(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）、
【化１】
0006378344.tif 000017
式中、
Ｒ１は−Ｆであり、Ｒ２は−Ｈ、または−Ｆであり、または
Ｒ１は−Ｈであり、Ｒ２は−Ｆである、
一般式（Ｉ）の化合物、並びに上述の化合物の薬学的に許容できる塩、溶媒和物および水和物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、式中、Ｒ１は−Ｆであり、Ｒ２は−Ｈである化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物を調製する方法であって、次のステップ：
ａ）一般式（ＩＩ）である出発物質を、式（ＩＩＩ）であるグリコシル酸水和物および塩基の付加下で反応させ一般式（ＩＶ）の化合物にすること、
【化２】
0006378344.tif 000018
ｂ）一般式（ＩＶ）である化合物を、酸の付加下、および加熱下で脱カルボキシル化し、一般式（Ｖ）の化合物にすること、
【化３】
0006378344.tif 000019
ｃ）一般式（Ｖ）である化合物を、触媒の付加下で芳香族化し、一般式（Ｉ）の化合物にすること、
を含み、
式中、
Ｒ１は−Ｆであり、Ｒ２は−Ｈ、または−Ｆであり、または
Ｒ１は−Ｈであり、Ｒ２は−Ｆである、方法。
【請求項４】
ステップｃ）において、使用される触媒はＰｄ／Ｃであることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
薬剤として使用のための請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
内耳の疾患および／または損傷の治療のための請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項７】
前記内耳の疾患および／または損傷は、急性内耳疾患であり、耳の爆傷（ｂｌａｓｔ  ｔｒａｕｍａ）、耳の爆風損傷（ｂｌａｓｔ  ｉｎｊｕｒｙ）、難聴、および挿入外傷を含む群から選択されることを特徴とする請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
前記内耳の疾患および／または損傷は、内耳の慢性疾患であり、慢性音響外傷、耳鳴、および老人性難聴を含む群から選択されることを特徴とする請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
前記内耳の損傷は、耳毒性物質に起因することを特徴とする請求項６〜請求項８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
少なくとも一つの請求項１に係る化合物を含む液滴、軟膏、スプレー、リポソーム、ゲル、エマルジョン、または注射液の形態の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの調製、並びに医学的用途、およびフルオロ−９−メチル−β−カルボリンを含む医薬組成物に関する。
【０００２】
本発明に係る化合物は、急性および慢性の耳疾患、および聴覚損傷、目まい、および平衡感覚障害、特に、難聴、爆傷（ｂｌａｓｔ  ｔｒａｕｍａ）、爆風損傷（ｂｌａｓｔ  ｉｎｊｕｒｙ）、耳鳴り、慢性的な騒音曝露に起因する迷路性難聴、加齢に関連した難聴、内耳プロテーゼの移植中の外傷（挿入外傷）、内耳領域の疾患に起因する目まい、メニエール病と関連するおよび／またはメニエール病の症状としての目まい、メニエール病と関連するおよび／またはメニエール病の症状としての平衡感覚障害、並びに、抗生物質および細胞増殖抑制剤に起因する聴覚損傷の治療に有用である。
【０００３】
世界保健機関（ＷＨＯ）の研究によると、約２億５千万人が、中程度および重度の耳疾患を患う。米国において、３千万人〜４千万人は、聴覚損傷および難聴を患う。治療の費用は単独で約毎年５００億米ドルである。聴覚障害者のためのドイツの団体（Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ  Ｓｃｈｗｅｒｈｏｒｉｇｅｎｂｕｎｄ）は、２００７年に、１４歳の頃からドイツ人口の約１９％が聴覚障害を患うということを報告している。
【０００４】
年齢が進むに従って、聴覚障害者の割合は上昇する。今でさえ聴覚障害は、６５歳を超えた人々において、骨および関節の疾患、高血圧、心臓病に続いて４番目に多い慢性的な身体障害となる。６０歳〜６９歳の人々の３７％、および７０歳以降の人々の５４％は、聴覚損傷を患う。ドイツ連邦共和国において、約１２００万人〜１５００万人の患者は、迷路性難聴を患い、約２９０万人の患者は、耳鳴りを患う。
【０００５】
用語「耳鳴り（Ｔｉｎｎｉｔｕｓ  ａｕｒｉｕｍ）」または要するに「耳鳴り（ｔｉｎｎｉｔｕｓ）」は、患者が持続性または反復性の雑音を認識するという兆候または症候群を意味し、二つの型の耳鳴りに分けることができる。比較的まれな「他覚的耳鳴り」において患者によって認識される騒音は、外部から認識されることもでき、または少なくとも騒音を測定することができる。騒音は、例えば内耳に接近して通る血管など体自身の音源に通常基づく。重大に、より頻繁な「自覚的耳鳴り」において、音響現象は、他人に知覚できる外部源ではない。「自覚的耳鳴り」は音響知覚であるので、耳に作用する音と無関係に、患者によって認識される。これらの知覚の原因は、多様であり、とりわけ、内耳の聴覚機能の障害に起因して生じる。耳鳴り患者が認識する明らかな騒音の型は、非常に多様である。用語耳鳴りは、次の音響印象を組み合わせる。
−ハミング（ｈｕｍｍｉｎｇ）または笛の音
−ヒッシング（ｈｉｓｓｉｎｇ）
−ラッシング（ｒｕｓｈｉｎｇ）
−スナッピング（ｓｎａｐｐｉｎｇ）またはノッキング（ｋｎｏｃｋｉｎｇ）
ノイズは、ノイズ強度が一定であってもよく、ノイズは、リズミカルに−脈動特性を有してもよい。
【０００６】
耳は、次のように構成される。耳たぶから耳の内側に耳道がつながる。耳道は鼓膜で終わる。耳のこの部分は、外耳と表記される。外耳の後ろには、中耳、鼓室とも呼ばれる空間があり、耳管に接続され、さらに鼻咽頭に接続される。中耳は、当該一方の側で鼓膜によって、および当該反対側で卵円窓および正円窓によって囲まれる。両方の窓の後ろに、続いて内耳と表記される空間がある。内耳は、平衡システム（前庭器）および音響知覚のためのいわゆるカタツムリ（蝸牛）のようないくつかの器官を収容する。カタツムリ（蝸牛）はまた、内耳における感覚細胞（有毛細胞）の担体としてコルチ器官を含む。
【０００７】
正円窓の膜は、内耳の空間に生物学的障壁を形成し、内耳の損傷および疾患の局所治療のための最大の障害となる。投与された活性剤は、内耳空間に入るために、この膜を克服しなければならない。活性剤は、機械的におよび機器に基づいて膜を通って投与することはできない。なぜなら、膜は、この操作によって損傷されることになるからである。活性剤は、正円窓膜に局所的に（すなわち、鼓膜を介して投与）投与されてもよく、その後、正円窓膜を貫通してもよい。その結果、活性剤は、蝸牛、すなわち鼓室階および前庭階の相互接続された区画によって形成される内耳空間を満たす外リンパに到達する。鼓室階および前庭階の間の膜によって分けられた区画は、中心階と呼ばれ、内リンパによって囲まれた聴覚器官（内有毛細胞および外有毛細胞）である感覚細胞を含む。これらは、コルチ器官のような周囲の支持細胞と共に示される。有毛細胞は、任意の原因（年齢、特定の抗生物質または細胞増殖抑制剤のような薬剤）における迷路難聴および、主に損傷による耳鳴りに関与する。外リンパ腔から中心階を分離する膜を越えて、活性剤は、直接または内リンパを通って有毛細胞に達してもよい。蝸牛における外リンパ区画、および内リンパ区画は、平衡システムに接続しているので、活性剤は、蝸牛から前庭器の感覚細胞にも達してもよい。
【０００８】
ドイツ特許出願（ＤＥ  １０  ２００７  ００９２６４  Ａ１）は、９−アルキル−βカルボリンを開示し、９−アルキル−βカルボリンの神経保護効果により、運動障害の、および/または例えばアルツハイマー病またはパーキンソン病などのような神経疾患の治療および／または予防のために使用することができることが開示されている。
【０００９】
Ｖｏｎ  Ｈａｍａｎｎらは、（Ｊ．Ｈａｍａｎｎら；Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔ．２００８，５２，６８８〜７００）中脳神経細胞の初代細胞培養においてβ−カルボリン  ９−メチル−β−カルボリンの神経保護効果を示した。そこに示される９−メチル−β−カルボリンに起因する神経細胞の生存率の増加は、しかしながら、増加した増殖によって引き起こされなかった。逆に、９−メチル−β−カルボリンの適用は、増殖の阻害および神経細胞の分化の増加につながった。９−メチル−β−カルボリンのこの効果は、ヒト神経芽腫細胞（ＳＨ−ＳＹ５Ｙ）で確認された。ソニックヘッジホッグのような神経栄養因子の分化の促進、発現の増加に伴い、Ｗｎｔ１およびＷｎｔ５ａが証明された。さらに、９−メチル−β−カルボリンは、中脳神経細胞の初代細胞培養において出現されるドーパミン作動性ニューロン数の上昇を誘導した。したがって、パーキンソン病の治療において９−メチル−β−カルボリンの治療的有用性が、見込まれる。
【００１０】
米国特許出願（ＵＳ２００４／０３８９７０  Ａ１）は、耳鳴りを含む様々な医学的適応の治療において活性剤としてβ−カルボリンの使用を開示する一方、９−アルキル−β−カルボリンから、および、それ故に６−および／または７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンから、構造的に非常に逸脱するβ−カルボリン基も記載されている。
【００１１】
国際特許出願（ＷＯ２０１１／０７９８４１）は、β−カルボリン、特に９−アルキル−βカルボリン、および内耳の疾患または損傷の治療のためのそれらの使用を開示する。９−アルキル−β−カルボリンの適用は、ヒト神経芽腫細胞（ＳＨ−ＳＹ５Ｙ）の神経分化、および神経保護特性を有する神経栄養因子の発現を促進することが示された。これは、ラットの蝸牛調製物の細胞培養物中で確認された。さらに、９−アルキル−β−カルボリンを内耳の正円窓に局所適用した後、９−メチル−β−カルボリンは、内耳の外リンパ腔に拡散することができ、そのことは、コルチ器官の毛感覚細胞の電気生理学的活性の上昇につながることを、モルモットで示した。
【００１２】
本発明の主要な目的は、聴覚損傷、加齢関連聴力損失（老人性難聴）、めまいおよび平衡障害の予防および治療のために、並びに学習および記憶を改善するために使用されてもよく、従来技術に優る利点を示し得る活性剤、および医薬組成物を提供することである。
【００１３】
本発明の目的は、独立請求項の教示によって解決される。本発明のさらなる有利な特徴、態様および詳細は、本出願における従属請求項、説明、図面、および実施例から明らかである。
［フルオロ−９−メチル−β−カルボリン］
驚くべきこと、本発明によると、一般式（Ｉ）のフルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、先行技術の化合物（例えば、９−メチル−β−カルボリン）と比較して、内耳疾患の治療において有効性の増加を示す。一般式（Ｉ）のフルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、低用量で適用される可能性、および毒性の低下を提供し、従来技術と比較して顕著な治療上の改善を示す、ということが明らかになっている。
【００１４】
さらに、驚くべきことに、本発明によると、６−および/または７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、特別な性質によって最先端の技術よりも卓越しており、治療的使用を支持するということが明らかになっている。したがって、９−メチル−β−カルボリンと比較して、６−および/または７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、ヒト神経芽腫細胞の神経分化を促進することにおいて有効性の増加が証明された。さらに、９−メチル−β−カルボリンと比較して、６−および/または７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、膜透過性の増加と関係付けられる脂溶性（親油性）の顕著な増加を示す。このことは、内耳の疾患または損傷の治療のために、または記憶力の改善および学習能力の向上のために、本発明による化合物の治療的使用にとって広範囲にわたって影響をもたらす。既に記述されるように、鼓膜、正円窓の膜および中央階の膜（膜ｔｅｃｔｏｒｉａｎａおよびライスナー膜）の膜のような生物学的膜は、内耳の有毛細胞への道中に、活性剤にとって天然の障害物を形成する。これは、鼓膜または正円窓における活性剤の局所適用に特に当てはまる。膜透過性の増加により活性剤の利用可能性も増加する。膜透過性に加えて体内での活性剤の分解は、全身に投与される場合、当該有効性のために、および可能な副作用のためにも、特に重要な役割を果たす。一方、９−メチル−β−カルボリンは、６位でヒドロキシル化によって分解され、続く結合反応を用いて６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンになり、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの代謝経路は、フッ化物基によって阻止される。これにより、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの半減期は増加しただけでなく、潜在的に有毒な分解生成物を形成する危険性は減少した。６−および／または７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの有効性の増加により、他の９−アルキル−β−カルボリンと比較して、治療において低用量の使用が可能であるようである。このことは、体への負担およびさらに望ましくない副作用の負担を軽減することができるので、慢性疾患の長期治療のために特に非常に重要である。結果的に、本発明は選択発明である。
【００１５】
用語「６−および／または７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン」は、「または」で連結される場合、化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、または化合物７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンのどちらかに関し、「および」で連結される場合、化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、および化合物７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン」に関する。
【００１６】
本発明は、一般式（Ｉ）の化合物、または一般式（Ｉ）のフルオロ−９−メチル−β−カルボリン、並びに前記化合物の薬学的に許容できる塩、溶媒和物および水和物、並びにプロドラッグおよび複合体化合物に関し、
【００１７】
【化１】
0006378344.tif 000002
【００１８】
式中、
Ｒ１は−Ｆであり、Ｒ２は−Ｈ、または−Ｆであり、または
Ｒ１は−Ｈであり、Ｒ２は−Ｆである。
【００１９】
本発明は、一般式（Ｉ）の化合物、または一般式（Ｉ）のフルオロ−９−メチル−β−カルボリン、並びに前記化合物の薬学的に許容できる塩、溶媒和物および水和物、並びにプロドラッグおよび複合体化合物にも関し、
【００２０】
【化２】
0006378344.tif 000003
【００２１】
式中、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して−Ｆまたは−Ｈであり、および
式中、両残基の少なくとも一つ、Ｒ１またはＲ２は、−Ｆである。
本発明は、一般式（Ｉ）の化合物、または一般式（Ｉ）のフルオロ−９−メチル−β−カルボリン、並びに前記化合物の薬学的に許容できる塩、溶媒和物および水和物、並びにプロドラッグおよび複合体化合物にも関し、
【００２２】
【化３】
0006378344.tif 000004
【００２３】
式中、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して−Ｆまたは−Ｈであり、および
式中、両残基の少なくとも一つ、Ｒ１またはＲ２は、−Ｈである。
Ｒ１は−ＦでありＲ２は−Ｈである場合、またはＲ１は−ＨでありＲ２は−Ｆである場合が好ましい。
【００２４】
本願において使用される用語プロドラッグは、不活性な形態またはより低い効果的な形態で投与される薬理学的物質として定義される。投与後、患者の体内において、当該活性の、有効形態、すなわち一般式（I）のフルオロ−９−メチル−β−カルボリンに変換される。
【００２５】
可能な酸は、本発明の化合物と酸付加塩を形成することができ、次の通りであってもよい：硫酸、スルホン酸、リン酸、硝酸、亜硝酸、過塩素酸、臭化水素酸、塩酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、シュウ酸、グルコン酸（グルコン酸（ｇｌｙｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、デキストロン酸）、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、タルトロン酸（ヒドロキシマロン酸、ヒドロキシプロパン二酸）、フマル酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、マロン酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、（ｏ−、ｍ−、ｐ−）トルイル酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフチルアミンスルホン酸、スルファニル酸、カンファースルホン酸、キナ（ｃｈｉｎａ）酸（キナ（ｑｕｉｎｉｃ）酸）、ｏ−メチル−マンデル酸、水素ベンゼンスルホン酸（ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｂｅｎｚｅｎｅ  ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ピクリン酸（２，４，６−トリニトロフェノール）、アジピン酸、ｄ−ｏ−トリル酒石酸；メチオニン、トリプトファン、アルギニンのようなアミノ酸、特に、グルタミン酸またはアスパラギン酸のような酸性アミノ酸。さらにベタイン型も可能である。
【００２６】
本発明のさらなる態様は、一般式（Ｉ）（つまり、一般式（Ｉ）のフルオロ−９−メチル−β−カルボリン）である本発明に係る化合物の調製方法に関し、次のステップを含む：
ａ）一般式（ＩＩ）（つまり、一般式（ＩＩ）のフルオロ−１−メチルトリプタミン塩酸塩）を出発物質として、一般式（ＩＩＩ）のグリオキシル酸水和物および塩基の付加下、反応させ、一般式（ＩＶ）の化合物にする反応、
【００２７】
【化４】
0006378344.tif 000005
【００２８】
ｂ）酸の付加下および加熱下で一般式（ＩＶ）の化合物を脱カルボキシル化し、一般式（Ｖ）の化合物に（つまり、一般式（Ｖ）のフルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリンに）する反応、
【００２９】
【化５】
0006378344.tif 000006
【００３０】
ｃ）一般式（Ｖ）の化合物（つまり、一般式（Ｖ）のフルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン）を、触媒の付加下、芳香族化し、一般式（Ｉ）の化合物に（つまり、一般式（Ｉ）のフルオロ−９−メチル−β−カルボリンに）する反応、
ここで、
Ｒ１は−ＦでありＲ２は−Ｈまたは−Ｆであり、または、
Ｒ１は−ＨでありＲ２は−Ｆである。
【００３１】
上記のように、残基Ｒ１およびＲ２の表現は、本発明に係る化合物の特定の調製方法のために、対応する合成の出発物質のためだけでなく、得られた中間体のため、および合成の最終生成物のために適用されるということは、言うまでもない。
【００３２】
本発明のさらなる態様は、したがって、一般式（Ｉ）（つまり、一般式（Ｉ）のフルオロ−９−メチル−β−カルボリン）である本発明に係る化合物の調製方法に関し、次のステップを含む：
ａ）一般式（ＩＩ）（つまり、一般式（ＩＩ）のフルオロ−１−メチルトリプタミン塩酸塩）を出発物質として、一般式（ＩＩＩ）のグリオキシル酸水和物および塩基の付加下、反応させ、一般式（ＩＶ）の化合物にする反応、
【００３３】
【化６】
0006378344.tif 000007
【００３４】
ｂ）酸の付加下および加熱下で一般式（ＩＶ）の化合物を脱カルボキシル化し、一般式（Ｖ）の化合物に（つまり、一般式（Ｖ）のフルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリンに）する反応、
【００３５】
【化７】
0006378344.tif 000008
【００３６】
ｃ）一般式（Ｖ）の化合物（つまり、一般式（Ｖ）のフルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン）を、触媒の付加下、芳香族化し、一般式（Ｉ）の化合物に（つまり、一般式（Ｉ）のフルオロ−９−メチル−β−カルボリンに）する反応、
ここで、Ｒ１は−Ｆであり、Ｒ２は−Ｈまたは−Ｆであり、これは一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＶ）、および（Ｖ）の化合物に同様に当てはまり、
または、ここで、Ｒ１は−Ｈであり、Ｒ２は−Ｆであり、これは一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＶ）、および（Ｖ）の化合物に同様に当てはまる。
【００３７】
出発物質としてフルオロ−１−メチルトリプタミン塩酸塩は、市販されている（以下参照）。本発明の好ましい実施形態において、ステップａ）では、ｐＨ値２〜６、好ましくは３〜５、特に好ましくは、ｐＨ値４が、塩基の添加によって達成される。さらに好ましい実施形態において、ステップａ）’では、化合物ＩＶの結晶化が、氷水中でインキュベートすることによって促進される。
【００３８】
さらに好ましい実施形態において、ステップｂ）は、不活性ガス下で、特に好ましくはＮ２下で行われる。さらに、ステップｂ）における反応生成物の結晶化は、冷たい状態、特に好ましくは、０℃〜５℃で数時間インキュベートするステップｂ）’によって促進すると好ましい。さらに好ましい実施形態において、ステップｂ）における反応生成物の精製のために、メタノールからの再結晶化は、結晶化後に行われる。さらに、フルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン（つまり、一般式（Ｖ）の化合物）は、ステップｃ）において、最初に水に溶解し、塩基、例えば水酸化ナトリウムまたは炭酸ナトリウムなどの添加によって、ｐＨ値をアルカリに、特に好ましくは、ｐＨ値がｐＨ１１〜１４に、特に好ましくはｐＨ１３に調節すると好ましい。
【００３９】
好ましい実施形態において、ステップｃ）における酸化的芳香族化のための触媒は、とりわけ、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｔ／Ｃ、ＰｄＣｌ２、Ｐｄ／セピオライト、Ｐｄ／ＳｉＯ２、およびＰｄ／ＡｌＯ４であってもよい。さらに、酸化的芳香族化を可能にする更なる添加剤は、当業者に知られている。しかしながら、Ｐｄ／Ｃ（炭素上のパラジウム、活性炭上のパラジウム）が好ましくは触媒として使用される。
【００４０】
ステップａ）およびｃ）で添加される塩基は、互いに独立して、例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮＨ４ＯＨ、水酸化テトラアルキルアンモニウム、リジンまたはアルギニン等の無機塩基または有機塩基であることが可能である。当業者は、反応を実行するために、ここに適している塩基を知っている。しかしながら、好ましいのは、ＫＯＨおよびＮａＯＨそれぞれである。
【００４１】
ステップｂ）で添加される酸は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、リンゴ酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、マロン酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、スルホン酸、ホスホン酸、過塩素酸、硝酸、ギ酸、プロピオン酸、グルコン酸、乳酸、酒石酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、亜硝酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフチルスルホン酸、スルファニル酸、カンファースルホン酸、キナ酸、マンデル酸、ｏ−メチルマンデル酸、水素ベンゼンスルホン（ｈｙｄｒｏｇｅｎｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ）酸、ピクリン酸、アジピン酸、ｄ−ｏ−トリル酒石酸、タルトロン酸、α−トルイル酸、（ｏ−、ｍ−、ｐ−）トルイル酸、またはナフチルアミンスルホン酸等の無機酸または有機酸であってもよい。当業者は反応を実行するために、ここに適している酸を知っている。しかしながら、塩酸が好ましい。
【００４２】
更なる実施形態によると、本発明は、一般式（Ｉ）のフルオロ−９−メチル−β−カルボリンに向けられ、
【００４３】
【化８】
0006378344.tif 000009
【００４４】
式中、Ｒ１は−Ｆであり、Ｒ２は−Ｆであり、さらにより好ましくは、式中、Ｒ１は−Ｈであり、Ｒ２は−Ｆであり、最も好ましくは、Ｒ１は−Ｆであり、Ｒ２は−Ｈである。
［６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ）］
特に好ましい実施形態によれば、本発明は、β−カルボリンである６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、その調製、並びに、その医学的使用、及び６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンを含む医薬組成物に関する。化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、本願において部分的に「６Ｆ９ＭβＣ」または「ＡＣ１０２」とも略される。一方で、従来技術において公知の９−メチル−β−カルボリンは、部分的に「９ＭβＣ」または「ＡＣ００２」と略される。
【００４５】
本発明による化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、より個別化した、すなわちより具体的な形で、先行技術に開示されていない。さらに、驚くべきことに、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、治療的使用を支持する当該特別な性質によって、先行技術とは異なる、ということが明らかになっている。したがって、９−メチル−β−カルボリンと比較して、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、ヒト神経芽腫細胞の神経分化を促進することにおいて有効性の増加が証明された（実施例２参照）。さらに、９−メチル−β−カルボリンと比較して、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、膜透過性の増加と関係付けられる親油性の顕著な増加を示す。このことは、内耳の疾患および損傷のそれぞれの治療のために本発明による化合物の治療的使用にとって広範囲にわたって影響をもたらす。既に記述されるように、鼓膜、正円窓の膜および中央階の膜（膜ｔｅｃｔｏｒｉａｎａおよびライスナー膜）のような生物学的膜は、内耳の有毛細胞への道中に、活性剤のための天然の障害物を形成する。これは、鼓膜または正円窓における活性剤の局所適用に特に当てはまる。膜透過性の増加により活性剤の利用可能性も増加する。膜透過性に加えて体内での活性剤の分解は、特に、全身に投与される場合、当該有効性のために、および可能な副作用のためにも、重要な役割を果たす。一方、９−メチル−β−カルボリンは、６位でヒドロキシル化によって分解され、続く結合反応を用いて６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンになり、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの代謝経路は、フッ化物基によって阻止される。これにより、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの半減期は増加しただけでなく、潜在的に有毒な分解生成物を形成する危険性は減少した。６−および／または７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの有効性の増加により、他の９−アルキル−β−カルボリンと比較して、治療において低用量の使用が可能であるようである。このことは、体への負担およびさらに望ましくない副作用の負担を軽減することができるので、慢性疾患の長期治療のために特に非常に重要である。
【００４６】
本発明は、一般式（Ｉａ）の化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、並びに前記化合物の薬学的に許容できる塩、溶媒和物および水和物、並びにプロドラッグおよび複合体化合物に関する。
【００４７】
【化９】
0006378344.tif 000010
【００４８】
本願で使用される用語プロドラッグは不活性な形態、またはより低い効果的な形態で投与される薬理学的物質として定義される。投与後に、プロドラックは、当該活性形態、または効果的な形態に、上記の場合には、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンに変換される。
【００４９】
可能な酸は、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンと酸付加塩を形成することができ、次の通りであってもよい：硫酸、スルホン酸、リン酸、硝酸、亜硝酸、過塩素酸、臭化水素酸、塩酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、シュウ酸、グルコン酸（グルコン酸（ｇｌｙｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、デキストロン酸）、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、タルトロン酸（ヒドロキシマロン酸、ヒドロキシプロパン二酸）、フマル酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、マロン酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、（ｏ−、ｍ−、ｐ−）トルイル酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフチルアミンスルホン酸、スルファニル酸、カンファースルホン酸、キナ（ｃｈｉｎａ）酸（キナ（ｑｕｉｎｉｃ）酸）、ｏ−メチル−マンデル酸、水素ベンゼンスルホン酸（ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｂｅｎｚｅｎｅ  ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ピクリン酸（２，４，６−トリニトロフェノール）、アジピン酸、ｄ−ｏ−トリル酒石酸；メチオニン、トリプトファン、アルギニンのようなアミノ酸、特に、グルタミン酸またはアスパラギン酸のような酸性アミノ酸。さらにベタイン型も可能である。
【００５０】
本発明のさらなる態様は、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの調製方法に関し、次のステップを含む：
ａ）式（ＩＩａ）の５−フルオロ−１−メチルトリプタミン塩酸塩を出発物質として、一般式（ＩＩＩ）のグリオキシル酸水和物および塩基の付加下、反応させ、式（ＩＶａ）の化合物にする反応、
【００５１】
【化１０】
0006378344.tif 000011
【００５２】
ｂ）酸の付加下および加熱下で式（ＩＶａ）の化合物を脱カルボキシル化し、式（Ｖａ）の６−フルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリンにする反応、
【００５３】
【化１１】
0006378344.tif 000012
【００５４】
ｃ）６−フルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン（Ｖａ）を、触媒の付加下、芳香族化し、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（Ｉａ）にする反応。
【００５５】
出発物質５−フルオロ−１−メチルトリプタミン塩酸塩は、例えばアコス  ゲーエムベーハー（ＡＫｏｓ  ＧｍＢＨ）（シュタイネン（Ｓｔｅｉｎｅｎ））から、市販されている。本発明の好ましい実施形態において、ステップａ）では、ｐＨ値２〜６、好ましくはｐＨ値３〜５、特に好ましくはｐＨ値４が、塩基の添加によって達成される。さらに好ましい実施形態において、ステップａ）’では、化合物ＩＶａ結晶化が氷水中でインキュベートすることによって促進される。
【００５６】
さらに好ましい実施形態において、ステップｂ）における反応は、不活性ガス下で、特に好ましくはＮ２下で行われる。さらに、冷たい状態、特に好ましくは、０℃〜５℃で数時間インキュベートするステップｂ）’によって、ステップｂ）における反応生成物の結晶化を促進すると好ましい。さらに好ましい実施形態において、ステップｂ）における反応生成物の精製のためにメタノールからの再結晶化は、結晶化後に行われる。さらに、ステップｃ）における６−フルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリンは、最初に水に溶解し、塩基、例えば水酸化ナトリウムまたは炭酸ナトリウムなどの添加によって、ｐＨ値をアルカリに、特に好ましくは、ｐＨ値をｐＨ１１〜１４に、特に好ましくはｐＨ１３に調節すると好ましい。
【００５７】
好ましい実施形態において、ステップｃ）における酸化的芳香族化のための触媒は、とりわけ、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｔ／Ｃ、ＰｄＣｌ２、Ｐｄ／セピオライト、Ｐｄ／ＳｉＯ２、およびＰｄ／ＡｌＯ４であってもよい。さらに、酸化的芳香族化を可能にする更なる添加剤は、当業者に知られている。しかしながら、Ｐｄ／Ｃ（炭素上のパラジウム、活性炭上のパラジウム）が好ましくは触媒として使用される。
【００５８】
ステップａ）およびｃ）で添加される塩基は、互いに独立して、例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮＨ４ＯＨ、水酸化テトラアルキルアンモニウム、リジンまたはアルギニン等の無機塩基または有機塩基であることが可能である。当業者は、反応を実行するために、ここに適している塩基を知っている。しかしながら、好ましいのは、ＫＯＨおよびＮａＯＨそれぞれである。
【００５９】
ステップｂ）で添加された酸は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、リンゴ酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、マロン酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、スルホン酸、ホスホン酸、過塩素酸、硝酸、ギ酸、プロピオン酸、グルコン酸、乳酸、酒石酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、亜硝酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフチルスルホン酸、スルファニル酸、カンファースルホン酸、キナ酸、マンデル酸、ｏ−メチルマンデル酸、水素ベンゼンスルホン酸（ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｂｅｎｚｅｎｅ  ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ピクリン酸、アジピン酸、ｄ−ｏ−トリル酒石酸、タルトロン酸、α−トルイル酸、（ｏ−、ｍ−、ｐ−）トルイル酸、またはナフチルアミンスルホン酸等の無機酸または有機酸であってもよい。当業者は反応を実行するために、ここに適している酸を知っている。しかしながら、塩酸が好ましい。
【００６０】
驚くべきことに、すでに公知の試験された９−メチル−β−カルボリンのようなβ−カルボリンと比較して、本発明の化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（Ｉａ）は、内耳疾患の治療における有効性の増加を示すことが明らかになった。これは、外傷後の（特に内耳における）細胞再生のために重要である、重要な細胞因子の遺伝子発現を誘導する活性剤における実験（実施例４参照）、および音響外傷後の聴覚システムの再生に関する組織学的（実施例６参照）、生理学的（実施例７参照）実験の両実験において示された。さらに、いくつかの実験は、本発明の化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（Ｉａ）において有意に増加した親油性を示す（実施例３参照）。標準物質９−メチル−β−カルボリンに対して、とりわけ、次の利点を生じる：
１．膜透過性が増加する。
２．排出は減速される（６Ｆ９ＭβＣの排出半減時間は９ＭβＣより約１．７５倍高い）。
３．β−カルボリンは、６位でヒドロキシル化によって分解されることが他のβ−カルボリンから公知であるので、６位でのフッ化物基による続く結合反応は、この代謝経路を遮断し、結果として：
−経口投与後の生物学的利用能を改善し、
−毒性代謝物または潜在的アレルゲン性代謝物となる危険性を最小化する。
４．β−カルボリンのさらに他の公知の代謝経路は、インビボにおいて連続的Ｎ−メチル化が進行し、毒性のジメチル化分解産物につながる。ここで、最初に２位の窒素原子、その後９位の窒素原子がメチル化される。最新の実験において、６Ｆ９ＭβＣは、幸運にも毒性ジメチル化産物をもたらさず（実施例８参照）、したがって、毒性代謝物の危険性をさらに最小化することが示された。
５．活性剤における増加した有効性は、重要な細胞因子の遺伝子発現を誘導し（実施例４）、そのことは、外傷後の（特に内耳での）細胞再生のために重要であり、音響外傷後の聴覚システムの再生に関する組織学的（実施例６参照）、および生理学的（実施例７参照）実験においても、重要である。
［７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（７Ｆ９ＭβＣ）］
さらなる実施形態によれば、本発明は、β−カルボリン  ７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの調製、並びに７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの医学的使用、及び７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンを含む医薬組成物に関する。
【００６１】
化合物７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、本願において部分的に「７Ｆ９ＭβＣ」とも略されるだろう。
本発明は、一般式（Ｉｂ）の化合物７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、並びに前記化合物の薬学的に許容できる塩、溶媒和物および水和物、並びにプロドラッグおよび複合体化合物に関する。
【００６２】
【化１２】
0006378344.tif 000013
【００６３】
上記に説明される通り、本願で使用される用語プロドラッグは不活性な形態、またはより低い効果的な形態で投与される薬理学的物質として定義される。投与後に、プロドラックは、当該活性形態、効果的な形態に、上記の場合には、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンに変換される。
【００６４】
可能な酸は、本発明の７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンと酸付加塩を形成することができ、次の通りであってもよい：硫酸、スルホン酸、リン酸、亜硝酸、過塩素酸、臭化水素酸、塩酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、シュウ酸、グルコン酸（グルコン酸（ｇｌｙｃｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、デキストロン酸）、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、タルトロン酸（ヒドロキシマロン酸、ヒドロキシプロパン二酸）、フマル酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、（ｏ−、ｍ−、ｐ−）トルイル酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフチルアミンスルホン酸、スルファニル酸、カンファースルホン酸、キナ（ｃｈｉｎａ）酸（キナ（ｑｕｉｎｉｃ）酸）、ｏ−メチル−マンデル酸、水素ベンゼンスルホン酸（ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｂｅｎｚｅｎｅ  ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ピクリン酸（２，４，６−トリニトロフェノール）、アジピン酸、ｄ−ｏ−トリル酒石酸；メチオニン、トリプトファン、アルギニンのようなアミノ酸、特に、グルタミン酸またはアスパラギン酸のような酸性アミノ酸。さらにベタイン型も可能である。
【００６５】
本発明のさらなる態様は、本発明の化合物７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの調製方法に関し、次のステップを含む：
ａ）式（ＩＩｂ）の６−フルオロ−１−メチルトリプタミン塩酸塩を出発物質として、一般式（ＩＩＩ）のグリオキシル酸水和物および塩基の付加下、反応させ、式（ＩＶｂ）の化合物にする反応、
【００６６】
【化１３】
0006378344.tif 000014
【００６７】
ｂ）酸の付加下および加熱下で式（ＩＶｂ）の化合物を脱カルボキシル化し、式（Ｖｂ）の７−フルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリンにする反応、
【００６８】
【化１４】
0006378344.tif 000015
【００６９】
ｃ）７−フルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン（Ｖｂ）を、触媒の付加下、芳香族化する反応。
出発物質６−フルオロ−１−メチルトリプタミン塩酸塩は、例えばオタヴァケミカルズ  リミテッド（Ｏｔａｖａｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｌｔｄ．）（ヴォーン（Ｖａｕｇｈａｎ）、カナダ）から、市販されている。本発明の好ましい実施形態において、ステップａ）では、ｐＨ値２〜６、好ましくはｐＨ値３〜５、特に好ましくはｐＨ値４が、塩基の添加によって達成される。さらに好ましい実施形態において、ステップａ）’では、化合物ＩＶｂの結晶化が氷水中でインキュベートすることによって促進される。
【００７０】
さらに好ましい実施形態において、ステップｂ）における反応は、不活性ガス下で、特に好ましくはＮ２下で行われる。さらに、冷たい状態、特に好ましくは、０℃〜５℃で数時間インキュベートするステップｂ）’によって、ステップｂ）における反応生成物の結晶化を促進すると好ましい。さらに好ましい実施形態において、ステップｂ）における反応生成物の精製のために、メタノールからの再結晶化は、結晶化後に行われる。さらに、ステップｃ）における７−フルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリンを、最初に水に溶解し、塩基、例えば水酸化ナトリウムまたは炭酸ナトリウムなどの添加によって、ｐＨ値をアルカリに、特に好ましくは、ｐＨ値をｐＨ１１〜１４に、特に好ましくはｐＨ１３に調節すると好ましい。
【００７１】
好ましい実施形態において、ステップｃ）における酸化的芳香族化のための触媒は、とりわけ、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｔ／Ｃ、ＰｄＣｌ２、Ｐｄ／セピオライト、Ｐｄ／ＳｉＯ２、およびＰｄ／ＡｌＯ４であってもよい。さらに、酸化的芳香族化を可能にする更なる添加剤は、当業者に知られている。しかしながら、Ｐｄ／Ｃ（炭素上のパラジウム、活性炭上のパラジウム）が好ましくは触媒として使用される。
【００７２】
ステップａ）およびｃ）で添加される塩基は、互いに独立して、例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮＨ４ＯＨ、水酸化テトラアルキルアンモニウム、リジンまたはアルギニン等の無機塩基または有機塩基であることができる。当業者は、反応を実行するために、ここに適している塩基を知っている。しかしながら、好ましいのは、ＫＯＨおよびＮａＯＨそれぞれである。
【００７３】
ステップｂ）で添加された酸は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、リンゴ酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、マロン酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、スルホン酸、ホスホン酸、過塩素酸、硝酸、ギ酸、プロピオン酸、グルコン酸、乳酸、酒石酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、亜硝酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフチルスルホン酸、スルファニル酸、カンファースルホン酸、キナ酸、マンデル酸、ｏ−メチルマンデル酸、水素ベンゼンスルホン酸（ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｂｅｎｚｅｎｅ  ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ピクリン酸、アジピン酸、ｄ−ｏ−トリル酒石酸、タルトロン酸、α−トルイル酸、（ｏ−、ｍ−、ｐ−）トルイル酸、またはナフチルアミンスルホン酸等の無機酸または有機酸であってもよい。当業者は反応を実行するために、ここに適している酸を知っている。しかしながら、塩酸が好ましい。
【００７４】
驚くべきことに、すでに公知の試験された９−メチル−β−カルボリンのようなβ−カルボリンと比較して、本発明の化合物７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（Ｉｂ）は、内耳疾患の治療における有効性の増加を示すことが明らかになった。さらに、いくつかの実験は、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの有効性に関する最新の実験に基づいて、標準物質９−メチル−β−カルボリンに対して、とりわけ、次の利点を生じる：
１．膜透過性が増加する。
２．排出は減速される（７Ｆ９ＭβＣの排出半減時間は９ＭβＣより約１．５倍高い）。
３． 活性剤における増加した有効性は、重要な細胞因子の遺伝子発現を誘導し（実施例４および実施例５参照）、そのことは、外傷後の（特に内耳での）細胞再生のために重要である。
［医薬用途＆製剤］
本発明の化合物は、内耳の疾患または損傷の治療のために、特に内耳の神経構造および感覚構造の治療のために、特に適している。これらの疾患または損傷は、本願において、好ましくは、聴覚機能および／または前庭機能に影響を与える。随伴症状は、とりわけ、聴覚損傷、聴覚消失、めまい、平衡障害、耳鳴り、見当識障害、吐き気および嘔吐を含む。
【００７５】
したがって、本発明の態様は、医薬として使用するための一般式（I）（または一般式（I）のフルオロ−９−メチル−β−カルボリン）の化合物に関する。本発明はまた、医薬として使用するための６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの化合物に関する。本発明はまた、医薬として使用するための７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの化合物に関する。本発明の化合物、特に７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、および特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、内耳の疾患及び／または損傷、特に迷路性難聴の治療に特に適している。内耳の疾患および／または損傷は、好ましくは内耳の急性および慢性の疾患であってもよい。音響外傷、耳の爆風損傷、難聴および外傷は、内耳プロテーゼの移植中の内耳の急性疾患（挿入外傷）まで数えられる。内耳の慢性疾患は、とりわけ、慢性音響外傷（慢性騒音曝露による迷路性難聴）、老人性難聴（年齢関連難聴）、耳硬化症およびメニエール病を含む。用語迷路性難聴（蝸牛難聴または感覚難聴としても定義される）は、慢性騒音暴露に起因する難聴（慢性迷路性難聴または慢性騒音外傷としても定義される）、および老人性難聴（年齢関連難聴）も含む。
【００７６】
本発明のさらに他の態様は、したがって、内耳の疾患および／または損傷を治療するための、一般式（I）の化合物、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、および特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンに関し、ここで、内耳の疾患および/または損傷は、音響外傷、耳の爆風損傷、聴覚損失および挿入外傷を含む群から選択される内耳の急性疾患である。
【００７７】
本発明のさらに他の態様は、したがって、内耳の疾患および／または損傷を治療するための、一般式（I）の化合物、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、および特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンに関し、ここで、内耳の疾患および/または損傷は、慢性音響外傷、耳鳴りおよび老人性難聴を含む群から選択される内耳の慢性疾患である。
【００７８】
さらに、本発明の化合物は、聴覚損傷、または耳疾患によって引き起こされる、特に、耳の平衡感覚の損傷によって引き起こされるめまいおよび平衡感覚障害の治療のために、並びに記憶を増加させるため、学習能力を増大させるため、および保持力、特に短期記憶および長期記憶の保持力を増加させるために適している。
【００７９】
内耳の疾患および損傷はまた、抗生物質および／または細胞増殖抑制剤のような耳毒性物質によって引き起こされてもよい。本発明の化合物は、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、および特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、内耳の疾患および／または損傷の治療に適しており、内耳の損傷は、耳毒性物質によって引き起こされると特徴付けられる。耳毒性物質は、好ましくは抗生物質および／または細胞増殖抑制剤であり、特に好ましくは、次を含む、またはからなる群からである：アンピシリン、バカンピシリン、カルベニシリン、インダニル、メズロシリン、ピペラシリン、チカルシリン、アモキシシリン−クラブラン酸、アンピシリン−スルバクタム、ベンジルペニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、メチシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、タゾバクタム、チカルシリン、クラブラン酸、ナフシリン、セファロスポリン、セファドロキシル、セファゾリン、セファレキシン、セファロチン、セファピリン、セファラジン、セファクロル、セフェマンドール、セフォニシド、セフォテタン、セフォキシチン、セフプロジル、セフトメタゾール、セフロキシム、イオラカベフ（ｉｏｒａｃａｒｂｅｆ）、セフジニル、セフチブテン、セフォペラゾン、セフィキシム、セフォタキシム、セフポドキシムプロキセチル、セフタジジム、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフェピム、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、テリスロマイシン、セスロマイシン、スピラマイシン、アンシマシン（ａｎｓｙｍａｃｉｎ）、オエランドマイシン（ｏｅｌａｎｄｏｍｙｃｉｎ）、リンコマイシン、トロレアンドマイシン、シノキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、グレパフロキサシン、レボフロキサシン、イオメフロキサシン（ｉｏｍｅｆｌｏｘａｃｉｎ）、モキシフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、トロバフロキサシン、オキソリン酸、ゲミフロキサシン、ペルフレオキサシン（ｐｅｒｆｌｏｘａｃｉｎ）、イミペネム−シラスタチン、メロペネム、アズトレオナム、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、テイコプラニン、バンコマイシン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、クロルテトラサイクリン、チゲサイクリン、マフェニド、スルファジアジン銀、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファメトキサゾール、スルファサラジン、スルフィソキサゾール、トリメトプリム−スルファメトキサゾール、スルファメチゾール、リファブチン、リファンピン、リファペンチン、リネゾリド、ストレプトグラミン、キノプリスチン（ｑｕｉｎｏｐｒｉｓｔｉｎ）、ダルホプリスチン、バシトラシン、クロラムフェニコール、ホスホマイシン、イソニアジド、メテナミン、メトロニダゾール、ムピロシン、ニトロフラントイン、ニトロフラゾン、ノボビオシン、ポリミキシン、スペク��ノマイシン、トリメトプリム、コリスチン、シクロセリン、カプレオマイシン、エチオナミド、ピラジナミド、パラ−アミノサリチル酸、エリスロマイシン−２’−アセテート、エリスロマイシン−２’−ステアレート、エリスロマイシンエストレート、エチルコハク酸エリスロマイシン、グルタミン酸エリスロマイシン、リファンピシン、ミコナゾール、ケトコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、ビホナゾール、ブトコナゾール、フェンチコナゾール、イソコナゾール、オキシコナゾール、セルタコナゾール、スルコナゾール、チオコナゾール、フルコナゾール、イトロコナゾール（ｉｔｒｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、イサブコナゾール、ラブコナゾール、ポサコナゾール、ボリコナゾール、テラコナゾール、アプフュンギン（ａｂｆｕｎｇｉｎ）、テルビナフィン、アモロルフィン、ナフチフィン、ブテナフィン、アニデュラファンギン、カスポファンギン、ミカファンギン、安息香酸、シクロピロックスオラミン、トルナフタート、５−フルオロシトシン、グリセオフルビン、ハロプロジン、フシジン酸、グラミシジン、プリスチナマイシン、ラモプラニン、チロトリシン、ナタマイシン、リモシジン、フィリピン、ナイスタチン、アムホテリシンＢ、カンジシン、およびハマイシン。
【００８０】
従って、本発明のさらなる態様は、内耳の疾患および／または損傷を治療するための、一般式（I）の化合物、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンに関し、ここで内耳の損傷は、耳毒性物質によって引き起こされる。
【００８１】
本発明のさらなる態様は、内耳の疾患および／または損傷を治療するための薬物を調製するための、本発明の化合物、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの使用に関する。本発明に係る実施形態は、一般式（Ｉ）の化合物、好ましくは、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（Ｉｂ）、および特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（Ｉａ）の投与によって、内耳の疾患および/または損傷を治療するための方法に関する。
【００８２】
さらに、本発明のさらなる興味深い側面は、下記の点に向けられるべきである。我々は、実験において、細胞レベルで、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ）は、８個の因子によってＣＲＥＢの濃度を増加させ、ＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子）の濃度を３倍まで増加させることを、明らかにしている。これらの洞察は、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ）が、内耳の疾患および／または損傷の治療に有用であるだけでなく、学習および記憶を促進することも示唆している。
【００８３】
学習および記憶の基本的なメカニズムは、非常に複雑である。それらは、分子レベルで、細胞レベルで、システム生物学のレベルで、および心理学のレベルで考えることができる。分子レベルでの記憶形成のための重要なプロセスの一つは、ｃＡＭＰ応答配列結合タンパク質（ＣＲＥＢ）の活性化である。これは、シナプスの新形成に、記憶形成に連結するプロセスにつながる。このプロセスは、多くの因子によって調節される。正の（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）増幅は、脳ＢＤＮＦおよび当該受容体ＴＲＫＢによって誘導される。生物行動実験（実施例９参照）は、未処置コントロール動物と比較して、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ）の腹腔内投与は、学習プロセスを促進し、記憶を向上させるということを動物モデルラットで示している。
【００８４】
本発明のさらなる態様は、したがって、学習および記憶を向上させるため、記憶を増加させるため、または学習能力を増加させるため、および保持性を増加させるための、一般式（Ｉ）の化合物、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンに関する。
【００８５】
本発明のさらなる態様は、学習および記憶を向上させるための医薬製剤の調製のために、本発明の化合物、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンを使用することに関する。本発明の実施形態は、一般式（Ｉ）の化合物、好ましくは、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（Ｉｂ）、特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（Ｉａ）の化合物を投与することにより学習および記憶を向上させるための方法に関する。
【００８６】
したがって、本発明のさらに他の実施形態は、学習プロセスおよび記憶プロセスを向上させるための一般式（Ｉ）の化合物、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンおよび、特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（Ｉａ）の化合物に関する。
【００８７】
本発明のさらなる態様は、学習プロセスおよび／または記憶プロセスを向上させるための医薬製剤の調製のために、本発明の化合物、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンを使用することに関する。本発明の実施形態は、一般式（Ｉ）の化合物、好ましくは、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（Ｉｂ）、特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（Ｉａ）の化合物を投与することにより学習プロセスおよび／または記憶プロセスを向上させるための方法に関する。
【００８８】
本発明のさらなる態様は、少なくとも一つの本発明の化合物（または少なくとも一つの一般式（Ｉ）の化合物）を含む液滴、軟膏、スプレー、リポソーム、ゲル、エマルションまたは注射液の形態の医薬組成物に関する。
【００８９】
本発明のさらなる態様は、一つ以上の本発明の化合物（一つ以上の一般式（Ｉ）の化合物）を含む液滴、軟膏、スプレー、リポソーム、ゲル、エマルションまたは注射液の形態の医薬組成物に関する。
【００９０】
本発明のさらに他の態様は、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンを含む液滴、軟膏、スプレー、リポソーム、ゲル、エマルションまたは注射液の形態の医薬組成物に関する。
【００９１】
本発明のさらに他の態様は、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンを含む液滴、軟膏、スプレー、リポソーム、ゲル、エマルションまたは注射液の形態の医薬組成物に関する。
【００９２】
本発明のさらに他の態様は、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、および７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンを含む液滴、軟膏、スプレー、リポソーム、ゲル、エマルションまたは注射液の形態の医薬組成物に関する。
【００９３】
したがって、本発明は、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、および／または７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンを含む液滴、軟膏、スプレー、リポソーム、ゲル、エマルションまたは注射液の形態の医薬組成物にも関する。
【００９４】
さらに、本発明は、少なくとも一つの本発明の化合物（または少なくとも一つの一般式（Ｉ）の化合物）またはその塩を用いて調製される医薬組成物にも関する。
さらに、本発明は、一つ以上の本発明の化合物（または一つ以上の一般式（Ｉ）の化合物）またはその塩を用いて調製される医薬組成物に関する。
【００９５】
さらに、本発明は、本発明の化合物７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンまたはその塩を用いて調製される医薬組成物に関する。
さらに、本発明は、本発明の化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンまたはその塩を用いて調製される医薬組成物に関する。
【００９６】
本発明は、本発明の化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンまたはその塩を用いて、および本発明の化合物７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンまたはその塩を用いて調製される医薬組成物にも関する。
【００９７】
同様に、本発明は、本発明の化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンおよび／または７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、またはそれらの塩を用いて調製される医薬組成物に関する。
【００９８】
医薬組成物は、少なくとも一つの本発明の化合物（または一つの一般式（Ｉ）の化合物）に加えて、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンに加えて、特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンに加えて、好ましくは薬学的に許容できる担体、アジュバント、および／または溶媒を含む。
【００９９】
医薬組成物は、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンに加えて、好ましくは薬学的に許容できる担体、アジュバント、および／または溶媒を含む。
本発明の化合物を含む医薬組成物は、経皮適用システム（プラスター、フィルム）、液滴、丸剤、錠剤、フィルム錠剤、層錠、糖衣錠、ゲル、ヒドロゲル、軟膏、シロップ、顆粒、坐剤（口蓋垂（ｕｖｕｌａｓ））、エマルジョン、分散体、マイクロカプセル、カプセル、マイクロ製剤、ナノ製剤、リポソーム、粉末、スプレー、エアロゾル、溶液、ジュース、懸濁液、輸液または注射液の形態で調製されおよび投与されてもよい。好ましいのは、リポソーム、ゲルおよびエマルジョンの形態の医薬組成物である。特に好ましくはヒドロゲル製剤である。
【０１００】
当該組成物は、とりわけ、吸入または静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、粘膜、経口、直腸、経皮、局所、頬、皮内、胃内、皮内、鼻腔内、頬内、経皮、鼓膜内または舌下投与に適している。特に好ましくは、中耳に投与または注射、および鼓膜に局所投与である。
【０１０１】
薬学的に許容される担体は、例えば、乳糖、デンプン、ソルビトール、スクロース、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、タルク、マンニトール、エチルアルコールなどに使用されてもよい。粉末および錠剤は、当該担体の５〜９５％からなることができる。
【０１０２】
さらに、エクスプローダー（ｅｘｐｌｏｄｅｒｓ）、染料、香料および/または結合剤を、医薬組成物に添加することができる。
液体製剤は、溶液、懸濁液、スプレーおよびエマルジョンを含む。たとえば注射溶液は、非経口注射用に、水に基づき、または水−プロピレングリコールに基づく。坐剤の調製のために、好ましくは、低融点ワックス、脂肪酸エステルおよびグリセリドを使用する。
【０１０３】
カプセルは、例えばメチルセルロース、ポリビニルアルコールまたは変性ゼラチンもしくはデンプンから調製される。エクスプローダーとして、デンプン、カルボキシメチルデンプンナトリウム；イナゴマメガム、カラヤガム、グアーガム、トラガカントガムなどのような天然および合成ガム；および寒天；およびメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、微結晶性セルロースのようなセルロース誘導体；およびアルギン酸塩；粘土およびベントナイトを使用することができる。これらの成分を、２〜３０ｗｔ％の量で使用してもよい。
【０１０４】
結合剤としては、砂糖；トウモロコシ、米またはジャガイモからの澱粉；アカシアガムまたはグアーガム、ゼラチン  トラガカントガムのような天然および合成ガム；アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸アンモニウムカルシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ワックス；マグネシウムケイ酸アルミニウムのような無機化合物を添加することができる。結合剤を、１〜３０ｗｔ％で添加することができる。
【０１０５】
潤滑剤として、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸カリウム、ステアリン酸のようなステアリン酸塩、ステアリン酸、高融点ワックス；塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウムのような水溶解性潤滑剤、ポリエチレングリコール、ホウ酸、ロイシンのようなアミノ酸を使用してもよい。当該潤滑剤を、０．０５〜１．５ｗｔ％の量で使用することができる。
【０１０６】
したがって、すべての医薬製剤が好ましく、正円窓膜に局所的に活性剤を投与するのに適している。さらに、医薬製剤は、膜透過促進剤を含む場合、本発明の一般式（Ｉ）の化合物、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンにおける正円窓膜の通過をサポートする。従って、液体またはゲル型製剤が特に好ましい。もちろん、活性剤を経口的に投与することも可能である。
【０１０７】
一般式（I）の化合物の任意の型の投与のための医薬組成物は、治療効果のために一般式（Ｉ）の化合物、必要に応じて無機または有機の、固体または液体の薬学的に許容できる担体物質の十分な量を含む。中耳の局所投与に適している医薬組成物は、水性溶液または懸濁液を含み、例えば、一般式（Ｉ）の化合物のみ、または可能な担体と共に含む凍結乾燥製剤の場合、中耳に投与する前に調製することができる。
【０１０８】
７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの任意の型の投与のための医薬組成物は、治療効果のために十分な量の７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンを含み、必要に応じて無機または有機の、固体または液体の薬学的に許容できる担体物質を含む。中耳の局所投与に適している医薬組成物は、水性溶液または懸濁液を含み、例えば、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンのみ、または担体と共に含む凍結乾燥製剤の場合、中耳に投与する前に調製することができる。
【０１０９】
６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの任意の型の投与のための医薬組成物は、治療効果のために十分な量の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンを含み、必要に応じて無機または有機の、固体または液体の薬学的に許容できる担体物質を含む。中耳の局所投与に適している医薬組成物は、水性溶液または懸濁液を含み、例えば、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンのみ、または担体と共に含む凍結乾燥製剤の場合、中耳に投与する前に調製することができる。
【０１１０】
医薬組成物はさらに、生分解性または非生物学的分解性の、水性または非水性の、またはミクロスフェアに基づかれるゲルを含む。当該ゲルの例は、ポリオキサマーズ（ｐｏｌｙｏｘａｍｅｒｅｓ）、ヒアルロネート、キシログルカン、キトサン、ポリエステル、ポリアクチド（ｐｏｌｙａｃｔｉｄｅｓ）、ポリグリコリド、またはそれらのコポリマー  ＰＬＧＡ、サッカロースアセテート（ｓａｃｃｈａｒｏｓｅａｃｅｔａｔｅ）、イソブチレート、およびグリセリンモノオレエートを含む。腸内投与または非経口投与に適している医薬組成物は、上記のように、錠剤、またはゼラチンカプセル、または水性溶液、または懸濁液を含む。
【０１１１】
医薬組成物は、滅菌されることができ、および／または例えば保存剤、安定化剤、湿潤剤および／または乳化剤、浸透圧および／または緩衝液を調節するための塩などのアジュバントを含むことができる。所望であれば、本発明に係る医薬組成物は、さらなる活性剤を含んでもよい。これらの医薬組成物は、従来技術から公知の任意の種類の方法によって、例えば、混合、顆粒化、糖衣化（ｃｏｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎｇ）、溶解、凍結乾燥のような従来の方法によって、調製されることができ、凍結乾燥剤のために、約０．０１〜１００ｗｔ％、好ましくは０．１〜５０ｗｔ％、最大１００ｗｔ％の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンを含むことができる。これらの医薬組成物は、凍結乾燥剤のために、約０．０１〜１００ｗｔ％、好ましくは０．１〜５０ｗｔ％、最大１００ｗｔ％の７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンも含むことができる。これらの医薬組成物は、凍結乾燥剤のために、約０．０１〜１００ｗｔ％、好ましくは０．１〜５０ｗｔ％、最大１００ｗｔ％の一般式（Ｉ）の化合物も含むことができる。
【０１１２】
好ましい実施形態において、本発明に係る医薬組成物は、局所投与用に製剤化される。耳性投与に適している担体は、薬学的に許容でき、本発明に係る化合物および／または当該更なる活性剤と反応しない、例えば、食塩、アルコール、植物油、ベンジルアルコール、アルキルグリコール、ポリエチレングリコール、グリセリントリアセテート、ゼラチン；ラクトースまたはデンプンのような炭水化物、炭酸マグネシウム（マグネシア、チョーク）、ステアリン酸塩（ワックス）、タルク、および鉱油（ワセリン）などの有機または無機物質である。記述される組成物は、滅菌されることができ、および／または潤滑剤、チオメルサール（すなわち、５０ｗｔ％）のような保存剤、安定化剤、および／または湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼすための塩、緩衝物質、染料および/または香味料のようなアジュバントを含むことができる。所望であれば、これらの組成物は、一つまたは複数のさらなる活性剤を含んでもよい。本発明に係る耳性組成物は、異なる化合物および／または物質、例えば、抗生物質のような他の生理活性物質；ステロイド、コルチゾン、鎮痛剤、アンチピリン、ベンゾカイン、プロカインのような抗炎症活性剤などを含んでもよい。
【０１１３】
局所投与のための本発明に係る組成物は、他の薬学的に許容できる化合物および／または物質を含むことができる。本発明の好ましい実施形態において、局所的賦形剤は、選択され、耳、中耳に、もしくは外耳道に投与される場合、一般式（Ｉ）の化合物、特に７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの、および可能な付加的な活性剤、または血液循環システムもしくは中枢神経システムに対する活性剤の放出を増大しない。可能な担体物質は、炭化水素酸、親水鉱油（ワセリン）のような水を含まない吸着剤、および水を含まないラノリン（すなわちアクアフォー（Ａｑｕａｐｈｏｒ（登録商標））を含み、ラノリンおよびコールドクリームのような水−オイルエマルジョンに基づかれることを意味する。より好ましくは、担体物質は基本的に除外せず、通常担体物質を含み、担体物質は、水溶性であり、並びに水中油型エマルジョン（クリームまたは親水性軟膏）に基づかれる物質であり、およびポリエチレングリコールに基づかれる担体物質のように水溶性基盤（ｂａｓｉｓ）の物質であり、およびメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースのようないくつかの物質を用いてゲル化された水溶液である。
【０１１４】
錠剤またはカプセルの形態での経口投与のために、本発明に係る化合物は、非毒性の薬学的に許容できるアジュバントと混合されることができ、アジュバントは、プレゲル化コーンスターチ、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースのような結合剤；ラクトース、サッカロース、ブルコース、マンニトール、ソルビトール、および他の還元糖および非還元糖、微結晶セルロース、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウムのような充填剤；ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ、ステアリン酸、ステアリルフマル酸ナトリウム、ベヘン酸グリセリル、ステアリン酸カルシウムなどの潤滑剤; ジャガイモデンプンまたはグリコール酸デンプンナトリウムのような崩壊剤；ドデシル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤；染料；香料；ゼラチン；甘味料；アラビアガム、トラガカントガムのような天然および合成ゴム、またはアルギン酸塩；緩衝塩；カルボキシメチルセルロース；ポリエチレングリコール；ワックスなど、を含むリストから選択されることができる。
【０１１５】
錠剤は、濃縮糖溶液によって被覆されることができ、例えば、アラビアガム、ゼラチン、タルク、酸化チタンなどを含むことができる。他の実施形態において、錠剤は、揮発性有機溶媒に、または有機溶媒の混合物に溶解するポリマーによって被覆されることができる。好ましい実施形態において、一般式（Ｉ）の化合物、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、および特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、即時放出用の錠剤として、徐放性形態の錠剤として製剤化される。即時放出用剤形は、６０分以下のような短い期間内に、大部分のまたは全量の一般式（Ｉ）の化合物の放出を可能にし、本発明に係る化合物の迅速な吸収を可能にする。徐放性形態は、一般式（Ｉ）の化合物の治療的に活性な血漿レベルに到達するために、および／またはより長い期間にわたって一定のこの治療的に活性な血漿レベルを維持するために、および／または一般式（Ｉ）の化合物、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、および特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの薬物動態学的特性を修正するために、より長い期間にわたって遅延放出を可能にする。
【０１１６】
本発明の化合物は、軟ゼラチンカプセルを製剤化するために、例えば、植物油またはポリエチレングリコールと混合することができる。硬ゼラチンカプセルは、ラクトース、サッカロース、マンニトール；ジャガイモデンプン、コーンスターチのようなデンプン、またはアミロペクチン、セルロース誘導体、またはゼラチンのような錠剤のための上述のアジュバントのいずれかを用いて顆粒形態の本発明の化合物を含むことができる。さらに、本発明に係る化合物の液体または半液体形態は、ハードゼラチンカプセルに充填することができる。
【０１１７】
一般式（Ｉ）の本発明に係る化合物、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、および特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、例えばポリグリコール酸／乳酸（ＰＧＬＡ）から調製されるマイクロビーズまたはマイクロカプセル中にも組み込むことができる。ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸とのコポリマー、ポリ−ε−カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリヒドロプラン（ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｐｕｒａｎｅｓ）、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマー、を含むリストから選択される生体適合性ポリマーは、本発明の医薬組成物からの本発明の化合物の制御放出を達成するために使用されることができる。
【０１１８】
さらなる実施形態において、一般式（Ｉ）の本発明に係る化合物、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、および特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、経口投与用の液体製剤として提供される。経口投与用の液体製剤を、溶液、シロップ、エマルジョンまたは懸濁液の形態で提供することができる。代替的に、経口投与用の液体製剤を、適用前に、水または他の適切な担体物質を用いて経口投与用の乾燥製剤の再構成によって調製することができる。経口投与用の製剤を、本発明に係る化合物の制御された遅延放出、およびおそらく付加的な活性剤を得ることができるように製剤化することができる。
【０１１９】
液体形態の経口投与のために、本発明に係る化合物を、エタノール、グリセリン、水のような非毒性の薬学的に許容される不活性担体物質；ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または硬化食用脂懸のような懸濁剤；レシチンまたはアラビアガムのような乳化剤；アーモンド油、油性エステル、エタノールまたは分画された植物油のような非水性担体物質；メチルもしくはプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸などの防腐剤、と共に使用することができる。例えば、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、クエン酸のような酸化防止剤のような安定化剤を、剤形の安定化のためにも使用することができる。例えば、本発明に係る化合物の溶液を、約０．２ｗｔ％、約２０ｗｔ％まで含むことができ、ここで平滑化（ｌｅｖｅｌｌｉｎｇ）化合物は、糖、並びにエタノール、水、グリセリンおよびプロピレングリコールの混合物であることができる。任意に、これらの液体製剤は、増粘剤および/または他のアジュバントとして、染料、香料、サッカリン、カルボキシセルロースを含むことができる。
【０１２０】
さらなる実施形態において、本発明に係る化合物の治療的に活性な量は、溶液によって経口投与され、ここで溶液は、保存剤、甘味剤、可溶化剤および溶媒を含んでもよい。経口投与のための溶液は、一つ以上の緩衝剤、香料またはさらなる賦形剤を含んでもよい。さらなる実施形態において、ペパーミントまたは他の香料を経口投与のための本発明の化合物の溶液に添加する。
【０１２１】
吸入による投与のために、本発明に係る化合物は、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガスのような適切な推進剤を用いて、加圧パックまたは噴霧器を用いてエアロゾルスプレーの剤形のように、適切な方法で投与することができる。加圧エアロゾルを使用する場合、投与量は、測定された量を投与するためのバルブを提供することによって決定されることができる。吸入器（ｉｎｈａｌｅｒｓ）または吸入器（ｉｎｓｕｆｆｌａｔｏｒｓ）において使用するための、例えばゼラチンなどのカプセルおよびカートリッジを、本発明に係る化合物、およびおそらく一つ以上のさらなる活性剤、並びにラクトースまたはデンプンのような適切な粉末基体を含むように、製剤化することができる。
【０１２２】
注射による非経口投与のための溶液を、本発明に係る化合物の、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの、および特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの水溶性の薬学的に許容できる塩の水溶液から、約０．５ｗｔ％〜１０ｗｔ％の濃度で調製することができる。これらの溶液は、安定剤および／または緩衝物質も含むことができ、適切な方法で、異なる投与単位を有するアンプルとして提供されることができる。
【０１２３】
したがって、本願において示される本発明の化合物、特に、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの、および特に好ましくは６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、内耳の疾患および／または損傷を治療するための医薬組成物の調製に有用である。ここで、内耳の疾患および／または損傷は、好ましくは、内耳の急性および/または慢性疾患である。音響外傷、耳の爆風損傷、難聴および挿入外傷は、内耳の急性疾患にとりわけ属する。慢性音響外傷、耳鳴り、および老人性難聴は、内耳の慢性疾患に属する。疾患および／または損傷は、さらに、それらが耳毒性物質によって引き起こされ得るこという事実によって特徴付けられる。
【図面の簡単な説明】
【０１２４】
【図１】一般式（ＩＩ）のフルオロ−１−メチルトリプタミン（塩酸塩として）およびｇｌｏｘｙｌｉｃ酸水和物（ＩＩＩ）の三段階の反応スキームであり、一般式（ＩＶ）および一般式（Ｖ）のフルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリンの中間体生成物を得て一般式（Ｉ）のフルオロ−９−メチル−β−カルボリンにする反応スキーム。ここで、Ｒ１＝−ＦおよびＲ２＝−Ｈまたは−Ｆのいずれかを適用し、これは一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＶ）、および（Ｖ）の化合物に同様に適用し、または、Ｒ１＝−ＨおよびＲ２＝−−Ｆを適用し、これは一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＶ）、および（Ｖ）の化合物に同様に適用する。
【図１ａ】５−フルオロ−１−メチルトリプタミン塩酸塩（ＩＩａ）およびｇｌｏｘｙｌｉｃ酸水和物（ＩＩＩ）の三段階の反応スキームであり、中間体生成物（ＩＶａ）および６−フルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン（Ｖａ）を得て６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（Ｉａ）にする反応スキーム。
【図１ｂ】６−フルオロ−１−メチルトリプタミン塩酸塩（ＩＩｂ）およびｇｌｏｘｙｌｉｃ酸水和物（ＩＩＩ）の三段階の反応スキームであり、中間体生成物（ＩＶｂ）および７−フルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン（Ｖｂ）を得て７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（Ｉｂ）にする反応スキーム。
【図２】ＡＣ１０２（６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン）と共にＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞株の１５日間インキュベーション。
【図３】ＡＣ００２（９−メチル−β−カルボリン）と共にＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞株の１５日間インキュベーション。  図２および図３は、濃度を異ならせて６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（ＡＣ１０２）の濃度増加に１５日間曝されたヒト神経芽腫細胞（ＳＨ−ＳＹ５Ｙ）の培養物を示す（図２）。比較のために同じ条件での９−メチル−β−カルボリン（ＡＣ１０２）の効果を、図３に示す。上段は、７０μｍｏｌ／Ｌを用いての最新の実験に由来し、一方下段は、以前の実験から濃度依存性を示す。本発明に係る化合物（ＡＣ１０２）は、細胞の増殖を阻害し、スリム伸展の出芽、ならびに細胞の大きさと形状の変化を誘導する。これは、分化誘導によって説明される。濃度０μＭ（参照）および３０μＭを、両方の時間で比較すると、化合物におけるこの効果は、特に顕著である。
【図４】９−メチル−β−カルボリン（９ＭβＣ、ＡＣ００２）および６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ、ＡＣ１０２）のＨＰＬＣクロマトグラム。反応時間は、５．３ｍｉｎおよび７．３ｍｉｎである。カラム：フェノメネックス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）  ルナ（Ｌｕｎａ）  ３ｕＣ１８（２）１００Ａ、溶出液：ＡＣＮ９０％／ＮＨ４Ａｃ４０ｍＭ［４５／５５］。
【図５Ａ】６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）に対するＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の曝露２日後（ライトグレーのバー）、７日後（濃い灰色のバー）、および１４日後（黒いバー）それぞれのＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子）の相対的な遺伝子発現を示す。相対的な遺伝子発現は、標準条件に対する各因子の遺伝子発現を意味する。
【図５Ｂ】６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）に対するＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の曝露２日後（ライトグレーのバー）、７日後（濃い灰色のバー）、および１４日後（黒いバー）それぞれのＬｉｆ（白血病阻害因子）の相対的な遺伝子発現を示す。相対的な遺伝子発現は、標準条件に対する各因子の遺伝子発現を意味する。
【図５Ｃ】６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）に対するＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の曝露２日後（ライトグレーのバー）、７日後（濃い灰色のバー）、および１４日後（黒いバー）それぞれのＮＴ３（ニューロトロフィン３）の相対的な遺伝子発現を示す。相対的な遺伝子発現は、標準条件に対する各因子の遺伝子発現を意味する。
【図５Ｄ】６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）に対するＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の曝露２日後（ライトグレーのバー）、７日後（濃い灰色のバー）、および１４日後（黒いバー）それぞれのＩｄ２（分化２の阻害剤）の相対的な遺伝子発現を示す。相対的な遺伝子発現は、標準条件に対する各因子の遺伝子発現を意味する。
【図５Ｅ】６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）に対するＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の曝露２日後（ライトグレーのバー）、７日後（濃い灰色のバー）、および１４日後（黒いバー）それぞれのＢＴＧ２（Ｂ細胞転座遺伝子２）の相対的な遺伝子発現を示す。相対的な遺伝子発現は、標準条件に対する各因子の遺伝子発現を意味する。
【図５Ｆ】６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）に対するＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の曝露２日後（ライトグレーのバー）、７日後（濃い灰色のバー）、および１４日後（黒いバー）それぞれのＣｂｌｎ（セレベリン１前駆体タンパク質）の相対的な遺伝子発現を示す。相対的な遺伝子発現は、標準条件に対する各因子の遺伝子発現を意味する。
【図５Ｇ】６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）に対するＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の曝露２日後（ライトグレーのバー）、７日後（濃い灰色のバー）、および１４日後（黒いバー）それぞれのＢａｘ／Ｂｃｌ２比の相対的な遺伝子発現を示す。相対的な遺伝子発現は、標準条件に対する各因子の遺伝子発現を意味する。
【図５Ｈ】６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）に対するＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の曝露２日後（ライトグレーのバー）、７日後（濃い灰色のバー）、および１４日後（黒いバー）それぞれのＤＲＤ２Ｓ（ドーパミン受容体サブタイプ２の短い変異体）の相対的な遺伝子発現を示す。相対的な遺伝子発現は、標準条件に対する各因子の遺伝子発現を意味する。
【図５Ｉ】６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）に対するＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の曝露２日後（ライトグレーのバー）、７日後（濃い灰色のバー）、および１４日後（黒いバー）それぞれのＤＫＫ１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ関連タンパク質１）の相対的な遺伝子発現を示す。相対的な遺伝子発現は、標準条件に対する各因子の遺伝子発現を意味する。
【図６Ａ】７Ｆ９ＭβＣに対するＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の曝露２日後（ライトグレーのバー）、７日後（濃い灰色のバー）、および１４日後（黒いバー）それぞれのＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子）の相対的な遺伝子発現を示す。相対的な遺伝子発現は、標準条件に対する各因子の遺伝子発現を意味する。
【図６Ｂ】７Ｆ９ＭβＣに対するＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の曝露２日後（ライトグレーのバー）、７日後（濃い灰色のバー）、および１４日後（黒いバー）それぞれのＬｉｆ（白血病阻害因子）の相対的な遺伝子発現を示す。相対的な遺伝子発現は、標準条件に対する各因子の遺伝子発現を意味する。
【図６Ｃ】７Ｆ９ＭβＣに対するＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の曝露２日後（ライトグレーのバー）、７日後（濃い灰色のバー）、および１４日後（黒いバー）それぞれのＤＲＤ２Ｓ（ドーパミン受容体サブタイプ２の短い変異体）の相対的な遺伝子発現を示す。相対的な遺伝子発現は、標準条件に対する各因子の遺伝子発現を意味する。
【図６Ｄ】７Ｆ９ＭβＣに対するＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞の曝露２日後（ライトグレーのバー）、７日後（濃い灰色のバー）、および１４日後（黒いバー）それぞれのＤＫＫ１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ関連タンパク質１）の相対的な遺伝子発現を示す。相対的な遺伝子発現は、標準条件に対する各因子の遺伝子発現を意味する。
【図７】音響外傷後のモルモットの蝸牛切断物におけるファロイジン（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８を用いて標識された）を用いた免疫組織化学的染色後の蛍光顕微鏡画像、ここで、片方の耳を６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ、耳につき合計で０．１０５ｍｇ）を用いて処理し（図７Ｂ）、未処理のもう片方の耳は、個体内対照（「ｃｏｎｔｒ」とも呼ばれる、図７Ａ）になる。内有毛細胞（ＩＨＣ）およびと三列（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ）の外有毛細胞（ＯＨＣ）を認識することができる。死細胞は白い矢印を用いて強調表示され、音響外傷の損傷効果を明らかにする。スケール＝２５μｍ。
【図８】音響外傷後のモルモットの蝸牛切断物におけるファロイジン（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８を用いて標識された）を用いた免疫組織化学的染色後の蛍光顕微鏡画像、ここで、片方の耳を９−メチル−β−カルボリン（９ＭβＣ、耳につき合計で０．２ｍｇ）を用いて処理し（図８Ｂ）、未処理のもう片方の耳は、個体内対照（「ｃｏｎｔｒ」とも呼ばれる、図８Ａ）になる。内有毛細胞（ＩＨＣ）および外有毛細胞（ＯＨＣ）を認識することができる。死細胞は白い矢印を用いて強調表示され、音響外傷の損傷効果を明らかにする。スケール＝１００μｍ。
【図９】図９は、音響的に誘導された騒音外傷後のモルモットにおける聴覚閾値の永久的なシフトを示し、ここで、騒音外傷の片方の耳を６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ、耳につき合計で０．１８ｍｇ）を用いて処理し、未処理のもう片方の耳は、個体内対照（ｃｏｎｔｒ）になる。聴力閾値は、音響誘発脳幹電位を測定することによって決定され、騒音外傷前３日間（Ｄ−３）、騒音外傷後３０分（Ｄ０）、および騒音外傷後の１４日目（Ｄ１４）に測定された。聴力閾値の永久的なシフトは、測定値Ｄ１４−Ｄ−３から計算された。示された値は、４つの独立した測定の平均値である（ｎ＝４）。
【図１０】図９と同様に、しかしながら、音響的に誘導された騒音外傷後のモルモットにおける聴覚閾値のリカバリーを示す。聴覚閾値は、測定値Ｄ０−Ｄ１４から計算された。示された値は、４つの独立した測定の平均値である（ｎ＝４）。
【図１１】図１１は、音響的に誘導された騒音外傷後のモルモットにおける聴覚閾値のリカバリーを示し、ここで、騒音外傷の片方の耳を９−メチル−β−カルボリン（９ＭβＣ、耳につき合計で０．２ｍｇ）を用いて処理し、未処理のもう片方の耳は、個体内対照（ｃｏｎｔｒ）になる。聴力閾値は、音響誘発脳幹電位を測定することによって決定され、音響騒音外傷前３日間（Ｄ−３）、音響騒音外傷後（Ｄ１）、および音響騒音外傷後の１４日目（Ｄ１４）に測定された。聴覚閾値のリカバリーは、測定された値Ｄ１−Ｄ１４から計算した。
【図１２】図１１と同様に、しかしながら、０．３５ｍｇの９−メチル−β−カルボリンを耳につき投与した。
【図１３】未処理の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンのＨＰＬＣクロマトグラム（６Ｆ９ＭβＣ、図１３Ａ）、肝臓ホモジネートと共に１時間インキュベートされた６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（図１３Ｂ）、６−フルオロ−２，９−ジメチル−β−カルボリン（６Ｆ２９ＤＭβＣ、図１３Ｃ）、および２，９−ジメチル−β−カルボリン（２９ＤＭβＣ、図１３Ｄ）。保持時間は１９．０分（６Ｆ９ＭβＣ＆肝臓＋６Ｆ９ＭβＣ）、１０．１分（６Ｆ２９ＤＭβＣ）、および９．１分（２９ＤＭβＣ）であった。カラム：フェノメネックス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）  ルナ（Ｌｕｎａ）  ３ｕＣ１８（２）１００Ａ、溶出液：ＡＣＮ９０％／ＮＨ４Ａｃ４０ｍＭ［４５／５５］
【発明を実施するための形態】
【０１２５】
［実施例］
実施例１ａ：６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの合成
ＨｏおよびＷａｌｋｅｒの手順（Ｂｅｎｇ  Ｔ．Ｈｏ、およびＫ．Ｅ．Ｗａｌｋｅｒ；Ｏｒｇ．Ｓｙｎｔｈ．１９７１，５１，１３６、またはＯｒｇ．Ｓｙｎｔｈ．１９８８，Ｃｏｌｌ．Ｖｏｌ．６，９６５）と同様に、１０ｍＬの水中に、３．５ｍｍｏｌ（８００ｍｇ）の５−フルオロ−１−メチルトリプタミン塩酸塩（図１ａ、式ＩＩａ、アコス  ゲーエムベーハー（ＡＫｏｓ  ＧｍＢＨ）（シュタイネン））を溶解し、８１０μＬの水中に３．９ｍｍｏｌ（３５６．４ｍｇ）のグリオキシル酸水和物（図１ａ、式ＩＩＩ）を有する溶液と合わせた。その後、３．４ｍｍｏｌ（１９０．４ｍｇ）水酸化カリウムの溶液を、撹拌しながらピペッティングした。ここで、ｐＨを約４に調整した。反応混合物を、室温で３時間撹拌し、結晶化の完結のため、さらに１時間氷浴中に入れた。オレンジベージュの沈殿物のベタイン（図１ａ、式ＩＶａ）を濾過し、少量の氷水を用いて洗浄した。脱炭酸のために、まだ湿ったろ過ケーキのベタイン（図１ａ、式ＩＶａ）をフラスコに移し、希塩酸（６．４８ｍＬの水および９１８μＬの濃塩酸）に溶解した。反応混合物を窒素下で１０分間還流させ、再び９４５μＬの濃塩酸を、セプタムを通して添加し、再び１５分間還流した。続いて、溶液を室温に戻し、０〜５℃で２時間保存した。 ６−フルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン（図１ａ、式Ｖａ）の形成された結晶をろ過し、メタノールから再結晶化した。収量：２３０ｍｇ（５２％）。
【０１２６】
芳香族化のために、１５ｍＬの水中に、２３０ｍｇの６−フルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン（図１ａ、式Ｖａ）を溶解し、水酸化ナトリウムを用いてｐＨ１３に設定し、酢酸エチルとトルエン（１；１）の混合物を用いて３回抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。油状の残渣を、５０ｍＬのトルエンを用いて取り、１００ｍｇのＰｄ／Ｃ（１０％）と合わせ、２４時間還流した。Ｐｄ／Ｃを、まだ温かい溶液からろ過し、ろ過ケーキを２０ｍＬの温かいトルエンを用いて洗浄した。有機層を真空中で蒸発させた。６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（図１ａ、式Ｉａ）の油状残渣は、静置中に結晶化し、１８３ｍｇ（９６％）のマスタード黄色結晶を形成する。
【０１２７】
融点：１１７〜１１８℃；遊離塩基のＧＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ＝２０１（１０％），２００（１００％），１９９（７１％），１８５（１３％），１４５（６％），１３１（６％），１Ｈ−ＮＭＲ：δ（ｐｐｍ）メタノールｄ４，４００ＭＨｚ：３．８０，ｓ，３Ｈ，Ｎ−ＣＨ３；７．３４，ｍ，１Ｈ；７．４３，ｍ，１Ｈ；７．７３，ｍ，１Ｈ；７．９１，ｍ，１Ｈ；８．２４，ｍ，１Ｈ；８．７３，ｍ，１Ｈ，１３Ｃ−ＮＭＲ：δ（ｐｐｍ）メタノールｄ４，１００ＭＨｚ：２８．２３；１０６．３８；１０６．６４；１１０．２０および１１０．２９，ｄ；１１４．６７；１１６．２５；１１６．５２；１２０．５９および１２０．６６，ｄ；１２７．９１；１３１．３０；１３６．９５；１３７．５１；１３８．３５；１５６．２０および１５８．５５，ｄ，
Ｃ１２Ｈ９ＦＮ２ｘ０．１Ｈ２Ｏｘ０．１トルエンのための成分分析：Ｃ，Ｈ，Ｎ，計算値：Ｃ：７２．２１；Ｈ：４．７７；Ｎ：１３．２６，実測値：Ｃ：７２．０１；Ｈ：４．５５；Ｎ：１３．４５
実施例１ｂ：７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの合成
６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの合成と同様に、１０ｍＬの水中に、３．５ｍｍｏｌ（８００ｍｇ）の６−フルオロ−１−メチルトリプタミン塩酸塩（図１ｂ、式ＩＩｂ、オタヴァケミカルズ リミテッド（Ｏｔａｖａｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｌｔｄ．）、ヴォーン、カナダ）を溶解し、８１０μLの水中に３．９ｍｍｏｌ（３５６．４ｍｇ）のグリオキシル酸水和物（図１ｂ、式ＩＩＩ）を有する溶液と合わせた。その後、３．４ｍｍｏｌ（１９０．４ｍｇ）水酸化カリウムの溶液を、撹拌しながらピペッティングした。ここで、ｐＨを約４に調整した。反応混合物を、室温で３時間撹拌し、結晶化の完結のため、さらに１時間氷浴中に入れた。オレンジベージュの沈殿物のベタイン（図１ｂ、式ＩＶｂ）を濾過し、少量の氷水を用いて洗浄した。脱炭酸のために、まだ湿ったろ過ケーキのベタイン（図１ｂ、式ＩＶｂ）をフラスコに移し、希塩酸（６．４８ｍＬの水および９１８μＬの濃塩酸）に溶解した。反応混合物を窒素下で１０分間還流させ、再び９４５μＬの濃塩酸を、セプタムを通して添加し、再び１５分間還流した。続いて、溶液を室温に戻し、０〜５℃で１２時間保存した。ここで、７−フルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリン（図１ｂ、式Ｖｂ）をＨＣｌ塩として得た。形成された結晶をろ過し、メタノールから再結晶化した。収量：それぞれ１ｍｍｏｌおよび２５０ｍｇ（２８％）。
【０１２８】
芳香族化のために、１５ｍＬの水中に、２５０ｍｇの７−フルオロ−９−メチル−２，３，４，９−テトラヒドロ−β−カルボリンｘＨＣｌ（図１ｂ、式Ｖｂ）を溶解し、水酸化カリウム溶液を用いてｐＨ１３に設定し、冷蔵庫で一晩保存した。遊離塩基は、ベージュ色の結晶性固体として結晶化し、ろ過し、水を用いて洗浄し、真空中で乾燥させた。固体を５０ｍＬのトルエン中に懸濁し、１００ｍｇのＰｄ／Ｃ（１０％）と合わせ、８時間還流した（変換制御用ＴＬＣ）。Ｐｄ／Ｃを、まだ温かい溶液からろ過し、ろ過ケーキを２０ｍＬの温かいトルエンを用いて洗浄した。有機相を真空中で蒸発させた。７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（図１ｂ、式Ｉｂ）の油状残渣は、静置中に結晶化し、マスタード黄色結晶を形成し、 それをカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３／メタノール  ９：１）によって精製した。精製後には１６０ｍｇ（８０％）が残る。
［実施例２：ヒト神経芽腫細胞（ＳＨ−ＳＹ５Ｙ）の分化］
ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞株を、ドイツの微生物および細胞培養のコレクションから得た（ＤＳＭＺ、ブラウンシュヴァイク（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ））。細胞を、１０％ＦＣＳ（ウシ胎児血清、バイオクロム  アーゲー）およびペニシリン／ストレプトマイシン（バイオクロム  アーゲー）を有するＭＥＭ（最小必須培地、ライフテクノロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））中で培養した。形態学的試験のために、細胞を１ｍＬの培地を用いて、２４ウェルプレート（ファルコン（Ｆａｌｃｏｎ）、細胞培養処理された）中に１．５×１０４細胞／ｃｍ２の密度で播種した。本発明に係る化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの１０ｍｍｏｌ／Ｌストック溶液を、５０％エタノール中で調製し、滅菌濾過した。細胞の播種後５時間して、本発明に係る化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、所望の最終濃度を達成する培地に相当量添加された。培地を週に一度交換した。細胞を、定期的に顕微鏡で調べた。顕微鏡画像は、１０×レンズおよび４×デジタルズームを用いてＢＺキーエンス１０で撮影した。自動コントラスト強調は、プログラムＢＺアナライザーを用いて行った。
【０１２９】
３０μＭの６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンと比較すると、試験された細胞における同等の分化が、約７０μＭの濃度の９−メチル−β−カルボリンで最初に観察されるため、本発明の化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、９−メチル−β−カルボリンと比較して有利であることが明らかである。５０μＭの９−メチル−β−カルボリンは、３０μＭの本発明の化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンと比べて、ヒト神経芽腫細胞の分化の指標として低すぎる神経突起伸長をもたらした。
実施例３：９−メチル−β−カルボリンと比較して６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの親油性
６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの親油性が、９−メチル−β−カルボリンの親油性よりも高いかどうか試験するために、次の実験を行った。実験的に、親油性は、オクタノールと水との間の実際の分配によって、またはより簡単に、ヴァルコ（Ｖａｌｋｏ）による、逆相カラム（ＲＰ１８）を用いるＨＰＬＣ実験（Ｋ．Ｖａｌｋｏ；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ  ２００４，１０３７（１−２），２９９−３１０）に記載されるように、決定された。本願において、調査する物質の成分は、固定相と強く異なって相互作用する。ここで、固定相と成分との相互作用がより弱い場合は、成分はより速くカラムを出る。これらの相互作用の強さに応じて、物質の成分は、異なる時間で（保持時間で）分離カラムの端に現れる。当該実験を、両物質を用いて行った。本発明の化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、９−メチル−β−カルボリンより長い保持時間を有することが示され（図４）、このことは、固定相だけでなく選択されるカラムに対しても６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンのより高い親油性を明確に示す。
【０１３０】
さらに、水中における両化合物の溶解性を、室温で水中における両化合物の濃度シリーズを調製することによって決定した。化合物が難溶性とされた濃度は、外部較正により決定した。対応する濃度をＨＰＬＣにより定量した。６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（ベース）は、２９．７ｍｇ／Ｌの最大溶解濃度を有し、９−メチル−β−カルボリン（ベース）は、１６８．３ｍｇ／Ｌの最大溶解濃度を有することが明らかになった。６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンのより低い水溶解性は、９−メチル−β−カルボリンと比較して増加した親油性を逆に支持する。
【０１３１】
化合物の親油性は、ＡＤＭＥパラメータ（「吸収」、「分布」、「代謝」、および「排泄」）に強い影響を持する。増加した親油性により、化合物は、親油性区画に特に富んでいる。膜を通過するために、化学物質は、生物学的二重膜の疎水性部分を通過しなければならないので親油性でなければならない。脂質溶解性および膜通過の間には良好な相関がしばしばある。したがって、親油性は、化合物の薬物動態に重要な影響を有する。要約すると、複数の実験は、９−メチル−β−カルボリンに比べて６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの重大に増加した親油性を示す。
【０１３２】
本発明に係る化合物の更なる重要な態様は、排泄半減期の延長に関する。９−メチル−β−カルボリンは、６位でヒドロキシル化、続く結合反応により分解される一方、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、フッ化物基によりこの代謝経路は阻害される。このことはおそらく、９−メチル−β−カルボリンに比べて６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの半減期が増加する理由である。 ハーマン（Ｈａｒｍａｎ）、９−メチル−β−カルボリンの構造類似体の半減期は、ヒトの血漿中において約６８分であるため(Ｒｏｍｍｅｌｓｐａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；Ｅｕ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２００２，４４１（１−２），１１５−１２５)、この値の延長は、特に慢性疾患の治療への用途において、本発明の化合物における関連のある利点を示す。
【０１３３】
動物生体およびより正確には外リンパ（作用の通知部位）における９−メチル−β−カルボリン（９ＭβＣ）、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ）、および７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（７Ｆ９ＭβＣ）における半減期のより良い評価のために、モルモットを用いた実験を行った。それゆえ、４０μｌのハイドロゲル（１８％ポロキサマー４０７および０．６％アルギン酸塩）にパックされた各活性剤（１つの耳につき全量１．４ｍｇで）を、麻酔をかけられたモルモットの正円窓の膜の前に一度で投与した。これらの膜は、外リンパで満たされた内耳から空気で満たされた中耳を分離する所望の時間（２０分、２時間、８時間または２４時間）の終了後、各時間の５μＬの外リンパを、蝸牛の上部（頂点）から麻酔下で除去した。その後、動物は殺された。各時点（２０分、２時間、８時間または２４時間）ごとに測定された値は、少なくとも両耳から取られ、平均化された。
【０１３４】
外リンパ試料において対応する活性剤の濃度を、高速液体クロマトグラフィー（一部では、高圧液体クロマトグラフィーとも名付けられる）によって、および各活性剤の自己蛍光の測定によって決定した。ＨＰＬＣのための溶出液は４５％から９０％のアセトニトリル、および５５％の酢酸アンモニウム（４０ｍＭ、ｐＨ＜５）に構成される。流速は０．４ｍＬ／分であり、注入量は１０μＬであった。信号が強すぎた場合、各試料を６０％のメタノールを用いて希釈した。各実行をした後、注射針を、１００％イソプロパノールを用いて洗浄した。検出限界は２０ｆｍｏｌ／Ｌであった。
【０１３５】
決定された活性剤濃度から、排泄半減期が算出された。９−メチル−β−カルボリンは、約３．４時間の排泄半減期を有し、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、約６．０時間の排泄半減期を有し、および７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、約５．０時間の排泄半減期を有することが示された。９−メチル−β−カルボリンと比較して、本発明の化合物は、排泄半減時間が１．５倍（７Ｆ９ＭβＣ）増加、１．７５倍（６Ｆ９ＭβＣ）増加することにより、先行技術と比較して大幅に向上した生物学的利用能が生ずる。全体的に、外リンパにおいて決定された半減期は、血液中の推定半減期よりも高いことは（例えば９ＭβＣに関して）、特筆すべきことである。
実施例４：定量的ＲＴ−ＰＣＲ−実験Ｉ
神経芽腫細胞において、本発明に係る化合物６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン、および７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン並びに先行技術の９−メチル−β−カルボリンが、損傷を受けた感覚有毛細胞において再生効果を有することが知られている重要な神経保護および神経栄養因子の発現にどの程度作用するのか調査した。さらに、それらは、脳幹を通って内耳からさらに脳の聴覚中心に情報を仲介するらせん神経節の神経細胞の活力を向上させる。外傷の場合において、感覚有毛細胞の神経伸長は後退することにより、対応する音の信号は、もはや先に進まない。神経栄養因子は、対応する音を再び聞くことができるように、神経伸長と適合する感覚有毛細胞との間の再接続を引き起こす。
【０１３６】
エッペンドルフ大学病院のヒト遺伝学研究所によって提供され、ブラウンシュヴァイク（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ）リソースセンターから受け取ったＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞株を本目的のために行われるＲＴ−ＰＣＲ（転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応）実験のために再び使用した。
【０１３７】
細胞を、１０％ＦＣＳ（ウシ胎児血清、バイオクロム  アーゲー）およびペニシリン／ストレプトマイシン（バイオクロム  アーゲー）を有するＭＥＭ（最小必須培地、ライフテクノロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））中で培養した。細胞を５ｍＬの培地を用いて、２５ｃｍ２の培養瓶（ファルコン（Ｆａｌｃｏｎ）、細胞培養処理された）中に１×１０５細胞／ｃｍ２の密度で播種した。化合物９−メチル−β−カルボリン（ＡＣ−００２または９ＭβＣ）および６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（ＡＣ−１０２または６Ｆ９ＭβＣ）１０ｍｍｏｌ／Ｌストック溶液を、それぞれ、蒸留水で調製し、滅菌濾過した。細胞の播種後１日して、培地における最終濃度が、６Ｆ９ＭβＣの場合は１０μＭ、２０μＭ、および３０μＭに達するように、９ＭβＣの場合は３０μＭ、５０μＭ、および７０μＭの最終濃度に達するように、化合物を、相当量（５〜５５μＬ）添加した。参照は、溶媒（蒸留水）の相当量のみを添加した。培地を週に一度交換した。
【０１３８】
細胞を定期的に顕微鏡で検査し、インキュベーション時間の２日、７日、および１４日後に収穫し、ＰＢＳを用いて洗浄し、すぐに−８０℃で凍結した。
ＲＮＡ単離は、ロシュ社のハイピュアＲＮＡ単離キットを用いて行った。この単離は、ＤＮａｓｅＩ消化を含む。ＲＮＡ濃度は、ナノドロップ分光光度計を用いて測定し、ＲＮＡ完全性を、バイオアナライザー２１００（アジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ））を用いて決定した。ランダムヘキサマープライマー、プロテクターＲＮＡインヒビター（ロシュ）およびトランスクリプターリバーストランスクリプターゼ（ファルメンタス（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ））を用いることによって、３００ｎｇのＲＮＡを各試料につきｃＤＮＡに転写した。
【０１３９】
反応後、この反応物を１：４希釈し、その２μＬを各定量的ＲＴ−ＰＣＲ毎に使用した。定量的ＲＴ−ＰＣＲは、個々の各プライマーのために決定されたアニーリング温度を用いて、ＳｙｂｒＧｒｅｅｎフォーマットで標準的な条件下、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ  ４８０を用いて行った。可能な場合は、エキソンにわたるプライマーを使用した。
【０１４０】
使用されたプライマーのリストを表１に明らかにした。
【０１４１】
【表１】
0006378344.tif 000016
【０１４２】
特異性を、融解曲線分析および続くゲル電気泳動によって確認した。各ＰＣＲのためにＰＣＲ効率およびＣｑ値をプログラムＬｉｎＲｅｇＰＣＲによって決定し、これらを、さらなる計算に使用した。Ｂ２Ｍ（β２−マイクログロブリン）を、試験条件に適するように複数の参照遺伝子から同定した。すべての結果は、対応する標準条件に相対的な結果であり、標準条件においては溶媒のみが指定された期間（すなわち２日、７日または１４日）に投与された。図５Ａ〜図５Ｉにおいては、相対的な（標準条件と相対的な）遺伝子発現も示される。ここでは、２日曝露はライトグレーで、７日曝露は濃い灰色で、１４日曝露は黒で表示される。図５Ａ〜５Ｉの各測定値は、独立した生物学的試料の平均値を表す。
【０１４３】
図５Ａは、６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）、または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）における２日曝露後、７日曝露後、および１４日曝露後のニューロトロフィンＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子）の相対的な遺伝子発現を示す。３０μＭの６Ｆ９ＭβＣまたは９ＭβＣを用いての曝露後のＢＤＮＦの発現を比較すると、すでにこの濃度で、６Ｆ９ＭβＣによって誘導される発現が、９ＭβＣによって誘導される発現の約２倍高いことが示される。
【０１４４】
図５Ｂは、６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）、または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）についての２日後、７日後、および１４日後の、細胞分化を刺激し増殖を阻害するＬＩＦ（白血病阻害因子）の相対的な遺伝子発現を示す。３０μＭの６Ｆ９ＭβＣまたは９ＭβＣを用いて曝露後のＬｉｆ発現を比較すると、すでにこの濃度で、６Ｆ９ＭβＣによって誘導される２日曝露後のＬｉｆの発現が、９ＭβＣによって誘導される発現の約３倍高いことが示される。さらに、６Ｆ９ＭβＣについての１４日曝露後の、Ｌｉｆ発現が、９ＭβＣと比較して約３倍高い。６Ｆ９ＭβＣについての７日曝露後のみ、Ｌｉｆ発現が、９ＭβＣと比較してわずかに低いようである。６Ｆ９ＭβＣの低濃度での高発現も注目すべきである。
【０１４５】
図５Ｃは、６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）、または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）についての２日後、７日後、および１４日後の、ニューロトロフィンＮＴ３（ニューロトロフィン３）の相対的な遺伝子発現を示す。３０μＭの６Ｆ９ＭβＣまたは９ＭβＣを用いての曝露後のＮＴ３発現を比較すると、すでにこの濃度で、６Ｆ９ＭβＣによるＮＴ３の１４日曝露後の発現が、９ＭβＣによって誘導される発現より約３．５倍高いことを示す。６Ｆ９ＭβＣの低濃度での高発現、特に、たった１０μＭの６Ｆ９ＭβＣで７日曝露後における高発現も注目すべきである。
【０１４６】
図５Ｄは、細胞分化を阻害し、したがって増殖を促進するＩｄ２（分化２阻害剤）の相対的遺伝子発現を示す。さらに、マウスにおいて、Ｉｄ２遺伝子が不活性化されると神経変性現象を示すことも、記述される。６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）、または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）についての２日曝露後、７日曝露後、および１４日曝露後の、Ｉｄ２の相対的な遺伝子発現を示す。３０μＭの６Ｆ９ＭβＣまたは９ＭβＣを用いての曝露後のＩｄ３発現を比較すると、すでにこの濃度で、６Ｆ９ＭβＣによって誘導されるＩｄ２の発現が、９ＭβＣによって誘導される発現より約２倍〜３．５倍高いことを示す。６Ｆ９ＭβＣの低濃度でのＩｄ２の高発現も、ここで注目すべきである。
【０１４７】
図５Ｅは、６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）、または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）についての２日曝露後、７日曝露後、および１４日曝露後の、神経保護ＢＴＧ２（Ｂ細胞転座遺伝子２）の相対的な遺伝子発現を示す。３０μＭの６Ｆ９ＭβＣまたは９ＭβＣを用いて曝露後のＢＴＧ２発現を比較すると、すでにこの濃度で、６Ｆ９ＭβＣによるＢＴＧ２発現が、９ＭβＣによって誘導される発現より約１．２５倍〜２．７倍高いことを示す。すでに１０μＭの６Ｆ９ＭβＣで、９ＭβＣを高濃度用いたのに匹敵するＢＴＧ２発現が観察されること（２日曝露を除く）も注目すべきである。
【０１４８】
図５Ｆは、６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）、または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）についての２日曝露後、７日曝露後、および１４日曝露後の、神経保護Ｃｂｌｎ（セレベリン１前駆体タンパク質）の相対的な遺伝子発現を示す。３０μＭの６Ｆ９ＭβＣまたは９ＭβＣを用いて曝露後のＣｂｌｎ発現を比較すると、すでにこの濃度で、６Ｆ９ＭβＣによるＣｂｌｎ発現が、９ＭβＣによって誘導される発現より約１．５倍高いことを示す（２日曝露を除く）。たったの２０μＭの６Ｆ９ＭβＣでＣｂｌｎ発現が、さらにより高くなるようである。
【０１４９】
図５Ｇは、６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）、または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）についての２日曝露後、７日曝露後、および１４日曝露後の、アポトーシスマーカーとしてみなされＢａｃおよびＢｃｌ２の遺伝子発現の割合を示す。Ｂａｘ／Ｂｃｌ２割合がより小さいと、アポトーシスはより低い。３０μＭの６Ｆ９ＭβＣまたは９ＭβＣを用いて曝露後のＢａｘ／Ｂｃｌ２割合を比較すると、９ＭβＣによる曝露後よりも６Ｆ９ＭβＣによる曝露後に重大により低くなる（２日曝露を除く）。低い濃度の６Ｆ９ＭβＣでの低いＢａｘ／Ｂｃｌ２割合も注目すべきである。
【０１５０】
図５Ｈは、６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）、または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）についての２日曝露後、７日曝露後、および１４日曝露後の、ＤＲＤ２Ｓ（ドーパミン受容体サブタイプ２の短い変異体）遺伝子発現の割合を示す。３０μＭの６Ｆ９ＭβＣまたは９ＭβＣを用いて曝露後のＤＲＤ２Ｓ発現を比較すると、この濃度で、２日曝露後および１４日曝露後の６Ｆ９ＭβＣによるＤＲＤ２Ｓ発現が、９ＭβＣによって誘導される発現より高く、７日曝露後は９ＭβＣによって誘導される発現より低いことを示す。６Ｆ９ＭβＣの低濃度で、７日曝露後のＤＲＤ２Ｓ発現は、９ＭβＣによって誘導される発現と匹敵するようである。
【０１５１】
図５Ｉは、６Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）、または９ＭβＣ（３０μＭ、５０μＭ及び７０μＭ）についての２日曝露後、７日曝露後、および１４日曝露後の、神経細胞の分化のために重要であり、最新の洞察では、感覚細胞の傷害で役割を果たしているＤＫＫ１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ関連タンパク質１）の相対的な遺伝子発現を示す。３０μＭの６Ｆ９ＭβＣまたは９ＭβＣを用いて曝露後のＤＫＫ１発現を比較すると、特により短い曝露（２日および７日）で、６Ｆ９ＭβＣによって誘導されるＤＫＫ１発現が、９ＭβＣによって誘導される発現より１．４倍〜２．７倍高い。１４日曝露の値は同等である。すでに１０μＭの６Ｆ９ＭβＣで、９ＭβＣの最高濃度でのＤＫＫ１発現と比較して同等またはさらにより高いＤＫＫ１発現が認められることは注目すべきでもある。
【０１５２】
全体的に、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、最先の技術水準の９−メチル−β−カルボリンと比較して、ほぼすべての細胞因子において有利な効果を有し、細胞の分化および増殖に、それによる外傷後の感覚組織の再生に、直接または間接的に影響を与えることを示す。特に強調されるのは、内耳における外傷後の細胞修復プロセスのために最も重要な因子に属する因子ＢＤＮＦおよびＬＩＦである。したがって、本発明に係る６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、内耳の疾患および／または損傷の治療に成功裏に適用されるだけでなく、最先の技術水準のメチル−β−カルボリンよりも低濃度でも潜在能力を有する。
実施例５：定量的ＲＴ−ＰＣＲ実験ＩＩ
実施例４と同様にして、本発明の活性剤７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（７Ｆ９ＭβＣ）を用いてのＲＴ−ＰＣＲ実験を、いくつかの重要な細胞因子のために行った。実験手順は、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンおよび９−メチル−β−カルボリンを用いる実験と同一であった。ここでは、培養培地のために同じ（６Ｆ９ＭβＣと同様）の最終濃度３０μＭ、５０μＭおよび７０μＭの７Ｆ９ＭβＣを用いた。試験されたのは、ＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子）、ＬＩＦ（白血病阻害因子）、ＤＲＤ２Ｓ（ドーパミン受容体サブタイプ２短い変異体）およびＤＫＫ１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ関連タンパク質１）であった。実施例４（表１）の各標的遺伝子のためにすでに列挙されたものと同じプライマーを使用した。すでに述べたように、特にＢＤＮＦおよびＬＩＦは、内耳における外傷後の細胞修復プロセスのために最も重要な因子に属する。
【０１５３】
図６Ａは、７Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）における２日曝露後、７日曝露後、および１４日曝露後のニューロトロフィンＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子）の相対的な遺伝子発現を示す。３０μＭの７Ｆ９ＭβＣまたは９ＭβＣを用いて曝露後のＢＤＮＦの発現を比較すると（図５Ａ）、２日曝露では、７Ｆ９ＭβＣによって誘導されるＢＤＮＦ発現が、９ＭβＣによって誘導される発現の約３倍高いことが示される。より長い曝露では、値が同程度である。
【０１５４】
図６Ｂは、７Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）についての２日後、７日後、および１４日後の、細胞分化を刺激し増殖を阻害するＬＩＦ（白血病阻害因子）の相対的な遺伝子発現を示す。３０μＭの７Ｆ９ＭβＣを用いてまたは３０μＭの９ＭβＣを用いて曝露後のＬｉｆ発現を比較すると（図５Ｂ）、２日曝露で、７Ｆ９ＭβＣによって誘導されるＬｉｆの発現が、９ＭβＣによって誘導される発現より約３倍高いことが示される。７日曝露では、７Ｆ９ＭβＣによる誘導はより弱く、１４日曝露では、値が同等である。２０μＭの７Ｆ９ＭβＣを用いて２日曝露後の、Ｌｉｆの高発現も注目すべきである。
【０１５５】
図６Ｃは、７Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）についての２日後、７日後、および１４日後の、ＤＲＤ２Ｓ（ドーパミン受容体サブタイプ２の短い変異体）の相対的な遺伝子発現を示す。３０μＭの７Ｆ９ＭβＣおよび３０μＭの９ＭβＣを用いての曝露後のＤＲＤ２Ｓ発現を比較すると（図５Ｈ）、２日曝露では、７Ｆ９ＭβＣによって誘導されるＤＲＤ２Ｓ発現が、９ＭβＣによって誘導される発現より約２倍高いことを示す。７日曝露後、値は同等であり、１４日曝露後、７Ｆ９ＭβＣによる誘導は、９ＭβＣによる誘導よりわずかに弱い。
【０１５６】
図６Ｄは、神経細胞の分化のために重要であり、最新の洞察では、感覚細胞の傷害で役割を果たしている因子ＤＫＫ１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ関連タンパク質１）における７Ｆ９ＭβＣ（１０μＭ、２０μＭ及び３０μＭ）についての２日曝露後、７日曝露後、および１４日曝露後の、相対的な遺伝子発現を示す。３０μＭの６Ｆ９ＭβＣおよび３０μＭの９ＭβＣを用いて曝露後のＤＫＫ１発現を比較すると（図５Ｉ）、２日曝露では、７Ｆ９ＭβＣによって誘導されるＤＫＫ１発現が、９ＭβＣによって誘導される発現より１．４倍高い。７日曝露後の値は同等であり、１４日曝露後は、７Ｆ９ＭβＣによる誘導は、９ＭβＣによる誘導より２．２倍高い。
【０１５７】
全体的に、技術水準の９−メチル−β−カルボリンと比較して７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、短い曝露で特に高い効果を達成することに留意される。一つの可能な説明は、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、９−メチル−β−カルボリンより親油性であり、そのことによって、より速く細胞を貫通するので、より高い濃度でより速く細胞に到達する。当該利点は効率的でより短い治療期間を可能にし、患者の利益を提供するので、治療的観点から、当該利点は望まれている。したがって、治療的立場から、７−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、例えば、音響外傷および難聴のような内耳の急性損傷の治療において最先端の技術からの９−メチル−β−カルボリンよりも優れている。
実施例６：免疫組織化学的実験
以下では、モルモットに９−メチル−β−カルボリン（９ＭβＣ）、または６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ）の投与が、内耳の外有毛細胞（ＯＨＣ）の音響外傷誘導死にどのように影響を与えるか、組織学的ベースに調査した。この時点で、内有毛細胞（ＩＨＣ）は、任意の外傷に対してより鈍感であることに留意するべきである。
【０１５８】
音響外傷を誘導するために、モルモットを、６０ｍｇ／ｋｇのケタミンおよび８ｍｇ／ｋｇのキシラジンを用いて麻酔した。その後、ベパンテン（Ｂｅｐａｎｔｅｎ）軟膏（バイエル）を目に投与し、動物を防音室に入れた。較正スピーカーを、動物の頭の上に直接置く。ここで、較正スピーカーは、半オクターブバンド、約８ｋＨｚ中心を、１１０ｄＢのボリュームを用いて、３０分の継続時間放出するように設定された。
【０１５９】
６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンおよび９−メチル−β−カルボリンは、それぞれ、ヒドロゲル（１８％ポロキサマー４０７および０．６％アルギン酸塩）にパックされ、全ての実験ごとに新たに調製され、適用まで＋４℃で冷蔵庫に保存された。
【０１６０】
熱感受性の液体混合物を、中耳の正円窓膜の前に直接的にハミルトンシリンジによって下から見て投与した（１０μＬ）。初回投与６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（例えば、０．０７ｍｇ）を、０．００７ｍｇ／μＬの濃度で音響外傷一時間後に投与し、二回目の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（５μＬの容量で０．０３５ｍｇ）を、三日目に投与した。ここで、動物につき片方の耳のみを処理し、一方もう片方の耳は個体内対照としての機能を果たした。ここで、対照は特に「ｃｏｎｔｒ」と略称される。比較実験において、活性剤ビヒクル（ハイドロゲル）だけの投与は、完全に未処理の耳と比較して効果はないことが明らかになった。各活性剤（コントロールを含む）のために４匹のモルモットを試験した。
【０１６１】
音響外傷後１４日目に、耳の領域を、蝸牛を含むように解剖した。調製物を、氷冷４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）中に２４時間入れ、＋４℃で保存した。 ＰＦＡ−固定後、調製物を、リン酸緩衝塩化ナトリウム溶液（ＰＢＳ）を用いて２回リンスし、その後、１０％エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）中に脱カルシウムのために静置した。少なくとも４８時間後に調製物を、ＰＢＳで２回リンスし、その後蝸牛をばらばらにした。感覚細胞を含むコルチ器官全体は、その後、蝸牛からばらばらにされ、同じ長さの４つの断片に切断した。各断片は３／４蝸牛ターンのコルチ器官に相当する。この方法で音誘導損傷を、局在化し、定量化することができる。切断物をＰＢＳ中に１０分間静置した。ＰＢＳには、２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）４８８を用いて標識されたファロイジン（インビトロジェン、カタログ＃Ａ１２３７９））を１：４０希釈で含んだ。その後、切断物を、１０分間ＰＢＳを用いて３回洗浄し、スライド上に平らに置いた。固定培地（インビトロジェン、カタログ＃Ｐ３６９３５）を含むドロップ（ｄｒｏｐ）プロロング（ＰｒｏＬｏｎｇ）ＤＡＰＩを、切断物上に添加し、その後、カバーガラスによって覆った。調製物を続いてマニキュア液によって密封した。４０倍の倍率での切断物の画像を蛍光顕微鏡（キーエンス（Ｋｅｙｅｎｃｅ））によって撮影した。図７、および図８は、各４匹のモルモットでの試験の代表的な結果を示す。
【０１６２】
未処理コントロールにおいて、音響外傷は、外有毛細胞の強い染色につながることを示した（図７Ａおよび図８Ａを参照）。この染色は、合計０．１０５ｍｇの６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンのみの単一の鼓室内投与によって防止され得る（図７Ｂ参照）。さらに、９−メチル−β−カルボリンの投与は、外有毛細胞の死を妨げることができ、（図８Ｂ参照）、ここで、９−メチル−β−カルボリンの重大に増加した用量（０．２ｍｇの９−メチル−β−カルボリン）が、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンに比べて必要とされる。したがって、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、聴覚損傷の治療に適しているだけでなく、技術水準の９−メチル−β−カルボリンよりも効率的である。
実施例７：音響誘発電位
以下では、音響外傷によって誘導される聴覚閾値の変化における６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ）および９−メチル−β−カルボリン（９ＭβＣ）の効果を、モルモットモデルで調査した。
【０１６３】
音響外傷を誘導するために、モルモットを６０ｍｇ／ｋｇのケタミンおよび８ｍｇ／ｋｇのキシラジンを用いて麻酔した。その後、ベパンテン（Ｂｅｐａｎｔｅｎ）軟膏（バイエル）を目に投与し、動物を防音室に入れた。較正スピーカーを、動物の頭の上に直接置いた。ここで、較正スピーカーは、半オクターブバンド、約８ｋＨｚ中心を、１１０ｄＢのボリュームを用いて、３０分の継続時間放出するように設定された。
【０１６４】
モルモットの聴覚閾値の評価の測定として、音響誘発電位を測定した。そのため、内耳からインパルスを送る脳幹の神経細胞の電気生理学的活性は、８、１１．３、１６、２２．６および３２ｋＨｚを用いての耳の超音波処理後に得られた。超音波処理は、５ｄＢの単一ステップで０ｄＢ〜９０ｄＢに上昇的に行われた。
【０１６５】
測定を、音響外傷前３日（Ｄ−３）、音響外傷後３０分（Ｄ０）および音響外傷後１４日（Ｄ１４）に行った。
動物ごとに片方の耳は処理されず、個体内対照（本願において一部は「ｃｏｎｔｒ」と略される）として使用され、もう片方の耳は、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンを用いて処理した。したがって、音響外傷後１時間で、０．１２ｍｇの用量の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（ビヒクルとしてヒドロゲル中に）を鼓室内に投与した。音響外傷後３日で０．０６ｍｇの６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの鼓室内に投与を行った。測定を、４匹のモルモット（ｎ＝４）で行った。
【０１６６】
比較実験において、活性剤ビヒクル（ハイドロゲル）だけの投与は、完全に未処理の耳と比較しても効果はないことが明らかになった。
その後、聴覚閾値の残存シフト（聴覚閾値の永久的シフトとも名付けられる）を、音響外傷前（Ｄ−３）および音響外傷後１４日（Ｄ１４）に測定された値から決定した。直接測定された音響外傷後（Ｄ０）および１４日（Ｄ１４）後の値から、音響外傷からのリカバリー後に測定された値（Ｄ０−Ｄ１４）も測定した。
【０１６７】
１４日後に関しては、まだ聴覚障害が残っており（図９参照）、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（全０．１８ｍｇ）の投与は、未処理対照と比較して聴覚閾値の重大な減少につながったことが、示された。特に１１．３および１６ｋＨｚの可聴周波数で、それぞれ、約２０ｄＢまたは３０ｄＢの聴覚閾値の減少が、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンによって示された。
【０１６８】
さらに、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（全０．１８ｍｇ）の投与によって、音響外傷からのリカバリーは、未処理コントロールと比較して重大に向上し得る。したがって、８、１１．３および１６ｋＨｚの可聴周波数で、それぞれ、約５ｄＢ、２５ｄＢまたは２０ｄＢによって、未処理の耳と比較して、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンに起因する向上したリカバリーを示した。
【０１６９】
６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンを用いての上記実施された実験と類似の、９−メチル−β−カルボリンを用いての対応実験も行った。実験手順は、ほぼ同一であり、ここで６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの代わりに、もちろん９−メチル−β−カルボリンを使用した。９−メチル−β−カルボリンの全用量は、ここでは耳あたり０．２ｍｇ、および０．３５ｍｇそれぞれであった。
【０１７０】
最先の技術水準の９−メチル−β−カルボリンも、未処理の対照と比較してリカバリーが明らかに促進した（図１１および図１２）。６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンと比較して、用量をわずか０．２ｍｇに増加した場合に、リカバリーが約５ｄＢから最大１０ｄＢ向上することが示されただけであった（図１１参照）。０．３５ｍｇの９−メチル−β−カルボリンにさらに増加しても（６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンの２倍高い）、約１０ｄＢの向上を示すだけであった（図１２参照）。
実施例８：毒性分解生成物に対する肝臓分解
以下では、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ）は、公知の毒性分解生成物に肝臓で代謝されるかどうか調査した。
【０１７１】
β−カルボリンは、Ｎ−メチルトランスフェラーゼ触媒反応によって、メチル化されたβ−カルボリニウムカチオンに変換されることが長い間知られている。メチル化されたβ−カルボリニウムカチオンは、とりわけミトコンドリア呼吸を阻害し、神経毒性効果を有することができるので、１−メチル−４−フェニルピリジニウム（ＭＰＰ＋、パーキンソン神経毒としても知られている）と共通するいくつかの毒物学的特性を有する。特に毒物は、ジメチル化されたβ−カルボリニウムカチオン、すなわち、２，９−ジメチル−β−カルボリニウムカチオンである。２，９−ジメチル−β−カルボリニウムカチオンは、２位および９位で連続的メチル化によって形成される。したがって、以下では、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ）は、対応する毒物６−フルオロ−２，９−ジメチル−β−カルボリニウムカチオン（６Ｆ９ＭβＣに直接的に由来する）および２，９−ジメチル−β−カルボリニウムカチオン（９ＭβＣに由来する）に、それぞれ肝臓で代謝されるかどうか調査した。
【０１７２】
ＨＰＬＣによってこれらの物質を同定するために、６−フルオロ−２，９−ジメチル−β−カルボリニウムカチオン（６Ｆ２９ＤＭβＣ）および２，９−ジメチル−β−カルボリニウムカチオン（２９ＤＭβＣ）を、参照ＨＰＬＣ測定によって決定された各保持時間で、オンサイトで合成した。純粋な６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ）を用いての参照測定も行われた。
【０１７３】
肝臓での分解過程をシミュレーションするために、６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ）の異なる濃度（１μＭ、１０μＭおよび１００μＭ）を、生理的条件下（生理的リン酸緩衝水酸化ナトリウム水溶液、ＰＢＳ中で３７℃）で１時間均質化されたラットの肝臓を用いてインキュベートした。その後、ろ過抽出物のＨＰＬＣ測定を行った。
【０１７４】
各物質の特徴付けは、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ、一部では高圧液体クロマトグラフィーとも名付けられる）により達成された。ＨＰＬＣのための溶出液は４５％〜９０％のアセトニトリル、および５５％の酢酸アンモニウム（４０ｍＭ、ｐＨ＜５）から構成された。流速は０．４ｍＬ／ｍｉｎであり、注入量は１０μＬであった。シグナルが強すぎた場合、各試料を、６０％のメタノールを用いて希釈した。例えば、肝臓ホモジネートからの試料は、分析法におけるダイナミックレンジが１：４０であるように測定前に希釈されなければならない。
【０１７５】
未処理の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ）では、１９．０分の保持時間が測定され（図１３Ａ参照）、一方、６−フルオロ−２，９−ジメチル−β−カルボリニウムカチオン（６Ｆ２９ＤＭβＣ）のための参照測定は、１０．１分の保持時間を示し（図１３参照）、２，９−ジメチル−β−カルボリニウムカチオン（２９ＤＭβＣ）のための参照測定は、９．１分の保持時間を示した（図１３Ｄ参照）。すべての３つの参照試料は、互いに分離可能な保持時間も有意に示した。ラットの肝臓ホモジネートとインキュベートされた６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（１００μＭ）は１９．０分でピークを示したが（６Ｆ９ＭβＣでもある）、６−フルオロ−２，９−ジメチル−β−カルボリニウムカチオン（６Ｆ２９ＤＭβＣ）または２，９−ジメチル−β−カルボリニウムカチオン（２９ＤＭβＣ）のピークはない。さらに、試験されたより低濃度の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（１μＭおよび１０μＭ）は、同一の結果を示した。
【０１７６】
与えられた条件の下、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、公知の毒性分解産物に幸いにも代謝しないことを、結論付けることができる。
以下では、参照カチオン６−フルオロ−２，９−ジメチル−β−カルボリニウムカチオン（６Ｆ２９ＤＭβＣ）および２，９−ジメチル−β−カルボリニウムカチオン（２９ＤＭβＣ）の合成が記述される。
【０１７７】
６Ｆ２９ＤＭβＣの合成のために、３ｍＬのアセトニトリル中に５０ｍｇ（すなわち、０．２５ｍｍｏｌ）の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（遊離塩基）を有する溶液に、２００ｍｇ（すなわち、１．４ｍｍｏｌ）のヨウ化メチルを添加する。反応混合物を室温で２４時間、窒素下で撹拌する。その後、溶媒を窒素気流によって除去する。黄色蛍光残渣を少量のアセトニトリルから再結晶化する。収量：５３ｍｇ（すなわち１５ｍｍｏｌ）６０％。
【０１７８】
２９ＤＭβＣの合成のために、３ｍＬのアセトニトリル中に５０ｍｇ（すなわち、０．２７ｍｍｏｌ）の９−メチル−β−カルボリン（遊離塩基）を有する溶液に、２００ｍｇ（すなわち、１．４ｍｍｏｌ）のヨウ化メチルを添加する。反応混合物を室温で２４時間、窒素下で撹拌する。その後、溶媒を窒素気流によって除去する。黄色蛍光残渣を少量のアセトニトリルから再結晶化し、ろ過し、真空内で乾燥させる。収量：４３ｍｇ（すなわち１３ｍｍｏｌ）４８％。
実施例９：６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンは、学習および記憶を向上させる。
【０１７９】
学習および記憶の基礎となるメカニズムは、非常に複雑である。それらは、分子レベルで、および細胞レベルで、システム生物学のレベルで、および心理学のレベルで考えることができる。分子レベルでの記憶形成のための重要なプロセスの一つは、ｃＡＭＰ応答配列結合タンパク質（ＣＲＥＢ）の活性化である。これは、シナプスの新形成に、記憶形成に連結するプロセスにつながる。このプロセスは、多くの因子によって調節される。正の（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）増幅は、脳ＢＤＮＦおよび当該受容体ＴＲＫＢによって誘導される。したがって、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリンを細胞レベルで調査した。
【０１８０】
細胞レベルでの我々の試験において、本発明の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ）は、８倍にＣＲＥＢ濃度を増加させ、最大３倍までＢＤＮＦの濃度を増加させることが明らかになった。これらの知見は、６Ｆ９ＭβＣは、学習および記憶を促進することを、示唆する。この仮説は、以下の実験で確認された。
【０１８１】
８方向迷路試験において、学習行動における６Ｆ９ＭβＣの効果を試験した。５ヶ月齢の雄ラットを１０日間、毎日のセッションで実験に使用した。その後、それらを２日間複数のセッションで迷路を探索させ、それらは、そこで食べ物の報酬を得ることも学んだ。その後、体重が開始体重の１０％減少するまで、食べ物を減らした。その後、８方向の迷路の各端部に食べ物を置き、カメラを動物のすべての動きを記録するように設置した。最初の試験日に、ラットを迷路の中心のプラットフォームに事前注射せずに配置した。翌日に生理食塩水に溶解された遊離塩基として２ｍｇ／ｋｇ体重の６−フルオロ−９−メチル−β−カルボリン（６Ｆ９ＭβＣ）を、実験者によって、ラットに腹腔内投与した。２時間後、動物を、迷路の中央のプラットフォーム上に置き、その場所から動物は全てのアームへアクセスした。この手順は、動物が一つの誤り、すなわち、対応するセッションにおいて以前、すでに入ったアームに行く事をするまで、毎日繰り返された。セッションの終了時には、すべての８アームを訪問しなければならなかった。
【０１８２】
６Ｆ９ＭβＣを用いて処理された１２匹のラット、および生理食塩水のみで処理された対照群の１２匹のラットを試験した。真実の（ｖｅｒｕｍ）群（６Ｆ９ＭβＣを受けた）は、６日後に基準に達し、対照群は、１４日後に基準に達した。違いは、反復測定のためのＡＮＯＶＡにより検証され、有意（ｐ＜０．０１）であった。これらの結果は、６Ｆ９ＭβＣは学習プロセスを加速し、記憶を向上させることを明らかに証明する。我々は、我々の仮説も検証することができた。
【０１８３】
このことは、活性剤６Ｆ９ＭβＣは、内耳の疾患に対して有効であるだけでなく、学習や記憶のような複雑な挙動に有益な影響を及ぼすことも示す。
参照：
１．）Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ｂａｓｅｄ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ  ｏｆ  ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙ  ｔｏ  ｍｏｄｅｌ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ．  Ｖａｌｋｏ  Ｋ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ  ２００４；１０３７（１−２）：２９９−３１０．
２．）Ｔｈｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｎｏｒｈａｒｍａｎ  ａｒｅ  ｈｉｇｈ  ｅｎｏｕｇｈ  ａｆｔｅｒ  ｓｍｏｋｉｎｇ  ｔｏ  ａｆｆｗｅｃｔ  ｍｏｎｏａｍｉｎｅｏｘｉｄａｓｅ  Ｂ  ｉｎ  ｐｌａｔｅｌｅｔｓ．  Ｒｏｍｍｅｌｓｐａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ２００２；４４１（１−２）：１１５−１２５．
【図１】
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【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
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【図５Ｈ】
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【図５Ｉ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【配列表】
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