(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
単純ヘルペスウイルス(HSV)感染の処置または予防のための抗ウイルスゲル配合剤を製造する方法であって、抗ウイルスゲル配合剤が、
3％グリセリンと0.12〜0.2g/mlクロルヘキシジンを蒸留水に加え、
グリセリン-クロルヘキシジン混合物にカルボポールを加え、1％(w/v)カルボポールのグリセリン-クロルヘキシジン-カルボポール混合物を調製し、
グリセリン-クロルヘキシジン-カルボポール混合物を室温で水和し、および
得られた混合物にホウ素化合物とポロキサマーを加える
ことによって調製される、製造する方法。
【請求項２】
0.5〜5％ホウ素化合物を特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項３】
0.3〜5％ポロキサマーを特徴とする請求項1または2記載の方法。
【請求項４】
五ホウ酸ナトリウム五水和物をホウ素化合物として用いることを特徴とする請求項2記載の方法。
【請求項５】
ホウ酸、ホウ酸アルカリ金属、ホウ酸アルカリのすべて水和物形、ホウ酸アンモニウム、ホウ酸エステルの1つをホウ素化合物として用いることを特徴とする請求項2記載の方法。
【請求項６】
配合剤が、錠剤、カプセル、トローチ、ドロップ、シロップ、坐薬、ゲル、ローション、アンプル、チューブの形でありうる請求項1〜5のいずれか記載の方法。
【請求項７】
配合剤が、経口、経鼻、眼、耳、局所、心室、膣、直腸、皮膚、静脈内、筋肉内、皮下、または皮内経路により投与することができる請求項1〜6のいずれか記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、単純ヘルペスウイルス(HSV)に有効な抗ウイルスゲル配合剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
単純ヘルペスウイルス(HSV)は重要なヒトの病原体であり、2本鎖DNAウイルスである。このウイルスは、種々の宿主種、複製周期時間、および該ウイルスが感染する細胞を分解するその能力に応じて分類される。現在HSVは、口、喉頭、唇、および眼の粘膜領域に感染するもの(HSV-1)と性感染する生殖性疾患を引き起こすものの2つの異なるサブタイプがある[1]。一般的に子供に見られるHSV-1感染の発生率は、地理的条件と社会経済的条件によって異なる。該ウイルスは、密接な接触により伝染し、低社会経済レベルの地域に住む子供の90％が検査でHSV-1に血清反応陽性である[2]。さらに、American National Eye Institute(NEI)によれば眼ヘルペス感染症は米国で400.000症例が報告されており、各年で50,000例の新規または反復症例が見られる[3]。
【０００３】
HSV感染は、粘膜上皮細胞に水疱性病変が生じた後に知覚ニューロンに感染し、次いで潜伏感染して宿主の生涯にわたって長引く[4]。潜伏期からのウイルスの再活性化は、原発感染巣またはその付近で疾患の再発をもたらす。HSV-1感染によって生じるヘルペスは、一般的に致死的ではない。しかしながら、角膜感染(角膜炎)、中枢神経系感染(脳炎)、および新生児と免疫系の弱いヒトの感染が重篤な疾患を生じうる[5]。
【０００４】
今日の技術では、HSV感染に用いられる薬剤の種類は限られている。臨床診療に用いられる最も重要な薬剤は、アシクロビル、ビダラビン、シドホビル、トリフルリジン、ブリブジン、およびホスカルネット[6]である。特にアシクロビル、ビダラビン、およびホスカルネットに耐性のHSV種はこれら抗ヘルペス薬の無意識的な連続使用により生じる[7-8-9-10]。しかしながら、特に化学療法や臓器移植を受けた個体の免疫系の不全によりこれらの薬剤に対する耐性が生じたHSV種は、臨床応用において重大な問題をもたらす。経験されるこれらの困難とこれら治療的応用での薬剤の種類が限られていることにより、新規予防的抗ヘルペス薬の開発や既存システムをより効率的にすることは重要な領域になっている。
【０００５】
至適濃度で信頼できる有効な化合物であるクロルヘキシジン(1,1'-ヘキサメチレン-ビス[5-(p-クロロ-フェニル)-ビグアニド；C22H30Cl2N102C6H12O7)は、虫歯形成を予防するためにうがい薬、ゲル、および歯磨き粉に用いられる。実施した試験では、クロルヘキシジンは多くの微生物種（酵母、真菌、通性嫌気性菌、および好気性菌）に対して抗微生物活性を有することが認められている[11]。クロルヘキシジンの抗微生物特性に加えて、その単純ヘルペスウイルスに対する抗ウイルス活性もin vitroおよびin vivo試験で示されている[12]。in vitro試験において、クロルヘキシジンはベロ細胞においてHSV-1ウイルスの複製を阻害することがわかっている。さらに、感染した皮膚に局所適用するとウイルスの増殖と病変の形成を阻害することが動物試験でわかっている[13]。また、同じ試験で、クロルヘキシジン単独で抗ウイルス活性があり、そのアシクロビルとの併用は相乗効果を示すことがわかっている。結論として、該併用群は、アシクロビルを単独で投与した群よりウイルス複製を有意に減少させることが示されている。
【０００６】
1世紀以上にわたりホウ素が植物に重要な微量元素であることが知られている。行われた試験では、この元素はプロトンとイオンの伝達、ステロイドホルモンの合成と放出、および動物とヒトの骨とカルシウムの代謝に重要な役割を果たすと述べられている[14]。最新の応用では、細菌[15-16]および真菌[17-18]種に対する種々のホウ素化合物の抗微生物活性が示されている。ホウ素を用いた製剤をヒトに局所適用するとヘルペスが治癒することを報告している[19]。
【０００７】
最新の出願である米国特許文献no. US4285934は、ホウ酸(15%)、タンニン酸(15%)、およびサリチル酸(3%)の併用がヘルペス病変に有効であることを開示している。
【０００８】
最新の他の出願である特許文献no. EP1790349およびWO2005-MX7920050902は、五ホウ酸ナトリウム五水和物が免疫系を活性化することによりウイルスおよび細菌疾患の治療に用いることができることを開示している。しかしながら、該文献はこれら成分の単純ヘルペスウイルスおよび他のウイルスに対する抗ウイルス活性についてはなんら記載しなかった。
【０００９】
ポロキサマーとしても知られるプリロニックである別の成分は、疎水性ポリプロピレンオキサイドと親水性ポリエチレンオキサイド単位からなるトリブロック構造を有する合成ポリマーである[20]。これらポリマーは、その両親媒性構造により界面活性剤であり、細胞膜と相互作用することができる。プリロニックは、それが形成するミセルの量が溶液の臨界ミセル濃度より大きいため薬剤の輸送に用いることができる[21]。さらに、プリロニックは細胞生存率を増大させ、攪拌ストレスを減少させるためにバイオリアクターに用いることができる[22]。ポロキサマーの別の成分はナノゲル製剤に用いられる。該ポリマーの粘膜付着特性の結果、該薬剤は細胞に有効に浸透することができ、その効果をその分解を防ぐことにより増強することができる。
【００１０】
最新の知られた出願の一つである米国特許文献no. US2007/0141091は、ポロキサマーを1％(w/v)の濃度で加え、感染に対して局所的に用いることを開示している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
（発明の要約）
本発明の目的は、HSV-1ウイルスに有効な抗ウイルスゲル配合剤を提供することである。
【００１２】
本発明の別の目的は、HSV-1感染が短期間生じる領域に生じる変形を除去する抗ウイルスゲル配合剤を提供することである。
【００１３】
本発明のさらなる目的は、HSV-1感染が短期間生じる領域の痛みを静める抗ウイルスゲル配合剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
(発明の詳細な説明）
本発明の目的を満たすために開発した「抗ウイルスゲル配合剤」を添付した図面に示す。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ゲル製剤内の成分の抗ウイルス活性のグラフ的表示である(NC；陰性コントロール、CHX;クロルヘキシジン、NaB；五ホウ酸ナトリウム五水和物)。
【００１６】
本発明において、抗ヘルペスクロルヘキシジンは、種々の濃度の五ホウ酸ナトリウム五水和物(NaB5O8.5H2O)化合物とポロキサマーの組み合わせにより得られる。
【実施例】
【００１７】
(実験的研究）
ゲルの製造
本発明のゲルの製造において、最初に3％グリセリン(97ml水中3mlグリセリン)と0.12〜0.2g/mlクロルヘキシジンを蒸留水に加えた。
【００１８】
該調製混合物中の1％(w/v)カルボポール溶液を調製した後、カルボポールをゲル化し、pHを中性にするため1Lのカルボポール-水混合物に1.6gの18％NaOH溶液を加えた。
【００１９】
グリセリン-水-クロルヘキシジン混合物中の1％カルボポールを室温で水和した。得られた混合物に0.5〜5％ホウ素化合物(g/ml)と0.3〜5％ポロキサマー(g/ml)を加えた。
【００２０】
混合物を4℃で16〜24時間保存し、すぐ使えるようにした。得られたゲルをその最終型で実験的研究に用いた。
【００２１】
本発明の実験的研究では、五ホウ酸ナトリウム五水和物をホウ素化合物として用いた。この他に、ホウ素化合物のうち、ホウ酸、ホウ酸アルカリおよびホウ酸アルカリ土類金属、およびこれらホウ酸塩のすべての水和物型、ホウ酸アンモニウム、ホウ酸エステルを用いることもできる。
（分類研究）
細胞毒性の測定
【００２２】
製造したゲル製剤の毒性作用をMTS法を用いて測定した[24]。ゲル中の用いた分子を培地中で単独または組み合わせて調製し、数を数えて96ウェル培養プレートに接種した（5000細胞/ウェル）細胞株L929(マウス繊維芽細胞)、HF(ヒト繊維芽細胞)、およびVero(ミドリザル腎細胞)に適用した。該分子の毒性に対する該細胞の反応を細胞生存率を3日間測定することにより測定した。細胞生存率を、細胞のミトコンドリアデヒドロゲナーゼ酵素活性を測定するMTSという方法を用いて測定した。培地と共に細胞に加えたMTS物質は細胞生存の指標として有色ホルマザン結晶の形成をもたらす。生じる色変化をELISAプレートリーダーを用いる吸光度測定(490 nm)に基づいて評価した。得られた値をマイクロソフトオフィスエクセルデータベースを用いて分析した。
抗ウイルス活性の測定
【００２３】
活性分子またはその組み合わせのHSV(単純ヘルペス)1型ウイルスに対する抗ウイルス活性を先に文献[25]に報告されたごとく測定した。これら物質がVero(ベロ)細胞に毒性作用があるか否かを細胞生存率分析により測定した。抗ウイルス分析は、製造したゲル製剤に文献で先に用いた0.0005、0.001、および0.002％クロルヘキシジン濃度を加えて完結した。ベロ細胞を5000細胞/ウェルの濃度で96ウェル培養プレートに播いた。細胞が完全に定着した翌日に、抗ウイルス活性を分析する7種の異なるウイルス希釈と活性成分の組み合わせを細胞に適用した。3日後に細胞生存率をMTS実験で示し、ウイルス阻害を計算した。
実験結果
【００２４】
ベロ細胞と単純ヘルペス1型ウイルスを用いて五ホウ酸ナトリウム五水和物、クロルヘキシジン、およびポロキサマーの混合物からなる抗ウイルスゲル製剤の単純ヘルペス1型ウイルスに対する活性を観察した。ウイルスストック希釈液を調製し、分析に用いた。10-5濃度以下の5つの異なる濃度を主ストックから調製し、これらの濃度のうち生存細胞がみられなかった10-1濃度の希釈を削除した。その他の抗ウイルス分析を10-2〜10-5の範囲の4つの異なる濃度値で行った。クロルヘキシジンを3つの異なる濃度：0.0005、0.001、0.002％で適用した。
【００２５】
クロルヘキシジン単独の適用では、最良の抗ウイルス活性が0.002％の平均濃度で観察された。しかしながら、この濃度値は毒性作用があることがわかっている[12]。
【００２６】
抗ウイルス活性分析を、調製した混合物に先に行った実験に基づいて決定した量の五ホウ酸ナトリウム五水和物を加えて行った。五ホウ酸ナトリウム五水和物の細胞毒性作用を抗ウイルス分析前にベロ細胞で試験することにより測定した。実験に用いた濃度は300μg/mlまでにわたり細胞毒性作用はみられなかった。
【００２７】
高率の抗ウイルス活性が、300μg/ml 五ホウ酸ナトリウム五水和物、0.0005％クロルヘキシジン、5mg/mlポロキサマーを用いて調製した混合物で、10-4および10-5濃度、特に10-3のウイルス希釈で認められた。この結果に従って、最も高い抗ウイルス活性がこれら4分子の組み合わせにより得られた。このように4つの異なる分子を組み合わせて調製した製剤を用いてクロルヘキシジンを細胞に毒性のないレベルで用いることができ、最大の抗ウイルス活性を有する生成物を形成することができる（図1）。
【００２８】
本発明の適用により、抗ウイルス活性は免疫系を強化することでウイルスの複製を抑制し、ウイルスの増殖を抑制する。
【００２９】
本発明の配合剤は、錠剤、カプセル、トローチ、ドロップ、シロップ、坐薬、ゲル、ローション、アンプル、チューブの適用などの多くの薬理学的領域に用いるのに適している。製造した配合剤は、身体への吸収を可能にするすべての種類の経路、例えば、経口、経鼻、眼、耳、局所、心室、膣、直腸、皮膚、静脈内、筋肉内、皮下、および皮内経路により投与することができる。
【００３０】
(参考文献）
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【図１】
0006416207.tif 000002