(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液またはその成分の一つの試料から、赤血球の表現型の抗原と、特にこの抗原に対する抗体との少なくとも一つの反応を検出するためのインビトロ診断装置（１０）であって、
−支持（１２）、及び
−前記支持内に配され、０．０５ｍｍから１．５ｍｍの厚さを有し、孔の直径が２μｍから３０μｍの疎水性の多孔質膜（１４）であって、前記膜が前記試料を受けるように意図された少なくとも一つの親水性の反応領域（１６）を備え、前記親水性の反応領域（１６）の表面が前記疎水性の多孔質膜（１４）の表面よりも小さい、疎水性の多孔質膜（１４）、を備え、
前記多孔質膜（１４）の前記親水性の反応領域（１６）が、前記多孔質膜の先行する化学的または物理的な処理によって多孔質基板の化学的機能を変更することなく、洗剤で親水性にされることを特徴とするインビトロ診断装置（１０）。
【請求項２】
前記洗剤が非イオン性の表面活性剤であることを特徴とする、請求項１に記載の診断装置（１０）。
【請求項３】
前記洗剤が０．０１から２％（重量／体積）の量で使用されることを特徴とする、請求項１または２に記載の診断装置（１０）。
【請求項４】
前記多孔質膜（１４）が前記支持（１２）に配され、前記支持（１２）が少なくとも一つの開口部（２０）を備え、各開口部（２０）が前記多孔質膜の各親水性の反応領域（１６）に垂直であることを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の診断装置（１０）。
【請求項５】
前記支持（１２）が硬質プラスチック支持であることを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の診断装置（１０）。
【請求項６】
前記多孔質膜（１４）の下方に配された吸収性膜（１８）も備えることを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載の診断装置（１０）。
【請求項７】
前記多孔質膜（１４）の前記親水性の反応領域（１６）が捕捉剤も備えることを特徴とする、請求項１から６のいずれか一項に記載の診断装置（１０）。
【請求項８】
前記捕捉剤が赤血球の型／表現型の抗原を備えることを特徴とする、請求項７に記載の診断装置（１０）。
【請求項９】
前記捕捉剤がヘモグロビンを欠いた赤血球であることを特徴とする、請求項８に記載の診断装置（１０）。
【請求項１０】
前記捕捉剤が抗体であることを特徴とする、請求項７に記載の診断装置（１０）。
【請求項１１】
前記捕捉剤がポリカチオン性のポリマーであることを特徴とする請求項７に記載の診断装置（１０）。
【請求項１２】
前記反応領域（１６）が前記多孔質膜の厚さに全体にわたって親水性であることを特徴とする、請求項１から１１のいずれか一項に記載の診断装置（１０）。
【請求項１３】
前記反応領域（１６）が前記反応領域の表面で親水性であることを特徴とする、請求項１から１２のいずれか一項に記載の診断装置（１０）。
【請求項１４】
前記反応領域（１６）が二つの親水性の領域（１６−１、１６−２）を備え、前記反応領域の中央（１６−１）で、周辺（１６−２）よりも親水化度が高いことを特徴とする、請求項１から１３のいずれか一項に記載の診断装置（１０）。
【請求項１５】
前記反応領域（１６）が、異なる親水化度を有する二つの親水性の領域を有し、一方は表面、他方は厚さ中であることを特徴とする、請求項１から１３の何れか一項に記載の診断装置（１０）。
【請求項１６】
前記反応領域（１６）が、前記多孔質膜の先行する化学的または物理的な処理によって多孔質基板の化学的機能を変更することなしに、二つの異なる洗剤で親水性にされることを特徴とする、請求項１４または１５に記載の診断装置（１０）。
【請求項１７】
請求項１から１６のいずれか一項に記載の装置（１０）の製造方法であって、以下のステップを備えることを特徴とする製造方法：
−０．０５ｍｍから１．５ｍｍの厚さで、孔の直径が２μｍから３０μｍの疎水性の多孔質膜（１４）を、少なくとも一つの洗剤によって、前記膜の少なくとも一つの領域（１６）上で親水化するステップ、
−選択的に捕捉剤溶液を堆積するステップ、
−乾燥するステップ、
−前記多孔質膜（１４）、及び選択的に、前記多孔質膜（１４）の下方に配された吸収性膜（１８）を、支持（１２）と組み合わせるステップ。
【請求項１８】
血液またはその成分の一つの試料から、ＡＢＯ血液型の同定及び決定、拡張Ｒｈｅｓｕｓ表現型検査、異常な凝集素の探索、自己抗体の探索、寒冷凝集素の探索、及び／またはクロス検証をするための、請求項１から１６のいずれか一項に記載の装置の使用。
【請求項１９】
赤血球の試料から、抗原の二つの異なる分布の存在を検出するために、赤血球の血液型を表現型検査するプロセスであって、以下のステップを含むことを特徴とする表現型検査プロセス：
−請求項１から６のいずれか一項に記載の装置（１０）の前記反応領域の中央で前記多孔質膜（１４）を水和するために溶液を堆積するステップであって、前記反応領域（１６）が二つの親水性の領域（１６−１、１６−２）を備え、前記反応領域の中央（１６−１）で周辺（１６−２）よりも親水化度が高く、前記中央で抗体を含む捕捉剤を備えるステップ、
−表現型検査される前記赤血球をバッファ液中で希釈するステップ、
−表現型検査される前記赤血球を含むこの溶液を、前記反応領域の前記中央で加えるステップ、
−保温するステップ、
−前記反応領域上にリンス液を堆積するステップ。
【請求項２０】
赤血球の試料からの、赤血球の血液型の表現型検査プロセスであって、以下のステップを備えることを特徴とする表現型検査プロセス：
−前記多孔質膜（１４）を請求項１から６のいずれか一項に記載の装置（１０）の前記反応領域（１６）の位置で水和するために溶液を堆積するステップであって、前記反応領域（１６）が単一の親水性の領域を備え、かつ、抗体を含む捕捉剤を備えるステップ、
−選択的に、表現型検査される前記赤血球をバッファ液中で希釈するステップ、
−表現型検査される前記赤血球を含むこの溶液を、前記反応領域の前記中央に加えるステップ、
−保温するステップ、
−前記反応領域上にリンス液を堆積するステップ。
【請求項２１】
血漿、血清、または完全の血液の試料から、血液中に存在する多価抗体を検出するためのプロセスであって、以下のステップを備えることを特徴とするプロセス：
−試験される試料を、請求項１から６のいずれか一項に記載の装置（１０）の前記反応領域（１６）上に堆積するステップであって、前記反応領域（１６）が抗原を含む捕捉剤を備えるステップ、
−前記捕捉剤と同一の抗原を含む、既知の表現型の赤血球試験を加えるステップ、
−混合物を前記親水性の領域に通すステップ、
−リンス液を前記反応領域上に堆積するステップ。
【請求項２２】
血漿、血清、または完全の血液の試料から、血中に存在する抗赤血球抗体の検出、クロス検証、または自己抗体若しくは寒冷凝集素の探索のためのプロセスであって、以下のステップを備えることを特徴とするプロセス：
−バッファ、既知の表現型の赤血球試験とともに、試験される試料を保温するステップ、
−この混合物に赤血球を凝集させることが可能な作用物質を加えるステップ、
−請求項１から６のいずれか一項に記載の装置（１０）の前記反応領域（１６）上に、前記混合物を堆積するステップ、
−前記赤血球を凝集させることが可能な作用物質を含む溶液を、前記反応領域上に堆積するステップ、
−クームス、人間の抗グロブリン、または抗補体試薬を、前記反応領域上に堆積するステップ、及び
−前記反応領域上にリンス液を堆積するステップ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、赤血球抗原と、特にこれらの抗原に対する抗体との反応を検出するための、血液の試料または血液の成分の試料からの、インビトロ（ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）診断装置に関連する。
【０００２】
本発明は、血液型の同定及び決定のための、この装置の使用にも適用する。
【背景技術】
【０００３】
免疫血液学的診断の目的は、抗体による赤血球の攻撃を提供又は診断することである。このために、その存在または不存在が血液型を決定する、赤血球の表面に存在する抗原を決定するためのツールを持つことだけでなく、血液が赤血球の既知の抗原に対する一つ以上の抗体を含むかどうかを同定することが必要であり、抗体の存在は不適合の可能性を意味する。
【０００４】
従って慣習上の技術は、赤血球の表面の血液型抗原の存在または不存在を探索し同定すること及び／または血漿中で血液型の抗抗原（ａｎｔｉ−ａｎｔｉｇｅｎ）抗体の存在または不存在を探索し同定することからなる。
【０００５】
例えばＡＢＯシステムについては、Ｂｅｔｈ−Ｖｉｎｃｅｎｔ試験が、赤血球によって運ばれる抗原を決定し、補完的なＳｉｍｏｎｉｎ−Ｍｉｃｈｏｎ試験または血清クロスチェックが血清中を循環する抗体を決定する。
【０００６】
Ｂｅｔｈ−Ｖｉｎｃｅｎｔ試験では、個々の赤血球は既知の特異性の抗体の試薬と一緒にされる。一般に、この試験は、抗体が対応する赤血球の抗原を認識した時に、赤血球の癒着を観察することによって可視的にされる。
【０００７】
Ｓｉｍｏｎｉｎ試験では、個々の血漿は、それぞれがＡＢＯシステムの精確な抗原性グループに属する赤血球と一緒にされる。これは、赤血球試験（ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ  ｔｅｓｔ）と個々の血漿との癒着試験である。
【０００８】
所謂、不規則性抗体の探索には、個々の血液中における様々な赤血球抗原に対する免疫グロブリンの存在または不存在の検出が必要である。自己抗体研究の場合、すでにインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で固定された抗体が直接試験で個々内を直接探索される。アロ抗体探索の場合、間接クームス法を用いて、抗原が既知である赤血球試験上へのこれらの免疫グロブリンの固定を明らかにすることが目的である。
【０００９】
免疫血液学の分野で表現型検査に使用されるプロセス及び装置は非常にたくさんあるが、血液型の既存の表現型検査技術は多くの不利点を有する。
【００１０】
例えばマイクロプレート技術は、遠心分離フェーズに続く撹拌段階を必要とする。支持上に同時に存在する複数の反応は同一の再懸濁キネティックを有さないので、撹拌段階は重要である。従って、強力な癒着を再懸濁することに成功することなく弱い癒着が進行する危険性が存在する。それらは目視チェックの下で行わなければならず、一部の試薬の付着現象には特に注意が払われなければならない。
【００１１】
同様に、ゲル試験による濾過技術が実行される際、特にＡＢＯ型の血漿試験中に一部の癒着が検出されない危険性がやはり存在する。ゲルへと通っていく際の、小さな癒着の切断による分離のためである。
【００１２】
また、これら全ての技術は、赤血球をデカントするため、またはゲルを通すために、遠心分離段階を必要とするので、大きな不利がある。それは膨大な時間と分析コストを追加し、扱うのが困難なかさばる遠心分離器の使用を必要とする制限的な段階である。
【００１３】
例えば特許文献１に記述されるように免疫濾過法もまた周知であり、試料中に存在する分析物を、捕捉要素を運びながら多孔質膜を通過する際に捕捉するステップと、表出要素（ｒｅｖｅｌａｔｉｏｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ）によってその存在を明らかにするステップとからなる。このタイプの装置は試料の堆積領域、親水性の多孔質膜を備え、膜上に捕捉試薬が堆積され、膜下に吸収性膜が配置される。このタイプの試験の実行は、試料堆積領域に純粋または希釈された試料を堆積するステップからなり、それは多孔質膜を通って吸収性膜で終了する。毛管現象による多孔質膜へのこの移動中に、試料中に捕捉要素に対応する分析物が存在する場合、分析物は捕捉剤によって固定化される。さらに、捕捉領域上の分析物の存在を検出可能であり、要素を視覚的に検出させる（着色した生成物）、または物理的若しくは化学的方法で明らかにされるようにするのを耐える表出剤（ｒｅｖｅｌａｔｉｏｎ  ａｇｅｎｔ）によって好ましい分析物の捕捉スポット上の存在を明らかにする必要がある。
【００１４】
しかしこの方法は著しい感度及び特異性の問題を有する。試料が堆積すると、多孔質膜を広がり浸透し、多くの分析物が多孔質膜のデッドボリューム中で失われるか、捕捉領域の外側を通過するからである。表出液についても同様である。従って、より大きな体積の試験される試料及び表出液を堆積することが可能であるために吸収システムを過大寸法にする必要があり、縮小可能な試験の実行を妨げ、その反応速度は制御され、表出剤を受けることは免除され、ロボットピペッタを利用可能である。
【００１５】
この問題を解決し、信号を濃縮する試みで、親水性の多孔質膜の上及び下に、流れが捕捉スポットを通過するように強制する貫通した疎水性の構造を挿入することが特許文献２または特許文献３に提案されている。しかし、これらの装置にはスポットからの遠心拡散の問題が依然として存在し、捕捉スポットを通過し、それに固定されてない表出要素は、親水性の多孔質膜中を遠心的に拡散可能であり、スポットの外周に蓄積され得る。表出要素はその後、やはりスポット上に集中される洗浄を逃れるだろう。求心拡散によるスポットへのリターンの形態で、この表出要素のリターン現象が存在し、好ましい分析物が存在しない場合でもスポットの再着色を引き起こす。この現象は、誤った陽性結果が表れてしまうので、試験の読み取り（一般に５分から１５分）を非常に急に妨げる。疑い、人的エラー、または情報の喪失の場合に、これらの装置は後に装置を再解釈しないので、これは大きな問題である。
【００１６】
今日既存の免疫濾過装置の別の主要な問題は、動作速度及びいくつかの場合にはプレインキュベーション時間の制御である。捕捉要素と分析物との、及び分析物と表出要素との相互作用が特定の反応速度を有するので、これらの時間は重要である。これらの反応速度は時間の関数として実行される相互作用の数を表す。従って捕捉剤／分析物結合及び表出／分析剤の関数として、十分な信号を得るためには、各結合に対して十分な数の相互作用が保証されなければならない。従って、相互作用剤／分析物捕捉がより遅いイベントでは、膜を横切る試料の通過速度は制限されねばならない。制限的な、表出要素と分析物との相互作用であるイベントでは、表出要素及び分析物が捕捉スポット上を混合するプレインキュベーション時間を伴って進む必要がある。特定のシステムなしには、親水性の膜の通過は急である（５００μｌ／ｍｉｎ）。
【００１７】
流れを制御するために、ピストンの活用が、特に特許文献４で提案された。
【００１８】
プレインキュベーション時間を制御するために、特許文献５では二つの部分で装置を使用することが提案された：試料収集領域及び多孔質膜を備える上部と、多孔質膜及び吸収性膜を備える下部である。初期位置では、毛管現象で流体が移動できないので、これら二つのブロックは通信しない。機械的な取扱いの後、二つの領域は接触し、流体は毛管現象で流れることができる。疎水性の膜上に捕捉要素を堆積し、界面活性剤の添加によって通過を活性化することも提案された。
【００１９】
機械的なアプローチは、専用のシステムの開発及び使用を必要とするので、ロボットの使用を排除するのが難しい。またそれらは取り扱い中、全ての投影に専門家をさらす。
【００２０】
システムを下塗り（ｐｒｉｍｅ）するために試験が実行される際に表面活性剤を添加するのは、捕捉剤／分析物相互作用に著しく干渉するので、非常に有害である。また、免疫血液学の特定の場合には、表出剤として使用される赤血球は、液体状の表面活性剤と相性がよくない。赤血球の膜が溶解し、それらのヘモグロビンを全て放出するからである。
【００２１】
特許文献６に開示された別の方法は流れを制御するために第一の下に追加の膜を使用することからなるが、提案された装置は親水性の多孔質膜中の試料及び表出要素の拡散に関連する問題を解決していない。
【００２２】
従って、既存の免疫血液学的診断試験は多くの不利点を有する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２３】
【特許文献１】欧州特許出願第２１６７９６７号明細書
【特許文献２】加国登録特許１３１２２６５号明細書
【特許文献３】国際公開第０２／０５２２６３号
【特許文献４】米国特許出願公開第２００８／０３１８３４２号明細書
【特許文献５】国際公開第０３／０１６９０２号
【特許文献６】欧州特許出願第０３３４０１５号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２４】
また本願発明は毛管現象によるインビトロの免疫血液学的診断用に適合され、信頼でき、速く、可動性で、安価で、製造及び使用が単純で、小型化及び自動化可能で、相当な感度を有する装置を提案することで、従来技術の不利点を修正することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
この目的に応えるために本発明は、血液またはその成分の試料から、表現型の抗原赤血球と、特にこの抗原に対する抗体との少なくとも一つの反応を検出するためのインビトロ診断装置を提案し、該装置は、
−支持、及び
−０．０５ｍｍから１．５ｍｍの厚さで、孔の直径が２μｍから３０μｍの疎水性の多孔質膜であって、上記膜が上記試料を受けるように意図された少なくとも一つの親水性の反応領域を備え、上記反応領域が疎水性の多孔質膜の表面よりも小さな表面を有する疎水性の多孔質膜を備えることを特徴とする。
【００２６】
本発明はこの装置の使用、特に赤血球的血液型の表現型検査及び抗体の検出、この装置の実行のためのプロセスにも関連する。
【００２７】
有利に、本発明は今日既存の免疫濾過試験から生じる全ての不利点を、特に、
−偽陽性の原因となる表出剤のリターンを防止する
−より小さな体積の使用からの高められた感度
−システムの小型化及び自動化
−装置の機械的な取扱いの必要なく、反応の反応速度の制御、によって改善する。
【００２８】
他の特徴及び利点は、添付図面についてのみの例示として与えられる、本発明の以下の説明から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】本発明に係る装置の特定の実施形態の図解を示す透視図である。
【図２Ａ】親水性の反応領域の第一の変形を伴う、本発明に係る装置の疎水性の多孔質膜及び吸収性膜を示す図である。
【図２Ｂ】親水性の反応領域の第二の変形を伴う、本発明に係る装置の疎水性多孔質膜を示す図である。
【図３Ａ】図２Ａに示された変形に対応する、疎水性の多孔質膜を伴う、本発明に係る装置の断面図である。
【図３Ｂ】図２Ｂに示された変形に対応する、疎水性の多孔質膜を伴う、本発明に係る装置の断面図である。
【図４Ａ】図２Ａに示された疎水性の多孔質膜の反応領域及び下方の吸収性膜の一部上の、本発明に係る装置を使用した後に得られる結果を示す図である。
【図４Ｂ】図２Ｂに示された疎水性の多孔質膜の反応領域上の、本発明に係る装置の使用後に得られた結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本発明に係る装置１０は、血液またはその成分の１つの試料から、赤血球の表現型の抗原と、特にこの抗原に対する抗体との少なくとも一つの反応を検出するためのインビトロ診断装置である。
【００３１】
これは、特にインビトロの免疫血液学的な診断に適応された、毛管現象を介したインビトロ診断用の装置である。
【００３２】
赤血球の表現型の抗原、または赤血球の型（ｇｒｏｕｐ）の抗原、または血液型の抗原は、それに対する抗体の生成を引き起こすことができ、及び／または認識し、その後免疫システムによる赤血球の破壊を可能にすることが必要な、赤血球の表面に存在する全ての免疫原性の分子を意味する。
【００３３】
赤血球の表現型の抗原と、特にこの抗原に対する抗体との反応は、抗原−抗体反応であり、本明細書を通して呼ばれる。
【００３４】
血液またはその成分の１つの試料とは、完全な血液または、特に赤血球片、白血球片、血漿、若しくは血清から選択される成分の一つを意味する。
【００３５】
図１に示される通り、本発明に係る装置１０は：
−支持１２、及び
−試験される試料を受けるように意図される親水性の反応領域１６を少なくとも１つ備える疎水性の多孔質膜１４、を備える。
【００３６】
多孔質膜１４は０．０５ｍｍから１．５ｍｍの厚さを有し、好ましくは０．１ｍｍから１ｍｍであり、更により好ましくは０．４ｍｍから０．８ｍｍである。
【００３７】
孔の直径は２から３０μｍであり、好ましくは７から１２μｍである。
【００３８】
疎水性の多孔質膜１４は、水性溶媒によって変化しない任意の材料を含み得る。この材料は、例えばニトロセルロースポリマー、セルロース等の、化学的に変更されているか、変更されていない天然高分子、または例えばポリエチレン、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）、若しくはＰＶＤＦ等のフッ素化ポリマー等の合成高分子から特に選択され得る。この材料は最初に疎水性でなければならず、適切な処理によって疎水性にされる。これらのポリマーは後に使用される捕捉剤とリンクを形成可能な試薬グループ（ｒｅａｇｅｎｔ  ｇｒｏｕｐ）で官能化されてもされなくてもよい。
【００３９】
疎水性の多孔質膜１４は少なくとも一つの親水性の反応領域１６を備える。反応領域１６は、疎水性の多孔質膜１４の表面よりも小さな表面を有する、つまり膜１４は完全には親水化されない。
【００４０】
多孔質膜１４の親水性の反応領域１６は、好ましくは、先行する疎水性の多孔質膜１４の化学的または物理的な処理によって多孔質基板の化学的機能を変更することなく、局所的な洗剤の添加によって親水性にされる。
【００４１】
洗剤とは任意の親水化剤を意味し、つまり、疎水性の膜１４を親水性にすることが可能な任意の物質を意味する。
【００４２】
使用される洗剤は、天然洗剤、化学的に変更された、若しくは化学合成によって得られた天然洗剤から選択され得る。好ましくは、これは非イオン性の界面活性剤であり、例えばＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、Ｔｗｅｅｎ  ２０またはｓａｐｏｎｉｎである。
【００４３】
洗剤は水溶液またはエタノールなどの有機溶剤で０．０１から５％まで希釈され得る。好ましくは、膜１４を局所的に親水性にするために使用される洗剤は０．０１から２％（重量／体積）のドーズ（ｄｏｓｅ）で使用される。
【００４４】
膜の他の特性（特に空隙率と厚さ）に関連する、使用される洗剤の量は、膜を通過する流体の動作速度を制御する。捕捉要素を受けるように意図される膜を親水性にするために、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００に関しては０．１％、Ｔｗｅｅｎについては０．０５％の最大ドーズを超える必要はないことが一般的に認められる。しかし、本発明に係る膜１４の特定の特性のために、この膜を局所的に親水性にすることが可能な洗剤は、領域の反応性を妨害することなく、特にＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００またはＴｗｅｅｎ−２０については、２％まで使用することができ、これによって膜１４の親水化が容易になる。
【００４５】
同じ疎水性の膜１４は、親水性の反応領域が交わらないという条件で、いくつかの親水性の反応領域１６を備えることができる。
【００４６】
反応領域１６はいかなる幾何学的な形態でもよいが、直径０．３ｍｍから２０ｍｍ円形の円形またはスポットの形態が好ましい。
【００４７】
反応領域１６は多孔質膜１４の厚さ全体及び／または表面で親水性であり得る。
【００４８】
図２Ａ、３Ａ、及び４Ａに示されるように、反応領域１６は単一の親水化度を有し得る。この構成は分析される試料中の抗体の特定の存在の検出に特に適合される。
【００４９】
変形によれば、反応領域１６は異なる親水化度を有するいくつかの領域を備え得る。
【００５０】
図２Ｂ、３Ｂ及び４Ｂに示される通り、反応領域１６は二つの親水性の領域１６−１、１６−２を有し得り、周辺の１６−２よりも反応領域の中央１６−１で親水化度が大きい。これらの親水性の領域は膜１４の表面のみであることが好ましい。
【００５１】
反応領域１６は異なる親水化度を有し、一方は表面に、他方は厚さに、二つの親水性の領域を備えることもできる。
【００５２】
反応領域１６が二つの親水性の領域を備える場合、反応領域１６は、先行する多孔質膜の化学的または物理的な処理によって多孔質基板の化学的な機能を変更することなく、二つの異なる洗剤で親水化される。
【００５３】
有利に、図２Ｂ、３Ｂ及び４Ｂで示されるように、特に表面で、異なる親水化を有する二つの領域を有する反応領域１６の構成は、特に二重分布（ｄｏｕｂｌｅ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）と呼ばれる現象である、一方は陽性であり、他方は陰性である二つの分布の任意の共存を区別するという、輸血の専門家の特定の関心事に応える。この構成は特に試験される試料中の特定の抗原の検出及び同定に適応される。
【００５４】
多孔質膜１４の親水性の領域１６は捕捉剤を含み得る。捕捉剤は膜１４に吸収され、または共有結合的に結合される。
【００５５】
捕捉剤は、単独または表出剤と複合された、試験される試料中に含まれる関連する分析物を保持可能な、領域１６上に固定された任意の化学的または生物的な要素を意味する。
【００５６】
試験される試料中の特定の抗体の存在を同定することが目的の時は、これらの捕捉剤は特定の赤血球の表現型の抗原を備える。それらは断片の精製された、若しくは精製されない抗原、または抗原、ボイドセルを運ぶ、若しくは抗原を運ばないセルの膜、または合成によって得られる組換蛋白質若しくは組替抗原でもよい。好ましくは、捕捉剤は抗原を運ぶ、ヘモグロビンを欠いた赤血球である。
【００５７】
試験される試料中の特定の抗原の存在を同定することが目的の際は、捕捉剤は抗体である。
【００５８】
捕捉剤は、反応領域１６上に存在する時、反応領域１６を区切るために、膜１４を親水化する役割の洗剤と同時に堆積されてもよく、親水化の後で洗剤とは独立に堆積されてもよい。
【００５９】
捕捉剤は、ｐＨ４からｐＨ１０、好ましくはｐＨ６．５からｐＨ７．８、より一層好ましくはｐＨ７からｐＨ７．５で安定化されたｐＨ溶液を含む非変性バッファ中で、反応領域１６上に堆積され得る。捕捉剤は吸収されても、共有結合的に結合されてもよい。
【００６０】
捕捉剤は、アジ化ナトリウム、抗生物質等の微生物学的な安定性を維持することを意図された補助剤、砂糖（スクロース、ブドウ糖、トレハロース）等の立体配座安定性を意図された補助剤、同様にこれらの機能を実施するために当業者に知られた任意の他の作用剤に添加され得る。
【００６１】
捕捉剤は領域１６の全体に、または一部にだけ存在することができる。
【００６２】
洗剤及び／または捕捉剤は、ロボットのまたは手動のピペッタで堆積可能な溶液の形態が好ましい。有利に、これらの溶液は、毛管現象によって好ましい体積を保持する針を用いて簡単に堆積することもできる。これらの針は任意の材料で作ることが可能だが、より好ましくは金属製であり、疎水コートを有するか、有さない。それらの末端は平坦であるか、所定の大きさの切り目を有することができる。
【００６３】
洗剤及び／または捕捉剤溶液の堆積の後に、膜の乾燥が続かねばならず、乾燥の期間は適用される温度に依存する：室温では少なくとも４時間、３７℃では少なくとも１時間である。
【００６４】
本発明に係る装置は、吸収性膜１８を多孔質膜１４の下に備えることができる。この膜１８は、特に反応領域１６が膜１４の厚さ全体にわたって親水性である時に、膜１４によって保持されない、反応領域１６の位置に堆積された液体を吸収する。
【００６５】
膜１８は、吸収紙、セルロース等、毛管現象によって受動的な吸収を可能にする材料を含むか、吸収性ポリマーからなり得る。例示として、以下の製品が挙げられる：
・Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃ０４８、Ｃ０６８、Ｃ０８３、Ｃ２４８
・Ｗｈａｔｍａｎ  ＣＦ３、ＣＦ４、ＣＦ１０、Ｇｒａｄｅ  ４７０、ＣＦ５、ＣＦ６、ＣＦ７、Ｇｒａｄｅ  ９００、Ｇｒａｄｅ  ３００
・Ａｈｌｓｔｒｏｍ  Ｇｒａｄｅｓ  ６０１、６４２、６３１、２３８、２３７、２２２、２４３、３２０
・Ｐａｌｌ  Ｇｒａｄｅｓ  １１１、１１３、１３３、１６５、１９７、８９７５、８９６４、８３０１、Ａｃｃｕｗｉｋ（登録商標）  Ｕｌｔｒａ
・Ｃｌｅａｎｉｓ  Ｇｅｌｍａｘ超吸収性パッド
・綿
【００６６】
吸収性膜１８の組成及び寸法は、試験中に使用される全溶液を吸収可能なように選択されねばならない（μｌでのＶｔｏｔａｌ）。各膜は吸収容量（μｌ／ｃｍ２でのＣ）によって特徴づけられ、膜及びその寸法（ｃｍ２でのＤ）は以下の式を満たすように選択される：
Ｄ  ＞  Ｖｔｏｔａｌ／Ｃ
【００６７】
代替的に、液体は膜上の領域と膜下の領域との圧力差によって吸収され得る。例えば部分的な真空を伴う吸引システムの使用である。
【００６８】
膜１４及び選択的に膜１８は支持１２内に配される。
【００６９】
本発明に係る装置１０の支持１２は好ましくは硬質の（ｒｉｇｉｄ）支持である。それは例えばシェルであり得る。
【００７０】
好ましくは、支持は液体を逃がさない硬質の材料を含む。これは特にポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、アクリロニトリルブタジエンスチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリカーボネート、ポリアミド、ポリ塩化ビニル、ポリメタクリル酸メチル等のプラスチック材料であり得る。
【００７１】
好ましくは、支持１２は少なくとも一つの開口部２０を備え、各開口部２０は、多孔質膜１４の各親水性の反応領域１６に直角である。この開口部２０は親水性の反応領域１６上に堆積された試料の収集領域に対応する。この親水性の領域１６は、二つの親水性の領域が常に膜１４上の疎水性の領域によって分けられているならば、開口部の基底部と同一の、より小さな、またはより大きな寸法でよい。
【００７２】
開口部２０は、必要であれば、下方の信号を見るために、透明なエッジを有してもよい。
【００７３】
収集領域は、反応膜１６上に堆積される、試験される試料の最大体積を少なくとも含むことができるような寸法でなければならない。
【００７４】
各反応領域１６の独立は反応領域間の疎水性の膜によって構成されるバリアによって得られる。この独立は単一の膜を備える同一の装置上でいくつかの異なる診断を実行する。変形によると、この独立は、支持１２を、仕切りによって分けられた、それぞれが独自の膜を有する物理的に独立したユニットに分割することによって選択的に実施されてもよい。
【００７５】
さらに、開口部２０の周り、開口部の底、前記開口部２０の開口部の反対側のドームの過剰な厚さをつくることによって、膜１４及び１８間の接触を改善することができる。
【００７６】
支持１２は標準的なＳＢＳ／ＡＩＮＳＩと外部寸法で適合する寸法を有する、いくつかの開口部２０を有するシェルであり得る。
【００７７】
本発明に係る装置１０は、毛管現象によって、特に血液またはその成分の一つである生物学的な流体中の分析物の存在または不存在を決定するのに使用され得る。この分析物は、赤血球の表現型の抗原またはこの抗原に対する抗体であり得る。
【００７８】
装置１０は特に以下のために利用される：
−赤血球を表現型検査する、つまり、それらの表面の抗原を決定すること。
−アンチＡまたはアンチＢ抗体の存在を同定するシモニン（Ｓｉｍｏｎｉｎ）試験。
−特にアロ抗体、自己抗体、またはさらに寒冷凝集素の探索の点から赤血球の、細胞性抗原に対する抗体の探索または同定。
【００７９】
具体的に、従って本発明の目的は、血液またはその成分の一つの試料から、ＡＢＯ血液型の同定及び決定、拡張Ｒｈｅｓｕｓ表現型検査、異常な凝集素の探索、自己抗体の探索、寒冷凝集素の探索、及び／またはクロス検証のための装置１０の使用である。
【００８０】
本発明に係る装置１０の使用は表出剤の使用を必要とする。好ましくは、これは赤血球である。これらの赤血球は：
−抗体を探索するための装置の使用、またはシモニン試験のための、赤血球試験と呼ばれる既知の表現型の赤血球
−表現型検査用の装置の使用のために試験される試料中に含まれる赤血球、である。
【００８１】
試験される試料中の存在を検出することが目的である分析物の関数として、捕捉剤の性質、表出剤の性質、親水化方法（単一または複数、厚さ中または表面）、及び追跡の実験計画の全ては変わる必要がある。
【００８２】
全ての場合において、反応領域上で試験される試料の堆積に先行して、バッファ液によって反応領域１６の水和を進めることができる。このバッファはｐＨ６からｐＨ８．５、好ましくはｐＨ６．５からｐＨ７．８、特にｐＨ７からｐＨ７．５の安定化されたｐＨの溶液を含み得り、２５０ｍＯｓｍから８００ｍＯｓｍ、好ましくは３００ｍＯｓｍから６００ｍＯｓｍのモル浸透圧濃度を有し得る。この溶液は、選択的に、低濃度の洗剤（０．０１から０．０５％ｍ／ｖのＴｗｅｅｎ  ２０）、飽和剤（ＢＳＡ）、及び／または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。
【００８３】
同様に、結果を読むためには、バッファのすすぎを用いる必要がある。好ましくは、このバッファの洗浄は、ｐＨが２から１０、好ましくは５から９の、ＰＢＳ、ＴＢＳ、または食塩水を含む。バッファのモル浸透圧濃度は、赤血球の溶血を避けるために制御されなければならない。バッファは、捕捉剤に直接的にまたは間接的に固定された表出剤または着色された分析物を引き離さないように選択されなければならない。驚くべきことに、本発明に係る装置の使用のために、ＮａＣｌ等の塩類溶液作用因子、または例えばグリシンまたはタウリン等の非イオン性のオスモライトの存在によって得られる少し高浸透圧の洗浄液（つまり３００ｍＯｓｍから８００ｍＯｓｍ）を使用することが好ましい。このバッファは表出剤の色と対照的な色で着色され得る。例えば、表出剤が赤血球の場合、洗浄バッファ液は青または緑に着色され得る。バックグラウンドノイズを消すために洗浄液に少量の界面活性剤を添加することもできる。これらの界面活性剤は、好ましくは非イオン性の表面活性剤であり、特に糖のエステル、とりわけソルビタンのポリオキシエチレンエステル（Ｔｗｅｅｎ）である。
【００８４】
装置１０の使用中、液体はとりわけピペッタシステムまたは毛管現象の複製システムによって堆積され得る。
【００８５】
有利に、本発明に係る装置は遠心分離も、撹拌も、真空引きも、特別な装置も必要としない。またそれは手動で完全に自律的に使用され得、ロボット上で簡単に自動化され得る。膜１４の異なる特性は動作速度を制御し、膜１４の穴のサイズが如何に大きくても、抗原−抗体反応を可能とするのに十分な長さの動作時間を生成する。
【００８６】
第一の変形によれば、本発明の目的は、赤血球の表現型検査のための装置１０の使用である。
【００８７】
目的は赤血球の表面の抗原を探索することである。この場合、抗体または抗体の混合物が捕捉剤として使用され、具体的に問題の抗原または抗原の変形を認識することができる。抗体は、精製または半精製された単一クローンの（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ）抗体、単一クローンの抗体を含む培養表面活性剤（ｃｕｌｔｕｒｅ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ）（表１参照）、または多クローンの抗体、抗血清であり得る。凝集素またはレクチンも使用され得る。
【００８８】
単一クローンの抗体の非網羅的なライブは以下である：
【００８９】
【表１】
0006339562.tif 000002
【００９０】
特定の実施形態によると、本発明の目的は、陽性の表現型の分布と陰性の表現型の分布（二重分布）とを同時に検出するために、赤血球（純粋な赤血球または完全な血液）の試料から赤血球の血液型を表現型検査するプロセスであり、以下のステップを備える：
【００９１】
−本発明に係る装置１０の反応領域の中央で多孔質膜１４を水和するために溶液を堆積するステップ。前記反応領域１６は二つの親水性の領域１６−１、１６−２を備え、周辺の１６−２よりも反応領域の中央１６−１で親水化度が大きく、中央で抗体を含む捕捉剤を備え；膜の水和のための溶液は免疫血液学的反応に望ましいと知られる溶液であり、選択的に、例えばｐＨ６からｐＨ８．５、好ましくはｐＨ６．５からｐＨ７．８、特にｐＨ７からｐＨ７．５のｐＨで安定化され、２５０ｍＯｓｍから８００ｍＯｓｍ、好ましくは３００ｍＯｓｍから６００ｍＯｓｍのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファなどの添加物を含む。この溶液は、選択的に、低濃度の洗剤（特に０．０１から０．０５％ｍ／ｖのＴｗｅｅｎ  ２０）、飽和剤（例えばＢＳＡ）、及び／または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。このバッファは選択的にプロテアーゼ活性を有し得、例えばパパインまたはブロメラインなどの酵素を添加することによって得られ得る。このバッファは選択的に、反応の可能性を持たせ、小球と捕捉要素とのより長い接触を維持するために、ポリブレンまたはポリリジン等のポリカチオン性の作用物質を含み得る；
−バッファ液中で、特に、選択的に、例えばｐＨ６からｐＨ８．５、好ましくはｐＨ６．５からｐＨ７．８、特にｐＨ７からｐＨ７．５のｐＨで安定化され、２５０ｍＯｓｍから８００ｍＯｓｍ、好ましくは３００ｍＯｓｍから６００ｍＯｓｍのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファなどの添加物を含む、免疫血液学的反応に望ましいと知られているバッファ液中で、表現型検査される赤血球を希釈するステップ。この溶液は、選択的に、低濃度の洗剤（特に０．０１から０．０５％ｍ／ｖのＴｗｅｅｎ  ２０）、飽和剤（例えばＢＳＡ）、及び／または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。このバッファは選択的にプロテアーゼ活性を有し得、例えばパパインまたはブロメラインなどの酵素を添加することによって得られ得る。このバッファは選択的に、反応の可能性を持たせ、赤血球の捕捉要素とのより長時間の接触を維持するために、ポリブレンまたはポリリジン等のポリカチオン性の作用物質を含み得る；
−表現型検査される赤血球を含むこの溶液を反応領域の中央１６−１に加えるステップ；
−好ましくは１５℃から４０℃、特に１８℃から２５℃の温度で、６０秒から１５分、特に２分から１０分の間、保温（ｉｎｃｕｂａｔｅ）するステップ；
−反応領域上にリンス液を堆積するステップ；リンス液は抗原−抗体反応に対して有害ではないと知られている溶液であり、赤血球の保全性を維持し、非特異的な相互作用を緩めることができ、例えばｐＨ６からｐＨ８．５、好ましくはｐＨ６．５からｐＨ７．８、特にｐＨ７からｐＨ７．５のｐＨで安定化され、２５０ｍＯｓｍから８００ｍＯｓｍ、好ましくは３００ｍＯｓｍから６００ｍＯｓｍのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファ等である。この溶液は、選択的に、低濃度の洗剤（特に０．０１から０．０５％ｍ／ｖのＴｗｅｅｎ  ２０）、飽和剤（例えばＢＳＡ）、及び／または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。ポリカチオン性の作用物質の先行する使用の場合、このバッファは、例えばこのタイプの添加物によって生じる非特異的な相互作用を緩めることが可能なように１００ｍＭより多いＮａＣｌを含むなど、強イオン性であろう。
【００９２】
堆積される試料は、赤血球または完全な血液でよい。試料は、ｐＨ６からｐＨ８．５、好ましくはｐＨ６．５からｐＨ７．８、特にｐＨ７からｐＨ７．５のｐＨで安定化され、２５０ｍＯｓｍから８００ｍＯｓｍ、好ましくは３００ｍＯｓｍから６００ｍＯｓｍのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファ中で希釈され得る。この溶液は、選択的に、低濃度の洗剤（特に０．０１から０．０５％ｍ／ｖのＴｗｅｅｎ  ２０）、飽和剤（例えばＢＳＡ）、及び／または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。このバッファは選択的に、例えばパパインまたはブロメラインなどの酵素の添加によって得られるプロテアーゼ活性を有し得る。
【００９３】
このプロセスを実行するために用いられる装置１０の膜１４の反応領域１６の親水化は、好ましくは表面親水化である。
【００９４】
親水化は例えば、０．１％ｍ／ｖから１％ｍ／ｖ、好ましくは０．２％ｍ／ｖから１％ｍ／ｖの濃度の、２μｌから４０μｌ、好ましくは５μｌから２０μｌの体積の、エタノール中のＴｗｅｅｎ  ２０溶液を用いて実行され得り、親水化領域は、その中央に、０．１％ｍ／ｖから２％ｍ／ｖ、好ましくは０．５％ｍ／ｖから１％ｍ／ｖの濃度、２５ｎｌから１５μｌ、好ましくは１００ｎｌから１０μｌの体積のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ１００の水溶液を用いて、厚さ中に作られる。
【００９５】
試料中に存在する赤血球が捕捉要素によって認識された抗原を予期した場合、赤血球は洗浄にもかかわらず膜１４の反応領域１６の中央に固定化されたままであり、中央反応領域１６−１は赤を維持する。試料中に存在する赤血球が捕捉要素によって認識される抗原を運ばない場合、赤血球は洗浄によって洗い流される：中央領域１６−１は白のままであり、周辺領域１６−２で赤いリングが形成する。試料が二つの異なる分布を有する場合、中央の赤２２−１及び赤い周辺リング２２−２の両方が観測される。
【００９６】
結果を読むのは視覚的でも自動でも可能である。
【００９７】
他の特定の実施形態によると本発明の目的は、二重分布の検出を許さず、赤血球（精製された赤血球または完全な血液）の試料から、赤血球の血液型を表現型検査するためのプロセスであり、以下のステップを含む：
−本発明に係る装置１０の反応領域の中央で多孔質膜１４を水和するために溶液を堆積するステップ。上記反応領域１６は単一の親水性の領域を備え、抗体を含む捕捉剤を含み、膜の親水化のための溶液は、選択的に、例えばｐＨ６からｐＨ８．５、好ましくはｐＨ６．５からｐＨ７．８、特にｐＨ７からｐＨ７．５のｐＨで安定化され、２５０ｍＯｓｍから８００ｍＯｓｍ、好ましくは３００ｍＯｓｍから６００ｍＯｓｍのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファ等の添加物を含む、免疫血液学的反応に望ましいと知られている溶液である。この溶液は選択的に低濃度の洗剤（特に０．０１から０．０５％ｍ／ｖのＴｗｅｅｎ  ２０）、飽和剤（例えばＢＳＡ）、及び／または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。このバッファは選択的にプロテアーゼ活性を有し得、例えばパパインまたはブロメラインなどの酵素を添加することによって得られ得る。このバッファは選択的に、反応の可能性を持たせ、赤血球の捕捉要素とのより長時間の接触を維持するために、ポリブレンまたはポリリジン等のポリカチオン性の作用物質を含み得る。
−選択的に、バッファ液中で、特に、選択的に、例えばｐＨ６からｐＨ８．５、好ましくはｐＨ６．５からｐＨ７．８、特にｐＨ７からｐＨ７．５のｐＨで安定化され、２５０ｍＯｓｍから８００ｍＯｓｍ、好ましくは３００ｍＯｓｍから６００ｍＯｓｍのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファなどの添加物を含む、免疫血液学的反応に望ましいと知られているバッファ液中で、表現型検査される赤血球を希釈するステップ。この溶液は選択的に低濃度の洗剤（特に０．０１から０．０５％ｍ／ｖのＴｗｅｅｎ  ２０）、飽和剤（例えばＢＳＡ）、及び／または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。このバッファは選択的にプロテアーゼ活性を有し得、例えばパパインまたはブロメラインなどの酵素を添加することによって得られる。このバッファは選択的に、反応の可能性を持たせ、赤血球の捕捉要素とのより長時間の接触を維持するために、ポリブレンまたはポリリジン等のポリカチオン性の作用物質を含み得る。
−表現型検査される赤血球を含むこの溶液を反応領域の中央に添加するステップ。
−好ましくは１５℃から４０℃、特に１８℃から２５℃の温度で、２秒から１５分、特に１分から１０分の間、保温するステップ。
−抗原−抗体反応に有害ではないと知られている溶液であり、赤血球の保全性を維持し、非特異的な相互作用を緩めることができ、例えばｐＨ６からｐＨ８．５、好ましくはｐＨ６．５からｐＨ７．８、好ましくはｐＨ７からｐＨ７．５のｐＨで安定化され、２５０ｍＯｓｍから８００ｍＯｓｍ、好ましくは３００ｍＯｓｍから６００ｍＯｓｍのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファ等のリンス液を反応領域上に堆積するステップ。この溶液は選択的に低濃度の洗剤（特に０．０１から０．０５％ｍ／ｖのＴｗｅｅｎ  ２０）、飽和剤（例えばＢＳＡ）、及び／または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。ポリカチオン性の作用物質の先行する使用の場合、このバッファは、例えばこのタイプの添加物によって生じる非特異的な相互作用を緩めることが可能なように１００ｍＭより多いＮａＣｌを含むなど、強イオン性であろう。
【００９８】
このプロセスを実行するために使用される装置１０の膜１４の反応領域１６の親水化は、厚み親水化であり得る。装置１０は、膜１４の下方に、例えば吸収性膜１８などの吸収システムを備えることも必要である。
【００９９】
親水化は、０．１％ｍ／ｖから２％ｍ／ｖ、好ましくは０．５％ｍ／ｖから１％ｍ／ｖの濃度、２５ｎｌから１５μｌ、好ましくは１００ｎｌから１０μｌの体積のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ１００の水溶液を用いて実施され得る。
【０１００】
試料中に存在する赤血球が捕捉要素によって認識される抗原を運ぶ場合、赤血球は、洗浄にもかかわらず膜１４の反応領域１６の中央２２に固定化されたままであり、反応領域１６は赤いままである。試料中に存在する赤血球が、捕捉要素によって認識される抗原を運ばない場合、赤血球は洗浄によって洗い流され、反応領域１６は白を維持する。吸収性膜１８は膜１４に固定されない全てを吸収する（領域２４）。
【０１０１】
結果を読むのは視覚的でも自動でも可能である。
【０１０２】
第二の変形によると、本発明の目的は血液中の多価抗体を検出するための、またはシモニン試験のための装置１０の使用である。
【０１０３】
目的は特定の抗体の探索である。従って捕捉要素は好ましい抗体を対象とする抗原を含む。
【０１０４】
固定化された抗原は、ポリマーまたは蛋白質構造に結合する、または結合しない合成抗原であり得る。これらは抗原または好ましい変形の抗原の混合の一つ以上のシークエンスを含む組換え蛋白質でもあり得る。固定化された抗原は、セルまたはセルの断片、特に、膜状の断片または細胞内容を欠いたセルの上でもあり得る。これらのセルは特に、「ゴースト（ｇｈｏｓｔ）」とも呼ばれる、細胞質を欠いた赤血球であり得る。
【０１０５】
試料が問題の抗原に対する抗体を有する場合、抗体は反応領域１６の位置で膜１４の表面に捕捉されたままであろう。
【０１０６】
これらの抗体の存在を明らかにするためには、それらの抗体の性質を認識することによって（ａｎｔｉ−ＩｇＧ、ａｎｔｉ−ＩｇＭ）、または、使用される抗体が多価（いくつかの抗原を同時に検出可能）である場合には、問題の抗原も運んでいる表出要素も利用され得る、表出要素を使用する必要がある。
【０１０７】
【表２】
0006339562.tif 000003
【０１０８】
従って本発明の別の目的は、血漿、血清、または完全の血液の試料から、血液中に存在する多価抗体の検出用のプロセスであり、以下のステップを備える：
−試験される試料を装置１０の反応領域１６上に堆積するステップであって、上記反応領域１６が抗原を含む捕捉剤を含むステップ、
−捕捉剤と同じ抗原を備える、既知の表現型の赤血球試験を添加するステップ、
−混合物を親水性の領域を透過させるステップであって、上記親水性の領域が１分から４５分、好ましくは３分から１５分の通過時間を可能にする特性を有するステップ、
−例えばｐＨ６からｐＨ８．５、好ましくはｐＨ６．５からｐＨ７．８、特にｐＨ７からｐＨ７．５のｐＨで安定化され、２５０ｍＯｓｍから８００ｍＯｓｍ、好ましくは３００ｍＯｓｍから６００ｍＯｓｍのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファ等のリンス液を反応領域上に堆積するステップ。この溶液は選択的に低濃度の洗剤（特に０．０１から０．０５％ｍ／ｖのＴｗｅｅｎ  ２０）、飽和剤（例えばＢＳＡ）を含み得る。
【０１０９】
堆積される試料は、ｐＨ６からｐＨ８．５、好ましくはｐＨ６．５からｐＨ７．８、特にｐＨ７からｐＨ７．５のｐＨで安定化され、２５０ｍＯｓｍから８００ｍＯｓｍ、好ましくは３００ｍＯｓｍから６００ｍＯｓｍのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファ中で希釈された、又は希釈されていない、血漿、血清、または完全の血液であり得る。この溶液は選択的に低濃度の洗剤（例えば０．０１から０．０５％ｍ／ｖのＴｗｅｅｎ  ２０）、飽和剤（例えばＢＳＡ）、及び／または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。このバッファは、好ましくはＮａＣｌの１００ｍＭ未満の塩分濃度である。
【０１１０】
このプロセスを実行するために使用される装置１０の膜１４の反応領域１６の親水化は、好ましくは厚さで実行される。従って、装置１０は、膜１４の下方の吸収システム、例えば吸収性膜１８、も備える必要がある。
【０１１１】
親水化は０．３％ｍ／ｖから２％ｍ／ｖ、好ましくは０．５％ｍ／ｖから１％ｍ／ｖの濃度、２５ｎｌから１５μｌ、好ましくは１００ｎｌから１０μｌの体積のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ１００の水溶液を用いて実施され得る。捕捉剤は、洗剤と混合されて、または反応領域１６の親水化後に、膜上に堆積され得る。
【０１１２】
試験される血漿が、捕捉剤中及び表出剤（赤血球試験）中に存在する抗原に対する抗体を含む場合、反応領域１６に赤い中央２２が現れる。白い中央は、試験される血漿中に、捕捉剤中及び表出剤（赤血球試験）中の両方に存在する抗原に対する抗体が存在しないことを知らせる。吸収性膜１８は、膜１４に固定されていない全てを吸収する（領域２４）。
【０１１３】
結果を読むのは視覚的でも自動でも可能である。
【０１１４】
第三の変形によると、本発明の目的は、血中の異常な凝集素を探索するための装置１０の使用である。
【０１１５】
目的は、試料の血漿抗体によって、または後続の補足の活性化によって感作された赤血球の存在を同定することである。
【０１１６】
この形式では、捕捉剤が存在しないか、後者はポリカチオン性のポリマー等の凝集剤である。
【０１１７】
血漿とともに赤血球パネル試験を保温した後、混合物に赤血球を可逆的に凝集させることが可能な作用物質を添加する。この可逆的凝集剤は、例えばポリブレン、ポリリジンまたはポリエチレンイミン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｎｍｉｎｅ）等のポリカチオン性のポリマーから選択され得る。形成される凝集体の寸法は膜を介してそれらを通すには大きすぎるので、赤血球は保持されたままであり、小球のボタンを形成する。小球は、ボタンの不安定化を避けるために、やはり凝集剤を含む溶液を用いて、非特異的なグロブリンの過剰量で洗浄される。これらの保持された小球の洗浄後、後者が感作されている場合、ボタンのセルの細網化を実行するために、多価クームス試薬が添加される。低ドーズの界面活性剤を含む食塩水バッファの添加は感作されていないセルの凝集をほどき、網状の感作細胞の凝集を維持する。
【０１１８】
【表３】
0006339562.tif 000004
【０１１９】
これらのプロセスを実行するために、このプロセスを実行するために使用される装置１０の膜１４の反応領域１６の親水化が好ましくは厚さで実行される。従って装置１０は膜１４の下方の吸収システム、例えば吸収性膜１８、も備える必要がある。
【０１２０】
親水化は０．３％ｍ／ｖから２％ｍ／ｖ、好ましくは０．５％ｍ／ｖから１％ｍ／ｖの濃度、２５ｎｌから１５μｌ、好ましくは１００ｎｌから１０μｌの体積のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ１００の水溶液を用いて実施され得る。有利に可逆的な凝集剤が添加され得、好ましくは例えばポリブレン、ポリリジンまたはポリエチレンイミン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｉｎｍｉｎｅ）等のポリカチオン性のポリマーから選択され得る。
【０１２１】
この第３の変形によると、従って、本発明の別の目的は、血漿、血清、または完全の血液の試料から、血中に存在する抗赤血球抗体の検出、クロス検証、または自己抗体若しくは寒冷凝集素の探索のためのプロセスであり、以下のステップを備えることを特徴とする：
−アロ抗体の探索のために、試験される試料を、バッファ、既知の表現型の赤血球試験、及び赤血球を凝集することが可能な作用物質とともに、１５℃から４０°Ｃ、好ましくは約３７°Ｃの温度で、３分から６０分、好ましくは５分から３０分の間、予め保温するステップ。バッファは、ＬＩＳＳバッファ（例えば５０ｍＭより少ないＮａＣｌを含む）等の低イオン力のバッファである。自己抗体の探索のためには、予め保温しない試料の赤血球を含む試料を単に用いる。
−この混合物に小球を凝集させることが可能な作用物質、例えばヘキサジメトリンブロマイドの溶液を添加するステップ。
−好ましくは１５秒から５分の期間の後、本発明に係る装置１０の反応領域１６上に混合物を堆積し、それを流すステップ；それはスポットの上にセルのボタンを形成する。
【０１２２】
反応領域上に、赤血球を凝集させることが可能な作用物質を含む溶液を堆積するステップであって、赤血球を凝集させることができる作用物質は、例えばヘキサジメトリンブロマイドの溶液であってよく、好ましくは溶液中のヘキサジメトリンブロマイドの濃度が０．０１から２％（ｍ／ｖ）であり、更により好ましくは０．０５から０．５％の範囲であるステップ；この作用物質は非特異的な蛋白質の洗浄を実施し、セルのボタンの保全性を維持する。
−クームス、人間の抗グロブリン、または抗補体試薬を反応領域上に堆積するステップ。
−例えばｐＨ６からｐＨ８．５、好ましくはｐＨ６．５からｐＨ７．８、好ましくはｐＨ７からｐＨ７．５のｐＨで安定化され、３００ｍＯｓｍから８００ｍＯｓｍのモル浸透圧濃度の高調食塩水等のリンス液を反応領域上に堆積するステップ。この溶液は、選択的に低濃度の洗剤（例えば０．０１から０．０５％ｍ／ｖのＴｗｅｅｎ  ２０）及び赤と対照的な色（青または緑）の色素を含み得る。
【０１２３】
堆積される試料は、ｐＨ６からｐＨ８．５、好ましくはｐＨ６．５からｐＨ７．８、特にｐＨ７からｐＨ７．５のｐＨで安定化され、２５０ｍＯｓｍから８００ｍＯｓｍ、好ましくは３００ｍＯｓｍから６００ｍＯｓｍのモル浸透圧濃度の溶液を含むバッファ中で希釈された、又は希釈されていない、血漿、血清、または完全の血液であり得る。この溶液は選択的に低濃度の洗剤（例えば０．０１から０．０５％ｍ／ｖのＴｗｅｅｎ  ２０）、飽和剤（特にＢＳＡ）、及び／または抗原−抗体反応の可能性を持たせることが可能な作用物質を含み得る。このバッファは、好ましくはＮａＣｌの５０ｍＭ未満の塩分濃度を有する。
【０１２４】
試験される血漿が表出剤（赤血球試験）中に存在する抗原に対する抗体を含む場合、または試料の赤血球がすでにインビボで感作されている場合、赤い中央２２が反応領域１６に現れる。白い中央は表出剤（赤血球試験）中に存在する抗原に対する抗体の不存在、または検出不能な量を知らせる。吸収性膜１８は膜１４に固定されていない全てを吸収する（領域２４）。
【０１２５】
結果を読むのは視覚的でも自動でも可能である。
【０１２６】
本発明に係る装置１０は、最も頻繁に実施される適切な補完的な試験を組み合わせる範囲に従って、提供され得、同一のカード上で専門家によって同時に提供され得、全ての試験は同様に実施され、解釈される。
【０１２７】
各カード上で、インラインに配置された、いくつかの試料（ドナーまたは患者）用のカラム内に配置されたいくつかの分析物が検出され得る。これは、例えば、
−ＡＢＯ−Ｄ血液分類、
−Ｒｈｅｓｕｓ−Ｋｅｌｌ分類、
−異常な凝集素の探索（３つの赤血球表現型）、
−異常な凝集素の同定（１０の赤血球表現型）、
−拡張表現型検査、
−抗グロブリンを伴う直接制御、
−直接互換性試験、のためのカードであり得る。
【０１２８】
本発明に係る装置１０は、やはり上記装置の使用のプロセスの少なくとも一つを実行するのに必要な試薬を備えるキット中に存在し得る。
【符号の説明】
【０１２９】
１０  診断装置
１２  支持
１４  多孔質膜
１６  反応領域
１６−１  中央
１６−２  周辺
１８  吸収性膜
２０  開口部
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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