(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
0006297055.tif 000024
（式中、
Ｒ１は次の構造
【化２】
0006297055.tif 000025
のうちのいずれかであり、
Ｒ２は、水素、−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキル、ハロゲン、（Ｃ１〜３）−アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキル−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキルまたはＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキル、ハロゲンまたは（Ｃ１〜３）−アルキルであり、
Ｒ４は水素またはフッ素であり、
Ｒ５は、（Ｃ１〜３）−アルキル、（Ｃ１〜３）−フルオロ−アルキルまたはＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、同一であるか、または異なっており、水素、（Ｃ１〜３）−アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキルまたはハロゲンからそれぞれ独立に選択され、
かつ
Ｒ１３は、水素、（Ｃ１〜３）−アルキルまたは（Ｃ１〜３）−フルオロ−アルキルである）
またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体。
【請求項２】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体を、１種または複数種の薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体とともに含む医薬組成物。
【請求項３】
薬剤として使用するための、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体、または請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８の調節が関与する障害の治療に使用するための、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体、または請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
次式を有する置換２−アミノ−４−ヒドロキシキナゾリン。
【化３】
0006297055.tif 000026
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、複素環置換２−アミノ−キナゾリン誘導体、その調製方法、医薬組成物、およびウイルス感染症の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の調節または活性化作用が関与する、ウイルス感染症、免疫障害または炎症性障害の治療における複素環置換２−アミノ−キナゾリン誘導体の使用に関する。Ｔｏｌｌ様受容体は、ロイシンに富む細胞外ドメイン、および保存領域を含有する細胞質の伸長を特徴とする主要な膜貫通タンパク質である。自然免疫系は、一定のタイプの免疫細胞の細胞表面上に発現するこのＴＬＲを介して病原体関連分子パターンを認識し得る。外来病原体を認識すると、サイトカインの産生および食細胞における共刺激分子の上方制御が活性化される。これにより、Ｔ細胞挙動が調節される。
【０００３】
ほとんどの哺乳類種には、１０〜１５種類のＴｏｌｌ様受容体があると推定されている。（ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３と命名された）１３種のＴＬＲが、ヒトおよびマウスでともに確認されており、これらの多くと同等の形態が、他の哺乳類種において見出されている。しかしながら、ヒトに見られるある特定のＴＬＲに相当するものが、全ての哺乳動物に存在するわけではない。例えば、ヒトにおけるＴＬＲ１０と類似したタンパク質をコードする遺伝子がマウスにおいて存在するが、過去のどこかの時点で、レトロウイルスによって損傷されたようである。一方、マウスは、ヒトにおいては示されないＴＬＲ１１、１２および１３を発現する。他の哺乳動物は、ヒトに見られないＴＬＲを発現し得る。他の非哺乳類種は、トラフグに見られるＴＬＲ１４によって示されるような、哺乳動物とは異なるＴＬＲを有し得る。これにより、ヒト自然免疫のモデルとして実験動物を使用するプロセスが複雑になる恐れがある。
【０００４】
ＴＬＲに関する概説については、次の雑誌論文を参照されたい。Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｊ．Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ，４２６，ｐ３３−３８，２００３；Ａｋｉｒａ，Ｓ．，Ｔａｋｅｄａ，Ｋ．，ａｎｄ  Ｋａｉｓｈｏ，Ｔ．，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２１，ｐ３３５−３７６，２００３；Ｕｌｅｖｉｔｃｈ，Ｒ．Ｊ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４，ｐ５１２−５２０，２００４。
【０００５】
国際公開第２００６／１１７６７０号パンフレットにはプリン誘導体、国際公開第９８／０１４４８号パンフレットおよび国際公開第９９／２８３２１号パンフレットにはアデニン誘導体、および国際公開第２００９／０６７０８１号パンフレットにはピリミジンなど、Ｔｏｌｌ様受容体に対する活性を示す化合物が既に記載されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、従来技術の化合物と比較して、選択性が好ましく、効力が高く、代謝安定性が高く、安全性プロファイルが改善されている新規なＴｏｌｌ様受容体調節剤が強く求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明によって、式（Ｉ）の化合物
【化１】
0006297055.tif 000002
またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体を提供し、式中、
Ｒ１は次の構造
【化２】
0006297055.tif 000003
のうちのいずれかであり、
Ｒ２は、水素、−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキル、ハロゲン、（Ｃ１〜３）−アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキル−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキルまたはＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキル、ハロゲン、（Ｃ１〜３）−アルキルまたは−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ７であり、ここでＲ７は、−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキル、ＮＨ２、ＮＨ（ＣＨ３）、Ｎ（ＣＨ３）２、Ｎ（ＣＨ３）（Ｃ１〜３）−アルキル、Ｎ（（Ｃ１〜３）−アルキル）２またはピロリジン（ｐｙｒｏｌｉｄｉｎｅ）であり、
Ｒ４は水素またはフッ素であり、
Ｒ５は、（Ｃ１〜３）−アルキル、（Ｃ１〜３）−フルオロ−アルキルまたはＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ６は、ＮＨ２、ＮＨ（ＣＨ３）もしくはＮ（ＣＨ３）２、１つまたは複数のＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１またはＲ１２で任意選択的に置換された（ヘテロ）−アニリン、または１つまたは複数のＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１またはＲ１２で任意選択的に置換された（ヘテロ）−ベンジルアミンであり、
Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、同一であるか、または異なっており、水素、（Ｃ１〜３）−アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキルまたはハロゲンからそれぞれ独立に選択され、
かつ
Ｒ１３は、水素、（Ｃ１〜３）−アルキルまたは（Ｃ１〜３）−フルオロ−アルキルである。
【０００８】
本発明に係る好ましい化合物は、表ＩＩに示す番号１２および２９の化合物である。
【０００９】
式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容できる塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物または多形体は、医薬品として、特に、Ｔｏｌｌ様受容体（特に、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８活性）の調節剤としての活性を有する。
【００１０】
さらなる態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体を、１種または複数種の薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体とともに含む医薬組成物を提供する。
【００１１】
さらに、本発明に係る式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、互変異性体、立体異性体の形態もしくは多形体、または式（Ｉ）の前記化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、互変異性体、立体異性体の形態もしくは多形体を含む医薬組成物は、薬剤として使用され得る。
【００１２】
本発明の別の態様は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、互変異性体、立体異性体の形態もしくは多形体、または式（Ｉ）の前記化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、互変異性体、立体異性体の形態もしくは多形体を含む前記医薬組成物が、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８の調節が関与する障害の治療に相応に使用され得るというものである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
「（Ｃ１〜３）−アルキル」という用語は、規定数の炭素原子を含有する、直鎖状、分枝鎖状または環状の飽和脂肪族炭化水素を指す。
【００１４】
「（Ｃ１〜３）−フルオロ−アルキル」という用語は、１個または複数個の水素原子がフッ素原子で置換された、規定数の炭素原子を含有する、直鎖状、分枝鎖状または環状の脂肪族炭化水素を指す。
【００１５】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素、好ましくはフッ素および塩素を指す。
【００１６】
「アニリン」という用語は、アミノ基に結合したフェニル基からなる式Ｃ６Ｈ５ＮＲ１３−の化合物を指し、「（ヘテロ）−アニリン」は、芳香環に１〜３個の窒素原子、好ましくは１個の窒素原子が存在することを意味する。
【００１７】
「ベンジルアミン」という用語は、アミン官能基に結合したベンジル基Ｃ６Ｈ５ＣＨ２からなる式Ｃ６Ｈ５ＣＨ２ＮＲ１３−の化合物を意味し、「（ヘテロ）−ベンジルアミン」は、芳香環に１〜３個の窒素原子、好ましくは１個の窒素原子が存在することを意味する。
【００１８】
本明細書で使用する場合、実線のくさび形結合としてでも破線のくさび形結合としてでもなく実線としてのみ示される結合を有する任意の化学式、あるいは１個以上の原子の周りに特定の配置（例えばＲ、Ｓ）を有するものとして示される任意の化学式は、それぞれにあり得る立体異性体、または２つ以上の立体異性体の混合物を想定している。
【００１９】
本明細書の上記または下記における「立体異性体」、「立体異性体の形態」または「立体化学的な異性体の形態」という用語は、互換的に使用される。
【００２０】
本発明は、純粋な立体異性体としてまたは２つ以上の立体異性体の混合物としての、本発明の化合物の全ての立体異性体を含む。
鏡像異性体は、重ね合わせることができない互いの鏡像となっている立体異性体である。１対の鏡像異性体の１：１混合物は、ラセミ体またはラセミ混合物である。
【００２１】
ジアステレオマー（またはジアステレオ異性体）は、鏡像異性体ではない立体異性体であり、すなわち、鏡像の関係にない。化合物が二重結合を含有する場合、置換基は、Ｅ配置またはＺ配置であり得る。化合物が少なくとも二置換非芳香族環式基を含有する場合、置換基は、シス配置またはトランス配置であり得る。
【００２２】
したがって、本発明は、化学的に可能な場合はいつでも、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体、Ｅ異性体、Ｚ異性体、シス異性体、トランス異性体、およびこれらの混合物を含む。
【００２３】
その全ての用語、すなわち、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体、Ｅ異性体、Ｚ異性体、シス異性体、トランス異性体およびこれらの混合物の意味は、当業者に公知である。
【００２４】
絶対配置は、カーン・インゴルド・プレローグ表示法に従って明記される。不斉原子における配置は、ＲまたはＳによって特定される。絶対配置が不明の分割立体異性体は、これが平面偏光を回転させる方向に応じて（＋）または（−）によって示すことができる。例えば、絶対配置が不明の分割鏡像異性体は、これが平面偏光を回転させる方向に応じて（＋）または（−）によって示すことができる。
【００２５】
特定の立体異性体が同定される場合、これは、前記立体異性体が他の立体異性体を実質的に含まない、すなわち５０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、さらにより好ましくは５％未満、特に２％未満、最も好ましくは１％未満の他の立体異性体を伴うことを意味する。従って、式（Ｉ）の化合物が、例えば（Ｒ）と明記されるとき、これは、化合物が（Ｓ）異性体を実質的に含まないことを意味し、式（Ｉ）の化合物が、例えばＥと明記されるとき、これは、化合物がＺ異性体を実質的に含まないことを意味し、式（Ｉ）の化合物が、例えばシスと明記されるとき、これは、化合物がトランス異性体を実質的に含まないことを意味する。
【００２６】
式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容できる塩は、その酸付加塩および塩基塩を含む。好適な酸付加塩は、非毒性塩を形成する酸から形成される。好適な塩基塩は、非毒性塩を形成する塩基から形成される。
【００２７】
本発明の化合物はまた、非溶媒和形態および溶媒和形態で存在してもよい。「溶媒和物」という用語は、本発明の化合物と、１種または複数種の薬学的に許容できる溶媒分子、例えばエタノールとを含む分子錯体を表すために、本明細書において使用される。
【００２８】
「多形体」という用語は、本発明の化合物が２つ以上の形態または結晶構造で存在する能力を指す。
【００２９】
本発明の化合物は、結晶性または非晶質製品として投与され得る。それらは、沈殿、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥、または蒸発乾燥などの方法によって、例えば、固体プラグ、粉末、またはフィルムとして得ることができる。それらは、単独でまたは本発明の１種または複数種の他の化合物と組み合わせて、または１種または複数種の他の薬物と組み合わせて投与され得る。一般に、それらは、１種または複数種の薬学的に許容できる賦形剤とともに製剤として投与されるであろう。「賦形剤」という用語は、本発明の化合物以外の任意の成分を表すために、本明細書において使用される。賦形剤の選択は、具体的な投与形態、溶解性および安定性に対する賦形剤の影響、および剤形の性質などの要因に大きく左右される。
【００３０】
本発明の化合物またはその任意のサブグループは、投与のために様々な医薬品形態へと製剤化され得る。適切な組成物として、薬物の全身投与のために通常使用される全ての組成物を挙げることができる。本発明の医薬組成物を調製するために、有効量の、活性成分としての特定の化合物を、任意選択的に付加塩形態で、薬学的に許容できる担体と組み合わせて緊密な混合物とする。この担体は、投与に所望される製剤の形態に応じて、非常に様々な形態をとり得る。これらの医薬組成物は、例えば、経口、経直腸、または経皮投与に好適な単一の剤形であるのが望ましい。例えば、経口剤形の組成物を調製する際に、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤および溶液剤などの経口液体製剤の場合には、例えば水、グリコール、油、アルコールなどの通常の医薬媒体のうちいずれかを使用することができ、または散剤、丸剤、カプセル剤および錠剤の場合には、デンプン、糖、カオリン、希釈剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などの固体担体を使用することができる。投与が容易であるため、錠剤およびカプセル剤は最も有利な経口単位剤形となり、その場合、固体医薬担体が当然使用される。使用の直前に液体形態に変換され得る固形製剤も含まれる。経皮投与に好適な組成物においては、担体は、浸透促進剤および／または好適な湿潤剤を、任意選択的に、少ない割合の任意の性質の好適な添加剤と組み合わせて含み、これらの添加剤は、有意な有害作用を皮膚に及ぼすものではない。前記添加剤は、皮膚への投与を容易にすることができ、かつ／または所望の組成物の調製に有用となり得る。これらの組成物は、様々な方法で、例えば、経皮貼付剤として、スポットオン剤（ｓｐｏｔ−ｏｎ）として、軟膏剤として投与され得る。本発明の化合物はまた、この方法による投与のための当該技術分野において使用される方法および製剤を用いて、吸入または吹送によって投与され得る。したがって、一般に、本発明の化合物は、溶液剤、懸濁剤または乾燥散剤の形態で肺に投与され得る。
【００３１】
前述した医薬組成物を、投与を容易にし、投与量を均一にするために、単位剤形に製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される単位剤形とは、単位投与量として好適な物理的に個別の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と共同して所望の治療効果を生じるよう計算された所定量の活性成分を含有する。そのような単位剤形の例としては、錠剤（分割錠剤またはコーティング錠剤を含む）、カプセル剤、丸剤、粉末パケット、オブラート、坐剤、注射液、または懸濁剤など、およびそれらを複数に分割したものがある。
【００３２】
感染症の治療の当業者は、以下に示される試験結果から有効量を決定することができるであろう。一般に、有効な一日量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であろうと考えられる。必要な用量を２、３、４またはそれより多いサブ用量として、一日において適切な間隔で投与することが適切であり得る。前記サブ用量は、例えば、単位剤形当たり１〜１０００ｍｇ、特に、５〜２００ｍｇの活性成分を含有する単位剤形として製剤化され得る。
【００３３】
正確な投与量および投与頻度は、当業者に周知のように、使用される式（Ｉ）の特定の化合物、治療される特定の病態、治療される病態の重症度、特定の患者の年齢、体重および全身的な身体状態ならびに個体が摂取している可能性のある他の薬剤に応じて決まる。さらに、有効量は、治療される対象の応答に応じて、かつ／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、減少または増加させ得ることが明らかである。したがって、上記の有効量の範囲は指針に過ぎず、本発明の範囲も使用も、いかなる程度であれ限定することは意図されていない。
【００３４】
式（Ｉ）の化合物の調製
式（Ｉ）の化合物は、スキーム１に従って調製される。文献（Ｏ’Ｈａｒａ  ｅｔ．  ａｌ．  ＪＯＣ  （１９９１）  ５６，  ｐ７７６）に記載されている方法に従って、置換アントラニル酸エステルまたは置換アントラニル酸（ＩＩ）を、酸性条件下、過剰シアナミドの存在下にて、アルコール溶媒（例えばエタノール）またはジグリムを使用して加熱した。続く２−アミノ−４−ヒドロキシキナゾリン（ＩＩＩ）のアミン置換は、極性非プロトン性溶媒（例えばＤＭＦ）中ＤＢＵおよびアミンの存在下で、ＢＯＰまたはＰｙＢＯＰなどのカップリング剤によって進行し得る。
【化３】
0006297055.tif 000004
【実施例】
【００３５】
実験部分。
置換２−アミノ−４−ヒドロキシキナゾリンの作製の基本手順
【化４】
0006297055.tif 000005
磁気撹拌子を備えた５００ｍＬ圧力容器中に、２−アミノ−６−メトキシ安息香酸（２５ｇ、１４９．６ｍｍｏｌ）、エタノール（２００ｍＬ）、シアナミド（９．４３ｇ、２２４ｍｍｏｌ）および濃厚ＨＣｌ（６ｍＬ）を入れた。混合物を１００℃で１６時間撹拌した。反応混合物を放置して室温まで冷却し、固体を濾過によって単離し、エタノールおよびＤＩＰＥで洗浄した。粗生成物を５０℃で真空乾燥して、オフホワイト色固体を得た。
【００３６】
ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝１９２（Ｍ＋Ｈ）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ３．８８（ｓ，３Ｈ），６．９６（ｄｄ，Ｊ＝８．２，３．１Ｈｚ，２Ｈ），７．６９（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），１２．６７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）
【００３７】
【表１】
0006297055.tif 000006
【００３８】
【表２】
0006297055.tif 000007
【００３９】
化合物ＩＶの作製の基本手順
化合物ＩＩＩ（１．５ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（３．７５ｍｍｏｌ）を、３０ｍＬガラスバイアル中で５ｍＬのＤＭＦに溶解した。５分後にＢＯＰ（１．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５分間撹拌し、次いで、アミン（２．２５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を終夜撹拌した。粗製反応混合物を、（ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８  −  １０μｍ、２５０ｇ、５ｃｍ）の分取ＨＰＬＣによって精製した。移動相（０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＭｅＯＨ）、所望の画分を回収し、蒸発させ、ＭｅＯＨに溶解し、再度蒸発させて、生成物を固体として得た。
【００４０】
化合物２２、２３、２４、２６、２７および２８の作製の基本手順
式（Ｉ）の化合物８（表ＩＩを参照）（２．１ｇ、６．５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）中に分注し、ＬｉＯＨ（４０９ｍｇ、９．７４ｍｍｏｌ）を添加し、次いでＭｅＯＨ（５ｍＬ）を添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。水のみが残るまで溶媒を蒸発させた。１０ｍＬの１ＭのＨＣｌを添加し、化合物を２−メチルテトラヒドロフラン（２×２５ｍＬ）で抽出した。まとめた有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、溶媒を減圧留去して、２−アミノ−４−［１−（２−ピリジル）エチルアミノ］キナゾリン−７−カルボン酸を白色固体として得た。
【００４１】
２−アミノ−４−［１−（２−ピリジル）エチルアミノ］キナゾリン−７−カルボン酸（２００ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）およびＰｙＢＯＰ（４２１ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）を、３０ｍＬガラスバイアル中でＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。５分後にヒューニッヒ塩基（０．５５７ｍＬ、３．２３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を５分間撹拌し、次いでアミンを添加した。反応混合物を終夜撹拌した。粗製反応混合物を、（ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８  −  １０μｍ、２５０ｇ、５ｃｍ）の分取ＨＰＬＣによって精製した。移動相（０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＭｅＯＨ）、所望の画分を回収し、蒸発させ、ＭｅＯＨに溶解し、再度蒸発させて、生成物を固体として得た。
【００４２】
化合物２９の作製手順
式（Ｉ）の化合物１２（表ＩＩを参照）（１５００ｍｇ、４．７８ｍｍｏｌ）およびピリジン塩酸塩（３．３２ｇ、２８．７ｍｍｏｌ）をピリジン（２０ｍＬ）に溶解し、１２０℃に１６時間加熱した。ピリジンを減圧留去した。残留画分をＮａＨＣＯ３（飽和水）溶液で反応停止した。沈殿物を濾過して採り、水で洗浄し、５０℃で真空乾燥して褐色固体を得、これを分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８  −  １０μｍ、２００ｇ、５ｃｍ）、移動相：０．２５％  ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＣＨ３ＣＮ）によって精製し、所望の画分を回収し、蒸発させ、ＭｅＯＨに溶解し、再度蒸発させて、２−アミノ−４−［（５−メチルイソオキサゾール−３−イル）メチルアミノ］キナゾリン−５−オール（１００ｍｇ）を固体として得た。
【００４３】
２−アミノ−４−［（５−メチルイソオキサゾール−３−イル）メチルアミノ］キナゾリン−５−オール（４０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（１４４ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（７．５ｍＬ）に溶解し、室温で３０分間撹拌した。２−ブロモエチルメチルエーテル（０．０１８ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物全体を室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、粗製残渣を１ＭのＨＣｌで中和し、（ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８  −  １０μｍ、２５０ｇ、５ｃｍ）の分取ＨＰＬＣによって精製した。移動相（０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＭｅＯＨ）、所望の画分を回収し、蒸発させ、ＭｅＯＨに溶解し、再度蒸発させて、化合物２９を固体として得た。
【００４４】
化合物３０の作製手順
７５−ｍＬステンレス鋼オートクレーブに、Ｎ２雰囲気下で、２−アミノ−５−ブロモ−キナゾリン−４−オール（３ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（５６ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、１，３ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（２０６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（２．４５ｇ、２５ｍｍｏｌ）、メタノール（２５ｍＬ）およびＴＨＦ（３０ｍＬ）を投入した。オートクレーブを密閉し、５０ｂａｒまでＣＯガス加圧し、反応を１００℃で１６時間行った。形成した沈殿物を濾過によって除去し、メチル２−アミノ−４−ヒドロキシ−キナゾリン−５−カルボキシラート（２．３５ｇ）を得た。
【００４５】
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中メチル２−アミノ−４−ヒドロキシ−キナゾリン−５−カルボキシラート（２．３５ｇ）を０℃まで冷却した。次いで、ＬｉＡｌＨ４を添加した。混合物を室温に達するまで放置し、１６時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）を０℃で、次いで３ｇのＮａ２ＳＯ４を滴加した。１０Ｈ２Ｏを添加し、混合物全体を３０分間撹拌した。沈殿物を濾過して除去し、濾液をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させて乾燥し、２−アミノ−５−（ヒドロキシメチル）キナゾリン−４−オール（７５０ｍｇ）を黄色固体として得た。
【００４６】
２−アミノ−５−（ヒドロキシメチル）キナゾリン−４−オール（３００ｍｇ、１，５７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍＬ）中にＤＢＵ（０．５８６ｍＬ、３．９２ｍｍｏｌ）とともに懸濁させ、５分後にＢＯＰ（８３３ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ）を添加した。１５分後に（５−メチル−３−イソオキサゾリル）メチルアミン（０．３２０ｍＬ、３．１４ｍｍｏｌ）を添加した。
この混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、粗生成物を（ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８  −  １０μｍ、２５０ｇ、５ｃｍ）の分取ＨＰＬＣによって精製した。移動相（０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＭｅＯＨ）、所望の画分を回収し、蒸発させ、ＭｅＯＨに溶解し、再度蒸発させて、化合物３０を固体（１１９ｍｇ）として得た。
【００４７】
化合物３１の作製手順
新たに調製したＮａＯＭｅ溶液（１．２５ｍＬ、６．２５ｍｍｏｌ）を、Ｎ２雰囲気下で、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中２−アミノ−５−ブロモ−８−フルオロ−キナゾリン−４−オール（５００ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）、臭化銅（Ｉ）（３９ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＡｃ（０．０７６ｍＬ、０．７８ｍｍｏｌ）の混合物に添加した。混合物を圧力容器中で昇温させて１６時間還流した。溶媒を減圧留去した。残渣を分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８  −  １０μｍ、２００ｇ、５ｃｍ）、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＭｅＯＨ）によって精製し、所望の画分を回収し、蒸発させ、ＭｅＯＨに溶解し、再度蒸発させて、２−アミノ−８−フルオロ−５−メトキシ−キナゾリン−４−オール（１５０ｍｇ）を固体として得た。
【００４８】
２−アミノ−８−フルオロ−５−メトキシ−キナゾリン−４−オール（１５０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に分注し、ＤＢＵ（０．５３６ｍＬ、３．５９ｍｍｏｌ）を添加し、次いでＢＯＰ試薬（３９６ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を撹拌し、これが均質になったとき、（５−メチル−３−イソオキサゾリル）メチルアミン（０．１１５ｍＬ、１．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を１６時間撹拌した。反応物を減圧濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（固定相：ＲＰ  Ｖｙｄａｃ  Ｄｅｎａｌｉ  Ｃ１８  −  １０μｍ、２００ｇ、５ｃｍ）、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＭｅＯＨ）によって精製し、所望の画分を回収し、蒸発させ、ＭｅＯＨに溶解し、再度蒸発させて、化合物３１を固体（６４ｍｇ）として得た。
【００４９】
化合物３２の作製手順
１ｍＬピリジン中化合物３１（５２．５ｍｇ、０．１７３ｍｍｏｌ）およびピリジン塩酸塩（０．１２ｇ、１．０３９ｍｍｏｌ）を１２０℃に１６時間加熱した。揮発性物質を減圧留去した。残渣をＮａＨＣＯ３（飽和水）溶液で反応停止した。沈殿物を濾過して採り、水で洗浄し、５０℃で真空乾燥して、２−アミノ−８−フルオロ−４−［（５−メチルイソオキサゾール−３−イル）メチルアミノ］キナゾリン−５−オール（１０ｍｇ）を褐色固体として得た。
【００５０】
ＤＭＦ（５ｍＬ）中２−アミノ−８−フルオロ−４−［（５−メチルイソオキサゾール−３−イル）メチルアミノ］キナゾリン−５−オール（１０ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（３３．８ｍｇ、０．１０４ｍｍｏｌ）を室温で３０分間撹拌した。２−クロロエチルメチルエーテル（４．１ｍｇ、０．０４３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物全体を室温で１６時間撹拌した。
溶媒を減圧留去した。残渣をＭｅＯＨに溶解し、沈殿物（塩）を濾過によって除去した。濾液を減圧濃縮し、粗製残渣を、（固定相：ＲＰ  ＳｕｎＦｉｒｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤ−１０μｍ、３０×１５０ｍｍ）、移動相：０．２５％ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液、ＣＨ３ＣＮ）の分取ＨＰＬＣによって精製し、所望の画分を回収し、蒸発させ、ＭｅＯＨに溶解し、再度蒸発させて、化合物３２を固体（２ｍｇ）として得た。
【００５１】
【表３】
0006297055.tif 000008
【００５２】
【表４】
0006297055.tif 000009
【００５３】
【表５】
0006297055.tif 000010
【００５４】
【表６】
0006297055.tif 000011
【００５５】
【表７】
0006297055.tif 000012
【００５６】
【表８】
0006297055.tif 000013
【００５７】
【表９】
0006297055.tif 000014
【００５８】
ＳＦＣ精製方法。
基本手順
表に規定したカラムを使用して、超臨界ＣＯ２および表に規定したモディファイヤーで、超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）分離を実施した。
【００５９】
【表１０】
0006297055.tif 000015
【００６０】
分析方法
基本手順
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による測定を、各方法において規定したＬＣポンプ、ダイオードアレイ（ＤＡＤ）またはＵＶ検出器およびカラムを使用して実施した。必要に応じ、追加的な検出器を含めた（下の方法の表を参照）。
【００６１】
カラムからのフローを、大気圧イオン源で構成された質量分析計（ＭＳ）に送った。化合物の整数モノアイソトピック分子量（ＭＷ）の同定を可能にするイオンを得るために、調整パラメータ（例えば、走査範囲、データ収集時間（ｄｗｅｌｌ  ｔｉｍｅ）など）を設定することは、当業者の知識の範囲内である。適切なソフトウェアによって、データ取得を実施した。
【００６２】
化合物は、その実験の保持時間（Ｒｔ）およびイオンによって記述される。データの表に異なる指定がなければ、報告された分子イオンは、［Ｍ＋Ｈ］＋（プロトン化分子）および／または［Ｍ−Ｈ］−（脱プロトン化分子）に相当する。化合物が直接イオン化できなかった場合、付加物の種類が明記されている（すなわち、［Ｍ＋ＮＨ４］＋、［Ｍ＋ＨＣＯＯ］−など）。同位体パターンが複数ある分子（Ｂｒ、Ｃｌなど）については、報告された値は最低同位体質量について得られたものである。全ての結果は、使用した方法に通常伴う実験上の不確実性とともに得られた。
【００６３】
以下では、「ＳＱＤ」はシングル四重極検出器、「ＭＳＤ」は質量選択検出器、「ＲＴ」は室温、「ＢＥＨ」は架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッド、「ＤＡＤ」はダイオードアレイ検出器、「ＨＳＳ」は高強度シリカを意味する。
【００６４】
【表１１】
0006297055.tif 000016
【００６５】
【表１２】
0006297055.tif 000017
【００６６】
【表１３】
0006297055.tif 000018
【００６７】
式（Ｉ）の化合物の生物学的活性
生物学的アッセイの説明
ＴＬＲ７およびＴＬＲ８活性の評価
化合物がヒトＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８を活性化する能力を、ＴＬＲ７またはＴＬＲ８発現ベクターおよびＮＦκＢ−ｌｕｃレポーターコンストラクトを一過的にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を使用して、細胞レポーターアッセイで評価した。
【００６８】
簡潔に述べると、ＨＥＫ２９３細胞を、培養培地（１０％ＦＣＳおよび２ｍＭグルタミンが補充されたＤＭＥＭ）中で成長させた。１５ｃｍ皿内での細胞のトランスフェクションについては、細胞をトリプシン−ＥＤＴＡで剥離し、ＣＭＶ−ＴＬＲ７またはＴＬＲ８プラスミド（１７００ｎｇ）と、ＮＦκＢ−ｌｕｃプラスミド（８５０ｎｇ）と、トランスフェクション試薬との混合物をトランスフェクトし、加湿した５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で４８時間インキュベートした。次に、トランスフェクトした細胞をＰＢＳ中で洗浄し、トリプシン−ＥＤＴＡで剥離し、１．２５×１０５個の細胞／ｍＬの密度で培地に再懸濁させた。次に、４０マイクロリットルの細胞を、１００％ＤＭＳＯ中２００ｎＬの化合物が既に存在する、３８４ウェルプレートの各ウェル中に分注した。３７℃、５％ＣＯ２で６時間インキュベートした後、１５μｌのＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を各ウェルに添加し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取りを実施してルシフェラーゼ活性を求めた。４通りに実施した測定値から用量反応曲線を作成した。最低有効濃度（ＬＥＣ）値を、アッセイの標準偏差より少なくとも２倍高い効果を誘発する濃度として定義し、各化合物について求めた。
【００６９】
３８４ウェルプレート中で、ＣＭＶ−ＴＬＲ７コンストラクトのみをトランスフェクトした、ウェル当たり４０μＬの細胞（１．２５×１０５個の細胞／ｍＬ）とともに、同様の希釈系列の化合物を使用して、並行して化合物の毒性を求めた。３７℃、５％ＣＯ２で６時間インキュベートした後に、ウェル当たり１５μＬのＡＴＰ  ｌｉｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を添加し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取ることによって、細胞生存率を測定した。データをＣＣ５０として報告した。
【００７０】
並行して、ＮＦκＢ−ｌｕｃレポーターコンストラクトのみをトランスフェクトした、ウェル当たり４０μＬの細胞（１．２５×１０５個の細胞／ｍＬ）とともに、同様の希釈系列の化合物（１００％ＤＭＳＯ中２００ｎＬの化合物）を使用した。３７℃、５％ＣＯ２で６時間インキュベートした後、１５μｌのＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を各ウェルに添加し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取りを実施してルシフェラーゼ活性を求めた。カウンタースクリーンデータをＬＥＣとして報告した。
【００７１】
ＩＳＲＥプロモーター配列の活性化
ＰＢＭＣからの調整培地によるインターフェロン刺激応答配列（ＩＳＲＥ）の活性化を測定することにより、化合物のＩＦＮ−Ｉ誘導能力も評価した。配列ＧＡＡＡＣＴＧＡＡＡＣＴのＩＳＲＥ配列はＳＴＡＴ１−ＳＴＡＴ２−ＩＲＦ９転写因子に対する応答性が高く、それはＩＦＮ−Ｉがその受容体ＩＦＮＡＲ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、ＰＴ３３７２−５Ｗ）に結合すると活性化される。Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製のプラスミドｐＩＳＲＥ−Ｌｕｃ（ｒｅｆ．６３１９１３）は、このＩＳＲＥ配列を５コピー、その後にホタルルシフェラーゼＯＲＦを含有する。ｐＩＳＲＥ−Ｌｕｃを安定トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞株（ＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ）を、調整ＰＢＭＣ細胞培養培地のプロファイルに合うように樹立した。
【００７２】
簡潔に述べると、標準的なＦｉｃｏｌｌ遠心分離プロトコルを使用して、少なくとも２供与体の軟膜からＰＢＭＣを調製した。単離したＰＢＭＣを、１０％ヒトＡＢ血清が補充されたＲＰＭＩ培地に再懸濁させ、２×１０５個の細胞／ウェルを、化合物（全体積７０μＬ）を含有する３８４ウェルプレート中に分注した。終夜インキュベートした後、３０μＬ中５×１０３個のＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ細胞／ウェルの入った（前日に播種した）３８４ウェルプレートに上清１０μＬを移した。２４時間インキュベートした後、４０μＬ／ウェルのＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用してルシフェラーゼ活性をアッセイすることによって、ＩＳＲＥ配列の活性化を測定し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で測定した。ＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ細胞に対する各化合物の刺激活性をＬＥＣ値として報告したが、これを、ＰＢＭＣに適用するとアッセイの標準偏差を少なくとも２倍上回るルシフェラーゼ活性が得られる化合物濃度と定義した。ここで、ＬＥＣは、規定量のＰＢＭＣ培養培地の移入に対するＩＳＲＥ活性化の程度を示す。組み換えインターフェロンα−２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ）を標準対照化合物として使用した。
【００７３】
【表１４】
0006297055.tif 000019
【００７４】
【表１５】
0006297055.tif 000020
本発明は、以下の態様を包含し得る。
［１］
式（Ｉ）の化合物
【化５】
0006297055.tif 000021
（式中、
Ｒ１は次の構造
【化６】
0006297055.tif 000022
のうちのいずれかであり、
Ｒ２は、水素、−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキル、ハロゲン、（Ｃ１〜３）−アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキル−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキルまたはＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキル、ハロゲン、（Ｃ１〜３）−アルキルまたは−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ７であり、ここでＲ７は、−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキル、ＮＨ２、ＮＨ（ＣＨ３）、Ｎ（ＣＨ３）２、Ｎ（ＣＨ３）（Ｃ１〜３）−アルキル、Ｎ（（Ｃ１〜３）−アルキル）２またはピロリジンであり、
Ｒ４は水素またはフッ素であり、
Ｒ５は、（Ｃ１〜３）−アルキル、（Ｃ１〜３）−フルオロ−アルキルまたはＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ６は、ＮＨ２、ＮＨ（ＣＨ３）もしくはＮ（ＣＨ３）２、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１またはＲ１２のうち１つまたは複数で任意選択的に置換された（ヘテロ）−アニリン、またはＲ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１またはＲ１２のうち１つまたは複数で任意選択的に置換された（ヘテロ）−ベンジルアミンであり、
Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、同一であるか、または異なっており、水素、（Ｃ１〜３）−アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜３）−アルキルまたはハロゲンからそれぞれ独立に選択され、
かつ
Ｒ１３は、水素、（Ｃ１〜３）−アルキルまたは（Ｃ１〜３）−フルオロ−アルキルである）
またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体。
［２］
上記［１］に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体を、１種または複数種の薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤または担体とともに含む医薬組成物。
［３］
薬剤として使用するための、上記［１］に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体、または上記［２］に記載の医薬組成物。
［４］
ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８の調節が関与する障害の治療に使用するための、上記［１］に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、互変異性体、立体異性体の形態、溶媒和物もしくは多形体、または上記［２］に記載の医薬組成物。
［５］
次式を有する置換２−アミノ−４−ヒドロキシキナゾリン。
【化７】
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