(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における胃腸腫瘍の形成を阻害する、胃腸腫瘍の成長を阻害する、胃腸腫瘍の転移を阻害する、あるいは胃腸癌を治療または予防する；対象における１つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞のアポトーシスを誘導する；胃腸癌治療に対する対象の応答性を増加させる；胃腸癌治療に対する対象の胃腸腫瘍の感度を増加させる；治療に対して抵抗性である対象における１つまたは複数の胃腸癌細胞を再感作する；胃腸癌を患う対象の腫瘍性細胞の胃腸癌治療に対する抵抗性を少なくとも部分的に逆転する；胃腸癌を抱えた患者の胃腸癌治療に対する抵抗性を完全にまたは部分的に逆転する；あるいは胃腸癌治療に対して抵抗性である、または抵抗性であるかもしくは抵抗性になると予測される、胃腸癌を抱えた患者の１つまたは複数の腫瘍を、胃腸癌治療に対して再感作する；
際に使用するための、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む組成物であって、
（ａ）プロポリスがシクロデキストリンに完全に内包されており、
（ｂ）シクロデキストリンがγ−シクロデキストリンであるか、または化学修飾γ−シクロデキストリンであり、
（ｃ）該組成物が約１〜約５ｍｇ／ｇのＣＡＰＥ濃度、および１０ｍｇ／ｇを超えるピノセムブリン濃度を有し、かつ
（ｄ）胃腸腫瘍が胃腫瘍または咽喉腫瘍であり、かつ胃腸癌が胃癌または咽喉癌である、組成物。
【請求項２】
少なくとも１つの追加の治療薬を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記プロポリスがプロポリス抽出物もしくはフラクションであるか、または前記プロポリスがロウを含まないか、または前記プロポリスがヨーロッパ産もしくはポプラプロポリスである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が約１０重量％〜約５０重量％のプロポリスを含むか、または前記組成物が約１０重量％〜約５０重量％のプロポリス抽出物もしくはフラクションを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が、約１０重量％〜約５０重量％のプロポリス、約１０重量％〜約４０重量％のプロポリス、約１０重量％〜約３０重量％のプロポリス、約１５重量％〜約２５重量％のプロポリス、約１５重量％〜約３０重量％のプロポリス、約１５重量％〜約４０重量％のプロポリス、約１５重量％〜約５０重量％のプロポリス、約２０重量％〜約３０重量％のプロポリス、もしくは約２５重量％のプロポリス、もしくは約３０重量％のプロポリスを含むか、または前記組成物が、約１０重量％〜約５０重量％のプロポリス樹脂、約１０重量％〜約４０重量％のプロポリス樹脂、約１０重量％〜約３０重量％のプロポリス樹脂、約１５重量％〜約２５重量％のプロポリス樹脂、約１５重量％〜約３０重量％のプロポリス樹脂、約１５重量％〜約４０重量％のプロポリス樹脂、約１５重量％〜約５０重量％のプロポリス樹脂、約２０重量％〜約３０重量％のプロポリス樹脂、もしくは約２５重量％のプロポリス樹脂、もしくは約３０重量％のプロポリス樹脂を含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物中のシクロデキストリンに対するプロポリスのモル比が約１：１以下である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記ヨーロッパ産プロポリスが、約５ｍｇ／ｇを超えるガランギン濃度、および約３．５ｍｇ／ｇを超えるクリシン濃度を有する、請求項３に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物が、カフェイン酸フェニルエーテルエステル（ＣＡＰＥ）、カフェイン酸、ピノセムブリン、カフェ酸ベンジル、クリシン、ガランギン、およびピノバンクシン−３−アセテートのうちの３つ以上を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が、約１ｍｇ／ｇを超えるガランギン濃度を有し、前記組成物が、約１ｍｇ／ｇを超えるクリシン濃度を有し、かつ前記組成物が、９．１〜１７．５ｍｇ／ｇのピノバンクシン−３−アセテート濃度を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
経口投与のために製剤化されている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
局所投与のために製剤化されている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
食品、飲料、食品添加物、飲料用添加物、栄養補助食品、栄養製品、医療食品、または栄養補給食品である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、胃腸癌の治療および予防のための組成物に関する。具体的には、本発明は、１つまたは複数のプロポリス抽出物を含む抗胃腸癌組成物を包含する、プロポリスおよびシクロデキストリンを含有する抗胃腸癌組成物に関する。特に、プロポリスおよびγ−シクロデキストリン（例えば、ヨーロッパ産プロポリスおよびγ−シクロデキストリン）を含む抗胃腸癌組成物、ならびに、結腸直腸、胃および咽喉癌などの胃腸癌の治療または予防における、かかる組成物の使用が意図される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
未精製のプロポリスは、蜜ロウと混合された、芽や樹液などの植物源からミツバチによって収集された樹脂から生成される樹脂状物質である。未精製のプロポリスの色は、植物源によって、黄色からほとんど黒に近い茶色まで、様々である。通常、ロウは不溶性であるが樹脂系化合物は高溶解性であるエタノールを用いて抽出することで、蜜ロウをプロポリスから分離する。プロポリスの種類は多数あり、樹脂化合物や地域の植物源に基づいている。プロポリスの種類で最もよく知られているのは、樹脂化合物が主にポプラ（それから、数は少なくなるが、シラカバやヤナギ）の葉および芽の滲出液からミツバチによって得られる「ヨーロッパ産」プロポリスと、主にバッカリス・ドラクンクリフォーリア（Ｂａｃｃｈａｒｉｓ  ｄｒａｃａｎｃｕｌｉｆｏｌｉａ）の木の葉の滲出液からミツバチによって得られる「ブラジル産グリーン」プロポリスである。ニュージーランドで生産されたプロポリスは、その組成が、広く他のヨーロッパのプロポリスに一致するため、「ヨーロッパ産」として分類することができる（Ｍａｒｋｈａｍ  ｅｔ  ａｌ，  １９９６．  ＨＰＬＣ  ａｎｄ  ＧＣ−ＭＳ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｊｏｒ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  ｐｒｏｐｏｌｉｓ．  Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ４２（１）：  ２０５−２１１（非特許文献１））。未精製のプロポリスとプロポリス由来の抽出物は、抗菌作用、抗カビ性、および抗ウイルス活性を有することが報告されている。数種類の癌治療におけるその使用は、特に乳癌においても研究されている。
【０００３】
樹脂の複雑な多成分性質のために、プロポリス樹脂中に存在する抗癌成分の同定および検証は難しいとされている。ブラジル産グリーンプロポリスでは、抗癌活性は主にアルテピリンＣに起因し、ヨーロッパ産プロポリス樹脂の場合、抗癌活性は主にカフェイン酸フェネチルエステル（ＣＡＰＥ）、ジヒドロキシ桂皮酸エステル、およびクリシン、アグリコンフラボノイドに起因する（例えば、Ｓａｗｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ  （２０１２）  "Ｔｈｅ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｐｒｏｐｏｌｉｓ"，  Ｆｏｌｉａ  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｃｙｔｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ，  ５０  （１），  ２５−３７（非特許文献２）を参照）。
【０００４】
結腸直腸癌は、先進国で女性と男性において、それぞれ２番目と３番目に最も一般的な癌であると言われている。結腸直腸癌は、先進国（米国、オーストラリア、ヨーロッパ、ニュージーランドが最高率）でより一般的であり、発展途上国における発生率に比べて、実に１０倍以上である。手術が有効でありうる一方、良好な手術結果には早期発見が非常に重要である。他の治療法は、原発腫瘍またはリンパ節外の転移を治療する際の現在の化学療法および放射線治療の有効性は議論されているため、主に、延命と苦痛緩和治療に向けられている。
【０００５】
食道癌、咽頭癌、または喉頭癌と呼ばれる咽喉癌は、咽頭、鼻咽頭、中咽頭、下咽頭、喉頭（発声器）の組織または扁桃線で発症する腫瘍全般を指す。咽喉癌の治療は、手術、放射線治療法または化学療法が含まれる。咽喉癌の治療は喉を損傷し得、患者が呼吸する、眠る、食べる方法を変更する可能性がある。
【０００６】
胃癌は、世界の癌に関する最も一般的な死因の第２位である。症状は病気の初期段階では発生していない可能性があるため、診断が遅れることが多い。胃を除去（胃切除）するための手術が、胃癌を治すことができる唯一の治療法である。手術後の化学療法および放射線療法は、治癒の可能性を高めることができる。
【０００７】
したがって、結腸直腸癌、胃癌および咽喉癌の治療または予防に使用するのに適したもの、ならびに、抗胃腸癌活性の維持をサポートするか、または抗胃腸癌活性を強化することが可能であるものを含む、抗胃腸癌組成物が必要である。
【０００８】
本発明の目的は、結腸直腸癌、胃癌および咽喉癌の治療もしくは予防に用いる安定した抗胃腸癌組成物を含む、抗胃腸癌組成物を提供すること、または、少なくとも公衆に有用な選択を提供することである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｍａｒｋｈａｍ  ｅｔ  ａｌ，  １９９６．  ＨＰＬＣ  ａｎｄ  ＧＣ−ＭＳ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｊｏｒ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  ｐｒｏｐｏｌｉｓ．  Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ４２（１）：  ２０５−２１１
【非特許文献２】Ｓａｗｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ  （２０１２）  "Ｔｈｅ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｐｒｏｐｏｌｉｓ"，  Ｆｏｌｉａ  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｃｙｔｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ，  ５０  （１），  ２５−３７
【発明の概要】
【００１０】
したがって、第一の態様において、本発明は、プロポリスおよびシクロデキストリン、特にγ−シクロデキストリン、を含む抗胃腸癌組成物に関する。
【００１１】
一実施形態では、抗胃腸組成物は、抗結腸直腸癌組成物である。別の実施形態では、抗胃腸組成物は、抗胃癌組成物である。さらなる実施形態では、抗胃腸組成物は、抗咽喉癌組成物である。
【００１２】
別の態様において、本発明は、プロポリスおよびγ−シクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる医薬組成物に関する。一実施形態において、組成物は、腸の健康状態を改善または維持するためのものである。したがって、一実施形態において、本発明は、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる、腸の健康状態を改善または維持するための医薬組成物に関する。
【００１３】
一実施形態では、プロポリスはプロポリス樹脂である。一実施形態では、樹脂はプロポリス樹脂であり、シクロデキストリンはγ−シクロデキストリンである。
【００１４】
別の態様において、本発明は、対象において胃腸癌を治療または予防する方法であって、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む方法に関する。
【００１５】
別の態様において、本発明は、対象における胃腸腫瘍形成の阻害、胃腸腫瘍成長の阻害、胃腸腫瘍転移の阻害、または胃腸癌を治療もしくは予防する方法であって、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物の有効量を、それを必要とする対象に個別、同時または順次投与することを含む方法に関する。
【００１６】
本発明の他の態様では、対象における１つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、それを必要とする対象に、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物の有効量の投与を含む方法に関する。
【００１７】
一実施形態では、アポトーシスは、結腸直腸腫瘍細胞、胃腫瘍細胞、または咽喉腫瘍細胞などの胃腸腫瘍細胞のものである。
【００１８】
本発明の他の態様では、対象における１つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞の増殖を調整する方法であって、それを必要とする対象にプロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物の有効量を投与することを含む方法に関する。
【００１９】
一実施形態では、例えば上記調整は低減である。したがって、本発明は、対象における１つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞の増殖を低減する方法であって、それを必要とする対象にプロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物の有効量を投与することを含む方法に関する。
【００２０】
一実施形態では増殖は、結腸直腸腫瘍細胞、胃腫瘍細胞または咽喉腫瘍細胞などの胃腸腫瘍細胞のものである。
【００２１】
本発明の他の態様は、胃腸癌治療に対する対象の応答性を増加させる方法であって、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物を対象に投与することを含む方法に関する。
【００２２】
本発明の他の態様は、胃腸癌治療に対する対象の胃腸腫瘍への感度を増加させる方法であって、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物を対象に投与することを含む方法に関する。
【００２３】
さらなる態様において、本発明は、治療に対して抵抗性のある１つまたは複数の胃腸癌細胞を再感作する方法であって、１つまたは複数の胃腸癌細胞に対して、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物の有効量を投与することを含む方法に関する。
【００２４】
一実施形態では、胃腸癌細胞は、対象に存在する腫瘍を含む。一実施形態では、胃腸癌細胞は、結腸直腸癌細胞である。他の実施形態では、胃腸癌細胞は、胃癌細胞である。さらなる実施形態において、胃腸癌細胞は咽喉癌細胞である。
【００２５】
本発明はまた、胃腸癌を患う対象における腫瘍性細胞の、胃腸癌治療への抵抗性を少なくとも部分的に逆転させる方法であって、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物を対象に投与することを含む方法に関する。
【００２６】
本発明はさらに、胃腸癌治療に対する胃腸癌を患う患者の抵抗性を全体または部分的に逆転する方法であって、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物を、当該対象に投与するステップを含む方法に関する。
【００２７】
別の態様において、本発明は、胃腸癌療法による治療に抵抗性であるか、または抵抗性であるかもしくは抵抗性になると予測される、胃腸癌を患う患者の１つまたは複数の腫瘍の再感作の方法を提供し、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物を当該患者に投与するステップを含む方法を提供する。
【００２８】
一実施形態では、上記１つまたは複数の腫瘍は、例えば、組織試料、腫瘍生検、または血液もしくは血漿試料などの患者からの試料中の、ＡＫＴ、ＪＮＫまたはＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路の１つまたは複数の活性化の増加を含む、該１つまたは複数の腫瘍内または患者内の１つまたは複数の癌細胞生存促進性シグナル伝達経路の増加した活性化に起因して、胃腸癌治療に対して抵抗性であるか、あるいは胃腸癌治療に対して抵抗性であるかもしくは抵抗性になることが予測される。
【００２９】
一実施形態において、本発明は、１つまたは複数の腫瘍内または患者内の１つまたは複数の癌細胞生存促進性シグナル伝達経路を不活性化または抑制する方法を提供する。例えば、本発明は、１つまたは複数の腫瘍内でのＡＫＴ、ＪＮＫまたはＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路の１つまたは複数を不活性化または抑制する方法に関する。
【００３０】
一実施形態では、１つまたは複数の腫瘍は、腫瘍（複数可）内でのＡＫＴ、ＪＮＫまたはＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路の１つまたは複数の増加した活性化に起因して、胃腸癌治療に対して抵抗性であるか、または抵抗性であるかもしくは抵抗性になることが予測される。
【００３１】
一実施形態において、本発明は、一次胃腸癌治療に抵抗性になる腫瘍を予防する方法であって、この抵抗性が、例えば腫瘍（複数可）内の、１つまたは複数のＡＫＴ、ＪＮＫまたはＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路の活性化の増加によって少なくとも部分的に媒介される、方法を提供する。
【００３２】
一実施形態では、腫瘍は化学療法での治療に対して抵抗性がある。
【００３３】
一実施形態では、胃腸癌は結腸直腸癌である。他の実施形態では、胃腸癌は胃癌である。さらなる実施形態において、胃腸癌は咽喉癌である。
【００３４】
さらなる態様において、本発明は、プロポリスおよびシクロデキストリン、特にプロポリスおよびγ−シクロデキストリン、例えば、ヨーロッパ産プロポリスとγ−シクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、消化管の健康状態を改善する方法に関する。
【００３５】
さらなる態様において、本発明は、プロポリスおよびγ−シクロデキストリンを含む相乗作用組成物を提供する。一実施形態において、組成物は、相乗作用治療組成物である。一実施形態において、組成物は、相乗作用治療効果を提供する。
【００３６】
一実施形態では、プロポリスおよびγ−シクロデキストリンは、いずれか1つのみの効果よりも大きいか、いずれか1つのみの相加効果を上回る、相乗的な治療効果を提供する。例えば、アポトーシスの誘導、胃腸癌細胞の生存または増殖、治療に対する再感作、胃腸癌の治療または予防、あるいは治療法に対する対象の応答性または腫瘍に優れた効果がある。一実施形態では、プロポリスおよびγ−シクロデキストリンは、必要に応じて、同時投与または順次投与された胃腸癌治療の投与の、投与量または投与期間の減少または増加を可能にする。
【００３７】
本発明の他の態様では、本明細書に記載した目的のための組成物の製造におけるプロポリスおよびシクロデキストリンの使用に関する。
【００３８】
本発明の他の態様では、本明細書に記載した目的のための組成物の製造における、少なくとも一つの追加の治療薬とプロポリスおよびγ−シクロデキストリンの使用に関する。
【００３９】
本発明の他の態様では、本明細書に記載した目的のための組成物の製造における、少なくとも１つの追加の治療薬とプロポリスおよびγ−シクロデキストリンを含む複合体の使用であって、組成物が、プロポリスおよびγ−シクロデキストリン複合体ならびに少なくとも１つの追加の治療薬の、個別、同時、または順次投与を提供するために処方される、前記使用に関する。
【００４０】
本発明の他の態様は、プロポリスおよびγ−シクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物に関する。
【００４１】
本発明の他の態様は、本明細書に記載した目的のための、プロポリスおよびγ−シクロデキストリンを、任意で１つ以上、２つ以上または３つ以上の追加の治療薬と同時、個別または順次使用のための組合せ調製剤として、含む、本質的に含んでなる、またはからなる製品に関する。
【００４２】
本発明の他の態様は、胃腸癌の治療または予防における使用のための本発明の組成物に関する。
【００４３】
以下の実施形態は、上述の態様のいずれかに関し得る。
【００４４】
様々な実施形態において、シクロデキストリンはγ−シクロデキストリンであるか、または、シクロデキストリンは、γ−シクロデキストリンを含むシクロデキストリンの組み合わせとして存在する。
【００４５】
一実施形態において、シクロデキストリンは化学修飾シクロデキストリンである。
【００４６】
一実施形態において、プロポリスは、プロポリス抽出物またはフラクションとして抗胃腸癌組成物中に存在する。
【００４７】
一実施形態では、抗胃腸癌組成物中に存在するプロポリスは、ロウを含まない。例えば、プロポリスは当該技術分野において既知である抽出方法を用いて脱ロウされてきた。
【００４８】
一実施形態において、プロポリスは「ヨーロッパ産」または「ポプラ」プロポリスである。例えば、「ヨーロッパ産」プロポリスは、１つまたは複数のポプラ、シラカバ、マツまたはヤナギ種の芽および葉の滲出液に少なくとも一部が由来する。他の実施形態では、プロポリスは「ブラジル産グリーン」プロポリスである。例えば、「ブラジル産」プロポリスは、少なくとも部分的にバッカリス・ドラクンクリフォーリアの葉の浸出液からミツバチによって得られる。
【００４９】
一実施形態において、この組成物は約１．０重量％〜約９９重量％のプロポリスを含む。他の実施形態では、この組成物は約１．０重量％〜約９９重量％のプロポリス樹脂を含む。
【００５０】
様々な実施形態では、組成物は、約１重量％〜約９９重量％のプロポリス、約１重量％〜約２５重量％のプロポリス、約１重量％〜約３０重量％のプロポリス、約５重量％〜約２５重量％のプロポリス、約５重量％〜約３０重量％のプロポリス、約５重量％〜約９９重量％のプロポリス、約１０重量％〜約２５重量％のプロポリス、約１０重量％〜約３０重量％のプロポリス、約１０重量％〜約９９重量％のプロポリス、約１５重量％〜約２５重量％、約１５重量％〜約３０重量％、約１５重量％〜約９９重量％、約２０重量％〜約２５重量％、約２０重量％〜約３０重量％、約２０重量％〜約９９重量％または約２５重量％のプロポリス、または約３０重量％のプロポリスを含む。
【００５１】
様々な実施形態では、組成物は、約１重量％〜約９９重量％のプロポリス樹脂、約１重量％〜約２５重量％のプロポリス樹脂、約１重量％〜約３０重量％のプロポリス樹脂、約５重量％〜約２５重量％のプロポリス樹脂、約５重量％〜約３０重量％のプロポリス樹脂、約５重量％〜約９９重量％のプロポリス樹脂、約１０重量％〜約２５重量％のプロポリス樹脂、約１０重量％〜約３０重量％のプロポリス樹脂、約１０重量％〜約９９重量％のプロポリス樹脂、約１５重量％〜約２５重量％、約１５重量％〜約３０重量％、約１５重量％〜約９９重量％、約２０重量％〜約２５重量％、約２０重量％〜約３０重量％、約２０重量％〜約９９重量％、または約２５重量％のプロポリス樹脂、または約３０重量％のプロポリス樹脂を含む。
【００５２】
一実施形態において、組成物中のプロポリスは、シクロデキストリン内に完全に内包されている。
【００５３】
一実施形態において、組成物中のプロポリスに対するシクロデキストリンのモル比は、約１：１未満である。
【００５４】
一実施形態において、ヨーロッパ産のプロポリスはカフェイン酸フェニルエーテルエステル（ＣＡＰＥ）を含む。一実施形態において、ヨーロッパ産のプロポリスはクリシンを含む。一実施形態において、ヨーロッパ産のプロポリスはカフェイン酸を含む。一実施形態において、ヨーロッパ産のプロポリスはカフェ酸ベンジルを含む。一実施形態において、ヨーロッパ産のプロポリスはピノバンクシンを含む。一実施形態において、ヨーロッパ産のプロポリスはピノセムブリンを含む。一実施形態において、ヨーロッパ産のプロポリスはガランギンを含む。
【００５５】
様々な実施形態では、ヨーロッパ産のプロポリスは、２つ以上のＣＡＰＥ、クリシン、ガランギン、ピノセムブリン、ピノバンクシン、カフェ酸ベンジルおよびカフェイン酸の任意の組合せを含む。
【００５６】
一実施形態において、ヨーロッパ産プロポリスは、約１ｍｇ／ｇ、約１．５ｍｇ／ｇ以下、約２ｍｇ／ｇ以下、約２．５ｍｇ／ｇ、約３ｍｇ／ｇ、約３．５ｍｇ／ｇ、約４ｍｇ／ｇ、約４．５ｍｇ／ｇ、約５ｍｇ／ｇ、約５．５ｍｇ／ｇ、約６ｍｇ／ｇ、約７．５ｍｇ／ｇ、約１０ｍｇ／ｇ、約１５ｍｇ／ｇ、約２０ｍｇ／ｇ、約２５ｍｇ／ｇ、約３０ｍｇ／ｇ、約４０ｍｇ／ｇ、約５０ｍｇ／ｇ、約７５ｍｇ／ｇ、約１００ｍｇ／ｇ、約１２５ｍｇ／ｇ、約１５０ｍｇ／ｇ、約１７５ｍｇ／ｇ、約２００ｍｇ／ｇ、２５０ｍｇ／ｇ、約３００ｍｇ／ｇ、約３５０ｍｇ／ｇ、約４００ｍｇ／ｇ、約４５０ｍｇ／ｇ、約５００ｍｇ／ｇ、約５５０ｍｇ／ｇ、約６００ｍｇ／ｇ、約６５０ｍｇ／ｇ、約７００ｍｇ／ｇ、約７５０ｍｇ／ｇ、約８００ｍｇ／ｇ、約８５０ｍｇ／ｇ、約９００ｍｇ／ｇ、約９５０ｍｇ／ｇ、最大で約１０００ｍｇ／ｇより高いＣＡＰＥ濃度を有する。
【００５７】
一実施形態において、ヨーロッパ産プロポリスは、約１ｍｇ／ｇ、約１．５ｍｇ／ｇ以下、約２ｍｇ／ｇ以下、約２．５ｍｇ／ｇ、約３ｍｇ／ｇ、約３．５ｍｇ／ｇ、約４ｍｇ／ｇ、約４．５ｍｇ／ｇ、約５ｍｇ／ｇ、約５．５ｍｇ／ｇ、約６ｍｇ／ｇ、約７．５ｍｇ／ｇ、約１０ｍｇ／ｇ、約１５ｍｇ／ｇ、約２０ｍｇ／ｇ、約２５ｍｇ／ｇ、約３０ｍｇ／ｇ、約４０ｍｇ／ｇ、約５０ｍｇ／ｇ、約７５ｍｇ／ｇ、約１００ｍｇ／ｇ、約１２５ｍｇ／ｇ、約１５０ｍｇ／ｇ、約１７５ｍｇ／ｇ、約２００ｍｇ／ｇ、２５０ｍｇ／ｇ、約３００ｍｇ／ｇ、約３５０ｍｇ／ｇ、約４００ｍｇ／ｇ、約４５０ｍｇ／ｇ、約５００ｍｇ／ｇ、約５５０ｍｇ／ｇ、約６００ｍｇ／ｇ、約６５０ｍｇ／ｇ、約７００ｍｇ／ｇ、約７５０ｍｇ／ｇ、約８００ｍｇ／ｇ、約８５０ｍｇ／ｇ、約９００ｍｇ／ｇ、約９５０ｍｇ／ｇ、最大で約１０００ｍｇ／ｇより高いピノセムブリン濃度を有する。
【００５８】
一実施形態において、ヨーロッパ産プロポリスは、約１ｍｇ／ｇ、約１．５ｍｇ／ｇ以下、約２ｍｇ／ｇ以下、約２．５ｍｇ／ｇ、約３ｍｇ／ｇ、約３．５ｍｇ／ｇ、約４ｍｇ／ｇ、約４．５ｍｇ／ｇ、約５ｍｇ／ｇ、約５．５ｍｇ／ｇ、約６ｍｇ／ｇ、約７．５ｍｇ／ｇ、約１０ｍｇ／ｇ、約１５ｍｇ／ｇ、約２０ｍｇ／ｇ、約２５ｍｇ／ｇ、約３０ｍｇ／ｇ、約４０ｍｇ／ｇ、約５０ｍｇ／ｇ、約７５ｍｇ／ｇ、約１００ｍｇ／ｇ、約１２５ｍｇ／ｇ、約１５０ｍｇ／ｇ、約１７５ｍｇ／ｇ、約２００ｍｇ／ｇ、２５０ｍｇ／ｇ、約３００ｍｇ／ｇ、約３５０ｍｇ／ｇ、約４００ｍｇ／ｇ、約４５０ｍｇ／ｇ、約５００ｍｇ／ｇ、約５５０ｍｇ／ｇ、約６００ｍｇ／ｇ、約６５０ｍｇ／ｇ、約７００ｍｇ／ｇ、約７５０ｍｇ／ｇ、約８００ｍｇ／ｇ、約８５０ｍｇ／ｇ、約９００ｍｇ／ｇ、約９５０ｍｇ／ｇ、最大で約１０００ｍｇ／ｇより高いガランギン濃度を有する。
【００５９】
一実施形態において、ヨーロッパ産プロポリスは、約１ｍｇ／ｇ、約１．５ｍｇ／ｇ以下、約２ｍｇ／ｇ以下、約２．５ｍｇ／ｇ、約３ｍｇ／ｇ、約３．５ｍｇ／ｇ、約４ｍｇ／ｇ、約４．５ｍｇ／ｇ、約５ｍｇ／ｇ、約５．５ｍｇ／ｇ、約６ｍｇ／ｇ、約７．５ｍｇ／ｇ、約１０ｍｇ／ｇ、約１５ｍｇ／ｇ、約２０ｍｇ／ｇ、約２５ｍｇ／ｇ、約３０ｍｇ／ｇ、約４０ｍｇ／ｇ、約５０ｍｇ／ｇ、約７５ｍｇ／ｇ、約１００ｍｇ／ｇ、約１２５ｍｇ／ｇ、約１５０ｍｇ／ｇ、約１７５ｍｇ／ｇ、約２００ｍｇ／ｇ、２５０ｍｇ／ｇ、約３００ｍｇ／ｇ、約３５０ｍｇ／ｇ、約４００ｍｇ／ｇ、約４５０ｍｇ／ｇ、約５００ｍｇ／ｇ、約５５０ｍｇ／ｇ、約６００ｍｇ／ｇ、約６５０ｍｇ／ｇ、約７００ｍｇ／ｇ、約７５０ｍｇ／ｇ、約８００ｍｇ／ｇ、約８５０ｍｇ／ｇ、約９００ｍｇ／ｇ、約９５０ｍｇ／ｇ、最大で約１０００ｍｇ／ｇより高いクリシン濃度を有する。
【００６０】
一実施形態において、ヨーロッパ産プロポリスは、約１ｍｇ／ｇ、約１．５ｍｇ／ｇ以下、約２ｍｇ／ｇ以下、約２．５ｍｇ／ｇ、約３ｍｇ／ｇ、約３．５ｍｇ／ｇ、約４ｍｇ／ｇ、約４．５ｍｇ／ｇ、約５ｍｇ／ｇ、約５．５ｍｇ／ｇ、約６ｍｇ／ｇ、約７．５ｍｇ／ｇ、約１０ｍｇ／ｇ、約１５ｍｇ／ｇ、約２０ｍｇ／ｇ、約２５ｍｇ／ｇ、約３０ｍｇ／ｇ、約４０ｍｇ／ｇ、約５０ｍｇ／ｇ、約７５ｍｇ／ｇ、約１００ｍｇ／ｇ、約１２５ｍｇ／ｇ、約１５０ｍｇ／ｇ、約１７５ｍｇ／ｇ、約２００ｍｇ／ｇ、２５０ｍｇ／ｇ、約３００ｍｇ／ｇ、約３５０ｍｇ／ｇ、約４００ｍｇ／ｇ、約４５０ｍｇ／ｇ、約５００ｍｇ／ｇ、約５５０ｍｇ／ｇ、約６００ｍｇ／ｇ、約６５０ｍｇ／ｇ、約７００ｍｇ／ｇ、約７５０ｍｇ／ｇ、約８００ｍｇ／ｇ、約８５０ｍｇ／ｇ、約９００ｍｇ／ｇ、約９５０ｍｇ／ｇ、最大で約１０００ｍｇ／ｇより高いカフェ酸ベンジル濃度を有する。
【００６１】
様々な実施形態では、組成物は、１つまたは複数のカフェイン酸フェニルエーテルエステル（ＣＡＰＥ）、カフェイン酸、ピノセムブリン、カフェ酸ベンジル、クリシン、ガランギン、およびピノバンクシンを含む。
【００６２】
例示的実施形態では、組成物は、１つまたは複数のＣＡＰＥ、カフェイン酸、ピノセムブリン、カフェ酸ベンジル、クリシン、ガランギンおよびピノバンクシンが追加されている。
【００６３】
一実施形態において、組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇより高いＣＡＰＥ濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間で選択することができる（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）。
【００６４】
一実施形態において、組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇより高いピノセムブリン濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間で選択することができる（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）。
【００６５】
一実施形態において、組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇより高いガランギン濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間で選択することができる（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）。
【００６６】
一実施形態において、組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇより高いクリシン濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間で選択することができる（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）。
【００６７】
一実施形態において、組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇより高いピノバンクシン濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間で選択することができる（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）。
【００６８】
一実施形態において、組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇより高いカフェイン酸濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間で選択することができる（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）。
【００６９】
様々な実施形態では、組成物は、少なくとも１つの追加の治療薬を含むか、または、同時、順次、もしくは個別に投与され、好ましくは、少なくとも１つの追加の治療薬は抗腫瘍薬であり、好ましくは、抗腫瘍薬は、抗腫瘍食品成分、化学療法薬、または免疫療法薬から選択される。
【００７０】
様々な実施形態では、上記胃腸癌治療、治療薬、または抗腫瘍薬は、アポトーシスを誘導するために、例えば、１つまたは複数の胃腸癌細胞あるいは１つまたは複数の腫瘍性細胞でアポトーシスを誘導するために、有効である。
【００７１】
一実施形態においては、胃腸癌治療、治療薬、または抗腫瘍剤は、ブチレートまたはブチレート源である。
【００７２】
さらなる実施形態では、ブチレートは、腸または結腸のミクロフローラによるシクロデキストリンの消化によって生成される。
【００７３】
一実施形態において、組成物は消費財である。
【００７４】
一実施形態において、組成物は、食品、飲料、食品添加物、飲料用添加物、栄養補助食品、栄養製品、医療食品、栄養補給食品、医薬品または薬剤である。
【００７５】
様々な実施形態において、組成物は、経口、局所、または非経口投与のために処方されうる。
【００７６】
一実施形態において、組成物は、１つまたは複数の追加の抗胃腸癌薬を含む。
【００７７】
一実施形態において、組成物は医薬組成物である。
【００７８】
様々な実施形態では、化学療法薬は、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ビンフルニンを含むビンカアルカロイドなどの分裂抑制剤、ポドフィロトキシン、ドセタキセル、ラロタキセル、オルタタキセル、パクリタキセルおよびテセタキセルを含むタキサン系、ならびにイクサベピロンなどのエポチロン類；トポテカン、イリノテカン、カンプトセシン、ルビテカンおよびベロテカンなどのトポイソメラーゼＩ阻害剤、アムサクリン、エトポシド、エトポシドホスファートおよびテニポシドを含むトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、アクラルビシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、アムルビシン、ピラルビシン、バルルビシン、およびゾルビシンなどのアントラサイクリン、ならびにミトキサントロンおよびピキサントロンなどのアントラセンジオン；アミノプテリンなどのジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤を含むアンチメタボライト、メトトレキサート、ペメトレキセド、ラルチトレキセドおよびペメトレキセドなどのチミジル酸シンターゼ阻害剤、ペントスタチンを含むアデノシンデアミナーゼ阻害剤、クラドリビン、クロファラビンおよびフルダラビンなどのハロゲンまたはリボヌクレオチド還元酵素阻害剤、チオグアノシンおよびメルカプトプリンを含むチオプリン、フルオロウラシル、カペシタビン、テガフール、カルモフールおよびフロクスウリジンを含むチミジル酸シンターゼ阻害剤、シタラビンなどのＤＮＡポリメラーゼ阻害剤、ゲムシタビンなどのリボヌクレオチド還元酵素阻害剤、アザシチジンおよびデシタビンなどの低メチル化剤、ならびにヒドロキシ尿素などのリボヌクレオチド還元酵素阻害剤；メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、トロホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、プレドニムスチン、ベンダムスチン、ウラムスチン、エストラムスチン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、フォテムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、およびストレプトゾシンなどのニトロソ尿素を含む、ナイトロジェンマスタードなどのアルキル化剤を含む、細胞周期非特異抗新生物剤、ブスルファン、マンノスルファン、およびトレオスルファンなどのアルキルスルホン酸塩、カルボコン、チオテパ、トリアジコン、およびトリエチレンメラミンなどのアジリジン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、トリ白金テトラニトラート、サトラプラチンなどの白金剤を含むアルキル化剤類、プロカルバジン、トリアゼン、例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、アルトレタミンなどのヒドラジン類、およびミトブロニトール、ならびにアクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノマイシン、マイトマイシン、およびプリカマイシンなどのストレプトマイシン類；アミノレブリン酸、アミノレブリン酸メチル、エファプロキシラル、ならびにポルフィマーナトリウム、タラポルフィン、テモポルフィンおよびベルテポルフィンなどの光増感剤；例えば、ティピファニブ、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、例えば、アルボシジブおよびセリシクリブ、プロテアソーム阻害剤、例えば、ボルテゾミブ、ホスホジエステラーゼ酵素阻害剤、例えば、アナグレリド、ＩＭＰデヒドロゲナーゼ酵素阻害剤、例えば、チアゾフリン、リポオキシゲナーゼ酵素阻害剤、例えば、マソプロコール、ＰＡＲＰ酵素阻害剤、例えば、オラパリブなどのファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬を含む酵素阻害剤；アトラセンタン、レチノイドＸ受容体拮抗剤、例えば、ベキサロテンおよびテストラクトンなどのエンドテリン受容体拮抗剤のような受容体拮抗剤；ならびにアムサクリン、トラベクテジンなどの他の化学療法剤は、例えば、アリトレチノインおよびトレチノイン、三酸化ヒ素、などのレチノイド、例えば、アスパラギナーゼまたはペガスパルガーゼ、セレコキシブ、デメコルチン、エレスクロモルとして、エルサマイシン、エトグルシド、およびロニダミンなどのアスパラギン欠乏剤からなる群から選択される。
【００７９】
本明細書に開示された数値（例えば、１〜１０）の範囲への言及は、その範囲内の全ての有理数（例えば、１、１．１、２、３、３．９、４、５、６、６．５、７、８、９および１０）と、その範囲内の有理数の任意の範囲（例えば、２〜８、１．５〜５．５および３．１〜４．７）を参照し、したがって、本明細書に明示的に開示されるすべての範囲のすべての部分的な範囲はここに明示的に開示されて組み込むことが意図されている。これらは具体的に意図されているものの例のみであり、列挙された最小値と最大値との間の数値のすべての可能な組み合わせが同様に、本出願に明確に記載されたものと見なされるべきである。
【００８０】
特許明細書、他の外部文書、または他の情報源を参照する本明細書において、、これは概して、本発明の特徴を議論するための背景を提供する目的のためである。特に指示のない限り、かかる外部文書への参照は、かかる文書、またはかかる情報源が、任意の管轄で、先行技術、または当該技術分野において一般的に知られている一部を形成することを認めるものとして解釈されるべきではない。
【００８１】
本発明はまた、部分、要素および特徴、個々にまたは一括して参照または本願明細書に示され、任意または前記部分、要素または特徴の２つ以上の全ての組み合わせに存するように広く言えるものであってよく、特定の整数は本発明が関連する当該技術分野において知られている同等物に記載されている、かかる既知の等価物は、個々に明記するかのように本明細書に組み込まれていると見なされる。
[本発明1001]
対象における胃腸癌を治療または予防する、あるいは対象における1つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
[本発明1002]
対象における胃腸腫瘍の形成を阻害する、胃腸腫瘍の成長を阻害する、胃腸腫瘍の転移を阻害する、あるいは胃腸癌を治療または予防する方法であって、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物の有効量を、それを必要とする対象に個別、同時または順次投与することを含む、方法。
[本発明1003]
胃腸癌治療に対する対象の応答性を増加させる、または胃腸癌治療に対する対象における胃腸腫瘍の感度を増加させる方法であって、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
[本発明1004]
治療に抵抗性である1つまたは複数の胃腸癌細胞を再感作する方法であって、該1つまたは複数の癌細胞に、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物の有効量を投与することを含む、方法。
[本発明1005]
胃腸癌を患う対象における腫瘍性細胞の胃腸癌治療に対する抵抗性を少なくとも部分的に逆転する、胃腸癌を抱えた患者の胃腸癌治療に対する抵抗性を完全にまたは部分的に逆転する、あるいは胃腸癌治療に対して抵抗性であるか、または抵抗性であるかもしくは抵抗性になると予測される、胃腸癌を抱えた患者の1つまたは複数の腫瘍を再感作する方法であって、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物を、前記対象へ投与することを含む、方法。
[本発明1006]
プロポリスおよびシクロデキストリン、特にプロポリスおよびγ−シクロデキストリン、例えばヨーロッパ産プロポリスおよびγ−シクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、消化管の健康状態を改善する方法。
[本発明1007]
前記組成物がプロポリスおよびシクロデキストリンからなる、本発明1001〜1006のいずれかの方法。
[本発明1008]
対象における胃腸腫瘍の形成を阻害する、胃腸腫瘍の成長を阻害する、胃腸腫瘍の転移を阻害する、あるいは胃腸癌を治療または予防する；対象における1つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞のアポトーシスを誘導する；胃腸癌治療に対する対象の応答性を増加させる；胃腸癌治療に対する対象の胃腸腫瘍の感度を増加させる；治療に対して抵抗性である対象における1つまたは複数の胃腸癌細胞を再感作する；胃腸癌を患う対象の腫瘍性細胞の胃腸癌治療に対する抵抗性を少なくとも部分的に逆転する；胃腸癌を抱えた患者の胃腸癌治療に対する抵抗性を完全にまたは部分的に逆転する；あるいは胃腸癌治療に対して抵抗性である、または抵抗性であるかもしくは抵抗性になると予測される、胃腸癌を抱えた患者の1つまたは複数の腫瘍を、胃腸癌治療に対して再感作する
際に使用する組成物の製造における、プロポリスおよびシクロデキストリンの使用。
[本発明1009]
前記シクロデキストリンがγ−シクロデキストリンである、本発明1008の使用。
[本発明1010]
前記組成物が少なくとも1つの追加の治療薬を含む、本発明1008または1009の使用。
[本発明1011]
プロポリスおよびシクロデキストリンを含む抗胃腸癌組成物。
[本発明1012]
前記シクロデキストリンがγ−シクロデキストリンであるか、または前記シクロデキストリンが、γ−シクロデキストリンを含むシクロデキストリン類の組み合わせとして存在する、本発明1001〜1007のいずれかの方法、本発明1008〜1010のいずれかの使用、または本発明1011の組成物。
[本発明1013]
前記シクロデキストリンが化学修飾シクロデキストリンである、本発明1001〜1007もしくは1012のいずれかの方法、本発明1008〜1010もしくは1012のいずれかの使用、または本発明1011もしくは1012の組成物。
[本発明1014]
前記プロポリスがプロポリス抽出物またはフラクションである、本発明1001〜1007、1012もしくは1013のいずれかの方法、本発明1008〜1010、1012もしくは1013のいずれかの使用、または本発明1011〜1013のいずれかの組成物。
[本発明1015]
前記プロポリスがロウを含まない、本発明1014の方法、使用、または組成物。
[本発明1016]
前記プロポリスがヨーロッパ産またはポプラプロポリスである、本発明1001〜1007もしくは1012〜1014のいずれかの方法、本発明1008〜1010もしくは1012〜1014のいずれかの使用、または本発明1011〜1014のいずれかの組成物。
[本発明1017]
前記プロポリスがブラジル産グリーンプロポリスである、本発明1001〜1007もしくは1012〜1014のいずれかの方法、本発明1008〜1010もしくは1012〜1014のいずれかの使用、または本発明1011〜1014のいずれかの組成物。
[本発明1018]
前記ブラジル産グリーンプロポリスが、少なくとも部分的にバッカリス・ドラクンクリフォーリアの葉の滲出物からミツバチにより得られる、本発明1017の方法、使用、または組成物。
[本発明1019]
前記組成物が約1．0重量％〜約99重量％のプロポリスを含む、本発明1001〜1007もしくは1012〜1018のいずれかの方法、本発明1008〜1010もしくは1012〜1018のいずれかの使用、または本発明1011〜1018のいずれかの組成物。
[本発明1020]
前記組成物が約1．0重量％〜約99重量％のプロポリス樹脂を含む、本発明1001〜1007もしくは1012〜1018のいずれかの方法、本発明1008〜1010もしくは1012〜1018のいずれかの使用、または本発明1011〜1018のいずれかの組成物。
[本発明1021]
前記組成物が、約1重量％〜約99重量％のプロポリス、約1重量％〜約25重量％のプロポリス、約1重量％〜約30重量％のプロポリス、約5重量％〜約25重量％のプロポリス、約5重量％〜約30重量％のプロポリス、約5重量％〜約99重量％のプロポリス、約10重量％〜約25重量％のプロポリス、約10重量％〜約30重量％のプロポリス、約10重量％〜約99重量％のプロポリス、約15重量％〜約25重量％、約15重量％〜約30重量％、約15重量％〜約99重量％、約20重量％〜約25重量％、約20重量％〜約30重量％、約20重量％〜約99重量％、または約25重量％のプロポリス、または約30重量％のプロポリスを含む、本発明1019の方法、使用、または組成物。
[本発明1022]
前記組成物が、約1重量％〜約99重量％のプロポリス樹脂、約1重量％〜約25重量％のプロポリス樹脂、約1重量％〜約30重量％のプロポリス樹脂、約5重量％〜約25重量％のプロポリス樹脂、約5重量％〜約30重量％のプロポリス樹脂、約5重量％〜約99重量％のプロポリス樹脂、約10重量％〜約25重量％のプロポリス樹脂、約10重量％〜約30重量％のプロポリス樹脂、約10重量％〜約99重量％のプロポリス樹脂、約15重量％〜約25重量％、約15重量％〜約30重量％、約15重量％〜約99重量％、約20重量％〜約25重量％、約20重量％〜約30重量％、約20重量％〜約99重量％、または約25重量％のプロポリス樹脂、または約30重量％のプロポリス樹脂を含む、本発明1020の方法、使用、または組成物。
[本発明1023]
前記組成物中のプロポリスがシクロデキストリンに完全に内包されている、本発明1001〜1007もしくは1012〜1022のいずれかの方法、本発明1008〜1010もしくは1012〜1022のいずれかの使用、または本発明1011〜1022のいずれかの組成物。
[本発明1024]
前記組成物中のシクロデキストリンに対するプロポリスのモル比が約1：1以下である、本発明1001〜1007もしくは1012〜1023のいずれかの方法、本発明1008〜1010もしくは1012〜1023のいずれかの使用、または本発明1011〜1023のいずれかの組成物。
[本発明1025]
プロポリスおよびγ−シクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物。
[本発明1026]
対象における胃腸腫瘍の形成を阻害する、胃腸腫瘍の成長を阻害する、胃腸腫瘍の転移を阻害する、あるいは胃腸癌を治療または予防する；対象における1つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞のアポトーシスを誘導する；胃腸癌治療に対する対象の応答性を増加させる；胃腸癌治療に対する対象の胃腸腫瘍の感度を増加させる；治療に対して抵抗性である対象における1つまたは複数の胃腸癌細胞を再感作する；胃腸癌を患う対象の胃腸癌治療に対する腫瘍性細胞の抵抗性を少なくとも部分的に逆転する；胃腸癌を抱えた患者の胃腸癌治療に対する抵抗性を完全にまたは部分的に逆転する；あるいは、胃腸癌治療に対して抵抗性である、または抵抗性であるかもしくは抵抗性になると予測される、胃腸癌を抱えた患者の1つまたは複数の腫瘍を、胃腸癌治療に対して再感作する
際に使用する、先行する本発明のいずれかの組成物。
[本発明1027]
胃腸癌の治療または予防に使用するための、本発明1026の組成物。
[本発明1028]
シクロデキストリンを含む抗胃腸癌組成物。
[本発明1029]
前記ヨーロッパ産プロポリスが、約1ｍｇ／ｇを超える濃度のカフェイン酸フェニルエーテルエステルを有する、本発明1016の方法、使用、または組成物。
[本発明1030]
前記ヨーロッパ産プロポリスが、約10ｍｇ／ｇを超える濃度のピノセムブリンを有する、本発明1016または1029の方法、使用、または組成物。
[本発明1031]
前記ヨーロッパ産プロポリスが、約5ｍｇ／ｇを超える濃度のガランギンを有する、本発明1016、1029または1030の方法、使用、または組成物。
[本発明1032]
前記ヨーロッパ産プロポリスが、約3．5ｍｇ／ｇを超える濃度のクリシンを有する、本発明1016または1029〜1031のいずれかの方法、使用、または組成物。
[本発明1033]
前記組成物が、カフェイン酸フェニルエーテルエステル（ＣＡＰＥ）、カフェイン酸、ピノセムブリン、カフェ酸ベンジル、クリシン、ガランギン、およびピノバンクシンのうちの2つ以上を含む、本発明1001〜1032のいずれかの方法、使用、または組成物。
[本発明1034]
前記組成物が、ＣＡＰＥ、カフェイン酸、ピノセムブリン、カフェ酸ベンジル、クリシン、ガランギン、およびピノバンクシンの1つまたは複数を添加されたものである、本発明1001〜1033のいずれかの方法、使用、または組成物。
[本発明1035]
前記組成物が、約1ｍｇ／ｇを超えるＣＡＰＥ濃度を有する、本発明1001〜1034のいずれかの方法、使用、または組成物。
[本発明1036]
組成物が、約1ｍｇ／ｇを超えるピノセムブリン濃度を有する、本発明1001〜1035のいずれかの方法、使用、または組成物。
[本発明1037]
前記組成物が、約1ｍｇ／ｇを超えるガランギン濃度を有する、本発明1001〜1036のいずれかの方法、使用、または組成物。
[本発明1038]
前記組成物が、約1ｍｇ／ｇを超えるクリシン濃度を有する、本発明1001〜1037のいずれかの方法、使用、または組成物。
[本発明1039]
前記組成物が、約1ｍｇ／ｇを超えるより高いピノバンクシン濃度を有する、本発明1001〜1038のいずれかの方法、使用、または組成物。
[本発明1040]
前記組成物が、約1ｍｇ／ｇを超えるより高いカフェイン酸濃度を有する、本発明1001〜1039のいずれかの方法、使用、または組成物。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１】実施例１に記載されているように、ヨーロッパ産プロポリス−シクロデキストリン複合体、ＣＡＰＥ富化ヨーロッパ産プロポリス−シクロデキストリン、ヨーロッパ産プロポリスチンキ剤および非修飾シクロデキストリンを使用したＤＬＤ−１アッセイのデータをまとめてグラフに示した。１Ａのグラフでは、背の高いバーはアッセイにおけるフラクションのより高い活性（阻害％）とその逆を示している。１Ｂのグラフは、実施例１に記載されているように、プロポリスを含む試料についての有効％（％有効性＝％阻害／プロポリス濃度）、および同定された試料についての阻害％を示している。
【図２】純粋なＣＡＰＥに対する本発明の組成物中のＣＡＰＥの有効性の比較。有効性は、有効濃度に対する相対的阻害（％阻害／試験培地における有効濃度）として提示される。高い値は、高い有効性に相当する。
【図３】陰性コントロール（細胞のみ）と比較した、ＨＣＴ−１１６およびＨＣＴ−１１６−Ｒ細胞のアポトーシスに対する、ＣＡＰＥ、ヨーロッパ産プロポリスシクロデキストリン複合体、ブチレートおよびこれらの混合物の効果。
【発明を実施するための形態】
【００８３】
詳細な説明
本発明は、プロポリスおよびシクロデキストリン、特にγ−シクロデキストリン、例えば、ヨーロッパ産プロポリスおよびγ−シクロデキストリンを含む組成物が、増強された効力を含む抗胃腸癌効力および予防活性を有するという発見に基づく。本発明の医薬組成物、例えば本発明の抗胃腸癌組成物は、プロポリスの活性および物理化学的性質を増強させる。本発明の栄養補助食品組成物、例えば、本発明の消化管健康組成物も、組成物中に存在するプロポリスの活性および物理化学的性質を増強させる。
【００８４】
したがって、抗胃腸癌組成物は、哺乳動物対象への投与に適するように、例えばそれらが人体に安全な物質で構成され、製剤化されていれば、栄養補助食品組成物、飲料、食品などの消費財でだけはなく、抗胃腸癌医薬組成物や薬の製造に使用することができる。
【００８５】
さらに、本発明の組成物の実施形態の抗胃腸癌活性は持続的に維持されるため、組成物の投与量または投与回数を低減させることができ、またはより高い効力が提供され、あるいはその両方である。
【００８６】
本発明の（本明細書において互換的に使用される）用語「抗胃腸癌組成物」または「抗胃腸癌活性を有する組成物」は、組成物の任意の種類を考慮する。例としては、プロポリスおよびシクロデキストリンを含有する抗胃腸癌組成物、または、プロポリスを含有する材料およびシクロデキストリンを含有する抗胃腸癌組成物が挙げられる。プロポリスまたはシクロデキストリン単独でのいずれかで観察される、任意の抗胃腸癌活性を増強する相乗作用組成物が、特に考慮される。抗胃腸癌組成物は、抗結腸直腸癌、抗胃癌または抗咽喉癌組成物でありうる。
【００８７】
「および／または」という語は、「および」または「または」を意味しうる。
【００８８】
用語「癌」および「癌性」は、一般に、異常または無秩序な細胞増殖、細胞生存、細胞運動性、腫瘍性および／または発癌性を特徴とする、哺乳動物における生理的状態を指す。癌および癌の病状は、例えば、転移、隣接細胞の正常な機能の妨害、サイトカインの分泌または他の異常なレベルでの分泌産物、抑制または炎症の悪化または、免疫反応、新生組織形成、前悪性、悪性度、周囲または離れた組織あるいは臓器への侵入、例えばリンパ節などに関連付けることができる。具体的には、上皮性腫瘍、非上皮性腫瘍、癌腫類、腺癌類、胃リンパ腫、カルチノイド腫瘍、間質性腫瘍類または扁平上皮癌、例えば、上皮内癌、同様に、侵襲性の結腸直腸、胃または咽喉癌の結腸直腸癌、胃癌、咽喉癌および前癌状態が挙げられる。
【００８９】
本明細書で使用される「含む」という用語は、「少なくとも一部からなる」を意味する。各々に記述の用語によって、用語、特徴、序文を含む本明細書における記述を解釈する場合、すべてが存在する必要があるが、他の特徴もまた存在することができる。「含み」や「含まれる」などの関連用語も同様に解釈されるべきである。
【００９０】
「有効量」は、治療効果を与えるために必要な量である。動物およびヒトへの投与量の相互関係（体表面の平方メートル当たりのミリグラムに基づく）が、フレーライク（Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈ）ら（１９６６年）によって記載されている。体表面積は、対象の身長と体重からおおよそ決定できる（例えば、科学的表（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｔａｂｌｅｓ）、ガイギー医薬品（Ｇｅｉｇｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、アードリー（Ａｒｄｌｅｙ）（ニューヨーク州、１９７０年、５３７）を参照）。有効な用量はまた、当業者に認識されているように、投与経路や賦形剤の使用などに依存して異なる。
【００９１】
本明細書で使用されるとき、プロポリスの「抽出物」または「フラクション」は、少なくともプロポリスによって示される１つまたは複数の抗胃腸癌活性をそれらが保持している場合に、本発明での使用に適している。そのような機能的抽出物または機能的フラクションは、未精製のプロポリスよりも大きなまたは小さな活性を有し得る。一例として、機能的抽出物または機能的フラクションが有する未精製のプロポリスの１つまたは複数の生物学的活性は、未精製のプロポリスで見られるよりも大きなまたは小さな程度で、機能的抽出物または機能的フラクションにおいて存在する場合がある。別の例では、機能的抽出物または機能的フラクションが有する未精製のプロポリスの各々の生物学的活性は、未精製のプロポリスで見られるよりも大きなまたは小さな程度で、機能的抽出物または機能的フラクションに存在する。さらに別の例では、未精製のプロポリスの１つまたは複数の生物学的活性が維持されているか、未精製のプロポリスで見られるよりも大きな程度で存在しているが、未精製のプロポリスの１つまたは複数の他の生物学的活性は、存在しないか、または未精製のプロポリスに見られるよりも小さな程度である、機能的抽出物または機能的フラクションを提供することが好ましい場合がある。このような機能的抽出物の例は、本明細書中の実施例に記載の抗胃腸癌チンキ剤が挙げられる。
【００９２】
プロポリスによって誘発される１つまたは複数の生物学的効果があるかを決定するための方法とアッセイは、当該技術分野において周知であり、例が本明細書に記載されており、かかる方法とアッセイは、プロポリスの１つまたは複数の機能的抽出物または機能的フラクションを同定または検証するために使用することができる。例えば、本明細書において実施例に記載されるもののような細胞内の１つまたは複数の発癌性の特徴を増加させるプロポリスの能力のアッセイは、プロポリスの１つまたは複数の機能的抽出物または機能的フラクションを同定することに適している。
【００９３】
本明細書で使用する場合、「プロポリス」は、任意の植物源からミツバチにより生産されたプロポリスを意図する。一実施形態において、プロポリスは「ヨーロッパ産」プロポリスである。「ヨーロッパ産」プロポリスは、「ポプラ」プロポリスなどの異なる名称でも知られている。例えば、プロポリスは主にポプラとより狭い範囲でシラカバ（カラマツまたはヤナギ）の１つまたは複数の芽滲出液と葉滲出液に由来する。プロポリスは、植物源（Ｓｆｏｒｃｉｎ  ａｎｄ  Ｂａｎｋｏｖａ，  ２０１１．  Ｐｒｏｐｏｌｉｓ：  ｉｓ  ｔｈｅｒｅ  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｅｗ  ｄｒｕｇｓ？  Ｊ．  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  １３３：  ２５３−２６０．）に基づいて、７つの主な種類に分類されている。それらの種類は、ヨーロッパ産、北米産、南部南米産、ニュージーランド産の「ポプラ」；アルテピリンＣを含有する「ブラジル産グリーン」；ロシア産の「シラカバ」；キューバ、ブラジル、メキシコ産の「レッドプロポリス」；針葉樹から供給されるギリシャ、シチリア、クレタ、マルタ産のジテルペンが豊富な「地中海」；キューバおよびベネズエラ産の「クルシア」；ならびに「プロポリン」を含む沖縄、台湾、インドネシア産の「パシフィック」である。
【００９４】
様々な国からのヨーロッパ型プロポリスで報告された例示的な化合物と化合物の濃度は、ブラジル産グリーンプロポリスの比較例と共に、下表１に示されている。それらの化合物は、例えば、ヨーロッパ型プロポリスであるとプロポリスの供給源を同定すること、または、本発明での使用に適したプロポリスを特徴付けおよび同定することにおいて有用である。ブラジル産グリーンプロポリスは、ヨーロッパ型プロポリスに特徴的なフラボノイドとカフェイン酸エステル化合物のいずれも含有していないことが報告されている。
【００９５】
（表１）様々な地域からのプロポリスのエタノール可溶性抽出物についての組成的データ（Ｋｕｍａｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２００４  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ  ｉｎ  ｐｌａｓｍａ  ａｎｄ  ｕｒｉｎｅ  ｏｆ  Ｕｒｕｇｕａｙａｎ  ｐｒｏｐｏｌｉｓ−ｔｒｅａｔｅｄ  ｒａｔｓ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５２（１０）：３０３８〜３０８８より適合）
0006429859.tif 000002
全ての値はｍｇ／ｇプロポリス樹脂である。ＮＱｂｐ＝定量化されていないが存在している。
１シンナミリデン酢酸（またはフェニルペンタン酸）、Ａｒｇ＝アルゼンチン、Ａｕｓ＝オーストラリア、Ｂｒａ＝ブラジル産グリーン？プロポリス、Ｂｕｌ＝ブルガリア、Ｃｈｉｌ＝チリ、Ｃｈｉ＝中国（ａ＝河北省、ｂ＝湖北省、ｃ＝浙江省）、Ｈｕｎ＝ハンガリー、ＮＺ＝ニュージーランド、ＳＡ＝南アフリカ、Ｕｋｒ＝ウクライナ、Ｕｒｕ＝ウルグアイ、Ｕｚｂ＝ウズベキスタン、ＭＨＮＺ１＝ニュージーランド産プロポリス（Ｍａｎｕｋａ  Ｈｅａｌｔｈ  ＮＺ  Ｌｔｄ）、ＭＨＮＺ２＝ニュージーランド産プロポリス（Ｍａｎｕｋａ  Ｈｅａｌｔｈ  ＮＺ  Ｌｔｄ）
【００９６】
当業者によって認識されるように、プロポリスのアイデンティティ、および特定の場合においては、本発明における使用を含む特定の用途についての適合性は、プロポリスの組成の分析によって決定されうる。「マーカー化合物」と呼ばれることが多い、特定の化合物（本明細書で論じる化合物を含む）の存在および量は、特定の用途について、プロポリスの特定の供給源、例えばブラジル産プロポリスと比較したヨーロッパ産プロポリス、の適合性を決定できる。本発明の特定の実施形態において、１つまたは複数のマーカー化合物の存在または量は、本発明の組成物の製剤前に、予備的なグレーディング工程としてアッセイされる。
【００９７】
本発明の組成物または本発明の組成物の成分などの抗胃腸癌活性を有する薬剤に関して使用される場合、「抗胃腸癌活性を保持する」という用語および文法的等価物ならびにその派生語句は、薬剤が依然として有用な抗胃腸癌活性を有することを意味することが意図されている。好ましくは、維持された活性が、本来の活性の少なくとも約３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９または１００％であり、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間で選択することができる（例えば、約３５％〜約１００％、約５０％〜約１００％、約６０％〜約１００％、約７０％〜約１００％、約８０％〜約１００％、および約９０％〜約１００％）。本発明の例示的な組成物は、それらが含む抗胃腸癌剤（複数可）の有用な抗胃腸癌活性の維持を支持することができ、理想的には本明細書で検討される方法で利用されるまで、抗胃腸癌活性を保持すると言うことができる。
【００９８】
本発明の組成物または本発明の組成物の成分に関して使用される場合、「抗胃腸癌活性を増強する」という用語およびその文法的等価物ならびに派生語句は、抗胃腸癌剤の等価量または濃度は、組成物中に存在する場合、組成物の非存在下での薬剤（薬剤単独など）に比べて抗胃腸癌活性が増加することを意味することが意図される。好ましくは、増強された活性は、元の活性の少なくとも約１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００％、またはそれ以上であり、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間で選択することができる（例えば、約１０５％〜約２００％、約１２０％〜約２００％、約１４０％〜約２００％、約１５０％〜約２００％、約１８０％〜約２００％および約１９０％〜約２００％）。特定の実施形態では、本発明の組成物は、増強された抗胃腸癌活性、つまり、プロポリス単独またはシクロデキストリン単独での抗胃腸癌活性の少なくとも約１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００％、またはそれ以上を示すことができる。同様に、本発明の好ましい組成物は、増強された抗胃腸癌活性の維持をサポートすることが可能であり、理想的には、本明細書中で意図される方法を用いて使用されるまで、増強された抗胃腸癌活性を保持すると言える。増強された活性（活性の維持増強を含む）は、いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、本発明の組成物の種々の成分間の相乗作用に起因すると考えられる。
【００９９】
本明細書で使用される場合、本発明の組成物に関連して使用される用語「安定」は、好ましくは２時間を超えて、３時間、６時間、９時間、１２時間、１５時間、１８時間、２０時間を超えて、１日を超えて、好ましくは、約２、約３、約４、好ましくは約５、より好ましくは約６日、好ましくは１週間、２週間、３週間、１か月あるいはそれ以上、抗胃腸癌活性を支持することができる組成物を意味する。当然のことながら、特定の実施形態において、安定的な組成物は、プロポリスまたはシクロデキストリン単独よりも長期間にわたって抗胃腸癌活性を有するものが含まれる。
【０１００】
用語「経口投与」は、経口、口腔内、腸内および胃内投与を含む。
【０１０１】
用語「非経口投与」は、これらに限定されないが、局所（任意の皮膚、表皮または粘膜表面への投与を含む）、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内および腫瘍内（任意の腫瘍への直接投与を含む）が挙げられる。
【０１０２】
用語「製薬上許容できるキャリア」は、本発明の組成物の成分として対象に投与することができる賦形剤、希釈剤または補助剤を含むがこれらに限定されないキャリアを指すことが意図される。好ましいキャリアは、プロポリスまたは抽出物の有効量を送達するのに十分な用量で投与された場合に組成物の活性を低下させず、かつ毒性でなく、あるいは、投与されたときに、別の抗胃腸癌剤の活性を低下させない。
【０１０３】
名詞の後の用語「（複数可）」は、単数形または複数形または、その両方を意図している。
【０１０４】
「対象」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくは哺乳動物のコンパニオンアニマルまたはヒトを指すことが意図される。好適なコンパニオンアニマルには猫、犬、馬が挙げられる。他の哺乳動物対象は、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、シカまたは家禽などの農業用動物あるいは、サル、ラットまたはマウスなどの実験動物が挙げられる。
【０１０５】
用語「治療」およびその派生語句は、その最も広い可能な文脈で解釈されるべきである。この用語は、対象が完全に回復するまで治療されることを意味すると解釈されるべきではない。したがって、「治療」は、実質的に静的なレベルで対象の疾患の進行や症状を維持すること、対象の回復、特定の状態の症状の発症もしくは重症度の緩和および／または予防の確率を増加させること、あるいは患者の生活の質を広げることが広く含まれる。用語「治療」は、病気の予防に対して敏感な人や体力をつけるための健康状態の維持を広く含む。
【０１０６】
本発明の使用例
本発明の方法および組成物は、結腸直腸癌、結腸直腸癌細胞に関連する腫瘍性疾患、ならびに結腸直腸癌、結腸直腸癌治療および関連疾患の症状の治療または予防に使用することができる。結腸直腸癌は、大腸、特に結腸と直腸に影響を及ぼす腫瘍性疾患である（ゆえに、それらは一般に結腸癌または大腸癌と呼ばれる）。危険因子には、年齢、食事、特に脂肪、アルコールや赤身の肉の高摂取、性別が男性であること、肥満、喫煙や運動不足などが挙げられる。
【０１０７】
結腸直腸癌は、胃腸管の結腸または直腸の上皮細胞に由来し、最も一般的にはＷｎｔ−ＡＰＣ−β−カテニンシグナル伝達経路の欠陥に関連している。可能な場合、好適な治療法は完全な外科的切除であり、これにより治癒しうる。癌が転移してリンパ節に侵入した場合、化学療法薬フルオロウラシルまたはカペシタビンが平均余命を増加させることが報告されている。使用に考慮される他の化学療法薬としては、フルオロウラシル、カペシタビン、ＵＦＴ、ロイコボリン、イリノテカン、オキサリプラチン、またはそれら薬剤の組合せなどが挙げられる。しかしながら、癌がより広い範囲に及んでいる場合や、手術が不可能な場合は、治療は一般的に苦痛緩和治療と平均余命の延長に重点を置く。放射線療法と化学療法の組み合わせは、直腸癌のために考慮することができるが、放射線治療法は、一般的に腸の放射線感受性に起因して、結腸癌では使用されない。
【０１０８】
特定の実施形態では、本発明の方法および組成物は、胃癌、胃癌細胞に関連する腫瘍性疾患、ならびに胃癌、胃癌治療、および関連する疾患の症状の治療または予防に使用される。
【０１０９】
胃癌は、胃の任意の部分に生じる腫瘍性疾患である。ほとんどの患者が進行した症状を示すため予後が悪い。危険因子は、年齢、食事、特に薫製食品、塩蔵した魚、加工肉や野菜の漬物の高摂取、喫煙、性別が男性であること、自己免疫性萎縮性胃炎や腸上皮化生の既往歴が挙げられる。
【０１１０】
胃癌の約９０％が腺癌であり、胃粘膜の腺上皮に起因する。他の種類では、リンパ腫（ＭＡＬＴｏｍａｓまたはＭＡＬＴリンパ腫）、およびカルチノイドと間質性腫瘍が挙げられる。可能な場合、好ましい治療は、胃と周囲のリンパ節の全部または一部の完全な外科的切除である。胃癌は化学療法剤に特に敏感ではないが、化学療法は、フルオロウラシル、カペシタビン、ＢＣＮＵ（カルムスチン）、メチル−ＣＣＮＵ（セムスチン）およびドキソルビシン（アドリアマイシン）、マイトマイシンＣ、シスプラチンならびにタキソテールが苦痛緩和治療の分野で使用されてきた。放射線療法と化学療法の組み合わせは、時に、胃癌の治療のために使用される。
【０１１１】
ある種の実施形態にて、本発明はまた、胃腸癌を患っている対象における腫瘍性細胞の胃腸癌治療に対する抵抗性を少なくとも部分的に反転する方法、あるいは、胃腸癌を抱えた患者の胃腸癌治療に対する抵抗性を完全にまたは部分的に反転させる方法、あるいは、胃腸癌治療に対して抵抗性があるか、または抵抗性があるもしくは抵抗性になることが予測される胃腸癌を抱えた患者の１つまたは複数の腫瘍の再感作の方法であって、これら方法が、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む、本質的に含んでなる、またはからなる組成物を前記患者へ投与する工程を含む、方法に関する。
【０１１２】
一実施形態では、１つまたは複数の腫瘍は、例えば、組織試料、腫瘍生検、または血液もしくは血漿試料などの患者からの試料中のＡＫＴ、ＪＮＫまたはＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路の１つまたは複数の活性化の増加を含む、１つまたは複数の腫瘍内または患者内の１つまたは複数の癌細胞生存促進性シグナル伝達経路の増加した活性化に起因して、胃腸癌治療に対して抵抗性であるか、抵抗性であるかもしくは抵抗性になることが予測される。
【０１１３】
胃腸癌の発症および進行に関わる癌細胞生存促進性シグナル伝達経路は、当該技術分野において既知である。
【０１１４】
本発明の方法および組成物は、咽喉癌、咽喉癌細胞に関連する腫瘍性疾患、ならびに咽喉癌、咽喉癌治療、および関連疾患の症状の治療または予防に使用することができる。
【０１１５】
食道癌、咽頭癌、または喉頭癌と呼ばれる咽喉癌は、咽頭、鼻咽頭、口腔咽頭、下咽頭、喉頭（発生器）の組織または扁桃線で発症する腫瘍全般を指す。咽喉癌の約９０％は、これらの領域の粘膜内層（上皮）から生じる扁平上皮癌である。危険因子には、食事、特にアルコールの過剰摂取、喫煙、無煙たばこの使用、ビンロウのそしゃく、ならびに職業的なニッケル製錬、織物繊維および木工環境発がん物質への暴露が挙げられる。
【０１１６】
最も一般的な治療法は、腫瘍の外科的切除および放射線療法である。化学療法剤を、手術および／または放射線と組合せて使用してもよい。薬剤には、パクリタキセル、カルボプラチン、セツキシマブ、タキソテールおよびドセタキセルが含まれる。
【０１１７】
本発明の方法および組成物は、消化管の健康状態を維持または改善するために使用することができる。
【０１１８】
確固たる消化管の健康状態は、腸の快適さ、感染症に対する抵抗および慢性胃腸疾患の予防に関連している。
【０１１９】
これは、悪い腸の健康状態、免疫力の低下、および胃腸の炎症に関連する症状の治療または予防を含む。例えば、本発明の方法および組成物は、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、環境腸疾患、感染性下痢の治療または予防、および内臓痛の除去または緩和するのに有用である。
【０１２０】
プロポリスおよびプロポリスを含有する材料
プロポリスは、ニュージーランドや他の地域で、一般的に樹脂状粘着性固体として入手可能である。プロポリスは、例えば、プロポリス含有量を評価するために、格納部にプロポリスが保持された養蜂箱から得てもよい。本発明における使用のために、プロポリスは、生物活性成分を維持しながら、例えばシクロデキストリンと共に、混合に適した形態に加工できることを、当業者は理解するであろう。典型的には、プロポリスまたはその抽出物は、微粒子形態または濃縮チンキ剤に加工される。活性プロポリスまたは抽出物を微粒子形態または濃縮チンキに調製する様々な方法が知られている。最も一般的には、未精製のプロポリスをエタノールまたはエタノール／水混合液を用いて抽出し、希チンキを生成する。未精製のプロポリスを伴うロウは、溶媒中で溶けにくく、ほとんど抽出されない。抽出されたロウは全て、希チンキを冷却し、次いで沈殿、ろ過または遠心分離することで除去できる。チンキは次いで、溶媒を部分的ないし完全に蒸発させ、任意でその後に凍結乾燥させて粉末にすることによって、濃縮チンキ剤にすることができる。あるいは、チンキ剤は、噴霧乾燥して粉末にすることができる。フラクションは、例えば、サイズ排除マトリックスまたは逆相マトリックス、または超臨界フラクション化を用いて、クロマトグラフィーなど（ＨＰＬＣなど）の当該技術分野で公知の方法を用いて調製することができる。かかるクロマトグラフィー法で使用するための典型的な溶媒は、エタノールまたは他の水混和性アルコールである。
【０１２１】
一実施形態のプロポリスまたは濃プロポリスチンキは、プロポリスの特性を増強する他の化合物、例えば、製剤化または投与の容易さを増強する化合物、あるいは抗胃腸癌活性を増強する化合物、あるいはプロポリス中に存在する１つまたは複数の抗胃腸癌活性の安定性を増強する化合物、と組み合わせる。さらなる化合物の例は、プロポリスの治療利益を向上させるものである。ＣＡＰＥ、カフェイン酸、ピノセムブリン、カフェ酸ベンジル、クリシン、ガランギン、ピノバンクシン、およびピノバンクシン−３−アセテートなどの生物学的に活性な化合物を含む、プロポリス、特にヨーロッパ産プロポリス中に存在する１つまたは複数の化合物が添加されている、例示的な組成物が特に想定される。他の例において、追加の化合物は、組成物の生理的利益を改善または維持するために含まれ、例えば、マンニトールは、得られる組成物の利尿作用を増強するために添加することができる。代替的に、あるいは付加的に、賦形剤および／または噴射剤などの他の化合物を、組成物の投薬、製造または送達特性を改善するために追加できる。
【０１２２】
特に意図される実施形態では、任意選択で１つまたは複数の追加の化合物を添加した、脱ロウしたプロポリス樹脂は、シクロデキストリンと混合され、この混合物は乾燥される。混合物のさらなる処理は、例えば、組成物の他の成分との容易な混合を可能とする粒度分布、容易な錠剤化、または対象への容易な投与を得るために行われる。
【０１２３】
典型的な実施形態では、例えば加熱して、細菌、原生動物、酵母、カビ、およびプロポリス中に自然に存在している他の生物を死滅させることにより、プロポリスまたはプロポリス樹脂を滅菌する。
【０１２４】
シクロデキストリンおよびシクロデキストリンを含有する材料
シクロデキストリンは、トロイダル構造を形成するグルコピラノース環単位から構成される環状分子である。シクロデキストリン分子の内側は疎水性で、外側は親水性であり、シクロデキストリン分子を水溶性としている。溶解度は、シクロデキストリンの外側のヒドロキシル基の置換を介して変更することができる。同様に内部の疎水性を置換によって変更することができるが、内部の疎水性の性質は一般的に、キャビティ内に比較的疎水性のゲストを収容することを可能としている。ある分子内の別の分子の収容は錯体形成として知られており、得られた生成物は包接複合体と呼ばれている。シクロデキストリンは、一般に、分子を構成するモノマー単位の数に関連して特定され、アルファ−シクロデキストリン（α−シクロデキストリン）は６つのモノマー単位を含み、ベータ−シクロデキストリン（β−シクロデキストリン）は７つのモノマー単位を含み、γ−シクロデキストリン（γ−シクロデキストリン）は８つのモノマー単位を含む。３２個の１，４−アンヒドログルコピラノシド単位を含むよく特徴づけられたシクロデキストリンを含む、より大きなシクロデキストリン分子が記述されている。
【０１２５】
シクロデキストリン分子は、例えば、化学的修飾、例えば、その１つまたは複数の理化学的特性を変更することによって、都合良く誘導体化される。シクロデキストリン誘導体の例としては、メチル化シクロデキストリン、スルホブチルシクロデクストリン（ｓｕｌｆｏｂｕｔｙｌｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ）、マルトシルシクロデキストリン（ｍａｌｔｏｓｙｌｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ）、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、およびそれらの塩が挙げられる。当業者であれば、シクロデキストリンの種々の誘導体が特定の目的のために適する場合があり、例えばシクロデキストリンの特定の誘導体はヒト対象への投与は許容されないが、工業用途には適していることが理解されよう。
【０１２６】
本発明の抗胃腸癌組成物を含むシクロデキストリンは市販のものでもよく、当業者に周知の方法によって独立に調製してもよい。対象へ投与するための抗胃腸癌組成物に使用するシクロデキストリン、例えば、本発明の飲料、食品、または医薬品を製造するためのシクロデキストリンは、人体に安全であるべきであり、好ましくは薬学的に許容されるシクロデキストリンであることは、当業者に明らかであろう。
【０１２７】
具体的に意図される実施形態では、γ−シクロデキストリン、またはγ−シクロデキストリンを含む組合せが使用される。このような実施形態において、本明細書において実施例に提示されるように、抗胃腸癌活性が実質的に増強される。かかるγ−シクロデキストリンを含む組成物は、口当たりまたは賞味性の増強を提供するように処方することができ、例えば、γ−シクロデキストリンおよびプロポリスを含む組成物は、プロポリス中に存在するあらゆる不快な味を被覆する傾向を強く示す。
【０１２８】
本発明での使用に適したシクロデキストリンは、商業的供給源から得ることができ、またはデンプンから酵素変換などの当該技術分野において既知の方法によって、独立して調製することができる。特定の実施形態では、ワッカーＡＧ社（Ｗａｃｋｅｒ  ＡＧ）で商業的に供給されるＣＡＶＡＭＡＸ  Ｗ８  ＦＯＯＤ、γ−シクロデキストリンが使用される。
【０１２９】
本発明の組成物
本発明の例示的な抗胃腸癌組成物は、粉末、すなわちシクロデキストリンとプロポリスチンキ剤を混合した後、水を添加して組成物を均質化し、次いで噴霧乾燥または凍結乾燥することで得られる。本発明のその他の例示的な抗胃腸癌組成物には溶液類が含まれ、例えば、プロポリスチンキ剤およびシクロデキストリンを混合し、次いで水中に分散させたもの、プロポリスまたはプロポリスを含有する材料およびシクロデキストリンを独立して水に溶解または分散させ、次いで例えば練ることで混合したもの、さらに、プロポリス粉末または樹脂をそれが可溶性である他の有機溶媒、例えば、プロピレングリコール、エチルアセテート、イソプロピルアルコールなどにまず溶解させ、得られた溶液をシクロデキストリンと混合し、次いで水に加え、例えば練ることでさらに混合し、次いで噴霧または凍結乾燥などの当該技術分野において既知の手段で乾燥させるたものが含まれる。ある種の実施形態にて、前述の通り粉末として調製した抗胃腸癌組成物は、例えば、より強力な抗胃腸癌活性を維持することができるか、または上記のように調製した抗胃腸癌組成物の溶液よりも長い期間、抗胃腸癌活性を維持することができるので、好ましい場合がある。
【０１３０】
本発明のプロポリスおよびシクロデキストリンの含有量は、期待される抗胃腸癌活性が実現される限り、任意のレベルであってよい。
【０１３１】
いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、本出願人は、プロポリスのシクロデキストリンに対するモル比が１：１以下であるとき、組成物中のプロポリスが完全に内包されると考える。
【０１３２】
いくつかの実施形態で、プロポリスのシクロデキストリンに対するモル比は、本発明の組成物中で１：１を上回る可能性がある。かかる組成物において、過剰なプロポリスは、シクロデキストリンによって内包されることはない。
【０１３３】
一般に知られている他の抗胃腸癌物質を、組成物を適用する用途に応じて、本発明の抗胃腸癌組成物と組み合わせることができる。
【０１３４】
いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、本出願人は、本発明の例示的な組成物で観察された増強された抗胃腸癌活性は、プロポリス（特にプロポリスとして存在する場合）とγ−シクロデキストリンとの間の相乗効果に少なくとも部分的に起因し得ると考える。再度、いずれの理論に拘束されることを望むものではないが、本出願人は、観察された増強された抗胃腸癌活性の達成において、プロポリス中に存在するポリフェノールなどの例示的な組成物の他成分の役割があり得ることを認める。
【０１３５】
対象への投与に適した組成物は、食品、飲料、食品添加物、飲料用添加物、栄養補助食品、栄養製品、医療食品、栄養補給食品、医薬品、医療機器、医薬品または医薬として処方することができる。適切な製剤は、その技術と本明細書の教えに関する技術熟練者によって調製することができる。
【０１３６】
一実施形態において、本発明は、任意選択で少なくとも１つの抗胃腸癌剤を用いた、食品、飲料、食品添加物、飲料用添加物、栄養補助食品、栄養製品、医療食品、栄養補給食品、医療機器、医薬用品、薬剤または医薬品の製造における、プロポリスおよびγ−シクロデキストリンの使用に関する。一実施形態において、組成物は、経口投与用に製剤化される。他の実施形態では、組成物は、局所投与を含む、非経口投与用に製剤化される。特定の実施形態において、組成物は、アポトーシス誘導、胃腸癌の治療または予防、消化管の健康状態維持もしくは改善、または上述されたような１つまたは複数の他の用途のためのものである。
【０１３７】
一実施形態において、組成物は、粉末、錠剤、カプレット、丸薬、ハードまたはソフトカプセル剤またはトローチ剤の形態である。
【０１３８】
一実施形態において、組成物は、サシェ、分配可能（dispensable）粉末、顆粒状、懸濁状、エリキシル剤、液体、飲料の形態、または、例えば水もしくは果汁を含む食品や飲料に添加できる他のあらゆる形態である。一実施形態において、組成物は、経腸製品、固形経腸製品または液状経腸製品である。
【０１３９】
一実施形態において、組成物は、クリーム、軟膏、硬膏、点眼剤または点耳剤を含む滴下溶液、吸入器もしくは吸入可能な組成物、包帯、パッド、またはスプレーの形態である。
【０１４０】
一実施形態において、組成物はさらに、保管中または投与後に組成物の分解を防止または減少させる１つまたは複数の構成成分（酸化防止剤など）を含む。
【０１４１】
一実施形態において、本明細書における有用な組成物は、１つまたは複数のシクロデキストリンを担持する任意の食用コンシューマー向け製品を含む。組成物が少なくとも１つの追加の抗胃腸癌剤としてタンパク性因子を含む場合、食用コンシューマー向け製品は、タンパク質を担持することができるものである。適した食用コンシューマー向け製品の例としては、焼き菓子、粉末、液体、製菓製品、再構成された果物製品、スナックバー類、食品バー類、ナッツバー類、スプレッド類、ソース類、ディップ類、アイスクリーム、ヨーグルトおよびチーズなどの乳製品、乳製品および非乳製品ベースの飲料（例えばミルクシェークなどの乳飲料およびヨーグルト飲料）などのドリンク類、粉乳、乳製品および非乳製品ベースのスポーツまたは栄養補給剤などのスポーツ補助食品または栄養補助食品、食品添加物（プロテインスプリンクルおよび毎日の補助食品タブレットを含む栄養補助食品製品など）が挙げられる。この実施態様の範囲内で、本明細書で有用な組成物はまた、粉末または液体形態の特殊調製粉乳であってもよい。本明細書で有用な好適な栄養補助食品組成物は、同様の形にて提供されてよい。乳または１つもしくは複数の乳製品または乳の構成成分、例えば、乳タンパク質、乳清タンパク質、初乳成分、乳脂肪、あるいは乳または１つもしくは複数の乳製品または乳の構成成分の任意のフラクション、例えば、乳脂肪フラクション、乳タンパク質フラクション、乳清タンパク質フラクション、初乳フラクションなどを付加的に含む組成物が特に考慮される。
【０１４２】
本明細書で有用な組成物は、カルシウム、亜鉛、マグネシウム、セレン、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ２、複合糖質類、ヤシ、ダイズ、オリーブ、キャノーラ、コーン、ヒマワリ、ベニバナ、ピーナッツ、ブドウ種子、ゴマ、ナッツ、アーモンド、カシュー、ヘーゼルナッツ、マカダミア、ペカン、ピスタチオ、およびクルミなどの食用または調理用油、およびその他の食用としては、アサイー、アマランス、アンズ、アルガン、アーティチョーク、アボカド、ババス、ベン、ブラックカラント種子、ルリヂサ種子、ボルネオ牛脂ナッツ、ユウガオ、バッファロー・ヒョウタン、いなご豆のさや（イナゴマメ）、コフネヤシ、コリアンダー種子、オオマツヨイグサ、偽亜麻、大麻、カポック種子、ラレマンティア、メドウフォーム種子、マスタード、オクラ種子（ハイビスカス種子）、シソの実、ペキー、松の実、けしの実、プルーン・カーネル、パンプキン種子、キノア、キバナタカサブロウ、コメヌカ、茶葉（ツバキ）、アザミ、スイカ種子または、小麦粉芽油またはこれらの組み合わせなどの因子をさらに含んでもよい。
【０１４３】
本明細書で有用な組成物は、経口または非経口（局所、皮下、筋肉内および静脈内を含む）投与を含むがこれらに限定されない任意の選択された経路によって対象への投与を可能にするように製剤化される。対象への投与経路は、一般的に組成物が投与される目的を考慮に入れ、例えば、本発明の医薬組成物は、微生物疾患または障害を治療するために投与される場合、投与経路は、一般に微生物疾患または障害の性質を考慮して選択されることを当業者は理解するであろう。
【０１４４】
一般に、経口投与のために、本明細書で有用な食事（例えば、食品、食品添加物または食品サプリメント）、食物栄養補助食品または医薬組成物は、既知の製剤技術に従って当業者により製剤化することができる。
【０１４５】
したがって、本発明の有用な医薬組成物は、意図された投与経路および標準的な薬務に関して選択された適切な製薬上許容できるキャリア（賦形剤、希釈剤、補助剤、およびそれらの組み合わせを含む）と共に製剤化することができる。例えばレミントンの薬学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｏｌ、Ａ．編、マック・パブリッシング社（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ）、１９８０年）を参照されたい。
【０１４６】
好ましい投与経路は経口であるが、異なる薬剤のための異なる経路を含む複数の経路による投与を含む任意の投与方法が本発明の任意の組成物に好適でありうることが理解されるべきである。したがって、本発明の任意の組成物の吸入（鼻または口腔吸入）ならびに膣および直腸投与も考慮される。本発明の任意の組成物の髄内、硬膜外、関節内、および胸膜内の投与もまた考慮される。第２の投与経路による１つまたは複数の他の抗胃腸癌剤を含む１つまたは複数の他の薬剤の個別、同時または順次投与を伴う第１の投与経路による、任意選択で少なくとも１つの追加の抗胃腸癌因子と共に、本発明の組成物を投与することも考慮される；例えば、少なくとも１つの追加的な抗胃腸癌剤の局所投与を伴う本発明の組成物の経口投与。
【０１４７】
本発明の組成物はまた、剤形として製剤化することができる。本明細書で有用な剤形は、粉末、液体、錠剤またはカプセル剤として経口投与することができる。適切な剤形は、必要に応じて乳化剤、酸化防止剤、香料または着色剤、または腸溶コーティング剤などの追加の薬剤を含有してよい。適当な腸溶性コーティング剤は知られている。活性成分を取囲む腸溶性コーティングは、胃の中の活性成分の放出を防止するが、剤形が胃を出た後の放出を可能にする。本明細書で有用な剤形は、活性成分の即時、遅延、修飾、持続、パルスまたは制御放出のために適合させることができる。適切な製剤は、乳化剤、酸化防止剤、香料または着色剤を含む、必要に応じて追加の薬剤を含有してよい。
【０１４８】
カプセルは、ゼラチンまたはセルロースなどの任意の標準的な薬学的に許容される材料を含有することができる。錠剤は、固体キャリアおよび潤滑剤と活性成分の混合物を圧縮することにより、従来の手順に従って製剤化することができる。固体キャリアの例としては、デンプンおよび糖ベントナイトが挙げられる。活性成分はまた、ハードシェル錠剤、またはラクトースもしくはマンニトール、従来の充填剤、および錠剤化剤などの結合剤を含有するカプセル剤の剤形で投与することもできる。医薬組成物は、非経口経路を介して投与することもできる。非経口剤形の例には、活性剤の水溶液、等張生理食塩水、もしくは５％グルコース、または他の周知の薬学的に許容される賦形剤が含まれる。当業者に周知の可溶化剤は、抗胃腸癌剤の送達のための医薬品賦形剤として利用することができる。
【０１４９】
注入用剤形は、液体溶液または懸濁液として製剤化しうる。固形形態は、注入前に適切な溶液、または懸濁液の液体に調製することもできる。剤形はまた、乳剤であってもよい。プロポリス、またはプロポリス含有材料、およびシクロデキストリン、またはシクロデキストリン含有材料、および存在する場合、少なくとも１つの追加の抗胃腸癌因子を、例えば、水、塩類溶液、デキストロース、グリセロール、エタノール等、およびこれらの組み合わせなどのキャリアと混合してよい。
【０１５０】
持続放出性製剤は、プロポリスおよびシクロデキストリンを組み込んで調製することができる。持続放出性調製物の好適例には、プロポリスおよびシクロデキストリン（および存在する場合、少なくとも１つの追加の抗胃腸癌剤）を含有する固体疎水性ポリマー類の半透性マトリックスが挙げられる。マトリックスは、成形物品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態であってよい。持続放出性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）または、ポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３７７３９１９号を参照）、Ｌ−グルタミン酸およびエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー類、非分解性エチレン−ビニルアセテート、ならびに分解可能な乳酸−グリコール酸コポリマー類、例えばＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ(商標)（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注入可能なミクロスフィア）が挙げられる。
【０１５１】
プロポリスおよびシクロデキストリン（および存在する場合、少なくとも１つの追加の抗胃腸癌剤）を含む局所製剤は、ローション類、クリーム類、軟膏類、硬膏類またはこのような用途のための公知のキャリアを使用した軟膏として調製することができる。かかる製剤は、直接投与、例えば、傷に直接適用、手術部位上に噴霧など、または、例えば、帯具もしくは包帯に含浸させることで間接的に施したり、または手術用機器、包帯などの上に噴霧することができるものであってよい。
【０１５２】
本発明はまた、任意に少なくとも１つのさらなる治療剤と共に、プロポリスおよびシクロデキストリンを含有する非経口単位剤形に関する。
【０１５３】
様々な実施形態では、上記少なくとも１つのさらなる治療薬は、アミノグリコシドなどの抗生物質であり、例えばアミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルミシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、またはパロモマイシン；ゲルダナマイシンまたはハービマイシンなどのアンサマイシン；ロラカルベフなどのカルバセフェム；エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチンまたはメロペネムなどのカルバペネム；セファドロキシル、セファゾリン、セファロチンもしくはセファロシン、またはセファレキシンなどのセファロスポリン系（第一世代）；セファクロル、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、またはセフロキシムなどのセファロスポリン系（第二世代）；セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシムまたはセフトリアキソンなどのセファロスポリン系（第三世代）；セフェピムなどのセファロスポリン系（第四世代）；セフトビプロールなどのセファロスポリン系（第五世代）；テイコプラニン、またはバンコマイシンなどのグリコペプチド；アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、テリスロマイシン、スペクチノマイシンなどのマクロライド系；アズトレオナムなどのモノバクタム系；アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリン、ピペラシリンまたはチカルシリンなどのペニシリン系；バシトラシン、コリスチンまたはポリミキシンｂなどのポリペプチド系；シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ノルフロキサシンまたはオフロキサシンなどのキノロン系；マフェニド、スルホンアミドクリソイジン（旧）、スルフアセトアミド、スルファジアジン、スルファメチゾール、スルファニルミド（旧）、スルファサラジン、スルフィソキサゾール、トリメトプリムまたはトリメトプリム−スルファメトキサゾール（コトリモキサゾール）（ｔｍｐ−ｓｍｘ）などのスルホンアミド系；デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリンなどのテトラサイクリン系；その他例えば、アルスフェナミン、クロラムフェニコール、クリンダマイシン、リンコマイシン、エタンブトール、ホスホマイシン、フシジン酸、フラゾリドン、イソニアジド、リネゾリド、メトロニダゾール、ムピロシン、ニトロフラントイン、プラテンシマイシン、ピラジナミド、キヌプリスチン／ダルホプリスチン、リファンピシン（米国ではリファンピン）、チアンフェニコール、チニダゾール、ダプソン、クロファジミン；またはダプトマイシン、グリシルサイクリン、チゲサイクリンなどの環状リポペプチド系または、リネゾリドなどのオキサゾリジノン系である。
【０１５４】
他の実施形態では、少なくとも１つのさらなる治療薬は、ポリエン抗カビ剤などの抗カビ剤、例えばナタマイシン、リモシジン、フィリピン、ナイスタチン、アンホテリシンＢ、カンジシン、イミダゾール、例えばミコナゾール、ケトコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、ビフォナゾール、ブトコナゾール、フェンチコナゾール、イソコナゾール、オキシコナゾール、セルタコナゾール、スルコナゾールまたは、チオコナゾール；フルコナゾール、イトラコナゾール、イサブコナゾール、ラブコナゾール、ポサコナゾール、ボリコナゾールまたはテルコナゾールなどのトリアゾール系；アバファンギンなどのチアゾール系；テルビナフィン、アモロルフィン、ナフチフィンまたはブテナフィンなどのアリルアミン系；アニデュラフンギン、カスポフンギンまたは、ミカファンギンなどのエキノカンジン系；その他例えば、安息香酸、シクロピロックス、トルナフテート、ウンデシレン酸、フルシトシンまたは５−フルオロシトシン、グリセオフルビン、ハロプロジン、重炭酸ナトリウム、または代替物として、例えばアリシン、ティーツリー油、シトロネラ油、ヨウ素、レモングラス、オリーブの葉、オレンジ油、パルマローザオイル、パチョリ、レモンマートル、インドセンダン種子油、ヤシ油、亜鉛または、セレンである。
【０１５５】
あるいは薬剤は、本明細書に記載のもののいずれかから選択される。
【０１５６】
本発明に有用な組成物の効力は、生体外および生体内の両方で評価されうる。例えば、以下の例を参照されたい。簡潔に述べると、一実施形態において、組成物は、例えば、生体外での腫瘍性細胞増殖に対する、それ自身の能力について試験されうる。生体内研究のためには、本組成物は、動物（例えば、マウス）に食べさせるかまたは注入することができ、次いで、胃腸癌細胞の生存、増殖、転移、あるいは１つもしくは複数の胃腸癌の症状または関連する病気もしくは疾患に対するその効果を評価する。その結果に基づいて、適切な投与量範囲、頻度、および投与経路を決定することができる。
【０１５７】
本明細書で有用な組成物は、単独で、あるいは１つもしくは複数の他の抗胃腸癌剤または１つもしくは複数の追加の治療薬と組み合わされて使用されてよい。当該抗胃腸癌剤または追加の治療薬は、食品、飲料、食品添加物、飲料用添加物、食品構成成分、飲料構成成分、栄養補助食品、栄養製品、医療食品、栄養補給食品、医療機器、医薬用品、薬剤または医薬品であっても、これらを含んでいてもよい。当該抗胃腸癌剤または追加の治療薬は好ましくは、１つまたは複数の腫瘍性の病気または疾患、あるいは１つまたは複数の腫瘍性の病気または疾患の１つまたは複数の症状を弱めるのに効果的であるか、そうでなければ投与された対象に利益を付与する。好ましい治療薬としては、治療用食品因子、免疫原性または免疫活性化剤、創傷治癒剤などが挙げられる。
【０１５８】
さらに、上記追加の抗胃腸癌または治療薬（食品ベースおよび医薬品の両方）を、本明細書において有用な組成物とは個別に、同時に、または順次に投与する本発明の方法において用いてもよいことを理解すべきである。
【０１５９】
理解されるように、投与する組成物の用量、投与期間、および全般的投与計画は、対象の症状の重症度、治療される疾患の種類、選択された投与方法、対象の年齢、性別、および／または全般的な健康状態などの変数に応じて、対象の間で異なる場合がある。しかしながら、一般的な例として、投与当たりまたは１日当り、体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ〜約５０００ｍｇの本明細書で有用な組成物が投与され、体重１ｋｇ当たり１ｍｇ〜約４０００ｍｇの本明細書で有用な組成物が投与され、体重１ｋｇ当たり１ｍｇ〜約３０００ｍｇの本明細書で有用な組成物が投与され、体重１ｋｇ当たり１ｍｇ〜約２０００ｍｇの本明細書で有用な組成物が投与され、体重１ｋｇ当たり１ｍｇ〜約１０００ｍｇの本明細書で有用な組成物が投与され、好ましくは１日当り、好ましくは１ｋｇ当たり約５０ｍｇ〜約１０００ｍｇである。一実施形態では、投与は、本明細書で有用な組成物の体重１ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ〜約２５０ｍｇである。
【０１６０】
様々な実施形態では、投与当たりまたは１日当たり、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約５０ｍｇのプロポリス、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約４０ｍｇのプロポリス、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約３０ｍｇのプロポリス、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約２０ｍｇのプロポリス、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約１０ｍｇのプロポリス、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約５ｍｇのプロポリス、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約１ｍｇのプロポリス、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約０．５ｍｇのプロポリス、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約０．１ｍｇのプロポリスまたは、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約０．０５ｍｇのプロポリスを送達するために、十分な組成物が投与される。
【０１６１】
投与には、毎日１回の服用などの単回投与、または適切である可能性がある場合には複数の別個の分割用量が含まれ得ることを理解されたい。当業者は、その技術と本開示を考慮して、過度の実験をせずに、与えられた条件の（用量および投与のタイミングを含む）有効な投与計画を決定できることを理解すべきである。
【０１６２】
本発明はまた、シクロデキストリンと組み合わせたプロポリスまたはプロポリスを含む材料を含む、本質的に含んでなる、またはからなる食品組成物、栄養補給組成物、または経口医薬組成物に関する。ある種の実施形態において、組成物は約１重量％〜約９９重量％のプロポリスまたはプロポリスを含む材料および約１重量％〜約９９重量％のシクロデキストリンを本質的に含んでなる。例えば、組成物は、約１０〜８０重量％のプロポリスまたはプロポリスを含む材料および約２０〜９０重量％のシクロデキストリンを本質的に含んでなる。別の例では、組成物は約２０重量％〜約４０重量％のプロポリスおよび約６０重量％〜約８０重量％のシクロデキストリンを本質的に含んでなる。
【０１６３】
本発明はまた、シクロデキストリンに内包されたプロポリスまたはプロポリスを含有する材料を含む、本質的に含んでなる、またはからなる食品組成物、栄養補給組成物、または経口医薬組成物に関する。ある種の実施形態において、組成物は約１重量％〜約３０重量％のプロポリスまたはプロポリスを含有する材料および約７０重量％〜約９９重量％のシクロデキストリンを本質的に含んでなる。ある種の実施形態において、組成物は約１０重量％〜約２５重量％のプロポリスまたはプロポリスを含有する材料および約７５重量％〜約９０重量％のシクロデキストリンを本質的に含んでなる。別の例では、組成物は約２０重量％〜約３０重量％のプロポリスおよび約７０重量％〜約８０重量％のシクロデキストリンを本質的に含んでなる。
【０１６４】
一実施形態において、本発明の組成物は、プロポリスまたはプロポリスのフラクションを含む。一実施形態において、組成物は、少なくとも約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、あるいは９９重量％のプロポリスまたはプロポリスのフラクションを含み、有用な範囲は、これらの値のいずれかから選択することができる（例えば、約１重量％〜約２５重量％、約１重量％〜約３０重量％、約５重量％〜約３０重量％、約１５重量％〜約３０重量％、約２０重量％〜約３０重量％、約２５重量％〜約３０重量％、約１０重量％〜約５０重量％、約１５重量％〜約５０重量％、約４０重量％〜約９９重量％、約４５重量％〜約９９重量％、約５０重量％〜約９９重量％、約５５重量％〜約９９重量％、約６０重量％〜約９９重量％、約６５重量％〜約９９重量％、約７０重量％〜約９９重量％、約７５重量％〜約９９重量％、約８０重量％〜約９９重量％、約８５重量％〜約９９重量％、約９０重量％〜約９９重量％または、約９５重量％〜約９９重量％）。
【０１６５】
一実施形態において、本発明の組成物は、シクロデキストリン、好ましくはγ−シクロデキストリンを含む。一実施形態において、組成物は、少なくとも約１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、あるいは９９重量％のシクロデキストリンを含み、有用な範囲は、これらの値のいずれかから選択することができる（例えば、約１重量％〜約９９重量％、約５重量％〜約９９重量％、約１０重量％〜約９９重量％、約１５重量％〜約９９重量％、約２０重量％〜約９９重量％、約２５重量％〜約９９重量％、約３０重量％〜約９９重量％、約３５重量％〜約９９重量％、約４０重量％〜約９９重量％、約４５重量％〜約９９重量％、約５０重量％〜約９９重量％、約５５重量％〜約９９重量％、約６０重量％〜約９９重量％、約６５重量％〜約９９重量％、約７０重量％〜約９９重量％、約７５重量％〜約９９重量％、約８０重量％〜約９９重量％、約８５重量％〜約９９重量％、約９０重量％〜約９９重量％または、約９５重量％〜約９９重量％）。
【０１６６】
別の抗胃腸癌剤または治療薬と組み合わせて使用される場合、本明細書で有用な組成物の投与は、その他の抗胃腸癌剤または治療薬と同時または順次であってよい。同時投与は、すべての成分を含む単一剤形の投与または実質的に同時の別個の剤形の投与を含む。順次投与は、異なるスケジュールに従う投与を含み、好ましくは、本明細書で有用な組成物および他の治療薬が提供される期間に重複が存在するような投与である。
【０１６７】
さらに、本発明による組成物は、特定の場合において、対象に有益であり得る追加の活性成分と共に製剤化され得ることが考慮される。例えば、疾患過程の同じまたは異なるファセットを標的とする治療薬を使用することができる。
【０１６８】
したがって、本発明の「抗胃腸癌組成物を含む食品および飲料」は、一般的な食品や健康食品に使用可能である。本発明の抗胃腸癌組成物はプロポリスの味を被覆するので、それらは、そのまま、または粉末の形態で食することができる。それらは、ケーキ、ビスケット、クッキー、チョコレート、甘味菓子や、ドロップまたはチューインガムを含む他の製菓類の成分や原材料として使用することができる。本発明の組成物は、飲料として水に加えられてもよく、牛乳、紅茶、コーヒー、ホットチョコレートなどの飲料用の甘味料、および果汁飲料、スポーツドリンクなどの成分または原材料として使用できる。
【０１６９】
本発明の例示的な抗胃腸癌組成物と、かかる組成物を調製するための方法を、以下の実施例を参照しながら説明する。
【実施例】
【０１７０】
実施例１
本実施例では、プロポリスおよびシクロデキストリンを含む本発明の組成物の調製および特徴付けについて記載する。
【０１７１】
複合体ＣＤ１
２７質量％の固形プロポリスを含むプロポリス−γシクロデキストリン複合体を、２３．１重量％の固形プロポリス（マヌカヘルス（Ｍａｎｕｋａ  Ｈｅａｌｔｈ）より供給された、ロウを含まないもの）を含むプロポリスのエタノール性チンキ剤を使用して作製した。６．１６ｋｇのγ−シクロデキストリン（ワッカーＡＧ社（Ｗａｃｋｅｒ  ＡＧ）により供給されたＣＡＶＡＭＡＸ  Ｗ８）を、均質なペースト状の茶色の液体が得られるまで手でステンレス製タンク内のプロポリスチンキ剤９．５０ｋｇと混合した。次いで１２．３ｋｇの水を４段階で添加し、次いで得られた混合物を１時間６０００ｒｐｍで均質化した。次いで、さらに水３０．４３ｋｇを、連続的に攪拌しながら４段階で添加した。次いで、この溶液を噴霧乾燥し、微細な黄色粉末を得た。複合体ＣＤ１のフラボノイドおよびヒドロキシ桂皮酸の含量を表２に示す。
【０１７２】
複合体ＣＤ２
複合体ＣＤ１と同一の手順を使用して、ＣＡＰＥを添加したプロポリス−γシクロデキストリン複合体を製造したが、以下の変更を加えた。１２ｇの固形ＣＡＰＥ（シグマ・アルドリッチ社より供給、純度＞９７％）を２３．１重量％の固形分を含有する９．５ｋｇのプロポリスと共に完全に溶解するまで混合した。ＣＡＰＥを添加したプロポリスチンキ剤は、γ−シクロデキストリン、次いで水と混合し、次いで上記のように噴霧乾燥した。複合体ＣＤ２のフラボノイドおよびヒドロキシ桂皮酸の含量を表２に示す。本組成物は、複合体ＣＤ１の２倍のＣＡＰＥ濃度を含む。
【０１７３】
複合体ＣＤ３
２４質量％の固形プロポリスを含むプロポリス−γシクロデキストリン複合体を、２５．０重量％の固形プロポリス（マヌカヘルス（Ｍａｎｕｋａ  Ｈｅａｌｔｈ）より供給された、ロウを含まないもの）を含むプロポリスのエタノール性チンキ剤を使用して作製した。３００ｇのγ−シクロデキストリン（ワッカーＡＧ社（Ｗａｃｋｅｒ  ＡＧ）により供給されたＣＡＶＡＭＡＸ  Ｗ８）を、均質なペースト状の茶色の液体が得られるまで手でガラス容器内のプロポリスチンキ剤３７５ｇと混合した。次いで１３５０ｇの水を４段階で添加し、次いで得られた混合物を１時間６０００ｒｐｍで均質化した。溶液を次に凍結乾燥機トレイに添加し、蒸発により質量が６００ｇ失われるまで強制ファンの前に置いた。残余溶液はその後一晩凍らせてから凍結乾燥させ、容易に粉砕が可能な淡黄色の粉末を得た。複合体ＣＤ３のフラボノイドおよびヒドロキシ桂皮酸の含量を表２に示す。
【０１７４】
複合体ＣＤ４
１９質量％の固形プロポリスを含むプロポリス−γシクロデキストリン複合体を、１９重量％の固形プロポリス（マヌカヘルス（Ｍａｎｕｋａ  Ｈｅａｌｔｈ）より供給された、ロウを含まないもの）を含むプロポリスのプロピレングリコール溶液を使用して作製した。３００ｇのγ−シクロデキストリン（ワッカーＡＧ社（Ｗａｃｋｅｒ  ＡＧ）より供給されたＣＡＶＡＭＡＸ  Ｗ８）を、完全に溶解するまで、１３５０ｇの水と共に６０℃で混合した。プロポリスのプロピレングリコール溶液３７５ｇを、連続的に攪拌しながら混合物に徐々に添加した。当該混合物は、すべての溶液を添加した後、高速で６０℃でさらに１時間撹拌した。次に溶液を凍結乾燥機トレイに注ぎ、空気を室温まで下げ、一晩凍結させてから凍結乾燥して、容易に粉砕可能な黄色の粉末を得た。複合体ＣＤ４のフラボノイドおよびヒドロキシ桂皮酸の含量を表２に示す。
【０１７５】
複合体ＣＤ５
２９質量％の固形プロポリスを含むプロポリス−γシクロデキストリン複合体を、５０．０重量％の固形プロポリス（マヌカヘルス（Ｍａｎｕｋａ  Ｈｅａｌｔｈ）より供給された、ロウを含まないもの）を含むプロポリスのエタノール性チンキ剤を使用して作製した。７ｋｇの濃縮したプロポリスチンキ剤を、９．５ｋｇのγ−シクロデキストリン（ワッカーＡＧ社（Ｗａｃｋｅｒ  ＡＧ）より供給されたＣＡＶＡＭＡＸ  Ｗ８）とステンレス鋼のボウル内で段階的に混合した。すべてのチンキ剤をシクロデキストリンに添加したら、得られたペーストを、プラネタリーミキサーの泡立て器アタッチメントを使用して、さらに１時間混合した。次に、５０．１ｋｇの水を４段階で添加し、黄色の溶液を得た。全ての水を添加したら、溶液を次いでさらに１時間撹拌した。次いで、溶液を凍結乾燥機トレイ上で秤量し、その後、ブラストフリーザー内に置いた。トレイの内容物が完全に凍結したら、トレイを凍結乾燥機に移し、次いで凍結乾燥して、容易に粉砕可能な黄色の粉末を得た。複合体ＣＤ５のフラボノイドおよびヒドロキシ桂皮酸の含量を表２に示す。
【０１７６】
複合体ＣＤ６
２１質量％の固形プロポリスを含有するプロポリス−γシクロデキストリン複合体を、４０．３重量％の固形プロポリス（マヌカヘルス（Ｍａｎｕｋａ  Ｈｅａｌｔｈ）より供給された、ロウを含まないもの）を含有するプロポリスのエタノール性チンキ剤を使用して作製した。６．３５ｋｇの濃縮したプロポリスチンキ剤を、プラネタリーミキサーに接続されているＫ型ミキサーで攪拌しながら、８．１３ｋｇのγ−シクロデキストリン（ワッカーＡＧ社により供給されたＣＡＶＡＭＡＸ  Ｗ８）を入れたステンレス鋼のボウルにゆっくりと連続的に添加した。すべてのチンキ剤をシクロデキストリンに添加したら、得られたペースト／粉末をさらに３０分混合した。その後、ペーストをボウルから取り出し、攪拌棒を泡立て器に変えてから、水６０．０  ｋｇをボウルに加えた。混合を再開し、ペースト／粉末を半連続的に添加した。すべてのペースト／粉末を添加したら、溶液をその後さらに１時間撹拌した。得られた分散液をその後トレイに移し、４０℃で一晩加熱して、若干の水を追い出し、また、ペースト状の沈着物として内包されたプロポリスの沈殿物を生じさせた。次いで希薄な溶液を注意深くトレイの上から注ぎ出し、次いでペーストを、凍結乾燥機トレイ上で秤量し、次に、これらのトレイをブラストフリーザー内に置いた。トレイの内容物が完全に凍結したら、トレイを凍結乾燥機に移し、その後凍結乾燥して、容易に粉砕可能な黄色の粉末を得た。複合体ＣＤ６のフラボノイドおよびヒドロキシ桂皮酸の含量を表２に示す。
【０１７７】
複合体ＣＤ７
約２２質量％のニュージーランド産固形プロポリスを含有するプロポリス−αシクロデキストリン複合体を、４０．３重量％の固形プロポリス（マヌカヘルス（Ｍａｎｕｋａ  Ｈｅａｌｔｈ）より供給された、ロウを含まないもの）を含有するプロポリスのエタノール性チンキ剤を使用して作製した。１０．９１ｇの濃縮したプロポリスチンキ剤を、１２．９２ｇのα−シクロデキストリン（ワッカーＡＧ社（Ｗａｃｋｅｒ  ＡＧ）より供給されたＣＡＶＡＭＡＸ  Ｗ６）とステンレス鋼のボウル内で手で段階的に混合した。すべてのチンキ剤をシクロデキストリンに添加したら、得られたペーストをさらに３０分混合した。次に、研究室規模のフードミキサーで泡立て器のアタッチメントを使用してステンレス鋼ボウルの内容物を混合することによって、９６．３ｇの水を４段階で加えた。全ての水を添加したら、次いで溶液をさらに１時間撹拌した。十分に混合された溶液の大部分を次いでガラス製丸底フラスコに添加し、フラスコの内容物が完全に凍結するまで、アセトンのドライアイス浴中で手動で回転させた。フラスコを次いで、研究室規模の凍結乾燥機へ移し、次いで凍結乾燥して、淡黄色の容易に粉砕可能な粉末を得た。複合体ＣＤ７のフラボノイドおよびヒドロキシ桂皮酸の含量を表２に示す。
【０１７８】
複合体ＣＤ８
約２２質量％のニュージーランド産固形プロポリスを含有するプロポリス−βシクロデキストリン複合体を、４０．３重量％の固形プロポリス（マヌカヘルス（Ｍａｎｕｋａ  Ｈｅａｌｔｈ）より供給された、ロウを含まないもの）を含有するプロポリスのエタノール性チンキ剤を使用して作製した。１０．０６ｇの濃縮したプロポリスチンキ剤を、１２．８１ｇのα−シクロデキストリン（シグマ・ケミカル社（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）より供給）とステンレス鋼のボウル内で手で段階的に混合した。すべてのチンキ剤をシクロデキストリンに添加したら、得られたペーストをさらに３０分混合した。９８．４ｇの水を次に、研究室規模のフードプロセッサーで泡立て器のアタッチメントを使用してステンレス鋼ボウルの内容物を混合することによって４段階で添加した。全ての水を添加したら、溶液をその後、さらに１時間撹拌した。十分に混合した溶液の大部分を次いで、ガラス製丸底フラスコに添加し、フラスコの内容物が完全に凍結するまで、アセトンのドライアイス浴中で手動で回転させた。フラスコを次いで、研究室規模の凍結乾燥機へ移し、次いで凍結乾燥して、淡黄色の容易に粉砕可能な粉末を得た。複合体ＣＤ８のフラボノイドおよびヒドロキシ桂皮酸の含量を表２に示す。
【０１７９】
複合体ＣＤ９
約２０質量％の固形ブラジル産グリーンプロポリスを含有するプロポリス−γシクロデキストリン複合体を、４０．０重量％の固形プロポリス（ブラジルのポレネクター社（Ｐｏｌｅｎｅｃｔａｒ）より供給された、ロウを含まないもの）を含有するプロポリスのプロピレングリコール溶液を使用して作製した。８．１３ｇのγ−シクロデキストリン（ワッカーＡＧ社（Ｗａｃｋｅｒ  ＡＧ）より供給されたＣＡＶＡＭＡＸ  Ｗ８）を、研究室規模のフードプロセッサーのステンレス鋼ボウル内で６０．０ｇの水中に溶解させた。シクロデキストリンが完全に溶解したら、６．３５ｇのブラジル産グリーンプロポリスのプロピレングリコール溶液を、実験室規模のフードプロセッサーで泡立て器アタッチメントを使用して、撹拌しながら溶液に滴下した。全てのプロポリス溶液を添加したら、当該溶液をその後さらに３０分撹拌した。十分に混合した溶液の大部分を次いで、ガラス製丸底フラスコに添加し、フラスコの内容物が完全に凍結するまで、アセトンのドライアイス浴中に手動で回転させた。フラスコを次いで研究室規模の凍結乾燥機へ移し、次いで凍結乾燥して、容易に粉砕可能な淡緑色の粉末を得た。複合体ＣＤ９のフラボノイドおよびヒドロキシ桂皮酸の含量を表２に示す。
【０１８０】
（表２）シクロデキストリン複合体のＣＡＰＥおよびフラボノイド組成（ｍｇ／ｇ複合体）
0006429859.tif 000003
【０１８１】
実施例２
本実施例は、本発明の組成物の抗結腸癌効力の評価について記載する。この研究は、結腸癌腺癌細胞株ＤＬＤ−１で増殖分析を使用して実施した。
【０１８２】
材料と方法
以下の表３に示す試験試料を、ＭＴＴアッセイによって評価されるように、ヒト結腸直腸腺癌細胞（ＤＬＤ−１）の生存率および増殖を調節する能力について評価した。非添加細胞対照（陰性コントロール）に加えて、陽性コントロールである５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を研究に含めた。すべての試料は、２００μｇ／ｍｌの全固形分に対して標準化した。
【０１８３】
こうして、ＤＬＤ−１結腸癌細胞を以下のものに曝露した。
・固形分２５質量％のプロポリスをもともと含有するチンキ剤であって、次いで全固形分の２００μｇ／ｍｌを得るように試験液で希釈したチンキ剤。このチンキ剤は、シクロデキストリン内包プロポリス試料を製造するために使用した。
・シクロデキストリンプロポリス（２５％のプロポリスチンキ剤を内包したγ−シクロデキストリン）、実施例１の表２からのＣＤ１
・シクロデキストリンプロポリス＋ＣＡＰＥ（チンキ剤と比較してＣＡＰＥ濃度が２倍になるようにＣＡＰＥを添加したγ−シクロデキストリン内包２５％プロポリチンキ剤）、実施例１の表２からのＣＤ２
・γ−シクロデキストリン単独（ＣＡＶＡＭＡＸ  Ｗ８  Ｆｏｏｄ  γ−シクロデキストリン）
・陽性コントロールとして７．５０ｎｇ／ｍｌの５−フルオロウラシル
【０１８４】
シクロデキストリンに内包された試料およびγ−シクロデキストリン単独はすべて、試料の重量当たりで分析し、従って、プロポリスとして最大で５０μｇ／ｍｌの総固形分を含む。
【０１８５】
（表３）試験試料
0006429859.tif 000004
【０１８６】
試験材料および試験方法の説明
ヒト結腸直腸腺癌上皮細胞株を凍結保存から復活させ、試験および参照試料の存在下で培養した。細胞の培養条件は、細胞の供給者（ＡＴＣＣ）によって記載されたものであった。次いでＭＴＴアッセイを培養上で実施し、細胞増殖に対する試料の効果を判断した。
【０１８７】
この方法は、以下に報告されている手順に基づいた。
0006429859.tif 000005
【０１８８】
試料調製
試験品を、以下の表に示す濃度で１５％のエタノール（ＥＴＯＨ）／ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）に溶解した。
【０１８９】
（表４）本プロジェクトに用いた試験試料の濃度
0006429859.tif 000006
【０１９０】
試料＃４は、２ｍｇ／ｍＬの固形分の作業原液を得るために５０倍に希釈した。
【０１９１】
試料＃２、＃３ならびに＃５は粉末であった。２ｍｇを計量し、１ｍｌの１５％ＥＴＯＨ／  ＨＢＳＳに溶解することにより、作業原液を調製した。
【０１９２】
実験手順
試験システムの特徴付け
１．ヒト結腸直腸腺癌細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣｌ−２２１、ＤＬＤ−１）
２．ペニシリン−ストレプトマイシン溶液：０．９％のＮａＣｌ（シグマ（Ｓｉｇｍａ）カタログ番号Ｐ−０７８１）中の１００００単位／ｍｌのペニシリン、１０ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン、−２０℃で保存
３．ＤＭＥＭ培養基（インビトロジェン、カタログ番号１２１００−０４６）、−２０℃で保存
４．トリプシン−ＥＤＴＡ溶液：０．２５％トリプシン／ＥＤＴＡ、インビトロジェン、カタログ番号１５４０００５４（１０×ストック）
５．リン酸緩衝塩類溶液（ＰＢＳ）（ＴＢＬで調製）
６．ハンクス緩衝塩類溶液（ＨＢＳＳ）．（ＧＩＢＣＯカタログ番号１４１８５−０５２）、４℃で保存
７．ウシ胎児血清（ＧＩＢＣＯカタログ番号１００９１−１４８）、−２０℃で保存
８．ＭＴＴ試薬：ＰＢＳ中に１０ｍｇ／ｍｌで溶解させ−２０℃で保存した１００ｍｇ／バイアル（シグマ（Ｓｉｇｍａ）カタログ番号Ｍ−２１２８）。作業液として５ｍｇ／ｍｌ  ＭＴＴ溶液をＰＢＳで調製し、４℃で保存
９．ＭＴＴ溶解緩衝液：１０％ナトリウムドデシルサルフェート（ＳＤＳ）／４５％ジメチルホルムアミド（２０ｇのＳＤＳを１００ｍｌの再蒸留水（ＤＤＷ）中に溶解させ、９０ｍｌのジメチルホルムアミドをこのＳＤＳ溶液に加えた）。ｐＨを氷酢酸で４．７に調整し、ＤＤＷを最終容量の２００ｍｌまで添加した。
１０．５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、（シグマ（Ｓｉｇｍａ）カタログ番号Ｆ−６６２７）。１５％エタノール／ＨＢＳＳに溶解して１５０ｎｇ／ｍｌおよび７５ｎｇ／ｍｌの２つの作業液を調製した。最終濃度は、７．５０ｎｇ／ｍｌおよび３．７５ｎｇ／ｍｌであった。
【０１９３】
培地調製
結腸直腸腺癌（ＤＬＤ−１）細胞の増殖用の培地は、ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（１リットル当たり１０ｍｌ）を加えたＤＭＥＭ培地であった。使用直前にＦＢＳを添加して１０％ｗ／ｖとした。
【０１９４】
細胞の培養
１．米国のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションから入手したヒト結腸直腸腺癌細胞（ＤＬＤ−１）を凍結保存から復活させた。
２．上述の培地（培地調製を参照）を使用した初期増殖の後、培養物を以下の通りトリプシン−ＥＤＴＡを用いて継代培養した。培地を除去し、５ｍｌのトリプシンＥＤＴＡ溶液を添加し、３７℃で５分間、またはすべての細胞が剥離するまで、インキュベートした。トリプシンを、等量のＤＭＥＭ培地を添加することによって中和させ、培養物を３００ｇ（１２００ｒｐｍ）で５分間、４℃で遠心分離にかけた。
３．上清をデカントし、細胞ペレットをＤＭＥＭ培地、ＦＢＳ（１０％）、ペニシリン（１００単位／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）に再懸濁した。これら細胞を、３７℃、５％ＣＯ２／９５％エアで培養した。
４．コンフルエンスに達した後、上記２に記載されているように、細胞をトリプシン−ＥＤＴＡを用いて剥離し、遠心分離にかけた。
５．上記３に記載されているように、上清を捨て、ＤＭＥＭおよび添加物中に７．５×１０４細胞／ｍｌで細胞を再懸濁した。細胞懸濁液の２３ｍｌの総容積が必要であった。
６．下記のプレートのレイアウトに記載されるように、３つの９６ウェルプレートの各ウェルに、１８０μｌの細胞（１３，５５０細胞／ウェル）または培地を添加した。プレートを、３７℃、５％ＣＯ２／９５％エアで８時間インキュベートした。これは細胞が強固に接着するために十分であった。
７．上記の図に示すように、各ウェルに試験試料または陽性コントロールを２０μｌずつ入れた。「培地」または「細胞のみ」とラベルされたウェルに、２０μｌの１５％ＥＴＯＨ／ＨＢＳＳを添加した。各試料は６つのレプリケートで評価したが、３つすべてのプレートのコントロールは９つのレプリケートで評価した（合わせた３つ組）。
８．各ウェルの総容量は２００μｌであった。
９．プレートは、３７℃、５％ＣＯ２／９５％エアで１９時間インキュベートした。
【０１９５】
細胞増殖分析
１．インキュベーションが完了次第、２０μｌのＭＴＴ作業液（５ｍｇ／ｍｌ）をすべてのウェルに加え、３７℃、５％ＣＯ２／９５％エアで２時間インキュベートした。
２．１００μｌのＭＴＴ溶解緩衝液を次いで添加し、プレートをシェーカー上で５％ＣＯ２／９５％のエアで３７℃で３時間インキュベートし、続いてピペッティングして、完全に可溶化するまで結晶を砕いて溶解させた。プレートを、あらゆる残存する不溶性物質をペレット化するために、１２００ｒｐｍで１０分間遠心分離にかけた。各ウェルから２００μｌのアリコートを新しい９６ウェルプレートへ移した。ＶｅｒｓａＭａｘマイクロプレートリーダーを用いて５７０ｎｍでプレートを読み取った。
３．結果は、細胞のみの対照との比較で、試料の存在下で培養した細胞の増殖パーセンテージとして表された。ブランク読み取りは、バックグラウンド読み取りとして、すべてのウェルから差し引いた。
【０１９６】
結果と考察
細胞の増殖に対するコントロールおよび試験試料の効果のまとめを、表５および図１に示す。
【０１９７】
（表５）ＤＬＤ−１細胞の増殖に対する試験試料の効果
0006429859.tif 000007
ＮＳ＝有意でない
【０１９８】
ストック細胞培養物の成長中に観察された細胞の比較的迅速な増殖速度により、試験試料との細胞のインキュベーション時間を８時間に短縮することができた。これは、ＭＴＴとの反応に続く培養コントロールの色強度によって評価されるように（平均ＯＤ５７０ｎｍ＝０．７０４７）、申し分ないことが分かった。各試料を６つのレプリケートで分析した。これら６つの試料中には優れた一貫性があり、すべてのレプリケートについてのＳＥＭが、期待される限度内であり、６つすべてを平均吸収度値の算出に使用した。コントロール（陰性と陽性の両方）について、９つのレプリケートは、統計評価に使用するのに十分均一であった。
【０１９９】
ＣＤ１シクロデキストリンプロポリス複合体
２００μｇ／ｍｌのシクロデキストリンプロポリス複合体は、結腸癌細胞の増殖の統計的に有意な阻害剤であった。増殖を２３．９％減少させた。
【０２００】
ＣＤ２シクロデキストリンプロポリス＋ＣＡＰＥ
２００μｇ／ｍｌでの調製物シクロデキストリンプロポリス＋ＣＡＰＥも、細胞成長の阻害剤として統計的に有意であった。増殖を２８．２％減少させた。
【０２０１】
２５％プロポリスチンキ剤
２００μｇ／ｍｌ濃度の２５％プロポリスチンキ剤は、結腸癌成長の統計的に有意な阻害剤であった。増殖を２４．９％減少させた。
【０２０２】
ＣＡＶＡＭＡＸ  Ｗ８  Ｆｏｏｄ  γ−シクロデキストリン
２００μｇ／ｍｌのＣＡＶＡＭＡＸ  Ｗ８  Ｆｏｏｄ  γ−シクロデキストリンは、わずか９．１％の減少で、細胞の増殖に有意な効果を起こさなかった。
【０２０３】
本研究において、７．５ｎｇ／ｍｌの５−フルオロウラシルは、有意でない６．７％の成長阻害を生じた。これは予想外であった。以前の研究に基づくと、この濃度では、統計的に有意な減少が記録されるだろう、と予想された。
【０２０４】
上述の分析は、試験材料の等価質量に基づいて行われた。したがって、試験材料の最終濃度が２００μｇ／ｍＬである天然のプロポリスチンキ剤について、２００μｇ全体がプロポリス固形分で構成されていた。シクロデキストリン複合体は、最大でも２５％のプロポリスを含むものであり、２００μｇのうち５０μｇのみがプロポリスを構成していた。図１を参照すると明確に分かるように、また、上記で観察されるように、天然のプロポリス（例えばチンキ剤）とプロポリス／γ−シクロデキストリン組成物についてほぼ同一の活性が観察された。したがって、このデータは、本発明のプロポリス／γ−シクロデキストリン組成物のこの例は、複合体中のプロポリス固形分の含有量が５０μｇ／ｍｌのみ（図１Ｂを参照）であるため、天然のプロポリスと比較して本アッセイでは約４倍の活性を示すことを示唆する。
【０２０５】
以下の表６および図１Ｂは、それぞれのプロポリス含有試料の％効力を示し、％効力＝％阻害／試料中のプロポリス濃度である。
【０２０６】
（表６）試験試料の効力
0006429859.tif 000008
【０２０７】
本出願人はまた、シクロデキストリン複合体中に存在するＣＡＰＥを倍量にしても、生物活性はほんのわずかしか増加せず、この濃度でのＣＡＰＥは増殖に大きな効果がないことが示唆されていることを注記する。
【０２０８】
これらのデータは、プロポリスと比較した本発明の組成物の効力の増強を裏付けている。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、出願人は、これは、本プロポリスおよびシクロデキストリン組成物によって示される、結腸直腸細胞の増殖に対する予想外の相乗効果に起因し得ることを示唆する。
【０２０９】
実施例３
この実施例では、ＣＡＰＥ、クリシンおよびガランギンの純粋な標準品と比較して、シクロデキストリンに内包されたプロポリスの有効性を示す。すべての試料は、実施例２で使用した同一のヒト結腸直腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１に対して試験した。
【０２１０】
材料と方法
この試験方法および実験手順は、実施例２で使用したものと同一である。ＣＡＰＥ、ガランギンおよびクリシン標準品は、シグマ・アルドリッチ社（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）から９９％以上の純度で入手した。当該ＣＡＰＥ、クリシンおよびガランギン濃度は表７に示す。
【０２１１】
（表７）ＣＡＰＥ、クリシンおよびガランギンの試験濃度
0006429859.tif 000009
【０２１２】
以下の試料を、表８で特定した場合を除き、２００μｇ／ｍｌのウェル濃度で試験した。
【０２１３】
結果と考察
（表８）ＤＬＤ−１細胞の増殖に対するシクロデキストリン複合体および純粋化合物の効果
0006429859.tif 000010
【０２１４】
表８に示すように、ＣＡＰＥ、クリシンおよびガランギンの標準品は全て、２００μｇ／ｍｌの濃度でＤＬＤ−１増殖の統計的に有意な阻害剤であった。また、これらの化合物がシクロデキストリン複合体中にはるかに低い濃度で存在する場合には、増殖は有意である。相対的阻害（濃度に対する％阻害の比率）対試験物質濃度を図２に示す。
【０２１５】
結果は、シクロデキストリン中のこれら３つの化合物を含有するプロポリスの内包が、それらの活性を大きく増加させることを示している。
【０２１６】
実施例４
本実施例は、ヒト結腸直腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６中でアポトーシスを誘発し、このヒト結腸直腸癌細胞における、およびブチレートに対して抵抗性を示すようにされた癌細胞株ＨＣＴ−１１６Ｒにおける、ブチレートのアポトーシス効果を強化する、本発明の組成物シクロデキストリン内包プロポリスの能力を実証する。酪酸は、可溶性繊維の消化から生じる腸内ミクロフローラによって生成される。
【０２１７】
材料と方法
細胞培養と化学物質
ヒト結腸直腸細胞株ＨＣＴ−１１６を、米国のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，メリーランド州ロックビル）から入手した。このブチレート抵抗性細胞株は、ボルドラーノ・Ｍ（Ｂｏｒｄｏｎａｒｏ  Ｍ）、ラザロヴァ・ＤＬ（Ｌａｚａｒｏｖａ  ＤＬ）、サートラリ・ＡＣ（Ｓａｒｔｏｒｅｌｌｉ  ＡＣ）に記述されているように、ブチレートの濃度を増加させて親細胞を培養することでＨＣＴ−１１６から誘導された。Ｗｎｔシグナル伝達によるβ−カテニンの活性化が、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤の効果を媒介する。（Ｅｘｐ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．  ２００７；  ３１３：１６５２〜６６（その中での参照を含む））。
【０２１８】
結腸直腸細胞を、１０％ウシ胎児血清および抗生物質を用いてアルファ−ＭＥＭ培地で成長させた。プロポリス−シクロデキストリン複合体ＣＤ１中のＣＡＰＥの濃度は、１．７９μｇ／１００μｇシクロデキストリン内包プロポリス固形分、または０．４１μｇ／１００μｇシクロデキストリン複合体であった。原液は、１Ｍ濃度の水中に溶解させたブチレートを除いて、ジメチルスルホキシド中に調製した。
【０２１９】
アポトーシスアッセイ
処理の２４時間前に、結腸癌細胞を、ウェル当たり１００，０００〜１２０，０００で２４ウェルプレートに播種した。細胞のみの陰性コントロールを、５ｍＭブチレートの陽性コントロール、１．２ｕｇ／ｍｌのＣＡＰＥ、５ｍＭのブチレート＋１．２ｕｇ／ｍｌのＣＡＰＥ、１００ｕｇ／ｍｌのプロポリス−シクロデキストリン、または５ｍＭのブチレート＋１００ｕｇ／ｍｌのプロポリス−シクロデキストリンに５０時間さらした細胞と比較した。すべての細胞（浮遊性細胞および接着細胞）を採取し、ＰＥアネキシンＶアポトーシス検出キットＩ（ＢＤ  バイオサイエンス社（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、＃５５９７６３）を使用してアポトーシスおよび壊死マーカーに関して染色した。フローサイトメトリー分析を、ＦＡＣＳ  Ａｒｉａ  ＩＩおよびＤｉＶａソフトウェアを用いて実施した。パーセント・アポトーシスは、アポトーシスの細胞の数を、すべての分析された細胞の数で割ったものに、１００を乗じたものである。
【０２２０】
統計
すべてのデータは、少なくとも３セットの独立した実験の平均±標準偏差として提示されている。スチューデントのＴ試験分析を使用して、統計差の有意性を決定した。差は、Ｐ＜０．０５で有意であるとみなされる。
【０２２１】
結果
結腸癌細胞に対するブチレートのアポトーシス効果は、ＣＡＰＥとプロポリスによって、異なる程度に強化される
ＨＣＴ−１１６およびＨＣＴ−Ｒ細胞を用いて、ブチレート、ＣＡＰＥおよびプロポリス−シクロデキストリン複合体、ならびにブチレートおよびＣＡＰＥまたはプロポリスシクロデキストリンの組み合わせのアポトーシス効果を比較した。結果は、陰性コントロールに対して規準化して、表９および図３に示す。
【０２２２】
（表９）ＨＣＴ−１１６およびＨＣＴ−１１６Ｒ細胞のアポトーシスに対する、純粋化合物、プロポリスγ−シクロデキストリン複合体ＣＤ１、およびそれらのブチレートとの混合物の効果
0006429859.tif 000011
【０２２３】
ＣＡＰＥに暴露したＨＣＴ−１１６細胞は、陰性コントロールと比較してアポトーシスの有意な増加はなかった。プロポリス−シクロデキストリン複合体はＣＡＰＥがほんの１／４程度であるにもかかわらず、プロポリス−シクロデキストリン複合体ＣＤ１に暴露したＨＣＴ−１１６細胞は陰性コントロールよりも約８％高い有意なレベルのアポトーシスを受けた（図３参照）。ＨＣＴ−１１６細胞のブチレート処理は、細胞のみに対して３５％のアポトーシスが得られた。ＣＡＰＥまたはプロポリス−シクロデキストリンとブチレートの組み合わせは、ブチレートによって達成されるＨＣＴ−１１６細胞のアポトーシスを強化した。ＣＡＰＥとブチレートの組み合わせは、細胞のみに対して５２％のアポトーシスが得られた（ブチレート単独と比較してＰ＜０．０５）。プロポリス−シクロデキストリンとブチレートの組み合わせは、ＣＡＰＥが１／４のみであるにもかかわらず、細胞のみに対して５８％のアポトーシスが得られた（ブチレート単独と比較してＰ＜０．０５）。ＨＣＴ−Ｒ細胞は、ブチレート単独（想定通り）またはＣＡＰＥ単独で試験した場合は有意なアポトーシスを受けなかったが、しかし、プロポリス−シクロデキストリン複合体への曝露は、１１％、Ｐ＜０．０５の、陰性コントロールに対して有意に高いレベルのアポトーシスを生じた。ＣＡＰＥまたはプロポリス−シクロデキストリンとブチレートの組合せは、ブチレートのアポトーシス効果に対してＨＣＴ−Ｒ細胞を再感作した。ＣＡＰＥとブチレートの組み合わせは、コントロールに対して１２％のアポトーシスが得られた（ブチレート単独と比較してＰ＜０．０５）。プロポリス−シクロデキストリン複合体とブチレートの組み合わせは、コントロールに対して３３％とアポトーシスがさらに高まった（ブチレート単独と比較してＰ＜０．０５）。
【０２２４】
考察
本実施例は、カフェイン酸フェネチルエステル（ＣＡＰＥ）と、単独試験したＣＡＰＥの量の1/4を含有するプロポリス−シクロデキストリン複合体とが、ヒト結腸癌細胞におけるアポトーシスに差示的効果を発揮することを示す。プロポリス−シクロデキストリン組成物は、ＣＡＰＥ（用いた濃度のみでは有効でない）よりはるかに大きな程度で、ブチレートに暴露された結腸癌細胞のアポトーシスを強化した。また、プロポリス−シクロデキストリン複合体は、ブチレート誘導アポトーシスに対してブチレート抵抗性ＨＣＴ−Ｒ細胞を再感作することについて、ＣＡＰＥより強力であった。
【０２２５】
腸ミクロフローラによって消化可能な可溶性繊維を含有する食事がインサイチューでブチレートを生成すること、また、長期暴露に起因して、結腸癌細胞が、そのような方法で生成されるかまたは他の手段で投与されるブチレートに対して抵抗性になりうることが予想される。本実施例では、従来のおよびブチレート抵抗性の結腸直腸癌細胞の両方のアポトーシスを調節するための本発明の組成物の効力（第２のアポトーシス剤ありおよびなしの両方で）と、本発明の組成物は、かかる薬剤によって誘導されるアポトーシスに対する結腸直腸細胞の抵抗性を逆転させることができることを実証する。これらの結果は、胃腸癌の治療および予防における本発明の組成物の効力を裏付けている。
【０２２６】
実施例５
本実施例は、ヒト結腸癌腺癌細胞株ＤＬＤ−１；ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６；ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７；ならびにヒト食道扁平上皮細胞癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖を阻害する、本発明の組成物γ−シクロデキストリン内包ヨーロッパ型プロポリスの能力を実証する。実施例５〜８で使用される一般的な方法を以下に示す。
【０２２７】
胃腸癌抗増殖アッセイのための材料および方法
実施例１で調製した試料ＣＤ５γ−シクロデキストリンを、ＭＴＴアッセイ法で評価されるように、ヒト結腸直腸腺癌細胞（ＤＬＤ−１）；ヒト結腸癌細胞株（ＨＣＴ−１１６）；ヒト胃癌細胞株（ＮＣＩ−Ｎ８７）；ならびにヒト扁平上皮細胞癌細胞株（ＫＹＳＥ−３０）の生存率および増殖を調整するための能力を評価した。本研究において、陰性コントロールとしての非添加細胞コントロールに加えて、陽性コントロールである５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を、３種類の濃度で含めた。［比較用の試験化合物を含んでいるか？］
【０２２８】
試験材料および試験方法の説明
上記４つのヒト胃腸癌細胞株は、凍結保存から復活させ、試験試料および参照試料の存在下で培養した。次いで培養物にＭＴＴアッセイを実施し、細胞の生存率および増殖に対する試料の効果を判断した。
【０２２９】
試料準備
試験試料、および実施例５〜８のすべての他の試験試料を、２ｍｇ／ｍＬ固形分の濃度に、１５％エタノール／ハンクス平衡塩溶液（ＥＴＯＨ）／ＨＢＳＳ中に溶解させた。このアッセイにおいて、試料の最終濃度は、１．５％の最終ＥｔＯＨ濃度の２００μｇ／ｍｌであった。
【０２３０】
実験手順
本試験システムの特徴付け
１．ヒト結腸直腸腺癌細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣｌ−２２１、  ＤＬＤ−１）（ＡＴＣＣ、ベセスダ、米国、メリーランド州）
２．ヒト胃癌細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−５８２２、  ＮＣＩ−Ｎ８７）（ＡＴＣＣ、ベセスダ、米国、メリーランド州）
３．ヒト食道扁平上皮細胞癌（ＥＣＡＣＣ、ＫＹＳＥ−３０）（シグマ・アルドリッチ社、ニュージーランド、オークランド）
４．ヒト結腸癌細胞（ＥＣＡＣＣ  ＨＣＴ−１１６）（シグマ・アルドリッチ社、ニュージーランド、オークランド）
５．ペニシリン−ストレプトマイシン溶液：１００００単位／ｍｌのペニシリン、０．９％ＮａＣｌ（シグマ（Ｓｉｇｍａ）カタログ番号Ｐ−０７８１）中の１０ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシン溶液、−２０℃で保存
６．ＤＬＤ−１細胞用：ＤＭＥＭ培養基（インビトロジェン社（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）カタログ番号１２１００−０４６）、４℃で保存
７．ＮＣＩ−Ｎ８７細胞用：ＲＰＭＩ−１６４０培地、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、４５００ｍｇ／Ｌグルコースおよび１５００ｍｇ／Ｌ重炭酸ナトリウム（シグマ（Ｓｉｇｍａ）Ｒ６５０４）を含有するように改変、４℃で保存
８．ＫＹＳＥ−４１０細胞用：ＲＰＭＩ−１６４０培地、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（シグマ（Ｓｉｇｍａ）Ｒ６５０４）を含有するように改変、４℃で保存
９．ＨＣＴ−１１６細胞用：ＭｃＣｏｙ'ｓ  ５Ａ培地、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（シグマ（Ｓｉｇｍａ）Ｍ４８７９２）を含有するように改変、４℃で保存
１０．トリプシンＥＤＴＡ溶液：０．２５％トリプシン／ＥＤＴＡ、インビトロジェン、カタログ番号１５４０００５４（１０×ストック）
１１．ホスフェート緩衝剤塩類溶液（ＰＢＳ）（ＴＢＬで調製）
１２．ハンクス緩衝塩類溶液（ＨＢＳＳ）（ギブコ（ＧＩＢＣＯ）カタログ番号１４１８５−０５２）、４℃で保存
１３．ウシ胎児血清（ギブコ（ＧＩＢＣＯ）カタログ番号１００９１−１４８）、−２０℃で保存
１４．ＭＴＴ試薬：１００ｍｇ／バイアル（シグマ（Ｓｉｇｍａ）カタログ番号Ｍ−２１２８）、ＰＢＳ中に１０ｍｇ／ｍｌで溶解、−２０℃で保存。作業溶液として５ｍｇ／ｍｌ  ＭＴＴ溶液をＰＢＳ中に調製し、４℃で保存。
１５．ＭＴＴ溶解緩衝液：１０％ナトリウムドデシルサルフェート（ＳＤＳ）／４５％ジメチルホルムアミド（２０ｇＳＤＳを１００ｍｌの再蒸留水（ＤＤＷ）中に溶解し、このＳＤＳ溶液に９０ｍｌのジメチルホルムアミドを加える）。ｐＨを氷酢酸で４．７に調整し、ＤＤＷを最終容量の２００ｍｌまで添加。
１６．５−フルオロウラシル  （５−ＦＵ）、（シグマ（Ｓｉｇｍａ）カタログ番号Ｆ−６６２７）。３つの作業溶液が、１９．５μｇ／ｍｌ、６．５μｇ／ｍｌおよび１．９５μｇ／ｍｌで１５％エタノール／ＨＢＳＳに溶解させて調製される。最終濃度は１．９５μｇ／ｍｌ（１５μＭ）、０．６５μｇ／ｍｌ（５μＭ）および０．１９５μｇ／ｍｌ（１．５μＭ）になる。
【０２３１】
培地調製
それぞれの細胞株の播種用の培地は上記に記載されている。各培地は、ＡＴＣＣ／ＥＣＡＣＣの指示に従い、ペニシリン−ストレプトマイシン溶液を加えて（１リットル当たり１０ｍｌ）調製した。ＦＢＳ（１０％）を使用直前に添加した。
【０２３２】
細胞の培養
１．米国のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）またはヨーロピアン・コレクション・オブ・セル・カルチャー（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ）のいずれかより入手したそれぞれの細胞株を凍結保存から復活させた。
２．前述の培地を使用して初代増殖の後（試験システムの特徴付けと培地調製を参照）、培養物をトリプシン−ＥＤＴＡを用いて継代培養した。培地を除去し、５ｍｌのトリプシン−ＥＤＴＡ溶液を添加して、３７℃で５分間または細胞が剥離するまで培養した。等量の関連培地を添加し、懸濁物を４℃、３００ｇ（１２００ｒｐｍ）で５分間遠心分離することによって、トリプシンを中和させた。
３．上清をデカントし、ＦＢＳ（１０％）、ペニシリン（１００単位／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を入れた関連培地に細胞ペレットを再懸濁した。
４．コンフルエンスに達した後、上記２に記載されているように細胞をトリプシン−ＥＤＴＡを用いて剥離し、遠心分離にかけた。
５．上記３に記載されているように、上清を捨て、細胞を、１．０ｘ１０４細胞／ｍｌで関連培地および添加物に再懸濁した。各細胞懸濁液の総容量約５４ｍｌが必要であった。
６．６つの９６ウェルプレートの各ウェルに、既定のプレートレイアウトに記載されるように１８０μｌの細胞（１，８００細胞／ウェル）または培地を添加した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２／９５％エアで約４８時間インキュベートして、細胞を付着させた。
７．各ウェルに、２０μｌのそれぞれの試験化合物または５−ＦＵを、プレートレイアウトに示されるように添加した。「培地」または「細胞のみ」とラベルされた陰性コントロールウェルに、２０μｌの１５％ＥＴＯＨ／ＨＢＳＳを添加した。各試料またはコントロールを３つまたは６つのレプリケートで評価した。
８．各ウェルの総容量は２００μｌであった。
９．プレートを３７℃、５％ＣＯ２／９５％エアで２４時間インキュベートした。
【０２３３】
細胞増殖分析
１．インキュベーションが完了次第、２０μｌのＭＴＴ作業液（５ｍｇ／ｍｌ）をすべてのウェルに加え、３７℃、５％ＣＯ２／９５％エアで３時間〜４時間インキュベートした。プレートを３０分から６０分おきにモニターし、少数の細胞が結晶の存在を示した場合には、以下のステップ２のように溶解緩衝液を添加した。
２．次いでＭＴＴ溶解緩衝液１００μｌを加え、プレートを３７℃、５％ＣＯ２／９５％エアで一晩インキュベートした。あらゆる残存する不溶性物質をペレット化するために、当該プレートを１２００ｒｐｍで１０分間遠心分離にかけた。各ウェルから２００μｌを、新しい９６ウェルプレートに移した。次いで、プレートを５５０ｎｍのＶｅｒｓａＭａｘマイクロプレートリーダーで読み取った。
３．ブランク読み取りは、バックグラウンド読み取りとして、すべてのウェルから差し引いた。結果は、細胞のみの対照との比較で試料の存在下で培養した細胞の増殖パーセンテージとして表された。  
４．ＶｅｒｓａＭａｘ９６ウェルプレートリーダーを用いて、細胞の増殖を比色分析（５５０ｎｍで）で評価した。
５．平均値の標準誤差の百分率を評価し、ＳＥＭ％＞１５の場合、極端な外れ値を削除する。予備的統計的有意性を、α≦０．０５（外れ値を有するおよび有さない）で、独立したスチューデントのｔ試験を用いて評価する。
【０２３４】
試験方法に関する観察
種々の試験調製物および５−ＦＵの存在下での幾つかの癌細胞の培養を４８時間実施した。これは、２４時間後のＤＬＤ−１およびＮＣＩ−Ｎ８７の陰性コントロールの細胞密度の目視観測が、成長が予期されたほど急速でないことを示唆したためである。統一性の面から、他の培養の時間を同じに設定した。
【０２３５】
本研究計画には、平均標準誤差（ＳＥＭ）が１５％を超えた場合、レプリケート間の外れ値を計算から削除することが必要であった。試料が強い拮抗物質である場合には、吸収の値は小さい。結果として、これらの間の小さな変化は、より弱い阻害試料と比較した場合、パーセンテージとして表される平均からの変動は比較的大きいことを意味する。これにより、実質的に完全な阻害が起こるいくつかの外れ値が、分析から除外された。
【０２３６】
結果
ＣＤ５  γ−シクロデキストリンについての細胞増殖アッセイの結果は、３つの濃度の陽性コントロール５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）および陰性コントロール（細胞のみ、培地あり、試験化合物または陽性コントロールなし）についての結果と共に、表１０に示す。表において、ＯＤは、５７０ｎｍで測定された光学密度；ＳＥＭは、測定した光学密度の平均値に関する標準誤差；ｐは、スチューデントのｔ試験によって測定値が統計的に有意な確率値（ここでは＜０．０５とする）；刺激（％）は、陰性コントロール（試験化合物不活性）と比較した増殖の刺激パーセント値；阻害（％）は、陰性コントロールと比較した増殖の減少パーセント値であり、大きな数は、試験化合物が抗癌増殖ポテンシャルを有することを示す。
【０２３７】
（表１０）４つの胃腸細胞株に対するＣＤ５  γ−シクロデキストリンに内包されたヨーロッパ型プロポリスの抗増殖活性
0006429859.tif 000012
【０２３８】
考察
ＣＤ５  γ−シクロデキストリンは４つの細胞株の３つに対して高い活性があり、７３．０％のヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１、７９．３％のヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、３２．７％のヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、および７０．５％のヒト扁平上皮細胞癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖の阻害をもたらした。
【０２３９】
阻害の程度は、周知の抗癌剤５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を使用して達成された阻害の程度と同程度であり、実際ＮＣＩ−Ｎ８７については優れていた。この結果は、γ−シクロデキストリン内包ヨーロッパ型プロポリスが、胃腸癌について範囲の広い抗増殖活性を有することを示す。この結果はまた、実施例２〜４に示したヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１に対する抗癌活性、および実施例４に示したヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６に対する抗癌活性を確認するものである。
【０２４０】
実施例６
本実施例は、ヒト結腸癌腺癌細胞株ＤＬＤ−１、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、ならびにヒト食道扁平上皮細胞癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖を阻害する、本発明の組成物であるα−シクロデキストリン内包ヨーロッパ型プロポリスの能力を示す。この研究は、ＤＬＤ−１、ＨＣＴ−１１６、ＮＣＩ−Ｎ８７、ＫＹＳＥ−３０の増殖アッセイを使用して実施した。
【０２４１】
アッセイで使用した２００μｇ／ｍｌの濃度のα−シクロデキストリン内包ヨーロッパ型プロポリスは、実施例１に従って、表２に示した組成で試験物質ＣＤ６を製造した。実施例５に詳述した同じ試験方法を実施例６でも使用した。
【０２４２】
結果
α−シクロデキストリンに内包されたヨーロッパ型プロポリスについての抗増殖アッセイの結果を表１１に示す。細胞のみ（陰性コントロール）および５−ＦＵ陽性コントロールについての結果は、実施例５と同一であるため、表には含まれていない。
【０２４３】
（表１１）４つの胃腸細胞株に対するＣＤ６  α−シクロデキストリンに内包されたヨーロッパ型プロポリスの抗増殖活性
0006429859.tif 000013
【０２４４】
考察
ＣＤ６  α−シクロデキストリンは、４つの細胞株の２つに対して中程度に活性があり、６１．７％のヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１、５７．８％のヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、２４．６％のヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、および４８．７％のヒト扁平上皮細胞癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖の阻害をもたらした。
【０２４５】
阻害の程度は、周知の抗癌剤５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を使用して達成された阻害の程度と同程度であった。この結果は、α−シクロデキストリン内包ヨーロッパ型プロポリスは、胃腸癌について広い範囲で抗増殖活性を有するが、その活性はγ−シクロデキストリン内包ヨーロッパ型プロポリスのものより低いことを示す。
【０２４６】
実施例７
本実施例は、ヒト結腸癌腺癌細胞株ＤＬＤ−１、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、ならびにヒト食道扁平上皮細胞癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖を阻害する、本発明の組成物β−シクロデキストリン内包ヨーロッパ型プロポリスの能力を示す。この研究は、ＤＬＤ−１、ＨＣＴ−１１６、ＮＣＩ−Ｎ８７、ならびにＫＹＳＥ−３０の増殖アッセイを使用して実施した。
【０２４７】
アッセイで使用した２００μｇ／ｍｌの濃度のβ−シクロデキストリン内包ヨーロッパ型プロポリスは、実施例１に従って、表２に示した組成で試験物質ＣＤ７を製造した。実施例５に詳細に示した同じ試験手順を実施例７にも使用した。
【０２４８】
結果
α−シクロデキストリン内包ヨーロッパ型プロポリスについての抗増殖アッセイの結果を、表１２に示す。細胞のみ（陰性コントロール）および５−ＦＵ陽性コントロールについての結果は、実施例５と同一であるため表には含まれていない。
【０２４９】
（表１２）４つの胃腸細胞株に対するＣＤ７  β−シクロデキストリンに内包されたヨーロッパ型プロポリスの抗増殖活性
0006429859.tif 000014
【０２５０】
考察
ＣＤ７  β−シクロデキストリンは、４つの細胞株の２つに対して中程度に活性があり、６２．５％のヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１、４９．６％のヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、２１．８％のヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、および４２．９％のヒト扁平上皮細胞癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖の阻害をもたらした。阻害の程度は、周知の抗癌剤５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を使用して達成した阻害の程度と同程度であった。
【０２５１】
この結果は、β−シクロデキストリン内包ヨーロッパ型プロポリスが、胃腸癌について広い範囲の抗増殖活性を有するが、その活性はγ−シクロデキストリン内包ヨーロッパ型プロポリスのものより低いことを示す。
【０２５２】
実施例８
本実施例は、ヒト結腸癌腺癌細胞株ＤＬＤ−１、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、ならびにヒト食道扁平上皮細胞癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖を阻害する、本発明の組成物γ−シクロデキストリン内包ブラジル型プロポリスの能力を示す。この研究は、ＤＬＤ−１、ＨＣＴ−１１６、ＮＣＩ−Ｎ８７、ならびにＫＹＳＥ−３０の増殖アッセイを使用して実施した。
【０２５３】
アッセイで使用した２００μｇ／ｍｌの濃度のγ−シクロデキストリン内包ブラジル型プロポリスは、実施例１、試験物質ＣＤ８に従って製造した。実施例５に詳細に示した同じ試験手順を実施例８にも使用した。
【０２５４】
結果
γ−シクロデキストリンに内包されたブラジル型グリーンプロポリスについての抗増殖アッセイの結果を、表１３に示す。細胞のみ（陰性コントロール）および５−ＦＵ陽性コントロールについての結果は、実施例５と同一であるため表には含まれていない。
【０２５５】
（表１３）４つの胃腸細胞株に対するＣＤ８  γ−シクロデキストリンに内包されたブラジル産グリーン型プロポリスの抗増殖活性
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【０２５６】
考察
ＣＤ８  γ−シクロデキストリンは、４つの細胞株の３つに対して中程度〜弱い活性があり、１８．８％のヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１、２４．３％のヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、２１．３％のヒト扁平上皮細胞癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖の阻害をもたらした。ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７の増殖は３．４％刺激されたが、この刺激は有意ではなかった。
【０２５７】
阻害の程度は、効果が見られなかったＮＣＩ−Ｎ８７に対するもの以外は、周知の抗癌剤５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を使用して達成されるものと同程度であった。この結果は、γ−シクロデキストリン内包ブラジル産グリーン型プロポリスは、胃腸癌について比較的広い範囲の抗増殖活性を有するが、この活性はγ−シクロデキストリン内包ヨーロッパ型プロポリスのものよりはるかに低いことを示す。
【０２５８】
実施例９
本実施例は、ヨーロッパ型ＮＺシクロデキストリン内包プロポリスＣＤ８とブラジル産グリーンシクロデキストリン内包プロポリスＣＤ９との抗食道癌活性の比較評価；ならびに、親ＮＺプロポリス乾燥固形分の、ブラジル産グリーンプロポリス固形分に対する；およびγ−シクロデキストリン単独に対する比較評価を提供する。この研究は、実施例５で概説した一般法を使用して、ヒト扁平上皮細胞癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖アッセイを使用して実施された。ニュージーランド産プロポリスは、実施例１で用いたものと同じ方法で複合体ＣＤ８を製造した。ブラジル産グリーンプロポリスは、実施例１で用いたものと同じ方法で複合体ＣＤ９を製造した。ニュージーランド産プロポリスは、５．８１ｍｇ／ｇのＣＡＰＥ、２０．９２ｍｇ／ｇのピノバンクシン、４３．８４ｍｇ／ｇのピノバンクシン３アセテート、８５．１７ｍｇ／ｇのピノセムブリン、２７．６０ｍｇ／ｇのクリシンならびに３９．７４ｍｇ／ｇのガランギンを含有していた。ブラジル産プロポリスは、８．３６ｍｇ／ｇのアルテピリン−ｃ、０．２６ｍｇ／ｇのカフェイン酸、ならびに４．３１ｍｇ／ｇのパラ−クマル酸を含有していた。
【０２５９】
結果
ＫＹＳＥ−３０細胞増殖アッセイの結果を、３つの濃度の陽性コントロール５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）および陰性コントロール（細胞のみ、培地あり、試験化合物または陽性コントロールなし）についての結果と共に、試験した化合物とプロポリスチンキ剤試料について表１４に示す。表中、ｎはレプリケートの数；ＯＤは５７０ｎｍで測定された光学密度；ＳＥＭは、測定した光学密度の平均値に関する標準誤差；ｐは、スチューデントのｔ試験によって測定値が統計的に有意な確率値（ここで＜０．０５とする）（ＮＳ＝有意でない）；阻害（％）は、陰性コントロールと比較した増殖の減少パーセントであり、大きな数は、試験化合物が抗癌増殖ポテンシャルを有することを示す。
【０２６０】
（表１４）食道扁平上皮細胞癌細胞株ＫＹＳＥ−３０に対するシクロデキストリン内包プロポリスＣＤ８およびＣＤ９ならびにプロポリス乾燥固形分の抗増殖活性
0006429859.tif 000016
【０２６１】
考察
本実施例は、γ−シクロデキストリン内包ニュージーランド産プロポリスが、約1/4の乾燥固形分プロポリスを含んでいるのみにも関わらず、親ニュージーランド産乾燥固形分プロポリス（増殖の阻害が２９．７％）より活性（増殖の阻害が３１．２％）であることを示す。この活性は、最も高い試験濃度の、周知の抗癌剤５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）と同程度である。結果は、実施例２の結腸癌細胞株ＤＬＤ−１のγ−シクロデキストリン内包ニュージーランド産プロポリスとニュージーランド産プロポリスの乾燥固形分による増殖の阻害について見られたものと非常に類似している。γ−シクロデキストリン単独では増殖を８．８％阻害した。
【０２６２】
これらのデータは、抗胃腸癌について、プロポリスと比較して本発明の組成物の効力が増強されていることを裏付ける。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、出願人は、これは、ニュージーランド産プロポリスおよびシクロデキストリン組成物によって示される、胃腸癌細胞の増殖に対する予想外の相乗効果に起因し得ることを示唆する。それに対し、ブラジル産グリーンγ−シクロデキストリンプロポリス複合体は、ブラジル産グリーンプロポリスの乾燥固形分の同等な量とほぼ同一レベルの活性を有し、かつヒトの食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖に対して単独のγ−シクロデキストリンよりも活性がわずかに高いだけであった。またこれらのデータは、この細胞株については、ヨーロッパ型のプロポリスが、シクロデキストリンによる内包のための好ましい種類のプロポリスであることを示す。
【０２６３】
産業上の利用性
プロポリスまたはその抽出物もしくはフラクションとシクロデキストリンとを含有する本発明の抗胃腸癌組成物は、食品および飲料類、医療用具、医療用品、機能性食品ならびに医薬品を含む消費財にて使用可能である。かかる組成物を使用する方法、例えば、胃腸癌およびその症状の治療におけるものは、医療分野において用途を有する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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