(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物又はこれらの薬学的に許容される塩、水和物若しくは水和塩；又はこれらの化合物の多結晶型物質；又はそれらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマー。
【化１】
0006332773.tif 000122
式中、
【化２】
0006332773.tif 000123
が単結合又は二重結合を表す；
【化３】
0006332773.tif 000124
が単結合である場合、Ｕ及びＵ’がそれぞれ独立してＨ、Ｒ５、アミン保護基、細胞結合分子と接続するための反応基を含む連結体（Ｌ’）、又は当該位置で接続している細胞結合分子を表す；
VとV’はそれぞれ独立に、Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨＯＨ；エーテル（−ＯＲ５）；エステル（−ＯＣＯＲ５、例えばアセテート）；カーボネート（−ＣＯＯＲ５）；アミン（−ＮＲ５Ｒ５’、−ＮＲ５ＣＯＲ５’、−ＮＲ５Ｒ５’Ｒ５’’）；カルバメート（−ＯＣＯＮＲ５Ｒ５’）；グアニジウム（−ＮＲ５（Ｃ＝ＮＨ）ＮＲ５’Ｒ５’’）；アミノ酸又はペプチド（−ＮＲ５ＣＯ（Ａａ）ｔ：Ａａはアミノ酸又は１〜１００個のアミノ酸単位（ｔはアミノ酸単位の数を表す。）を含むポリペプチドである。）；任意に置換された窒素含有５又は６員複素環（ピペリジン、テトラヒドロピロール、ピラゾール、モルホリン等)；尿素（−ＮＲ５ＣＯＲ５’Ｒ５’’）；チオカルバメート（−ＯＣＳＮＨＲ５）；チオール（ＳＨ）；スルフィド；スルホキシド（−ＳＯＲ５）；スルフォン（−ＳＯＯＲ５）；亜硫酸（−ＳＯ３、ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、又はＨＳＯ３−、ＳＯ３２−、若しくは−ＨＳＯ２−塩）；重亜硫酸（−ＳＯ３）；スルホンアミド（−ＮＲ５ＳＯＯＲ５’）；メタ重亜硫酸（Ｈ２Ｓ２Ｏ５又はＳ２Ｏ５２−塩）；モノ、ジ、トリ及びテトラチオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、又はＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−若しくはＰＳ４３−の塩）；チオホスフェートエステル（（Ｒ５Ｏ）２ＰＯＳＲ５’）；チオスルフェート（−Ｓ２Ｏ３Ｈ又はＳ２Ｏ３２−塩）；ジチオニト（−Ｓ２Ｏ４Ｈ又はＳ２Ｏ４２−塩）；ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲ５）（Ｓ）（ＯＨ）又は陽イオンと生成する塩）；ヒドロキシルアミン誘導体（−ＮＲ５ＯＲ５’）；ヒドロキサム酸（Ｒ５Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ又は陽イオンと生成する塩）；ホルムアルデヒドスルホキシレート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−又はその塩）；アミド（−ＮＲ５ＣＯＲ５’）；アジド（−Ｎ３）；シアノ基；ハロゲン；トリアルキル基、アミド亜リン酸エステル（ホスホロアミド酸）、トリアリールホスホニウム、アミノ酸誘導体基；細胞結合分子と接続するための反応基を有する連結体（Ｌ’）、又は当該位置で結合している細胞結合分子から選択される。Ｒ５、Ｒ５’及びＲ５’’の定義は、後述の通りである；
ＵとＶ及び／又はＵ’とＶ’が互いに結合し、ＵとＶ及び／又はＵ’とＶ’が環状化合物の一部分である環状カルバメート、環状チオカルバメート、又は環状アミンを形成してもよい；
【化４】
0006332773.tif 000125
が二重結合である場合、ＵとＵ’が空き、ＶとＶ’がＨ、炭素数１〜４の直鎖又は分岐アルキル基である；
ｌ、ｍ、ｎ、ｌ’、ｍ’及びｎ’は０、１、２、３、４、５又は６の数字であり；
Ｘ、Ｘ’、Ｙ及びＹ’はそれぞれ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、アルキル、アルケン、又はエーテルであり；
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−Ｒ５、ＣＯＨ又はＣＯＲ５であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’は独立してＨ、任意に置換していてもよい炭素数１〜１０の直鎖、分岐若しくは環状アルキル基、アルケニル基、アルキニル基若しくはアリール基、ポリエチレングリコール単位（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＲ５、ハロゲン、グアニジウム［−ＮＲ５（Ｃ＝ＮＨ）ＮＲ５’Ｒ５’’］、−ＯＲ５、−ＮＲ５Ｒ５’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ５ＣＯＲ５’、−ＳＲ５、−ＳＯＲ５で表されるスルホキシド、−ＳＯ２Ｒ５で表されるスルフォン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ３Ｈ、スルフェート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲ５Ｒ５’ で表されるスルホンアミド、シアノ基、アジド基、−ＣＯＲ５、−ＯＣＯＲ５、−ＯＣＯＮＲ５Ｒ５’、−ＣＦ３、−ＯＲ５、アリール基、複素環、Ｐ（Ｏ）Ｒ５Ｒ５’ Ｒ５’’、細胞結合分子と接続するための反応基を有する連結体（Ｌ’）、又は当該位置で結合している細胞結合分子から選択される；
Ｒ５、Ｒ５’及びＲ５’’はそれぞれ独立して、Ｈ、炭素数１〜１０の直鎖、分岐鎖又は環状アルキル基、アルケニル基、アルキニル基又はアリール基、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−Ｒ１（ｒは０〜１００であり、Ｒ１の定義は前記の通りである。）、任意に置換されていてもよい炭素数６〜１８のアリール基、独立してＯ、Ｎ、及びＳ原子から選択される１以上のヘテロ原子を含み、任意に置換されていてもよい５〜１８員環の複素芳香環、独立してＮ、Ｏ、Ｓ及びＰ原子から選択される１〜６個のヘテロ原子を含み、任意に置換されていてもよい３〜１８員環の複素環から選択される；Ｒ５、Ｒ５’及びＲ５’’は更に、−ＮＲ１Ｒ２、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＲ１、−ＣＯＯＲ１、−ＣＯＮＲ１、−ＰＯ２Ｒ１Ｒ２、−ＰＯＲ１Ｒ２Ｒ３、−ＰＯ３Ｈ又は薬用塩から選択される少なくとも１つの置換基により置換されていてもよい；
ｑは０、１又は２であり；
Ｒ２とＲ３又はＲ２’とＲ３’は、互いに結合して＝Ｃ（二重結合）、＝Ｏ（ケトン）、＝Ｓ、＝ＮＲ５、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｒ５）−、又は基＝ＣＲ５Ｒ５’を含む二重結合を形成してもよい； 
Ｒ１とＲ２、Ｒ１’とＲ２’、Ｒ３とＲ４、又はＲ３’とＲ４’は、互いに結合して芳香環、複素環又は複素アリール環を形成してもよい； 
Ｌ及びＬ’は、それぞれ独立して連結体、連結体と細胞結合分子（Ｑ）との共有結合により形成されたクラスター、又は細胞接着分子（ＣＢＡ）と結合できる官能基を含有する連結体である；
Ｌ及びＬ’が連結体である場合、Ｌ及びＬ’が−Ｗｗ−（Ａａ）ｒ−Ｔｔ−、−Ｗｗ−（Ａａ）ｒ−Ｔｔ−Ｑ、又はＱ−Ｗｗ−（Ａａ）ｒ−Ｔｔで表される放出可能連結体であり、式中、Ｗは拡張ユニットであり、ｗは０又は１であり、Ａａはそれぞれ独立したアミノ酸を含むアミノ酸ユニットであり、ｒは０〜１００の間の整数である。前記拡張ユニットＷは、自壊性又は非自壊性ユニット、ペプチドユニット、ヒドラゾン結合、ジスルフィド結合、エステル結合、オキシム結合、アミド結合又はチオエーテル結合を含んでいてもよい；
前記自壊性ユニットは、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体、複素環ＰＡＢ類縁物質、β−グルクロニド、及びｏ−又はｐ−アミノベンジルアセタール等の電子構造がパラアミノベンジルカルバモイル（ＰＡＢ）基と類似する芳香族化合物を含み、好ましくは、前記自壊性ユニットは下記のいずれか１つを含み；
【化５】
0006332773.tif 000126
式中、（＊）で標識された原子は、追加スペーサー若しくは放出可能連結体単位、細胞毒性分子及び／又は細胞接着分子（ＣＢＡ）との結合点である；Ｘ１、Ｙ１、Ｚ２、及びＺ３は独立してＮＨ、Ｏ又はＳである；Ｚ１は独立してＨ、ＮＨ、Ｏ又はＳである；ｖは０又は１である；Ｑ１は独立してＨ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲ５、ＳＲ５、ＮＲ５Ｒ５’、Ｎ＝ＮＲ５、Ｎ＝Ｒ５、ＮＲ５Ｒ５’、ＮＯ２、ＳＯＲ５Ｒ５’、ＳＯ２Ｒ５、ＳＯ３Ｒ５、ＯＳＯ３Ｒ５、ＰＲ５Ｒ５’、ＰＯＲ５Ｒ５’、ＰＯ２Ｒ５Ｒ５’、ＯＰＯ（ＯＲ５）（ＯＲ５’）又はＯＣＨ２ＰＯ（ＯＲ５）（ＯＲ５’)であり、式中、Ｒ５及びＲ５’の定義が前記の通りである；
非自壊性ユニットは、下記の構造のうちの一つであり；
【化６】
0006332773.tif 000127
0006332773.tif 000128
式中、（＊）で標識された原子は、追加スペーサー若しくは放出可能連結体単位、細胞毒性分子及び／又は細胞接着分子（ＣＢＡ）との結合点である；Ｘ１、Ｙ１、Ｑ１、Ｒ５及びＲ５’の定義は前記の通りである；ｒは０〜１００である；ｍ、ｎ及びｐは０〜６である； 
スペーサー（Ｔ）は炭素数１〜１０の直鎖、分岐又は環状アルキル、アルケニル、アルキニル、又はアリールであり、また、Ｔはポリエチレングリコール（−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−）スペーサーでもよい；ｔは０又は１〜１００である。Ｔは、自身のアミド結合が加水分解された後、環化反応を行うことができる。このようなアミドは、置換された又は置換されていない４−アミノ酪酸アミド、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］及びビシクロ［２．２．２］環系、及び２−アミノフェニルプロピオン酸アミドを含む。
更に、Ｌ及びＬ’は、Ｒ５、ＯＲ５、ＳＲ５、ＮＨＲ５、又はＮＲ５Ｒ５’であってもよく、また、式（Ｉ）上のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’、Ｒ４’、Ｕ、Ｕ’、Ｖ、又はＶ’もまた、拡張ユニット（Ｗｗ）又はスペーサーユニット（Ｔｔ）を介してＱと連結するのに用いられることができ； 
Ｑは細胞結合分子（ＣＢＡ）、該細胞結合分子と結合できる官能基、又は細胞結合分子が付着した連結体と反応できる官能基であり、該官能基はチオール、アミン、ヒドラジン、アルコキシアミノ、置換ジスルフィド、マレイミド、ハロアセチル基、カルボキシル基、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル、ケトン、エステル、アルデヒド、アルキニル、アルケニル、又は保護されたチオール若しくはジスルフィド基である。
【請求項２】
式（Ｉ）の化合物が、下記の式（Ｉａ）（Ｉｂ）又は（Ｉｃ）に示すエナンチオマーである、請求項１記載の化合物。
【化７】
0006332773.tif 000129
式中、
【化８】
0006332773.tif 000130
は単結合又は二重結合を表す；
Ｕ、Ｕ’、Ｖ、Ｖ’、Ｘ、Ｘ’、Ｙ、Ｙ’、Ｚ、Ｚ’、ｌ、ｌ’、ｍ、ｍ’、ｎ、ｎ’、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ４’、及びＬの定義は式（Ｉ）と同じである。
【請求項３】
式（Ｉ）の化合物が、下記の式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）の化合物又はこれらの薬学的に許容される塩、水和物若しくは水和塩；又はこれらの化合物の多結晶型物質；又はそれらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマーである、請求項１記載の化合物。
【化９】
0006332773.tif 000131
式中、Ｘ、Ｘ’、Ｙ、Ｙ’、Ｚ、Ｚ’、ｌ、ｌ’、ｍ、ｍ’、ｎ、ｎ’、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ４’、及びＬの定義は式（Ｉ）と同じである；
Ｖ及びＶ’はそれぞれ独立して、エーテル、エステル、カーボネート、カーバメート、環状カーバメート、尿素、チオカーバメート、環状チオカーバメート、スルフィド、スルホキシド、スルホン、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、スルホンアミド、アミン、環状アミン、ヒドロキシルアミン誘導体、アミド、アジド、シアノ、ハロゲン、トリアルキル又はトリアリールホスホニウム、及びアミノ酸誘導基からなる群から選択される；
Ｖ’’が（＝）Ｏ、（＝）ＮＨ、（＝）Ｎ−ＣＯＮＲ５Ｒ５’、（＝）Ｎ−ＣＯＮＲ５、（＝）Ｎ−ＣＯＯＲ５、又は（＝）Ｎ−Ｏ−Ｒ５である；
Ｒ５、Ｒ５’及びＲ５’’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル若しくはカルボニルアルキル、又はそれらの薬用塩から選択される。Ｒ５、Ｒ５’及びＲ５’’は更に、−Ｎ（Ｒ１）（Ｒ２）、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＲ１、−ＣＯ２Ｒ１、−ＣＯＮＲ１、−ＰＯ２Ｒ１Ｒ２、−ＰＯＲ１Ｒ２Ｒ３、及び−ＰＯ３Ｈ、又はそれらのＮａ塩、Ｋ塩、Ｃａ塩、アンモニウム塩若しくはその他の薬学的に許容される塩から選択される少なくとも１つの置換基により置換されていてもよい。Ｒ５、Ｒ５’及びＲ５’’は、拡張ユニット（Ｗｗ）又はスペーサーユニット（Ｔｔ）を介して細胞結合分子と結合することもできる。Ｗ、ｗ、Ｔ及びｔの定義は式（Ｉ）と同じである；
【請求項４】
式（Ｉ）の化合物が、下記の式（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）、（ＸＩＶ）、（ＸＶ）、（ＸＶＩ）若しくは（ＸＩＩ）の化合物又はこれらの薬学的に許容される塩、水和物若しくは水和塩；又はこれらの化合物の多結晶型物質；又はそれらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマーである、請求項１記載の化合物。
【化１０】
0006332773.tif 000132
0006332773.tif 000133
式中、
【化１１】
0006332773.tif 000134
は単結合又は二重結合を表す；
Ｕ、Ｕ’、Ｖ、Ｖ’、ｎ、ｎ’、Ｘ、Ｘ’及びＬの定義は式（Ｉ）と同じである；
Ｒ６及びＲ６’の定義は式（Ｉ）中のＲ５と同じである。Ｒ６及びＲ６’は、拡張ユニット（Ｗｗ）又はスペーサーユニット（Ｔｔ）を介して細胞結合分子と結合することもできる。Ｗ、ｗ、Ｔ及びｔの定義は式（Ｉ）と同じである。
【請求項５】
連結体Ｌが、以下の基からなる群から選択される、請求項１記載の化合物；
Ｒ５、ＯＲ５、ＳＲ５、ＮＲ５Ｒ５’、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（Ａａ）ｒ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（Ａａ）ｒ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−（Ａａ）ｒ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒ（Ａａ）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７＝Ｒ８）（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（Ａａ）ｔ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＮＲ１１ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（Ａａ）ｔ（ＮＲ１１ＣＯ）（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＮＲ７）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＮＲ１１ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＮＲ７）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−フェニル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−フリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−オキサゾリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チアゾリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−チエニル−（ＣＯ）（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−イミダゾリル−（ＣＯ）（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−モルホリノ−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−ピペラジノ−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−Ｎ−メチルピペラジン−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ）ｍ−（Ａａ）ｔフェニル−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−（Ａａ）ｔフリル−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−オキサゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チアゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チエニル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−イミダゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−モルホリノ−（Ａａ）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−ピペラジノ−（Ａａ）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−Ｎ−ピペラジノ−（Ａａ）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（Ａａ）ｒ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（Ａａ）ｒ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−Ｋ（Ａａ）ｒ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒ（Ａａ）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７＝Ｒ８）（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（Ａａ）ｔ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＮＲ１１ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（Ａａ）ｔ（ＮＲ１１ＣＯ）（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＮＲ７）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＮＲ１１ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＮＲ７）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−フェニル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−フリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−オキサゾリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チアゾリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−チエニル−（ＣＯ）（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−イミダゾリル−（ＣＯ）（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−モルホリノ−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−ピペラジノ−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−Ｎ−メチルピペラジン−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ）ｍ−（Ａａ）ｔフェニル−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−（Ａａ）ｔフリル−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−オキサゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チアゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チエニル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−イミダゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−モルホリノ−（Ａａ）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−ピペラジノ−（Ａａ）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−Ｎ−メチルピペラジノ−（Ａａ）ｔＱ。
（式中、ｍ、Ａａ、ｔ、ｎ、Ｑ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５の定義は式（Ｉ）におけるのと同じであり；Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１はそれぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ８アルキル基、アリール基、アルケニル基、アルキニル基、エーテル、エステル、アミン又はアミド（これらは１以上のハロゲン、ＣＮ、ＮＲ１Ｒ２、ＣＦ３、ＯＲ１、アリール基、複素環、Ｓ（Ｏ）Ｒ１、ＳＯ２Ｒ１、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＲ１、−ＣＯ２Ｒ１、−ＣＯＮＲ１、−ＰＯ２Ｒ１Ｒ２、−ＰＯ３Ｈ又はＰ（Ｏ）Ｒ１Ｒ２Ｒ３で任意に置換されていてもよい。）から選択され；ＫがＮＲ１、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、Ｂ又はその他のヘテロ原子である。）
【請求項６】
連結体ＬがＲ５、ＯＲ５、ＳＲ５、又はＮＲ５Ｒ５’である場合、Ｕ、Ｕ’、Ｖ、Ｖ’、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ４’、Ｒ６、又はＲ６’のうちの１つが独立して以下の結合基から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物；
−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（Ａａ）ｒ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（Ａａ）ｒ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−（Ａａ）ｒ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒ（Ａａ）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７＝Ｒ８）（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（Ａａ）ｔ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＮＲ１１ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（Ａａ）ｔ（ＮＲ１１ＣＯ）（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＮＲ７）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＮＲ１１ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＮＲ７）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−フェニル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−フリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−オキサゾリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チアゾリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−チエニル−（ＣＯ）（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−イミダゾリル−（ＣＯ）（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−モルホリノ−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−ピペラジノ−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−Ｎ−メチルピペラジン−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ）ｍ−（Ａａ）ｔフェニル−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−（Ａａ）ｔフリル−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−オキサゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チアゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チエニル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−イミダゾリル−（Ａａ）ｔ−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−モルホリノ−（Ａａ）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−ピペラジノ−（Ａａ）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−Ｎ−ピペラジノ−（Ａａ）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（Ａａ）ｒ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（Ａａ）ｒ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−Ｋ（Ａａ）ｒ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒ（Ａａ）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７＝Ｒ８）（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（Ａａ）ｔ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＮＲ１１ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（Ａａ）ｔ（ＮＲ１１ＣＯ）（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＮＲ７）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＮＲ１１ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＮＲ７）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−フェニル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−フリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−オキサゾリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チアゾリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−チエニル−（ＣＯ）（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−イミダゾリル−（ＣＯ）（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−モルホリノ−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−ピペラジノ−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−Ｎ−メチルピペラジン−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ）ｍ−（Ａａ）ｔフェニル−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−（Ａａ）ｔフリル−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−オキサゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チアゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チエニル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−イミダゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−モルホリノ−（Ａａ）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−ピペラジノ−（Ａａ）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−Ｎ−ピペラジノ−（Ａａ）ｔＱ。
（式中、ｍ、Ａａ、ｔ、ｎ、Ｑ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５の定義は式（Ｉ）におけるのと同じであり；Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、及びＲ１１はそれぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ８アルキル基、アリール基、アルケニル基、アルキニル基、エーテル、エステル、アミン又はアミド（これらは１以上のハロゲン、ＣＮ、ＮＲ１Ｒ２、ＣＦ３、ＯＲ１、アリール基、複素環、Ｓ（Ｏ）Ｒ１、ＳＯ２Ｒ１、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＲ１、−ＣＯ２Ｒ１、−ＣＯＮＲ１、−ＰＯ２Ｒ１Ｒ２、−ＰＯ３Ｈ又はＰ（Ｏ）Ｒ１Ｒ２Ｒ３で任意に置換されていてもよい。）から選択され；ＫがＮＲ１、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、Ｂ又はその他のヘテロ原子である。）
【請求項７】
式（Ｉ）の化合物が、下記の式（ＸＶＩＩＩ−１）〜（ＸＶＩＩＩ−７９）の化合物である、請求項１記載の化合物。
【化１２】
0006332773.tif 000135
0006332773.tif 000136
0006332773.tif 000137
0006332773.tif 000138
0006332773.tif 000139
0006332773.tif 000140
0006332773.tif 000141
0006332773.tif 000142
0006332773.tif 000143
0006332773.tif 000144
0006332773.tif 000145
式中、
Ａａ、ｎ、ｒ及びＱの定義は請求項1の式（Ｉ）と同じである。
【請求項８】
式（Ｉ）が細胞結合分子−薬物共役体として、以下の式（ＸＩＸ）、（ＸＸ）、（ＸＸＩ）、（ＸＸＩＩ）、（ＸＸＩＩＩ）及び（ＸＸＩＶ）である、請求項１記載の化合物。
【化１３】
0006332773.tif 000146
0006332773.tif 000147
式中、Ｕ、Ｕ’、Ｖ、Ｖ’、ｌ、ｌ’、ｍ、ｍ’、ｎ、ｎ’、Ｘ、Ｘ’、Ｙ、Ｙ’、Ｚ、Ｚ’、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４及びＲ４’の定義は、請求項１の式（Ｉ）と同じである。ＣＢＡは細胞結合分子である；
Ｌ及びＬ’は独立して、−Ｗｗ−（Ａａ）ｒ−Ｔｔ−；−Ｗｗ−（Ａａ）ｒ−Ｔｔ−Ｑ；又はＱ−Ｗｗ−（Ａａ）ｒ−Ｔｔ−の構造を有し、式中、Ｗ、ｗ、Ａａ、ｒ、Ｔ、ｔ及びＱの定義は、式（Ｉ）と同じである。
【請求項９】
細胞結合分子−薬物共役体として、以下の細胞結合分子を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物：
抗体全長（多クローン又は単クローン抗体）；一本鎖抗体；二重特異性抗体、三重特異性抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆａｂ発現ライブラリで得られるフラグメント、抗イディオタイプ（ａｎｔｉ−Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ’ｓ、及び如何なる癌細胞抗原、ウイルス抗原又は微生物抗原と免疫特異的に結合する上記のいずれかのエピトープ結合フラグメント；インターフェロン；ペプチド；リンホカイン；ホルモン類；成長因子及びコロニー刺激因子；インスリン及びインスリン様成長因子（ＩＧＦ−Ｉ及びＩＧＦ−ＩＩ）、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ並びにＧＭ−ＣＳＦ；ワクチン成長因子（ＶＧＦ）；線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦｓ）；小分子量タンパク質、ポリペプチド、ペプチド及びペプチドホルモン；血小板成長因子；インターロイキン及びサイトカイン；ビタミン；アポタンパク質及び糖タンパク質；糖結合タンパク質又はリポタンパク質；細胞栄養素輸送分子（トランスフェリン等）；小分子阻害剤；標的細胞と結合する共役されたタンパク質を含むペプチド、ペプチド類縁物質又はタンパク質；非ペプチド又はその他の細胞結合分子又は物質。
【請求項１０】
請求項１、２、３、４、７又は８に記載の化合物及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項１１】
哺乳動物における異常な細胞成長の抑制又は増殖性疾患の治療のために用いられ、前記疾患が癌、良性又は悪性腫瘍；白血病及びリンパ悪性腫瘍；ニューロン類と神経膠こう細胞類、アストロサイト類、視床下部類、腺体、マクロファージ類、上皮、基質、胞胚、血管生成及び免疫欠損関連疾患；炎症；自己免疫性疾患；構造破壊性疾患；骨組織破壊；伝染性疾患；ウイルス性疾患；繊維化疾患；神経退化性疾患；膵臓又は腎臓疾患を含む、請求項１０記載の医薬組成物。
【請求項１２】
任意に相乗効果薬物を含み、該相乗効果薬物が化学療法剤、自己免疫疾患治療剤、抗感染症治療剤、抗ウイルス剤若しくはその他の免疫治療剤、又はこれらの相乗効果薬物のいくつかであり、断続的に又は持続的に哺乳動物に投与できる、請求項１１記載の医薬組成物。
【請求項１３】
細胞結合分子−薬物共役体としての化合物であって、抗体、抗体フラグメント、二フラグメント抗体、三フラグメント抗体、表皮成長因子（ＥＧＦ）、前立腺特異性膜表面抗原 (ＰＳＭＡ) 阻害剤、メラニン細胞刺激（ＭＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、多クローン抗体、成長ホルモンインヒビン、葉酸、蛋白分解酵素阻害剤、雌性ホルモン、雌性ホルモン類縁物質、アンキリン反復タンパク質（ＤＡＲＰｉｎｓ）、又は雄性ホルモン若しくはその類縁物質である細胞結合分子（ＣＢＡ）を含む、請求項１又は８に記載の化合物。
【請求項１４】
連結体（２）並びに式（３）及び（３’）の単量体分子を、中間生成物（４）を経て結合させ、次いでＮａＢＨ４で還元することにより式（Ｉ）の化合物を得る工程を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物又はこれらの薬学的に許容される塩、光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマーの製造方法であって、
前記連結体（２）は、式（１）のジオールから得ることができ、
【化１４】
0006332773.tif 000148
式中、
【化１５】
0006332773.tif 000149
が単結合又は二重結合を表し；
Ｕ、Ｕ’、Ｖ、Ｖ’、Ｘ、Ｘ’、Ｙ、Ｙ’、Ｚ、Ｚ’、ｌ、ｌ’、ｍ、ｍ’、ｎ、ｎ’、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ４’及びＬの定義は式（Ｉ）と同じであり；
ＬＧは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、トリフラート、メシレート、トシレート、ニトロフェノキシ、ジニトロフェノキシ、ペンタフルオロフェノキシ、又は光延反応を経て活性化された中間基から選択される脱離基であり；
式（Ｉ）の化合物が式（７）又は（８）に示すような対称的な分子である場合、該化合物は、式（７）の化合物を得るために連結体化合物（６）と式（３）の単量体分子との直接的な結合を行い、次いで式（８）の化合物を得るためにＮａＢＨ４で還元することにより得ることができ、前記連結体化合物（６）は、式（５）のジオールから得ることができ；
【化１６】
0006332773.tif 000150
式中、
---が選択可能な単結合を表し；
【化１７】
0006332773.tif 000151
が単結合又は二重結合を表し；
Ｘ、Ｘ’、Ｙ、Ｙ’、Ｚ、Ｚ’、ｌ、ｌ’、ｍ、ｍ’、ｎ、ｎ’、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ４’及びＬの定義は式（Ｉ）と同じであり；
ＬＧは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、トリフラート、メシレート、トシレート、ニトロフェノキシ、ジニトロフェノキシ、ペンタフルオロフェノキシ、又は光延反応を経て活性化された中間基から選択される脱離基である、方法。
【請求項１５】
表面再構成された抗体、表面再構成された一本鎖抗体、又は表面再構成された抗体フラグメントである細胞結合分子（ＣＢＡ）を含む、細胞結合分子−薬物共役体としての請求項１、２、３、４、７又は８に記載の化合物。
【請求項１６】
前記細胞接着分子が好ましくは、ヒト化抗体、ヒト化一本鎖抗体、ヒト化抗体フラグメント、キメラ型抗体、キメラ型抗体フラグメント、ドメイン抗体、又はドメイン抗体フラグメントを含む、請求項１、２、３、４、７又は８に記載の化合物。
【請求項１７】
標的細胞と結合する細胞結合分子を含み、該標的細胞は、腫瘍細胞；ウイルス感染細胞；微生物感染細胞；寄生虫感染細胞；自己免疫細胞；活性化細胞；骨髄細胞；活性化Ｔ細胞若しくはＢ細胞、又はメラニン細胞；ＣＤ４、ＣＤ６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５６、ＣＤ６６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ９８、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１２５、ＣＤ２２１、ＣＤ２２７、ＣＤ２６２、ＣＤ３０９、ＣＤ３２６、ＣＥＡＣＡＭ３、ＣＥＡＣＡＭ５、ＤＬＬ４、ｃＭｅｔ、ＥｐＣＡＭ、ＣａｎＡｇ、ＣＡＬＬＡ、ＥＧＦＲ、ＣＴＬＡ４、ＣＸＣＲ４、エンドグリン、ＥＲＢＢ２、ＦＣＧＲ１，ＦＯＬＲ、ＧＤ２、Ｇ−２８、ＧＤ３イディオタイプ、熱ショックタンパク質、ＨＥＲ１、ＨＬＡ−ＤＲ１０、ＨＬＡ−ＤＲＢ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ−２受容体、ＩＬ−６Ｒ、インテグリン（αｖβ３、α５β１、α６β４、α１１β３、α５β５、αｖβ５）、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ４、抗トランスフェリン受容体、ｐ９７、ＭＳ４Ａ１、ＭＵＣ１又はＭＵＣ１−ＫＬＨ、ＭＵＣ１６、ＣＡ１２５、ＣＥＡ，ｇｐ１００、ＭＡＲＴ１、ＭＰＧ、ヌクレオリン、神経癌遺伝子生成物、Ｐ２１、抗Ｎ−ヒドロキシアセチルノイラミン酸パラトープ、ＰＬＡＰ様睾丸アルカリホスファターゼ、ＰＳＭＡ、ＰＳＡ、ＲＯＢＯ４、ＴＡＧ７２、Ｔ細胞膜貫通タンパク質、Ｔｉｅ（ＣＤ２０２ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＰＢＧ、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＶＣＡＭ−１、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−２（ＣＤ３０９）、Ｈｅｒ−２抗原、Ｈｅｒ−３抗原が発現している細胞；又はインスリン成長因子受容体、上皮成長因子受容体、若しくは葉酸受容体が発現している細胞から選択される、請求項１、２、３、４、７又は８に記載の細胞結合分子−薬物共役体としての化合物。
【請求項１８】
細胞接着分子上に、反応性のジスルフィド、マレイミド、ハロゲン化アセチル、ヒドラジド、ニトリル、アルキニル、アルキルオキシアミノ、又はアルデヒド基を導入する（共有結合されたＣＢＡ−Ｌ’’分子を形成する）ために、任意に０〜３０％の有機共溶媒を含むｐＨ３〜９の水系緩衝液において、細胞接着分子（ＣＢＡ）を連結体（Ｌ’’）で修飾することと、
次いで、細胞接着分子−薬物分子共役体を生成するために、任意に０〜３０％の有機共溶媒を含むｐＨ３〜９の水系緩衝液において、ＣＢＡ−Ｌ’’分子と式（Ｉ）中の薬物残基（Ｄｒｕｇ）とを反応させることと、
を含む、細胞結合分子−薬物共役体としての請求項８記載の化合物の製造方法。
【請求項１９】
薬物残基上に、反応性のジスルフィド、マレイミド、ハロゲン化アセチル基、ヒドラジド、ニトリル、アルキニル、アルキルオキシアミノ、アルデヒド、Ｎ−ヒドロキシサクシニルイミド（ＮＨＳ）エステル、又はペンタフルオロフェニルエステル基を導入する（共有結合されたＤｒｕｇ−Ｌ’’分子を形成する）ために、有機溶媒又は任意に０〜９９％の有機共溶媒を含むｐＨ３〜９の水系緩衝液において、薬物残基（Ｄｒｕｇ）を連結体（Ｌ’’）で修飾することと、
次いで、細胞接着分子−薬物分子共役体を生成するために、任意に０〜３０％の有機共溶媒を含むｐＨ３〜９の水系緩衝液において、Ｄｒｕｇ−Ｌ’’分子と細胞接着分子（ＣＢＡ）又は事前修飾されたＣＢＡとを反応させることと、
を含む、細胞結合分子−薬物共役体としての請求項８記載の化合物の製造方法。
【請求項２０】
任意に有機共溶媒を０〜３０％含むｐＨ３〜９の水系緩衝液中で、細胞接着分子と、ジスルフィド、マレイミド、ハロゲン化アセチル、ヒドラジド、ニトリル、アルキニル、アルキルオキシアミノ、アルデヒド基、Ｎ−ヒドロキシサクシニルイミド（ＮＨＳ）エステル、又はペンタフルオロフェニルエステル等の反応性官能基を有する式（Ｉ）の薬物残基と、を直接反応させる工程を含む、請求項８記載の細胞結合分子−薬物共役体の製造方法。
【請求項２１】
癌、自己免疫疾患、伝染性疾患又はウイルス性疾患の治療のために、生体外、体内又は体外を通じて哺乳動物へ有効投与量で投与することに使用できる、請求項１、２、３、４、７又は８に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規細胞毒性分子であるピロール［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）誘導体及びこれらの薬物の疾患治療における使用に関する。これらの新規細胞毒性分子は、これらの誘導体と細胞結合分子との化学的結合により、ピロール［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）誘導体を特異的標的細胞群へ送達することによって、疾病の標的治療を実現する。
【背景技術】
【０００２】
ブレンツキシマブ  ベドチン（商品名Ａｄｃｅｔｒｉｓ）及びトラスツズマブ  エムタンシン（商品名Ｋａｄｃｙｌａ）の発売を成し遂げた後、抗体薬物共役体（ＡＤＣ）は、非常に潜在力のある癌治療方法に発展した。この新規ＡＤＣ化合物は、抗癌活性を有する細胞毒性分子がモノクローナル抗体に共有結合的に導入されており、抗原が発現している癌細胞へ特異的に細胞毒性分子を送達することができ、これで癌細胞を殺すことができる。ＡＤＣ薬物の技術プラットフォームは、細胞毒性分子、連結体技術、抗体技術及び共役カップリング方法を含み、この内容はまだ発展中である。最適化ＡＤＣ薬物の製造における肝心な要素の一つは、この細胞毒性分子である。
【０００３】
ピロール［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）は、種々のストレプトマイセス属に由来する配列選択性のあるＤＮＡ結合剤グループとして周知である。このメンバーの周知の化合物として、ＤＣ−８１、トマイマイシン、ポロトラマイシンＢ、プロトラカルシン、メチルアントラマイシン、ポロトラマイシン、プロトラカルシン、シバノマイシン（Ｓｉｂａｎｏｍｙｃｉｎ）、ネオトラマイシン、チカマイシン、アベマイシン（Ａｂｂｅｍｙｃｉｎ）、シビロマイシン、及びアントラマイシンが含まれる（I. O’Neil， et al., Tetrahedron Letters 2003, 44, 7809-7812; L. Cipolla, et al., Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry, 2009, 9, 1-31; L. Hurley, J. Antibiot.1977, 30, 349; K. Schimizu, et al., J. Antibiot 1982, 35, 992; J. Lown, et al., Biochem.Pharmacol.1979, 28, 2017; D. Thurston, et al., Chem. Rev. 1994, 94, 433; P. Molina, et al., Tetrahedron 1995, 51, 5617; A. Kamal, et al., Chem. Commun.1996, 385; A. Kamal, et al., Tetrahedron Lett.1996, 37, 6803）。これらの化合物は、Ｃ１１位が求電子性を有し、ＤＮＡ小溝のグアニン塩基上のＮＨ２基をアルキル化することができるＤＮＡ小溝上の３塩基対配列Ｐｕ−Ｇ−Ｐｕ（Ｐｕ：プリン、Ｇ：グアニン）において、共有結合付加化合物を形成することにより、抗癌活性を示す(D. Thurston, Molecular Aspects of Anticancer Drug-DNA Interactions, The Macmillan Press Ltd.: London, UK, 1993, 54-88; D. Antonow, D. Thurston, Chem. Rev., 2011, 111, 2815-2864; P. Dervan, Science, 1989, 232, 464; L. Hurley, J. Med. Chem., 1989, 32, 2027; D. Thurston, Chem. Br., 1990, 26, 767)。更に、ＰＢＤは抗腫瘍剤としてだけでなく、遺伝子調節因子及びＤＮＡ構造プローブとしての可能性がある(L. Hurley, J. Med. Chem., 1989, 32, 2027-2033)。
【０００４】
サーストン及び共同研究者は、２つのＤＣ−８１サブユニットが、各芳香族Ａ環上のフェノール位において、不活性なプロピルジオキシ結合により接続している、最初のＣ８／Ｃ８’−結合ＰＢＤ二量体（ＤＳＢ−１２０）を報告した（D. Thurston, et al., J. Org. Chem., 1996, 61, 8141)。これらのＣ８／Ｃ８’−ジエーテル結合ＰＢＤ二量体は、単量体であるＤＣ−８１と比べて、少なくとも２倍の高いＤＮＡ結合親和性を示す。３炭素スペース（ｎ＝３）のＣ８／Ｃ８’−結合ＰＢＤ二量体アナログ（ＤＳＢ−１２０）は、別々の２つの塩基対で、６つのＤＮＡ塩基対をまたいだ反対鎖のグアニン塩基との架橋により、共有的に５’−Ｐｕ−ＧＡＴＣ−Ｐｙ配列と結合する(K. Rahman, et al., J. Am. Chem. Soc., 2009, 131(38), 13756-13766; C. Martin, et al., Biochemistry, 2005, 44(11), 4135-4147)。更に伸長したＰＢＤ二量体（ｎ＝５）は、特定の塩基対をまたいで５’−Ｐｕ−ＧＡ（Ｔ／Ａ）ＴＣ−Ｐｙ配列と架橋することができる (S. Hopton, A. Thompson, Biochemistry, 2011, 50(21), 4720-4732; M. Smellie, et al., Biochemistry, 2003, 42(27), 8232-8239; S. Gregson, et al., J. Med. Chem., 2004, 47(5), 1161-1174)。Ｃ８／Ｃ８’−結合ＰＢＤ二量体の中で、炭素数５の鎖を有するものは、テストされた殆どの細胞株において最高の細胞毒性を示した(D. Thurston, et al., J. Org. Chem., 1996, 61, 8141; A. Kamal, et al., Curr. Med. Chem.-Anticancer Agents, 2002, 2, 215-254; S. Gregson, et al., J. Med. Chem., 2004, 47(5), 1161-1174)。
【０００５】
Ｃ８／Ｃ８’結合ＰＢＤ二量体が報告された後、構造が修飾された多数のＰＢＤ二量体が合成され、それらの生物活性、特にＤＮＡ結合能及び抗癌活性が評価された( US. Pat. Nos. 8,383,618; 8,372,831; 8,217,167; 8,318,726; 8,153,627; 7,754,694; 7,741,319; 7,704,924; 7,612,062; 7,608,615; 7,557,099; 7,528,128; 7,528,126; 7,476,664; 7,465,724; 7,429,658; 7,407,951; 7,312,210; 7,265,105; 7,189,710; 7,183,054; 7,173,026; 7,067,511; 7,056,913; 7,049,311; 7,015,215; 6,979,684; 6,951,853; 6,939,869; 6,884,799; 6,800,622; 6,683,073; 6,660,856; 6,562,806; 6,362,331; J. Seifert, et al., Org. Biomol. Chem., 2012, 10(34), 6850-6860; K. Rahman, et al., J. Antimicro. Chem., 2012, 67(7), 1683-1696; J. Hartley, et al., Cancer Research, 2010, 70(17), 6849-6858; J. Hartley, et al., Invest. New Drugs, 2012, 30(3), 950-958; P. Howard, et al., WO 2011130613; J. Hartley, et al., Expert Opin. Invest. Drugs., 2011, 20(6), 733-744; P. Howard, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2009, 19(22), 6463-6466; L.Cipolla, et al., Anti-Cancer Agents Med. Chem., 2009, 9(1), 1-31; Ar. Tiberghien, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2008, 18(6), 2073-2077; B. Purnell, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2006, 16(21), 5677-5681; A. Kamal, Bioorg. Med. Chem., 2006, 14(2), 385-394; P. Howard, et al., WO 2005085259; R. Kumar, et al., Eur. J. Med.Chem., 2005, 40(7), 641-654; A. Kamal, et al., Bioorg. Med. Chem., 2004, 12(20), 5427-5436; G. Wilkinson, Invest. New Drugs, 2004, 22(3), 231-240; R. Kumar, et al., Mini-Reviews Med. Chem., 2003, 3(4), 323-339; S. Gregson, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2001, 11(21), 2859-2862; B. Reddy, et al., Anti-Cancer Drug Design, 2000, 15(3), 225-238; Y. Damayanthi, et al., J. Org. Chem., 1999, 64, 290-292)。これらの二量体のいくつかを表１に示す。注意に値するのは、ＤＮＡ小溝でねじれのない鎖間結合を形成するために、２つのＰＢＤサブユニット間で柔軟な連結体を有するＰＢＤ二量体だけが、ＰＢＤ単量体と比べて有意に一層高い活性を有していることである。いままで、多くのこれらの化合物が臨床試験段階に入ったが、生物学的利用能が低いことから、殆どが次の段階まで進展していない。従って、一部のＰＢＤ二量体を抗体等の細胞結合分子と共役させることによって、生物学的利用能及び治療効果を強化することができる（U.S. Pat. Nos. 8,426,402; 8,404,678; 8,163,736; 8,097,238; A. Commercon, et al.,WO 2012014147; FR 2963007；P. Howard, et al., WO 2011130598; P. Howard, et al., WO 2011130613; P. Howard, et al., WO 2011130616; A. Commercon, et al., WO 2011023883; H. Bouchard, et al., WO 2009016516；L.Gauzy, et al.， Eur. Pat. Appl. EP 2019104; L. Gauzy, Robert Zhao, et al., WO 2007085930; L. Masterson, Bioorg. Med. Chem. Let., 2006, 16(2), 252-256; W. Li, et al., WO 2012128868; N. Fishkin, et al., WO 2012112687; R. Chari, WO 2012112708; Z. Zhilina, et al., Bioconj. Chem., 2004, 15(6), 1182-1192; A. Kamal, et al., MedChemComm, 2011, 2(8), 780-8; L. Masterson, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2006, 16(2), 252-6; M. Sagnou, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2000, 10(18), 2083-2086; K. M. Rahman, et al., J. Med. Chem., 2013, 56, 2911-35; A. Kamal, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2012, 22, 571-8; M. C. Hsieh, et al., Toxicol. Appl. Pharmacol., 2011, 255, 150-9; C. Lee, et al., Chem Biol Interact, 2009, 180, 360-7; B. Reddy, et al., Anticancer Drug Des, 2000, 15, 225-38) 。しかしながら、ＰＢＤ二量体は、抗体−薬物共役体中のプロドラッグとして修飾されたいくつかでさえ、水系緩衝溶液に殆ど溶けないため、かなりの量の抗体又はタンパク質凝集を引き起こした。（US patent Nos 8,426,402; 8,404,678; 8,163,736; 8,097,238; A.Commercon, et al., WO 2012014147; FR 2963007; P. Howard, et al., WO 2011130598; P. Howard, et al., WO 2011130613; P. Howard, et al., WO 2011130616; A.Commercon, et al., WO 2011023883; H. Bouchard, et al., WO 2009016516;L. Gauzy, et al., Eur. Pat. Appl. EP 2019104; L.Gauzy, Robert Zhao, et al., WO 2007085930; L. Masterson, Bioorg. Med. Chem. Let., 2006, 16(2), 252-256; W. Li, et al., WO 2012128868; N. Fishkin, et al., WO 2012112687; R. Chari, WO 2012112708; Z. Zhilina, et al., Bioconj. Chem., 2004, 15(6), 1182-1192; A. Kamal, et al., MedChemComm, 2011, 2(8), 780-8; L. Masterson, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2006, 16(2), 252-6; M. Sagnou, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2000, 10(18), 2083-2086; K. Rahman, M. et al., J. Med. Chem., 2013, 56, 2911-35; A. Kamal, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2012, 22, 571-8; M. C. Hsieh, et al., Toxicol. Appl. Pharmacol., 2011, 255, 150-9; C. Lee, et al., ChemBiol Interact, 2009, 180, 360-7; B. Reddy, et al., Anticancer Drug Des, 2000, 15, 225-38)。ここに我々は、良好な抗腫瘍活性を有し、且つ水系溶媒中でタンパク質凝集することなく、細胞表面結合リガンドと容易に共役し、結合することができる新規ＰＢＤ二量体誘導体を開示する。従って、これらの物質は、癌及び免疫疾患を治療するために、細胞結合分子との共役に一層有効に用いることができる。
【０００６】
【表１】
0006332773.tif 000002
0006332773.tif 000003
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許公開２００６／１００５８３号公報
【特許文献２】国際公開ＷＯ２０１１／０９１２７５号公報
【特許文献３】国際公開ＷＯ０１／５１１１６号公報
【特許文献４】米国特許第４，８０１，２９７号公報
【特許文献５】国際公開ＷＯ９８／３３５４４号公報
【特許文献６】米国特許第８，３８３，６１８号公報
【特許文献７】米国特許第８，３７２，８３１号公報
【特許文献８】米国特許第８，２１７，１６７号公報
【特許文献８】米国特許第８，３１８，７２６号公報
【特許文献９】米国特許第８，１５３，６２７号公報
【特許文献１０】米国特許第７，７５４，６９４号公報
【特許文献１１】米国特許第７，７４１，３１９号公報
【特許文献１２】米国特許第７，７０４，９２４号公報
【特許文献１３】米国特許第７，６１２，０６２号公報
【特許文献１４】米国特許第７，６０８，６１５号公報
【特許文献１５】米国特許第７，５５７，０９９号公報
【特許文献１６】米国特許第７，５２８，１２８号公報
【特許文献１７】米国特許第７，５２８，１２６号公報
【特許文献１８】米国特許第７，４７６，６６４号公報
【特許文献１９】米国特許第７，４６５，７２４号公報
【特許文献２０】米国特許第７，４２９，６５８号公報
【特許文献２１】米国特許第７，４０７，９５１号公報
【特許文献２２】米国特許第７，３１２，２１０号公報
【特許文献２３】米国特許第７，２６５，１０５号公報
【特許文献２４】米国特許第７，１８９，７１０号公報
【特許文献２５】米国特許第７，１８３，０５４号公報
【特許文献２６】米国特許第７，１７３，０２６号公報
【特許文献２７】米国特許第７，０６７，５１１号公報
【特許文献２８】米国特許第７，０５６，９１３号公報
【特許文献２９】米国特許第７，０４９，３１１号公報
【特許文献３０】米国特許第７，０１５，２１５号公報
【特許文献３１】米国特許第６，９７９，６８４号公報
【特許文献３２】米国特許第６，９５１，８５３号公報
【特許文献３３】米国特許第６，９３９，８６９号公報
【特許文献３４】米国特許第６，８８４，７９９号公報
【特許文献３５】米国特許第６，８００，６２２号公報
【特許文献３６】米国特許第６，６８３，０７３号公報
【特許文献３７】米国特許第６，６６０，８５６号公報
【特許文献３８】米国特許第６，５６２，８０６号公報
【特許文献３９】米国特許第６，３６２，３３１号公報
【特許文献４０】国際公開ＷＯ２０１１／１３０６１３号公報
【特許文献４１】国際公開ＷＯ２００５／０８５２５９号公報
【特許文献４２】米国特許第８，４２６，４０２号公報
【特許文献４３】米国特許第８，４０４，６７８号公報
【特許文献４４】米国特許第８，１６３，７３６号公報
【特許文献４５】米国特許第８，０９７，２３８号公報
【特許文献４６】国際公開ＷＯ２０１２／０１４１４７号公報
【特許文献４７】フランス特許第２９６３００７号公報
【特許文献４８】国際公開ＷＯ２０１１／１３０５９８号公報
【特許文献５０】国際公開ＷＯ２０１１／１３０６１６号公報
【特許文献５１】国際公開ＷＯ２０１１／０２３８８３号公報
【特許文献５２】国際公開ＷＯ２００９／０１６５１６号公報
【特許文献５３】欧州特許出願第２０１９１０４号
【特許文献５４】国際公開ＷＯ２００７／０８５９３０号公報
【特許文献５５】国際公開ＷＯ２０１２／１２８８６８号公報
【特許文献５６】国際公開ＷＯ２０１２／１１２６８７号公報
【特許文献５７】国際公開ＷＯ２０１２／１１２７０８;号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Tetrahedron Letters 2003, 44, 7809-7812
【非特許文献２】Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry, 2009, 9, 1-31
【非特許文献３】J. Antibiot.1977, 30, 349
【非特許文献４】J. Antibiot 1982, 35, 992
【非特許文献５】Biochem.Pharmacol.1979, 28, 2017
【非特許文献６】Chem. Rev. 1994, 94, 433
【非特許文献７】Tetrahedron 1995, 51, 5617
【非特許文献８】Chem. Commun.1996, 385
【非特許文献９】Tetrahedron Lett.1996, 37, 6803
【非特許文献１０】The Macmillan Press Ltd.: London, UK, 1993, 54-88;
【非特許文献１１】Chem. Rev., 2011, 111, 2815-2864
【非特許文献１３】Science, 1989, 232, 464
【非特許文献１４】J. Med. Chem., 1989, 32, 2027
【非特許文献１５】Chem. Br., 1990, 26, 767
【非特許文献１６】J. Med. Chem., 1989, 32, 2027-2033
【非特許文献１７】J. Org. Chem., 1996, 61, 8141
【非特許文献１８】J. Am. Chem. Soc., 2009, 131(38), 13756-13766
【非特許文献１９】C. Martin, et al., Biochemistry, 2005, 44(11), 4135-4147
【非特許文献２０】Biochemistry, 2011, 50(21), 4720-4732
【非特許文献２１】Biochemistry, 2003, 42(27), 8232-8239
【非特許文献２２】J. Med. Chem., 2004, 47(5), 1161-1174
【非特許文献２３】J. Org. Chem., 1996, 61, 8141
【非特許文献２４】Curr. Med. Chem.-Anticancer Agents, 2002, 2, 215-254
【非特許文献２５】J. Med. Chem., 2004, 47(5), 1161-1174
【非特許文献２６】J. Org. Chem., 1996, 61, 8141
【非特許文献２７】J. Am. Chem. Soc., 2009, 131(38), 13756-13766
【非特許文献２８】Biochemistry, 2005, 44(11), 4135-4147
【非特許文献２９】Biochemistry, 2011, 50(21), 4720-4732
【非特許文献３０】Biochemistry, 2003, 42(27), 8232-8239
【非特許文献３１】J. Med. Chem., 2004, 47(5), 1161-1174
【非特許文献３２】J. Org. Chem., 1996, 61, 8141
【非特許文献３３】Curr. Med. Chem.-Anticancer Agents, 2002, 2, 215-254
【非特許文献３４】J. Med. Chem., 2004, 47(5), 1161-1174
【非特許文献３５】Org. Biomol. Chem., 2012, 10(34), 6850-6860
【非特許文献３６】J. Antimicro. Chem., 2012, 67(7), 1683-1696
【非特許文献３７】Cancer Research, 2010, 70(17), 6849-6858
【非特許文献３８】Invest. New Drugs, 2012, 30(3), 950-958
【非特許文献３９】Expert Opin. Invest. Drugs., 2011, 20(6), 733-744
【非特許文献４０】Bioorg. Med. Chem. Lett., 2009, 19(22), 6463-6466
【非特許文献４１】Anti-Cancer Agents Med. Chem., 2009, 9(1), 1-31
【非特許文献４２】Bioorg. Med. Chem. Lett., 2008, 18(6), 2073-2077
【非特許文献４３】Bioorg. Med. Chem. Lett., 2006, 16(21), 5677-5681
【非特許文献４４】Bioorg. Med. Chem., 2006, 14(2), 385-394
【非特許文献４５】Eur. J. Med.Chem., 2005, 40(7), 641-654
【非特許文献４６】Bioorg. Med. Chem., 2004, 12(20), 5427-5436
【非特許文献４７】Invest. New Drugs, 2004, 22(3), 231-240
【非特許文献４８】Mini-Reviews Med. Chem., 2003, 3(4), 323-339
【非特許文献４９】Bioorg. Med. Chem. Lett., 2001, 11(21), 2859-2862
【非特許文献５０】Anti-Cancer Drug Design, 2000, 15(3), 225-238
【非特許文献５１】J. Org. Chem., 1999, 64, 290-292
【非特許文献５２】Bioorg. Med. Chem. Let.，2006, 16(2), 252-256
【非特許文献５３】Bioconj. Chem., 2004, 15(6), 1182-1192
【非特許文献５４】MedChemComm, 2011, 2(8), 780-8
【非特許文献５５】Bioorg. Med. Chem. Lett., 2006, 16(2), 252-6
【非特許文献５６】Bioorg. Med. Chem. Lett., 2000, 10(18), 2083-2086
【非特許文献５７】J. Med. Chem., 2013, 56, 2911-35
【非特許文献５８】Bioorg. Med. Chem. Lett., 2012, 22, 571-8
【非特許文献５９】Toxicol. Appl. Pharmacol., 2011, 255, 150-9
【非特許文献６０】Chem Biol Interact, 2009, 180, 360-7
【非特許文献６１】Anticancer Drug Des, 2000, 15, 225-38
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の第１の実施形態は、細胞毒性分子、具体的には細胞毒性分子であり、細胞増殖を効率的に抑制できるピロール［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン誘導体の開示である。特に、本発明は、細胞増殖を抑制するために任意に細胞結合分子と結合され、又は結合することができる新規ピロール［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン誘導体を開示する。本発明の細胞毒性分子及び細胞接着分子により形成されたそれらの共役体は、以下の式（Ｉ）の化合物又はこれらの薬学的に許容される塩、水和物若しくは水和塩；又はこれらの化合物の多結晶型物質；又はそれらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマーで示される。
【００１１】
【化１】
0006332773.tif 000004
【００１２】
式中、
【化２】
0006332773.tif 000005
が単結合又は二重結合を表し、
【化３】
0006332773.tif 000006
が単結合である場合、Ｕ及びＵ’がそれぞれ独立してＨ、Ｒ５、アミン保護基、細胞結合分子と接続するための反応基を含む連結体（Ｌ’）、又は当該位置で接続している細胞結合分子を表す；
【００１３】
VとV’はそれぞれ独立に、Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨＯＨ；エーテル（−ＯＲ５）；エステル（−ＯＣＯＲ５、例えばアセテート）；カーボネート（−ＣＯＯＲ５）；アミン（−ＮＲ５Ｒ５’、−ＮＲ５ＣＯＲ５’、−ＮＲ５Ｒ５’Ｒ５’’）；カルバメート（−ＯＣＯＮＲ５Ｒ５’）；グアニジウム（−ＮＲ５（Ｃ＝ＮＨ）ＮＲ５’Ｒ５’’）；アミノ酸又はペプチド（−ＮＲ５ＣＯ（Ａａ）ｔ：Ａａはアミノ酸又は１〜１００個のアミノ酸単位（tはアミノ酸単位の数を表す。）を含むポリペプチドである。）；任意に置換された窒素含有５又は６員複素環（ピペリジン、テトラヒドロピロール、ピラゾール、モルホリン等)；ＵとＶ及び／又はＵ’とＶ’が環状化合物の一部分であるような環状カルバメート；尿素（−ＮＲ５ＣＯＲ５’Ｒ５’’）；チオカルバメート（−ＯＣＳＮＨＲ５）；ＵとＶ及び／又はＵ’とＶ’が環状化合物の一部分であるような環状チオカルバメート；チオール（ＳＨ）；−ＳＲ５等のスルフィド；スルホキシド（−ＳＯＲ５）；スルフォン（−ＳＯＯＲ５）；亜硫酸（−ＳＯ３、ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、又はＨＳＯ３−、ＳＯ３２−、若しくは−ＨＳＯ２−塩）；重亜硫酸（−ＳＯ３）；スルホンアミド（−ＮＲ５ＳＯＯＲ５’）；メタ重亜硫酸（Ｈ２Ｓ２Ｏ５又はＳ２Ｏ５２−塩）；モノ、ジ、トリ及びテトラチオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、又はＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−若しくはＰＳ４３−の塩）；チオホスフェートエステル（（Ｒ５Ｏ）２ＰＯＳＲ５’）；チオスルフェート（−Ｓ２Ｏ３Ｈ又はＳ２Ｏ３２−塩）；ジチオニト（−Ｓ２Ｏ４Ｈ又はＳ２Ｏ４２−塩）；ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲ５）（Ｓ）（ＯＨ）又は陽イオンと生成する塩）；環状アミン（ＵとＶ及び／又はＵ’とＶ’が環状化合物の一部分である）；ヒドロキシルアミン誘導体（−ＮＲ５ＯＲ５’）；ヒドロキサム酸（Ｒ５Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ又は陽イオンと生成する塩）；ホルムアルデヒドスルホキシレート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−又はその塩）；アミド（−ＮＲ５ＣＯＲ５’）；アジド（−Ｎ３）；シアノ基；ハロゲン；トリアルキル基、アミド亜リン酸エステル（ホスホロアミド酸）、トリアリールホスホニウム、アミノ酸誘導体基；連結体（Ｌ’）細胞結合分子と接続するための反応基を有する連結体（Ｌ’）、又は当該位置で結合している細胞結合分子から選択される。Ｒ５、Ｒ５’及びＲ５’’の定義は、後述の通りである。
【００１４】
【化４】
0006332773.tif 000007
が二重結合である場合、ＵとＵ’が空き、ＶとＶ’がＨ、 炭素数１〜４の直鎖又は分岐アルキル基である。
【００１５】
ｌ、ｍ、ｎ、ｌ’、ｍ’及びｎ’は０、１、２、３、４、５又は６の数字であり；
【００１６】
Ｘ、Ｘ’、Ｙ及びＹ’はそれぞれ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２又は−ＣＨＲ５−等のアルキル、＝ＣＨ−又は＝ＣＲ５等のアルケニル、又は−Ｃ（ＯＲ５）Ｈ等のエーテルである。
【００１７】
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−Ｒ５、ＣＯＨ又はＣＯＲ５である。
【００１８】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’は独立してＨ、任意に置換していてもよい炭素数１〜１０の直鎖、分岐若しくは環状アルキル基、アルケニル基、アルキニル基若しくはアリール基、ポリエチレングリコール単位（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＲ５、ハロゲン、グアニジウム［−ＮＲ５（Ｃ＝ＮＨ）ＮＲ５’Ｒ５’’］、−ＯＲ５、−ＮＲ５Ｒ５’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ５ＣＯＲ５’、−ＳＲ５、−ＳＯＲ５で表されるスルホキシド、−ＳＯ２Ｒ５で表されるスルフォン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ３Ｈ、スルフェート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲ５Ｒ５’ で表されるスルホンアミド、シアノ基、アジド基、−ＣＯＲ５、−ＯＣＯＲ５、−ＯＣＯＮＲ５Ｒ５’、−ＣＦ３、−ＯＲ５、アリール基、複素環、Ｐ（Ｏ）Ｒ５Ｒ５’ Ｒ５’’、連結体（Ｌ’）細胞結合分子と接続するための反応基を有する連結体（Ｌ’）、又は当該位置で結合している細胞結合分子から選択される。
【００１９】
Ｒ５、Ｒ５’及びＲ５’’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アルケニル、アルキイル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、カルボニルアルキル、又は薬用塩である。Ｒ５、Ｒ５’及びＲ５’’は更に、−ＮＲ１Ｒ２、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＲ１、−ＣＯＯＲ１、−ＣＯＮＲ１、−ＰＯ２Ｒ１Ｒ２、−ＰＯＲ１Ｒ２Ｒ３、及び−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基により置換されていてもよい。
【００２０】
ｑは０、１又は２である。
【００２１】
Ｒ２とＲ３又はＲ２’とＲ３’は、互いに結合して＝（二重結合）、＝Ｏ（ケトン）、＝Ｓ、＝ＮＲ５、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｒ５）−、又は二重結合含有基＝ＣＲ５Ｒ５’を形成してもよい。また、Ｒ１とＲ２、Ｒ１’とＲ２’、Ｒ３とＲ４、又はＲ３’とＲ４’は、互いに結合して芳香環、複素環又は複素アリール環を形成してもよい； 
【００２２】
Ｌ及びＬ’は、それぞれ独立して連結体、連結体と細胞結合分子（Ｑ）との共有結合により形成されたクラスター、又は細胞接着分子（ＣＢＡ）と結合できる官能基を含有する連結体である。Ｌ及びＬ’が連結体である場合、好ましくは、Ｌ及びＬ’が−Ｗｗ−（Ａａ）ｒ−Ｔｔ−、−Ｗｗ−（Ａａ）ｒ−Ｔｔ−Ｑ、又はＱ−Ｗｗ−（Ａａ）ｒ−Ｔｔで表される放出可能連結体であり、式中、Ｗは拡張ユニットであり、ｗは０又は１であり、Ａａはそれぞれ独立したアミノ酸を含むアミノ酸ユニットであり、ｒは０〜１００の間の整数である。
【００２３】
前記拡張ユニットＷは、自壊性又は非自壊性ユニット、ペプチドユニット、ヒドラゾン結合、ジスルフィド結合、エステル結合、オキシム結合、アミド結合又はチオエーテル結合を含んでいてもよい。前記自壊性ユニットは、これらに限定されないが、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体、複素環ＰＡＢ類縁物質、β−グルクロニド、及びｏ−又はｐ−アミノベンジルアセタール等の電子構造がパラアミノベンジルカルバモイル（ＰＡＢ）基と類似する芳香族化合物を含み、好ましくは、前記自壊性連結体成分は下記のいずれか１つを含む。
【００２４】
【化５】
0006332773.tif 000008
【００２５】
式中、（＊）で標識された原子は、追加スペーサー若しくは放出可能連結体単位、細胞毒性分子及び／又は細胞接着分子（ＣＢＡ）との結合点である；Ｘ１、Ｙ１、Ｚ２、及びＺ３は独立してＮＨ、Ｏ又はＳである；Ｚ１は独立してＨ、ＮＨ、Ｏ又はＳである；ｖは０又は１である；Ｑ１は独立してＨ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル基、（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲ５、ＳＲ５、ＮＲ５Ｒ５’、Ｎ＝ＮＲ５、Ｎ＝Ｒ５、ＮＲ５Ｒ５’、ＮＯ２、ＳＯＲ５Ｒ５’、ＳＯ２Ｒ５、ＳＯ３Ｒ５、ＯＳＯ３Ｒ５、ＰＲ５Ｒ５’、ＰＯＲ５Ｒ５’、ＰＯ２Ｒ５Ｒ５’、ＯＰＯ（ＯＲ５）（ＯＲ５’）又はＯＣＨ２ＰＯ（ＯＲ５）（ＯＲ５’)であり、式中、Ｒ５及びＲ５’の定義が前記の通りである；好ましくは、Ｒ５及びＲ５’は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル基、Ｃ２−Ｃ８アルケニル基、アルキニル基、ヘテロアルキル基、Ｃ３−Ｃ８アリール基、複素環、炭素環、環状アルキル基、複素環アルキル基、ヘテロアラルキル基、アルキルカルボニル基又は薬用陽イオン塩から選択される。
【００２６】
非自壊性連結体成分は、下記の構造のうちの一つである。
【化６】
0006332773.tif 000009
0006332773.tif 000010
【００２７】
式中、（＊）で標識された原子は、追加スペーサー若しくは放出可能連結体単位、細胞毒性分子及び／又は細胞接着分子（ＣＢＡ）との結合点である；Ｘ１、Ｙ１、Ｑ１、Ｒ５及びＲ５’の定義は前記の通りである；ｒは０〜１００である；ｍ、ｎ及びｐは０〜６である。
【００２８】
スペーサー（Ｔ）は炭素数１〜１０直鎖、分岐又は環状アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、又はアリール基であり、また、Ｔはポリエチレングリコール（−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−）スペーサーでもよい；ｔは０又は１〜１００である。Ｔは、自身のアミド結合が加水分解された後、環化反応を行うことができる。このようなアミドは、置換された又は置換されていない４−アミノ酪酸アミド、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］及びビシクロ［２．２．２］環系、及び２−アミノフェニルプロピオン酸アミドを含む。
【００２９】
更に、Ｌは、Ｒ５、ＯＲ５、ＳＲ５、ＮＨＲ５、又はＮＲ５Ｒ５’であってもよく、また、式（Ｉ）上のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’、Ｒ４’、Ｕ、Ｕ’、Ｖ、又はＶ’は、拡張ユニット（Ｗｗ）又はスペーサーユニット（Ｔｔ）を介してＱと連結するのに用いられることができる。
【００３０】
Ｑは細胞結合分子（ＣＢＡ）、該細胞結合分子と結合できる官能基、又は細胞結合分子が付着した連結体と反応できる官能基であり、該官能基はチオール、アミン、ヒドラジン、アルコキシアミノ、置換ジスルフィド、マレイミド、ハロアセチル基、カルボキシル基、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル、ケトン、エステル、アルデヒド、アルキニル、アルケニル、又はＳＡｃ、ＳＳＲ１若しくはＳＳＡｒのような保護されたチオール若しくはジスルフィド基である。Ａｒは芳香環基又は複素芳香環基である。
【００３１】
本発明の第二の実施形態は、（１）治療有効量の、任意に細胞結合分子と結合できるか、あるいは結合した１以上の式（Ｉ）〜（ＸＩＸ）のピロール［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン誘導体と、（２）薬学的に許容される担体、希釈剤又は補助材料と、を含み、標的細胞又は該標的細胞を含む組織を殺すことができる治療組成物を開示する。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】ベンゾジアゼピン二量体結合物の合成を説明する。
【図２】ベンゾジアゼピン二量体共役物の結合物の合成を説明する。
【図３】ベンゾジアゼピン二量体共役物の結合物の合成を説明する。
【図４】ベンゾジアゼピン二量体共役物の結合物と中間体の合成を説明する。
【図５】中間体とベンゾジアゼピン二量体共役物の合成を説明する。
【図６】ベンゾジアゼピン二量体の中間体合成を説明する。
【図７】ベンゾジアゼピン二量体の中間体合成を説明する。
【図８】ベンゾジアゼピン二量体の中間体合成を説明する。
【図９】ベンゾジアゼピン二量体の中間体合成を説明する。
【図１０】ベンゾジアゼピン二量体の中間体合成を説明する。
【図１１】中間体とベンゾジアゼピン二量体共役物の合成を説明する。
【図１２】ベンゾジアゼピン二量体共役物の合成を説明する。
【図１３】ベンゾジアゼピン二量体共役物の合成を説明する。
【図１４】ベンゾジアゼピン二量体共役物の合成を説明する。
【図１５】ベンゾジアゼピン二量体共役物の合成を説明する。
【図１６】ベンゾジアゼピン二量体共役物の合成を説明する。
【図１７】ベンゾジアゼピン二量体共役物の合成を説明する。
【図１８】ベンゾジアゼピン二量体共役物の合成を説明する。
【図１９】ベンゾジアゼピン二量体共役物の合成を説明する。
【図２０】ベンゾジアゼピン二量体共役物の合成を説明する。
【図２１】ベンゾジアゼピン二量体共役物の合成を説明する。
【図２２】ベンゾジアゼピン二量体共役物の合成を説明する。
【図２３】ベンゾジアゼピン二量体共役物の合成を説明する。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
定義：
「アルキル」とは、鎖中又は環中に１〜８個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐してもよい脂肪族炭化水素基を意味する。「分岐」とは、直鎖状のアルキル基に１以上の低級アルキル基、例えばメチル、エチル又はプロピルが結合されていることを意味する。アルキルの具体例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、３−ペンチル、オクチル、ノニル、デシル、シクロペンチル、シクロヘキシル、２，２−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルペンチル、 ３，３−ジメチルペンチル、２，３，４−トリメチルペンチル、３−メチルヘキシル、２，２−ジメチルヘキシル、 ２，４−ジメチルヘキシル、２，５−ジメチルヘキシル、３，５−ジメチルヘキシル、２，４−ジメチルペンチル、２−メチルヘプチル、３−メチルヘプチル、ｎ−ヘプチル、イソヘプチル、オクチル、及びイソオクチルが含まれる。Ｃ１〜Ｃ８アルキル基は未置換のものでもよく、１以上の基で置換されていてもよい。該基にはＣ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８）、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’，−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、 −Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮが含まれるが、これらに限定されない。尚、Ｒ’とはＣ１〜Ｃ８アルキル又はアリールを表す。
【００３４】
「環状アルキル」、 「シクロアルキル」及び「Ｃ３〜Ｃ８炭素環」は交換的に使用してもよい。これらは、飽和又は不飽和の３、４、５、６、７又は８員環非芳香族炭素環状化合物を指す。典型的なＣ３〜Ｃ８炭素環としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンタジエニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、１，３−シクロヘキサジエニル、１，４−シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、１，３−シクロヘプジタジエニル、１，３，５−シクロヘプタトリエニル、シクロオクチル及びシクロオクタジエニルを含むが、これらに制限されるものではない。Ｃ３〜Ｃ８炭素環は未置換のものでも１以上の置換基（ただし，次の置換基の一つまたは複数に制限されない）で置換されたものでもよい。即ち、前記置換基としては、−Ｃ１〜Ｃ８のアルキル、−ＯＲ５、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ５、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ５、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｒ５’、−ＮＨＣ(Ｏ)Ｒ５、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ５、−Ｓ（Ｏ）Ｒ５、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨＲ５、−ＮＲ５Ｒ５’、及び−ＣＮが挙げられ、尚、Ｒ５及びＲ５’はそれぞれ独立にＨ、Ｃ１〜Ｃ８のアルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル若しくはカルボニルアルキル又はそれらの薬用塩である。Ｒ５及びＲ５’は更に、少なくとも１つの−Ｎ（Ｒ５）（Ｒ５’）、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＲ５、−ＣＯ２Ｒ５、−ＣＯＮＲ５、又は−ＰＯ３Ｈから選択される基により置換されることができる。
【００３５】
「Ｃ３〜Ｃ８の炭素環状基」（Ｃ３〜Ｃ８ｃａｒｂｏｃｙｃｌｏ）とは、前記炭素環基における水素原子の１つが化学結合に置換された基を指す。
【００３６】
「複素環」とは、環上の１〜４個の炭素原子が独立してＯ、Ｎ、Ｓ、Ｓｅ及びＰからなる群から選択されるヘテロ原子により置換された、芳香族または非芳香のＣ３〜Ｃ１４炭素環を指す。前記ヘテロ原子として好ましくはＯ、Ｎ及びＳである。適切な複素環としては、「Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ」（第７６版, ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ, １９９5−１９９6, 第２−２５〜２−２６頁）に記載され、この参照により開示に組み込まれる。
【００３７】
適切な非芳香族複素環は、ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、オキシラニル、テトラヒドロフラニル、ジオキソラニル、テトラヒドロピラニル、ジオキサニル、ジオキサラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、ピラニル、イミダゾリニル、ピロリニル、ピラゾリニル、チアゾリジニル、テトラヒドロチオピラニル、ジチアニル、チオモルホリニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピリジル、ジヒドロピリジル、テトラヒドロピリニジニル、ジヒドロチオピラニル、アゼパニル、これら基とフェニルにより生じた縮合環を含むが、これらに制限されない。
【００３８】
「アルキル」、「シクロアルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」、「アリール」、「ヘテロアリール」、「複素環基」（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ）等には、２個の水素原子が除去されることにより形成される、対応する「アルキレン」、「シクロアルキレン」、「アルケニレン」、「アルキニレン」、「アリーレン」、「ヘテロアリーレン」、「複素環基」（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｎｅ）等をも指す。
【００３９】
「ハロゲン原子」とは、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素原子を指し、好ましくは塩素及び臭素原子である。
【００４０】
「薬学的」又は「薬学的に許容」とは、対応する化合物又は組成物を必要に応じて動物又は人間に投与した場合に、副作用、アレルギー又は他の有害反応が生じないことを指す。
【００４１】
薬学的に許容される補助材料は、全ての担体、希釈剤、助剤又は成形剤を含み、例えば、防腐剤、抗酸化剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、溶剤、分散性媒質、コーティング剤、抗菌剤、抗真菌剤、等張剤、吸収遅延剤などを含む。医薬分野において、活性を有する薬物成分にこれら補助材料を加えるという方法は一般的な方法である。補助材料が薬物活性成分と相容しない場合を除き、薬物成分に補助材料を加入することが妥当であるとは言える。良好な結果を得るために、活性を有する補助材料を薬物成分に加入してもよい。
【００４２】
本願発明において、「薬用可能な塩」とは、本発明の化合物の塩類誘導物を指す。適当な修飾により、本願発明に係る化合物が相応の酸塩又はアルカリ塩に形成され得る。薬用可能な塩としては、常用の無毒の塩又は第四級アンモニウムを含み、これら塩は、本願発明に係る化合物と相応の無毒の無機酸又は有機酸によって調製され得る。例えば、無機酸としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、アミノスルホン酸、リン酸及び硝酸などを含み、有機酸としては、酢酸、プロピオ酸、こはく酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、トルエンスルホン酸、シュウ酸、フマル酸、及び乳酸などを含み、これら酸は薬学的に許容される塩に用いることが可能である。他の塩としては、トロメタモール、メグルミン、ピロールエタノールなどのアンモニウム塩、及びナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛、マグネシウムなどの金属塩を含む。
【００４３】
本願発明において、薬学的な塩は、従来の化学方法により、酸性又は塩基性残基を含む親化合物から製造することができる。一般的に、これらの塩は、水、有機溶媒、又は両者の混合溶媒中で、これらの化合物の遊離酸又は遊離塩基形態と化学量論的な量の適切な塩基又は酸との反応により得ることができる。非水系の反応溶媒として一般的に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、又はアセトニトリルが好ましい。適切な塩のリストとしては、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ」, 第１７版. Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ, Ｅａｓｔｏｎ, ＰＡ, １９８５, 第１４１８頁に挙げられ、当該開示は参照として組み込まれる。
【００４４】
「化合物」、「細胞毒性分子」、「細胞毒性化合物」、「細胞毒性二量体」及び「細胞毒性二量体化合物」の語は、交換的に使用することができる。これらの語は、本発明及び組み入れられた文献で公開された構造若しくは分子式又はそれらの誘導体を含むことを意図する。これらの語は、本発明で公開された化合物の全ての立体異性体、幾何異性体、互変異性体、溶媒化物、代謝物、塩（例えば、薬学的に許容される塩）、プロドラッグ及びプロドラッグの塩も含む。当該用語は、前記の化合物の如何なる溶媒化物、水和物及び多結晶型物質も含む。本願で記載されている発明のある局面において、特に列挙されている「立体異性体」、「幾何異性体」、「互変異性体」、「溶媒化物」、「代謝産物」、「塩」、「プロドラッグ」、「プロ薬用塩」、「共役物」、「共役物塩」、「水和物」及び「多結晶型物質」は、他の記載を列挙することなく「化合物」と記載されている本発明のその他の局面において、これらの記載を省略することを意図するものと解釈してはならない。
【００４５】
「イミン反応性試薬」は、イミノ基と反応できる試薬類を指す。イミン反応性試薬は例示的に以下の内容を含むが、これらに限らない。亜硫酸塩（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２又はＨＳＯ３−、ＳＯ３２−若しくはＨＳＯ２−と陽イオンとから形成される塩）、メタ亜硫酸塩（Ｈ２Ｓ２Ｏ５又はＳ２Ｏ５２−と陽イオンとから形成される塩）、モノチオリン酸塩、ジチオリン酸塩、トリチオリン酸塩、テトラチオリン酸塩（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３又はＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−若しくはＰＳ４３−と陽イオンとから形成される塩)、チオリン酸エステル（（Ｒ５Ｏ）２ＰＳ（ＯＲ５）、Ｒ５ＳＨ、Ｒ５ＳＯ、Ｒ５ＳＯ２Ｈ、Ｒ５ＳＯ３Ｈ）、各種アミン（ヒドロキシルアミン（ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２ＯＲ５、Ｒ５ＮＨＲ５’、ＮＨ２Ｒ５）、ＮＨ２ＣＯＮＨ２、ＮＨ２Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ２）、チオ硫酸塩 (Ｈ２Ｓ２Ｏ３又はＳ２Ｏ３２−と陽イオンとから形成される塩)、亜ジチオン酸塩（Ｈ２Ｓ２Ｏ４又はＳ２Ｏ４２−と陽イオンとから形成される塩）、ジチオリン酸エステル（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲ５）（ＳＨ）（ＯＨ）又はこれと陽イオンとから形成される塩)、ヒドロキサム酸（Ｒ５Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ又はこれと陽イオンとから形成される塩)、ヒドラジド（Ｒ５ＣＯＮＨＮＨ２）、ヒドロキシメタンスルフィン酸塩 (ＨＯＣＨ２ＳＯ２Ｈ又はＨＯＣＨ２ＳＯ２−と陽イオンとから形成される塩、例えばＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋)、糖ヌクレオチド (例えば、ＧＤＰ−マンノース)、フルダラビン又はその混合物。式中、Ｒ５とＲ５’がそれぞれ独立して炭素数１〜８の直鎖又は分岐アルキル基であり、−Ｎ（Ｒ５）（Ｒ５’）、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＲ５、−ＣＯ２Ｒ５、−ＣＯＮＲ５、及び−ＰＯ３Ｈから選択される基の少なくとも１つにより置換されることができる；Ｒ５とＲ５’は更に任意に上記アルキル基のための置換基により置換されていてもよい；好ましい陽イオンはＮａ＋又はＫ＋のような一価陽イオンである。前記イミン反応性試薬は好ましくは、亜硫酸塩、ヒドロキシルアミン、尿素及びヒドラジンから選択される。更に好ましくは、前記イミン反応性試薬はＮａＨＳＯ３及びＫＨＳＯ３である。
【００４６】
「細胞結合剤」又は「細胞結合分子」は、如何なる既知の又は間もなく公開され、ポリペプチド及び非ポリペプチドを含む。一般的には、これらは抗体（特にモノクローナル抗体）、少なくとも一つの結合部位を含む抗体断片、リンフォカイン、ホルモン、成長因子、栄養輸送体分子（例えば、トランスフェリン）、又は如何なるその他の細胞結合分子若しくは物質 (例えば、ビタミン) であることができる。
【００４７】
細胞結合分子のより具体的な例は、下記を含む：
−モノクローナル抗体（ｍＡｂ）；
−一本鎖抗体；
−Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ等の抗体フラグメント(Parham, J. Immunol., 1983, 131, 2895-2902; Spring, et al., J. Immunol., 1974, 113, 470-478; Nisonoff, et al., Arch. Biochem. Biophys., 1960, 89, 230-244)、Ｆａｂ発現ライブラリにより得られる断片、抗イディオ（ａｎｔｉ−Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ’ｓ、及び上記免疫特異的に癌細胞抗原、ウイルス抗原又は微生物抗原と結合する上記の抗原決定基結合断片。
−インターフェロン；
−ペプチド又は共役タンパク質若しくは共役ポリペプチド；
−ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ−６等のリンホカイン；
−インスリン、ＴＲＨ（甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン）、ＭＳＨ（メラノサイト刺激ホルモン）、並びにアンドロゲン及びエストロゲン等のステロイドホルモン等のホルモン類；
−ＥＧＦ、ＴＧＦα、インスリン様成長因子（ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ）、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ及びＧＭ−ＣＳＦ（Burgess, Immunology Today, 1984, 5, 155-158）、並びに葉酸等のビタミン等の成長因子及びコロニー刺激因子；
−トランスフェリン(O'Keefe, et al., J. Biol. Chem., 1985,260, 932-937) 。
【００４８】
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、モノクローナル抗体一本鎖又はフラグメントは、周知の技術で生産することができる。当該技術により、極めて選択性の高い細胞結合分子をモノクローナル抗体の形で取得することができる。マウス、ラット、ハムスター又はその他の哺乳動物を、完全的な標的細胞、標的細胞から分離された抗原、完全的なウイルス、弱められた完全的なウイルス及び外殻タンパク質等のウイルスタンパク質のような所望の抗原で免疫化することによりモノクローナル抗体を取得するための技術は周知である。
【００４９】
適切な細胞結合分子の選択は、標的とされる特定の細胞コロニーに基づいて決定される問題であるが、一般的には、適切に利用できる場合、モノクローナル抗体が好ましい。
【００５０】
例えば、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）として知られている抗−ＣＤ２０抗原のモノクローナル抗体は、キメラ型（マウス／ヒト）モノクローナル抗体であり、これは、米国食品医薬品局によりにより認可された、再発性又は難治性の濾胞ＮＨＬの最初の治療用抗体である（J. P. Leonard, et al., Clin. Canc. Res., 2004, 10:5327-5334）。オファツムマブ（Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）として知られているその他の抗−ＣＤ２０抗体は、リツキシマブ及びその他の殆どのＣＤ２０を標的とする抗体とは異なる抗原決定基を標的とするヒトモノクローナル抗体である。これは、米国食品薬品局により慢性リンパ球性白血病の治療用に認可され、また、濾胞性非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、リウマチ性関節炎及び再発寛解型多発性硬化症の治療に対する潜在的有効性も示されている（B. Coiffier, et al., Blood, 2008, 111, 1094-100; B.Zhang, Mabs, 2009, 1(4), 326-31）。Ｂ細胞リンパ系悪性腫瘍治療に使用され、アフツズマブ（現在名オビヌツズマブ）と呼ばれている第三世代のヒト化及び糖エンジニアリング化抗−ＣＤ２０抗体も発展している(T Robak, Current opinion in investigational drugs, 2009,10(6), 588-596)。オビヌツズマブ（Ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ）は、完全ヒト化ＩＩ型ＩｇＧ１  ＩＩ型抗−ＣＤ２０抗体であり、これは、悪性ヒト化Ｂ細胞上のヒトＣＤ２０抗原の細胞外ドメインに選択的に結合できる。同様に、抗−ＣＤ１９抗原モノクローナル抗体Ｂ４はネズミ科のＩｇＧ１であり、Ｂ細胞上のＣＤ１９抗原（Nadler, et al., J. Immunol.,1983, 131, 244-250）と結合し、Ｂ細胞又は非ホジキンリンパ腫又は慢性リンパ球白血病等のＣＤ１９抗原を発現する病態細胞を標的細胞として用いられる。更に、ＲＦＢ４（E. Mansfield, et al., Blood, 1997, 90, 2020-2026)とCMC-544 (J. F.DiJoseph, Blood, 2004, 103, 1807-1814) 、ＣＭＣ−５４４（DiJoseph, J.F., Blood 103:1807-1814 (2004)）及びＬＬ２（Pawlak-Byczkowska, E.J. et al., Cancer Res. 49:4568-4577 (1989)）を含む抗−ＣＤ２２抗体は、Ｂ細胞癌症及びその他のＢ細胞過形成疾患の潜在的な治療方法として応用できる。ＬＬ２抗体（旧称ＨＰＢ−２）は、ＣＤ２２抗原を標的とするＩｇＧ２ａマウスモノクローナル抗体である（Pawlak-Byczkowska, E.J. et al., (1989) supra）。また、ゲムツズマブ（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ）と呼ばれている抗−ＣＤ３３抗原モノクローナル抗体は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を治療するための、細胞毒性剤と共役した最初のモノクローナル抗体である（P. F. Bross, et al., Clin Cancer Res., 7(6), 1490-6）。Ｍｙ９−６と呼ばれている、類似の抗−ＣＤ３３抗原モノクローナル抗体は、ネズミ科のＩｇＧ１抗体であり、ＣＤ３３抗原と特異的に結合し（J.D. Griffin, et al.,Leukemia Res., 1984, 521）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）でＣＤ３３を発現する標的細胞に用いることができる。更に、骨髄細胞に結合するＧＭ−ＣＳＦ抗体は、急性骨髄性白血病の病変細胞の細胞結合分子として使用することができる。活性Ｔ細胞と結合するＩＬ−２抗体は、拒絶反応予防、移植片対宿主病の治療及び予防、並びに急性Ｔ細胞白血病の治療に使用することができる。メラニン細胞に結合されるＭＳＨ抗体は、悪性黒色腫の治療に使用できる。
【００５１】
新規細胞毒性分子及びその共役体の発明
本発明のＰＢＤ二量体誘導体は、任意に結合基を介して細胞結合分子と結合し、又は結合できる、一つの又は複数のピロール［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン誘導体を含む。前記結合基は、一般的な方法によりピロール［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン誘導体と共有的に結合される化学的残基の一部である。
【００５２】
本発明で開示されたＰＢＤ二量体の構造は、以下に示す式（Ｉ）の化合物又はこれらの薬学的に許容される塩、水和物若しくは水和塩；又はこれらの化合物の多結晶型物質；又はそれらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマーである。
【化７】
0006332773.tif 000011
【００５３】
式中、
【化８】
0006332773.tif 000012
が単結合又は二重結合を表し、
【化９】
0006332773.tif 000013
が単結合である場合、Ｕ及びＵ’がそれぞれ独立してＨ、Ｒ５、アミン保護基、細胞結合分子と接続するための反応基を含む連結体（Ｌ’）、又は当該位置で接続している細胞結合分子を表す。
【００５４】
VとV’はそれぞれ独立に、Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨＯＨ；エーテル（−ＯＲ５）；エステル（−ＯＣＯＲ５、例えばアセテート）；カーボネート（−ＣＯＯＲ５）；アミン（−ＮＲ５Ｒ５’、−ＮＲ５ＣＯＲ５’、−ＮＲ５Ｒ５’Ｒ５’’）；カルバメート（−ＯＣＯＮＲ５Ｒ５’）；グアニジウム（−ＮＲ５（Ｃ＝ＮＨ）ＮＲ５’Ｒ５’’）；アミノ酸又はペプチド（−ＮＲ５ＣＯ（Ａａ）ｔ：Ａａはアミノ酸又は１〜１００個のアミノ酸単位（tはアミノ酸単位の数を表す。）を含むポリペプチドである。）；任意に置換された窒素含有５又は６員複素環（ピペリジン、テトラヒドロピロール、ピラゾール、モルホリン等)；ＵとＶ及び／又はＵ’とＶ’が環状化合物の一部分であるような環状カルバメート；尿素（−ＮＲ５ＣＯＲ５’Ｒ５’’）；チオカルバメート（−ＯＣＳＮＨＲ５）；ＵとＶ及び／又はＵ’とＶ’が環状化合物の一部分であるような環状チオカルバメート；チオール（ＳＨ）；−ＳＲ５等のスルフィド；スルホキシド（−ＳＯＲ５）；スルフォン（−ＳＯＯＲ５）；亜硫酸（−ＳＯ３、ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、又はＨＳＯ３−、ＳＯ３２−、若しくは−ＨＳＯ２−塩）；重亜硫酸（−ＳＯ３）；スルホンアミド（−ＮＲ５ＳＯＯＲ５’）；メタ重亜硫酸（Ｈ２Ｓ２Ｏ５又はＳ２Ｏ５２−塩）；モノ、ジ、トリ及びテトラチオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、又はＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−若しくはＰＳ４３−の塩）；チオホスフェートエステル（（Ｒ５Ｏ）２ＰＯＳＲ５’）；チオスルフェート（−Ｓ２Ｏ３Ｈ又はＳ２Ｏ３２−塩）；ジチオニト（−Ｓ２Ｏ４Ｈ又はＳ２Ｏ４２−塩）；ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲ５）（Ｓ）（ＯＨ）又は陽イオンと生成する塩）；環状アミン（ＵとＶ及び／又はＵ’とＶ’が環状化合物の一部分である）；ヒドロキシルアミン誘導体（−ＮＲ５ＯＲ５’）；ヒドロキサム酸（Ｒ５Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ又は陽イオンと生成する塩）；ホルムアルデヒドスルホキシレート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−又はその塩）；アミド（−ＮＲ５ＣＯＲ５’）；アジド（−Ｎ３）；シアノ基；ハロゲン；トリアルキル基、アミド亜リン酸エステル（ホスホロアミド酸）、トリアリールホスホニウム、アミノ酸誘導体基；連結体（Ｌ’）細胞結合分子と接続するための反応基を有する連結体（Ｌ’）、又は当該位置で結合している細胞結合分子から選択される。Ｒ５、Ｒ５’及びＲ５’’の定義は、後述の通りである。
【００５５】
【化１０】
0006332773.tif 000014
が二重結合である場合、ＵとＵ’が空き、ＶとＶ’がＨ、 炭素数１〜４の直鎖又は分岐アルキル基である。
【００５６】
ｌ、ｍ、ｎ、ｌ’、ｍ’及びｎ’は０、１、２、３、４、５又は６の数字である。
【００５７】
Ｘ、Ｘ’、Ｙ及びＹ’はそれぞれ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２又は−ＣＨＲ５−等のアルキル、＝ＣＨ−又は＝ＣＲ５等のアルケニル、又は−Ｃ（ＯＲ５）Ｈ等のエーテルである。
【００５８】
Ｚ及びＺ’はそれぞれ、Ｎ、ＣＨ、Ｃ−Ｒ５、ＣＯＨ又はＣＯＲ５である。
【００５９】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’は独立してＨ、任意に置換していてもよい炭素数１〜１０の直鎖、分岐若しくは環状アルキル基、アルケニル基、アルキニル基若しくはアリール基、ポリエチレングリコール単位（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＲ５、ハロゲン、グアニジウム［−ＮＲ５（Ｃ＝ＮＨ）ＮＲ５’Ｒ５’’］、−ＯＲ５、−ＮＲ５Ｒ５’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ５ＣＯＲ５’、−ＳＲ５、−ＳＯＲ５で表されるスルホキシド、−ＳＯ２Ｒ５で表されるスルフォン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ３Ｈ、スルフェート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲ５Ｒ５’ で表されるスルホンアミド、シアノ基、アジド基、−ＣＯＲ５、−ＯＣＯＲ５、−ＯＣＯＮＲ５Ｒ５’、−ＣＦ３、−ＯＲ５、アリール基、複素環、Ｐ（Ｏ）Ｒ５Ｒ５’ Ｒ５’’、連結体（Ｌ’）細胞結合分子と接続するための反応基を有する連結体（Ｌ’）、又は当該位置で結合している細胞結合分子から選択される。
【００６０】
Ｒ５、Ｒ５’及びＲ５’’はそれぞれ独立して、Ｈ、炭素数１〜１０の直鎖、分岐鎖又は環状アルキル基、アルケニル基、アルキニル基又はアリール基、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−Ｒ１（ｒは０〜１００であり、Ｒ１の定義は前記の通りである。）、任意に置換されていてもよい炭素数６〜１８のアリール基、独立してＯ、Ｎ、及びＳ原子から選択される１以上のヘテロ原子を含み、任意に置換されていてもよい５〜１８員環の複素芳香環、独立してＮ、Ｏ、Ｓ及びＰ原子から選択される１〜６個のヘテロ原子を含み、任意に置換されていてもよい３〜１８員環の複素環から選択される；Ｒ５、Ｒ５’及びＲ５’’は更に、−ＮＲ１Ｒ２、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＲ１、−ＣＯＯＲ１、−ＣＯＮＲ１、−ＰＯ２Ｒ１Ｒ２、−ＰＯＲ１Ｒ２Ｒ３、−ＰＯ３Ｈ又は薬用塩から選択される少なくとも１つの置換基により置換されていてもよい。
【００６１】
ｑは０、１又は２である。
【００６２】
Ｒ２とＲ３又はＲ２’とＲ３’は、互いに結合して＝Ｃ（二重結合）、＝Ｏ（ケトン）、＝Ｓ、＝ＮＲ５、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｒ５）−、又は基＝ＣＲ５Ｒ５’を含む二重結合を形成してもよい。Ｒ１とＲ２、Ｒ１’とＲ２’、Ｒ３とＲ４、又はＲ３’とＲ４’は、互いに結合して芳香環、複素環又は複素アリール環を形成してもよい。
【００６３】
Ｌは連結体、連結体と細胞結合分子との共有結合により形成されたクラスター、又は細胞接着分子と結合できる官能基を含有する連結体である。Ｌが連結体である場合、好ましくはＣ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｓｉ、Ｂ及びＰから選択される原子の鎖であり、前記細胞表面結合リガンドとＰＢＤ誘導体とを共有的に結合する放出可能連結体である。連結体は、例えば約２〜約１００個の原子の範囲のように、様々な異なる長さを有することができる。連結体の形成に用いられる原子は、各種の化学的に適切な方法、例えば、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、エーテル、ポリオキシアルキレン、エステル、アミン、イミン、ポリアミン、ヒドラジン、ヒドラゾン、アミド、尿素、セミカルバジド、カルバジド、アルコキシアミン、アルコキシルアミン、ウレタン、アミノ酸、アシルオキシルアミン、オキシム、アルドキシム、ケトキシム、アミドキシム、及びヒドロキサム酸等の形成により結合されてもよい。更に、放出可能連結体（Ｌ）を形成する原子は飽和又は不飽和でもよく、遊離基であってもよく、連結体中で環状シクロアルカン、環状エーテル、環状アミン、アリーレン、ヘテロアリーレン等の二価の環状構造を形成するために、互いに環化してもよい。
【００６４】
好ましくは、Ｌが式：−Ｗｗ−（Ａａ）ｒ−Ｔｔ−、−Ｗｗ−（Ａａ）ｒ−Ｔｔ−Ｑ、又はＱ−Ｗｗ−（Ａａ）ｒ−Ｔｔで表される構造を有し、式中、Ｗは拡張ユニットであり、ｗは０又は１であり、Ａａはそれぞれ独立したアミノ酸ユニットであり、ｒは独立して０〜１００の間の整数である。前記拡張ユニットＷは独立して、自壊性又は非自壊性ユニット、ペプチドユニット、ヒドラゾン結合、ジスルフィド結合、エステル結合、オキシム結合、又はチオエーテル結合を含んでいてもよい。前記自壊性ユニットは、これらに限定されないが、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（Hay et al. (1999)Bioorg. Med. Chem. Lett. 9, 2237）、複素環ＰＡＢ類縁物質、β−グルクロニド、及びｏ−又はｐ−アミノベンジルアセタール等の電子的にパラアミノベンジルカルバモイル（ＰＡＢ）基と類似する芳香族化合物を含む。
【００６５】
好ましくは、前記自壊性連結体成分は下記のいずれか１つを含む。
【化１１】
0006332773.tif 000015
【００６６】
式中、（＊）で標識された原子は、追加スペーサー若しくは放出可能連結体単位、細胞毒性分子及び／又は細胞接着分子（ＣＢＡ）との結合点である；Ｘ１、Ｙ１、Ｚ２、及びＺ３は独立してＮＨ、Ｏ又はＳである；Ｚ１は独立してＨ、ＮＨ、Ｏ又はＳである；ｖは０又は１である；Ｑ１は独立してＨ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲ５、ＳＲ５、ＮＲ５Ｒ５’、Ｎ＝ＮＲ５、Ｎ＝Ｒ５、ＮＲ５Ｒ５’、ＮＯ２、ＳＯＲ５Ｒ５’、ＳＯ２Ｒ５、ＳＯ３Ｒ５、ＯＳＯ３Ｒ５、ＰＲ５Ｒ５’、ＰＯＲ５Ｒ５’、ＰＯ２Ｒ５Ｒ５’、ＯＰＯ（ＯＲ５）（ＯＲ５’）又はＯＣＨ２ＰＯ（ＯＲ５）（ＯＲ５’)であり、ここで、Ｒ５及びＲ５’の定義が前記の通りであり、好ましくは、Ｒ５及びＲ５’は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、Ｃ３−Ｃ８アリール、複素環、炭素環、環状アルキル、複素環アルキル、ヘテロアラルキル、アルキルカルボニル又は薬用陽イオン塩から選択される。
【００６７】
非自壊性連結体成分は、下記の構造のうちの一つである。
【化１２】
0006332773.tif 000016
0006332773.tif 000017
【００６８】
式中、（＊）で標識された原子は、追加スペーサー若しくは放出可能連結体単位、細胞毒性分子及び／又は細胞接着分子（ＣＢＡ）との結合点である。Ｘ１、Ｙ１、Ｑ１、Ｒ５及びＲ５’の定義は前記の通りである。ｒは０〜１００である。ｍ、ｎ及びｐは０〜６である。
【００６９】
スペーサー（Ｔ）は炭素数１〜１０の直鎖、分岐又は環状アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、又はポリエチレングリコール（−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−）スペーサーである。ｔは０又は１〜１００である。
【００７０】
Ｔは、自身のアミド結合が加水分解された後、環化反応を行うことができる。このようなアミドは、置換された又は置換されていない４−アミノ酪酸アミド（Rodrigues, et al., Chemistry Biology, 1995, 2, 223）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］及びビシクロ［２．２．２］環系（Storm, et al., J. Am. Chem. Soc., 1972, 94, 5815）、及び２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Amsberry, et al., J. Org. Chem.,1990, 55, 5867）を含む。グリシンにおける置換基とするアミノ基含有薬物分子の脱離反応（Kingsbury, et al., J. Med. Chem., 1984, 27, 1447）も、本発明の細胞結合分子−細胞毒性剤に有用な自壊性連結体成分の１つの例である。
【００７１】
更に、Ｌは、Ｒ５、ＯＲ５、ＳＲ５、ＮＨＲ５、又はＮＲ５Ｒ５’であってもよく、また、式（Ｉ）上のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’、Ｒ４’、Ｕ、Ｕ’、Ｖ、又はＶ’もまた、該化合物を細胞結合分子との共役に利用する場合に、拡張ユニット（Ｗｗ）又はスペーサーユニット（Ｔｔ）を介してＱと連結するのに用いられることができる。
【００７２】
Ｑは細胞結合分子（ＣＢＡ）、又は細胞結合分子と反応できる官能基、又は細胞結合分子と接続している連結体と反応できる官能基である。前記官能基は、チオール、アミン、ヒドラジン、アルコキシアミノ、置換ジスルフィド、マレイミド、ハロゲン化アセチル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、又はＳＡｃ、ＳＳＲ５若しくはＳＳＡｒ等の保護されたチオール若しくはジスルフィドジから選択される。
【００７３】
「放出可能連結体」の語は、生理的条件で崩壊することができる少なくとも１つの結合、例えば、ｐＨ不安定性、酸不安定性、アルカリ不安定性、酸化不安定性、代謝不安定性、生物化学的不安定性、又は酵素不安定性の結合を含む連結体を指す。このような結合を開裂させる生理的条件は、必ずしも生物化学的又は代謝的プロセスを含む必要はなく、その代わりに、加水分解又は置換反応、例えば、サイトゾルｐＨよりも低いｐＨであるエンドソームにおける反応、及び／又は細胞内のチオール（悪性細胞中のｍｍｏｌ濃度のグルタチオン）のジスルフィド交換反応のような一種の一般的な化学反応条件でもよいと理解される。
【００７４】
拡張ユニット（−Ｗ−）が存在する場合、これが目的の結合分子ユニット（ＣＢＡ）とアミノ酸ユニット（−Ａａ−）又は（−Ｔ−）（−Ａａ−が存在しない場合）とを接続してもよい。拡張ユニットＷは独立して、自壊性スペーサー、ペプチドユニット、ヒドラゾン結合、又はジスルフィド結合若しくはチオエーテル結合を含有することができる。この点について、結合分子（ＣＢＡ）は、拡張ユニット上の官能基と結合を形成することができる官能基を有する。結合分子上に自然に存在し又は化学的操作を経て存在させることができる有用な官能基には、スルフヒドリル（−ＳＨ）、アミノ、ヒドロキシ、カルボニル、炭水化物上のアノマーヒドロキシ、及びカルボキシルが含まれるが、これらに限定されない。好ましい官能基はスルフヒドリル、カルボキシル及びアミノである。スルフヒドリル基は、リガンド分子内のジスルフィド結合の還元により生成できる。あるいは、スルフヒドリル基は、２−イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）又はチオラクトン若しくは他のスルフヒドリル生成試薬、例えばシスルフィド結合を含む修飾されたＴを用いたを用いた接着分子のリジン残基中のアミノ基の反応により、又はチオエステルの還元又は加水分解を行うことにより生成することができる。
【００７５】
具体的な放出可能連結体（Ｌ）の例は、下記のものが含まれるが、これらに限定されない。
【００７６】
−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（Ａａ）ｒ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（Ａａ）ｒ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−（Ａａ）ｒ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒ（Ａａ）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７＝Ｒ８）（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（Ａａ）ｔ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＮＲ１１ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（Ａａ）ｔ（ＮＲ１１ＣＯ）（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＮＲ７）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＮＲ１１ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＮＲ７）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−フェニル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−フリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−オキサゾリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チアゾリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−チエニル−（ＣＯ）（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−イミダゾリル−（ＣＯ）（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−モルホリノ−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−ピペラジノ−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−Ｎ−メチルピペラジン−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−（ＣＲ５Ｒ）ｍ−（Ａａ）ｔフェニル−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−（Ａａ）ｔフリル−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−オキサゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チアゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チエニル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−イミダゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−モルホリノ−（Ａａ）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−ピペラジノ−（Ａａ）ｔＱ、−（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−Ｎ−ピペラジノ−（Ａａ）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（Ａａ）ｒ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（Ａａ）ｒ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−Ｋ（Ａａ）ｒ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７Ｒ８）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒ（Ａａ）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＲ７＝Ｒ８）（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（Ａａ）ｔ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＮＲ１１ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（Ａａ）ｔ（ＮＲ１１ＣＯ）（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＮＲ７）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＮＲ１１ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＯＣＮＲ７）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ９Ｒ１０）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｒＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−フェニル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−フリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−オキサゾリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チアゾリル−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−チエニル−（ＣＯ）（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−イミダゾリル−（ＣＯ）（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−モルホリノ−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−ピペラジノ−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｔ−Ｎ−メチルピペラジン−（ＣＯ）（Ａａ）ｔ（ＣＲ７Ｒ８）ｎＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ）ｍ−（Ａａ）ｔフェニル−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−（Ａａ）ｔフリル−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−オキサゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チアゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−チエニル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−イミダゾリル（Ａａ）ｔ−Ｑ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−モルホリノ−（Ａａ）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−ピペラジノ−（Ａａ）ｔＱ、−Ｋ（ＣＲ５Ｒ６）ｍ−Ｎ−メチルピペラジノ−（Ａａ）ｔＱ。
【００７７】
式中、ｍ、Ａａ、ｔ、ｎ、Ｑ、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５の定義は上記の通りである。Ｒ６、Ｒ７及びＲ８はそれぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ８アルキル基、アリール基、アルケニル基、アルキニル基、エーテル、エステル、アミン又はアミドから選択され、これらは１以上のハロゲン、ＣＮ、ＮＲ１Ｒ２、ＣＦ３、ＯＲ１、アリール基、複素環、Ｓ（Ｏ）Ｒ１、ＳＯ２Ｒ１、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＲ１、−ＣＯ２Ｒ１、−ＣＯＮＲ１、−ＰＯ２Ｒ１Ｒ２、−ＰＯ３Ｈ又はＰ（Ｏ）Ｒ１Ｒ２Ｒ３で任意に置換されていてもよい。ＫはＮＲ１、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、Ｂ又はその他のヘテロ原子である。
【００７８】
式（Ｉ）の化合物の各種の幾何異性体及び立体異性体もまた、本特許の一部分である。
【００７９】
式（Ｉ）の化合物の立体異性体として好ましくは、以下の式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、及び（Ｉｃ）で表される。
【００８０】
【化１３】
0006332773.tif 000018
0006332773.tif 000019
【００８１】
式中、
【化１４】
0006332773.tif 000020
が一つの単結合又は二重結合を表す。
【００８２】
Ｘ、Ｘ’、Ｙ、Ｙ’、Ｚ、Ｚ’、ｌ、ｌ’、ｍ、ｍ’、ｎ、ｎ’、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ４’、及びＬの定義は式（Ｉ）と同じである。
【００８３】
式（Ｉ）の別の好ましい実施形態は、新規ＰＢＤ誘導体が以下の式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の構造を有する。
【００８４】
【化１５】
0006332773.tif 000021
【００８５】
式中、Ｘ、Ｘ’、Ｙ、Ｙ’、Ｚ、Ｚ’、ｌ、ｌ’、ｍ、ｍ’、ｎ、ｎ’、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ４’、及びＬの定義は式（Ｉ）と同じである。
【００８６】
Ｖ及びＶ’はそれぞれ独立して、ＯＨ、−ＯＲ５等のエーテル、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ５等のエステル、−ＣＯＯＲ５（例えば、アセテート）、−ＯＣＯＯＲ５等のカーボネート、−ＯＣＯＮＲ５Ｒ５’等のカーバメート、Ｎ１０及びＣ１１が環の一部分であるような環状カーバメート、−ＮＲＣＯＮＲ５Ｒ５’等の尿素、−ＯＣＳＮＨＲ５等のチオカーバメート、Ｎ１０及びＣ１１が環の一部分であるような環状チオカーバメート、−ＳＨ、−ＳＲ５等のスルフィド、−ＳＯＲ５等のスルホキシド、−ＳＯＯＲ５等のスルホン、−ＳＯ３−等の亜硫酸塩、−ＯＳＯ３−等の重亜硫酸塩、−ＮＲＳＯＯＲ等のスルホンアミド、−ＮＲＲ’等のアミン、Ｎ１０及びＣ１１が環の一部分であるような環状アミン、−ＮＲ５ＯＲ５’等のヒドロキシルアミン誘導体、−ＮＲ５ＣＯＲ５’−ＮＲ５ＣＯＮＲ５’Ｒ５’’等のアミド、−Ｎ３等のアジド、シアノ、ハロゲン、トリアルキル又はトリアリールホスホニウム、及びアミノ酸誘導基からなる群から選択される。
【００８７】
Ｖ’’は（＝）Ｏ、（＝）ＮＨ、（＝）Ｎ−ＣＯＮＲ５Ｒ５’、（＝）ＮＣＯＮＲ５、（＝）ＮＣＯＯＲ５、又は（＝）Ｎ−Ｏ−Ｒ５である。
【００８８】
Ｒ５、Ｒ５’及びＲ５’’はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル若しくはカルボニルアルキル、又はそれらの薬用塩から選択される。Ｒ５、Ｒ５’及びＲ５’’は更に、−Ｎ（Ｒ１）（Ｒ２）、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＲ１、−ＣＯ２Ｒ１、−ＣＯＮＲ１、−ＰＯ２Ｒ１Ｒ２、−ＰＯＲ１Ｒ２Ｒ３、及び−ＰＯ３Ｈ、又はそれらのＭ塩（Ｎａ塩、Ｋ塩、Ｃａ塩、アンモニウム塩若しくはその他の薬学的に許容される塩）から選択される少なくとも１つの置換基により置換されているか、あるいは拡張ユニット（Ｗｗ）又はスペーサーユニット（Ｔｔ）を介して細胞結合分子と結合することができる。
【００８９】
特定の実施形態において、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）のＰＢＤ誘導体は、それぞれ以下の式（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）、（ＸＩＶ）、（ＸＶ）、及び（ＸＶＩ）で表される。
【００９０】
【化１６】
0006332773.tif 000022
0006332773.tif 000023
【００９１】
Ｕ、Ｕ’、Ｖ、Ｖ’、ｎ、ｎ’、Ｘ、Ｘ’及びＬの定義は式（Ｉ）と同じである。Ｒ６及びＲ６’の定義は式（Ｉ）中のＲ５と同じであり、好ましくは、Ｒ６及びＲ６’はそれぞれ独立してＣ１〜Ｃ８アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、環状基、シクロヘテロ、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルキルアミノ、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＣＮ、若しくはＨであるか、あるいは拡張ユニット（Ｗｗ）又はスペーサーユニット（Ｔｔ）を介して細胞結合分子と結合されている。Ｗ、ｗ、Ｔ及びｔの定義は式（Ｉ）と同じである。
【００９２】
幾らかの実施形態において、本発明の細胞毒性分子及びその共役体は、以下のいずれか１つの構造を有する。
【００９３】
【化１７】
0006332773.tif 000024
0006332773.tif 000025
0006332773.tif 000026
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0006332773.tif 000031
0006332773.tif 000032
0006332773.tif 000033
0006332773.tif 000034
【００９４】
Ａａ、ｎ及びＱの定義は式（Ｉ）及び（ＩＩ）と同じである。好ましくは、ＱがＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、環状基、シクロヘテロ、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルキルアミノ基、ハロゲン、ＮＯ２、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＳＳＣＨ３、−ＳＳＡｃ、−ＳＳＡｒ、−ＳＳ−ピリジン、−ＳＳＡｒ（ＮＯ２）、−Ｓ−細胞接着分子、若しくはＮＨＳエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、アルコキシアミン、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、ヒドラジン、アミン若しくはチオラクトンから選択される官能基、又は拡張ユニット（Ｗｗ）若しくはスペーサーユニット（Ｔｔ）を通じて細胞接着分子と接続されている。Ｗ、ｗ、Ｔ及びｔの定義は式（Ｉ）と同じである。あるいは、Ｑが下記の構造体のいずれか１つから選択される。
【００９５】
【化１８】
0006332773.tif 000035
【００９６】
式中、ＤはＨ、−ＮＯ２、−ＳＯ３−、ＣＮ、又はＦである。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｒ、ｍ、及びｎの定義は式（Ｉ）におけるものと同じである。ｗとｗ’はそれぞれ０又は１である。
【００９７】
細胞毒性分子としてのＰＢＤ誘導体の合成
本発明の化合物及び方法は、当業者に既知の各種の方法により得ることができる。これらの化合物は、例えば、実施例の項に記載された方法の適用又は当業者よる適切な変更により合成することができる。適切な調整及び変更は、当業者に容易に理解できるほど明確であり、周知であるかあるいは当業者が化学論文から容易に知得することができる。特に、そのような方法は、Richard C. Larock, Comprehensive Organic Transformations, A Guide to Functional Group Preparations, vol II, 2nd Ed., Wiley Publishers, 2010に見出される。
【００９８】
本発明の細胞毒性分子は、非対称的に置換された炭素原子を１以上含んでもよいことから、特定の立体化学又は異性体が明確に示されていない限り、光学的に活性又はラセミ体、全キラル、ジアステレオ異性及びラセミ体、並びに全ての幾何異性体の構造が意図される。そのような光学的に活性な形態をどのようにして製造及び分離するかは周知である。例えば、立体異性体は、これらの限られないが、ラセミ体の分割、通常、逆相及びキラルクロマトグラフィー、優先的な塩形成、並びに再結晶等を含む標準的方法により、又はキラルな出発物質からのキラル合成により、あるいは標的キラル中心の計画的合成により分離されていてもよい。
【００９９】
本発明の細胞毒性分子は、各種の方法により合成できる。試薬及び出発原料は、商業的に入手可能であり、あるいは当業者により周知の技術方法で容易に合成できる。特記しない限り、全ての置換基の定義は前記で述べた通りである。
【０１００】
本発明の細胞毒性分子の合成反応において、必要に応じて、副反応を避けるために、最終産物において望まれる特定の反応性の官能基、例えば、ヒドロキシ、アミノ、イミノ、チオ、又はカルボニル基を保護する必要がある。一般的な保護基は、例えば、Peter G. M. Wuts,Theodora W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed., John Wiley and Sons, 2006; Compendium of Organic Synthetic Methods,Vols. 1-2, Ian T. Harrison, Shuyen Harrison; Vols 3-5, Louis S. Hegedus, Leroy Wade; Vols 6-12, Michael B. Smith, John Wiley and Sons, 2006-2012を参照し、標準的な操作方法に基づいて用いられる。
【０１０１】
一般的に合成反応は、適切な溶剤、温度及び時間の条件の下で実施する。細胞毒性分子の合成反応において、反応又は試薬に不利な影響を与えない各種の溶媒を使用できる。適当な溶媒には、ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン及びキシレン等の炭化水素 (芳香族炭化水素、脂肪族炭化水素又は環状脂肪族炭化水素でもよい。) ；クロロホルム、ジクロロメタン及びジクロロエタン等のハロゲン含有炭化水素；ジメチルアセトアミド又はジメチルホルムアミド等のアミド；メタノール及びエタノール等のアルコール；並びにジエチルエーテル及びテトラヒドロフラン等のエーテルが含まれる。反応は、広い温度範囲、−１００〜３００℃、好ましくは０〜１００℃で行うことができる。合成反応の時間もまた多くの要因、特に反応温度及び反応試薬の特性に依存して広く変動し、５秒〜４週間、好ましくは１０分間〜２０時間とすることができる。更に、調製された細胞毒性分子は、反応混合物から一般的な方法、例えば、蒸発又は蒸留により反応混合物から溶媒を除去すること、あるいは蒸留で溶媒を除去した後、残留物を水中に注ぎ入れ、水と互いに溶け合わない有機溶媒で抽出してから、蒸留で抽出物中の溶媒を除去することで分離・純化できる。分離又は純化は、その他の様々な周知の技術、例えば、再結晶、再沈降又は各種のクロマトグラフィー。特にカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー又は高速液体クロマトグラフィーでも実現できる。
【０１０２】
細胞毒性分子及びそれと細胞結合分子との共役体の合成反応のいくつかは、更に図１〜２３及び本明細書の実施例１〜７３で例示されているが、これに限定されない。
【０１０３】
細胞結合分子−細胞毒性分子の共役体
本発明は、架橋連結体（Ｌ）の接続基を通じて細胞結合分子と共有的に接続されたＰＢＤ誘導体の少なくとも１つを含む共役分子も提供する。前記共役体として好ましくは、１〜２０分子の本発明のＰＢＤ誘導体と細胞結合分子とが、ＰＢＤ誘導体の連結体の接続基を通じて共有的に接続されていることを含む。
【０１０４】
前述のように、細胞表面結合分子−細胞毒性分子の共役体は、式（Ｉ）の化合物又はこれらの薬学的に許容される塩、水和物若しくは水和塩；又はこれらの化合物の多結晶型物質；又はそれらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー若しくはエナンチオマーで示される。
【０１０５】
【化１９】
0006332773.tif 000036
【０１０６】
式中、Ｕ、Ｕ’、Ｖ、Ｖ’、ｍ、ｍ’ｎ、ｎ’、Ｘ、Ｘ’、Ｙ、Ｙ’、Ｚ、Ｚ’、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ４’及びＬの定義は式（Ｉ）と同じである。好ましくは、Ｌは連結体と細胞結合分子との共有結合により形成したクラスターである。
【０１０７】
ＬがＲ５、ＯＲ５、ＳＲ５又はＮＲ５Ｒ５’である場合、式（Ｉ）中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’、Ｒ４、Ｕ、Ｕ’、Ｖ、又はＶ’は、Ｌ’、拡張ユニット（Ｗｗ）、又はスペーサーユニット（Ｔｔ）を通じて細胞結合分子（ＣＢＡ）と接続することができる。式中、ＣＢＡ、Ｌ’、Ｗ、ｗ、Ｔ、及びｔは本願を通じて記載された通りである。
【０１０８】
幾らかの実施形態において、本発明の共役体は、式（ＸＩＸ）、（ＸＸ）、（ＸＸＩ）、（ＸＸＩＩ）、（ＸＸＩＩＩ）、及び（ＸＸＩＶ）に示される。
【０１０９】
【化２０】
0006332773.tif 000037
0006332773.tif 000038
【０１１０】
式中、Ｕ、Ｕ’、Ｖ、Ｖ’、ｍ、ｍ’ｎ、ｎ’、Ｘ、Ｘ’、Ｙ、Ｙ’、Ｚ、Ｚ’、Ｒ１、Ｒ１’、Ｒ２、Ｒ２’、Ｒ３、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ４’及びＬの定義は式（Ｉ）と同じである。Ｌ’は式（Ｉ）で定義されているＬと同じであるか、あるいは独立的である。
【０１１１】
薬物の担持量は、細胞結合分子毎に１〜２０の薬物残基（Ｄ）の範囲でよく、好ましくは、式（ＩＸ）〜（ＸＩＶ）中、細胞結合分子毎に平均２〜８の薬物残基の範囲である。ＡＤＣの製造において、ＣＢＡが抗体である場合、好ましい担持量は、抗体毎に３〜６の薬物残基であり、共役反応後の抗体毎の薬物残基の平均数は、質量スペクトル、ＥＬＩＳＡ分析及びＨＰＬＣ等の一般的な方法で表示できる。共役体上の薬物担持量の定量化分布も確定できる。特定の状況の下で、薬物が担持された共役体から、特定の値の薬物担持量が一定値である共役体の分離、精製及び均質性の特徴づけは、逆相ＨＰＬＣ又は電気泳動法等の方法により実現できる。
【０１１２】
細胞結合分子（ＣＢＡ）には様々な種類があり、ペプチド類と非ペプチド類が含まれる。細胞結合分子には一般に、大分子量タンパク質、例えば、抗体全長（ポリクローナル及びモノクローナル抗体）；一本鎖抗体；抗体断片、例えば、Ｆａｂ,  Ｆａｂ’，Ｆ（ａｂ’）２,  Ｆｖ［Ｐａｒｈａｍ,  Ｊ.  Ｉｍｍｕｎｏｌ.  １３１, ２８９５−２９０２（１９８３）］、Ｆａｂ発現ライブラリによって得られた断片、抗イディオタイプ（ａｎｔｉ−Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ’ｓ、並びに癌細胞抗原、ウイルス抗原、又は微生物抗原と免疫特異的に結合する上記いずれかのエピトープ結合断片；アフィボディ（Ａｆｆｉｂｏｄｙ）等の抗体摸倣物；ドメイン抗体（ｄＡｂ）；ナノボディ；ユニボディ；ＤＡＲＰｉｎｓ；アンチカリン；ヴァーサボディ；デュオカリン；リポカリン；ヴァイマー（ｖｉｍｅｒｓ）；インターフェロン（例えば、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ型）；ペプチド；リンホカイン、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、又はインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）；ホルモン、例えば、インスリン、ＴＲＨ（甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン）、ＭＳＨ（細胞刺激ホルモン）、又はアンドロゲン、エストロゲン若しくはメラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）等のステロイドホルモン；成長因子及びコロニー刺激因子、例えば、上皮成長因子（ＥＦＧ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）；トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦα、ＴＧＦβ、インスリン及びインスリン様成長因子（ＩＧＦ−Ｉ,ＩＧＦ−ＩＩ）Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、及びＧＭ−ＣＳＦ［Ｂｕｒｇｅｓｓ, Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ,５,１５５−１５８(１９８４)]；ワクチン増殖因子（ＶＧＦ）；線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）；小分子量タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、及びペプチドホルモン、例えば、ボンベシン、ガストリン、及びガストリン放出ペプチド；血小板由来増殖因子；インターロイキン及びサイトカイン、例えば、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、白血病阻害因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）；葉酸等のビタミン；アポタンパク質及び糖タンパク質、例えば、トランスフェリン[Ｏ’Ｋｅｅｆｅ  ｅｔ  ａｌ,  Ｊ.  Ｂｉｏ.  Ｃｈｅｍ.  ２６０,  ９３２−９２７ (１９８５)]；レクチン等の糖結合タンパク質又はリポタンパク；細胞の栄養輸送分子；並びに小分子阻害剤、例えば、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）の阻害剤、小分子チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）、非ペプチド、または他の細胞結合分子または物質、例えば、生体活性ポリマー（Ｄｈａｒ, ｅｔ ａｌ,  Ｐｒｏｃ.  Ｎａｔｌ.  Ａｃａｄ.  Ｓｃｉ.  ２００８,  １０５,  １７３５６−６１）、デンドリマー（Ｌｅｅ,  ｅｔ  ａｌ,  Ｎａｔ.  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ.  ２００５,  ２３,  １５１７−２６; Ａｌｍｕｔａｉｒｉ,  ｅｔ  ａｌ;  Ｐｒｏｃ.  Ｎａｔｌ.  Ａｃａｄ.  Ｓｃｉ.  ２００９,  １０６,  ６８５−９０）、ナノ粒子（Ｌｉｏｎｇ,  ｅｔ  ａｌ,  ＡＣＳ  Ｎａｎｏ,  ２００８,  １９,  １３０９−１２;  Ｍｅｄａｒｏｖａ,  ｅｔ  ａｌ,  Ｎａｔ.  Ｍｅｄ.  ２００７,１３, ３７２−７; Ｊａｖｉｅｒ,  ｅｔ  ａｌ,  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ.  ２００８,  １９,  １３０９−１２）、リポソーム（Ｍｅｄｉｎａｉ,  ｅｔ  ａｌ,  Ｃｕｒｒ.  Ｐｈａｒ.  Ｄｅｓ.  ２００４,  １０,  ２９８１−９）、ウイルスキャプ(Ｆｌｅｎｎｉｋｅｎ,  ｅｔ  ａｌ,  Ｖｉｒｕｓｅｓ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌ.  ２００９,  ３２７,７１−９３）を含むが、これらに限定されない。一般的に、適切なものを利用できれば、細胞表面結合分子としてモノクローナル抗体が好ましい。
【０１１３】
本発明の共役体に用いられる連結体は、これらに限られないが、ジスルフィド連結体、チオエーテル連結体、アミド結合連結体、ペプチド加水分解酵素不安定性連結体、光不安定性連結体、酸不安定性連結体（例えば、ヒドラゾン類連結体）、エステル加水分解酵素不安定性連結体、酸化不安定性連結体、代謝不安定連結体及び生物化学的不安定性連結体を含む。
【０１１４】
好ましくは、前記連結体は、それぞれ還元されたジスルフィド結合及びリジン残基に由来する細胞結合分子のチオール及びアミノ基との間の反応を介して、前記細胞結合分子と接続される。更に具体的には、前記誘導体が、−ＣＯ−基を通じて前記細胞結合分子のリジン残基のアミノ基とアミド結合を形成することによって、細胞結合分子と接続される。
【０１１５】
更に、前記連結体は１又は複数の連結体単位で構成することができる。このような単位として例示的に、６−マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロパノイル（ＭＰ）、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ又はｖｃ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｌａ−ｐｈｅ又はａｆ）、グリシン−グリシン、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル  ４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル  ４−（Ｎ−マレイミドメチル) シクロヘキサン−１−カルボン酸エステル（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル  （４−ヨード−アセチル）アミノ安息香酸塩（ＳＩＡＢ）、１又は複数のエチレンオキシド（−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−）単位（ＥＯ又はＰＥＯ）が挙げられる。前記連結体は、細胞中への薬物の放出を促進する「開裂可能連結体」でもよい。更なる連結体成分は本発明の技術分野で公知であり、そのいくつかは以下に示す通りである。
【０１１６】
【化２１】
0006332773.tif 000039
0006332773.tif 000040
【０１１７】
式中、Ｒ７、Ｒ８、及びＲ９の定義は、Ｒ５と同じであり、好ましくは、独立にそれぞれＣ１〜Ｃ８アルキル又はアルケニル、Ｃ３〜Ｃ７炭素環、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−、アリーレン、Ｃ１〜Ｃ８アルキレン−アリーレン−、アリーレン、Ｃ１〜Ｃ８アルキレン、−Ｃ１〜Ｃ８アルキレン−（Ｃ１〜Ｃ８炭素環）−、−（Ｃ３〜Ｃ７炭素環）−Ｃ１〜Ｃ８アルキレン−、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−、−（Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロ）−Ｃ１〜Ｃ９アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｋ−、−（ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ）ｋ−、及び−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｋ−ＣＨ２−から選択される；ｋは１〜３０の整数である；Ｘ’’’、Ｙ’’’、及びＺ’’’は独立にそれぞれＮＨ、Ｏ又はＳから選択される；Ｒ１及びＲ２の定義は前記の通りである。
【０１１８】
本発明の共役体の好ましい実施形態は、抗体／細胞毒素、抗体フラグメント／細胞毒素、二重特異性抗体／細胞毒素、三重特異性抗体／細胞毒素、上皮成長因子（ＥＧＦ）／細胞毒素、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）阻害剤／細胞毒素、メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）／細胞毒素、甲状腺刺激ホルモン／細胞毒素、多クローン抗体／細胞毒素、ソマトスタチン／細胞毒素、葉酸／細胞毒素、マトリプターゼ阻害剤／細胞毒素、エストロゲン／細胞毒素、エストロゲン類縁物質／細胞毒素、合成アンキリン反復タンパク質（ＤＡＲＰｉｎｓ）／細胞毒素、アンドロゲン／細胞毒素、及びアンドロゲン類縁物質／細胞毒素である。
【０１１９】
本発明の共役体のより好ましい実施形態は、モノクローナル抗体／細胞毒素である。本発明の細胞毒性剤の共役体に使用される抗体には、以下の抗体が含まれるが、これらに限らない。：３Ｆ８（抗ＧＤ２抗体）、アバゴボマブ（抗ＣＡ−１２５抗体）、アブシキシマブ（抗ＣＤ４１抗体（インテグリンα−ＩＩＢ））、アダリムマブ（抗ＴＮＦ−α抗体）、アダリムマブ（抗ＥｐＣＡＭ抗体、ＣＤ３２６）、アフェリモマブ（抗ＴＮＦ−αα）; アフツズマブ（抗ＣＤ２０抗体）、アラシズマブ  ペグオル（Alacizumab pegol）（抗ＶＥＧＦＲ2抗体）、ＡＬＤ５１８（抗ＩＬ−６抗体）、アレムツズマブ（別名：キャンパス、マブキャンパス、抗ＣＤ５２抗体）、アルツモマブ（抗ＣＥＡ抗体）、アナツモマブ（抗ｔａｇ−７２抗体）、アンルキンズマブ（ＩＭＡ−６３８、抗ＩＬ−１３抗体）、アポリズマブ（抗−ＨＬＡ−ＤＲ抗体）、アルシツモマブ（抗ＣＥＡ抗体）、アセリズマブ（抗Ｌ−セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）抗体）、アトリズマブ（Atlizumab）（別名：トシリズマブ、アクテムラ、Ｒｏアクテムラ、抗ＩＬ−６受容体抗体）、アトロリムマブ（Atorolimumab）（抗アカゲザル因子抗体）、バピネオズマブ（抗β−アミロイド抗体）、バシリキシマブ（シムレクト、抗ＣＤ２５（ＩＬ−２受容体α鎖）抗体）、バビツキシマブ（Bavituximab）（抗ホスファチジルセリン抗体）、ベクツモマブ（Bectumomab）（別名：LymphoScan、抗ＣＤ２２抗体）、ベリムマブ（別名：BENLYSTA、LymphoStat-B、抗ＢＡＦＦ抗体）、ベンラリズマブ（Benralizumab）（抗ＣＤ１２５抗体）、ベルチリムマブ（抗ＣＣＬ１１（エオタキシン−１）抗体）、ベシレソマブ（別名：Scintimun、抗ＣＥＡ関連抗原抗体）、ベバシズマブ（別名：アバスチン、抗ＶＥＧＦ抗体）、ビシロマブ（別名：FibriScint、抗フィブリンＩＩβ鎖抗体）、ビバツヅマブ（抗ＣＤ４４ｖ６抗体）、ブリナツモマブ（blinatumomab）（別名：ＢｉＴＥ、抗ＣＤ１９抗体）、ブレンツキシマブ（Brentuximab）（ｃＡＣ１０、抗ＣＤ３０  ＴＮＦＲＳＦ８抗体）、ブリアキヌマブ（Briakinumab）（抗ＩＬ−１２、ＩＬ−２３抗体）、カナキヌマブ（別名：Ｉｌａｒｉｓ、抗ＩＬ−１抗体）、カンツズマブ（別名：Ｃ２４２、抗ＣａｎＡｇ抗体）、カプロマブ（Capromab）、カツマキソマブ（別名：removab、抗ＥｐＣＡＭ、抗ＣＤ３抗体）、ＣＣ４９ （抗ＴＡＧ−７２抗体）、セデリズマブ（Cedelizumab）（抗ＣＤ４抗体）、セルトリズマブペゴル（別：CIMZIA、抗ＴＮＦ−α抗体）、セツキシマブ（別名：エルビタックス、ＩＭＣ−Ｃ２２５、抗ＥＧＦＲ抗体）、シタツズマブ（抗ＥｐＣＡＭ抗体）、シクスツムバム（Cixutumumab）（抗ＩＧＦ−１抗体）、クレノリキシマブ（抗ＣＤ４抗体）、クリバツズマブ（Clivatuzumab）（抗ＭＵＣ１抗体）、コナツムマブ（Conatumumab）（抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ２抗体）、ＣＲ６２６１（抗Ａ型インフルエンザ赤血球凝集素抗体）、ダセツズマブ（Dacetuzumab）（抗ＣＤ４０抗体）、ダクリズマブ（別名：Zenapax、抗ＣＤ２５C（ＩＬ−２受容体のα鎖）抗体）、ダラツムマブ（Daratumumab）（抗ＣＤ３８（サイクリックＡＤＰリボースヒドロラーゼ）抗体）、デノスマブ（別名：Prolia、抗ＲＡＮＫＬ抗体）、デツモマブ（抗Ｂ−リンパ腫細胞抗体）、ドルリモマブ、ドルキシズマブ（Dorlixizumab）、エクロメキシマブ���Ecromeximab）（抗ＧＤ３ガングリオシド抗体）、エクリズマブ（別名：Soliris、抗Ｃ５抗体）、エドバコマブ（抗エンドトキシン抗体）、エドレコロマブ（別名：Panorex、ＭＡｂ１７−Ａ１、抗ＥｐＣＡＭ抗体）、エファリズマブ（別名：Raptiva、抗ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ）抗体）、エファングマブ（Efungumab）（別名：Mycograb、抗Ｈｓｐ９０抗体）、エロツズマブ（Elotuzumab）（抗ＳＬＡＭＦ７抗体）、エルシリモマブ（Elsilimomab）（抗ＩＬ−６抗体）、エンリモマブペゴル（抗ＩＣＡＭ−１（ＣＤ５４）抗体）、エピツモマブ（Epitumomab）（抗エピシアリン抗体）、エプラツズマブ（抗ＣＤ２２抗体）、エルリズマブ（Erlizumab）（抗ＩＴＧＢ２（ＣＤ１８）抗体）、エルツマキソマブ（Ertumaxomab）（別名：Rexomun、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＣＤ３抗体）、エタラシズマブ（別名：Abegrin、抗インテグリンαｖβ３）、エクシビビルマブ（抗Ｂ型肝炎表面抗原抗体（ＨＢｓ抗体））、ファノレソマブ（Fanolesomab）（別名：NeutroSpec、抗ＣＤ１５抗体）、ファラリモマブ抗体（faralimomab）（抗インターフェロン受容体抗体）、ファルレツズマブ（Farletuzumab）（抗葉酸受容体１抗体）、フェルビズマブ（Felvizumab）（ＲＳウイルスに対する抗体）、フェザキヌマブ（Fezakinumab）（抗ＩＬ−２２抗体）、フィギツムマブ(Figitumumab)（抗ＩＧＦ−１受容体抗体）、フォントリズマブ(Fontolizumab)（抗ＩＦＮ−γ抗体）、フォラビルマブ(Foravirumab)（抗狂犬病ウイルス糖タンパク質抗体）、フレソリムマブ(Fresolimumab)（抗ＴＧＦ−β抗体）、ガリキシマブ(Galiximab)（抗ＣＤ８０抗体）、ガンテネルマブ(Gantenerumab)（抗βアミロイド抗体）、ガビリモマブ(Gavilimomab)（抗ＣＤ１４７（basigin）抗体）、ゲムツズマブ（抗ＣＤ３３抗体）、ギレンツシキマブ（Girentuximab）（抗炭酸脱水酵素９抗体）、グレムバツムマブ（Glembatumumab）（別名：CR011、抗ＧＰＮＭＢ抗体）、ゴリムマブ（別名：Simponi、抗ＴＮＦ−α抗体）、ゴミリキシマブ（Gomiliximab）（抗ＣＤ２３C（ＩｇＥレセプター）抗体）、イバリズマブ（Ibalizumab）（抗ＣＤ４抗体）、イブリツモマブ（Ibritumomab）（抗ＣＤ２０抗体）、イゴボマブ（Igovomab）（別名：Indimacis-125、抗ＣＡ−１２５抗体）、イムシロマブ（imciromab）（別名：Myoscint、抗心筋ミオシン抗体）、インフリキシマブ（別名：Remicade、抗ＴＮＦ−α抗体）、インテツムマブ(Intetumumab)（抗ＣＤ５１抗体）、イノリモマブ（Inolimomab）（抗ＣＤ２５（ＩＬ−２受容体α鎖）抗体）、イノツズマブ(Inotuzumab)（抗ＣＤ２２抗体）、イピリムマブ（抗ＣＤ１５２抗体）、イラツムマブ(Iratumumab)（抗ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８）抗体）、ケリキシマブ（Keliximab）（抗ＣＤ４抗体）、ラベツズマブ（別名：CEA-Cide、抗ＣＥＡ抗体）、レブリキズマブ（Lebrikizumab）（抗ＩＬ−１３抗体）、レマレソマブ（Lemalesomab）（抗ＮＣＡ−９０（顆粒球抗原）抗体）、レルデリムマブ（Lerdelimumab）（抗ＴＧＦβ−２抗体）、レクサツムマブ（Lexatumumab）（抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ２抗体）、リビビルマブ（Libivirumab）（抗Ｂ型肝炎表面抗原抗体）、リンツズマブ（Lintuzumab）（抗ＣＤ３３抗体）、ルカツムマブ（Lucatumumab）（抗ＣＤ４０抗体）、ルミリキシマブ（Lumiliximab）（抗ＣＤ２３（ＩｇＥレセプター）抗体）、マパツムマブ（抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ１抗体）、マスリモマブ（Maslimomab）（抗Ｔ細胞受容体抗��）、マツズマブ（Matuzumab）（抗ＥＧＦＲ抗体）、メポリズマブ（別名：Bosatria、抗ＩＬ−５抗体）、メテリムマブ（Metelimumab）（抗ＴＧＦβ−１抗体）、ミラツズマブ（Milatuzumab）（抗ＣＤ７４抗体）、ミンレツモマブ（Minretumomab）（抗ＴＡＧ−７２抗体）、ミツモマブ（Mitumomab）（別名；ＢＥＣ−２、抗ガングリオシド抗体−ＧＤ３）、モロリムマブ（Morolimumab）（抗アカゲザル因子抗体）、モタビズマブ(Motavizumab)（別名：Numax、抗ＲＳウイルス抗体）、ムロモナブ（Muromonab）−ＣＤ３（別名：Orthoclone OKT3、抗ＣＤ３抗体）、ナコロマブ（Nacolomab）（抗Ｃ２４２抗体）、ナプツモマブ（Naptumomab）（抗５Ｔ４抗体）、ナタリズマブ（別名：Tysabri、抗インテグリンα４抗体）、ネバクマブ（Ｎebacumab）（抗エンドトキシン抗体）、ネシツムマブ（Necitumumab）（抗ＥＧＦＲ抗体）、ネレリモマブ（Nerelimomab）（抗ＴＮＦ−α抗体）、ニモツズマブ（別名：Theracim、Theraloc、抗ＥＧＦＲ抗体）、ノフェツモマブ（Nofetumomab）、オクレリズマブ（抗ＣＤ２０抗体）、オデュリモマブ（別名：Afolimomab、抗ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ）抗体）、オファツムマブ（別名：Arzerra、抗ＣＤ２０抗体）、オララツマブ（Olaratumab）（抗ＰＤＧＦ−Ｒα抗体）、オマリズマブ（Omalizumuba）（別名：Xolair、抗ＩｇＥ  Ｆｃ領域抗体）、オポルツズマブ（Oportuzumab）（抗ＥｐＣＡＭ抗体）、オレゴボマブ（Oregovomab）（別名：OvaRex、抗ＣＡ−１２５抗体）、オテリキシズマブ（Otelixizumab）（抗ＣＤ３抗体）、パギバキシマブ（Pagibaximab）（抗ＬＴＡ抗体）、パリビズマブ（別名：Synagis、Abbosynagis、抗ＲＳウイルス抗体）、パニツムマブ（別名：Vectibix、ＡＢＸ−ＥＧＦ、抗ＥＧＦＲ抗体）、パノバクマブ（Panobacumab）（抗緑膿菌抗体）、パスコリズマブ（Pascolizumab）（抗ＩＬ−４抗体）、ペムツモマブ（Pemtumomab）（別名：Theragyn、抗ＭＵＣ１抗体）、ペルツズマブ（別名：Omnitarg、２Ｃ４、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体）、ペクセリズマブ（Pexelizumab）（抗Ｃ５抗体）、ピンツモマブ（Pintumomab）（抗腺癌抗原抗体）、プリリキシマブ（Priliximab）（抗ＣＤ４抗体）、プリツムマブ（pritumumab）（抗ビメンチン抗体）、ＰＲＯ１４０（抗ＣＣＲ５抗体）、ラコツモマブ（racotumomab）（別名：１Ｅ１０、抗（Ｎ−グリコリルノイラミン酸（ＮｅｕＧｃ，ＮＧＮＡ）−ガングリオシド（ＧＭ３）抗体）、 ラフィビルマブ（Rafivirumab）(抗狂犬病ウイルス糖タンパク抗体）、ラムシルマブ(Ramucirumab)（抗ＶＥＧＦＲ２抗体）、ラニビズマブ（別名：Lucentis、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体）、ラキシバクマブ（Raxibacumab）（抗炭疽菌毒素、防御抗原抗体）、レガビルマブ（Regavirumab）（抗ＣＭＶ糖タンパク質Ｂ抗体）、レスリズマブ（Reslizumab）（抗ＩＬ−５抗体）、リロツムマブ (rilotumumab)（抗ＨＧＦ抗体）、リツキシマブ（別名：MabThera、Rituxanmab、抗ＣＤ２０抗体）、ロバツムマブ（Robatumumab）（抗ＩＧＦ−１受容体抗体）、ロンタリズマブ（Rontalizumab）（抗ＩＦＮ−α抗体）、ロベリズマブ（Rovelizumab）（別名：LeukArrest、抗ＣＤ１１、ＣＤ１８抗体）、ルプリズマブ（Ruplizumab）（別名：Antova、抗ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）抗体）、サツモマブ（Satumomab）（抗ＴＡＧ−７２抗体）、セビルマブ（Sevirumab）（抗ＣＭＶ抗体）、シブロツズマブ（抗ＦＡＰ抗体）、 シファリムマブ （Sifalimumab）（抗ＩＦＮ−α抗体）、シルツキシマブ（Siltuximab）（抗ＩＬ−６抗体）、シプリズマブ（抗ＣＤ２抗体）、（スマート）ＭＩ９５（抗ＣＤ３３抗体）、ソラネツマブ（solanezumab）（抗β−アミロイド抗体）、ソネプシズマブ（Sonepcizumab）（抗スフィンゴシン−１−リン酸抗体）、ソンツズマブ（Sontuzumab）（抗エピシアリン抗体）、スタムルマブ（Stamulumab）（抗ミオスタチン抗体）、スレソマブ（sulesomab）（別名：LeukoScan、（抗ＮＣＡ−９０（顆粒球抗原）抗体）））、タカツズマブ(Tacatuzumab)（抗α−フェトプロテイン抗体）、タドシズマブ（tadocizumab）（抗インテグリンαＩＩｂβ３抗体）、タリズマブ（抗ＩｇＥ抗体）、タネズマブ（tanezumab）（抗ＮＧＦ抗体）、タプリツモマブ（taplitumomab）（抗ＣＤ１９抗体）、テフィバズマブ（Tefibazumab）（別名：Aurexis、抗クランピング因子Ａ抗体）、テリモマブ（Telimomab）、テナツモマブ（Tenatumomab）（抗テネイシンＣ抗体）、テネリキシマブ（Teneliximab）（抗ＣＤ４０抗体）、テプリズマブ（Teplizumab）（抗ＣＤ３抗体）、ＴＧＮ１４１２（抗ＣＤ２８抗体）、チシリムマブ（別名：Tremelimumab、抗ＣＴＬＡ−４抗体）、ティガツズマブ（Tigatuzumab）（抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ２抗体）、ＴＮＸ−６５０（抗ＩＬ−１３抗体）、トシリズマブ（別名Atlizumab、Actemra、RoActemra、（抗ＩＬ−６受容体抗体）、トラリズマブ（Toralizumab）（抗ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）抗体）、トシツモマブ（抗ＣＤ２０抗体）、トラスツズマブ（別名：Herceptin、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体）、トレメリムマブ（Tremelimumab）（抗ＣＴＬＡ−４抗体）、 ツコツズマブセルモロイキン(Tucotuzumab celmoleukin)（抗ＥｐＣＡＭ抗体）、ツビルマブ(tuvirumab)（抗Ｂ型肝炎抗体）、ウルトキサズマブ（Urtox
azumab）（抗大腸菌抗体）、ウステキヌマブ（Ustekinumab）（別名：Stelara、抗ＩＬ−１２、ＩＬ−２３抗体）、バパリキシマブ(Vapaliximab)（抗ＡＯＣ３（ＶＡＰ−１）抗体）、 ベドリズマブ（Vedolizumab）、（抗インテグリンα４β７抗体）、ベルツズマブ（抗ＣＤ２０抗体）、ベパリモマブ（Vepalimomab）（抗ＡＯＣ３（ＶＡＰ−１））抗体）、ビシリズマブ（別名：Nuvion、抗ＣＤ３抗体）、ビタキシン（抗血管新生インテグリンａｖｂ３抗体）、ボロシキシマブ（Volociximab）（抗インテグリンα５β１）、ボツムマブ（Votumumab）（別名：HumaSPECT、抗腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８抗体）、ザルツムマブ（別名：HuMax-EGFr、（抗ＥＧＦＲ抗体）、ザノリムマブ（別名：HuMax-CD4、抗ＣＤ４抗体）、ジラリムマブ（Ziralimumab）（抗ＣＤ１４７（基本免疫グロブリン）抗体）、ゾリモマブ(zolimomab)（抗ＣＤ５抗体）、エタネルセプト（登録商標「Enbrel」）、アレファセプト（Alefacept）（登録商標「Amevive」）、アバタセプト（登録商標「Orencia」）、 リロナセプト（Rilonacept）（Arcalyst）、１４Ｆ７［抗ＩＲＰ−２（鉄調節タンパク質２）抗体] 、１４Ｇ２ａ（Ｎat.Cancer Inst.から黒色腫及び固形腫瘍のための抗ガングリオシドＧＤ２抗体）、Ｊ５９１（Weill Cornell Medical Schoolから前立腺癌を治療するための抗ＰＳＭＡ抗体、）、２２５．２８Ｓ［黒色腫のための抗ＨＭＷ−ＭＡＡ（高分子量黒色腫関連抗原）抗体、Sorin Radiofarmaci S.R.L.（ミラノ、イタリア）］、ＣＯＬ−１（Ｎat. Cancer Inst.から大腸癌及び胃癌のための抗ＣＥＡＣＡＭ３抗体、ＣＧＭ１）、ＣＹＴ−３５６（登録商標「Oncoltad」、前立腺癌）、ＨＮＫ２０（Ora Vax Inc.からＲＳウイルスのための）、ＩｍｍｕＲＡＩＴ（IMMUNOMEDICSから非ホジキンリンパ腫のための）、Ｌｙｍ−１（抗ＨＬＡ−ＤＲ１０抗体、Peregrine Pharmから腫瘍のため）、ＭＡＫ−１９５Ｆ［Abbott/Knollから敗血症、毒素ショックのための抗ＴＮＦ（腫瘍壊死因子；ＴＮＦＡ、ＴＮＦ−α；ＴＮＦＳＦ２）抗体］、ＭＥＤＩ−５００［別名：T10B9、MedImmune Incから移植片対宿主病のための抗ＣＤ３抗体、ＴＲαβ（Ｔ細胞受容体α／β）、］、ＲＩＮＧ  ＳＣＡＮ［Neoprobe Corp.から乳癌、結腸癌及び結腸直腸癌のための抗ＴＡＧ７２（腫瘍関連糖タンパク質７２）抗体）]、Ａｖｉｃｉｄｉｎ（抗ＥＰＣＡＭ（上皮細胞接着分子）抗体）、抗ＴＡＣＳＴＤ１（腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー１）抗体、抗ＧＡ７３３−２（胃腸腫瘍関連タンパク質２）抗体、抗ＥＧＰ−２（上皮糖タンパク質２）抗体；抗ＫＳＡ抗体；ＫＳ１／４抗原；Ｍ４Ｓ；腫瘍抗原１７−１Ａ；NeoRx Corp.から結腸癌、卵巣癌、前立腺癌、及び非ホジキンリンパ腫のためのＣＤ３２６；ＬＹＭＰＨＯＣＩＤＥ（IMMUNOMEDICS、ＮＪ）、スマートＩＤ１０（Protein Design Labs）、Oncolym（Techniclone Inc、ＣＡ）、Allomune（BioTransplant、ＣＡ）、抗ＶＥＧＦ抗体（ジェネンテック、ＣＡ）；ＣＥＡｃｉｄｅ（Immunomedics、ＮＪ）、ＩＭＣ−１Ｃ１１（ImClone Systems、ＮＪ）、並びにセツキシマブ（ImClone、ＮＪ）。
【０１２０】
結合リガンドとしての他の抗体には、以下の抗原：アミノペプチダーゼＮ（ＣＤ１３）、アネキシンＡ１、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６、様々な癌）、ＣＡ１２５（卵巣）、ＣＡ１５−３（癌腫）、ＣＡ１９−９（癌腫）、Ｌ６（癌腫）、ルイスＹ（癌腫）、ルイスＸ（癌腫）、α−フェトプロテイン（癌腫）、ＣＡ２４２（大腸直腸）、胎盤アルカリホスファターゼ（癌腫）、前立腺特異抗原（前立腺）、前立腺酸性ホスファターゼ（前立腺）、上皮成長因子（癌腫）、ＣＤ２（ホジキン病、ＮＨＬリンパ腫、多発性骨髄腫）、ＣＤ３ε（Ｔ細胞リンパ腫、肺癌、乳癌、胃癌、卵巣癌、自己免疫疾患、悪性腹水）、ＣＤ１９（Ｂ細胞悪性腫瘍）、ＣＤ２０（非ホジキンリンパ腫）、ＣＤ２２（白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、全身性エリテマトーデス）、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８（多発性骨髄腫）、ＣＤ４０（リンパ腫、多発性骨髄腫、白血病）、ＣＤ５１（転移性黒色腫、肉腫）、ＣＤ５２、ＣＤ５６（小細胞肺癌、卵巣癌、メルケル細胞癌及び液性腫瘍、多発性骨髄腫）、ＣＤ６６ｅ（癌）、ＣＤ７０（転移性腎細胞癌及び非ホジキンリンパ腫）、ＣＤ７４（多発性骨髄腫）、ＣＤ８０（リンパ腫）、ＣＤ９８（癌）、ムチン（癌腫）、ＣＤ２２１（固形腫瘍）、ＣＤ２２７（乳癌、卵巣癌）、ＣＤ２６２（非小細胞肺癌及び他の癌）、ＣＤ３０９（卵巣癌）、ＣＤ３２６（固形腫瘍）、ＣＥＡＣＡＭ３（結腸直腸癌、胃癌）、ＣＥＡＣＡＭ５（癌胎児性抗原；ＣＥＡ、ＣＤ６６ｅ）（乳癌、結腸直腸癌及び肺癌）、ＤＬＬ４（Δ−ｌｉｋｅ−４）、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体、種々の癌）、ＣＴＬＡ４（黒色腫）、ＣＸＣＲ４（ＣＤ１８４、ヘム腫瘍、固形腫瘍）、エンドグリン（ＣＤ１０５、固形腫瘍）、ＥＰＣＡＭ（上皮細胞接着分子、膀胱、頭部、頸部、結腸癌、ＮＨＬ、前立腺癌、及び卵巣癌）、ＥＲＢＢ２（上皮成長因子受容体２；肺癌、乳癌、前立腺癌）、ＦＣＧＲ１（自己免疫疾患）、ＦＯＬＲ（葉酸受容体、卵巣癌）、ＧＤ２ガングリオシド（癌）、Ｇ−２８G（細胞表面抗原糖脂質、黒色腫）、ＧＤ３イディオタイプ（癌）、熱ショックタンパク質（癌）、ＨＥＲ１（肺癌、胃癌）、ＨＥＲ２（乳癌、肺癌及び卵巣癌）、ＨＬＡ−ＤＲ１０（ＮＨＬ）、ＨＬＡ−ＤＲＢ（ＮＨＬ、Ｂ細胞白血病）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（癌腫）、ＩＧＦ１Ｒ（インスリン様成長因子−１受容体、固形腫瘍、血液癌）、ＩＬ−２受容体（インターロイキン−２受容体、Ｔ細胞白血病及びリンパ腫）、ＩＬ−６Ｒ（インターロイキン６受容体、多発性骨髄腫、ＲＡ、キャッスルマン病、ＩＬ６依存性腫瘍）、インテグリン（αVβ3、α5β1、α6β4、αＩＩβ3、α5β5、αVβ５、種々の癌）、ＭＡＧＥ−１（癌腫）、ＭＡＧＥ−２（癌腫）、ＭＡＧＥ−３（癌腫）、ＭＡＧＥ−４（癌腫）、抗トランスフェリン受容体（癌腫）、ｐ９７（黒色腫）、ＭＳ４Ａ１（膜貫通４−ドメインファミリーＡメンバー１）、非ホジキンＢ細胞リンパ腫、白血病）、ＭＵＣ１又はＭＵＣ１−ＫＬＨ（乳癌、卵巣癌、子宮頚癌、気管支及び胃腸癌）、ＭＵＣ１６（ＣＡ１２５）（卵巣癌）、ＣＥＡ（結腸）、ｇｐ１００（黒色腫）、ＭＡＲＴ１（黒色腫）、ＭＰＧ（黒色腫）、ＭＳ４Ａ１（膜貫通４−ドメインファミリーＡメンバー１、小細胞���癌、ＮＨＬ）、ヌクレオリン、神経癌遺伝子産物（癌腫）、Ｐ２１（癌腫）、抗−（Ｎ−グルコリルノイラミン酸のパラトープ（乳癌、黒色腫癌）、ＰＬＡＰ様精巣アルカリホスファターゼ（卵巣癌、精巣癌）、ＰＳＭＡ（前立腺癌）、ＰＳＡ（前立腺）、ＲＯＢＯ４、ＴＡＧ７２（腫瘍関連糖タンパク質７２、白血病（ＡＭＬ）、胃癌、結腸直腸癌、卵巣癌）、Ｔ細胞の膜貫通タンパク質（癌）、Ｔｉｅ（ＣＤ２０２ｂ）、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０Ｂ、癌）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｂ、多発性骨髄腫、ＮＨＬ、他の癌、ＲＡ及びＳＬＥ）、ＴＰＢＧ（栄養膜糖タンパク質、腎細胞癌）、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１（ＴＮＦ関連アポトーシスリガンド受容体１、リンパ腫、ＮＨＬ、結腸直腸癌、肺癌）、ＶＣＡＭ−１（ＣＤ１０６、黒色腫）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−２（ＣＤ３０９）（種々の癌）が含まれるが、これらに限られない。抗体により認識される他の腫瘍関連抗原については既に報告されている（Gerber等，mAbs 1:3 ， 247-253 （ 2009） ; Novellino et al，cancer immunol immunother. 54 （ 3 ） , 187 -207 （ 2005）Franke et al，cancer biother radiopharm. 2000 ， 15 ， 459 - 76 ）。抗体に対するこれらの抗原の例として、多くの他の表面抗原分類（ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１２ｗ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤｗ１７、ＣＤ１８、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３１、ＣＤ３２、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ４１、ＣＤ４２、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤ６１、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６３、ＣＤ６８、ＣＤ６９、ＣＤ７１、ＣＤ７２、ＣＤ７９、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＤ８７、ＣＤ８８、ＣＤ８９、ＣＤ９０、ＣＤ９１、ＣＤ９５、ＣＤ９６、ＣＤ１００、ＣＤ１０３、ＣＤ１０５、ＣＤ１０６、ＣＤ１０９、ＣＤ１１７、ＣＤ１２０、ＣＤ１２７、ＣＤ１３３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３５、ＣＤ１３８、ＣＤ１４１、ＣＤ１４２、ＣＤ１４３、ＣＤ１４４、ＣＤ１４７、ＣＤ１５１、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、ＣＤ１５６、ＣＤ１５８、ＣＤ１６３、ＣＤ１６６、ＣＤ１６８、ＣＤ１８４、ＣＤｗ１８６、ＣＤ１９５、ＣＤ２０２（ａ、ｂ）、ＣＤ２０９、ＣＤ２３５ａ、ＣＤ２７１、ＣＤ３０３、ＣＤ３０４）、アネキシンＡ１、ヌクレオリン、エンドグリン（ＣＤ１０５）、ＲＯＢＯ４、アミノペプチダーゼＮ、Δ−ｌｉｋｅ−４（ＤＬＬ４）、ＶＥＧＦＲ−２（ＣＤ３０９）、ＣＸＣＲ４９ＣＤ１８４）、Ｔｉｅ２、Ｂ７−Ｈ３、ＷＴ１、ＭＵＣ１、ＬＭＰ２、ＨＰＶ  Ｅ６  Ｅ７、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、イディオタイプ、ＭＡＧＥ  Ａ３、ｐ５３非変異体、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＧＤ２、ＣＥＡ、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｇｐ１００、ｐ５３変異体、プロテイナーゼ３（ＰＲ１）、ｂｃｒ−ａｂｌ、チロシナーゼ、サバイビン、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＥｐｈＡ２、ＰＡＰ、ＭＬ−ＩＡＰ、ＡＦＰ、ＥｐＣＡＭ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２  ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、ＡＬＫ、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ポリシアル酸、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ−２、ＧＤ３、フコースＧＭ１、メソテリン、ＰＳＣＡ、ＭＡＧＥ  Ａ１、ｓＬｅ（ａ）、ＣＹＰ１Ｂ１、ＰＬＡＣ１、ＧＭ３、ＢＯＲＩＳ、Ｔｎ、ＧｌｏｂｏＨ、ＥＴＶ６−ＡＭＬ、ＮＹ−ＢＲ−１、ＲＧＳ５、ＳＡＲＴ３、ＳＴｎ、炭酸脱水酵素ＩＸ、ＰＡＸ５、ＯＹ−ＴＥＳ１、精子タンパク質１７、ＬＣＫ、ＨＭＷＭＡＡ、ＡＫＡＰ−４、ＳＳＸ２、ＸＡＧＥ１、Ｂ７Ｈ３、レグマイン（ｌｅｇｕｍａｉｎ）、Ｔｉｅ２、Ｐａｇｅ４、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＤ−ＣＴ−１、ＦＡＰ、ＰＤＧＦＲ−β、ＭＡＤ−ＣＴ−２、Ｆｏｓタンパク質関連抗原１に対する抗体が含まれる。
【０１２１】
本発明で用いられる抗体の産生には、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏでの生成プロセス又はその組み合わせが含まれる。抗受容体ペプチドポリクローナル抗体の調製方法は、例えば、米国特許番号４，４９３，７９５（Ｎｅｓｔｏｒ等）に示すように周知である。モノクローナル抗体を調製するための典型的な方法は、特定の抗原免疫化マウスから単離したマウス脾臓細胞とミエローマ細胞とを融合させるとの方法である（Ｋｏｈｌｅｒ,Ｇ;Ｍｉｌｓｔｅｉｎ, Ｃ.１９７５.Ｎａｔｕｒｅ  ２５６:４９５−４９７）。詳しい操作方法に関して、ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ, Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ,  ｅｄｓ.,  ｃｏｌｄ ｓｐｒｉｎｇ  ｈａｒｂｏｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｐｒｅｓｓ, ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８）に記載されており、ここに本明細書の一部を構成するものとして、当該文献の内容を援用する。特に、目的の抗原でマウス、ラット、ハムスター、または他の哺乳動物を免疫させる方法により、モノクローナル抗体を獲得することができ、目的の抗原として、例えば、無傷の標的細胞、標的細胞から単離された抗原、全ウイルス、弱体化した全ウイルス及びウイルスタンパク質が挙げられる。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）６０００を用いて脾臓細胞とミエローマ細胞を融合させる。融合後得られたハイブリドーマについて、ＨＡＴ（ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミン）に対する感度を利用して、スクリーニングする。本発明の実施に有用なモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、特定の標的細胞受容体との免疫反応又は受容体活性の抑制を行うことにより同定される。
【０１２２】
本願発明で用いられるモノクローナル抗体は、適切な抗原特異性を有する抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を含む栄養培地でモノクローナルハイブリドーマ細胞の培養を開始することにより得ることができる。該培養では、ハイブリドーマ細胞が抗体を培養培地中に分泌するのに十分な時間及び条件を維持する必要がある。抗体含有培地上清を回収した後、周知の技術、例えばプロテインＡアフィニティークロマトグラフィー、陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、及び分子篩クロマトグラフィー（特に、抗原架橋プロテインＡを用いたアフィニティークロマトグラフィー及び分子篩クロマトグラフィー）、遠心分離、沈殿法、又は他のタンパク質を精製するための標準的な方法により、抗体を単離することができる。
【０１２３】
ハイブリドーマ培養に必要な培地及び人工合成培地は技術合成又は商業ルートを介して獲得することができる。そのうち、典型的な人工合成培地は、ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏなど、Ｖｉｒｏｌ ８：３９６（１９５９））に、４．５ｍｇ／Ｌのグルコース、２０ｍＭのグルタミン、２０％のＦＢＳ及び消泡剤（例えば、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体）を加えたものである。
【０１２４】
更に、細胞融合技術以外に、下記の方法によっても抗体を生成するための細胞株を構築することができる。例えば、発癌性ＤＮＡによるＢリンパ球の直接的トランスフォーメーション、又は発癌性ウイルス、例えばエプスタイン−バールウイルス（ＥＢＶ、ヒトヘルペスウイルス４（ＨＨＶ−４）としても知られている。）若しくはカポシ肉腫関連ウイルス（ＫＳＨＶ）のＢリンパ球へのトランスフェクションがある（詳しくは、米国特許番号４３４１７６１；４３９９１２１； ４４２７７８３； ４４４４８８７； ４４５１５７０； ４４６６９１７；４４７２５００； ４４９１６３２； ４４９３８９０を参照）。モノクローナル抗体は、既知の方法に基づいて、抗受容体ペプチド、又は末端カルボキシル基含有ペプチドにより調製されることができる（詳しくは、Ｎｉｍａｎ等 Ｐｒｏｃ.Ｎａｔｌ. Ａｃａｄ. Ｓｃｉ. ＵＳＡ，８０：４９４９−４９５３(１９８３);Ｇｅｙｓｅｎ 等Ｐｒｏｃ.Ｎａｔｌ. Ａｃａｄ. Ｓｃｉ. ＵＳＡ，８２：１７８−１８２(１９８５); Ｌｅｉ等Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３４(２０)：６６７５−６６８８(１９９５)を参照）。通常、抗受容体ポリペプチドまたはポリペプチド類似体は、モノクローナル抗体の抗受容体ポリペプチドを調製するための免疫原として、単独で、または架橋免疫原性担体に使用することができる。
【０１２５】
本発明の結合分子としてのモノクローナル抗体を製造するために、他の常用の製造方法もある。特に有用なものは、完全ヒト抗体の製造方法である。ファージディスプレイ技術は、親和性選択によって完全ヒト抗体ライブラリから、既知の抗原に特異的に結合する完全ヒト抗体を得られる。文献には、ファージディスプレイ技術そのもの、ベクトルの構築、及びライブラリのスクリーニングについて詳しい記載がある。詳しくは、Ｄｅｎｔｅ等Ｇｅｎｅ.１４８(１)：７−１３（１９９４)；Ｌｉｔｔｌｅ 等ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＡｄｖ. １２（３）: ５３９−５５（１９９４)；Ｃｌａｃｋｓｏｎ 等Ｎａｔｕｒｅ３５２：２６４−６２８(１９９１)；Ｈｕｓｅ等Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：１２７５−１２８１（１９８９）、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ等ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（２００１）（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ等  編集Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．）、及び一定の例として、Ｌｅｅ等Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０：１０７３−１０９３（２００４）を参照。
【０１２６】
ハイブリドーマ技術を用いてヒト以外の他の種（例：マウス）から得られたモノクローナル抗体について、ヒトに投与した際のヒト抗マウス抗体を避けるためにヒト化することができる。抗体のヒト化に関してよく知られている方法は、相補性決定領域の移植及びリモデリングである。詳しくは、米国特許第５，８５９，２０５号及び第６，７９７，４９２号；Ｌｉｕ等,Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ.２２２：９−２７（２００８); Ａｌｍａｇｒｏ 等，Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ. １；１３：１６１９−３３(２００８); Ｌａｚａｒ 等Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ.４４(８):１９８６−９８（２００７); Ｌｉ等Ｐｒｏｃ.Ｎａｔｌ.Ａｃａｄ.Ｓｃｉ.ＵＳＡ.１０３（１０）：３５５７−６２（２００６）を参照。前記文献の開示は参照として組み込まれる。完全ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン軽鎖および重鎖を大量に保有するトランスジェニックマウス、ウサギ、サルその他の哺乳動物に対し抗原免疫を行うことにより調製することができる。マウスを例に、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ.）, ＨｕＭａｂ−Ｍｏｕｓｅ （Ｍｅｄａｒｅｘ／ＢＭＳ), ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ)がいる。詳しくは、米国特許第６，５９６，５４１号、６，２０７，４１８号、６，１５０，５８４号、６，１１１，１６６号、６，０７５，１８１号、５，９２２，５４５号、５，６６１，０１６号、５，５４５，８０６号、５，４３６，１４９号及び５，５６９，８２５号を参照。ヒトの治療の過程では、マウス抗体可変領域遺伝子及びヒト抗体定常領域遺伝子を統合して構築されたキメラ抗体がヒトの体内で産生する免疫原性は、マウス抗体よりもはるかに低くなる（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ等， Ｍｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ. ２６：３９−６０（２００４）；Ｈｏｕｄｅｂｉｎｅ, Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ. １３：６２５−９(２００２)）。前記文献の開示は参照として組み込まれる。さらに、抗体可変領域の部位に特異的突然変異誘発をすることにより、抗体親和性及び特異性を向上させることができる（Ｂｒａｎｎｉｇａｎ等， Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｍｏｌ ＣｅｌｌＢｉｏｌ. ３：９６４−７０(２００２); Ａｄａｍｓ 等，ＪＩｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ. ２３１：２４９−６０(１９９９)）。モノクローナル抗体の定常領域を一部置き換えて、免疫エフェクター細胞との親和性を効果的に促進することによって、細胞毒性効果を増強することができる。
【０１２７】
悪性細胞抗原に対する免疫特異的抗体は、商業ルート又はいくつかの常用の技術方法、例えば化学合成又は組換え発現技術により得ることができる。同様に、悪性細胞抗原に対する免疫特異的抗体をコードするヌクレオチド配列は、ＧｅｎＢａｎｋデータベース又は他の類似のデータベースという商業ルート、公知文献、又はルーチンのクローニング及びシークエンシングにより得ることができる。
【０１２８】
ハイブリドーマ細胞に由来するモノクローナル抗体又は該抗体のファージディスプレイＦｖクローンをコードするＤＮＡは、通常の方法（例えば、ハイブリドーマ又はファージＤＮＡテンプレートから所望の重鎖及び軽鎖をコードする領域を特異的に増幅するために設計されたオリゴヌクレオチドプライマーを用いること）により、容易に分離して配列を決定することができる一旦単離すれば、組換え宿主細胞で所望のモノクローナル抗体を製造するために、ＤＮＡを発現ベクターに挿入してから、大腸菌、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は他の免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞等の宿主細胞へトランスフェクションすることができる(Skerra, et al., Curr. Opinion in Immunol., 1993, 5, 256；Pluckthun, Immunol. Revs., 1992, 130, 151)。抗体は、抗体生産収率向上及び抗体の適切な組み立てのために、発現されたポリペプチド成分の定量測定比率を制御する発現系を用いて製造することもできる。このような制御は、同時にポリペプチド成分の翻訳の強度を制御することにより少なくとも部分的に成し遂げられる。既知の発酵後、得られた抗体タンパク質は、更なる分析及び使用のために、実質的に単一の生成物を得るべく更に精製される。既知の標準的なタンパク質の精製方法を用いることができる。例示的な精製方法として、免疫アフィニティー分画（例えば、タンパク質Ａカラム）又はイオン交換カラムによる分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカゲルカラムクロマトグラフィー又は陽イオン交換カラムクロマトグラフィー（例えば、ＤＡＥＡ）、クロマト分画クロマトグラフィー、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿及びゲル濾過（例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−７５）がある。
【０１２９】
抗体を除いて、結合、ブロック、標的又はその他の方式で、標的細胞上の抗原決定基又は相応な受容体と相互作用する如何なるポリペプチド又はタンパク質は、結合分子として用いることができる。これらのポリペプチド又はタンパク質は、抗原決定基又は相応な受容体分子と親和性を有する任意のポリペプチド又はタンパク質でよく、免疫グロブリンファミリーに属することが必ずしも必要ではない。これらのポリペプチドは、ファージディスプレイ抗体と類似する方法で分離することができる（Szardenings, J Recept Signal Transduct Res., 2003, 23(4), 307-49）。このようなポリペプチドライブラリから無作為に選別して取得したポリペプチドは、抗体又は抗体フラグメントと同様に結合分子として使用することができる。ポリペプチド又はタンパク質の結合分子は、その結合特異性に影響を与えない限り、これらには限られないが、アルブミン、高分子化合物、リポソーム及びナノ粒子等の大分子又は物質と共役又は接続してもよい。
【０１３０】
細胞結合分子、好ましくは抗体上の異なるいくつかの反応基のうちの如何なる一つは、リジン残基のε−アミノ基、炭水化物残基の側鎖、カルボン酸基、ジスルフィド基、及びチオール基等の共役部位であってもよい。共役に適切な抗体反応基のレビューのために、G.T. Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press, 2008; Garnett, Adv. Drug Delivery Rev., 2001, 53, 171-216; Dubowchik, Walker, Pharmacology & Therapeutics, 1999, 83, 67-123等を参照し、これらの開示は参照として組み込まれる。
【０１３１】
本発明における細胞毒性剤は、直接に又は二官能性連結体又は架橋試薬を通じて、細胞結合分子と共役させることができる。前記二官能性連結体は、二つの反応性基を含む。一つは細胞結合分子と反応し、一方、もう一つは１つ又は複数の本発明における細胞毒性分子と反応できる。二官能性連結体は本技術分野で広く知られている（例えば、米国特許 5,208,020; 「Isalm, Dent, Bioconjugation」、第5章218-363ページ、「Groves Dictionaries Inc., New York, 1999」）。二官能性連結体として、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸エステル（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）酪酸エステル（ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）吉草酸エステル（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）酪酸エステル（ＳＤＰＢ）、２−イミノチオラン、Ｎ−スクシンイミジル−４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）酪酸エステル（ＳＮＰＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）吉草酸エステル（ＳＮＰＰ）、Ｎ−スルホスクシンイミジル−４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）酪酸エステル（ＳＳＮＰＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−メチル−４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）吉草酸エステル（ＳＭＮＰ）、Ｎ−スルホスクシンイミジル−４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）吉草酸エステル（ＳＳＮＰＰ）、４−スクシンイミジル−オキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）−トルエン（ＳＭＰＴ）、Ｎ−スルホスクシンイミジル−４−メチル−４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）吉草酸エステル（ＳＳＭＮＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−メチル−４−（２−ピリジルジチオ）吉草酸エステル（ＳＭＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（５−Ｎ，Ｎ−ジメチル−カルボキサミド−２−ピリジルジチオ）酪酸エステル（ＳＣＰＢ）、Ｎ−スルホスクシンイミジル−４−（５−Ｎ，Ｎ−ジメチル−カルボキサミド−２−ピリジルジチオ）酪酸エステル（ＳＳＣＰＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−４，４−ジメチル−４−（２−ピリジルジチオ）吉草酸エステル（ＳＤＭＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸エステル（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノ安息香酸エステル（ＳＩＡＢ）、ビスマレイミドポリエチレングリコール（ＢＭＰＥＧ）、ＢＭ（ＰＥＧ）１−２０、Ｎ−（β−マレイミドプロピルオキシ）−スクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、イミノチオラン（ＩＴ）、アジプイミド酸ジメチル塩酸塩又はイミド酸エステルの誘導体、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン)、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン−２，６−ジイソシアネート)、 ビス−活性化フッ素系化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン) 、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）、Ｅ−マレイミド��プロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、５−マレイミド吉草酸ＮＨＳ、ＨＢＶＳ、Ｎ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミノカプロン酸エステル）（ＳＭＣＣの長鎖類縁物質（ＬＣ−ＳＭＣＣ））、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）−酪酸ヒドラジド又は塩酸塩（ＭＰＢＨ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（ブロモアセトアミド）プロピオン酸エステル（ＳＢＡＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−ヨード酢酸エステル（ＳＩＡ）、κ−マレイミドウンデカン酸スクシンイミドエステル（ＫＭＵＡ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸エステル（ＳＭＰＢ）、スクシンイミジル−６−（β−マレイミドプロピオニルアミド）−ヘキサン酸エステル（ＳＭＰＨ）、スクシンイミジル−（４−ビニルスルホニル）安息香酸エステル（ＳＶＳＢ）、ジチオビス−マレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４−ビス−マレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４−ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビス−マレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビス−マレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、スルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸エステル（ｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸エステル（ｓｕｌｆｏ−ＳＩＡＢ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（ｓｕｌｆｏ−ＭＢＳ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（ｓｕｌｆｏ−ＧＭＢＳ）、Ｎ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（ｓｕｌｆｏ−ＥＭＣＳ）、Ｎ−（κ−マレイミドウンデカノイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（ｓｕｌｆｏ−ＫＭＵＳ）、及びスルホスクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸エステル（ｓｕｌｆｏ−ＳＭＰＢ）；又は商業的に入手可能な連結体 (例えば、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ’ｓ  Ｐｉｅｒｃｅから購入できるイミドエステル結合物：ＤＭＡ（アジプイミド酸ジメチル二塩酸塩）、ＤＭＰ（ピメルイミド酸ジメチル二塩酸塩）、ＤＭＳ（スベルイミド酸ジメチル二塩酸塩）、ＤＴＢＰ（３，３−ジチオビスプロピオンイミド酸ジメチル二塩酸塩）；ＮＨＳ−エステル架橋アミン：ＢＳ（ＰＥＧ）５（ビス（スクシンイミジル）ペンタ（エチレングリコール）、ＢＳ（ＰＥＧ）９（ビス（スクシンイミジル）ノナ（エチレングリコール）、ＢＳ３（ビス［スルホスクシンイミジル］スベリン酸塩）、ＢＳＯＣＯＥＳ（ビス［２−（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン酸塩）、ＤＳＧ（グルタル酸ジスクシンイミジル）、ＤＳＰ（ジチオビス［スクシンイミジル］プロピオン酸エステル）、ＤＳＳ（スベリン酸ジスクシンイミジル)、ＤＳＴ（酒石酸ジスクシンイミジル）、ＤＴＳＳＰ（３，３’−ジチオビス［スルホスクシンイミジルプロピオン酸エステル］）、ＥＧＳ（エチレングリコールビス［コハク酸スクシンイミジル］）、Ｓｕｌｆｏ−ＥＧＳ（エチレングリコールビス（コハク酸スルホスクシンイミジル））、ＴＳＡＴ（トリス−スクシンイミジルアミノトリ酢酸エステル）、ＤＦＤＮＢ（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）；アミン−スルフヒドリル架橋剤：Ｓｕｌｆｏ−ＳＩＡＢ（スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸エステル）、ＳＩＡＢ（スクシンイミジル（４−ヨウ化アセチル）アミノ安息香酸エステル）、ＳＢＡＰ（スクシンイミジル−３−（ブロモアセトアミド）プロピオン酸エステル）、ＳＩＡ（スクシンイミジルＮ−ヨウ化酢酸エステル）、Ｓｕｌｆｏ−ＳＭＣＣ（スルホスクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボン酸エステル）、ＳＭ（ＰＥＧ）ｎ（ＮＨＳ−ＰＥＧ−マレイミド架橋剤：スクシンイミジル−（［Ｎ−マレイミドプロピオンアミド）−＃エチレングリコール）エステル、＃＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、２０、２２、２４）、ＬＣ−ＳＭＣＣ（スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロン酸エステル））、Ｓｕｌｆｏ−ＥＭＣＳ（Ｎ−ε−マレイミドカプロイルオキシスルホスクシンイミドエステル）、ＥＭＣＳ（Ｎ−ε−マレイミドカプロイルオキシスクシンイミドエステル）、Ｓｕｌｆｏ−ＧＭＢＳ（Ｎ−γ−マレイミドブチルオキシスルホスクシンイミドエステル）、ＧＭＢＳ（Ｎ−γ−マレイミドブチルオキシスクシンイミドエステル）、Ｓｕｌｆｏ−ＫＭＵＳ（Ｎ−κ−マレイミドウンデカノイルオキシスルホスクシンイミドエステル）、Ｓｕｌｆｏ−ＭＢＳ（ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル）、ＭＢＳ（ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、Ｓｕｌｆｏ−ＳＭＰＢ（（スルホスクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸エステル）、ＳＭＰＢ（（スクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミジルフェニル）酪酸エステル）、ＡＭＡＳ（Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステル）、ＢＭＰＳ（Ｎ−β−マレイミジルプロピルオキシスクシンイミドエステル）、ＳＭＰＨ（スクシンイミジル−６−［（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサン酸エステル）、ＰＥＧ１２−ＳＰＤＰ（２−ピリジルジチオール−テトラオキサオクタトリアコンタン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、ＰＥＧ４−ＳＰＤＰ（２−ピリジルジチオール−テトラオキサテトラデカン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、Ｓｕｌｆｏ−ＬＣ−ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル−６−［３’−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサン酸エステル）、ＬＣ−ＳＰＤＰ（スクシンイミジル−６−［３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサン酸エステル）、ＳＭＰＴ（４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α（２−ピリジルジチオ）トルエン）；カルボニル−アミン架橋剤：ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）；光活性化架橋剤：ＡＮＢ−ＮＯＳ（Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシンイミドエステル���；ＮＨＳ−ジアジリン（ＳＤＡ）架橋剤：ＳＤＡ（ＮＨＳ−ジアジリン）（スクシンイミジル−４，４’−アジペンタノエート）、ＬＣ−ＳＤＡ（ＮＨＳ−ＬＣ−ジアジリン）（スクシンイミジル−６−（４，４’−アジペンタンアミド）ヘキサン酸エステル）、ＳＤＡＤ（ＮＨＳ−ＳＳ−ジアジリン）（スクシンイミジル−２−（［４，４’−アジペンタンアミド］エチル）−１，３’−ジチオプロピオン酸エステル）、Ｓｕｌｆｏ−ＳＤＡ（Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ジアジリン）（スルホスクシンイミジル−４，４’−アジペンタノエート）、Ｓｕｌｆｏ−ＬＣ−ＳＤＡ（Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣ−ジアジリン）（スルホスクシンイミジル−６−（４，４’−アジペンタンアミド）へキサン酸エステル)、Ｓｕｌｆｏ−ＳＤＡＤ（Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＳＳ−ジアジリン）（スルホスクシンイミジル−２−（［４，４’−アジペンタンアミド］エチル）−１，３’−ジチオプロピオン酸エステル）、Ｓｕｌｆｏ−ＳＡＮＰＡＨ（スルホスクシンイミジル−６−（４’−アジド−２’−ニトロフェニルアミノ）−ヘキサン酸エステル）、ＳＰＢ（スクシンイミジル−［４−（ソラレン−８−イルオキシ）］−酪酸エステル）；スルフィドリル−炭化水素架橋剤：ＢＭＰＨ（Ｎ−β−マレイミジルプロピオン酸ヒドラジド−ＴＦＡ）、ＥＭＣＨ（Ｎ−ε−マレイミジドカプロン酸ヒドラジド−ＴＦＡ）、ＫＭＵＨ（Ｎ−κ−マレイミドウンデカン酸ヒドラジド−ＴＦＡ）、ＭＰＢＨ（４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド塩酸塩）、ＰＤＰＨ（３−（２−ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド）；スルフィドリル−ヒドロキシ架橋剤：ＰＭＰＩ（ｐ−マレイミドフェニルイソシアネート）；スルフヒドリル−スルフヒドリル架橋剤：ＢＭ（ＰＥＧ）２（１，８−ビスマレイミド−ジエチレングリコール）、ＢＭ（ＰＥＧ）３（１，１１−ビスマレイミド−トリエチレングリコール）、ＢＭＢ（１，４−ビスマレイミドブタン）、ＢＭＤＢ（１，４−ビスマレイミド−２，３−ジヒドロキシブタン）、ＢＭＨ（ビスマレイミドヘキサン）、ＢＭＯＥ（ビスマレイミドエタン）、ＤＴＭＥ（ジチオビスマレイミドエタン）、ＴＭＥＡ（トリス（２−マレイミドエチル）アミン）、及びＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルフォン
）安息香酸エステル）が含まれる。
【０１３２】
ビスマレイミド又はビス−２−ピリジルジチオール試薬は、連続的又は併発の方式で、チオール含有細胞結合分子（例えば、抗体）のチオール基とチオール含有薬物残基、マーカー又は連結体中間体と接続することができる。チオール基含有細胞接着分子、薬物残基、マーカー又は連結体中間体と反応できる、ビスマレイミド及びピリジルジチオール以外のその他の官能基には、例えば、ヨウ化アセトアミド、臭化アセチルアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアネート及びイソチオシアネートが含まれる。
【０１３３】
更なる実施形態において、連結体が１以上の連結体成分により構成されていてもよい。典型的な連結体成分として、以下を含む。
【０１３４】
１．自壊性連結体成分
【化２２】
0006332773.tif 000041
【０１３５】
式中、（＊）で標識された原子は、追加のスペーサー若しくは放出可能連結体単位、細胞毒性分子、及び／又は細胞結合分子（ＣＢＡ）との結合点である。；Ｘ１、Ｙ１、Ｚ２及びＺ３は独立してＮＨ、Ｏ又はＳである；Ｚ１は独立してＨ、ＮＨ、Ｏ又はＳである；ｖは０又は１である；Ｑ１は独立してＨ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＲ５、ＳＲ５、ＮＲ５Ｒ５’、Ｎ＝ＮＲ５、Ｎ＝Ｒ５、ＮＲ５Ｒ５’、ＮＯ２、ＳＯＲ５Ｒ５’、ＳＯ２Ｒ５、ＳＯ３Ｒ５、ＯＳＯ３Ｒ５、ＰＲ５Ｒ５’、ＰＯＲ５Ｒ５’、ＰＯ２Ｒ５Ｒ５’、ＯＰＯ（ＯＲ５）（ＯＲ５’）又はＯＣＨ２ＰＯ（ＯＲ５）（ＯＲ５’)であり、ここで、Ｒ５及びＲ５’の定義は式（Ｉ）に記載した通りであり、好ましくは、Ｒ５及びＲ５’は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、アルキニル、ヘテロアルキル、Ｃ３−Ｃ８アリール、複素環、炭素環、環状アルキル、複素環アルキル、ヘテロアラルキル、アルキルカルボニル又は薬用陽イオン塩から選択される。
【０１３６】
２．自壊性連結体成分の例
【化２３】
0006332773.tif 000042
0006332773.tif 000043
【０１３７】
式中、（＊）で標識された原子は、追加スペーサー若しくは放出可能連結体単位、細胞毒性分子及び／又は細胞接着分子（ＣＢＡ）との結合点である。Ｘ１、Ｙ１、Ｑ１、Ｒ５、Ｒ５’及びｒの定義は、式（Ｉ）に記載した通りであ。ｍ、ｎ及びｐは０〜６である。
【０１３８】
３．連結体成分として例示的に、６−マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロパノイル（ＭＰ）、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ又はｖｃ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｌａ−ｐｈｅ又はａｆ）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−チオペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル) シクロアルカン−１−カルボン酸エステル（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スクシンイミジル−（４−アセチル）アミノ安息香酸塩（ＳＩＡＢ）、及び繰り返し単位として１又は複数のエチレンオキシド（−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−）単位（ＥＯ又はＰＥＯ）が挙げられる。他の連結体単位は本発明の技術分野で公知であり、ここではその一部を記載している。
【０１３９】
追加の実施形態において、連結体はアミノ酸残基を含有する。例示的なアミノ酸連結体には、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド又はペンタペプチドが含まれる。例示的なジペプチドには、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ又はｖｃ）及びアラニン−フェニルアラニン（ａｌａ−ｐｈｅ又はａｆ）が含まれる。例示的なトリペプチドには、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）及びグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が含まれる。アミノ酸連結体物を構成するアミノ酸残基には、天然に存在しているアミノ酸、副次的なアミノ酸及びシトルリンのような非天然型アミノ酸類縁物質が含まれる。アミノ酸連結体は、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ及びＤ、又はプラスミンプロテアーゼ等の特定の酵素により酵素的に開裂させるために、その選択性を設計及び最適化することができる。
【０１４０】
本発明の細胞結合分子−薬物共役体において、細胞結合分子（ＣＢＡ）は、二官能性連結体（Ｌ）を通じて、例えば、約１〜２０個の薬物分子／細胞結合分子毎のように、１又は複数の薬物分子（薬物又はＰＢＤ誘導体）と共役する。式（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）及び（ＸＩＶ）の共役体は、当業者に知られている有機化学反応、条件及び試薬を用いた様々な方法により、合成してもよい。かかる方法は、（１）最初に、任意に０〜３０％の有機共溶媒を含むｐＨ３〜９の水系緩衝液中で、細胞結合分子に反応性のジスルフィド、マレイミド、ハロゲン化アセチル、ヒドラジド、ニトリル、アルキニル、アルコキシアミノ又はアルデヒド基を導入することによって、共有結合によりＣＢＡ−Ｌを形成し、連結体（Ｌ）により細胞接着分子（ＣＢＡ）を修飾し、次いで、ＣＢＡ−Ｌ分子を式（Ｉ）の薬物残基と反応させて細胞結合分子−薬物共役体を生成する；又は（２）最初に、任意に０〜９９％の有機共溶媒を含むｐＨ３〜９の水系緩衝液又は有機溶媒中で、薬物残基に細胞結合分子に反応性のジスルフィド、マレイミド、ハロゲン化アセチル、ヒドラジド、ニトリル、アルキニル、アルコキシアミノ、アルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）又はペンタフルオロフェニルエステル基を導入することによって、共有結合によりＤｒｕｇ−Ｌを形成し、次いで、Ｄｒｕｇ−Ｌ分子を細胞接着分子（ＣＢＡ）又は予め修飾されたＣＢＡと反応させて細胞結合分子−薬物共役体を生成する；又は（３）任意に０〜３０％の有機共溶媒を含むｐＨ３〜９の水系緩衝液中で、反応性のジスルフィド、マレイミド、ハロゲン化アセチル、ヒドラジド、ニトリル、アルキニル、アルコキシアミノ、アルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）又はペンタフルオロフェニルエステル基を有する式（Ｉ）の薬物残基と細胞接着分子（ＣＢＡ）とを、直接的に反応させる。
【０１４１】
抗体等の細胞結合分子上のチオール基又はアミノ基は求核性を有し、連結体試薬及び薬物−連結体中間体上の求電子性基と反応して共有結合を形成することができる。これらの求電子基には、（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロゲン化ギ酸エステル及び酸塩化物等の活性エステル；（ｉｉ）ハロアセトアミド等のハロゲン化アルキル化及びハロゲン化ベンジル；（ｉｉｉ）アルデヒド基、ケトン基、カルボキシル基及びマレイミド基；及び（ｉｖ）ピリジルジスルフィドを含むスルフィド交換を経たジスルフィドが含まれる。薬物残基上の求核性基には、連結体残基及び連結体試薬上の求電子性基と反応して共有結合を形成することができるアミン、チオール、ヒドロキシ、ヒドラジド、オキシム、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボン酸エステル及びアリールヒドラジド基が含まれるが、これらに限らない。
【０１４２】
抗体又はタンパク質における求核性基は、機能性の連結体上の求電子性基と反応し、続いて細胞毒性分子と反応して、又は連結体−細胞毒性分子残基と直接反応して、共有結合性の細胞結合分子−細胞毒性剤共役体を形成することができる。抗体又はタンパク質上の求核性基には、（ｉ）Ｎ末端のアミノ基；（ｉｉ）リジン等の側鎖アミノ基、（ｉｉｉ）システイン等の側鎖チオール基、及び（ｉｖ）グリコシル化抗体の糖ヒドロキシ基又はアミノ基が含まれるが、これらに限定されない。アミノ基、チオール基及びヒドロキシ基は求核性を有し、連結体残基及び連結体−細胞毒性分子上の求電子性基と反応して共有結合を形成することができる。これらの求電子性基には、（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロゲン化ギ酸エステル及び酸塩化物等の活性エステル；（ｉｉ）ハロアセトアミド等のハロゲン化アルキル化及びハロゲン化ベンジル；（ｉｉｉ）アルデヒド基、ケトン基、カルボキシル基及びマレイミド基が含まれる。ある抗体は、システイン架橋のような、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）又はトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）等の還元剤で処理することにより反応性を取得することができる還元性鎖内ジスルフィド結合を含む（Getz, et al.,Anal. Biochem., Vol 273, 73-80; Soltec Ventures, Beverly, Mass, 1999）。従って、理論的には、システイン架橋から２つの反応性チオール求核剤が形成される。あるいは、例えば、リジン残基と２−イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）とを反応させて、アミノ基をチオール基に変換することによりリジン残基を修飾して、スルフヒドリル基を抗体に導入することができる。反応性チオール基は、１、２、３、４又はより多いシステイン残基を導入することによって（例えば、一つの又は複数の非天然システインアミノ酸残基を含む変性抗体を得ることによって）、抗体に導入してもよい。従って、細胞結合分子上のフリーのチオール基は、細胞毒性分子又は本発明の連結体−細胞毒性分子中間体上のチオール反応性基、例えば、マレイミド、ヨードアセトアミド、ピリジルジスルフィド、又はその他のチオール反応性基と共役することができる。抗体上のいくつかの共役していないフリーのチオール基は、再び酸化されることによって、鎖間及び鎖内ジスルフィド結合を形成することができる。
【０１４３】
本発明の抗体−薬物共役体は、抗体上のアルデヒド又はケトン等のカルボニル基のような求電子性基と、連結体試薬又は薬物上の求核性基との反応により得てもよい。連結体試薬上の有用な求核性基には、ヒドラジド、オキシム、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボン酸エステル及びアリールヒドラジド基が含まれるが、これらに限らない。ある実施形態では、連結体試薬又は薬物上の求核性基と反応できる求電子性基を導入して抗体を修飾する。他の実施形態では、連結体試薬又は薬物残基のアミノ基と反応することができるアルデヒド又はケトン基を生成するために、グリコシル化抗体の糖を過ヨウ素酸塩等の酸化剤により酸化することができる。得られるイミンシッフ塩基は安定な接続を形成し、又は一つの安定な接着物は、ホウ化水素試薬等の還元剤により還元され、安定なアミン接続を形成することができる。ある実施形態では、グリコシル化抗体の炭水化物部分がガラクトースオキシダーゼ又はメタ過ヨウ素酸ナトリウムと反応することにより、薬物上の適切な基と反応することができるカルボニル基（アルデヒド及びケトン）を抗体内に生成してもよい（Hermanson, Bioconjugate Techniques）。他の実施形態では、Ｎ末端セリン又はスレオニン残基を含有する抗体とメタ過ヨウ素酸ナトリウムとを反応させ、最初のアミノ酸に代えてアルデヒドを生成することができる（Geoghegan, Stroh, Bioconjugate Chem., 1992, 3, 138-146; U.S. Pat. No. 5,362,852）。このようなアルデヒドは、薬物残基又は連結体の求核性基と反応することができる。
【０１４４】
前記２ステップ共役反応の例を以下に示す。
【化２４】
0006332773.tif 000044
0006332773.tif 000045
【０１４５】
式中、Ｅはヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ及びＳ−ＮＨＳ等）、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル（Ｓ−テトラフルオロフェニルエステルを含む）、酸無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネート及びイソチオシアネート等を含むが、これらに制限されない。Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立してＨ、ＣＨ３又はＣ２Ｈ５である；ＪはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、トルエンスルホン酸エステル基（ＴｓＯ）、メタンスルホン酸エステル基（ＭｓＯ）、ニトロフェノール基、ジニトロフェノール基、又はペンタフルオロフェノール基である。
【０１４６】
細胞接着分子（例えば、抗体）に複数の求核基がある場合、これが薬物−連結体中間体又は連結体試薬と反応した後、引き続き薬物残基試薬と反応すると、得られる生成物は、抗体上で一つの又は複数の薬物残基が分布している細胞結合分子−細胞毒性剤共役体の混合物であることが理解される。各抗体の平均薬物量は、抗体及び薬物に特異的である二重ＥＬＩＳＡ抗体測定法で測定できる。混合物中の個々の共役体分子は、質量スペクトル方法で同定することができ、疎水性クロマトグラフィー等のＨＰＬＣにより分離することができる。ある実施形態において、単一薬物担体を有する共役体は、電気泳動又はクロマトグラフィーにより混合物から分離することができる。
【０１４７】
共役体において、ＡＤＣの積載量（薬物／抗体の比）は、異なる方法、例えば、（ｉ）抗体に対する薬物−連結体中間体又は連結体試薬のモル量を制御すること；（ｉｉ）共役反応の時間又は温度を制御すること；（ｉｉｉ）システインチオールの部分を還元し、又は還元条件を制限すること；（ｉｖ）抗体エンジニアリング技術を通じて抗体のアミノ酸配列の組み換え、抗体上でリジン又はシステイン残基の数及び位置を修飾することによって、薬物−連結体結合部位の位置及び数を制御すること（例えば、エンジニアリング化チオール基抗体（thioMab）又はチオール基抗体結合ユニット（thioFab））によって制御することができる。
【０１４８】
その他の更なるＡＤＣの例示的な製造方法は、図５、１１、１２、１３、１４、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２及び２３並びに本願明細書における実施例に記載されている。
【０１４９】
細胞結合分子−薬物共役体の疾病治療への応用
本発明の細胞接着分子−薬物共役体、特に抗体−薬物共役体（ＡＤＣ）は、腫瘍抗原が過剰に発現することを特徴とするような、様々な疾患及び障害を治療できることが期待される。典型的な状態及び過剰増殖性障害には、良性及び悪性腫瘍、白血病及びリンパ性腫瘍が含まれ、その他に、ニューロン、グリア、アストロサイト、視床下部、腺体、マクロファージ、上皮、基質、胞胚、炎症、血管生成、及び自己免疫疾患を含む免疫系の関連疾患が含まれている。
【０１５０】
別の特定の実施形態において、本発明の共役体は、癌の治療のための本発明の組成物及び方法に用いられる。かかる癌は、これらに限定されるものではないが、副腎皮質癌、肛門癌、膀胱癌、脳腫瘍（成人、脳幹グリオーマ、子供、小脳星状細胞腫、脳星状細胞腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉性および松果体腫瘍、視覚路および視床下部膠腫）、乳癌、カルチノイド腫瘍、胃腸、原発不明癌腫、子宮頸癌腫、大腸癌腫、子宮内膜癌、食道癌、肝外胆管癌、ユーイング・ファミリー腫瘍（ＰＮＥＴ）、頭蓋外悪性胚細胞腫瘍、眼癌、眼内黒色腫、胆嚢癌、胃癌（胃）、胚細胞腫瘍、性腺外、妊娠栄養膜腫瘍、頭頸部癌、下咽頭癌、膵島細胞がんしゅ、腎臓癌（腎細胞癌）、喉頭癌腫、白血病（急性リンパ芽球性、急性骨髄性、慢性リンパ性、慢性骨髄性、毛様細胞）、口唇および口腔癌、肝臓癌、肺癌（非小細胞、小細胞、リンパ腫（ＡＩＤＳ関連、中枢神経系、皮膚Ｔ細胞、ホジキン病、非ホジキン病、悪性中皮腫、黒色腫、メルケル細胞癌腫、原発不明の転移性扁平首癌、多発性骨髄腫及びその他の形質細胞腫瘍、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖症候群、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔癌、咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌（上皮、生殖細胞腫瘍、低悪性ポテンシャル腫瘍）、膵臓癌（外分泌腺、膵島細胞癌）、副鼻腔および鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫癌、、下垂体癌、形質細胞腫、前立腺癌、横紋筋肉腫、直腸癌、腎細胞癌（腎癌）、腎盂及び尿管(移行細胞)、唾液腺癌、セザリー症候群、皮膚癌、皮膚癌（皮膚様Ｔ細胞リンパ腫、カポジ肉腫、黒色腫）、小腸癌、軟部組織肉腫、胃癌、精巣癌、胸腺腫（悪性）、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌（肉腫）、子供の異常な癌、膣癌、外陰癌、ウィルムス腫瘍を含む。
【０１５１】
別の特定実施例において、本発明の化合物及び共役体は、自己免疫疾患の治療又は予防に用いることができる。該自己免疫疾患には、自己免疫性胃酸欠乏慢性活動性肝炎、急性散在性脳脊髄炎、急性出血性白質脳炎、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、強直性脊椎炎、アンチ糸球体基底膜／管状の基底膜腎炎、抗リン脂質症候群、抗シンセターゼ症候群、関節炎、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性心筋症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ球増殖症候群、自己免疫性末梢神経系疾患、自己免疫性膵炎、複数の自己免疫性内分泌障害Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ型、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性ブドウ膜炎、バーロー病／バーロー同心性硬化症、ベーチェット病、Ｂｅｒｇｅｒ病、Ｂｉｃｋｅｒｓｔａｆｆ脳炎、Ｂｌａｕ症候群、水疱性類天疱瘡、キャッスルマン病、シャーガス病、慢性疲労性免疫機能障害症候群、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、慢性再発性多病巣性骨髄炎、慢性ライム病、慢性閉塞性肺疾患、アレルギー性肉芽腫性血管炎、瘢痕性類天疱瘡、セリアック病、コーガン症候群、寒冷凝集素症、補体成分Ｃ２欠損症、頭部動脈炎、クレスト症候群、クローン病（特発性炎症性腸疾患）、クッシング症候群、皮膚白血球破砕性血管炎、悪性萎縮性丘疹症、有痛脂肪症、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、1型糖尿病、びまん性皮膚強皮症、心筋梗塞症、円板状紅斑性狼瘡、湿疹、子宮内膜症、付着部炎関連関節炎、好酸球性筋膜炎、後天性表皮水疱症、結節性紅斑、特発性混合クリオグロブリン血症、エバンス症候群、進行性骨化性線維形成異常症、線維筋痛症、線維筋炎、線維化性肺胞隔炎、胃炎、消化管類天疱瘡、巨細胞性動脈炎、腎球体腎炎、グッドパスチャー症候群、バセドウ病、ギラン・バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、アレルギー性紫斑病、妊娠性疱疹、化膿性汗腺炎、ヒューズ症候群（抗リン脂質抗体症候群）、低ガンマグロブリン血症、特発性炎症性脱髄疾患、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（自己免疫性血小板減少性紫斑病）、ＩｇＡ腎症（Ｂｅｒｇｅｒ病）、封入体筋炎、炎症性脱髄性多発性神経障害、間質性膀胱炎、過敏性腸症候群、若年性特発性関節炎、若年性関節リウマチ、皮膚粘膜リンパ節症候群、ランバート・イートン筋無力症候群、白血球破壊性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、リニアＩｇＡ疾患（ＬＡＤ）、ルー・ゲーリッグ病（筋萎縮性側索硬化症）、狼瘡様肝炎、紅斑性狼瘡、ブラウ症候群、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、ミラー・フィッシャー症候群、混合結合組織病、強皮症、ミュシャ−ヤコブ病、マックル・ウェルズ症候群、多発性骨髄腫、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎（デビック病）、神経性筋、眼瘢痕性類天疱瘡、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、オード甲状腺炎、回帰性リウマチ、パンダ症候群（合併連鎖球菌感染症の児童自己免疫神経精神障害）、腫瘍小脳変性症、発作性夜間血色素尿症、パリー・ロンベルク症候群、パーソネージ−ジョージア症候群、扁平部炎症、天疱瘡、尋常性天疱瘡、悪性貧��、静脈周囲性脳脊髓炎、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発筋痛、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、進行性炎症性神経障害、乾癬、乾癬性関節炎、壊疽性膿皮症、純赤血球無形成性貧血、ラスムッセン脳炎、レイノー病、再発性多発性軟骨炎、ライター症候群、下肢静止不能症候群、後腹膜線維症、関節リウマチ、リウマチ熱、サルコイドーシス、統合失調症、シュミット症候群、シュニッツラー症候群、強膜炎、強皮症、シェーグレン症候群、脊椎関節症、粘着性血症候群、スティル病、スティッフパーソン症候群、亜急性細菌性心内膜炎、スザック症候群、急性熱性好中球皮膚病、シデナム舞踏病、交感性眼炎、高安動脈炎、側頭動脈炎（巨細胞性動脈炎）、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎（特発性炎症性腸疾患）、未分化結合組織病、未分化脊椎関節症、血管炎、白斑、ウェゲナー肉芽腫症、ウィルソン症候群、ブルック・ウェストコット−アルドリッチ症候群が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５２】
その他の特定の実施例において、自己免疫疾患の治療又は予防用の共役体のために用いる結合分子には、抗エラスチン抗体；Ａｂｙｓ抗上皮細胞抗体；抗基底膜のＩＶ型コラーゲンタンパク質抗体；抗核抗体；抗二本鎖ＤＮＡ抗体、抗一本鎖ＤＮＡ抗体、抗カルジオリピン抗体ＩｇＭ、ＩｇＧ；抗セリアック抗体；抗リン脂質抗体ＩｇＫ、ＩｇＧ；抗ＳＭ抗体；抗ミトコンドリア抗体；甲状腺抗体；微粒体抗体、Ｔ細胞抗体；チログロブリン抗体、抗強皮症−７０抗体（ＡｎｔｉＳＣＬ−７０）；抗ジョー抗体（Ａｎｔｉ−Ｊｏ）、抗Ｕ１ＲＮＰ抗体（Ａｎｔｉ−Ｕ１ＲＮＰ）；抗Ｌａ／ＳＳＢ抗体；抗ＳＳＡ抗体；抗ＳＳＢ抗体；抗壁細胞抗体；抗ヒストン抗体；抗ＲＮＰ抗体；Ｃ−ＡＮＣＡ；Ｐ−ＡＮＣＡ；抗セントロメア抗体；抗フィブリン抗体、抗ＧＢＭ抗体、抗ガングリオシド抗体；抗デスモソーム糖タンパク質３コア抗体（ａｎｔｉ−Ｄｅｓｍｏｇｅｉｎ３）；抗ｐ６２抗体；抗ｓｐ１００抗体；抗ミトコンドリア（Ｍ２）抗体；リウマチ因子抗体；抗ＭＣＶ抗体；抗トポイソメラーゼ抗体；抗好中球細胞質（ｃＡＮＣＡ）抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５３】
いくつかの好ましい実施形態において、本発明の共役体に用いる結合分子は、自己免疫疾患に関連する活性化リンパ球によって発現された受容体又は受容体複合体と結合することができる。受容体又は受容体複合体は、例えば、免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーのメンバー（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ７９、ＣＤ９０、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、又はＩＣＯＳ）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリー（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ９５／Ｆａｓ、ＣＤ１３４／ＯＸ４０、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＩＮＦ−Ｒ１、ＴＮＦＲ−２、ＲＡＮＫ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、オステオプロテゲリン、Ａｐｏ２／ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、及びＡＰＯ−３）、インテグリン、サイトカイン受容体、ケモカイン受容体、主要組織適合性タンパク質、レクチン（Ｃ型、Ｓ型、若しくはＩ型）、又は補体調節タンパク質が挙げられる。
【０１５４】
別の具体的な実施形態において、ウイルス抗原又は細菌抗原に対して免疫特異性を有する有用な結合リガンドは、ヒト化又はヒトモノクローナル抗体である。本文で用いられている用語の「ウイルス抗原」には、免疫応答を誘発し得る如何なるウイルスペプチド、ポリペプチドタンパク質（例えば、ＨＩＶｇｐ１２０，ＨＩＶｎｅｆ，ＲＳＶ  Ｆ糖タンパク質、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ、インフルエンザウイルス血球凝集素、ＨＴＬＶｔａｘ、単純ヘルペスウイルス糖タンパク質（例えば、ｇＢ、ｇＣ、ｇＤ及びｇＥ）、及びＢ型肝炎表面抗原）が含まれるが、これらに限定されない。本文に用いられている用語の「細菌抗原」には、免疫応答を誘発し得る如何なる微生物ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、糖類、多糖、又は脂質分子（例えば、細菌、真菌、病原性原生動物、酵母ポリペプチド（例えば、ＬＰＳ及び５／８））が含まれるが、これらに限定されない。ウイルス又は細菌感染症の治療に有用なI型抗体には、パリビズマブ（ＲＶＳ感染の治療に用いられヒト化抗呼吸器合胞体ウイルスモノクローナル抗体）、ＰＲＯ５４２（ＨＩＶ感染の治療に用いるＣＤ４融合抗体）、Ｏｓｔａｖｉｒ（Ｂ型肝炎ウイルスの治療に用いるヒト抗体）、ＰＲＯＴＶＩＲ（サイトメガロウイルスの治療に用いるヒト化抗体ＩｇＧ１抗体）、及び抗ＬＰＳ抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５５】
本発明の結合分子−細胞毒性剤共役体は、伝染性疾患の治療に用いることができる。該伝染性疾患は、アシネトバクター感染症、放線菌症、アフリカ眠り病（アフリカトリパノソーマ症）、ＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）、アメーバ症、アナプラズマ、炭疽菌、細菌結核感染、アルゼンチン出血熱、回虫症、アスペルギルス症、アストロウイルス感染症、バベシア症、セレウス菌感染症、細菌性肺炎、細菌性膣炎、バクテロイデス感染、バランチジウム症、ベイリー線虫回虫感染症、ＢＫウイルス感染、黒色砂毛、ブラストシスホミニス感染症、ブラストミセス、ボリビア出血熱、ボレリア感染症、ボツリヌス中毒（および乳児ボツリヌス症）、ブラジル出血熱、ブルセラ症、バークホルデリア感染症、ブルーリ潰瘍、感染カリシウイルス（ノロウイルス、サポウイルス）、カンピロバクター感染症、カンジダ感染症（カンジダ症、鵞口瘡）、キャット・スクラッチ病、蜂巣炎、シャーガス病（アメリカトリパノソーマ症）、軟性下疳、水痘、衣原体、肺炎衣原体感染、霍乱、着色真菌症、肝吸虫病、クロストリジウム・ディフィシル感染症、コクシジオイデス症、コロラドダニ熱、風邪（急性ウイルス性鼻咽頭炎、急性鼻炎）、クロイツフェルト・ヤコブ病、クリミア−コンゴ出血熱、クリプトコッカス、クリプトスポリジウム、皮膚幼虫移行、シクロスポラ感染症、嚢虫症、サイトメガロウイルス感染、デング熱、二核アメーバ症、ジフテリア、裂頭条虫症、メジナ虫症、エボラ出血熱、包虫症、エールリヒア症、蟯虫（蟯虫感染症）、腸球菌感染症、エンテロウイルス感染症、発疹チフス、伝染性紅斑（第五病）、子供急性発疹、肥大吸虫症、片吸虫病、致死性家族性不眠症、フィラリア症、ウェルシュ菌によって引き起こされる食中毒、非寄生アメーバ感染症、フゾバクテリウム感染症、ガス壊疽（クロストリジウム筋壊死）、ジオトリクム症、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群、ランブル鞭毛虫症、鼻疽、顎口虫症、淋病、鼡径部肉芽腫(ドノヴァン症)、Ａ群連鎖球菌感染症、Ｂ群連鎖球菌感染症、インフルエンザ菌感染症、手足口病（ＨＦＭＤ）、ハンタウイルス肺症候群、ヘリコバクターピロリ感染、溶血性尿毒症症候群、腎症候性出血熱、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、単純ヘルペス、ヒストプラスマ症、鉤虫感染、人間バルカンウイルス感染、人間エールリヒア症エバンス、ヒト顆粒球アナプラズマ症、ヒトメタニューモウイルス感染症、ヒト単球性エー. リキア症、ヒト乳頭腫ウイルス感染、ヒトパラインフルエンザウイルス感染、小形条虫症、インフルエンザ、イソスポーラ症、川崎病、単核（球）症、キム菌感染、クールー、ラッサ熱、レジオネラ症（在郷軍人症）、レジオネラ症（ポンティアック熱）、リーシュマニア症、ハンセン病、レプトスピラ症、リステリア症、ライム病（ライムボレリア）、リンパフィラリア症（象皮病）、リンパ球性脈絡髄膜炎、マラリア、マールブルグ出血熱、麻疹、類鼻疽（ホイットモア病）、髄膜炎、髄膜炎菌性疾患、メタゴニムス症、微胞子虫症、伝染性軟属腫、流行性耳下腺炎、発疹チフス（風土病発疹チフス）、マイコプラズマ肺炎、菌腫、ハエ病、新生児結膜炎（新生児眼炎）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖ��ＪＤ，ｎｖＣＪＤ）、ノカルジア症、オンコセルカ症（失明性のフィラリア症）、副コクシジオイデス症（南米ブラストミセス）、肺吸虫症、パスツレラ病、アタマジラミ（アタマジラミ）、ボディシラミ病（ボディシラミ）、ケジラミ病（ケジラミ、Ｃｒａｒｂ  ｉｃｅ）、骨盤内炎症性疾患、百日咳（Ｗｏｏｐｉｎｇ  ｃｏｕｇｈ）、疫病、肺炎球菌感染症、カリニ肺炎、肺炎、ポリオ、プレボテラ感染症、ＰＡＭＥ、進行性多巣性白質脳症、オウム病、Ｑ熱、狂犬病、ラット咬傷発熱、呼吸器合胞体ウイルス感染、ライノウイルス感染、リケッチア感染症、リケッチア、リフトバレー熱、ロッキー山紅斑熱、ロタウイルス感染症、風疹、サルモネラ症、ＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）、疥癬、住血吸虫症、敗血症、下痢（赤痢）、帯状疱疹（Ｈｅｒｐｅｓ  ｚｏｓｔｅｒ）、天然痘、スポロトリクム、ブドウ球菌食中毒、ブドウ球菌感染、線虫、梅毒、条虫症、破傷風（開口障害）、白癬性毛瘡（Ｂａｒｂｅｒ’ｓ  ｉｔｃｈ）、手部白癬、黒色ひこう疹、足部白癬、爪白癬、癜風、トキソカラ症（眼幼虫移行症）、トキソカラ症（内臓幼虫移行症）、トキソプラズマ症、旋毛虫、トリコモナス症、クリプトビオシス（鞭虫感染症）、肺結核症、野兎病、尿素分解尿素マイコプラズマ感染、ベネズエラウマ脳炎、ベネズエラ出血熱、ウイルス性肺炎、ウエストナイル熱、白髪根粒菌病、偽結核菌感染症、エルシニア症、黄熱病、接合菌症を含むが、これらに限定されない。
【０１５６】
結合分子としてより好ましくは、本願に記載された病原性株に対する抗体であり、該病原性株には、アシネトバクター・バウマニ、アクチオマイセス・イスラエリー、アクチノマイセス・ゲレンセリアエ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｇｅｒｅｎｃｓｅｒｉａｅ）、プロピオニバクテリウム・プロピオニカス、トリパノソーマ・ブルーセイ、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、赤痢アメーバ、アナプラズマ属、炭疽菌、メチルスヘモリティクム（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ）、フニンウイルス、回虫、アスペルギルス、アストロウイルス科、バベシア属、セレウス菌細菌属、マルチプル・バクテリア、バクテロイデス属、結腸ポーチ繊毛虫、ベイリー回虫線虫属、ＢＫウイルス、ピエドライア・ホルタエ（Ｐｉｅｄｒａｉａｈｏｒｔａｅ）、ブラストシスティス・ホミニス、皮炎芽生菌病、マクポ・ウイルス、ボレリア属、ボツリヌス菌、サビア、ブルセラ属、通常バークホルデリア・セパシア及び他のバークホルデリア種、マイコバクテリウム・ウルセランス、カリシウイルス科ファミリー、カンピロバクター菌、通常カンジダ・アルビカンス及び他のカンジダ種、バルトネラ・ヘンセラ菌（英：Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｈｅｎｓｅｌａｅ）、Ａ群連鎖球菌及びブドウ球菌、クルーズトリパノソーマ、軟性下疳菌、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、クラミジア・トラコマチス、クラミジア・ニューモニエ、コレラ菌、フォンセカエ・ペドロソイ、肝吸虫症、クロストリジウム・ディフィシレ、コクシジオイデス・イミティス、コクシジオイデス・ポサダシ、コロラドダニ熱ウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、クロイツフェルト・ヤコブ病・プリオン、クリミア - コンゴ出血熱ウイルス、クリプトコックス・ネオフォルマンス、クリプトスポリジウム属、猫鉤虫、共寄生虫、シクロスポラ、有鉤条虫、サイトメガロウイルス、デング熱ウイルス（ＤＥＮ−１、ＤＥＮ−２、ＤＥＮ−３及びＤＥＮ−４）−フラビウイルス、双核アメーバ、コリネバクテリウム・ジフテリア、裂頭条虫属、メジナ虫（Ｄｒａｃｕｎｃｕｌｕｓｍｅｄｉｎｅｎｓｉｓ）、エボラウイルス、エキノコックス属、エーリキア属、蟯虫、エンテロコッカス属、エンテロウイルス属、発疹チフス・リケッチア、パルボウイルスＢ１９、ヒトヘルペスウイルス６型、ヒトヘルペスウイルス７型、肥大吸虫、肝蛭及び巨大肝蛭、ＦＦＩプリオン、フィラリアヘッド上科、ウェルシュ菌、フソバクテリウム、ウェルシュ菌、他のクロストリジウム属、ゲオトリクムカンジドウム、ＧＳＳプリオン、ランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａ）、バークホルデリア鼻疽菌、顎口顎線虫、剛棘顎口虫、淋菌、肉芽腫菌、化膿連鎖球菌、ストレプトコッカス・アガラクティエ、インフルエンザ菌、腸内ウイルス、ほとんどのコクサッキーA型ウイルス、腸内ウイルス７１型、シンノンブルウイルス、ヘリコバクター・ピロリ、大腸菌Ｏ１５８：Ｈ７、ブニヤウイルス科、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、ヒストプラスマ・カプスラーツム、十二指腸鉤虫、アメリカ鉤虫、インフルエンザ菌、ボカ人間ウイルス、エーリキア・エウィンギ（Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ  ｅｗｉｎｇｉｉ）、アナプラズマ・ファゴサイトフィルム、ヒトメタニューモウイルス、エールリッヒア・シャフェンシス、ヒトパピローマウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス、矮小条虫、縮小条虫、エプスタイン・バー・ウイルス、オルトミクソウイルス科、イソスポーラ・ベリ（Ｉｓｏｓｐｏｒａ  ｂｅｌｌｉ）、キンゲラ・キンゲ（Ｋｉｎｇｅｌｌａ  ｋｉｎｇａｅ）、肺炎桿菌、クレブシエラオツェーナ、クレブシエラリノシェレロモーティス（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｒｈｉｎｏｓｃｌｅｒｏｍｏｔｉｓ）、クーループリオン、ラッサ熱ウイルス、レジオネラ・ニューモフィラ、レジオネラ・ニューモフィラ、リーシュマニア、ハンセン菌とマイコバクテリウム・レプロマトーシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ）、レプトスピラ属、リステリア菌、ボレリア病及び他のボレリア種、バンクロフト糸状虫及びマレー糸状虫、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、プラスモジウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｇｅｎｕｓ）、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、偽鼻疽菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ）、髄膜炎菌、横川吸虫、微胞子虫門、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ムンプスウイルス、リケッチア・チフィ、マイコプラズマ・ニューモニエ、種々の細菌（アクチノミセトーマ）及び真菌（真菌性菌腫）、寄生ハエの幼虫の双翅目、クラミジア・トラコマチスや淋菌、ｖＣＪＤプリオン、ノカルジア・アステロイデス及び他のノカルジア種、回旋糸状虫、ブラジルブラストミセス、肺吸虫およびその他の肺吸虫属、パスツレラ属、アタマジラミ、コロモジラミ、フチルス・プビス（Ｐｈｔｈｉｒｕｓｐｕｂｉｓ）、百日咳菌、ペスト菌、肺炎球菌、ニューモシスチス嚢虫症、ポリオウイルス、プレボテラ属、ネグレリアのアメーバ、ＪＣウイルス、オウム病クラミジア、コクシエラ・バーネッティ、狂犬病ウイルス、ビーズチェーン大腸菌及びラット咬傷発熱スピロヘータ、呼吸器ＲＳウイルス、リノスポリジウム・セーベリ、ライノウイルス、リケッチア属、リケッチアダニ、リフトバレー熱ウイルス、ロッキー山紅斑熱リケッチア、ロタウイルス、風疹ウイルス、サルモネラ属、非定型肺炎コロナウイルス、疥癬ダニ、住血吸虫属、赤痢菌、水痘帯状疱疹ウイルス、大痘瘡又は小痘瘡、スポロトリックス・シェンキー、ブドウ球菌属、黄色ブドウ球菌、化膿連鎖球菌、糞線虫、梅毒スピロヘータ、条虫属、破傷風菌、白癬、トリコフィトン・トンズランス、白癬、エピデルモフィト. ン・フロッコースム、紅色白癬菌及び毛瘡白癬菌、紅色白癬菌、ホルテア・ウェルネッキ、白癬、マラセチア属、イヌ回虫や猫回虫、トキソプラズマ、旋毛虫、膣トリコモナス、鞭虫、結核菌、トゥーラホットフランシス細菌、ウレアプラズマ・ウレアリティカム、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、コレラ菌、グアナリトウイルス、西ナイルウイルス、白髪胞子菌、仮性結核菌、腸炎エルシニア、黄熱病ウイルス、ケカビ目（ムコール症）と昆虫メッシュカビ（エントモフトラ症）、緑膿菌、カンピロバクター胎児（ビブリオ）、アエロモナス細菌、エドワードシエラ属.タルダ、ペスト菌、志賀赤痢菌、赤痢��、赤痢ソンネ、ネズミチフス菌、トレポネーマ・ペルテヌエ、トレポネーマカラテネウム、フェンセンブルグドルフェリ、ボレリア・ブルグドルフェリ、レプトスピラ出血性黄疸、ニューモシスチスカリニ、ウシ流産菌、ブタ流産菌、マルタ熱菌、マイコプラズマ属、発疹チフスリケッチア、リケッチアツツツガムシ、クラミジア属、病原性真菌（アスペルギルス・フミガーツス、カンジダ・アルビカンス、ヒストプラスマカプスラーツム）；原虫（赤痢アメーバ、膣トリコモナス、人トリコモナス、トリパノソーマガンビエンス、ローデシアトリパノソーマ、ドノバンリーシュマニア、リーシュマニア熱帯、リーシュマニアブラジル、ニューモシスチスカリニ肺炎、三日熱マラリア原虫、熱帯熱マラリア原虫、悪性マラリア）；又は蠕虫（日本住血吸虫、マンソン住血吸虫、ビルハルツ住血吸虫と鉤虫）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５７】
ウイルス性疾患を治療するために本願発明で用いられる結合リガンドとしての他の抗体には、これらには限られないが、病原性ウイルスの抗原に対する抗体が含まれ、該病原性ウイルスには、これらには限れらないが、ポックスウイルス科（Ｐｏｘｙｉｒｉｄａｅ）、ヘルペスウイルス科、アデノウイルス科、パポバウイルス科、エンテロウイルス科、ピコナウイルス科、パルボウイルス、レオウイルス、レトロウイルスファミリー、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎、麻疹、呼吸器合胞体ウイルス、風疹、アルボウイルス、ラブドウイルス、アレナウイルス科、非Ａ／非Ｂ型肝炎ウイルス、ライノウイルス、コロナウイルス、ロタウイルス、腫瘍ウイルス［例えば、ＨＢＶ（肝細胞癌）、ＨＰＶ（子宮頸癌、肛門癌）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（カポジ肉腫）、ＥＢウイルス（鼻咽頭癌、バーキットリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫）、ＭＣＰｙＶ（メルケル細胞癌）、ＳＶ４０（シミアンウイルス４０）、ＨＣＶ（肝細胞癌）、ＨＴＬＶ−Ｉ（成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫）］；ウイルスによって引き起こされる免疫疾患：［例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＡＩＤＳ）］、中枢神経系ウイルス：［例えば、ＪＣＶ（進行性多巣性白質脳症）、ＭｅＶ（亜急性硬化性全脳炎）、ＬＣＶ（リンパ球性脈絡髄膜炎）、アルボウイルス脳炎、オルトミクソウイルスウイルス科（推定）（嗜眠性脳炎）、ＲＶ（狂犬病）、水疱性口内炎、ヘルペスウイルス性髄膜炎、ラムゼイ・ハント症候群ＩＩ型；ポリオウイルス（急性灰白髄炎、ポリオ後症候群）、ＨＴＬＶ−Ｉ（熱帯性痙性麻痺）］；サイトメガロウイルス（ＣＭＶ網膜炎、ＨＳＶ（ヘルペス性角膜炎））；心血管病ウイルス［例えば、ＣＢＶ（心膜炎、心筋炎）］；呼吸器系／急性鼻咽頭炎／ウイルス性肺炎：［ＥＢウイルス（ＥＢＶ感染症／伝染性単核球症）、サイトメガロウイルス、ＳＡＲＳコロナウイルス（重症急性呼吸器系症候群）、オルトミクソウイルスウイルス科：インフルエンザウイルスＡ／Ｂ／Ｃ（インフルエンザ／鳥インフルエンザ）、パラミクソウイルス：ヒトパラインフルエンザウイルス（パラインフルエンザ）、ＲＳＶ（ヒト呼吸器合胞体ウイルス）、ｈＭＰＶ］；消化器系ウイルス［ＭｕＶ（流行性耳下腺炎）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ性食道炎）；アデノウイルス（アデノウイルス感染）；ロタウイルス、ノロウイルス、アストロウイルス、コロナウイルス、ＨＢＶ（Ｂ型肝炎ウイルス）、ＣＢＶ、ＨＡＶ（Ａ型肝炎ウイルス）、ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）、ＨＤＶ（Ｄ型肝炎ウイルス）、ＨＥＶ（Ｅ型肝炎ウイルス）、ＨＧＶ（Ｇ型肝炎ウイルス）］；泌尿生殖器系ウイルス［例えば、ＢＫウイルス、ＭｕＶ（流行性耳下腺炎）］を含む。
【０１５８】
更なる目的によれば、本願発明は、本願発明の共役体及び薬学的に受け入れられる担体を共に含む、癌及び自己免疫疾患を治療するための医薬組成物にも関する。癌、自己免疫疾患、感染性疾患、又はウイルス性疾患を治療するための方法は、インビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）、インビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）又はエクスビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）で実行することができる。インビトロ療法の例としては、目標抗原を発現しない望ましい変異体以外の全ての細胞を死滅させるため、又は所望でない抗原を表現する変異体を死滅させるための細胞培養処理を含む。エクスビボ療法の例としては、移植の実行に先立って造血幹細胞（ＨＳＣ）を処理し、患部又は悪性細胞を殺すために、これを同一患者の体内へ戻すことを含む。例えば、癌及び自己免疫疾患の治療における自家移植に先立って、骨髄から癌細胞又はリンパ球細胞を除去するための、又は移植片対宿主病を防ぐために、移植に先立って、同種異系の骨髄又は組織からＴ細胞及び他のリンパ細胞を除去するための臨床的エキソビボ処理は、以下により実施することができる。患者又は他の個体から骨髄細胞を獲得した後、濃度範囲が１ｐＭ〜０．１ｍＭとなるように、本願発明の共役体を加えた血清含有培地で、３７℃で３０分間〜約４８時間培養する。的確な濃度条件及び培養時間（＝用量）は、経験豊富な臨床医によって容易に決められる。培養終了後、骨髄細胞を血清含有培地で洗浄し、静脈内注射等の既知の方法によって人体へ戻す。骨髄細胞の獲得及び再注入治療の間に、患者が他の治療（例えば、廃絶化学療法又は全身照射）を受けている場合、処理後の骨髄細胞は、標準的な医療装置を用いた液体窒素により冷凍保存される。
【０１５９】
インビボ臨床適用において、本発明の細胞結合分子−細胞毒性分子の共役体は、溶液の形式又は注射のために滅菌水に再溶解することができる凍結乾燥固体の形式で提供されている。適切な共役体の投与方法の例は下記のとおりである。８週間にわたって、共役体を毎週１回急速静脈投与注入する。急速投与量を５０〜５００ｍＬの生理食塩液に溶解させ、生理食塩液にヒト血清アルブミンを加えることができる（例えば、０．５〜１ｍｌの濃縮ヒト血清アルブミン溶液を１００ｍｇ／ｍｌ）。薬剤投与量は約５０μｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ体重・週であり、静脈注射（毎回の注射量が１０μｇ〜２００ｍｇ／ｋｇの範囲）である。８週間の治療が終了後、患者は、第２のコースの治療を受け入れることができる。投与経路、賦形剤、希釈剤、投与量、治療期間を含め、詳細な治療方法は、経験ある外科医によって決定することができる。
【０１６０】
インビボ又はエクスビボ法によって細胞群を選択的に死滅させることにより疾患を治療する例としては、いずれかの種類の癌、自己免疫疾患、移植拒絶反応、及び感染症（ウイルス、細菌または寄生虫を含む）がある。
【０１６１】
複数の要素に起因して、理想の生物学効果に必要な共役薬物の量は異なる。これら要素は、化合物の性質、有効性及び共役薬物の生物利用度、疾患の類型、患者の人種、患者の病的状態、並びに投与経路を含み、これらの要素を共同して、投与スケジュール及び投与経路が決定される。
【０１６２】
一般論として、本発明の連結体を介した共役体は、０．１〜１０％ｗ／ｖの濃度で該共役体を含むように、生理的緩衝液に溶解した非経口投与のための製剤であってもよい。典型的な用量の範囲は、１日あたり１μｇ／ｋｇ体重〜０．１ｇ／ｋｇ体重であり、好ましい用量の範囲は、１日あたり０．０１ｍg ／ｋｇ体重〜２０ｍｇ／ｋｇ体重か、或いは児童用量と等価量である。好ましい薬物投与量は、例えば、疾患又は障害の進行の型及び程度、個々の患者の全体的な健康状態、選択された薬物の相対的な生物学的活性、化合物の剤形、投与様式（静脈内、筋肉内、又はその他）、選択された投与様式における薬物の薬物動態学的特性、並びに投与速度（単回注射又は連続注入）及び投与スケジュール（一定時間内に投与の頻度）等の変数に適切に依存する。
【０１６３】
本発明の連結体を介した共役体は、単位剤量で投与することもでき、ここで、「単位剤量」とは、一人の患者に投与される一回の用量を意味し、簡単で便利な包装とするで使用することができ、活性な共役体自体又は後述の薬学的に許容される組成物として物理的及び化学的に安定な単位剤量を維持している。そのため、典型的な一日投与量の範囲は、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇである。一般に単位剤量は、一日あたり１〜３０００ｍｇの範囲である。単位剤量として好ましくは、１ｍｇ〜５００ｍｇを１日１〜４回投与することであり、更に好ましくは、１０ｍｇ〜５００ｍｇを１日１回投与することである。ここで与えられた共役体は、１種以上の薬学的に許容される賦形剤を医薬組成物に添加することによって調製することができる。単位剤量の薬剤は、経口投与のために、錠剤、単純カプセルまたは軟カプセルとして；鼻腔内投与のために、粉末、点鼻剤、またはエアロゾルとして；または、皮膚投与のために、例えば軟膏、クリーム、ローション、ゲルまたはスプレーまたは皮膚パッチとして投与されることができる。組成物は、好都合には単位剤形で投与することができ、任意の薬学の技術分野における公知の方法で用意することができ、例えば、「Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21th ed.; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005年」に記載の方法を参照できる。
【０１６４】
本願発明の化合物を含む医薬組成物の薬物剤型は、経口投与又は非経口投与用に製剤されていることが好ましい。例えば、錠剤、丸薬（ピル）、粉末、カプセル、トローチ等の経口投与製剤は、以下の原料又は類似の性質を有する他の化合物の１以上を含むことができる：微結晶性セルロース又はトラガカントゴム等の結合剤；デンプン又はラクトース等の希釈剤；デンプン及びセルロース誘導体等の分散剤；ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤；コロイド状シリカ等の滑剤；スクロース又はサッカリン等の甘味剤；ペパーミント又はサリチル酸メチル等の着香剤。カプセルは、硬質又は軟質の形式で、ゼラチンの混合により、あるいは任意に可塑剤との混合で得られ、デンプンカプセルも同様に得られる。更に、投与単位は、その物理的形態を改変するために、例えば、糖衣、シェラック又は腸溶剤等の様々な異なる材料を含めることができる。シロップ又はエリキシル剤等の他の経口剤形は、甘味剤、保存剤、顔料、着色剤及び調味剤を含むことができる。更に、活性化合物は、別の処理及び製剤で速溶性剤形、徐放性又は持続放出剤形を製造することができ、好ましくは、剤形が持続放出剤形である。好ましい錠剤製剤は、混合物で、ラクトース、コーンスターチ、ケイ酸マグネシウム、クロスカルメロースナトリウム、ポビドン、ステアリン酸マグネシウム、若しくはタルク又はその組み合わせを含有する。
【０１６５】
非経口投与用の液体製剤は、無菌の水性又は非水性溶液、懸濁液及びエマルションが挙げられる。液体薬剤は、結合剤、緩衝剤、防腐剤、キレート剤、甘味剤、香味剤及び着色剤等を含有してもよい。非水性溶媒には、アルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、及びオレイン酸エチル等の有機酸エステルが含まれる。水性担体には、水及びエタノールの混合物、緩衝剤並びに生理食塩水が含まれる。特に、生体適合性、生分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコライドコポリマー、又はポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレンコポリマーは、活性化合物の放出を制御する原料として使用することができる。静脈投与用の媒体には、流体並びに栄養補充液及びリンゲルデキストロース（Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ  ｄｅｘｔｒｏｓｅ）に基づく電解質補充液等が含まれる。これらの活性化合物のための他の可能な非経口送達系には、エチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、移植可能な注入システム、及びリポソームが含まれる。
【０１６６】
選択的な他の投与方法は吸入剤を含み、吸入剤は乾燥粉末、エアロゾル及び滴剤を含む。吸入剤は、例えば、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココール酸塩、デオキシコール酸塩を含む水溶液又は点鼻用液滴の形態又は鼻腔内適用のためのゲルとして投与するための油性溶液でもよい。口腔内投与用製剤、例えば錠剤又はトローチ剤は、スクロース又はアラビアゴム等の風味剤及びグリココール酸等のその他の添加剤を含有してもよい。直腸投与に適した製剤は、好ましくは、例えば、カカオバター等の固体基剤を含み、サリチル酸を含んでもよい単位投与の坐剤として与えられる。皮膚局所用製剤として好ましくは、軟膏、クリーム、ローション、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾル又はオイルの形態が好ましい。基剤としてワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール及びアルコール並びにそれらの混合物を含む。経皮投与に適した製剤は、別々のパッチとして与えることができ、また、親油性エマルジョン、緩衝液、水溶液、ポリマー又は接着剤に溶解または分散することができる。
【０１６７】
特定の実施態様において、本発明の細胞結合分子−細胞毒性剤共役体は、他の公知の又は公知となるであろう薬物、例えば、化学療法剤、放射線療法、免疫療法剤、自己免疫疾患治療薬、抗感染薬、又は他の抗体薬物共役体と同時に投与することにより、相乗効果を達成する。別の特定の実施態様において、相乗薬物又は放射線療法は、本発明の共役体の投与に先立って又は続いて投与又は施行することができ、ある局面では、少なくとも１時間、１２時間、１日、１週間、１ヶ月間、更に数か月、本発明の共役体に先立って又は続いて投与される。
【０１６８】
他の実施形態において、相乗効果を奏する薬物は、下記のものを含むが、これらに限定されない。
【０１６９】
１）化学療法剤：ａ）アルキル化剤：例えば、ナイトロジェンマスタード（クロラムブシル、シクロホスファミド、イホスファミド、メクロメタミン、メルファラン、トロホスファミド）；ニトロソ尿素化合物：（カルムスチン、ロムスチン）；アルキルスルホネート（ブスルファン、トレオスルファン）；トリアゼン（ダカルバジン）；白金含有化合物：（カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン）；ｂ）植物アルカロイド：例えば、ビンカアルカロイド類：（ビンクリスチン，ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン）; タキソイド類：（パクリタキセル、ドセタキセル）；ｃ）ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤：例えば、［エピポドフィリン類：（９−アミノカンプトテシン、カンプトテシン、クリスナトール、エトポシド、リン酸エトポシド、イリノテカン、テニポシド、トポテカン；マイトマイシン類：（マイトマイシンＣ）］；ｄ）代謝拮抗剤：例えば、｛［抗葉酸：ＤＨＦＲ阻害剤：（メトトレキサート、トリメトレキサート）；ＩＭＰデヒドロゲナーゼ阻害剤（ミコフェノール酸、チアゾフリン、リバビリン、ＥＩＣＡＲ）；リボヌクレオチド還元酵素阻害薬（ヒドロキシウレア、デフェロキサミン）］；［ピリミジン類似体：ウラシル類似体（５−フルオロウラシル、ドキシフルリジン、フロクスウリジン、ラチトレキセド（トミュデックス））；シトシン類似体：（シタラビン、シトシンアラビノシド、フルダラビン）；プリン類似体：（アザチオプリン、メルカプトプリン、チオグアニン）］；ｅ）ホルモン療法剤：例えば、｛受容体拮抗薬：［抗エストロゲン：（メゲストロール、ラロキシフェン、タモキシフェン）；ＬＨＲＨアゴニスト：（ゴセレリン、酢酸リュープロリド）；抗アンドロゲン：（ビカルタミド、フルタミド）］；レチノイド類／三角筋：［ビタミンＤ３類似体：（ＣＢ１０９３、ＥＢ１０８９、ＫＨ１０６０、コレカルシフェロール、エルゴカルシフェロール）；光線力学的療法剤：（ベルテポルフィン、フタロシアニン、光増感剤Ｐｃ４、デメトキシ−ヒポクレリンＡ）；サイトカイン類：（インターフェロンα、インターフェロンγ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＴＮＦドメイン含有ヒトタンパク質）］｝；ｆ）キナーゼ阻害剤：例えば、ＢＩＢＷ２９９２（抗ＥＧＦＲ／Ｅｒｂ２）、イマチニブ、ゲフィチニブ、ペガプタニブ、ソラフェニブ、ダサチニブ、スニチニブ、エルロチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、アキシチニブ、パゾパニブ、バンデタニブ、Ｅ７０８０（抗ＶＥＧＦＲ２）、ムブリチニブ、ポナチニブ（ＡＰ２４５３４）、バフェチニブ（ＩＮＮＯ−４０６）、ボスチニブ（ＳＫＩ−６０６）、カボザンチニブ、ビスモデギブ、イニパリブ、ルキソリチニブ、ＣＹＴ３８７、アキシチニブ、チボザニブ、ソラフェニブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、トラスツズマブ、ラニビズマブ、パニツムマブ、イスピネシブ；ｇ）その他：ゲムシタビン、エポキソミシン類（例えば、カルフィルゾミブ）、ボルテゾミブ、サリドマイド、レナリドミド、ポマリドマイド、トセドスタット、ザイブレスタット、ＰＬＸ４０３２、ＳＴＡ−９０９０、スチムバックス（Ｓｔｉｍｕｖａｘ）、アロベクチン−７、ザイゲバ、プロベンジ、エルボイ、イソプレニル化阻害剤（例えば、ロバスタチン）、ドーパミン作動性神経毒（例えば、１−メチル−４−フェニルピリジンイオン）、細胞周期阻害剤（例えば、スタウロスポリン）、アクチノマイシン類（例えば、アクチノマイシンＤ、ダクチノマイシン）、ブレオマイシン類（例えば，ブレオマイシンＡ２、ブレオマイシンＢ２、ペプロマイシン）、アントラサイクリン類（例えば，ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、エピルビシン、ピラルビシン、ゾルビシン、ミトキサントロン、ＭＤＲ阻害剤（例えば、ベラパミル）、Ｃａ２＋ＡＴＰ阻害剤（タプシガルギン）、ビスモデギブ、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、モセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３）、ベリノスタット、ＰＣＩ−２４７８１、エンチノスタット、ＳＢ９３９、レスミノスタット、ギビノスタット、ＡＲ−４２、ＣＵＤＣ−１０１、スルフォラファン、トリコスタチンＡ）；タプシガルギン、セレコキシブ、グリタゾン類、エピガロカテキンガレート、ジスルフィラム、サリノスポラミドＡ。本発明の化合物及び共役体との協同療法（相乗効果）として用いることができる既知の及び開示予定の抗がん剤のより詳細なリストは、米国国立がん研究所(www.cancer.gov； www.cancer.gov/ cancertopics / druginfo / alphalist)，、米国国立がん学会(www.cancer.org/treatment/index)、及び英国がん研究センター(www.cancerrearchuk.org, www.cancerresearchuk.org/cancer-help/about-cancer/ treatment/cancer-drugs/)を参照できる。
【０１７０】
２）抗自己免疫疾患薬：シクロスポリン、シクロスポリンＡ、アザチオプリン、アミノカプロン酸、ブロモクリプチン、クロラムブシル、クロロキン、シクロホスファミド、コルチコイド（例えば，ホルモン剤、ベタメタゾン、ブデソニド、フルニソリド、フルチカゾンプロピオン酸エステル、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、フルオコルトダナゾール、トリアムシノロンアセトニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、デヒドロイソアンドロステロン、エタネルセプト、ヒドロキシクロロキン、インフリキシマブ、メロキシカム、メトトレキサート、ミコフェノール酸モフェチル、シロリムス、タクロリムス、プレドニゾンを含むが、これらに限定されない。
【０１７１】
３）抗感染薬：ａ）アミノグリコシド類：アミカシン、アストロマイシン、ゲンタマイシン（ネチルマイシン、シソマイシン、イセパマイシン）、ハイグロマイシン、カナマイシン（アミカシン、アルベカシン、アミノデオキシカナマイシン、ジベカシン、トブラマイシン）、ネオマイシン（ネオマイシンＢ、パロモマイシン、リボスタマイシン）、ネチルマイシン, スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、ベルダミシン；ｂ）アンフェニコール類：アジダムフェニコール、クロラムフェニコール、フロルフェニコール、チアンフェニコール；ｃ）アンサマイシン類：ゲルダナマイシン、ハービマイシン；ｄ）カルバペネム類：ビアペネム、ドリペネム、エルタペネム、イミペネム／シラスタチン、メロペネム、パニペネム；ｅ）セフェム類：カルバセフェム（ロラカルベフ）、セファセトリル、セファクロル、セフラジン、セファドロキシル、セファロニウム、セファロリジン、セファロチン又はセファロスポリン、セファレキシン、セファログリシン、セファマンドール、セファピリン、セファトリジン、セファザフル、セファゼドン、セファゾリン、セフブペラゾン、セフカペン、セフダロキシム、セフェピム、セフミノックス、セフォキシチン、セフプロジル、セファロスポリン、セフテゾル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフェピム、セフェタメト、セフメノキシム、セフォジジム、セフォニシド、セフォペラゾン、セホラニド、セフォタキシム、、セフォチアム、セフォゾプラン、セファレキシン、セフピミゾール、セフピラミド、セフピロム、セフポドキシム、セフプロジル、セフキノム、セフスロジン、セフタジジム、セフテラム、セフチブテン、セフチオレン、セフチゾキシム、セフタジジム、セフトリアキソン、セフロキシム、セファゾリンフラン、セファマイシン（セフォキシチン、セフォテタン、セフメタゾール）、オキサセフェム（フロモキセフ、ラタモキセフ）；ｆ）糖ペプチド類：ブレオマイシン、バンコマイシン（オリタバンシン、テラバンシン）、テイコプラニン（ダルババンシン）、ラモプラニン、キュービシン；ｇ）グリシルサイクリン類：例えば、チゲサイクリン；ｈ）β−ラクタマーゼ阻害剤：ペナム（スルバクタム、タゾバクタム）、クラバム（クラブラン酸）；ｉ）リンコサミド類：クリンダマイシン、リンコマイシン；ｊ）リポペプチド類：ダプトマイシン、Ａ５４１４５、カルシウム依存性抗生物質（ＣＤＡ）；ｋ）マクロライド類：アジスロマイシン、セスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、フルリスロマイシン、ジョサマイシン、ケトライド（テリスロマイシン、エセスロマイシン）、ミデカマイシン、ミオカマイシン、オレアンドマイシン、リファマイシン（リファンピシンン、リファンピン、リファブチン、リファペンチン）、ロキタマイシン、ロキシスロマイシン、スペクチノマイシン、スピラマイシン、タクロリムス（ＦＫ５０６）、トロレアンドマイシン、テリスロマイシンン；ｌ）モノバクタム類：アズトレオナム、チゲモナム；Ｍ）オキサゾリジノン類：リネゾリド；Ｎ）ペニシリン類：アモキシシリン、アンピシリン（ピバンピシリン、ヘタシリン、バカンピシリ��、メタンピシリン、タランピシリン）、アジドシリン、アズロシリン、ペニシリン、ベンザチンペニシリン、フェノキシベンザチンペニシリン、クロメトシリン、プロカインペニシリン、カルベニシリン（カリンダシリン）、クロキサシリン、ジクロキサシリン、セファロスポリン、フルクロキサシリン、メシリナム（ピブメシリナム）、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリンナトリウム、フェネチシリン、ペニシリン、フェネチシリン、ペニシリン、ピペラシリン、プロピシリン、スルベニシリン、テモシリン、チカルシリン；ｏ）ポリペプチド類：バシトラシン、ポリミキシンＥ、ポリミキシンＢ; ｐ）キノロン類：アラトロフロキサシン、バロフロキサシン、シプロフロキサシン、クリナフロキサシン、ダノフロキサシン、ジフロキサシン、エノキサシン、エンロフロキサシン、オフロキサシン、ガレノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、グレパフロキサシン、Ｋａｎｏトロバフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、マルボフロキサシン、モキシフロキサシン、ナジフロキサシン、ノルフロキサシン、オルビフロキサシン、オフロキサシン、ペフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、シタフロキサシン、スパルフロキサシン、テマフロキサシン、トスフロキサシン、トロバフロキサシン；ｑ）ストレプトゾトシン類：プリスチナマイシン、キヌプリスチン／ダルホプリスチン；ｒ）スルホンアミド類：マフェニド、プロントジル、スルファセタミド、スルファメトキサゾール、スルファニルアミド、スルファサラジン、スルファフラゾール、トリメトプリム、トリメトプリム - スルファメトキサゾール（コトリモキサゾール）；ｓ）ステロイド系抗菌薬：例えば，フシジン酸；ｔ）テトラサイクリン類：ドキシサイクリン、クロルテトラサイクリン、クロモサイクリン、デメクロサイクリン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ペニメピサイクリン、ロリテトラサイクリン、テトラサイクリン、グリシルサイクリン（例えば、チゲサイクリン）；ｕ）他のタイプの抗生物質：アンノナシン、アルスフェナミン、バクトプレノール阻害剤（バシトラシン）、ＤＡＤＡＬ／ＡＲ阻害剤（サイクロセリン）、ジクチオスタチン、ディスコデルモライド、エレウテロビン、エポチロン、エタンブトール、エトポシド、ファロペネム、フシジン酸、フラゾリドン、イソニアジド、ラウリマリド、メトロニダゾール、ムピロシン、マイコラクトン、ＮＡＭ合成阻害剤（例えば、ホスホマイシン）、ニトロフラントイン、パクリタキセル、プラテンシマイシン、ピラジナミド、キヌプリスチン／ダルホプリスチン、リファンピン（リファンピシン）、タゾバクタムチニダゾール、ウバリシンを含むが、これらに限定されない。
【０１７２】
４）抗ウイルス薬：ａ）侵入／融合阻害剤：アプラビロック、マラビロク、ビクリビロック、ｇｐ４１（エンフビルチド）、ＰＲＯ１４０、ＣＤ４（イバリズマブ）；ｂ）インテグラーゼ阻害剤：ラルテグラビル、エルビテグラビル、グロボイドナンＡ；ｃ）成熟阻害剤：ベビリマット、ヴィヴィコン；ｄ）ノイラミニダーゼ阻害剤：オセルタミビル、ザナミビル、ペラミビル；ｅ）ヌクレオシド及びヌクレオチド：アバカビル、アシクロビル、アデフォビル、アムドキソビル、アプリシタビン、ブリブジン、シドフォビル、クレブジン、デキセルブシタビン、ジダノシン（ＤＤＩ）、エルブシタビン、エムトリシタビン（ＦＴＣ）、エンテカビル、ファムシクロビル、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、３’−フルオロ置換２’，３’−デオキシヌクレオシド類似体（例えば、３’−フルオロ−２’，３’−ジデオキシチミジン（ＦＬＴ）及び３’−フルオロ−２’，３’−ジデオキシグアノシン（ＦＬＧ）、ホミビルセン、ガンシクロビル、イドクスウリジン、ラミブジン（３ＴＣ）、ｌ−ヌクレオシド（例えば、β−ｌ−チミジン、β−ｌ−２’−デオキシシチジン）、ペンシクロビル、ラシビル、リバビリン、スタンピジン、スタブジン（ｄ４Ｔ）、タリバビリン（ビラミジン）、テルビブジン、テノホビル、トリフルリジン、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ザルシタビン（ｄｄＣ）、ジドブジン（ＡＺＴ）；ｆ）非ヌクレオシド：アマンタジン、アテビリジン、カプラビリン、ジアリールピリミジン（エトラビリン、リルピビリン）、デラビルジン、ドコサノール、エミビリン、エファビレンツ、ホスカルネット（ホスホリルギ酸）、イミキモド、インターフェロンα、ロビリド、ロデノシン、メチサゾン、ネビラピン、ＮＯＶ−２０５、ペグインターフェロンα、ポドフィロトキシン、リファンピシン、リマンタジン、レシキモド（Ｒ−８４８）、トロマンタジン；ｇ）プロテアーゼ阻害剤：アンプレナビル、アタザナビル、ボセプレビル、ダルナビル、ホスアンプレナビル、インジナビル、ロピナビル、ネルフィナビル、プレコナリル、リトナビル、サキナビル、テラプレビル（ＶＸ−９５０）、チプラナビル；Ｈ）抗ウイルス薬の他のタイプ：アブザイム、アルビドール、カラノリドＡ、セラゲニン、シアノビリン−Ｎ、ジアリールピリミジン、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、ホスカルネット、グリフィスシン、タリバビリン（ビラミジン）、ヒドロキシカルバミド、ＫＰ−１４６１、ミルテフォシン、プレコナリル、ポートマントー阻害剤、リバビリン、セリシクリブ。
【０１７３】
５）他の免疫治療薬物：例えば，イミキモド、インターフェロン（例えば、α、β）、顆粒球コロニー刺激因子、サイトカイン、インターロイキン（ＩＬ−１〜ＩＬ−３５）、抗体（例えば、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、パニツムマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、バシリキシマブ、ダクリズマブ、オマリズマブ）、タンパク質結合薬（例えば、アブラキサン）、並びにカリケアマイシン誘導体、メイタンシン誘導体（ＤＭ１及びＤＭ４）、ＣＣ−１０６５及びデュオカルマイシン小溝結合剤、効果的なパクリタキセル誘導体、ドキソルビシン、及びオーリスタチン有糸分裂阻害薬（例えば、トラスツズマブ−ＤＭ１、イノツズマブオゾガマイシン、ブレンツキシマブベドチン、グレンバツムマブべドチン、ロルボツズマブメルタンシン、ＡＮ−１５２ＬＭＢ２、ＴＰ−３８、ＶＢ４−８４５、カンツズマブメルタンシン、ＡＶＥ９６３３、ＳＡＲ３４１９、ＣＡＴ−８０１５（抗ＣＤ２２）、ＩＭＧＮ３８８、ミラツズマブ−ドキソルビシン、ＳＧＮ−７５（抗ＣＤ７０）、抗ＣＤ２２−ＭＣＣ−ＤＭ１）、ＩＭＧＮ８５３、抗ＣＤ２２−ＭＭＡＥ、抗ＣＤ２２−ＭＭＡＦ、及び抗ＣＤ２２カリケアマイシン) から選択される薬物と共役した抗体。
【実施例】
【０１７４】
以下の実施例により本発明を説明するが、これは本発明の範囲を制限するものと考えてはならない。
【０１７５】
実施例１；トリス （２−（ベンジルオキシ) エチル）ホスフィンオキシド（２）
【化２５】
0006332773.tif 000046
【０１７６】
アルゴンガス雰囲気下、マグネシウム屑（１．５０ｇ、６１．７０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８０ｍｌ）に加えて攪拌し、次いで（（２−ブロモエトキシ）メチル）ベンゼン（１３．１０ｇ、６１．２１ｍｍｏｌ）を２時間滴加し、その後３時間攪拌を継続した。反応液を−７８℃まで冷却し、オキシ塩化リン（Ｖ）（１．９０ｍｌ、２０．４０ｍｍｏｌ）を加えた。−７８℃で４時間攪拌した後、０．１Ｍ  ＮａＨＣＯ３水溶液（８０ｍｌ）で希釈し、飽和塩化ナトリウム溶液（１００ｍｌ）及びＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）を加えて分層し、水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出した。有機層を合併した後、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、次いでろ過、濃縮、及びＥｔＯＡｃ（１：１０〜１：６）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（６．１１ｇ、収率６６．２％）。ESI MS m/z+ 475.2 (M+Na)。 
【０１７７】
実施例２；トリス （２−ヒドロキシエチル) ホスフィンオキシド（３）
【化２６】
0006332773.tif 000047
【０１７８】
トリス （２−（ベンジルオキシ）エチル）ホスフィンオキシド（６．０３ｇ、１３．３３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍｌ）溶液を、Ｐｄ／Ｃ（０．３１ｇ、１０％Ｐｄ／Ｃ、５０ｗｔ％）を含む水素を満たした丸底フラスコ内に加えた。反応液を４時間激しく攪拌した後、反応液をろ過し、ろ液を濃縮し、目的生成物を得た（２．３３ｇ、収率９６％）。得られた生成物は純化せずに、直接に次のステップの反応に使用した。ESI MS m/z+ 205.8 (M+Na)。
【０１７９】
実施例３；Ｓ−（２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）ホスホリル）エチル）エタンチオエート（８）
【化２７】
0006332773.tif 000048
【０１８０】
ＰＰｈ３(３．３０ｇ、１２．５９ｍｏｌ)、チオ酢酸 (０．７２６ｇ、１０．０ｍｏｌ)、及びトリス（２−ヒドロキシエチル) ホスフィンオキシド（２．３０ｇ、１２．５８ｍｍｏｌ) をＴＨＦ（７０ｍｌ）に加え、０〜４℃でＤＩＡＤ（２．５ｍｌ、１２．６９ｍｍｏｌ）を１時間滴加した。反応液を０℃で１時間撹拌し、室温で１時間撹拌した。反応液にＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を加えて希釈した後、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液に注ぎ入れた（１００ｍｌ）。分層し、水層をＥｔＯＡｃ（２×６０ｍｌ）で抽出した。有機層を合併した後、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、次いでろ過、濃縮、及びＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１５〜１：８）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（１．７５ｇ、収率７３％）。ESI MS m/z+ 263.4 (M+Na)。
【０１８１】
実施例４；Ｓ−（２−（ビス（２−ブロモエチル）ホスホリル）エチル）エタンチオエート（９）
【化２８】
0006332773.tif 000049
【０１８２】
Ｓ−（２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）ホスホリル）エチル）エタンチオエート（０．９ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（５０ｍｌ）に、ＰＰｈ３（２．００ｇ、７．６３ｍｍｏｌ）とＣＢｒ４（２．４６ｇ、７．５０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で６時間撹拌した。反応液を濃縮し、次いでＥｔＯＡｃ（８０ｍｌ）で希釈した後、セライト（Ｃｅｌｉｔｅ）でろ過し、更に濃縮及びＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：８〜１：３）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（１．２１ｇ、収率８９％）。ESI MS m/z+ 571.2 (M+Na)。
【０１８３】
実施例５；Ｓ−（２−（ビス（２−（トシルオキシ）エチル）ホスホリル）エチル）エタンチオエート（１０）
【化２９】
0006332773.tif 000050
【０１８４】
Ｓ−（２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）ホスホリル）エチル）エタンチオエート（０．９ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）のピリジン（２０ｍｌ）及びＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）溶液にＴｓＣｌ（２．００ｇ、１０．５２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を６時間撹拌した。反応液を濃縮し、次いでＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：５〜１：３）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（１．７７ｇ、収率８６％）。ESI MS m/z+ 386.8 (M+Na)。
【０１８５】
実施例６；ビス（（２−ヒドロキシエチル）（２−（メチルスルフィノチオイル）エチル）ホスフィンオキシド（１２）
【化３０】
0006332773.tif 000051
【０１８６】
（２−（ビス（２−（ヒドロキシエチル）ホスホリル）エチル）エタンチオエート（１．２５ｇ、５．２０ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＯＨ（４０ｍｌ）及びＨ２Ｏ（２０ｍｌ）溶液に、４℃でＮａＯＨ（０．５Ｍ、２０ｍｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、ＨＣｌ（６Ｍ）でｐＨ７．０に調整してから、ＭｅＳＳＯ２Ｍｅ（１．０ｇ、７．９３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌した、濃縮し、次いでＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１５〜１：８）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（１．０９ｇ、収率８３％）。ESI MS m/z+ 267.4 (M+Na)。
【０１８７】
実施例７；（（２−メチルスルフィノチオイル）エチル）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（４−メチルベンゼンスルホネート）（１３）
【化３１】
0006332773.tif 000052
【０１８８】
ビス（２−ヒドロキシエチル）（２−メチルスルフィノチオイル）エチル）ホスフィンオキシド（１．０１ｇ、４．１３ｍｍｏｌ）のピリジン（１５ｍｌ）及びＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）溶液にＴｓＣｌ（２．００ｇ、１０．５２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で６時間撹拌した。反応終了後、濃縮し、次いでＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：５〜１：３）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（１．９８ｇ、収率８７％）。ESI MS m/z+ 575.2 (M+Na)。
【０１８９】
実施例８；ビス（２−ヒドロキシエチル）（２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチル）ホスフィンオキシド（１４）
【化３２】
0006332773.tif 000053
【０１９０】
４℃の下で（２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）ホスホリル）エチル）エタンチオエート（１．２５ｇ、５．２０ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＯＨ（４０ｍｌ）及び水（２０ｍｌ）溶液に、ＮａＯＨ（０．５Ｍ、２０ｍｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、ＨＣｌ（６Ｍ）でｐＨ７．５に中和してから、１，２−ジ（ピリジン−２−イル）ジスルファン（４．２０ｇ、１９．０９ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＯＨ溶液（４０ｍｌ）を加え、室温で４時間撹拌した。反応終了後、濃縮し、次いでＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１００％ＣＨ２Ｃｌ２〜１：８）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（１．２６ｇ、収率７９％）。ESI MS m/z+ 330.2 (M+Na)。
【０１９１】
実施例９；（（２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチル）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（４−メチルフェニルスルホネート）（１５）
【化３３】
0006332773.tif 000054
【０１９２】
ビス（（２−ヒドロキシエチル）（２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチル）ホスフィンオキシド（１．２１ｇ、３．９４ｍｍｏｌ）のピリジン（１５ｍｌ）及びＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）溶液に、ＴｓＣｌ（２．００ｇ、１０．５２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で６時間攪拌した。反応終了後、濃縮し、次いで酢酸エチル／ヘキサン（１：５〜１：３）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（２．１９ｇ、収率８７％）。ESI MS m/z+ 638.7 (M+Na)。
【０１９３】
実施例１０；トリメチル−３，３’，３’’−ホスフィントリイルトリプロパノエート（２６）
【化３４】
0006332773.tif 000055
【０１９４】
トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）（７．０ｇ、２４．４２ｍｍｏｌ）に対して、ＥｔＯＨ（２×１００ｍｌ）で共回転蒸発を行ってから、４℃でメタノール (２００ｍｌ)に溶解し、次いで塩化チオニル（９．０ｍｌ、１２２．２９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応終了後、濃縮し、真空乾燥することにより、目的化合物を得た（７．０ｇ、収率９８％）。ESI MS m/z+ 293.2 (M+H)。
【０１９５】
実施例１１；トリス (２−ヒドロキシプロピル)ホスフィンオキシド（２７）
【化３５】
0006332773.tif 000056
【０１９６】
トリメチル−３，３’，３’’−ホスフィントリイルトリプロパノエート（７．０ｇ、２３．９６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１００ｍｉ）に、０℃でＬｉＡｌＨ４（２Ｍ）のＴＨＦ溶液（７０ｍｌ）を加えた。反応混合物を０℃で４時間攪拌した後、冷水（５ｍｌ）で急冷し、ろ過及び蒸発乾燥を行うことによって、粗３，３’，３’’−ホスフィントリイルトリス（プロパン−１−オール）を得た（５．１ｇ、収率１０２％）。当該化合物は、直接に次のステップの反応に使用できる。前記で得た化合物を酢酸（８０ｍｌ）に溶解させ、次いでＨ２Ｏ２（２０ｍｌ、３３％水溶液）を加えた。反応混合物を一晩攪拌し、反応終了後に濃縮し、水（２×１００ｍｌ）及びトルエンと共に同時蒸発させ、次いで真空乾燥することにより、目的化合物を得た（４．８８ｇ、収率９１％）。ESI MS m/z+ 225.2 (M+H)。
【０１９７】
実施例１２；Ｓ−（３−（ビス（３−ヒドロキシプロピル）ホスホリル）プロピル）エタンチオエート（２８）
【化３６】
0006332773.tif 000057
【０１９８】
トリフェニルホスフィン（３．３０ｇ、１２．５９ｍｍｏｌ）、メルカプト酢酸（０．７６２ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びトリス（２−ヒドロキシプロピル）ホスフィンオキシド（２．８２ｇ、１２．５８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（７０ｍｌ）に溶解させ、０〜４℃でＤＩＡＤ（２．５ｍｌ、１２．６９ｍｍｏｌ）を１時間滴加した。反応混合物を０℃で１時間攪拌し、次いで室温で１時間攪拌した。反応終了後、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）を加え、次いで反応液を飽和Ｎａ２ＣＯ３（１００ｍｌ）に注ぎ入れた。液体を分層した後、ＥｔＯＡｃ（２×６０ｍｌ）で抽出した。有機層を合併した後、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過、濃縮、及びＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１５〜１：８）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（１．７７ｇ、収率８９％）。
【０１９９】
実施例１３；ビス（３−ヒドロキシプロピル）（３−（メチルスルフィノチオイル）プロピル）ホスフィンオキシド（３２）
【化３７】
0006332773.tif 000058
【０２００】
Ｓ−（３−（ビス（３−ヒドロキシプロピル）ホスホリル）プロピル）エタンチオエート（１．７５ｇ、６．２０ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＯＨ（４０ｍｌ）及び水（２０ｍｌ）溶液に、４℃でＮａＯＨ（０．５Ｍ、２０ｍｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌し、ＨＣｌ（６Ｍ）でｐＨ７．０に中和してから、ＭｅＳＳＯ２Ｍｅ（１．０ｇ、７．９３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で４時間撹拌した後、濃縮及びＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１５〜１：８）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（１．５６ｇ、収率８８％）。ESI MS m/z+ 309.4 (M+Na)。
【０２０１】
実施例１４；（（３−（メチルスルフィノチオイル）プロピル）ホスホリル）ビス（プロパン−３，１−ジイル）ビス（４−メチルベンゼンスルホネート）（３３）
【化３８】
0006332773.tif 000059
【０２０２】
ビス（３−ヒドロキシプロピル）（３−（メチルスルフィノチオイル）プロピル）ホスフィンオキシド（１．５１ｇ、５．３５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）及びピリジン（１５ｍｌ）溶液に、ＴｓＣｌ（３．００ｇ、１５．７８ｍｍｏｌ）を加えた。室温で６時間撹拌した後、濃縮及びＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：５〜１：８）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（２．７３ｇ、収率８６％）。ESI MS m/z+ 617.2 (M+Na)。
【０２０３】
実施例１５；４−（（（ビス（２−ヒドロキシエチル）ホスホリル）メチル）アミノ）−４−オキソ酪酸メチル（３９）
【化３９】
0006332773.tif 000060
【０２０４】
（アミノメチル）ビス（２−ヒドロキシエチル）ホスフィンオキシド（１．００ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）及び４−メトキシ−４−オキソブタン酸（０．７９ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（５０ｍｌ）溶液にＥＤＣ（２．４０ｇ，１２．５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を６時間撹拌した後、濃縮及びＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１５〜１：７）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（１．３９ｇ、収率８３％）。ESI MS m/z+ 304.2 (M+Na)。
【０２０５】
実施例１６；４−（（（ビス（２−トシルオキシ）エチル）ホスホリル）メチル）アミノ）−４−オキソ酪酸メチル（４０）
【化４０】
0006332773.tif 000061
【０２０６】
４−（（（ビス（２−ヒドロキシエチル）ホスホリル）メチル）アミノ）−４−オキソブ酪酸メチル（１．３５ｇ、４．８０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）及びピリジン（１５ｍｌ）溶液に、ＴｓＣｌ（２．５０ｇ、１３．１５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で６時間撹拌した後、濃縮及びＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：５〜１：３）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（２．３４ｇ、収率８３％）。ESI MS m/z+ 612.2 (M+Na)。
【０２０７】
実施例１７；Ｎ−（（ビス（２−ヒドロキシエチル)ホスホリル）メチル）−４−メチル−４−（メチルジスルファニル）ペンタンアミド（４４）
【化４１】
0006332773.tif 000062
【０２０８】
（アミノメチル）ビス（２−ヒドロキシエチル）ホスフィンオキシド（１．００ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）及び４−メチル−４−（メチルジスルファニル）吉草酸（１．１６ｇ、５．９８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（５０ｍｌ）にＥＤＣ（２．４０ｇ、１２．５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で８時間撹拌した後、濃縮及びＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１５〜１：７）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（１．６６ｇ、収率８１％）。ESI MS m/z+ 366.2 (M+Na)。
【０２０９】
実施例１８；（（（４−メチル−４−（メチルジスルファニル）ペンタンアミド）メチル）ホスホリル）−ビス（エタン−２，１−ジイル）ジメタンスルホネート（４５）
【化４２】
0006332773.tif 000063
【０２１０】
Ｎ−（（ビス（２−ヒドロキシエチル)ホスホリル）メチル）−４−メチル−４−（メチルジスルファニル）ペンタンアミド（１．２０ｇ、３．４９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）及びピリジン（１５ｍｌ）溶液に、ＭｓＣｌ（１．５０ｇ、１３．１６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で６時間撹拌した後、濃縮及びＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：５〜１：３）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（１．４４ｇ、収率８３％）。ESI MS m/z+ 522.1 (M+Na)。
【０２１１】
実施例１９；４−（ベンジルオキシ）−３−メトキシ安息香酸
【化４３】
0006332773.tif 000064
【０２１２】
４−ヒドロキシ−３−安息香酸（５０．０ｇ、２９７．５ｍｍｏｌ）をエタノール（３５０ｍｌ）及びＮａＯＨ溶液（２．０Ｍ、３５０ｍｌ）の混合溶媒に溶解し、次いでＢｎＢｒ（１４０．０ｇ、８２３．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を６５℃で８時間撹拌した後、濃縮し、水（２×４００ｍｌ）で４００ｍｌまで共蒸発させ、次いで６Ｍ  ＨＣｌでｐＨ３．０まで調節し、ろ過及びエタノールによる再結晶を行った後、４５℃で真空乾燥を行うことにより目的化合物を得た（６３．６ｇ、収率８３％）。ESI MS m/z+ 281.2 (M+Na)。
【０２１３】
実施例２０；４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸。
【化４４】
0006332773.tif 000065
【０２１４】
４−（ベンジルオキシ）−３−メトキシ安息香酸（６３．５ｇ、２４６．０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍｌ）及び氷酢酸（１００ｍｌ）の混合溶媒に溶解し、次いで発煙硝酸（２５ｍｌ、５２８．５ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を室温で６時間撹拌し、濃縮及びエタノールによる再結晶を行い、次いで４０℃で真空乾燥を行うことにより、目的化合物を得た（６３．３ｇ、収率８５％）。ESI MS m/z+326.1 (M+Na)。
【０２１５】
実施例２１；（２Ｓ，４Ｒ）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸メチル塩酸塩
【化４５】
0006332773.tif 000066
【０２１６】
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（１５．０ｇ、１１４．３ｍｍｏｌ）のドライメタノール（２５０ｍｌ）溶液に０〜４℃で塩化チオニル（１７ｍｌ、２３１．０ｍｍｏｌ）を滴加した。反応混合物を、室温で一晩撹拌攪し、濃縮及びエタノール／ヘキサンによる再結晶を行い、目的化合物を得た（１８．０ｇ、収率８７％）。ESI MS m/z+168.2 (M+Na)。
【０２１７】
実施例２２；（２Ｓ，４Ｒ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メチル  ４−ヒドロキシピロリジン−１，２−ジカルボキシレート
【化４６】
0006332773.tif 000067
【０２１８】
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンメチルエステル（１８．０ｇ、１０７．０ｍｍｏｌ）をメタノール（１５０ｍｌ）及び炭酸水素ナトリウム溶液（２．０Ｍ、３５０ｍｌ）の混合溶媒に溶解し、４時間内で二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（３０．０ｇ、１３７．６ｍｍｏｌ）を三回に分けて加えた。更に４時間撹拌した後、反応液を約３５０ｍｌに濃縮し、酢酸エチルで抽出した（４×８０ｍｌ）。有機相を合わせ、飽和食塩水（１００ｍｌ）で洗浄し、次いで無水硫酸マグネシウムによる乾燥、ろ過、濃縮及びヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１：１）によるＳｉＯ２クロマトグラフによる精製を行い、目的化合物を得た（２２．５４ｇ、収率８６％）。ESI MS m/z+ 268.2 (M+Na)。
【０２１９】
実施例２３；（Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メチル  ４−オキソピロリジン−１，２−ジカルボキシレート
【化４７】
0006332773.tif 000068
【０２２０】
目的化合物はＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ酸化反応により得ることができる（Franco Manfre, et al., J. Org. Chem., 1992, 57, 2060-2065）。また、Ｓｗｅｒｎ酸化反応で目的化合物を得ることができる。操作は以下の通りである。（ＣＯＣｌ）２（１３．０ｍｌ、７４．３８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（３５０ｍｌ）を−７８℃に冷却し、乾燥ＤＭＳＯ（２６ｍｌ）を滴加した。溶液を−７８℃で１５分間撹拌し、次いで（２Ｓ，４Ｒ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メチル  ４−ヒドロキシピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（８．０ｇ、３２．６３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（１００ｍｌ）を滴加した。−７８℃で２時間撹拌した後、トリエチルアミン（５０．０ｍｌ、１８０．３ｍｍｏｌ）を滴加し、溶液を室温まで加熱した。反応混合物をＮａＨ２ＰＯ４（４００ｍｌ、１．０Ｍ）で希釈し、液体を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（４×８０ｍｌ）で水相を抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過、濃縮及びＳｉＯ２クロマトグラフィー（７：３  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）による精製を行い、目的化合物を得た（６．７３ｇ、収率８５％）。ESI MS m/z+ 266.2 (M+Na)。
【０２２１】
実施例２４；（Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メチル  ４−メチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート
【化４８】
0006332773.tif 000069
【０２２２】
メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（１９．６２ｇ、５５．１１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１５０ｍｌ）に０℃でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（６．２０ｍｌ、５５．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（８０ｍｌ）を滴加した。０℃で２時間撹拌した後、得られた黄色のイリド懸濁液に、（Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メチル  ４−オキソピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（６．７０ｇ、２７．５５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（４０ｍｌ）を加えた。室温で１時間撹拌した後、反応混合物について濃縮、酢酸エチルによる希釈、水（１５０ｍｌ）及び飽和食塩水（１５０ｍｌ）による洗浄、無水硫酸マグネシウムによる乾燥を行い、更に濃縮及びＳｉＯ２フラッシュクロマトグラフィー（９：１  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）による精製を行い、目的化合物を得た（５．７７ｇ、収率８７％）。ESI MS m/z+ 264 (M+Na)。
【０２２３】
実施例２５；（Ｓ）−４−メチレンピロリジン−２−カルボン酸メチル
【化４９】
0006332773.tif 000070
【０２２４】
（Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メチル  ４−メチルピロリジン−１，２−ジカルボキシレート（５．７０ｇ、２３．６３ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（４０ｍｌ）溶液に４℃で塩酸溶液（１０ｍｌ、１２Ｍ）を滴加した。反応混合物を１時間撹拌した後、トルエン（５０ｍｌ）で希釈し、次いで濃縮及びエタノール／ヘキサンによる再結晶を行うことにより、目的化合物を得た（３．８５ｇ、収率９２％）。ESI MS m/z+142.2 (M+Na)。
【０２２５】
実施例２６；（Ｓ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）−４−メチレンピロリジン−２−カルボン酸メチル
【化５０】
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【０２２６】
４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸（２．７０ｇ、８．９１ｍｍｏｌ）及びオキサリルクロリド（２．０ｍｌ、２２．５０ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２溶液（７０ｍｌ）に触媒量のＤＭＦ（３５μｌ）を滴加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。回転蒸発方法で余分なＣＨ２Ｃｌ２及びオキサリルクロリドを除去した。塩化アセチルを新たなＣＨ２Ｃｌ２溶液（７０ｍｌ）に再懸濁させ、アルゴンガス雰囲気下、０℃で４−メチレン−Ｌ−プロリンメチルエステル塩酸塩（１．５８ｇ、８．９１ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（６ｍｌ）の混合溶液に滴加した。反応混合物を室温まで加熱して８時間撹拌した。回転蒸発方法でＣＨ２Ｃｌ２及びＥｔ３Ｎを除去し、残留物を水及びＥｔＯＡｃ（７０／７０ｍＬ）間に分配した。水層を更にＥｔＯＡｃ（２×６０ｍｌ）で抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水（４０ｍｌ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）及び濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２：８  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製することにより、目的化合物を得た（２．８８ｇ、収率７６．１％）。ESI MS m/z+ 449.1 (M+Na)。
【０２２７】
実施例２７；（Ｓ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）−４−メチレンピロリジン−２−アルデヒド
【化５１】
0006332773.tif 000072
【０２２８】
アルゴンガス雰囲気下、−７８℃で激しく攪拌しながら（Ｓ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）−４−メチレンピロリジン−２−カルボン酸メチル（２．８０ｇ、６．５７ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２溶液（６０ｍｌ）にＤＩＢＡＬ−Ｈ（１０ｍｌ、１Ｍ  ＣＨ２Ｃｌ２溶液）を滴加した。反応混合物を更に９０分間撹拌した後、メタノール（２ｍｌ）及び次いで５％ＨＣｌ（１０ｍｌ）を添加することにより、過剰の試薬を分解した。反応物を０℃まで加熱した。各層を分離し、更にＣＨ２Ｃｌ２（ジクロロメタン（３×５０ｍｌ）で水相を抽出した。有機相を合わせ、飽和食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）及び濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、９５：５  ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ）で精製することにより、目的化合物を得た（２．１９ｇ、収率８４％）。ESI MS m/z+ 419.1 (M+Na)。
【０２２９】
実施例２８；（Ｓ）−８−（ベンジルオキシ）−７−メトキシ−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロール［１，２−ａ］アゼピン−５（１１ａＨ）−オン
【化５２】
0006332773.tif 000073
【０２３０】
（Ｓ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）−４−メチレンピロリジン−２−アルデヒド（２．１８ｇ、５．５０ｍｍｏｌ）及びＮａ２Ｓ２Ｏ４（８．０ｇ、４５．９７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（６０ｍｌ）及び水（４０ｍｌ）の混合溶媒に溶解し、室温で２０時間撹拌した。溶剤は高真空下で除去した。残渣をメタノール（６０ｍｌ）に再懸濁させ、ｐＨが２になるまで６Ｍ  ＨＣｌを滴加した。反応混合物を室温で１時間撹拌した。メタノールのほとんどを除去することにより反応を終了させ、次いで酢酸エチル（１００ｍｌ）で希釈した。酢酸エチル溶液を飽和炭酸水素ナトリウム及び飽和食塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）させて濃縮した。その後、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、９７：３  ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ）で精製することにより、目的化合物を得た（１．５２ｇ、収率８０％）ESI MS m/z+ 372.1 (M+Na)。
【０２３１】
実施例２９；（Ｓ）−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］アゼピン−５（１１ａＨ）−オン
【化５３】
0006332773.tif 000074
【０２３２】
０℃で（Ｓ）−８−（ベンジルオキシ）−７−メトキシ−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロール［１，２−ａ］アゼピン−５（１１ａＨ）−オン（１．５０ｇ、４．３２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（７０ｍｌ）にＣＨ２ＳＯ３Ｈ（２５ｍｌ）を滴加した。反応混合物を０℃で１０分間撹拌し、次いで室温で２時間撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、冷ＮａＨＣＯ３（１．０Ｍ）でｐＨを４に調節し、ろ過した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（３×６０ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過、濃縮及びＣＨ３ＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１５）を溶離液としてＳｉＯ２クロマトグラフィーによる精製を行い、目的化合物を得た（８１１ｍｇ、収率７３％）。ESI MS m/z+ 281.1 (M+Na)。
【０２３３】
実施例３０；（Ｓ）−ピペリジン−２−カルボン酸メチル塩酸塩
【化５４】
0006332773.tif 000075
【０２３４】
アルゴンガス雰囲気下、０℃で（Ｓ）−ピペリジン−２−カルボン酸（１０．００ｇ、７７．４６ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（２００ｍｌ）に塩化チオニル（１５．０ｍｌ、２０５．６１ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物を０℃で３０分間撹拌し、室温で一晩放置し、濃縮及びエタノールによる再結晶によって、目的化合物を得た（９．９０ｇ、収率９２％）。ESI MS m/z+ 144.1 (M+Na)。
【０２３５】
実施例３１；（Ｓ）−１−（４−ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピペリジン−２−カルボン酸メチル
【化５５】
0006332773.tif 000076
【０２３６】
４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸（１．３５ｇ、４．４５ｍｍｏｌ）及び塩化オキサリル（１．０ｍｌ、１１．２５ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２溶液（４０ｍｌ）に触媒量のＤＭＦ（２０μｌ）を滴加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。過量のＣＨ２Ｃｌ２及び塩化オキサリルを回転蒸発方法で除去した。調製した塩化物を無水ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍｌ）に再懸濁し、アルゴンガス雰囲気下、０℃で（Ｓ）−ピペリジン−２−カルボン酸メチル塩酸塩（０．８０ｇ、４．４６ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（４ｍｌ）の混合溶液に滴加した。反応混合物を室温まで加熱して８時間撹拌を続けた。ＣＨ２Ｃｌ２及びトリエチルアミンを回転蒸発方法で除去し、残渣を水及び酢酸エチル（７０／７０ｍｌ）に分画した。水層を更に酢酸エチル（２×６０ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせ、飽和食塩水（３０ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させて濃縮した。その後、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２：８  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製することにより、目的化合物を得た（１．５１ｇ、収率７３．１％）。ESI MS m/z+ 465.1 (M+Na)。
【０２３７】
実施例３２；（Ｓ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピペリジン−２−カルバルデヒド
【化５６】
0006332773.tif 000077
【０２３８】
アルゴンガス雰囲気下、−７８℃で（Ｓ）−１−（４−ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピペリジン−２−カルボン酸メチル（１．５０ｇ、３．５０ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２溶液（５０ｍｌ）にＤＩＢＡＬ（７．５ｍｌ、１．０Ｍ）のトルエン溶液を滴加た。混合物を３０分間撹拌し、メタノール（０．５ｍｌ）を加えて反応を終了させた。混合物を酢酸エチル（１５０ｍｌ）及び塩酸溶液（１００ｍｌ、０．２Ｍ）を加えて希釈した。有機層を分離し、水層を酢酸エチル（３×８０ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過、濃縮及びＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）を溶離液としてＳｉＯ２クロマトグラフィーによる精製を行い、目的化合物を得た（１．５２ｇ、収率９０％）。1H NMR (CDCl3), 9.60 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.65 - 7.28 (m, 5H), 6.78 (m, 1H), 5.16 (s, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.22, (m, 1H), 3.01 (m, 1H), 2.20 (m, 1H), 1.84 (m, 1H), 1.65 - 1.40 (m, 4H); 13C NMR 200.24, 171.31, 155.13, 154.78, 148.41, 146.20, 137.57, 135.47, 129.03, 128.73, 127.31, 109.83, 109.41, 71.61, 64.50, 56.96, 45.98, 25.25, 23.42, 18.70。ESI MS m/z+ 421.1 (M+Na)。
【０２３９】
実施例３３；（Ｓ）−３−（ベンジルオキシ）−２−メトキシ−７，８，９，１０−テトラヒドロベンゾ［ｅ］ピリド［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１２（６ａＨ）−オン
【化５７】
0006332773.tif 000078
【０２４０】
（Ｓ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピペリジン−２−カルバルデヒド（１．５０ｇ，３．７７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍｌ）及び水（５０ｍｌ）混合溶媒溶液にＮａ２Ｓ２Ｏ４（５．０ｇ、２８．７３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を８時間撹拌し、ジオキサン（５０ｍｌ）を加えて希釈し、回転蒸発及びジオキサン（３×６０ｍｌ）との共回転蒸発により乾燥させた。固形物をＣＨ３ＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１、８０ｍｌ）と共に超音波振動を行い、ろ過及び回転蒸発を行って固体を取得した。メタノール（１００ｍｌ）を加えて当該固体を溶解し、次に濃塩酸（０．４ｍｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、重炭酸ナトリウム溶液（０．１Ｍ）でｐＨを３に調節し、濃縮及びＣＨ２Ｃｌ２（４×６０ｍｌ）による抽出を行った。有機層を合わせ、１Ｍ重炭酸ナトリウム／飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過、濃縮及びＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：３）を溶離液としてＳｉＯ２クロマトグラフィーによる精製を行い、目的化合物を得た（９５０ｍｇ、収率７２％）。1H NMR (CDCl3), 7.81 (d, 1H, J = 5.7 Hz), 7.38-7.23 (m, 6H), 6.74 (s, 1H), 5.12 (dd, 2H, J = 2.3, 21.8 Hz), 4.18 (m, 1H), 3.88 (d, 3H), 3.69 (m, 1H), 3.15 (m, 1H), 1.99 (m, 1H), 1.87 (m, 1H), 1.79-1.65 (m, 4H); 13C NMR 167.76, 163.31, 150.72, 148.48, 140.09, 136.46, 128.87, 128.28, 127.53, 121.77, 111.01, 71.02, 56.41, 49.84, 39.93, 24.76, 23.21, 18.62。ESI MS m/z+ 373.2(M+Na), 391.2(M+Na+H2O)。
【０２４１】
実施例３４；（Ｓ）−３−ヒドロキシ−２−メトキシ−７，８，９，１０−テトラヒドロベンゾ［ｅ］ピリド［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１２（６ａＨ）−オン
【化５８】
0006332773.tif 000079
【０２４２】
０℃で（Ｓ）−３−（ベンジルオキシ）−２−メトキシ−７，８，９，１０−テトラヒドロベンゾ［ｅ］ピリド［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１２（６ａＨ）−オン（９２５ｍｇ、２．６４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（５０ｍｌ）にＣＨ２ＳＯ３Ｈ（２５ｍｌ）を加えた。混合物を０℃で１０分間撹拌し、次いで室温で２時間撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過、濃縮及びＣＨ３ＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１５）を溶離液としてＳｉＯ２クロマトグラフィーによる精製を行い、目的化合物を得た（５５５ｍｇ、収率８１％）。1H NMR (CDCl3), 7.75 (d, 1H, J = 5.7 Hz), 7.28 (s, 1H), 6.70 (s, 1H), 4.08 (m, 1H), 3.83 (d, 3H), 3.61 (m, 1H), 3.08 (m, 1H), 1.91 (m, 1H), 1.81 (m, 1H), 1.71-1.55 (m, 4H); 13C NMR 167.81, 163.46, 148.53, 145.71, 140.84, 121.23, 111.89, 111.39, 56.45, 49.83, 39.96, 24.71, 23.22, 18.60。ESI MS m/z+ 283.7 (M+Na)。
【０２４３】
実施例３５；（Ｓ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボン酸メチル
【化５９】
0006332773.tif 000080
【０２４４】
４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸（２．００ｇ、６．６０ｍｍｏｌ）、Ｌ−プロリンメチルエステル塩酸塩（１．０９ｇ、６．６０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（３．５０ｇ、１８．２２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．０ｍｌ、５．７５ｍｍｏｌ）をＤＭＡ（２５ｍｌ）中で一晩撹拌した。混合物を回転蒸発させ、ＤＣＭで希釈し、次いで、それぞれ１Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４／飽和ＮａＣｌ及び０．１Ｍ  ＮａＨＣＯ３／飽和ＮａＣｌで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過、濃縮及びＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ（１：１５）を溶離液としてＳｉＯ２クロマトグラフィーによる精製を行い、目的化合物を得た（１．９６ｇ、収率７２％）。ESI MS m/z+ 437.1 (M+Na)。
【０２４５】
実施例３６；（Ｓ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルバルデヒド
【化６０】
0006332773.tif 000081
【０２４６】
アルゴンガス雰囲気下、−７８℃で（Ｓ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボン酸メチル（１．９０ｇ、４．５９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（５０ｍｌ）にＤＩＢＡＬのトルエン溶液（７．５ｍｌ、１．０Ｍ）を３０分間かけて添加した。混合物を−７８℃で３時間撹拌し、メタノール（０．５ｍｌ）を加えて反応を停止させた。混合物に酢酸エチル（１５０ｍｌ）及び塩酸溶液（１００ｍｌ、０．２Ｍ）を加えて希釈した。有機層を分離し、水層を酢酸エチル（３×８０ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせてＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過、濃縮及びＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）を溶離液としてＳｉＯ２クロマトグラフィーによる精製を行い、目的化合物を得た（１．３４ｇ、収率７６％）。ESI MS m/z+ 407.1 (M+Na)。
【０２４７】
実施例３７；（Ｓ）−８−（ベンジルオキシ）−７−メトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン
【化６１】
0006332773.tif 000082
【０２４８】
（Ｓ）−１−（４−（ベンジルオキシ）−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルバルデヒド（１．３０ｇ、３．３８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍｌ）及び水（５０ｍｌ）混合溶媒溶液にＮａ２Ｓ２Ｏ４（５．０ｇ、２８．７３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で８時間撹拌し、ジオキサン（５０ｍｌ）を加えて希釈し、回転蒸発及びジオキサン（３×６０ｍｌ）との共回転蒸発により乾燥させた。固形物をＣＨ３ＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１、８０ｍｌ）と共に超音波振動を行い、ろ過及び回転蒸発を行って固体を取得した。メタノール（１００ｍｌ）を加えて当該固体を溶解し、次に濃塩酸（０．４ｍｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、重炭酸ナトリウム溶液（０．１Ｍ）でｐＨを３に調節し、濃縮及びＣＨ２Ｃｌ２（４×６０ｍｌ）による抽出を行った。有機層を合わせ、１Ｍ重炭酸ナトリウム／飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過、濃縮及びＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：３）を溶離液としてＳｉＯ２クロマトグラフィーによる精製を行い、目的化合物を得た（８０７ｍｇ、収率７１％）。ESI MS m/z+ 359.2(M+Na), 377.2(M+Na+H2O)。
【０２４９】
実施例３８；（Ｓ）−８−（ヒドロキシ）−７−メトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン
【化６２】
0006332773.tif 000083
【０２５０】
０℃で（Ｓ）−８−（ベンジルオキシ）−７−メトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（７９５ｍｇ、２．３６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（３０ｍｌ）にＣＨ２ＳＯ３Ｈ（１５ｍｌ）を滴加した。混合物を０℃で１０分間、次いで室温で２時間撹拌し、その後、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、１．０Ｍ冷ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨを調節し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過、蒸発及びＣＨ３ＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１５）を溶離液としてＳｉＯ２クロマトグラフィーによる精製を行い、目的化合物を得た（４７７ｍｇ、収率８２％）。EIMS m/z+ 269.2 (M+Na), 287.2 (M+Na+H2O), 301.2 (M+Na+CH3OH)。
【０２５１】
実施例３９；（１１ａＳ，１１ａ’Ｓ）−８，８’−（（（（２−（メチルスルフィノチオイル）エチル）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（オキシ））−ビス（７−メトキシ−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン)
【化６３】
0006332773.tif 000084
【０２５２】
（Ｓ）−８−（ヒドロキシ）−７−メトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（６０．１ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１００ｍｇ、０．３０７ｍｍｏｌ）、及びＫＩ（３．２ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（５ｍｌ）に、（（２−メチルスルフィノチオイル）エチル）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（４−メチルベンゼンスルホネート）（１３）（６７．２ｍｇ、０．１２１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を一晩撹拌し、回転蒸発させ、次いで分取Ｃ−１８カラムによる高速液体クロマトグラフィー（φ１０ｍｍ×２００ｍｍカラム、流速：９ｍＬ／ｍｉｎ、移動相：０〜５分間はＡ：Ｂ＝８０：２０、続いて１５分間でＡ：Ｂ＝５０：５０、２５分間でＡ：Ｂ＝３０：７０、３０分間でＡ：Ｂ＝１０：９０、Ａ相：水、Ｂ相：ジオキサン) で精製し、凍結乾燥を行い、白色固体の目的化合物を得た（５４．６ｍｇ、収率６４％）。EI MS m/z+ 747.2 (M+Na), 763.3 (M+K), 781.3 (M+K+H2O)；MS m/z- 723.2 (M-H)。
【０２５３】
当該化合物は、３７℃で５日培養して測定したＲａｊｉ細胞に対するＩＣ５０値が５．０〜１１ｐＭであり、非常に強い殺傷能力を有する。
【０２５４】
実施例４０；（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）−８，８’−（（（（２−（メルカプトエチル）ホスホリル）ビス−（エタン−２，１−ジイル）ビス（オキシ））ビス（７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１１−スルホン酸ナトリウム
【化６４】
0006332773.tif 000085
【０２５５】
（１１ａＳ，１１ａ’Ｓ）−８，８’−（（（（２−（メチルスルフィノチオイル）エチル）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（オキシ））−ビス（７−メトキシ−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン)（２５ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）のイソプロパノール（５ｍｌ）及び水（５ｍｌ）混合溶媒溶液にＮａＨＳＯ３（９ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間撹拌した。次いで、ＴＣＥＰ（２９．１ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ）及びＮａＨ２ＰＯ４（３．０ｍｌ、２．５Ｍ、ｐＨ７．５）を加えた。４時間撹拌後、混合物を濃縮し、次いで高速液体クロマトグラフィー（Ｃ−１８カラム、移動相Ａ：水、移動相Ｂ：メタノール、３０分間で移動相Ｂを１０％から７５％に増加させた。）。画分を集めて凍結乾燥することにより、目的化合物を得た（１４．５ｍｇ、収率４９．３％）。ESI m/z- 841.2 ([M]-H)；また、副産物として、（１１ａＳ，１１ａ’Ｓ）−８，８’−（（（（２−（メルカプトエチル）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（オキシ））ビス（７−メトキシ−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン)を得た（２．５ｍｇ、収率１０％）。ESI m/z+ 701.2 (M+Na), 717.2 (M+Na+K)。
【０２５６】
実施例４１；（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）−８，８’−（（（（２−（（１−（４−（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）−４−オキソブチル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）チオ）エチル）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（オキシ））ビス（７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１１−スルホン酸ナトリウム
【化６５】
0006332773.tif 000086
【０２５７】
４−（Ｎ−マレイミド）酪酸スクシンイミジル（３．４ｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（０．５ｍｌ）に、（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）−８，８’−（（（（２−（メルカプトエチル）ホスホリル）ビス−（エタン−２，１−ジイル）ビス（オキシ））ビス（７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１１−スルホン酸ナトリウム（５．０ｍｇ、０．００５９ｍｍｏｌ）を加えた。２時間撹拌後、混合物を濃縮し、次いで高速液体クロマトグラフィー（Ｃ−１８カラム、移動相Ａ：水、移動相Ｂ：ジオキサン、３０分間で移動相Ｂを１０％から７５％に増加させた。）。画分を集めて凍結乾燥することにより、目的化合物を得た（４．９ｍｇ、収率７２％）。ESI MS m/z- 1165.2 (M-H)。
【０２５８】
実施例４２；チオエーテル結合により接続されたＰＢＤ誘導体と抗体との共役体及びその抗腫瘍活性
【化６６】
0006332773.tif 000087
【０２５９】
２．５ｍｇ／ｍＬの抗ＣＤ２０抗体及び５モル当量の（１１Ｓ，１１ａＳ，１１’Ｓ，１１ａ’Ｓ）−８，８’−（（（（２−（（１−（４−（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）−４−オキソブチル）−２，５−ジオキソピロリジン−３−イル）チオ）エチル）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（オキシ））ビス（７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１１−スルホン酸ナトリウムを、１０％ｖ／ｖＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）を含有するＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）緩衝液（ｐＨ７．５、５０ｍｌ）中において、３０℃で６時間撹拌した。ＮＡＰ脱塩用カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡ  Ｇｒａｄｅ，ＧＥ  Ｈｅｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、共役体を精製し、緩衝液を２５０ｍＭグリシン、１０ｍＭヒスチジン、１％ショ糖、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０、及び５０μＭ亜硫酸水素ナトリウムから構成される緩衝液（ｐＨ６．０）に交換した。次いで、Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析キット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ２０，０００ＭＷＣＯ）を用いて、同じ緩衝液で室温下４時間透析した。ＬＣ−ＭＳで測定した結果、精製された共役体は、１つの抗体毎に平均３．８個のＰＢＤ分子が結合し、単量体率が９９％であり（サイズ排除クロマトグラフィーにより測定）、非共役薬物は０．１％未満であり（デュアルカラム逆相クロマトグラフィー分析により測定）、最終タンパク質濃度が１．１ｍｇ／ｍｌであった。
【０２６０】
抗ＣＤ２０抗体とＰＢＤ二量体との共役体の体外（インビトロ）薬理評価。共役体のＲａｊｉ細胞に対するＩＣ５０値は１．０〜２．１ｐＭであり、抗原陽性のＲａｊｉ細胞に対して高い活性を有する。一方、非共役抗ＣＤ２０抗体で抗原をブロックした場合には、薬理活性が有意に低減しており、細胞毒性効果が抗原特異的であることが示されている。
【０２６１】
【表２】
0006332773.tif 000088
【０２６２】
実施例４３；（１１ａＳ）−７−メトキシ−８−（２−（（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）２−（メチルスルフィノチオイル）エチル）ホスホリル）−エトキシ）−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン
【化６７】
0006332773.tif 000089
【０２６３】
０℃で、（１１ａＳ，１１ａ’Ｓ）−８，８’−（（（（２−（メチルスルフィノチオイル）エチル）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（オキシ））−ビス（７−メトキシ−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン)（１５０ｍｇ、０．２０７ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）及び純エタノール（１．５ｍｌ）の混合溶媒溶液に、水素化ホウ素ナトリウムのメトキシエチルエーテル溶液（８２μｌ、５Ｍ、０．０４１ｍｍｏｌ）を加えて撹拌した。５分間後に氷浴を撤去し、室温で３時間撹拌し、次いで０℃まで冷却して飽和塩化アンモニウム溶液を加えることにより反応を終了させ、ジクロロメタンで希釈し、抽出した。塩水で有機相を洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、「Ｃｅｌｉｔｅ」を通じてろ過し、濃縮した。残渣を逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル／水）で精製した。対応する画分をジクロロメタンで抽出し、濃縮することにより、目的化合物である（１１ａＳ）−７−メトキシ−８−（２−（（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）２−（メチルスルフィノチオイル）エチル）ホスホリル）−エトキシ）−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（６３．１ｍｇ、収率４２％）、MS m/z+ 749.2 (M+Na), 765.3 (M+ K), 767.2 (M+Na+H2O)；及び（１１ａＳ，１１ａ’Ｓ）−８，８’−（（（（２−（メチルスルフィノチオイル）エチル）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（オキシ））−ビス（７−メトキシ−２−メチレン−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１０Ｈ）−オン)（１６．５ｍｇ、収率１０．９％）、MS m/z+ 751.2 (M+Na)，767.2 (M+ K)，769.2 (M+Na+H2O)；及び反応しなかった出発原料（１０．２ｍｇ、収率６．８％）、MS m/z+ 747.2 (M+Na)，765.2 (M+Na+H2O)；を得た。
【０２６４】
実施例４４；（１１ａＳ）−８−（２−（（２−メルカプトエチル）（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）ホスホリル）エトキシ）−７−メトキシ−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン
【化６８】
0006332773.tif 000090
【０２６５】
（１１ａＳ）−７−メトキシ−８−（２−（（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）２−（メチルスルフィノチオイル）エチル）ホスホリル）−エトキシ）−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（３０ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２ｍｌ）及びメタノール（５ｍｌ）の混合溶媒溶液に、新規に調製したＴＣＥＰ溶液（ＴＣＥＰ塩酸塩３０ｍｇを飽和重炭酸ナトリウム溶液でｐＨ６．５に中和し、次いでｐＨ６．５の１Ｍリン酸緩衝液４ｍｌで希釈して調製した。）を加えた。混合物を室温で３．５時間撹拌し、次いでジクロロメタン及び脱イオン水を加えて希釈及び分層を行った。有機相を濃縮し、逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル／水）で精製することにより、白色固体である目的化合物を得た（２０．２ｍｇ、収率７２％）。ESI MS m/z+ 703.2 (M+Na), 721.2 (M+Na+H2O), m/z- 697.2 (M+H2O-H)。
【０２６６】
実施例４５；２，５−ジオキソピロリジン−１−イル  ４−（（２−（（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）ホスホリル）エチル）ジスルファニル）−４−メチルペンタノエート
【化６９】
0006332773.tif 000091
【０２６７】
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル  ４−メチル−４−（（５−ニトロピリジン−２−イル）ジスルファニル）ペンタノエート連結体（５．２ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）のＤＭＡ溶液に、（１１ａＳ）−８−（２−（（２−メルカプトエチル）（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）ホスホリル）エトキシ）−７−メトキシ−２−メチレン−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（５．０ｍｇ、０．００７３ｍｍｏｌ）及びＮａＨ２ＰＯ４緩衝塩（０．５Ｍ、０．３ｍｌ、ｐＨ６．０）を加えた。２時間撹拌後、混合物を濃縮し、ＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、移動相Ａ：水、移動相Ｂ：ジオキサン、３０分間で移動相Ｂを１０％から６５％に増加させた。）。画分を集めて凍結乾燥することにより、目的化合物を得た（４．９ｍｇ、収率７３％）。ESI MS m/z+ 946.3 (M+Na), 964.3 (M+Na+H2O)。
【０２６８】
実施例４６；ジスルフィド結合により接続されたＰＢＤ誘導体と抗体との共役体及びその抗腫瘍活性
【化７０】
0006332773.tif 000092
【０２６９】
２．５ｍｇ／ｍＬの抗ＣＤ２０抗体及び５モル当量の２，５−ジオキソピロリジン−１−イル  ４−（（２−（（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−２−メチレン−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）ホスホリル）エチル）ジスルファニル）−４−メチルペンタノエートを、１０％ｖ／ｖＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）及び１ｍＭ亜硫酸水素ナトリウムを含有するＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）緩衝液（ｐＨ７．５、５０ｍｌ）中において、３０℃で６時間撹拌した。共役体を精製し、ＮＡＰ脱塩用カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡ  Ｇｒａｄｅ，ＧＥ  Ｈｅｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、緩衝液を２５０ｍＭグリシン、１０ｍＭヒスチジン、１％ショ糖、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０、及び５０μＭ亜硫酸水素ナトリウムから構成される緩衝液（ｐＨ６．０）に交換した。次いで、Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析キット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ２０，０００ＭＷＣＯ）を用いて、同じ緩衝液で室温下４時間透析した。ＬＣ−ＭＳで測定した結果、純化した共役体は、１つの抗体毎に平均３．６個のＰＢＤ誘導体分子が結合し、単量体率が９９％であり（サイズ排除クロマトグラフィーにより測定）、非共役薬物は０．１％未満であり（デュアルカラム逆相クロマトグラフィー分析により測定）、最終タンパク質濃度が１．５ｍｇ／ｍｌであった。
【０２７０】
抗ＣＤ２０抗体とＰＢＤ誘導体二量体との共役体の体外（インビトロ）薬理評価。共役体のＲａｊｉ細胞に対するＩＣ５０値は１．６〜２．５ｐＭであり、抗原陽性のＲａｊｉ細胞に対して高い活性を有する。一方、非共役抗ＣＤ２０抗体で抗原をブロックした場合には、薬理活性が有意に低減しており、細胞毒性効果が抗原特異的であることが示されている。
【０２７１】
【表３】
0006332773.tif 000093
【０２７２】
実施例４７； （６ａＳ，６ａ’Ｓ）−３，３’−（（（（２−（メチルスルフィノチオイル）エチル）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（オキシ））−ビス（２−メトキシ−７，８，９，１０−テトラヒドロベンゾ［ｅ］ピリド［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１２（６ａＨ）−オン
【化７１】
0006332773.tif 000094
【０２７３】
（Ｓ）−３−ヒドロキシ−２−メトキシ−７，８，９，１０−テトラヒドロベンゾ［ｅ］ピリド［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１２（６ａＨ）−オン（６５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１００ｍｇ、０．３０７ｍｍｏｌ）、及びＫＩ（３．２ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（５ｍｌ）に、（（２−（メチルスルフィノチオイル）エチル）−ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（４−メチルベンゼンスルホネート）（１３）（７１ｍｇ、０．１２３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１晩撹拌し、蒸発させ、分取Ｃ−１８カラムによるＨＰＬＣ（φ１０ｍｍ×２００ｍｍカラム、流速：９ｍＬ／ｍｉｎ、移動相：０〜５分間はＡ：Ｂ＝８０：２０、続いて１５分間でＡ：Ｂ＝５０：５０、２５分間でＡ：Ｂ＝３０：７０、３０分間でＡ：Ｂ＝１０：９０、Ａ相：水、Ｂ相：ジオキサン) で精製し、凍結乾燥を行い、白色固体の目的化合物を得た（５４．７ｍｇ、収率６１％）。EIMS m/z+ 751.2 (M+Na), 767.3 (M+K), 785.3 (M+K+H2O); MS m/z- 727.2 (M-H)。
【０２７４】
実施例４８；（１１ａＳ，１１ａ’Ｓ）−８，８’−（（（（２−（メチルスルフィノチオイル）エチル）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（オキシ））ビス（７−メトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン)
【化７２】
0006332773.tif 000095
【０２７５】
（Ｓ）−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（６０．４ｍｇ、０．２４５ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１００ｍｇ、０．３０７ｍｍｏｌ）、及びＫＩ（３．２ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（５ｍｌ）に、（（２−（メチルスルフィノチオイル）エチル）ホスホリル）−ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（４−メチルベンゼンスルホネート）（７１ｍｇ、０．１２３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１晩撹拌し、蒸発させ、分取Ｃ−１８カラムによるＨＰＬＣ（φ１０ｍｍ×２００ｍｍカラム、流速：９ｍＬ／ｍｉｎ、移動相：０〜５分間はＡ：Ｂ＝８０：２０、続いて１５分間でＡ：Ｂ＝５０：５０、２５分間でＡ：Ｂ＝３０：７０、３０分間でＡ：Ｂ＝１０：９０、Ａ相：水、Ｂ相：ジオキサン) で精製し、凍結乾燥を行い、白色固体の目的化合物を得た（５４．７ｍｇ、収率６１％）。EIMS m/z+ 723.2 (M+Na), 739.3 (M+K), 757.3 (M+K+H2O); MS m/z- 699.2 (M-H)。
【０２７６】
実施例４９；ビス（２−ブロモエチル) ホスフィン酸
【化７３】
0006332773.tif 000096
【０２７７】
アルゴンガス雰囲気下で、次亜リン酸アンモニウム（８．００ｇ、９６ｍｍｏｌ）及びヘキサメチルジシラザン（２０．０ｍｌ、９６ｍｍｏｌ）の混合物を１２０℃で１時間加熱した。混合物を室温まで冷却後、ジブロモエタン（６０ｍｌ）を加え、混合物を１２０℃で８時間撹拌した。形成されたトリメチルブロモシラン及び過量のジブロモエタンを真空下で除去した。次いで水系エタノール（１：１）溶媒１００ｍｌを残渣に滴加し、０．５時間還流した。その後、真空下で溶媒を除去し、酢酸エチルで抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で溶媒を除去することにより目的化合物を得た（１６．５３ｇ、収率６１％）ESI MS C4H8Br2O2P(M-H)、計算値276.8、測定値276.8。
【０２７８】
実施例５０；ビス（２−ブロモエチル）ホスフィン酸エチル
【化７４】
0006332773.tif 000097
【０２７９】
ビス（２−ブロモエチル) ホスフィン酸（５．００ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）のオルトギ酸トリエチル溶液（１００ｍｌ）をディーン−スターク（Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ）トラップで還流し、エタノール及びギ酸エチルを除去した。過量のオルトギ酸トリエチルを真空下で除去した。混合物について、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１５〜１：４）によるＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（２．８６ｇ、収率５２％）。ESI MS m/z+ 328.9 (M+Na), 330.9 (M+Na+2), 332.9 (M+Na+4)。
【０２８０】
実施例５１；ビス（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）ホスフィン酸エチル
【化７５】
0006332773.tif 000098
【０２８１】
（Ｓ）−８−ヒドロキシ−７−メトキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−５（１１ａＨ）−オン（６０．１ｍｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１００ｍｇ、０．３０７ｍｍｏｌ）、及びＫＩ（３．２ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）のブタノン溶液（５ｍｌ）に、ビス（２−ブロモエチル）ホスフィン酸エチル（３７．１ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１晩撹拌し、蒸発させ、分取Ｃ−１８カラムによるＨＰＬＣ（φ１０ｍｍ×２００ｍｍカラム、流速：９ｍＬ／ｍｉｎ、勾配溶媒系は、０〜５分間はＡ：Ｂ＝８０：２０、続いて１５分間でＡ：Ｂ＝５０：５０、２５分間でＡ：Ｂ＝３０：７０、３０分間でＡ：Ｂ＝１０：９０、Ａ相：水、Ｂ相：ジオキサンで行った。) で精製し、凍結乾燥を行い、白色固体の目的化合物を得た（５２．９ｍｇ、収率６８％）。ESI MS m/z+ 661.2 (M+Na), 677.3 (M+K), 679. (M+Na+H2O)。
【０２８２】
実施例５２；（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）ホスフィン酸エチル
【化７６】
0006332773.tif 000099
【０２８３】
０℃で、ビス（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）ホスフィン酸エチル（１００ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（１ｍｌ）と純エタノール（１．５ｍｌ）との混合溶媒溶液に、水素化ホウ素ナトリウムのメトキシエチルエーテル溶液（６３μｌ、０．５Ｍ、０．０３１ｍｍｏｌ）を加えた。５分後に氷浴を除き、混合物を室温で３時間撹拌し、次いで０℃に冷却して飽和塩化アンモニウム溶液を加えて反応を停止させ、ジクロロメタンで希釈し、分層した。塩水で有機相を洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、「セライト」（Ｃｅｌｉｔｅ）を通じてろ過及び濃縮を行った。残渣を逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル／水）で精製した。対応する画分をジクロロメタンで抽出し、濃縮することにより、目的化合物である（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）ホスフィン酸エチルを得た（４３．１ｍｇ、収率４３％）。MS m/z+ 663.3 (M+Na)，679.3 (M+K)，681.3 (M+Na+H2O)；ビス（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）ホスフィン酸エチル（９．２ｍｇ、収率９．２％）、MS m/z+ 665.2 (M+Na)，681.3 (M+K)，683.2 (M+Na+H2O)；未反応の出発原料（９．６ｍｇ、収率９．６％）。MS m/z+ 661.2 (M+Na)，679.2 (M+Na+H2O)。
【０２８４】
実施例５３；（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−１０−（４−ピリジン−２−イルジスルファニル）ブタノイル）−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）ホスフィン酸エチル
【化７７】
0006332773.tif 000100
【０２８５】
触媒量のＤＭＦ（５μｌ）を、４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）酪酸（５１．１ｍｇ、０．２２３ｍｍｏｌ）及び塩化オキサリル（０．１０ｍｌ、１．１２５ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２溶液（４．０ｍｌ）に加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。過量のＣＨ２Ｃｌ２及び塩化オキサリルを回転蒸発により除去した。得られた塩化物を新たなＣＨ２Ｃｌ２（３．０ｍｌ）に溶解させ、アルゴンガス雰囲気下、０℃で（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）ホスフィン酸エチル（４０．０ｍｇ、０．００６２ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（０．４ｍｌ）を加えた。反応混合物を室温まで加熱し、８時間撹拌を続けた。Ｅｔ３Ｎ及びＣＨ２Ｃｌ２を除去した後、残渣を水及び酢酸エチル（６／６ｍｌ）間で分層させた。水相を更に酢酸エチル（２×６ｍｌ）で抽出した。有機相を合わせて塩水（３ｍｌ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）及び濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２  １：２０〜１：８）で残渣の精製を行うことにより、目的化合物（３８．１ｍｇ、収率７２．１％）。EI MS m/z+ 874.2 ([M]++Na)，892.2 ([M]++Na+H2O)。
【０２８６】
実施例５４；ジスルフィド結合により接続されたＰＢＤ誘導体と抗体との共役体及びその抗腫瘍活性
【化７８】
0006332773.tif 000101
【０２８７】
３７℃で３０分間、モノクローナル抗体（５ｍｇ／ｍｌ、特別に調製されたシステインに富むＣＤ２２C又はＣＤ２０抗体）を含む５０ｍＭホウ酸ナトリウム含有するＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．８）をジチオスレイトール（ＤＤＴ）（最終濃度１０ｍＭ）で処理した。ゲルろ過（Ｇ−２５、ＰＢＳ含有１ｍＭ  ＤＴＰＡ）した後、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）でチオール基を検出した結果、抗体毎に約７〜８のチオール基があることが示された。還元抗体を含む１０％ｖ／ｖＤＭＡ及び１ｍＭ亜硫酸水素ナトリウム含有ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．５）に、（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−１０−（４−ピリジン−２−イルジスルファニル）ブタノイル）−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）（２−（（（Ｓ）−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，５，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イル）オキシ）エチル）ホスフィン酸エチル（１．２当量／ＳＨ）を４℃で加えた。反応は３０℃で６時間撹拌することにより行った。過量のシステインを加えることにより、反応を終了させた。ＮＡＰ脱塩用カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡ  Ｇｒａｄｅ，ＧＥ  Ｈｅｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、共役体を精製すると共に、緩衝液を２５０ｍＭグリシン、１０ｍＭヒスチジン、１％ショ糖、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０、及び５０μＭ亜硫酸水素ナトリウムから構成される緩衝液（ｐＨ６．０）に交換した。次いで、Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析キット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ２０，０００ＭＷＣＯ）を用いて、同じ緩衝液で室温下４時間透析した。ＬＣ−ＭＳで測定した結果、精製された共役体は、１つの抗体毎に平均３〜４個のＰＢＤ誘導体分子が結合し、単量体率が９９％であり（サイズ排除クロマトグラフィーにより測定）、非共役薬物は０．２％未満であり（デュアルカラム逆相クロマトグラフィー分析により測定）、最終タンパク質濃度が２．５ｍｇ／ｍｌであった（タンパク質濃度及び薬物担持量はそれぞれ、２８０ｎｍ及び２５４ｎｍでのスぺクトル分析により確認された。）。
【０２８８】
【表４】
0006332773.tif 000102
【０２８９】
実施例５５；ビス（２−（ベンジルオキシ）エチル）ホスフィンオキシド
【化７９】
0006332773.tif 000103
【０２９０】
マグネシウム棒（１．２ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）及びＥｔ２Ｏ（５０ｍｌ）を滴下漏斗及び凝縮管のある三つ口反応フラスコに加えた。滴下漏斗を（（２−ブロモエトキシ）メチル）ベンゼン（１０．７０ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）のＥｔ２Ｏ溶液（５０ｍｌ）で充たした。滴下漏斗上の溶液をＭｇスラリーへ滴加、僅かに加熱することにより反応を開始した。一旦加熱を開始すればそれ以上は必要なく、還流条件を維持できる速度で溶液を滴加した。溶液を完全にＭｇスラリーへ滴加した後、還流のためにフラスコを１時間加熱した。１時間後、溶液を０℃に冷却してから亜リン酸ジエチル（３．１０ｍｌ、２４．０ｍｍｏｌ）のＥｔ２Ｏ溶液（１０ｍｌ）を滴下漏斗に加えた。一旦氷浴を除去し、還流のために１時間加熱した。１時間後、混合物を氷浴で冷却し、１０％ＨＣｌ（５０ｍｌ）及び水（５０ｍｌ）を撹拌しながら徐々に加えた。エーテル層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、回転蒸発及びＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：２０〜１：１０）によるＳｉＯ２クロマトグラフでの精製を行い、目的化合物を得た（６．２６ｇ、収率８２％）。MS（ESI）m / z +  C18H23NaO3P、計算値341.1（M+Na）、測定値341.1。
【０２９１】
実施例５６；Ｐ，Ｐ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−（３−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピル）ホスフィン酸アミド
【化８０】
0006332773.tif 000104
【０２９２】
ビス（２−ベンジルオキシ）エチル）ホスフィンオキシド（１．０ｇ、３．１４ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（０．２０ｇ、１０ｗｔ％）のＴＨＦ溶液（３０ｍｌ）を２５０ｍｌの水素添加ボトルに加え、水素（３０ｐｓｉ）と接触させた。２時間振とうさせた後、セライトベッド（Ｃｅｌｉｔｅ  ｂｅｄ）を通じて混合物をろ過し、次いで濃縮及びＣＨ２Ｃｌ２／トルエンと共に共蒸発を行った。氷浴下で混合物をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）及びＣＣｌ４（３ｍｌ）に再溶解させ、続いて３−（ピリジン−２−イルスルファニル）プロパン−１−アミン（１．１０ｇ、５．５０ｍｍｏｌ）の２０％ＮａＯＨ水溶液（１０ｍｌ）を滴加した。反応混合物を２０〜２５℃で２時間撹拌した。有機相を分離し、飽和Ｋ２ＣＯ３溶液（２×３０ｍｌ）及び（３×３０ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、シリカゲルでクロマトグラフィーを行うことによって、目的化合物を得た（６６５ｍｇ、収率６３％）MS（ESI）m / z +  C12H21N2NaO3PS2、計算値359.1（M+Na）、測定値359.1。
【０２９３】
実施例５７；Ｐ，Ｐ−ビス（２−（ベンジルオキシ）エチル）−Ｎ−メチル−Ｎ−（３−（メチルアミノ）プロピル）ホスフィン酸アミド
【化８１】
0006332773.tif 000105
【０２９４】
光学的に純粋なビス（２−ベンジルオキシ）エチル）ホスフィンオキシド（１．００ｇ、３．１４ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（５ｍｌ）及びＣＣｌ４（２５ｍｌ）の混合物に、０℃でＮ，Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパン−１，３−ジアミン（１．８０ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で３０分間維持し、その後、室温まで加熱した。混合物を一晩撹拌後、減圧下で溶媒を除去し、水を加えた。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた。ろ過及び溶媒除去後、残渣をフラッシュＳｉＯ２クロマトグラフィーで精製することにより、目的化合物を得た（１．０９ｇ、収率８３％）。MS（ESI）m / z +  C23H35N2NaO3P、計算値441.2（M+Na）、測定値441.2。
【０２９５】
実施例５８；Ｐ，Ｐ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−メチル−Ｎ−（３−（メチルアミノ）プロピル）ホスフィン酸アミド
【化８２】
0006332773.tif 000106
【０２９６】
Ｐ，Ｐ−ビス（２−（ベンジルオキシ）エチル）−Ｎ−メチル−Ｎ−（３−（メチルアミノ）プロピル）ホスフィン酸アミド（１．００ｇ、２．３９ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（０．２０ｇ、Ｃ上に１０％Ｐｄ）のメタノール溶液（４０ｍｌ）を水素添加ボトルに加え、水素（３０ｐｓｉ）と接触させた。４時間振とうさせた後、セライトベッド（Ｃｅｌｉｔｅ  ｂｅｄ）を通じて混合物をろ過し、更なる精製はせずに次に反応に用いた（０．５６６ｇ、粗収率９９％）。MS（ESI）m / z +  C9H23N2NaO3P、計算値261.1（M+Na）、測定値261.1。
【０２９７】
実施例５９；Ｎ−（３−（（ビス−（２−ヒドロキシエチル）ホスホリル）（メチル）アミノ）プロピル）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−メチルブチルアミド
【化８３】
0006332773.tif 000107
【０２９８】
４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酪酸（０．６０ｇ、３．２７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（２５ｍｌ）に、（ＣＯＣｌ）２（１．００ｇ、７．８７ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（２０μｌ）を加えた。混合物を２時間撹拌し、蒸発乾燥させ、残渣をＴＨＦ（２０ｍｌ）に再度溶解させた。新規に調製したＰ，Ｐ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−メチル−Ｎ−（３−（メチルアミノ）プロピル）ホスフィン酸アミド（０．５６６ｇ、〜２．３８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）及び飽和Ｎａ２ＨＰＯ３緩衝液（６０ｍｌ、ｐＨ１０）の混合溶媒溶液に、４℃で新規に調製した４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）酪酸塩化物のＴＨＦ溶液（２０ｍｌ）を１時間滴下した。加えた後、混合物を室温で３時間撹拌し、濃Ｈ３ＰＯ４でｐＨ〜７．５に中和し、〜６５ｍｌまで濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した（３×４０ｍｌ）。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過、濃縮及びＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１０〜１：５）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（６０１ｍｇ、収率６３％）。MS（ESI）m / z +  C17H30N3NaO6P、計算値426.2（M+Na）、測定値426.2。
【０２９９】
実施例６０；（（（３−（４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ−１−イル）−Ｎ−メチルブチルアミド）−プロピル）（メチル）−アミノ）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル) ジメタンスルホン酸エステル
【化８４】
0006332773.tif 000108
【０３００】
Ｎ−（３−（（ビス−（２−ヒドロキシエチル）ホスホリル）（メチル）アミノ）プロピル）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−メチルブチルアミド（５９０ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）及びＥｔ３Ｎ（５ｍｌ）の混合溶媒溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．４０ｍｌ、５．１６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を４時間撹拌した後、濃縮及びＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１５〜１：１０）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（７１０ｍｇ、収率８７％）。MS（ESI）m / z +  C19H34N3NaO10PS2、計算値582.1（M+Na）、測定値582.1。
【０３０１】
実施例６１；Ｎ−（３−（（ビス（２−ヒドロキシエチル）ホスホリル）（メチル）アミノ）プロピル）−Ｎ−メチル−４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）ブチルアミド
【化８５】
0006332773.tif 000109
【０３０２】
４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）酪酸（１．０５ｇ、４．５８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（４０ｍｌ）に、（ＣＯＣｌ）２（１．２０ｇ、９．４４ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（２０μｌ）を加えた。混合物を２時間撹拌した後、蒸発乾燥させ、次いでＴＨＦ（３０ｍｌ）に再溶解した。新規に調製したＰ，Ｐ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−メチル−Ｎ−（３−（メチルアミノ）プロピル）ホスファミド（０．５６６ｇ、〜２．３８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（２０ｍｌ）及び飽和ＮａＨＰＯ３緩衝液（６０ｍｌ、ｐＨ１０）の混合溶媒溶液に、前記調製した４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）酪酸クロリドのＴＨＦ溶液（３０ｍｌ）を４℃で１時間滴加した。滴加後、混合物を室温で３時間撹拌し、濃Ｈ３ＰＯ４でｐＨを７．５に中和し、７５ｍｌまで濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍｌ）で抽出した。有機相を合わせ、ＮａＳＯ４で乾燥させ、ろ過、濃縮及びＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１０〜１：５）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（６４０ｍｇ、収率６０％）。MS（ESI）m / z +  C18H32N3NaO4PS2、計算値472.2（M+Na）、測定値472.2。
【０３０３】
実施例６２；（（メチル（３−（Ｎ−メチル−４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）ブチルアミド）プロピル）−アミノ）ホスホリル）−ビス（エタン−２，１−ジイル) ジメタンスルホン酸エステル
【化８６】
0006332773.tif 000110
【０３０４】
Ｎ−（３−（（ビス（２−ヒドロキシエチル）ホスホリル）（メチル）アミノ）プロピル）−Ｎ−メチル−４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）ブチルアミド（６３０ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）及びＥｔ３Ｎ（５ｍｌ）の混合溶媒溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．４０ｍｌ、５．１６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を４時間撹拌した後、濃縮及びＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１５〜１：１０）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（７２０ｍｇ、収率８５％）。MS（ESI）m / z +  C20H36N3NaO8PS4、計算値628.1（M+Na）、測定値628.1。
【０３０５】
実施例６３；（（（３−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピル）アミノ）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ビス（４−メチルベンゼンスルホン酸エステル
【化８７】
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【０３０６】
Ｐ，Ｐ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ−（３−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピル）ホスフィン酸アミド（５０２ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）及びＥｔ３Ｎ（５ｍｌ）の混合溶媒溶液に、塩化パラトルエンスルホニル（１．１５ｇ、６．０３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を４時間撹拌した後、濃縮及びＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１５〜１：１０）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（８０２ｍｇ、収率８３％）。MS（ESI）m / z +  C26H33N2NaO7PS4、計算値667.1（M+Na）、測定値667.1。
【０３０７】
実施例６４；２，２’−（クロロホスホリル）ジ酢酸ジメチル
【化８８】
0006332773.tif 000112
【０３０８】
アルゴンガス雰囲気下、Ｂｕ３ＳｎＣＨ２ＣＯ２Ｍｅ（７．２９ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）をＰＣｌ３（５ｍｌ、２．０Ｍ  ＣＨ２Ｃｌ２溶液）のベンゼン溶液（１００ｍｌ）に滴加した。３０分間還流させた後、ＮＭＲ及びＧＣ−ＭＳにより確認したところ、混合物中の生成物２，２’−（クロロホスホリル）二酢酸ジメチルの含有量が〜８５％であった。次いで、薄セライトベッド（Ｃｅｌｉｔｅ  ｂｅｄ）を通じて反応混合物をろ過し、該ベッドをベンゼンで洗浄してから、０℃まで冷却し、乾燥酸素を溶液に６時間通した。その後、０℃で溶液を迅速に蒸発・乾燥させ、アルゴンガスをパージし、精製をせずに直接次のステップに用いた。混合物中の目的化合物の純度が約８５％であることをＮＭＲにより確認した。MS（ESI）m / z +  C6H10ClNaO5P、計算値251.0（M+Na）、測定値251.0。
【０３０９】
実施例６５；２，２’、２’’−ホスホリルトリ酢酸トリメチル
【化８９】
0006332773.tif 000113
【０３１０】
アルゴンガス雰囲気下、Ｂｕ３ＳｎＣＨ２ＣＯ２Ｍｅ（１１．６７ｇ、３２．０ｍｍｏｌ）をＰＣｌ３（５ｍｌ、２．０Ｍ  ＣＨ２Ｃｌ２溶液）のベンゼン溶液（１００ｍｌ）に滴加した。３０分間還流させた後、ＮＭＲ及びＧＣ−ＭＳにより確認したところ、混合物中の生成物Ｐ（ＣＨ２ＣＯ２Ｍｅ）３の含有量が〜９３％であった。次いで、薄セライトベッド（Ｃｅｌｉｔｅ  ｂｅｄ）を通じて反応混合物をろ過し、該ベッドをベンゼンで洗浄してから、０℃まで冷却し、乾燥酸素を溶液に６時間通した。その後、溶液を蒸発させ、ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１５〜１：８）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（２．３１ｇ、収率８７％）。MS（ESI）m / z +  C9H15NaO7P、計算値289.0（M+Na）、測定値289.0。
【０３１１】
別の方法として、アルゴンガス雰囲気下、ＢｒＣＨ２ＣＯ２Ｍｅ（４．７０ｇ、３０．９０ｍｍｏｌ）をＰ（ＳｉＭｅ３）３（２．５０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）のベンゼン溶液（１００ｍｌ）に滴加した。３０分間還流させた後、ＮＭＲ及びＧＣ−ＭＳにより確認したところ、混合物中の生成物Ｐ（ＣＨ２ＣＯ２Ｍｅ）３の含有量が〜８９％であった。次いで、薄セライトベッド（Ｃｅｌｉｔｅ  ｂｅｄ）を通じて反応混合物をろ過し、該ベッドをＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、蒸発させ、ＣＨ２Ｃｌ２に再溶解させ、ｍ−ＣＰＢＡ（２．０７ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間激しく撹拌した。その後、蒸発させ、ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１５〜１：８）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（２．２５ｇ、収率８５％）。MS（ESI）m / z +  C9H15NaO7P、計算値289.0（M+Na）、測定値289.0。
【０３１２】
実施例６６；トリス（２−ヒドロキシエチル）ホスフィンオキシド
【化９０】
0006332773.tif 000114
【０３１３】
０℃でＬｉＡｌＨ４（２０ｍｌ  １．０Ｍ  ＴＨＦ溶液、２０ｍｍｏｌ）を２，２’、２’’−ホスホリルトリ酢酸トリメチル（２．２０ｇ，８．２７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍｌ）溶液に滴加した。混合物を０℃で２．５時間撹拌し、次いでメタノール（５ｍｌ）を加えて反応を終了させ、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍｌ）で希釈し、ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を溶離液として短ＳｉＯ２カラムを通じて精製し、濃縮及びエタノール／ヘキサンによる再結晶を行うことによって、目的化合物を得た（１．２３ｇ、収率８２％）。MS（ESI）m / z +  C6H15NaO4P、計算値205.07（M+Na）、測定値205.07。
【０３１４】
実施例６７；Ｐ，Ｐ−ビス（クロロメチル）−Ｎ−（３−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピル）ホスフィン酸アミド
【化９１】
0006332773.tif 000115
【０３１５】
３−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロパン−１−アミン（０．６０ｇ、３．００ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）及びＥｔ３Ｎ（５ｍｌ）の混合溶媒溶液に、ビス（クロロメチル）ホスフィン酸クロリド（０．５４ｇ、３．００ｍｌ  ＦＣＨ基から）のＣＨ２Ｃｌ２溶液（５ｍｌ）を０〜４℃で３０分間加えた。その後、混合物を室温で１時間撹拌し、蒸発させ、ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：２０〜１：１０）を溶離液としてＳｉＯ２カラムによる精製を行い、目的化合物を得た（８８７ｍｇ、収率８６％）。ESI MS m/z+ 367.0 (M+Na)。MS（ESI）m / z +  C10H15Cl2N2NaOPS2、計算値367.0（M+Na）、測定値367.0。
【０３１６】
実施例６８；Ｐ，Ｐ−ビス（（（（２Ｓ，３ａＲ）−２−フルオロ−８−メトキシ−１０−オキソ−１，２，３，３ａ，１０，１０ａ−ヘキサヒドロ−ベンゾ［ｂ］シクロペンタ［ｅ］アゼピン−７−イル）オキシ）メチル）−Ｎ−（３−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピル）ホスフィン酸アミド
【化９２】
0006332773.tif 000116
【０３１７】
（２Ｓ，３ａＲ）−２−フルオロ−７−ヒドロキシ−８−メトキシ−１，３，３ａ，１０ａ−テトラヒドロベンゾ［ｂ］シクロペンタ［ｅ］−アゼピン−１０（２Ｈ）−オン（Ｃ２−フルオロ置換ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン、A. Kamal, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2004, 14, 2669-2672を参照）（８０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（１１２ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）をブタノン（５ｍｌ）に加え、５分間撹拌し、続いて、Ｐ，Ｐ−ビス（クロロメチル）−Ｎ−（３−（ピリジン−２−イルジスルファニル）プロピル）ホスフィン酸アミド（５０ｍｇ、０．１４５ｍｍｏｌ）及びＫＩ（４ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を加えた。アルゴンガス雰囲気下、混合物を２４時間撹拌し、濃縮し、Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ（４５分間で５％ＣＨ３ＣＮから６０％ＣＨ３ＣＮ。ｖ＝９ｍｌ／ｍｉｎ）を溶離液として分取ＨＰＬＣ  Ｃ−１８カラム（２５×２ｃｍ）で精製することにより、目的化合物を得た（７３ｍｇ、収率６３％）。MS（ESI）m / z +  C38H41F2N4NaO7PS2、計算値821.2（M+Na）、測定値821.2 (M+Na) 、837.3 (M+K)、839.2 (M+Na+H2O)、857.2 (M+Na+2H2O)。
【０３１８】
３７℃で５日培養した後におけるＲａｊｉ細胞に対する体外薬効試験では、ＩＣ５０＝０．１〜０．５ｎＭであった。
【０３１９】
実施例６９：Ｎ−（３−（（ビス（２−（（（２Ｓ，３ａＲ）−２−フルオロ−８−メトキシ−１０−オキソ−１，２，３，３ａ，１０，１０ａ−ヘキサヒドロベンゾ［ｂ］シクロペンタ［ｅ］アゼピン−７−イル）オキシ）エチル）ホスホリル）（メチル）アミノ）−プロピル）−４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ−１−イル）−Ｎ−メチルブチルアミド
【化９３】
0006332773.tif 000117
【０３２０】
（２Ｓ，３ａＲ）−２−フルオロ−７−ヒドロキシ−８−メトキシ−１，３，３ａ，１０ａ−テトラヒドロベンゾ［ｂ］シクロペンタ［ｅ］−アゼピン−１０（２Ｈ）−オン（８０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（１１０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）をブタノン（５ｍｌ）に加え、５分間撹拌し、続いて、（（（３−（４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ−１−イル）−Ｎ−メチルブチルアミド）プロピル）（メチル）アミノ）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ジメタンスルホン酸エステル（８２ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ）及びＫＩ（４ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を加えた。アルゴンガス雰囲気下、混合物を２４時間撹拌し、濃縮し、Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ（４５分間で５％ＣＨ３ＣＮから６０％ＣＨ３ＣＮ。ｖ＝９ｍｌ／ｍｉｎ）を溶離液として分取ＨＰＬＣ  Ｃ−１８カラム（２５×２ｃｍ）で精製することにより、目的化合物を得た（７９ｍｇ、収率６１％）。MS（ESI）m / z +  C45H54F2N5NaO10P、計算値916.3（M+Na）、測定値916.3 、932.3 (M+K)、934.3 (M+Na+H2O)、952.3 (M+Na+2H2O)。
【０３２１】
実施例７０；Ｎ−（３−（（ビス（２−（（（２Ｓ，３ａＲ）−２−フルオロ−８−メトキシ−１０−オキソ−１，２，３，３ａ，１０，１０ａ−ヘキサヒドロベンゾ［ｂ］シクロペンタ［ｅ］アゼピン−７−イル）オキシ）エチル）ホスホリル）（メチル）アミノ）−プロピル）−Ｎ−メチル−４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）ブチルアミド
【化９４】
0006332773.tif 000118
【０３２２】
（２Ｓ，３ａＲ）−２−フルオロ−７−ヒドロキシ−８−メトキシ−１，３，３ａ，１０ａ−テトラヒドロベンゾ［ｂ］シクロペンタ［ｅ］−アゼピン−１０（２Ｈ）−オン（８０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（１１０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）をブタノン（５ｍｌ）に加え、５分間撹拌し、（（メチル（３−（Ｎ−メチル−４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）−ブチルアミド）プロピル）アミノ）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ジメタンスルホン酸エステル（８７ｍｇ、０．１４４ｍｍｏｌ）及びＫＩ（４ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を加えた。アルゴンガス雰囲気下、混合物を２４時間撹拌し、濃縮し、Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ（４５分間で５％ＣＨ３ＣＮから６０％ＣＨ３ＣＮ。ｖ＝９ｍｌ／ｍｉｎ）を溶離液として分取ＨＰＬＣ  Ｃ−１８カラム（２５×２ｃｍ）で精製することにより、目的化合物を得た（８２ｍｇ、収率６１％）。MS（ESI）m / z +  C46H56F2N5NaO8PS2、計算値962.3（M+Na）、測定値962.3 、978.3 (M+K)、980.3 (M+Na+H2O)、996.3 (M+Na+2H2O)。
【０３２３】
実施例７１；（２Ｒ，２’Ｒ，３ａＲ，３ａ’Ｒ，４Ｓ，４’Ｓ）−７，７−（（（（（３−（４−メルカプト−Ｎ−メチルブタン−アミド）プロピル）（メチル）アミノ）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（オキシ））ビス（２−フルオロ−８−メトキシ−１０−オキソ−１，２，３，３ａ，４，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｂ］シクロペンタ［ｅ］アゼピン−４−スルホン酸ナトリウム
【化９５】
0006332773.tif 000119
【０３２４】
Ｎ−（３−（（ビス（２−（（（２Ｓ，３ａＲ）−２−フルオロ−８−メトキシ−１０−オキソ−１，２，３，３ａ，１０，１０ａ−ヘキサヒドロベンゾ［ｂ］−シクロペンタ［ｅ］アゼピン−７−イル）オキシ）エチル）ホスホリル）（メチル）アミノ）プロピル）−Ｎ−メチル−４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）ブタンアミド（７０ｍｇ０．０７４ｍｍｏｌ）の１０％ＤＭＡ（ｖ／ｖ）含有Ｎａ２ＨＰＯ４緩衝液（５０ｍＭ、５ｍｌ）溶液及び２ｍＭ亜硫酸水素ナトリウム（ｐＨ７．８）を１時間撹拌し、続いて、ＴＣＥＰ（４０ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ、飽和ＮａＨＣＯ３で中和）で処理した。混合物を１時間撹拌し、濃縮し、Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ（４５分間で２％ＣＨ３ＣＮから５０％ＣＨ３ＣＮ。ｖ＝９ｍｌ／ｍｉｎ）を溶離液として分取ＨＰＬＣ  Ｃ−１８カラム（２５×２ｃｍ）で精製することにより、目的化合物を得た（５２ｍｇ、収率６８％）。MS（ESI）m / z -  C41H54F2N4Na2O14PS3、計算値1037.2 (M-H)、測定値1037.2。
【０３２５】
実施例７２；以下に示す、フリーのチオール基を含むＰＢＤ誘導体二量体と抗体との共役体の製造
【化９６】
0006332773.tif 000120
【０３２６】
１．０当量の連結体（ＳＭＣＣ又はＳＭＰＤＰ、〜２ｍＭ）のＤＭＡ溶液を、１．５当量の（２Ｒ，２’Ｒ，３ａＲ，３ａ’Ｒ，４Ｓ，４’Ｓ）−７，７−（（（（（３−（４−メルカプト−Ｎ−メチルブタン−アミド）プロピル）（メチル）アミノ）ホスホリル）ビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（オキシ））ビス（２−フルオロ−８−メトキシ−１０−オキソ−１，２，３，３ａ，４，５，１０，１０ａ−オクタヒドロベンゾ［ｂ］シクロペンタ［ｅ］アゼピン−４−スルホン酸ナトリウムを含有するＰＢＳ緩衝液（ｐＨ６．０）に加え、混合物を４〜２０℃で４５〜１２０分間インキュベートした。次いで、０．１〜０．２５当量のモノクローナル抗体を含有する緩衝液（ｐＨ〜８）を前記連結体−薬物含有混合物に加え、ｐＨを７．０〜８．０に調節した。室温で２〜２４時間インキュベートした後、ＰＢＳ（ｐＨ６．５）で平衡化したセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ２５カラムで精製した。導入されたＰＢＤ誘導体二量体分子の数は、２５４ｎｍ及び２８０ｎｍのＵＶで、又はＱＴＯＦ質量スペクトルで測定した。
【０３２７】
【表５】
0006332773.tif 000121
【０３２８】
実施例７３；生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）細胞毒性アッセイ
実験の操作プロセス：非共役遊離薬物又は薬物共役体を９６穴平底培養皿に加え、所望のモル範囲をカバーするために段階的に希釈した。抗原陽性（Ａｇ＋）又は抗原陰性（Ａｇ−）細胞を特定の細胞密度（１０００〜１００００細胞／ウェル）となるようにウェルに加え、細胞株及び薬物濃度毎に３つの並列サンプルを調製した。全ての細胞株をＲＰＭＩ−１６４０（カタログ番号１１８７５−０８５、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）で培養し、１０％胎児ウシ血清及びゲンタマイシンを補給した。オリフィス板を使い、３７℃、５％二酸化炭素の大気下で５日培養した。培養の最後の段階で、ＷＳＴ−８細胞活性検定方法を用い、生細胞をＷＳＴ−８（２〜７時間）で測定し、細胞毒性を評価した。各ウェルの吸光度を測定し、各濃度での細胞生存率を作図し、共役体の細胞毒効果又は抗原特異性を計算した。抗体−薬物共役体の効力及び特異性は、過量の裸の抗体を加える及び加えない条件の下で、共役体による抗原陽性細胞に対する殺傷効力によって測定した。
【０３２９】
参考文献
(1)   Ma, C.; et al. Acta Crystallogr Sect E Struct Rep Online 2012, 68, o126.
(2)   Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2012, 22, 571.
(3)   Hartley, J. A.; et al. Invest New Drugs 2012, 30, 950.
(4)   Bose, D. S.; et al. Eur J Med Chem 2012, 50, 27.
(5)   Shankaraiah, N.; et al. J Org Chem 2011, 76, 7017.
(6)   Rahman, K. M.; et al. Nucleic Acids Res 2011, 39, 5800.
(7)   Ourahou, S.; et al. Acta Crystallogr Sect E Struct Rep Online 2011, 67, o1906.
(8)   Kamal, A.; et al. ChemMedChem 2011, 6, 1665.
(9)   Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem 2011, 19, 2565.
(10)  Kamal, A.; et al. Eur J Med Chem 2011, 46, 3820.
(11)  Jebani, A.; et al. Acta Crystallogr Sect E Struct Rep Online 2011, 67, o2003.
(12)  Hsieh, M. C.; et al. Toxicol Appl Pharmacol 2011, 255, 150.
(13)  Hopton, S. R.; Thompson, A. S. Biochemistry 2011, 50, 4720.
(14)  Guerrini, G.; et al. Bioorg Med Chem 2011, 19, 3074.
(15)  Araujo, A. C.; et al. J Med Chem 2011, 54, 1266.
(16)  Antonow, D.; Thurston, D. E. Chem Rev 2011, 111, 2815.
(17)  Rettig, M.; et al. Org Biomol Chem 2010, 8, 3179.
(18)  Ourahou, S.; et al. Acta Crystallogr Sect E Struct Rep Online 2010, 66, o1653.
(19)  Ourahou, S.; et al. Acta Crystallogr Sect E Struct Rep Online 2010, 66, o732.
(20)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2010, 20, 3310.
(21)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem 2010, 18, 526.
(22)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem 2010, 18, 4747.
(23)  Kamal, A.; et al. Eur J Med Chem 2010, 45, 3924.
(24)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2010, 20, 5232.
(25)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem 2010, 18, 6666.
(26)  Kamal, A.; et al. Eur J Med Chem 2010, 45, 3870.
(27)  Kamal, A.; et al. Mini Rev Med Chem 2010, 10, 405.
(28)  Antonow, D.; et al. J Med Chem 2010, 53, 2927.
(29)  Rettig, M.; et al. Biochemistry 2009, 48, 12223.
(30)  Rettig, M.; et al. Bioorg Med Chem 2009, 17, 919.
(31)  Lee, C. H.; et al. Chem Biol Interact 2009, 180, 360.
(32)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem 2009, 17, 1557.
(33)  Kamal, A.; et al. Chemistry 2009, 15, 7215.
(34)  Hu, W. P.; et al. Bioorg Med Chem 2009, 17, 1172.
(35)  Howard, P. W.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2009, 19, 6463.
(36)  Doyle, M.; et al. J Antimicrob Chemother 2009, 64, 949.
(37)  Cipolla, L.; et al. Anticancer Agents Med Chem 2009, 9, 1.
(38)  Benzeid, H.; et al. Acta Crystallogr Sect E Struct Rep Online 2009, 65, o2322.
(39)  Wells, G.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2008, 18, 2147.
(40)  Wade Calcutt, M.; et al. J Mass Spectrom 2008, 43, 42.
(41)  Tiberghien, A. C.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2008, 18, 2073.
(42)  Tamazyan, R.; et al. Acta Crystallogr Sect E Struct Rep Online 2008, 64, o587.
(43)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2008, 18, 3769.
(44)  Kamal, A.; et al. ChemMedChem 2008, 3, 794.
(45)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2008, 18, 2434.
(46)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem 2008, 16, 7218.
(47)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2008, 18, 2594.
(48)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem 2008, 16, 3895.
(49)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem 2008, 16, 7804.
(50)  Hu, W. Pet al. Chem Res Toxicol 2008, 21, 1330.
(51)  Antonow, D.; et al. Biochemistry 2008, 47, 11818.
(52)  Zhao, D. M.; et al. Acta Crystallogr Sect E Struct Rep Online 2007, 64, o266.
(53)  Kamal, A.; et al. J Comb Chem 2007, 9, 29.
(54)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem 2007, 15, 6868.
(55)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2007, 17, 5345.
(56)  Hu, W. P.; et al. Chem Res Toxicol 2007, 20, 905.
(57)  Antonow, D.; et al. Bioorg Med Chem 2007, 15, 3041.
(58)  Antonow, D.; et al. J Comb Chem 2007, 9, 437.
(59)  Wang, J. J.; et al. J Med Chem 2006, 49, 1442.
(60)  Masterson, L. A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2006, 16, 252.
(61)  Khom, S.; et al. Mol Pharmacol 2006, 69, 640.
(62)  Kamal, A.; et alBioorg Med Chem Lett 2006, 16, 1160.
(63)  Venkatesan, A. M.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2005, 15, 5003.
(64)  Platt, D. M.; et al. J Pharmacol Exp Ther 2005, 313, 658.
(65)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem 2005, 13, 2021.
(66)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2005, 15, 2621.
(67)  Hadjivassileva, T.; et al. J Antimicrob Chemother 2005, 56, 513.
(68)  Correa, A.; et al. J Org Chem 2005, 70, 2256.
(69)  Clingen, P. H.; et al. Nucleic Acids Res 2005, 33, 3283.
(70)  Cheung, A.; et al. J Chromatogr B Anal Tech Biomed Life Sci 2005, 822, 10.
(71)  Tiberghien, A. C.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2004, 14, 5041.
(72)  Mischiati, C.; et al. Biochem Pharmacol 2004, 67, 401.
(73)  Masterson, L. A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2004, 14, 901.
(74)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem 2004, 12, 4337.
(75)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2004, 14, 4107.
(76)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2004, 14, 4791.
(77)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2004, 14, 4907.
(78)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2004, 14, 471.
(79)  Gregson, S. J.; et al. J Med Chem 2004, 47, 1161.
(80)  Chen, Z.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2004, 14, 1547.
(81)  Alley, M. C.; et al. Cancer Res 2004, 64, 6700.
(82)  Tercel, M.; et al. J Med Chem 2003, 46, 2132.
(83)  Smellie, M.; et al. Biochemistry 2003, 42, 8232.
(84)  Kumar, R.; Lown, J. W. Oncol Res 2003, 13, 221.
(85)  Kumar, R.; Lown, J. W. Mini Rev Med Chem 2003, 3, 323.
(86)  Kumar, R.; Lown, J. W. Org Biomol Chem 2003, 1, 3327.
(87)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2003, 13, 3577.
(88)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2003, 13, 3955.
(89)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2003, 13, 3451.
(90)  James, A. M.; et al. Eur J Biochem 2003, 270, 2827.
(91)  Hu, W. P.; et al. Kaohsiung J Med Sci 2003, 19, 6.
(92)  Gregson, S. J.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2003, 13, 2277.
(93)  Lisowski, V.; et al. J Enzyme Inhib Med Chem 2002, 17, 403.
(94)  Kamal, A.; Reddyet al. Bioorg Med Chem Lett 2002, 12, 1933.
(95)  Kamal, A.; et al. Curr Med Chem Anticancer Agents 2002, 2, 215.
(96)  Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2002, 12, 1917.
(97)  Berry, J. M.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2002, 12, 1413.
(98)  Li, M.; et al. Eur J Pharmacol 2001, 413, 63.
(99)  Langlois, N.; et al. J Med Chem 2001, 44, 3754.
(100) Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2001, 11, 387.
(101) Hu, W. P.; et al. J Org Chem 2001, 66, 2881.
(102) Gregson, S. J.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2001, 11, 2859.
(103) Reddy, B. S.; et al. Anticancer Drug Des 2000, 15, 225.
(104) Kamal, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2000, 10, 2311.
(105) Gregson, S. J.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2000, 10, 1845.
(106) Gregson, S. J.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2000, 10, 1849.
(107) Baraldi, P. G.; et al. Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids 2000, 19, 1219.
(108) Ashwell, M. A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 2000, 10, 783.
(109) Wilson, S. C.; et al. J Med Chem 1999, 42, 4028.
(110) Thurston, D. E.; et al. J Med Chem 1999, 42, 1951.
(111) Reddy, B. S.; Sondhi, S. M.; Lown, J. W. Pharmacol Ther 1999, 84, 1.
(112) Ohtake, Y.; et al. Bioorg Med Chem 1999, 7, 1247.
(113) Damayanthi, Y.; et al. J Org Chem 1999, 64, 290.
(114) Baraldi, P. G.; et al. Farmaco 1999, 54, 15.
(115) Baraldi, P. G.; et al. J Med Chem 1999, 42, 5131.
(116) Aranapakam, V.; et al. Bioorg Med Chem Lett 1999, 9, 1737.
(117) Aranapakam, V.; et al. Bioorg Med Chem Lett 1999, 9, 1733.
(118) Guiotto, A.; et al. Bioorg Med Chem Lett 1998, 8, 3017.
(119) Baraldi, P. G.; et al. Curr Pharm Des 1998, 4, 249.
(120) Baraldi, P. G.; et al. Bioorg Med Chem Lett 1998, 8, 3019.
(121) Puvvada, M. S.; et al. Biochemistry 1997, 36, 2478.
(122) Kossakowski, J.; et al. Acta Pol Pharm 1997, 54, 483.
(123) Walton, M. I.; et al. Cancer Chemother Pharmacol 1996, 38, 431.
(124) Thurston, D. E.; et al. J Org Chem 1996, 61, 8141.
(125) Mickelson, J. W.; et al. J Med Chem 1996, 39, 4654.
(126) Aoyama, T.; Shioiri, T. Yakugaku Zasshi 1995, 115, 446.
(127) Acri, J. B.; et al. Eur J Pharmacol 1995, 278, 213.
(128) TenBrink, R. E.; et al. J Med Chem 1994, 37, 758.
(129) Baraldi, P. G.; et al. J Med Chem 1994, 37, 4329.
(130) Puvvada, M. S.; et al. Nucleic Acids Res 1993, 21, 3671.
(131) Serra, M.; et al. J Pharmacol Exp Ther 1992, 263, 1360.
(132) Massa, S.; et al. J Med Chem 1992, 35, 4533.
(133) Werner, W.; et al. Biophys Chem 1990, 35, 271.
(134) Trapani, G.; et al. Farmaco 1990, 45, 577.
(135) Osada, H.; et al. Agric Biol Chem 1990, 54, 2883.
(136) Morris, S. J.; et al. J Antibiot (Tokyo) 1990, 43, 1286.
(137) Jones, G. B.; et al. Anticancer Drug Des 1990, 5, 249.
(138) Kaneko, T.; et al. J Med Chem 1985, 28, 388.
(139) Konishi, M.; et al. J Antibiot (Tokyo) 1984, 37, 200.
(140) Wright, W. B., Jr.; et al. J Med Chem 1980, 23, 462.
(141) Porretta, G. C.; et al. Farmaco Sci 1979, 34, 914.
(142) Wright, W. B., Jr.; et al. J Med Chem 1978, 21, 1087.
(143) Scalzo, M.; et al. Farmaco Sci 1977, 32, 579.
(144) Chimenti, F.; et al. Farmaco Sci 1977, 32, 339.
(145) Vomero, S.; et al. Farmaco Sci 1976, 31, 681.
(146) De Martino, G.; et al. Farmaco Sci 1976, 31, 785.
(147) Scalzo, M.; et al. Farmaco Sci 1974, 29, 459.
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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