(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
大豆種子抽出物及び大豆種子揮発性画分を含む抽出物組成物であって、
前記大豆種子抽出物は、２８．３０４〜２８．５９７分の内部標準のピーク時間で５．６６０〜５．９１３分、６．４２０〜６．６６０分、１０．１００〜１０．２４４分、１８．０１０〜１８．６００分、及び２０．５１０〜２０．８４７分のピーク時間を有し、
前記大豆種子揮発性画分は、移動相は８７％が水、１３％が５００ｍＭ ＮａＯＨである、ＣａｒｂｏＰａｃ ＰＡ１分析（４ｘ２５０ｍｍ）カラムを用いたイオンクロマトグラフィアッセイの分光写真で２．５８７〜２．６９０分のピーク時間を有し、
内部標準はマルトース一水和物であり、
定組成溶離を１．０ｍｌ／分の低速かつ０．５秒のサイクルで適用し、
全てのサイクルにおいて、アッセイを、０．００秒〜０．２秒において０．１Ｖ；０．２秒〜０．４秒において０．１Ｖ；０．４１秒〜０．４２秒において−２．０Ｖ；０．４３秒において０．６Ｖ；０．４４秒〜０．５秒において−０．１Ｖの相対電位で実施し、アッセイの総継続期間は５５分である、
抽出物組成物。
【請求項２】
前記大豆種子抽出物の含有量は、約０．００１重量％〜約５重量％であり、前記大豆種子揮発性画分の含有量は、約９５重量％〜約９９．９９９重量％である、請求項１に記載の抽出物組成物。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の前記抽出物組成物を調製するための方法であって、前記方法は、以下のステップ：
（ａ）大豆種子及び抽出溶液を提供するステップであって、前記抽出溶液は、水、又は約３０重量％〜約８０質量％の濃度でＣ１〜Ｃ７アルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；
（ｂ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約２５℃〜約５５℃の温度で、前記抽出溶液を用いて前記大豆種子を抽出して、粗抽出物を得るステップ；並びに
（ｃ）前記粗抽出物から固体を除去して液体部分を得るステップ
を含む、大豆種子抽出物を調製するためのプロセスを含み、
前記大豆種子揮発性画分を調製するプロセスが、
（ｉ）大豆種子を第２の抽出溶液中に供給するステップであって、前記第２の抽出溶液は、水、又は約１５重量％未満の濃度でＣ１〜Ｃ７アルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；並びに
（ｉｉ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約１１０℃未満の温度で、前記第２の抽出溶液を用いて前記大豆種子を抽出して、前記揮発性画分を回収するステップ
を含む、
方法。
【請求項４】
前記大豆種子抽出物を調製するための前記プロセスは更に、前記ステップ（ｃ）で得た前記液体部分を凝縮して凝縮固体部分を得るステップ（ｄ）を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記大豆種子抽出物を調製するための前記プロセスは更に、前記ステップ（ｄ）で得た前記凝縮固体部分を乾燥させるステップ（ｅ）を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記ステップ（ｉ）における前記アルコール溶液が、約５重量％未満の濃度でＣ１〜Ｃ７アルコールを含有する、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
創傷治癒を促進する薬品の製造における、抽出物組成物の使用であって、
前記抽出物組成物が、大豆種子抽出物を含み、該大豆種子抽出物は：
（ａ）大豆種子及び抽出溶液を提供するステップであって、前記抽出溶液は、水、又は約３０重量％〜約８０質量％の濃度でＣ１〜Ｃ７アルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；
（ｂ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約２５℃〜約５５℃の温度で、前記抽出溶液を用いて前記大豆種子を抽出して、粗抽出物を得るステップ；並びに
（ｃ）前記粗抽出物から固体を除去して液体部分を得るステップ
を含むプロセスによって調製される、
使用。
【請求項８】
前記抽出物組成物が、大豆種子揮発性画分をさらに含み、該大豆種子揮発性画分が、
（ｉ）大豆種子を第２の抽出溶液中に供給するステップであって、前記第２の抽出溶液は、水、又は約１５重量％未満の濃度でＣ１〜Ｃ７アルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；並びに
（ｉｉ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約１１０℃未満の温度で、前記第２の抽出溶液を用いて前記大豆種子を抽出して、前記揮発性画分を回収するステップ
を含むプロセスによって調製される、
請求項７に記載の使用。
【請求項９】
皮膚細胞遊走を促進する薬品の製造における、請求項７又は８に記載の抽出物組成物の使用。
【請求項１０】
前記皮膚細胞はケラチン生成細胞である、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
前記創傷は糖尿病性創傷である、請求項７又は８に記載の使用。
【請求項１２】
神経細胞増殖を促進する及び／又は脳疾患及び／又は神経変性疾患を治療する薬品の製造における、抽出物組成物の使用であって、
前記抽出物組成物が、大豆種子抽出物を含み、該大豆種子抽出物は：
（ａ）大豆種子及び抽出溶液を提供するステップであって、前記抽出溶液は、水、又は約３０重量％〜約８０質量％の濃度でＣ１〜Ｃ７アルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；
（ｂ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約２５℃〜約５５℃の温度で、前記抽出溶液を用いて前記大豆種子を抽出して、粗抽出物を得るステップ；並びに
（ｃ）前記粗抽出物から固体を除去して液体部分を得るステップ
を含むプロセスによって調製される、
使用。
【請求項１３】
前記抽出物組成物が、大豆種子揮発性画分をさらに含み、該大豆種子揮発性画分が、
（ｉ）大豆種子を第２の抽出溶液中に供給するステップであって、前記第２の抽出溶液は、水、又は約１５重量％未満の濃度でＣ１〜Ｃ７アルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；並びに
（ｉｉ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約１１０℃未満の温度で、前記第２の抽出溶液を用いて前記大豆種子を抽出して、前記揮発性画分を回収するステップ
を含むプロセスによって調製される、
請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記神経細胞は神経芽細胞腫細胞である、請求項１２又は１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記脳疾患及び／又は前記神経変性疾患は、血管性認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、脳血管疾患、炎症性脳損傷、炎症反応の周囲の脳損傷、脳病変、脳血腫、腫脹脳室及び脳室拡張からなる群から選択される、請求項１２又は１３に記載の使用。
【請求項１６】
乳癌を治療する薬品の製造における、抽出物組成物の使用であって、
前記抽出物組成物が、大豆種子抽出物を含み、該大豆種子抽出物は：
（ａ）大豆種子及び抽出溶液を提供するステップであって、前記抽出溶液は、水、又は約３０重量％〜約８０質量％の濃度でＣ１〜Ｃ７アルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；
（ｂ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約２５℃〜約５５℃の温度で、前記抽出溶液を用いて前記大豆種子を抽出して、粗抽出物を得るステップ；並びに
（ｃ）前記粗抽出物から固体を除去して液体部分を得るステップ
を含を含むプロセスによって調製される、
使用。
【請求項１７】
前記抽出物組成物が、大豆種子揮発性画分をさらに含み、該大豆種子揮発性画分が、
（ｉ）大豆種子を第２の抽出溶液中に供給するステップであって、前記第２の抽出溶液は、水、又は約１５重量％未満の濃度でＣ１〜Ｃ７アルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；並びに
（ｉｉ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約１１０℃未満の温度で、前記第２の抽出溶液を用いて前記大豆種子を抽出して、前記揮発性画分を回収するステップ
を含むプロセスによって調製される、
請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記乳癌はｐ５３変異型を有する乳癌である、請求項１６又は１７に記載の使用。
【請求項１９】
ＤＮＡ及び／又はＲＮＡ複製剤を妨げる副作用を低減する、及び／又はＤＮＡ及び／又はＲＮＡ複製剤を妨げる薬学的効果を増強する薬品の製造における、抽出物組成物の使用であって、
前記抽出物組成物が、大豆種子抽出物を含み、該大豆種子抽出物は：
（ａ）大豆種子及び抽出溶液を提供するステップであって、前記抽出溶液は、水、又は約３０重量％〜約８０質量％の濃度でＣ１〜Ｃ７アルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；
（ｂ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約２５℃〜約５５℃の温度で、前記抽出溶液を用いて前記大豆種子を抽出して、粗抽出物を得るステップ；並びに
（ｃ）前記粗抽出物から固体を除去して液体部分を得るステップ
を含を含むプロセスによって調製される、
使用。
【請求項２０】
前記抽出物組成物が、大豆種子揮発性画分をさらに含み、該大豆種子揮発性画分が、
（ｉ）大豆種子を第２の抽出溶液中に供給するステップであって、前記第２の抽出溶液は、水、又は約１５重量％未満の濃度でＣ１〜Ｃ７アルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；並びに
（ｉｉ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約１１０℃未満の温度で、前記第２の抽出溶液を用いて前記大豆種子を抽出して、前記揮発性画分を回収するステップ
を含むプロセスによって調製される、
請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記ＤＮＡ及び／又はＲＮＡ複製剤を妨げる薬剤は、シクロホスファミド、テモゾロミド、ヘキサメチルメラミン、白金錯体、ブレオマイシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、パクリタキセル、ドセタキセル、葉酸拮抗剤、プリン拮抗剤、及びピリミジン拮抗剤からなる群から選択される、請求項１９又は２０に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、大豆種子抽出物、該大豆種子抽出物を製造するための方法、並びに創傷治癒の促進、神経細胞増殖の促進並びに／又は脳疾患及び／若しくは神経変性疾患の治療、乳癌の治療、ＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ複製剤を妨げる副作用の低減、並びに／又はＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ複製剤を妨げる薬学的効果の増強における、該大豆種子抽出物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
大豆及び黒大豆を含むダイズ種（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ  （Ｌ．）  Ｍｅｒｒ．）は、世界中で、油及びタンパク質の最も重要な源の１つである。例えば、大豆を加工して、サラダ油として又はマーガリン及びショートニングの製造のために使用される食用油を得ることができる。大豆油はまた、塗料、リノリウム、油布、印刷用インク、石鹸、殺虫剤及び殺菌剤の製造においても使用される。その上、製油産業の副産物から得られるレシチンリン脂質は、食品、化粧品、医薬、皮革、塗料、プラスチック、石鹸及び洗剤中で湿潤剤及び安定化剤として使用できる。脱脂大豆は、極めてタンパク質が豊富な家畜用飼料原料である。更に、大豆タンパク質は、合成繊維、接着剤、織物の糊付け、防水加工、消火剤の泡等の製造においても使用できる。
【０００３】
医学的使用において、大豆は、多数の疾患に対して効果を有することが報告されている。
【０００４】
大豆は、腸、心臓、腎臓、肝臓及び胃の機能を調節するための栄養補助として使用できる。大豆油は多量の不飽和脂肪酸を含むため、高コレステロール血症に対処するために使用できる。大豆からの医療用レシチンは、脂肪作用薬として機能する。更に、抗硬直因子として公知のチグマステロール、及びいくつかの降圧剤においてジオスゲニンの代替物として使用されるシトステロールは大豆から調製される。大豆中に見られるイソフラボン類及びフィトエストロゲン類は、乳癌、前立腺癌及び結腸癌を含む様々な癌に対する予防効果を有することが示唆されてきた（非特許文献１）。その他の文献は、イソフラボン類の、乳癌の発生予防に対する効果を達成するために、少なくとも１００ｍｇの１日用量を１カ月間継続的に摂取するべきであることを示しており、またこれは、イソフラボン類は高用量で継続して摂取しなければ抗癌効果を呈しないことを示している（非特許文献２）。また、フィトステロール補足マーガリンは、中年の高コレステロール血症の個体において、血漿コレステロール及びＬＤＬコレステロールの合計濃度を低下させることも分かっている（非特許文献３）。
【０００５】
大豆からのいくつかの抽出物は、薬学的効果を有することも報告されている。茶大豆種、秋田在来の種皮からの７０％水性アセトン抽出物の１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）ラジカル捕捉活性が開示されている（非特許文献４）。胚芽抽出物、大豆、米糠、はと麦、ゴマ、コムギ、シトロン、緑茶、緑葉抽出物、及び米麹（これらは６０℃未満の温度下でゆっくりと焙煎され、コウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）によって３日間にわたり発酵させられ、これによって各原料が低分子量物質に変わる）からの抽出物は、抗酸化作用を有することが分かっている（非特許文献５）。ラットにおいて、血清グルタミン酸−シュウ酸トランスアミナーゼ（ｓＧＯＴ）及び血清グルタミン酸−ピルビン酸トランスアミナーゼ活性を測定することにより、黒大豆の水抽出物もまた、アセトアミノフェン誘発性肝損傷に作用することが報告されている（非特許文献６）。
【０００６】
大豆からのいくつかの特定の抽出物は、いくつかの皮膚疾患の治療において化粧品又は医薬中に適用されることが分かった。所定の比率でスフィンゴミエリン及びリン脂質を含有する大豆抽出物は、ドライスキンの治療用の化粧品中に使用されることが開示されている（特許文献１）。このような抽出物は、脂肪族アルコールを単独で又は水と混合して用いて、成熟した全粒大豆又はオイルフリー大豆粉を抽出し、続いて脂肪族炭化水素及び脂肪族ケトンで処理することにより製造される。従って、抽出物は脂溶性である。
【０００７】
乳清、及びキハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｅｏｎ  ａｍｕｒｅｎｓｅ  Ｒｕｐｒｅｃｈｔ）抽出物から選択された１つ又は複数の抽出物、並びに更に、コガネバナ（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ  Ｇｅｏｒｇｉ）、ヒレハリソウ（Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ  Ｌｉｎｎｅ）及びダイズ種から選択された抽出物を含有する、ざ瘡薬、化粧品産生抑制剤又は化粧品組成物は、ざ瘡又はざ瘡によって引き起こされる炎症性肌荒れといった皮膚疾患を予防又は治療するのに有効であることが分かっている（特許文献２）。
【０００８】
微生物による大豆の発酵産物もまた、抗活性酸素作用組成物、薬剤、食品、化粧品及び医薬として適用される（特許文献３等）。
【０００９】
大豆の多数の使用が報告されているものの、大豆抽出物の異なる複数の用途が依然として開発されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許出願公開第ＵＳ２００２／０００９５０９号明細書
【特許文献２】特開２００１−９７８４２明細書
【特許文献３】特許第４１３９１３２号明細書
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚ，  Ｈ．；  Ｐｈｙｔｏ−ｏｅｓｔｒｏｇｅｎｓ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，  ２００２，  Ｖｏｌ．  ３，  ｐ．  ３６４−３７３
【非特許文献２】Ｌｕ  ＬＪ，  Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＫＥ，  Ｇｒａｄｙ  ＪＪ，  Ｎａｇａｍａｎｉ  Ｍ．；  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｓｏｙａ  ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｏｎｅ  ｍｏｎｔｈ  ｏｎ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅｓ  ｉｎ  ｐｒｅｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｗｏｍｅｎ：  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｉｓｋ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ  Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｐｒｅｖ．  １９９６  Ｊａｎ；  ５（１）：  ６３７０
【非特許文献３】Ｍａｔｖｉｅｎｋｏ，  Ｏ．  Ａ．，  Ｌｅｗｉｓ，  Ｄ．  Ｓ．，  Ｓｗａｎｓｏｎ，  Ｍ．，  Ａｅｎｄｔ，  Ｂ．，  Ｒａｉｎｗａｔｅｒ，  Ｄ．  Ｌ．，  Ｓｔｅｗａｒｔ，  Ｊ．，  ａｎｄ  Ａｌｅｋｅｌ，  Ｄ．  Ｌ．；  Ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ｄａｉｌｙ  ｄｏｓｅ  ｏｆ  ｓｏｙｂｅａｎ  ｐｈｙｔｏｓｔｅｒｏｌｓ  ｉｎ  ｇｒｏｕｎｄ  ｂｅｅｆ  ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ｓｅｒｕｍ  ｔｏｔａｌ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ａｎｄ  ＬＤＬ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｉｎ  ｙｏｕｎｇ，  ｍｉｌｄｌｙ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉｃ  ｍｅｎ．  Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ．，  ２００２，  ７６，  ｐ．  ５７  ６４
【非特許文献４】Ｔａｋａｈａｔａ，  Ｙ．，  Ｏ．−Ｋａｍｅｙａｍａ，  Ｍ．，  Ｆｕｒｕｔａ，  Ｓ．，  Ｔａｋａｈａｓｈｉ，  Ｍ．，  ａｎｄ  Ｓｕｄａ，  Ｉ．；  Ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｚｅｄ  ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ  ｉｎ  ｂｒｏｗｎ  ｓｏｙｂｅａｎ  ｓｅｅｄ  ｃｏａｔ  ｗｉｔｈ  ａ  ｈｉｇｈ  ｒａｄｉｃａｌ−ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．  Ｊ．  Ａｇｒｉｃ．  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，  ２００１，  ４９，  ｐ．  ５８４３  ５８４７
【非特許文献５】Ｍｉｎａｍｉｙａｍａ，  Ｙ．，  Ｙｏｓｈｉｋａｗａ，  Ｔ．，  Ｔａｎｉｇａｗａ，  Ｔ．，  Ｔａｋａｈａｓｈｉ，  Ｓ．，  Ｎａｉｔｏ，  Ｙ．，  Ｉｃｈｉｋａｗａ，  Ｈ．，  ａｎｄ  Ｋｏｎｄｏ，  Ｍ．；  Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｄ  ｇｒａｉｎ  ｆｏｏｄ．  Ｊ．  Ｎｕｔｒ．  Ｓｃｉ．  Ｖｉｔａｍｉｎｏｌ．，  １９９４，  ４０，  ｐ．  ４６７  ４７７
【非特許文献６】Ｗｕ，  Ｓ．−Ｊ．，  Ｗａｎｇ，  Ｊ．−Ｓ．  ａｎｄ  Ｃｈａｎｇ，  Ｃ．−Ｈ．；  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｌｅｇｕｍｅｓ．  Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２００１，  Ｖｏｌ．  ８（３），  ｐ．  ２１３  ２１９
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、大豆種子抽出物、該大豆種子抽出物を製造するための方法、並びに創傷治癒の促進、神経細胞増殖の促進並びに／又は脳疾患及び／若しくは神経変性疾患の治療、乳癌の治療、ＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ複製剤を妨げる副作用の低減、並びに／又はＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ複製剤を妨げる薬学的効果の増強における、該大豆種子抽出物の使用に関する。
【００１３】
本発明は、大豆種子抽出物を含む抽出物組成物を提供するものであり、上記大豆種子抽出物は、以下のステップ：
（ａ）大豆種子及び抽出溶液を準備するステップであって、上記抽出溶液は、水、又は約９０重量％未満の濃度でアルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；
（ｂ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約６０℃未満の温度で、上記抽出溶液を用いて大豆種子を抽出して、粗抽出物を得るステップ；並びに
（ｃ）上記粗抽出物から固体を除去して液体部分を得るステップ
を含むプロセスによって調製される。
【００１４】
本発明はまた、上述の抽出物組成物を調製するための方法を提供するものであり、上記方法は、以下のステップ：
（ａ）大豆種子及び抽出溶液を準備するステップであって、上記抽出溶液は、水、又は約９０重量％未満の濃度でアルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；
（ｂ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約６０℃未満の温度で、上記抽出溶液を用いて大豆種子を抽出して、粗抽出物を得るステップ；並びに
（ｃ）上記粗抽出物から固体を除去して液体部分を得るステップ
を含む、大豆種子抽出物を調製するためのプロセスを含む。
【００１５】
本発明はまた、創傷治癒を促進する薬品の製造における、上述の抽出物組成物の使用を提供するものである。
【００１６】
本発明はまた、神経細胞増殖を促進する並びに／又は脳疾患及び／若しくは神経変性疾患を治療する薬品の製造における、上述の抽出物組成物の使用を提供するものである。
【００１７】
本発明はまた、乳癌を治療する薬品の製造における、上述の抽出物組成物の使用を提供するものである。
【００１８】
本発明はまた、ＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ複製剤を妨げる副作用を低減する、並びに／又はＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ複製剤を妨げる薬学的効果を増強する薬品の製造における、上述の抽出物組成物の使用を提供するものである。
【００１９】
本発明を以下の節において詳細に説明する。本発明の他の特性、目的及び利点は、詳細な説明及び請求項において確認できる。  
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】本発明による大豆種子抽出物（ＧＭＡ１）のイオンクロマトグラフィ分光写真
【図２】本発明による大豆種子抽出物（ＧＭＡ１）のイオンクロマトグラフィ分光写真
【図３】本発明による大豆種子抽出物（ＧＭＡ１）のイオンクロマトグラフィ分光写真
【図４】本発明による大豆種子の揮発性画分（ＧＭＣ１）のイオンクロマトグラフィ分光写真
【図５】本発明による大豆種子の揮発性画分（ＧＭＣ１）のイオンクロマトグラフィ分光写真
【図６】本発明による大豆種子の揮発性画分（ＧＭＣ１）のイオンクロマトグラフィ分光写真
【図７】イソフラボン類標準の高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）分光写真
【図８】大豆種子の揮発性画分（ＧＭＣ１）のＨＰＬＣ分光写真
【図９】大豆種子抽出物（ＧＭＡ１）を０．３重量部及び大豆種子の揮発性画分（ＧＭＣ１）を１重量部含有する抽出物組成物のＨＰＬＣ分光写真
【図１０】ＧＭＡ１及びＧＭＣ１の糖尿病性創傷治癒に対する効果を示す図。ＧＭＣ１及びＧＭＡ１が創傷閉鎖の改善に対して効果を有するかどうかを調査するために、ＳＴＺ誘発糖尿病ラットモデルを利用した。比較のために、クリーム基剤及びＣＧＳ−２１６８０で処理した２つのグループについても調査した。結果は、クリーム基剤単独と比較して、０．３％ＧＭＡ１及びＧＭＣ１の両方が創傷閉鎖に対して有効であり、０．３％ＧＭＡ１で処理したグループは創傷閉鎖においてＧＭＣ１よりも良好な結果を僅かに呈した。
【図１１】異なる投与量の、ＧＭＣ１と組み合わせたＧＭＡ１の、糖尿病性創傷治癒に対する効果を示す図。糖尿病性創傷閉鎖におけるＧＭＡ１とＧＭＣ１との最良の組み合わせを研究するために、実験を行った。図１１に示すように、ＧＭＡ１を異なる濃度：それぞれ０．００９％、０．０４５％及び０．０９％でＧＭＣ１と組み合わせた。比較のために、全ての実験的研究において、クリーム基剤及びＣＧＳ−２１６８０で処理した２つのグループについても調査した。結果は、創傷治癒に関して、用量レベル：０．００９％、０．０４５％及び０．０９％のＧＭＡ１のＧＭＣ１との組み合わせの効果が、ＧＭＣ１単独より良好であることを示す。最も高い投与量のＧＭＡ１（０．０９％）において最も有効な組み合わせ治療が見られた。
【図１２】大豆種子抽出物と大豆種子の揮発性画分との組み合わせの、ＨａＣａＴ細胞遊走に対する効果を示す図。
【図１３】ＧＭＡ１で処理したＩＭＲ−３２細胞の細胞生存率を示す図。データは、７つのグループの平均±ＳＥＭとして示す。２５ｍｇ／ｍｌのＧＭＡ１で処理したＩＭＲ−３２細胞及び陽性対照の細胞生存率は、極めて有意に、及び有意に上昇している（ＧＭＡ１ｐ＝０．０００８、陽性対照ｐ＝０．０２４６）。結果は、ＧＭＡ１が細胞成長を促進することを示す（＊＊＊ｐ＜０．００１）。
【図１４】ＧＭＣ１で処理したＩＭＲ−３２細胞の細胞生存率を示す図。データは、７つのグループの平均±ＳＥＭとして示す。２５ｍｇ／ｍｌのＧＭＣ１で処理したＩＭＲ−３２細胞及び陽性対照の細胞生存率は、極めて有意に、及び有意に上昇している（ＧＭＣ１ｐ＝０．０２５５、陽性対照ｐ＝０．０２４６）。結果は、ＧＭＣ１が細胞成長を促進することを示す（＊ｐ＜０．０５）。
【図１５】ＧＭＡ１及びＧＭＣ１（ＧＭ）で処理したＩＭＲ−３２細胞の細胞生存率を示す図。データは、７つのグループの平均±ＳＥＭとして示す。２５ｍｇ／ｍｌのＧＭで処理したＩＭＲ−３２細胞及び陽性対照の細胞生存率は、極めて有意に、及び有意に上昇している（ＧＭ＝０．００５９、陽性対照ｐ＝０．０２４６）。結果は、ＧＭが細胞成長を促進することを示す（＊＊ｐ＜０．０１）。
【図１６】放射状迷路（ｒａｄｉａｌ  ａｒｍ  ｍａｚｅ）の図。
【図１７】放射状迷路における認知症のラットの追跡進路を示す図。４日目のラットの追跡進路は、ＡｌＣｌ３＋Ｎ２グループのラットが訓練後に自身の記憶によって餌の場所に到達でき、ＡｌＣｌ３グループ及びＡｌＣｌ３＋クリーム基剤グループはそうでないことを示唆する。
【図１８】放射状迷路試験における認知症のラットの誤りの総数（ＴＭＥ：ｔｏｔａｌ  ｎｕｍｂｅｒ  ｏｆ  ｅｒｒｏｒｓ）の図。ＡｌＣｌ３グループ及びＡｌＣｌ３＋クリーム基剤グループのＴＭＥ値は、有意な差を示さず（ｐ＞０．０５）、大豆種子抽出物及び大豆種子の揮発性画分を含む抽出物組成物の処理後４日目のＴＭＥ値は、ＡｌＣｌ３グループのＴＭＥ値より有意に低い（ＡｌＣｌ３＋Ｎ２  ｐ＝０．０１２８）。これは、大豆種子抽出物及び大豆種子の揮発性画分を含む抽出物組成物が、ラットにおける認知症の治療に対して効果を有することを示す。データは、平均±ＳＥＭとして示す。統計分析のために、スチューデントのｔ検定及びｒｅｐｅａｔｅｄ  ＡＮＯＶＡを用いる。ＡｌＣｌ３グループとＡｌＣｌ３＋クリーム基剤グループとを比較するとき、ｐ＜０．０５は＊で印を付けられ、ｐ＜０．０１は＊＊で印を付けられ、これは統計上有意な差が存在することを意味する。
【図１９】放射状迷路試験における認知症のラットの参照（長期）記憶誤り（ＲＭＥ：ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  （ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ）  ｍｅｍｏｒｙ  ｅｒｒｏｒｓ）の図。ＡｌＣｌ３グループ及びＡｌＣｌ３＋クリーム基剤グループのＲＭＥ値は、有意な差を示さず（ｐ＞０．０５）、大豆種子抽出物及び大豆種子の揮発性画分を含む抽出物組成物の処理後４日目のＲＭＥ値は、ＡｌＣｌ３グループのＲＭＥ値より有意に低い（ｐ＝０．００４６）。これは、大豆種子抽出物及び大豆種子の揮発性画分を含む抽出物組成物が、ラットの長期記憶の復元に対して効果を有することを示す。データは、平均±ＳＥＭとして示す。統計分析のために、スチューデントのｔ検定及びｒｅｐｅａｔｅｄ  ＡＮＯＶＡを用いる。ｐ＜０．０５は＊で印を付けられ、ｐ＜０．０１は＊＊で印を付けられ、これは統計上有意な差が存在することを意味する。
【図２０】放射状迷路試験における、クリーム基剤（Ｍ）、ＧＭＣ１（Ｍ１）、及びＧＭＣ１＋０．５％ＧＭＡ１（Ｍ３）で処理した血管性認知症のラットの誤りの総数（ＴＭＥ）の図。これは、両側頸動脈結紮（２ＶＯ）グループのＴＭＥがシャムグループより有意に高い（８日目、ｐ＝０．００１３）ことを示し、これは両側頸動脈結紮によるラットにおける血管性認知症の誘発の成功を表す。結果は、ＴＭＥ値が、Ｍ１及びＭ３による処理後の２ＶＯグループと比較して有意に改善されることを示す（８日目、Ｍ１  ｐ＝０．００１９；Ｍ３  ｐ＝０．０３５５）。これは、Ｍ１及びＭ３がラットにおける血管性認知症の治療に関して効能を有することを示唆する。データは、平均±ＳＥＭとして示す。統計分析のために、スチューデントのｔ検定及びｒｅｐｅａｔｅｄ  ＡＮＯＶＡを用いる。ｐ＜０．０５は＊で印を付けられ、ｐ＜０．０１は＊＊で印を付けられ、これは統計上有意な差が存在することを意味する。
【図２１】放射状迷路試験における、クリーム基剤（Ｍ）、ＧＭＣ１（Ｍ１）、及びＧＭＣ１＋０．５％ＧＭＡ１（Ｍ３）で処理した血管性認知症のラットの参照（長期）記憶誤り（ＲＭＥ）の図。これは、両側頸動脈結紮（２ＶＯ）グループのＲＭＥがシャムグループより有意に高い（８日目、ｐ＝０．００１６）ことを示し、これは両側頸動脈結紮によるラットにおける血管性認知症の誘発の成功を表す。結果は、ＲＭＥ値が、Ｍ１及びＭ３による処理後の２ＶＯグループと比較して有意に改善されることを示す（８日目、Ｍ１  ｐ＝０．００２９；Ｍ３  ｐ＝０．０１７１）。これは、Ｍ１及びＭ３がラットにおける血管性認知症のＲＭＥの治療に関して効能を有することを示唆する。データは、平均±ＳＥＭとして示す。統計分析のために、スチューデントのｔ検定及びｒｅｐｅａｔｅｄ  ＡＮＯＶＡを用いる。ｐ＜０．０５は＊で印を付けられ、ｐ＜０．０１は＊＊で印を付けられ、これは統計上有意な差が存在することを意味する。
【図２２】放射状迷路試験における、クリーム基剤（Ｍ）、ＧＭＣ１（Ｍ１）、及びＧＭＣ１＋０．５％ＧＭＡ１（Ｍ３）で処理した血管性認知症のラットの作業（短期）記憶誤り（ＷＭＥ：ｗｏｒｋｉｎｇ  ｍｅｍｏｒｙ  ｅｒｒｏｒｓ）の図。これは、両側頸動脈結紮（２ＶＯ）グループのＷＭＥがシャムグループより有意に高い（８日目、ｐ＝０．０１１１）ことを示し、これは両側頸動脈結紮によるラットにおける血管性認知症の誘発の成功を表す。結果は、ＷＭＥが、Ｍ１及びＭ３による処理後の２ＶＯグループと比較して有意に改善されることを示す（８日目、Ｍ１  ｐ＝０．０１１１；Ｍ３  ｐ＝０．０１３９）。これは、Ｍ１及びＭ３がラットにおける血管性認知症のＷＭＥの治療に関して効能を有することを示唆する。データは、平均±ＳＥＭとして示す。統計分析のために、スチューデントのｔ検定及びｒｅｐｅａｔｅｄ  ＡＮＯＶＡを用いる。ｐ＜０．０５は＊で印を付けられ、ｐ＜０．０１は＊＊で印を付けられ、これは統計上有意な差が存在することを意味する。
【図２３】放射状迷路における血管性認知症（ＶＤ）のラットの追跡進路を示す図。８日目のラットの追跡進路は、ＧＭＣ１（Ｍ１）グループ及びＧＭＣ１＋０．５％ＧＭＡ１（Ｍ３）グループのラットは訓練後に自身の記憶によって餌の場所に到達できるが、２ＶＯグループ及びＭグループはそうでないことを示唆する。
【図２４】血管性認知症のラットの脳損傷グレードの統計図。ラットの脳のＣＴ画像に従った脳損傷の程度を、グレード０〜４に分類する。結果は、２ＶＯ（ｐ＝０．００００）グループの重篤な脳損傷が、ＧＭＣ１（Ｍ１）及びＧＭＣ１＋０．５％ＧＭＡ１（Ｍ３）による処理によって有意に縮小する（Ｍ１  ｐ＝０．００３０；Ｍ３  ｐ＝０．０２３８）ことを示唆する。データは、平均±ＳＥＭとして示す。統計分析のために、スチューデントのｔ検定及びｒｅｐｅａｔｅｄ  ＡＮＯＶＡを用いる。ｐ＜０．０５は＊で印を付けられ、ｐ＜０．０１は＊＊で印を付けられ、これは統計上有意な差が存在することを意味する。
【００２１】
脳損傷のＣＴグレード：
０：ＣＴスキャン上で明らかな異常はない
１：脳組織に小面積の異常な密度の領域
２：片側の脳組織の２５％超が異常な密度の領域、又は両側の脳組織に小面積の異常な密度の領域
３：片側の脳組織の５０％超が異常な密度の領域、正中線偏位、又は両側の脳組織の２５％超が異常な密度の領域
４：両側の脳組織の５５％超が異常な密度の領域、又は明らかな正中線偏位／歪み
【図２５】ヌードマウスの腫瘍成長速度の図。ヌードマウスにおいて腫瘍を誘発し、マウスをグループ分けに供し、腫瘍が所定の体積まで成長したときに、０．１ｇ／日の投与量で腫瘍領域及び背中の皮膚全体に抽出物組成物を投与した。結果は、腫瘍対照グループと比較して抽出物組成物が腫瘍成長速度を低下させることができることを示す。
【図２６】ヌードマウスの腫瘍成長速度の図。ヌードマウスにおいて腫瘍を誘発し、マウスをグループ分けに供し、腫瘍が所定の体積まで成長したときに、０．１ｇ／日の投与量で腫瘍領域及び背中の皮膚全体にＧＭＣ１及びＧＭＡ１を投与した。結果は、腫瘍対照グループと比較して抽出物組成物が腫瘍成長速度を低下させることができることを示す。
【図２７】ヌードマウスの腫瘍成長速度の図。ヌードマウスにおいて腫瘍を誘発し、マウスをグループ分けに供し、腫瘍が所定の体積まで成長したときに、０．１ｇ／日の投与量で腫瘍領域及び背中の皮膚全体にＣＴＸ注射及並びにＧＭＣ１及びＧＭＡ１を投与した。結果は、ＣＴＸ対照グループと比較して抽出物組成物が腫瘍成長速度を低下させることができることを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明は、大豆種子抽出物を含む抽出物組成物を提供するものであり、上記大豆種子抽出物は、以下のステップ：
（ａ）大豆種子及び抽出溶液を準備するステップであって、上記抽出溶液は、水、又は約９０重量％未満の濃度でアルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；
（ｂ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約６０℃未満の温度で、上記抽出溶液を用いて大豆種子を抽出して、粗抽出物を得るステップ；並びに
（ｃ）上記粗抽出物から固体を除去して液体部分を得るステップ
を含むプロセスによって調製される。
【００２３】
本発明の様々な実施形態の詳細な説明、実施例並びに関連する説明を有する化学的な図及び表を参照することにより、本発明をより容易に理解できる。請求項によって具体的に示さない限り、本発明は特定の調製方法、キャリア若しくは処方、又は局所、経口若しくは非経口投与を対象とした製品若しくは組成物に本発明の抽出物を配合する特定の形態に限定されないことを理解されたい。というのは、当業者は、このようなことは当然様々であり得ることを十分承知しているためである。また、本明細書中で使用する用語は、特定の実施形態を説明することを目的としたものにすぎず、限定を意図したものではないことを理解されたい。
【００２４】
本開示に従って利用される場合、以下の用語は、そうでないことが指示されない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする。
【００２５】
本明細書中でしばしば、範囲を「約（ａｂｏｕｔ）」ある特定の値から及び／又は「約」別の特定の値までとして表す。このような範囲を示す場合、ある実施形態は、上記ある特定の値から及び／又は上記他の特定の値までの範囲を含む。同様に、単語「約」の使用により値を近似値として表す場合、特定の値は別の実施形態を形成することが理解されるだろう。更に、各範囲の終点は、他の終点に関して及びこれとは独立して重要であることが理解されるだろう。
【００２６】
「任意の（ｏｐｔｉｏｎａｌ）」又は「任意に（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」は、続けて記載される事象又は状況が発生してもしなくてもよいことを意味し、また該記述は、上記事象又は状況が発生する例及び発生しない例を含むことを意味する。例えば、句「任意にある薬剤を含む（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ  ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  ａｎ  ａｇｅｎｔ）」は、薬剤が存在してもしなくてもよいことを意味する。
【００２７】
明細書及び添付の請求項中で使用される場合、単数形「ある（ａ、ａｎ）」、「その、上記（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかにそうでないことを指示していない限り、複数の指示物を含むことに留意しなければならない。従って、文脈によってそうでないことが要求されない限り、単数形の用語は複数を含むものとし、複数形の用語は単数を含むものとする。
【００２８】
本明細書中で使用される用語「被検体（ｓｕｂｊｅｃｔ）」は、いずれの動物、好ましくは哺乳類、より好ましくはヒトを指す。被検体の例は、非ヒト霊長類、げっ歯動物、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、雌ウシ、ウマ、イヌ及びネコを含む。
【００２９】
本明細書中で提供される場合、活性成分の「有効量（ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ａｍｏｕｎｔ）」という用語は、所望の機能の所望の調節をもたらすのに十分な成分の量を意味する。以下で指摘するように、必要となる正確な量は、被検体の病態、健康状態、年齢、性別、種及び体重、組成物の固有の特性及び処方等に応じて、被検体ごとに異なる。投与量レジメンは、最適な治療反応を誘発するよう調整してよい。例えば、いくつかの分割された用量を毎日投与してよく、又は治療状況の緊急要件によって指示されるように、用量を比例的に減らしてよい。従って、正確な「有効量」を特定することはできない。しかしながら当業者は、慣用の実験のみを用いて、適切な有効量を決定できる。
【００３０】
本明細書中で使用される用語「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」又は「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、上記用語が適用される障害、疾患若しくは容態、又は上記障害、疾患若しくは容態の１つ若しくは複数の症状の、逆転、軽減、進行の阻害、又はこれらの改善を示す。
【００３１】
本明細書中で使用される用語「キャリア（ｃａｒｒｉｅｒ）」又は「賦形剤（ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ）」は、キャリア及び／若しくは希釈剤及び／若しくはアジュバント若しくは治療剤を被検体に送達するためのキャリアとして使用される、又は取り扱い若しくは保管性能を改善するために、若しくは経口投与に好適なカプセル若しくは錠剤等の別個の物品としての用量単位の組成物の形成を可能とする若しくは容易にするために、処方に添加される、それ自体が治療剤ではないいずれの物質を指す。好適なキャリア又は賦形剤は、医薬製剤又は食品を製造する当業者には周知である。キャリア又は賦形剤としては、例示であり限定するものではないが、緩衝液、希釈剤、崩壊剤、結合剤、接着剤、湿潤剤、ポリマー、潤滑剤、滑剤、不快な味又は臭気、風味、着色、芳香をマスキング又は中和するために添加される物質、及び組成物の外観を改善するために添加される物質を挙げることができる。許容可能なキャリア又は賦形剤としては、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、重炭酸緩衝液、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸及び硫酸のナトリウム及びカルシウム塩、炭酸マグネシウム、タルク、ゼラチン、アカシアガム、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、デキストリン、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、スクロース、デンプン、ゼラチン、セルロース系材料（アルカン酸のセルロースエステル及びセルロースアルキルエステル等）、低融点蜜蝋、カカオバター、アミノ酸、尿素、アルコール、アスコルビン酸、リン脂質、タンパク質（例えば、血清アルブミン）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、塩化ナトリウム又は他の塩、リポソーム、マンニトール、ソルビトール、グリセロール又は粉末、ポリマー（ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、及びポリエチレングリコール等）並びに他の薬学的に許容可能な材料が挙げられる。キャリアは、治療的量の薬剤を送達するのに十分な用量で投与された場合に、治療剤の薬学的活性を破壊しないものとし、非毒性であるものとする。
【００３２】
本発明による抽出物組成物は、大豆種子抽出物を含む。本発明によると、大豆は、種子の種皮の色に応じて、黄大豆、枝豆、白大豆、ｐｅｅｌ  ｂｅａｎｓ、青大豆、黒大豆、好ましくは黄大豆又は黒大豆を指してよい。本発明による大豆は、マメ科、グリキネ属に属し；好ましくは大豆は、ダイズ種、Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｆｏｒｍｏｓａｎａ  Ｈｏｓｏｋａｗａ又はＧｌｙｃｉｎｅ  ｓｏｊａ  ａｕｃｔ．  ｎｏｎ  Ｓｉｅｂ．  ＆  Ｚｕｃｃである。
【００３３】
本発明による大豆種子は好ましくは、鞘から殻を取り除くことにより得られた種子を指す。一般に、大豆の果実は毛を有する鞘であり、鞘の殻が種子を覆っている。鞘の殻は、種子の内部を保護するために極めて硬く、水を通さない。大豆の果実から大豆種子を得る、即ち鞘の殻を取り除く方法は、当業者により公知である。好ましくは、本発明による大豆種子は、種皮、子葉及び胚軸を含む。
【００３４】
本発明による大豆種子抽出物は、以下のステップ：
（ａ）大豆種子及び抽出溶液を準備するステップであって、上記抽出溶液は、水、又は約９０重量％未満の濃度でアルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；
（ｂ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約６０℃未満の温度で、上記抽出溶液を用いて大豆種子を抽出して、粗抽出物を得るステップ；並びに
（ｃ）上記粗抽出物から固体を除去して液体部分を得るステップ
を含むプロセスによって調製される。
【００３５】
本発明による大豆種子を抽出するための抽出溶液は、水、又はアルコールを約９０重量％未満の濃度で含有するアルコール溶液である。好ましくは、アルコールはＣ１〜Ｃ７アルコールである。本明細書中で使用される用語「Ｃ１〜Ｃ７アルコール（Ｃ１  ｔｏ  Ｃ７  ａｌｃｏｈｏｌ）」は、直鎖又は分岐、置換又は非置換、単官能又は多官能、及び飽和又は不飽和アルコール；好ましくは非置換、単官能及び飽和アルコールを指す。本発明の好ましい一実施形態では、Ｃ１〜Ｃ７アルコールは、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、１−ペンタノール、２−ペンタノール、３−ペンタノール、２−メチル−１−ブタノール、２−メチル２−ブタノール、３−メチル−２−ブタノール、３−メチル−１−ブタノール、２，２−ジメチル−１−プロパノール、１−ヘキサノール、２，４−ヘキサジエン−１−オール、２−メチル−シクロペンタノール、シクロヘキサノール、１−ヘプタノール、２−ヘプタノール、又はシクロヘプチルアルコールからなる群から選択される。より好ましくは、Ｃ１〜Ｃ７アルコールはメタノール又はエタノールであり、最も好ましくは、Ｃ１〜Ｃ７アルコールはエタノールである。Ｃ１〜Ｃ７アルコールは、単独で又は組み合わせて使用できる。
【００３６】
本明細書中で使用されるアルコールは好ましくは、約９０％（ｖ／ｖ）未満；好ましくは約５％（ｖ／ｖ）〜約９０％（ｖ／ｖ）；より好ましくは約３０％（ｖ／ｖ）〜約８５％（ｖ／ｖ）；更に好ましくは約５０％（ｖ／ｖ）〜約７５％（ｖ／ｖ）の濃度を有するアルコール溶液である。
【００３７】
本発明によるプロセスは、（ｂ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約６０℃未満の温度で、抽出溶液を用いて大豆種子を抽出して、粗抽出物を得るステップを含む。溶液を用いて種子の一部を抽出する方法は、当業者には周知である。粗抽出物は例えば、大豆種子を粉砕、撹拌、撹乱、切断又は細断といったいずれの方法で小片に分割し、上記小片を抽出のために抽出溶液に浸漬することにより、得ることができる。この分野における複数の種子分割方法を本発明に適用できる。本発明の好ましい一実施形態では、大豆種子を粉砕して粉末とする。本発明の好ましい一実施形態では、大豆種子を抽出のために抽出溶液に浸漬し、より好ましくは、大豆種子を抽出溶液に浸漬し、超音波振動抽出に供する。
【００３８】
本発明のプロセスによると、ステップ（ｂ）の前に、大豆種子を好ましくは乾燥させる。
【００３９】
本発明によると、大豆種子と抽出溶液との比（ｗ／ｖ）は、具体的に制限されていない。本発明の好ましい一実施形態では、大豆種子と抽出溶液との比（ｗ／ｖ）は、約１：１〜約１：３０；より好ましくは約１：５〜約１：２０；最も好ましくは約１：１０である。
【００４０】
本発明によると、ステップ（ｂ）における抽出の温度は、６０℃未満；好ましくは約２５℃〜約５５℃；より好ましくは約３０℃〜約５０℃；更に好ましくは約４５℃である。
【００４１】
本発明の好ましい一実施形態では、抽出ステップ（ｂ）を反復でき、マージすることにより抽出物を回収する。
【００４２】
本発明によるプロセスは、粗抽出物から固体を除去して液体部分を得るステップ（ｃ）を含む。固体を除去して液体画分を得る方法は当業者には周知であり、例としてはろ過、遠心分離、又は沈殿が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４３】
好ましくは、本発明によるプロセスは更に、ステップ（ｃ）で得た液体部分を凝縮して凝縮固体部分を得るステップ（ｄ）を含む。凝縮の方法は、減圧凝縮器によるもの等、当業者には周知である。
【００４４】
好ましくは、本発明によるプロセスは更に、ステップ（ｄ）で得た凝縮固体部分を乾燥させるステップ（ｅ）を含む。乾燥の方法は、空気乾燥又は凍結乾燥器によるもの等、当業者には周知である。
【００４５】
本発明の好ましい一実施形態では、大豆種子抽出物を、ＣａｒｂｏＰａｃ  ＰＡ１分析（４ｘ２５０ｍｍ）カラムを用いたイオンクロマトグラフィアッセイに供する。移動相は８７％が水、１３％が５００ｍＭ  ＮａＯＨであり、内部標準はマルトース一水和物である。定組成溶離を１．０ｍｌ／分の低速かつ０．５秒のサイクルで適用する。全てのサイクルにおいて、アッセイを、０．００秒〜０．２秒において０．１Ｖ；０．２秒〜０．４秒において０．１Ｖ；０．４１秒〜０．４２秒において−２．０Ｖ；０．４３秒において０．６Ｖ；０．４４秒〜０．５秒において−０．１Ｖの相対電位で実施し、アッセイの総継続期間は５５分である。
【００４６】
得られた分光写真を図１〜３に示す。ピーク時間を表１に示す。
【００４７】
【表１】
0006417576.tif 000002
【００４８】
好ましくは、本発明による抽出物組成物は更に、大豆種子揮発性画分を含み、上記大豆種子揮発性画分は、以下のステップ：  
（ｉ）大豆種子を第２の抽出溶液中に供給するステップであって、上記第２の抽出溶液は、水、又は約１５重量％未満の濃度でアルコールを含有するアルコール溶液である、ステップ；並びに
（ｉｉ）約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約１１０℃未満の温度で、上記第２の抽出溶液を用いて大豆種子を抽出し、揮発性画分を回収するステップ
を含むプロセスによって調製される。
【００４９】
本発明による大豆種子揮発性画分を調製するための第２の抽出溶液は、水、又は約１５重量％未満の濃度でアルコールを含有するアルコール溶液であり、好ましくは水である。アルコールの種類は、大豆種子抽出物を調製するための溶液と同一であってよく、ここでは繰り返さない。
【００５０】
第２の抽出溶液のアルコールは、約１５％（ｖ／ｖ）未満、好ましくは約１０％（ｖ／ｖ）未満、より好ましくは約５％（ｖ／ｖ）未満の濃度を有するアルコール溶液である。
【００５１】
本発明による大豆種子揮発性画分を調製するためのプロセスは、約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約１１０℃未満の温度で、第２の抽出溶液を用いて大豆種子を抽出して、揮発性画分を回収するステップ（ｉｉ）を含む。抽出する方法は、大豆種子揮発性画分が約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）未満の気圧及び約１１０℃未満の温度で気化されるならば、大豆種子抽出物を調製する方法と同一であってよい。揮発性画分は、蒸気を冷却することにより、液体形態で回収できる。
【００５２】
本発明のある好ましい実施態様では、任意の気圧及び温度で粗抽出物を気化させ、その蒸気を冷却することによって上記揮発性画分を回収するプロセスは、ロータリエバポレータで実施でき、ここで蒸気は、冷水が供給される凝縮管へと気化され、その後蒸気は凝縮管を通過して冷却され、揮発性画分が液体形態で回収される。操作は単純でコストは低い。
【００５３】
本発明によると、大豆種子と第２の抽出溶液との比（ｗ／ｖ）は、具体的に制限されていない。本発明の好ましい一実施形態では、大豆種子と第２の抽出溶液との比（ｗ／ｖ）は、約１：１〜約１：３０；より好ましくは約１：５〜約１：２０；最も好ましくは約１：１０である。
【００５４】
本発明によると、ステップ（ｉｉ）における抽出の温度は１１０℃未満；好ましくは約６０℃〜約１１０℃である。
【００５５】
本発明の好ましい一実施形態では、抽出ステップ（ｉｉ）を反復でき、マージすることにより揮発性画分を回収する。
【００５６】
本発明の好ましい一実施形態では、大豆種子揮発性画分を、ＣａｒｂｏＰａｃ  ＰＡ１分析（４ｘ２５０ｍｍ）カラムを用いたイオンクロマトグラフィアッセイに供する。移動相は８７％が水、１３％が５００ｍＭ  ＮａＯＨであり、内部標準はマルトース一水和物である。定組成溶離を１．０ｍｌ／分の低速かつ０．５秒のサイクルで適用する。全てのサイクルにおいて、アッセイを、０．００秒〜０．２秒において０．１Ｖ；０．２秒〜０．４秒において０．１Ｖ；０．４１秒〜０．４２秒において−２．０Ｖ；０．４３秒において０．６Ｖ；０．４４秒〜０．５秒において−０．１Ｖの相対電位で実施し、アッセイの総継続期間は５５分である。
【００５７】
得られた分光写真を図４〜６に示す。ピーク時間を表２に示す。
【００５８】
【表２】
0006417576.tif 000003
【００５９】
本発明の一実施形態では、抽出物組成物に基づく大豆種子抽出の含有量は、約０．００１重量％〜約１０重量％；好ましくは約０．０１重量％〜約５重量％；より好ましくは約０．００１重量％〜約１．５重量％である。別の態様では、抽出物組成物に基づいた大豆種子揮発性画分の含有量は、約０．０４重量％〜約９９．９９９重量％；好ましくは約１０重量％〜約９９．９重量％；より好ましくは約３０重量％〜約９９重量％である。
【００６０】
本発明による抽出物組成物は好ましくは、薬学的組成物、食品組成物又は化粧品組成物である。
【００６１】
本発明による薬学的組成物は好ましくは、筋肉内、皮内、静脈内、皮下、腹腔内、鼻腔内、経口、粘膜、又は外部経路を含むがこれらに限定されない、当該技術分野において公知のいずれの方法により、局所的又は全身的に投与される。当業者は、適切な経路、処方及び投与スケジュールを決定できる。本発明では、薬学的組成物は、対応する投与経路に応じて、液体溶液、懸濁液、エマルジョン、シロップ、錠剤、丸薬、カプセル、徐放性製剤、粉末、顆粒、アンプル、注射、点滴、キット、軟膏、ローション、塗布薬、クリーム、又はこれらの組み合わせといった様々な方法で処方できる。必要に応じて、薬学的組成物を滅菌してよく、又はいずれの薬学的に許容可能なキャリア若しくは賦形剤と混合してよく、上記薬学的に許容可能なキャリア又は賦形剤の多くは当業者には公知である。
【００６２】
本明細書中で使用される外部経路は、局所投与としても公知であり、吹送及び吸入による投与を含むがこれらに限定されない。局所投与のための様々なタイプの調剤薬の例としては、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、泡沫、経皮吸収パッチによる送達のための調剤薬、粉末、スプレー、エアロゾル、吸入器若しくはインサフレータにおいて使用するためのカプセル若しくはカートリッジ、又は点滴薬（例えば目薬若しくは点鼻薬）、噴霧化のための溶液／懸濁液、坐剤、腟坐剤、停留かん腸及び噛み砕けるか若しくは吸引可能な錠剤若しくはペレット、又はリポソーム若しくはマイクロカプセル化調剤薬が挙げられる。
【００６３】
例えば軟膏、クリーム及びゲルは、好適な増ちょう剤及び／又はゲル化剤及び／又は溶媒が添加された水性又は油性基剤を用いて処方してよい。従ってこのような基剤としては例えば、水、及び／又は流動パラフィン若しくは落花生油若しくはひまし油等の植物油といった油、又はポリエチレングレコール等の溶媒を挙げることができる。基剤の性質に応じて使用できる増ちょう剤及びゲル化剤としては、軟パラフィン、ステアリン酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、ポリエチレングリコール、羊毛脂、蜜蝋、カルボキシポリメチレン及びセルロース誘導体、並びに／又はモノステアリン酸グリセリル及び／若しくは非イオン性乳化剤が挙げられる。
【００６４】
ローションは、水性又は油性基剤を用いて処方してよく、一般に、１つ又は複数の乳化剤、安定化剤、分散剤、懸濁剤又は増ちょう剤も含有することになる。
【００６５】
外用塗布のための粉末は、いずれの好適な粉末基剤、例えばタルク、ラクトース又は澱粉を用いて処方してよい。点滴薬は、１つ又は複数の分散剤、可溶化剤、懸濁剤又は防腐剤も含む、水性又は非水性基剤を用いて処方してよい。
【００６６】
スプレー組成物は例えば、いずれの好適な液化噴射剤を用いて定量吸入器等の加圧パックから送達される水性溶液若しくは懸濁液として又はエアロゾルとして処方してよい。吸入に好適なエアロゾル組成物は、懸濁液又は溶液とすることができる。エアロゾル組成物は任意に、例えばオレイン酸又はレシチン及び共溶媒（例えばエタノール）である界面活性剤等の、当該技術において周知の付加的処方賦形剤を含有してよい。
【００６７】
局所調剤薬は、患部に１日あたり１回又は複数回の塗布により投与してよく、有利には、皮膚領域にわたり閉鎖包帯を使用してよい。継続的な又は長期にわたる送達を、接着剤リザーバシステムによって達成してよい。
【００６８】
本発明による化粧品組成物は、本質的に水で構成される水相処方であってよく、これはまた、水と水混和性溶媒（水中混和性が２５℃で５０重量％超）との混合物、例えばエタノール又はイソプロパノール等の１〜５つの炭素原子を含有する低級モノアルコール類；プロピレングリコール、エチレングリコール、１，３−ブチレングリコール又はジプロピレングリコール等の２〜８つの炭素原子を含有するグリコール類；Ｃ３−Ｃ４ケトン類；及びＣ２−Ｃ４アルデヒド類；並びにグリセリンも含んでよい。このような水性処方は好ましくは、水性ゲル又はヒドロゲル処方の形態である。ヒドロゲル処方は、液体溶液を増ちょうするための増ちょう剤を含む。増ちょう剤の例としては、カルボマー、セルロース基材、ゴム類、アルギン、寒天、ペクチン類、カラゲナン、ゼラチン、鉱物又は改質鉱物増ちょう剤、ポリエチエグリコール及び多価アルコール類、ポリアクリルアミド及び他のポリマー増ちょう剤が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、組成物の安定性及び最適な流動特性をもたらす増ちょう剤を使用する。
【００６９】
本発明による化粧品組成物は、エマルジョン又はクリーム処方の形態であってよい。これは、乳化界面活性剤を含有できる。このような界面活性剤は、アニオン性又は非イオン性界面活性剤から選択してよい。界面活性剤の特性及び機能（乳化）の定義に関して、文献“Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｋｉｒｋ−Ｏｔｈｍｅｒ”、２２巻、３３３〜４３２頁、第３版、１９７９年、Ｗｉｌｅｙを参照してよく、アニオン性及び非イオン性界面活性剤に関して上記参考文献の特に３４７〜３７７頁を参照してよい。
【００７０】
本発明による化粧品組成物において好んで使用される界面活性剤は：非イオン性界面活性剤：脂肪酸類、脂肪族アルコール類、ポリエトキシル化ステアリル又はセチルステアリル等のポリエトキシル化又はポリグリセロール化脂肪族アルコール類、スクロースの脂肪酸エステル類、アルキルグルコースエステル類、特にＣ１〜Ｃ６アルキルグルコースのポリオキシエチレン化脂肪酸エステル類、及びこれらの混合物；アニオン性界面活性剤：アミン類で中和したＣ１６〜Ｃ３０脂肪酸、アンモニア水又はアルカリ塩類及びこれらの混合物から選択される。好ましくは、水中油型又は水中ワックス型エマルジョンを得ることを可能とする界面活性剤を使用する。
【００７１】
本発明による化粧品組成物は更に、ブチル化ｐ−クレゾール、ブチル化ヒドロキノンモノメチルエーテル、及びトコフェロールからなる群から選択される有効量の生理学的に許容可能な抗酸化剤を含んでよい。
【００７２】
本発明による化粧品組成物は更に、天然若しくは改質アミノ酸、天然若しくは改質ステロール化合物、天然若しくは改質コラーゲン、絹タンパク質又は大豆タンパク質を含んでよい。
【００７３】
本発明による化粧品組成物は好ましくは、皮膚、毛、まつ毛、又は爪等のケラチン質への局所塗布のために処方される。これらは、特に水性又は油性溶液、水中油型又は油中水型エマルジョン、シリコーンエマルジョン、マイクロエマルジョン又はナノエマルジョン、水性又は油性ゲル又は液体、ペースト状又は固体無水物の形態の、このタイプの塗布に通常使用されるいずれの提示形態のものであってよい。
【００７４】
本発明による化粧品組成物は、いくぶん流動的であってよく、白色又は色付きのクリーム、軟膏、乳液、ローション、セラム、ペースト、ムース又はゲルの外観を有してよい。本発明による化粧品組成物は任意に、エアロゾル、パッチ又は粉末の形態で、皮膚上に局所的に塗布してよい。本発明による化粧品組成物はまた、例えばスティック状の固体形態であってもよい。これは、皮膚用の手入れ用品及び／又はメイクアップ製品として使用してよい。あるいは、本発明による化粧品組成物は、シャンプー又はコンディショナーとして処方してよい。
【００７５】
公知の様式で、本発明による化粧品組成物はまた、親水性又は親油性ゲル化剤、防腐剤、抗酸化剤、溶媒、香料、充填剤、顔料、臭気吸収剤及び染料といった、化粧品において一般的な添加剤及びアジュバントを含有してもよい。
【００７６】
抽出物組成物を、食品組成物の製造プロセス中に、従来の食品組成物（即ち食用品若しくは飲物又はこれらの前駆体）に添加してよい。殆ど全ての食品組成物は、本発明の本発明の抽出物組成物を追加できる。本発明の抽出物組成物を追加できる食品組成物としては、キャンディー、焼いた食品、アイスクリーム、乳製品、甘い及び風味のあるスナック、スナックバー、食事代替製品、ファストフード、スープ、パスタ、麺類、缶詰食品、冷凍食品、乾燥食品、冷蔵食品、油脂類、ベビーフード、又はパンに塗られる柔らかい食品、又はこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
本発明はまた、創傷治癒を促進する薬品の製造における上述の抽出物組成物の使用を提供するものである。
【００７８】
本発明はまた、創傷治癒を促進する必要がある被検体における創傷治癒を促進するための方法を提供し、上記方法は、有効量の上述の抽出物組成物及び任意に薬学的に許容可能なキャリア又は賦形剤を上記被検体に投与するステップを含む。
【００７９】
好ましくは、本発明による抽出物組成物は、皮膚細胞遊走を促進することにより、創傷治癒を促進する。本発明の好ましい一実施形態では、抽出物組成物は、ケラチン生成細胞遊走を促進でき、皮膚細胞は好ましくはケラチン生成細胞である。別の態様では、本発明による動物モデルにおいて、抽出物組成物は糖尿病患者における創傷治癒を促進でき、創傷は好ましくは糖尿病性創傷である。
【００８０】
本発明の一実施形態では、大豆種子抽出物及び大豆種子揮発性画分を含む組成物は、創傷閉鎖において、クリーム基剤と比較して有意な効果（ｐ＜０．５）を有し、大豆種子抽出物は、創傷閉鎖において大豆種子揮発性画分より良好な結果を呈する。
【００８１】
本発明の別の一実施形態では、糖尿病性創傷の治癒に対する効果を調査するために、異なる用量レベルの大豆種子抽出物を、大豆種子揮発性画分と組み合わせて使用する。結果は、創傷治癒に関して、大豆種子抽出物と大豆種子揮発性画分との組み合わせ効果が、大豆種子揮発性画分単独より良好であることを示す。最も高い投与量の大豆種子抽出物において最も効果的な組み合わせ治療が見られた。
【００８２】
本発明の一実施形態では、皮膚ケラチン生成細胞遊走の促進に対する効果をアッセイするために、大豆種子抽出物及び大豆種子揮発性画分を単独で又は組み合わせて使用する。結果は、皮膚ケラチン生成細胞遊走の促進に関して、大豆種子抽出物と大豆種子揮発性画分との組み合わせ効果が、大豆種子抽出物又は大豆種子揮発性画分単独より良好であることを示す。
【００８３】
本発明はまた、神経細胞増殖を促進する並びに／又は脳疾患及び／若しくは神経変性疾患を治療する薬品の製造における、上述の抽出物組成物の使用を提供するものである。
【００８４】
本発明はまた、神経細胞増殖を促進する並びに／又は脳疾患及び／若しくは神経変性疾患を治療する必要がある被検体において、神経細胞増殖を促進する並びに／又は脳疾患及び／若しくは神経変性疾患を治療するための方法を提供し、上記方法は、有効量の上述の抽出物組成物及び任意に薬学的に許容可能なキャリア又は賦形剤を上記被検体に投与するステップを含む。
【００８５】
好ましくは、神経細胞は中枢神経系細胞であり、より好ましくは脳神経細胞であり、更に好ましくは神経芽細胞腫細胞である。
【００８６】
本発明による脳疾患及び／又は神経変性疾患は、血管性認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、脳血管疾患、炎症性脳損傷、炎症反応の周囲の脳損傷、脳病変、脳血腫、腫脹脳室及び脳室拡張からなる群から選択される。
【００８７】
本発明の一実施形態では、大豆種子抽出物、大豆種子揮発性画分、並びに大豆種子抽出物及び大豆種子揮発性画分を含む抽出物組成物を使用して、ヒトの神経芽細胞腫細胞を治療する。結果は、大豆種子抽出物、大豆種子揮発性画分、及び大豆種子抽出物、大豆種子揮発性画分を含む抽出物組成物で処理した後、細胞生存率が有意に上昇することを示す。従って、大豆種子抽出物、大豆種子揮発性画分、並びに大豆種子抽出物及び大豆種子揮発性画分を含む抽出物組成物は、神経細胞増殖の促進に対して効果を有する。
【００８８】
本発明の別の一実施形態では、大豆種子抽出物及び大豆種子揮発性画分を含む抽出物組成物で処理した後の、認知症ラット動物モデルの放射状迷路試験において、全記憶誤り及び参照記憶誤りは、非処理グループより有意に少ない。これは、大豆種子抽出物及び大豆種子揮発性画分を含む抽出物組成物が、認知症のラットの治療に対して効果を有することを示す。
【００８９】
本発明の別の一実施形態では、大豆種子抽出物及び大豆種子揮発性画分を含む抽出物組成物で処理した後の、認知症ラット動物モデルの放射状迷路試験において、全記憶誤り及び参照記憶誤りは、非処理グループより有意に少ない。これは、大豆種子抽出物及び大豆種子揮発性画分を含む抽出物組成物が、認知症のラットの治療に対して効果を有することを示す。
【００９０】
血管性認知症のモデルにおいて、結果は、血管性認知症によって引き起こされる記憶障害が、本発明による抽出物組成物による処理後に、有意に改善されることを示す。大豆種子揮発性画分並びに大豆種子抽出物及び大豆種子揮発性画分を含む抽出物組成物の両方は、作業記憶誤り、参照記憶誤り及び全記憶誤りを改善する。大豆種子揮発性画分単体と比較して、大豆種子抽出物及び大豆種子揮発性画分を含む抽出物組成物は、血管性認知症によって引き起こされる記憶障害の治療に対してより良好な効果を有する。
【００９１】
本発明はまた、乳癌を治療する薬品の製造における、上述の抽出物組成物の使用を提供するものである。
【００９２】
本発明はまた、乳癌の治療を必要とする被検体において、乳癌を治療するための方法を提供し、上記方法は、有効量の上述の抽出物組成物及び任意に薬学的に許容可能なキャリア又は賦形剤を上記被検体に投与するステップを含む。
【００９３】
好ましくは、乳癌はｐ５３変異型を有する乳癌である。
【００９４】
本発明の好ましい一実施形態では、ヒト乳癌細胞株のｐ５３変異型を使用して、マウスにおける腫瘍成長を観察するために、原発部位における状況を模擬するための動物モデルを確立する。ヒトにおける投与を模擬する場合、異なる濃度の本発明による抽出物組成物を投与する。これは、本発明による抽出物組成物が、担腫瘍マウスにおける腫瘍成長速度の抑制に対して効果を有することを示す。
【００９５】
本発明はまた、ＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ複製剤を妨げる副作用を低減する、並びに／又はＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ複製剤を妨げる薬学的効果を増強する薬品の製造における、上述の抽出物組成物の使用を提供するものである。
【００９６】
本発明はまた、ＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ複製剤を妨げる副作用を低減する、並びに／又はＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ複製剤を妨げる薬学的効果を増強する必要がある被検体において、ＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ複製剤を妨げる副作用を低減する、並びに／又はＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ複製剤を妨げる薬学的効果を増強するための方法を提供し、上記方法は、有効量の上述の抽出物組成物及び任意に薬学的に許容可能なキャリア又は賦形剤を上記被検体に投与するステップを含む。
【００９７】
本明細書中で使用される用語「ＤＮＡ及び／又はＲＮＡ複製剤を妨げる（ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ＤＮＡ  ａｎｄ／ｏｒ  ＲＮＡ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｄｒｕｇｓ）」は、有糸分裂に不可欠なＤＮＡ及び／又はＲＮＡ複製のプロセスを阻むことにより、腫瘍細胞を死滅させる薬剤を指す。好ましくは、ＤＮＡ及び／又はＲＮＡ複製剤を妨げる薬剤は、シクロホスファミド、テモゾロミド、ヘキサメチルメラミン、白金錯体、ブレオマイシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、パクリタキセル、ドセタキセル、葉酸拮抗剤、プリン拮抗剤、又はピリミジン拮抗剤である。
【００９８】
本発明の好ましい一実施形態では、ヒト乳癌細胞株を使用して、原発部位における状況を模擬するための動物モデルを確立する。シクロホスファミドを投与した担腫瘍マウスと比較して、本発明による抽出物組成物は、担腫瘍マウスにおける腫瘍成長速度の抑制に対して、化学療法剤の増強効果を有する。本発明による抽出物組成物は、腫瘍成長を抑制し、腫瘍サイズの削減に対する化学療法剤の増強効果を有し、腫瘍の圧迫を減少させることにより痛みを軽減し、従って患者はより良好な生活の質を得ることができる。
【００９９】
本発明の実践において当業者を助けるために以下の実施例を提供する。
実施例
大豆種子抽出物（ＧＭＡ１）
大豆（ダイズ種）の種子を粉砕して粉末とし、７０重量％のエタノール又は蒸留水を抽出溶液として適用し、大豆種子と抽出溶液との比（ｗ／ｖ）は約１：１０であった。大豆種子を約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）の気圧及び約４５℃の温度で抽出して粗抽出物を得た。上記粗抽出物から固体を除去して液体部分を得た。減圧凝縮器により上記液体部分を更に凝縮して、凝縮固体部分を得た。上記凝縮固体部分を更に７０℃で乾燥させた。
【０１００】
大豆種子揮発性画分（ＧＭＣ１）
大豆（ダイズ種（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ  （Ｌ．）Ｍｅｒｒ．））の種子を粉砕して粉末とし、２重量％のエタノール又は蒸留水を第２の抽出溶液として適用し、大豆種子と第２の抽出溶液との比（ｗ／ｖ）は約１：１０であった。揮発性大豆種子をロータリエバポレータ中で約１ａｔｍ（１０１３２５Ｐａ）の圧力及び約９０℃未満の温度で気化させ、冷水を供給した凝縮管を通過させることにより、大豆種子揮発性画分を得た。
【０１０１】
大豆種子抽出物（ＧＭＡ１）及び大豆種子揮発性画分（ＧＭＣ１）の分析
得られた大豆種子抽出物（ＧＭＡ１）及び大豆種子揮発性画分（ＧＭＣ１）を、ＣａｒｂｏＰａｃ  ＰＡ１分析（４ｘ２５０ｍｍ）カラムを用いたイオンクロマトグラフィアッセイに供した。移動相は８７％が水、１３％が５００ｍＭ  ＮａＯＨであり、内部標準はマルトース一水和物である。定組成溶離を１．０ｍｌ／分の低速かつ０．５秒のサイクルで適用した。全てのサイクルにおいて、アッセイを、０．００秒〜０．２秒において０．１Ｖ；０．２秒〜０．４秒において０．１Ｖ；０．４１秒〜０．４２秒において−２．０Ｖ；０．４３秒において０．６Ｖ；０．４４秒〜０．５秒において−０．１Ｖの相対電位で実施し、アッセイの総継続期間は５５分であった。
【０１０２】
大豆種子抽出物（ＧＭＡ１）の分光写真を図１〜３に示す。ピーク時間を表１に示す。
【０１０３】
大豆種子揮発性画分（ＧＭＣ１）の分光写真を図４〜６に示す。ピーク時間を表２に示す。
【０１０４】
ごく少量のイソフラボン類を含有する大豆種子抽出物（ＧＭＡ１）及びイソフラボン類を含有しない大豆種子揮発性画分（ＧＭＣ１）
揮発性高性能液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）を適用して、大豆種子抽出物（ＧＭＡ１）及び大豆種子揮発性画分（ＧＭＣ１）がイソフラボン類を含有しているかどうかをアッセイした。
【０１０５】
ＨＰＬＣの条件は以下に列挙した。
【０１０６】
装置：日立ＨＰＬＣ  ＣＭ５０００  Ｓｅｒｉｅｓ；ポンプ：ＣＭ５１１０；検出器：ＣＭ５４３０（ＤＡＤ）；自動供給システム：ＣＭ５２１０；カラムオーブン：ＣＭ５３１０；ソフトウェア：ＯｐｅｎＬａｂ。カラム：ＲＰ  Ｃ１８、４．６×２５０ｍｍ  ５μｍ；検出波長：ＵＶ  ２５４ｎｍ；流速：０．８分／ｍｌ；カラムオーブン温度：３０℃；勾配：表３に示す通り。
【０１０７】
【表３】
0006417576.tif 000004
【０１０８】
イソフラボン類標準のＨＰＬＣ分光写真を図７に示し、ここでピークは１８．８５３分及び２４．６９３分の保持時間において発生した。
【０１０９】
大豆種子揮発性画分（ＧＭＣ１）のＨＰＬＣ分光写真を図８に示し、ここでピークは発生しなかった。
【０１１０】
０．３重量部の大豆種子抽出物（ＧＭＡ１）及び１重量部の大豆種子揮発性画分（ＧＭＣ１）を含有する軟膏のＨＰＬＣ分光写真を図９に示し、ここでピークは、１７．３０７分、１９．３１３分、２０．２６７分、２０．８５３分、２４．３０７分及び２５．２４７分の保持時間において発生した。
【０１１１】
図７〜９を比較すると、これは図８の大豆種子揮発性画分（ＧＭＣ１）のＨＰＬＣ分光写真においてピークは発生せず、従って大豆種子揮発性画分（ＧＭＣ１）はイソフラボン類を含有せず、イソフラボン類指紋吸収ピークに対応するピークは、図９の０．３重量部の大豆種子抽出物（ＧＭＡ１）及び１重量部の大豆種子揮発性画分（ＧＭＣ１）を含有する抽出物組成物のＨＰＬＣ分光写真において、ごく少量発生することを示す。変換後、ダイジンの含有量は４．８μｇ／ｍｌであり、ゲニスチンの含有量は８．２３μｇ／ｍｌであり、上記含有量はイソフラボン類の薬学的に有効な量から離れている。従って、大豆種子抽出物（ＧＭＡ１）はごく少量のイソフラボン類しか含有せず、上記ごく少量のイソフラボン類はイソフラボン類の薬学的効果を呈さない。
【０１１２】
創傷治癒を促進するための抽出物組成物
材料及び方法
およそ８週齢の、体重範囲２５０ｇ〜３００ｇのオスのＳＤラットを、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ、台湾から得た。７日間の隔離後、体重が３５０ｇ超とならなかったラットを移動した。ラットを動物の耳刻によって識別した。各ケージには、ケージ番号、研究番号、性別及びグループ名を記したラベルを付した。ラットは、ＡＡＡＬＡＣ公認の動物施設においてポリカーボネートケージに、ケージ１個あたり２頭ずつ収容した。
【０１１３】
環境条件は：温度２１±２℃；湿度５０±２０％；光サイクル：１２時間は明るく、１２時間は暗い、というものであった。Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ５００１（ＰＭＩＲ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｉｎｃ．，  ＭＯ，米国）を、研究期間全体を通して自由裁量で供給した。ケージに取り付けられたボトルを介して、水道水を自由裁量で供給した。
実験方法
表４に従って試料（試験物品）を調製した。
【０１１４】
【表４】
0006417576.tif 000005
【０１１５】
ＣＧＳ−２１６８０：２４８．４ｇのクリーム基剤に１．６７ｍｇのＣＧＳ−２１６８０を添加することにより調製された、特異的アデノシンＡ２Ａサブタイプ受容体アゴニスト。
【０１１６】
糖尿病のラット：体重３００ｇ超のラットに、静脈内注射によって１用量のストレプトゾトシン（ＳＴＺ、６５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。２カ月にわたり高血糖（３００ｍｇ／ｄＬ超）を有するＳＴＺ−誘発ラットを選択して、創傷閉鎖試験を行った。
【０１１７】
糖尿病のラットのための外傷手術：重量３００ｇ未満の糖尿病のラットを排除し、残りを無作為に６つのグループに分けた。続いてラットをペントバルビタールで麻酔し、手術領域（背部領域）上の毛を除去した。各ラットにおいて、背部中間領域上の３つの皮膚（２つの肩甲骨の中心点から４、６及び８ｃｍ）を、丸歯切断刃を用いて切除（全層）した。
【０１１８】
薬物治療及び創傷閉鎖測定：動物を重量測定し、創傷閉鎖の評価のために創傷の面積を１日おきに測定した。各創傷に薬を１日２回塗布し、創傷をチーズクロスで覆った。創傷が動物の引っ掻きを受けるのを防ぐために、ラットの首にフードを着けた。創傷閉鎖測定のために、４日目、６日目、８日目、１０日目、１２日目及び１４日目に創傷の写真を撮影した。写真を撮影する際、標準的な定規を創傷のそばに置いた。Ｉｍａｇｅ  ｐｒｏ（Ｍｅｄｉａ  ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ社）を用いて創傷を分析する前に、異なる写真距離によって引き起こされるエラーを回避するために、写真中の標準的な定規を用いて長さを標準化した。
【０１１９】
データ分析及び統計：ラットの背部上の３つの創傷面積を、Ｉｍａｇｅ  ｐｒｏによって分析した。元の創傷面積は、０日目の面積であった。元の創傷面積から異なる時点における創傷面積を引き、続いて元の創傷面積で除算して、創傷閉鎖パーセンテージを得る。各ラットの３つの創傷閉鎖パーセンテージの平均は、各ラットの創傷閉鎖を表す。データは、平均±標準誤差（ＳＥＭ）として示した。試験結果のｐ値は、統計ソフトウェア（ＳＹＳＴＡＴ、Ｓｙｓｔａｔ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ）のｔ検定によって計算した。Ｐ＜０．０５は有意な差が存在することを意味し、これは＊で印を付けられる。Ｐ＜０．０１は極めて有意な差が存在することを意味し、これは＊＊で印を付けられる。Ｐ＜０．００１は過度に有意な差が存在することを意味し、これは＊＊＊で印を付けられる。
【０１２０】
結果：
薬物治療後、創傷面積を異なる時点において測定し、統計ソフトウェアを用いて創傷閉鎖パーセンテージを分析し、これを表５及び図１０に示した。４日目において、グループ：クリーム基剤、ＣＧＳ−２１６８０、ＧＭＣ１及び０．３％ＧＭＡ１に関する創傷閉鎖パーセンテージはそれぞれ、−８３．３３±６．６０（％）、２１．８７±５．６１（％）、−１１．４４±４．３４（％）及び−７．０９±３．６５（％）である。全ての処理グループは、実験期間全体を通して、クリーム基剤グループとは有意に異なる。８日目〜１０日目において、創傷閉鎖パーセンテージは、主にＧＭＣ１及び３％ＧＭＡ１で処理したグループによって高まり、−４．１０±３．０４（％）から４０．１５±６．４７（％）、及び２１．２１±５．５２（％）から６２．１９±３．８５（％）に変化した。１４日目において、ＧＭＣ１及び３％ＧＭＡ１の創傷閉鎖パーセンテージはそれぞれ８６．２０±１．８８（％）及び９１．２±２．２３（％）であり、クリーム基剤の５８．９２±１３．１４（％）と比較して有意に高まった。
【０１２１】
【表５】
0006417576.tif 000006
【０１２２】
結果は、０．３％ＧＭＡ１及びＧＭＣ１の両方が、クリーム基剤担体と比較して創傷閉鎖に有効であり、０．３％ＧＭＡ１で処理したグループが、創傷閉鎖においてＧＭＣ１より僅かに良好な結果を示すことを示す。
【０１２３】
糖尿病性創傷の閉鎖の促進におけるＧＭＡ１とＧＭＣ１との最適な組み合わせを調査した。異なる用量レベルのＧＭＡ１：０．００９％、０．０４５％及び０．０９％をＧＭＣ１と組み合わせて使用した。比較のために、クリーム基剤及びＣＧＳ−２１６８０も組み込んだ。
【０１２４】
薬物治療後、創傷面積を異なる時点において測定し、統計ソフトウェアを用いて創傷閉鎖パーセンテージを分析し、これを表６及び図１１に示した。表６及び図１１に示すように、クリーム基剤グループと比較することにより、組み合わせ薬剤グループにおけるＧＭＡ１用量レベルの増加、即ちＧＭＡ１が０．００９％、０．０４５％及び０．０９％となるのに伴って、統計的優位性の上昇が観察される。結果は、創傷閉鎖に関して、異なる用量レベル：０．００９％、０．０４５％、０．０９％のＧＭＡ１のＧＭＣ１との組み合わせ効果が、ＧＭＣ１単独より良好であることを示す。最も高い投与量のＧＭＣ１（０．０９％）において最も有効な組み合わせ治療が見られる。
【０１２５】
【表６】
0006417576.tif 000007
【０１２６】
皮膚細胞遊走を促進するための抽出物組成物
抽出物組成物の皮膚細胞遊走の促進に対する効果をアッセイするために、ＨａＣａＴ細胞（ヒト皮膚ケラチン生成細胞）を使用した。
【０１２７】
細胞遊走アッセイの試料は：
Ａ１−０．３：０．３μｇ／ｍＬのＧＭＡ１を含有
Ａ１−０．３−ＣＳＴＣ−２５００Ｘ：２５００倍に希釈したＧＭＣ１及び０．３μｇ／ｍＬのＧＭＡ１を含有
細胞株：ＨａＣａＴ
培地：１０％ウシ胎児血清を含有するＤＭＥＭ
陽性対照：ＣＧＳ−２１６８０
細胞培養：ＨａＣａＴ細胞を、１０％ウシ胎児血清を含有するＤＭＥＭ中で、３７℃、ＣＯ２５％で培養し、週に２回継代培養した。
【０１２８】
創傷治癒アッセイ：Ｏｒｉｓ  Ｃｅｌｌ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ  ｋｉｔを適用した。細胞を、ストッパ付き９６ウェルプレートに播種し（４×１０４細胞／ウェル）、炭酸ガスインキュベータ中で培養した。一晩中培養した後、ストッパを引き抜き創傷を生成し、新たな培地又は試験物品を含有する培地又はＣＧＳ−２１６８０（陽性対照）を追加した。０、１６及び２４時間にわたる処理後、光学顕微鏡下で１００倍の拡大観察で細胞を観察し、創傷治癒を監視するために写真を撮影した。
【０１２９】
分析：ｉｍａｇｅ  ｊのソフトウェアを適用して、創傷治癒面積を定量化した。０時間の時点の面積を、創傷の元のサイズとした。一定の期間後、創傷面積は徐々に減少し、０時間の時点の元の面積に対して創傷面積を計算することによって創傷治癒の程度を定量化して（治癒速度＝Ｔ１６又はＴ２４時点における面積とそのＴ０／Ｔ０面積との間の差）、薬剤のＨａＣａＴ細胞遊走活性に対する効果を評価した。
【０１３０】
統計：各グループを少なくとも４回繰り返した。データは、平均±標準誤差（ＳＥＭ）として示した。試験結果の有意性は、ｔ検定によって計算した。
結果：
ＧＭＣ１及びＧＭＡ１の創傷治癒の促進に対する効果を比較するために、ＨａＣａＴ細胞遊走アッセイを用いる。２５００倍に希釈したＧＭＣ１及び０．３μｇ／ｍＬのＧＭＡ１の組み合わせ効果（Ａ１−０．３−ＣＳＴＣ−２５００Ｘ）は、ＨａＣａＴ細胞遊走の促進において、Ａ１−０．３より良好である（図１２）。
【０１３１】
神経細胞増殖を促進するための抽出物組成物
材料及び方法：
細胞株：ヒト神経芽細胞腫細胞ＩＭＲ−３２（Ｆｏｏｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、台湾から購入）
試薬：ＨｙＣｌｏｎｅ（商標）ＤＭＥＭ／高グルコース培地（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）、ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｇｉｂｃｏ（登録商標））、ＨｙＣｌｏｎｅ（登録商標）リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）、抗生物質抗真菌剤溶液（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ／Ｆｕｎｇｉｚｏｎｅ  １００ｘ；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）、トリパンブルー、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物（ＭＴＴ）、及びジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｓｉｇｍａ社）。
【０１３２】
装置：ラミナーフロー（ＶＥＲＴＩＣＡＬ  ＨＦ−４ＢＨ）
細胞株：ＩＭＲ−３２細胞を、１０％のウシ胎児血清を追加したＤＭＥＭ／高グルコース培地において、３７℃、ＣＯ２５％の加湿空気中で培養した（ＨｙＣｌｏｎｅ）。
【０１３３】
ＩＭＲ−３２細胞を、１０％のＦＢＳを追加した１００μＬの培養培地を含む９６ウェルプレートに、密度５ｘ１０４で２４時間播種した。投与後、培養培地を５％のＦＢＳを追加した１００μＬの培地に変更し、続いて、各グループに関して、２５ｍｇ／ｍＬのＧＭＣ１、２５ｍｇ／ｍＬのＧＭＡ１、ＧＭＣ１＋０．３％のＧＭＡ１（ＧＭ）又はＰＢＳ（対照グループ）及び１０％のＦＢＳを追加した１００μＬの培地（陽性対照グループ）となるよう処方した。各グループを９６ウェルプレートにおいて少なくとも７回繰り返し、ＭＴＴアッセイのために７２時間インキュベートした。
【０１３４】
ＭＴＴアッセイ：培養皿をインキュベータから取り出し、ラミナーフローフードの中に移した。各ウェルに関して、培地を、０．５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ試薬を含む１００μＬの血清非含有培地に置き換え、３０〜６０分インキュベートした。同量のＤＭＳＯを各ウェルに添加し、５分間振とうした。ＥＬＩＳＡリーダにおいて、５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【０１３５】
データ分析及び統計：ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６を用いて結果を分析し、統計分析のためにＴ検定を使用した。示されたデータは、細胞生存率±ＳＥＭのパーセンテージレートであった。
結果：
細胞生存率レートを表７〜９及び図１３〜１５に示す。細胞生存率レートは、２５ｍｇ／ｍＬのＧＭＡ１（表７及び図１３）、２５ｍｇ／ｍＬのＧＭＣ１（表８及び図１４）又はＧＭＣ１＋０．３％のＧＭＡ１（ＧＭ、表９及び図１５）で処理した後、ＰＢＳ対照グループと比較して、有意に上昇する。
【０１３６】
【表７】
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【０１３７】
【表８】
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【０１３８】
【表９】
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【０１３９】
脳疾患及び／又は神経変性疾患を治療するための抽出物組成物
（Ｉ）誘発された認知症
材料及び方法：
およそ６週齢の、体重範囲２５０ｇ〜３００ｇのオスのラットを、ＢｉｏＬＡＳＣＯ、台湾から得た。７日間の隔離後、体重が３５０ｇ超とならなかったラットを移動した。ラットを尾の入れ墨によって識別した。各ケージには、ケージ番号、研究番号、性別及びグループ名を記したラベルを付した。ラットは、動物施設においてポリカーボネートケージに、ケージ１個あたり２頭ずつ収容した。
【０１４０】
環境条件は：温度２５±１℃；湿度６０±５％；光サイクル：１２時間は明るく、１２時間は暗い、というものであった。研究期間全体を通して、Ａｌｔｒｏｍｉｎ  １３２４  ＦＯＲＴＩ（ドイツ）を自由裁量で供給した。ケージに取り付けられたボトルを介して、水道水を自由裁量で供給した。
【０１４１】
グループを表１０に示した。
【０１４２】
【表１０】
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【０１４３】
認知症誘発：
８週齢のラットに、１５ｍｇ／ｍＬのＡｌＣｌ３溶液を１００ｍｇ／ｋｇの用量で毎日経口投与して、認知症と同様の症状を誘発した。ラットを表１０に示すグループに分け、試験物品を頭部及び頸部領域に３０秒間メッセージをしながら局所的に塗布し、５週目〜１１週目に鼻粘膜に塗布した。１１週目に訓練を開始し、そして１１週目に、放射状迷路によって記憶能力を評価した。治療中、ラットには継続的にＡｌＣｌ３を与えた。
【０１４４】
放射状迷路：放射状迷路は、ラットの空間学習及び記憶を測定するための最も一般的な方法の１つである。放射状迷路は、Ｏｌｔｏｎによって７０年代に設計された。これは、空腹のラットに各アームの端部にある食物を確認させ、ラットをある期間内に迷路内の餌の場所を覚えるように訓練することに基づく。これにより、ラットの作業記憶（短期記憶と呼ぶ）及び参照記憶（長期記憶と呼ぶ）を同時に測定できる。放射状迷路を図１６に示す。サイズ：（Ａ）１２２ｃｍ；（Ｂ）４７ｃｍ；（Ｃ）３０ｃｍ；（Ｄ）１０ｃｍ；（Ｅ）２０ｃｍ。
【０１４５】
ラットを１週間にわたり環境に慣らした。各ラットの重さを量り、２４時間絶食させた。実験の前に、ラットの体重を元の体重の８０〜８５％となるよう維持し、通常の食餌の６０％を毎日の訓練（１日２回）後に与えた。１日目及び２日目、アーム及び中央プラットフォームに餌をばらまいた。４頭のラットを同時に中央プラットフォームに置き、１０分間迷路を探検させた。３日目及び４日目、各アームの端部に餌を置いた。各ラットを別個に中央プラットフォームに置き、食物が尽きるまでラットに迷路を探検させた。ラットが１０分以内に全ての食物を食べ尽くさなかった場合、訓練を停止した。５〜１４日目、４つの固定アームの端部に餌を置いた。各ラットを中央プラットフォームに置き、４つのアーム上の餌が尽きるまで迷路を探検させた。ラットが１０分以内に全ての食物を食べ尽くさなかった場合、訓練を停止した。アームへの入場を自動的に記録及び分析した。各ラットを１日２回訓練し、２つの訓練の間は１時間置いた。
【０１４６】
以下の３つのインジケータを分析した：
ａ：作業記憶（短期記憶）誤り（ＷＭＥ）：餌を付けたアームへの再入場の回数。
【０１４７】
ｂ：参照記憶（長期記憶）誤り（ＲＭＥ）：餌を付けていないアームへの再入場の回数。
【０１４８】
ｃ：全記憶誤り（ＴＭＥ）：ＷＭＥ＋ＲＭＥ
これら３つのインジケータは、ラットの学習及び記憶の能力を表し、これは脳損傷のレベルと共に上昇する。
【０１４９】
データ分析及び統計：統計分析のために、スチューデントのｔ検定及びｒｅｐｅａｔｅｄ  ＡＮＯＶＡを用いた。示されたデータは、各グループの平均結果±ＳＥＭであった。ＡｌＣｌ３グループのデータを通常のグループと比較して、統計的優位性を計算した。また、ＡｌＣｌ３グループのデータをＡｌＣｌ３＋Ｎ２群とも比較して、統計的優位性を計算した。ｐ＜０．０５である場合、これは＊で印を付けられる。ｐ＜０．０１である場合、これは＊＊で印を付けられる。
結果：
重金属誘発性認知症はアルツハイマー病と類似していることが報告されている。これらは両方とも、アミロイド前駆体タンパク質の形成を誘発し、これは老人斑及び神経原線維濃縮体の形成につながる。従って本発明者らは、重金属誘発性認知症ラットを、大豆種子抽出物及び大豆種子揮発性画分を含有する抽出物組成物の、アルツハイマー様疾患に対する効果を理解するための動物モデルとして採用した。結果を図１７〜１９に示す。図１７を参照すると、４日目のラットの追跡進路は、ＡｌＣｌ３＋Ｎ２グループのラットが訓練後に自身の記憶によって餌の場所に到達でき、ＡｌＣｌ３グループ及びＡｌＣｌ３＋クリーム基剤グループがそうでないことを示唆する。図１８を参照すると、ＡｌＣｌ３グループ及びＡｌＣｌ３＋クリーム基剤グループのＴＭＥ値は、有意な差を示さず（ｐ＞０．０５）、大豆種子抽出物及び大豆種子の揮発性画分を含む抽出物組成物の処理後４日目のＴＭＥ値は、ＡｌＣｌ３グループのＴＭＥ値より有意に低い（ＡｌＣｌ３＋Ｎ２  ｐ＝０．０１２８）。これは、大豆種子抽出物及び大豆種子の揮発性画分を含む抽出物組成物が、認知症のラットの治療に対して効果を有することを示す。図１９を参照すると、ＡｌＣｌ３グループ及びＡｌＣｌ３＋クリーム基剤グループのＲＭＥ値は、有意な差を示さず（ｐ＞０．０５）、大豆種子抽出物及び大豆種子の揮発性画分を含む抽出物組成物の処理後４日目のＲＭＥ値は、ＡｌＣｌ３グループのＲＭＥ値より有意に低い（ｐ＝０．００４６）。これは、大豆種子抽出物及び大豆種子の揮発性画分を含む抽出物組成物が、ラットの長期記憶の復元に対して効果を有することを示す。結果は、放射状迷路試験において、ＡｌＣｌ３グループの誤りは対照グループより有意に高いことを示し、これはＡｌＣｌ３によるラットにおける認知症の誘発の成功を表す。参照記憶の記憶障害もまた、大豆種子抽出物及び大豆種子の揮発性画分を含む抽出物組成物で処理した後に有意に改善される。これは、大豆種子抽出物及び大豆種子の揮発性画分を含む抽出物組成物が認知症の治療に効能を有することを示す。
【０１５０】
（ＩＩ）血管性認知症：
材料及び方法：
グループを表１１に示した。
【０１５１】
【表１１】
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【０１５２】
ラット及び動物施設は（Ｉ）誘発された認知症で説明した通りである。
【０１５３】
ラットを、１：１．５のケタミン−Ｒｏｍｐｕｎ混合物で麻酔し（０．１ｍＬ／１００ｇ、腹腔内）、手術プレート上に固定した。両方の総頸動脈を背部頸部領域における正中頸部切開によって露出させ、これらを絹縫合糸を用いて二重結紮した。創傷を縫合し、ラットを回復するまで暖かい光の下に置いた。
【０１５４】
クリーム基剤（Ｍ）、ＧＭＣ１（Ｍ１）、及びＧＭＣ１＋０．５％ＧＭＡ１（Ｍ３）を、頭部及び頸部領域に３０秒間マッサージをしながら局所的に塗布し、また鼻粘膜に塗布した。治療を４週間継続し、最後の２週間にラットの記憶を放射状迷路によって測定した。放射状迷路試験は、（Ｉ）誘発された認知症で説明した通りである。
【０１５５】
データ分析及び統計：統計分析のために、対応の無い場合のｔ検定及び２要因ＡＮＯＶＡを用いた。示したデータは、各グループの平均結果±ＳＥＭであった。シャムグループのデータを２ＶＯグループと比較して、統計的優位性を計算した。薬剤で処理したグループを２ＶＯグループと比較して、統計的優位性を計算した。Ｐ＜０．０５は有意な差が存在することを意味し、これは＊で印を付けられる。Ｐ＜０．０１は極めて有意な差が存在することを意味し、これは＊＊で印を付けられる。
結果：
２ＶＯグループの誤りの回数はシャムグループより有意に高く（図２０〜２３）、これは両側頸動脈結紮によるラットにおける血管性認知症の誘発の成功を指し、血管性認知症によって引き起こされた記憶障害は、２週間のＭ１及びＭ３による処理後に有意に改善する。ＶＤラットの脳のコンピューター断層撮影の結果によると、両方の総頸動脈（２ＶＯ）の両側閉塞は、脳組織の腫脹、軟化、組織分解、又は血餅形成さえ引き起こし、従って認知症を誘発した。脳損傷は、Ｍ１及びＭ３による処理後に有意に減少する。
乳癌を治療するための、並びにＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ複製剤を妨げる副作用を低減するための、並びに／又はＤＮＡ及び／若しくはＲＮＡ複製剤を妨げる薬学的効果を増強するための抽出物組成物
材料
細胞株及び試薬：ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（Ｆｏｏｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、台湾から購入）；ペニシリン−ストレプトマイシン−ネオマイシン混合物（１００ｘ）、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及びダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）をＧｉｂｃｏから購入；シクロホスファミド（ＣＴＸ，Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標））。
【０１５６】
動物施設：およそ６〜８週齢のメスのＢＡＬＢ／ｃＡｎＮ．Ｃｇ−Ｆｏｘｎ１ｎｕ／ＣｒｌＮａｒｌマウスを、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｎｔｅ、台湾から入手した。環境条件は、温度：２５±１℃；湿度：６０±５％；独立した大気条件；制御された光サイクル、というものであった。研究期間中、水及び食物を自由裁量で供給した。マウスは、実験動物委員会の標準的な手順に従って収容した。
【０１５７】
担腫瘍マウス誘発：ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（ヒト乳癌細胞）を５×１０６細胞まで培養し、メスのヌードマウスの注射に必要な細胞を、トリプシンを用いて回収し、腫瘍の誘発のためにＰＢＳ溶液中で再懸濁した。ヌードマウスの腫瘍を１００μＬの細胞溶液の皮下注射により誘発し、通常の食餌となるようケージ内に再び放した。腫瘍が約３００ｍｍ３となったとき、マウスを異なる用量の抽出物組成物の局所投与に供し、ＣＴＸグループ及び非ＣＴＸグループにグループ分けした。抽出物組成物の効能を理解するために、重量、食欲、血糖及び腫瘍サイズ成長を毎週観察して、ヌードマウスの通常の生理学的状態の外観を評価した。
【０１５８】
担腫瘍マウス及び処理のグループ分け：腫瘍が約３００ｍｍ３となったとき、マウスを表１２に示すグループ分けに供した。化学療法剤（１週間に１回注射）を抽出物組成物と共に投与した。腫瘍領域、腫瘍の周りの皮膚、及び背中の皮膚全体に対して、処理グループに０．１ｇ／日の投与量で局所投与した。５週間の処理後、ヌードマウスの重量、食欲、血糖及び腫瘍サイズ成長を観察した。
【０１５９】
【表１２】
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【０１６０】
担腫瘍マウスの臨床的評価：重量、食欲、血糖及び腫瘍サイズを含む、担腫瘍マウスの生理学的状態及び腫瘍サイズを評価した。腫瘍サイズを：腫瘍体積（ｍｍ３）＝ａｂ２／２に従って計算して、腫瘍成長速度を評価した。
【０１６１】
結果：
処理後の、ヒト乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１によって誘発された担腫瘍マウスにおいて、抽出物組成物Ｊ１及びＪ２は、ヌードマウスにおける腫瘍成長の抑制に対して効果を示す。生理学状態の評価において、抽出物組成物グループは、より良好な食欲及び血糖値を示す。
【０１６２】
【表１３】
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【０１６３】
ＧＭＣ１＋０．５％ＧＭＡ１（ＮＯ  ＣＴＸ＋Ｌ５）グループにおいて、これは、抽出物組成物がヌードマウスにおける腫瘍成長を抑制することを示す（図２６）。
【０１６４】
通常のグループと比較して、腫瘍＋化学療法剤クループ（ＣＴＸグループ）、抽出物組成物＋化学療法剤クループ（ＣＴＸ＋Ｌ１グループ及びＣＴＸ＋Ｌ５グループ）の生理学的状態及び腫瘍成長を評価した。表１４並びに図２６及び２７を参照すると、ＣＴＸ＋Ｌ１グループ及びＣＴＸ＋Ｌ５グループの結果は、体重、平均食物摂取量及び平均血糖に影響を及ぼすことなく、化学療法剤を投与した担腫瘍マウスにおける腫瘍の削減に対する、化学療法剤の効果を増強させることを示す（表１５〜１７）。
【０１６５】
【表１４】
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【０１６６】
【表１５】
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【０１６７】
【表１６】
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【０１６８】
【表１７】
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【０１６９】
臨床的に、癌治療の放棄に関する主要な原因の１つは、癌によって引き起こされる癌性疼痛である。癌性疼痛は、一部は腫瘍によって引き起こされ、主に内臓、末梢神経及び骨への腫瘍の侵入によって引き起こされる炎症及び神経圧迫によるものであることが分かっている。抽出物組成物は、腫瘍成長を効果的に抑制し、また癌によって引き起こされる癌性疼痛を部分的に抑制し、治療に役立つ。
【０１７０】
本発明を、上述の特定の実施形態と併せて説明したが、それらに対する多数の代替例並びにそれらの修正例及び変形例が、当業者には明らかであろう。全てのこのような代替例、修正例及び変形例は、本発明の範囲内に含まれるものと見なされる。
【図１】
0006417576.tif 000019
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
0006417576.tif 000030
【図１３】
0006417576.tif 000031
【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
0006417576.tif 000034
【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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