(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）
菌に由来する細胞外小胞を有効成分として含有する、代謝疾患の治療または予防用の薬学
組成物であって、
上記の代謝疾患は、肥満および糖尿病からなる群より選ばれることを特徴とする、薬学組成物。
【請求項２】
上記の細胞外小胞はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃ
ｉｎｉｐｈｉｌａ）菌で自然的または人工的に分泌されるものを特徴とする、請求項１に
記載の代謝疾患の治療または予防用の薬学組成物。
【請求項３】
上記の細胞外小胞は平均直径が２０〜３００ｎｍであることを特徴とする、請求項１に記
載の代謝疾患の治療または予防用の薬学組成物。
【請求項４】
アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）
菌に由来する細胞外小胞を含有する、代謝疾患の予防または改善用の食品組成物であって、
上記の代謝疾患は、肥満および糖尿病からなる群より選ばれることを特徴とする、食品組成物。
【請求項５】
上記の細胞外小胞はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃ
ｉｎｉｐｈｉｌａ）菌で自然的または人工的に分泌されることを特徴とする、請求項４に
記載の代謝疾患の予防または改善用の食品組成物。
【請求項６】
上記の細胞外小胞は平均直径２０〜３００ｎｍであることを特徴とする、請求項４に記載
の代謝疾患の予防または改善用の食品組成物。
【請求項７】
上記の食品は、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎ
ｉｐｈｉｌａ）菌を添加して発酵させた発酵食品であることを特徴とする、請求項４に記
載の代謝疾患の予防または改善用の食品組成物。
【請求項８】
請求項１の組成物を個体（ただし、人間を除く。）に投与する段階を含む代謝疾患の治療方法。
【請求項９】
代謝疾患の治療用途の請求項１の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来する細胞外小胞（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）を有効成分として含有する代謝疾患の治療、予防または改善用の薬学および食品組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
代謝疾患（Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）は生体内での物質代謝の障害により発生する疾患を総称する。一般的に糖質、脂質、たんぱく質、ビタミン、電解質および水分などの不均衡によって発生するようになるが、その例としては、肥満、糖尿病、高脂血症、動脈硬化症、高血圧などがある。この中でも、２型糖尿病の場合には主に成人期に現れる糖尿病として、インスリンに対する抵抗性の増加を特徴とする。インスリン受容体そのもの減少、またはその敏感度が落ちったり、細胞内のグリコーゲン合成を引き起こすセカンドメッセンジャーに問題が発生すると、インスリンに対する敏感度が落ちることになる。したがって、２型糖尿病をインスリン非依存型糖尿病と呼ばれ、糖尿の８５〜９０％を占めている。
【０００３】
一方、原核細胞や真核細胞は細胞外小胞を分泌して、分泌された小胞が様々な機能を行うことが最近報告された。細菌から分泌された細胞外小胞は内毒素（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ＬＰＳ）と細菌由来のたんぱく質を含有しており、炎症性疾患を誘導することが知られている。しかし、病原性細菌に由来する小胞による局所炎症反応の発生を抑制する機制についてはよく知られていない状態である。
【０００４】
また、ヒトや動物のいくつかの分泌物、排泄物または組織の洗浄液などで細胞外小胞が発見されたことが報告されて、組織に存在する細胞外小胞は小胞を分泌する組織の状態を反映することと知られており、疾病の診断に用いることができると報告された。
【０００５】
大腸には宿主細胞の数の約１０倍程度の数の腸内共生細菌が生息している。アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌はヒトを含めた哺乳類の腸内に共生しながら粘液を分解して生存するグラム陰性菌として糖尿や肥満と関連がある菌として知られている。また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌そのものは炎症性腸炎を悪化させると知られている。最近、本発明者はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）が細胞外小胞を分泌して、この菌に由来する細胞外小胞が炎症性腸炎を予防する効果があることを報告したことがある（Ｋａｎｇ  ＣＳ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｇｕｔ  ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ，  ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ  Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ，ｐｒｏｔｅｃｔ  ｔｈｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｘｔｒａｎ  ｓｕｌｆａｔｅ  ｓｏｄｉｕｍ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｏｌｉｔｉｓ．ＰＬＯＳ  ＯＮＥ  ２０１３）。
【０００６】
一方、５’ＡＭＰ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ（ＡＭＰＫ）は細胞でエネルギー恒常性に重要な役割をする酵素として、肝臓、脳、筋肉、脂肪、膵臓などに発現される。ＡＭＰＫを活性化させると、肝臓でのコレステロール、中性脂肪（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ）の合成を抑制して、筋肉で脂肪酸の酸化、ブドウ糖の吸収を増加させ、膵臓でインスリン分泌を調節すると知られている。糖尿病の治療剤の中でインスリン抵抗性を回復させるメトホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）や運動などがＡＭＰＫを活性化して代謝疾患を好転させると知られている。
【０００７】
しかし、いまだにアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌そのものではなく、この菌に由来される細胞外小胞が肥満や糖尿病などの代謝疾患を軽減または治療できるという研究結果は報告されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者は、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）が分泌する細胞外小胞が高脂肪の食餌によって誘導される肥満と糖尿を抑制し、高脂肪の食餌が原因で発生する糖尿病の病因に重要なインスリン抵抗性を回復させて、これはＡＭＰＫの活性化を通じて起こることができることを発見し、本発明を完成することになった。
【０００９】
したがって、本発明はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来する細胞外小胞を用いて、肥満、糖尿病、高脂血症、高血圧などの代謝疾患の治療または予防用の薬学および食品組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記のような課題を解決するために、本発明はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌に由来する細胞外小胞を有効成分として含有する、代謝疾患の治療または予防用の薬学組成物を提供する。
【００１１】
また、本発明は、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌に由来する細胞外小胞を含有する、代謝疾患の予防または改善用の食品組成物を提供する。
【００１２】
また、本発明はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌に由来する細胞外小胞を個体に投与する段階を含む、代謝疾患の予防または治療方法を提供する。
【００１３】
また、本発明は、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌に由来する細胞外小胞を代謝疾患の予防または治療に用いる用途を提供する。
【００１４】
本発明の一実施例として、上記の細胞外小胞はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌で自然的または人工的に分泌されるものを特徴とする。
【００１５】
本発明の他の実施例として、上記の細胞外小胞は平均直径が２０〜３００ｎｍであり、望ましくは５０〜２００ｎｍであることを特徴とする。
【００１６】
本発明の他の実施例として、上記の代謝疾患は肥満、糖尿病、高脂血症、および高血圧からなる群より選ばれることを特徴とする。
【００１７】
本発明の他の実施例として、上記の食品はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌を添加して発酵させた発酵食品であることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来する細胞外小胞を有効成分として含有する薬学組成物は、高脂肪の食餌によって誘導される肥満、糖尿病、高脂血症および高血圧などの代謝疾患を治療および予防することできる。
【００１９】
また、本発明のアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来する細胞外小胞を含有する発酵食品の組成物は、高脂肪の食餌によって誘導される肥満、糖尿病、高脂血症および高血圧などの代謝疾患を予防及び改善することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）培養液から分離された細胞外小胞を電子顕微鏡で観察した結果である。
【図２】図２はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞の平均直径を光散乱法で測定した結果である。
【図３】図３はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌とアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞のたんぱく質発現様相をＳＤＳ−ＰＡＧＥで比較評価した結果である。
【図４】図４はマクロファージでＬＰＳによる炎症性サイトカイン（ＩＬ−６）の分泌がアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）の前処理により抑制されることを示した結果である。
【図５】図５は高脂肪の食餌により誘導された肥満および糖尿マウスモデルでアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）を胃腸に直接投与した後、代謝疾患の治療効果を確認するための実験プロトコルである。
【図６】図６は高脂肪の食餌により誘導された代謝疾患マウスモデルでアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（Ａｋｋ  ＥＶ）を胃腸に直接投与した後、体重の変化を観察した結果である。
【図７】図７は高脂肪の食餌により誘導された代謝疾患マウスモデルでアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（Ａｋｋ  ＥＶ）を胃腸に直接投与した後、空腹時の血糖量を測定した結果である。
【図８】図８は高脂肪の食餌により誘導された代謝疾患マウスモデルでアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（Ａｋｋ  ＥＶ）を胃腸に直接投与した後、血液内のインスリンの濃度を測定した結果である。
【図９】図９は高脂肪の食餌により誘導された代謝疾患マウスモデルでアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（Ａｋｋ  ＥＶ）を胃腸に直接投与した後、脾臓細胞を体外に分離して抗−ＣＤ３抗体および抗−ＣＤ２８抗体で４８時間の刺激を与えた後、その上澄み液でＩＦＮ−γとＩＬ−１７の濃度を測定した結果である。
【図１０】図１０はマウスの筋肉細胞（ｍｙｏｃｙｔｅ）に高脂肪酸を処理して、インスリン抵抗性を誘導した後、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（Ａｋｋ  ＥＶ）によるインスリンのシグナル伝達の阻害が回復されたのかを確認した結果である。
【図１１】図１１はマウスの胃腸にアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌（ｂａｃｔｅｒｉａ）とアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）をそれぞれ直接投与した後、これらの体内分布の様相を比較評価した結果である。
【図１２】図１２はマウスの胃腸にアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌（ｂａｃｔｅｒｉａ）とアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）をそれぞれ直接投与した後、１２時間目に、血液および様々な臓器（心臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓、脂肪、筋肉）を摘出して、これらの体内分布の様相を比較評価した結果である。
【図１３】図１３はマウスの大腸にアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）菌（ｂａｃｔｅｒｉａ）とアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）をそれぞれ直接投与した後、これらが腸の防御膜を突き抜けて、組織に吸収されるかを比較評価した結果である。
【図１４】図１４はマウスの大腸にアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）を直接投与した後、腸管内の毛細血管に細胞外小胞が吸収されるかを確認した結果である。
【図１５】図１５は体外筋肉細胞（ｍｙｏｃｙｔｅ）にアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）を様々な濃度（０．１、１、１０ｕｇ／ｍｌ）で投与した後、６０分目に、ＡＭＰＫの活性化を確認した結果である。
【図１６】図１６は体外筋肉細胞（ｍｙｏｃｙｔｅ）にアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）１ｕｇを投与した後、様々な時間（１０、２０、３０、６０ｍｉｎ）にＡＭＰＫの活性化を確認した結果である。
【図１７】図１７は 体外筋肉細胞（ｍｙｏｃｙｔｅ）にメトホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）、ＡＭＰＫシグナル抑制剤（ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｃ）、Ｅ．ｃｏｌｉ由来の細胞外小胞をそれぞれ投与した後、ＡＭＰＫの活性化を確認した結果である。
【図１８】図１８は体外筋肉細胞（ｍｙｏｃｙｔｅ）にインスリン、メトホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）をそれぞれ投与した後、ブドウ糖の吸収程度を比較評価した結果である。
【図１９】図１９は体外筋肉細胞（ｍｙｏｃｙｔｅ）にインスリン、メトホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）をそれぞれ投与した後、ブドウ糖の吸収受容体であるＧＬＵＴ４  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒの発現程度を比較評価した結果である。
【図２０】図２０は体外筋肉細胞（ｍｙｏｃｙｔｅ）にアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）を投与した後、ブドウ糖の吸収に関するＡＭＰＫシグナル抑制剤（ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｃ）の効果を確認した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明は腸内の細菌、特にアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来する細胞外小胞を有効成分として含有する、代謝疾患の治療または改善用の薬学・食品組成物に関するものである。
【００２２】
本発明者は高脂肪の食餌により誘導された代謝疾患のマウスモデルで、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来する細胞外小胞を胃腸に投与した時に、肥満が抑制されて、脂肪酸によるインスリン抵抗性が回復されると同時に糖尿病の表現型が抑制されて、免疫機能が向上されることを確認した。
【００２３】
また、本発明者はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）細菌そのものとアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞のたんぱく質発現様相が相違することを確認した。
【００２４】
また、本発明者はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）細菌そのものとアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞の体内吸収様相を比較した結果、細胞外小胞の体内吸収がはるかに優れていることを知ることができた。
【００２５】
また、本発明者は筋肉細胞にアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞を投与した時、ＡＭＰＫ活性化により筋肉細胞でのブドウ糖の吸収受容体（ＧＬＵＴ４）の発現が促進されて、結局ブドウ糖の吸収が増加されることを確認した。
【００２６】
本明細書で「代謝疾患（Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ）」とは、生体内での物質代謝障害により発生する疾患を総称する。一般的に糖質、脂質、たんぱく質、ビタミン、電解質および水分などの不均衡により発生するようになるが、代表的な例としては高脂肪の食餌により発生する肥満、糖尿病、高脂血症、動脈硬化症などがある。
【００２７】
本明細書で「代謝疾患の治療または予防」とは、代謝疾患の軽減、緩和および症状の改善を含め、また代謝疾患にかかる可能性を低くすることを含む意味である。
【００２８】
本明細書で「アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来する細胞外小胞」とは、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）の培養液から分離されたり、またはアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）で発酵させた食品から分離されることができる。上記の細菌培養液または上記の細菌添加発酵食品で上記の細胞外小胞を分離する方法は細胞外小胞を含むことであれば特に制限されなく、例えば、細菌培養液や発酵食品で、遠心分離、超高速遠心分離、フィルターによるろ過、ゲルろ過クロマトグラフィー、フリーフロー電気泳動、毛細管電気泳動、ポリマーを用いた分離などの方法およびこれらの組み合わせを用いて細胞外小胞を分離することができる。また、不純物の除去のための洗浄、収得された細胞外小胞の濃縮などの過程をさらに含むことができる。
【００２９】
上記の細胞外小胞は自然的に分泌されたものであったり、あるいは人工的に分泌された細胞外小胞を含む。
【００３０】
上記の方法により分離された細胞外小胞は平均直径が２０〜３００ｎｍであることができるが、望ましくは３０〜２００ｎｍである。
【００３１】
本発明の一実施例によれば、上記の代謝疾患の治療または予防用の組成物は薬学的組成物で製造することができる。治療および予防に用いるために本発明の細胞外小胞そのものを投与することができるが、薬学的組成物の活性成分として、上記の細胞外小胞が含まれることが好ましい。
【００３２】
上記の薬学的組成物は、上記の分離された細胞外小胞を有効成分として含有して薬学的に許容できる担体を含むことができる。上記の薬学的に許容できる担体は製剤の際に通常的に用いられるものであり、食塩水、滅菌水、リンゲル液、緩衝食塩水、シクロデキストリン、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エタノール、リポソームなどを含むが、これに限定されなく、必要に応じて抗酸化剤、緩衝液など他の通常の添加剤をさらに含むことができる。また、希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤、潤滑剤などを付加的に添加して、水溶液、懸濁液、乳濁液などのような注射用の剤形、丸剤、カプセル、顆粒または錠剤に製剤化することができる。適合な薬学的に許容される担体および製剤化に関しては、レミントンの文献（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡ）に開示されている方法を用いて、各成分に基づいて、好ましく製剤化することができる。本発明の薬学的組成物は、剤形に特別な制限はないが、注射剤、吸入剤、皮膚外用剤などに製剤化することができる。
【００３３】
本発明の薬学的組成物の投与方法は特別に制限されるものではないが、目的とする方法により静脈内、皮下、腹腔内、吸入、皮膚塗布または局所適用のように非経口投与したり、経口投与することができる。
【００３４】
投与量は患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率および疾患の重症度によりその範囲が様々である。一日投与量は治療を必要とする個体に投与されることにより軽減された疾病の状態に対して治療に十分な、本発明の治療用の物質の量を意味する。治療用の物質の効果的な量は特定化合物、疾病の状態およびその深刻さ、治療を必要とする個体により異なり、これは同業者により通常的に決定されることができる。非制限的な例として、本発明による組成物の人体に対する投与量は患者の年齢、体重、性別、投与の形態、健康状態および病気の程度によって異なる場合があり、体重が７０ｋｇの成人患者を基準にする時、一般的には０．０１〜１０００ｍｇ／日、好ましくは１〜５００ｍｇ／日であり、一定時間の間で１日１回ないし数回に分割投与することもできる。
【００３５】
本発明の一実施例によれば、上記の代謝疾患の予防または改善用の組成物は食品組成物で製造されることができる。本発明の組成物が食品組成物で製造される場合、有効成分として上記の細胞外小胞を含有するだけでなく、食品製造の際に通常的に添加される成分を含めて、例えば、たんぱく質、炭水化物、脂肪、栄養素、調味剤および香味剤を含むことができる。例えば、本発明の食品組成物がドリンク剤に製造される場合には、本発明の細胞外小胞以外に、クエン酸、液状果糖、砂糖、ブドウ糖、酢酸、リンゴ酸、果汁などをさらに含むことができる。
【００３６】
本発明の組成物が食品組成物で製造される場合、キムチのような発酵食品そのものを用いることができる。
【実施例】
【００３７】
以下、本発明の理解を助けるために実施例を提示する。しかし、下記の実施例は本発明をより解りやすくするために提供されているものだけであり、実施例により本発明の内容が限定されることではない。
【００３８】
実施例１．アッカーマンシア・ムシニフィラ培養液から細胞外小胞の分離
【００３９】
アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ、ＡＴＣＣＢＡＡ−８３５）菌株を滅菌された（ａｕｔｏｃｌａｖｅｄ）Ｂｒａｉｎ  ｈｅａｒｔ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｂｒｏｔｈ（ＢＤ２３７５００）２Ｌで７２時間の間、Ｏ．Ｄ  １．５になるように嫌気性チャンバーで培養した後、培養液を２０分間高速遠心分離（１０，０００×ｇ）し、菌の沈殿ペレットを除いた上澄み液を得た。上澄み液は０．４５μｍフィルターと０．２２μｍフィルターでろ過を行い、Ｑｕｉｘｓｔａｎｄ  ｂｅｎｃｈｔｏｐ  ｓｙｓｔｅｍを用いて約１４倍程度濃縮した培養液を得た。この培養液をさらに１５０，０００×ｇ、４℃で２時間の間、超高速遠心分離を行って、ペレットを得た後、滅菌生理食塩水（ＰＢＳ）で溶かしてタンパク質定量した。
【００４０】
実施例２．細胞外小胞の特性分析
【００４１】
上記の実施例１の方法で獲得したのがアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞であるかを確認するために、タンパク質定量により５０μｇ／ｍｌのサンプルを得た後、ＪＥＭ１０１１電子顕微鏡（Ｊｅｏｌ、Ｊａｐａｎ）で観察した。その結果、図１に示したように、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が球形であることを確認することができた。
【００４２】
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）から分離した細胞外小胞の大きさを光散乱法（ｄｙｎａｍｉｃ  ｌｉｇｈｔ  ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ、ＤＬＳ）で確認するために、５０μｇ／ｍｌのサンプルをｚｅｔａｓｉｚｅｒ  ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｋ、ＵＫ）を通じて確認した。その結果、図２に示したように、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞の平均直径が２０〜３００ｎｍの範囲であることが分かった。
【００４３】
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）から分離した細胞外小胞のタンパク質パタンを確認するために、１０ｕｇ／ｍｌのサンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥを通じて確認した。その結果、図３に示したように、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）のタンパク質発現様相がアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）細菌（Ｂａｃｔｅｒｉａ）タンパク質発現と異なることを知ることができた。
【００４４】
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）から分離した細胞外小胞の抗炎症の効果を評価するために、マクロファージにＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）を処理する前に細胞外小胞（１ｕｇ／ｍｌ）を前処理した後、ＥＬＩＳＡを通じて分泌される炎症性サイトカインを測定した。その結果、図４に示したように、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞をマクロファージに前処理するとＬＰＳにより誘導されるＩＬ−６の分泌量が減少することが分かった。
【００４５】
実施例３．高脂肪食餌で誘導された肥満および糖尿病マウスでのアッカーマンシア・ムシニフィラ由来の細胞外小胞の治療効果
【００４６】
上記の実施例１から得られたアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が高脂肪食餌により誘導された肥満と糖尿病を抑制するかを確認するために、次のような方法で実験を行った。
【００４７】
正常食餌（Ｒｅｇｕｌａｒ  ｄｉｅｔ；ＲＤ）を２カ月間与えられた正常マウスと、高脂肪食餌（Ｈｉｇｈ  ｆａｔ  ｄｉｅｔ；ＨＦＤ）を２カ月間与えられた肥満および糖尿病を誘導したマウスモデルに、実施例１から得られた細胞外小胞をマウス当たり１０ｕｇずつ３週間二日の間隔で投与した（図５参考）。この際に、対照群（ｎａｇａｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ）では正常食餌のみを与えられた正常マウスと正常食餌および細胞外小胞を投与したマウスグループを用いた。
【００４８】
二日の間隔で細胞外小胞を投与すると同時に体重を測定した結果、図６に示したように、高脂肪食餌のみを与えられたマウスグループ（ＨＦＤ）に比べて、細胞外小胞を投与した高脂肪食餌マウスグループ（ＨＦＤ＿Ａｋｋ  ＥＶ）は３週間の間体重の増加が表れないことを確認した。
【００４９】
また、細胞外小胞の投与が終わった後、６時間の間飢えさせた後、空腹時の血糖を測定した結果、図７に示したように、細胞外小胞を投与した高脂肪食餌マウスグループ（ＨＦＤ＋Ａｋｋ  ＥＶ）の血糖が高脂肪食餌のみを与えられたマウスグループ（ＨＦＤ−Ａｋｋ  ＥＶ）に比べて減少されていることを確認した。
【００５０】
また、細胞外小胞の投与が終わってから２４時間の後、マウスの心臓から採取した血液でインスリンの濃度を測定した結果、図８に示したように、細胞外小胞を投与した高脂肪食餌マウスグループ（ＨＦＤ＋Ａｋｋ  ＥＶ）が高脂肪食餌のみを与えられたマウスグループ（ＨＦＤ−Ａｋｋ  ＥＶ）に比べてインスリン濃度がより増加されていることを確認した。
【００５１】
上記の結果からアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）に由来した細胞外小胞が高脂肪食餌により誘導された肥満および糖尿を治療するのに効果があることを知ることができる。
【００５２】
実施例４．免疫機能の調節効果
【００５３】
上記の実施例１から得られたアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が免疫機能でも影響を及ぶかを確認するために、次のような方法で実験を行った。
【００５４】
上記の実施例３と同じ方法で細胞外小胞の投与を終了した後、２４時間の後にマウス血液を採取すると同時に脾臓を一緒に採取した。採取した各マウスグループの脾臓は１００μｍと４０μｍのｃｅｌｌ  ｓｔｒａｉｎｅｒを用いて組織にある免疫細胞を抽出した。抽出物を４００×ｇ、５分間遠心分離して、細胞の数を数えてｗｅｌｌ当たり５×１０５ｃｅｌｌを細胞培養プレート（ｐｌａｔｅ）に入れた後、Ｔ細胞のｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅを刺激（サイトカイン分泌刺激）するａｎｔｉ−ＣＤ３およびａｎｔｉ−ＣＤ２８をそれぞれ１ｕｇ／ｍＬ、０．５ｕｇ／ｍＬを入れて、４８時間の間、培養した。
【００５５】
培養が終わった後、各グループの間の炎症性サイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅ）分泌の差を確認するために、細胞培養プレートで各グループの上澄み液を収めて４００×ｇ、５分間遠心分離で上澄み液に存在する細胞を除去して、再びその上澄み液のみを収めた。収めた上澄み液はＥＬＩＳＡでＩＦＮ−γとＩＬ−１７の濃度を確認した結果、図９に示したように、高脂肪食餌のみを投与したマウスグループ（ＨＦＤ−Ａｋｋ  ＥＶ）では増加したＩＦＮ−γとＩＬ−１７の濃度が、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞と一緒に投与した高脂肪食餌マウスグループ（ＨＦＤ＋Ａｋｋ  ＥＶ）では減少されたことを確認した。
【００５６】
肥満および糖尿は炎症と関連があるため、ＩＦＮ−γとＩＬ−１７のような炎症性サイトカインが減少されたことは肥満および糖尿の治療に免疫機能を好転させ、効果を表すことを意味することである。
【００５７】
実施例５．インスリン抵抗性によるシグナル伝達の抑制に及ぶ影響
【００５８】
上記の実施例１から得られたアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞がインスリン抵抗性を回復させるかを確認するために次のような方法で実験を行った。
【００５９】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏでインスリン抵抗性を実現するために、マウス由来の筋肉細胞（Ｃ２Ｃ１２、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１７７２）培養液に、脂肪酸（ｓｏｄｉｕｍ  ｐａｌｍｉｔａｔｅ、ＳＩＧＭＡ）１ｍＭと４％のＢＳＡ（Ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ）を４８時間処理した。この後、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞を１ｕｇ／ｍｌ濃度で入れ、６時間培養して、インスリンを２ｎＭの濃度で処理して細胞内部のシグナル伝達を確認した。
【００６０】
インスリンを処理していない群と処理した群で、細胞内インスリンシグナル伝達で重要な指標であるｐｈｏｓｐｈｏ−Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ−１（ｐ−ＩＲＳ−１）の量の差をｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔで確認した結果、図１０に示したように、細胞外小胞が処理された群でｐ−ＩＲＳ−１が示されたことから、インスリン抵抗性により阻害された細胞内シグナル伝達が回復されたことが分かった。
【００６１】
上記の結果はアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が高脂肪酸によって筋肉細胞で誘導されたインスリン抵抗性、すなわち、インスリンによる細胞内シグナル伝達が阻害されたことを回復させてくれる役割をすることができることを意味する。
【００６２】
実施例６．細菌および細菌由来の細胞外小胞の体内吸収、分布、排泄の様相
【００６３】
アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）細菌とアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が胃腸管を介して全身的に吸収されるかを比較評価するために次のような方法で実験を行った。
【００６４】
まず、対照群ではＰＢＳを用いており、それぞれ蛍光で表示した５０ｕｇのアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）細菌とアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞をマウスの胃腸管に投与して、０分、５分、３時間、６時間、１２時間後に蛍光発光映像装置（ＩＶＩＳ；Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ）を用いて蛍光を測定した。その結果、図１１に示したように、細菌の場合には全身的に吸収されていないが、細菌由来の細胞外小胞の場合には投与した後、５分で全身的に吸収されて、投与の後３時間目では膀胱に蛍光が濃く観察されて細胞外小胞が泌尿器に排泄されることを知ることができたし、投与の後１２時間までも体内に存在することを知ることができた。
【００６５】
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が全身的に吸収された後、様々な臓器に浸潤された様相を確認するために、蛍光で表示された５０μｇの細胞外小胞をマウス胃腸管に投与して、１２時間後に血液、心臓、肺、肝臓、腎臓、脾臓、脂肪、筋肉を採取した。採取した組織でＩＶＩＳ方法で蛍光を観察した結果、図１２に示したように、細胞外小胞が胃腸管に投与されてから１２時間目に血液および上記のすべての臓器に分布されることを知ることができたが、細菌そのものの蛍光は観察されなかった。
【００６６】
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が腸内防御壁を透過するかを確認するために、マウスの大腸に１０ｕｇのアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）細菌とアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞をそれぞれ１０分間投与した。この後、大腸を分離して免疫組織化学法（ＩＨＣ；ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）で確認した結果、図１３に示したように、細菌である場合には腸内防御壁を通過しなかったが、細胞外小胞の場合には腸内防御壁に通過して組織に吸収されることが分かった。
【００６７】
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が腸内防御壁を透過して毛細血管に吸収されるかを確認するために、マウスの大腸に蛍光で表示した１０μｇの細胞外小胞を注入した。この後、Ｌｉｖｅ  ｉｍａｇｉｎｇ法で大腸に位置した毛細血管を観察した結果、図１４に示したように、血管内で細胞外小胞が吸収されて移動することが分かった。
【００６８】
実施例７．アッカーマンシア・ムシニフィラ由来の細胞外小胞が筋肉細胞でＡＭＰＫの活性化に及ぶ影響
【００６９】
ＡＭＰＫはエネルギー恒常性の維持に重要なタンパク質として知られているので、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が筋肉細胞（ｍｙｏｃｙｔｅ）でＡＭＰＫ活性化を通じてブドウ糖の代謝に及ぶ影響を評価するために次のような方法で実験を行った。
【００７０】
まず、体外でアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞の処理濃度によるＡＭＰＫ活性を評価するために、筋肉細胞に細胞外小胞を０、０．１、１、１０ｕｇ／ｍｌの濃度で１時間処理した。この後、ＡＭＰＫシグナル伝達で重要な指標であるｐＡＭＰＫ（Ｐｈｏｓｐｈｏ−５’ＡＭＰ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ）とｐＡＣＣ（Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  Ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ）の発現量の差をｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔで測定した結果、図１５に示したように、細胞外小胞の処理濃度によりｐＡＭＰＫおよびｐＡＣＣの発現が増加したため、細胞外小胞が濃度に依存的でＡＭＰＫを活性化することが分かった。
【００７１】
また、体外でアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞の処理時間によるＡＭＰＫ活性を評価するために、筋肉細胞に細胞外小胞を１０ｕｇ／ｍｌの濃度で０、１０、２０、３０、６０分処理した。この後、ＡＭＰＫシグナル伝達で重要な指標であるｐＡＭＰＫとｐＡＣＣの発現様相をｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔで測定した結果、図１６に示したように、ｐＡＭＰＫとｐＡＣＣの発現様相が細胞外小胞の処理の１０分後に増加し始めて６０分間持続されることが分かった。
【００７２】
一方、上記のアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）以外の菌で由来された細胞外小胞がＡＭＰＫ活性に及ぶ効果をさらに比較するために、筋肉細胞にＥ．ｃｏｌｉ由来の細胞外小胞を１０ｕｇ／ｍｌの濃度で処理した。この後、ＡＭＰＫシグナル伝達で重要な指標であるｐＡＭＰＫとｐＡＣＣの発現量をｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔで測定した結果、図１７に示したように、ｐＡＭＰＫとｐＡＣＣの発現量が著しく減少したため、ＡＭＰＫシグナル伝達が阻害されたことを知ることができた。逆に、ＡＭＰＫのシグナル伝達はｍｅｔｆｏｒｍｉｎ（糖尿病の治療剤）により増加して、ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｃ（ＡＭＰＫシグナル伝達の抑制剤）により減少した。
【００７３】
実施例８．アッカーマンシア・ムシニフィラ由来の細胞外小胞が筋肉細胞でブドウ糖の吸収に及ぶ影響
【００７４】
アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が筋肉細胞（ｍｙｏｃｙｔｅ）でブドウ糖の吸収に及ぶ影響を評価するために、体外で筋肉細胞に１０ｕｇ／ｍｌのアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞を１時間処理した後、ブドウ糖の吸収量を放射性同位元素（２−［１４Ｃ］ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ）で確認した。その結果、図１８に示したように、対照群（ＮＴ；Ｎｏ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）に比べて、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）により筋肉細胞でブドウ糖の吸収が増加して、これはインスリン（１０ｎｍ）やメトホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ、５０ｍＭ）処理による増加と類似する程度であることが分かった。
【００７５】
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞が筋肉細胞（ｍｙｏｃｙｔｅ）でブドウ糖の運送たんぱく質（ＧＬＵＴ４  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）の発現に及ぶ影響を評価するために、体外で筋肉細胞に１０ｕｇ／ｍｌのアッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞を１時間処理した後、細胞膜でのＧＬＵＴ４発現程度をＯ−ＰｈｅｎｙｌｅｎｅＤｉａｍｉｎｅ（ＯＰＤ）ａｓｓａｙで測定した。その結果、図１９に示したように、対照群（ＮＴ；Ｎｏ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）に比べて、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞（ＥＶ）によりＧＬＵＴ４の発現が増加して、これはインスリン（１０ｎｍ）やメトホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ、５０ｍＭ）処理による増加と類似する程度であることが分かった。
【００７６】
また、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞により増加されるブドウ糖の吸収がＡＭＰＫシグナル伝達により抑制されるかを評価するために、筋肉細胞にｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｃ（ＡＭＰＫシグナル伝達阻害剤）を前処理して、１０ｕｇ／ｍｌの細胞外小胞を１時間処理した後、ブドウ糖の吸収量を放射性同位元素（２−［１４Ｃ］ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ）で測定した。その結果、図２０に示したように、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞により増加されるブドウ糖の吸収がｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｃにより減少されることがわかった。このように、アッカーマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）由来の細胞外小胞により筋肉細胞でインスリン抵抗性が好転されることは、ＡＭＰＫシグナル伝達過程と密接な関係があることを意味することである。
【００７７】
上記では本発明の好ましい実施例を参考に説明したが、当該技術分野で通常の知識を有する者であれば、下記の特許請求の範囲に記載された本発明の思想および領域から逸脱しない範囲内で、本発明を多様に修正および変更できることを理解できるだろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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