(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0006316846.tif 000015
｛式中、
Ｒ１は、脂肪族直鎖もしくは分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基、または
【化２】
0006316846.tif 000016
であり；
Ｒ５は、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、または−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；
Ｒ６は、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、または−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ
Ｈ２ＣＨ３であり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７およびＲ８は−（ＣＨ２）ｘＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；
ここで、ｘは０または１であり；
Ｍは１価のカチオンである｝
で表されるポリミキシンまたはその塩を含む組成物。
【請求項２】
Ｒ１がヘプタノイル、メチルヘプタノイル、オクタノイル、メチルオクタノイル、ノナノイル、メチルノナノイルまたはデシルである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
Ｒ１がヘプタノイル、（Ｓ）−６−メチルヘプタノイル、（Ｓ）−７−メチルヘプタノイル、オクタノイル、（Ｓ）−６−メチルオクタノイル、ノナノイル、（Ｓ）−６−メチルノナノイル、（Ｓ）−７−メチルノナノイル、（Ｓ）−８−メチルノナノイル、またはデカノイルである、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
ＭがＮａ＋、Ｋ＋、ＨｍＮ（Ｃ１〜４アルキル）ｎ＋（式中、ｍは０〜４であり、ｎは０〜４であるが、但しｍ＋ｎ＝４である）、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記ポリミキシンまたはその塩が、ＵＨＰＬＣで少なくとも１０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも２０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも３０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも４０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも５０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも６０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも７０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも８０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも９０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも９５％、ＵＨＰＬＣで少なくとも９７％、ＵＨＰＬＣで少なくとも９８％、またはＵＨＰＬＣで少なくとも９９％の量で存在する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
ｘが１であり、ＭがＨ＋、Ｎａ＋、またはＫ＋である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記ポリミキシンまたはその塩が、ＵＨＰＬＣで少なくとも１０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも２０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも３０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも４０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも５０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも６０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも７０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも８０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも９０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも９５％、ＵＨＰＬＣで少なくとも９７％、ＵＨＰＬＣで少なくとも９８％、またはＵＨＰＬＣで少なくとも９９％の量で存在する、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記式（Ｉ）で表される前記ポリミキシンまたはその塩が、（Ａ）〜（Ｈ）：
（Ａ）Ｒ１が６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５およびＲ６がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｂ）Ｒ１が
【化３】
0006316846.tif 000017
であり；Ｒ２、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）
２であり；Ｒ３が−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５が−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；Ｒ６が−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｃ）Ｒ１が６−メチルヘプタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５およびＲ６がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｄ）Ｒ１が６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５が−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３であり；Ｒ６が−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｅ）Ｒ１がオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５およびＲ６がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｆ）Ｒ１が７−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５およびＲ６がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｇ）Ｒ１が６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５が−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；Ｒ６が−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｈ）Ｒ１が６−メチルヘプタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５が−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；Ｒ６が−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記式（Ｉ）で表される前記ポリミキシンまたはその塩が、（Ａ）〜（Ｈ）：
（Ａ）Ｒ１が６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５およびＲ６がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｂ）Ｒ１が
【化４】
0006316846.tif 000018
であり；Ｒ２、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ３が−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５が−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；Ｒ６が−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｃ）Ｒ１が６−メチルヘプタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５およびＲ６がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｄ）Ｒ１が６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５が−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３であり；Ｒ６が−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｅ）Ｒ１がオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５およびＲ６がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｆ）Ｒ１が７−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５およびＲ６がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｇ）Ｒ１が６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５が−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；Ｒ６が−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｈ）Ｒ１が６−メチルヘプタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５が−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；Ｒ６が−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物の治療有効量と、任意選択により薬学的に許容される医薬品添加物とを含む医薬組成物。
【請求項１１】
グラム陰性菌感染の治療に使用される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記感染が、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、アシネトバクター・バウマンニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、またはこれらの組み合わせにより引き起こされる、請求項１１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩を含む組成物を本明細書に開示する。
【背景技術】
【０００２】
ポリミキシンは、ポリミキサ菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｏｌｙｍｙｘａ）によって産生される抗生物質として１９４７年に発見された。ポリミキシンは、ヘプタペプチド環と、Ｎ末端にアミド結合した脂肪酸とを含有する抗生物質作用のあるデカペプチドである。現在、市販の２種類のポリミキシン混合物；ポリミキシンＢとポリミキシンＥ（コリスチン）が臨床使用されている。これらの混合物は共に、ゲバルツ（Ｇｏｅｖａｅｒｔｓ）ら（２００２年）およびファン・デン・ボッシェ（Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｏｓｓｃｈｅ）ら（２０１１年）により記載されているように種々の成分を含む。欧州薬局方によれば、コリスチンはポリミキシンＥ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ１−ｉおよびＥ１−７ＭＯＡを７７％超含まなければならないが、微量成分であるポリミキシンＥ３、Ｅ１−ｉおよびＥ１−ＭＯＡはそれぞれ１０％未満でなければならない。
【０００３】
コリスチンに関する毒性のため、混合物は１９５０年代にスルホメチル化により改良された。スルホメチル化コリスチンはコリスチメタートナトリウム（ＣＭＳ）と称され、これはコリスチンのプロドラッグであると見なされている。ＣＭＳは依然として、緑膿菌（シュードモナス・エルギノーサ：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、アシネトバクター・バウマンニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、肺炎桿菌（クレブシエラ・ニューモニエ：Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、および他のグラム陰性病原体などの多剤耐性生物に対する最後の治療選択肢として臨床使用されている。長年にわたり、ＣＭＳの溶液も緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）によって引き起こされる定着または感染をコントロールするために、嚢胞性線維症（ＣＦ）患者の肺に噴霧化により投与されてきた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
市販のＣＭＳ製品は様々なポリミキシンの誘導体の複雑な混合物を含有することから、幾つかの結果を招く。これらの最たるものは、市販されている製品の治療効果に関する。体内に注入または吸入されるとＣＭＳはコリスチンリザーバとみなすことができるため、排泄される前に適量のＣＭＳがコリスチンに変換されることが重要である。そのように変換されない場合、血清コリスチン濃度は標的とする病原菌を死滅させるまたはその増殖を防止するのに十分高い濃度に到達することができない。従って、置換基の量を制御したＣＭＳを混合物としてまたは一成分として製造できることにより、過少投与または過量投与の防止により治療能力が向上する。それはまた、ＣＭＳの加水分解速度（ＣＭＳのコリスチンへの生体内変換速度）に影響を及ぼすことにより、分子のプロドラッグ特性も向上させることができる。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
式（Ｉ）
【０００６】
【化１】
0006316846.tif 000002
【０００７】
｛式中、
Ｒ１は、脂肪族直鎖もしくは分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基、または
【０００８】
【化２】
0006316846.tif 000003
【０００９】
であり；
Ｒ５は、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、または−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；
Ｒ６は、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、または−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３であり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７およびＲ８はそれぞれ−（ＣＨ２）ｘＣＨ２ＮＨ２、または−（ＣＨ２）ｘＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２のいずれかであり；
ここで、ｘは０または１であり；
Ｍは１価のカチオンであり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７およびＲ８の少なくとも３つは、−（ＣＨ２）ｘＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である｝
で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩を含む組成物。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９の構造。
【図２】ＰＥ１−（ＳＭ）８１，５，８，９の構造。
【図３】ＰＥ１−（ＳＭ）６１，５，９の構造。
【図４】本明細書に記載の幾つかのスルホメチル化ポリミキシンの一般的な化学構造（表１参照）。
【図５】３位にＤＡＰ残基を含有するデカスルホメチル化ポリミキシンの構造。
【図６】ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９（図１、上）およびＣＭＳ実用標準物質（下）のＵＨＰＬＣクロマトグラム。
【図７】ＰＥ２−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９の構造。
【図８】ＰＥ１−ｉ−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９の構造。
【図９】実施例４に記載のＰＥ−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９組成物中のポリミキシン成分の構造。
【図１０】実施例５に記載のＰＢ−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９組成物中のポリミキシン成分の構造。
【図１１】コリスチン（Ｓｉｇｍａ、Ｃ４４６１）の存在下でのＨＫ−２細胞の細胞溶解率。
【図１２】ペンタ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，３，５，８，９ポリミキシンＥ１の存在下でのＨＫ−２細胞の細胞溶解率。
【図１３】ペンタ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，３，５，８，９ポリミキシンＥ２の存在下でのＨＫ−２細胞の細胞溶解率。
【図１４】ペンタ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，３，５，８，９ポリミキシンＥ１−ｉの存在下でのＨＫ−２細胞の細胞溶解率。
【図１５】ペンタ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，３，５，８，９ポリミキシンＢの存在下でのＨＫ−２細胞の細胞溶解率。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
定義
本明細書で使用する「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」要素という語句は、その要素の１つ以上を指し；例えば、１種の化合物は、１種以上の化合物または少なくとも１種の化合物を指す。このようなものとして、「１つの（ａ）」（もしくは「１つの（ａｎ）」）、「１つ以上」、および「少なくとも１つ」という用語は、本明細書では互換的に使用することができる。
【００１２】
本明細書で使用する「任意選択の」または「任意選択により」という用語は、その後に記載されている事象または状況が起こり得るが、必ずしも起こる必要はなく、この記載が、その事象または状況が起こる場合と、起こらない場合とを含むことを意味する。例えば、「任意選択の結合」は、結合が存在しても、または存在しなくてもよく、この記載が単結合、二重結合、または三重結合を含むことを意味する。
【００１３】
「立体異性体」という用語は、普通の一般的な意味を有する。
式（Ｉ）で表されるポリミキシンまたはその塩は、天然（Ｌ−）および非天然（Ｄ−）アミノ酸残基の立体化学名を有し得る、炭素をベースにする幾つかの立体中心を含有する。−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３部分および−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３部分は、Ｌ−イソロイシンおよびＬ−トレオニンに見られる基と同じ立体化学を有する炭素をベースにする立体中心を含有することが理解されるだろう。
【００１４】
本明細書に記載の「脂肪族直鎖または分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基」という表現はカルボニル部分と非カルボニル部分と含有する置換基を指し、それには、ヘプタノイル、メチルヘプタノイル（（Ｓ）−６−メチルヘプタノイルを含む）、オクタノイル、メチルオクタノイル（（Ｓ）−６−メチルオクタノイル、（Ｓ）−７−メチルオクタノイルを含む）、ノナノイル、メチルノナノイル（（Ｓ）−６−メチルノナノイル、（Ｓ）−７−メチルノナノイル、および（Ｓ）−８−メチルノナノイルを含む）ならびにデカノイルを含むがこれらに限定されるものではない既知のポリミキシン化合物に見られるアシル基が含まれる。
【００１５】
本明細書に記載の「塩」または「その塩」という用語は、カチオンとアニオンとを含む化合物を指し、これは当業者に既知の任意の方法で、例えば、プロトン受容部分のプロトン化および／またはプロトン供与部分の脱プロトン化により製造することができる。あるいは、塩は、カチオン／アニオンメタセシス、またはカチオン／アニオン交換反応のいずれかにより製造することができる。
【００１６】
「−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２」という表現は、媒体のｐＨに応じて、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２または−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ３＋のいずれかを包含するものと理解される。
本明細書に記載の「Ｍは１価のカチオンである」という用語は、価数１の正電荷を含有するカチオン性種を指し、その例としては、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、ＨｍＮ（Ｃ１〜４アルキル）ｎ＋（式中、ｍは０〜４であり、ｎは０〜４であるが、但しｍ＋ｎ＝４である）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００１７】
本明細書に記載の「Ｃ１〜４アルキル」という用語は、炭素数１〜４の直鎖または分岐鎖アルキル基を指す。Ｃ１〜４アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、およびｎ−ブチルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００１８】
本明細書に記載の「ＤＡＢ」という用語は、カルボニル炭素に隣接する炭素原子（即ち、α−炭素）がＬ型と称される立体化学を有する、２，４−ジアミノ酪酸から誘導される基を指す。あるいは、Ｌ−ＤＡＢは、文献ではＬ−ＤＢＵとも称される。
【００１９】
本明細書に記載の「ＤＡＢ残基」という用語は、少なくとも１個のアミノ酸にアミド結合した２，４−ジアミノブチレート化合物を指す。天然のポリミキシンは、通常、６個のＤＡＢ残基を含み、そのうち５個は遊離γ−アミノ基を有する。
【００２０】
本明細書に記載の「スルホメチル」という用語は、−ＣＨ２ＳＯ３Ｍ部分（式中、Ｍは前述の通りである）を指す。スルホネート（−ＳＯ３）部分は酸の形態であってもよいが、生理学的環境（生体内）ではそれは負電荷を有し、Ｍなどのカチオンが結合している。
【００２１】
本明細書に記載の「ＤＡＰ」という用語は、化合物、２，３ジアミノプロピオネートを指す。
本明細書に記載の「ＤＡＰ残基」という用語は、少なくとも１個のアミノ酸にアミド結合した２，３−ジアミノプロピオネート化合物を指す。
【００２２】
本明細書に記載の「ＦＡ」という用語は、「脂肪酸アシル」という表現の略称であり、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩に関する「脂肪族直鎖または分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基」という表現に包含される。
【００２３】
本明細書に記載の「ＵＨＰＬＣで少なくともＸ％の量で」という用語は、本願の材料および方法の部に記載のＵＨＰＬＣ法により得られるクロマトグラム中の関連するピークの相対積分面積と理解されたい。
【００２４】
「ＵＨＰＬＣクロマトグラムによる純度がＹ％超である」という用語は、本願の材料および方法の部に記載のＵＨＰＬＣ法により得られるクロマトグラム中の関連するピークの相対積分面積と理解されたい。
【００２５】
第１の実施形態は、式（Ｉ）
【００２６】
【化３】
0006316846.tif 000004
【００２７】
｛式中、
Ｒ１は、脂肪族直鎖もしくは分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基、または
【００２８】
【化４】
0006316846.tif 000005
【００２９】
であり；
Ｒ５は、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、または−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；
Ｒ６は、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、または−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３であり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７およびＲ８はそれぞれ、−（ＣＨ２）ｘＣＨ２ＮＨ２、または−（ＣＨ２）ｘＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２のいずれかであり；
ここで、ｘは０または１であり；
Ｍは１価のカチオンであり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７およびＲ８の少なくとも３つは、−（ＣＨ２）ｘＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である｝
で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩を含む組成物に関する。
【００３０】
第１の実施形態の第１の態様では、Ｒ１は、ヘプタノイル、メチルヘプタノイル、オクタノイル、メチルオクタノイル、ノナノイル、メチルノナノイルまたはデシルである。
第１の実施形態の第２の態様では、Ｒ１は、ヘプタノイル、（Ｓ）−６−メチルヘプタノイル、オクタノイル、（Ｓ）−６−メチルオクタノイル、（Ｓ）−７−メチルオクタノイル、ノナノイル、（Ｓ）−６−メチルノナノイル、（Ｓ）−７−メチルノナノイル、（Ｓ）−８−メチルノナノイルまたはデカノイルである。
【００３１】
第１の実施形態の第３の態様では、前述の組成物は、ＭがＮａ＋、Ｋ＋、ＨｍＮ（Ｃ１〜４アルキル）ｎ＋、またはこれらの組み合わせからなる群から選択され、ｍは０〜４であり、ｎは０〜４であるが、但しｍ＋ｎ＝４であることを特徴とする。
【００３２】
第１の実施形態の第４の態様では、ｘは１であり、ＭはＨ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である
。
第１の実施形態の第５の態様では、ｘは１であり、ＭはＨ＋、Ｎａ＋またはＫ＋であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７およびＲ８のうちの３つは−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００３３】
第１の実施形態の第６の態様では、ｘは１であり、ＭはＨ＋、Ｎａ＋またはＫ＋であり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
第１の実施形態の第７の態様では、ｘは１であり、ＭはＨ＋、Ｎａ＋またはＫ＋であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７およびＲ８のうちの４つは−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００３４】
第１の実施形態の第８の態様では、ｘは１であり、ＭはＨ＋、Ｎａ＋またはＫ＋であり、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ７およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００３５】
第１の実施形態の第９の態様では、ｘは１であり、ＭはＨ＋、Ｎａ＋またはＫ＋であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である；
第１の実施形態の第１０の態様では、第１の実施形態の第２の態様〜第９の態様のいずれか１つに記載の組成物は、少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩が、ＵＨＰＬＣで少なくとも１０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも２０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも３０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも４０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも５０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも６０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも７０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも８０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも９０％、ＵＨＰＬＣで少なくとも９５％、ＵＨＰＬＣで少なくとも９７％、ＵＨＰＬＣで少なくとも９８％、またはＵＨＰＬＣで少なくとも９９％の量で存在することを特徴とする。
【００３６】
第１の実施形態の第１１の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、５個よりも多いスルホメチル基を含む。
第１の実施形態の第１２の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＤＡＢ残基のγ−アミノ基に結合したスルホメチル基を６〜１０個含む。
【００３７】
第１の実施形態の第１３の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＤＡＢ残基のγ−アミノ基に結合したスルホメチル基を６個、８個、または１０個含む。
【００３８】
第１の実施形態の第１４の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＤＡＢ残基のγ−アミノ基に結合したスルホメチル基を１０個含む。
第１の実施形態の第１５の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＤＡＢ残基のγ−アミノ基に結合したスルホメチル基を８個含む。
【００３９】
第１の実施形態の第１６の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＤＡＢ残基のγ−アミノ基に結合したスルホメチル基を６個含む。
第１の実施形態の第１７の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ポリミキシンのＤＡＢ残基のγ−アミノ基５個のそれぞれに２個ずつ結合したスルホメチル基を含む。このようなポリミキシンはデカスルホメチル化されている。
【００４０】
第１の実施形態の第１８の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシ
ンまたはその塩は、ポリミキシンのＤＡＢ残基のγ−アミノ基のうちの４個に２個結合したスルホメチル基を含む。このようなポリミキシンは、オクタスルホメチル化されている。
【００４１】
第１の実施形態の第１９の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ポリミキシンのＤＡＢ残基のγ−アミノ基のうちの３個に２個結合したスルホメチル基を含む。このようなポリミキシンは、ヘキサスルホメチル化されている。
【００４２】
第１の実施形態の第２０の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、通常のポリミキシン番号付け方式（図４）を用いたＤＡＢ残基１、３、５、８および９のγ−アミノ基に２個結合したスルホメチル基を含む。前記ポリミキシン化合物は、本明細書では、ペンタ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，３，５，８，９ポリミキシンと称される。デカスルホメチル化ポリミキシンＥ１の構造を図１に示し、それに略称ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９を与える。
【００４３】
第１の実施形態の第２１の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、通常のポリミキシン番号付け方式（図４）を用いたＤＡＢ残基１、５、８および９のγ−アミノ基に２個結合したスルホメチル基を含む。前記ポリミキシン化合物の一例は、本明細書では、テトラ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，５，８，９ポリミキシンＥ１と称される。このような化合物の一例を図２に示す。この化合物の略称はＰＥ１−（ＳＭ）８１，５，８，９である。
【００４４】
オクタスルホメチル化ポリミキシンの他の例としては、テトラ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，３，５，８ポリミキシンＥ１、テトラ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，３，８，９ポリミキシンＥ１、テトラ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，３，５，９ポリミキシンＥ１、テトラ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ３，５，８，９ポリミキシンＥ１がある。
【００４５】
第１の実施形態の第２２の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＤＡＢ残基１、５、および９のγ−アミノ基に２個結合したスルホメチル基を含む。前記ポリミキシンの一例は、本明細書では、トリ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，５，９ポリミキシンＥ１と称され、その構造を図３に示す。この化合物の略称はＰＥ１−（ＳＭ）６１，５，９である。ヘキサスルホメチル化ポリミキシンの他の例を表１に示す。
【００４６】
表１：ペンタ、テトラおよびトリＮγ−ビス−スルホメチル化されているポリミキシンの例
【００４７】
【表１】
0006316846.tif 000006
【００４８】
第１の実施形態の第２３の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ポリミキシンＥのＤＡＢ残基１、３、５、８および９のγ−アミノ基に結合したスルホメチル基を含む。
【００４９】
第１の実施形態の第２４の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ポリミキシンＥのＤＡＢ残基１、５、８および９のγ−アミノ基に２個結合したスルホメチル基を含む。
【００５０】
第１の実施形態の第２５の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ポリミキシンＥのＤＡＢ残基１、５、および９のγ−アミノ基に２個結合したスルホメチル基を含む。
【００５１】
第１の実施形態の第２６の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ポリミキシンＥまたはその塩である。
第１の実施形態の第２７の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ポリミキシンＢまたはその塩である。
【００５２】
第１の実施形態の第２８の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＵＨＰＬＣクロマトグラムによる純度が１０％超である。
第１の実施形態の第２９の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシ
ンまたはその塩は、ＵＨＰＬＣクロマトグラムによる純度が２０％超である。
【００５３】
第１の実施形態の第３０の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＵＨＰＬＣクロマトグラムによる純度が３０％超である。
第１の実施形態の第３１の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＵＨＰＬＣクロマトグラムによる純度が４０％超である。
【００５４】
第１の実施形態の第３２の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＵＨＰＬＣクロマトグラムによる純度が５０％超である。
第１の実施形態の第３３の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＵＨＰＬＣクロマトグラムによる純度が６０％超である。
【００５５】
第１の実施形態の第３４の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＵＨＰＬＣクロマトグラムによる純度が７０％超である。
第１の実施形態の第３５の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＵＨＰＬＣクロマトグラムによる純度が８０％超である。
【００５６】
第１の実施形態の第３６の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＵＨＰＬＣクロマトグラムによる純度が９０％超である。
第１の実施形態の第３７の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、ＵＨＰＬＣクロマトグラムによる純度が９５％超である。
【００５７】
第１の実施形態の第３８の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、６〜１０個のスルホメチル基を含む少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩を少なくとも１０％ｗ／ｗ含む。
【００５８】
第１の実施形態の第３９の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、６〜１０個のスルホメチル基を含む少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩を少なくとも２０％ｗ／ｗ含む。
【００５９】
第１の実施形態の第４０の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、６〜１０個のスルホメチル基を含む少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩を少なくとも３０％ｗ／ｗ含む。
【００６０】
第１の実施形態の第４１の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、６〜１０個のスルホメチル基を含む少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩を少なくとも４０％ｗ／ｗ含む。
【００６１】
第１の実施形態の第４２の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、６〜１０個のスルホメチル基を含む少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩を少なくとも５０％ｗ／ｗ含む。
【００６２】
第１の実施形態の第４３の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、６〜１０個のスルホメチル基を含む少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩を少なくとも６０％ｗ／ｗ含む。
【００６３】
第１の実施形態の第４４の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、６〜１０個のスルホメチル基を含む少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩を少なくとも７０％ｗ／ｗ含む。
【００６４】
第１の実施形態の第４５の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、６〜１０個のスルホメチル基を含む少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩を少なくとも８０％ｗ／ｗ含む。
【００６５】
第１の実施形態の第４６の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、６〜１０個のスルホメチル基を含む少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩を少なくとも９０％ｗ／ｗ含む。
【００６６】
第１の実施形態の第４７の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、６〜１０個のスルホメチル基を含む少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩を少なくとも９５％ｗ／ｗ含む。
【００６７】
第１の実施形態の第４８の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、（Ａ）〜（Ｊ）、
（Ａ）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｂ）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｃ）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ４、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ３およびＲ７はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｄ）Ｒ１は
【００６８】
【化５】
0006316846.tif 000007
【００６９】
であり；Ｒ２、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ３は−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５は−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；Ｒ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｅ）Ｒ１は６−メチルヘプタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｆ）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５は−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３であり；Ｒ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｇ）
（１）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（２）Ｒ１は６−メチルヘプタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（３）Ｒ１はオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（４）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５は−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３であり；Ｒ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（５）Ｒ１は７−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｈ）
（１）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５は−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；Ｒ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（２）Ｒ１は６−メチルヘプタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ５は−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；Ｒ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｉ）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｊ）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ４、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり；Ｒ３およびＲ７はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
のいずれか１つを含む。
【００７０】
第１の実施形態の第４９の態様では、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩は、（Ａ）〜（Ｊ）、
（Ａ）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｂ）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｃ）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ４、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ３およびＲ７はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｄ）Ｒ１は
【００７１】
【化６】
0006316846.tif 000008
【００７２】
であり；Ｒ２、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ３は−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５は−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；Ｒ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｅ）Ｒ１は６−メチルヘプタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８は
それぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｆ）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５は−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３であり；Ｒ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｇ）
（１）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（２）Ｒ１は６−メチルヘプタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（３）Ｒ１はオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（４）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５は−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３であり；Ｒ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（５）Ｒ１は７−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｈ）
（１）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５は−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；Ｒ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（２）Ｒ１は６−メチルヘプタノイルであり；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ５は−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；Ｒ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｉ）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
（Ｊ）Ｒ１は６−メチルオクタノイルであり；Ｒ２、Ｒ４、およびＲ８はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２であり；Ｒ３およびＲ７はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり；Ｒ５およびＲ６はそれぞれ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２である；
のいずれか１つを含む。
【００７３】
第１の実施形態の第５０の態様では、少なくとも１種のポリミキシンは、図１、図２、図３、図５、図７または図８に示す構造で表される。
第１の実施形態の第５１の態様では、組成物は、図９または図１０に示す構造で表されるポリミキシンを含む。
【００７４】
ポリミキシンは、ヘプタペプチド環と、Ｎ末端にアミド結合した脂肪酸とを含有する抗生物質作用のあるデカペプチドである。幾つかのポリミキシンは、ポリミキサ菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｏｌｙｍｙｘａ）により天然に産生される。ポリミキシンの構造および歴史は既知であり、例えば、ベルコフ（Ｖｅｌｋｏｖ）ら著、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．）２０１０年、第５３巻（５）：１８９８〜１９１６頁に記載されている。
【００７５】
本明細書に記載のポリミキシンは、置換基の数およびそれらの位置に関して多くの分子種を包含する。例えば、水溶液中では、電荷はｐＨに依存する。本明細書に記載のポリミ
キシン化合物は、薬学的に許容される塩およびそのイオンを全て包含する。このようなポリミキシンにはもちろん、六ナトリウム塩、八ナトリウム塩、および十ナトリウム塩もある。他の薬学的に許容される塩、例えば、カリウム塩、リチウム塩、およびアンモニウム塩（ＨｍＮ（Ｃ１〜４アルキル）ｎ＋［式中、ｍは０〜４であり、ｎは０〜４であるが、但しｍ＋ｎ＝４である］など）、またはこれらの組み合わせも含まれる。
【００７６】
本明細書に記載のポリミキシンは、ＤＡＢ残基のγ−アミノ基に結合した６〜１０個のスルホメチル基を有する任意のポリミキシン化合物を含む。
ポリミキシン中の残基の番号付けは、ベルコフ（Ｖｅｌｋｏｖ）らに準拠し、例えば、図４を参照されたい。天然のポリミキシンでは、Ｎ末端アミノ酸残基１に脂肪酸が結合しており、アミノ酸残基（１０）がアミノ酸残基（４）とラリアット（ｌａｒｉａｔｅ）構造を形成する。換言すれば、いくつかの天然のポリミキシンでは、Ｌ−ＤＡＢ残基（１）に脂肪酸アシル基（６−メチルヘプタン酸または６−メチルオクタン酸など）がアミド結合しているとともに、Ｌ−ＤＡＢ残基（４）にトレオニン残基（１０）がアミド結合している。
【００７７】
ポリミキシンＢとポリミキシンＥ（コリスチン）との唯一の構造の違いは、アミノ酸成分にある。ポリミキシンは、トリペプチド側鎖を有する環状ヘプタペプチド環として配列されたＬ−アミノ酸を主に含有し、この側鎖は脂肪酸に共有結合している。（例えば、図４参照。）ポリミキシンＢとポリミキシンＥとの違いは残基６にある。ポリミキシンＢでは残基（６）はＤ−フェニルアラニンであり、ポリミキシンＥでは残基（６）はＤ−ロイシンであり、これらは共に残基（７）にＬ−ロイシンを含有する。
【００７８】
図４に識別されている立体化学表記は、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩に存在する、炭素をベースにする立体中心の可能性のある立体化学表記を限定しようとするものではないことを理解されたい。
【００７９】
表２：スルホメチル化ポリミキシンの例
【００８０】
【表２】
0006316846.tif 000009
【００８１】
天然のポリミキシンの多くは、アミド結合によりペプチドに結合した６−メチルヘプタン酸または６−メチルオクタン酸を含む。従来技術では、天然脂肪酸を合成脂肪酸と交換した多数のポリミキシンが製造されてきた。本発明のポリミキシンは、このような半合成ポリミキシンが他の点では特許請求の範囲の特徴を満たす場合、それらも包含するものとする。例えば、多くの半合成ポリミキシンが文献に記載されており、例えば、マギー（Ｍ
ａｇｅｅ）ら著、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．）、２０１３年、第５６巻：５０７９〜５０９３頁を参照されたい。
【００８２】
本明細書に記載の「ＣＭＳ」という用語は、スルホメチル化ポリミキシンＥ１およびスルホメチル化ポリミキシンＥ２を含む組成物を指す。ケミカルアブストラクトは、このような組成物にＣＭＳのための番号８０６８−２８−８を割り当てた。
【００８３】
本明細書に記載の「コリスチン」という用語は、ポリミキシンＥ１およびポリミキシンＥ２を含む組成物を指す。ケミカルアブストラクトは、コリスチンのための番号１０６６−１７−７を割り当てた。欧州薬局方によれば、コリスチンはポリミキシンＥ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ１ｉおよびＥ１−７ＭＯＡを７７％超含まなければならないが、微量成分であるポリミキシンＥ３、Ｅ１−ｉおよびＥ１−ＭＯＡはそれぞれ１０％未満でなければならない。
【００８４】
本明細書に記載の「ポリミキシンＥ」という用語は、「コリスチン」と互換的に使用される。
本明細書に記載の「ポリミキシンＥ１」という用語は、ＣＡＳ番号７７２２−４４−３を有する化合物を指す。ポリミキシンＥ１はコリスチンＡと互換的に使用される。
【００８５】
本明細書に記載の「ポリミキシンＥ２」という用語は、ＣＡＳ番号７２３９−４８−７３を有する化合物を指す。ポリミキシンＥ２は、コリスチンＢと互換的に使用される。
本明細書に記載の「スルホメチル化ポリミキシン」という表現は、Ｌ−ＤＡＢ残基のγ−アミノ基に結合したスルホメチル基を少なくとも１個含むポリミキシンを指す。
【００８６】
式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩に包含される特定のポリミキシン誘導体としては、米国特許出願公開第２０１２／０３１６１０５号明細書に対応する国際公開第２０１２／１６８８２０号に記載のＬ−ＤＡＢ残基のγ−アミノ基またはＬ−ＤＡＰ残基のβ−アミノ基に結合したスルホメチル基を６〜１０個含む少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩が挙げられる。前記文献では、化合物は６〜１０個のスルホメチル基を含有していない。式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンまたはその塩の一例としては、次の構造を有する化合物が挙げられる。
【００８７】
第２の実施形態は、第１の実施形態の多数の態様に記載の組成物のいずれか１つを有効量含む医薬組成物に関する。
第２の実施形態の第１の態様では、医薬組成物は薬学的に許容される医薬品添加物をさらに含む。薬学的に許容される医薬品添加物としては、保存剤、緩衝液、抗酸化剤、または賦形剤を挙げることができる。好適な賦形剤としては、賦形剤、すなわち、注射用水、０．９％ＮａＣｌ、０．９％ＮａＣｌに溶解した５％ブドウ糖溶液、５％ブドウ糖水溶液、０．４５％ＮａＣｌに溶解した５％ブドウ糖溶液、０．２２５％ＮａＣｌに溶解した５％ブドウ糖溶液、および乳酸加リンゲル液が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００８８】
医薬組成物は、注射経路で投与（例えば、非経口投与もしくは静脈内投与）するのに好適な賦形剤、または、例えば、ネブライザもしくは他のこのような吸入デバイスを用いる吸入により投与するのに好適な賦形剤を用いて再構成できる凍結乾燥品であってもよい。
【００８９】
本明細書で使用する「有効量」という用語は、対象における細菌感染、例えば、グラム陰性菌感染、例えば、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、アシネトバクター・バウマンニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ  ｃｏｌｉ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）等による感染症状を軽減するために必要な量を意味する。用量は、各特定の症例における個々の要求に応じて調節される。その投与量は、治療される疾患の重症度、患者の年齢および全身的健康状態、患者の治療に用いられている他の医薬、投与経路および形態、ならびに、関与する開業医の好みおよび経験などの多数の要因に応じて、広い範囲内で変わり得る。
【００９０】
第３の実施形態は、グラム陰性菌感染の治療における、第１の実施形態の多数の態様に記載の組成物のいずれか１つを有効量含む医薬組成物の使用に関する。
第３の実施形態の第１の態様では、用法は、市販のポリミキシン医薬品、例えば、米国薬局方、注射用コリスチンメタンスルホン酸塩などと同じである。
【００９１】
第３の実施形態の第２の態様では、使用は、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、アシネトバクター・バウマンニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、またはこれらの組み合わせによって引き起こされるまたは媒介される感染を治療するための使用である。
【００９２】
第４の実施形態は、感染患者のグラム陰性菌感染の治療方法であって、患者に第１の実施形態の多数の態様に記載の組成物のいずれか１つを有効量含む医薬組成物を投与する工程を含む方法に関する。
【００９３】
第４の実施形態の第１の態様では、治療方法は、市販のポリミキシン医薬品、例えば、米国薬局方、注射用コリスチンメタンスルホン酸塩などについて示されている用法と実質的に同じである。
【００９４】
第４の実施形態の第２の態様では、グラム陰性菌感染は、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、アシネトバクター・バウマンニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、またはこれらの組み合わせによって引き起こされるまたは媒介される。
【００９５】
第５の実施形態は、感染患者のグラム陰性菌感染の治療方法であって、患者に第１の実施形態の多数の態様に記載の組成物のいずれか１つを有効量含む医薬組成物を、別の抗菌剤と併用投与する工程を含む方法に関する。
【００９６】
第５の実施形態の第１の態様では、本医薬組成物と別の抗菌剤との投与は、同時に、または択一的に投与順不同で行われる。
第５の実施形態の第２の態様では、グラム陰性菌感染は、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、アシネトバクター・バウマンニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、またはこれらの組み合わせによって引き起こされるまたは媒介される。
【００９７】
第６の実施形態は、第１の実施形態の多数の態様に記載の組成物のいずれか１つの製造方法であって：
式ＩＩ、
【００９８】
【化７】
0006316846.tif 000010
【００９９】
｛式中、
Ｒ１は、脂肪族直鎖もしくは分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基、または
【０１００】
【化８】
0006316846.tif 000011
【０１０１】
であり；
Ｒ５は、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、または−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり；
Ｒ６は、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、または−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３であり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７およびＲ８はそれぞれ−（ＣＨ２）ｘＣＨ２ＮＨ２であり；
ここで、ｘは０または１である｝
の化合物またはその塩をメチルスルホン化試薬と反応させる工程、
を含む方法に関する。
【０１０２】
第７の実施形態は、第５の実施形態に記載の方法で得られる生成物に関する。
材料および方法
超高圧液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）：
使用したＵＨＰＬＣ法は、クォータナリポンプシステムとＵＶ検出器とを備えたウォーターズ・アクイティ（Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ）システムであった。使用したカラムは、３０℃に保持したウォーターズ・アクイティ（Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ）ＵＰＬＣ  ＣＳＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、１５０×２．１ｍｍであった。エンパワー（Ｅｍｐｏｗｅｒ）２を用いて全てのクロマトグラムを記録した。流速は０．３０ｍＬ／分であり、注入量は２μＬであった。移動相は、Ａ）０．０５Ｍリン酸緩衝液ｐＨ６．５およびアセトニトリル（ＭｅＣＮ）、比率９５：５ｖ／ｖ  Ｂ）０．０５Ｍリン酸緩衝液ｐＨ６．５およびＭｅＣＮ、比率５０：５０ｖ／ｖで構成された。溶媒および化学物質は全て、分析用のものであり、使用前に０．２μｍフィルタで濾過した。使用した勾配は；当初、２０％Ｂ；０〜１０分、３２％Ｂまで直線勾配；１０〜３５分、４７％Ｂまで直線勾配；３５〜３６分、２０％Ｂまで直線勾配；３６分〜４４分、２０％Ｂであった。クロマトグ
ラムは全て、２１０ｎｍで記録した。溶媒および化学物質は全て、独国のメルク（Ｍｅｒｃｋ）から購入し、分析用のものまたは分析に適した（ｐｒｏ  ａｎａｌｙｓｉｓ）（ＰＡ）ものであった。
【０１０３】
ＵＨＰＬＣおよびＭＳ用の試験試料溶液の調製
試料は、ＣＭＳ実用標準物質を水に溶解した直後にメタノール（ＭｅＯＨ）で希釈することにより調製し、試料の最終濃度が２ｍｇ／ｍＬとなり、含水率が５％となるようにした。これは、スルホメチル化化合物の加水分解を低減することにより試料の安定性を向上させる。個々の成分の同定は、単離された成分を純メタノールに約１ｍｇ／ｍＬの濃度となるように溶解することにより行った。使用前、試料は全て、２〜８℃の冷蔵庫またはオートサンプラー内で貯蔵した。
【０１０４】
質量分析（ＭＳ）
試料は全て、ネガティブモードのエレクトロスプレー注入飛行時間型質量分析装置（ＥＳＩ−ＴＯＦ  ＭＳ）（ブルカー・マイクロＴＯＦ（Ｂｒｕｋｅｒ  ｍｉｃｒｏＴＯＦ））で分析した。試料を、濃度が０．５ｍｇ／ｍＬになるようにメタノールに溶解し、３０分間超音波浴にかけた。試料を流速２５０μＬ／時間で約３０秒間注入した。ＭＳ設定は；エンド・プレート・オフセット（Ｅｎｄ  Ｐｌａｔｅ  Ｏｆｆｓｅｔ）−５００Ｖ、キャピラリ３５００Ｖ、ネブライザ３．０バール、ドライガス、２５０℃で４．０ｍＬ／分、キャピラリ出口、−８０Ｖから１２０Ｖまで変化、一般値−１００．０Ｖ、スキマー１−３３．３Ｖ、六重極１−２３．５Ｖ、六重極ＲＦ  ３００．０Ｖｐｐ、スキマー２、−２２３．５Ｖであった。キャピラリ出口は、成分のフラグメンテーションに著しい影響を及ぼす。従って、個々の成分についてこのパラメータを最適化することが必要であった。一部の化合物では、依然として幾らかのフラグメンテーションが見られた。イオン源分解産物中の種々雑多な塩、および他の成分が存在するため、ＭＳスペクトルは純粋ではなく、その他のシグナルを含有する可能性がある。しかし、各成分は一成分として単離された（ＵＨＰＬＣにより確認）ため、得られる最高質量はインタクトな分子であり、比較的低い質量を有する他の全ての質量はフラグメントであることが予測された。これはまた、キャピラリ出口エネルギーを変えることにより確認された。
【０１０５】
ＮＭＲ：実験結果は、ブルカー（Ｂｒｕｋｅｒ）６００ＭＨｚ分光器を用いて、１Ｄおよび２Ｄ  ＮＭＲ実験用の標準的パルスシーケンスで得た。データは、ＣＤ３ＯＨ中、２９８Ｋで記録した。化学シフトは、ＣＨＤ２ＯＨ（δΗ３．３０ｐｐｍ）およびＣＤ３ＯＨ（δＣ４９．０ｐｐｍに対するｐｐｍで報告する。以下のＮＭＲ実験結果を取得した：１Ｈ、１３Ｃ、ＤＥＰＴ、ＣＯＳＹ、ＨＭＢＣ、ＨＳＱＣ、ＴＯＣＳＹおよびＮＯＥＳＹ。１５Ｎケミカルシフトは、ウィシャート（Ｗｉｓｈａｒｔ）ら著、ジャーナル・オブ・バイオモレキュラー・ＮＭＲ（Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．ＮＭＲ）１９９５年、第６巻：１３５〜１４０頁）に記載されている周波数比を用いて参照した。
【０１０６】
（実施例）
以下の実施例は、本明細書に開示する対象の理解を深める役割を果たすものであって、例により本発明を限定するものではない。
【０１０７】
実施例１
ペンタ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，３，５，８，９ポリミキシンＥ１（ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９（図１））の製造
単離した硫酸ポリミキシンＥ１（３．５ｇ）と、ホルムアルデヒド重亜硫酸ナトリウム（１１．３ｇ）付加物の４５％ｗ／ｗ水溶液とを混合し、撹拌しつつ６０℃に加熱した。次いで、２Ｍ  ＮａＯＨを数回添加することによりｐＨを７．０〜７．５に保持した。１８時間後、混合物を周囲温度に冷却し、メタノール／アセトニトリル（１／１  ｖ／ｖ）
２００ｍＬ中で沈殿させることにより、粗生成物を白色固体として得た。
【０１０８】
生成物を次の手順で脱塩精製した：Ｃ１８カラム  ６μ、例えば、フェノメネックスＸブリッジ・プレップ・シールド（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｘ  Ｂｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｓｈｉｅｌｄ）１０×２５０ｍｍまたは類似のものを、５％ＭｅＣＮ（塩非含有）で洗浄し、平衡化させた。カラムを、最大流量１５０ｍＬ／分のウォーターズ・デルタ・プレップ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｄｅｌｔａ  Ｐｒｅｐ）ＨＰＬＣシステムに装着した。検出器は、２８０ｎｍに調節したウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）２４８７であった。２３０ｍｇのＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９の５％ＭｅＣＮ溶液９ｍＬと、１ｍＬの２Ｍ  ＮａＣｌとの混合物をカラムにロードし、流量は６〜８ｍＬ／分とした。
【０１０９】
５％ＭｅＣＮを用いて６〜８ｍＬ／分で溶出および脱塩を行い、ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９画分を回収する。このプロセス中にカラム上で幾らかの分解が起こったが、ヘッド部分（頭部）とテイル部分（尾部）とを切り離すことにより、高純度が維持される。ヘッド画分（Ｈｅａｄ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）の約３５ｍＬを回収して１００％ＭｅＣＮ４５０ｍＬに直接入れ、１００％ＭｅＣＮをさらに５５０ｍＬ添加した後、２Ｌ梨形蒸発フラスコ内のＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ（９７：３）溶液を減圧蒸発させた。蒸留プロセスはビュッヒ・ロタベイパー（Ｂｕｅｃｈｉ  Ｒｏｔａｖａｐｏｒ）で行った。９４：６の共沸混合物を留去すると、２Ｌ減圧蒸留フラスコ内に、水を含まないＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９残渣が得られる。この残渣を３×８ｍＬの１００％ＭｅＯＨ（無水）で取り出し、５０ｍＬ減圧蒸発フラスコに注ぎ、ＭｅＯＨ−ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９懸濁液が１〜２ｍＬになるまで減圧蒸発させた。１５ｍＬの１００％ＭｅＣＮを添加し、水浴温度３５℃で溶液／懸濁液をさらに減圧下で蒸発乾固した。このプロセス中に、圧力を９３３３〜７９９９Ｐａ（７０〜６０Ｔｏｒｒ）から２６６６〜２０００Ｐａ（２０〜１５Ｔｏｒｒ）に減圧させた。減圧を維持したまま３５℃の水浴中で低速回転しながら、さらなる減圧乾燥を３０分間行った。収量は、ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９という物質１５０ｍｇであった。実験を数回行って９９０ｍｇのバッチを得、相対クロマトグラフィー純度は９０％より高かった。
【０１１０】
逆相（ＣＳＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、１５０×２．１ｍｍ）で勾配を用いたＵＨＰＬＣは、ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９、Ｃ６３Ｈ１１０Ｎ１６Ｎａ１０Ｏ４３Ｓ１０に関して単一のピークを示した。カラム溶離液を２１０ｎｍで監視すると、純度は９３％であった−図６参照。分析はまた、単離成分を直接注入することによりＥＳＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（ネガティブモード）を用いて行った：Ｃ６３Ｈ１１０Ｎ１６Ｎａ１０Ｏ４３Ｓ１０［Ｍ］のｍ／ｚ計算値＝２３２８．３。［Ｍ＋８Ｎａ］−２：ｍ／ｚ実測値１１４１．２、および［Ｍ＋７Ｎａ］−３  ｍ／ｚ実測値７５３．１。生成物の同定は、１Ｈ−、１３Ｃ、および１５Ｎ−ＮＭＲ分光法で行った（データ不掲載）。
【０１１１】
実施例２
ペンタ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，３，５，８，９ポリミキシンＥ２（ＰＥ２−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９（図７））の製造
硫酸ポリミキシンＥ２（３．５ｇ）とホルムアルデヒド重亜硫酸ナトリウム（１１．３ｇ）付加物の４５％ｗ／ｗ水溶液とを混合し、撹拌しつつ６０℃に加熱した。次いで、２Ｍ  ＮａＯＨを数回添加することによりｐＨを７．０〜７．５に保持した。１８時間後、混合物を周囲温度に冷却し、メタノール／アセトニトリル（１／１  ｖ／ｖ）２００ｍＬ中で沈殿させることにより、粗生成物を白色固体として得た。生成物をさらに、実施例１に記載のように脱塩精製した。
【０１１２】
逆相（ＣＳＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、１５０×２．１ｍｍ）で勾配を用いたＵＨＰＬＣは、ＰＥ２−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９、Ｃ６２Ｈ１０８Ｎ１６Ｎａ１０Ｏ４３Ｓ
１０に関して単一のピークを示した。カラム溶離液を２１０ｎｍで監視すると、純度は８１％であった。分析はまた、単離成分を直接注入することによりＥＳＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（ネガティブモード）を用いて行った：Ｃ６２Ｈ１０８Ｎ１６Ｎａ１０Ｏ４３Ｓ１０［Ｍ］のｍ／ｚ計算値＝２３１４．５。［Ｍ＋８Ｎａ］−２：ｍ／ｚ実測値１１３５．２、および［Ｍ＋７Ｎａ］−３：ｍ／ｚ実測値７４８．５。生成物の同定はＮＭＲ分光法で行った。
【０１１３】
実施例３
ペンタ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，３，５，８，９ポリミキシンＥ１−ｉ（ＰＥ１−ｉ−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９（図８））の製造
硫酸ポリミキシンＥ１−ｉ（３．５ｇ）と、ホルムアルデヒド重亜硫酸ナトリウム（１１．３ｇ）付加物の４５％ｗ／ｗ水溶液とを混合し、撹拌しつつ６０℃に加熱した。次いで、２Ｍ  ＮａＯＨを数回添加することによりｐＨを７．０〜７．５に保持した。１８時間後、混合物を周囲温度に冷却し、メタノール／アセトニトリル（１／１  ｖ／ｖ）２００ｍＬ中で沈殿させることにより、粗生成物を白色固体として得た。生成物をさらに、実施例１に記載のように脱塩精製した。
【０１１４】
逆相（ＣＳＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、１５０×２．１ｍｍ）で勾配を用いたＵＨＰＬＣは、ＰＥ１−ｉ−（ＳＭ）１０、Ｃ６３Ｈ１１０Ｎ１６Ｎａ１０Ｏ４３Ｓ１０に関して単一のピークを示した。カラム溶離液を２１０ｎｍで監視すると、純度は９５％であった。分析はまた、単離成分を直接注入することによりＥＳＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（ネガティブモード）を用いて行った：［Ｍ＋８Ｎａ］−２：ｍ／ｚ実測値１１４１．２、および［Ｍ＋７Ｎａ］−３：ｍ／ｚ実測値７５３．１。
【０１１５】
実施例４
ペンタ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，３，５，８，９ポリミキシンＥ（ＰＥ−（ＳＭ）１０）１，３，５，８，９（図９）の製造
硫酸コリスチン混合物（３．５ｇ）と、ホルムアルデヒド重亜硫酸ナトリウム（１１．３ｇ）付加物の４５％ｗ／ｗ水溶液とを混合し、撹拌しつつ６０℃に加熱した。次いで、２Ｍ  ＮａＯＨを数回添加することによりｐＨを７．０〜７．５に保持した。１８時間後、混合物を周囲温度に冷却し、メタノール／アセトニトリル（１／１  ｖ／ｖ）２００ｍＬ中で沈殿させることにより、粗生成物を白色固体として得た。生成物；ＰＥ−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９（図９）をさらに、実施例１に記載のように脱塩精製した。
【０１１６】
逆相（ＣＳＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、１５０×２．１ｍｍ）で勾配を用いたＵＨＰＬＣは、ポリミキシン、略称ＰＥ−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９の各主要成分について単一のピークを示した。カラム溶離液を２１０ｎｍで監視すると、５つの主要なポリミキシンピークの全相対純度は８３％であった。分析はまた、ＰＥ−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９混合物を直接注入することにより、ネガティブモードのＥＳＩ−ＴＯＦ  ＭＳを用いて行い、主成分について算出した。  Ｅ１：Ｃ６３Ｈ１１０Ｎ１６Ｎａ１０Ｏ４３Ｓ１０［Ｍ］のｍ／ｚ計算値＝２３２８．３、およびＥ２：Ｃ６２Ｈ１０８Ｎ１６Ｎａ１０Ｏ４３Ｓ１０［Ｍ］のｍ／ｚ計算値＝２３１４．５。それぞれ、［Ｍ＋８Ｎａ］−２：ｍ／ｚ実測値１１４１．２＋１１３５．１、および［Ｍ＋７Ｎａ］−３：ｍ／ｚ実測値７４８．５および７５３．１。
【０１１７】
実施例５
ペンタ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，３，５，８，９ポリミキシンＢ（ＰＢ−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９（図１０））の製造
硫酸ポリミキシンＢ（３．５ｇ）と、ホルムアルデヒド重亜硫酸ナトリウム（１１．３ｇ）付加物の４５％ｗ／ｗ水溶液とを混合し、撹拌しつつ６０℃に加熱した。次いで、２
Ｍ  ＮａＯＨを数回添加することによりｐＨを７．０〜７．５に保持した。１８時間後、混合物を周囲温度に冷却し、メタノール／アセトニトリル（１／１  ｖ／ｖ）２００ｍＬ中で沈殿させることにより、粗生成物を白色固体として得た。生成物；ＰＢ−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９（図１０）をさらに、実施例１に記載のように脱塩精製した。
【０１１８】
逆相（ＣＳＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、１５０×２．１ｍｍ）で勾配を用いたＵＨＰＬＣは、ＰＢ−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９を示した。分析はまた、ＰＭＢ−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９混合物を直接注入することにより、ＥＳＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（ネガティブモード）を用いて行い、主成分について算出した。  Ｂ１：Ｃ６６Ｈ１１０Ｎ１６Ｎａ１０Ｏ４３Ｓ１０［Ｍ］のｍ／ｚ計算値＝２３６２．３、およびＢ２：Ｃ６５Ｈ１０６Ｎ１６Ｎａ１０Ｏ４３Ｓ１０［Ｍ］のｍ／ｚ計算値＝２３４８．３。主成分（各実測質量についてポリミキシンＢ成分の混合物）として、Ｍ−２：ｍ／ｚ実測値１１５８．２＋１１５１．２、およびＭ−３  ｍ／ｚ実測値７６４．４および７５９．８。
【０１１９】
実施例６
アシネトバクター・バウマンニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）および大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）に対するデカスルホメチル化ポリミキシンの抗菌活性。
【０１２０】
ＥＵＣＡＳＴにより液体培地希釈法を用いて最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を求めることにより、デカスルホメチル化ポリミキシンの抗菌活性を試験した。４種類の細菌指標生物、例えば、アシネトバクター・バウマンニイ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）コリスチン感受性、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）＃３０１０、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＡＴＣＣ２７８５３、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）ＡＴＣＣ２５９２２、および大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）ＤＳＡ４４３を使用した。試験は、デンマーク、コペンハーゲン、国立血清学研究所、微生物学および感染対策部（Ｓｔａｔｅｎｓ  Ｓｅｒｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔ，Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ  ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌ）で行った。
【０１２１】
使用した濃度範囲は０．１２５〜１２８μｇ／ｍＬであった。ゲンタマイシンは、陽性品質対照として含まれた。ゲンタマイシンの調製：１０００μｇ／ｍＬ保存溶液：Ｈｅｘａｍｉｃｉｎの４０ｍｇ／ｍＬ溶液０．１２５ｍｌ＋滅菌水４．８７５ｍＬ。１２８μｇ／ｍＬ：「１０００μｇ／ｍＬ保存溶液」０．６４０ｍＬ＋ミュラー・ヒントン液体培地（ＭＨＢ）４．３６ｍＬ。
【０１２２】
本明細書に開示する化合物の調製：５ｍｇ／ｍＬ保存溶液：５ｍｇのバイアル１本を滅菌水１．０ｍＬに添加した。５１２μｇ／ｍＬ溶液：「５ｍｇ／ｍＬ保存溶液」０．２０５ｍＬ＋ＭＨＢ１．７９５ｍＬ
接種物の調製：５％馬血液寒天平板からの新鮮な終夜培養コロニーを濁度０．５マックファーランド（ＭｃＦａｒｌａｎｄ）に懸濁し、ミュラー・ヒントン液体培地で１×１０６ＣＦＵ／ｍｌにさらに希釈した。合計５０μＬの希釈細菌懸濁液（ミュラー・ヒントンＢＢＬ  ＩＩ−液体培地、ＳＳＩ）を、本明細書に記載の２倍化合物（ｔｗｏ  ｆｏｌｄ
ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）またはゲンタマイシン希釈液５０μＬを含有するウェルに添加した。化合物は全て、トリプリケートで試験した。プレートは３５℃で１６〜２０時間インキュベートした。
【０１２３】
結果を表３に示す。陽性対照ゲンタマイシンのＭＩＣは、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎ
ｏｓａ）ＡＴＣＣ２７８５３（０．５〜２μｇ／ｍＬ）および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＡＴＣＣ２５９２２（０．２５〜１μｇ／ｍＬ）の範囲内であり、手順が適切であったことを示した。
【０１２４】
アシネトバクター・バウマンニイ（Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ）コリスチン感受性菌株を除く全ての菌株に対して、対照物質ＣＭＳはデカスルホメチル化ポリミキシンより低いＭＩＣ値を有した。アシネトバクター・バウマンニイ（Ａ．ｂａｕｍａｎｎｉｉ）コリスチン感受性菌株に対しては、５種のデカスルホメチル化ポリミキシンのうち３種はＣＭＳ対照と同等の活性を示した。ＭＩＣデータは、全てのデカスルホメチル化ポリミキシン物質についての抗菌活性を示しているが、一般に、ＣＭＳ対照と比較して活性が低い。
【０１２５】
表３．デカスルホメチル化ポリミキシンのＭＩＣ（μｇ／ｍＬ）結果
【０１２６】
【表３】
0006316846.tif 000012
【０１２７】
実施例７
テトラ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，５，８，９ポリミキシンＥ１（ＰＥ１−（ＳＭ）８１，５，８，９（図２））の製造
重亜硫酸ナトリウムホルムアルデヒド付加物（９．８０ｇ、６８．５ｍｍｏｌ）を水（１００ｍＬ）に溶解し、３７％ＨＣｌ（１．７５ｇ、１７．７ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、ポリミキシンＥ１（１１．７ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を撹拌溶液にゆっくり添加した。次いで、得られた分散液を４０℃に１０時間加熱し、その後、凍結乾燥して白色固体を得た。
【０１２８】
４００ｍｇのスルホメチル化ポリミシンＥ１を２０ｍＬの５０％メタノールに溶解し、ウォーターズ・プレップＬＣユニバーサル・ベース（Ｗａｔｅｒｓ  Ｐｒｅｐ  ＬＣ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｂａｓｅ）に装着したウォーターズ・ノバ・パック（Ｗａｔｅｒｓ  Ｎｏｖａ  Ｐａｋ）Ｃ１８、６μｍ、６×１０−９ｍ（６０Å）、４０×３１０ｍｍに２０ｍＬ／分の流量でロードした。物質溶液を供する前に、カラムをＡ−溶離液で平衡化した。
【０１２９】
Ａ−溶離液は、ＣＨ３ＣＮ：１０ｍＭトリエチルアミン  ４０ｍＭ  ＮａＣｌ緩衝液、１：９であった。
Ｂ−溶離液は、ＣＨ３ＣＮ：１０ｍＭトリエチルアミン  ４０ｍＭ  ＮａＣｌ緩衝液、
４：６であった。
【０１３０】
溶離系は、アイソクラティックの０〜５分はＡ−溶離液１００％であり、２０分間でＡ１００％からＡ５０％に直線勾配で変化させた。
最初の５つの主要ピークを回収し、解析した。ＲＴ１２分の最初の主要ピークはＰＥ１−（ＳＭ）８１，５，８，９であった。この画分を、さらにワークアップする前に−８０℃の冷凍庫で貯蔵した。ＰＥ１−（ＳＭ）８１，５，８，９（図１１）を含む、依然として低温の融解速度の速い画分５０〜１００ｍＬを１００％ＣＨ３ＣＮで希釈し、ＣＨ３ＣＮ中に約４％の水が含まれるようにした。純度７５〜８５％のＰＥ１−（ＳＭ）８１５〜３０ｍｇを含有する希釈画分を減圧下で蒸発乾固し、１００％メタノールに再溶解し、−２０℃の冷凍庫で回収して、１５０〜３００ｍｇの物質を得た。
【０１３１】
物質を分取ＨＰＬＣで上記と同様に再処理し、最後に、実施例１のように脱塩精製した。生成物の同定は、１Ｈ−、１３Ｃ−、および１５Ｎ−ＮＭＲ分光法で行った。
精製したＰＥ１−（ＳＭ）８１，５，８，９の、逆相（ＣＳＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、１５０×２．１ｍｍ）で勾配を用いたＵＨＰＬＣは、オクタスルホメチル化ポリミキシンに関して単一のピークを示した。カラム溶離液を２１０ｎｍで監視すると、ＰＥ１−（ＳＭ）８１，５，８，９の純度は９４％であった。分析はまた、オクタおよびヘキサスルホン化コリスチン混合物を直接注入することにより、ＥＳＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（ネガティブモード）を用いて行った：Ｃ６１Ｈ１０８Ｎ１６Ｎａ８Ｏ３７Ｓ８［Ｍ］のｍ／ｚ計算値＝２０９６．４。ＰＥ１−（ＳＭ）８１，５，８，９［Ｍ＋８Ｎａ］−２  ｍ／ｚの実測値１０２５．２、および［Ｍ＋７Ｎａ］−３  ｍ／ｚの実測値６７５．８。
【０１３２】
表４．オクタスルホメチル化ポリミキシンＥ１のＭＩＣ（μｇ／ｍＬ）結果
【０１３３】
【表４】
0006316846.tif 000013
【０１３４】
実施例８
トリ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ＤＡＢ１，５，９ポリミキシンＥ１（略称：ＰＥ１−（ＳＭ）６１，５，９（図３））の製造
重亜硫酸ナトリウムホルムアルデヒド付加物（９．８０ｇ、６８．５ミリモル）を水（１００ｍＬ）に溶解し、３７％ＨＣｌ（１．７５ｇ、１７．７ｍｍｏｌを添加した。次いで、ポリミキシンＥ１（１１．７ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を撹拌溶液にゆっくり添加した。次いで、得られた分散液を４０℃に１０時間加熱し、その後、凍結乾燥して白色固体を得た。
【０１３５】
４００ｍｇのスルホメチル化ポリミシンＥ１を２０ｍＬの５０％メタノールに溶解し、ウォーターズ・プレップＬＣユニバーサル・ベース（Ｗａｔｅｒｓ  Ｐｒｅｐ  ＬＣ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｂａｓｅ）に装着したウォーターズ・ノバ・パック（（Ｗａｔｅｒｓ
Ｎｏｖａ  Ｐａｋ）Ｃ１８、６μｍ、６×１０−９ｍ（６０Å）、４０×３１０ｍｍに２０ｍＬ／分の流量でロードした。物質溶液を供する前に、カラムをＡ−溶離液で平衡化した。
【０１３６】
Ａ−溶離液は、ＣＨ３ＣＮ：１０ｍＭトリエチルアミン  ４０ｍＭ  ＮａＣｌ緩衝液、１：９であった。
Ｂ−溶離液は、ＣＨ３ＣＮ：１０ｍＭトリエチルアミン  ４０ｍＭ  ＮａＣｌ緩衝液、４：６であった。
【０１３７】
溶離系は、アイソクラティックの０〜５分はＡ−溶離液１００％であり、および２０分間でＡ１００％からＡ５０％に直線勾配で変化させた。
最初の５つの主要ピークを回収し、解析した。２２分の最後の主要ピークはＰＥ１−（ＳＭ）６１，５，９であった（図３）。この画分を、さらにワークアップする前に、−８０℃の冷凍庫で貯蔵した。ＰＥ１−（ＳＭ）６１，５，９を含む、依然として低温の融解速度の速い画分５０〜１００ｍＬを１００％ＣＨ３ＣＮで希釈し、ＣＨ３ＣＮ中に約４％の水が含まれるようにした。純度７５〜８５％のＰＥ１−（ＳＭ）６１，５，９１５〜３０ｍｇを含有する希釈画分を減圧下で蒸発乾固し、１００％メタノールに再溶解し、−２０℃の冷凍庫で回収して、１５０〜３００ｍｇの物質を得た。
【０１３８】
物質を上記と同様に分取ＨＰＬＣで再処理し、最後に、実施例１のように脱塩精製した。生成物の同定はＮＭＲ分光法で行った。
逆相（ＣＳＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、１５０×２．１ｍｍ）で勾配を用いたＵＨＰＬＣは、ＰＥ１−（ＳＭ）６１，５，９に関して単一のピークを示した。カラム溶離液を２１０ｎｍで監視すると、ＰＥ１−（ＳＭ）６１，５，９の純度は８７％であった。分析はまた、オクタおよびヘキサスルホメチル化ポリミキシンＥ１を直接注入することにより、ＥＳＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（ネガティブモード）を用いて行った：Ｃ５９Ｈ１０６Ｎ１６Ｎａ６Ｏ３１Ｓ６［Ｍ］のｍ／ｚ計算値＝１８６４．５。ＰＥ１−（ＳＭ）６１，５，９［Ｍ＋８Ｎａ］−２  ｍ／ｚの実測値９０９．３、および［Ｍ＋７Ｎａ］−３  ｍ／ｚの実測値５９８．５。
【０１３９】
表５．ヘキサスルホメチル化ポリミキシンＥ１のＭＩＣ（μｇ／ｍＬ）結果
【０１４０】
【表５】
0006316846.tif 000014
【０１４１】
実施例９
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ毒性試験
ＨＫ−２細胞（腎臓ネフロンの近位尿細管由来のヒトパピローマウイルス１６形質転換細胞株）を９６ウェルプレートに播種し、０．０５ｍｇ／ｍＬウシ下垂体抽出物および５ｎｇ／ｍＬ  ＥＧＦを含むケラチノサイト血清非含有培地で２４時間培養した。損傷した細胞膜しか透過しないシントックス・グリーン（Ｓｙｔｏｘ  Ｇｒｅｅｎ）の存在下、指定された化合物で細胞を処理した。
【０１４２】
細胞溶解した細胞のパーセンテージを示す、２時間毎に１画像のタイムラプス撮影を行った。結果は図１１〜１５で視覚化されており、それらは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＨＫ−２細胞を溶解する能力に関するコリスチンとデカスルホメチル化ポリミキシンとの相違を示している。この差は１００μｇ／ｍＬを超える濃度において明らかであり、治療の最初の
２４時間で最も顕著である。
【０１４３】
十分且つ完全な説明が本明細書に記載されているものと考えるが、一定の特許文献および非特許文献は一定の本質的な主題を含み得る。これらの特許文献および非特許文献が本質的な主題について記載している場合、これらの文献はそれらの内容全体が参照により本明細書に援用される。援用される主題の意味は、本明細書に開示される対象の意味に準ずることが理解される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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