(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
フトモモ科ミルキア属（Ｍｙｒｔａｃｅａｅ  Ｍｙｒｃｉａ）の植物又はその抽出物を有効成分とし、前記植物がムルタ・カベルーダ（Ｍｙｒｃｉａ  ｂｒａｃｔｅａｔａ）である、チロシナーゼ阻害剤及び／又はメラニン産生抑制剤。
【請求項２】
前記抽出物が水、アルコールまたはこれらの混合溶媒による抽出物である、請求項１に記載のチロシナーゼ阻害剤及び／又はメラニン産生抑制剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のチロシナーゼ阻害剤及び／又はメラニン産生抑制剤を配合してなる美白剤。
【請求項４】
請求項１又は２に記載のチロシナーゼ阻害剤及び／若しくはメラニン産生抑制剤、又は請求項３に記載の美白剤を配合してなる皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は美白剤に関する。さらに詳しくは、フトモモ科（Ｍｙｒｔａｃｅａｅ）ミルキア属（Ｍｙｒｃｉａ）、特に好ましくはムルタ・カベルーダ（Ｍｙｒｃｉａ  ｂｒａｃｔｅａｔａ）の植物またはその抽出物であるメラニン産生抑制剤及び/又はチロシナーゼ阻害剤とこれを含有する美白用の医薬組成物、化粧料組成物、並びに食品などに関する。
【背景技術】
【０００２】
加齢に伴うシミ、ソバカスや日焼け後の皮膚色素沈着は、皮膚内に存在する色素細胞（メラノサイト）の活性化によりメラニン産生が著しく亢進した結果として生ずるものであり、中高年齢層における肌の悩みの一つになっている。
【０００３】
一般に、メラニンは色素細胞の中で生合成される酵素であるチロシナーゼの働きによって、チロシンからドーパ、ドーパからドーパキノンに変化し、ついで５,６−ジヒドロキシインドフェノール等の中間体を経て形成されるものとされている。従って、皮膚色素沈着症等を予防・治療するためには、メラニン産生過程を阻害することが有効である。
【０００４】
このような考えに基づき、従来から種々の美白成分が提案されている。例えば、チロシナーゼ活性を阻害してメラニン産生を抑制するものとして、コロイド硫酸やグルタチオンに代表される硫黄化合物等、コウジ酸、アルブチンなどが知られている。
【０００５】
このうち特に、コウジ酸及びその誘導体はチロシナーゼ阻害剤、メラニン産生抑制剤として、美白用化粧料に使用されてきた（特許文献１−３参照）。しかし近年になって、コウジ酸が発がん性及び遺伝毒性を有する可能性が指摘され、これに替わる安全なチロシナーゼ阻害剤、メラニン産生抑制剤が求められている。
【０００６】
さらに、美白用化粧料においては、皮膚に対する低刺激性の要求や天然指向を反映して、植物の抽出物中にメラニン産生抑制作用を有するものを見いだそうとする試みがなされている（特許文献４−８参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特公昭５６−１８５６９号公報
【特許文献２】特公昭６０−９７２２号公報
【特許文献３】特公昭６０−１０００５号公報
【特許文献４】特公昭６１−１０４４２号公報
【特許文献５】特公平５−２７６０５号公報
【特許文献６】特公平５−８７４８２号公報
【特許文献７】特許第５１４９５４８号
【特許文献８】特許第４９７５０６９号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、上述のような現状に鑑み、安全性及び皮膚官能性に優れ、高いチロシナーゼ阻害作用及び／又はメラニン産生抑制作用を有する新規美白剤を提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、上記課題の解決のため、種々の天然物を探索し、フトモモ科ミルキア属の植物に強いチロシナーゼ阻害作用及びメラニン産生抑制作用があることを初めて見出し、本願発明を完成するに至った。
【００１０】
本発明は、以下のチロシナーゼ阻害剤及び／又はメラニン産生抑制剤を提供するものである。
１．フトモモ科ミルキア属の植物又はその抽出物を有効成分とするチロシナーゼ阻害剤及び／又はメラニン産生抑制剤。
２．１の植物がムルタ・カベルーダ（Ｍｙｒｃｉａ  ｂｒａｃｔｅａｔａ）であるチロシナーゼ阻害剤及び／又はメラニン産生抑制剤。
３．前記抽出物が水、アルコールまたはこれらの混合溶媒による抽出物である、１~２に記載のチロシナーゼ阻害剤及び／又はメラニン産生抑制剤。
４．前期記載のアルコールがエタノールであることを特徴とする１〜３に記載のチロシナーゼ阻害剤及び／又はメラニン産生抑制剤。
５．前期記載の溶媒のエタノール濃度が１０〜１００容量％であることを特徴とする１〜４に記載のチロシナーゼ阻害剤及び／又はメラニン産生抑制剤。
６．１〜５を配合してなる美白剤。
７．１〜６を配合してなる皮膚外用剤。
【発明の効果】
【００１１】
皮膚の着色の原因となるメラニン色素は、皮膚組織中の色素細胞（メラノサイト）で生
成される。皮膚のシミやソバカス等の色素沈着は、日光からの紫外線暴露による刺激やホ
ルモン異常、または遺伝的要因等が原因となって、色素細胞が活性化された結果、メラニ
ン色素が異常沈着して発生するものと考えられている。通常、皮膚組織の代謝（ターンオ
ーバー）によりメラニンは代謝されるが、加齢に伴う皮膚組織の代謝の低下なども、色素
沈着の原因となる。
【００１２】
本発明において使用されるフトモモ科ミルキア属の植物またはその抽出物、例えばムルタ・カベルーダまたはその抽出物は、原産地ブラジルで煎剤として使用されている安全性の高い素材である。ムルタ・カベルーダは、後述する実験例で示すように、メラニン合成に関わる酵素チロシナーゼに対して、阻害作用が知られているアルブチンよりも優れた阻害活性を示し、メラニン産生を抑制する作用を有する事から、美白（色素沈着やくすみの改善）作用を有する。このため、ムルタ・カベルーダはチロシナーゼ阻害剤、メラニン生成抑制剤、美白剤の有効成分として有用であるとともに、美白の効果を目的とする皮膚外用剤（美白外用剤）の有効成分として有用である。
【００１３】
本発明のチロシナーゼ阻害剤、メラニン生成抑制剤、美白剤を含む美白外用剤は、安全で、優れた美白作用を有し、日焼け後の色素沈着、シミ、ソバカス、紅斑等の淡色化、くすみを目立たなくさせるなど、美肌効果を有し、健康な肌を維持できるため、特に美白化粧料、美肌化粧料、スキンケア化粧料などとして有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明において、チロシナーゼ阻害作用及び／又はメラニン産生抑制作用を有する有効成分は、フトモモ科ミルキア属の植物に由来し、これら植物の抽出物が好ましく使用される。フトモモ科ミルキア属の植物としては、ムルタ・カベルーダ（Ｍｙｒｃｉａ  ｂｒａｃｔｅａｔａ）、マピシー（Ｍｙｒｃｉａ  ｌａｎｃｅｏｌａｔａ）、ゴヤベイラ・ブラーヴァ（Ｍｙｒｃｉａ  ｌｏｎｇｉｐｅｓ）、ペドラ・ウメ・カア（Ｍｙｒｃｉａ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）、ピタンガ・ミウーダ（Ｍｙｒｃｉａ  ｒｕｂｅｌｌａ）などが挙げられ、好ましくはムルタ・カベルーダが例示される。
【００１５】
ムルタ・カベルーダ（学名：Ｍｙｒｃｉａ  ｂｒａｃｔｅａｔａ、Ｍｕｌｔа‐ｃａｂｅｌｕｄａ、Ｍｙｒｔｕｓ  ｂａｃｔｅａｔａ、Ｇｏｉａｂｉｎｈａなどとしても知られている）は、フトモモ科ミルキア属（Ｍｙｒｔｕｓ  ｂｒａｃｔｅａｔａ）に属し、南米に分布する亜高木である。
【００１６】
ミルキア属の植物は周知であり、南米を中心に広く分布している。特によく知られているのはペドラ・ウメ・カア（Ｍｙｒｃｉａ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）で、ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害作用（特開２００８−２９７２３０）、５αリダクターゼ阻害作用（特開２００６−２５７０６０）、リパーゼ阻害作用（特開２００６−２５７０５８）、セリンプロテアーゼ活性阻害作用（特開２００１−２４０５５１）などが報告されている。また特開２００３−０５５２４６では、メラニン産生抑制作用剤としての使用が提案されているが、その効果についての報告はない。
【００１７】
ミルキア属に属する種のうち、ムルタ・カベルーダについては報告が少ない。提唱されている生物学的活性はいずれも民間療法において定着したもので、消化不良・胃弱に対する効果や子供の下痢止めなどの効果が期待されている。種々の天然物を探索した結果、意外にも、ムルタ・カベルーダにアルブチンを超える強いチロシナーゼ阻害作用及びメラニン産生抑制作用があることが発見された。
【００１８】
本発明で使用するフトモモ科ミルキア属の植物（例えばムルタ・カベルーダ）の抽出物とは、該植物の葉、樹皮（茎ないし幹）、花、実、根等の植物体の一部又は全植物体から抽出して得られるものである。植物がムルタ・カベルーダの場合、好ましくは葉、樹皮、花からの抽出物が好ましく例示される。抽出物の製造方法は特に限定されず、例えば、適当な抽出溶媒を用いて常温ないし加熱抽出したものが例示される。抽出溶媒としては、例えば、水、含水アルコール（例えば含水エタノール）、炭素数１〜４の低級アルコール（例えばメタノール、エタノール、ｎ-プロパノール、イソプロパノール）、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、酢酸エチルなどのエステル類、多価アルコール（エチレングリコール、１，３-ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテルなどのエーテル類、ヘキサンなどの有機溶媒が挙げられる。好ましくは、水、含水溶媒、或いは水混和性溶媒であり、特に好ましくは、水、エタノール、含水エタノールが挙げられる。含水エタノールの場合、エタノール濃度としては、制限されないものの、２０〜９０容量％、特に４０〜８０容量％を好適に挙げることができる。これらの溶媒は単独でも２種以上を混合して用いてもよい。
植物抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過等の処理をして用いてもよく、抽出液を蒸発乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物(粉末)として用いても良い。
【００１９】
本発明のチロシナーゼ阻害剤及び／又はメラニン産生抑制剤において、フトモモ科ミルキア属の植物の抽出物の配合量は、メラニン生成抑制作用を有する限り特に制限されないが、乾燥換算として、０．０００１〜１００重量％、好ましくは０．００１〜５０重量％、より好ましくは０．０１〜２５重量％を挙げることができる。
【００２０】
本発明のチロシナーゼ阻害剤及び／又はメラニン産生抑制剤は、メラニンの産生を抑制する作用を有し、美白剤の有効成分として、また美白の効果を目的とする化粧料の有効成分として、好適に使用することができる。
【００２１】
本発明の美白剤は、前述するチロシナーゼ及び／又はメラニン産生抑制剤を有効成分として含有することを特徴とする。当該美白剤に配合するメラニン生成抑制剤の割合は、チロシナーゼ及び／又はメラニン産生抑制剤のチロシナーゼ及び／又はメラニン産生抑作用に基づいて美白作用を有する限り特に制限されないが、通常、フトモモ科ミルキア属の植物またはそれらの抽出物の配合量に換算して（乾燥物換算）、０．０００５〜２０重量％、好ましくは０．００１〜１０重量％、より好ましくは０．０１〜１重量％である。
【００２２】
本発明の美白剤は、その形態を特に問うものではなく、例えば粉末状、顆粒状、錠剤状、カプセル状などの固形製剤形態を有していてもよいし、また液状、懸濁液状、乳液状などの液状製剤形態を有していてもよい。
【００２３】
本発明の美白剤は、フトモモ科ミルキア属の植物の抽出物のチロシナーゼ阻害活性に基づいて、メラニンの産生を抑制する作用を有するため、美白（シミやくすみの予防および低減を含む）を効果とする皮膚外用剤（美白外用剤）、特に美白化粧料の有効成分として、好適に使用することができる。
【００２４】
本発明の美白剤には、フトモモ科ミルキア属の植物あるいはこれらの抽出物以外に、従来公知の美白剤を組み合わせて配合してもよい。また、通常、化粧料に用いられる成分、例えば、保湿剤、皮膜剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色材、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００２５】
本発明の美白剤の剤型は、水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、油液系、ゲル系、軟
膏系、エアゾール系、水−油２層系、および水−油−粉末３層系等、幅広い剤型を採るこ
とができる。例えば、その形態として、化粧液、乳液、クリーム、ジェル、美容液、パック、マスク等を挙げることができる。
【００２６】
また本発明の美白剤は、美白の効果を目的とする皮膚外用剤、特に化粧料の有効成分としても使用することができる。この場合の美白剤の皮膚外用剤（好ましくは化粧料）に対する配合割合としては、皮膚外用剤が美白効果を発揮する限り特に制限されないが、フトモモ科ミルキア属の植物またはそれらの抽出物の配合量に換算して（乾燥物換算）、０．０００５〜２０重量％、好ましくは０．００１〜１０重量％、より好ましくは０．０１〜１重量％を挙げることができる。皮膚外用剤の形態は特に制限されず、例えば皮膚外用剤が基礎化粧品である場合、その形態として、化粧水、乳液、クリーム、ジェル、エッセンス、美容液、パック、マスク等が挙げられる。また、皮膚外用剤がメークアップ化粧品であれば、その形態として、ファンデーション、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラなどが挙げられる。その他の形態として、洗顔料、マッサージ用剤、クレンジング用剤、アフターシェーブローション、プレシェーブローション、シェービングクリーム、ボディソープ、ボディークリーム、石けん等を挙げることができる。
【００２７】
以下、本発明を実施例、試験例、および処方例により詳細に説明するが、これらの実施例等によって本発明は何ら限定されるものではない。
【実施例】
【００２８】
（実施例１）  ムルタ・カベルーダの含水エタノール抽出物の調製
乾燥した植物体５gに、８０容量％の含水エタノール（エタノール：精製水＝８：２（ｖ／ｖ））を５０ｍｌ加え、室温で１晩振とう混和した。その後、回転数３，０００ ｒｐｍで１５分間遠心分離し上清を得た。得られた上清をロータリーエバポレーターに供し、エタノールをある程度除いた後に、凍結乾燥し含水エタノール抽出物（５８６ ｍｇ）を得た。
【００２９】
（実施例２）  ペドラ・ウメ・カアの含水エタノール抽出物の調製
乾燥した植物体５gに、８０容量％の含水エタノール（エタノール：精製水＝８：２（ｖ／ｖ））を５０ｍｌ加え、室温で１晩振とう混和した。その後、回転数３，０００ ｒｐｍで１５分間遠心分離し上清を得た。得られた上清をロータリーエバポレーターに供し、エタノールをある程度除いた後に、凍結乾燥し含水エタノール抽出物（５９０ ｍｇ）を得た。
【００３０】
（試験例1）  チロシナーゼ阻害活性の測定
実施例１、２で調製したムルタ・カベルーダ、ペドラ・ウメ・カア抽出物を試験試料として、次の方法でチロシナーゼ阻害活性を測定した。
（１）試験方法
プレートは、チロシナーゼ阻害活性測定用と細胞毒性確認用の2枚を作成した。９６ウェルプレートに、２０ ｎｇ／ｍｌ ＭＳＨ ／ ＤＭＥＭ培地（ギブコ社）に懸濁したマウスメラノーマＢ１６細胞を５×１０３ ｃｅｌｌｓ／ウェルの割合で播種し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で24時間インキュベートした。その後、被験試料としてムルタ・カベルーダ抽出物、ペドラ・ウメ・カア抽出物、アルブチン、コントロールとして溶媒（ＤＭＳＯ）を加え、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で３日間培養した。培養後、１枚のプレートは、上清を除去し、ＰＢＳでウェルを洗浄後、１％ＴＲＩＴＯＮ ／ ＰＢＳ溶液、１．９７ｍｇ／ｍｌ Ｌ−ＤＯＰＡを９：１の割合で添加し、添加０、１時間後のＡｂｓ４９２を測定し、チロシナーゼ阻害活性の算出に用いた。残りの１枚のプレートはＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏキット（プロメガ社）を用いた生存細胞測定に用いた。
【００３１】
細胞生存率（％）を下記の計算式より導いた。
（数１）
細胞生存率（％）=（［測定値］Ｂ−［測定値］Ｓ）／［測定値］Ｂ×１００
［測定値］Ｂ：コントロール測定値
［測定値］Ｓ：被験試料測定値
【００３２】
チロシナーゼ阻害活性（％）を下記の計算式より導いた。また得られた阻害活性（％）から各被験試料のＩＣ５０を求めた。
【００３３】
（数２）
チロシナーゼ阻害活性（％）=（［測定値］Ｂ−［測定値］Ｓ）／［測定値］Ｂ×１００
［測定値］Ｂ：コントロール測定値（１時間）―コントロール測定値（０時間）
［測定値］Ｓ：被験試料測定値（１時間）―被験試料測定値（０時間）
【００３４】
（２）試験結果
【００３５】
終濃度３００μｇ／ｍｌでサンプルを添加した際のチロシナーゼ阻害活性と細胞生存率を表１に示す。
【表１】
0006378969.tif 000002
【００３６】
各被験試料のＩＣ５０値を表１に示す。
【表２】
0006378969.tif 000003
【００３７】
上記の結果から、本発明のムルタ・カベルーダ抽出物は、ペドラ・ウメ・カア抽出物のような強い細胞毒性を示さず、且つ美白剤として一般的に使用されているアルブチンより強いチロシナーゼ阻害活性を有することが明らかになった。
【００３８】
（試験例２）  細胞のメラニン産生に対する抑制作用
実施例１で調製したムルタ・カベルーダ抽出物を試験試料として、メラニン生成抑制作用を測定した。
（１）試験方法
細胞培養用１０ｃｍディッシュに、ＤＭＥＭ培地（ギブコ社）に懸濁したマウスメラノーマＢ１６細胞を３×１０５ ｃｅｌｌｓ播種し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で２４時間インキュベートした。その後、被験試料としてムルタ・カベルーダ抽出物、アルブチン、コントロールとして溶媒（ＤＭＳＯ）を加え、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で３日間培養した。培養後、上清を除去し、ＰＢＳでウェルを洗浄後、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液（ギブコ社）を加えて細胞を剥離させ、得られた細胞懸濁液をチューブに回収した。得られた細胞懸濁液のうち２０μｌをＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏキット（プロメガ社）を用いた生存細胞測定に供した。
細胞懸濁液を回収したチューブを１５，０００ｒｐｍにて１０分間遠心し、細胞をチューブの底に集積した後、上清を除いた。細胞数に対応する量の１Ｎ ＮａＯＨを加え、９５℃で６０分間インキュベートしてメラニンを抽出し、写真を撮影後４０５ ｎｍの吸光度を測定し、測定値（被験試料測定値、コントロール測定値）とした。同時に１Ｎ ＮａＯＨの吸光度を測定し、バックグラウンド値とした。
【００３９】
得られた測定値から、下式を用いて、各被験試料およびコントロールについてメラニン産生抑制率（％）を求めた。
（数３）
メラニン生成抑制率（％）＝
｛（コントロールの吸光度−被験試料の吸光度）／コントロールの吸光度 ｝× １００
被験試料の吸光度：被験試料測定値−バックグラウンド値  
コントロールの吸光度：コントロール測定値−バックグラウンド値
【００４０】
（２）試験結果
結果を表２に示す。
【００４１】
【表３】
0006378969.tif 000004
【００４２】
上記の結果から、本発明のムルタ・カベルーダ抽出物は、メラニン生成抑制作用を有することが明らかになった。このことから、これらムルタ・カベルーダ抽出物はメラニン生成抑制作用に基づいて、メラニン生成抑制剤として、また美白剤、および美白を効果とする化粧料の有効成分として有用であると考えられる。
【００４３】
処方例１：化粧水形態を有する美白剤
以下の表４に示される各成分を用い、常法に従い化粧水形態を有する美白剤を調製した。
【００４４】
【表４】
0006378969.tif 000005
【００４５】
処方例２：美容液形態を有する美白剤
以下の表５に示される各成分を用い、常法に従い美容液形態を有する美白剤を製造した。
【００４６】
【表５】
0006378969.tif 000006
【００４７】
処方例３：乳液形態を有する美白剤
以下の表６に示される各成分を用い、常法に従い乳液を製造した。
【００４８】
【表６】
0006378969.tif 000007
【００４９】
処方例４：クリーム形態を有する美白剤
以下の表７に示される各成分を用い、常法に従いクリームを製造した。
【００５０】
【表７】
0006378969.tif 000008
【００５１】
処方例５：バスソルト形態を有する美白剤
以下の表８に示される各成分を用い、常法に従いバスソルトを製造した。
【００５２】
【表８】
0006378969.tif 000009
【００５３】
処方例６：茶葉
ムルタ・カベルーダの葉を必要に応じて滅菌加工をした後、短冊状、刻み状、粉末あるいは顆粒に粉砕加工した後、大袋、ティーパック、スティックあるいは三方シールに充填し包装した。また、滅菌処理後に焙煎工程を加えてもよい。
処方例７：錠剤
以下の表９に示される各成分を用い、常法に従い錠剤を製造した。
【００５４】
【表９】
0006378969.tif 000010
【００５５】
処方例８：カプセル剤
以下常法に従い、表１０に示される各成分を混合し、カプセルに充填し、カプセル製剤を得た。
【００５６】
【表１０】
0006378969.tif 000011