(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットであって、該アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットがブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、該薬物層には前記アンドログラホリドとｐＨ７．０以上の条件下で溶解するポリマーＡと賦形剤とが含まれ、該アンドログラホリドと該ポリマーＡとの重量比が１：２〜１：０．２であり、該薬物層の重量増分が２０ｗｔ％〜１００ｗｔ％、好ましくは３０ｗｔ％〜８０ｗｔ％であり、該腸溶性コーティング層にはｐＨ５．５以上の条件下で溶解するポリマーＢと賦形剤とが含まれ、該腸溶性コーティング層の重量増分は５ｗｔ％〜３０ｗｔ％、好ましくは８ｗｔ％〜２０ｗｔ％、最も好ましくは１０ｗｔ％〜１８ｗｔ％であり、該ポリマーＡがメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、該ポリマーＢがメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーである、マイクロペレット。
【請求項２】
前記薬物層に含まれる前記賦形剤としては可塑剤、付着防止剤、色素、親水性ポリマー及び界面活性剤が挙げられ、前記腸溶性コーティング層に含まれる前記賦形剤としては可塑剤及び付着防止剤が挙げられる、請求項１に記載のマイクロペレット。
【請求項３】
前記ポリマーＡが１：２の比のメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、及び／又は前記ポリマーＢが１：１の比のメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーである、請求項１に記載のマイクロペレット。
【請求項４】
前記可塑剤がクエン酸トリエチル、セバシン酸ジブチル、プロパンジオール及びＰＥＧからなる群から選択される１以上であり、該可塑剤の量が前記ポリマーＡの１０ｗｔ％〜７０ｗｔ％、好ましくは前記ポリマーＡの１０ｗｔ％〜２０ｗｔ％であり、前記付着防止剤がタルク粉末であり、該付着防止剤の量が前記ポリマーＡの２５ｗｔ％〜１００ｗｔ％、好ましくは前記ポリマーＡの３０ｗｔ％〜５０ｗｔ％であるか、又は前記付着防止剤がモノステアリン酸グリセリンであり、該付着防止剤の量が前記ポリマーＡの２ｗｔ％〜２０ｗｔ％、好ましくは前記ポリマーＡの５ｗｔ％〜１０ｗｔ％である、請求項２に記載のマイクロペレット。
【請求項５】
前記ブランクペレットコアの直径が２００μｍ〜６００μｍ、好ましくは３００μｍ〜５００μｍであり、前記ブランクペレットコアの量が前記配合物の１０ｗｔ％〜７０ｗｔ％、好ましくは前記配合物の２０ｗｔ％〜６０ｗｔ％である、請求項１に記載のマイクロペレット。
【請求項６】
前記成分が重量部基準で前記ブランクペレットコア：前記アンドログラホリド：前記ポリマーＡ：前記可塑剤：前記付着防止剤：前記界面活性剤＝２００：（１０〜１００）：（１０〜１００）：（１〜１５）：（１〜３０）：（０〜３）、好ましくは２００：（１５〜６６）：（１３〜７４）：（２〜１３．５）：（３〜２７）：（０〜１．３２）、最も好ましくは２００：（２０〜５０）：（３０〜６０）：（５〜１０）：（５〜２０）：（０．５〜１．２）の割合にて存在する、請求項２に記載のマイクロペレット。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載のマイクロペレットの作製方法であって、
（１）前記薬物の前記ブランクペレットコアへの塗布：
ａ）．前記ポリマーＡを医薬溶媒に分散し、該ポリマーＡを機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＡ溶液を得る工程と、該ポリマーＡ溶液に前記賦形剤を添加し、その後前記アンドログラホリドを添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＡコーティング溶液を得る工程と、
ｂ）．前記ブランクペレットコアを秤量し、流動床に投入する工程と、気流を調整することで該ブランクペレットコアを十分に流動した状態にする工程と、該ブランクペレットコアの材料の温度が所定の値に達するまで加熱デバイスを始動させ、蠕動ポンプを始動し、前記ポリマーＡコーティング溶液をスプレーガンに通して霧化させ、該ブランクペレットコアの表面に均一に分散させることで、薬物充填マイクロペレットを得る工程と、
（２）前記腸溶性コーティング層の調製：
ａ）．前記ポリマーＢを薬用有機溶媒又は水に分散し、該ポリマーＢを機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＢ溶液を得る工程と、前記賦形剤を該ポリマーＢ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＢコーティング溶液を得る工程と、
ｂ）．前記薬物充填マイクロペレットを前記流動床の底部噴霧デバイスに投入し、流動床デバイスを用いてコーティングを行い、前記ポリマーＢコーティング溶液を均一に拡散することで、重量増分が５ｗｔ％〜３０ｗｔ％である前記腸溶性コーティング層を形成する工程と、
を含み、該ポリマーＡがメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、該ポリマーＢがメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーである、作製方法。
【請求項８】
（１）前記薬物の前記ブランクペレットコアへの塗布：
ａ）．前記ポリマーＡを薬用エタノールに分散し、該ポリマーＡの含量を５ｗｔ％にして、該ポリマーＡを機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＡ溶液を得る工程と、均一になるように撹拌を続けながら、該ポリマーＡ溶液に前記賦形剤として可塑剤、付着防止剤及びドデシル硫酸ナトリウムの界面活性剤を添加し、その後前記アンドログラホリドを添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＡコーティング溶液を得る工程と、
ｂ）．直径２００μｍ〜６００μｍのブランクスクロースペレットコアを秤量し、流動床に投入する工程と、気流を調整することで該ペレットコアを十分に流動した状態にする工程と、加熱デバイスを始動させ、該ブランクペレットコアの材料の温度を２５℃〜３５℃に保ち、該ブランクペレットコアの材料の温度が所定の値に達するまで蠕動ポンプを始動させ、前記ポリマーＡコーティング溶液をスプレーガンに通して霧化させ、該ブランクペレットコアの表面に均一に分散させることで、薬物充填マイクロペレットを得る工程と、
（２）前記腸溶性コーティング層の調製：
ａ）．前記ポリマーＢを薬用エタノールに分散し、該ポリマーＢを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解する工程と、前記賦形剤として前記可塑剤及び前記付着防止剤を前記ポリマーＢ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＢコーティング溶液を得る工程と、
ｂ）．前記薬物充填マイクロペレットを前記流動床の底部噴霧デバイスに投入し、流動床デバイスを用いてコーティングを行い、前記ポリマーＢコーティング溶液を均一に拡散することで、重量増分が８ｗｔ％〜２０ｗｔ％である前記腸溶性コーティング層を形成する工程と、
を含む、請求項７に記載の作製方法。
【請求項９】
請求項１〜６のいずれか一項に記載のマイクロペレットを顆粒剤又はカプセル剤へと調製することを特徴とする、アンドログラホリド腸溶性標的製剤。
【請求項１０】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療する薬剤の作製における、請求項１〜６のいずれか一項に記載のマイクロペレット、又は請求項９に記載の標的製剤の使用。
【請求項１１】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎（ＵＣ）又はクローン病である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
結腸癒着、腸壁が赤く腫れ、肥厚化すること、及び弾性低下の改善を含む、請求項１０又は１１に記載の使用。
【請求項１３】
結腸潰瘍、出血点及び穿孔の低減を含む、請求項１０又は１１に記載の使用。
【請求項１４】
前記薬剤を腸溶性製剤へと調製することを特徴とする、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
前記薬剤を腸溶性標的マイクロペレットへと調製することを特徴とする、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
前記腸溶性標的マイクロペレットを顆粒剤又はカプセル剤へと調製することを特徴とする、請求項１５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医学分野に関する。より特には、本発明はアンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレット及びその作製方法に関するものである。また、本発明は炎症性腸疾患の治療用の薬剤の作製におけるアンドログラホリド及びアンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットの使用に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
アンドログラホリド（Ｃ２０Ｈ３０Ｏ５）は、キツネノマゴ科植物のアンドログラフィス・パニクラタ（Andrographis Paniculata：サンビロート）から抽出されたジテルペンラクトン化合物である。アンドログラホリドは、抗病原性微生物、下熱、抗炎症、身体の免疫の改善、胆嚢の正常化機能による肝臓の保護、及び抗腫瘍等の効果から天然抗生物質として知られているアンドログラフィス・パニクラタ・ニース（Andrographis Paniculata Nees）における主有効成分の一つである。アンドログラホリドはジテルペンラクトン化合物に属する。アンドログラホリドは薬草抽出物であることから、副作用が少なく、抗炎症がより良好であり、供給源が広範であり、価格競争力があるという利点がある。
【０００３】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は腸管における再発性の慢性炎症疾患であり、主に潰瘍性大腸炎（ＵＣ）及びクローン病（ＣＤ）を含む。そのはっきりした原因及び発病機序が解明されていないため、臨床上有効な治療法は依然欠いている。ＵＣの臨床症状としては、腸管の損傷（そのほとんどが遠位結腸及びＳ字結腸において先ず現れる）；主に左側腹部の持続的な陰痛又は鈍痛（下痢の後に緩和することもある）；テネスムスを伴う粘液様及び血性膿様の便が挙げられる。ＣＤの臨床症状としては、主に腹痛；主に食後に起こる発作性事象及び疝痛を特徴とする左側腹部の疝痛又は痙攣性の鋭痛；下痢と便秘とが交互に起こる粘液性の水便が挙げられる。腸狭窄、腸閉塞、腸瘻、腸ポリープ及び更には発癌等の一連の疾患はＵＣよりもＣＤにてよく見られ得る。
【０００４】
クローン病（ＣＤ）はＩＢＤの一つとして特定されている。通常、炎症、鬱血又はリンパの腫脹の症状が患者の結腸、小腸又は胃にて起こる場合がある。ＣＤとＵＣとの主な違いは炎症位置及び炎症自体にある。クローン病は消化系の任意の部分、例えば小腸、結腸、胃及び食道を冒す場合があり、回腸末端及び隣接結腸部分及び右半結腸にて一般的に見られる。一方、ＵＣは結腸及び直腸のみで起こり、直腸及びＳ字結腸にて一般的に見られる。微視的には、クローン病は腸の内壁全体を冒すとされ、ＵＣは粘膜に限局される。
【０００５】
クローン病は慢性かつ再発性の疾患である。効果的な治療薬は原因が未知であることから未だ開発されていない。これまでクローン病を治療するのに使用されてきた薬物としては、主にグルココルチコイド、サリチル酸配合物、免疫抑制剤、抗生物質、メトトレキサート及び生物製剤（例えばインフリキシマブ）が挙げられる。これらの薬物は疾患の自然経過を変えることができることが分かっているが、疾患の病態を完全寛解し、合併症の発生を抑えることはできない。その上、グルココルチコイド及び免疫抑制剤等の既知の西洋薬剤が明らかな有害反応を引き起こすことが多く、長期投与によって身体への損傷が生じることもある。したがってクローン病を治療するために新たな薬剤及びその配合物を開発する必要がある。
【０００６】
他方、結腸への薬物送達は研究開発において長い間難題とされており、結腸自体の生理学的特徴により左右される。結腸は消化管の下半分に位置しており、薬物を経口投与しても結腸に到達させることは非常に難しく、注腸投与は不便でかつ痛みを伴うことが知られている。このため、結腸標的製剤法が生まれた。経口の結腸特異的な薬物送達システム（ＯＣＳＤＤＳ）は部位特異的な薬物送達システムを指し、薬物を全く放出させることなく、薬物を消化管の上半分である胃及び十二指腸を通過させ、回盲部へと移るまで薬剤を放出させないことで、薬物送達技法により局所又は全身の治療効果が呈される。一般的に用いられるＯＣＳＤＤＳ技法はｐＨ依存型と酵素分解型とに分けられる。
【０００７】
ｐＨ依存型ＯＣＳＤＤＳはヒトの胃腸管におけるそれぞれの部分の異なるｐＨ値を利用することにより結腸特異的な送達を達成するものである。通常、健常な人の胃のｐＨ値は１〜３と最も低く、十二指腸のｐＨ値は４〜６であり、空腸のｐＨ値は６〜７であり、回腸のｐＨ値は７〜７．５であり、結腸のｐＨ値は７〜８である。
【０００８】
現在一般的に使用されている腸溶性コーティング材料は溶解するｐＨ値が様々である。最初のタイプはｐＨ値５．５以上、２番目のタイプはｐＨ値６．０以上、３番目のタイプはｐＨ値７．０以上で溶解し始めるものであった。今日では薬物はｐＨ依存型腸溶性標的製剤においてコーティングするのに３番目の腸溶性ポリマー材料を使用して被覆されている。この薬物は回盲部へと移るまで胃腸管の上半分では放出されないことを達成することができる。全ての中国特許（特許文献１、特許文献２、特許文献３）がこの技法に関するものである。しかしながら臨床研究から分かるように、様々な個体によって胃腸のｐＨ値は互いに大きく異なる。ＩＢＤ患者と健常者との間には差があり、大腸炎患者における結腸ｐＨ値は健常者における結腸ｐＨ値より低い。そのため、この種のポリマーを単独で使用しても、薬物はｉｎ  ｖｉｔｒｏでは放出されず、便と一緒に排出される。
【０００９】
アンドログラホリドの酵素分解型の経口の結腸特異的な送達については、従来技術はブランクペレットコアをアンドログラホリドでコーティングすることで薬物充填マイクロペレットを得る工程と、該マイクロペレットを単糖細孔形成剤が含まれる不水溶性ポリマーで覆う工程とを含む。上記ポリマーの膜は結腸に達するまで胃及び小腸では放出されない。膜内の単糖は結腸酵素により分解され、膜に細孔が形成されることで、薬物が徐々に溶解及び放出される。この技法はｐＨ依存型のＯＣＳＤＤＳにおける個体間の差による欠点を克服するものであるが、いくつかの問題がある。単糖、例えばグアーガムが水に溶解すると直ぐに、身体に入った後の単糖の溶解により形成される細孔から薬物が放出されるため、有効量の薬物を結腸に確実に到達させることが難しい。加えて、単糖分子は構造的に堅固である。単糖分子がポリマー鎖に組み込まれると、ポリマー鎖の伸展性に影響を及ぼすだけでなく、ポリマー膜の完全性も破壊され、これによりコーティング膜が脆くなり（crisped）、容易に壊れる。したがって、輸送中に又は胃腸蠕動により膜が早期に壊れ得るリスクが増大する。この結果から、ＩＢＤを治療するのに新たなアンドログラホリド製剤の開発が依然必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】中国特許出願公開第１９８１７４３号明細書
【特許文献２】中国特許出願公開第１０１２０９２４６号明細書
【特許文献３】中国特許出願公開第１０３３１５９５９号明細書
【発明の概要】
【００１１】
第１の態様では、本発明の目的はアンドログラホリドの新たな使用、特にＩＢＤの治療のための薬剤の作製におけるアンドログラホリドの使用を提供することである。第１の態様では上記ＩＢＤとしてはＵＣ及びクローン病が挙げられる。
【００１２】
他方、本発明の目的は新たなｐＨ依存型の腸溶性標的製剤を提供することである。換言すると、二種のｐＨ依存性ポリマーを併用することで、腸管の異なるｐＨ値によるｉｎ  ｖｉｔｒｏでの標的放出という目的が達成される。特に本発明はアンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットに関するものである。該マイクロペレットはＩＢＤ、例えばＵＣ及びクローン病をより良好に治療するのに使用される。また本発明は上記ｐＨ依存型の腸溶性標的製剤を作製する方法にも関するものである。
【００１３】
好ましくは、本発明は下記のような技術的解決策に関する：
１．アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットであって、該アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットがブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、該薬物層には前記アンドログラホリドとｐＨ７．０以上の条件下で溶解するポリマーＡと賦形剤とが含まれ、該アンドログラホリドと該ポリマーＡとの重量比が１：２〜１：０．２であり、該薬物層の重量増分が２０ｗｔ％〜１００ｗｔ％、好ましくは３０ｗｔ％〜８０ｗｔ％であり、該腸溶性コーティング層にはｐＨ５．５以上の条件下で溶解するポリマーＢと賦形剤とが含まれ、該腸溶性コーティング層の重量増分は５ｗｔ％〜３０ｗｔ％、好ましくは８ｗｔ％〜２０ｗｔ％、最も好ましくは１０ｗｔ％〜１８ｗｔ％であることを特徴とする、マイクロペレット。
２．前記薬物層に含まれる前記賦形剤としては可塑剤、付着防止剤、色素、親水性ポリマー及び界面活性剤が挙げられ、前記腸溶性コーティング層に含まれる前記賦形剤としては可塑剤及び付着防止剤が挙げられ、好ましくは、該賦形剤としては更に親水性ポリマー及び色素が挙げられる、パラグラフ１に記載のマイクロペレット。
３．前記ポリマーＡがメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、前記ポリマーＢがメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーである、パラグラフ１に記載のマイクロペレット。
４．前記ポリマーＡが１：２の比のメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、及び／又は前記ポリマーＢが１：１の比のメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーである、パラグラフ１に記載のマイクロペレット。
５．前記可塑剤がクエン酸トリエチル、セバシン酸ジブチル、プロパンジオール及びＰＥＧからなる群から選択される１以上であり、該可塑剤の量が前記ポリマーＡの１０ｗｔ％〜７０ｗｔ％、好ましくは前記ポリマーＡの１０ｗｔ％〜２０ｗｔ％であり、前記付着防止剤がタルク粉末であり、該付着防止剤の量が前記ポリマーＡの２５ｗｔ％〜１００ｗｔ％、好ましくは前記ポリマーＡの３０ｗｔ％〜５０ｗｔ％であるか、又は前記付着防止剤がモノステアリン酸グリセリンであり、該付着防止剤の量が前記ポリマーＡの２ｗｔ％〜２０ｗｔ％、好ましくは前記ポリマーＡの５ｗｔ％〜１０ｗｔ％である、パラグラフ２に記載のマイクロペレット。
６．前記ブランクペレットコアの直径が２００μｍ〜６００μｍ、好ましくは３００μｍ〜５００μｍであり、前記ブランクペレットコアの量が前記配合物の１０ｗｔ％〜７０ｗｔ％、好ましくは前記配合物の２０ｗｔ％〜６０ｗｔ％である、パラグラフ１に記載のマイクロペレット。
７．前記成分が重量部基準で前記ブランクペレットコア：前記アンドログラホリド：前記ポリマーＡ：前記可塑剤：前記付着防止剤：前記界面活性剤＝２００：（１０〜１００）：（１０〜１００）：（１〜１５）：（１〜３０）：（０〜３）、好ましくは２００：（１５〜６６）：（１３〜７４）：（２〜１３．５）：（３〜２７）：（０〜１．３２）、最も好ましくは２００：（２０〜５０）：（３０〜６０）：（５〜１０）：（５〜２０）：（０．５〜１．２）の割合にて存在する、パラグラフ２に記載のマイクロペレット。
８．パラグラフ１〜７のいずれか一項に記載のマイクロペレットの作製方法であって、
（１）前記薬物の前記ブランクペレットコアへの塗布：
ａ）．前記ポリマーＡを医薬溶媒に分散し、該ポリマーＡを機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＡ溶液を得る工程と、前記賦形剤、その後前記アンドログラホリドを該ポリマーＡ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＡコーティング溶液を得る工程と、
ｂ）．前記ブランクペレットコアを秤量し、流動床に投入する工程と、気流を調整することで該ブランクペレットコアを十分に流動した状態にする工程と、該ブランクペレットコアの材料の温度が所定の値に達するまで加熱デバイスを始動させ、蠕動ポンプを始動し、前記ポリマーＡコーティング溶液をスプレーガンに通して霧化させ、該ブランクペレットコアの表面に均一に分散させることで、薬物充填マイクロペレットを得る工程と、
（２）前記腸溶性コーティング層の調製：
ａ）．前記ポリマーＢを薬用有機溶媒又は水に分散し、該ポリマーＢを機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＢ溶液を得る工程と、前記賦形剤を該ポリマーＢ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＢコーティング溶液を得る工程と、
ｂ）．前記薬物充填マイクロペレットを前記流動床の底部噴霧デバイスに投入し、流動床デバイスを用いてコーティングを行い、前記ポリマーＢコーティング溶液を均一に拡散することで、重量増分が５ｗｔ％〜３０ｗｔ％である前記腸溶性コーティング層を形成する工程と、
を含む、作製方法。
９．（１）前記薬物の前記ブランクペレットコアへの塗布：
ａ）．前記ポリマーＡを薬用エタノールに分散し、該ポリマーＡの含量を５ｗｔ％にして、該ポリマーＡを機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＡ溶液を得る工程と、均一になるように撹拌を続けながら、該ポリマーＡ溶液に前記賦形剤として可塑剤、付着防止剤及びドデシル硫酸ナトリウムである界面活性剤を添加し、その後前記アンドログラホリドを添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＡコーティング溶液を得る工程と、
ｂ）．直径２００μｍ〜６００μｍのブランクスクロースペレットコアを秤量し、流動床に投入する工程と、気流を調整することで該ペレットコアを十分に流動した状態にする工程と、加熱デバイスを始動させ、該ブランクペレットコアの材料の温度を２５℃〜３５℃に保ち、該ブランクペレットコアの材料の温度が所定の値に達するまで蠕動ポンプを始動させ、前記ポリマーＡコーティング溶液をスプレーガンに通して霧化させ、該ブランクペレットコアの表面に均一に分散させることで、薬物充填マイクロペレットを得る工程と、
（２）前記腸溶性コーティング層の調製：
ａ）．前記ポリマーＢを薬用エタノールに分散し、該ポリマーＢを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解する工程と、前記賦形剤として前記可塑剤及び前記付着防止剤を前記ポリマーＢ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＢコーティング溶液を得る工程と、
ｂ）．前記薬物充填マイクロペレットを前記流動床の底部噴霧デバイスに投入し、流動床デバイスを用いてコーティングを行い、前記ポリマーＢコーティング溶液を均一に拡散することで、重量増分が８ｗｔ％〜２０ｗｔ％である前記腸溶性コーティング層を形成する工程と、
を含む、パラグラフ８に記載の作製方法。
１０．パラグラフ１〜７のいずれか一項に記載のマイクロペレットを顆粒剤又はカプセル剤へと調製することを特徴とする、アンドログラホリド腸溶性標的製剤。
１１．炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療する薬剤の作製におけるアンドログラホリド、パラグラフ１〜７のいずれかに記載のマイクロペレット、又はパラグラフ１０に記載の標的製剤の使用。
１２．前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎（ＵＣ）又はクローン病である、パラグラフ１１に記載の使用。
１３．結腸癒着、腸壁が赤く腫れ、肥厚化すること、及び弾性低下の改善を含む、パラグラフ１１又は１２に記載の使用。
１４．結腸潰瘍、出血点及び穿孔の低減を含む、パラグラフ１１又は１２に記載の使用。
１５．前記薬剤を腸溶性製剤へと調製することを特徴とする、パラグラフ１１〜１４のいずれかに記載の使用。
１６．前記薬剤を腸溶性標的マイクロペレットへと調製することを特徴とする、パラグラフ１１〜１４のいずれかに記載の使用。
１７．前記腸溶性標的マイクロペレットを顆粒剤又はカプセル剤へと調製することを特徴とする、パラグラフ１６に記載の使用。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ＴＮＢＳ起因性大腸炎マウスの体重に対するアンドログラホリドの効果を示す図である。
【図２】ＴＮＢＳ起因性ＵＣラットにおける各群の結腸の全体観察画像を示す図である（Ａ〜Ｆ）。
【図３】試験薬物群、クローン病モデル群及びブランク対照群におけるゼブラフィッシュの腸管を示す図である（緑色の点線に囲まれた領域がゼブラフィッシュの腸管である）。
【図４】アンドログラホリドを様々な用量にて投与した後の（ブランク対照群と比較した上での）クローン病モデルにおける腸管腔の拡張の改善度を示す図である。
【図５】腸管腔の面積に基づき算出された、クローン病モデルにおける様々な用量のアンドログラホリドの治療有効性を示す図である。
【図６】薬物で処理した後のゼブラフィッシュの腸組織における好中球分布を示す図である（黄色の点線に囲まれた領域がゼブラフィッシュの腸管であり、緑色の明るいスポットで示されたものが好中球である）。
【図７】擬似腸液（リン酸緩衝液、ｐＨ６．５）中の薬物の累積放出量を示す図である。
【図８】擬似結腸液（リン酸緩衝液、ｐＨ７．２）中の薬物の累積放出量を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の第１の態様では、上記ＩＢＤは主にＵＣ及びクローン病に関するものである。研究により本発明の発明者は、アンドログラホリドが結腸癒着、腸壁が赤く腫れ、肥厚化すること、及び弾性低下に対する改善効果を有すると結論付けている。加えて、アンドログラホリドは結腸潰瘍、出血点及び穿孔を低減することが可能である。
【００１６】
本発明の上記薬物は医薬品有効成分（ＡＰＩ）としてアンドログラホリドを使用することにより作製されたいずれか一つの適格薬物を含む。好ましくは、本発明の該薬物は唯一のＡＰＩとして又は複数のＡＰＩの一つとしてアンドログラホリドを含む医薬組成物を表す。
【００１７】
本発明のアンドログラホリドは従来技術に属するものであり、市販されているか又は従来法により調製される。例えば、アンドログラホリドは下記方法により調製される：アンドログラフィス・パニクラタの葉を９５％（ｖ／ｖ）エタノールに浸し、得られたエタノール浸出液を活性炭にて脱色して、エタノール浸出液中のエタノールを蒸留により回収することで濃縮液を得る。その濃縮液を静置することで粗結晶を得る。該粗結晶に１５倍量（１５×）の９５％（ｖ／ｖ）エタノールを添加し、加熱することにより溶解して、活性炭にて脱色し、熱い状態のまま濾過する。濾液を静置することで再結晶化により淡黄色の結晶を得る。得られた結晶を蒸留水、クロロホルム及びメタノールにて洗浄することにより精製して、アンドログラホリドの最終生成物を得る。
【００１８】
アンドログラホリドは医薬組成物の形態で投与されるのが望ましい。上記組成物は従来、１種又は複数種の生理学的に許容可能な賦形剤又は担体と組み合わせて使用することができる。可能であれば、アンドログラホリドをＡＰＩとして作用させ、患者に直接投与すし、そのＡＰＩを医薬製剤として直接投与するのが好ましい。他の成分との相溶性及び服用者に対する安全性に関して、上記担体は薬学的に許容可能なものでなければならない。
【００１９】
上記医薬組成物を、臨床に適用する場合、薬学的に許容可能な剤形のいずれか一つへと調製することができる。この剤形としては、錠剤、例えば糖衣錠、フィルムコート錠及び腸溶性コート錠；カプセル剤、例えば硬カプセル、軟カプセル又は腸溶性カプセル；注射剤；坐剤、例えば腸用坐剤；滴剤等が挙げられるが、これらに限定されず、腸溶性製剤、例えば腸溶性錠剤及び腸溶性カプセルが好ましい。
【００２０】
上記医薬組成物を医薬製剤へと調製する際、薬学的に許容可能な賦形剤を添加してもよい。
【００２１】
経口製剤の場合、従来の賦形剤、例えば接着剤、充填剤、希釈剤、打錠用剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、香味剤及び湿潤剤を含むことができる。必要に応じて、錠剤をコーティングしてもよい。好適な充填剤としては、セルロース、マンニトール、ラクトース及び他の類似の充填剤が挙げられる。好適な崩壊剤としては、デンプン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）及びデンプン誘導体（例えばデンプングリコール酸ナトリウム）が挙げられる。好適な滑沢剤としてはステアリン酸マグネシウムが挙げられる。好適な湿潤剤としてはドデシル硫酸ナトリウムが挙げられる。経口固形製剤は混合、充填、打錠等の従来法により調製することができる。混合を繰り返し行うことで、大量の充填剤が使用された組成物にＡＰＩを均一に分散させる。
【００２２】
注射剤の場合、該注射剤の液体単位製剤にはアンドログラホリド及び無菌担体が含まれる。上記ＡＰＩを液体に溶解させるか又は懸濁させるかは担体の種類及び濃度によって決まる。一般に溶液はＡＰＩを１種の担体に溶解し、滅菌し、適切なバイアル又はアンプルに入れ、封をすることにより調製される。薬学的に許容可能なアジュバント、例えば局所麻酔薬、防腐剤及び緩衝剤を要求に応じて担体に溶解してもよい。その安定性を改善させるために、バイアルに入れた後、本発明の医薬組成物を凍結させ、真空下で処理することで水を取り除くことができる。
【００２３】
成人治療についての薬剤の有効一日用量はＵＣ及びクローン病の予防及び治療に使用される場合、常時０．０２ｍｇ〜５０００ｍｇ、好ましくは１ｍｇ〜１５００ｍｇの範囲である。治療に必要な上記用量は単回用量又は複数回用量のいずれかであり、複数回用量では薬剤を１日に２回、３回、４回以上等といった適切な間隔で投与する。本発明の製剤は０．１ｗｔ％〜９９．９ｗｔ％のＡＰＩを含むことができる。
【００２４】
本発明の第２の態様では、新規のｐＨ依存型腸溶性標的製剤であって、アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットがブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、該薬物層には上記アンドログラホリドとｐＨ７．０以上の条件下で溶解するポリマーＡと賦形剤とが含まれ、該アンドログラホリドと該ポリマーＡとの重量比が１：２〜１：０．２、好ましくは１：１．５〜１：０．５であり、該薬物層の重量増分が２０ｗｔ％〜１００ｗｔ％、好ましくは３０ｗｔ％〜８０ｗｔ％であり、該腸溶性コーティング層にはｐＨ５．５以上の条件下で溶解するポリマーＢと賦形剤とが含まれ、該腸溶性コーティング層の重量増分は５ｗｔ％〜３０ｗｔ％、好ましくは８ｗｔ％〜２０ｗｔ％、最も好ましくは１０ｗｔ％〜１８ｗｔ％であることを特徴とする、製剤が提供される。
【００２５】
第２の態様において、上記ポリマーＡはメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマー、好ましくは１：２の比のメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、上記ポリマーＢはメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマー、好ましくは１：１の比のメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーである。
【００２６】
好ましくは、ポリマーＡはRohm Inc.（ドイツ）から購入されるＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ１００から選択され、ポリマーＢは好ましくはＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌシリーズのポリマー、最も好ましくはＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５である。
【００２７】
薬物層に含まれる上記賦形剤としては、可塑剤、付着防止剤、色素、親水性ポリマー及び界面活性剤が挙げられる。好ましくは、界面活性剤はドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）又はＴｗｅｅｎ−８０から選択され、添加量はアンドログラホリドの０〜５ｗｔ％、好ましくはアンドログラホリドの１ｗｔ％〜３ｗｔ％である。
【００２８】
上記可塑剤がクエン酸トリエチル、セバシン酸ジブチル、プロパンジオール及びＰＥＧからなる群から選択される１以上であり、該可塑剤の量が上記ポリマーＡの１０ｗｔ％〜７０ｗｔ％、好ましくは上記ポリマーＡの１０ｗｔ％〜２０ｗｔ％であり、上記付着防止剤がタルク粉末であり、該付着防止剤の量が上記ポリマーＡの２５ｗｔ％〜１００ｗｔ％、好ましくは上記ポリマーＡの３０ｗｔ％〜５０ｗｔ％であるか、又は上記付着防止剤がモノステアリン酸グリセリンであり、該付着防止剤の量が上記ポリマーＡの２ｗｔ％〜２０ｗｔ％、好ましくは上記ポリマーＡの５ｗｔ％〜１０ｗｔ％である。
【００２９】
上記ブランクペレットコアの直径が２００μｍ〜６００μｍ、好ましくは３００μｍ〜５００μｍであり、上記ブランクペレットコアの量が上記配合物の１０ｗｔ％〜７０ｗｔ％、好ましくは上記配合物の２０ｗｔ％〜６０ｗｔ％である。上記ブランクペレットコアは従来の医薬ペレットコア、好ましくはブランクスクロースペレットコア又は微結晶性セルロースペレットコアである。
【００３０】
上記成分が重量部基準で上記ブランクペレットコア：上記アンドログラホリド：上記ポリマーＡ：上記可塑剤：上記付着防止剤：上記界面活性剤＝２００：（１０〜１００）：（１０〜１００）：（１〜１５）：（１〜３０）：（０〜３）の割合にて存在する。
【００３１】
上記成分は重量部基準で、ブランクペレットコア：アンドログラホリド：ポリマーＡ：可塑剤：付着防止剤：界面活性剤＝２００：（１５〜６６）：（１３〜７４）：（２〜１３．５）：（３〜２７）：（０〜１．３２）の割合にて存在するのが好ましい。
【００３２】
上記成分は重量部基準で、ブランクペレットコア：アンドログラホリド：ポリマーＡ：可塑剤：付着防止剤：界面活性剤＝２００：（２０〜５０）：（３０〜６０）：（５〜１０）：（５〜２０）：（０．５〜１．２）の割合にて存在するのが最も好ましい。
【００３３】
第２の態様において、腸溶性コーティング層に含まれる上記賦形剤としては可塑剤及び付着防止剤が挙げられ、これらは上記のように選択される。可塑剤の量はポリマーＢの１５ｗｔ％を占め、付着防止剤の量はポリマーＢの３０ｗｔ％を占める。
【００３４】
ブランクペレットコア及び薬物層の７つの最適な配合を下記に示す：
【００３５】
【表１】
0006389889.tif 000002
【００３６】
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットを作製する作製法を下記に示す：
（１）薬物のブランクペレットコアへの塗布
ａ）．ポリマーＡを薬用有機溶媒に分散し、該ポリマーＡを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＡ溶液を得て、可塑剤及び粘着防止剤、その後アンドログラホリドを該ポリマーＡ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＡコーティング溶液を得て、コーティングの際に機械的撹拌を維持することにより、コーティング溶液を均一な分散液に保ち、
ｂ）．ブランクペレットコアを秤量し、流動床に投入し、気流を調整することで該ブランクペレットコアを十分に流動した状態にして、該ブランクペレットコアの材料の温度が所定の値に達するまで加熱デバイスを始動させ、蠕動ポンプを始動し、ポリマーＡコーティング溶液をスプレーガンに通して霧化させ、該ブランクペレットコアの表面に均一に分散させることで、薬物充填マイクロペレットを得て、
（２）腸溶性コーティング層の調製
ａ）．ポリマーＢを薬用有機溶媒又は水に分散し、該ポリマーＢを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＢ溶液を得て、可塑剤及び付着防止剤を該ポリマーＢ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＢコーティング溶液を得て、
ｂ）．上記薬物充填マイクロペレットを流動床の底部噴霧デバイスに投入し、流動床デバイスを用いてコーティングを行い、ポリマーＢコーティング溶液を均一に拡散することで、重量増分が５ｗｔ％〜３０ｗｔ％である腸溶性コーティング層を形成する。
【００３７】
好ましくは、アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットを作製する作製法を下記に示す：
（１）薬物のブランクペレットコアへの塗布
ａ）．ポリマーＡを薬用エタノールに分散し、該ポリマーＡの含量を５ｗｔ％にして、該ポリマーＡを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＡ溶液を得て、均一になるように撹拌を続けながら、適量の可塑剤、付着防止剤及びドデシル硫酸ナトリウムの界面活性剤、その後アンドログラホリドを該ポリマーＡ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＡコーティング溶液を得て、コーティングの際に機械的撹拌を維持することにより、コーティング溶液を均一な分散液に保ち、
ｂ）．直径２００μｍ〜６００μｍのブランクスクロースペレットコアを秤量し、流動床に投入し、気流を調整することで該ペレットコアを十分に流動した状態にして、加熱デバイスを始動させ、該ブランクペレットコアの材料の温度を２５℃〜３５℃に保ち、該ブランクペレットコアの材料の温度が所定の値に達するまで蠕動ポンプを始動させ、ポリマーＡコーティング溶液をスプレーガンに通して霧化させ、該ブランクペレットコアの表面に均一に分散させることで、薬物充填マイクロペレットを得て、
（２）腸溶性コーティング層の調製
ａ）．ポリマーＢを薬用エタノールに分散し、該ポリマーＢを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解して、可塑剤及び付着防止剤を該ポリマーＢ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＢコーティング溶液を得て、
ｂ）．薬物充填マイクロペレットを流動床の底部噴霧デバイスに投入し、流動床デバイスを用いてコーティングを行い、ポリマーＢコーティング溶液を均一に拡散することで、重量増分が８ｗｔ％〜２０ｗｔ％である腸溶性コーティング層を形成する。
【００３８】
加えて、本発明はアンドログラホリド腸溶性標的製剤に関するものでもあり、該製剤には従来法により得られたマイクロペレットから調製されるカプセル剤又は顆粒剤が含まれる。
【００３９】
有益な効果
特別なｐＨ依存型の技法が本発明に用いられており、すなわち下記の２つのｐＨ依存性ポリマーを併用することで結腸ｐＨ値が異なる身体内での腸溶性標的放出を達成する。
（１）第１のタイプの腸溶性材料、例えばＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ  １００−５５を腸溶性コーティング層に使用しており、これにより十二指腸に達した後に腸溶性コーティング層の迅速な溶解により薬物層が露出するまで、胃では薬剤を放出させないようにする。
（２）第２のタイプの腸溶性材料（例えばＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ  １００）を中間層として薬物層の骨格に使用しており、層中に薬物が均一に分散されている。マイクロペレットが十二指腸に達すると、腸溶性コーティング層の溶解により薬物が徐々に放出される。一方、薬物層におけるＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ  １００が低ｐＨ条件において放出遅延効果を有することから、低ｐＨ条件下では薬物はほとんど放出されず、ｐＨが７に近い小腸の末端に近付いたときだけ、薬物が急速に放出される。
【００４０】
上記のように、本発明のアンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットは、ブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層との三層構造を有する。腸溶性コーティング層は製剤が胃に入り、５．５未満のｐＨでも無傷のままである。しかしながら十二指腸に達すると、腸溶性コーティング層は比較的短期間にて溶解し、薬物層が露出する。薬物層におけるＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ  １００は持続放出及び腸溶解の二重の役割を果たす。アンドログラホリドはＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ  １００内に均一に分散している。十二指腸に達すると、外側の層が溶解する。体液に曝されると直ぐに、アンドログラホリドが放出され始める。十二指腸のｐＨ値は低いため、限られた量のＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ  １００が溶解し、ごく僅かな量の薬物が非常に緩やかな速度で放出する。薬物が胃腸管の下半分に移るにつれて、ｐＨ値が徐々に上がり、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｓ  １００の溶解速度が上がり、薬物の放出速度が徐々に増大する。結果として、回腸及び結腸に近付くまで薬物のほとんどが放出されず、腸の炎症を治療することが可能となる。
【００４１】
本発明の上記ブランクペレットコアの直径は臨床で一般的に用いられているマイクロペレットのペレットコア（５００μｍ〜１０００μｍ）よりも極めて小さい２００μｍ〜６００μｍである。このことは比表面積を改善し、薬物と炎症部位との接触面積を増大させ、アンドログラホリドがＩＢＤに対する治療効果を発揮するのを助ける。ブランクペレットコアの量は配合物の約１０ｗｔ％〜７０ｗｔ％を占める。
【００４２】
Ｅｕｄｒａｇｉｔシリーズのポリマーはマイクロペレットをコーティングする膜材料として使用され、可塑剤及び付着防止剤が配合物に添加される。ここでの可塑剤の主な役割はガラス転移温度及び最小膜形成温度を低減するだけでなく、ポリマー膜の柔軟性を増大させることである。付着防止剤の主な役割はブランクペレットコア同士の接着の原因となる膜のベタ付きを抑えることである。界面活性剤を薬物に対する湿潤効果を高めるのに使用することができる。
【００４３】
アンドログラホリド及びその新たな製剤の薬理効果は下記実験により証明される。
【００４４】
薬理学的研究１  ＴＮＢＳ誘導性ＵＣに対するアンドログラホリドの薬理学的研究
１．目的
マウスＩＢＤモデルを用いて、ＵＣ及びクローン病を治療するためのアンドログラホリドの予備評価を行った。
【００４５】
２  材料
２．１  動物
体重１８ｇ〜２４ｇの５０匹のＳＰＦ  Ｂａｌｂ／ｃ雄マウスは、Beijing Weitonglihua Experimental Animals Inc.から証明書番号ＳＣＸ（ＪＩＮＧ）２０１１−００１２にて提供されるものであった。
【００４６】
２．２  飼育条件
動物を、仕切りをした動物室においてそれぞれのケージにて１０匹のマウス、２０℃〜２５℃の温度、及び４０％〜６０％の相対湿度にて、水及び食餌を自由に与えながら飼育し、床敷材は毎日交換した。
【００４７】
２．３  試験薬剤及び試薬
試験薬剤：白色乾燥粉末であるアンドログラホリドは、Tasly Modern TCM Resource Inc.からバッチ番号２０１００５０１にて提供されるものであり、収率９８％及び純度９８％であった。
陽性対照薬物：スルファサラジン錠を、Shanghai Sanwei Pharmaceutical Inc.からバッチ番号２００２０６Ｃ１１及び２５０ｍｇ／錠剤、１２錠×５の規格にて購入した。
試薬：２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）を、Sigma Inc.からバッチ番号０３３Ｋ５０２０及び５％（ｗ／ｖ）及び１０ｍｌ／ボトルの規格にて購入した。
【００４８】
３  方法
３．１  モデルの作製
５％（ｗ／ｖ）ＴＮＢＳ溶液を再蒸留水にて希釈し、等量の５０％（ｖ／ｖ）エタノールと混合することで１．５％（ｗ／ｖ）ＴＮＢＳ溶液を得た。モデル対照群において、マウスに体重１０ｇ当たり０．０５ｍｌの用量にて１ｗｔ％ペントバルビタール溶液を用いて麻酔をかけた。麻酔をかけた後、胃灌流デバイスを、肛門を通して約３ｃｍの深さまでゆっくりと挿入して、結腸に到達させることにより、マウスに０．１ｍｌ／マウスの用量にて１．５％（ｗ／ｖ）ＴＮＢＳ溶液を投与し、ＩＢＤを誘導した。生理食塩水群では、生理食塩水を０．１ｍｌ／マウスの用量にて結腸にゆっくりと注入した。正常対照群では、５０％（ｖ／ｖ）エタノールを０．１ｍｌ／マウスの用量にて結腸にゆっくりと注入した。
【００４９】
３．２  グループ分け及び投与
１週間の適応給餌の後、全ての動物を体重に応じて、正常対照群、モデル対照群、アンドログラホリド低用量群（２０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）、アンドログラホリド高用量群（４０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）及び陽性対照群（スルファサラジン群、３００ｍｇ／ｋｇ／ｄ）の５つの群（１群に付き１０匹のマウス）にランダムに分けた。モデル作製の２時間後、各処理群における動物にアンドログラホリドを１日２回、陽性対照群では１日１回経口投与した。７日間の連続投与後、最後の投与から２４時間後に腹部を開き、結腸と他の臓器との癒着の程度を観察した。結腸を切り離し、秤量した。
【００５０】
３．４  評価指標
１．体重：モデル作製後、体重を毎日測定し、動物における変化を観察した。
【００５１】
２．炎症の評価：最後の投与の２４時間後、腹部を開き、結腸と他の臓器との癒着の程度を観察した。結腸の各部分を摘出し秤量することで、結腸指標として体重に対する結腸の重量の割合を算出した。式を下記に示した：
結腸比重の減少率＝（モデル対照群の結腸指数−処理群の結腸指数）／モデル対照群の結腸指数×１００％
【００５２】
３．組織病理学的検査：結腸の一部を採取し、病理片を作製した。スコア標準は下記のとおりにした：
０スコア、炎症症状なし；
１スコア、構造変化のない低悪性度の炎症；
２スコア、低悪性度の白血球浸潤；
３スコア、高悪性度の白血球浸潤、高血管密度、腸陰窩伸長、結腸壁の肥厚化及び表在性潰瘍；
４スコア、粘膜層にまで及ぶ高悪性度の白血球浸潤、腸陰窩伸長、杯細胞の減少、高血管密度、結腸壁の肥厚化、及び広範潰瘍。
【００５３】
３．５  統計
ＳＰＳＳ１１．５ソフトウェアを分析に使用し、データをｘ*±Ｓで表した（＊：ｘに上線）。分散分析を群間の有意差の比較に使用した。Ｐ＜０．０５が統計的に有意な差を示すものであった。
【００５４】
４．結果
４．１  ＴＮＢＳ誘導性ＵＣマウスの体重に対するアンドログラホリドの効果
体重指数はマウスの全体の健康状態を概ね反映することができるものであった。正常対照群と比較して、ＴＮＢＳの直腸投与によりＵＣを形成することでマウスの成長が影響を受け、体重の増加がゆっくりとなった。アンドログラホリド又はスルファサラジンにより処理すると、モデル対照群よりも体重が迅速に増加した。データを図１に示した。
【００５５】
４．２  結腸の重量、結腸指数及び結腸比重の減少率に対するアンドログラホリドの効果
ＴＮＢＳによりＵＣを誘導した後、モデル対照群における結腸の重量及び結腸指数は正常対照群よりも明らかに高く、このことはモデル作製に成功したことを示している。投与の７日後、モデル対照群と比較して、アンドログラホリド高用量群及びスルファサラジン群における結腸の重量は有意に減少し（Ｐ＜０．０１）、アンドログラホリド高用量群、低用量群及びスルファサラジン群における結腸指数は有意に減少し（Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１）、結腸比重の減少率は３３．２０％、５８．９６％及び４７．８７％であった。データを表１に示した。
【００５６】
【表２】
0006389889.tif 000003
【００５７】
４．３  ＴＮＢＳ誘導性大腸炎マウスにおける結腸の組織病理的変化に対するアンドログラホリドの効果
ＴＮＢＳによりＵＣを誘導した後、結腸の癒着、腸壁が赤く腫れ、肥厚化すること、弾性低下、ＵＣ表面、結腸の出血点及び穿孔といった一連の症状が起こり、このことは結腸における広範な炎症性損傷を示すものであった。アンドログラホリド群及びスルファサラジン群における腸の弾性はモデル対照群よりも高く、結腸の重量の増加はモデル対照群よりも極めて少なく、このことは結腸の癒着及び炎症性滲出等の炎症反応がモデル対照群よりも弱かったことを示すものであった。潰瘍及び出血等により引き起こされる腸粘膜及び腸壁の組織病理学的損傷を肉眼で調べたところ、アンドログラホリド高用量群及び陽性対照群（スルファサラジン群）における結腸の組織病理学的損傷はモデル対照群よりも極めて小さかった。データを表２に示した。
【００５８】
【表３】
0006389889.tif 000004
【００５９】
５  結論
動物大腸炎モデルを作製するのに多くの方法が存在し、ＴＮＢＳ／エタノール誘導モデルは臨床上のＵＣ病理的変化に最も類似するものであった。エタノールは腸粘膜障壁を破壊し、ハプテンであるＴＮＢＳは組織タンパク質と組み合わせて、自己免疫反応を誘導した後に腸の炎症を引き起こすことによりＴリンパ球を感作させる。この方法により生じたモデルラットは、便の変化、並びに腸の全体的形態変化及び組織的変化といったＵＳ患者の臨床症状との類似点を数多く有する。
【００６０】
本研究では、大腸炎モデルマウスを使用することで、アンドログラホリドの治療効果を予備評価した。結果から分かるように、高用量アンドログラホリド（４０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）はモデル対照群のマウスにおける体重の減少傾向を遅らせることができ、モデル対照群と比較して結腸指数を有意に減少させるとともに（Ｐ＜０．０１）、結腸の病理的変化を改善することができ、結腸比重の減少率は５８．９６％であった。上述の指標を考慮すると、アンドログラホリドはマウスにおける大腸炎に対する大幅な改善効果を有し、ＵＣに対する或る特定の治療効果を有し、更にはクローン病を治療することも可能であった。
【００６１】
薬理学的研究２  デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘導性ＵＣに対するアンドログラホリドの治療効果に関する研究
１．目的
ＤＳＳ誘導性ＵＣに対するアンドログラホリドの有効性を評価した。
【００６２】
２．動物
８４匹のＢａｌｂ／ｃマウス（ＳＰＦグレード、半数が雄及び半数が雌、体重１８ｇ〜２２ｇ）は、Guangdong Medical Experimental Animal Centerから証明書番号ＳＹＸＫ（ＹＵＥ）２００８−０００２にて提供されるものであった。飼育条件：一群において各ゲージに付き７匹のマウスを温度及び湿度：２０℃〜２６℃及び４０％〜７０％にて飼育した。動物に断続的に光を当てた（１０時間昼及び１４時間夜）。飼育室の状態を常に一定に保ち、実験結果の信頼性を確保した。動物には完全ペレット飼料（Guangdong Medical Experimental Animal Centerにより提供される）を給餌し、飲用ボトルを通じて水及び食餌を自由に与えた。
【００６３】
３．主な装置及び試薬
３．１  主な装置
３．１．１  電子天秤、精度：０．００１ｇ、Zhongshan Hengxin Electronics Inc.
３．１．２  有機組織用の自動脱水機（ＴＳ−１２Ｎ、Xiaogan Hongye Medical Device Inc．）
３．１．３  有機組織用の包埋機（ＢＭ−ＶＩＩ、Xiaogan Hongye Medical Device Inc．）
３．１．４  パラフィン切片用機器（ＲＭ２１３５、Leica Inc.、ドイツ）
３．１．５  切片を引き伸ばし、焼くための機器（ＣＳ−Ｖ  Ｉ、Xiaogan Hongye Medical Device Inc.）
３．１．６  有機組織用の自動染色機（ＲＳ−１８ＩＩ、Xiaogan Hongye Medical Device Inc.）
【００６４】
３．２  試薬
３．２．１  アンドログラホリドは、Tasly Modern TCM Resource Inc.によりバッチ番号２０１４０５０８にて提供されるものであり、９５％を超える純度であった。
３．２．２  陽性対照薬物：メサラジン腸溶性錠剤を、Sunflower Pharmaceutical GroupのJiamusi Luling Pharmaceutical Inc.からバッチ番号１４０２２５にて購入した。
３．２．３  デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）を、MPBIO Inc.から購入した。
【００６５】
４  用量設計及びグループ分け
４．１  グループ分け：検疫を合格した８４匹のマウスを、モデル対照群、陽性対照群、試験薬物低用量胃内群、試験薬物高用量胃内群、試験薬物低用量結腸内群及び試験薬物高用量結腸内群の６つの群（１群に付き１４匹のマウス）へとランダムに分けた。全ての動物に連続して１４日間、毎日５％ＤＳＳ溶液を飲ませ、ＵＣモデルを構築した。動物に５％ＤＳＳ飲用水を与えてから２日目に治療用薬物を投与した。
【００６６】
４．２  用量：本研究では、全ての群におけるマウスの投与用量は顧客の要求に基づき設計し、同じ用量を胃内群及び結腸内群の両方に採用した。モデル対照群（動物は処理せず）、陽性対照群（メサラジン腸溶性錠剤、２２７．５ｍｇ・ｋｇ−１・ｄ−１）、アンドログラホリド低用量胃内群（６０ｍｇ・ｋｇ−１・ｄ−１）、アンドログラホリド高用量胃内群（１８０ｍｇ・ｋｇ−１・ｄ−１）、アンドログラホリド低用量結腸内群（６０ｍｇ・ｋｇ−１・ｄ−１）、及びアンドログラホリド高用量結腸内群（１８０ｍｇ・ｋｇ−１・ｄ−１）。
【００６７】
５  方法
５．１  ＵＣモデルの作製方法：全ての動物に連続して１４日間、毎日５％ＤＳＳ溶液を飲ませた。
【００６８】
５．２  投与方法：モデル作製から２日目に、マウスを１ｍＬ／１００ｇにて連続して１４日間、１日１回薬物にて胃内又は結腸内処理した。
【００６９】
５．３  実験におけるサンプリング方法：最後の投与の２時間後、マウスを頚椎脱臼により屠殺し、腹部を開き、結腸を切り離した。腸間膜側に沿って腸管腔を切断し、４℃の生理食塩水にてすすぎ、プラスチックプレート上に広げた。
【００７０】
５．４  疾患活動性指数（ＤＡＩ）の評価方法：疾患活動性指数を投与後７日目及び１４日目に評価した。この方法は下記３つのパラメータとともに提示されるものであった：体重減少率（不変ＢＷ：０スコア、１〜５：１スコア、５〜１０：２スコア、１０〜１５：３スコア、１５超：４スコア）、便粘稠度（正常便：０スコア、緩い便：２スコア、下痢：４スコア）、及び血便（正常便：０スコア、便潜血：２スコア、及び陽性血便：４スコア）。３つのパラメータの総スコアを３で除算し、ＤＡＩを得た。すなわちＤＡＩ＝（ＢＷ指数スコア＋便特性スコア＋血便スコア）／３であった。
【００７１】
６  観察指標
６．１  観察：マウスにおける一般臨床症状を実験開始から終了まで毎日観察し、便、精神状態及び死亡状況を記録した。
【００７２】
６．２  体重：ＢＷを実験開始から終了まで毎週記録した。
【００７３】
６．３  ＤＡＩの算出：ＤＡＩを投与後７日目及び１４日目に算出することで、疾患活動性を評価した。
【００７４】
６．４  肛門から８ｃｍ〜１０ｃｍ離れた結腸粘膜組織をサンプリングして、パラフィン埋包し、通常のＨＥを用いて染色した。結腸粘膜損傷を顕微鏡により観察し、組織的損傷を、下記指標に基づきスコア付けした：潰瘍炎症性肉芽種、線維症及び病変深度。
【００７５】
７．統計
データを平均±標準偏差（ｘ＊±Ｓ）として表した（＊：ｘに上線）。全ての数値変数を、ＳＰＳＳ１３．０ソフトウェアを用いて一元配置ＡＮＯＶＡにより分析した。ｔ検定分析を群間比較に用いた。Ｐ＜０．０５は統計的に有意な差を示すものであった。
【００７６】
８  結果
モデル作製から７日後、軟便、下痢、血便及びＢＷ減少がモデル対照群のマウスにて観察されたが、処理群ではモデル対照群と比べて便がより形を保ち、血便の発生は僅かに少なかった。実験中に死亡しているのが発見されたマウスはいなかった。
【００７７】
８．１  ＤＡＩに対する効果
全ての群における疾患活動性を比較することにより、ＤＳＳを飲ませてから３日目〜５日目にＤＳＳ群にて下痢が見られ、便潜血試験は陽性であった。５日目〜７日目に、様々なレベルの血便が肉眼で観察された。また、陽性対照群及びアンドログラホリド高用量結腸内群において３日目〜５日目に下痢及び便潜血が見られたが、５日目以降、これらのマウスにおいて肉眼で観察される明らかな血便は見られなかった。投与の１４日後、陽性対照群及びアンドログラホリド高用量結腸内群における血便及び下痢の回数はモデル対照群よりも少なく、ＤＡＩはモデル対照群と比較して有意に減少し（Ｐ＜０．０１）、アンドログラホリド高用量胃内群における血便及び下痢の回数には或る特定の減少傾向があったが、モデル対照群と比較して統計的に有意な差ではなかった。データを表３に示した。
【００７８】
【表４】
0006389889.tif 000005
【００７９】
９．  結論及び考察
これまで、使用しているＤＳＳ誘導モデルのメカニズムは未だ全く解明されていない。おそらくはこれには、マクロファージ機能不全、腸内フローラの不均衡、ＤＳＳ負電荷による結腸上皮細胞のＤＮＡ合成への影響、上皮細胞増殖の阻害、及び腸粘膜関門の破壊といった多くの面が関連しているためであり、このことはＤＳＳ誘導性モデルがヒトＩＢＤの研究により理想的なモデルであることを示していた。結果から分かるように、アンドログラホリド高用量結腸内群（１８０ｍｇ／ｋｇ）において、肉眼で観察される血便の発生が投与の僅か７日後には減少し、投与の１４日後に血便及び下痢が改善した。ＤＡＩスコアはモデル対照群と比べて有意に低く（Ｐ＜０．０１）、このことからアンドログラホリドがＵＣに対する或る特定の保護効果を有することが証明された。
【００８０】
薬理学的研究３  ＴＮＢＳ誘導性ＵＣに関するアンドログラホリドの薬理学的研究
１．目的
ＴＮＢＳ誘導性ＵＣに対するアンドログラホリドの有効性を評価した。
【００８１】
２．動物
８４匹のＳＤラット（ＳＰＦグレード、半数が雄及び半数が雌、体重１８０ｇ〜２２０ｇ）は、Guangdong Medical Experimental Animal Centerから提供されるものであり、証明書番号はＳＹＸＫ（ＹＵＥ）２００８−０００２であった。飼育条件：一群において各ゲージに付き５匹のラットを温度及び湿度：２０℃〜２６℃及び４０％〜７０％にて飼育した。動物に断続的に光を当てた（１０時間昼及び１４時間夜）。飼育室の状態を常に一定に保ち、実験結果の信頼性を確保した。動物には完全ペレット飼料（Guangdong Medical Experimental Animal Centerにより提供される）を給餌し、飲用ボトルを通じて水及び食餌を自由に与えた。
【００８２】
３．主な装置及び試薬
３．１  主な装置
３．１．１  電子天秤、精度：０．００１ｇ、Zhongshan Hengxin Electronics Inc.
３．１．２  有機組織用の自動脱水機（ＴＳ−１２Ｎ、Xiaogan Hongye Medical Device Inc．）
３．１．３  有機組織用の包埋機（ＢＭ−ＶＩＩ、Xiaogan Hongye Medical Device Inc．）
３．１．４  パラフィン切片用機器（ＲＭ２１３５、Leica Inc.、ドイツ）
３．１．５  切片を引き伸ばし、焼くための機器（ＣＳ−Ｖ  Ｉ、Xiaogan Hongye Medical Device Inc.）
３．１．６  有機組織用の自動染色機（ＲＳ−１８ＩＩ、Xiaogan Hongye Medical Device Inc.）
【００８３】
３．２  試薬
３．２．１  アンドログラホリドは、バッチ番号２０１４０５０８にて提供されるものであり、９５％を超える純度であった。
３．２．２  陽性対照薬物：メサラジン腸溶性錠剤を、Sunflower Pharmaceutical GroupのJiamusi Luling Pharmaceutical Inc.からバッチ番号１４０２２５にて購入した。
３．２．３  ＴＮＢＳをSigma Inc.からバッチ番号ＳＬＢＧ２５６６Ｖにて購入した。
【００８４】
４  用量設計及びグループ分け
４．１  グループ分け：検疫を通過した８４匹のラットを全て、ＵＣモデルの作製に使用した。その成功したラットを、モデル対照群、陽性対照群、アンドログラホリド低用量胃内群、アンドログラホリド高用量胃内群、アンドログラホリド低用量結腸内群、及びアンドログラホリド高用量結腸内群の６つの群（１群に付き１４匹のラット）にランダムに分けた。
【００８５】
４．２  用量：同じ用量を胃内群及び結腸内群の両方に採用した。モデル対照群（動物は処理せず）、陽性対照群（メサラジン腸溶性錠剤、４２０ｍｇ・ｋｇ−１・ｄ−１）、アンドログラホリド低用量胃内群（３０ｍｇ・ｋｇ−１・ｄ−１）、アンドログラホリド高用量胃内群（９０ｍｇ・ｋｇ−１・ｄ−１）、アンドログラホリド低用量結腸内群（３０ｍｇ・ｋｇ−１・ｄ−１）、及びアンドログラホリド高用量結腸内群（９０ｍｇ・ｋｇ−１・ｄ−１）。
【００８６】
５．  方法
５．１  ＵＣモデルの作製方法：ラットに麻酔をかけた。２ｍｍ径のラテックスチューブを、肛門を通してラットの身体内の約８ｃｍの位置にゆっくりと挿入し、ＴＮＢＳの５０％エタノール溶液（ＴＮＢＳ  １２５ｍｇ／ｋｇ）を一度に０．５ｍｌ／ラット、インジェクタを用いて腸管腔に注入した。ラットの尾を３０秒間持ち上げ、モデル作製剤（すなわちＴＮＢＳ）をラットの腸管腔に完全に浸潤させた。
【００８７】
５．２  投与方法：胃内投与及び結腸内投与の両方において、同じ用量（１ｍＬ／１００ｇ）が、連続して５日間、１日１回で採用された。
【００８８】
５．３  実験におけるサンプリング方法：最後の投与の２時間後、ラットを頚椎脱臼により屠殺し、腹部を開き、結腸を切り離した。腸間膜側に沿って腸管腔を切断し、４℃の生理食塩水にてすすぎ、プラスチックプレート上に広げた。
【００８９】
５．４  結腸の肉眼的形態損傷についてのスコア付けの方法は粘膜損傷についてのスコア付けの方法を参照し（Bjelkengren G, Aronsen KF, Augustsson NE, etc. Radioprotective effect of local administration of lysine vasopressin and triglycyl lysine vasopressin on the rectal mucosa in rats[J]. Acta Oncol, 1995, 34(4):487-92）、点状出血及び小赤斑（１ｍｍ未満）：１スコア、片状出血及び大赤斑（＝１ｍｍ）：３スコア、並びにびらん及び潰瘍：５スコアと粘膜損傷スコアを記録した。
【００９０】
６  観察指標
６．１  観察：ラットにおける一般臨床症状をラットでの実験開始から終了まで毎日観察した。
【００９１】
６．２  ＢＷを実験開始から実験終了まで記録した。
【００９２】
６．３  結腸損傷の程度を肉眼で観察し、血点、片状出血及び潰瘍を含む、結腸の肉眼的形態損傷をスコア付けした。
【００９３】
７．統計
データを平均±標準偏差（ｘ＊±Ｓ）として表した（＊：ｘに上線）。全ての数値変数を、ＳＰＳＳ１３．０ソフトウェアを用いて一元配置ＡＮＯＶＡにより分析した。ｔ検定分析を群間比較に用いた。Ｐ＜０．０５は統計的に有意な差を示すものであった。
【００９４】
８．結果
８．１  ラットにおける一般状態に対するアンドログラホリドの効果
モデル対照群において、１日目にラットで無形水様便が見られ、排便頻度が上昇し、２日目〜３日目に粘液を伴うものとなり、これは投与の終了まで続いた。陽性対照群（４２０ｍｇ／ｋｇ）において、１日目にラットで無形水様便が見られたが、水様便症状のほとんどはラットで５日目〜６日目には消失した。アンドログラホリド高用量胃内群及びアンドログラホリド高用量結腸内群（９０ｍｇ／ｋｇ）において、１日目にラットで無形水様便が見られたが、症状は２日目〜３日目には徐々に消失し、４日目〜５日目には完全に消失した。
【００９５】
８．２  ＵＣに対するアンドログラホリドの効果
モデル対照群において、ラットの腸壁が肥厚化し、ひだが消失して、大きい面積の壊死が生じ、広範な粘膜鬱血、浮腫及び潰瘍が多くの部位にて見られた。陽性対照群において、腸壁は軽度に肥厚化し、ひだの一部が消失して、小さい面積の壊死が生じ、粘膜鬱血、浮腫が多くの部位にて見られたが、潰瘍面積はモデル対照群に比べて減少した（Ｐ＜０．０５）。アンドログラホリド高用量結腸内群（９０ｍｇ／ｋｇ）において、ラットにおける結腸疾患の症状は明らかに緩和し、明らかに肥厚化した腸壁は見られず、ひだは正常であり、顕著な粘膜鬱血は観察されず、浮腫及び非常に小さい面積の壊死が局所的にのみ視認可能であった。潰瘍面積はモデル対照群及び陽性対照群に比べて有意に減少した（Ｐ＜０．０１）。アンドログラホリド高用量胃内群に比べても、潰瘍面積は減少していた（Ｐ＜０．０５）。データを表４及び図２に示した。
【００９６】
【表５】
0006389889.tif 000006
【００９７】
９．結論
ハプテンとしてＴＮＢＳを主にエタノールと併せて使用し、モデルを構築した。このモデルのメカニズムは下記のように説明されるものであった：エタノール、ハプテンとして作用するＴＮＢＳを使用して、結腸組織に浸潤させることにより、粘膜損傷を引き起こさせ、組織タンパク質等の高分子物質と組み合わせることにより完全な抗原を形成し、免疫応答（主にＴｈ１免疫応答）を起こさせた後、ヒトＣＤと同様の炎症をもたらした。
【００９８】
結果から分かるように、アンドログラホリドは、ラットのＴＮＢＳ誘導性ＵＣモデルにおける下痢を改善するとともに、結腸損傷及び潰瘍率の改善に対する或る特定の効果を有し得る。アンドログラホリド高用量胃内群と比較して、アンドログラホリド高用量結腸内群は結腸損傷及び潰瘍率の改善に対してより強い効果を有していた（Ｐ＜０．０５）。直腸局所投与が胃内投与よりもＵＣの改善に対するより良好な効果を有し、そのため適用に或る特定の利点があることが確認された。
【００９９】
薬理学的研究４  ゼブラフィッシュクローン病モデルに対する治療効果
１．  ゼブラフィッシュクローン病モデルにおける有効性評価についての濃度調査
野生型ＡＢ株ゼブラフィッシュクローン病モデルの養魚場の水（１Ｌの逆浸透水に４８０μＳ／ｃｍ〜５１０μＳ／ｃｍの導電率、６．９〜７．２のｐＨ値及び５３．７ｍｇ／Ｌ  ＣａＣＯ３〜７１．６ｍｇ／Ｌ  ＣａＣＯ３硬度の２００ｍｇの即溶海塩を添加したもの）に、０μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ及び５００μｇ／ｍＬの濃度のアンドログラホリドを添加した。各濃度にて、３０匹のゼブラフィッシュを処理し、その間のゼブラフィッシュの死亡数を毎日数え、死亡した魚を適時取り除いた。処理後、各群におけるゼブラフィッシュの死亡数を統計的に分析し、ＪＭＰソフトウェアを用いて最適な濃度−効果曲線を引き、ＭＮＬＣを算出した。濃度を調べることにより、ＤＭＳＯ中の薬物の溶解度が約２５０ｍｇ／ｍｌであり、投与法は養魚場の水に薬物を溶解することであった。濃度が５００μｇ／ｍｌ以上である場合、薬物は沈殿し始めたが、ゼブラフィッシュに毒性及び死亡は見られなかったことが見出された。結果として、本研究でのクローン病における有効性評価のために下記の４つの濃度を選択した：５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、２５０μｇ／ｍＬ及び５００μｇ／ｍＬ。
【０１００】
２．ゼブラフィッシュクローン病モデルにおけるアンドログラホリドの有効性
上述の濃度調査の結果に従って、ゼブラフィッシュクローン病モデルにおける有効性を評価するために、それぞれ５０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ、２５０μｇ／ｍｌ及び５００μｇ／ｍｌの４つの濃度の処理群を設定した一方で、陽性対照群（プレドニゾロン投与群、１０μＭでプレドニゾロンの入った養魚場の水）、ブランク対照群及びクローン病モデル群を設定した。
【０１０１】
クローン病モデル（主に炎症）を、ＴＮＢＳ（２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸）を使用することにより構築し、３０匹のゼブラフィッシュを各処理群にランダムに分けた。ゼブラフィッシュをアンドログラホリド（上述の４つの異なる濃度にて）、プレドニゾロン（陽性対照群）及び賦形剤（賦形剤投与群）で処理した４８時間後、各群において１０匹のゼブラフィッシュをランダムに取り出して、観察を行い、写真を撮影した。画像解析ソフトウェアを用いて、写真を分析した。その上、腸粘膜の厚さ、腸管腔の直径及び腸管腔の面積を顕微鏡下で慎重に観察し、腸管腔の直径及び腸管腔の面積を定量分析した。ゼブラフィッシュクローン病における試験薬物の治療有効性を各群における腸管腔の面積に従って算出した。算出式は下記のように表された：
治療有効性（％）＝[１−（投与群−ブランク対照群）／（モデル群−ブランク対照群）］×１００％
【０１０２】
統計分析結果は平均±ＳＥとして表した。分散分析を多くの群間の比較に、ダネットｔ検定を２群間の比較に用いた。Ｐ＜０．０５は統計的に有意な差を示すものであった。
【０１０３】
図３に示されるように、ブランク対照群及び溶媒対照群において、腸粘膜は平滑であり、形態的に完全であり、腸の張りは明らかであり、ひだは規則的であった。モデル対照群（クローン病）において、ゼブラフィッシュの腸管腔は拡張しており、腸管腔の面積は増大し、腸粘膜は薄化しており、ひだは不規則、平坦化又は消失していた。陽性対照薬物（プレドニゾロン）による処理後、クローン病ゼブラフィッシュの腸管腔の拡張は低減し、腸管腔の面積は低減し、腸の張り及びひだが大幅に回復した。低濃度のアンドログラホリド（５０μｇ／ｍｌ）で処理した後、クローン病ゼブラフィッシュの腸管腔の面積は或る程度まで低減したが、腸の張り及びひだの明らかな回復は見られなかった。しかしながら高濃度のアンドログラホリド（１００μｇ／ｍｌ、２５０μｇ／ｍｌ、５００μｇ／ｍｌ）は大腸炎における粘膜形態を効果的に改善することができ、腸管腔の拡張は大幅に低減し、腸管腔の面積は正常に近づき、腸の張り及びひだは基本的に回復した。
【０１０４】
図４及び図５に示されるように、陽性対照薬物であるプレドニゾロンで投与した後、腸管腔の面積は（７６±９．３）％低減し、すなわち治療有効性は（７６±９．３）％であった。アンドログラホリド（５０μｇ／ｍｌ）にはゼブラフィッシュクローン病に対して或る特定の効果があり、腸管腔の面積は（３８±１２．９）％低減した。しかしながら、モデル対照群と比較すると、統計的に有意な差はなかった（Ｐ＞０．０５）。アンドログラホリド高濃度群（１００μｇ／ｍｌ、２５０μｇ／ｍｌ及び５００μｇ／ｍｌ）において、ゼブラフィッシュの腸管腔の面積は（４９±８．９）％、（６５±１４．７）％及び（６５±１０．１）％低減し、これはモデル対照群と比較して統計的に又は極めて有意な差（Ｐ＜０．０５及びＰ＜０．０１）であった。
【０１０５】
図６及び表５に示されるように、少量の好中球がブランク対照群及び溶媒対照群のゼブラフィッシュの腸組織に見出された。モデル対照群（クローン病）において、腸管腔は大幅に拡張し、大量の好中球が腸管腔組織に浸潤し、明らかな炎症があった。陽性薬物であるプレドニゾロンはクローン病組織において好中球を大幅に減少させることができた。腸管腔に浸潤した好中球の数に基づき、炎症軽減率は（７２±４．１４）％であり、これはクローン病モデル群と比較して極めて統計的に有意な差（ｐ＜０．００１）であった。様々な濃度（５０μｇ／ｍｌ、１００μｇ／ｍｌ、２５０μｇ／ｍｌ及び５００μｇ／ｍｌ）のアンドログラホリドはクローン病ゼブラフィッシュの腸管腔組織への好中球の浸潤を大幅に低減し、炎症の軽減を促すことができた。クローン病の組織における炎症軽減率はそれぞれ、（４５±３．７４）％、（４６±３．７４）％、（６３±４．４２）％及び（７９±８．９８）％であり、これはクローン病モデル群と比較して極めて有意な差（ｐ＜０．００１）であった。
【０１０６】
【表６】
0006389889.tif 000007
【０１０７】
薬理学的研究５  ｐＨ依存型腸溶性標的製剤の薬理学的研究
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出実験
上述の最適化したものの中から選択された２つの配合物により調製されたマイクロペレットのｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出を求めた。換言すると、１５０ｍｇのアンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットをカプセルに充填し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出を測定した。中国薬局方（中国薬典）の溶出度測定法第Ｉ法を、放出媒体として異なるｐＨ塩溶液（１０００ｍｌ）を用いて１００ｒｐｍの回転数にて用いた。中国薬局方の要件に従って、サンプリング後、ＨＰＬＣを用いて、異なる期間の薬物の放出量を測定した。結果を図７及び図８に示した。ここでは、＃１配合物の放出速度が最も高く、＃７配合物の放出速度が最も低かった。他の配合物については、放出速度は最高の放出速度と最低の放出速度との間であった。
【実施例】
【０１０８】
１．アンドログラホリド腸溶性錠剤及びカプセル剤についての調製例
実施例１−１  腸溶性錠剤の調製
アンドログラホリドの抽出：アンドログラフィス・パニクラタの葉を９５％（ｖ／ｖ）エタノールに浸し、得られたエタノール浸出液を活性炭にて脱色して、エタノールを蒸留により回収することで濃縮液を得た。その濃縮液を静置することで粗結晶を得た。該粗結晶に１５倍量（１５×）の９５％（ｖ／ｖ）エタノールを添加し、加熱することにより溶解して、活性炭にて脱色し、熱い状態のまま濾過した。得られた濾液を静置することで再結晶化により淡黄色の結晶を得た。得られた結晶を蒸留水、クロロホルム及びメタノールにて洗浄することにより精製して、アンドログラホリドの最終生成物を得た。
【０１０９】
適量の賦形剤を上述の得られたアンドログラホリドに添加することで、従来法により腸溶性錠剤を調製した。
【０１１０】
実施例１−２  腸溶性カプセル剤の調製
抽出法は実施例１−１と同じものとした。
【０１１１】
適量の賦形剤を上述の得られたアンドログラホリドに添加することで、従来法により腸溶性カプセル剤を調製した。
【０１１２】
実施例１−３  顆粒剤の調製
アンドログラホリド                      １００ｇ
微結晶性セルロース                      ５０ｇ
ラクトース                              ５０ｇ
デンプン                                ５０ｇ
スクロース                              ２５０ｇ
にて５００ｇの顆粒剤を調製した。
【０１１３】
方法：
抽出法は実施例１−１と同じものとした。加えて、配合物中のアンドログラホリド及び他の賦形剤を１００メッシュの篩にて篩分して、適量の水を用いて十分に混合することで軟材へと調製し、１４メッシュの篩にて造粒して選別した。
【０１１４】
実施例１−４  腸用坐剤の調製
実施例１−３の配合に従ってこれらの材料を十分に混合し、そこにマトリックスを加えることで、従来法により腸用坐剤を調製した。
【０１１５】
２．ｐＨ依存型のアンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットの実施例及び調製例
下記実施例及び調製例におけるパーセントは重量パーセントを表していることに留意されたい。
【０１１６】
実施例２−１
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、該薬物層は下記配合（ｇ）にて構成されるものであった：
【０１１７】
【表７】
0006389889.tif 000008
【０１１８】
ここで、上記ブランクペレットコアは直径６００μｍのブランクスクロースペレットコアであり、上記可塑剤はクエン酸トリエチルであり、上記付着防止剤はタルク粉末であり、上記界面活性剤はＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）であった。
【０１１９】
腸溶性コーティング層には、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５と可塑剤と付着防止剤とが含まれており、可塑剤及び付着防止剤は薬物層に示されているものを選択した。可塑剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の１５％であり、付着防止剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の３０％であり、コーティングの重量増分は５％であった。
【０１２０】
実施例２−２
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、該薬物層は下記配合（ｇ）にて構成されるものであった：
【０１２１】
【表８】
0006389889.tif 000009
【０１２２】
ここで、上記ブランクペレットコアは直径２００μｍのブランク微結晶性セルロースペレットコアであり、上記可塑剤はセバシン酸ジブチルであり、上記付着防止剤はモノステアリン酸グリセリンであり、上記界面活性剤はＴｗｅｅｎ−８０であった。
【０１２３】
腸溶性コーティング層には、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５と可塑剤と付着防止剤とが含まれており、可塑剤及び付着防止剤は薬物層に示されているものを選択した。可塑剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の１５％であり、付着防止剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の３０％であり、コーティングの重量増分は３０％であった。
【０１２４】
実施例２−３
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、該薬物層は下記配合（ｇ）にて構成されるものであった：
【０１２５】
【表９】
0006389889.tif 000010
【０１２６】
ここで、上記ブランクペレットコアは直径４００μｍのブランクスクロースペレットコアであり、上記可塑剤はプロパンジオールであり、上記付着防止剤はタルク粉末であり、上記界面活性剤はＳＤＳであった。
【０１２７】
腸溶性コーティング層には、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５と可塑剤と付着防止剤とが含まれており、可塑剤及び付着防止剤は薬物層に示されているものを選択した。可塑剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の１５％であり、付着防止剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の３０％であり、コーティングの重量増分は８％であった。
【０１２８】
実施例２−４
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、該薬物層は下記配合（ｇ）にて構成されるものであった：
【０１２９】
【表１０】
0006389889.tif 000011
【０１３０】
ここで、上記ブランクペレットコアは直径５００μｍのブランクスクロースペレットコアであり、上記可塑剤はプロパンジオールであり、上記付着防止剤はタルク粉末であった。
【０１３１】
腸溶性コーティング層には、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ３０Ｄ−５５と可塑剤と付着防止剤とが含まれており、可塑剤及び付着防止剤は薬物層に示されているものを選択した。可塑剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ３０Ｄ−５５の１５％であり、付着防止剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ３０Ｄ−５５の３０％であり、コーティングの重量増分は２０％であった。
【０１３２】
実施例２−５
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、該薬物層は下記配合（ｇ）にて構成されるものであった：
【０１３３】
【表１１】
0006389889.tif 000012
【０１３４】
ここで、上記ブランクペレットコアは直径５００μｍのブランクスクロースペレットコアであり、上記可塑剤はＰＥＧであり、上記付着防止剤はタルク粉末であった。
【０１３５】
腸溶性コーティング層には、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５と可塑剤と付着防止剤とが含まれており、可塑剤及び付着防止剤は薬物層に示されているものを選択した。可塑剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の１５％であり、付着防止剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の３０％であり、コーティングの重量増分は２８％であった。
【０１３６】
実施例２−６
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、該薬物層は下記配合（ｇ）にて構成されるものであった：
【０１３７】
【表１２】
0006389889.tif 000013
【０１３８】
ここで、上記ブランクペレットコアは直径５００μｍのブランクスクロースペレットコアであり、上記可塑剤はＰＥＧであり、上記付着防止剤はタルク粉末であった。
【０１３９】
腸溶性コーティング層には、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５と可塑剤と付着防止剤とが含まれており、可塑剤及び付着防止剤は薬物層に示されているものを選択した。可塑剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の１５％であり、付着防止剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の３０％であり、コーティングの重量増分は１５％であった。
【０１４０】
実施例２−７
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、該薬物層は下記配合（ｇ）にて構成されるものであった：
【０１４１】
【表１３】
0006389889.tif 000014
【０１４２】
ここで、上記ブランクペレットコアは直径５００μｍのブランクスクロースペレットコアであり、上記可塑剤はクエン酸トリエチルであり、上記付着防止剤はタルク粉末であった。
【０１４３】
腸溶性コーティング層には、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５と可塑剤と付着防止剤とが含まれており、可塑剤及び付着防止剤は薬物層に示されているものを選択した。可塑剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の１５％であり、付着防止剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の３０％であり、コーティングの重量増分は１５％であった。
【０１４４】
実施例２−８
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、該薬物層は下記配合（ｇ）にて構成されるものであった：
【０１４５】
【表１４】
0006389889.tif 000015
【０１４６】
ここで、上記ブランクペレットコアは直径６００μｍのブランクスクロースペレットコアであり、上記可塑剤はクエン酸トリエチルであり、上記付着防止剤はタルク粉末であり、上記界面活性剤はＳＤＳであった。
【０１４７】
腸溶性コーティング層には、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５と可塑剤と付着防止剤とが含まれており、可塑剤及び付着防止剤は薬物層に示されているものを選択した。可塑剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の１５％であり、付着防止剤の量はＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の３０％であり、コーティングの重量増分は８％であった。
【０１４８】
実施例２−９
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、該薬物層にはアンドログラホリドとｐＨ７．０以上の条件下にて溶解するポリマーＡとが含まれ、アンドログラホリドとポリマーＡとの重量比は１：２であり、薬物層の重量増分は２０％であった。
【０１４９】
上記腸溶性コーティング層にはｐＨ５．５以上の条件下にて溶解するポリマーＢが含まれており、腸溶性コーティング層の重量増分は８％であった。上記腸溶性コーティング層における可塑剤及び付着防止剤は薬物層と同じものであり、上記腸溶性コーティング層におけるポリマーＢの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合は、薬物層におけるポリマーＡの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合と同じであった。
【０１５０】
本実施例では、上記ポリマーＡはメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、上記ポリマーＢはメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーである。
【０１５１】
上述の可塑剤はクエン酸トリエチルであり、付着防止剤はタルク粉末であった。
【０１５２】
実施例２−１０
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、該薬物層にはアンドログラホリドとｐＨ７．０以上の条件下にて溶解するポリマーＡとが含まれ、アンドログラホリドとポリマーＡとの重量比は１：０．２であり、薬物層の重量増分は１００％であり、該腸溶性コーティング層にはｐＨ５．５以上の条件下にて溶解するポリマーＢが含まれており、腸溶性コーティング層の重量増分は２０％であった。
【０１５３】
上記ポリマーＡは１：２の比のメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、ポリマーＢは１：１の比のメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーであった。
【０１５４】
上述の可塑剤はセバシン酸ジブチルであり、付着防止剤はモノステアリン酸グリセリンであった。
【０１５５】
実施例２−１１
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、該薬物層にはアンドログラホリドとｐＨ７．０以上の条件下にて溶解するポリマーＡとが含まれ、アンドログラホリドとポリマーＡとの重量比は１：１．５であり、薬物層の重量増分は３０％であった。上記腸溶性コーティング層にはｐＨ５．５以上の条件下にて溶解するポリマーＢが含まれており、腸溶性コーティング層の重量増分は１０％であった。上記腸溶性コーティング層における可塑剤及び付着防止剤は薬物層と同じものであり、上記腸溶性コーティング層におけるポリマーＢの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合は、薬物層におけるポリマーＡの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合と同じであった。
【０１５６】
上記ポリマーＡは１：２の比のメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、ポリマーＢは１：１の比のメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーであった。
【０１５７】
実施例２−１２
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、上記薬物層には、アンドログラホリドと、ｐＨ７．０以上の条件下にて溶解するポリマーＡと、可塑剤と、付着防止剤と、色素と、親水性ポリマーと、界面活性剤とが含まれ、アンドログラホリドとポリマーＡとの重量比は１：２であり、薬物層の重量増分は１００％であり、上記可塑剤はポリマーＡの１０％を占めるクエン酸トリエチルから選択され、上記付着防止剤はポリマーＡの２５％を占めるタルク粉末から選択された。
【０１５８】
上記腸溶性コーティング層にはｐＨ５．５以上の条件下にて溶解するポリマーＢが含まれており、腸溶性コーティング層の重量増分は２０％であった。上記腸溶性コーティング層における可塑剤及び付着防止剤は薬物層と同じものであり、上記腸溶性コーティング層におけるポリマーＢの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合は、薬物層におけるポリマーＡの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合と同じであった。
【０１５９】
上記ポリマーＡは１：２の比のメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、ポリマーＢは１：１の比のメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーであった。
【０１６０】
上述の可塑剤はクエン酸トリエチルであり、付着防止剤はタルク粉末であった。
【０１６１】
実施例２−１３
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、上記薬物層には、アンドログラホリドと、ｐＨ７．０以上の条件下にて溶解するポリマーＡと、可塑剤と、付着防止剤とが含まれ、アンドログラホリドとポリマーＡとの重量比は１：０．５であり、薬物層の重量増分は８０％であり、上記可塑剤はポリマーＡの７０％を占めるセバシン酸ジブチルから選択され、上記付着防止剤はポリマーＡの１００％を占めるタルク粉末から選択された。
【０１６２】
上記腸溶性コーティング層にはｐＨ５．５以上の条件下にて溶解するポリマーＢが含まれており、腸溶性コーティング層の重量増分は１８％であった。上記腸溶性コーティング層における可塑剤及び付着防止剤は薬物層と同じものであり、上記腸溶性コーティング層におけるポリマーＢの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合は、薬物層におけるポリマーＡの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合と同じであった。
【０１６３】
上記ポリマーＡは１：２の比のメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、ポリマーＢは１：１の比のメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーであった。
【０１６５】
実施例２−１４
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、上記薬物層には、アンドログラホリドと、ｐＨ７．０以上の条件下にて溶解するポリマーＡと、可塑剤と、付着防止剤とが含まれ、アンドログラホリドとポリマーＡとの重量比は１：１であり、薬物層の重量増分は５０％であり、上記可塑剤はポリマーＡの２０％を占めるプロパンジオールから選択され、上記付着防止剤はポリマーＡの３０％を占めるタルク粉末から選択された。
【０１６６】
上記腸溶性コーティング層にはｐＨ５．５以上の条件下にて溶解するポリマーＢが含まれており、腸溶性コーティング層の重量増分は１５％であった。上記腸溶性コーティング層における可塑剤及び付着防止剤は薬物層と同じものであり、上記腸溶性コーティング層におけるポリマーＢの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合は、薬物層におけるポリマーＡの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合と同じであった。
【０１６７】
上記ポリマーＡは１：２の比のメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、ポリマーＢは１：１の比のメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーであった。
【０１６９】
実施例２−１５
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、上記薬物層には、アンドログラホリドと、ｐＨ７．０以上の条件下にて溶解するポリマーＡと、可塑剤と、付着防止剤とが含まれ、アンドログラホリドとポリマーＡとの重量比は１：１．５であり、薬物層の重量増分は６０％であり、上記可塑剤はポリマーＡの５０％を占めるＰＥＧから選択され、上記付着防止剤はポリマーＡの８０％を占めるタルク粉末から選択された。
【０１７０】
上記腸溶性コーティング層にはｐＨ５．５以上の条件下にて溶解するポリマーＢが含まれており、腸溶性コーティング層の重量増分は１６％であった。上記腸溶性コーティング層における可塑剤及び付着防止剤は薬物層と同じものであり、上記腸溶性コーティング層におけるポリマーＢの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合は、薬物層におけるポリマーＡの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合と同じであった。
【０１７１】
上記ポリマーＡは１：２の比のメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、ポリマーＢは１：１の比のメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーであった。
【０１７３】
実施例２−１６
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、上記薬物層には、アンドログラホリドと、ｐＨ７．０以上の条件下にて溶解するポリマーＡと、可塑剤と、付着防止剤とが含まれ、アンドログラホリドとポリマーＡとの重量比は１：１．５であり、薬物層の重量増分は６０％であり、上記可塑剤はポリマーＡの５０％を占めるＰＥＧから選択され、上記付着防止剤はポリマーＡの２０％を占めるモノステアリン酸グリセリンから選択された。
【０１７４】
上記腸溶性コーティング層にはｐＨ５．５以上の条件下にて溶解するポリマーＢが含まれており、腸溶性コーティング層の重量増分は１６％であった。上記腸溶性コーティング層における可塑剤及び付着防止剤は薬物層と同じものであり、上記腸溶性コーティング層におけるポリマーＢの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合は、薬物層におけるポリマーＡの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合と同じであった。
【０１７５】
上記ポリマーＡは１：２の比のメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、ポリマーＢは１：１の比のメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーであった。
【０１７７】
実施例２−１７
アンドログラホリド腸溶性標的マイクロペレットはブランクペレットコアと薬物層と腸溶性コーティング層とから構成され、上記薬物層には、アンドログラホリドと、ｐＨ７．０以上の条件下にて溶解するポリマーＡと、可塑剤と、付着防止剤とが含まれ、アンドログラホリドとポリマーＡとの重量比は１：１．５であり、薬物層の重量増分は６０％であり、上記可塑剤はポリマーＡの５０％を占めるＰＥＧから選択され、上記付着防止剤はポリマーＡの２０％を占めるモノステアリン酸グリセリンから選択された。
【０１７８】
上記腸溶性コーティング層にはｐＨ５．５以上の条件下にて溶解するポリマーＢが含まれており、腸溶性コーティング層の重量増分は１６％であった。上記腸溶性コーティング層における可塑剤及び付着防止剤は薬物層と同じものであり、上記腸溶性コーティング層におけるポリマーＢの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合は、薬物層におけるポリマーＡの量と可塑剤及び付着防止剤の量との割合と同じであった。
【０１７９】
上記ポリマーＡは１：２の比のメタクリル酸とメタクリル酸メチルとのコポリマーであり、ポリマーＢは１：１の比のメタクリル酸とアクリル酸エチルとのコポリマーであった。
【０１８１】
上述の実施例におけるマイクロペレットは下記の方法により調製した。
【０１８２】
調製例２−１
（１）薬物のブランクペレットコアへの塗布
ａ）．ポリマーＡを薬用有機溶媒に分散し、該ポリマーＡを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＡ溶液を得て、可塑剤及び粘着防止剤、その後アンドログラホリドを該ポリマーＡ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＡコーティング溶液を得て、コーティングの際に機械的撹拌を維持することにより、コーティング溶液を均一な分散液に保ち、
ｂ）．ブランクペレットコアを秤量し、流動床に投入し、気流を調整することで該ブランクペレットコアを十分に流動した状態にして、該ブランクペレットコアの材料の温度が所定の値に達するまで加熱デバイスを始動させ、蠕動ポンプを始動し、ポリマーＡコーティング溶液をスプレーガンに通して霧化させ、該ブランクペレットコアの表面に均一に分散させることで、薬物充填マイクロペレットを得て、
（２）腸溶性コーティング層の調製
ａ）．ポリマーＢを薬用有機溶媒又は水に分散し、該ポリマーＢを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＢ溶液を得て、可塑剤及び付着防止剤を該ポリマーＢ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＢコーティング溶液を得て、
ｂ）．上記薬物充填マイクロペレットを流動床の底部噴霧デバイスに投入し、流動床デバイスを用いてコーティングを行い、ポリマーＢコーティング溶液を均一に拡散することで、重量増分が５％である腸溶性コーティング層を形成する。
【０１８３】
調製例２−２
（１）薬物のブランクペレットコアへの塗布
ａ）．ポリマーＡを薬用有機溶媒に分散し、該ポリマーＡを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＡ溶液を得て、可塑剤及び粘着防止剤、その後アンドログラホリドを該ポリマーＡ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＡコーティング溶液を得て、コーティングの際に機械的撹拌を維持することにより、コーティング溶液を均一な分散液に保ち、
ｂ）．ブランクペレットコアを秤量し、流動床に投入し、気流を調整することで該ブランクペレットコアを十分に流動した状態にして、該ブランクペレットコアの材料の温度が所定の値に達するまで加熱デバイスを始動させ、蠕動ポンプを始動し、ポリマーＡコーティング溶液をスプレーガンに通して霧化させ、該ブランクペレットコアの表面に均一に分散させることで、薬物充填マイクロペレットを得て、
（２）腸溶性コーティング層の調製
ａ）．ポリマーＢを薬用有機溶媒又は水に分散し、該ポリマーＢを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＢ溶液を得て、可塑剤及び付着防止剤を該ポリマーＢ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＢコーティング溶液を得て、
ｂ）．上記薬物充填マイクロペレットを流動床の底部噴霧デバイスに投入し、流動床デバイスを用いてコーティングを行い、ポリマーＢコーティング溶液を均一に拡散することで、重量増分が３０％である腸溶性コーティング層を形成する。
【０１８４】
調製例２−３
（１）薬物のブランクペレットコアへの塗布
ａ）．ポリマーＡを薬用エタノールに分散し、該ポリマーＡの含量を５ｗｔ％にして、該ポリマーＡを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＡ溶液を得て、均一になるように撹拌を続けながら、適量の可塑剤、付着防止剤及びドデシル硫酸ナトリウムの界面活性剤、その後アンドログラホリドを該ポリマーＡ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＡコーティング溶液を得て、コーティングの際に機械的撹拌を維持することにより、コーティング溶液を均一な分散液に保ち、
ｂ）．直径２００μｍのブランクスクロースペレットコアを秤量し、流動床に投入し、気流を調整することで該ペレットコアを十分に流動した状態にして、加熱デバイスを始動させ、該ブランクペレットコアの材料の温度を２５℃に保ち、該ブランクペレットコアの材料の温度が所定の値に達するまで蠕動ポンプを始動させ、ポリマーＡコーティング溶液をスプレーガンに通して霧化させ、該ブランクペレットコアの表面に均一に分散させることで、薬物充填マイクロペレットを得て、
（２）腸溶性コーティング層の調製
ａ）．ポリマーＢを薬用エタノールに分散し、該ポリマーＢを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解して、可塑剤及び付着防止剤を該ポリマーＢ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＢコーティング溶液を得て、
ｂ）．上記薬物充填マイクロペレットを流動床の底部噴霧デバイスに投入し、流動床デバイスを用いてコーティングを行い、ポリマーＢコーティング溶液を均一に拡散することで、重量増分が８％である腸溶性コーティング層を形成する。
【０１８５】
調製例２−４
（１）薬物のブランクペレットコアへの塗布
ａ）．ポリマーＡを薬用エタノールに分散し、該ポリマーＡの含量を５ｗｔ％にして、該ポリマーＡを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＡ溶液を得て、均一になるように撹拌を続けながら、適量の可塑剤、付着防止剤及びドデシル硫酸ナトリウムである界面活性剤、その後アンドログラホリドを該ポリマーＡ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＡコーティング溶液を得て、コーティングの際に機械的撹拌を維持することにより、コーティング溶液を均一な分散液に保ち、
ｂ）．直径６００μｍのブランクスクロースペレットコアを秤量し、流動床に投入し、気流を調整することで該ペレットコアを十分に流動した状態にして、加熱デバイスを始動させ、該ブランクペレットコアの材料の温度を３５℃に保ち、該ブランクペレットコアの材料の温度が所定の値に達するまで蠕動ポンプを始動させ、ポリマーＡコーティング溶液をスプレーガンに通して霧化させ、該ブランクペレットコアの表面に均一に分散させることで、薬物充填マイクロペレットを得て、
（２）腸溶性コーティング層の調製
ａ）．ポリマーＢを薬用エタノールに分散し、該ポリマーＢを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解して、可塑剤及び付着防止剤を該ポリマーＢ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＢコーティング溶液を得て、
ｂ）．上記薬物充填マイクロペレットを流動床の底部噴霧デバイスに投入し、流動床デバイスを用いてコーティングを行い、ポリマーＢコーティング溶液を均一に拡散することで、重量増分が２０％である腸溶性コーティング層を形成する。
【０１８６】
調製例２−５
（１）薬物のブランクペレットコアへの塗布
ａ）．ポリマーＡを薬用エタノールに分散し、該ポリマーＡの含量を５ｗｔ％にして、該ポリマーＡを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解することで、ポリマーＡ溶液を得て、均一になるように撹拌を続けながら、適量の可塑剤、付着防止剤及びドデシル硫酸ナトリウムの界面活性剤、その後アンドログラホリドを該ポリマーＡ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＡコーティング溶液を得て、コーティングの際に機械的撹拌を維持することにより、コーティング溶液を均一な分散液に保ち、
ｂ）．直径４００μｍのブランクスクロースペレットコアを秤量し、流動床に投入し、気流を調整することで該ペレットコアを十分に流動した状態にして、加熱デバイスを始動させ、該ブランクペレットコアの材料の温度を３２℃に保ち、該ブランクペレットコアの材料の温度が所定の値に達するまで蠕動ポンプを始動させ、ポリマーＡコーティング溶液をスプレーガンに通して霧化させ、該ブランクペレットコアの表面に均一に分散させることで、薬物充填マイクロペレットを得て、
（２）腸溶性コーティング層の調製
ａ）．ポリマーＢを薬用エタノールに分散し、該ポリマーＢを高速剪断機械的撹拌により完全に溶解して、可塑剤及び付着防止剤を該ポリマーＢ溶液に添加し、十分に撹拌することで、ポリマーＢコーティング溶液を得て、
ｂ）．上記薬物充填マイクロペレットを流動床の底部噴霧デバイスに投入し、流動床デバイスを用いてコーティングを行い、ポリマーＢコーティング溶液を均一に拡散することで、重量増分が１５％である腸溶性コーティング層を形成する。
【０１８７】
調製例２−６
実施例２−１〜実施例２−１７から得られたマイクロペレットを調製して、従来の顆粒剤及びカプセル剤を得た。
【図１】
0006389889.tif 000016
【図２】
0006389889.tif 000017
【図３】
0006389889.tif 000018
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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