(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｃ−ＭＡＦ遺伝子の発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数の増加を、肺がんを有する被験体における転移および／または肺がんを有する被験体において転移を起こす傾向の指標とするインビトロでの方法であって、
（ｉ）前記被験体の腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子の発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数を定量する工程、ならびに
（ｉｉ）工程（ｉ）で得られた発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数をコントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数と比較する工程を含み、
前記遺伝子の発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数が、前記コントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数と比較して上昇している場合、前記被験体は、転移について陽性の診断を有するかまたは転移を起こす傾向がより高い、方法。
【請求項２】
ｃ−ＭＡＦ遺伝子の発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数の増加を、肺がんを有する被験体のための個別化治療のデザインの指標とするインビトロでの方法であって、
（ｉ）前記被験体の腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子の発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数を定量する工程、ならびに
（ｉｉ）工程（ｉ）で得られた発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数をコントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数と比較する工程を含み、
前記腫瘍サンプル中の前記発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数が、前記コントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数と比較して上昇している場合、前記被験体は、転移の予防および／または処置を目指す治療、ならびに／あるいは骨分解の予防を目指す治療を受けるのに適格である、方法。
【請求項３】
前記骨分解を予防する薬剤が、ビスホスホネート、ＲＡＮＫＬインヒビター、ＰＴＨまたはＰＴＨＬＨ（中和抗体およびペプチドを包含する）インヒビターまたはＰＲＧアナログ、ラネル酸ストロンチウム、ＤＫＫ−１インヒビター、ＭＥＴおよびＶＥＧＦＲ２の二重インヒビター、ラジウム２２３、カルシトニン、およびカテプシンＫインヒビターからなる群より選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＲＡＮＫＬインヒビターが、ＲＡＮＫＬ特異的抗体およびオステオプロテゲリンからなる群より選択され、および／または前記ビスホスホネートが、ゾレドロン酸である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＲＡＮＫＬ特異的抗体が、デノスマブである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルの定量が、前記遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）または前記ｍＲＮＡのフラグメント、前記遺伝子の相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）または前記ｃＤＮＡのフラグメントを定量する工程、あるいは前記遺伝子によってコードされるタンパク質またはそのバリアントのレベルを定量する工程を含む、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
ｃ−ＭＡＦレベルを、肺がんを有する被験体における転移および／または肺がんを有する被験体において転移を起こす傾向の指標とするインビトロでの方法であって、ｃ−ＭＡＦ遺伝子が前記被験体の腫瘍サンプルにおいて増幅しているかどうかを決定する工程を含み、前記遺伝子が増幅している場合、前記被験体は、転移について陽性の診断を有するかまたは転移を起こす傾向がより高い、方法。
【請求項８】
前記肺がんが、ＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅の程度が、遺伝子座１６ｑ２２−ｑ２４の増幅の程度を決定することによって決定される、請求項７または請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅の程度が、ｃ−ＭＡＦ遺伝子特異的プローブを使用することによって決定される、請求項７または請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記コントロールサンプルが、転移に罹患していない被験体由来の肺がんの腫瘍組織サンプルである、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記増幅の程度、発現レベルまたはコピー数が、インサイチュハイブリダイゼーションまたはＰＣＲによって決定される、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記転移が、骨転移である、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
肺がんに罹患している被験体における前記がんの骨転移を予測するためのキットであって、前記キットは：ａ）前記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数を定量するための手段；およびｂ）前記サンプル中の定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数をｃ−ＭＡＦの参照の発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数と比較するための手段を備える、キット。
【請求項１５】
ｃ−ＭＡＦ遺伝子の発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数を、肺がんに罹患している被験体についての指標とするインビトロでの方法であって、前記方法は：
ａ）前記被験体からのサンプルを提供する工程；
ｂ）前記サンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数を定量する工程；ならびに
ｃ）前記サンプル中で定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数をｃ−ＭＡＦの発現、増幅の程度および／またはコピー数の所定の参照レベルと比較する工程；を含み、ここで、前記遺伝子の発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数が、前記遺伝子の発現、増幅の程度および／またはコピー数の所定の参照レベルと比較して上昇している場合、前記被験体は、不良な予後および転移について陽性の診断を有するか、あるいは転移を起こす傾向がより高い、インビトロでの方法。
【請求項１６】
肺がんに罹患している被験体を骨転移の上昇したリスクを有するコホートに分類するためのキットであって、前記キットは、ａ）前記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数を決定するための手段；およびｂ）前記サンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数をｃ−ＭＡＦの発現、増幅の程度および／またはコピー数の所定の参照レベルと比較するための手段を含み、前記被験体は、前記サンプル中のｃ−ＭＡＦの前記発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数に基づいて、コホートに分類されることを特徴とする、キット。
【請求項１７】
肺がんに罹患している被験体のサンプルをタイプ分けするためのキットであって、前記キットは：ａ）前記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数を定量するための手段；およびｂ）ｃ−ＭＡＦの参照の発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数との比較において、前記サンプル中の前記定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベル、増幅の程度および／またはコピー数をタイプ分けするための手段；を備え、ここで、前記タイプ分けは、前記被験体における骨転移のリスクに関する予後情報を提供する、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表への言及
本願とともに出願され、電子的に提出される配列表（「３１９０００２ＰＣ０１ＳＥＱＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」、４８，３９２バイト、２０１３年６月６日に作成）の内容は、その全体が参照により本明細書中に援用される。
【０００２】
関連出願の引用
本願は、２０１２年６月６日に出願した米国仮特許出願第６１／６５６，３７２号に対する米国特許法第１１９条（ｅ）項の下での優先権を主張し、この出願は、その全体が本明細書に参考として援用される。
【０００３】
発明の背景
発明の分野
本発明は、ｃ−ＭＡＦ遺伝子が原発腫瘍サンプルにおいて増幅されたかどうかの決定に基づく、転移、特に骨転移、特に肺がんの診断または予後診断に関する。同様に、本発明は、肺がんにおける転移の診断または予後診断のための方法に関し、ならびに肺がんを有する被験体において個別化治療（ｃｕｓｔｏｍｉｚｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ）をデザインするための方法にも関し、その方法は、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の発現レベルを決定する工程を含む。最後に、本発明は、肺がんの転移、特に、骨転移の処置のための治療標的としてのｃ−ＭＡＦインヒビターの使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
背景技術
様々な重要な器官において腫瘍細胞と周囲の正常組織との間の込み入った相互作用によって引き起こされる複雑なプロセスである転移は、固形腫瘍を有する患者における、すべてのがんによる死亡の９０パーセントを占める。原発性腫瘍に転移を形成させる分子機序および細胞機序は、この生命を脅かす大きな問題に対してよりよく対処するために理解されなければならない。転移遺伝子および機序の同定は、この致命的な状態の基本的な生物学および臨床的な実践に対するその関係の理解にとって不可欠である。以前の研究は、転移プロセスが複雑であるという認識をもたらしたが、それは、転移がどのように、また、なぜ生じるのか、どのような機序が転移を組織特異的なプロセスにするのか、原発性腫瘍の摘出後何年も経過してからどのような事象が休止状態の転移を活性で致命的にするのか、どのような転移媒介性遺伝子が、最終的に、価値のある診断マーカーおよび治療標的になるのかについて説明できなかった。
【０００５】
肺骨特異的転移
肺がんは、肺の組織におけるコントロール不良の細胞成長によって特徴付けられる疾患である。未処置のままであると、この成長は、近くの組織、そして最終的には身体の他の部分へ、転移と呼ばれるプロセスにおいて肺を越えて広がり得る。原発性肺がんとして知られている、肺で始まるほとんどのがんは、上皮細胞に由来するがん腫である。世界的に、肺がんは、男性および女性におけるがん関連性の死亡の最も一般的な原因であり、２００４年の時点で、毎年１３０万人の死亡の原因となっている。最も一般的な症状は、息切れ、咳（喀血を含む）、および体重減少である。
【０００６】
肺がんは、４つの主なタイプの肺がんおよび複数の副次的なまたはまれな形態からなる。臨床病理学的な理由で、それらは、燕麦細胞がんとも呼ばれる小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）および非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）の広範なカテゴリーに分けられることが多い。ＮＳＣＬＣは、３つの主なタイプである扁平上皮がん（ＳＣＣ）、腺がん、および大細胞がんにさらに分けられる。大細胞がんが、がんの他のタイプの、分化が乏しいまたは未分化の形態を示すかもしれないので、それは、漠然と定義される存在であり、その診断のための基準は、広く変動する。肺がんの最も一般的な原因は、タバコの煙への長期的な曝露である。非喫煙者は、肺がんの症例の１５％を占め、これらの症例は、遺伝要因、ラドンガス、アスベスト、および副流煙を含む大気汚染の組み合わせに帰することが多い。
【０００７】
他の多くのがんと同様に、肺がんは、癌遺伝子の活性化または腫瘍抑制遺伝子の不活性化によって開始される。癌遺伝子は、人々をがんによりかかりやすくすると考えられる遺伝子である。癌原遺伝子は、特定の発癌物質に曝露された場合、癌遺伝子に変わると考えられる。Ｋ−ｒａｓ癌原遺伝子における突然変異は、肺腺がんの１０〜３０％の原因となる。上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）は、細胞増殖、アポトーシス、血管新生、および腫瘍浸潤を調節する。ＥＧＦＲの突然変異および増幅は、非小細胞肺がんにおいて一般的であり、ＥＧＦＲインヒビターによる処置のための基礎を提供する。Ｈｅｒ２／ｎｅｕは、それほど頻繁には影響を与えられない。染色体の損傷は、ヘテロ接合性の損失に至り得る。これは、腫瘍抑制遺伝子の不活性化を引き起こし得る。染色体３ｐ、５ｑ、１３ｑ、および１７ｐに対する損傷は、小細胞肺がんにおいて特に一般的である。染色体１７ｐ上に位置するｐ５３腫瘍抑制遺伝子は、症例の６０〜７５％において影響を与えられている。突然変異するまたは増幅することが多い他の遺伝子は、ｃ−ＭＥＴ、ＮＫＸ２−１、ＬＫＢ１、ＰＩＫ３ＣＡ、およびＢＲＡＦである。
【０００８】
いくつかの遺伝的多型は、肺がんに関連する。これらは、インターロイキン−１、シトクロムＰ４５０、カスパーゼ−８などのようなアポトーシスプロモーター、およびＸＲＣＣ１などのようなＤＮＡ修復分子をコードする遺伝子における多型を含む。これらの多型を有する人々は、発癌物質への曝露の後に肺がんを起こす可能性がより高い。
【０００９】
分類
肺がんは、組織学的なタイプに従って分類される。この分類は、この疾患の臨床上の管理および予後に対して重要な関係を有する。大多数の肺がんは、がん腫−上皮細胞から発生する悪性疾患である。顕微鏡下で組織病理学者によって見られる悪性細胞のサイズおよび外観によって分類される２つの最も優勢な組織学的なタイプの肺がん腫は、非小細胞肺がんおよび小細胞肺がんである。非小細胞タイプは、圧倒的に最も優勢である。
【００１０】
転移する、すなわち広がる肺がんは、病理学者がかなりの確実性を伴って腫瘍が肺から発生した、すなわち、原発性肺がんであると言うのを可能にする細胞マーカープロファイルを保持することが多いので、肺の外側で見つけられたがんは、肺の内部で発生したと決定され得る。腺がんと組織診断された原発性肺がんは、典型的に、ＴＴＦ−１による核免疫染色を有する。
【００１１】
非小細胞肺がん
非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）は、それらの予後および管理が類似しているので、一まとめにされる。３つの主なサブタイプがある：扁平上皮細胞肺がん、腺がん、および大細胞肺がん。
【００１２】
扁平上皮細胞肺がんは、肺がんの２５％を占め、普通、中心の気管支の近くで始まる。空洞および関連する壊死は、腫瘍の中心に共通して見つけられる。十分に分化した扁平上皮細胞肺がんは、他のがんのタイプよりもゆっくりと成長することが多い。
【００１３】
腺がんは、非小細胞肺がんの４０％を占める。それは、普通、肺周辺組織から生じる。腺がんのほとんどの症例は、喫煙に関連するが、喫煙したことがない人々（「喫煙未経験者」）の間で、腺がんは、肺がんの最も一般的な形態である。腺がんのサブタイプである細気管支肺胞上皮がんは、女性の喫煙未経験者においてより一般的であり、処置に対して異なる応答を有し得る。
【００１４】
小細胞肺がん
小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）は、それほど一般的ではない。それは、以前は、「燕麦細胞」がん腫と呼ばれた。ほとんどの症例は、より大きな気道（主気管支および二次気管支）において発生し、急速に成長して、かなり大きくなる。小細胞は、高密度の神経分泌顆粒（神経内分泌ホルモンを含有する小胞）を含有し、これは、この腫瘍に、内分泌／腫瘍随伴症候群の関連性を与えるものである。最初のうちは化学療法および放射線に対してより感受性であるが、それは、診察時に転移性であることが多く、最終的に、より悪い予後を伴う。小細胞肺がんは、長い間、限局期（ｌｉｍｉｔｅｄ  ｓｔａｇｅ）および進展期（ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ  ｓｔａｇｅ）疾患に二分して段階づけられてきた。このタイプの肺がんは、喫煙に強く関連する。
【００１５】
予後診断
非小細胞肺がんにおける予後因子は、肺の症状の存在または非存在、腫瘍サイズ、細胞型（組織診断）、複数のリンパ節への伝播（期）および転移の程度、ならびに血管浸潤を含む。手術不可能な疾患を有する患者については、予後は、不良なパフォーマンスステータスおよび１０％より多くの体重減少によって悪影響を与えられる。小細胞肺がんにおける予後因子は、診断の時のパフォーマンスステータス、性別、疾患の期、および中枢神経系または肝臓の関与を含む。
【００１６】
非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）については、予後は、一般に不良である。ＩＡ期疾患の完全な外科的切除後、５年生存率は、６７％である。ＩＢ期疾患では、５年生存率は、５７％である。ＩＶ期  ＮＳＣＬＣを有する患者の５年生存率は、約１％である。
【００１７】
小細胞肺がんについては、予後はまた、一般に不良である。ＳＣＬＣを有する患者についての全般的な５年生存率は、約５％である。進展期ＳＣＬＣを有する患者は、１％未満の平均５年生存率を有する。限局期疾患についての生存期間中央値は、２０か月であり、５年生存率は２０％である。
【００１８】
Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによって提供されるデータによれば、米国における肺がんの診断時の年齢中央値は７０歳であり、死亡時の年齢中央値は７２歳である。米国において、医療保険を有する人々は、より良好な転帰を有する可能性が高い。
【００１９】
転移
原発性肺がんは、それら自体、最も一般的には、副腎、肝臓、脳、および骨に転移する。
【００２０】
骨格転移は、進行期肺がんにおいて生じ、それらは、高レベルの罹患率をもたらす。骨転移疾患の最初の診断時に、治療的介入は、多くは痛みを軽減することを目的とした待期的な選択肢である、全身性化学療法、放射線治療、およびビスホスホネートを普通含む。
【００２１】
健康な骨格の骨において、新しい骨基質の形成および古い骨基質の吸収の均しいバランスは、骨を分解する破骨細胞と骨を形成する骨芽細胞との協調した活性を介して達成される。転移骨疾患の間に、骨吸収と骨形成との正常なバランスは、浸潤する腫瘍細胞、骨芽細胞、および破骨細胞の間で生じるホモタイプおよびヘテロタイプの細胞間相互作用によって破壊される。肺がんに関連するものを含む二次性骨腫瘍を有するほとんどの患者は、溶骨性病変の症状を示す。そのため、転移骨疾患において現在使用されているまたは評価段階にあるほとんどの処置戦略は、破骨細胞の骨分解活性の上昇から骨基質を保護するようにデザインされてきた。肺の骨転移溶骨性病変は、乳房のものとともに、一般的な特徴であり、前立腺がんとは対照的である。後者において、去勢抵抗性の前立腺がんおよび転移骨疾患において存在するさらなる合併症は、骨形成病変もしくは骨芽細胞病変としても知られている骨硬化性病変または混合型病変とも呼ばれる溶骨性病変および骨硬化性病変の両方の組み合わせである。骨硬化性病変は、網状の外観および機械的な強度の低下を有する、不十分に組織化されたＩ型コラーゲン原線維の複数の層を有する骨沈着物が典型である。肺がん骨転移および乳がん骨転移の一般的な表現型の特徴に基づいて、このプロセスが、類似する分子機序をはっきり示す可能性がある。
【００２２】
肺がん細胞は、それぞれのサブタイプの間でも、ゲノム異常により誘導される転写の変化を高忠実度で維持する。結果として生じるドミナント遺伝子は、系全般において実質的なゲノム、転写、翻訳、および生物学的な不均一性が存在するにもかかわらず、転移性の転帰を予測する分子事象を明らかにするであろう。しかしながら、がんの発生の経緯により、部位特異的な転移についての異なるまたは共通の媒介物質がもたらされるかどうかは未知である。起源となる細胞と関係する素因は、転移性の進行の間に様々な律速的な障壁を生じさせ得る。本特許は、骨への転移を予測するための詳細な新しい予後因子についての期および治療標的としてのそれらの潜在的な価値を定めることを目指す。
【００２３】
固形腫瘍がんを有する患者のほとんどが転移後に死亡するという事実は、腫瘍を転移させる分子機序および細胞機序を理解することが極めて重要であることを意味している。最近の刊行物は、まだほとんど知られていない複雑な機序によってどのようにして転移が引き起こされるか、およびまた、どのようにして種々の転移細胞型が特定の器官に対する指向性を有するかを示してきた。これらの組織特異的な転移細胞は、それらを特定の器官に転移増殖させる（ｃｏｌｏｎｉｚｅ）、獲得した一連の機能を有する。
【００２４】
しかしながら、ＮＳＣＬＣ肺がんなどのような特定の肺がんに罹患している患者が転移に罹患するであろうか否かの診断および／または予後診断を可能にし、したがって、適した治療を、上記がんに罹患している被験体に適用することができる遺伝子マーカーは現在の技術水準にない。それゆえ、肺がんに罹患している被験体における転移の存在の診断、および／または肺がんに罹患している被験体が転移、特に骨転移を起こす確率の予測を可能にする新しいマーカーを同定する必要がある。新しい予後因子の同定は、最も適した処置の選択において指針となる。
【００２５】
骨転移を予測するマーカーの同定は、肺細胞による骨転移性組織の広がりおよび転移増殖に制限を課すことによって予防的な治療上の機会を提供し、致命的な状態を遅延させるまたは変える。本発明者らは、好ましい実施形態である溶骨性前立腺骨転移において、真の関連性の肺がん骨転移遺伝子およびゲノムの変化としてｃ−ＭＡＦおよび１６ｑ２２−２４ゲノムの増加を同定した。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２６】
（発明の簡単な概要）
本発明者らは、播種性肺がん細胞転移、特に骨転移に影響を与えるシグナルのバランスの同定が、この疾患の予後診断を確立するためのおよびこの疾患に対する予防的な治療的介入のための有益な情報を提供するということを決定した。本発明者らは、肺から骨への転移病変、特に溶骨性骨転移を駆動する際に役割を果たしているとしてＭＡＦおよび１６ｑ２２−２４ゲノムの増加を同定した。
【００２７】
本発明者らは、肺がんが転移、特に骨転移を引き起こす傾向がより高いことに関連するマーカーとしてｃ−ＭＡＦを同定した。ＭＡＦ過剰発現は、ｃ−ＭＡＦ遺伝子が位置する遺伝子座１６ｑ２２−ｑ２４の増幅によるように思われる。
【００２８】
ｃ−ＭＡＦ発現レベルを、２つの患者コホートにおいて研究した。第１のコホートは、肺がんを有する患者由来の原発性腫瘍についての発現プロファイルおよび臨床上の注記を含有した。第２の患者コホートは、骨への転移を起こした９つの腫瘍、骨以外の他の部位への転移を起こし、５年間の最小限の臨床上の経過観察を有した１６の腫瘍、および転移を起こさず、５年間の最小限の臨床上の経過観察を有する４９の肺原発性腫瘍を含む肺原発性腫瘍生検材料から構成される組織マイクロアレイの形態をしており、腫瘍細胞および腫瘍生検材料におけるｃ−ＭＡＦの遺伝子（ｍＲＮＡ）およびタンパク質の発現は、観察された再発、転移、骨転移、および全生存を含んだ様々な臨床パラメーターと陽性に相関する。さらに、これらの研究は、肺がん転移、特に骨転移における予後診断のためのマーカーおよび標的遺伝子としてのｃ−ＭＡＦの役割を示した。同様に、発明者らは、ｃ−ＭＡＦ遺伝子を含む遺伝子座１６ｑ２２−ｑ２４の増幅を、肺がんを有する被験体における転移、特に骨転移の存在と関連させた。
【００２９】
したがって、第１の態様において、本発明は、肺がんを有する被験体における転移の診断および／または肺がんを有する被験体において転移、特に骨転移を起こす傾向の予後診断のためのインビトロでの方法であって、
（ｉ）上記被験体の腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルまたは１６ｑ２２−２４コピー数の増加を定量する工程および
（ｉｉ）以前に得られた発現レベルまたはコピーをコントロールサンプル中の上記遺伝子の発現レベルと比較する工程を含み、
コントロールサンプルにおける上記遺伝子の発現レベルと比較して、上記遺伝子の発現レベルが上昇しているかまたはゲノム領域が増幅されている場合、上記被験体は、転移について陽性の診断を有するかまたは転移、特に骨転移を起こす傾向がより高い方法に関する。
【００３０】
第２の態様において、本発明は、肺がんを有する被験体のための個別化治療をデザインするためのインビトロでの方法であって、
（ｉ）上記被験体の腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルまたは１６ｑ２２−２４コピー数の増加を定量する工程および
（ｉｉ）以前に得られた発現レベルをコントロールサンプル中の上記遺伝子の発現レベルと比較する工程を含み、
コントロールサンプルにおける上記遺伝子の発現レベルと比較して、発現レベルが上昇しているかまたは１６ｑ２２−２４コピー数が増加している場合、上記被験体は、転移の予防および／または処置を目指す治療を受けるのに適格である方法に関する。この方法の特定の態様において、被験体は、その後、骨転移を予防する、阻害する、および／または処置する少なくとも１つの治療を投与される。上記参照値と比較して、発現レベルが上昇しないまたは１６ｑ２２−２４コピー数が増加しない場合、上記被験体は、骨転移の予防、阻害、および／または処置を目指す治療を受けるのに適格ではない。本方法の特定の態様では、次いで、被験体は、骨転移を予防、阻害、および／または処置する少なくとも１つの治療が投与されない。いくつかの態様において、参照値は、転移に罹患していない被験体由来の肺がんのサンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルである。いくつかの態様において、肺がんは、ＳＣＬである。いくつかの実施形態において、肺がんは、ＮＳＣＬＣである。いくつかの態様において、肺がんは、肺腺がんである。
【００３１】
第３の態様において、本発明は、骨転移を有する肺がんを有する被験体のための個別化治療をデザインするためのインビトロでの方法であって、
（ｉ）上記被験体の骨転移性腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルまたは１６ｑ２２−２４コピー数の増加を定量する工程および
（ｉｉ）工程（ｉ）において得られた発現レベルをコントロールサンプル中の上記遺伝子の発現レベルと比較する工程を含み、
コントロールサンプルにおける上記遺伝子の発現レベルと比較して、ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルまたは１６ｑ２２−２４コピー数増加が上昇している場合、上記被験体は、骨分解の予防を目指す治療を受けるのに適格である方法に関する。この方法の特定の態様において、被験体は、その後、骨転移を予防する、阻害する、および／または処置する少なくとも１つの治療を投与される。上記参照値と比較して、ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルが上昇しないまたは１６ｑ２２−２４コピー数が増加しない場合、上記被験体は、骨分解の予防のための治療を受けるのには適格ではない。本方法の特定の態様では、次いで、被験体は、骨転移を予防、阻害、および／または処置する少なくとも１つの治療が投与されない。
【００３２】
第４の態様において、本発明は、肺がんを有する被験体における転移の診断および／または肺がんを有する被験体において転移を起こす傾向の予後診断のためのインビトロでの方法であって、ｃ−ＭＡＦ遺伝子が上記被験体の腫瘍組織サンプルにおいて増幅しているまたは転座しているかどうかを決定する工程を含み、上記遺伝子がコントロールサンプルと比較して増幅している場合、上記被験体は、転移について陽性の診断を有するかまたは転移を起こす傾向がより高い方法に関する。この方法の特定の態様において、被験体は、その後、骨転移を予防するまたは阻害する少なくとも１つの治療を投与される。この方法の特定の態様において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子が上記被験体の腫瘍組織サンプルにおいて増幅していないまたは転座していない場合、被験体は、骨転移を予防、阻害および／または処置する少なくとも１つの治療が投与されない。特定の態様において、ｃ−ＭＡＦの平均より高い発現レベルは、骨転移のリスク増加を示し、このリスクは、ｃ−ＭＡＦ発現のレベルに比例する。特定の態様において、ｃ−ＭＡＦの発現レベルが、平均レベルと比較して、平均＋１標準偏差より高い場合、上記被験体は、早期の骨転移を起こす傾向がより高いと結論づけられ得る。
【００３３】
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している患者の臨床転帰を予測するためのインビトロでの方法に関し、その方法は、上記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子が、参照遺伝子コピー数と比べて増幅されているかを決定する工程を含み、ここで、上記参照遺伝子コピー数と比較したときのｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅は、不良な臨床転帰を示す。この方法の特定の態様において、被験体は、その後、骨転移を予防する、阻害するおよび／または処置する少なくとも１つの治療を投与される。そのような増幅が観察されない場合、被験体は、その後、骨転移を予防する、阻害するおよび／または処置する少なくとも１つの治療を投与されない。第７の態様の別の実施形態において、本発明は、肺がんに罹患している患者の臨床転帰を予測するためのインビトロでの方法に関し、その方法は、上記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子が、転座しているかを決定する工程を含み、ここで、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の転座（例えば、ｔ（１４，１６））は、不良な臨床転帰を示す。いくつかの実施形態において、本発明は、ｃ−ＭＡＦの増幅または転座を有する患者のために個別化治療をデザインすることに関する。いくつかの実施形態において、個別化治療は、骨転移を予防する、阻害するおよび／または処置する少なくとも１つの治療薬である。
【００３４】
第５の態様において、本発明は、肺がん転移、特に骨転移を処置するおよび／または予防するための医薬製品の調製におけるｃ−ＭＡＦ阻害剤の使用に関する。別の態様において、本発明は、肺がんからの骨転移の予防における使用のためのｃ−ＭＡＦ阻害剤に関する。いくつかの態様において、本発明は、骨分解の回避または予防における使用のためのｃ−ＭＡＦ阻害剤に関する。
【００３５】
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患しており、かつ転移腫瘍組織サンプルにおいてコントロールサンプルと比較して上昇したｃ−ＭＡＦレベルまたは１６ｑ２２−２４コピー数の増加を有する被験体における骨転移の処置のための医薬製品の調製における、骨分解を回避するかもしくは予防することができる薬剤の使用に関する。
【００３６】
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している被験体における上記がんの骨転移を予測するためのキットに関し、そのキットは：ａ）上記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを定量するための手段；およびｂ）上記サンプル中の定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベルを参照ｃ−ＭＡＦ発現レベルと比較するための手段を備える。本発明はまた、そのようながんに罹患している被験体における肺がんの骨転移を予測するためのそのようなキットの使用に関する。１つの実施形態において、被験体は、その後、そのキットを使用した結果に基づいて、骨転移を予防する、阻害する、および／もしくは処置する少なくとも１つの治療を投与されるまたはその治療が投与されない。
【００３７】
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している被験体における肺がんの骨転移を予測するためのキットに関し、そのキットは：ａ）上記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅、１６ｑ２３または１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅または転座を定量するための手段；およびｂ）上記サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅されたレベル、１６ｑ２３または１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅または転座を参照と比較するための手段を備える。別の態様において、本発明は、肺がんからの骨転移に罹患している被験体の臨床転帰を予測するためのキットに関し、そのキットは：ａ）上記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルまたは１６ｑ２３もしくは１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅もしくは転座を定量するための手段；およびｂ）上記サンプル中の定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベルまたは１６ｑ２３もしくは１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅もしくは転座を参照ｃ−ＭＡＦ発現レベルまたは１６ｑ２３もしくは１６ｑ２２−２４遺伝子座と比較するための手段を備える。本発明は、肺がんからの骨転移に罹患している被験体の臨床転帰を予測するための、そのようなキットの使用にも関する。１つの実施形態において、被験体は、その後、そのキットを使用した結果に基づいて、骨転移を予防する、阻害するおよび／もしくは処置する少なくとも１つの治療を投与されるか、またはその治療が投与されない。
【００３８】
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している被験体に対する治療を決定するためのキットに関し、そのキットは：ａ）上記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルまたは１６ｑ２３もしくは１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅もしくは転座を定量するための手段；ｂ）上記サンプル中の定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベルを参照ｃ−ＭＡＦ発現レベルまたは１６ｑ２３もしくは１６ｑ２２−２４遺伝子座と比較するための手段；ならびにｃ）定量された発現レベルと参照発現レベルとの比較に基づいて、上記被験体において骨転移を予防するためおよび／または減少させるための治療を決定するための手段を備える。本発明は、肺がんに罹患している被験体に対する治療を決定するための、そのようなキットの使用にも関する。１つの実施形態において、被験体は、その後、そのキットを使用した結果に基づいて、骨転移を予防する、阻害するおよび／もしくは処置する少なくとも１つの治療を投与されるか、またはその治療が投与されない。
【００３９】
別の態様において、本発明は、ｉ）乳がんに罹患している被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルまたは１６ｑ２３もしくは１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅もしくは転座を定量するための試薬、およびｉｉ）骨転移のリスクと相関するように予め決定されている１つまたは複数のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルまたは１６ｑ２３もしくは１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅もしくは転座の指標を備えるキットに関する。本発明は、肺がんに罹患している被験体における上記がんの骨転移を予測するための、そのようなキットの使用にも関する。１つの実施形態において、被験体は、その後、そのキットを使用した結果に基づいて、骨転移を予防する、阻害するおよび／もしくは処置する少なくとも１つの治療を投与されるか、またはその治療が投与されない。
【００４０】
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している被験体のサンプルをタイプ分けするためのインビトロでの方法に関し、その方法は：
ａ）上記被験体からのサンプルを提供する工程；
ｂ）上記サンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルまたは１６ｑ２３もしくは１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅もしくは転座を定量する工程；
ｃ）定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベルまたは１６ｑ２３もしくは１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅もしくは転座を、ｃ−ＭＡＦ発現の所定の参照レベルまたは１６ｑ２３もしくは１６ｑ２２−２４遺伝子座のコピー数と比較することによって上記サンプルをタイプ分けする工程；
を含み、ここで、上記タイプ分けは、上記被験体における骨転移のリスクに関する予後情報を提供する。１つの実施形態において、被験体は、タイプ分けによって提供される予後情報に基づいて、少なくとも１つの治療を投与されるか、またはその治療が投与されない。
【００４１】
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している被験体における骨転移のリスクを予防するためまたは減少させるための方法に関し、上記方法は、骨転移を予防するかまたは減少させる薬剤を上記被験体に投与する工程を含み、ここで、上記薬剤は、上記被験体におけるｃ−ＭＡＦの発現レベルまたは１６ｑ２３もしくは１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅もしくは転座の定量から決定された処置レジメンに従って投与される。
【００４２】
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している被験体をコホートに分類する方法に関し、その方法は：ａ）上記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルまたは１６ｑ２３もしくは１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅もしくは転座を決定する工程；ｂ）上記サンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルをｃ−ＭＡＦ発現の所定の参照レベルまたは正常ゲノムと比較する工程；およびｃ）そのサンプル中のｃ−ＭＡＦの上記発現レベルまたは１６ｑ２３もしくは１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅もしくは転座に基づいて、上記被験体をコホートに分類する工程を含む。１つの実施形態において、本方法は、骨転移の症状のより早期の症状発現を有すると予測される患者を同定するために使用される。特定の態様において、そのコホートは、臨床試験を行うために使用される。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
肺がんを有する被験体における転移の診断のためのおよび／または肺がんを有する被験体において転移を起こす傾向の予後診断のためのインビトロでの方法であって、
（ｉ）前記被験体の腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルを定量する工程および（ｉｉ）以前に得られた発現レベルをコントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベルと比較する工程を含み、
前記遺伝子の発現レベルが、前記コントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベルと比較して上昇している場合、前記被験体は、転移について陽性の診断を有するかまたは転移を起こす傾向がより高い、方法。
（項目２）
肺がんを有する被験体のための個別化治療をデザインするためのインビトロでの方法であって、
（ｉ）前記被験体の腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルを定量する工程および（ｉｉ）以前に得られた発現レベルをコントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベルと比較する工程を含み、
前記発現レベルが、前記コントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベルと比較して上昇している場合、前記被験体は、転移の予防および／または処置を目指す治療を受けるのに適格である、方法。
（項目３）
前記転移が、骨転移である、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記骨転移が、溶骨性転移である、項目３に記載の方法。
（項目５）
骨転移を有する肺がんを有する被験体のための個別化治療をデザインするためのインビトロでの方法であって、
（ｉ）前記被験体の骨転移性腫瘍組織サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルを定量する工程および
（ｉｉ）工程（ｉ）において得られた発現レベルをコントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベルと比較する工程を含み、
前記ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルがコントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベルと比較して上昇している場合、前記被験体は、骨分解の予防を目指す治療を受けるのに適格である方法。
（項目６）
前記骨分解を予防する薬剤が、ビスホスホネート、ＲＡＮＫＬインヒビター、ＰＴＨまたはＰＴＨＬＨ（中和抗体およびペプチドを包含する）またはＰＲＧアナログ、ラネル酸ストロンチウム、カルシトニン、およびカテプシンＫインヒビターからなる群より選択される、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記ＲＡＮＫＬインヒビターが、ＲＡＮＫＬ特異的抗体およびオステオプロテゲリンからなる群より選択される、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記ＲＡＮＫＬ特異的抗体が、デノスマブである、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記ビスホスホネートが、ゾレドロン酸である、項目６に記載の方法。
（項目１０）
前記肺がんが、ＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣである、項目５〜９のいずれかに記載の方法。
（項目１１）
前記ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルの定量が、前記遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮ
Ａ）または前記ｍＲＮＡのフラグメント、前記遺伝子の相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）または前記ｃＤＮＡのフラグメントを定量する工程を含む、項目１〜１０のいずれかに記載の方法。
（項目１２）
前記発現レベルが、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、またはＤＮＡもしくはＲＮＡアレイによって定量される、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルの定量が、前記遺伝子によってコードされるタンパク質またはそのバリアントのレベルを定量する工程を含む、項目１〜１０のいずれかに記載の方法。
（項目１４）
前記タンパク質のレベルが、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡまたはタンパク質アレイによって定量される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
肺がんを有する被験体における転移を診断するためのおよび／または肺がんを有する被験体において転移を起こす傾向の予後診断のためのインビトロでの方法であって、ｃ−ＭＡＦ遺伝子が前記被験体の腫瘍サンプルにおいて増幅しているかどうかを決定する工程を含み、前記遺伝子が増幅している場合、前記被験体は、転移について陽性の診断を有するかまたは転移を起こす傾向がより高い、方法。
（項目１６）
前記肺がんが、ＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣである、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅が、遺伝子座１６ｑ２２−ｑ２４の増幅を決定することによって決定される、項目１５または項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅が、ｃ−ＭＡＦ遺伝子特異的プローブを使用することによって決定される、項目１５または項目１６に記載の方法。
（項目１９）
コントロールサンプルが、転移に罹患していない被験体由来の肺がんの腫瘍組織サンプルである、項目１５〜１８のいずれかに記載の方法。
（項目２０）
前記増幅が、インサイチュハイブリダイゼーションまたはＰＣＲによって決定される、項目１５〜１９のいずれかに記載の方法。
（項目２１）
前記転移が、骨転移である、項目１５〜２０のいずれかに記載の方法。
（項目２２）
前記骨転移が、溶骨性転移である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
肺がんから骨転移を処置および／または予防するための医薬製品の調製におけるｃ−ＭＡＦ阻害剤の使用。
（項目２４）
前記肺がんが、ＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣである、項目２３に記載の使用。
（項目２５）
前記ｃ−ＭＡＦ阻害剤が、ｃ−ＭＡＦ特異的ｓｉＲＮＡ、ｃ−ＭＡＦ特異的アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｃ−ＭＡＦ特異的リボザイム、ｃ−ＭＡＦ阻害性抗体、ドミナント陰性ｃ−ＭＡＦバリアント、および表１または表２からの化合物からなる群から選択される、項目２３または２４に記載の使用。
（項目２６）
肺がんに罹患しており、転移性腫瘍サンプルにおいてコントロールサンプルと比較して上昇したｃ−ＭＡＦレベルを有すると同定された被験体における骨転移の処置のための医
薬製品の調製における、骨分解を回避または予防することができる薬剤の使用。
（項目２７）
骨分解を回避または予防することができる薬剤が、ビスホスホネート、ＲＡＮＫＬインヒビター、ＰＴＨまたはＰＴＨＬＨ（中和抗体およびペプチドを含む）またはＰＲＧアナログ、ラネル酸ストロンチウム、ＥＧＦＲインヒビター、カルシトニン、ならびにカテプシンＫインヒビターからなる群から選択される、項目２６に記載の使用。
（項目２８）
前記ＲＡＮＫＬインヒビターが、ＲＡＮＫＬ特異的抗体およびオステオプロテゲリンの群から選択される、項目２７に記載の使用。
（項目２９）
前記ＲＡＮＫＬ特異的抗体が、デノスマブである、項目２８に記載の使用。
（項目３０）
前記ビスホスホネートが、ゾレドロン酸である、項目２７に記載の使用。
（項目３１）
前記肺がんが、ＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣである、項目２６〜３０のいずれかに記載の使用。
（項目３２）
前記骨転移が、溶骨性転移である、項目２６〜３１のいずれかに記載の使用。
（項目３３）
前記肺がんが、肺腺がんである、項目１に記載の方法。
（項目３４）
肺がんに罹患している被験体における前記がんの骨転移を予測するためのキットであって、前記キットは：ａ）前記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを定量するための手段；およびｂ）前記サンプル中の定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベルを参照ｃ−ＭＡＦ発現レベルと比較するための手段を備える、キット。
（項目３５）
肺がんに罹患している被験体のサンプルをタイプ分けするためのインビトロでの方法であって、前記方法は：
ａ）前記被験体からサンプルを提供する工程；
ｂ）前記サンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを定量する工程；
ｃ）定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベルをｃ−ＭＡＦ発現の所定の参照レベルと比較することによって前記サンプルをタイプ分けする工程；
を含み、ここで、前記タイプ分けは、前記被験体における骨転移のリスクに関する予後情報を提供する、インビトロでの方法。
（項目３６）
肺がんに罹患している被験体における骨転移のリスクを予防するためまたは減少させるための方法であって、前記被験体は、上昇したｃ−ＭＡＦレベルを有すると同定されており、前記方法は、骨転移を予防するかまたは減少させる薬剤を前記被験体に投与する工程を含み、ここで、前記薬剤は、前記被験体におけるｃ−ＭＡＦの発現レベルの定量から決定された処置レジメンに従って投与される、方法。
（項目３７）
肺がんに罹患している被験体をコホートに分類する方法であって、前記方法は、ａ）前記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを決定する工程；ｂ）前記サンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルをｃ−ＭＡＦ発現の所定の参照レベルと比較する工程；およびｃ）前記サンプル中のｃ−ＭＡＦの前記発現レベルに基づいて、前記被験体をコホートに分類する工程を含む、方法。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】肺原発性腫瘍におけるｃ−ＭＡＦの遺伝子発現は、カプラン・マイヤープロットにおいて観察され、得られたＨＲおよびｐ値によって強調されるように、転移と有意に相関する。
【００４４】
【図２】ａ）原発性腫瘍切除後の肺がん患者の集団全体における任意の時点の骨の無転移生存確率（ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｂｏｎｅ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）を示すカプラン・マイヤープロット。ｂ）免疫組織化学（ＩＨＣ）によって測定したｃ−ＭＡＦ高または低タンパク質発現カテゴリーに従って、肺がん原発性腫瘍生検材料における任意の時点の骨の無転移生存確率を示すカプラン・マイヤープロット。標準的な方法により、受信者動作曲線（ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ  ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  ｃｕｒｖｅ）（ＲＯＣ曲線）に基づいて、ｃ−ＭＡＦ発現カットオフ（ｃｕｔ  ｏｆ）（２０，０００光学密度、Ｏ．Ｄ．単位）を選択した（曲線下面積、ＡＵＣは、０．８０である）。
【００４５】
【図３】ａ）原発性腫瘍切除の時点からの肺がん患者の集団全体における生存確率を示すカプラン・マイヤープロット。ｂ）ｃ−ＭＡＦの高または低タンパク質発現カテゴリーに従って、原発性肺がんにおける生存確率を示すカプラン・マイヤープロット。標準的な方法により、任意の時点の骨転移に基づく受信者動作曲線（ＲＯＣ曲線）に基づいて、ｃ−ＭＡＦ発現カットオフ（ｃｕｔ  ｏｆ）（２０，０００光学密度、Ｏ．Ｄ．単位）を選択した。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
発明の詳細な説明
ｃ−ＭＡＦ発現レベルに基づく肺がん転移の診断および予後診断のための方法
本発明者らは、ｃ−ＭＡＦ遺伝子およびタンパク質が、肺がん転移において過剰発現されること、ならびに原発性肺腫瘍におけるｃ−ＭＡＦ発現レベルが、肺がんの様々な臨床上のパラメーター（特に再発および転移の確率）と相関することを同定した。したがって、ｃ−ＭＡＦ過剰発現は、骨における肺腫瘍転移の発症と相関する。そのため、ｃ−ＭＡＦは、肺がんを有する被験体における転移（特に骨転移）の診断および／または予後診断のためのマーカーとして使用することができる。
【００４７】
したがって、一態様において、本発明は、肺がんを有する被験体における転移の診断および／または肺がんを有する被験体において転移を起こす傾向の予後診断のためのインビトロでの方法（以後、本発明の第１の方法）であって、
（ｉ）上記被験体由来の腫瘍サンプル（例えば肺腫瘍組織、循環肺腫瘍細胞、循環肺腫瘍ＤＮＡ）中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルを定量する工程および
（ｉｉ）以前に得られた発現レベルをコントロールサンプル中の上記遺伝子の発現レベルと比較する工程を含み、
上記遺伝子の発現レベルが、コントロールサンプル中の上記遺伝子の発現レベルと比較して上昇している場合、上記被験体は、転移について陽性の診断を有するかまたは転移（好ましい部位の骨転移で）を起こす傾向がより高い、方法に関する。
【００４８】
ｃ−ＭＡＦ遺伝子（ＭＡＦまたはＭＧＣ７１６８５としても知られるｖ−ｍａｆ筋腱膜性線維肉腫癌遺伝子ホモログ（鳥類））は、ホモ二量体またはヘテロ二量体のように作用するロイシンジッパーを含む転写因子である。ＤＮＡ結合部位に応じて、コードされるタンパク質は、転写活性化因子または転写抑制因子であり得る。ｃ−ＭＡＦをコードするＤＮＡ配列は、アクセッション番号ＮＧ＿０１６４４０（配列番号１）としてＮＣＢＩデータベースに記載されている。ｃ−ＭＡＦのコード配列は、配列番号１３に示されている。上記ＤＮＡ配列からは２つのメッセンジャーＲＮＡが転写され、その各々が、２つのｃ−ＭＡＦタンパク質アイソフォーム、αアイソフォームおよびβアイソフォームのうちの１つを生じる。上記アイソフォームの各々に対する相補ＤＮＡ配列は、それぞれ、アクセッション番号ＮＭ＿００５３６０．４（配列番号２）およびＮＭ＿００１０３１８０４．２（配列番号３）としてＮＣＢＩデータベースに記載されている。
【００４９】
本発明の文脈においては、「転移」は、最初にがんが生じた器官から異なる器官へのがんの伝播として理解されている。転移は、通常、血液またはリンパ系を通じて起きる。がん細胞が広がって、新しい腫瘍を形成するとき、後者は、二次性腫瘍または転移性腫瘍と呼ばれる。二次性腫瘍を形成しているがん細胞は、元の腫瘍のがん細胞に似ている。肺がんが、例えば、骨に広がる（転移する）場合、二次性腫瘍は、悪性の肺がん細胞から形成される。その骨における疾患は、転移性肺がんであって、骨がんではない。本発明の方法の特定の実施形態において、転移は、骨に広がった（転移した）肺がんである。
【００５０】
本発明において、「肺がんを有する被験体における転移の診断」は、そのサインを研究することによって、すなわち本発明の文脈において、コントロールサンプルと比較した、肺がん腫瘍組織中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルの上昇（すなわち過剰発現）によって、疾患（転移）を同定することと理解される。
【００５１】
本発明において、「肺がんを有する被験体における転移を起こす傾向の予後診断」は、上記被験体が有する肺がんが今後転移するであろうかどうかをサインに基づいて知ることと理解される。本発明の文脈において、サインは、腫瘍組織中のｃ−ＭＡＦ遺伝子過剰発現である。
【００５２】
本発明の方法は、第１の工程において、被験体由来の腫瘍組織サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルを定量する工程を含む。
【００５３】
好ましい実施形態において、本発明の第１の方法は、単一のマーカーとしてｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルのみを定量する工程を含む、すなわち、この方法は、何らかのさらなるマーカーの発現レベルを決定する工程を含まない。
【００５４】
本明細書中で使用されるとき、用語「被験体」または「患者」とは、哺乳動物として分類されるすべての動物のことを指し、それらとしては、家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ａｎｉｍａｌ）および家畜（ｆａｒｍ  ａｎｉｍａｌ）、霊長類およびヒト、例えば、人間、非ヒト霊長類、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコまたはげっ歯類が挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、被験体は、任意の年齢または人種のヒトの男性または女性である。
【００５５】
用語「不良」または「良好」は、本明細書中で使用されるとき、被験体が好ましいまたは好ましくない転帰を示すことを意味する臨床転帰のことを指す。当業者によって理解されるように、そのような確率の評価は、診断される被験体の１００％に対して正しいことが好ましいが、正しくない場合もある。しかしながら、この用語は、被験体の統計学的に有意な一部が、所与の転帰についての素因を有すると同定され得ることを要求する。ある一部が統計学的に有意であるかどうかは、当業者によって、様々な周知の統計評価ツール、例えば、信頼区間の決定、ｐ値の決定、スチューデントｔ検定、マン・ホイットニー検定などを使用して容易に決定され得る。詳細には、ＤｏｗｄｙおよびＷｅａｒｄｅｎ，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８３に見出される。好ましい信頼区間は、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％である。ｐ値は、好ましくは、０．０５、０．０１、０．００５もしくは０．０００１またはそれ未満である。より好ましくは、集団の被験体の少なくとも約６０パーセント、少なくとも約７０パーセント、少なくとも約８０パーセントまたは少なくとも約９０パーセントが、本発明の方法によって適切に同定され得る。
【００５６】
本発明において、「腫瘍サンプル」は、原発性肺がん腫瘍を起源とするサンプル（例えば、腫瘍組織、循環腫瘍細胞、循環腫瘍ＤＮＡ）と理解される。上記サンプルは、従来の方法、例えば、関連する医学的技法の当業者に周知の方法を用いる生検によって、得ることができる。生検サンプルを得るための方法は、腫瘍を大きな片に分割する工程、または顕微解剖、または当該分野で公知の他の細胞分離方法を含む。腫瘍細胞は、さらに、小ゲージ針を用いた吸引による細胞診によって得ることができる。サンプルの保存および取扱いを単純にするために、サンプルは、ホルマリン中で固定されて、パラフィンに浸され得るか、またはまず凍結されて、次いで、急速凍結を可能にする極低温媒体（ｈｉｇｈｌｙ  ｃｒｙｏｇｅｎｉｃ  ｍｅｄｉｕｍ）への浸漬によってＯＣＴ化合物などの組織凍結媒体に浸され得る。
【００５７】
当業者が理解するように、遺伝子発現レベルは、上記遺伝子の、または上記遺伝子によってコードされるタンパク質のメッセンジャーＲＮＡレベル、ならびに上記遺伝子を含むゲノム領域のコピー数または転座数を測定することによって、定量され得る。
【００５８】
この目的のために、生物学的サンプルは、組織または細胞の構造を物理的にまたは機械的に壊すように処理されて、細胞内の構成要素が核酸を調製するための水溶液中または有機溶液中に放出され得る。核酸は、当業者に公知の商業的に利用可能な方法によって抽出される（Ｓａｍｂｒｏｏｃｋ，Ｊ．ら、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  cｌｏｎｉｎｇ：ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」，第３版，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１−３巻）。
【００５９】
したがって、ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルは、上記遺伝子の転写に起因するＲＮＡ（メッセンジャーＲＮＡまたはｍＲＮＡ）またはあるいは上記遺伝子の相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）から定量され得る。ゆえに、本発明の特定の実施形態において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルの定量は、ｃ−ＭＡＦ遺伝子のメッセンジャーＲＮＡもしくは上記ｍＲＮＡのフラグメント、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の相補ＤＮＡもしくは上記ｃＤＮＡのフラグメントまたはそれらの混合物の定量を含む。
【００６０】
ｃ−ＭＡＦ遺伝子によってコードされるｍＲＮＡレベルまたはその対応するｃＤＮＡのｍＲＮＡレベルを検出するためおよび定量するために、実質的に任意の従来の方法を本発明の範囲内で使用することができる。非限定的な例証として、上記遺伝子によってコードされるｍＲＮＡレベルは、従来の方法、例えば、ｍＲＮＡ増幅および上記ｍＲＮＡ増幅産物の定量を含む方法（例えば、電気泳動および染色、またはあるいはサザンブロットおよび好適なプローブの使用、ノーザンブロットおよび目的の遺伝子（ｃ−ＭＡＦ）のｍＲＮＡの、またはその対応するｃＤＮＡの特異的プローブの使用、Ｓ１ヌクレアーゼを用いたマッピング、ＲＴ−ＰＣＲ、ハイブリダイゼーション、マイクロアレイなど）を用いて、好ましくは、好適なマーカーを使用するリアルタイム定量的ＰＣＲによって、定量され得る。同様に、ｃ−ＭＡＦ遺伝子によってコードされる上記ｍＲＮＡに対応するｃＤＮＡレベルもまた、従来の技法を用いることによって定量され得る；この場合、本発明の方法は、対応するｍＲＮＡの逆転写（ＲＴ）によって、対応するｃＤＮＡを合成し、それに続く増幅および上記ｃＤＮＡ増幅産物の定量のための工程を含む。発現レベルを定量するための従来の方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、２００１（上掲）に見出すことができる。
【００６１】
特定の実施形態において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルは、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）またはＤＮＡもしくはＲＮＡアレイによって定量される。
【００６２】
さらに、ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルは、上記遺伝子によってコードされるタンパク質、すなわち、ｃ−ＭＡＦタンパク質（ｃ−ＭＡＦ）［ＮＣＢＩ，アクセッション番号Ｏ７５４４４］またはｃ−ＭＡＦタンパク質の任意の機能的に等価なバリアントの発現レベルを定量することによっても定量され得る。２つのｃ−ＭＡＦタンパク質アイソフォーム、４０３アミノ酸で構成されているαアイソフォーム（ＮＰ＿００５３５１．２）（配列番号４）および３７３アミノ酸で構成されているβアイソフォーム（ＮＣＢＩ，ＮＰ＿００１０２６９７４．１）（配列番号５）が存在する。ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルは、いずれかのｃ−ＭＡＦタンパク質アイソフォームの発現レベルを定量することによって定量され得る。したがって、特定の実施形態において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子によってコードされるタンパク質のレベルの定量は、ｃ−ＭＡＦタンパク質の定量を含む。
【００６３】
本発明の文脈において、「ｃ−ＭＡＦタンパク質の機能的に等価なバリアント」は、（ｉ）アミノ酸残基の１つまたは複数が、保存されたまたは保存されていないアミノ酸残基（好ましくは、保存されたアミノ酸残基）によって置換された、ｃ−ＭＡＦタンパク質（配列番号４または配列番号５）のバリアント（ここで、そのような置換されたアミノ酸残基は、遺伝暗号によってコードされるアミノ酸残基であってもよいし、そうでなくてもよい）または（ｉｉ）１つまたは複数のアミノ酸の挿入または欠失を含みかつｃ−ＭＡＦタンパク質と同じ機能を有する、すなわち、ＤＮＡ結合転写因子として作用するバリアントと理解される。ｃ−ＭＡＦタンパク質のバリアントは、国際特許出願ＷＯ２００５／０４６７３１（その全体が参照により本明細書中に援用される）に示されているような、ｃ−ＭＡＦがインビトロにおける細胞増殖を促進する能力に基づく方法、ＷＯ２００８０９８３５１（その全体が参照により本明細書中に援用される）に記載されているような、ｃ−ＭＡＦを発現する細胞においてサイクリンＤ２プロモーターまたはｃ−ＭＡＦ応答領域（ＭＡＲＥまたはｃ−ＭＡＦ応答エレメント）を含むプロモーターの支配下のレポーター遺伝子の転写能力をいわゆるインヒビターが阻止する能力に基づく方法、またはＵＳ２００９０４８１１７Ａ（その全体が参照により本明細書中に援用される）に記載されているような、ＮＦＡＴｃ２およびｃ−ＭＡＦを発現する細胞においてＰＭＡ／イオノマイシンによる刺激に応答してＩＬ−４プロモーターの支配下のレポーター遺伝子の発現をいわゆるインヒビターが阻止する能力に基づく方法を用いて同定され得る。
【００６４】
本発明に係るバリアントは、好ましくは、いずれかのｃ−ＭＡＦタンパク質アイソフォーム（配列番号４または配列番号５）のアミノ酸配列と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列類似性を有する。バリアントと先に定義された特定のｃ−ＭＡＦタンパク質配列との間の類似性の程度は、当業者に広く公知のアルゴリズムおよびコンピュータプロセスを用いて決定される。２つのアミノ酸配列間の類似度は、好ましくは、ＢＬＡＳＴＰアルゴリズム［ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ら、ＮＣＢＩ  ＮＬＭ  ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４，Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）］を用いて決定される。
【００６５】
ｃ−ＭＡＦタンパク質発現レベルは、被験体由来のサンプル中の上記タンパク質の検出および定量を可能にする任意の従来の方法によって定量され得る。非限定的な例証として、上記タンパク質レベルは、例えば、ｃ−ＭＡＦ結合能を有する抗体（または抗原決定基を含むそのフラグメント）を使用し、続いて、形成された複合体を定量することによって、定量され得る。これらのアッセイにおいて使用される抗体は、標識されていてもよいし、されていなくてもよい。使用され得るマーカーの例証的な例としては、放射性同位体、酵素、フルオロフォア、化学発光試薬、酵素基質または補因子、酵素インヒビター、粒子、色素などが挙げられる。標識されていない抗体（一次抗体）および標識された抗体（二次抗体）を使用する本発明において使用され得る幅広い公知のアッセイがある；これらの技法としては、ウエスタンブロットまたはウエスタントランスファー、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）、ＲＩＡ（ラジオイムノアッセイ）、競合ＥＩＡ（競合酵素免疫測定法）、ＤＡＳ−ＥＬＩＳＡ（二重抗体サンドイッチＥＬＩＳＡ）、免疫細胞化学的および免疫組織化学的技法、特異的抗体を含むタンパク質マイクロアレイもしくはバイオチップの使用に基づく技法、またはディップスティックなどの形式でのコロイド沈殿に基づくアッセイが挙げられる。上記ｃ−ＭＡＦタンパク質を検出するためおよび定量するための他の方法としては、アフィニティークロマトグラフィー法、リガンド結合アッセイなどが挙げられる。免疫学的方法が使用されるとき、ｃ−ＭＡＦタンパク質に高親和性で結合すると知られている任意の抗体または試薬が、その量を検出するために使用され得る。それにもかかわらず、抗体、例えば、ポリクローナル血清、ハイブリドーマの上清またはモノクローナル抗体、抗体フラグメント、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ヒト化ダイアボディ、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ナノボディ、アルファボディ、ステープルド（ｓｔａｐｌｅｄ）ペプチド、シクロペプチドおよび抗体の使用。本発明の状況において使用され得る市販の抗ｃ−ＭＡＦタンパク質抗体は、販売されている（例えば、抗体ａｂ４２７、ａｂ５５５０２、ａｂ５５５０２、ａｂ７２５８４、ａｂ７６８１７、ａｂ７７０７１（Ａｂｃａｍ  ｐｌｃ，３３０  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐａｒｋ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＣＢ４  ０ＦＬ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）、ＡｂＤ  ＳｅｒｏｔｅｃのＯ７５４４４モノクローナル抗体（マウス抗ヒトＭＡＦアジド不含モノクローナル抗体、非結合体化、クローン６ｂ８（Ｍｏｕｓｅ  Ａｎｔｉ−Ｈｕｍａｎ  ＭＡＦ  Ａｚｉｄｅ  ｆｒｅｅ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｕｎｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ，Ｃｌｏｎｅ  ６ｂ８））など）。抗ｃ−ＭＡＦ抗体を提供している多くの営利会社がある（例えば、Ａｂｎｏｖａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｂｅｔｈｙｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｂｉｏｗｏｒｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＧｅｎｅＴｅｘなど）。
【００６６】
特定の実施形態において、ｃ−ＭＡＦタンパク質レベルは、ウエスタンブロット、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡまたはタンパク質アレイによって定量される。
【００６７】
別の特定の実施形態において、ｃ−ＭＡＦタンパク質レベルは、エキソソームまたは循環（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ）ＤＮＡから定量される。エキソソームは、インビボおよびインビトロにおいてほとんどの細胞型によって分泌される４０〜１００ｎｍの膜ベシクルである。エキソソームは、コンパートメントの内腔に内向きに出芽することによって、多胞体（ＭＶＢ）と呼ばれるエンドソームの特定の集団として形成する。ＭＶＢと原形質膜とが融合すると、これらの内部ベシクルが分泌される。エキソソームは、当該分野で周知のいくつかの方法によって多種多様な細胞系または体液から単離され得る（Ｔｈｅｒｙ  Ｃ．ら、Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２００６  Ａｐｒ；Ｃｈａｐｔｅｒ  ３：Ｕｎｉｔ  ３．２２）（その全内容が、本明細書中に参照により援用される）。ＥｘｏＱｕｉｃｋＴＭまたはＥｘｏＴｅｓｔＴＭなどのいくつかの市販キットが、エキソソームを単離するために利用可能である。
【００６８】
本発明の第１の方法は、第２の工程において、被験体由来の腫瘍サンプル（原発性腫瘍生検材料、循環腫瘍細胞、および循環腫瘍ＤＮＡを含むが、これらに限定されない）中で得られるｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルを、コントロールサンプル中の上記遺伝子の発現レベルと比較する工程を含む。
【００６９】
いったん、肺がんを有する被験体由来の腫瘍組織サンプル、循環腫瘍細胞、または循環腫瘍ＤＮＡ中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルが、測定され、コントロールサンプルと比較されたら、上記遺伝子の発現レベルがコントロールサンプル中のその発現レベルと比較して上昇している場合、上記被験体は、転移について陽性の診断を有するかまたは転移を起こす傾向がより高いと結論づけられ得る。
【００７０】
ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルの決定は、コントロールサンプルまたは参照サンプルの値と相関しているはずである。解析されるべき腫瘍のタイプに応じて、コントロールサンプルの正確な性質は変動し得る。したがって、診断が評価されることになっている場合、参照サンプルは、転移していない肺がんを有する被験体由来の腫瘍組織サンプルまたは転移していない肺がんを有する被験体由来の生検サンプルの腫瘍組織コレクションにおいて測定されたｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルの中央値に対応する腫瘍組織サンプルである。
【００７１】
上記参照サンプルは、代表的には、被験体集団由来の等量のサンプルを合わせることによって得られる。一般に、代表的な参照サンプルは、臨床的に十分に考証されている被験体および転移が無いことが十分に特徴付けられている被験体から得られる。そのようなサンプルでは、バイオマーカー（ｃ−ＭＡＦ遺伝子）の正常濃度（参照濃度）が、例えば、参照集団の平均濃度を提供することによって決定され得る。マーカーの参照濃度を決定する場合に、様々な考慮がなされる。そのような考慮すべき事柄は、患者の年齢、体重、性別、全般的な身体的状態などである。例えば、好ましくは、上記の考慮すべき事柄に従って、例えば、様々な年齢カテゴリーに従って分類された、等量の少なくとも２人、少なくとも１０人、少なくとも１００人から好ましくは、１０００人を超える被験体の群が、参照群としてみなされる。参照レベルが由来するサンプル集合は、好ましくは、その研究の患者対象と同じタイプのがん（例えば、肺がん）に罹患している被験体によって形成される。同様に、患者のコホート内の参照値は、すべての感度および特異度のペアについて、どのペアが最善の値を提供し、かつどれに参照値が対応するのかを決定するために、受信者動作曲線（ＲＯＣ）を使用し、曲線下面積を測定して、確立することができる。
【００７２】
いったん、この中央値または参照値が確立されたら、この中央値を有する患者由来の腫瘍組織において発現されたこのマーカーのレベルは、比較し、したがって、「上昇した」発現レベルに割り当てることができる。被験体の間のばらつき（例えば年齢、人種などに関連する側面）のために、ｃ−ＭＡＦ発現の絶対参照値を確立することは非常に困難である（事実上不可能ではないにしても）。したがって、特定の実施形態において、ｃ−ＭＡＦ発現の「上昇した」または「低下した」発現に対する参照値は、有している疾患が上で述べられた方法のいずれかによって十分に考証された被験体から単離された１つまたはいくつかのサンプルにおいてアッセイを行うことを含む従来の手段によってｃ−ＭＡＦ発現レベルのパーセンタイルを計算することによって決定される。次いで、ｃ−ＭＡＦの「低下した」レベルは、好ましくは、ｃ−ＭＡＦ発現レベルが正常集団における５０パーセンタイル以下である（例えば、正常集団における６０パーセンタイル以下、正常集団における７０パーセンタイル以下、正常集団における８０パーセンタイル以下、正常集団における９０パーセンタイル以下および正常集団における９５パーセンタイル以下である発現レベルを含む）サンプルに対して割り当てられ得る。次いで、「上昇した」ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルは、好ましくは、ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルが正常集団における５０パーセンタイル以上である（例えば、正常集団における６０パーセンタイル以上、正常集団における７０パーセンタイル以上、正常集団における８０パーセンタイル以上、正常集団における９０パーセンタイル以上および正常集団における９５パーセンタイル以上である発現レベルを含む）サンプルに対して割り当てられ得る。
【００７３】
本発明においては、「上昇した発現レベル」は、それが参照サンプルまたはコントロールサンプルにおけるｃ−ＭＡＦ遺伝子のレベルよりも高いレベルのことを指すときの発現レベルと理解される。特に、参照サンプル中の発現レベルが、患者から単離したサンプルと比較して、少なくとも、１．１倍、１．５倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍またはなおもそれより高いとき、そのサンプルは、高いｃ−ＭＡＦ発現レベルを有すると考えられ得る。
【００７４】
本発明の文脈において、被験体が罹患している肺がんが、身体の他の器官（特定の実施形態において骨）に転移している場合、「被験体は、転移について陽性の診断を有する」ことが理解される。
【００７５】
なおさらに好ましい実施形態において、骨への転移は、溶骨性骨転移である。本明細書中で使用されるとき、「溶骨性骨転移」と言う表現は、腫瘍細胞による破骨細胞活性の刺激に起因して転移の近傍で骨吸収（骨密度の進行性消失）が生じ、重篤な疼痛、病理学的骨折、高カルシウム血症、脊髄圧迫、および神経圧迫に起因する他の症候群を特徴とする、転移のタイプを指す。
【００７６】
他方では、被験体が罹患している肺がんが今後転移する確率が高い場合、「被験体は、転移を起こす傾向がより高い」ことが本発明において理解される。
【００７７】
当業者は、原発性肺腫瘍が転移する傾向の予測が、同定されるすべての被験体（すなわち、被験体の１００％）に対して正しくあることを意図していないことを理解する。それにもかかわらず、その用語は、被験体の統計学的に有意な一部（例えば、コホート研究におけるコホート）の同定を可能にすることを必要とする。ある一部が統計学的に有意であるかどうかは、当業者によって、様々な周知の統計評価ツール、例えば、信頼区間の決定、ｐ値の決定、スチューデントｔ検定、マン・ホイットニー検定などを使用する単純な様式で決定され得る。詳細は、ＤｏｗｄｙおよびＷｅａｒｄｅｎ，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８３に提供されている。好ましい信頼区間は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％である。ｐ値は、好ましくは、０．１、０．０５、０．０１、０．００５または０．０００１である。より好ましくは、集団の被験体の少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％または少なくとも９０％が、本発明の方法によって適切に同定され得る。
【００７８】
本明細書中で使用されるとき、「骨分解を回避するためまたは予防するための薬剤」とは、骨芽細胞の増殖を刺激するか、または破骨細胞の増殖を阻害するか、または骨の構造を固定することによって、骨分解を予防するか、阻害するか、処置するか、減少させるか、または停止することができる任意の分子のことを指す。
【００７９】
本明細書中で使用されるとき、「ｃ−ＭＡＦ阻害剤」とは、ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現を完全にまたは部分的に阻害することができる（その両方が、上記遺伝子の発現産物の生成を妨げること（ｃ−ＭＡＦ遺伝子の転写を妨害することおよび／またはｃ−ＭＡＦ遺伝子発現に由来するｍＲＮＡの翻訳を阻止すること）およびｃ−ＭＡＦタンパク質活性を直接阻害することによって）任意の分子のことを指す。ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現インヒビターは、国際特許出願ＷＯ２００５／０４６７３１（その全内容が本明細書によって参照により援用される）に示されているような、ｃ−ＭＡＦがインビトロにおける細胞増殖を促進する能力をいわゆるインヒビターが阻止する能力に基づく方法、ＷＯ２００８０９８３５１（その全内容が本明細書によって参照により援用される）に記載されているような、ｃ−ＭＡＦを発現する細胞においてサイクリンＤ２プロモーターもしくはｃ−ＭＡＦ応答領域（ＭＡＲＥまたはｃ−ＭＡＦ応答エレメント）を含むプロモーターの支配下のレポーター遺伝子の転写能力をいわゆるインヒビターが阻止する能力に基づく方法、またはＵＳ２００９０４８１１７Ａ（その全内容が本明細書によって参照により援用される）に記載されているような、ＮＦＡＴｃ２およびｃ−ＭＡＦを発現する細胞においてＰＭＡ／イオノマイシンによる刺激に応答してＩＬ−４プロモーターの支配下のレポーター遺伝子の発現をいわゆるインヒビターが阻止する能力に基づく方法を用いて同定され得る。
【００８０】
本明細書中で使用されるとき、ラパマイシンの哺乳動物における標的（ｍＴＯＲ）または「ｍＴｏｒ」とは、ＥＣ２．７．１１．１に相当するタンパク質のことを指す。ｍＴｏｒ酵素は、セリン／トレオニンタンパク質キナーゼであり、細胞増殖、細胞運動性、細胞成長、細胞生存および転写を制御する。
【００８１】
本明細書中で使用されるとき、「ｍＴｏｒインヒビター」とは、ｍＴｏｒ遺伝子の発現を完全にまたは部分的に阻害することができる（その両方が、上記遺伝子の発現産物の生成を妨げること（ｍＴｏｒ遺伝子の転写を妨害することおよび／またはｍＴｏｒ遺伝子発現に由来するｍＲＮＡの翻訳を阻止すること）およびｍＴｏｒタンパク質活性を直接阻害することによって）任意の分子のことを指す。ｍＴｏｒインヒビターは、ｍＴｏｒ活性の阻害に加えて１またはそれより多くの標的を有するインヒビターを含む。
【００８２】
本明細書中で使用されるとき、「Ｓｒｃ」とは、ＥＣ２．７．１０．２に相当するタンパク質のことを指す。Ｓｒｃは、非レセプターチロシンキナーゼおよび癌原遺伝子である。Ｓｒｃは、細胞成長および胚発生において役割を果たし得る。
【００８３】
本明細書中で使用されるとき、「Ｓｒｃインヒビター」とは、Ｓｒｃ遺伝子の発現を完全にまたは部分的に阻害することができる（その両方が、上記遺伝子の発現産物の生成を妨げること（Ｓｒｃ遺伝子の転写を妨害することおよび／またはＳｒｃ遺伝子発現に由来するｍＲＮＡの翻訳を阻止すること）およびＳｒｃタンパク質活性を直接阻害することによって）任意の分子のことを指す。
【００８４】
本明細書中で使用されるとき、「プロスタグランジン−エンドペルオキシドシンターゼ２」、「シクロオキシゲナーゼ−２」または「ＣＯＸ−２」とは、ＥＣ１．１４．９９．１に相当するタンパク質のことを指す。ＣＯＸ−２は、アラキドン酸からのプロスタグランジンエンドペルオキシドＨ２への変換に関与する。
【００８５】
本明細書中で使用されるとき、「ＣＯＸ−２インヒビター」とは、ＣＯＸ−２遺伝子の
発現を完全にまたは部分的に阻害することができる（その両方が、上記遺伝子の発現産物の生成を妨げること（ＣＯＸ−２遺伝子の転写を妨害することおよび／またはＣＯＸ−２遺伝子発現に由来するｍＲＮＡの翻訳を阻止すること）およびＣＯＸ−２タンパク質活性を直接阻害することによって）任意の分子のことを指す。
【００８６】
本明細書中で使用されるとき、「転帰」または「臨床転帰」とは、結果として生じる疾患の経過および／または疾患の進行のことを指し、例えば、再発、再発までの期間、転移、転移までの期間、転移の数、転移の部位の数および／または疾患に起因する死亡によって特徴付けられ得る。例えば、良好な臨床転帰としては、治癒、再発の予防、転移の予防および／または一定の期間内の生存（再発なし）が挙げられ、不良な臨床転帰としては、疾患の進行、転移および／または一定の期間内の死亡が挙げられる。
【００８７】
「予測する」は、本明細書中で使用されるとき、肺がんに罹患している被験体が遠隔器官への転移を起こす可能性の決定のことを指す。本明細書中で使用されるとき、「予後良好」は、被験体が、一定期間内において生存するおよび／または再発もしくは遠隔転移を有しないかもしくは有するリスクが低いと予想される（例えば、予測される）ことを示す。用語「低い」は、相対的な用語であり、本願の文脈において、臨床転帰（再発、遠隔転移など）に関して「低」発現グループのリスクのことを指す。「低」リスクは、不均一ながん患者集団に対する平均リスクより低いリスクと考えられ得る。Ｐａｉｋら（２００４）の研究では、再発の全体的な「低」リスクは、１５パーセントより低いと考えられた。そのリスクはまた、期間に応じて変動し得る。その期間は、がんの最初の診断の後または予後診断が行われた後の、例えば、５年、１０年、１５年またはなおも２０年であり得る。
【００８８】
本明細書中で使用されるとき、「予後不良」は、被験体が、一定期間内において生存しないおよび／または再発もしくは遠隔転移を有するかもしくは有するリスクが高いと予想される、例えば、予測されることを示す。用語「高い」は、相対的な用語であり、本願の文脈において、臨床転帰（再発、遠隔転移など）に関して「高」発現グループのリスクのことを指す。「高」リスクは、不均一ながん患者集団に対する平均リスクより高いリスクと考えられ得る。Ｐａｉｋら（２００４）の研究では、再発の全体的な「高」リスクは、１５パーセントより高いと考えられた。そのリスクはまた、期間に応じて変動し得る。その期間は、がんの最初の診断のまたは予後診断が行われた後の、例えば、５年、１０年、１５年またはなおも２０年であり得る。
【００８９】
「参照値」は、本明細書中で使用されるとき、患者または患者から回収されたサンプルの臨床検査によって得られた値／データに対する参照として使用される検査値のことを指す。参照値または参照レベルは、絶対値；相対値；上限および／もしくは下限を有する値；一連の値；平均値（ａｖｅｒａｇｅ  ｖａｌｕｅ）；中央値、平均値（ｍｅａｎ  ｖａｌｕｅ）、または特定のコントロール値もしくはベースライン値と比較される値であり得る。参照値は、個別のサンプル値、例えば、試験されている被験体から得られた値などであるが、より早い時点における値に基づき得る。参照値は、多数のサンプル（例えば、暦年齢が一致する群の被験体の集団由来）に基づいてもよいし、試験されるべきサンプルを含むまたは除外したサンプルのプールに基づいてもよい。
【００９０】
用語「処置」は、本明細書中で使用されるとき、本明細書中に記載されるような臨床状態を終結させるか、予防するか、回復させるか、またはその臨床状態への罹患性を低下させることを目指す任意のタイプの治療のことを指す。好ましい実施形態において、処置という用語は、本明細書中で定義されるような障害または状態の予防的処置（すなわち、臨床状態への罹患性を低下させる治療）に関する。したがって、「処置」、「処置する」およびそれらの等価な用語は、ヒトを含む哺乳動物において、病理学的な状態または障害の任意の処置を包含する、所望の薬理学的効果または生理学的効果を得ることを指す。その効果は、障害もしくはその徴候を完全にもしくは部分的に予防することに関して予防的であり得、かつ／または障害および／もしくはその障害に起因し得る有害作用に対する部分的もしくは完全な治癒に関して治療的であり得る。すなわち、「処置」は、（１）被験体において障害が生じることもしくは再発することを予防すること、（２）障害を阻害すること、例えば、その進行を停止すること、（３）例えば、失った機能、不足している機能もしくは不完全な機能を再建するかもしくは修復するか、または非効率なプロセスを刺激することによって、宿主が障害もしくはその徴候にもはや罹患していないように、障害もしくはそれに関連する少なくとも徴候を停止することもしくは終結させること（例えば、障害またはその徴候の後退を引き起こすこと）、または（４）障害もしくはそれに関連する徴候を軽減すること、緩和すること、もしくは回復させること（ここで、回復させることとは、少なくとも、パラメータ（例えば、炎症、疼痛または免疫不全）の大きさの減少のことを指すために広い意味において使用される）を含む。
【００９１】
本明細書中で使用されるとき、「サンプル」または「生物学的サンプル」は、被験体から単離された生物学的材料を意味する。生物学的サンプルは、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の発現レベルの決定に適した任意の生物学的材料を含み得る。サンプルは、任意の好適な生物学的組織または体液（例えば、腫瘍組織、血液、血漿、血清、尿または脳脊髄液（ＣＳＦ）など）から単離され得る。
【００９２】
本明細書中で使用されるとき、本明細書中で使用される遺伝子の「発現レベル」という用語は、被験体のサンプル中の遺伝子によって生成される遺伝子産物の測定可能な量のことを指し、ここで、その遺伝子産物は、転写産物または翻訳産物であり得る。したがって、発現レベルは、核酸遺伝子産物（例えば、ｍＲＮＡまたはｃＤＮＡ）またはポリペプチド遺伝子産物に関係し得る。発現レベルは、被験体のサンプルおよび／または参照サンプル（複数可）から得られ、例えば、新規に検出され得るか、または事前の測定値に対応し得る。発現レベルは、例えば、当業者に公知であるような、マイクロアレイ法、ＰＣＲ法（例えば、ｑＰＣＲ）および／または抗体ベースの方法を用いて、決定され得るかまたは測定され得る。
【００９３】
本明細書中で使用されるとき、用語「遺伝子コピー数」とは、細胞における核酸分子のコピー数のことを指す。遺伝子コピー数は、細胞のゲノム（染色体）ＤＮＡにおける遺伝子コピー数を含む。正常な細胞（非腫瘍細胞）では、遺伝子コピー数は、通常、２コピー（染色体対の各メンバーにおいて１コピー）である。遺伝子コピー数は、時折、細胞集団のサンプルから採取された遺伝子コピー数の半数を含む。
【００９４】
「上昇した発現レベル」は、それが参照サンプルまたはコントロールサンプルにおけるｃ−ＭＡＦ遺伝子のレベルよりも高いレベルのことを指すときの発現レベルと理解される。この上昇したレベルは、ある遺伝子または１６ｑ２３もしくは１６ｑ２２−２４染色体遺伝子座の増幅または転座によって、他の機序を排除せずに引き起こされ得る。特に、患者から単離されたサンプル中の発現レベルが、参照またはコントロールと比較して、少なくとも、約１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍またはなおもそれより高いとき、そのサンプルは、高いｃ−ＭＡＦ発現レベルを有すると考えられ得る。
【００９５】
「プローブ」は、本明細書中で使用されるとき、目的の特定の核酸配列に相補的なオリゴヌクレオチド配列のことを指す。いくつかの実施形態において、プローブは、転座を起こすと知られている染色体の領域に特異的であり得る。いくつかの実施形態において、プローブは、特異的な標識またはタグを有する。いくつかの実施形態において、タグは、フルオロフォアである。いくつかの実施形態において、プローブは、その標識が核酸およびタンパク質への白金の安定な配位結合（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｖｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ）に基づくＤＮＡインサイチュハイブリダイゼーションプローブである。いくつかの実施形態において、プローブは、米国特許出願１２／０６７５３２および米国特許出願１２／１８１，３９９（これらの全体が本明細書において参照により援用される）に記載されているか、またはＳｗｅｎｎｅｎｈｕｉｓら、「Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｐｅａｔ−ｆｒｅｅ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  ｐｒｏｂｅｓ」Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４０（３）：ｅ２０（２０１２）に記載されている。
【００９６】
「タグ」または「標識」は、本明細書中で使用されるとき、プローブまたはプローブの位置を可視化するか、マークするか、または別途捕捉することを可能にする、プローブと直接または間接的に会合されている任意の物理的な分子のことを指す。
【００９７】
「転座」は、本明細書中で使用されるとき、等しくない量または等しい量で染色体間で染色体材料が交換することを指す。場合によっては、転座は、同じ染色体上で起きる。場合によっては、転座は、異なる染色体間で起きる。転座は、乳がんおよび白血病を含む多くのタイプのがんにおいて高頻度で生じる。転座は、主要な相互転座またはより複雑な二次転座であり得る。多くのがんの起因事象を構成すると考えられている免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎ）重鎖（ＩｇＨ）遺伝子座が関わる主要な転座がいくつかある（Ｅｙｃｈｅｎｅ，Ａ．，Ｒｏｃｑｕｅｓ，Ｎ．，およびＰｕｏｐｏｎｎｏｔ，Ｃ．，Ａ  ｎｅｗ  ＭＡＦｉａ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．２００８．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｃａｎｃｅｒ．８：６８３−６９３）。
【００９８】
「倍数体」または「倍数性」は、本明細書中で使用されるとき、細胞が、２より多いコピーの目的の遺伝子を含むことを示す。場合によっては、目的の遺伝子は、ＭＡＦである。いくつかの実施形態において、倍数性は、目的の遺伝子の発現の蓄積に関連する。いくつかの実施形態において、倍数性は、ゲノム不安定性に関連する。いくつかの実施形態において、ゲノム不安定性は、染色体転座に至り得る。
【００９９】
「ホールゲノムシーケンシング」は、本明細書中で使用されるとき、生物のゲノム全体が１回で配列決定されるプロセスである。例えば、Ｎｇ．，Ｐ．Ｃ．ａｍｄ  Ｋｉｒｋｎｅｓｓ，Ｅ．Ｆ．，Ｗｈｏｌｅ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．２０１０．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．６２８：２１５−２２６を参照のこと。
【０１００】
「エクソームシーケンシング」は、本明細書中で使用されるとき、生物のＤＮＡのコード領域全体が配列決定されるプロセスである。エクソームシーケンシングでは、ｍＲＮＡが配列決定される。ゲノムの非翻訳領域は、エクソームシーケンシングに含められない。例えば、Ｃｈｏｉ，Ｍ．ら、Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｂｙ  ｗｈｏｌｅ  ｅｘｏｍｅ  ｃａｐｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｍａｓｓｉｖｅｌｙ  ｐａｒａｌｌｅｌ  ＤＮＡ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．２００９．ＰＮＡＳ．１０６（４５）：１９０９６−１９１０１を参照のこと。
【０１０１】
「腫瘍組織サンプル」は、肺がん腫瘍（循環腫瘍細胞および循環腫瘍ＤＮＡが挙げられるがこれらに眼底されない）を起源とする組織サンプルと理解される。上記サンプルは、従来の方法、例えば、関連する医学的技法の当業者に周知の方法を用いる生検によって、得ることができる。
【０１０２】
「溶骨性骨転移」とは、骨吸収（骨密度の進行性消失）が、腫瘍細胞による破骨細胞活性の刺激に起因する転移の近くにおいて生じる転移のタイプのことを指し、重篤な疼痛、病理学的骨折、高カルシウム血症、脊髄圧迫、および神経圧迫に起因する他の症候群を特徴とする。
【０１０３】
肺腫瘍を有する患者において本発明の個別化治療をデザインするための方法
当該分野において公知であるように、がんに罹患している被験体に施されるべき処置は、後者が悪性腫瘍であるかどうか、すなわち、それが転移を起こす高い確率を有するかどうか、または後者が良性の腫瘍であるかどうかに左右される。第１の仮定では、一般に好まれる処置は、化学療法などの全身性処置であり、第２の仮定では、一般に好まれる処置は、放射線治療などの局所性処置である。
【０１０４】
ゆえに、本発明に記載されるように、肺がん細胞におけるｃ−ＭＡＦ遺伝子の過剰発現が、転移の存在に関係することを考えれば、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の発現レベルは、上記がんに罹患している被験体に最も適した治療に関して決定することを可能にする。
【０１０５】
したがって、別の態様において、本発明は、肺がんを有する被験体のために個別化治療をデザインするためのインビトロでの方法に関し、その方法は、
（ｉ）上記被験体の腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルを定量する工程、および
（ｉｉ）以前に得られた発現レベルをコントロールサンプル中の上記遺伝子の発現レベルと比較する工程
を含み、ここで、その発現レベルが、上記コントロールサンプル中の上記遺伝子の発現レベルと比較して上昇している場合、上記被験体は、転移の予防および／または処置を目指す治療を受けるのに適格である。本発明の特定の局面では、次いで、被験体は、骨転移を予防、阻害および／または処置する少なくとも１つの治療を投与される。
ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルが、上記参照値と比較して上昇していない場合、上記被験体は、骨分解を予防するための治療を受けるのに適格ではない。本方法の特定の態様では、次いで、被験体は、骨転移を予防、阻害および／または処置する少なくとも１つの治療が投与されない。
【０１０６】
特定の実施形態において、転移は、骨転移である。より好ましい実施形態では、骨転移は、溶骨性転移である。
【０１０７】
用語および表現「被験体」、「肺がん」、「腫瘍サンプル」、「転移」、「発現レベルの決定」、「ｃ−ＭＡＦ遺伝子」、「上昇した発現レベル」、および「コントロールサンプル」は、本発明の第１の方法に関して詳細に説明されており、本発明の第２および第３の方法に等しく適用可能である。
【０１０８】
本発明の第２の方法は、第１の工程に、肺がんに罹患している被験体の腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルを定量する工程を含む。
【０１０９】
好ましい実施形態において、本発明の第２の方法は、ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルだけを単一マーカーとして定量する工程を含み、すなわち、その方法は、いかなる追加のマーカーの発現レベルを決定する工程も含まない。
【０１１０】
本発明の第２の方法の場合、サンプルは、被験体の原発腫瘍組織サンプルである。第２の工程において、被験体の腫瘍サンプルにおいて得られたｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルは、コントロールサンプル中の上記遺伝子の発現レベルと比較される。ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルの決定は、コントロールサンプルまたは参照サンプルの値と関係づけられるはずである。解析されるべき腫瘍のタイプに応じて、コントロールサンプルの正確な性質は変動し得る。したがって、好ましくは、参照サンプルは、転移していない肺がんを有する被験体の腫瘍組織サンプル、または転移していない肺がんを有する被験体の生検サンプルの腫瘍組織コレクションにおいて測定されたｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルの中央値に対応するサンプルである。
【０１１１】
なおも別の実施形態において、平均より高いｃ−ＭＡＦの発現レベルは、骨転移の上昇したリスクを示し、上記リスクは、ｃ−ＭＡＦ発現のレベルに比例する。したがって、肺がんに罹患している被験体における骨転移のリスクは、用量依存的である。
【０１１２】
いったん、サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルが、測定されて、コントロールサンプルと比較されたら、上記遺伝子の発現レベルが、コントロールサンプルにおけるそれらの発現レベルと比較して上昇している場合、上記被験体は、転移の予防（被験体がまだ転移を起こしていない場合）および／または処置（被験体がすでに転移を受けている場合）を目指す治療を受けるのに適格であると結論づけられ得る。そのような上昇した発現が観察されない場合、被験体は、骨転移を予防、阻害および／または処置する少なくとも１つの治療が投与されない。
【０１１３】
がんが転移していたとき、化学療法、ホルモン処置、免疫療法またはそれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない全身性処置が使用される。さらに、放射線治療および／または手術が使用され得る。処置の選択は、通常、原発がんのタイプ、サイズ、転移の位置、患者の年齢、全般的な健康状態、および以前に使用された処置のタイプに左右される。
【０１１４】
全身性処置は、全身に到達する処置である：
・化学療法は、がん細胞を破壊する医薬の使用である。それらの医薬は、通常、経口または静脈内の経路によって投与される。時折、化学療法は、放射線処置とともに使用される。肺がんに対する好適な化学療法処置としては、アントラサイクリン（ドキソルビシン、エピルビシン、ペグ化リポソームドキソルビシン）、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル、アルブミンナノ粒子結合型パクリタキセル）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ持続注入、カペシタビン）、ビンカアルカロイド（ビノレルビン、ビンブラスチン）、ゲムシタビン、白金塩（シスプラチン、カルボプラチン）、シクロホスファミド、エトポシド、および上記の１つまたは複数の組み合わせ、例えば、シクロホスファミド／アントラサイクリン  ＋／−  ５−フルオロウラシルレジメン（例えば、ドキソルビシン／シクロホスファミド（ＡＣ）、エピルビシン／シクロホスファミド、（ＥＣ）シクロホスファミド／エピルビシン／５−フルオロウラシル（ＣＥＦ）、シクロホスファミド／ドキソルビシン／５−フルオロウラシル（ＣＡＦ）、５−フルオロウラシル／エピルビシン／シクロホスファミド（ＦＥＣ））、シクロホスファミド／メトトレキサート（ｍｅｔｏｔｈｒｅｘａｔｅ）／５−フルオロウラシル（ＣＭＦ）、アントラサイクリン／タキサン（例えば、ドキソルビシン／パクリタキセルまたはドキソルビシン／ドセタキセル）、ドセタキセル／カペシタビン、ゲムシタビン／パクリタキセル、タキサン／白金レジメン（例えば、パクリタキセル／カルボプラチンまたはドセタキセル／カルボプラチン）が挙げられるがこれらに限定されない。
・ホルモン治療は、いくつかのホルモンががん成長を促進するという事実に基づく。例えば、卵巣によって生成された女性におけるエストロゲンは、時折、乳がんの成長を促進する。これらのホルモンの産生を停止するためのいくつかの方法がある。１つの方法は、それらを生成する器官を摘出することであり、女性の場合は、卵巣であって、男性の場合は、精巣である。より頻繁には、これらの器官がホルモンを生成するのを予防するかまたはホルモンががん細胞に作用するのを予防する医薬を使用することができる。
・免疫療法は、がんと戦う患者の免疫系自体を助ける処置である。患者における転移を処置するために使用される免疫療法にはいくつかのタイプがある。これらとしては、サイトカイン、モノクローナル抗体および抗腫瘍ワクチンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１１５】
別の態様において、処置は、アルファラディン（ラジウム−２２３二塩化物）である。アルファラディンは、がん細胞を殺すために、ラジウム−２２３の崩壊からのアルファ線を使用する。ラジウム−２２３は、天然に、カルシウム模倣物としてのその特性のおかげで骨転移に対して自身を標的化する。アルファ線は、２〜１０個の細胞という非常に短い範囲（ベータまたはガンマ線に基づく現行の放射線治療と比べて）を有するので、周囲の健常な組織（特に骨髄）にもたらす損傷はより少ない。カルシウムとよく似た特性を有するので、ラジウム−２２３は、身体内の骨を構築するためにカルシウムが使用されている位置（去勢抵抗性の進行前立腺がんを有する男性の骨格転移に見られるようなより速い異常な骨成長の部位を含む）に引き込まれる。ラジウム−２２３は、注射後、異常に骨が成長している部位に血流によって運ばれる。がんが身体内で生じ始めた位置は、原発腫瘍として公知である。これらの細胞のうちのいくつかは、離脱して、血流によって身体の別の部位に運ばれ得る。次いで、それらのがん細胞は、身体のその位置に定着して、新しい腫瘍を形成し得る。これが起きる場合、それは、二次がんまたは転移と呼ばれる。末期の前立腺がんを有するほとんどの患者は、骨にその疾患の最大の負担を被る。ラジウム−２２３を用いる目的は、この二次がんを選択的に標的化することである。骨に取り込まれない任意のラジウム−２２３は、すみやかに腸へと経路を定められ、排泄される。
【０１１６】
別の態様において、処置は、ｍＴｏｒインヒビターである。いくつかの態様において、ｍＴｏｒインヒビターは、ｍＴｏｒ／ＰＩ３キナーゼの二重インヒビターである。いくつかの態様において、ｍＴｏｒインヒビターは、転移を予防するためまたは阻害するために使用される。いくつかの態様において、ｍＴｏｒインヒビターは：ＡＢＩ００９（シロリムス）、ラパマイシン（シロリムス）、Ａｂｒａｘａｎｅ（パクリタキセル）、Ａｂｓｏｒｂ（エベロリムス）、Ａｆｉｎｉｔｏｒ（エベロリムス）、Ｇｌｅｅｖｅｃと併用のＡｆｉｎｉｔｏｒ、ＡＳ７０３０２６（ピマセルチブ（ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ））、Ａｘｘｅｓｓ（ウミロリムス（ｕｍｉｒｏｌｉｍｕｓ））、ＡＺＤ２０１４、ＢＥＺ２３５、Ｂｉｏｆｒｅｅｄｏｍ（ウミロリムス）、ＢｉｏＭａｔｒｉｘ（ウミロリムス）、ＢｉｏＭａｔｒｉｘ  ｆｌｅｘ（ウミロリムス）、ＣＣ１１５、ＣＣ２２３、Ｃｏｍｂｏ  Ｂｉｏ−ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  Ｅｌｕｔｉｎｇ  Ｓｔｅｎｔ  ＯＲＢＵＳＮＥＩＣＨ（シロリムス）、Ｃｕｒａｘｉｎ  ＣＢＬＣ１０２（メパクリン）、ＤＥ１０９（シロリムス）、ＤＳ３０７８、Ｅｎｄｅａｖｏｒ  ＤＥＳ（ゾタロリムス）、Ｅｎｄｅａｖｏｒ  Ｒｅｓｏｌｕｔｅ（ゾタロリムス）、Ｆｅｍａｒａ（レトロゾール）、Ｈｏｃｅｎａ（アントロキノノール（ａｎｔｒｏｑｕｉｎｏｎｏｌ））、ＩＮＫ１２８、Ｉｎｓｐｉｒｏｎ（シロリムス）、ＩＰＩ５０４（レタスピマイシン（ｒｅｔａｓｐｉｍｙｃｉｎ）塩酸塩）、ＫＲＮ９５１（チボザニブ（ｔｉｖｏｚａｎｉｂ））、ＭＥ３４４、ＭＧＡ０３１（テプリズマブ（ｔｅｐｌｉｚｕｍａｂ））、ＭｉＳｔｅｎｔ  ＳＥＳ（シロリムス）、ＭＫＣ１、Ｎｏｂｏｒｉ（ウミロリムス）、ＯＳＩ０２７、ＯＶＩ１２３（コルジセピン）、Ｐａｌｏｍｉｄ  ５２９、ＰＦ０４６９１５０２、Ｐｒｏｍｕｓ  Ｅｌｅｍｅｎｔ（エベロリムス）、ＰＷＴ３３５９７、Ｒａｐａｍｕｎｅ（シロリムス）、Ｒｅｓｏｌｕｔｅ  ＤＥＳ（ゾタロリムス）、ＲＧ７４２２、ＳＡＲ２４５４０９、ＳＦ１１２６、ＳＧＮ７５（ボルセツズマブマホドチン（ｖｏｒｓｅｔｕｚｕｍａｂ  ｍａｆｏｄｏｔｉｎ））、Ｓｙｎｅｒｇｙ（エベロリムス）、Ｔａｌｔｏｒｖｉｃ（リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ））、Ｔａｒｃｅｖａ（エルロチニブ）、Ｔｏｒｉｓｅｌ（テムシロリムス）、Ｘｉｅｎｃｅ  Ｐｒｉｍｅ（エベロリムス）、Ｘｉｅｎｃｅ  Ｖ（エベロリムス）、Ｚｏｍａｘｘ（ゾタロリムス）、Ｚｏｒｔｒｅｓｓ（エベロリムス）、ゾタロリムス溶出性末梢ステント（Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｓｔｅｎｔ）ＭＥＤＴＲＯＮＩＣ（ゾタロリムス）、ＡＰ２３８４１、ＡＰ２４１７０、ＡＲｍＴＯＲ２６、ＢＮ１０７、ＢＮ１０８、Ｃａｎｓｔａｔｉｎ  ＧＥＮＺＹＭＥ（カンスタチン（ｃａｎｓｔａｔｉｎ））、ＣＵ９０６、ＥＣ０３７１、ＥＣ０５６５、ＫＩ１００４、ＬＯＲ２２０、ＮＶ１２８、Ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ＯＮＣＯＩＭＭＵＮＥ（シロリムス）、ＳＢ２６０２、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  ＰＮＰ  ＳＡＭＹＡＮＧ  ＢＩＯＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ（シロリムス）、ＴＯＰ２１６、ＶＬＩ２７、ＶＳ５５８４、ＷＹＥ１２５１３２、ＸＬ３８８、Ａｄｖａｃａｎ���エベロリムス）、ＡＺＤ８０５５、Ｃｙｐｈｅｒ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｐｌｕｓ  シロリムス溶出性冠動脈ステント（シロリムス）、Ｃｙｐｈｅｒ  シロリムス溶出性冠動脈ステント（シロリムス）、薬物コーティングされたバルーン（シロリムス）、Ｅ−Ｍａｇｉｃ  Ｐｌｕｓ（シロリムス）、Ｅｍｔｏｒ（シロリムス）、Ｅｓｐｒｉｔ（エベロリムス）、Ｅｖｅｒｔｏｒ（エベロリムス）、ＨＢＦ００７９、ＬＣＰ−Ｓｉｒｏ（シロリムス）、Ｌｉｍｕｓ  ＣＬＡＲＩＳ（シロリムス）、ｍＴＯＲインヒビター  ＣＥＬＬＺＯＭＥ、Ｎｅｖｏ  シロリムス溶出性冠動脈ステント（シロリムス）、ｎＰＴ−ｍＴＯＲ、Ｒａｐａｃａｎ（シロリムス）、Ｒｅｎａｃｅｐｔ（シロリムス）、ＲｅＺｏｌｖｅ（シロリムス）、Ｒｏｃａｓ（シロリムス）、ＳＦ１１２６、Ｓｉｒｏｌｉｍ（シロリムス）、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  ＮＯＲＴＨ  ＣＨＩＮＡ（シロリムス）、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  ＲＡＮＢＡＸＹ（シロリムス）、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  ＷＡＴＳＯＮ（シロリムス）Ｓｉｒｏｐａｎ（シロリムス）、Ｓｉｒｏｖａ（シロリムス）、Ｓｕｐｒａｌｉｍｕｓ（シロリムス）、Ｓｕｐｒａｌｉｍｕｓ−Ｃｏｒｅ（シロリムス）、Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ  ＷＡＴＳＯＮ（タクロリムス）、ＴＡＦＡ９３、Ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  ＡＣＣＯＲＤ（テムシロリムス）、Ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  ＳＡＮＤＯＺ（テムシロリムス）、ＴＯＰ２１６、Ｘｉｅｎｃｅ  Ｐｒｉｍｅ（エベロリムス）、Ｘｉｅｎｃｅ  Ｖ（エベロリムス）からなる群より選択される。具体的な態様において、ｍＴｏｒインヒビターは、Ａｆｉｎｉｔｏｒ（エベロリムス）（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｆｉｎｉｔｏｒ．ｃｏｍ／ｉｎｄｅｘ．ｊｓｐ？ｕｓｅｒｔｒａｃｋ．ｆｉｌｔｅｒ＿ａｐｐｌｉｅｄ＝ｔｒｕｅ＆ＮｏｖａＩｄ＝４０２９４６２０６４３３８２０７９６３；最終アクセス日２０１２年１１月２８日）である。別の態様において、エベロリムスは、アロマターゼインヒビターと組合わされる（例えば、Ｂａｓｅｌｇａ，Ｊ．ら、Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ  ｉｎ  Ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  Ｈｏｒｍｏｎｅ−Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１２．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６６（６）：５２０−５２９（これは本明細書中で参照により援用される）を参照のこと）。別の態様において、ｍＴｏｒインヒビターは、当該分野で公知の方法によって特定され得る（例えば、Ｚｈｏｕ，Ｈ．ら、Ｕｐｄａｔｅｓ  ｏｆ  ｍＴｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．２０１０．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１０（７）：５７１−８１（これは本明細書中で参照により援用される）を参照のこと）。いくつかの態様において、ｍＴｏｒインヒビターは、進行した肺がんを有する患者において転移を処置するためまたは予防するためまたは阻害するために使用される。いくつかの態様において、ｍＴｏｒインヒビターは、第２の処置と組み合わせて使用される。いくつかの態様において、第２の処置は、本明細書中に記載される任意の処置である。
【０１１７】
別の態様において、処置は、Ｓｒｃキナーゼインヒビターである。いくつかの態様において、Ｓｒｃインヒビターは、転移を予防するためまたは阻害するために使用される。いくつかの態様において、Ｓｒｃキナーゼインヒビターは、以下の群：ＡＺＤ０５３０（サラカチニブ（ｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ））、Ｂｏｓｕｌｉｆ（ボスチニブ（ｂｏｓｕｔｉｎｉｂ））、ＥＮＭＤ９８１６９３、ＫＤ０２０、ＫＸ０１、Ｓｐｒｙｃｅｌ（ダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ））、Ｙｅｒｖｏｙ（イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ））、ＡＰ２３４６４、ＡＰ２３４８５、ＡＰ２３５８８、ＡＺＤ０４２４、ｃ−Ｓｒｃキナーゼインヒビター  ＫＩＳＳＥＩ、ＣＵ２０１、ＫＸ２３６１、ＳＫＳ９２７、ＳＲＮ００４、ＳＵＮＫ７０６、ＴＧ１００４３５、ＴＧ１００９４８、ＡＰ２３４５１、Ｄａｓａｔｉｎｉｂ  ＨＥＴＥＲＯ（ダサチニブ）、Ｄａｓａｔｉｎｉｂ  ＶＡＬＥＡＮＴ（ダサチニブ）、Ｆｏｎｔｒａｘ（ダサチニブ）、Ｓｒｃキナーゼインヒビター  ＫＩＮＥＸ、ＶＸ６８０（トザセルチブ（ｔｏｚａｓｅｒｔｉｂ）乳酸塩）、ＸＬ２２８およびＳＵＮＫ７０６から選択される。いくつかの実施形態において、Ｓｒｃキナーゼインヒビターは、ダサチニブである。別の態様において、Ｓｒｃキナーゼインヒビターは、当該分野で公知の方法によって特定され得る（例えば、Ｓｅｎ，Ｂ．ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｆ．Ｍ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｒｃ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｋｉｎａｓｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｃａｎｃｅｒｓ．２０１１．Ｊ．Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ．２０１１：１４  ｐａｇｅｓ（これは本明細書中で参照により援用される）を参照のこと）。いくつかの態様において、Ｓｒｃキナーゼインヒビターは、ＳＲＣ応答性シグネチャ（ＳＲＳ）が陽性である患者において転移を処置するためまたは予防するためまたは阻害するために使用される。いくつかの態様において、患者は、ＳＲＳ＋かつＥＲ−である（例えば、Ｚｈａｎｇ，ＣＨ．−Ｆ，ら、Ｌａｔｅｎｔ  Ｂｏｎｅ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｉｎ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｉｅｄ  ｔｏ  Ｓｒｃ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｓｉｇｎａｌｓ．２００９．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．１６：６７−７８（これは本明細書中で参照により援用される）を参照のこと）。いくつかの態様において、Ｓｒｃキナーゼインヒビターは、進行した肺がんを有する患者において転移を処置するためまたは予防するためまたは阻害するために使用される。いくつかの態様において、Ｓｒｃキナーゼインヒビターは、第２の処置と組み合わせて使用される。いくつかの態様において、第２の処置は、本明細書中に記載される任意の処置である。
【０１１８】
別の態様において、処置は、ＣＯＸ−２インヒビターである。いくつかの態様において、ＣＯＸ−２インヒビターは、転移を予防するためまたは阻害するために使用される。いくつかの態様において、ＣＯＸ−２インヒビターは、以下の群：ＡＢＴ９６３、Ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ  ＥＲ  ＪＯＨＮＳＯＮ（アセトアミノフェン）、Ａｃｕｌａｒ  Ｘ（ケトロラクトロメタミン）、ＢＡＹ１０１９０３６（アスピリン）、ＢＡＹ９８７１１１（ジフェンヒドラミン、ナプロキセンナトリウム）、ＢＡＹｌ１９０２（ピロキシカム）、ＢＣＩＢＵＣＨ００１（イブプロフェン）、Ｃａｐｏｘｉｇｅｍ（アプリコキシブ（ａｐｒｉｃｏｘｉｂ））、ＣＳ５０２、ＣＳ６７０（ペルビプロフェン（ｐｅｌｕｂｉｐｒｏｆｅｎ））、Ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ  ＨＰＢＣＤ（ジクロフェナク）、Ｄｉｒａｃｔｉｎ（ケトプロフェン）、ＧＷ４０６３８１、ＨＣＴ１０２６（ニトロフルルビプロフェン（ｎｉｔｒｏｆｌｕｒｂｉｐｒｏｆｅｎ））、Ｈｙａｎａｌｇｅｓｅ−Ｄ（ジクロフェナク）、ＨｙｄｒｏｃｏＤｅｘ（アセトアミノフェン、デキストロメトルファン、ヒドロコドン）、Ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  Ｓｏｄｉｕｍ  ＰＦＩＺＥＲ（イブプロフェンナトリウム）、Ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  ｗｉｔｈ  Ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ  ＰＦＩＺＥＲ（アセトアミノフェン、イブプロフェン）、Ｉｍｐｒａｃｏｒ（ケトプロフェン）、ＩＰ８８０（ジクロフェナク）、ＩＰ９４０（インドメタシン）、ＩＳＶ２０５（ジクロフェナクナトリウム）、ＪＮＳ０１３（アセトアミノフェン、トラマドール塩酸塩）、Ｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ  ＴＤＳ（ケトプロフェン）、ＬＴＮＳ００１（ナプロキセンエテメシル（ｎａｐｒｏｘｅｎ  ｅｔｅｍｅｓｉｌ））、Ｍｅｓａｌａｍｉｎｅ  ＳＡＬＩＸ（メサラミン）、Ｍｅｓａｌａｍｉｎｅ  ＳＯＦＡＲ（メサラミン）、Ｍｅｓａｌａｚｉｎｅ（メサラミン）、ＭＬ３０００（リコフェロン（ｌｉｃｏｆｅｌｏｎｅ））、ＭＲＸ７ＥＡＴ（エトドラク）、Ｎａｐｒｏｘｅｎ  ＩＲＯＫＯ（ナプロキセン）、ＮＣＸ４０１６（ニトロアスピリン）、ＮＣＸ７０１（ニトロアセトアミノフェン）、Ｎｕｐｒｉｎ  ＳＣＯＬＲ（イブプロフェン）、ＯＭＳ１０３ＨＰ（アミトリプチリン塩酸塩、ケトプロフェン、オキシメタゾリン塩酸塩）、Ｏｒａｌｅａｓｅ（ジクロフェナク）、ＯｘｙｃｏＤｅｘ（デキストロメトルファン、オキシコドン）、Ｐ５４、ＰｅｒｃｏＤｅｘ（アセトアミノフェン、デキストロメトルファン、オキシコドン）、ＰＬ３１００（ナプロキセン、ホスファチジルコリン）、ＰＳＤ５０８、Ｒ−Ｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ（ケトプロフェン）、Ｒｅｍｕｒａ（ブロムフェナクナトリウム）、ＲＯＸ８２８（ケトロラクトロメタミン）、ＲＰ１９５８３（ケトプロフェンリジン）、ＲＱ００３１７０７６、ＳＤＸ１０１（Ｒ−エトドラク）、ＴＤＳ９４３（ジクロフェナクナトリウム）、ＴＤＴ０７０（ケトプロフェン）、ＴＰＲ１００、ＴＱ１０１１（ケトプロフェン）、ＴＴ０６３（Ｓ−フルルビプロフェン）、ＵＲ８８８０（シミコキシブ（ｃｉｍｉｃｏｘｉｂ））、Ｖ０４９８ＴＡ０１Ａ（イブプロフェン）、ＶＴ１２２（エトドラク、プロプラノロール）、ＸＰ２０Ｂ（アセトアミノフェン、デキストロプロポキシフェン）、ＸＰ２１Ｂ（ジクロフェナクカリウム）、ＸＰ２１Ｌ（ジクロフェナクカリウム）、Ｚｏｅｎａｓａ（アセチルシステイン、メサラミン）、Ａｃｅｐｈｅｎ、Ａｃｔｉｆｅｄ  Ｐｌｕｓ、Ａｃｔｉｆｅｄ−Ｐ、Ａｃｕｌａｒ、Ａｃｕｌａｒ  ＬＳ、Ａｃｕｌａｒ  ＰＦ、Ａｃｕｌａｒ  Ｘ、Ａｃｕｖａｉｌ、Ａｄｖｉｌ、Ａｄｖｉｌ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｓｉｎｕｓ、Ａｄｖｉｌ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｉｎｕｓ、Ａｄｖｉｌ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ａｄｖｉｌ  ＰＭ、Ａｄｖｉｌ  ＰＭ  Ｃａｐｓｕｌｅ、Ａｉｒ  Ｓａｌｏｎｐａｓ、Ａｉｒｔａｌ、Ａｌｃｏｈｏｌ−Ｆｒｅｅ  ＮｙＱｕｉｌ  Ｃｏｌｄ  ＆  Ｆｌｕ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ａｌｅｖｅ、Ａｌｅｖｅ  ＡＢＤＩ  ＩＢＲＡＨＩＭ、Ａｌｅｖｅ−Ｄ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  ＢＡＹＥＲ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｅｘｔｒａ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｌｅｍｏｎ−Ｌｉｍｅ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｏｒｉｇｉｎａｌ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｐｌｕｓ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  ｐｌｕｓ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｃｏｕｇｈ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  ｐｌｕｓ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｃｏｕｇｈ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ  Ｃｏｌｄ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｄａｙ  Ｎｏｎ−Ｄｒｏｗｓｙ  Ｃｏｌｄ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｆｌｕ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｎｉｇｈｔ  Ｃｏｌｄ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｓｉｎｕｓ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｓｐａｒｋｌｉｎｇ  Ｏｒｉｇｉｎａｌ  Ｃｏｌｄ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  ＰＭ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｗａｋｅ−Ｕｐ  Ｃａｌｌ、Ａｎａｃｉｎ、Ａｎａｐｒｏｘ、Ａｎａｐｒｏｘ  ＭＩＮＥＲＶＡ、Ａｎｓａｉｄ、Ａｐｉｔｏｘｉｎ、Ａｐｒａｎａｘ、Ａｐｒａｎａｘ  ａｂｄｉ、Ａｒｃｏｘｉａ、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｆｏｒｍｕｌａ  Ｂｅｎｇａｙ、Ａｒｔｈｒｏｔｅｃ、Ａｓａｃｏｌ、Ａｓａｃｏｌ  ＨＤ、Ａｓａｃｏｌ  ＭＥＤＵＮＡ  ＡＲＺＮＥＩＭＩＴＴＥＬ、Ａｓａｃｏｌ  ＯＲＩＦＡＲＭ、Ａｓｐｉｒｉｎ  ＢＡＹＥＲ、Ａｓｐｉｒｉｎ  Ｃｏｍｐｌｅｘ、Ａｓｐｉｒｉｎ  Ｍｉｇｒａｎ、ＡＺＤ３５８２、Ａｚｕｌｆｉｄｉｎｅ、Ｂａｒａｌｇａｎ  Ｍ、ＢＡＹ１０１９０３６、ＢＡＹ９８７１１１、ＢＡＹｌ１９０２、ＢＣＩＢＵＣＨ００１、Ｂｅｎａｄｒｙｌ  Ａｌｌｅｒｇｙ、Ｂｅｎａｄｒｙｌ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ、Ｂｅｎｙｌｉｎ  ４  Ｆｌｕ、Ｂｅｎｙｌｉｎ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｂｅｎｙｌｉｎ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ、Ｂｅｎｙｌｉｎ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｉｎｕｓ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ、Ｂｅｎｙｌｉｎ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｉｎｕｓ  Ｐｌｕｓ、Ｂｅｎｙｌｉｎ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｂｅｎｙｌｉｎ１  Ａｌｌ−Ｉｎ−Ｏｎｅ、Ｂｒｅｘｉｎ、Ｂｒｅｘｉｎ  ＡＮＧＥＬＩＮＩ、Ｂｒｏｍｄａｙ、Ｂｕｆｆｅｒｉｎ、Ｂｕｓｃｏｐａｎ  Ｐｌｕｓ、Ｃａｌｄｏｌ��ｒ、Ｃａｌｍａｔｅｌ、Ｃａｍｂｉａ、Ｃａｎａｓａ、Ｃａｐｏｘｉｇｅｍ、Ｃａｔａｆｌａｍ、Ｃｅｌｅｂｒｅｘ、Ｃｅｌｅｂｒｅｘ  ＯＲＩＦＡＲＭ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ａｄｖｉｌ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｓｉｎｕｓ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｕｇｈ  ａｎｄ  Ｒｕｎｎｙ  Ｎｏｓｅ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  ｃｏｌｄ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｃｏｕｇｈ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  ｃｏｌｄ  ａｎｄ  ｓｔｕｆｆｙ  ｎｏｓｅ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  Ｆｌｕ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  ｃｏｌｄ  ＆  ａｌｌｅｒｇｙ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  Ｃｏｕｇｈ  ＆  Ｒｕｎｎｙ  Ｎｏｓｅ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  Ｃｏｕｇｈ  ＆  Ｓｏｒｅ  Ｔｈｒｏａｔ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  ｍｕｌｔｉ  ｓｙｍｐｔｏｍ  ｃｏｌｄ、Ｃｌｉｎｏｒｉｌ、Ｃｏｄｒａｌ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｃｏｄｒａｌ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ  Ｄａｙ  Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｃｏｄｒａｌ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ  Ｎｉｇｈｔ  Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｃｏｄｒａｌ  Ｎｉｇｈｔｉｍｅ、Ｃｏｌａｚａｌ、Ｃｏｍｂｕｎｏｘ、Ｃｏｎｔａｃ  Ｃｏｌｄ  ｐｌｕｓ  Ｆｌｕ、Ｃｏｎｔａｃ  Ｃｏｌｄ  ｐｌｕｓ  Ｆｌｕ  Ｎｏｎ−Ｄｒｏｗｓｙ、Ｃｏｒｉｃｉｄｉｎ  Ｄ、Ｃｏｒｉｃｉｄｉｎ  ＨＢＰ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｃｏｒｉｃｉｄｉｎ  ＨＢＰ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ  Ｍｕｌｔｉ−Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｃｏｌｄ、Ｃｏｒｉｃｉｄｉｎ  ＨＢＰ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ  Ｆｌｕ、Ｃｏｒｉｃｉｄｉｎ  ＨＢＰ  Ｎｉｇｈｔｔｉｍｅ  Ｍｕｌｔｉ−Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｃｏｌｄ、Ｃｏｒｉｃｉｄｉｎ  ＩＩ  Ｅｘｔｒａ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、ＣＳ５０２、ＣＳ６７０、Ｄａｙｐｒｏ、Ｄａｙｐｒｏ  Ａｌｔａ、ＤＤＳ０６Ｃ、Ｄｅｍａｚｉｎ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｄｅｍａｚｉｎ  Ｃｏｕｇｈ、Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｄｅｍａｚｉｎ  ｄａｙ／ｎｉｇｈｔ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｄｅｍａｚｉｎ  ＰＥ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｄｅｍａｚｉｎ  ＰＥ  ｄａｙ／ｎｉｇｈｔ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ  ＨＰＢＣＤ、Ｄｉｍｅｔａｐｐ  Ｄａｙ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｄｉｍｅｔａｐｐ  Ｍｕｌｔｉ−Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｄｉｍｅｔａｐｐ  Ｎｉｇｈｔ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｄｉｍｅｔａｐｐ  Ｐａｉｎ  ａｎｄ  Ｆｅｖｅｒ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｄｉｍｅｔａｐｐ  ＰＥ  Ｓｉｎｕｓ  Ｐａｉｎ、Ｄｉｍｅｔａｐｐ  ＰＥ  Ｓｉｎｕｓ  Ｐａｉｎ  ｐｌｕｓ  Ａｌｌｅｒｇｙ、Ｄｉｐｅｎｔｕｍ、Ｄｉｒａｃｔｉｎ、Ｄｉｓｐｒｉｎ  Ｃｏｌｄ  ’ｎ’  Ｆｅｖｅｒ、Ｄｉｓｐｒｉｎ  Ｅｘｔｒａ、Ｄｉｓｐｒｉｎ  Ｆｏｒｔｅ．Ｄｉｓｐｒｉｎ  Ｐｌｕｓ、Ｄｒｉｓｔａｎ  Ｃｏｌｄ、Ｄｒｉｓｔａｎ  Ｊｕｎｉｏｒ、Ｄｒｉｘｏｒａｌ  Ｐｌｕｓ、Ｄｕｅｘｉｓ、Ｄｙｎａｓｔａｔ、Ｅｆｆｅｒａｌｇａｎ、Ｅｆｆｅｒａｌｇａｎ  Ｐｌｕｓ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｃ、Ｅｆｆｅｒａｌｇａｎ  Ｖｉｔａｍｉｎ  ��、Ｅｌｉｘｓｕｒｅ  ＩＢ、Ｅｘｃｅｄｒｉｎ  Ｂａｃｋ  ａｎｄ  Ｂｏｄｙ、Ｅｘｃｅｄｒｉｎ  Ｍｉｇｒａｉｎｅ、Ｅｘｃｅｄｒｉｎ  ＰＭ、Ｅｘｃｅｄｒｉｎ  Ｓｉｎｕｓ  Ｈｅａｄａｃｈｅ、Ｅｘｃｅｄｒｉｎ  Ｔｅｎｓｉｏｎ  Ｈｅａｄａｃｈｅ、Ｆａｌｃｏｌ、Ｆａｎｓａｍａｃ、Ｆｅｌｄｅｎｅ、ＦｅｖｅｒＡｌｌ、Ｆｉｏｒｉｎａｌ、Ｆｉｏｒｉｎａｌ  ｗｉｔｈ  Ｃｏｄｅｉｎｅ、Ｆｌａｎａｘ、Ｆｌｅｃｔｏｒ  Ｐａｔｃｈ、Ｆｌｕｃａｍ、Ｆｏｒｔａｇｅｓｉｃ、Ｇｅｒｂｉｎ、Ｇｉａｚｏ、Ｇｌａｄｉｏ、Ｇｏｏｄｙ’ｓ  Ｂａｃｋ  ａｎｄ  Ｂｏｄｙ  Ｐａｉｎ、Ｇｏｏｄｙ’ｓ  Ｃｏｏｌ  Ｏｒａｎｇｅ、Ｇｏｏｄｙ’ｓ  Ｅｘｔｒａ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ、Ｇｏｏｄｙ’ｓ  ＰＭ、Ｇｒｅａｓｅｌｅｓｓ  Ｂｅｎｇａｙ、ＧＷ４０６３８１、ＨＣＴ１０２６、Ｈｅ  Ｘｉｎｇ  Ｙｉ、Ｈｙａｎａｌｇｅｓｅ−Ｄ、ＨｙｄｒｏｃｏＤｅｘ、Ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  Ｓｏｄｉｕｍ  ＰＦＩＺＥＲ、Ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  ｗｉｔｈ、Ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ  ＰＦＩＺＥＲ、Ｉｃｙ  Ｈｏｔ  ＳＡＮＯＦＩ  ＡＶＥＮＴＩＳ、Ｉｍｐｒａｃｏｒ、Ｉｎｄｏｃｉｎ、Ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ  ＡＰＰ  ＰＨＡＲＭＡ、Ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ  ＭＹＬＡＮ、Ｉｎｆａｎｔｓ’  Ｔｙｌｅｎｏｌ、ＩＰ８８０、ＩＰ９４０、Ｉｒｅｍｏｄ、ＩＳＶ２０５、ＪＮＳ０１３、Ｊｒ．Ｔｙｌｅｎｏｌ、Ｊｕｎｉｆｅｎ、Ｊｕｎｉｏｒ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ  Ａｄｖｉｌ、Ｊｕｎｉｏｒ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ  Ｍｏｔｒｉｎ、Ｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ  ＴＤＳ、Ｌｅｍｓｉｐ  Ｍａｘ、Ｌｅｍｓｉｐ  Ｍａｘ  Ａｌｌ  ｉｎ  Ｏｎｅ、Ｌｅｍｓｉｐ  Ｍａｘ  Ａｌｌ  Ｎｉｇｈｔ、Ｌｅｍｓｉｐ  Ｍａｘ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｌｉａｌｄａ、Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｍｏｕｔｈ  Ｗａｓｈ、Ｌｌｏｙｄｓ  Ｃｒｅａｍ、Ｌｏｄｉｎｅ、Ｌｏｒｆｉｔ  Ｐ、Ｌｏｘｏｎｉｎ、ＬＴＮＳ００１、Ｍｅｒｓｙｎｄｏｌ、Ｍｅｓａｌａｍｉｎｅ  ＳＡＬＩＸ、Ｍｅｓａｌａｍｉｎｅ  ＳＯＦＡＲ、Ｍｅｓａｌａｚｉｎｅ、Ｍｅｓａｓａｌ  ＧＬＡＸＯ、Ｍｅｓａｓａｌ  ＳＡＮＯＦＩ、Ｍｅｓｕｌｉｄ、
Ｍｅｔｓａｌ  Ｈｅａｔ  Ｒｕｂ、Ｍｉｄｏｌ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ、Ｍｉｄｏｌ  Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｍｉｄｏｌ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｇｅｌｓ、Ｍｉｄｏｌ  ＰＭ、Ｍｉｄｏｌ  Ｔｅｅｎ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ｍｉｇｒａｎｉｎ  ＣＯＡＴＥＤ  ＴＡＢＬＥＴＳ、ＭＬ３０００、Ｍｏｂｉｃ、Ｍｏｈｒｕｓ、Ｍｏｔｒｉｎ、Ｍｏｔｒｉｎ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｉｎｕｓ  Ｐａｉｎ、Ｍｏｔｒｉｎ  ＰＭ、Ｍｏｖａｌｉｓ  ＡＳＰＥＮ、ＭＲＸ７ＥＡＴ、Ｎａｌｆｏｎ、Ｎａｌｆｏｎ  ＰＥＤＩＮＯＬ、Ｎａｐｒｅｌａｎ、Ｎａｐｒｏｓｙｎ、Ｎａｐｒｏｓｙｎ  ＲＰＧ  ＬＩＦＥ  ＳＣＩＥＮＣＥ、Ｎａｐｒｏｘｅｎ  ＩＲＯＫＯ、ＮＣＸ４０１６、ＮＣＸ７０１、ＮｅｏＰｒｏｆｅｎ  ＬＵＮＤＢＥＣＫ、Ｎｅｖａｎａｃ、Ｎｅｘｃｅｄｅ、Ｎｉｆｌａｎ、Ｎｏｒｇｅｓｉｃ  ＭＥＤＩＣＩＳ、Ｎｏｖａｌｇｉｎ、Ｎｕｐｒｉｎ  ＳＣＯＬＲ、Ｎｕｒｏｆｅｎ、Ｎｕｒｏｆｅｎ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｎｕｒｏｆｅｎ  Ｍａｘ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ  Ｍｉｇｒａｉｎｅ、Ｎｕｒｏｆｅｎ  Ｐｌｕｓ、Ｎｕｒｏｍｏｌ、ＮｙＱｕｉｌ  ｗｉｔｈ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｃ、Ｏｃｕｆｅｎ、ＯＭＳ１０３ＨＰ、Ｏｒａｌｅａｓｅ、Ｏｒｕｄｉｓ  ＡＢＢＯＴＴ  ＪＡＰＡＮ、Ｏｒｕｖａｉｌ、Ｏｓｔｅｌｕｃ、ＯｘｙｃｏＤｅｘ、Ｐ５４、Ｐａｎａｄｏｌ、Ｐａｎａｄｏｌ  Ａｃｔｉｆａｓｔ、Ｐａｒａｄｉｎｅ、Ｐａｒａｍａｘ、Ｐａｒｆｅｎａｃ、Ｐｅｄｅａ、Ｐｅｎｎｓａｉｄ、Ｐｅｎｔａｓａ、Ｐｅｎｔａｓａ  ＯＲＩＦＡＲＭ、Ｐｅｏｎ、Ｐｅｒｃｏｄａｎ、Ｐｅｒｃｏｄａｎ−Ｄｅｍｉ、ＰｅｒｃｏＤｅｘ、Ｐｅｒｃｏｇｅｓｉｃ、Ｐｅｒｆａｌｇａｎ、ＰＬ２２００、ＰＬ３１００、Ｐｏｎｓｔｅｌ、Ｐｒｅｘｉｇｅ、Ｐｒｏｌｅｎｓａ、ＰＳＤ５０８、Ｒ−Ｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ、Ｒａｎｔｕｄｉｌ、Ｒｅｌａｆｅｎ、Ｒｅｍｕｒａ、Ｒｏｂａｘｉｓａｌ、Ｒｏｔｅｃ、Ｒｏｗａｓａ、ＲＯＸ８２８、ＲＰ１９５８３、ＲＱ００３１７０７６、Ｒｕｂｏｒ、Ｓａｌｏｆａｌｋ、Ｓａｌｏｎｐａｓ、Ｓａｒｉｄｏｎ、ＳＤＸ１０１、Ｓｅｌｔｏｕｃｈ、ｓｆＲｏｗａｓａ、Ｓｈｉｎｂａｒｏ、Ｓｉｎｕｍａｘ、Ｓｉｎｕｔａｂ、Ｓｉｎｕｔａｂ、ｓｉｎｕｓ、Ｓｐａｌｔ、Ｓｐｒｉｘ、Ｓｔｒｅｆｅｎ、Ｓｕｄａｆｅｄ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｃｏｕｇｈ、Ｓｕｄａｆｅｄ  Ｈｅａｄ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｉｎｕｓ、Ｓｕｄａｆｅｄ  ＰＥ  Ｃｏｌｄ  ｐｌｕｓ  Ｃｏｕｇｈ、Ｓｕｄａｆｅｄ  ＰＥ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｐｌｕｓ  Ｐａｉｎ、Ｓｕｄａｆｅｄ  ＰＥ、Ｓｅｖｅｒｅ  Ｃｏｌｄ、Ｓｕｄａｆｅｄ  ＰＥ  Ｓｉｎｕｓ  Ｄａｙ  ｐｌｕｓ  Ｎｉｇｈｔ  Ｒｅｌｉｅｆ  Ｄａｙ  Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｓｕｄａｆｅｄ  ＰＥ  Ｓｉｎｕｓ  Ｄａｙ  ｐｌｕｓ  Ｎｉｇｈｔ  Ｒｅｌｉｅｆ  Ｎｉｇｈｔ  Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｓｕｄａｆｅｄ  ＰＥ  Ｓｉｎｕｓ  ｐｌｕｓ  Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐａｉｎ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｓｕｄａｆｅｄ  Ｓｉｎｕｓ  Ａｄｖａｎｃｅ、Ｓｕｒｇａｍ、Ｓｙｎａｌｇｏｓ−ＤＣ、Ｓｙｎｆｌｅｘ、Ｔａｖｉｓｔ  ａｌｌｅｒｇｙ／ｓｉｎｕｓ／ｈｅａｄａｃｈｅ、ＴＤＳ９４３、ＴＤＴ０７０、Ｔｈｅｒａｆｌｕ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｏｒｅ  Ｔｈｒｏａｔ、Ｔｈｅｒａｆｌｕ  Ｄａｙｔｉｍｅ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｃｏ��ｄ  ａｎｄ  Ｃｏｕｇｈ、Ｔｈｅｒａｆｌｕ  Ｄａｙｔｉｍｅ  Ｗａｒｍｉｎｇ  Ｒｅｌｉｅｆ，Ｔｈｅｒａｆｌｕ  Ｗａｒｍｉｎｇ  Ｒｅｌｉｅｆ  Ｃａｐｌｅｔｓ  Ｄａｙｔｉｍｅ  Ｍｕｌｔｉ−Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｃｏｌｄ、Ｔｈｅｒａｆｌｕ  Ｗａｒｍｉｎｇ  Ｒｅｌｉｅｆ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｃｈｅｓｔ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ、Ｔｈｏｍａｐｙｒｉｎ、Ｔｈｏｍａｐｙｒｉｎ  Ｃ、Ｔｈｏｍａｐｙｒｉｎ  Ｅｆｆｅｒｖｅｓｃｅｎｔ、Ｔｈｏｍａｐｙｒｉｎ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｔｉｌｃｏｔｉｌ、Ｔｉｓｐｏｌ、Ｔｏｌｅｃｔｉｎ、Ｔｏｒａｄｏｌ、ＴＰＲ１００、ＴＱ１０１１、Ｔｒａｕｍａ−Ｓａｌｂｅ、Ｔｒａｕｍａ−Ｓａｌｂｅ  Ｋｗｉｚｄａ、Ｔｒｅｏ、Ｔｒｅｘｉｍｅｔ、Ｔｒｏｖｅｘ、ＴＴ０６３、Ｔｙｌｅｎｏｌ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｍｕｌｔｉ−Ｓｙｍｐｔｏｍ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｂａｃｋ  Ｐａｉｎ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  ＆  Ｃｏｕｇｈ  Ｄａｙｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  ＆  Ｃｏｕｇｈ  Ｎｉｇｈｔｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｉｎｕｓ  Ｄａｙｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｉｎｕｓ  Ｎｉｇｈｔｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  Ｈｅａｄ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ  Ｓｅｖｅｒｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  Ｍｕｌｔｉ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｄａｙｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  Ｍｕｌｔｉ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｎｉｇｈｔｔｉｍｅ  Ｌｉｑｕｉｄ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  Ｍｕｌｔｉ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｓｅｖｅｒｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  Ｎｏｎ−Ｄｒｏｗｓｉｎｅｓｓ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ  Ｄａｙｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｃｏｌｄ，Ｃｏｕｇｈ  ａｎｄ  Ｆｌｕ  Ｎｉｇｈｔ  ｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｆｌｕ  Ｎｉｇｈｔｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｍｅｎｓｔｒｕａｌ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  ＰＭ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｓｉｎｕｓ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ  ＆  Ｐａｉｎ  Ｄａｙｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｓｉｎｕｓ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ  ＆  Ｐａｉｎ  Ｎｉｇｈｔｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｓｉｎｕｓ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ  ＆  Ｐａｉｎ  Ｓｅｖｅｒｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｓｉｎｕｓ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ  Ｄａｙｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｕｌｔｒａ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｗｉｔｈ  Ｃａｆｆｅｉｎｅ  ａｎｄ  Ｃｏｄｅｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｗｉｔｈ  Ｃｏｄｅｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｕｌｔｒａ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ  Ｂｅｎｇａｙ  Ｃｒｅａｍ、Ｕｌｔｒａｃｅｔ、ＵＲ８８８０、Ｖ０４９８ＴＡ０１Ａ、Ｖｉｃｋｓ  ＮｙＱｕｉｌ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｖｉｃｏｐｒｏｆｅｎ、Ｖｉｍｏｖｏ、Ｖｏｌｔａｒｅｎ  Ｅｍｕｌｇｅｌ、Ｖｏｌｔａｒｅｎ  ＧＥＬ、Ｖｏｌｔａｒｅｎ  ＮＯＶＡＲＴＩＳ  ＣＯＮＳＵＭＥＲ  ＨＥＡＬＴＨ  ＧＭＢＨ、Ｖｏｌｔａｒｅｎ  ＸＲ、ＶＴ１２２、Ｘｅｆｏ、Ｘｅｆｏ  Ｒａｐｉｄ、Ｘｅｆｏｃａｍ、Ｘｉｂｒｏｍ、ＸＬ３、Ｘｏｄｏｌ、ＸＰ２０Ｂ、ＸＰ２１Ｂ、ＸＰ２１Ｌ、ＺｉｐｓｏｒおよびＺｏｅｎａｓａから選択される。別の態様において、ＣＯＸ−２インヒビターは、当該分野で公知の方法によって特定され得る（��えば、Ｄａｎｎｈａｒｄｔ，Ｇ．ａｎｄ  Ｋｉｅｆｅｒ，Ｗ．Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ−ｃｕｒｒｅｎｔ  ｓｔａｔｕｓ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ．２００１．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３６：１０９−１２６（これは本明細書中で参照により援用される）を参照のこと）。いくつかの態様において、ＣＯＸ−２インヒビターは、進行した肺がんを有する患者において転移を処置するためまたは予防するためまたは阻害するために使用される。いくつかの態様において、ＣＯＸ−２インヒビターは、第２の処置と組み合わせて使用される。いくつかの態様において、第２の処置は、本明細書中に記載される任意の処置である。いくつかの態様において、ＣＯＸ−２インヒビターは、デノスマブ、Ｚｏｍｅｔａ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｓ．ｚｏｍｅｔａ．ｃｏｍ／ｉｎｄｅｘ．ｊｓｐ？ｕｓｅｒｔｒａｃｋ．ｆｉｌｔｅｒ＿ａｐｐｌｉｅｄ＝ｔｒｕｅ＆ＮｏｖａＩｄ＝２９３５３７６９３４４６７６３３６３３；最終アクセス日２０１２年１２月２日）、ＣａｒｂｏｚａｎｔｉｎｉｂまたはＣａｂｏｚａｎｔｉｎｉｂ、ＰＴＨＬＨ（副甲状腺ホルモン様ホルモン）またはＰＴＨｒＰ（副甲状腺ホルモン関連タンパク質）を阻止する抗体またはペプチドからなる群より選択される第２の処置と組み合わせて使用される。
【０１１９】
別の態様において、骨分解を回避するためおよび／または予防するために使用される処置剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
・副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）インヒビターおよび副甲状腺様ホルモン（ＰＴＨＬＨ）インヒビター（阻止抗体を含む）またはそれらの組換え型（ＰＴＨのアミノ酸７〜３４に対応するテリパラチド）。このホルモンは、破骨細胞を刺激してその活性を高めることによって作用する。
・ラネル酸ストロンチウムは、代替の経口処置であり、骨芽細胞の増殖を刺激し、破骨細胞の増殖を阻害するので、「二重作用骨剤（ｄｕａｌ  ａｃｔｉｏｎ  ｂｏｎｅ  ａｇｅｎｔｓ）」（ＤＡＢＡ）と呼ばれる薬物の群の一部を形成する。
・「エストロゲンレセプター調節因子（ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）」（ＳＥＲＭ）は、機序に関係なくエストロゲンがレセプターに結合するのを干渉するかまたは阻害する化合物のことを指す。エストロゲンレセプター調節因子の例としては、とりわけ、エストロゲンプロゲスターゲン、エストラジオール、ドロロキシフェン、ラロキシフェン、ラソホキシフェン（ｌａｓｏｆｏｘｉｆｅｎｅ）、ＴＳＥ−４２４、タモキシフェン、イドキシフェン（ｉｄｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン、フルベストラント（ｆｌｕｖｅｓｔｒａｎｔ）、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル−２，２−ジメチルプロパノエート  ４，４’ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニル−ヒドラゾンおよびＳＨ６４６が挙げられる。
・カルシトニンは、カルシトニンレセプターを介して破骨細胞の活性を直接阻害する。カルシトニンレセプターは、破骨細胞の表面上で同定されている。
・ビスホスホネートは、骨粗鬆症および骨転移を伴うがん（後者は、乳がんおよび前立腺がんに関連する高カルシウム血症を伴うかまたは伴わない）などの、骨吸収および再吸収を伴う疾患の予防および処置のために使用される医薬品の群である。本発明の第５の方法によってデザインされる治療において使用され得るビスホスホネートの例としては、窒素含有ビスホスホネート（例えば、パミドロネート、ネリドロネート（ｎｅｒｉｄｒｏｎａｔｅ）、オルパドロネート（ｏｌｐａｄｒｏｎａｔｅ）、アレンドロネート、イバンドロネート、リセドロネート、インカドロネート、ゾレドロネート（ｚｏｌｅｄｒｏｎａｔｅ）またはゾレドロン酸など）および窒素非含有ビスホスホネート（例えば、エチドロネート、クロドロネート、チルドロネートなど）が挙げられるが、これらに限定されない。
・「カテプシンＫインヒビター」とは、カテプシンＫシステインプロテアーゼ活性に干渉する化合物のことを指す。カテプシンＫインヒビターの非限定的な例としては、４−アミノ−ピリミジン−２−カルボニトリル誘導体（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ  ＧＭＢＨの名称下の国際特許出願ＷＯ０３／０２０２７８に記載されている）、公報ＷＯ０３／０２０７２１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ  ＧＭＢＨ）および公報ＷＯ０４／０００８４３（ＡＳＴＲＡＺＥＮＥＣＡ  ＡＢ）に記載されているピロロ−ピリミジン、ならびにＡｘｙｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓの公報ＰＣＴ  ＷＯ００／５５１２６、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｃａｎａｄａ  ＆  Ｃｏ．およびＡｘｙｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのＷＯ０１／４９２８８に記載されているインヒビターが挙げられる。
・本明細書中で使用されるとき「ＤＫＫ−１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ−１）インヒビター」は、ＤＫＫ−１活性を低下させることができる任意の化合物のことを指す。ＤＫＫ−１は、主に成体の骨において発現され、溶骨性病変を有するミエローマ患者においてアップレギュレートされる、可溶性Ｗｎｔ経路アンタゴニストである。ＤＫＫ−１を標的化する薬剤は、多発性骨髄腫患者における溶骨性骨疾患の予防に役割を果たし得る。Ｎｏｖａｒｔｉｓ製のＢＨＱ８８０は、ファースト・イン・クラスの完全にヒトの抗ＤＫＫ−１中和抗体である。前臨床試験は、ＢＨＱ８８０が骨形成を促進し、それによって、腫瘍が誘導する溶骨性疾患を阻害するという仮説を支持している（Ｅｔｔｅｎｂｅｒｇ  Ｓ．ら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ．Ａｐｒｉｌ  １２−１６，２００８；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．要旨）。
・本明細書中で使用されるとき「ＭＥＴおよびＶＥＧＦＲ２の二重インヒビター」は、ＭＥＴによって駆動される腫瘍エスケープを阻止するようにデザインされた、ＭＥＴ経路およびＶＥＧＦ経路の強力な二重インヒビターである任意の化合物のことを指す。ＭＥＴは、腫瘍細胞および内皮細胞だけでなく、骨芽細胞（骨を形成する細胞）および破骨細胞（骨を除去する細胞）においても発現される。ＨＧＦは、これらの細胞型のすべてにおいてＭＥＴに結合し、ＭＥＴ経路に複数のオートクラインループおよびパラクリンループにおける重要な役割を与える。腫瘍細胞におけるＭＥＴの活性化は、転移性の骨病変の確立において重要であるとみられる。同時に、骨芽細胞および破骨細胞におけるＭＥＴ経路の活性化は、異常な骨の成長（すなわち、芽細胞性の病変）または破壊（すなわち、溶解性の病変）を含む骨転移の病理学的特色をもたらし得る。したがって、ＭＥＴ経路の標的化は、転移性の骨病変の確立および進行を予防する実行可能なストラテジーであり得る。以前はＸＬ１８４（ＣＡＳ８４９２１７−６８−１）として知られていたカボザンチニブ（ｃａｂｏｚａｎｔｉｎｉｂ）（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ，Ｉｎｃ）は、ＭＥＴによって駆動される腫瘍エスケープを阻止するようにデザインされた、ＭＥＴ経路およびＶＥＧＦ経路の強力な二重インヒビターである。複数の前臨床試験において、カボザンチニブは、腫瘍細胞を死滅させ、転移を減少させ、血管新生（腫瘍の成長を支えるために必要な新しい血管の形成）を阻害することが示されている。別の好適な二重インヒビターは、Ｅ７０５０（Ｎ−［２−フルオロ−４−（｛２−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピペリジン−１−イル］カルボニルアミノピリジン−４−イル｝オキシ）フェニル］−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）シクロプロパン−１，１−ジカルボキサミド（２Ｒ，３Ｒ）−タルトレート）（ＣＡＳ９２８０３７−１３−２）またはフォレチニブ（ｆｏｒｅｔｉｎｉｂ）（ＧＳＫ１３６３０８９、ＸＬ８８０、ＣＡＳ８４９２１７−６４−７としても知られる）である。
・本明細書中で使用されるとき「ＲＡＮＫＬインヒビター」は、ＲＡＮＫ活性を低下させることができる任意の化合物のことを指す。ＲＡＮＫＬは、ストローマ細胞およびＴ−リンパ球細胞の骨芽細胞膜の表面上に見出され、これらのＴ−リンパ球細胞は、それを分泌する能力が証明されている唯一の細胞である。その主要な機能は、骨吸収に関わる細胞である破骨細胞の活性化である。ＲＡＮＫＬインヒビターは、ＲＡＮＫＬがそのレセプター（ＲＡＮＫ）に結合するのを阻止すること、ＲＡＮＫ媒介性シグナル伝達を阻止すること、またはＲＡＮＫＬの転写もしくは翻訳を阻止することによってＲＡＮＫＬの発現を減少させることによって、作用し得る。本発明における使用に適したＲＡＮＫＬアンタゴニストまたはインヒビターとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
・ＲＡＮＫＬに結合することができ、ＲＡＮＫタンパク質の細胞外ドメインの全体またはフラグメントを含む、好適なＲＡＮＫタンパク質。可溶性ＲＡＮＫは、マウスもしくはヒトＲＡＮＫポリペプチドのシグナルペプチドおよび細胞外ドメインを含み得るか、またはあるいは、シグナルペプチドが除去されたそのタンパク質の成熟型が使用され得る。
・オステオプロテゲリンまたはＲＡＮＫＬ結合能を有するそのバリアント。
・ＲＡＮＫＬ特異的アンチセンス分子。
・ＲＡＮＫＬの転写産物をプロセシングすることができるリボザイム。
・特異的な抗ＲＡＮＫＬ抗体。「抗ＲＡＮＫＬ抗体またはＲＡＮＫＬに対し指向する抗体」は、１つまたは複数のＲＡＮＫＬの機能を阻害する、核因子κＢに対する活性化レセプターのリガンド（ＲＡＮＫＬ）に特異的に結合することができるすべての抗体と本明細書中で理解される。それらの抗体は、当業者に公知の任意の方法を用いて調製され得る。したがって、ポリクローナル抗体は、阻害されるべきタンパク質で動物を免疫することによって調製される。モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｍｉｌｓｔｅｉｎら（Ｎａｔｕｒｅ，１９７５，２５６：４９５）に記載されている方法を用いて調製される。本発明の文脈において好適な抗体としては、可変抗原結合領域および定常領域を含むインタクトな抗体、フラグメント「Ｆａｂ」、「Ｆ（ａｂ’）２」および「Ｆａｂ’」、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディおよび二重特異性抗体が挙げられる。
・特異的な抗ＲＡＮＫＬナノボディ。ナノボディは、天然に存在する重鎖抗体の独特の構造的および機能的特性を含む、抗体由来の治療タンパク質である。ナノボディ技術は、ラクダ科動物（ラクダおよびラマ）が軽鎖を欠く完全に機能的な抗体を有するという発見の後に、最初に開発された。ナノボディの一般構造は、
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
であり、ここで、ＦＲ１からＦＲ４は、フレームワーク領域１〜４であり、ＣＤＲ１からＣＤＲ３は、相補性決定領域１〜３である。これらの重鎖抗体は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。重要なことには、クローニングされ、単離されたＶＨＨドメインは、元の重鎖抗体の完全な抗原結合能を有する完全に安定なポリペプチドである。独特の構造的および機能的特性を有するこれらの新しく発見されたＶＨＨドメインは、Ａｂｌｙｎｘがナノボディと名付けた新世代の治療用抗体の基礎を形成している。
【０１２０】
１つの実施形態において、ＲＡＮＫＬインヒビターは、ＲＡＮＫＬ特異的抗体、ＲＡＮＫＬ特異的ナノボディおよびオステオプロテゲリンからなる群より選択される。具体的な実施形態において、抗ＲＡＮＫＬ抗体は、モノクローナル抗体である。なおもより具体的な実施形態において、抗ＲＡＮＫＬ抗体は、デノスマブ（ｄｅｎｏｓｕｍａｂ）（Ｐａｇｅａｕ，Ｓｔｅｖｅｎ  Ｃ．（２００９）．ｍＡｂｓ  １（３）：２１０−２１５、ＣＡＳ番号６１５２５８−４０−７）（その全内容が本明細書によって参照により援用される）である。デノスマブは、ＲＡＮＫＬに結合して、その活性化を妨げる完全にヒトのモノクローナル抗体である（これは、ＲＡＮＫレセプターには結合しない）。デノスマブの様々な態様が、米国特許第６，７４０，５２２号；同第７，４１１，０５０号；同第７，０９７，８３４号；同第７，３６４，７３６号（これらの各々の全内容が本明細書によってその全体において参照により援用される）によって包含されている。別の実施形態において、ＲＡＮＫＬインヒビターは、デノスマブと同じエピトープに結合する抗体、抗体フラグメントまたは融合構築物。
【０１２１】
好ましい実施形態において、抗ＲＡＮＫＬナノボディは、ＷＯ２００８１４２１６４（その内容は参照により本願に援用される）に記載されているようなナノボディのいずれかである。なおもより好ましい実施形態において、抗ＲＡＮＫＬ抗体は、ＡＬＸ−０１４１（Ａｂｌｙｎｘ）である。ＡＬＸ−０１４１は、閉経後の骨粗鬆症、関節リウマチ（ｒｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、がんおよびある特定の医薬に関連する骨減少を阻害するように、および健常な骨代謝のバランスを再建するように、デザインされた。
【０１２２】
好ましい実施形態において、骨分解を予防する薬剤は、ビスホスホネート、ＲＡＮＫＬインヒビター、ＰＴＨおよびＰＴＨＬＨインヒビターまたはＰＲＧアナログ、ラネル酸ストロンチウム、ＤＫＫ−１インヒビター、ＭＥＴおよびＶＥＧＦＲ２の二重インヒビター、ラジウム−２２３  カルシトニンならびにカテプシンＫインヒビターからなる群より選択される。より好ましい実施形態において、骨分解を予防する薬剤は、ビスホスホネートである。なおもより好ましい実施形態において、ビスホスホネートは、ゾレドロン酸である。
【０１２３】
１つの実施形態において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、骨への原発性肺がん腫瘍の転移を予防するためまたは阻害するために投与される。１つの実施形態において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、大分子である。別の実施形態において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、小分子である。いくつかの実施形態において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、マラビロク（ｍａｒａｖｉｒｏｃ）（Ｖｅｌａｓｃｏ−Ｖｅｌａ’ｑｕｅｚ，Ｍ．ら、２０１２．ＣＣＲ５  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｂｌｏｃｋｓ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｏｆ  Ｂａｓａｌ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．７２：３８３９−３８５０）である。いくつかの実施形態において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、ビクリビロク（ｖｉｃｒｉｖｉｒｏｃ）（Ｖｅｌａｓｃｏ−Ｖｅｌａ’ｑｕｅｚ，Ｍ．ら、２０１２．ＣＣＲ５  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｂｌｏｃｋｓ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｏｆ  Ｂａｓａｌ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．７２：３８３９−３８５０）である。いくつかの態様において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、アプラビロク（ａｐｌａｖｉｒｏｃ）（Ｄｅｍａｒｅｓｔ  Ｊ．Ｆ．ら、２００５．Ｕｐｄａｔｅ  ｏｎ  Ａｐｌａｖｉｒｏｃ：Ａｎ  ＨＩＶ  Ｅｎｔｒｙ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＣＣＲ５．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２（Ｓｕｐｐｌ．１）：Ｓ１３）である。いくつかの態様において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、スピロピペリジンＣＣＲ５アンタゴニスト（Ｒｏｔｓｔｅｉｎ  Ｄ．Ｍ．ら、２００９．Ｓｐｉｒｏｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ  ＣＣＲ５  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．１９（１８）：５４０１−５４０６）である。いくつかの実施形態において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、ＩＮＣＢ００９４７１（Ｋｕｒｉｔｚｋｅｓ，Ｄ．Ｒ．２００９．ＨＩＶ−１  ｅｎｔｒｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：ａｎ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ＨＩＶ  ＡＩＤＳ．４（２）：８２−７）である。
【０１２４】
好ましい実施形態において、ＭＥＴおよびＶＥＧＦＲ２の二重インヒビターは、カボザンチニブ、フォレチニブおよびＥ７０５０からなる群より選択される。
【０１２５】
好ましい実施形態において、ラジウム２２３治療は、アルファラディンである。
【０１２６】
あるいは、転移を処置するためおよび／もしくは予防するために上で述べられた薬剤の
うちの２つ以上の薬剤が組み合わされる組合せ処置が行われ得るか、または上記薬剤は、他のサプリメント（例えば、カルシウムまたはビタミンＤ）もしくはホルモン処置と組合わされ得る。
【０１２７】
骨転移を有する肺がん患者において本発明の個別化治療をデザインするための方法
既に骨に転移しており、ｃ−ＭＡＦレベルが上昇している肺がんに罹患している患者は、破骨細胞活性の上昇によって引き起こされる骨分解の予防を目指した治療から特に利益を得ることができる。
【０１２８】
したがって、別の態様において、本発明は、骨転移を有する肺がんを有する被験体のために個別化治療をデザインするためのインビトロでの方法（以後、本発明の第３の方法）であって、
（ｉ）上記被験体の骨由来の転移性腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルを定量する工程および
（ｉｉ）以前に得られた発現レベルをコントロールサンプル中の上記遺伝子の発現レベルと比較する工程を含み、
発現レベルが、コントロールサンプル中の上記遺伝子の発現レベルと比較して上昇している場合、上記被験体は、骨分解の予防を目指す治療を受けるのに適格であり、
発現レベルが上記参照値と比較して上昇していない場合、上記被験体は、骨転移の予防および／または処置を目指す治療を受けるのに適格ではない方法に関する。
【０１２９】
用語および表現「被験体」、「肺がん」、「腫瘍サンプル」、「転移」、「発現レベルの決定」、「ｃ−ＭＡＦ遺伝子」、「上昇した発現レベル」、および「コントロールサンプル」は、本発明の第１の方法に関して詳細に説明されており、本発明の第２および第３の方法に等しく適用可能である。
【０１３０】
好ましい実施形態において、骨転移は、溶骨性転移である。
【０１３１】
本発明の第３の方法は、第１の工程に、肺がんに罹患している被験体の腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルを定量する工程を含む。本発明の第３の方法の場合、サンプルは、骨転移からの組織サンプルである。
【０１３２】
好ましい実施形態において、本発明の第３の方法は、ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルだけを単一マーカーとして定量する工程を含み、すなわち、その方法は、いかなる追加のマーカーの発現レベルを決定する工程も含まない。
【０１３３】
第２の工程において、被験体の腫瘍サンプルにおいて得られたｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルは、コントロールサンプルにおける前記遺伝子の発現レベルと比較される。ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルの決定は、コントロールサンプルまたは参照サンプルの値と相関されなければならない。解析されるべき腫瘍のタイプに応じて、コントロールサンプルの正確な性質は変動し得る。したがって、本発明の第３の方法を含む場合において、参照サンプルは、転移に罹患していない肺がんを有する被験体の腫瘍組織サンプル、または転移に罹患していない肺がんを有する被験体の生検サンプルの腫瘍組織コレクションにおいて測定されたｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルの中央値に対応するサンプルである。
【０１３４】
いったん、サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルが、測定されて、コントロールサンプルと比較されたら、上記遺伝子の発現レベルが、コントロールサンプル中のその発現レベルと比較して上昇している場合、上記被験体が、骨分解の回避または予防を目指す治療を受けるのに適格であると結論することができる。
【０１３５】
本明細書中で使用されるとき、「骨分解を回避するためまたは予防するための薬剤」とは、骨芽細胞の増殖を刺激するか、または破骨細胞の増殖を阻害することによって、骨分解を予処置するかまたは停止することができる任意の分子のことを指す。
【０１３６】
骨分解および／または骨転移の回避および／または予防のために使用される薬剤の例証的な例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
・副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）またはその組換え型（ＰＴＨのアミノ酸１〜３４に対応するテリパラチド）。このホルモンは、骨芽細胞を刺激してその活性を高めることによって作用する。
・ラネル酸ストロンチウムは、代替の経口処置であり、骨芽細胞の増殖を刺激し、破骨細
胞の増殖を阻害するので、「二重作用骨剤」（ＤＡＢＡ）と呼ばれる薬物の群の一部を形成する。
・「エストロゲンレセプター調節因子」（ＳＥＲＭ）は、機序に関係なくエストロゲンがレセプターに結合するのを干渉するかまたは阻害する化合物のことを指す。エストロゲンレセプター調節因子の例としては、とりわけ、エストロゲンプロゲスターゲン、エストラジオール、ドロロキシフェン、ラロキシフェン、ラソホキシフェン、ＴＳＥ−４２４、タモキシフェン、イドキシフェン、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン、フルベストラント、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル−２，２−ジメチルプロパノエート  ４，４’ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニル−ヒドラゾンおよびＳＨ６４６が挙げられる。
・カルシトニンは、カルシトニンレセプターを介して破骨細胞の活性を直接阻害する。カルシトニンレセプターは、破骨細胞の表面上で同定されている。
・ビスホスホネートは、骨粗鬆症および骨転移を伴うがん（後者は、乳がんおよび前立腺がんに関連する高カルシウム血症を伴うかまたは伴わない）などの、骨吸収および再吸収を伴う疾患の予防および処置のために使用される医薬品の群である。本発明の第３の方法によってデザインされる治療において使用され得るビスホスホネートの例としては、窒素含有ビスホスホネート（例えば、パミドロネート、ネリドロネート、オルパドロネート、アレンドロネート、イバンドロネート、リセドロネート、インカドロネート、ゾレドロネートまたはゾレドロン酸など）および窒素非含有ビスホスホネート（例えば、エチドロネート、クロドロネート、チルドロネートなど）が挙げられるが、これらに限定されない。
・「カテプシンＫインヒビター」とは、カテプシンＫシステインプロテアーゼ活性に干渉する化合物のことを指す。カテプシンＫインヒビターの非限定的な例としては、４−アミノ−ピリミジン−２−カルボニトリル誘導体（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ  ＧＭＢＨの名称下の国際特許出願ＷＯ０３／０２０２７８に記載されている）、公報ＷＯ０３／０２０７２１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ  ＧＭＢＨ）および公報ＷＯ０４／０００８４３（ＡＳＴＲＡＺＥＮＥＣＡ  ＡＢ）に記載されているピロロ−ピリミジン、ならびにＡｘｙｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓの公報ＰＣＴ  ＷＯ００／５５１２６、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｃａｎａｄａ  ＆  Ｃｏ．およびＡｘｙｓ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓのＷＯ０１／４９２８８に記載されているインヒビターが挙げられる。
・本明細書中で使用されるとき「ＤＫＫ−１（Ｄｉｃｋｋｏｐｆ−１）インヒビター」は、ＤＫＫ−１活性を低下させることができる任意の化合物のことを指す。ＤＫＫ−１は、主に成体の骨において発現され、溶骨性病変を有するミエローマ患者においてアップレギュレートされる、可溶性Ｗｎｔ経路アンタゴニストである。ＤＫＫ−１を標的化する薬剤は、多発性骨髄腫患者における溶骨性骨疾患の予防に役割を果たし得る。Ｎｏｖａｒｔｉｓ製のＢＨＱ８８０は、ファースト・イン・クラスの完全にヒトの抗ＤＫＫ−１中和抗体である。前臨床試験は、ＢＨＱ８８０が骨形成を促進し、それによって、腫瘍が誘導する溶骨性疾患を阻害するという仮説を支持している（Ｅｔｔｅｎｂｅｒｇ  Ｓ．ら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ．４月  １２−１６，２００８；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．要旨）。
・本明細書中で使用されるとき「ＭＥＴおよびＶＥＧＦＲ２の二重インヒビター」は、ＭＥＴによって駆動される腫瘍エスケープを阻止するようにデザインされた、ＭＥＴ経路およびＶＥＧＦ経路の強力な二重インヒビターである任意の化合物のことを指す。ＭＥＴは、腫瘍細胞および内皮細胞だけでなく、骨芽細胞（骨を形成する細胞）および破骨細胞（骨を除去する細胞）においても発現される。ＨＧＦは、これらの細胞型のすべてにおけるＭＥＴに結合し、ＭＥＴ経路に、複数のオートクラインループおよびパラクリンループにおいて重要な役割を与える。腫瘍細胞におけるＭＥＴの活性化は、転移性の骨病変の確立において重要であるとみられる。同時に、骨芽細胞および破骨細胞におけるＭＥＴ経路の活性化は、異常な骨の成長（すなわち、芽細胞性の病変）または破壊（すなわち、溶解性の病変）を含む骨転移の病理学的特色をもたらし得る。したがって、ＭＥＴ経路の標的化は、転移性の骨病変の確立および進行の予防の実行可能なストラテジーであり得る。以前はＸＬ１８４（ＣＡＳ８４９２１７−６８−１）として知られていたカボザンチニブ（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ，Ｉｎｃ）は、ＭＥＴによって駆動される腫瘍エスケープを阻止するようにデザインされた、ＭＥＴ経路およびＶＥＧＦ経路の強力な二重インヒビターである。複数の前臨床試験において、カボザンチニブは、腫瘍細胞を死滅させ、転移を減少させ、血管新生（腫瘍の成長を支えるために必要な新しい血管の形成）を阻害することが示されている。別の好適な二重インヒビターは、Ｅ７０５０（Ｎ−［２−フルオロ−４−（｛２−［４−（４−メチルピペラジン−１−イル）ピペリジン−１−イル］カルボニルアミノピリジン−４−イル｝オキシ）フェニル］−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）シクロプロパン−１，１−ジカルボキサミド（２Ｒ，３Ｒ）−タルトレート）（ＣＡＳ９２８０３７−１３−２）またはフォレチニブ（ＧＳＫ１３６３０８９、ＸＬ８８０、ＣＡＳ８４９２１７−６４−７としても知られる）である。
・本明細書中で使用されるとき「ＲＡＮＫＬインヒビター」は、ＲＡＮＫ活性を低下させることができる任意の化合物のことを指す。ＲＡＮＫＬは、ストローマ細胞およびＴ−リンパ球細胞の骨芽細胞膜の表面上に見出され、これらのＴ−リンパ球細胞は、それを分泌する能力が証明されている唯一の細胞である。その主要な機能は、骨吸収に関わる細胞である破骨細胞の活性化である。ＲＡＮＫＬインヒビターは、ＲＡＮＫＬがそのレセプター（ＲＡＮＫ）に結合するのを阻止すること、ＲＡＮＫ媒介性シグナル伝達を阻止すること、またはＲＡＮＫＬの転写もしくは翻訳を阻止することによってＲＡＮＫＬの発現を減少させることによって、作用し得る。本発明における使用に適したＲＡＮＫＬアンタゴニストまたはインヒビターとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
・ＲＡＮＫＬに結合することができ、ＲＡＮＫタンパク質の細胞外ドメインの全体またはフラグメントを含む、好適なＲＡＮＫタンパク質。可溶性ＲＡＮＫは、マウスもしくはヒトＲＡＮＫポリペプチドのシグナルペプチドおよび細胞外ドメインを含み得るか、またはあるいは、シグナルペプチドが除去されたそのタンパク質の成熟型が使用され得る。
・オステオプロテゲリンまたはＲＡＮＫＬ結合能を有するそのバリアント。
・ＲＡＮＫＬ特異的アンチセンス分子。
・ＲＡＮＫＬの転写産物をプロセシングすることができるリボザイム。
・特異的な抗ＲＡＮＫＬ抗体。「抗ＲＡＮＫＬ抗体またはＲＡＮＫＬに対し指向する抗体」は、１つまたは複数のＲＡＮＫＬの機能を阻害する、核因子κＢに対する活性化レセプターのリガンド（ＲＡＮＫＬ）に特異的に結合することができるすべての抗体と本明細書中で理解される。それらの抗体は、当業者に公知の任意の方法を用いて調製され得る。したがって、ポリクローナル抗体は、阻害されるべきタンパク質で動物を免疫することによって調製される。モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｍｉｌｓｔｅｉｎら（Ｎａｔｕｒｅ，１９７５，２５６：４９５）に記載されている方法を用いて調製される。本発明の文脈において好適な抗体としては、可変抗原結合領域および定常領域を含むインタクトな抗体、フラグメント「Ｆａｂ」、「Ｆ（ａｂ’）２」および「Ｆａｂ’」、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディおよび二重特異性抗体が挙げられる。
・特異的な抗ＲＡＮＫＬナノボディ。ナノボディは、天然に存在する重鎖抗体の独特の構造的および機能的特性を含む、抗体由来の治療タンパク質である。ナノボディ技術は、ラクダ科動物（ラクダおよびラマ）が軽鎖を欠く完全に機能的な抗体を有するという発見の後に、最初に開発された。ナノボディの一般構造は、
【０１３７】
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
であり、ここで、ＦＲ１からＦＲ４は、フレームワーク領域１〜４であり、ＣＤＲ１からＣＤＲ３は、相補性決定領域１〜３である。これらの重鎖抗体は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）および２つの定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）を含む。重要なことには、クローニングされ、単離されたＶＨＨドメインは、元の重鎖抗体の完全な抗原結合能を有する完全に安定なポリペプチドである。独特の構造的および機能的特性を有するこれらの新しく発見されたＶＨＨドメインは、Ａｂｌｙｎｘがナノボディと名付けた新世代の治療用抗体の基礎を形成している。
【０１３８】
１つの実施形態において、ＲＡＮＫＬインヒビターは、ＲＡＮＫＬ特異的抗体、ＲＡＮＫＬ特異的ナノボディおよびオステオプロテゲリンからなる群より選択される。好ましい実施形態において、抗ＲＡＮＫＬ抗体は、モノクローナル抗体である。なおもより好ましい実施形態において、抗ＲＡＮＫＬ抗体は、デノスマブ（Ｐａｇｅａｕ，Ｓｔｅｖｅｎ  Ｃ．（２００９）．ｍＡｂｓ  １（３）：２１０−２１５、ＣＡＳ番号６１５２５８−４０−７）である。本発明の状況では、デノスマブは、ＲＡＮＫＬに結合して、その活性化を妨げるモノクローナル抗体である（これは、ＲＡＮＫレセプターには結合しない）。デノスマブの様々な態様が、米国特許第６，７４０，５２２号；同第７，４１１，０５０号；同第７，０９７，８３４号；同第７，３６４，７３６号（これらの各々の全内容が本明細書によって参照により援用される）によって包含されている。別の実施形態において、ＲＡＮＫＬインヒビターは、デノスマブと同じエピトープに結合する抗体、抗体フラグメントまたは融合構築物である。
【０１３９】
好ましい実施形態において、抗ＲＡＮＫＬナノボディは、ＷＯ２００８１４２１６４（その内容は参照により本願に援用される）に記載されているようなナノボディのいずれかである。なおもより好ましい実施形態において、抗ＲＡＮＫＬ抗体は、ＡＬＸ−０１４１（Ａｂｌｙｎｘ）である。ＡＬＸ−０１４１は、閉経後の骨粗鬆症、関節リウマチ、がんおよびある特定の薬剤に関連する骨減少を阻害するように、および健常な骨代謝のバランスを再建するように、デザインされた。
【０１４０】
好ましい実施形態において、骨分解を予防する薬剤は、ビスホスホネート、ＲＡＮＫＬインヒビター、ＰＴＨおよびＰＴＨＬＨインヒビターまたはＰＲＧアナログ、ラネル酸ストロンチウム、ＤＫＫ−１インヒビター、ＭＥＴおよびＶＥＧＦＲ２の二重インヒビター、エストロゲンレセプター調節因子、ラジウム−２２３、カルシトニンならびにカテプシンＫインヒビターからなる群より選択される。より好ましい実施形態において、骨分解を予防する薬剤は、ビスホスホネートである。なおもより好ましい実施形態において、ビスホスホネートは、ゾレドロン酸である。
【０１４１】
１つの実施形態において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、骨への原発性肺がん腫瘍の転移を予防するためまたは阻害するために投与される。１つの実施形態において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、大分子である。別の実施形態において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、小分子である。いくつかの実施形態において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、Ｍａｒａｖｉｒｏｃ（Ｖｅｌａｓｃｏ−Ｖｅｌａ’ｑｕｅｚ，Ｍ．ら、２０１２．ＣＣＲ５  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｂｌｏｃｋｓ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｏｆ  Ｂａｓａｌ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．７２：３８３９−３８５０）である。いくつかの実施形態において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、Ｖｉｃｒｉｖｉｒｏｃ（Ｖｅｌａｓｃｏ−Ｖｅｌａ’ｑｕｅｚ，Ｍ．ら、２０１２．ＣＣＲ５  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ｂｌｏｃｋｓ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｏｆ  Ｂａｓａｌ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．７２：３８３９−３８５０）である。いくつかの態様において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、Ａｐｌａｖｉｒｏｃ（Ｄｅｍａｒｅｓｔ  Ｊ．Ｆ．ら、２００５．Ｕｐｄａｔｅ  ｏｎ  Ａｐｌａｖｉｒｏｃ：Ａｎ  ＨＩＶ  Ｅｎｔｒｙ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＣＣＲ５．Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２（Ｓｕｐｐｌ．１）：Ｓ１３）である。いくつかの態様において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、スピロピペリジンＣＣＲ５アンタゴニスト（Ｒｏｔｓｔｅｉｎ  Ｄ．Ｍ．ら、２００９．Ｓｐｉｒｏｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ  ＣＣＲ５  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．１９（１８）：５４０１−５４０６）である。いくつかの実施形態において、ＣＣＲ５アンタゴニストは、ＩＮＣＢ００９４７１（Ｋｕｒｉｔｚｋｅｓ，Ｄ．Ｒ．２００９．ＨＩＶ−１  ｅｎｔｒｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：ａｎ  ｏｖｅｒｖｉｅｗ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ＨＩＶ  ＡＩＤＳ．４（２）：８２−７）である。
【０１４２】
好ましい実施形態において、ＭＥＴおよびＶＥＧＦＲ２の二重インヒビターは、Ｃａｂｏｚａｎｔｉｎｉｂ、ＦｏｒｅｔｉｎｉｂおよびＥ７０５０からなる群より選択される。
【０１４３】
別の態様において、処置は、ｍＴｏｒインヒビターである。いくつかの態様において、ｍＴｏｒインヒビターは、ｍＴｏｒ／ＰＩ３キナーゼの二重インヒビターである。いくつかの態様において、ｍＴｏｒインヒビターは、転移を予防するためまたは阻害するために使用される。いくつかの態様において、ｍＴｏｒインヒビターは：ＡＢＩ００９（シロリムス）、ラパマイシン（シロリムス）、Ａｂｒａｘａｎｅ（パクリタキセル）、Ａｂｓｏｒｂ（エベロリムス）、Ａｆｉｎｉｔｏｒ（エベロリムス）、Ｇｌｅｅｖｅｃと併用のＡｆｉｎｉｔｏｒ、ＡＳ７０３０２６（ピマセルチブ（ｐｉｍａｓｅｒｔｉｂ））、Ａｘｘｅｓｓ（ウミロリムス（ｕｍｉｒｏｌｉｍｕｓ））、ＡＺＤ２０１４、ＢＥＺ２３５、Ｂｉｏｆｒｅｅｄｏｍ（ウミロリムス）、ＢｉｏＭａｔｒｉｘ（ウミロリムス）、ＢｉｏＭａｔｒｉｘ  ｆｌｅｘ（ウミロリムス）、ＣＣ１１５、ＣＣ２２３、Ｃｏｍｂｏ  Ｂｉｏ−ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  Ｅｌｕｔｉｎｇ  Ｓｔｅｎｔ  ＯＲＢＵＳＮＥＩＣＨ（シロリムス）、Ｃｕｒａｘｉｎ  ＣＢＬＣ１０２（メパクリン）、ＤＥ１０９（シロリムス）、ＤＳ３０７８、Ｅｎｄｅａｖｏｒ  ＤＥＳ（ゾタロリムス）、Ｅｎｄｅａｖｏｒ  Ｒｅｓｏｌｕｔｅ（ゾタロリムス）、Ｆｅｍａｒａ（レトロゾール）、Ｈｏｃｅｎａ（アントロキノノール（ａｎｔｒｏｑｕｉｎｏｎｏｌ））、ＩＮＫ１２８、Ｉｎｓｐｉｒｏｎ（シロリムス）、ＩＰＩ５０４（レタスピマイシン（ｒｅｔａｓｐｉｍｙｃｉｎ）塩酸塩）、ＫＲＮ９５１（チボザニブ（ｔｉｖｏｚａｎｉｂ））、ＭＥ３４４、ＭＧＡ０３１（テプリズマブ（ｔｅｐｌｉｚｕｍａｂ））、ＭｉＳｔｅｎｔ  ＳＥＳ（シロリムス）、ＭＫＣ１、Ｎｏｂｏｒｉ（ウミロリムス）、ＯＳＩ０２７、ＯＶＩ１２３（コルジセピン）、Ｐａｌｏｍｉｄ  ５２９、ＰＦ０４６９１５０２、Ｐｒｏｍｕｓ  Ｅｌｅｍｅｎｔ（エベロリムス）、ＰＷＴ３３５９７、Ｒａｐａｍｕｎｅ（シロリムス）、Ｒｅｓｏｌｕｔｅ  ＤＥＳ（ゾタロリムス）、ＲＧ７４２２、ＳＡＲ２４５４０９、ＳＦ１１２６、ＳＧＮ７５（ボルセツズマブマホドチン（ｖｏｒｓｅｔｕｚｕｍａｂ  ｍａｆｏｄｏｔｉｎ））、Ｓｙｎｅｒｇｙ（エベロリムス）、Ｔａｌｔｏｒｖｉｃ（リダフォロリムス（ｒｉｄａｆｏｒｏｌｉｍｕｓ））、Ｔａｒｃｅｖａ（エルロチニブ）、Ｔｏｒｉｓｅｌ（テムシロリムス）、Ｘｉｅｎｃｅ  Ｐｒｉｍｅ（エベロリムス）、Ｘｉｅｎｃｅ  Ｖ（エベロリムス）、Ｚｏｍａｘｘ（ゾタロリムス）、Ｚｏｒｔｒｅｓｓ（エベロリムス）、ゾタロリムス溶出性末梢ステント（Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｓｔｅｎｔ）ＭＥＤＴＲＯＮＩＣ（ゾタロリムス）、ＡＰ２３８４１、ＡＰ２４１７０、ＡＲｍＴＯＲ２６、ＢＮ１０７、ＢＮ１０８、Ｃａｎｓｔａｔｉｎ  ＧＥＮＺＹＭＥ（カンスタチン（ｃａｎｓｔａｔｉｎ））、ＣＵ９０６、ＥＣ０３７１、ＥＣ０５６５、ＫＩ１００４、ＬＯＲ２２０、ＮＶ１２８、Ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ＯＮＣＯＩＭＭＵＮＥ（シロリムス）、ＳＢ２６０２、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  ＰＮＰ  ＳＡＭＹＡＮＧ  ＢＩＯＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ（シロリムス）、ＴＯＰ２１６、ＶＬＩ２７、ＶＳ５５８４、ＷＹＥ１２５１３２、ＸＬ３８８、Ａｄｖａｃａｎ���エベロリムス）、ＡＺＤ８０５５、Ｃｙｐｈｅｒ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｐｌｕｓ  シロリムス溶出性冠動脈ステント（シロリムス）、Ｃｙｐｈｅｒ  シロリムス溶出性冠動脈ステント（シロリムス）、薬物コーティングされたバルーン（シロリムス）、Ｅ−Ｍａｇｉｃ  Ｐｌｕｓ（シロリムス）、Ｅｍｔｏｒ（シロリムス）、Ｅｓｐｒｉｔ（エベロリムス）、Ｅｖｅｒｔｏｒ（エベロリムス）、ＨＢＦ００７９、ＬＣＰ−Ｓｉｒｏ（シロリムス）、Ｌｉｍｕｓ  ＣＬＡＲＩＳ（シロリムス）、ｍＴＯＲインヒビター  ＣＥＬＬＺＯＭＥ、Ｎｅｖｏ  シロリムス溶出性冠動脈ステント（シロリムス）、ｎＰＴ−ｍＴＯＲ、Ｒａｐａｃａｎ（シロリムス）、Ｒｅｎａｃｅｐｔ（シロリムス）、ＲｅＺｏｌｖｅ（シロリムス）、Ｒｏｃａｓ（シロリムス）、ＳＦ１１２６、Ｓｉｒｏｌｉｍ（シロリムス）、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  ＮＯＲＴＨ  ＣＨＩＮＡ（シロリムス）、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  ＲＡＮＢＡＸＹ（シロリムス）、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  ＷＡＴＳＯＮ（シロリムス）Ｓｉｒｏｐａｎ（シロリムス）、Ｓｉｒｏｖａ（シロリムス）、Ｓｕｐｒａｌｉｍｕｓ（シロリムス）、Ｓｕｐｒａｌｉｍｕｓ−Ｃｏｒｅ（シロリムス）、Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ  ＷＡＴＳＯＮ（タクロリムス）、ＴＡＦＡ９３、Ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  ＡＣＣＯＲＤ（テムシロリムス）、Ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ  ＳＡＮＤＯＺ（テムシロリムス）、ＴＯＰ２１６、Ｘｉｅｎｃｅ  Ｐｒｉｍｅ（エベロリムス）、Ｘｉｅｎｃｅ  Ｖ（エベロリムス）からなる群より選択される。具体的な態様において、ｍＴｏｒインヒビターは、Ａｆｉｎｉｔｏｒ（エベロリムス）（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｆｉｎｉｔｏｒ．ｃｏｍ／ｉｎｄｅｘ．ｊｓｐ？ｕｓｅｒｔｒａｃｋ．ｆｉｌｔｅｒ＿ａｐｐｌｉｅｄ＝ｔｒｕｅ＆ＮｏｖａＩｄ＝４０２９４６２０６４３３８２０７９６３；最終アクセス日２０１２年１１月２８日）である。別の態様において、ｍＴｏｒインヒビターは、当該分野で公知の方法によって特定され得る（例えば、Ｚｈｏｕ，Ｈ．ら、Ｕｐｄａｔｅｓ  ｏｆ  ｍＴｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．２０１０．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１０（７）：５７１−８１（これは本明細書中で参照により援用される）を参照のこと）。いくつかの態様において、ｍＴｏｒインヒビターは、進行した肺がんを有する患者において転移を処置するためまたは予防するためまたは阻害するために使用される。いくつかの態様において、ｍＴｏｒインヒビターは、第２の処置と組み合わせて使用される。いくつかの態様において、第２の処置は、本明細書中に記載される任意の処置である。
【０１４４】
別の態様において、処置は、Ｓｒｃキナーゼインヒビターである。いくつかの態様において、Ｓｒｃインヒビターは、転移を予防するためまたは阻害するために使用される。いくつかの態様において、Ｓｒｃキナーゼインヒビターは、以下の群：ＡＺＤ０５３０（サラカチニブ（ｓａｒａｃａｔｉｎｉｂ））、Ｂｏｓｕｌｉｆ（ボスチニブ（ｂｏｓｕｔｉｎｉｂ））、ＥＮＭＤ９８１６９３、ＫＤ０２０、ＫＸ０１、Ｓｐｒｙｃｅｌ（ダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ））、Ｙｅｒｖｏｙ（イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ））、ＡＰ２３４６４、ＡＰ２３４８５、ＡＰ２３５８８、ＡＺＤ０４２４、ｃ−Ｓｒｃキナーゼインヒビター  ＫＩＳＳＥＩ、ＣＵ２０１、ＫＸ２３６１、ＳＫＳ９２７、ＳＲＮ００４、ＳＵＮＫ７０６、ＴＧ１００４３５、ＴＧ１００９４８、ＡＰ２３４５１、Ｄａｓａｔｉｎｉｂ  ＨＥＴＥＲＯ（ダサチニブ）、Ｄａｓａｔｉｎｉｂ  ＶＡＬＥＡＮＴ（ダサチニブ）、Ｆｏｎｔｒａｘ（ダサチニブ）、Ｓｒｃキナーゼインヒビター  ＫＩＮＥＸ、ＶＸ６８０（トザセルチブ（ｔｏｚａｓｅｒｔｉｂ）乳酸塩）、ＸＬ２２８およびＳＵＮＫ７０６から選択される。いくつかの実施形態において、Ｓｒｃキナーゼインヒビターは、ダサチニブである。別の態様において、Ｓｒｃキナーゼインヒビターは、当該分野で公知の方法によって特定され得る（例えば、Ｓｅｎ，Ｂ．ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｆ．Ｍ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｒｃ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｋｉｎａｓｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｃａｎｃｅｒｓ．２０１１．Ｊ．Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ．２０１１：１４  ｐａｇｅｓ（これは本明細書中で参照により援用される）を参照のこと）。いくつかの態様において、Ｓｒｃキナーゼインヒビターは、ＳＲＣ応答性シグネチャ（ＳＲＳ）が陽性である患者において転移を処置するためまたは予防するためまたは阻害するために使用される。いくつかの態様において、患者は、ＳＲＳ＋である（例えば、Ｚｈａｎｇ，ＣＨ．−Ｆ，ら、Ｌａｔｅｎｔ  Ｂｏｎｅ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｉｎ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｉｅｄ  ｔｏ  Ｓｒｃ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｓｉｇｎａｌｓ．２００９．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．１６：６７−７８（これは本明細書中で参照により援用される）を参照のこと）。いくつかの態様において、Ｓｒｃキナーゼインヒビターは、進行した肺がんを有する患者において転移を処置するためまたは予防するためまたは阻害するために使用される。いくつかの態様において、Ｓｒｃキナーゼインヒビターは、第２の処置と組み合わせて使用される。いくつかの態様において、第２の処置は、本明細書中に記載される任意の処置である。
【０１４５】
別の態様において、処置は、ＣＯＸ−２インヒビターである。いくつかの態様において、ＣＯＸ−２インヒビターは、転移を予防するためまたは阻害するために使用される。いくつかの態様において、ＣＯＸ−２インヒビターは、以下の群：ＡＢＴ９６３、Ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ  ＥＲ  ＪＯＨＮＳＯＮ（アセトアミノフェン）、Ａｃｕｌａｒ  Ｘ（ケトロラクトロメタミン）、ＢＡＹ１０１９０３６（アスピリン）、ＢＡＹ９８７１１１（ジフェンヒドラミン、ナプロキセンナトリウム）、ＢＡＹｌ１９０２（ピロキシカム）、ＢＣＩＢＵＣＨ００１（イブプロフェン）、Ｃａｐｏｘｉｇｅｍ（アプリコキシブ（ａｐｒｉｃｏｘｉｂ））、ＣＳ５０２、ＣＳ６７０（ペルビプロフェン（ｐｅｌｕｂｉｐｒｏｆｅｎ））、Ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ  ＨＰＢＣＤ（ジクロフェナク）、Ｄｉｒａｃｔｉｎ（ケトプロフェン）、ＧＷ４０６３８１、ＨＣＴ１０２６（ニトロフルルビプロフェン（ｎｉｔｒｏｆｌｕｒｂｉｐｒｏｆｅｎ））、Ｈｙａｎａｌｇｅｓｅ−Ｄ（ジクロフェナク）、ＨｙｄｒｏｃｏＤｅｘ（アセトアミノフェン、デキストロメトルファン、ヒドロコドン）、Ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  Ｓｏｄｉｕｍ  ＰＦＩＺＥＲ（イブプロフェンナトリウム）、Ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  ｗｉｔｈ  Ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ  ＰＦＩＺＥＲ（アセトアミノフェン、イブプロフェン）、Ｉｍｐｒａｃｏｒ（ケトプロフェン）、ＩＰ８８０（ジクロフェナク）、ＩＰ９４０（インドメタシン）、ＩＳＶ２０５（ジクロフェナクナトリウム）、ＪＮＳ０１３（アセトアミノフェン、トラマドール塩酸塩）、Ｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ  ＴＤＳ（ケトプロフェン）、ＬＴＮＳ００１（ナプロキセンエテメシル（ｎａｐｒｏｘｅｎ  ｅｔｅｍｅｓｉｌ））、Ｍｅｓａｌａｍｉｎｅ  ＳＡＬＩＸ（メサラミン）、Ｍｅｓａｌａｍｉｎｅ  ＳＯＦＡＲ（メサラミン）、Ｍｅｓａｌａｚｉｎｅ（メサラミン）、ＭＬ３０００（リコフェロン（ｌｉｃｏｆｅｌｏｎｅ））、ＭＲＸ７ＥＡＴ（エトドラク）、Ｎａｐｒｏｘｅｎ  ＩＲＯＫＯ（ナプロキセン）、ＮＣＸ４０１６（ニトロアスピリン）、ＮＣＸ７０１（ニトロアセトアミノフェン）、Ｎｕｐｒｉｎ  ＳＣＯＬＲ（イブプロフェン）、ＯＭＳ１０３ＨＰ（アミトリプチリン塩酸塩、ケトプロフェン、オキシメタゾリン塩酸塩）、Ｏｒａｌｅａｓｅ（ジクロフェナク）、ＯｘｙｃｏＤｅｘ（デキストロメトルファン、オキシコドン）、Ｐ５４、ＰｅｒｃｏＤｅｘ（アセトアミノフェン、デキストロメトルファン、オキシコドン）、ＰＬ３１００（ナプロキセン、ホスファチジルコリン）、ＰＳＤ５０８、Ｒ−Ｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ（ケトプロフェン）、Ｒｅｍｕｒａ（ブロムフェナクナトリウム）、ＲＯＸ８２８（ケトロラクトロメタミン）、ＲＰ１９５８３（ケトプロフェンリジン）、ＲＱ００３１７０７６、ＳＤＸ１０１（Ｒ−エトドラク）、ＴＤＳ９４３（ジクロフェナクナトリウム）、ＴＤＴ０７０（ケトプロフェン）、ＴＰＲ１００、ＴＱ１０１１（ケトプロフェン）、ＴＴ０６３（Ｓ−フルルビプロフェン）、ＵＲ８８８０（シミコキシブ（ｃｉｍｉｃｏｘｉｂ））、Ｖ０４９８ＴＡ０１Ａ（イブプロフェン）、ＶＴ１２２（エトドラク、プロプラノロール）、ＸＰ２０Ｂ（アセトアミノフェン、デキストロプロポキシフェン）、ＸＰ２１Ｂ（ジクロフェナクカリウム）、ＸＰ２１Ｌ（ジクロフェナクカリウム）、Ｚｏｅｎａｓａ（アセチルシステイン、メサラミン）、Ａｃｅｐｈｅｎ、Ａｃｔｉｆｅｄ  Ｐｌｕｓ、Ａｃｔｉｆｅｄ−Ｐ、Ａｃｕｌａｒ、Ａｃｕｌａｒ  ＬＳ、Ａｃｕｌａｒ  ＰＦ、Ａｃｕｌａｒ  Ｘ、Ａｃｕｖａｉｌ、Ａｄｖｉｌ、Ａｄｖｉｌ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｓｉｎｕｓ、Ａｄｖｉｌ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｉｎｕｓ、Ａｄｖｉｌ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ａｄｖｉｌ  ＰＭ、Ａｄｖｉｌ  ＰＭ  Ｃａｐｓｕｌｅ、Ａｉｒ  Ｓａｌｏｎｐａｓ、Ａｉｒｔａｌ、Ａｌｃｏｈｏｌ−Ｆｒｅｅ  ＮｙＱｕｉｌ  Ｃｏｌｄ  ＆  Ｆｌｕ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ａｌｅｖｅ、Ａｌｅｖｅ  ＡＢＤＩ  ＩＢＲＡＨＩＭ、Ａｌｅｖｅ−Ｄ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  ＢＡＹＥＲ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｅｘｔｒａ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｌｅｍｏｎ−Ｌｉｍｅ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｏｒｉｇｉｎａｌ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｐｌｕｓ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  ｐｌｕｓ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｃｏｕｇｈ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  ｐｌｕｓ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｃｏｕｇｈ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ  Ｃｏｌｄ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｄａｙ  Ｎｏｎ−Ｄｒｏｗｓｙ  Ｃｏｌｄ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｆｌｕ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｎｉｇｈｔ  Ｃｏｌｄ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｓｉｎｕｓ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｐｌｕｓ  Ｓｐａｒｋｌｉｎｇ  Ｏｒｉｇｉｎａｌ  Ｃｏｌｄ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  ＰＭ、Ａｌｋａ−Ｓｅｌｔｚｅｒ  Ｗａｋｅ−Ｕｐ  Ｃａｌｌ、Ａｎａｃｉｎ、Ａｎａｐｒｏｘ、Ａｎａｐｒｏｘ  ＭＩＮＥＲＶＡ、Ａｎｓａｉｄ、Ａｐｉｔｏｘｉｎ、Ａｐｒａｎａｘ、Ａｐｒａｎａｘ  ａｂｄｉ、Ａｒｃｏｘｉａ、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｆｏｒｍｕｌａ  Ｂｅｎｇａｙ、Ａｒｔｈｒｏｔｅｃ、Ａｓａｃｏｌ、Ａｓａｃｏｌ  ＨＤ、Ａｓａｃｏｌ  ＭＥＤＵＮＡ  ＡＲＺＮＥＩＭＩＴＴＥＬ、Ａｓａｃｏｌ  ＯＲＩＦＡＲＭ、Ａｓｐｉｒｉｎ  ＢＡＹＥＲ、Ａｓｐｉｒｉｎ  Ｃｏｍｐｌｅｘ、Ａｓｐｉｒｉｎ  Ｍｉｇｒａｎ、ＡＺＤ３５８２、Ａｚｕｌｆｉｄｉｎｅ、Ｂａｒａｌｇａｎ  Ｍ、ＢＡＹ１０１９０３６、ＢＡＹ９８７１１１、ＢＡＹｌ１９０２、ＢＣＩＢＵＣＨ００１、Ｂｅｎａｄｒｙｌ  Ａｌｌｅｒｇｙ、Ｂｅｎａｄｒｙｌ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ、Ｂｅｎｙｌｉｎ  ４  Ｆｌｕ、Ｂｅｎｙｌｉｎ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｂｅｎｙｌｉｎ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ、Ｂｅｎｙｌｉｎ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｉｎｕｓ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ、Ｂｅｎｙｌｉｎ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｉｎｕｓ  Ｐｌｕｓ、Ｂｅｎｙｌｉｎ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｂｅｎｙｌｉｎ１  Ａｌｌ−Ｉｎ−Ｏｎｅ、Ｂｒｅｘｉｎ、Ｂｒｅｘｉｎ  ＡＮＧＥＬＩＮＩ、Ｂｒｏｍｄａｙ、Ｂｕｆｆｅｒｉｎ、Ｂｕｓｃｏｐａｎ  Ｐｌｕｓ、Ｃａｌｄｏｌ��ｒ、Ｃａｌｍａｔｅｌ、Ｃａｍｂｉａ、Ｃａｎａｓａ、Ｃａｐｏｘｉｇｅｍ、Ｃａｔａｆｌａｍ、Ｃｅｌｅｂｒｅｘ、Ｃｅｌｅｂｒｅｘ  ＯＲＩＦＡＲＭ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ａｄｖｉｌ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｓｉｎｕｓ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｕｇｈ  ａｎｄ  Ｒｕｎｎｙ  Ｎｏｓｅ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  ｃｏｌｄ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｃｏｕｇｈ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  ｃｏｌｄ  ａｎｄ  ｓｔｕｆｆｙ  ｎｏｓｅ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  Ｆｌｕ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  ｃｏｌｄ  ＆  ａｌｌｅｒｇｙ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  Ｃｏｕｇｈ  ＆  Ｒｕｎｎｙ  Ｎｏｓｅ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  Ｃｏｕｇｈ  ＆  Ｓｏｒｅ  Ｔｈｒｏａｔ、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｐｌｕｓ  ｍｕｌｔｉ  ｓｙｍｐｔｏｍ  ｃｏｌｄ、Ｃｌｉｎｏｒｉｌ、Ｃｏｄｒａｌ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｃｏｄｒａｌ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ  Ｄａｙ  Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｃｏｄｒａｌ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ  Ｎｉｇｈｔ  Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｃｏｄｒａｌ  Ｎｉｇｈｔｉｍｅ、Ｃｏｌａｚａｌ、Ｃｏｍｂｕｎｏｘ、Ｃｏｎｔａｃ  Ｃｏｌｄ  ｐｌｕｓ  Ｆｌｕ、Ｃｏｎｔａｃ  Ｃｏｌｄ  ｐｌｕｓ  Ｆｌｕ  Ｎｏｎ−Ｄｒｏｗｓｙ、Ｃｏｒｉｃｉｄｉｎ  Ｄ、Ｃｏｒｉｃｉｄｉｎ  ＨＢＰ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｃｏｒｉｃｉｄｉｎ  ＨＢＰ  Ｄａｙ  ａｎｄ  Ｎｉｇｈｔ  Ｍｕｌｔｉ−Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｃｏｌｄ、Ｃｏｒｉｃｉｄｉｎ  ＨＢＰ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ  Ｆｌｕ、Ｃｏｒｉｃｉｄｉｎ  ＨＢＰ  Ｎｉｇｈｔｔｉｍｅ  Ｍｕｌｔｉ−Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｃｏｌｄ、Ｃｏｒｉｃｉｄｉｎ  ＩＩ  Ｅｘｔｒａ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、ＣＳ５０２、ＣＳ６７０、Ｄａｙｐｒｏ、Ｄａｙｐｒｏ  Ａｌｔａ、ＤＤＳ０６Ｃ、Ｄｅｍａｚｉｎ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｄｅｍａｚｉｎ  Ｃｏｕｇｈ、Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｄｅｍａｚｉｎ  ｄａｙ／ｎｉｇｈｔ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｄｅｍａｚｉｎ  ＰＥ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｄｅｍａｚｉｎ  ＰＥ  ｄａｙ／ｎｉｇｈｔ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ  ＨＰＢＣＤ、Ｄｉｍｅｔａｐｐ  Ｄａｙ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｄｉｍｅｔａｐｐ  Ｍｕｌｔｉ−Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｄｉｍｅｔａｐｐ  Ｎｉｇｈｔ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｄｉｍｅｔａｐｐ  Ｐａｉｎ  ａｎｄ  Ｆｅｖｅｒ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｄｉｍｅｔａｐｐ  ＰＥ  Ｓｉｎｕｓ  Ｐａｉｎ、Ｄｉｍｅｔａｐｐ  ＰＥ  Ｓｉｎｕｓ  Ｐａｉｎ  ｐｌｕｓ  Ａｌｌｅｒｇｙ、Ｄｉｐｅｎｔｕｍ、Ｄｉｒａｃｔｉｎ、Ｄｉｓｐｒｉｎ  Ｃｏｌｄ  ’ｎ’  Ｆｅｖｅｒ、Ｄｉｓｐｒｉｎ  Ｅｘｔｒａ、Ｄｉｓｐｒｉｎ  Ｆｏｒｔｅ．Ｄｉｓｐｒｉｎ  Ｐｌｕｓ、Ｄｒｉｓｔａｎ  Ｃｏｌｄ、Ｄｒｉｓｔａｎ  Ｊｕｎｉｏｒ、Ｄｒｉｘｏｒａｌ  Ｐｌｕｓ、Ｄｕｅｘｉｓ、Ｄｙｎａｓｔａｔ、Ｅｆｆｅｒａｌｇａｎ、Ｅｆｆｅｒａｌｇａｎ  Ｐｌｕｓ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｃ、Ｅｆｆｅｒａｌｇａｎ  Ｖｉｔａｍｉｎ  ��、Ｅｌｉｘｓｕｒｅ  ＩＢ、Ｅｘｃｅｄｒｉｎ  Ｂａｃｋ  ａｎｄ  Ｂｏｄｙ、Ｅｘｃｅｄｒｉｎ  Ｍｉｇｒａｉｎｅ、Ｅｘｃｅｄｒｉｎ  ＰＭ、Ｅｘｃｅｄｒｉｎ  Ｓｉｎｕｓ  Ｈｅａｄａｃｈｅ、Ｅｘｃｅｄｒｉｎ  Ｔｅｎｓｉｏｎ  Ｈｅａｄａｃｈｅ、Ｆａｌｃｏｌ、Ｆａｎｓａｍａｃ、Ｆｅｌｄｅｎｅ、ＦｅｖｅｒＡｌｌ、Ｆｉｏｒｉｎａｌ、Ｆｉｏｒｉｎａｌ  ｗｉｔｈ  Ｃｏｄｅｉｎｅ、Ｆｌａｎａｘ、Ｆｌｅｃｔｏｒ  Ｐａｔｃｈ、Ｆｌｕｃａｍ、Ｆｏｒｔａｇｅｓｉｃ、Ｇｅｒｂｉｎ、Ｇｉａｚｏ、Ｇｌａｄｉｏ、Ｇｏｏｄｙ’ｓ  Ｂａｃｋ  ａｎｄ  Ｂｏｄｙ  Ｐａｉｎ、Ｇｏｏｄｙ’ｓ  Ｃｏｏｌ  Ｏｒａｎｇｅ、Ｇｏｏｄｙ’ｓ  Ｅｘｔｒａ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ、Ｇｏｏｄｙ’ｓ  ＰＭ、Ｇｒｅａｓｅｌｅｓｓ  Ｂｅｎｇａｙ、ＧＷ４０６３８１、ＨＣＴ１０２６、Ｈｅ  Ｘｉｎｇ  Ｙｉ、Ｈｙａｎａｌｇｅｓｅ−Ｄ、ＨｙｄｒｏｃｏＤｅｘ、Ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  Ｓｏｄｉｕｍ  ＰＦＩＺＥＲ、Ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  ｗｉｔｈ、Ａｃｅｔａｍｉｎｏｐｈｅｎ  ＰＦＩＺＥＲ、Ｉｃｙ  Ｈｏｔ  ＳＡＮＯＦＩ  ＡＶＥＮＴＩＳ、Ｉｍｐｒａｃｏｒ、Ｉｎｄｏｃｉｎ、Ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ  ＡＰＰ  ＰＨＡＲＭＡ、Ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ  ＭＹＬＡＮ、Ｉｎｆａｎｔｓ’  Ｔｙｌｅｎｏｌ、ＩＰ８８０、ＩＰ９４０、Ｉｒｅｍｏｄ、ＩＳＶ２０５、ＪＮＳ０１３、Ｊｒ．Ｔｙｌｅｎｏｌ、Ｊｕｎｉｆｅｎ、Ｊｕｎｉｏｒ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ  Ａｄｖｉｌ、Ｊｕｎｉｏｒ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ  Ｍｏｔｒｉｎ、Ｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ  ＴＤＳ、Ｌｅｍｓｉｐ  Ｍａｘ、Ｌｅｍｓｉｐ  Ｍａｘ  Ａｌｌ  ｉｎ  Ｏｎｅ、Ｌｅｍｓｉｐ  Ｍａｘ  Ａｌｌ  Ｎｉｇｈｔ、Ｌｅｍｓｉｐ  Ｍａｘ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｌｉａｌｄａ、Ｌｉｓｔｅｒｉｎｅ  Ｍｏｕｔｈ  Ｗａｓｈ、Ｌｌｏｙｄｓ  Ｃｒｅａｍ、Ｌｏｄｉｎｅ、Ｌｏｒｆｉｔ  Ｐ、Ｌｏｘｏｎｉｎ、ＬＴＮＳ００１、Ｍｅｒｓｙｎｄｏｌ、Ｍｅｓａｌａｍｉｎｅ  ＳＡＬＩＸ、Ｍｅｓａｌａｍｉｎｅ  ＳＯＦＡＲ、Ｍｅｓａｌａｚｉｎｅ、Ｍｅｓａｓａｌ  ＧＬＡＸＯ、Ｍｅｓａｓａｌ  ＳＡＮＯＦＩ、Ｍｅｓｕｌｉｄ、
Ｍｅｔｓａｌ  Ｈｅａｔ  Ｒｕｂ、Ｍｉｄｏｌ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ、Ｍｉｄｏｌ  Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｍｉｄｏｌ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｇｅｌｓ、Ｍｉｄｏｌ  ＰＭ、Ｍｉｄｏｌ  Ｔｅｅｎ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ｍｉｇｒａｎｉｎ  ＣＯＡＴＥＤ  ＴＡＢＬＥＴＳ、ＭＬ３０００、Ｍｏｂｉｃ、Ｍｏｈｒｕｓ、Ｍｏｔｒｉｎ、Ｍｏｔｒｉｎ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｉｎｕｓ  Ｐａｉｎ、Ｍｏｔｒｉｎ  ＰＭ、Ｍｏｖａｌｉｓ  ＡＳＰＥＮ、ＭＲＸ７ＥＡＴ、Ｎａｌｆｏｎ、Ｎａｌｆｏｎ  ＰＥＤＩＮＯＬ、Ｎａｐｒｅｌａｎ、Ｎａｐｒｏｓｙｎ、Ｎａｐｒｏｓｙｎ  ＲＰＧ  ＬＩＦＥ  ＳＣＩＥＮＣＥ、Ｎａｐｒｏｘｅｎ  ＩＲＯＫＯ、ＮＣＸ４０１６、ＮＣＸ７０１、ＮｅｏＰｒｏｆｅｎ  ＬＵＮＤＢＥＣＫ、Ｎｅｖａｎａｃ、Ｎｅｘｃｅｄｅ、Ｎｉｆｌａｎ、Ｎｏｒｇｅｓｉｃ  ＭＥＤＩＣＩＳ、Ｎｏｖａｌｇｉｎ、Ｎｕｐｒｉｎ  ＳＣＯＬＲ、Ｎｕｒｏｆｅｎ、Ｎｕｒｏｆｅｎ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ、Ｎｕｒｏｆｅｎ  Ｍａｘ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ  Ｍｉｇｒａｉｎｅ、Ｎｕｒｏｆｅｎ  Ｐｌｕｓ、Ｎｕｒｏｍｏｌ、ＮｙＱｕｉｌ  ｗｉｔｈ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｃ、Ｏｃｕｆｅｎ、ＯＭＳ１０３ＨＰ、Ｏｒａｌｅａｓｅ、Ｏｒｕｄｉｓ  ＡＢＢＯＴＴ  ＪＡＰＡＮ、Ｏｒｕｖａｉｌ、Ｏｓｔｅｌｕｃ、ＯｘｙｃｏＤｅｘ、Ｐ５４、Ｐａｎａｄｏｌ、Ｐａｎａｄｏｌ  Ａｃｔｉｆａｓｔ、Ｐａｒａｄｉｎｅ、Ｐａｒａｍａｘ、Ｐａｒｆｅｎａｃ、Ｐｅｄｅａ、Ｐｅｎｎｓａｉｄ、Ｐｅｎｔａｓａ、Ｐｅｎｔａｓａ  ＯＲＩＦＡＲＭ、Ｐｅｏｎ、Ｐｅｒｃｏｄａｎ、Ｐｅｒｃｏｄａｎ−Ｄｅｍｉ、ＰｅｒｃｏＤｅｘ、Ｐｅｒｃｏｇｅｓｉｃ、Ｐｅｒｆａｌｇａｎ、ＰＬ２２００、ＰＬ３１００、Ｐｏｎｓｔｅｌ、Ｐｒｅｘｉｇｅ、Ｐｒｏｌｅｎｓａ、ＰＳＤ５０８、Ｒ−Ｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎ、Ｒａｎｔｕｄｉｌ、Ｒｅｌａｆｅｎ、Ｒｅｍｕｒａ、Ｒｏｂａｘｉｓａｌ、Ｒｏｔｅｃ、Ｒｏｗａｓａ、ＲＯＸ８２８、ＲＰ１９５８３、ＲＱ００３１７０７６、Ｒｕｂｏｒ、Ｓａｌｏｆａｌｋ、Ｓａｌｏｎｐａｓ、Ｓａｒｉｄｏｎ、ＳＤＸ１０１、Ｓｅｌｔｏｕｃｈ、ｓｆＲｏｗａｓａ、Ｓｈｉｎｂａｒｏ、Ｓｉｎｕｍａｘ、Ｓｉｎｕｔａｂ、Ｓｉｎｕｔａｂ、ｓｉｎｕｓ、Ｓｐａｌｔ、Ｓｐｒｉｘ、Ｓｔｒｅｆｅｎ、Ｓｕｄａｆｅｄ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｃｏｕｇｈ、Ｓｕｄａｆｅｄ  Ｈｅａｄ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｉｎｕｓ、Ｓｕｄａｆｅｄ  ＰＥ  Ｃｏｌｄ  ｐｌｕｓ  Ｃｏｕｇｈ、Ｓｕｄａｆｅｄ  ＰＥ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｐｌｕｓ  Ｐａｉｎ、Ｓｕｄａｆｅｄ  ＰＥ、Ｓｅｖｅｒｅ  Ｃｏｌｄ、Ｓｕｄａｆｅｄ  ＰＥ  Ｓｉｎｕｓ  Ｄａｙ  ｐｌｕｓ  Ｎｉｇｈｔ  Ｒｅｌｉｅｆ  Ｄａｙ  Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｓｕｄａｆｅｄ  ＰＥ  Ｓｉｎｕｓ  Ｄａｙ  ｐｌｕｓ  Ｎｉｇｈｔ  Ｒｅｌｉｅｆ  Ｎｉｇｈｔ  Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｓｕｄａｆｅｄ  ＰＥ  Ｓｉｎｕｓ  ｐｌｕｓ  Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐａｉｎ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｓｕｄａｆｅｄ  Ｓｉｎｕｓ  Ａｄｖａｎｃｅ、Ｓｕｒｇａｍ、Ｓｙｎａｌｇｏｓ−ＤＣ、Ｓｙｎｆｌｅｘ、Ｔａｖｉｓｔ  ａｌｌｅｒｇｙ／ｓｉｎｕｓ／ｈｅａｄａｃｈｅ、ＴＤＳ９４３、ＴＤＴ０７０、Ｔｈｅｒａｆｌｕ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｏｒｅ  Ｔｈｒｏａｔ、Ｔｈｅｒａｆｌｕ  Ｄａｙｔｉｍｅ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｃｏ��ｄ  ａｎｄ  Ｃｏｕｇｈ、Ｔｈｅｒａｆｌｕ  Ｄａｙｔｉｍｅ  Ｗａｒｍｉｎｇ  Ｒｅｌｉｅｆ，Ｔｈｅｒａｆｌｕ  Ｗａｒｍｉｎｇ  Ｒｅｌｉｅｆ  Ｃａｐｌｅｔｓ  Ｄａｙｔｉｍｅ  Ｍｕｌｔｉ−Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｃｏｌｄ、Ｔｈｅｒａｆｌｕ  Ｗａｒｍｉｎｇ  Ｒｅｌｉｅｆ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｃｈｅｓｔ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ、Ｔｈｏｍａｐｙｒｉｎ、Ｔｈｏｍａｐｙｒｉｎ  Ｃ、Ｔｈｏｍａｐｙｒｉｎ  Ｅｆｆｅｒｖｅｓｃｅｎｔ、Ｔｈｏｍａｐｙｒｉｎ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｔｉｌｃｏｔｉｌ、Ｔｉｓｐｏｌ、Ｔｏｌｅｃｔｉｎ、Ｔｏｒａｄｏｌ、ＴＰＲ１００、ＴＱ１０１１、Ｔｒａｕｍａ−Ｓａｌｂｅ、Ｔｒａｕｍａ−Ｓａｌｂｅ  Ｋｗｉｚｄａ、Ｔｒｅｏ、Ｔｒｅｘｉｍｅｔ、Ｔｒｏｖｅｘ、ＴＴ０６３、Ｔｙｌｅｎｏｌ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｍｕｌｔｉ−Ｓｙｍｐｔｏｍ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｂａｃｋ  Ｐａｉｎ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  ＆  Ｃｏｕｇｈ  Ｄａｙｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  ＆  Ｃｏｕｇｈ  Ｎｉｇｈｔｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｉｎｕｓ  Ｄａｙｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｓｉｎｕｓ  Ｎｉｇｈｔｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  Ｈｅａｄ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ  Ｓｅｖｅｒｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  Ｍｕｌｔｉ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｄａｙｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  Ｍｕｌｔｉ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｎｉｇｈｔｔｉｍｅ  Ｌｉｑｕｉｄ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  Ｍｕｌｔｉ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｓｅｖｅｒｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  Ｎｏｎ−Ｄｒｏｗｓｉｎｅｓｓ  Ｆｏｒｍｕｌａ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｌｄ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ  Ｄａｙｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｃｏｌｄ，Ｃｏｕｇｈ  ａｎｄ  Ｆｌｕ  Ｎｉｇｈｔ  ｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｆｌｕ  Ｎｉｇｈｔｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｍｅｎｓｔｒｕａｌ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  ＰＭ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｓｉｎｕｓ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ  ＆  Ｐａｉｎ  Ｄａｙｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｓｉｎｕｓ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ  ＆  Ｐａｉｎ  Ｎｉｇｈｔｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｓｉｎｕｓ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ  ＆  Ｐａｉｎ  Ｓｅｖｅｒｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｓｉｎｕｓ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｃｏｎｇｅｓｔｉｏｎ  Ｄａｙｔｉｍｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  Ｕｌｔｒａ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｗｉｔｈ  Ｃａｆｆｅｉｎｅ  ａｎｄ  Ｃｏｄｅｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｔｙｌｅｎｏｌ  ｗｉｔｈ  Ｃｏｄｅｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｕｌｔｒａ  Ｓｔｒｅｎｇｔｈ  Ｂｅｎｇａｙ  Ｃｒｅａｍ、Ｕｌｔｒａｃｅｔ、ＵＲ８８８０、Ｖ０４９８ＴＡ０１Ａ、Ｖｉｃｋｓ  ＮｙＱｕｉｌ  Ｃｏｌｄ  ａｎｄ  Ｆｌｕ  Ｒｅｌｉｅｆ、Ｖｉｃｏｐｒｏｆｅｎ、Ｖｉｍｏｖｏ、Ｖｏｌｔａｒｅｎ  Ｅｍｕｌｇｅｌ、Ｖｏｌｔａｒｅｎ  ＧＥＬ、Ｖｏｌｔａｒｅｎ  ＮＯＶＡＲＴＩＳ  ＣＯＮＳＵＭＥＲ  ＨＥＡＬＴＨ  ＧＭＢＨ、Ｖｏｌｔａｒｅｎ  ＸＲ、ＶＴ１２２、Ｘｅｆｏ、Ｘｅｆｏ  Ｒａｐｉｄ、Ｘｅｆｏｃａｍ、Ｘｉｂｒｏｍ、ＸＬ３、Ｘｏｄｏｌ、ＸＰ２０Ｂ、ＸＰ２１Ｂ、ＸＰ２１Ｌ、ＺｉｐｓｏｒおよびＺｏｅｎａｓａから選択される。別の態様において、ＣＯＸ−２インヒビターは、当該分野で公知の方法によって特定され得る（��えば、Ｄａｎｎｈａｒｄｔ，Ｇ．ａｎｄ  Ｋｉｅｆｅｒ，Ｗ．Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ−ｃｕｒｒｅｎｔ  ｓｔａｔｕｓ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ．２００１．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３６：１０９−１２６（これは本明細書中で参照により援用される）を参照のこと）。いくつかの態様において、ＣＯＸ−２インヒビターは、進行した肺がんを有する患者において転移を処置するためまたは予防するためまたは阻害するために使用される。いくつかの態様において、ＣＯＸ−２インヒビターは、第２の処置と組み合わせて使用される。いくつかの態様において、第２の処置は、本明細書中に記載される任意の処置である。いくつかの態様において、ＣＯＸ−２インヒビターは、デノスマブ、Ｚｏｍｅｔａ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｓ．ｚｏｍｅｔａ．ｃｏｍ／ｉｎｄｅｘ．ｊｓｐ？ｕｓｅｒｔｒａｃｋ．ｆｉｌｔｅｒ＿ａｐｐｌｉｅｄ＝ｔｒｕｅ＆ＮｏｖａＩｄ＝２９３５３７６９３４４６７６３３６３３；最終アクセス日２０１２年１２月２日）、ＣａｒｂｏｚａｎｔｉｎｉｂまたはＣａｂｏｚａｎｔｉｎｉｂ、ＰＴＨＬＨ（副甲状腺ホルモン様ホルモン）またはＰＴＨｒＰ（副甲状腺ホルモン関連タンパク質）を阻止する抗体またはペプチドからなる群より選択される第２の処置と組み合わせて使用される。
【０１４６】
好ましい実施形態において、ラジウム−２２３療法は、アルファラディン（別名Ｘｏｆｉｇｏ）（ラジウム−２２３二塩化物）である。アルファラディンは、がん細胞を殺すために、ラジウム−２２３の崩壊からのアルファ線を使用する。ラジウム−２２３は、天然に、カルシウム模倣物としてのその特性のおかげで骨転移に対して自身を標的化する。アルファ線は、２〜１０個の細胞という非常に短い範囲（ベータまたはガンマ線に基づく現行の放射線治療と比べて）を有するので、周囲の健常な組織（特に骨髄）にもたらす損傷はより少ない。カルシウムとよく似た特性を有するので、ラジウム−２２３は、身体内の骨を構築するためにカルシウムが使用されている位置（去勢抵抗性の進行前立腺がんを有する男性の骨格転移に見られるようなより速い異常な骨成長の部位を含む）に引き込まれる。ラジウム−２２３は、注射後、異常に骨が成長している部位に血流によって運ばれる。がんが身体内で生じ始めた位置は、原発腫瘍として公知である。これらの細胞のうちのいくつかは、離脱して、血流によって身体の別の部位に運ばれ得る。次いで、それらのがん細胞は、身体のその位置に定着して、新しい腫瘍を形成し得る。これが起きる場合、それは、二次がんまたは転移と呼ばれる。末期の前立腺がんを有するほとんどの患者は、骨にその疾患の最大の負担を被る。ラジウム−２２３を用いる目的は、この二次がんを選択的に標的化することである。骨に取り込まれない任意のラジウム−２２３は、すみやかに腸へと経路を定められ、排泄される。好ましい実施形態において、骨分解を予防する薬剤は、ビスホスホネートである。なおもより好ましい実施形態において、ビスホスホネートは、ゾレドロン酸である。
【０１４７】
あるいは、転移を処置するためおよび／もしくは予防するために上で述べられた薬剤のうちの２つ以上の薬剤が組み合わされる組合せ処置が行われ得るか、または上記薬剤は、他のサプリメント（例えば、カルシウムまたはビタミンＤ）もしくはホルモン処置と組合わされ得る。
【０１４８】
ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅の検出に基づく、肺がんにおける転移の診断または予後診断の方法
一態様において、本発明は、肺がんを有する被験体における転移の診断（以後、本発明の第４の診断方法）および／または肺がんを有する被験体において転移を起こす傾向の予後診断のためのインビトロでの方法であって、ｃ−ＭＡＦ遺伝子が上記被験体の腫瘍組織サンプルにおいて増幅しているか否かを決定する工程を含み、上記遺伝子がコントロールサンプルと比較して増幅している場合、上記被験体は、転移について陽性の診断を有するかまたは転移を起こす傾向がより高い、方法に関する。
【０１４９】
特定の実施形態において、本発明の第４の方法において診断される肺がんは、ＮＳＣＬＣである。
【０１５０】
用語「ｃ−ＭＡＦ遺伝子」、「転移」、「腫瘍サンプル」、「肺がん」、「肺がんを有する被験体における転移の診断」、「肺がんを有する被験体において転移を起こす傾向の予後診断」、「被験体」、「患者」、「転移の陽性の診断を有する被験体」、「転移を起こす傾向がより高い被験体」は、本発明の第１の方法の文脈において詳細に説明されており、本発明の第４の方法に等しく適用可能である。
【０１５１】
特定の実施形態において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅の程度は、上記遺伝子を含む染色体領域の増幅の決定によって決定され得る。好ましくは、その増幅がｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅の存在を示す染色体領域は、ｃ−ＭＡＦ遺伝子を含む遺伝子座１６ｑ２２−ｑ２４である。遺伝子座１６ｑ２２−ｑ２４は、１６番染色体、上記染色体の長腕およびバンド２２〜バンド２４の範囲に位置する。この領域は、ＮＣＢＩデータベースにおいてコンティグＮＴ＿０１０４９８．１５およびＮＴ＿０１０５４２．１５と対応する。別の好ましい実施形態において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅の程度は、上記遺伝子に特異的なプローブを使用することによって決定され得る。
【０１５２】
本発明の第４の診断／予後診断方法は、第１の工程に、ｃ−ＭＡＦ遺伝子が被験体の腫瘍サンプルにおいて増幅されているかを決定する工程を含む。その目的のために、腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅は、コントロールサンプルと比較される。
【０１５３】
本明細書中で理解されるように、用語「遺伝子の増幅」とは、遺伝子または遺伝子フラグメントの様々なコピーが、個別の細胞または細胞系において形成されるプロセスのことを指す。その遺伝子のコピーは、必ずしも同じ染色体に位置するとは限らない。その重複領域は、「アンプリコン」と呼ばれることが多い。通常は、生成されるｍＲＮＡの量、すなわち、遺伝子発現レベルは、特定の遺伝子のコピー数に比例して増加する。
【０１５４】
特定の実施形態において、肺がんを有する被験体における転移の診断のためのおよび／または肺がんを有する被験体において転移を起こす傾向の予後診断のための本発明の第４の方法は、上記被験体の腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子コピー数を決定する工程および上記コピー数を、コントロールまたは参照サンプルのコピー数と比較する工程を含み、ｃ−ＭＡＦコピー数が、コントロールサンプルのｃ−ＭＡＦコピー数と比較して高い場合、被験体は、転移について陽性の診断を有するかまたは転移を起こす傾向がより高い。
【０１５５】
コントロールサンプルは、転移に罹患していない肺がんを有する被験体の腫瘍サンプルまたは転移に罹患していない肺がんを有する被験体の生検サンプル中の腫瘍組織コレクションにおいて測定されたｃ−ＭＡＦ遺伝子コピー数の中央値に対応する腫瘍サンプルを指す。上記参照サンプルは、代表的には、被験体集団由来の等量のサンプルを合わせることによって得られる。ｃ−ＭＡＦ遺伝子コピー数が、コントロールサンプル中の上記遺伝子のコピー数と比較して上昇している場合、被験体は、転移について陽性の診断を有するかまたは転移を起こす傾向がより高い。
【０１５６】
本明細書中で使用されるとき、用語「遺伝子コピー数」とは、細胞における核酸分子のコピー数のことを指す。遺伝子コピー数は、細胞のゲノム（染色体）ＤＮＡにおける遺伝子コピー数を含む。正常な細胞（非腫瘍細胞）では、遺伝子コピー数は、通常、２コピー（染色体対の各メンバーにおいて１コピー）である。遺伝子コピー数は、時折、細胞集団のサンプルから採取された遺伝子コピー数の半数を含む。  
【０１５７】
本発明において、「遺伝子コピー数の上昇」は、ｃ−ＭＡＦ遺伝子コピー数が、参照サンプルまたはコントロールサンプルが有するコピー数よりも多い場合と理解される。特に、ｃ−ＭＡＦ遺伝子のコピー数が、２コピーを超える、例えば３、４、５、６、７、８、９、または１０コピーである、さらに１０コピーを超える場合、サンプルのｃ−ＭＡＦコピー数が上昇していると考えることができる。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、増幅は、１６ｑ２３遺伝子座の領域における増幅である。いくつかの実施形態において、増幅は、およそ１６番染色体の約７９，３９２，９５９ｂｐ〜約７９，６６３，８０６ｂｐ（セントロメアからテロメアまで）の染色体領域の任意の部分における増幅である。いくつかの実施形態において、増幅は、１６番染色体の約７９，３９２，９５９ｂｐ〜約７９，６６３，８０６ｂｐであるがＤＮＡ反復エレメントを排除したゲノム領域における増幅である。いくつかの実施形態において、増幅は、その領域に特異的なプローブを使用して測定される。
【０１５９】
特定の実施形態において、増幅またはコピー数は、インサイチュハイブリダイゼーションまたはＰＣＲによって決定される。
【０１６０】
ｃ−ＭＡＦ遺伝子または染色体領域１６ｑ２２−ｑ２４が増幅されているかを決定するための方法は、当該分野において広く公知である。上記方法としては、インサイチュハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）（例えば、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、色素形成インサイチュハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）またはシルバーインサイチュハイブリダイゼーション（ＳＩＳＨ））、ゲノム比較ハイブリダイゼーションまたはポリメラーゼ連鎖反応（例えば、リアルタイム定量的ＰＣＲ）が挙げられるがこれらに限定されない。いずれのＩＳＨ法の場合も、増幅またはコピー数は、染色体または核における、蛍光の点、有色の点または銀を有する点の数を数えることによって測定され得る。
【０１６１】
蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）は、染色体における特定のＤＮＡ配列の有無を検出するためおよびその特定のＤＮＡ配列の位置を特定するために使用される、細胞遺伝学的技法である。ＦＩＳＨは、染色体のいくつかの部分にだけ結合する蛍光プローブ（このプローブは、それらの部分と高い程度の配列類似性を示す）を使用する。代表的なＦＩＳＨ法では、ＤＮＡプローブは、ニックトランスレーションまたはＰＣＲなどの酵素反応を用いてＤＮＡに組み込まれる、代表的には、フッ素−ｄＵＴＰ、ジゴキシゲニン−ｄＵＴＰ、ビオチン−ｄＵＴＰまたはハプテン−ｄＵＴＰの形態の、蛍光分子またはハプテンで標識される。遺伝物質（染色体）を含むサンプルを、スライドガラスに載せ、ホルムアミド処理によって変性させる。次いで、標識されたプローブを、当業者が決定する好適な条件下で、その遺伝物質を含むサンプルとハイブリダイズさせる。ハイブリダイゼーションの後、直接（フッ素で標識されたプローブの場合）または間接的に（ハプテンを検出する蛍光標識された抗体を使用して）サンプルを観察する。
【０１６２】
ＣＩＳＨの場合、プローブを、ジゴキシゲニン、ビオチンまたはフルオレセインで標識し、好適な条件において、遺伝物質を含むサンプルとハイブリダイズさせる。
【０１６３】
ＤＮＡに結合し得る任意のマーキング分子または標識分子が、本発明の第４の方法において使用されるプローブを標識するために使用され得、それにより、核酸分子の検出が可能になる。標識するための標識の例としては、放射性同位体、酵素基質、補因子、リガンド、化学発光剤、フルオロフォア、ハプテン、酵素およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。標識するための方法および種々の目的のために適した標識を選択するための指針は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９）およびＡｕｓｕｂｅｌら（Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９８）に見られ得る。
【０１６４】
ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅を直接決定すること、または遺伝子座１６ｑ２２−ｑ２４の増幅を決定することによって、増幅の存在が決定され、コントロールサンプル中の上記遺伝子の増幅と比較されたら、その後、ｃ−ＭＡＦ遺伝子における増幅が検出される場合、被験体が、転移についての陽性の診断を有するかまたは転移を起こす傾向がより高いという事実が示される。
【０１６５】
ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅の決定は、転移に罹患していない肺がんを有する被験体の腫瘍組織サンプルにおいて測定されたｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅のレベルに対応するか、または転移に罹患していない肺がんを有する被験体の生検サンプルの腫瘍組織コレクションにおいて測定されたｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅の中央値に対応する、コントロールサンプルまたは参照サンプルの値と相関させることを必要とする。上記参照サンプルは、代表的には、被験体集団由来の等量のサンプルを合わせることによって得られる。一般に、代表的な参照サンプルは、臨床的に十分に考証されている被験体および転移が無いことが十分に特徴付けられている被験体から得られる。参照レベルが由来するサンプルコレクションは、好ましくは、その研究の患者対象と同じタイプのがん（例えば、ＮＳＣＬＣ）に罹患している被験体で構成されている。いったん、この中央値が確立されたら、患者の腫瘍組織におけるｃ−ＭＡＦの増幅のレベルは、この中央値と比較され得、ゆえに、増幅が存在する場合、被験体は、転移についての陽性の診断を有するかまたは転移を起こす傾向がより高い。
【０１６６】
好ましい実施形態において、転移は、骨転移である。なおより好ましい実施形態において、骨転移は、溶骨性骨転移である。本明細書中で使用されるとき、「溶骨性骨転移」と言う表現は、腫瘍細胞による破骨細胞活性の刺激に起因して転移の近傍で骨吸収（骨密度の進行性消失）が生じ、重篤な疼痛、病理学的骨折、高カルシウム血症、脊髄圧迫、および神経圧迫に起因する他の症候群を特徴とする、転移のタイプを指す。
【０１６７】
ｃ−ＭＡＦ遺伝子の転座の検出に基づく、肺がんにおける転移の予後診断の方法
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している患者の臨床転帰を予測するためのインビトロでの方法に関し、その方法は、上記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子が、転座しているかを決定する工程を含み、ここで、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の転座は、不良な臨床転帰を示す。
【０１６８】
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している患者の臨床転帰を予測するためのインビトロでの方法に関し、その方法は、上記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子が、転座しているかを決定する工程を含み、ここで、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の転座は、不良な臨床転帰を示す。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、転座遺伝子は、１６ｑ２３遺伝子座の領域由来である。いくつかの実施形態において、転座遺伝子は、およそ１６番染色体の約７９，３９２，９５９ｂｐ〜約７９，６６３，８０６ｂｐ（セントロメアからテロメアまで）の染色体領域の任意の部分由来である。いくつかの実施形態において、転座遺伝子は、およそ１６番染色体の約７９，３９２，９５９ｂｐ〜約７９，６６３，８０６ｂｐであるがＤＮＡ反復エレメントを排除したゲノム領域由来である。いくつかの実施形態において、転座は、その領域に特異的なプローブを使用して測定される。
【０１７０】
特定の実施形態において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の転座は、上記遺伝子を含む染色体領域の転座の決定によって決定され得る。１つの実施形態において、転座は、ｔ（１４，１６）転座である。別の実施形態において、転座している染色体領域は、遺伝子座１６ｑ２２−ｑ２４由来である。遺伝子座１６ｑ２２−ｑ２４は、１６番染色体、上記染色体の長腕およびバンド２２〜バンド２４の範囲に位置する。この領域は、ＮＣＢＩデータベースにおいてコンティグＮＴ＿０１０４９８．１５およびＮＴ＿０１０５４２．１５と対応する。好ましい実施形態において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子は、１４番染色体の遺伝子座１４ｑ３２に転座し、転座ｔ（１４，１６）（ｑ３２，ｑ２３）が生じる。この転座は、ＩｇＨ遺伝子座における強力なエンハンサーの隣にＭＡＦ遺伝子に配置し、このことは、場合によってはＭＡＦの過剰発現をもたらす（Ｅｙｃｈｅｎｅ，Ａ．，Ｒｏｃｑｕｅｓ，Ｎ．，ａｎｄ  Ｐｕｏｐｏｎｎｏｔ，Ｃ．，Ａ  ｎｅｗ  ＭＡＦｉａ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．２００８．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｃａｎｃｅｒ．８：６８３−６９３）。
【０１７１】
好ましい実施形態において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の転座は、上記転座に特異的なプローブを使用することによって決定され得る。いくつかの実施形態において、転座は、二色プローブを使用して測定される。いくつかの実施形態において、転座は、二重融合プローブを使用して測定される。いくつかの実施形態において、転座は、二色の二重融合プローブを使用して測定される。いくつかの実施形態において、転座は、２つの別個のプローブを使用して測定される。
【０１７２】
別の好ましい実施形態において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の転座は、１４ｑ３２および１６ｑ２３に対するプローブを含むＶｙｓｉｓ  ＬＳＩ  ＩＧＨ／ＭＡＦ  Ｄｕａｌ  Ｃｏｌｏｒ二重融合プローブ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｂｂｏｔｔｍｏｌｅｃｕｌａｒ．ｃｏｍ／ｕｓ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ａｎａｌｙｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ−ｒｅａｇｅｎｔ／ｆｉｓｈ／ｖｙｓｉｓ−ｌｓｉ−ｉｇｈ−ｍａｆ−ｄｕａｌ−ｃｏｌｏｒ−ｄｕａｌ−ｆｕｓｉｏｎ−ｐｒｏｂｅ．ｈｔｍｌ；最終アクセス日２０１２年１１月５日）を使用して決定される。別の好ましい実施形態において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の転座は、Ｋｒｅａｔｅｃｈ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＭＡＦ／ＩＧＨ  ｇｔ（１４；１６）Ｆｕｓｉｏｎプローブ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｋｒｅａｔｅｃｈ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｒｅｐｅａｔ−ｆｒｅｅｔｍ−ｐｏｓｅｉｄｏｎｔｍ−ｆｉｓｈ−ｐｒｏｂｅｓ／ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ／ｍａｆ−ｉｇｈ−ｇｔ１４１６−ｆｕｓｉｏｎ−ｐｒｏｂｅ．ｈｔｍｌ；最終アクセス日２０１２年１１月５日）、Ａｂｎｏｖａ  ＭＡＦ  ＦＩＳＨプローブ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｂｎｏｖａ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ＿ｄｅｔａｉｌ．ａｓｐ？Ｃａｔａｌｏｇ＿ｉｄ＝ＦＡ０３７５；最終アクセス日２０１２年１１月５日）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｔａｌｉａ  ＩＧＨ／ＭＡＦ  Ｔｗｏ  Ｃｏｌｏｒ，Ｔｗｏ  Ｆｕｓｉｏｎ転座プローブ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒｇｅｎｅｔｉｃｓｉｔａｌｉａ．ｃｏｍ／ｄｎａ−ｆｉｓｈ−ｐｒｏｂｅ／ｉｇｈｍａｆ／；最終アクセス日２０１２年１１月５日）、Ｃｒｅａｔｉｖｅ  Ｂｉｏａｒｒａｙ  ＩＧＨ／ＭＡＦ−ｔ（１４；１６）（ｑ３２；ｑ２３）ＦＩＳＨプローブ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｒｅａｔｉｖｅ−ｂｉｏａｒｒａｙ．ｃｏｍ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ．ａｓｐ？ｃｉｄ＝３５＆ｐａｇｅ＝１０；最終アクセス日２０１２年１１月５日）、Ａｒｕｐ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのＦＩＳＨによる多発性骨髄腫パネル（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｒｕｐｌａｂ．ｃｏｍ／ｆｉｌｅｓ／ｔｅｃｈｎｉｃａｌ−ｂｕｌｌｅｔｉｎｓ／Ｍｕｌｔｉｐｌｅ％２０Ｍｙｅｌｏｍａ％２０％２８ＭＭ％２９％２０ｂｙ％２０ＦＩＳＨ．ｐｄｆ；最終アクセス日２０１２年１１月５日）、Ａｇｉｌｅｎｔの１６ｑ２３または１４ｑ３２に特異的なプローブ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｉｃｓ．ａｇｉｌｅｎｔ．ｃｏｍ／ＰｒｏｄｕｃｔＳｅａｒｃｈ．ａｓｐｘ？ｃｈｒ  １６＆ｓｔａｒｔ＝７９４８３７００＆ｅｎｄ＝７９７５４３４０；最終アクセス日２０１２年１１月５日；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｉｃｓ．ａｇｉｌｅｎｔ．ｃｏｍ／ＰｒｏｄｕｃｔＳｅａｒｃｈ．ａｓｐｘ？Ｐａｇｅｉｄ＝３０００＆ＰｒｏｄｕｃｔＩＤ＝６３７；最終アクセス日２０１２年１１月５日）、Ｄａｋｏの１６ｑ２３または１４ｑ３２に特異的なプローブ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄａｋｏ．ｃｏｍ／ｕｓ／ａｒ４２／ｐｓｇ４２８０６０００／ｂａｓｅｐｒｏｄｕｃｔｓ＿ｓｕｒｅｆｉｓｈ．ｈｔｍ？ｓｅｔＣｏｕｎｔｒｙ＝ｔｒｕｅ＆ｐｕｒｌ＝ａｒ４２／ｐｓｇ４２８０６０００／ｂａｓｅｐｒｏｄｕｃｔｓ＿ｓｕｒｅｆｉｓｈ．ｈｔｍ？ｕｎｄｅ���ｉｎｅｄ＆ｓｕｂｍｉｔ＝Ａｃｃｅｐｔ％２０ｃｏｕｎｔｒｙ；最終アクセス日２０１２年１１月５日）、Ｃｙｔｏｃｅｌｌ  ＩＧＨ／ＭＡＦ  Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ，Ｄｕａｌ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｂｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｚｅｎｔｅｃｈ．ｂｅ／ｕｐｌｏａｄｓ／ｄｏｃｓ／ｐｒｏｄｕｃｔｓ＿ｉｎｆｏ／ｐｒｅｎａｔａｌｏｇｙ／ｃｙｔｏｃｅｌｌ％２０２０１２−２０１３％２０ｃａｔａｌｏｇｕｅ％５Ｂ３％５Ｄ．ｐｄｆ；最終アクセス日２０１２年１１月５日）、Ｍｅｔａｓｙｓｔｅｍｓ  ＸＬ  ＩＧＨ／ＭＡＦ  Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  −Ｄｕａｌ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｂｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｅｔａｓｙｓｔｅｍｓ−ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ．ｃｏｍ／ｉｎｄｅｘ．ｐｈｐ？ｏｐｔｉｏｎ＝ｃｏｍ＿ｊｏｏｄｂ＆ｖｉｅｗ＝ａｒｔｉｃｌｅ＆ｊｏｏｂａｓｅ＝５＆ｉｄ＝１２％３Ａｄ−５０２９−１００−ｏｇ＆Ｉｔｅｍｉｄ＝２７２；最終アクセス日２０１２年１１月５日）、Ｚｅｉｓｓ  ＦＩＳＨ  Ｐｒｏｂｅｓ  ＸＬ，１００μｌ，ＩＧＨ／ＭＡＦＢ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｍｉｃｒｏ−ｓｈｏｐ．ｚｅｉｓｓ．ｃｏｍ／？ｓ＝４４０６７５６７５ｄｅｄｃ６＆ｌ＝ｅｎ＆ｐ＝ｕｋ＆ｆ＝ｒ＆ｉ＝５０００＆ｏ＝＆ｈ＝２５＆ｎ＝１＆ｓｄ＝００００００−０５２８−２３１−ｕｋ；最終アクセス日２０１２年１１月５日）またはＧｅｎｙｃｅｌｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＩＧＨ／ＭＡＦ  Ｄｕａｌ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｂｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｏｏｇｌｅ．ｃｏｍ／ｕｒｌ？ｓａ＝ｔ＆ｒｃｔ＝ｊ＆ｑ＝＆ｅｓｒｃ＝ｓ＆ｓｏｕｒｃｅ＝ｗｅｂ＆ｃｄ＝１＆ｖｅｄ＝０ＣＣＱＱＦｊＡＡ＆ｕｒｌ＝ｈｔｔｐ％３Ａ％２Ｆ％２Ｆｗｗｗ．ｇｅｎｙｃｅｌｌ．ｅｓ％２Ｆｉｍａｇｅｓ％２Ｆｐｒｏｄｕｃｔｏｓ％２Ｆｂｒｏｃｈｕｒｅｓ％２Ｆｌｐｈｍｉｅ６＿８６．ｐｐｔ＆ｅｉ＝ＭｈＧＹＵＯｉ３ＧＫＷＨ０ＱＧｌｔ４ＤｏＤｗ＆ｕｓｇ＝ＡＦＱｊＣＮＥｑＱＭｂＴ８ｖＱＧｊＪｂｉ９ｒｉＥｆ３ｌＶｇｏＦＴＦＱ＆ｓｉｇ２＝Ｖ５ＩＳ８ｊｕＥＭＶＨＢ１８Ｍｖ２Ｘｘ＿Ｗｗ；最終アクセス日２０１２年１１月５日）を使用して決定される。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、プローブ上の標識は、フルオロフォアである。いくつかの実施形態において、プローブ上のフルオロフォアは、橙色である。いくつかの実施形態において、プローブ上のフルオロフォアは、緑色である。いくつかの実施形態において、プローブ上のフルオロフォアは、赤色である。場合によっては、プローブ上のフルオロフォアは、黄色である。いくつかの実施形態において、１つのプローブは、赤色フルオロフォアで標識され、１つは、緑色フルオロフォアで標識される。いくつかの実施形態において、１つのプローブは、緑色フルオロフォアで標識され、１つは、橙色フルオロフォアで標識される。場合によっては、プローブ上のフルオロフォアは、黄色である。例えば、ＭＡＦ特異的プローブが、赤色フルオロフォアで標識され、ＩＧＨ特異的プローブが、緑色フルオロフォアで標識され、白色が見られる場合、それは、それらのシグナルが重なっており、転座が起きていることを示す。
【０１７４】
いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＳｐｅｃｔｒｕｍＯｒａｎｇｅである。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＳｐｅｃｔｒｕｍＧｒｅｅｎである。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＤＡＰＩである。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＰｌａｔｉｎｕｍＢｒｉｇｈｔ４０５である。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＰｌａｔｉｎｕｍＢｒｉｇｈｔ４１５である。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＰｌａｔｉｎｕｍＢｒｉｇｈｔ４９５である。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＰｌａｔｉｎｕｍＢｒｉｇｈｔ５０５である。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＰｌａｔｉｎｕｍＢｒｉｇｈｔ５５０である。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＰｌａｔｉｎｕｍＢｒｉｇｈｔ５４７である。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＰｌａｔｉｎｕｍＢｒｉｇｈｔ５７０である。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＰｌａｔｉｎｕｍＢｒｉｇｈｔ５９０である。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＰｌａｔｉｎｕｍＢｒｉｇｈｔ６４７である。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＰｌａｔｉｎｕｍＢｒｉｇｈｔ４９５／５５０である。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＰｌａｔｉｎｕｍＢｒｉｇｈｔ４１５／４９５／５５０である。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＤＡＰＩ／ＰｌａｔｉｎｕｍＢｒｉｇｈｔ４９５／５５０である。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＦＩＴＣである。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄである。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＤＥＡＣである。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、Ｒ６Ｇである。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、Ｃｙ５である。いくつかの実施形態において、フルオロフォアは、ＦＩＴＣ、Ｔｅｘａｓ  ＲｅｄおよびＤＡＰＩである。いくつかの実施形態において、ＤＡＰＩ対比染色は、転座、増幅またはコピー数の変化を可視化するために使用される。
【０１７５】
本発明の１つの実施形態は、第１の工程においてｃ−ＭＡＦ遺伝子が被験体のサンプル中で転座しているかを決定する方法を含む。好ましい実施形態において、サンプルは、腫瘍組織サンプルである。
【０１７６】
特定の実施形態において、肺がんを有する被験体において骨転移を起こす傾向の予後診断のための本発明の方法は、ｃ−ＭＡＦ遺伝子が転座している上記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子コピー数を決定する工程および上記コピー数をコントロールサンプルまたは参照サンプルのコピー数と比較する工程を含み、ここで、そのｃ−ＭＡＦのコピー数が、コントロールサンプルのｃ−ＭＡＦのコピー数と比較して多い場合、その被験体は、骨転移を起こす傾向がより高い。好ましい実施形態では、骨転移は、非常に早期の骨転移である。好ましい実施形態では、骨転移は、溶骨性転移である。
【０１７７】
「平均レベル」は、本明細書中で使用されるとき、一群の等しくない値の全体的な有意性を要約するかまたは表す、ｃ−ＭＡＦ発現レベルの単一の値（平均値、最頻値または中央値として）に関する。好ましい実施形態において、平均レベルは、肺がん腫瘍の代表的なコホートから得られる発現レベルの平均に対応する。その患者コホートは、評価しようとしている個々の患者を代表する年齢によって定義される。
【０１７８】
「標準偏差」は、本明細書中で使用されるとき、数値の集合のばらつきの尺度に関する。例えば、ｃ−ＭＡＦの正常な平均レベルに対する標準偏差は、肺腫瘍サンプルに見出されるｃ−ＭＡＦレベルの集合のばらつきである。そのデータから離れて広がるほど、偏差は大きくなる。標準偏差は、度数分布における平均値からの、実測値の平方偏差の平均値の平方根を求めることによって得ることができる。
【０１７９】
いったん、肺がんを有する被験体由来のサンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルが、測定されて、平均レベルと比較されたら、上記遺伝子の発現レベルが、平均レベルと比較して平均＋１標準偏差より高い場合、上記被験体は、早期の骨転移を起こす傾向がより高いと結論づけられ得る。
【０１８０】
ｃ−ＭＡＦ遺伝子または染色体領域１６ｑ２２−ｑ２４が転座しているかを決定するための方法は、当該分野において広く公知であり、ｃ−ＭＡＦの増幅について先に記載された方法を含む。上記方法としては、インサイチュハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）（例えば、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、色素形成インサイチュハイブリダイゼーション（ＣＩＳＨ）またはシルバーインサイチュハイブリダイゼーション（ＳＩＳＨ））、ゲノム比較ハイブリダイゼーションまたはポリメラーゼ連鎖反応（例えば、リアルタイム定量的ＰＣＲ）が挙げられるがこれらに限定されない。いずれのＩＳＨ方法の場合も、増幅、コピー数または転座は、染色体または核における、蛍光の点、有色の点または銀を有する点の数を数えることによって決定され得る。他の実施形態において、コピー数の変化および転座の検出は、ホールゲノムシーケンシング、エクソームシーケンシングの使用、または任意のＰＣＲに由来する技術の使用によって検出され得る。例えば、ＰＣＲは、転座を検出するためにゲノムＤＮＡのサンプルにおいて行われ得る。１つの実施形態において、定量的ＰＣＲが使用される。１つの実施形態において、ＰＣＲは、ｃ−ＭＡＦ遺伝子に特異的なプライマーおよびＩＧＨプロモーター領域に特異的なプライマーを用いて行われる；生成物が生成される場合、転座が生じている。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅およびコピー数は、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の転座が決定された後に、決定される。いくつかの実施形態において、プローブを使用して、細胞がｃ−ＭＡＦ遺伝子倍数体であるかが決定される。いくつかの実施形態において、倍数性の決定は、目的の遺伝子からの２種より多いシグナルが存在するかを決定することによって行われる。いくつかの実施形態において、倍数性は、目的の遺伝子に特異的なプローブからのシグナルを測定し、それをセントロメアプローブまたは他のプローブと比較することによって決定される。
【０１８２】
ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅または転座の検出に基づく、肺がんにおける臨床転帰の予後診断の方法
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している患者の臨床転帰を予測するためのインビトロでの方法（本明細書中以後、本発明の第７の方法）に関し、その方法は、上記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子が、参照遺伝子コピー数と比べて増幅されているかまたは転座しているかを決定する工程を含み、ここで、上記参照遺伝子コピー数と比較したときのｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅は、不良な臨床転帰を示す。
【０１８３】
本発明の第７の方法は、第１の工程に、ｃ−ＭＡＦ遺伝子が被験体のサンプルにおいて増幅されているかを決定する工程を含む。ｃ−ＭＡＦの増幅の決定は、本質的に本発明の第５の方法に記載されているように行われる。好ましい実施形態において、サンプルは、腫瘍組織サンプルである。好ましい実施形態において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅は、遺伝子座１６ｑ２３または１６ｑ２２−ｑ２４の増幅を決定することによって決定される。別の好ましい実施形態において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅は、ｃ−ＭＡＦ遺伝子特異的プローブを使用することによって決定される。
【０１８４】
第２の工程において、本発明の第７の方法は、上記コピー数をコントロールサンプルまたは参照サンプルのコピー数と比較する工程を含み、ここで、そのｃ−ＭＡＦコピー数が、コントロールサンプルのｃ−ＭＡＦコピー数と比べて多い場合、これは、不良な臨床転帰を示す。
【０１８５】
好ましい実施形態において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子コピー数が、参照サンプルまたはコントロールサンプルが有するコピー数より多いとき、ｃ−ＭＡＦ遺伝子は、参照遺伝子コピー数と比較して、増幅されている。１つの例において、ｃ−ＭＡＦ遺伝子のゲノムコピー数が、試験サンプルにおいて、コントロールサンプルと比べて少なくとも、２倍増加（すなわち、６コピー）、３倍増加（すなわち、８コピー）、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍または５０倍増加している場合、ｃ−ＭＡＦ遺伝子は、「増幅されている」と言われる。別の例において、細胞１つあたりのｃ−ＭＡＦ遺伝子のゲノムコピー数が、少なくとも、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０などである場合、ｃ−ＭＡＦ遺伝子は、「増幅されている」と言われる。
【０１８６】
別の実施形態において、参照遺伝子コピー数は、骨転移に罹患していない被験体由来の肺がんのサンプル中の遺伝子コピー数である。
【０１８７】
別の実施形態において、増幅は、インサイチュハイブリダイゼーションまたはＰＣＲによって決定される。
【０１８８】
本発明の治療方法
ｃ−ＭＡＦ阻害剤を使用する骨転移の処置
ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現阻害剤または上記遺伝子によってコードされるタンパク質の阻害剤は、肺がん転移の処置および／または予防において使用することができる。
【０１８９】
別の態様において、本発明は、骨転移肺がんの処置または予防のための医薬の製造のためのｃ−ＭＡＦ阻害剤の使用に関する。
【０１９０】
別の態様において、本発明は、被験体へのｃ−ＭＡＦ阻害剤の投与を含む、その必要がある上記被験体における肺がん由来の骨転移の処置または予防のための方法に関する。
【０１９１】
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している被験体において骨転移のリスクを予防するまたは低下させるための方法であって、上記被験体に骨転移を予防するまたは低下させる薬剤を投与する工程を含み、上記薬剤は、上記被験体におけるｃ−ＭＡＦの発現レベルの定量から決定される処置レジメンに従って投与される、方法に関する。
【０１９２】
そのため、別の態様において、本発明は、肺がん転移を処置するおよび／または予防するための医薬製品の調製における、ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現阻害剤または上記遺伝子によってコードされるタンパク質の阻害剤（以後、本発明の阻害剤）の使用に関する。あるいは、本発明は、肺がん転移の処置および／または予防における使用のための、ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現阻害剤または上記遺伝子によってコードされるタンパク質の阻害剤に関する。あるいは、本発明は、被験体における肺がん転移を処置するための方法であって、上記被験体にｃ−ＭＡＦインヒビターを投与する工程を含む方法に関する。
【０１９３】
本明細書中で使用されるとき、「ｃ−ＭＡＦ阻害剤」とは、ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現を完全にまたは部分的に阻害することができる（その両方が、上記遺伝子の発現産物の生成を妨げること（ｃ−ＭＡＦ遺伝子の転写を妨害することおよび／またはｃ−ＭＡＦ遺伝子発現に由来するｍＲＮＡの翻訳を阻止すること）およびｃ−ＭＡＦタンパク質活性を直接阻害することによって）任意の分子のことを指す。Ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現インヒビターは、国際特許出願ＷＯ２００５／０４６７３１（その全内容が本明細書によって参照により援用される）に示されているような、ｃ−ＭＡＦがインビトロにおける細胞増殖を促進する能力をいわゆるインヒビターが阻止する能力に基づく方法、ＷＯ２００８０９８３５１（その全内容が本明細書によって参照により援用される）に記載されているような、ｃ−ＭＡＦを発現する細胞においてサイクリンＤ２プロモーターもしくはｃ−ＭＡＦ応答領域（ＭＡＲＥまたはｃ−ＭＡＦ応答エレメント）を含むプロモーターの支配下のレポーター遺伝子の転写能力をいわゆるインヒビターが阻止する能力に基づく方法、またはＵＳ２００９０４８１１７Ａ（その全内容が本明細書によって参照により援用される）に記載されているような、ＮＦＡＴｃ２およびｃ−ＭＡＦを発現する細胞においてＰＭＡ／イオノマイシンによる刺激に応答してＩＬ−４プロモーターの支配下のレポーター遺伝子の発現をいわゆるインヒビターが阻止する能力に基づく方法を用いて同定され得る。
【０１９４】
非限定的な例証として、本発明における使用に適したｃ−ＭＡＦ阻害剤としては、アンチセンスオリゴヌクレオチド、干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、触媒ＲＮＡまたは特異的なリボザイム、および阻害性抗体が挙げられる。
【０１９５】
アンチセンスオリゴヌクレオチド
本発明のさらなる態様は、発現を阻害する、例えば、活性が阻害されるべきであるｃ−ＭＡＦをコードする核酸の転写および／または翻訳を阻害するための、単離された「アンチセンス」核酸の使用に関する。アンチセンス核酸は、従来の塩基相補性によって、または、例えば、二重らせんの主溝（ｌａｒｇｅ  ｇｒｏｏｖｅ）における特異的な相互作用を介して二本鎖ＤＮＡに結合する場合、薬物の可能性のある標的に結合し得る。通常、これらの方法は、当該分野において通常使用される一連の技法のことを指し、それらには、オリゴヌクレオチド配列への特異的結合に基づく任意の方法が含まれる。
【０１９６】
本発明のアンチセンス構築物は、例えば、細胞において転写されるときに、ｃ−ＭＡＦをコードする細胞ｍＲＮＡの少なくとも１つの独特の部分に相補的なＲＮＡを生成する発現プラスミドとして、投与され得る。あるいは、アンチセンス構築物は、細胞に導入されたら、標的核酸のｍＲＮＡおよび／または遺伝子配列とハイブリダイズして遺伝子発現の阻害をもたらす、エキソビボにおいて生成されたオリゴヌクレオチドプローブである。そのようなオリゴヌクレオチドプローブは、好ましくは、内因性ヌクレアーゼ、例えば、エキソヌクレアーゼおよび／またはエンドヌクレアーゼに抵抗性であるがゆえにインビボにおいて安定である、改変されたオリゴヌクレオチドである。アンチセンスオリゴヌクレオチドとしてそれらを使用するための核酸分子の例は、ホスホルアミデート、ホスホチオネートおよびメチルホスホネートのＤＮＡアナログである（米国特許第５１７６９９６号；同第５２６４５６４号；および同第５２５６７７５号も参照のこと）（それらの全体が参照により本明細書に援用される）。さらに、アンチセンス治療において有用なオリゴマーを構築するための一般的なアプロキシメーション（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｉｏｎｓ）は、例えば、Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｋｒｏｌら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：９５８−９７６，１９８８；およびＳｔｅｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４８：２６５９−２６６８，１９８８に概説されている。
【０１９７】
アンチセンスオリゴヌクレオチドに関して、標的遺伝子の翻訳開始部位由来のオリゴデオキシリボヌクレオチド領域、例えば、−１０〜＋１０が、好ましい。アンチセンスアプロキシメーションは、標的ポリペプチドをコードするｍＲＮＡに相補的なオリゴヌクレオチドのデザイン（ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれか）を含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、転写されたｍＲＮＡに結合して、翻訳が妨げられる。
【０１９８】
ｍＲＮＡの５’末端、例えば、開始コドンＡＵＧを含むそこまでの非翻訳５’配列に相補的なオリゴヌクレオチドは、翻訳を阻害するために最も効率的な様式で機能するに違いない。それにもかかわらず、ｍＲＮＡの非翻訳３’配列に相補的な配列もまた、ｍＲＮＡ翻訳を阻害するために効率的であることが示された（Ｗａｇｎｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３７２：３３３，１９９４）。ゆえに、ｍＲＮＡの翻訳を阻害するアンチセンスアプロキシメーションでは、遺伝子の非コード領域である非翻訳５’または３’領域において相補的なオリゴヌクレオチドが、使用され得る。ｍＲＮＡの非翻訳５’領域に相補的なオリゴヌクレオチドは、開始コドンＡＵＧの相補体を含まなければならない。ｍＲＮＡのコード領域に相補的なオリゴヌクレオチドは、それほど効率的な翻訳インヒビターでないが、それらも、本発明に従って使用され得る。それらが、ｍＲＮＡの５’領域、３’領域またはコード領域とハイブリダイズするようにデザインされる場合、アンチセンス核酸は、少なくとも６ヌクレオチド長を有しなければならず、好ましくは、およそ１００未満、より好ましくは、およそ５０、２５、１７または１０未満のヌクレオチド長を有しなければならない。
【０１９９】
好ましくは、まず、アンチセンスオリゴヌクレオチドが遺伝子発現を阻害する能力を定量するインビトロ研究を行う。好ましくは、これらの研究は、オリゴヌクレオチドのアンチセンス遺伝子阻害と非特異的な生物学的作用とを識別するコントロールを使用する。また、好ましくは、これらの研究は、標的ＲＮＡまたはタンパク質のレベルをＲＮＡまたはタンパク質の内部コントロールのレベルと比較した。アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して得られる結果は、コントロールオリゴヌクレオチドを使用して得られる結果と比較され得る。好ましくは、コントロールオリゴヌクレオチドは、アッセイされるオリゴヌクレオチドとほぼ同じ長さであり、標的配列への特異的なハイブリダイゼーションを妨げるために必要であると考えられるアンチセンス配列にすぎないものと異ならないオリゴヌクレオチド配列である。
【０２００】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、一本鎖もしくは二本鎖のＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはそれらのキメラ混合物もしくは誘導体もしくは修飾されたバージョンであり得る。オリゴヌクレオチドは、例えば、分子の安定性、そのハイブリダイゼーション能力などを改善するために、塩基の基、糖の基またはリン酸骨格において修飾され得る。オリゴヌクレオチドは、他の結合基（例えば、ペプチド（例えば、オリゴヌクレオチドを宿主細胞のレセプターに導くためのペプチド）または細胞膜を通じた輸送を促進するための物質（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３−６５５６，１９８９；Ｌｅｍａｉｔｒｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８−６５２，１９８７；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／０９８１０を参照のこと）もしくは血液脳関門を通じた輸送を促進するための物質（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１３４を参照のこと）、挿入剤（例えば、Ｚｏｎ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９−５４９，１９８８を参照のこと））を含み得る。このために、オリゴヌクレオチドは、別の分子、例えば、ペプチド、輸送剤（ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、ハイブリダイゼーションによって惹起される切断剤などに結合体化され得る。
【０２０１】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾された塩基の少なくとも１つの基を含み得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、アラビノース、２−フルオロアラビノース、キシルロースおよびヘキソースを含むがこれらに限定されない群から選択される少なくとも１つの修飾された糖の基も含み得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、中性ペプチドに類似の骨格も含み得る。そのような分子は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）オリゴマーとして知られており、例えば、Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３：１４６７０，１９９６およびＥｇｌｏｍら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６５：５６６，１９９３に記載されている。
【０２０２】
なおも別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾されたリン酸骨格を含む。なおも別の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、アルファ−アノマーオリゴヌクレオチドである。
【０２０３】
標的ｍＲＮＡ配列のコード領域に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用することができるが、転写される非翻訳領域に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用することもできる。
【０２０４】
場合によっては、内因性のｍＲＮＡ翻訳を抑制するのに十分な細胞内濃度のアンチセンスに到達することが難しいことがある。ゆえに、好ましいアプロキシメーションは、アンチセンスオリゴヌクレオチドを強力なｐｏｌ  ＩＩＩまたはｐｏｌ  ＩＩプロモーターの支配下に配置した組換えＤＮＡ構築物を使用する。
【０２０５】
あるいは、遺伝子制御領域（すなわち、プロモーターおよび／またはエンハンサー）に相補的なデオキシリボヌクレオチド配列に、体内の標的細胞において遺伝子転写を妨げる三重らせん構造を形成するように指示することによって、標的遺伝子発現を減少させることができる（Ｈｅｌｅｎｅ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．６（６）：５６９−８４，１９９１を広く参照のこと）。ある特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、アンチセンスモルホリンである。
【０２０６】
ｓｉＲＮＡ
低分子干渉ＲＮＡまたはｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉によって標的遺伝子の発現を阻害することができる物質である。ｓｉＲＮＡは、化学的に合成され得るか、インビトロ転写によって得ることができるか、または標的細胞においてインビボで合成され得る。代表的には、ｓｉＲＮＡは、１５〜４０ヌクレオチド長の二本鎖ＲＮＡからなり、１〜６ヌクレオチドの３’および／または５’突出領域を含み得る。その突出領域の長さは、ｓｉＲＮＡ分子の全長と無関係である。ｓｉＲＮＡは、転写後の標的メッセンジャーの分解またはサイレンシングによって作用する。
【０２０７】
本発明のｓｉＲＮＡは、ｃ−ＭＡＦをコードする遺伝子のｍＲＮＡまたは上記タンパク質をコードする遺伝子配列と実質的に相同である。「実質的に相同」は、ｓｉＲＮＡが、ＲＮＡ干渉によって後者を分解することができるほど、標的ｍＲＮＡと十分に相補的または類似である配列を有すると理解される。上記干渉を引き起こすために適したｓｉＲＮＡとしては、ＲＮＡによって形成されるｓｉＲＮＡ、ならびに種々の化学修飾を含むｓｉＲＮＡ、例えば：
・ヌクレオチド間の結合が天然に見られる結合と異なる（例えば、ホスホロチオネート結合）ｓｉＲＮＡ
・フルオロフォアなどの機能的な試薬とＲＮＡ鎖の結合体
・２’位の種々のヒドロキシル官能基での修飾による、ＲＮＡ鎖の末端、特に３’末端の修飾
・２’−Ｏ−メチルリボースまたは２’−Ｏ−フルオロリボースのような２’位におけるＯ−アルキル化残基などの改変された糖を有するヌクレオチド
・ハロゲン化された塩基（例えば、５−ブロモウラシルおよび５−ヨードウラシル）、アルキル化された塩基（例えば、７−メチルグアノシン）などの改変された塩基を有するヌクレオチド
が挙げられる。
【０２０８】
ｓｉＲＮＡは、そのままで、すなわち、上述の特徴を有する二本鎖ＲＮＡの形態で、使用され得る。あるいは、ｓｉＲＮＡのセンス鎖配列およびアンチセンス鎖配列を含むベクターを、目的の細胞におけるその発現に好適なプロモーターの支配下で使用することが、可能である。
【０２０９】
ｓｉＲＮＡの発現に適したベクターは、ｓｉＲＮＡの２本の鎖をコードする２つのＤＮＡ領域が、転写の際にループを形成するスペーサー領域によって分断された１本の同じＤＮＡ鎖においてタンデムに配置されているベクターであり、単一のプロモーターが、ｓｈＲＮＡを生じるＤＮＡ分子の転写を指示する。
【０２１０】
あるいは、ｓｉＲＮＡを形成する各鎖が、異なる転写単位の転写から形成されるベクターを使用することも可能である。これらのベクターは、その後、分岐（ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ）転写ベクターと収束（ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ）転写ベクターとに分割される。分岐転写ベクターでは、ｓｉＲＮＡを形成する各ＤＮＡ鎖の転写が、同じであっても異なってもよいそれ自体のプロモーターに依存するように、その各ＤＮＡ鎖をコードする転写単位が、ベクター内でタンデムに配置される（Ｗａｎｇ，Ｊ．ら、２００３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，１００：５１０３−５１０６およびＬｅｅ，Ｎ．Ｓ．ら、２００２，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２０：５００−５０５）。収束転写ベクターでは、ｓｉＲＮＡを生じるＤＮＡ領域は、２つの逆方向のプロモーターに隣接したＤＮＡ領域のセンス鎖およびアンチセンス鎖を形成する。センスおよびアンチセンスのＲＮＡ鎖の転写の後、後者は、機能的ｓｉＲＮＡを形成するためにハイブリッドを形成する。２つのＵ６プロモーター（Ｔｒａｎ，Ｎ．ら、２００３，ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，３：２１）、マウスＵ６プロモーターおよびヒトＨ１プロモーター（Ｚｈｅｎｇ，Ｌ．ら、２００４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，１３５−１４０およびＷＯ２００５０２６３２２）ならびにヒトＵ６プロモーターおよびマウスＨ１プロモーター（Ｋａｙｋａｓ，Ａ．ａｎｄ  Ｍｏｏｎ，Ｒ．，２００４，ＢＭＣ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，５：１６）が使用される逆方向プロモーター系を有するベクターが記載されている。
【０２１１】
収束発現ベクターまたは分岐発現ベクターからのｓｉＲＮＡの発現におけるその使用に適したプロモーターには、ｓｉＲＮＡを発現させようとする細胞と適合性の任意のプロモーターまたはプロモーター対が含まれる。したがって、本発明に適したプロモーターとしては、構成的プロモーター（例えば、真核生物ウイルス（例えば、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ＳＶ４０、ＣＭＶ、トリ肉腫ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス）のゲノムに由来するプロモーター）、メタロチオネイン遺伝子プロモーター、単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ遺伝子プロモーター、レトロウイルスＬＴＲ領域、免疫グロブリン遺伝子プロモーター、アクチン遺伝子プロモーター、ＥＦ−１アルファ遺伝子プロモーター、ならびにタンパク質発現が分子または外来性シグナルの添加に依存する誘導性プロモーター、例えば、テトラサイクリンシステム、ＮＦカッパーＢ／ＵＶ光システム、Ｃｒｅ／Ｌｏｘシステムおよび熱ショック遺伝子プロモーター、ＷＯ／２００６／１３５４３６に記載されている制御可能なＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターならびに組織特異的プロモーター（例えば、ＷＯ２００６０１２２２１に記載されているＰＳＡプロモーター）が挙げられるが、必ずしもこれらに限定されない。好ましい実施形態において、プロモーターは、恒常的に作用するＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターである。ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターは、限られた数の遺伝子（例えば、５Ｓ  ＲＮＡ、ｔＲＮＡ、７ＳＬ  ＲＮＡおよびＵ６  ｓｎＲＮＡ）にしか見られない。他のＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターとは異なり、ＩＩＩ型プロモーターは、いかなる遺伝子内配列も必要とせず、むしろ、−３４および−２４位におけるＴＡＴＡボックス、−６６〜−４７の近位配列エレメントすなわちＰＳＥ、および場合によっては、−２６５〜−１４９位の遠位配列エレメントすなわちＤＳＥを含む５’方向の配列を必要とする。好ましい実施形態において、ＩＩＩ型ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターは、ヒトまたはマウスのＨ１遺伝子およびＵ６遺伝子のプロモーターである。なおもより好ましい実施形態において、プロモーターは、２つのヒトまたはマウスのＵ６プロモーター、マウスＵ６プロモーターおよびヒトＨ１プロモーターまたはヒトＵ６プロモーターおよびマウスＨ１プロモーターである。
【０２１２】
ｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡを形成する逆平行鎖がループまたはヘアピン領域によって接続されていることを特徴とするいわゆるｓｈＲＮＡ（短ヘアピンＲＮＡ）から細胞内に産生され得る。ｓｈＲＮＡは、プラスミドまたはウイルス、特にレトロウイルスによってコードされ得、プロモーターの支配下にある。ｓｈＲＮＡの発現に適したプロモーターは、ｓｉＲＮＡの発現についての上記のパラグラフにおいて示されたプロモーターである。
【０２１３】
ｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡの発現に適したベクターとしては、原核生物発現ベクター（例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔおよびそれらの誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏＩＥｌ、ｐＣＲｌ、ＲＰ４）、ファージベクターおよびシャトルベクター（例えば、ｐＳＡ３およびｐＡＴ２８）、酵母発現ベクター（例えば、２−ミクロンプラスミドタイプのベクター、インテグレーションプラスミド、ＹＥＰベクター、セントロメアプラスミドなど）、昆虫細胞発現ベクター（例えば、ｐＡＣシリーズベクターおよびｐＶＬシリーズベクター）、植物発現ベクター（例えば、ｐＩＢＩ、ｐＥａｒｌｅｙＧａｔｅ、ｐＡＶＡ、ｐＣＡＭＢＩＡ、ｐＧＳＡ、ｐＧＷＢ、ｐＭＤＣ、ｐＭＹ、ｐＯＲＥシリーズベクターなど）およびウイルスベクターベース（アデノウイルス、アデノウイルス随伴ウイルスならびにレトロウイルス、特にレンチウイルス）の高等真核生物細胞発現ベクターまたは非ウイルスベクター（例えば、ｐｃＤＮＡ３、ｐＨＣＭＶ／Ｚｅｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＥＦｌ／Ｈｉｓ、ｐＩＮＤ／ＧＳ、ｐＲｃ／ＨＣＭＶ２、ｐＳＶ４０／Ｚｅｏ２、ｐＴＲＡＣＥＲ−ＨＣＭＶ、ｐＵＢ６／Ｖ５−Ｈｉｓ、ｐＶＡＸｌ、ｐＺｅｏＳＶ２、ｐＣＩ、ｐＳＶＬおよびｐＫＳＶ−１０、ｐＢＰＶ−１、ｐＭＬ２ｄおよびｐＴＤＴｌ）が挙げられる。好ましい実施形態において、ベクターは、レンチウイルスベクターである。
【０２１４】
本発明のｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡは、当業者に公知の一連の技法を用いて得ること
ができる。ｓｉＲＮＡをデザインするための基礎と考えられるヌクレオチド配列の領域は、限定的でなく、それは、コード配列（開始コドンと終止コドンの間）の領域を含み得るか、またはあるいは、好ましくは、２５〜５０ヌクレオチド長で、開始コドンに対して３’方向の任意の位置の非翻訳５’または３’領域の配列を含み得る。ｓｉＲＮＡをデザインする１つの方法は、ＡＡ（Ｎ１９）ＴＴモチーフの識別（ここで、Ｎは、ｃ−ＭＡＦ遺伝子配列内の任意のヌクレオチドであり得る）および高Ｇ／Ｃ含有量を有するそれらのモチーフの選択を含む。上記モチーフが見つからない場合、ＮＡ（Ｎ２１）モチーフ（ここで、Ｎは、任意のヌクレオチドであり得る）を識別することができる。
【０２１５】
ｃ−ＭＡＦ特異的ｓｉＲＮＡには、ＷＯ２００５０４６７３１（その全体が本明細書に参考として援用される）に記載されているｓｉＲＮＡが含まれ、その鎖のうちの一方は、ＡＣＧＧＣＵＣＧＡＧＣＡＧＣＧＡＣＡＡ（配列番号６）である。他のｃ−ＭＡＦ特異的ｓｉＲＮＡ配列としては、ＣＵＵＡＣＣＡＧＵＧＵＧＵＵＣＡＣＡＡ（配列番号７）、ＵＧＧＡＡＧＡＣＵＡＣＵＡＣＵＧＧＡＵＧ（配列番号８）、ＡＵＵＵＧＣＡＧＵＣＡＵＧＧＡＧＡＡＣＣ（配列番号９）、ＣＡＡＧＧＡＧＡＡＡＵＡＣＧＡＧＡＡＧＵ（配列番号１０）、ＡＣＡＡＧＧＡＧＡＡＡＵＡＣＧＡＧＡＡＧ（配列番号１１）およびＡＣＣＵＧＧＡＡＧＡＣＵＡＣＵＡＣＵＧＧ（配列番号１２）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１６】
ＤＮＡ酵素
他方で、本発明は、本発明のｃ−ＭＡＦ遺伝子の発現を阻害するＤＮＡ酵素の使用も企図する。ＤＮＡ酵素は、アンチセンス技術とリボザイム技術の両方の機構的な特色のいくつかを組み込んでいる。ＤＮＡ酵素は、アンチセンスオリゴヌクレオチドと同様の特定の標的核酸配列を認識するが、それにもかかわらず、リボザイムと同様に触媒性であり、標的核酸を特異的に切断するように、デザインされる。
【０２１７】
リボザイム
活性が阻害されるべきであるｃ−ＭＡＦをコードするｍＲＮＡの翻訳を妨げるために標的ｍＲＮＡの転写産物を触媒的に切断するためにデザインされたリボザイム分子もまた、使用され得る。リボザイムは、特定のＲＮＡの切断を触媒することができる酵素的ＲＮＡ分子である（概説として、Ｒｏｓｓｉ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ４：４６９−４７１，１９９４を参照のこと）。リボザイムの作用機序は、相補的な標的ＲＮＡへのリボザイム分子配列の特異的なハイブリダイゼーションとその後のエンドヌクレアーゼによる切断事象を含む。リボザイム分子の組成は、好ましくは、標的ｍＲＮＡに相補的な１つまたは複数の配列およびｍＲＮＡの切断を担う周知の配列または機能的に等価な配列を含む（例えば、米国特許第５０９３２４６号を参照のこと）。
【０２１８】
本発明において使用されるリボザイムは、エンドリボヌクレアーゼＲＮＡであるハンマーヘッド型リボザイム（本明細書中以後、「Ｃｅｃｈ型リボザイム」）（Ｚａｕｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２４：５７４−５７８，１９８４を含む。
【０２１９】
リボザイムは、改変されたオリゴヌクレオチド（例えば、安定性、標的化などを改善するように改変されたオリゴヌクレオチド）によって形成され得、そしてそれらはインビボで標的遺伝子を発現する細胞に分配されるべきである。好ましい分配方法は、トランスフェクトされた細胞が、内因性の標的メッセンジャーを破壊して翻訳を阻害するのに十分な量のリボザイムを産生するように、強力な構成的ｐｏｌ  ＩＩＩまたはｐｏｌ  ＩＩプロモーターの支配下においてリボザイムを「コードする」ＤＮＡ構築物を使用することを含む。リボザイムは、触媒的であるので、他のアンチセンス分子とは異なり、その効率のために、低い細胞内濃度しか必要ない。
【０２２０】
阻害性抗体
本発明の文脈において、「阻害性抗体」は、ｃ−ＭＡＦタンパク質に特異的に結合して、上記タンパク質の機能の１つまたは複数、好ましくは、転写に関連する機能を阻害することができる任意の抗体と理解される。それらの抗体は、当業者に公知である任意の方法（そのうちのいくつかが上で述べられた）を使用して、調製され得る。したがって、ポリクローナル抗体は、阻害されるべきタンパク質で動物を免疫することによって調製される。モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｍｉｌｓｔｅｉｎら（Ｎａｔｕｒｅ，１９７５，２５６：４９５）によって記載された方法を用いて調製される。本発明の文脈において、好適な抗体としては、可変抗原結合領域および定常領域を含むインタクトな抗体、「Ｆａｂ」、「Ｆ（ａｂ’）２」および「Ｆａｂ’」、Ｆｖ、ｓｃＦｖフラグメント、ダイアボディ、二重特異性抗体、アルファボディ、シクロペプチドおよびステープルドペプチドが挙げられる。いったん、ｃ−ＭＡＦタンパク質結合能を有する抗体が同定されたら、このタンパク質の活性を阻害することができる抗体が、阻害剤識別アッセイを用いて選択される。
【０２２１】
阻害性ペプチド
本明細書中で使用されるとき、用語「阻害性ペプチド」とは、上で説明されたようにｃ−ＭＡＦタンパク質に結合してその活性を阻害することができる、すなわち、ｃ−ＭＡＦの遺伝子転写を活性化させることができることを妨げる、ペプチドのことを指す。
【０２２２】
ネガティブｃ−ＭＡＦドミナント
ｍａｆファミリーのタンパク質は、ホモ二量体化およびＡＰ−１ファミリーの他のメンバー（例えば、ＦｏｓおよびＪｕｎ）とのヘテロ二量体化をすることができるので、ｃ−ＭＡＦ活性を阻害する１つの方法は、ｃ−ＭＡＦと二量体化することができるが転写を活性化させる能力を欠くネガティブドミナントの使用によるものである。したがって、ネガティブｃ−ＭＡＦドミナントは、細胞に存在し、トランス活性化ドメイン（例えば、ｍａｆＫ、ｍａｆＦ、ｍａｆｇおよびｐｉ８）を含むアミノ末端の３分の２を欠く、任意の小さいｍａｆタンパク質であり得る（Ｆｕｊｉｗａｒａら（１９９３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ８，２３７１−２３８０；Ｉｇａｒａｓｈｉら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，７６１５−７６２４；Ａｎｄｒｅｗｓら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０，１１４８８−１１４９２；Ｋａｔａｏｋａら（１９９５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１５，２１８０−２１９０）（Ｋａｔａｏｋａら（１９９６）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １２，５３−６２）。
【０２２３】
あるいは、ネガティブｃ−ＭＡＦドミナントには、他のタンパク質と二量体化する能力を維持しているが転写を活性化する能力を欠くｃ−ＭＡＦバリアントが含まれる。これらのバリアントは、例えば、タンパク質のＮ末端に位置するｃ−ＭＡＦトランス活性化ドメインを欠いているバリアントである。したがって、例証的な様式では、ネガティブｃ−ＭＡＦドミナントバリアントには、少なくともアミノ酸１〜１２２、少なくともアミノ酸１〜１８７または少なくともアミノ酸１〜２５７（その全体が本明細書に参考として援用される米国特許第６２７４３３８号に記載されているようなヒトｃ−ＭＡＦのナンバリングを考慮することによって）が除去されているバリアントが含まれる。
【０２２４】
本発明は、ネガティブｃ−ＭＡＦドミナントバリアントと、標的細胞における発現に適したプロモーターの作動性の支配下のｃ−ＭＡＦをコードするポリヌクレオチドとの両方の使用を企図する。本発明のポリヌクレオチド転写を制御するために使用され得るプロモーターは、構成的プロモーター、すなわち、基底レベルの転写を指示するプロモーター、または転写活性に外部のシグナルが必要である誘導性プロモーターであり得る。転写の制御に適した構成的プロモーターは、とりわけ、ＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＤＨＦＲプロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、１ａ伸長因子（ＥＦ１ａ）プロモーター、アルブミンプロモーター、ＡｐｏＡ１プロモーター、ケラチンプロモーター、ＣＤ３プロモーター、免疫グロブリン重鎖または軽鎖プロモーター、ニューロフィラメントプロモーター、ニューロン特異的エノラーゼプロモーター、Ｌ７プロモーター、ＣＤ２プロモーター、ミオシン軽鎖キナーゼプロモーター、ＨＯＸ遺伝子プロモーター、チミジンキナーゼプロモーター、ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーター、ＭｙｏＤ遺伝子プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）遺伝子プロモーター、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）プロモーター、アクチン遺伝子プロモーターである。好ましい実施形態において、トランス活性化因子の発現を制御するプロモーターは、ＰＧＫ遺伝子プロモーターである。好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチド転写を制御するプロモーターは、Ｔ７ファージのＲＮＡポリメラーゼプロモーターである。
【０２２５】
好ましくは、本発明の文脈において使用され得る誘導性プロモーターは、誘導剤（ｉｎｄｕｃｅｒ  ａｇｅｎｔ）の非存在下ではゼロまたは無視できる基底発現を示す誘導剤に応答するプロモーターであり、３’位に位置する遺伝子の活性化を促進することができる。誘導剤のタイプに応じて、誘導性プロモーターは、Ｔｅｔ  ｏｎ／ｏｆｆプロモーター（Ｇｏｓｓｅｎ，Ｍ．ａｎｄ  Ｈ．Ｂｕｊａｒｄ（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：５５４７−５５５１；Ｇｏｓｓｅｎ，Ｍ．ら、１９９５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６８：１７６６−１７６９；Ｒｏｓｓｉ，Ｆ．Ｍ．Ｖ．ａｎｄ  Ｈ．Ｍ．Ｂｌａｕ，１９９８，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．９：４５１−４５６）；Ｐｉｐ  ｏｎ／ｏｆｆプロモーター（米国特許第６２８７８１３号）；抗黄体ホルモン依存性プロモーター（ＵＳ２００４１３２０８６）、エクジソン依存性プロモーター（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒｓｏｎら、１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：６３１４−６３１８；Ｎｏら、１９９６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：３３４６−３３５１，Ｓｕｈｒら、１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５：７９９９−８００４およびＷＯ９７３８１１７）、メタロチオネイン依存性プロモーター（ＷＯ８６０４９２０）およびラパマイシン依存性プロモーター（Ｒｉｖｅｒａら、１９９６，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２：１０２８−３２）として分類される。
【０２２６】
ネガティブｃ−ＭＡＦドミナントバリアントをコードするポリヌクレオチドの発現に適したベクターとしては、原核生物発現ベクター由来のベクター（例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔおよびそれらの誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥｌ、ｐＣＲｌ、ＲＰ４）、ファージおよびシャトルベクター（例えば、ｐＳＡ３およびｐＡＴ２８）、酵母発現ベクター（例えば、２−ミクロンタイプのプラスミドベクター、インテグレーションプラスミド、ＹＥＰベクター、セントロメアプラスミドなど）、昆虫細胞発現ベクター（例えば、ｐＡＣシリーズベクターおよびｐＶＬシリーズベクター）、植物発現ベクター（例えば、ｐＩＢＩ、ｐＥａｒｌｅｙＧａｔｅ、ｐＡＶＡ、ｐＣＡＭＢＩＡ、ｐＧＳＡ、ｐＧＷＢ、ｐＭＤＣ、ｐＭＹ、ｐＯＲＥシリーズベクターなど）およびウイルスベクターベース（アデノウイルス、アデノウイルス随伴ウイルスならびにレトロウイルスおよび特にレンチウイルス）の高等真核生物細胞発現ベクターまたは非ウイルスベクター（例えば、ｐＳｉｌｅｎｃｅｒ  ４．１−ＣＭＶ（Ａｍｂｉｏｎ）、ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１／ｈｙｇ  ｐＨＣＭＶ／Ｚｅｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＥＦｌ／Ｈｉｓ、ｐＩＮＤ／ＧＳ、ｐＲｃ／ＨＣＭＶ２、ｐＳＶ４０／Ｚｅｏ２、ｐＴＲＡＣＥＲ−ＨＣＭＶ、ｐＵＢ６／Ｖ５−Ｈｉｓ、ｐＶＡＸｌ、ｐＺｅｏＳＶ２、ｐＣＩ、ｐＳＶＬおよびｐＫＳＶ−１０、ｐＢＰＶ−１、ｐＭＬ２ｄおよびｐＴＤＴｌ）が挙げられる。
【０２２７】
ｃ−ＭＡＦタンパク質活性の他の阻害性化合物
本発明における使用に適した他のｃ−ＭＡＦ阻害性化合物としては、以下が挙げられる：
【表１−１】
0006386450.tif 000002
【表１−２】
0006386450.tif 000003
【表１−３】
0006386450.tif 000004
【表１−４】
0006386450.tif 000005
【表１−５】
0006386450.tif 000006
【０２２８】
他のｃ−ＭＡＦインヒビターは、特許出願ＷＯ２００５０６３２５２に記載されている（例えば、以下の表（表２）に示されるもの）。
【表２−１】
0006386450.tif 000007
【表２−２】
0006386450.tif 000008
【表２−３】
0006386450.tif 000009
【０２２９】
好ましい実施形態において、ｃ−ＭＡＦ阻害剤は、骨転移の処置および／または予防のために用いられる。なおもより好ましい実施形態において、骨転移は、溶骨性転移である。
【０２３０】
ｃ−ＭＡＦ阻害剤は、代表的には、薬学的に許容され得るキャリアとともに投与される。
【０２３１】
用語「キャリア」とは、希釈剤または賦形剤のことを指し、それによって、活性成分が投与される。そのような薬学的キャリアは、滅菌された液体（例えば、水および油（石油、動物、植物または合成起源のものを含む（例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油など）））であり得る。特に注射可能な溶液用の、水または食塩水溶液ならびにデキストロース水溶液およびグリセロール水溶液が、キャリアとして使用されるのが好ましい。好適な薬学的キャリアは、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，１９９５によって「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。好ましくは、本発明のキャリアは、州政府もしくは連邦政府の規制当局によって承認されたものであるか、または米国薬局方、もしくは動物、より具体的には人間におけるその使用について一般に認識されている他の薬局方に列挙されているものである。
【０２３２】
本発明の薬学的組成物の所望の薬学的剤形を製造するために必要なキャリアおよび補助物質は、他の因子のなかでも、選択される薬学的剤形に依存する。薬学的組成物の前記薬学的剤形は、当業者に公知の従来の方法に従って製造されるだろう。活性成分を投与するための種々の方法、使用されるべき賦形剤およびそれらを生成するためのプロセスの概説は、「Ｔｒａｔａｄｏ  ｄｅ  Ｆａｒｍａｃｉａ  Ｇａｌｅｎｉｃａ」，Ｃ．Ｆａｕｌｉ  ｉ  Ｔｒｉｌｌｏ，Ｌｕｚａｎ  ５，Ｓ．Ａ．１９９３  Ｅｄｉｔｉｏｎに見られる。薬学的組成物の例としては、経口投与、局所投与または非経口投与用の、任意の固体組成物（錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤など）または液体組成物（溶液、懸濁液またはエマルジョン）が挙げられる。さらに、薬学的組成物は、必要であると見なされる場合、安定剤、懸濁剤、保存剤、界面活性剤などを含み得る。
【０２３３】
医薬において使用するために、ｃ−ＭＡＦ阻害剤は、単離されたものとして、またはさらなる活性剤とともに、プロドラッグ、塩、溶媒和化合物もしくは包接化合物の形態で見出され得、薬学的に許容され得る賦形剤とともに製剤化され得る。本発明におけるその使用にとって好ましい賦形剤としては、糖、デンプン、セルロース、ゴムおよびタンパク質が挙げられる。特定の実施形態において、本発明の薬学的組成物は、固体の薬学的剤形（例えば、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、坐剤、液体の形態を得るために再構成され得る滅菌された結晶または無定形固体など）、液体の薬学的剤形（例えば、溶液、懸濁液、エマルジョン、エリキシル剤、ローション、軟膏など）または半固体の薬学的剤形（ゲル、軟膏、クリームなど）として製剤化されるだろう。本発明の薬学的組成物は、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路、動脈内経路、髄内（ｉｎｔｒａｍｅｄｕｌａｒｒｙ）経路、鞘内経路、心室内経路（ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｒｏｕｔｅｒ）、経皮的経路、皮下経路、腹腔内経路、鼻腔内経路、腸管経路、局所経路、舌下経路または直腸経路が挙げられるがこれらに限定されない任意の経路によって投与され得る。活性成分を投与するための種々の方法、使用されるべき賦形剤およびそれらの製造プロセスの概説は、Ｔｒａｔａｄｏ  ｄｅ  Ｆａｒｍａｃｉａ  Ｇａｌｅｎｉｃａ，Ｃ．Ｆａｕｌｉ  ｉ  Ｔｒｉｌｌｏ，Ｌｕｚａｎ  ５，Ｓ．Ａ．，１９９３  ＥｄｉｔｉｏｎおよびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．），２０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  ＰＡ，ＵＳＡ（２０００）に見られる。薬学的に許容され得るキャリアの例は、当該分野において公知であり、それらとしては、リン酸緩衝食塩水溶液、水、エマルジョン（例えば、油／水エマルジョン）、種々のタイプの湿潤剤、滅菌された溶液などが挙げられる。前記キャリアを含む組成物は、当該分野で公知の従来のプロセスによって製剤化され得る。
【０２３４】
核酸（ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡをコードするポリヌクレオチド、またはネガティブｃ−ＭＡＦドミナントをコードするポリヌクレオチド）が投与される場合、本発明は、前記核酸を投与するために個々に調製された薬学的組成物を企図する。その薬学的組成物は、前記裸の核酸、すなわち、身体のヌクレアーゼによる分解から核酸を保護する化合物の非存在下の核酸を含み得、それは、トランスフェクションのために使用される試薬に関連する毒性が排除されるという利点を必要とする。裸の化合物に適した投与経路としては、血管内経路、腫瘍内経路、頭蓋内経路、腹腔内経路、脾臓内経路、筋肉内経路、網膜下経路、皮下経路、粘膜経路、局所経路および経口経路が挙げられる（Ｔｅｍｐｌｅｔｏｎ，２００２，ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，２１：８５７−８６７）。あるいは、それらの核酸は、コレステロールに結合体化された、または細胞膜を通過して転座を促進することができる化合物（例えば、ＨＩＶ−１  ＴＡＴタンパク質由来のＴａｔペプチド、Ｄ．ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒアンテナペディアタンパク質のホメオドメインの３番目のらせん、単純ヘルペスウイルスＶＰ２２タンパク質、アルギニンオリゴマー、およびＷＯ０７０６９０９０に記載されているようなペプチド）に結合体化された、リポソームの一部を形成して、投与され得る（Ｌｉｎｄｇｒｅｎ，Ａ．ら、２０００，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ，２１：９９−１０３、Ｓｃｈｗａｒｚｅ，Ｓ．Ｒ．ら、２０００，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，２１：４５−４８、Ｌｕｎｄｂｅｒｇ，Ｍら、２００３，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ８：１４３−１５０およびＳｎｙｄｅｒ，Ｅ．Ｌ．ａｎｄ  Ｄｏｗｄｙ，Ｓ．Ｆ．，２００４，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２１：３８９−３９３）。あるいは、そのポリヌクレオチドは、アデノ随伴ウイルスまたはレトロウイルス（例えば、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）またはレンチウイルス（ＨＩＶ、ＦＩＶ、ＥＩＡＶ）に基づくウイルス）において、プラスミドベクターまたはウイルスベクター、好ましくは、アデノウイルスベースのベクターの一部を形成して、投与され得る。
【０２３５】
ｃ−ＭＡＦ阻害剤またはそれらを含む薬学的組成物は、体重１キログラムあたり１０ｍｇ未満、好ましくは、体重１ｋｇあたり５、２、１、０．５、０．１、０．０５、０．０１、０．００５、０．００１、０．０００５、０．０００１、０．００００５または０．００００１ｍｇ未満の用量で投与され得る。単位用量は、注射、吸入または局所投与によって投与され得る。
【０２３６】
用量は、処置される状態の重症度および応答に依存し、それは、数日間〜数ヶ月間またはその状態が鎮静するまで、変動し得る。患者の身体におけるその薬剤の濃度を定期的に測定することによって、最適な投与量が決定され得る。動物モデルにおける事前のインビトロまたはインビボアッセイによって得られるＥＣ５０値から、最適な用量が決定され得る。単位用量は、１日に１回または１日に１回未満、好ましくは、２、４、８または３０日ごとに１回未満で投与され得る。あるいは、開始用量の後、１回または数回の維持用量（通常、開始用量よりも少ない量）を投与することが可能である。維持レジメンは、０．０１μｇ〜１．４ｍｇ／ｋｇ体重／日、例えば、１０、１、０．１、０．０１、０．００１または０．００００１ｍｇ／ｋｇ体重／日の用量範囲での患者の処置を含み得る。維持用量は、好ましくは、５、１０または３０日ごとにせいぜい１回投与される。処置は、患者が罹患している障害のタイプ、その重症度および患者の状態に従って変動する時間にわたって継続されなければならない。処置の後、その疾患がその処置に応答しない場合、用量を増加すべきかどうか、またはその疾患の改善がみとめられる場合もしくは望まれない副作用がみとめられる場合、用量を減少させるかどうかを決定するために、患者の進行をモニターしなければならない。
【０２３７】
上昇したｃ−ＭＡＦレベルを有する、骨転移を伴う肺がん患者における骨分解の処置または予防
本発明者らは、ｃ−ＭＡＦレベルが、転移、好ましい実施形態において骨転移において上昇していることを決定した。骨に転移しており、かつ上記転移においてｃ−ＭＡＦレベルが上昇している肺がんに罹患している患者は、破骨細胞活性の上昇によって引き起こされる骨分解の予防を目指した治療から特に利益を得ることができる。
【０２３８】
したがって、別の態様において、本発明は、肺がんに罹患しており、かつ転移腫瘍組織サンプルにおいてコントロールサンプルと比較して上昇したｃ−ＭＡＦレベルを有する被験体における骨転移の予防および／または処置のための医薬製品の調製における、骨分解を回避するかまたは予防するための薬剤の使用に関する。
【０２３９】
あるいは、本発明は、肺がんに罹患しており、転移性腫瘍組織サンプルにおいてコントロールサンプルと比較して上昇したｃ−ＭＡＦレベルを有する被験体において、骨転移の予防および／または処置における使用のための骨分解を回避するかまたは予防するための薬剤に関する。
【０２４０】
あるいは、本発明は、肺がんに罹患しており、転移性腫瘍組織サンプルにおいて、コントロールサンプルと比較して上昇したｃ−ＭＡＦレベルを有する被験体における分解の予防および／または処置の方法であって、上記被験体に、骨分解を回避するかまたは予防するための薬剤を投与する工程を含む方法に関する。
【０２４１】
特定の実施形態において、骨転移は、溶骨性転移である。別の特定の実施形態において、肺がんは、ＮＳＣＬＣである。
【０２４２】
用語および表現「被験体」、「肺がん」、「腫瘍サンプル」、「転移」、「ｃ−ＭＡＦ遺伝子」、「増加または上昇した発現レベル」、および「コントロールサンプル」は、本発明の第１の方法に関して詳細に説明されており、骨分解を回避するまたは予防するための薬剤に等しく適用可能である。
【０２４３】
本発明において記載される治療方法に適した骨分解を回避または予防することができる薬剤は、個別化治療方法の文脈において上記に詳細に説明されている。
【０２４４】
参照またはコントロールサンプルは、転移に罹患していない肺がんを有する被験体の腫瘍サンプルまたは転移に罹患していない肺がんを有する被験体の生検サンプル中の腫瘍組織コレクションにおいて測定されたｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルの中央値に対応する腫瘍サンプルである。
【０２４５】
ｃ−ＭＡＦレベルがコントロールサンプルと比較して上昇しているかどうかを決定または定量するための方法は、本発明の第１の方法との関連において詳細に説明されており、骨分解を回避するためまたは予防するための薬剤にも等しく適用可能である。
【０２４６】
あるいは、骨分解を回避するためまたは予防するための、上で述べられた薬剤のうちの２つ以上の薬剤が組合わされることにより転移が処置されるおよび／もしくは予防される組み合わせ処置が行われ得るか、または前記薬剤が、他のサプリメント（例えば、カルシウムまたはビタミンＤ）もしくはホルモンと組合わされ得る。
【０２４７】
骨分解を回避するためまたは予防するための薬剤は、代表的には、薬学的に許容され得るキャリアとともに投与される。用語「キャリア」およびキャリアのタイプは、ｃ−ＭＡＦ阻害剤、ならびにそれらが投与され得る形態および用量について上で定義されてきたが、骨分解を回避するためまたは予防するための薬剤にも等しく適用可能である。
【０２４８】
本発明のキット
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している被験体における前記がんの骨転移を予測するためのキットに関し、そのキットは：ａ）前記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを定量するための手段；およびｂ）前記サンプル中の定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベルを参照ｃ−ＭＡＦ発現レベルと比較するための手段を備える。
【０２４９】
別の態様において、本発明は、肺がんからの骨転移に罹患している被験体の臨床転帰を予測するためのキットに関し、そのキットは：ａ）前記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを定量するための手段；およびｂ）前記サンプル中の定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベルを参照ｃ−ＭＡＦ発現レベルと比較するための手段を備える。
【０２５０】
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している被験体に対する治療を決定するためのキットに関し、そのキットは：ａ）前記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを定量するための手段；ｂ）前記サンプル中の定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベルを参照ｃ−ＭＡＦ発現レベルと比較するための手段；およびｃ）定量された発現レベルと参照発現レベルとの比較に基づいて、前記被験体において骨転移を予防するためおよび／または減少させるための治療を決定するための手段を備える。ｄ）定量された発現レベルと参照発現レベルとの比較に基づいて、前記被験体において骨転移を予防するためおよび／または減少させるための治療を除外するための手段。
【０２５１】
別の態様において、本発明は、ｉ）肺がんに罹患している被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを定量するための試薬、およびｉｉ）骨転移のリスクと相関するように予め決定されている１つまたは複数のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベル指標を備えるキットに関する。
【０２５２】
１６ｑ２３および１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅および転座を含む前記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを定量するための手段は、先に詳細に記載された。
【０２５３】
好ましい実施形態において、発現を定量するための手段は、ｃ−ＭＡＦ遺伝子に特異的に結合および／または増幅するプローブおよび／またはプライマーのセットを含む。
【０２５４】
特定の実施形態において、肺がんは、ＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣがんである。
【０２５５】
特定の実施形態において、キットは、肺がん生検、循環肺がん細胞、循環肺腫瘍ＤＮＡ（これらに限定されない）に適用される。
【０２５６】
本発明の方法の特定の実施形態のすべてが、本発明のキットおよびそれらの使用に適用可能である。
【０２５７】
肺がんに罹患している被験体のサンプルをタイプ分けするための方法
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している被験体のサンプルをタイプ分けするためのインビトロでの方法に関し、その方法は：
ａ）前記被験体からサンプルを提供する工程；
ｂ）前記サンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを定量する工程；
ｃ）定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベルをｃ−ＭＡＦ発現の所定の参照レベルと比較することによって前記サンプルをタイプ分けする工程；
を含み、ここで、前記タイプ分けは、前記被験体における骨転移のリスクに関する予後情報を提供する。
【０２５８】
１６ｑ２３および１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅および転座を含む、前記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを定量するための手段は、先に詳細に記載された。特定の実施形態において、肺がんは、ＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣである。好ましい実施形態において、サンプルは、腫瘍組織サンプル、循環腫瘍細胞または循環腫瘍ＤＮＡである。
【０２５９】
肺がんに罹患している被験体を分類するための方法
別の態様において、本発明は、肺がんに罹患している被験体をコホートに分類するための方法に関し、その方法は：ａ）前記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを決定する工程；ｂ）前記サンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルをｃ−ＭＡＦ発現の所定の参照レベルと比較する工程；およびｃ）そのサンプル中のｃ−ＭＡＦの前記発現レベルに基づいて、前記被験体をコホートに分類する工程を含む。
【０２６０】
１６ｑ２３および１６ｑ２２−２４遺伝子座の増幅および転座を含む、前記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを定量するための手段は、先に詳細に記載された。
【０２６１】
特定の実施形態において、肺がんは、ＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣである。好ましい実施形態において、サンプルは、腫瘍組織サンプル、循環腫瘍細胞または循環ＤＮＡである。好ましい実施形態において、前記コホートは、前記参照発現レベルと比較して、匹敵するｃ−ＭＡＦ発現レベルを有すると判定された少なくとも１つの他の個体を含む。別の好ましい実施形態において、前記サンプル中のｃ−ＭＡＦの前記発現レベルは、前記所定の参照レベルと比べて上昇しており、コホートのメンバーは、骨転移の上昇したリスクを有すると分類される。別の好ましい実施形態において、前記コホートは、臨床試験を行うためのコホートである。好ましい実施形態において、サンプルは、腫瘍組織サンプルである。
【０２６２】
以下の実施例は、本発明を例証するものであって、その範囲を限定しない。
【実施例】
【０２６３】
実施例１
転移、特に骨転移のリスクのある患者を同定するためのｃ−ＭＡＦおよび１６ｑ２２−２４の臨床的関連性および予後診断値
ｃ−ＭＡＦを、様々な肺がん患者サンプルコホートにおいて試験した。肺がん原発性腫瘍のトランスクリプトームを含有する遺伝子発現プロファイルおよび転移についての臨床上の注記を含む第１のもの、ならびに組織マイクロアレイの形態をしている肺腫瘍生検材料および骨転移までの時間および全生存についての臨床上の注記に基づく第２のコホート。これらの腫瘍は、すべての肺がんサブタイプおよび期を代表するものである。第１のコホートにおいて、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の発現は、転移までの時間を含む、臨床上のパラメーターと相関する。同様に、原発性腫瘍診断後の骨再発および全生存についての臨床上の注記を使用して、ｃ−ＭＡＦ特異的抗体およびｃ−ＭＡＦ遺伝子座特異的ＦＩＳＨプローブを使用する免疫組織化学および蛍光インサイチュハイブリダイゼーションによるｃ−ＭＡＦタンパク質発現のレベルおよび１６ｑ２３ゲノムの増加を決定し、ｃ−ＭＡＦ発現のレベルおよび１６ｑ２３ゲノムの増加と骨再発のリスクとの間の関連性を確立する、肺原発性腫瘍生検材料の第２のセット（ｎ＝７４）。
【０２６４】
詳細な説明：
患者コホートＩ
発明者らは、これらの腫瘍中のＭＡＦ発現が転移と相関するかどうかを確かめるために適切な統計分析を行った。発明者らは、ＥＧＦＲおよびＫＲＡＳ突然変異体ならびにＳＣＬＣおよびＮＳＣＬＣを含む肺原発性腫瘍のコホートを使用した。患者の情報は、Ｃｈｉｔａｌｅ  Ｄ、Ｇｏｎｇ  Ｙ、Ｔａｙｌｏｒ  ＢＳ、Ｂｒｏｄｅｒｉｃｋ  Ｓ、Ｂｒｅｎｎａｎ  Ｃ、Ｓｏｍｗａｒ  Ｒ、Ｇｏｌａｓ  Ｂ、Ｗａｎｇ  Ｌ、Ｍｏｔｏｉ  Ｎ、Ｓｚｏｋｅ  Ｊ、Ｒｅｉｎｅｒｓｍａｎ  ＪＭ、Ｍａｊｏｒ  Ｊ、Ｓａｎｄｅｒ  Ｃ、Ｓｅｓｈａｎ  ＶＥ、Ｚａｋｏｗｓｋｉ  ＭＦ、Ｒｕｓｃｈ  Ｖ、Ｐａｏ  Ｗ、Ｇｅｒａｌｄ  Ｗ、Ｌａｄａｎｙｉ  Ｍ．「Ａｎ  ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｌｏｓｓ  ｏｆ  ＤＵＳＰ４  ｉｎ  ＥＧＦＲ−ｍｕｔａｎｔ  ｔｕｍｏｒｓ．」Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．  ２００９；  ２８：  ２７７３−８３から抽出した。
統計分析はすべて、Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒ（Ｇｅｎｔｌｅｍａｎら（２００４））を使用して、Ｒで実行した。
発明者らは、発明者らがＭＡＦ発現を通して転移表現型について説明することができるかどうかを確かめるためにＣｏｘ比例ハザードモデルを調整した（Ｐａｃｋａｇｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌのＲファンクションｃｏｘｐｈを使用）。ｃ−ＭＡＦは、統計的に有意な効果を有した（ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘアレイにおいてｃ−ＭＡＦに対して特異的な３つの独立したプローブを使用）。肺原発性腫瘍におけるｃ−ＭＡＦの遺伝子発現が、カプラン・マイヤープロットにおいて観察され、得られたＨＲおよびｐ値によって強調されるように、転移と有意に相関した（図１）。患者コホートＩＩ
【０２６５】
同様に、原発性腫瘍診断後の骨再発についての臨床上の注記が利用可能であり、入手されており、ｃ−ＭＡＦのレベルがｃ−ＭＡＦ特異的抗体を使用する免疫組織化学によって決定され、ｃ−ＭＡＦ発現のレベルと骨再発のリスクとの間の関連性が確立されている、（７４）肺原発性腫瘍のデータセット。肺がん患者由来の第２のパラフィン包埋原発性腫瘍組織由来のサンプル。これらのサンプルは、必要とされる適切な臨床データおよび臨床委員会の承認と一緒に、その臨床的な実践の間にＶａｌｌ  ｄ’Ｈｅｂｒｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによって収集された。
【０２６６】
以下の要件を満たすサンプルを選択した：
【０２６７】
９つのサンプルは、診断時に局所的疾患（Ｍ０）を有し、経過観察の任意の時点で骨再発が確認された患者に属した。
【０２６８】
４９のサンプルは、少なくとも５年後に無転移のままである診断時の患者に属した。
【０２６９】
残りの１６の腫瘍は、診断時にＭ０であり、後に骨以外の位置に再発を有した患者由来のものである。
【０２７０】
実施例２
ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現は、肺がんにおいて、転移、特に骨転移のリスクに関連する。
ｃ−ＭＡＦ骨転移遺伝子の発現は、上記に記載される肺がん発現データセットを使用する、転移を含む臨床パラメーターと相関した。図１において説明されるように、ｃ−ＭＡＦ発現は、高リスクの転移と関連した。標準的な統計分析の後に、発明者らは、これらの腫瘍におけるＭＡＦ発現が転移と有意に相関することを示した。ＥＧＦＲおよびＫＲＡＳ突然変異体ならびにＳＣＬＣおよびＮＳＣＬＣを含む肺原発性腫瘍のコホートを使用した。統計分析はすべて、Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒ（Ｇｅｎｔｌｅｍａｎら（２００４））を使用して実行した。
【０２７１】
発明者らがＭＡＦ発現を通して転移表現型について説明することができるかどうかを確かめるためにＣｏｘ比例ハザードモデルを調整した（Ｐａｃｋａｇｅｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌのＲファンクションｃｏｘｐｈを使用）。ｃ−ＭＡＦは、統計的に有意な効果を有した（ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘアレイにおいてｃ−ＭＡＦに対して特異的な３つの独立したプローブを使用）。肺原発性腫瘍におけるｃ−ＭＡＦの遺伝子発現が、カプラン・マイヤープロットにおいて観察され、得られたＨＲおよびｐ値によって強調されるように、転移と有意に相関した（図１）。腫瘍を、ｃ−ＭＡＦ発現の３つのグループに従って分類した：高（＞平均の＋１標準偏差）、中（＜平均の＋１標準偏差かつ＞平均の−１標準偏差）、および低（＜平均の−１標準偏差）。
【０２７２】
実施例３：
ｃ−ＭＡＦ発現は、骨転移のリスクに関連する。
免疫組織化学分析
【０２７３】
ｃＭＡＦ免疫染色は、Ｄａｋｏ  Ｌｉｎｋプラットフォームにおいて、正電荷スライドガラス上で実行した。脱パラフィンの後、抗原の回収を実行した。内因性ペルオキシダーゼをクエンチする。抗ｃ−ＭＡＦ抗体を使用し、その後、ペルオキシダーゼ（ｐｒｅｏｘｉｄａｓｅ）と結合した二次抗体とのインキュベーションを行った。ｃ−ＭＡＦ免疫染色を、コンピュータ処理された測定値によってスコア付けする。
【０２７４】
肺がんにおける転移および骨転移についてのｃ−ＭＡＦの予後値および予測値
肺がんの転移についてのｃ−ＭＡＦ発現の予後値および予測値を評価した。ｃ−ＭＡＦタンパク質レベルを免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定した。ＭＡＦ免疫染色を、コンピュータ処理された測定値によってスコア付けした。各検体の９つの代表的な画像を、Ｎｕａｎｃｅ  ＦＸ  Ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｔｒａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＣＲＩ  Ｉｎｃ）を備えたＤＭ２０００Ｌｅｉｃａ顕微鏡を使用して４２０〜７００ｎｍにおいて１０ｎｍ波長の間隔で取得した。画像のスペクトルデータセットを取得する前に、各波長においてデバイスのウェルをおよそ９０％満たすのに必要な露出時間を決定するためにスライドのブランク領域をイメージングしつつ、自動露出ルーチンを行い、線源強度、フィルター透過効率およびカメラ感度のばらつきを補償した。純粋なＤＡＢおよびヘマトキシリン色素の色のライブラリーを作製し、Ｎｕａｎｃｅ１．６．４ソフトウェアを使用してそれらの色を分離（ｕｎｍｉｘ）するために使用した。次いで、参照のキューブ（種々の波長において撮影された大量の画像）を、各新規症例に対して取得した後、同じ露出時間を使用して３つの代表的な組織の視野のスペクトルイメージングを得た。画像の逆重畳の後、照明の不均一を補償するためにスペクトルデータをフラットフィールド処理し（ｆｌａｔ  ｆｉｅｌｄｅｄ）、バックグラウンドにフィルターにかけた。ベールの法則の変換を使用して、参照キューブで除算したサンプルの比の負のｌｏｇを得ることによって、陽性シグナルを透過濃度から光学密度単位に変換した。コンピュータ支援閾値（ｃｏｍｐｕｔｅｒ−ａｉｄｅｄ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）を設定した。それにより、すべての陽性シグナルを強調する疑似カラー画像が生成される。解析によって、目的の領域の平均強度からｃ−ＭＡＦの定量的データが得られた。上皮細胞（正常および悪性）の核だけが、異なるサイズ閾値を設定することによって自動的に検出され、ストローマ細胞またはリンパ球の核はそうではなく、それらは、病理学者によって確認された。各症例を、統計解析のために目的の全領域のシグナル強度の平均値について算出した。コンピュータ処理された測定値の出力によって、ｃ−ＭＡＦ発現について１１６０〜９９７６０の光学密度単位（Ｏ．Ｄ．）の範囲の連続データが生成された。標準的な手順により、受信者動作曲線に基づいて、高および低発現についてカットオフ（２００００Ｏ．Ｄ．）を決定した（ＡＵＣ  ０．８０２）。結果を表３において概説する。
【表３】
0006386450.tif 000010
【０２７５】
この値に基づいて、ｃ−ＭＡＦ高グループ対低グループにおける骨転移に罹患するリスクのオッズ比は、ＯＲ（任意の時点の骨転移）＝５３．３７（９５％Ｃ．Ｉ．８．２４〜３４５．９２）であった。
【０２７６】
次に、研究の集団全体の骨進行までの時間を確認し（図２ａ）、次に、２つのグループの任意の時点の骨転移無転移生存確率（ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｂｏｎｅ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ａｔ  ａｎｙ  ｔｉｍｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ−ｆｒｅｅ）を評価した（図２ｂ）。興味深いことには、研究のコホートにおいて、ｃ−ＭＡＦ高発現腫瘍は、低レベルを発現する腫瘍よりも全生存率が小さい。
【０２７７】
解析した第２のコホートに基づいて、診断の臨床的特徴を抽出した。ｃ−ＭＡＦ高レベル発現は、０．７７８の感度、０．９３８の特異度、６３．６％の陽性予測値、および９６．８％の陰性予測値で、骨転移を予測する。
【０２７８】
肺腫瘍におけるｃ−ＭＡＦ遺伝子またはタンパク質発現は、任意の時点で、転移および骨転移と有意に相関する。
【０２７９】
実施例４
１６ｑ２２−ｑ２４（ｃ−ＭＡＦ遺伝子を含む）染色体増幅は、肺がんにおける転移、特に骨転移を予測し、そのリスクの予後診断指標となる。
次に、発明者らは、ｃ−ＭＡＦ遺伝子の遺伝子座を含むｃｈｒ１６ｑ２２−ｑ２４における増加が、肺がん患者における骨転移のリスクに関連するかどうかを決定した。この目的ために、ｃｈｒ１６ｑ２２−ｑ２４増幅を同定する１６ｑ２３  １４ｑ３２二重蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）プローブを、１６ｑ２２−２４領域のコピーの数を測定するために使用した。１４ｑ３２プローブはまた、腫瘍倍数性を標準化するためにも使用した。
【０２８０】
肺がんにおける骨転移との１６ｑ２２−２４  ＣＮＡ増加の関連性の予後値および予測値を評価した。１６ｑ２３および１４ｑ３２のコピーは、ＦＩＳＨによって決定した。スライドを、１６ｑ２３  ＭＡＦおよび１４ｑ３２ＩＧＨプローブ混合物とインキュベートした。このＳｐｅｃｔｒｕｍＯｒａｎｇｅプローブは、ＭＡＦ遺伝子領域の側面に位置し、およそ２．２Ｍｂのギャップを有する、それぞれおよそ３５０ｋｂである２つのセグメントから構成される。セントロメアのセグメントは、ｃｈｒ１６：７５７２９９８５−７６０７９７０５に位置し（Ｍａｒｃｈ  ２００６  ａｓｓｅｍｂｌｙ、ＵＣＳＣ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｒｏｗｓｅｒ）、テロメアのセグメントは、ｃｈｒ１６：７８２９０００３−７８６３５８７３に位置する（Ｍａｒｃｈ  ２００６  ａｓｓｅｍｂｌｙ、ＵＣＳＣ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｒｏｗｓｅｒ）。このプローブは５つの遺伝子ＶＡＴ１Ｌ、ＣＬＥＣ３Ａ、ＷＷＯＸ、５ｓｒＲＮＡ、およびＭＡＦの側面に位置する（セントロメアからテロメアの順）。並行して、ＣＥＰ１６（セントロメアｃｈｒ１６）プローブ（Ａｂｂｏｔ）を、ＣＮＡを決定するために使用した。ＣＥＰ１６（１６ｑ１１．２）（Ａｂｂｏｔ）プローブは、１６ｑ２３  ＣＮＡをスコア付けするために使用した。ＤＡＰＩ対比染色を適用し、画像を蛍光顕微鏡により獲得した。
【０２８１】
結果を表４および５において概説する。
【表４】
0006386450.tif 000011
【０２８２】
【表５】
0006386450.tif 000012
【０２８３】
これらの値に基づいて、１６ｑ２２−２４増加またはＣＮＡ増加陽性グループ対陰性グループにおける骨転移に罹患するリスクのオッズ比を計算した。決定のために陰性にスコア付けされる骨転移を有する患者がいなかったので、また、標準的な統計処理（Ｇｌａｓ，  Ａ．Ｓ．ら、２００３、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ５６、１１２９−１１３５）による評価上の誤差を回避するために、０．５単位をそれぞれの値に追加し、パラメーターを再計算した。この評価に基づいて、骨転移に罹患する１６ｑ２２−２４増加陽性患者についてのＯＲは、６２．６３（９５％ＣＩ  ３．４２〜１１４７．７８）であり、１４ｑ３２を使用して標準化した１６ｑ２２−２４  ＣＮＡ増加の陽性患者対コントロールについてのＯＲは、２２５．８９（９５％ＣＩ  １１．２２〜４５４６．９９）であった。小さなサイズのコホートは推定値を不正確にしたが、それぞれの場合において最小３．４２および１１．２２の臨床的に適切なＯＲ内であった。
【０２８４】
１６ｑ２３の増加を測定するためにＦＩＳＨを使用するデータに基づいて、診断の臨床的特徴を抽出した。１６ｑ２２−２４の増加（細胞当たり≧２．５コピー）は、１．００の感度、０．７７２の特異度、４０．９％の陽性予測値、および１００．０％の陰性予測値で、骨転移のリスクが高い肺がん患者を予測する。
【表６】
0006386450.tif 000013
【０２８５】
１４ｑ３２のコピーに対して標準化した１６ｑ２３の増加を測定するためにＦＩＳＨを使用するデータに基づいて、診断の臨床的特徴を抽出した。１６ｑ２２−２４  ＣＮＡの増加（１４ｑ３２に対して標準化した細胞当たりの≧１６ｑ２３の１．５コピー）は、１．００の感度、０．９３０の特異度、６９．２％の陽性予測値、および１００．０％の陰性予測値で、骨転移の肺がんのリスクを予測する。
【表７】
0006386450.tif 000014
【０２８６】
肺腫瘍における１６ｑ２２−２４、特に１６ｑ２３の増幅／増加またはＣＮＡの増加は、任意の時点で、骨転移のリスクを強く予測し、また、それに関連する。
（項目１）
肺がんを有する被験体における転移の診断のためのおよび／または肺がんを有する被験体において転移を起こす傾向の予後診断のためのインビトロでの方法であって、
（ｉ）前記被験体の腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルを定量する工程および
（ｉｉ）以前に得られた発現レベルをコントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベルと比較する工程を含み、
前記遺伝子の発現レベルが、前記コントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベルと比較して上昇している場合、前記被験体は、転移について陽性の診断を有するかまたは転移を起こす傾向がより高い、方法。
（項目２）
肺がんを有する被験体のための個別化治療をデザインするためのインビトロでの方法であって、
（ｉ）前記被験体の腫瘍サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルを定量する工程および
（ｉｉ）以前に得られた発現レベルをコントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベルと比較する工程を含み、
前記発現レベルが、前記コントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベルと比較して上昇している場合、前記被験体は、転移の予防および／または処置を目指す治療を受けるのに適格である、方法。
（項目３）
前記転移が、骨転移である、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記骨転移が、溶骨性転移である、項目３に記載の方法。
（項目５）
骨転移を有する肺がんを有する被験体のための個別化治療をデザインするためのインビトロでの方法であって、
（ｉ）前記被験体の骨転移性腫瘍組織サンプル中のｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルを定量する工程および
（ｉｉ）工程（ｉ）において得られた発現レベルをコントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベルと比較する工程を含み、
前記ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルがコントロールサンプル中の前記遺伝子の発現レベルと比較して上昇している場合、前記被験体は、骨分解の予防を目指す治療を受けるのに適格である方法。
（項目６）
前記骨分解を予防する薬剤が、ビスホスホネート、ＲＡＮＫＬインヒビター、ＰＴＨまたはＰＴＨＬＨ（中和抗体およびペプチドを包含する）またはＰＲＧアナログ、ラネル酸ストロンチウム、カルシトニン、およびカテプシンＫインヒビターからなる群より選択される、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記ＲＡＮＫＬインヒビターが、ＲＡＮＫＬ特異的抗体およびオステオプロテゲリンからなる群より選択される、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記ＲＡＮＫＬ特異的抗体が、デノスマブである、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記ビスホスホネートが、ゾレドロン酸である、項目６に記載の方法。
（項目１０）
前記肺がんが、ＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣである、項目５〜９のいずれかに記載の方法。
（項目１１）
前記ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルの定量が、前記遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）または前記ｍＲＮＡのフラグメント、前記遺伝子の相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）または前記ｃＤＮＡのフラグメントを定量する工程を含む、項目１〜１０のいずれかに記載の方法。
（項目１２）
前記発現レベルが、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、またはＤＮＡもしくはＲＮＡアレイによって定量される、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記ｃ−ＭＡＦ遺伝子発現レベルの定量が、前記遺伝子によってコードされるタンパク質またはそのバリアントのレベルを定量する工程を含む、項目１〜１０のいずれかに記載の方法。
（項目１４）
前記タンパク質のレベルが、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡまたはタンパク質アレイによって定量される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
肺がんを有する被験体における転移を診断するためのおよび／または肺がんを有する被験体において転移を起こす傾向の予後診断のためのインビトロでの方法であって、ｃ−ＭＡＦ遺伝子が前記被験体の腫瘍サンプルにおいて増幅しているかどうかを決定する工程を含み、前記遺伝子が増幅している場合、前記被験体は、転移について陽性の診断を有するかまたは転移を起こす傾向がより高い、方法。
（項目１６）
前記肺がんが、ＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣである、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅が、遺伝子座１６ｑ２２−ｑ２４の増幅を決定することによって決定される、項目１５または項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記ｃ−ＭＡＦ遺伝子の増幅が、ｃ−ＭＡＦ遺伝子特異的プローブを使用することによって決定される、項目１５または項目１６に記載の方法。
（項目１９）
コントロールサンプルが、転移に罹患していない被験体由来の肺がんの腫瘍組織サンプルである、項目１５〜１８のいずれかに記載の方法。
（項目２０）
前記増幅が、インサイチュハイブリダイゼーションまたはＰＣＲによって決定される、項目１５〜１９のいずれかに記載の方法。
（項目２１）
前記転移が、骨転移である、項目１５〜２０のいずれかに記載の方法。
（項目２２）
前記骨転移が、溶骨性転移である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
肺がんから骨転移を処置および／または予防するための医薬製品の調製におけるｃ−ＭＡＦ阻害剤の使用。
（項目２４）
前記肺がんが、ＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣである、項目２３に記載の使用。
（項目２５）
前記ｃ−ＭＡＦ阻害剤が、ｃ−ＭＡＦ特異的ｓｉＲＮＡ、ｃ−ＭＡＦ特異的アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｃ−ＭＡＦ特異的リボザイム、ｃ−ＭＡＦ阻害性抗体、ドミナント陰性ｃ−ＭＡＦバリアント、および表１または表２からの化合物からなる群から選択される、項目２３または２４に記載の使用。
（項目２６）
肺がんに罹患しており、転移性腫瘍サンプルにおいてコントロールサンプルと比較して上昇したｃ−ＭＡＦレベルを有する被験体における骨転移の処置のための医薬製品の調製における、骨分解を回避または予防することができる薬剤の使用。
（項目２７）
骨分解を回避または予防することができる薬剤が、ビスホスホネート、ＲＡＮＫＬインヒビター、ＰＴＨまたはＰＴＨＬＨ（中和抗体およびペプチドを含む）またはＰＲＧアナログ、ラネル酸ストロンチウム、ＥＧＦＲインヒビター、カルシトニン、ならびにカテプシンＫインヒビターからなる群から選択される、項目２６に記載の使用。
（項目２８）
前記ＲＡＮＫＬインヒビターが、ＲＡＮＫＬ特異的抗体およびオステオプロテゲリンの群から選択される、項目２７に記載の使用。
（項目２９）
前記ＲＡＮＫＬ特異的抗体が、デノスマブである、項目２８に記載の使用。
（項目３０）
前記ビスホスホネートが、ゾレドロン酸である、項目２７に記載の使用。
（項目３１）
前記肺がんが、ＳＣＬＣまたはＮＳＣＬＣである、項目２６〜３０のいずれかに記載の使用。
（項目３２）
前記骨転移が、溶骨性転移である、項目２６〜３１のいずれかに記載の使用。
（項目３３）
前記肺がんが、肺腺がんである、項目１に記載の方法。
（項目３４）
肺がんに罹患している被験体における前記がんの骨転移を予測するためのキットであって、前記キットは：ａ）前記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを定量するための手段；およびｂ）前記サンプル中の定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベルを参照ｃ−ＭＡＦ発現レベルと比較するための手段を備える、キット。
（項目３５）
肺がんに罹患している被験体のサンプルをタイプ分けするためのインビトロでの方法であって、前記方法は：
ａ）前記被験体からサンプルを提供する工程；
ｂ）前記サンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを定量する工程；
ｃ）定量されたｃ−ＭＡＦの発現レベルをｃ−ＭＡＦ発現の所定の参照レベルと比較することによって前記サンプルをタイプ分けする工程；
を含み、ここで、前記タイプ分けは、前記被験体における骨転移のリスクに関する予後情報を提供する、インビトロでの方法。
（項目３６）
肺がんに罹患している被験体における骨転移のリスクを予防するためまたは減少させるための方法であって、前記方法は、骨転移を予防するかまたは減少させる薬剤を前記被験体に投与する工程を含み、ここで、前記薬剤は、前記被験体におけるｃ−ＭＡＦの発現レベルの定量から決定された処置レジメンに従って投与される、方法。
（項目３７）
肺がんに罹患している被験体をコホートに分類する方法であって、前記方法は、ａ）前記被験体のサンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルを決定する工程；ｂ）前記サンプル中のｃ−ＭＡＦの発現レベルをｃ−ＭＡＦ発現の所定の参照レベルと比較する工程；およびｃ）前記サンプル中のｃ−ＭＡＦの前記発現レベルに基づいて、前記被験体をコホートに分類する工程を含む、方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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