(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
表面脱アセチル化キチンナノファイバー（ＳＤＡＣＮＦ）を含む創傷治癒促進剤であって、ケロイド化を抑制しつつ創傷治癒を促進するものである剤。
【請求項２】
ＳＤＡＣＮＦの脱アセチル化度が５〜２０％である請求項１記載の創傷治癒促進剤。
【請求項３】
ＳＤＡＣＮＦのファイバー径が４〜２０ナノメートル、ファイバー長が１００ナノメー
トル以上である請求項１または２記載の創傷治癒促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、創傷治癒促進剤に関する。詳細には、本発明は、表面脱アセチル化キチンナノファイバーを含む創傷治癒促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
創傷治癒を促進するために様々な物質が用いられおり、検索もされている。例えば抗菌剤、抗生物質、壊死組織融解剤、肉芽形成促進剤、上皮形成促進剤などを含む創傷治療薬が用いられている。天然高分子を有効成分とした創傷治癒促進剤も知られており、キチンおよびキトサンの局所適用が創傷治癒促進作用を有することもわかっている（非特許文献１参照）。しかし、天然高分子を主体とする創傷治癒促進剤は毒性や副作用が少ないという利点を有するが、さらなる創傷治癒作用が望まれている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】伊藤幹雄  臨床透析、第２４巻、第１３号、５０−５２頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
毒性や副作用が少なく、しかも十分な創傷治癒促進作用を有する物質を検索し、効果の優れた創傷治癒促進剤を開発することが、本発明が解決しようとする課題であった。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは鋭意研究を重ね、表面脱アセチル化キチンナノファイバー（「ＳＤＡＣＮＦ」、「表面キトサン化キチンナノファイバー」ともいう）を用いることによって上記課題を解決できることを見いだし、本発明を完成させるに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は以下のものを提供する。
（１）ＳＤＡＣＮＦを含む創傷治癒促進剤。
（２）ＳＤＡＣＮＦの脱アセチル化度が５〜２０％である（１）記載の創傷治癒促進剤。
（３）ＳＤＡＣＮＦのファイバー径が４〜２０ナノメートル、ファイバー長が１００ナノメートル以上である（１）または（２）記載の創傷治癒促進剤。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、毒性や副作用が少なく、しかも十分な効果を有する創傷治癒促進剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、純水、α−キチン、α−キチンナノファイバー、ＳＤＡＣＮＦ、キトサンナノファイバーを創傷に適用した場合の、８日目の肉眼像である。
【図２】図２は、純水、α−キチン、α−キチンナノファイバー、ＳＤＡＣＮＦ、キトサンナノファイバーを創傷に適用した場合の、４日目の表皮−真皮の切片像（中倍像）である。図中のスケールバーは２００ミクロンである。
【図３】図３は、純水、α−キチン、α−キチンナノファイバー、ＳＤＡＣＮＦ、キトサンナノファイバーを創傷に適用した場合の、８日目の表皮−真皮の切片像（低倍像）である。図中のスケールバーは４００ミクロンである。
【図４】図４は、純水、α−キチン、α−キチンナノファイバー、ＳＤＡＣＮＦ、キトサンナノファイバーを創傷に適用した場合の、８日目の表皮−真皮の切片像（高倍像）である。図中のスケールバーは１００ミクロンである。
【図５】図５は、無処置ならびに純水、α−キチン、α−キチンナノファイバー、ＳＤＡＣＮＦ、キトサンナノファイバーを創傷に適用した場合の、４日目の皮膚組織所見を示す。
【図６】図６は、無処置ならびに純水、α−キチン、α−キチンナノファイバー、ＳＤＡＣＮＦ、キトサンナノファイバーを創傷に適用した場合の、８日目の皮膚組織所見を示す。
【図７】図７は、無処置ならびに純水、α−キチン、α−キチンナノファイバー、ＳＤＡＣＮＦ、キトサンナノファイバーを創傷に適用した場合の、４日目の皮膚修復ステージを示す。
【図８】図８は、無処置ならびに純水、α−キチン、α−キチンナノファイバー、ＳＤＡＣＮＦ、キトサンナノファイバーを創傷に適用した場合の、８日目の皮膚修復ステージを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明は、１の態様において、ＳＤＡＣＮＦを含む創傷治癒促進剤を提供する。本発明に用いるＳＤＡＣＮＦの製造法は当業者に公知であり、いずれの方法を用いて得られたものであってもよい。本発明に用いるＳＤＡＣＮＦの製造法は、例えば、奥ら、キチン・キトサン研究第１６巻第２号、２３１ページ（２０１０年）、生田ら、キチン・キトサン研究第１８巻第２号、１９７ページ（２０１２年）などに記載されている。本発明に用いるＳＤＡＣＮＦ製造の具体的手順の一例を以下に説明する。キチン粉末を水酸化ナトリウム水溶液（例えば２０重量％）中に分散させ、適当時間（例えば６時間）不活性気体（例えばアルゴン）雰囲気下で乾留する。反応後、上澄を除去し、残渣に酢酸水溶液（例えば０．５重量％）を添加して酸可溶部分を溶解させた後、遠心分離により固体分を回収する。回収した固体分に再び酢酸水溶液（例えば１重量％）を添加して、粉砕装置（例えばグラインダー（例えば砥石の回転数１５００ｒｐｍ、パス数３回、固形分１重量％））で粉砕し、ＳＤＡＣＮＦを得ることができる。
【００１０】
本発明に用いる好ましいＳＤＡＣＮＦは以下の物性を有する：脱アセチル化度は約５〜約２０％、好ましくは約７〜約１５％、ファイバー径は約２〜約５０ナノメートル、好ましくは約４〜約２０ナノメートル、より好ましくは約４〜約１０ナノメートル、ファイバー長は約１００ナノメートル以上、好ましくは約２００ナノメートル以上。また、結晶化度については、原料と比較して総体的な結晶度の低下が約２０％以内であることが好ましい。
【００１１】
本発明の創傷治癒促進剤中のＳＤＡＣＮＦの量は、剤形および適用すべき創傷のサイズや性質等のファクターに応じて適宜変更することができるが、例えば、濃度１％の懸濁液０．５〜１０ｍｌ、好ましくは２〜５ｍｌを創傷部位に適用してもよい。
【００１２】
本発明の創傷治癒促進剤の剤形は外用剤の形態であれば特に制限はなく、クリーム、軟膏、パスタ、ローション、パッチ、シート、ハイドロゲル、スポンジなどが例示されるが、これらに限らない。これらの剤形の製造法は当業者に公知である。本発明の創傷治癒促進剤を創傷部位に直接適用することができる。例えば、軟膏の形態の本発明の創傷治癒促進剤の適量を創傷部位に１日数回適用してもよい。
【００１３】
本発明の創傷治癒促進剤は、当業者に公知の創傷治癒促進物質や抗生物質と併用してもよいし、これらの物質を含むものであってもよい。かかる物質の例として、ヨウ素、ポピドンヨード、ブロメライン、ソルコセリル、塩化リゾチーム、トレチノイントコフェリル、ブクラデシンナトリウム、アルプロスタジル  アルファデクス、トラフェルミン、ゲンタマイシン、塩酸フラジオマイシン等が挙げられるが、これらに限らない。
【００１４】
以下に実施例を示して本発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、実施例は本発明を限定するものと解してはならない。
【実施例１】
【００１５】
（１）実験材料
以下の実験群で実験を行った：
・蒸留水適用群
・α−キチン（α−chitin）適用群
・α−キチンナノファイバー（α−ＮＦ）適用群
・表面脱アセチル化キチンナノファイバー（ＳＤＡＣＮＦ）適用群
・キトサンナノファイバー（chitosan NF）適用群。
各群につき  ４匹のラット（Whister、雌、体重１３０〜１５０ｇ）を使用した。
【００１６】
α−キチンナノファイバーの製法を以下に示す。α−キチンは甲陽ケミカル製キチンＴＣ−Ｌを用いた。キチン粉末に水を添加して１％濃度に調整した。これを石臼式磨砕機（スーパーマスコロイダー、増幸産業）を用いて荒破砕した後、ボール衝突チャンバーを搭載した湿式粉砕装置（スターバーストミニ、HJP-25001S、スギノマシン）を用いて処理した。衝突回数は３０回、ノズルの径は１００μm、衝突圧力は２００MPaとした。
キトサンナノファイバーの製法を以下に示す。キトサンは甲陽ケミカル製（コーヨーキトサンFH-80）を用いた。キトサン粉末に水を添加して１％濃度に調整した。これをボール衝突チャンバーを搭載した湿式粉砕装置（スターバーストミニ、HJP-25001S、スギノマシン）を用いて処理した。衝突回数は３０回、ノズルの径は１００μm、衝突圧力は２００MPaとした。
【００１７】
ＳＤＡＣＮＦを以下のようにして調製した。キチン粉末（甲陽ケミカル製キチンTC-L）を濃アルカリ処理（２０ｗｔ％水酸化ナトリウムを用いて６時間乾留）して脱アセチル化し、純水で洗浄した。次いで、［００１６］と同様の方法により粉砕し、ＳＤＡＣＮＦを得た。ファイバー径は約４〜約２０ナノメートル、ファイバー長は約１００ナノメートル以上であった。脱アセチル化度は約１０〜約２０％であった。
【００１８】
（２）実験方法
ラット円形皮膚欠損モデルを用いた。皮膚を欠損させる７日前からラットを馴化させた。ラットの背の皮膚に直径８ｍｍの穴を開けた（０日目）。皮膚を欠損させると同時に試料を塗布し、２日目、４日目および６日目に試料を塗布した。４日目および８日目に採材した。塗布した試料は、α−キチン、α−キチンナノファイバー、ＳＤＡＣＮＦ、キトサンナノファイバーをそれぞれ１％となるよう蒸留水に懸濁したものであった。マイクロシリンジを用いて試料を患部に週３回塗布した（０．１ｍｌ）。
【００１９】
（３）実験結果
１．創傷部位の肉眼像
試料塗布８日目の創傷部位の肉眼像を図１に示す。これらの写真からわかるように、表面キトサン化キチンナノファイバー（ＳＤＡＣＮＦ）を塗布した創傷部位が、純水、α−キチン、α−キチンナノファイバー、キトサンナノファイバーを塗布した創傷部位と比べて、顕著に小さくなったことが確認される。これらの結果は、実験したすべての動物個体において同様の傾向であった。これらの結果から、ＳＤＡＣＮＦを塗布した系で最も創傷の修復が早いことが示された。
【００２０】
２．創傷部位の皮膚切片観察および皮膚組織所見
４日目および８日目に採材した皮膚試料の切片を顕微鏡観察した。中倍像（４日目）、低倍像（８日目）、高倍像（８日目）を、それぞれ図２、図３、図４に示す。また、４日目および８日の創傷部位の皮膚組織所見について、痂皮、潰瘍、上皮化、線維芽細胞の増殖、コラーゲンの蓄積、単核細胞数、多核巨細胞数および血管新生の各項目を数値化し、図５（４日目）および図６（８日目）に示す。これらの結果を以下にまとめる。ＳＤＡＣＮＦ塗布群では４日目より上皮化ならびに膠原繊維の増殖が確認され、８日目にはほぼ完全な上皮化ならびに膠原繊維の増殖が確認された。さらに８日目では痂皮の残存は見られなかった。一方、キチン塗布群では、上皮化は４日目では確認できず、８日目でも不十分であった。また、膠原繊維の増殖もＳＤＡＣＮＦ塗布群と比較した場合不十分であった。また、キチンナノファイバー塗布群では、４日目には上皮化は確認されず、８日目にて上皮化は確認されたが全周には至っていなかった。膠原繊維の増殖もＳＤＡＣＮＦ塗布群と比較すると軽微であった。また、キトサンナノファイバー塗布群では、膠原繊維の増殖はＳＤＡＣＮＦ塗布群と同程度確認されたものの、上皮化は不十分であった。これらの結果は、実験したすべての動物個体において同様の傾向であった。これらの結果から、ＳＤＡＣＮＦを塗布した系で最も創傷の修復が早いことが示された。
【００２１】
３．創傷部位の皮膚修復ステージ
４日目および８日目の皮膚修復ステージについて、炎症期、増殖期、リモデリング期の特徴を数値化し、図７および図８に示す。ＳＤＡＣＮＦ塗布群では、既に４日目でリモデリング期の特徴が見られ（図７）、８日目には増殖期およびリモデリング期の特徴が顕著であった。ＳＤＡＣＮＦ塗布群のリモデリング期のスコアが５であるのに対して他の群では１〜３であった。これらの結果は、実験したすべての動物個体において同様の傾向であった。これらの結果から、ＳＤＡＣＮＦ塗布群は、他の群と比較して創傷修復の進行が早いことが示された。また、８日目においてＳＤＡＣＮＦ塗布群のリモデリング期のスコアが高いことは、ケロイド化せずに皮膚が再生される傾向が大きいことを意味する。
【００２２】
以上の結果から、ＳＤＡＣＮＦの創傷治癒促進効果が、無処置群、蒸留水塗布群、α−キチン塗布群、α−キチンナノファイバー塗布群、キトサンナノファイバー塗布群と比較して極めて高いことが示された。
【産業上の利用可能性】
【００２３】
本発明は極めて優れた創傷治癒促進剤を提供するので、医薬品の分野において利用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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