(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
白扁豆抽出物を有効成分として含む非アルコール性脂肪肝疾患の予防または改善のための健康機能食品組成物。
【請求項２】
前記白扁豆抽出物は、熱水抽出物であることを特徴とする、請求項１に記載の非アルコール性脂肪肝疾患の予防または改善のための健康機能食品組成物。
【請求項３】
前記白扁豆抽出物は、組成物総重量に対して０．１ないし１０重量％であることを特徴とする、請求項１または２に記載の非アルコール性脂肪肝疾患の予防または改善のための健康機能食品組成物。
【請求項４】
前記白扁豆抽出物は、肝組職の中性脂肪含量を低減させることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の非アルコール性脂肪肝疾患の予防または改善のための健康機能食品組成物。
【請求項５】
前記非アルコール性脂肪肝疾患は、非アルコール性単純性脂肪肝、非アルコール性脂肪肝炎及び非アルコール性肝硬変から選択されたいずれか一つであることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の非アルコール性脂肪肝疾患の予防または改善のための健康機能食品組成物。
【請求項６】
白扁豆抽出物を有効成分として含む、非アルコール性脂肪肝疾患の予防または治療のための薬学組成物。
【請求項７】
前記白扁豆抽出物は、熱水抽出物であることを特徴とする、請求項６に記載の非アルコール性脂肪肝疾患の予防または治療のための薬学組成物。
【請求項８】
前記白扁豆抽出物は、組成物総重量に対して０．１ないし１０重量％であることを特徴とする、請求項６または７に記載の非アルコール性脂肪肝疾患の予防または治療のための薬学組成物。
【請求項９】
前記白扁豆抽出物は、肝組職の中性脂肪含量を低減させることを特徴とする、請求項６〜８のいずれか１項に記載の非アルコール性脂肪肝疾患の予防または治療のための薬学組成物。
【請求項１０】
前記非アルコール性脂肪肝疾患は、非アルコール性単純性脂肪肝、非アルコール性脂肪肝炎及び非アルコール性肝硬変から選択されたいずれか一つであることを特徴とする、請求項６〜９のいずれか１項に記載の非アルコール性脂肪肝疾患の予防または治療のための薬学組成物。
【請求項１１】
前記有効成分以外に薬学的に許容可能な食塩水、滅菌水、リンゲル液、緩衝食塩水、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エタノール、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、澱粉、アカシアゴム、燐酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微細結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、滑石、ステアリン酸マグネシウム及びミネラルオイルから選択された１種以上の担体をさらに含むことを特徴とする、請求項６〜１０のいずれか１項に記載の非アルコール性脂肪肝予防または治療のための薬学組成物。
【請求項１２】
前記有効成分以外に薬学的に許容可能な抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、希釈剤、界面活性剤、結合剤、潤滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁液剤及び保存剤から選択された１種以上の補助剤をさらに含むことを特徴とする、請求項６〜１１のいずれか１項に記載の非アルコール性脂肪肝予防または治療のための薬学組成物。
【請求項１３】
白扁豆抽出物を有効成分として含む、高脂肪食餌によって上昇した体重を低減させるための組成物。
【請求項１４】
白扁豆抽出物を有効成分として含む、人間を除いた動物の非アルコール性脂肪肝疾患の予防または治療のための獣医学的組成物。
【請求項１５】
白扁豆抽出物を有効成分として含む、動物の非アルコール性脂肪肝疾患の予防または改善のための飼料添加剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、白扁豆（Ｄｏｌｉｃｈｏｓ  ｌａｂｌａｂ  Ｌｉｎｎｅ）抽出物を有効成分として含む非アルコール性脂肪肝疾患の予防または改善のための健康機能食品組成物及び薬学組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
韓国内の肝疾患死亡率は人口十万人当り２３．５人で非常に高く、４０代の死亡原因の１位（４１．１人／１０万人）、５０代の死亡原因の２位（７２．４人／１０万人）、３０代の死亡原因の３位（１０人／１０万人）を占めるなど、肝疾患は韓国中年層人口の主要死亡原因となっている。
【０００３】
前記肝疾患のうち脂肪肝は、正常細胞内には存在しない中性脂肪が肝細胞内に非正常的に沈着して現れる現象をいう。正常肝は約５％が脂肪組職で構成されており、中性脂肪、脂肪酸、リン脂質、コレステロール及びコレステロールエステルが脂肪の主要成分であるが、一応脂肪肝が発生すれば、ほとんどの成分が中性脂肪に入れ替えられ、中性脂肪の量が肝重量の５％以上になれば脂肪肝と診断される。脂肪肝が悪くなって肝細胞内の脂肪の塊が大きくなれば、核を含む細胞の重要な構成成分が一側に偏って肝細胞の機能が低下し、細胞内に蓄積された脂肪のため膨脹した肝細胞が肝細胞の間にある微細血管及びリンパ腺を圧迫して肝内の血液及びリンパ液の循環に障害が生じる。このようになれば、肝細胞に酸素及び栄養が適宜に供給されなくなって肝機能が低下する。
【０００４】
非アルコール性脂肪肝疾患（ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ、ＮＡＦＬＤ）は、アルコールによる肝損傷ではなく脂肪酸が中性脂肪の形で肝の実質細胞内に５％以上蓄積された場合と定義される。病理学的には、単純脂肪肝と炎症を伴う脂肪肝炎とに分類されるが、長期間放置すれば、肝炎、肝纎維、肝硬変などの深刻な肝疾患に移行できる。韓国内でも生活様式の変化につれて非アルコール性肝疾患の発生頻度が増加しつつある。
【０００５】
一方、白扁豆は、いわゆる、フジマメまたは鵲豆と呼ばれ、葉は三出複葉で互生しており、托葉は小さくて三角上欄型であり、小葉片は広い卵形で葉が尖っており、茎の近くにある葉は広い楔形あるいは切れ刃形状をしており、エッジがのっぺりしていて両面に毛が疎らに生えている。花は白い蝶形であり、２ないし５個の種子も白色を帯びている。
【０００６】
百偏豆は昔から民間療法で健胃化湿、和中消暑に効能があると伝わっており、韓国登録特許第０３１６２６９号にフジマメ葉のメタノール抽出物が生理活性を増大させる効能について開示しており、韓国登録特許第０９２９９７９号に百偏豆を含む漢方薬組成物が抗癌剤の投与で誘導された肝腸と腎臟の毒性を低減させる効果について開示しているが、非アルコール性脂肪肝への効能に関する研究は未だ報告されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は前記のような要求に応じて導出されたものであり、本発明の有効成分である白扁豆抽出物を処理した肝細胞で中性脂肪の含量が効果的に減少することを確認した上で本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記の技術的課題を解決するために本発明は、白扁豆抽出物を有効成分として含む非アルコール性脂肪肝疾患の予防または改善のための健康機能食品組成物を提供する。
【０００９】
また本発明は、白扁豆抽出物を有効成分として含む非アルコール性脂肪肝疾患の予防または治療のための薬学組成物を提供する。
【００１０】
また本発明は、白扁豆抽出物を有効成分として含む高脂肪食餌によって上昇した体重または血糖を低減させるための組成物を提供する。
【００１１】
また本発明は、白扁豆抽出物を個体に投与する工程を含む非アルコール性脂肪肝疾患の予防または治療方法を提供する。
【００１２】
また本発明は、白扁豆抽出物を有効成分として含む人間を除いた動物の脂肪肝疾患の予防または治療のための獣医学的組成物を提供する。
【００１３】
また本発明は、白扁豆抽出物を有効成分として含む動物の脂肪肝疾患の予防または改善のための飼料添加剤を提供する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明は、白扁豆抽出物を有効成分として含む非アルコール性脂肪肝疾患（ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ、ＮＡＦＬＤ）の予防または改善のための健康機能食品組成物に係り、本発明の組成物は、中性脂肪の蓄積を抑制することで非アルコール性脂肪肝疾患の予防または改善のための健康機能性食品及び医薬品として有効に用いられる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）にオレイン酸塩及びパルミチン酸塩が２：１の濃度比で混合している遊離脂肪酸を濃度別（０．１２５、０．２５、０．５及び１．０ｍＭ）に処理した後、中性脂肪の含量を測定した結果である。（Ａ）は、ナイルレッド（アディポレッド）で染色した後で中性脂肪の含量を確認した結果であり、（Ｂ）は、オイルレッドＯで染色した後で中性脂肪のイメージを獲得した結果である。対照区は、遊離脂肪酸が含まれていない５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ溶液を処理したものである。
【図２】肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）で１ｍＭの遊離脂肪酸を処理して生成された中性脂肪が陽性対照群である甘草フィトソム（１８  ｂｅｔａ−ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）によって減少した程度を確認した結果であって、ナイルレッドで染色した後で中性脂肪の含量を確認した図面である。対照区は、遊離脂肪酸が含まれていない５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ溶液を処理したものである。
【図３】肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）で１ｍＭの遊離脂肪酸を処理して生成された中性脂肪が陽性対照群である甘草フィトソム（１８  ｂｅｔａ−ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）によって減少した程度を確認した結果であって、オイルレッドＯで染色した後で中性脂肪のイメージを獲得した結果である。対照区は、遊離脂肪酸が含まれていない５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ溶液を処理したものである。
【図４】肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）で１ｍＭの遊離脂肪酸を処理して生成された中性脂肪が白扁豆の熱水抽出物によって減少した程度を確認したナイルレッド染色のアッセイ結果である。対照区は、遊離脂肪酸が含まれていない５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ溶液を処理したものである。
【図５】肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）で１ｍＭの遊離脂肪酸を処理して生成された中性脂肪が白扁豆の熱水抽出物によって減少した程度を確認したオイルレッドＯ染色のアッセイから獲得した中性脂肪のイメージである。対照区は、遊離脂肪酸が含まれていない５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ溶液を処理したものである。
【図６】肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）で１ｍＭの遊離脂肪酸を処理して生成された中性脂肪が白扁豆のエタノール抽出物によって減少した程度を確認したナイルレッド染色のアッセイ結果である。対照区は、遊離脂肪酸が含まれていない５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ溶液を処理したものである。
【図７】肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）で１ｍＭの遊離脂肪酸を処理して生成された中性脂肪が白扁豆のエタノール抽出物によって減少した程度を確認したオイルレッドＯ染色のアッセイから獲得した中性脂肪のイメージである。対照区は、遊離脂肪酸が含まれていない５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ溶液を処理したものである。
【図８】本発明の一実施形態による白扁豆の熱水抽出物の細胞毒性を確認するために施したＭＴＳのアッセイ結果である。対照区は、遊離脂肪酸が含まれていない５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ溶液を処理したものである。
【図９】本発明の一実施形態による白扁豆の熱水抽出物と、対照群としての大豆抽出物、黒豆抽出物、緑豆抽出物及び豌豆抽出物とが中性脂肪の含量を低減させる程度を比べたナイルレッド染色のアッセイ結果である。対照区は、遊離脂肪酸が含まれていない５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ溶液を処理したものであり、１ｍＭ遊離脂肪酸を処理した時の中性脂肪の含量を１００％の基準として相対的な値を示したものである。
【図１０】本発明の一実施形態による白扁豆の熱水抽出物が高脂肪食餌によるマウスの体重の増加（Ａ）及び肝組織重量の増加（Ｂ）に及ぼす影響を確認した結果である。ＣＯＮは、正常対照群であり、ＨＦＤは、高脂肪食餌の摂取によって脂肪肝が引き起こされた高脂肪食餌群であり、ＨＦＤ＋ＤＬＬ−Ｅｘは、高脂肪食餌と２５、５０、１００（ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）の白扁豆の熱水抽出物とを共に摂取した実験群である。（Ａ）で＊、＊＊は、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）対比高脂肪食餌と白扁豆の熱水抽出物とを共に摂取した群の体重が有意的に減少したことを意味し、（Ｂ）で＃＃は、正常群（ＣＯＮ）対比高脂肪食餌群（ＨＦＤ）の肝組織重量が有意的に増加したことを意味し（ｐ＜０．０１）、＊、＊＊は、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）対比高脂肪食餌と白扁豆の熱水抽出物とを共に摂取した実験群（ＨＦＤ＋ＤＬＬ−Ｅｘ）の肝組織重量が有意的に減少したことを意味する。Ｍ１００は、陽性対照群であって、高脂肪食餌と共にミルクシスル抽出物（１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を投与した群である。
【図１１】本発明の一実施形態による２５、５０、１００（ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）の白扁豆の熱水抽出物が高脂肪食餌によるマウスの総脂肪（Ａ）、腹部皮下脂肪（Ｂ）、副睾丸脂肪組職（Ｃ）、小腸脂肪組職（Ｄ）の重量に及ぼす影響を確認した結果である。＃＃は、正常群（ＣＯＮ）対比高脂肪食餌群（ＨＦＤ）の総脂肪（Ａ）、腹部皮下脂肪（Ｂ）、副睾丸脂肪組職（Ｃ）、小腸脂肪組職（Ｄ）の重量が有意的に増加したことを意味し（ｐ＜０．０１）、＊、＊＊は、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）対比高脂肪食餌と白扁豆の熱水抽出物とを共に摂取した実験群（ＨＦＤ＋ＤＬＬ−Ｅｘ）の総脂肪（Ａ）、腹部皮下脂肪（Ｂ）、副睾丸脂肪組職（Ｃ）、小腸脂肪組職（Ｄ）の重量が有意的に減少したことを意味する。Ｍ１００は、陽性対照群であって、高脂肪食餌と共にミルクシスル抽出物（１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を投与した群である。
【図１２】本発明の一実施形態による２５、５０、１００（ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）の白扁豆の熱水抽出物が高脂肪食餌による血液内のＡＬＴ及びＡＳＴ増加を低減させるかどうかを確認した結果である。＃＃は、正常群（ＣＯＮ）対比高脂肪食餌群（ＨＦＤ）のＡＬＴ（Ａ）及びＡＳＴ（Ｂ）が有意的に増加したことを意味し（ｐ＜０．０１）、＊、＊＊は、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）対比高脂肪食餌と白扁豆の熱水抽出物とを共に摂取した実験群（ＨＦＤ＋ＤＬＬ−Ｅｘ）のＡＬＴ（Ａ）及びＡＳＴ（Ｂ）が有意的に減少したことを意味する。Ｍ１００は、陽性対照群であって、高脂肪食餌と共にミルクシスル抽出物（１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を投与した群である。
【図１３】本発明の一実施形態による２５、５０、１００（ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）の白扁豆の熱水抽出物が高脂肪食餌による血液内の中性脂肪（Ａ）、総コレステロール（Ｂ）、低密度リポタンパク質（Ｃ）、遊離脂肪酸（Ｄ）の増加を低減させるかどうかを確認した結果である。＃＃は、正常群（ＣＯＮ）対比高脂肪食餌群（ＨＦＤ）の血液内中性脂肪（Ａ）、総コレステロール（Ｂ）、低密度リポタンパク質（Ｃ）、遊離脂肪酸（Ｄ）が有意的に増加したことを意味し（ｐ＜０．０１）、＊、＊＊は、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）対比高脂肪食餌と白扁豆の熱水抽出物とを共に摂取した実験群（ＨＦＤ＋ＤＬＬ−Ｅｘ）の血液内中性脂肪（Ａ）、総コレステロール（Ｂ）、低密度リポタンパク質（Ｃ）、遊離脂肪酸（Ｄ）が有意的に減少したことを意味する。Ｍ１００は、陽性対照群であって、高脂肪食餌と共にミルクシスル抽出物（１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を投与した群である。
【図１４】本発明の一実施形態による２５、５０、１００（ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）の白扁豆の熱水抽出物が高脂肪食餌による空腹血糖の増加を低減させるかどうかを確認した結果である。＃＃は、正常群（ＣＯＮ）対比高脂肪食餌群（ＨＦＤ）の空腹血糖が有意的に増加したことを意味し（ｐ＜０．０１）、＊、＊＊は、高脂肪食餌群（ＨＦＤ）対比高脂肪食餌と白扁豆の熱水抽出物とを共に摂取した実験群（ＨＦＤ＋ＤＬＬ−Ｅｘ）の空腹血糖が有意的に減少したことを意味する。Ｍ１００は、陽性対照群であって、高脂肪食餌と共にミルクシスル抽出物（１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を投与した群である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明は、白扁豆抽出物を有効成分として含む非アルコール性脂肪肝の予防または改善のための健康機能食品組成物に関する。
【００１７】
前記白扁豆抽出物は、当業界で公知の通常的な抽出溶媒を使える。望ましい抽出溶媒は、水、炭素数１ないし４の無水または含水の低級アルコール（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ノルマル・プロパノール、イソ・プロパノール及びノルマル・ブタノールなど）、前記低級アルコールと水との混合溶媒、アセトン、エチルアセテート、クロロホルム、１，３−ブチレングリコール、ヘキサン、ジエチルエーテル、またはブチルアセテートであり、さらに望ましくは、水またはエタノール、最も望ましくは水である。
【００１８】
前記水を用いて抽出する熱水抽出は、白扁豆重量に対して５ないし１０倍の体積ほど水を入れ、９０ないし１１０℃で２ないし３時間加熱して抽出することである。抽出溶液をろ過紙でろ過した後で凍結乾燥させて使うことが望ましいが、これに限定されるものではない。
また、エタノール抽出を行う場合、白扁豆重量に対して５ないし１０倍の体積ほど８０％エタノールを入れて、２０ないし２５℃の常温で２２ないし２４時間浸漬して抽出する。抽出溶液をろ過紙でろ過した後で凍結乾燥させて使うことが望ましいが、これに限定されるものではない。
【００１９】
前記白扁豆抽出物は、肝組職の中性脂肪含量を低減させることを特徴とし、前記非アルコール性脂肪肝疾患は、非アルコール性単純性脂肪肝、非アルコール性脂肪肝炎及び非アルコール性肝硬変から選択されたいずれか一つであることが特徴であるが、これに限定されるものではない。
【００２０】
前記白扁豆抽出物は組成物総重量に対して０．１ないし１０重量％であることが望ましいが、これに限定されるものではなく、前記本発明の組成物を非アルコール性脂肪肝疾患の予防または改善を目的として食品に添加して健康機能性食品を製造できるが、前記健康機能食品は特にこれに限定されるものではなく、健康機能性食品、栄養補助剤、営養剤、ファーマフード、健康食品、ニュ−トラシュティカル、デザイナーフード、食品添加剤などのあらゆる食品になりうるが、望ましくは、肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンデー類、スナック類、お菓子類、ピザ、ラーメン、ヌードル、ガム、アイスクリームを含む酪農製品、各種スープ、飲み物、お茶、ドリンク剤、アルコール飲料及びビタミン複合剤などである。この時、添加する方法は通常的な方法が適当に使われ、添加量は使用の目的（予防、健康または治療的処置）に応じて適宜に定められる。
【００２１】
前記本発明の組成物は有効成分以外の多様な成分をさらに含んでもよいが、これらの多様な成分は特にこれに限定されるものではなく、望ましくは、様々な営養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使われる炭酸化剤などである。また、嗜好性及び／または機能性を付け加えるために天然果物ジュース、果物飲料及び野菜飲料の製造のための果肉を含むことができ、これら成分は独立的にまたは組み合わせて使える。
【００２２】
また、本発明は白扁豆抽出物を有効成分として含む非アルコール性脂肪肝疾患の予防または治療のための薬学組成物に関する。
【００２３】
前記白扁豆抽出物は、当業界で公知の通常的な抽出溶媒を使える。望ましい抽出溶媒としては、水、炭素数１ないし４の無水または含水の低級アルコール（例：メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ノルマル・プロパノール、イソプロパノール及びノルマル・ブタノールなど）、前記低級アルコールと水との混合溶媒、アセトン、エチルアセテート、クロロホルム、１，３−ブチレングリコール、ヘキサン、ジエチルエーテル、またはブチルアセテートがあり、さらに望ましくは水またはエタノール、最も望ましくは水がある。
【００２４】
前記水を用いて抽出する熱水抽出の場合、白扁豆重量に対して５ないし１０倍の体積ほど水を入れ、９０ないし１１０℃で２ないし３時間加熱して抽出する。抽出溶液をろ過紙でろ過した後で凍結乾燥させて使うことが望ましいが、これに限定されるものではない。
【００２５】
また、エタノール抽出を行う場合、白扁豆重量に対して５ないし１０倍の体積ほど８０％エタノールを入れ、２０ないし２５℃の常温で２２ないし２４時間浸漬して抽出する。抽出溶液をろ過紙でろ過した後で凍結乾燥させて使うことが望ましいが、これに限定されるものではない。
【００２６】
前記白扁豆抽出物は、肝組職の中性脂肪含量を低減させることを特徴とし、前記非アルコール性脂肪肝疾患は、非アルコール性単純性脂肪肝、非アルコール性脂肪肝炎及び非アルコール性肝硬変から選択されたいずれか一つであることを特徴とするが、これに限定されるものではない。
【００２７】
本発明の薬学組成物は、薬学的に許容される担体を含むことができる。本発明の薬学組成物に含まれる薬学的に許容される担体は製剤時に通常的に用いられるものであって、食塩水、滅菌水、リンゲル液、緩衝食塩水、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エタノール、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、澱粉、アカシアゴム、燐酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微細結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、滑石、ステアリン酸マグネシウム及びミネラルオイルなどを含むが、これに限定されるものではない。
【００２８】
本発明の薬学的組成物は、前記成分以外に抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、希釈剤、界面活性剤、結合剤、潤滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁液剤または保存剤などをさらに含むことができる。
【００２９】
本発明の薬学的組成物は経口または非経口投与でき、望ましくは、経口投与方式で適用される。本発明の薬学的組成物の好適な投与量は製剤化方法、投与方式、患者の年齢、体重、性、病的状態、食べ物、投与時間、投与経路、排泄速度及び反応感応性のような要因によって多様に処方される。本発明の薬学的組成物の投与量は、望ましくは、大人基準として０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇである。
【００３０】
本発明の薬学的組成物は、当業者に容易に行われる方法によって薬学的に許容される担体及び／または賦形剤を用いて製剤化することで単位用量の形態で製造されるか、または多用量容器内に入れて製造される。この時、剤形はオイルまたは水性媒質中の溶液、懸濁液、シロップ剤または乳化液の形態であるか、またはエキス剤、酸剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤またはカプセル剤の形態であり、分散剤または安定化剤をさらに含むことができる。
【００３１】
また本発明は、白扁豆抽出物を有効成分として含む、高脂肪食餌によって上昇した体重または血糖を低減させるための組成物に関する。
【００３２】
また本発明は、白扁豆抽出物を個体に投与する工程を含む非アルコール性脂肪肝疾患の予防または治療方法に関する。
【００３３】
前記個体は、非アルコール性脂肪肝疾患を病む患者を始めとして非アルコール性脂肪肝疾患の可能性のある人間を含む全ての動物をいう。
【００３４】
また本発明は、白扁豆抽出物を有効成分として含む、人間を除いた動物の脂肪肝疾患の予防または治療のための獣医学的組成物に関する。
【００３５】
本発明の白扁豆抽出物を含む獣医学的組成物は、通常の方法による適宜な賦形剤及び希釈剤をさらに含むことができる。本発明の白扁豆抽出物を含む獣医学的組成物に含まれる賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸、ゼラチン、カルシウムフォスフェート、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレート、セタノール、ステアリルアルコール、流動パラフィン、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、メチルパラベン、プロピルパラベン及び鉱物油を挙げられる。
【００３６】
本発明による白扁豆抽出物を含む獣医学的組成物は、充填剤、抗凝血剤、潤滑剤、湿潤剤、香辛料、乳化剤、防腐剤などをさらに含むことができるが、本発明による獣医学的組成物は、動物に投与された後で活性成分の迅速及び持続的な、または遅延した放出を提供するように当業界で公知の方法を使って剤形化され、剤形は、酸剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、溶液、シロップ、エアロゾル、軟質または硬質ゼラチンカプセル、坐剤、滅菌注射溶液、滅菌外用剤などの形態であり得る。
【００３７】
本発明による獣医学的組成物は、動物の年齢、性別、体重によって変わるが、０．１ないし１００ｍｇ／ｋｇの量を１日１回ないし数回投与することができ、投与量は投与経路、疾病の程度、性別、体重、年齢などによって増減できる。よって、前記投与量はどの面から見ても本発明の範囲を限定するものではない。
【００３８】
また本発明は、白扁豆抽出物を有効成分として含む、動物の脂肪肝疾患の予防または改善のための飼料添加剤に関する。
【００３９】
前記飼料添加剤は、２０ないし９０重量％の白扁豆抽出物を含む高濃縮液、粉末または顆粒形態である。
【００４０】
本発明の飼料添加剤は、クエン酸、フマル酸、アジピン酸、乳酸、りんご酸などの有機酸やリン酸ナトリウム、リン酸カリウム、酸性ピロリン酸塩、ポリリン酸塩（重合リン酸塩）などのリン酸塩やポリフェノール、カテキン、アルファ・トコフェロール、ローズマリー抽出物、ビタミンＣ、緑茶抽出物、甘草抽出物、キトサン、タンニン酸、フィチン酸などの天然抗酸化剤から選択された一つ以上をさらに含むことができる。
【００４１】
本発明の白扁豆抽出物を含む動物飼料添加剤及びこれを含む飼料は、補助成分としてアミノ酸、無機塩類、ビタミン、抗生物質、抗菌物質、抗酸化物質、抗カビ酵素、消化及び吸収向上剤、成長促進剤、疾病予防剤などのような物質が共に使われる。
【００４２】
前記飼料添加剤は、動物に単独に、食用担体中に他の飼料添加剤と組み合わせられて投与される。また、前記飼料添加剤は、動物飼料にトップ・ドレッシングとしてまたは直接混合して、または飼料と別途に経口剤形、注射または経皮で、または他の成分と組み合わせて容易に投与できる。通常的に、当業界で公知のように単独一日投与量または分割一日投与量を使える。前記飼料添加剤を動物飼料と別途に投与する場合、当業界で公知のように抽出物の投与形態は、抽出物を非毒性製薬上許容可能な食用担体と組み合わせて即座に放出するか、または徐放性剤形に製造する。このような食用担体は、固体または液体、例えば、とうもろこし澱粉、ラクトース、スクロース、豆フレーク、落花生油、オリーブ油、胡麻油及びプロピレングリコールである。固体担体が使われる場合、抽出物の投与型は錠剤、カプセル剤、酸剤、トローチ剤または含糖錠剤または微分酸性形態のトップ・ドレッシングであリ得る。液体担体が使われる場合、軟ゼラチンカプセル剤、またはシロップ剤または液体懸濁液剤、エマルジョン剤または溶液剤の投与形態であリ得る。また、投与形態は、補助剤、例えば、保存剤、安定化剤、湿潤剤または乳化剤、溶液促進剤などを含む。また、白扁豆抽出物が飼料添加剤として含まれる動物飼料は動物の食餌要求を満たすが、通常的に使われる任意のタンパク質含有の有機穀粉であり得る。このようなタンパク質含有の穀粉は通常的にとうもろこし、豆穀粉またはとうもろこし／豆穀粉のミックスで主に構成されている。前記の飼料添加剤は浸漬、噴霧または混合して前記動物飼料に添加して用いられる。
【００４３】
本発明の獣医学的組成物または飼料添加剤は伴侶動物の食餌に適用できる。
【実施例】
【００４４】
以下、実施例を用いて本発明をさらに詳細に説明する。これら実施例は単に本発明をさらに具体的に説明するためのものであり、本発明の範囲がこれらに制限されないということは当業者に明らかである。
【００４５】
［試薬］
１）オイルレッドＯ（Ｏｉｌ  Ｒｅｄ  Ｏ；Ｓｉｇｍａ（Ｃａｔ＃Ｏ−０６２５）、ＦＷ４０８．５）保存溶液の製造
０．３５ｇのオイルレッドＯを１００ｍｌのイソプロパノールに溶解させて製造した後、０．２μｍのフィルタを用いてろ過して常温に保管した。
【００４６】
２）オイルレッドＯワーキング溶液の製造
前記オイルレッドＯ保存溶液６ｍｌと４ｍｌのｄｄＨ２Ｏとを混合した後、０．２μｍのフィルタを用いてろ過して常温に２０分間放置した。
【００４７】
３）１０％ホルマリン溶液の製造
６３ｍｌのｄｄＨ２Ｏに２７ｍｌのホルマリン原液を希釈させた保存溶液（３７％、Ｍｅｒｃｋ、Ｃａｔ＃  Ｋ３６６５８００３）と１０ｍｌの１０Ｘ  ＰＢＳとを混合した。
【００４８】
４）１００％イソプロパノール（Ｍｅｒｃｋ、Ｃａｔ＃  Ｋ３６５４３８３４）をブランクとして使った。
【００４９】
５）６０％イソプロパノールの製造
前記１００％イソプロパノール６ｍｌと４ｍｌのｄｄＨ２Ｏとを混合して製造した。
【００５０】
＜実施例１＞  肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）の培養
肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）はＡＴＴＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）社から購入して使った。肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）は１０％のＦＢＳ、１％のペニシリン・ストレプトマイシンが含まれているＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  ｍｅｄｉｕｍ）培地で培養した。前記細胞は３７℃で５％のＣＯ２培養基で培養し、培養された細胞は２４ウェルプレートに一定数の細胞（３×１０４ｃｅｌｌｓ／５００μｌ  ｗｅｌｌ）を株分けして実験を行った。
【００５１】
２４ウェルプレートに細胞を株分けした後、細胞が２４ウェルに完全について細胞の形態を揃えた後で細胞が７５％の飽和度に到逹した時に使った。
【００５２】
＜実施例２＞  遊離脂肪酸（Ｆｒｅｅ  Ｆａｔｔｙ  Ａｃｉｄ；ＦＦＡ）の製造
（１）１００ｍＭのパルミチン酸塩（シグマＰ−０５００）及び１００ｍＭのオレイン酸塩（シグマＯ−７５０１０）保存溶液の製造
７０℃で０．１Ｍ  ＮａＯＨ溶液を溶媒として用いて製造し、０．２μｍのフィルタを用いてろ過した後で滅菌した。
【００５３】
（２）遊離脂肪酸が含まれていない５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ（シグマＡ−６００３）溶液の製造
３次蒸溜水（ｄｄＨ２Ｏ）を溶媒として用いて製造した後で滅菌し、４℃冷蔵保管した。
【００５４】
（３）オレイン酸塩及びパルミチン酸塩の濃度が２：１になるように混合した５ｍＭの混合脂肪酸保存溶液の製造
６０℃で前記（２）で製造した３次蒸溜水に溶かした遊離脂肪酸が含まれていない５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ溶液を溶媒として用いて、前記（１）で製造したそれぞれの脂肪酸の濃度が５ｍＭになるように脂肪酸保存溶液１０ｍｌを製造した。前記（１）で製造した１００ｍＭのパルミチン酸塩及び１００ｍＭのオレイン酸塩保存溶液から１６５μｌ（１．６５ｍＭ）のパルミチン酸塩及び３３０μｌ（３．３ｍＭ）のオレイン酸塩を取って９，５０５μｌの５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ溶液に滴下しつつ、振りながら混ぜた。次いで常温で冷やした後、０．２μｍのフィルタでろ過した（前記製造した混合溶液は−２０℃で３ないし４週間保管しても安定している）。
【００５５】
（４）１％（ｗ／ｖ）のＢＳＡを含む１ｍＭの混合遊離脂肪酸の製造
無菌環境で前記（３）で製造した５％（ｗ／ｖ）のＢＳＡを含む５ｍＭの混合遊離脂肪酸（オレイン酸塩及びパルミチン酸塩が２：１の濃度比で混合されている遊離脂肪酸）溶液（１０ｍｌ）と、０．５％のＦＢＳ／１％のペニシリン・ストレプトマイシンとが含まれているＤＭＥＭ培地に４９５μｌのＮａＯＨを含む成長培地（４０ｍｌ）を混合して、ＦＦＡの最終濃度が１ｍＭであり、またＢＳＡは１％（ｗ／ｖ）になるように５０ｍｌを製造した。
【００５６】
（５）ＢＳＡ対照溶液の製造
１０ｍｌの５％  ＦＦＡ−ｆｒｅｅ  ＢＳＡ溶液＋４０ｍｌの０．５％  ＦＢＳ／１％  ペニシリン・ストレプトマイシンが含まれているＤＭＥＭ培地に４９５μｌのＮａＯＨを含む成長培地を混合して、最終体積が５０ｍｌになるように用意した。
【００５７】
（６）陽性対照溶液の製造
１０ないし１００μｍの甘草フィトソム（１８  ｂｅｔａ−ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）を陽性対照群として使った。
【００５８】
＜実施例３＞  白扁豆抽出物の製造
（１）白扁豆の熱水抽出物の製造
白扁豆２００ｇに２Ｌの水を加え、９０ないし１００℃の温度で２ないし３時間加熱した後で抽出物をろ過した。次いで、凍結乾燥器を用いて減圧乾燥させて得た白扁豆の熱水抽出物を実験に使うために１０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯに溶かして使った。
【００５９】
（２）白扁豆のエタノール抽出物の製造
白扁豆２００ｇに２Ｌの８０％  エタノールを加え、２０ないし２５℃の常温で２２ないし２４時間浸漬した後で抽出物をろ過した。次いで、減圧濃縮器で濃縮し、凍結乾燥器を用いて減圧乾燥させて得た白扁豆のエタノール抽出物を実験に使うために１０％（ｖ／ｖ）のＤＭＳＯに溶かして使った。
【００６０】
＜実施例４＞  中性脂肪の含量評価
（１）ナイルレッド（アディポレッド）染色（Ａｄｉｐｏ  Ｒｅｄ  ｓｔａｉｎｉｎｇ）のアッセイ
肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）を含む培地に１ｍＭの遊離脂肪酸（ＦＦＡ）を処理し、２４時間後に培地を弱く吸引した。
【００６１】
３７℃の条件下でアディポレッド溶液（３００μｌのアディポレッドを１０ｍｌのＰＢＳに溶かして製造）を５００μｌ／ｗｅｌｌずつ株分けした後、常温の暗室条件下で１５分間弱く振りながら反応させた。この過程中に染料の光脱色を最小化するためにプレートをアルミニウムホイルで包んで保管した。
【００６２】
反応が終わった後でこれを分光光度計（ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ）に適用し、励起波長は４８５ｎｍ、放出波長は５７２ｎｍの条件で測定した。
【００６３】
（２）オイルレッドＯ染色のアッセイ
前記肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）から培地を除去した後、０．５ｍｌのＰＢＳ緩衝溶液を用いて細胞を洗浄してＰＢＳ緩衝溶液を完璧に除去した。次いで、常温で１０％のホルマリン０．５ｍｌを添加して１０分間培養した。
【００６４】
前記ホルマリンを除去して新鮮なホルマリンを０．５ｍｌ添加した後、少なくとも１時間以上培養した（前記細胞は染色前にホルマリン溶液に数日間保管することができ、アルミニウムホイルとパラフィルムで包んで細胞が乾燥になることを防止せねばならない）。
【００６５】
次いで、ピペットでホルマリンを除去した後、０．５ｍｌのｄｄＨ２Ｏを用いて２回洗浄した。常温で５分間６０％のイソプロパノールで細胞を洗浄した。常温で細胞を完璧に乾燥させた（この時、ドライヤーを用いて乾燥してもよい）。
【００６６】
前記乾燥した細胞に０．５ｍｌのオイルレッドＯ溶液を添加して１０分間常温で培養した後、オイルレッドＯ溶液を除去して直ちにｄｄＨ２Ｏを添加して洗浄する工程を４回繰り返した。染色溶液の破片をできるだけ除去し、以後に蛍光顕微鏡を用いてイメージを獲得した。
【００６７】
水気を完壁に除去して乾燥状態で１００％のイソプロパノールに溶解させたオイルレッドＯ染色溶液０．５ｍｌを添加し、１０分間やさしく振りながら培養した。この時、オイルレッドＯ染色がよく染み込むようにピペットで上下に混ぜた後、９６ウェルプレートに移して５００ｎｍでＯＤを測定した。１００％  イソプロパノールのＯＤ値を測定して基準値（０点）として使った。
【００６８】
＜実施例４．１＞  肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）で遊離脂肪酸によって増加した中性脂肪含量の確認
非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬＤ）についての白扁豆抽出物の効能を確認するために、細胞モデルである遊離脂肪酸によって誘導された細胞性非アルコール性脂肪肝モデルを使った。
【００６９】
肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）にオレイン酸塩とパルミチン酸塩とを２：１の重量比で混合した遊離脂肪酸を０．１２５、０．２５、０．５及び１．０ｍＭ濃度で処理した後、中性脂肪の含量変化をナイルレッド染色のアッセイとオイルレッドＯ染色のアッセイとを通じて確認した結果、遊離脂肪酸の濃度増加に比例して中性脂肪の含量が増加するということが分かった（図１）。
【００７０】
＜実施例４．２＞  白扁豆抽出物を用いて肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）で遊離脂肪酸を処理して生成された中性脂肪の含量低減効果の確認
先ず、中性脂肪を分解する効果のある物質と知られている甘草フィトソム（１８  ｂｅｔａ−ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）を濃度（０、１０、３０、５０及び１００μｍ）別に処理して細胞内の中性脂肪の含量低減程度を確認した。
【００７１】
図２に開示したように、甘草フィトソム（１８  ｂｅｔａ−ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）を濃度（０、１０、３０、５０及び１００μｍ）別に処理した肝臓癌細胞株にナイルレッド染色のアッセイを行った結果、甘草フィトソム（１８  ｂｅｔａ−ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）は中性脂肪の含量を約１０ないし１５％低減させる効果があった。オイルレッドＯ染色のアッセイ結果イメージからも、甘草フィトソム（１８  ｂｅｔａ−ｇｌｙｃｙｒｒｈｅｔｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）の濃度が増加するほど中性脂肪が減少したということが分かった（図３）。
【００７２】
次いで、肝臓癌細胞株（ＨｅｐＧ２）に１ｍＭのオレイン酸塩及びパルミチン酸塩の混合された（２：１）遊離脂肪酸を処理して生成された中性脂肪が白扁豆の熱水抽出物によって減少する程度をナイルレッド染色のアッセイとオイルレッドＯ染色のアッセイとを通じて確認した結果、白扁豆の熱水抽出物の１０、５０及び１００μｇ／ｍｌの濃度に対して約２８％の中性脂肪が濃度依存的に減少する効果があるということが分かった（図４及び図５）。
【００７３】
また、白扁豆のエタノール抽出物は前記白扁豆の熱水抽出物に比べて低減程度が少し弱いが、図６及び図７によれば、ナイルレッド染色アッセイとオイルレッドＯ染色のアッセイ結果から、肝細胞内の中性脂肪の含量を低める効果が１０ないし１５％あるということが分かった。
【００７４】
＜実施例４．３＞  白扁豆の熱水抽出物及び豆類（大豆、黒豆、緑豆及び豌豆）抽出物の中性脂肪の含量低減効果の比較
白扁豆の熱水抽出物の肝細胞内での中性脂肪の含量低減効果が他の豆種類の抽出物でもあるかどうかを確認するために、大豆抽出物、黒豆抽出物、緑豆抽出物及び豌豆抽出物を対照区として用いてナイルレッドアッセイを施して中性脂肪の含量変化を分析した。ナイルレッドのアッセイ結果において、図９に開示したように、本発明の白扁豆抽出物以外の他の豆抽出物では中性脂肪を低減させる効果が現れず、白扁豆抽出物のみで有意的に中性脂肪が減少したことが分かった（図９）。
【００７５】
＜実施例５＞  白扁豆抽出物の細胞毒性の確認
本発明による白扁豆の熱水抽出物の細胞毒性を確認するためにＭＴＳアッセイを施した。ＭＴＳアッセイは通常の実験方法で施し、結果は図８に開示したように、５００μｇ／ｍｌの高濃度で処理する場合にも細胞生存率がほとんど変わらないということを観察することで、細胞毒性がほとんど現れないということが分かった。
【００７６】
＜実施例６＞  白扁豆抽出物が高脂肪食餌マウスに及ぼす効果の確認
（１）実験動物の飼育
実験動物は、８週齢で雄のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス１２０匹をサムタコ社から購入し、２週間適応させた後で実験に使った。次いで、乱塊法によって正常食餌対照群（ＣＯＮ、１０％  ｆａｔ）、高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ、６０％  ｆａｔ）、高脂肪食餌をしながら前記実施例３の（１）で製造した白扁豆の熱水抽出物を投与した群（２５ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａ）、及び陽性対照群として高脂肪食餌と共にミルクシスル抽出物（１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を投与した群に分けて９週間飼育し、水と実験食餌は自由に供給した。マウスは各群当り２０匹ずつ使った。各群を対象として前記高脂肪食餌と抽出物は毎日９週間経口投与方式で供給した。毎週一回ずつ９週間体重の変化を測定し、食餌摂取量、肝重量、腹部脂肪重量を測定した。飼育室の温度は２２±１℃、湿度は５０±５％に維持し、明暗は１２時間間隔で調節した。１０％の正常食餌と６０％の高脂肪食餌とは中央実験動物社から購入して供給した。
【００７７】
（２）体重変化と肝組織、総脂肪、腹部皮下脂肪、副睾丸脂肪組職及び小腸脂肪組職の変化
前記実施例３の（１）で製造した白扁豆の熱水抽出物が高脂肪食餌によるマウスの体重増加に及ぼす影響を確認した結果、高脂肪食餌群に比べて高脂肪食餌と共に本発明の実施例３の（１）で製造した白扁豆の熱水抽出物を摂取した群の体重が著しく低い結果を示した。特に、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの白扁豆の熱水抽出物投与群で体重の増加が著しく低い結果を示した（図１０Ａ）。
【００７８】
実施例３の（１）で製造した白扁豆の熱水抽出物が高脂肪食餌によって増加した肝組職重量を低減させられるかどうかを確認した結果、高脂肪食餌群に比べて高脂肪食餌と共に本発明の白扁豆の熱水抽出物を摂取した群の肝組職重量が著しく減少したことが分かった。
【００７９】
高脂肪食餌の長期間摂取は非アルコール性脂肪肝を引き起こす。本実験では、高脂肪食餌を摂取して脂肪肝が引き起こされた高脂肪食餌群（ＨＦＤ）の肝組職重量が正常対照群（ＣＯＮ）の肝組職重量に比べて著しく増加したことが分かるが、高脂肪食餌と共に白扁豆の熱水抽出物を投与した群では肝組織の重量が著しく低い結果を示した。特に、高脂肪食餌と共に１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの白扁豆の熱水抽出物を投与した群で肝組織の重量が著しく低い結果を示した（図１０Ｂ）。このような結果は、本発明の白扁豆の熱水抽出物が高脂肪食餌によって引き起こされる肝組職への脂肪蓄積を防止する効果を持つということを裏付ける。
【００８０】
また、本発明の白扁豆の熱水抽出物が高脂肪食餌によるマウスの総脂肪、腹部皮下脂肪、副睾丸脂肪組職及び小腸脂肪組職の増加に及ぼす影響を確認した結果、高脂肪食餌群に比べて高脂肪食餌及び白扁豆の熱水抽出物を摂取した群の場合、総脂肪、腹部皮下脂肪、副睾丸脂肪組職及び小腸脂肪組職の増加が著しく減少する結果を示した。特に、１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの白扁豆の熱水抽出物投与群で著しく低い結果を示した（図１１）。
【００８１】
このような結果は、本発明の生薬抽出物が肥満の予防または治療効果があるということを示す。
【００８２】
（３）血中ＡＬＴ及びＡＳＴの変化
本発明の白扁豆の熱水抽出物が高脂肪食餌による血中ＡＬＴ及びＡＳＴの増加を低減させられるかどうかを確認した結果、高脂肪食餌群に比べて高脂肪食餌と共に本発明の実施例３の（１）で製造した白扁豆の熱水抽出物を摂取した群でのＡＬＴ及びＡＳＴが著しく減少する結果を示した（図１２）。
【００８３】
このような結果は、本発明の白扁豆の熱水抽出物の食餌添加が血中ＳＧＰＴ（ＡＬＴ）及びＳＧＯＴ（ＡＳＴ）酵素の活性を低減させる可能性があるということを示し、これは、本発明の生薬抽出物が高脂肪食餌によって生じる非アルコール性脂肪肝を改善して肝損傷を抑制する効能を奏することができるということを示す。
【００８４】
（４）血液内の中性脂肪、総コレステロール、低密度リポタンパク質、遊離脂肪酸の変化
本発明の実施例３の（１）で製造した白扁豆の熱水抽出物が高脂肪食餌によって増加した血液内中性脂肪、総コレステロール、低密度リポタンパク質、及び遊離脂肪酸数値を低減させるかどうかを確認した結果、高脂肪食餌群で著しく増加していた中性脂肪、総コレステロール、低密度リポタンパク質、及び遊離脂肪酸数値が白扁豆の熱水抽出物投与群で比較的濃度依存的に減少する結果を示した（図１３）。
【００８５】
したがって、白扁豆の熱水抽出物の食餌添加は、血液内脂質のレベルを有意的に低減させて高脂肪食餌によって誘導された非アルコール性脂肪肝を改善すると現れた。
【００８６】
（５）空腹時の血中糖濃度の変化
本発明の白扁豆の熱水抽出物が高脂肪食餌による血中糖濃度を低減させるかどうかを確認した結果、高脂肪食餌群に比べて高脂肪食餌と本発明の白扁豆の熱水抽出物とを摂取した群の血中糖濃度が濃度依存的に有意的に減少した（図１４）。
【００８７】
したがって、本発明の白扁豆の熱水抽出物の食餌添加は血清内の糖濃度を有意的に低減させると現われた。
【図１】
0006360972.tif 000002
【図２】
0006360972.tif 000003
【図３】
0006360972.tif 000004
【図４】
0006360972.tif 000005
【図５】
0006360972.tif 000006
【図６】
0006360972.tif 000007
【図７】
0006360972.tif 000008
【図８】
0006360972.tif 000009
【図９】
0006360972.tif 000010
【図１０】
0006360972.tif 000011
【図１１】
0006360972.tif 000012
【図１２】
0006360972.tif 000013
【図１３】
0006360972.tif 000014
【図１４】
0006360972.tif 000015