(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）の重症度を評価することを補助する方法であって、
心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で、ＩＬ−１８を、シスタチンＣ、ＴＦＦ３（トレフォイル因子３）、クラステリンおよびＡ１−Ｍｉｃ（α−１−ミクログロブリン）からなる群から選択される少なくとも１つ以上のマーカーと組合せて測定するステップと、
ＩＬ−１８と、シスタチンＣ、ＴＦＦ３（トレフォイル因子３）、クラステリンおよびＡ１−Ｍｉｃ（α−１−ミクログロブリン）からなる群から選択される少なくとも１つ以上のバイオマーカーとの測定されたレベルに基づいて危険スコアを生成するステップであって、危険スコアが所定のカットオフを超える場合、対象はＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があると判定されるステップと、
対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があると判定されない場合は、ＴＦＦ３（トレフォイル因子３）、β−２  Ｍ（β−２  ミクログロブリン）およびＡ１−Ｍｉｃ（α−１−ミクログロブリン）からなる群から選択される１つ以上のバイオマーカーの測定されたレベルに基づいて危険スコアをさらに生成するステップであって、危険スコアが所定のカットオフを超える場合、対象はＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があると判定され、または危険スコアが所定のカットオフより低い場合、対象はＡＫＩを起こす危険がないと判定されるステップと、
を含む方法。
【請求項２】
対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があるかどうか判定するために、バイオマーカーＩＬ−１８と、シスタチンＣ、ＴＦＦ３（トレフォイル因子３）、クラステリンおよびＡ１−Ｍｉｃ（α−１−ミクログロブリン）からなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーが測定される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＩＬ−１８およびＴＦＦ３を測定するステップを含む、請求項１〜２のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
ＩＬ−１８およびＡ１−ミクログロブリンを測定するステップを含む、請求項１〜２のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があるかどうか判定するために、バイオマーカーＩＬ−１８と、シスタチンＣ、ＴＦＦ３、クラステリンおよびＡ１−ミクログロブリンからなる群から選択される少なくとも２つのバイオマーカーが測定される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
ＩＬ−１８、ＴＦＦ３およびＡ１−ミクログロブリンを測定するステップを含む、請求項１または５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
ＩＬ−１８、Ａ１−ミクログロブリンおよびシスタチンＣを測定するステップを含む、請求項１または５のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
対象から得た生体試料が尿である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
心臓手術の後に患者で尿クレアチニン（ｕＣｒ）を測定するステップ、および、請求項１に記載の危険スコアの生成において、マーカーの各々とｕＣｒとの比を使用するステップをさらに含む、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
バイオマーカーが、心臓手術の後０時間〜１２時間の間に測定される、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
対象でＡＫＩの発症を予測するために、少なくとも１つのバイオマーカー／ｕＣｒの加重線形組合せがレシーバー動作特性（ＲＯＣ）曲線下面積分析と共に使用される、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法に従って心臓手術の後の対象において急性腎臓損傷（ＡＫＩ）の発症および重症度を診断または予測するのに使用するための診断キットであって、前記キットは、対象から得た試料においてバイオマーカーＩＬ−１８と、ＴＦＦ３、シスタチンＣ、クラステリン、Ｂ２−ミクログロブリンおよびＡ１−ミクログロブリンからなる群から選択される少なくとも１つ以上のバイオマーカーとの定量的測定のための手段を含み、前記試料は、心臓手術の後２４時間以内に採取され、前記バイオマーカーのレベルは、対象がＡＫＩを起こすかどうかおよびＡＫＩの重症度に関する指標となる、診断キット。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法に従って心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）の発症および重症度を診断または予測するのに使用するための看護現場デバイスであって、前記デバイスは、心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料において、マーカーＩＬ−１８と、ＴＦＦ３、シスタチンＣ、クラステリン、Ｂ２−ミクログロブリンおよびＡ１−ミクログロブリンからなる群から選択される少なくとも１つ以上のバイオマーカーとを測定するための手段を含み、そのマーカーのレベルは、対象がＡＫＩを起こすかどうかおよびＡＫＩの重症度の指標となる、看護現場デバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、急性腎臓損傷を予測し、処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
急性腎臓損傷（ＡＫＩ）は、心肺バイパス（ＣＰＢ）の頻度が高く、重篤な合併症である。ＡＫＩは、尿排出量の低減がしばしば付随する、糸球体濾過速度（ＧＦＲ）の比較的急な低下を特徴とする、新規のまたは悪化した腎機能不全である（Mehta et al 2007, J Vasc Surg. 46(5):1085；著者返信1085）。ＡＫＩは任意の原因の一過性血圧低下の発症の後に最も一般的に起こるが、腎毒素またはレントゲン写真の造影剤に反応して起こることもある。ＡＫＩの臨床像は、全ての入院患者の５〜７％で見出すことができ、複合外科手術との関連でより一般的であるかもしれない。定義次第では、ＡＫＩは心肺バイパス（ＣＰＢ）の後に成人の最大３〜４０％で起こる。心臓手術の合併症としてＡＫＩを経験した患者の中で、死亡の確率は軽度の場合の４倍から腎不全の場合の１５倍を超える確率に増加する。１〜５％の症例での腎臓置換療法を必要とする重度のＡＫＩは、最大７０％の死亡率と関連している。
【０００３】
ＣＰＢ関連のＡＫＩの病因は、複雑であり且つ多因子性のものであり、以下のいくつかの損傷経路を含む：腎血流減少、拍動流の減損、低体温、粥状塞栓形成および全身性炎症応答。損傷のこれらの機構は、異なる時間に異なる強度で活動的であるようであり、おそらく相乗的に作用する。現行の臨床診療では、急性腎臓損傷（ＡＫＩ）は、ＲＩＦＬＥ（危険、損傷、不全、喪失、末期（risk, injury, failure, loss, end stage））またはＡＫＩＮ（急性腎臓損傷ネットワーク）などの様々なＡＫＩ定義システムを使用して、血清クレアチニンの増加を検出することによって典型的に診断される（Bellomo 2005 Intensive Care Med. 33(3):409-13。Epub 2006 Dec 13.、Bagshaw et al 2008 23(5):1569-74。Epub 2008 Feb 15）。しかしながら、血清クレアチニンは、いくつかの理由のために腎臓機能の急変中の信頼できない指標物質である。第１に、血清クレアチニン濃度は腎臓機能の約５０％が失われてしまうまで変化しないかもしれない。第２には、数日かかる可能性がある定常状態に到達するまで、血清クレアチニンは腎臓機能を正確に反映しない。最後に、クレアチニンの血清中レベルは、いくつかの腎臓以外の因子、例えば年齢、性別、人種、血管内容量、筋肉代謝、薬物および栄養により影響される。これらの理由の全てによりＡＫＩの診断がかなりの遅れることが助長され、その時点ではかなりの腎損傷が起こってしまっており、この損傷は部分的または完全に不可逆的なものである可能性がある（Bagshaw et al 2007, Curr Opin Crit Care. 13(6):638-44）。術前危険因子に基づき、腎臓置換術理論（ＲＲＴ）につながる重度のＡＫＩの予測のために様々な臨床アルゴリズムが提案されてきたが、より程度の低い腎損傷の早期診断のための客観的検査は広く利用可能なものではない。
【０００４】
血清クレアチニンが上昇する前に、ＣＰＢ中およびその後にＡＫＩの信頼できる早期予測を可能にすることができるバイオマーカーの臨床有用性を評価する必要性がある。そのようなバイオマーカーを同定する能力は、非常に初期の時点でのＡＫＩ患者において急性腎不全のリスク層別化および期間予測を助け、したがって有効な予防または治療戦略をもたらす。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
発明の要旨
現在、心肺バイパス手術（ＣＰＢ）などの心臓手術の後の術後期に、急性腎臓損傷（ＡＫＩ）を速やかに（０〜４８時間）診断する方法がない。本発明は、ＣＰＢなどの心臓手術の後にＡＫＩの早期予測を可能にするだけでなく、本発明のバイオマーカーは、初めて、ＡＫＩの重症度のグレードを分類するためにさらに使用することもでき、ＡＫＩを起こす危険があると予測される患者のために適当な治療的介入を施与することを可能にする。
【０００６】
一態様では、本発明は、心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）損傷の重症度を評価する方法であって、
心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で表１および／または表２の１つまたは複数のマーカーを測定するステップと、
表１のバイオマーカーの１つまたは複数の測定されたレベルに基づいて危険スコアを生成するステップであって、危険スコアが所定のカットオフを超える場合、対象はＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があると判定されるステップと、
任意選択で、対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があると判定されない場合は、表２から選択されるバイオマーカーの１つまたは複数の測定されたレベルに基づいて危険スコアをさらに生成するステップであって、危険スコアが所定のカットオフを超える場合、対象はＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があると判定され、または危険スコアが所定のカットオフより低い場合、対象はＡＫＩを起こす危険がないと判定されるステップと、
を含む方法を含む。
【０００７】
一例において、対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があるかどうか判定するために、表１の２つ、３つ、４つまたはそれ以上のバイオマーカーが測定される。別の例において、対象がＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があるかどうか判定するために、表２の２つまたは３つのバイオマーカーが測定される。別の例において、対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／ＦもしくはＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があるかまたはＡＫＩを起こす危険がないか判定するために、表１および表２の２つまたはそれ以上のバイオマーカーが測定される。
【０００８】
対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があるかどうか判定するために使用することができる単一のマーカーおよび組合せの例を、表１４に示す。対象がＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があるかどうか判定するために使用することができる組合せの例を、表１５に示す。他の組合せの例は、表３に示す。
【０００９】
別の態様では、本発明は、心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）損傷の重症度を評価する方法であって、
心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料でＴＦＦ３を測定するステップと、
バイオマーカーの測定されたレベルに基づいて危険スコアを生成するステップであって、所定のカットオフと比較したときの危険スコアが、対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があるかどうかの指標となるステップと、
を含む方法を含む。
【００１０】
別の態様では、本発明は、心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）損傷の重症度を評価する方法であって、
心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料でＡ１−ミクログロブリンを測定するステップと、
バイオマーカーの測定されたレベルに基づいて危険スコアを生成するステップであって、所定のカットオフと比較したときの危険スコアが、対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があるかどうかの指標となるステップと、
を含む方法を含む。
【００１１】
別の態様では、本発明は、心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）損傷の重症度を評価する方法であって、
心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で、ＩＬ−１８、シスタチンＣ、ＮＧＡＬ、ＴＦＦ３、クラステリン、Ｂ２−ミクログロブリンおよびＡ１−ミクログロブリンからなる群から選択されるバイオマーカーの少なくとも１つを測定するステップと、
バイオマーカーの１つまたは複数の測定されたレベルに基づいて危険スコアを生成するステップであって、所定のカットオフと比較したときの危険スコアが、対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆ、ＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があるか、またはＡＫＩの危険がないかの指標となるステップと、
を含む方法を含む。
【００１２】
さらに別の態様では、本発明は、心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）損傷の重症度を評価する方法であって、
心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で、ＩＬ−１８、シスタチンＣ、ＮＧＡＬ、ＴＦＦ３、クラステリンおよびＡ１−ミクログロブリンからなる群から選択されるバイオマーカーの少なくとも１つを測定するステップと、
バイオマーカーの１つまたは複数の測定されたレベルに基づいて危険スコアを生成するステップであって、危険スコアが、対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があるかどうかの指標となるステップと、
を含む方法を含む。
【００１３】
さらに別の態様では、本発明は、心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）損傷の重症度を評価する方法であって、
心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で、ＴＦＦ３、Ｂ２−ミクログロブリンおよびＡ１−ミクログロブリンからなる群から選択されるバイオマーカーの少なくとも１つを測定するステップと、
バイオマーカーの１つまたは複数の測定されたレベルに基づいて危険スコアを生成するステップであって、危険スコアが、対象がＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があるかまたはＡＫＩを起こす危険がないかの指標となるステップと、
を含む方法を含む。
【００１４】
別の態様では、本発明は、心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）の発症を診断または予測する方法であって、心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で、ＩＬ−１８、シスタチンＣ、ＮＧＡＬ、ＴＦＦ３、クラステリン、Ｂ２−ミクログロブリンおよびＡ１−ミクログロブリンから選択されるバイオマーカーの少なくとも４つを測定するステップであって、そのレベルはＡＫＩの指標となるか、またはＡＫＩの発症の前兆となる（predictive）ステップを含む方法を含む。
【００１５】
別の態様では、本発明は、心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）の発症を診断または予測する方法であって、以下のいずれかを測定するステップを含む方法を含む：
心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料中の、そのレベルはＡＫＩの指標となるか、ＡＫＩの発症の前兆となる、ＴＦＦ３、ならびにＩＬ１８、シスタチンＣ、ＮＧＡＬ、クラステリン、Ｂ２−ミクログロブリンおよびＡ１−ミクログロブリンから選択されるバイオマーカーの少なくとも１つ、
心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料中の、そのレベルはＡＫＩの指標となるか、ＡＫＩの発症の前兆となる、Ａ１−ミクログロブリン、ならびにＩＬ１８、シスタチンＣ、ＮＧＡＬ、クラステリン、Ｂ２−ミクログロブリンおよびＴＦＦ−３から選択されるバイオマーカーの少なくとも１つ、または
心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料中の、そのレベルはＡＫＩの指標となるか、ＡＫＩの発症の前兆となる、クラステリン、ならびにＩＬ１８、シスタチンＣ、ＮＧＡＬ、Ａ１−ミクログロブリン、Ｂ２−ミクログロブリンおよびＴＦＦ−３から選択されるバイオマーカーの少なくとも１つ。
【００１６】
上記の方法では、ＣＰＢ手術などの心臓手術の後に対象で尿クレアチニン（ｕＣｒ）を、および対象での急性腎臓損傷（ＡＫＩ）の発症の予測因子としてマーカーの各々とｕＣｒとの比を測定することもできる。一例において、対象でＡＫＩの発症および重症度を予測するために、少なくとも１つのバイオマーカー／ｕＣｒの加重線形組合せ（weighted linear combination）がレシーバー動作特性（ＲＯＣ）曲線下面積分析（Receiver-Operating Characteristic area under the curve analysis）と共に使用される。
【００１７】
さらに別の態様では、本発明は、心臓手術の後２４時間以内に採取された患者の試料中の、表１および表２に示す１つまたは複数のバイオマーカーの定量的測定のための診断キットであって、バイオマーカーのレベルは、対象がＡＫＩを起こすかどうかおよびＡＫＩの重症度に関する指標となるキットを含む。
【００１８】
本発明のバイオマーカーは、当技術分野で公知である任意のデバイスまたは方法を使用して測定することができる。一例では、心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）の発症を診断または予測するための看護現場デバイス（a point of care device）が使用される。一例では、デバイスは、心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で表１からの少なくとも１つのマーカーおよび表２からの１つのマーカーを測定するために使用され、そのレベルはＡＫＩおよびＡＫＩの重症度の指標となる。心臓手術の例にはＣＰＢが含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１は、手術前後の異なる時点での尿クレアチニン標準化の後のＩＬ−１８値の箱ひげ図（ボックスプロット）である。
【図２】図２は、手術前後の異なる時点での尿クレアチニン標準化の後のＮＧＡＬ値の箱ひげ図である。
【図３】図３は、手術前後の異なる時点での尿クレアチニン標準化の後のＴＦＦ３値の箱ひげ図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
発明の詳細な説明
患者の遺伝子およびプロテオーム（protenomic）プロファイルは、疾患の診断のために使用することができること、または治療処置への患者の応答を決定することができることを示唆する証拠が増加している。様々な疾患を処置するために利用できる多数の療法があるならば、遺伝子およびタンパク質因子の判定は、例えば特定の手術または薬物への患者の応答を予測するかまたは変化させるために使用することができる。これらの因子の判定は、より優れた処置および早期の介入を提供するために使用することができた。
【００２１】
心肺バイパス手術（ＣＰＢ）の重篤な合併症は急性腎臓損傷（ＡＫＩ）であり、それは腎臓機能の急激な喪失を指す。ＣＰＢ後のＡＫＩは、その診断が遅れる（一般的に事象から１〜５日後）ことによる重篤な合併症であり、３〜４０％の発生率を有し、死亡率の増加および慢性腎臓疾患の危険にしばしばつながることがある。急性腎臓損傷の統一された定義を確立するために、Ａｃｕｔｅ  Ｄｉａｌｙｓｉｓ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅは、危険、損傷、不全、喪失および末期腎臓（ＲＩＦＬＥ）分類を策定した。
【００２２】
ＲＩＦＬＥは急性腎臓損傷の重症度の増加の３つのグレードである危険（risk）（クラスＲ）、損傷（injury）（クラスＩ）および不全（failure）（クラスＦ）を規定する。ＲＩＦＬＥ分類は、ベースライン状態からの血清クレアチニンまたは尿排出量のいずれかの変化に基づいて、急性腎臓損傷の重症度の３つのグレードを提供する。例えば、ベースラインと比較した以下の血清クレアチニン（ＳＣｒ）レベルを、患者の病期診断のために使用することができる：
【００２３】
【表０】
0006416778.tif 000002
【００２４】
血清クレアチニン（ＳＣｒ）だけに基づくＡＫＩの診断は、ＳＣｒ測定の変動性を含む限界を有し、患者の水分補給状態または体液管理によって影響を受ける可能性がある。さらに、ＳＣｒはあまり感受性ではなく、しばしば損傷が起こってから１〜５日後にのみ起こる。優れたベースライン腎機能を有する一部の患者は、「腎予備力（renal reserve）」によるＳＣｒの増加なしに腎臓損傷が起こる可能性がある。ＡＫＩのためのＲＩＦＬＥの別の要素である尿排出量は、特にＣＰＢの後のＡＫＩに関してはＳＣｒと同様に遅く、感受性でない。したがってＡＫＩの診断およびグレーディングのために現在実施されている方法は、不十分である。本発明は、ＣＰＢ手術などの心臓手術の後のＡＫＩの早期予測を可能にし、ＡＫＩを起こすＣＰＢ患者への治療的有益性を最大にする可能性を提供する。
【００２５】
本明細書に記載される方法は、心臓手術の後に患者がＡＫＩを起こすかどうか早期に（例えば、２４時間以内に）予測するために、特にＡＫＩの重症度を予測するために使用することができる尿中のタンパク質バイオマーカーの１つまたは複数の同定に一部基づく。本発明により、ＲＩＦＬＥを使用するＡＫＩのグレーディングのための現在認識されるシステムに適合させようと試みるとき、本発明を使用して患者を３つのグレードに分類することができる。具体的には、本発明のバイオマーカーは、個体が手術後にＲＩＦＬＥ危険クラスＩまたはＦ（本明細書においてＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆと呼ぶ）を起こしそうかどうか予測することができる。個体がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを有していないと判定される場合は、その個体がＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす可能性について個体をさらに評価することができる。個体がＲＩＦＬＥ  Ｒカテゴリーに分類されないと評価される場合は、その個体はＡＫＩを起こす可能性が低い個体であると評価される。
【００２６】
したがって、本方法は、個体がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆ、ＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす可能性があるか、ＡＫＩを起こす可能性がないかを予測する手段を提供する。
【００２７】
本発明の方法はＣＰＢまたはＣＡＢＧなどの心臓手術に適用できるだけでなく、ＡＫＩをもたらし、ＡＫＩの重症度レベルの判定が有益であろういかなる手術（身体的外傷）または事象にも適用できる。企図される手術には、心臓手術および移植手術ほかを含めることができる。
【００２８】
バイオマーカー
本発明は、ＣＰＢなどの心臓手術の後４８時間（例えば０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、２０、２４、２８、３０、３４、３８、４０、４２、４４、４６または４８時間）以内にＡＫＩを指示し、グレード分けするために、特定のタンパク質バイオマーカーを使用することができるとの知見に基づく。特に、上に説明されるようにＡＫＩの重症度の３つの群を予測することができるように、腎臓バイオマーカーを２つの群に分けることができることが判明した。バイオマーカーの第１の群は、重度のＡＫＩ（ＲＩＦＬＥモデルによって解釈される「損傷」および「不全」と同等；ＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆ）の指標となり、表１に示され、マーカーの第２の群は、より穏やかなＡＫＩ（ＲＩＦＬＥによって解釈される「危険」と同等、ＲＩＦＬＥ  Ｒ）の指標となり、表２に示される。
【００２９】
一例では、危険スコアを生成して、その危険スコアを所定のカットオフと比較することによって個体がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があるかどうか判定するために、ＴＦＦ３またはＡ１−ミクログロブリンなどの単一のバイオマーカーを使用することができる。
【００３０】
別の例では、危険スコアを生成して、その危険スコアを所定のカットオフと比較することによって個体がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があるかどうか最初に判定するために、ＴＦＦ３またはＡ１−ミクログロブリンなどの単一のバイオマーカーを使用することができ、個体がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを有しないと判定される場合は、危険スコアを生成して、その危険スコアを所定のカットオフと比較することによってその個体がＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があるかどうか判定するためにその単一のマーカーを任意選択で使用することもできる。個体がＲＩＦＬＥ  Ｉ／ＦまたはＲＩＦＬＥ  Ｒを有しないと判定される場合は、その個体はＡＫＩを起こすいかなる危険も有しないと評価される。
【００３１】
別の例では、ＣＰＢから４８時間以内、例えば１２、８、４時間以下以内にＡＫＩの重症度を予測し、グレード分けするために、ＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆバイオマーカー（表１）および／またはＲＩＦＬＥ  Ｒバイオマーカー（表２）の組合せを使用することができることが判明した。
【００３２】
【表１】
0006416778.tif 000003
【００３３】
【表２】
0006416778.tif 000004
【００３４】
別の例では、本発明のバイオマーカーには、表１に列挙される少なくとも１つのバイオマーカータンパク質および表２に列挙される少なくとも１つのバイオマーカータンパク質が含まれる。バイオマーカーの任意の組合せを選択することができる。組合せの例を、下の表３に示す。
【００３５】
【表３】
0006416778.tif 000005
【００３６】
バイオマーカータンパク質の検出
ＣＰＢなどの心臓手術の後に対象が特定のグレードのＡＫＩを起こす可能性の増加を有するかどうか判定するために、表１および表２に開示されるバイオマーカータンパク質が測定される。一般的に、本発明の方法は、尿、血液、血清または血漿などの対象の生体流体試料で対象のバイオマーカータンパク質を検出するために使用される。一例では、表１で特定されるＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆマーカーまたは表２で特定されるＲＩＦＬＥ  Ｒマーカーが心臓手術後の患者の血清または血漿試料から測定され、血清中レベルは、上述のＲＩＦＬＥ基準によって判定されるＡＫＩの発症および重症度を予測するために使用される。別の例では、表１で特定されるＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆバイオマーカーまたは表２で特定されるＲＩＦＬＥ  Ｒバイオマーカーが心臓手術後の患者の尿試料から測定され、尿中レベルはＡＫＩの発症および重症度を予測するために使用される。任意選択で、事象後の患者での血清クレアチニン（ｓＣｒ）および／または尿クレアチニン（ｕＣｒ）を標準化のために測定し、使用することもできる。
【００３７】
本発明の方法の実施で使用される生体試料は、対象から収集される新鮮試料もしくは冷凍試料であるか、または既知の診断、処置および／もしくは転帰履歴を有する保管試料であってもよい。特定の実施形態では、本発明の方法は、試料を処理せずにまたは限定的処理により尿試料自体で実施される。
【００３８】
一部の例では、対象のバイオマーカータンパク質は、手術前に、例えば手術の０〜２４時間前、および／または手術（例えば、ＣＰＢ）から４８時間以内、例えば手術直後、０時、それ以後の任意の時間、例えば０〜０．５、約０〜１、約０〜２、約０〜３、約０〜４、約０〜５、約０〜６、約０〜７、約０〜８、約０〜９、約０〜１０、もしくは約０．５〜４時間、もしくは約０．５〜８時間、もしくは約０．５〜１２時間、もしくは約０．５〜２４時間、もしくは約０．５〜４８時間以内の任意の時間；または約０．５時間、もしくは約１時間、もしくは約２時間、もしくは約３時間、もしくは約４時間、もしくは約５時間、もしくは約６時間、もしくは約７時間、もしくは約８時間、もしくは約９時間、もしくは約１０時間、もしくは約１１時間、もしくは約１２時間、もしくは約２４時間以内に測定することができる。別の例では、対象のバイオマーカータンパク質は、ＩＣＵへの入院の後に測定することができる。この明細書では、「約」はプラスマイナス１０パーセントの範囲を表すために定量的用語で用いられる。さらに、「約」が定量的用語と併用される場合、値プラスマイナス１０パーセントに加えて、定量的用語の正確な値も企図され、記載されるものと理解される。例えば、用語「約３パーセント」は正確に３パーセントを明示的に企図し、記載し、含む。
【００３９】
本明細書に記載されるバイオマーカーレベルは直接に計算することができる、あるいはクレアチニン（または任意の他の適当なマーカー）などの標準化バイオマーカーとの比として計算および／または表現することができる。例えば、ＴＦＦ３レベルは、同じ試料タイプでのクレアチニンレベルの比として計算および／または表現することができる（例えば、そのレベルは、尿１ミリリットルあたりのＴＦＦ３のｎｇ数をｍｇ／ｍｌ尿で表す尿クレアチニンで割り算したものとして表すことができる）。
【００４０】
本発明の方法は、事象後にバイオマーカーの存在下で表１または表２の尿バイオマーカーを測定し、変化の動態を使用して患者でのＡＫＩの発症および重症度を予測することを含むこともできる。実際、バイオマーカーはそれらのダイナミックレンジに基づいて特異的に選択される、すなわち損傷前のベースラインレベルと比較して、または非ＡＫＩ対象のレベル（正常範囲）と比較してそれらのレベルが損傷の結果強くモジュレートされるバイオマーカーが好ましい。実施例７も参照。
【００４１】
一実施形態では、変化の動態を測定する場合、陽性のパーセント変化はＲＩＦＬＥ  ＲのＡＫＩと関連し、より陽性のパーセント変化はＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆの前兆となる。
【００４２】
尿バイオマーカータンパク質レベルは、限定されずに免疫沈降アッセイ、質量分析、ウエスタンブロット法を含む当業者に公知である任意のアッセイを使用して、およびディップスティックにより従来の技術を使用して測定することができる。一実施形態では、尿中のバイオマーカータンパク質のレベルは、イムノアッセイによって検出される。イムノアッセイには、限定されずに、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）とも呼ばれる酵素免疫検定法（ＥＩＡ）、放射線免疫検定法（ＲＩＡ）、拡散イムノアッセイ（ＤＩＡ）、蛍光免疫検定法（ＦＩＡ）、化学発光イムノアッセイ（ＣＬＩＡ）、計数イムノアッセイ（ＣＩＡ）、ラテラルフロー免疫クロマトグラフィーアッセイとしても知られるラテラルフロー試験またはイムノアッセイ（ＬＦＩＡ）、および磁気イムノアッセイ（ＭＩＡ）が含まれる。
【００４３】
比較のために、患者からの尿試料中のバイオマーカータンパク質のレベルは、標準化値として使用される測定された尿Ｃｒレベルに対して測定することができる。
【００４４】
個体がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆの危険を起こす可能性があるかどうか予測するために使用される、尿などの試料中の表１のバイオマーカーのレベル、または、個体がＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす可能性があるかどうかを測定するために使用される表２のバイオマーカーのレベルは、任意のタンパク質結合剤を使用して判定することができる。一部の実施形態では、タンパク質結合剤はバイオマーカータンパク質に特異的に結合するリガンドであり、例えば、合成ペプチド、化学物質、小分子、または抗体もしくは抗体断片もしくはその変異形であってもよい。一部の実施形態では、タンパク質結合剤はリガンドまたは抗体または抗体断片であり、一部の実施形態では、タンパク質結合剤は好ましくは検出可能に標識される。
【００４５】
本発明の一実施形態では、抗体を使用するイムノアッセイは、表１および／または表２のバイオマーカータンパク質の尿中レベルを測定するために使用される。本明細書で用いるように、用語「抗体」には、抗体のポリクローナル、モノクローナルまたは他の精製された調製物が含まれ、組換え抗体には、ヒト化抗体、二重特異的抗体、および抗体分子に由来する少なくとも１つの抗原結合決定因子を有するキメラ分子が含まれる。使用される抗体は、例えば任意のアイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥなど）の完全抗体を含むものとし、測定されるバイオマーカータンパク質と特異的に同じく反応性であるその断片を含む。抗体の断片の非限定例には、タンパク分解および／または組換え断片、例えばペプチドリンカーによって連結されるＶＬおよびＶＨドメインを含有する、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ｄＡｂおよび単鎖抗体（ｓｃＦｖ）が含まれる。ｓｃＦｖは、共有結合または非共有結合で連結して、２つ以上の結合部位を有する抗体を形成することができる。
【００４６】
本発明の方法で有益なバイオマーカータンパク質は、当技術分野で公知である。
【００４７】
【表４】
0006416778.tif 000006
【００４８】
バイオマーカータンパク質に対する抗体は、当業者に公知である方法を使用して生成することができる。あるいは、市販抗体を使用することができる。一実施形態では、対象のバイオマーカーを分析するための市販のキット、例えばＲＢＭが入手できる。
【００４９】
一実施形態では、抗体は検出可能に標識される。
【００５０】
本明細書で用いるように「検出可能に標識される」には、測定可能な手段によって標識される抗体が含まれ、限定されずに酵素、放射能、蛍光および化学発光で標識される抗体が含まれる。抗体は、検出可能なタグ、例えばｃ−Ｍｙｃ、ＨＡ、ＶＳＶ−Ｇ、ＨＳＶ、ＦＬＡＧ、Ｖ５、ＨＩＳまたはビオチンで標識されてもよい。
【００５１】
一実施形態では、抗体は、抗体を酵素に連結することによって検出可能に標識される。酵素は、その基質に曝露させたとき、次に、例えば分光光度的、蛍光定量的または視覚的手段によって検出することができる化学部分を生成するような方法で基質と反応する。本発明の抗体を検出可能に標識するために用いることができる酵素には、リンゴ酸脱水素酵素、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ−Ｖ−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコール脱水素酵素、アルファ−グリセロリン酸脱水素酵素、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−ＶＩ−リン酸脱水素酵素、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼが含まれるが、これらに限定されない。
【００５２】
抗体を蛍光化合物で標識することも可能である。蛍光標識抗体を適切な波長の光に曝露させると、蛍光によりその存在を次に検出することができる。最も一般的に使用される蛍光標識化合物には、ＣＹＥ色素、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアルデヒドおよびフルオレスカミンがある。ランタニド系の標識などの蛍光放射金属を使用して、抗体を検出可能に標識することもできる。これらの金属は、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート化基を使用して抗体に付着させることができる。
【００５３】
抗体は、それを化学発光化合物に結合することによって検出可能に標識することもできる。化学反応の過程中に発生する発光の存在を検出することによって、化学発光−抗体の存在が次に判定される。特に有益な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、ルシフェリン、イソルミノール、セロマティックアクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩およびシュウ酸エステルである。
【００５４】
一例では、ＲＩＦＬＥ  Ｉ／ＦおよびＲＩＦＬＥ  Ｒのレベルを判定するために使用されるアッセイは、競合的イムノアッセイなどのイムノアッセイである。別の実施形態では、イムノアッセイは非競合的イムノアッセイである。
【００５５】
別の実施形態では、尿中のバイオマーカータンパク質のレベルは、ＥＬＩＳＡアッセイによって検出される。当業者に周知であるＥＬＩＳＡの異なる形、例えば標準ＥＬＩＳＡ、競合的ＥＬＩＳＡおよびサンドイッチＥＬＩＳＡがある。ＥＬＩＳＡの標準技術は、"Methods in Immunodiagnosis", 2nd Edition, Rose and Bigazzi, eds. John Wiley & Sons, 1980；Campbell et al., "Methods and Immunology", W. A. Benjamin, Inc., 1964；およびOellerich, M. 1984, J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 22:895-904に記載される。
【００５６】
本明細書に記載されるＥＬＩＳＡ法については、抗バイオマーカー抗体の既知量を固体表面に固定し、次に、抗原バイオマーカーが固定化抗体（第１の抗体）に結合することができるように対象のバイオマーカーを含有する尿試料を表面に洗い流す。あらゆる未結合のバイオマーカーおよび尿試料中に存在するいかなるバイオマーカー以外のタンパク質も除去するために、表面を洗浄する。検出抗体（第２の抗体）を表面に加える。検出抗体は、対象中のバイオマーカーに特異的である。ＥＬＩＳＡの実施は、抗バイオマーカー抗体の既知量を、固体支持体（通常、ポリスチレンマイクロタイタープレート）の上に非特異的に（表面への吸着を通して）、または特異的に（「サンドイッチ」ＥＬＩＳＡでの、抗バイオマーカー抗体に特異的な別の抗体による捕捉を通して）固定化することを含む。試料のバイオマーカータンパク質の固定化の後、検出抗体を加え、抗原との複合体を形成する。
【００５７】
一実施形態では、測定する各バイオマーカータンパク質に特異的な少なくとも２つの抗体を使用して、表１からの少なくとも１つのバイオマーカーおよび表２からの少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを選択して、測定する。別の実施形態では、測定する各バイオマーカータンパク質に特異的な少なくとも３つの抗体を使用して、第１のバイオマーカータンパク質、第２のバイオマーカータンパク質および第３のバイオマーカータンパク質を規定する３つのバイオマーカータンパク質（少なくとも１つは表１から、１つは表２から選択される）のレベルを測定し、各抗体は、測定する第１のバイオマーカータンパク質、第２のバイオマーカータンパク質または第３のバイオマーカータンパク質と特異的に反応する。一実施形態では、測定する各バイオマーカータンパク質に特異的な少なくとも４つの抗体を使用して、第１、第２、第３および第４のバイオマーカータンパク質を規定する４つのバイオマーカータンパク質（少なくとも１つは表１から、１つは表２から選択される）のレベルを測定する。
【００５８】
別の実施形態では、試料中の表１および／または表２のバイオマーカーのレベルは、看護現場検査（ＰＯＣ）としても知られるオンザスポットアッセイによって検出される。ＰＯＣは、患者看護の現場またはその近くでの診断検査と規定され、例えばこの場合にはＰＯＣはＩＣＵ内であってもよい。提供される例によって明白になるように、本発明は、心臓手術の後最初の１〜２４時間以内のＲＩＦＬＥ  Ｉ／ＦもしくはＲＩＦＬＥ  Ｒの発症、またはＡＫＩの無発症およびそのグレード分けに関して、患者の状態に関する正確な読取りを提供することができる。ＰＯＣは、患者に便利で迅速な検査をもたらす。これは、患者がタイムリーに結果を受け取る可能性を増加させる。ＰＯＣは、移動可能で、持ち運びができる携帯機器（例えば、血糖メーター、神経伝導研究デバイス）および検査キット（例えば、ＣＲＰ、ＨＢＡ１Ｃ、ホモシステイン、ＨＩＶ唾液アッセイなど）の使用を通して達成される。ＰＯＣ検査は、当技術分野、特にイムノアッセイで周知である。例えば、ＰＯＣ診断キットにＬＦＩＡ検査ストリップまたはディップスティックを容易に組み込むことができる。当業者は、異なるフォーマットを使用してＰＯＣのためにイムノアッセイを改変することができ、例は微流動デバイスフォーマットまたは検査ストリップフォーマットでのＥＬＩＳＡである。
【００５９】
一実施形態では、尿中のバイオマーカータンパク質のレベルは、免疫クロマトグラフィーアッセイとしても知られるラテラルフローイムノアッセイ検査（ＬＦＩＡ）、またはストリップ検査によって検出される。ＬＦＩＡは、流体試料中の標的バイオマーカー抗原の存在（または不在）を検出するために、表１および／または表２のタンパク質を検出することができる単純なデバイスである。自宅検査、看護現場検査または検査室用途のための医学診断のために使用される、多くのＬＦＩＡ検査が現在ある。ＬＦＩＡ検査は、検査試料が毛管作用を通して固体基質に沿って流れる形のイムノアッセイである。試料が検査に加えられた後、それは、試料と混ざり、抗体または抗原で前処理された系またはゾーンに遭遇する基質を移動させる着色試薬に遭遇する。
【００６０】
別の実施形態では、尿中のバイオマーカータンパク質のレベルは、拡散イムノアッセイ（ＤＩＡ）によって検出される。このアッセイでは、マイクロチャネル、例えば微流動チップ内の流れと垂直である分子の輸送は、抗原と抗体の間の結合によって影響を受ける。流体試料中の分析物またはバイオマーカーの検出のための微流動拡散イムノアッセイは、当技術分野で、例えば米国特許第６，５４１，２１３号；第６，９４９，３７７号；第７，２７１，００７号；米国特許出願第２００９０１９４７０７号；第２００９０１８１４１１号；Hatch et al., 2001, Nature Biotechnology 19(5): 461-465; Kに記載されている。
【００６１】
別の例では、ＰＯＣ検査デバイスは、参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ２００６０２６３８９４に開示されるピエゾ（またはピロ）フィルムに基づく。このＰＯＣ検査を使用する一実施形態では、ピエゾフィルムは、本発明の表１および／または表２に開示される１つまたは複数のバイオマーカーに対する抗体でコーティングされる。一例では、ＰＯＣデバイスは、ピエゾフィルムが存在するチャンバーにつながる毛細管を有するカートリッジである。毛細管の内部表面は、ピエゾフィルムに結合する抗体と異なる分子部位であるが、表１および／または表２に開示されるバイオマーカーに同様に特異的に結合することができる、本発明の表１および／または表２に開示される１つまたは複数のバイオマーカーに対する第２の抗体の乾燥層でコーティングされる（今回は炭素粒子に連結される）。体液試料は、カートリッジ内のピエゾフィルム検査領域まで、炭素−抗体コンジュゲートを溶解しつつ毛細管に沿って移動する。炭素コンジュゲートと混合された試料がピエゾフィルムに到達すると、本発明の表１および／または表２に開示される１つまたは複数のタンパク質バイオマーカーが検査試料中に存在する場合は、両方の抗体に同時に結合する。この反応は、本発明の表１および／または表２に開示される１つまたは複数のバイオマーカーが２セットの抗体の間に詰められている、「サンドイッチ」をもたらす。サンドイッチ反応は、炭素粒子をピエゾフィルムに連結させる。反応中、デスクトップ読取装置は、フラッシング発光ダイオード（ＬＥＤ）を使用して試料を数ミリ秒おきに照らす。フィルムに連結された炭素粒子は光を吸収してそれを熱に変換し、熱はフィルムを変形させて電荷を生成する。より多くの炭素粒子がフィルムに連結されるに従って、光の各パルスはより大きな熱伝達を、したがってより大きな電荷をもたらす。電荷の変化速度は、試料中の本発明の表１および／または表２に開示される１つまたは複数のバイオマーカーの濃度に比例する。ピエゾフィルム越えの電荷の経時的測定は、試料中のタンパク質バイオマーカー濃度の尺度となる。
【００６２】
上記のシステムを使用する別の実施形態では、競合アッセイフォーマットを用いることができる。この例では、表１および／または表２に列挙されるバイオマーカーの１つまたは複数に対する抗体がピエゾフィルムにコーティングされ、毛細管の内部は炭素標識にコンジュゲートされるバイオマーカータンパク質誘導体の乾燥層でコーティングされる。体液試料が毛細管に沿って移動すると、それは炭素−タンパク質コンジュゲートを溶解する。炭素コンジュゲートと混合させた試料がピエゾフィルムに到達すると、試料中のバイオマーカータンパク質はコーティングされたバイオマーカー抗体に関してタンパク質コンジュゲートと競合し、タンパク質バイオマーカーの濃度はピエゾフィルム越しの経時的変化を測定することによって判定することができる。あるいは、試料タンパク質および抗体が結合することができる表１および／または表２に示すバイオマーカーの１つまたは複数のバイオマーカー誘導体は、ピエゾフィルムに結合する。この例では、毛細管の内面は、炭素で標識したバイオマーカー抗体の乾燥層でコーティングされる。試料が抗体−炭素コンジュゲートを溶解すると、試料中のバイオマーカータンパク質は抗体への結合に関してバイオマーカー誘導体と競合する。タンパク質バイオマーカーの濃度は、ピエゾフィルム越しの経時的変化を測定することによって判定することができる。これらのアッセイで使用される競合者は、バイオマーカー抗体結合部位に関してバイオマーカータンパク質と競合することができる任意の分子、ペプチドまたはその誘導体であってもよい。バイオマーカー誘導体は、任意の公知の標識、例えばビオチン化標識または炭素にコンジュゲートさせることができる。
【００６３】
キット
本発明の実施形態は、診断キットおよび診断キットを含む製造品をさらに提供する。キットは、ヒトでＡＫＩを予測するための手段を含むことができる。
【００６４】
一実施形態では、キットは尿試料中のバイオマーカータンパク質のレベルに応答性である指示薬を含み、バイオマーカータンパク質は表１からの少なくとも１つのバイオマーカーおよび表２からの少なくとも１つのバイオマーカーから選択される。例については表３を参照する。キットは、尿試料収集のためのカップまたは管、または任意の他の収集デバイスをさらに含むことができる。別の実施形態では、キットは、検査結果の解釈を記載する少なくとも１つの図および／または説明書を任意選択でさらに含むことができる。
【００６５】
データ分析
本発明の方法では、測定される各バイオマーカーのレベルは、ｕＣＲ、または１つもしくはいくつかの対照タンパク質もしくは内因性代謝産物の平均、または尿比重による標準化の後の値に一般的に変換される。生成される値は、次にＡＫＩソフトウェアアルゴリズムに提供されてスコアを生成するために使用され、スコアは、ＡＫＩを起こす可能性のある対象を選択し、ＡＫＩの重症度を予測するために、次に所定のカットオフと比較される。
【００６６】
一例において、対象でＡＫＩの発症を予測するために、表１の少なくとも１つのバイオマーカー／ｕＣｒおよび表２の１つのバイオマーカー／ｕＣｒの加重線形組合せがレシーバー動作特性（ＲＯＣ）曲線下面積分析と共に使用される。
【００６７】
試料分析操作を促進するために、読取装置によってデバイスから得られるデータは、デジタル式コンピュータを使用して分析してもよい。一般的に、コンピュータはデバイスからデータの受け取りおよび保存、ならびに集めたデータの分析および報告、例えばバックグラウンドの減算、対照が適切に性能を発揮したことの検証、シグナルの標準化、ハイブリダイズした標的の量を判定するための蛍光データの解釈、バックグラウンドの標準化等のために適切にプログラムされる。
【００６８】
一例では、本発明の方法では、ＣＰＢ手術などの心臓手術を受ける患者からの尿試料は手術後に収集され、任意選択で、ベースラインとして手術前にも収集される。術後試料、および任意選択でベースライン試料のために、尿試料は表１および／または２に示すバイオマーカーのいずれかについて測定される。本発明のバイオマーカーのレベルを標準化するために、尿クレアチニンを測定することもできる。下に示す方法を含めて、当技術分野の任意の方法によってデータを分析することができる。
【００６９】
方法１：前処理のみ
ステップ１：手術の前と後に表１および表２のバイオマーカーの１つまたは複数を測定する。
ステップ２：表１のバイオマーカーの処理した測定値の各々を、マーカー特異的カットオフと比較する。マーカー特異的カットオフを超えるマーカーの数を、判定する。前で特定された数のマーカーがカットオフを超える場合は、患者はＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆカテゴリーに属すると分類される。全てのマーカーがカットオフを超えること、または１つ以外の全てのマーカー、または２つ以外の全てのマーカーなど、または単一のマーカーだけがカットオフを超えることが必要かもしれない。患者がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆとして分類される場合は、評価はここで終わり、そうでなければ評価は次のステップに進行することができる。
ステップ３：表２のバイオマーカーの全ての処理したマーカー測定値の加重平均をとり、結果を前に特定したカットオフと比較する。使用される加重は全てのバイオマーカーについて同じであってもよいが、それらは各マーカーに特異的であってもよい。加重平均がカットオフを上回る場合は、結果をＲＩＦＬＥ  Ｒとして分類する。患者がＲＩＦＬＥ  Ｒとして分類されない場合は、次のステップに進む。
ステップ４：患者を「ＡＫＩなし（No AKI）」として分類する。
【００７０】
方法２：前処理および尿クレアチニン標準化。
ステップ１：手術の前と後に表１および表２のバイオマーカーの１つまたは複数ならびに尿クレアチニンを測定する。
ステップ２：尿クレアチニン以外の全ての測定されたバイオマーカーについて、マーカーの値を尿クレアチニンの値で割り算する。
ステップ３：表１のマーカーの処理したマーカー測定値の各々を、マーカー特異的カットオフと比較する。マーカー特異的カットオフを超えるマーカーの数を、判定する。前で特定された数のマーカーがカットオフを超える場合は、患者はＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆカテゴリーに属すると分類される。全てのマーカーがカットオフを超えること、または１つ以外の全てのマーカー、または２つ以外の全てのマーカーなど、または単一のマーカーだけがカットオフを超えることが必要かもしれない。患者がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆとして分類される場合は、評価はここで終わり、そうでなければ評価は次のステップに進行することができる。
ステップ４：表２の単一のマーカーの測定値または表２のマーカーの全ての処理したマーカー測定値の加重平均をとり、結果を前に特定したカットオフと比較する。使用される加重は全てのマーカーについて同じであってもよいが、それらは各マーカーに特異的であってもよい。加重平均がカットオフを上回る場合は、結果をＲＩＦＬＥ  Ｒとして分類する。患者がＲＩＦＬＥ  Ｒとして分類されない場合は、次のステップに進む。
ステップ５：患者を「ＡＫＩなし」として分類する。
【００７１】
方法３：前処理およびベースライン標準化
ステップ１：手術の前と後に表１および表２のバイオマーカーの１つまたは複数ならびに尿クレアチニンを測定する。
ステップ２：各バイオマーカーについて、術後試料の値をベースライン試料の値で割り算する。各々の引き続くステップのために、これらの生じた値を使用する。
ステップ３：表１のマーカーの処理したマーカー測定値の各々を、マーカー特異的カットオフと比較する。マーカー特異的カットオフを超えるマーカーの数を、判定する。前で特定された数のマーカーがカットオフを超える場合は、患者はＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆカテゴリーに属すると分類される。全てのマーカーがカットオフを超えること、または１つ以外の全てのマーカー、または２つ以外の全てのマーカーなど、または単一のマーカーだけがカットオフを超えることが必要かもしれない。患者がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆとして分類される場合は、評価はここで終わり、そうでなければ評価は次のステップに進行することができる。
ステップ４：表２の単一のマーカーの測定値または表２のマーカーの全ての処理したマーカー測定値の加重平均をとり、結果を前に特定したカットオフと比較する。使用される加重は全てのマーカーについて同じであってもよいが、それらは各マーカーに特異的であってもよい。加重平均がカットオフを上回る場合は、結果をＲＩＦＬＥ  Ｒとして分類する。患者がＲＩＦＬＥ  Ｒとして分類されない場合は、次のステップに進む。
ステップ５：患者を「ＡＫＩなし」として分類する。
【００７２】
方法４：前処理、尿クレアチニンおよびベースライン標準化
ステップ１：手術の前と後に、尿クレアチニンを含む表１および／または表２のバイオマーカーのいずれかを測定する。
ステップ２：各バイオマーカーおよびベースラインならびに術後試料について、マーカーの値を同じ試料の尿クレアチニンの値で割り算する。生じた値を次のステップのために使用する。
ステップ３：各バイオマーカーについて、術後試料の値をベースライン試料の値で割り算する。各々の引き続くステップのために、これらの生じた値を使用する。
ステップ４：表１のマーカーの処理したマーカー測定値の各々を、マーカー特異的カットオフと比較する。マーカー特異的カットオフを超えるマーカーの数を、判定する。前で特定された数のマーカーがカットオフを超える場合は、患者はＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆカテゴリーに属すると分類される。全てのマーカーがカットオフを超えること、または１つ以外の全てのマーカー、または２つ以外の全てのマーカーなど、または単一のマーカーだけがカットオフを超えることが必要かもしれない。患者がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆとして分類される場合は、評価はここで終わり、そうでなければ評価は次のステップに進行する。
ステップ５：表２のマーカーの全ての処理したマーカー測定値の加重平均をとり、結果を前に特定したカットオフと比較する。使用される加重は全てのマーカーについて同じであってもよいが、それらは各マーカーに特異的であってもよい。加重平均がカットオフを上回る場合は、結果をＲＩＦＬＥ  Ｒとして分類する。患者がＲＩＦＬＥ  Ｒとして分類されない場合は、次のステップに進む。
ステップ６：患者を「ＡＫＩなし」として分類する。
【００７３】
追加の分類法：
患者をＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆ、ＲＩＦＬＥ  ＲまたはＡＫＩなしと分類するための上記の分類法の代わりに、いくつかの他の標準の分類ツールを同様に使用することができた。可能な方法は、限定されずに以下のものであってもよい：
・線形回帰、ロジスティック回帰、多項回帰
・ペナルティー線形またはロジスティックまたは多項回帰
・サポートベクターマシン（Support Vector Machines）
・線形判別分析
・二次判別分析
・分類および回帰ツリー
・ランダムフォレスト（Random Forests）
【００７４】
当技術分野で訓練された人々にとって、これらおよび他の類似の方法は全て標準とみなされ、上記の分類ステップのいずれかに容易に適用できる。これらおよび他の方法のより詳細な参考文献については、Hastie, Tibshirani and Friedmanによる"Elements of Statistical Learning"を参照する。
【００７５】
試料分析操作を促進するために、得られるデータは、デジタル式コンピュータを使用して分析してもよい。一般的に、コンピュータは、デバイスからのデータの受け取りおよび保存、ならびに集めたデータの分析および報告、例えばバックグラウンドの減算、対照が適切に性能を発揮したことの検証、シグナルの標準化、ハイブリダイズした標的の量を判定するための蛍光データの解釈、バックグラウンドの標準化等のために適切にプログラムされる。
【００７６】
急性の腎臓処置
ＡＫＩの処置のために、抗アポトーシス／抗壊死薬剤、抗炎症剤、抗敗血剤、様々な増殖因子および血管拡張薬などの新規治療薬剤の臨床検査を使用することができるが、結果は満足できるものでない。ＡＫＩのための満足できる治療薬剤の欠如は、特にＡＫＩの診断のために適する早期バイオマーカーの欠如のためであり、したがって、早期介入の実行をほとんど不可能にしている。
【００７７】
当技術分野に、ＡＫＩを処置する多くの方法があり、例えば、処置戦略には以下のものがある：
・流体管理の変更
・処置レジメンの変更（腎毒性薬物を腎毒性の低い他の薬物に交換する、腎毒性薬物による処置を中止する、薬物製剤を腎毒性の低い製剤に変更する）
・腎臓を害するか、既存の腎臓損傷を悪化させる可能性のある処置／臨床ルーチンを避ける（例えば血管造影、造影色素の投与）
・腎臓置換処置または支持療法を開始する
【００７８】
ＡＫＩの処置で使用される、入手可能な薬物：
−  腎臓灌流を増加させる薬物、例えばフェノールドーパム
−  炎症および酸化的ストレスを阻害する薬物、例えばＮ−アセチル−システイン
−  利尿剤、例えばフロセミド
−  ドーパミン
−  心房性ナトリウム利尿ペプチド
−  組換えヒト（ｒｈ）ＩＧＦ−１
−  テオフィリン
【００７９】
ＡＫＩを処置する薬物候補または提案された処置戦略：
−  Ｐ３８阻害剤、例えばＮｏｖａｒｔｉｓ  ＢＣＴ１９７
−  Ｐ５３阻害剤、例えばＱｕａｒｋ  Ｉ５ＮＰ／Ｑｕａｒｋ  ＱＰＩ−１００２
−  鉄キレーター、例えばデフェリプロン
−  中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）阻害剤および／またはエンドセリン変換酵素（ＥＣＥ）阻害剤または骨形成タンパク質（ＢＭＰ）ファミリーの鍵となる受容体の二重阻害剤活性化因子、例えばＴＨＲ−１８４
−  メラノコルチン（アルファ−ＭＳＨ）ペプチド類似体、例えばＺＰ１４８０（ＡＢＴ−７１９）またはＡＰ２１４
−  炎症経路の阻害剤
−  幹細胞療法
【００８０】
本発明の方法は、表１および／または表２に存在する１つまたは複数のマーカーの濃度の判定に基づく、ＡＫＩの重症度の予測を可能にする。したがって、本発明の方法を使用して得られる結果に基づいて、医師は治療的介入の最良形態を判定することができるようになる。本発明は、個体がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆ、ＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす可能性があるかまたはＡＫＩを起こす可能性はないかを判定することができ、そのことは各患者個々のために適当な治療戦略を選択するのに重要である。例えば、対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こすと予測される場合は、医師はおそらく透析などの支持腎機能療法で処置するであろうが、個体がＲＩＦＬＥ  Ｒを起こすと予測される場合は、対象は透析を提供されないだろう。本発明は、心臓手術の後に個体がＡＫＩのどのグレードの重症度を有するかについての予測を初めて可能にする。したがって、この技術革新は、ＡＫＩを処置または予防するためのパーソナライズされた療法の基礎であり、したがって患者の転帰を向上させるのを助ける。
【実施例】
【００８１】
実施例１：  臨床データの概要
この分析のためのデータは、心肺バイパス手術を受ける患者における観察的前向き調査研究で収集された。選択的手術を受けた１８歳またはいかなる性別の、書面で同意した患者を試験に含めることができた。試験に登録された患者のうち、我々の分析で評価が可能であるために、患者は以下の基準を満たさなければならなかった：
−  患者は、研究を完了した
−  患者は、ベースライン／スクリーニング血清クレアチニン値ならびに２４〜７２時間のウィンドウ中に少なくとも２つの血清クレアチニン測定値を有する。血清クレアチニンは一般的に２４時間おきに１回採取されるだけなので、実際上は、血清クレアチニンが１２時間〜８４時間のウィンドウ中にある場合は、この基準は満たされたとみなした。
−  患者は、１、２、４または８時間の時点で、少なくとも２つの収集された尿試料を有する
−  患者は、１２、２４または４８時間の時点で収集される少なくとも１つの尿試料を有する。
研究では、合計２２０人の患者が登録され、そのうち２００人が上の基準により評価が可能だった。
【００８２】
評価が可能な患者について、彼らのＡＫＩ状態も評価した。レベル「危険」、「損傷」または「不全」の１つのＡＫＩを有すると評価されるために、患者の血清クレアチニンのベースラインからの変化は、少なくとも３６時間の間閾値を上回らなければならない（腎前性高窒素血症による血清クレアチニンの一過性の上昇を排除するために）。さらに、手術から最初の７日以内に基準が満たされる場合にだけ、患者がＡＫＩを有するとして数える（その頃までにＣＰＢ手術によって引き起こされるＡＫＩが提示されているべきである）。血清クレアチニンの非常に短時間の増加を有するだけの患者がＡＫＩ症例と数えられないように、我々は３６時間の時間ウィンドウを導入した。血清クレアチニンのそのような持続的増加が、腎臓への永続的損傷の非常により優れた評価を与えると我々は考える。詳細には、分類は以下の規則に従った：
−  患者が少なくとも３６時間の間、ベースライン血清クレアチニンレベルから２００％を超える増加を有する場合は、患者は「不全」として分類される。
−  患者が「不全」として分類されずに、少なくとも３６時間ベースラインを少なくとも１００％上回る血清クレアチニンの増加を有する場合は、患者は「損傷」として分類される。
−  患者が「損傷」または「不全」として分類されずに、少なくとも３６時間の間、ベースラインを少なくとも５０％上回る血清クレアチニンの増加を有する場合は、患者は「危険」として分類される。
−  患者が「危険」、「損傷」または「不全」として分類されない場合は、患者は「ＡＫＩなし」として分類される。
【００８３】
これらの基準は、ＣＰＢ手術から７日以内に満たされなければならない。血清クレアチニンのベースライン値として、両方とも入手できる場合は我々はスクリーニングおよび手術前の値の平均を使用し、手術前の値が欠落している場合はスクリーニング値を、スクリーニング値が欠落している場合は手術前の値を使用する。スクリーニングおよび手術前の血清クレアチニン値の両方が欠落している患者は、評価不能であるとみなされる。バイオマーカーレベルを判定するためのキットは、ＫｉｄｎｅｙＭＡＰ（登録商標）キットを使用するＲｕｌｅｓ  Ｂａｓｅｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＲＢＭ）から得られた。
【００８４】
２００人の患者のうち、これらの基準により１８７人の患者を「ＡＫＩなし」、８人を「危険」、３人を「損傷」および２人を「不全」として分類した。鍵となる臨床変数の要約統計値の表を、下の表に提供する。
【００８５】
【表５】
0006416778.tif 000007
【００８６】
実施例２：  考慮中のバイオマーカーおよび前処理
各バイオマーカーについて、分析でそれらを使用する前に特定の前処理ステップを実施した。使用するアッセイの感度のために、尿中のマーカーが検出限界を下回り、したがって値が報告されないか、または定量限界を下回る（値は報告されえる）ことが起こる可能性がある。これらの両方の場合に、測定値はこのバイオマーカーおよび試料ロットの定量限界の半分に等しい値で置き換えられる。測定結果は、以後前処理測定値と呼ぶ。
【００８７】
我々の以下の分析では、この前処理測定値ならびに尿クレアチニン（ＵＣＲＥＡ）で標準化された測定値を使用する。この標準化のために、同じ尿試料からの尿クレアチニンの前処理測定値が使用される。標準化は、尿での前処理バイオマーカー測定値を、同じ尿試料からの前処理尿クレアチニン測定値によって割り算することによって実施する。これを、以下ＵＣＲＥＡ標準化バイオマーカー測定値と呼ぶ。
【００８８】
前処理およびＵＣＲＥＡ標準化測定値に加えて、前処理およびＵＣＲＥＡ標準化測定値のベースラインからの変化も評価する。これのために、患者の手術前の尿試料が入手できなければならない。手術前の尿試料が欠落している場合は、この患者のベースライン測定値からの変化は欠落しているとみなす。患者の前処理バイオマーカーについては、ベースラインからの変化倍率を得るために、前処理バイオマーカー測定値を、同じ患者の前処理ベースライン測定値によって割り算する。患者のＵＣＲＥＡ標準化バイオマーカーについては、ベースラインからの変化倍率を得るために、ＵＣＲＥＡ標準化バイオマーカー測定値を、同じ患者の標準化ベースライン測定値によって割り算する。
【００８９】
全般的に、我々の分析では、前処理、標準化、ベースラインからの前処理変化倍率、およびベースライン測定値からのＵＣＲＥＡ標準化変化倍率を全てのバイオマーカーについて考慮する。使用時に、これらの４つの導き出された変数の各々に底１０への対数変換を適用する。
【００９０】
実施例３：  モデルの一変量評価
考慮中の各バイオマーカーについて、２つの二成分エンドポイントに関してレシーバー動作曲線下面積（ＡＵＣ）を計算する。第１の評価では、「損傷」または「不全」として分類される患者を「ＡＫＩなし」または「危険」として分類される患者と比較する。第２の評価では、「損傷」または「不全」のいずれかとして分類される患者を排除し、「危険」として分類される患者を「ＡＫＩなし」として分類される患者と比較するだけである。
【００９１】
実施例４：  「損傷」または「不全」を「危険」または「ＡＫＩなし」に対して分類する
患者を「危険」または「ＡＫＩなし」に対して「損傷」または「不全」として分類するときには、前処理、ＵＣＲＥＡ標準化、ベースラインからの前処理変化倍率、およびベースライン測定値からのＵＣＲＥＡ標準化変化倍率を使用すると、バイオマーカーアルファ−１−ミクログロブリン（Ａ１Ｍｉｃｒｏ）、クラステリン（ＣＬＵ）、シスタチン−Ｃ（ＣＹＳＣ）、インターロイキン−１８（ＩＬ−１８）、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）およびトレフォイル因子３（ＴＦＦ３）は、０〜４８時間の範囲で性能を示す。
【００９２】
以下の表では、これらのバイオマーカーの各々について、４つの変換の各々について、ならびにＩＣＵへの到着から０、１、２、４、８、１２、２４および４８時間後の各時点についてのデータを提示する。
【００９３】
【表６】
0006416778.tif 000008
0006416778.tif 000009
前処理変換を使用するバイオマーカーA1Micro、CLU、CYSC、IL-18、NGALおよびTFF3については、表から、時点0、1、2、4、8、12、24および48時間について、「危険」または「AKIなし」と分類される者から「損傷」または「不全」と分類されるAKI患者を識別するためにこれらのマーカーを使用することができることがわかる。全てのこれらのマーカーについて、1時間、2時間、4時間、8時間および48時間の時点は特に優れた性能を示す。さらに、この例ではAKIの重度の症例を分類するために、マーカーA1Micro、CYSC、IL-18、NGALおよびTFF3が特に優れている。
【００９４】
【表７】
0006416778.tif 000010
0006416778.tif 000011
UCREA標準化変換を使用するバイオマーカーA1Micro、CLU、CYSC、IL-18、NGALおよびTFF3については、表から、0、1、2、4、8、12、24および48時間の時点について、「危険」または「AKIなし」と分類される者から「損傷」または「不全」と分類されるAKI患者を識別するためにこれらのマーカーを使用することができることがわかる。全てのこれらのマーカーについて、1時間、2時間、4時間、8時間および48時間の時点は特に優れた性能を示す。さらに、この例ではAKIの重度の症例を分類するために、マーカーA1Micro、CYSC、IL-18、NGALおよびTFF3が特に優れている。
【００９５】
【表８】
0006416778.tif 000012
0006416778.tif 000013
ベースライン変換からの前処理変化倍率（pre-processed fold-change）を使用するバイオマーカーA1Micro、CLU、CYSC、IL-18、NGALおよびTFF3については、表から、0、1、2、4、8、12、24および48時間の時点について、「危険」または「AKIなし」と分類される者から「損傷」または「不全」と分類されるAKI患者を識別するためにこれらのマーカーを使用することができることがわかる。全てのこれらのマーカーについて、1時間、2時間、4時間および48時間の時点は特に優れた性能を示す。さらに、この例ではAKIの重度の症例を分類するために、マーカーCLU、CYSC、IL-18およびNGALが特に優れている。
【００９６】
【表９】
0006416778.tif 000014
0006416778.tif 000015
ベースライン変換からのUCREA標準化変化倍率を使用するバイオマーカーA1Micro、CLU、CYSC、IL-18、NGALおよびTFF3については、表から、0、1、2、4、8、12、24および48時間の時点について、「危険」または「AKIなし」と分類される者から「損傷」または「不全」と分類されるAKI患者を識別するためにこれらのマーカーを使用することができることがわかる。全てのこれらのマーカーについて、1時間、2時間、4時間および48時間の時点は特に優れた性能を示す。さらに、この例ではAKIの重度の症例を分類するために、マーカーCLU、CYSC、IL-18およびNGALが特に優れている。
【００９７】
実施例５：  「ＡＫＩなし」に対して「危険」に分類する
「ＡＫＩなし」と分類される患者に対して「危険」と分類されるＡＫＩ患者を比較する場合、バイオマーカーＡ１Ｍｉｃｒｏ、Ｂ２ＭｉｃｒｏおよびＴＦＦ３は、前処理、ＵＣＲＥＡ標準化、ベースラインからの前処理変化倍率、ベースラインからのＵＣＲＥＡ標準化変化倍率の変換を使用すると、０〜４８時間の範囲で性能を示す。
【００９８】
以下の表では、これらのバイオマーカー、変換、ならびに０、１、２、４、８、１２、２４および４８時間の時点の各々についてのデータを提示する。
【００９９】
【表１０】
0006416778.tif 000016
0006416778.tif 000017
前処理変換を使用するバイオマーカーA1Micro、B2MicroおよびTFF3は、「AKIなし」患者に対して「危険」を分類する性能を示す。
【０１００】
【表１１】
0006416778.tif 000018
0006416778.tif 000019
UCREA標準化変換を使用するバイオマーカーA1Micro、B2MicroおよびTFF3は、「AKIなし」に対して「危険」を分類する性能を示す。マーカーの性能は、1、2および4時間の時点で特に優れている。
【０１０１】
【表１２】
0006416778.tif 000020
ベースラインからのUCREA標準化変化倍率を使用するバイオマーカーA1Micro、B2MicroおよびTFF3は、「危険」と分類される患者を「AKIなし」と分類される患者から識別する性能を示す。
【０１０２】
【表１３】
0006416778.tif 000021
0006416778.tif 000022
ベースラインからのUCREA標準化変化倍率を使用するバイオマーカーA1Micro、B2MicroおよびTFF3は、「危険」と分類される患者を「AKIなし」と分類される患者から識別する性能を示す。
【０１０３】
実施例６：  モデルの多変量評価
モデルの多変量評価のために、我々が使用する分類問題に従い、一変量マーカーを多変量モデルに合わせるための異なる方法を使用する。
【０１０４】
「危険」および「ＡＫＩなし」に対する「損傷」および「不全」患者の分類のために、観察が「正常な」患者とどのように異なるかについて評価するアプローチを使用する。第１のステップでは、モデル中のマーカーごとに、対数凹密度関数に適合するアプローチを使用して「ＡＫＩなし」と分類される患者のマーカーの分布を推定する。新たな観察を評価するとき、バイオマーカーごとに、「ＡＫＩなし」患者の推定される分布に関するｐ値が評価される。次に、それらを平均することによってｐ値を合体させる。ｐ値を合体させるための我々が考慮した他の選択肢は、ｐ値の対数の最小値、最大値または平均をとる。これらの方法の各々は、得られたモデルの感度／特異性曲線に関して特定のトレードオフを有する。ここでは、危険スコアのより小さい値は、「損傷」または「不全」と分類されるＡＫＩを有するより高い危険に対応する。
【０１０５】
「危険」または「ＡＫＩなし」に対して「損傷」または「不全」に分類するために、マーカーＡ１Ｍｉｃｒｏ、ＣＬＵ、ＣＹＳＣ、ＩＬ−１８、ＮＧＡＬおよびＴＦＦ３が考慮されている。我々はこれらのマーカーの全ての可能な組合せを考慮するが、同時の場合には多くても３つのマーカーに制限する。これらのモデルの各々について、モデルが達成するＡＵＣに関して１時間、２時間および４時間の時点で分類性能を計算する。その後、３つのＡＵＣを平均することによってモデルにランクをつける。表１に、１時間、２時間および４時間の時点でのＡＵＣの平均によってソートされた、全てのこれらのモデルのリストが見出される。これらの３つの時点でのＡＵＣも、同様に列挙される。この表で使用されるバイオマーカーデータは、尿クレアチニンによる標準化を使用して変換されている。
【０１０６】
【表１４】
0006416778.tif 000023
0006416778.tif 000024
【０１０７】
「ＡＫＩなし」カテゴリーの患者に対する「危険」カテゴリーの患者の分類のために、２つの異なるモデルを考慮する。第１のバージョンでは、変換後のままのバイオマーカーをとり、それらを平均する。得られたマーカーの平均は危険スコアであり、より高い値はＡＫＩを有するより高い危険に対応する。第２のバージョンでは、「ＡＫＩなし」患者の群で平均値０および標準偏差１を有するように、バイオマーカーの各々を先ず標準化する。この標準化の後、モデル中のマーカーを平均し、この平均は危険スコアとして使用され、前と同じようにより高い値はＡＫＩのより高い危険に対応する。表１に、１時間、２時間および４時間の時点でのＡＵＣの平均によってソートされた、全てのこれらのモデルのリストが見出される。これらの３つの時点でのＡＵＣも、同様に列挙される。この表で使用されるバイオマーカーデータは、尿クレアチニンによる標準化を使用して変換されている。
【０１０８】
【表１５】
0006416778.tif 000025
【０１０９】
実施例７：  時間別のアッセイの範囲およびＡＫＩの重症度
マーカーのダイナミックレンジに基づくマーカーの選択も実施した。この例では、ＩＬ−１８、ＮＧＡＬおよびＴＦＦ３のためのアッセイの変動性の範囲を、異なる時点での異なるＡＫＩ群について示す。これらのグラフのために、尿クレアチニン標準化値を使用した。
【０１１０】
図１は、手術の前と後の異なる時点での尿クレアチニン標準化の後のＩＬ−１８値の箱ひげ図を示す。示すデータは、プロッティングの前に対数を底１０にとることによって先ず変換される。グラフは、「損傷／不全」患者を「ＡＫＩなし」または「危険」患者と比較するときの、１００以上の係数のＩＬ−１８の変化倍率を図示する。
【０１１１】
図１は、手術の前と後の異なる時点の尿クレアチニン標準化の後のＮＧＡＬ値の箱ひげ図を示す。示すデータは、プロッティングの前に対数を底１０にとることによって先ず変換される。グラフは、「損傷／不全」患者を「ＡＫＩなし」または「危険」患者と比較するときの、１０以上の係数のＮＧＡＬの変化倍率を図示する。
【０１１２】
図３は、手術の前と後の異なる時点の尿クレアチニン標準化の後のＴＦＦ３値の箱ひげ図を示す。示すデータは、プロッティングの前に対数を底１０にとることによって先ず変換される。グラフは、「損傷／不全」患者を「ＡＫＩなし」または「危険」患者と比較するときの、３以上の係数のＴＦＦの変化倍率を図示する。さらにグラフは、手術後のＴＦＦ３レベルが、他のバイオマーカーよりもよく、例えばＩＬ−１８よりもよく、「危険」患者を「ＡＫＩなし」患者と区別することができることを示す。
本発明は、以下の態様を包含し得る。
［１］
心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）損傷の重症度を評価する方法であって、
心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で表１および／または表２の１つまたは複数のマーカーを測定するステップと、
表１のバイオマーカーの１つまたは複数の測定されたレベルに基づいて危険スコアを生成するステップであって、危険スコアが所定のカットオフを超える場合、対象はＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があると判定されるステップと、
任意選択で、対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があると判定されない場合は、表２から選択されるバイオマーカーの１つまたは複数の測定されたレベルに基づいて危険スコアをさらに生成するステップであって、危険スコアが所定のカットオフを超える場合、対象はＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があると判定され、または危険スコアが所定のカットオフより低い場合、対象はＡＫＩを起こす危険がないと判定されるステップと、
を含む方法。
［２］
対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があるかどうか判定するために、表１の２つ以上のバイオマーカーが測定される、上記［１］に記載の方法。
［３］
対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があるかどうか判定するために、表１の３つ以上のバイオマーカーが測定される、上記［１］に記載の方法。
［４］
対象がＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があるかどうか判定するために、表２の２つ以上のバイオマーカーが測定される、上記［１］に記載の方法。
［５］
対象がＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があるかどうか判定するために、表２の３つのバイオマーカーが測定される、上記［１］に記載の方法。
［６］
対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／ＦもしくはＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があるかまたはＡＫＩを起こす危険がないか判定するために、表１および表２の２つ以上のバイオマーカーが測定される、上記［１］に記載の方法。
［７］
対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があるかどうか判定するために、表１４に示すバイオマーカー組合せのいずれかが測定される、上記［１］に記載の方法。
［８］
対象がＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があるかどうか判定するために、表１５に示すバイオマーカー組合せのいずれかが測定される、上記［１］に記載の方法。
［９］
心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）損傷の重症度を評価する方法であって、
心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で、ＩＬ−１８、シスタチンＣ、ＮＧＡＬ、ＴＦＦ３、クラステリン、Ｂ２−ミクログロブリンおよびＡ１−ミクログロブリンからなる群から選択されるバイオマーカーの少なくとも１つを測定するステップと、
バイオマーカーの１つまたは複数の測定されたレベルに基づいて危険スコアを生成するステップであって、所定のカットオフと比較したときの危険スコアが、対象がＲＩＦＬＥ
Ｉ／Ｆ、ＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があるか、またはＡＫＩの危険がないかの指標となるステップと、
を含む方法。
［１０］
心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）損傷の重症度を評価する方法であって、
心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で、ＩＬ−１８、シスタチンＣ、ＮＧＡＬ、ＴＦＦ３、クラステリンおよびＡ１−ミクログロブリンからなる群から選択されるバイオマーカーの少なくとも２つを測定するステップと、
少なくとも２つのバイオマーカーの測定されたレベルに基づいて危険スコアを生成するステップであって、危険スコアが、対象がＲＩＦＬＥ  Ｉ／Ｆを起こす危険があるかどうかの指標となるステップと、
を含む方法。
［１１］
心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）損傷の重症度を評価する方法であって、
心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で、ＴＦＦ３、Ｂ２−ミクログロブリンおよびＡ１−ミクログロブリンからなる群から選択されるバイオマーカーの少なくとも１つを測定するステップと、
バイオマーカーの１つまたは複数の測定されたレベルに基づいて危険スコアを生成するステップであって、危険スコアが、対象がＲＩＦＬＥ  Ｒを起こす危険があるかまたはＡＫＩを起こす危険がないかの指標となるステップと、
を含む方法。
［１２］
心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）の発症を診断または予測する方法であって、心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で、ＩＬ−１８、シスタチンＣ、ＮＧＡＬ、ＴＦＦ３、クラステリン、Ｂ２−ミクログロブリンおよびＡ１−ミクログロブリンから選択されるバイオマーカーの少なくとも４つを測定するステップであって、そのレベルはＡＫＩの指標となるか、またはＡＫＩの発症の前兆となるステップを含む、方法。
［１３］
心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）の発症を診断または予測する方法であって、心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で、ＴＦＦ３と、ＩＬ１８、シスタチンＣ、ＮＧＡＬ、クラステリン、Ｂ２−ミクログロブリンおよびＡ１−ミクログロブリンから選択されるバイオマーカーの少なくとも１つとを測定するステップであって、そのレベルはＡＫＩの指標となるか、またはＡＫＩの発症の前兆となるステップを含む、方法。
［１４］
心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）の発症を診断または予測する方法であって、心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で、Ａ１−ミクログロブリンと、ＩＬ１８、シスタチン、ＮＧＡＬ、クラステリン、Ｂ２−ミクログロブリンおよびＴＦＦ−３から選択されるバイオマーカーの少なくとも１つとを測定するステップであって、そのレベルはＡＫＩの指標となるか、またはＡＫＩの発症の前兆となるステップを含む、方法。
［１５］
ＣＰＢ手術の後に患者で尿クレアチニン（ｕＣｒ）を測定するステップ、および前記患者で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）の発症の予測因子としてマーカーの各々とｕＣｒとの比を判定するステップをさらに含む、上記項目のいずれかに記載の方法。
［１６］
バイオマーカーが、心臓手術の後０時間〜１２時間の間に測定される、上記項目のいずれかに記載の方法。
［１７］
対象でＡＫＩの発症を予測するために、少なくとも１つのバイオマーカー／ｕＣｒの加重線形組合せがレシーバー動作特性（ＲＯＣ）曲線下面積分析と共に使用される、上記項目のいずれかに記載の方法。
［１８］
心臓手術の後２４時間以内に採取された患者の試料中の、表１および表２に列挙されるバイオマーカーのいずれか１つの定量的測定のための診断キットであって、バイオマーカーのレベルは、対象がＡＫＩを起こすかどうかおよびＡＫＩの重症度に関する指標となる、診断キット。
［１９］
心臓手術の後に対象で急性腎臓損傷（ＡＫＩ）の発症を診断または予測するための看護現場デバイスであって、心臓手術の後２４時間以内に対象から得た生体試料で表１からの少なくとも１つのマーカーおよび表２からの１つのマーカーを測定するステップを含み、そのレベルはＡＫＩおよびＡＫＩの重症度の指標となる、看護現場デバイス。
【図１】
0006416778.tif 000026
【図２】
0006416778.tif 000027
【図３】
0006416778.tif 000028