(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する単離された抗体またはそのフラグメントであって、該フラグメントが、Fab、Fab'、F(ab')2、scFv、dsFv、ds-scFv、2量体、ミニボディ、ダイアボディ、およびそれらの多量体からなる群から選択されるか、または該フラグメントが二重特異性抗体フラグメントであり、
軽鎖可変領域（VL）が、
- 配列SEQ ID NO：1の軽鎖CDR1（LC-CDR1）；および
- 配列SEQ ID NO：2の軽鎖CDR2（LC-CDR2）；および
- 配列SEQ ID NO：3の軽鎖CDR3（LC-CDR3）
を含み、かつ
重鎖可変領域（VH）が、
- 配列SEQ ID NO：4の重鎖CDR1（HC-CDR1）；および
- 配列SEQ ID NO：5の重鎖CDR2（HC-CDR2）；および
- 配列SEQ ID NO：6の重鎖CDR3（HC-CDR3）
を含むか、または
軽鎖可変領域（VL）が、
- 配列SEQ ID NO：7の軽鎖CDR1（LC-CDR1）；および
- 配列SEQ ID NO：8の軽鎖CDR2（LC-CDR2）；および
- 配列SEQ ID NO：9の軽鎖CDR3（LC-CDR3）
を含み、かつ
重鎖可変領域（VH）が、
- 配列SEQ ID NO：10の重鎖CDR1（HC-CDR1）；および
- 配列SEQ ID NO：11の重鎖CDR2（HC-CDR2）；および
- 配列SEQ ID NO：12の重鎖CDR3（HC-CDR3）
を含む、単離された抗体またはそのフラグメント。
【請求項２】
軽鎖可変領域（VL）の配列が、配列SEQ ID NO：13、またはSEQ ID NO：13の全長にわたりSEQ ID NO：13に対して少なくとも90％の同一性を有する配列を含みまたはからなり；かつ重鎖可変領域（VH）の配列が、配列SEQ ID NO：14、またはSEQ ID NO：14の全長にわたりSEQ ID NO：14に対して少なくとも90％の同一性を有する配列を含むまたはからなる、請求項1記載の抗体。
【請求項３】
軽鎖可変領域（VL）の配列が、配列SEQ ID NO：15、またはSEQ ID NO：15の全長にわたりSEQ ID NO：15に対して少なくとも90％の同一性を有する配列を含みまたはからなり；かつ重鎖可変領域（VH）の配列が、配列SEQ ID NO：16、またはSEQ ID NO：16の全長にわたりSEQ ID NO：16に対して少なくとも90％の同一性を有する配列を含むまたはからなる、請求項1記載の抗体。
【請求項４】
モノクローナル抗体である、請求項1〜３のいずれか一項記載の抗体。
【請求項５】
2012年4月25日付でCollection Nationale de Cultures de Microorganismes（CNCM）に番号CNCM I-4618の下で寄託されたハイブリドーマによって産生される、請求項２記載の抗体。
【請求項６】
2012年4月25日付でCollection Nationale de Cultures de Microorganismes（CNCM）に番号CNCM I-4617の下で寄託されたハイブリドーマによって産生される、請求項３記載の抗体。
【請求項７】
請求項1〜６のいずれか一項に定義される抗体またはそのフラグメントをコードする、単離された核酸分子。
【請求項８】
請求項７に定義される核酸分子を含む、ベクター。
【請求項９】
請求項７に定義される核酸分子または請求項８に定義されるベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１０】
請求項1〜６のいずれか一項に定義される抗体およびそのフラグメントと、請求項７に定義される単離された核酸分子と、請求項８に定義されるベクターとからなる群より選択される少なくとも1つの化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項１１】
医薬として使用するための、請求項1〜６のいずれか一項に定義される抗体もしくはそのフラグメント、請求項７に定義される単離された核酸分子、または請求項８に定義されるベクター。
【請求項１２】
異常な血管新生を伴う癌、異常な血管新生を伴う眼科疾患、関節リウマチ、乾癬、血管腫、子宮内膜症およびカポジ肉腫からなる群より特に選択される、病的血管新生疾患または望ましくない過剰な新血管形成によって特徴づけられる疾患の処置および／または予防において使用するための、請求項1〜６のいずれか一項に定義される抗体もしくはそのフラグメント、請求項７に定義される単離された核酸分子、または請求項８に定義されるベクター。
【請求項１３】
少なくとも1つのヒトケモカインの発現および／または発現レベルを決定する方法であって、以下の工程：
（i）請求項1〜６のいずれか一項記載の少なくとも1つの抗体および／またはそのフラグメントを用いて、対象の生物学的試料におけるCXCL1、CXCL7およびCXCL8からなる群より選択される少なくとも1つのヒトケモカインの発現および／または発現レベルをインビトロで決定する工程
を含み、工程（i）で決定された発現および／または発現レベルが、該対象における病的血管新生疾患または望ましくない過剰な新血管形成によって特徴づけられる疾患を診断および／または予後予測するために使用される、方法。
【請求項１４】
請求項1〜６のいずれか一項記載の少なくとも1つの抗体および／またはそのフラグメントを含む、請求項１３記載の方法を実施するためのキット。
【請求項１５】
請求項1〜６のいずれか一項に定義される抗体もしくはそのフラグメント、請求項７に定義される単離された核酸分子、または請求項８に定義されるベクターを含む、医薬。
【請求項１６】
異常な血管新生を伴う癌、異常な血管新生を伴う眼科疾患、関節リウマチ、乾癬、血管腫、子宮内膜症およびカポジ肉腫からなる群より特に選択される、病的血管新生疾患または望ましくない過剰な新血管形成によって特徴づけられる疾患の処置および／または予防のための医薬であって、請求項1〜６のいずれか一項に定義される抗体もしくはそのフラグメント、請求項７に定義される単離された核酸分子、または請求項８に定義されるベクターを含む、医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患の予防および処置の分野に関する。
【０００２】
特に、本発明は、特にケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、とりわけ病的血管新生疾患の処置および／または予防のための医薬として使用するための、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する抗体ならびにそれらの用途に関する。
【背景技術】
【０００３】
癌を処置する上での血管新生の標的化は、1970年代前半にJudah Folkmanによって提案された。この初期の仮説は多くの前臨床および臨床研究によって検証され、ヒト化モノクローナル抗体および多種のキナーゼ阻害剤を含む多くの治療化合物が開発されるに至った。
【０００４】
血管新生の最も重要な因子の1つは、VEGF（血管内皮成長因子）である。VEGFの発見からほぼ20年後に、VEGFを標的とするヒト化モノクローナル抗体であるベバシズマブ（Hurwitz et al., 2004）が、標準的な化学療法剤イリノテカンと組み合わせての結腸癌の処置に関して、食品医薬品局（FDA）の承認を得た。
【０００５】
スニチニブリンゴ酸塩（Choueiri et al., 2008）およびソラフェニブトシル酸塩（Eisen et al., 2008）等の受容体チロシンキナーゼ阻害剤だけでなく、テムシロリムス（Motzer et al., 2008）等の細胞内キナーゼ阻害剤および非受容体セリンスレオニンキナーゼ阻害剤を含む他の多くの抗血管新生化合物も、開発された。
【０００６】
これらの治療を用いることで無増悪生存期間が著しく増大したが、不可避的な再発および死に至る疾患進行が観察された。いくつかの最近の論文には、処置回避（treatment evasion）と呼ばれる新しい現象と、チロシンキナーゼ阻害剤を用いる処置の場合における高い転移能を有するより攻撃的な細胞の選択が報告されている（Ebos et al., 2009, Paez-Ribes et al., 2009）
【０００７】
このように、VEGFはRCC抗血管新生治療の標的となったが；VEGFのみの標的化は部分的にしか成功しなかった。VEGFに対する中和性ヒト化抗体（すなわち、ベバシズマブ）を用いることで無増悪生存期間が著しく増大したが（Yang et al., 2003）（Escudier et al., NEJM 2007）、ASCOミーティング2009で発表されたピボタルAVOREN研究においてプラセボ患者とベバシズマブ処置患者の間の全生存（overall survival）に有意差がなかったことが報告された（Escudier et al., 2010）。処置回避は、VEGFプレmRNAの選択的スプライシングから生じたVEGFxxxbと呼ばれる抗血管新生形態のVEGFの存在に起因する、血管新生過剰または無効果を含む様々な機構を通じて生じ得る。
【０００８】
WO 2008/130969は、5つの抗原：ヒトIL-8（CXCL8）、Gro-アルファ（CXCL1）、Gro-ベータ（CXCL2）、Gro-ガンマ（CXCL3）およびENA-78（CXCL5）に結合することができる、該5つの抗原の混合物のマウスへの注射によって得られたモノクローナル抗体を開示し、かつ非ヒト霊長類における吸入LPS急性肺炎症モデルにおける該抗体の使用を開示している。しかし、WO 2008/130969は、CXCL1、CXCL7およびCXCL8に結合するモノクローナル抗体を開示していない。
【０００９】
WO 2011/100271は、ヒトIL-8（CXCL8）、Gro-アルファ（CXCL1）、Gro-ベータ（CXCL2）、Gro-ガンマ（CXCL3）、GCP2、NAP2（CXCL7）およびENA-78（CXCL5）に結合することができるモノクローナル抗体を開示している。しかし、WO 2011/100271は、該抗原に対する該モノクローナル抗体の親和性を開示していない。
【００１０】
したがって、当技術分野では、患者の寿命を延ばしかつ再発および死に至る疾患進行を回避する新規かつ改善された抗血管新生化合物に対する大きな要望が依然として存在する。本発明者らは、本明細書に開示される本発明によって、大きな進展をもたらした。
【発明の概要】
【００１１】
本発明の目的は、上記の問題の全部または一部を解決することができる新規の化合物を提供することによって、この要望を満たすことである。
【００１２】
予想外に、本発明者らは、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する新たに開発された抗体が、特にRCC（明細胞腎細胞癌）のマウスモデルにおいて、腫瘍成長を効果的に阻害することができることを実証した。RCCは、（フォンヒッペルリンダウ遺伝子の変異に起因して生じる）高度に血管形成された腫瘍なので、抗血管新生治療の研究に最も関連するモデルの1つである。
【００１３】
CXCL8を含むケモカインの抑制は腫瘍成長を阻害するのではなく逆に促進することがいくつかの最近の論文で報告されていることから、これらの結果は予想外である。これに関連して、Yao et al. (2007)は、CXCL-8の抑制がヌードマウスにおける腫瘍成長を促進することを実証している。
【００１４】
驚くべきことに、これらの新たに開発された抗体は、単独でまたは組み合わせて使用される市販の抗CXCL1抗体、抗CXCL7抗体および抗CXCL8抗体よりも効果的に腫瘍成長を阻害することができる。（市販の抗CXCL1抗体を含むまたは含まない）市販の抗CXCL7抗体および抗CXCL8抗体の組み合わせが腫瘍成長の阻害に対して相加的効果を得ることができないと本発明者らが実証したので、これらの結果は、まさに予想外のことである。逆に、本発明者らは、市販の抗CXCL7抗体および抗CXCL8抗体の併用が、腫瘍成長の阻害に関してそれらの個別使用よりも非効果的であること、およびRCCのマウスモデルにおいて腫瘍促進効果を有することを示した。
【００１５】
したがって、1つの局面において、本発明は、特に25℃で、とりわけ実施例に記載されるBiacore（登録商標）プラズモン共鳴分析により、表面プラズモン共鳴によって決定される場合に、最大16 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL1に、最大5 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL7に、および最大45 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL8に結合することができる、ヒトケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する単離された抗体またはそのフラグメントに関する。
【００１６】
本発明の抗体は、ヒトCXCL7に特異的であるがヒトCXCL1および8に対する類似性を有しているペプチド、特に配列
0006416224.tif 000002
のペプチドでラット等の動物を免疫し、その後に、抗体を単離するためのスクリーニング方法を行うことによって得ることができる。キーホールリンペットヘモシアニンに連結されたペプチドに対するELISA試験およびBourcier et al. (2011)に記載されるCXCR2発現細胞におけるCXCL-7により誘導されるERK活性化を阻害する抗体の能力の試験を含む、抗体を単離するための異なる方法が使用され得る。
【００１７】
特定の態様において、本発明はまた、
（i）ヒトCXCL7に特異的であるがヒトCXCL1および8に対する類似性を有している少なくとも1つのペプチド、特に配列
0006416224.tif 000003
のペプチドで少なくとも1体の動物を免疫する工程、
（ii）当業者に公知の任意の方法によってモノクローナル抗体を作製する工程、例えば、該動物からB細胞を単離し、該B細胞を骨髄細胞と融合させて、モノクローナル抗体を分泌することができる不死化ハイブリドーマ細胞を形成する工程、
（iii）配列SEQ ID NO：20のペプチドもしくはキーホールリンペットヘモシアニンに連結された配列SEQ ID NO：20のペプチドに結合することができる抗体および／または特にBourcier et al. (2011)に記載されるアッセイにおいてCXCR2発現細胞においてCXCL7により誘導されるERK活性化を阻害することができる抗体を単離するためのスクリーニング方法を実施する工程
を含む方法によって得られる抗体または該方法によって得ることができる抗体にも関する。
【００１８】
本発明にしたがう抗体は、特に、以下の利点を有する：
-  複数のCXCLケモカイン、特にCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する、他に例のない、報告された抗体である；
-  CXCL1、CXCL7およびCXCL8の各ケモカインに対するその親和性が、該ケモカインの1つのみに対して指向する市販の抗体と比較して重要である；
-  実験モデルにおいて腫瘍成長を高めるベバシズマブ（VEGFを指向する抗体）（Escudier et al., 2010）と比較して、本発明の抗体は、腫瘍成長を阻害する；
-  本発明の抗体は、古典的なVEGF/VEGFR経路と異なる独立した血管新生経路を標的とする。CXCLケモカイン経路は、血管新生性および炎症性の両方である。さらにCXCLケモカインは、腫瘍細胞がそれらの受容体であるCXCR1およびCXCR2を発現するため、自己分泌増殖経路を誘導する。したがって、関連するCXCLケモカイン（CXCL1、CXCL7およびCXCL8）を阻害することによって、本発明の抗体により血管新生、炎症および増殖が阻害される。
【００１９】
別様に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術および科学用語は、関連分野の当業者に広く理解されているのと同じ意味を有する。
【００２０】
利便性を考慮して、本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される特定の用語および語句の意味を提供する。
【００２１】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）を含むことが意図されている。とりわけ、抗体（または「免疫グロブリン」）は、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも2つの重（H）鎖および2つの軽（L）鎖を含む糖タンパク質からなる。
【００２２】
各重鎖は、重鎖可変領域（またはドメイン）（本明細書でVHと略称される）および重鎖定常領域（以降、CH）を含む。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはイプシロンに分類され、それぞれ、IgG、IgM、IgA、IgDおよびIgEという抗体のアイソタイプを定義する。免疫グロブリンIgG、IgDおよびIgAの重鎖定常領域（それぞれ、γ、δおよびα鎖）は、3つのドメイン（CH1、CH2およびCH3）ならびに柔軟性を付与するヒンジ領域を含み、免疫グロブリンIgMおよびIgEの重鎖定常領域は、4つのドメイン（CH1、CH2、CH3およびCH4）を含む。
【００２３】
本発明の抗体は、その重鎖の構造に依存してIgG、IgM、IgA、IgDおよびIgEアイソタイプであり得る。しかし、好ましい態様において、本発明の抗体はIgGアイソタイプである、すなわちその重鎖がガンマ（γ）タイプである。
【００２４】
IgG抗体は、血清中におけるそれらの存在量の順にIgG1、IgG2、IgG3およびIgG4と命名された4つの個別のサブタイプに分類される（IgG1が最も豊富である）。γ鎖におけるヒンジ領域の構造は、これらのサブタイプの各々に、その特有の生物学的プロフィールを付与する（それらのFc領域の間に約95％の類似性がある場合でさえも、そのヒンジ領域の構造は相対的に異なる）。
【００２５】
本発明の抗体は、IgG1、IgG2、IgG3またはIgG4サブタイプであり得る。
【００２６】
しかし、好ましい態様において、本発明の抗体は、IgG1サブタイプまたはIgG2サブタイプである。
【００２７】
各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書でVLと略称される）と、1つのドメインのみを含む軽鎖定常領域CLとを含む。哺乳動物では、2つのタイプの軽鎖、すなわち第2染色体上の免疫グロブリンカッパ遺伝子座によってコードされるカッパ（κ）鎖と、第22染色体上の免疫グロブリンラムダ遺伝子座によってコードされるラムダ（λ）鎖とが存在する。好ましい態様において、本発明の抗体は、カッパ軽鎖を有する。
【００２８】
VHおよびVL領域をさらに、「相補性決定領域」（CDR）と命名された超可変性の領域に細分することができ、これは主として抗原のエピトープ結合を担い、かつこれらには「フレームワーク領域」（FR）と命名されたより保存された領域が点在し得る。各VHおよびVLは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順で配置される、3つのCDRおよび4つのFRから構成される：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。各ドメインに対するアミノ酸配列の割当ては、周知例にしたがう（CHOTHIA et al., J. Mol. Biol., 1987; CHOTHIA et al., Nature, 1898）。特定の抗原に結合する抗体の機能的能力は各軽鎖／重鎖対の可変領域に依存し、大部分がそれらのCDRによって決定される。重鎖の可変領域は、異なるB細胞によって産生された抗体で相違するが、単一のB細胞またはB細胞クローン（またはハイブリドーマ）によって産生されたすべての抗体では同一である。
【００２９】
これに対して、抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第1成分（C1q）を含む宿主組織または因子に対する免疫グロブリンの結合を媒介する。
【００３０】
本明細書で使用される場合、「抗体フラグメント」という用語は、所望の生物学的活性を示す（すなわち、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する）限り、Fab、Fab'、F(ab')2、scFv、dsFv、ds-scFv、2量体、ミニボディ、ダイアボディおよびそれらの多量体ならびに二重特異性抗体フラグメントを表すことが意図される。抗体は、従来技術を用いてフラグメント化され得る。抗体フラグメントの作製のために様々な技術が開発されている。伝統的に、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解消化を通じて取得されていた。例えば、F(ab')2フラグメントは、抗体をペプシンで処理することによって作製され得る。得られるF(ab')2フラグメントを処理して、Fab'フラグメントを生成するためのジスルフィド架橋を還元することができる。パパイン消化は、Fabフラグメントの形成をもたらすことができる。Fab、Fab'およびF(ab')2、scFv、dsFv、ds-scFv、2量体、ミニボディ、ダイアボディ、二重特異性抗体フラグメントならびにその他のフラグメントはまた、組換え技術によって合成することもできる。
【００３１】
本発明の文脈で、抗体は、あるペプチドに関して107 M-1より高い、好ましくは5.107 M-1より高い、より好ましくは108 M-1より高い親和性定数Ka（平衡解離定数の逆数、すなわち1/KD）を有する場合、そのペプチド「を指向する」または「に結合する」と言われる。
【００３２】
ペプチドまたは抗原（Ag）に対する抗体（Ab）の結合を特徴づけるために使用される親和性定数は、解離定数の逆数であり、以下のように定義される。
0006416224.tif 000004
【００３３】
この親和性は、例えば、平衡透析によって、蛍光消光によってまたは表面プラズモン共鳴によって測定され得、これらの技術は当技術分野で慣用的に使用されている。特に、平衡解離定数（KD）および親和性定数（Ka）は、実施例に記載される方法にしたがい表面プラズモン共鳴によって決定され得る。
【００３４】
特に、本発明の単離された抗体またはそのフラグメントは、特に25℃で、とりわけ実施例に記載されるBiacore（登録商標）プラズモン共鳴分析により、表面プラズモン共鳴によって決定される場合に、最大16 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL1に、最大4 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL7に、および最大45 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL8に結合することができる。
【００３５】
特に、本発明の単離された抗体またはそのフラグメントは、特に25℃で、とりわけ実施例に記載されるBiacore（登録商標）プラズモン共鳴分析により、表面プラズモン共鳴によって決定される場合に、最大12 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL1に、最大5 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL7に、および最大20 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL8に結合することができる。
【００３６】
本明細書で使用される場合、「CXCL1」という用語は、成長調節癌遺伝子アルファ、GRO-αとしても公知のCXCケモカインに関する。
【００３７】
好ましくは、ヒトCXCL1は、SEQ ID NO：17に示される配列（NCBI参照配列：NM_001511）によってコードされるケモカインに関する。
【００３８】
本明細書で使用される場合、「CXCL7」という用語は、好中球活性化ペプチド-2、NAP-2としても公知のCXCケモカインに関する。
【００３９】
好ましくは、ヒトCXCL7は、SEQ ID NO：18に示される配列（GenBank: NM_002704）によってコードされるケモカインに関する。
【００４０】
本明細書で使用される場合、「CXCL8」という用語は、インターロイキン8、IL-8としても公知のCXCケモカインに関する。
【００４１】
好ましくは、ヒトCXCL8は、SEQ ID NO：19に示される配列（GenBank: NM_000584）によってコードされるケモカインに関する。
【００４２】
本発明を提供する上で参照される同一性のパーセンテージは、例えばNeedleman and Wunsch 1970のアルゴリズムを用いて、比較される配列の全体的なアラインメントに基づき、すなわち、それらの全長にわたる配列のアラインメントに基づき決定される。この配列比較は、例えば、10.0に等しい「ギャップオープン（Gap open）」パラメータ、0.5に等しい「ギャップエクステンド（Gap Extend）」パラメータおよび行列「BLOSUM 62」を用いることによってニードルソフトウェアを用いて行われ得る。ニードル等のソフトウェアは、ワールドワイドウェブサイトebi.ac.ukにおいて「needle」の名の下で入手可能である。
【００４３】
特に、本発明にしたがう、ヒトケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する単離された抗体またはそのフラグメントは、SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：1の全長にわたりSEQ ID NO：1に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：2の全長にわたりSEQ ID NO：2に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：3の全長にわたりSEQ ID NO：3に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：4の全長にわたりSEQ ID NO：4に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：5の全長にわたりSEQ ID NO：5に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：6の全長にわたりSEQ ID NO：6に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：7の全長にわたりSEQ ID NO：7に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：8の全長にわたりSEQ ID NO：8に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：9の全長にわたりSEQ ID NO：9に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：10の全長にわたりSEQ ID NO：10に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：11の全長にわたりSEQ ID NO：11に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、またはSEQ ID NO：12の全長にわたりSEQ ID NO：12に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のCDRの中から選択される、特にSEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11またはSEQ ID NO：12からなる配列のCDRの中から選択される、少なくとも1つ、特に少なくとも2つ、少なくとも3つ、少なくとも4つ、少なくとも5つ、とりわけ6つの相補性決定領域（CDR）を含む。
【００４４】
特に、本発明にしたがう、ヒトケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する単離された抗体またはそのフラグメントは、
-  SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：1の全長にわたりSEQ ID NO：1に対して少なくとも90％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：2の全長にわたりSEQ ID NO：2に対して少なくとも90％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：3の全長にわたりSEQ ID NO：3に対して少なくとも90％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：4の全長にわたりSEQ ID NO：4に対して少なくとも90％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：5の全長にわたりSEQ ID NO：5に対して少なくとも90％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：6の全長にわたりSEQ ID NO：6に対して少なくとも90％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：7の全長にわたりSEQ ID NO：7に対して少なくとも90％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：8の全長にわたりSEQ ID NO：8に対して少なくとも90％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：9の全長にわたりSEQ ID NO：9に対して少なくとも90％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：10の全長にわたりSEQ ID NO：10に対して少なくとも90％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：11の全長にわたりSEQ ID NO：11に対して少なくとも90％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：12の全長にわたりSEQ ID NO：12に対して少なくとも90％の同一性を有する配列、特にSEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12
からなる群より選択される配列のCDRからなる群より選択される6つの相補性決定領域（CDR）を含む。
【００４５】
特に、本発明にしたがう、ヒトケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する単離された抗体またはそのフラグメントは、
-  SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：1の全長にわたりSEQ ID NO：1に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：2の全長にわたりSEQ ID NO：2に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：3の全長にわたりSEQ ID NO：3に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：7の全長にわたりSEQ ID NO：7に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：8の全長にわたりSEQ ID NO：8に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、またはSEQ ID NO：9の全長にわたりSEQ ID NO：9に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のCDRの中から選択される、特にSEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8またはSEQ ID NO：9からなる配列のCDRの中から選択される、少なくとも1つ、特に少なくとも2つ、とりわけ3つのCDR；ならびに
-  SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：4の全長にわたりSEQ ID NO：4に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：5の全長にわたりSEQ ID NO：5に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：6の全長にわたりSEQ ID NO：6に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：10の全長にわたりSEQ ID NO：10に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：11の全長にわたりSEQ ID NO：11に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、またはSEQ ID NO：12の全長にわたりSEQ ID NO：12に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のCDRの中から選択される、特にSEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11またはSEQ ID NO：12からなる配列のCDRの中から選択される、少なくとも1つ、特に少なくとも2つ、とりわけ3つのCDR
を含む。
【００４６】
特に、本発明にしたがう、ヒトケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する単離された抗体またはそのフラグメントは、
-  SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：1の全長にわたりSEQ ID NO：1に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：2の全長にわたりSEQ ID NO：2に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：3の全長にわたりSEQ ID NO：3に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のCDRの中から選択される、特にSEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3からなる配列のCDRの中から選択される、少なくとも1つ、特に少なくとも2つ、とりわけ3つのCDR；または
-  SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：7の全長にわたりSEQ ID NO：7に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：8の全長にわたりSEQ ID NO：8に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、またはSEQ ID NO：9の全長にわたりSEQ ID NO：9に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のCDRの中から選択される、特にSEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9からなる配列のCDRの中から選択される、少なくとも1つ、特に少なくとも2つ、とりわけ3つのCDR；ならびに
-  SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：4の全長にわたりSEQ ID NO：4に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：5の全長にわたりSEQ ID NO：5に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：6の全長にわたりSEQ ID NO：6に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のCDRの中から選択される、特にSEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6からなる配列のCDRの中から選択される、少なくとも1つ、特に少なくとも2つ、とりわけ3つのCDR；または
-  SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：10の全長にわたりSEQ ID NO：10に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：11の全長にわたりSEQ ID NO：11に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、またはSEQ ID NO：12の全長にわたりSEQ ID NO：12に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のCDRの中から選択される、特にSEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12からなる配列のCDRの中から選択される、少なくとも1つ、特に少なくとも2つ、とりわけ3つのCDR
を含む。
【００４７】
特に、本発明にしたがう、ヒトケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する単離された抗体またはそのフラグメントは、
-  SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：1の全長にわたりSEQ ID NO：1に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：2の全長にわたりSEQ ID NO：2に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：3の全長にわたりSEQ ID NO：3に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のCDRの中から選択される、特にSEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3からなる配列のCDRの中から選択される、少なくとも1つ、特に少なくとも2つ、とりわけ3つのCDR；ならびに
-  SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：4の全長にわたりSEQ ID NO：4に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：5の全長にわたりSEQ ID NO：5に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：6の全長にわたりSEQ ID NO：6に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のCDRの中から選択される、特にSEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6からなる配列のCDRの中から選択される、少なくとも1つ、特に少なくとも2つ、とりわけ3つのCDR
を含む。
【００４８】
特に、本発明にしたがう、ヒトケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する単離された抗体またはそのフラグメントは、
-  SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：7の全長にわたりSEQ ID NO：7に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：8の全長にわたりSEQ ID NO：8に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、またはSEQ ID NO：9の全長にわたりSEQ ID NO：9に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のCDRの中から選択される、特にSEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9からなる配列のCDRの中から選択される、少なくとも1つ、特に少なくとも2つ、とりわけ3つのCDR；ならびに
-  SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：10の全長にわたりSEQ ID NO：10に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：11の全長にわたりSEQ ID NO：11に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、またはSEQ ID NO：12の全長にわたりSEQ ID NO：12に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のCDRの中から選択される、特にSEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12からなる配列のCDRの中から選択される、少なくとも1つ、特に少なくとも2つ、とりわけ3つのCDR
を含む。
【００４９】
特に、本発明にしたがう、ヒトケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する単離された抗体またはそのフラグメントは、SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：1の全長にわたりSEQ ID NO：1に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：2の全長にわたりSEQ ID NO：2に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：3の全長にわたりSEQ ID NO：3に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：4の全長にわたりSEQ ID NO：4に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：5の全長にわたりSEQ ID NO：5に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：6の全長にわたりSEQ ID NO：6に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のCDRの中から選択される、特にSEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6からなる配列のCDRの中から選択される、6つのCDRを含む。
【００５０】
特に、本発明にしたがう、ヒトケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する単離された抗体またはそのフラグメントは、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：7の全長にわたりSEQ ID NO：7に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：8の全長にわたりSEQ ID NO：8に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、またはSEQ ID NO：9の全長にわたりSEQ ID NO：9に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：10の全長にわたりSEQ ID NO：10に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、SEQ ID NO：11の全長にわたりSEQ ID NO：11に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、またはSEQ ID NO：12の全長にわたりSEQ ID NO：12に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のCDRの中から選択される、特にSEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12からなる配列のCDRの中から選択される、6つのCDRを含む。
【００５１】
本発明の抗体の別の態様において、軽鎖可変領域（VL）は、
-  配列SEQ ID NO：1もしくはSEQ ID NO：7、またはSEQ ID NO：1の全長にわたりSEQ ID NO：1に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、もしくはSEQ ID NO：7の全長にわたりSEQ ID NO：7に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：1もしくはSEQ ID NO：7の軽鎖CDR1（LC-CDR1）；および／または
-  配列SEQ ID NO：2もしくはSEQ ID NO：8、またはSEQ ID NO：2の全長にわたりSEQ ID NO：2に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、もしくはSEQ ID NO：8の全長にわたりSEQ ID NO：8に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：2もしくはSEQ ID NO：8の軽鎖CDR2（LC-CDR2）；および／または
-  配列SEQ ID NO：3もしくはSEQ ID NO：9、またはSEQ ID NO：3の全長にわたりSEQ ID NO：3に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、もしくはSEQ ID NO：9の全長にわたりSEQ ID NO：9に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：3もしくはSEQ ID NO：9の軽鎖CDR3（LC-CDR3）
を含み；ならびに
重鎖可変領域（VH）は、
-  配列SEQ ID NO：4もしくはSEQ ID NO：10、またはSEQ ID NO：4の全長にわたりSEQ ID NO：4に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、もしくはSEQ ID NO：10の全長にわたりSEQ ID NO：10に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：4もしくはSEQ ID NO：10の重鎖CDR1（HC-CDR1）；および／または
-  配列SEQ ID NO：5もしくはSEQ ID NO：11、またはSEQ ID NO：5の全長にわたりSEQ ID NO：5に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、もしくはSEQ ID NO：11の全長にわたりSEQ ID NO：11に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：5もしくはSEQ ID NO：11の重鎖CDR2（HC-CDR2）；および／または
-  配列SEQ ID NO：6もしくはSEQ ID NO：12、またはSEQ ID NO：6の全長にわたりSEQ ID NO：6に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、もしくはSEQ ID NO：12の全長にわたりSEQ ID NO：12に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：6もしくはSEQ ID NO：12の重鎖CDR3（HC-CDR3）
を含む。
【００５２】
特に、本発明にしたがう抗体の軽鎖可変領域（VL）は、
-  配列SEQ ID NO：1の軽鎖CDR1（LC-CDR1）；および
-  配列SEQ ID NO：2の軽鎖CDR2（LC-CDR2）；および
-  配列SEQ ID NO：3の軽鎖CDR3（LC-CDR3）
を含む。
【００５３】
特に、本発明にしたがう抗体の重鎖可変領域（VH）は、
-  配列SEQ ID NO：4の重鎖CDR1（HC-CDR1）；および
-  配列SEQ ID NO：5の重鎖CDR2（HC-CDR2）；および
-  配列SEQ ID NO：6の重鎖CDR3（HC-CDR3）
を含む。
【００５４】
特に、本発明にしたがう抗体の軽鎖可変領域（VL）は、
-  配列SEQ ID NO：7の軽鎖CDR1（LC-CDR1）；および
-  配列SEQ ID NO：8の軽鎖CDR2（LC-CDR2）；および
-  配列SEQ ID NO：9の軽鎖CDR3（LC-CDR3）
を含む。
【００５５】
特に、本発明にしたがう抗体の重鎖可変領域（VH）は、
-  配列SEQ ID NO：10の重鎖CDR1（HC-CDR1）；および
-  配列SEQ ID NO：11の重鎖CDR2（HC-CDR2）；および
-  配列SEQ ID NO：12の重鎖CDR3（HC-CDR3）
を含む。
【００５６】
特に、本発明にしたがう抗体の軽鎖可変領域（VL）は、
-  配列SEQ ID NO：1、またはSEQ ID NO：1の全長にわたりSEQ ID NO：1に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：1の軽鎖CDR1（LC-CDR1）；および
-  配列SEQ ID NO：2、またはSEQ ID NO：2の全長にわたりSEQ ID NO：2に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：2の軽鎖CDR2（LC-CDR2）；および
-  配列SEQ ID NO：3、またはSEQ ID NO：3の全長にわたりSEQ ID NO：3に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：3の軽鎖CDR3（LC-CDR3）
を含み、ならびに
重鎖可変領域（VH）は、
-  配列SEQ ID NO：4、またはSEQ ID NO：4の全長にわたりSEQ ID NO：4に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：4の重鎖CDR1（HC-CDR1）；および
-  配列SEQ ID NO：5、またはSEQ ID NO：5の全長にわたりSEQ ID NO：5に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：5の重鎖CDR2（HC-CDR2）；および
-  配列SEQ ID NO：6、またはSEQ ID NO：6の全長にわたりSEQ ID NO：6に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：6の重鎖CDR3（HC-CDR3）
を含む。
【００５７】
特に、本発明にしたがう抗体の軽鎖可変領域（VL）は、
-  配列SEQ ID NO：1の軽鎖CDR1（LC-CDR1）；および
-  配列SEQ ID NO：2の軽鎖CDR2（LC-CDR2）；および
-  配列SEQ ID NO：3の軽鎖CDR3（LC-CDR3）
を含み、ならびに
重鎖可変領域（VH）は、
-  配列SEQ ID NO：4の重鎖CDR1（HC-CDR1）；および
-  配列SEQ ID NO：5の重鎖CDR2（HC-CDR2）；および
-  配列SEQ ID NO：6の重鎖CDR3（HC-CDR3）
を含む。
【００５８】
特に、本発明にしたがう抗体の軽鎖可変領域（VL）は、
-  配列SEQ ID NO：7、またはSEQ ID NO：7の全長にわたりSEQ ID NO：7に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：7の軽鎖CDR1（LC-CDR1）；および
-  配列SEQ ID NO：8、またはSEQ ID NO：8の全長にわたりSEQ ID NO：8に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：8の軽鎖CDR2（LC-CDR2）；および
-  配列SEQ ID NO：9、またはSEQ ID NO：9の全長にわたりSEQ ID NO：9に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：9の軽鎖CDR3（LC-CDR3）
を含み、ならびに
重鎖可変領域（VH）は、
-  配列SEQ ID NO：10、またはSEQ ID NO：10の全長にわたりSEQ ID NO：10に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：10の重鎖CDR1（HC-CDR1）；および
-  配列SEQ ID NO：11、またはSEQ ID NO：11の全長にわたりSEQ ID NO：11に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：11の重鎖CDR2（HC-CDR2）；および
-  配列SEQ ID NO：12、またはSEQ ID NO：12の全長にわたりSEQ ID NO：12に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列、特に配列SEQ ID NO：12の重鎖CDR3（HC-CDR3）
を含む。
【００５９】
特に、本発明にしたがう抗体の軽鎖可変領域（VL）は、
-  配列SEQ ID NO：7の軽鎖CDR1（LC-CDR1）；および
-  配列SEQ ID NO：8の軽鎖CDR2（LC-CDR2）；および
-  配列SEQ ID NO：9の軽鎖CDR3（LC-CDR3）
を含み、ならびに
重鎖可変領域（VH）は、
-  配列SEQ ID NO：10の重鎖CDR1（HC-CDR1）；および
-  配列SEQ ID NO：11の重鎖CDR2（HC-CDR2）；および
-  配列SEQ ID NO：12の重鎖CDR3（HC-CDR3）
を含む。
【００６０】
特に、軽鎖可変領域（VL）の配列は、配列SEQ ID NO：13、またはSEQ ID NO：13の全長にわたりSEQ ID NO：13に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含みまたはからなり、および／または重鎖可変領域（VH）の配列は、配列SEQ ID NO：14、またはSEQ ID NO：14の全長にわたりSEQ ID NO：14に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる。
【００６１】
1つの態様において、軽鎖可変領域（VL）の配列は配列SEQ ID NO：13からなり、重鎖可変領域（VH）の配列は配列SEQ ID NO：14からなる。
【００６２】
特に、軽鎖可変領域（VL）の配列は、配列SEQ ID NO：15、またはSEQ ID NO：15の全長にわたりSEQ ID NO：15に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含みまたはからなり、および／または重鎖可変領域（VH）の配列は、配列SEQ ID NO：16、またはSEQ ID NO：16の全長にわたりSEQ ID NO：16に対して少なくとも80％、特に少なくとも85％、少なくとも86％、少なくとも87％、少なくとも88％、少なくとも89％、少なくとも90％、少なくとも91％、少なくとも92％、少なくとも93％、少なくとも94％、少なくとも95％、少なくとも96％、少なくとも97％、少なくとも98％、少なくとも99％の同一性を有する配列を含むまたはからなる。
【００６３】
別の態様において、軽鎖可変領域（VL）の配列は配列SEQ ID NO：15からなり、重鎖可変領域（VH）の配列は配列SEQ ID NO：16からなる。
【００６４】
本発明の抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であり得る。
【００６５】
「ポリクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、異なるB細胞源から得られた抗体を表す。それは典型的に、標的抗原の様々な決定基またはエピトープに対して指向する様々な抗体を含む。これらの抗体は、動物において産生され得る。分子生物学、微生物学および組換えDNA技術の従来技術は、当技術分野の技術の範囲内である。そのような技術は、文献において十分に説明されている。例えば、本発明の抗体は、以下の従来法により調製され得る。哺乳動物（例えば、マウス、ハムスターまたはウサギ）は、その哺乳動物において抗体反応を誘発する免疫原性形態のCXCL1、CXCL7およびCXCL8で免疫され得る。ポリペプチドに免疫原性を付与する技術は、担体への連結または当技術分野で周知の他の技術を含む。例えば、ポリペプチドは、アジュバントの存在下で投与され得る。免疫の進行は、血漿または血清中の抗体力価の検出によってモニタリングされ得る。標準的なELISAまたは他の免疫アッセイ手順が、抗体のレベルを評価するために、抗原としての免疫原と共に使用され得る。免疫後、抗血清が取得され得、かつ所望の場合、ポリクローナル抗体が血清から単離され得る。
【００６６】
「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、ほぼ均質の抗体集団由来の抗体を意味する。とりわけ、集団内の対象抗体は、最小の比率で見出され得るいくつかの可能性のある自然変異を除いて、同一である。換言すると、モノクローナル抗体は、単一の細胞クローン（例えば、ハイブリドーマ、均質な抗体をコードするDNA分子でトランスフェクトされた真核生物宿主細胞、均質な抗体をコードするDNA分子でトランスフェクトされた原核生物宿主細胞等）の成長により生ずる均質な抗体からなり、かつ一般に、1つおよびただ1つのアイソタイプおよびサブタイプの重鎖ならびに1つのみのタイプの軽鎖によって特徴づけられる。加えて、ポリクローナル抗体の調製と異なり、各モノクローナル抗体は、抗原の単一のエピトープに対して指向するものである。
【００６７】
モノクローナル抗体を作製するために、上記のようにして免疫された動物から抗体産生細胞（リンパ球）が収集され、そして標準的な体細胞融合手順によって骨髄細胞と融合され、それによってこれらの細胞が不死化され、ハイブリドーマ細胞が生成され得る。そのような技術は、当技術分野で周知である（例えば、Kohler and Milstein(1975)によって最初に開発されたハイブリドーマ技術ならびにその他の技術、例えばヒトB細胞ハイブリドーマ技術（Kozbor et al., 1983）、ヒトモノクローナル抗体を作製するためのEBV-ハイブリドーマ技術（Cole et al., Methods Enzymol, 121; 140-67 (1986)）およびコンビナトリアル抗体ライブラリのスクリーニング（Huse et al., Science 246; 1275 (1989)））。ハイブリドーマ細胞は、標的ポリペプチドに対して特異的に反応する抗体の産生について免疫化学的にスクリーニングされ、そのポリペプチドに結合するモノクローナル抗体のみが単離され得る。
【００６８】
特に、本発明の抗体は、モノクローナル抗体である。
【００６９】
本発明の抗体は、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、CDRグラフト抗体、ファージディスプレイ抗体、細菌ディスプレイ抗体、酵母ディスプレイ抗体、トランスジェニックマウス産生抗体、変異誘発抗体、および無作為化抗体であり得る。
【００７０】
キメラ抗体は、異なる部分が異なる動物種由来である分子、例えばマウスモノクローナル抗体（mAb）由来の可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する分子である（例えば、Cabilly et al.,（米国特許第4,816,567号）、およびBoss et al.（米国特許第4,816,397号）を参照のこと）。単鎖抗体は、抗原結合部位を有し、単一のポリペプチドからなる。それらは、例えばLadner et al.（米国特許第4,946,778号）に記載される方法を用いる、当技術分野で公知の技術によって作製され得る。
【００７１】
本発明の抗体のヒト化形態は、最小限の非ヒト免疫グロブリン由来配列を含むキメラ抗体である。その大部分において、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、レシピエントの超可変領域の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えばマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類の超可変領域の残基によって置き換えられている。いくつかの例において、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）のフレームワーク領域（FR)の残基が、ドナー抗体の対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体において見出されない残基を含み得る。通常、ヒト化抗体は、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリン（所望の特異性、親和性および能力を有するドナー抗体）のものに対応し、FRのすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも1つ、および典型的に2つの可変ドメインの実質的にすべてを含み得る。1つの態様において、ヒト化抗体は、アクセプター（非ヒト）FR、例えばマウスFRに対して少なくとも65％の配列同一性を示すヒト化FRを含む。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Fc）、特にヒト免疫グロブリンの少なくとも一部を含み得る。非ヒト抗体をヒト化する方法は、当技術分野で報告されている。好ましくは、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から導入された1つまたは複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、「移入」残基と称され、これは典型的に「移入」可変ドメインから取得される。ヒト化は、本質的に、超可変領域の配列を対応するヒト抗体の配列で置換することによって行われ得る。したがって、そのようなヒト化抗体とは、実質的にインタクトには満たないヒト可変ドメインが対応する非ヒト種由来配列によって置換された、キメラである。実際には、ヒト化抗体は、典型的に、いくつかの超可変領域残基および潜在的にいくつかのFR残基がげっ歯類抗体の類似部位由来の残基によって置換された、ヒト抗体である。ヒト化抗体の作製に使用される、軽鎖および重鎖両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を減少させるために非常に重要である。他の方法は、通常、抗体アクセプター可変領域フレームワークへのドナーCDR結合親和性の付与を含む。1つの方法は、可変領域結合フラグメントの移植およびその結合親和性の最適化の同時実施を含む。別の方法は、抗体可変領域の結合親和性の最適化に関連する。
【００７２】
多重特異性抗体は、異なる抗原に特異的に結合する少なくとも2つの抗原結合部位を有する抗体分子である。そのような分子は、例えばSegal, US 4,676,980またはUS 6,121,424に記載された方法を用いる、当技術分野で公知の技術によって産生され得る。ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に対して指向するモノクローナル抗体は、関心対象のポリペプチドで組換えコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリ（例えば、抗体ファージディスプレイライブラリ）をスクリーニングすることによって同定および単離され得る。ファージディスプレイライブラリを作製およびスクリーニングするためのキットは、市販されている。加えて、抗体ディスプレイライブラリの作製およびスクリーニングにおいて使用するのに特に適した方法および試薬の例は、例えば、US 5,223,409、WO 92/18619およびWO 91/17271で見出され得る。
【００７３】
抗体は、（例えば、動物の血液もしくは血清から）生成された後に単離または合成され得、そして周知の技術によってさらに精製され得る。タンパク質に特異的な抗体は、親和性クロマトグラフィー、ELISPOTまたはELISAによって選択または精製され得る。例えば、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8は、固相支持体、例えばクロマトグラフィーカラムに共有結合または非共有結合により連結され得る。カラムは次いで、多数の異なるエピトープに対して指向する抗体を含む試料からケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する抗体を精製し、実質的に精製された抗体組成物、すなわち混入抗体を実質的に含まない組成物を生成するために使用され得る。「実質的に精製された抗体組成物」は、本願において、その抗体試料がStrep-Tag II配列のそれ以外のエピトープに対して指向する混入抗体を最大30％（乾燥重量）しか含まないこと、好ましくは試料の最大20％、さらにより好ましくは最大10％および最も好ましくは最大5％（乾燥重量）が混入抗体であることを意味する。「精製された抗体組成物」は、組成物中の抗体の少なくとも99％がケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向するものであることを意味する。
【００７４】
本発明の抗体は、それらの「裸の」もしくは未連結形態で投与され得、またはそれらに連結された他の薬剤を有し得る。例えば、抗体は、検出可能に標識された形態であり得る。抗体は、放射性同位体、親和性標識（例えば、ビオチン、アビジン等）、酵素標識（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ等）、蛍光標識（例えば、FITCまたはローダミン等）、常磁性原子等の使用を通じて検出可能に標識され得る。そのような標識を行う手順は、当技術分野で周知である。
【００７５】
別の態様において、本発明の抗体は、凍結乾燥される。そのような態様において、凍結乾燥された抗体は、投与時に担体または希釈剤と、例えば本明細書上記のものと混合される。さらに別の態様において、本発明の抗体は、ポリマー等の化合物に連結される。1つの態様において、ポリマーは、ポリアルキレングリコールである。1つの態様において、ポリアルキレングリコールは、ポリエチレングリコールまたはPEGである。
【００７６】
治療において使用するために、抗体は、薬学的に許容される賦形剤と適切に配合される。予防的または治療的処置に適した配合物は、非経口的に、好ましくは動脈内に、腹腔内に、静脈内に、皮下に、筋内に、またはエアゾールを通じて投与され得、かつそれらは有効量の抗体を含む。この量は、患者の全身状態、疾患の進行およびその他の要因に依存して変化する。
【００７７】
特に、本発明の抗体は、2012年4月25日付でCollection Nationale de Cultures de Microorganismes（CNCM）に番号CNCM I-4617の下で寄託されたハイブリドーマ（本発明者らによって12A10-13とも称される）によって産生される。
【００７８】
特に、本発明の抗体は、2012年4月25日付でCollection Nationale de Cultures de Microorganismes（CNCM）に番号CNCM I-4618の下で寄託されたハイブリドーマ（本発明者らによって35B11-8とも称される）によって産生される。
【００７９】
ハイブリドーマCNCM I-4617およびCNCM I-4618は、ヒトCXCL7に特異的であるがヒトCXCL1および8との類似性を有するペプチド、すなわち配列
0006416224.tif 000005
のペプチドによるLOU-Mラットの免疫によって入手した。これらの2つのハイブリドーマを単離するために、異なるスクリーニング分析、すなわち、キーホールリンペットヘモシアニンに連結された該ペプチドに対するELISA試験およびBourcier et al. (2011)に記載されるCXCR2発現細胞におけるCXCL-7により誘導されるERK活性化を阻害する抗体の能力の試験を使用した。
【００８０】
これらのハイブリドーマは、本発明の抗体を高収量で産生する。
【００８１】
本発明はまた、本発明にしたがう抗体またはそのフラグメントをコードする単離された核酸分子に関する。
【００８２】
「核酸分子」という用語は、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドのいずれかのヌクレオチドのポリマー形態、またはそのアナログを表す。
【００８３】
本発明はまた、本発明にしたがう抗体またはそのフラグメントをコードする核酸分子を含むベクターに関する。該ベクターは、準安定的または安定的な発現に適したものであり得る。
【００８４】
特に、本発明にしたがうベクターは、クローニングベクターまたは発現ベクターである。
【００８５】
ベクターは、ウイルスベクター、例えばバクテリオファージ、または非ウイルス、例えばプラスミドであり得る。
【００８６】
本発明はまた、本発明にしたがう抗体もしくはそのフラグメントをコードする核酸分子または該核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞に関する。
【００８７】
本発明はまた、
-  本発明にしたがう抗体およびそのフラグメント、
-  本発明にしたがう抗体またはそのフラグメントをコードする単離された核酸分子；ならびに
-  該核酸分子を含むベクター
からなる群より選択される少なくとも1つの化合物を含む薬学的組成物に関する。有利な態様は、上記の通りである。
【００８８】
「医薬」および「薬学的組成物」という用語は、本明細書で言い換え可能にかつそれらの最も広義の意味で使用される。
【００８９】
（特に、本発明にしたがう抗体およびそのフラグメントと、本発明にしたがう抗体をコードする単離された核酸分子と、該核酸分子を含むベクターとからなる群より選択される）そのような化合物は、治療有効量（活性かつ非毒性の量）で、本発明にしたがう薬学的組成物または医薬中に存在し得る。治療有効量は、症状または状態を改善する化合物の量を表す。治療効果および毒性は、細胞培養物または実験動物において、標準的な薬学的手順、例えばED50（その集団の50％において治療的に有効な量）およびLD50（その集団の50％に対して致死性の用量）によって決定され得る。毒性 対 治療効果の量の比が治療指数であり、それはLD50/ED50比として表され得る。大きな治療指数を示す薬学的組成物が好ましい。
【００９０】
例えば、本発明にしたがう抗体は、少なくとも1ヶ月ごとに、特に少なくとも3週間ごとに、とりわけ少なくとも2週間ごとに、とりわけ少なくとも1週間ごとに、0.1μg/kg患者体重〜100 mg/kg、特に1 mg/kg〜50 mg/kgの範囲の量で、患者に投与、特に静脈内投与され得る。
【００９１】
本発明にしたがう薬学的組成物は、経口、静脈内、筋内、動脈内、髄内、髄腔内、脳室内、経皮、皮下、腹腔内、鼻内、腸、局所、舌下直腸手段または眼を含むがこれらに限定されない任意の多くの経路によって投与され得る。
【００９２】
活性成分に加えて、本発明の薬学的組成物は、活性化合物を薬学的に使用できる調製物へと処理するのを容易にする賦形剤および助剤を含む、適当な薬学的に許容される担体を含み得る。特に、本発明にしたがう薬学的組成物は、薬学的に許容される担体に配合される。薬学的に許容される担体は、当業者に周知である。配合および投与技術に関するさらなる詳細は、Remington's Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co., Easton, Pa)の最新版で見出され得る。
【００９３】
特に、薬学的に許容される担体は、等張液を含むまたは等張液である。
【００９４】
本発明はまた、医薬として使用するための本発明にしたがう抗体またはそのフラグメントに関する。その有利な態様は、上記の通りである。
【００９５】
本発明はまた、医薬として使用するための本発明にしたがう抗体またはそのフラグメントをコードする単離された核酸分子に関する。その有利な態様は、上記の通りである。
【００９６】
本発明はまた、医薬として使用するための本発明にしたがう抗体をコードする核酸分子を含むベクターに関する。その有利な態様は、上記の通りである。
【００９７】
本発明はまた、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患の処置および／または予防において使用するための本発明にしたがう抗体またはそのフラグメントに関する。その有利な態様は、上記の通りである。
【００９８】
本発明はまた、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患の処置および／または予防において使用するための本発明にしたがう抗体またはそのフラグメントをコードする単離された核酸分子に関する。その有利な態様は、上記の通りである。
【００９９】
本発明はまた、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患の処置および／または予防において使用するための本発明にしたがう抗体またはそのフラグメントをコードする単離された核酸分子を含むベクターに関する。その有利な態様は、上記の通りである。
【０１００】
本明細書で使用される場合、「ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患」という用語は、上記ケモカインの少なくとも1つ、特に少なくとも2つ、とりわけすべてが関与する任意の疾患を表す。ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患は、病的血管新生疾患および炎症疾患を含む。例えば、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する炎症疾患は、緑内障、滲出型加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症等の眼科疾患であり得る。炎症疾患はまた、喘息および関節リウマチ（これは血管新生疾患でもある）も含む。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、「病的血管新生疾患」という用語は、内皮細胞の異常増殖により血管網が病的に発達する任意の疾患を表す。病的血管新生疾患の例は、Carmeliet et al., 2000の文献に記載されている。血管新生は、異常な血管構造によって特徴づけられる疾患と戦う上での治療標的であり得る。したがって「病的血管新生疾患」、「病的血管新生障害」、「望ましくない過剰な新血管形成によって特徴づけられる疾患」、「望ましくない過剰な新血管形成によって特徴づけられる障害」、「望ましくない病的血管新生を伴う疾患」、「望ましくない病的血管新生を伴う障害」、「血管新生を阻害する必要のある疾患」または「血管新生を阻害する必要のある障害」は、言い換え可能に使用され得る。
【０１０２】
特に、病的血管新生疾患または望ましくない過剰な新血管形成によって特徴づけられる疾患は、
-  異常な血管新生を伴う癌、特に異常な血管新生を伴う固形腫瘍、とりわけ明細胞腎細胞癌を含む腎癌、乳癌、卵巣癌、肺癌、膵癌および結腸癌；
-  異常な血管新生を伴う眼科疾患、特に加齢黄斑変性、糖尿病性網膜症、網膜色素変性症およびぶどう膜炎；
-  関節リウマチ；
-  乾癬；
-  血管腫；
-  子宮内膜症；
-  ならびにカポジ肉腫
からなる群より選択される。特に、病的血管新生疾患は、明細胞腎細胞癌である。
【０１０３】
本発明はまた、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、または望ましくない過剰な新血管形成によって特徴づけられる疾患の処置および／または予防のための医薬の調製における、
-  本発明にしたがう抗体およびそのフラグメント、
-  本発明にしたがう抗体またはそのフラグメントをコードする単離された核酸分子；ならびに
-  該核酸分子を含むベクター
からなる群より選択される少なくとも1つの化合物の使用に関する。
【０１０４】
本発明はまた、以下の工程を含む、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、または望ましくない過剰な新血管形成によって特徴づけられる疾患の処置および／または予防の方法に関する：
-  本発明にしたがう抗体およびそのフラグメント、
-  本発明にしたがう抗体またはそのフラグメントをコードする単離された核酸分子；ならびに
-  該核酸分子を含むベクター
からなる群より選択される治療または予防量の少なくとも1つの化合物を、それを必要とする患者に投与する工程。
【０１０５】
本発明にしたがう治療方法はさらに、治療または予防量の少なくとも別の関心対象の化合物（例えば、抗腫瘍剤、抗血管新生化合物、抗炎症化合物）を、それを必要とする患者に投与する工程を含み得る。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、「抗腫瘍剤」という用語は、腫瘍の成長を防ぐまたは腫瘍の縮小を促進する任意の化合物を表す。抗腫瘍剤は、抗血管新生化合物、DNAインターカレーター／架橋剤（オキサリプラチン、ミトキサントロン等）、DNA合成阻害剤（シトシンβ-D-アラビノフラノシド、5-フルオロウラシル等）、DNA-RNA転写調節剤（ドキソルビシン、アクチノマイシンD）、微小管阻害剤（パクリタキセル、ノコダゾール）であり得る。
【０１０７】
本明細書で使用される場合、「抗血管新生化合物」という用語は、病的な血管網の発達を阻害する任意の化合物を表す。特に、抗血管新生化合物は、VEGF受容体およびCXCL/ELR+ケモカインの受容体（例えば、CXCR1およびCXCR2）等の血管新生促進因子の受容体を阻害し得る。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、「抗炎症化合物」という用語は、炎症を軽減する任意の化合物を表す。特に、抗炎症化合物は、コルチコイドおよび非ステロイド抗炎症剤イブプロフェン誘導体であり得る。
【０１０９】
特に、抗血管新生化合物は、
-  ベバシズマブ（特に癌の処置および／または予防の場合）ならびにラニビズマブ（特に加齢黄斑変性の処置および／または予防の場合）等の抗VEGF抗体；
-  セツキシマブ等の抗EGF受容体抗体；
-  スニチニブ、ソラフェニブ、アキシチニブ、レゴラフェニブ等のVEGFR1、2、3、CSFR、PDGFRを含む血管新生に関与する受容体の阻害剤；
-  エベロリムス、テムシロリムス等のm-TORの阻害剤；
-  エルロチニブ等のEGF受容体の阻害剤
からなる群より選択される。
【０１１０】
本発明にしたがう抗体、核酸分子および／またはベクターは、関心対象の化合物と同時に、別々に、または順次投与され得る。
【０１１１】
本発明はまた、医薬として同時に、別々にまたは順次使用するための、
-  本発明にしたがう抗体およびそのフラグメントと、本発明にしたがう抗体またはそのフラグメントをコードする単離された核酸分子と、該核酸分子を含むベクターとからなる群より選択される少なくとも1つの化合物；ならびに
-  少なくとも別の関心対象の化合物
を含む、組み合わせ製品に関する。
【０１１２】
その有利な態様は、上記の通りである。
【０１１３】
特に、別の関心対象の化合物は、抗血管新生化合物である。
【０１１４】
本発明はまた、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患の予防および／または処置に使用するための、本発明にしたがう組み合わせ製品に関する。
【０１１５】
本発明はまた、以下の工程を含む、試料中のCXCL1、CXCL7およびCXCL8からなる群より選択される少なくとも1つのケモカインを検出する方法に関する：
試料を本発明にしたがう抗体および／またはそのフラグメントと共にインキュベートする工程。
【０１１６】
特に、試料は、生物学的試料である。
【０１１７】
「生物学的試料」という用語は、診断またはモニタリングアッセイにおいて使用され得る生物から得られる様々な試料タイプを包含する。この用語は、血液および生物学的起源の他の液体試料、固形の組織試料、例えば生検標本またはそれらから得られる組織培養物もしくは細胞およびそれらの子孫を包含する。加えて、この用語は、循環している腫瘍またはその他の細胞を包含し得る。この用語は、詳細には、臨床試料を包含し、さらに細胞培養物中の細胞、細胞上清、細胞溶解産物、血清、血漿、尿、羊水、水性の体液を含む生物学的流体および眼試料の場合のガラス体ならびに組織試料を含む。この用語はまた、入手後に任意の方法、例えば試薬処理、可溶化または特定成分の濃縮、で操作された試料を包含する。
【０１１８】
有利な点として、生物学的試料は、体液、その画分、組織抽出物および細胞抽出物を含む群より選択され得る。特に、生物学的試料は、血漿試料および腫瘍抽出物を含む群から選択され得る。
【０１１９】
特に、本発明にしたがう試料中のケモカインを検出する方法はさらに、CXCL1、CXCL7およびCXCL8からなる群より選択される少なくとも1つのケモカインと本発明にしたがう抗体の結合を検出する工程を含む。
【０１２０】
本発明にしたがう試料中のケモカインを検出する方法は、以下を含むがこれらに限定されない当業者に周知の様々な技術に基づき得る：
-  ウェスタンブロットアッセイ（細胞溶解産物中または溶液中に存在するケモカインまたはそのフラグメントを膜に固定し、膜をその後、当技術分野で周知の適切な条件下で、好ましくは標識された本発明の抗体と共に、インキュベートする）、
-  ELISAアッセイ（ケモカインまたはそのフラグメントをマイクロタイタープレートに固定し、プレートをその後、当技術分野で周知の適切な条件下で、好ましくは標識された本発明の抗体と共に、インキュベートする）、
-  免疫組織化学アッセイ（好ましくは標識された、組み換え抗体を用いて、ケモカインまたはそのフラグメントを発現する固定された細胞または組織を含む試料を染色する）、
-  フローサイトメトリーアッセイ（好ましくは標識された、組み換え抗体を用いて、当技術分野で周知の適切な条件下で、ケモカインまたはそのフラグメントを発現する固定されたまたは生きた細胞を含む試料を染色するために使用される）。
【０１２１】
本発明にしたがう試料中のケモカインを検出する方法の1つの態様において、本発明の抗体は、固体支持体上にコーティングされる。
【０１２２】
これらの検出技術は、Sambrook, Fritsch and Maniatis - "Molecular Cloning - A Laboratory Manual" Second Edition Cold Spring Harbor Laboratory, 1989に十分に記載されている。抗体の使用を必要とする任意の他の検出技術も、本発明に包含される。試料中のケモカインの存在および最終的にはその量が、これらの技術により決定され得る。これらの技術のいくつかは、上記のような検出可能なマーカー、好ましくは蛍光または発光マーカーを用いた本発明の抗体の標識を必要とする。
【０１２３】
本発明はまた、以下の工程を含む、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8からなる群より選択されるケモカインを試料から精製する方法に関する：
試料を本発明にしたがう抗体および／またはそのフラグメントと共にインキュベートする工程。
【０１２４】
本発明にしたがうケモカインを試料から精製する方法は、フローサイトメトリーアッセイ、免疫沈降アッセイを含むがこれらに限定されない当業者に周知の様々な技術に基づき得る。これらの検出技術は、Sambrook, Fritsch and Maniatis - "Molecular Cloning - A Laboratory Manual" Second Edition Cold Spring Harbor Laboratory, 1989に十分に記載されている。
【０１２５】
本発明はまた、以下を含む、本発明にしたがい試料中のケモカインを検出するおよび試料からケモカインを精製する方法を実施する上で有用なキットに関する：
-  本発明にしたがう少なくとも1つの抗体および／またはそのフラグメント；ならびに
-  本発明にしたがう抗体および／またはそのフラグメントを検出するための少なくとも1つの試薬。
【０１２６】
本発明にしたがう抗体を検出するための試薬は、ELISA試薬、ウェスタンブロット試薬およびドットブロット試薬からなる群より選択され得る。
【０１２７】
本発明はまた、以下の工程を含む、対象におけるケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、特に明細胞腎細胞癌のインビトロまたはエクスビボにおける診断および／または予後予測方法、特にインビトロにおける診断および／または予後予測方法に関する：
本発明にしたがう少なくとも1つの抗体および／またはそのフラグメントを用いて、対象の生物学的試料におけるCXCL1、CXCL7およびCXCL8からなる群より選択される少なくとも1つのヒトケモカインの発現および／または発現レベルを決定する工程。実際、本発明者らは、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8が、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関する疾患、病的血管新生疾患、明細胞腎細胞癌に罹患した患者の全生存に関する予後予測因子であることを実証した。特に、本発明者らは、これらのケモカイン、特にCXCL1およびCXCL7の過剰発現が、全生存に関する予後不良因子であることを示した。
【０１２８】
特に、工程（i）は、本発明の抗体および／またはそのフラグメントを認識する1つのケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する少なくとも1つの標識された2次抗体をさらに使用することによって実施され得る。
【０１２９】
例えば、工程（i）は、本発明の抗体またはそのフラグメントがマイクロタイタープレート上に固定されるELISAアッセイによって実施され得、プレートはその後、当技術分野で周知の適切な条件下で、本発明にしたがう抗体および／またはそのフラグメントを認識する1つのケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する少なくとも1つの標識された2次抗体と共にインキュベートされる。この態様にしたがい、3つのケモカインの発現レベルが同時に決定され得る。
【０１３０】
本発明の方法はさらに、工程（i）で決定された発現レベルを対照レベルと比較して、患者がケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌に罹患しているかどうかを決定する工程（ii）を含み得る。
【０１３１】
好ましい態様において、本発明の方法は、工程（i）で決定された発現レベルを対照レベルと比較して、工程（i）で決定された発現レベルが対照レベルよりも有意に高いかどうかを決定する工程（ii）をさらに含み；有意に高い発現レベルは、対象がケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌に罹患していることを示し；対照レベルは健常対象由来またはケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌に罹患していない対象由来の少なくとも1つの生物学的試料において決定された少なくとも1つのケモカインの発現レベルである。
【０１３２】
本発明はまた、以下の工程を含む、対象におけるケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の増悪転帰（pejorative outcome）を決定するためのインビトロまたはエクスビボにおける方法に関する：
（a）本発明にしたがう少なくとも1つの抗体および／またはそのフラグメントを用いて、対象の生物学的試料におけるCXCL1、CXCL7およびCXCL8からなる群より選択される少なくとも1つのヒトケモカインの発現および／または発現レベルを決定する工程。
【０１３３】
本発明の方法はさらに、工程（a）で決定された発現レベルを対照レベルと比較して、患者がケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の増悪転帰を起こしているかどうかを決定する工程（b）を含み得る。
【０１３４】
特に、工程（a）は、本発明の抗体および／またはそのフラグメントを認識する1つのケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する少なくとも1つの標識された2次抗体をさらに使用することによって実施され得る。
【０１３５】
例えば、工程（a）は、本発明の抗体またはそのフラグメントがマイクロタイタープレート上に固定されるELISAアッセイによって実施され得、プレートはその後、当技術分野で周知の適切な条件下で、本発明の抗体および／またはそのフラグメントを認識する1つのケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する少なくとも1つの標識された2次抗体と共にインキュベートされる。この態様にしたがい、3つのケモカインの発現レベルが同時に決定され得る。
【０１３６】
適当な「対照レベル」は、少なくとも1つの参照試料において決定された少なくとも1つのケモカインの発現レベルおよび参照しきい値を含む。
【０１３７】
「参照試料」は、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する既知の疾患状態、特に既知の病的血管新生疾患の状態、とりわけ既知の明細胞腎細胞癌の状態を有する対象由来または健常対象由来またはケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌に罹患していない対象由来の生物学的試料である。
【０１３８】
好ましくは、対照レベルは、数体の対象由来の数個の参照試料において決定された少なくとも1つのケモカインの平均発現レベルである。
【０１３９】
好ましくは、参照試料は、工程（i）または（a）の生物学的試料と同タイプの生物学的試料（すなわち、対応する生理学的性質の生物学的試料）である。
【０１４０】
好ましい態様において、本発明の方法は、工程（a）で決定された発現レベルと対照レベルを比較し、工程（a）で決定された発現レベルが対照レベルよりも有意に高いかどうかを決定する工程（b)を含み；有意に高い発現レベルは、対象におけるケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の増悪転帰を示し；対照レベルは、健常対象由来またはケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌に罹患していない対象由来の少なくとも1つの生物学的試料において決定された少なくとも1つのケモカインの発現レベルである。
【０１４１】
適当な「対照レベル」は、健常対象の、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌に罹患していない対象の同タイプの生物学的試料において決定された少なくとも1つのケモカインの発現レベルを含む。
【０１４２】
好ましくは、対照レベルは、数体の健常対象の、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌に罹患していない数体の対象の同タイプの生物学的試料において決定された少なくとも1つのケモカインの平均発現レベルである。
【０１４３】
そのような少なくとも1つのケモカインの有意に高い発現レベルは、対照レベルの少なくとも10％超、15％超、20％超、25％超、30％超、好ましくは35％超の発現の増加に相当し得る。
【０１４４】
そのような参照しきい値は、試験する生物学的試料のタイプおよび少なくとも1つのケモカインの発現レベルを決定するために使用される方法に依存して変化し得る。しかし、特定の実験条件（同タイプの試験する生物学的試料、同じ少なくとも1つのケモカインの発現レベルを決定する方法）に対して、しきい値は、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する安定的な疾患、特に安定的な病的血管新生疾患、とりわけ安定的な明細胞腎細胞癌を有する患者（生存患者）の集団ならびにケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、特に明細胞腎細胞癌の増悪転帰を起こした患者（死亡患者）の集団の両方を含む参照患者プールに基づき決定され得る。これらの患者の少なくとも1つのケモカインの発現レベルを測定することによって、参照しきい値Tが、以下の特徴により決定され得る：
-  ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する安定的な疾患、特に安定的な病的血管新生疾患、とりわけ安定的な明細胞腎細胞癌を有する参照患者（生存患者）のすべてまたは大部分が、Tを下回る少なくとも1つのケモカインの発現レベル値を有する；ならびに
-  ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の増悪転帰を起こした参照患者（死亡患者）のすべてまたは大部分が、Tを上回る少なくとも1つのケモカインの発現レベル値を有する。
【０１４５】
この場合、工程（i）で決定された発現レベルがしきい値Tよりも有意に高いならば、それは対象におけるケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の増悪転帰を示す。
【０１４６】
特に、試験する生物学的試料が血漿試料である場合、参照しきい値は、
-  CXCL7に関して、265〜1825 ng/ml、好ましくは450〜800 ng/ml、より好ましくは640 ng/mlの範囲；
-  CXCL8に関して、0〜30 pg/ml、好ましくは5〜15 pg/ml、より好ましくは11 pg/mlの範囲
に含まれ得る。
【０１４７】
特に、試験する生物学的試料が腫瘍溶解産物試料である場合、参照しきい値は、
-  CXCL1に関して、50〜150 pg/mg、好ましくは75〜125 pg/mg、より好ましくは96 pg/mg総タンパク質の範囲；
-  CXCL7に関して、800〜1400 pg/mg、好ましくは1000〜1200 pg/mg、より好ましくは1152 pg/mg総タンパク質の範囲；
-  CXCL8に関して、50〜350 pg/mg、好ましくは150〜250 pg/mg、より好ましくは206 pg/mg総タンパク質の範囲
に含まれ得る。
【０１４８】
対象における病的血管新生疾患、特に明細胞腎細胞癌の増悪転帰を決定する本発明の方法の1つの態様において、対象は抗血管新生治療に供される。
【０１４９】
抗血管新生治療は、対象への抗血管新生化合物の投与を含み得る。
【０１５０】
本明細書で使用される場合、「決定」という用語は、定性的な検出および定量の両方を意味し得る。
【０１５１】
「発現」という用語は、概ね、検出可能レベルのアミノ酸配列またはタンパク質が発現されるようポリヌクレオチド配列が適切に転写および翻訳されるプロセスを表す。本明細書の特定の文脈において、発現は、mRNAの産生を表す。他の文脈において、発現は、タンパク質またはそのフラグメントの産生を表す。フラグメントは、酵素的切断または正常もしくは低下した条件を示す生物学的プロセスを通じて産生され得る。
【０１５２】
例えば酵素連結免疫吸着アッセイ（ELISA）、放射免疫アッセイ（RIA）等により、本発明にしたがう抗体またはそのフラグメントを用いる免疫アッセイを含むがこれらに限定されない、任意の様々な公知の方法が、個体の生物学的試料中の少なくとも1つのケモカインの検出に使用され得る。
【０１５３】
本発明はまた、本発明にしたがう少なくとも1つの抗体および／またはそのフラグメントを含む、本発明の対象におけるケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患のインビトロまたはエクスビボにおける診断および／または予後予測方法を実施するためのキットに関する。
【０１５４】
特定の態様において、本発明はまた、本発明にしたがう少なくとも1つの抗体および／またはそのフラグメントを含む、対象におけるケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患または望ましくない過剰な新血管形成により特徴づけられる疾患もしくは障害のインビトロにおける診断および／または予後予測方法を実施するためのキットに関する。
【０１５５】
キットは、緩衝液、発色試薬、標識、反応表面、検出手段、対照試料、標準、説明書ならびに対象がケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌に罹患しているかどうかを決定するための解釈情報を含むがこれらに限定されない、本発明の方法において有用な追加要素を提供し得る。
【０１５６】
キットはまた、
-  本発明にしたがう抗体またはそのフラグメントを検出するための少なくとも1つの試薬
を含み得る。
【０１５７】
本発明はまた、本発明にしたがう少なくとも1つの抗体および／またはそのフラグメントを含む、本発明にしたがう対象におけるケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の増悪転帰を決定するために本発明の方法を実施するためのキットに関する。
【０１５８】
キットは、緩衝液、発色試薬、標識、反応表面、検出手段、対照試料、標準、説明書ならびに対象におけるケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の増悪転帰を決定するための解釈情報を含むがこれらに限定されない、本発明の方法において有用な追加要素を提供し得る。
【０１５９】
キットはまた、
-  本発明にしたがう抗体またはそのフラグメントを検出するための少なくとも1つの試薬
を含み得る。
【０１６０】
本発明はまた、
-（i'')特に本発明の方法にしたがい、対象におけるケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌を診断および／または予後予測する工程；ならびに
-（iii''）ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌に罹患した対象を、抗炎症および／または抗血管新生治療で処置する工程、特にケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患に罹患した対象に抗炎症化合物および／または抗血管新生化合物（特に本発明にしたがう抗体、そのフラグメント、核酸分子、ベクターからなる群より選択される少なくとも1つの化合物）を投与する工程
を含む方法に関する。
【０１６１】
特に、この方法は、
-（i'')対象の生物学的試料におけるCXCL1、CXCL7およびCXCL8からなる群より選択される少なくとも1つのヒトケモカインの発現および／または発現レベルの決定を含む、対象におけるケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌を診断および／または予後予測する工程；ならびに
-（iii''）ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患に罹患した対象への本発明にしたがう抗体、そのフラグメント、核酸分子、ベクターからなる群より選択される少なくとも1つの化合物の投与を含む、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌に罹患した対象を、抗炎症および抗血管新生治療で処置する工程
を含む。そのような方法は、（ケモカインCXCL1、CXCL7および／またはCXCL8を過剰発現する）患者の処置をより個人向けにし、したがって不必要な抗VEGF治療による患者の処置を回避する（したがって再発および死に至る疾患進行を回避する）利点を有する。好ましい態様において、本発明の方法はさらに、（ii''）工程（i''）で決定された発現レベルを対照レベルと比較して、工程（i''）で決定された発現レベルが対照レベルよりも有意に高いかどうかを決定する工程を含み；有意に高い発現レベルは、対象におけるケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の増悪転帰を示し；対照レベルは、健常対象由来またはケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌に罹患していない対象由来の少なくとも1つの生物学的試料において決定される少なくとも1つのケモカインの発現レベルである。
【０１６２】
本発明はまた、
-（i'''')特に本発明の方法にしたがい、対象におけるケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の増悪転帰を決定する工程；
-（iii''''）ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の増悪転帰を起こした対象を、抗炎症治療および／または抗血管新生治療で処置する工程、特にケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患の増悪転帰を起こした対象に抗炎症化合物および／または抗血管新生化合物（特に本発明にしたがう抗体、そのフラグメント、核酸分子、ベクターからなる群より選択される少なくとも1つの化合物）を投与する工程
を含む方法に関する。
【０１６３】
特に、この方法は、
-（i'''')対象の生物学的試料におけるCXCL1、CXCL7およびCXCL8からなる群より選択される少なくとも1つのヒトケモカインの発現および／または発現レベルの決定を含む、対象におけるケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の増悪転帰を決定する工程；ならびに
-（iii''''）ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患の増悪転帰を起こした対象への本発明にしたがう抗体、そのフラグメント、核酸分子、ベクターからなる群より選択される少なくとも1つの化合物の投与を含む、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の増悪転帰を起こした対象を抗炎症および抗血管新生治療で処置する工程
を含む。そのような方法は、（ケモカインCXCL1、CXCL7および／またはCXCL8を過剰発現する）患者の処置をより個人向けにし、したがって不必要な抗VEGF治療による患者の処置を回避する（したがって再発および死に至る疾患進行を回避する）利点を有する。好ましい態様において、本発明の方法はさらに、（ii''''）工程（i''''）で決定された発現レベルを対照レベルと比較して、工程（i''''）で決定された発現レベルが対照レベルよりも有意に高いかどうかを決定する工程を含み；有意に高い発現レベルは、対象におけるケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の増悪転帰を示し；対照レベルは、健常対象由来またはケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌に罹患していない対象由来の少なくとも1つの生物学的試料において決定される少なくとも1つのケモカインの発現レベルである。
【０１６４】
本発明はまた、
-  配列SEQ ID NO：20を含むまたはからなる配列のペプチド、およびSEQ ID NO：20の全長にわたりSEQ ID NO：20に対して少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のペプチド
からなる群より選択されるペプチドに関する。
【０１６５】
本発明はまた、免疫原性ペプチドとしての、
-  配列SEQ ID NO：20を含むまたはからなる配列のペプチド、およびSEQ ID NO：20の全長にわたりSEQ ID NO：20に対して少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のペプチド
からなる群より選択される本発明の少なくとも1つのペプチドの使用に関する。
【０１６６】
本明細書で使用される場合、「免疫原性ペプチド」という用語は、T細胞により初回刺激を受ける免疫によって認識される、動物を免疫するのに有用なペプチドに関する。
【０１６７】
ペプチドの免疫原性は、免疫原性担体と架橋もしくは連結することによって、または適当なアジュバントの使用によって増大し得る。適当な免疫原性担体または適当なアジュバントの決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。免疫原性担体の例は、二官能性または誘導体化剤、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を通じた連結）、N-ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を通じたもの）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、SOCL2またはR1N=C＝NR、式中R1およびRは異なるアルキル基、を用いるキーホールリンペットヘモシアニン（KHL）、破傷風トキソイド（TT）、ウシ血清アルブミン（BSA）、オボアルブミン（OVA）、ウシサイログロブリン（BTG）、グルタチオンSトランスフェラーゼ（GST）、ウシサイログロブリンまたはダイズトリプシン阻害剤を含むがこれらに限定されず、特にキーホールリンペットヘモシアニン（KLH）である。
【０１６８】
本発明はまた、
-  配列SEQ ID NO：20を含むまたはからなる配列のペプチド、およびSEQ ID NO：20の全長にわたりSEQ ID NO：20に対して少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のペプチド
からなる群より選択される本発明の少なくとも1つのペプチドを含む免疫原性組成物に関する。
【０１６９】
本発明はまた、医薬として使用するための、特にケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の予防および／または処置のための、
-  配列SEQ ID NO：20を含むまたはからなる配列のペプチド、およびSEQ ID NO：20の全長にわたりSEQ ID NO：20に対して少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のペプチド
からなる群より選択される本発明のペプチドに関する。
【０１７０】
予防または治療において使用するために、ペプチドは、薬学的に許容される賦形剤と適切に配合される。予防的または治療的処置に適した配合物は、経口的または非経口的に、好ましくは皮下または筋内に投与され得、またはそれらは有効量のペプチドを含む。この量は、CXCL1、CXCL7およびCXCL8を含む群より選択される少なくとも1つのケモカインに対して指向する液性または細胞媒介免疫応答を誘起することができる量であるべきであり、それは患者の全身状態、疾患の進行および他の要因に依存する。
【０１７１】
別の態様において、本発明のペプチドは、凍結乾燥される。そのような態様において、凍結乾燥された本発明のペプチドは、投与時に、例えば上記などの担体または希釈剤と混合される。さらに別の態様において、本発明の抗体は、ポリマー等の化合物に連結される。1つの態様において、ポリマーは、ポリアルキレングリコールである。1つの態様において、ポリアルキレングリコールは、ポリエチレングリコールまたはPEGである。
【０１７２】
本発明はまた、
-  配列SEQ ID NO：20を含むまたはからなる配列のペプチド、およびSEQ ID NO：20の全長にわたりSEQ ID NO：20に対して少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のペプチド
からなる群より選択される本発明のペプチドを含む薬学的組成物に関する。
【０１７３】
本発明はまた、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患、とりわけ明細胞腎細胞癌の予防および／または処置のための医薬の製造のための、
-  配列SEQ ID NO：20を含むまたはからなる配列のペプチド、およびSEQ ID NO：20の全長にわたりSEQ ID NO：20に対して少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のペプチド
からなる群より選択される本発明のペプチドに関する。
【０１７４】
本発明はまた、以下の工程を含む、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患の処置および／または予防の方法に関する：
-  配列SEQ ID NO：20を含むまたはからなる配列のペプチド、およびSEQ ID NO：20の全長にわたりSEQ ID NO：20に対して少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％の同一性を有する配列を含むまたはからなる配列のペプチド
からなる群より選択される治療または予防量の本発明の少なくとも1つのペプチドを、それを必要とする患者に投与する工程。
【０１７５】
本発明はまた、
（α）非ヒト動物を、
配列SEQ ID NO：20を含むもしくはからなる配列のペプチド、およびSEQ ID NO：20の全長にわたりSEQ ID NO：20に対して少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％の同一性を有する配列を含むもしくはからなる配列のペプチド
からなる群より選択される少なくとも1つのペプチド；ならびに／または
非ヒト動物の細胞内で有効なプロモーターの制御下で上記少なくとも1つのペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む少なくとも1つの発現ベクター
の反復投与により免疫する工程；ならびに
（β）得られた血清を免疫した非ヒト動物から収集し、上記少なくとも1つのペプチドに対して指向する抗体を取得する工程；
（χ）工程（β）で取得した抗体の、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に特異的に結合する能力をインビトロまたはエクスビボで決定する工程；ならびに最後に、
（δ）ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に特異的に結合することができる抗体を選択する工程
を含む、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する抗体を製造する方法に関する。
【０１７６】
好ましくは、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する抗体を製造する方法はさらに、血清抗体を基材、好ましくは固体支持体、最も好ましくはポリスチレン固体支持体に固定する工程を含む。
【０１７７】
適当な非ヒト動物は、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ハムスター、ウサギを含むがこれらに限定されず、好ましくはマウスである。
【０１７８】
工程（α）において免疫原性ペプチドとして使用されるペプチドは、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に対して指向する液性免疫反応を誘起することができる完全なペプチドまたはそのフラグメントおよび誘導体を含み得る。
【０１７９】
動物の血清は、抗体力価の評価のためにサンプリングされ得る。最適な力価に達したとき、動物は、適当量の個々の血清を得るために採血され得る。必要とされる抗体精製度は、意図される用途に依存する。特定の目的では、精製を全く必要としないが、他の場合、例えば抗体を固体支持体に固定する場合、望ましくない物質を除去し非特異的結合を減少または排除するための精製工程が採用され得る。
【０１８０】
工程（β）で得られた抗体の、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に特異的に結合する能力をインビトロまたはエクスビボで決定する工程（χ）は、例えばScatchard分析（1949）または本明細書中以降に記載される表面プラズモン共鳴分析によって、当業者により容易に決定され得る。
【０１８１】
「非ヒト動物の細胞内で有効なプロモーターの制御下で少なくとも1つのペプチドをコードするヌクレオチド配列」という用語は、非ヒト動物の細胞内でヌクレオチド配列の発現を促すプロモーターに機能的に連結された少なくとも1つのペプチドをコードするヌクレオチド配列に関する。
【０１８２】
一般に、本発明において有用なベクターは、少なくとも1つのペプチドをコードするヌクレオチド配列の挿入または組み込みによって操作された、プラスミド、ファージミド、ウイルス、ウイルスもしくは細菌供給源由来の他のビヒクルを含むがこれらに限定されない。
【０１８３】
少なくとも1つのペプチドの発現は、安定的または一過的発現ベクターを用いる、それぞれ、安定的または一過的な発現であり得る。一過的発現ベクターの例は、プラスミドを含む。安定的発現ベクターの例は、レンチウイルスベクターを含む。好ましくは、少なくとも1つのペプチドの発現は、安定的なものである。
【０１８４】
少なくとも1つのペプチドの発現はまた、当業者に周知の構成的または誘導的プロモーターを用いる構成的または誘導的なものであり得る。構成的プロモーターの例は、ベータ-アクチンプロモーター、筋クレアチンキナーゼプロモーター、ヒト伸長因子、シミアンウイルス（例えば、SV40）、パピローマウイルス、アデノウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（HIV）、サイトメガロウイルス（CMV）、ラウス肉腫ウイルス（RSV）、B型肝炎ウイルス（HBV）由来のプロモーター、モロニー白血病ウイルスおよび他のレトロウイルスの長末端反復（LTR）ならびに単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーター等の哺乳動物またはウイルスプロモーターを含む。当業者は、列挙されていないが当技術分野で公知の他の構成的プロモーターを容易に使用することができる。
【０１８５】
本発明において有用なプロモーターはまた、誘導剤の存在下で発現される誘導性プロモーターを含む。例えば、メタロチオネインプロモーターは、特定の金属イオンの存在下で転写および翻訳を促進するよう誘導される。
【０１８６】
好ましくは、少なくとも1つのペプチドの発現は、構成的なものである。
【０１８７】
特に、工程（δ）は、表面プラズモン共鳴によって決定される場合に、最大16 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL1に、最大5 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL7に、および最大45 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL8に結合することができる抗体の選択を含み得る。
【０１８８】
本発明はまた、
（a''）非ヒト動物を、
配列SEQ ID NO：20を含むもしくはからなる配列のペプチド、およびSEQ ID NO：20の全長にわたりSEQ ID NO：20に対して少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％の同一性を有する配列を含むもしくはからなる配列のペプチド
を含む群より選択される少なくとも1つのペプチド；ならびに／または
非ヒト動物の細胞内で有効なプロモーターの制御下で上記少なくとも1つをコードするヌクレオチド配列を含む少なくとも1つの発現ベクター
の反復投与により免疫する工程；ならびに
（b''）得られた血清を免疫した非ヒト動物から収集し、上記少なくとも1つのペプチドに対して指向する抗体を取得する工程；
（c''）工程（b）で取得した抗体の、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に特異的に結合する能力をインビトロまたはエクスビボで決定する工程；ならびに最後に、
（d''）ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に特異的に結合することができる抗体を選択する工程
を含む、ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8に関連する疾患、特に病的血管新生疾患の処置のための抗体を選択する方法に関する。
【０１８９】
特に、工程（d''）は、表面プラズモン共鳴によって決定される場合に、最大16 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL1に、最大5 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL7に、および最大45 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL8に結合することができる抗体の選択を含み得る。
[本発明1001]
表面プラズモン共鳴によって決定される場合に、最大16 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL1に、最大5 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL7に、および最大45 nMの平衡解離定数（KD）でヒトケモカインCXCL8に結合することができる、ヒトケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8を指向する単離された抗体またはそのフラグメント。
[本発明1002]
軽鎖可変領域（VL）が、
- 配列SEQ ID NO：1、またはSEQ ID NO：1の全長にわたりSEQ ID NO：1に対して少なくとも90％の同一性を有する配列の軽鎖CDR1（LC-CDR1）；および
- 配列SEQ ID NO：2、またはSEQ ID NO：2の全長にわたりSEQ ID NO：2に対して少なくとも90％の同一性を有する配列の軽鎖CDR2（LC-CDR2）；および
- 配列SEQ ID NO：3、またはSEQ ID NO：3の全長にわたりSEQ ID NO：3に対して少なくとも90％の同一性を有する配列の軽鎖CDR3（LC-CDR3）
を含み、重鎖可変領域（VH）が、
- 配列SEQ ID NO：4、またはSEQ ID NO：4の全長にわたりSEQ ID NO：4に対して少なくとも90％の同一性を有する配列の重鎖CDR1（HC-CDR1）；および
- 配列SEQ ID NO：5、またはSEQ ID NO：5の全長にわたりSEQ ID NO：5に対して少なくとも90％の同一性を有する配列の重鎖CDR2（HC-CDR2）；および
- 配列SEQ ID NO：6、またはSEQ ID NO：6の全長にわたりSEQ ID NO：6に対して少なくとも90％の同一性を有する配列の重鎖CDR3（HC-CDR3）
を含む、本発明1001の抗体。
[本発明1003]
軽鎖可変領域（VL）が、
- 配列SEQ ID NO：7、またはSEQ ID NO：7の全長にわたりSEQ ID NO：7に対して少なくとも90％の同一性を有する配列の軽鎖CDR1（LC-CDR1）；および
- 配列SEQ ID NO：8、またはSEQ ID NO：8の全長にわたりSEQ ID NO：8に対して少なくとも90％の同一性を有する配列の軽鎖CDR2（LC-CDR2）；および
- 配列SEQ ID NO：9、またはSEQ ID NO：9の全長にわたりSEQ ID NO：9に対して少なくとも90％の同一性を有する配列の軽鎖CDR3（LC-CDR3）
を含み、重鎖可変領域（VH）が、
- 配列SEQ ID NO：10、またはSEQ ID NO：10の全長にわたりSEQ ID NO：10に対して少なくとも90％の同一性を有する配列の重鎖CDR1（HC-CDR1）；および
- 配列SEQ ID NO：11、またはSEQ ID NO：11の全長にわたりSEQ ID NO：11に対して少なくとも90％の同一性を有する配列の重鎖CDR2（HC-CDR2）；および
- 配列SEQ ID NO：12、またはSEQ ID NO：12の全長にわたりSEQ ID NO：12に対して少なくとも90％の同一性を有する配列の重鎖CDR3（HC-CDR3）
を含む、本発明1001の抗体。
[本発明1004]
軽鎖可変領域（VL）の配列が、配列SEQ ID NO：13、またはSEQ ID NO：13の全長にわたりSEQ ID NO：13に対して少なくとも90％の同一性を有する配列を含みまたはからなり；かつ重鎖可変領域（VH）の配列が、配列SEQ ID NO：14、またはSEQ ID NO：14の全長にわたりSEQ ID NO：14に対して少なくとも90％の同一性を有する配列を含むまたはからなる、本発明1001または1002の抗体。
[本発明1005]
軽鎖可変領域（VL）の配列が、配列SEQ ID NO：15、またはSEQ ID NO：15の全長にわたりSEQ ID NO：15に対して少なくとも90％の同一性を有する配列を含みまたはからなり；かつ重鎖可変領域（VH）の配列が、配列SEQ ID NO：16、またはSEQ ID NO：16の全長にわたりSEQ ID NO：16に対して少なくとも90％の同一性を有する配列を含むまたはからなる、本発明1001または1003の抗体。
[本発明1006]
モノクローナル抗体である、本発明1001〜1005のいずれかの抗体。
[本発明1007]
2012年4月25日付でCollection Nationale de Cultures de Microorganismes（CNCM）に番号CNCM I-4618の下で寄託されたハイブリドーマによって産生される、本発明1004の抗体。
[本発明1008]
2012年4月25日付でCollection Nationale de Cultures de Microorganismes（CNCM）に番号CNCM I-4617の下で寄託されたハイブリドーマによって産生される、本発明1005の抗体。
[本発明1009]
本発明1001〜1008のいずれかに定義される抗体またはそのフラグメントをコードする、単離された核酸分子。
[本発明1010]
本発明1009に定義される核酸分子を含む、ベクター。
[本発明1011]
本発明1009に定義される核酸分子または本発明1010に定義されるベクターを含む、宿主細胞。
[本発明1012]
本発明1001〜1008のいずれかに定義される抗体およびそのフラグメントと、本発明1009に定義される単離された核酸分子と、本発明1010に定義されるベクターとからなる群より選択される少なくとも1つの化合物を含む、薬学的組成物。
[本発明1013]
医薬として使用するための、本発明1001〜1008のいずれかに定義される抗体もしくはそのフラグメント、本発明1009に定義される単離された核酸分子、または本発明1010に定義されるベクター。
[本発明1014]
異常な血管新生を伴う癌、異常な血管新生を伴う眼科疾患、関節リウマチ、乾癬、血管腫、子宮内膜症およびカポジ肉腫からなる群より特に選択される、病的血管新生疾患または望ましくない過剰な新血管形成によって特徴づけられる疾患の処置および／または予防において使用するための、本発明1001〜1008のいずれかに定義される抗体もしくはそのフラグメント、本発明1009に定義される単離された核酸分子、または本発明1010に定義されるベクター。
[本発明1015]
以下の工程を含む、対象における病的血管新生疾患または望ましくない過剰な新血管形成によって特徴づけられる疾患のインビトロにおける診断および／または予後予測方法：
（i）本発明1001〜1008のいずれかの少なくとも1つの抗体および／またはそのフラグメントを用いて、対象の生物学的試料におけるCXCL1、CXCL7およびCXCL8からなる群より選択される少なくとも1つのヒトケモカインの発現および／または発現レベルを決定する工程。
[本発明1016]
本発明1001〜1008のいずれかの少なくとも1つの抗体および／またはそのフラグメントを含む、本発明1015の方法を実施するためのキット。
【図面の簡単な説明】
【０１９０】
【図１Ａ】（本発明者らが12A10-13とも命名したCNCM I-4617および本発明者らが35B11-8とも命名したCNCM I-4618という2つのハイブリドーマにより産生された）本発明の抗体の腫瘍成長阻害能力を示している。免疫に使用されたペプチドが示されている（pCXCL7と命名された）。類似性が最大となるCXCL7のこのドメインとCXCLサイトカインの他のドメインとの比較も示されている。
【図１Ｂ】（本発明者らが12A10-13とも命名したCNCM I-4617および本発明者らが35B11-8とも命名したCNCM I-4618という2つのハイブリドーマにより産生された）本発明の抗体の腫瘍成長阻害能力を示している。3.106 786-OLUC+細胞をヌードマウス（グループあたりn=10）に皮下注射した。注射の15日後、すべてのマウスが腫瘍を発生させ、対照としてのPBSまたは2つのハイブリドーマ12A10-13もしくは35B11-8により産生された抗体15 mg/kgで毎週処置した。記載されるようにして生物発光を毎週測定した（Grepin et al., 2012）。データは平均±SDである。対照および処置マウスの腫瘍サイズ間の統計学的差が示されている：*p<0.05。
【図１Ｃ】（本発明者らが12A10-13とも命名したCNCM I-4617および本発明者らが35B11-8とも命名したCNCM I-4618という2つのハイブリドーマにより産生された）本発明の抗体の腫瘍成長阻害能力を示している。平均容積±SDおよび統計学的分析：*p<0.05；**p<0.01。
【図１Ｄ】（本発明者らが12A10-13とも命名したCNCM I-4617および本発明者らが35B11-8とも命名したCNCM I-4618という2つのハイブリドーマにより産生された）本発明の抗体の腫瘍成長阻害能力を示している。腫瘍保有マウスの代表画像。
【図１Ｅ】（本発明者らが12A10-13とも命名したCNCM I-4617および本発明者らが35B11-8とも命名したCNCM I-4618という2つのハイブリドーマにより産生された）本発明の抗体の腫瘍成長阻害能力を示している。CXCL1、7、8およびVEGFの腫瘍内量をELISAによって検出した。データは平均±SDである。統計学的差は*p<0.05；**p<0.011であった。
【図２】ヌードマウスにおける実験的ccRCCの成長に対する、CXCL7またはCXCL8に対して指向する市販の抗体の効果を示している。3.106 786-OLUC+細胞をヌードマウス（グループあたりn=7）に皮下注射した。注射の15日後、すべてのマウスが腫瘍を発生させ、対照としてのPBSまたは市販の抗CXCL7抗体もしくは抗CXCL8抗体（Prepotech（登録商標）500M33および500M08）もしくは両抗体の組み合わせ15 mg/kgで毎週処置した。記載されるようにして生物発光を毎週測定した（Grepin et al., 2012）。統計学的有意差が示されている：*p<0.05。
【図３】ヌードマウスにおける実験的ccRCCの成長に対する、CXCL1、CXCL7またはCXCL8に対して指向する市販の抗体の組み合わせの抗体 対 2つのハイブリドーマ12A10-13（CNCM I-4617）および35B11-8（CNCM I-4618）により産生された本発明の抗体の効果の比較を示している。3.106 786-OLUC+細胞をヌードマウス（グループあたりn=10）に皮下注射した。注射の15日後、すべてのマウスが腫瘍を発生させ、対照としてのPBSまたは2つのハイブリドーマ12A10-13もしくは35B11-8により産生された抗体15 mg/kgまたは市販の抗CXCL1抗体、抗CXCL7抗体および抗CXCL8抗体（Prepotech（登録商標）500P92、500M33および500M08）の組み合わせ15 mg/kgで毎週処置した。カリパスを用いて腫瘍を測定し、その容積を以下のようにして計算した（v = L x I2 x 0.52, Auerbach et al., 1978）。統計学的有意差が示されている：*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001。
【図４】2つのハイブリドーマ12A10-13（CNCM I-4617）、35B11-8（CNCM I-4618）により産生される本発明の抗体ならびに市販の抗体（Peprotech（登録商標））の結合および解離定数を示している。
【図５】2つのハイブリドーマ12A10-13（CNCM I-4617）、35B11-8（CNCM I-4618）により産生される抗体のアイソタイプ決定を示している。これらの抗体は、ハイブリドーマ12A10-13により産生される抗体についてはIgG2Cおよびハイブリドーマ35B11-8により産生される抗体についてはIgG1として特徴づけられた。
【図６】腎細胞癌患者の全生存のカプラン・マイヤー換算を示している。（図6A）CXCL1（第3四分位値96.2 pg/mgタンパク質）および（図6B）CXCL7（第1四分位値1152 pg/mgタンパク質）および（図6C）CXCL8（中央値206 pg/mg）のベースラインレベルと全生存の相関。全生存は、CXCL1のベースラインレベルがその第3四分位値より小さかったもしくは大きかったまたはCXCL7のベースラインレベルがその第1四分位値よりも小さかったもしくは大きかった患者サブグループから計算した。
【図７】患者の臨床および生物学的パラメータならびに単変量分析を示している。
【図８】患者の臨床および生物学的パラメータならびに多変量分析を示している。
【図９Ａ】レーザー誘導脈絡膜新血管形成（ChNV）のラットモデルにおける2つのハイブリドーマ12A10-13（CNCM I-4617）および35B11-8（CNCM I-4618）により産生された本発明の抗体の効果を示している。脈絡膜新血管形成（ChNV）は、第0日に、ラットの右眼において、532 nmアルゴンレーザー光凝固装置を用いて誘導した（150 mW、100 msによる6つの75μmサイズのスポット）。2つのハイブリドーマ12A10-13（CNCM I-4617）（12A）、35B11-8（CNCM I-4618）（35B）により産生された本発明の抗体を、第0日に硝子体内投与（30μg/眼）し、生理学的血清を陰性対照として投与した（ビヒクル-VEH）。第23日（レーザー処置後）の病巣サイズ評価を表している。データは平均±SEMである。統計学的分析：*p<0.05。
【図９Ｂ】レーザー誘導脈絡膜新血管形成（ChNV）のラットモデルにおける2つのハイブリドーマ12A10-13（CNCM I-4617）および35B11-8（CNCM I-4618）により産生された本発明の抗体の効果を示している。脈絡膜新血管形成（ChNV）は、第0日に、ラットの右眼において、532 nmアルゴンレーザー光凝固装置を用いて誘導した（150 mW、100 msによる6つの75μmサイズのスポット）。2つのハイブリドーマ12A10-13（CNCM I-4617）（12A）、35B11-8（CNCM I-4618）（35B）により産生された本発明の抗体を、第0日に硝子体内投与（30μg/眼）し、生理学的血清を陰性対照として投与した（ビヒクル-VEH）。第14日（レーザー処置後）の血管造影評価を表している。データは平均±SEMである。統計学的分析：*p<0.05；**p<0.01。第14日に、血管造影図（ハイデルベルグの網膜血管造影図）において病巣部蛍光強度をスコア付けすることによって、右眼の眼底新血管を評価した。
【図９Ｃ】レーザー誘導脈絡膜新血管形成（ChNV）のラットモデルにおける2つのハイブリドーマ12A10-13（CNCM I-4617）および35B11-8（CNCM I-4618）により産生された本発明の抗体の効果を示している。脈絡膜新血管形成（ChNV）は、第0日に、ラットの右眼において、532 nmアルゴンレーザー光凝固装置を用いて誘導した（150 mW、100 msによる6つの75μmサイズのスポット）。2つのハイブリドーマ12A10-13（CNCM I-4617）（12A）、35B11-8（CNCM I-4618）（35B）により産生された本発明の抗体を、第0日に硝子体内投与（30μg/眼）し、生理学的血清を陰性対照として投与した（ビヒクル-VEH）。第21日（レーザー処置後）の血管造影評価を表している。データは平均±SEMである。統計学的分析：*p<0.05；**p<0.01。第21日に、血管造影図（ハイデルベルグの網膜血管造影図）において病巣部蛍光強度をスコア付けすることによって、右眼の眼底新血管を評価した。
【発明を実施するための形態】
【０１９１】
本発明は、以下の段落において実施例を用いて詳細に説明されるが、本発明の技術的範囲はこれらの実施例に限定されない。
【実施例】
【０１９２】
I.  材料および方法
ヒト腎臓試料
患者の臨床的特徴ならびに正常および腫瘍組織の血管新生プロフィールは、以前にGrepin R, et al. (2012)に記載されたものである。
【０１９３】
細胞株および分子生物学
786-OLUC+、RCC-10LUC+およびACHNLUC+細胞を、レンチウイルス形質導入（pLenti6/V5-D-TOPO, Invitrogen, France）およびブラスチシジン選択（10μg/ml）によって得た。
【０１９４】
腫瘍異種移植片形成およびサイズ評価
786-OLUC+、RCC-10LUC+またはACHNLUC+細胞（3.106〜10.106細胞）を、5週齢の雌ヌード（nu/nu）マウス（Janvier, France）の側腹部に皮下注射した。生物発光は、In Vivo Imaging System（IVIS, Caliper LifeSciences, France）を製造元の指示にしたがい用いて定量した。腫瘍容積（v = L x l2 x 0.52 (Auerbach et al., 1978)）を、並行してカリパスを用いて決定した。生物発光と腫瘍容積の値の間に線形の関係が見られた。
【０１９５】
サイトカインの測定
CXCLサイトカイン、FGF、ヒトおよびマウスVEGFは、PeproTech ELISAキットを製造元の推奨（PeproTech, Neuilly-sur-Seine, France）にしたがい用いて測定した。VEGF-Cは、Human DuoSet ELISAキットを用いて、VEGF-Dは、Quantikine ELISAキット（R&D Systems, Minneapolis, USA）を用いて、測定した。
【０１９６】
統計学的分析
統計学的分析は、両側で、Windows版R-2.12.2を用いて行った。統計学的比較は、質的データについてはChi-2検定またはFisher正確確率検定を、量的データについてはStudent t検定またはWilcoxon検定を、打ち切りデータについてはLog-Rank検定を用いて行った。
【０１９７】
材料および方法  Biacore（登録商標）分析
機器
CM5センサーチップを含むBIAcore（登録商標）3000 SPR（表面プラズモン共鳴）バイオセンサー、BIAcore（登録商標）3000制御ソフトウェア4.1バージョンおよびBIAevaluationソフトウェア4.1バージョン（GE Healthcare）。
【０１９８】
試薬
N-ヒドロキシスクシンイミド（NHS）、N-エチル-N'-(3-ジメチルアミノプロピル)-カルボジイミド塩酸塩（EDC）およびエタノールアミン塩酸塩NaOH、pH 8.5を含むアミンカップリングキット。
【０１９９】
HBS-EP緩衝液、0.01M HEPES、pH 7.4、0.15M NaCl、3mM EDTA、0.05%(v/v)サーファクタントP20を含む水性緩衝液。
【０２００】
捕捉抗体（ポリクローナルウサギ抗マウス免疫グロブリン抗体）、固定用緩衝液（10mM酢酸ナトリウムpH 5.0溶液）および再生用溶液（10mMグリシン-HCl pH 1.7溶液）を含むマウス抗体捕捉キット。
【０２０１】
これらの試薬はすべて、GE Healthcare製である。
【０２０２】
抗原および抗体
ポリクローナルウサギ抗マウスIgG抗体（マウス抗体捕捉キット、GE Healthcare）、1 mg/mLストック濃度。
【０２０３】
自家製のモノクローナルラットIgG抗体：Mc12A10-13およびMc35B11-8、それぞれ30.5μg/μLおよび32μg/μL（ストック濃度）。
【０２０４】
市販のモノクローナルマウスIgG抗体：McCXCL1、McCXCL7、McCXCL8、McPanCXCL1-2-3。これらの抗体は、それぞれ以下の2 mg/mL、1 mg/mL、1 mg/mLおよび0.5 mg/mLのストック濃度になるよう、濾過された脱イオン水（mQ）に溶解させる。試験する抗原は、1 mg/mLのストック濃度となるよう濾過された脱イオンに溶解されたサイトカインCXCL1、CXCL3、NAP2、IL8である。
【０２０５】
CM5センサーチップ表面における捕捉抗体の固定化
ポリクローナルウサギ抗マウス抗体（マウス抗体捕捉キット）は、GE Healthcareにより供給される実験プロトコルにしたがう標準的なアミンカップリング化学を用いてCM5センサーチップ上に共有結合により固定する。
【０２０６】
最初に、CM5表面のカルボキシメチルデキストランを、1:1比の0.4M EDCおよび0.1M NHSの7分間の注入により活性化する。次に、固定用緩衝液（マウス抗体捕捉キット）中に30μg/mLとなるよう希釈されたポリクローナルウサギ抗マウス抗体を、7分間の注入により、活性化された表面に固定する。残存する活性化カルボキシメチルデキストラン基を、1Mエタノールアミン塩酸塩NaOHの7分間の注入によりブロックする。この注入はまた、非共有結合的に結合している抗体をはずす。
【０２０７】
これらの固定工程を、25℃、10μL/分の流速およびHSP-EP泳動用緩衝液を用いて行う。
【０２０８】
BIAcore（登録商標）3000の場合、CM5センサー表面上に4つの流路（フローセル）が設計されている。ポリクローナルウサギ抗マウスIgG抗体を、第2、第3および第4のフローセル（FC）に共有結合によりカップリングし、第1のFC（FC1）を減算用参照のためのブランクとして残す。第1のFC（FC1）は、活性化（EDC/NHS）および不活性化（エタノールアミン塩酸塩NaOH）のみ行い、捕捉抗体を注入しない。
【０２０９】
結合分析（リガンド捕捉および分析体結合）
結合分析は、ウィザード法、特に「捕捉分子を用いる結合」を用いて実施する。
【０２１０】
最初に、リガンド（関心対象の抗体）を固定された抗体で捕捉する。希釈された抗体Mc12A10-13（5μg/mL）、Mc35B11-8（8μg/mL）、McCXCL1（2μg/mL）、McCXCL7（1μg/mL）、McCXCL8（3μg/mL）、McPan CXCL1-2-3（5μg/mL）を、5μL/分の流速で3分間の注入により、CM5センサーチップ上に固定されたポリクローナルウサギ抗マウスIgG抗体によって捕捉する。「捕捉抗体-リガンド」複合体を、分析体（サイトカイン）の注入前に10分間安定化させる。この捕捉は、非共有結合的相互作用である。
【０２１１】
次に、一定範囲のサイトカイン濃度を捕捉された抗体（リガンド）上に注入する（分析体）。サイトカインCXCL1、CXCL3、NAP2、IL8を、0〜10μg/mLの濃度範囲、20μg/mLの流速で、捕捉されたリガンド上に注入する。「リガンド／分析体」複合体が形成される。結合および解離フェーズを、それぞれ約3分間および2.5分間モニタリングする。誘導されたシグナルをRU（レゾナンス単位）で測定する。
【０２１２】
再生工程を各サイトカイン（分析体）注入の間に行い、「リガンド-分析体」複合体をはずす。この工程は、20μL/分の流速での再生用緩衝液（マウス抗体捕捉キット）の注入からなる。試験される「リガンド-分析体」対によって、再生のための注入の期間は、30秒間〜3分間の間で変化する。再生工程の最後に、CM5センサーチップを最低5分間（試験する「リガンド-分析体」対によって5〜7分間）安定化させる。
【０２１３】
再生後、捕捉抗体（ポリクローナルウサギ抗マウスIgG抗体）のみがCM5センサーチップ上に残る。このチップは、再度、新たな結合分析サイクルを行うことができる。
【０２１４】
抗体およびサイトカインの希釈は、HBS-EP泳動用緩衝液を用いて行う。
【０２１５】
これらの結合分析はすべて、HBS-EP泳動用緩衝液を用いて25℃で行う。結合分析は、FC1およびFC2をモニタリングするだけである。FC1が対照（ブランク）の場合、FC2で測定されたシグナルからFC1で得られたシグナルを差し引く。さらに、各サイトカイン濃度で得られたシグナルから泳動用緩衝液の注入（0μg/mLのサイトカイン）により得られた値を差し引く。
【０２１６】
材料および方法 - 脈絡膜新血管形成
脈絡膜新血管形成（ChNV）は、第0日に、ラットの右眼において、532nmアルゴンレーザー光凝固装置を用いて誘導した（150 mW、100 msによる6つの75μmサイズのスポット）。
【０２１７】
Pigmented Brown Norwayラットを、以下の3種類の異なる処置（レーザー誘導脈絡膜新血管形成のラットモデルにおける第0日の硝子体内投与）に対応する、8体の動物の3つのグループに分割した：
-  ハイブリドーマ12A10-13（CNCM I-4617）（12A）により産生された本発明の抗体30μg/眼；
-  ハイブリドーマ35B11-8（CNCM I-4618）（35B）により産生された本発明の抗体30μg/眼；
-  陰性対照としての生理学的血清（ビヒクル - VEH）。
【０２１８】
病巣のサイズを、第23日（レーザー処置後）に評価した。
【０２１９】
血管造影図（ハイデルベルグの網膜血管造影図）において病巣部蛍光強度をスコア付けすることによって、第14および21日に右眼において眼底部の新血管を評価した。
【０２２０】
II. 結果
II.1 CXCL1、CXCL7およびCXCL8に対して指向する抗体は腫瘍成長を減少させた
ELR+CXCLのタンパク質配列類似性を、腫瘍成長に関与するサイトカインCXCL1、7および8を同時に認識する抗体の開発に使用した。
【０２２１】
この目的で、本発明者らは、配列
0006416224.tif 000006
のヒトCXCL7に特異的なペプチドを用いてLou/Mラットを免疫した。しかし、このペプチドは、図1Aに示されるように、CXCL1、2、3および8と類似性を共有していた。
【０２２２】
以下の異なるスクリーニング方法を使用して、2つの異なるハイブリドーマ12A10-13（CNCM I-4617）、35B11-8（CNCM I-4618）を単離した：キーホールリンペットヘモシアニンに連結された配列SEQ ID NO：20のペプチドに対するELISA試験、および以前に記載されたような（Bourcier C., et al. (2011)）、CXCR2発現細胞におけるCXCL7により誘導されたERK活性化を阻害するこれらの抗体の能力。
【０２２３】
関心対象の主要なCXCLに対するこれらの抗体の平衡解離定数KDおよび親和性定数Kaを、Biacore（登録商標）プラズモン共鳴分析によって決定し、それが図4に示されている。これらの結果は、異なるサイトカイン、特にCXCL7、CXCL1およびCXCL8に対する2つの抗体の多重特異性を実証した。さらに、（2つのハイブリドーマ12A10-13/CNCM I-4617、35B11-8/CNCM I-4618によって産生される）本発明の抗体は、市販の抗CXCL7抗体よりも高い親和性でヒトケモカインCXCL7に結合することができる。
【０２２４】
これらの抗体は、ハイブリドーマ12A10-13（CNCM I-4617）によって産生される抗体についてはIgG2C、ハイブリドーマ35B11-8（CNCM I-4618）によって産生される抗体についてはIgG1と特徴づけられた（図5）。この特徴づけは、専用キット（Ratアイソタイプ決定キット、AbD Serotec、参照番号：RMT1）を用いて行った。
【０２２５】
腫瘍成長を阻害する本発明の抗体の能力を、ヌードマウスにおけるccRCC異種移植腫瘍の発達に対するこれらの抗体の効果の分析によって評価した。
【０２２６】
図1B、CおよびDは、両抗体が腫瘍成長を強く阻害したことを明確に示している。
【０２２７】
さらに、両抗体は、腫瘍の攻撃性に関連する主要なサイトカインであるCXCL1、CXCL7およびCXCL8の腫瘍内量を減少させた。これらの抗体を用いた腫瘍保有マウスの処置はまた、VEGF発現も減少させ、それらの強力な抗血管新生効果を際立たせた（図1E）。
【０２２８】
これらの新たに開発された抗体は、単独でまたは組み合わせて使用される市販の抗CXCL1抗体、抗CXCL7抗体および抗CXCL8抗体よりも効果的に腫瘍成長を阻害することができる（図1B、1C、2および3）。市販の抗CXCL7抗体および抗CXCL8抗体の組み合わせが（市販の抗CXCL1抗体を含んでいてもいなくても）腫瘍成長の阻害に対して相加的効果を得ることができないことから、これらの結果は真に驚くべきものである。これに対して、本発明者らは、市販の抗CXCL7抗体および抗CXCL8抗体の併用が、腫瘍成長の阻害に関してそれらの個別使用よりも非効果的であることおよびRCCのマウスモデルにおいて腫瘍促進効果を有することを示した（図2）。
【０２２９】
II.2 CXCL1、CXCL7およびCXCL8は明細胞腎細胞癌患者の全生存の予後予測因子となる
ケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8が患者の転帰に関係するかどうかを調査するため、51名の明細胞腎細胞癌（ccRCC）に罹患した患者の全生存（Grepin R, et al. (2012)）と異なるサイトカインの腫瘍内量の間の相関を決定した。合計で、22名の患者（43％）が追跡期間中に死亡した。第3四分位より高いCXCL1レベル（96.2 pg/mg）または第1四分位より高いCXCL7レベル（1152 pg/mg）を示した患者が有意に高い死亡率であったことは注目に値する（図6Aおよび6B）。中央値より高いCXCL8レベル（206 pg/mg）を示した患者は、より高い死亡率を示した（図6C）。
【０２３０】
単変量生存分析は、CXCL1およびCXCL7の発現が全生存に関する予後不良因子であることを示した（それぞれ、p=0.017およびp=0.0015）（図7）。さらに、どちらも患者の転帰に関する予後不良因子であることが知られている診断時の転移およびFurhman分類もまた、全生存と有意に相関した（p= <10-3および0.001）。
【０２３１】
次いで、全生存に関するCXCL1、CXCL7のレベル、診断時の転移およびFurhman分類の予後予測有意性を、多変量Cox回帰モデルにおいて分析した（図8）。CXCL7発現は、全生存に関する独立した予後予測パラメータであることが分かった（p=0.014）が、CXCL1は統計学的有意性に達しなかった（p=0.059）。同様の結果が、全生存に関する診断時の転移およびFurhman分類についても得られた（p=0.0005および0.007；図8）。
【０２３２】
これらの結果は、特に本発明の抗体を用いたケモカインCXCL1、CXCL7およびCXCL8の過剰発現の検出が病的血管新生疾患、明細胞腎細胞癌に罹患した患者の全生存に関する予後予測因子であることを示している。
【０２３３】
II.3 CXCL1、CXCL7およびCXCL8に対して指向する抗体はレーザー誘導脈絡膜新血管形成のラットモデルにおいて病巣サイズを有意に縮小し血管漏出を減少させた
加齢黄斑変性におけるCXCL1、CXCL7およびCXCL8に対して指向する抗体の効果を調査するため、レーザー誘導脈絡膜新血管形成のラットモデルにおいて実験を行った。
【０２３４】
脈絡膜新血管形成（ChNV）は、第0日に、ラットの右眼において、532nmアルゴンレーザーを用いて誘導した。
【０２３５】
Pigmented Brown Norwayラットを、以下の3種類の異なる処置（レーザー誘導脈絡膜新血管形成のラットモデルにおける第0日の硝子体内投与）に対応する、8体の動物の3つのグループに分割した：
-  ハイブリドーマ12A10-13（CNCM I-4617）（12A）により産生された本発明の抗体30μg/眼；
-  ハイブリドーマ35B11-8（CNCM I-4618）（35B）により産生された本発明の抗体30μg/眼；
-  陰性対照としての生理学的血清（ビヒクル - VEH）。
【０２３６】
病巣のサイズを、第23日（レーザー処置後）に評価した。図9Aに示されるように、病巣のサイズは、本発明の両方の抗体（12A10-13（CNCM I-4617）（12A）：p=0.0014；35B11-8（CNCM I-4618）（35B）p=0.004）による処置後の第23日に劇的に減少した。
【０２３７】
血管造影図（ハイデルベルグの網膜血管造影図）において病巣部蛍光強度をスコア付けすることによって、第14および21日に右眼において眼底部の新血管を評価した。結果が図9Bおよび9Cに示されている。
【０２３８】
ビヒクル処置グループ（陰性対照 - VEH）において、誘導された眼は、レーザー損傷の14および21日後に同程度の蛍光漏出を示した。その平均蛍光漏出は、重度の漏出スポット（スコア3）の78％で第14日に2.8±0.2（平均±SD、n=8、中央値=2.8）および第21日に2.8±0.4（平均±SD、n=8；中央値=3.0）であり、これによりChNVの形成および持続が示された。
【０２３９】
ハイブリドーマ12A10-13（CNCM I-4617）（12A）により産生された本発明の抗体30μgの硝子体内注射は、ビヒクルグループとの比較で、第14および21日に血管漏出の32％減少を示し（それぞれ、p=0.002および0.0046）、漏出抑制の傾向は、ハイブリドーマ35B11-8（CNCM I-4618）（35B）により産生された本発明の抗体30μgの眼注射においても観察された。
【０２４０】
これらの結果は、レーザー誘導脈絡膜新血管形成のラットモデルにおいて病巣サイズを縮小し血管漏出を減少させる本発明の抗体の効果を明確に示している。
【０２４１】
参考文献
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【配列表】
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