(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
唯一の活性成分としてブロメラインとナットウキナーゼとを含有し、前記ブロメラインと前記ナットウキナーゼの重量比が１．６：１である、繊維素溶解に使用するための組成物。
【請求項２】
前記活性成分を以下の範囲で含有する、請求項１に記載の組成物：
ａ）ブロメライン：２０〜４００ｍｇ；および
ｂ）ナットウキナーゼ：１０〜２００ｍｇ。
【請求項３】
経口投与に適した形態である、請求項１から２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４】
二層錠の形態であって、各層が単一の酵素を含有し、約４〜８時間かけて時間依存的に
腸放出制御されることで胃を保護する、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
血栓性静脈炎の治療に使用するための、重量比１．６：１のブロメライン及びナットウキナーゼの組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は静脈血栓状態の予防および治療のための線維素溶解組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
静脈血栓症は、１つまたは複数の静脈内腔における血栓の形成を特徴とする疾患であり、静脈炎とは異なり、非炎症性の原因を有する。
【０００３】
この疾患は以下のいくつかの原因によって引き起こされる可能性があり、これらが個々に、またはさまざまに組み合わさって生じることがある：静脈壁の変形、血流停滞、または血液凝固性の変化。これらの事象は、全身の健康状態が良くない人、糖尿病患者、心臓病患者、術後回復期の患者で高い頻度で見られる。
【０００４】
非常に罹患頻度が高いのは、下肢の他に、骨盤静脈、門脈および硬膜静脈洞である。血栓は血管壁に緩く付着して形成されるため、容易にはがれて塞栓となり、これが血管を閉塞する可能性がある。
【０００５】
血栓は血管を閉塞し、完全に血流を止めてしまう可能性がある。続いて、結合組織が血管に侵入し、血管を線維性の塊に変える。新しく微小血管が形成され、血流が完全に、または部分的に回復できる場合もある。静脈血栓症に関連した障害および派生臨床パターンは、部位や関係する血管の重要性によって異なり；範囲が広いほど、循環障害によって生じる以下のような影響が明らかになる：静脈血管床の減少、周囲組織領域の浮腫、青みがかった色、ある程度の急性疼痛。血管が細ければ、静脈血栓症は無症状で治癒することがあるのに対し、別の症例では、合併症が生じ、もっとも重症になると、肺塞栓症になることがある。
【０００６】
静脈血栓症の治療には四肢の固定がある。血栓溶解剤の使用も指示される。
【０００７】
ブロメラインはパイナップル科に属するパイナップル（Ａｎａｎａｓ  ｃｏｍｏｓｕｓ）の果実と幹とから抽出されるシステインとプロテアーゼとの混合物である。成分の分子量は８〜２８．５ｋＤａである。
【０００８】
ブロメライン濃度は、タンパク質分解単位（ＧＤＵ単位もしくは国際単位［ＩＵ］）または重量単位で表される。ブロメラインは主に、抗炎症剤および抗浮腫剤として使用される。
【０００９】
これは、たとえ外傷的事象や術後組織反応の後でも、軟組織の炎症状態にとりわけ効果がある。ブロメラインの抗炎症活性は、その能力により、抗炎症プロスタグランジン（すなわちプロスタグランジンＥ２）の生合成を増大させ、炎症誘発性プロスタグランジンを阻害することが示されている。
【００１０】
抗炎症用途では、ブロメラインは４０ｍｇ用量で１日に２〜６回反復投与されるが、それよりはるかに多い用量での試験でも、軽い胃腸障害やまれな過敏性反応という唯一の例外を除いて、目立った副作用は認められていない。ブロメラインのこの他の薬理活性には、抗血栓作用、線維素溶解促進作用、降圧作用、およびアテローム性プラークを溶解させる能力がある。抗生剤および抗腫瘍療法における相乗作用についても記載されている。ブロメラインは、膵液と組み合わさって、消化酵素としても用いられる。
【００１１】
ナットウキナーゼは、煮た大豆を特別な納豆菌：Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ｎａｔｔｏで発酵させた日本の伝統的な食品である納豆から抽出されるタンパク質分解酵素である。
【００１２】
ナットウキナーゼは、サブチリシンファミリーに属する約３０ｋＤａのセリンプロテアーゼで、強い線維素溶解活性を有する。このため、アセチルサリチル酸、チクロピジンおよびワルファリンといったこの他の凝集抑制剤や抗凝固剤の代用品として使用される。
【００１３】
特許文献１は、血栓性静脈炎の予防および治療のために、さまざまな酵素（真菌プロテアーゼ、パパイン、ブロメライン、真菌パンクレアチン、アミラーゼ、ナットウキナーゼ、プロテアーゼ−Ｓ、リパーゼ）と薬草誘導体（ルチン、ショウガ）および微量元素（カルシウム、マグネシウム、カリウム、およびその他の元素）とを組み合わせた調合剤を開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】国際公開２００８／０２１９８７号
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ａｓｔｒｕｐ，Ｔ．：Ｔｈｅ  ｆｉｂｒｉｎ  ｐｌａｔｅ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．；４０：３４６−３５１，１９５２
【非特許文献２】「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，米国ニューヨーク州）
【発明の概要】
【００１６】
本発明の目的は、特に有利な相乗効果を示す、特定比かつ適切な処方での、わずか２つの酵素、すなわちブロメラインとナットウキナーゼとの組み合わせである。
【００１７】
本発明は、唯一の活性成分としてブロメラインとナットウキナーゼとを含む、静脈血栓状態の予防および治療のための線維素溶解組成物、ならびに、その線維素溶解特性を考慮した、ブロメラインとナットウキナーゼとの併用に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
好ましい実施態様に従って、本発明による組成物は、以下の範囲内で活性成分を含有する：
ａ）ブロメライン：２０〜４００ｍｇ、好ましくは１６０ｍｇ／用量／日；および
ｂ）ナットウキナーゼ：１０〜１００ｍｇの用量で使用。
【００１９】
より好ましい実施態様に従って、本発明による組成物は、以下の用量で活性成分を含有する：
ｃ）ブロメライン：１６０ｍｇ／用量／日；および
ｄ）ナットウキナーゼ：１００ｍｇ／用量／日。
【００２０】
好ましい実施態様に従って、本発明による組成物は、ブロメラインとナットウキナーゼとを１．６：１の重量比で含有する。
【００２１】
好ましい実施態様に従って、本発明による組成物は、１層につき１酵素の二層錠として配合される。
【００２２】
臨床試験
ブロメラインとナットウキナーゼの調合剤の血栓溶解効果を調べる試験を、Ａｓｔｒｕｐｔモデル（Ｔｈｅ  ｆｉｂｒｉｎ  ｐｌａｔｅ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．；４０：３４６−３５１，１９５２）に従って実施した。２４単位のプラスミノーゲンの存在下でウシ線維素を用いて３連で各試験を行い、ブロメラインとナットウキナーゼの線維素溶解活性を個々に検証し、さらに、２つの物質をさまざまな重量比で混合した。上述したモデルでは、ブロメラインの活性は１１．５±２．５ＦＵ／ｍＬであり、一方、ナットウキナーゼの活性は１８．９±３．３ＦＵ／ｍＬであった。２つの酵素を１：１の比率で混合すると、線維素溶解活性は、９７．８±１３．３ＦＵ／ｍＬと明らかな相乗効果を示した。この相乗効果は、両方の酵素の用量を１／１０に減量し、重量比１：１の混合で２つの化合物の線維素溶解活性を再試験することによって確認した。このように実施すると、線維素溶解活性は１２．７±２．９ＦＵ／ｍＬとなり、両方の酵素を１０倍用量で用いることによって得られる値と相似している。
【００２３】
さらに試験を実施すると、ブロメラインとナットウキナーゼとを１．６：１の重量比で混合することにより最高の結果が得られることが示された。
【００２４】
ブロメラインとナットウキナーゼとの組み合わせの効果は、同じくＡｓｔｒｕｐｔモデルを使用した、特許文献１に記載されているタンパク質分解酵素と他の成分との組み合わせと比較することによっても評価された。すなわち、個々の化合物、全体の混合物、および個々の酵素のみの（つまり薬草誘導体を含まない）混合物の線維素溶解活性を評価した。個別では、化合物の大多数（真菌プロテアーゼ、パパイン、パンクレアチン、アミラーゼ、プロテアーゼ−Ｓ）は、ブロメラインおよびナットウキナーゼより活性がはるかに低いことがわかった。後者２つは、それぞれ活性値が１２５±１３．２ＦＵ／ｍＬおよび１３９．５±３４．７ＦＵ／ｍＬで、他の単一酵素よりも１００倍以上活性が高いことが証明された。しかしながら、薬草誘導体および微量元素は、完全に不活性であることが証明された。全成分（酵素、薬草誘導体および微量元素）の混合物は線維素溶解活性をもたらすものの、ブロメラインとナットウキナーゼのみの混合物によって得られる活性に満たない。線維素溶解活性は、全体の混合物が４７．９±１１．８ＦＵ／ｍＬ、全酵素の混合物が５２．７±８．４ＦＵ／ｍＬ、ブロメラインとナットウキナーゼとの組み合わせが１１２７．６７±１１９．６ＦＵ／ｍＬであった。これらの試験は、ブロメラインとナットウキナーゼとの組み合わせが、特許文献１でクレームされている組み合わせ、および同明細書に記載されている単一酵素の組み合わせよりも効果的であることを明確に示している。この現象は、異なるタンパク質構造と、薬草誘導物の分子を有するタンパク質構造とを混合することによって生じる可能性のある拮抗作用によるものであるかもしれず、薬草誘導物が、線維素の同一分子エピトープを奪い合って、線維素溶解プロセスを非効率的に、またはあまり効率的でなくしている。
【００２５】
配合
本発明による組成物は、経口投与に適するように配合でき、例えば「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，米国ニューヨーク州）に記載されている、製薬技術において周知の従来の方法で、それらの最終用途のために許容される賦形剤、希釈剤、充填剤、抗ケーキング剤、香味剤および甘味剤を用いて調合される。
【００２６】
上述の通り、好ましい実施態様に従って、本発明による組成物は、１層につき１酵素の二層錠として配合され；二層とも、約４〜８時間かけて時間依存的に腸放出制御されることで胃を保護する。この種の放出は、各層の中心核において、さまざまな重合度のＭｅｔｈｏｃｅｌまたはＭｅｔｈｏｌｏｓｅを使用することにより可能となり、ＡｖｉｃｅｌまたはＭｉｃｒｏｃｅｌと１：１の比率で混合し、さらに、１：０．５の比率で事前に構成されたマンニトールとリン酸二カルシウムとの混合物と１：１の比率で事前混合する。次いで、胃保護フィルムコーティングは、容量が１０〜３００ｋｇ、好ましくは５０ｋｇの業務用コーティングパンで直接シェラックを用いて行うことができる。最終的に、フィルムコーティングは、業務用コーティングパンで、炭酸アンモニウムとクエン酸トリエチルとシェラックの１：０．５：０．５の混合物を併用したステップを追加してより強固にすることができる。
【００２７】
本発明による配合例を以下に示す。
実施例１）以下を含有する胃保護徐放錠：
・ブロメライン８０ｍｇ
・ナットウキナーゼ５０ｍｇ
【００２８】
実施例２）各層ごとに以下を含有する二層胃保護徐放錠：
・ブロメライン１６０ｍｇ
・ナットウキナーゼ１００ｍｇ
【００２９】
実施例３）以下を含有する、流動層で得られる胃保護顆粒：
・ブロメライン３２０ｍｇ
・ナットウキナーゼ２００ｍｇ