(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の固体脂質ナノ粒子を含む薬学的組成物であって、
前記複数の固体脂質ナノ粒子がプロスタサイクリンアナログ；カチオン性化合物；および界面活性剤を含み、
前記界面活性剤がポリオキシエチレングリコール−脂質（ＰＥＧ化−脂質）であり、前記医薬組成物中の前記ＰＥＧ化−脂質のモル％が約２０％〜約３０％の範囲であり、前記ＰＥＧ化−脂質がジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ２０００（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００）であり、
前記固体脂質ナノ粒子の平均直径が５０ｎｍ以下である、薬学的組成物。
【請求項２】
前記プロスタサイクリンアナログは、エポプロステノール、トレプロスチニルまたはイロプロストである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記プロスタサイクリンアナログは、トレプロスチニルである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記カチオン性化合物は、アルキル−アンモニウム、アルキル−ポリアンモニウム、直鎖状ポリアミン、直鎖状ポリエチレンイミン、分枝状ポリエチレンイミン、ポリ−Ｌ−リジン、トリメチル−ポリ−グルコサミン、多価金属イオン、Ｎ，Ｎ’−ジヘキサデシル−１，２−エタンジアミン、テトラエチルヘキサデカン−１，１６−ジアミン、ヘキサデカン−１，１６−ビス（トリメチルアンモニウムブロミド）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、ジメチルジヘキサデシルアンモニウムクロリド、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルスルフェート（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ジステアロイル−３−（トリメチルアンモニオ）プロパンクロリド（ＤＳＴＡＰ）、ジミリストイルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、またはジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド（ＤＯＤＡＢ）である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記カチオン性化合物は、カチオン性脂質である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記複数の固体脂質ナノ粒子の平均直径は、約１ｎｍ〜約５０ｎｍである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記プロスタサイクリンアナログが、前記カチオン性化合物と複合体形成している、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
少なくとも約１重量％の前記プロスタサイクリンアナログが、前記カチオン性化合物と複合体形成している、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記カチオン性化合物が、前記固体脂質ナノ粒子のコアを形成する、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記界面活性剤が前記カチオン性化合物を安定化する、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
肺高血圧症の処置を必要とする患者において肺高血圧症を処置するための薬学的組成物であって、
複数の固体脂質ナノ粒子を含み、
前記複数の固体脂質ナノ粒子がプロスタサイクリンアナログ；カチオン性化合物；および界面活性剤を含み、
前記界面活性剤がポリオキシエチレングリコール−脂質（ＰＥＧ化−脂質）であり、前記医薬組成物中の前記ＰＥＧ化−脂質のモル％が約２０％〜約３０％の範囲であり、前記ＰＥＧ化−脂質がジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ２０００（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２０００）であり、
前記固体脂質ナノ粒子の平均直径が５０ｎｍ以下であり、前記患者に投与される、薬学的組成物。
【請求項１２】
前記肺高血圧症は、肺動脈性肺高血圧症である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
前記肺高血圧症は、ＩＩ群  肺高血圧症である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記肺高血圧症は、ＩＩＩ群  肺高血圧症である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記肺高血圧症は、群ＩＶ  肺高血圧症である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
前記肺高血圧症は、Ｖ群  肺高血圧症である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記投与は、経口投与、非経口投与、皮下投与、吸入投与、静脈内投与または注入投与である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
前記プロスタサイクリンアナログは、エポプロステノール、トレプロスチニルもしくはイロプロストである、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
前記プロスタサイクリンアナログは、トレプロスチニルである、請求項１８に記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
前記カチオン性化合物は、アルキル−アンモニウム、アルキル−ポリアンモニウム、直鎖状ポリアミン、直鎖状ポリエチレンイミン、分枝状ポリエチレンイミン、ポリ−Ｌ−リジン、トリメチル−ポリ−グルコサミン、多価金属イオン、Ｎ，Ｎ’−ジヘキサデシル−１，２−エタンジアミン、テトラエチルヘキサデカン−１，１６−ジアミン、ヘキサデカン−１，１６−ビス（トリメチルアンモニウムブロミド）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、ジメチルジヘキサデシルアンモニウムクロリド、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルスルフェート（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ジステアロイル−３−（トリメチルアンモニオ）プロパンクロリド（ＤＳＴＡＰ）、ジミリストイルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、またはジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド（ＤＯＤＡＢ）である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
前記カチオン性化合物は、カチオン性脂質である、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
前記複数の固体脂質ナノ粒子の平均直径は、約１ｎｍ〜約５０ｎｍである、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
前記プロスタサイクリンアナログが、前記カチオン性化合物と複合体形成している、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
少なくとも約１重量％の前記プロスタサイクリンアナログが、前記カチオン性化合物と複合体形成している、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項２５】
前記カチオン性化合物が、前記固体脂質ナノ粒子のコアを形成する、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項２６】
前記界面活性剤が前記カチオン性化合物を安定化する、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の引用
本願は、２０１２年１１月３０日に出願した米国仮出願第６１／７３２，２２３号からの優先権を主張する。米国仮出願第６１／７３２，２２３号は、すべての目的のためにその全体が本明細書中に参考として援用される。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
肺高血圧症（ＰＨ）は、肺血管系における異常に高い血圧によって特徴付けられる。それは、心不全をもたらし、かつ肺動脈、肺静脈、もしくは肺毛細管において起こり得る進行性の致死的疾患である。症状に関しては、患者は、息切れ、目眩、失神、および他の症状（これらは全て、運動によって悪化する）を経験する。原因は複数あり、原因不明の特発性であり得、他の系における高血圧症（例えば、患者が門脈高血圧症および肺高血圧症の両方を有する門脈肺高血圧症）をもたらし得る。
【０００３】
肺高血圧症は、世界保健機関（ＷＨＯ）によって５つの群に分類されている。Ｉ群は、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）といわれ、原因が不明の（特発性の）ＰＡＨ、遺伝性ＰＡＨ（すなわち、家族性ＰＡＨもしくはＦＰＡＨ）、薬物もしくは毒素によって引き起こされるＰＡＨ、ならびに結合組織疾患、ＨＩＶ感染症、肝臓病、および先天性心疾患などの状態によって引き起こされるＰＡＨを含む。ＩＩ群  肺高血圧症は、左心疾患と関連する肺高血圧症として特徴付けられる。ＩＩＩ群  肺高血圧症は、肺疾患（例えば、慢性閉塞性肺疾患および間質性肺疾患）と関連するＰＨ、ならびに睡眠関連呼吸障害（例えば、睡眠時無呼吸症）と関連するＰＨとして特徴付けられる。ＩＶ群  ＰＨは、慢性血栓性および／もしくは塞栓性疾患に起因するＰＨ（例えば、肺における血塊もしくは血液凝固障害によって引き起こされるＰＨ）である。Ｖ群は、他の障害もしくは状態、例えば、血液障害（例えば、真性多血症、本態性血小板血症）、全身性障害（例えば、サルコイドーシス、脈管炎）、代謝障害（例えば、甲状腺疾患、糖原病）によって引き起こされるＰＨを含む。
【０００４】
Ｉ群  ＰＨ、もしくは肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）は、肺血管抵抗（ＰＶＲ）の孤立性増大（ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅ）によって定義される呼吸困難−疲労症候群であり、これは、進行性の右心不全をもたらす。ＰＡＨは、結合組織疾患（ＣＴＤ）、先天性心疾患（ＣＨＤ）、門脈高血圧症、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、および食欲抑制薬、主にフェンフルラミンの摂取を含む種々の状態と関連して起こる。
【０００５】
ＰＡＨは、米国で３０，０００〜４０，０００人の人々を悩ましており、２０，０００〜２５，０００人が治療中である。それは、最終的には患者に心不全による死を引き起こす進行性の疾患である。利用可能な処置があるにも関わらず、１年死亡率は１５％である。現在のＰＡＨの処置は、通常は、カルシウムチャネルブロッカー（ＣＣＢ）で開始して、ホスホジエステラーゼ−５（ＰＤＥ−５）阻害剤が続く順次併用療法（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）である。いくらかの場合には、エンドセリンレセプターアンタゴニスト（ＥＲＡ）およびプロスタノイド（例えば、プロスタサイクリン）が、上記疾患が進行すると追加される。プロスタノイドは、ＰＡＨに対する最も有効なクラスの薬物であると認められているが、それらの有効性は、かなりの毒性／許容性の問題および不便な投与レジメン（例えば、毎日のＩＶ注入もしくは１日あたり４〜９回の吸入）に起因して制限されている。現在の吸入プロスタノイド製品は、イロプロスト（Ｖｅｎｔａｖｉｓ（登録商標）、１日あたり６〜９回の吸入処置）およびトレプロスチニル（Ｔｙｖａｓｏ（登録商標）、１日あたり、４時間間隔を空けて４回の吸入処置）である。イロプロストの半減期より長いものの、トレプロスチニルの半減期は、それでも比較的短く、患者が起きている間に４時間ごとに投薬を必要とする。Ｔｙｖａｓｏ（登録商標）（トレプロスチニル）の患者に関しては、投薬コンプライアンスは、主要な問題である。
【０００６】
門脈肺高血圧症は、門脈高血圧症および肺高血圧症が同時に存在することによって定義され、肝疾患の重度の合併症である。門脈肺高血圧症の診断は、血行力学的判定基準に基づく：（１）門脈高血圧症および／もしくは肝疾患（臨床診断−腹水／静脈瘤／脾腫）、（２）安静時平均肺動脈圧＞２５ｍｍＨｇ、（３）肺血管抵抗＞２４０ダイン・秒・ｃｍ−５、（４）肺動脈閉塞圧＜１５ｍｍＨｇもしくは肺内外圧差＞１２ｍｍＨｇ。
【０００７】
トレプロスチニルは、類似の抗血小板凝集作用および血管拡張作用（急性肺血管拡張を含む）を有するプロスタサイクリンの三環系ベンゾインデンアナログ（ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ  ｂｅｎｚｉｎｄｅｎｅ  ａｎａｌｏｇｕｅ）である。トレプロスチニルは、皮下投与後に絶対的バイオアベイラビリティ１００％で迅速にかつ完全に吸収され、消失半減期４．６時間を有する。トレプロスチニルの連続皮下注入は、１．２５〜２２ｎｇ／ｋｇ／分の投与速度による約１０時間後の定常状態血漿濃度と関連づけられる。投与した薬物のうちの約７９％が、未変化薬物（４％）もしくは同定可能な代謝産物（６４％）のいずれかとして、尿中に排泄される。トレプロスチニルのクリアランスは、肝機能障害を有する患者では最大８０％へと減少するので、肝疾患と関連するＰＡＨを有する患者では慎重な投薬を要する。
【０００８】
静脈内トレプロスチニルの用量は、同じ効力を維持するためには皮下注入の用量の少なくとも２倍であると報告された。さらに、静脈内トレプロスチニルは、ＰＡＨ患者を、血流感染症、血栓症、および許容性不十分の急激な過量投与もしくは過少量投与を生じる送達系機能不全を含む一連の合併症に曝すようである。
【０００９】
エポプロステノールは、ＰＡＨ患者の処置に同様に使用されてきたもう１つのプロスタサイクリンである。しかし、現在の処置は理想的ではない。例えば、エポプロステノールは、その不安定性および非常に短い半減期（２〜７分）が原因で、連続注入として投与されなければならない。
【００１０】
複雑な送達システムおよびプロスタサイクリンと関連する潜在的副作用から、いくらかの患者およびケア提供者は、このクラスの薬剤を利用するのを思いとどまってきた。従って、より安定なプロスタサイクリン組成物および投与経路が、より効率的なプロスタサイクリン治療を提供するために必要とされる。本発明は、この必要性および他の必要性に対処する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
（発明の要旨）
本発明は、一般に、プロスタサイクリンもしくはそのアナログを含む薬学的組成物、上記薬学的組成物を含むシステム、ならびに上記薬学的組成物を使用するための方法、ならびに種々の適応症、例えば、肺高血圧症（例えば、肺動脈性肺高血圧症、慢性血栓塞栓性肺高血圧症）および門脈肺高血圧症の処置のためのシステムに関する。
【００１２】
本発明の第１の局面は、プロスタサイクリンを含む薬学的組成物に関する。一実施形態において、上記薬学的組成物は、プロスタサイクリン（例えば、トレプロスチニル）もしくはそのアナログ、カチオン性化合物および界面活性剤を含む。別の実施形態において、上記薬学的組成物は、プロスタサイクリン（例えば、トレプロスチニル）もしくはそのアナログ、カチオン性化合物、界面活性剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）および疎水性添加剤（例えば、スクアラン）を含む。一実施形態において、上記カチオン性化合物は、カチオン性脂質、カチオン性ポリマー、もしくは無機イオンである。さらなる実施形態において、上記プロスタサイクリンは、トレプロスチニルである。なおさらなる実施形態において、上記無機イオンは、アルミニウムイオンである。まださらなる実施形態において、上記疎水性添加剤は、スクアランである。
【００１３】
一実施形態において、上記薬学的組成物は、上記プロスタサイクリンもしくはそのアナログおよび上記カチオン性化合物を含む複数の粒子を含む。上記複数の粒子の平均直径は、一実施形態において、約５００ｎｍ以下、約４００ｎｍ以下、約３００ｎｍ以下、約２００ｎｍ以下、約１５０ｎｍ以下、約１００ｎｍ以下、もしくは約５０ｎｍ以下である。別の実施形態において、上記複数の粒子の平均直径は、約１００ｎｍ〜約５００ｎｍ以下、約２００ｎｍ〜約４００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約３００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約５００ｎｍもしくは約１００ｎｍ〜約４００ｎｍである。さらなる実施形態において、上記界面活性剤は、上記複数の粒子のうちの１以上と会合する。さらなる実施形態において、上記複数の粒子は、複数の固体粒子である。別の実施形態において、上記複数の粒子は、固体のコロイド粒子、ポリマー−脂質ハイブリッドナノ粒子、ナノ構造の脂質キャリア、ポリマーミクロスフェア、ナノ粒子、ミセル、リポソーム、固体脂質粒子、固体脂質ナノ粒子、もしくはこれらの組み合わせを含む。さらなる実施形態において、上記複数の粒子は、固体脂質ナノ粒子を含む。
【００１４】
一実施形態において、上記界面活性剤は、上記薬学的組成物中の複数の粒子のうちの１以上と会合する。上記界面活性剤は、さらなる実施形態において、ＰＥＧ化脂質である。
【００１５】
上記プロスタサイクリンもしくはそのアナログは、一実施形態において、トレプロスチニル、エポプロステノール、もしくはイロプロストである。
【００１６】
さらに別の実施形態において、上記カチオン性化合物は、マルチカチオン性である。上記マルチカチオン性化合物は、一実施形態において、イオンもしくは脂質である。一実施形態において、上記マルチカチオン性化合物は、アルキル−アンモニウム、アルキル−ポリアンモニウム、直鎖状ポリアミン、直鎖状ポリエチレンイミン、分枝状ポリエチレンイミン、ポリ−Ｌ−リジン、トリメチル−ポリ−グルコサミン、もしくは多価金属イオンから選択される。さらなる実施形態において、上記カチオン性化合物は、ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド（ｄｉＣ１８ｄＭＡ）、ジメチルジヘキサデシルアンモニウムクロリド、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルスルフェート（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ジステアロイル−３−（トリメチルアンモニオ）プロパンクロリド（ＤＳＴＡＰ）、ジミリストイルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）である。少なくとも１種のカチオン性化合物は、他の実施形態において、Ｎ，Ｎ’−ジヘキサデシル−１，２−エタンジアミン、テトラエチルヘキサデカン−１，１６−ジアミン、もしくはヘキサデカン−１，１６−ビス（トリメチルアンモニウムブロミド）である。一実施形態において、上記カチオン性化合物は、ある種の金属イオン、例えば、アルミニウム、マグネシウム、ベリリウム、ストロンチウム、バリウム、もしくはカルシウムである。一実施形態において、上記カチオン性化合物は、カチオン性脂質（例えば、ｄｉＣ１８ｄＭＡ）である。
【００１７】
上記で提供されるように、一局面において、本発明は、プロスタサイクリンもしくはそのアナログ、カチオン性化合物、および界面活性剤を含む薬学的組成物に関する。少なくとも１種の界面活性剤は、一実施形態において、非イオン性である。上記界面活性剤は、一実施形態において、ポリオキシエチレングリコール−脂質（「ＰＥＧ化脂質」もしくは「ＰＥＧ−脂質」ともいわれる）、ポリオキシプロピレングリコール−脂質、グルコシド−脂質、グリセロール−脂質、もしくはポリソルベート−脂質である。一実施形態において、上記薬学的組成物は、上記プロスタサイクリンもしくはそのアナログ、少なくとも１種の上記カチオン性化合物および少なくとも１種の上記界面活性剤を含む複数の粒子を含む。さらなる実施形態において、上記複数の粒子は、固体脂質ナノ粒子を含む。
【００１８】
本発明の一局面において、本明細書で記載されるプロスタサイクリン組成物の有効量は、それを必要とする患者に、例えば、肺高血圧症もしくは門脈肺高血圧症の処置のために、投与される。一実施形態において、上記投与は、鼻内、経口、非経口、注射（例えば、皮下、静脈内、筋肉内）、吸入、もしくは注入によるものである。別の実施形態において、上記プロスタサイクリン組成物は、吸入によって上記患者の肺に送達される。一実施形態において、上記薬学的組成物は、肺高血圧症（例えば、肺動脈性肺高血圧症、慢性血栓塞栓性肺高血圧症）もしくは門脈肺高血圧症の処置のために、１日１回の投薬レジメンもしくは１日２回の投薬レジメンで投与される。
【００１９】
さらに別の実施形態において、上記薬学的組成物は、吸入デバイス、例えば、ネブライザーによって患者の肺に投与される。さらなる実施形態において、上記組成物を（例えば、ネブライザーもしくは他のエアロゾル生成器で）エアロゾル化すると、そのエアロゾル化組成物は、カスケードインパクションによって測定される場合、１０μｍ未満の平均エアロゾル液滴サイズ、すなわち、空気力学的重量中位径（ＭＭＡＤ）を有する。さらなる実施形態において、エアロゾル化すると、そのエアロゾルは、カスケードインパクションによって測定される場合、約８μｍ未満、約７μｍ未満、約６μｍ未満、約５μｍ未満、約４μｍ未満、約３μｍ未満もしくは約２μｍ未満のＭＭＡＤを有する。
【００２０】
本発明の別の局面は、肺高血圧症、例えば、肺動脈性肺高血圧症を処置するかまたはこれらに対する予防を提供するためのシステムに関する。上記システムは、一実施形態において、プロスタサイクリンもしくはそのアナログ、カチオン性化合物、界面活性剤を含む薬学的組成物；および吸入デバイス（例えば、乾燥粉末吸入器もしくはネブライザー）を含む。上記吸入デバイスは、一実施形態において、携帯式で使用しやすい電子式ネブライザーである。一実施形態において、上記ネブライザーは、使い捨てである。さらなる実施形態において、上記薬学的組成物は、疎水性添加剤を含む。一実施形態において、上記薬学的組成物は、上記プロスタサイクリンもしくはそのアナログ、上記カチオン性化合物および上記界面活性剤を含む複数の粒子、例えば、固体脂質ナノ粒子を含む。一実施形態において、上記吸入デバイスは、ネブライザーである。一実施形態において、上記プロスタサイクリンは、トレプロスチニルである。さらなる実施形態において、上記カチオン性化合物は、金属イオン、ポリマー、もしくは脂質である。一実施形態において、上記吸入デバイス（例えば、ネブライザー）は、約０．１〜１．０ｍＬ／分の速度で上記薬学的組成物のエアロゾルを生成する。一実施形態において、上記エアロゾル液滴の空気力学的重量中位径は、カスケードインパクションによって測定される場合、約１μｍ〜５μｍである。一実施形態において、上記エアロゾルの微細粒子画分（ＦＰＦ）は、カスケードインパクションによって、例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｓｃａｄｅ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ（ＡＣＩ）もしくはＮｅｘｔ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ（ＮＧＩ）によって測定される場合、約５０％以上、または約６０％もしくは約６５％である。
【００２１】
本発明の別の局面は、肺高血圧症の処置もしくは肺高血圧症に対する予防の提供を必要とする患者において肺高血圧症を処置するかもしくは肺高血圧症に対する予防を提供するための方法に関する。一実施形態において、上記患者は、本明細書で記載されるプロスタサイクリン組成物を静脈内に、皮下に、もしくは吸入によって、投与される。一実施形態において、上記方法は、上記薬学的組成物をエアロゾル化する工程およびそのエアロゾルを、該エアロゾルの肺への送達を必要とする患者の肺に送達する工程を包含する。一実施形態において、上記肺高血圧症は、Ｉ群  肺高血圧症（すなわち、ＰＡＨ）である。別の実施形態において、上記肺高血圧症は、ＩＩ群、ＩＩＩ群、ＩＶ群もしくはＶ群の肺高血圧症である。上記方法は、一実施形態において、有効量の本明細書で記載される薬学的組成物を、肺高血圧症の処置の必要性のある患者に投与する工程を包含する。
【００２２】
本発明の別の局面は、門脈肺高血圧症の処置もしくは門脈肺高血圧症に対する予防を必要とする患者において、門脈肺高血圧症を処置するかもしくは門脈肺高血圧症に対する予防を提供するための方法に関する。上記方法は、一実施形態において、有効量の、本明細書で記載されるプロスタサイクリン組成物のうちの１つを、門脈肺高血圧症の処置の必要性のある患者に投与する工程を包含する。一実施形態において、投与は、吸入、皮下もしくは静脈内によるものである。
【００２３】
一実施形態において、上記薬学的組成物は、１日１回もしくは１日２回、それを必要とする患者に投与される。上記組成物が吸入によって投与される実施形態において、投与すると、一実施形態では、上記プロスタサイクリン（例えば、トレプロスチニル）もしくはそのアナログは、約６時間〜約４８時間、例えば、約１２時間〜約３６時間もしくは約１２時間〜約２４時間の範囲に及ぶ期間にわたって、上記肺内に放出される。
【００２４】
本発明の別の局面は、本明細書で記載される薬学的組成物のうちの１以上の複数の固体粒子を含むエアロゾルに関する。一実施形態において、上記複数の固体粒子は、光散乱によって測定される場合、２００ｎｍ未満の平均直径を有する。別の実施形態において、上記複数の固体粒子は、光散乱によって測定される場合、平均直径  約１ｎｍ〜約１０００ｎｍ、もしくは約１０ｎｍ〜約５００ｎｍ、もしくは約１００ｎｍ〜約２５０ｎｍを有する。一実施形態において、上記プロスタサイクリンは、トレプロスチニルである。さらなる実施形態において、上記粒状組成物は、粉末形態もしくは液体形態にあり、吸入デバイス（例えば、ネブライザー）によって、約０．１〜約１．０ｍＬ／分の速度でエアロゾルとして、肺への送達を必要とする患者の肺に送達される。一実施形態において、上記粒状組成物は、トレプロスチニルを含み、乾燥粉末形態にある。さらなる実施形態において、上記乾燥粉末組成物は、吸入デバイス、例えば、乾燥粉末吸入器によって、肺への送達を必要とする患者の肺に送達される。
【００２５】
一実施形態において、本発明は、上記プロスタサイクリンもしくはそのアナログおよび上記カチオン性化合物を組みこむ粒子組成物を提供し、上記薬物の経時的な制御放出を提供し、従って、１日に２回もしくは３回、またはより少ない投薬頻度を可能にする。一実施形態において、上記カチオン性化合物は、カチオン性脂質である。本発明の薬学的組成物はまた、一実施形態において、血圧変化などの全身的な血行力学的効果を低下させる。本明細書で記載される薬学的組成物の別の利益は、一実施形態において、咳を引き起こす噴霧への急激な曝露をさらに低下させることである。
【００２６】
一実施形態において、本発明はまた、ステルス設計（ｓｔｅａｌｔｈ  ｄｅｓｉｇｎ）の使用によって、肺内で、６〜２４時間の期間の経過にわたって上記プロスタサイクリンもしくはそのアナログを保持または放出し、かつ残留時間を最大化する（貪食細胞および肺サーファクタント細胞による取り込みを回避する）エアロゾル化粒子を提供する。
【００２７】
本発明はまた、一実施形態において、肺高血圧症患者および門脈肺高血圧症患者に、有効であるその一方で、処置に伴う患者の忍容性およびコンプライアンスを改善する改善されたプロスタサイクリン組成物を提供する。特定のプロスタサイクリンは、肺高血圧症の処置のために必要とされており、本明細書で提供される組成物は、一実施形態において、投薬頻度を現在承認されているプロスタサイクリン治療に関して１日４回から、毎日１回、２回もしくは３回へと低下させるその一方で、重度の咳、咽喉刺激性、および疼痛の発生率を有意に低減させ、従って、忍容性を改善する。本明細書で記載される薬学的組成物は、一実施形態において、患者の負担および現在利用可能な肺高血圧症の薬物療法、例えば、肺動脈性肺高血圧症の薬物療法によって引き起こされる不快感を低減する。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１は、本発明の３つの実施形態の模式図である。一番上の図は、プロスタサイクリン（例えば、トレプロスチニル）もしくはプロスタサイクリンアナログ（例えば、トレプロスチニル）、カチオン性脂質、および界面活性剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）を含む固体粒子を示す。中央の図は、複合体形成がカチオン性化合物とプロスタサイクリン（ｐｒｏｓｔａｃｙｌｉｎ）もしくはプロスタサイクリンアナログとの間に存在する、脂質で被覆された小粒子を表す。上記カチオン性化合物は、一実施形態において、無機イオンもしくはカチオン性脂質である。一番下の図は、プロスタサイクリンもしくはプロスタサイクリンアナログがリポソーム内部でカチオン性化合物と複合体形成しており、ポリマー脂質（界面活性剤）が表面構造の一部であるリポソームの図である。
【図２】図２は、本発明での使用のための代表的なトレプロスチニル酸および塩の化学構造を図示する。
【図３】図３は、本発明のトレプロスチニル組成物を製造するための一実施形態のダイアグラムである。
【図４】図４Ａは、スクアラン濃度の関数として、トレプロスチニル：カチオン性脂質の固定比を有する本発明の組成物のナノ粒子直径のグラフである。図４Ｂは、スクアラン濃度の関数として、トレプロスチニル：カチオン性脂質：ＰＥＧ化脂質の固定比を有する本発明の組成物のナノ粒子直径のグラフである。
【図５】図５は、ＰＥＧ化脂質ｍｏｌ％の関数としての粒度のグラフである。
【図６Ａ】図６Ａは、それぞれの組成物を調製するために使用されるカチオン性脂質含有量（ｍｏｌ％）の関数として、粒子会合トレプロスチニルの％を示すグラフである。
【図６Ｂ】図６Ｂは、（ｉ）それぞれのトレプロスチニル組成物中に存在するカチオン性脂質および（ｉｉ）各組成物の粒子電荷の関数としての、遊離トレプロスチニルのグラフである。
【図６Ｃ】図６Ｃは、（ｉ）それぞれのトレプロスチニル組成物中に存在するカチオン性脂質および（ｉｉ）各組成物の粒子電荷の関数としての、遊離トレプロスチニルのグラフである。
【図７】図７は、透析時間の関数としての、会合した脂質粒子もしくは遊離トレプロスチニルのいずれかに由来するトレプロスチニルの量のグラフである。
【図８Ａ】図８Ａ〜Ｃは、改変ＧｌｏＳｅｎｓｏｒアッセイによって測定される場合、１０μＭ  トレプロスチニル、７μＭ  Ｔ５２７および５μＭ  Ｔ５５０（図８Ａ）、１μＭ  トレプロスチニル、Ｔ５２７およびＴ５５０（図８Ｂ）または０．１μＭ  トレプロスチニル、Ｔ５２７およびＴ５５０（図８Ｃ）  Ｔ５２７−４に対して応答した、時間の関数としてのＣＨＯ−Ｋ１−Ｐ４細胞（２．５×１０４  細胞／ウェル）の相対的ｃＡＭＰ応答のグラフである。
【図８Ｂ】図８Ａ〜Ｃは、改変ＧｌｏＳｅｎｓｏｒアッセイによって測定される場合、１０μＭ  トレプロスチニル、７μＭ  Ｔ５２７および５μＭ  Ｔ５５０（図８Ａ）、１μＭ  トレプロスチニル、Ｔ５２７およびＴ５５０（図８Ｂ）または０．１μＭ  トレプロスチニル、Ｔ５２７およびＴ５５０（図８Ｃ）  Ｔ５２７−４に対して応答した、時間の関数としてのＣＨＯ−Ｋ１−Ｐ４細胞（２．５×１０４  細胞／ウェル）の相対的ｃＡＭＰ応答のグラフである。
【図８Ｃ】図８Ａ〜Ｃは、改変ＧｌｏＳｅｎｓｏｒアッセイによって測定される場合、１０μＭ  トレプロスチニル、７μＭ  Ｔ５２７および５μＭ  Ｔ５５０（図８Ａ）、１μＭ  トレプロスチニル、Ｔ５２７およびＴ５５０（図８Ｂ）または０．１μＭ  トレプロスチニル、Ｔ５２７およびＴ５５０（図８Ｃ）  Ｔ５２７−４に対して応答した、時間の関数としてのＣＨＯ−Ｋ１−Ｐ４細胞（２．５×１０４  細胞／ウェル）の相対的ｃＡＭＰ応答のグラフである。
【図９Ａ】図９Ａは、遊離トレプロスチニル（２μＭ）、Ｔ４２０（噴霧化前）、Ｔ４２０（噴霧化後、２μＭ）、Ｔ４７１（噴霧化前、２μＭ）およびＴ４７１（噴霧化後、２μＭ）に対して応答した、時間の関数としてのＣＨＯ−Ｋ１−Ｐ４細胞（２．５×１０４  細胞／ウェル）の相対的ｃＡＭＰ応答のグラフである。
【図９Ｂ】図９Ｂは、遊離トレプロスチニル（２μＭ）、Ｔ４４１（噴霧化前）、Ｔ４４１（噴霧化後、２μＭ）、Ｔ４７０（噴霧化前、２μＭ）およびＴ４７０（噴霧化後、２μＭ）に対して応答した、時間の関数としてのＣＨＯ−Ｋ１−Ｐ４細胞（２．５×１０４  細胞／ウェル）の相対的ｃＡＭＰ応答のグラフである。
【図１０Ａ】図１０Ａ〜１０Ｄは、トレプロスチニル濃度の関数としてのＣＨＯ−Ｋ１細胞増殖阻害を示すグラフである。細胞を、４８時間の期間にわたってそれぞれの組成物で処理した。Ｔ５２７（図１０Ａ）、Ｔ５５０（図１０Ｂ）、Ｔ４４１（図１０Ｃ）、Ｔ４２０（図１０Ｄ）。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜１０Ｄは、トレプロスチニル濃度の関数としてのＣＨＯ−Ｋ１細胞増殖阻害を示すグラフである。細胞を、４８時間の期間にわたってそれぞれの組成物で処理した。Ｔ５２７（図１０Ａ）、Ｔ５５０（図１０Ｂ）、Ｔ４４１（図１０Ｃ）、Ｔ４２０（図１０Ｄ）。
【図１０Ｃ】図１０Ａ〜１０Ｄは、トレプロスチニル濃度の関数としてのＣＨＯ−Ｋ１細胞増殖阻害を示すグラフである。細胞を、４８時間の期間にわたってそれぞれの組成物で処理した。Ｔ５２７（図１０Ａ）、Ｔ５５０（図１０Ｂ）、Ｔ４４１（図１０Ｃ）、Ｔ４２０（図１０Ｄ）。
【図１０Ｄ】図１０Ａ〜１０Ｄは、トレプロスチニル濃度の関数としてのＣＨＯ−Ｋ１細胞増殖阻害を示すグラフである。細胞を、４８時間の期間にわたってそれぞれの組成物で処理した。Ｔ５２７（図１０Ａ）、Ｔ５５０（図１０Ｂ）、Ｔ４４１（図１０Ｃ）、Ｔ４２０（図１０Ｄ）。
【図１１Ａ】図１１Ａ〜１１Ｄは、トレプロスチニル濃度の関数としてのＮＲ８３８３ラット肺胞細胞増殖阻害４８を示すグラフである。細胞を、７２時間にわたってそれぞれの組成物で処理した。Ｔ５２７（図１１Ａ）、Ｔ５５０（図１１Ｂ）、Ｔ４４１（図１１Ｃ）、Ｔ４２０（図１１Ｄ）。
【図１１Ｂ】図１１Ａ〜１１Ｄは、トレプロスチニル濃度の関数としてのＮＲ８３８３ラット肺胞細胞増殖阻害４８を示すグラフである。細胞を、７２時間にわたってそれぞれの組成物で処理した。Ｔ５２７（図１１Ａ）、Ｔ５５０（図１１Ｂ）、Ｔ４４１（図１１Ｃ）、Ｔ４２０（図１１Ｄ）。
【図１１Ｃ】図１１Ａ〜１１Ｄは、トレプロスチニル濃度の関数としてのＮＲ８３８３ラット肺胞細胞増殖阻害４８を示すグラフである。細胞を、７２時間にわたってそれぞれの組成物で処理した。Ｔ５２７（図１１Ａ）、Ｔ５５０（図１１Ｂ）、Ｔ４４１（図１１Ｃ）、Ｔ４２０（図１１Ｄ）。
【図１１Ｄ】図１１Ａ〜１１Ｄは、トレプロスチニル濃度の関数としてのＮＲ８３８３ラット肺胞細胞増殖阻害４８を示すグラフである。細胞を、７２時間にわたってそれぞれの組成物で処理した。Ｔ５２７（図１１Ａ）、Ｔ５５０（図１１Ｂ）、Ｔ４４１（図１１Ｃ）、Ｔ４２０（図１１Ｄ）。
【図１２】図１２は、遊離トレプロスチニルＴ５２７もしくはＴ５５０でチャレンジした動物において、時間の関数としての肺動脈圧（低酸素ベースライン値のパーセントとして表される）のグラフである。
【図１３Ａ】図１３Ａ〜１３Ｂは、ＰＢＳ、遊離トレプロスチニル、Ｔ５２７もしくはＴ５５０でチャレンジした動物に対して応答した、全身の動脈圧（ベースラインの低酸素値の％として表される）  対  時間のグラフである。
【図１３Ｂ】図１３Ａ〜１３Ｂは、ＰＢＳ、遊離トレプロスチニル、Ｔ５２７もしくはＴ５５０でチャレンジした動物に対して応答した、全身の動脈圧（ベースラインの低酸素値の％として表される）  対  時間のグラフである。
【図１４Ａ】図１４Ａは、ＰＡＨのインビボ急性低酸素症ラットモデルにおいて、ＰＢＳ、トレプロスチニル、Ｔ５２７およびＴ５５０でチャレンジした動物に対して応答した、時間の関数としてのインビボでの心拍数（「ＢＰＭ」もしくは「1分あたりの拍動数」として表される）のグラフである。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは、ＰＡＨのインビボ急性低酸素症ラットモデルにおいて、ＰＢＳ、トレプロスチニル、Ｔ５２７およびＴ５５０でチャレンジした動物に対して応答した、時間の関数としてのインビボでの心拍数（出発低酸素値からの％として表される）のグラフである。垂直方向の破線は、ｘ軸の時間増分における変化を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
（発明の詳細な説明）
本明細書全体を通じて、用語「約（ａｂｏｕｔ）」および／もしくは「約、およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」は、数値および／もしくは範囲に関して使用され得る。用語「約」は、記載される値の近くのそれらの値を意味すると理解される。例えば、「約４０［単位］」は、４０の±２５％以内（例えば、３０から５０まで）、±２０％以内、±１５％以内、±１０％以内、±９％以内、±８％以内、±７％以内、±６％以内、±５％以内、±４％以内、±３％以内、±２％以内、±１％以内、±１％未満、またはその中もしくはそれ以下の任意の他の値もしくは値の範囲を意味し得る。さらに、語句「約［ある値］未満」もしくは「約［ある値］より大きい」とは、本明細書で提供される用語「約」の定義に鑑みて理解されるべきである。用語「約」および「約、およそ」は、交換可能に使用される。
【００３０】
本明細書全体を通じて、数値範囲は、特定の量に関して提供される。これらの範囲がその中の全ての部分範囲を含むことは理解されるべきである。従って、「５０〜８０」の範囲は、その中の全ての考えられる範囲（例えば、５１〜７９、５２〜７８、５３〜７７、５４〜７６、５５〜７５、６０〜７０など）を含む。さらに、所定の範囲内の全ての値は、それによって包含される範囲の端点であり得る。（例えば、範囲５０〜８０は、端点を伴う範囲（例えば、５５〜８０、５０〜７５など）を含む）。
【００３１】
本明細書全体を通じて、単語「ａ（１つの、ある）」もしくは「ａｎ（１つの、ある）」は、別段明確に示されなければ、「１以上」を意味することが理解される。さらに、単語「ａ（１つの、ある）」もしくは「ａｎ（１つの、ある）」および語句「１以上」は、交換可能に使用され得る。
【００３２】
用語「処置する」とは、以下を包含する：（１）状況、障害もしくは状態を罹っている可能性があるかもしくはその素因があり得るが、上記状況、障害もしくは状態の臨床症状もしくは不顕性の症状（ｓｕｂｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｙｍｐｔｏｍ）をまだ経験していないかまたは示していない被験体において発生しつつある上記状況、障害もしくは状態の臨床症状の出現を予防または遅らせること；（２）上記状況、障害もしくは状態を阻害すること（例えば、上記疾患の発生、維持処置の場合にはその再発、その臨床症状もしくは不顕性の症状のうちの少なくとも１つを停止、低減もしくは遅らせること）；ならびに／あるいは（３）上記状態を軽減すること（例えば、上記状況、障害もしくは状態、またはその臨床症状もしくは不顕性の症状のうちの少なくとも１つの後退を引き起こすこと）。処置される予定の被験体に対する利益は、統計的に有意であるか、または上記被験体にもしくは医師に少なくとも知覚できるかのいずれかである。
【００３３】
「予防」は、本明細書で使用される場合、感染もしくは疾患の完全な防止、またはその感染もしくは疾患の症状の発生の防止；感染もしくは疾患またはその症状の始まりを遅らせること；あるいは後に発生した感染もしくは疾患またはその症状の重症度の低減を意味し得る。
【００３４】
「有効量」は、所望の治療応答を生じるために十分な、本発明において使用されるプロスタサイクリン組成物の量を意味する。
【００３５】
「リポソーム分散物」とは、複数のリポソームを含む溶液もしくは懸濁物をいう。
【００３６】
「エアロゾル」とは、本明細書で使用される場合、液体もしくは乾燥粒子のガス状懸濁物である。本明細書で提供されるエアロゾルは、一実施形態において、本明細書で記載される薬学的組成物を含む。
【００３７】
用語「疎水性添加剤」および「疎水性充填剤」とは、本明細書で交換可能に使用される。
【００３８】
一局面において、本発明は、プロスタサイクリンもしくはそのアナログ、カチオン性化合物、および界面活性剤を含む薬学的組成物に関する。図１は、この局面の実施形態を示し、ここで上記組成物は、粒子、例えば、コロイド粒子もしくはナノ粒子の形態にある。特に、図１は、プロスタサイクリンもしくはプロスタサイクリンアナログ、カチオン性化合物および界面活性剤を含む粒子を示す。上記カチオン性化合物は、一実施形態において、上記プロスタサイクリンが粒子形態で隔離されることを可能にする。理論によって拘束されることは望まないが、上記カチオン性化合物が静電相互作用を介してバルク溶液との交換を低減すると考えられる。上記カチオン性化合物は、一実施形態において、疎水性であり、上記プロスタサイクリンもしくはプロスタサイクリンアナログと静電的に相互作用する。上記界面活性剤は、一実施形態において、生物学的組織との相互作用（ここでは、上記プロスタサイクリンもしくはプロスタサイクリンアナログの交換が、生物学的材料との相互作用による衝突交換および侵食によって促進される）を低減するために上記粒子の表面被覆を提供する。上記界面活性剤としてのＰＥＧ化脂質の使用は、本明細書で提供される組成物において、一実施形態では、マクロファージによる取り込みを最小限にする。
【００３９】
一実施形態において、上記薬学的組成物中のプロスタサイクリンもしくはプロスタサイクリンアナログは、トレプロスチニルである。よって、一実施形態において、上記薬学的組成物は、トレプロスチニル、カチオン性化合物、および界面活性剤を含む。別の実施形態において、上記薬学的組成物は、トレプロスチニル、カチオン性化合物、界面活性剤および疎水性添加剤を含む。さらなる実施形態において、上記薬学的組成物は、粒子形態、例えば、ミセル粒子もしくは固体ナノ粒子の形態にある。さらなる実施形態において、上記カチオン性化合物は、カチオン性脂質もしくは無機カチオン（例えば、金属カチオン）である（図１，中央）。なおさらなる実施形態において、上記カチオン性化合物は、マルチカチオン性である。
【００４０】
本明細書で提供される薬学的組成物は、一実施形態において、トレプロスチニル、エポプロステノール、イロプロスト、もしくはそれらのアナログ、例えば、トレプロスチニル、エポプロステノールもしくはイロプロストのアナログから選択されるプロスタサイクリンを含む。上記組成物は、一実施形態において、複数の粒子、例えば、ナノ粒子を含む。上記複数の粒子は、固体粒子、ナノ粒子、固体脂質ナノ粒子、ミセル、リポソームもしくはプロリポソーム（ｐｒｏｌｉｐｏｓｏｍｅ）、またはこれらの混合物を含み得る（図１）。一実施形態において、上記薬学的組成物は、ミセル複合化プロスタサイクリン、プロリポソーム複合化プロスタサイクリン、もしくはリポソーム複合化プロスタサイクリン、またはミセル、リポソームもしくはプロリポソーム中に被包されたプロスタサイクリンを含む分散物である。「リポソーム複合化プロスタサイクリン（ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｄ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ）」とは、上記プロスタサイクリン（もしくはプロスタサイクリンの組み合わせ）がリポソーム中に被包される実施形態を含み、プロスタサイクリン組成物の任意の形態を含む。ここでは、上記プロスタサイクリンのうちの少なくとも約１重量％が、リポソームとの複合体の一部として、あるいは上記プロスタサイクリンが水相に、可溶性形態で、または沈殿した形態もしくは複合体化した形態で、または疎水性二重層の相に、またはリポソーム二重層の界面頭部基領域に存在し得るリポソームとして、のいずれかで上記リポソームと会合している。
【００４１】
一実施形態において、本明細書で提供される薬学的組成物は、カチオン性化合物と複合体化したプロスタサイクリンを含み、ここで上記プロスタサイクリンは、粒子形態で、例えば、固体ナノ粒子、コロイド粒子、ミセルもしくはリポソームとして存在する。一実施形態において、上記プロスタサイクリンのうちの少なくとも約１重量％は、上記カチオン性化合物、例えば、カチオン性脂質と、例えば、複合体もしくはナノ粒子の一部として、会合している。
【００４２】
一実施形態において、上記組成物は、それを必要とする患者に、噴霧によって、例えば、肺高血圧症もしくは門脈肺高血圧症の処置のために投与され、上記組成物の噴霧の前に、上記組成物中のプロスタサイクリンもしくはプロスタサイクリンアナログのうちの少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％もしくは少なくとも約９５％は、上記カチオン性化合物と粒子形態で会合している。会合は、一実施形態において、フィルターを介した分離（ここでカチオン性化合物およびカチオン性化合物と会合した薬物が保持され（すなわち、濃縮水（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）中にある）、遊離薬物が濾液中にある）によって測定される。
【００４３】
一実施形態において、上記プロスタサイクリンは、上記カチオン性化合物と会合し、粒子、例えば、コロイド粒子もしくはナノ粒子を形成する。別の実施形態において、上記プロスタサイクリンは、ミセルもしくはリポソームとして、上記カチオン性化合物と会合する（図１、一番下）。リポソームの場合、上記プロスタサイクリンは、水相中にあり得るか、または疎水性二重層の相もしくは上記リポソーム二重層の界面頭部基領域にあり得る。
【００４４】
別の実施形態において、本明細書で提供される組成物は、プロスタサイクリンもしくはプロスタサイクリンアナログ、カチオン性化合物および界面活性剤を含む、ミセル分散物もしくはナノ粒子組成物である。さらなる実施形態において、上記ミセル分散物もしくはナノ粒子組成物は、疎水性添加剤、例えば、スクアランを含む。例えば、一実施形態において、上記組成物は、トレプロスチニル、カチオン性脂質、ＰＥＧ化脂質およびスクアランを含む。一実施形態において、上記組成物は、プロスタサイクリンおよび上記カチオン性化合物、例えば上記カチオン性脂質を、ミセルもしくはナノ粒子中に含む。上記ミセル分散物もしくはナノ粒子組成物は、一実施形態において、上記カチオン性化合物と会合した、例えば、静電的に会合した少なくとも約１重量％のプロスタサイクリンを有する。
【００４５】
一実施形態において、噴霧後の上記組成物、すなわち、エアロゾル化した薬学的組成物の微細粒子画分（ＦＰＦ）は、ＮＧＩもしくはＡＣＩによって測定される場合、約５０％、もしくは約５５％、もしくは約６０％、もしくは約６５％、もしくは約７０％、もしくは約７５％である。さらなる実施形態において、上記エアロゾルのＦＰＦは、ＡＣＩによって測定される場合、約６４％以上、ＡＣＩによって測定される場合、約７０％以上、ＮＧＩによって測定される場合、約５１％以上、もしくはＮＧＩによって測定される場合、約６０％以上である。
【００４６】
本明細書で提供される組成物、システム、および方法は、一実施形態において、プロスタサイクリンもしくはそのアナログ、カチオン性化合物および界面活性剤を含む。一実施形態において、上記組成物は、粒子形態、例えば、ミセル粒子もしくは固体脂質ナノ粒子の形態にある。一実施形態において、上記カチオン性化合物は、脂質である。一実施形態において、上記組成物は、脂質に被包されたもしくは脂質と会合したプロスタサイクリンもしくはそのアナログ、例えば、固体脂質ナノ粒子を含む。本発明の薬学的組成物において使用される脂質は、合成であっても、半合成であっても天然に存在する脂質であってもよく、これらとしては、リン脂質、トコフェロール、トコフェロール誘導体、ステロール、ステロール誘導体、および脂肪酸が挙げられる。
【００４７】
本明細書で提供される薬学的組成物中のカチオン性化合物は、モノカチオン性もしくはマルチカチオン性であり得る。一実施形態において、上記カチオン性化合物は、正味のカチオン性であり、すなわち、上記化合物は、正味の正電荷とともに、正電荷および負電荷の両方を有する。上記カチオン性化合物の例としては、カチオン性脂質、アルキル−アンモニウム、アルキル−ポリアンモニウム、直鎖状ポリアミン、直鎖状ポリエチレンイミン、分枝状ポリエチレンイミン、ポリ−Ｌ−リジン、トリメチル−ポリ−グルコサミン、無機イオン、金属イオン、多価無機イオン、もしくは多価金属イオンが挙げられるが、これらに限定されない。さらなる実施形態において、上記カチオン性化合物は、ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド（ｄｉＣ１８ｄＭＡ）、ジメチルジヘキサデシルアンモニウムクロリド、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルスルフェート（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、１，２−ジステアロイル−３−（トリメチルアンモニオ）プロパンクロリド（ＤＳＴＡＰ）、ジミリストイルトリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、もしくはジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド（ＤＯＤＡＢ）であり得る。上記カチオン性化合物はまた、Ｎ，Ｎ’−ジヘキサデシル−１，２−エタンジアミン、テトラエチルヘキサデカン−１，１６−ジアミン、もしくはヘキサデカン−１，１６−ビス（トリメチルアンモニウムブロミド）であり得る。一実施形態において、上記カチオン性化合物は、金属カチオン（例えば、アルミニウム、マグネシウム、ベリリウム、ストロンチウム、バリウム、もしくはカルシウム）である。他の多価金属もまた、使用され得る。一実施形態において、上記カチオン性化合物は、ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド（ｄｃ１８ｄＭＡ）である。
【００４８】
一実施形態において、少なくとも１種の上記カチオン性化合物は、カチオン性脂質（すなわち、正に荷電した脂質）である。使用される上記カチオン性脂質は、脂肪酸のアンモニウム塩、リン脂質およびグリセリド、ならびにステロール誘導体を含み得る。上記脂肪酸としては、飽和もしくは不飽和いずれかである炭素鎖長が１２〜２６炭素原子の脂肪酸が挙げられる。いくつかの具体例としては、以下が挙げられる：ミリスチルアミン、パルミチルアミン、ラウリルアミンおよびステアリルアミン、ジラウロイルエチルホスホコリン（ＤＬＥＰ）、ジミリストイルエチルホスホコリン（ＤＭＥＰ）、ジパルミトイルエチルホスホコリン（ＤＰＥＰ）およびジステアロイルエチルホスホコリン（ＤＳＥＰ）、Ｎ−（２，３−ジ−（９−（Ｚ）−オクタデセニルオキシ）−プロパ−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）、および１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）。
【００４９】
一実施形態において、上記組成物中の少なくとも１種の上記界面活性剤は、中性、非イオン性、カチオン性、もしくはアニオン性である。上記界面活性剤は、一実施形態において、両親媒性であり、ＰＥＧ化脂質もしくはブロックコポリマーである。さらなる実施形態において、少なくとも１種の上記界面活性剤は、少なくとも１種のアニオン性界面活性剤を含む。
【００５０】
上記界面活性剤は、一実施形態において、ＰＥＧ化脂質である。さらなる実施形態において、上記ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ５００、ＰＥＧ１０００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ３０００、ＰＥＧ４０００、もしくはＰＥＧ５０００を含む。さらなる実施形態において、上記ＰＥＧ化脂質の脂質成分は、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジミリストイルグリセロール  グリセロール（ＤＭＧ）、ジホスファチジルグリセロール（ＤＰＧ）、ジステアロイルグリセロール（ＤＳＧ）もしくはコレステロールに共有結合したＰＥＧを含む：。その分子量（ＭＷ）に依存して、ＰＥＧはまた、当該分野でポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）もしくはポリオキシエチレン（ＰＯＥ）ともいわれる。上記ＰＥＧ化脂質は、分枝状もしくは非分枝状のＰＥＧ分子を含み得、特定のＰＥＧ  ＭＷによって限定されない。
【００５１】
例えば、上記ＰＥＧ化脂質（ＰＥＧ−脂質）は、一実施形態において、分子量  ３００ｇ／ｍｏｌ、４００ｇ／ｍｏｌ、５００ｇ／ｍｏｌ、１０００ｇ／ｍｏｌ、１５００ｇ／ｍｏｌ、２０００ｇ／ｍｏｌ、２５００ｇ／ｍｏｌ、３０００ｇ／ｍｏｌ、３５００ｇ／ｍｏｌ、４０００ｇ／ｍｏｌ、４５００ｇ／ｍｏｌ、５０００ｇ／ｍｏｌもしくは１０，０００ｇ／ｍｏｌを有するＰＥＧ分子を含む。一実施形態において、上記ＰＥＧは、ＭＷ  １０００ｇ／ｍｏｌもしくは２０００ｇ／ｍｏｌを有する。
【００５２】
上記ＰＥＧ化脂質（もしくは「ＰＥＧ−脂質」）の脂質成分は、正味の電荷（例えば、カチオン性もしくはアニオン性）を有し得るか、または正味の中性であり得る。本発明のＰＥＧ化脂質成分において使用される脂質は、合成であっても、半合成であっても、天然に存在する脂質であってもよく、これらとしては、リン脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質、セラミド、トコフェロール、ステロイド、脂肪酸、もしくは糖タンパク質（例えば、アルブミン）が挙げられる。一実施形態において、上記脂質は、コレステロールである。別の実施形態において、上記脂質は、リン脂質である。リン脂質としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、およびホスファチジン酸（ＰＡ）。一実施形態において、上記リン脂質は、卵リン脂質、ダイズリン脂質もしくは水素化された卵およびダイズのリン脂質である。一実施形態において、上記ＰＥＧ化脂質は、リン脂質を含む。さらなる実施形態において、上記リン脂質は、１２〜２６個の炭素原子の鎖を含むグリセロールの２位および３位に脂肪酸のエステル結合、ならびにコリン、グリセロール、イノシトール、セリン、エタノールアミン、およびその対応するホスファチジン酸を含むグリセロールの１位に異なる頭部基を含む。これらの脂肪酸の鎖は、飽和もしくは不飽和であり得、上記リン脂質は、種々の鎖長および種々の不飽和の程度の脂肪酸から構成され得る。特に、一実施形態では、本明細書で提供されるプロスタサイクリン組成物のＰＥＧ化脂質は、ジステアロイルホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、ジミリストイルグリセロール（ＤＭＧ）、ジホスファチジルグリセロール（ＤＰＧ）もしくはジステアロイルグリセロール（ＤＳＧ）を含む。
【００５３】
本明細書で開示されるＰＥＧ化脂質を含む組成物において使用するための脂質の他の例としては、以下が挙げられる：ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルグリセロール（ＤＳＰＧ）、ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、および混合リン脂質（例えば、パルミトイルステアロイルホスファチジルコリン（ＰＳＰＣ）およびパルミトイルステアロイルホスファチジルグリセロール（ＰＳＰＧ）、トリアシルグリセロール、ジアシルグリセロール、セラミド、スフィンゴシン、スフィンゴミエリンおよび単一のアシル化リン脂質（例えば、モノ−オレイル−ホスファチジルエタノールアミン（ＭＯＰＥ）））。別の実施形態において、上記ＰＥＧ化脂質の脂質部分は、脂肪酸のアンモニウム塩、リン脂質、グリセリド、リン脂質およびグリセリド、ステロール（例えば、コレステロール）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、またはこれらの組み合わせを含む。上記脂肪酸は、一実施形態において、飽和もしくは不飽和のいずれかである１２〜２６個の炭素原子の炭素鎖長の脂肪酸を含む。いくつかの具体例としては、以下が挙げられる：ミリスチルアミン、パルミチルアミン、ラウリルアミンおよびステアリルアミン、ジラウロイルエチルホスホコリン（ＤＬＥＰ）、ジミリストイルエチルホスホコリン（ＤＭＥＰ）、ジパルミトイルエチルホスホコリン（ＤＰＥＰ）およびジステアロイルエチルホスホコリン（ＤＳＥＰ）、Ｎ−（２，３−ジ−（９（Ｚ）−オクタデセニルオキシ）−プロパ−ｌ−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）および１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）。本明細書で提供される組成物において使用するためのステロールの例としては、コレステロールおよびエルゴステロールが挙げられる。本明細書で提供される組成物中で使用するためのＰＧ、ＰＡ、ＰＩ、ＰＣおよびＰＳの例としては、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＧ、ＤＭＰＡ、ＤＰＰＡ、ＤＳＰＡ、ＤＭＰＩ、ＤＰＰＩ、ＤＳＰＩ、ＤＭＰＳ、ＤＰＰＳおよびＤＳＰＳ、ＤＳＰＣ、ＤＰＰＧ、ＤＭＰＣ、ＤＯＰＣ、卵ＰＣおよびダイズＰＣが挙げられる。
【００５４】
一実施形態において、上記ＰＥＧ化脂質は、コレステロール−ＰＥＧ２０００、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ１０００もしくはＤＳＧ−ＰＥＧ２０００である。
【００５５】
本発明の組成物において使用するための界面活性剤の他の例としては、ポリオキシエチレングリコール−脂質、ポリオキシプロピレングリコール−脂質、グルコシド−脂質、グリセロール−脂質、もしくはポリソルベート−脂質が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、上記界面活性剤は、アニオン性脂質（負に荷電した脂質）である。使用され得る上記負に荷電した脂質としては、ホスファチジル−グリセロール（ＰＧ）、ホスファチジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）およびホスファチジルセリン（ＰＳ）が挙げられる。例としては、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＧ、ＤＭＰＡ、ＤＳＰＡ、ＤＰＰＳ、ＤＳＰＳ、ＤＰＰＡ、ＤＭＰＩ、ＤＰＰＩ、ＤＳＰＩおよびＤＭＰＳが挙げられる。
【００５６】
本発明の別の実施形態において、本明細書で提供される薬学的組成物は、疎水性添加剤をさらに含む。一実施形態において、上記疎水性添加剤は、炭化水素、テルペン、もしくは疎水性脂質であり得る。さらなる実施形態において、上記疎水性添加剤は、酢酸コレステリル、ステアリン酸エチル、パルミテート、ミリステート、パルミチン酸パルミチル、酢酸トコフェリル、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、例えば、パルミテート、ミリステート、ドデカノエート、デカノエート、オクタノエート、もしくはスクアランであり得るが、これらに限定されない。
【００５７】
一実施形態において、本発明の薬学的組成物は、疎水性添加剤としてスクアランを含む。一実施形態において、スクアランのモル範囲は、上記組成物のうちの約０．１ｍｏｌ％〜約２８ｍｏｌ％である。別の実施形態において、上記スクアラン濃度は、２５ｍｏｌ％である。
【００５８】
本発明のなお別の実施形態において、上記疎水性添加剤を含む薬学的組成物はまた、本明細書で記載される界面活性剤を含み得る。この実施形態において、上記薬学的組成物は、ポリオキシエチレングリコール−リン脂質を含み得る。本発明のこの実施形態に使用される適切なポリオキシエチレングリコール−リン脂質は、ポリオキシエチレングリコール−コレステロールである。別の実施形態において、上記疎水性添加剤を含む薬学的組成物はまた、ポリオキシエチレングリコール−脂質を含み得る。上記ポリオキシエチレングリコール−脂質は、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン−ポリオキシエチレングリコールもしくはジステアロイルグリセロール−ポリオキシエチレングリコールであり得るが、これらに限定されない。
【００５９】
本発明の一実施形態によれば、上記疎水性添加剤は、３０〜５０ｍｏｌ％、例えば、３５〜４５ｍｏｌ％で上記組成物中に存在し得る。なおさらなる実施形態において、上記疎水性添加剤は、４０ｍｏｌ％で上記組成物中に存在する。
【００６０】
一実施形態において、上記疎水性添加剤（例えば、少なくとも部分的に疎水性である添加剤）は、上記プロスタサイクリン化合物および上記カチオン性化合物を含む組成物中に存在する場合、炭化水素、テルペン化合物もしくは疎水性脂質（例えば、トコフェロール、酢酸トコフェロール、ステロール、ステロールエステル、アルキルエステル、ビタミンＡアセテート、トリグリセリド、リン脂質）である。
【００６１】
上記テルペン化合物（疎水性添加剤）は、一実施形態において、炭化水素（例えば、イソプレンもしくはスクアレン）である。別の実施形態において、上記テルペン化合物は、ヘミテルペン（Ｃ５Ｈ８）、モノテルペン（Ｃ１０Ｈ１６）、セスキテルペン（Ｃ１５Ｈ２４）、ジテルペン（Ｃ２０Ｈ３２）（例えば、カフェストール、カーウェオール、センブレン、タキサジエン）、セステルテルペン（Ｃ２５Ｈ４０）、トリテルペン（Ｃ３０Ｈ４８）、セスクアテルペン（Ｃ３５Ｈ５６）、テトラテルペン（Ｃ４０Ｈ６４）、ポリテルペン（例えば、トランス二重結合を有するポリイソプレン）もしくはノルイソプレノイド（例えば、３−オキソ−α−イオノール、７，８−ジヒドロイオノン誘導体）である。上記テルペン化合物は、別の実施形態において、以下の表１に提供される化合物のうちの１つから選択される。
【表１】
0006357481.tif 000002
【００６２】
一実施形態において、本明細書で記載されるプロスタサイクリン組成物は、粒子形態にある。よって、一実施形態において、本明細書で提供される薬学的組成物は、上記プロスタサイクリンもしくはそのアナログおよび上記カチオン性化合物を含む複数の粒子を含む。さらなる実施形態において、上記界面活性剤は、上記組成物中の複数の粒子のうちの少なくとも１つと会合する。
【００６３】
上記薬学的組成物中の複数の粒子は、一実施形態において、固体コロイド粒子、ポリマー−脂質ハイブリッドナノ粒子（Ｖｉｅｉｒａ  ａｎｄ  Ｃａｒｍｏｎａ−Ｒｉｂｅｉｒｏ  （２００８）．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎａｎｏｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１−１３（その全体において参考として援用される））、ナノ構造脂質キャリア、ポリマーミクロスフェア（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）．  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，  ５３：１−１２（その全体において参考として援用される））、ナノ粒子、ミセル、リポソーム、固体脂質ナノ粒子（Ｗｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）．  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ，  ９３：１９９３−２００４（その全体において参考として援用される））、またはこれらの組み合わせを含む。
【００６４】
上記で提供されるように、一実施形態において、本明細書で提供される薬学的組成物は、少なくとも１種のカチオン性化合物およびプロスタサイクリンもしくはそのアナログを含む複数の固体粒子を含む。一実施形態において、上記カチオン性化合物は、本発明の粒子のコアを形成し、少なくとも１種の上記界面活性剤は、上記カチオン性化合物を安定化する（図１）。さらなる実施形態において、少なくとも１種の上記界面活性剤は、ＰＥＧ化脂質である。
【００６５】
一実施形態において、本明細書で提供される薬学的組成物は、界面活性剤によって安定化された固体脂質コアを含む複数の固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）を含む。一実施形態において、上記コア脂質は、カチオン性脂質、例えば、上記で記載されるカチオン性脂質のうちの１つである。さらなる実施形態において、上記プロスタサイクリンもしくはそのアナログは、上記粒子のコアで、上記粒子の外層で、もしくはこれらの組み合わせで会合する。
【００６６】
一実施形態において、本明細書で提供される薬学的組成物は、カチオンポリマー、プロスタサイクリンもしくはそのアナログおよび界面活性剤ポリマー（例えば、ＰＥＧ化脂質）を含む複数の固体ポリマーナノ粒子を含む。さらなる実施形態において、上記複数の粒子は、少なくとも１種の上記カチオンポリマーと少なくとも１種の上記界面活性剤ポリマーとの間の静電相互作用によって形成される（例えば、Ｖｉｅｉｒａ  ａｎｄ  Ｃａｒｍｏｎａ−Ｒｉｂｅｉｒｏ  （２００８）．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎａｎｏｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１−１３（その全体において参考として援用される）を参照のこと）。一実施形態において、上記プロスタサイクリンもしくはそのアナログは、静電相互作用もしくは疎水性相互作用、またはこれらの組み合わせによって、上記粒子と会合する。
【００６７】
上記プロスタサイクリンもしくはそのアナログ、カチオン性化合物および界面活性剤は、一実施形態において、複数の粒子へと自己集合する。例えば、特定の脂質（例えば、ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド（ＤＯＤＡＢ）およびジヘキサデシルリン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｄｉｈｘａｄｅｃｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｅ）（ＤＨＰ））は、上記脂質を分散させるための手順に依存して、水性溶液中で自己集合する。
【００６８】
一実施形態において、上記組成物のうちの少なくとも約１％もしくは少なくとも１０％、もしくはは少なくとも２５％、もしくは少なくとも５０％もしくは少なくとも７５％もしくは少なくとも９０％は、単一の粒子もしくは複数の粒子のいずれかとして、粒子形態にある。投与前に、上記組成物中の複数の粒子の平均直径は、一実施形態において、光散乱によって測定される場合、約５００ｎｍ以下である。別の実施形態において、上記組成物中の粒子の平均直径は、光散乱によって測定される場合、約４００ｎｍ以下、もしくは約３００ｎｍ以下、もしくは約２００ｎｍ以下、もしくは約１００ｎｍ以下、もしくは約５０ｎｍ以下である。別の実施形態において、上記組成物中の粒子(複数可)の平均直径は、光散乱によって測定される場合、約１００ｎｍ〜約５００ｎｍ、もしくは約１５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、もしくは約２００ｎｍ〜約５００ｎｍ、もしくは約２５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、もしくは約３００ｎｍ〜約５００ｎｍ、もしくは約３５０ｎｍ〜約５００ｎｍである。一実施形態において、上記粒子もしくは複数の粒子は、１つの固体粒子もしくは複数の固体粒子（例えば、固体脂質ナノ粒子）である。一実施形態において、上記組成物中の複数の粒子(複数可)の平均直径は、光散乱によって測定される場合、約１０〜約１００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約１００ｎｍ〜約２００ｎｍ、約２００ｎｍ〜約３００ｎｍ、約２１０ｎｍ〜約２９０ｎｍ、約２２０ｎｍ〜約２８０ｎｍ、約２３０ｎｍ〜約２８０ｎｍ、約２４０ｎｍ〜約２８０ｎｍ、約２５０ｎｍ〜約２８０ｎｍもしくは約２６０ｎｍ〜約２８０ｎｍである。さらなる実施形態において、上記粒子もしくは複数の粒子は、固体脂質ナノ粒子もしくは複数の固体脂質ナノ粒子、またはミセルもしくは複数のミセルである。
【００６９】
別の実施形態において、上記複数の粒子は、複数のミセルもしくはリポソームである。リポソームは、捕捉された水性の体積を含む完全に閉じた脂質二重層膜である。リポソームは、単層小胞（単一の膜二重層を有する）もしくは多層小胞（複数の膜二重層によって特徴付けられ、各々が、水性の層によって次の層からは分離されているタマネギ様の構造）、またはこれらの組み合わせであり得る。上記二重層は、疎水性「尾部」領域および親水性「頭部」領域を有する２つの脂質モノレイヤーから構成される。上記膜二重層の構造は、上記脂質モノレイヤーの上記疎水性（非極性）「尾部」が、上記二重層の中心に向かって配向する一方で、上記親水性「頭部」が水相に向かって配向するような構造である。
【００７０】
リポソームは、種々の方法（例えば、Ｃｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８７）を参照のこと）によって生成され得る。一実施形態において、米国特許出願公開第２００８／００８９９２７号に記載される方法のうちの１つ以上は、上記プロスタサイクリン被包脂質組成物（リポソーム分散物）を生成するために本明細書で使用されている。米国特許出願公開第２００８／００８９９２７号の開示は、全ての目的のためにその全体において参考として援用される。例えば、一実施形態において、少なくとも１種の脂質およびプロスタサイクリンは、コアセルベート（すなわち、別個の脂質相）と混合されて、リポソーム組成物を形成する。上記コアセルベートは、上記脂質と混合する前に、上記脂質と混合する間に、もしくは上記脂質と混合した後に、形成され得る。さらに、上記コアセルベートは、活性薬剤のコアセルベートであり得る。
【００７１】
一実施形態において、上記リポソーム分散物は、１種以上の脂質を、脂質溶液を形成する有機溶媒中に溶解させることによって形成され、上記プロスタサイクリンコアセルベートは、上記プロスタサイクリンの水性溶液と上記脂質溶液との混合から形成する。さらなる実施形態において、上記有機溶媒は、エタノールである。なおさらなる実施形態において、上記１種以上の脂質は、リン脂質およびステロールを含む。
【００７２】
一実施形態において、リポソームは、超音波処理法、押し出し法、ホモジナイゼーション法、膨潤法、エレクトロフォーメーション法、逆エマルジョン法もしくは逆蒸発（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎ）法によって生成される。Ｂａｎｇｈａｍの手順（Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  （１９６５）（その全体において本明細書に参考として援用される））は、通常の多層小胞（ＭＬＶ）を生成する。Ｌｅｎｋ  ｅｔ  ａｌ．（米国特許第４，５２２，８０３号、同第５，０３０，４５３号および同第５，１６９，６３７）号、Ｆｏｕｎｔａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（米国特許第４，５８８，５７８号（その全体において本明細書に参考として援用される））およびＣｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（米国特許第４，９７５，２８２（その全体において本明細書に参考として援用される））は、それらの水性区画の各々において実質的に等しい層間溶質分布を有する多層リポソームを生成するための方法を開示する。Ｐａｐｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第４，２３５，８７１号（その全体において本明細書に参考として援用される）は、逆相蒸発によるオリゴラメラリポソームの調製を開示する。上記方法の各々は、本発明での使用に適用可能である。この段落で開示される特許の各々は、全ての目的のために本明細書に参考として援用される。
【００７３】
単層小胞は、多くの技術、例えば、米国特許第５，００８，０５０号および米国特許第５，０５９，４２１号（各々は、全ての目的のために本明細書に参考として援用される）の押し出し技術によってＭＬＶから生成され得る。超音波処理およびホモジナイゼーションは、より小さな単層リポソームをより大きなリポソームから生成するために同じように使用され得る（例えば、Ｐａｐｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９６８）；  Ｄｅａｍｅｒ  ａｎｄ  Ｕｓｔｅｒ  （１９８３）；およびＣｈａｐｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９６８）（これらの各々は、それらの全体において本明細書に参考として援用される）を参照のこと）。
【００７４】
Ｂａｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．  （Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １３，  １９６５，  ｐｐ．  ２３８−２５２）のリポソーム調製は、有機溶媒中にリン脂質を懸濁し、次いで、それを乾燥するまでエバポレートして、その反応容器にリン脂質薄膜を残すことを包含する。次に、適切な量の水相を添加し、６０混合（６０  ｍｉｘｔｕｒｅ）により「膨潤」させ、多層小胞（ＭＬＶ）からなる得られたリポソームを機械的手段によって分散させる。この調製は、Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．  （Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ．  １３５，  １９６７，  ｐｐ．  ６２４−６３８（その全体において本明細書に参考として援用される））によって記載される小さな超音波処理単層小胞、および大きな単層小胞を進化させるための基本を提供する。
【００７５】
大きな単層小胞（ＬＵＶ）を生成するための技術、例えば、逆相蒸発、注入手技、および洗浄剤希釈は、本明細書で提供される薬学的組成物で使用するためのリポソームを生成するために使用され得る。リポソームを生成するためのこれらのおよび他の方法の総説は、テキスト、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，  Ｍａｒｃ  Ｏｓｔｒｏ，  ｅｄ．，  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８３，  Ｃｈａｐｔｅｒ  １（これは、本明細書に参考として援用される）に見出され得る。Ｓｚｏｋａ，  Ｊｒ．  ｅｔ  ａｌ．，  （Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｂｉｏｅｎｇ．  ９，  １９８０，  ｐ．  ４６７（その全体において本明細書に参考として援用される）（それはまた、全ての目的のためにその全体において本明細書に参考として援用される）もまた参照のこと。
【００７６】
リポソームを作製するための他の技術は、逆相蒸発小胞（ＲＥＶ）を形成するものを包含する。米国特許第４，２３５，８７１号。使用され得るリポソームの別のクラスは、実質的に等しいラメラ溶質分布を有するとして特徴付けられる。このクラスのリポソームは、米国特許第４，５２２，８０３号（その全体において本明細書に参考として援用される）に定義されるように安定なプルリラメラ小胞（ｐｌｕｒｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）（ＳＰＬＶ）が優位を占め、米国特許第４，５８８，５７８号（その全体において本明細書に参考として援用される）に記載されるとおりの単相小胞（ｍｏｎｏｐｈａｓｉｃ  ｖｅｓｉｃｌｅ）および上記に記載されるとおりの凍結・融解多層小胞（ｆｒｏｚｅｎ  ａｎｄ  ｔｈａｗｅｄ  ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅ）（ＦＡＴＭＬＶ）を含む。
【００７７】
種々のステロールおよびそれらの水溶性誘導体（例えば、コレステロールヘミスクシネート）は、リポソームを形成するために使用されてきた；例えば、米国特許第４，７２１，６１２号（その全体において本明細書に参考として援用される）を参照のこと。Ｍａｙｈｅｗ  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＣＴ公開番号ＷＯ  １９８５／００９６８（その全体において本明細書に参考として援用される）は、α−トコフェロールおよび特定その誘導体を含むリポソーム中に薬物を被包することによって、該薬物の毒性を低減するための方法を記載する。また、種々のトコフェロールおよびそれらの水溶性誘導体は、リポソームを形成するために使用されてきた（ＰＣＴ公開番号８７／０２２１９（全ての目的のために本明細書に参考として援用される）を参照のこと）。
【００７８】
いくつかの実施形態において、本明細書で記載される薬学的組成物は、モル比（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｒａｔｉｏ）１：９、２：８、３：７、４：６、５：５、６：４、７：３、８：２、もしくは９：１で個々の成分を含む界面活性剤を有し得る。例えば、コレステロール−ＰＥＧ、ＤＳＧ−ＰＥＧ、ＤＳＰＥ−ＰＥＧは、一実施形態において、それぞれ、モル比約１：１、約１：９、および約１：９で存在する。他の実施形態において、界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレングリコール−脂質もしくはポリオキシエチレングリコール−リン脂質）は、モル比約１：１もしくは約１：９で存在する。
【００７９】
本明細書で提供される薬学的組成物は、プロスタサイクリンもしくはそのアナログ、カチオン性化合物および界面活性剤を含む。本明細書で提供される薬学的組成物中の上記カチオン性化合物および界面活性剤  対  プロスタサイクリン（もしくはプロスタサイクリンアナログ）の重量比は、一実施形態において、１０：１以下、９：１以下、８：１以下、７：１以下、５：１以下、３：１以下、２．５：１以下、２：１以下、１．５：１以下、１：１以下、０．５：１以下、もしくは０．１：１以下である。
【００８０】
本明細書で提供される薬学的組成物中の上記カチオン性化合物  対  プロスタサイクリン（もしくはプロスタサイクリンアナログ）の重量比は、一実施形態において、１０：１以下、９：１以下、８：１以下、７：１以下、５：１以下、３：１以下、２．５：１以下、２：１以下、１．５：１以下、１：１以下、０．５：１以下、もしくは０．１：１以下である。
【００８１】
一実施形態において、上記カチオン性化合物は、カチオン性脂質であり、本明細書で提供される薬学的組成物中の上記カチオン性脂質  対  プロスタサイクリン（もしくはプロスタサイクリンアナログ）の重量比は、１０：１以下、９：１以下、８：１以下、７：１以下、５：１以下、３：１以下、２．５：１以下、２：１以下、１．５：１以下、１：１以下、０．５：１以下、もしくは０．１：１以下である。
【００８２】
別の実施形態において、上記カチオン性化合物は、ｄｉＣ１８ｄＭＡであり、上記プロスタサイクリンは、トレプロスチニルである。さらなる実施形態において、本明細書で提供される薬学的組成物中の上記カチオン性脂質  対  トレプロスチニルの重量比は、１０：１以下、９：１以下、８：１以下、７：１以下、５：１以下、３：１以下、２．５：１以下、２：１以下、１．５：１以下、１：１以下、０．５：１以下、もしくは０．１：１以下である。
【００８３】
一実施形態において、本明細書で提供される組成物は、１種以上の薬学的賦形剤、もしくは他の添加剤をさらに含む。このような賦形剤もしくは添加剤は、１種以上の安定化ポリオール、例えば、より高次のポリサッカリド／ポリマー（制御放出を促進するため）、ステアリン酸マグネシウム、ロイシンおよび／もしくはトリロイシン（滑沢剤として）、ならびにリン脂質および／もしくは界面活性剤を含み得る。発泡剤（ｂｌｏｗｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、例えば、揮発性塩（例えば、炭酸アンモニウム、ギ酸など）はまた、本発明の噴霧乾燥粉末中で密度の低減した粒子を生成するために供給材料中に含まれ得る。
【００８４】
噴霧補助物質はまた、本発明の組成物もしくはシステムとともに使用され得る。このような噴霧補助物質は、噴霧乾燥プロセスの間に本発明の組成物の粘性を低減し、かつ／またはその流体力学的特性を改善し得る。噴霧補助物質としては、マルトデキストリン、ラクトース、ゼラチン、タルク、トリエチルシトレート、およびこれらの混合物が挙げられ得る。このような噴霧補助物質は、約１ｗｔ％〜約１５ｗｔ％（例えば、約２ｗｔ％、約３ｗｔ％、約４ｗｔ％、約５ｗｔ％、約６ｗｔ％、約７ｗｔ％、約８ｗｔ％、約９ｗｔ％、約１０ｗｔ％、約１１ｗｔ％、約１２ｗｔ％、約１３ｗｔ％、約１４ｗｔ％、もしくはその中の任意の他の値もしくは値の範囲）の範囲に及ぶ量で上記組成物中に存在し得る。特定の実施形態において、上記噴霧補助物質は、マルトデキストリンであり、上記組成物中のマルトデキストリンの量は、約１ｗｔ％、約２ｗｔ％、約３ｗｔ％、約４ｗｔ％、約５ｗｔ％、約６ｗｔ％、約７ｗｔ％、約８ｗｔ％、約９ｗｔ％、約１０ｗｔ％、約１１ｗｔ％、約１２ｗｔ％、約１３ｗｔ％、約１４ｗｔ％、約１５ｗｔ％である。他の実施形態において、上記噴霧補助物質は、ラクトースであり、上記組成物中のラクトースの量は、約１ｗｔ％、約２ｗｔ％、約３ｗｔ％、約４ｗｔ％、約５ｗｔ％、約６ｗｔ％、約７ｗｔ％、約８ｗｔ％、約９ｗｔ％、約１０ｗｔ％、約１１ｗｔ％、約１２ｗｔ％、約１３ｗｔ％、約１４ｗｔ％、約１５ｗｔ％である。さらに他の実施形態において、上記噴霧補助物質は、ゼラチンであり、上記組成物中のゼラチンの量は、約１ｗｔ％、約２ｗｔ％、約３ｗｔ％、約４ｗｔ％、約５ｗｔ％、約６ｗｔ％、約７ｗｔ％、約８ｗｔ％、約９ｗｔ％、約１０ｗｔ％、約１１ｗｔ％、約１２ｗｔ％、約１３ｗｔ％、約１４ｗｔ％、約１５ｗｔ％である。
【００８５】
本発明の別の局面において、肺高血圧症（ＰＨ）を処置するための方法が提供される。世界保健機関（ＷＨＯ）は、ＰＨを５つの群に分けた。Ｉ群  ＰＨは、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）、特発性肺動脈性肺高血圧症（ＩＰＡＨ）、家族性肺動脈性肺高血圧症（ＦＰＡＨ）、および他の疾患と関連する肺動脈性肺高血圧症（ＡＰＡＨ）を含む。例えば、膠原血管病（ｃｏｌｌａｇｅｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ）（例えば、強皮症）、全身循環および肺循環の間の先天性短絡、門脈高血圧症ならびに／またはＨＩＶ感染症と関連する肺動脈性肺高血圧症は、Ｉ群  ＰＨに含まれる。ＩＩ群  ＰＨは、左心疾患、例えば、動脈疾患もしくは心室疾患、または弁疾患（例えば、僧帽弁狭窄）と関連する肺高血圧症を含む。ＷＨＯＩＩＩ群  肺高血圧症は、肺疾患、例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患（ＩＬＤ）、および／もしくは低酸素血症と関連する肺高血圧症として特徴付けられる。ＩＶ群  肺高血圧症は、慢性血栓性および／もしくは塞栓性疾患に起因する肺高血圧症である。ＩＶ群  ＰＨはまた、慢性血栓塞栓性肺高血圧症といわれる。ＩＶ群  ＰＨ患者は、血塊に起因する血管の遮断もしくは狭窄を経験する。Ｖ群  ＰＨは、「多方面にわたる」カテゴリーであり、血液障害（例えば、真性多血症、本態性血小板血症）、全身性障害（例えば、サルコイドーシス、脈管炎）および／もしくは代謝障害（例えば、甲状腺疾患、糖原病）によって引き起こされるＰＨを含む。
【００８６】
例えば、本明細書で提供される方法は、Ｉ群（すなわち、肺動脈性肺高血圧症もしくはＰＡＨ）、ＩＩ群、ＩＩＩ群、ＩＶ群もしくはＶ群のＰＨ患者を処置するために使用され得る。ＰＨを処置するための方法のうちの１実施形態において、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）を処置するための方法。別の実施形態において、慢性血栓塞栓性肺高血圧症患者を処置するための方法が提供される。一実施形態において、上記方法は、投与を必要とする患者に有効量の、本明細書で記載されるプロスタサイクリン組成物のうちの１つを投与する工程を包含する。さらなる実施形態において、投与は、肺（吸入）経路、皮下経路もしくは静脈内経路を介して上記患者に行われる。本発明の組成物は、単独で投与されてもよいし、他の免疫学的組成物、抗原性組成物、ワクチン組成物、もしくは治療組成物と共投与もしくは逐次的に投与されてもよい。
【００８７】
一実施形態において、処置の必要性のある患者は、クラスＩ  ＰＡＨ患者、クラスＩＩ  ＰＡＨ患者、クラスＩＩＩ  ＰＡＨ患者もしくはクラスＩＶ  ＰＡＨ患者である。クラスＩ  ＰＡＨ患者は、身体活動の制限を有しない。なぜなら日常の身体活動は、過度の呼吸困難もしくは疲労、胸痛、または失神寸前を引き起こさないからである。処置は、クラスＩ  ＰＡＨ患者には必要ない。クラスＩＩ  ＰＡＨ患者は、身体活動に僅かな制限がある。これらの患者は、安静時には快適であるが、日常の身体活動は、過度の呼吸困難もしくは疲労、胸痛または失神寸前を引き起こす。クラスＩＩＩ  ＰＡＨ患者は、身体活動に顕著な制限がある。安静時には快適であるものの、クラスＩＩＩ  ＰＡＨ患者は、日常未満の身体活動の結果として、過度の呼吸困難もしくは疲労、胸痛または失神寸前を経験する。クラスＩＶ  ＰＡＨ患者は、症状なしにはいかなる身体活動も実行することはできない。クラスＩＶ  ＰＡＨ患者は、安静時にも呼吸困難および／もしくは疲労を経験することがあり、不快感は、いかなる身体活動によっても増大する。右心不全の徴候は、しばしば、クラスＩＶ  ＰＡＨ患者に発現することが多い。
【００８８】
本発明の別の局面において、門脈肺高血圧症（ＰＰＨ）を処置するための方法が提供される。一実施形態において、上記方法は、投与を必要とする患者に、本明細書で記載されるプロスタサイクリン組成物のうちの１つの有効量を投与する工程を包含する。さらなる実施形態において、投与は、肺（吸入）経路、皮下経路もしくは静脈内経路を介して上記患者に行われる。
【００８９】
上記で提供されるように、本発明の組成物は、吸入を介して、すなわち、吸入デバイスで、送達を必要とする患者に送達され得る。「吸入デバイス」は、薬学的組成物を患者の肺に送達するために使用されるデバイスである。吸入デバイスとしては、ネブライザーおよび吸入器、例えば、定量式吸入器もしくは乾燥粉末吸入器が挙げられる。乾燥粉末もしくは液体は、吸入デバイスによって患者の肺に送達され得る。「ネブライザー」は、吸入デバイスの１タイプであり、気道へと吸入され得るサイズのエアロゾルへと液体を変換するデバイスである。空気圧式（ｐｎｅｕｍｏｎｉｃ）ネブライザー、超音波式ネブライザー、電子式ネブライザー、例えば、受動電子メッシュ式ネブライザー、能動電子メッシュ式ネブライザーおよび振動メッシュ式ネブライザーは、特定のネブライザーが必要とされる特性でかつ必要とされる産出速度でエアロゾルを発する場合、本発明での使用に適用可能である。
【００９０】
バルク液体を小液滴へと空気圧で変換するプロセスは、霧化（ａｔｏｍｉｚａｔｉｏｎ）といわれる。空気圧式ネブライザーの操作は、液体の霧化のための駆動力として加圧ガス供給を必要とする。超音波式ネブライザーは、液体を呼吸に適する液滴に変換するために液体リザーバーにおける圧電素子によって導入される電気を使用する。種々のタイプのネブライザーが、Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｃａｒｅ，  Ｖｏｌ．  ４５，  Ｎｏ．  ６，  ｐｐ．  ６０９−６２２  （２０００）（その開示は、その全体において全ての目的のために参考として援用される）に記載されている。
【００９１】
肺高血圧症の処置のためにトレプロスチニルおよびそのアナログを投与するための方法は、米国特許第５，１５３，２２２号；同第６，５２１，２１２号；同第７，５４４，７１３号および米国特許出願公開第２０１０／００７６０８３号（各々の開示は、それらの全体において全ての目的のために参考として援用される）に記載されている。
【００９２】
一実施形態において、肺高血圧症（ＰＨ）、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）もしくは門脈肺高血圧症（ＰＰＨ）を処置するための吸入、皮下投与もしくは静脈内投与による有効量の本発明のプロスタサイクリン組成物の投与は、トレプロスチニルの有効量が皮下、静脈内、もしくは吸入によって投与される場合の有効量のトレプロスチニルの投与と比較して、副作用の数の低下、もしくは１以上の副作用（本明細書内で「有害事象」ともいわれる）の重症度の低下を生じる。例えば、一実施形態において、ＰＨ、ＰＡＨもしくはＰＰＨの患者は、トレプロスチニルの該患者への吸入投与によって誘発される咳もしくは咳応答の重症度および／もしくは頻度と比較して、本発明のプロスタサイクリン化合物もしくは組成物を吸入によって（例えば、噴霧化、乾燥粉末吸入器によって、もしくは定量式吸入器によって）投与される場合に、咳の重症度および／もしくは頻度の低下または咳応答の低下を経験する。
【００９３】
別の実施形態において、本発明のプロスタサイクリン化合物もしくは組成物の有効量の静脈内投与、皮下投与もしくは吸入投与は、トレプロスチニルの皮下投与、静脈内投与もしくは吸入投与と比較して、以下の有害事象のうちの１以上の重篤度の低下、または以下の有害事象のうちの１以上の発生の低下を生じる：頭痛、咽喉刺激／咽頭痛、悪心、紅潮および／もしくは失神。
【００９４】
別の実施形態において、ＰＨ、ＰＡＨもしくはＰＰＨの処置のための有効量の本発明のプロスタサイクリン組成物の静脈内投与、皮下投与もしくは吸入投与は、トレプロスチニルの皮下投与、静脈内投与もしくは吸入投与と比較して、全身有害事象の重症度の低下、または全身有害事象の発生の低下を生じる。
【００９５】
理論によって拘束されることは望まないが、患者が示した本発明のプロスタサイクリン組成物の改善された有害事象プロフィールは、トレプロスチニルと比較して、患者のコンプライアンスの改善を生じると考えられる。
【００９６】
一実施形態において、本発明のプロスタサイクリン組成物は、ＰＨ、ＰＡＨ（例えば、Ｔｙｖａｓｏ（登録商標）、Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標））もしくはＰＰＨの現在承認された治療と比較して、実質的に等価もしくはより良好な治療応答をなお達成する一方、より少ない頻度で投与される。上記患者の治療応答は、一実施形態において、肺血管抵抗指数（ＰＶＲＩ）の処置前の値からの低下、平均肺動脈圧の処置前の値からの低下、低酸素血症スコアの処置前の値からの増加、酸素化指数の処置前の値からの低下、処置前と比較して右心機能の改善、または処置前と比較して運動能の改善（例えば、6分間歩行テストによって比較した場合）である。上記治療応答は、一実施形態において、処置前の値と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％もしくは少なくとも５０％の改善である。別の実施形態において、上記治療応答は、処置前のレベルと比較して、約１０％〜約７０％、約１０％〜約６０％、約１０％〜約５０％、約１０％〜約４０％、約１０％〜約３０％、約１０％〜約２０％、約２０％〜約７０％、約２０％〜約６０％もしくは約１０％〜約５０％の改善である。
【００９７】
理論によって拘束されることを望まないが、本発明の化合物および組成物の投薬頻度が低いことは、異なるＰＨ、ＰＡＨもしくはＰＰＨの処置（例えば、トレプロスチニル−Ｔｙｖａｓｏ（登録商標）、Ｒｅｍｏｄｕｌｉｎ（登録商標））を施している患者のコンプライアンスと比較して、患者コンプライアンスの改善を可能にする。
【００９８】
別の実施形態において、上記プロスタサイクリン組成物は、ネブライザーによって、ＰＨ、ＰＡＨもしくはＰＰＨの処置の必要性のある患者に投与される。投与は、一実施形態において、毎日１回、毎日２回、毎日３回もしくは２日に１回行う。
【００９９】
一実施形態において、本発明の組成物もしくは化合物は、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）によって、ＰＨ、ＰＡＨもしくはＰＰＨの処置の必要性のある患者に投与される。上記患者は、一実施形態において、本発明のプロスタサイクリン組成物を毎日１回、毎日２回、もしくは毎日３回投与される。一実施形態において、投与は、食物とともに行われる。一実施形態において、各投与は、ＤＰＩから１〜５用量（数息（ｐｕｆｆｓ））、例えば、１用量（１息）、２用量（２息）、３用量（３息）、４用量（４息）もしくは５用量（５息）を含む。上記ＤＰＩは、一実施形態において、小型であって、上記患者が携行可能である。
【０１００】
別の実施形態において、本明細書で記載されるＰＨ、ＰＡＨもしくはＰＡＨの処置法によって肺経路によって、投与を必要とする患者に投与される上記プロスタサイクリン組成物は、遊離プロスタサイクリン（例えば、遊離トレプロスチニル）が肺経路によって（例えば、ｂｙ  噴霧化、乾燥粉末吸入器、もしくは定量式吸入器によって）ＰＨ、ＰＡＨもしくはＰＰＨの処置の必要性のある患者に投与される場合、遊離プロスタサイクリンの肺排出半減期（ｔ１／２）と比較して、上記プロスタサイクリン化合物のより大きなｔ１／２を提供する。
【０１０１】
別の実施形態において、本明細書で記載されるＰＨ、ＰＡＨもしくはＰＰＨの処置法によって、投与を必要とする患者に投与される上記プロスタサイクリン化合物は、遊離プロスタサイクリン（例えば、遊離トレプロスチニル）が該患者に投与される場合に、トレプロスチニルの全身排出半減期（ｔ１／２）と比較して、該プロスタサイクリン化合物のより大きな全身排出半減期（ｔ１／２）を提供する。さらなる実施形態において、上記プロスタサイクリン組成物およびトレプロスチニルの投与は、皮下投与もしくは静脈内投与のいずれかを包含する。
【０１０２】
別の実施形態において、ＰＨ、ＰＡＨもしくはＰＰＨの処置の必要性のある患者に投与される上記プロスタサイクリン化合物は、上記遊離プロスタサイクリン（例えば、遊離トレプロスチニル）が患者に投与される場合に、トレプロスチニルの肺もしくは血漿のＣｍａｘそれぞれと比較して、該プロスタサイクリン化合物のより大きな平均肺Ｃｍａｘおよび／もしくはより小さな血漿Ｃｍａｘを該患者に提供する。さらなる実施形態において、上記プロスタサイクリン組成物および上記遊離プロスタサイクリンの投与は、静脈内投与を包含する。
【０１０３】
別の実施形態において、ＰＨ、ＰＡＨもしくはＰＰＨの処置の必要性のある患者に投与される上記プロスタサイクリン組成物は、上記遊離プロスタサイクリン（例えば、遊離トレプロスチニル）が該患者に投与される場合に、該プロスタサイクリン化合物の平均肺もしくは血漿の曲線下面積（ＡＵＣ０−ｔ）と比較して、より大きな、該プロスタサイクリン化合物の平均肺もしくは血漿の曲線下面積（ＡＵＣ０−ｔ）を提供する。さらに別の実施形態において、投与を必要とする患者に投与される上記プロスタサイクリン組成物は、上記遊離プロスタサイクリン（例えば、遊離トレプロスチニル）が該患者に投与される場合に、該プロスタサイクリン化合物のピーク濃度までの肺もしくは血漿の時間（ｔｍａｘ）と比較して、より大きな、該プロスタサイクリン化合物のピーク濃度までの肺もしくは血漿の時間（ｔｍａｘ）を提供する。
【０１０４】
上記で提供されるように、本発明のプロスタサイクリン化合物および組成物は、送達を必要とする患者に、肺経路、静脈内経路もしくは皮下経路によって送達され得る。肺経路に関しては、本発明のプロスタサイクリン化合物および組成物は、このような投与に適合された任意の投与量分注デバイス（ｄｏｓａｇｅ  ｄｉｓｐｅｎｓｉｎｇ  ｄｅｖｉｃｅ）で使用され得る。上記デバイスは、一実施形態において、最適な計量正確性およびその構成要素（例えば、容器、バルブおよびアクチュエーター）と製剤との適合性を確実にするように構築され、機械式ポンプシステム（例えば、定量式ネブライザー、乾燥粉末吸入器、ソフトミスト吸入器、もしくはネブライザーのシステム）に基づき得る。例えば、肺送達デバイスとしては、ジェット式ネブライザー、電子式ネブライザー、ソフトミスト吸入器、およびカプセルベースの乾燥粉末吸入器が挙げられる。
【０１０５】
上記プロスタサイクリンもしくはそのアナログは、一実施形態において、肺に持続的に（ｓｕｓｔａｉｎｌｙ）送達され、上記プロスタサイクリンもしくはそのアナログは、最大約８時間まで、もしくは最大約１２時間まで、もしくは最大約１６時間まで、もしくは最大約２０時間まで、もしくは最大約２４時間まで、もしくは最大約３６時間までもしくは最大約４８時間までの期間にわたって、投与後に放出される。別の実施形態において、上記プロスタサイクリンもしくはそのアナログは、肺に持続的に送達され、上記プロスタサイクリンもしくはそのアナログは、約２０時間〜約４８時間、もしくは約２４時間〜約３６時間もしくは約３０時間〜約４８時間の範囲に及ぶ期間にわたって、投与後に放出される。
【０１０６】
一実施形態において、上記薬学的組成物は、１日１回の投薬レジメンもしくは１日２回の投薬レジメンで、投与を必要とする患者に投与される。さらなる実施形態において、上記組成物は、噴霧化によって投与される。なおさらなる実施形態において、上記プロスタサイクリンは、トレプロスチニルである。
【０１０７】
本発明によれば、吸入による以外にも、投与は、経口的に、非経口的に、皮下に、静脈内に、もしくは注入によって行われ得る。上記組成物はまた、鼻経路による投与のために製剤化され得る。鼻投与に適した組成物は、そのキャリアが固体である場合、例えば、鼻から吸う様式で、例えば、鼻の近くまでに保持される粉末の容器から鼻経路を通って急速に吸入することによって投与される、約３〜約５００ミクロンの範囲の粒度を有する粗い粉末を含む。上記キャリアが例えば、鼻スプレー、点鼻薬として、もしくはネブライザーによるエアロゾル投与による投与のための液体である適切な組成物は、活性成分の水性もしくは油性の溶液を含む。
【０１０８】
本発明の別の局面において、ＰＨ、ＰＡＨもしくはＰＰＨ以外の疾患、障害もしくは状態を処置するための方法が提供される。上記方法は、本明細書で提供されるプロスタサイクリン組成物のうちの１つ、例えば、プロスタサイクリン（例えば、トレプロスチニル）もしくはそのアナログ、カチオン性化合物、界面活性剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）および疎水性添加剤（例えば、スクアラン）を含むナノ粒子組成物の治療上有効な量を、投与を必要とする患者に投与する工程を包含する。上記疾患、障害、および状態としては、慢性血栓塞栓性肺高血圧症、うっ血性心不全、末梢血管疾患、喘息、重症の間欠性跛行、免疫抑制、増殖性疾患、がん（例えば、肺がん、肝臓がん、脳のがん、膵臓がん、腎臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸がん、および頭頚部がん、虚血性の病変、神経障害性足部潰瘍、および肺線維症、腎機能、ならびに間質性肺疾患が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、上記薬学的製剤は、トレプロスチニルに加えて、１種以上のさらなる活性成分を含む。
【０１０９】
米国特許第５，１５３，２２２号（その全体において本明細書に参考として援用される）は、肺高血圧症の処置のためのトレプロスチニルの使用を記載している。トレプロスチニルは、静脈内経路および皮下経路が承認されており、後者は、連続静脈内カテーテルと関連する潜在的な敗血症的事象を回避する。米国特許第６，５２１，２１２号および同第６，７５６，０３３号（各々は、それらの全体において本明細書に参考として援用される）は、肺高血圧症、末梢血管疾患ならびに他の疾患および状態の処置のための吸入によるトレプロスチニルの投与を記載している。米国特許第６，８０３，３８６号（その全体において本明細書に参考として援用される）は、肺がん、肝臓がん、脳のがん、膵臓がん、腎臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸がんおよび頭頸部がんなどのがんを処置するためのトレプロスチニルの投与を開示している。米国特許出願公開第２００５／０１６５１１１号（その全体において本明細書に参考として援用される）は、虚血性病変のトレプロスチニル処置を開示している。米国特許第７，１９９，１５７号（その全体において本明細書に参考として援用される）は、トレプロスチニル処置が腎機能を改善することを開示している。米国特許第７，８７９，９０９号（その全体において本明細書に参考として援用される）は、神経障害性足部潰瘍のトレプロスチニル処置を開示している。米国特許出願公開第２００８／０２８０９８６号（その全体において本明細書に参考として援用される）は、肺線維症、トレプロスチニルでの間質性肺疾患および喘息のトレプロスチニルでの処置を開示している。米国特許第６，０５４，４８６号（その全体において本明細書に参考として援用される）は、トレプロスチニルでの末梢血管疾患の処置を開示している。米国特許出願公開第２００９／００３６４６５号（その全体において本明細書に参考として援用される）は、トレプロスチニルを含む併用療法を開示している。米国特許出願公開第２００８／０２００４４９号は、定量式吸入器を使用するトレプロスチニルの送達を開示している。米国特許第７，４１７，０７０号、同第７，３８４，９７８号および同第７，５４４，７１３号、ならびに米国特許出願公開第２００７／００７８０９５号、同第２００５／０２８２９０１号、および同第２００８／０２４９１６７号（各々は、それらの全体において本明細書に参考として援用される）は、トレプロスチニルおよび他のプロスタサイクリンアナログの経口製剤、ならびに種々の状態の処置のためのそれらの使用を記載している。米国特許出願公開第２０１２／０００４３０７号（本明細書に参考として援用される）は、レイノー現象、全身性硬化症および指の虚血性病変の処置のために経口投与されるトレプロスチニルの使用を開示している。
【０１１０】
さらに、以下の参考文献は、本発明の実施形態を実施するための全ての目的で参考として援用される：  Ｊ．  Ｏｒｇ．  Ｃｈｅｍ．  ２００４，  ６９，  １８９０−１９０２，  Ｄｒｕｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ，  ２００１，  ２６（４），  ３６４−３７４，  米国特許第５，１５３，２２２号、同第６，０５４，４８６号、同第６，５２１，２１２号、同第６，７５６，０３３号、同第６，８０３，３８６号、および同第７，１９９，１５７号、米国特許出願公開第２００５／０１６５１１１号、同第２００５／０２８２９０３号、同第２００８／０２００４４９号、同第２００８／０２８０９８６号、同第２００９／００３６４６５号および同第２０１２／００１０１５９号。
【０１１１】
一実施形態において、うっ血性心不全、末梢血管疾患、喘息、重症の間欠性跛行、免疫抑制、増殖性疾患、例えば、がん（例えば、肺がん、肝臓がん、脳のがん、膵臓がん、腎臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸がんおよび頭頸部がん）、虚血性病変、神経障害性足部潰瘍、ならびに肺線維症、腎機能および／もしくは間質性肺疾患のために、処置を必要とする患者を処置するための方法が提供される。一実施形態において、上記方法は、本明細書で提供されるプロスタサイクリン組成物のうちの１つ、例えば、プロスタサイクリン（例えば、トレプロスチニル）もしくはそのアナログ、カチオン性化合物、界面活性剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）および疎水性添加剤（例えば、スクアラン）を含むナノ粒子組成物の有効量を、上記患者に投与する工程を包含する。投与は、一実施形態において、吸入（例えば、ネブライザーもしくは定量式吸入器で）、皮下もしくは静脈内によるものである。いくつかの実施形態において、上記薬学的製剤は、トレプロスチニル一水和物に加えて、１種以上の活性成分を含み得る。
【０１１２】
一実施形態において、間質性肺疾患（例えば、肺線維症）もしくは喘息、または間質性肺疾患もしくは喘息と関連する状態を、このような処置の必要性のある患者において処置および／もしくは予防するための方法が提供される。さらなる実施形態において、上記方法は、本明細書で提供されるプロスタサイクリン組成物のうちの１つ、例えば、プロスタサイクリン（例えば、トレプロスチニル）もしくはそのアナログ、カチオン性化合物、界面活性剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）および疎水性添加剤（例えば、スクアラン）を含むナノ粒子組成物の有効量を、上記患者に投与する工程を包含する。上記組成物もしくは化合物は、一実施形態において、噴霧剤、例えば、クロロ−フルオロカーボン（ＣＦＣ）もしくはフルオロカーボンの使用によって、ＭＤＩを介して送達される。上記患者は、一実施形態において、本発明のプロスタサイクリン化合物もしくは組成物を、毎日１回、毎日２回もしくは毎日３回投与される。一実施形態において、上記投与は、食物とともに行われる。一実施形態において、各投与は、ＭＤＩから１〜５用量（数息）、例えば、１用量（１息）、２用量（２息）、３用量（３息）、４用量（４息）もしくは５用量（５息）を含む。上記ＭＤＩは、一実施形態において、小型であって、患者が携行可能である。別の実施形態において、投与は、皮下もしくは静脈内である。別の実施形態において、間質性肺疾患（例えば、肺線維症）もしくは喘息、または間質性肺疾患もしくは喘息と関連する状態の処置のための、本発明のプロスタサイクリン化合物もしくは組成物の有効量の静脈内投与、皮下投与もしくは吸入投与は、トレプロスチニルの皮下投与、静脈内投与もしくは吸入投与と比較して、全身有害事象の重症度の低減、または全身有害事象の発生の低下を生じる。
【０１１３】
一実施形態において、虚血性疾患もしくは状態（例えば、強皮症（全身性硬化症が挙げられる）、またはレイノー現象）を、そのような処置の必要性のある患者において処置するための方法が提供される。さらなる実施形態において、上記方法は、本明細書で提供されるプロスタサイクリン組成物のうちの１つ、例えば、プロスタサイクリン（例えば、トレプロスチニル）もしくはそのアナログ、カチオン性化合物、界面活性剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）および疎水性添加剤（例えば、スクアラン）を含むナノ粒子組成物の有効量を、上記患者に投与する工程を包含する。投与は、一実施形態において、吸入（例えば、ネブライザーもしくは定量式吸入器で）、皮下もしくは静脈内によるものである。別の実施形態において、虚血性疾患もしくは状態（例えば、強皮症（全身性硬化症が挙げられる）、またはレイノー現象）の処置のための本発明のプロスタサイクリン化合物もしくは組成物の有効量の静脈内投与、皮下投与もしくは吸入投与は、トレプロスチニルの皮下投与、静脈内投与もしくは吸入投与と比較して、全身有害事象の重症度の低減、または全身有害事象の発生の低下を生じる。
【０１１４】
本明細書で提供されるプロスタサイクリン組成物、例えば、プロスタサイクリン（例えば、トレプロスチニル）もしくはそのアナログ、カチオン性化合物、界面活性剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）および疎水性添加剤（例えば、スクアラン）を含むナノ粒子組成物は、一実施形態において、指の虚血性病変（例えば、指の潰瘍もしくは壊死性病変）に対して患者を処置するために、または指の虚血性病変と関連する症状および／もしくは機能障害(複数可)の数を改善もしくは低減するために、使用される。用語「指の虚血性病変」とは、被験体（例えば、ヒト）の指、すなわち、足指もしくは手指にある病変をいう。一実施形態において、指の虚血性病変は、虚血性疾患もしくは状態（例えば、強皮症（全身性硬化症が挙げられる）、またはレイノー現象）によって引き起こされ得るか、またはこれらと関連し得る。改善および／もしくは低減され得る症状は、例えば、指の虚血性潰瘍および／もしくは強皮症と関連する疼痛であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるプロスタサイクリン化合物もしくは組成物を投与する工程は、処置の必要性のある患者に投与すると、指の虚血性病変と関連する１以上の機能障害の改善もしくは低減を提供する。例えば、一実施形態において、本明細書で提供されるプロスタサイクリン組成物は、手の機能障害を改善もしくは低減する、すなわち、処置される患者の手の機能において改善を提供する。投与は、一実施形態において、吸入（例えば、ネブライザーもしくは定量式吸入器で）、皮下もしくは静脈内によるものである。別の実施形態において、指の虚血性病変の処置のための本発明のプロスタサイクリン化合物もしくは組成物の有効量の静脈内投与、皮下投与もしくは吸入投与は、トレプロスチニルの皮下投与、静脈内投与もしくは吸入投与と比較して、全身有害事象の重症度の低減、または全身有害事象の発生の低下を生じる。
【０１１５】
一実施形態において、腎機能を改善するか、または腎機能不全もしくは腎不全と関連する症状を処置するための方法を、それを必要とする患者に提供される。さらなる実施形態において、上記方法は、投与を必要とする被験体に、本明細書で提供されるプロスタサイクリン組成物のうちの１つ、例えば、プロスタサイクリン（例えば、トレプロスチニル）もしくはそのアナログ、カチオン性化合物、界面活性剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）および疎水性添加剤（例えば、スクアラン）を含むナノ粒子組成物の有効量を投与する工程を包含する。腎機能の低下と関連した具体的症状としては、例えば、異常に少ない排尿、クレアチニンおよび尿素窒素の血中レベルの増加、尿中へのタンパク質漏出ならびに／または疼痛が挙げられる。投与は、一実施形態において、吸入（例えば、ネブライザーもしくは定量式吸入器で）、皮下もしくは静脈内によるものである。別の実施形態において、腎機能の改善または腎機能不全もしくは腎不全と関連する症状の改善のための本発明のプロスタサイクリン化合物もしくは組成物の有効量の静脈内投与、皮下投与もしくは吸入投与は、トレプロスチニルの皮下投与、静脈内投与もしくは吸入投与と比較して、全身有害事象の重症度の低減、または全身有害事象の発生の低下を生じる。
【０１１６】
一実施形態において、うっ血性心不全を含む心血管疾患を処置するための方法が提供される。上記方法は、一実施形態において、投与を必要とする患者に、本明細書で提供されるプロスタサイクリン組成物、例えば、プロスタサイクリン（例えば、トレプロスチニル）もしくはそのアナログ、カチオン性化合物、界面活性剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）および疎水性添加剤（例えば、スクアラン）を含むナノ粒子組成物を投与する工程を包含する。投与は、一実施形態において、吸入（例えば、ネブライザーもしくは定量式吸入器）、皮下もしくは静脈内によるものである。
【０１１７】
一実施形態において、末梢血管疾患（末梢動脈閉塞疾患および間欠性跛行が挙げられる）を処置するための方法が提供される。一実施形態において、上記方法は、投与を必要とする患者に、本明細書で記載されるプロスタサイクリン組成物、例えば、プロスタサイクリン（例えば、トレプロスチニル）もしくはそのアナログ、カチオン性化合物、界面活性剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）および疎水性添加剤（例えば、スクアラン）を含むナノ粒子組成物を投与する工程を包含する。本明細書で提供されるプロスタサイクリン化合物および組成物に加えて、他の薬理学的に活性な物質が、本発明の製剤中に存在し得、これらは、末梢血管疾患を処置するために有用であることが公知である。例えば、本発明の化合物は、トレンタール（赤血球変形能を増大させることが公知の物質）と組み合わせて存在し得る。投与は、一実施形態において、吸入（例えば、ネブライザーもしくは定量式吸入器で）、皮下もしくは静脈内によるものである。
【０１１８】
一実施形態において、神経障害性糖尿病性足部潰瘍を処置および／もしくは予防するための方法が提供される。一実施形態において、上記方法は、投与を必要とする患者に、本明細書で記載されるプロスタサイクリン組成物、例えば、プロスタサイクリン（例えば、トレプロスチニル）もしくはそのアナログ、カチオン性化合物、界面活性剤（例えば、ＰＥＧ化脂質）および疎水性添加剤（例えば、スクアラン）を含むナノ粒子組成物を投与する工程を包含する。投与は、一実施形態において、吸入（例えば、ネブライザーもしくは定量式吸入器で）、皮下もしくは静脈内によるものである。本明細書で提供されるプロスタサイクリン化合物および組成物に加えて、他の薬理学的に活性な物質が、本発明の製剤中に存在し得、これらは、糖尿病性神経障害を有する患者における足部潰瘍を処置および／もしくは予防するために有用であることが公知である。例えば、本発明の組成物は、疼痛を処置するための鎮痛剤、包帯交換、血管拡張薬の薬物療法、および局所もしくは経口の抗生物質と組み合わせて存在し得る。
【０１１９】
一実施形態において、本明細書で記載される処置法に関する本発明のプロスタサイクリン組成物の有効量の肺投与、静脈内投与もしくは皮下投与は、トレプロスチニルの有効量が、皮下、静脈内によって、もしくは吸入によって投与される場合の、トレプロスチニルの有効量の投与と比較して、副作用の数の低下、または１以上の副作用（本明細書で「有害事象」ともいわれる）の重症度の低減を生じる。例えば、一実施形態において、本明細書で提供されるプロスタサイクリン組成物のうちの１つでの処置の必要性のある患者は、本発明のプロスタサイクリン組成物を（例えば、噴霧化、乾燥粉末吸入器、もしくは定量式吸入器によって）吸入することによって投与される場合に、上記患者へのトレプロスチニルの吸入投与によって誘発される咳もしくは咳応答の重症度および／もしくは頻度と比較して、咳の重症度および／もしくは頻度の低下、または咳応答の低下を経験する。
【０１２０】
別の実施形態において、本明細書で記載される処置法によって肺経路によって、投与を必要とする患者に投与されるプロスタサイクリン組成物は、非製剤化プロスタサイクリンが肺経路によって（例えば、噴霧化、乾燥粉末吸入器、もしくは定量式吸入器によって）プロスタサイクリン処置の必要性のある患者に投与される場合の、プロスタサイクリンの肺排出半減期（ｔ１／２）と比較して、上記組成物中に存在するプロスタサイクリンのより大きな肺排出半減期（ｔ１／２）を提供する。
【０１２１】
別の実施形態において、本明細書で記載される処置法によって、投与を必要とする患者に投与されるプロスタサイクリン組成物は、非製剤化プロスタサイクリンが上記患者に投与される場合の、該プロスタサイクリンの全身排出半減期（ｔ１／２）と比較して、該組成物中に存在するプロスタサイクリンのより大きな全身半減期（ｔ１／２）を提供する。さらなる実施形態において、上記プロスタサイクリン化合物およびトレプロスチニルの投与は、皮下投与もしくは静脈内投与のいずれかを含む。
【０１２２】
別の実施形態において、処置の必要性のある患者に投与される上記プロスタサイクリン組成物は、非製剤化プロスタサイクリン（すなわち、遊離プロスタサイクリン）が上記患者に投与される場合の、該プロスタサイクリンの肺Ｃｍａｘもしくは血漿Ｃｍａｘと比較して、該組成物中に存在するプロスタサイクリンのより大きな平均肺最大濃度（Ｃｍａｘ）、または該組成物中に存在するプロスタサイクリンのより低い血漿Ｃｍａｘを提供する。さらなる実施形態において、上記プロスタサイクリンの投与は、静脈内投与を含む。
【０１２３】
別の実施形態において、処置の必要性のある患者に投与される上記プロスタサイクリン組成物は、非製剤化プロスタサイクリンが上記患者に投与される場合の、該プロスタサイクリンの平均肺曲線下面積（ＡＵＣ０−ｔ）と比較して、上記組成物中に存在するプロスタサイクリンのより大きな平均肺曲線下面積（ＡＵＣ０−ｔ）を提供する。さらに別の実施形態において、投与を必要とする患者に投与される上記プロスタサイクリン組成物は、非製剤化プロスタサイクリン（すなわち、遊離プロスタサイクリン）が上記患者に投与される場合の、該プロスタサイクリンのピーク濃度までの肺もしくは血漿の時間（ｔｍａｘ）と比較して、上記プロスタサイクリンのより大きなピーク濃度までの肺もしくは血漿の時間（ｔｍａｘ）を提供する。
【０１２４】
一実施形態において、本明細書で提供される組成物、例えば、本明細書で提供されるプロスタサイクリン組成物、例えば、プロスタサイクリン（例えば、トレプロスチニル）もしくはそのアナログ、カチオン性化合物、界面活性剤および疎水性添加剤（例えば、スクアラン）を含むナノ粒子組成物は、１種以上のさらなる活性薬剤と併用して投与される。いくつかの実施形態において、このような１種以上のさらなる活性薬剤はまた、定量式吸入器を使用して、本明細書で提供されるプロスタサイクリン化合物もしくは組成物と一緒に投与され得る。一実施形態において、このような１種以上のさらなる活性薬剤は、別個に、すなわち、本明細書で提供されるプロスタサイクリン組成物より前に、もしくはその後に、投与され得る。本明細書で記載されるプロスタサイクリン組成物と併用して投与され得る特定のさらなる活性薬剤は、プロスタサイクリンが投与される処置もしくは予防のための特定の疾患もしくは状態に依存し得る。いくらかの場合、上記さらなる活性薬剤は、心血管系薬剤、例えば、ｃｏｘ−２インヒビター、ｒｈｏキナーゼインヒビター、カルシウムチャネルブロッカー、ホスホジエステラーゼインヒビター、エンドセリンアンタゴニスト（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）、もしくは抗血小板薬であり得る。
【０１２５】
上記で提供されるように、本発明のプロスタサイクリン化合物および組成物は、肺経路、静脈内経路もしくは皮下経路によって、送達を必要とする患者に送達され得る。肺経路に関しては、本発明のプロスタサイクリン化合物および組成物は、このような投与に適合された任意の投与量分注デバイスで使用され得る。上記デバイスは、一実施形態において、最適な計測正確性およびその構成要素（例えば、容器、バルブおよびアクチュエーター）と製剤との適合性を確実にするように構築され、機械式ポンプシステム（例えば、定量式ネブライザー、乾燥粉末吸入器、ソフトミスト吸入器、もしくはネブライザーのもの）に基づき得る。例えば、肺送達デバイスとしては、本明細書で詳細に記載される、ジェット式ネブライザー、電子式ネブライザー、ソフトミスト吸入器、およびカプセルベースの乾燥粉末吸入器が挙げられる。
【０１２６】
噴霧化すると、その噴霧化組成物（「エアロゾル化組成物」ともいわれる）は、エアロゾル化粒子の形態にある。上記エアロゾル化組成物は、上記エアロゾルの粒度によって、例えば、上記エアロゾル化組成物と関連する「空気力学的重量中位径」もしくは「微細粒子画分」を測定することによって、特徴付けられる。「空気力学的重量中位径」もしくは「ＭＭＡＤ」は、水性のエアロゾル液滴の空気力学的分離に関して正規化され、インパクター測定、例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｓｃａｄｅ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ（ＡＣＩ）もしくはＮｅｘｔ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ（ＮＧＩ）によって決定される。ガス流量は、一実施形態において、ＡＣＩについては２８リットル／分であり、ＮＧＩについては１５リットル／分である。
【０１２７】
「幾何標準偏差」もしくは「ＧＳＤ」は、空気力学的粒度分布の拡がりの尺度である。低ＧＳＤは、狭い液滴サイズ分布（均質にサイズのそろった液滴）を特徴付け、これは、呼吸器系にエアロゾルを標的化するのに有利である。本明細書で提供される噴霧化組成物の平均液滴サイズは、一実施形態において、５μｍ未満もしくは約１μｍ〜約５μｍであり、１．０〜２．２、もしくは約１．０〜約２．２、もしくは１．５〜２．２、もしくは約１．５〜約２．２の範囲のＧＳＤを有する。
【０１２８】
一実施形態において、上記噴霧化組成物の空気力学的重量中位径（ＭＭＡＤ）は、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｓｃａｄｅ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ（ＡＣＩ）もしくはＮｅｘｔ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ（ＮＧＩ）によって測定される場合、約１μｍ〜約５μｍ、もしくは約１μｍ〜約４μｍ、もしくは約１μｍ〜約３μｍもしくは約１μｍ〜約２μｍである。別の実施形態において、上記噴霧化組成物のＭＭＡＤは、カスケードインパクションによって、例えば、ＡＣＩもしくはＮＧＩによって測定される場合、約５μｍ以下、約４μｍ以下、約３μｍ以下、約２μｍ以下、もしくは約１μｍ以下である。
【０１２９】
一実施形態において、上記薬学的組成物のエアロゾルのＭＭＡＤは、カスケードインパクションによって測定される場合、約４．９μｍ未満、約４．５μｍ未満、約４．３μｍ未満、約４．２μｍ未満、約４．１μｍ未満、約４．０μｍ未満もしくは約３．５μｍ未満である。
【０１３０】
一実施形態において、上記薬学的組成物のエアロゾルのＭＭＡＤは、カスケードインパクションによって（例えば、ＡＣＩもしくはＮＧＩによって）測定される場合、約１．０μｍ〜約５．０μｍ、約２．０μｍ〜約４．５μｍ、約２．５μｍ〜約４．０μｍ、約３．０μｍ〜約４．０μｍもしくは約３．５μｍ〜約４．５μｍである。
【０１３１】
「微細粒子画分」もしくは「ＦＰＦ」とは、本明細書で使用される場合、カスケードインパクションによって測定される場合、直径５μｍ未満の粒度を有するエアロゾルの画分をいう。ＦＰＦは、通常、パーセンテージとして表される。
【０１３２】
一実施形態において、上記エアロゾル化組成物のＦＰＦは、ＡＣＩもしくはＮＧＩによって測定される場合、約５０％以上、ＡＣＩもしくはＮＧＩによって測定される場合、約６０％以上、またはＡＣＩもしくはＮＧＩによって測定される場合、約７０％以上である。別の実施形態において、上記エアロゾル化組成物のＦＰＦは、ＮＧＩもしくはＡＣＩによって測定される場合、約５０％〜約８０％、もしくは約５０％〜約７０％もしくは約５０％〜約６０％である。
【０１３３】
一実施形態において、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）は、本発明の組成物のための吸入送達デバイスとして使用される。一実施形態において、上記ＤＰＩは、ＮＧＩもしくはＡＣＩによって測定される場合、直径が約１μｍ〜約１０μｍ、もしくは約１μｍ〜約９μｍ、もしくは約１μｍ〜約８μｍ、もしくは約１μｍ〜約７μｍ、もしくは約１μｍ〜約６μｍ、もしくは約１μｍ〜約５μｍ、もしくは約１μｍ〜約４μｍ、もしくは約１μｍ〜約３μｍ、もしくは約１μｍ〜約２μｍのＭＭＡＤを有する粒子を生成する。別の実施形態において、上記ＤＰＩは、ＮＧＩもしくはＡＣＩによって測定される場合、約１μｍ〜約１０μｍ、もしくは約２μｍ〜約１０μｍ、もしくは約３μｍ〜約１０μｍ、もしくは約４μｍ〜約１０μｍ、もしくは約５μｍ〜約１０μｍ、もしくは約６μｍ〜約１０μｍ、もしくは約７μｍ〜約１０μｍ、もしくは約８μｍ〜約１０μｍ、もしくは約９μｍ〜約１０μｍのＭＭＡＤを有する粒子を生成する。
【０１３４】
一実施形態において、上記ＤＰＩによって生成される粒子のＭＭＡＤは、ＮＧＩもしくはＡＣＩによって測定される場合、約１μｍ以下、約９μｍ以下、約８μｍ以下、約７μｍ以下、６μｍ以下、５μｍ以下、約４μｍ以下、約３μｍ以下、約２μｍ以下、もしくは約１μｍ以下である。
【０１３５】
一実施形態において、上記ＤＰＩによって生成される粒子のＭＭＡＤは、ＮＧＩもしくはＡＣＩによって測定される場合、約９．９μｍ未満、約９．５μｍ未満、約９．３μｍ未満、約９．２μｍ未満、約９．１μｍ未満、約９．０μｍ未満、約８．５μｍ未満、約８．３μｍ未満、約８．２μｍ未満、約８．１μｍ未満、約８．０μｍ未満、約７．５μｍ未満、約７．３μｍ未満、約７．２μｍ未満、約７．１μｍ未満、約７．０μｍ未満、約６．５μｍ未満、約６．３μｍ未満、約６．２μｍ未満、約６．１μｍ未満、約６．０μｍ未満、約５．５μｍ未満、約５．３μｍ未満、約５．２μｍ未満、約５．１μｍ未満、約５．０μｍ未満、約４．５μｍ未満、約４．３μｍ未満、約４．２μｍ未満、約４．１μｍ未満、約４．０μｍ未満もしくは約３．５μｍ未満である。
【０１３６】
一実施形態において、上記ＤＰＩによって生成される粒子のＭＭＡＤは、約１．０μｍ〜約１０．０μｍ、約２．０μｍ〜約９．５μｍ、約２．５μｍ〜約９．０μｍ、約３．０μｍ〜約９．０μｍ、約３．５μｍ〜約８．５μｍもしくは約４．０μｍ〜約８．０μｍである。
【０１３７】
一実施形態において、上記ＤＰＩによって生成されるプロスタサイクリン粒状組成物のＦＰＦは、ＡＣＩもしくはＮＧＩによって測定される場合、約４０％以上、ＡＣＩもしくはＮＧＩによって測定される場合、約５０％以上、ＡＣＩもしくはＮＧＩによって測定される場合、約６０％以上、またはＡＣＩもしくはＮＧＩによって測定される場合、約７０％以上である。別の実施形態において、上記エアロゾル化組成物のＦＰＦは、ＮＧＩもしくはＡＣＩによって測定される場合、約４０％〜約７０％、もしくは約５０％〜約７０％もしくは約４０％〜約６０％である。
【０１３８】
本発明の別の局面は、肺高血圧症、例えば、肺動脈性肺高血圧症、もしくは門脈肺高血圧症を処置するか、またはこれらに対する予防を提供するためのシステムに関する。一実施形態において、上記システムは、プロスタサイクリンもしくはそのアナログ、カチオン性化合物および界面活性剤を含む薬学的組成物；ならびに吸入デバイスを含む。一実施形態において、上記吸入デバイスは、ネブライザーである。さらなる実施形態において、上記プロスタサイクリン組成物は、疎水性添加剤（例えば、スクアラン）を含み、上記組成物は、複数のナノ粒子を含む。
【０１３９】
ネブライザータイプの吸入送達デバイスは、溶液（通常は、水性）、または懸濁物として、本発明の組成物を含み得る。例えば、上記プロスタサイクリン組成物は、食塩水中に懸濁され得、上記吸入送達デバイスにロードされ得る。吸入のために上記組成物の噴霧化したスプレーを生成することにおいて、上記ネブライザー送達デバイスは、超音波式で、加圧空気によって、他のガスによって、電子的にもしくは機械的に（例えば、振動メッシュもしくはアパーチャープレート）駆動され得る。振動メッシュ式ネブライザーは、微細な粒子、低速エアロゾルを生成し、従来のジェット式ネブライザーもしくは超音波式ネブライザーより速い速度で、治療溶液および懸濁物を噴霧化する。よって、処置の継続期間は、ジェット式もしくは超音波式のネブライザーと比較して、振動メッシュ式ネブライザーで短縮され得る。本明細書で記載される方法での使用に適用可能な振動メッシュ式ネブライザーとしては、Ｐｈｉｌｉｐｓ  Ｒｅｓｐｉｒｏｎｉｃｓ  Ｉ−Ｎｅｂ（登録商標）、Ｏｍｒｏｎ  ＭｉｃｒｏＡｉｒ、ｔｈｅ  Ｎｅｋｔａｒ  Ａｅｒｏｎｅｂ（登録商標）、およびＰａｒｉ  ｅＦｌｏｗ（登録商標）が挙げられる。上記ネブライザーは、一実施形態において、単回使用（例えば、使い捨て）もしくは複数回使用ネブライザーである。一実施形態において、本明細書で提供されるシステムは、電子メッシュ式ネブライザー、空気圧式（ジェット式）ネブライザー、超音波式ネブライザー、呼吸増強式（ｂｒｅａｔｈ−ｅｎｈａｎｃｅｄ）ネブライザーおよび呼吸作動式（ｂｒｅａｔｈ−ａｃｔｕａｔｅｄ）ネブライザーから選択されるネブライザーを含む。一実施形態において、上記ネブライザーは、携行式である。
【０１４０】
上記吸入送達デバイスは、ネブライザー、乾燥粉末吸入器、もしくは定量式吸入器（ＭＤＩ）、または当業者に公知の任意の他の適切な吸入送達デバイスであり得る。上記デバイスは、上記プロスタサイクリン組成物の単一用量を含み得、これを送達するために使用され得るか、または上記デバイスは、本発明の組成物の複数用量を含み、これを送達するために使用され得る。
【０１４１】
ネブライザー−タイプの吸入送達デバイスは、溶液（通常は、水性）として、もしくは懸濁物として、本発明の組成物を含み得る。例えば、上記プロスタサイクリン化合物もしくは組成物は、食塩水中に懸濁され得、上記吸入送達デバイスにロードされ得る。吸入のための上記組成物の噴霧化されたスプレーを生成することにおいて、上記ネブライザー送達デバイスは、超音波式で、加圧空気によって、他のガスによって、電子式でもしくは機械式で（例えば、振動メッシュ式もしくはアパーチャープレート）駆動され得る。振動メッシュ式ネブライザーは、微細な粒子、低速エアロゾルを生成し、従来のジェット式もしくは超音波式のネブライザーより速い速度で、治療溶液および懸濁物を霧状にする。よって、処置の継続期間は、ジェット式もしくは超音波式のネブライザーと比較して、振動メッシュ式ネブライザーで短縮され得る。本明細書で記載される方法での使用に適用可能な振動メッシュ式ネブライザーとしては、Ｐｈｉｌｉｐｓ  Ｒｅｓｐｉｒｏｎｉｃｓ  Ｉ−Ｎｅｂ（登録商標）、Ｏｍｒｏｎ  ＭｉｃｒｏＡｉｒ、Ｎｅｋｔａｒ  Ａｅｒｏｎｅｂ（登録商標）、およびＰａｒｉ  ｅＦｌｏｗ（登録商標）が挙げられる。
【０１４２】
上記ネブライザーは、持ち運びができかつ携帯式のデザインであり得、自己充足式の電気ユニットが装備され得る。上記ネブライザーデバイスは、規定された開口サイズの２つの一致した出口チャネル（ここを通って、液体製剤が加速され得る）を有するノズルを含み得る。これは、２つの流れの衝突を生じ、上記製剤の霧状化を生じる。上記ネブライザーは、機械式アクチュエーターを使用して液体製剤を規定された開口サイズ(複数可)の複数穴ノズルに通して、吸入のために製剤のエアロゾルを生成することができる。単回用量ネブライザーのデザインでは、製剤の単回用量を含むブリスターパックが使用され得る。
【０１４３】
本発明において、上記ネブライザーを使用して、例えば肺の膜内での粒子の配置に最適となる大きさの粒子を確実につくることができる。
【０１４４】
別の実施形態において、本明細書で記載されるネブライザーは、約０．３５ｇ／分より速い、約０．４０ｇ／分より速い、約０．５０ｇ／分より速い速度で、もしくは約０．６０ｇ／分〜約０．７０ｇ／分の速度で上記プロスタサイクリン薬学的組成物のエアロゾルを生成する。さらなる実施形態において、上記エアロゾルの微細粒子画分（ＦＰＦ）は、カスケードインパクションによって測定される場合、約５０％以上、カスケードインパクションによって測定される場合、約６０％以上、カスケードインパクションによって測定される場合、約７０％以上である。
【０１４５】
空気圧式ネブライザーの操作の原理は、一般に、当業者に公知であり、例えば、Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｃａｒｅ，  Ｖｏｌ．  ４５，  Ｎｏ．  ６，  ｐｐ．  ６０９−６２２  （２０００）（全ての目的のために本明細書に参考として援用される）に記載される。簡潔には、加圧ガス供給が、空気圧式ネブライザーにおいて液体の霧化のための駆動力として使用される。加圧ガスが送達されると、それは、陰圧の領域を引き起こす。次いで、エアロゾル化される溶液は、そのガス流の中に送達され、液体薄膜へとせん断される。この薄膜は不安定であり、表面張力が原因で液滴へと壊れる。より小さな粒子（すなわち、本明細書で記載されるＭＭＡＤおよびＦＰＦ特性を有する粒子）は、次いで、エアロゾル流の中にバッフルを配置することによって形成され得る。１つの空気圧式ネブライザーの実施形態において、ガスおよび溶液は、出口ポート（ノズル）を離れてバッフルと相互作用する前に、混合される。別の実施形態において、液体およびガスが出口ポート（ノズル）を離れるまで、混合は起こらない。一実施形態において、上記ガスは、空気、Ｏ２および／もしくはＣＯ２である。
【０１４６】
一実施形態において、液滴サイズおよび産出速度は、空気圧式ネブライザーにおいて、調整され得る。しかし、噴霧化される組成物、および該組成物の特性（例えば、％会合プロスタサイクリン）が上記ネブライザーの改変に起因して変更されるかどうかには、考慮が払われるべきである。例えば、一実施形態において、上記ガス速度および／もしくは薬学的組成物の速度は、本発明の産出速度および液滴サイズを達成するように改変される。さらにもしくは代わりに、上記ガスおよび／もしくは溶液の流量は、本発明の液滴サイズおよび産出速度を達成するように調整され得る。例えば、ガス速度の増大は、一実施形態において、液滴サイズを低下させた。一実施形態において、薬学的組成物の流れ  対  ガスの流れの比は、本発明の液滴サイズおよび産出速度を達成するように調整される。一実施形態において、液体  対  ガスの流れの比の増大は、粒度を増大させる。
【０１４７】
噴霧化時間は、一実施形態において、上記流れを増大させてネブライザーを動かすことによって短縮される。例えば、Ｃｌａｙ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８３）．  Ｌａｎｃｅｔ  ２，  ｐｐ．  ５９２−５９４およびＨｅｓｓ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）．  Ｃｈｅｓｔ  １１０，  ｐｐ．  ４９８−５０５（これらの各々は、全ての目的のために本明細書に参考として援用される）を参照のこと。
【０１４８】
一実施形態において、リザーバーバッグもしくはチャンバが、噴霧化プロセスの間にエアロゾルを捕捉するために使用され、上記エアロゾルは、その後吸入によって被験体に提供される。別の実施形態において、本明細書で提供されるネブライザーは、バルブ付きのオープンベント型デザインを含む。この実施形態において、患者がネブライザーを通じて吸入する場合、ネブライザーの産出は増大する。呼気相の間に、一方向バルブは、ネブライザーチャンバから離れる流れに患者を向ける。
【０１４９】
一実施形態において、本明細書で提供されるネブライザーは、連続式ネブライザーである。言い換えると、用量を投与する一方で薬学的組成物をネブライザーに再充填することを必要としない。
【０１５０】
一実施形態において、振動メッシュ式ネブライザーは、本発明のプロスタサイクリン組成物を、それを必要とする患者に送達するために使用される。一実施形態において、上記ネブライザーの膜は、約５０ｋＨｚ〜約５００ｋＨｚ、約１００ｋＨｚ〜約４５０ｋＨｚ、約１５０ｋＨｚ〜約４００ｋＨｚ、もしくは約２００ｋＨｚ〜約３５０ｋＨｚの超音波周波数で振動する。
【０１５１】
一実施形態において、本明細書で提供されるネブライザーは、空気圧縮機を使用しないので、空気流を発生させない。一実施形態において、エアロゾルは、デバイスの混合チャンバに入るエアロゾルヘッドによって生成される。上記患者が吸入する場合、空気は、上記混合チャンバの背面にある一方向吸入バルブを介して上記混合チャンバに入り、そのエアロゾルを、マウスピースを通して該患者へと運ぶ。呼息する際には、上記患者の息は、上記デバイスのマウスピース上の一方向呼息バルブを通って流れる。一実施形態において、上記ネブライザーは、上記混合チャンバの中にエアロゾルを生成し続け、それは、次いで、次の呼吸のときに被験体によって吸い込まれ、そしてネブライザーの薬剤リザーバーが空になるまで、このサイクルが継続する。
【０１５２】
本明細書で提供される組成物は、一実施形態において、吸入（例えば、噴霧化）によって、ＰＨ、ＰＡＨもしくはＰＰＨの処置のために使用される。上記組成物は、一実施形態において、ネブライザーによって投与される。これは、送達を必要とする患者の肺へと送達するための上記組成物のエアロゾルミストを提供する。
【０１５３】
一実施形態において、上記ネブライザーは、約０．１〜１．０ｍＬ／分の速度で上記薬学的組成物のエアロゾルを生成する。一実施形態において、上記噴霧化組成物の空気力学的重量中位径（ＭＭＡＤ）は、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｓｃａｄｅ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ（ＡＣＩ）もしくはＮｅｘｔ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ（ＮＧＩ）によって測定される場合、約１μｍ〜約５μｍ、もしくは約１μｍ〜約４μｍ、もしくは約１μｍ〜約３μｍもしくは約１μｍ〜約２μｍである。別の実施形態において、上記噴霧化組成物のＭＭＡＤは、カスケードインパクションによって測定される場合、約５μｍ以下、約４μｍ以下、約３μｍ以下、約２μｍ以下、もしくは約１μｍ以下である。
【０１５４】
一実施形態において、本明細書で提供されるシステムは、プロスタサイクリン組成物、例えば、トレプロスチニル組成物、例えば、トレプロスチニル固体ナノ粒子製剤を含む。
【０１５５】
本発明の別の局面は、粒状組成物（これは、プロスタサイクリンもしくはそのアナログ、カチオン性化合物および界面活性剤を含む）を含むプロスタサイクリンエアロゾルに関する。一実施形態において、上記粒状組成物は、固体脂質ナノ粒状組成物である。一実施形態において、上記エアロゾルは、約０．１〜約１．０ｍＬ／分の速度で生成される。
【０１５６】
一実施形態において、上記プロスタサイクリン組成物をエアロゾル化する前に、該組成物中に存在するプロスタサイクリンのうちの約６０％〜約１００％は、粒子形態にある。さらなる実施形態において、上記プロスタサイクリンは、トレプロスチニル、エポプロステノール、もしくはイロプロストである。別の実施形態において、噴霧化する前に、約６５％〜約９９％、約７５％〜約９９％、約８５％〜約９９％、約９５％〜約９９％、もしくは約９７％〜約９９％が、粒子形態にある。
【０１５７】
別の実施形態において、上記プロスタサイクリン組成物をエアロゾル化する前に、該組成物中に存在するプロスタサイクリンのうちの約８５％〜約９９％、もしくは約９０％〜約９９％もしくは約９５％〜約９９％もしくは約９６％〜約９９％は、粒子形態にある。さらなる実施形態において、上記プロスタサイクリンは、トレプロスチニル、エポプロステノール、もしくはイロプロストである。別の実施形態において、噴霧化する前に、上記組成物中に存在するプロスタサイクリンのうちの約９８％は、粒子形態にある。
【０１５８】
一実施形態において、上記エアロゾル化組成物のＦＰＦは、カスケードインパクションによって測定される場合、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９７．５％以上、もしくは９９％以上である。さらなる実施形態において、上記組成物は、トレプロスチニルを含む。さらなる実施形態において、上記組成物は、カチオン性脂質を含む。なおさらなる実施形態において、上記組成物は、ミセル状組成物である。
【０１５９】
一実施形態において、本明細書で記載される吸入デバイスは、約０．１〜１．０ｍＬ／分の速度で上記プロスタサイクリン薬学的組成物のエアロゾルを生成する（すなわち、総産出速度を達成する）。上記プロスタサイクリン組成物のエアロゾルは、一実施形態において、約０．２５ｇ／分より速い、約０．３５ｇ／分より速い、約０．４５ｇ／分より速い、約０．５５ｇ／分より速い、約０．６０ｇ／分より速い、約０．６５ｇ／分より速いもしくは約０．７０ｇ／分より速い速度で生成される。別の実施形態において、本明細書で記載される吸入デバイスは、約０．５３ｇ／分〜約０．８０ｇ／分で、約０．５３ｇ／分〜約０．７０ｇ／分、約０．５５ｇ／分〜約０．７０ｇ／分、約０．５３ｇ／分〜約０．６５ｇ／分、もしくは約０．６０ｇ／分〜約０．７０ｇ／分で、上記プロスタサイクリン薬学的組成物のエアロゾルを生成する（すなわち、総産出速度を達成する）。一実施形態において、上記システムの吸入デバイスは、ネブライザーもしくは乾燥粉末吸入器である。
【０１６０】
噴霧化すると、一実施形態において、上記薬学的組成物中の粒子は、薬物を漏出する。一実施形態において、噴霧化後の粒子会合プロスタサイクリンの量は、約２５％〜約９０％、もしくは約４０％〜約８０％もしくは約５０％〜約７０％である。これらのパーセンテージはまた、本明細書で「噴霧化後の％会合プロスタサイクリン」ともいわれる。本明細書で提供される場合、一実施形態では、本明細書で提供される組成物は、複数の粒子を含み、該粒子は、プロスタサイクリン、例えば、トレプロスチニルを含む。一実施形態において、噴霧化後の％会合プロスタサイクリンは、約３０％〜約８０％である。
【０１６１】
一実施形態において、噴霧化後の％会合プロスタサイクリンは、コールドトラップ中で濃縮することによって空気からエアロゾルを再生することによって測定され、その液体は、その後、遊離プロスタサイクリンおよび被覆プロスタサイクリン（会合プロスタサイクリン）についてアッセイされる。
【０１６２】
一実施形態において、上記薬学的組成物のエアロゾルのＭＭＡＤは、カスケードインパクションによって測定される場合、約４．９μｍ未満、約４．５μｍ未満、約４．３μｍ未満、約４．２μｍ未満、約４．１μｍ未満、約４．０μｍ未満もしくは約３．５μｍ未満である。
【０１６３】
一実施形態において、上記薬学的組成物のエアロゾルのＭＭＡＤは、カスケードインパクションによって測定される場合、約１．０μｍ〜約５．０μｍ、約２．０μｍ〜約４．５μｍ、約２．５μｍ〜約４．０μｍ、約３．０μｍ〜約４．０μｍもしくは約３．５μｍ〜約４．５μｍである。
【実施例】
【０１６４】
本発明は、以下の実施例を参照することによってさらに例示される。しかし、これらの実施例は、上記で記載される実施形態のように、例示であって本発明の範囲を限定するとは決して解釈されるべきではないことに注意すべきである。
【０１６５】
これらの実験で使用されるトレプロスチニル組成物は、遊離酸もしくは塩のいずれかの形態でトレプロスチニルを含み得る（図１）。トレプロスチニルは、例えば、米国特許第６，７６５，１１７号および同第８，４９７，３９３号に開示される方法によって合成され得る。プロスタグランジン誘導体の合成は、米国特許第４，６６８，８１４号に記載されている。米国特許第６，７６５，１１７号；同第８，４９７，３９３号；および同第４，６６８，８１４号の開示は、全ての目的のために、それらの全体において参考として援用される。
【０１６６】
以下のアッセイを、以下で提供される実施例において使用した。
【０１６７】
（濾過アッセイ）
遊離トレプロスチニル（すなわち、会合していない）のパーセンテージを測定するために、濃度１ｍＭ、１００μＭ、および１０μＭのトレプロスチニルナノ粒子製剤の５００μＬを使用した。サンプルを、３００００Ｄａ分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を有するＶｉｖａｃｏｎスピンフィルタにロードし、２５分間５０００×ｇで遠心分離した。その濾液を集め、そのトレプロスチニル含有量をＨＰＬＣによって測定した。濾液中のトレプロスチニル含有量は、「遊離トレプロスチニル」、すなわち、非ナノ粒子会合トレプロスチニルに等しく、濾過前の全トレプロスチニル含有量のパーセンテージとして表される。
【０１６８】
（粒度アッセイ）
上記トレプロスチニル組成物の粒度を測定するために、９５０μＬの脱イオンＨ２Ｏ（０．０２μｍフィルタを通して濾過した）中に希釈したサンプル５０μＬを、使い捨てプラスチックキュベットの中にアリコートに分け、Ｍｏｂｉｕｓ粒子分析器（Ｗｙａｔｔ，  ＣＡ）で分析した。データを集め、１０回の収集（２３℃で３秒／収集）について平均した。
【０１６９】
（ＨＰＬＣアッセイ）
トレプロスチニル濃度を、Ｃｏｒｏｎａ検出器およびＰＤＡ検出器付きのＷａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９５システムを使用して、ＨＰＬＣ分析によって測定した。ＵＶ吸光度を２７０ｎｍで測定した。カラムＡＣＥ  ３  Ｃ８  ４．６×５０（Ｍａｃ−Ｍｏｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ）を使用した。
【０１７０】
移動相Ａは、２５％  アセトニトリル、２５％  メタノール、５０％  水、０．１％  ギ酸、および０．０１％  トリエチルアミンを含んだ。移動相Ｂは、５０％  アセトニトリル、５０％  メタノール、０．１％  ギ酸、および０．０１％  トリエチルアミンを含んだ。移動相勾配を、相Ｂを４０から９５％へと５分間かけて増加させて使用した。
【０１７１】
（実施例１−トレプロスチニル組成物の合成）
本発明のトレプロスチニル組成物を、以下のように調製した。所望のモル比のトレプロスチニル、カチオン性脂質、疎水性充填剤、およびＰＥＧ化脂質の混合物を、エタノール中に溶解した。表２は、上記方法によって作製したトレプロスチニル組成物の代表的な番号を示す。さらに、各組成物の平均粒度（ｎｍ）を、最後の列に示す。
【０１７２】
エタノール溶液中の成分の全濃度は、通常、４０ｍＭもしくは８０ｍＭであった。上記溶液の特定の体積（通常は、１ｍＬ）を、全流量１００ｍＬ／分で、十字混合路（ｍｉｘｉｎｇ  ｃｒｏｓｓ）中で２つの流れを合わせることによって、インラインで９容の水性緩衝液と混合した。緩衝液（水性投入）  対  脂質の流量比は、約２０：１であった。混合プロセスの模式図については、図３を参照のこと。
【表２−１】
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【表２−２】
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【０１７３】
Ｇｉｌｓｏｎ  ４０２シリンジポンプを使用して、上記エタノール溶液を送達した。蠕動ポンプを使用して、水性緩衝溶液を送達した。混合した後、上記トレプロスチニルナノ粒子は、自発的に形成した。最終混合物中に残っているエタノール溶媒を、次いで、窒素ガスの流れを吹き込むことによって、もしくは窒素ガスを注入することによって除去した。
【０１７４】
表３に示されるように、種々のタイプのカチオン性脂質を含む組成物を作製した。カチオン性脂質の種々のタイプのうち、トリオクチル−アミン（ｔｒｉＣ８−アミン）は、最小のトレプロスチニル保持（最高の遊離％）を有する製剤を生成した。臭化物塩としてのジドデシルジメチルアンモニウム（ｄｉＣ１２ｄＭＡ）を含む組成物は、高いトレプロスチニル保持を示した（表３）。
【表３】
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【０１７５】
（実施例２−トレプロスチニル組成物の粒度特徴付け）
全ての粒度測定を、準弾性光散乱（ＱＥＬＳ）モードでＷｙａｔｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＭｏｂｉｕｓＴＭ  Ｚｅｔａ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ／Ｐａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｉｚｉｎｇ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔを使用して行った。組成物アリコートを、予め濾過した（０．０２μｍ孔フィルタ）超高純度脱イオンＨ２Ｏ中で１０倍希釈した。光散乱データを集め、Ｄｙｎａｍｉｃｓ（登録商標）  ｖ．  ７．２．４機器ソフトウェアを使用して、粒度およびサイズ分布に変換した。報告される平均粒度直径は、粒子拡散定数（ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｃｏｎｓｔａｎｔ）（懸濁物中の粒子の生の散乱強度によって決定される）を数学的に適合させて、粒度平均および平均直径あたりの粒度分布を得るキュムラントモデル（ｃｕｍｕｌａｎｔｓ  ｍｏｄｅｌ）に基づいた。試験サンプルは、Ｔ４２６、Ｔ４２０、Ｔ４２７、およびＴ４２８を含んだ（表４）。
【表４】
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【０１７６】
これらの実験結果から、トレプロスチニル組成物の粒度（平均粒子直径）は、スクアラン（疎水性充填剤）が増加するに伴って増加するということがわかった。図４に示されるように、スクアラン含有量は、粒度に関して他の成分に反比例する。図４Ａにおいて、上記トレプロスチニルおよびカチオン性脂質の比を固定し、ＳＤＧ−ＰＥＧは、全てのサンプル（Ｔ４２６、Ｔ４２０、Ｔ４２７およびＴ４２８）に関して２０％で存在した。図４Ｂ（Ｔ４２９、Ｔ４２０、Ｔ４３０、およびＴ４３１）は、固定したトレプロスチニル／カチオン性脂質／ＰＥＧ比を有するトレプロスチニル組成物のナノ粒子直径を示す。スクアランの効果は、適合線の傾きによって決定されるようにＴＲ／ＣＬ／ＰＥＧ比が固定されている（例えば、ＰＥＧ  ％は、他の脂質成分に伴って低下する）、図４Ｂのサンプルにおいてわずかにより明白であることが認められた。これらのデータは、ある程度まで、ＰＥＧパーセンテージも、トレプロスチニル組成物の粒度において役割を果たすことを示唆する。
【０１７７】
図５は、トレプロスチニル、ｄＣ１６（カチオン性脂質）およびＤＳＧ−ＰＥＧ２０００もしくはＤＳＰＥ−ＰＥＧ２Ｋのいずれかを含む組成物の粒度におけるＰＥＧ化−脂質濃度の役割を示す。図５に示されるように、ＰＥＧ化脂質濃度は、粒度に逆相関する。すなわち、粒子のサイズは、両方の組成物に関してＰＥＧ化脂質のｍｏｌ％が増加するにつれて減少する。ＤＳＰＥ−ＰＥＧ２Ｋを含む組成物の粒度は、２０％  ＰＥＧ（ｍｏｌ％）あたりでプラトーに達する。
【０１７８】
（実施例３：組成物成分の関数としてのトレプロスチニルナノ粒子会合）
トレプロスチニル会合の程度に対する種々の組成物成分の効果を測定した。この研究で使用される組成物は、Ｔ５９０、Ｔ５９１およびＴ５９２であった（図６Ａ）。これらの成分は、以下の表５に提供される。トレプロスチニル遊離％を、組成物を全トレプロスチニル濃度１０μＭへと希釈した後に、記載されるように測定した。会合したトレプロスチニルを、１００％−ＴＲＰ遊離％として計算した。トレプロスチニル会合は、カチオン性脂質含有量が増加するにつれて増加することがわかった（図６Ａ）。
【表５】
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【表６】
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【０１７９】
図６Ｂはまた、遊離トレプロスチニル（％）の測定された量（これは、カチオン性脂質含有量の関数として、会合トレプロスチニルに対して逆である）を示す。表６は、試験した各組成物のカチオン性脂質／トレプロスチニルモル比を示す。これらの組成物におけるＰＥＧ化脂質：トレプロスチニルのモル比は、一定比０．５で維持された。図６Ａと一致して、会合トレプロスチニルの量は、カチオン性脂質含有量の増加と相関する（図６Ｂ）。図６Ｂはまた、試験した各組成物についての粒子の全電荷を示す。粒子電荷を、粒子における荷電した成分（ＴＲＰおよびＰＥＧ化脂質については（−）の、ならびにカチオン性脂質については（＋）の対応する記号で示される）の濃度の合計として計算した。ＰＥＧ化脂質およびカチオン性脂質の両方が、粒子と１００％会合していると想定し、その一方で、ナノ粒子中のＴＲＰ含有量をＴＲＰ合計（１−ＴＲＰ遊離％／１００％）として計算した。図６Ｂのデータは、より正に荷電した粒子がトレプロスチニルをより大きな程度まで保持することを示す。具体的には、ほぼ１００％保持（１〜２％  遊離ＴＲＰ）が、上記粒子の電荷が正味の正になると達成される。
【０１８０】
図６Ｃは、カチオン性脂質の関数として遊離トレプロスチニルの量および上記組成物中の粒子の全電荷を示す。この実験で試験した組成物を表７に示し、各々、カチオン性脂質としてｄｉＣ１４ｄＭＡを含んだ。図６Ｂと一致して、会合トレプロスチニルの量は、カチオン性脂質含有量の増加と相関する。つまり、遊離トレプロスチニルの量は、カチオン性脂質濃度が増加するにつれて減少する。さらに、会合トレプロスチニルの量は、正の粒子電荷の増加と正に相関する。
【表７】
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【０１８１】
（透析アッセイ）
表８は、透析研究において使用した組成物を示す。この研究の結果は、どの組成物がインビボで持続した放出プロフィールを提供し得るかの指標として使用され得る。
【表８】
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【０１８２】
各サンプルの５ｍＬを、１Ｌの１×ＰＢＳに対して透析した。５０μＬのサンプルを集め、種々の時点でＨＰＬＣによって試験した（図７）。２５０μＬのサンプルを２４時間で集めた。サンプルを集めるごとに、等体積の１×ＰＢＳを透析バッグに添加した。吸光度データを、計算した希釈率に対して正規化した。使用した透析膜は、５０ｋＤａ  ＭＷカットオフを有した。
【０１８３】
研究の結果を、図７に示す。遊離トレプロスチニルは、最も早く透析された。なぜならその動力学は、透析膜の孔を通る自由拡散によってのみ制限されたからである。組成物Ｔ４１６（カチオン性脂質を含まない）は、ほぼ同程度に早く放出され、このことから、正味の正電荷がトレプロスチニルの効率的な保持に必要とされるという本発明者らが以前に観察したことを確認した。対照的に、Ｔ４２６、Ｔ４２７、Ｔ４２８、Ｔ４２９、Ｔ４３０およびＴ４３１は各々、ゆっくりと透析された。このことは、これらの組成物がインビボで徐放性組成物として有用であり得ることを示していた。上位３つの組成物は、Ｔ４２８＞Ｔ４３１＞４２７であり、トレプロスチニル含有量は、それぞれ、３．３％、６．９％、および１０％であった。このことは、ＴＲＰ／カチオン性脂質比が一定（２：１）では、より低いＴＲＰ  ｍｏｌ％を有する組成物が、トレプロスチニルをより良好に保持し、透析の間にこれをよりゆっくりと放出することを示唆する。
【０１８４】
（実施例４−トレプロスチニル組成物に応答したＣＨＯ−Ｋ１細胞における環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）レベルの測定）
ＧｌｏＳｅｎｓｏｒＴＭ  ｃＡＭＰアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）に基づいた細胞ベースのチャイニーズ・ハムスター卵巣−Ｋ１（ＣＨＯ−Ｋ１）アッセイを使用して、ｃＡＭＰレベルに対するトレプロスチニルアルキルエステル化合物の効果を特徴付けた。
【０１８５】
ｃＡＭＰは、Ｇα−ｓおよびＧα−ｉプロテインを通じて作用するＧ−タンパク質共役レセプター（ＧＰＣＲ）のシグナル伝達に関与するセカンドメッセンジャーである。トレプロスチニルレセプターはＧＰＣＲであるので、上記アッセイは、それぞれのプロスタサイクリン組成物がそのレセプターを結合し、ＧＰＣＲ細胞シグナル伝達カスケードを活性化するかどうかの指標を提供する。
【０１８６】
ＧｌｏＳｅｎｓｏｒＴＭアッセイは、ホタルルシフェラーゼの遺伝子改変された形態（この中に、ｃＡＭＰ結合タンパク質部分が挿入されている）を利用する。ｃＡＭＰが結合すると、コンホメーション変化が誘導され、光産出の増加がもたらされる。
【０１８７】
ＥＰ２プロスタノイドレセプターを、ＧｌｏＳｅｎｓｏｒＴＭプラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ）とともにＣＨＯ−Ｋ１細胞へと、以下のように共トランスフェクトした。ＣＨＯ−Ｋ１細胞を、その単層が５０〜９０％コンフルエントになったときに回収した。まず、細胞を５ｍＬ  ＰＢＳで洗浄した。２ｍＬの予め温めておいた（３７℃）０．０５％  トリプシン−ＥＤＴＡ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｃａｔ  ＃：  ２５３０００５４）を添加し、フラスコの側部を軽くたたくことによって、細胞を剥がした。次に、１０％  ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；  Ｈｙｃｌｏｎｅ，  Ｃａｔ  ＃：  ＳＨ３００７１．０３）を含む１０ｍＬの抗生物質非含有増殖培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈ，  Ｃａｔ  ＃：  ３１７６５０９２）を添加し、細胞を、２５０×ｇにおいて５分間、室温で遠心分離した。培地を吸引し、細胞ペレットを、１０ｍＬの増殖培地中で再懸濁した。血球計算板を使用して細胞数を決定した。培養用に処理した９６ウェル平底プレート（Ｃｏｓｔａｒ，  Ｃａｔ  ＃：  ３９１７）の各ウェルに、１×１０４  細胞／１００μＬ  抗生物質非含有増殖培地を播種した。上記細胞を、３７℃および５％  ＣＯ２で一晩、ウォータージャケット付きインキュベーター中でインキュベートした。
【０１８８】
最大２０ウェルまでの小規模トランスフェクションのために、ｐＧＬｏＳｅｎｓｏｒ−２２Ｆ  ｃＡＭＰプラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ，  Ｃａｔ  ＃：  Ｅ２３０１）（２μｇ）：（ＥＰ２）（１０ｎｇ）（Ｏｒｉｇｅｎｅ，  Ｃａｔ  ＃：  ＳＣ１２６５５８）：ｐＧＥＭ−３Ｚｆ（＋）（１０ｎｇ）（Ｐｒｏｍｅｇａ，  Ｃａｔ  ＃：  Ｐ２２７１）比を、終濃度１２．６ｎｇ／μＬ（全プラスミド）へとＯｐｔｉ−ＭＥＭ  Ｉ血清低減培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｃａｔ  ＃：  １９８５０６２）中に希釈した。次に、６μＬのＦｕＧＥＮＥ  ＨＤトランスフェクション試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，  Ｃａｔ  ＃：  Ｅ２３１１）を、１６０μＬの希釈したプラスミドに添加し、穏やかにピペッティングすることによって注意深く混合した。その複合体を、室温で０〜１０分間インキュベートし、次いで、９６ウェルホワイトアッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ，  Ｃａｔ  ＃：  ３９１７）のウェル１つあたり８μＬのその複合体を添加し、細胞単層を壊すことなく穏やかに混合した。上記プレートを、２０〜２４時間、３７℃および５％  ＣＯ２で、ウォータージャケット付きインキュベーター中でインキュベートした。インキュベーション後、細胞を処理し、分析した。
【０１８９】
より大規模なトランスフェクションのために、前述の工程をそれに応じてスケールアップさせ、細胞を最後のインキュベーション後に凍結した。凍結したトランスフェクション済みＣＨＯ−Ｋ１細胞を調製するために、培地を培養フラスコから吸引し、細胞を５ｍＬ  ＰＢＳですすいだ。上記のように、２ｍＬの予め温めておいた（３７℃）０．０５％  トリプシン−ＥＤＴＡ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｃａｔ  ＃：  ２５３０００５４）を添加し、フラスコの側部を軽くたたくことによって細胞を剥がした。次に、１０％  ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ，  Ｃａｔ  ＃：  ＳＨ３００７１．０３）を含む１０ｍＬの抗生物質非含有増殖培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｃａｔ  ＃：  ３１７６５０９２）を添加し、細胞を２５０×ｇで５分間、室温において遠心分離した。血球計算板を使用して細胞数を決定した。培地を吸引し、細胞ペレットを凍結用培地（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，  ｃａｔ  ＃：    Ｓ−００２−５Ｆ）中に２．５×１０６  細胞／バイアルで再懸濁した。長期間貯蔵のための液体窒素に移す前に、トランスフェクトした細胞を−８０℃で一晩インキュベートした。次いで、凍結したストックをアッセイに使用する１日前に解凍し、細胞を、１００μＬの抗生物質非含有完全培地（Ｆ１２（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｃａｔ  ＃  ：  ３１７６５０９２）＋１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ，  Ｃａｔ  ＃：  ＳＨ３００７１．０３））中に２．５×１０４  細胞／ウェルで播種した。３７℃および５％  ＣＯ２で、ウォータージャケット付きインキュベーター中で一晩インキュベートした後、その細胞はｃＡＭＰ応答アッセイに使える状態にあった。
【０１９０】
ｃＡＭＰ測定のための準備において、上記細胞を、処理前にＧｌｏＳｅｎｓｏｒ  ｃＡＭＰ試薬で平衡化した。平衡化のために、培地を個々のウェルから注意深く除去した。次に、９６ウェルプレートの１ウェルあたり１００μＬの平衡化培地（６％ｖ／ｖのＧｌｏｓｅｎｓｏｒ  Ｒｅａｇｅｎｔストック溶液（Ｐｒｏｍｅｇａ，  Ｃａｔ  ＃：  Ｅ２９１）、１０％  ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ，  Ｃａｔ  ＃：  ＳＨ３００７１．０３）および８８％  ＣＯ２非依存性培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｃａｔ  ＃：  １８０４５０８８））を添加し、各ウェルの側面に添加した。次いで、上記プレートを２時間室温でインキュベートした。第１のプレリード測定（ｐｒｅ−ｒｅａｄ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ）を、マイクロプレートリーダー（ＭｉｃｒｏＬｕｍａｔ  Ｐｌｕｓ）を使用して行った。プレートを、室温でさらに１０分間インキュベートし、続いて、第２のプレリード測定を行った。
【０１９１】
遊離トレプロスチニルおよびトレプロスチニル組成物の作業溶液を、細胞にいったん添加して終濃度が１×になるように、１０×濃度で調製した。処理後に、各プレートを、マイクロプレートリーダー（ＭｉｃｒｏＬｕｍａｔ  Ｐｌｕｓ）を使用して、アッセイの継続時間にわたって５分ごとに読み取った。コントロールと比較したｃＡＭＰの倍数変化を決定するために、トランスフェクション効率を、上記第２のプレリード測定値をその対応するプレリード測定値の平均で除算することによって決定した。次に、サンプルの正規化した相対光単位（ＲＬＵ）を、プレート読み取り測定値をトランスフェクション効率で除算することによって決定した。次いで、コントロールと比較したｃＡＭＰの倍数変化を、サンプルの正規化したＲＬＵをコントロールの正規化したＲＬＵで除算することによって決定した。
【０１９２】
（遊離トレプロスチニルを使用するｃＡＭＰアッセイの検証）
上記ｃＡＭＰアッセイを、遊離トレプロスチニルを使用して検証した。トレプロスチニル（１０μＭ、１μＭ、０．１μＭ、０．０１μＭ、０．００１μＭ、０．０００１μＭ、０．００００１μＭ、および０．０００００１μＭ）を、平衡化したＣＨＯ−Ｋ１細胞に添加し、次いで、上記細胞を、３０分間インキュベートした。次いで、室温で発光を測定した。
【０１９３】
（トレプロスチニル組成物）
ＥＰ２レセプターおよびＧｌｏＳｅｎｓｏｒＴＭプラスミドで共トランスフェクトしたＣＨＯ−Ｋ１細胞を、遊離トレプロスチニル（１０μＭ）、ならびにトレプロスチニル組成物Ｔ５２７およびＴ５５０（表９）で、示された濃度でチャレンジした。次いで、ｃＡＭＰレベルを、図８Ａ〜Ｃに示されるように、８時間の時間経過にわたって５分ごとに測定した。
【表９】
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【０１９４】
トレプロスチニル組成物（２μＭ）に応答したｃＡＭＰレベルは、遊離トレプロスチニルに等しく、そのレベルは、少なくとも６時間持続した。上記持続したｃＡＭＰレベルは、遊離トレプロスチニルに対する応答では示されなかった。
【０１９５】
（噴霧化トレプロスチニル組成物）
上記の細胞ベースの（ＣＨＯ−Ｋ１）  ｃＡＭＰアッセイをまた使用して、ｃＡＭＰレベルに対する種々のトレプロスチニル組成物を噴霧化する効果を特徴付けた。
【０１９６】
Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒ  Ａｅｒｏｎｅｂ  Ｐｒｏ（Ａｅｒｏｇｅｎ）を使用して、トレプロスチニル組成物を噴霧化した。所望の体積の製剤（通常は、３ｍＬ）を、ネブライザーのメッシュヘッドにロードした。そのヘッドを、ガラス製インピンジャーに直接接続して気密シールした。サンプル全体が噴霧化されるまで工場出荷時の設定を使用して噴霧化を実行した。完全に噴霧化した後に、上記ヘッドを外した；インピンジャーにキャップをし、５分間６００×ｇで遠心分離して、インピンジャー内部のエアロゾルを沈降させた。その手順は、噴霧化したサンプルを集めるにあたって、ほぼ１００％収率をもたらした。
【０１９７】
この実験で試験される組成物は、以下の表１０に示され、結果は、図９Ａ〜Ｂに示される。ｃＡＭＰレベルを、２４０分の時間経過にわたって５分ごとに測定した。
【表１０】
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【０１９８】
２μＭ用量を使用するこれらの実験の結果は、図８に示される。トレプロスチニル組成物Ｔ４２０およびＴ４４１（２μＭ）に対するｃＡＭＰ応答は、遊離トレプロスチニルによって誘導される応答以上であった（図９Ａ，  ９Ｂ）。Ｔ４２０およびＴ４４１組成物に応答したｃＡＭＰレベルは、遊離トレプロスチニルより有意に長く持続した。
【０１９９】
（実施例５−細胞増殖に対するトレプロスチニル組成物の効果の決定）
細胞増殖に対するトレプロスチニル化合物のいずれかの効果を決定するために、ＣＨＯ−Ｋ１細胞およびラット肺胞細胞（ＮＲ８３８３細胞）を使用する細胞ベースのアッセイを行った。
【０２００】
（ＣＨＯ−Ｋ１細胞）
ＣＨＯ−Ｋ１細胞を、その細胞単層が５０〜９０％コンフルエントになったときに回収した（継代４〜１１を使用する）。培地をフラスコから吸引し、細胞を２ｍＬのＦ１２培地ですすいだ。次に、１ｍＬの予め温めておいた（３７℃）０．２５％  トリプシン−ＥＤＴＡ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｃａｔ＃：  ２５３０００５４）を添加し、フラスコの側部を軽くたたくことによって、フラスコから細胞を剥がした。次いで、完全増殖培地（Ｆ１２（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｃａｔ  ＃：  ３１７６５０９２）＋１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ，  Ｃａｔ  ＃：  ＳＨ３００７１．０３）＋１×Ｐｅｎ−Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  ｃａｔ  ＃  １５１４０−１２２））を、体積１０ｍＬで添加した。細胞を、２５０×ｇで５分間、室温で遠心分離し、その培地を吸引した。細胞ペレットを、１０ｍＬ  完全増殖培地中で再懸濁した。血球計算板を使用して、細胞数を決定した。次いで、細胞を、１００μＬの完全増殖培地中、９６ウェルプレートの１ウェルあたり２０００細胞、播種した。上記プレートを、３７℃および５％  ＣＯ２で、ウォータージャケット付きインキュベーター中で一晩インキュベートした。
【０２０１】
翌日、８０μＬの新鮮な完全培地を各ウェルに添加し、ＣＨＯ−Ｋ１細胞を、トレプロスチニル化合物および組成物処理でチャレンジした。作業溶液は、１０×濃度で調製し、２倍連続希釈後に、１ウェルあたり２０μＬアリコートを添加して、最終１×濃度に達するようにした。３７℃および５％  ＣＯ２で、ウォータージャケット付きインキュベーター中で４８時間インキュベートした後、細胞増殖に対するその阻害効果を決定した。プレートを、１ウェルあたり２０μＬのＰｒｅｓｔｏ  Ｂｌｕｅ試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  ｃａｔ  ＃：  Ａ１３２６２）を使用して分析した。上記試薬を混合し、プレートを、３７℃および５％  ＣＯ２で１時間、ウォータージャケット付きインキュベーター中でインキュベートした。プレートを、発光λ：５９０ｎｍおよび励起λ：５６０ｎｍで、ＣｙｔｏＦｌｕｏｒ  Ｓｅｒｉｅｓ  ４０００（ＰｅｒＳｅｐｔｉｖｅ  ＢｉｏＳｙｓｔｅｍｓ）もしくはＳｙｎｅｒｇｙ  Ｎｅｏマイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ）のいずれかを使用して読み取った。以下の式を使用して、％阻害を決定した：％阻害＝１００％−（処理したサンプル／コントロール×１００％）。
【０２０２】
（ＮＲ８３８３細胞）
ラット肺胞ＮＲ８３８３細胞を、その単層が５０〜９０％コンフルエントになったときに回収した（継代５〜１１を使用する）。ＮＲ８３８３細胞は、接着性および非接着性両方の細胞を含むので、培地を、５０ｍＬ  Ｆａｌｃｏｎチューブに移した。フラスコに残っている細胞を得るために、２ｍＬの何も添加していない（ｐｌａｉｎ）培地を添加し、その残っている細胞を７５ｃｍ２フラスコから細胞スクレイパーで掻きだし、上記５０ｍＬチューブに添加した。細胞を、２００×ｇで５分間、室温において遠心分離し、その培地を吸引した。細胞ペレットを、１０ｍＬ  完全増殖培地（Ｆ１２（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｃａｔ  ＃：  ３１７６５０９２）＋１５％  ＦＢＳ−熱不活化（Ｈｙｃｌｏｎｅ，  Ｃａｔ  ＃：  ＳＨ３００７１．０３）＋１×Ｐｅｎ−Ｓｔｒｅｐ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  ｃａｔ  ＃：  １５４１０  −  １２２））中に再懸濁した。血球計算板を使用して、細胞数を決定した。次いで、細胞を、１００μＬの完全増殖培地中で、９６ウェルプレートの１ウェルあたり４０００細胞、播種した。上記プレートを、３７℃および５％  ＣＯ２で一晩、ウォータージャケット付きインキュベーター中でインキュベートした。
【０２０３】
翌日、８０μＬの新鮮な完全培地を各ウェルに添加し、ＮＲ８３８３細胞を、トレプロスチニル化合物処理でチャレンジした。３７℃および５％  ＣＯ２で、ウォータージャケット付きインキュベーター中で７２時間のインキュベーションの後、細胞増殖に対するその阻害効果を決定した。測定および計算は、ＣＨＯ−Ｋ１細胞について上記で記載されるとおりに行った。
【０２０４】
４種のトレプロスチニル組成物Ｔ４４１、Ｔ４２０、Ｔ５５０、およびＴ５２７を、細胞増殖阻害アッセイにおいて試験した（図１０  −  ＣＨＯ−Ｋ１、図１１  −  ＮＲ８３８３）。図１０は、ＣＨＯ−Ｋ１細胞増殖に対するＴ５２７（図１０Ａ）、Ｔ５５０（図１０Ｂ）、Ｔ４４１（図１０Ｃ）およびＴ４２０（図１０Ｄ）の阻害効果を示す。特に、Ｔ５５０のみが、試験された最高濃度（２５μＭ）でＣＨＯ−Ｋ１細胞に対して重要な阻害効果（４０％）を示した。図１０Ａを参照のこと。他の組成物は、全ての濃度で有意な効果を示さなかった。
【表１１】
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【０２０５】
図１１は、ＮＲ８３８３細胞増殖に対する試験されたトレプロスチニル組成物Ｔ５２７（図１１Ａ）、Ｔ５５０（図１１Ｂ）、Ｔ４４１（図１１Ｃ）およびＴ４２０（図１１Ｄ）の効果をまとめる。全ての試験されたトレプロスチニル組成物は、中程度から最高までの濃度で細胞増殖のある程度の阻害を示した。具体的には、４種の組成物のうち、Ｔ５２７およびＴ５５０の両方は、２５μＭ濃度でＮＲ８３８３肺胞細胞増殖に対して、同様に、３０％および６０％の有意な阻害効果を示した（図１１Ａおよび１１Ｂ）。
【０２０６】
（実施例６-インビボでのトレプロスチニル組成物）
インビボでのトレプロスチニル組成物の効果を、ラットモデルを使用することによって決定した。若い雄性ラットＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）を研究に使用した。ラットに、ケタミン／キシラジンで麻酔をかけ、加温パッド上に置き、外科的分離および気管のカテーテル法の後に、研究全体を通じて機械的に換気した。
【０２０７】
カテーテルを、収縮期（ｓｙｓ）および拡張期（ｄｉａｓ）血圧の測定のために、大腿動脈中に配置した。開胸術を行い、カテーテルを右心室に挿入し、肺動脈の収縮期および拡張期血圧の測定のために、肺動脈に配置した。酸素飽和度（ＳａＯ２）を、足に配置したパルスオキシメーターで測定した。
【０２０８】
室内空気（ＦＩＯ２＝０．２１）で換気したラットを用いて、心血管測定をこれらの正常酸素条件下で行った。低酸素症を誘発するために、ＦＩＯ２を、ＳａＯ２が５０〜６０％の間の値に下がるまで３０分間の期間をかけて低下させ、パラメーターの各々に関してベースライン低酸素症値を決定した。４匹のラットの群は、各々、ＰＢＳ、遊離トレプロスチニル（１．７μｇ／ｋｇおよび１０μｇ／ｋｇ）、Ｔ５２７（１０μｇ／Ｋｇ）もしくはＴ５５０（１０μｇ／ｋｇ）のいずれかを受けた。目標の用量は、図１２〜１４に示されるように、トレプロスチニル誘導体組成物の分子量における差異に起因して、体重によって僅かに変動した。実際に達成した肺用量は、図１２に提供されるより約１／５低かった（例えば、１０μｇ／ｋｇの投与は、肺において約２μｇ／ｋｇを生じた）。平均ＰＡＰ（ｍＰＡＰ）の正規化したバリエーションは、図１２において、（Ｔ＝０）での低酸素ベースライン値からのパーセンテージとして示される。低酸素ベースラインＰＡＰ値は１００％であり、圧力の変化は、低酸素ベースラインと比較して測定した。平均ＳＡＰ（ｍＳＡＰ）の正規化したバリエーションは、図１３Ａ−Ｂにおいて低酸素ベースライン値からのパーセンテージとして示される。心拍数は、図１４Ａ〜Ｂにおいて、低酸素ベースライン値のパーセンテージとして経時的に示される。
【０２０９】
種々の処置を、ラットの肺への噴霧化薬物の吸入によって与えた。ラットの肺動脈圧（ＰＡＰ）、全身動脈圧（ＳＡＰ）、および心拍数を、１８０分間にわたって連続して測定した。ＰＡＰシグナルを、１秒あたり２００の点で集めた。
【０２１０】
記載される発明は、その具体的実施形態を参照しながら記載されてきたが、種々の変更が行われ得、本発明の真の趣旨および範囲から逸脱することなく、均等物で代用され得ることは、当業者によって理解されるはずである。さらに、特定の状況、材料、組成物、プロセス、プロセスの工程(複数可)を、本記載される発明の目的となる趣旨および範囲へと適合させるために、多くの改変が行われ得る。全てのこのような改変は、本明細書に添付される特許請求の範囲の範囲内に入ることが意図される。
【０２１１】
本明細書中で参照される特許、特許出願、特許出願公開、雑誌論文、およびプロトコルは、それらの全体において、全ての目的のために参考として援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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