(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
タバコ材料の細菌含有量を修正する方法であって、未収穫のタバコ材料を、収穫の約２４時間前未満に処理溶液と接触させることを含み、前記処理溶液が、（ｉ）塩を含む溶液であって、前記塩が、ＮａＣｌ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＫＣｌ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される溶液、（ｉｉ）１つ以上の酵素を含む溶液、ならびに（ｉｉｉ）１つ以上のプロバイオティクスを含む溶液からなる群から選択され、前記接触させることが、収穫後に減少した総細菌含有量を有する処理済みのタバコ材料を提供し、前記１つ以上の酵素はアスパラギナーゼを含み、前記１つ以上のプロバイオティクスはラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）細菌を含む、前記方法。
【請求項２】
前記未収穫のタバコ材料が、タバコ種子、タバコ実生、未成熟の生植物、成熟した生植物、またはこれらの一部からなる群から選択される、請求項１に記載の前記方法。
【請求項３】
前記処理済みのタバコ材料の前記総細菌含有量が、収穫後に数で少なくとも約５０％減少する、請求項１に記載の前記方法。
【請求項４】
前記処理済みのタバコ材料の前記総細菌含有量が、収穫後に数で少なくとも約８０％減少する、請求項１に記載の前記方法。
【請求項５】
前記タバコ材料の前記総細菌含有量が、グラム陰性細菌を含み、前記処理済みタバコ材料の前記グラム陰性細菌含有量が、収穫後に数で少なくとも約５０％減少する、請求項１に記載の前記方法。
【請求項６】
前記タバコ材料の前記総細菌含有量が、ラクトバチルス属の細菌を含み、前記処理済みタバコ材料の前記ラクトバチルス細菌含有量が、収穫後に増加する、請求項１に記載の前記方法。
【請求項７】
前記処理溶液が、約１重量パーセント〜約４重量パーセントの塩の濃度を有する、請求項１に記載の前記方法。
【請求項８】
前記処理溶液が、ＮａＣｌを含む、請求項１に記載の前記方法。
【請求項９】
前記処理溶液が、ラクトバチルス細菌を含む、請求項１に記載の前記方法。
【請求項１０】
前記処理溶液が、ラクトバチルス・ヘルベティカスを含む、請求項１に記載の前記方法。
【請求項１１】
前記処理溶液が、約１×１０５コロニー形成単位／ｍＬ〜約１×１０１０コロニー形成単位／ｍＬのプロバイオティクス細菌濃度を有する、請求項１に記載の前記方法。
【請求項１２】
前記処理溶液が、約１０ＡＵ〜約５０，０００ＡＵ／植物の酵素濃度を有する、請求項１に記載の前記方法。
【請求項１３】
前記処理溶液が、界面活性剤をさらに含む、請求項１に記載の前記方法。
【請求項１４】
前記処理済みのタバコ材料を収穫することと、
前記収穫された処理済みタバコ材料を乾燥調製して、処理済みの乾燥調製されたタバコ材料を得ることと、をさらに含む、請求項１に記載の前記方法。
【請求項１５】
前記処理溶液が、前記処理溶液の約０．５重量％〜約１５重量％の濃度でＮａＣｌを含み、
前記処理済みのタバコ材料を収穫することと、
前記収穫された処理済みのタバコ材料を乾燥調製して、処理済みの乾燥調製されたタバコ材料を得ることと、をさらに含む、請求項１に記載の前記方法。
【請求項１６】
前記処理済みの乾燥調製されたタバコ材料を発酵に供することと、
前記発酵されたタバコ材料を、無煙タバコ製品に組み込むことと、をさらに含む、請求項１４または１５に記載の前記方法。
【請求項１７】
前記発酵が、未処理の乾燥調製されたタバコ材料の発酵に必要とされる時間よりも少ない時間で完了する、請求項１６に記載の前記方法。
【請求項１８】
前記処理済みの乾燥調製されたタバコ材料のタバコ特異的ニトロソアミン含有量が、未処理の乾燥調製されたタバコ材料と比べて減少する、請求項１４または１５に記載の前記方法。
【請求項１９】
前記処理済みの乾燥調製されたタバコ材料を加工して、タバコ製品への組み込みに好適な形態で加工済みのタバコ材料を提供することと、
前記加工済みのタバコ材料を、無煙タバコ製品または喫煙物品に組み込むことと、をさらに含む、請求項１４または１５に記載の前記方法。
【請求項２０】
前記加工済みのタバコ材料が、刻みフィラーの形態であるか、またはタバコブレンドの形態である、請求項１９に記載の前記方法。
【請求項２１】
前記喫煙物品が、喫煙時における、未処理の対照喫煙物品と比べて減少した主流煙のタバコ特異的ニトロソアミン含有量を特徴とする、請求項１９に記載の前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物ならびに植物（例えば、タバコ）の栽培方法、収穫方法、及び／または処理方法の修正に関する。具体的には、本発明は、タバコから製造もしくは誘導された製品、またはさもなければタバコを組み込み、かつヒトによる消費を目的とする製品に関する。
【背景技術】
【０００２】
シガレットなどの人気のある喫煙物品は、実質的に円筒形のロッド形状構造を有し、包装紙で包囲され、それによりいわゆる「喫煙可能なロッド」を形成する、刻みタバコ（例えば、刻みフィラー形態）などの喫煙可能な材料の装填物、巻物、または柱状物を含む。通常、シガレットは、タバコとエンドツーエンド関係で整列した円筒形フィルタ要素を有する。典型的には、フィルタ要素は、「プラグラップ」として知られている紙材料によって外接された可塑化セルロースアセテートトウを含む。ある特定のシガレットは、多数のセグメントを有するフィルタ要素を組み込み、これらのセグメントのうちの１つは、活性炭粒子を含むことができる。典型的には、フィルタ要素は、「チッピングペーパー」として知られている外接する包装材料を使用して、タバコロッドの一端に取り付けられる。周囲空気での引き込まれた主流煙の希釈を提供するために、チッピング材料及びプラグラップを穿孔することも望ましくなっている。シガレットは、その一端に点火して、タバコロッドを燃焼することによって使用される。その後、喫煙者は、シガレットの反対側の端（例えば、フィルタ端）に引き込むことによって、主流煙を受け取って口の中に入れる。
【０００３】
シガレット製造に使用されるタバコは、典型的にはブレンドされた形態で使用される。例えば、通常「アメリカンブレンド（Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｂｌｅｎｄｓ）」と呼ばれるある特定の人気のあるタバコブレンドは、フル・キュアード（ｆｌｕｅ−ｃｕｒｅｄ）タバコ、バーレー種（ｂｕｒｌｅｙ）タバコ、及びオリエンタル（Ｏｒｉｅｎｔａｌ）タバコの混合物を含み、多くの場合、再生タバコ刻み及び加工済みのタバコ葉柄などのある特定の加工済みのタバコを含む。特定のシガレットブランドの製造に使用されるタバコブレンド内の各種類のタバコの正確な量は、ブランド間で異なる。しかしながら、多くのタバコブレンドについて、フル・キュアードタバコがブレンドの比較的大きな部分を構成する一方で、オリエンタルタバコは、ブレンドの比較的小さな部分を構成している。例えば、Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ，Ｖｏｇｅｓ（Ｅｄ．）ｐ．４４−４５（１９８４），Ｂｒｏｗｎｅ，Ｔｈｅ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓ，３ｒｄ  Ｅｄ．，ｐ．４３（１９９０）及びＴｏｂａｃｃｏ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．）ｐ．３４６（１９９９）を参照されたい。
【０００４】
タバコは、いわゆる「無煙」形態でたしなむことが可能である。特に人気のある無煙タバコ製品は、加工済みのタバコまたはタバコ含有調合物をユーザーの口腔に挿入することによって使用される。様々な種類の無煙タバコ製品が既知である。例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｗａｒｔｚへの米国特許第１，３７６，５８６号、Ｌｅｖｉの同第３，６９６，９１７号、Ｐｉｔｔｍａｎらの同第４，５１３，７５６号、Ｓｅｎｓａｂａｕｇｈ，Ｊｒ．らの同第４，５２８，９９３号、Ｓｔｏｒｙらの同第４，６２４，２６９号、Ｔｉｂｂｅｔｔｓの同第４，９９１，５９９号、Ｔｏｗｎｓｅｎｄの同第４，９８７，９０７号、Ｓｐｒｉｎｋｌｅ，ＩＩＩらの同第５，０９２，３５２号、Ｗｈｉｔｅらの同第５，３８７，４１６号、Ｗｉｌｌｉａｍｓの同第６，６６８，８３９号、Ｗｉｌｌｉａｍｓの同第６，８３４，６５４号、Ａｔｃｈｌｅｙらの同第６，９５３，０４０号、Ａｔｃｈｌｅｙらの同第７，０３２，６０１号、及びＡｔｃｈｌｅｙらの同第７，６９４，６８６号、Ｗｉｌｌｉａｍｓの米国特許出願公開第２００４／００２０５０３号、Ｑｕｉｎｔｅｒらの同第２００５／０１１５５８０号、Ｓｔｒｉｃｋｌａｎｄらの同第２００６／０１９１５４８号、Ｈｏｌｔｏｎ，Ｊｒらの同第２００７／００６２５４９号、Ｈｏｌｔｏｎ，Ｊｒらの同第２００７／０１８６９４１号、Ｓｔｒｉｃｋｌａｎｄらの同第２００７／０１８６９４２号、Ｄｕｂｅらの同第２００８／００２９１１０号、Ｒｏｂｉｎｓｏｎらの同第２００８／００２９１１６号、Ｒｏｂｉｎｓｏｎらの同第２００８／０１７３３１７号、Ｅｎｇｓｔｒｏｍらの同第２００８／０１９６７３０号、Ｎｅｉｌｓｅｎらの同第２００８／０２０９５８６号、Ｃｒａｗｆｏｒｄらの同第２００８／０３０５２１６号、Ｅｓｓｅｎらの同第２００９／００６５０１３号、Ｋｕｍａｒらの同第２００９／０２９３８８９号、Ｇａｏらの同第２０１０／０２９１２４５号、及びＭｕａらの同第２０１１／０１３９１６４号、ＡｒｎａｒｐらのＰＣＴ公開第ＷＯ０４／０９５９５９号、ならびにＡｔｃｈｌｅｙのＷＯ２０１０／１３２４４４に記載されている無煙タバコ調合物、成分、及び処理方法論を参照されたい。
【０００５】
無煙タバコ製品の一種は、「スナッフ」と称される。一般的に「スヌース」と称される代表的な種類の湿性スナッフ製品は、欧州（特に、スウェーデン）において、Ｓｗｅｄｉｓｈ  Ｍａｔｃｈ  ＡＢ、Ｆｉｅｄｌｅｒ  ＆  Ｌｕｎｄｇｒｅｎ  ＡＢ、Ｇｕｓｔａｖｕｓ  ＡＢ、Ｓｋａｎｄｉｎａｖｉｓｋ  Ｔｏｂａｋｓｋｏｍｐａｇｎｉ  Ａ／Ｓ、及びＲｏｃｋｅｒ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ＡＢなどの企業によって、またはこれらを通して製造されている。米国において入手することができるスヌース製品は、Ｒ．Ｊ．Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｔｏｂａｃｃｏ  ＣｏｍｐａｎｙによってＣａｍｅｌ  Ｓｎｕｓ  Ｆｒｏｓｔ、Ｃａｍｅｌ  Ｓｎｕｓ  Ｏｒｉｇｉｎａｌ、及びＣａｍｅｌ  Ｓｎｕｓ  Ｓｐｉｃｅという商品名で市販されている。例えば、Ｂｒｙｚｇａｌｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，１Ｎ１８００  Ｌｉｆｅ  Ｃｙｃｌｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ，Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｌｉｆｅ  Ｃｙｃｌｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｌｏｏｓｅ  ａｎｄ  Ｐｏｒｔｉｏｎ  Ｓｎｕｓ（２００５）も参照されたい。加えて、スヌースに関連するある特定の品質基準は、いわゆるＧｏｔｈｉａＴｅｋ基準として構築されている。代表的な無煙タバコ製品もまた、Ｈｏｕｓｅ  ｏｆ  Ｏｌｉｖｅｒ  Ｔｗｉｓｔ  Ａ／Ｓにより商品名Ｏｌｉｖｅｒ  Ｔｗｉｓｔで、Ｕ．Ｓ．Ｓｍｏｋｅｌｅｓｓ  Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｃｏ．によりＣｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｓｋｏａｌ、ＳｋｏａｌＤｒｙ、Ｒｏｏｓｔｅｒ、Ｒｅｄ  Ｓｅａｌ、Ｈｕｓｋｙ、及びＲｅｖｅｌで、Ｐｈｉｌｉｐ  Ｍｏｒｒｉｓ  ＵＳＡにより「ｔａｂｏｋａ」で、Ｃｏｎｗｏｏｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，ＬＬＣによりＬｅｖｉ  Ｇａｒｒｅｔｔ、Ｐｅａｃｈｙ、Ｔａｙｌｏｒ’ｓ  Ｐｒｉｄｅ、Ｋｏｄｉａｋ、Ｈａｗｋｅｎ  Ｗｉｎｔｅｒｇｒｅｅｎ、Ｇｒｉｚｚｌｙ、Ｄｅｎｔａｌ、Ｋｅｎｔｕｃｋｙ  Ｋｉｎｇ、及びＭａｍｍｏｔｈ  Ｃａｖｅで、ならびにＲ．Ｊ．Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  Ｔｏｂａｃｃｏ  ＣｏｍｐａｎｙによりＣａｍｅｌ  Ｏｒｂｓ、Ｃａｍｅｌ  Ｓｔｉｃｋｓ、及びＣａｍｅｌ  Ｓｔｒｉｐｓで市販されている。
【０００６】
ここ数年間にわたって、タバコ製品で利用されるタバコ材料の全体的な特性または性質を変更するための種々の処理方法及び添加剤が提案されている。例えば、タバコ材料の化学特性または官能特性を変更するために、または喫煙可能な材料の場合には、喫煙物品によって発生する主流煙の化学特性または官能特性を変更するために、添加剤または処理プロセスが利用されている。例えば、ある特定の化学化合物の含有量を減少することによって、タバコの化学的構築物を変更する目的で、様々な種類の酵素、細菌、及び微生物（例えば、真菌及び酵母）が、タバコと共に使用されている。例えば、全てが、参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｅｉｆｅｒの米国特許第３，１３２，６５１号、Ｓｉｌｂｅｒｍａｎの同第３，５１３，８５７号、Ｂａｖｌｅｙの同第３，２４０，２１４号、Ｈａｒｖｅｙの同第３，６３６，０９７号、Ｒｏｓｅｎの同第３，６１２，０６５号、Ｒｏｓｅｎの同第３，９４３，９４５号、Ｍａｌａｎの同第４，１３５，５２１号、Ｇｅｉｓｓらの同第４，１４０，１３６号、Ｎｅｗｔｏｎらの同第４，１５１，８４８号、Ｔｅｎｇの同第４，３０７，７３３号、Ｍａｔｔｉｎａらの同第４，３０８，８７７号、Ｇａｉｓｃｈの同第４，４０７，３０７号、Ｇｒａｖｅｌｙらの同第４，４７６，８８１号、Ｇｒａｖｅｌｙらの同第４，５５６，０７３号、Ｇｒａｖｅｌｙらの同第４，５５７，２８０号、Ｓｅｍｐらの同第４，５６６，４６９号、Ｇａｉｓｃｈの同第４，５７２，２１９号、Ｇａｉｓｃｈの同第４，７０９，７１０号、Ｐｏｕｌｏｓｅの同第４，７１６，９１１号、Ｂｅｒｎａｓｅｋの同第４，８８７，６１８号、Ｃｌａｐｐの同第４，９４１，４８４号、Ｗｈｉｔｅの同第５，０９９，８６２号、Ｔｅａｇｕｅの同第５，３４３，８７９号、Ｒｏｔｈらの同第５，３７２，１４９号、ＤｅＧｒａｎｐｒｅｅｔの同第５，６０１，０９７号、Ｋｏｇａらの同第７，５４９，４２５号、Ｋｏｇａらの同第７，５４９，４２６号、及びＫｏｇａらの同第７，５５６，０４６号、Ｋｉｅｒｕｌｆｆの国際特許出願公開第ＷＯ２０００／０２４６４号、ならびにＫｉｅｒｕｌｆｆ欧州特許出願第１０９４７２４号を参照されたい。
【０００７】
タバコ植物などの植物の特性及び性質を変更するためのさらなる方法、ならびに喫煙物品または無煙タバコ製品において有用なタバコ組成物及び調合物を提供することが望ましいであろう。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許第１，３７６，５８６号明細書
【特許文献２】米国特許第３，６９６，９１７号明細書
【特許文献３】米国特許第４，５１３，７５６号明細書
【特許文献４】米国特許第４，５２８，９９３号明細書
【特許文献５】米国特許第４，６２４，２６９号明細書
【特許文献６】米国特許第４，９９１，５９９号明細書
【特許文献７】米国特許第４，９８７，９０７号明細書
【特許文献８】米国特許第５，０９２，３５２号明細書
【特許文献９】米国特許第５，３８７，４１６号明細書
【特許文献１０】米国特許第６，６６８，８３９号明細書
【特許文献１１】米国特許第６，８３４，６５４号明細書
【特許文献１２】米国特許第６，９５３，０４０号明細書
【特許文献１３】米国特許第７，０３２，６０１号明細書
【特許文献１４】米国特許第７，６９４，６８６号明細書
【特許文献１５】米国特許出願公開第２００４／００２０５０３号明細書
【特許文献１６】米国特許出願公開第２００５／０１１５５８０号明細書
【特許文献１７】米国特許出願公開第２００６／０１９１５４８号明細書
【特許文献１８】米国特許出願公開第２００７／００６２５４９号明細書
【特許文献１９】米国特許出願公開第２００７／０１８６９４１号明細書
【特許文献２０】米国特許出願公開第２００７／０１８６９４２号明細書
【特許文献２１】米国特許出願公開第２００８／００２９１１０号明細書
【特許文献２２】米国特許出願公開第２００８／００２９１１６号明細書
【特許文献２３】米国特許出願公開第２００８／０１７３３１７号明細書
【特許文献２４】米国特許出願公開第２００８／０１９６７３０号明細書
【特許文献２５】米国特許出願公開第２００８／０２０９５８６号明細書
【特許文献２６】米国特許出願公開第２００８／０３０５２１６号明細書
【特許文献２７】米国特許出願公開第２００９／００６５０１３号明細書
【特許文献２８】米国特許出願公開第２００９／０２９３８８９号明細書
【特許文献２９】米国特許出願公開第２０１０／０２９１２４５号明細書
【特許文献３０】米国特許出願公開第２０１１／０１３９１６４号明細書
【特許文献３１】国際公開第２００４／０９５９５９号
【特許文献３２】国際公開第２０１０／１３２４４４号
【特許文献３３】米国特許第３，１３２，６５１号明細書
【特許文献３４】米国特許第３，５１３，８５７号明細書
【特許文献３５】米国特許第３，２４０，２１４号明細書
【特許文献３６】米国特許第３，６３６，０９７号明細書
【特許文献３７】米国特許第３，６１２，０６５号明細書
【特許文献３８】米国特許第３，９４３，９４５号明細書
【特許文献３９】米国特許第４，１３５，５２１号明細書
【特許文献４０】米国特許第４，１４０，１３６号明細書
【特許文献４１】米国特許第４，１５１，８４８号明細書
【特許文献４２】米国特許第４，３０７，７３３号明細書
【特許文献４３】米国特許第４，３０８，８７７号明細書
【特許文献４４】米国特許第４，４０７，３０７号明細書
【特許文献４５】米国特許第４，４７６，８８１号明細書
【特許文献４６】米国特許第４，５５６，０７３号明細書
【特許文献４７】米国特許第４，５５７，２８０号明細書
【特許文献４８】米国特許第４，５６６，４６９号明細書
【特許文献４９】米国特許第４，５７２，２１９号明細書
【特許文献５０】米国特許第４，７０９，７１０号明細書
【特許文献５１】米国特許第４，７１６，９１１号明細書
【特許文献５２】米国特許第４，８８７，６１８号明細書
【特許文献５３】米国特許第４，９４１，４８４号明細書
【特許文献５４】米国特許第５，０９９，８６２号明細書
【特許文献５５】米国特許第５，３４３，８７９号明細書
【特許文献５６】米国特許第５，３７２，１４９号明細書
【特許文献５７】米国特許第５，６０１，０９７号明細書
【特許文献５８】米国特許第７，５４９，４２５号明細書
【特許文献５９】米国特許第７，５４９，４２６号明細書
【特許文献６０】米国特許第７，５５６，０４６号明細書
【特許文献６１】国際公開第２０００／００２４６４号
【特許文献６２】欧州特許出願１０９４７２４号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ，Ｖｏｇｅｓ（Ｅｄ．）ｐ．４４−４５（１９８４）
【非特許文献２】Ｂｒｏｗｎｅ，Ｔｈｅ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓ，３ｒｄ  Ｅｄ．，ｐ．４３（１９９０）
【非特許文献３】Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．）ｐ．３４６（１９９９）
【非特許文献４】Ｂｒｙｚｇａｌｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，１Ｎ１８００  Ｌｉｆｅ  Ｃｙｃｌｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ，Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｌｉｆｅ  Ｃｙｃｌｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｌｏｏｓｅ  ａｎｄ  Ｐｏｒｔｉｏｎ  Ｓｎｕｓ（２００５）
【発明の概要】
【００１０】
本開示は、植物またはそれらの一部を、それらに存在するある特定の細菌の量を修正する（例えば、増加及び／または減少させる）ために処理する方法を提供する。具体的には、開示される方法は、タバコ植物及び材料に適用可能であり、いくつかの実施形態では、タバコ植物または材料に関連する総細菌含有量の減少をもたらし、及び／もしくはタバコ植物または材料に関連するラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）細菌の含有量の増加をもたらす。
【００１１】
一態様において、本発明は、タバコ材料の細菌含有量を修正する方法を提供し、方法は、未収穫のタバコ材料を、収穫の最大約２４時間前に処理溶液と接触させることを含み、この処理溶液は、（ｉ）塩、糖、またはこれらの組み合わせを含む溶液、（ｉｉ）１つ以上の酵素を含む溶液、及び（ｉｉｉ）１つ以上のプロバイオティクスを含む溶液からなる群から選択され、該接触させることが、収穫後に減少した総細菌含有量を有する処理済みのタバコ材料を提供する。
【００１２】
ある特定の実施形態では、処理溶液は、ＮａＣｌを含み得る。いくつかの実施形態では、処理溶液は、約１〜約４重量パーセントの塩、糖、またはこれらの組み合わせの濃度を有する。処理溶液は、いくつかの実施形態では、ラクトバチルス細菌を含む。例えば、処理溶液は、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）を含んでもよい。処理溶液がプロバイオティクス細菌を含む場合、この処理溶液は、例えば、約１×１０５コロニー形成単位／ｍＬ〜約１×１０１０コロニー形成単位／ｍＬのプロバイオティクス細菌濃度を有してもよい。処理溶液が酵素を含む場合、この処理溶液は、約１０ＡＵ〜約５０，０００ＡＵ／植物の酵素濃度を有してもよい。
【００１３】
一実施形態では、この方法は、タバコ材料を乾燥調製し、処理済みの乾燥調製されたタバコ材料を得ることをさらに含む。ある特定の実施形態では、処理済みの乾燥調製されたタバコ材料のタバコ特異的ニトロソアミン（ＴＳＮＡ）含有量は、未処理の乾燥調製されたタバコ材料と比べて減少する。本発明の別の態様において、タバコ材料の細菌含有量を修正する方法が提供され、この方法は、未収穫のタバコ材料を収穫の最大２４時間前に、処理溶液の約０．５重量％〜約１５重量％の濃度でＮａＣｌを含む塩溶液と接触させること（該接触させることが、収穫後に減少した総細菌含有量を有する処理済みのタバコ材料を提供する）と、処理済みのタバコ材料を収穫することと、収穫された処理済みのタバコ材料を乾燥調製して、処理済みの乾燥調製されたタバコ材料を得ることと、を含む。
【００１４】
未収穫のタバコ材料は、例えば、タバコ種子、タバコ実生、未成熟の生植物、成熟生植物、又はこれらの一部からなる群から選択され得る。ある特定の実施形態では、処理済みのタバコ材料の総細菌含有量は、収穫後に数で少なくとも約５０％減少し、ある特定の実施形態では、処理済みのタバコ材料の総細菌含有量は、収穫後に数で少なくとも約８０％減少する。いくつかの実施形態では、タバコ材料の総細菌含有量は、グラム陰性細菌を含み、処理済みのタバコ材料のグラム陰性細菌の含有量は、収穫後に数で少なくとも５０％減少する。いくつかの実施形態では、タバコ材料の総細菌含有量は、ラクトバチルス属の細菌を含み、処理済みのタバコ材料のラクトバチルス細菌含有量は収穫後に増加する。
【００１５】
１つ以上の追加の成分が、処理溶液に添加され得る。例えば、処理溶液は、１つ以上の界面活性剤をさらに含むことができる。種々の追加のステップが本明細書に提供される方法において含まれ得る。いくつかの実施形態では、方法は、処理済みの乾燥調製されたタバコ材料を発酵に供することをさらに含み、この発酵は、未処理の乾燥調製されたタバコ材料に対して必要とされる時間よりも少ない時間で完了する。いくつかの実施形態では、この方法は、処理済みの乾燥調製されたタバコ材料を加工して、タバコ製品への組み込みに適した形態で加工済みのタバコ材料を提供することと、加工済みのタバコ材料を無煙タバコ製品または喫煙物品に組み込むことと、をさらに含むことができる。加工済みのタバコ材料は、例えば、刻みフィラー形態及び／またはタバコブレンドの形態であり得る。一実施形態では、この方法は、未収穫のタバコ材料を塩含有溶液と接触させて処理済みのタバコ材料を得ることと、処理済みのタバコ材料を収穫し乾燥調製することと、乾燥調製されたタバコ材料を発酵に供することと、発酵されたタバコ材料を無煙タバコ製品に組み込むこととを含む。
【００１６】
本明細書に記載される方法に従って調製された、喫煙物品（例えば、シガレット）または無煙タバコ製品の形態のタバコ製品も提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って製造された喫煙物品は、喫煙時に、未処理の対照喫煙物品と比べて減少した主流煙のＴＳＮＡ含有量を特徴とする。
【００１７】
本発明は、以下の実施形態を含むが、これらに限定されない。
【００１８】
実施形態１：タバコ材料の細菌含有量を修正する方法であって、未収穫のタバコ材料を、処理溶液と、収穫の最大約２４時間前に接触させることを含む方法であって、この処理溶液が、（ｉ）塩、糖、またはこれらの組み合わせを含む溶液、（ｉｉ）１つ以上の酵素を含む溶液、及び（ｉｉｉ）１つ以上のプロバイオティクスを含む溶液からなる群から選択され、該接触させることが、収穫後に減少した総細菌含有量を有する処理済みのタバコ材料を提供することを特徴とする、方法。
【００１９】
実施形態２：未収穫のタバコ材料が、タバコ種子、タバコ実生、未成熟の生植物、成熟生植物、またはこれらの一部からなる群から選択されることを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００２０】
実施形態３：処理済みのタバコ材料の総細菌含有量が、収穫後に数で少なくとも約５０％減少することを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００２１】
実施形態４：処理済みのタバコ材料の総細菌含有量が、収穫後に数で少なくとも約８０％減少することを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００２２】
実施形態５：タバコ材料の総細菌含有量がグラム陰性細菌を含み、処理済みのタバコ材料のグラム陰性細菌含有量が、収穫後に数で少なくとも約５０％減少することを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００２３】
実施形態６：タバコ材料の総細菌量が、ラクトバチルス属の細菌を含み、処理済みのタバコ材料のラクトバチルス細菌含有量が、収穫後に増加することを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００２４】
実施形態７：処理溶液が、ＮａＣｌを含むことを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００２５】
実施形態８：処理溶液が、約１〜約４重量パーセントの塩、糖、またはこれらの組み合わせの濃度を有することを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００２６】
実施形態９：処理溶液が、約５重量％〜約１５重量％の濃度でＮａＣｌを含むことを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００２７】
実施形態１０：処理溶液が、ラクトバチルス細菌を含むことを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００２８】
実施形態１１：処理溶液が、ラクトバチルス・ヘルベティカスを含むことを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００２９】
実施形態１２：処理溶液が、約１×１０５コロニー形成単位／ｍＬ〜約１×１０１０コロニー形成単位／ｍＬのプロバイオティクス細菌濃度を有することを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００３０】
実施形態１３：処理溶液が、約１０ＡＵ〜約５０，０００ＡＵ／植物の酵素濃度を有することを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００３１】
実施形態１４：処理溶液が、界面活性剤をさらに含むことを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００３２】
実施形態１５：方法が、処理済みのタバコ材料を収穫することと、処理済みのタバコ材料を乾燥調製して、処理済みの乾燥調製されたタバコ材料を得ることと、をさらに含むことを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００３３】
実施形態１６：処理溶液が、処理溶液の約０．５重量％〜約１５重量％の濃度でＮａＣｌを含み、処理済みのタバコ材料を収穫することと、収穫された処理済みのタバコ材料を乾燥調製し、処理済みの乾燥調製されたタバコ材料を得ることをさらに含むことを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００３４】
実施形態１７：処理済みの乾燥調製されたタバコ材料を発酵に供することと、発酵されたタバコ材料を無煙タバコ製品に組み込むことと、をさらに含むことを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００３５】
実施形態１８：発酵が、未処理の乾燥タバコ材料の発酵で必要とされる時間よりも少ない時間で完了することを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００３６】
実施形態１９：前後の実施形態のいずれかに記載の方法に従って調製された無煙タバコ製品。
【００３７】
実施形態２０：処理済みの乾燥調製されたタバコ材料のタバコ特異的ニトロソアミン含有量が、未処理の乾燥調製されたタバコ材料と比べて減少することを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００３８】
実施形態２１：処理済みの乾燥調製されたタバコ材料を加工し、タバコ製品中への組み込みに適した形態で加工済みのタバコ材料を提供することと、加工済みのタバコ材料を無煙タバコ製品または喫煙物品に組み込むことと、をさらに含むことを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００３９】
実施形態２２：加工済みタバコ材料が、刻みフィラー形態またはタバコブレンドの形態であることを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００４０】
実施形態２３：開示された方法に従って調製された喫煙物品が、喫煙時に、未処理の対照喫煙物品と比べて減少した主流煙のＴＳＮＡ含有量であることを特徴とする、前後の実施形態のいずれかに記載の方法。
【００４１】
実施形態２４：シガレットの形態のタバコ製品または前後の実施形態のいずれかに記載の方法に従って調製された無煙タバコ製品の形態のタバコ製品。
【００４２】
本開示のこれらのまたは他の特徴、態様、及び利点は、以下の詳細な説明を以下に簡単に記載されている添付の図面と併せて読み取ることから明確になるであろう。本発明は、上述の実施形態の２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の任意の組み合わせ、ならびに本開示において記載される任意の２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の特徴または要素の組み合わせを、かかる特徴または要素が、本明細書に記載される具体的な実施形態において明示的に組み合わされているかどうかに無関係に含む。本開示は、開示された発明の任意の分離可能な特徴または要素が、その種々の態様及び実施形態のいずれかにおいて、文脈上明確に指定しない限り、組み合わせ可能であるよう意図されているとみなされるべきであるように、任意の全体論的に読み取られるよう意図されている。本発明の他の態様及び利点は、以下から明らかになるであろう。
【００４３】
本発明の実施形態の理解をもたらすために、添付の図面が参照され、添付の図面においては、参照符号が、本発明の例示的な実施形態の構成要素を指している。図面はあくまでも例示にすぎず、本発明を限定するものとして解釈するべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】喫煙可能な材料、包装材料成分、及びシガレットのフィルタ要素を示す、シガレットの形態を有する喫煙物品の拡大透視図である。
【図２】本発明の無煙タバコ組成物で充填された外側小袋を示す、製品の幅にわたって切り取られた無煙タバコ製品実施形態の断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
本発明が、ここでより完全に説明されるであろう。しかしながら、本発明は、多くの異なる形態での実施形態であることができ、本明細書に記載される実施形態に限定されるものとして解釈されるべきではなく、むしろこれらの実施形態は、本開示が十分かつ完全であるように、ならびに本発明の範囲を当業者に最大限に伝えるように提供されるものである。本明細書及び特許請求の範囲内で使用される場合の、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上明確に指定しない限り、複数の指示対象を包含する。「乾燥重量パーセント」または「乾燥重量基準」への言及は、乾燥成分（すなわち、水を除くすべての成分）を基準とする重量を指す。
【００４６】
本発明は、ある特定の細菌の修正されたレベルを有する、植物、植物構成成分、及び植物材料を提供する。いくつかの実施形態では、修正された細菌レベルを有するこれらの植物、植物構成成分、及び植物材料は、乾燥調製に供され、乾燥調製後に種々の化合物（例えば、タバコ特異的ニトロソアミン（ＴＳＮＡ））の修正されたレベルを示すことができる。１つの例示的な態様では、本発明は、ある特定の細菌及び／または種々の化合物の修正されたレベルを有するタバコ植物、植物構成成分、またはタバコ材料、かかるタバコから誘導されたタバコ材料を組み込むタバコ製品、ならびにある特定の細菌及び／または種々の化合物の修正されたレベルを有するタバコを調製するための及びこのタバコから誘導されたタバコ材料をタバコ製品に組み込むための方法を提供する。
【００４７】
タバコ材料内のある特定の細菌のレベルを修正する方法は、一般的には、タバコを、塩及び／または糖溶液、プロバイオティクス溶液、ならびに／もしくは酵素溶液（本明細書では「処理溶液」と総じて称される）のうちの１つ以上と接触させることによって、タバコ（種々の形態の、例えば未収穫のまたは収穫された形態の）を処理することを含む。本明細書に提供される説明は、大部分でタバコの処理に焦点を当てているが、様々な他の植物（果実、野菜、花、及びこれらの構成成分を含む）が、本明細書に提供される方法により処理され、その中のある特定の化合物（例えば、細菌）の修正されたレベルを有する、植物、植物構成成分、及びそれらからの材料ならびに製品を得ることができることに留意する。
【００４８】
タバコは、植物のライフサイクルの種々の段階で処理され得るが、典型的には、タバコ植物または植物構成要素の乾燥調製の前に、または乾燥調製の早期段階中に処理され得る（すなわち、このタバコ植物または植物構成成分は、「乾燥調製されていないかまたは部分的に乾燥調製されたタバコ」であり、これは、収穫の前の処理及び処理溶液による乾燥調製の黄変／褐変期を通しての処理を包含する。黄変／褐変期は、乾燥調製中に発生し、タバコが収穫される時点を描写するが、完全な乾燥調製を受けてはいない。
【００４９】
ある特定の好ましい実施形態では、タバコは、乾燥調製される前に、すなわち「未成熟（ｇｒｅｅｎ）」形態で処理される。「未成熟」とは、ある特定の実施形態では、植物または植物構成成分内の細胞が相当なまたは実質的な細胞死を経験しておらず、細胞呼吸がある程度発生することができる形態を有するタバコを意味する。「未成熟」形態のタバコ材料は収穫済みのまたは未収穫の形態であり得るが、ある特定の実施形態では、本明細書に記載される処理を受けているタバコ材料は、未収穫の状態である。
【００５０】
したがって、「タバコ」、「タバコ植物」、または「タバコ植物構成成分」は、タバコ植物のライフサイクルの種々の段階にあるタバコを意味する。例えば、本開示に従って処理されるタバコ植物構成成分は、タバコ種子、タバコ実生、未収穫のタバコ植物（成熟の異なる段階における）、収穫済みの植物、または上記のいずれかの一部であり得、これら全ては、本明細書に更に詳しく説明されるタバコ植物の段階であるとみなされる。ある特定の実施形態では、タバコは、乾燥される前に（すなわち、収穫前にまたは収穫直後に）処理される。いくつかの実施形態では、タバコは、「生きている」とみなされる形態で処理される。ある特定の実施形態では、タバコは、畑で処理され、これは処理が、未収穫の形態のタバコ植物の少なくとも一部で行われることを意味する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように処理され得る未収穫のタバコ植物は、畑で成長し、地中にその根を張り、生生物体の生物学的活性を通して生存し続けているものとしてさらに説明することができる。
【００５１】
ある特定の実施形態では、処理は、収穫の前の特定の時間範囲内で行うことができる。例えば、いくつかの実施形態では、収穫の約１週間前未満、例えば収穫の約２日前未満、または収穫の約１日前未満にタバコを処理することが有益な場合がある。ある特定の実施形態では、収穫の前の所定の時間数で、例えば収穫の約１〜約２４時間前、収穫の約２〜約１２時間前、または収穫の約３〜約１０時間前にタバコを処理することが有益である場合もある。例えば、タバコは、収穫の約２４時間前未満、収穫の約１５時間前未満、収穫の約１２時間前未満、収穫の約１０時間前未満、収穫の約８時間前未満、または収穫の約６時間前未満に処理されてもよい。一実施形態では、タバコは、収穫の約５時間前に処理される。畑での処理は、例えば、雨による希釈作用ならびに乾燥及びＵＶ照射の考えられる損傷作用を回避するために、収穫前の制限された時間期間内で行われることが特に有益である。いくつかの実施形態では、処理が無傷植物で行われ得る一方で、他の実施形態では、処理は、それらから除去された一部分を有する植物（例えば、処理前に花が植物から取り除かれた場合、または葉が植物から取り除かれた場合）で行われてもよいことに留意する。
【００５２】
上述のように、処理溶液は、一般的に、塩及び／または糖溶液、プロバイオティクス溶液、ならびに／もしくは酵素溶液のうちの１つ以上を含む。これらの種類の処理溶液の各々は、本明細書により詳細に説明されるであろう。かかる溶液の混合物（例えば、プロバイオティクス含有塩及び／または糖溶液、酵素含有塩及び／または糖溶液、もしくは酵素及びプロバイオティクスの両方を含有する溶液）も本明細書に記載される方法のある特定の実施形態において使用され得ることも理解される。処理溶液は、一般的に、液体（溶液）形態であるものとして記載されている。これらは処理「溶液」として記載されているが、いくつかの実施形態において、ある程度の比率の固形物が不完全に溶解され得る（例えば、「処理溶液」が溶液、分散液、または懸濁液形態であり得るように）ことに留意する。塩、糖、酵素、及び／またはプロバイオティクスが混合されている液体は様々であり得るが、一般的には、この液体は水を含むであろう。好ましい実施形態では、溶液は水溶液（すなわち、水を含む）であるが、種々の他の溶媒（例えば、メタノール、エタノール、及びプロパノールなどの極性有機溶媒）が、水の代わりにまたは水に加えて使用され得る。塩、糖、プロバイオティクス、または酵素の濃度及び量は様々であり得る。一般的には、塩、糖、プロバイオティクス、または酵素の量は、適用されるタバコ材料中の１種以上の細菌の量を変化させるのに十分な量である。他の実施形態では、塩、糖、プロバイオティクス、または酵素の適用は、乾燥（例えば、凍結乾燥）形態の塩、糖、プロバイオティクス、または酵素で行われ得る。例えば、いくつかの実施形態において、サイロ貯蔵茎葉飼料または乾燥塩漬貯蔵で使用されるものに類似する方法が、本明細書で使用され得る。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｔｅｖｅｎｓ  Ｈ．Ｒ．，Ｏｎ  Ｅｎｓｉｌａｇｅ  ｏｆ  Ｇｒｅｅｎ  Ｆｏｒａｇｅ  Ｃｒｏｐｓ  ｉｎ  Ｓｉｌｏｓ（１８８１）を参照されたい。
【００５３】
処理溶液が塩及び／または糖溶液を含む実施形態において、溶液の特定の組立は様々であり得る。ある特定の実施形態では、処理溶液は、これが処理に供される植物またはそれらの部分に対して高張であるようなものであってもよい。高張溶液は、一般的には、例えば半透膜によって溶質が分離される別の溶液と比べて高濃度の溶質を含む溶液であると理解される。膜の高張溶液側にあるより高い濃度の溶質のために、流体は一般的に、等張状態（ここでは、膜の両側の溶質濃度は等しい）に到達するまで、膜を横切って高張溶液中に流入する。本出願に関しては、高張溶液は、溶液中の溶質または溶質（複数）が、処理されることになる植物中の溶質または溶質（複数）の濃度よりも高い濃度におけるものである。
【００５４】
ある特定の実施形態では、処理溶液は、塩溶液である。様々な種類の植物の塩溶液処理が既知であり、例えば、全てが参照により本明細書に組み込まれる、Ｈｅｍｐｆｆｉｎｇらの米国特許第６，７５５，２００号、ならびにＬｉらの米国特許出願公開第２００８／０２０２５３８号及びＭａｒｓｈａｌｌらの同第２０１２／０２７９５１０号に記載されている。この目的に任意の塩が使用され得るが、食品グレードの塩が特に好ましい。例示の塩としては、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）、塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ２）、塩化カリウム（ＫＣｌ）、及びこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。ある特定の好ましい実施形態では、処理溶液はＮａＣｌ溶液である。いくつかの実施形態では、この塩溶液は、重炭酸塩または炭酸塩アニオン含有溶液ではない。この塩は、ヨウ素化されてもヨウ素化されていなくてもよい（すなわち、これらに添加された少量のヨウ素を有する）が、好ましくは、ヨウ素化されていない。この塩は、例えば、自然塩、海水塩、塩漬け用塩であり得る。塩粒子の少なくとも一部が、例えば、水中に溶解され、溶液を形成することができる限りにおいて、塩の粒径及び形状は様々であり得る（例えば、塩は粒状、フレーク状、または粉末状であり得る）。
【００５５】
ある特定の実施形態では、溶質は糖を含む。食品グレードの糖を含む任意の糖がこの目的で使用され得、スクロース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マルトース、及びラクトース、ラムノース、キシロース、ならびにこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。本開示により使用される糖の形態は、糖の少なくとも一部が、例えば水中に溶解され、高張溶液を形成することができる限りにおいて、例えば、粉末状形態、結形態、またはシロップ形態であり得る。いくつかの実施形態では、塩及び糖の両方を含有する溶液が、本明細書に開示される方法により使用され得る。
【００５６】
処理溶液がプロバイオティクス含有溶液を含む実施形態では、溶液は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、２０１２年４月１１日に出願された、Ｍａｒｓｈａｌｌらの米国特許出願第１３／４４４，２７２号に記載されているものであり得る。簡単に言いうと、プロバイオティクス処理は、種々の供給源によってプロバイオティクスとして分類され得る全ての生微生物を包含するよう意図される１つ以上の「プロバイオティクス」または「プロバイオティクス微生物」による処理を含む。例えば、国際連合食糧農業機関（ＦＡＯ）は、プロバイオティクスを「適切な量で投与される場合、ホストに健康上の利益を付与する生微生物」として定義している。いくつかの報告において、かかる健康上の利益としては、腸管、呼吸器管、及び／または泌尿生殖器管のコロニー形成、コレステロール代謝、ラクトース代謝、カルシウムの吸収、ビタミンの合成、酵母及び膣感染の減少、消化困難（例えば、便秘及び下痢性疾患）の減少、天然抗生物質、乳酸、酵素、過酸化水素の生産、抗生物質様物質の生産による病原性微生物の阻害、ならびにｐＨの減少が含まれ得るが、これらに限定されない。「プロバイオティクス」の従来の定義は、ヒト及び動物の消化性微生物に関連するが、この用語は、農業の分野におけるなどのその他の目的で適用されている。例示的なプロバイオティクスとしては、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥム（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム属（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ）、ビフィドバクテリウム・サーモフィラム（ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・アリメンタリウス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｉｍｅｎｔａｒｉｕｓ）、ラクトバチルス・アミロヴォルス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）、ラクトバチルス・ブルガリクス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ビフィダス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｉｆｉｄｕｓ）、ラクトバチルス・ブレビス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス・カゼイ（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・コーカシクス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｕｃａｓｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・クリスパータス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、ラクトバチルス・クルヴァトゥス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバチルス・デルブリッキー（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｃｋｉｉ）、ラクトバチルス・ファーメンタム（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバチルス・ガリナラム（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ガセリ（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ジョンソニー（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・ラクティス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・ライヒマニ（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｅｉｃｈｍａｎｎｉｉ）、ラクトバチルス・パラカゼイ（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・プランタルム（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ロイテリ（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・ラムノーサス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・サルヴァリウス、ラクトバチルス属（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、ラクトバチルス・スポロジーナス（ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｏｒｏｇｅｎｅｓ）、ラクトコッカス・ラクティス（ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、ストレプトコッカス・クレモリス（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｅｒｍｏｒｉｓ）、ストレプトコッカス・フェシウム（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｃｅｉｕｍ）、ストレプトコッカス・インファンティス（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ストレプトコッカス・サーモフィルス（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｃｅｉｕｍ）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、スタフィロコッカス・サーモフィルス（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、スタフィリコッカス・カルノーサス（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｃａｒｎｏｓｕｓ）、スタフィリコッカス・キシローサス（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｘｙｌｏｓｕｓ）、サッカロマイセス・ボウファルディ（ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）、サッカロマイセス・セレビシエー（ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、サッカロマイセス・ボウファルディ（ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）、バチルス・セレウスバールトヨ（ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ  ｖａｒ  ｔｏｙｏ）、バチルス・ズブチリス（ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルス・コアギュランス（ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、及びバチルス・リケニフォルミス（ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）が含まれるが、これらに限定されない。
【００５７】
処理溶液が酵素含有溶液を含む実施形態では、溶液は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、２０１２年７月１９日に出願された、Ｍｏｌｄｏｖｅａｎｕらの米国特許出願第１３／５５３，２２２号に記載されるようなものであり得る。簡単に言うと、酵素処理は、１つ以上の酵素による処理を含み、本明細書で使用される場合、異なるサイズ及び構造の任意の球状タンパク質を指す。一般的に、本発明により有用である酵素は、植物材料内の１つ以上の化学反応を何らかの方法で触媒するよう機能する（例えば、それらの速度を増加させることによって）。任意の型の酵素または酵素型の組み合わせ、例えば、ヒドロラーゼ（化学結合の加水分解を触媒する）、イソメラーゼ（分子内の異性化を触媒する）、リガーゼ（２つ以上の分子を結合するよう機能する）、リアーゼ（加水分解及び酸化以外のメカニズムにより化学結合を開裂する）、オキシドレダクターゼ（酸化／還元反応を触媒する）、及びトランスフェラーゼ（種々の部分、例えば官能基を転移させる）を本発明に従って使用することができる。酵素の供給源は様々であり得、酵素は、例えば、微生物源（例えば、細菌源または真菌源）、植物源、動物源から得ることができ、及び／または合成的に生成することもできる。例示の酵素としては、アミラーゼ（例えば、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、γ−アミラーゼ、またはこれらの組み合わせ）及び／またはプロテアーゼ（例えば、セリンプロテアーゼ、スレオニンプロテアーゼ、システインプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ、メタロプロテアーゼ、及びグルタミン酸プロテアーゼ、例えばプロテアーゼバチルス・リケニフォルミス（ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、プロテアーゼバチルス属（ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）プロテアーゼアスペルギルス・オリゼ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、プロテアーゼバチルス・アミノリケファシエンス（ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、プロテアーゼバチルス（ｂａｃｉｌｌｕｓ）、及びプロテアーゼストレプトマイセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｇｒｉｓｅｕｓ）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、１つ以上の酵素は、アスパラギナーゼ（例えば、ＰｒｅｖｅｎｔＡＳｅ（商標）、ＤＳＭ  Ｆｏｏｄ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｉｅｓ、Ｈｅｅｒｌｅｎ、ＮＬ及びＡｃｒｙｌａｗａｙ（登録商標）、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ、Ａ／Ｓ、Ｂａｇｓｖａｅｒｄ、ＤＫ）を含む。ある特定の実施形態では、１つ以上の酵素は、ポリフェノールオキシダーゼ（ＰＰＯ）を含む。いくつかの実施形態では、この１つ以上の酵素は、モノフェノールオキシダーゼ酵素（チロシナーゼ）またはｏ−ジフェノール酸素オキシドレダクターゼ酵素（カテコールオキシダーゼ）などのオキシダーゼを含む。別の例示のオキシダーゼは、ラッカーゼである。
【００５８】
処理溶液の溶質（すなわち、塩（複数可）、糖（複数可）、プロバイオティクス、酵素、またはこれらの組み合わせ）は、様々な濃度で存在することができる。一般的に、いくらか希釈した溶液が本明細書に提供される方法に従って使用されるが、この濃度は、処理されたタバコ植物において所望の効果を引き出すのに十分な任意の濃度であり得る。
【００５９】
例えば、いくつかの実施形態では、塩、糖、またはこれらの組み合わせは、処理溶液の約０．５重量％〜約１５重量％の、処理溶液の約０．５重量％〜約１０重量％の、または処理溶液の約１重量％〜約５重量％の（例えば、処理溶液の約１．５重量％、約２重量％、約２．５重量％、または約３重量％の）濃度で存在する。
【００６０】
いくつかの実施形態では、処理溶液は、約１×１０５コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍＬ〜約１×１０１０ＣＦＵ／ｍＬ（例えば、約２×１０６ＣＦＵ／ｍＬ）の量でプロバイオティクスを含む。ＣＦＵは、プロバイオティクスサンプル中の生（生存）細胞の測定値を提供する。
【００６１】
いくつかの実施形態では、処理溶液は、約１０〜約５０，０００の活性単位（ＡＵ）／植物の量で酵素を含む。例えば、酵素の例示の量は、約１００〜約１０，０００ＡＵ／植物、例えば、約５００〜約５，０００ＡＵ／植物であり得る（市販の製品ＰｒｅｖｅｎｔＡＳｅ（商標）Ｌ（ＤＳＭからの）についての典型的なＡＵレベルは、アスパラギナーゼの標本では２，６００ＡＵ／ｍＬである）。乾燥タバコ（約１２％の水分）については、２０〜１００ＡＵ／ｇの範囲が使用される。酵素が市販のポリフェノールオキシダーゼ（ＰＰＯ）を含む実施形態では、約１００〜約１０，０００ＡＵ／植物、例えば、約１，０００〜約５，０００ＡＵ／植物が使用され得る（市販の製品（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎからの）についての典型的なＡＵレベルは、標本について１，０００ＡＵ／ｍＬである）。
【００６２】
ある特定の実施形態では、処理溶液で他の成分を植物に適用することができる。かかる成分は、同じ調合物中に（例えば、同じ溶液、分散液、懸濁液中に）添加することができるか、または別個の調合物でタバコに適用することができる。例えば、いくつかの実施形態では、１つ以上の界面活性剤及び／または洗浄剤が、糖、塩、酵素、及び／またはプロバイオティクスと共に適用される。この界面活性剤は、例えば、非イオン性界面活性剤であり得る。種々の界面活性剤を使用することができ、これらには、ポリソルベート界面活性剤（ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ−２０（登録商標））及びポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ−８０（登録商標））など、ならびにポリ（エチレングリコール）系界面活性剤（Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘシリーズ界面活性剤など）が含まれるが、これらに限定されない。処理溶液がタバコを有効に被覆することを助けるための他の試薬としては、種々の糖、植物抽出物（例えば、ユッカ抽出物、海藻抽出物）、及びこれらの派生物が含まれる。ある特定の酵素及びプロバイオティクスは、特定のｐＨ範囲のみで活性であり、したがって、ｐＨ調節剤、酸、塩基、及び／または緩衝剤の使用は、ある特定の処理溶液の適用において有益な場合もある。いくつかの実施形態では、処理溶液は、１つ以上のアミノ酸（例えば、リジン、グリシン、ヒスチジン、アラニン、メチオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、プロリン、フェニルアラニン、バリン、及びアルギニン）、カチオン（例えば、二価及び／または三価のカチオン）を組み込む組成物、ある特定の非還元糖、ある特定の還元剤、フェノール性化合物（例えば、少なくとも１つのフェノール性官能基を有する化合物）、少なくとも１つの遊離チオール基または官能基を有するある特定の化合物、酸化剤（例えば、過酸化水素またはオゾン）、酸化触媒（例えば、二酸化チタン）、天然植物抽出物（例えば、ローズマリー抽出物）、及びこれらの組み合わせを含有してもよい。任意選択的に処理溶液を用いて植物に添加され得る１つ以上の他の成分の量は、様々であり得る。例えば、ある特定の実施形態では、処理溶液は、処理溶液の最大約２５重量％、例えば、約１重量％〜約２０重量％を含んでもよい。
【００６３】
上述のように、処理は、タバコ材料（例えば、未成熟のタバコ植物材料）を、本明細書に記載される処理溶液の種類のうちの１種以上で処理することを含むことができる。かかる処理は、いくつかの実施形態では、タバコを、２種以上の異なる種類の処理溶液で順次処理すること（例えば、短い間に連続して、またはかなり異なる時間点で）、または同時処理すること（例えば、２種以上の異なる溶液をタバコに別々に適用することによって、または溶液を混合して、２種以上の異なる溶質を含む単一の処理溶液を提供し、単一の処理溶液をタバコに適用することによって）を含むことができる。タバコは、処理溶液（すなわち、塩及び／または糖溶液、ブロバイオティクス溶液、ならびに／もしくは酵素溶液）で１回処理することができるか、または複数回処理することができる。いくつかの実施形態では、同一であっても異なってもよい２つの処理溶液が、別個の調合物で提供され、タバコ植物のライフサイクルの異なる時点で適用され得る（例えば、１つが畑で栽培される植物に適用され、もう１つが収穫後に適用されるか、または１つが種子に適用され、もう１つが畑で栽培される植物に適用される）。
【００６４】
本明細書に提供される方法による処理溶液によるタバコの処理は、得られる処理済みのタバコに及ぼす種々の効果を有することができる。得られる特定の結果が、処理で使用される塩（複数可）、糖（複数可）、酵素（複数可）、及び／またはプロバイオティクス（複数可）の特定の種類に少なくとも部分的に関連し得ることに留意する。
【００６５】
例えば、ある特定の実施形態では、塩及び／または糖溶液、プロバイオティクス溶液、ならびに／もしくは酵素溶液で処理されたタバコは、それらの関連するある特定の細菌の修正されたレベルを示すことができる。タバコ植物は、それらの関連する細菌の種々のレベルを自然に有することが知られている。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＬａｒｓｓｏｎ  Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，４：４（２００８）及びＨｕａｎｇ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８８（２）：５５３（２０１０）を参照されたい。
【００６６】
「細菌」は、原核微生物として科学的に分類される原核微生物の属を指すと一般に理解されている。大部分の細菌は、グラム陽性（「アクチノバクテリア」門に原則的に分類される）またはグラム陰性（「プロトバクテリア」門に原則的に分類される）として分類され得る。本明細書で言及される「グラム陰性」とは、細胞質膜ならびに外側細胞膜によって覆われた細菌であり、２つの膜の間にペプチドグリカンの薄い層のみを有し、グラム染色技法においてクリスタルバイオレット染色液を保持することができない細菌を指す（一方、グラム陽性細菌は、単一のユニットの脂質膜のみによって覆われ、ペプチドグリカンの厚い層（２０〜８０ｎｍ）を有し、これが染色液を保持する）。例示のグラム陰性細菌としては、プロテオバクテリア（例えば、腸内細菌属（エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、セラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、パントエア（Ｐａｎｔｏｅａ）、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、及びクレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ））、シュードモナス科（シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）及び根圏細菌（Ｒｈｉｚｏｂａｃｔｅｒ）を含む）、モラクセラ科（例えば、モナクセラ（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ）及びアシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、ヘリコバクター科（例えば、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ））、キサントモナス科（例えば、ステノトロモナス（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ）及びキサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ））、ブデオビブリオ科（例えば、ブデオビブリオ（Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ））、バークホルデリア科（例えば、バークホルデリア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ））、レジオネラ科（例えば、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ））、リゾビウム科（例えば、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ））、アセトバクター科（例えば、酢酸細菌）、らせん菌科（例えば、らせん菌（Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ））、ならびにカンピロバクター科（例えば、カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）の属からのもの）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、タバコ植物に関連するある特定の細菌は、嫌気性微生物である。
【００６７】
腸内細菌は、腸内細菌科のグラム陰性、嫌気性細菌であり、ヒトを含む動物の腸管で通常見出される。サルモネラ、プロテウス、セラチア、エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）、シュードモナス、及びクレブシエラを含む４０を超える属がこの科で同定されている。動物の腸管内で見出される他の細菌型、例えば、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、フソバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ユーバクテリウム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ルミノコッカス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、ペプチドコッカス（Ｐｅｐｔｉｄｏｃｏｃｃｕｓ）、ペプトストレプトコッカス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、エシェリキア、及びビフィドバクテリウム属に属する細菌も腸内細菌とみなされることができる。腸内細菌を定量化するための種々のテストはまた、腸内細菌科（例えば、サルモネラ及びエシェリキア）に加えて、ある特定の他のグラム陰性細菌を定量化することもできる。これらの細菌の一部は、健康上の問題がなく腸管内で生存することができるが、一部は、日和見病原体であり得、及び／または感染の徴候を引き起こす場合があり、したがって、かかる細菌の存在は、多くの場合、最小限に抑えられることが有利である。
【００６８】
ラクトバチルスは、乳酸を生産するグラム陰性桿菌の特定の大きな属である。この属内の多くの細菌は、有益である（及びしたがって、通常プロバイオティクス調製物として使用される）。
【００６９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される処理は、修正された総細菌計数、修正された腸内細菌計数、及び／または修正されたラクトバチルス計数を有する処理済みのタバコ植物材料をもたらす。限定することを意図するものではないが、いくつかの実施形態において、糖及び／または塩溶液は、タバコ植物に対して高張性溶液を作り出すことによって細菌計数を修正することができ、プロバイオティクス及び／または酵素は、タバコ材料に伴う単位面積当たりの競合的細菌負荷量を提供することによって細菌計数を修正することができると考えられている。
【００７０】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される処理は、修正された細菌計数を有する処理済みのタバコ植物材料を提供し、具体的には、総細菌計数における全体的な減少を提供することができる。総細菌計数は、当該技術分野において既知の任意の方法を用いて、例えば、サンプルを希釈し、希釈したサンプル（複数可）を増殖培地（例えば、平板計数寒天培地、ＰＣＡ）上で平板培養することによって、行うことができる。次いでこの平板をインキュベートし、サンプル中に存在する各細菌は、平板上の個々のコロニーに増殖すると予想される。得られたコロニーを見ることができ（例えば顕微鏡下で）、計数し、総細計数をコロニー形成単位／グラム（ＣＦＵ／ｇ）で提供する。他の方法としては、計数チャンバーを用いる方法、細菌を保持することができる膜フィルタを用いる方法、光度計側法及び／または分光分析法（例えば、比濁分析）が含まれるが、これらに限定されない。塩及び／または糖溶液、プロバイオティクス溶液、ならびに／もしくは酵素溶液のうちの１つ以上による処理後の総細菌計数の減少は、例えば、総細菌計数を基準として、約８０％を超える、約８５％を超える、約９０％を超える、約９２％を超える、約９５％を超える、または約９６％を超える減少であり得る（これは、例えば、処理済みのタバコサンプルの１グラム当たりのコロニー形成単位を取得し、これを未処理のタバコサンプルの１グラム当たりのコロニー形成単位で除算し、得られた数を１から減算し、１００を乗算することによって得られる）。
【００７１】
処理の前にタバコ植物材料中に存在する総細菌のうちのいくらかの割合は、グラム陰性細菌を含む。したがって、処理後に、タバコ植物材料は、一般的に修正されたグラム細菌計数を示すことができ、具体的には、グラム陰性細菌計数における全体的な減少を示すことができるということになる。いくつかの実施形態では、グラム陰性細菌の減少は、グラム陰性細菌に特異的な（グラム陽性細菌と対照的なものとしての）方法を用いて処理の前後に上述の通りに総細菌計数を評価することによって定量化することができる。このような方法は、いくつかの実施形態では、グラム染色、顕微鏡下での細菌の観察、迅速微生物同定システム、及び／またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）プロトコルを含むことができる。
【００７２】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される処理は、修正された腸内細菌計数を有するタバコ植物を提供し、具体的には、腸内細菌計数における全体的な減少を有する植物材料を提供することができる。腸内細菌計数は、例えば、上述の総細菌計数法によって定量化することができ、ここでは、細菌は、一般的な細菌増殖培地よりはむしろ選択的培地（例えば、平板計数寒天培地（ＰＣＡ）平板よりはむしろバイオレットレッド胆汁寒天培地（ＶＲＢＡ）平板で増殖される。塩及び／または糖溶液、プロバイオティクス溶液、ならびに／もしくは酵素溶液のうちの１つ以上による処理後の腸内細菌計数の減少は、例えば、総細菌計数を基準として、約８０％を超える、約８５％を超える、約９０％を超える、約９２％を超える、約９５％を超える、または約９６％を超える減少であり得る（これは、例えば、処理済みタバコサンプルの１グラム当たりのコロニー形成単位を取得し、これを未処理のタバコサンプルの１グラム当たりのコロニー形成単位で除算し、得られた数を１から減算し、１００を乗算することによって得られる）。
【００７３】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される処理は、修正されたラクトバチルス細菌計数を提供し、特異的には、ラクトバチルス細菌計数における全体的な増加を提供することができる。ラクトバチルス計数は、例えば、ラクトバチルスに特異的な培地（例えば、ｄｅＭａｎ  Ｒｏｇｏｓａ及びＳｈａｒｐｅ（ＭＲＳ）培地）上で、上述された計数方法を用いて得ることができる。ＭＲＳ培地は、ラクトバチルスに加えて、ある特定の他の種類の細菌の増殖を許容し得るために、ある特定の実施形態における「修正されたラクトバチルス細菌計数」は、嫌気的条件下においてＭＲＳ培地上で増殖する全ての細菌の計数を指し、例えば、これは、ラクトバチルス（に加えて、ロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）及びペジオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）を含んでもよい。塩及び／または糖溶液、プロバイオティクス溶液、ならびに／もしくは酵素溶液のうちの１つ以上による処理後のラクトバチルス細菌計数の増加は、例えば、総細菌計数を基準として、約５０％を超える、約１００％を超える、約１５０％を超える、約２００％を超える、約３００％を超える、または約４００％を超える増加であり得る（これは、例えば、処理済みタバコサンプルの１グラム当たりのコロニー形成単位を取得し、これを未処理のタバコサンプルの１グラム当たりのコロニー形成単位で除算し、得られた数を１から減算し、１００を乗算することによって得られる）。ラクトバチルス計数の増加がある特定の実施形態では望ましいが、一部の処理は、ラクトバチルス計数の減少をもたらす（例えば、いくつかの実施形態では、約０％〜約５０％の処理済みのタバコのラクトバチルス計数の減少を提供する）ことに留意する。
【００７４】
異なる処理は、タバコ植物材料内に存在する種々の細菌のレベルに及ぼす異なる効果を有し得る。上述のように、本明細書に記載される処理は、処理済みのタバコの特性に影響を与えることができ、処理済みのタバコを乾燥調製する前にある特定の細菌の含有量を修正することは特に有益であり得る。本明細書に開示される前乾燥調製処理は、いくつかの実施形態では、その後の加工ステップに対するさらなる密接な関係を有し得る。
【００７５】
タバコ製品の生産において、タバコ材料は、タバコを消費可能な形態に変換するために、乾燥調製され及び／または熟成されることが多い。乾燥調製は、例えば、収穫されたタバコ材料を、ある特定のタバコ成分の酸化及び分解を許容する条件下で、包囲空間（例えば、タバコ乾燥小屋）内に配置することを含む。乾燥調製は、典型的には、タバコを乾燥させて、通常、タバコの全体的な化学的性質に対する変化をもたらす。
【００７６】
タバコを乾燥調製し及び／または熟成するための方法の例が、例えば、Ｂｅｉｎｈａｒｔの米国特許第１，３２７，６９２号、Ｈｅｌｊｏの同第２，７５８，６０３号、Ｍａｒｔｉｎの同第５，６７６，１６４号、Ｈｅｍｐｆｌｉｎｇらの同第６，７５５，２００号、Ｐｅｒｆｅｔｔｉらの同第７，２９３，５６４号、及びＬｉらの同第８，３５３，３００号、ならびにＭａｒｓｈｅｌｌらの米国特許出願公開第２０１０／０１１６２８１号及び同第２０１２／０２７９５１０号（これらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に説明されている。種々の種類のタバコについての他の種類の乾燥調製及び熟成プロセスの説明は、参照により本明細書にさらに組み込まれる、Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．）（１９９９）に提供されている。
【００７７】
例えば、タバコは、エア・キュアリンング（自然乾燥、ａｉｒ−ｃｕｒｉｎｇ）、ダーク・エア・キュアリング（暗気乾燥、ｄａｒｋ  ａｉｒ  ｃｕｒｉｎｇ）、サン・キュアリング（天日乾燥、ｓｕｎ−ｃｕｒｉｎｇ）、ファイヤー・キュアリング（火力乾燥、ｆｉｒｅ  ｃｕｒｉｎｇ）、及びフル・キュアリング（熱風乾燥、ｆｌｕｅ  ｃｕｒｉｎｇ）が含まれるが、これらに限定されない方法によって乾燥調製することができる。フル・キュアリングは、タバコを煙に曝すことなく、熱風がタバコを乾燥調製する包囲空間においてタバコを乾燥調製することを含み、例えば、Ｎｅｓｔｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｉｔｒａｇｅ  Ｔａｂａｋｆｏｒｓｃｈ．Ｉｎｔ．，２０（２００３）：４６７−４７５及びＰｅｅｌｅの米国特許第６，８９５，９７４号（双方ともに参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ファイヤー・キュアードタバコは、一般的に、低いくすぶり状態で維持される火炎により発生したガスにタバコが曝される包囲空間内でタバコを乾燥調製することを含み、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｙｒｄらの米国特許出願公開第２０１２／０１２５３５４号に記載されている。エア・キュアリングは、典型的には、十分に換気された包囲空間内にタバコを吊るし、周囲条件で乾燥させることを含み、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｉｔｒａｇｅ  Ｔａｂａｋｆｏｒｓｃｈ．Ｉｎｔ．２１（２００５）：３０５−３２０、Ｓｔａａｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｉｔｒａｇｅ  Ｔａｂａｋｆｏｒｓｃｈ  Ｉｎｔ．２１（２００５）：３２１−３３０、及びＷｉｌｌｉａｍｓの米国特許第６，８３４，６５４号に記載されている。サン・キュアリングは、一般的には、タバコを被覆されていない状態において日光で乾燥調製することを含む。
【００７８】
修正された細菌レベルを含むタバコ材料（本明細書に記載される処理を介して提供される）は、乾燥調製された後の未処理のタバコ材料と比べて、乾燥調製された後にタバコ材料中の他の種類の化合物の修正されたレベルをもたらすことができる。こうした化合物は、ある特定の実施形態では、煙毒物及び／または煙毒物前駆体であり得る。例えば、ある特定の化合物は、少なくとも部分的には、乾燥プロセス中の細菌（例えば、グラム陰性細菌）の作用によって生成されると考えられる。具体的に言うと、細菌は、酵素硝酸塩レダクターゼを生成することができ、硝酸塩レダクターゼは、硝酸塩を一酸化窒素に変換し、一酸化窒素はその後、前駆体タバコアルカロイドと反応し、タバコ特異的ニトロソアミン（ＴＳＮＡ）を生成することができる。例示のＴＳＮＡ化合物としては、Ｎ−ニトロソノルニコチン（ＮＮＮ）、４−メチル−Ｎ−ニトロソアミノ−１−（３−ピリジル）−１−ブタノン（ＮＮＫ）、Ｎ−ニトロソアナタビン（ＮＡＴ）、４−メチル−Ｎ−ニトロソアミノ−１−（３−ピリジル）−１−ブタノール（ＮＮＡＬ）、及びＮ−ニトロソアナバシン（ＮＡＢ）が含まれる。
【００７９】
低レベルＴＳＮＡは、典型的には、未成熟のタバコ材料において観察されるが、ＴＳＮＡは、タバコの乾燥調製、発酵、及び／または熟成プロセス中に形成されると一般的に理解されている。その結果、栽培または乾燥プロセスを修正することによるＴＳＮＡレベルを減少するための種々の努力が試みられてきた。例えば、全てが参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｏｋｅｌｍａｎの米国特許第４，３４３，３１７号及び同第４，３４７，８５９号、Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌの同第５，８０３，０８１号、Ｗｉｌｌｉａｍｓの同第６，２０２，６４９号、Ｐｅｅｌｅの同第６，８０５，１３４号、Ｐｅｒｆｅｔｔｉらの同第７，２９３，５６４号、Ｐｅｅｌｅの同第７，４０４，４０６号、Ｌｉらの同第８，３５３，３００号、Ｃｈｅｎらの米国特許出願公開第２０１２／０２３４３３４号、ＭａｌｉｋのＰＣＴ出願公開第ＷＯ８３／０１１８０号、ＷｉｌｌｉａｍｓのＷＯ９８／０５２２６及びＷＯ９８／５８５５５、ＨｅｍｐｆｌｉｎｇらのＷＯ０１／３５７７０及びＷＯ０２／１３６３６、ＫｏｇａらのＷＯ０３／０９４６３９、ならびにＭｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．１６１，６７−７６（１９８７）を参照されたい。
【００８０】
したがって、一般的に乾燥調製に供されたタバコ材料に関連する細菌（例えば、グラム陰性細菌）のレベルを修正することは、いくつかの実施形態において、ＴＳＮＡの修正されたレベルを有する（例えば、本明細書に記載される乾燥調製の前に処理されていない同等のタバコ材料中のものよりも重量で少ないＴＳＮＡを有する）乾燥調製されたタバコ材料をもたらすことができる。本発明のある特定の実施形態では、ＴＳＮＡレベルの減少は、様々であり得るが、一般的には、処理済みの乾燥調製されたタバコは、同等に乾燥調製された（未処理の）タバコ中に存在するＴＳＮＡの量と比較して、約１０重量％〜約９０重量％のＴＳＮＡを含むであろう。例えば、ある特定の実施形態では、処理済みのタバコ材料は、乾燥調製された後の未処理のタバコ材料と比較して、ＴＳＮＡ化合物において少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、または８０％の減少を示すことができる。
【００８１】
本明細書に記載されるように、塩及び／または糖溶液、プロバイオティクス溶液、ならびに／もしくは酵素溶液を含む処理溶液によるタバコ材料の処理は、いくつかの実施形態において、未処理のタバコ材料と比べて、修正された（例えば、増加した）処理済みのタバコ材料に関連するラクトバチルスの数をもたらす。タバコ材料の処理に関連する乳酸菌におけるこの可能な増加は、いくつかの実施形態において、さらなる有益な効果を有する。ある特定の実施形態では（例えば、タバコ材料が、ある特定の無煙タバコ製品において使用されるために調製されている）、タバコ材料は乾燥調製され、その後発酵される。
【００８２】
発酵は、一般的に、タバコ材料を水（例えば、湿度）及び熱に曝すことを必要とする。発酵プロセスは、温度及び水分含有量が制御され得るチャンバー内で行うことができる。タバコが発酵プロセス中に曝される高温及び高水分含有量の結果として、ある特定の化合物（例えば、アンモニア）は、タバコから効果的に除去され得る。いくつかの実施形態では、発酵は細菌によるプロセスであり、ある特定の細菌が、タバコ材料を発酵する中で反応し風味を生成する酵素を生成する。
【００８３】
タバコについての例示の発酵プロセスは、参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｒｅｎｉｋらの米国特許第２，９２７，１８８号、Ｓｅｎｓａｂａｕｇｈらの同第４，６６０，５７７号、Ｓｅｎｓａｂａｕｇｈらの同第４，５２８，９９３号、の及びＲｏｔｈらの同第５，３２７，１４９号に提供されている。発酵は、ラクトバチルスの存在によって増強され、その結果、所定のタバコサンプルに関連するラクトバチルスの量の修正が、タバコ材料の発酵に影響を与えることができる。処理済みのタバコが、その後発酵に供される場合、発酵は、いくつかの実施形態においては、より多くの数のラクトバチルス細菌の存在によって増強され得る。「増強される」とは、発酵プロセスが、例えば、より迅速に、及び／またはより均一に進むことを意味する。
【００８４】
本明細書に提供される方法が適用可能であるタバコまたはタバコ（複数）は、
様々であり得る。ある特定の実施形態では、使用され得るタバコとしては、フル・キュアード葉またはＶｉｒｇｉｎｉａ葉（例えば、Ｋ３２６）、バーレー葉、サン・キュアード葉（例えば、Ｋａｔｅｒｉｎｉ、Ｐｒｅｌｉｐ、Ｋｏｍｏｔｉｎｉ、Ｘａｎｔｈｉ及びＹａｍｂｏｌタバコを含むＩｎｄｉａｎ  Ｋｕｒｎｏｏｌ及びＯｒｉｅｎｔａｌタバコ）、Ｍａｒｙｌａｎｄ葉、ダーク葉、ダーク・ファイヤド葉、ダーク・エア・キュアード葉（例えば、Ｐａｓａｄｏ、Ｃｕｂａｎｏ、Ｊａｔｉｍ及びＢｅｚｕｋｉタバコ）、ライト・エア・キュアード葉（例えば、Ｎｏｒｔｈ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ及びＧａｌｐａｏタバコ）、Ｉｎｄｉａｎエア・キュアード葉、Ｒｅｄ  Ｒｕｓｓｉａｎ及びＲｕｓｔｉｃａタバコ、ならびに様々な他の珍しい特産品タバコ及び前述のタバコのいずれかの種々のブレンドが含まれる。様々な種類のタバコ、栽培実施法及び収穫実施法の説明が、参照により本明細書に組み込まれる、Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．）（１９９９）に記載されている。ニコチアナ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ）種からの植物の様々な代表的な他の種類が、それぞれが参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｏｏｄｓｐｅｅｄ，Ｔｈｅ  Ｇｅｎｕｓ  Ｎｉｃｏｔｉａｎａ，（Ｃｈｏｎｉｃａ  Ｂｏｔａｎｉｃａ）（１９５４）、Ｓｅｎｓａｂａｕｇｈ，Ｊｒらの米国特許第４，６６０，５７７号、Ｗｈｉｔｅらの同第５，３８７，４１７号及びＬａｗｓｏｎらの同第７，０２５，０６６号、Ｌａｗｒｅｎｃｅ，Ｊｒによる米国特許出願公開第２００６／００３７６２３号及びＭａｒｓｈａｌｌらによる同第２００８／０２４５３７７号に記載されている。例示のニコチアナ種としては、ニコチアナ・タバカム（Ｎ．ｔａｂａｃｕｍ）、ニコチアナ・ルスティカ（Ｎ．ｒｕｓｔｉｃａ）、ニコチアナ・アラタ（Ｎ．ａｌａｔａ）、ニコチアナ・アレンツィイ（Ｎ．ａｒｅｎｔｓｉｉ）、ニコチアナ・エクセルシオール（Ｎ．ｅｘｃｅｌｓｉｏｒ）、ニコチアナ・フォルゲチアナ（Ｎ．ｆｏｒｇｅｔｉａｎａ）、ニコチアナ・グラウカ（Ｎ．ｇｌａｕｃａ）、ニコチアナ・グルチノサ（Ｎ．ｇｌｕｔｉｎｏｓａ）、ニコチアナ・ゴセイ（Ｎ．ｇｏｓｓｅｉ）、ニコチアナ・カワカミイ（Ｎ．ｋａｗａｋａｍｉｉ）、ニコチアナ・ナイチアナ（Ｎ．ｋｎｉｇｈｔｉａｎａ）、ニコチナナ・ラングスフォルフィー（Ｎ．ｌａｎｇｓｄｏｒｆｆｉ）、ニコチアナ・オトファラ（Ｎ．ｏｔｏｐｈｏｒａ）、ニコチアナ・セッチェルリ（Ｎ．ｓｅｔｃｈｅｌｌｉ）、ニコチアナ・シルベストリス（Ｎ．ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ）、ニコチアナ・トメントサ（Ｎ．ｔｏｍｅｎｔｏｓａ）、ニコチアナ・トメントシフォミス（Ｎ．ｔｏｍｅｎｔｏｓｉｆｏｒｍｉｓ）、ニコチアナ・アンドゥラタ（Ｎ．ｕｎｄｕｌａｔａ）、ニコチアナ・ｘ・サンデラエ（Ｎ．ｘ  ｓａｎｄｅｒａｅ）、ニコチアナ・アフリカナ（Ｎ．ａｆｒｉｃａｎａ）、ニコチアナ・アンプレシカウリス（Ｎ．ａｍｐｌｅｘｉｃａｕｌｉｓ）、ニコチアナ・ベナビデシイ（Ｎ．ｂｅｎａｖｉｄｅｓｉｉ）、ニコチアナ・ボナリエンシス（Ｎ．ｂｏｎａｒｉｅｎｓｉｓ）、ニコチアナ・デブネイ（Ｎ．ｄｅｂｎｅｙｉ）、ニコチアナ・ロンギフロラ（Ｎ．ｌｏｎｇｉｆｌｏｒａ）、ニコチアナ・マリチナ（Ｎ．ｍａｒｉｔｉｎａ）、ニコチアナ・メガロシフォン（Ｎ．ｍｅｇａｌｏｓｉｐｈｏｎ）、ニコチアナ・オシデンタリス（Ｎ．ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）、ニコチアナ・パニクラタ（Ｎ．ｐａｎｉｃｕｌａｔａ）、ニコチアナ・プランバギニフォリア（Ｎ．ｐｌｕｍｂａｇｉｎｉｆｏｌｉａ）、ニコチアナ・レイモンディイ（Ｎ．ｒａｉｍｏｎｄｉｉ）、ニコチアナ・ロズラタ（Ｎ．ｒｏｓｕｌａｔａ）、ニコチアナ・シムランス（Ｎ．ｓｉｍｕｌａｎｓ）、ニコチアナ・ストックトニイ（Ｎ．ｓｔｏｃｋｔｏｎｉｉ）、ニコチアナ・スアヴェオレンス（Ｎ．ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ）、ニコチアナ・アンブラティカ（Ｎ．ｕｍｂｒａｔｉｃａ）、ニコチアナ・ベルンチナ（Ｎ．ｖｅｌｕｔｉｎａ）、ニコチアナ・ウィガンディオイデス（Ｎ．ｗｉｇａｎｄｉｏｉｄｅｓ）、ニコチアナ・アカウリス（Ｎ．ａｃａｕｌｉｓ）、ニコチアナ・アカミナタ（Ｎ．ａｃｕｍｉｎａｔａ）、ニコチアナ・アテヌアタ（Ｎ．ａｔｔｅｎｕａｔａ）、ニコチアナ・ベンサミアナ（Ｎ．ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）、ニコチアナ・カビコラ（Ｎ．ｃａｖｉｃｏｌａ）、ニコチアナ・クレベランディイ（Ｎ．ｃｌｅｖｅｌａｎｄｉｉ）、ニコチアナ・コルディフォリア（Ｎ．ｃｏｒｄｉｆｏｌｉａ）、ニコチアナ・コリンボサ（Ｎ．ｃｏｒｙｍｂｏｓａ）、ニコチアナ・フラグランス（Ｎ．ｆｒａｇｒａｎｓ）、ニコチアナ・グッドスピーディイ（Ｎ．ｇｏｏｄｓｐｅｅｄｉｉ）、ニコチアナ・リニアリス（Ｎ．ｌｉｎｅａｒｉｓ）、ニコチアナ・ミエルシイ（Ｎ．ｍｉｅｒｓｉｉ）、ニコチアナ・ヌディカウリス（Ｎ．ｎｕｄｉｃａｕｌｉｓ）、ニコチアナ・オブツシフォリア（Ｎ．ｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａ）、ニコチアナ・オクシデンタリス・サブスピーシス・ヘスペリス（Ｎ．ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ  ｓｕｂｓｐ．Ｈｅｒｓｐｅｒｉｓ）、ニコチアナ・パウシフロラ（Ｎ．ｐａｕｃｉｆｌｏｒａ）、ニコチアナ・ペチュニオイデス（Ｎ．ｐｅｔｕｎｉｏｉｄｅｓ）、ニコチアナ・クラドリヴァルヴス（Ｎ．ｑｕａｄｒｉｖａｌｖｉｓ）、ニコチアナ・レパンダ（Ｎ．ｒｅｐａｎｄａ）、ニコチアナ・ロツンディフォリア（Ｎ．ｒｏｔｕｎｄｉｆｏｌｉａ）、ニコチアナ・ソランフォリア（Ｎ．ｓｏｌａｎｉｆｏｌｉａ）、及びニコチアナ・スペガウイニイ（Ｎ．ｓｐｅｇａｚｚｉｎｉｉ）が含まれる。
【００８５】
ニコチアナ種は、遺伝子改変または品種間交雑技術（例えば、タバコ植物は、成分、特性、または属性の生産を増加させるまたは減少させるために、遺伝子的に修飾されるかまたは品種間交雑され得る）を使用して誘導され得る。例えば、Ｆｉｔｚｍａｕｒｉｃｅらの米国特許第５，５３９，０９３号、Ｗａｈａｂらの同第５，６６８，２９５号、Ｆｉｔｚｍａｕｒｉｃｅらへ同第５，７０５，６２４号、Ｗｅｉｇｌの同第５，８４４，１１９号、Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚらの同第６，７３０，８３２号、Ｌｉｕらの同第７，１７３，１７０号、Ｃｏｌｌｉｖｅｒらの同第７，２０８，６５９号、及びＢｅｎｎｉｎｇらの同第７，２３０，１６０号、Ｃｏｎｋｌｉｎｇらの米国特許出願公開第２００６／０２３６４３４号、ならびにＮｉｅｌｓｅｎらのＰＣＴ公開第ＷＯ２００８／１０３９３５号に記載される植物の遺伝子改変の種類を参照されたい。それぞれが、参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｅｎｓａｂａｕｇｈ，Ｊｒ．らの米国特許第４，６６０，５７７号、Ｗｈｉｔｅらの同第５，３８７，４１６号、及びＤｏｍｉｎｇｕｅｚらの同第６，７３０，８３２号に記載されているタバコの種類も参照されたい。最も好ましくは、タバコ材料は、適切に乾燥調製されかつ熟成されたものである。フル・キュアードタバコを乾燥調製するための特に好ましい技術及び条件は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｎｅｓｔｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｉｔｒａｇｅ  Ｔａｂａｋｆｏｒｓｃｈ．Ｉｎｔ．，２０（２００３）４６７−４７５及びＰｅｅｌｅの米国特許第６，８９５，９７４号に記載されている。タバコを自然乾燥（ａｉｒ  ｃｕｒｉｎｇ）するための代表的な技術及び条件は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｉｔｒａｇｅ  Ｔａｂａｋｆｏｒｓｃｈ．Ｉｎｔ．，２１（２００５）３０５−３２０及びＳｔａａｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｅｉｔｒａｇｅ  Ｔａｂａｋｆｏｒｓｃｈ．Ｉｎｔ．，２１（２００５）３２１−３３０に記載されている。ある特定の種類の珍しいまたは稀なタバコは、自然乾燥され得る。オリエンタルタバコの喫煙品質を改善するための様式及び方法は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｌａｗｓｏｎらの米国特許第７，０２５，０６６号に記載されている。代表的なオリエンタルタバコとしては、ｋａｔｅｒｉｎｉ、ｐｒｅｌｉｐ、ｋｏｍｏｔｉｎｉ、ｘａｎｔｈｉ及びｙａｍｂｏｌタバコが含まれる。ダーク。エア・キュアードタバコを含んでいるタバコ組成物は、参照により本明細書に組み込まれる、Ｍａｒｓｈａｌｌらの米国特許出願公開第２００８／０２４５３７７号に記載されている。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｅｅｓｏｎらの米国特許出願公開第２０１１／０２４７６４０号に記載されるタバコの種類も参照されたい。
【００８６】
ニコチアナ種は、それらの中に存在する種々の化合物の含有量に対して選択され得る。例えば、ある特定の実施形態では、ニコチアナ種（例えば、Ｇａｌｐａｏ  ｃｏｍｍｕｎタバコ）の植物は、葉面化合物に富むために特に栽培される。ある特定の実施形態では、ニコチアナ種の植物は、ある特定の望ましくない化合物（例えば、アスパラギン）のそれらの比較的低いレベルのために特に栽培される。タバコ植物は、温室、栽培室、または戸外で栽培するか、または水耕法で栽培することができる。
【００８７】
本明細書に記載される処理溶液がタバコ植物または植物材料に適用される手段は、様々であり得る。本発明において、植物を使用されるかまたは使用のために修正され得る塩及び／または糖溶液、プロバイオティクス溶液、ならびに／もしくは酵素溶液で処理するためのある特定の方法は、全てが参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｅｉｓｓらの米国特許第４，１４０，１３６号、Ｎｅｗｔｏｎらの同第４，１５１，８４８号、Ｍａｔｔｉｎａらの同第４，３０８，８７７号、Ｇｒａｖｅｌｙらの同第４，４７６，８８１号、Ｇｒａｖｅｌｙらの同第４，５５６，０７３号、Ｇｒａｖｅｌｙらの同第４，５５７，２８０号、Ｓｅｍｐらの同第４，５６６，４６９号、Ｒｏｔｈらの同第５，３７２，１４９号、Ｋｏｇａらの同第７，５４９，４２５号、Ｋｏｇａらの同第７，５４９，４２６号、及びＫｏｇａらの同第７，５５６，０４６号に提供されている。
【００８８】
本明細書に開示される処理溶液の適用方法は、少なくとも部分的には、タバコ植物の段階に応じることが多いであろう。例えば、ある特定の実施形態では、塩及び／または糖溶液、プロバイオティクス溶液、ならびに／もしくは酵素溶液は、植え付け前のタバコ種子に適用される。このような実施形態では、処理溶液は、種子処理またはコーティングの形態で適用することができる。例えば、種子をかかる溶液中にさっと浸し、この溶液中に浸漬し、またはこの溶液で噴霧することができる。ある特定の実施形態では、溶液は、実生または未収穫の（生）植物形態で適用されてもよく、もしくはタバコ植物が植え付けられることになるまたは現在植えられている土壌に適用されてもよい。このような実施形態では、処理溶液の噴霧塗布を使用することができる（例えば、液体ブームスプレーヤー、スピードスプレーヤー、スプリンクラーシステム、噴霧器、または空中噴霧機を使用して）が、適用の方法は、これらに限定されない。本発明において、使用され得るまたは使用するために修正され得る植物を微生物で処理するためのある特定の方法は、全てが参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｅｉｓｓらの米国特許第４，１４０，１３６号、Ｎｅｗｔｏｎらの同第４，１５１，８４８号、Ｍａｔｔｉｎａらの同第４，３０８，８７７号、Ｇｒａｖｅｌｙらの同第４，４７６，８８１号、Ｇｒａｖｅｌｙらの同第４，５５６，０７３号、Ｇｒａｖｅｌｙらの同第４，５５７，２８０号、Ｓｅｍｐらの同第４，５６６，４６９号、Ｒｏｔｈらの同第５，３７２，１４９号、Ｋｏｇａらの同第７，５４９，４２５号、Ｋｏｇａらの同第７，５４９，４２６号、及びＫｏｇａらの同第７，５５６，０４６号に提供されている。
【００８９】
タバコ植物が未だ生きている形態の間に処理（すなわち、塩及び／または糖、プロバイオティクス（複数可）、ならびに／若しくは酵素（複数可）を含有する溶液）を適用することは有利であり得るが、いくつかの実施形態では、タバコ植物の収穫後に処理溶液を適用することも可能である。こうした適用は、収穫の直後、収穫後の加工（例えば、植物の乾燥（ｄｒｙｉｎｇ）、乾燥調製（ｃｕｒｉｎｇ）、及び／または物理的加工）の前後、もしくはこれらの間の任意の段階を含む収穫後の任意の時点で生じ得る。有利には、処理は、タバコ植物材料が相当に乾燥される前に行われる。塩及び／または糖溶液、プロバイオティクス溶液、ならびに／もしくは酵素溶液の適用は、植物のライフサイクルにおける一時期において行うことができ、または２つ以上の時期に行うこともできる。
【００９０】
タバコ植物全体、またはニコチアナ種の植物のある特定の部分または一部を、本明細書に提供されるように使用することができ及び／または処理することができる。例えば、植物を事実上全て（例えば、植物全体）収穫し、それら自体として用いることができる。あるいは、植物の様々な部分もしくは一部を収穫するか、または収穫後の処理のために分離することができる。例えば、花、葉、葉柄、茎、根、種子、及びこれらの様々な組み合わせを、使用またはさらなる処理のために単離することができる。
【００９１】
処理後に、処理済みのたばこ材料は、未成熟の形態で使用することができる（例えば、植物またはそれらの一部は、任意の乾燥調製プロセスに供することなく使用することができる）。例えば、植物またはそれらの一部は、意味のある貯蔵、処理または加工条件に供することなく使用することができる。ある特定の状況において、植物またはそれらの一部は、収穫後事実上直ちに使用されることが好ましい。あるいは、例えば、未成熟の形態の植物またはそれらの一部は、後の使用のために、冷蔵または凍結、凍結乾燥、照射、黄変、乾燥、乾燥調製することができる（例えば風乾技法、または加熱を用いる技法を使用して）、加熱、調理（例えば、ローストし、フライにし、または茹で）、または、そうでなければ、後の使用のために、貯蔵または処理に供することができる。利点、例えばＴＳＮＡ形成の減少、発酵の増強等は、乾燥調製された後に実現され、したがって、本明細書に記載される処理済み材料は、使用、例えばタバコ製品における使用の前に好都合に乾燥調製される。
【００９２】
タバコ材料は、物理的に加工され得る（処理の前後及び乾燥調製の前後に）。植物またはそれらの一部は、個々の一部または断片に分離することができる（例えば、葉は葉柄から取り出すことができ、及び／または葉柄及び葉は茎から取り出すことができる）。収穫された植物または個々の一部もしくは断片は、一部または断片にさらに細分することができる（例えば、充填材型の断片、顆粒、微粒子または微粉として特徴付けることができる断片または一部に、葉を寸断し、切断し、細かく砕き、摩砕または粉砕することができる）。タバコ材料は、加工済みタバコの一部もしくは断片、本質的に天然ラミナ及び／または葉柄の形態の、乾燥調製され熟成されたタバコ、タバコ抽出物、抽出された（例えば、溶媒として水を用いて）タバコパルプ、前述の混合物（例えば、抽出されたタバコパルプを顆粒状の、乾燥調製され熟成された天然タバコラミナと組み合わせる混合物）の形態を有することができる。タバコ製品に使用されるタバコは、タバコラミナ、またはタバコラミナと葉柄の混合物を含むことが最も好ましい。タバコ製品内のタバコの部分は、加工済みのタバコ葉柄（例えば、カットロールド（ｃｕｔ−ｒｏｌｌｅｄ）葉柄、カットロールドエクスパンデッド（ｃｕｔ−ｒｏｌｌｅｄ−ｅｘｐａｎｄｅｄ）葉柄またはカットパフト（ｃｕｔ−ｐｕｆｆｅｄ）葉柄）、もしくはボリュームエクスパンデッド（ｖｏｌｕｍｅ  ｅｘｐａｎｄｅｄ）タバコ（例えば、ドライアイスエクスパンデッド（ｄｒｙ  ｉｃｅ  ｅｘｐａｎｄｅｄ）タバコ（ＤＩＥＴ）などのパフト（ｐｕｆｆｅｄ）タバコ）などの加工された形態のタバコ材料を含む。例えば、ｄｅ  ｌａ  Ｂｕｒｄｅらの米国特許第４，３４０，０７３号、Ｇｕｙらの同第５，２５９，４０３号、及びＰｏｉｎｄｅｘｔｅｒらの同第５，９０８，０３２号、及びＰｏｉｎｄｅｘｔｅｒらの同第７，５５６，０４７号（これらの全ては、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるタバコ膨張プロセスを参照されたい。加えて、タバコ製品は、所望により発酵されたタバコを組み込んでもよい。参照により本明細書に組み込まれる、ＡｔｃｈｌｅｙらのＰＣＴ公開第ＷＯ０５／０６３０６０号に記載されているタバコ加工技術の種類も参照されたい。
【００９３】
タバコがこのような形態で提供される方法は様々であり得る。植物、またはそれらの一部は、外部応力または圧力に供することができる（例えば、プレスまたはロール処理に供することによる）。こうした加工条件を実行する場合、植物またはそれらの一部は、その天然含水率に近似した含水率（例えば、収穫直後の含水率）、植物またはそれらの一部に水分を添加することによって達成される含水率、もしくは植物またはそれらの一部を乾燥した結果として生じる含水率を有してもよい。例えば、植物またはそれらの一部の粉末化、微粉砕、粉砕、または摩砕した断片は、約２５重量パーセント未満、多くの場合約２０重量パーセント未満、及び頻繁には約１５重量パーセント未満の水分を有することができる。タバコの一部または断片は、最も好ましくは、タバコは、粉砕、摩砕等のための装置及び技術を用いて粉末タイプの形状に細砕され、粉砕され、または微粉化され得る。最も好ましくは、例えばハンマーミル、カッターヘッド、エアコントロールミル等の装置を用いての破砕または摩砕中には、タバコは、比較的乾燥している形態にある。例えば、タバコの一部または断片は、その含水率が約１５重量パーセント未満〜約５重量パーセント未満である場合、粉砕または摩砕されてもよい。
【００９４】
喫煙可能なまたは無煙形態で使用されることを意図するタバコ組成物は、単一の種類のタバコを組み込んでもよい（例えば、いわゆる「ストレートグレード（ｓｔｒａｉｇｈｔ  ｇｒａｄｅ）」形態で）。例えば、タバコ組成物内のタバコは、フル・キュアードタバコから単独で構成されてもよい（例えば、タバコの全てが、フル・キュアードタバコラミナもしくはフル・キュアードタバコラミナ及びフル・キュアードタバコ葉柄の混合物のいずれかから構成され、または誘導されてもよい）。タバコ組成物内のタバコはまた、いわゆる「ブレンドされた」形態を有してもよい。例えば、本発明のタバコ組成物内のタバコは、フル・キュアードタバコ、バーレー種（例えば、マラウイバーレータバコ）及びオリエンタルタバコの一部もしくは断片の混合物を含んでもよい（例えば、タバコラミナ、もしくはタバコラミナ及びタバコ葉柄の混合物から構成され、または誘導されたタバコとして）。例えば、代表的なブレンドは、乾燥重量基準で約３０〜約７０部のバーレータバコ（例えば、ラミナ、もしくはラミナ及び葉柄）及び、約３０〜約７０部のフル・キュアードタバコ（例えば、葉柄、ラミナ、もしくはラミナ及び葉柄）を組み込んでもよい。他の例示的なタバコブレンドは、乾燥重量基準で、約７５部のフル・キュアードタバコ、約１５部のバーレータバコ、及び約１０部のオリエンタルタバコ、もしくは約６５部のフル・キュアードタバコ、約２５分のバーレータバコ、及び約１０部のオリエンタルタバコ、あるいは約６５部のフル・キュアードタバコ、約１０部のバーレータバコ、及び約２５部のオリエンタルタバコを組み込む。他の例示的なタバコブレンドは、約２０〜約３０部のオリエンタルタバコ及び約７０〜約８０部のフル・キュアードタバコを組み込む。
【００９５】
本開示に従って処理されたタバコは、ある特定の実施形態において、その後抽出され得る。様々な抽出技術を使用することができる。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｂｅｅｓｏｎらの米国特許出願公開第２０１１／０２４７６４０号に記載される抽出プロセを参照されたい。タバコの成分を抽出するための他の例示の技術は、全てが参照により本明細書に組み込まれる、Ｆｉｏｒｅの米国特許第４，１４４，８９５号、Ｏｓｂｏｒｎｅ，Ｊｒ．らの同第４，１５０，６７７号、Ｒｅｉｄの同第４，２６７，８４７号、Ｗｉｌｄｍａｎらの同第４，２８９，１４７号、Ｂｒｕｍｍｅｒらの同第４，３５１，３４６号、Ｂｒｕｍｍｅｒらの同第４，３５９，０５９号、Ｍｕｌｌｅｒの同第４，５０６，６８２号、Ｋｅｒｉｔｓｉｓの同第４，５８９，４２８号、Ｓｏｇａらの同第４，６０５，０１６号、Ｐｏｕｌｏｓｅらの同第４，７１６，９１１号、Ｎｉｖｅｎ，Ｊｒ．らの同第４，７２７，８８９号、Ｂｅｒｎａｓｅｋらの同第４，８８７，６１８号、Ｃｌａｐｐらの同第４，９４１，４８４号、Ｆａｇｇらの同第４，９６７，７７１号、Ｒｏｂｅｒｔｓらの同第４，９８６，２８６号、Ｆａｇｇらの同第５，００５，５９３号、Ｇｒｕｂｂｓらの同第５，０１８，５４０号、Ｗｈｉｔｅらの同第５，０６０，６６９号、Ｆａｇｇの同第５，０６５，７７５号、Ｗｈｉｔｅらの同第５，０７４，３１９号、Ｗｈｉｔｅらの同第５，０９９，８６２号、Ｗｈｉｔｅらの同第５，１２１，７５７号、Ｆａｇｇの同第５，１３１，４１４号、Ｍｕｎｏｚらの同第５，１３１，４１５号、Ｆａｇｇの同第５，１４８，８１９号、Ｋｒａｍｅｒの同第５，１９７，４９４号、Ｓｍｉｔｈらの同第５，２３０，３５４号、Ｆａｇｇの同第５，２３４，００８号、Ｓｍｉｔｈの同第５，２４３，９９９号、Ｒａｙｍｏｎｄらの同第５，３０１，６９４号、Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｐａｒｒａらの同第５，３１８，０５０号、Ｔｅａｇｕｅの同第５，３４３，８７９号、Ｎｅｗｔｏｎの同第５，３６０，０２２号、Ｃｌａｐｐらの同第５，４３５，３２５号、Ｂｒｉｎｋｌｅｙらの同第５，４４５，１６９号、Ｌａｕｔｅｒｂａｃｈの同第６，１３１，５８４号、Ｋｉｅｒｕｌｆｆらの同第６，２９８，８５９号、Ｍｕａらの同第６，７７２，７６７号、及びＴｈｏｍｐｓｏｎの同第７，３３７，７８２号に記載されている。
【００９６】
本発明で論じられるタバコ材料は、本明細書に記載される酵素処理の前後に、または酵素処理中に、もしくは別途さらに処理及び／または加工することができる。例えば、所望される場合、タバコ材料は、照射され、低温殺菌され、若しくは制御された熱処理に別途かけられてもよい。こうした処理プロセスは、参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｕａらの米国特許公開第２００９／００２５７３８号に詳説されている。好都合なことに、処理溶液が酵素を含む実施形態では、酵素は、高温において、少なくとも約７５％が、少なくとも約８０％が、少なくとも約８５％が、少なくとも約９０％が、少なくとも約９５％が、少なくとも約９８％が、少なくとも約９９％が、または完全に不活性化され及び／または分解されることに留意する。したがって、酵素処理されたタバコが熱処理され及び／または高温で使用される（例えば、シガレット内に組み込まれ、高温で燃焼する）ある特定の実施形態では、活性酵素のほとんど全てが、タバコ材料中にそのまま残ることはない。
【００９７】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される処理済みのタバコ材料は、水及びタバコ材料の加熱の際にアスパラギンがアクリルアミドを形成する反応を阻害することができる添加剤（例えば、リジン、グリシン、ヒスチジン、アラニン、メチオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、プロリン、フェニルアラニン、バリン、アルギニン、二価及び酸化のカチオンを組み込んでいる組成物、アスパラギナーゼ、ある特定の非還元糖、ある特定の還元剤、フェノール性化合物、少なくとも１つの遊離チオール基または官能基を有するある特定の化合物、酸化剤、酸化触媒、天然植物抽出物（例えば、ローズマリー抽出物）、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される添加剤）とさらに接触させることができる。例えば、全てが参照により本明細書に組み込まれる、米国特許公開第２０１０／０３００４６３号、同第２０１１／００４８４３４号、及び同第２０１２／００６０８５４号を参照されたい。ある特定の実施形態では、この種類の処理は、オリジナルのタバコ材料が前述した抽出及び／または蒸留プロセス中に加熱される場合に有用である。
【００９８】
処理済みのタバコ材料は、本発明による様々な種類のタバコ製品内に組み込まれ得る。例えば、いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載される種類の処理のうちの１つ以上に供した処理済みのタバコ材料を含む、シガレットなどの喫煙物品を提供する。図１を参照すると、シガレットの形態で、本発明の喫煙物品のある特定の代表的な成分を有する喫煙物品１０が示されている。シガレット１０は、周囲を囲む包装材料内に封入された、喫煙可能なフィラー材料（例えば、本明細書に記載されるように処理されたタバコ材料などの約０．３〜約１．０ｇの喫煙可能なフィラー材料）の充填物または巻物の一般的に円筒形のロッド１２を含む。ロッド１２は、通常「タバコロッド」と称される。タバコロッド１２の端部は、開いて、喫煙可能な詰め物材料を露出させている。シガレット１０は、包装材料１６に施された１つの任意選択のバンド２２（例えば、デンプン、エチルセルロース、またはアルギン酸ナトリウムなどのフィルム形成剤を含む印刷されたコーティング）を有するものとして示されていて、このバンドは、シガレットの長手方向軸を横切る方向にシガレットロッドを囲む。すなわち、このバンド２２は、シガレットの長手方向軸に対して交差方向の領域を設ける。バンド２２は、包装材料の内表面に（すなわち、喫煙可能なフィラー材料に面して）、またはあまり好ましくはないが、包装材料の該表面に印刷することができる。シガレットは１つの任意選択のバンドを有する包装材料を有するが、シガレットはまた、２、３、またはそれ以上の番号が付いた任意選択の空間を置いたさらなるバンドを有する包装材料を有することができる。
【００９９】
タバコロッド１２の一方の端部に点火端部１８があり、吸い口端部２０にはフィルタ要素２６が配置されている。フィルタ要素２６は、フィルタ要素とタバコロッドが端から端までの関係において軸方向に整列するように、好ましくは互いに当接するように、タバコロッド１２の一方の端部に隣接して配置されている。フィルタ要素２６は、概ね円筒形状を有することができ、その直径は、タバコロッドの直径と本質的に等しくなり得る。フィルタ要素２６の端部は、空気及び煙がそこを通る通路を可能にする。
【０１００】
換気または空気希釈された喫煙物品には、それぞれがプラグラップ２８を通って延在する一連の孔３０などの任意選択の空気希釈手段が設けられている。任意選択の孔３０は、レーザー穿孔法などの当業者に既知の様々な技法によって作製され得る。あるいは、いわゆるオフライン空気希釈技法（例えば、多孔性の紙プラグラップ及び前穿孔チッピングペーパーの使用を通しての）を使用することができる。フィルタ要素２６は、その外周または長手方向周囲に沿って外側プラグラップ２８の層により囲まれている。使用時には、喫煙者は、マッチまたはシガレットライターを用いてシガレット１０の点火端部１８を点火する。かくして、喫煙可能な材料１２が燃焼を開始する。シガレット１０の吸い口端部２０は、喫煙者の唇内に配置される。喫煙可能な材料１２の燃焼によって発生した熱分解生成物（例えば、タバコ煙の成分）が、シガレット１０を通り、フィルタ要素２６を通って喫煙者の口内に引き込まれる。
【０１０１】
ある特定の実施形態において、本発明によれば、喫煙物品は、本明細書に記載されるように処理された（すなわち、塩及び／または糖溶液、プロバイオティクス溶液、ならびに／もしくは酵素溶液のうちの１つ以上で処理され、前乾燥調製された）タバコを含む。喫煙物品内のタバコは、いくつかの実施形態においては、かかる処理済みのタバコのみを含むことができるか、または他のタバコ材料と組み合わせて種々の量の処理済みのタバコを含有することができる。例えば、処理済みのタバコは、喫煙物品中の全てのタバコ材料の重量に基づいて、約２５％以上、約５０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上、または約１００％の量で存在することができる。好都合なことに、いくつかの実施形態では、タバコ材料の処理において使用された塩、糖、酵素、及び／またはプロバイオティクスは、このように製造されたシガレットから生じる煙の中には移動されない。
【０１０２】
図２を参照すると、本明細書に記載されるように処理されたタバコ（すなわち、塩及び／または糖溶液、プロバイオティクス溶液、ならびに／もしくは酵素溶液のうちの１つ以上で処理されたタバコ）を含む代表的なスヌースタイプのタバコ製品が示されている。具体的には、図２は、無煙タバコ組成物４４を収容する水浸透性の外側小袋４２を有する無煙タバコ製品４０を図示し、このタバコ組成物は、本明細書に記載されるように処理され刻まれたまたは粒子状のタバコ材料を含む。さらなる添加剤が、本発明による無煙タバコ組成物と混合され得るか、もしくは無煙タバコ組成物内に別途組み込まれ得る。この添加剤は、人工的であり得るか、もしくはハーブまたは生物学的供給源から得られかまたはそれらに由来することも可能である。添加剤の例示的タイプとしては、塩（例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム等）、天然甘味料（例えば、フルクトース、ショ糖、グルコース、マルトース、バニリン、エチルバニリングルコシド、マンノース、ガラクトース、ラクトース等）、人工甘味料（例えば、スクラロース、サッカリン、アスパルテーム、アセスルフェームＫ、ネオテーム等）、有機及び無機充填剤（例えば、穀物、加工穀物、ポン菓子、マルトデキストリン、デキストロース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、コーンスターチ、ラクトース、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、微粉砕セルロース等）、結合剤（例えば、ポビドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び結合剤の他の改質セルロース型、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、デンプン系結合剤、アラビアガム、レシチン等）、ｐＨ調整剤又は緩衝剤（例えば、金属水酸化物、好ましくは、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムなどのアルカリ金属水酸化物、及び金属炭酸塩などの他のアルカリ金属緩衝剤、好ましくは、炭酸カリウム又は炭酸ナトリウム、又は重炭酸ナトリウムなどの金属重炭酸塩等）、着色剤（例えば、キャラメル着色剤、酸化チタン等を含む染料及び色素）、湿潤剤（例えば、グリセリン、プロピレングリコール等）、口腔ケア添加剤（例えば、タイム油、ユーカリ油、及び亜鉛）、防腐剤（例えば、ソルビン酸カリウム等）、シロップ（例えば、ハチミツ、高フルクトース含有コーンシロップ等）、崩壊補助剤（例えば、微結晶セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、グルコール酸ナトリウムデンプン、前処理ゼラチン化コーンスターチ等）、風味剤及び香料混合物、酸化防止剤、及びこれらの混合物が含まれる。所望の場合、参照により本明細書に組み込まれる、Ｄｕｂｅらの米国特許出願公開第２００８／００２９１１０号に記載されるようにマイクロカプセル化され得る。加えて、例示的なカプセル化された添加剤は、例えば、先に参照により本明細書に組み込まれた、ＡｔｃｈｌｅｙのＷＯ２０１０／１３２４４４  Ａ２に記載されている。
【実施例】
【０１０３】
実験
本発明は、以下の実施例によって完全に説明されるが、この実施例は、本発明を説明するために記載されているもので、これらを限定するものとして解釈されるべきではない。別段の指示がない限り、全ての部及びパーセントは重量に基づき、別段の指示がない限り、全ての重量パーセントは、乾燥重量基準で表わされ、すなわち、水分含量を除外することを意味する。
【０１０４】
ダーク・エア・キュアードタバコを、収穫の５時間前に、プロバイオティクス細菌溶液、及び酵素溶液、ならびに／もしくは３％の塩化ナトリウムの塩溶液のうちの１つ以上で処理する。溶液は、背負式噴霧器を用いて塗布する。溶液は、推奨される栽植距離を用いて、１エーカー当たり１００ガロンの溶液を基準としており、用量／植物は以下に提供される。
【０１０５】
処理済みのタバコを収穫し、中央の葉柄サンプルを、細菌計数、腸内細菌計数、及びラクトバチルス計数について分析する。各々の処理済みのタバコサンプル１０グラムを、バターフィールドのリン酸塩緩衝液中に配置し、水で１０−２〜１０−８倍に希釈する。処理済みのタバコサンプル希釈液を、総好気性細菌計数については、平板計数寒天培地（ＰＣＡ）に、グラム陰性細菌計数については、バイオレットレッド胆汁寒天培地（ＶＲＢＡ）に、嫌気性細菌（ラクトバチルス）計数については、ＭＲＳ培地に加える。倍率下で見ることができる細菌コロニーの数を計数し、１グラム当たりのコロニー形成単位（ＣＦＵ／ｇ）を推定する。
【０１０６】
ＣＶＳから入手可能なプロバイオティクス溶液（６．００×１０９ＣＦＵ／植物を提供するよう調製された溶液）で処理されたタバコは、９１％の処理後の総細菌減少、４０％の処理後の腸内細菌減少、及び４６％の処理後のラクトバチルス減少（全てが、処理前後の総細菌計数に基づく）を示した。
【０１０７】
Ｗａｌｇｒｅｅｎｓから入手可能なプロバイオティクス溶液（６．４０×１０９ＣＦＵ／植物を提供するよう調製された溶液）で処理されたタバコは、９６％の処理後の総細菌減少、５８％の処理後の腸内細菌減少、及び４２％の処理後のラクトバチルス減少（全てが、処理前後の総細菌計数に基づく）を示した。
【０１０８】
界面活性剤（Ｄｒｅｘｅｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＣｏｍｐａｎｙからのＳｕｒｆ−Ａｃ（登録商標））と組み合わせた、ＣＶＳから入手可能なプロバイオティクス溶液（６．００×１０９ＣＦＵ／植物を提供するよう調製された溶液）で処理されたタバコは、９５％の処理後の総細菌減少、６６％の処理後の腸内細菌減少、及び５７％の処理後のラクトバチルス増加（全てが、処理前後の総細菌計数に基づく）を示した。
【０１０９】
ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）プロバイオティクス溶液（６．６４×１０１０ＣＦＵ／植物を提供するよう調製された溶液）で処理されたタバコは、９５％の処理後の総細菌減少、７５％の処理後の腸内細菌減少、及び４３％の処理後のラクトバチルス増加（全てが、処理前後の総細菌計数に基づく）を示した。
【０１１０】
ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）プロバイオティクス溶液（２．７２×１０１０ＣＦＵ／植物を提供するよう調製された溶液）で処理されたタバコは、９３％の処理後の総細菌減少、２０％の処理後の腸内細菌減少、及び３３％の処理後のラクトバチルス減少（全てが、処理前後の総細菌計数に基づく）を示した。
【０１１１】
ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔｉｓ）プロバイオティクス溶液（４．１６×１０１０ＣＦＵ／植物を提供するよう調製された溶液）で処理されたタバコは、８２％の処理後の総細菌減少、２５％の処理後の腸内細菌減少、及び１６％の処理後のラクトバチルス減少（全てが、処理前後の総細菌計数に基づく）を示した。
【０１１２】
ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）プロバイオティクス溶液（５．２０×１０９ＣＦＵ／植物を提供するよう調製された溶液）で処理されたタバコは、９７％の処理後の総細菌減少、３９％の処理後の腸内細菌減少、及び４００％を超える処理後のラクトバチルス増加（全てが、処理前後の総細菌計数に基づく）を示した。
【０１１３】
ＰｒｅｖｅｎｔＡＳｅ（商標）酵素溶液（３．２ｍＬのアスパラギナーゼ／植物を提供するよう調製された溶液）で処理されたタバコは、８８％の処理後の総細菌減少、７５％の処理後の腸内細菌減少、及び４３％の処理後のラクトバチルス減少（全てが、処理前後の総細菌計数に基づく）を示した。
【０１１４】
３％のＮａＣｌ溶液で処理されたタバコは、９４％の処理後の総細菌減少、７６％の処理後の腸内細菌減少、及び４００％を超える処理後のラクトバチルス増加（全てが、処理前後の総細菌計数に基づく）を示した。
【０１１５】
このデータは、全ての処理溶液が、処理済みのタバコ材料に伴う総細菌の減少を提供したことを示している（処理前のタバコ材料と比べて）。塩（ＮａＣｌ）で処理されたタバコ材料は、望ましいラクトバチルス細菌において有意な増加を示した。この所見は、かかるＮａＣｌ（及び他の塩）で処理されたタバコ材料を、さらなる発酵プロセスに及びかかる発酵されたタバコ材料の無煙タバコ製品への組み込みに特に適したものにすることができる。さらに、ラクトバチルス・ヘルベティカスで処理されたタバコ材料は、処理後のラクトバチルス細菌における実質的な増加を示した。一部の増加は、処理溶液中のラクトバチルス細菌の存在に起因すると予想され得るが、この増加は、他のラクトバチルスプロバイオティクス溶液で処理されたタバコ材料について留意されたものよりも非常に高い（例えば、ラクトバチルス・プランタルムで処理されたタバコは、ラクトバチルス細菌においてわずか４３％の増加を示し、ラクトバチルス・アシドフィルスで処理されたタバコは、ラクトバチルス細菌において３３％の減少を示した）。結果的に、ラクトバチルス・ヘルベティカスで処理されたタバコ材料は、さらなる発酵プロセスに及び同様にかかる発酵されたタバコ材料の無煙タバコ製品への組み込みに特に十分に適するものであり得る。
【０１１６】
上述の説明で提示された教示内容の利益を有する、本発明の多くの変更形態及び他の実施形態が、本発明が関連する技術分野の当業者には思い浮かぶことであろう。したがって、本発明は、開示された特定の実施形態に限定されるものではなく、その変更形態及び他の実施形態は、添付の特許請求の範囲内に含まれるものであることが理解されるべきである。特定の用語が本明細書で使用されているが、これらは一般的意味及び説明的意味で使用されているにすぎず、制限の目的ではない。
【図１】
0006396423.tif 000002
【図２】
0006396423.tif 000003