(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
パウチの製造に用いる多層膜であって、前記多層膜が
コンタクト層、
コア層、及び
外層を含み、
前記コンタクト層及び前記コア層が第一の接合層により一体化され、
前記外層及び前記コア層が第二の接合層により一体化され、
前記コンタクト層が、（Ａ）０．８７０ｇ／ｃｍ３〜０．９１０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するエチレン及びα−オレフィンの共重合体を単独、又は（Ｂ）０．９１０ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリオレフィンとの混合物で含み、
前記コア層が、（Ｃ’）２５〜４８ｍｏｌ％の範囲のエチレンを含有する耐屈曲亀裂性エチレンビニルアルコール共重合体、又は（Ｃ）２５〜４８ｍｏｌ％の範囲のエチレンを含有するエチレンビニルアルコール共重合体、及び（Ｄ）アイオノマー酸エチレン共重合体の混合物を含み、
前記外層が、（Ｅ）０．９１０ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリオレフィンを単独、又は（Ｆ）０．８７０ｇ／ｃｍ３〜０．９１０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するエチレン及びα−オレフィンの共重合体との混合物で含み、
前記第一の接合層及び前記第二の接合層が、互いに独立して、（Ｇ）カルボン酸若しくはカルボン酸無水物でグラフト化されたポリオレフィンの共重合体を単独、又は（Ｈ）ポリオレフィンの共重合体との混合物で含む多層膜。
【請求項２】
前記エチレン及びα−オレフィンの共重合体（Ａ）が、４〜８個の炭素原子を有するポリオレフィンプラストマー、特にメタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体である、請求項１に記載の多層膜。
【請求項３】
前記ポリオレフィン（Ｂ）が、エチレンのホモポリマー、特にエチレンの低密度ポリマーである、請求項１又は２に記載の多層膜。
【請求項４】
前記エチレンビニルアルコール共重合体（Ｃ）が耐屈曲亀裂性である、請求項１〜３の何れか１項に記載の多層膜。
【請求項５】
前記共重合体（Ｄ）が、エチレンアイオノマーのアクリル酸共重合体であり、
カルボキシレート基が亜鉛カチオンを伴う、請求項１〜４の何れか１項に記載の多層膜。
【請求項６】
前記ポリオレフィン（Ｅ）が、４〜８個の炭素原子を有する１以上のオレフィンとエチレンとの共重合体、特にエチレン及びヘキセンの直鎖状低密度共重合体である、請求項１〜５の何れか１項に記載の多層膜。
【請求項７】
前記共重合体（Ｆ）が、４〜８個の炭素原子を有するポリオレフィンプラストマー、特にメタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体である、請求項１〜６の何れか１項に記載の多層膜。
【請求項８】
前記共重合体（Ｇ）が、無水マレイン酸でグラフト化されたエチレンの共重合体である、請求項１〜７の何れか１項に記載の多層膜。
【請求項９】
前記共重合体（Ｈ）が、４〜８個の炭素原子を有するポリオレフィンプラストマー、特にメタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体である、請求項１〜８の何れか１項に記載の多層膜。
【請求項１０】
前記コンタクト層が、質量比（Ｂ）／（Ａ）が９５／５以下、好ましくは５／９５〜９５／５の範囲、より好ましくは０．２〜５の範囲、なお一層好ましくは０．２〜２の範囲である（Ａ）及び（Ｂ）の混合物を含む、請求項１〜９の何れか１項に記載の多層膜。
【請求項１１】
前記コア層が、質量比（Ｃ）／（Ｄ）が９５／５〜５５／４５の範囲、好ましくは１０〜１９の範囲、より好ましくは１５〜１９の範囲である、（Ｃ）２５〜４８ｍｏｌ％の範囲のエチレンを含有するエチレンビニルアルコール共重合体、及び（Ｄ）アイオノマー酸エチレン共重合体の混合物を含む、請求項１〜１０の何れか１項に記載の多層膜。
【請求項１２】
前記外層が、質量比（Ｅ）／（Ｆ）が５／９５以上、好ましくは５／９５〜１００／０の範囲、より好ましくは１〜５の範囲、なお一層好ましくは１〜２．５の範囲である（Ｅ）及び（Ｆ）の混合物を含む、請求項１〜１１の何れか１項に記載の多層膜。
【請求項１３】
前記第一の接合層及び前記第二の接合層が、互いに独立して、質量比（Ｈ）／（Ｇ）が９５／５以下、好ましくは５／９５〜９５／５の範囲、より好ましくは０．２〜５の範囲、なお一層好ましくは０．２〜２．５の範囲である（Ｇ）及び（Ｈ）の混合物を含む、請求項１〜１２の何れか１項に記載の多層膜。
【請求項１４】
前記コンタクト層が、γ照射に対して、細胞増殖を減速し若しくは遅らせ得る分解化合物を放出し得る添加剤を０．０６ｗｔ％以下含有する、請求項１〜１３の何れか１項に記載の多層膜。
【請求項１５】
前記多層膜の任意の層の２つの間に、１つ又は複数の中間層をさらに含む、請求項１〜１３の何れか１項に記載の多層膜。
【請求項１６】
前記コンタクト層、前記第一の接合層、前記コア層、前記第二の接合層、及び前記外層を共押出する工程を含む、請求項１〜１５の何れか１項に記載の多層膜の製造方法。
【請求項１７】
使い捨てパウチであって、前記使い捨てパウチの壁面が請求項１〜１５の何れか１項に記載の多層膜を含む使い捨てパウチ。
【請求項１８】
請求項１７に記載の使い捨てパウチを含むバイオリアクター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞培地若しくは細胞培養液を調製、保管、又は運搬するのに使用できる使い捨てパウチの壁面（ｗａｌｌ）のための多層膜、及びそのような多層膜の製造方法に関する。
【０００２】
また、本発明は、その多層膜から製造された使い捨てパウチ、及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
使い捨てパウチは、細胞培養の分野、例えば、使い捨てバイオリアクターに、又は細胞培地（ｃｅｌｌ  ｍｅｄｉｕｍ）若しくは細胞培養液のような細胞液を保管若しくは運搬するために、広範に使用されている。
【０００４】
そのようなパウチは、互いに密封された２つの大きい壁面を含み得る。一度広げると、それらは、しばしば２Ｄパウチ（「Ｄ」は次元を意味する）と呼ばれる事実の正当な理由である、限られた体積となり、比較的薄いままとなる。また、３Ｄパウチは、３，０００リットル以上の大きさに達し得る体積を有する、互いに密封された、平らに畳まれたり、又は畳まれていない形状となったりし得る、２つの末端壁（ｅｎｄ  ｗａｌｌｓ）及び側壁（ｓｉｄｅ  ｗａｌｌ）を含むことが知られている。そのような３Ｄパウチは、国際公開第２０００／０４１３１号に記載され、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ社によって、ＦＬＥＸＥＬ（登録商標）３Ｄの商標で販売されている。
【０００５】
使い捨てパウチの壁面は、一般的に、そのパウチを満たす媒質と接触するコンタクト層、バリア層、及びその容器（ｂａｇ）の外部環境と接触する外層を含む多層膜からなり、その３層は、接合層で互いに接合されている。
【０００６】
もし、パウチが生物製剤製品で満たされるなら、コンタクト層は、パウチの膜及び生物製剤製品の分解が引き起こされることなく、この生物製剤製品と接触できる材料から形成されるべきである。さらに、それ自身で密封可能でなければならない。その目的のため、材料は一般的に、ポリエチレンのようなポリオレフィンから選択される。
【０００７】
バリア層は、酸素、二酸化炭素のような気体の通過に対して保護され、典型的には、エチレンビニルアルコール（ＥＶＯＨ）から形成される。
【０００８】
外層は、パウチの壁面の機械的強度に寄与する。その目的のため、高い機械的応力に耐えるのに十分可撓性がなければならないが、製品で満たされる際にパウチの変形を防ぐため、伸縮し過ぎてはならない。
【０００９】
バイオリアクターの分野において、種々の体系は、主に、揺動運動、軌道運動、又は軸運動を含み得る、それらの撹拌方法で異なっている。それゆえ、機械的応力は、ある種の体系から別の体系に代わるとかなり変わり得る。また、液体輸送の分野において、機械的応力はかなり高くなり得る。双方の分野において、これらの機械的応力に耐えることができない膜は、結果として、外部に製品が漏出し得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
それゆえ、液／液撹拌又は固／液撹拌の何れかによる溶液の調製、２Ｄ若しくは３Ｄパウチにおける液体の保管又は運搬、少量も多量も、あらゆる撹拌方法のバイオリアクターのような、広い範囲の適用における使用を可能にするために、種々の機械的応力に耐え得る膜が必要である。
【００１１】
さらに、生物製剤の分野において、使い捨てパウチは、使用前に殺菌されている。殺菌は、一般的に、γ照射又はエチレンオキシド処理の何れかによって実施される。それゆえ、パウチを含む種々の膜に使用される材料は、それらの物理的特性が劣化されることなく、γ線又はエチレンオキシド処理に耐えられなければならない。
【００１２】
コンタクト膜がポリエチレンから形成されるパウチの場合、本願の出願人は、γ照射がパウチの殺菌に使用された場合に、そのパウチにおいて調製される細胞培養の細胞増殖（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｇｒｏｗｔｈ）が、特に、細胞培養の初期に起こる誘導期のために、減速し得ることを発見した。
【００１３】
広範な試験後、さらに、本願の出願人は、コンタクト膜により培地へと放出される化合物であって、パウチをγ照射する間、コンタクト膜の抗酸化剤の分解により生じる化合物が、この誘導期の原因の一部であったことを発見した。
【００１４】
それゆえ、γ照射による殺菌に対して、培地の細胞増殖への影響がないか、或いは限定的である膜が必要とされている。特に、γ照射に対して分解化合物（細胞増殖を妨げ得る分解化合物）をほとんど放出しない膜が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、顕著な機械的特性を示し、これにより広い範囲の適用が可能となり、さらに、γ照射による殺菌に対して細胞増殖への影響がないか、或いは限定的であり、これにより細胞培地を調製、保管、又は運搬するのに特に好適となる使い捨てパウチの多層膜の提供により、これらの全ての要求が満たされる。さらに、本発明の多層膜は、所望の構造に従って容易に組み合わすことができる成分から形成される。
【００１６】
本発明の第一の目的は、パウチの製造に用いる多層膜であって、多層膜が
コンタクト層、
コア層、及び
外層を含み、
コンタクト層及びコア層が第一の接合層により一体化され、
外層及びコア層が第二の接合層により一体化され、
コンタクト層が、（Ａ）０．８７０ｇ／ｃｍ３〜０．９１０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するエチレン及びα−オレフィンの共重合体を単独、又は（Ｂ）０．９１０ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリオレフィンとの混合物で含み、
コア層が、（Ｃ’）２５〜４８ｍｏｌ％の範囲のエチレンを含有する耐屈曲亀裂性エチレンビニルアルコール共重合体、又は（Ｃ）２５〜４８ｍｏｌ％の範囲のエチレンを含有するエチレンビニルアルコール共重合体、及び（Ｄ）アイオノマー酸エチレン共重合体（ｉｏｎｏｍｅｒ  ａｃｉｄ  ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ）の混合物を含み、
外層が、（Ｅ）０．９１０ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリオレフィンを単独、又は（Ｆ）０．８７０ｇ／ｃｍ３〜０．９１０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するエチレン及びα−オレフィンの共重合体との混合物で含み、
第一の接合層及び第二の接合層が、互いに独立して、（Ｇ）カルボン酸若しくはカルボン酸無水物でグラフト化されたポリオレフィンの共重合体を単独、又は（Ｈ）ポリオレフィンの共重合体との混合物で含む。
【００１７】
１つの実施形態において、エチレン及びα−オレフィンの共重合体（Ａ）は、４〜８個の炭素原子を有するポリオレフィンプラストマー、特にメタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体である。
【００１８】
１つの実施形態において、ポリオレフィン（Ｂ）は、エチレンのホモポリマー、特にエチレンの低密度ポリマーである。
【００１９】
１つの実施形態において、エチレンビニルアルコール共重合体（Ｃ）は耐屈曲亀裂性である。
【００２０】
１つの実施形態において、共重合体（Ｄ）は、エチレンアイオノマーのアクリル酸共重合体であり、カルボキシレート基は亜鉛カチオンを伴う。
【００２１】
１つの実施形態において、ポリオレフィン（Ｅ）は、４〜８個の炭素原子を有する１以上のオレフィンとエチレンとの共重合体、特にエチレン及びヘキセンの直鎖状低密度共重合体である。
【００２２】
１つの実施形態において、共重合体（Ｆ）は、４〜８個の炭素原子を有するポリオレフィンプラストマー、特にメタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体である。
【００２３】
１つの実施形態において、共重合体（Ｇ）は、無水マレイン酸でグラフト化されたエチレンの共重合体である。
【００２４】
１つの実施形態において、共重合体（Ｈ）は、４〜８個の炭素原子を有するポリオレフィンプラストマー、特にメタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体である。
【００２５】
１つの実施形態において、コンタクト層は、質量比（Ｂ）／（Ａ）が９５／５以下、好ましくは５／９５〜９５／５の範囲、より好ましくは０．２〜５の範囲、なお一層好ましくは０．２〜２の範囲である（Ａ）及び（Ｂ）の混合物を含む。
【００２６】
１つの実施形態において、コア層は、質量比（Ｃ）／（Ｄ）が９５／５〜５５／４５の範囲、好ましくは１０〜１９の範囲、より好ましくは１５〜１９の範囲である、（Ｃ）２５〜４８ｍｏｌ％の範囲のエチレンを含有するエチレンビニルアルコール共重合体、及び（Ｄ）アイオノマー酸エチレン共重合体の混合物を含む。
【００２７】
１つの実施形態において、外層は、質量比（Ｅ）／（Ｆ）が５／９５以上、好ましくは５／９５〜１００／０の範囲、より好ましくは１〜５の範囲、なお一層好ましくは１〜２．５の範囲である（Ｅ）及び（Ｆ）の混合物を含む。
【００２８】
１つの実施形態において、第一の接合層及び第二の接合層は、互いに独立して、質量比（Ｈ）／（Ｇ）が９５／５以下、好ましくは５／９５〜９５／５の範囲、より好ましくは０．２〜５の範囲、なお一層好ましくは０．２〜２．５の範囲である（Ｇ）及び（Ｈ）の混合物を含む。
【００２９】
１つの実施形態において、コンタクト層は、γ照射に対して、細胞増殖を減速し若しくは遅らせ得る分解化合物を放出可能な、亜リン酸トリス（２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）のような添加剤を含まないか、又は限られた量、好ましくは０．１０ｗｔ％未満、より好ましくは０．０７ｗｔ％未満含有する。
【００３０】
１つの実施形態において、多層膜の任意の層の２つの間に、１つ又は複数の中間層をさらに含む。
【００３１】
本発明の別の目的は、コンタクト層、第一の接合層、コア層、第二の接合層、及び外層を共押出する工程を含む、本発明の多層膜の製造方法である。
【００３２】
本発明の別の目的は、使い捨てパウチであって、その使い捨てパウチの壁面が本発明の多層膜を含む。
【００３３】
本発明の別の目的は、本発明の使い捨てパウチを含むバイオリアクターである。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
特に断らない限り、本願において言及されるポリマーの密度は、Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｔｅｓｔ  Ｍｅｔｈｏｄ  ＡＳＴＭ  Ｄ７９２−０８に従って測定される。
【００３５】
本発明によれば、「一体化され」との表現は、２つの層が直接的に、又は間接的、すなわち１つ若しくは複数の中間層により、一緒に結合されることを意味する。それゆえ、本発明の多層膜は、上で定義された通り、任意の層の２つの間に、１つ又は複数の中間層をさらに含んでもよい。そのような中間層は、以下のポリマー、又はそれらの混合物の中から選択されるポリマーを含んでもよい：
−ポリエチレン（ＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリメチルペンテン（ＰＭＰ）、又はポリブテン−１（ＰＢ−１）等の半結晶性の熱可塑性ポリオレフィン；
−ポリイソブチレン（ＰＩＢ）、エチレン−プロピレン（ＥＰＲ若しくはＥＰＭ）、又はエチレン−プロピレン−ジエンゴム（ＥＰＤＭ）等のポリオレフィン系エラストマー；
−ポリイソブチレン（ＰＩＢ）；
−以下のような、コモノマーとしてエチレンを含むポリマー：
−エチレン−酢酸ビニル（ＥＶＡ）；
−エチレン−アクリル酸メチル（ＥＭＡ）、エチレン−アクリル酸エチル（ＥＥＡ）等のエチレンコポリマー−アクリルエステル；
−エチレン−アクリルエステル−無水マレイン酸（ＥＥＡＭＡ）；又は
−エチレン−ポリビニルアルコール（ＥＶＯＨ）。
【００３６】
本発明において、「層がＸを含む」との表現は、その層が、任意の量でＸを含むか、或いは実質的にＸからなることを意味する。
【００３７】
［コンタクト層］
本発明によれば、コンタクト層は、（Ａ）０．８７０ｇ／ｃｍ３〜０．９１０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するエチレン及びα−オレフィンの共重合体を単独、又は（Ｂ）０．９１０ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリオレフィンとの混合物で含む。
【００３８】
好ましくは、共重合体（Ａ）は、０．８９０ｇ／ｃｍ３〜０．９０５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度、好ましくは０．８９５ｇ／ｃｍ３〜０．９０５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する。
【００３９】
好ましくは、ポリオレフィン（Ｂ）は、０．９１５ｇ／ｃｍ３〜０．９３５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度、好ましくは０．９２０ｇ／ｃｍ３〜０．９３０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する。
【００４０】
前述の通り、コンタクト層は、膜及び生物製剤製品の分解が引き起こされることなく、生物製剤製品と接触できる材料から形成されるべきである。
【００４１】
さらに、それ自身で密封可能でなければならない。その目的のため、０．８７０ｇ／ｃｍ３〜０．９１０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するエチレン及びα−オレフィンの共重合体（Ａ）は、ポリオレフィンプラストマーの中から選択され得る。これらの樹脂は、シングルサイト又はチーグラー−ナッタ触媒反応プロセスの何れかにより生成される。それらは、特にエチレンと、少なくとも３個の炭素原子、好ましくは４〜８個の炭素原子を有する、１−ブテン、１−ヘキセン、又は１−オクテンのような１以上のα−オレフィンとのコポリマー、より具体的にはエチレン及びオクテン、エチレン及びヘキセン、エチレン及びブテン、若しくはエチレン及びプロピレンのコポリマーの中から選択される。エチレン及びα−オレフィンの共重合体（Ａ）は、より好ましくは、一般的にｍＬＬＤＰＥ−Ｃ８と呼ばれる、メタロセン触媒を利用する処理から生成された、エチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体である。
【００４２】
好適なコポリマー（Ａ）は、ＡＦＦＩＮＩＴＹ（登録商標）若しくはＥＮＧＡＧＥ（登録商標）の商標でＤｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙより、又はＥＸＡＣＴ（登録商標）の商標でＥｘｘｏｎＭｏｂｉｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌより市販されている。
【００４３】
コンタクト層の加工を滑らかにし、固着効果を低減するために、共重合体（Ａ）は０．９１０ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリオレフィン（Ｂ）と混合されてもよい。ポリマー（Ｂ）は、オレフィンのホモポリマー又はコポリマー、好ましくはエチレンのホモポリマーの中から選択されてもよい。ポリオレフィン（Ｂ）は、より好ましくは、一般的にＬＤＰＥと呼ばれている、エチレンの低密度ポリマーである。好適なポリオレフィン（Ｂ）は、例えば、ＬＵＰＯＬＥＮ（登録商標）（より正確に言えばＬＵＰＯＬＥＮ（登録商標）２４２６ＨＫ）の商標でＬｙｏｎｄｅｌｌＢａｓｅｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓより、又はＤＯＷ  ＬＤＰＥ（登録商標）の名前でＤＯＷ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙより市販されている。
【００４４】
コンタクト層の可撓性、密封性、及び固着効果は、（Ａ）及び（Ｂ）の割合を調整することにより制御される。
【００４５】
１つの実施形態において、コンタクト層は、質量比（Ｂ）／（Ａ）が９５／５以下の、好ましくは５／９５〜９５／５の範囲である（Ａ）及び（Ｂ）の混合物を含む。
【００４６】
可撓性、密封性、及び固着効果の間の好適な妥協点であり、従って広い範囲の適用を可能にするため、質量比（Ｂ）／（Ａ）は、０．２〜５の範囲、好ましくは０．２〜２の範囲であってもよい。
【００４７】
コンタクト層は、ポリマーを保護するための抗酸化剤（３−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸ステアリル、ペンタエリトリトールテトラキス［３−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）プロピオナート］、亜リン酸トリス（２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）、ブチルヒドロキシトルエン、１，３，５−トリス（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンジル）−ｓ−トリアジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオン、ビス［３，３−ビス［３−（１，１−ジメチルエチル）−４−ヒドロキシフェニル］ブタン酸］エチレン）、又は層の加工を補助するための粘着防止剤（二酸化ケイ素、ケイ酸マグネシウム、炭酸カルシウム、ステアリン酸カルシウム、エチレンビスステアロアミド、ステアリルエルカ酸アミド、ステアルアミド、エルカ酸アミド、モノステアリン酸グリセロール、ステアリン酸亜鉛、若しくはシリコーン等）のような、１以上の従来の添加剤を含有してもよい。好ましくは、添加剤は、ヨーロッパ薬局方６．０、非経口の調剤用及び眼科の調剤用の容器のための添加剤を有する、３．１．３ポリオレフィン又は３．１．５ポリエチレンに従うべきである。好ましくは、コンタクト層における添加剤の量は、０．５０ｗｔ％未満、好ましくは０．１０ｗｔ％未満、より好ましくは０．０７ｗｔ％未満とすべきである。
【００４８】
もし、コンタクト層が細胞培地と接触することを意図しているなら、コンタクト層は、スリップ剤を、或いは可塑剤としてフタレートを含有すべきではない。なぜなら、これらの添加剤が、層の表面に移動しやすい小さい分子量の分子を含有し、これにより細胞培地を汚染するからである。
【００４９】
さらに、コンタクト層は、２５ｋＧｙ〜５０ｋＧｙの範囲のγ照射に対して、細胞増殖を減速し又は遅らせ得る分解化合物を放出し得る添加剤を含有すべきではなく、或いは含有しても限られた量（０．１０ｗｔ％未満、好ましくは０．０７ｗｔ％未満）とすべきである。
【００５０】
細胞増殖を減速し又は遅らせ得るそのような分解化合物は、Ｒｅｎｏｌｉｔより市販されちるＥＶＡフィルムＢＦ１４００のような制御した膜（細胞増殖を遅らせ又は減速させない）と比較して、Ｐｅｒ−Ｃ６細胞株を用いて、７日間、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｔｅｄｉｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈ製Ｂｉｏｓｔａｔ（登録商標）Ｃｕｌｔｉｂａｇ  ＲＭシステムにおいて膜の試験をすることにより検出されてもよい。
【００５１】
誘導期が少なくとも２４時間である場合、細胞増殖は減速し又は遅れると考えられている。
【００５２】
そのような分解化合物は抗酸化剤から放出され得る。抗酸化剤は、熱、光、触媒残留物のような不純物、又は機械的応力により開始され得るポリマー分解を防ぐために使用される。
【００５３】
コンタクト層は、好ましくは、抗酸化剤を含有しないか、或いは０．３ｗｔ％未満（好ましくは０．１０ｗｔ％未満、より好ましくは０．０７ｗｔ％未満）の限られた量含有する。そのような酸化剤の例を表１に示す。
【００５４】
【表１】
0006362620.tif 000002
【００５５】
抗酸化剤は、分解プロセスを停止させるのに用いられるメカニズムに依存して、主要なものと副次的なものの２種類に分類される。細胞増殖を減速し又は遅らせ得る分解化合物は、フェノール系の抗酸化剤又は亜リン酸エステル系の抗酸化剤のような、主要な抗酸化剤及び副次的な抗酸化剤から放出され得る。
【００５６】
特に、コンタクト層は、副次的な抗酸化剤を含有しないか、或いは限られた量（０．０１ｗｔ％未満）の副次的な抗酸化剤、好ましくは亜リン酸トリス（２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）のような亜リン酸エステル系の抗酸化剤を含有する。
【００５７】
以下の通り、亜リン酸トリス（２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）は、γ照射下で、分解化合物を放出しながらリン酸塩に変化する。
【００５８】
【化１】
0006362620.tif 000003
【００５９】
コンタクト層の厚さは、１５０μｍ〜３００μｍ、好ましくは２００〜２５０μｍ、より好ましくは２２５μｍ〜２４５μｍである。
【００６０】
コンタクト層は押出により製造されてもよい。好ましくは、コンタクト層は、細胞培地に対して不活性なコンタクト層を形成するためにシリコーンを使用することなく、多層膜の他の層と共に押出することにより製造される。
【００６１】
［コア層］
本発明によれば、コア層は、（Ｃ’）２５〜４８ｍｏｌ％の範囲のエチレンを含有する耐屈曲亀裂性エチレンビニルアルコール共重合体、又は（Ｃ）２５〜４８ｍｏｌ％の範囲のエチレンを含有するエチレンビニルアルコール共重合体、及び（Ｄ）アイオノマー酸エチレン共重合体の混合物を含む。
【００６２】
耐屈曲亀裂性（ｆｌｅｘ  ｃｒａｃｋ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）は、Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｔｅｓｔ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｆｌｅｘ  Ｄｕｒａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｆｌｅｘｉｂｌｅ  Ｂａｒｒｉｅｒ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ＡＳＴＭ  Ｆ３９２（２００４）に従って測定される。本発明によれば、材料は、ＡＳＴＭ  Ｆ３９２（膜サンプル：３０μｍ単一層、試験条件：２３℃、Ｇｅｌｂｏ  ｆｌｅｘ  ｔｅｓｔｅｒ：４４０°ねじり運動）の方法に従って１００サイクル後に測定されたピンホールの数が３０以下であれば、耐屈曲亀裂性であるとする。コア層にそのようなポリマーを導入することによって、多層膜を機械的応力により強くするということが見出された。
【００６３】
２５〜４８ｍｏｌ％の範囲のエチレンを含有するエチレンビニルアルコール共重合体（Ｃ）又は（Ｃ’）は、酸素、二酸化炭素のような気体の通過を妨げるのに使用される。エチレンビニルアルコールコポリマーは、一般的にＥＶＯＨである。好ましくは、共重合体（Ｃ）又は（Ｃ’）におけるエチレンの含有量は、２９〜４４ｍｏｌ％、最も好ましくは約２９〜３８ｍｏｌ％の範囲である。エチレン含有量が２５〜４８ｍｏｌ％である、好適なＥＶＯＨは、例えば、ＳＯＡＲＮＯＬ（登録商標）の商標でＮｉｐｐｏｎ  Ｇｏｓｈｅｉより市販されている。エチレン含有量が２７〜４８ｍｏｌ％である好適なＥＶＯＨは、例えば、ＥＶＡＬ（登録商標）の商標でＫｕｒａｒａｙより市販されている。
【００６４】
有利なことに、共重合体（Ｃ）は耐屈曲亀裂性である。
【００６５】
好ましくは、耐屈曲亀裂性ポリマー（Ｃ）又は（Ｃ’）は、ねじれ運動（ｔｏｒｓｉｏｎ）又はねじれを適用した運動（ｔｗｉｓｔｉｎｇ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｍｏｖｅｍｅｎｔｓ）の間や、その後でさえも、気体の通過を妨げる特性が維持されている。
【００６６】
共重合体（Ｃ）又は（Ｃ’）において、エチレンの含有量が低いほど、層において気体の通過を妨げる特性は高くなるが、同時にコア層は硬くなる。もしコア層が硬過ぎるなら、亀裂や、多層膜内で層間剥離が生じ得る。
【００６７】
亀裂又は層間剥離のリスクを限定するため、共重合体（Ｃ）は、バリア層の機械的応力を吸収するのに役立つアイオノマー酸エチレン共重合体（Ｄ）と混合される。共重合体（Ｄ）は、共重合体（Ｃ）と容易に混合し、接合層との良好な親和性を示すため、特に好適である。
【００６８】
「アイオノマー酸エチレン共重合体」は、亜鉛又はナトリウムイオンのような金属塩を用いて部分的に中和された、酸エチレン共重合体を意味する。好適なコポリマー（Ｄ）は、エチレンアイオノマーのアクリル酸コポリマーを含み、カルボキシレート基は亜鉛カチオンを伴っている。そのようなコポリマーは、例えば、ＳＵＲＬＹＮ（登録商標）の商標でＤｕＰｏｎｔ  Ｐａｃｋａｇｉｎｇ  ＆  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓより、又はＡＭＰＬＩＦＹ（登録商標）ＩＯの商標でＤｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙより市販されている。
【００６９】
膜の可撓性及びガスバリア効果は、（Ｃ）及び（Ｄ）の割合を調整することにより制御できる。
【００７０】
１つの実施形態において、コア層は、質量比（Ｃ）／（Ｄ）が９５／５〜５５／４５の範囲である、（Ｃ）２５〜４８ｍｏｌ％の範囲のエチレンを含有するエチレンビニルアルコール共重合体及び（Ｄ）アイオノマー酸エチレン共重合体の混合物を含む。
【００７１】
可撓性及びガスバリア効果の間の好適な妥協点であり、故に広い範囲の適用を可能にするため、質量比（Ｃ）／（Ｄ）は、１０〜１９の範囲、好ましくは１５〜１９の範囲であってもよい。
【００７２】
コア層の厚さは、５μｍ〜５０μｍ、好ましくは１５〜４０μｍ、より好ましくは２０μｍ〜３０μｍである。
【００７３】
コア層は押出により製造されてもよい。好ましくは、コア層は、細胞培地に対して不活性なコンタクト層を形成するためにシリコーンを使用することなく、多層膜の他の層と共に押出することにより製造される。
【００７４】
［外層］
本発明において、外層は、（Ｅ）０．９１０ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリオレフィンを単独、又は（Ｆ）０．８７０ｇ／ｃｍ３〜０．９１０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するエチレン及びα−オレフィンの共重合体との混合物で含む。
【００７５】
好ましくは、ポリオレフィン（Ｅ）は、０．９２５ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度、より好ましくは０．９３０ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する。
【００７６】
好ましくは、共重合体（Ｆ）は、０．８９０ｇ／ｃｍ３〜０．９０５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度、より好ましくは０．８９５ｇ／ｃｍ３〜０．９０５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する。
【００７７】
０．９１０ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するポリオレフィン（Ｅ）は、オレフィンのホモポリマー又はコポリマー、好ましくはエチレンのコポリマーの中から選択されてもよい。エチレンの直鎖状低密度共重合体は、引張応力に対して良好な機械抵抗を示すため、特に好適である。好ましいポリオレフィン（Ｅ）は、エチレンと、ブテン、ヘキセン、又はオクテンのような少なくとも３個の炭素原子、好ましくは４〜８個の炭素原子を有する１以上のオレフィンとのコポリマーを含む。ポリオレフィン（Ｅ）は、より好ましくは、一般的にＬＬＤＰＥ−Ｃ６と呼ばれている、エチレン及びヘキセンの直鎖状低密度共重合体である。好適なポリオレフィン（Ｅ）は、例えば、ＩＮＥＯＳ  ＬＬＤＰＥ（より正確に言えばＩＮＥＯＳ  ＬＬＤＰＥ  ＬＬ６９３０ＡＡ）の名前でＩＮＥＯＳより、又はＤＯＷＬＥＸ（商標）（より正確に言えばＤＯＷＬＥＸ（商標）ＳＣ  ２１０８Ｇ）の商標でＤＯＷ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙより市販されている。
【００７８】
０．８７０ｇ／ｃｍ３〜０．９１０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するエチレン及びα−オレフィンのコポリマー（Ｆ）は、ポリオレフィンプラストマーの中から選択されてもよい。これらの樹脂は、シングルサイト又はチーグラー−ナッタ触媒反応プロセスの何れかにより生成される。それらは、特に、エチレンと、少なくとも３個の炭素原子、好ましくは４〜８個の炭素原子を有する、１−ブテン、１−ヘキセン、又は１−オクテンのような１以上のα−オレフィンとのコポリマー、より具体的には、エチレン及びオクテン、エチレン及びヘキセン、エチレン及びブテン、若しくはエチレン及びプロピレンのコポリマーの中から選択されてもよい。エチレン及びα−オレフィンの共重合体（Ｆ）は、より好ましくは、一般的にｍＬＬＤＰＥ−Ｃ８と呼ばれる、メタロセン触媒を利用する処理から生成された、エチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体である。好適なポリオレフィン（Ｆ）は、例えば、ＡＦＦＩＮＩＴＹ（登録商標）若しくはＥＮＧＡＧＥ（登録商標）の商標でＤｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙより、又はＥＸＡＣＴ（登録商標）の商標でＥｘｘｏｎＭｏｂｉｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌより市販されている。
【００７９】
外層はパウチ壁面の機械的強度に寄与する。その目的のため、高い機械的応力に耐えるのに十分可撓性がなければならないが、製品で満たされる際に、パウチの変形を防ぐために伸縮し過ぎてはならず、すなわち十分に剛性がなければならない。
【００８０】
ポリオレフィン（Ｅ）は、膜に所望の剛性を与え、一方、共重合体（Ｆ）は、膜に機械的強度に対する耐性、特に、ねじれの負荷に対する耐性を与える。膜の可撓性及び剛性は、（Ｅ）及び（Ｆ）の割合を良好に調整することにより制御できる。
【００８１】
ある適用においては、膜がパウチに収容される液体の圧力に耐え得るべきである（例えば、多量の液体を有する）場合、ポリオレフィン（Ｅ）の量を共重合体（Ｆ）よりも多くすることが好ましい。
【００８２】
他の適用においては、膜が屈曲及び機械的な負荷に耐えるべきである場合、共重合体（Ｆ）量をポリオレフィン（Ｅ）よりも多くすることが好ましいだろう。
【００８３】
１つの実施形態において、外層は、質量比（Ｅ）／（Ｆ）が５／９５以上、好ましくは５／９５〜１００／０の範囲である（Ｅ）及び（Ｆ）の混合物を含む。
【００８４】
可撓性及び剛性の間の好適な妥協点であり、従って広い範囲の適用を可能にするため、質量比（Ｅ）／（Ｆ）は、１〜５の範囲、好ましくは１〜２．５の範囲であってもよい。
【００８５】
外層は、ポリマーを保護するため、抗酸化剤（３−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸ステアリル、プロピオナート−ペンタエリトリトールテトラキス［３−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）プロピオナート］、亜リン酸トリス（２，４−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）、ブチルヒドロキシトルエン、１，３，５−トリス（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンジル）−ｓ−トリアジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオン、ビス［３，３−ビス［３−（１，１−ジメチルエチル）−４−ヒドロキシフェニル］ブタン酸］エチレン）のような、又は層の加工を補助するため、粘着防止剤（二酸化ケイ素、ケイ酸マグネシウム、炭酸カルシウム、ステアリン酸カルシウム、エチレンビスステアロアミド、ステアリルエルカ酸アミド、ステアルアミド、エルカ酸アミド、モノステアリン酸グリセロール、ステアリン酸亜鉛、若しくはシリコーン等）のような、１以上の従来の添加剤を含有してもよい。好ましくは、添加剤は、ヨーロッパ薬局方６．０、非経口の調剤用及び眼科の調剤用の容器のための添加剤を有する、３．１．３ポリオレフィン又は３．１．５ポリエチレンに従うべきである。好ましくは、コンタクト層における添加剤の量は、０．５０ｗｔ％未満、好ましくは０．１０ｗｔ％未満、より好ましくは０．０７ｗｔ％未満とすべきである。
【００８６】
好ましくは、添加剤は、γ照射で分解されやすい何れの化合物も含有しない組成物の中から選択される。
【００８７】
外層の厚さは、５０μｍ〜１５０μｍ、特に５５μｍ〜１５０μｍ、好ましくは８０〜１２０μｍ、より好ましくは９０μｍ〜１１０μｍである。
【００８８】
外層は押出により製造されてもよい。好ましくは、外層は、細胞培地に対して不活性なコンタクト層を形成するためにシリコーンを使用することなく、多層膜の他の層と共に押出することにより製造される。
【００８９】
［接合層］
本発明によれば、第一の接合層及び第二の接合層は、互いに独立して、（Ｇ）カルボン酸若しくはカルボン酸無水物でグラフト化されたポリオレフィンの共重合体を単独、又は（Ｈ）ポリオレフィンの共重合体との混合物で含む。
【００９０】
接合層は、コンタクト層、コア層、及び外層の間を互いに密封し、パウチの使用中、これらの層の剥離を防ぐことができる。
【００９１】
１つの実施形態において、ポリオレフィン（Ｇ）は、０．８７５ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する。
【００９２】
１つの実施形態において、ポリオレフィン（Ｈ）は、０．８７０ｇ／ｃｍ３〜０．９１０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する。
【００９３】
１つの実施形態において、第一の接合層及び第二の接合層は、同一の組成物を有する。
【００９４】
結合特性は、カルボン酸又はカルボン酸無水物でグラフト化されたポリオレフィンの共重合体である共重合体（Ｇ）により与えられる。カルボン酸又はカルボン酸無水物でグラフト化された、ポリオレフィンの共重合体は、好ましくはエチレンの共重合体、より具体的には、無水マレイン酸でグラフト化された、エチレンと、少なくとも３個の炭素原子、好ましくは４〜８個の炭素原子を有する、ブテン、ヘキセン、又はオクテンのような１以上のオレフィンとの共重合体である。より好ましくは、ポリマー（Ｇ）は、無水マレイン酸でグラフト化された、エチレンの共重合体である。好適なポリマー（Ｇ）は、例えば、ＢＹＮＥＬ（登録商標）の商標でＤｕｐｏｎｔより、又はＡＭＰＬＩＦＹ（商標）ＴＹ若しくはＡＭＰＬＩＦＹ（商標）ＧＲの商標で、Ｄｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙより市販されている。
【００９５】
コンタクト層、コア層、及び外層との良好な親和性のため、及び膜の良好な可撓性のため、ポリマー（Ｇ）は共重合体（Ｈ）と混合される。
【００９６】
共重合体（Ｈ）は、ポリオレフィンプラストマーの中から選択されてもよい。これらの樹脂は、シングルサイト又はチーグラー−ナッタ触媒反応プロセスの何れかにより生成される。それらは、特に、エチレンと、少なくとも３個の炭素原子、好ましくは４〜８個の炭素原子を有する、１−ブテン、１−ヘキセン、又は１−オクテンのような１以上のα−オレフィンとのコポリマー、より具体的には、エチレン及びオクテン、エチレン及びヘキセン、エチレン及びブテン、若しくはエチレン及びプロピレンのコポリマーの中から選択されてもよい。エチレン及びα−オレフィンの共重合体（Ｈ）は、より好ましくは、一般的にｍＬＬＤＰＥ−Ｃ８と呼ばれる、メタロセン触媒を利用する処理から生成された、エチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体である。好適なポリオレフィン（Ｈ）は、例えば、ＡＦＦＩＮＩＴＹ（登録商標）若しくはＥＮＧＡＧＥ（登録商標）の商標でＤｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙより、又はＥＸＡＣＴ（登録商標）の商標でＥｘｘｏｎＭｏｂｉｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌより市販されている。
【００９７】
１つの実施形態において、第一の接合層及び第二の接合層は、互いに独立して、質量比（Ｈ）／（Ｇ）が９５／５未満、好ましくは５／９５〜９５／５の範囲である（Ｇ）及び（Ｈ）の混合物を含む。
【００９８】
可撓性及び密封性の間の好適な妥協点であり、従って広い範囲の適用を可能にするため、質量比（Ｈ）／（Ｇ）は、０．２〜５の範囲、好ましくは０．２〜２．５の範囲であってもよい。
【００９９】
接合層の厚さは、５μｍ〜５０μｍ、好ましくは１０〜３０μｍ、より好ましくは１５μｍ〜２５μｍである。
【０１００】
接合層は押出により製造されてもよい。好ましくは、接合層は、細胞培地に対して不活性なコンタクト層を形成するためにシリコーンを使用することなく、多層膜の他の層と共に押出することにより製造される。
【０１０１】
［多層膜］
本発明の多層膜は、コンタクト層、コア層、及び外層を含み、コンタクト層及びコア層は第一の接合層により一体化され、外層及びコア層は第二の接合層により一体化され、それらの層はこれまでに画定された通りである。
【０１０２】
１つの特定の実施形態において、本発明の多層膜は、
コンタクト層、
コア層、
外層、及び
２つの接合層を含み、
コンタクト層及びコア層が第一の接合層により一体化され、
外層及びコア層が第二の接合層により一体化され、
コンタクト層が、０．８９５ｇ／ｃｍ３〜０．９０５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する、メタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体のような、（Ａ）４〜８個の炭素原子を有するポリオレフィンプラストマーを含み、
コア層が、質量比（Ｃ）／（Ｄ）が１５〜１９の範囲である、（Ｃ）２５〜４８ｍｏｌ％の範囲のエチレンを含有するエチレンビニルアルコール共重合体、及び（Ｄ）アイオノマー酸エチレン共重合体の混合物を含み、
外層が、（Ｅ）０．９３０ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する、エチレン及びヘキセンの直鎖状低密度共重合体を含み、
第一の接合層及び第二の接合層が、互いに独立して（Ｇ）無水マレイン酸でグラフト化されたエチレンの共重合体を含む。
【０１０３】
好ましい実施形態において、前述の多層膜の共重合体（Ｃ）は耐屈曲亀裂性である。
【０１０４】
１つの特定の実施形態において、本発明の多層膜は、
コンタクト層、
コア層、
外層、及び
２つの接合層を含み、
コンタクト層及びコア層が第一の接合層により一体化され、
外層及びコア層が第二の接合層により一体化され、
コンタクト層が、０．８９５ｇ／ｃｍ３〜０．９０５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する、メタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体のような、（Ａ）４〜８個の炭素原子を有するポリオレフィンプラストマーを含み、
コア層が、（Ｃ’）２５〜４８ｍｏｌ％の範囲のエチレンを含有する耐屈曲亀裂性エチレンビニルアルコール共重合体を含み、
外層が、（Ｅ）０．９３０ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する、エチレン及びヘキセンの直鎖状低密度共重合体を含み、
第一の接合層及び第二の接合層が、互いに独立して（Ｇ）無水マレイン酸でグラフト化されたエチレンの共重合体を含む。
【０１０５】
別の特定の実施形態において、本発明の多層膜は、
コンタクト層、
コア層、
外層、及び
２つの接合層を含み、
コンタクト層及びコア層が第一の接合層により一体化され、
外層及びコア層が第二の接合層により一体化され、
コンタクト層が、質量比（Ｂ）／（Ａ）が０．２〜２の範囲である、（Ａ）０．８９５ｇ／ｃｍ３〜０．９０５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する、４〜８個の炭素原子を有するポリオレフィンプラストマー、特に、メタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体と、（Ｂ）０．９２０ｇ／ｃｍ３〜０．９３０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するエチレンの低密度ポリマーとの混合物を含み、
コア層が、質量比（Ｃ）／（Ｄ）が１５〜１９の範囲である、（Ｃ）２５〜４８ｍｏｌ％の範囲のエチレンを含有するエチレンビニルアルコール共重合体、及び（Ｄ）アイオノマー酸エチレン共重合体の混合物を含み、
外層が、（Ｅ）０．９３０ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する、エチレン及びヘキセンの直鎖状低密度共重合体を含み、
第一の接合層及び第二の接合層が、互いに独立して、質量比（Ｈ）／（Ｇ）が０．２〜２．５の範囲である、（Ｇ）無水マレイン酸でグラフト化されたエチレンの共重合体と、（Ｈ）４〜８個の炭素原子を有するポリオレフィンプラストマー、特に、メタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体との混合物を含む。
【０１０６】
好ましい実施形態において、前述の多層膜の共重合体（Ｃ）は耐屈曲亀裂性である。
【０１０７】
別の特定の実施形態において、本発明の多層膜は、
コンタクト層、
コア層、
外層、及び
２つの接合層を含み、
コンタクト層及びコア層が第一の接合層により一体化され、
外層及びコア層が第二の接合層により一体化され、
コンタクト層が、質量比（Ｂ）／（Ａ）が０．２〜２の範囲である、（Ａ）０．８９５ｇ／ｃｍ３〜０．９０５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する、４〜８個の炭素原子を有するポリオレフィンプラストマー、特に、メタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体と、（Ｂ）０．９２０ｇ／ｃｍ３〜０．９３０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有するエチレンの低密度ポリマーとの混合物を含み、
コア層が、質量比（Ｃ）／（Ｄ）が１５〜１９の範囲である、（Ｃ）２５〜４８ｍｏｌ％の範囲のエチレンを含有するエチレンビニルアルコール共重合体、及び（Ｄ）アイオノマー酸エチレン共重合体の混合物を含み、
外層が、質量比（Ｅ）／（Ｆ）が１〜２．５の範囲である、（Ｅ）０．９３０ｇ／ｃｍ３〜０．９４０ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する、エチレン及びヘキセンの直鎖状低密度共重合体と、（Ｆ）０．８９５ｇ／ｃｍ３〜０．９０５ｇ／ｃｍ３の範囲の密度を有する、４〜８個の炭素原子を有するポリオレフィンプラストマー、特に、メタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体との混合物を含み、
第一の接合層及び第二の接合層が、互いに独立して、質量比（Ｈ）／（Ｇ）が０．２〜２．５の範囲である、（Ｇ）無水マレイン酸でグラフト化されたエチレンの共重合体と、（Ｈ）４〜８個の炭素原子を有するポリオレフィンプラストマー、特に、メタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体との混合物を含む。
【０１０８】
好ましい実施形態において、前述の多層膜の共重合体（Ｃ）は耐屈曲亀裂性である。
【０１０９】
層は、鋳造若しくは中空押出（ｂｌｏｗ  ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ）のような押出若しくは共押出、押出コーティング、押出コーティング、及び積層、又はこれらの組合せを含む、当業者に周知である標準の押出技術、例えば、少なくとも２つの層を共押出し、次いで別の層上にコーティングすることにより、又は少なくとも２つの層を共押出し、別の層を押出し、次いで共押出層及び押出層を一緒にコーティング及び積層することによって多層膜に加工されてもよい。
【０１１０】
好ましくは、多層膜は共押出処理を用いて製造される。
【０１１１】
従って、本発明の別の目的は、上記の通り、多層膜の製造方法であって、コンタクト層、第一の接合層、コア層、第二の接合層、及び外層の共押出を含む。
【０１１２】
その方法は、許容できないレベルに抽出物（ｅｘｔｒａｃｔａｂｌｅｓ）を増加させ得るスリップ剤、及び他の低分子量の添加剤を含まずに実施されるべきである。
【０１１３】
本発明に係る多層膜は、２Ｄパウチ又は３Ｄパウチを含む使い捨てパウチを製造するのに特に適している。
【０１１４】
従って、本発明の別の目的は、上記の通り、使い捨てパウチであって、その使い捨てパウチの壁面が多層膜を含む。
【０１１５】
その目的のため、多層膜の厚さは、２００μｍ〜５００μｍ、好ましくは３００〜４５０μｍ、より好ましくは３５０μｍ〜４５０μｍである。
【０１１６】
本発明の多層膜は種々の機械的応力に耐えることができ、液／液撹拌又は固／液撹拌の何れかによる溶液の調製、２Ｄ若しくは３Ｄパウチにおける液体の保管又は運搬、少量も多量も、あらゆる撹拌方法のバイオリアクターのような、広い範囲の適用において使用可能となる。
【０１１７】
そのようなパウチは、当業者に周知の標準技法に従って製造されてもよい。
【０１１８】
本発明の多層膜は、γ照射による殺菌に対して培地の細胞増殖への影響がないか、或いは限定的であるため、細胞培地又は細胞培養に用いることを意図した使い捨てパウチを製造するのに特に適している。特に、本発明の多層膜のコンタクト層は、γ照射に対して、細胞増殖を妨げ得る分解化合物を放出しないか、放出しても限られた量である。
【図面の簡単な説明】
【０１１９】
【図１】図１は、時間の関数とした培地の細胞密度を表し、本発明に係る多層膜で形成されたパウチにおいて増殖する培地を、先行技術（ＥＶＡコンタクト層）のパウチにおいて増殖する培地と比較した。
【０１２０】
ここで、以下の実施例において本発明をさらに説明する。これらの実施例は、本発明を説明するために示されものであり、決して本発明を限定して解釈するべきものではない。
【実施例】
【０１２１】
［実施例１：多層膜］
４００μｍの厚さを有する多層膜を、本発明の教示に従って、調製し、共押出した。その多層膜は、
９８ｗｔ％のＬＬＤＰＥ−Ｃ６（密度０．９３６ｇ／ｃｍ３）及び２ｗｔ％の粘着防止樹脂を含む、厚さ１００μｍの外層、
９５ｗｔ％のＥＶＯＨ（エチレン含量３８％ｍｏｌ）及び５ｗｔ％のＰＥ亜鉛アイオノマー（密度０．９５０ｇ／ｃｍ３）を含む、厚さ２５μｍのコア層、
６８ｗｔ％のｍＬＬＤＰＥ−Ｃ８（密度０．９０２ｇ／ｃｍ３）、３０ｗｔ％の添加剤を含まないＬＤＰＥ（密度０．９２３ｇ／ｃｍ３）、及び２ｗｔ％の粘着防止樹脂を含む、厚さ２３５μｍのコンタクト層、
７０ｗｔ％のｍＬＬＤＰＥ−Ｃ８（密度０．９０２ｇ／ｃｍ３）及び３０ｗｔ％のＬＬＤＰＥ−ＭＡＨを含む、コンタクト層とコア層との間の第一の接合層、及び
７０ｗｔ％のｍＬＬＤＰＥ−Ｃ８（密度０．９０２ｇ／ｃｍ３）及び３０ｗｔ％のＬＬＤＰＥ−ＭＡＨを含む、コンタクト層とコア層との間の第二の接合層を有する。
ＬＬＤＰＥ−Ｃ６＝エチレン及びヘキセンの直鎖状低密度共重合体
ＥＶＯＨ＝エチレンビニルアルコールポリマー
ＰＥ亜鉛アイオノマー＝カルボキシレート基が亜鉛カチオンを伴う、エチレンのアクリル酸コポリマーアイオノマー
ｍＬＬＤＰＥ−Ｃ８＝メタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体
ＬＬＤＰＥ−ＭＡＨ＝無水マレイン酸でグラフト化されたエチレンの直鎖状低密度共重合体
ＬＤＰＥ＝エチレンの低密度ポリマー
【０１２２】
［実施例２：機械的応力試験］
（２．１．軌道運動する撹拌台（Ｓｔｉｒｒｉｎｇ  ｔａｂｌｅ））
実施例１の多層膜（膜Ｎｏ．１）で形成された２Ｄパウチ（容積１０リットル）を１０リットルの水で満たし、軌道運動する撹拌台に載置した。撹拌速度は１４０ｒｐｍであった。その試験はパウチ外へ液体が漏出するまで実施された。漏出は１．１時間後（標準偏差＝０．３）に生じた。
【０１２３】
コア層が耐屈曲亀裂性ＥＶＯＨ（密度１．１２ｇ／ｃｍ３）を含有していることを除いて、膜Ｎｏ．１の１つと同様の多層膜で形成された２Ｄパウチ（膜Ｎｏ．２）を、同じ条件下で試験した。漏出は１．５時間後（標準偏差＝０．３）に生じた。
【０１２４】
外層が３０ｗｔ％のｍＬＬＤＰＥ−Ｃ８（密度０．９０２ｇ／ｃｍ３）、６８ｗｔ％のＬＬＤＰＥ−Ｃ６（密度０．９３６ｇ／ｃｍ３）、及び２ｗｔ％の粘着防止樹脂を含有していることを除いて、膜Ｎｏ．２の１つと同様用の多層膜で形成された２Ｄパウチ（膜Ｎｏ．３）を、同じ条件下で試験した。漏出は２．１時間後（標準偏差＝０．７）に生じた。
【０１２５】
この実施例は、耐屈曲亀裂性ＥＶＯＨのコア層への使用が膜を機械的応力により強くする（漏出までの時間を３６％まで増加させる）ことを示している。
【０１２６】
さらに、この実施例は、高密度のポリオレフィンに対して低密度のエチレン及びα−オレフィンの共重合体（０．８７０ｇ／ｃｍ３〜０．９１０ｇ／ｃｍ３の範囲、特に０．９０２ｇ／ｃｍ３）の、外層への添加が膜を機械的応力になお一層強くする（漏出までの時間を４０％まで増加させる）ことを示している。
【０１２７】
耐屈曲亀裂性ＥＶＯＨのコア層への使用と、低密度のエチレン及びα−オレフィンの共重合体の外層への添加とで、漏出が生じるまでの時間を９０％まで増加させる。
【０１２８】
（２．２．ロッキング運動）
２００リットル容積の３種のパウチを、上記の通り、膜Ｎｏ．１、膜Ｎｏ．２、及び膜Ｎｏ．３で形成し、１００リットルの水で満たし、２０ｒｐｍの速度及び１０°の角度で動かした。その試験を２１日間実施した。
【０１２９】
膜Ｎｏ．１で形成したパウチに関しては、５日後に漏出が生じた。
【０１３０】
膜Ｎｏ．２及び３で形成したパウチに関しては、２１日後に漏出が生じなかった。
【０１３１】
この実施例は、実施例２．１において得られた結果を実証した。
【０１３２】
［実施例３：細胞密度］
１０リットルの３種の容器を、３種の異なる膜Ａ、Ｂ、及びＣで製造した。
【０１３３】
膜Ａは、照会番号ＢＦ１４００（Ｒｅｎｏｌｉｔ製）で市販されている。ＥＶＡコンタクト層を含む。
【０１３４】
膜Ｂ及びＣは、コンタクト層、コア層、外層、及び２つの接合層を含む本発明に係る多層膜である。膜Ｂ及びＣは、コンタクト層を除いて同一である。
【０１３５】
膜Ｂの厚さは４００μｍである。コンタクト層は、厚さが２３５μｍであり、ｍＬＬＤＰＥ−Ｃ８（密度０．９０２ｇ／ｃｍ３）、及び０．１２ｗｔ％未満の、γ照射に対して細胞増殖を減速し又は遅らせ得る分解化合物を放出し得る添加剤を含む。
【０１３６】
膜Ｃの厚さは４００μｍである。コンタクト層は、厚さが２３５μｍであり、ｍＬＬＤＰＥ−Ｃ８（密度０．９０２ｇ／ｃｍ３）と、添加剤を含まないＬＤＰＥ（密度０．９２３ｇ／ｃｍ３）との混合物、及び最大０．０６ｗｔ％のγ照射に対して細胞増殖を減速し又は遅らせ得る分解化合物を放出し得る添加剤を含む。
ｍＬＬＤＰＥ−Ｃ８＝メタロセン触媒を利用する処理から生成されたエチレン及び１−オクテンの直鎖状低密度共重合体
ＬＤＰＥ＝エチレンの低密度ポリマー（ＩＮＥＯＳ製ＩＮＥＯＳ  ＥＬＴＥＸ  ＭＥＤ  ＰＨ２３Ｈ６３０）
【０１３７】
前述の３種の膜を用いて形成した、Ｃｕｌｔｉｂａｇ  ＲＭ  １０Ｌ  Ｏｐｔｉｃａｌ仕様（ｄｅｓｉｇｎ）において、細胞培養を実施し、２５〜４０ｋＧｙでγ照射した。
【０１３８】
同時に、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｔｅｄｉｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈ製Ｂｉｏｓｔａｔ（登録商標）Ｃｕｌｔｉｂａｇ  ＲＭシステムにより、Ｐｅｒ−Ｃ６細胞株を用いて、７日間、細胞培養を実施した。
【０１３９】
増殖挙動を追うために、異なる日付でのサンプリングにより細胞密度を測定した。
【０１４０】
図１は、時間の関数とした細胞密度を表す。
―◆―  膜Ａで形成された容器における細胞培養
―○―  膜Ｃで形成された容器における細胞培養
―▲―  膜Ｂで形成された容器における細胞培養
【０１４１】
［結果］
細胞培養中ずっと、細胞の生存率は８０％超であった。
【０１４２】
膜Ａで形成された容器において実施された細胞培養は、良好な成長を示した。
【０１４３】
膜Ｂで形成された容器において実施された細胞培養は、良好でない成長を示した。
【０１４４】
膜Ｃで形成された容器において実施された細胞培養は、良好な成長を示した。
【０１４５】
図１は、膜Ｃが細胞増殖に影響を与えなかった一方で、膜Ｂが細胞増殖を遅らせていることを示している。これらの結果から、細胞増殖における遅延は、コンタクト層における添加剤の含有が原因であることが考えられる。この添加剤は、γ照射に対して、細胞増殖を減速し又は遅らせる分解化合物を放出し得る。
【０１４６】
それゆえ、コンタクト層において、γ照射に対してそのような分解化合物を放出し得る添加剤の量を制限することが好ましい。
【０１４７】
本発明の膜は、γ照射後短期間（一週間のうち）、及びγ照射後数ヶ月の双方で、細胞増殖に影響がなく、それは膜Ａではあり得ないだろう。
【図１】
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