(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物
【化１】
0006266659.tif 000041
、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
化合物
【化２】
0006266659.tif 000042
。
【請求項３】
請求項１または２に記載の化合物、及び薬学的に許容される賦形剤を含む、薬学的組成物。
【請求項４】
治療を必要とする対象において癌を治療するための薬学的組成物であって、有効な投薬量の請求項１および２のいずれか一項に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項５】
前記癌が、
（ａ）癌腫であって、膀胱、乳房、結腸、直腸、腎臓、肝臓、肺、食道、胆嚢、卵巣、膵臓、胃、子宮頚、甲状腺、前立腺、および皮膚の各癌を含むもの、
（ｂ）リンパ系統の造血器腫瘍であって、白血病、急性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫を含むもの、
（ｃ）リンパ系統の造血器腫瘍であって、急性及び慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、及び前骨髄球性白血病を含むもの、
（ｄ）間葉性由来の腫瘍であって、繊維肉腫、及び横紋筋肉腫、並びに他の肉腫であって、軟部組織及び骨肉腫を含むもの、
（ｅ）中枢及び末梢神経系の腫瘍であって、星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、及び神経鞘腫を含むもの、
（ｆ）黒色腫、セミノーマ、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症（ｘｅｎｏｄｅｒｏｍａ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓｕｍ）、角化棘細胞腫、甲状腺濾胞癌、カポジ肉腫、子宮内膜癌、頭頸部癌、膠芽腫、悪性腹水又は造血癌
より選択される、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記癌がリンパ系統の造血器腫瘍である、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記癌が軟部組織肉腫である、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記癌が乳癌である、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記癌が神経膠腫である、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記癌が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記癌が黒色腫である、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記癌が骨髄異形成症候群である、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記癌がｐ５３野生型（ｐ５３ＷＴ）として特定される、請求項５から１２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記薬学的組成物が、放射線治療と組み合わせて使用される、請求項５から１２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記薬学的組成物が、放射線治療と組み合わせて使用される、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特に癌の治療のための、治療剤として有用なＭＤＭ２阻害剤に関する。本発明はまた、ＭＤＭ２阻害剤を含有する薬学的組成物にも関する。
【背景技術】
【０００２】
ｐ５３は、細胞周期停止、アポトーシス、老化、及びＤＮＡ修復に関与する多数の遺伝子の転写を活性化することにより細胞ストレスに応答する、腫瘍抑制因子及び転写因子である。ｐ５３活性化の原因となることがまれな正常な細胞とは異なり、腫瘍細胞は、低酸素症及びアポトーシス促進性癌遺伝子活性化をはじめとする様々な障害からの絶え間ない細胞ストレス下にある。したがって、腫瘍内のｐ５３経路の不活性化の強力な選択的利点があり、ｐ５３機能を排除することが、腫瘍生存にとって必須条件であり得ることが提案されている。この考えの裏づけとして、３つのグループの研究者らは、マウスモデルを使用して、定着腫瘍の維持には、ｐ５３機能の欠如が継続して要求されることを示している。研究者が、不活化ｐ５３を有する腫瘍にｐ５３機能を戻すと、腫瘍は退縮した。
【０００３】
ｐ５３は、固形腫瘍の５０％及び液性腫瘍の１０％において、突然変異及び／または喪失により不活化される。ｐ５３経路の他の主要成員もまた、癌内で遺伝子的または後成的に変化させられる。腫瘍性タンパク質であるＭＤＭ２はｐ５３機能を阻害し、それは、遺伝子増幅により、１０％という高さであると報告されている発現率で活性化される。ＭＤＭ２は、次いで、別の腫瘍抑制因子であるｐ１４ＡＲＦにより阻害される。ｐ５３の下流の変化が、ｐ５３ＷＴ腫瘍（ｐ５３野生型）内でｐ５３経路を少なくとも部分的に不活化する原因であり得ることが示唆されている。この概念の裏づけとして、いくつかのｐ５３ＷＴ腫瘍は、低減したアポトーシス能力を示すように見えるが、細胞周期停止を経るそれらの能力は、元の状態のままである。１つの癌治療戦略は、ＭＤＭ２に結合し、かつｐ５３とのその相互作用を無効にする、小分子の使用を伴う。ＭＤＭ２は、３つの機序によりｐ５３活性を阻害する：１）Ｅ３ユビキチンリガーゼとして機能して、ｐ５３分解を促進すること、２）ｐ５３転写性活性化ドメインに結合すること、及びそれをブロックすること、ならびに３）ｐ５３を細胞核から細胞質へ搬出すること。これら３つの機序の全ては、ＭＤＭ２とｐ５３との相互作用を無効にすることによりブロックされるだろう。特に、この治療戦略は、ｐ５３ＷＴである腫瘍に適用され得、小分子ＭＤＭ２阻害剤を用いた研究は、インビトロ及びインビボ両方における腫瘍成長の有望な減退をもたらしている。さらには、ｐ５３不活化腫瘍を有する患者においては、ＭＤＭ２阻害による正常な組織内での野生型ｐ５３の安定化が、細胞分裂毒からの正常な組織の選択的保護を可能にするかもしれない。
【０００４】
本発明は、ｐ５３及びＭＤＭ２間の相互作用を阻害すること、及びｐ５３下流エフェクター遺伝子を活性化することができる化合物に関する。そのため、本発明の化合物は、癌、細菌感染症、ウイルス感染症、潰瘍、及び炎症の治療に有用であろう。特に、本発明の化合物は、乳房、結腸、肺、及び前立腺腫瘍等の固形腫瘍、ならびにリンパ腫及び白血病等の液性腫瘍を治療することに有用である。本明細書において使用される場合、ＭＤＭ２は、ヒトＭＤＭ２タンパク質を意味し、ｐ５３は、ヒトｐ５３タンパク質を意味する。ヒトＭＤＭ２は、ＨＤＭ２またはｈＭＤＭ２とも称され得ることに留意されたい。
【発明の概要】
【０００５】
実施形態１において、本発明は、化合物
【化１】
0006266659.tif 000002
、
、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００６】
実施形態２において、本発明は、化合物
【化２】
0006266659.tif 000003
を提供する。
【０００７】
実施形態３において、本発明は、実施形態１または２のいずれか一項の化合物、及び薬学的に許容される賦形剤を含む、薬学的組成物を提供する。
【０００８】
実施形態４において、本発明は、治療を必要とする対象における癌の治療方法あって、該対象に、有効な投薬量の実施形態１〜２のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０００９】
実施形態５において、本発明は、該癌が、膀胱、乳房、結腸、直腸、腎臓、肝臓、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、食道、胆嚢、卵巣、胆嚢、胃、子宮頚、甲状腺、前立腺、皮膚、急性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、急性もしくは慢性骨髄性白血病、黒色腫、子宮内膜癌、頭頸部癌、膠芽腫、または骨肉腫より選択される、実施形態４の方法を提供する。
【００１０】
実施形態６において、本発明は、該癌が膀胱癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００１１】
実施形態７において、本発明は、該癌が乳癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００１２】
実施形態８において、本発明は、該癌が結腸癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００１３】
実施形態９において、本発明は、該癌が直腸癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００１４】
実施形態１０において、本発明は、該癌が腎臓癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００１５】
実施形態１１において、本発明は、該癌が肝臓癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００１６】
実施形態１２において、本発明は、該癌が小細胞肺癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００１７】
実施形態１３において、本発明は、該癌が非小細胞肺癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００１８】
実施形態１４において、本発明は、該癌が食道癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００１９】
実施形態１５において、本発明は、該癌が胆嚢癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００２０】
実施形態１６において、本発明は、該癌が卵巣癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００２１】
実施形態１７において、本発明は、該癌が膵臓癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００２２】
実施形態１８において、本発明は、該癌が胃癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００２３】
実施形態１９において、本発明は、該癌が子宮頚癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００２４】
実施形態２０において、本発明は、該癌が甲状腺癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００２５】
実施形態２１において、本発明は、該癌が前立腺癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００２６】
実施形態２２において、本発明は、該癌が皮膚癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００２７】
実施形態２３において、本発明は、該癌が急性リンパ球性白血病である、実施形態４の方法を提供する。
【００２８】
実施形態２４において、本発明は、該癌が慢性骨髄性白血病である、実施形態４の方法を提供する。
【００２９】
実施形態２５において、本発明は、該癌が急性リンパ芽球性白血病である、実施形態４の方法を提供する。
【００３０】
実施形態２６において、本発明は、該癌がＢ細胞リンパ腫である、実施形態４の方法を提供する。
【００３１】
実施形態２７において、本発明は、該癌がＴ細胞リンパ腫である、実施形態４の方法を提供する。
【００３２】
実施形態２８において、本発明は、該癌がホジキンリンパ腫である、実施形態４の方法を提供する。
【００３３】
実施形態２９において、本発明は、該癌が非ホジキンリンパ腫である、実施形態４の方法を提供する。
【００３４】
実施形態３０において、本発明は、該癌が有毛細胞性リンパ腫である、実施形態４の方法を提供する。
【００３５】
実施形態３１において、本発明は、該癌がバーキットリンパ腫である、実施形態４の方法を提供する。
【００３６】
実施形態３２において、本発明は、該癌が急性骨髄性白血病である、実施形態４の方法を提供する。
【００３７】
実施形態３３において、本発明は、該癌が慢性骨髄性白血病である、実施形態４の方法を提供する。
【００３８】
実施形態３４において、本発明は、該癌が黒色腫である、実施形態４の方法を提供する。
【００３９】
実施形態３５において、本発明は、該癌が子宮内膜癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００４０】
実施形態３６において、本発明は、該癌が頭頸部癌である、実施形態４の方法を提供する。
【００４１】
実施形態３７において、本発明は、該癌が膠芽腫である、実施形態４の方法を提供する。
【００４２】
実施形態３８において、本発明は、該癌が骨肉腫である、実施形態４の方法を提供する。
【００４３】
実施形態３９において、本発明は、該癌がｐ５３野生型として特定される、実施形態４、または６〜３８のいずれか一項の方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
本発明は、特に癌の治療のための、治療剤として有用なＭＤＭ２阻害剤を提供する。本発明はまた、ＭＤＭ２阻害剤を含有する薬学的組成物にも関する。
【００４５】
「−」という記号は、共有結合を表し、別の基との連結点を示すためにラジカル基においても使用され得る。化学構造において、この記号は、分子内のメチル基を表すために一般的に使用される。
【００４６】
「含む」という用語は、示された構成要素を含むが他の要素を除外せず、無制限であることが意図される。
【００４７】
「治療上有効量」という用語は、特定の疾患もしくは病態の１つ以上の症状を緩和、減衰、もしくは排除する、または特定の疾患もしくは病態の１つ以上の症状の発症を予防するもしくは遅らせる、化合物の量を意味する。
【００４８】
「患者」及び「対象」という用語は、互換的に使用されてもよく、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヒト等の動物を意味する。特定の患者は哺乳動物である。患者という用語には、オス及びメスが含まれる。
【００４９】
「薬学的に許容される」という用語は、本発明の化合物、または本化合物の塩、または本化合物を含有する製剤、または特定の賦形剤等の参照物質が、患者への投与に好適であることを意味する。
【００５０】
「治療すること」、「治療する」、「治療」等の用語は、予防（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）（例えば、予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ））及び緩和治療を含む。
【００５１】
「賦形剤」という用語は、製剤及び／または患者への投与に典型的に含まれる、医薬品有効成分（ＡＰＩ）以外の、任意の薬学的に許容される添加剤、担体、希釈剤、アジュバント、または他の成分を意味する。
【００５２】
本発明の化合物は、治療上有効量で患者に投与される。本化合物は、単独で、または薬学的に許容される組成物または製剤の一部として、投与され得る。加えて、本化合物または組成物は、例えばボーラス注射により、全て同時に投与されるか、一連の錠剤等により複数回投与されるか、または、例えば、経皮送達を使用する等、一定期間にわたって実質的に均一に送達され得る。本化合物の用量は、時間とともに変化し得ることにも留意されたい。
【００５３】
加えて、本発明の化合物は、単独で、または他の薬学的に活性な化合物と組み合わせて、投与され得る。他の薬学的に活性な化合物は、本発明の化合物と同じ疾患もしくは病態、または異なる疾患もしくは病態を治療することが意図され得る。患者に複数の薬学的に活性な化合物を投与する予定、または投与している場合、化合物は同時または順次に投与され得る。例えば、錠剤の場合、活性化合物は、１つの錠剤または別個の錠剤内に含まれていてもよく、同時または任意の順番で順次に投与され得る。加えて、本組成物は異なる形態であってもよいことを認識されたい。例えば、１つ以上の化合物は、錠剤を介して送達されてもよく、別の１つの化合物は注射、またはシロップとして経口で投与される。全ての組み合わせ、送達方法、及び投与順序が企図される。
【００５４】
「癌」という用語は、未制御の細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理状態を意味する。癌の一般的な分類としては、癌腫、リンパ腫、肉腫、及び芽細胞腫が挙げられる。
【００５５】
本発明の化合物を、癌治療に使用することができる。癌治療の方法は、それを必要とする患者に、治療上有効量の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。
【００５６】
本発明の化合物を、腫瘍治療に使用することができる。腫瘍治療の方法は、それを必要とする患者に、治療上有効量の化合物、またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。
【００５７】
本発明はまた、癌等の病態の治療のための薬剤の製造における本発明の化合物の使用にも関係する。
【００５８】
本発明の化合物を用いて治療され得る癌としては、膀胱、乳房、結腸、直腸、腎臓、肝臓、肺（小細胞肺癌、及び非小細胞肺癌）、食道、胆嚢、卵巣、膵臓、胃、子宮頚、甲状腺、前立腺、及び皮膚（扁平上皮細胞癌を含む）の癌等の癌腫、リンパ系統の造血器腫瘍（白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞性リンパ腫、及びバーキットリンパ腫を含む）、骨髄系統の造血器腫瘍（急性及び慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、及び前骨髄球性白血病を含む）、間葉性由来の腫瘍（繊維肉腫、及び横紋筋肉腫、ならびに、他の肉腫、例えば、軟部組織及び骨）、中枢及び末梢神経系の腫瘍（星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、及び神経鞘腫を含む）、及び他の腫瘍（黒色腫、セミノーマ、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症（ｘｅｎｏｄｅｒｏｍａ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓｕｍ）、角化棘細胞腫、甲状腺濾胞癌、及びカポジ肉腫を含む）等が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の化合物を用いて治療することができる他の癌としては、子宮内膜癌、頭頸部癌、膠芽腫、悪性腹水、及び造血癌が挙げられる。
【００５９】
本発明の化合物によって治療することができる特定の癌としては、軟部組織肉腫、骨肉腫等の骨癌、乳房腫瘍、膀胱癌、リーフラウメニ症候群、脳腫瘍、横紋筋肉腫、副腎皮質癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）が挙げられる。
【００６０】
癌治療に関する本発明の特定の実施形態において、癌は、ｐ５３野生型（ｐ５３ＷＴ）として特定される。別の特定の実施形態において、癌は、ｐ５３ＷＴ及びＣＤＫＮ２Ａ突然変異体として特定される。別の態様において、本発明は、どの患者に本発明の化合物を投与すべきかを決定するための診断を提供する。例えば、患者の癌細胞の試料を採取し、分析して、ｐ５３及び／またはＣＤＫＮ２Ａに関して癌細胞の状態を決定し得る。１つの態様において、ｐ５３に関して突然変異する癌を有する患者よりも、ｐ５３ＷＴである癌を有する患者が、治療のために選択される。別の態様において、ｐ５３ＷＴであり、かつ突然変異体ＣＤＮＫ２Ａタンパク質を有する癌の患者が、これらの特性を有しない患者よりも、選択される。分析のために癌細胞を採取することは、当業者に周知である。「ｐ５３ＷＴ」という用語は、ゲノムＤＮＡ配列番号ＮＣ＿００００１７バージョン９（７５１２４４５．．７５３１６４２）（ＧｅｎＢａｎｋ）によってコードされるタンパク質、ｃＤＮＡ配列番号ＮＭ＿０００５４６（ＧｅｎＢａｎｋ）によってコードされるタンパク質、またはＧｅｎＢａｎｋ配列番号ＮＰ＿０００５３７．３を有するタンパク質を意味する。「ＣＤＮＫ２Ａ突然変異体」という用語は、野生型でないＣＤＮＫ２Ａタンパク質を意味する。「ＣＤＫＮ２Ａ野生型」という用語は、ゲノムＤＮＡ配列番号９：２１９５７７５１−２１９８４４９０（Ｅｎｓｅｍｂｌ  ＩＤ）によってコードされるタンパク質、ｃＤＮＡ配列番号ＮＭ＿００００７７（ＧｅｎＢａｎｋ）もしくはＮＭ＿０５８１９５  ９ＧｅｎＢａｎｋ）によってコードされるタンパク質、またはＧｅｎＢａｎｋ配列番号ＮＰ＿００００６８もしくはＮＰ＿４７８１０２を有するタンパク質を意味する。
【００６１】
本発明の化合物はまた、甲状腺過形成（特に、グレーブス病）等の過剰増殖性障害、及び嚢胞（多嚢胞性卵巣症候群（シュタインレベンタール症候群）に特有の卵巣支質の血管過剰等）を治療するために使用することもできる。
【００６２】
本発明の化合物はまた、以下の疾患または病態を治療するために使用することもできる：喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気腫、乾癬、接触性皮膚炎、結膜炎、アレルギー性鼻炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、潰瘍性大腸炎、クローン病、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、及びハンチントン病。
【００６３】
本発明の化合物はまた、炎症性疾患、低酸素症、潰瘍、ウイルス感染症、細菌感染症、及び細菌性敗血症の治療にも使用することができる。
【００６４】
本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、１つ以上の追加の薬学的に活性な化合物／薬剤と組み合わせて投与してもよい。特定の実施形態において、追加の薬学的に活性な薬剤は、癌を治療するために使用することができる薬剤である。例えば、追加の薬学的に活性な薬剤は、抗腫瘍薬、抗血管新生剤、化学療法剤、及びペプチド系（ｐｅｐｔｉｄａｌ）癌治療剤より選択することができる。さらに別の実施形態において、抗腫瘍薬は、抗生物質型薬剤、アルキル化剤、代謝拮抗剤、ホルモン剤、免疫剤、インターフェロン型薬剤、キナーゼ阻害剤、混合型薬剤、及びそれらの組み合わせより選択される。追加の薬学的に活性な化合物／薬剤は、従来の有機化学小分子であってもよく、または、タンパク質、抗体、ペプチド体、ＤＮＡ、ＲＮＡ等の高分子、もしくはそのような高分子の断片であり得ることにも留意されたい。
【００６５】
癌治療に使用することができ、１つ以上の本発明の化合物と組み合わせて使用することができる、具体的な薬学的に活性な薬剤の例としては、メトトレキサート、タモキシフェン、フルオロウラシル、５−フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、メルカプトプリン、シスプラチン、カルボプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エトポシド、ビンブラスチン、ビンクリスチン、パシタクセル（ｐａｃｉｔａｘｅｌ）、チオグアニン、イダルビシン、ダクチノマイシン、イマチニブ、ゲムシタビン、アルトレタミン、アスパラギナーゼ、ブレオマイシン、カペシタビン、カルムスチン、ｃｌａｄｉｓａｔ．ＮａＣｌ水溶液、シクロホスファミン、シタラビン、デカラジン、ドセタキセル、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、フルダラビン、ミトスマイシン（ｍｉｔｏｓｍｙｃｉｎ）、ミトキサン（ｍｉｔｏｘａｎｅ）、ミトキサントロン、トポテカン、ビノレルビン、アドリアマイシン、ミスラム（ｍｉｔｈｒａｍ）、イミキモド、アレムツズマブ（ａｌｅｍｔｕｚｍａｂ）、エキセメスタン、ベバシズマブ、セツキシマブ、アザシチジン、クロファラビン、デシタビン、デサチニブ（ｄｅｓａｔｉｎｉｂ）、デクスラゾキサン、ドセタキセル、エピルビシン、オキサリプラチン、エルロチニブ、ラロキシフェン、フルベストラント、レトロゾール、ゲフィチニブ、ゲムツズマブ、トラスツズマブ、ゲフィチニブ、イキサベピロン、ラパチニブ、レナリドマイド、アミノレブリン酸、テモゾロミド、ネララビン、ソラフェニブ、ニロチニブ、ペグアスパラガーゼ、ペメトレキセド、リツキシマブ、ダサチニブ、サリドマイド、ベキサロテン、テムシロリムス、ボルテゾミブ、ボリノスタット、カペシタビン、ゾレドロン酸、アナストロゾール、スニチニブ、アプレピタント、及びネララビン、またはその薬学的に許容される塩が挙げられる。
【００６６】
癌治療に使用することができ、本発明の化合物と組み合わせて使用することができる、追加の薬学的に活性な薬剤としては、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）阻害剤、肝細胞成長因子／散乱因子（ＨＧＦ／ＳＦ）阻害剤、アンジオポエチン１及び／または２阻害剤、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）アゴニスト、組換えヒトａｐｏ２リガンド（ＴＲＡＩＬ）、インスリン様成長因子１受容体（ＩＧＦＲ−１）阻害剤、ｃＦＭＳ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、ｃ−ｍｅｔ阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤、ＣＤＫ４及び／または６阻害剤、及びＢ−ｒａｆ阻害剤が挙げられる。
【００６７】
癌治療に使用することができ、本発明の化合物と組み合わせて使用することができる、さらなる追加の薬学的に活性な薬剤としては、好ましくは癌細胞上のタンパク質と結合する抗体が、リンカーを使用して癌細胞に対して有害な化学化合物と結合する、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）が挙げられる。癌細胞に対して有害な化学化合物の例としては、マイタンシノイド誘導体及びオーリスタチン誘導体が挙げられる。
【００６８】
癌治療に使用することができ、本発明の化合物と組み合わせて使用することができる、依然としてさらなる追加の薬学的に活性な薬剤としては、エポエチンアルファ、ダルベポエチンアルファ、パニツムマブ、ペグフィルグラスチム、パリフェルミン、フィルグラスチム、デノスマブ、アンセスチム、ＡＭＧ  １０２、ＡＭＧ  ３１９、ＡＭＧ  ３８６、ＡＭＧ  ４７９（ガニツマブ）、ＡＭＧ  ５１１、ＡＭＧ  ９００、ＡＭＧ  ６５５（コナツブマブ）、ＡＭＧ  ７４５、ＡＭＧ  ９５１、及びＡＭＧ  ７０６（モテサニブ）、またはその薬学的に許容される塩が挙げられる。
【００６９】
別の態様において、本発明は、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）経路内のタンパク質の阻害剤である１つ以上の医薬品と組み合わせた本発明の化合物の使用に関する。本発明の化合物とＰＩ３Ｋ経路内のタンパク質の阻害剤との組み合わせは、癌細胞成長アッセイにおいて、増強されたアポトーシス及び細胞死滅をはじめとする相乗作用を示している。ＰＩ３Ｋ経路内のタンパク質の例としては、ＰＩ３Ｋ、ｍＴＯＲ、及びＰＫＢ（Ａｋｔとしても知られる）が挙げられる。ＰＩ３Ｋタンパク質は、α、β、δ、またはγを含むいくつかのイソ型で存在する。本発明の化合物と組み合わせて使用することができるＰＩ３Ｋ阻害剤は、１つ以上のイソ型に関して選択的であり得ることが企図される。選択的とは、化合物が１つ以上のイソ型を他のイソ型よりも阻害することを意味する。選択性は、当業者に周知の概念であり、インビトロもしくは細胞に基づくアッセイの周知の活性で測定することができる。好ましい選択性は、１つ以上のイソ型について他のイソ型よりも２倍超、好ましくは１０倍、またはより好ましくは１００倍大きい選択性を含む。１つの態様において、本発明の化合物と組み合わせて使用することができるＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＰＩ３Ｋα選択的阻害剤である。別の態様において、本化合物は、ＰＩ３Ｋδ選択的阻害剤である。
【００７０】
本発明の化合物と組み合わせて使用することができるＰＩ３Ｋ阻害剤の例としては、以下に開示されるものが挙げられる：ＰＣＴ公開出願番号ＷＯ２０１０／１５１７９１、ＰＣＴ公開出願番号ＷＯ２０１０／１５１７３７、ＰＣＴ公開出願番号ＷＯ２０１０／１５１７３５、ＰＣＴ公開出願番号ＷＯ２０１０１５１７４０、ＰＣＴ公開出願番号ＷＯ２００８／１１８４５５、ＰＣＴ公開出願番号ＷＯ２００８／１１８４５４、ＰＣＴ公開出願番号ＷＯ２００８／１１８４６８、米国公開出願番号ＵＳ２０１００３３１２９３、米国公開出願番号ＵＳ２０１００３３１３０６、米国公開出願番号ＵＳ２００９００２３７６１、米国公開出願番号ＵＳ２００９００３０００２、米国公開出願番号ＵＳ２００９０１３７５８１、米国公開出願番号ＵＳ２００９／００５４４０５、米国公開出願番号ＵＳ２００９／０１６３４８９、米国公開出願番号ＵＳ２０１０／０２７３７６４、米国公開出願番号ＵＳ２０１１／００９２５０４、またはＰＣＴ公開出願番号ＷＯ２０１０／１０８０７４。
【００７１】
本発明の化合物と組み合わせた使用に好ましいＰＩ３Ｋ阻害剤としては、
【化３】
0006266659.tif 000004
、またはその薬学的に許容される塩が挙げられる。
【００７２】
下記の式ＩＩａの化合物、またはその薬学的に許容される塩もまた好ましく、
【化４】
0006266659.tif 000005
式中、Ｘ１は、フッ素または水素であり、Ｙ１は、水素またはメチルであり、Ｚ１は、水素またはメチルである。
【００７３】
ＰＩ３Ｋ及びｍＴＯＲの両方を阻害する化合物（二重阻害剤）は公知である。依然として別の態様において、本発明は、本発明の化合物と組み合わせて使用するためのＰＩ３Ｋ及びｍＴＯＲ二重阻害剤の使用を提供する。
【００７４】
ｍＴＯＲは、ＰＩ３Ｋ経路内のタンパク質である。本発明の化合物と組み合わせてｍＴＯＲ阻害剤を使用することが、本発明の別の態様である。本発明の化合物と組み合わせて使用することができるｍＴＯＲ阻害剤としては、以下の文書に開示されているものが挙げられる：ＰＣＴ公開出願番号ＷＯ２０１０／１３２５９８、またはＰＣＴ公開出願番号ＷＯ２０１０／０９６３１４。
【００７５】
ＰＫＢ（Ａｋｔ）もまた、ＰＩ３Ｋ経路内のタンパク質である。本発明の化合物と組み合わせてｍＴＯＲ阻害剤を使用することが、本発明の別の態様である。本発明の化合物と組み合わせて使用することができるＰＫＢ阻害剤としては、以下の文書に開示されるものが挙げられる：米国特許番号７，３５４，９４４、米国特許番号７，７００，６３６、米国特許番号７，９１９，５１４、米国特許番号７，５１４，５６６、米国特許出願公開番号ＵＳ２００９／０２７０４４５  Ａ１、米国特許番号７，９１９，５０４、米国特許番号７，８９７，６１９、またはＰＣＴ公開出願番号ＷＯ２０１０／０８３２４６  Ａ１。
【００７６】
本発明の化合物は、ＣＤＫ４及び／または６阻害剤と組み合わせて使用することができる。本発明の化合物と組み合わせて使用することができるＣＤＫ４及び／または６阻害剤としては、以下の文書に開示されるものが挙げられる：ＰＣＴ公開出願番号ＷＯ２００９／０８５１８５、または米国特許出願公開番号ＵＳ２０１１／００９７３０５。
【００７７】
本発明の化合物は、吐き気を治療する薬学的に活性な薬剤と組み合わせて使用することもできる。吐き気を治療するために使用することができる薬剤の例としては、ドロナビノール、グラニセトロン、メトクロプラミド、オンダンセトロン、及びプロクロルペラジン、またはその薬学的に許容される塩が挙げられる。
【００７８】
加えて、本発明の化合物は、癌治療に使用することができる他の薬剤、例えばアセマンナン、アクラルビシン、アルデスロイキン、アリトレチノイン、アミホスチン、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アルグラビン（ａｒｇｌａｂｉｎ）、三酸化ヒ素、ＢＡＭ  ００２（Ｎｏｖｅｌｏｓ）、ビカルタミド、ブロクスウリジン、セルモロイキン、セトロレリックス、クラドリビン、クロトリマゾール、ＤＡ  ３０３０（Ｄｏｎｇ−Ａ）、ダクリズマブ、デニロイキンジフチトクス、デスロレリン、ジラゼプ、ドコサノール、ドキセルカルシフェロール、ドキシフルリジン、ブロモクリプチン、シタラビン、ＨＩＴジクロフェナク、インターフェロンアルファ、トレチノイン、エデルホシン、エドレコロマブ、エフロルニチン、エミテフール、エピルビシン、エポエチンベータ、リン酸エトポシド、エクシスリンド、ファドロゾール、フィナステリド、リン酸フルダラビン、ホルメスタン、ホテムスチン、硝酸ガリウム、ゲムツズマブゾガマイシン、ギメラシル／オテラシル／テガフールの合剤、グリコピン（ｇｌｙｃｏｐｉｎｅ）、ゴセレリン、ヘプタプラチン（ｈｅｐｔａｐｌａｔｉｎ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ヒト胎児アルファフェトプロテイン、イバンドロン酸、インターフェロンアルファ、天然型インターフェロンアルファ、インターフェロンアルファ−２、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンアルファ−Ｎ１、インターフェロンアルファ−ｎ３、インターフェロンアルファコン−１、天然型インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンベータ１ａ、インターフェロンベータ１ｂ、天然型インターフェロンガンマ、インターフェロンガンマ−１ａ、インターフェロンガンマ−１ｂ、インターロイキン−１ベータ、ヨーベングアン、イルソグラジン、ランレオチド、ＬＣ  ９０１８（Ｙａｋｕｌｔ）、レフルノミド、レノグラスチム、レンチナン硫酸、レトロゾール、白血球アルファインターフェロン、リュープロレリン、レバミソール＋フルオロウラシル、リアロゾール、ロバプラチン、ロニダミン、ロバスタチン、マソプロコール、メラルソプロール、メトクロプラミド、ミフェプリストン、ミルテホシン、ミリモスチム、ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ、ミトグアゾン、ミトラクトール、ミトキサントロン、モルグラモスチム、ナファレリン、ナロキソン＋ペンタゾシン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ニルタミド、ノスカピン、新規赤血球生成刺激タンパク質、ＮＳＣ  ６３１５７０オクトレオチド、オプレルベキン、オサテロン、パクリタキセル、パミドロン酸、ペグインターフェロンアルファ−２ｂ、ペントサンポリ硫酸ナトリウム、ペントスタチン、ピシバニール、ピラルビシン、ウサギ抗胸腺細胞ポリクローナル抗体、ポリエチレングリコールインターフェロンアルファ−２ａ、ポルフィマーナトリウム、ラルチトレキセド、ラスブリカーゼ、レニウムＲｅ１８６エチドロネート、ＲＩＩレチンアミド、ロムルチド、サマリウム（１５３Ｓｍ）レキシドロナム、サルグラモスチム、シゾフィラン、ソブゾキサン、ソネルミン（ｓｏｎｅｒｍｉｎ）、塩化ストロンチウム−８９、スラミン、タソネルミン、タザロテン���テガフール、テモポルフィン、テニポシド、テトラクロロデカオキシド、チマルファシン、サイロトロピンアルファ、トレミフェン、トシツモマブ−ヨウ素１３１、トレオスルファン、トレチノイン、トリロスタン、トリメトレキサート、トリプトレリン、天然型腫瘍壊死因子アルファ、ウベニメクス、膀胱癌ワクチン、丸山ワクチン、黒色腫ライセートワクチン、バルルビシン、ベルテポルフィン、ビルリジン、ジノスタチンスチマラマー、アバレリクス、ＡＥ  ９４１（Ａｅｔｅｒｎａ）、アンバムスチン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｂｃｌ−２（Ｇｅｎｔａ）、ＡＰＣ  ８０１５（Ｄｅｎｄｒｅｏｎ）、デキサミノグルテチミド、ジアジクオン、ＥＬ  ５３２（Ｅｌａｎ）、ＥＭ  ８００（Ｅｎｄｏｒｅｃｈｅｒｃｈｅ）、エニルウラシル、エタニダゾール、フェンレチニド、フィルグラスチムＳＤ０１（Ａｍｇｅｎ）、ガロシタビン、ガストリン１７免疫原、ＨＬＡ−Ｂ７遺伝子療法（Ｖｉｃａｌ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ヒスタミン二塩酸塩、イブリツモマブチウキセタン、イロマスタット、ＩＭ  ８６２（Ｃｙｔｒａｎ）、インターロイキン−２、イプロキシフェン、ＬＤＩ  ２００（Ｍｉｌｋｈａｕｓ）、レリジスチム、リンツズマブ、ＣＡ１２５モノクロナール抗体（ＭＡｂ）（Ｂｉｏｍｉｒａ）、癌ＭＡｂ（Ｊａｐａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、ＨＥＲ−２及びＦｃ  ＭＡｂ（Ｍｅｄａｒｅｘ）、イディオタイプ１０５ＡＤ７  ＭＡｂ（ＣＲＣ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、イディオタイプＣＥＡ  ＭＡｂ（Ｔｒｉｌｅｘ）、ＬＹＭ−１−ヨウ素１３１  ＭＡｂ（Ｔｅｃｈｎｉｃｌｏｎｅ）、多形性上皮性ムチン−イットリウム９０  ＭＡｂ（Ａｎｔｉｓｏｍａ）、マリマスタット、メノガリル、ミツモマブ、モテキサフィンガドリニウム、ＭＸ  ６（Ｇａｌｄｅｒｍａ）、ノラトレキシド、Ｐ３０タンパク質、ペグビソマント、ポルフィロマイシン、プリノマスタット、ＲＬ０９０３（Ｓｈｉｒｅ）、ルビテカン、サトラプラチン、フェニル酢酸ナトリウム、スパルホス酸、ＳＲＬ１７２（ＳＲ  Ｐｈａｒｍａ）、ＳＵ５４１６（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＴＡ０７７（Ｔａｎａｂｅ）、テトラチオモリブデート、タリブラスチン、トロンボポイエチン、エチルエチオプルプリンスズ、チラパザミン、癌ワクチン（Ｂｉｏｍｉｒａ）、黒色腫ワクチン（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、黒色腫ワクチン（Ｓｌｏａｎ  Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、黒色腫オンコライセートワクチン（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅ）、ウイルス性黒色腫細胞ライセートワクチン（Ｒｏｙａｌ  Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ）、またはバルスポダールと組み合わせて使用することができる。また、上に引用された薬剤を、適切な場合、薬学的に許容される塩として投与してもよい。
【００７９】
本発明の化合物を、放射線療法、ホルモン療法、外科手術、及び免疫療法と組み合わせて使用してもよく、それらの療法は当業者に周知である。
【００８０】
本発明の１つの態様は、別個に投与され得る薬学的に活性な化合物の組み合わせを用いた疾患／病態の治療を企図するので、本発明は、別個の薬学的組成物をキット形態に組み合わせることにさらに関する。本キットは、本発明の化合物、及び第２の薬学的化合物という、２つの別個の薬学的組成物を含む。本キットは、別個の組成物を収容するための容器、例えば分割されたボトルまたは分割されたホイルパケットを含む。容器の追加の例としては、注射器、箱、バッグが挙げられる。典型的に、本キットは、別個の構成成分の使用のための指示書を含む。キット形態は、別個の構成成分が、好ましくは異なる剤形（例えば、経口及び非経口）で投与されるとき、異なる投与間隔で投与されるとき、または処方する医師もしくは獣医師により、その組み合わせの個々の構成成分の滴定が望まれるとき、特に有利である。
【００８１】
そのようなキットの例は、いわゆるブリスターパックである。ブリスターパックは、包装産業において周知であり、薬学的単位剤形（錠剤、カプセル等）の包装に広く使用されている。ブリスターパックは、一般的に、好ましくは透明なプラスチック材料のホイルで覆われた比較的硬い材料のシートから成る。包装工程中、プラスチックホイル内に凹所が形成される。この凹所は、包装される錠剤またはカプセルのサイズ及び形状を有する。次に、錠剤またはカプセルがこの凹所内に置かれ、比較的硬い材料のシートが、凹所が形成された方向とは反対側のホイルの前面において、プラスチックホイルに封をする。結果として、錠剤またはカプセルは、プラスチックホイルとシートとの間の凹所内に密封される。好ましくは、シートの強度は、凹所に対して手で圧力を加え、それによってシート内の凹所がある場所に開口部が形成されることにより、錠剤またはカプセルを取り出すことができる程のものである。次いで、錠剤またはカプセルは、該開口部を介して取り出され得る。
【００８２】
キット上に記憶補助を提供することが望ましい場合があり、例えば、錠剤またはカプセルの隣に数字がある形態では、投薬計画の日付に対応した数字によって、どの錠剤またはカプセルを摂取すべきか特定される。そのような記憶補助の別の例は、例えば、「第１週、月、火、．．．等．．第２週、月、火、．．」等のような、カードに印刷されるカレンダーである。記憶補助の他の変形は、容易に明らかであるだろう。「１日用量」は、所与の一日に摂取される１つのの錠剤もしくはカプセル、またはいくつかの丸剤もしくはカプセルであり得る。また、本発明の化合物の１日用量は、１つの錠剤またはカプセルから成り得る一方、第２の化合物の１日用量は、いくつかの錠剤またはカプセルから成り得、及びその反対もあり得る。記憶補助は、これを反映して、活性薬剤の正しい投与を援助すべきである。
【００８３】
本発明の別の特定の実施形態において、１日用量を意図された使用の順に一つずつ分注するように設計されたディスペンサーが提供される。好ましくは、ディスペンサーは、投薬計画の遵守をさらに促進するために、記憶補助を備える。そのような記憶補助の一例は、分注された１日用量の数を示す機械式カウンタである。そのような記憶補助の別の例は、例えば、最後の一日量が摂取された日を読み出す、及び／またはいつ次の用量を摂取すべきか気付かせる、液晶読出しまたは可聴の注意信号と一体となった蓄電式マイクロチップメモリである。
【００８４】
本発明の化合物及び他の薬学的に活性な化合物を、所望であれば、患者に対して、経口的に、直腸に、非経口的に（例えば、静脈内、筋肉内、または皮下）、嚢内に、膣内に、腹腔内に、膀胱内に、局所的に（例えば、粉末剤、軟膏剤、または点滴薬）、または口腔もしくは鼻腔噴霧剤として、投与できる。薬学的に活性な薬剤を投与するために当業者によって使用されるすべての方法が企図される。
【００８５】
非経口注射に好適な組成物は、生理学的に許容される無菌性水性もしくは非水性溶液、分散体、懸濁液、または乳化剤、及び無菌性注射可能溶液もしくは分散体への再構成のための無菌性粉末剤を含んでもよい。好適な水性及び非水性担体、希釈剤、溶媒、またはビヒクルの例としては、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロール等）、それらの好適な混合物、植物油（オリーブ油等）、及びエチルオレエート等の注射可能な有機エステルが挙げられる。例えば、レシチン等のコーティングの使用により、分散体の場合は要求される粒子サイズの維持により、及び界面活性剤の使用により、適切な流動性を維持することができる。
【００８６】
これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤等のアジュバントを含有してもよい。微生物汚染は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等の様々な抗菌薬及び抗真菌薬を添加することにより、防止することができる。また、例えば、糖、塩化ナトリウム等の等張剤を含むことが望ましい場合もある。注射可能な薬学的組成物の長期吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、アルミニウムモノステアレート、及びゼラチンの使用によりもたらすことができる。
【００８７】
経口投与のための固体剤形は、カプセル、錠剤、粉末剤、及び顆粒剤を含む。そのような固体剤形において、活性化合物は、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウム等の少なくとも１つの不活性の慣例的賦形剤（または担体）、または（ａ）充填剤もしくは増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、マンニトール、及びケイ酸、（ｂ）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及びアカシア、（ｃ）保水剤、例えば、グリセロール、（ｄ）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定の複雑ケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム、（ａ）溶解遅延剤、例えば、パラフィン、（ｆ）吸収促進剤、例えば、四級アンモニウム化合物、（ｇ）湿潤剤、例えば、セチルアルコール、及びグリセロールモノステアレート、（ｈ）吸着剤、例えば、カオリン、及びベントナイト、ならびに（ｉ）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、またはそれらの混合物、と混合される。カプセル、及び錠剤の場合、剤形はまた、緩衝剤を含んでもよい。
【００８８】
類型の固形組成物はまた、ラクトースまたは乳糖といった賦形剤、ならびに高分子量ポリエチレングリコール等を使用した軟及び硬充填ゼラチンカプセル内で充填剤として使用されてもよい。
【００８９】
錠剤、糖衣錠、カプセル、丸剤、及び顆粒剤等の固体剤形は、当該技術分野において周知の腸溶コーティング等、コーティング及びシェルを用いて調剤することができる。それらは、不透明化剤も含有してもよく、本活性化合物（複数可）を遅延式で腸管のある特定の部分内に放出するような組成物でもあり得る。使用され得る包埋組成物は、高分子物質及びワックスである。本活性化合物はまた、適切な場合、上記の賦形剤のうちの１つ以上とともにした、マイクロカプセル化形態であり得る。
【００９０】
経口投与のための液状剤形は、薬学的に許容される乳化剤、溶液、懸濁液、シロップ、及びエリキシル剤を含む。本活性化合物に加え、液状剤形は、水もしくは他の溶媒等の当該技術分野において一般に使用される不活性希釈剤、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油、具体的には、綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ひまし油、ならびに胡麻油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステル、またはそれらの物質の混合物等を含有してもよい。
【００９１】
そのような不活性希釈剤の他に、本組成物は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味料、着香料、ならびに芳香剤等のアジュバントも含み得る。懸濁液は、本活性化合物に加えて、懸濁化剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールならびにソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、及びトラガント、またはそれらの物質の混合物等を含有してもよい。
【００９２】
直腸投与のための組成物は、好ましい坐剤であり、本発明の化合物と、通常室温では固体だが体温では液体であるため、直腸または膣腔内で溶けて本活性構成成分を放出する、ココアバター、ポリエチレングリコール、または坐剤ワックス等の適切な非刺激性賦形剤もしくは担体とを混合することによって調製することができる。
【００９３】
本発明の化合物の局所投与のための剤形は、軟膏剤、粉末剤、噴霧剤、及び吸入剤を含む。本活性化合物（複数可）は、無菌条件下で、生理学的に許容される担体、及び必要とされ得る任意の防腐剤、緩衝剤、もしくは噴射剤と混合される。眼科用製剤、眼軟膏剤、粉末剤、及び溶液もまた、本発明の範囲内にあるものとして企図される。
【００９４】
本発明の化合物を、１日当たり約０．１〜約３，０００ｍｇの範囲の用量レベルで患者に投与することができる。約７０ｋｇの体重を有する正常な成人にとっては、体重１キログラム当たり約０．０１〜約１００ｍｇの範囲の用量が、典型的に十分である。使用され得る具体的な用量及び用量範囲は、患者の要件、治療する病態もしくは疾患の重症度、及び投与される化合物の薬学的活性を含む、いくつかの要因に依存する。特定の患者のための用量範囲及び最適用量の決定は、当該技術分野の範囲内である。
【００９５】
本発明の化合物を、薬学的に許容される塩、エステル、アミド、またはプロドラッグとして投与することができる。「塩」という用語は、本発明の化合物の無機及び有機塩を指す。化合物の最終分離及び精製中に、または、精製した化合物を、その遊離塩基もしくは酸性型において、適切な有機もしくは無機塩基もしくは酸と別々に反応させ、かように形成される塩を分離することによって、塩をインサイツで調製することができる。代表的な塩としては、水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩（ｐａｌｍｉｔｉａｔｅ）、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩（ｎａｐｈｔｈｙｌａｔｅ）、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩、及びラウリルスルホン酸塩等が挙げられる。塩は、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ及びアルカリ土類金属に基づくカチオン、ならびに非毒性アンモニウム、四級アンモニウム、及びアミンカチオンを含むがそれらに限定されない、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミン等を含んでもよい。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ，６６：１−１９（１９７７）を参照のこと。
【００９６】
本発明の化合物の薬学的に許容されるエステルの例としては、Ｃ１〜Ｃ８アルキルエステルが挙げられる。許容されるエステルとしてはさらに、Ｃ５〜Ｃ７シクロアルキルエステル、ならびにベンジル等のアリールアルキルエステルが挙げられる。Ｃ１〜Ｃ４アルキルエステルが一般に使用される。本発明の化合物のエステルは、当該技術分野において周知の方法に従って調製され得る。
【００９７】
本発明の化合物の薬学的に許容されるアミドの例としては、アンモニアから誘導されるアミド、第一級Ｃ１〜Ｃ８アルキルアミン、及び第二級Ｃ１〜Ｃ８ジアルキルアミンが挙げられる。第二級アミンの場合、アミンは、少なくとも１個の窒素原子を含有する５または６員ヘテロシクロアルキル基の形態であってもよい。アンモニアから誘導されるアミド、Ｃ１〜Ｃ３第一級アルキルアミン、及びＣ１〜Ｃ２ジアルキル第二級アミンが、一般に使用される。本発明の化合物のアミドは、当業者に周知の方法に従って調製され得る。
【００９８】
「プロドラッグ」という用語は、インビボで転換されて本発明の化合物をもたらす化合物を意味する。転換は、血液中の加水分解を介する等、様々な機序によって生じ得る。プロドラッグ使用の考察は、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｗ．Ｓｔｅｌｌａ，“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，“Ｖｏｌ．１４  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓによって、及びＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，ｅｄ．Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７において提供される。
【００９９】
例示すると、本発明の化合物はカルボン酸官能基を含有するので、プロドラッグは、酸基の水素原子を、（Ｃ１〜Ｃ８アルキル、（Ｃ２〜Ｃ１２）アルカノイルオキシメチル、４〜９個の炭素原子を有する１−（アルカノイルオキシ）エチル、５〜１０個の炭素原子を有する１−メチル−１−（アルカノイルオキシ）エチル、３〜６個の炭素原子を有するアルコキシカルボニルオキシメチル、４〜７個の炭素原子を有する１−（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、５〜８個の炭素原子を有する１−メチル−１−（アルコキシカルボニルオキシ）エチル、３〜９個の炭素原子を有するＮ−（アルコキシカルボニル）アミノメチル、４〜１０個の炭素原子を有する１−（Ｎ−（アルコキシカルボニル）アミノメチル、３−フタリジル、４−クロトノラクトニル、ガンマ−ブチロラクトン−４−イル、ジ−Ｎ，Ｎ−（Ｃ１〜Ｃ２）アルキルアミノ（Ｃ２〜Ｃ３）アルキル（β−ジメチルアミノエチル等）、カルバモイル−（Ｃ１〜Ｃ２）アルキル、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１〜Ｃ２）アルキルカルバモイル−（Ｃ１〜Ｃ２）アルキル、及びピペリジノ−、ピロリジノ−、もしくはモルホリノ（Ｃ２−３）アルキル等の基で置き換えることにより形成されるエステルを含有することができる。
【０１００】
本発明の化合物は、不斉もしくはキラル中心を含有してもよく、それ故に、異なる立体異性形態で存在する。本化合物の全ての立体異性形態、ならびにラセミ混合物を含むそれらの混合物が、本発明の部分を形成することが企図される。加えて、本発明は、全ての幾何及び位置異性体を企図する。例えば、本化合物が二重結合を含む場合、シス型及びトランス型の両方（それぞれＺ及びＥと指定される）、ならびに混合物が企図される。
【０１０１】
ジアステレオ異性混合物等の立体異性体の混合物を、クロマトグラフィ及び／または分別結晶等の公知の方法により、それらの物理的化学差異に基づいて、それらの個々の立体化学的構成成分に分離することができる。鏡像異性体もまた、鏡像異性混合物を適切な光学活性化合物（例えば、アルコール）と反応させてジアステレオ異性混合物に変換し、ジアステレオ異性体を分離し、個々のジアステレオ異性体を対応する純粋な鏡像異性体へと変換すること（例えば、加水分解すること）により、分離することができる。また、いくつかの化合物は、アトロプ異性体（例えば、置換ビアリール）であってもよい。
【０１０２】
本発明の化合物は、非溶媒和形態、ならびに水（水和物）、エタノール等などの薬学的に許容される溶媒とともに溶媒和形態で存在してもよい。本発明は、溶媒和及び非溶媒和の両方の形態を企図及び包含する。
【０１０３】
本発明の化合物が異なる互変異性形態で存在し得ることも可能である。本発明の化合物の全ての互変異性体が企図される。例えば、テトラゾール部分の全ての互変異性形態が本発明に含まれる。また、例えば、本化合物の全てのケト‐エノールまたはイミン−エナミン形態が本発明に含まれる。
【０１０４】
当業者は、本明細書に含まれる化合物名及び構造が化合物の特定の互変異性体に基づき得ることを認識するであろう。特定の互変異性体のみの名称または構造が使用され得るが、別途記載されない限り、全ての互変異性体が本発明により包含されることが意図される。
【０１０５】
本発明は、合成化学者に周知の方法等の検査技法を使用してインビトロで合成される、または新陳代謝、発酵、消化等を介する等インビボ技術を使用して合成される化合物を包含することも意図される。本発明の化合物を、インビトロ及びインビボ技術の組み合わせを使用して合成され得ることも企図される。
【０１０６】
本発明はまた、１個以上の原子が通常天然に見出される原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられていることを除いて、本明細書内に引用されるものと同一の同位体的標識化化合物も含む。本発明の化合物に組み込むことができる同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、亜リン酸、フッ素、及び塩素の同位体、例えば、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１６Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、及び３６Ｃｌが挙げられる。１つの態様において、本発明は、１個以上の水素原子が重水素（２Ｈ）原子と置き換わる化合物に関する。
【０１０７】
前述の同位体及び／または他の原子の他の同位体を含有する本発明の化合物は、本発明の範囲内である。本発明のある特定の同位体的標識化化合物、例えば３Ｈ及び１４Ｃ等の放射性同位体が組み込まれるようなものが、薬物及び／または物質の組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム、すなわち、３Ｈ、及び炭素−１４、すなわち、１４Ｃ同位体が、それらの調製及び検出の容易性により特に好ましい。さらに、重水素、すなわち、２Ｈ等のより重い同位体との置換が、より優れた代謝安定性から生じるある特定の療法的有利、例えば、増加したインビボ半減期または低減された投与量要件を与えることができるため、いくつかの状況において好まれる場合がある。本発明の同位体的標識化化合物は、一般的に、容易に入手可能な同位体的標識化試薬を非同位体的標識化試薬の代わりに用いることにより調製することができる。
【０１０８】
本発明の化合物は、結晶状態を含む、ならびに非晶状態として、様々な固体状態で存在してもよい。本発明化合物の多形とも称される異なる結晶状態、及び非晶状態は、本発明の部分として企図される。
【０１０９】
本発明の化合物の合成において、ある特定の脱離基を使用することが望ましい場合がある。「脱離基」（「ＬＧ」）という用語は、一般的に、求核基により置き換え可能な基を指す。そのような脱離基は、当該技術分野において公知である。脱離基の例としては、ハロゲン化合物（例えば、Ｉ、Ｂｒ、Ｆ、Ｃｌ）、スルホン酸塩（例えば、メシル酸塩、トシル酸塩）、硫化物（例えば、ＳＣＨ３）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール等が挙げられるが、それらに限定されない。求核基の例としては、アミン、チオール、アルコール、グリニャール試薬、アニオン種（例えば、アルコキシド、アミド、カルバニオン）等が挙げられるが、それらに限定されない。
【０１１０】
本明細書内に引用される全ての特許、公開特許出願、及び他の刊行物は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１１】
以下に提示される実施例は、本発明の特定の実施形態を例示する。これらの実施例は、代表的であることが意図され、いかなる様式においても本特許請求の範囲を制限することを目的としない。別途記述がない限り、本明細書内で固体に対してパーセントが使用されるとき、それは、参照される固体組成物に対する重量パーセントである。本明細書内で液体に対してパーセントが使用されるとき、それは、参照される溶液に対する容量パーセントである。
【０１１２】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ５−ｍｍ  ｚ−軸勾配ＢＢＩプローブを装着した５００  ＭＨｚ  Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩＩ分析計システム（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｂｉｏｓｐｉｎ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）、またはＢｒｕｋｅｒ  ５−ｍｍ  ｚ−軸勾配ＢＢＯプローブを装着した４００  ＭＨｚ  Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩもしくはＡｖａｎｃｅ  ＩＩＩ分析計システムで獲得した。試料を、概して、ＮＭＲ分析のために、６００μＬのＤＭＳＯ−ｄ６またはＣＤ３ＯＤのいずれかの中に溶解させた。１Ｈ化学シフトは、ＤＭＳＯ−ｄ６では２．５０ｐｐｍ、ＣＤ３ＯＤでは３．３０ｐｐｍで、分析のために使用した重溶媒からの残留プロトン信号に関して参照した。
【０１１３】
有意なピークを集計し、概して、プロトンの数、多重度（ｓは一重項、ｄは二重項、ｄｄは二重項の二重項、ｔは三重項、ｑは四重項、ｍは多重項、ｂｒ  ｓは広幅一重項）、及びヘルツ単位での結合定数（複数可）を含む。
【０１１４】
電子衝撃イオン化（ＥＩ）質量スペクトルを、概して、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ６１４０  Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ  ＬＣ／ＭＳ質量分析計上で記録した。質量分析測定結果を、電荷に対する質量の比率として報告し、時としてその後に各イオンの比存在度が続く（括弧内）。下記の実施例内の出発原料は、概して、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ等の商用供給源から、または文献手順を介するかのいずれかで入手可能である。
【０１１５】
本明細書内では、以下の略称が使用され得る：
【表１】
0006266659.tif 000006
0006266659.tif 000007
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【実施例】
【０１１６】
本明細書内における本発明の化合物は、一般的に、市販の出発原料で開始し、当業者に公知の合成技術を使用して調製することができる。
【０１１７】
［実施例１］
２−（（３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−１−シクロプロピルエチル）−５−（３−クロロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−３−イル）酢酸（２０１１年１２月８日公開のＷＯ２０１１／１５３５０９（Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．）の実施例３５１
【化５】
0006266659.tif 000010
ステップＡ．２−（３−クロロフェニル）−１−（４−クロロフェニル）エタノン
【化６】
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ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（テトラヒドロフラン中１Ｍ、１１７ｍＬ）を、テトラヒドロフラン（５８ｍＬ）中の２−（３−クロロフェニル）酢酸（１０ｇ、５８．６ｍｍｏｌ）の−７８℃溶液に、１時間かけて徐々に添加した。−７８℃で４０分間撹拌後、テトラヒドロフラン（３５ｍＬ）中のメチル４−クロロベンゾエート（１０ｇ、５８．６ｍｍｏｌ）の溶液を、１０分の期間をかけて添加した。その反応物を、−７８℃で３時間撹拌し、次いで２５℃まで温めた。２５℃で２時間後、その反応物を、飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止処理し、大部分のテトラヒドロフランを減圧下で除去した。残渣を酢酸エチル（２回、１００ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機層を、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濾液を濃縮した。生成物をエーテル／ペンタンから再結晶化させ、表題化合物を白色固体として得た。
【０１１８】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６，δｐｐｍ）：８．０５（ｍ，２Ｈ）、７．６２（ｍ，２Ｈ）、７．３３（ｍ，３Ｈ）、７．２１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．４５（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）＝２６５．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１９】
ステップＢ：メチル４−（３−クロロフェニル）−５−（４−クロロフェニル）−２−メチル−５−オキソペンタノエート
【化７】
0006266659.tif 000012
メチルメタクリレート（１２．６５ｍＬ、１１９ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（２８３ｍＬ）中の２−（３−クロロフェニル）−１−（４−クロロフェニル）エタノン（３０ｇ、１１３ｍｍｏｌ、実施例１、ステップＡ）の溶液に添加した。次いでカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．２７ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で２日間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、３００ｍＬの酢酸エチルで置き換えた。有機相をブライン（５０ｍＬ）、水（３回、５０ｍＬ）、及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、メチル４−（３−クロロフェニル）−５−（４−クロロフェニル）−２−メチル−５−オキソペンタノエートをジアステレオ異性体のおよそ１：１混合物として得た。
【０１２０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：７．８７（ｍ，２Ｈ）、７．３８（ｍ，２Ｈ），７．２７〜７．１４（一連のｍ，４Ｈ），４．６１（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｓ，１．５Ｈ），３．６０（ｓ，１．５Ｈ）、２．４５（ｍ，１Ｈ）、２．３４（ｍ，１Ｈ）、２．１０（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．９，９．４，５．５Ｈｚ，０．５Ｈ）、１．９６（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．７，９．０，４．３Ｈｚ，０．５Ｈ）、１．２２（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１．５Ｈ）、１．１６（ｄ，Ｊ＝７．０，１．５Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）＝３８７．０［Ｍ＋２３］＋。
【０１２１】
ステップＣ：（３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−（３−クロロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オン、及び（３Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−（３−クロロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オン
【化８】
0006266659.tif 000013
メチル４−（３−クロロフェニル）−５−（４−クロロフェニル）−２−メチル−５−オキソペンタノエート（４０ｇ、１０４．０ｍｍｏｌ、実施例１、ステップＢ）を、２００ｍＬの無水トルエン中に溶解させ、真空下で濃縮した。残渣を、使用前に２時間、高真空下に置いた。化合物を２×２０ｇのバッチに分け、以下のように処理した：無水２−プロパノール（１０４ｍＬ）中のメチル４−（３−クロロフェニル）−５−（４−クロロフェニル）−２−メチル−５−オキソペンタノエート（２０ｇ、５２．０ｍｍｏｌ）を、２５０ｍＬガラス製水素化容器中、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２．３３ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）で処理した。３．８ｍＬのトルエン中のＲｕＣｌ２（Ｓ−ｘｙｌｂｉｎａｐ）（Ｓ−ＤＡＩＰＥＮ）（０．１９１ｇ、０．１５６ｍｍｏｌ、Ｓｔｒｅｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗｂｕｒｙｐｏｒｔ、ＭＡ）を添加した。１．５時間後、容器を５０ｐｓｉ（３４４．７ｋＰａ）まで加圧し、水素で５回パージし、室温で撹拌させた。その反応物に、必要に応じて追加の水素を注入した。３日後、反応物を組み合わせ、５０％飽和塩化アンモニウム溶液と酢酸エチルとの間で分割した。水層を酢酸エチルで抽出した。組み合わせた有機相をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗生成物（主として、（４Ｒ，５Ｒ）−イソプロピル４−（３−クロロフェニル）−５−（４−クロロフェニル）−５−ヒドロキシ−２−メチルペンタノエート）を、テトラヒドロフラン（４５０ｍＬ）及びメタノール（１５０ｍＬ）中に溶解させた。水酸化リチウム（１．４Ｍ、１４９ｍＬ、２０８ｍｍｏｌ）を添加し、その溶液を室温で２４時間撹拌した。その混合物を真空下で濃縮し、残渣を酢酸エチル中に再溶解させた。１Ｎの塩酸水溶液を、水層が約１のｐＨを有するまで、撹拌しながら添加した。層を分離し、有機相をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。その物質を２００ｍＬの無水トルエン中に溶解させ、ピリジニウムｐ−トルエンスルホン酸塩（ＰＰＴＳ、０．７８４ｇ、３．１２ｍｍｏｌ）で処理した。その反応物を、ディーンスターク条件下で、セコ酸が消費されるまで（約２時間）加熱して還流させた。その反応物を室温まで冷却し、飽和炭酸水素ナトリウム（５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。その溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗物質を、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィ（１２０ｇカラム、１００％ジクロロメタンで溶離）によって精製した。表題化合物を、およそ９４：６の鏡像異性体比、及びメチルジアステレオ異性体の７：３混合物を有する白色固体として得た。
【０１２２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：７．２２〜６．９８（一連のｍ，５Ｈ）、６．９１（ｄｔ，Ｊ＝７．４，１．２Ｈｚ，０．３Ｈ）、６．８１（ｍ，２Ｈ）、６．７３（ｄｔ，Ｊ＝７．６，１．４Ｈｚ，０．７Ｈ）、５．７６（ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ，０．３Ｈ）、５．６９（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，０．７Ｈ）、３．６７（ｄｔ，Ｊ＝６．６，４．３Ｈｚ，０．３Ｈ）、３．５５（ｔｄ，Ｊ＝７．８，４．７Ｈｚ，０．７Ｈ）、２．９６（四重項のｄ，Ｊ＝１３．５，６．７Ｈｚ，０．７Ｈ）、２．８１（ｍ，０．３Ｈ）、２．５６（ｄｔ，Ｊ＝１４．３，８．０Ｈｚ，０．７Ｈ）、２．３２（ｄｔ，Ｊ＝１３．６９，７．０Ｈｚ，０．３Ｈ）、２．０６（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．７，８．４，４．１，０．３Ｈ）、１．８５（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．１，１２．５，７．４，０．７Ｈ）、１．４２（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，０．９Ｈ）、１．４１（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２．１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）＝３５７．０［Ｍ＋２３］＋。［α］Ｄ（２２℃，ｃ＝１．０，ＣＨ２Ｃｌ２）＝−３１．９°；ｍ．ｐ．９８〜９９℃。
【０１２３】
ステップＤ．（３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アリル−５−（３−クロロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オン
【化９】
0006266659.tif 000014
−３５℃（アセトニトリル／ドライアイス浴）の、テトラヒドロフラン（２２ｍＬ）中の（３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−５−（３−クロロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オン、及び（３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−５−（３−クロロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オン（４．５ｇ、１３．４ｍｍｏｌ、実施例１、ステップＣ）、ならびに臭化アリル（３．４８ｍＬ、４０．３ｍｍｏｌ）の溶液を、テトラヒドロフラン（１．０Ｍ、１７．４５ｍＬ、１７．４５ｍｍｏｌ）中のリチウムビス（トリメチルシリル）アミドの溶液で処理した。その反応物を、１時間かけて−５℃まで温め、次いで５０％飽和塩化アンモニウムで反応停止処理した。その反応物を１００ｍＬの酢酸エチルで希釈し、層を分離した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、真空下で静置して、表題化合物を白色固体として得た。キラルＳＦＣ（９２％ＣＯ２、８％メタノール（２０ｍＭアンモニア）、５ｍＬ／分、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｘ−２カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ．ＣＡ）、１００バール（１０，０００ｋＰａ）、４０℃、５分法）を使用して、本化合物が９６：４の鏡像異性体比を有することを決定した。（主要鏡像異性体：表題化合物、保持時間＝２．４５分、９６％；少量鏡像異性体（構造は図示せず、保持時間＝２．１２分、４％）。表題化合物を、ヘプタン（４０ｍＬ中４．７ｇスラリー化）に還流で添加することにより再結晶化させ、１．５ｍＬのトルエンを滴加して可溶化した。その溶液を０℃まで冷却した。白色固体を濾過し、２０ｍＬの冷ヘプタンですすぎ、白色粉末を得た。キラルＳＦＣ（９２％ＣＯ２、８％メタノール、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｘ−２カラム、上記と同じ方法）が、９９．２：０．８の鏡像異性体比を示した。（主要鏡像異性体、２．４５分、９９．２％；少量鏡像異性体：２．１２分、０．８％）
【０１２４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：７．２４（ｄｄｄ，Ｊ＝８．０，２．０，１．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．２０−７．１５（一連のｍ，３Ｈ）、６．９１（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．７８（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．６０（ｍ，２Ｈ）、５．８４（ｄｄｔ，Ｊ＝１７．６，１０．２，７．４Ｈｚ，１Ｈ）、５．７０（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．２１〜５．１３（一連のｍ，２Ｈ）、３．８２（ｄｔ，Ｊ＝１１．７，４．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．６２（ＡＢＸＪＡＢ＝１３．７Ｈｚ，ＪＡＸ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、２．５３（ＡＢＸ，ＪＡＢ＝１３．９Ｈｚ，ＪＢＸ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）。１．９９（ｄｄ，Ｊ＝１４．１，１１．９Ｈｚ，１Ｈ）、１．９２（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．９，３．９，１．２Ｈｚ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ，δｐｐｍ）：１７５．９、１４０．２、１３４．５、１３４．３、１３４．０、１３２．２、１２９．８、１２８．６、１２８．０、１２７．９、１２７．８、１２６．４、１１９．９、８３．９、４４．５、４２．４、４０．７、３１．８、２６．１。ＭＳ（ＥＳＩ）＝３７５．２［Ｍ＋Ｈ］＋。ＩＲ＝１７３０ｃｍ−１。［α］Ｄ（２４℃，ｃ＝１．０，ＣＨ２Ｃｌ２）＝−１９１°。ｍ．ｐ．１１１〜１１４℃。
【０１２５】
ステップＥ．（２Ｓ）−２−（（２Ｒ）−２−（３−クロロフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロピル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−シクロプロピル−２−ヒドロキシエチル）−２−メチルペント−４−エナミド
【化１０】
0006266659.tif 000015
（３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アリル−５−（３−クロロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オン（１２５．０ｇ、３３３ｍｍｏｌ、実施例１、ステップＤ）を、（Ｓ）−２−アミノ−２−シクロプロピルエタノール（１０１ｇ、９９９ｍｍｏｌ）に添加し、反応混合物を、１１０℃で、アルゴン下で２５時間加熱した。その反応混合物を、酢酸イソプロピルで希釈し、室温まで冷却し、３Ｍの塩酸（４００ｍＬ）を徐々に添加した。その混合物を室温で２０分間撹拌し、層を分離した。有機層を１Ｍの塩酸（２００ｍＬ）及びブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、所望の生成物を茶色の油（１５９ｇ）として得た。
【０１２６】
ステップＦ．（３Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，８Ｓ）−８−アリル−６−（３−クロロフェニル）−５−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−８−メチル−２，３，５，６，７，８−ヘキサヒドロオキサゾロ［３，２−ａ］ピリジン−４−イウム  ４−メチルベンゼンスルホン酸塩
【化１１】
0006266659.tif 000016
磁気撹拌棒、添加漏斗、セプタム、内部温度センサを備えた２Ｌの四口丸底フラスコに、ｐ−トルエンスルホン酸無水物（２４０ｇ、７３４ｍｍｏｌ）、及び無水ジクロロメタン（６００ｍＬ）を充填した。内部温度を１４℃に調整し、混合物を１０分間撹拌した。無水ジクロロメタン（４００ｍＬ）中の（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−２−（３−クロロフェニル）−３−（４−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロピル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−シクロプロピル−２−ヒドロキシエチル）−２−メチルペント−４−エナミド（１５９．０ｇ、３３４ｍｍｏｌ、実施例１、ステップＥ）の溶液を、その反応混合物に添加した。温度は１７℃まで上昇した後、１４℃に戻った。反応混合物を７℃まで冷却し、２，６−ルチジン（１６０ｍＬ、１３７２ｍｍｏｌ）（活性化４Å分子ふるい上で乾燥させた）を、添加漏斗を介して、反応混合物に滴加した。添加は１時間後に完了した。反応混合物を水槽から取り出し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を、１６時間還流で加熱した。ＬＣＭＳは、いくらかの中間物が残存することを示した。追加のｐ−トルエンスルホン酸無水物（０．２５当量）及びルチジン（０．５当量）を添加し、反応混合物を８時間還流で加熱した。ＬＣＭＳは、反応が完了したことを示した。反応混合物を室温まで冷却し、添加漏斗を介して、１Ｍの硫酸水溶液（７６４ｍＬ、７６４ｍｍｏｌ）に撹拌しながら添加した。添加には３０分を要し、その後、溶液を室温で３０分間撹拌した。層を分離し、有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、茶色のシロップを得た。そのシロップからいかなるジクロロメタンをも除去するため、それを酢酸エチル中に取り込み、真空下で２回濃縮して、濃厚な茶色のシロップを得た。酢酸エチル（２Ｌ）を添加し、全てのシロップが溶解するまで（約４５分）混合物を６０℃で加熱した。その溶液を室温まで冷却しながら撹拌した。２時間後に結晶が形成され、混合物を１時間１０℃まで冷却した後、真空濾過及び冷たい（１０℃）酢酸エチルでの洗浄により、固体を収集した。これにより、７０ｇの所望の生成物をオフホワイトの結晶性固体として得た。濾液を真空下で１．５Ｌまで濃縮し、混合物を１０℃で１．５時間撹拌した。混合物を真空下で濾過して、ＮＭＲによりルチジニウムトシレートであることが示された薄茶色の結晶性固体を得た。濾液を真空下で濃縮して、茶色のシロップ（１６１ｇ）を得た。ヘプタンをそのシロップに添加し、その混合物を加熱した。最小量の酢酸エチルを、原料が溶解するまで添加した。その溶液を室温まで冷却し、次いで冷凍室内に置いた。結果として生じた固体を、真空濾過により収集し、冷たい（０℃）酢酸エチルで洗浄して、所望の生成物をオフホワイトの結晶性固体（３４ｇ）として得た。濾液を濃縮して、茶褐色の油を得、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィ（１．５ｋｇ  ＳｉＯ２カラム、ヘキサン中２０％〜１００％のアセトンの勾配溶離）により精製して、所望の生成物を薄茶色のシロップ（７３ｇ）として得た。
【０１２７】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：−０．３〜−０．２（ｍ，２Ｈ）、０．０６〜０．１１（ｍ，１Ｈ）、０．３１〜０．３６（ｍ，１Ｈ）、０．３８〜０．４３（ｍ，１Ｈ）、１．５７（ｓ，３Ｈ）、１．９１（ｄｄ，Ｊ＝３．７及び１３．９Ｈｚ、１Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），２．６４（ｄｄ，Ｊ＝７．３ａｎｄ１３．７Ｈｚ，１Ｈ），２．７２（ｄｄ，Ｊ＝７．６及び１３．７Ｈｚ，１Ｈ）、２．９５（ｔ，Ｊ＝１３．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．３２（ｄｔ，Ｊ＝３．７及び１０．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．４７（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．５７〜４．６２（ｍ，１Ｈ）、５．３２（ｄ，Ｊ＝１６．９Ｈｚ，１Ｈ）、５．３５（ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．４６（ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．８２（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．８４〜５．９３（ｍ，１Ｈ）、６．９４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．０４（ｓ，１Ｈ）、７．１４〜７．２０（ｍ，５Ｈ）、７．２８〜７．４０（ｍ，３Ｈ）、７．８８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ））。ＭＳ（ＥＳＩ）４４０．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２８】
ステップＧ．（３Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−３−アリル−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−１−シクロプロピルエチル）−５−（３−クロロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−３−メチルピペリジン−２−オン
【化１２】
0006266659.tif 000017
２−メチル−２−プロパンチオール（０．１９５ｍＬ、１．７９６ｍｍｏｌ、活性化４Å分子ふるい上で乾燥させた）を、無水テトラヒドロフラン（４ｍＬ）中のテトラヒドロフラン（１．０Ｍ、１．８ｍＬ、１．８ｍｍｏｌ）中のリチウムビス（トリメチルシリル）アミドの溶液に、室温で添加した。その反応混合物を６０℃で加熱した。６０℃で１５分後、（３Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，８Ｓ）−８−アリル−６−（３−クロロフェニル）−５−（４−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−８−メチル−２，３，５，６，７，８−ヘキサヒドロオキサゾロ［３，２−ａ］ピリジン−４−イウム  ４−メチルベンゼンスルホン酸塩（１．００ｇ、１．６３２ｍｍｏｌ、実施例１、ステップＦ）を、固体として添加した。その反応混合物を６０℃で１２時間加熱し、次いで室温まで冷却し、水で希釈した。その溶液を酢酸エチルで３回抽出し、有機物をプールし、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、上清をデカントし、真空下で濃縮して、茶色の油を得た。フラッシュクロマトグラフィ（８０ｇ  ＳｉＯ２カラム、ヘキサン中１０〜６０％の酢酸エチル勾配溶離による精製により、所望の生成物を無色のシロップとして得た。
【０１２９】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：−０．８８〜−０．８５（ｍ，１Ｈ）、−０．１６〜−０．１３（ｍ，１Ｈ）、０．２２〜０．２７（ｍ，１Ｈ）、０．３９〜０．４４（ｍ，１Ｈ）、１．２８（ｓ，３Ｈ）、１．３５（ｓ，９Ｈ）、１．６６〜１．７１（ｍ，１Ｈ）、１．８６（ｄｄ，Ｊ＝３．２及び１３．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．１６（ｔ，Ｊ＝１３．７，１Ｈ）、２．２１〜２．２７（ｍ，１Ｈ）、２．６０（ｄｄ，Ｊ＝４．４及び１２．０Ｈｚ，１Ｈ）、２．６５（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．１２（ｄｔ，Ｊ＝３．２及び１０．３Ｈｚ，１Ｈ）、３．６０（ｔ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．６８（ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．１６〜５．１９（ｍ，２Ｈ）、５．８３〜５．９２（ｍ，１Ｈ）、６．７９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．９３〜７．０４（ｍ，３Ｈ）、７．０９〜７．１６（ｍ，２Ｈ）、７．１９〜７．２４（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）５３０．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３０】
ステップＨ．２−（（３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−１−シクロプロピルエチル）−５−（３−クロロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−３−イル）酢酸
【化１３】
0006266659.tif 000018
塩化ルテニウム（ＩＩＩ）水和物（３０．０ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル（１２ｍＬ）、アセトニトリル（１２ｍＬ）、及び水（１８ｍＬ）中の（３Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−３−アリル−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−１−シクロプロピルエチル）−５−（３−クロロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−３−メチルピペリジン−２−オン（３．２５ｇ、６．１３ｍｍｏｌ、実施例１、ステップＨ）、及び過ヨウ素酸ナトリウム（１．３３ｇ）の溶液に、１８℃で添加した。添加時に温度は２５℃まで上昇した。温度を２２℃より下に維持しながら、追加の過ヨウ素酸ナトリウムを、１回１．３３ｇを５回、３０分かけて添加した。１．５時間後、ＬＣＭＳが、反応が完了したことを示し、過ヨウ素酸ナトリウム（１当量）を添加した。１．５時間後、反応混合物を真空濾過し、酢酸エチルで洗浄し、層を分離した。水層を酢酸エチルで抽出し、有機物を組み合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、緑色の油を得た。フラッシュクロマトグラフィ（３３０ｇ  ＳｉＯ２カラム、ヘキサン中０％〜２０％イソプロパノールの勾配溶離による精製により、表題化合物を白色固体として得た。
【０１３１】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：−１．１５〜−１．０５（ｍ，１Ｈ）、−０．３５〜−０．２５（ｍ，１Ｈ）、０．１８〜０．２８（ｍ，１Ｈ）、０．３３〜０．４０（ｍ，１Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）、１．５１（ｓ，３Ｈ）、１．８６（ｄｄ，Ｊ＝２．７及び１３．７Ｈｚ，１Ｈ）、１．８７〜１．９３（ｍ，１Ｈ）、２．４７（ｔ，Ｊ＝１３．９，１Ｈ）、２．７２〜２．７６（ｍ，１Ｈ）、２．７６（ｄ，Ｊ＝１５．５Ｈｚ，１Ｈ），２．９３（ｄ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．１２（ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，１Ｈ）、３．１２（ｄｔ，Ｊ＝２．７ａｎｄ１２．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．２９（ｔ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．９５（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．８６〜６．８９（ｍ，１Ｈ）、６．９６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．０８〜７．１４（ｍ，３Ｈ）、７．１５〜７．３５（ｍ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）５８０．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３２】
［実施例２］
２−（（３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−１−シクロプロピルエチル）−５−（３−クロロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−３−イル）アセトアミド
【化１４】
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塩化オキサリル（０．０３３ｍＬ、０．３７９ｍｍｏｌ）を、無水ジクロロメタン（１．５ｍＬ）中の２−（（３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−１−シクロプロピルエチル）−５−（３−クロロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−３−イル）酢酸（０．２００ｇ、０．３４４ｍｍｏｌ、実施例１、ステップＨ）の溶液に、室温で添加した。その反応混合物を室温で１時間撹拌し、次いで真空下で濃縮して、酸塩化物を白色の泡（２０６ｍｇ）として得た。リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（テトラヒドロフラン中１．０Ｍ、０．５１６ｍＬ、０．５１６ｍｍｏｌ）、及び無水テトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）を、室温で添加した。その反応混合物を室温で５．５時間撹拌し、次いで１Ｎの塩酸で希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。有機物をプールし、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、上清をデカントし、真空下で濃縮して、黄色の泡を得た。フラッシュクロマトグラフィ（１２ｇ  ＳｉＯ２カラム；３５％〜１００％酢酸エチルの勾配溶離）による精製により、表題化合物をオフホワイトの泡として得た。
【０１３３】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：−１．１０〜−１．００（ｍ，１Ｈ）、−０．３８〜−０．３２５（ｍ，１Ｈ）、０．１７〜０．２６（ｍ，１Ｈ）、０．３０〜０．３８（ｍ，１Ｈ）、１．４３（ｓ，３Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）、１．８５〜１．９２（ｍ，１Ｈ）、２．００（ｄｄ，Ｊ＝２．７及び１３．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．３９（ｔ，Ｊ＝１３．７，１Ｈ）、２．６５〜２．７５（ｍ，１Ｈ）、２．７３〜２．８０（ｍ，２Ｈ）、２．９０〜２．９６（ｍ，１Ｈ）、３．３１（ｄｔ，Ｊ＝２．９及び１０．８Ｈｚ，１Ｈ）、４．３０〜４．３８（ｍ，１Ｈ）、４．９６（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ）、５．６３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、６．６４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、６．９０〜６．９１（ｍ，１Ｈ）、７．００（ｓ，２Ｈ）、７．０６〜７．１１（ｍ，３Ｈ）、７．１２−７．２９（ｍ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）５７９．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３４】
［実施例３］
２−（（３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−１−シクロプロピルエチル）−５−（３−クロロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−３−イル）−Ｎ−フェニルアセトアミド
【化１５】
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Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ′−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ、０．１１７ｇ、０．６１２ｍｍｏｌ）を、２−（（３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−１−シクロプロピルエチル）−５−（３−クロロフェニル）−６−（４−クロロフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−３−イル）酢酸（０．１１８ｇ、０．２０４ｍｍｏｌ、実施例１、ステップＨ）、及びアニリン（０．０２０ｍＬ、０．２２５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で添加した。添加完了後、反応混合物を氷浴から取り出し、室温で１９時間撹拌した。その反応混合物を氷冷の１Ｍの塩酸で希釈してｐＨを１に調整し、その溶液をエーテルで２回抽出した。組み合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、上清をデカントし、真空下で濃縮して、オレンジ色の油を得た。フラッシュクロマトグラフィ（１２ｇ  ＳｉＯ２カラム、ヘキサン中１５％〜１００％の酢酸エチルの勾配溶離による精製により、表題化合物を白色の泡として得た。
【０１３５】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：−１．３２〜−１．２０（ｍ，１Ｈ）、−０．４０〜−０．２８（ｍ，１Ｈ）、−０．２８〜−０．１０（ｍ，１Ｈ）、０．３０〜０．４０（ｍ，１Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）、１．４７（ｓ，３Ｈ）、１．９４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、２．０７（ｄｄ，Ｊ＝２．７及び１３．７Ｈｚ，１Ｈ）、２．３９（ｔ，Ｊ＝１３．７，１Ｈ）、２．６７〜２．７３（ｍ，２Ｈ）、２．９５（ｔ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，２Ｈ）、３．３０（ｄｔ，Ｊ＝２．７及び１１．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．３１（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．９４（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．８６〜６．８９（ｍ，１Ｈ），６．９９（ｓ，１Ｈ）、７．０２〜７．０９（ｍ，６Ｈ）、７．１７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．３８（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）、７．６６（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）６５５．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３６】
［実施例４］
２−（（３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−１−シクロプロピルエチル）−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−３−イル）酢酸
【化１６】
0006266659.tif 000021
ステップＡ．メチル−４−クロロ−３−フルオロベンゾエート
【化１７】
0006266659.tif 000022
メタノール（４．５Ｌ）中の４−クロロ−３−フルオロ安息香酸（４５０．０ｇ、２．５８６ｍｏｌ、Ｆｌｕｏｒｏｒｏｃｈｅｍ、Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ、ＵＫ）の溶液を、０℃まで冷却し、塩化チオニル（４５０．０ｍＬ）を３０分かけて添加した。その反応混合物を周囲温度で１２時間撹拌した。その反応物をＴＬＣでモニタリングした。完了すると、溶媒を減圧下で除去し、残渣を１．０Ｍの炭酸水素ナトリウム溶液（５００ｍＬ）で反応停止処理した。水層をジクロロメタン（２回、５．０Ｌ）で抽出した。組み合わせた有機層をブライン（２．５Ｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、表題化合物を薄茶色の固体として得た。粗化合物を、さらなる精製をせずに、次のステップで使用した。
【０１３７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：７．８２〜７．７４（ｍ，２Ｈ）、７．４６（ｄｄ，Ｊ＝８．２，７．５Ｈｚ，１Ｈ）、３．９２（ｓ，３Ｈ）。
【０１３８】
ステップＢ．１−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−２−（３−クロロフェニル）エタノン
【化１８】
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ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（テトラヒドロフラン中１Ｍ、４Ｌ、４０００ｍｍｏｌ）を、１時間かけて、無水テトラヒドロフラン（１．７５Ｌ）中の３−クロロフェニル酢酸（２５０．０ｇ、１４６５ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃で、窒素下で添加した。結果として生じた反応混合物を−７８℃でさらに１時間撹拌した。次いで、テトラヒドロフラン（５００ｍＬ）中のメチル−４−クロロ−３−フルオロベンゾエート（２２１．０ｇ、１１７５ｍｍｏｌ、実施例４、ステップＡ）の溶液を、１時間かけて、−７８℃で添加し、結果として生じた反応混合物を同じ温度で２時間撹拌した。その反応物をＴＬＣでモニタリングした。完了時に、反応混合物を２Ｎの塩酸（２．５Ｌ）で反応停止処理し、水相を酢酸エチル（２回、２．５Ｌ）で抽出した。組み合わせた有機層をブライン（２．５Ｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗物質を得、それをフラッシュカラムクロマトグラフィ（シリカゲル：１００〜２００メッシュ、生成物はヘキサン中２％の酢酸エチルにおいて溶離）により精製して、表題化合物を白色固体として得た。
【０１３９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：７．７４（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．１，８．９，１．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．５６〜７．４８（ｍ，１Ｈ）、７．２６（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）、７．１２（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．２２（ｓ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２８２．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４０】
ステップＣ．メチル５−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−４−（３−クロロフェニル）−２−メチル−５−オキソペンタノエート
【化１９】
0006266659.tif 000024
メチルメタクリレート（１２５．０ｇ、１０９７ｍｍｏｌ）、及びカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（テトラヒドロフラン中１Ｍ、１１５ｍＬ、１１５ｍｍｏｌ）を、無水テトラヒドロフラン（２．６１Ｌ）中の１−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−２−（３−クロロフェニル）エタノン（３２７．０ｇ、１１６０ｍｍｏｌ、実施例４、ステップＢ）の溶液に、０℃で順次添加した。その反応混合物を０℃で１時間撹拌し、次いで周囲温度まで温め、１２時間撹拌した。完了時に、反応物を水（１．０Ｌ）で反応停止処理し、酢酸エチル（２回、２．５Ｌ）で抽出した。組み合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗物質を得て、それをフラッシュカラムクロマトグラフィ（シリカゲル：６０〜１２０メッシュ、生成物はヘキサン中４％の酢酸エチルにおいて溶離）により精製し、表題化合物（ジアステレオ異性体の混合物）を薄黄色の液体として得た。
【０１４１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：７．７４〜７．６１（ｍ，４Ｈ）、７．４７〜７．４０（ｍ，２Ｈ）、７．２８〜７．１８（ｍ，６Ｈ）、７．１６〜７．１０（ｍ，２Ｈ）、４．５６（ｍ，２Ｈ）、３．６８（ｓ，３Ｈ），３．６０（ｓ，３Ｈ）、２．５０〜２．３９（ｍ，２Ｈ）、２．３７〜２．２５（ｍ，２Ｈ）、２．１０〜２．０２（ｍ，１Ｈ）、１．９４（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．６，９．１，４．２Ｈｚ，１Ｈ）、１．２１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）、１．１５（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）３８３．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４２】
ステップＤ．（３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オン、及び（３Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オン
【化２０】
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メチル５−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−４−（３−クロロフェニル）−２−メチル−５−オキソペンタノエート（１３８．０ｇ、３６０ｍｍｏｌ、実施例４、ステップＣ）（グローブバッグに移す前に氷上で１０分間冷却した）を充填した２０００ｍＬ反応器中、無水２−プロパノール（５００ｍＬ）及びカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１６．１６ｇ、１４４ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で密封したグローブバッグの中で順次追加した。この混合物を３０分間撹拌させた。３０．０ｍＬトルエン中のＲｕＣｌ２（Ｓ−ｘｙｌｂｉｎａｐ）（Ｓ−ＤＡＩＰＥＮ）（１．７５９ｇ、１．４４０ｍｍｏｌ、Ｓｔｒｅｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗｂｕｒｙｐｏｒｔ、ＭＡ、グローブバッグ内で秤量）を添加した。その反応物を室温で２時間激しく撹拌した。その容器を水素化装置上に設置し、水素で３回パージし、５０ｐｓｉ（３４４．７ｋＰａ）まで加圧した。反応物を室温で一晩撹拌させた。完了時、反応物を水（１．５Ｌ）で反応停止処理し、酢酸エチル（２回、２．５Ｌ）で抽出した。有機層をブライン（１．５Ｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、粗物質を得て、それをフラッシュカラムクロマトグラフィ（シリカゲル；６０〜１２０メッシュ；生成物はヘキサン中１２％の酢酸エチルにおいて溶離）により精製して、暗色の液体をジアステレオ異性体として得た。
【０１４３】
生成物をテトラヒドロフラン（１．９Ｌ）及びメタノール（４８０ｍＬ）中の（２４０．０ｇ、５８１ｍｍｏｌ）中に溶解させ、水酸化リチウム一水和物（２．５Ｍ水溶液、４８０．０ｍＬ）を添加した。その反応混合物を周囲温度で１２時間撹拌した。完了時に、溶媒を減圧下で除去し、残渣を２Ｎの塩酸でｐＨ５〜６の間まで酸性化した。水相を酢酸エチル（２回、１．０Ｌ）で抽出した。組み合わせた有機層をブライン（７５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、暗色の液体を得、それをさらなる精製をせず使用した。
【０１４４】
粗中間物の一部（２５．４ｇ、主としてセコ酸）を、ディーンスターク装置を備えた５００ｍＬ丸底フラスコに添加した。ピリジニウムｐ−トルエンスルホン酸塩（０．５１６ｇ、２．０５３ｍｍｏｌ）、及びトルエン（２７４ｍＬ）を添加し、混合物を１時間還流させた（油槽温度約１５０℃）。反応物を室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。反応物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１５０ｍＬ）で希釈し、ジエチルエーテル（２回、１５０ｍＬ）で抽出し、ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄した。組み合わせた有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィ（３分割、３３０ｇ  ＳｉＯ２／各、ヘキサン中０％〜３０％のアセトンの勾配溶離、３５分）による精製により、表題化合物を淡黄色の固体、及びＣ２でジアステレオ異性体の１：１．６混合物として得た。ＭＳ（ＥＳＩ）３５３．０５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４５】
ステップＥ．（３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アリル−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オン
【化２１】
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（３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オン、及び（３Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オン（１８ｇ、５１．０ｍｍｏｌ、実施例４、ステップＤ）を、炉乾燥５００ｍＬ丸底フラスコに添加した。その固体を無水トルエン中に溶解させ、濃縮して偶発的な水を除去した。テトラヒドロフラン（２００ｍＬ）中の３−ブロモプロプ−１−エン（１１．０２ｍＬ、１２７ｍｍｏｌ、添加前に未希釈で塩基性アルミナに通過させた）を添加し、反応器を排気し、アルゴンを３回補充した。リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１．０Ｍ、５６．１ｍＬ、５６．１ｍｍｏｌ）を−４０℃（ドライアイス／アセトニトリル浴）で滴加し、アルゴン下で撹拌した。反応物を−１０℃まで徐々に温め、−１０℃で３時間撹拌した。反応物を飽和塩化アンモニウム（１０ｍＬ）で反応停止処理し、濃縮し、粗生成物を水（１５０ｍＬ）及びジエチルエーテル（２００ｍＬ）で希釈した。層を分離し、水層をジエチルエーテル（２００ｍＬ／各）で、もう２回洗浄した。組み合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で残渣まで濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィ（２回、３３０ｇ  シリカゲルカラム、ヘキサン中０％〜３０％のアセトンの勾配溶離）により精製して、表題化合物を白色固体として得た。あるいは生成物を、ジクロロメタン中の最小限のヘキサンから結晶化することができる。鏡像異性体過剰は、キラルＳＦＣ（９０％ＣＯ２、１０％メタノール（２０ｍＭアンモニア）、５．０ｍＬ／分、１００バール（１０，０００ｋＰａ）、４０℃、５分法、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｘ−２（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ）（１００ｍｍｘ４．６ｍｍ、５μｍカラム）、保持時間：１．６２分（マイナー）及び２．１７分（メジャー））により、８７％であると決定した。純度は、ヘキサン及びジクロロメタン中の再結晶化を介して９８％超まで高めることが可能である。
【０１４６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：７．２４〜７．１７（ｍ，３Ｈ）、６．９４（ｓ，１Ｈ）、６．８０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．４８（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，１．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．４０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、５．９０〜５．７６（ｍ，１Ｈ）、５．６９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、５．２０〜５．１３（ｍ，２Ｈ）、３．８１（ｄｄ，Ｊ＝１３．９，６．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．６２（ｄｄ，Ｊ＝１３．８，７．６Ｈｚ，１Ｈ）、２．５０（ｄｄ，Ｊ＝１３．８，７．３Ｈｚ，１Ｈ）、１．９６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、１．４０（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）３９３．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４７】
ステップＦ．（２Ｓ）−２−（（２Ｒ）−３−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−２−（３−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロピル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−シクロプロピル−２−ヒドロキシエチル）−２−メチルペント−４−エナミド
【化２２】
0006266659.tif 000027
ナトリウムメトキシド（メタノール中２５％、６０．７ｍｌ、２６５ｍｍｏｌ）を、メタノール（１７７ｍＬ）中の（Ｓ）−２−アミノ−２−シクロプロピルエタノール塩酸塩（３６．５ｇ、２６５ｍｍｏｌ、ＮｅｔＣｈｅｍ  Ｉｎｃ．、Ｏｎｔａｒｉｏ、Ｃａｎａｄａ）の溶液に、０℃で添加した。添加中に沈殿物が形成された。添加完了後、反応混合物を氷浴から取り出し、室温まで温めた。反応混合物を真空下で濾過し、固体をジクロロメタンで洗浄した。濾液を真空下で濃縮して、濁った茶色の油を得た。その油をジクロロメタン（１５０ｍＬ）中に溶解させ、真空下で濾過し、固体相をジクロロメタンで洗浄して、濾液を透明なオレンジ色の溶液として得た。その溶液を真空下で濃縮して、（Ｓ）−２−アミノ−２−シクロプロピルエタノールを薄茶色の液体として得た。
【０１４８】
（３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−３−アリル−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−オン（３２ｇ、８１ｍｍｏｌ、実施例４、ステップＥ）を、（Ｓ）−２−アミノ−２−シクロプロピルエタノール（２６．７ｇ、２６５ｍｍｏｌ）と組み合わせ、その懸濁液を１００℃で一晩加熱した。その反応混合物を室温まで冷却し、酢酸エチルで希釈し、１Ｎの塩酸（２回）、水、及びブラインで洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空下で濃縮して、表題化合物を白色固体として得た。
【０１４９】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：０．２３〜０．３０（ｍ，２Ｈ）、０．４５〜０．５６（ｍ，２Ｈ）、０．８１（ｍ，１Ｈ）、１．１２（ｓ，３Ｈ）、１．９２〜２．０９（ｍ，３Ｈ）、２．３９（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，７．２Ｈｚ，１Ｈ）、２．８６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、２．９５（ｄｔｄ，Ｊ＝９．５，６．３，６．３，２．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．４４（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，５．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．４９（ｍ，１Ｈ）、３．６１（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，２．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．７８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．９５〜５．１３（ｍ，２Ｈ）、５．６３（ｍ，１Ｈ）、５．９９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．９４〜７．１６（ｍ，３Ｈ）、７．１６〜７．３２（ｍ，４Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）４９４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５０】
ステップＧ．（３Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−３−アリル−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−１−（（Ｓ）−１−シクロプロピル−２−ヒドロキシエチル）−３−メチルピペリジン−２−オン
【化２３】
0006266659.tif 000028
ジクロロメタン（８０ｍＬ）中の（２Ｓ）−２−（（２Ｒ）−３−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−２−（３−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロピル）−Ｎ−（（Ｓ）−１−シクロプロピル−２−ヒドロキシエチル）−２−メチルペント−４−エナミド（４０．２ｇ、８１ｍｍｏｌ、実施例４、ステップＦ）の溶液を、ジクロロメタン（２２０ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホン酸無水物（６６．３ｇ、２０３ｍｍｏｌ）に、０℃で添加し、その反応混合物を同温度で１０分間撹拌した。２，６−ルチジン（４３．６ｍＬ、３７４ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を、添加漏斗を介して、０℃で滴加した。反応混合物を徐々に室温まで温め、次いでそれを還流で撹拌した。２４時間後、水（６００ｍＬ）中の炭酸水素ナトリウム（６８．３ｇ、８１４ｍｍｏｌ）、及び１，２−ジクロロエタン（３００ｍＬ）を順次添加した。その反応混合物を還流で１時間加熱し、次いで室温まで冷却した。層を分離し、水層をジクロロメタンで抽出した。組み合わせた有機層を１Ｎの塩酸、水、及びブラインで洗浄し、次いで減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィ（１．５ｋｇ  ＳｉＯ２カラム、ヘキサン中１０％〜５０％の酢酸エチルの勾配溶離）により精製して、表題化合物を白色固体として得た。
【０１５１】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：０．０６（ｍ，１Ｈ）、０．２６（ｍ，１Ｈ）、０．５７〜０．６７（ｍ，２Ｈ）、０．８５（ｍ，１Ｈ）、１．２５（ｓ，３Ｈ）、１．８５〜２．２０（ｍ，２Ｈ）、２．５７〜２．６５（ｍ，２Ｈ）、３．０９（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８，９．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ）、３．１９（ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．３６（ｔｄ，Ｊ＝１０．３，４．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．６３（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．８６（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ）、５．１６〜５．１９（ｍ，２Ｈ）、５．８７（ｍ，１Ｈ）、６．７７（ｄｄ，Ｊ＝７．７，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．８０〜６．９０（ｍ，２Ｈ）、７．０２（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）、７，１６（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，７．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．２１（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．２９（ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）４７６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５２】
ステップＨ．（３Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，８Ｓ）−８−アリル−５−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−６−（３−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−８−メチル−２，３，５，６，７，８−ヘキサヒドロオキサゾロ［３，２−ａ］ピリジン−４−イウム  ４−メチルベンゼンスルホン酸塩
【化２４】
0006266659.tif 000029
ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（３０．３ｇ、１５９ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を、トルエン（３８６ｍＬ）中の（３Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−３−アリル−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−１−（（Ｓ）−１−シクロプロピル−２−ヒドロキシエチル）−３−メチルピペリジン−２−オン（７３．６ｇ、１５４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。その反応混合物を、ディーンスターク装置を使用して、還流で加熱した。４時間後、反応物を冷却し、減圧下で濃縮して、表題化合物を淡黄色のシロップとして得た。粗生成物を、さらなる精製をせずに、次のステップで使用した。
【０１５３】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：−０．２５〜−０．１０（ｍ，２Ｈ）、０．０８〜０．１８（ｍ，１Ｈ）、０．３３〜０．５０（ｍ，２Ｈ）、１．５７（ｓ，３Ｈ）、１．９２（ｄｄ，Ｊ＝３．７及び１３．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．３７（ｓ，３Ｈ）、２．６３（ｄｄ，Ｊ＝７．３及び１３．７Ｈｚ，１Ｈ）、２．７２（ｄｄ，Ｊ＝７．６及び１３．７Ｈｚ，１Ｈ）、２．９３（ｔ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．２９（ｍ，１Ｈ）、４．５１（ｔ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．５７〜４．６３（ｍ，１Ｈ）、５．３３（ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．３７（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．４７（ｄｄ，Ｊ＝９．１ａｎｄ１０．０Ｈｚ，１Ｈ）、５．７５−５．９３（ｍ，２Ｈ）、６．８０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．０８（ｓ，１Ｈ）、７．１６〜７．２０（ｍ，５Ｈ）、７．２５〜７．３２（ｍ，２Ｈ）、７．８７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）４５８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５４】
ステップＩ．（３Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−３−アリル−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−１−シクロプロピルエチル）−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチルピペリジン−２−オン
【化２５】
0006266659.tif 000030
２−メチル−２−プロパンチオール（１５．２５ｍＬ、１３５ｍｍｏｌ、活性化４Å分子ふるい上で乾燥させた）を、テトラヒドロフラン（１．０Ｍ、１３５ｍＬ、１３５ｍｍｏｌ）中のリチウムビス（トリメチルシリル）アミドの溶液に、５００ｍＬ丸底フラスコ中、室温で、アルゴン下で添加した。その反応混合物を６０℃まで加熱した。３０分後、無水テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中の（３Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，８Ｓ）−８−アリル−５−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−６−（３−クロロフェニル）−３−シクロプロピル−８−メチル−２，３，５，６，７，８−ヘキサヒドロオキサゾロ［３，２−ａ］ピリジン−４−イウム  ４−メチルベンゼンスルホン酸塩（７８ｇ、１２３ｍｍｏｌ、実施例４、ステップＨ）の溶液を、カニューレを介して添加した。反応混合物を６０℃で３時間加熱し、次いで室温まで冷却した。反応混合物を水で反応停止処理し、酢酸エチルで３回抽出した。有機物をプールし、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、黄色の泡を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィ（１．５ｋｇ  ＳｉＯ２カラム、ヘキサン中５％〜３０％の酢酸エチルの勾配溶離による精製により、表題化合物をオフホワイトの泡として得た。
【０１５５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：−０．８９〜−０．８０（ｍ，１Ｈ）、−０．１５ｔｏ−０．０９（ｍ，１Ｈ）、０．２７〜０．３４（ｍ，１Ｈ）、０．４１〜０．４８（ｍ，１Ｈ）、１．２８（ｓ，３Ｈ）、１．３５（ｓ，９Ｈ）、１．７０〜１．７７（ｍ，１Ｈ）、１．８６（ｄｄ，Ｊ＝３．１及び１３．５Ｈｚ，１Ｈ）、２．１６（ｔ，Ｊ＝１３．７，１Ｈ）、２．１７〜２．２３（ｍ，１Ｈ）、２．６０〜２．６３（ｍ，３Ｈ）、３．０９（ｄｔ，Ｊ＝３．１及び１０．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．６２（ｔ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．７０（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ）、５．１６（ｓ，１Ｈ）、５．１９〜５．２１（ｍ，１Ｈ）、５．８２〜５．９３（ｍ，１Ｈ）、６．６５〜６．８０（ｍ，１Ｈ）、６．８０〜６．８３（ｍ，１Ｈ）、６．８４〜６．９８（ｍ，１Ｈ）、７．０５〜７．０７（ｍ，１Ｈ）、７．１２−７．１８（ｍ，２Ｈ）、７．１９〜７．２６（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）５４８．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５６】
ステップＪ．２−（（３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−１−シクロプロピルエチル）−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−３−イル）酢酸
【化２６】
0006266659.tif 000031
塩化ルテニウム（ＩＩＩ）水和物（０．５６２ｍｇ、２．４９３ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル（２１６ｍＬ）、アセトニトリル（２１６ｍＬ）、及び水（３２４ｍＬ）中の（３Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−３−アリル−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルチオ）−１−シクロプロピルエチル）−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチルピペリジン−２−オン（６２．１７ｇ、１１３ｍｍｏｌ、実施例４、ステップＩ）、及び過ヨウ素酸ナトリウム（２４．６７ｇ）の混合物に、２０℃で添加した。温度は２９℃まで素早く上昇した。その反応混合物を２０℃まで冷却し、残りの過ヨウ素酸ナトリウムの等量を、内部反応温度を２５℃より低く維持するように注意して、１回２４．６７ｇを５回、２時間かけて添加した。反応が不完全だったため、追加の過ヨウ素酸ナトリウム（１３ｇ）を添加した。温度は２２℃から２５℃に上昇した。さらに１．５時間撹拌した後、反応混合物を真空下で濾過し、酢酸エチルで洗浄した。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。有機物をプールし、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、濃緑色の泡を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィ（１．５ｋｇ  ＳｉＯ２カラム、ヘキサン中０％〜２０％のイソプロパノールの勾配溶離）による精製により、オフホワイトの泡を得た。ヘプタン（９７０ｍＬ）中の１５％の酢酸エチルをその泡に添加し、その混合物を、泡が溶解するまで８０℃で加熱した。次いでその溶液を徐々に冷却し、６０℃において、先に得た結晶物質をその溶液に蒔いた。その混合物を室温まで冷却し、次いで室温で２時間置いた後、真空濾過により固体を収集し、非常に淡いピンク色を有する白色固体（５７．１ｇ）を得た。母液を真空下で濃縮して、ピンク色の泡（８．７ｇ）を得た。ヘプタン（１３０ｍＬ）の１５％の酢酸エチルをその泡に添加し、それを８０℃で加熱して、物質を完全に溶解させた。その溶液を冷却し、５０℃において、それに結晶物質を蒔いた。室温まで冷却した後、固体を真空濾過により収集して、非常に淡いピンク色を有する白色結晶性固体を得た。
【０１５７】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：−１．１０〜−１．００（ｍ，１Ｈ）、−０．３０〜−０．２２（ｍ，１Ｈ）、０．２７−０．３７（ｍ，１Ｈ）、０．３８〜０．４３（ｍ，１Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）、１．５０（ｓ，３Ｈ）、１．８７（ｄｄ，Ｊ＝２．７及び１３．７Ｈｚ，１Ｈ）、１．８９〜１．９５（ｍ，１Ｈ）、２．４６（ｔ，Ｊ＝１３．７，１Ｈ）、２．６９〜２．７３（ｍ，１Ｈ）、２．７８（ｄ，Ｊ＝１４．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．９３（ｄｄ，Ｊ＝２．０及び１３．７Ｈｚ，１Ｈ）、３．０７（ｄ，Ｊ＝１４．９Ｈｚ，１Ｈ）、３．１１（ｄｔ，Ｊ＝２．７及び１１．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．３０（ｔ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．９８（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ），６．７５〜６．８７（ｍ，１Ｈ）、６．８８〜６．９０（ｍ，１Ｈ）、６．９８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．０２〜７．０９（ｍ，１Ｈ）、７．１１〜７．１６（ｍ，２Ｈ）、７．１６〜７．２５（ｍ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）５９８．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５８】
［実施例５］
４−（２−（（３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−１−シクロプロピルエチル）−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−３−イル）アセタミド）−２−メトキシ安息香酸
【化２７】
0006266659.tif 000032
ステップＡ．メチル  ４−（２−（（３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−１−シクロプロピルエチル）−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−３−イル）アセタミド）−２−メトキシベンゾエート
【化２８】
0006266659.tif 000033
Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ′−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ、７６ｇ、３９８ｍｍｏｌ）を、ピリジン（３３２ｍＬ）中の２−（（３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−１−シクロプロピルエチル）−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−３−イル）酢酸（７９．４ｇ、１３３ｍｍｏｌ、実施例４、ステップＪ）、及びメチル  ４−アミノ−２−メトキシベンゾエート（２６．４ｇ、１４６ｍｍｏｌ）の混合物に、３℃で添加した。その混合物を室温まで温め、室温で１６時間撹拌した。その反応混合物を０℃まで冷却し、１Ｍの塩酸（１Ｌ）の氷冷溶液に添加した。エーテル（１Ｌ）を添加し、層を激しく揺り動かして分離した。有機層を１Ｍの塩酸（６回、５００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）、ブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、オフホワイトの泡を得た。
【０１５９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δｐｐｍ）：−１．２０〜−１．１２（ｍ，１Ｈ）、−０．３５〜−０．２０（ｍ，１Ｈ）、０．０５〜０．２０（ｍ，１Ｈ）、０．３２〜０．４５（ｍ，１Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）、１．４８（ｓ，３Ｈ）、１．８６〜１．９８（ｍ，１Ｈ）、２．０３（ｄｄ，Ｊ＝２．７及び１３．７Ｈｚ，１Ｈ）、２．４３（ｔ，Ｊ＝１３．７，１Ｈ）、２．６４〜２．７５（ｍ，１Ｈ）、２．８０（ｄ，Ｊ＝１４．３Ｈｚ，１Ｈ）、２．８９〜２．９６（ｍ，２Ｈ）、３．２４（ｄｔ，Ｊ＝２．５及び１０．８Ｈｚ，１Ｈ）、３．８９（ｓ，３Ｈ）、３．９６（ｓ，３Ｈ）、４．２８〜４．３６（ｍ，１Ｈ）、４．９８（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．８５〜６．９３（ｍ，３Ｈ）、６．９９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．０６〜７．１８（ｍ，４Ｈ）、７．８２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．８５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．８１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）７６１．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１６０】
ステップＢ．４−（２−（（３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−１−シクロプロピルエチル）−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−３−イル）アセタミド）−２−メトキシ安息香酸
【化２９】
0006266659.tif 000034
水（２９５ｍＬ）中の水酸化リチウム一水和物（１８．２ｇ、４３３ｍｍｏｌ）の溶液を、テトラヒドロフラン（５９１ｍＬ）及びメタノール（１９７ｍＬ）中のメチル  ４−（２−（（３Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル）−１−シクロプロピルエチル）−６−（４−クロロ−３−フルオロフェニル）−５−（３−クロロフェニル）−３−メチル−２−オキソピペリジン−３−イル）アセタミド）−２−メトキシベンゾエート（１６４．９ｇ、２１７ｍｍｏｌ、実施例５、ステップＡ）の溶液に、室温で添加した。室温で１５時間撹拌した後、微量のエステルが残ったため、反応混合物を５０℃で１時間加熱した。反応が完了したときに、混合物を真空下で濃縮して、テトラヒドロフラン及びメタノールを除去した。その濃厚な混合物を水（１Ｌ）で希釈し、１Ｍの塩酸（１Ｌ）を添加した。結果として生じた白色固体を、ブフナー漏斗内で真空濾過により収集した。真空を解除し、濾過ケーキに水（１Ｌ）を添加した。その物質をヘラで撹拌して、それを水中に均等に懸濁させた。次いで液体を真空濾過により除去した。この洗浄サイクルをさらに３回繰り返して、白色固体を得た。その固体を、４５℃で、真空下で３日間乾燥させて、表題化合物を白色固体として得た。
【０１６１】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  −１．３０〜−１．１２（ｍ，１Ｈ）、−０．３０〜−０．１３（ｍ，１Ｈ）、０．１４〜０．２５（ｍ，１Ｈ）、０．２５〜０．３８（ｍ，１Ｈ）、１．３０（ｓ，３Ｈ）、１．３４（ｓ，９Ｈ）、１．７５〜１．８６（ｍ，１Ｈ）、２．０８〜２．１８（ｍ，２Ｈ）、２．５０〜２．６０（ｍ，１Ｈ）、２．６６（ｄ，Ｊ＝１３．７，１Ｈ）、３．０２〜３．１６（ｍ，２Ｈ）、３．４０〜３．５０（ｍ，１Ｈ）、３．７７（ｓ，３Ｈ）、４．０５〜４．２０（ｍ，１Ｈ）、４．８９（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．９０〜６．９３（ｍ，３Ｈ）、７．１９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２２〜７．２６（ｍ，３Ｈ）、７．４０〜７．５０（ｍ，１Ｈ）、７．５４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．６８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）１０．４４（ｓ，１Ｈ）、１２．２９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ）７４７．２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１６２】
生物学的アッセイ
ホモジニアス時間分解蛍光アッセイ（ＨＴＲＦ１及びＨＴＲＦ２アッセイ）
インビトロＨＴＲＦアッセイのための標準アッセイ条件は、１Ｘ  ＰＢＳ緩衝剤ｐＨ７．４中のブラック３８４ウェルＣｏｓｔａｒポリプロピレンプレート内の５０μｌ合計反応量、１ｍＭ  ＤＴＴ、０．１％  ＢＳＡ、２．５ｎＭｇ  ＳＴ−ｈＭＤＭ２（ａａ  １−１８８）、５ｎＭ  ビチオン化ｐ５３（ａａ  １−８３）、１．８ｎＭ  ＳＡ−ＸＬｅｎｔ（Ｃｉｓｂｉｏ；Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）、０．６ｎＭ  抗ＧＳＴクリプテートモノクロナール抗体（Ｃｉｓｂｉｏ；Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）、及び２００ｍＭ  ＫＦで構成された。ヒトＭＤＭ２のアミノ酸残基１〜１８８を、アミノ末端グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）融合タンパク質（ＧＳＴ−ｈＭＤＭ２）として、大腸菌内において発現させた。ヒトｐ５３の残基１〜８３を、アミノ末端ＡｖｉＴａｇ（商標）−ＴｒｘＡ−６ｘＨｉｓ融合タンパク質（ビチオン化ｐ５３）として、大腸菌内において発現させた。各タンパク質は、親和クロマトグラフィによって、細胞ペーストから精製した。
【０１６３】
具体的には、１０μＬのＧＳＴ−ｈＭＤＭ２を、１０％ＤＭＳＯ中１０μｌの希釈化合物（さまざまな濃度、段階希釈される）とともに、室温で２０分間インキュベートした。２０μＬのビチオン化ｐ５３を、ＧＳＴ−ｈＭＤＭ２＋化合物混合物に添加し、次いで室温で６０分間インキュベートした。ＳＡ−ＸＬｅｎｔ、抗ＧＳＴクリプテート抗体、及びＫＦからなる１０μＬの検出用緩衝剤を、ＧＳＴ−ｈＭＤＭ２、ビチオン化ｐ５３、及び化合物反応物に添加し、平衡に達するよう４時間を超えて室温で放置した。反応物中のＤＭＳＯの最終濃度は２％であった。時間分解蛍光示数を、マイクロプレートマルチラベルリーダー上で測定した。抑制のパーセンテージは、ｎｕｔｌｉｎ−３に対して計算された。
【０１６４】
ＨＴＲＦ２アッセイでは、全てのアッセイ条件は上記と同じままであり、例外として試薬の濃度において以下の変化があった：０．２ｎＭ  ＧＳＴ−ｈＭＤＭ２（１〜１８８）、０．５ｎＭ  ビチオン化ｐ５３（１〜８３）、０．１８ｎＭ  ＳＡ−ＸＬｅｎｔ、及び１００ｍＭ  ＫＦ。
【０１６５】
ＥｄＵアッセイ
ＳＪＳＡ−１を、１ウェルにつき２．８×１０３細胞の密度で、４０μＬの成長培地中の３８４ウェル細胞培養プレート内に播種し、３７℃及び５％ＣＯ２で、２４時間インキュベートした。成長培地は、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウム、１Ｘ  ペニシリン−ストレプトマイシン、２ｍＭ  グルタミン、及び１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から成った。
【０１６６】
翌日、成長培地を除去し、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ  ピリビン酸ナトリウム、１Ｘ  ペニシリン−ストレプトマイシン、２ｍＭ  グルタミン、及び１０％ヒト血清を補充したＲＰＭＩ  １６４０から成る化合物培地に置き換えた。ＤＭＳＯ中に溶解させた試験化合物を、化合物培地で希釈し、３３μＭ〜３ｐＭの濃度範囲まで細胞に添加した。その細胞を１６時間、３７℃及び５％ＣＯ２で１６時間、化合物で処理した。３日目に、Ｃｌｉｃｋ−Ｉｔ  ＥｄＵ  ＨＣＳアッセイを使用して、化合物処理後の細胞増殖状態を決定した。化合物培地中に溶解させたＥｄＵを、１０μＭの最終濃度まで細胞に添加した。次いでその細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で１時間インキュベートした。ＥｄＵ標識後、Ｃｌｉｃｋ−Ｉｔ  ＥｄＵ  ＨＣＳアッセイ手順を、３８４ウェル形式用に調整するためにアッセイ容量を２５μＬまで減らし、製造メーカの指示に従って実行した。要するに、細胞を４％ホルムアルデヒドで固定し、ＰＢＳ中０．１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ  １００で透過処理した。ＰＢＳで洗浄後、細胞を、Ｃｌｉｃｋ−Ｉｔ反応緩衝剤及びＮｕｃｌｅａｒＭａｓｋ（商標）Ｂｌｕｅ染料で順次処理した。次いで細胞を洗浄し、Ｏｐｅｒａハイコンテンツスクリーニングシステム（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して撮像した。細胞に組み込まれたＥｄＵのパーセンテージを計算し、ＩＣ５０計算に使用した。
【０１６７】
Ｃｌｉｃｋ−Ｉｔ  ＥｄＵ  ＨＣＳアッセイキットは、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）より入手し、ＲＰＭＩ１６４０、Ｌ−グルタミン、ＨＥＰＥＳ、及びピリビン酸ナトリウムは、Ｃｅｌｌｇｒｏ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）より入手した。３８４ウェル細胞培養プレートは、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）より入手した。ＦＢＳは、ＨｙＣｌｏｎｅ／ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）より入手し、ヒト血清は、Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ（Ｈｉｃｋｓｖｉｌｌｅ、ＮＹ）より入手した。ＳＪＳＡ−１細胞株は、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）より入手した。
【０１６８】
ＤＭＳＯ処理済ウェルからの値を、ＰＯＣ（対照パーセント）＝１００に、及び非ＥｄＵ標識細胞をＰＯＣ＝０に、正規化した。ＩＣ５０値を、Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒ  Ｖ９．０．１を使用して決定した。Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒにおいて用量反応データ分析に使用される曲線当てはめアルゴリズムは、ＲＯＵＴ（外れ値検出によるロバスト回帰）と称されるロバストな当てはめアルゴリズムのカスタム実装形態であり、４パラメータロジスティック（４ＰＬ）Ｈｉｌｌモデルを使用する。このアルゴリズムは、ロバストな、非線形回帰を実行し、外れ値を検出するためにデータ点の残差を分析し、次いで、外れ値として先に定義されたデータ点を無視して単純曲線フィットを実施する。
【０１６９】
モデル：
【数１】
0006266659.tif 000035
ＲＯＵＴ実装形態は、４つの当てはめパラメータ（Ｓｏ、Ｓｉｎｆ、ＡＣ５０  ＩＰ、ｎＨｉｌｌ）を当てはめ、４つのフィットパラメータおよび当てはめ結果（最大活性、ＡＣ５０移行）を、それらの９５％信頼区間とともに返す：
【表２】
0006266659.tif 000036
【０１７０】
ヒト肝細胞固有クリアランスアッセイ
２０人のドナーからプールされた凍結ヒト肝細胞（Ｃｅｌｓｉｓ−Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ）を使用して、実施例化合物の固有クリアランスを決定した。インキュベーション内の肝細胞の生存率は７０〜７５％であった。各実施例化合物を、１００万細胞／ｍＬの密度で肝細胞を含有する細胞インキュベーション培地（Ｃｅｌｓｉｓ−Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ）１つにつき５００ｎＭの濃度で、インキュベートした。１アリコートのインキュベーション混合物（１００μＬ）を、各時間点のために調製した。インキュベーションは、３７℃のインキュベータ内で、１００％相対湿度で空気９５％及びＣＯ２５％の雰囲気下において、１４００ｒｐｍで振とうしながら実行した。０、５、１５、３０、６０、及び９０分で、インキュベーション混合物のアリコートをインキュベータから取り出し、０．１％（ｖ／ｖ）ギ酸及び内部標準（７−ヒドロキシ−４−トリフルオロメチルクマリン）を含有するアセトニトリルで反応停止処理した。次いで試料を、５７００ｒｐｍ（６１００ｇ）で、４℃で１０分間遠心分離した。上澄みを試料プレートに移し、０．１％ギ酸を含有する同量の水と混合し、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用して分析した。
【０１７１】
試料分析のためのＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステムは、陰イオンモードで作動するＡＰＩ４０００三連四重質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）と連動した逆相ＵＨＰＬＣ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｍｏｄｅｌ  Ｎｅｘｅｒａ  ＬＣ−３０ＡＤ、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ、Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＭＤ）で構成された。クロマトグラフ分離を、５５℃で１．２ｍＬ／分の移動相流量で維持されるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｋｉｎｅｔｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ）（２×５０ｍｍ、２．６μｍ）を使用して達成した。移動相は、水中０．１％ギ酸（Ａ）及びアセトニトリル中０．１％ギ酸（Ｂ）で構成された。勾配溶離プログラムを以下のように適用した：初期線形を０．８分で９５％Ａ／５％Ｂから５％Ａ／９５％Ｂに上昇させ、０．２分間５％Ａ／９５％Ｂで保持し、次いで０．１分で９５％Ａ／５％Ｂに戻し、次の注入の前にさらに０．５分間この構成で再平衡させた。適切な多重反応モニタリング（ＭＲＭ）トランジションを、各実施例化合物の検出のために使用し、ＭＲＭトランジションｍ／ｚ  ２２９．２→２０１．２を、内部標準（７−ヒドロキシ−４−トリフルオロメチルクマリン）の検出のために使用した。
【０１７２】
固有クリアランス（ＣＬｉｎｔ）を、以下の等式（Ｏｂａｃｈ、１９９７及び１９９９）を基に、肝細胞インキュベーション内の実施例化合物のインビトロｔ１／２から計算した。
【数２】
0006266659.tif 000037
【０１７３】
ヒト肝細胞固有クリアランスアッセイ及び計算のための参考文献
Ｙｅ  Ｑ．，Ｊｉａｎｇ  Ｂ．Ｍ．，Ｃｈａｎ  Ｈ．，Ｌｉｘｉａ  Ｊ（公開準備中）Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  Ｃｌｅａｒａｎｃｅ  Ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｃｌｅａｒａｎｃｅ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ：Ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  Ａｓｓａｙ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ  ｏｎ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  Ａｃｃｕｒａｃｙ。
Ｏｂａｃｈ  ＲＳ（１９９７）Ｎｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｍｉｃｒｏｓｏｍｅｓ：ｉｍｐａｃｔ  ｏｎ  ｓｃａｌｅ−ｕｐ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｔｏ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ａｓ  ａｓｓｅｓｓｅｄ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｗａｒｆａｒｉｎ，ｉｍｉｐｒａｍｉｎｅ，ａｎｄ  ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ．Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ  Ｄｉｓｐｏｓ  ２５：１３５９−１３６９。
Ｏｂａｃｈ  ＲＳ（１９９９）Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｏｆ  ｔｗｅｎｔｙ−ｎｉｎｅ  ｄｒｕｇｓ  ｆｒｏｍ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｍｉｃｒｏｓｏｍａｌ  ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｄａｔａ．Ａｎ  ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｈａｌｆ−ｌｉｖｅ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ａｎｄ  ｎｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｍｉｃｒｏｓｏｍｅｓ．Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ  Ｄｉｓｐｏｓ  ２７：１３５０−１３５９。
【０１７４】
ヒト肝細胞ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ３Ａ４誘導アッセイ
材料。オメプラゾール、フェノバルビタール、リファンピシン、デキサメタゾン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、クレブスヘンゼライト緩衝剤（ＫＨＢ）（ＫＨＢの成分＝組織培養水中、０．３０ｇ／Ｌ硫酸マグネシウム七水和物、０．１６ｇ／Ｌ第一リン酸カリウム、０．３６ｇ／Ｌ塩化カリウム、６．９５ｇ／Ｌ塩化ナトリウム、２．１ｇ／Ｌ炭酸水素ナトリウム、０．３８ｇ／Ｌ塩化カルシウム二水和物、１２．６ｍＭ  ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ））、フェナセチン、アセトアミノフェン、ブプロピオン塩酸塩、テストステロン、６β−ヒドロキシテストステロン、プラゾシン塩酸塩、細胞培養等級水、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、及びウィリアム培地Ｅ（ＷＭＥ）を、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）より購入した。インシュリン−トランスフェリン−セレンサプリメント（ＩＴＳ）、ペニシリン−ストレプトマイシン−Ｌ−グルタミンサプリメント（ＰＳＧ）、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、リン酸塩緩衝食ブライン（ＰＢＳ）、凍結肝細胞融解培地（ＣＨＲＭ）、及び凍結成人ヒト肝細胞の３つの個々のドナーロットを、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）より入手した。Ｉ型コラーゲンプレコート２４ウェルプレート、及びヒドロキシブプロピオンは、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｌａｂｗａｒｅ（Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）より得た。ヒトＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ３Ａ４、及び１８Ｓ  ｒＲＮＡのための分岐  ＤＮＡ（ｂ−ＤＮＡ）プローブセット、ならびにＰａｎｏｍｉｃｓ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＸＬ  Ｋｉｔは、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｉｎｃ．（Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ）より購入した。
【０１７５】
インビトロ法。１日目、肝細胞播種培地（ＨＰＭ）を、１Ｘ  ＰＳＧ、１Ｘ  ＩＴＳ、０．１μＭ  デキサメタゾン、及び１０％ＦＢＳの最終濃度までＤＭＥＭを補足することによって調製した。肝細胞維持培地（ＨＭＭ）の形成を、１Ｘ  ＰＳＧ、１Ｘ  ＩＴＳ、及び０．１μＭ  デキサメタゾンの最終濃度までＷＭＥを補充することによって達成した。凍結ヒト肝細胞のバイアルを、３７℃の水槽内で静かに旋回させることによって１．５〜２分間解凍し、直ちに各個人の肝細胞ロットをＣＨＲＭバイアル中に置き、１００ｇ、２５℃で、１０分間遠心分離した。ＣＨＲＭ培地をペレット状の肝細胞から取り除き、各個人のロットをＨＰＭ中に静かに再懸濁させた。肝細胞の各ロットを、血球計数器を使用して数え、ＨＰＭで０．７５×１０６総細胞数／ｍＬの最終濃度まで希釈した。各調製の生存率は、９０％以上であった。個々のロットを、およそ０．３８×１０６細胞数／ウェルで、コラーゲンコート２４ウェルプレート内に播種した。肝細胞を、９５％空気／５％ＣＯ２及び９０％相対湿度の雰囲気下において、３７℃のインキュベータ（Ｓｔｅｒｉ−Ｃｕｌｔ  ＣＯ２  Ｉｎｃｕｂａｔｏｒ、Ｍｏｄｅｌ  ３３１０、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）内に置き、細胞に３〜６時間の付着期間を与えた。付着期間後、播種培地及び非付着細胞を吸引によって除去し、３７℃ＨＭＭを各細胞（０．５ｍＬ／ウェル）に添加し、細胞を一晩インキュベートした。２日目、培地を吸引し、新たな３７℃ＨＭＭを、一晩の馴養期間、細胞に再適用した。３日目および４日目、培地を吸引し、ＤＭＳＯ（０．１％、溶媒対照）、オメプラゾール（５０μＭ、ＣＹＰ１Ａ２陽性対照誘導剤）、フェノバルビタール（１０００μＭ、ＣＹＰ２Ｂ６陽性対照誘導剤）、リファンピシン（１０μＭ、ＣＹＰ３Ａ４陽性対照誘導剤）のいずれかを含有する新たな３７℃ＨＭＭ、実施例１〜５を、ウェル（０．５ｍＬ／ウェル、Ｎ＝３ウェル／処理／ＣＹＰイソ型）に適用した。試験する実施例化合物を、０．１％ＤＭＳＯの最終インキュベーション濃度となるよう、ＤＭＳＯ保存溶液中で調製した。実施例化合物処理を、合計４８時間維持した。５日目、培地を吸引し、肝細胞をＫＨＢ（３７℃、ｐＨ７．４）で静かに一度洗浄した。ＫＨＢを除去し、ＫＨＢの第２の適用を行った（０．５ｍＬ／ウェル）。肝細胞をインキュベータ内に戻し、１０分間ＫＨＢに馴養させた。Ｐ４５０酵素活性を、ＫＨＢ（３７℃、ｐＨ７．４、０．５ｍＬ／ウェル）中に溶解させたマーカ基質フェナセチン（１００μＭ、ＣＹＰ１Ａ２プローブ基質、３０分インキュベーション）、ブプロピオン塩酸塩（１００μＭ、ＣＹＰ２Ｂ６プローブ基質、２０分インキュベーション）、及びテストステロン（２００μＭ、ＣＹＰ３Ａ４プローブ基質、１４分インキュベーション）の添加により、続いて決定した。基質インキュベーション期間後、緩衝剤を収集し、分析するまで−８０℃で保存した。ｍＲＮＡ分析に使用される肝細胞を、ＰＢＳ（０．５ｍＬ／ウェル、２５℃、カルシウム及びマグネシウムを含有）中で一度洗浄し、プロトコル調製済ｂ−ＤＮＡ溶解緩衝剤を各ウェルに添加した（０．５ｍＬ／ウェル）。溶解緩衝剤を上下に５回静かにピペット操作することにより、肝細胞を溶解させ、プレートを、分析するまで−８０℃で保存した。
【０１７６】
Ｐ４５０活性分析。アセトアミノフェン、ヒドロキシブプロピオン、及び６β−ヒドロキシテストステロン（それぞれ、フェナセチンのＣＹＰ１Ａ２代謝、ブプロピオン塩酸塩のＣＹＰ２Ｂ６代謝、テストステロンのＣＹＰ３Ａ４代謝のための代謝産物）の分析及び定量を、逆相高速液体クロマトグラフ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ、Ｋｙｏｔｏ、Ｊａｐａｎ）、及び三連四重質量分析計（ＡＰＩ  ５０００、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を含むシステム上で、多重反応モニタリングを介して、Ｔｕｒｂｏ  ＩｏｎＳｐｒａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、液体クロマトグラフィ−タンデム質量分析により実施した。検体（２５μＬ）をＣ１８カラム（Ｏｎｙｘ  Ｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃ  Ｃ１８、１００×３．０ｍ；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ）に載せ、分析物を、４．６分で、移動相Ａ（０．１％酢酸及び５％メタノールを有する水）からＢ（０．１％酢酸及び９５％メタノールを有する水）への直線勾配で溶離した。流量は１ｍＬ／分であった。その代謝産物を、代謝産物と、内部標準（プラゾシン）と、真正アセトアミノフェン、ヒドロキシブプロピオン、及び６β−ヒドロキシテストステロンを使用して調製された標準曲線とのピーク面積比率の比較により定量した。
【０１７７】
Ｐ４５０  ｍＲＮＡ分析。ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｂ６、及びＣＹＰ３Ａ４  ｍＲＮＡ含有量を、製造メーカの指示に従って実施されるアッセイで、Ｐａｎｏｍｉｃｓ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒ  ＸＬ  Ｋｉｔを使用した分岐ＤＮＡ（ｂ−ＤＮＡ）信号増幅技術を用いて決定した。捕捉増量剤、標識増量剤、及びヒトＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ３Ａ４、及び１８Ｓ  ｒＲＮＡのための遮断プローブを含むｂ−ＤＮＡプローブセットを、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｉｎｃより購入した。プレート洗浄ステップを、Ｅｌｘ４０５自動マイクロプレート洗浄器（ＢｉｏＴｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）上で実施し、Ｌｕｍｉｎｏｓｋａｎ  Ａｓｃｅｎｔマイクロプレートルミノメータ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｌａｂ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｈｅｌｓｉｎｋｉ、Ｆｉｎｌａｎｄ）上で、発光を分析した。Ｐ４５０  ｍＲＮＡレベルを、ハウスキーピング遺伝子１８Ｓ  ｒＲＮＡのｍＲＮＡレベルに正規化した。
【０１７８】
データ報告。ｍＲＮＡ分析用の各Ｐ４５０イソ型について、溶媒対照（溶媒対照を１．０に設定）での倍増を、陽性対照及び実施例化合物の各処理群に対し計算した。加えて、陽性対照のパーセントを、次の方程式に従って、全ての処理群のｍＲＮＡレベルに対して計算した。
％陽性対照＝［（実施例化合物で処理された細胞の活性−溶媒のみで処理された細胞の活性）／（陽性対照で処理された細胞の活性−溶媒のみで処理された細胞の活性）］×１００
【０１７９】
評価基準
なし＝２０％未満ＰＣ（陽性対照）
中＝２０〜３９％ＰＣ
強＝４０％以上ＰＣ
【０１８０】
ｍＲＮＡ転写誘導アッセイデータ
ＣＹＰ１Ａ２またはＣＹＰ２Ｂ６データ
実施例１〜５の化合物のいずれもＣＹＰ１Ａ２またはＣＹＰ２Ｂ６の誘導を示さなかった。
【表３】
0006266659.tif 000038
0006266659.tif 000039
0006266659.tif 000040
【０１８１】
実施例４を作るための実施例１の化合物へのフッ素基の添加が、実施例１の化合物よりも高いヒト肝細胞クリアランスをもたらす。このデータを見ると、実施例５の化合物もまたフッ素基を含有しているが、実施例１または４の化合物のいずれよりも低いヒト肝細胞クリアランスを示すことは驚きであり、予期していなかった。
【０１８２】
加えて、実施例１のカルボン酸官能基がアミド（実施例２）に変換されるとき、肝細胞クリアランスは増大し、フェニルアミド誘導体が作られるとき（実施例３）、さらに増大する。さらには、実施例２及び３の両方が、ＣＹＰ３Ａ４  ｍＲＮＡ誘導を示す。フッ素基及び誘導体化フェニルアミド官能基の両方を含有する実施例５の化合物が、ＣＹＰ３Ａ４  ｍＲＮＡ誘導を示さず、さらに、実施例１〜４のいずれよりも低いヒト肝細胞クリアランスを示すことはさらに驚きであり、予期していなかった。ヒト肝細胞クリアランスデータ及びＣＹＰ３Ａ４  ｍＲＮＡ誘導データは、ヒト治療のための適切な化合物の選択を助けるために、当業者によって使用されることに留意されたい。