(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性成分としてカルバミン酸３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−イソオキサゾール−５−イルメチルエステルと、担体として前記活性成分の融点以下のガラス転移温度を有する水溶性ポリマーと、可塑剤とを含み、前記水溶性ポリマーが、ポリビニルピロリドン、ヒプロメロースアセテートスクシネート及びこれらの組み合わせから選択されるものであり、前記可塑剤が、Ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート、ポリエチレングリコール４００及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるものである、固体分散体。
【請求項２】
前記水溶性ポリマーが、組成物の全重量に基づいて３０重量％またはそれ以上で含まれる、請求項１に記載の固体分散体。
【請求項３】
前記可塑剤が、組成物の全重量に基づいて１〜１０重量％またはそれ以上で含まれる、請求項１に記載の固体分散体。
【請求項４】
１０〜５０重量％の活性成分、および５０〜９０重量％のポリビニルピロリドンを含む、請求項１に記載の固体分散体。
【請求項５】
１０〜５０重量％の活性成分、４５〜８５重量％のポリビニルピロリドン又はヒプロメロースアセテートスクシネート、及び１〜５重量％のＤ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート又はポリエチレングリコール４００を含む、請求項１に記載の固体分散体。
【請求項６】
活性成分の融点以下の温度で溶融される、請求項１に記載の固体分散体。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の固体分散体を含む、経口投与のための組成物。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の固体分散体を含む、中枢神経系疾患の治療のための医薬組成物。
【請求項９】
退行性脳疾患の治療のためである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
活性成分としてのカルバミン酸３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−イソオキサゾール−５−イルメチルエステル、担体として前記活性成分の融点以下のガラス転移温度を有する水溶性ポリマー、及び可塑剤を混合し、次いで、前記混合物を活性成分の融点以下の温度で溶融押出することを特徴とし、前記水溶性ポリマーが、ポリビニルピロリドン、ヒプロメロースアセテートスクシネート及びこれらの組み合わせから選択されるものであり、前記可塑剤が、Ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート、ポリエチレングリコール４００及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるものである、固体分散体の製造方法。
【請求項１１】
前記混合物が、温度が順次低くなっている４つまたはそれ以上の加熱ブロックを通過する際に溶融されるものである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記加熱ブロックが、第１〜第４の加熱ブロックからなり、第１の加熱ブロックの溶融温度が、１６０〜１４５℃に制御され、第２の加熱ブロックの溶融温度が、１４４〜１２０℃に制御され、第３の加熱ブロックの溶融温度が、１１９〜８０℃に制御され、および第４の加熱ブロックの溶融温度が、７９〜７０℃に制御されているものである、請求項１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経口投与時に難溶性薬物のバイオアベイラビリティを向上させるために用いられる固体分散体、特に、難溶性化合物であるカルバミン酸３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−イソオキサゾール−５−イルメチルエステルの固体分散体及びその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
カルバミン酸３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−イソオキサゾール−５−イルメチルエステルは、下記構造
【化１】
0006266006.tif 000002
を有するアゾール誘導体化合物である。
【０００３】
これは、特許文献１として出願されたものである。この化合物は、高い神経細胞保護作用があり、神経細胞の死滅又は神経退化と関連した疾患に治療効果を示すが、水に対する溶解度が極めて低く、経口投与時に非常に低いバイオアベイラビリティを示す。
【０００４】
難溶性薬物は、水に対する低い溶解性のため、胃液や体液などにおいてもその溶解度及び溶解速度が低く、胃腸管を通した吸収が阻害され、経口投与時に低いバイオアベイラビリティを示す。従って、難溶性薬物の溶解性や吸収度を改善するための様々な研究が行われている。結晶性化合物をアモルファスに変換するか、微細化して、表面積を高める物理的変化を通じて改善するか、又は界面活性剤や適当な溶媒を用いて乳剤若しくはマイクロエマルジョンとして開発し、溶解度と吸収度を高めようとする試みがその例である。アモルファスは、結晶形に比べて水に対する溶解度が１０−１６００倍以上高いので、アモルファスに変換させれば、バイオアベイラビリティが顕著に増加される。しかし、アモルファスは、時間が経つにつれて自由エネルギーが低い結晶形に再び再結晶される傾向が大きいので、保存安定性が低いという問題が存在する。粒子径を微細化して、表面積を高める試みは、溶解速度が低い物質の溶解速度の改善には効果的であるが、物質の固有の溶解度は変化させることができない。さらに、ハンマー・ミール（Hammer Mill）やジェット・ミル（Jet mill）等の粉砕機を用いた微細化は、化合物のエネルギー反応性から適用に限界がある。界面活性剤のような可溶化剤を用いて、マイクロエマルジョンなどを製造し、その溶解度を改善する方法等もよく活用されているが、用いられる溶解助剤や有機溶媒、界面活性剤の毒性により使用に制約がある。難溶性薬物の溶解度改善のための他の方法として、固体分散体を用いた研究が試行されている。固体分散体は、固体状態の水溶性ポリマーマトリックスに薬物粒子が分散される系であり、薬物粒径を小さくし、薬物粒子の表面積を広げることができ、固体分散体を製造する過程で薬物がアモルファスに変換され、部分又は全体的にアモルファス状態で存在するため、薬物の溶解度の増加はもちろん、保存性の面からも効率的である。固体分散体の製造方法として、噴霧乾燥法及び溶融押出法が知られている。噴霧乾燥法は、薬物及び水溶性ポリマーの特性に応じて適当な溶媒と混合した後、噴霧して、固体分散体を製造する方法であり、難溶性薬物と水溶性ポリマーとを一緒に溶解させることができる溶媒を見出すことが困難であるという問題が存在する。特に、薬物が溶媒に対して溶解度が低い場合、多量の有機溶媒を使用するため、商業的な生産に適用することが難しく、溶媒の回収とそれに伴う環境汚染の恐れがある。他の方法として、溶融押出法は、薬物及び水溶性ポリマー混合物を薬物の融点及びポリマー混合物のガラス転移温度以上に溶融して、薬物をアモルファス状態に変換させ、ポリマーに可塑性を付与して押出すことによって固体分散体を形成する方法である。本発明者は、特定の条件下で溶融押出法を用いることによって、溶解度及びバイオアベイラビリティが顕著に改善され、物理化学的安定性が向上された難溶性化合物の固体分散体を効率的に製造することができることを見出して、本発明を完成した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】韓国特許出願第２０１０−００１６６８６号
【特許文献２】韓国特許出願第２０１０−００４１４３６号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、難溶性化合物であるカルバミン酸３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−イソオキサゾール−５−イルメチルエステル化合物の溶解度および物理化学的安定性を改善させることができる固体分散体及びその製造方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記課題を解決するために、本発明は、活性成分として、カルバミン酸３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−イソオキサゾール−５−イルメチルエステル、および担体として、カルバミン酸３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−イソオキサゾール−５−イルメチルエステルの融点以下のガラス転移温度を有する水溶性ポリマーを含み、溶融押出により製造されることを特徴とする固体分散体を提供する。本発明の固体分散体は、可塑剤をさらに含んでもよい。
【０００８】
本発明はまた、活性成分であるカルバミン酸３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−イソオキサゾール−５−イルメチルエステル及び担体である水溶性ポリマーを混合し、この混合物を前記活性成分の融点以下の温度で溶融押出することによって固体分散体を製造する方法を提供する。本発明による方法において、前記混合物は、可塑剤をさらに含んでいてもよい。
【０００９】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１０】
本発明で用いられる活性成分のカルバミン酸３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−イソオキサゾール−５−イルメチルエステル（以下、「ＣＢＩ」という）は、下記式の構造を有する置換アゾール誘導体化合物である。本発明において、用語ＣＢＩは、全ての医薬的に許容できる塩、異性体、溶媒和物及びこれらの組み合わせを含むものとして用いられる。
【００１１】
ＣＢＩは、麻痺、アルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、ピック病、クロイツフェルト・ヤコブ（Creutzfeld-Jacob）病、パーキンソン−ＡＬＳ−認知症症候群、ウィルソン病、多発性硬化症、進行性核上まひ、神経障害痛と双極性障害、大脳皮質基底核変性症、統合失調症、注意欠陥過活動性障害、認知症、筋萎縮性側索硬化症、網膜疾患、てんかん、脳卒中、一過性虚血発作、心筋虚血、筋肉虚血、脳血流の持続性閉塞を伴う外科的技術から引き起こされた虚血、頭部外傷、脊髄外傷、低酸素症及び鬱病からなる群から選択される疾患の予防又は治療のために用いられてもよい。
【化２】
0006266006.tif 000003
【００１２】
前記活性成分のＣＢＩは、好ましくは、組成物の全重量に基づいて１０〜７０重量％で含まれる。活性成分が少なくとも１０重量％またはそれ以上で含まれる場合、固体分散体内で含量均一性を確保することが容易であり、活性成分が７０重量％以下で含まれる場合、高分子担体との混合によるバイオアベイラビリティおよび可溶化の改善効果を有する。
【００１３】
本発明の固体分散体において、担体として、活性成分であるＣＢＩ以下のガラス転移温度を有する水溶性ポリマーを含んでいてもよく、好ましくは、ポリビニルピロリドン及び／又はヒプロメロースアセテートスクシネート（Hypromellose Acetate Succinate）が挙げられ、より好ましくは、ポリビニルピロリドンとしてポリビニルピロリドンＫ３０が挙げられる。水溶性ポリマーは、好ましくは、組成物の全重量に基づいて３０重量％またはそれ以上、より好ましくは、３０〜９０％で含まれる。ポリビニルピロリドンは、いずれの範囲の分子量も使用することができるが、特に、３０，０００〜６０，０００の分子量を有する場合、溶融押出が容易な粘度を形成するため好ましい。
【００１４】
本発明は、可塑剤を含んでいてもよい。溶融押出を促進するものであれば、いずれであってもよいが、好ましくは、Ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート（ＴＰＧＳ）、ポリエチレングリコール４００又はこれらの両方を使用することができる。前記可塑剤は、好ましくは、組成物の全重量に基づいて１〜１０重量％で用いられる。
【００１５】
本発明の好ましい実施態様として、活性成分ＣＢＩを１０〜５０重量％で含み、水溶性ポリマーとして、ポリビニルピロリドンを５０〜９０重量％で含むか、あるいは活性成分ＣＢＩを１０〜５０重量％で含み、水溶性ポリマーとして、ポリビニルピロリドン又はヒプロメロースアセテートスクシネートを４５〜８５％、及び可塑剤として、Ｄ−アルファ−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシネート（ＴＰＧＳ）又はポリエチレングリコール４００を１〜５重量％で含む固体分散体である。
【００１６】
また、本発明は、ＣＢＩ、水溶性ポリマー及び任意の可塑剤を混合し、この混合物をＣＢＩの融点以下の温度で溶融押出して、ＣＢＩ含有固体分散体を製造する方法を提供する。本発明の方法は、特に、活性成分のＣＢＩの融点以下の温度で溶融押出して、固体分散体を製造することを特徴とする。
【００１７】
前記混合物は、好ましくは、温度が順次低くされている４個またはそれ以上の加熱ブロックを通して溶融される。具体的に、粉末として予め混合した薬物と水溶性ポリマーの混合物が、押出成形機に取り込まれ、溶融押出されて、本発明の固体分散体が製造されるものであって、前記押出成形機は、相互に区別されるように設計された数種類の加熱ブロックからなり、連続して連結されている。ここで、前記区別された加熱ブロックは、溶融される薬物、即ち、活性成分のＣＢＩの融点以下の温度を示すように制御される。より好ましくは、加熱ブロックは、第１〜第４の加熱ブロックからなり、第１の加熱ブロックの溶融温度は、１６０〜１４５℃に制御され、第２の加熱ブロックの溶融温度は、１４４〜１２０℃に制御され、第３の加熱ブロックの溶融温度は、１１９〜８０℃に制御され、第４の加熱ブロックの溶融温度は、７９〜７０℃に制御される。
【００１８】
本発明の製造方法は、薬物のアモルファスへの完全な変換のために、通常、薬物の融点より、例えば、１５〜３０℃より高い温度で溶融押出して、固体分散体を製造する従来技術に比べ、活性成分のＣＢＩの融点よりさらに低い温度で溶融押出して固体分散体を製造することに相違点が存在する。融点よりさらに低い温度で溶融しても、設定温度が順次低くなっている数個の加熱ブロックを通過させ、特定の徐冷及び溶融を連続して経た後に押出することによって、融点以下の温度であっても活性成分が十分にアモルファスに変換され、表１３と図２及び３に示されるように、優れた溶解パターン及びバイオアベイラビリティを示す固体分散体の製造が可能となる。このように、本発明の製造方法は、活性成分のＣＢＩの融点よりさらに低い温度で溶融押出して、固体分散体を製造するので、活性成分のＣＢＩまたは用いられる担体ポリマーの分解や損傷の恐れがない。また、分散体を製造する上で、有機溶媒の使用を要しないので、環境汚染や作業環境のリスクが生じることがない。また、本発明により製造された固体分散体または前記固体分散体を含む経口製剤は、有機溶媒や界面活性剤などを一切含んでおらず、生体に非常に安全な水溶性ポリマーのみを使用しているので、安全性の側面から非常に優れている。また、噴霧乾燥法を通して製造することに比べ、有機溶媒を選択するステップを要しないため製造工程が単純になる。
【００１９】
本発明に係る固体分散体は、固体として押出され、長い毛細管の形態で固形化されていてもよい。これは、粉末の形態で製造するために適当な切断機または粉砕機を用いることによって粉砕される。このような粉末は、人体に投与することができる錠剤の形態で製剤化されるか、あるいはゼラチンカプセルに充填されていてもよい。
【００２０】
固形分散体が投与の便宜性のための経口製剤として製剤化される場合、医薬的に許容可能な賦形剤を含んでいてもよい。前記賦形剤として、微細結晶セルロースまたはラクトースは、所望される容量を達成するための希釈剤として用いることができ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはＳｉＯ２は、粉末に流動性を付与し、カプセル充填時に機械的な付着を防止するための滑沢剤として添加されてもよい。また、錠剤の崩壊を補助する崩壊剤として、クロスカメロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、およびクロスポビドンが用いられてもよい。
【００２１】
前記本発明に係る固体分散体は、難溶性化合物であるＣＢＩの水に対する溶解度を顕著に増加させる。それにより、ＣＢＩは、錠剤の溶出試験の基準を満たす溶出率を示す（実験例３を参照のこと）。また、ビーグル犬を用いた薬物動態実験の結果として、前記分散体は、その経口投与後にＣＢＩの投与と比較して優れたバイオアベイラビリティを示す（実験例４を参照のこと）。
【００２２】
よって、本発明の固体分散体をそれぞれ含む経口投与のための組成物及び医薬組成物は、ＣＢＩが治療効果を示す前記疾患、特に退行性脳疾患をはじめとする中枢神経系疾患に有効に用いることができる。
【００２３】
以下、本発明は、実施例によってより詳細に説明する。しかしながら、下記実施例は、その実施における特定の技術タイプとして本発明の例示のみのためにものであり、本発明の範囲がそれらの形式によって限定されることを意図するものではない。
【発明の効果】
【００２４】
本発明の固体分散体は、それが経口で投与されると、難溶性化合物であるＣＢＩの溶解度及び溶出速度を顕著に増加させて、バイオアベイラビリティを効率的に改善する。本発明の固体分散体を含有した製剤は、物理化学的に非常に安定性が高く、高い保存安定性を示す。さらに、本発明による前記固体分散体の製造方法は、有機溶媒または界面活性剤を使用しないことから安全である。前記分散体は、活性成分の融点以下の温度で溶融押出され、それゆえ、活性成分またはポリマーの分解や損傷の恐れがなく、製造工程が簡便である。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】製造例１で得られたＣＢＩ（左側）と、実施例１で得られた本発明のＣＢＩを含有する固体分散体（右側）についての走査電子顕微鏡による結果を示す。
【図２】実施例７で得られた固体分散体を含有する錠剤の溶出試験の結果を示す。
【図３】本発明の固体分散体がビーグル犬に経口投与された後に観察した薬物動力学プロファイルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
＜製造例１＞
カルバミン酸３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−イソオキサゾール−５−イルメチルエステル（ＣＢＩ）の製造
カルバミン酸３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−イソオキサゾール−５−イルメチルエステル（ＣＢＩ）の製造は、韓国特許出願第２０１０−００４１４３６号で詳細に記載されている。具体的には、次のように製造した。
【００２７】
４−ベンジルオキシベンズアルデヒド（４．２４ｇ，２０ｍｍｏｌ）を、エタノールおよび水の０．２Ｍ混合液（３：１，１００ｍＬ）に撹拌しながら溶解した。ＮＨ２ＯＨ−ＨＣｌ（２.７８ｇ，４０ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（２．４６ｇ、３０ｍｍｏｌ）をこれに加え、室温で約３０分間撹拌した。液体クロマトグラフィーで反応の終結を確認し、水とエタノールを減圧下で蒸留し、淡黄色の固形化合物を得た。この固形化合物を水とエチルアセテートで３回抽出し、有機溶媒層を減圧条件にかけ、粗製化合物をヘキサン／エチルアセテート（１０：１）で再結晶化して、白色の固体化合物を得た。得られた固形物４−ベンジルオキシ−ベンズアルデヒドオキシム（２．２７ｇ，１０ｍｍｏｌ；９２％純度の化合物）を塩化メチレン（４０ｍＬ，０．２５Ｍ）に溶解し、プロパルギルアルコール（１．７７ｍｌ、３０ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液に、１０％ＮａＯＣｌ（１３．７ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を、滴下漏斗を利用して０℃で極めてゆっくり滴下した。ＮａＯＣｌを全部加え、温度を室温にゆっくり昇温ながら、約５時間撹拌した。液体クロマトグラフィーで反応の終結を確認した後、減圧下で蒸留し、塩化メチレンを蒸発し、残余物に水（２００ｍＬ）を加え、生成された固形物をろ過した。ろ過された化合物を過剰量の水で洗浄、最後に、ジエチルエーテルで洗浄した。前記得られた固体化合物をエチルアセテート／ヘキサン（１：２）で再結晶化して、白色の固形物［３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−イソオキサゾール−５−イル］−メタノールを得た（収率：２．５ｇ）。１．０４ｍＬ（１２ｍｍｏｌ）のクロロスルホニルイソシアネートを、−７８℃で２５０ｍＬのフラスコ内の［３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−イソオキサゾール−５−イル］−メタノール（２．８１３ｇ，１０ｍｍｏｌ）を含有するＴＨＦ（５０ｍＬ、０．２Ｍ）溶液にゆっくり加えた。液体クロマトグラフィーで出発物質が全て消失したことを確認し、水を反応液に加えた。１時間後、減圧下で蒸留し、ＴＨＦを蒸発し、そこに、１００ｍＬの水を加え、生成された固形物をろ過した。ろ過された固形物を、１００ｍＬの水およびエチルアセテート／ヘキサン（１：２）溶液でそれぞれ洗浄し、乾燥させ、３．４ｇの粗生成物（純度：９５．９％）を得た。前記粗生成物を、１％メタノールを含むエチルアセテート／ヘキサン／塩化メチレン（１：４：１）溶液で再結晶化して、２．７４３ｇのカルバミン酸３−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−イソオキサゾール−５−イルメチルエステル（ＣＢＩ）を９９％の純度で得た。
【００２８】
＜実施例１〜６＞
溶融押出された固体分散体の製造
表２〜７の組成を有する固形分散体は、直径１８ｍｍの二重スクリューを用いることによってＣＢＩ、水溶性ポリマー及び可塑剤混合物から製造した。前記混合物を、４つに区分された加熱ブロック（ゾーン１〜ゾーン４）が連続して連結された押出成形機に投入し、溶融混合し、押出すことによって得られた固体分散体を、粉砕機で粉砕し、粉末として実施例１〜６の固体分散剤を得た。詳細な製造条件を表１に示す。ポリビニルピロリドンＰＶＰ  Ｋ３０を水溶性ポリマーとして使用した。前記製造例１で製造されたＣＢＩ（左側）と、本実施例１で製造されたＣＢＩを含有する固体分散体（右側）を、図１で示されるように、電子顕微鏡で撮影した。図１からわかるように、固体分散体において、ＣＢＩは、主にアモルファスの微細状態でポリマーマトリックスに均一に分散される。
【表１】
0006266006.tif 000004
【表２】
0006266006.tif 000005
【表３】
0006266006.tif 000006
【表４】
0006266006.tif 000007
【表５】
0006266006.tif 000008
【表６】
0006266006.tif 000009
【表７】
0006266006.tif 000010
【００２９】
＜比較例１＞
溶融押出された固体分散体の製造
比較例１の溶融押出された固体分散体は、加熱ブロックの設定温度を下記条件としたことを除いて、前記実施例１に記載された方法と同一の方法で製造した。不純物は、前記実施例１及び比較例１の固体分散体について高速液体クロマトグラフィーを利用して測定した。本実験に用いられたカラムは、１５０ｃｍ×４．６ｍｍ，３．５μｍ  Ｃ１８カラムであり、流速は、１．０ｍＬ／分であり、カラム温度は、３０℃であり、検出は、２６０ｎｍで行った。移動相は、アセトニトリルおよび０．１％のトリフルオロ酢酸水溶液を用いて次の変化条件で３０分間適用した。
【表８】
0006266006.tif 000011
【００３０】
その結果、開始温度がＣＢＩの融点であるゾーン１で加温し溶融することによって得られた比較例１の固体分散体の場合、分解産物が工程中に生じ、０．８７および１．３２の相対保持時間（ＲＲＴ）に相当する不純物（この合計が６．５％であった）が検出された。しかしながら、０．６％のみの総不純物が本発明の分散体で検出された。この結果から、本発明の製造方法は、安全な方法であって、その有効成分はほとんど分解されないとが確認された。
【表９】
0006266006.tif 000012
【００３１】
＜実施例７＞
固体分散体を含有する錠剤の製造
製造された固体分散体は、投与を容易にするために錠剤に製造されうる。前記錠剤は、医薬的に許容可能な崩壊剤、製造に必要な賦形剤として希釈剤および滑沢剤を加えることによって製造した。具体的に、実施例２で製造した固体分散体、崩壊剤としてクロスカルメローススナトリウム、滑沢剤としてステアリン酸マグネシウムおよび希釈剤として微結晶セルロースを用いた。前記錠剤は、流動性を高めるためにＳｉＯ２を用いることによって製造し、成分量は下記の表１０に示す。
【表１０】
0006266006.tif 000013
【００３２】
＜実験例１＞
活性成分ＣＢＩの溶解度の同定
数種類の溶媒条件（即ち、錠剤水、メタノール、エタノール、アセトン、およびジエチルエーテル）下において、ＣＢＩの溶解度を測定した。具体的には、約５〜４０ｍｇのＣＢＩを、１.５ｍＬびマイクロチューブに入れ、１ｍＬの試験溶媒を加えた。該混合物を、溶解平衡に達するまで、室温条件で回転撹拌器でゆっくり２４時間撹拌した。撹拌後、懸濁溶液を０.４５マイクロメーターメンブレインろ過紙でろ過した。該上清を採取し、分析用に同量の希釈溶液で２倍に希釈した。ＣＢＩの濃度を高速液体クロマトグラフィーで分析した。本実験で用いたカラムは、１５０ｃｍ×４．６ｍｍ，５μｍのＣ１８カラムであり、移動相は、３５容積％のアセトニトリル、２０容積％のメタノール、４５容積％の蒸留水の混合液であった。流速は、１.０ｍＬ／分であり、検出は、２５５ｎｍで行った。結果を表１１に示し、数値は３回繰り返した平均値±標準偏差として表す。
【表１１】
0006266006.tif 000014
【００３３】
前記結果から、ＣＢＩは、水にほとんど溶解されない極めて難溶性化合物であることが確認される。
【００３４】
＜実験例２＞
ＣＢＩの熱分析
ＣＢＩの特徴付けについての融点および熱依存性変化の評価は、ＤＳＣ（示差走査熱量測定）によって行った。実験方法は、以下で簡単に説明した。１〜２ｍｇのＣＢＩを正確に秤量し、標準アルミニウムパンに入れた。温度を５０℃から３５０℃まで１００℃／分の加熱速度で昇温した。熱特性は、２５ｍＬ／分の窒素気流下で分析した。分析結果を表１２に示す。
【表１２】
0006266006.tif 000015
【００３５】
＜実験例３＞
固体分散体を含有する錠剤の溶出試験
実施例７で製造した固体分散体を含有する錠剤は、下記のように米国薬局方溶出試験法第２法（パドル法）に従って溶出実験を行い、その結果を図２に示す。
［溶出試験法］
試験方法：米国薬局方溶出試験法第２法（パドル法）
溶出媒体：１．５％  ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）を含有する蒸留水  ５００ｍＬ
撹拌速度：５０ｒｐｍ
溶離液の温度：３７±０．５℃
【００３６】
図２から分かるように、本発明の固体分散体から製造された錠剤は、錠剤の溶出試験の基準を満たす溶出率（すなわち、４５分間で８０％またはそれ以上）を示す。この結果から、極めて難溶性であるＣＢＩの溶出特性が非常に效果的に改善されたことを確認することができる。
【００３７】
＜実験例４＞
ビーグル犬に対する固体分散体の薬物動態試験
実験直前に、３匹のビーグル犬の体重をそれぞれ測った。試験群として実施例３の固体分散体および対照群としてＣＢＩ粉末を、それぞれ４０ｍｇ／ｋｇに相当する量で秤量し、ゼラチンカプセルに充填し、経口投与した。投薬直前と投薬後０．５、１、２、４、６、８及び２４時間で血液を膝窩静脈から採取した。前記血漿は、遠心分離により前記血液サンプルから分離し、分析するまで−２０℃で保存／保管した。分析のために、血漿サンプル（０．５ｍＬ）を正確に１．５ｍＬのポリプロピレン遠心分離管に移した。前記混合物を３０秒間ボルテックスし、４００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。前記血漿中のＣＢＩ濃度をＬＣ−ＭＳ／ＭＳで分析した。移動相として、０．１％のギ酸−アセトニトリル／脱イオン水（６０／４０，ｖ／ｖ）の混合溶液を、流速０．２５ｍＬ／分とし、カラムはＸｔｅｒｒ（登録商標）ＳＣ１８（３．０×５０ｍｍ，２．５マイクロメーター，Ｗａｔｅｒｓ，ＵＳＡ）を使用した。ピークは、三連四重極質量分析計（triple-quadrupole mass spectrometry）を利用してＭＲＭ（multiple reaction monitoring）方法によって検出した。イオン化は、電気噴霧イオン化（ＥＳＩ）を使用して陽性モード（positive mode）で分析し、イオン噴霧温度は５００℃に設定した。ＭＲＭ方法において、ＣＢＩおよび内部標準化合物のプロトン化分子イオン（protonated molecular ion）は、各々、３２５．１および２６８．０のｍ／ｚ値を示すようにモニターし、それゆえ、生成された生成物イオン（production）は、９１．０および１５５．０のｍ／ｚ値を示すようにモニターした。血漿中の薬物の濃度時間曲線下の面積（ＡＵＣ）は、直線台形（trapezoidal）法によって算出した。その結果を下記の表１３及び図３に示す。
【表１３】
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【００３８】
前記結果から理解できるように、ＣＢＩ粉末を投与した対照群において、全ての時間帯で定量感度以下が示され、前記薬物が全く経口で吸収されなかったことが確認される。一方で、本発明の固体分散体を投与した試験群では、投薬後１時間で０．５３１μｇ／ｍＬの最大血中濃度を示し、ＣＢＩの経口投与による吸収及びバイオアベイラビリティが顕著に改善されたことが確認される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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