）リン脂質及びそれらの組合せを含む。
【０２１７】
ある特定の実施形態においては、鼻腔内投与のために調製されたプールヒトＩｇＧの乾燥粉末組成物は、さらに、粘膜浸透促進剤を含む。粘膜浸透促進剤の非限定的な例は、胆汁酸塩、脂肪酸、界面活性剤及びアルコールである。粘膜浸透促進剤の特定の非限定的な例は、コール酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロデオキシコレート、グリココール酸ナトリウム、ジメチルスルホキシドまたはエタノールである。
【０２１８】
ある特定の実施形態においては、鼻腔内投与のために調製されたプールヒトＩｇＧの乾燥粉末組成物は、さらに、分散剤を含む。分散剤は、ＩｇＧのエアロゾル化または鼻腔内粘膜組織のＩｇＧ吸収、あるいはそれらの両方を支援する薬剤である。分散剤の非限定的な例は、粘膜浸透促進剤及び界面活性剤である。
【０２１９】
ある特定の実施形態においては、鼻腔内投与のために調製されたプールヒトＩｇＧの乾燥粉末組成物は、さらに、生体付着剤を含む。生体付着剤の非限定的な例は、キトサンまたはシクロデキストリンを含む。ある特定の実施形態においては、鼻腔内投与のために調製されたプールヒトＩｇＧの乾燥粉末組成物は、さらに、充填剤を含む。充填剤の非限定的な例は、乳糖、ショ糖、マンニトールもしくはソルビトールを含む糖；例えば、トウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉、ジャガイモ澱粉、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース等のセルロース製剤；またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰまたはポビドン）もしくはリン酸カルシウム等の他のものを含む。
【０２２０】
プールヒトＩｇＧの乾燥粉末組成物の粒度は、当該技術分野における標準的な方法によって判定可能である。例えば、粒子は、ふるいにかけることができる、またはメッシュ篩を通してろ過することができる。ある特定の実施形態における乾燥粒子は、約０．１μｍから約２５０μｍの平均直径を持つ。いくつかの実施形態における乾燥粒子は、１μｍから約２５μｍの平均直径を持つ。いくつかの実施形態における乾燥粒子は、１０μｍから約１００μｍの平均直径を持つ。さらに他の実施形態における乾燥粒子は、約０．１μｍ±１０％、０．２μｍ±１０％、０．３μｍ±１０％、０．４μｍ±１０％、０．５μｍ±１０％、０．６μｍ±１０％、０．７μｍ±１０％、０．８μｍ±１０％、０．９μｍ±１０％、１．０μｍ±１０％、２μｍ±１０％、３μｍ±１０％、４μｍ±１０％、５μｍ±１０％、６μｍ±１０％、７μｍ±１０％、８μｍ±１０％、９μｍ±１０％、１０μｍ±１０％、１１μｍ±１０％、１２μｍ±１０％、１３μｍ±１０％、１４μｍ±１０％、１５μｍ±１０％、１６μｍ±１０％、１７μｍ±１０％、１８μｍ±１０％、１９μｍ±１０％、２０μｍ±１０％、２５μｍ±１０％、３０μｍ±１０％、３５μｍ±１０％、４０μｍ±１０％、４５μｍ±１０％、５０μｍ±１０％、６０μｍ±１０％、６５μｍ±１０％、７０μｍ±１０％、７５μｍ±１０％、８０μｍ±１０％、８５μｍ±１０％、９０μｍ±１０％、９５μｍ±１０％、１００μｍ±１０％、１１０μｍ±１０％、１２０μｍ±１０％、１３０μｍ±１０％、１４０μｍ±１０％、１５０μｍ±１０％、１６０μｍ±１０％、１７０μｍ±１０％、１８０μｍ±１０％、１９０μｍ±１０％、２００μｍ±１０％、２２５μｍ±１０％、２５０μｍ±１０％、２７５μｍ±１０％、３００μｍ±１０％、３５０μｍ±１０％、４００μｍ±１０％、４５０μｍ±１０％、５００μｍ±１０％の、または、それより大きな平均直径を持つ。
【０２２１】
一つの実施形態においては、鼻腔内投与のために調製されたプールヒトＩｇＧのジェル、クリームまたは軟膏組成物が、ＣＮＳ障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病及び多発性硬化症）の治療に提供される。特定の実施形態においては、本明細書で提供される鼻腔内投与のために調製されたジェル、クリームまたは軟膏治療組成物は、本質的に緩衝剤及びプールヒトＩｇＧからなる。
【０２２２】
一つの実施形態においては、鼻腔内投与のために調製されたプールヒトＩｇＧのジェル、クリームまたは軟膏組成物は、さらに、担体剤を含む。ジェル及び軟膏組成物のための担体剤の非限定的な例は、ヒアルロン酸、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、トウモロコシ澱粉、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、キサンタンガム、デキストリン、カルボキシメチル澱粉、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、メトキシエチレン無水マレイン酸コポリマー、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、例えば蜜蝋、オリーブ油、カカオバター、胡麻油、ダイズ油、椿油、落花生油、牛肉脂肪、ラード及びラノリン、白色ワセリン、パラフィン、炭化水素ジェル軟膏等の油脂、例えばステアリン酸などの脂肪酸、例えばセチルアルコール及びステアリルアルコール等のアルコール、ポリエチレングリコール、水及びそれらの組合せ等の天然または合成ポリマーを含む。
【０２２３】
ある特定の実施形態におけるプールヒト免疫グロブリンは、一つまたは複数の血管収縮剤と共調製される。存在する血管収縮剤は、血液中への免疫グロブリンの吸収を減少させることによって、プールヒト免疫グロブリンへの対象外曝露（例えば、全身的な曝露）を減少させるため、ＣＮＳへ（例えば脳へ）の免疫グロブリンの標的指向化を効果的に増加させる。他の医薬剤と血管収縮剤との共調合方法は、すべての目的で全内容が参照により本明細書に援用される米国特許出願公開第２００８／０３０５０７７号に記載されている。この様式でプールヒト免疫グロブリンと共調製されてもよい血管収縮剤の非限定的な例は、テトラヒドロゾリン、メトキサミン、フェニレフリン、エフェドリン、ノルエピネフリン、オキシメタゾリン、テトラヒドロゾリン、キシロメタゾリン、クロニジン、グアナベンズ、グアンファシン、α−メチルドーパ、アルギニンバソプレッシン及びプソイドエフェドリンを含む。
【０２２４】
中枢神経系の障害
ＩＶＩＧ治療は、ＣＮＳ障害の治療に用いられている。具体的には、ＩＶＩＧは、多発性硬化症（ＭＳ）、全身強直性症候群、アルツハイマー病（ＡＤ）、ポリオ後症候群、ナルコレプシー、脳卒中、線維筋痛及び他の疼痛症候群の治療に関して研究され、応用されてきた。Ｓｔａｎｇｌｅ ２００８（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，１（２）：１１５−１２４）。
【０２２５】
ＩＶＩＧは、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）を治療するためにも使用されている。ＮＭＯは、デビック病またはデビック症候群としても知られる、視神経及び脊髄の自己免疫炎症性障害である。例えば、ＮＭＯの治療には、２ｇ／ｋｇのＩＶＩＧを誘導量として投与後、０．４〜０．５ｇ／ｋｇのＩＶＩＧを毎月維持量として使用している。Ａｗａｄ  ｅｔ  ａｌ．２０１１（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，９：４１７４２８）。
【０２２６】
ＩＶＩＧは、また、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）の治療においても使用され、研究されている。ＡＤＥＭは、脳の免疫介在性疾患である。具体的には、ＡＤＥＭは、自己免疫性髄鞘脱落が伴い、ＭＳ境界型疾患と分類される。例えば、ＡＤＥＭの治療には、２ｇ／ｋｇのＩＶＩＧを標準用量として、２日〜５日間に渡って投与できる。Ｐｏｈｌ  ｅｔ  ａｌ．２０１２（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｏｐｔｉｏｎｓｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１４：２６４−２７５）。
【０２２７】
ＩＶＩＧは、また、パーキンソン病（ＰＤ）の治療においても使用され、研究されている。例えば、研究は、ＩＶＩＧが、ＰＤ発病への考えられる寄与因子であるα−シヌクレイン神経毒性を、未知のメカニズムにより減少させることを示している。Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．２０１２（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１４：５５０−５５７）及びＰａｔｒｉａｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６１：５２７−５３５）。
【０２２８】
ＩＶＩＧは、また、ＭＳの治療においても使用され、研究されている。例えば、ＩＶＩＧはうまくシルダー病（ＳＤ）（ＭＳの珍しい変異体）の治療において使用された。ＩＶＩＧは、ＭＳの珍しい異型であるシルダー病（ＳＤ）の治療に使用され、成果を上げている。Ｋｒａｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．２０１２（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．ｏｆ  Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１６：２０６−２０８）。ＩＶＩＧは、また、ＭＳ患者における急性再発症の治療にも有益である、と示唆されている。Ｅｌｏｖａａｒａ  ｅｔ  ａｌ．２０１１（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３４（２）：８４−８９）。
【０２２９】
ＩＶＩＧは、また、強迫性障害（ＯＣＤ）及びチック障害の治療においても使用され、研究されている。例えば、ＩＶＩＧは、感染症によって引き起こされたＯＣＤ及びチック障害を持つ子供たちのＯＣＤ及びチック障害の症状を緩和させることが示されている。Ｐｅｒｌｍｕｔｔｅｒ，ｅｔ  ａｌ．１９９９（Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，３５４：１１５３−１１５８）。同様に、ＩＶＩＧが、小児期発症ＯＣＤ及びチック障害を持つＯＣＤ及びチック障害患者サブグループにおける神経精神症状を緩和させるのに有効であることも示されている。Ｓｎｉｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００３（Ｊ．ｏｆ  Ｃｈｉｌｄ  ａｎｄ  Ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔ  Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１３（ｓｕｐｐ１）：Ｓ８１−Ｓ８８）。
【０２３０】
一つの態様において、本発明は、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物の治療有効量を対象の脳へ送達することによる、治療が必要な対象における中枢神経系（ＣＮＳ）障害の治療方法を提供する。この方法における脳への組成物の送達は、対象の鼻腔上皮へ直接、組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における組成物は、鼻腔嗅上皮へ直接投与される。ある特定の実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系を主に冒す全身萎縮、錐体外路障害及び運動障害、中枢神経系の神経変性障害、中枢神経系の脱髄障害、中枢神経系の突発性もしくは発作性障害、中枢神経系の麻痺症候群、中枢神経系の神経、神経根もしくは神経叢の障害、器質性精神障害、精神活性物質の使用に起因する精神もしくは行動障害、統合失調症、統合失調型障害もしくは妄想性障害、気分（感情）障害、神経症性、ストレス関連性もしくは身体表現性障害、行動症候群、成人の人格もしくは行動障害、心理発達障害、または幼児発病の行動障害もしくは情動障害からなる群から選択される。いくつかの実施形態におけるＣＮＳ障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン舞踏病、脳性麻痺、双極性障害、統合失調症、または小児急性発症神経精神症候群（ＰＡＮＳ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態におけるＣＮＳ障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、溶連菌感染症関連小児自己免疫性精神神経疾患（ＰＡＮＤＡＳ）、または小児急性発症神経精神症候群（ＰＡＮＳ）からなる群から選択される。
【０２３１】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系を主に冒す全身萎縮である。主に中枢神経系に冒す全身萎縮の非限定的な例は、以下のものを含む：ハンチントン舞踏病、遺伝性運動失調症（例えば、先天性非進行性運動失調症、本態性振戦を伴う早期発症小脳性運動失調症、ハント運動失調症、継続腱反射を伴う早期発症小脳性運動失調症などの早期発症小脳性運動失調症、フリードライヒ運動失調症、及び、Ｘ連鎖劣性脊髄小脳失調症、遅発性小脳性運動失調症、血管拡張性失調症（ルイ・バー症候群）、または遺伝性痙性対麻痺）、脊髄性筋萎縮またはそれに関連した障害（例えば、ウェルドニッヒ・ホフマン病（１型）、幼児期の進行性延髄麻痺（ファツィオ・ロンド症候群）、クーゲルベルク・ヴェランダー病（３型）、または家族性運動神経疾患などの運動神経疾患、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、原発性側索硬化症、進行性延髄麻痺、及び進行性脊髄性筋萎縮）、腫瘍随伴神経筋障害及び神経病、新生物疾患における中枢神経系を主に冒す全身萎縮、腫瘍随伴辺縁脳症、及び粘液水腫における中枢神経系を主に冒す全身萎縮。
【０２３２】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、錐体外路障害及び運動障害である。中枢神経系を冒す錐体外路障害及び運動障害の非限定的な例は、以下のものを含む：パーキンソン病、二次性パーキンソン症候群（例えば、神経弛緩薬性悪性症候群または脳炎後遺症性パーキンソン症候群）、基底神経節の変性疾患（例えば、ハレルフォルデン・スパッツ病、進行性核上眼筋麻痺（スティール・リチャードソン・オルゼウスキー症候群）または線条体黒質変性症）、ジストニア（例えば、薬物性ジストニア、特発性家族性ジストニア、特発性非家族性ジストニア、痙性斜頸、口腔顔面運動異常などの特発性口腔顔面ジストニアまたは眼瞼痙攣）、本態性振戦、薬物性振戦、筋硬直、薬物性舞踏病、薬物性チック、レストレスレッグス症候群、及び全身強直性症候群。
【０２３３】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系の神経変性障害である。中枢神経系を冒す神経変性障害の非限定的な例は、以下のものを含む：アルツハイマー病、限局性脳萎縮（例えば、ピック病）、脳の老年性変性、アルコールによる神経系の退化、灰白質退化（例えば、アルパーズ症候群）、レビー小体型認知症、亜急性壊死性脳症（例えば、リー病）、及び脊髄亜急性連合変性症。ある特定の実施形態におけるＣＮＳ障害は、認知症によって特徴づけられる障害である。ある特定の実施形態における認知症は、大脳皮質を冒す障害から生じる（例えば、アルツハイマー病と関連した）皮質認知症である。ある特定の実施形態における認知症は、皮質の下に位置する脳の部分における機能障害から生じる（例えば、パーキンソン病及びハンチントン舞踏病と関連した）皮質下認知症である。ある特定の実施形態における認知症は、薬剤投与の副作用である。特定の実施形態における認知症は、化学療法剤投与の副作用である。特定の実施形態における認知症は、心臓バイパス処置の結果である。特定の実施形態における認知症は、血管障害（例えば、心筋梗塞、脳卒中、高血圧）の結果である。特定の実施形態における認知症は、鬱病の結果である。
【０２３４】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系の脱髄障害である。中枢神経系を冒す脱髄障害の非限定的な例は、以下のものを含む：多発性硬化症、急性播種性髄鞘脱落障害（例えば、視神経脊髄炎（デビック症候群）または急性及び亜急性出血性白質脳炎（ハースト病））、広汎性硬化症、脳梁の中心髄鞘脱落、橋中心髄鞘崩壊、中枢神経系の脱髄疾患における急性横断性脊髄炎、亜急性壊死性脊髄炎、及び同心性硬化症（バロ病）。
【０２３５】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系の突発性あるいは発作性障害である。中枢神経系を冒す突発性及び発作性障害の非限定的な例は、以下のものを含む：癲癇（例えば、局所発症性発作の局在関連性（局所の）（部分的な）真性癲癇及び癲癇症候群、単純な部分発作の局在関連性（局所の）（部分的な）症候性癲癇及び癲癇症候群、複雑部分発作の局在関連性（局所の）（部分的な）症候性癲癇及び癲癇症候群、幼少及び新生児ひきつけにおけるミオクローヌス性癲癇（家族性）などの良性癲癇症候群、小児期欠神癲癇（例えば、ピクノレプシー）、目覚めけいれん大発作性癲癇、欠神癲癇またはミオクローヌス性癲癇（衝動的な小発作）等の若年性癲癇、無緊張性、間代性、ミオクローヌス性、緊張性あるいは強直間代性癲癇発作などの非特異性癲癇発作、ミオクローヌス欠神またはミオクローヌス性失立発作の癲癇、乳児痙攣、レノックス・ゲシュタウト症候群、サラーム発作、症候性初期ミオクローヌス性脳症、ウェスト症候群、持続性部分癲癇（コジェフニコフ癲癇）、けいれん大発作または小発作）、頭痛（例えば、前兆を伴わない片頭痛（普通型片頭痛）、前兆を伴う片頭痛（典型的片頭痛）、片頭痛発作重積状態及び複雑片頭痛などの片頭痛、群発性頭痛症候群、血管性頭痛、緊張型頭痛、慢性外傷後頭痛、または薬物誘発性頭痛）、脳血管突発性あるいは発作性障害（例えば、椎骨脳底動脈症候群、頸動脈症候群（半球状）、多発性及び両側性前大脳動脈症候群、一過性黒内症、及び一過性全健忘などの一過性脳虚血発作または関連症候群、中大脳動脈症候群、前大脳動脈症候群、後大脳動脈症候群などの脳脈管症候群、脳幹卒中症候群（例えば、ベネディクト症候群、クロード症候群、フォヴィーユ症候群、ミラール・グブラー症候群、ワレンベルグ症候群またはウェーバー症候群）、小脳卒中症候群、純粋運動性ラクナ症候群、純粋感覚性ラクナ症候群、またはラクナ症候群）、及び睡眠障害（例えば、不眠症、過剰不眠症、概日リズムの混乱、睡眠無呼吸、睡眠発作または脱力発作）。
【０２３６】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系の麻痺症候群である。中枢神経系を冒す麻痺症候群の非限定的な例は、以下のものを含む：脳性麻痺（例えば、痙攣性四肢脳性麻痺、痙攣性両側脳性麻痺、痙攣性半身不随脳性麻痺、運動障害脳性麻痺、または失調性脳性麻痺）、半身不随（例えば、弛緩性片麻痺または痙性片麻痺）、対麻痺または四肢麻痺（例えば、弛緩性対麻痺、痙性対麻痺、両下肢の麻痺、下部対麻痺、弛緩性四肢麻痺、痙攣性四肢麻痺、または四肢麻痺）、上肢の両側麻痺、下肢の単麻痺、上肢の単麻痺、馬尾症候群、及びトッド麻痺（癲癇後）。
【０２３７】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系の神経、神経根または神経叢の障害である。中枢神経系を冒す神経、神経根または神経叢の障害の非限定的な例は、以下のものを含む：三叉神経の障害（Ｖ、例えば、三叉神経痛）、顔面神経障害（ＶＩＩ、例えば、ベル麻痺、顔面神経麻痺、顔面神経膝神経節炎、メルカーソン症候群、メルカーソン・ローゼンタール症候群、間代性片側顔面痙攣、顔面ミオキミア）、嗅神経障害（Ｉ）、舌咽神経障害（ＩＸ）、迷走神経障害（Ｘ）、舌下神経障害（ＸＩＩ）、多発性脳神経障害、そして、ＣＮＳを冒す神経根または神経叢の障害（例えば、胸郭口症候群などの腕神経叢疾患、腰仙神経叢疾患、頸部神経根、胸部神経根の障害、腰仙部神経根障害、パーソネージ・アルドレン・ターナー症候群などの神経痛性筋萎縮、または痛みのある、あるいはない幻影肢症候群）。
【０２３８】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系の他の分類に属する障害である。これらの障害の非限定的な例は、以下のものを含む：水頭症、中毒性脳症、脳嚢胞、低酸素性脳症、良性脳圧亢進症、ウイルス感染後疲労症候群、脳症、脳圧縮、脳浮腫、ライ症候群、照射後脳症、外傷性脳損傷、脊髄空洞症、延髄空洞症、血管性ミエロパシー、脊髄圧迫、ミエロパシー、脳脊髄液漏出、髄膜障害（例えば、脳髄膜あるいは脊髄膜の付着）、及び神経系の処置後障害（例えば、脊椎穿刺からの脳脊髄液漏出、脊椎あるいは腰椎穿刺への有害反応、または脳室シャント後の脳圧低下）。
【０２３９】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、器質性精神障害である。中枢神経系を冒す器質性精神障害の非限定的な例は、以下のものを含む：認知症（例えば、アルツハイマー病、ピック病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）疾患に関連する認知症、または多発梗塞性認知症などの血管認知症）、アルコール及び他の精神活性物質によって誘発されていない器質性健忘症候群、アルコール及び他の精神活性物質によって誘発されていない精神錯乱、脳損傷及び機能障害による及び体の病気による精神障害（例えば、器質性幻覚症、器質性緊張病性障害、器質性妄想（統合失調症様）障害、器質性気分（感情）障害、器質性不安障害、器質性解離性障害、器質性感情不安定（無力症）障害、軽度の認知障害、または器質性脳症候群）、及び脳疾患、損傷及び機能障害による人格及び行動障害（例えば、器質性人格障害、脳炎後症候群、または脳振盪後遺症）。
【０２４０】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、精神活性物質の使用に起因する精神あるいは行動障害である。中枢神経系を冒す精神活性物質の使用に起因する精神あるいは行動障害の非限定的な例は、以下のものを含む：（例えば、アルコール、オピオイド、大麻、ベンゾジアゼピンまたはコカイン使用からの）急性中毒、（例えば、アルコール、オピオイド、大麻、ベンゾジアゼピン、コカインまたはニコチン中毒からの）依存症候群、禁断症候群（例えば、アルコールまたはベンゾジアゼピン禁断症候群）、振戦譫妄、及び精神病性障害（例えば、アルコール幻覚または精神刺激薬精神病）、健忘症候群（例えば、コルサコフ症候群）、残留性及び遅発性精神病性障害（例えば、幻覚剤使用後の知覚障害）。
【０２４１】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、自閉症スペクトラム障害である。ある特定の実施形態におけるＣＮＳ障害は、自閉症、アスペルガー症候群、特定不能の広汎性発達障害（ＰＤＤ−ＮＯＳ）、小児期崩壊性障害またはレット症候群である。
【０２４２】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、統合失調症、統合失調型障害または妄想性障害である。中枢神経系を冒す統合失調症、統合失調型障害及び妄想性障害の非限定的な例は、以下のものを含む：統合失調症（例えば、妄想型統合失調症、破瓜型統合失調症（解体型統合失調症）、緊張型統合失調症、未分化型統合失調症、統合失調症後鬱病、残留性統合失調症、単純型統合失調症、体感異常統合失調症、統合失調様障害または統合失調様精神病）、統合失調型障害、持続性妄想性障害（例えば、妄想性障害、妄想醜形恐怖症、退行期妄想状態または好訴妄想症）、急性あるいは一過性の精神病性障害（例えば、統合失調症の症状のない急性多形性精神病性障害、統合失調症の症状を示す急性多形性精神病性障害、または急性統合失調症様精神病性障害）、誘発性妄想性障害（例えば、２人組精神病、誘発妄想性障害または誘発精神病性障害）、統合失調感情障害（例えば、躁型、鬱型または混合型統合失調感情障害）、及び慢性幻覚性精神病。
【０２４３】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、気分（感情）障害である。中枢神経系を冒す気分（感情）障害の非限定的な例は、以下のものを含む：躁病エピソード（例えば、軽躁病、精神病症状のない躁病、または精神病症状のある躁病）、双極性感情障害（例えば、現行エピソード低躁病の双極性感情障害、精神病症状のない現行エピソード躁病の双極性感情障害、精神病症状のある現行エピソード躁病の双極性感情障害、現行エピソード軽度または中程度の鬱病の双極性感情障害、精神病症状のない現行エピソード重症鬱病の双極性感情障害、精神病症状のある現行エピソード重症鬱病の双極性感情障害、現行エピソード混合双極性感情障害、現在鎮静の双極性感情障害、双極ＩＩ障害、または再発性躁病エピソード）、鬱病エピソード（例えば、軽度の鬱病エピソード、中程度の鬱病エピソード、精神病症状のない重症鬱病エピソード、精神病症状のある重症鬱病エピソード、非定型鬱病、または単一エピソードの「仮面」鬱病）、再発性鬱病性障害（例えば、軽度の現行エピソードの再発性鬱病性障害、中程度の現行エピソードの再発性鬱病性障害、精神病症状のない重症現行エピソードの再発性鬱病性障害、精神病症状のある重症現行エピソードの再発性鬱病性障害、または現在鎮静の再発性鬱病性障害）、持続性気分（感情）障害（例えば、循環気質または気分変調）、混乱感情エピソード、及び再発性短期鬱病エピソード。
【０２４４】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、神経症性、ストレス関連性あるいは身体表現性障害である。中枢神経系を冒す神経症性、ストレス関連性あるいは身体表現性障害の非限定的な例は、以下のものを含む：恐怖症性不安障害（例えば、広所恐怖症、対人恐怖症、社会神経症、高所恐怖症、動物恐怖症、閉所恐怖症または単純恐怖症）、他に分類される不安障害（例えば、恐慌性障害（偶発性発作性不安）または全般性不安障害）、強迫性障害、適応障害（例えば、急性ストレス反応、心的外傷後ストレス障害または適応障害）、解離性（転換）障害（例えば、解離性健忘、解離性遁走、解離性昏睡、トランス障害、憑依障害、解離性運動不全、解離性痙攣、解離麻酔及び感覚消失、混乱解離性（転換）障害、ガンザー症候群、または多重人格障害）、身体表現性障害（例えば、ブリケー障害、多発性心身障害、身体醜形障害、（非妄想）醜形恐怖症、心気症性神経症、心気症及び疾病恐怖症などの心気症性障害、心臓神経症、ダコスタ症候群、胃神経症及び神経循環無力症などの身体表現性自律神経機能不全、または精神疼痛）、神経衰弱症、離人症性現実感消失症候群、ダハト症候群、職業神経症（例えば、書痙）、精神衰弱、精神衰弱神経症、及び心因性失神。
【０２４５】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、生理的撹乱または物理的要因に関連する行動症候群である。中枢神経系を冒す生理的撹乱または物理的要因に関連する行動症候群の非限定的な例は、以下のものを含む：摂食障害（例えば、拒食症、非定型拒食症、神経性過食症、非定型神経性過食症、他の精神的撹乱に関連する過食、他の精神的撹乱に関連する嘔吐または成人異食症）、非器質性睡眠障害（例えば、非器質性不眠症、非器質性過剰睡眠、非器質性睡眠リズム障害、夢中歩行（夢遊病）、睡眠驚愕（夜驚症）、または悪夢）、器質性障害または疾患に起因しない性的機能不全、産褥に関連する精神あるいは行動障害（例えば、産後鬱病、分娩後鬱病または産褥精神病）、及び非依存性誘発物質の濫用。
【０２４６】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、成人の人格または行動障害である。中枢神経系を冒す成人の人格及び行動障害の非限定的な例は、以下のものを含む：特定人格障害（例えば、妄想性人格障害、統合失調質人格障害、反社会的人格異常などの離社会的人格障害、境界性人格障害、演技性人格障害などの感情不安定人格障害、強迫人格障害、心配性（回避性）人格障害、依存性人格障害、偏心人格障害、無責任人格障害、未熟人格障害、自己愛性人格障害、受動攻撃性人格障害、または精神神経症人格障害などの強迫性人格障害）、混乱人格障害、習慣または衝動障害、（例えば、病的賭博、病的放火（放火癖）、病的窃盗（盗癖）または抜毛症）、及びミュンヒハウゼン症候群。
【０２４７】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、心理発達障害である。中枢神経系を冒す心理発達障害の非限定的な例は、以下のものを含む：言葉または言語の発達障害（例えば、特定言語構音障害、表出性言語障害、受容言語障害（受容失語症）、癲癇を伴う後天性失語症（ランドウ・クレフナー症候群）、または幼児性発音）、学業における発達障害（例えば、発達性難読症などの特異的読書障害、特異的スペリング障害、発達性失算症及びゲルストマン症候群などの算数技能の特異的障害、または学業における混乱障害）、運動機能の発達障害（例えば、発達性統合運動障害）、混乱性特異的発達障害、及び広汎発達障害（例えば、小児自閉症、非定型自閉症、レット症候群、精神薄弱及び常同行動に関連する過敏性障害、またはアスペルガー症候群）。
【０２４８】
一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、通常、幼児期及び思春期に発症する行動障害あるいは情動障害である。中枢神経系を冒す通常幼児期及び思春期に発症する行動障害あるいは情動障害の非限定的な例は、以下のものを含む：多動障害（例えば、注意欠如多動性障害及び活動過多の注意力欠陥症候群などの活動及び注意の撹乱、または多動性行動障害）、行動障害（例えば、家系限定行動障害、非社交的行動障害、社交的行動障害、または反抗挑戦性障害）、行動または感情の混乱障害（例えば、抑鬱性行動障害）、幼児期発症情動障害（例えば、幼児期分離不安障害、幼児期恐怖症性不安障害、幼児期社会不安障害、同胞抗争障害、同一性障害、または過剰不安障害）、幼児期及び思春期に特異的に発症する社会機能する障害（例えば、選択的無言症、幼児期反応性愛着障害、または幼児期の脱抑制愛着障害）、チック障害（例えば、一過性チック障害、慢性運動あるいは音声チック障害、または複合音声及び多動チック障害（デ・ラ・トゥレット）及び、通常幼児期及び思春期に発症する他に分類される行動障害あるいは情動障害（例えば、非器質性遺尿症、非器質性大便失禁、幼少及び幼児期の食物摂取障害、幼少及び幼児期の異食症、常同行動障害、吃音（口ごもり）、速話症、活動過多のない注意欠陥障害、溶連菌感染症関連小児自己免疫性精神神経疾患（ＰＡＮＤＡＳ）、または小児急性発症神経精神症候群（ＰＡＮＳ））。
【０２４９】
ＣＮＳ障害の治療方法の一つの実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンを０．０５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ含む乾燥粉末組成物を、それを毎日必要とする対象へ鼻腔内投与することを含む。他の実施形態におけるＣＮＳ障害の治療のための本明細書で提供する方法は、表１及び表２に示すバリエーション１から８１６の中から選択した投薬量及び頻度の組合せで、プールヒトＩｇＧの乾燥粉末組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、乾燥粉末組成物を投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、乾燥粉末組成物を投与することを含む。
【０２５０】
ＣＮＳ障害の治療方法の一つの実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンを０．０５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ含む液体（例えば水性）組成物を、それを毎日必要とする対象へ鼻腔内投与することを含む。他の実施形態におけるＣＮＳ障害の治療のための本明細書で提供する方法は、表１及び表２に示すバリエーション１から８１６の中から選択した投薬量及び頻度の組合せで、プールヒトＩｇＧの液体（例えば水性）組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、組成物を滴状投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、組成物を滴状投与することを含む。別の特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、スプレーを介して組成物を投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、スプレーを介して組成物を投与することを含む。
【０２５１】
ＣＮＳ障害の治療方法の一つの実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンを０．０５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ含むジェル、クリームまたは軟膏組成物を、それを毎日必要とする対象へ鼻腔内投与することを含む。他の実施形態におけるＣＮＳ障害の治療のための本明細書で提供する方法は、表１及び表２に示すバリエーション１から８１６の中から選択した投薬量及び頻度の組合せで、プールヒトＩｇＧのジェル、クリームまたは軟膏組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、ジェル、クリームまたは軟膏組成物を投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、ジェル、クリームまたは軟膏組成物を投与することを含む。
【０２５２】
アルツハイマー病
ＩＶＩＧは、アルツハイマー病治療に使用されている。ＩＶＩＧが、β−アミロイドに対する抗体を含むことが提案されている。Ｒｅｌｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２００９（Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ３０（１１）：１７２８−３６）。この研究では、プールヒトＩｇＧが、軽度のアルツハイマー病（ＡＤ）と診断された８人の対象へ、静脈内投与された（ＩＶＩＧ療法）。患者は、６ヵ月間ＩＶＩＧ療法を受け、一旦治療を中止し、それから治療を再開し、さらに９ヵ月間に渡り治療を受けた。ＡＤ患者からの血清中のβ−アミロイド抗体が、ＩＶＩＧ用量に比例して増加すること、及び、各々の注入の後、血漿レベルのβ−アミロイドが一時的に増加することが発見された。６ヵ月の治療の後、患者に対して、精神状態に関するミニテストが実行された。精神状態ミニスコアは、６ヵ月後に平均２．５ポイント上昇し、ウォッシュアウト中にベースラインへ戻り、そして以降のＩＶＩＧ治療中に安定していた。
【０２５３】
一つの態様において、本発明は、対象の脳へプールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物の治療有効量を送達することによる、治療を必要とする対象におけるアルツハイマー病の治療方法を提供する。この方法における脳への組成物の送達は、対象の鼻腔上皮へ直接、組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における組成物は、鼻腔嗅上皮へ直接投与される。一つの実施形態におけるアルツハイマー病は、早期発症アルツハイマー病である。別の実施形態におけるアルツハイマー病は、遅発性アルツハイマー病である。
【０２５４】
アルツハイマー病の治療方法の一つの実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンを０．０５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ含む乾燥粉末組成物を、それを毎日必要とする対象へ鼻腔内投与することを含む。他の実施形態におけるアルツハイマー病の治療のための本明細書で提供する方法は、表１及び表２に示すバリエーション１から８１６の中から選択した投薬量及び頻度の組合せで、プールヒトＩｇＧの乾燥粉末組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、乾燥粉末組成物を投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、乾燥粉末組成物を投与することを含む。一つの実施形態におけるアルツハイマー病は、早期発症アルツハイマー病である。別の実施形態におけるアルツハイマー病は、遅発性アルツハイマー病である。
【０２５５】
アルツハイマー病の治療方法の一つの実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンを０．０５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ含む液体（例えば水性）組成物を、それを毎日必要とする対象へ鼻腔内投与することを含む。他の実施形態におけるアルツハイマー病の治療のための本明細書で提供する方法は、表１及び表２に示すバリエーション１から８１６の中から選択した投薬量及び頻度の組合せで、プールヒトＩｇＧの液体（例えば水性）組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、組成物を滴状投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、組成物を滴状投与することを含む。別の特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、スプレーを介して組成物を投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、スプレーを介して組成物を投与することを含む。一つの実施形態におけるアルツハイマー病は、早期発症アルツハイマー病である。別の実施形態におけるアルツハイマー病は、遅発性アルツハイマー病である。
【０２５６】
アルツハイマー病の治療方法の一つの実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンを０．０５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ含むジェル、クリームまたは軟膏組成物を、それを毎日必要とする対象へ鼻腔内投与することを含む。他の実施形態におけるアルツハイマー病の治療のための本明細書で提供する方法は、表１及び表２に示すバリエーション１から８１６の中から選択した投薬量及び頻度の組合せで、プールヒトＩｇＧのジェル、クリームまたは軟膏組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、ジェル、クリームまたは軟膏組成物を投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、ジェル、クリームまたは軟膏組成物を投与することを含む。一つの実施形態におけるアルツハイマー病は、早期発症アルツハイマー病である。別の実施形態におけるアルツハイマー病は、遅発性アルツハイマー病である。
【０２５７】
多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、最も一般的なヒト自己免疫疾患の一つを代表する中枢神経系（ＣＮＳ）の慢性神経変性及び炎症性疾患である。多発性硬化症（ＭＳ）は、特に脳及び脊髄を冒す自己免疫疾患である。ＭＳは、神経細胞を囲む保護被覆である髄鞘への損傷に起因する。髄鞘が損傷を受けると、神経信号は減速する、あるいは停止する。髄鞘への損傷は、体自身の免疫細胞が神経系を攻撃するときに生ずる炎症に起因する。これは、脳、視神経及び脊髄のどの領域に沿っても生ずる可能性がある。
【０２５８】
ＭＳは、疾患の進行に基づき、四つの亜型に分類される。再発寛解型ＭＳ（ＲＭＳＳ）、二次性進行型ＭＳ（ＳＰＭ）、一次性進行性ＭＳ（ＰＰＭＳ）、及び進行性再発性ＭＳ（ＰＲＭＳ）。ＭＳと診断される患者の８０パーセント以上は、ＲＭＳＳの初期徴候を示す。ＲＭＳＳは、再発（症状再燃）後の鎮静によって特徴づけられる。再発は、軽度から重度の再燃があり得る。また、鎮静は、数日から数か月まで続くことがある。ＲＭＳＳ患者は、しばしばＳＰＭＳを発症する。ＳＰＭＳは、再発後に部分回復のみがあるのが特徴である。部分回復局面中、症状は軽減するが、完全な回復には至らない。ＳＰＭＳは、回復及び部分回復のサイクルが慢性身体障害に置き換えられるまで症状が着実に悪化するＭＳの進行亜型である。ＰＰＭＳは、ＭＳ発症の約１５パーセントを占める。回復または部分回復の期間なしに、ゆっくりと着実に進行することが特徴である。ＰＲＭＳは、ＭＳの最も希な亜型である。ＰＲＭＳは、回復を繰り返しながら、症状及び発作が着実に悪化するという特徴がある。
【０２５９】
ＭＳに対しては、ペプチド誘発トランスジェニックマウスモデルがある。実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、脳炎の動物モデルである。ＥＡＥは、ＣＮＳの炎症性脱髄疾患である。急性及び再発性ＥＡＥは、脳の白質内に局所炎症性脱髄病変が形成されるという特徴がある。この表現型は、ＰＬＰ１３９−１５１ペプチドの投与を介して、正常なＳＪＬマウスに誘発することができる。慢性進行性ＥＡＥは、正常に見える白質内の広範囲な軸索損傷、及び灰白質内、特に皮質内の広範囲な髄鞘脱落に病理学的に関連する。この表現型は、ＭＯＧ３５−５５ペプチドの投与を介して、正常なＣ５７ＢＬ／６マウスに誘発することができる。
【０２６０】
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンド／受容体超ファミリー、特にＴＮＦ及びＦａｓ／Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）が、ＭＳの発病に関わっているという証拠もある。Ａｋａｓｓｏｇｌｏｕ  ｅｔ  ａｌ．１９９８（Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．１５３（３）：８０１−８１３）。したがって、ＴＮＦが不足しているマウスモデルを、ＭＳ病理の研究に使用できる。ＴＮＦノックアウトのトランスジェニックマウスモデルの遺伝子型は、ｐ５５ＴＮＦＲ（ｐ５５−／−）、ｐ７５ＴＮＦＲ（ｐ７５−／−）及びＴＮＦ（ＴＮＦ−／−）を含む。
【０２６１】
ＩＶＩＧは、多くの自己免疫疾患の治療に有用であると立証されている。しかし、ＭＳの治療におけるその役割は、不確かなままである。異なるタイプのＭＳ患者におけるＩＶＩＧ治験は、毎月のＩＶＩＧが有益であるとの報告から、ＩＶＩＧ投与は疾病進行を減速させない、あるいは疾患による欠陥を回復させないとの報告まで、多様な結果に至っている。
【０２６２】
一つの態様において、本発明は、対象の脳へプールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物の治療有効量を送達することによる、治療が必要な対象における多発性硬化症の治療方法を提供する。この方法における脳への組成物の送達は、対象の鼻腔上皮へ直接、組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における組成物は、鼻腔嗅上皮に直接投与される。
【０２６３】
多発性硬化症の治療方法の一つの実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンを０．０５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ含む乾燥粉末組成物を、それを毎日必要とする対象へ鼻腔内投与することを含む。他の実施形態における多発性硬化症の治療のための本明細書で提供する方法は、表１及び表２に示すバリエーション１から８１６の中から選択した投薬量及び頻度の組合せで、プールヒトＩｇＧの乾燥粉末組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、乾燥粉末組成物を投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、乾燥粉末組成物を投与することを含む。
【０２６４】
多発性硬化症の治療方法の一つの実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンを０．０５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ含む液体（例えば水性）組成物を、それを毎日必要とする対象へ鼻腔内投与することを含む。他の実施形態における多発性硬化症の治療のための本明細書で提供する方法は、表１及び表２に示すバリエーション１から８１６の中から選択した投薬量及び頻度の組合せで、プールヒトＩｇＧの液体（例えば水性）組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、組成物を滴状投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、組成物を滴状投与することを含む。別の特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、スプレーを介して組成物を投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、スプレーを介して組成物を投与することを含む。
【０２６５】
多発性硬化症の治療方法の一つの実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンを０．０５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ含むジェル、クリームまたは軟膏組成物を、それを毎日必要とする対象へ鼻腔内投与することを含む。他の実施形態における多発性硬化症の治療のための本明細書で提供する方法は、表１及び表２に示すバリエーション１から８１６の中から選択した投薬量及び頻度の組合せで、プールヒトＩｇＧのジェル、クリームまたは軟膏組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、ジェル、クリームまたは軟膏組成物を投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、ジェル、クリームまたは軟膏組成物を投与することを含む。
【０２６６】
パーキンソン病
パーキンソン病（ＰＤ）は、ＣＮＳの変性疾患である。ＰＤは、運動制御の減衰と顕著にリンクしている。ＰＤに起因する運動制御の損失は、黒質内の、すなわち中脳の領域内のドーパミン生成細胞の死から生ずる。疾患の進行初期における最も一般的な症状は、振盪、硬直、動作の遅鈍と、歩行及び歩調に伴う困難を含む。疾患が進行すると認知及び行動に関わる問題が発生し、疾患の進行期には認知症が生じる。追加の症状は、感覚の、睡眠の及び感情の問題を含む。ＰＤは、年輩者に一般的で、５０歳後に発症することが多い。
【０２６７】
ＰＤに対しては、数多くのトランスジェニックマウスモデルがある。これらのモデルは、例えば、Ｐａｒｋ２（パーキン）トランスジェニック系、ＬＲＲＫ２トランスジェニック系及びシヌクレイントランスジェニック系を含む（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）。トランスジェニックモデルに加えて、パーキンソン症候群は、化合物ＭＰＴＰ、ロテノン、パラコートまたはマンネブを投与することによって、マウスに誘発することもできる。
【０２６８】
一つの態様において、本発明は、対象の脳へプールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物の治療有効量を送達することによる、治療を必要とする対象におけるパーキンソン病の治療方法を提供する。この方法における脳への組成物の送達は、対象の鼻腔上皮へ直接、組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における組成物は、鼻腔嗅上皮に直接投与される。
【０２６９】
パーキンソン病の治療方法の一つの実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンを０．０５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ含む乾燥粉末組成物を、それを毎日必要とする対象へ鼻腔内投与することを含む。他の実施形態におけるパーキンソン病の治療のための本明細書で提供する方法は、表１及び表２に示すバリエーション１から８１６の中から選択した投薬量及び頻度の組合せで、プールヒトＩｇＧの乾燥粉末組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、乾燥粉末組成物を投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、乾燥粉末組成物を投与することを含む。
【０２７０】
パーキンソン病の治療方法の一つの実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンを０．０５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ含む液体（例えば水性）組成物を、それを毎日必要とする対象へ鼻腔内投与することを含む。他の実施形態におけるパーキンソン病の治療のための本明細書で提供する方法は、表１及び表２に示すバリエーション１から８１６の中から選択した投薬量及び頻度の組合せで、プールヒトＩｇＧの液体（例えば水性）組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、組成物を滴状投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、組成物を滴状投与することを含む。別の特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、スプレーを介して組成物を投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、スプレーを介して組成物を投与することを含む。
【０２７１】
パーキンソン病の治療方法の一つの実施形態における方法は、プールヒト免疫グロブリンを０．０５ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ含むジェル、クリームまたは軟膏組成物を、それを毎日必要とする対象へ鼻腔内投与することを含む。他の実施形態におけるパーキンソン病の治療のための本明細書で提供する方法は、表１及び表２に示すバリエーション１から８１６の中から選択した投薬量及び頻度の組合せで、プールヒトＩｇＧのジェル、クリームまたは軟膏組成物を鼻腔内投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の鼻上皮へ直接、ジェル、クリームまたは軟膏組成物を投与することを含む。特定の実施形態における方法は、対象の嗅上皮へ直接、ジェル、クリームまたは軟膏組成物を投与することを含む。
【０２７２】
具体的な実施形態
第一の態様においては、本開示は、プールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む組成物の治療有効量を対象の脳へ送達することを含む、治療を必要とする対象における中枢神経系（ＣＮＳ）疾患の治療方法を提供する。この方法における脳への組成物の送達は、対象の鼻上皮へ直接、組成物を鼻腔内投与することを含む。
【０２７３】
第一の態様の一つの実施形態においては、対象へ投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも４０％が、対象の鼻上皮に接触する。
【０２７４】
第一の態様の一つの実施形態においては、対象へ投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも５０％が、対象の鼻上皮に接触する。
【０２７５】
第一の態様の一つの実施形態においては、対象へ投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも６０％が、対象の鼻上皮に接触する。
【０２７６】
第一の態様の一つの実施形態における鼻上皮は、対象の嗅上皮である。
【０２７７】
第一の態様の一つの実施形態においては、対象へ投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも４０％が、対象の嗅上皮に接触する。
【０２７８】
第一の態様の一つの実施形態においては、対象へ投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも５０％が、対象の嗅上皮に接触する。
【０２７９】
第一の態様の一つの実施形態においては、対象へ投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも６０％が、対象の嗅上皮に接触する。
【０２８０】
第一の態様の一つの実施形態における鼻上皮は、対象の、三叉神経終末に関連する鼻上皮である。
【０２８１】
第一の態様の一つの実施形態においては、対象へ投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも４０％が、対象の、三叉神経終末に関連する鼻上皮に接触する。
【０２８２】
第一の態様の一つの実施形態においては、対象へ投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも５０％が、対象の、三叉神経終末に関連する鼻上皮に接触する。
【０２８３】
第一の態様の一つの実施形態においては、対象へ投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも６０％が、対象の、三叉神経終末に関連する鼻上皮に接触する。
【０２８４】
第一の態様の一つの実施形態における脳への組成物の送達は、対象の鼻腔上側３分の１に組成物を鼻腔内投与することを含む。
【０２８５】
第一の態様の一つの実施形態においては、対象へ投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも４０％が、対象の鼻腔上側３分の１に接触する。
【０２８６】
第一の態様の一つの実施形態においては、対象へ投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも５０％が、対象の鼻腔上側３分の１に接触する。
【０２８７】
第一の態様の一つの実施形態においては、対象へ投与されるプールヒトＩｇＧの少なくとも６０％が、対象の鼻腔上側３分の１に接触する。
【０２８８】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系の神経変性障害である。特定の実施形態における中枢神経系の神経変性障害は、アルツハイマー病である。特定の実施形態における中枢神経系の神経変性障害は、パーキンソン病である。
【０２８９】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系を主に冒す全身萎縮である。特定の実施形態における中枢神経系を主に冒す全身萎縮は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である。特定の実施形態における中枢神経系を主に冒す全身萎縮は、ハンチントン舞踏病である。
【０２９０】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、錐体外路障害及び運動障害である。
【０２９１】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系の脱髄障害である。特定の実施形態における中枢神経系の脱髄障害は、多発性硬化症である。
【０２９２】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系の突発性あるいは発作性障害である。
【０２９３】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系の麻痺症候群である。特定の実施形態におけるＣＮＳ障害の中枢神経系麻痺症候群は、脳性麻痺である。
【０２９４】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、中枢神経系の神経、神経根または神経叢の障害である。
【０２９５】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、器質性精神障害である。
【０２９６】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、精神活性物質の使用に起因する精神障害あるいは行動障害である。
【０２９７】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、統合失調症、統合失調型障害または妄想性障害である。特定の実施形態における統合失調症、統合失調型障害または妄想性障害は、統合失調症である。
【０２９８】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、気分（感情）障害である。特定の実施形態における気分（感情）障害は、双極性障害である。
【０２９９】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、神経症性、ストレス関連性あるいは身体表現性障害である。
【０３００】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、行動症候群である。
【０３０１】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、成人の人格または行動障害である。
【０３０２】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、心理発達障害である。
【０３０３】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるＣＮＳ障害は、幼児発病の行動障害あるいは情動障害である。特定の実施形態における幼児発病の行動障害あるいは情動障害は、小児急性発症神経精神症候群（ＰＡＮＳ）である。別の特定の実施形態における幼児発病の行動障害あるいは情動障害は、溶連菌感染症関連小児自己免疫性精神神経疾患（ＰＡＮＤＡＳ）である。
【０３０４】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における組成物の鼻腔内投与は、非侵襲性鼻腔内送達デバイスの使用を含む。
【０３０５】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における組成物の鼻腔内投与は、鼻上皮へ直接、組成物の液滴を投与することを含む。
【０３０６】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における組成物の鼻腔内投与は、鼻上皮へ組成物のエアロゾルを指向性投与することを含む。特定の実施形態における組成物のエアロゾルは、液体エアロゾルである。特定の実施形態における組成物のエアロゾルは、粉末エアロゾルである。
【０３０７】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧを含む組成物は、透過性増大剤を含まない。
【０３０８】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧを含む組成物は、本質的に、プールヒトＩｇＧ及びアミノ酸からなる。特定の実施形態におけるアミノ酸は、グリシンである。別の特定の実施形態におけるアミノ酸は、ヒスチジンである。別の特定の実施形態におけるアミノ酸は、プロリンである。
【０３０９】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧを含む組成物は、水性組成物である。一つの実施形態における組成物は、１０ｍｇ／ｍｌから２５０ｍｇ／ｍｌのプールヒトＩｇＧ及び５０ｍＭから５００ｍＭのグリシンを含む。特定の実施形態における調合物のｐＨは、４．０から７．５である。別の特定の実施形態における組成物のｐＨは、４．０から６．０である。別の特定の実施形態における組成物のｐＨは、６．０から７．５である。
【０３１０】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧを含む組成物は、乾燥粉末組成物である。一つの実施形態における乾燥粉末組成物は、１０ｍｇ／ｍｌから２５０ｍｇ／ｍｌのプールヒトＩｇＧ及び５０ｍＭから５００ｍＭのグリシンを含む水溶液から調製される。特定の実施形態における乾燥粉末組成物は、４．０から７．５のｐＨを有する水溶液から調製される。別の特定の実施形態における組成物のｐＨは、４．０から６．０である。別の特定の実施形態における組成物のｐＨは、６．０から７．５である。
【０３１１】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における方法は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり０．０８ｍｇから１００ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。
【０３１２】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における方法は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり０．２ｍｇから４０ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。
【０３１３】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における方法は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり０．５ｍｇから２０ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。
【０３１４】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における方法は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり０．５ｍｇから１０ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。
【０３１５】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における方法は、対象に、対象の体重１ｋｇあたり１ｍｇから５ｍｇの用量のプールヒトＩｇＧ（ｍｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を鼻腔内投与することを含む。
【０３１６】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における方法は、対象に、５０ｍｇから１０ｇの一定用量のプールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む。
【０３１７】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における方法は、対象に、１００ｍｇから５ｇの一定用量のプールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む。
【０３１８】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における方法は、対象に、５００ｍｇから２．５ｇの一定用量のプールヒトＩｇＧを鼻腔内投与することを含む。
【０３１９】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における方法は、対象に、少なくとも月２回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。
【０３２０】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における方法は、対象に、少なくとも週１回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。
【０３２１】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における方法は、対象に、少なくとも週２回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。
【０３２２】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における方法は、対象に、少なくとも１日１回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。
【０３２３】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における方法は、対象に、少なくとも１日２回、プールヒトＩｇＧの一用量を鼻腔内投与することを含む。
【０３２４】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態におけるプールヒトＩｇＧを含む組成物は、少なくとも０．１％の抗アミロイドβ  ＩｇＧを含む。
【０３２５】
上記提供のいずれかの方法の一つの実施形態における方法は、治療が必要な対象に、ＣＮＳ障害に対する第二の療法を施すことを含む。一つの実施形態におけるＣＮＳ障害に対する第二の療法は、コリンエステラーゼ阻害剤である。特定の実施形態におけるコリンエステラーゼ阻害剤は、ドネペジルである。別の特定の実施形態におけるコリンエステラーゼ阻害剤は、リバスチグミンである。別の特定の実施形態におけるコリンエステラーゼ阻害剤は、ガランタミンである。別の特定の実施形態におけるコリンエステラーゼ阻害剤は、タクリンである。別の実施形態におけるＣＮＳ障害に対する第二の療法は、ＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体の阻害剤である。特定の実施形態におけるＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体の阻害剤は、メマンチンである。
【実施例】
【０３２６】
実施例１−ラットのＩｇＧ鼻腔内投与に対する許容度
ラットのＩｇＧ鼻腔内投与に対する許容度を調べるために試験を実施した。この試験の目的は、種々の濃度及び製剤での鼻腔内ＩｇＧ投与に対するラットの許容度を判定することであった。
【０３２７】
実験計画：ＩｇＧを、液体タンパク質溶液または微小球製剤として調製した。液体ＩｇＧタンパク質溶液は、グリシン中で２００ｍｇ／ｍｌ及び１００ｍｇ／ｍｌに調製した。ｐＨは５．１〜５．３であった。ＩｇＧ微小球製剤は、ＰＥＧ中で２００ｍｇ／ｍｌ及び１５０ｍｇ／ｍｌに調製した。ＩｇＧ製剤は、麻酔をかけた８匹の成体雄スプラーグドーリーラットへ投与した。
【０３２８】
麻酔の前に、各ラットの体重を量った。麻酔カクテルを調製し、全量、半量及び四分の一量の麻酔用量を、動物の体重から計算した。全用量は、３０ｍｇ／ｋｇのケタミン、６ｍｇ／ｋｇのキシラジン及び１ｍｇ／ｋｇのアセプロマジンを含んだ。麻酔は、左後脚の腿の上に皮下投与した。麻酔は、手順を通して、後足または尾をつまんで反射運動を査定することによってモニターした。反射運動がある場合、必要に応じて、半用量ブースターまたは四分の一用量ブースターを投与した。薬剤投与中、動物には、必要に応じ、初期投与の約２０から２５分後、半用量ブースターを投与した。
【０３２９】
麻酔ラットは、金属手術トレイ内の加温パッド上に背中を付けて置いた。加温パッドは、サーモスタットへつながれており、直腸プローブからの連続的な測定値に基づき、３７℃の温度を維持するよう自動的に管理された。２"×２"のガーゼパッドをきつく巻きテープで束ねて枕にし、頸の下に入れ、カウンターに水平な正しい頸の位置を保った。
【０３３０】
６μｌ一滴をピペットに装填して、ティッシュで拭いて乾いた状態にした。（ラットの正中線から４５°の角度で維持した）ピペットからゆっくりと６μｌ滴を放出してピペット先端に滴を形成させながら、一方の鼻孔を完全に塞ぐために、パラフィルムで被覆した綿棒を使用した（気流を妨げるよう、綿棒の平坦な部分を穏やかに鼻孔に押しつけた）。滴は、吸入されるよう、開鼻孔へ降ろした。ＩｇＧ製剤は、表３に記載のように鼻腔内投与した。
【０３３１】
（表３）鼻腔内許容度のテストのための、８匹のラットへのＩｇＧ鼻腔内投与
0006379113.tif 000008
【０３３２】
結果。３匹のラットが、液体製剤の鼻腔内ＩｇＧを受けた。１匹のラットが、１００ｍｇ／ｍｌで６０μｌを受け、うまく許容した。２匹のラットが、２００ｍｇ／ｍｌで６０μｌを受けた。第一のラットは、おそらく浅麻酔に関わる問題のために、いくらかの呼吸困難があった。第二のラットは、いくらかの呼吸困難があったが、生き残った。気管切開は必要なかった。
【０３３３】
４匹のラットが微小球製剤を受けた。２匹のラットが、１５０ｍｇ／ｍｌで６０μｌを受けた。１匹のラットは、２００ｍｇ／ｍｌで６０μｌを受けた。もう１匹のラットは、１５０ｍｇ／ｍｌで１６２μｌを受けた。これらのラットは、２００ｍｇ／ｍｌでの利用可能な最高濃度を非常によく許容した。
【０３３４】
ラットは、液体及び微小球製剤を許容したが、ラットは、タンパク質製剤よりも微小球製剤をよりよく許容した。
【０３３５】
実施例２−３０及び９０分での液体、微小球及びフラグメント生体内分布の比較
この試験の目的は、鼻腔内投与されたＩｇＧの、麻酔ラットの中枢神経系及び周縁組織に到達する量を定量化することであった。具体的には、異なる調合物と投与様式の生体内分布を比較した。表４に、異なる調合物及び投与様式を説明する。
【０３３６】
（表４）生体内分布試験で使用した調合物及び投与様式
0006379113.tif 000009
【０３３７】
実験計画：４０匹の雄スプラーグドーリーラットに、１２５Ｉ放射性標識ＩｇＧの三つの製剤のうちの一つを与えた。これらは、ｐＨ５．１〜５．３のグリシン中の液体ＩｇＧタンパク質溶液、ＰＥＧを含む微小球製剤中のＩｇＧを含んだ。またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中のＦａｂ抗体フラグメントとして与えた。薬剤投与は鼻腔内あるいは静脈内であった。ラットは、生体内分布試験のために、ＩｇＧ製剤の送達開始から３０または９０分後に屠殺した。
【０３３８】
鼻腔内送達のために、ラットを麻酔し、金属手術トレイ内の加温パッド上に背中を付けて置いた。加温パッドは、サーモスタットへつながれており、直腸プローブからの連続的な測定値に基づき、３７℃の温度を維持するよう自動的に管理された。２"×２"のガーゼパッドをきつく巻きテープで束ねて枕にし、頸の下に入れ、カウンターに水平な正しい頸の位置を保った。放射線に対する保護のために、手術トレイと実験者との間に鉛含浸シールドを配置した。投与溶液、ピペット、ピペットチップ及び廃棄物処理用容器は、アクセスを容易にするために、シールドの向こう側に配置した。
【０３３９】
シールドの向こう側でピペットへ６μｌ一滴を装填して、ティッシュで拭いて乾いた状態にした。（ラットの正中線から４５°の角度で維持した）ピペットからゆっくりと６μｌ滴を放出してピペット先端に滴を形成させながら、一方の鼻孔を完全に塞ぐために、パラフィルムで被覆した綿棒を使用した（気流を妨げるよう、綿棒の平坦な部分を穏やかに鼻孔に押しつけた）。滴は、吸入されるよう、開鼻孔へ降ろした。２分後、他方の鼻孔を塞いで、６μｌ一滴を同じ様式で投与した。滴は、１４分間に渡り合計８滴（各々の鼻孔へ４滴）が送達されるまで、２分毎に、上記のように交互の鼻孔へ投与した。各滴の送達時間と共に、動物の呼吸または送達の成功に関する詳細も書き留めた。具体的な活性を測定して判定するために、各投与溶液の３μｌアリコートの三つをガンマ計数した。
【０３４０】
静脈内ＩｇＧ送達のためには、ラットの大腿動脈へのカニューレ挿入が必要であった。麻酔動物は、手術トレイ内に、３７℃に維持された加温パッドに背中を付けて配置した。両方の後脚を、縫合糸をゆるく脚に結びつけ、止血鉗子でそれらを重くすることによって固定した。表面の血管を切らないように注意しながら、中央鼠径部の箇所に、切れの良くないハサミで小さな切れ目を表面に入れた。綿棒を使用しての鈍的解剖によって、大伏在静脈から鼠径靭帯までの大腿静脈を露出させた。その領域が良く見えるよう皮膚を切り離すために、切れの良くないハサミを使用した。上を覆っている筋肉は、筋肉を通して湾曲針を用いて４−０縫合糸で縫うことによって引っ込ませ、縫合糸の終端へ湾曲止血鉗子を付けて重くすることによって固定した。大腿静脈及び動脈を囲む結合組織は、鈍的解剖（綿棒）で慎重に除去した。静脈及び動脈間の結合組織は、血管に平行な動作を慎重に行い、また、血管を破らないように注意して、二対の鉗子を使用して剥ぎ取った。領域が乾いた場合、生理食塩水を適用した。
【０３４１】
枝分れがない領域においては、静脈下に角度鉗子を挿入し、先端で結合組織を突き通して、鉗子をゆっくりと開き、１２インチの４−０縫合糸を非常に慎重に通過させた。静脈が潰れた場合は、綿棒を使用して、慎重に静脈へ血液をフルに注ぎ込んだ。第二の縫合糸を、同様の方法で通した。中央及び側方の縫合糸を結んで、緩い結び目にした。綿棒を使用し、静脈へ血液をフルに注ぎ込んだ。（膝に最も近い）側方の縫合糸は、結んで堅い結び目にした。中央縫合の縫合糸へ止血鉗子を付けることによって、血流を止めるために、いくらかの張力を加えた。
【０３４２】
大腿静脈に１ｍｍの横切開を入れ、すぐに、０．９％のＮａＣｌで先に満たされたチュービングに結ばれて三方活栓へ取り付けられた鈍い２５Ｇ蝶針を挿入した。その針のまわりに中央縫合糸を縛り付け、それを固定した。静脈内配置であることを確認するため、少量の血液を引き出してから、生理食塩水を押し入れた。自由な縫合糸は、カニューレを固定している蝶針へ結びつけた。筋肉を突き出させ、四肢を固定している縫合糸を除去し、手術領域を、生理食塩水で濡れたガーゼで覆った。
【０３４３】
１２５Ｉ−ＩｇＧの静脈内注入のために、鉛のシールドの向こう側のフード内にシリンジポンプを配置した。放射線での汚染を防止するため、ポンプの部品をパラフィルム（またはサランラップ）で覆った。ポンプは、４．７５ｍｍ直径及び５０μｌ／分の流量に設定した。投与溶液（４８μｌ）は、１．５ｍｌのマイクロ遠心機チューブ内で、４５２μｌの生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ、総体積５００μｌ）と混合させた。生理食塩水で満たした１ｃｃのシリンジを、蝶針に付けられた三方活栓へ付け、ポンプ内に配置した。生理食塩水シリンジを活栓に固定するため、パラフィルムを使用した。ラットへ活栓が閉じられた状態でポンプを起動させ、活栓を生理食塩水で満たした。
【０３４４】
２７Ｇまたは３０Ｇ針に付けた１ｃｃのシリンジを、マイクロ遠心機チューブから薬剤を収集するために使用してから、そのシリンジを三方活栓へ結合させた。活栓を回して、投与溶液とラットとの間の流れを開にした。ラットに気泡が入ることがないよう、また、大腿静脈近くで流体が滞留する（これは、針が静脈に入っていないことを示す）ことがないよう確認しながら、チュービングを投与溶液で満たした。活栓を回して、生理食塩水シリンジ及びラットへの流れを開にした。
【０３４５】
時間と生理食塩水シリンジの開始体積とを書き留め、ポンプを起動させた。生理食塩水シリンジの停止体積も、１４分間注入の終了時に書き留めた。少なくとも７００μｌの生理食塩水が注入された（１４分間に渡り５０μｌ／分）。投与生理食塩水量がチュービング体積よりも僅かに多かったことは、投与溶液のすべてが投与されたことを保証した。
【０３４６】
所望の終了時点の２分前、麻酔動物は、金属手術トレイ内に、背中を下に向けて水平に配置させた。加温パッド、直腸プローブ及び頸枕は取り除いた。テープを用いて、前肢をその受け皿に固定した。受け皿の後部を僅かに上げて、動物から血液が流れ去るようにした。皮膚を切開し、胸骨を露出させた。胸骨を止血鉗子で固定し、胸郭を側方へ切開して横隔膜を露出させた。横隔膜を側方へ切開し、胸腔を露出させた。
【０３４７】
動物の腋の下の方へ胸郭の側面に切れ目を入れるのに手術ハサミを使用し、心臓を露出させる切開を『Ｖ』状に形成した。その腔を開いたままに保つために、胸骨を保持する止血鉗子を、頭の上方にテープ止めした。左心室に小さな切れ目を入れる間、尖っていない鉗子を使用して心臓を静止させた。１８Ｇで１"の尖っていない針を持つ１ｃｃシリンジを左心室内へ挿入して、約０．１ｍｌの血液を採り、それを、ガンマ計数のために予め計量されたチューブへ入れた。６０ｃｃの生理食塩水で満たした拡張セットに付けられた第二の１８Ｇの尖っていない針を、左心室を通してから大動脈へ挿入した。大きなブルドッグ鉗子を、心臓の丁度真上の大動脈上に配置して、尖っていない針を固定した。
【０３４８】
動物には、１５ｍｌ／分の流量でシリンジポンプを使用して、６０ｍｌの生理食塩水を灌流した後、３６０ｍｌのパラホルムアルデヒドを灌流した。
【０３４９】
実験手順を通して、動物組織、手術ツール及び器材の放射能汚染を防ぐために、厳しい予防措置に従った。ガイガーカウンターを各ワークステーションに配置し、ツール、ワークスペース及びスタッフを連続的にスクリーニングした。二重層の手袋、白衣、眼保護具、マスク及びブッファンキャップを含む保護具を、いつも着用した。放射線被曝を最小にするため、鉛含浸シールドを使用した。曝露を定量化するために、実験手順を通して、スタッフは放射性モニタリングバッジも身に着けた。
【０３５０】
各々の組織試料は、収集の直後、後の測定のために、予めラベルが付けられかつ予め計量されたガンマチューブへ入れられた。
【０３５１】
脳解剖のために、肩甲骨のちょうど真上で、頸の周りの皮膚及び筋肉をメスで切り、動物を断首するために大きなハサミを使用し、気管及び食道からの汚染を回避するよう背側から腹側へ切った。脳を露出させるために、頭の背側に正中切開を行ってから、皮膚を剥がし、背側硬膜を付着させたまま残すように注意しながら、ストレートな止血鉗子を使用して骨を砕いた。背側硬膜を収集した。
【０３５２】
頭蓋から脳を取り出すために頭を反転し、小さなスパチュラを使用して腔から脳を自由にした。脳の近くで、後部視神経及び三叉神経を切った。それから、解剖のため脳を清潔なシャーレへ入れた。
【０３５３】
頭蓋の底部から、腹側の頭蓋壁に鉗子をこすりつけることによって腹側硬膜を収集した。下垂体、視神経交叉及び三叉神経を収集した。三叉神経の前部は、頭蓋内の視認可能な枝分れの前の部分から構成されたが、他方、三叉神経節を含む残部は、後部切片と見なされた。それから、頭を脇に置き、後の解剖のためにキムワイプで覆った。
【０３５４】
顕微鏡を利用し、脳から血管を除去した。手術鉗子、マイクロ剪刀及び３０Ｇ針を使用して、脳底動脈及びウイリス動脈輪を取り出し、予め計量された紙の上へ載せた（この組織が非常に軽いため、紙を使用した）。脳から血管を離して持ち上げるために針を、掴んで保持するために鉗子を、及び、切れ目を入れるためにマイクロ剪刀を使用した。この組織を収集後直ちに計量し、そして、紙全体を潰してチューブの底に配置した。
【０３５５】
冠状マトリックス内へ脳を配置する前に、嗅球を、かみそりの刃を使用して自然な角度で切り離した。冠状脳マトリックス内においては、各々の動物を同じ位置（ブレグマ）へ正規化するために、除去前に視神経交叉があった箇所の中心に、かみそりの刃を入れた。追加の刃を、第一の刃から２ｍｍ毎に配置した。その結果、６×２ｍｍのスライス、視神経交叉に対して吻側３枚及び尾側３枚のスライスが生じた。
【０３５６】
刃を取り外して、各々のスライスから組織を切り裂いた（図１Ａ〜１Ｆ）。皮質及び海馬の残部切片は、マトリックス内で残りの脳組織から切り裂いて、それぞれのチューブへ入れた。上頸部脊髄を収集した。それから、残りの脳を正中線に沿って二分し、図１Ｇに示すように、中脳、脳橋、髄質及び小脳へ切り分けた。
【０３５７】
頭に戻って、頸の腹側に前方へ切れ目を入れ、皮膚を後ろへ剥いて、リンパ節、唾液腺及び頚筋を露出させた。表在リンパ節、深頸リンパ節、頸動脈及び甲状腺を切り裂いて、結合組織を除去した。正中線に沿って頭蓋を二分するために、かみそりの刃を使用した。嗅上皮及び呼吸上皮を収集した。
【０３５８】
体解剖のために、背を下にして体を配置し、メスを用いて縦方向に、腹腔を膀胱へ切開した。肝臓（表在右葉）、腎臓（左、先端）、腎動脈、脾臓（先端）、肺（右、頂葉）及び心臓の、３ｍｍ正方形試料を収集した。約０．１〜０．２ｍｌの尿を収集した。
【０３５９】
体を反転させて腹部を下に向け、動物の体長、脊柱に沿って、肩から尻へ表面切開を行った。皮膚は、両側の下層組織から剥がし、肩甲骨を露出させた。腋の下の腋窩リンパ節を切り裂いて、結合組織を除去した。右三角筋を収集した（約３ｍｍ２）。
【０３６０】
脊柱を覆う筋肉には、メスで切り目を入れた。脊髄を露出させるために、小さな止血鉗子を脊柱に挿入させ、覆っている脊柱及び組織を削り取った。小さなスパチュラを使用して脊髄腔から脊髄を緩め、鉗子を使用してそれを取り出し、シャーレへ入れた。鉗子を使用して、脊髄から硬膜を剥がした。脊髄は、下頸部、胸部及び腰部の部分に切り分けた。下頸部セグメントの頂部約２ｍｍは廃棄した。
【０３６１】
気管及び食道の２ｃｍセグメントを体から切り離し、結合組織を除去した。（断頭点に最も近い）各々の頂部０．５ｃｍは廃棄した。
【０３６２】
試料を含む予め計量されているガンマチューブを、組織量を判定するために再計量した。ラットからの組織試料を、コブラＩＩオートガンマカウンターを使用して、標準１２５Ｉプロトコル及び５分の計数時間に従って計数した。８０％以上の計数効率を保証にするために、カウンターは毎週正規化した。バックグラウンド計数は減算した。
【０３６３】
各々の組織試料のｎＭ濃度の平均及び標準誤差を計算した。各組織に対する平均の二つの標準偏差の外にある値は、異常値と考え、データセットから取り除いた。投与溶液の測定した具体的な作用、各組織のＣＰＭ及び各組織の体積（１ｇ＝１ｍｌとみなす）を用いて、各組織に対するＩｇＧのｎＭ濃度を計算した。
【０３６４】
結果、３０分終点での鼻腔内ＩｇＧ液体製剤の分布。８匹のラットが、３０分終点で、６９．６μＣｉを含む４７．４μｌ中に６．０ｍｇの平均用量で、ＩＮ  ＩｇＧ液体製剤を受けた。動物はＩＮ投与を良く許容し、すべてが、３０分の所望終点まで生存した。
【０３６５】
ＩＮ薬剤投与の部位で、呼吸上皮及び嗅覚上皮における平均ＩｇＧ濃度は、各々、１３６，２１３ｎＭ及び４４２ｎＭであった。ＩｇＧの１３．１ｎＭから６．０ｎＭの吻側から尾側への勾配が、三叉神経内に観察された。ＩｇＧの４．１ｎＭから１．５ｎＭの、嗅球から前嗅核への同程度の勾配が観察された。ＩＮ投与後のＩｇＧ平均皮質濃度は、１．３ｎＭであった。他の脳領域におけるＩｇＧ濃度は、線条体の最低０．７ｎＭから視床下部の最高１．７ｎＭまで変化した。海馬が０．６ｎＭのＩｇＧを含むことが発見された。試料とした追加の脳物質内にも、吻側から尾側への濃度勾配（１．６ｎＭから０．７ｎＭ）が観察された。同様に、脊髄でも、吻側から尾側への濃度勾配（１．２ｎＭから０．３ｎＭ）が観察された。脳の硬膜中のＩｇＧ平均濃度は、脊髄硬膜濃度の２．８ｎＭに比べ、１５．２ｎＭであった。その硬膜は、恐らく、いくらかの、またはほとんどのクモ膜も含み、一緒になって、髄膜の三つの構成要素のうちの二つを構成する。腹側の頭蓋腔から試料として得た他の組織（下垂体及び視神経交叉）は、各々、８．２ｎＭ及び７．４ｎＭのＩｇＧを含んでいた。
【０３６６】
３０分終点でのＩｇＧ血液濃度は、１３．９ｎＭであった。末梢器官におけるＩｇＧ濃度は、心臓の最低１．３ｎＭから脾臓及び腎臓の最高６．１ｎＭまでの範囲で、尿が８．１ｎＭ含んでいた。脳底動脈及び頸動脈のＩｇＧ濃度は、腎動脈よりもかなり高かった（１１．７及び１４．１ｎＭ対４．４ｎＭ）。試料としたリンパ節のＩｇＧ平均濃度は、４．７ｎＭであった。ＩＮ投与と呼吸困難（肺、食道及び気管）の変化を査定するために測定した組織のＩｇＧレベルは、動物全体で一貫していた。
【０３６７】
結果、３０分終点での鼻腔内ＩｇＧ微小球製剤（低μＣｉ）の分布。４匹のラットが、３０分終点で、２４．７μＣｉを含む４８．０μｌ中に７．２ｍｇの平均用量で、ＩＮ  ＩｇＧ微小球製剤（低μＣｉ）を受けた。４匹のラットからの生データを、表５に示す。この投与溶液からの、測定した具体的な作用は、提供された具体的な作用に基づいて期待したものよりもかなり低かった。動物はＩＮ投与を良く許容し、すべてが、３０分の所望終点まで生存した。合計２１１の濃度値から、０個の統計学的に有意な異常値と、１４個の統計学的に有意ではない異常値が確認された。
【０３６８】
（表５）異常値を含んでの、３０分終点での（低ｕＣｉを持つ）鼻腔内投与ＩｇＧ微小球製剤の生体内分布（ｎＭ濃度）
0006379113.tif 000010
0006379113.tif 000011
＊＝負のチューブ重量、そのため、ｎＭが計算できなかった。
【０３６９】
結果、３０分終点での鼻腔内ＩｇＧ微小球製剤の分布。８匹のラットが、３０分終点で、６０．０μＣｉを含む４８．０μｌ中に７．２ｍｇの平均用量で、ＩＮ  ＩｇＧ微小球製剤を受けた。８匹のラットからの生データを、表６に示す。動物はＩＮ投与を良く許容し、すべてが、３０分の所望終点まで生存した。
【０３７０】
（表６）異常値を除外した、３０分終点での鼻腔内投与ＩｇＧ微小球製剤の生体内分布（ｎＭ濃度）
0006379113.tif 000012
0006379113.tif 000013
Ｘ＝分析から取り除いた異常値
【０３７１】
ＩＮ薬剤投与の部位で、呼吸上皮及び嗅覚上皮における平均ＩｇＧ濃度は、各々、７４，８４４．８ｎＭ及び３２６ｎＭであった。ＩｇＧの１．５ｎＭから１．１ｎＭの吻側から尾側への勾配が、三叉神経内に観察された。ＩｇＧの１．２ｎＭから０．６ｎＭの、嗅球から前嗅核への同程度の勾配が観察された。ＩＮ投与後のＩｇＧ平均皮質濃度は、０．５ｎＭであった。他の脳領域におけるＩｇＧ濃度は、視床の最低０．１ｎＭから線条体の最高１．１ｎＭまでの範囲であった。海馬が０．２ｎＭのＩｇＧを含むことが発見された。試料とした追加の脳物質におけるＩｇＧ平均濃度は、平均皮質濃度に類似した０．４ｎＭであって、濃度勾配は観察されなかった。脊髄内には、吻側から尾側への濃度勾配（０．４２ｎＭから０．０６ｎＭ）が観察された。脳の硬膜中のＩｇＧ平均濃度は、脊髄硬膜濃度の０．６ｎＭに比べ、４．３ｎＭであった。腹側の頭蓋から試料として得た他の組織、下垂体及び視神経交叉は、各々、２．２ｎＭ及び１．７ｎＭのＩｇＧを含んでいた。
【０３７２】
３０分終点でのＩｇＧ血液濃度は、１７５ｎＭであった。末梢器官におけるＩｇＧ濃度は、肝臓の最低０．２ｎＭから腎臓の最高０．８ｎＭまでの範囲で、尿が１．６ｎＭ含んでいた。脳底動脈及び頸動脈のＩｇＧ濃度は、腎動脈の濃度よりもかなり高かった（９．３及び３．１ｎＭ対０．６ｎＭ）。試料としたリンパ節のＩｇＧ平均濃度は、１．０ｎＭであった。ＩＮ投与と呼吸困難（肺、食道及び気管）の変化を査定するために測定した組織のＩｇＧレベルは、動物全体で一貫していた。甲状腺のＩｇＧレベルは、異常値の除去後でさえも、１６．１ｎＭから３，２７５ｎＭの範囲で大いに異なった。
【０３７３】
結果、３０分終点での鼻腔内ＩｇＧフラグメント製剤の分布。４匹のラットが、７６．４μＣｉを含む４８．２μｌ中に約３．３ｍｇの平均用量で、ＩＮ  ＩｇＧ  Ｆａｂ抗体フラグメント製剤を受けた。４匹のラットからの生データを、表７に示す。全４件の実験は、３０分の終点で完了した。予想通り、動物はＩＮ投与を良く許容し、すべてが、所望の終点まで生存した。
【０３７４】
（表７）異常値を除外した、３０分終点での鼻腔内投与ＩｇＧ  Ｆａｂ製剤の生体内分布（ｎＭ濃度）
0006379113.tif 000014
0006379113.tif 000015
0006379113.tif 000016
Ｘ＝分析から取り除いた異常値
【０３７５】
ＩＮ薬剤投与の部位での、呼吸上皮及び嗅覚上皮における平均ＩｇＧ  Ｆａｂ濃度は、各々、１０８，０７６ｎＭ及び３１３ｎＭであった。三叉神経内には、９７．２ｎＭから３０．１ｎＭの、ＩｇＧ  Ｆａｂの吻側から尾側への勾配が観察された。ＩｇＧ  Ｆａｂの３７．３ｎＭから１８．８ｎＭの、嗅球から前嗅核への同程度の勾配が観察された。ＩＮ投与後のＩｇＧ  Ｆａｂ平均皮質濃度は、９．３ｎＭであった。他の脳領域におけるＩｇＧ濃度は、線条体の最低５．６ｎＭから視床下部の最高１６．３ｎＭまで変化した。海馬が５．８ｎＭのＩｇＧ  Ｆａｂを含むことが発見された。試料とした追加の脳物質内には、吻側から尾側への濃度勾配（２７．０ｎＭから５．７ｎＭ）が観察された。同様に、脊髄でも、吻側から尾側への濃度勾配（１４．７ｎＭから０．７ｎＭ）が観察された。脳の硬膜中のＩｇＧ  Ｆａｂ平均濃度は、脊髄硬膜濃度の４．７ｎＭに比べ、１１３．１ｎＭであった。腹側の頭蓋腔から試料として得た他の組織（下垂体及び視神経交叉）は、各々、４２．６ｎＭ及び２５．６ｎＭのＩｇＧ  Ｆａｂを含んでいた。
【０３７６】
３０分終点でのＩｇＧ  Ｆａｂ血液濃度は、３２．９ｎＭであった。末梢器官のＩｇＧ  Ｆａｂ濃度は、心臓の最低２．５ｎＭから腎臓及び尿の最高１２．４ｎＭまでの範囲で、脾臓が８．７ｎＭ含んでいた。脳底動脈及び頸動脈のＩｇＧ  Ｆａｂ濃度は、腎動脈よりもかなり高かった（６５．７及び３８．１ｎＭ対８．６ｎＭ）。
【０３７７】
結果、３０分終点と９０分終点の比較。ＩｇＧ液体製剤に対しては、３０分終点に比較すると、延長９０分終点での脳組織のＩｇＧ濃度は、概して類似、あるいは僅かに高かった。３０分終点に比べ９０分終点では、ＩｇＧ微小球製剤において、より多くの変動があった。いくつかの組織（視床、中脳）がより多く、また、いくつかの組織（線条体、後頭皮質）が、より少なく含んでいた。表８及び表９に、組織のＩｇＧ濃度を要約する。
【０３７８】
（表８）異常値を取り除いた、３０分終点及び９０分終点におけるＩＮ、ＩＶ及びＦａｂ  ＩｇＧの組織中濃度の要約（ｎＭ±ＳＥ）
0006379113.tif 000017
0006379113.tif 000018
【０３７９】
（表９）６ｍｇ用量へ正規化された組織内ＩｇＧ濃度の要約
0006379113.tif 000019
【０３８０】
結果、９０分終点での鼻腔内ＩｇＧ液体製剤の分布。６匹のラットが、９０分終点で、７０．０μＣｉを含む４７．６μｌ中に７．４ｍｇの平均用量で、ＩＮ  ＩｇＧ液体製剤を受けた。動物はＩＮ投与を良く許容し、すべてが、９０分の所望終点まで生存した。表１０に、９０分終点での、ＩＮ  ＩｇＧ液体製剤投与に対する組織内のナノモルＩｇＧ濃度を示す。
【０３８１】
（表１０）異常値を除外した、９０分終点での鼻腔内ＩｇＧ液体製剤投与後のＩｇＧの組織中濃度（ｎＭ）
0006379113.tif 000020
0006379113.tif 000021
0006379113.tif 000022
【０３８２】
Ｘ＝分析から取り除いた異常値。ＩＮ薬剤投与の部位での、呼吸上皮及び嗅覚上皮における平均ＩｇＧ濃度は、各々、１６３，６２７ｎＭ及び３５５ｎＭであった。三叉神経内には、１９．３ｎＭから８．４ｎＭの、ＩｇＧの吻側から尾側への勾配が観察された。ＩｇＧの９．９ｎＭから２．５ｎＭの、嗅球から前嗅核への同程度の勾配も観察された。ＩＮ投与後のＩｇＧ平均皮質濃度は、２．２ｎＭであった。他の脳領域におけるＩｇＧ濃度は、視床の最低０．６ｎＭから視床下部の最高１．９ｎＭまでの変動があった。海馬が１．０ｎＭのＩｇＧを含むことが発見された。試料とした追加の脳物質内にも、吻側から尾側への濃度勾配（３．３ｎＭから１．２ｎＭ）が観察された。同様に、脊髄でも、吻側から尾側への濃度勾配（２．０ｎＭから０．４ｎＭ）が観察された。脳の硬膜中のＩｇＧ平均濃度は、脊髄硬膜濃度の３．３ｎＭに比べ、３１．７ｎＭであった。腹側の頭蓋から試料として得た他の組織、下垂体及び視神経交叉は、各々、８．４ｎＭ及び８．０ｎＭのＩｇＧを含んでいた。
【０３８３】
３０分終点でのＩｇＧ血液濃度は、１９．７ｎＭであった。末梢器官のＩｇＧ濃度は、肝臓の最低２．６ｎＭから脾臓の最高７．７ｎＭまで変動し、尿が１７．５ｎＭ含んでいた。脳底動脈及び頸動脈内のＩｇＧ濃度は、腎動脈内の濃度に類似していた（１４．８及び１６．１ｎＭ対１１．４ｎＭ）。試料としたリンパ節のＩｇＧ平均濃度は、７．８ｎＭであった。ＩＮ投与と呼吸困難（肺、食道及び気管）の変化を査定するために測定した組織のＩｇＧレベルは、動物全体で一貫していた。
【０３８４】
結果、９０分終点での鼻腔内ＩｇＧ微小球製剤の分布。６匹のラットが、９０分終点で、５９．７μＣｉを含む４８．０μｌ中に７．２ｍｇの平均用量で、ＩＮ  ＩｇＧ微小球製剤を受けた。動物はＩＮ投与を良く許容し、すべてが、９０分の所望終点まで生存した。表１１に、６匹のラットのうちの５匹における９０分終点での、ＩＮ  ＩｇＧ微小球製剤投与に対する組織内のナノモルＩｇＧ濃度を示す。
【０３８５】
（表１１）異常値を除外した、９０分終点での、鼻腔内ＩｇＧ微小球製剤投与後の組織内ＩｇＧ濃度（ｎＭ）
0006379113.tif 000023
【０３８６】
Ｘ＝分析から取り除いた異常値。ＩＮ薬剤投与の部位での、呼吸上皮及び嗅覚上皮における平均ＩｇＧ濃度は、各々、１２４，５０９ｎＭ及び３，１９１ｎＭであった。三叉神経内には、８．０ｎＭから３．１ｎＭの、ＩｇＧの吻側から尾側への勾配が観察された。ＩｇＧの１．５ｎＭから０．６ｎＭの、嗅球から前嗅核への同程度の勾配も観察された。ＩＮ投与後のＩｇＧ平均皮質濃度は、０．５ｎＭであった。他の脳領域におけるＩｇＧ濃度は、視床の最低０．３ｎＭから中隔核の最高０．６５ｎＭまでの変動があった。海馬が０．５ｎＭのＩｇＧを含むことが発見された。試料とした追加の脳物質におけるＩｇＧ平均濃度は、０．４ｎＭで、平均皮質濃度に類似し、吻側から尾側への濃度勾配も観察された。同様に、脊髄でも、吻側から尾側への濃度勾配（０．６ｎＭから０．２ｎＭ）が観察された。脳の硬膜中のＩｇＧ平均濃度は、脊髄硬膜濃度の０．７ｎＭに比べ、８．６ｎＭであった。腹側の頭蓋から試料として得た他の組織、下垂体及び視神経交叉は、各々、２．８ｎＭ及び１．９ｎＭのＩｇＧを含んでいた。
【０３８７】
３０分終点でのＩｇＧ血液濃度は、２２３．０ｎＭであった。末梢器官のＩｇＧ濃度は、心臓の最低０．６ｎＭから腎臓の最高２．６ｎＭまで変動し、尿が６．３ｎＭ含んでいた。脳底動脈及び頸動脈内のＩｇＧ濃度は、腎動脈内の濃度に類似していた（５．８及び６．３ｎＭ対３．７ｎＭ）。試料としたリンパ節のＩｇＧ平均濃度は、２．５ｎＭであった。ＩＮ投与と呼吸困難（肺、食道及び気管）の変化を査定するために測定した組織のＩｇＧレベルは、動物全体で驚くほど一貫していた。異常値を取り除く前では、甲状腺のＩｇＧレベルは大いに異なった。
【０３８８】
全体として、６．０ｍｇ用量へ正規化すると、ＩｇＧ液体製剤のＩＮ投与は、脳内濃度０．４から１．７ｎＭの範囲で、微小球製剤よりも高い脳内濃度を示した。表８に、ＩＮ、ＩＶ及びＦａｂデータの要約を示す。これは、嗅上皮及び呼吸上皮に到達する微小球ＩｇＧの低濃度から説明できる。鼻腔内微小球製剤は、また、液体製剤よりも血液中で約１０倍高いＩｇＧ濃度に至った。
【０３８９】
６ｍｇ  ＩＮ用量へ正規化した場合、組織内Ｆａｂ濃度は、液体ＩｇＧ製剤よりも脳内で平均１９倍高かった。表９に、６ｍｇ用量へ正規化された組織内ＩｇＧ濃度を要約する。無傷ＩｇＧに対してＦａｂの分子量が３倍小さいことが、鼻腔からＣＮＳへの直接送達効率の向上の原因である可能性が高い。Ｆａｂが、アルツハイマー病治療のためのＩｇＧに類似した生体影響を持つなら、ＩＮ送達の有望な候補になるであろう。
【０３９０】
図２Ａ及び図２Ｂに、３０分及び９０分終点での、鼻腔内ＩｇＧ液体及び微小球製剤投与後の脳組織内濃度（ｎＭ）の比較を示す。
【０３９１】
３０分後の、液体タンパク質製剤のＩＮ及びＩＶ送達の結果。平均して、３０分終点で、ＩｇＧ液体製剤のＩＮ投与は、等価のＩＶ投与よりも低い脳内濃度になった（例えば、１．３ｎＭ対２．６ｎＭの平均皮質濃度）。しかし、これらの脳内ＩｇＧ濃度を達成するために、ＩＶ投与は、ＩＮ投与よりも１００倍高い血中濃度であった（１，３６１ｎＭ対１３．９ｎＭ）。末梢器官及び器系においても、ＩＶ対ＩＮ投与に関わる、より高濃度のＩｇＧが観察された。例えば、リンパ系のＩｇＧ濃度は、ＩＶ対ＩＮ投与で１０倍であった（４３．６ｎＭ対４．７ｎＭ）。
【０３９２】
組織内濃度を、血液、肝臓またはリンパ濃度へ正規化した場合、ＩＮ投与が中枢神経系を標的とすることが明白であった。表１２に、鼻腔内及び静脈内ＩｇＧ投与の、血中濃度に対する組織内濃度の比率を示す。例えば、前頭皮質に対しては、血中濃度に対して正規化した場合、ＩＮ投与はＩＶよりも４８倍高濃度になる。肝臓内濃度に対して正規化した場合は、４０倍高く、また、平均リンパ中濃度に対して正規化した場合は、５倍高い。鼻腔内投与は、ＩＶ投与に比べ（血液に比べ）、β−アミロイド及びヘム（両方とも、ＩｇＧを結合することが知られている）を蓄積することが既知である、前頭皮質、海馬、及び脳脈管系の血管壁を含む脳領域へのＩｇＧ標的指向化を約５０倍向上させた。重要なことに、β−アミロイドはヘムをしっかりと結合する。そして、ヘムは、記憶に関わる脳の受容体を不活性化することで知られている強力な酸化促進剤であり、また炎症誘発剤である。
【０３９３】
（表１２）鼻腔内及び静脈内ＩｇＧ標的指向化の比較
0006379113.tif 000024
0006379113.tif 000025
【０３９４】
８匹のラットが、３０分終点で、（注入のために生理食塩水で５００μｌの総体積へ希釈した）６９．５μＣｉを含む４７．４μｌ中に６．０ｍｇの平均用量で、ＩＶ  ＩｇＧ液体製剤を受けた。動物はＩＶ投与を良く許容し、すべてが、３０分の所望終点まで生存した。１匹の動物（ＢＡＸ−３）を、平均、標準誤差及び異常値の分析から取り除いた。その理由は、血中濃度が、他のすべての動物で観察された値の２０％未満で、このことがＩＶ注入の失敗を示唆したためである。７匹のラットにおける静脈内投与ＩｇＧ液体製剤のナノモル濃度を、３０分終点で計測した。それらを表１３に示す。
【０３９５】
（表１３）ラットにおける静脈内投与ＩｇＧ液体製剤の組織内濃度を、３０分終点で測定し、異常値は取り除いた。
0006379113.tif 000026
0006379113.tif 000027
Ｘ＝分析から取り除いた異常値
【０３９６】
３０分終点でのＩｇＧ血液濃度は、１，３６１ｎＭであった。呼吸上皮及び嗅覚上皮におけるＩｇＧ濃度は、予想通り低かった（各々、４３ｎＭ及び４１ｎＭ）。三叉神経内には、１０．５ｎＭから６．３ｎＭの、ＩｇＧの吻側から尾側への勾配が観察された。ＩｇＧの３．４ｎＭから１．９ｎＭの、嗅球から前嗅核への同程度の勾配も観察された。ＩＶ投与後の平均皮質ＩｇＧ濃度は、２．６ｎＭであった。他の脳領域におけるＩｇＧ濃度は、海馬の最低１．１ｎＭから視床下部の最高２．０ｎＭまでの変動があった。試料とした追加の脳物質におけるＩｇＧ平均濃度は、平均皮質濃度に類似した２．３ｎＭであって、濃度勾配は観察されなかった。同様に、脊髄でも濃度勾配は観察されなかった。平均ＩｇＧ濃度は２．１ｎＭであった。脳の硬膜中のＩｇＧ平均濃度は、脊髄硬膜濃度の４７．２ｎＭに比べ、２５．６ｎＭであった。腹側の頭蓋から試料として得た他の組織、下垂体及び視神経交叉は、各々、１０．１ｎＭ及び５．１ｎＭのＩｇＧを含んでいた。
【０３９７】
末梢器官におけるＩｇＧ濃度は、筋肉の最低１９．１ｎＭから腎臓の最高３５５．１ｎＭまで変動し、尿が９２．６ｎＭ含んでいた。脳底動脈及び頸動脈のＩｇＧ濃度は、腎動脈よりもかなり低かった（１８．１及び３３．２ｎＭ対１１１．２ｎＭ）。試料としたリンパ節のＩｇＧ平均濃度は、４３．６ｎＭであった。
【０３９８】
実施例３−ＩｇＧの無傷性に対するＩＮ及びＩＶ送達の影響
ＩＮ及びＩＶ投与後のＩｇＧが無傷のままかどうかを調べるために、試験を実施した。具体的には、ラットに、１２５Ｉ放射性標識ＩｇＧを鼻腔内または静脈内投与し、投与３０分後に、全無傷及び分解ＩｇＧを測定した。
【０３９９】
実験計画：ラットを麻酔し、実施例２で先に述べたようにＩｇＧを投与した。血液及び脳が採取され、無傷ＩｇＧを検出した。
【０４００】
血液は、鼻腔内投与の約３０分後、プロテアーゼ阻害剤を含む少なくとも１００ｍｌの生理食塩水を灌流する前に採取し、血清を処理した。
【０４０１】
各血液試料（１．０ｍｌ）を、２．０ｍｌの均質化緩衝剤（Ｈ．Ｂ．、１０ｍＭトリス緩衝剤、ｐＨ８．０、プロテアーゼ阻害剤を含む）及びアプロチニン（単位ｍｌの血液に１００μｌ）を含むガラス／組織ホモジェナイザーへ加えた。試料は、手動で均質化させ（３０パス）、それから、予め計量した円錐チューブ（１５ｍｌ）内へ移し、氷上に保管した。ガンマ計数のために、３個ずつ２５μｌの試料を取り出した。
【０４０２】
試料は、１，０００×ｇ（３，１６０ｒｐｍ）、１０分間、４℃で遠心分離した。血液上澄みを、予め計量した超遠心器チューブへ入れ、氷上に保管した。２回目として、この抽出手順を血液ペレットに対して繰り返した（すなわち、ペレットを含む円錐テストチューブへ同量の均質化緩衝剤を加え、ペレットを外すために数度反転させ、ガラスホモジェナイザー内へ移し、１５パスで均質化し、同じ予め計量した円錐テストチューブへ移し、遠心分離し、そして血液上澄みを除いた）。すべての血液上澄みをプールし、同じ予め計量した円錐チューブ内で保管した。抽出手順を、血液ペレットに対して３回目として繰り返した。ガンマ計数のために、プール血液上澄みから３個ずつ２５μｌの試料を取り出した。
【０４０３】
プール血液上澄みの２ｍｌを、５，０００×ｇ（７，０７１ｒｐｍ）、９０分間、４℃で、１００ｋＤａ濾過管内にて超遠心分離機にかけた。最初の２匹のラットの後、２ｍｌを濾過するには多くの時間がかかることが分かったため、その後の動物に対しては、１ｍｌのみのプール血液上澄みを遠心分離した。同時に、プール血液上澄みの２ｍｌを、３０ｋＤａ濾過管内にて、５，０００×ｇ（７，０７１ｒｐｍ）９０分間、４℃で超遠心分離機にかけた。最初の２匹のラットの後、２ｍｌを濾過するには多くの時間がかかることが判明したので、その後の動物に対しては、１ｍｌのみのプール血液上澄みを遠心分離した。
【０４０４】
そして、プール血液上澄みの２ｍｌを、５，０００×ｇ（７，０７１ｒｐｍ）、９０分間、４℃で、１０ｋＤａ濾過管内にて超遠心分離機にかけた。最初の２匹のラットの後、２ｍｌを濾過するには多くの時間がかかることが判明したため、以降の動物に対しては、１ｍｌのみのプール血液上澄みを遠心分離した。ガンマ計数のために、濾過液（１００ｋＤａ濾過管）、保留物（１００ｋＤａ濾過管）、濾過液（３０ｋＤａ濾過管）、保留物（３０ｋＤａ濾過管）、ガンマ計数のための濾過液（１０ｋＤａ濾過管）、ガンマ計数のための保留物（１０ｋＤａ濾過管）から、３個ずつの２５μｌ試料を取り出した。
【０４０５】
各々の脳を（氷上で）摘出し、計量し、そしてガラス組織ホモジェナイザーへ入れた。脳を、１：３の希釈（すなわち、湿った脳１ｇあたり２ｍｌの緩衝剤）で、均質化緩衝剤と共に手動で均質化した（４０〜５０パス）。そして、ホモジェネートを、予め計量した円錐チューブ（１５ｍｌ）内へ移し、氷上に保管した。ガンマ計数のために、脳ホモジェネートから３個ずつの２５μｌ試料を取り出した。試料は、１，０００×ｇ（３，１６０ｒｐｍ）、１０分間、４℃で遠心分離した。脳上澄みを、予め計量した超遠心器チューブへ移し、氷上に保管した。
【０４０６】
２回目として、ペレットに対して抽出手順を繰り返した（すなわち、ペレットを含む円錐テストチューブへ同量の均質化緩衝剤を加え、ペレットを外すために数度反転させ、ガラスホモジェナイザーへ移し、２０〜３０パスで均質化し、同じ予め計量した円錐テストチューブへ移し、遠心分離し、そして上澄みを除いた）。すべての脳上澄みは、同じ予め計量した円錐チューブ内にプールして保管した。３回目として、ペレットに対して抽出手順を繰り返した。ガンマ計数のために、プール脳上澄みから３個ずつの２５μｌ試料を取り出した。
【０４０７】
プール脳上澄みの２ｍｌを、５，０００×ｇ（７，０７１ｒｐｍ）、９０分間、４℃で、１００ｋＤａ濾過管内にて超遠心分離機にかけた。最初の２匹のラットの後、２ｍｌを濾過するには多くの時間がかかることが判明したため、以降の動物に対しては、１ｍｌのみのプール血液上澄みを遠心分離した。同時に、プール脳上澄みの２ｍｌを、３０ｋＤａ濾過管内にて、５，０００×ｇ（７，０７１ｒｐｍ）９０分間、４℃で超遠心分離機にかけた。最初の２匹のラットの後、２ｍｌを濾過するには多くの時間がかかることが判明したため、以降の動物に対しては、１ｍｌのみのプール血液上澄みを遠心分離した。そして、プール脳上澄みの２ｍｌを、５，０００×ｇ（７，０７１ｒｐｍ）、９０分間、４℃で、１０ｋＤａ濾過管内にて超遠心分離機にかけた。最初の２匹のラットの後、２ｍｌを濾過するには多くの時間がかかることが判明したため、以降の動物に対しては、１ｍｌのみのプール血液上澄みを遠心分離した。
【０４０８】
ガンマ計数のために、濾過液（１００ｋＤａ濾過管）、保留物（１００ｋＤａ濾過管）、濾過液（３０ｋＤａ濾過管）、保留物（３０ｋＤａ濾過管）、ガンマ計数のための濾過液（１０ｋＤａ濾過管）、ガンマ計数のための保留物（１０ｋＤａ濾過管）から、３個ずつの２５μｌ試料を取り出した。
【０４０９】
結果：３０分終点で、５６μＣｉを含む５２μｌの平均用量で、２匹のラットがＩＶ  ＩｇＧ液体製剤を受け、また、２匹のラットがＩＮ  ＩｇＧ液体製剤を受けた（ＩＶ注射のために、生理食塩水で５００μｌの総体積へ希釈した）。動物は投与を良く許容し、すべてが、３０分の所望終点まで生存した。
【０４１０】
脳内では、両ＩＮ及びＩＶ送達後の１２５Ｉ標識ＩｇＧからのガンマ数の約８０％が、１００ｋＤより大きかった。このことは、無傷のタンパク質を示唆する。血液中では、ＩＶ送達後の１２５Ｉ標識ＩｇＧからのガンマ数の１００％が、１００ｋＤより大きかった。このことは、すべてが無傷であったことを示唆する。ＩＮ送達では、血液中に発見される１２５Ｉ標識ＩｇＧからのガンマ数の３３％のみが、１００ｋＤより大きかった。このことは、１２５Ｉ標識ＩｇＧが分解されて、除去プロセスの一部として、鼻腔、脳または両方から血液へ入る可能性があることを示唆する。これは、また、ＩＮ投与後にＣＮＳへ入るＩｇＧが、鼻腔から血液へ、そして脳へ移動せず、しかし、むしろ嗅覚神経及び三叉神経に関わる直接的な経路に沿って移動するという付加的証拠をも提供する。表１４に、鼻腔内または静脈内投与後の、脳及び血液内ＩｇＧの無傷性について要約する。
【０４１１】
（表１４）脳及び血液内ＩｇＧの無傷性についての要約
0006379113.tif 000028
【０４１２】
実施例４−アミロイドプラーク量に対するＩｇＧ鼻腔内投与の影響
ＩｇＧ鼻腔内投与がインビボで脳内のアミロイドプラーク量を減少させるかどうかを調べるために、試験を実施した。試験の目的は、二つの用量（０．４ｇ／ｋｇ／２週と０．８ｇ／ｋｇ／２週）の鼻腔内送達ＩｇＧによる常習的処置が、アルツハイマー病のトランスジェニックアミロイドマウスモデルのアミロイドプラーク量に影響を及ぼすかどうかを判定することであった。
【０４１３】
実験計画：この試験では、アルツハイマー病のマウスモデルとして、ＴＧ２５７６（「ＴＧ」）アミロイドマウスモデルを使用した。Ｃ５７マウスは対照として使用した。ＴＧ２５７６マウス（カタログ番号１３４９−ＲＤ１−Ｍ）は、Ｔａｃｏｎｉｃ，Ｉｎｃ．から、１ヵ月間隔で５０匹ずつの２バッチ（バッチ１及びバッチ２）で取得した。動物は個々に収容し、食物及び水へ自由にアクセス可能に、１２時間の光サイクルで飼った。ｍｇ／ｋｇ投与スキームでの薬剤投与のために、マウスを、各治療群内で、小、中、大の三つのサイズクラスに分けた。サイズ群は、マウスの１／３を各サイズ群に含ませるようにした。マウスは、２週毎に新しいサイズ群を編成するよう再評価した。マウスは、表１５に説明するように、２０匹のマウスから成る５つの治療群に分けた。
【０４１４】
（表１５）ＩｇＧ鼻腔内投与に割り当てた治療群
0006379113.tif 000029
【０４１５】
マウスは、注文後、生後２ヵ月で動物施設内へ収容され、６ヵ月間、個々に飼育された。生後８ヵ月のマウスを、１ヵ月に渡り、覚醒時鼻腔内送達を許容するように慣らした。それから、７ヵ月間、週に３回、マウスをＩｇＧまたは生理食塩水で鼻腔内処置した。生後１６ヵ月のとき、鼻腔内治療を続けながら、行動テストを５週間行った。生後約１７ヵ月で、群毎に１２匹のマウスを安楽死させ、分析のために脳組織を収集した。
【０４１６】
Ｂａｘｔｅｒより送られてきたストックから、金曜午後に、ＩＮ送達のためのＩｇＧ及び生理食塩水を調製し、次週の使用のために約４℃で保管した。溶液は、０．４ｍｇ／ｋｇ／２週ＩｇＧあるいは０．８ｍｇ／ｋｇ／２週ＩｇＧのいずれかの用量を送達するよう、また、合計２４μｌを送達するよう調製した。薬剤は、また、治療群内の三つのサイズクラスの各々の必要を満たすように調製した。
【０４１７】
鼻腔内投与を開始する前に、２〜４週間、マウスを慣らした。処置への順応は、覚醒時鼻腔内薬剤送達の最大効果のための正しい体位置を確実にする上で重要だった。加えて、このプロセスへ適切に順応されていないマウスは、投与後、重度の不安反応を生じることがある。マウスは、９つのステップのうちの各ステップで、処置に対する安心感によって、約１〜３日を過ごした後、次のステップへ進行した。マウスのストレスレベルを、進歩の目安として使用した。このことは、マウスの動作、放尿、排便、振戦及び噛み付きの量や頻度を監視することを意味する。マウスが高ストレス応答を示す場合、その反応が減少するまでそのステップに留まった後、次に進んだ。表１６に、順応スケジュール例を示す。マウスの順応は、以下の１日に１回のステップを通して進行した。ステップは、マウスの不安を最小にするために、１日につき１回を超えて実行することはなかった。
【０４１８】
第一に、この入門ステップ中は、頻繁に跳ねるので、ケージトップの上方１フィートを超えない範囲で、２から３分間マウスを掌に載せた。マウスが手から這い出て腕に登ろうとした場合、マウスを尾の根元で持ち上げ、もう１度手に戻した。第二に、マウスを３分間掌の中で優しく撫でた。マウスを自由に動き回らせながら、頭から尾の方向へ撫でた。第三に、マウスを３分間掌に載せ、耳の後をマッサージした（親指と人差し指で頸の後ろの皮膚を軽く抓った）。第四に、マウスをホールドし、首筋で３０秒間持ち上げ、マウスを３０秒間ケージトップで休ませてから、再びホールドを繰り返した。第五に、マウスを、反転させることなく３０秒間、鼻腔内グリップを使用してホールドしてから、元のケージトップへ解放した。これは、１分間の休息後、２度目を繰り返した。第六に、マウスを、頸が床に平行で腹側が天井を向くように反転させながら、鼻腔内グリップでホールドした。この位置に３０秒間ホールドしてから、１分間の休息後、２度目を繰り返した。マウス自身がグリップから逃げた場合、マウスをケージトップ上に戻してから、もう１度グリップした。マウスのストレスレベルが増加し過ぎた場合、マウスはケージへ戻した。第七に、マウスを、鼻腔内グリップでホールドし、反転させて、３０秒間、空の先端を付けたピペッターで、各々の鼻孔をしばらく覆った。１分間の休息後、このステップを繰り返した。第八に、マウスを、鼻腔内グリップでホールドし、反転させて、左右の鼻孔へ、６μｌの生理食塩水を鼻腔内投与した。第九に、マウスを、鼻腔内グリップでホールドし、反転させて、左右の鼻孔へ６μｌの生理食塩水を２回、鼻腔内投与した。投与の合間には、マウスをケージトップに戻した。
【０４１９】
（表１６）覚醒時ＩＮ薬剤送達への順応のためのスケジュール例
0006379113.tif 000030
【０４２０】
薬剤の覚醒時鼻腔内送達のために、鼻腔内グリップで、２４μｌの液体を投与するため、各マウスを２回拘束して、頸を床に平行にホールドした。具体的には、無麻酔マウスの首筋を掴み、穏やかにではあるが、しっかりと、マウスが動き回らないよう反転姿勢にホールドした。２０μｌピペッターを使用して、各マウスに６μｌの４滴を（交互の鼻孔に）点鼻した。マウスが生後９ヵ月になったとき、鼻腔内薬剤送達を開始した。
【０４２１】
生後１６ヵ月のマウスに対して、記憶、感覚運動及び不安緩解の変化に関して査定するための５週間に渡る行動試験を実施した。これらは、モーリス水迷路隠蔽及び可視プラットフォームテスト（参照記憶、視認能力）、ラジアルアーム水迷路（作業記憶）、受動回避課題（記憶）、バーンズ迷路（記憶）、オープンフィールド試験（探査行動）、高架十字迷路（不安）及びロータロッド（運動技能）を含んだ。
【０４２２】
行動試験後、各治療群からの１２匹のマウスを安楽死させ、生化学的分析のために、それらの脳を収集した。これらの分析は、アミロイドプラーク、炎症マーカー及び可溶性及び不溶性アミロイドに対する免疫組織化学（ＩＨＣ）を含む。
【０４２３】
経心腔的灌流を介しての安楽死の前に、（１：４に無菌生理食塩水で希釈された６０ｍｇ／ｋｇの）ペントバルビタールナトリウムで、マウスを麻酔した。全用量の半分の第一のブースターを与えた後、必要に応じて、追加で４分の１用量ブースターを複数回与えた。手順中、後足と尾を抓ることを含む反射運動をテストすることによって、麻酔レベルと痛みへの感度を５分毎に監視した。それから、１５ｍｌの（プロテアーゼ阻害剤を全く必要としない）氷冷生理食塩水での経心腔的灌流により、マウスを安楽死させて、心臓から血液を採集した。手短に、マウスの腕をテープで押さえた。胸骨を露出させるために、皮膚を切り裂いた。胸骨を保持するために止血鉗子を使用した。胸骨の両側を縦に切るために、切れの良くない解剖ハサミを使用し、心臓を曝すためにＶ字形に切開した。灌流の前に心臓から血液を採集し、血清へ処理した。２４ゲージカニューレを使用して、左心室に小さな孔を開けた。そのカニューレを大動脈内へ挿入し、適所に保持した。カニューレに（５ｍｌの０．９％ＮａＣｌで満たされた）延長チュービングを繋ぎ、そのマウスに１５ｍｌの生理食塩水を手動で灌流した。
【０４２４】
血液の回転を下げて、血清を二つのアリコートに分けた。一つのアリコートは５０μｌであった。これは、最終的にプールされ、治療群の全体的な健全性を分析するために送られるものである。残りの血清は、専用チューブへ入れ、他の分析のために瞬間凍結させた。
【０４２５】
脳を採集し、マウス脳マトリックス内で矢状方向に半分割した。脳の左半分は、嗅球、皮質／海馬混合物、中隔、中脳／間脳、脳幹（上頸部脊髄のＶまで）及び小脳に切り分けた。これらの組織をマイクロ遠心機チューブへ入れ、液体窒素で瞬間凍結させた。右半分は、マトリックス内に残し、センターラインから３ｍｍでスライスした。脳の中心側の内側部分は、（１０ｍｌのホルマリンで満たした１５ｍｌの円錐チューブ内の）ホルマリン中でポストフィックスさせて、ＩＨＣ分析のためにスライスした。外側部分は、最終的な炎症分析のために、液体窒素中で瞬間凍結させた。
【０４２６】
マウス脳の右半分の中央３ｍｍ矢状切片は、各々を２０ｍｌの１０％ホルマリンへ入れることによって定着させた。これらの試料は、室温で数時間定着させてから、一晩中、ゆっくりと動くロッカー上で、４℃で定着させた。定着後の矢状方向脳切片は、中央側を下にして、標識病理学カセットへ入れた。Ｒｅｇｉｏｎ'ｓＨｏｓｐｉｔａｌの病理学部門が、パラフィン処理及び包埋（脱水、パラフィン浸潤、パラフィンブロック化）を実施した。パラフィンブロックには、コーディングあるいは再標識して盲検化した。
【０４２７】
パラフィンブロックは、ライカＲＭ２２３５ミクロトームを使用して、５μｍの厚さで切断し、Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ  Ｐｌｕｓ顕微鏡スライド（Ｃａｒｄｉｎａｌ  Ｈｅａｌｔｈ，カタログ番号Ｍ６１４６−ＰＬＵＳ）上に採集した。マウス毎に、７つの切片を採集した。少なくとも、あるいは約１００μｍの組織が、（中央から側方へ１〜６と標識した）組織切片採取物間で除かれた。染色すべき切片の品質を向上させるために、７つの切片のうちの一つを特定して取り出すのに解剖顕微鏡を使用した。
【０４２８】
スライドを脱パラフィンして水和した。具体的には、染色皿間での容易な移動のために、スライドをガラス染色ジャーラック内に置いた。固形パラフィンをキシレン洗浄（除去）で除いてから、エタノールあるいは水で水和した。具体的には、スライドを、５分間隔で３回キシレンで洗浄し、５分間隔で２回、１００％エタノールで洗浄し、１回、９５％エタノールで５分間洗浄し、５分間流水でリンスし、そして５分間ＰＢＳでリンスした。
【０４２９】
抗体染色の前に、スライドを前処理するために、熱誘導性エピトープ賦活（ＨＩＥＲ）を用いた。Ｔｒｉｓ・ＥＤＴＡ緩衝液（ｐＨ９）を使用した。スライドを、７０℃へ予熱した標的賦活溶液（Ｔｒｉｓ・ＥＤＴＡ  ｐＨ９）を含むスチーマー耐性皿に浸した。それから、スライドを入れた皿をスチーマー内へ置き、３０分間９７℃に温置した。スチーマーをオフにして、少なくとも６５℃まで冷えるのを待った。スライドの容器をスチーマーから取り出し、もう１０〜１５分間、冷えるのを待った。それから、スライドを容器から取り出し、コプランジャー内で１０分間、ＰＢＳでリンスした。
【０４３０】
それから、湿度室内で１時間、非特異的結合部位を正常血清ブロッキング溶液（３００μｌ／スライド）でブロックした。アミロイドに対する一次抗体（Ｃｏｖａｎｃｅからの精製抗βアミロイド、１７−２４（４Ｇ８）単クローン抗体（ＳＩＧ−３９２２０））を、一次抗体希釈緩衝液（０．０１ＭのＰＢＳ、ｐＨ７．２）中に１：２００の希釈で含む湿気箱内に、切片を、室温で１時間、温置した。切片を、二次抗体（ヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ａ２１２３５）からのアレクサフルオロ６４７（２ｍｇ／ｍｌ））希釈緩衝液（０．０１ＭのＰＢＳ、ｐＨ７．２）内に、１：２００の二次濃度で、室温で１時間温置した。
【０４３１】
それから、スライドをＤＡＰＩで対比染色した。ＰＢＳ中に希釈した３００ｎＭのＤＡＰＩを使用した。１μｌの１４．３ｍＭ  ＤＡＰＩストックを、４８ｍｌのＰＢＳ中で希釈し、撹拌し、完全に混合させた。ＤＡＰＩ溶液を、スライドを含むコプランジャーへ注いだ。スライドを室温で２０分間温置した。スライドを、すばやくＰＢＳ内でリンスしてから、２×１０分、洗浄緩衝液内でリンスし、その後、ＰＢＳ内で１０分間温置した。
【０４３２】
染色後すぐに、スライドを脱水し、クリアにして取り付けた。具体的には、スライドを、９５％のエタノール内に５分間、１００％のエタノール内に５分刻みで２回、キシレン内に５分刻みで３回温置し、そして試料を乾燥させずに、カバーグラスを付けてＤＰＸ内に取り付けた。取り付けたスライドは、室温で保管した。
【０４３３】
蛍光染色されたプラークの画像は、Ｃ１ｓｉスペクトルコンフォーカルアタッチメント及びＡＺプランアポ４×対物レンズが付いたＡＺ１００マルチズームマクロスコープで捕えた。ＤＡＰＩ染色に対するフィルタを使用する落射蛍光イメージングにより、海馬及び皮質に関する最初の位置決め及び焦点合わせを行った。それから、ＩＨＦ標識アミロイドを捉えるために、スコープを、６３７ｎｍレーザーを使用する共焦点イメージングへ切り替えた。最適な信号検出のためのｚ軸の微細チューニングを、５１２×５１２ピクセルの解像度で確認した。それから、ニコンＥＺーＣ１ソフトウェアを用いて、画像を１０２４×１０２４でキャプチャし、生画像ファイルをニコンの「．ｉｄｓ」ファイル形式で保存した。Ｆｉｊｉ（ＩｍａｇｅＪ）を使用して、６３７ｎｍチャネルの対応ｔｉｆｆファイルを生成した。それから、ｔｉｆｆファイルを、（１６ビットから）８ビット画像へ変換し、そしてコントラストを、Ｆｉｊｉ（ＩｍａｇｅＪ）におけるバッチ処理（マクロプログラミング）によって０．５％向上させた。
【０４３４】
海馬及び皮質内の選択関心領域におけるプラークを、各領域で検出されるプラークの平均数を判定することによって、また、各領域内のプラーク被覆パーセント面積を決定することによって数量化した。画像処理及び分析をＦｉｊｉで実行した。プラークは、Ｆｉｊｉ内で、粒子分析と、各確認粒子をプラークとして認める最小ピクセル値を選択する閾値関数とを用いて区分した。これらの値は、多数の正及び負の対照を分析し、対照スライド内のプラークを、どの値が正確に識別するのかを検証することによって判定した。各画像内の関心領域は、プラークの包含を最大にする位置へ関心領域を配置するよう指示された盲検研究者が選択した。識別されたプラークのサイズ（ピクセル）及び数を、データ分析のためにエクセルへコピーした。それから、プラークを、それらの相対サイズによって特徴づけた。この試験で報告するプラークサイズは、粒子が完全な円に適合すると仮定した計算プラーク半径である。プラーク数と、各関心領域から計算されたプラーク被覆パーセント面積は、治療群を比較する上での単一データポイントとして用いた。群間の有意性を査定するために、両側ｔ検定を用いた。
【０４３５】
採集組織切片の完全なセットを染色する前に、関連染色対照で、染色及び顕微鏡分析の最初の検証を実施した。これらの対照は、生理食塩水を受けたトランスジェニックマウスの１匹からの切片を使用した正の対照、染色手順から一次あるいは二次抗体のいずれかの温置を省いた負の対照、及び、生理食塩水を受けた野生型マウスの１匹からの切片を使用した負の対照を含んだ。一次及び二次抗体の滴定を含む追加の対照、及び、異なるエピトープ賦活方法の比較を、これらの抗体と同じ実験手順を使用して、予め我々の研究室で実施した。
【０４３６】
組織上澄みを、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（以前はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）からのキット（パーツ番号：ＫＨＢ３４８２（Ａβ４０）及びＫＨＢ３４４２（Ａβ４２））を使用して分析した。概して最初に、正しい希釈を、ＴＧまたはＷＴマウスからの三つの試料で判定してから、すべての試料をその希釈にした。試料は、標準曲線に当てはめられる多項方程式を使用して定量化した。それから、ウェル内で測定したＡＢ量は、希釈及び総タンパク質（ＢＣＡアッセイによる判定）に対して補正した。
【０４３７】
結果：脳組織片におけるアミロイドプラーク免疫組織化学的測定は、有意な薬効があることを実証した。ＩｇＧを鼻腔内投与したＴＧマウスの両群は、皮質内のプラーク量に有意な減少があった（図３Ａ、３Ｂ及び３Ｅ）。
【０４３８】
ＩｇＧの低用量及び高用量の鼻投与は、ＴＧ２５７６マウスの皮質内の総プラーク被覆パーセント面積を有意に減少させた（図３Ａ）。プラーク被覆パーセント面積は、各々、２５．７％（低用量、ｐ＝０．０１４）及び２４．３％（高用量、ｐ＝０．０３７）減少した。プラークを定義する最小閾値を、半径２５μｍから５０μｍへ増加させたとき、プラーク被覆パーセント面積の変化は、低用量に対して２７．１％、また、高用量に対して２６．０％と、僅かにより強調された（各々、０．０１及び０．０２６のｐ値）。最小閾値を１００μｍに設定したときのプラーク量の減少も有意であると分かった（各々、０．０３５及び０．０２１のｐ値）。排他的により小さなプラーク（半径５０μｍ未満）を分析に使用した際は、プラーク被覆パーセント面積の変化は明らかでなかった。したがって、皮質内のプラーク減少は、５０μｍよりも大きな、より明瞭なプラークであるようである。
【０４３９】
低用量及び高用量ＩｇＧ治療群の両方の皮質内プラーク数は、検出プラーク数の減少への傾向を示した（図３Ｂ）。この減少は、分析に小プラーク（半径５０μｍ未満）を含まなかった場合の低用量ＩｇＧ治療群において有意なものになった。具体的には、鼻腔内投与ＩｇＧによる治療は、５０μｍから１００μｍまでの半径を持つプラーク、１００μｍを超える半径を持つプラーク、及び５０μｍを超える半径を持つプラークを含んでデータ分析した場合、プラーク量に有意な減少を示した。高用量ＩｇＧ治療群に対するプラーク量の減少は、分析プラークの半径を、１００μｍを超える設定にした場合に有意なものになった。
【０４４０】
大脳皮質内に見られる結果とは対照的に、ＩｇＧ治療は、海馬内で検出されるプラーク被覆パーセント面積またはプラーク数に有意な変化をもたらすことはなかった（図３Ｃ及び３Ｄ）。低用量及び高用量ＩｇＧの両方の鼻腔内投与は、海馬内のプラーク量を僅かに減少させるように見えたが、その減少はわずかで、脳のこの領域に対しては有意なものではなかった。
【０４４１】
図３Ｅに、老化ＴＧマウスの海馬及び皮質内アミロイドプラークの免疫蛍光染色を示す。図示のように、低及び高ＩｇＧ用量で治療したマウスの海馬及び皮質内アミロイドプラークに対しては、生理食塩水で処置したＴＧマウスに比べ、染色減少が見られる。
【０４４２】
実施例５−可溶性及び不溶性ＡＢ４０及びＡＢ４２に対する鼻腔内投与ＩｇＧの影響
トランスジェニックアミロイドマウスモデルにおける、二つの用量での常習的鼻腔内（ＩＮ）ＩｇＧ投与の有効性を査定する試験を実施した。具体的には、野生型及びＴｇ２５７６（アミロイドマウスモデル）において、鼻腔内ＩｇＧ投与の前後に、可溶性及び不溶性アミロイドβペプチドＡβ４０及びＡβ４２値を測定した。試験の目的は、アルツハイマー病のトランスジェニックアミロイドマウスモデルにおいて、二つの用量（０．４ｇ／ｋｇ／２週及び０．８ｇ／ｋｇ／２週）での鼻腔内送達ＩｇＧによる常習的治療が、アミロイドプラーク量に影響を及ぼすかどうかを判定することであった。
【０４４３】
実験計画：実施例４に説明したように、この試験では、アルツハイマー病のマウスモデルとして、ＴＧ２５７６（「ＴＧ」）アミロイドマウスモデルを使用し、対照としてＣ５７マウスを使用した。マウスの処理、薬剤の製剤及び薬剤の投与は、実施例４で説明したように実施した。
【０４４４】
マウスは、表１５に説明するように、各々が２０匹のマウスから成る５つの治療群に分けた。生後約１７ヵ月で１２ヵ月間の治療歴のある、各々の治療群からの１２匹のマウスを安楽死させ、アミロイドプラーク濃度変化が検出できるかどうかを判定するために、ＴＧ及び対照マウスの脳内Ａβ４０及びＡβ４２アミロイドペプチドの濃度をＥＬＩＳＡで測定した。
【０４４５】
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＥＬＩＳＡキットを使用して、ＥＬＩＳＡで、Ａβ４０及びＡβ４２を測定した。ＥＬＩＳＡキットは、使用の準備ができるまで、冷蔵庫内に保管した。キットを冷蔵庫から取り出し、使用前に室温へ戻した。
【０４４６】
標準と試料は、重複させて処置した。試料と標準を、１ｍＭのＡＥＢＳＦ（セリンプロテアーゼ阻害剤）とのプロテアーゼ阻害剤カクテル内で処置した。セリンプロテアーゼはＡβペプチドを急速に分解させる可能性があるので、ＡＥＢＳＦは重要であった。試料は、ＥＬＩＳＡプレートへの適用準備ができるまで、氷上に保持した。
【０４４７】
試料マトリックスは、Ａβ回収に劇的な影響を及ぼす。正確な定量化を確実にするために、複数の標準曲線を、試料と同じ希釈液で生成した。５００ｍｌの脱イオン水中に２．３１グラムの重炭酸ナトリウムを溶解させることによって標準再構成緩衝液を調製し、２Ｎの水酸化ナトリウムを使用して、ｐＨが９．０になるまでｐＨを調節した。
【０４４８】
定量標準曲線のための複数の標準液を調製した。Ｈｕ  Ａβ４２スタンダードを使用した。Ｈｕ  Ａβ４２スタンダードは、室温（ＲＴ）へ平衡化させてから、標準再構成緩衝液（５５ｍＭの重炭酸ナトリウム、ｐＨ９．０）で１００ｎｇ／ｍｌへ再構成させた。標準混合物を撹拌し、優しく混ぜてから、完全な再構成を確実にするために１０分間放置した。それから、標準曲線を生成する前に、標準を短時間撹拌した。Ａβペプチド標準を使用しての標準曲線の生成は、希釈実験試料に使用する緩衝液と同じ組成を用いて実行した。０．１ｍｌの再構成標準を、０．９ｍｌの標準希釈液緩衝液を含むチューブへ加え、１０，０００ｐｇ／ｍｌのＨｕ  Ａβ４０とラベルを付けた。標準を混合してから、その１０，０００ｐｇ／ｍｌ標準の０．１ｍｌを、１．９ｍｌの標準希釈液緩衝液を含むチューブへ加え、５００ｐｇ／ｍｌのＨｕ  Ａβ４０混合物とラベルを付けた。標準を混合してから、標準の段階希釈液を作るために、０．１５ｍｌの標準希釈液緩衝液を２５０、１２５、６２．５、３１．２５、１５．６３、７．８１及び０ｐｇ／ｍｌのＨｕ  Ａβ４０とラベルを付けた６本のチューブの各々に加えた。
【０４４９】
それから、試料をプレートに対して準備した。具体的には、試料をフリーザーから取り出し、溶けるのを待ち、プロテアーゼ阻害剤錠剤と混合されたキットに備えられた希釈緩衝液を使用して、所望の希釈へと希釈した。試料は、プレート上のウェル内への装填のときまで、氷上に保持した。
【０４５０】
プレートは、シャーピーで、ＡＢ４０またはＡＢ４２のいずれかであると表示を付けた。５０ｕｌの標準と試料を、予め表示を付けたウェルへ加えた。キットに備えられたＨｕ  Ａβ４０またはＡβ４２検出抗体溶液の５０μｌを、各ウェルへ加えた。プレートは、カバーをして、３時間室温で揺らしながら温置した。３時間の期限切れの直前に、抗ウサギＩｇＧ  ＨＲＰ使用液を調製した。これを作るのに、アッセイに使用する８個のウェルストリップの各々に対して、１０μｌの抗ウサギＩｇＧ  ＨＲＰ（１００×）濃縮溶液を、１ｍｌのＨＲＰ希釈液で希釈し、抗ウサギＩｇＧ  ＨＲＰ使用液と表示を付けた。
【０４５１】
溶液は、静かにウェルから完全に注ぎ出し、ウェルを５回、３００μｌの洗浄液で洗浄した。プレートは、乾いていることを確認するため、研究室の仕事台に激しく打ちつけた。抗ウサギＩｇＧ  ＨＲＰ使用液の１００μｌを各ウェルへ加えた。プレートは、カバーをして、室温で３０分間そのままにした。溶液は、静かにウェルから完全に注ぎ出し、ウェルを、３００μｌの洗浄液で５回洗浄した。プレートは、乾いていることを確認するため、研究室の仕事台に激しく打ちつけた。１００μｌの安定化クロモゲンを各ウェルへ加え、すぐにプレートを暗所に置き、２０分間そのままにした。１００μｌの停止液を各ウェルへ加え、混合するために、プレートの側面を優しくたたいた。
【０４５２】
停止液を加えた後の３０分以内にプレートリーダーを空白にして、４５０ｎｍで各ウェルの吸光度を読み取った。標準曲線を用いて、濃度を判定した。
【０４５３】
結果：Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した両Ａβ４０及びＡβ４２に対するＥＬＩＳＡプレートは、一貫した標準曲線を生成した。可溶性Ａβ４０及びＡβ４２と不溶性Ａβ４０及びＡβ４２に対する試料のための脳上澄みの最高の希釈は、各々、１０×、無希釈、１００００×、２５００×であった。最初に、標準曲線に基づきＥＬＩＳＡプレートのウェル内の試料濃度を判定することで、各タンパク質の脳内濃度を分析した。それから、これらの値は、上澄みの希釈、抽出プロセスからの希釈に対して補正し、抽出全タンパク質のＢＣＡ分析からの補正係教で処理した。各タンパク質については、統計異常値である、あるいは標準曲線内に当てはめるにはあまりに高過ぎる、または低過ぎるという理由で、１個から４個の試料を除外した。表１７及び表１８に、可溶性及び不溶性Ａβ４０濃度についての要約を示す。表１９及び表２０に、可溶性及び不溶性Ａβ４２濃度についての要約を示す。表２１に、可溶性Ａβ４０／Ａβ４２の比率を示し、表２２に、不溶性Ａβ４０／Ａβ４２の比率を示す。
【０４５４】
（表１７）脳内で検出された可溶性Ａβ４０
0006379113.tif 000031
【０４５５】
（表１８）脳内で検出された不溶性Ａβ４０
0006379113.tif 000032
0006379113.tif 000033
【０４５６】
（表１９）脳内で検出された可溶性Ａβ４２
0006379113.tif 000034
【０４５７】
（表２０）脳内で検出された不溶性Ａβ４２
0006379113.tif 000035
【０４５８】
（表２１）可溶性Ａβ４０／Ａβ４２の比率
0006379113.tif 000036
【０４５９】
（表２２）不溶性Ａβ４０／Ａβ４２の比率
0006379113.tif 000037
【０４６０】
最も明白で予想できた結果は、可溶性及び不溶性Ａβ４０及びＡβ４２の両方が、すべてのＴＧマウスにおいて、ＷＴマウスよりも大幅に高かったことであった。可溶性Ａβ４０及びＡβ４２は、ＷＴマウスでは検出できなかったが、不溶性Ａβ４０及びＡβ４２は、ＴＧマウスよりも約１０００倍低いけれども存在した。次に最も明白な結果は、すべてのＴＧマウスで、不溶性Ａβ４０及びＡβ４２の濃度が、可溶性Ａβ４０及びＡβ４２よりも、各々、粗く見て約５０００及び７５００倍高と非常に高かったことであった。
【０４６１】
三つのＴＧ群間での群比較に関しては、ＡＮＯＶＡを用いた場合、可溶性あるいは不溶性Ａβ４０またはＡβ４２に対する群のいずれにおいても、有意な差は全くなかった。このことは、薬剤処置と生理食塩水処置のＴＧマウス間には皮質内のプラークに明白な違いがあったので、不溶性アミロイドに対しては多少驚きであった。最も妥当な説明は、ＥＬＩＳＡが、プラークのＩＨＣスライドほど、これらの違いに敏感でなかった、ということである。
【０４６２】
実施例６−体重及び生存に対するＩｇＧ鼻腔内投与の影響
トランスジェニックアミロイドマウスモデルにおいて、二つの用量で、常習的鼻腔内（ＩＮ）ＩｇＧ投与の有効性を査定するために試験を実施した。試験の目的は、二つの用量（０．４ｇ／ｋｇ／２週と０．８ｇ／ｋｇ／２週）の鼻腔内送達ＩｇＧによる常習的処置が、マウスの体重及び生存に影響を及ぼすかどうかを判定することであった。
【０４６３】
実験計画：実施例４に説明したように、この試験では、アルツハイマー病のマウスモデルとして、ＴＧ２５７６（「ＴＧ」）アミロイドマウスモデルを使用した。Ｃ５７マウスは対照として使用した。マウスの処理、薬剤の製剤及び薬剤の投与は、実施例４で説明したように実施した。
【０４６４】
マウスは、表１５に説明するように、各々が２０匹のマウスから成る５つの治療群に分けた。マウスの体重及び生存を１０３週間監視した。各マウスの体重を毎週記録した（データは示さない）。
【０４６５】
結果：これらの実験は、鼻腔内ＩｇＧがＴＧマウスの生存期間を延ばすことを示した。図４Ａに示すように、高（０．８ｇ／ｋｇ／２週）あるいは低（０．４ｇ／ｋｇ／２週）用量のＩｇＧ鼻腔内投与を受けたＴＧマウスは、生理食塩水鼻腔内投与を受けたＴＧマウス（対照）に比べ、生存期間が延びる。図４Ｂに示すように、ＩｇＧ鼻腔内投与を受けたＴＧマウスは、ＷＴマウスよりも、生存期間が長かった。この試験は、各コホートに２０匹のマウスで開始したが、（実施例５に説明するように）アミロイドプラーク含有量を評価するために集団安楽死を実行したので、カプラン・マイヤー生存分析は、安楽死させなかった各コホート８匹のマウスサブグループを使用して実行した。サブグループのマウスへの投与は、先に述べたように、実験全体を通して引き続き行われた。
【０４６６】
実施例７−記憶に対するＩｇＧ鼻腔内投与の影響
ＩｇＧ鼻腔内投与が、インビボで脳内記憶に影響を及ぼすかどうかを調べるために、試験を実施した。この試験の目的は、二つの用量（０．４ｇ／ｋｇ／２週と０．８ｇ／ｋｇ／２週）の鼻腔内送達ＩｇＧによる常習的処置が、アルツハイマー病のトランスジェニックアミロイドマウスモデルにおける記憶に影響を及ぼすかどうかを調べることであった。
【０４６７】
実験計画：実施例４で説明した、生後１５ヵ月のマウスに対して、記憶、感覚運動及び不安緩解の変化に関して査定するための６週間に渡る行動試験を実施した。これらは、モーリス水迷路隠蔽及び可視プラットフォームテスト（参照記憶、視認能力）、ラジアルアーム水迷路（作業記憶）、受動回避課題（記憶）、バーンズ迷路（記憶）、オープンフィールド試験（探査行動）、高架十字迷路（不安）及びロータロッド（運動技能）を含んだ。
【０４６８】
結果：各行動試験に対しては、表２３に上述したようにｔ検定を使用して、比較データを分析した。統計的異常値と、各行動試験に対して特定した指示に従わないマウスを除去した後、統計的試験をデータに対して実行した。最初に、ＷＴ−生理食塩水（ＷＴ−Ｓａｌ）マウスをＴＧ−生理食塩水（ＴＧ−Ｓａｌ）マウスに比較することによって、そのテストに対するトランスジェニック（モデル）の影響があるのかどうかを判定するために、データを分析した。すべてのＴＧ及びすべてのＷＴマウス間の比較も行った。後者の分析は、薬剤処置によって混乱するが、試料サイズを増大させることによって有用なものとなり、トランスジェニック（モデル）の潜在的な影響の概要を得るのに役立つ。個々の薬剤治療群間での比較を行った。具体的には、薬剤が影響したかどうかを判定するために、薬剤処置ＴＧ群を直接ＴＧ−生理食塩水群と比較した。
【０４６９】
（表２３）鼻腔内にＩｇＧを投与した野生型及びアルツハイマー病マウスモデルにおける行動試験の結果を評価するために使用されたｔ検定
0006379113.tif 000038
【０４７０】
全体として、三つの視覚空間記憶テストでは、マウスは経時的に学んだ。概して、ＴＧマウスに比べ、ＷＴマウスの能力に改善があった。このことは予想通りであった。高架十字迷路においても、ＷＴ及びＴＧマウス間には差があった。ロータロッド及びオープンフィールド試験では、わずかな違いが観察されたが、これらの違いは予期されていなかった。しかし、バーンズ迷路では従順のみが問題であった。指示に従わないマウスを取り除くと、学習傾向は存在し、モデルの影響は、ＭＷＭ及びＲＡＷＭに見られるものを反映した。
【０４７１】
モーリス水迷路（ＭＷＭ）隠れプラットフォーム。ＭＷＭは、空間記憶の標準的なテストである。隠れプラットフォームテスト（４日間、４回のトライアル／日）を用いて、ＭＷＭパフォーマンスを査定した。トライアルを開始する前に、マウスを水泳に慣らした。これらのトライアルブロックの各々に対して、ＭＷＭ（水を入れた丸いタブ）の、四つの四半部内へ、マウスをランダムに落とし、６０秒間泳がせた、あるいはプラットフォームに到達するまで泳がせた。マウスの、プラットフォームに着くための能力は、以前のトライアルからの視覚的手がかりを記憶する能力、及びプラットフォームに対する自身の位置を記憶する能力に依存した。６０秒後に、プラットフォームに着かなかったマウスは、プラットフォームへ載せた。トライアルとトライアルの間の２０秒間、マウスをプラットフォーム上に載せたままに、すなわち、休ませた。逃避潜時を記録するＭｏｕｓｅＡｐｐソフトウェアを使用して、すべてのデータを記録した。
【０４７２】
モーリス水迷路視覚プラットフォームは、視認能力を査定するためにデザインされている。これは、プラットフォームが水面よりも少しだけ上がっている、識別のために旗が立てられている、また、側面に目立つようストライプが施されていることを除き、ＭＷＭ隠れプラットフォームと同じように実施した。１日だけのコースであった。ＭＷＭ隠れプラットフォームテストと同じように分析を行った。
【０４７３】
全体として、モーリス水迷路隠れプラットフォームテストは、その週全体を通して、また、個々の一日一日中に、明確な学習傾向があったことを示した。このことは、テストが記憶を測定するのに有効であったことを実証している。逃避潜時は、三日目及び四日目が最も低かった。また、それらの日の特にトライアル３及び４で最も低かった。
【０４７４】
トランスジェニックモデルの影響の証拠があった。表２５及び表２６は、両ＷＴ群の逃避潜時が、三日目及び四日目に、すべての三つのＴＧ群よりも低かったことを示す。ＷＴ−生理食塩水マウスの逃避潜時は、ＴＧ−生理食塩水マウスよりも低かった（表２４、表２５、表２６、表２７及び表２８）。しかし、ＷＴ及びＴＧ群を一緒にしたとき、Ｂ１−Ｔ２、Ｂ３−Ｔ４、Ｂ４−Ｔ１、Ｂ４−Ｔ３及びＢ４−Ｔ４（ｐ＜０．０５または０．０１、表２４、表２７及び表２８）を含む複数の有意差があった。この差となった原動力の大部分は、このタスクで特に優秀であったＴＧ−高マウスによるものであった。
【０４７５】
（表２４）行動テスト内での具体的な比較のためのｔ検定の要約
検定は両側検定で、対応のない検定である。報告数値は、ｐ値である。灰色セルｐ＜０．０５、四角セルｐ＜０．１。
0006379113.tif 000039
0006379113.tif 000040
0006379113.tif 000041
【０４７６】
（表２５）モーリス水迷路テストからの平均逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000042
【０４７７】
（表２６）不従順を取り除いた、モーリス水迷路テストからの平均逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000043
【０４７８】
（表２７）モーリス水迷路テストからの毎日平均逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000044
【０４７９】
（表２８）不従順を取り除いた、モーリス水迷路テストからの毎日平均逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000045
【０４８０】
ＲＡＷＭでのように、三つのトランスジェニック群は、表２５及び表２６に密接に集められている。ＴＧ−生理食塩水及びＴＧ−低間の唯一の有意差は、Ｂ１−Ｔ１、Ｂ２−Ｔ２及びＢ４−Ｔ１（表２４）に現れた。各ケースで、ＴＧ−生理食塩水マウスは、逃避潜時が、このタスクで特に悪かったＴＧ−低マウスよりも短かった。一つの実施例のみにおいて、ＴＧ−高及びＴＧ−生理食塩水間（Ｂ１−Ｔ１）に統計的有意差があった。そのケースでは、ＴＧ−生理食塩水が非常に良く行動し、ＴＧ−高マウスを上回った。しかしながら、注目すべきは、ＷＴ−高マウスの能力が、そのタスクにおいて、他のすべての群を一貫して上回ったことである。各トライアルで実行したｔ検定は、ＷＴ−高及びＷＴ−生理食塩水間に全く統計的有意差を示さなかったが、ＡＮＯＶＡによる繰り返し測定は、これら二つの群間に違いを実証する可能性はある。
【０４８１】
ＭＷＭ隠れプラットフォームテストに対して、逃避潜時（プラットフォームを発見する時間）を収集した。各トライアルの各日（１〜４）に対して、ｔ検定を実施した。記憶をより正確に表すために、不従順なマウスを取り除いて、データを分析した。不従順なマウスとは、ある程度学んでいて当然と思えるトライアル３及び４に対して、６０秒（全利用時間）の逃避潜時を示したマウス、と定義した。群ごとの不従順なマウスのパーセンテージを記録した。隠れプラットフォームテストに対して、不従順性は、以下の通りであった。ＴＧ−低＝８．３％、ＴＧ−高＝１５．３％、ＴＧ−生理食塩水＝７．８％、ＷＴ−高＝７．８％、及びＷＴ−生理食塩水＝１８．１％。
【０４８２】
ラジアルアーム水迷路（ＲＡＷＭ）。ＲＡＷＭは、短期作業記憶を評価するために用いられる。ＭＷＭ同様、このテストは、水を入れた丸いタブ、部屋中に視覚的な手がかり、及び隠したプラットフォームを用いる。中心から延びる同等サイズの６本の放射状に分散されたアームを設けるために、インサートをタンク内に配置しているという点でユニークである。トライアルを開始する前に、マウスを水泳に慣らした。マウスは、各トライアルに対してランダムに選択した順序で、４本のラジアルアームに落とし、プラットフォームを発見させるための１分を与えた。各トライアル間には、２０秒間の休みを入れた。トライアルは、１２日間、毎日行った。毎日、プラットフォームは新しい位置へ移動させた。テストの半ばで、テストを少し容易にする目的で、追加で迷路内部の視覚的な手がかりをタンクへ加えた。視覚的手がかりは、テープで作った大『Ｘ』で、それを、逃避プラットフォームを持つアームの上方の迷路の内壁に貼り付けた。エラーと逃避潜時の両方を記録した。
【０４８３】
（表２９）ブロック１〜４にグループ分けされたマウスのＲＡＷＭ逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000046
【０４８４】
全体として、ＲＡＷＭは、逃避潜時が約３５秒未満になることはなかったという一般的な傾向により分かるように、ブロック１及び２のマウスには難しすぎた（表３０）。ブロック３及び４において追加で視覚的手がかりを付加した後、トライアル１からトライアル４のすべての治療群に、プラットフォーム発見時間及びエラーの明白な減少傾向が現れた（表３０、表３１及び表３２）。このことは、記憶を測るためにテストが有効であることを実証した。
【０４８５】
（表３０）ブロック１及び２のＲＡＷＭ逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000047
【０４８６】
（表３１）ブロック１及び３のＲＡＷＭ逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000048
【０４８７】
（表３２）ブロック１及び４のＲＡＷＭ逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000049
【０４８８】
ＲＡＷＭには、トランスジェニックモデルの影響の明白な証拠があった（表３３及び表３４）。表３５に、全期間に渡る平均としての、すべての群の概要を示す。すべての四つのトライアルにおいて、両ＷＴ群は、全三つのＴＧ群よりも、プラットフォーム発見時間が短かった。同じことは、トライアル２〜４に対するエラーにも言えた（表３６）。表３３、表３４、表３５及び表３６に、個々のブロック及びトライアルを示す。逃避潜時に関しては、Ｂ１−Ｔ１（バッチ１−トライアル１）、Ｂ１−Ｔ３及びＢ３−Ｔ２において、ＷＴ−生理食塩水マウスが、ＴＧ−生理食塩水マウスに比べ、非常に短い逃避潜時を示した（ｐ＜０．０５または０．１）（表２４）。エラー（表３６）に関しては、Ｂ１−Ｔ３、Ｂ３−Ｔ２及びＢ４−Ｔ２において、ＷＴ−生理食塩水マウスが、ＴＧ−生理食塩水マウスに比べ、非常に少ないエラーを示した（ｐ＜０．０５または０．１）（表２４）。（治療に関係なく）すべてのＷＴマウスを合わせて、すべてのＴＧマウスに比較すると、ＷＴマウスが、ＴＧマウスよりも優れていることが明らかであった。すべての日を合わせると、すべてのトライアルにおいて、ＷＴマウスが、ＴＧマウスよりも逃避潜時が短く、エラーも少なかった（表３５及び表３６）。同様に、個々のブロック及びトライアルに関しては、ブロック２〜４におけるすべてのトライアルで、すべてのＷＴマウスが、逃避潜時がより短く、エラーもより少なかった（表３５及び表３６）。統計学的に、Ｂ１−Ｔ１、Ｂ３−Ｔ２、Ｂ３−Ｔ４及びＢ４−Ｔ４において、ＷＴマウスの逃避潜時が、ＴＧマウスよりも短かった（ｐ＜０．０５）（表２４）。統計学的に、Ｂ１−Ｔ１、Ｂ３−Ｔ２、Ｂ３−Ｔ４、Ｂ４−Ｔ２及びＢ４−Ｔ４において、ＷＴマウスのエラーが、ＴＧマウスよりも少なかった（ｐ＜０．０５）（表２４）。
【０４８９】
（表３３）ＲＡＷＭテストの１２日間記録によるＲＡＷＭ逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000050
【０４９０】
（表３４）ブロック１〜４のＲＡＷＭ逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000051
【０４９１】
（表３５）ＲＡＷＭ逃避潜時（秒）の１２日平均
0006379113.tif 000052
【０４９２】
（表３６）ＲＡＷＭエラーの１２日平均（トライアル平均）
0006379113.tif 000053
【０４９３】
ＲＡＷＭには、ＴＧモデルの影響の証拠があった。すべての日々に渡って平均したすべての群の要約（表３５）は、すべての四つのトライアルにおいて、両ＷＴ群のプラットフォーム発見時間が、全三つのＴＧ群よりも短かった。同じことは、トライアル２〜４に対するエラーにも言えた（表３５及び表３６）。表３５及び表３６に、個々のブロック及びトライアルを示す。逃避潜時に関しては、Ｂ１−Ｔ１（バッチ１−トライアル１）、Ｂ１−Ｔ３及びＢ３−Ｔ２において、ＷＴ−生理食塩水マウスが、ＴＧ−生理食塩水マウスに比べ、非常に短い逃避潜時を示した（ｐ＜０．０５または０．１）（表２４）。表３６に示すように、Ｂ１−Ｔ３、Ｂ−３Ｔ２及びＢ４−Ｔ２において、ＷＴ−生理食塩水マウスが、ＴＧ−生理食塩水マウスに比べ、非常に少ないエラーを示した（ｐ＜０．０５または０．１）（表２４）。（治療に関係なく）すべてのＷＴマウスを合わせて、すべてのＴＧマウスに比較すると、ＷＴマウスが、ＴＧマウスよりも優れていることが明らかであった。すべての日を合わせると、すべてのトライアルにおいて、ＷＴマウスが、ＴＧマウスよりも逃避潜時が短く、エラーも少なかった（表３５）。同様に、個々のブロック及びトライアルに関しては、ブロック２〜４におけるすべてのトライアルで、すべてのＷＴマウスが、逃避潜時がより短く、エラーもより少なかった（表３５及び表３６）。統計学的に、Ｂ１−Ｔ１、Ｂ３−Ｔ２、Ｂ３−Ｔ４及びＢ４−Ｔ４において、ＷＴマウスの逃避潜時が、ＴＧマウスよりも短かった（ｐ＜０．０５）（表２４）。統計学的に、Ｂ１−Ｔ１、Ｂ３−Ｔ２、Ｂ３−Ｔ４、Ｂ４−Ｔ２及びＢ４−Ｔ４において、ＷＴマウスのエラーが、ＴＧマウスよりも少なかった（ｐ＜０．０５）（表２４）。
【０４９４】
バーンズ迷路。バーンズ迷路は、部屋中の視覚的手がかりを助けに、テーブル上の逃避孔を発見することに基づく視覚記憶タスクである。テーブルは、丸いものを、床から１ｍの高さに設置し、テーブルの周縁に等間隔で、４０の逃避孔を設けた。これらの孔の一つには、直下に逃避ボックスを設けたが、他は開いたままにした。逃避ボックスを発見する動機は、明るいライトと、テーブル表面上に吹くファンの形態での有害刺激であった。逃避ボックスは、試験期間中、一つの同じ位置に置いた。マウスには、逃避ボックスの位置を学ぶための１日３回のトライアルを入れて、４日を与えた。マウスには、逃避孔を発見するよう、テーブル上で最長２分まで与えた。２分後に逃避ボックスを発見していない場合、マウスをそのボックスに入れた。孔を発見する逃避潜時とエラーとを記録して分析した。エラーは、逃避ボックスを持たない貫通孔への頭の突き出し、と定義した。
【０４９５】
全体として、バーンズ迷路テストは、この試験のマウスに対して、うまく行かなかった。これが、不従順の問題があった唯一の行動テストであった（全マウスのおよそ５０％がタスクを実行しなかった）。テストの実行中、概して、マウスは有害刺激を恐れなかった。しかし、従順であるため分析に含んだマウスの間では、日数とトライアル全体に渡って、逃避潜時に見ることができる学習傾向があった。
【０４９６】
このテストでは、モデルの影響の証拠があった。表３７及び表３８は、両ＷＴ群における三日目及び四日目の逃避潜時が、全三つのＴＧ群よりも低いことを示す。このことは、他の二つの長期記憶タスク、ＲＡＷＭ及びＭＷＭテストで収集したデータにも反映されている。この違いは、また、表３９及び表４０のように、すべてのＷＴマウスとＴＧマウスを合わせたときにも見られる。
【０４９７】
（表３７）処置別の、バーンズ水迷路からの平均逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000054
【０４９８】
（表３８）不従順を取り除いた、処置別の、バーンズ水迷路からの平均逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000055
【０４９９】
（表３９）遺伝子型別の、バーンズ水迷路からの平均逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000056
【０５００】
（表４０）不従順を取り除いた、遺伝子型別の、バーンズ水迷路からの平均逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000057
【０５０１】
バーンズ迷路テストには、薬効の証拠がなかった（表３７、表３８、表３９、表４０、表４１、表４２）。唯一の統計学的有意性は、Ｂ４−Ｔ１にあった。それでは、ＴＧ−低マウスの行動が酷く悪く、それらの逃避潜時が、ＴＧ−生理食塩水マウスよりも長かった（ｐ＜０．１、表２４）。
【０５０２】
（表４１）処置別の、バーンズ水迷路からの平均エラー数
0006379113.tif 000058
【０５０３】
（表４２）遺伝子型別の、バーンズ水迷路からの平均エラー
0006379113.tif 000059
【０５０４】
バーンズ迷路に関しては、逃避潜時（逃避孔を発見する時間）と、エラー（逃避ボックスを持たない孔へマウスが頭を突っ込んだ回数）の両方を収集した。各トライアルの各日（１〜３）に対して、ｔ検定を実施した。記憶をより正確に表すために、不従順なマウスを取り除いて、データを分析した。不従順なマウスとは、ある程度学んでいて当然と思えるトライアル３に対して、１２０秒（全利用時間）の逃避潜時を示したマウス、と定義した。以下の、群ごとの不従順なマウスのパーセンテージを記録した。ＴＧ−低＝４８．６％、ＴＧ−高＝６１．１％、ＴＧ−生理食塩水＝４８．４％、ＷＴ−高＝４５．６％、及びＷＴ−生理食塩水＝５２．８％。
【０５０５】
高架十字迷路。高架十字迷路は、開いた二本のアームと囲まれた二本のアームからなる４本の高架アーム迷路の中央に動物を置く、不安ベースラインの標準テストである。動物が、アームの各々に入った回数、及び４分間のうちの各アーム内で過ごした時間を記録した。テストは、潜在的に危険な環境（開いた、無防備なアーム）への無条件反射を判定するために用い、齧歯動物が迷路の開アームを回避する度合いで、不安関連行動を測定した。
【０５０６】
高架十字迷路には、トランスジェニックの影響があった。このモデルにおいては、すべてのＴＧマウスが、すべてのＷＴマウスよりも、迷路の開アームへより頻繁に入り、開アーム内でより多くの時間を過ごした。このことは、ＷＴマウスが開空間に関して持つ探索行動の抑制と、不安を実証している。ＷＴ−生理食塩水マウスをＴＧ−生理食塩水マウスに比較した場合、意義深いことにＴＧマウスは、より頻繁に開アームへ入り、また、そこでより多くの時間を費やしていた（表２４、表４３及び表４４）。すべてのＷＴマウス及びすべてのＴＧマウスを合わせた場合、同じ結果が見られた（表４４及び表４５、ｐ＜０．０５、表２４）。
【０５０７】
（表４３）高架十字迷路中の開アーム内平均滞在時間
0006379113.tif 000060
【０５０８】
（表４４）高架十字迷路中の、開アームへの平均進入頻度
0006379113.tif 000061
【０５０９】
高架十字迷路テストには、薬効の証拠が全くなかった。ＴＧ−高群は、開アームへの進入が最も多く、また開アームでの滞在時間も最も多かったが、その違いは、他の群から有意に異なる程ではなかった（表２４、表４３及び表４４）。
【０５１０】
高架十字迷路に関しては、開及び閉アームでの滞在時間と、（アーム進入頻度とも呼ぶ）アーム進入回数との両方を記録した。１２０秒未満で迷路から落ちたマウスは、分析に含まなかった。落ちた３匹のマウスがあったが、それらは、すべて異なる群からのものであった。異常値については、開アームでの滞在時間及び開アームへの進入頻度の両方が、それらの治療群の平均から、標準偏差の二倍を超えた場合、マウスを取り除いた。異常値は、３匹のマウスを含んだが、それらは、すべて異なる群からのものであった。
【０５１１】
オープンフィールド迷路テスト。オープンフィールド迷路テストは、薬剤治療または不安による自発活動の変化を検出するために用いられる。各マウスに４分間を与え、ＥｔｈｏＶｉｓｉｏｎビデオ追跡システムによって追跡しながら、個々に角箱を探検させるようにした。分析のために、角箱を、ＥｔｈｏＶｉｓｉｏｎ内の「線引き」機能を使用して手動で描いた線によって、１６個の等しい大きさの正方形に細分割した。線横断回数及び探検パターンを測定した。
【０５１２】
オープンフィールド迷路テストには、トランスジェニックの影響または薬効の証拠が全くなかった。すべての群のマウスが、非常に類似した線横断及び速度を示した（表２４、表４５、表４６、表４７及び表４８）。
【０５１３】
（表４５）マウスの平均速度
0006379113.tif 000062
【０５１４】
（表４６）遺伝子型別に平均化された、マウスの平均速度
0006379113.tif 000063
【０５１５】
（表４７）マウスによる平均線横断回数
0006379113.tif 000064
【０５１６】
（表４８）遺伝子型別に平均化された、マウスによる平均線横断回数
0006379113.tif 000065
【０５１７】
オープンフィールド迷路に関しては、線横断回数と全体的な速度との両方を測定した。個々のマウスの線横断が治療群の平均から、標準偏差の二倍を超えた場合、異常値は取り除いた。これは、３匹のマウスを含んだが、各々は、異なる治療群からのものであった。線横断及び速度の両方に対して、分析を行った。
【０５１８】
ロータロッドパフォーマンステスト。ロータロッドパフォーマンステストは、持久力、バランス及び協調性における変化を検出するために用いられる。マウスを自動回転バーの上に置き、最長６０秒間、バーの上を歩かせた。回転速度を徐々に増加させ、齧歯動物の、回転バー上に残留する能力を、バー上の全残留時間として記録した。マウスには３回のトライアルを与えた。最長時間を分析に使用する。
【０５１９】
ロータロッドテストには、トランスジェニックモデルの影響が全くなかった。すべての群は本質的に同じように行動し、群間には、統計的有意差が全くなかった（表２４、表４９、表５０及び表５１）。すべてのＷＴマウスが、すべてのＴＧマウスに優る、という有意でない傾向があった（表４９、表５０及び表５１）。
【０５２０】
（表４９）治療群別の、ロータロッド上での最長平均ラン
0006379113.tif 000066
【０５２１】
（表５０）治療群別の、ロータロッド上での平均ラン時間
0006379113.tif 000067
【０５２２】
（表５１）治療群別の、ロータロッド上でのラン時間（秒）のトライアル平均
0006379113.tif 000068
【０５２３】
トランスジェニック群間には、薬効の証拠が全くなかった（表４９、表５０及び表５１）。しかし、ＷＴ−高マウスが、ＷＴ−生理食塩水マウスよりも、ロータロッド上に長時間残留することが観察された。ＷＴ−生理食塩水及びＷＴ−高間のｔ検定は、最長ランに対して０．０８９のｐ値を、また、平均ランに対して０．０４１のｐ値を生じた（ｔ検定示さず、表４９、表５０及び表５１）。
【０５２４】
ロータロッドテストに関しては、マウスが落ちる前の回転バー上の時間を記録した。３回のトライアルを実施した。トライアル３の前にマウスが１２０秒（最長時間）に到達した場合、以降のランは実施しなかった。各治療群に対して、各マウスについて、バー上の平均時間とバー上の最長時間の両方を分析した。開始前、マウスがロッド上に十分長く（約３秒）留まらなかった場合は、データを記録することができなかった。３回のトライアルに対して、開始するのに十分長く留まらなかったマウスは、１匹だけあった。
【０５２５】
受動回避タスク。受動回避タスクは、マウス及びラットの短期または長期記憶を査定するために用いられる古典的条件づけテストである。受動回避装置は、等しい大きさの明区画及び暗区画からなり、明るい電球が、明区画の屋根の中央に固定されている。床は、ショックを与える器具に結合された金属格子からなる。二つの区画は、トラップドアによって分離されている。学習日（１日目）に、マウスを明区画に置き、暗区画へ入るのに費やした時間を記録し、初期潜時と呼んだ。マウスが暗室に入った直後、ドアは自動的に閉まり、３秒間、電気フットショック（０．７ｍＡ）が送られた。取得トライアル後の２４時間後、第二の維持トライアルを実施した。暗区画に入るのにマウスが費やす時間を、維持潜時（ＲＬ、最高５００秒まで記録した。このエントリー中は、全くショックを与えていない）とした。ＩＮ  ＩｇＧ  ＷＴ対ＴＧの影響を比較するために、ｔ検定を実行した。
【０５２６】
ＲＡＷＭ、ＭＷＭ隠れプラットフォーム及びバーンズ迷路テストのすべてが、ＴＧマウスよりもＷＴマウスで学習効果や学習改善の証拠を示したが、このテストは、薬剤治療に関係なく、逆の影響をも一貫して示した。トランスジェニック群間には、薬効の証拠がなかった（表２４、表５２、表５３及び表５４）。
【０５２７】
（表５２）受動的回避学習日逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000069
【０５２８】
（表５３）受動的回避テスト日逃避潜時（秒）
0006379113.tif 000070
【０５２９】
（表５４）受動的回避平均逃避潜時差（秒）
0006379113.tif 000071
【０５３０】
このテストは、予想外なＴＧ影響を示した。記憶障害のあるＴＧマウスは、通常、トレーニング後、暗室に入ってショックを受けることがないようにすべきことを思い出せないはずであるが、そうではなかった。ＴＧマウスは、概して、テスト日にチャンバーに入らなかったが、ＷＴマウスは、テスト日に、ショックを受けるかどうかを気にしないようであった。表５２、表５３及び表５４に、これらの結果を見ることができる。ＴＧマウスに比較してＷＴマウスの成果が悪いのは、統計学的に有意である（ｐ＜０．０５、表２４）。ＷＴマウスが暗室に入ろうとする同様の意欲は、学習局面にも見られるため、正常なＷＴマウスが、痛みを伴うショックを受けに行こうとする一因となっている可能性がある。
【０５３１】
受動回避タスクに関しては、学習日（１日目）及びテスト日（２日目）の両方の逃避潜時を記録し、テスト日及び学習日間の逃避潜時差を計算した。１日目にショックを受けなかったマウスは、テスト日（２日目）には走らせなかった。これらは、四つの群からの７匹のマウスであった。マウスがショックを受けなかったのは、単に暗室に入らなかったからである。計算による異常値はなかった。学習トライアルとテストトライアルに対して、分析を行った。
【０５３２】
モーリス水迷路・視覚プラットフォーム。すべてのマウスがＲＤ１遺伝子に対して遺伝的に検査され、それらのマウスの視力に問題が無かったので、このテストにおけるパフォーマンス差は、期待されていなかった。トランスジェニックモデルであることの影響は全くなかった。すべての群は、本質的に同じように行動し、群間に統計的有意差はなかった（表２４）。トライアル１では、ＷＴ−生理食塩水による強力なパフォーマンスがあったため、一つの統計的有意差が見られたが、同様なことが、以降のトライアルに現れることはなかった。また、トランスジェニック群間には、薬効の証拠が全くなかった（表２４、表５５、表５６、表５７及び表５８）。しかし、ＭＷＭ隠れプラットフォームテストに非常に類似して、ＷＴ−高マウスが、他のすべての群に優る傾向があった（表５５、表５６、表５７及び表５８）。個々のトライアルに対するＷＴ−生理食塩水及びＷＴ−高間のｔ検定比較は、有意なものではなかったが、これら二つの群間のすべてのトライアルに対するｔ検定は、０．０６のｐ値を示した。
【０５３３】
（表５５）治療群別の視覚逃避（秒）
0006379113.tif 000072
【０５３４】
（表５６）不従順を取り除いた、治療群別の視覚逃避（秒）
0006379113.tif 000073
【０５３５】
（表５７）遺伝子型群別の視覚逃避（秒）
0006379113.tif 000074
【０５３６】
（表５８）不従順を取り除いた、遺伝子型別の視覚逃避（秒）
0006379113.tif 000075
【０５３７】
視覚プラットフォームＭＷＭに関しては、逃避潜時（プラットフォームを発見する時間）を収集した。各トライアルの各日（１−４）に対して、ｔ検定を実施した。データは、記憶をより正確に表すために、不従順なマウスを取り除いて分析した。不従順なマウスとは、ある程度学んでいて当然と思えるトライアル３及び４に対して、６０秒（全利用時間）の逃避潜時を示したマウス、と定義した。群ごとの不従順なマウスのパーセンテージを記録した。視覚プラットフォームテストに対する不従順パーセンテージは、以下の通りであった。ＴＧ−低＝６．９％、ＴＧ−高＝６．９％、ＴＧ−生理食塩水＝３．１％、ＷＴ−高＝３．１％、及びＷＴ−生理食塩水＝１．４％。
【０５３８】
実施例８−放射性標識１２５Ｉ−ＩｇＧは、鼻腔内送達でＣＮＳに到達する
ラット及びマウスにおいて、静脈内送達及び鼻腔内送達された放射性標識１２５Ｉ−ＩｇＧのＣＮＳ到達量を、２時間の時点で測定することの実現可能性を判定するために、また、その方法を最適化するために、試験を実施した。
【０５３９】
実験計画：この実験には二つの局面があった。局面１では、２時間の生存時間を持つ麻酔、薬剤投与方法（ラット及びマウスの頸静脈へのカニューレ挿入による静脈内注入、ラットへの鼻腔内チューブ法）、（非イオン性界面活性剤の有無での）経心腔的灌流、及び毛管除去及びガンマ計数のための組織処理を含む種々の異なる方法をテストするために、６匹のマウス及びラットを使用した。表５１に、各テストで使用した動物及び方法を示す。
【０５４０】
（表５９）実施例８の局面１の実験的デザイン
Ｒ＝ラット及びＭ＝マウス。
0006379113.tif 000076
【０５４１】
局面２では、以降の局面１実験の最適技術を決定するために、１８匹のラットに高ＩＶＩＧ用量を投与後、三つの組織処理技術をテストした。１８匹のラットは、三つの実験群に分けた（表６０）。
【０５４２】
（表６０）局面２のための実験群
0006379113.tif 000077
【０５４３】
成体雄スプラーグドーリーラット（Ｎ＝６、平均体重２５０ｇ）、及び成体雄Ｃ５７ｂｌｋマウス（ｎ＝６、７〜８週）を局面１で使用した。成体雄スプラーグドーリーラット（Ｎ＝１８、平均体重２６４ｇ）を、局面２で使用した。これらの動物は、食物及び水へ自由にアクセス可能に、ペアで収容し、１２時間の光サイクルで飼育した。
【０５４４】
局面１及び２実験の開始前、扱いを始める前に、動物を３日間施設に慣れさせた。動物を約２週間に渡って、人間の扱いにゆっくり慣らした。順応プロセス中、人間と動物の絆を深めるため、扱い後、富化食物の褒美を与えた。マウスを扱うとき、拘束技術は、タオル、拘束デバイスを使用して、または首筋を掴んで、簡潔に行った。
【０５４５】
ケタミンＨＣｌ（３０ｍｇ／ｋｇ）、キシラジンＨＣｌ（６ｍｇ／ｋｇ）及びアセプロマジン（１ｍｇ／ｋｇ）を含む麻酔カクテルを用いた。すべての麻酔は、皮下注射として投与した。上記のカクテルと５０ｍｇ／ｋｇのケタミンを交互にブースターとした。試験中、１０〜１５分毎に麻酔レベルを査定するために、反射運動をテストした。
【０５４６】
特殊なピペットチップを使用して、ラットに鼻腔内送達を行った。ラットの鼻孔に特殊なピペットチップを挿入した。ピペットチップは、ジェル充填ピペットチップの先端を２３ｍｍ切り落として、１６ｍｍ長のチュービング（内径＝０．０４ｍｍ、外径＝０．０７ｍｍ）を付けることによって作成した。チュービングは、ピペットチップの広い末端を覆って５．５ｍｍの重なりで被せ、ピペットチップで最細端から１４．５ｍｍの箇所に、シャーピーで黒マークを付けた。最終的に、細端を黒マークまでラットの鼻へ挿入した。
【０５４７】
鼻腔内送達のために、完全に麻酔されたラットは、その背中を、金属手術トレイ内の加温パッド上に付けて置いた。ラットの体内温度を３７℃に維持するために、加温パッドと直腸プローブを使用した。２"×２"ガーゼパッドを巻いて枕にし、しっかりとテープで巻いた。それから、ラットの頸の下に枕を配置して、鼻孔から胴体への下側が平らで水平になるようにした。
【０５４８】
放射線に対する保護のために、手術トレイと実験者との間に鉛含浸シールドを配置した。投与溶液、ピペット、ピペットチップ及び廃棄物処理用容器は、アクセスを容易にするために、シールドの向こう側に配置した。改良ピペットチップを、ラットの鼻孔へ黒マークまで挿入した。（ラットの鼻の中に改良ピペットチップを慎重に保持しながら、）送達試料（４０〜５０μｌ）をピペッター内へ、すなわち改良ピペットチップ終端の開チューブ内へ配置したピペッターのチップ内へ引き入れ、そして全用量を、ラットの鼻孔内へゆっくり放出させた。
【０５４９】
安楽死させた後、分析のために脳を取り出した。汚染を回避するために、大きな外科用鋏で、背側から腹側への切断によって頭を取り除いた。メスを使用して、頭蓋上の毛皮と皮膚を、鼻から断頭点へ切開した。皮膚を折り返して、小さなガーゼパッドで押さえ、頭蓋の頂部を露出させた。小さな止血鉗子を使用して、脊柱の残部を少しずつ削り取り、上頸部脊髄と脳後部（小脳）を露出させた。次に、頭蓋の頂部を嗅球まで取り除き、脳の背側全体を露出させた。止血鉗子を、一つの刃が頭蓋の腹側面をこするように挿入させた。このことによって、脳の背側面の健全性が維持されることを確実にした。頭蓋及び硬膜から脳の側面を緩くするために、小さなスパチュラを使用した。脳を、清潔なシャーレの上で反転させた。視神経を切断することで、脳を頭蓋から解放した。脳を、灌流の質に関して査定した。
【０５５０】
脳は、背側を上に配置した。自然な角度で嗅球を脳から切り離すために、単一刃のかみそりを使用した。嗅球は採集した。脳を七つの冠状切片（図５を参照）に切断するために、かみそりの刃を使用した。各切片を半分割し、計数のために、チューブに入れた。
【０５５１】
毛管除去のために、各脳切片を計量し、氷冷摺合せガラスホモジェナイザーへ移した。そのホモジェナイザーへ、組織試料重量の２．８５７倍の体積の緩衝液、ｐＨ７．４（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１４１ｍＭのＮａＣｌ、４ｍＭのＫＣｌ、２．８ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＳＯ４-Ｈ２Ｏ、１ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４及び１０ｍＭのＤ−グルコース）を加えた。垂直ストロークを使用して、脳試料を均質化させた。ホモジェネート内の最終デキストラン濃度を１５．５％にするために、均質化脳試料へ、少量の２６％デキストラン溶液を加えた。それから、ホモジェネートを撹拌し、垂直ストロークで２回目の均質化を行ってから、小さなガラス遠心分離管へ静かに注いだ。それから、ホモジェネートを、スインギングバケットローター内で、１５分間、４℃、５４００×ｇの速度で遠心分離した。ホモジェネートは、次の複数の層へ分離させた：毛管セグメントを含む底部ペレット、透明な液体層、及び神経組織を含む頂部「クリーム」層。ホールピペットを使用して、クリーム層と透明液体層を、新しいチューブへ移した。ガンマカウンターを使用して、上澄み及びペレットの放射能を測定した。
【０５５２】
結果：局面２からのデータは、静脈内１２５Ｉ−ＩＶＩＧが中枢神経系に到達したことを示す。毛管除去組織処理の動物は、脳組織内に最も多くのＩＶＩＧ（４９，７９１ｎｇ）を含んでいた。第二の灌流液として０．０２５％トリトンＸで灌流された動物は、脳組織内に最も少ないＩＶＩＧ（３３，８５５ｎｇ）を含んでいた（表６１及び表６２）。毛管壁に固着したＩＶＩＧのすべてを保持するはずの毛管除去ペレットは、僅かに、それらの動物（表６３）の全脳ＩＶＩＧの約３％であった。毛管ペレット内の低量のＩＶＩＧは、処理中のホモジナイゼーション摩擦から生じた可能性が考えられる。それにより、毛管壁に固着したＩＶＩＧが、ペレット内の毛細管に留まらずに、解放され、上澄みに溶け込むのが許容された可能性がある。
【０５５３】
（表６１）ＣＰＭで測定した中枢神経系内に存在する１２５Ｉ−ＩＶＩＧ
0006379113.tif 000078
【０５５４】
（表６２）群別のｎｇ
0006379113.tif 000079
【０５５５】
（表６３）群別のｎｇ
0006379113.tif 000080
＊総推定血液体積は、体重×０．０６＋０．７７と決定した（Ｌｅｅ及びＢｌａｕｆｏｘ、１９８５）。
【０５５６】
トリトンＸ灌流法は、生理食塩水灌流対照に対して、ＩＶＩＧ全脳濃度が２８％減少した。灌流液は、（１５ｍｌ／分の流量で灌流される）２５ｍｌのうちの、血管から除かれるＩＶＩＧ量を示すべきである。各灌流液の三つの２５０μｌ試料を、ガンマカウンターで計数した。それから、三つの平均を計算した。各灌流液中のＩＶＩＧの全量を判定するために、ｎｇ／μｌ  ＩＶＩＧ濃度を測定し、２５０００を乗算した（使用した灌流液、２５ｍｌ）。（１５ｍｌ／分で約９０ｍｌの）第一の灌流液は採集せず、その理由は、このステップが、試験の全動物について同じであったためである。０．０２５％トリトンＸで灌流された群においては、生理食塩水（１９９ｎｇ／μｌ）で灌流された群に比べ、より多量の１２５Ｉ−ＩＶＩＧ（４３９ｎｇ／μｌ）を除去した。この違いは、血管から残留トリトンＸを除去することを意図する第三の灌流液には見られなかった（各々、１７０ｎｇ／μｌ及び１８２ｎｇ／μｌ）（表１及び２）。このことは、トリトンＸのこの濃度で、血管からのＩＶＩＧの最大除去が達成されたことを示唆する。灌流液中のトリトンＸをより高濃度にすれば、さらに減少をもたらす可能性がある。
【０５５７】
これらの結果によると、すべての方法において、注入された全送達ＩＶＩＧの約０．０２％が、脳に到達した（表５５）。局面２の実験中、脳組織が僅かにピンクであることに気づいた。このことは、灌流された総体積が、脳から完全に血液を除去するのに適切ではなかったことを示唆する。このわずかな呈色は、各実験群のすべての動物に一貫して見られた。次の局面の灌流液の総体積を増加させることで、この問題は解決できる。
【０５５８】
実施例９−マウスにおける、鼻腔内及び静脈内投与ＩｇＧの生体内分布
鼻腔内により、及び静脈内によりマウスに投与したプールヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）の生体内分布を比較するために、試験を実施した。脳へのＩｇＧの送達と血流中の残留ＩｇＧを測定した。
【０５５９】
実験計画：ヨウ素１２５で放射性標識したＩｇＧ（１２５Ｉ−ＩｇＧ）を、麻酔させたラットへ１４分間に渡って、左大腿静脈へ注入（静脈内投与、ＩＶ）、または滴として鼻腔内投与（ＩＮ）した。動物を屠殺して、異なる九つの（ＩｇＧ投与後の１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、８時間、１２時間、２４時間及び７２時間の）時点で、マウスの脳、血液及び体内の１２５Ｉ−ＩｇＧ濃度を測定した。血液試料を心臓から採集し、動物を灌流し、脳を取り出した。放射性標識ＩｇＧを、定量分析のためにガンマカウンターで検出した。各脳の半分を処理して上澄みにし、サイズ排除カラムを通して、１２５Ｉ標識の無傷性を調べた。三つの実験コホートに、表６４に説明するようにＩｇＧを投与した。
【０５６０】
（表６４）ＩｇＧ鼻腔内投与に割り当てた治療群
0006379113.tif 000081
＊実験群毎合計２７匹のラットに対して、各時点で３匹のラット。
【０５６１】
送達日に、各１２５Ｉ−ＩｇＧアリコートをフリーザーから取り出し、室温に戻した（約２０分）。それから、アリコートを優しく撹拌した。１μｌの試料を９９９μｌの水に入れ、撹拌した（１：１，０００の希釈）。その希釈から三つの２０μｌ試料を取り出し、ラベルを付けたガンマチューブへ入れた。もう一つの１０μｌを９０μｌの水に入れ、撹拌した（１：１０，０００の希釈）。１：１０，０００の希釈から、三つの２０μｌ試料を取り出し、ラベルを付けたガンマチューブへ入れた。後に、ガンマ計数を介して、標準を定量化した。１２５Ｉの崩壊を考慮するため、生理食塩水で希釈を変えることによって、群内のすべての用量を、体積、重量（ｍｇ）及び放射能（μＣｉ）について等しくした。
【０５６２】
大腿静脈にカニューレを挿入された成体雄スプラーグドーリーラット（ＨａｒｌａｎからのＲｅｇｉｏｎｓ  ＨｏｓｐｉｔａｌのＡｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ）を、この実験で使用した。正確な投与を確実にするよう、すべてのラットは体重約２５０ｇであった。動物は、食物及び水へ自由にアクセス可能に、個々に収容した。動物は、１２時間の光サイクルで飼った。
【０５６３】
ＩＮ液滴、ＩＮデバイス及びＩＶ投与に対しては、ケタミンＨＣｌ（３０ｍｇ／ｋｇ）、キシラジンＨＣｌ（６ｍｇ／ｋｇ）及びアセプロマジン（１ｍｇ／ｋｇ）を含む麻酔カクテルを使用した。すべての麻酔は、皮下注射として投与した。上記説明のカクテルと５０ｍｇ／ｋｇのケタミンとを交互にブースターとした。試験中、１０〜１５分毎に麻酔レベルを査定するために、反射運動をテストした。４時間目以降に屠殺される群の動物は、麻酔からの回復を許し、安楽死前に再麻酔させた。
【０５６４】
ＩＮ液滴送達のために、麻酔ラットは、背中を加温パッドに付けて配置した。エッペンドルフピペッターで、８×６μｌ点鼻剤として交互の鼻孔へ２分毎に、４８μｌの総体積で１２５Ｉ−ＩｇＧを鼻腔内投与した。それから、安楽死時点まで、動物を副作用及び麻酔レベルに関して監視した。鼻腔内送達中、５００μｌの生理食塩水試料を１４分間に渡って、大腿静脈を介して注入した。すべての動物は、送達完了後の１５分後に、反転させて背中を離した。
【０５６５】
ＩＮデバイス送達のために、麻酔動物を背中を下にして置き、鼻孔内へチューブを、約１４ｍｍほど深く挿入した。チューブは、嗅上皮に向けて１５μｌの投与溶液を送達するアクチュエータに結合されていた。送達の開始時に１ボーラスをスプレーし、送達開始の１０分後にもう一つをスプレーした。それから、安楽死時点まで、動物を副作用及び麻酔レベルに関して監視した。鼻腔内送達中、５００μｌの生理食塩水試料を１４分間に渡って、大腿静脈を介して注入した。すべての動物は、送達完了後の１５分後に、反転させて背中を離した。
【０５６６】
ＩＶ送達のために、麻酔動物は、背中を下に配置した。１ｃｃシリンジに付けた尖っていない２２ゲージ針を、大腿静脈カニューレへ挿入した。１２５Ｉ−ＩｇＧを５００μｌアリコート内で調製し、１４分間に渡って注入した。それから、安楽死時点まで、動物を副作用及び麻酔レベルに関して監視した。
【０５６７】
実験終了時に、心臓から直接採血し、動物は、心臓を介して直接、１２０ｍｌの氷冷生理食塩水で灌流させた。血液の小さな一滴を、予め計量したラベル付きガンマチューブに入れ、約０．６ｍｌを、ラベル付き血清分離チューブに入れた。血清分離チューブをスピンさせて、血清を採集した。血清は、均質化緩衝剤で希釈した。希釈血清は、１００ｋＤａサイズの排除濾過デバイス内で、さらにスピンダウンさせた。フィルタの頂部と底部から試料を採集し、ラベル付きガンマチューブに入れた。フィルタも採集し、ラベル付きガンマチューブに入れた。
【０５６８】
脳は、頭蓋から取り出して半分割した。左半球は、下記の説明のように、さらに処理した。右半球は、計量し、七つの部分へ切り分け、ラベル付きガンマチューブに入れた。
【０５６９】
加えて、嗅上皮及び気道上皮を別個に採集した。上皮は、ガンマカウンターの定量限界よりも多量の１２５Ｉを含むことが予期されたので、双方とも多数の部分に分けた。上皮の各部分は、予め計量したラベル付きガンマチューブに入れた。
【０５７０】
左半球は、頭蓋から切除後、計量した。上澄みを回収するために、それを均質化させ、スピンダウンさせた。上澄みは、１００ｋＤａサイズの排除濾過デバイスで、さらにスピンダウンさせた。フィルタの頂部と底部から試料を採集し、ラベル付きガンマチューブに入れた。ペレットを採集し、予め計量したラベル付きガンマチューブに入れた。フィルタも採集し、ラベル付きガンマチューブに入れた。
【０５７１】
体組織の３〜５ｍｍの試料を採集し、予め計量したラベル付きガンマチューブに入れた。体組織は、肝臓、脾臓、腎臓、小腸、肺、食道、気管及び血液（先に述べたように、直接心臓から採血）を含む。コブラＩＩオートガンマカウンターを使用して、試料を含むガンマチューブを計数した。
【０５７２】
結果：初期の時点における脳内のＩｇＧの無傷性は、静脈内投与（１５分で６９％）に比べ、鼻腔内投与で僅かに少なかった（例えば、１５分でＩＮ高の４９％、ＩＮ低の４９％、ＩＮデバイスの４０％）（表６５、表６６、表６７及び表６８）。しかし、無傷性の計算方法が認証されていない、また、ガンマ計数器に限界があるため、非無傷、すなわち「遊離」１２５Ｉが拡大されてしまう可能性がある。濾過デバイスチューブの（非無傷ＩｇＧが予想される）「底部」を代表するアリコートのガンマチューブからのＣＰＭ数は、ＩＮ処置動物の多くで、むしろ低かった。通常、計数は、背景の少なくとも２倍（この試験においては、約５０ＣＰＭ）に到達することが望まれる。
【０５７３】
（表６５）高用量点鼻剤（０．０２ｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を介してラットに投与したＩｇＧの生体内分布及び無傷性
0006379113.tif 000082
【０５７４】
（表６６）低用量点鼻剤（０．００２ｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を介してラットに投与したＩｇＧの生体内分布及び無傷性
0006379113.tif 000083
【０５７５】
（表６７）高用量鼻腔内デバイス（０．０２ｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を介してラットに投与したＩｇＧの生体内分布及び無傷性
0006379113.tif 000084
【０５７６】
（表６８）高用量静脈内注入（０．０２ｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を介してラットに投与したＩｇＧの生体内分布及び無傷性
0006379113.tif 000085
【０５７７】
（表６９）免疫グロブリンＧの無傷性に関して補正した、高用量点鼻剤（０．０２ｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を介してラットに投与したＩｇＧの生体内分布及び無傷性
0006379113.tif 000086
【０５７８】
（表７０）免疫グロブリンＧの無傷性に関して補正した、低用量点鼻剤（０．００２ｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を介してラットに投与したＩｇＧの生体内分布及び無傷性
0006379113.tif 000087
【０５７９】
（表７１）免疫グロブリンＧの無傷性に関して補正した、高用量鼻腔内デバイス（０．０２ｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を介してラットに投与したＩｇＧの生体内分布及び無傷性
0006379113.tif 000088
【０５８０】
（表７２）免疫グロブリンＧの無傷性に関して補正した、高用量静脈内注入（０．０２ｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）を介してラットに投与したＩｇＧの生体内分布及び無傷性
0006379113.tif 000089
【０５８１】
鼻腔内ＩＮデバイスで達成された無傷ＩｇＧの最大脳送達量（０．７１μｇ  ＩｇＧ／ｇ組織）は、同じ用量（０．０２ｇ／ｋｇ）の静脈内（ＩＶ）投与で達成された最大脳送達量（０．４０μｇ  ＩｇＧ／ｇ組織）のほぼ２倍であったが、最大血中濃度は２５倍小さかった（ＩＮデバイスの５．３μｇ  ＩｇＧ／ｇ、ＩＶの１３２μｇ  ＩｇＧ／ｇ）（表７１及び表７２）。
【０５８２】
７２時間に渡る脳曝露のＡＵＣは、ＩＮデバイス投与対静脈内投与で、かなり等価だった（無傷性に対する補正後の、右／左半球で、３１８／２６２のＩＮデバイス対３９８／３６９のＩＶ）。しかし、血液曝露のＡＵＣは、静脈内が、ほぼ６倍大きかった（無傷性に対する補正後の、５，１８１デバイス対３２，６９４、表７３）。
【０５８３】
（表７３）ＩＮ１、ＩＮ２またはＩＶを介してのプールヒトＩｇＧ投与を受けたラットの、経時的ＩＮ及びＩＶ  １２５Ｉ−ＩｇＧの曲線下面積及び最大濃度
0006379113.tif 000090
【０５８４】
すべての四つの送達方法は、脳内ＩｇＧ濃度が経時的に減少することを示した（表６５、表６６、表６７、表６８、表６９、表７０、表７１及び表７２）。脳への鼻腔内液滴送達は、用量に依存的であった（表６５、表６６、表６９及び表７０）。ＩｇＧの高用量で処置された動物は、無傷性に対する補正後、最大脳内濃度を示した（０．１２μｇ  ＩｇＧ／ｇ）。これは、ＩｇＧのより低用量で処置した動物の脳内濃度（０．０２９μｇ  ＩｇＧ／ｇ）の約４倍高かった（表６９、表７０及び表７３）。
【０５８５】
第二の１２５Ｉ−ＩｇＧピークが、ＩＮ投与群のほとんどの組織で観察された（表６５、表６６及び表６７）。この第二のピークは、動物モデルのアーチファクトによるものである可能性がある。動物は、２時間頃から麻酔から目覚め始め、正常に食べ、飲み、身づくろいすることができた。その結果、起き上がった後、鼻に残っていたＩｇＧのいくつかを摂取し、鼻咽頭を通して口及び食道へ通過された可能性がある。したがって、４時間後に生じたこの第二のピークは、無傷ＩｇＧの直接的な鼻から脳への送達ではなく、おそらく、分解ＩｇＧの血液から脳への送達の結果である。
【０５８６】
３匹のラットから成る小群も、非増強剤ベースの投薬溶液で鼻腔内処置した（表７４）。この群は、１時点（３０分）のみを持ち、実施例９及び表６５で説明したＩＮ高群と同じ濃度及び方法で投与を受けた。３０分の時点での濃度は、呼吸上皮（２，０９７μｇ  ＩｇＧ／ｇ）及び嗅上皮（３７μｇ  ＩｇＧ／ｇ）で、ＩＮ高群の１５分（８，６１４μｇｖＩｇＧ／ｇ及び５８５μｇ  ＩｇＧ／ｇ）及び３０分（１１，７９０μｇ  ＩｇＧ／ｇ及び１２７μｇ  ＩｇＧ／ｇ）の各々に比べ非常に低かった。右半球は等しい（非増強剤及びＩＮ高群の両方に対する０．２２μｇ  ＩｇＧ／ｇ）が、左半球は、ＩＮ高群に比べ非常に低い（０．０４μｇ  ＩｇＧ／ｇ）。
【０５８７】
（表７４）非増強剤ベースの投与溶液（ＩＮ４）で投与したＩｇＧに比較した、高用量点鼻剤（０．０２ｇ  ＩｇＧ／ｋｇ）（ＩＮ高）を介してラットに投与したＩｇＧの生体内分布及び無傷性
0006379113.tif 000091
【０５８８】
送達ＣＰＭの総量に対する、脳（または推定血液体積）内の測定ＣＰＭのパーセンテージとして、生物学的利用率を計算した。鼻腔内デバイスを介しての送達は、すべての方法の中で最高の生物学的利用率（３０分での０．０３７％）を示し、静脈内送達での最高生物学的利用率（２時間での０．０１８％）の２倍高であった（表７５及び表７６）。
【０５８９】
（表７５）生物学的利用率、脳（脳に到達した送達ＣＰＭの％、無傷性に関する補正なし）
0006379113.tif 000092
【０５９０】
（表７６）生物学的利用率、血液（脳に到達した送達ＣＰＭの％、無傷性に関する補正なし）
0006379113.tif 000093
【０５９１】
静脈内注入よりも侵襲性でないオプションであるだけでなく、ＩＮ液滴またはＩＮデバイスを使用して達成される脳への（すなわち、血液及び全身的な曝露がより少ない）標的指向化の向上は、ＩｇＧ療法による全身性副作用の危険性を減少させることが期待できる。
【０５９２】
実施例１０−ＩＮ液滴及びＩＮデバイスによって投与したＩｇＧの安定性、及び嗅上皮への標的指向化
最適投与様式を判定するために、ＩＮ液滴またはＩＶ及びＩＮデバイスによって投与したＩｇＧの安定性を比較した。ＩＮデバイスを介して投与したＩｇＧの分解及び凝集を測定した。また、嗅覚標的化を査定した。
【０５９３】
ＩｇＧの安定性：ＩＮデバイスからスプレーしたＩｇＧの試料を、非スプレーのＩｇＧ溶液（ＩＶＩＧ及びＩＮ液滴の代表）に比較した。５つのＩｇＧ調合物を調製し、スプレー及び溶液トライアル群に分けた（Ａ＝２５％プールＩｇＧ、Ｂ＝５％プールＩｇＧ、Ｃ＝１０％プールＩｇＧ、Ｄ＝２０％プールＩｇＧ、Ｅ＝２５％プールＩｇＧ）。スプレーＩｇＧ試料及び溶液ＩｇＧ試料を、非還元及び還元ゲル上に流した。ゲルは、以下のように染色された、あるいはブロッティングを行った。１）クーマシー染色、非還元ゲル、及び２）ウエスタンブロット及びクーマシー染色された還元ＳＤＳ−Ｐａｇｅゲル。
【０５９４】
非還元ゲル（図６Ａ）内には、溶液及びスプレーＩｇＧの両方に対する明らかな高次凝集体またはＩｇＧ分解形態が全く見られなかった。還元ウエスタンブロット（図６Ｂ）内には、無傷ＩｇＧの他に、ＩｇＧの重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）フラグメントも見られた。重鎖及び軽鎖（ＨＣ／ＬＣ）の組合せは、還元ゲル上にも見られた。これらの結果に基づくと、ＩＮデバイスを介してＩｇＧをスプレーすることが、ＩｇＧ分解を増進することはなく、ＩｇＧ凝集を増加させることもない。
【０５９５】
嗅上皮への標的指向化：鼻腔内デバイスで、及び鼻腔内液滴で、ＩｇＧをラットに投与した。ヒスチジン緩衝液で調製したＩｇＧの２５％溶液に、０．０１％フルオレセイントレーサーを混ぜた。それから、鼻腔内デバイスまたは滴を使用して、それをラットに鼻腔内送達し、ラットの脳を画像化して神経ＩｇＧフルオレセイン沈着を検出した。
【０５９６】
図７Ａ及び７Ｂに、鼻腔内ＩｇＧ（薬剤投与後の２分未満）の沈着パターンの代表画像を示す。図７Ａは、ラットにおける、０．０１％フルオレセイントレーサーを混ぜた１５μｌの２５％ＩｇＧ溶液のデバイス投与後の沈着を示す。図７Ｂは、点鼻剤で投与された同じ化合物の沈着後の沈着パターンを示す。図７から分かるように、デバイス投与からは、より大きな嗅上皮（ＯＥ）染色がある。
【０５９７】
本明細書に説明する実施例及び実施形態は、説明目的のみのためであり、それらを考慮した種々の修正または変更が当業者に示唆され、本出願の範囲及び添付の請求項の範囲内に含まれることを理解すべきである。本明細書中に引用したすべての出版物、特許及び特許出願は、すべての目的のために参照により全文が本明細書に援用される。
【０５９８】
実施例１１−鼻腔内ＩｇＧ投与は、プラークに覆われる脳領域を減少させる
脳プラーク及び脈管アミロイドへの鼻腔内ＩｇＧの影響を査定するために、実験をデザインした。Ｔｇ２５７６マウス脳のコンゴレッド染色は、低用量及び高用量ＩｇＧ鼻腔内治療群におけるプラーク被覆領域、プラーク数、及びプラークの総強度の減少を明らかにした。その減少は、皮質内の免疫染色で識別されるβ−アミロイドの減少に近い。例えば、低用量群におけるアミロイドは、ＩＨＣで査定すると、２５．７％、コンゴレッドで分析すると、２２％減少した。しかし、免疫染色と違って、コンゴレッドプラーク染色における減少は、統計学的有意性のレベルに達しなかった。
【０５９９】
プラークアミロイド減少は、低用量あるいは高用量ＩｇＧ群のいずれにおいても、脈管アミロイドについては観察されなかった。統計学的には有意でないが、高用量ＩｇＧ群については、脈管アミロイドの僅かな増加が観察された。
【０６００】
実験計画：この試験の狙いは、鼻腔内ＩｇＧ処置が、Ｔｇ２５７６マウスの脳内プラーク及び／または脈管アミロイドを変化させるかどうかを判定することであった。生後９ヵ月のマウスに、７ヵ月間、週３回ＩｇＧあるいは塩水で鼻腔内処置した（実験群の説明は、表１５に提供されている）。生後１６ヵ月で、行動テストを実施し、そして生後約１７ヵ月で、群毎に１２匹のマウスを（生理食塩水での経心腔的灌流により）安楽死させ、分析のために脳組織を採集した。脳を矢状方向に半分割し、右半分をホルマリンに漬け、パラフィンに埋め、５μｍで区分した。矢状方向正中線から約２．５ｍｍの切片を、コンゴレッド染色に使用した。
【０６０１】
対照群、ＷＴ−ＰＢＳ及びＷＴ−高用量、及び実験Ｔｇ２５７６群、Ｔｇ−ＰＢＳ、Ｔｇ−低用量（４００μｇ／ｋｇ／２週）及びＴｇ−高（８００μｇ／ｋｇ／２週）の脳のプラーク及び脈管アミロイドの定量化を、コンゴレッド染色及び蛍光顕微鏡法を使用して分析した。この手順では、矢状切片を標準コンゴレッド手順で染色し、ニコンＡ１スペクトル共焦点顕微鏡を使用して蛍光的に画像化した。具体的には、取得及び分析を制御するために、ＮＩＳエレメント画像処理ソフトウェアを使用した。画像をキャプチャするために、１０×倍率の対物レンズを使用した。この倍率では、より小さな血管がプラークから簡単に区別できた。この倍率では、全脳切片をキャプチャするのに、（５％の重なりで）３０枚の画像から成る６×５タイリングが必要であった。これら３０枚の画像の各々は、５枚の個々の画像から成るｚ−スタックの最大輝度投影から作成された。これは、組織切片全体に渡るキャプチャ焦点面の変化を補正した。コンゴレッドを励起するために、５６１ｎｍのレーザー励起（１０％の電圧）を使用した。そして、蛍光を定量化するために、５７０〜６２０ｎｍ間のスペクトルを取得した。
【０６０２】
（ｘ−ｙ平面の３０枚とｚ方向の５枚の）１５０枚の個々の画像を縫い合わせることによって、完全な矢状切片の単一画像を取得した。図１２に、これらの画像の代表例を示す。ニコンのエレメントＡＲソフトウェアを使用して、総アミロイドから脈管成分を非選択することによって、手動で、盲検研究者がプラーク及び脈管系アミロイド沈着を区別した。アミロイドに覆われた領域（領域）、個々のアミロイド沈着物の数（#）、及びそれら物体の強度の合計（合計強度）を、アミロイド沈着物（プラーク及び脈管の両方）の総計として、また、プラーク及び脈管沈着物の個々に対して、判定した。
【０６０３】
具体的には、脈管及びプラークアミロイドを識別するための画像分析及び定量化は、第一に、最適で一貫した視検を得る探索表（ＬＵＴ）を調整することからなった。第二に、全脳の、アミロイド被覆画分を判定するために、脳切片の脳領域全体を定量化した。その際、すべての組織をハイライトしながら小脳を外すよう閾値を設定した。第三に、アミロイド染色物を正確に選択する、定量化前の背景または組織染色アーチファクトに起因する染色を除外する、及び、小脳内の物体を除外する、ように閾値をセットすることによって、総アミロイド占領域を定量化した。第四に、手動で、１：１の解像度の画像にズームし、血管に関わるハイライトされた選択を個々に除外することによって、脈管系アミロイドを排除した。第五に、プラークアミロイド占領域を定量化した。
【０６０４】
各矢状切片毎に、総アミロイド染色物（合計）、アミロイド染色プラーク（プラーク）及びアミロイド染色脈管沈着物（脈管系）を正確に測定してデータを収集した。合計及びプラークに対して、別個の測定値を直接取得した。脈管のための値は、合計からプラークを減算することによって取得した。各データセットに対して、以下のものを含むパラメータを決定した。１）物体の数、２）面積（物体の集まりによって占有された面積％）、及び３）合計強度（個々の物体に対する［平均強度＊面積］の合計に等しい）。面積パラメータに対しては、二つの別個の値を計算した。１）画像面積（画像の合計面積で除算した画像から合計した面積＊１００）、及び２）組織面積（脳組織によって占有された面積で除算した画像から合計した面積＊１００）。
【０６０５】
表１５に説明した５つの実験群の各々に対する三つのパラメータの各々について、平均値、標準偏差及び標準誤差を計算した。両側ｔ検定を用いて、５つの実験群を有意性について分析し、次の比較を行った。ＷＴ−生理食塩水対Ｔｇ−生理食塩水、Ｔｇ−生理食塩水対Ｔｇ−低、Ｔｇ−生理食塩水対Ｔｇ−高、及びＴｇ−低対Ｔｇ−高。
【０６０６】
結果：全アミロイド、プラークアミロイド、または脈管アミロイドの蓄積における変化は、Ｔｇ−低またはＴｇ−高群のいずれに対するＴｇ−ＰＢＳ群の比較において、ｔ検定で有意なものに至らなかった（表７７）。しかし、査定した三つのパラメータ、アミロイド被覆面積（図８Ａ及び図８Ｂ）、個々のアミロイド沈着物の数（図８Ｂ及び図９Ｂ）及びこれら物体の強度の合計（アミロイドの総量を表現する合計強度、図８Ｃ及び図９Ｃ）の各々については、総アミロイドとプラークアミロイドの両方に関して、低及び高ＩｇＧ鼻腔内処置の両方で減少することが発見された。プラーク被覆面積は、低用量で２２％と高用量で２０％減少した。プラーク数は、低用量で１７％と高用量で１９％減少した。これらプラークの合計強度は、低用量群で１６％と高用量群で２４％減少した。
【０６０７】
（表７７）群間のパーセンテージ変化と、関連するｔ検定のｐ値
0006379113.tif 000094
【０６０８】
脈管系には、アミロイドの減少はなかった（図１０Ａ、１０Ｂ及び１０Ｃ）。脈管アミロイドについては、高ＩｇＧ鼻腔内治療群で、三つのパラメータの各々が増加したが、低用量群では、この増加は、皆無、あるいは程度がより小さい、のいずれかであった（図１０Ａ、１０Ｂ及び１０Ｃ）。これらの脈管アミロイド沈着物の合計強度は、低用量群で３％、高用量群で１１％増加した（表７７）。
【０６０９】
図１１Ａ及び図１１Ｂに、総アミロイドに寄与する脈管及びプラークアミロイドの相対的な割合を示す。表７８に、標準偏差及び百分率誤差とともに各群の平均値を示す。
【０６１０】
（表７８）治療群別のアミロイドプラークの平均値
0006379113.tif 000095
【０６１１】
（表７９）（ＩＤ番号によって識別された）各マウスに関する面積及び合計強度の生データ
0006379113.tif 000096
0006379113.tif 000097
【０６１２】
図１２Ａ〜１２Ｆに、共焦点蛍光顕微鏡で捕えたコンゴレッド染色矢状切片を示す。ｚ−スタック最大強度投影画像を作成するために、５１２×５１２の解像度での５枚の個々の１０×画像を使用した（図１２Ａ）。分析のための単一画像を作成するために、全組織切片を包含する３０枚のこれらｚ−スタック投影を（５％の重なりで６×５の）タイル状に張った（図１２Ｂ〜１２Ｆ）。５６１ｎｍのレーザー励起によってコンゴレッドを励起し、定量化のために、５７０〜６２０ｎｍ間のスペクトルを取得した。アミロイド沈着物の選択は、ニコンエレメントＡＲソフトウェアの閾値処理機能で実施した。図１２Ａ及び図１２Ｃ〜１２Ｆに、閾値処理の実施例を、赤でハイライトすることによって示している。図１２Ａは、アミロイドプラーク及び脈管アミロイドをハイライトして、フル解像度で皮質及び海馬の一部分を示している。図１２Ａは、ハイライトなしの、Ｔｇ−低マウスからの切片の例である。群からの代表画像、ＷＴ−生理食塩水（図１２Ｃ）、Ｔｇ−生理食塩水（図１２Ｄ）、Ｔｇ−低（図１２Ｅ）及びＴｇ−高（図１２Ｆ）を、閾値処理を行って示している。
【０６１３】
分析：コンゴレッド染色は、低ＩｇＧ及び高ＩｇＧ鼻腔内治療群の両方の、アミロイド量の減少を明らかにした（図８Ａ〜８Ｃ）。アミロイドの脈管成分が僅かに増加する（図１０Ａ〜１０Ｃ）ことが発見されたので、アミロイドのこの減少は、プラーク量の減少の結果であった（図９Ａ〜９Ｃ）。コンゴレッドの結果が統計学的に有意なレベルに至らなかったが、プラーク量の減少は、β−アミロイドの免疫検出（ＩＨＣ試験）によって判定されたこれらのマウスの皮質内プラークの、統計学的に有意な減少によって支持されている。β−アミロイドを標的とする４Ｇ８抗体を使用するその試験では、プラーク被覆パーセント面積は、各々、０．０１４及び０．０３７のｐ値で、低用量ＩｇＧ群で２５．７％、及び高用量ＩｇＧ群で２４．３％減少した。コンゴレッド蛍光染色を使用するこの試験では、プラーク被覆領域は、各々、０．３５及び０．４８のｐ値で、低用量で２２％、及び高用量で２０％減少した。したがって、ＩＨＣ分析で観察された同程度のプラーク減少は、コンゴレッド分析でも検出された。
【０６１４】
ＩＨＣ及びコンゴレッド分析間で観察される統計的検出力の差は、複数の実験パラメータに起因している可能性がある。ＩＨＣ分析は、マウスの脳皮質あるいは海馬に限られて、有意な減少は皮質のみで観察された。コンゴレッド分析では、嗅球を除いた、脳橋及び小脳の前方の完全な脳切片を含んだ。脳のこれら追加領域全体のプラーク量の変動及び希釈が、有意性の低いｐ値の原因となった可能性がある。加えて、ＩＨＣ分析では、各マウスからの三つの組織切片を含んだのに対して、コンゴレッド染色では、単一の切片を分析した。違いは、各々の方法の染色性にも関連する可能性がある。コンゴレッドは、アミロイドのβ−シートの不溶性繊維状タンパク質集合体を検出するのに対し、ＩＨＣは、すべてのＴｇヒトβ−アミロイドタンパク質を検出する。
【０６１５】
脈管系のアミロイド染色は、ほとんどの場合、脳の比較的大きな血管内のみに観察される。これは、これらの血管内に流出アミロイド輸送体、ＬＲＰ１が欠如していることに、少なくとも部分的に起因することを示唆している。この点に関して一貫して、脈管アミロイドは、この試験では、ほぼ排他的に比較的大きな血管内で観察された。また、ＩｇＧは、脈管アミロイドの凝集に影響しなかったか、僅かに増加させた、のいずれかであった。脳は別個のリンパ系を持たないが、比較的大きな脳血管を囲む血管周囲空間は、β−アミロイドを含む間質液及び細胞外溶質が脳から流出することを可能にする経路を提供する。
【０６１６】
実施例１２−鼻腔内ＩｇＧ処置Ｔｇ２５７６マウスの免疫蛍光染色、星状細胞（ＧＦＡＰ）及び小膠細胞（ＣＤ１１ｂ）の定量化
ヒト免疫グロブリンは、広範囲の炎症性タンパク質に反応する。また、静脈内投与ＩｇＧは、種々の異なる病状下で、抗炎症性を誘発することが示されている（Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎ  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００８；２６：５１３−５３３）。この試験は、低用量及び高用量ＩＮ  ＩｇＧの常習的投与への反応としての、Ｔｇ２５７６マウスの脳における二つの炎症性マーカーの発現を査定した。
【０６１７】
冷凍試料が利用可能だったマウスの三つのトランスジェニック群［ＴＧ−生理食塩水のｎ＝２、ＴＧ−低（０．４ｇ／ｋｇ／２週）ｎ＝４、ＴＧ−高（０．８ｇ／ｋｇ／２週）ｎ＝６］からの脳組織を、ＧＦＡＰ及びＣＤ１１ｂについて分析した。実験Ｔｇ２５７６マウスの脳のＧＦＡＰ及びＣＤ１１ｂ染色の両方の定量化は、蛍光顕微鏡法を使用して分析した。この手順では、固着冷凍脳切片（正中矢状面から１ミリメートル）を、アミロイドに対する抗体、活性星状細胞（ＧＦＡＰ）に対するマーカー、及び活性小膠細胞（ＣＤ１１ｂ）に対するマーカーを用いて３回染色した。蛍光は、ニコンＡ１スペクトル共焦点顕微鏡で捕えた。ＧＦＡＰ及びＣＤ１１ｂ染色の平均強度を定量化するために、前頭皮質の一部と海馬の一部を包含する矢状切片を使用した。図１４に、画像の一例を示す。
【０６１８】
手短に、脳を２ｍｍの矢状切片に区分し、２０％のショ糖に入れた。それから、試験のすべての動物切片を採集するまで、切片は４℃で保管した。すべての試料を採集した後、組織を（すばやくドライアイスで冷凍し）ＯＣＴ内に取り付け、ライカＣＭ３０５０クライオスタット上で２０μｍに区分した。スライドは、室温で一晩中乾燥させて、−２０℃のフリーザー内で保管した。それから、用意した切片を、標準ＩＨＣ染色プロトコルに従って染色した。
【０６１９】
染色された切片の蛍光は、ニコンＡ１スペクトル共焦点顕微鏡で、ＡｌｘａＦｌｕｏｒ４０５、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８及びＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５６８に対応する三つのチャネルを使用して画像化した。そのシステムを、ニコンＴｉ２０００Ｅ広視野、逆位、蛍光顕微鏡に取り付けた。取得及び分析を制御するために、ＮＩＳエレメント画像処理ソフトウェアを使用した。画像をキャプチャするために、２０×倍率の対物レンズを使用した。定量分析のために、前頭皮質及び海馬の一部を含む５１２×５１２画像を個々にキャプチャした。画像定量化は、ニコンのエレメントＡＲソフトウェアで行い、（ＧＦＡＰ及びＣＤ１１ｂに対応する）合計及び平均強度値を、各画像に対して決定した。
【０６２０】
結果は、ＧＦＡＰまたはＣＤ１１ｂのいずれの比較にも、Ｔｇ−ＰＢＳ群が、Ｔｇ−低あるいはＴｇ−高群に比べ、統計学的に有意でなかったことを示す（表８０）。ＧＦＡＰ染色の平均強度は、数パーセントのみの違いで、すべての三つの群でほぼ同じであった（表８０、図１３Ａ）。ＣＤ１１ｂ染色の平均強度は、低用量ＩＮ  ＩｇＧで１７％減少し（ｐ＝０．７４１）、この減少のマグニチュードは、高用量ＩＮ  ＩｇＧで４７％（ｐ＝０．３７９）と、より大きかった（表８０、図１３Ｂ）。
【０６２１】
（表８０）ＧＦＡＰ及びＣＤ１１ｂ染色の結果
0006379113.tif 000098
【０６２２】
炎症マーカー、ＧＦＡＰ及びＣＤ１１ｂに関するＴｇ２５７６マウス脳の免疫蛍光染色は、生理食塩水及び低または高ＩＮ  ＩｇＧ治療群間の有意差を明らかにしなかった。この分析の統計的検出力は、利用可能な、生理食塩水処置Ｔｇマウス数が少なかったことに制限された。ＧＦＡＰ抗体を使用しての星状細胞染色に対して取得した値は、低または高ＩＮ  ＩｇＧ治療のいずれに関しても、定量化において全く変化がないことを明らかにした（表８０）。有意性は達成されなかったが、ＣＤ１１ｂに対する抗体を使用した小膠細胞染色には、明らかな減少があった。ＣＤ１１ｂマーカーの平均強度は、低用量ＩＮ  ＩｇＧで１７％減少し、高用量ＩＮ  ＩｇＧで４７％減少した（表８０）。
【０６２３】
この試験では、ＧＦＡＰ、星状細胞活性化マーカーは、二つの治療ＩｇＧ濃度のいずれでも変えられることはなかった。この結果は、ＡＰＰ／ＰＳ１ｄＥ９マウスのＩＶＩＧ治療が、ＧＦＡＰの発現に有意な影響を与えることはなかったことを示す以前の研究と一貫している（ＰｕｌｉＬ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１２；９：１０５．）。この試験のＣＤ１１ｂ、小膠細胞活性化マーカーは、タンパク質発現における用量依存減少を示した。しかし、低用量あるいは高用量値のいずれも、統計学的に有意なものに至っていない。上記のＡＰＰ／ＰＳ１ｄＥ９試験では、Ｐｕｌｉ ｅｔ．ａｌ．（同上）は、小膠細胞マーカーＣＤ４５における有意な減少、及び静脈内ＩｇＧ治療による小膠細胞マーカーＩｂａ１の上昇を発見している。Ｍａｇｇａ，ｅｔ．ａｌ．（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１０；７：９０）も、ＩＶＩＧが、星状細胞が関与するメカニズムを介してではなく小膠細胞が関与するメカニズムを介して、ＡＰＰ／ＰＳ１マウスモデルで機能することを発見した。この試験で確認した影響は、統計学的有意性に達しなかったが、結果は、ＩｇＧが小膠細胞調整を介してＣＮＳの炎症性に影響を与えるメカニズムを、確実に支持している。
【図１Ａ】
0006379113.tif 000099
【図１Ｂ】
0006379113.tif 000100
【図１Ｃ】
0006379113.tif 000101
【図１Ｄ】
0006379113.tif 000102
【図１Ｅ】
0006379113.tif 000103
【図１Ｆ】
0006379113.tif 000104
【図１Ｇ】
0006379113.tif 000105
【図２Ａ】
0006379113.tif 000106
【図２Ｂ】
0006379113.tif 000107
【図３Ａ】
0006379113.tif 000108
【図３Ｂ】
0006379113.tif 000109
【図３Ｃ】
0006379113.tif 000110
【図３Ｄ】
0006379113.tif 000111
【図３Ｅ】
0006379113.tif 000112
【図４】
0006379113.tif 000113
【図５】
0006379113.tif 000114
【図６Ａ】
0006379113.tif 000115
【図６Ｂ】
0006379113.tif 000116
【図７】
0006379113.tif 000117
【図８Ａ】
0006379113.tif 000118
【図８Ｂ】
0006379113.tif 000119
【図８Ｃ】
0006379113.tif 000120
【図９Ａ】
0006379113.tif 000121
【図９Ｂ】
0006379113.tif 000122
【図９Ｃ】
0006379113.tif 000123
【図１０Ａ】
0006379113.tif 000124
【図１０Ｂ】
0006379113.tif 000125
【図１０Ｃ】
0006379113.tif 000126
【図１１】
0006379113.tif 000127
【図１２Ａ】
0006379113.tif 000128
【図１２Ｂ】
0006379113.tif 000129
【図１２Ｃ】
0006379113.tif 000130
【図１２Ｄ】
0006379113.tif 000131
【図１２Ｅ】
0006379113.tif 000132
【図１２Ｆ】
0006379113.tif 000133
【図１３】
0006379113.tif 000134
【図１４】
0006379113.tif 000135