(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
体外式膜型人工肺を有する対象における血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐための組成物であって、血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐために治療効果のある量の遺伝子組換え的に(transgenically)産生されたアンチトロンビンを含む組成物。
【請求項２】
前記遺伝子組換え的に産生されたアンチトロンビンが高マンノース型グリコシル化パターンを有する、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記遺伝子組換え的に産生されたアンチトロンビンが高フコース型グリコシル化パターンを有する、請求項１または２記載の組成物。
【請求項４】
前記遺伝子組換え的に産生されたアンチトロンビンがＧａｌＮａｃ（Ｎ−アセチルガラクトサミン）を含む、請求項１から３いずれか１項記載の組成物。
【請求項５】
前記遺伝子組換え的に産生されたアンチトロンビンが、ヤギにおいて遺伝子組換え的に産生されたものである、請求項１から４いずれか１項記載の組成物。
【請求項６】
前記遺伝子組換え的に産生されたアンチトロンビンがＡＴｒｙｎ（登録商標）である、請求項１から５いずれか１項記載の組成物。
【請求項７】
前記遺伝子組換え的に産生されたアンチトロンビンが、１ｋｇ当たり６単位の投与量で投与される、請求項１から６いずれか１項記載の組成物。
【請求項８】
前記遺伝子組換え的に産生されたアンチトロンビンが、１ｋｇ当たり８０単位の投与量で投与される、請求項１から６いずれか１項記載の組成物。
【請求項９】
前記遺伝子組換え的に産生されたアンチトロンビンが、１ｋｇ当たり２９５単位の投与量で投与される、請求項１から６いずれか１項記載の組成物。
【請求項１０】
前記遺伝子組換え的に産生されたアンチトロンビンが、体外膜型酸素供給の開始時に血液中に存在するアンチトロンビン活性のレベルを維持するのに十分な投与量で投与される、請求項１から６いずれか１項記載の組成物。
【請求項１１】
前記遺伝子組換え的に産生されたアンチトロンビンが単回投与で投与される、請求項１から１０いずれか１項記載の組成物。
【請求項１２】
前記遺伝子組換え的に産生されたアンチトロンビンが、持続注入が後に続くボーラスにより投与される、請求項１から１０いずれか１項記載の組成物。
【請求項１３】
ヘパリンをさらに含む、請求項１から１２いずれか１項記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の説明】
【０００１】
本出願は、全ての内容がここに引用される、２０１２年８月３日に出願された米国仮特許出願第６１／６７９３４５号の米国法典第３５編第１１９条の下での恩恵を主張するものである。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、体外膜型酸素供給方法（ＥＣＭＯ）に関する。
【背景技術】
【０００３】
体外式膜型人工肺（ＥＣＭＯ）は、心臓と呼吸を支援する酸素を、この機能を肺と心臓が果たすことのできない患者に供給する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ＥＣＭＯには、血流および抗凝血の注意深い管理が必要である。ＥＣＭＯ中の血流のより良好な調節、凝血の予防および改善された止血を可能にする新たな方法が望ましい。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
１つの態様において、本開示は、体外膜型酸素供給方法を提供する。１つの実施の形態において、体外式膜型人工肺を有する対象における血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐ方法であって、体外式膜型人工肺を有する対象に治療効果のある量のアンチトロンビンを投与して、血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐ工程を含む方法が提供される。１つの実施の形態において、治療効果のある量は、血液凝固を抑制し、出血を防ぐのに効果的である。別の実施の形態において、治療効果のある量は、全身性炎症抑制などの抗炎症作用を提供するのにも効果的である。
【０００６】
別の実施の形態において、アンチトロンビンは、高マンノース型グリコシル化パターンを有する。別の実施の形態において、アンチトロンビンは、高フコース型グルコシル化パターンを有する。別の実施の形態において、アンチトロンビンは、ＧａｌＮａｃ（Ｎ−アセチルガラクトサミン）を含む。別の実施の形態において、アンチトロンビンは、遺伝子組換え的に(transgenically)産生されたアンチトロンビンである。別の実施の形態において、アンチトロンビンは、ヤギにおいて遺伝子組換え的に産生される。別の実施の形態において、アンチトロンビンはＡＴｒｙｎ（登録商標）である。
【０００７】
別の実施の形態において、アンチトロンビンは、１ｋｇ当たり６単位の投与量で投与される。別の実施の形態において、アンチトロンビンは、１ｋｇ当たり８０単位の投与量で投与される。別の実施の形態において、アンチトロンビンは、１ｋｇ当たり２９５単位の投与量で投与される。
【０００８】
別の実施の形態において、アンチトロンビンは、体外膜型酸素供給の開始時に、血液中に存在するアンチトロンビン活性のレベルを維持するのに十分な投与量で投与される。
【０００９】
別の実施の形態において、アンチトロンビンは単回投与で投与される。別の実施の形態において、アンチトロンビンは、ボーラスにより投与され、その後、持続注入が行われる。
【００１０】
別の実施の形態において、前記方法は、ヘパリンを投与する工程をさらに含む。
【００１１】
本発明の制限の各々は、本発明の様々な態様を包含し得る。したがって、任意の１つの要素または要素の組合せを含む本発明の制限の各々は、本発明の各態様に含まれ得ることが予測される。本発明は、以下の説明に記載された、または図面に示された構成要素の配置および構成の詳細にその用途が制限されるものではない。本発明は、他の実施の形態が可能であり、様々な様式で実施されるまたは実行されることが可能である。また、ここに使用される用語法および専門用語は、説明の目的のためであって、制限と考えるべきではない。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
１つの態様において、本開示は、体外式膜型人工肺を有する対象における血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐ方法であって、体外式膜型人工肺を有する対象に治療効果のある量のアンチトロンビンを投与して、血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐ工程を含む方法を提供する。いくつかの実施の形態において、ここに開示された方法に使用されるアンチトロンビンは、ＡＴｒｙｎ（登録商標）である。
【００１３】
体外膜型酸素供給（ＥＣＭＯ）
ＥＣＭＯは、心臓および呼吸を支援する酸素を、この機能を肺と心臓が果たすことのできない患者に供給する手法である。ＥＣＭＯ手法において、患者の血管内にカニューレが留置され、患者の血液がＥＣＭＯ装置を通じてポンプで送り込まれる。ＥＣＭＯ装置において、血液は、血液から二酸化炭素を除去し、酸素を加える膜型人工肺を流される。この血液は、静脈系から採取され、静脈系（静脈−静脈ＥＣＭＯ）に、または動脈系（静脈−動脈ＥＣＭＯ）に戻すことができる。
【００１４】
ＥＣＭＯは、通常は、ウイルス感染（例えば、Ｈ１Ｎ１およびｈＲＳＶ）および外傷（例えば、溺水）を含む様々な原因のために、肺と心臓が機能を停止した患者に使用される。ＥＣＭＯは、呼吸器系が未発達の新生児にも使用されることがある。
【００１５】
どの体外手法にもあるように、ＥＣＭＯに関する主な課題は、感染を防ぎ、止血を維持して、血液凝固（凝血）および出血を防ぐ必要性である。血液凝固および出血の防止は、一般に、ヘパリンおよび／または他の抗凝血剤の投与により行われる。血液凝固は、様々な時点で血液サンプルを採取し、活性凝固時間（一般に、１４０〜２００秒の間であるべきである）、ａＰＰＴ（活性化部分トロンボプラスチン時間）、または抗Ｘａ因子レベルを測定することによって、監視することができる。止血を評価するために血液サンプル中で決定できる他のパラメータは、凝固カスケードに働く酵素のレベルと活性である（例えば、Niebler et al., 2011, Artificial Organs 35: 1024-1028、およびAgati et al., 2006, ASAIO Journal 52: 513-516を参照のこと）。
【００１６】
アンチトロンビンおよびＡＴｒｙｎ（登録商標）
１つの態様において、本開示は、体外式膜型人工肺を有する対象における血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐ方法であって、体外式膜型人工肺を有する対象に治療効果のある量のアンチトロンビンを投与して、血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐ工程を含む方法を提供する。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、高マンノース型グリコシル化パターンを有する。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、高フコース型グルコシル化パターンを有する。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、ＧａｌＮａｃ（Ｎ−アセチルガラクトサミン）を含む。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、遺伝子組換え的に産生されたアンチトロンビンである。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、ヤギにおいて遺伝子組換え的に産生される。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンはＡＴｒｙｎ（登録商標）である。
【００１７】
従来より、「アンチトロンビン」という用語は、アンチトロンビンＩ、アンチトロンビンＩＩ、アンチトロンビンＩＩＩおよびアンチトロンビンＩＶを含む密接に関連するタンパク質の一群に関係する。しかしながら、アンチトロンビンＩＩＩは、顕著な生理的機能に関連付けられてきたアンチトロンビン群の唯一の構成員であり、最新文献では、しばしば、アンチトロンビンとアンチトロンビンＩＩＩという用語は交換可能に使用されている。ここに用いたアンチトロンビンは、別記しない限り、アンチトロンビンＩＩＩを称する。しかしながら、アンチトロンビンＩＩＩと同様の活性を有するアンチトロンビンＩＩＩ以外のアンチトロンビン群の構成員も、ここに開示された方法に使用して差し支えないことも認識すべきである。
【００１８】
一般に、アンチトロンビンは、約５８ｋＤＡの分子量を有する、４３２のアミノ酸を含むタンパク質である。しかしながら、いくつかの非ヒトアンチトロンビンは、長さが４３３のアミノ酸である。アンチトロンビンは、トロンビンおよびＸａ因子を阻害するセリン・プロテアーゼ阻害剤である。アンチトロンビンは、ヒトを含む哺乳類の血清中に天然に見つかる。健常人からのヒト血清中のアンチトロンビンの生理的濃度は、約１４〜２０ｍｇ／ｄＬである。
【００１９】
アンチトロンビンは、Ａｓｎ９６、Ａｓｎ１３５、Ａｓｎ１５５およびＡｓｎ１９２の４つのグリコシル化部位を含む糖タンパク質である。アンチトロンビンは、アルファ形態（アルファ−アンチトロンビン）およびベータ形態（ベータ−アンチトロンビン）の両方で生じ、アルファ形態が最も一般的である。アンチトロンビンのベータ形態は、Ａｓｎ１３５でグリコシル化されていないので、アルファ形態から区別できる。いくつかの実施の形態において、ここに開示された方法に使用されるアンチトロンビンは、主要なアルファ形態のアンチトロンビンおよび微量のベータ形態のアンチトロンビンの両方を含む。いくつかの実施の形態において、ここに開示された方法に使用されるアンチトロンビンは、アルファ−アンチトロンビンである。他の実施の形態において、アンチトロンビンは、ベータ−アンチトロンビンである。
【００２０】
アンチトロンビンは哺乳類種の間で保存され、アミノ酸配列にはわずかな差しかない。いくつかの実施の形態において、ここに開示された方法による対象の治療に使用されるアンチトロンビンの種は、対象と同じ種である。それゆえ、例えば、ヒトアンチトロンビン（そのアミノ酸配列による）がヒトの治療方法に使用されるのに対し、ウシアンチトロンビン（重ねて、そのアミノ酸配列による）はウシの治療方法に使用される。他の実施の形態において、対象の治療に使用されるアンチトロンビンの種は、対象と異なる種からのものである。
【００２１】
アミノ酸配列に加え、アンチトロンビンのグリコシル化も種特異性であり得ることをさらに認識すべきである。それゆえ、例えば、ヒト血漿から単離されたヒトアンチトロンビン（血漿由来ヒトアンチトロンビン）は、ヤギ血漿から単離されたヤギアンチトロンビンとは異なるグリコシル化パターンを有する。しかしながら、下記に説明するように、ヒトアンチトロンビンは、例えば、ヒトアンチトロンビン（ヒトのアミノ酸配列を有するアンチトロンビン）に、ヤギアンチトロンビンのグリコシル化を模倣したグリコシル化パターンを与えることによって、ヤギにおいて産生されるであろう。
【００２２】
いくつかの実施の形態において、ここに開示された方法に使用されるアンチトロンビンは、高マンノース型グリコシル化パターンを有する。ここに用いた、高マンノース型グリコシル化パターンを有するアンチトロンビンは、グリコシル化側鎖の１つ以上が、オリゴマンノースまたはハイブリッド型オリゴ糖を構成するアンチトロンビンを称する（血漿由来ヒトアンチトロンビンに見つかる主な側鎖構造である、二本触覚状複合型オリゴ糖を構成する側鎖とは対照的に）。いくつかの実施の形態において、ここに開示された方法に使用されるアンチトロンビンは、高フコース型グルコシル化パターンを有する。ここに用いた、高フコース型グリコシル化パターンを有するアンチトロンビンは、複合型オリゴ糖を有するグリコシル化部位の大半の隣接したＧｌｃＮａｃにフコースを有するアンチトロンビンを称する。いくつかの実施の形態において、ここに開示された方法に使用されるアンチトロンビンは、ＧａｌＮａｃ（Ｎ−アセチルガラクトサミン）を含む。いくつかの実施の形態において、ここに開示された方法に使用されるアンチトロンビンは、高マンノース型パターン、高フコース型パターンを有し、ＧａｌＮａｃを含む。ヤギにおいて遺伝子組換え的に産生されたヒトアンチトロンビン（ヒトアミノ酸配列を有するアンチトロンビン）は、高マンノース型パターン、高フコース型パターンを有し、ＧａｌＮａｃを含むのに対し、血漿由来ヒトアンチトロンビンは、一般に、これらのグリコシル化パターンを有さない（例えば、米国特許第５８４３７０５号、米国特許第６４４１１４５号、および米国特許第７０１９１９３号の各明細書を参照のこと）。
【００２３】
ここに開示された方法に使用されるアンチトロンビンは、様々な方法により産生することができる。いくつかの実施の形態において、そのアンチトロンビンは、血漿からの単離により産生される。いくつかの実施の形態において、そのアンチトロンビンは組換え的に(recombinantly)産生される。いくつかの実施の形態において、そのアンチトロンビンは遺伝子組換え的に産生される。
【００２４】
いくつかの実施の形態において、ここに開示された方法に使用されるアンチトロンビンは、遺伝子組換え的に産生される。いくつかの実施の形態において、遺伝子組換え的に産生されるアンチトロンビンは、（非ヒト）哺乳類において産生される。いくつかの実施の形態において、遺伝子組換え的に産生されるアンチトロンビンは、有蹄動物において産生される。いくつかの実施の形態において、遺伝子組換え的に産生されるアンチトロンビンは、ヤギにおいて産生される。第１の種において産生されるアンチトロンビンは、第２の種からのアンチトロンビンであり得ることを認識すべきである。それゆえ、例えば、ヒトアンチトロンビンは、マウスおよびヤギにおいて遺伝子組換え的に産生され得る。同様に、ウシアンチトロンビンも、マウスおよびヤギにおいて遺伝子組換え的に産生され得る。その上、アンチトロンビンは、起源の種においても遺伝子組換え的に産生され得る。それゆえ、ヤギアンチトロンビンは、ヤギにおいて遺伝子組換え的に産生され得る。
【００２５】
いくつかの実施の形態において、ここに開示された方法に使用されるアンチトロンビンは、遺伝子組換え的に産生される。いくつかの実施の形態において、遺伝子組換え的に産生されたアンチトロンビンは、血漿由来アンチトロンビンとは異なるグリコシル化パターンを有する。一般に、アンチトロンビンのグリコシル化パターンは、アンチトロンビンが産生される動物の種に依存する。それゆえ、例えば、マウスにおいて遺伝子組換え的に産生されるアンチトロンビンは、ヤギにおいて産生されるアンチトロンビンとは異なるグリコシル化パターンを有すると予測される。
【００２６】
いくつかの実施の形態において、ここに開示された方法に使用されるアンチトロンビンは、ヤギにおいて遺伝子組換え的に産生されるアンチトロンビンのグリコシル化パターンを有する。
【００２７】
遺伝子組換え的に産生されるアンチトロンビンのグリコシル化パターンも、そのタンパク質が産生されるトランスジェニック動物の臓器または身体部分の性質に依存し得ることを認識すべきである。それゆえ、乳腺において産生されるアンチトロンビンのグリコシル化パターンは、同じ種において産生された場合でさえも、血液中で産生されるアンチトロンビンとは異なると予測される。いくつかの実施の形態において、ここに開示された方法に使用されるアンチトロンビンは、非ヒト哺乳類の乳腺において産生される。いくつかの実施の形態において、ここに開示された方法に使用されるアンチトロンビンは、ヤギの乳腺において産生される。
【００２８】
ヤギにおいて産生されるアンチトロンビンのグリコシル化パターンを有するアンチトロンビンは、例えば、ヤギ以外の種においてアンチトロンビンを産生するか、そのアンチトロンビンを得て、下流の処理工程などにおいて、グリコシル化パターンを変更することによって提供することもできることをさらに認識すべきである。例えば、グリコシル化アンチトロンビンがマウスにおいて産生され、マウス産生アンチトロンビンのグリコシル化パターンを、インビトロ変更によって変えて、ヤギアンチトロンビンのグリコシル化パターンを生成してもよい。例えば、マウス産生アンチトロンビンは、グリコシラーゼまたはトランスフェラーゼの作用により変えられてもよい。その上、グリコシル化パターンは、非酵素的（すなわち、合成）方法によって変更されてもよい。
【００２９】
ヤギ産生アンチトロンビンのグリコシル化パターンを有するアンチトロンビンは、細胞（例えば、昆虫細胞、細菌細胞）においてアンチトロンビンを産生し、下流の処理工程においてグリコシル化パターンを加えるまたは変更することによって、提供してもよい。あるいは、ヤギ産生アンチトロンビンのグリコシル化パターンを有するアンチトロンビンは、非ヤギ種（またはことによるとヤギの異なる組織）からの血漿からの単離によって提供してもよく、そのグリコシル化パターンを下流の処理工程においてその後、変更してもよい。
【００３０】
いくつかの実施の形態において、ここに開示された方法に使用されるアンチトロンビンは、ＡＴｒｙｎ（登録商標）である。ＡＴｒｙｎ（登録商標）は、ヤギの乳腺において産生されるトランスジェニックヒトアルファアンチトロンビンである（例えば、米国特許第５８４３７０５号、米国特許第６４４１１４５号、および米国特許第７０１９１９３号の各明細書を参照のこと）。ＡＴｒｙｎ（登録商標）は、遺伝性アンチトロンビン欠乏症患者における周術期および周産期血栓塞栓性事象の予防について、ＦＤＡにより承認されている。欧州において、ＡＴｒｙｎ（登録商標）は、深部静脈血栓症および血栓塞栓症の予防のために、臨床的リスクの状況にある、先天性アンチトロンビン欠乏症の外科患者への使用が承認されている。
【００３１】
ヤギ産生（ヒト）アンチトロンビンＡＴｒｙｎ（登録商標）のグリコシル化パターンは、血漿由来ヒトアンチトロンビンのグリコシル化パターンとは異なる。グリコシル化パターンが異なるので、ＡＴｒｙｎ（登録商標）は、血漿由来ヒトアンチトロンビンとは異なる生理的性質をいくつか有している。例えば、ＡＴｒｙｎ（登録商標）のクリアランス率は、血漿単離アンチトロンビンのクリアランス率よりも高い（例えば、米国特許第７０１９１９３号明細書参照）。
【００３２】
対象
１つの態様において、本開示は、体外式膜型人工肺を有する対象における血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐ方法であって、体外式膜型人工肺を有する対象に治療効果のある量のアンチトロンビンを投与して、血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐ工程を含む方法を提供する。ここに用いた「対象」は、ヒトまたは以下に限られないが、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、または非ヒト霊長類を含む他の脊椎動物の哺乳類である。いくつかの実施の形態において、対象はヒトである。いくつかの実施の形態において、対象は子供である。
【００３３】
ヘパリンおよび付加療法
１つの態様において、本開示は、体外式膜型人工肺を有する対象における血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐ方法であって、体外式膜型人工肺を有する対象に治療効果のある量のアンチトロンビンを投与して、血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐ工程を含む方法を提供する。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、ヘパリンと共に投与される。ヘパリンは、アンチトロンビンと結合し、アンチトロンビンのプロテアーゼ阻害活性を増加させる。アンチトロンビンがヘパリンと共に投与される、本開示の実施の形態において、アンチトロンビおよびヘパリンの投与のどの併用レジメンも受け入れられる。それゆえ、いくつかの実施の形態において、ヘパリンは、アンチトロンビンと同時に投与される（例えば、同時に注入される）。いくつかの実施の形態において、ヘパリンは、アンチトロンビンの投与の前、または後に投与される。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンおよびヘパリンは、部分的に重複した投与レジメンを有する（例えば、ある期間に亘りアンチトロンビンのみを投与し、その後、アンチトロンビンとヘパリンの組合せの投与が行われる）。
【００３４】
ここに提供される方法のいくつかの実施の形態において、ヘパリンは投与されない。
【００３５】
いくつかの実施の形態において、体外式膜型人工肺を有する対象における血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐ方法であって、アンチトロンビンを投与する工程を含む方法は、付加療法と同時に行われる。いくつかの実施の形態において、付加療法は、血液凝固を抑制するおよび／または出血を低減させるために使用できる療法である。これらの付加療法は、抗凝血剤の投与（アンチトロンビンまたはヘパリンと一緒のアンチトロンビンに加え）を含む。抗凝血剤は、当該技術分野で公知であり、その例としては、クマディン、ワルファリン、アセノクマロール、フェンプロクーモン、アトロメンチン、ブロジファクム、フェニンジオン、フォンダパリヌクス、イドラパリヌクス、リバーロキサバン、アピキサバン、ヒルジン、レピルジン、ビバリルド(bivalirud)、アルガトロバン、ダビガトラン、キシメレガトラン(ximelegatran)、バトロキソビンおよびヘメンチン(hementin)が挙げられる。
【００３６】
いくつかの実施の形態において、アンチトロンビン（例えば、ＡＴｒｙｎ（登録商標））は、他の欠乏症を支援するために、ＥＣＭＯ中に、全血、濃厚赤血球、ＦＦＰ（新鮮凍結血漿）または血小板などの他の血液製剤と共に与えられることもある。
【００３７】
治療効果のある量
１つの態様において、本開示は、体外式膜型人工肺を有する対象における血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐ方法であって、アンチトロンビンを投与する工程を含む方法を提供する。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、体外式膜型人工肺における血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐのに治療効果のある量で投与される。交換可能に用いられる「治療効果のある量」および「有効量」という用語は、所望の治療効果、例えば、血液凝固の抑制および／または出血の防止を実現するのに必要な量または十分な量を称する。ここに提供される教示と組み合わせれば、様々な活性化合物および効能、相対的バイオアベイラビリティ、対象の体重、副作用の重症度および好ましい投与方法などの重み係数の中から選択することによって、実質的な毒性を生じないけれども、特定の対象を治療するのに効果のある効果的な予防的または治療的処方計画を選択することができる。
【００３８】
任意の特定の用途にとっての有効量は、治療されている病気または症状、投与すべき特定の治療薬、対象のサイズ、または病気や疾患の重症度などの要因に応じて変わり得る。当業者は、過度な実験を必要とせずに、アンチトロンビンの有効量を経験的に決定できる。最大投与量、すなわち、ある医学的判断にしたがう最高の安全投与量を使用することが一般に好ましい。アンチトロンビンの適切な全身レベルを達成するために、一日、一週または一月につき多数回の投薬を考えてもよい。いくつかの実施の形態において、全身レベルは、ボーラスにより行い、その後、ＥＣＭＯにおけるアンチトロンビン（例えば、組換えヒトアンチトロンビン、ＡＴｒｙｎ（登録商標）など）の持続注入が行われてもよい。いくつかの実施の形態において、そのような投与は、間欠ボーラスのみにより与えられるアンチトロンビンによるよりも、より十分な制御およびより精密な抗凝血を与えることができる。ボーラスは、例えば、静脈内または筋肉内、くも膜下、または皮下注射により与えることができる。適切な全身レベルは、例えば、患者におけるアンチトロンビンのピークまたは持続的血漿レベルの測定によって決定できる。投与の方法のいずれも、アンチトロンビンレベルおよび／または活性の監視および必要に応じた投与量調節を含み得る。
【００３９】
投与すべきアンチトロンビン（例えば、ＡＴｒｙｎ（登録商標））の投与量は、ｋｇ当たりのアンチトロンビンの単位である、ｍｇ／ｋｇまたは一日当たりのアンチトロンビンの単位で一般に表される。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、ｋｇ当たり１単位以上、ｋｇ当たり２単位以上、ｋｇ当たり５単位以上、ｋｇ当たり１０単位以上、ｋｇ当たり２０単位以上、ｋｇ当たり３０単位以上、ｋｇ当たり４０単位以上、ｋｇ当たり５０単位以上、ｋｇ当たり１００単位以上、ｋｇ当たり１５０単位以上、ｋｇ当たり２００単位以上、ｋｇ当たり２５０単位以上、ｋｇ当たり３００単位以上、ｋｇ当たり３５０単位以上、ｋｇ当たり４００単位以上、ｋｇ当たり４５０単位以上、ｋｇ当たり５００単位以上、ｋｇ当たり６００単位以上、ｋｇ当たり７００単位以上、ｋｇ当たり８００単位以上、ｋｇ当たり９００単位以上、またはｋｇ当たり１０００単位以上の投与量で投与される。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、ｋｇ当たり６単位の投与量で投与される。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、ｋｇ当たり８０単位の投与量で投与される。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、ｋｇ当たり２９５単位の投与量で投与される。
【００４０】
いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、一日につき１０単位以上、一日につき５０単位以上、一日につき１００単位以上、一日につき２００単位以上、一日につき５００単位以上、一日につき１０００単位以上、一日につき１５００単位以上、一日につき２０００単位以上、一日につき２５００単位以上、一日につき３０００単位以上、一日につき３５００単位以上、一日につき４０００単位以上、一日につき４５００単位以上、一日につき５０００単位以上、一日につき５５００単位以上、一日につき６０００単位以上、一日につき７０００単位以上、一日につき８０００単位以上、一日につき９０００単位以上、一日につき１０，０００単位以上、一日につき１５，０００単位以上、または一日につき２０，０００単位以上の投与量で投与される。
【００４１】
ここに開示された方法において投与すべきアンチトロンビン（例えば、ＡＴｒｙｎ（登録商標））の投与量は、所望の治療目的に応じて変わり得る。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、体外膜型酸素供給の開始時に血液中に存在するアンチトロンビン活性のレベルを維持するのに十分な投与量で投与される。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、体外膜型酸素供給の開始時に血液中に存在するアンチトロンビン活性のレベルを超えるのに十分な投与量で投与される。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、体外膜型酸素供給の開始時に血液中に存在するアンチトロンビン活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１２０％、少なくとも１３０％、少なくとも１４０％、少なくとも２００％、少なくとも３００％以上を得るのに十分な投与量で投与される。
【００４２】
いくつかの実施の形態において、治療効果のある量が一回の投薬で投与される。いくつかの実施の形態において、治療効果のある量が複数回の投薬で投与される。投薬量は、投与方法に応じて、アンチトロンビンの局所または全身の所望のレベルを達成するために適切に調節してよい。対象の応答がそのような投与量で不十分である場合、対象の許容範囲が許す程度まで、より多い投与量（または異なるより局所的な送達経路でのより多い有効量）を用いてもよい。化合物の適切な全身レベルを達成するために、一日当たり複数回の投薬を考えてもよい。
【００４３】
投与
１つの態様において、本開示は、体外式膜型人工肺を有する対象における血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐ方法であって、アンチトロンビンを投与する工程を含む方法を提供する。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、持続注入により投与される。いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは、一回の投薬で投与される。
【００４４】
アンチトロンビンは、典型的に、医薬組成物として対象に投与され、この組成物は、通常、薬学的に許容される濃度の塩、緩衝剤、防腐剤、適合担体、アジュバント、および必要に応じて他の治療成分を含有してよい。この医薬組成物の医薬担体および他の成分の性質は、投与方法に依存する。
【００４５】
本開示の医薬組成物は、ここに記載された治療方法を実施する上で当業者に公知のどのような手段と経路によって投与してもよい。投与の好ましい経路としては、以下に限られないが、経口、静脈内、皮下、非経口、腫瘍内、筋肉内、鼻腔内、頭蓋内、舌下、気管内、吸入、眼、膣、および直腸が挙げられる。
【００４６】
アンチトロンビンは、全身投与が望ましい場合、注射により、例えば、ボーラス注入、または持続注入により、非経口投与のために配合されてもよい。注入のための配合物は、防腐剤を加えた、単位投薬形態、例えば、アンプル剤または複数回投薬容器で提供されてもよい。この組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルションなどの形態をとってよく、懸濁剤、安定剤および／または分散剤などの配合剤を含有してもよい。非経口投与のための医薬配合物としては、水溶性形態にある活性化合物の水溶液が挙げられる。さらに、活性化合物の懸濁液は、適切な油性注入懸濁液として調製してもよい。適切な親油性溶媒またはビヒクルとして、ゴマ油などの脂肪油、またはオレイン酸エチルまたはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームが挙げられる。水性注入懸濁液は、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、またはデキストランなどの、懸濁液の粘度を増加させる物質を含有してもよい。必要に応じて、懸濁液は、高濃度溶液を調製できるように化合物の溶解度を増加させる適切な安定剤または作用物質を含有してもよい。
【００４７】
経口投与について、アンチトロンビンは、その化合物を、当該技術分野によく知られた薬学的に許容された担体と組み合わせることによって、容易に配合できる。そのような担体により、本開示の化合物を、治療されるべき対象による経口摂取のための、錠剤、丸薬、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして配合することができる。経口で使用するための医薬調製物は、所望であれば、錠剤または糖衣錠のコアを得るために、適切な助剤を加えた後、必要に応じて、得られた混合物を粉砕し、その顆粒の混合物を処理して、固体賦形剤として得ることができる。適切な賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖類などの充填剤；例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースなどのセルロース調製物、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。所望であれば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸またはアルギン酸ナトリウムのようなその塩などの崩壊剤を加えてもよい。必要に応じて、経口配合物は、食塩水または緩衝剤、例えば、内部酸状態を中和するためのＥＤＴＡ中に配合しても、またはどの担体も含まずに投与してもよい。
【００４８】
経口送達について、放出位置は、胃、小腸（十二指腸、空腸、または回腸）、または大腸であってよい。当業者には、胃で溶解しないが、十二指腸または小腸のどこかで物質を放出する配合が利用できる。腸溶コーティングとして使用されることが多い不活性成分の例としては、トリメリット酸酢酸セルロース（ＣＡＴ）、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣＰ）、ＨＰＭＣＰ５０、ＨＰＭＣＰ５５、ポリフタル酸酢酸ビニル（ＰＶＡＰ）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ３０Ｄ、Ａｑｕａｔｅｒｉｃ、フタル酸酢酸セルロース（ＣＡＰ）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ、およびセラックである。これらのコーティングは、混合膜として使用してもよい。コーティングまたはコーティングの混合物を錠剤上に用いても差し支えなく、それは、胃に対する保護を意図するものではない。これには、糖衣、または錠剤を飲み込みやすくするコーティングが含まれる。カプセルは、乾燥治療粉末を送達するための硬質シェル（ゼラチンなど）からなってもよい；液体形態には、軟質ゼラチンシェルを用いてもよい。オブラート(cachets)のシェル材料は、厚いデンプン紙または他の食用紙であって差し支えない。丸薬、トローチ剤、成形錠または粉薬錠剤については、湿式塊化技法を使用することができる。
【００４９】
アンチトロンビンは、顆粒またはペレットの形態で微細なマルチパーティキュレート(multi-particulates)として配合物中に含めることができる。カプセル投与のための材料の配合物は、粉末、軽く圧縮されたプラグまたは錠剤としてであっても差し支えない。医薬組成物は、圧縮によって調製しても差し支えない。医薬組成物の体積を不活性材料で希釈または増加させてもよい。これらの希釈剤としては、炭水化物、特に、マンニトール、ａ−ラクトース、無水ラクトース、セルロース、スクロース、変性デキストランおよびデンプンが挙げられる。トリリン酸カルシウム、炭酸マグネシウム、および塩化ナトリウムを含む特定の無機塩を充填剤として使用してもよい。市販の希釈剤のいくつかは、Ｆａｓｔ−Ｆｌｏ、Ｅｍｄｅｘ、ＳＴＡ−Ｒｘ  １５００、ＥｍｃｏｍｐｒｅｓｓおよびＡｖｉｃｅｌｌである。
【００５０】
固体投薬形態におけるように、医薬組成物の配合物に崩壊剤を含ませてもよい。崩壊剤として使用される材料としては、以下に限られないが、デンプン系の市販の崩壊剤である、Ｅｘｐｌｏｔａｂを含むデンプンが挙げられる。デンプングリコール酸ナトリウム、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ウルトラミロペクチン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、オレンジの皮、酸型カルボキシメチルセルロース、海綿およびベントナイトを使用してもよい。治療剤を一緒に保持して、硬質錠剤を形成し、アカシア、トラガカント、デンプンおよびゼラチンなどの天然生成物からの材料を含めるために、結合剤を使用してもよい。配合プロセス中の粘着を防ぐために、治療剤の配合物中に減摩剤を含ませてもよい。治療剤とダイの壁との間の層として、潤滑剤を使用してもよく、潤滑剤としては、以下に限られないが、マグネシウム塩とカルシウム塩を含むステアリン酸、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、液体パラフィン、植物油および蝋が挙げられる。配合中の薬物の流動特性を改善し、圧縮中の再配置を助けるであろう流動促進剤を加えてもよい。流動促進剤としては、デンプン、タルク、焼成シリカ、および水和ケイアルミン酸塩が挙げられる。
【００５１】
吸入による投与について、アンチトロンビンは、適切な噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガスを使用して、加圧パックまたは噴霧器からのエアゾールスプレーの形態で都合よく送達されるであろう。
【００５２】
また、アンチトロンビンの肺送達もここでは考えられる。アンチトロンビンは、局所または全身送達のために、哺乳類の肺に送達されてもよい。吸入分子の他の報告書としては、Adjei et al., 1990, Pharmaceutical Research, 7:565-569；Adjei et al., 1990, International Journal of Pharmaceutics, 63:135-144 （酢酸ロイプロリド）；Braquet et al., 1989, Journal of Cardiovascular Pharmacology, 13(suppl. 5):143-146 （エンドセリン−１）；Hubbard et al., 1989, Annals of Internal Medicine, Vol. III, pp. 206-212 （ａ１−アンチトリプシン）；Smith et al., 1989, J. Clin. Invest. 84:1145-1146 （ａ−１−プロテイナーゼ）；Oswein et al., 1990, "Aerosolization of Proteins", Proceedings of Symposium on Respiratory Drug Delivery II, Keystone, Colorado, March,（組換えヒト成長ホルモン）；Debs et al., 1988, J. Immunol. 140:3482-3488 （インターフェロン−ｇおよび腫瘍壊死因子アルファ)；およびPlatz等の米国特許第５２８４６５６号明細書（顆粒球コロニー刺激因子）がある。全身効果のための薬物の肺送達のための方法および組成物が、１９９５年９月１９日に発行されたWong等の米国特許第５４５１５６９号明細書に記載されている。
【００５３】
アンチトロンビンを含む医薬組成物の鼻送達も考えられる。鼻送達により、医薬組成物を肺に堆積させる必要なく、鼻に組成物を投与した直後にその組成物を血流に通過させることができる。
【００５４】
いくつかの実施の形態において、アンチトロンビンは局所投与される。局所投与法は、当該技術分野で公知であり、目的区域または目的臓器に依存する。局所投与経路は、経皮（皮膚への塗布）、吸入、直腸（例えば、浣腸または座薬により）、点眼法（結膜上）、点耳法、鼻腔内、および膣などの標準的な局所投与法の使用を含む。
【００５５】
アンチトロンビンは、例えば、ココアバターまたは他のグリセリドなどの従来の座薬基剤を含有する、座薬または停留浣腸などの直腸または膣用組成物中に配合してもよい。先に記載された配合物に加え、化合物は、持続性薬剤調製物として配合してもよい。そのような長時間効果のある配合物は、適切な高分子または疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルションとして）またはイオン交換樹脂と、もしくは難溶性類似物、例えば、難溶性塩として、配合してもよい。
【００５６】
前記医薬組成物は、適切な固体またはゲル相担体または賦形剤も含んでよい。そのような担体または賦形剤の例としては、以下に限られないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖類、デンプン、セルロース類似体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールなどのポリマーが挙げられる。
【００５７】
適切な液体または固体医薬調製物形態は、例えば、吸入のための水溶液または食塩水である、マイクロカプセルに入れられる、らせん状にされる、微細な金粒子上に被覆される、リポソーム内に含まれる、噴霧される、エアゾールである、皮膚に埋め込まれる錠剤である、または皮膚に傷をつけるべき鋭い物体上で乾燥される。医薬組成物としては、活性化合物が持続して放出される、顆粒、粉末、錠剤、被覆錠剤、（マイクロ）カプセル、座薬、シロップ、エマルション、懸濁液、クリーム、ドロップまたは調製物が挙げられ、その調製において、賦形剤および添加剤および／または崩壊剤、結合剤、被覆剤、膨潤剤、潤滑剤、香味料、甘味料および／または可溶化剤などの１種類以上の助剤が、先に記載したように慣例的に使用される。この医薬組成物は、様々な薬物送達システムに使用するのに適している。薬物送達の方法の手短な概要については、ここに引用するLanger, 1990, Science 249, 1527-1533を参照のこと。
【００５８】
ここに記載された作用物質および組成物は、それ自体で（純粋なまま）、または薬学的に許容される塩の形態で、投与されてもよい。薬に使用する場合、その塩は、薬学的に許容されるべきであるが、その薬学的に許容される塩を調製するために、薬学的に許容されない塩を都合よく使用してもよい。そのような塩としては、以下に限られないが、以下の酸から調製されたものが挙げられる：塩化水素酸、塩化臭素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸。また、そのような塩は、カルボン酸基のナトリウム、カリウム、またはカルシウムの塩などの、アルカリ金属またはアルカリ土類の塩として調製しても差し支えない。
【００５９】
本開示の医薬組成物は、薬学的に許容される担体中に含まれる有効量のアンチトロンビンを含有する。薬学的に許容される担体という用語は、ヒトまたは他の脊椎動物に投与するのに適している、１種類以上の適合する固体または液体充填剤、希釈剤または封入物質を意味する。担体という用語は、施用を促進するために活性成分と組み合わされる、天然または合成の有機または無機成分を意味する。前記医薬組成物の成分は、所望の医薬能力を実質的に損なうであろう相互作用のない様式で、本開示の組成物と、または互いに、混合されることもできる。
【００６０】
非生分解性と生分解性両方の高分子材料を、本開示の組成物を送達するための粒子の製造に使用することができる。そのようなポリマーは天然または合成ポリマーであってよい。そのポリマーは、放出が望ましい時間に基づいて選択される。特に興味深い生体接着ポリマーとしては、その教示がここに引用される、Sawhney et al., 1993, Macromolecules 26, 581-587に記載された生体内分解性ハイドロゲルが挙げられる。その例としては、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリ無水物、ポリアクリル酸、アルギン酸塩、キトサン、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸エチル）、ポリ（メタクリル酸ブチル）、ポリ（メタクリル酸イソブチル）、ポリ（メタクリル酸ヘキシル）、ポリ（メタクリル酸イソデシル）、ポリ（メタクリル酸ラウリル）、ポリ（メタクリル酸フェニル）、ポリ（アクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸イソプロピル）、ポリ（アクリル酸イソブチル）、およびポリ（アクリル酸オクタデシル）が挙げられる。
【００６１】
アンチトロンビンは、放出制御製剤中に含まれてもよい。「放出制御」という用語は、ここに記載された作用物質および組成物の配合物から放出される様式およびプロファイルが制御されている、ここに記載された任意の作用物質および組成物を含有する配合物を称することが意図されている。これは、即効型並びに非即効型配合物を称し、非即効型配合物としては、以下に限られないが、持続放出(sustained release)配合物および遅延放出配合物が挙げられる。「持続放出」（「徐放(extended release)」とも称される）という用語は、長期間に亘り化合物を徐々に放出し、必ずではないが、好ましくは、長期間に亘り薬物の血中濃度を実質的に一定にする、薬物配合物を称するために従来の意味で使用される。「遅延放出」という用語は、配合物の投与と、そこからの化合物の放出との間に時間遅延がある、薬物配合物を称するために従来の意味で使用される。「遅延放出」は、長期間に亘る化合物の徐々の放出を含んでも含まなくてもよく、それゆえ、「持続放出」であってもなくてもよい。長期の持続放出性インプラントの使用は、慢性症状の治療にとって特に適しているであろう。ここに用いた「長期の」放出は、少なくとも７日間、好ましくは３０〜６０日間に亘り治療レベルの活性成分を送達するように、そのインプラントが構成され、配置されることを意味する。長期の持続放出性インプラントは、当業者によく知られており、上述した放出製剤のいくつかを含む。
【００６２】
キット
１つの態様において、本開示は、アンチトロンビン（例えば、ＡＴｒｙｎ（登録商標））を含むキットを提供する。いくつかの実施の形態において、このアンチトロンビンは滅菌容器内にあるか、前記キットが滅菌容器を含んでいる。いくつかの実施の形態において、本キットは、医薬担体およびキットの成分の投与のための使用説明書を含む。いくつかの実施の形態において、このキットは、医薬品バイアル、医薬品希釈バイアル、およびアンチトロンビンを含む。この希釈バイアルは、本開示の組成物の濃縮溶液または凍結乾燥粉末であり得るものを希釈するための生理食塩水などの希釈剤を収容してもよい。いくつかの実施の形態において、その使用説明書は、特定量の希釈剤を特定量の濃縮医薬組成物と混合し、それによって、注射または注入のための最終的な配合物が調製される使用説明書を含んでいる。いくつかの実施の形態において、その使用説明書は、注射器または他の投与装置に使用するための使用説明書を含んでいる。いくつかの実施の形態において、その使用説明書は、有効量の本開示の組成物で患者を治療するための使用説明書を含んでいる。医薬品を収容するか否かにかかわらず、キット内に含まれる容器は、その容器が瓶、隔膜付きバイアル、隔膜付きアンプル、輸液バッグなどであるか否かにかかわらず、医薬品がオートクレーブ処理されたかまたは他の様式で殺菌されたときに色を変える従来のマーカーなどの印を含んでもよい。
【００６３】
本発明を、以下の実施例によりさらに説明するが、その実施例は、決して、さらなる制限であると考えるべきではない。本明細書中に挙げられた文献（論文、発行特許、公開特許出願、および同時係属特許出願を含む）の全ての全内容は、特に先に参照された教示について、引用により明白にここに含まれる。しかしながら、どの文献の引用も、その文献が従来技術であると認めることを意図していない。
【実施例】
【００６４】
実施例１：体外膜型酸素供給中のＡＴｒｙｎ（登録商標）の投与
抗凝血を管理し、血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐために、ＥＣＭＯ中にＡＴｒｙｎ（登録商標）を患者に投与する。所望の活性凝固時間（一般に、１４０〜２００秒の間）を維持するのに十分な投与量でヘパリンを投与する。ＥＣＭＯの開始から２４時間以内で注射(bolus dose)としてＡＴｒｙｎ（登録商標）を投与する。投与されるＡＴｒｙｎ（登録商標）の投与量は、２〜３００単位／ｋｇに及ぶ。
【００６５】
ＡＴｒｙｎ（登録商標）の効果は、血液中のアンチトロンビン活性のレベルを決定することによって評価される（Niebler et al., 2011, Artificial Organs 35: 1024-1028参照）。
【００６６】
実施例２：小児科集団における体外膜型酸素供給中のＡＴｒｙｎ（登録商標）の投与
抗凝血を管理し、血液凝固を抑制するおよび／または出血を防ぐために、ＥＣＭＯ中にＡＴｒｙｎ（登録商標）を小児科の患者に投与する。ＡＴｒｙｎ（登録商標）の継続投与は、ＥＣＭＯの開始時に始まった。血液中のアンチトロンビン活性のレベルをチェックし、少なくとも１００％のアンチトロンビン活性（初期レベルと比べて）を維持するのに十分な投与量でＡＴｒｙｎ（登録商標）を投与する。少なくとも１５０秒の所望の活性凝固時間を維持するのに十分な投与量でヘパリンを投与する（Agati et al., 2006, ASAIO Journal 52: 513-516参照）。
【００６７】
同等物
先に記載した明細書は、当業者が本発明を実施できるほど十分であると考えられる。提供された実施例は、本発明の特定の態様および実施の形態の説明を意図しているので、本発明はその実施例により範囲が制限されるべきではない。他の機能的に同等な実施の形態が、本発明の範囲に含まれる。ここに示され、記載されたものに加えて、本発明の様々な改変が、先の説明から当業者に明白になり、付随の特許請求の範囲に包含される。本発明の利点および目的は、本発明の各実施の形態により必ずしも含まれるものではない。