(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
カボザンチニブの単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩であって、前記単離メタボライトが、
【化６７】
0006389238.tif 000087
【化６８】
0006389238.tif 000088
から選択される化合物であり、ＧＡがグルクロン酸部分である、単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
【請求項２】
【化５３】
0006389238.tif 000089
から選択される、請求項１の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
【請求項３】
【化５４】
0006389238.tif 000090
である、請求項１の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
【請求項４】
【化５５】
0006389238.tif 000091
である、請求項１の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
【請求項５】
【化５６】
0006389238.tif 000092
である、請求項１の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
【請求項６】
【化５７】
0006389238.tif 000093
である、請求項１の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
【請求項７】
【化５８】
0006389238.tif 000094
である、請求項１の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
【請求項８】
【化５９】
0006389238.tif 000095
である、請求項１の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
【請求項９】
【化６０】
0006389238.tif 000096
である、請求項１の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
【請求項１０】
【化６１】
0006389238.tif 000097
である、請求項１の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
【請求項１１】
無統制な、異常な、及び／または不必要な細胞活性に関連する病気あるいは疾患を治療するための組成物であって、請求項１から１０の化合物またはそれの医薬的に許容可能な塩を含み、前記病気あるいは疾患が癌である、組成物。
【請求項１２】
【化６２】
0006389238.tif 000098
からなるグループから選択される化合物、または、その医薬的に許容可能な塩と、少なくとも一つの医薬的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
【請求項１３】
経口投与される、請求項１２の組成物。
【請求項１４】
【化６３−１】
0006389238.tif 000099
【化６３−２】
0006389238.tif 000100
から選択される化合物であって、前記化合物内のＧＡがグルクロン酸部分である前記化合物、または、それの医薬的に許容可能な塩。
【請求項１５】
【化６４】
0006389238.tif 000101
から選択される、請求項１４の化合物、または、それの医薬的に許容可能な塩。
【請求項１６】
カボザンチニブのメタボライトの識別方法であって、
哺乳動物における前記哺乳動物の組織または体液内のＮ−（４−｛［６，７−ビス（メンチルオキシ）キノリン−４−イル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）サイクロプロペイン−１，１−ジカルボキシアミドのメタボライトのレベルまたは濃度を検出あるいは測定することを含み、
前記カボザンチニブが哺乳動物へ投与されており、
前記メタボライトが、
【化６５−１】
0006389238.tif 000102
【化６５−２】
0006389238.tif 000103
からなるグループから選択され、これら化合物内のＧＡがグルクロン酸部分である、前記識別方法。
【請求項１７】
前記メタボライトが、
【化６６】
0006389238.tif 000104
から選択される、請求項１６の方法。
【請求項１８】
前記体液が、血漿、胆汁、尿及び糞便からなるグループから選択される、請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権の主張
本出願は、２０１３年３月１５日に出願された米国特許出願番号第６１／７９２，４１３号の優先権を主張する。上記出願の全内容は、本文に援用される。
本開示は、Ｎ−（４−｛［６，７−ビス（メンチルオキシ）キノリン−４−イル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）サイクロプロペイン−１，１−ジカルボキシアミド、ｃ−Ｍｅｔ阻害剤のメタボライトに関する。
【背景技術】
【０００２】
伝統的に、癌の治療の劇的な向上は、新規メカニズムで作用する治療薬の識別に関連している。癌治療に活用可能な一つのメカニズムは、プロテインキナーゼ活性の調整である。その理由は、プロテインキナーゼ活性化を介しての信号伝達が、腫瘍細胞の特徴の多くの原因となっているからである。プロテインキナーゼ信号伝達は、例えば、甲状腺、胃、頭頸部、肺、胸、前立腺及び結腸直腸における癌だけでなく、脳腫瘍細胞の成長及び増殖においても特異的な関連がある。
【０００３】
プロテインキナーゼは、レセプター型または非レセプター型に分類できる。レセプター型チロシンキナーゼは、多様な生物活性を有する多数の膜横断レセプターからなる。レセプター型チロシンキナーゼに関する詳細な議論については、Ｐｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＤＮ＆Ｐ７（６）：３３４−３３９，１９９４を参照。プロテインキナーゼと、それらのリガンドが、種々の細胞活性で重要な役割を演ずるので、プロテインキナーゼ酵素活性に関する規制排除は、細胞特性の改変、例えば癌に関連する無秩序な細胞増殖などにつながる可能性がある。腫瘍学的徴候に加えて、改変キナーゼ・シグナリングは、例えば、免疫学的疾患、心血管疾患、炎症性疾患及び変性疾患を含む数多くの他の病理学的疾患に関係している。したがって、プロテインキナーゼは、小型分子薬剤を発見するための魅力的なターゲットである。特に抗血管新生及び増殖抑制作用に関する小型分子調整のための魅力的なターゲットとしては、レセプター型チロシンキナーゼＲｅｔ、ｃ−Ｍｅｔ及びＶＥＧＦＲ２がある。
【０００４】
キナーゼｃ−Ｍｅｔは、Ｍｅｔ、Ｒｏｎ及びＳｅａを含むヘテロ二量体レセプター・チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）のサブファミリーの原型メンバーである。ｃ−Ｍｅｔのための内在性リガンドは、血管新生の強力な誘発因子の、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）である。ｃ−ＭｅｔへのＨＧＦの結合は、自己リン酸化を介するレセプターの活性化を誘発し、レセプター依存性シグナリングの増加に至るため、細胞の増殖及び侵入を促進する。抗ＨＧＦ抗体またはＨＧＦ拮抗剤は、生体内における腫瘍転移を阻止することが示されている（Ｍａｕｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００２，１３，４１−５９（サイトカイン及び成長因子のレビュー）を参照）。ｃ−Ｍｅｔ、ＶＥＧＦＲ２及び／またはＲｅｔの過剰発現は、多種多様な腫瘍タイプ、例えば、胸部、大腸、腎臓、肺、扁平細胞骨髄性白血病、血管腫、黒色腫及び（グリア芽細胞腫、巨細胞グリア芽細胞腫、神経膠肉腫、オリゴデンドログリア構成要素を有するグリア芽細胞腫を含む）星状細胞腫瘍で示されている。Ｒｅｔタンパク質は、チロシンキナーゼ活性のある膜横断レセプターである。Ｒｅｔは、甲状腺髄様癌のほとんどの家族性形態において突然変異する。これらの変異は、Ｒｅｔのキナーゼ機能を活性化し、それを発癌性形態へ変換する。
【０００５】
したがって、上記説明のＲｅｔ、ｃ−Ｍｅｔ及びＶＥＧＦＲ２を特に含むキナーゼの信号伝達を特に阻止、規制及び／または調整する小型分子化合物が、異常な細胞増殖及び血管新生に関連する病状を治療あるいは予防するための手段として、特に望ましい。そのような小型分子の一つが、ＸＬ１８４であり、Ｎ−（４−｛［６，７−ビス（メンチルオキシ）キノリン−４−イル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）サイクロプロペイン−１，１−ジカルボキシアミドとして、また、名称カボザンチニブ（ＣＯＭＥＴＲＩＱ（商標））などで知られている。これは、カボザンチニブのＬ−リンゴ酸塩である。カボザンチニブは、次の化学構造を持つ。
【化１】
0006389238.tif 000002
カボザンチニブは、２０１２年１１月に米国で、進行性転移性甲状腺髄様癌の治療のための認可を受けた。カボザンチニブの他の臨床試験が進行中である。
ＷＯ２００５／０３０１４０は、カボザンチニブの合成（実施例４８）を説明し、また、キナーゼの信号伝達を阻止、規制及び／または調整するこの分子の治療活性を開示する（アッセイ、表４、エントリ２８９）。実施例４８は、ＷＯ２００５／０３０１４０の段落［０３５３］に記載されている。
現在も、カボザンチニブに類似する活性プロフィールを示す化合物を識別する必要はある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２００５／０３０１４０号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｐｌｏｗｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＤＮ＆Ｐ７（６）：３３４−３３９，１９９４
【非特許文献２】Ｍａｕｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００２，１３，４１−５９
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、これらのニーズ及び他のニーズを満たすための、カボザンチニブのメタボライトに関する。
【０００９】
この態様の一つの実施形態におけるメタボライトは、式Ｉａの化合物であり、
【化２】
0006389238.tif 000003
次の特質の一つ以上を持つ。
ａ）Ｒ１またはＲ２の一方が、Ｈ、ＳＯ３Ｈまたはグルクロン酸部分であり、他方がＭｅである。
ｂ）Ｒ３は、ＯＨまたはＯＳＯ３Ｈである。
ｃ）Ｒ４は、Ｒ４がＯ−である場合にＮがＮ＋であるという条件で、Ｏ−である。
ｄ）Ｒ５は、ＯＨまたはＯＳＯ３Ｈである。
ｅ）Ｒ６は、ＯＨまたはＯＳＯ３Ｈである。
【００１０】
この態様のもう一つの実施形態におけるメタボライトは、式Ｉｂの化合物である。
【化３】
0006389238.tif 000004
式中、
ａ）Ｒ１またはＲ２はＭｅである。あるいは、Ｒ１またはＲ２の一方がＨ、ＳＯ３Ｈあるいはグルクロン酸部分であり、他方がＭｅである。
ｂ）Ｒ３は、Ｈ、ＯＨまたはＯＳＯ３Ｈである。
ｃ）Ｒ４は、Ｒ４がＯ−である場合にＮがＮ＋であるという条件で、不在であるか、あるいはＯ−である。
ｄ）Ｒ６は、ＨまたはＭｅである。
【００１１】
この態様のもう一つの実施形態にけるメタボライトは、式Ｉｃの化合物である。
【化４】
0006389238.tif 000005
式中、
ａ）Ｒ５は、ＯＨまたはＯＳＯ３Ｈである。
ｂ）Ｒ６は、ＯＨまたはＯＳＯ３Ｈである。及び
ｃ）Ｒ７は、Ｈ、ＳＯ３Ｈまたはグルクロン酸部分である。
【００１２】
一つの態様において、本発明は、式Ｉａ、ＩｂまたはＩｃを持つカボザンチニブの単離メタボライトに関する。
【００１３】
一つの実施形態におけるカボザンチニブのメタボライトは、以下のものから選択される。
【化５−１】
0006389238.tif 000006
【化５−２】
0006389238.tif 000007
これらにおけるＧＡは、例えば、次のようなグルクロン酸部分である。
【化６】
0006389238.tif 000008
【００１４】
もう一つの態様における本発明は、以下のものから選択される化合物に関する。
【化７−１】
0006389238.tif 000009
【化７−２】
0006389238.tif 000010
これらにおけるＧＡは、グルクロン酸部分である。
【００１５】
もう一つの態様においては、本発明は、無統制な、異常な、及び／または不必要な細胞活性に関連する病気あるいは疾患の治療方法に関する。その方法は、カボザンチニブのメタボライトである化合物を、それを必要とする哺乳動物へ治療的に有効な量で投与することからなる。一つの実施形態におけるメタボライトは、以下のものから選択される。
【化８−１】
0006389238.tif 000011
【化８−２】
0006389238.tif 000012
または、それらの医薬的に許容可能な塩。
【００１６】
もう一つの態様においては、本発明は、カボザンチニブの治療的に活性なメタボライトと少なくとも一つの医薬的に許容可能な担体からなる医薬組成物に関する。一つの実施形態におけるメタボライトは、以下のものから選択される。
【化９】
0006389238.tif 000013
または、それらの医薬的に許容可能な塩と少なくとも一つの医薬的に許容可能な担体。
【００１７】
もう一つの態様における本発明は、以下のものからなる、カボザンチニブのメタボライトの識別方法に関する。
カボザンチニブを哺乳動物へ投与すること。
哺乳動物における、哺乳動物の組織または体液におけるカボザンチニブのメタボライトのレベルまたは濃度を検出あるいは測定すること。
この場合、メタボライトは、以下のものからなるグループから選択される。
【化１０】
0006389238.tif 000014
これらにおけるＧＡは、グルクロン酸部分である。
【００１８】
上記化合物は、さらに、他の方法、例えば、テスト化合物のキナーゼ阻害力を判定するためのバイオアッセー法に、または関連方法の内部標準として使用されてもよい。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
一つの態様における本発明は、カボザンチニブのメタボライト、特にヒト・メタボライトに関する。したがって、それらメタボライトを、以下、「ヒト・メタボライト」と呼ぶ。カボザンチニブのヒト・メタボライトは、本文に説明するものをも含んで、投与及び監視に関する臨床プロトコルに従ってカボザンチニブを摂取または投与した後のヒト対象者の体内で形成されたカボザンチニブのメタボライトを含む。種々の実施形態におけるその用語は、その種が特定のトライアルで検出あるいは分析されるか否かを問わず、生体内で形成された分子種を包含する。いくつかのメタボライトは、代謝に関わるチトクロームＰ４５０及びＵＧＴ酵素を含んで、異なる遺伝子構成と種々の酵素の存在及び活性を反映するため、特定な個人に特有なものであるということをも想定している。したがって、ヒト・メタボライトは、人体で形成されるすべての、そのようなメタボライトをカバーする。
【００２０】
いくつかのヒト・メタボライトを、スキーム１に示す。これらのヒト・メタボライトは、カボザンチニブの臨床試験中に識別されたもので、メタボリックプロファイリングによれば、特にヒト血漿、尿及び糞便から、スキーム１の化合物Ｉとして現れる。
【化１１】
0006389238.tif 000015
【００２１】
種々の実施形態においては、スキーム１に示したものを含んで、カボザンチニブ・メタボライトは、本分野の技術者が利用可能な方法によって、体組織及び体液から単離される、及び／または合成的に調製される。体組織及び体液サンプルに対して種々の分離プロセスを実行可能であり、その後のさらなる分析、例えば、核磁気共鳴、ガス・クロマトグラフィー（ＧＣ）、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）及びマススペクトル分析にサンプルを提供できる。そのようなサンプルにおけるメタボライトは、他のメタボライトのいずれの存在をも本質的に欠いている組成物内に含まれる。メタボライトの存在は、例えば、放射性同位元素からの核崩壊の測定、屈折率の測定、炎電離、磁場における電離及び偏向、紫外線（ＵＶ吸収）等の物理的な方法によって定量化できる。
【００２２】
種々の実施形態におけるヒト・メタボライトは、純度の程度が相当高い結晶または溶液形態で提供される。比較的に純度の高い形態で、例えば、８０パーセント以上、９０パーセント以上、９５パーセント以上または９９パーセント以上の純度で化合物を調製する有機合成ルートが利用可能である。本質的に純度１００パーセントの化合物を提供するために、再結晶や他の精製法を実行することもできる。そのような合成方法及び精製技術は、本技術において既知である。
【００２３】
種々の実施形態におけるメタボライトは、実質的に純粋な形態で提供される。「実質的に純粋な」は、メタボライトが、ＦＤＡの承認を得るのに十分に純粋であり、不純物または他の物質を本質的に全く含まないことを意味する。代替的に、「実質的に純粋な」は、安全性、効果、安定性及び他の望ましい特性に関して、化合物の特性に悪い影響あるいは容認し難い影響を及ぼさない不純物のレベルを意味する。
【００２４】
一つの実施形態における本発明は、スキーム１に表すような単離メタボライトに関する。この実施形態及び他の実施形態におけるメタボライトは、以下のものから選択される。
【化１２−１】
0006389238.tif 000016
【化１２−２】
0006389238.tif 000017
これらにおけるＧＡは、グルクロン酸部分である。
【００２５】
より詳しくは、メタボライトは、以下のものから選択される。
【化１３】
0006389238.tif 000018
【００２６】
特定な実施形態における単離メタボライトは、
【化１４】
0006389238.tif 000019
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００２７】
もう一つの特定な実施形態における単離メタボライトは、
【化１５】
0006389238.tif 000020
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００２８】
もう一つの特定な実施形態における単離メタボライトは、
【化１６】
0006389238.tif 000021
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００２９】
もう一つの特定な実施形態における単離メタボライトは、
【化１７】
0006389238.tif 000022
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００３０】
もう一つの特定な実施形態における単離メタボライトは、
【化１８】
0006389238.tif 000023
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００３１】
もう一つの特定な実施形態における単離メタボライトは、
【化１９】
0006389238.tif 000024
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００３２】
もう一つの特定な実施形態における単離メタボライトは、
【化２０】
0006389238.tif 000025
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００３３】
もう一つの特定な実施形態における単離メタボライトは、
【化２１】
0006389238.tif 000026
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００３４】
本発明の方法は、ヒト等の哺乳動物へカボザンチニブまたはカボザンチニブ・メタボライトを投与すること、及び哺乳動物の組織または体液中のメタボライトの一つの濃度レベルを測定することによって、メタボライトを検出することを含む。体液は、限定せずに、血液血漿、胆汁、尿及び糞便を含み、組織は、限定せずに、肝ミクロソーム、肝細胞及び灌流肝臓を含む。種々の実施形態におけるメタボライトは、組織または体液中のメタボライト検出または定量化を支援するよう、種々の同位元素で同位元素標識される。したがって、メタボライトは、１４Ｃまたは３Ｈ（トリチウム）で標識したものを含み、それらの核崩壊生成物から、特定なメタボライトを検出する、あるいは識別する。メタボライトは、また、１３Ｃまたは２Ｈ（ジュウテリウム）で標識したメタボライトを含み、その化合物の核磁気共鳴や質量分光分析を容易にする。本文中で用いるジュウテリウム標識は、ジュウテリウムで置換されたことを意味し、また、トリチウム標識は、トリチウムで置換されたことを意味する。種々の他の実施形態におけるスキーム１に示すような本発明のメタボライトは、また、それらの塩、互変異性体及び（１４Ｃ、１３Ｃ、３Ｈまたは２Ｈを含む）同位元素標識変異体を含む。
【００３５】
より詳しくは、一つの実施形態における本発明は、以下のものからなる、カボザンチニブのメタボライトの識別方法を提供する。
カボザンチニブを哺乳動物へ投与すること。
哺乳動物における、哺乳動物の組織または体液におけるカボザンチニブのメタボライトのレベルまたは濃度を検出あるいは測定すること。
この場合、メタボライトは、以下のものからなるグループから選択される。
【化２２−１】
0006389238.tif 000027
【化２２−２】
0006389238.tif 000028
これらにおけるＧＡは、グルクロン酸部分である。この方法では、体液は、血漿、胆汁、尿及び糞便からなるグループから選択される。これらの方法及び他の方法では、メタボライトは、同位体標識及びＨＰＬＣ／ＭＳを含む従来の解析手法を用いて識別される。
【００３６】
より詳しくは、メタボライトは、以下のものから選択される。
【化２３】
0006389238.tif 000029
【００３７】
本発明のもう一つの態様は、キナーゼの生体内活性の調整方法であり、この方法は、対象者へ、以下のものから選択された化合物であるカボザンチニブ・メタボライトを、有効な量投与することからなる。
【化２４−１】
0006389238.tif 000030
【化２４−２】
0006389238.tif 000031
または、そのような化合物からなる医薬組成物。
【００３８】
この態様の一つの実施形態におけるキナーゼの生体内活性の調整は、前記キナーゼの抑制からなる。
【００３９】
この態様のもう一つの実施形態におけるキナーゼは、ｃ−Ｍｅｔ、ＲＥＴ、ＫＤＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｆｌｔ−３及びｆｌｔ−４の少なくとも一つである。
【００４０】
もう一つの実施形態におけるキナーゼは、ｃ−Ｍｅｔである。
【００４１】
本発明のもう一つの態様は、無統制な、異常な、及び／または不必要な細胞活性に関連する病気あるいは疾患の治療方法に関する。この方法は、以下のものから選択された化合物であるカボザンチニブ・メタボライトを、それを必要とする哺乳動物へ、治療的に有効な量投与することからなる。
【化２５】
0006389238.tif 000032
または、そのような化合物からなる医薬組成物。
【００４２】
特定な実施形態における化合物は、
【化２６】
0006389238.tif 000033
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００４３】
もう一つの特定な実施形態における化合物は、
【化２７】
0006389238.tif 000034
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００４４】
もう一つの特定な実施形態における化合物は、
【化２８】
0006389238.tif 000035
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００４５】
もう一つの特定な実施形態における化合物は、
【化２９】
0006389238.tif 000036
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００４６】
もう一つの特定な実施形態における化合物は、
【化３０】
0006389238.tif 000037
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００４７】
もう一つの特定な実施形態における化合物は、
【化３１】
0006389238.tif 000038
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００４８】
もう一つの特定な実施形態における化合物は、
【化３２】
0006389238.tif 000039
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００４９】
もう一つの特定な実施形態における化合物は、
【化３３】
0006389238.tif 000040
または、それの医薬的に許容可能な塩である。
【００５０】
もう一つの態様においては、本発明は、ｃ−Ｍｅｔ、ＫＤＲ、ＲＥＴ、ｃ−Ｋｉｔ、ｆｌｔ−３及びｆｌｔ−４から選択されたキナーゼの活性調節因子のスクリーニング方法に関する。この方法は、
【化３４−１】
0006389238.tif 000041
【化３４−２】
0006389238.tif 000042
から選択された化合物であるカボザンチニブ・メタボライトと、少なくとも一つの候補剤を組み合わせること、及び、前記キナーゼの活性に対する候補剤の影響を測定することからなる。
【００５１】
本発明のもう一つの態様は、細胞内における増殖活性の阻止方法に関する。この方法は、一つの細胞または複数の細胞へ、化合物からなる組成物を、有効な量投与することからなる。その化合物は、以下のものから選択されたカボザンチニブ・メタボライトである。
【化３５】
0006389238.tif 000043
【００５２】
本発明のもう一つの態様は、ｃ−Ｍｅｔ、ＫＤＲ、ＲＥＴ、ｃ−Ｋｉｔ、ｆｌｔ−３及びｆｌｔ−４から選択されたキナーゼの活性調節因子のスクリーニング方法である。この方法は、化合物と少なくとも一つの候補剤を組み合わせること、及び前記キナーゼの活性に対する候補剤の影響を測定することからなる。この場合の化合物は、以下のものから選択されたカボザンチニブ・メタボライトである。
【化３６】
0006389238.tif 000044
【００５３】
ｃ−ＭＥＴまたは他のキナーゼに対して阻害力を示す上記の単離メタボライトは、ヒトまたは他の哺乳動物への投与に適切な剤形へ調製できる。いくつかの実施形態におけるメタボライトは、従来の療法あるいはカボザンチニブによる療法に比べ、好適な毒性プロフィールを示してもよい。
【００５４】
ｃ−ＭＥＴの阻害剤として、いくつかの実施形態におけるメタボライトは、癌を治療するために用いられる。「癌」は、胸部、大腸、腎臓、肺、扁平細胞骨髄性白血病、血管腫、黒色腫、星細胞腫及びグリア芽細胞腫を含む腫瘍タイプであり、また、下記の他の細胞増殖病状を含むが、これらに限らない。心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫及び奇形腫。肺：気管支癌（扁平細胞、未分化型小細胞、未分化型大細胞、腺癌）、肺胞（細気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨性腫様過誤腫、イネソテリオーマ。胃腸：食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（管状腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、類癌腫、ビポーマ）、小腸（腺癌、リンパ腫、類癌腫、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）。尿生殖路：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍［腎芽細胞腫］、リンパ腫、白血病、腎細胞癌）、膀胱及び尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）前立腺（腺癌、肉腫、前立腺の小細胞癌）、精巣（精上皮腫、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛膜癌、肉腫、間質細胞癌、線維腫、線維腺腫、類腺腫瘍、脂肪腫）。肝臓：肝癌（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞性腺腫、血管腫。骨：骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網肉腫）、悪性巨細胞腫脊索腫、骨軟骨腫（骨軟骨外骨腫）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫及び巨細胞腫。神経系：頭蓋（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星細胞腫、髄芽細胞腫、膠腫、上衣腫、胚細胞腫［松果体腫］、多形神経膠芽腫、希突起膠細胞腫、シュワン細胞腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍、）脊髄神経線維腫、髄膜腫、膠腫、肉腫。婦人科：子宮（子宮内膜癌）、子宮頸管（子宮頸癌、腫瘍前頸部異形成）卵巣（卵巣癌［漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、分類不能癌］、顆粒層・卵胞膜細胞腫瘍、セルトリー・ライデッグ細胞腫、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、陰門（扁平上皮癌、上皮内癌腫、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胎児性横紋筋肉腫）、卵管（癌）。血液学的：血液（骨髄性白血病［急性及び慢性］、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫［悪性リンパ腫］。皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、ほくろ形成異常母斑症、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬。副腎：神経芽細胞腫、及び甲状腺髄様癌を含む甲状腺癌。したがって、本文の用語「癌性細胞」は、上記症状のいずれか一つに冒された細胞を含む。
【００５５】
一つの実施形態における癌は、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、甲状腺髄様癌、肝癌、胃腸癌、膵癌、骨癌、血液癌、皮膚癌、腎臓癌、乳癌、大腸癌及び卵管癌から選択される。
【００５６】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、卵巣癌である。
【００５７】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、前立腺癌である。
【００５８】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、肺癌である。
【００５９】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、甲状腺髄様癌である。
【００６０】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、肝癌である。
【００６１】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、胃腸癌である。
【００６２】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、膵癌である。
【００６３】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、骨癌である。
【００６４】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、血液癌である。
【００６５】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、皮膚癌である。
【００６６】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、腎臓癌である。
【００６７】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、乳癌である。
【００６８】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、大腸癌である。
【００６９】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、卵管癌である。
【００７０】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、肝癌であり、この肝癌は、肝細胞癌、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫または血管腫である。
【００７１】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、胃腸癌であり、この胃腸癌は、扁平上皮癌、腺癌または平滑筋肉腫である食道癌、癌腫またはリンパ腫である胃癌、管状腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、類癌腫またはビポーマである膵臓癌、腺癌、リンパ腫、類癌腫、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫である小腸癌、または腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫または平滑筋腫である大腸癌である。
【００７２】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、膵臓癌であり、この膵臓癌は、管状腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、類癌腫またはビポーマである。
【００７３】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、骨癌であり、この骨癌は、骨肉腫、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性細網肉腫、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫脊索腫、骨軟骨外骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫または類骨骨腫である。
【００７４】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、血液癌であり、この血液癌は、骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫または骨髄異形成症候群である。
【００７５】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、皮膚癌であり、この皮膚癌は、悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌またはカポジ肉腫である。
【００７６】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、腎腫瘍または腎細胞癌である。
【００７７】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、乳癌である。
【００７８】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、大腸癌腫瘍である。
【００７９】
もう一つの実施形態における病気あるいは疾患は、卵管癌腫である。
【００８０】
代替的に、または追加的に、メタボライトは、例えば、副作用、毒性、代謝、摂取、生体利用性、及び排泄ルート等の非薬理学的影響を研究する目的で、上述の病状の全くない対象者または試験動物へ投与される。
【００８１】
種々の実施形態におけるメタボライトは、経口、直腸、鼻腔内、肺内（例えば、吸入によって）、または非経口投与（例えば、皮内、経皮、皮下、筋肉内あるいは静脈内）ルートを含む適切なルートによって投与される。経口投与は、いくつかの実施形態において好適である。投薬は、食物の有無に関わらず、すなわち断食または非絶食状態で可能である。剤形の非限定的な例は、非被覆あるいは被覆錠剤、カプセル、粉末、顆粒、坐薬、溶液、軟膏、クリーム及びスプレーを含む。
【００８２】
経口投与に適切な本発明の調合物は、各々が所定量の有効成分を含む例えば、カプセル、カシェ剤または錠剤などの別々のユニットとして、粉末または顆粒として、水性液体または非水溶液体の溶液あるいは懸濁液として、または水中油型液体エマルション、あるいは油中水型液体エマルションとして調製される。活性成分はまた大形丸剤、舐剤あるいはペーストとしても提供できる。
【００８３】
錠剤は、オプションとして一つ以上の副成分を含んで、圧縮または成形によって形成される。圧縮錠剤は、例えば、粉末または顆粒などの流動性形態の有効成分を適切な機械内で圧縮することによって調製されてもよい。また、オプションとして、結合剤、潤滑剤、不活性希釈液、防腐剤、界面活性剤または分散剤と混合されてもよい。成形錠剤は、不活性希釈液で湿らせた粉末状活性成分の混合物を、適切な機械内で成形することによって形成されてもよい。錠剤は、オプションとして被覆してもよいし、切り目を入れてもよい。また、オプションとして、有効成分の緩効性または放出制御を提供するように調製される。一つの実施形態における薬剤の酸加水分解は、腸溶剤皮の使用によって回避される。
【００８４】
腸溶剤皮は、本発明の化合物を保護する手段であり、本発明の化合物へ、胃腸管の一部、典型的に上部消化管、特に胃及び食道がさらされることを回避する。このようにすれば、胃粘膜組織は、吐き気などの副作用を起こす本発明の化合物へさらされることから保護される。また、代替的に、本発明の化合物は、胃腸管の一つ以上の箇所、典型的に上部消化管に存在する状況から保護される。
【００８５】
口腔内への局所投与に適切な調合物は、有効成分を風味ベース、通常、ショ糖及びアカシアまたはトラガカンタに入れたトローチ剤、有効成分を不活性ベース、例えばゼラチン及びグリセリンまたはショ糖及びアカシア等に入れたパステル、及び有効成分を適切な液体担体に含ませた口内洗浄剤を含む。
【００８６】
直腸投与のための調合物は、例えばカカオバターまたはサリチラートを含む適切なベースを有する坐薬としてもよい。
【００８７】
有効成分を単独で投与することも可能であるが、医薬調合物とすることが好ましい。動物及びヒト両方への使用のための調合物は、上記定義のように、少なくとも一つの有効成分と、一つ以上の許容可能な担体とから、また、オプションとして他の薬剤成分からなる。担体は、調合物の他の成分と共存し、投与を受けた者へ生理的に無害である、という点で「許容可能」でなければならない。
【００８８】
種々の実施形態における化合物は、担体系内に調製される。そのような担体系は、既知であり、結合剤、充填剤、防腐剤、崩壊剤、流量調整剤、可塑剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、潤滑剤、溶剤、放出遅延剤（腸溶剤皮を含む）、抗酸化剤及び噴霧剤ガスを含む。特にヒトへの投与のために調製される場合、活性剤は、少なくとも一つの医薬的に許容可能な担体と組み合わされることが好ましい。そのような担体は、既知であり、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール及びＮ−ビニルピロリドン・ポリマーを含むが、これらに限定されるものではない。投与形態は、剤形の０．１％から約９０重量％までを形成する治療的に有効な量の化合物からなる。
【００８９】
本発明の化合物は、従来の方法で選択される従来の担体及び賦形剤で調製される。錠剤は、賦形剤、滑走剤、充填剤、結合剤などを含む。水性調合物は、無菌形態で調製され、経口投与ではない他の様式の送達を意図する場合、概して等張性がある。すべての調合物は、オプションとして、「医薬賦形剤のハンドブック」（１９８６）に記載されているような賦形剤を含む。賦形剤は、アスコルビン酸と他の抗酸化剤、ＥＤＴＡ等のキレート剤、デキストリン、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース等の炭水化物、ステアリン酸などを含む。
【００９０】
調合物は、前述の投与ルートに適切なものを含む。調合物は、好都合にユニット剤形に形成され、薬学における周知の方法で調製されてもよい。技術及び調合物は、概してレミントンの製薬学（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．）に記載されている。そのような方法は、有効成分を、一つ以上の副成分からなる担体と混合するステップを含む。概して、調合物は、液体担体または微粉化固体担体、あるいは、それら両方を有効成分と一様に緊密に混合させることによって調製され、それから、必要に応じて、製品へと成形加工される。
【００９１】
特定な実施形態において、本発明は、
【化３７−１】
0006389238.tif 000045
【化３７−２】
0006389238.tif 000046
から選択された化合物、または、それの医薬的に許容可能な塩であるカボザンチニブ・メタボライト、及び、少なくとも一つの医薬的に許容可能な担体からなる医薬組成物を提供する。
【００９２】
本文に開示の化合物は、技術者に利用可能な方法に従って形成できる。例えば、スキーム２に説明するが、対応するアミン及びカルボン酸からフェノールＣ−１及びＣ−２を形成するのに、ペプチド化学を用いることができる。そのような変形を達成するために、種々のプロセス及び試薬が利用可能であり、例えば、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ６１（２００５）１０８２７−１０８５２に説明がある。代表的な実施例をスキーム２に示す。この実施例の賦活剤は、塩化チオニル、塩化オキサリル等である。対応する酸塩化物は、各々、化合物ＡまたはＢと反応して、フェノールＣ−１またはＣ−２を提供する。トリエチルアミン、アルカリ金属水酸化物などの塩基の存在下における、塩化スルホン酸または三酸化硫黄−トリメチルアミン錯体などの硫化剤によるフェノールＣ−１またはＣ−２の後続反応は、各々、対応する硫酸水素塩２ｂまたは２ａを提供できる。
【化３８】
0006389238.tif 000047
【００９３】
化合物Ａは、スキーム３によって調製した。ベンジルハライド等を用いるＡ−１のベンジル化は、ベンジル保護Ａ−２を提供する。硝酸及び硫酸の混合物を用いるＡ−２のニトロ化は、Ａ−３を提供する。Ａ−３内のニトロ基のアミンＡ−４への還元は、標準ニトロ還元条件、例えば鉄及び酢酸アンモニウムを用いて達成してもよい。蟻酸エチル及び、ナトリウムメトキシド等のアルコキシドによるＡ−４の環化は、Ａ−５を提供する。Ａ−５のオキシ塩化燐を用いる対応塩化物への変換は、Ａ−６を提供する。４アミノ・フェノールとのＡ−６の反応は、Ａ−７を提供する。これは、メタンスルホン酸で脱保護され、化合物Ａを提供する。
【化３９】
0006389238.tif 000048
【００９４】
同様に、化合物Ｂはスキーム４によって調製した。Ｂ−１の脱メチル化は、Ｂ−２を提供する。ベンジルハライドＢｎＸ（ＸはＢｒ、ＣｌまたはＩ等）を用いるＢ−２のベンジル化は、ベンジル保護Ｂ−３を提供する。硝酸及び硫酸の混合物を用いるＢ−３のニトロ化は、Ｂ−４を提供する。Ｂ−４内のニトロ基のアミンＢ−５への還元は、標準ニトロ還元条件、例えば鉄及び酢酸アンモニウムを用いて達成してもよい。蟻酸エチル及び、ナトリウムメトキシド等のアルコキシドによるＢ−５の環化は、Ｂ−６を提供する。Ｂ−６のオキシ塩化燐を用いる対応塩化物への変換は、Ｂ−７を提供する。４アミノ・フェノールとのＢ−７の反応は、Ｂ−８を提供する。これは、化合物Ｂを提供するよう、メタンスルホン酸で脱保護された。
【化４０】
0006389238.tif 000049
【００９５】
フェノール１３及び１６は、化合物７から同様に調製できる。その合成に関しては、ＷＯ２００５／０３０１４０に実施例７３として開示されている。したがって、スキーム５においては、２−アミノ−５−フルオロフェノール（ＣＡＳ登録番号５３９８１−２４−１）との７のカップリングは、１３を提供する。５−アミノ−２−フルオロフェノール（ＣＡＳ登録番号１００３６７−４８−４）との７のカップリングは、１６を提供する。
【化４１】
0006389238.tif 000050
【００９６】
フェノール１３及び１６は、例えば、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム等の強力な水酸化物の存在下で、三酸化硫黄トリメチルアミン錯体などの硫化剤を用いる、あるいはトリエチルアミン等のアミン塩基の存在下で塩化スルホン酸を用いることで、スキーム１に示す対応硫酸塩９及び１２へ容易に変換できる。
【００９７】
フェノール１５ａ及び１５ｂは、ＷＯ２００５／０３０１４０に、実施例４３を調整するために開示されたと類似の方法を使用することによって調製できる。これより、スキーム６においては、トリフレートＤ（ＷＯ２００５／０３０１４０の実施例３３）または塩化物Ａ−６（ＷＯ２００５／０３０１４０の実施例３２）とのフェノールＣ（ＷＯ２００５／０３０１４０の実施例３８）のカップリングは、Ｅを提供する。これは、それから、Ｐｄ触媒水素化分解条件下で脱保護され、化合物１５を生ずる。同様に、トリフレートＦまたは塩化物Ｂ−７とのフェノールＣの反応は、Ｇを提供する。これは、Ｏ−ベンジル脱保護を受け、化合物１５ｂを提供する。
【化４２】
0006389238.tif 000051
【００９８】
Ｎ−オキシド１９は、カボザンチニブの、過酸化物、過酸などの酸化剤との反応によって調製できる。一つの実施形態における酸化剤は、過ホウ酸ナトリウム四水和物である。
【００９９】
以下の非限定的な実施例は、本発明を説明することを意図している。
【実施例】
【０１００】
カボザンチニブ・メタボライトの識別。
この試験の目的は、ヒト血漿、尿及び糞便内のカボザンチニブのメタボライトを捉えて識別することであった。血漿、尿及び糞便サンプルは、健康な男性対象者における、［１４Ｃ］カボザンチニブ（１００μＣｉ）を含むカボザンチニブ（Ｌ−リンゴ酸塩）の単一１７５ｍｇ経口投与後の、カボザンチニブの質量バランス試験から採集した。
試験デザインと、血漿、尿及び糞便の採取。
【０１０１】
８人の男性対象者が試験に参加し、各対象者は、［１４Ｃ］−カボザンチニブ（１００μＣｉ）を含む１７５ｍｇのカボザンチニブ（Ｌ−リンゴ酸塩）の単一経口投与を受けた。メタボライト・プロファイリングのために、８人の対象者から血漿、尿及び糞便サンプルを採集した。
血漿サンプルは、投与前、及び投与後の０．５、１、２、３、４、５、８、１４、２４、７２、１６８、３３６、５０４及び６４８時間に採集した。尿サンプルは、投与前、投与後の０から８時間、８から２４時間、２４時間間隔で４８０時間まで、及び、４８時間を超える間隔で投与後５０４から１１５２時間までのものを採集した。糞便サンプルは、投与前、２４時間間隔で投与後４８０時間まで、及び、４８時間を超える間隔で投与後５０４から１１５２時間までのものを採集した。すべてのサンプルはＱＰＳＬＬＣ（ニューアーク、ＤＥ）へ送り、−７０℃で保管した。十分なレベルの放射能を持つサンプルに対するメタボライト・プロファイリング及び識別のために、放射性流通検出器（ＲＦＤ）に結合したＨＰＬＣ／タンデムＭＳを使用した。
【０１０２】
十分なレベルの放射能を持つ血漿サンプルの放射性定量化のために、ＨＰＬＣ分取後にＴｏｐＣｏｕｎｔＮＸＴ（商標）での計数を行った。この試験では、カボザンチニブとそのメタボライトとを分離するために、三つの（３）ＨＰＬＣ法を用いた。ＨＰＬＣ法１は、異なる時点の、プールした尿及び糞便サンプルと個々の血漿サンプルの分析のために用いた。ＨＰＬＣ法２は、カボザンチニブ硫酸塩と共溶出可能なメタボライトを捜すための薬剤対薬剤相互作用試験からの血漿サンプルの分析に用いた。ＨＰＬＣ法３は、プールした血漿サンプルに対して用いた。
【０１０３】
カボザンチニブ及びメタボライトに関して、６人の対象者からの血漿、尿及び糞便に対する選択サンプルを分析し、報告した。
【０１０４】
２人の対象者からのサンプルは、調査試験に用いた。
テスト品。
【０１０５】
この試験のテスト品は、［１４Ｃ］カボザンチニブ及びカボザンチニブの混合物であった。星印は、［１４Ｃ］標識の位置を示す。［１４Ｃ］標識カボザンチニブは、ＷＯ２００５／０３０１４０に説明のように調製した。ただし、標識のない４ーアミノフェノールの代わりに、［１４Ｃ］標識４ーアミノフェノールを用いた。［１４Ｃ］標識４−アミノフェノールは、例えば、ハルトマン・アナリティック、アメリカン放射性標識ケミカルズまたはフィシャー・サイエンティフィックから、塩酸塩として市販されている。
【化４３】
0006389238.tif 000052
一般的な化学薬品及び標準品。
【０１０６】
蟻酸及び酢酸アンモニウムは、シグマアルドリッチ・ケミカル社（セントルイス、ＭＯ）から得た。アセトニトリル（Ｂ＆Ｊブランド、微量のアルデヒド及びケトンに感度がある適用のために、カルボニルを含まない）、水（Ｂ＆Ｊブランド、ＧＣ、ＨＰＬＣ及び分光測光法のために）、及びメタノール（ＨＰＬＣグレード）は、フィシャー・サイエンティフィック（ピッツバーグ、ＰＡ）から購入した。タイプＩ水は、Ｅｌｇａｓｔａｔ  ＵＨＱ  ＰＳ浄水システムを用いて生成した。非放射性標識メタボライト標準（フルオロアニリン切断生成物、カボザンチニブ硫酸塩及びカボザンチニブＮ−オキシド）は、エグゼリシス社（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ，Ｉｎｃ．）が提供した。
生体サンプル収集。
【０１０７】
血漿、尿及び糞便サンプルは、健康な男性対象者における、［１４Ｃ］カボザンチニブ（１００μＣｉ）を含むカボザンチニブ（Ｌ−リンゴ酸塩）の単一１７５ｍｇ経口投与後の、カボザンチニブの質量バランス試験から採集した。サンプルは、ドライアイスに付けて、セレリオン（リンカーン、ＮＥ）からＱＰＳＬＬＣ（ニューアーク、ＤＥ）へ輸送し、分析まで、−７０℃で保存した。メタボライト・プロファイリング、識別及び放射性定量化に、６人の対象者からのサンプルを用いた。２人の対象者からの血漿サンプルは、共溶出性メタボライトの調査の一部として、ブリッジング試験のみに使用した。
ヒト血漿サンプルの準備及び放射性回収。
【０１０８】
メタボライト・プロファイリング、識別及び放射性定量化のために、６人の対象者に対して、投与後０．５、１、２、３、４、５、８、１４、２４、７２、１６８及び３３６時間に採集した個々の放射性標識血漿サンプルを処理し、分析した。共溶出性メタボライトの調査のためには、投与前、投与後１から７、８から９６、及び１２０から３３６時間の、６人の対象者の非放射性標識血漿サンプルをプールし、処理し、そして分析した。非放射性標識から、ヒト質量バランス試験からの放射性標識血漿サンプルへ、メタボライト・データの橋渡しをするために、ハミルトン・プーリング法を用いて、６人の対象者の各人の投与後０から１６８時間の［１４Ｃ］血漿サンプルをプールし、処理し、そして放射性定量化によって分析した。２人の対象者からの投与後１から１６８時間の［１４Ｃ］血漿サンプルを（等量）プールし、処理し、そして分析した。
血漿抽出及び回収のための最初の方法。
【０１０９】
１人の対象者からの二つの血漿サンプル（投与後４及び７２時間）を、最初の抽出及び回収分析に用いた。質量バランス試験の各血漿サンプルに対する総放射能は、エグゼリシス社が提供したもので、それを１００％と定義した。バイオ・フードの下でサンプルを解凍した後、各血漿サンプルの二つの０．５ｍｌアリクォットを、３量（１．５ｍＬ）のＭｅＯＨ：ＡＣＮ（２０：８０、ｖ／ｖ）へ加え、（５分間）攪拌した。混合物を２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上澄みを清潔なチューブへ移した。二つの追加の、３量のＭｅＯＨ：ＣＡＮ（２０：８０、ｖ／ｖ）で、ペレットを抽出した。混合物を遠心分離し、上澄みを結合させた。２９００ＴＲ液体シンチレーション・カウンター（ＬＳＣ）（パッカード・インスツルメンツ、メリディアン、ＣＴ）で、アリクォットを分析した。抽出回収は、以下のように計算した。
抽出回収（％）＝（上澄み中のＤＰＭ／血漿サンプル中のＤＰＭ）ｘ１００
【０１１０】
抽出からの上澄みは、周囲水槽内の窒素流下で蒸発乾燥させた。残留物を、それから、０．３５から０．５ｍＬのＭｅＯＨ：ＡＣＮ：水（１０：２０：７０、ｖ／ｖ／ｖ）で再構成した。再構成されたサンプルは、１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、アリクォットを、再構成回収のためにＬＳＣによって分析した。
再構成回収（％）＝（再構成溶液中のＤＰＭ／上澄み中のＤＰＭ）ｘ１００
血漿サンプルの準備。
【０１１１】
同じ方法を採用し、サンプルの利用可能な量と放射能レベルに応じて１．０から２ｍｌの血漿サンプルを使用して、放射性標識及び非放射性標識血漿サンプルを抽出した。上澄みは、周囲水槽内の窒素流下で蒸発乾燥させ、残留物を、０．３５から０．５ｍＬのＭｅＯＨ：ＡＣＮ：水（１０：２０：７０、ｖ／ｖ／ｖ）で再構成した。再構成サンプルを、１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。分析のために、上澄みのアリクォットをＨＰＬＣシステムへ注入した。
人尿サンプルの準備及び放射性回収。
【０１１２】
１人の対象者から（投与後０から７２、１６８から１９２及び３１２から３３６時間に）プールした尿サンプルを、３組（各々４ｍＬ）で凍結乾燥し、残留物を、１ｍＬの水：ＡＣＮ：ＦＡ（８０：２０：０．１、ｖ／ｖ／ｖ）中で再構成した。プール尿及び再構成溶液中の放射能を、ＬＳＣを用いて計数し、再構成回収を計算した。メタボライト・プロファイリング、識別及び放射性定量化のために、６人の対象者の各人からの投与前及び三つのプール尿サンプル（投与後０から７２時間、１６８から１９２時間及び３１２から３３６時間）を分析した。各プール尿サンプルは凍結乾燥し、残留物を、水：ＡＣＮ：ＦＡ（８０：２０：０．１、ｖ／ｖ／ｖ）で再構成し、そして再構成サンプルを分析前に１０分間、１５，０００ｒｐｍで遠心分離した。
人尿サンプルの準備及び放射性回収。
【０１１３】
糞便サンプルの抽出回収を評価するために、バイオ・フードの下で、１人の対象者から二つの糞便ホモジェネート・サンプルを解凍した。抽出のために、約５．５から６ｇの糞便ホモジェネートを正確に計量した。糞便ホモジェネートに１５ｍＬのＡＣＮ：ＭｅＯＨ（８０：２０）を加えた。混合物を３分間攪拌し、１０分間３０００ｒｐｍで遠心分離した。上澄みは、清潔なチューブへ移した。抽出プロシージャを、さらに２回繰り返した。すべての三つの抽出からの上澄みを結合させた。混合上澄みの放射能をＬＳＣによって測定した。抽出回収を、次の式を用いて計算した。
抽出回収（％）＝（上澄み内のＤＰＭ／糞便ホモジェネート内のＤＰＭ）ｘ１００
【０１１４】
上澄みを、周囲温度の窒素流の下で濃縮し、残留物を、ＭｅＯＨ：ＡＣＮ：水（１０：２０：７０）で再構成した。再構成回収のために、再構成溶液のアリクォットをＬＳＣで計数した。
再構成回収（％）＝（再構成溶液内のＤＰＭ／上澄み内のＤＰＭ）ｘ１００
総合回収（％）＝抽出回収（％）ｘ再構成回収（％）／１００
【０１１５】
メタボライト・プロファイリング、識別及び放射性定量化のために、６人の対象者の各人から投与前及び三つのプール糞便サンプル（投与後０から７２、１６８から１９２及び３１２から３３６時間）を、抽出回収に関するものと同じプロシージャを用いて抽出した。上澄みを、窒素流の下で乾燥させ、残留物を、水：ＡＣＮ：ＦＡ（８０：２０：０．１、ｖ／ｖ／ｖ）で再構成した。再構成サンプルは、分析前に、１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。
ＨＰＬＣコラム回収。
【０１１６】
ＨＰＬＣ法１を用いることで、すべての放射性構成要素がコラムから効果的に溶出されることを示すために、ＨＰＬＣコラム回収を実行した。尿サンプル（対象者１０４２、投与後２４から４８時間）のアリクォットを、ＨＰＬＣシステムへ、コラムのある状態またはコラムのない状態で注入し、０から３０分の溶離液を、清潔な５０ｍＬ遠心分離管へ採集した。収集後、各々の注入からの溶離液の重量を測定した。ＬＳＣを用いて、２セットのアリクォット（１ｍＬ）を計数した。装着コラムの有無に関わらず、収集した溶離液に含まれる総放射能を計算するために、カウントの平均値を用いた。
コラム回収（％）＝（コラムあり溶離液中のＤＰＭ／コラム無し溶離液中のＤＰＭ）ｘ１００
【０１１７】
ＨＰＬＣ法３は、プールされた血漿のみに用いた。利用可能なサンプル量に限りがあるため、コラム回収は実行しなかった。
ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＲＦＤ及びＨＰＬＣ放射性分析システム。
【０１１８】
メタボライト・プロファイリング及び識別のためのシステム（ＨＰＬＣ／ＭＳ／ＲＦＤ）は、ＨＴＣ  ＰＡＬオートサンプラー、サーベイヤーＨＰＬＣポンプ、ＬＴＱリニア・イオントラップ質量スペクトロメータ及びβ−ＲＡＭモデル３ＲＦＤから構成された。質量分析及びＲＦＤによって取得したデータは、各々、エクスキャリバー及びローラ・ライト３ソフトウェアによって処理した。ＨＰＬＣ溶離液は、ＲＦＤと質量スペクトロメータとの間で、３対１の比率で分けた。以下は、ＨＰＬＣ、質量スペクトロメータ及びＲＦＤに対する条件の要約である。
【化４４−１】
0006389238.tif 000053
【化４４−２】
0006389238.tif 000054
【化４４−３】
0006389238.tif 000055
【０１１９】
高解像度ＭＳのためのＨＰＬＣ−ＭＳシステムは、ミクロム・バイオリソーセズ・パラダイムＭＳ４Ｂ・ＨＰＬＣ及びサーモＬＴＱオービトラップ・ディスカバリー質量スペクトロメータから構成された。クロマトグラフィの条件とイオン源パラメータは、ＬＴＱシステムのためのＨＰＬＣ法１と同じだった。データは、質量中心モードにおいて３００００の解像度で取得した。
【０１２０】
血漿サンプルの放射性定量化には、ＨＰＬＣ／トップ・カウントＮＸＴ（商標）システムを用いた。システムは、ＨＴＣ  ＰＡＬオートサンプラー、二つの島津ＨＰＬＣポンプ及びフォックシーＪｒフラクション・コレクター（Ｉｓｃｏ社、リンカーン、ＮＥ）から構成された。ルーマ・プレート（商標）９６−ウエルプレート内に採集したＨＰＬＣフラクションは、ＥＺ−２プラスパーソナル蒸発器（ジェネバック、ヴァレー・コテージ、ニューヨーク）を用いて乾燥し、乾燥サンプルを、トップ・カウントＮＸＴ（商標）マイクロプレート・シンチレーション＆ルミネセンス・カウンター（パーキンエルマー（登録商標））で計数した。データは、プロＦＳＡ（パーキンエルマー（登録商標））ソフトウェアを用いて処理した。ＨＰＬＣ法は、前述のものと同じであった。
メタボライト識別。
【０１２１】
次のプロセスによって、マトリックス内の総放射能の５％またはトータルＡＵＣの５％を超えるメタボライトを識別した。エグゼリシス社によって提供されたカボザンチニブとそのメタボライト標準の質量スペクトル（ＭＳ、ＭＳ／ＭＳ及びＭＳ／ＭＳ／ＭＳ）を、イオントラップ質量スペクトロメータで取得し、主要なフラグメント・パターンを提案した。これらメタボライトの識別は、質量スペクトル（ＭＳ及びＭＳ／ＭＳ）と持続時間を標準品に照合することによって検証した。他の未知のメタボライトに対しては、ＬＣ／ＭＳクロマトグラムを、ＬＣ放射性クロマトグラムで見られるものと同じ持続時間で、フル・スキャン・ポジティブ及びネガティブ・イオン化モードで作動させて、分子イオンを捜した。それから、対応する分子イオンに対して、生成イオン質量スペクトル及び高解像度質量スペクトルを取得した。推定メタボライト構造は、それらの質量フラグメント・パターン分析に基づいて提案したものである。
カボザンチニブとそのメタボライトの定量化。
【０１２２】
異なる時点または時間間隔における各マトリックスからの、プール・サンプルあるいは個々のサンプルのカボザンチニブとそのメタボライトの定量化は、それらの放射性クロマトグラムで発見された対応ピークの統合に基づいて行った。血漿サンプルについては、各時点の各々のピークに対するサンプルの総放射能パーセンテージを計算し、ｎｇ／ｍｌに変換した。
【０１２３】
血漿内のカボザンチニブとそのメタボライトの定量化：
ｎｇ／ｍＬ＝（総放射能に対する％）ｘ（時点でのトータル同等量ｎｇ／ｍＬ）／１００
【０１２４】
トータル同等量ｎｇ／ｍＬの値は、ヒト質量バランス試験の結果から得た。
【０１２５】
プール尿サンプルについては、各々のピークに対するプール・サンプルにおける総放射能パーセンテージを、プール・サンプルのトータル非親％として計算した。
プール・サンプルのトータル非親％＝（ピークの総放射能／非親ピークの総放射能）ｘ１００
【０１２６】
プール糞便サンプルについては、各々のピークに対するプール・サンプルの総放射能パーセンテージを、プール・サンプルにおけるトータル非親プラス親パーセンテージとして計算した。
プール・サンプルにおけるトータル非親プラス親の％＝（ピークの総放射能／親及び非親ピークの総放射能）ｘ１００
【０１２７】
各々のピークに対するプール・サンプルの総放射能パーセンテージを、プール・サンプルにおける親のパーセンテージに変換した。
プール・サンプルの親％＝（ピークの総放射能／親ピークの総放射能）ｘ１００
【０１２８】
放射能検出器に対する定量化の限度は、放射性クロマトグラムの信号対ノイズ比（３対１）として定義した。トップ・カウント及びβ−ＲＡＭ放射性流通検出器に対する定量化の下限は、各々、１０及び５００ｄｐｍであった。
結果及び考察。
放射性回収。
【０１２９】
最初の抽出回収は、３度抽出の３量のＭｅＯＨ：ＡＣＮ（２０：８０）と一緒に、投与後４時間及び７２時間における１人の対象者からの血漿サンプルを用いて測定した。４及び７２時間のサンプルからの放射能の平均抽出回収は、各々、９８．４３％と９４．９９％であった。乾燥及びＭｅＯＨ：ＡＣＮ溶液への再構成後の再構成回収は、各々、９２．７３％及び８５．９０％であった。総合回収は、各々、９１．２７％及び８１．６０％であった。
【０１３０】
対象者からの投与後０から８、２４から４８、７２から９６及び１２０から１４４時間のサンプルを用いて測定した尿遠心分離回収は、１０２％と１０４％との間であった。凍結乾燥後の尿再構成回収は、対象者からのプール・サンプルを用いて、９４．７％であった。
【０１３１】
投与後０から４８時間のプール糞便サンプルについては、抽出、再構成及び総合回収は、各々、９８．４８％、８８．８０％及び８７．３７％であった。投与後１２０から１６８時間のプール糞便サンプルについては、抽出、再構成及び総合回収は、各々、８５．８５％、８７．６９％及び７５．２４％であった。
【０１３２】
尿サンプルに対するＨＰＬＣコラムからの放射能回収は、９７．０５％であった。
【０１３３】
回収を解明するための血漿、尿及び糞便の放射性定量化には、補正係教は全く適用しなかった。
メタボライト・プロファイリング。
【０１３４】
対象者においては、カボザンチニブ、化合物９（カボザンチニブ硫酸塩）及び化合物１９（カボザンチニブＮ−オキシド）が、放射性クロマトグラムでの主要なピークであった。投与後７２時間後の血漿サンプルでは、化合物２（脱メチル化及び硫酸化フルオロアニリン切断生成物）が主要なメタボライトであった。メタボライト化合物７（フルオロアニリン切断生成物）は、マイナー・ピークの一つであった。ＨＰＬＣ法１を用いることによって、メタボライト化合物７、３（デメチルカボザンチニブグルクロニドＢ）、９及び１０（フルオロアニリン切断生成物のメチルエステル）が共溶出された。
【０１３５】
代表的なヒト尿メタボライト・プロフィール、投与後０から７２時間、１４４から１９２時間及び２８８から３３６時間のヒト尿サンプルの（ＨＰＬＣ法１を用いる）放射性クロマトグラムを、対象者から採集した。メタボライト化合物６は、投与後０から７２時間、１４４から１９２時間及び２８８から３３６時間のプール尿サンプルにおける主要なメタボライトであった。化合物６に加えて、メタボライト化合物１、４、５、７及び１９が、投与後０から７２時間のプール・サンプルに観察された。メタボライト化合物１、４、５及び７が、投与後１４４から１９２時間のプール・サンプルに観察された。メタボライト化合物１及び５が、投与後２８８及び３３６時間のプール・サンプルで検出された。親化合物カボザンチニブは、尿サンプルには観察されなかった。
【０１３６】
代表的なヒト糞便メタボライト・プロフィール、投与後０から７２時間、１４４から１９２時間、及び２８８から３３６時間のヒト糞便サンプルの（ＨＰＬＣ法１を用いる）放射性クロマトグラム。親カボザンチニブ及びメタボライト化合物４、７、１１及び１５（化合物１６を含む）が、投与後０から７２時間のプール・サンプルで観察された。メタボライト化合物４、７、１１、１５、１６及び１８が、投与後１４４から１９２時間のプール・サンプルで観察された。メタボライト化合物４及び１１が、投与後２８８から３３６時間のプール・サンプルで観察された。
ＨＰＬＣ／ＭＳ分析を用いるメタボライト識別。
【０１３７】
ＨＰＬＣ法１を用いる標準物質のＨＰＬＣ／ＭＳ分析は、カボザンチニブ、フルオロアニリン切断生成物（化合物７）、硫酸塩（化合物９）及びＮ−オキシド（化合物１９）の持続時間が、各々、２０．３、１４．４、１６．５及び２３．１分であることを示した。
【０１３８】
次に、血漿、尿及び糞便サンプルをＨＯＰＬＣ／ＭＳによって分析し、化合物を、それらのプロトン化分子イオンとフラグメンテーション・パターンに基づき識別した。
ヒト血漿におけるカボザンチニブとそのメタボライトに関するメタボライト識別。
【０１３９】
ＸＩＣにおける約１９．１分でのピークの質量スペクトルは、ｍ／ｚ５０２のプロトン化分子イオンを示した。その生成物イオン・スペクトルは、ｍ／ｚ３９１、３２３及び２９７に主要フラグメントを示した。このことは、カボザンチニブ標準のものと一貫している。ＭＳデータを、表１及び２にまとめる。
【表１−１】
0006389238.tif 000056
【表１−２】
0006389238.tif 000057
【表２−１】
0006389238.tif 000058
【表２−２】
0006389238.tif 000059
カボザンチニブ・メタボライトのキナーゼ活性。
キナーゼ希釈。
【０１４０】
キナーゼ活性は、プロトコル・ガイド・ボリューム５７、キナーゼ・プロフィーラー・サービス・アッセイ・プロトコルに従って、ＥＭＤミリポアによって測定し、プロファイルした。結果を、以下の表３にまとめる。抑制を、次のキーでＩＣ５０として示す。Ａ＝５０ｎＭ未満のＩＣ５０、Ｂ＝５０ｎＭよりも大きいが５００ｎＭ未満のＩＣ５０、Ｃ＝５００ｎＭよりも大きいが５０００ｎＭ未満のＩＣ５０、及びＤ＝５，０００ｎＭよりも大きいＩＣ５０。キナゾリンまたはキノリンについての官能性に応じて、本発明の模範的な化合物は、ｃ−Ｍｅｔ、ＫＤＲ、ｃ−Ｋｉｔ、ｆｌｔ−３及びｆｌｔ−４のいずれかに対する選択性を示す。表３のリスト中の酵素の略語には、以下の定義がある。ｃ−Ｍｅｔは、肝細胞増殖因子レセプター・キナーゼを指す。ＲＥＴは、ＲＥＴ癌原遺伝子キナーゼを指す。ＫＤＲは、キナーゼ・インサート・ドメイン・レセプター・チロシンキナーゼを指す。ｆｌｔ−１アルファ、ｆｌｔ−３及びｆｌｔ−４は、レセプター・チロシンキナーゼのＦＬＫ系統群の代表であるｆｍｓのようなチロシンキナーゼを指す。オーロラＢ  ＭＰは、オーロラＢキナーゼを指す。ＩＣ５０値の代わりにパーセンテージがリストされている場合は、１μＭでのパーセント抑制を示す。表内の空のセルは、データ不足であることのみを示す。
【表３−１】
0006389238.tif 000060
【表３−２】
0006389238.tif 000061
メタボライト合成と構造データ。
【０１４１】
６−デスメチル酸。
【化４５】
0006389238.tif 000062
【０１４２】
ベッセル内に、スキーム４によって調製した４−（４−アミノフェノキシ）−７−メトキシキノリン−６−オル（１５．０ｇ、５３．３ｍモル）と炭酸カリウム（２９．５ｇ、２１３．３ｍモル、４当量）を、２０℃．で、ＴＨＦ（２１０ｍＬ、１４ｖｏｌ）及び水（９０ｍＬ、６ｖｏｌ）中に懸濁した。別個のベッセル内に、ナトリウム１−（メトキシカルボニル）シクロプロパンカルボキシラート（１７．７１ｇ、１０６．６ｍモル、２当量）を、ＴＨＦ（９０ｍＬ、６ｖｏｌ）中に懸濁した。ＤＭＦ（１２０μＬ、３モル％）を加え、１５℃未満へ冷却した。塩化オキサリル（９．３４ｍＬ、１０６．６ｍモル、２当量）を９０分に渡って加え、反応を１０から１５℃で２時間エージングした。酸塩化物スラリーを、２０から２５℃で２時間に渡ってカボザンチニブ懸濁液へ加え、少なくとも３時間エージングした。その結果、ＨＰＬＣ分析は、モノ及びビスカルボニル化物質の混合物への９９％を超える変換を示した。反応混合物をセライト（登録商標）で濾過し、ＴＨＦ（３０ｍＬ、２ｖｏｌ）で洗浄し、層を分離させた。１ＭのＮａＯＨ（１５０ｍＬ、１０ｖｏｌ）上側ＴＨＦ層へ加え、混合物を４０℃で１時間加熱した。その結果、ＨＰＬＣ分析は、９９％を超えるケン化物を示した。混合物を２５℃へ冷却し、そして上側ＴＨＦ層を除去した。水性層を１ＭのＨＣｌでｐＨ３から４へ酸性化させて生成物を沈殿させてから、１時間エージングした。沈殿物を濾過し、水（９０ｍＬ、６ｖｏｌ）で洗浄し、５０℃で窒素放出しながら（２０ｐｓｉｇを超える）真空下で乾燥させ、灰色から褐色の粉を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ１０．８−１１．０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、１０．７（ｓ、１Ｈ）、８．６５（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．８１（ｄ、Ｊ＝９．３Ｈｚ、２Ｈ）、７．６７（ｓ、１Ｈ）、７．５８（ｓ、１Ｈ）、７．３２（ｄ、Ｊ＝９．３Ｈｚ、２Ｈ）、６．６９（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．０１（ｓ、３Ｈ）、２．４８−２．５３（ｍ、４Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ３９３［Ｍ−Ｈ］−。
【０１４３】
６−硫酸水素塩６−デスメチル酸
【化４６】
0006389238.tif 000063
【０１４４】
６−デスメチル酸（１２０ｍｇ、０．３０ｍモル）、水酸化カリウム（１１８ｍｇ、２．１ｍモル、７当量）及び三酸化硫黄トリメチルアミン錯体（２９２ｍｇ、２．１ｍモル、７当量）を、水（３ｍＬ、２５ｖｏｌ）中に溶解し、２時間７０℃へ加熱した。その結果、ＨＰＬＣによる分析は、９９％を超える変換を示した。それから、反応混合物を氷浴で冷却し１ＮのＨ２ＳＯ４水溶液を滴下して約ｐＨ１へ酸性化させた。スラリーは、２５℃で１時間エージングし、フィルターを通し、水（３ｍＬ、２５ｖｏｌ）で洗浄し、そして脱液させた。それから、湿った塊をアセトン（３ｍＬ、２５ｖｏｌ）で洗浄し、２４時間窒素を放出しながら３５℃の（２０ｐｓｉｇを超える）真空下で乾燥させ、ベージュ色の粉を得た。
【０１４５】
代替的に、６−デスメチル酸（１２０ｍｇ、０．３０ｍモル）を、ＭｅＣＮ（５０ｖｏｌ、６ｍＬ）中に懸濁させ、トリエチルアミン（１．２７ｍＬ、９．１２ｍモル、３０当量）を加えてから、氷浴で冷却した。塩化スルホン酸（１０１μＬ、１．５２ｍモル、５当量）を滴下して加え、それから、反応を１時間７０℃へ加熱した。その結果、ＨＰＬＣによる分析は、９８パーセントを超える変換を示した。それから、反応混合物を氷浴で２時間冷却し、沈殿物を形成させた。沈殿物は、冷たいＭｅＣＮ（５０ｖｏｌ）でリンスしながら、濾過で除去した。それから、そのＭｅＣＮ溶液を、約２０ｖｏｌ（約２ｍＬ）へ濃縮し、１００ｖｏｌの１ＮのＨＣｌで反応を停止させ、氷浴で冷却して微細沈殿物を得た。それを濾過し、５０ｖｏｌの水と５０ｖｏｌのアセトンで洗浄し、２４時間窒素を放出しながら３５℃の（２０ｐｓｉｇを超える）真空下で乾燥させ、ベージュ色の粉を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ１０．８（ｓ、１Ｈ）、８．８３（ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、１Ｈ）、８．５（ｓ、１Ｈ）、７．８５（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、７．５２（ｓ、１Ｈ）、７．４０（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）、６．８４（ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、１Ｈ）、４．０４（ｓ、３Ｈ）、３．２０−３．７０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、１．３９−１．４８（ｂｒ  ｓ、４Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ４７３［Ｍ−Ｈ］−、２３６。
【０１４６】
オルト−ヒドロキシ−カボザンチニブ
【化４７】
0006389238.tif 000064
【０１４７】
フラスコに、カルボン酸（０．８４ｇ、２．１ｍモル）、ＴＨＦ（１．２ｍＬ）及びＤＭＦ（５μＬ）を充填し、１５℃．へ冷却した。このスラリーへ約２０分に渡って、塩化オキサリル（０．１７ｍＬ、２．１ｍモル）を滴下して加えた。２時間後、その酸塩化物スラリーを、約１５分に渡って、アニリン（０．２ｇ、１．６ｍモル）、ＴＨＦ（２．８ｍＬ）中の炭酸カリウム（０．６３ｇ、４．６ｍモル）及び水（１ｍＬ）の攪拌懸濁液を含むもう一つのベッセルへ加えた。３時間後、ＨＰＬＣ分析は、生成物への完全な変換を示した。攪拌を停止し、下側水性層を除去し、水（３０ｍＬ）を加えて生成物を沈殿させた。それから、生成物を濾過によって採集し、１：１のＴＨＦ水溶液（２×１０ｍＬ）で洗浄し、青白い灰色の固体を得た。それから、それを、流動相としてメタノール／ジクロロメタンを用いるシリカ・ジェル上でのフラッシュクロマトグラフィによってさらに精製した。
【０１４８】
代替的に、アセトニトリル（１００ｍＬ）内のカルボン酸（４．０８ｇ、１０ｍモル）、アニリン（１．５２ｇ、１２ｍモル）及びトリエチルアミン（２．７ｍＬ、２０ｍモル）の懸濁液を、ＥＤＡＣ（２．３０ｇ、１２ｍモル）及びＨＯＢｔ（０．５ｇ、３ｍモル）で処理した。そのスラリーを、室温で一晩中攪拌し、反応進展をＨＰＬＣによって監視した。反応の終了時に、１５０ｍＬの水を加え、沈殿物を濾過によって採集し、水で洗浄してから、フラッシュクロマトグラフィによって精製した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ１０．４６（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、１０．２９（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、１０．０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．４７（ｄ、１Ｈ）、７．９２（ｄｄ、１Ｈ）、７．７３（ｄｄ、２Ｈ）、７．５１（ｓ、１Ｈ）、７．４０（ｓ、１Ｈ）、７．２８（ｄｄ、２Ｈ）、６．６８（ｄｄ、１Ｈ）、６．６２（ｄｔ、１Ｈ）、６．４５（ｄ、１Ｈ）、３．９５（ｓ、３Ｈ）、３．９４（ｓ、３Ｈ）、１．６０−１．５５（ｍ、４Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、１００ＭＨｚ）δ１６９．８２、１６７．６７、１５９．９１、１５７．５１、１５２．５８、１４９．９７、１４９．３５、１４９．０９、１４８．９８、１４８．８６、１４６．４９、１３５．７２、１２３．００、１２２．９７、１２２．９１、１２２．４３、１２１．３０、１１５．１７、１０７．８６、１０５．１０、１０４．８７、１０３．１６、１０２．４３、１０２．１９、９９．０８、５５．７４、５５．７１、５５．６６、３０．０２、１６．５１。
ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ５１８．３［Ｍ＋Ｈ］＋、５００．３。
【０１４９】
カボザンチニブ−ヒドロキシ硫酸塩。
【化４８】
0006389238.tif 000065
【０１５０】
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のヒドロキシ−カボザンチニブ（０．９５ｇ、１．９ｍモル）の懸濁液に、トリエチルアミン（５ｍＬ、３６ｍモル）を加え、５℃未満へ冷却した。塩化スルホン酸（１ｍＬ、１５ｍモル）を、約１５分に渡って、温度が１０℃未満に留まるよう滴下しながら加えた。室温で一晩中攪拌した後のＨＰＬＣ分析は、出発物質が約５パーセント残留していることを示した。反応混合物は、１ＮのＨＣｌ（２５ｍＬ）水溶液で処理した。沈殿物を濾過によって採集し、水（４ｘ２５ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させてオフホワイトの固体（９３７ｍｇ、８２パーセント粗産物）を得た。ＡＮ−ＨＰＬＣによる分析は、生成物が９０．８％純粋であり、主要な不純物が出発物質であることを示した。生成物は、水性酢酸アンモニウム／アセトニトリル流動相システムを用いるＣ１８コラム上での調製用ＨＰＬＣによって、９９パーセントを超える（ＡＮ−ＨＰＬＣ）程度に精製された。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ１０．３９（ｓ、１Ｈ）、９．６９（ｓ、１Ｈ）、８．８１（ｄ、１Ｈ）、７．９５（ｄｄ、１Ｈ）、７．８５（ｄ、２Ｈ）、７．７７（ｓ、１Ｈ）、７．５１（ｓ、１Ｈ）、７．１１（ｓ、１Ｈ）、７．０８（ｄｄ、１Ｈ）、６．９３（ｄｄ、１Ｈ）、６．４５（ｄ、１Ｈ）、４．０５（ｓ、３Ｈ）、４．０４（ｓ、３Ｈ）、１．５３（ｓ、４Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ５９６．０［Ｍ−Ｈ］−。
【化４９】
0006389238.tif 000066
【０１５１】
フラスコに、カルボン酸（０．８４ｇ、２．１ｍモル）、ＴＨＦ（１．２ｍＬ）及びＤＭＦ（５μＬ）を充填し、１５℃へ冷却した。このスラリーへ、塩化オキサリル（０．１７ｍＬ、２．１ｍモル）を、約２０分に渡って、滴下して加えた。２時間後、その酸塩化物スラリーを、約１５分に渡って、アニリン（０．２ｇ、１．６ｍモル）、ＴＨＦ（２．８ｍＬ）中の炭酸カリウム（０．６３ｇ、４．６ｍモル）及び水（１ｍＬ）の攪拌懸濁液を含むもう一つのベッセルへ加えた。９０分後のＨＰＬＣ分析は、生成物への完全な変換を示した。攪拌を停止し、下側水性層を除去してエチルアセテート（１５ｍＬ）で抽出した。有機層を結合させ、無水ＭｇＳＯ４の上で乾燥し、フィルターを通して濃縮させて茶色の固体を得た。それから、その固体を、流動相としてエチルアセテート／ヘプタンを用いるシリカ・ジェル上でのフラッシュクロマトグラフィによってさらに精製した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ１０．１５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、９．９６（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、９．８９（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．４６（ｄ、１Ｈ）、７．７６（ｄ、１Ｈ）、７．５０（ｓ、１Ｈ）、７．４１（ｄ、２Ｈ）、７．３９（ｓ、１Ｈ）、７．２２（ｄ、２Ｈ）、７．０７−６．９８（ｍ、２Ｈ）、６．４２（ｄ、１Ｈ）、３．９４（ｓ、３Ｈ）、３．９３（ｓ、３Ｈ）、１．４６（ｂｒ  ｓ、４Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、１００ＭＨｚ）δ１６８．２７、１６７．９５、１６０．０２、１５２．５６、１４９．４８、１４９．３３、１４８．８６、１４８．５６、１４６．４６、１４６．２１、１４４．５２、１４４．３９、１３６．４５、１３５．３３、１３５．３１、１２２．２３、１２１．２２、１１５．６３、１１５．４４、１１５．１５、１１１．２９、１１１．２３、１１０．２６、１０７．８５、１０３．０４、９９．０８、５５．７３、５５．７１、３１．６６、１５．４０。ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ５１８．３［Ｍ＋Ｈ］＋、５０２．３。
【０１５２】
カボザンチニブＮ−オキシド。
【化５０】
0006389238.tif 000067
【０１５３】
フラスコに、カボザンチニブ（３．２１ｇ、６．４ｍモル）、酢酸（３２．１ｍＬ）及び過ホウ酸ナトリウム四水和物（１．９８ｇ、１２．８ｍモル）を充填し、６５℃へ加熱し、一晩中、攪拌した。２４時間後のＨＰＬＣ分析は、約３８：６２の出発物質：生成物を示した。さらに酸化性物質（１．９８ｇ、１２．８ｍモル）を加え、一晩中、加熱を続けた。真空下で溶剤を除去し、残留物を、ジクロロメタン−メタノール勾配（１０％のメタノール−ジクロロメタンへのジクロロメタン）を用いるフラッシュクロマトグラフィによって精製し、０．９５ｇの生成物を白い固体として得た。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）δ１０．２０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、１０．０８（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、８．２８（ｄ、１Ｈ）、７．９０（ｓ、１Ｈ）、７．７４（ｄ、２Ｈ）、７．６４（ｄｄ、２Ｈ）、７．４８（ｓ、１Ｈ）、７．２３（ｄ、２Ｈ）、７．１５（ｔ、２Ｈ）、６．４５（ｄ、１Ｈ）、３．９７（ｓ、３Ｈ）、３．９４（ｓ、３Ｈ）、１．４７（ｂｒ  ｓ、４Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、１００ＭＨｚ）δ１７２．１１、１６８．１８、１６８．１３、１５９．４９、１５７．０９、１５３．３４、１５０．７２、１５０．５７、１４９．９８、１３７．４１、１３６．３２、１３５．２４、１３５．２１、１３４．０６、１２２．４４、１２２．３６、１２２．１９、１２０．６５、１１７．２３、１１．１７、１１４．９５、１０４．３７、１００．３４、９９．１２、５６．０９、５６．０３、３１．５９、１５．４２。ＭＳ（ＡＰＣＩ＋）ｍ／ｚ５１８．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５４】
１−［４−（６，７−ジメトキシ−キノリン−４−イルオキシ）フェニルカルバモイル］シクロプロパンカルボン酸
【化５１】
0006389238.tif 000068
【０１５５】
ＴＨＦ（３．５ｍＬ）中のシクロプロピルジカルボン酸（４４９ｍｇ、３．４５ｍモル）に、ＴＥＡ（４８５μＬ、３．４５ｍモル）を加えた。その溶液を、室温の窒素雰囲気下で４０分間攪拌してから、塩化チオニル（２５０μＬ、３．４４ｍモル）を加えた。反応を、一酸塩化物の形成について、ＬＣＭＳによって監視した（ＭｅＯＨでサンプルを反応停止させて、対応するモノメチルエステルを探した）。室温で３時間攪拌後、４−（６，７−ジメトキシ−キノリン−４−イルオキシ）−フェニルアミン（１．０２ｇ、３．４４ｍモル）を固体として加え、その後、さらにＴＨＦ（１．５ｍＬ）を加えた。反応は、室温で１６時間、起こり続けた。生じた濃いスラリーを、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、１ＮのＮａＯＨで抽出した。二相スラリーを濾過し、その水相を、濃縮ＨＣｌで約ｐＨ６へ酸性化させ、そして濾過した。両方の固体を結合し、ＥｔＯＡｃで洗浄してから、真空下で乾燥した。所望の生成物、１−［４−（６，７−ジメトキシ−キノリン−４−イルオキシ）−フェニルカルバモイル］−シクロプロパンカルボン酸（９６２ｍｇ、６８．７パーセントの収率、９７パーセントの純度）を、白い固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ／ＮａＯＨ）：７．９７（ｄ、１Ｈ）、７．１８（ｄ、２Ｈ）、６．７６（ｍ、４Ｈ）、６．０８（ｄ、１Ｈ）、３．７３（ｓ、３Ｈ）、３．５６（ｓ、３Ｈ）、１．１５（ｄ、４Ｈ）。
【０１５６】
前述の開示は、明瞭さ及び理解を目的として、図及び実施例によって詳細に説明したものである。本発明を、種々の、特異的な好適実施形態及び技術に関して説明した。しかしながら、本発明の精神及び範囲を超えることなく、多くのバリエーション及び改良が可能であると理解すべきである。添付の請求項の範囲内で変更や修正が実践できることは、当業者には明白である。したがって、上記説明は、説明目的のものであり、制限するものではないことを理解すべきである。本発明の範囲は、上記説明によってではなく、次の添付請求項によって定まり、請求項の権利が及ぶ等価技術範囲をも含むものである。
一実施形態において、例えば、以下の項目が提供される。
（項目１）
カボザンチニブの単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
（項目２）
【化５２−１】
0006389238.tif 000069
【化５２−２】
0006389238.tif 000070
から選択された化合物であって、前記化合物内のＧＡがグルクロン酸部分である、項目１の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
（項目３）
【化５３】
0006389238.tif 000071
から選択される、項目２の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
（項目４）
【化５４】
0006389238.tif 000072
である、項目２の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
（項目５）
【化５５】
0006389238.tif 000073
である、項目２の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
（項目６）
【化５６】
0006389238.tif 000074
である、項目２の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
（項目７）
【化５７】
0006389238.tif 000075
である、項目２の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
（項目８）
【化５８】
0006389238.tif 000076
である、項目２の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
（項目９）
【化５９】
0006389238.tif 000077
である、項目２の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
（項目１０）
【化６０】
0006389238.tif 000078
である、項目２の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
（項目１１）
【化６１】
0006389238.tif 000079
である、項目２の単離メタボライト、または、それの医薬的に許容可能な塩。
（項目１２）
無統制な、異常な、及び／または不必要な細胞活性に関連する病気あるいは疾患を治療する、疾患の治療方法であって、項目１から１１の化合物またはそれの医薬的に許容可能な塩を、それを必要とする哺乳動物へ、治療的に有効な量で投与することからなる、前記方法。
（項目１３）
【化６２】
0006389238.tif 000080
または、それらの医薬的に許容可能な塩と、少なくとも一つの医薬的に許容可能な担体からなる、医薬組成物。
（項目１４）
経口投与に適切な、項目１３の組成物。
（項目１５）
【化６３−１】
0006389238.tif 000081
【化６３−２】
0006389238.tif 000082
から選択される化合物であって、前記化合物内のＧＡがグルクロン酸部分である前記化合物、または、それの医薬的に許容可能な塩。
（項目１６）
【化６４】
0006389238.tif 000083
から選択される、項目１５の化合物、または、それの医薬的に許容可能な塩。
（項目１７）
カボザンチニブのメタボライトの識別方法であって、
カボザンチニブを哺乳動物へ投与すること、
哺乳動物における前記哺乳動物の組織または体液内のＮ−（４−｛［６，７−ビス（メンチルオキシ）キノリン−４−イル］オキシ｝フェニル）−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）サイクロプロペイン−１，１−ジカルボキシアミドのメタボライトのレベルまたは濃度を検出あるいは測定することからなり、前記メタボライトが、
【化６５−１】
0006389238.tif 000084
【化６５−２】
0006389238.tif 000085
からなるグループから選択され、これら化合物内のＧＡがグルクロン酸部分である、前記識別方法。
（項目１８）
前記メタボライトが、
【化６６】
0006389238.tif 000086
から選択される、項目１７の方法。
（項目１９）
前記体液が、血漿、胆汁、尿及び糞便からなるグループから選択される、項目１７に記載の方法。