(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号４９、５０、５２または５３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、融合タンパク質であって、ストレプトコッカス・ニューモニエに対する免疫反応を誘発する、融合タンパク質。
【請求項２】
配列番号４９、５０、５２または５３のアミノ酸配列と少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質であって、ストレプトコッカス・ニューモニエに対する免疫反応を誘発する、融合タンパク質。
【請求項３】
配列番号４９、５０、５２または５３のアミノ酸配列と少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質であって、ストレプトコッカス・ニューモニエに対する免疫反応を誘発する、融合タンパク質。
【請求項４】
配列番号４９、５０、５２または５３のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質であって、ストレプトコッカス・ニューモニエに対する免疫反応を誘発する、融合タンパク質。
【請求項５】
配列番号４９、５０、５２または５３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の融合タンパク質であって、ストレプトコッカス・ニューモニエに対する免疫反応を誘発する、融合タンパク質。
【請求項６】
配列番号４９、５０、５２または５３のアミノ酸配列と少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の融合タンパク質であって、ストレプトコッカス・ニューモニエに対する免疫反応を誘発する、融合タンパク質。
【請求項７】
配列番号４９、５０、５２または５３のアミノ酸配列と少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の融合タンパク質であって、ストレプトコッカス・ニューモニエに対する免疫反応を誘発する、融合タンパク質。
【請求項８】
配列番号４９、５０、５２または５３のアミノ酸配列からなる、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項９】
脂質付加されている、請求項１〜８の何れか１項に記載の融合タンパク質であって、ストレプトコッカス・ニューモニエに対する免疫反応を誘発する、融合タンパク質。
【請求項１０】
医薬的に許容可能な担体と、請求項１〜８の何れか１項に記載の融合タンパク質と、を含むワクチン製剤。
【請求項１１】
アジュバントをさらに含む、請求項１０に記載のワクチン製剤。
【請求項１２】
１〜１０００μｇの融合タンパク質を含む、請求項１０に記載のワクチン製剤。
【請求項１３】
Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニー形成またはＳ．ニューモニエ感染に罹患しているかまたは罹患し易い対象を処置するための請求項１０に記載のワクチン製剤であって、有効量の前記ワクチン製剤が、前記対象に投与されることを特徴とする、ワクチン製剤。
【請求項１４】
前記対象におけるＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染を抑制する、請求項１３に記載のワクチン製剤。
【請求項１５】
前記対象におけるＳ．ニューモニエによるコロニー形成を抑制する、請求項１３に記載のワクチン製剤。
【請求項１６】
前記対象におけるＳ．ニューモニエの症状を抑制する、請求項１３に記載のワクチン製剤。
【請求項１７】
前記対象においてＳ．ニューモニエ誘導性敗血症を抑制する、請求項１３に記載のワクチン製剤。
【請求項１８】
前記対象においてＳ．ニューモニエ誘導性肺炎を抑制する、請求項１３に記載のワクチン製剤。
【請求項１９】
前記対象においてＳ．ニューモニエ誘導性髄膜炎を抑制する、請求項１３に記載のワクチン製剤。
【請求項２０】
前記対象においてＳ．ニューモニエ誘導性中耳炎を抑制する、請求項１３に記載のワクチン製剤。
【請求項２１】
前記対象においてＳ．ニューモニエ誘導性副鼻腔炎を抑制する、請求項１３に記載のワクチン製剤。
【請求項２２】
前記対象においてＳ．ニューモニエ誘導性臓器障害を抑制する、請求項１３に記載のワクチン製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本願は、内容がその全体において参照により本明細書中に組み込まれる、２０１２年１月２０日出願の米国特許仮出願第６１／５８９，２６７号明細書の優先権を主張する。
【０００２】
政府からの援助
本研究は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈにより授与されたＧｒａｎｔ  ＡＩ０６６０１３のもと、連邦政府の支援により行った。したがって、アメリカ合衆国連邦政府は、本発明において一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
肺炎球菌疾患は、米国でおよび世界中で疾病および死亡の主要な原因であり続けている。毎年、数百万例もの肺炎、髄膜炎、菌血症および中耳炎の症例が、病原体ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染に起因するものである。Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は、健常成人の約５〜１０％および健常小児の２０〜４０％の鼻咽頭でコロニー形成する莢膜付きのグラム陽性球菌である。Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）がエウスタキー管、鼻洞、肺、血流、髄膜、関節腔、骨または腹膜腔に運ばれると、通常のコロニー形成が病原性となる。Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は、この菌が免疫系を回避できるようになるいくつかの病原性因子を有する。例としては、宿主免疫細胞による食作用を阻止する多糖類カプセル、補体介在性のオプソニン作用を阻害するプロテアーゼおよび宿主細胞の溶解を引き起こすタンパク質が挙げられる。多糖類カプセルにおいて、複雑な多糖類の存在に基づいて、肺炎球菌が様々な血清型に分類される。現在まで、９３種類を超える血清型のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）が同定されている。
【０００４】
Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染に対する免疫反応を利用するために様々な医薬組成物が使用されてきた。多価肺炎球菌ワクチン、ＰＰＶ−２３は、成人および高齢者集団におけるＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による肺炎および他の侵襲性疾患を予防するために開発された。このワクチンは、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の２３種類の血清型由来の莢膜多糖類（ＣＰ）を含有する。これらのＣＰは、Ｔ細胞非依存性抗原であるため、短命な抗体反応しか誘導せず、反復投与が必要であることから、免疫寛容のリスクが上昇する。Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜多糖類に対して産生される抗体は、抗莢膜抗体と呼ばれ、成人および免疫が正常である者において防御性があると認められている。しかし、２歳未満の小児および免疫機能が低下している者では、高齢者を含め、Ｔ細胞非依存性抗原にうまく反応せず、したがってＰＰＶ−２３による最適な防御性が付与されない。別のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンであるプレブナー（Ｐｒｅｖｎａｒ）は、ジフテリアトキソイドタンパク質と複合体化された７種類のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型由来の細菌多糖類を含む。このワクチンは、ＢおよびＴ細胞反応の両方を誘導する。しかし、これは、７種類の肺炎球菌血清型しか防御しないため、血清型変換により、ワクチン血清型でないものに対してプレブナーが無効となり得る。血清型変換は、いくつかの臨床試験および疫学研究で既に明らかとなっており、これらのワクチンの異なる製剤の開発が必要である。一例は、最近導入された、１３種類の肺炎球菌血清型に対するプレブナー１３である。さらに、これら２種類のプレブナー製剤は製造コストが高く、発展途上国でのそれらの利用は非常に制限される。ＰＰＶ−２３は、２３種類の、精製されているが非複合型である多糖類からなり、有効範囲が広いが、肺炎球菌疾患に対するリスクが最大の集団である２歳未満の小児に対しては防御性を発揮しない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、今もなお、現在のストラテジーが与えるものよりも有効性が高い医薬組成物を設計することが必要とされている。特に、このような組成物は、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫反応を誘発する新規または特異的抗原を組み込む必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は、特に乳幼児、高齢者または免疫機能が低下している患者において健康上の大きな懸念である。Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対するＤＮＡおよびタンパク質配列情報はしばらく前から分かっており、研究者らは、長い間、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対するワクチンの作製を試みてきたが、全年齢層で長時間持続し、かつ有効である免疫反応をどのようにして誘発するかということが大きな問題であった。本願で使用されるある一定のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗原は、最初に、無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞で免疫付与したかまたはＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）生菌を感染させたか何れかのマウス由来または健常ヒトドナー由来の免疫細胞を、Ｔ細胞特異的な免疫反応についてスクリーニングすることによって同定された。したがって、本開示は、とりわけ、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する、ある種の非常に有効なワクチンを提供する。本ワクチンは、治療的または予防的に使用され得る。本開示はまた、特異的な抗原および、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫反応を誘発するためにその抗原を使用するための方法も提供する。
【０００７】
いくつかの実施形態において、表１からの２、３、４以上のポリペプチドまたはその免疫原性断片もしくは変異体が、例えば融合タンパク質として、互いに共有結合される。
【０００８】
いくつかの実施形態において、本ワクチン製剤は、表２で示されるものなど、ＳＰ０１４８、ＳＰ２１０８およびＳＰ１９１２またはそれらの変異体の１または全てまたは断片を含む（またはそれからなる）１つまたは複数の融合タンパク質を含むかまたはそれからなる。
【０００９】
ある特定の態様において、本開示は、医薬的に許容可能な担体と、配列番号６、配列番号２もしくは配列番号９またはその免疫原性断片と少なくとも７０、８０または９０％相同であるアミノ酸配列を有する２つ以上の免疫原性ポリペプチドと、を含むかまたはそれからなる融合タンパク質と、を含むかまたはそれからなるワクチン製剤を提供する。
【００１０】
ある特定の実施形態において、本開示は、配列番号６のアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を有する第一の免疫原性ポリペプチドと、配列番号９のアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を有する第二の免疫原性ポリペプチドと、を含むかまたはそれからなる融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態において、第一の免疫原性ポリペプチドは、配列番号６のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなるかまたはそれらを含み、第二の免疫原性ポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、第一の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のアミノ末端に位置し、第二の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する。
【００１１】
いくつかの実施形態において、本融合タンパク質は、配列番号２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を有する第三の免疫原性ポリペプチドをさらに含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、第三の免疫原性ポリペプチドは、配列番号２またはその免疫原性断片からなるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、第三の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のアミノ末端に位置し、第一の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する。いくつかの実施形態において、第一の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のアミノ末端に位置し、第二の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する。いくつかの実施形態において、第三の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のアミノ末端に位置し、第二の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する。いくつかの実施形態において、第一の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のアミノ末端に位置し、第三の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する。
【００１２】
ある特定の実施形態において、本開示は、配列番号２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を有する第一の免疫原性ポリペプチドと、配列番号９のアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を有する第二の免疫原性ポリペプチドと、を含むかまたはそれからなる融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態において、第一の免疫原性ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなるかまたはそれらを含み、第二の免疫原性ポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、第一の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のアミノ末端に位置し、第二の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する。
【００１３】
さらなる実施形態において、本開示は、配列番号２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を有する第一の免疫原性ポリペプチドと、配列番号６のアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を有する第二の免疫原性ポリペプチドと、を含むかまたはそれからなる融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態において、第一の免疫原性ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなるかまたはそれらを含み、第二の免疫原性ポリペプチドは、配列番号６のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、第一の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のアミノ末端に位置し、第二の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する。いくつかの実施形態において、第二の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のアミノ末端に位置し、第一の免疫原性ポリペプチドは、本融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する。
【００１４】
いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書中に記載の１つまたは複数の融合タンパク質と、医薬的に許容可能な担体と、を含むかまたはそれからなるワクチン製剤を提供する。
【００１５】
さらなる実施形態において、本開示は、有効量の本明細書中に記載のワクチン製剤を対象に投与することを含む、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染に罹患しているかまたは罹患し易い対象を処置する方法を提供する。
本発明は、例えば、以下の項目も提供する。
（項目１）
配列番号６のアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を有する第一の免疫原性ポリペプチドと、
配列番号９のアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を有する第二の免疫原性ポリペプチドと、
を含む、融合タンパク質。
（項目２）
前記第一の免疫原性ポリペプチドが、配列番号６のアミノ酸配列またはその免疫原性断片を含み、前記第二の免疫原性ポリペプチドが、配列番号９のアミノ酸配列またはその免疫原性断片を含む、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目３）
前記第一の免疫原性ポリペプチドが、配列番号６のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目４）
前記第二の免疫原性ポリペプチドが、配列番号９のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目５）
前記第一の免疫原性ポリペプチドが、配列番号６のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなり、前記第二の免疫原性ポリペプチドが、配列番号９のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目１に記載の融合タンパク質。
（項目６）
前記第一の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のアミノ末端に位置し、前記第二の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する、項目１〜５の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目７）
前記第二の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のアミノ末端に位置し、前記第一の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する、項目１〜５の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目８）
配列番号４９のアミノ酸配列またはその免疫原性断片を含む、項目６に記載の融合タンパク質。
（項目９）
配列番号４９のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目６に記載の融合タンパク質。
（項目１０）
配列番号２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を有する第三の免疫原性ポリペプチドをさらに含む、項目１〜５の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目１１）
前記第三の免疫原性ポリペプチドが、配列番号２またはその免疫原性断片を含む、項目１０に記載の融合タンパク質。
（項目１２）
前記第三の免疫原性ポリペプチドが、配列番号２またはその免疫原性断片からなる、項目１０に記載の融合タンパク質。
（項目１３）
前記第三の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のアミノ末端に位置し、前記第一の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する、項目１０〜１２の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目１４）
配列番号５２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片を含む、項目１３に記載の融合タンパク質。
（項目１５）
配列番号５２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目１３に記載の融合タンパク質。
（項目１６）
前記第一の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のアミノ末端に位置し、前記第二の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する、項目１０〜１２の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目１７）
配列番号５３のアミノ酸配列またはその免疫原性断片を含む、項目１６に記載の融合タンパク質。
（項目１８）
配列番号５３のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目１６に記載の融合タンパク質。
（項目１９）
前記第三の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のアミノ末端に位置し、前記第二の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する、項目１０〜１２の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目２０）
配列番号５４のアミノ酸配列またはその免疫原性断片を含む、項目１９に記載の融合タンパク質。
（項目２１）
配列番号５４のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目１９に記載の融合タンパク質。
（項目２２）
前記第一の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のアミノ末端に位置し、前記第三の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する、項目１０〜１２の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目２３）
配列番号５１のアミノ酸配列またはその免疫原性断片を含む、項目２２に記載の融合タンパク質。
（項目２４）
配列番号５１のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目２２に記載の融合タンパク質。
（項目２５）
配列番号２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を有する第一の免疫原性ポリペプチドと、
配列番号９のアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を有する第二の免疫原性ポリペプチドと、
を含む融合タンパク質。
（項目２６）
前記第一の免疫原性ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片を含み、前記第二の免疫原性ポリペプチドが、配列番号９のアミノ酸配列またはその免疫原性断片を含む、項目２５に記載の融合タンパク質。
（項目２７）
前記第一の免疫原性ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目２５に記載の融合タンパク質。
（項目２８）
前記第二の免疫原性ポリペプチドが、配列番号９のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目２５に記載の融合タンパク質。
（項目２９）
前記第一の免疫原性ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなり、前記第二の免疫原性ポリペプチドが、配列番号９のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目２５に記載の融合タンパク質。
（項目３０）
前記第一の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のアミノ末端に位置し、前記第二の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する、項目２５〜２９の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目３１）
配列番号５０のアミノ酸配列を含む、項目３０に記載の融合タンパク質。
（項目３２）
配列番号５０のアミノ酸配列からなる、項目３０に記載の融合タンパク質。
（項目３３）
前記第二の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のアミノ末端に位置し、前記第一の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する、項目２５〜２９の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目３４）
配列番号２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を有する第一の免疫原性ポリペプチドと、
配列番号６のアミノ酸配列またはその免疫原性断片と少なくとも９０％相同であるアミノ酸配列を有する第二の免疫原性ポリペプチドと、
を含む融合タンパク質。
（項目３５）
前記第一の免疫原性ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片を含み、前記第二の免疫原性ポリペプチドが、配列番号６のアミノ酸配列またはその免疫原性断片を含む、項目３４に記載の融合タンパク質。
（項目３６）
前記第一の免疫原性ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目３４に記載の融合タンパク質。
（項目３７）
前記第二の免疫原性ポリペプチドが、配列番号６のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目３４に記載の融合タンパク質。
（項目３８）
前記第一の免疫原性ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなり、前記第二の免疫原性ポリペプチドが、配列番号６のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目３４に記載の融合タンパク質。
（項目３９）
前記第一の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のアミノ末端に位置し、前記第二の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する、項目３４〜３８の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目４０）
配列番号４８のアミノ酸配列またはその免疫原性断片を含む、項目３９に記載の融合タンパク質。
（項目４１）
配列番号４８のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目３９に記載の融合タンパク質。
（項目４２）
前記第二の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のアミノ末端に位置し、前記第一の免疫原性ポリペプチドが、前記融合タンパク質のカルボキシル末端に位置する、項目３４〜３８の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目４３）
配列番号４７のアミノ酸配列またはその免疫原性断片を含む、項目４２に記載の融合タンパク質。
（項目４４）
配列番号４７のアミノ酸配列またはその免疫原性断片からなる、項目４２に記載の融合タンパク質。
（項目４５）
配列番号６、２または９の免疫原性断片が、アミノ末端、カルボキシル末端または両末端の１〜２０個のアミノ酸残基を欠く配列番号６、２または９のアミノ酸配列である、項目１〜８、１０〜１３、１６、１９、２２、２５〜３０、３３〜３９または４２の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目４６）
脂質付加されている、項目１〜４５の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目４７）
ヒスチジンタグを含む、項目１〜４６の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目４８）
少なくとも２個の免疫原性ポリペプチドの間にリンカー配列を含む、項目１〜４７の何れか１項に記載の融合タンパク質。
（項目４９）
前記リンカー配列が、１〜４０個のアミノ酸を含む、項目４８に記載の融合タンパク質。
（項目５０）
前記リンカー配列が、１０〜３０個のアミノ酸を含む、項目４９に記載の融合タンパク質。
（項目５１）
前記リンカー配列が、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個のアミノ酸を含む、項目５０に記載の融合タンパク質。
（項目５２）
前記リンカー配列が、配列番号６９、７０または７１である、項目４９に記載の融合タンパク質。
（項目５３）
医薬的に許容可能な担体と、項目１〜５２の何れか１項に記載の融合タンパク質と、を含むワクチン製剤。
（項目５４）
アジュバントをさらに含む、項目５３に記載のワクチン製剤。
（項目５５）
前記アジュバントがｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のアゴニストである、項目５４に記載のワクチン製剤。
（項目５６）
前記アジュバントがミョウバンである、項目５５に記載のワクチン製剤。
（項目５７）
１〜１０００μｇの融合タンパク質の各免疫原性ポリペプチドを含み、１〜２５０μｇのアジュバントを含む、項目５６に記載のワクチン製剤。
（項目５８）
ＴＨ１７細胞を接触させた後、対照の非関連抗原により誘導されるものよりも少なくとも１．５倍大きいＴＨ１７細胞反応を誘導する、項目５３〜５７の何れか１項に記載のワクチン製剤。
（項目５９）
非感染対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染を阻害する、項目５３〜５８の何れか１項に記載のワクチン製剤。
（項目６０）
対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニー形成を阻害する、項目５３〜５９の何れか１項に記載のワクチン製剤。
（項目６１）
対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の症状を抑制する、５３〜６０の何れか１項に記載のワクチン製剤。
（項目６２）
前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）誘導性敗血症を抑制する、項目６１に記載のワクチン製剤。
（項目６３）
前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）誘導性肺炎を抑制する、項目６１に記載のワクチン製剤。
（項目６４）
前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）誘導性髄膜炎を抑制する、項目６１に記載のワクチン製剤。
（項目６５）
前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）誘導性中耳炎を抑制する、項目６１に記載のワクチン製剤。
（項目６６）
前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）誘導性副鼻腔炎を抑制する、項目６１に記載のワクチン製剤。
（項目６７）
前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）誘導性臓器障害を抑制する、項目６１に記載のワクチン製剤。
（項目６８）
Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染に罹患しているかまたは罹患し易い対象を処置する方法であって、有効量の項目５３〜６７の何れか１項に記載のワクチン製剤を前記対象に投与することを含む、方法。
（項目６９）
前記対象が非感染対象であり、前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染を抑制する、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニー形成を阻害する、項目６８に記載の方法。
（項目７１）
前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）症状を抑制する、項目６８に記載の方法。
（項目７２）
前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）誘導性敗血症を抑制する、項目６８に記載の方法。
（項目７３）
前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）誘導性肺炎を抑制する、項目６８に記載の方法。
（項目７４）
前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）誘導性髄膜炎を抑制する、項目６８に記載の方法。
（項目７５）
前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）誘導性中耳炎を抑制する、項目６８に記載の方法。
（項目７６）
前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）誘導性副鼻腔炎を抑制する、項目６８に記載の方法。
（項目７７）
前記対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）誘導性臓器障害を抑制する、項目６８に記載の方法。
（項目７８）
１回投与で前記対象を処置する、項目６８に記載の方法。
（項目７９）
３回以内の投与で前記対象を処置する、項目６８に記載の方法。
（項目８０）
前記対象がヒトである、項目６８に記載の方法。
【００１６】
本明細書中に記載の本発明の教示は、添付の図面と一緒に読んだ場合、次の様々な例示的実施形態の記載から、より詳細に理解されよう。以下に記載の図面は単に説明を目的とするものであり、何ら本発明の教示の範囲を限定するものではないことを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、実施例１に記載のとおり、指定のタンパク質およびコレラ毒素アジュバントを用いて免疫付与し、次に無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞で刺激したマウスからの血液試料によって生成されたＩＬ−１７の濃度を示す。左パネルは散布図形式でデータを示し、右パネルは各試料に対する平均および標準偏差を示す。免疫付与群「３種類全て」は、ＳＰ２１０８、ＳＰ０１４８およびＳＰ１６３４の組み合わせで免疫付与した動物を表す。
【図２】図２は、実施例１に記載のとおり、指定のタンパク質およびコレラ毒素アジュバントを用いて免疫付与し、次に３種類のタンパク質（ＳＰ２１０８、ＳＰ０１４８およびＳＰ１６３４）の組み合わせで刺激したマウスからの血液試料によって生成されたＩＬ−１７の濃度を示す。
【図３】図３は、実施例１に記載のとおり、指定のタンパク質およびコレラ毒素アジュバントを用いて免疫付与し、次にＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の鼻腔内投与により負荷試験を行ったマウスにおける鼻洗浄液から得られたＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニーの数を示す。００３は対照の非関連抗原を表す。
【図４】図４は、実施例２に記載のとおり、指定のタンパク質およびコレラ毒素アジュバントを用いて免疫付与し、次にＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の鼻腔内投与により負荷試験を行ったＢＡＬＢ／ｃマウスにおける鼻洗浄液から得られたＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニーの数を示す。
【図５】図５は、実施例３に記載のとおり、指定のタンパク質およびコレラ毒素アジュバントを用いて免疫付与し、次に免疫付与タンパク質（左パネル）または無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞（右パネル）で刺激したマウスからの血液試料によって生成されたＩＬ−１７Ａの濃度を示す。
【図６】図６は、実施例４に記載のとおり、指定のタンパク質およびコレラ毒素アジュバントを用いて免疫付与し、次にＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の鼻腔内投与により負荷試験を行ったマウスにおける鼻洗浄液から得られたＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニーの数を示す。
【図７】図７は、実施例５に記載のとおり、指定のタンパク質およびアジュバントミョウバンを用いて免疫付与し、次にＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を用いた吸引による負荷試験を行ったマウスの生存を示す。
【図８】図８は、実施例６に記載のとおり、指定のタンパク質およびアジュバントミョウバンで免疫付与し、次にＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を用いた吸引による負荷試験を行ったマウスの生存を示す。
【図９】図９は、実施例７に記載のとおり、指定のタンパク質およびコレラ毒素アジュバントを用いて免疫付与し、次にＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の鼻腔内投与により負荷試験したマウスにおける鼻洗浄液から得られたＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニーの数を示す。
【図１０】図１０は、実施例８に記載のとおり、指定のタンパク質およびミョウバンを用いて免疫付与し、次に左上で指定されるタンパク質で刺激したマウスからの血液試料によって生成されたＩＬ−１７Ａの濃度を示す。
【図１１】図１１は、実施例９に記載のとおり、指定のタンパク質およびミョウバンで、または無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞＋ミョウバン（ＷＣＶ）を用いて免疫付与し、次にＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の鼻腔内投与により負荷試験したマウスにおける鼻洗浄液から得られたＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニーの数を示す。
【図１２】図１２は、実施例１０に記載のとおり、２つの統合試験において、指定のタンパク質およびミョウバンで、または無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞＋ミョウバン（ＷＣＶ）で免疫付与し、次にＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の鼻腔内投与により負荷試験したマウスにおける鼻洗浄液から得られたＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニーの数を示す。
【図１３】図１３は、実施例１１に記載のとおり、指定のタンパク質およびミョウバンで、または無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞＋ミョウバン（ＷＣＢ）で免疫付与し、次にＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の鼻腔内投与により負荷試験したマウスにおける鼻洗浄液から得られたＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニーの数を示す。
【図１４】図１４は、実施例１２に記載のとおり、指定のタンパク質に特異的な抗体または血清を注射し、次にＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を用いた吸引による負荷試験を行ったマウスの生存を示す。
【図１５】図１５は、６回の別個の吸引による負荷試験において敗血症を免れた動物の割合を示すが、このうち２回は実施例６および１２で詳述する。
【図１６−１】図１６のパネルＡ〜Ｃは、実施例１３に記載のとおり、指定のタンパク質およびミョウバンで免疫付与し、次いで右上で示されるタンパク質で刺激したマウスからの血液試料により生成される平均ＩＬ−１７Ａ反応を示す。
【図１６−２】図１６のパネルＡ〜Ｃは、実施例１３に記載のとおり、指定のタンパク質およびミョウバンで免疫付与し、次いで右上で示されるタンパク質で刺激したマウスからの血液試料により生成される平均ＩＬ−１７Ａ反応を示す。
【図１７−１】図１７のパネルＡおよびＢは、指定の融合タンパク質およびミョウバンで、またはミョウバン単独を用いて免疫付与したマウスからの血液試料により生成されるＩＬ−１７Ａの濃度を示す。右上で示され、および実施例１４に記載のとおり、血液試料を免疫付与タンパク質または対照タンパク質で刺激した。
【図１７−２】図１７のパネルＡおよびＢは、指定の融合タンパク質およびミョウバンで、またはミョウバン単独を用いて免疫付与したマウスからの血液試料により生成されるＩＬ−１７Ａの濃度を示す。右上で示され、および実施例１４に記載のとおり、血液試料を免疫付与タンパク質または対照タンパク質で刺激した。
【図１８】図１８は、指定の融合タンパク質およびミョウバンで、またはミョウバン単独で免疫付与したマウスの脾臓細胞から得られたＩＬ−１７Ａスポット形成単位（ＳＦＵ）の数を示す。右上で示され、および実施例１５に記載のとおり、重複ペプチド（ＯＬＰ）、無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞（ＷＣＡ）または培地で脾臓細胞を刺激した。
【図１９−１】図１９のパネルＡおよびＢは、指定のタンパク質およびミョウバンで、またはミョウバン単独で、指定の用量にて免疫付与したマウスからの血液試料により生成された平均ＩＬ−１７Ａ反応を示す。左上で示され、および実施例１６に記載のとおり、重複ペプチド（ＯＬＰ）または無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞（ＷＣＡ）により血液試料を刺激した。
【図１９−２】図１９のパネルＡおよびＢは、指定のタンパク質およびミョウバンで、またはミョウバン単独で、指定の用量にて免疫付与したマウスからの血液試料により生成された平均ＩＬ−１７Ａ反応を示す。左上で示され、および実施例１６に記載のとおり、重複ペプチド（ＯＬＰ）または無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞（ＷＣＡ）により血液試料を刺激した。
【図２０】図２０は、指定のタンパク質およびミョウバンで、またはミョウバン単独で免疫付与したマウスからの血液試料により生成されるＩＬ−１７Ａの濃度を示す。実施例１７に記載のとおり、無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞で血液試料を刺激した。
【図２１−１】図２１のパネルＡ〜Ｄは、図１８に記載のとおり、指定のタンパク質およびミョウバンで、またはミョウバン単独で免疫付与し、次いでＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の鼻腔内投与により負荷試験したマウスの鼻洗浄液から得られたＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニー（ＣＦＵ）数を示す。
【図２１−２】図２１のパネルＡ〜Ｄは、図１８に記載のとおり、指定のタンパク質およびミョウバンで、またはミョウバン単独で免疫付与し、次いでＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の鼻腔内投与により負荷試験したマウスの鼻洗浄液から得られたＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニー（ＣＦＵ）数を示す。
【図２１−３】図２１のパネルＡ〜Ｄは、図１８に記載のとおり、指定のタンパク質およびミョウバンで、またはミョウバン単独で免疫付与し、次いでＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の鼻腔内投与により負荷試験したマウスの鼻洗浄液から得られたＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニー（ＣＦＵ）数を示す。
【図２１−４】図２１のパネルＡ〜Ｄは、図１８に記載のとおり、指定のタンパク質およびミョウバンで、またはミョウバン単独で免疫付与し、次いでＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の鼻腔内投与により負荷試験したマウスの鼻洗浄液から得られたＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニー（ＣＦＵ）数を示す。
【図２２−１】図２２のパネルＡおよびＢは、タンパク質およびミョウバン無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞およびミョウバン（ＷＣＢ）の指定の組み合わせ、またはミョウバン単独で免疫付与したマウスからの血液試料により生成されるＩＬ−１７Ａの濃度を示す。上記の各グラフで示され、および実施例２０に記載のとおり、血液試料を重複ペプチド（ＯＬＰ）または無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞（ＷＣＡ）で刺激した。
【図２２−２】図２２のパネルＡおよびＢは、タンパク質およびミョウバン無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞およびミョウバン（ＷＣＢ）の指定の組み合わせ、またはミョウバン単独で免疫付与したマウスからの血液試料により生成されるＩＬ−１７Ａの濃度を示す。上記の各グラフで示され、および実施例２０に記載のとおり、血液試料を重複ペプチド（ＯＬＰ）または無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞（ＷＣＡ）で刺激した。
【図２３−１】図２３のパネルＡおよびＢは、実施例２１に記載のとおり、タンパク質およびミョウバン、無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞およびミョウバン（ＷＣＢ）の指定の組み合わせ、またはミョウバン単独で免疫付与し、次いでＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の鼻腔内投与により負荷試験したマウスの鼻洗浄液から得られたＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニー（ＣＦＵ）数を示す。
【図２３−２】図２３のパネルＡおよびＢは、実施例２１に記載のとおり、タンパク質およびミョウバン、無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞およびミョウバン（ＷＣＢ）の指定の組み合わせ、またはミョウバン単独で免疫付与し、次いでＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の鼻腔内投与により負荷試験したマウスの鼻洗浄液から得られたＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニー（ＣＦＵ）数を示す。
【図２４−１】図２４のパネルＡおよびＢは、実施例２２に記載のとおり、タンパク質およびミョウバンの指定の組み合わせまたはミョウバン単独で免疫付与し、次いでＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の静脈内投与により負荷試験したマウスに対する瀕死になるまでの時間を示す。
【図２４−２】図２４のパネルＡおよびＢは、実施例２２に記載のとおり、タンパク質およびミョウバンの指定の組み合わせまたはミョウバン単独で免疫付与し、次いでＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の静脈内投与により負荷試験したマウスに対する瀕死になるまでの時間を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本明細書中で言及される刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は全て、それらの全体において参照により組み込まれる。さらに、材料、方法および実施例は単なる例示であり、限定するものではない。別段の断りがない限り、本明細書中で使用される技術および科学用語は全て、本発明が属する技術分野の熟練者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中に記載のものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施または試験において使用し得るもの、適切な方法および材料が本明細書中で記載される。
【００１９】
Ａ．融合タンパク質
本願は、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）融合タンパク質を記載する。本融合タンパク質は、Ｔ細胞反応を誘発する（例えば、主に誘発する）、またはＴ細胞およびＢ細胞反応の両方を誘発する、１つまたは２つ以上のポリペプチドを含む。ある特定の実施形態において、本融合タンパク質は、表１で列挙される１つまたは２つ以上のポリペプチドまたは遺伝子を含む。いくつかの実施形態において、本融合タンパク質は、表１で列挙されるポリペプチドまたは遺伝子のうち２つを含む。いくつかの実施形態において、本融合タンパク質は、表１で列挙されるポリペプチドまたは遺伝子のうち３つを含む。
【００２０】
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、表１で示される配列番号１〜１１またはその免疫原性断片を含むアミノ酸配列を有する２つ以上の免疫原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、表１で示される配列番号１〜１１またはその免疫原性断片を含むアミノ酸配列を有する２つの免疫原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、表１で示される配列番号１〜１１またはその免疫原性断片を含むアミノ酸配列を有する３個の免疫原性ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの免疫原性ポリペプチドは、ＳＰ２１０８（配列番号６）である。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの免疫原性ポリペプチドは、ＳＰ０１４８（配列番号２）である。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの免疫原性ポリペプチドは、ＳＰ１９１２（配列番号９）である。
【００２１】
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、表１で列挙されるポリペプチド（例えば、ＳＰ１９１２、ＳＰ１９１２Ｌ、シグナル配列があるかもしくはないＳＰ０１４８またはシグナル配列があるかもしくはないＳＰ２１０８）と相同である１つまたは複数のポリペプチドを含む。Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の個々の株は、互いに関連する多くの突然変異を含有し、これらのうちいくつかの結果、異なる株の間で異なるタンパク質配列が生じる。当業者は、アミノ酸配列またはその一部を異なるＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株由来の相同アミノ酸配列で容易に置換し得る。ある特定の態様において、本願は、表１で列挙されるポリペプチドまたはその免疫原性断片と少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または９９．５％の同一性がある免疫原性ポリペプチドを提供する。表１で列挙されるポリペプチドのこのような変異体を設計するために血清型のバリエーションが使用され得る。
【００２２】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の融合タンパク質は、表１で列挙される免疫原性ペプチド（例えばＳＰ１９１２、ＳＰ１９１２Ｌ、シグナル配列があるかまたはないＳＰ０１４８、シグナル配列があるかまたはないＳＰ２１０８の断片）の２つ以上の断片を含む。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の融合タンパク質は、表１で列挙されるポリペプチドと大きさが近い短縮化突然変異体を含む。例えば、これらは、一方または両方の末端部から、最大１、２、３、４、５、１０または２０個のアミノ酸を欠き得る（融合タンパク質における成分ポリペプチドを指す）。ある特定の実施形態において、断片は、配列番号１〜１１の何れか１つのＮ末端、Ｃ末端または両末端において１〜５、１〜１０または１〜２０個のアミノ酸残基を欠く、配列番号１〜１１の何れかの短縮化断片である。ある特定の実施形態において、断片は、配列番号１〜１１の何れか１つのＮ末端、Ｃ末端または両末端において１〜１０個のアミノ酸残基を欠く、配列番号１〜１１の何れかの短縮化断片である。例えば、断片は、配列番号１〜１１の何れか１つのＮ末端およびＣ末端の両末端で１０個のアミノ酸残基を欠き得、その結果、２０個のアミノ酸残基を欠くタンパク質となる。例えば１〜１０、１１〜２０、２１〜３０または３１〜４０個のアミノ酸の内部欠失も企図される。
【００２３】
【表１】
0006379041.tif 000002
【００２４】
【表２】
0006379041.tif 000003
【００２５】
融合タンパク質の特定の例を表２で提供する。
【００２６】
【表３】
0006379041.tif 000004
【００２７】
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、Ｎ末端ポリペプチドおよびＣ末端ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、Ｎ末端ポリペプチドおよびＣ末端ポリペプチドの一方または両方が、免疫原性ポリペプチド、例えば配列番号１〜１１のうち１つまたはその免疫原性断片もしくは変異体を含むアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、Ｎ末端ポリペプチドおよびＣ末端ポリペプチドは、互いに直接結合される。いくつかの実施形態において、Ｎ末端ポリペプチドおよびＣ末端ポリペプチドは、リンカーペプチドを介して連結される。存在する場合、リンカーの長さおよび／またはアミノ酸は、より柔軟または強固なリンカーを得るために調整され得る。代表的なペプチドリンカーは、配列番号６９〜７１として示される。リンカーは、一般的に１〜４０、例えば１０〜３０などおよび具体的には１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０アミノ酸長であり得る。
【００２９】
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、表２で示される融合タンパク質の免疫原性断片を含む。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、配列番号４７〜５４の何れかの免疫原性断片であるかまたはそれを含む。例えば、融合タンパク質は、配列番号４７〜５４のうち何れか１つのＮ末端、Ｃ末端または両末端から、最大１、２、３、４、５、１０または２０個のアミノ酸を欠き得る。いくつかのこのような実施形態において、Ｎ末端およびＣ末端から同数の残基が除去され、一方、他の実施形態において、Ｃ末端と比べて異なる数の残基がＮ末端から除去される。有利に、いくつかの実施形態において、Ｎ末端ポリペプチドは、脂質付加を妨げないよう、短縮されない。
【００３０】
ある特定の態様において、本願は、表２で列挙される融合タンパク質と少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または９９．５％の配列同一性がある融合タンパク質を提供する。ある特定の実施形態において、融合タンパク質は、配列番号４７〜５４のうち何れか１つと少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または９９．５％の同一性を有するアミノ酸配列であるかまたはそれを含む。
【００３１】
いくつかの実施形態において、本融合タンパク質は、表１で列挙されるポリペプチドまたは遺伝子の変異体または断片を含む。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の融合タンパク質中に含まれる断片は、全長ポリペプチドまたは表１で列挙されるポリペプチドとサイズが近い。例えば、これらは、一方または両末端から最大１、２、３、４、５、１０、２０または３０個のアミノ酸を欠き得る。ある特定の実施形態において、この断片は、１００〜５００アミノ酸長または１５０〜４５０または２００〜４００または２５０〜３５０アミノ酸長である。いくつかの実施形態において、この断片は、１００〜２００、１５０〜２５０、２００〜３００、２５０〜３５０、３００〜４００、３５０〜４５０または４００〜５００アミノ酸長である。ある特定の実施形態において、この断片は、発現宿主、例えばＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、昆虫細胞株（例えばバキュロウイルス発現系）または哺乳動物（例えば、ヒトまたはチャイニーズハムスター卵巣）細胞株によるシグナル配列のプロセシングまたは部分的プロセシングの結果生じる。上記の断片またはそのサブ断片（例えば８〜５０、８〜３０または８〜２０個のアミノ酸残基の断片）は、好ましくは、下記の生物学的活性の１つ、例えばＩＬ−１７放出量の少なくとも１．５倍または２倍以上の増加（例えば、絶対的目安として、または免疫学的に不活性であるタンパク質に対する相対的なもの何れか）などを有する。
【００３２】
ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＴＩＧＲ４ゲノムにおいて、公開されているデータベース、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ（ワールドワイドウェブ上のＮＣＢＩ  ＮＩＨウェブサイト上、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｉｔｅｓ／ｅｎｔｒｅｚ？ｄｂ＝ｇｅｎｅ）においてローカスタグを検索することによって各遺伝子およびポリペプチドのＤＮＡおよびタンパク質配列が見出され得、指定される配列も本願に含まれる。
【００３３】
表１のある一定のポリペプチドおよびその変異体を以下で詳細に記載する。
【００３４】
１．ＳＰ０１４８（配列番号２）およびその変異体
タンパク質ＳＰ０１４８は、「ＡＢＣトランスポーター、基質結合タンパク質」と呼ばれる。このクラスのタンパク質は、一般に、膜貫通タンパク質複合体と一過性に相互作用する細胞外タンパク質である。このような複合体は、細胞膜を横切って特異的な基質を移動させるために、ＡＴＰ加水分解によって生じるエネルギーを使用する。ＳＰ０１４８は、膜結合型輸送複合体に特有である、アミノ酸４０〜２４６にわたる保存されたＰＢＰｂ（ペリプラズム結合タンパク質）ドメインを含有する２７６または２７７（分離株に依存）のアミノ酸タンパク質である。さらに、ＳＰ０１４８は、大部分がＰＢＰｂドメインと同一の広がりを有し、アミノ酸４０〜２４４に広がる、細菌性細胞外溶質結合タンパク質ファミリー３ドメインを有する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、前記のドメインおよびモチーフの１つまたは複数を含むかまたは欠くＳＰ０１４８の短縮化突然変異体を含む。
【００３５】
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＳＰ０１４８から選択される少なくとも２０個の連続アミノ酸残基を含有するポリペプチドを含む。本ポリペプチドはまた、少なくとも２０残基の断片の変異体でもあり得る。ある特定の実施形態において、本ポリペプチドは、ＳＰ０１４８からの、２５０、２２５、２００、１７５、１５０、１２５または１００個以下の連続アミノ酸を含む。
【００３６】
内因性ＳＰ０１４８は、その分泌および潜在的な脂質付加を支配するシグナル配列を含む。いくつかの実施形態において、配列番号２のポリペプチドのシグナル配列は、発現宿主、例えばＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）によって部分的にまたは完全にプロセシングされる。いくつかの実施形態において、シグナル配列（配列番号１）を欠くＳＰ０１４８の変異体が使用される。配列番号１のポリペプチドは、配列番号３７の核酸によりコードされるが、他の核酸配列（コドン最適化配列を含む）も使用され得る。配列番号３８は、本明細書中でのスクリーニングにおいて使用されるＳＰ０１４８の全長配列をコードする。
【００３７】
ＳＰ０１４８のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列の変異体は、米国特許出願公開第２００５／００２０８１３号明細書、米国特許第７，３７８，５１４号明細書および同第７，５０４，１１０号明細書および欧州特許出願第ＥＰ１５７２８６８号明細書および同第ＥＰ１８５５７１７号明細書で見出され得る。
【００３８】
異なるＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型由来のＳＰ０１４８配列の組み合わせを示すコンセンサス配列を配列番号３および４として提供する。したがって、ある特定の実施形態において、融合タンパク質は、配列番号３〜４の何れかまたはその免疫原性断片を含むかまたはそれからなるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む（例えば配列番号１または２のうち１つを含むアミノ酸配列を有するポリペプチドの代わり）。
【００３９】
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＳＰ０１４８の免疫原性断片を含むかまたはそれからなる。ＳＰ０１４８の代表的な免疫原性断片としては、ＡＬＧＬＶＡＡＧＶ（配列番号７４）、ＥＬＴＧＹＥＩＥＶ（配列番号７５）、ＡＶＮＮＬＳＹＴＫ（配列番号７６）、ＴＹＬＰＡＥＡＤＩ（配列番号７７）、ＲＹＮＭＡＶＮＮＬ（配列番号７８）、ＤＦＱＱＩＭＶＲＬ（配列番号７９）、ＥＨＴＤＮＰＴＩＬ（配列番号８０）、ＡＰＩＡＱＮＰＮＶ（配列番号８１）、ＬＰＳＤＱＱＰＹＶ（配列番号８２）、ＹＶＹＰＬＬＡＱＧ（配列番号８３）、ＱＧＬＤＮＬＫＶＩ（配列番号８４）、ＫＹＬＹＡＡＰＩ（配列番号８５）、ＧＥＬＴＧＹＥＩ（配列番号８６）、ＮＰＮＶＬＶＶＫＫ（配列番号８７）、ＫＬＳＫＱＦＦＧＤ（配列番号８８）、ＧＳＰＲＰＦＩＹＥ（配列番号８９）、ＡＶＮＮＬＳＹＴＫ（配列番号９０）、ＫＩＦＤＫＩＧＶＥ（配列番号９１）、ＭＶＲＬＳＤＧＱＦ（配列番号９２）、ＹＶＹＰＬＬＡＱＧ（配列番号９３）、ＶＶＱＡＴＴＳＡＫ（配列番号９４）、ＴＬＥＫＬＳＫＱＦ（配列番号９５）、ＶＡＡＧＶＬＡＡＣ（配列番号９６）、ＬＤＮＬＫＶＩＥＬ（配列番号９７）およびＮＭＡＶＮＮＬＳＹ（配列番号９８）が挙げられる。
【００４０】
２．ＳＰ２１０８（配列番号６）およびその変異体
ポリペプチドＳＰ２１０８は、４２３アミノ酸長であり、あるいはＭａｌＸ、マルトース／マルトデキストリンＡＢＣトランスポーターまたはマルトース／マルトデキストリン結合タンパク質として知られる。このタンパク質の殆ど（アミノ酸３〜４２３）はＭａｌＥ（マルトース結合ペリプラズム）ドメインに分類される。さらに、ＳＰ２１０８は、その分泌および潜在的な脂質付加を支配するシグナル配列を含有する。いくつかの実施形態において、配列番号６のポリペプチドのシグナル配列は、発現宿主、例えばＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）によって部分的または完全にプロセシングされる。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、前記のドメインおよびモチーフの１つまたは複数を含むＳＰ２１０８の短縮化突然変異体を含む。
【００４１】
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、シグナル配列を欠くＳＰ２１０８変異体を含む。この変異体は、ポリペプチド配列の配列番号５により表され、例えば配列番号３９による核酸によりコードされ得るが、遺伝子コードの縮重のため、他のＤＮＡ配列（コドン最適化配列を含む）が使用され得る。
【００４２】
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＳＰ２１０８から選択される少なくとも２０個の連続アミノ酸残基を含有するポリペプチドを含む。本ポリペプチドはまた、少なくとも２０残基断片の変異体でもあり得る。ある特定の実施形態において、本ポリペプチドは、ＳＰ２１０８からの４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０または１００個以下の連続アミノ酸を含む。
【００４３】
異なる血清型由来のＳＰ２１０８配列の組み合わせを示すコンセンサス配列を配列番号７および８として提供する。したがって、ある特定の実施形態において、融合タンパク質は、配列番号７〜８の何れかまたはその免疫原性断片を含むかまたはそれからなるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含有する（例えば配列番号５または６のうち１つを含むアミノ酸配列を有するポリペプチドの代わり）。
【００４４】
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＳＰ２１０８の免疫原性断片を含むかまたはそれからなる。代表的なＳＰ２１０８の免疫原性断片としては、ＡＩＩＤＧＰＷＫＡ（配列番号９９）、ＶＭＭＡＰＹＤＲＶ（配列番号１００）、ＳＩＡＧＩＮＹＡＫ（配列番号１０１）、ＶＷＤＰＡＫＮＭＬ（配列番号１０２）、ＱＰＬＰＮＩＳＱＭ（配列番号１０３）、ＡＰＹＤＲＶＧＳＬ（配列番号１０４）、ＡＰＡＶＩＥＳＬＶ（配列番号１０５）、ＦＹＹＴＹＧＬＬＡ（配列番号１０６）、ＳＫＹＡＦＡＧＥ（配列番号１０７）、ＴＥＧＡＧＮＬＩ（配列番号１０８）、ＬＡＤＷＴＮＦＹＹ（配列番号１０９）、ＳＬＶＭＹＹＮＫＤ（配列番号１１０）、ＫＥＡＧＶＫＶＴＬ（配列番号１１１）、ＫＳＴＡＶＬＧＴＶ（配列番号１１２）、ＧＡＫＴＤＤＴＴＫ（配列番号１１３）、ＳＱＫＦＶＤＦＬＶ（配列番号１１４）、ＱＡＦＫＤＡＫＶＮ（配列番号１１５）、ＡＶＩＥＳＬＶＭＹ（配列番号１１６）、ＤＡＫＴＡＡＮＤＡ（配列番号１１７）、ＹＧＶＡＴＩＰＴＬ（配列番号１１８）、ＫＴＡＡＩＩＤＧＰ（配列番号１１９）、ＫＡＹＥＫＥＡＧＶ（配列番号１２０）、ＡＧＮＧＡＹＶＦＧ（配列番号１２１）およびＡＷＶＩＰＱＡＶＫ（配列番号１２２）が挙げられる。
【００４５】
３．ＳＰ１９１２（配列番号９）およびその変異体
ＳＰ１９１２は、９９アミノ酸の仮想タンパク質である。このタンパク質の機能は明確には分かっていないが、配列分析から、これが推定チオレドキシンであることが示唆される。
【００４６】
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＳＰ１９１２から選択される少なくとも２０個の連続アミノ酸残基を含有するポリペプチドを含む。本ポリペプチドはまた、少なくとも２０残基断片の変異体でもあり得る。ある特定の実施形態において、本ポリペプチドは、ＳＰ１９１２からの９０、７５、６０、４５または３０個以下の連続アミノ酸を含む。
【００４７】
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、外因性脂質付加配列を含むＳＰ１９１２変異体を含む。いくつかの実施形態において、シグナル配列は、脂質付加を支配する。したがって、脂質付加シグナルは、例えばＳＰ２１０８（配列番号６７）またはＳＰ０１４８のシグナル配列またはＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）シグナル配列であり得る。Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）遺伝子ＲｌｐＢ（配列番号６８）のシグナル配列を含む代表的な変異ＳＰ１９１２Ｌは、ポリペプチド配列の配列番号１０により表される。ＳＰ１９１２（配列番号９）およびＳＰ１９１２Ｌ（配列番号１０）は、それぞれ、配列番号４０および４１による核酸によってコードされ得るもの、遺伝子コードの縮重のため、他のＤＮＡ配列（コドン最適化配列を含む）が使用され得る。いくつかの実施形態において、脂質付加配列は、ＳＰ２１０８（配列番号６）またはＳＰ０１４８（配列番号２）などの全長ポリペプチドをＳＰ１９１２と融合させることによって提供される。代表的な融合物は配列番号４９〜５４である。
【００４８】
異なる血清型由来のＳＰ１９１２配列の組み合わせを示すコンセンサス配列を配列番号１１として提供する。したがって、ある特定の実施形態において、製剤融合タンパク質は、配列番号１１またはその免疫原性断片を含むかまたはそれからなるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む（例えば、配列番号９を含むアミノ酸配列を有するポリペプチドの代わり）。
【００４９】
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ＳＰ１９１２の免疫原性断片を含むかまたはそれからなる。代表的なＳＰ１９１２の免疫原性断片としては、ＫＭＷＭＡＧＬＡＬＬＧＩＧＳＬ（配列番号１２３）、ＬＬＧＩＧＳＬＡＬＡＴＫＫＶＡ（配列番号１２４）、ＭＡＧＬＡＬＬＧＩＧＳＬＡＬＡ（配列番号１２５）、ＷＭＡＧＬＡＬＬＧＩＧＳＬＡＬ（配列番号１２６）、ＧＬＡＬＬＧＩＧＳＬＡＬＡＴＫ（配列番号１２７）、ＬＡＬＬＧＩＧＳＬＡＬＡＴＫＫ（配列番号１２８）、ＦＳＤＭＧＥＩＡＴＬＹＶＱＶＹ（配列番号１２９）、ＫＡＫＫＭＷＭＡＧＬＡＬＬＧＩ（配列番号１３０）、ＡＬＬＧＩＧＳＬＡＬＡＴＫＫＶＡＫＫＭＷＭＡＧＬＡＬＬＧＩＧ（配列番号１３１）、ＳＤＭＧＥＩＡＴＬＹＶＱＶＹＥ（配列番号１３２）、ＤＭＧＥＩＡＴＬＹＶＱＶＹＥＳ（配列番号１３３）、ＡＧＬＡＬＬＧＩＧＳＬＡＬＡＴ（配列番号１３４）、ＭＧＥＩＡＴＬＹＶＱＶＹＥＳＳ（配列番号１３５）、ＫＫＭＷＭＡＧＬＡＬＬＧＩＧＳ（配列番号１３６）、ＧＭＫＡＫＫＭＷＭＡＧＬＡＬＬ（配列番号１３７）、ＭＫＡＫＫＭＷＭＡＧＬＡＬＬＧ（配列番号１３８）、ＨＦＳＤＭＧＥＩＡＴＬＹＶＱＶ（配列番号１３９）、ＭＮＧＭＫＡＫＫＭＷＭＡＧＬＡ（配列番号１４０）、ＭＷＭＡＧＬＡＬＬＧＩＧＳＬＡ（配列番号１４１）、ＤＨＦＳＤＭＧＥＩＡＴＬＹＶＱ（配列番号１４２）、ＲＤＨＦＳＤＭＧＥＩＡＴＬＹＶ（配列番号１４３）およびＮＧＭＫＡＫＫＭＷＭＡＧＬＡＬ（配列番号１４４）が挙げられる。
【００５０】
４．脂質付加ポリペプチド
ある特定の実施形態において、本明細書中に記載の融合タンパク質は、少なくとも１つの脂質付加ポリペプチドを含有する。いくつかの実施形態において、本融合タンパク質は脂質付加される。ある特定の実施形態において、本融合タンパク質は、Ｎ末端ペプチドにおいて脂質付加される。脂質部分への複合体化は、直接的または（例えばリンカーを介して）間接的であり得る。この脂質部分は、合成または天然で産生され得る。ある特定の実施形態において、表１または２からのポリペプチドは、脂質部分に化学的に複合体化され得る。ある特定の実施形態において、コンストラクトは、表１または２からの遺伝子もしくはポリペプチドまたはその免疫原性断片もしくは変異体および、リポボックスモチーフを含む脂質付加配列を含み得る。カノニカルなリポボックスモチーフは配列番号６６として示す。脂質付加配列は、タンパク質に対してＮ末端またはＣ末端であり得、シグナルまたは他の配列において、または融合タンパク質において埋め込まれ得る。代表的な脂質付加配列としては、ＳＰ２１０８のシグナル配列（配列番号６７）およびＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）遺伝子ＲｌｐＢのシグナル配列（配列番号６８）が挙げられる。シグナル配列は、例えば、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）またはＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）シグナル配列であり得る。代表的なＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）シグナル配列としては、ｍｌｐＡシグナル配列（Ｌｉｎ，Ｊ．Ｊ．ら、“Ａｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ｍｕｔａｎｔ  ｗｉｔｈ  ａｎ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  ｓｉｇｎａｌ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｏｕｔｅｒ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ”Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１９７８  Ｏｃｔ；７５（１０）：４８９１−５）、ｌａｍＢシグナル配列（Ｅｍｒ，Ｓ．Ｄ．ら、“Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ａｌｔｅｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｈａｇｅ  ｌａｍｂｄａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ａｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ｏｕｔｅｒ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ”，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１９７８  Ｄｅｃ；７５（１２）：５８０２−６）またはＭＢＰシグナル配列（Ｂａｓｓｆｏｒｄ，Ｐ．Ｊ．，“Ｕｓｅ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｆｕｓｉｏｎ  ｔｏ  ｓｔｕｄｙ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍａｌｔｏｓｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｏ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ｐｅｒｉｐｌａｓｍ”Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１９７９  Ｊｕｌ；１３９（１）：１９−３１）が挙げられる。Ｌｐｐは、脂質付加を支配する代表的なＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）シグナル配列である（Ｃｕｌｌｅｎ，Ｐ．Ａ．ら、“Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｐｌａｓｍｉｄ  ｖｅｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ”Ｐｌａｓｍｉｄ．２００３  Ｊａｎ；４９（１）：１８−２９）。脂質付加を支配するＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）シグナル配列はまた、Ｌｅｇｒａｉｎ．Ｍ．ら（“Ｐｒｏｄｕｃｔ��ｏｎ  ｏｆ  ｌｉｐｉｄａｔｅｄ  ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ”Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ  Ｐｕｒｉｆ．１９９５  Ｏｃｔ；６（５）：５７０−８）においても記載されており、例えば遺伝子ＲｌｐＢ（配列番号６８）のシグナル配列である。多くのＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）シグナル配列が当技術分野で公知である。あるこのようなシグナル配列は配列番号６７である。
【００５１】
５．タグ付加ポリペプチド
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の融合タンパク質に含まれる１つまたは複数のポリペプチドは、タグを含み得る。タグは、Ｎ末端またはＣ末端であり得る。例えば、タグは、精製、検出、溶解度を向上させるか、またはタンパク質または核酸における他の所望の特徴を付与するために、核酸またはポリペプチドに付加され得る。例えば、精製タグは、アフィニティー精製において使用され得るペプチド、オリゴペプチドまたはポリペプチドであり得る。例としては、Ｈｉｓ、ＧＳＴ、ＴＡＰ、ＦＬＡＧ、ｍｙｃ、ＨＡ、ＭＢＰ、ＶＳＶ−Ｇ、チオレドキシン、Ｖ５、アビジン、ストレプトアビジン、ＢＣＣＰ、カルモジュリン、Ｎｕｓ、Ｓタグ、リポタンパク質Ｄおよびβガラクトシダーゼが挙げられる。特定の代表的なＨｉｓタグとしては、ＨＨＨＨＨＨ（配列番号６４）およびＭＳＹＹＨＨＨＨＨＨ（配列番号６５）が挙げられる。他の実施形態において、本ポリペプチドは、タンパク質精製タグなどのタグを含まず、精製タグに対する親和性に依存しない方法によって精製される。いくつかの実施形態において、本融合タンパク質は短い。これは、一部の例において、本融合タンパク質は、表１または２のポリペプチドの一方または両末端で１、２、３、４、５、１０または２０個以下のさらなるアミノ酸を含む。
【００５２】
Ｂ．核酸
ある特定の実施形態において、本願は、本明細書中に記載のポリペプチドおよび／または融合タンパク質のうち１つまたは複数をコードする核酸、例えばＤＮＡ、ＲＮＡまたはそれらの類似体などを提供する。上記のポリペプチドに対する基礎となるＤＮＡ配列は、タンパク質産物の配列に影響を与えないようにして修飾され得、このような配列は本発明に含まれる。例えば、このＤＮＡ配列は、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、昆虫細胞株（例えば、バキュロウイルス発現系を用いて）または哺乳動物（例えば、ヒトまたはチャイニーズハムスター卵巣）細胞株などの宿主における発現を向上させるためにコドン最適化され得る。
【００５３】
ある特定の実施形態において、本願は、表１または２のポリヌクレオチド配列と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるポリヌクレオチド（ＤＮＡ、ＲＮＡまたはそれらの類似体など）または上記配列の変異体もしくは一部を提供する。ある特定の実施形態において、本ポリヌクレオチドは、６００〜２０００、８００〜１８００、１０００〜１６００、１２００〜１４００ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、本ポリヌクレオチドは、６００〜１６００、８００〜１８００、１０００〜２０００、２０００〜３０００または３０００〜４０００ヌクレオチド長である。例えば表１のポリペプチドまたは表２の融合タンパク質またはその免疫原性断片の組み換え産生のために、これらの核酸が使用され得る。
【００５４】
様々な制御エレメントの調節下で様々な発現ベクターの何れかに表１もしくは２のペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドをクローニングし得、表１もしくは２の他のペプチドまたは関心対象の他の配列を用いて融合物を作製し得る。核酸をクローニングする方法は、当技術分野において日常的であり、従来からのものである。核酸および／またはタンパク質を、例えば、単離する、クローニングする、修飾する、標識する、操作する、配列決定するおよび他に処置するかまたは分析することにおいて本願で言及される分子生物学の方法を記載する一般的な参考のために、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．Ｃｏｌｄ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら（１９９５）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎ．Ｙ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ；Ｄａｖｉｓら（１９８６）、Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｈａｍｅｓら（１９８５），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ＩＬ  Ｐｒｅｓｓ；Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ，Ｎ．Ｃ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．；およびＣｏｌｉｇａｎ，Ｊ．Ｅ．，ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．を参照のこと。
【００５５】
Ｃ．免疫原性組成物
本開示はまた、１つまたは複数の本明細書中に記載の融合タンパク質の、またはこれを含む、免疫原性組成物（例えばワクチン組成物）も提供する。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、医薬的に許容可能な担体をさらに含む。無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞を用いて免疫付与したかまたはＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）生菌を感染させたかの何れかのマウスからの、またはＴ細胞特異的な免疫反応を誘発する健常なヒトドナーからの免疫細胞をスクリーニングすることによって、本明細書中に記載のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗原を同定した。Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は非常に一般的な疾患およびコロニー形成病原体であるため、ヒトドナーはその一生のうちある時点でＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）におそらく確実に曝露されている。したがって、本開示は、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染に対抗するための、免疫付与もしくは感染マウスまたはヒトにおいて全年齢層で長時間にわたり強力な免疫反応を誘発するＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗原を含む融合タンパク質の免疫原性組成物を企図する。
【００５６】
ある特定の実施形態において、本明細書中に記載の免疫原性組成物（例えばワクチン組成物）は、ＴＨ１７細胞を接触させた後、対照の非関連抗原（遺伝子名ＵＳ１２のＨＳＶ−２タンパク質ＩＣＰ４７など）により誘導されるものよりも少なくとも１．５倍大きいＴＨ１７細胞反応を誘導する。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の免疫原性組成物は、非感染対象においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染を抑制する。ある特定の実施形態において、本明細書中に記載の免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）がコロニー形成するかまたは感染した個体においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）鼻咽頭コロニー形成の発生頻度を減少させるかまたは持続時間を短縮する。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）が感染した個体において敗血症の発現を抑制する。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の免疫原性組成物は、侵襲性疾患、例えば肺炎、髄膜炎、中耳炎、副鼻腔炎またはＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による他の部位もしくは臓器の感染などの発生を抑制する。
【００５７】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の免疫原性組成物はまた、融合タンパク質、例えば欠失突然変異体、短縮化突然変異体、オリゴヌクレオチドおよびペプチド断片を含め、前記の連鎖球菌ポリペプチドの一部も含み得る。いくつかの実施形態において、前記のポリペプチドの一部は免疫原性である。タンパク質の一部の免疫原性は、全長タンパク質の免疫原性を測定するために使用されるものと同じアッセイを使用して、容易に測定される。いくつかの実施形態において、本ポリペプチドの一部は、全長タンパク質と実質的に同じ免疫原性を有する。いくつかの実施形態において、この免疫原性は、全長タンパク質（例えば表１、２および３のポリペプチド）の免疫原性よりも、１０％、２０％、３０％、４０％または５０％以下だけ低い。ペプチド断片は、例えば、直鎖状、環状または分岐状であり得る。
【００５８】
一般的には、本明細書中に記載のポリペプチドおよび融合タンパク質およびその断片および変異体は免疫原性である。これらのポリペプチドは、哺乳動物、例えばマウス、モルモットまたはヒトにおいて免疫原性であり得る。免疫原性ポリペプチドは、一般に、アッセイにおいて、または対象において顕著な免疫反応を生じさせることが可能なものである。免疫反応は、自然、液性、細胞介在性または粘膜性（自然、液性および細胞介在性免疫の結合要素）であり得る。例えば、免疫原性ポリペプチドは、Ｔ細胞により産生されるＩＬ−１７の量を増加させ得る。あるいは、またはさらに、免疫原性ポリペプチドは、（ｉ）ポリペプチドおよび／または細菌全体に結合する抗体、例えば中和抗体の産生を誘導し得、（ｉｉ）ＴＨ１７免疫を誘導し得、（ｉｉｉ）例えばＣＤ４＋Ｔ細胞を増加させ、および／または感染もしくは再感染部位へのＣＤ４＋Ｔ細胞の局在化を増進させることによって、ＣＤ４＋Ｔ細胞反応を活性化し得、（ｉｖ）例えばＣＤ８＋Ｔ細胞を増加させ、および／または感染または再感染の部位へのＣＤ８＋Ｔ細胞の局在化を増進させることによって、ＣＤ８＋ＣＴＬ反応を活性化し得、（ｖ）ＴＨ１免疫を誘導し得、（ｖｉ）抗微生物ペプチドを誘導し得、および／または（ｖｉｉ）自然免疫を活性化し得る。いくつかの実施形態において、免疫原性ポリペプチドは、検出可能量の、その抗原に特異的な抗体の産生を引き起こす。
【００５９】
ある特定の実施形態において、本明細書中に記載のポリペプチドは、ヒト自己抗原および／または腸内共生細菌（例えば、特定のバクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、フゾバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ユーバクテリウム属（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ルミノコッカス属（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、ペプトコッカス属（Ｐｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ペプトストレプトコッカス属（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、大腸菌属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）およびラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）の種）と、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％または７０％未満の同一性を有する。ヒト自己抗原の例としては、インスリン、増殖細胞核抗原、シトクロムＰ４５０およびミエリン塩基性タンパク質が挙げられる。
【００６０】
本明細書中に記載のポリペプチド（例えば本明細書中に記載の融合タンパク質に含まれるポリペプチド）は、１つまたは複数の免疫原性部分および１つまたは複数の非免疫原性部分を含み得る。免疫原性部分は、対象となるポリペプチドの様々な欠失突然変異体（例えば断片）に対する、タンパク質マイクロアレイ、ＥＬＩＳＰＯＴ／ＥＬＩＳＡ技術および／または特異的なアッセイを含む様々な方法によって同定され得る。免疫原性部分はまた、コンピューターアルゴリズムによっても同定され得る。ＥｐｉＭａｔｒｉｘ（ＥｐｉＶａｘ製造）などの一部のこのようなアルゴリズムは、計算マトリクスのアプローチを用いる。抗原エピトープを同定するための他の計算ツールとしては、ＰＥＰＶＡＣ（Ｐｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ  ＥＰｉｔｏｐｅ−ｂａｓｅｄ  ＶＡＣｃｉｎｅ、ｉｍｍｕｎａｘ．ｄｆｃｉ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＰＥＰＶＡＣにおいてワールドワイドウェブ上のＤａｎａ  Ｆａｒｂｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅにより提供）、ＭＨＣＰｒｅｄ（部分最小二乗法を使用し、ｗｗｗ．ｊｅｎｎｅｒ．ａｃ．ｕｋ／ＭＨＣＰｒｅｄにおいてワールドワイドウェブ上のＴｈｅ  Ｊｅｎｎｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅにより提供）および、ｔｏｏｌｓ．ｉｍｍｕｎｅｅｐｉｔｏｐｅ．ｏｒｇにおけるワールドワイドウェブ上の免疫エピトープデータベースアルゴリズムが含まれる。本明細書中に記載のポリペプチドの免疫原性断片は、実験的に測定するか、またはアルゴリズム（例えば、ｗｗｗ．ｓｙｆｐｅｉｔｈｉ．ｄｅで見出されるＳＹＦＰＥＩＴＨＩアルゴリズム）により同定する場合、少なくとも１つの免疫原性部分を含む。
【００６１】
Ｄ．多成分免疫原性組成物
ある特定の実施形態において、本明細書中に記載の免疫原性組成物（例えばワクチン組成物）は、本明細書中に記載の融合タンパク質およびさらに１つまたは複数のまたは２つ以上の既知のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗原を含む。一部の例において、既知のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗原は、主に表３で示される抗体標的である。一部の例において、既知のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗原は多糖類である。一部の例において、既知のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗原は、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）コロニー形成またはＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）誘導性敗血症、肺炎、髄膜炎、中耳炎、副鼻腔炎またはＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による他の部位もしくは臓器の感染を防ぐ。
【００６２】
【表４】
0006379041.tif 000005
【００６３】
ある適切な当技術分野で認められているクラスのＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗原は、肺炎球菌表面タンパク質Ａ（ＰｓｐＡ）（配列番号２７）およびＰｓｐＡの誘導体である。ＰｓｐＡの誘導体としては、非プロリンブロックがあるプロリンリッチセグメント（ＰＲ＋ＮＰＢ、ＰＲＮとも呼ばれ、下記ならびにＤａｎｉｅｌｓ，Ｃ．Ｃ．ら（２０１０）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７８：２１６３−７２でさらに記載される）および、ＰｓｐＡのプロリンリッチ領域（例えば、配列ＰＡＰＡＰ、ＰＫＰ、ＰＫＥＰＥＱおよびＰＥＫＰの１つまたは複数を含有し、任意選択で非プロリンブロックを含む領域）の全てまたは断片を含む関連コンストラクトが挙げられる。いくつかの実施形態において、ＰｓｐＡの断片または変異体は、非プロリンブロックおよびＰｓｐＡ配列の１０、２０  ３０、４０個以上のさらなるアミノ酸があるプロリンリッチセグメントを含む。Ｈ７０（配列番号３３）は、プロリンリッチ領域およびアミノ酸２９０〜４１０のＰｓｐＡを包含する非プロリンブロックを含む、ある代表的な配列である。非プロリンブロックの例は、代表的な配列ＥＫＳＡＤＱＱＡＥＥＤＹＡＲＲＳＥＥＥＹＮＲＬＴＱＱＱ（配列番号３４）を有し、これは一般的に、ＰｓｐＡの非コイル領域の、本来はプロリンリッチエリアにプロリン残基がない。非プロリンブロック（ＮＰＢ）配列の他の実施形態には、配列番号３５および３６が含まれ、ＰｓｐＡおよびその誘導体は、ＮＰＢがあるかまたはない類似のプロリンリッチ構造（すなわちＰＫＰ、ＰＫＥＰＥＱおよびＰＥＫＰ）を発現する遺伝子を含み得る。ＮＰＢの何れかの末端のアミノ酸は、プロリンリッチ領域の境界となる。一例において、ＰＲ−領域に対するアミノ末端境界はＤＬＫＫＡＶＮＥ（配列番号７２）であり、カルボキシ末端境界は（Ｋ／Ｇ）ＴＧＷ（Ｋ／Ｇ）ＱＥＮＧＭＷ（配列番号７３）である。ＮＰＢを含有するペプチドは、特に免疫原性であり、このことから、ＮＰＢが重要なエピトープであり得ることが示唆される。コイルドコイル構造を含有する代表的な免疫原性ＰｓｐＡポリペプチド誘導体は、配列番号２８および３１を含む。コイルドコイル構造を欠く免疫原性ＰｓｐＡポリペプチド誘導体の特定の実施形態は、配列番号２９、３０および３２で示されるアミノ酸配列を有する。免疫原性ＰｓｐＡポリペプチド配列番号２８〜３０は、ＰＲおよびＮＰＢ配列の両方を含む（ＰＲ＋ＮＰＢ）。配列番号３１および３２の免疫原性ＰｓｐＡポリペプチドは、ＰＲ配列のみを含み（ＰＲ単独）、ＮＰＢを欠く。
【００６４】
別の適切な当技術分野で認められているクラスのＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗原は、ニューモリソイド（ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｏｉｄ）である。ニューモリソイド（ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｏｉｄ）は、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）タンパク質ニューモリシン（ＰＬＹ）に対して相同性を有するが、ニューモリシンと比較して毒性が低くなっている。ニューモリソイド（ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｏｉｄ）は、ニューモリシンの天然のまたは改変誘導体であり得る。いくつかの実施形態において、ニューモリソイド（ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｏｉｄ）は、ニューモリシンに対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、ニューモリソイド（ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｏｉｄ）の毒性は、赤血球に対する溶血活性および多形核白血球の抑制の一方または両方に対するアッセイにおいて、ニューモリシンの毒性の、１／２、１／５、１／１０、１／２０、１／５０、１／１００、１／２００、１／５００または１／１０００未満である。両アッセイとも、Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｆ．Ｋ．ら（“Ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｉｎ，ｔｈｅ  ｔｈｉｏｌ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｔｏｘｉｎ  ｏｆ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，ｄｏｅｓ  ｎｏｔ  ｒｅｑｕｉｒｅ  ａ  ｔｈｉｏｌ  ｇｒｏｕｐ  ｆｏｒ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｃｔｉｖｉｔｙ”Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．１９８９  Ａｕｇ；５７（８）：２５４７−５２）に記載されている。代表的なニューモリソイドとしては、ＰｄＴ（Ｂｅｒｒｙ，Ａ．Ｍ．ら（１９９５）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ６３：１９６９−７４にさらに記載される三重突然変異体）；Ｐｄ−ＡおよびＰｄ−Ｂ（Ｐａｔｏｎ  Ｊ．Ｃ．ら、“Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｏｂｔａｉｎｅｄ  ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｉｎ  ｔｏｘｏｉｄｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ｔｙｐｅ  １９Ｆ  ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ”Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．１９９１  Ｊｕｌ；５９（７）：２２９７−３０４）；ｒＰｄ２およびｒＰｄ３（Ｆｅｒｒｅｉｒａら、“ＤＮＡ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｄｅｔｏｘｉｆｉｅｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｏｆ  ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｉｎ  ｆａｉｌ  ｔｏ  ｐｒｏｔｅｃｔ  ｍｉｃｅ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｗｉｔｈ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ”ＦＥＭＳ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（２００６）４６：２９１−２９７）；Ｐｌｙ８、Δ６ＰＬＹ、Ｌ４６０Ｄ（例えば、ＵＳ２００９／０２８５８４６およびＬ．Ｍｉｔｃｈｅｌｌ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  Ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｏｉｄｓ，ＡＳＭ２０１１  ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ａｂｓｔｒａｃｔ，２０１１を参照）；またはそれらの変異体が挙げられる。いくつかの実施形態において、ニューモリシンは、アミノ酸４２８もしくは４３３または近傍など、触��中心において突然変異を有する。
【００６５】
他の適切なＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗原としては、コリン結合タンパク質Ａ（ＣｂｐＡ）およびその誘導体（ＡＤ  Ｏｇｕｎｎｉｙｉら、“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ｅｌｉｃｉｔｅｄ  ｂｙ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｉｎ  ａｎｄ  ＣｂｐＡ，Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００１  Ｏｃｔ；６９（１０）：５９９７−６００３）；肺炎球菌表面アドヘシンＡ（ＰｓａＡ）；カゼイン分解プロテアーゼ；ソルターゼＡ（ＳｒｔＡ）；線毛１（ｐｉｌｕｓ  １）ＲｒｇＡアドヘシン；ＰｐｍＡ；ＰｒｔＡ；ＰａｖＡ；ＬｙｔＡ；Ｓｔｋ−ＰＲ；ＰｃｓＢ；ＲｒｇＢおよびその誘導体が挙げられる。ＣｐｂＡ誘導体は、国際公開第２０１２／１３４９７５号パンフレットに記載の融合タンパク質を含む。このような融合タンパク質は、ＣｐｂＡの、Ｒ２ドメイン、Ｒ２１および／またはＲ２２サブドメインまたはそれらの活性のある変異体および断片または何らかのそれらの組み合わせの１つまたは複数のコピーを含み得る。このような融合タンパク質は、ニューモリソイド（ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｏｉｄ）をさらに含み得る。コンストラクトＹＬＮは、例えばＣｐｂＡポリペプチドＹＰＴおよびＮＥＥＫおよびニューモリソイド（ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｏｉｄ）Ｌ４６０Ｄ（配列番号５５）を含む。
【００６６】
いくつかのケースにおいて、抗原は、対応する野生型Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）タンパク質と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％同一である。上述のポリペプチドおよびそれらをコードする核酸の配列は公知であり；例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＦＭ２１１１８７．１に基づくＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＡＴＣＣ７００６６９完全ゲノム配列およびその中の関連ポリペプチド配列を参照のこと。
【００６７】
いくつかの実施形態において、免疫原性組成物（例えばワクチン組成物）は、混合物中で、１つまたは複数の、例えば表１もしくは３からの２、３または４つ以上のポリペプチドまたはその免疫原性断片もしくは変異体と組み合わせて、１つまたは複数の本明細書中に記載の融合タンパク質を含有する。いくつかの実施形態において、混合物は、全長ポリペプチドおよび、発現宿主、例えばＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、昆虫細胞株（例えばバキュロウイルス発現系）または哺乳動物（例えば、ヒトまたはチャイニーズハムスター卵巣）細胞株によるシグナル配列のプロセシングまたは部分的プロセシングの結果得られる断片の両方を含有する。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、何らかの他の抗原が存在しない、配列番号４７〜５４の何れかの１つまたは複数の融合タンパク質を含有する。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、他の抗原が存在しない、配列番号１〜３６の１つまたは複数のさらなるタンパク質と組み合わせた、配列番号４７〜５４の何れかの１つまたは複数の融合タンパク質を含有する。
【００６８】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の融合タンパク質と合わせて、修飾なしで、表１および３に記載のポリペプチドが使用され得る。ある特定の実施形態において、断片などのより小型の関連ポリペプチドが使用され、これらの分子量が約５０００ダルトン未満である場合、例えば、１５００〜５０００ダルトンである場合、修飾は、所望の免疫反応を誘発することにおいて有用であり得る。例えば、より小型のポリペプチドを、適切な免疫原性担体、例えば破傷風トキソイド、キーホールリンペットヘモシアニンなどと複合体化させ得る。
【００６９】
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載のポリペプチドは、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）多糖類と複合体化され得る。複合体化多糖類は、例えば米国特許第５，６２３，０５７号明細書、米国特許第５，３７１，１９７号明細書またはＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２３５２６明細書に記載のとおりであり得る。
【００７０】
本明細書中に記載の免疫原性組成物のいくつかの実施形態は、哺乳動物細胞へのポリペプチドの導入および細胞介在性免疫反応の続く刺激を促進するための膜移行配列（ＭＴＳ）を含有する融合タンパク質（例えば表１、２または３のポリペプチド）を含む、免疫原性ポリペプチドを含む。代表的な膜移行配列としては、カポジ線維芽細胞成長因子のシグナル配列における疎水性領域、α−シヌクレイン、β−シヌクレインまたはγ−シヌクレインのＭＴＳ、アンテナペディアホメオドメインの第三ヘリックス、ＳＮ５０、インテグリンβ３  ｈ領域、ＨＩＶ  Ｔａｔ、ｐＡｎｔｐ、ＰＲ−３９、アバエシン、アピダエシン、Ｂａｃ５、Ｂａｃ７、Ｐ．ベルゲイ（Ｐ．ｂｅｒｇｈｅｉ）ＣＳタンパク質および米国特許第６，２４８，５５８号明細書、同第６，４３２，６８０号明細書および同第６，２４８，５５８号明細書に記載されるＭＴＳが挙げられる。
【００７１】
ある特定の実施形態において、抗原（例えば、表１、２または３のポリペプチド）は別の分子と共有結合される。これにより、例えば、抗原の半減期、溶解度、バイオアベイラビリティまたは免疫原性が向上し得る。抗原に共有結合され得る分子としては、炭水化物、ビオチン、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリシアル酸、Ｎ−プロピオニル化ポリシアル酸、核酸、多糖類およびＰＬＧＡが挙げられる。分子量が３００ｇ／ｍｏｌ未満〜１０，０００，０００ｇ／ｍｏｌ超の範囲の多くの様々なタイプのＰＥＧがある。ＰＥＧ鎖は、直線状、分岐状であり得るか、または櫛形または星型の形状を有し得る。いくつかの実施形態において、タンパク質の天然産生型が、免疫系を刺激する部分と共有結合される。このような部分の例は、脂質部分である。一部の例において、脂質部分は、ＴＬＲ−２またはＴＬＲ−４などのＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）により認識され、自然免疫系を活性化する。
【００７２】
いくつかの実施形態において、多成分免疫原性組成物を形成させるための公知の方法を用いて、本明細書中に記載の融合タンパク質および１つまたは複数のさらなる成分を一緒に混合する。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の融合タンパク質および１つまたは複数のさらなる成分は、公知の方法を用いて、ナノカプセル化される。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載の融合タンパク質および１つまたは複数のさらなる成分は、公知の方法を用いてナノまたはミクロ粒子の形にされる。いくつかの実施形態において、多成分免疫原性組成物を形成させるために、公知の方法を用いて、共有結合を通じて本明細書中に記載の融合タンパク質および１つまたは複数のさらなる成分を複合体化する。いくつかの実施形態において、多成分免疫原性組成物を形成させるために、公知の方法を用いて、本明細書中に記載の融合タンパク質および１つまたは複数のさらなる成分を非共有結合により連結させる。融合タンパク質および１つまたは複数のさらなる成分を組み合わせるさらなる方法は、例えばＰＣＴ／ＵＳ１２／３７４１２号明細書およびＰＣＴ／ＵＳ０９／４４９５６号明細書に記載されている。
【００７３】
Ｅ．さらなる免疫原性組成物成分
ある特定の実施形態において、本明細書中に記載の免疫原性組成物（例えばワクチン組成物）は、次の１つまたは複数を含む：アジュバント、安定化剤、緩衝液、界面活性剤、制御放出成分、塩、防腐剤および／または免疫原性組成物中に含まれるポリペプチドに特異的な抗体。
【００７４】
１．アジュバント
いくつかの実施形態において、免疫原性組成物はアジュバントを含み得る。アジュバントは、その主要な作用機序に基づき、大きく２つのクラス：ワクチン送達系および免疫賦活アジュバントに分類され得る（例えば、Ｓｉｎｇｈら、Ｃｕｒｒ．ＨＩＶ  Ｒｅｓ．１：３０９−２０，２００３を参照）。殆どのワクチン製剤において、アジュバントは、それにより免疫系が抗原に対する反応を生じさせるように免疫系に対してシグナルを提供し、その抗原は、病原体に対する反応の特異性を推進するために必要とされる。ワクチン送達系は、粒子状製剤、例えば、エマルション、微粒子、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）、例えば粒子および／またはマトリクスであり得るナノ粒子およびリポソームであることが多い。対照的に、免疫賦活アジュバントは病原体に由来することがあり、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）、例えばリポ多糖類（ＬＰＳ）、モノホスホリル脂質（ＭＰＬ）またはＣｐＧ含有ＤＮＡに相当し得、これらは自然免疫系の細胞を活性化する。
【００７５】
あるいは、アジュバントは有機および無機として分類され得る。無機アジュバントとしては、リン酸アルミニウム、非晶質アルミニウムヒドロキシリン酸硫酸および水酸化アルミニウムなどのミョウバン塩が挙げられ、これらはヒトワクチンで一般的に使用される。有機アジュバントは、巨大分子を含む有機分子を含む。有機アジュバントの例はコレラ毒素である。
【００７６】
アジュバントはまた、それらが誘導する反応によっても分類され得る。いくつかの実施形態において、アジュバントは、ＴＨ１細胞またはＴＨ２細胞の活性化を誘導する。他の実施形態において、アジュバントは、Ｂ細胞の活性化を誘導する。また他の実施形態において、アジュバントは、抗原提示細胞の活性化を誘導する。これらの分類は相互排他的ではなく；いくつかのケースにおいて、アジュバントは複数のタイプの細胞を活性化する。
【００７７】
ある特定の実施形態において、アジュバントは、ＴＨ１７細胞の活性化を誘導する。これは、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞がＩＬ−１７を分泌することを促進し得る。いくつかの実施形態において、ＴＨ１７細胞の活性化を誘導するアジュバントは、以下のアッセイにおいて、実験試料と対照との比が少なくとも２倍、場合により１０倍となるものである。このアッセイにおいて、実験者は、２種類の細胞集団：（１）アジュバントおよびＴＨ１７活性化を誘導することが分かっているポリペプチドで免疫付与した動物由来の細胞および（２）アジュバントおよび無関係な（対照の）ポリペプチドで処置した動物由来の細胞によって分泌されるＩＬ−１７レベルを比較する。ＴＨ１７細胞の活性化を誘導するアジュバントにより、集団（１）の細胞は、集団（２）の細胞よりも、２倍超、または１０倍超多いＩＬ−１７を産生するようになり得る。ＩＬ−１７は、例えばＥＬＩＳＡまたはＥＬＩＳＰＯＴによって測定され得る。コレラ毒素および不安定毒素（腸管毒素原性Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）またはＥＴＥＣにより産生）などのある種の毒素は、ＴＨ１７反応を活性化する。したがって、いくつかの実施形態において、アジュバントは毒素である。表１からのある一定のポリペプチドと組み合わせてマウスモデルにおいてコレラ毒素を使用して、防御免疫を誘導することができた（実施例１〜２参照）。ある形態の不安定毒素がＩｎｔｅｒｃｅｌｌによって作製されている。アジュバントとして活性があるが、毒性が非常に低くなった不安定毒素の変異誘導体も同様に使用し得る。不安定毒素の例示的な解毒型変異誘導体としては、ＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼ活性を欠く突然変異体が挙げられる。不安定毒素の特定の解毒化変異誘導体としては、ＬＴＫ７（Ｄｏｕｃｅら、“Ｍｕｔａｎｔｓ  ｏｆ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ｈｅａｔ−ｌａｂｉｌｅ  ｔｏｘｉｎ  ｌａｃｋｉｎｇ  ＡＤＰ−ｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｃｔ  ａｓ  ｎｏｎｔｏｘｉｃ，ｍｕｃｏｓａｌ  ａｄｊｕｖａｎｔｓ”ＰＮＡＳ  Ｖｏｌ．９２，ｐｐ．１６４４−１６４８，Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １９９５）およびＬＴＫ６３（Ｗｉｌｌｉａｍｓら、“Ｉｎｎａｔｅ  Ｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｈｅａｔ−Ｌａｂｉｌｅ  Ｔｏｘｉｎ  ｏｆ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ（ＬＴＫ６３）Ｐｒｏｖｉｄｅｓ  Ｇｅｎｅｒｉｃ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｌｕｎｇ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ”Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００４，１７３：７４３５−７４４３）、ＬＴ−Ｇ１９２（Ｄｏｕｃｅら、“Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｄｅｔｏｘｉｆｉｅｄ  ｍｕｔａｎｔｓ  ｏｆ  ｈｅａｔ−ｌａｂｉｌｅ  ｔｏｘｉｎ  ｆｒｏｍ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ａｒｅ  ａｂｌｅ  ｔｏ  ａｃｔ  ａｓ  ｏｒａｌ  ａｄｊｕｖａｎｔｓ”Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．１９９９  Ｓｅｐ；６７（９）：４４００−６）およびＬＴＲ７２（“Ｍｕｃｏｓａｌ  ａｄｊｕｖａｎｔｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ＬＴＲ７２，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｕｔａｎｔ  ｏｆ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ｈｅａｔ−ｌａｂｉｌｅ  ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ  ｗｉｔｈ  ｐａｒｔｉａｌ  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｏｆ  ＡＤＰ−ｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ”Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９９８  Ａｐｒ  ６；１８７（７）：１１２３−３２）が挙げられる。
【００７８】
いくつかの実施形態において、アジュバントはＶＬＰ（ウイルス様粒子）を含む。このようなあるアジュバントプラットフォームであるアルファウイルスレプリコンは、アルファウイルスを用いてＴＨ１７細胞の活性化を誘導し、Ａｌｐｈａｖａｘにより製造されている。アルファウイルスレプリコン系のある特定の実施形態において、アルファウイルスは、関心対象の抗原、関心対象のサイトカイン（例えば、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７産生を刺激するサイトカイン）またはその両方を発現するように改変され得、ヘルパー細胞株で産生され得る。さらに詳細な情報は、米国特許第５，６４３，５７６号明細書および同第６，７８３，９３９号明細書で見出され得る。いくつかの実施形態において、ワクチン製剤は、サイトカインをコードする核酸と組み合わせて患者に投与される。
【００７９】
アジュバントのある一定のクラスは、ＴＨ１７反応を活性化するためにｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を活性化する。ＴＬＲは白血球膜で見られ得る周知のタンパク質であり、外来抗原（微生物抗原を含む）を認識する。公知のＴＬＲリガンドを関心対象の抗原とともに（例えば融合タンパク質として）投与することにより、関心対象の抗原に特異的な免疫反応の発現が促進され得る。ＴＬＲを活性化するある代表的なアジュバントは、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）を含む。従来、ＭＰＬは、Ｓ．ミネソタ（Ｓ．ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）などのグラム陰性細菌から得られる解毒化リポ多糖（ＬＰＳ）内毒素として産生されてきた。特に、ＬＰＳの逐次的な酸および塩基の加水分解により、（ＭＰＬである）免疫活性脂質Ａ分画が産生され、単糖基およびＬＰＳに存在するリン酸塩のうち１つを残して全てが欠失する。多数の合成ＴＬＲアゴニスト（特にＴＬＲ−４アゴニスト）が、Ｅｖａｎｓ  ＪＴら、“Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ＴＬＲ−４  ｌｉｇａｎｄｓ  ＭＰＬ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ａｎｄ  Ｒｉｂｉ．５２９”Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ２００３  Ａｐｒ；２（２）：２１９−２９で開示されている。ＭＰＬアジュバントのように、これらの合成化合物はＴＬＲを介して自然免疫系を活性化する。別のタイプのＴＬＲアゴニストは、合成リン脂質二量体、例えばＥ６０２０である（Ｉｓｈｉｚａｋａ  ＳＴら、“Ｅ６０２０：ａ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４  ａｇｏｎｉｓｔ  ａｓ  ａ  ｖａｃｃｉｎｅ  ａｄｊｕｖａｎｔ”Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．Ｖａｃｃｉｎｅｓ．２００７  Ｏｃｔ；６（５）：７７３−８４）。（ＴＬＲ−４アゴニストを含む）様々なＴＬＲアゴニストが、例えば、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＩＲＤＩ），Ｃｏｒｉｘａ，Ｅｓａｉ，Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．およびＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈにより製造および／または販売されている。ＴＬＲを活性化する別の例示的なアジュバントは、ＭＰＬの混合物、トレハロースジコイノミコレート（Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ  Ｄｉｃｏｙｎｏｍｙｃｏｌａｔｅ）（ＴＤＭ）および臭化ジオクタデシルジメチルアンモニウム（ＤＤＡ）を含む。別のＴＬＲ活性化アジュバントはＲ８４８（レシキモド）である。
【００８０】
いくつかの実施形態において、アジュバントはサポニンであるか、またはそれを含む。一般に、サポニンは、キラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ）の樹木の樹皮から分離されるものなどの、トリテルペン配糖体である。生物学的供給源からのサポニン抽出物を（例えばクロマトグラフィーにより）さらに分画化して、最良のアジュバント活性および許容可能な毒性を有する抽出物部分を単離し得る。アジュバントとして用いられるキラヤ・サポナリア（Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ）の樹木由来の典型的な抽出物分画は、分画ＡおよびＣとして知られる。
【００８１】
本明細書中に記載のワクチン製剤中で使用され得る特定形態のサポニンは、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）である。ＩＳＣＯＭは、一般にキラヤ属（Ｑｕｉｌｌａｊａ）のサポニン分画および脂質（例えば、コレステロールおよびホスファチジルコリンなどのリン脂質）を含む、当技術分野で認識されているアジュバントクラスである。ある特定の実施形態において、ＩＳＣＯＭは、関心対象のポリペプチドまたは核酸とともに組み立てられる。しかし、異なるサポニン分画を異なる比で使用し得る。さらに、異なるサポニン分画が同じ粒子中で一緒に存在してもよいし、または粒子１個につき実質的に１分画のみを有してもよい（異なる分画を有する粒子を一緒に混合することにより、分画ＡとＣとの指定の比が生じるように）。これに関連して、「実質的に」は、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％またはさらには１％未満を指す。このようなアジュバントは、７０〜９５Ａ：３０〜５Ｃ、例えば７０Ａ：３０Ｃ〜７５Ａ：５Ｃ、７５Ａ：５Ｃ〜８０Ａ：２０Ｃ、８０Ａ：２０Ｃ〜８５Ａ：１５Ｃ、８５Ａ：１５Ｃ〜９０Ａ：１０Ｃ、９０Ａ：１０Ｃ〜９５Ａ：５Ｃまたは９５Ａ：５Ｃ〜９９Ａ：１Ｃの比になるように混合された分画Ａおよび分画Ｃを含み得る。
【００８２】
ある特定の実施形態において、アジュバントの組み合わせが用いられる。３種類の代表的なアジュバントの組み合わせは、ＭＰＬおよびミョウバン、Ｅ６０２０およびミョウバンならびにＭＰＬおよびＩＳＣＯＭである。
【００８３】
アジュバントは抗原に共有結合され得る。いくつかの実施形態において、アジュバントは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の活性化を通じて炎症反応を誘導するタンパク質を含み得る。いくつかの実施形態において、これらのタンパク質の１つまたは複数を選択した抗原と組み換えにより融合し得、得られる融合分子が樹状細胞の成熟を促進し、樹状細胞を活性化してサイトカインおよびケモカインを産生させ、最終的にはＴ細胞に対する抗原の提示およびＴ細胞反応の惹起を推進するようになる（Ｗｕら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００５；６５（１１），ｐｐ  ４９４７−４９５４参照）。ある特定の実施形態において、本明細書中に記載の、融合タンパク質を含むポリペプチドは、Ｌｕら（“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌ  ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆａｔａｌ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ  ｂｙ  ａ  ｔｒｉｖａｌｅｎｔ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｏｆ  ａ  ｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌ  ｗａｌｌ  ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ”Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．２００９  Ｍａｙ；７７（５）：２０７６−８３）に記載の、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の肺炎球菌表面アドヘシンＡ（ＰｓａＡ）とニューモリソイド（ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｏｉｄ）ＰｄＴおよび細胞壁多糖（ＰｓａＡ：ＰｄＴ−ＣＰ）との融合タンパク質を含む三価複合体系という状況で提示される。ＰｄＴには３つのアミノ酸置換（Ｗ４３３Ｆ、Ｄ３８５ＮおよびＣ４２８Ｇ）があり、これらは分子を無毒性にするが、そのＴＬＲ−４介在性の炎症特性を妨げない。ＴＬＲ−４−アゴニストＰｄＴへのポリペプチドの融合物と多糖を複合体化することにより、ポリペプチドに対する免疫反応が促進される。いくつかの実施形態において、三価複合体において、本明細書中に記載の１つまたは複数のポリペプチドがＰｓａＡの代わりに使用される。三価複合体系は、一般にミョウバンを含み、通常は非経口投与される。抗原と共有結合され得る他の代表的アジュバントは、多糖類、ニューモリシン、合成ペプチド、リポペプチドおよび核酸を含む。
【００８４】
一般に、ワクチンの各用量中に同じアジュバントまたはアジュバント混合物が存在する。しかし、任意選択で、１回目のワクチン用量とともにアジュバントを投与し、その後の回の用量（すなわち追加免疫注射）では投与しないことがある。あるいは、強力なアジュバントが第１のワクチン用量とともに投与され得、より弱いアジュバントまたはより低用量の強力なアジュバントがその後の回の用量とともに投与され得る。アジュバントは、対象への抗原の投与前、抗原の投与と同時または抗原の投与後（あるときには１、２、６、または１２時間以内、あるときには１、２または５日以内）に投与し得る。ある種のアジュバントは、ヒト患者、非ヒト動物またはその両方に適切である。
【００８５】
２．他の成分
上記の抗原およびアジュバントに加えて、ワクチン製剤または免疫原性組成物は、１つまたは複数のさらなる成分を含み得る。
【００８６】
ある特定の実施形態において、ワクチン製剤または免疫原性組成物は、１つまたは複数の安定化剤、例えば、糖類（スクロース、グルコースまたはフルクトースなど）、リン酸塩（二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸カリウム、リン酸二カリウムまたはリン酸一ナトリウムなど）、グルタミン酸塩（Ｌ−グルタミン酸一ナトリウムなど）、ゼラチン（加工ゼラチン、加水分解ゼラチンまたはブタゼラチンなど）、アミノ酸（アルギニン、アスパラギン、ヒスチジン、Ｌ−ヒスチジン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、リジン、フェニルアラニン、チロシンおよびこれらのアルキルエステルなど）、イノシンまたはホウ酸ナトリウムを含み得る。
【００８７】
ある特定の実施形態において、本ワクチン製剤または免疫原性組成物は、重炭酸ナトリウムおよびアスコルビン酸の混合物などの１つまたは複数の緩衝液を含む。いくつかの実施形態において、本ワクチン製剤は、塩水、例えばリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）または蒸留水中で投与され得る。
【００８８】
ある特定の実施形態において、本ワクチン製剤または免疫原性組成物は、１つまたは複数の界面活性剤、例えばポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０）、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、ポリエチレングリコールｔｅｒｔ−オクチルフェニルエーテルｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェニル−ポリエチレングリコール（ＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００）；ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート（ＴＷＥＥＮ  ２０）；およびホルムアルデヒドおよびオキシランとの４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノールポリマー（ＴＹＬＯＸＡＰＯＬ）を含む。界面活性剤は、イオン性であってもよいし、または非イオン性であってもよい。
【００８９】
ある特定の実施形態において、本ワクチン製剤または免疫原性組成物は、１つまたは複数の塩、例えば塩化ナトリウム、塩化アンモニウム、塩化カルシウムまたは塩化カリウムなどを含む。
【００９０】
ある特定の実施形態において、防腐剤が本ワクチンまたは免疫原性組成物中に含まれる。他の実施形態において、防腐剤は使用されない。防腐剤は、複数回投与のワクチンバイアルにおいて最も頻繁に使用され、単回投与のワクチンバイアルで必要とされることはあまりない。ある特定の実施形態において、防腐剤は、２−フェノキシエタノール、メチルおよびプロピルパラベン、ベンジルアルコールおよび／またはソルビン酸である。
【００９１】
ある特定の実施形態において、本ワクチン製剤または免疫原性組成物は、制御放出製剤である。
【００９２】
Ｆ．ワクチンの使用
本明細書中に記載のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンは、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の予防的および／または治療的処置に使用され得る。したがって、本願は、本明細書中に記載のワクチン製剤の何れかの有効量を投与することを含む、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染に罹患しているかまたは罹患し易い対象を処置するための方法を提供する。いくつかの態様において、本方法は、個体におけるＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）のコロニー形成を阻害する。いくつかの態様において、本方法は、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の症状または敗血症、肺炎、髄膜炎、中耳炎、副鼻腔炎またはＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による他の部位もしくは臓器の感染など、侵襲性疾患または続発症を抑制する。ワクチン接種を受ける対象は、男性であっても、または女性であってもよく、小児であっても、または成人であってもよい。いくつかの実施形態において、治療対象はヒトである。他の実施形態において、対象は非ヒト動物である。
【００９３】
１．予防的使用
予防的な実施形態において、例えば、疾患における最初の、かつ必須の段階であるコロニー形成を防ぐことによってＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の確立を防ぐのに役立ち得る免疫反応を誘導するために、本ワクチンを対象に投与する。したがって、いくつかの態様において、本方法は、非コロニー形成対象または非感染対象におけるＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の感染を阻害する。別の態様において、本方法は、既にコロニー形成されている個体においてコロニー形成持続期間を短縮し得る。
【００９４】
いくつかの実施形態において、本発明のワクチン組成物は、防御免疫を付与し、それにより、ワクチン接種を受けた個体において、ワクチンに曝露された結果として、症状もしくは続発症の発症遅延、または症状もしくは続発症の軽症化が認められるようになる。ある特定の実施形態において、症状または続発症の軽症化は、少なくとも２５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％またはさらには９０％である。特定の実施形態において、ワクチン接種を受けた個体は、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）との接触時に症状または続発症を示し得ないか、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）のコロニー形成が起こらないか、またはその両方であり得る。防御免疫は、一般に、以下の機序：粘膜、液性または細胞性免疫の１つまたは複数によって達成される。粘膜免疫は、主として、気道、胃腸および尿生殖路の粘膜表面上の分泌型ＩｇＡ（ｓＩＧＡ）抗体の結果である。ｓＩＧＡ抗体は、抗原プロセシング細胞、ＢおよびＴリンパ球が介在する一連の事象後に産生され、その結果、粘膜に覆われる生体組織上でＢリンパ球によるｓＩＧＡ産生が起こる。液性免疫は、一般に、血清中のＩｇＧ抗体およびＩｇＭ抗体の結果である。細胞性免疫は、細胞傷害性Ｔリンパ球を通じて、またはマクロファージおよびＴリンパ球を含む遅延型過敏性ならびに、抗体を必要としない、Ｔ細胞を含む他の機序を通じて達成され得る。特に、細胞性免疫は、ＴＨ１細胞またはＴＨ１７細胞が介在し得る。
【００９５】
基本的に、何れの個体もＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に感染するある一定のリスクを有する。しかし、ある一部のサブ集団は感染リスクが高い。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のようなワクチン製剤（例えば、表１、表２または３からの１つまたは複数のポリペプチドまたはこのポリペプチドをコードする核酸またはこのポリペプチドとの反応性がある抗体を含む組成物）が、免疫機能が低下している患者に投与される。
【００９６】
医学的処置から生じる免疫機能低下状態によって、問題となる個体のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染リスクが高まる可能性がある。免疫機能が低下することが知られている処置の前または処置中に、免疫機能低下状態を有する個体において感染を予防的に処置することが可能である。免疫機能が低下することが知られている処置の前または処置中に、抗原性組成物（例えば、表１もしくは表２からの２つ以上の抗原、表３からの抗原またはそれらの抗原をコードする核酸）で、または表１もしくは表２からの２つ以上の抗原に対して、または表３からの抗原に対して反応性がある抗体で予防的に処置することによって、後のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染を予防するかまたは免疫機能低下状態ゆえに感染症に罹患する個体のリスクを低下させることが可能である。例えば免疫機能低下状態に導く処置後に個体がＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染症に罹患した場合、その個体に抗原組成物を投与することによって感染症を処置することも可能である。
【００９７】
次の群は、肺炎球菌性疾患またはその合併症のリスクが高く、したがってこれらの群の１つまたは複数に該当する対象にとって、本明細書中に記載のワクチン製剤の投与を受けることは有利である：小児、特に月齢１ヶ月〜５歳または月齢２ヶ月〜２歳の小児；無脾症、脾機能不全または鎌状赤血球症の２歳以上の小児；ネフローゼ症候群、慢性脳脊髄液漏出、ＨＩＶ感染または免疫抑制が関連する他の状態を有する２歳以上の小児。
【００９８】
別の実施形態において、肺炎球菌抗原組成物の少なくとも１回の用量が、肺炎球菌疾患またはその合併症のリスクが高い以下の群の成人に投与される：６５歳の者全員；無脾症、脾臓機能不全または鎌状赤血球症の成人；以下の病態を有する成人：慢性心肺疾患、肝硬変、アルコール中毒、慢性腎疾患、ネフローゼ症候群、糖尿病、慢性脳脊髄液漏出、ＨＩＶ感染、ＡＩＤＳおよび免疫抑制が関連する他の状態（ホジキン病、リンパ腫、多発性骨髄腫、臓器移植のための免疫抑制）、人工内耳を有する者；長期にわたり心疾患および肺疾患などの健康上の問題を有する者ならびに、長期ステロイド剤、ある一定の抗癌剤、放射線療法など、感染に対する身体の抵抗性を低下させる何らかの薬物又は処置を受けている者；アラスカ先住民およびある一定のネイティブアメリカン集団。
【００９９】
２．治療的使用
治療適用において、本ワクチンは、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染に罹患している患者に対して、その患者を処置するのに十分な量で投与され得る。患者を治療するとは、この場合、感染者におけるＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の症状および／または細菌負荷および／または続発症を軽減することを指す。いくつかの実施形態において、患者を治療するとは、症状もしくは続発症の持続期間を短縮すること、または症状もしくは続発症の強度を低下させることを指す。いくつかの実施形態において、本ワクチンは、ワクチン接種を受けた患者からのＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の感染性を低下させる。ある特定の実施形態において、上記の低下（短縮）は、少なくとも２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％またはさらに９０％である。
【０１００】
治療的な実施形態において、本ワクチンは個体に対して感染後に投与される。本ワクチンは、感染直後、例えば症状または続発症が現れる前に投与してもよいし、または症状または続発症が現れている最中または現れた後に投与してもよい。
【０１０１】
治療用Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンは、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染の様々な症状または続発症の強度を低下させ、および／または持続期間を短縮し得る。Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染の症状または続発症は多くの形態をとり得る。ある場合には、感染患者は、肺炎、急性副鼻腔炎、中耳炎（耳感染症）、髄膜炎、菌血症、敗血症、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、蜂巣炎または脳膿瘍を発症する。
【０１０２】
敗血症は、稀なものではあるが、致命的なＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染の合併症であり、細菌が血流に侵入して全身性炎症が起こる。一般に、発熱が認められ、白血球数が増加する。敗血症のさらなる記載は、Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，Ｂ．ら、“Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｓｅｐｓｉｓ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ：ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  ｏｒｇａｎ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ”Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．Ｊａｎ  ２００５；６（１）：２−８で見出される。
【０１０３】
３．ワクチン接種効力のアッセイ
本明細書中で開示されるワクチンによるワクチン接種効力は、上記の臨床転帰に加えて、数多くの方法で決定され得る。第一に、ワクチン接種後、対象由来のＴ細胞を刺激することにより、ＩＬ−１７レベル（特にＩＬ−１７Ａ）をアッセイし得る。このＩＬ−１７レベルを、ワクチン接種前の同じ対象におけるＩＬ−１７レベルと比較し得る。ＩＬ−１７（例えばＩＬ−１７Ａ）レベルの上昇、例えば１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍または１００倍以上の上昇から、ワクチンに対する反応の上昇が示される。あるいは（または合わせて）、肺炎球菌死滅について、患者からのＴ細胞または抗体の存在下で好中球をアッセイし得る。肺炎球菌死滅の増加、例えば１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍または１００倍以上の増加から、ワクチンに対する反応の増加が示される。さらに、ＴＨ１７細胞活性化を測定し得、ＴＨ１７細胞活性化の増加、例えば１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍または１００倍以上の増加は、ワクチンに対する反応の上昇と相関する。また、ワクチンに特異的な抗体レベルも測定し得、特異的抗体レベルの上昇、例えば１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍または１００倍以上の上昇は、ワクチン効力の上昇と相関する。ある特定の実施形態において、これらのアッセイのうち２つ以上を使用する。例えば、ＩＬ−１７レベルおよびワクチン特異的抗体レベルを測定し得る。あるいは、ワクチン未接種個体と比較して、ワクチン接種個体における肺炎球菌感染症の発生率、重症度または持続期間などの疫学的マーカーを追跡し得る。
【０１０４】
ワクチン効力はまた、マウスモデルなどの様々なモデル系でもアッセイし得る。例えば、ＢＡＬＢ／ｃまたはＣ５７ＢＬ／６系統のマウスを使用し得る。試験ワクチンを対象に（単回用量または複数回用量として）投与した後、実験者は、負荷試験用量のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を投与する。ある場合には、鼻腔内投与する負荷試験用量は、ワクチン未接種の動物においてＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）のコロニー形成（特に鼻腔内コロニー形成）を生じさせるのに十分であり、ある場合には、吸引により投与される負荷試験用量は、ワクチン未接種の動物において敗血症および高い致死率を生じさせるのに十分である。次に、ワクチン接種動物におけるコロニー形成の減少または致死率の低下を測定し得る。実施例１〜２および４は、マウスモデルでの鼻腔内負荷試験後のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）鼻腔内コロニー形成の阻害における表１のポリペプチドの効力を示す。実施例５および６は、マウスモデルでの吸引によるＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染後の敗血症および死亡を阻止することにおける表１のポリペプチドの効力を示す。
【０１０５】
Ｇ．免疫原性組成物の使用
１．Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染に対する防御
本開示の免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫反応を誘発するように設計される。本明細書中に記載の組成物（例えば、表１、２または表３の、融合タンパク質を含む１つまたは複数のポリペプチドまたはこのポリペプチドをコードする核酸を含むもの）は、それが投与される哺乳動物における抗体反応もしくは細胞介在性免疫反応またはその両方を刺激し得る。いくつかの実施形態において、本組成物は、ＴＨ１偏向ＣＤ４＋Ｔ細胞反応、ＴＨ１７偏向ＣＤ４＋Ｔ細胞反応および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞反応を刺激する。いくつかの実施形態において、本組成物は、抗体反応を刺激する。いくつかの実施形態において、本組成物は、ＴＨ１偏向ＣＤ４＋Ｔ細胞反応、ＴＨ１７偏向ＣＤ４＋Ｔ細胞反応および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞反応および抗体反応を刺激する。
【０１０６】
ある特定の実施形態において、本組成物（例えば、表１、２または３の１つまたは複数のポリペプチド、またはこのポリペプチドをコードする核酸またはこのペプチドと反応性がある抗体を含むもの）は、サイトカインまたはＩＬ−１７などのサイトカインをコードするヌクレオチドコード領域を含み、哺乳動物の免疫系にさらなる刺激を提供する。ある特定の実施形態において、本組成物はＩＬ−１７などのサイトカインを含む。
【０１０７】
理論に縛られることを望むものではないが、いくつかの実施形態において、ＴＨ１７細胞反応は、本明細書中で開示される組成物、例えば、表１、２または３の１つまたは複数のポリペプチドを含むものに対する免疫反応を開始させることにおいて望ましい。ある特定の実施形態において、能動的なＴＨ１７反応は、肺炎球菌感染の排除において有益である。例えば、ＩＬ−１７Ａ受容体欠損マウスでは、肺炎球菌負荷試験からの全細胞に基づく防御性が低下している（Ｌｕら、“Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１７Ａ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ｔｏ  ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌ  ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ”ＰＬｏＳ  Ｐａｔｈｏｇ．２００８  Ｓｅｐ  １９；４（９））。
【０１０８】
したがって、本明細書において、本明細書中に記載の組成物（例えば、表１、２または３の１つまたは複数のポリペプチドを含むもの）を対象に投与することによってＩＬ−１７産生を増加させる方法が提供される。さらに、本願は、前記の組成物を対象に投与することによってＴＨ１７細胞を活性化する方法を提供する。ある特定の実施形態において、ＩＬ−１７Ａレベルの上昇の結果、例えば好中球様細胞の好中球の動員および活性化の誘導によって、好中球または好中球様細胞による肺炎球菌の死滅が増加する。ある特定の実施形態において、この肺炎球菌の死滅は抗体および補体とは独立したものである。しかし、特異的抗体産生および補体活性化は、肺炎球菌感染の排除に寄与する有用なさらなる機構であり得る。
【０１０９】
免疫原性ポリペプチドまたは免疫原性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを医薬担体と一緒に含有する免疫原性組成物も提供される。
【０１１０】
一部の例において、本免疫原性組成物は、配列番号４７〜５４から選択される１つまたは複数のポリペプチドなど、配列番号１〜２６および４７〜５４の１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸を含む。いくつかの実施形態において、これらの核酸は、免疫付与個体において発現され、この個体は、コードされるＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗原を産生し、このようにして産生されるＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗原は、免疫付与個体において免疫賦活効果を生じさせ得る。
【０１１１】
このような核酸含有免疫賦活組成物は、例えば、複製起点および配列番号４７〜５４の１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸の発現を推進するプロモーターを含み得る。このような組成物はまた、プロモーター（任意選択で強力なウイルスプロモーター）、配列番号４７〜５４の１つまたは複数のポリペプチドをコードする１つまたは複数の核酸およびポリアデニル化／転写終結配列が挿入される細菌性プラスミドベクターも含み得る。一部の例において、核酸はＤＮＡである。
【０１１２】
Ｈ．用量および投与経路
１．剤形、量およびタイミング
各ワクチンまたは免疫原性組成物用量中の抗原の量は、単回投与で、または複数回投与にわたるかの何れかで、上記のとおりの予防的または治療的反応を誘導する有効量として選択される。好ましくは、用量は典型的なワクチンにおいて顕著な有害な副作用がないものである。このような量は、どの特異抗原を使用するかによって異なり得る。一般的に、用量には各タンパク質が１〜１０００μｇ、ある場合には２〜１００μｇ、例えば４〜４０μｇ含まれると予想される。いくつかの態様において、本ワクチン製剤は、１〜１０００μｇのポリペプチドおよび１〜２５０μｇのアジュバントを含む。いくつかの実施形態において、送達しようとする抗原の適切な量は、対象の年齢、体重および健康状態（例えば免疫機能低下状態）に依存する。存在する場合、一般に、アジュバントは、用量あたり１μｇ〜２５０μｇ、例えば５０〜１５０μｇ、７５〜１２５μｇまたは１００μｇの量で存在する。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、上記の結果を達成するために、ワクチン投与を１回のみ行う。他の実施形態において、初回のワクチン接種後、対象は１回以上の追加ワクチン接種を受け、合計２回、３回、４回または５回のワクチン接種を受ける。有利には、回数は３回以下である。追加ワクチン接種は、例えば、初回ワクチン接種の約１ヶ月後、２ヶ月後、４ヶ月後、６ヶ月後または１２ヶ月後に投与され得、１つのワクチン接種療法には０ヶ月目、０．５〜２ヶ月目および４〜８ヶ月目での投与が含まれることになる。同じまたは異なる経路によって投与され得るワクチンの分割用量の投与が有利であり得る。
【０１１４】
本明細書中に記載のワクチンおよび免疫原性組成物は様々な剤形をとり得る。ある特定の実施形態において、本組成物は、固形または粉末状の（例えば凍結乾燥）形態で提供され；本組成物はまた、溶液形態でも提供され得る。ある特定の実施形態において、剤形は、ある用量の凍結乾燥組成物および希釈剤の少なくとも１つの別個の滅菌容器として提供される。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、続く組成物の投与に、前の投与より高い濃度の組成物が含有されるように、本組成物は用量漸増形式で投与される。いくつかの実施形態において、本組成物は、続く本組成物の投与に、前の投与より低い濃度の組成物が含有されるような方法で投与され得る。
【０１１６】
治療適用において、組成物は、疾患に罹患している患者に対して、その患者を処置するのに十分な量で投与される。本明細書中に記載の組成物の治療適用は、本組成物で処置されていない個体において起こるレベルの９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％または１０％など、感染力が低下するか、疾患進行が遅延するか、細菌の生存能または複製が減少するかまたは毒性に必要とされるタンパク質の発現が阻害されることを含む。
【０１１７】
予防的な実施形態において、感染症または他の状態の確立を阻害し得る免疫反応を誘導するために、ヒトまたは他の哺乳動物に組成物が投与される。いくつかの実施形態において、組成物は細菌が感染を確立するのを部分的に阻止し得る。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、本組成物は抗生物質と併用して投与される。この同時投与は、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に最近曝露された（または最近曝露された疑いがある）患者に本医薬組成物が投与される場合に特に適切である。ペニシリン、アモキシシリン、アモキシシリン／クラブラン酸塩、セフロキシム、セフォタキシム、セフトリアキソンおよびバンコマイシンを含め、多くの抗生物質が肺炎球菌感染を処置するために使用される。適切な抗生物質は、感染のタイプおよび重症度ならびに感染の何らかの既知の抗生物質耐性に基づき選択され得る（Ｊａｃｏｂｓ  ＭＲ“Ｄｒｕｇ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ：ｒａｔｉｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  ｃｈｏｉｃｅｓ”Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ．１９９９  Ｍａｙ  ３；１０６（５Ａ）：１９Ｓ−２５Ｓ）。
【０１１９】
２．投与経路
本明細書中のワクチン製剤および医薬組成物は、個体への投与により、一般には全身投与によって送達し得（例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮内、皮下、真皮下、経皮、頭蓋内、鼻腔内、粘膜、肛門内、腟内、経口、口腔経路またはそれらは吸入され得る）、またはそれらは局所適用によって投与し得る。いくつかの実施形態において、投与経路は筋肉内である。他の実施形態において、投与経路は皮下である。また他の実施形態において、投与経路は粘膜である。ある特定の実施形態において、投与経路は経皮または皮内である。
【０１２０】
ある一定の投与経路が特定のアジュバントを含むワクチン製剤および免疫原性組成物に特に適切である。特に、経皮投与は、毒素（例えばコレラ毒素または不安定毒素）を含むＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンに対する１つの適切な投与経路であり；他の実施形態において、投与は鼻腔内である。アルファウイルスレプリコンとともに製剤化されるワクチンは、例えば筋肉内または皮下経路によって投与され得る。モノホスホリ脂質Ａ（Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙ  Ｌｉｐｉｄ  Ａ）（ＭＰＬ）、トレハロースジコイノミコレート（Ｔｒｅｈａｌｏｓｅ  Ｄｉｃｏｙｎｏｍｙｃｏｌａｔｅ）（ＴＤＭ）および臭化ジオクタデシルジメチルアンモニウム（ＤＤＡ）を含むワクチンは、（とりわけ）筋肉内および皮下投与に適切である。レシキモドを含むワクチンは、例えば局所投与または皮下投与され得る。
【０１２１】
３．製剤
本ワクチン製剤または免疫原性組成物はヒト患者への投与に適切であり得、ワクチンまたは免疫原性組成物製剤はＵＳＦＤＡ指針に準拠し得る。いくつかの実施形態において、本ワクチン製剤または免疫原性組成物は、非ヒト動物への投与に適切である。いくつかの実施形態において、本ワクチンまたは免疫原性組成物は、内毒素または外毒素の何れも実質的に含まない。内毒素はリポ多糖（ＬＰＳ）分子などの発熱物質を含み得る。本ワクチンまたは免疫原性組成物はまた、発熱または他の副作用を引き起こし得る不活性タンパク質断片を実質的に含まないものであり得る。いくつかの実施形態において、本組成物が含有する内毒素、外毒素および／または不活性タンパク質断片は、１％未満、０．１％未満、０．０１％未満、０．００１％未満または０．０００１％未満である。いくつかの実施形態において、本ワクチンまたは免疫原性組成物は、発熱物質のレベルが、工業用水、水道水または蒸留水よりも低い。他のワクチンまたは免疫原性組成物成分は、イオン交換クロマトグラフィー、限外ろ過または蒸留などの当技術分野で公知の方法を用いて精製し得る。他の実施形態において、発熱物質は、患者への投与前に不活性化または破壊され得る。ワクチン用の原材料、例えば水、緩衝液、塩および他の化学物質もまた、スクリーニングされ、発熱物質が除去され得る。本ワクチン中の全材料が無菌であり得、無菌性であることについて本ワクチンの各ロットを試験し得る。したがって、ある特定の実施形態において、本ワクチン中の内毒素レベルはＵＳＦＤＡにより定められるレベル、例えば髄腔内注射用組成物では０．２内毒素（ＥＵ）／ｋｇ生成物；非髄腔内注射用組成物では５ＥＵ／ｋｇ生成物および滅菌水では０．２５〜０．５ＥＵ／ｍＬ、を下回る。
【０１２２】
ある特定の実施形態において、製剤が含む夾雑タンパク質は、５０％、２０％、１０％または５％未満（乾燥重量による）である。ある特定の実施形態において、他の生物学的巨大分子、例えば他のタンパク質（特に、精製製剤としての、または対象再構成混合物中のそれらの機能における、成分タンパク質の特徴を実質的に遮蔽するか、減弱させるか、混乱させるかまたは変化させ得る他のタンパク質）が実質的に存在しない状態で所望の分子が存在する。ある特定の実施形態において、少なくとも８０％、９０％、９５％、９９％または９９．８％（乾燥重量による）の同じタイプの生体巨大分子が存在する（しかし、水、緩衝液および他の小分子、特に分子量５０００未満である分子が存在し得る）。いくつかの実施形態において、精製サブユニットタンパク質を含むワクチンまたは免疫原性組成物が含有する、サブユニットタンパク質が発現された宿主細胞由来のタンパク質は、精製サブユニットの量に対して５％、２％、１％、０．５％、０．２％、０．１％未満である。いくつかの実施形態において、所望のポリペプチドは、核酸および／または炭水化物を実質的に含まない。例えば、いくつかの実施形態において、本ワクチンまたは免疫原性組成物が含有する宿主細胞ＤＮＡおよび／またはＲＮＡは、５％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、０．２％未満または０．１％未満である。ある特定の実施形態において、製剤中に少なくとも８０％、９０％、９５％、９９％または９９．８％（乾燥重量による）の同じタイプの生体巨大分子が存在する（しかし、水、緩衝液および他の小分子、特に分子量５０００未満である分子が存在し得る）。
【０１２３】
本ワクチンまたは免疫原性組成物は、妥当なリスク便益比の範囲内で毒性が低いかまたは毒性がないことが好ましい。ある特定の実施形態において、本ワクチンまたは免疫原性組成物は、ワクチン接種を受ける動物に対するＬＤ５０測定値未満の濃度で成分を含む。マウスまたは他の実験モデル系でＬＤ５０測定値を得て、ヒトおよび他の動物に当てはめ得る。ヒトおよび他の動物における化合物のＬＤ５０を推定するための方法は、当技術分野で周知である。ワクチン製剤または免疫原性組成物およびその中の何らかの成分のＬＤ５０値は、ラットにおいて、１００ｇ／ｋｇ超、５０ｇ／ｋｇ超、２０ｇ／ｋｇ超、１０ｇ／ｋｇ超、５ｇ／ｋｇ超、２ｇ／ｋｇ超、１ｇ／ｋｇ超、５００ｍｇ／ｋｇ超、２００ｍｇ／ｋｇ超、１００ｍｇ／ｋｇ超、５０ｍｇ／ｋｇ超、２０ｍｇ／ｋｇ超または１０ｍｇ／ｋｇ超であり得る。ボツリヌス毒素などの毒素（アジュバントとして使用され得る）を含むワクチン製剤または免疫原性組成物が含有するボツリヌス毒素は、ＬＤ５０よりも顕著に少ないものであるべきである。
【０１２４】
本ワクチン製剤または医薬組成物の導入に適切な製剤は、投与経路により異なる。例えば、関節内（関節におけるもの）、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、鼻腔内および皮下経路などによる非経口投与に適切な製剤としては、水性および非水性の等張滅菌注射溶液が挙げられ、これは、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤および、製剤を対象となる受容者の血液と等張にする溶質および、懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤および防腐剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁液を含有し得る。本製剤は単回用量または複数回用量の密封容器、例えばアンプルおよびバイアル中で提供され得る。
【０１２５】
注射溶液および懸濁液は、既に述べられた種類の滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製し得る。治療用Ｔ細胞の養子移入の場合、細胞を静脈内投与または非経口投与し得る。
【０１２６】
経口投与に適切な製剤は、（ａ）希釈剤、例えば水、塩水またはＰＥＧ４００中で懸濁された有効量のポリペプチドまたはパッケージ核酸（ｐａｃｋａｇｅｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）などの液状溶液；（ｂ）それぞれが所定量の活性成分を液体、固形物、顆粒またはゼラチンとして含有する、カプセル、サシェまたは錠剤；（ｃ）適切な液体中の懸濁液；および（ｄ）適切なエマルションからなり得る。錠剤形態は、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、リン酸カルシウム、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、トラガカント、微結晶性セルロース、アラビアゴム、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸および他の賦形剤、着色剤、充填剤、結合剤、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、防腐剤、香味料、色素、崩壊剤および医薬的に適合性の担体のうち１つまたは複数を含み得る。薬用キャンディー形態は、香料、通常はスクロースおよびアラビアゴムまたはトラガカント中に活性成分を含み得、トローチは、不活性基剤、例えばゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアラビアゴムエマルション、ゲルなどの中に活性成分を含み得、活性成分に加えて、当技術分野で公知の担体を含有し得る。本医薬組成物は、例えばリポソーム中に、または活性成分を持続放出させる製剤中に封入され得る。
【０１２７】
抗原は、単独で、または他の適切な成分と組み合わせて、吸入を介して投与しようとするエアロゾル製剤（例えばこれは「噴霧」し得る）にされ得る。エアロゾル製剤は、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの、加圧される許容可能な噴射剤中に入れられ得る。エアロゾル製剤は経口送達または経鼻送達し得る。
【０１２８】
腟内または直腸投与に適切な製剤としては、例えば座薬が挙げられるが、これは座薬基剤とともにポリペプチドまたはパッケージ核酸（ｐａｃｋａｇｅｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）からなる。適切な座薬基剤としては、天然または合成トリグリセリドまたはパラフィン炭化水素が挙げられる。さらに、ポリペプチドまたはパッケージ核酸（ｐａｃｋａｇｅｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）と、例えば液体トリグリセリド、ポリエチレングリコールおよびパラフィン炭化水素を含む基剤との組み合わせからなるゼラチン直腸カプセルを使用することもまた可能である。
【０１２９】
Ｉ．ワクチン製剤および免疫原性組成物の調製および保存
本明細書中に記載のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンおよび免疫原性組成物は、様々な技術を用いて作製され得る。例えば、ポリペプチドは、適切な宿主細胞において組み換えＤＮＡ技術を用いて産生され得る。適切な宿主細胞は、細菌、酵母、哺乳動物または他のタイプの細胞であり得る。宿主細胞は、関連するポリペプチド遺伝子の１つの外因性コピーを発現するように修飾され得る。一般に、遺伝子は、強力なプロモーターおよびポリアデニル化配列などの適切な制御配列に動作可能に連結されている。いくつかの実施形態において、プロモーターは誘導性または抑制性である。他の制御配列は、ポリペプチドをどのように精製したいかということに依存して、関心対象のポリペプチドの分泌もしくは排出または細胞質もしくは膜における関心対象のポリペプチドの保持をもたらし得る。遺伝子は、染色体外プラスミドに存在してもよいし、または宿主ゲノムに組み込まれてもよい。当業者は、天然配列と１００％同一の核酸を使用する必要はないことを認めるであろう。むしろ、これらの配列に対するいくつかの改変が許容され、これが望ましい場合がある。例えば、核酸は、コードされるポリペプチドが同じままであるように、遺伝子コードの縮重を利用するように改変され得る。いくつかの実施形態において、特定の宿主における発現を向上させるために、遺伝子をコドン最適化する。核酸は、例えばＰＣＲによるか、または化学合成によって産生され得る。
【０１３０】
組み換え細胞株を作製したら、そこからポリペプチドを単離し得る。単離は、例えばアフィニティー精製技術によるか、または物理学的分離技術（例えばサイズカラム）によって達成され得る。
【０１３１】
本開示のさらなる態様において、１つまたは複数のポリペプチドまたはその免疫原性断片もしくは変異体を担体および／またはアジュバントと混合することを含む製造方法が提供される。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、本ワクチン製剤および免疫原性組成物に含めるための抗原は、細胞培養において産生され得る。ある方法は、１つまたは複数の発現ベクターを提供し、配列番号４７〜５４など、表１、２または３のアミノ酸配列を有するポリペプチドから選択される１つまたは複数のポリペプチドをコードするヌクレオチドをクローニングし、次いでこのポリペプチドを発現および単離することを含む。
【０１３３】
本明細書中に記載の免疫原性ポリペプチドおよびこのポリペプチドを発現する核酸組成物は、哺乳動物に核酸組成物を投与するための、パック、ディスペンサー装置およびキット中に包装され得る。例えば、１つまたは複数の単位剤形を含有するパックまたはディスペンサー装置が提供される。一般に、本明細書中で開示されるものなどの、指示される状態の処置にその化合物が適切であるというラベル上の適切な指示と一緒に、化合物の投与に関する説明書が梱包材料とともに提供され得る。
【０１３４】
本開示を次の実施例によってさらに説明する。この実施例は、単に例証目的のために提供される。これらは、何ら本開示の範囲または内容を限定するものとして解釈されるべきものではない。
【実施例】
【０１３５】
Ｖ．実施例
実施例１
ＳＰ２１０８、ＳＰ０１４８およびＳＰ１６３４ポリペプチド
４μｇのポリペプチドを１μｇのコレラ毒素アジュバント（ＣＴ）と組み合わせて使用して、ＳＰ２１０８ポリペプチド（配列番号６）、ＳＰ０１４８ポリペプチド（配列番号２）およびＳＰ１６３４ポリペプチド（配列番号２５）をワクチン組成物として製剤化した。組み合わせのために、４μｇの各ポリペプチドを使用した。組成物をＣ５７ＢＬ／６マウスに１週間おきに３回、鼻腔内投与した。次に対象を３週間安静にし、その時点で免疫原性のために採血した。このアッセイの場合、ヘパリン処理全血を後眼窩洞から採取した。無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞（ＷＣＣ）または３種類のポリペプチドの組み合わせの何れかにより、全ＰＢＭＣを丸底試験管中で３日間刺激した。次に上清を回収し、ＩＬ−１７レベルについてＥＬＩＳＡにより評価した。コレラ毒素単独（ＣＴ）またはＨＳＶからの非関連抗原（００３）を陰性対照として使用した。ＩＬ−１７免疫原性アッセイの結果を図１および図２で示し、ここで左パネルは散布図形式でデータを示し、右パネルは、標準偏差とともに平均値としてデータを示す。対象をさらに２週間安静にした後、その時点で、莢膜付きＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）生菌の鼻腔内投与によって、対象に対して負荷試験を行った。１週間後に対象を屠殺し、鼻洗浄液から、コロニー形成単位（ＣＦＵ）の数をカウントした。コロニー形成アッセイの結果を図３で示す。
【０１３６】
実施例２
ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて試験したＳＰ０１４８、ＳＰ０３１４、ＳＰ０８８２およびＳＰ２１０８ポリペプチド
異なるマウス遺伝子型間で同様の免疫反応が見られるか否かを決定するために、ワクチン組成物をＢＡＬＢ／ｃマウスに投与した。ワクチン組成物には、ポリペプチドＳＰ０１４８（配列番号２）、ＳＰ０３１４（配列番号２６）、ＳＰ０８８２（配列番号１７）またはＳＰ２１０８（配列番号６）およびコレラ毒素アジュバント（ＣＴ）が含まれた。実施例１と同様のプロトコールを使用してマウスに対して免疫付与を行い、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）を用いて鼻腔内負荷試験を行い、ＣＦＵ数を記録した。このコロニー形成実験の結果を図４で示す。
【０１３７】
実施例３
ＳＰ１９１２、ＳＰ２１０８およびＳＰ０１４８ポリペプチド：ＩＬ−１７Ａ免疫原性アッセイ
ポリペプチドＳＰ１９１２（配列番号９）、ＳＰ２１０８（配列番号６）またはＳＰ０１４８（配列番号２）をワクチン組成物としてコレラ毒素アジュバント（ＣＴ）とともに製剤化した。ワクチン組成物をマウスに１週間おきに２回、投与した。陽性対照は、無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞＋ＣＴ（ＷＣＢ）であり、陰性対照はＣＴ単独またはＣＴを含まない組み換えタンパク質（ＳＰ１９１２を除く）であった。最終免疫付与の３週間後、後眼窩洞から末梢血を採取し、全血アッセイで評価した。簡潔に述べると、ヘパリザインド処理全血（ｈｅｐａｒｉｚｉｎｅｄ  ｗｈｏｌｅ  ｂｌｏｏｄ）を培地中で希釈し、次に２つ組でＡ）免疫付与タンパク質またはＢ）全細胞ワクチンとともに６日間培養した。上清を回収し、ＩＬ−１７ＡレベルをＥＬＩＳＡにより測定した。ＩＬ−１７Ａ免疫原性アッセイの結果を図５で示す。グラフ中の各記号は個々のマウスからの反応を表し、線は群の反応中央値を示す。
【０１３８】
実施例４
ＳＰ１９１２、ＳＰ２１０８およびＳＰ０１４８ポリペプチド：コロニー形成アッセイ
実施例３に記載のとおり、ポリペプチドＳＰ１９１２（配列番号９）、ＳＰ２１０８（配列番号６）またはＳＰ０１４８（配列番号２）およびコレラ毒素アジュバント（ＣＴ）を含むワクチン製剤を用いて、動物に対して免疫付与を行い、次に、最終免疫付与の４週間後（および後眼窩採血の１週間後）に、１０７個の生菌タイプの６Ｂ型Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）で鼻腔内負荷試験を行った。負荷試験の７日後、動物を安楽死させ、鼻咽頭腔を洗浄し許容性の培地上で培養し、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の力価を評価した。洗浄毎の細菌のコロニー形成単位（ＣＦＵ）として結果を図６で示す。各記号は個々のマウス反応からの力価を表し、横線は群の中央値を表す。（＊＊＊＝ｐ値＜０．０５）。
【０１３９】
実施例５
ＳＰ１９１２ポリペプチド：吸引による負荷試験（敗血症アッセイ）
マウスに対する敗血症防止能について、ポリペプチドＳＰ１９１２を評価した。１０匹のマウスの群に対して、ミョウバンに吸着させたＳＰ１９１２ポリペプチド（配列番号９）またはニューモリソイド（ＰｄＴ）の何れかを含むワクチン組成物で２週間おきに３回、皮下投与により免疫付与を行った。陽性対照は無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞＋ミョウバン（ＷＣＢ）であり、陰性対照はミョウバン単独であった。最終免疫付与の３週間後、ＩＬ−１７Ａ反応および抗体レベルの評価のために血液を採取し、次に１週間後、マウスに対して、１０７個の０６０３株（６Ｂ型）Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）生菌を用いて吸引による負荷試験を行った。動物を生存について８日間監視した。吸引による負荷試験の結果は、各免疫付与群に対する生存曲線として図７で示す。
【０１４０】
実施例６
ニューモリソイド（Ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｏｉｄ）ＰｄＴ、ＳＰ０１４８およびＳＰ０６４１Ｎポリペプチド：吸引による負荷試験（敗血症アッセイ）
単独で、またはＳＰ０６４１Ｎおよび／またはニューモリソイド（ＰｄＴ）との組み合わせで免疫付与した場合の、マウスに対する敗血症防止能について、ポリペプチドＳＰ０１４８を評価した。１０匹のマウスの群に対して、ポリペプチドＳＰ０１４８（配列番号２）を含むワクチン組成物を用いて、単独で、またはミョウバンに吸着させたポリペプチドＳＰ０６４１Ｎ（配列番号１３）および／またはＰｄＴと組み合わせて、２週間おきに３回、皮下投与により免疫付与を行った。陽性対照は無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞＋ミョウバン（ＷＣＢ）であり、陰性対照はミョウバン単独であった。最終免疫付与の３週間後、ＩＬ−１７および抗体の評価のために血液を採取し、次に１週間後、マウスに対して、１０７個の０６０３株（６Ｂ型）Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）生菌を用いて吸引による負荷試験を行った。動物を生存について８日間監視した。データは各免疫付与群に対する生存曲線として図８で示す。
【０１４１】
実施例７
ＳＰ１９１２、ＳＰ２１０８およびＳＰ０１４８ポリペプチド：コロニー形成アッセイ
全部で４回の個々の試験に対して、基本的に実施例４に記載のとおり、さらなる試験を行った。簡潔に述べると、実施例３に記載のとおり、ポリペプチドＳＰ１９１２（配列番号９）、ＳＰ２１０８（配列番号６）、ＳＰ０１４８（配列番号２）を含むワクチン製剤または、さらにＳＰ２１０８＋ＳＰ０１４８およびコレラ毒素アジュバント（ＣＴ）を用いて、動物に対して免疫付与を行った。対照動物に対して、無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞＋ＣＴ（ＷＣＶ）またはＣＴ単独で免疫付与を行った。免疫付与した動物に対して、最終免疫付与の４週間後、１０７個の６Ｂ型Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）生菌を用いて鼻腔内投与により負荷試験を行った。負荷試験の７日後、動物を安楽死させ、鼻咽頭腔を洗浄し許容性の培地上で培養し、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の力価を評価した。４回の試験を統合した結果を洗浄毎の細菌のコロニー形成単位（ＣＦＵ）として図９で示す。各記号は個々のマウス反応からの力価を表し、横線は群の中央値を表す。（＊＊＊＝ｐ値＜０．０５）。Ｎは、評価した動物の総数を示す。パーセンテージは、コロニー形成を免れた動物数を指す。
【０１４２】
実施例８
ＳＰ１９１２およびＳＰ０１４８ポリペプチド：ＩＬ−１７免疫原性アッセイ
１０匹のマウスの群に対して、ミョウバンに吸着させた、ＳＰ１９１２ポリペプチド（配列番号９）、ＳＰ０１４８ポリペプチド（配列番号２）またはその両方の何れかを含むワクチン組成物を用いて、２週間おきに２回、皮下投与により免疫付与を行った。対照動物はミョウバン単独で免疫付与した。最終免疫付与の３週間後、ヘパリン処理血液を心穿刺により採取し、全血アッセイにおいてＩＬ−１７Ａレベルを評価した。簡潔に述べると、ヘパリザインド処理全血（ｈｅｐａｒｉｚｉｎｅｄ  ｗｈｏｌｅ  ｂｌｏｏｄ）を培地中で希釈し、次に免疫付与タンパク質とともに６日間培養した。上清を回収し、ＩＬ−１７ＡレベルをＥＬＩＳＡにより測定した。ＩＬ−１７Ａ免疫原性アッセイの結果を図１０で示す。グラフ中の各記号は個々のマウスからの反応を表し、線は群の反応中央値を示す。
【０１４３】
実施例９
ＳＰ１９１２およびＳＰ０１４８ポリペプチド：コロニー形成アッセイ
ミョウバンに吸着させた、様々な用量のポリペプチドＳＰ０１４８（配列番号２）±ＳＰ１９１２（配列番号９）を含むワクチン製剤を用いて、２週間おきに３回、動物に対して皮下投与により免疫付与を行った。対照動物は無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞＋ミョウバン（ＷＣＶ）またはミョウバン単独で免疫付与した。最終免疫付与の４週間後、免疫付与動物に対して、１０７個の６Ｂ型Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）生菌を用いて鼻腔内投与により負荷試験を行った。負荷試験の７日後、動物を安楽死させ、鼻咽頭腔を洗浄し、許容性の培地上で培養し、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の力価を評価した。洗浄毎の細菌のコロニー形成単位（ＣＦＵ）として結果を図１１で示す。各記号は個々のマウス反応からの力価を表し、横線は群の中央値を表す。群の動物数のうちコロニー形成を免れた動物数を図の上部で示す。
【０１４４】
実施例１０
ＳＰ１９１２、ＳＰ０１４８およびＳＰ２１０８ポリペプチド：コロニー形成アッセイ
２回の別個の試験において、ミョウバンに吸着させた、ポリペプチドＳＰ０１４８（配列番号２）およびＳＰ０１４８＋ＳＰ１９１２（配列番号９）を含むワクチン製剤を用いて、またはさらに、ＳＰ２１０８（配列番号６）、ＳＰ２１０８＋ＳＰ０１４８およびＳＰ２１０８＋ＳＰ１９１２を用いて、２週間おきに３回、動物に対して皮下投与により免疫付与を行った。対照動物は無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞＋ミョウバン（ＷＣＶ）またはミョウバン単独で免疫付与した。最終免疫付与の４週間後、免疫付与動物に対して、１０７個の６Ｂ型Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）生菌を用いて鼻腔内投与により負荷試験を行った。負荷試験の７日後、動物を安楽死させ、鼻咽頭腔を洗浄し、許容性の培地上で培養し、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の力価を評価した。２回の試験を統合した結果を洗浄毎の細菌のコロニー形成単位（ＣＦＵ）として図１２で示す。各記号は個々のマウス反応からの力価を表し、横線は群の中央値を表す。群の動物数のうちコロニー形成を免れた動物数および対応するコロニー形成を免れた動物のパーセンテージを図の上部で示す。（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１  ミョウバン対照と比較したダンの多重比較検定）。
【０１４５】
実施例１１
ニューモリソイド（ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｏｉｄ）Ｌ４６０Ｄ、ＰｓｐＡ誘導体ＣＤ２、ＳＰ１９１２、ＳＰ０１４８およびＳＰ２１０８ポリペプチド：コロニー形成アッセイ
ミョウバンに吸着させた、ポリペプチドＳＰ０１４８（配列番号２）、ＳＰ２１０８（配列番号６）、ＳＰ０１４８＋ＳＰ２１０８および、ＳＰ１９１２（配列番号９）または既知のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗原Ｌ４６０Ｄ＋ＣＤ２と組み合わせたＳＰ０１４８＋ＳＰ２１０８を含むワクチン製剤を用いて、２週間おきに３回、動物に対して皮下投与により免疫付与を行った。２回の別個の試験を行った。対照動物はミョウバン単独で免疫付与した。最終免疫付与の４週間後、免疫付与動物に対して１０７個の６Ｂ型Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）生菌を用いて鼻腔内投与により負荷試験を行った。負荷試験の７日後、動物を安楽死させ、鼻咽頭腔を洗浄し、許容性の培地上で培養し、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の力価を評価した。洗浄毎の細菌のコロニー形成単位（ＣＦＵ）として２回目の試験の結果を図１３で示す。各記号は個々のマウス反応からの力価を表し、横線は群の中央値を表す。群の動物数のうちコロニー形成を免れた動物数を図の上部で示す。
【０１４６】
以下の図表は、実施例１０および１１に記載の４回の試験においてコロニー形成を免れた動物の絶対数および対応するパーセンテージを示す。
【０１４７】
【表５】
0006379041.tif 000006
【０１４８】
実施例１２
ＰｓｐＡ、ＳＰ０１４８およびＳＰ２１０８受動抗体移入および吸引による負荷試験（敗血症アッセイ）
１０匹のマウスの群に対して、ＰｓｐＡに特異的なモノクローナル抗体、ＳＰ０１４８、ＳＰ２１０８またはこれらの組み合わせに特異的な熱失活ウサギ血清を注射した。抗体および抗血清濃度および総注射体積は、正常ウサギ血清（ＮＲＳ）およびＰＢＳで調整した。対照動物にはＮＲＳまたは無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞（ＷＣＶ）に対する血清を注射した。注射の１日後、マウスに対して、１０６個のＳ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＷＵ−２型（ＳＴ−３）生菌を用いて吸引による負荷試験を行った。動物を生存について８日間監視した。各免疫付与群に対する生存曲線としてデータを図１４で示す。
【０１４９】
図１５は、６回の別個の吸引による負荷試験において敗血症を免れた動物のパーセンテージを示すが、そのうち２回は実施例６および１２で詳述する。
【０１５０】
実施例１３
ＳＰ０１４８、ＳＰ２１０８およびＳＰ１９１２融合タンパク質：ＩＬ−１７Ａ免疫原性アッセイ
４匹のマウスの群に対して、ミョウバンに吸着させた、融合タンパク質ＳＰ２１０８／０１４８／１９１２（配列番号５３）、ＳＰ０１４８／２１０８（配列番号４８）、ＳＰ０１４８／１９１２（配列番号５０）または単一の抗原ＳＰ２１０８（配列番号６）、ＳＰ０１４８（配列番号２）およびＳＰ１９１２（配列番号９）の同等の組み合わせを含むワクチン組成物を用いて、２週間おきに３回、皮下投与により免疫付与を行った。対照動物はミョウバン単独で免疫付与した。最終免疫付与から２週間後、後眼窩洞から末梢血液を採取し、全血アッセイにおいてＩＬ−１７Ａレベルについて評価した。簡潔に述べると、ヘパリザインド処理全血（ｈｅｐａｒｉｚｉｎｅｄ  ｗｈｏｌｅ  ｂｌｏｏｄ）を培地中で希釈し、次いで、単一（非融合）免疫付与タンパク質とともに６日間培養した。上清を回収し、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−１７Ａレベルを測定した。ＩＬ−１７Ａ免疫原性アッセイの結果を図１６、パネルＡ−Ｃで示す。各バーは、指定の抗原に対する反応における４匹のマウスの各群からの平均±ＳＤ  ＩＬ−１７Ａ反応を表す。
【０１５１】
実施例１４
ＳＰ０１４８、ＳＰ２１０８およびＳＰ１９１２融合タンパク質：ＩＬ−１７Ａ免疫原性アッセイ
４〜８匹のマウスの群に対して、ミョウバンに吸着させた、融合タンパク質ＳＰ０１４８／１９１２／２１０８（配列番号５２）またはＳＰ２１０８／１９１２（配列番号４９）を含むワクチン組成物を用いて、２週間おきに３回、皮下投与により免疫付与を行った。対照動物はミョウバン単独で免疫付与した。最終免疫付与から３週間後、後眼窩洞から末梢血液を採取し、全血アッセイにおいてＩＬ−１７Ａレベルについて評価した。簡潔に述べると、ヘパリザインド処理全血（ｈｅｐａｒｉｚｉｎｅｄ  ｗｈｏｌｅ  ｂｌｏｏｄ）を培地中で希釈し、次いで、免疫付与タンパク質、対照タンパク質とともに、または培地単独で、６日間培養した。細胞不含上清を回収し、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−１７Ａ濃度を測定した。ＩＬ−１７Ａ免疫原性アッセイの結果を図１７、パネルＡおよびＢで示す。各記号は、個々のマウスのＩＬ−１７Ａ反応を表し、線は群の反応中央値を示す。
【０１５２】
実施例１５
ＳＰ２１０８およびＳＰ１９１２融合タンパク質：Ｔ細胞反応の頻度
実施例１４で示される、融合タンパク質ＳＰ２１０８／１９１２（配列番号４９）を含むワクチン組成物またはミョウバン単独で免疫付与したマウスから、末梢血液採取と同時に脾臓を摘出した。単一の細胞縣濁液を脾臓から調製した。赤血球を溶解させ、ウェルあたり２００〜８００個の細胞になるように、抗ＩＬ−１７Ａ捕捉抗体で被覆したＥＬＩＳｐｏｔプレート上に脾臓細胞を播種し、ＳＰ２１０８またはＳＰ１９１２にまたがる重複ペプチド（ＯＬＰ）、無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞（ＷＣＡ）または培地単独で刺激した。温置２日後、細胞を取り出し、ビオチン化抗ＩＬ−１７Ａ抗体およびホースラディッシュペルオキシダーゼ基質で標識することによってＩＬ−１７Ａを視覚化した。各着色スポットは、ＩＬ−１７Ａを分泌した細胞に相当する。脾臓細胞１０６個あたりのスポット形成単位（ＳＦＵ）数としてアッセイの結果を図１８で示す。各記号は、個々のマウスからのスポット頻度を表し、線は群の反応中央値を示す。
【０１５３】
実施例１６
ＳＰ０１４８、ＳＰ２１０８、ＳＰ１９１２および融合タンパク質：ＩＬ−１７Ａ用量反応アッセイ
ミョウバンに吸着させた、３０、１００または３００ｐｍｏｌの融合タンパク質ＳＰ０１４８／１９１２／２１０８（配列番号５２）、ＳＰ０１４８／２１０８／１９１２（配列番号５４）、ＳＰ２１０８／０１４８／１９１２（配列番号５３）、ＳＰ０１４８／１９１２（配列番号５０）、ＳＰ２１０８／１９１２（配列番号４９）またはＳＰ０１４８（配列番号２）、ＳＰ２１０８（配列番号６）およびＳＰ１９１２（配列番号９）の指定の混合物を含むワクチン組成物を用いて、２週間おきに３回、４匹のマウスの群に対して皮下投与により免疫付与を行った。対照動物はミョウバン単独で免疫付与した。最終免疫付与から２週間後、後眼窩洞から末梢血液を採取し、全血アッセイにおいてＩＬ−１７Ａレベルについて評価した。簡潔に述べると、ヘパリザインド処理全血（ｈｅｐａｒｉｚｉｎｅｄ  ｗｈｏｌｅ  ｂｌｏｏｄ）を培地中で希釈し、次いで、ＳＰ０１４８、ＳＰ１９１２またはＳＰ２１０８にまたがる重複ペプチド（ＯＬＰ）、無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞（ＷＣＡ）とともに、または培地単独で６日間培養した。細胞不含上清を回収し、ＩＬ−１７Ａ濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。ＩＬ−１７Ａ用量反応アッセイの結果を図１９、パネルＡおよびＢで示す。各バーは、培地誘導性（非特異的な）バックグラウンドを差し引いた、マウス群の平均の特異的ＩＬ−１７Ａ反応を表す。
【０１５４】
実施例１７
ＳＰ０１４８、ＳＰ２１０８、ＳＰ１９１２および融合タンパク質：ＩＬ−１７Ａ免疫原性アッセイ
ミョウバンに吸着させた、融合タンパク質ＳＰ２１０８／１９１２（配列番号４９）またはＳＰ０１４８／１９１２／２１０８（配列番号５２）またはＳＰ０１４８（配列番号２）、ＳＰ２１０８（配列番号６）およびＳＰ１９１２（配列番号９）の指定の混合物を含むワクチン組成物を用いて、２週間おきに３回、１０匹のマウスの群に対して皮下投与により免疫付与を行った。対照動物はミョウバン単独で免疫付与した。最終免疫付与から３週間後、後眼窩洞から末梢血液を採取し、全血アッセイにおいてＩＬ−１７Ａレベルについて評価した。簡潔に述べると、ヘパリザインド処理全血（ｈｅｐａｒｉｚｉｎｅｄ  ｗｈｏｌｅ  ｂｌｏｏｄ）を培地中で希釈し、次いで、無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞（ＷＣＡ）とともに６日間培養した。細胞不含上清を回収し、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−１７Ａレベルを測定した。ＩＬ−１７Ａ免疫原性アッセイの結果を図２０で示す。各記号は、個々のマウスのＩＬ−１７Ａ反応を表し、線は群の反応中央値を示す。
【０１５５】
実施例１８
ＳＰ０１４８、ＳＰ２１０８およびＳＰ１９１２融合タンパク質：鼻腔内負荷試験およびコロニー形成アッセイ
ミョウバンに吸着させた、融合タンパク質ＳＰ２１０８／１９１２（配列番号４９）、ＳＰ０１４８／１９１２（配列番号５０）、ＳＰ０１４８／２１０８／１９１２（配列番号５４）、ＳＰ０１４８／１９１２／２１０８（配列番号５２）またはＳＰ２１０８／０１４８／１９１２（配列番号５３）またはＳＰ０１４８（配列番号２）、ＳＰ２１０８（配列番号６）およびＳＰ１９１２（配列番号９）の混合物を含むワクチン製剤を指定の用量で用いて、２週間おきに３回、動物に対して皮下投与により免疫付与を行った。対照動物はミョウバン単独で免疫付与した。最終免疫付与から２５日後、免疫付与動物に対して、１０６〜１０７コロニー形成単位（ＣＦＵ）の０６０３Ｍ２０Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株の生菌を用いて鼻腔内投与により負荷試験を行った。負荷試験から１０日後、動物を安楽死させ、鼻咽頭腔を洗浄し（鼻洗浄）、許容性の培地上で液体培養し、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の力価を評価した。鼻洗浄あたりのＣＦＵとして、コロニー形成アッセイの結果を図２１、パネルＡ〜Ｄで示す。各記号は、個々のマウスからのコロニー形成密度を表し、横線は、群の中央値を表す。パネルＡにおいて、星印は、マン−ホイットニーＵ検定による統計学的有意差を指し；防御されたマウスの絶対数および細菌コロニー形成における対応する対数減少中央値も示す。（＊ｐ＜０．０５；＊＊ｐ＜０．００５；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００５）。
【０１５６】
実施例１９
ＳＰ０１４８、ＳＰ２１０８およびＳＰ１９１２融合タンパク質：吸引による負荷試験および敗血症アッセイ
ミョウバンに吸着させた、融合タンパク質ＳＰ２１０８／０１４８（配列番号４７）、ＳＰ０１４８／２１０８（配列番号４８）、ＳＰ２１０８／１９１２（配列番号４９）、ＳＰ０１４８／１９１２（配列番号５０）、ＳＰ２１０８／１９１２／０１４８（配列番号５１）、ＳＰ０１４８／１９１２／２１０８（配列番号５２）、ＳＰ２１０８／０１４８／１９１２（配列番号５３）またはＳＰ０１４８／２１０８／１９１２（配列番号５４）を含むワクチン組成物を用いて、２週間おきに３回、１０匹のマウスの群に対して皮下投与により免疫付与を行った。対照動物に対して、無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞＋ミョウバン（ＷＣＶ）またはミョウバン単独で免疫付与した。最終免疫付与から３週間後、ＩＬ−１７Ａおよび抗体の評価のために血液を採取し、次いで１週間後、マウスに対して１０７個のＷＵ−２（血清型３）Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株生菌を用いて吸引による負荷試験を行った。動物を生存について８日間監視した。各免疫付与群に対する生存曲線として結果を報告する。
【０１５７】
実施例２０
融合タンパク質ＳＰ２１０８／１９１２＋Ｂ細胞抗原：ＩＬ−１７Ａ免疫原性アッセイ
ミョウバンに吸着させた、融合タンパク質ＳＰ２１０８／１９１２（配列番号４９）＋Ｂ細胞抗原ＹＬＮおよびＨ７０（配列番号３３）またはＢ細胞抗原ＰＲＮ−Ｌ４６０Ｄの何れかを含むワクチン組成物を用いて、２週間おきに３回、２０匹のマウスの群に対して皮下投与により免疫付与を行った。対照動物に対して、無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞（ＷＣＢ）またはミョウバン単独で免疫付与を行った。最終免疫付与の２〜３週間後、後眼窩洞から末梢血液を採取し、全血アッセイにおいてＩＬ−１７Ａレベルについて評価した。簡潔に述べると、ヘパリザインド処理全血（ｈｅｐａｒｉｚｉｎｅｄ  ｗｈｏｌｅ  ｂｌｏｏｄ）を培地中で希釈し、次いで、ＳＰ２１０８またはＳＰ１９１２にまたがる重複ペプチド（ＯＬＰ）または無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞（ＷＣＡ）とともに６日間培養した。細胞不含上清を回収し、ＩＬ−１７Ａ濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。ＩＬ−１７Ａ免疫原性アッセイの結果を図２２、パネルＡおよびＢで示す（２つ組の実験）。各記号は、個々のマウスのＩＬ−１７Ａ反応を表し、線は群の反応中央値を示す。
【０１５８】
実施例２１
融合タンパク質ＳＰ２１０８／１９１２＋Ｂ細胞抗原：鼻腔内負荷試験とそれに続くコロニー形成アッセイ
ミョウバンに吸着させた、無莢膜Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）死菌全細胞（ＷＣＢ）、融合タンパク質ＳＰ２１０８／１９１２（配列番号４９）＋Ｂ細胞抗原ＹＬＮおよびＨ７０（配列番号３３）またはＢ細胞抗原ＰＲＮ−Ｌ４６０Ｄの何れかを含むワクチン組成物を用いて、２週間おきに３回、２０匹のマウスの群に対して皮下投与により免疫付与を行った。対照動物はミョウバン単独で免疫付与した。最終免疫付与の３〜５週間後、免疫付与動物に対して、１０７個の０６０３Ｍ２０  Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株生菌を用いて鼻腔内投与により負荷試験を行った。負荷試験から１０日後、動物を安楽死させ、鼻咽頭腔を洗浄し（鼻洗浄）、許容性の培地上で液体培養し、Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の力価を評価した。鼻洗浄あたりの細菌のコロニー形成単位（ＣＦＵ）として、コロニー形成アッセイの結果を図２３、パネルＡおよびＢで示す（２つ組実験）。各記号は、個々のマウスからのコロニー形成密度を表し、横線は、群の中央値を表す。
【０１５９】
実施例２２
融合タンパク質ＳＰ２１０８／１９１２＋Ｂ細胞抗原：静脈内負荷試験とそれに続く敗血症アッセイ
ミョウバンに吸着させた、Ｂ細胞抗原ＹＬＮ＋Ｈ７０（配列番号３３）、融合タンパク質ＳＰ２１０８／１９１２（配列番号４９）＋Ｂ細胞抗原ＹＬＮおよびＨ７０（配列番号３３）または融合タンパク質ＳＰ２１０８／１９１２（配列番号４９）＋Ｂ細胞抗原ＰＲＮ−Ｌ４６０Ｄを含むワクチン組成物を用いて、２週間おきに３回、２０匹のマウスの群に対して皮下投与により免疫付与を行った。対照動物はミョウバン単独で免疫付与した。最終免疫付与から３週間後、３．６×１０６個のＤＢＬ６Ａ  Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株生菌を免疫付与動物に静脈内注射した。２１日間にわたり、生存について動物を監視した。各マウスが瀕死状態または死亡に至るまでの経過時間として、結果を図２４、パネルＡおよびＢで示す（２つ組実験）。各記号は、個々のマウスの反応を表し、線は群の反応中央値を示す。
【０１６０】
均等物
本開示をその詳細な説明と合わせて述べてきたが、前述の説明は、例証であって、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲により定められることを理解されたい。他の態様、長所および変更は続く特許請求の範囲内である。
【０１６１】
配列
配列番号１
【化１】
0006379041.tif 000007
【０１６２】
配列番号２
【化２】
0006379041.tif 000008
【０１６３】
配列番号３
【化３】
0006379041.tif 000009
【０１６４】
配列番号４
【化４】
0006379041.tif 000010
【０１６５】
配列番号５
【化５】
0006379041.tif 000011
【０１６６】
配列番号６
【化６】
0006379041.tif 000012
【０１６７】
配列番号７
【化７】
0006379041.tif 000013
【０１６８】
配列番号８
【化８】
0006379041.tif 000014
【０１６９】
配列番号９
【化９】
0006379041.tif 000015
【０１７０】
配列番号１０
【化１０】
0006379041.tif 000016
【０１７１】
配列番号１１
【化１１】
0006379041.tif 000017
【０１７２】
配列番号１２
【化１２】
0006379041.tif 000018
【０１７３】
配列番号１３
【化１３】
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【０１７４】
配列番号１４
【化１４】
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【０１７５】
配列番号１５
【化１５】
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【０１７６】
配列番号１６
【化１６】
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【０１７７】
配列番号１７
【化１７】
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【０１７８】
配列番号１８
【化１８】
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【０１７９】
配列番号１９
【化１９】
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【０１８０】
配列番号２０
【化２０】
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【０１８１】
配列番号２１
【化２１】
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【０１８２】
配列番号２２
【化２２】
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【０１８３】
配列番号２３
【化２３】
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【０１８４】
配列番号２４
【化２４】
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【０１８５】
配列番号２５
【化２５】
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【０１８６】
配列番号２６
【化２６】
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【０１８７】
配列番号２７
【化２７】
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【０１８８】
配列番号２８
【化２８】
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【０１８９】
配列番号２９
【化２９】
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【０１９０】
配列番号３０
【化３０】
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【０１９１】
配列番号３１
【化３１】
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【０１９２】
配列番号３２
【化３２】
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【０１９３】
配列番号３３
【化３３】
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【０１９４】
配列番号３４
【化３４】
0006379041.tif 000040
【０１９５】
配列番号３５
【化３５】
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【０１９６】
配列番号３６
【化３６】
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【０１９７】
配列番号３７
【化３７】
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【０１９８】
配列番号３８
【化３８】
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【０１９９】
配列番号３９
【化３９】
0006379041.tif 000045
【０２００】
配列番号４０
【化４０】
0006379041.tif 000046
【０２０１】
配列番号４１
【化４１】
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【０２０２】
配列番号４２
【化４２】
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【０２０３】
配列番号４３
【化４３】
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【０２０４】
配列番号４４
【化４４】
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【０２０５】
配列番号４５
【化４５】
0006379041.tif 000051
【０２０６】
配列番号４６
【化４６】
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【０２０７】
配列番号４７
【化４７】
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【０２０８】
配列番号４８
【化４８】
0006379041.tif 000054
【０２０９】
配列番号４９
【化４９】
0006379041.tif 000055
【０２１０】
配列番号５０
【化５０】
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【０２１１】
配列番号５１
【化５１】
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【０２１２】
配列番号５２
【化５２】
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【０２１３】
配列番号５３
【化５３】
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【０２１４】
配列番号５４
【化５４】
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【０２１５】
配列番号５５
【化５５】
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【０２１６】
配列番号５６
【化５６】
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【０２１７】
配列番号５７
【化５７】
0006379041.tif 000063
【０２１８】
配列番号５８
【化５８】
0006379041.tif 000064
【０２１９】
配列番号５９
【化５９】
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【０２２０】
配列番号６０
【化６０】
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【０２２１】
配列番号６１
【化６１】
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【０２２２】
配列番号６２
【化６２】
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【０２２３】
配列番号６３
【化６３】
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【０２２４】
配列番号６４
【化６４】
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【０２２５】
配列番号６５
【化６５】
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【０２２６】
配列番号６６
【化６６】
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【０２２７】
配列番号６７
【化６７】
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【０２２８】
配列番号６８
【化６８】
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【０２２９】
配列番号６９
【化６９】
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【０２３０】
配列番号７０
【化７０】
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【０２３１】
配列番号７１
【化７１】
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【０２３２】
配列番号７２
【化７２】
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【０２３３】
配列番号７３
【化７３】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６−１】
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【図１６−２】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１８】
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【図１９−１】
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【図１９−２】
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【図２０】
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【図２１−１】
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【図２１−２】
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【図２１−３】
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【図２１−４】
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【図２２−１】
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【図２２−２】
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【図２３−１】
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【図２３−２】
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【図２４−１】
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【図２４−２】
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【配列表】
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