(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の配列：ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＫＱＫＧＨＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（ａｋａ  １１Ｌ０−Ｃ６）（配列番号２）；ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＡＲＧＱＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（ａｋａ  １１Ｌ５−Ｂ０６）（配列番号３）；ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＳＶＳＷＳＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（ａｋａ  １１Ｌ９−Ｃ０９）（配列番号５）；ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＳＲＧＶＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（ａｋａ  １１Ｌ１０−Ａ０５）（配列番号６）；ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＡＮＨＧＮＲＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（ａｋａ  １Ｌ３−Ｂ９）（配列番号１）；ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＤＫＬＳＡＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（ａｋａ  １１Ｌ６−Ｆ０３）（配列番号４）；および、ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＲＫＳＮＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（ａｋａ  １１Ｌ１１−Ａ０９）（配列番号７）
のいずれかの１２位〜１７位部分のモチーフ並びに３１位〜３６位のモチーフを維持し、かつ当該配列と少なくとも９０％の同一性を有し、インターロイキン−１７ａ（ＩＬ−１７ａ）に結合するフィノマー配列が、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に結合する抗体またはＩＬ−６Ｒ結合能を有するその部分配列と複合体を形成している、
ＩＬ−１７ａおよびＩＬ−６Ｒの両方に結合し、両方の活性を阻害する二重特異性融合ポリペプチド。
【請求項２】
フィノマー配列が、該配列のアミノ酸位置２８−４２のＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲモチーフを含む、請求項１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項３】
グリコシル化ＩＬ−１７ａに結合して、ＩＬ−１７受容体機能またはシグナル伝達を阻害する、請求項１または２に記載の融合ポリペプチド。
【請求項４】
フィノマー配列がグリコシル化ＩＬ−１７ａに対して１から２００ｎＭの結合親和性（Ｋｄ）を有する、請求項３記載の融合ポリペプチド。
【請求項５】
フィノマー配列が配列番号１のポリペプチドのグリコシル化ＩＬ−１７ａに対する結合親和性よりも高い、グリコシル化ＩＬ−１７ａに対する結合親和性（ＫｄまたはＫＤ）を有する、請求項１〜４のいずれかに記載の融合ポリペプチド。
【請求項６】
フィノマー配列が配列番号１〜７いずれかに記載の配列と少なくとも９５％同一性を有する配列である、請求項１〜５いずれかに記載の融合ポリペプチド。
【請求項７】
フィノマー配列が配列番号１〜７いずれかに記載の配列を有する、請求項６に記載の融合ポリペプチド。
【請求項８】
フィノマー配列が、ＩＬ−６Ｒに結合する抗体の重鎖もしくは軽鎖配列またはＩＬ−６Ｒ結合能を有するその部分配列と複合体を形成する、請求項１〜７いずれかに記載の融合ポリペプチド。
【請求項９】
フィノマー配列が、ＩＬ−６Ｒに結合する抗体の重鎖配列またはＩＬ−６Ｒ結合能を有するその部分配列のアミノ末端またはカルボキシル末端と複合体を形成する、請求項８に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１０】
フィノマー配列が、ＩＬ−６Ｒに結合する抗体の軽鎖配列またはＩＬ−６Ｒ結合能を有するその部分配列のアミノ末端またはカルボキシル末端と複合体を形成する、請求項８に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１１】
フィノマー配列がリンカーを介してＩＬ−６Ｒに結合する抗体の重鎖もしくは軽鎖配列またはＩＬ−６Ｒ結合能を有するその部分配列と複合体を形成する、請求項１〜１０のいずれかに記載の融合ポリペプチド。
【請求項１２】
融合ポリペプチドが、同時にＩＬ−１７ａおよびＩＬ−６Ｒに結合する、請求項１〜１１のいずれかに記載の融合ポリペプチド。
【請求項１３】
ＩＬ−６Ｒに結合する抗体またはＩＬ−６Ｒ結合能を有するその部分配列が、以下の可変領域ＣＤＲ１−３を有する重鎖（ＨＣ）：ＳＤＨＡＷＳ；ＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳ；および、ＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹ、および以下の可変領域ＣＤＲ１−３を有する軽鎖（ＬＣ）：ＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮ；ＹＴＳＲＬＨＳ；および、ＱＱＧＮＴＬＰＹＴを含む、請求項１〜１２いずれかに記載の融合ポリペプチド。
【請求項１４】
ＩＬ−６Ｒに結合する抗体が、以下の配列：
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１２）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１３）
それぞれの配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖（ＨＣ）および（ＬＣ）を含む、請求項１３に記載の融合ポリペプチド。
【請求項１５】
ＩＬ−６Ｒに結合する抗体が配列番号１２および１３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１４記載の融合ポリペプチド。
【請求項１６】
以下の重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）配列：
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＫＱＫＧＨＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１４）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１５）；
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１６）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＫＱＫＧＨＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１７）；
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＡＲＧＱＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１８）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１９）；
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２０）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＡＲＧＱＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号２１）；
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＳＶＳＷＳＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号２２）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２３）；
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２４）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＳＶＳＷＳＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号２５）；
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＳＲＧＶＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号２６）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２７）；
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２８）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＳＲＧＶＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号２９）、
において、配列番号１４と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖と配列番号１５と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖、
配列番号１６と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖と配列番号１７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖、
配列番号１８と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖と配列番号１９と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖、
配列番号２０と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖と配列番号２１と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖、
配列番号２２と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖と配列番号２３と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖、
配列番号２４と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖と配列番号２５と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖、
配列番号２６と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖と配列番号２７と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖、
配列番号２８と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖と配列番号２９と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖、
のいずれかの組み合わせを含む、請求項１３記載の融合ポリペプチド。
【請求項１７】
配列番号１４と１５、配列番号１６と１７、配列番号１８と１９、配列番号２０と２１、配列番号２２と２３、配列番号２４と２５、配列番号２６と２７、および配列番号２８と２９のいずれかの組み合わせを含む、請求項１６記載の融合ポリペプチド。
【請求項１８】
融合ポリペプチドが、ヒトのＩＬ−１７ａまたはＩＬ−６Ｒに結合する、請求項１〜１７のいずれかに記載の融合ポリペプチド。
【請求項１９】
ポリペプチドが単離または精製されている、請求項１〜１８のいずれかに記載の融合ポリペプチド。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれかに記載の融合ポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項２１】
自己免疫疾患または障害の処置のための請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
自己免疫疾患または障害が、筋肉、骨格、神経系、結合組織、内分泌系、皮膚、気道もしくは肺系、胃腸系、眼科系、または循環器系に影響を与えるものである、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
自己免疫疾患または障害が、関節炎、関節リウマチ、乾癬、およびブドウ膜炎からなる群より選択される、請求項２１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願との相互関係
本願は、２０１４年３月１６日に出願された米国仮出願番号第６１／９５４，４３７号に基づいて優先権を主張する。この仮出願の内容全体は、引用により本明細書に包含させる。
【０００２】
本発明は、インターロイキン−１７ａ（ＩＬ−１７ａ）およびインターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）の両方に結合し得る融合タンパク質に関する。本発明はまた、融合ポリペプチドを産生する形質転換細胞、融合ポリペプチドを含む組成物、ならびに融合ポリペプチドを用いる疾患または障害の処置法にも関する。
【背景技術】
【０００３】
Ｔｈ１７細胞は、慢性炎症プロセスの中心的メディエーターであり、以前はＴｈ１媒介性であると考えられていた自己免疫症状のいくつかのタイプにおける主要な病原性エフェクターである（Weaver T. et al. (2008) Annu. Rev. Immunol., 25, p. 821−852）。炎症促進性（pro−inflammatory）サイトカインであるＩＬ−１７は、主にＴｈ１７細胞によって発現され、関節リウマチ（ＲＡ）患者の滑液中に高レベルで存在し、早期ＲＡの発症に関与することが示されている。さらに、ＩＬ−１７は、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１の強力な誘導因子であり、後者は骨糜爛および罹患患者において強い痛みを惹起する主な原因となっている（Lubberts E. (2008)Cytokine, 41, p. 84−91）。さらに、異常な、または過剰なＩＬ−１７の産生は、種々の他の疾患および障害、例えば、骨関節症、骨インプラントの緩み、急性移植拒絶（Antonysamy et al., (1999) J. Immunol, 162, p. 577−584; van Kooten et al. (1998) J. Am. Soc. Nephrol., 9, p.1526−1534）、敗血症、敗血症性または内毒素性ショック、アレルギー、喘息（Molet et al. (2001) J. Allergy Clin. Immunol., 108, p. 430−438）、骨喪失、乾癬（Teunissen et al. (1998) J. Invest. Dermatol, 111, p. 645−649）、虚血、全身性硬化症（Kurasawa et al. (2000) Arthritis Rheum., 43, p. 2455−2463）、脳卒中、および他の炎症性疾患等の病因に関連している。従って、ＩＬ−１７の生物学的活性を調節する治療法が必要とされている。
【０００４】
関節炎モデルの発症初期段階において、抗原免疫後早期の、ＩＬ−１７受容体−ＩｇＧ１−Ｆｃ融合タンパク質による内因性ＩＬ−１７の中和は、実験的関節炎の発症を抑制する（Lubberts et al. (2001) J. Immunol., 167, p. 1004−1013）。さらに、コラーゲン誘発性関節炎モデル発症後における中和抗ＩＬ−１７抗体を用いる治療は、関節の炎症、軟骨破壊および骨糜爛を軽減した（Lubberts et al. (2004) Arthritis and Rheumatism, 50; 650−659）。抗ＩＬ−１７抗体による治療後では、組織学的解析による関節炎症の抑制が認められ、全身のＩＬ−６レベルも有意に減少した。これに対して、マウスＩＬ−１７をアデノウイルスベクターによって全身的ならびに局所的なＩＬ−１７過剰発現により、コラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）の発症は加速し、局所での滑膜炎症は悪化した（Lubberts et al. (2001) J. Immunol., 167, p. 1004−1013 および Lubberts et al. (2002), Inflamm. Res. 51, p102−104）。ごく最近には、抗ＩＬ−１７抗体の使用により、乾癬、関節リウマチおよび非感染性ブドウ膜炎の臨床症状を改善したことが示された（Leonardi C. et al. (2012) N. Engl. J. Med. 366, p. 1190−1199; Hueber W. et al. (2010) Sci Transl Med. 2(52):52ra72）。
【０００５】
インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、細胞増殖および分化を調節する強力なサイトカインであり、急性炎症性応答の重要なメディエーターでもある。ＩＬ−６は、特異的ＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）およびシグナル伝達サブユニット（ｇｐ１３０）からなる受容体複合体を介して作用する。ＩＬ−６シグナル伝達の調節不全は、多発性骨髄腫、自己免疫疾患および前立腺癌等の多くの疾患の病因に関与している。従って、ＩＬ−６および／またはＩＬ−６Ｒの生物学的活性を調節する治療法が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国仮出願番号第６１／９５４，４３７号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Weaver T. et al.(2008) Annu. Rev. Immunol., 25, p. 821−852
【非特許文献２】Lubberts E. (2008)Cytokine, 41, p. 84−91
【非特許文献３】Antonysamy et al., (1999) J. Immunol, 162, p. 577−584
【非特許文献４】van Kooten et al. (1998) J. Am. Soc. Nephrol., 9, p.1526−1534
【非特許文献５】Molet et al. (2001) J. Allergy Clin. Immunol., 108, p. 430−438）
【非特許文献６】Teunissen et al. (1998) J. Invest. Dermatol, 111, p. 645−649
【非特許文献７】Kurasawa et al. (2000) Arthritis Rheum., 43, p. 2455−2463
【非特許文献８】Lubberts et al. (2001) J. Immunol., 167, p. 1004−1013
【非特許文献９】Lubberts et al. (2004) Arthritis and Rheumatism, 50; 650−659
【非特許文献１０】Lubberts et al. (2001) J. Immunol.,167, p. 1004−1013
【非特許文献１１】Lubberts et al. (2002), Inflamm. Res. 51, p102−104
【非特許文献１２】Leonardi C. et al. (2012) N. Engl. J. Med. 366, p. 1190−1199
【非特許文献１３】Hueber W. et al. (2010) Sci Transl Med. 2(52):52ra72
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、インターロイキン−１７ａ（以降、“ＩＬ−１７ａ”）およびインターロイキン−６受容体（以降、“ＩＬ−１６Ｒ”）の両方に結合し得る融合ポリペプチドを提供することである。本発明の別の目的は、ＩＬ−１７ａおよびＩＬ−１６Ｒの両方の活性を抑制、低下、減少、阻害または阻止し得る融合ポリペプチドを提供することである。本発明の別の目的は、融合ポリペプチドを産生する形質転換細胞を提供することである。本発明のさらなる目的は、疾患または障害の処置のための融合ポリペプチドを含む組成物を提供することである。本発明のさらなる目的は、融合ポリペプチドを用いて疾患または障害を処置する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、インターロイキン−１７ａ（ＩＬ−１７ａ）に結合し、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に結合する抗体またはその部分配列（“ｍＡｂ”）と複合体形成する融合ポリペプチド、すなわちフィノマー（Fynomer）配列（“ｆｙｎｏ”は、フィノマー(商標)とも言われる）を含むＦｙｎｏｍＡｂが、ＩＬ−１７ａおよびＩＬ−６Ｒの両方の機能または活性を抑制、低下、減少、阻害または阻止し得ることを示すデータを提供する。データはまた、異なる時間に、異なる細胞から産生された典型的なＦｙｎｏｍＡｂの異なるロットは、ロット間で同様の挙動をすることを示す。典型的な８個のＦｙｎｏｍＡｂ構築物（コンストラクト）は、ＩＬ−１７ａおよびＩＬ−６Ｒに対して非常に類似した親和性を有し、細胞ベースのアッセイにおいて類似の機能活性を有した。軽鎖融合体（ＣＯＶＡ８０２、ＣＯＶＡ８０４、ＣＯＶＡ８０６およびＣＯＶＡ８０８）は、良好なＳＥＣプロファイルを有し、低凝集性であった。
【００１０】
一態様において、インターロイキン−１７ａ（ＩＬ−１７ａ）に結合し、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に結合する抗体または該抗体の部分配列と複合体形成する、フィノマー配列を含む二重特異性融合ポリペプチドを提供する。二重特異性融合ポリペプチドは、ＩＬ−１７ａおよびＩＬ−６Ｒに同時に結合する融合ポリペプチドであり得る。
【００１１】
一態様において、フィノマー配列は、ＩＬ−６Ｒに結合する抗体の重鎖もしくは軽鎖配列、または該重鎖もしくは軽鎖配列の部分配列と複合体形成し得る。フィノマー配列は、抗体の重鎖配列またはその部分配列のアミノ末端またはカルボキシル末端と複合体形成し得る。フィノマー配列は、抗体の軽鎖配列またはその部分配列のアミノ末端またはカルボキシル末端と複合体形成し得る。
【００１２】
二重特異性融合ポリペプチドは、ＩＬ−６Ｒに結合する抗体または該抗体の部分配列と複合体形成する、１個またはそれ以上のＩＬ−１７ａ結合配列を含み得る。特定の態様において、二重特異性融合ポリペプチドは、ＩＬ−６Ｒ結合抗体またはその部分配列と複合体形成する、２個またはそれ以上、例えば、３、４、５、６、７または８個のＩＬ−１７ａ結合フィノマー配列を含み得る。
【００１３】
ＩＬ−１７ａ結合フィノマー配列は、種々の長さの配列であってよい。一態様において、フィノマー配列は、約１０から８０アミノ酸長である。
【００１４】
ＩＬ−１７ａ結合フィノマー配列は、ＩＬ−１７ａに対して種々の親和性を有する配列であり得る。一態様において、フィノマー配列は、ＩＬ−１７ａに対して約１０−９Ｍから約１０−１３Ｍの結合親和性（Ｋｄ）を有し得る。好ましい態様において、フィノマー配列は、グリコシル化ＩＬ−１７ａに対して約１から約２００ｎＭの結合親和性（Ｋｄ）を有し得る。さらに好ましい態様において、フィノマー配列は、グリコシル化ヒトＩＬ−１７ａに対して約１から約２００ｎＭ、または約５から約５０ｎＭの結合親和性（Ｋｄ）を有し得る。フィノマー配列は、グリコシル化ＩＬ−１７ａに対する配列番号１のフィノマー配列の結合親和性（ＫｄまたはＫＤ）と同等またはそれ以上のグリコシル化ＩＬ−１７ａに対する結合親和性を有し得る。
【００１５】
ＩＬ−１７ａ結合フィノマー配列は、対照フィノマー配列と同一性を有する配列であり得る。特定の態様において、フィノマー配列は、以下に示す対照配列の何れかと少なくとも９０％またはそれ以上（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の同一性を有する配列であり得る：
ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＫＱＫＧＨＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（ａｋａ  １１Ｌ０−Ｃ６）（配列番号２）；
ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＡＲＧＱＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（ａｋａ  １１Ｌ５−Ｂ０６）（配列番号３）；
ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＳＶＳＷＳＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（ａｋａ  １１Ｌ９−Ｃ０９）（配列番号５）；
ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＳＲＧＶＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（ａｋａ  １１Ｌ１０−Ａ０５）（配列番号６）；
ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＡＮＨＧＮＲＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（ａｋａ  １Ｌ３−Ｂ９）（配列番号１）；
ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＤＫＬＳＡＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（ａｋａ  １１Ｌ６−Ｆ０３）（配列番号４）；および、
ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＲＫＳＮＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（ａｋａ  １１Ｌ１１−Ａ０９）（配列番号７）。
【００１６】
ＩＬ−１７ａ結合フィノマー配列は、上記の対照フィノマー配列にアミノ酸置換、挿入、付加または欠失を有する配列であり得る。一態様において、フィノマー配列は、以下の配列の何れかであり得る：
ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＫＱＫＧＨＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号２）；
ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＡＲＧＱＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号３）；
ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＳＶＳＷＳＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号５）；
ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＳＲＧＶＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号６）；
ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＡＮＨＧＮＲＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１）；  ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＤＫＬＳＡＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号４）；および、
ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＲＫＳＮＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号７）、または１−２、２−３、３−４、５−６、６−７、７−８、８−９、９−１０、１０−１５、１５−２０、２０−２５もしくは２５−３０個の保存的、非保存的、または保存的および非保存的アミノ酸置換を有する上記の配列のいずれか、または１−２、２−３、３−４、５−６、６−７、７−８、８−９、９−１０、１０−１５、１５−２０、２０−２５もしくは２５−３０個のアミノ酸欠失もしくは挿入を有する上記の配列のいずれか。
【００１７】
一態様において、ＩＬ−１７ａ結合フィノマー配列は、対照フィノマー配列に含まれている配列と同一の特定のモチーフ配列を含み得る。一態様において、ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹ、ＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬ、ＳＴＨＥＹＥ、ＳＴＨＥＹＥＤ、ＷＷＥＡＲ、ＤＷＷＥＡＲおよびＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱの１個またはそれ以上のモチーフが、本発明において使用されるＩＬ−１７ａ結合フィノマー配列に含まれる。特定の態様において、フィノマー配列は、該配列のアミノ酸位置３１−３６の配列ＳＴＨＥＹＥ、または該配列のアミノ酸位置２８−４２の配列ＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲを含み得る。
【００１８】
ＩＬ−１７ａ結合フィノマー配列は、特定の位置または領域（location）に特定のアミノ酸残基を有する配列であり得る。特に、フィノマー配列は、ｓｒｃループ配列の直後に位置するＥ残基、および／またはｓｒｃループ配列、ＳＴＨＥＹの直後に位置するＥ残基を有していてよい。
【００１９】
ＩＬ−１７ａ結合フィノマー配列は、特定の活性または機能を有する配列であり得る。一態様において、フィノマー配列は、ＩＬ−１７ａに結合し、ＩＬ−１７受容体の機能またはシグナル伝達を阻害、減少または抑制し得る。さらなる態様において、フィノマー配列は、グリコシル化ＩＬ−１７ａに結合し、ＩＬ−１７受容体の機能またはシグナル伝達を阻害、減少または抑制し得る。さらに別の態様において、フィノマー配列は、グリコシル化ＩＬ−１７ａに結合し、線維芽細胞によるＩＬ−６の産生を阻害、減少または抑制し得る。例えば、フィノマー配列は、線維芽細胞によるＩＬ−６の産生を阻害、減少または抑制するのに、約１０から約２５０ｎＭまたは約１０から約１００ｎＭのＩＣ５０を有し得る。
【００２０】
本発明の二重特異性融合ポリペプチドは、ＩＬ−６Ｒに結合する抗体または該抗体の部分配列、例えばＩＬ−６Ｒに結合するＶＨもしくはＶＬ鎖を含む。一態様において、抗体またはその部分配列は、ＩＬ−６Ｒへの結合について約１０−５Ｍから約１０−１３Ｍの結合親和性（Ｋｄ）を有し得る。
【００２１】
ＩＬ−６Ｒ結合抗体またはその部分配列、例えばＶＨもしくはＶＬ鎖は、種々の長さを有する配列であり得る。特に、該配列は、約５０から１００アミノ酸長を有する配列であり得る。特定の態様において、抗体またはその部分配列は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合したＦｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬ、ＶＨ、ダイアボディー（（ＶＬ−ＶＨ）２もしくは（ＶＨ−ＶＬ）２）、トリアボディー（三価抗体）、テトラボディー（四価抗体）、ミニボディー（（ｓｃＦＶ−ＣＨ３）２）、ＩｇＧｄｅｌｔａＣＨ２、ｓｃＦｖ−Ｆｃまたは（ｓｃＦｖ）２−Ｆｃフラグメントであり得る。
【００２２】
ＩＬ−６Ｒ結合抗体またはその部分配列は、種々のイソ型を有する配列であり得る。ある態様において、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤイソ型を有するものであり得る。
【００２３】
ＩＬ−６Ｒ結合抗体またはその部分配列は、以下に示す対照配列と顕著な同一性を有する配列であり得る。特定の態様において、抗体またはその部分配列は、以下の重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）配列のいずれかと少なくとも９０％またはそれ以上（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の配列同一性を有する配列であり得る：
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１２）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１３）。
【００２４】
ＩＬ−６Ｒ結合抗体またはその部分配列は、１つの対照配列に１個またはそれ以上のアミノ酸置換、挿入、付加または欠失を有する配列であってよい。特定の態様において、抗体またはその部分配列は、以下の重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）配列のいずれかであり得る：
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１２）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１３）、または上記の重鎖（ＨＣ）または軽鎖（ＬＣ）配列のいずれかの可変鎖配列内もしくは外に、１−２、２−３、３−４、５−６、６−７、７−８、８−９、９−１０、１０−１５、１５−２０、２０−２５、２５−３０個の保存的、非保存的、または保存的および非保存的アミノ酸置換、またはアミノ酸挿入もしくは欠失を有する配列。
【００２５】
ＩＬ−６Ｒ結合抗体またはその部分配列は、以下に記載の重鎖（ＨＣ）および／または軽鎖（ＬＣ）配列のいずれかであり得る：（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＫＱＫＧＨＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１４）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１５）（ａｋａ ＣＯＶＡ ８０１）；
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号１６）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＫＱＫＧＨＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１７）（ａｋａ ＣＯＶＡ ８０２）；
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＡＲＧＱＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号１８）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１９）（ａｋａ ＣＯＶＡ ８０３）；
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２０）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＡＲＧＱＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号２１）（ａｋａ ＣＯＶＡ ８０４）；
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＳＶＳＷＳＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号２２）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２３）（ａｋａ ＣＯＶＡ ８０５）；
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２４）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＳＶＳＷＳＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号２５）（ａｋａ ＣＯＶＡ ８０６）；
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＳＲＧＶＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号２６）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２７）（ａｋａ ＣＯＶＡ ８０７）；
（ＨＣ）ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＲＰＳＱＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＹＳＩＴＳＤＨＡＷＳＷＶＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＭＬＲＤＴＳＫＮＱＦＳＬＲＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹＷＧＱＧＳＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２８）；
（ＬＣ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＳＲＧＶＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ（配列番号２９）（ａｋａ ＣＯＶＡ ８０８）、または上記の重鎖（ＨＣ）または軽鎖（ＬＣ）配列のいずれかの可変鎖配列内もしくは外に、１−２、２−３、３−４、５−６、６−７、７−８、８−９、９−１０、１０−１５、１５−２０、２０−２５、２５−３０個の保存的、非保存的、または保存的および非保存的アミノ酸置換、またはアミノ酸挿入もしくは欠失を有する配列。
【００２６】
ＩＬ−６Ｒ結合抗体は、トシリズマブなどの公知のＩＬ−６Ｒ抗体であり得る。抗体の部分配列は、抗体の重鎖もしくは軽鎖、または該重鎖もしくは軽鎖の可変領域配列内もしくは外にアミノ酸置換、挿入もしくは欠失を有する配列であり得る。部分配列は、抗体の重鎖または軽鎖可変領域配列の相補性決定領域（ＣＤＲ）内または外にアミノ酸置換、挿入または欠失を有する配列であってもよい。部分配列は、公知のＩＬ−６Ｒ結合抗体の重鎖または軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域（ＦＲ）内または外にアミノ酸置換、挿入または欠失を有する配列であってもよい。
【００２７】
ＩＬ−６Ｒ結合配列は、特定の活性または機能を有する配列であり得る。一態様において、ＩＬ−６Ｒ結合配列はＩＬ−６Ｒに結合し、ＩＬ−６Ｒの機能またはシグナル伝達を阻害、減少または抑制する。
【００２８】
本発明において、ＩＬ−６Ｒ結合抗体、その部分配列、またはそのＶＨもしくはＶＬ鎖およびフィノマー配列は、直接またはリンカーを介して結合できる。一態様において、結合は、共有結合またはアミド結合であってよい。別の態様において、結合は、リンカーを介してであってよい。リンカーの非限定例には、ペプチドおよび炭素鎖列が含まれ得る。一態様において、約１−５、５−１０、１０−１５、１５−２０、２０−２５、２５−５０または５０−１００個のアミノ酸残基を有するペプチド配列；および、約１−５、５−１０、１０−１５、１５−２０、２０−２５、２５−５０または５０−１００個の炭素原子を有する炭素鎖を、リンカーとして使用することができる。リンカーペプチドの例は、（ＧＧＧＧＳ）Ｘ（Ｘ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳのモチーフを含むか、またはそれから構成されるものであり得る。
【００２９】
本発明の二重特異性融合ポリペプチドが結合する標的配列には、哺乳動物のＩＬ−１７ａおよびＩＬ−６Ｒが含まれる。特定の態様において、標的は、ヒトＩＬ−１７ａおよび／またはＩＬ−６Ｒである。
【００３０】
本発明の二重特異性融合ポリペプチドは、単離および／または精製ポリペプチドとして提供され得る。本発明はまた、本発明の二重特異性融合ポリペプチドを含む医薬組成物などの組成物を提供する。組成物は、滅菌医薬組成物または製剤であり得る。
【００３１】
本発明により、本発明の二重特異性融合ポリペプチドを産生する形質転換細胞もまた、提供される。細胞は、原核細胞または真核細胞であってよい。
【００３２】
本発明の二重特異性融合ポリペプチドは、ヒトなどの対象における疾患または病状の処置のために使用され得る。本発明により処置されるべき疾患または病状には、自己免疫疾患もしくは障害、および免疫応答に関連する炎症、または異常なもしくは望ましくない免疫応答により引き起こされた炎症が含まれるが、これらに限定されない。一態様において、本発明の二重特異性融合ポリペプチドは、自己免疫疾患もしくは障害、または炎症の処置を必要とする対象に投与される。自己免疫疾患、障害および炎症は、対象の任意の細胞、組織または臓器に影響を与えるものであり得る。二重特異性融合ポリペプチドにより処置されるべき自己免疫疾患、障害または炎症は、筋肉、骨格、神経系、結合組織、内分泌系、皮膚、気道または肺系、胃腸系、眼系または循環系に影響を与えるものであり得る。
【００３３】
本発明の二重特異性融合ポリペプチドは、単独で投与されるか、または二重特異性融合ポリペプチドにより処置されるべき自己免疫疾患もしくは障害、または炎症の処置に有用である第二の、またはさらなる薬物と共投与され得る。一態様において、本発明の二重特異性融合ポリペプチドは、第二の薬物の投与前、それと同時に、またはその投与後に投与され得る。
【発明の効果】
【００３４】
本発明により、二重特異性融合ポリペプチドおよび薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、二重特異性融合ポリペプチドにより処置される、自己免疫疾患もしくは障害、または炎症などの疾患または障害の処置のための医薬組成物もまた提供される。組成物は二重特異性融合ポリペプチドによって処置されるべき疾患または病状の処置に有用な第二の、またはさらなる薬物をさらに含み得る。
【００３５】
本発明により、自己免疫疾患もしくは障害、または炎症などの疾患または障害の処置のための医薬組成物の製造を目的とする、二重特異性融合ポリペプチドの使用も提供される。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、トランジェントなＣＨＯ ＦｙｎｏｍＡｂ材料のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図２】図２は、マウスＰＫ試験のために作製された安定なＣＨＯ ＦｙｎｏｍＡｂ材料のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図３】図３は、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＰＫ試験のために作製された安定なＣＨＯ ＦｙｎｏｍＡｂ材料のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を示す。
【図４】図４は、組み換えヒトＩＬ−１７ＡとＦｙｎｏｍＡｂの相互作用の結合動態分析を示す。
【図５】図５は、ＣＯＶＡ８０４およびＣＯＶＡ８０６についてのＩＬ−１７Ａ結合ＥＬＩＳＡを示す。
【図６】図６は、組み換えヒトＩＬ−６ＲとＦｙｎｏｍＡｂの相互作用の結合動態分析を示す。
【図７】図７は、トランジェントなＣＨＯ ＦｙｎｏｍＡｂ材料を用いるＨＴ−２９ ＩＬ−１７Ａ アッセイを示す。
【図８】図８は、マウスＰＫ試験のために作製された安定なＣＨＯプールＦｙｎｏｍＡｂ材料を用いるＨＴ−２９ ＩＬ−１７Ａ アッセイを示す。
【図９】図９は、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＰＫ試験のために作製された安定なＣＨＯプールＦｙｎｏｍＡｂ材料を用いるＨＴ−２９ ＩＬ−１７Ａ アッセイを示す。
【図１０】図１０は、トランジェントなＣＨＯ ＦｙｎｏｍＡｂ材料を用いるＨＥＫ−Ｂｌｕｅ ＩＬ−６Ｒ 阻害アッセイを示す。
【図１１】図１１は、マウスＰＫ試験のために作製された安定なＣＨＯプールＦｙｎｏｍＡｂ材料を用いるＨＥＫ−Ｂｌｕｅ ＩＬ−６Ｒ 阻害アッセイを示す。
【図１２】図１２は、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＰＫ試験のために作製された安定なＣＨＯプールＦｙｎｏｍＡｂ材料を用いるＨＥＫ−Ｂｌｕｅ ＩＬ−６Ｒ 阻害アッセイを示す。
【図１３】図１３は、血清安定性二重結合ＥＬＩＳＡのセットアップを示す。
【図１４】図１４は、ＣＯＶＡ８０１−８０８で示されるＦｙｎｏｍＡｂの血清安定性評価を示す。
【図１５】図１５は、ヒト血清の存在下での、ＣＯＶＡ８０４および８０６で示されるＦｙｎｏｍＡｂの二重結合の評価を示す。
【図１６】図１６は、細胞表面に発現されるＩＬ−６Ｒおよび可溶性ＩＬ−１７Ａの同時結合を示す。
【図１７】図１７は、可溶性ＩＬ−６Ｒの存在下での、ＨＴ−２９ ＩＬ−１７Ａ機能アッセイを示す。
【図１８】図１８は、ＩＬ−１７Ａの存在下でのＩＬ−６Ｒ阻害を示す。
【図１９】図１９は、表示のフィノマーポリペプチドによる、グリコシル化および非グリコシル化ＩＬ−１７Ａの用量依存的インビトロ阻害を示す。Ａ）１Ｌ３−Ｂ０９、（Ｂ）１１Ｌ０−Ｃ６、（Ｃ）１１Ｌ５−Ｂ０６、（Ｄ）１１Ｌ６−Ｆ０３、（Ｅ）１１Ｌ９−Ｃ０９、（Ｆ）１１Ｌ１０−Ａ０５。
【図２０】図２０は、ＷＯ２０１１／０２３６８５に記載のＦｙｎ  ＳＨ３由来ポリペプチドによる、グリコシル化および非グリコシル化ＩＬ−１７Ａの用量依存的インビトロ阻害を示す：（Ａ）Ｆｙｎ  ＳＨ３由来ＩＬ−１７結合体２Ｃ１（配列番号３０）（ＷＯ２０１１／０２３６８５では、配列番号１０７）。（Ｂ）Ｆｙｎ  ＳＨ３由来ＩＬ−１７結合体Ａ１＿２（“Ａ１”）（配列番号３１）（ＷＯ２０１１／０２３６８５では、配列番号５３）。（Ｃ）Ｆｙｎ  ＳＨ３由来ＩＬ−１７結合体Ｂ１＿２（“Ｂ１”）（配列番号３２）（ＷＯ２０１１／０２３６８５では、配列番号３９）。
【図２１】図２１は、フィノマーポリペプチド１１Ｌ１１−Ａ０９による、グリコシル化および非グリコシル化ＩＬ−１７Ａの用量依存的インビトロ阻害の結果を示す。
【図２２】図２２は、ＣＯＶＡ８０１およびＣＯＶＡ８０２で示されるＦｙｎｏｍＡｂについての時間に対してプロットした平均血清濃度を示す。
【図２３】図２３は、ＣＯＶＡ８０３およびＣＯＶＡ８０４で示されるＦｙｎｏｍＡｂについての時間に対してプロットした平均血清濃度を示す。
【図２４】図２４は、ＣＯＶＡ８０５およびＣＯＶＡ８０６で示されるＦｙｎｏｍＡｂについての時間に対してプロットした平均血清濃度を示す。
【図２５】図２５は、ＣＯＶＡ８０７およびＣＯＶＡ８０８で示されるＦｙｎｏｍＡｂについての時間に対してプロットした平均血清濃度を示す。
【図２６】図２６は、カニクイザルにおける、ＣＯＶＡ８０１およびＣＯＶＡ８０２で示されるＦｙｎｏｍＡｂについての時間に対してプロットした平均血清濃度を示す。
【図２７】図２７は、カニクイザルにおける、ＣＯＶＡ８０３およびＣＯＶＡ８０４で示されるＦｙｎｏｍＡｂについての時間に対してプロットした平均血清濃度を示す。
【図２８】図２８は、カニクイザルにおける、ＣＯＶＡ８０６で示されるＦｙｎｏｍＡｂについての時間に対してプロットした平均血清濃度を示す。
【図２９】図２９は、カニクイザルにおける、ＣＯＶＡ８０８で示されるＦｙｎｏｍＡｂについての時間に対してプロットした平均血清濃度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
詳細な説明
用語“フィノマー”は、ヒトＦｙｎキナーゼＳＨ３ドメインに基づく、またはそれに由来する、後にモデル化された非免疫グロブリン由来結合（ポリ）ペプチドを意味し、Gebauer and Skerra (2009) Curr Opinion in Chemical Biology 13:245−255に記載されたいわゆる足場（scaffold）である。ヒトＦｙｎキナーゼのＳＨ３ドメインは、タンパク質などの異なる標的に対して高い親和性および特異性で結合するタンパク質（フィノマーと称する）を操作するための足場として使用され得る（ＷＯ２００８／０２２７５９、ＷＯ２０１１／０２３６８５、Grabulovski D. et al., (2007) J Biol Chem 282, p. 3196−3204, Bertschinger J. et al. (2007) Protein Eng Des Sel, 20, p.57−68および、Schlatter et al. (2012) mAbs, 4(4) p. 497−50）。ＲＴループ（ＥＡＲＴＥＤ）領域およびｓｒｃループ（ＮＳＳＥ）領域にそれぞれ下線を付したＦｙｎ３配列の配列：
【表１】
0006345800.tif 000002
【００３８】
“ＩＬ−１７ａフィノマー”または“抗ＩＬ−１７ａフィノマー”およびそれらの文法的な変形は、インターロイキン−１７ａ（ＩＬ−１７ａ）タンパク質に結合するフィノマー配列を意味する。ＲＴループおよびｓｒｃループ内のアミノ酸位置は、グリコシル化ＩＬ−１７Ａに対する結合特異性を決定すると考えられる。代表的なＩＬ−１７ａ結合フィノマー配列（配列番号１−７）を以下に示す：
ＲＴループ ｓｒｃループ
配列番号１：GVTLFVALYDYANHGNRDLSFHKGEKFQILSTHEYEDWWEARSLTTGETGYIPSNYVAPVDSIQ；
配列番号２：GVTLFVALYDYKQKGHLDLSFHKGEKFQILSTHEYEDWWEARSLTTGETGYIPSNYVAPVDSIQ；
配列番号３：GVTLFVALYDYSARGQLDLSFHKGEKFQILSTHEYEDWWEARSLTTGETGYIPSNYVAPVDSIQ；
配列番号４：GVTLFVALYDYDKLSALDLSFHKGEKFQILSTHEYEDWWEARSLTTGETGYIPSNYVAPVDSIQ；
配列番号５：GVTLFVALYDYESVSWSDLSFHKGEKFQILSTHEYEDWWEARSLTTGETGYIPSNYVAPVDSIQ；
配列番号６：GVTLFVALYDYSSRGVLDLSFHKGEKFQILSTHEYEDWWEARSLTTGETGYIPSNYVAPVDSIQ；および、
配列番号７：GVTLFVALYDYSRKSNLDLSFHKGEKFQILSTHEYEDWWEARSLTTGETGYIPSNYVAPVDSIQ。
【００３９】
“ＩＬ−６Ｒ抗体”または“抗ＩＬ−６Ｒ抗体”およびそれらの文法的な変形は、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）タンパク質に結合するポリクローナルまたはモノクローナル抗体を意味する。代表的なＩＬ−６Ｒ結合抗体重鎖および軽鎖配列（配列番号８および９）を以下に示す：
トシリズマブ重鎖配列（配列番号８）、ＣＤＲに下線を付す。
【表２】
0006345800.tif 000003
トシリズマブ軽鎖配列（配列番号９）、ＣＤＲに下線を付す。
【表３】
0006345800.tif 000004
【００４０】
ＩＬ−６Ｒ結合抗体、および／またはＩＬ−６Ｒに結合する抗体の重鎖および軽鎖配列のさらなる例は、ＵＳ２０１３０１２２０１２；ＵＳ２０１２０２２５０６０；ＵＳ２０１２０１２８６２６；および、ＵＳ２０１２００７７７３１に記載されている。ＩＬ−６Ｒに結合するナノボディはＷＯ２００８／０２００７９に記載されている。
【００４１】
本明細書で用いる用語“ＩＬ−１７ａ、“ＩＬ−１７ａタンパク質”、“ＩＬ−１７ａ配列”および“ＩＬ−１７ａドメイン”は、任意の天然に存在する状態（context）から単離された、それに基づく、もしくはそこに存在するＩＬ−１７ａタンパク質配列の全てもしくは一部（例えば、抗原性領域またはエピトープなどの部分配列）、または人工的に作製された（例えば、遺伝子操作された）ＩＬ−１７ａ、を意味する。従って、用語ＩＬ−１７ａなどには、細胞性の、ならびに組み換えまたは合成産生されたＩＬ−１７ａ配列が含まれる。
【００４２】
本明細書で用いる用語“ＩＬ−６Ｒ、“ＩＬ−６Ｒタンパク質”、“ＩＬ−６Ｒ配列”および“ＩＬ−６Ｒドメイン”は、任意の天然に存在する状態から単離された、それに基づく、もしくはそこに存在するＩＬ−６Ｒタンパク質配列（例えば、抗原性領域またはエピトープなどの部分配列）、または人工的に作製された（例えば、遺伝子操作された）ＩＬ−６Ｒ、の全てもしくは一部を意味する。従って、用語ＩＬ−６Ｒなどには、細胞性の、ならびに組み換えまたは合成産生されたＩＬ−６Ｒ配列が含まれる。
【００４３】
哺乳動物のＩＬ−１７ａ配列およびＩＬ−６Ｒ配列は、当業者に公知である。ヒトＩＬ−１７ａタンパク質配列（配列番号１０）の代表的な非限定的な例は、
MTPGKTSLVSLLLLLSLEAIVKAGITIPRNPGCPNSEDKNFPRTVMVNLNIHNRNTNTNPKRSSDYYNRSTSPWNLHRNEDPERYPSVIWEAKCRHLGCINADGNVDYHMNSVPIQQEILVLRREPPHCPNSFRLEKILVSVGCTCVTPIVHHVA
である。
【００４４】
ヒトＩＬ−６Ｒタンパク質配列（配列番号１１）の代表的な非限定的な例は、
MLAVGCALLAALLAAPGAALAPRRCPAQEVARGVLTSLPGDSVTLTCPGVEPEDNATVHWVLRKPAAGSHPSRWAGMGRRLLLRSVQLHDSGNYSCYRAGRPAGTVHLLVDVPPEEPQLSCFRKSPLSNVVCEWGPRSTPSLTTKAVLLVRKFQNSPAEDFQEPCQYSQESQKFSCQLAVPEGDSSFYIVSMCVASSVGSKFSKTQTFQGCGILQPDPPANITVTAVARNPRWLSVTWQDPHSWNSSFYRLRFELRYRAERSKTFTTWMVKDLQHHCVIHDAWSGLRHVVQLRAQEEFGQGEWSEWSPEAMGTPWTESRSPPAENEVSTPMQLTTNKDDDNILFRDSANATSLPVQDSSSVPLPTFLVAGGSLAFGTLLCIAIVLRFKKTWKLRALKEGKTSMHPPYSLGQLVPERPRPTPVLVPLISPPVSPSSLGSDNTSSHNRPDARDPRSPYDISNTDYFFPR
である。
【００４５】
用語“抗体”は、それぞれＶＨおよびＶＬと記載する重鎖および軽鎖可変ドメインを介して別の分子（抗原）に結合するタンパク質を意味する。“抗体”とは、任意のポリクローナルまたはモノクローナル免疫グロブリン分子、またはそれらの混合物を意味し、例えばＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤである。抗体は任意の抗体クラスまたはサブクラスに属している。ＩｇＧのサブクラスの例は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４である。
【００４６】
抗体に関して用いられるとき、用語“モノクローナル”は、任意の真核生物、原核生物、またはファージクローンを含む単一クローンに基づく、それから得られる、またはそれに由来する抗体を意味する。従って、“モノクローナル”抗体は、本明細書中、構造的に定義され、それが産生される方法では定義されない。
【００４７】
抗体には、カッパまたはラムダ軽鎖配列を有する抗体であって、天然に存在する抗体のような全長の配列、それらの混合物（すなわち、カッパ鎖配列およびラムダ鎖配列の融合物）、およびそれらの部分配列／フラグメントのいずれもが含まれる。天然に存在する抗体分子は、２つのカッパ軽鎖および２つのラムダ軽鎖を含む。カッパ軽鎖とラムダ軽鎖との主な違いは、定常領域の配列中にある。
【００４８】
重（Ｈ）鎖および／もしくは軽（Ｌ）鎖または重（Ｈ）鎖もしくは軽（Ｌ）鎖のフラグメントを含む、またはそれから構成される抗体には、単一のＨ鎖もしくはＬ鎖または単一のＨ鎖もしくはＬ鎖フラグメント、または複数の（２、３、４またはそれ以上の）重（Ｈ）鎖および／もしくは軽（Ｌ）鎖、もしくは複数の重（Ｈ）鎖および／もしくは軽（Ｌ）鎖のフラグメントが含まれる。抗体またはフラグメントの重（Ｈ）鎖および／もしくは軽（Ｌ）鎖を含む融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含むことが必ずしも必要とはされず、それ故に、融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）と本明細書中に記載される。抗体またはそのフラグメントは、他の抗体、そのフラグメント、重（Ｈ）鎖、軽（Ｌ）鎖、または抗体の重（Ｈ）鎖もしくは軽（Ｌ）鎖とは異なるポリペプチドとの、オリゴマー（より高次のまたは結合価の）形態であってよく、例えばトリマー、テトラマー、ペンタマー、ヘキサマー、ヘプタマーなどである。
【００４９】
本明細書で用いる用語“二重特異性”およびその文法上の変形は、融合ポリペプチド配列に関して使用されるとき、該融合ポリペプチドが２つの異なる標的に結合することを意味する。ポリペプチド標的は、それらが異なるアミノ酸配列を有するとき、異なると考えられる。本発明の二重特異性融合ポリペプチドは、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）およびインターロイキン−１７ａ（ＩＬ−１７ａ）に結合する。
【００５０】
本明細書で用いる用語“融合”または“キメラ”およびその文法上の変形は、配列に関して使用されるとき、該配列が、２つまたはそれ以上の異なるタンパク質に基づく、それらに由来する、またはそれらから得られる、もしくはそれらから単離される、１つまたは複数の部分を含むことを意味する。すなわち、例えば、配列の一部は、１つの特定のタンパク質に基づき、該配列の別の部分は、異なる特定のタンパク質に基づいていてよい。従って、融合またはキメラポリペプチドとは、該ポリペプチドの異なる部分が、異なるタンパク質由来のものである分子である。
【００５１】
用語“タンパク質”、“ポリペプチド”および“ペプチド”は、本明細書中、互換的に用いられ、アミド結合もしくは同等の結合により共有結合された、２以上のアミノ酸、または“残基”を意味する。アミノ酸配列は、非天然化学結合または非アミド化学結合によって結合されていてよく、例えば、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、二官能性マレイミド、またはＮ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いて形成されたものを含む。非アミド結合には、例えば、ケトメチレン、アミノメチレン、オレフィン、エーテル、チオエーテルなどが含まれる（例えば、Spatola in Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides and Proteins, Vol. 7, pp 267−357 (1983), “Peptide and Backbone Modifications,” Marcel Decker, NY).
【００５２】
本発明は、インターロイキン−１７ａ（ＩＬ−１７ａ）に結合し、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）に結合する抗体または該ＩＬ−６Ｒに結合する抗体の部分配列と複合体を形成するフィノマー配列を含む融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）を提供する。フィノマー配列は、ＩＬ−６Ｒ結合抗体またはその部分配列のアミノ末端またはカルボキシ末端に結合し得る。同様に、フィノマー配列のアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかは、抗体またはその部分配列のアミノ末端またはカルボキシ末端に結合し得る。複数のフィノマーが、フィノマー配列のアミノ末端またはカルボキシ末端を介して、抗体またはその部分配列の複数のアミノ末端またはカルボキシ末端に結合し得る。加えて、フィノマーの末端間（end-to-end）または一連の複数のフィノマーは、抗体またはその部分配列のアミノ末端またはカルボキシ末端に結合し得る。
【００５３】
用語“結合する”または“結合”は、フィノマー、抗体もしくはその部分配列、または融合ポリペプチド（例えば、ＦｙｎｏｍＡｂ）に関して使用されるとき、該フィノマー、抗体もしくはその部分配列、または融合ポリペプチドが、全部または一部の標的に特異的に結合することを意味する。フィノマー、抗体もしくはその部分配列、または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、ＩＬ−１７ａおよび／またはＩＬ−６Ｒタンパク質に特異的または選択的に結合し、それは、ＩＬ−１７ａまたはＩＬ−６Ｒタンパク質に存在するエピトープまたは抗原決定基に対して選択的である。選択的結合とは、標的タンパク質への結合を意味する。標的タンパク質への結合を顕著に妨害しない非標的タンパク質への結合もまた、選択的であると考えられる。選択的結合は、本明細書に記載の、または当技術分野で公知の、特異性、親和性、ならびに競合的および非競合的結合アッセイを用いて、非選択的結合と区別することができる。
【００５４】
本発明のフィノマー／抗体融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、例示されるフィノマー、抗体およびその部分配列と同じか、または実質的に同じ結合特異性を有し得る。標的に対する親和性は、対照フィノマー、抗体もしくはその部分配列、または対照フィノマー／抗体融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の親和性よりも高くても、低くてもよい。所定のＦｙｎｏｍＡｂは、別のフィノマー、抗体、部分配列またはＦｙｎｏｍＡｂと互いに干渉しない標的の領域への結合について検出可能に競合しても、しなくても、または結合を阻害してもしなくてもよい。
【００５５】
標的上の全てのまたは一部の配列に特異的に結合するフィノマー／抗体融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）はまた、標的と同じか、または類似のエピトープを有する他のタンパク質に結合し得る。同じ配列もしくはエピトープまたはエピトープの一部に結合する融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、標的に対して、対照フィノマーまたは抗体またはそれらの融合物よりも高いか、または低い相対的結合親和性または特異性を有し得る。
【００５６】
フィノマーおよび抗体、ならびに融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）にはまた、それらのそれぞれの標的への結合に競合する配列が含まれる。従って、例えば、所定のフィノマー、抗体、部分配列またはＦｙｎｏｍＡｂは、ＩＬ−１７ａおよび／またはＩＬ−６Ｒへの結合について、別のフィノマー、抗体、部分配列またはＦｙｎｏｍＡｂの結合を阻害するか、または競合し得る。特定の非限定的な例において、フィノマー、抗体、部分配列またはＦｙｎｏｍＡｂは、ＣＯＶＡ８０１から８０８のいずれかのＩＬ−１７ａおよび／またはＩＬ−６Ｒへの結合を、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％、またはそれ以上阻害し得る。従って、フィノマーは、ＩＬ−１７ａ（例えば、グリコシル化ＩＬ−１７ａ）への結合について、配列番号１から７で示されるフィノマーの何れかの結合と競合するものであってよく、抗体またはその部分配列は、ＩＬ−６Ｒへの結合について、配列番号８および９を含む抗体の結合について競合するものであってもよい。
【００５７】
本発明のＦｙｎｏｍＡｂには、標的（例えば、ＩＬ−１７ａまたはＩＬ−６Ｒ）に対して、対照フィノマー／抗体もしくはその部分配列または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）よりも高いか、または低い親和性を有する、フィノマー／抗体もしくはその部分配列または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）が含まれ得る。例えば、本発明のＦｙｎｏｍＡｂは、ＩＬ−１７ａ（例えば、グリコシル化ＩＬ−１７ａ）および／またはＩＬ−６Ｒに対してより高いか、または低い親和性を有するもの、ならびに配列番号１から７に記載のフィノマー配列と少なくとも６０％もしくはそれ以上（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％）の同一性を有する配列、または配列番号８もしくは９に記載の重鎖もしくは軽鎖可変領域配列と少なくとも６０％もしくはそれ以上（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％）の同一性を有する配列であり得る。特定の態様において、本発明の融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、グリコシル化ＩＬ−１７ａに対して、配列番号１に記載のフィノマー配列よりも高い親和性を有する。
【００５８】
従って、本発明のＦｙｎｏｍＡｂは、ＩＬ−１７ａ（例えば、グリコシル化ＩＬ−１７ａ）および／またはＩＬ−６Ｒに対して、同じか、または異なる結合親和性を有する配列を含む。例えば、本発明のＦｙｎｏｍＡｂは、別のＦｙｎｏｍＡｂ、例えば、ＣＯＶＡ８０１−８０８と比較して、２−５、５−１０、１０−１００、１００−１０００または１０００−１０，０００倍高いかまたは低い親和性を有し、または任意の数値もしくは範囲もしくはかかる範囲内の数値で、標的（例えば、グリコシル化ＩＬ−１７ａおよび／またはＩＬ−６Ｒ）に対する親和性を有し得る。
【００５９】
結合親和性は、結合速度（Ｋａ）および解離速度（Ｋｄ）により決定され得る。平衡親和性定数ＫＤは、Ｋａ／Ｋｄ比率である。別のフィノマーまたは抗体と同じ結合親和性を有するフィノマーまたは抗体は、各抗体の解離定数（Ｋｄ）が、約１から１０倍以内（対照フィノマーまたは抗体よりも、１−１０倍高い親和性または１−１０倍低い親和性、または任意の数値もしくは範囲もしくはかかる範囲内の数値）であることを意味する。標的抗原（例えば、ＩＬ−１７ａ、例えばグリコシル化ＩＬ−１７ａ、またはＩＬ−６Ｒ）に対する例示的親和性は、５ｘ１０−２Ｍ、１０−２Ｍ、５ｘ１０−３Ｍ、１０−３Ｍ、５ｘ１０−４Ｍ、１０−４Ｍ、５ｘ１０−５Ｍ、１０−５Ｍ、５ｘ１０−６Ｍ、１０−６Ｍ、５ｘ１０−７Ｍ、１０−７Ｍ、５ｘ１０−８Ｍ、１０−８Ｍ、５ｘ１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５ｘ１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５ｘ１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５ｘ１０−１２Ｍ、１０−１２Ｍ、５ｘ１０−１３Ｍ、１０−１３Ｍ、５ｘ１０−１４Ｍ、１０−１４Ｍ、５ｘ１０−１５Ｍ、および１０−１５Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）を有する。一般に、標的に対する結合親和性（Ｋｄ）は、１０−７Ｍ、５ｘ１０−８Ｍ、１０−８Ｍ、５ｘ１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５ｘ１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５ｘ１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５ｘ１０−１２Ｍ、または１０−１２Ｍ未満であってよい。
【００６０】
より具体的には、典型的な標的抗原ＩＬ−１７ａ（例えば、グリコシル化ＩＬ−１７ａ）に対するフィノマーまたは融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の親和性は、約０．０１ｎＭから約０．５０ｎＭ、または約０．０２ｎＭから約０．４０ｎＭのＫＤである。より具体的には、典型的な標的抗原ＩＬ−６Ｒに対する抗体もしくはその部分配列または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）親和性は、約０．２０ｎＭから約１．２５ｎＭ、または約０．３０ｎＭから約１．１０ｎＭのＫＤである。
【００６１】
フィノマーおよび抗体、ならびに融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、対照フィノマー、抗体またはＦｙｎｏｍＡｂを含む融合物として少なくとも一部の“活性”または“機能”を有するものを含み得る。該活性または機能とは、結合親和性（例えば、Ｋｄ、ＫＤ）、結合特異性、または活性、例えば、アンタゴニスト活性であり得る。用語“少なくとも一部”は、フィノマー、抗体、または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）が、本明細書に例示の対照フィノマー、抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の活性または機能の少なくとも測定可能または検出可能な量を保持することを意味する。本発明のフィノマー、抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、対照フィノマー、抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）より高いか、または低い活性または機能を有し得る。
【００６２】
フィノマー、抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、アンタゴニスト活性もしくは機能またはアゴニスト活性もしくは機能を有し得る。一態様において、フィノマー、抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、ＩＬ−１７ａおよび／またはＩＬ−６Ｒに対してアンタゴニスト活性もしくは機能またはアゴニスト活性もしくは機能を有するものであり得る。
【００６３】
“アンタゴニスト”は、標的分子の１個またはそれ以上の活性、例えばＩＬ−１７ａまたはＩＬ−６Ｒによるシグナル伝達を減少、低下または阻害することができる。アンタゴニストは、受容体へのＩＬ−１７ａの結合またはリガンドへのＩＬ−６Ｒの結合を妨害し、リガンドによって活性化された細胞を無能化または死滅させ、および／またはシグナル伝達を妨害し得る。アンタゴニストは、リガンドと受容体との相互作用を完全に阻止、実質的に減少、低減または阻害することができる。
【００６４】
“アゴニスト”は、ＩＬ−１７ａまたはＩＬ−６Ｒによりシグナル伝達などの、標的分子の１つまたは複数の活性を増大、誘導または活性化させることができる。アゴニストは、リガンドへの受容体の結合を増加、誘導もしくは促進し得る（またはその逆）か、または受容体またはリガンドに直接作用して、シグナル伝達を増加、誘導、促進もしくは活性化し得る。
【００６５】
対照フィノマー、抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の活性または機能を有する、フィノマー、抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、本明細書に記載の、または当技術分野で公知の種々の方法によって同定され得る。例えば、プレート上（ＥＬＩＳＡ）、または細胞上（細胞ベースのＥＬＩＳＡ）でのＩＬ−１７ａ（例えば、グリコシル化ＩＬ−１７ａ）またはＩＬ−６Ｒに対する結合アッセイを用いることができる。ＩＬ−１７ａまたはＩＬ−６Ｒへの結合の特異的阻害は、結合特異性ならびに親和性の尺度として使用され得る。アッセイの例は、ＩＬ−１７ａまたはＩＬ−６Ｒ活性、例えば、シグナル伝達活性などの、機能または活性を決定することができるものであり得る。
【００６６】
本明細書に記載の通り、本発明の抗体、フィノマーまたは融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、対照配列内に１個またはそれ以上の修飾を有するものであり得る。修飾の非限定的な例は、参照フィノマー、参照抗体（重鎖もしくは軽鎖）または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の、１個または複数のアミノ酸置換（例えば、１−３、３−５、５−１０またはそれ以上の残基）、付加（例えば、１−３、３−５、５−１０またはそれ以上の残基）または欠失（例えば、部分配列もしくはフラグメント）を含んでいてよい。特定の態様において、修飾フィノマー、抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、非修飾参照抗体、フィノマーまたは融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の機能または活性の少なくとも一部、例えば、インビトロもしくはインビボまたは細胞中もしくは細胞上（例えば、培養）、またはインビボでの、ＩＬ−６ＲまたはＩＬ−１７ａ（例えば、グリコシル化ＩＬ−１７ａ）への結合親和性（例えば、Ｋｄ、ＫＤ）または結合特異性を保持する。
【００６７】
フィノマー、抗体もしくはその部分配列またはＦｙｎｏｍＡｂは、それぞれ本明細書に記載の親もしくは参照フィノマー、または抗体の重鎖もしくは軽鎖可変領域配列、または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）と、少なくとも部分的な配列同一性（１００％未満）を有するものであり得る。例えば、本明細書に記載のフィノマー（配列番号１−７）、および／またはトシリズマブの重鎖および軽鎖配列（配列番号８−９）である。かかるフィノマー、抗体、その部分配列または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の同一性パーセントは、わずか６０％であってよく、またはそれ以上であってよい（例えば、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％）。同一性パーセントは、配列番号１−９に記載の配列の全長配列に亘ってよく、または配列番号１−９のいずれか内の連続領域もしくは部分(area)である。一面において、同一性パーセントを共有する配列の長さは、５個またはそれ以上の連続アミノ酸、例えば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９もしくは２０個の連続アミノ酸である。別の面において、同一性パーセントを共有する配列の長さは、２０個またはそれ以上の連続アミノ酸、例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４もしくは３５個の連続アミノ酸である。さらなる面において、同一性パーセントを共有する配列の長さは、３５個またはそれ以上の連続アミノ酸、例えば、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４５、４７、４８、４９もしくは５０個の連続アミノ酸である。さらに別の面において、同一性パーセントを共有する配列の長さは、５０個またはそれ以上の連続アミノ酸、例えば、５０−５５、５５−６０、６０−６５、６５−７０、７０−７５、７５−８０、８０−８５、８５−９０、９０−９５、９５−１００もしくは１００−１１０個の連続アミノ酸である。
【００６８】
本発明により、フィノマー配列、配列番号１−９に記載の抗体の重鎖もしくは軽鎖可変領域、または配列番号１−９の配列中に１個またはそれ以上のアミノ酸置換を含む配列の何れかを有する融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）を提供する。一態様において、置換されたフィノマーおよび／または抗体の重鎖および／または軽鎖配列は、標的ＩＬ−１７ａ（例えば、グリコシル化ＩＬ−１７ａ）および／またはＩＬ−６Ｒに対して少なくとも一部の結合親和性および／または結合特異性を保持していてよい。
【００６９】
一態様において、フィノマー配列は、１−１５、１−１２、１−８、１−５、１−３またはそれ以下（例えば、１個または２個）のアミノ酸置換を有し得る。特に、置換は、任意のフィノマー配列（配列番号１−７）内のアミノ酸の置換であり得る。
【００７０】
別の態様において、任意の置換は、フィノマー配列中のモチーフＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹ、ＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬ、ＳＴＨＥＹ、ＳＴＨＥＹＥ、ＳＴＨＥＹＥＤ、ＷＷＥＡＲ、ＤＷＷＥＡＲ、ＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ、またはＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲ中にはない。別の態様において、フィノマー配列中のｓｒｃループ配列の直後に位置するＥ−アミノ酸残基は置換されていない。
【００７１】
抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、定常または可変（例えば、ＣＤＲもしくはＦＲなどの超可変）領域中に１個またはそれ以上の置換を有していてよい。定常または可変領域内の１個または数個のアミノ酸置換は、許容され得る。１個またはそれ以上の超可変領域内の複数のアミノ酸の非保存的置換は、抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の結合活性、特異性に影響を与える。
【００７２】
従って、修飾は、参照抗体、フィノマーまたは融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）由来のアミノ酸配列のスモールおよびラージ領域の欠失を含み得る。欠失領域は、要すれば、別のアミノ酸配列に置換されてもよい。置換された配列は、欠失領域として長さが同じ、長いまたは短くてもよい。
【００７３】
抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）修飾の特定の例は、例えば、重鎖または軽鎖定常領域の置換により、異なるイソ型またはサブクラスを有するような変化である。Ｉｇサブクラスの変更は、機能または活性（例えば、抗ＩＬ−６Ｒ活性、安定性）を変化または改善する結果となり得る。別の例は、インビボもしくはＰＫにおける増加した血清安定性および／または半減期などの、改善された特性をもたらす変化である。（例えば、Antibody Engineering Vol. 1, Konterman R and Duebel S, eds., 2010, Springer、ＷＯ２００６／１３０８３４およびHorton et al., Cancer Res 68:8049 (2008)に記載の通り）。Ｆｃにおける置換の非限定的な例には、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、Ｈ４３５Ｒ、Ｈ４３５Ｑ、Ｇ２３６Ｒ、Ｌ３２８Ｒ、Ｓ２３９Ｄ、Ｉ３３２Ｅが含まれる。ＩｇＧ１における置換の非限定的な例は、Ｆｃ領域の残基２３８、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２６５、２７２、２８９、２８８、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、３８６、３８８、４００、４１３、４１５、４２４、４３３、４３４、４３５、４３９および／または４７７にあってよい。
【００７４】
一態様において、重鎖または軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３）またはＦＲは、１−１５、１−１２、１−８、１−５、１−３個またはそれ以下（例えば、１個または２個）のアミノ酸置換を有していてよい。一態様において、可変領域配列内の置換は、例えば、ＣＤＲまたはＦＲ内の、保存的アミノ酸置換であり得る。別の態様において、可変領域配列内の置換は、ＣＤＲ内になくてもよい。別の態様において、該置換は、ＦＲ内であってよい。別の態様において、可変領域配列内の置換は、ＦＲ内になくてよい。ＩＬ−６Ｒ結合を供する重鎖および軽鎖可変領域ＣＤＲ配列の例は、配列番号８および９に記載され、すなわち、重鎖可変領域ＣＤＲ１−３は、ＳＤＨＡＷＳ；ＹＩＳＹＳＧＩＴＴＹＮＰＳＬＫＳ；および、ＳＬＡＲＴＴＡＭＤＹであり、軽鎖可変領域ＣＤＲ１−３は、ＲＡＳＱＤＩＳＳＹＬＮ；ＹＴＳＲＬＨＳ；および、ＱＱＧＮＴＬＰＹＴである。
【００７５】
超可変領域内の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）などの、抗体による抗原結合に寄与する構造的決定因子は、当技術分野で公知である。例えばＤ領域およびＪ領域のような付加的領域の位置、構造および機能もまた公知である。所定の標的（例えば、ＩＬ−６Ｒ）に結合する、抗体、その部分配列または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、一般に、少なくとも一部の機能またはＩＬ−６Ｒ結合活性を保持するように、ＩＬ−６Ｒに結合する重鎖または軽鎖配列と十分な配列同一性を有する１個またはそれ以上のＣＤＲおよびＦＲ配列を有し得る。例えば、本明細書中に例示される通り、配列番号８−９に記載される重鎖または軽鎖配列の１個またはそれ以上のＣＤＲは、ＩＬ−６Ｒに対して結合特異性を有する抗体の少なくとも一部の機能または活性を保持し得る。
【００７６】
領域的な変異性分析を、相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）における特定の置換の効果を予測するために用いることができる（Shapiro et al., J Immunol. 163:259 (1999)）。要約すれば、配列比較は、より高いまたはより低い変異性の領域を予測する、ＩｇイントロンＤＮＡ内に位置するジ−およびトリ−ヌクレオチド配列間の変異階層性を示している。定量的構造活性相関（ＱＳＡＲ）を、抗体認識ドメインの性質を識別するために用いることができ、従って、リガンド結合に関与するアミノ酸を同定するために用いることができる。次に、ＱＳＡＲに基づく予測モデルは、置換（変異）の効果を予測するために使用されてよい。例えば、その抗原と相互作用する抗体の結合および解離速度に対する変異の影響は、両方の反応速度（ＫａおよびＫｄ）定数について定量的予測モデルを構築するために使用されており、次に、それを、抗体の他の変異の影響を予測するために使用することができる（De Genst et al., J Biol. Chem. 277:29897 (2002)）。従って、当業者は、かかる分析を、非置換の抗体、部分配列または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の少なくとも一部の活性または機能を保持する、例えば、ＩＬ−６Ｒに対して少なくとも一部の結合を保持する、抗体または部分配列を生じる可能性のあるアミノ酸置換を予測するために使用し得る。
【００７７】
所定の置換の影響は、非置換の参照抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の結合活性、特異性または抗体機能もしくは活性の少なくとも一部を保持する、抗体および融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）を同定するためにアッセイすることができる。例えば、ＩＬ−６Ｒに結合する抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の超可変領域内のアミノ酸置換、付加、欠失または挿入は、ＩＬ−６Ｒ結合活性または結合特異性についてアッセイすることができる。従って、アミノ酸置換、ならびに付加、欠失および挿入を有する抗体および融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、インビトロ（例えば、培養）、またはインビボで、結合親和性、結合特異性、細胞上の標的（例えば、ＩＬ−６Ｒ）に対する結合性などの機能または活性の少なくとも一部が、少なくとも部分的に保持されるように包含される。
【００７８】
用語“同一性”およびその文法的な変形は、２以上の比較対象物が同じであることを意味する。従って、２つのアミノ酸配列が同一であるとき、それらは同じアミノ酸配列を有する。同一性は、配列の定義された部分(area)（領域またはドメイン）を超えて存在してよい。相同性または同一性の“部分、領域またはドメイン”とは、２以上の参照エンティティの一部が相同性を共有するか、または同じであることを意味する。従って、２つの配列が１以上の配列領域に亘って同一であるとき、それらはこれらの領域において同一性を共有する。
【００７９】
アミノ酸置換は、保存的または非保存的であり得る。“保存的置換”は、生物学的、化学的または構造的に類似の残基による１つのアミノ酸の置換を意味する。生物学的に類似とは、置換が生物学的活性に対応しており、例えば、ＩＬ−１７ａまたはＩＬ−６Ｒへの結合を保持することを意味する。構造的に類似とは、アミノ酸が、同様の長さの側鎖を有すること、例えばアラニン、グリシンおよびセリンであるか、または同様の大きさを有することを意味する。化学的に類似とは、残基が同じ電荷を有するか、または両方とも親水性もしくは疎水性であることを意味する。特定の非限定的な例には、１つの疎水性残基の別の残基への置換、例えばイソロイシン、バリン、ロイシンもしくはメチオニンの置換、または１つの極性残基の別の残基への置換、例えば、アルギニンのリシンへの置換、グルタミンのアスパラギン酸への置換、もしくはグルタミンのアスパラギンへの置換、セリンのスレオニンへの置換などが含まれる。
【００８０】
アミノ酸置換は、天然に存在するＬ−アミノ酸がＤ−アミノ酸で置換されてもよいことを除き、同じアミノ酸での置換であってもよい。従って、修飾には、１もしくはそれ以上のＤ−アミノ酸のＬ−アミノ酸への置換、またはＤ−アミノ酸の混合物のＬ−アミノ酸への置換が含まれる。
【００８１】
２つの配列間の同一性の程度は、コンピュータプログラムおよび当該分野で公知の数学的アルゴリズムを用いて確認することができる。配列の同一性（相同性）パーセントを計算するかかるアルゴリズムは、一般的に、比較領域または部分に亘って配列ギャップおよびミスマッチを説明する。例えば、ＢＬＡＳＴ（例えば、ＢＬＡＳＴ  ２．０）検索アルゴリズム（例えば、Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403 (1990)を参照、NCBIより公衆に利用可能）は、次の例示的検索パラメーターを有する：Ｍｉｓｍａｔｃｈ  −２；ｇａｐ  ｏｐｅｎ  ５；ｇａｐ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ２。ポリペプチド配列比較のために、ＢＬＡＳＴＰアルゴリズムは、一般に、スコアリングマトリックス、例えばＰＡＭ１００、ＰＡＭ２５０、ＢＬＯＳＵＭ６２またはＢＬＯＳＵＭ５０と組み合わせて使用される。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）およびＳＳＥＡＲＣＨ配列比較プログラムもまた、同一性の程度を定量するために使用される（Pearson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185 (2000); および、 Smith et al., J. Mol. Biol. 147:195 (1981)）。ドローネベーストポロジーマッピングを用いてタンパク質構造の類似性を定量するためのプログラムもまた開発されている（Bostick et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 304:320 (2003））。
【００８２】
修飾は、参照組成物の活性または機能（例えば、ＩＬ−１７ａまたはＩＬ−６Ｒへの親和性または特異的結合）への変更を含む。増加した結合親和性、増加したアンタゴニスト活性などの、改変された特性を有する、修飾フィノマー、抗体および融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、当技術分野で公知の方法を用いて製造できる。例えば、親和性成熟技術は、抗体結合親和性を改善するために使用可能である（ＵＳ２００４／０１６２４１３Ａ１；米国特許第６，６５６，４６７号、同第６，５３１，５８０号、同第６，５９０，０７９号および同第５，９５５，３５８号；Fiedler et al., Protein Eng. 15:931 (2002); Pancook et al., Hybrid. Hybridomics 20:383 (2001); Daugherty et al., Protein Eng. 11:825 (1998); Wu et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 95:6037 (1998); および、Osbourn et al., Immunotechnology 2:181 (1996)）。
【００８３】
フィノマー、抗体および融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）には、本明細書に記載の部分配列（例えば、フラグメント）および修飾形態（例えば、配列変異体）が含まれる。フィノマー部分配列は、参照フィノマーの機能的フラグメントまたは部分配列、例えば、配列番号１−７のいずれかの１つまたはそれ以上のアミノ酸の欠失を有する配列を意味する。“抗体”部分配列は、免疫グロブリンの機能的フラグメントまたは部分配列を意味する。抗体部分配列の非限定的な例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合したＦｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬ、ＶＨ、ダイアボディー（（ＶＬ−ＶＨ）２もしくは（ＶＨ−ＶＬ）２）、トリアボディー（三価抗体）、テトラボディー（四価抗体）、ミニボディー（（ｓｃＦＶ−ＣＨ３）２）、ＩｇＧｄｅｌｔａＣＨ２、ｓｃＦｖ−Ｆｃまたは（ｓｃＦｖ）２−Ｆｃフラグメントが含まれ得る。特定の面において、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｄ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合したＦｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬ、ＶＨ、ダイアボディー（（ＶＬ−ＶＨ）２もしくは（ＶＨ−ＶＬ）２）、トリアボディー（三価抗体）、テトラボディー（四価抗体）、ミニボディー（（ｓｃＦＶ−ＣＨ３）２）、ＩｇＧｄｅｌｔａＣＨ２、ｓｃＦｖ−Ｆｃおよび（ｓｃＦｖ）２−Ｆｃ部分配列である。かかる部分配列および融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、配列番号８または９に記載の配列の少なくとも一部（例えば、１つまたはそれ以上のＣＤＲ（重鎖または軽鎖可変領域配列のＣＤＲ１−ＣＤＲ３）および／または配列番号８−９のＦＲ）を有し得る。
【００８４】
特定の面において、部分配列は、実質的に同じか、または同じ、ＩＬ−１７ａもしくはＩＬ−６Ｒ結合親和性またはＩＬ−１７ａもしくはＩＬ−６Ｒ結合特異性、またはインビトロもしくはインビボでの、インビトロもしくはインビボでの細胞でのＩＬ−１７ａ結合フィノマーもしくはＩＬ−６Ｒ結合抗体の１個またはそれ以上の機能もしくは活性を有する。用語“機能的部分配列”および“機能的フラグメント”は、フィノマー、抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）に言及するとき、無傷の参照フィノマーまたは抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の１つまたはそれ以上の機能もしくは活性の少なくとも一部を保持する、フィノマーまたは抗体または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の一部を意味し、例えば、ＩＬ−１７ａに結合するフィノマー、ＩＬ−６Ｒに結合する抗体またはＩＬ−１７ａおよびＩＬ−６Ｒに結合する融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）を意味する。
【００８５】
一本鎖抗体を含む抗体部分配列は、重鎖または軽鎖可変領域（複数可）の全てまたは一部（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３）を単独で、または以下の、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインの１つまたはそれ以上の全てまたは一部と組み合わせて含み得る。また、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む重鎖または軽鎖可変領域（複数可）（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３）の任意の組み合わせの抗原結合部分配列もまた含まれる。
【００８６】
本発明に包含される二重特異性融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）のさらなる修飾は、付加（誘導体）／挿入である。付加の例は、ポリペプチド配列の付加を含んでいてよく、それは、対照天然（野生型）配列中に通常は存在しない１個またはそれ以上の分子を有するアミノ酸配列が、該配列に共有結合している。ペプチド付加の特定の例は、二重特異性融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）に異なる機能または相補的機能を付与する、第二の異種配列、すなわち、異種機能的ドメインが結合（共有結合または非共有結合）したものである。従って、二重特異性融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）には、ドメインが異なる機能を付与する異種ドメイン、すなわち異種機能的ドメインが含まれ得る。例えば、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３Ｆｃ領域の部分を含むキメラであり得る。
【００８７】
本発明で使用可能な異種の機能的ドメインは、アミノ酸残基またはドメインに限定されない。従って、異種の機能的ドメインは、任意の種々の異なる種類の小型または大型の機能的部分から構成されていてよい。かかる部分には、核酸、ペプチド、炭水化物、脂質、有機低分子／化合物、例えば薬物（例えば、抗細胞増殖剤）、金属（金、銀）、または放射性同位体が含まれ得る。従って、別の態様において、検出可能に標識されたＦｙｎｏｍＡｂが本発明で提供される。
【００８８】
異種ドメインの非限定的な例には、精製または検出タグおよび標識が含まれ得る。精製および検出可能な（検出）タグおよび標識の具体例には、酵素（西洋ワサビペルオキシダーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールトランスフェラーゼ）；酵素基質；リガンド（例えば、ビオチン）；受容体（アビジン）；放射性同位体／放射性核種（例えば、Ｃ１４、Ｓ３５、Ｐ３２、Ｐ３３、Ｈ３、Ｉ１２５、Ｉ１３１、ガリウム−６７および６８、スカンジウム−４７、インジウム−１１１、およびラジウム−２２３）；Ｔ７−、ポリヒスチジン、Ｈｉｓ−、ｍｙｃ−、ＨＡ−およびＦＬＡＧ−タグ；電子密度試薬；エネルギー移動分子；常磁性（paramagnetic）ラベル；フルオロフォア（フルオレセイン、ローダミン、フィコエリスリン）；発色団；化学発光体（イミダゾール、ルシフェラーゼ）；生物発光剤；造影剤（例えば、ガドリニウム；マンガン；硫酸バリウム；ヨード化または非ヨード化（non−iodinated）剤）；イオン性または非イオン性薬剤；磁性および常磁性薬剤（例えば、酸化鉄キレート）；ナノ粒子；補欠分子族（例えば、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチン）；蛍光Bussitu（例えば、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリン）；発光物質（例えば、ルミノール）；または、生物発光材料（例えば、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、エクオリン）が含まれ得る。酵素は、一般に、それらの活性により検出される。例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼは、通常、３，３’−，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）などの基質を定量可能な青色に変換するその能力により検出される。リガンドは、アビジンまたはストレプトアビジンに結合できるビオチン、およびプロテインＡに結合できるＩｇＧなどの他の分子を結合し得る。
【００８９】
検出可能な標識のさらなる非限定的な例には、放射性同位体などの放射性物質、金属または金属酸化物が含まれ得る。放射性同位体は、３Ｈ、１０Ｂ、１８Ｆ、１１Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１８Ｏ、１５Ｏ、３２Ｐ、Ｐ３３、３５Ｓ、３５Ｃｌ、４５Ｔｉ、４６Ｓｃ、４７Ｓｃ、５１Ｃｒ、５２Ｆｅ，５９Ｆｅ、５７Ｃｏ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７２Ａｓ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、８１ｍＫｒ、８２Ｒｂ、８５Ｓｒ、８９Ｓｒ、８６Ｙ、９０Ｙ、９５Ｎｂ、９４ｍＴｃ、９９ｍＴｃ、９７Ｒｕ、１０３Ｒｕ、１０５Ｒｈ、１０９Ｃｄ、１１１Ｉｎ、１１３Ｓｎ、１１３ｍＩｎ、１１４Ｉｎ、Ｉ１２５、Ｉ１３１、１４０Ｌａ、１４１Ｃｅ、１４９Ｐｍ、１５３Ｇｄ、１５７Ｇｄ、１５３Ｓｍ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１６９Ｅｒ、１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、２０１Ｔｌ、２０３Ｐｂ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉまたは２２５Ａｃの１つまたはそれ以上のような、アルファ、ベータまたはガンマ線を放出する放射性核種を含む。
【００９０】
検出可能な標識のさらなる非限定的な例としては、金、銀、銅、ホウ素、マンガン、ガドリニウム、鉄、クロム、バリウム、ユーロピウム、エルビウム、プラセオジム、インジウムまたはテクネチウムなどの金属または金属酸化物が含まれ得る。
【００９１】
融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の抗体に結合される異種ドメインとして使用できる薬剤は、細胞傷害剤であってもよい。本明細書で用いる用語“細胞傷害剤”は、細胞の機能もしくは増殖を減少、阻害、抑制、低下、干渉または阻止する物質、および／または細胞の破壊を引き起こす物質を意味する。細胞傷害剤は、標的細胞を殺す、または該細胞の増殖もしくは複製を阻害するために使用されてよい。
【００９２】
細胞傷害剤の例には、ジフテリア毒素、コレラ毒素、リシン、およびマイトマイシンＣが含まれ得る。さらなる例には、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、ＰＢＤ、アウリスタチンおよびドラスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号および同第５，７８０，５８８号）；カリケアマイシン（米国特許第５，７１２，３７４、５，７１４，５８６、５，７３９，１１６、５，７６７，２８５、５，７７０，７０１、５，７７０，７１０、５，７７３，００１、および５，８７７，２９６）、ゲムシタビン、シスプラチン、ドキソルビシン、イリノテカン、ＢＣＮＵ、ストレプトゾシン、ビンクリスチンおよび５−フルオロウラシル（米国特許第５，７７０，７１０号；また、例えば、米国特許第４，３６２，６６３号；同第４，３７１，５３３号；同第５，４７５，０９２号；同第５，５８５，４９９号；同第５，８４６，５４５号；および同第６，３３３，４１０号）が含まれる。
【００９３】
細胞傷害剤のさらなる例には、タキサン類（例えば、タキソール）およびメイタンシノイド類が含まれ得る。哺乳動物細胞における微小管形成を阻害するメイタンシノイド類の例としては、メイタンシノールおよびメイタンシノール類縁体が含まれ得る。メイタンシノール類縁体の例には、修飾された芳香環を有するもの、および他の位置に修飾を有するもの（例えば、メイタンシノールおよびＣ−３メイタンシノールエステルなどのメイタンシンおよびメイタンシノイド（米国特許番号第４，１５１，０４２号）；合成メイタンシノールならびにその誘導体および類縁体（米国特許第４，１３７，２３０号；同第４，２４８，８７０号；同第４，２５６，７４６号；同第４，２６０，６０８号；同第４，２６５，８１４号；同第４，２９４，７５７号；同第４，３０７，０１６号；同第４，３０８，２６８号；同第４，３０８，２６９号；同第４，３０９，４２８号；同第４，３１３，９４６号；同第４，３１５，９２９号；同第４，３１７，８２１号；同第４，３２２，３４８号；同第４，３３１，５９８号；同第４，３６１，６５０号；同第４，３６４，８６６号；同第４，４２４，２１９号；同第４，４５０，２５４号；同第４，３６２，６６３号；および、同第４，３７１，５３３号）が含まれ得る。
【００９４】
二重特異性融合ポリペプチドＦｙｎｏｍＡｂは、付加を有していてよいか、または誘導体であってもよい。例えば、ポリペプチドは、糖残基、リン酸基、ユビキチン、脂肪酸もしくは脂質を含んでいてよく、またはグリコシル化、リン酸化、アセチル化、アミド化もしくはホルミル化されていてよい。ポリペプチドは、保護基／遮断基または多数の化学修飾基の何れかにより誘導体化されていてよい。ポリペプチドの修飾はまた、分子内または分子間ジスルフィド結合（複数可）でもあり得る。
【００９５】
アミノ酸またはペプチド模倣配列などのリンカーは、フィノマーおよび／または抗体配列と異種機能的ドメインとの間に、該２つのエンティティが、少なくとも部分的には、異なる機能または活性を維持するように挿入されてよい。一態様において、フィノマードメインは、重（Ｈ）鎖または軽（Ｌ）鎖に、該重（Ｈ）鎖または軽（Ｌ）鎖のアミノ（ＮＨ２）末端またはカルボキシ（Ｃ）末端の最後のアミノ酸直後に結合される。リンカーは、柔軟な立体構造、規則的な二次構造の形成不能、またはドメイン間の結合を促進する、もしくはそれと相互作用し得る疎水性もしくは荷電特性を含む、１つまたはそれ以上の特性を有し得る。一般には、フレキシブルなタンパク質領域に見出されるアミノ酸の例には、Ｇｌｙ、ＡｓｎおよびＳｅｒが含まれ得る。他の中性に近いアミノ酸、例えばＴｈｒおよびＡｌａもまた、リンカー配列に使用できる。リンカー配列の長さは、融合タンパク質の機能または活性に顕著に影響を与えることなく変えることができる（例えば、米国特許第６，０８７，３２９号を参照のこと）。特定の面において、フィノマーおよび抗体の重または軽鎖は、約１から２５個のアミノ酸残基を有するペプチド配列によって結合されている。
【００９６】
リンカーの例としては、スルホ−スクシンイミジル誘導体（スルホ−ＳＭＣＣ、スルホ−ＳＭＰＢ）、ジスクシンイミジルスベレート（ＤＳＳ）、グルタル酸ジスクシンイミジル（ＤＳＧ）および酒石酸ジスクシンイミジル（ＤＳＴ）などの化学部分および結合剤もまた含んでいてよい。リンカーにはさらに、直鎖炭素鎖、例えばＣＮ（式中、Ｎ＝１−１００個の炭素原子、例えば、Ｃ、ＣＣ、ＣＣＣ、ＣＣＣＣ、ＣＣＣＣＣ、ＣＣＣＣＣＣ、ＣＣＣＣＣＣＣ、ＣＣＣＣＣＣＣＣ）が含まれる。
【００９７】
フィノマー、抗体または部分配列は、複数（例えば、２個またはそれ以上）の変異、修飾または標識を有していてよいことが理解される。例えば、抗体の重鎖または軽鎖配列は、アビジンで検出され得るようにビオチンと結合されてよく、ならびに検出可能シグナルを提供するようにＩ１２５で標識されてよい。他の置換および可能性は当業者に容易に明らかであり、本発明の範囲内であると考えられる。
【００９８】
抗体および融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の例には、哺乳動物の配列、ヒトの配列、ヒト化された配列、および霊長動物の配列が含まれ得る。抗体に関して、用語“ヒト”は、アミノ酸配列が完全にヒト由来であることを意味する。従って、“ヒト抗体”は、ヒト免疫グロブリンアミノ酸配列を有する抗体、すなわち、標的に特異的に結合するヒト重鎖および軽鎖可変ならびに定常領域を有する抗体を意味する。従って、“ヒトＩＬ−６Ｒ抗体”または“ヒト抗ＩＬ−６Ｒ抗体”は、ヒト免疫グロブリンアミノ酸配列を有する抗体を意味し、ＩＬ−６Ｒに結合する。すなわち、抗体アミノ酸の全ては、ヒトであるか、またはヒト抗体に存在し得る。従って、例えば、非ヒト抗体は、非ヒトアミノ酸残基をヒト抗体に存在し得るアミノ酸残基で置換することにより、完全ヒト抗体とされ得る。ヒト抗体、ＣＤＲ領域マップおよびヒト抗体コンセンサス残基中に存在するアミノ酸残基は、当技術分野で公知である（例えば、Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4th Ed.US Department of Health and Human Services. Public Health Service (1987); および、Chothia and Lesk J. Mol. Biol.186:651 (1987)）。２２の既知のヒトＶＨ ＩＩＩ配列の調査に基づくヒトＶＨサブグループＩＩＩのコンセンサス配列、および３０の既知のヒトκＩ配列の調査に基づくヒトＶＬκ鎖サブグループＩのコンセンサス配列は、Padlan Mol. Immunol.31:169 (1994);および、 Padlan Mol. Immunol.28:489 (1991)に記載されている。従って、ヒト抗体には、１つまたはそれ以上のアミノ酸残基が別のヒト抗体中に存在する１つまたはそれ以上のアミノ酸で置換された抗体が含まれる。
【００９９】
抗体に関して用いられるとき、用語“ヒト化”とは、抗体のアミノ酸配列が、アクセプターヒト免疫グロブリン分子中の所望の標的（例えば、ＩＬ−６Ｒ）に特異的に結合する１つまたはそれ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）の非ヒトアミノ酸残基（例えば、マウス、ラット、ヤギ、ウサギ、非ヒト霊長動物など）、ならびにＣＤＲに隣接するアミノ酸残基であるＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）中の１つまたはそれ以上のヒトアミノ酸残基を有することを意味する。該免疫グロブリンのヒトフレームワーク領域の残基は、対応する非ヒト残基で置換されていてよい。従って、ヒトフレームワーク領域内の残基は、非ヒトＣＤＲドナー抗体からの対応する残基で置換されて、抗原親和性または特異性を変化させ、例えば、一般的には改善し得る。さらに、ヒト化抗体には、ヒト抗体にも、ドナーＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見出されない残基が含まれ得る。例えば、ヒト抗体またはドナー非ヒト抗体中に見出されない特定の位置でのフレームワーク置換は、その位置でヒト抗体の結合親和性または特異性をを改善するために予測され得る。
【０１００】
分子モデリングに基づく、抗体フレームワークおよびＣＤＲ置換は、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用のモデル化ならびに特定の位置における異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較により、当技術分野で知られている（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号；および、Riechmann et al., Nature 332:323 (1988)参照）。“霊長動物化”と言われる抗体は、アクセプターヒト免疫グロブリン分子およびフレームワーク領域アミノ酸残基が、任意のヒト残基に加えて、任意の霊長動物のアミノ酸残基（例えば、サル、テナガザル、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、マカク）であってよいこと以外、本明細書で用いる“ヒト化”の意味の範囲内である。
【０１０１】
フィノマーおよび抗体部分配列は、宿主細胞へのフィノマーまたは抗体コーティング配列の全部または一部の発現を含む遺伝子技術により調製され得る。ＩＬ−６Ｒ結合抗体は、従来のハイブリドーマ技術、組換え、およびファージディスプレイ技術、またはそれらの組み合わせを含む技術を用いて製造され得る（米国特許第４，９０２，６１４号、同第４５４３，４３９号、および同第４，４１１，９９３号；また、Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Plenum Press, Kennett, McKearn, and Bechtol (eds.), 1980, および Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988参照）。ＩＬ−６Ｒ結合モノクローナル抗体はまた、霊長動物またはヒト対象を含む動物から免疫グロブリン配列を直接クローニングすることにより得られる。
【０１０２】
マウス、ウサギ、ラット、ヒツジ、ウシまたは去勢ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウマ、モルモット、およびヒトを含む霊長動物などの動物は、ＩＬ−６Ｒに結合する抗体を得るためにＩＬ−６Ｒで免疫化され得る。かかる動物は、ヒト抗体を発現することが可能な、ヒトＩｇＧ遺伝子座（例えば、ラムダまたはカッパ軽鎖）を有する遺伝子的に改変された非ヒト動物であってもよい。内生免疫グロブリンを発現しない１個またはそれ以上のヒト免疫グロブリン遺伝子（カッパまたはラムダ）を有するトランスジェニック動物は、例えば米国特許第５，９３９，５９８号に記載されている。従って、このような動物は、ヒト抗体を産生するために用いられ得る。該動物の非限定的な例には、ヒト免疫グロブリン遺伝子（ＷＯ０２／４３４７８）およびＨＡＣマウス（ＷＯ０２／０９２８１２）を生成し得る、ヒトトランス染色体ＫＭマウス(商標)（Tomizuka et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:722 (2000); および、Ishida et al., Cloning Stem Cells 4:91 (2004）)が含まれ得る。抗原に応答する免疫化動物から単離し、骨髄腫細胞と融合させた脾臓細胞を用いる従来のハイブリドーマ技術を、ヒトモノクローナル抗体を得るために使用できる。ヒトポリクローナル抗体およびヒトモノクローナル抗体を製造するためのさらなる方法は、既報である（例えば、Kuroiwa et al., Nat. Biotechnol. 20:889 (2002)；ＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９６／３４０９６；ＷＯ９６／３３７３５；米国特許第５，４１３，９２３号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，５４５，８０６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８８５，７９３号；同第５，９１６，７７１号；および、同第５，９３９，５９８参照）。ヒト抗体を産生するための技術の概要は、Lonberg and Huszar(Int. Rev. Immunol.13:65 (1995)に記載されている）。
【０１０３】
フィノマーおよび抗体部分配列はまた、タンパク質加水分解によっても製造できる。例えば、抗体をペプシンまたはパパインで消化することができる。ペプシンでの酵素的切断によって産生された抗体フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２と記載される５Ｓフラグメントを提供する。このフラグメントは、チオール還元剤を用いてさらに切断されて、３．５ＳのＦａｂ’一価フラグメントを生じ得る。あるいは、ペプシンを用いる酵素的切断により、直接、２つの一価のＦａｂ’フラグメントおよびＦｃフラグメントを生じる（例えば、米国特許第４，０３６，９４５号および同第４，３３１，６４７号；および、Edelman et al., Methods Enymol. 1:422 (1967)参照）。一価の軽鎖−重鎖フラグメントを形成するための重鎖の分離、フラグメントのさらなる切断、または他の酵素的もしくは化学的切断のような、抗体を切断する他の方法もまた、使用可能である。一本鎖Ｆｖおよび抗体は、米国特許第４，９４６，７７８号および同第５，２５８，４９８号； Huston et al., Mehtods Enzymol.203:46 (1991); Shu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:7995 (1993); および、Skerra et al., Science 240:1038 (1988)に記載の通りに製造することができる。
【０１０４】
抗体は、例えば、ＣＤＲ移植技術（ＥＰ２３９，４００；Ｗ０９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５３０，１０１号；および、同第５，５８５，０８９）、ベニヤリング（veneering）またはリサーフィシング（resurfacing）（ＥＰ５９２，１０６；ＥＰ５１９，５９６； Padlan, Molecular Immunol. 28:489 (1991); Studnicka et al., Prptein Engineering 7:805 (1994); Roguska. et al., Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 91:969 (1994))、および鎖シフティング(U.S. Patent No. 5,565,332)を含む、当技術分野で公知の種々の技術を用いてヒト化され得る。ヒトコンセンサス配列(Padlan, Mol. Immunol.31:169 (1994); および、Padlan, Mol. Immunol. 28:489 (1991))は、抗体をヒト化するために使用可能である(Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285 (1992); および、Presta et al., J. Immunol.151:2623 (1993)）。
【０１０５】
キメラ抗体の作製方法は、当技術分野で公知である（例えば、Morrison, Science 229:1202 (1985); Oi et al., BioTechniques 4:214 (1986); Gillies et al., J. Immunol. Methods 125:191 (1989)；および米国特許第５，８０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号；および、同第４，８１６，３９７号）。ある種の抗体由来の可変ドメインが別の種の可変ドメインに置換されているキメラ抗体が、例えば、Munro, Nature 312:597 (1984); Neuberger et al., Nature 312:604 (1984); Sharon et al., Nature 309:364 (1984); Morrison et al., Proc. Nat’l. Acad. Sci. USA 81:6851 (1984); Boulianne et al., Nature 312:643 (1984); Capon et al., Nature 337:525 (1989); および、Traunecker et al., Nature 339:68 (1989)に記載されている。
【０１０６】
フィノマー、抗体および融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）をコード化する核酸もまた提供される。一態様において、核酸は、ＩＬ−１７ａに結合する任意のフィノマー配列と少なくとも６０％またはそれ以上（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の同一性を有する配列、例えば、配列番号１−７に記載のポリペプチドをコード化する核酸配列と６０％またはそれ以上の同一性を有する配列をコード化する。
【０１０７】
別の態様において、核酸は、配列番号８または９に記載の何れかの重鎖または軽鎖可変領域配列と少なくとも６０％またはそれ以上（例えば、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の同一性を有する配列をコード化する。さらなる態様において、核酸は、ＩＬ−６Ｒに結合する抗体の何れかの重鎖または軽鎖可変領域配列、例えばＩＬ−１７ａに結合する何れかのフィノマー配列、例えば、配列番号１−７に記載の配列に融合または結合する配列番号８または９に記載の重鎖または軽鎖配列と、少なくとも６０％またはそれ以上（例えば、少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の同一性を有する配列をコード化する。さらなる態様において、核酸は、配列番号１−７、または配列番号８もしくは９の１つもしくは複数のアミノ酸付加、欠失もしくは置換を有する配列、または配列番号８もしくは９の何れかに融合した配列番号１−７の何れかを含む融合ポリペプチドをコード化する。
【０１０８】
用語“核酸”および“ポリヌクレオチド”などは、ホスホジエステル結合または同等の結合により結合した少なくとも２つまたはそれ以上のリボ−またはデオキシ−リボ核酸塩基対（ヌクレオチド）を意味する。核酸には、ポリヌクレオチドおよびポリヌクレオシドが含まれる。核酸には、一本鎖、二本鎖または三重鎖の、環状または直鎖状分子が含まれる。定型的な核酸には、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、天然に存在するおよび天然に存在しない核酸、例えば、合成核酸が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０９】
核酸は、種々の長さのものであり得る。核酸の長さは、一般に、約２０ヌクレオチド長から２０Ｋｂの範囲、または任意の数値もしくは範囲内もしくはかかる長さを包含する長さであり、１０ヌクレオチド長から１０Ｋｂ、１から５Ｋｂまたはそれ以下、１０００から約５００ヌクレオチド長またはそれ以下である。核酸はまた、より短くてよく、例えば、１００から約５００ヌクレオチド、または約１２から２５、２５から５０、５０から１００、１００から２５０、もしくは約２５０から５００ヌクレオチド長であるか、または任意の数値もしくは範囲内もしくはかかる長さを包含する長さである。特定の面において、核酸配列は、約１０−２０、２０−３０、３０−５０、５０−１００、１００−１５０、１５０−２００、２００−２５０、２５０−３００、３００−４００、４００−５００、５００−１０００もしくは１０００−２０００ヌクレオチド長、または任意の数値もしくは範囲内もしくはかかる長さを包含する長さを有する。より短いポリヌクレオチドは、通常、一本鎖または二本鎖ＤＮＡの“オリゴヌクレオチド”または“プローブ”と言われる。しかしながら、かかるオリゴヌクレオチドの長さには上限がない。
【０１１０】
構成成分（例えば、フィノマー、抗体、重鎖または軽鎖配列、融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）、それらをコード化する核酸など）に関連して使用されるとき、用語“単離された”とは、該成分が、ヒトの手で作製されたか、またはそれらの天然に存在するインビボ環境から、完全にまたは少なくとも部分的に分離されることを意味する。一般的に、単離された成分は、それらが通常天然において結合する1つまたはそれ以上の物質、例えば、１つまたはそれ以上のタンパク質、核酸、脂質、炭水化物、細胞膜を実質的に含まない。用語“単離された”とは、多量体／オリゴマー、変異体、修飾形態もしくは誘導形態、またはヒトによって製造された宿主細胞内で発現される形態などの、該成分の別個の物理的形態を排除するものではない。用語“単離された”とはまた、ヒトの手によって製造される成分を含む組成物または製剤を排除するものでもない。
【０１１１】
“単離された”成分はまた、それが天然において一般的に結合している物質のほとんどまたは全てを含まないとき、“精製された”とされてもよい。従って、実質的に純粋なまたは精製された、単離された融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）は、例えば、ゲノムまたはｃＤＮＡライブラリー中のポリペプチドライブラリーまたは核酸のような、数百万の他の配列の間に存在するポリペプチドまたは複数のポリヌクレオチドを含んでいない。“精製された”成分は、１つ以上の他の分子と組み合わされていてよい。従って、“精製された”は、成分の組み合わせ、例えばＦｙｎｏｍＡｂの組み合わせ（複数のＦｙｎｏｍＡｂ）、および他の活性剤または薬物と組み合わせたＦｙｎｏｍＡｂを排除しない。
【０１１２】
核酸は、種々の標準的なクローニング技術および化学合成技術を用いて製造できる。技術としては、核酸増幅、例えば、ゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡ標的と、配列をコード化する抗体にアニーリングすることができるプライマー（例えば、縮重プライマー混合物）を用いる、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）が挙げられるが、これに限定されない。核酸はまた、化学合成（例えば、固相ホスホラミダイト合成）または遺伝子からの転写により製造することもできる。その後、製造された配列は、インビトロで翻訳されるか、またはプラスミド中にクローニングされて、増殖させ、次いで細胞（例えば、動物または植物における、真核生物または哺乳動物細胞、酵母または細菌などの宿主細胞）内で発現させることができる。
【０１１３】
核酸は、核酸の発現が、“発現制御エレメント”により影響を受けるか、または調節される、核酸構築物中に挿入され得る。“発現制御エレメント”は、それが作動可能に連結されている核酸配列の発現を調節するか、または付与する核酸配列を意味する。発現制御エレメントには、適当には、プロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、遺伝子サイレンサー、タンパク質をコードする遺伝子の前の開始コドン（例えば、ＡＴＧ）などが含まれる。
【０１１４】
核酸配列に作動可能に連結された発現制御エレメントは、転写を、そして適当であれば、核酸配列の翻訳を制御する。発現制御エレメントには、構成的に転写を活性化するエレメントが含まれ、それは、誘導性であるか（すなわち、活性化のために外部シグナルを必要とする）、または脱抑制可能であるか（すなわち、転写をオフにするためにシグナルを必要とする；シグナルがもはや存在しなくなったとき、転写は活性化されるか、または“脱抑制”される）、または細胞タイプもしくは組織（すなわち、組織特異的制御エレメント）に特異的である。
【０１１５】
核酸は、宿主細胞中での増殖のためにプラスミドに挿入され、次いで遺伝子操作され得る。プラスミドとは、宿主細胞中で増殖することができる核酸である。プラスミドは、要すれば、宿主細胞中でフィノマー、抗体（重鎖または軽鎖）または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）をコードする核酸の発現を駆動するために発現制御エレメントを含み得る。ベクターは、本明細書中、プラスミドと同義的に用いられ、宿主細胞における発現のための発現制御エレメント（例えば、発現ベクター）も含み得る。プラスミドおよびベクターは、一般的に、少なくとも細胞内での増殖のための複製起点およびプロモーターを含む。従って、プラスミドおよびベクターは、フィノマー、抗体（重鎖または軽鎖）または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の遺伝子操作および発現に有用である。
【０１１６】
フィノマー、抗体（重鎖または軽鎖）または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）をコードする核酸は、合成的にまたは組換え方法を用いて製造されるか、ハイブリドーマ等の細胞から単離することができる。単離された核酸は、適切な発現ベクターに挿入され、フィノマー、抗体（重鎖または軽鎖）または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の産生のために培養され得る、適切な宿主細胞（例えば、ＣＨＯ、植物および他の細胞）に導入され得る。
【０１１７】
本発明により、本発明のフィノマー、抗体（重鎖または軽鎖）または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）をコードする核酸(遺伝子)を発現するか、または該核酸を用いて形質転換される、宿主細胞を提供する。宿主細胞およびその子孫は、フィノマー、抗体（重鎖または軽鎖）または融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）の発現のために安定的にまたは一時的にトランスフェクトされ得る。
【０１１８】
宿主細胞には、原核細胞および真核細胞、例えば、細菌、真菌（酵母）、植物、昆虫、および動物細胞（例えば、霊長動物およびヒトを含む哺乳動物）などが含まれるが、これらに限定されない。例えば、組み換えバクテリオファージ核酸、プラスミド核酸またはコスミド核酸発現ベクターで形質転換した細菌；組み換え酵母発現ベクターで形質転換した酵母；組み換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）で感染させたか、または組み換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換した植物細胞システム；組み換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）で感染させた昆虫細胞システム；および、組み換えウイルス発現ベクター（例えば、レトロウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス）で感染させた動物細胞システム、または安定な発現のために操作された形質転換動物細胞システムがある。
【０１１９】
細胞（例えば、宿主細胞）または生物について使用されるとき、用語“形質転換された”または“トランスフェクトされた”は、外因性分子、例えば、細胞へのタンパク質または核酸（例えば、導入遺伝子）の取り込み後の細胞の遺伝的変化を意味する。従って、“トランスフェクトされた”または“形質転換された”細胞は、外因性分子が、例えば、組み換えＤＮＡ技術によりヒトによって導入された細胞またはその子孫である。
【０１２０】
細胞は、所望のポリペプチドが産生されるように、増殖され得る。トランスフェクトされたか、または形質転換された細胞の子孫は、複製中に起こる突然変異が存在し得るため、親細胞と同一でなくてもよい。
【０１２１】
本発明はさらに、本発明の二重特異性融合ポリペプチドおよび薬学的または生理学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。担体、希釈剤または賦形剤に言及するとき、本明細書で用いる用語“薬学的に許容される”および“生理的に許容される”とは、溶媒（水性または非水性）、界面活性剤、溶液、エマルジョン、分散媒体、コーティング剤または等張剤および吸収促進剤もしくは遅延剤であってよく、それは、医薬投与法および組成物中の他の成分に適合性である。本発明の医薬組成物は、錠剤（コーティング剤または非コーティング剤）、カプセル剤（硬カプセル剤または軟カプセル剤）、マイクロビーズ、エマルジョン、粉剤、顆粒剤、結晶、懸濁液、シロップまたはエリキシルの形態で提供されてもよい。
【０１２２】
医薬組成物は、特定の投与経路または使用に適合性であるように剤形化され得る。非経腸投与、皮内投与、または皮下投与のための医薬組成物は、水、食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒などの滅菌希釈剤を含んでいてよい。組成物は、微生物の増殖を阻止するための１種以上の防腐剤（例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；ＥＤＴＡなどのキレート剤；酢酸バッファー、クエン酸バッファーまたはリン酸バッファーなどの緩衝剤、および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張性の調整のための添加物）をさらに含んでいてよい。
【０１２３】
注射のための医薬組成物は、分散媒および滅菌粉末からなる注射可能な滅菌溶液もしくは分散液のための滅菌水溶液（水溶性）または用時調製形の形態であってよい。静脈内投与について、好適な担体の例としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ(商標)（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）およびリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、およびポリエチレングリコール）、またはそれらの好適な混合物を含む、溶媒または分散媒であり得る。流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用、または界面活性剤の使用によって、維持され得る。抗菌剤および抗真菌剤の例としては、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、およびチメロサールが挙げられる。吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの添加は、注射可能組成物の吸収を延長し得る。ポリソルベート２０またはポリソルベート８０は、例えば、１％まで、組成物に添加してよい。添加剤の他の非限定的な例としては、ヒスチジンＨＣｌ、α，α−トレハロース二水和物が挙げられる。
【０１２４】
さらなる医薬製剤および送達システムは、当業者に公知であり、本発明の方法に提供可能である（例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences (1990) 18th ed., Mack Publishing Co., Easton, PA; The Merck Index (1996) 12th ed., Merck Publishing Group, 白色house, NJ; Pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms, Technonic Publishing Co., Inc., Lancaster, Pa., (1993); および、Poznansky, et al., Drug Delivery Systems, R. L. Juliano, ed., Oxford, N.Y. (1980), pp. 253−315参照）。
【０１２５】
本発明は、ＩＬ−１７ａおよび／またはＩＬ−６Ｒ機能または活性に関連する応答、障害または疾患を調節または治療するための方法ならびに二重特異性融合ポリペプチドの使用を提供する。応答、障害および疾患の例としては、免疫応答、障害および疾患、炎症応答、障害および疾患、ならびに炎症が挙げられるが、これらに限定されない。応答、障害および疾患の例としてはまた、自己免疫応答、障害および疾患が挙げられるが、これに限定されない。応答の例にはさらに、Ｔ細胞および／またはＢ細胞応答、障害および疾患が挙げられる。
【０１２６】
一態様において、本明細書に記載の二重特異性融合ポリペプチドまたは医薬組成物が、免疫応答、障害または疾患、炎症応答、障害または疾患、または炎症の処置の必要な対象に投与される方法または使用が提供される。別の態様において、自己免疫障害または疾患の処置のための方法または使用が提供される。さらなる態様では、Ｔ細胞および／またはＢ細胞応答の調節のため、またはＴ細胞および／またはＢ細胞応答に関連する障害および疾患の処置のための方法または使用が提供される。さらなる態様において、Ｉｌ−１７ａおよび／またはＩＬ−６Ｒ機能または活性を調節するための方法または使用が提供される。
【０１２７】
本発明によって調節または処置され得る応答、障害および疾患の例としては、急性および慢性の望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症応答、障害もしくは疾患または炎症が挙げられるが、これらに限定されない。応答、障害および疾患の例としてはまた、急性および慢性の自己免疫応答、障害および疾患が挙げられるが、これに限定されない。応答、障害および疾患は、抗体もしくは細胞により、または抗体および細胞の組み合わせにより媒介されるものであり得る。さらに、応答、障害および疾患は、ＩＬ−１７ａおよび／またはＩＬ−６Ｒ機能または活性により媒介されるものであり得る。さらに、応答、障害および疾患は、ＩＬ−１７ａおよび／またはＩＬ−６Ｒ機能または活性を調節することによる治療に感受性があるものであり得る。
【０１２８】
一態様において、対象における、急性または慢性の望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症応答、障害もしくは疾患または炎症を減少、低下、阻害、抑制、制限または制御するための方法または二重特異性融合ポリペプチドの使用を提供する。一態様において、対象における、急性または慢性の自己免疫応答、障害もしくは疾患を減少、低下、阻害、抑制、制限または制御するための方法または使用を提供する。さらなる態様において、対象における、急性または慢性の抗体および／または細胞媒介性応答、障害もしくは疾患を減少、低下、阻害、抑制、制限または制御するための方法または使用を提供する。さらに別の態様において、ＩＬ−１７ａおよび／またはＩＬ−６Ｒ機能または活性により媒介される急性または慢性の応答、障害もしくは疾患を減少、低下、阻害、抑制、制限または制御するための方法または使用を提供する。さらに別の態様において、ＩＬ−１７ａおよび／またはＩＬ−６Ｒ機能または活性を調節することによる処置に感受性がある急性または慢性の応答、障害もしくは疾患を減少、低下、阻害、抑制、制限または制御するための方法または使用を提供する。
【０１２９】
用語“免疫障害”および“免疫疾患”は、障害または疾患に応じて、異なる生理的症状または異常によって特徴付けられる免疫機能または活性を意味する。本明細書で用いる“望ましくない免疫応答”または“異常な免疫応答”は、所望のまたは生理的に正常な応答、活性または機能より大きな、または小さな、すべての免疫応答、活性または機能を意味する。その例は、急性または慢性の免疫応答、活性または機能が含まれる。“望ましくない免疫応答”は、一般的に、免疫系の望ましくない、または異常に増加した、または不適切な応答、活性もしくは機能として特徴付けられる。しかしながら、望ましくない免疫応答、機能または活性は、例えば、正常な応答、機能または活性であってもよい。従って、正常な免疫応答は、それらが望ましくないなら、異常とは見なされないも、ここで説明する用語の意味に包含される。望ましくない免疫応答、機能または活性はまた、異常な応答、機能または活性でもあり得る。異常な免疫応答、機能または活性は、正常から逸脱する。
【０１３０】
望ましくない、または異常な免疫応答の１つの非限定的な例は、免疫応答が過剰である場合、例えば自己免疫障害もしくは疾患である場合である。望ましくない、または異常な免疫応答の別の非限定的な例は、免疫応答が、任意の組織または臓器における急性または慢性の炎症応答または炎症、例えば骨格の関節（関節リウマチ、若年性特発性関節炎）、肺もしくは気道（アレルギー）、または腸もしくは胃腸管（クローン病、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）もしくは潰瘍性大腸炎）をもたらす場合である。
【０１３１】
望ましくない、または異常な免疫応答、炎症応答、炎症は、多くの異なる生理的に有害な症状または合併症により特徴付けられ、それらは、体液性、細胞媒介性またはそれらの組み合わせであり得る。本発明により処置され得る応答、障害および疾患には、対象における細胞または組織／臓器損傷を直接的または間接的にもたらす、または引き起こすものが含まれるが、これに限定されない。全身、領域または局所レベルで、免疫応答、炎症応答、または炎症は、腫れ、痛み、頭痛、発熱、悪心、骨格関節の痛み、腫れ、こわばりや可動性の欠如、発疹、発赤、または他の変色により特徴付けられ得る。細胞レベルでは、免疫応答、炎症応答または炎症は、Ｔ細胞活性化および／または分化、マクロファージ、単球などによる領域の細胞浸潤、抗体の産生、サイトカイン、リンホカイン、ケモカイン、インターフェロンおよびインターロイキンの産生、細胞増殖および成熟因子（例えば、増殖因子および分化因子）、細胞蓄積または遊走および細胞、組織または臓器損傷の１個以上により特徴付けられ得る。従って、本発明の方法および使用は、免疫応答、炎症応答または炎症の特徴的な生理的症状または細胞もしくは生物学的応答の処置ならびにかかる応答の際の改善効果を含む。
【０１３２】
自己免疫応答、障害および疾患は、一般的に、増加したまたは望ましくない体液性もしくは細胞媒介性免疫応答もしくは免疫記憶、または自己抗原に対する減少したまたは不十分な免疫耐容を特徴とする、免疫系の望ましくないまたは異常な応答、活性または機能として特徴付けられる。本発明により処置され得る自己免疫応答、障害および疾患には、対象における細胞または組織／臓器損傷を引き起こす応答、障害および疾患が含まれるが、これに限定されない。
【０１３３】
一態様において、対象における、望ましくない、または異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答または炎症を減少、低下、阻害、抑制、制限または制御するための方法または使用を提供する。別の態様において、対象における、自己免疫応答、障害もしくは疾患を減少、低下、阻害、抑制、制限または制御するための方法または使用を提供する。さらなる態様において、望ましくない、または異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答または炎症の有害な症状、または自己免疫応答、障害もしくは疾患の有害な症状を減少、低下、阻害、抑制、制限または制御するための方法または使用を提供する。
【０１３４】
一面において、本発明の方法または使用は、疾患の症状（例えば、望ましくない、または異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、または炎症）の発生、頻度、重症度、進行、または持続時間の減少をもたらし得る。例えば、本発明の方法または使用は、望ましくない、または異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、または炎症、または自己免疫応答、障害もしくは疾患の有害な症状の進行から対象を保護するか、またはその重症度、頻度、持続期間もしくは可能性を減少、低下、阻害、抑制、制限または制御することができる。
【０１３５】
望ましくない、または異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、または炎症の有害な症状、または自己免疫応答、障害もしくは疾患の有害な症状の例としては、腫れ、痛み、発疹、変色、頭痛、発熱、悪心、下痢、鼓腸、無気力、骨格関節の硬直もしくは低下した可動性、呼吸困難、低下した筋肉量もしくは四肢の可動性、麻痺、感覚障害、例えば、視覚または組織または細胞の損傷が挙げられる。有害な症状は、特定の組織または臓器、あるいは身体の領域または部位（ａｒｅａ）、例えば、皮膚、上皮もしくは粘膜組織、消化管、消化器官、腸、尿生殖路、膵臓、胸腺、肺、肝臓、腎臓、筋肉、中枢神経もしくは末梢神経、脾臓、皮膚、骨格関節（例えば、膝、足首、腰、肩、手首、指、足指、または肘）、血管もしくはリンパ管、または心肺組織もしくは臓器で起こり得る。自己免疫応答、障害もしくは疾患の有害な症状のさらなる例としては、Ｔ細胞産生、生存、増殖、活性化もしくは分化、および／または自己抗体の産生、または炎症促進性サイトカインもしくはケモカイン（例えば、ＩＬ−１７ａおよびＩＬ−６）の産生が挙げられる。
【０１３６】
異常なまたは望ましくない免疫応答、障害および疾患の非限定的な例としては、本発明により処置され得る、炎症応答、障害および疾患、炎症、自己免疫応答、障害および疾患が挙げられ、以下のものを含む：多発性筋炎、血管炎症候群、巨細胞性動脈炎、高安動脈炎、再発性多発軟骨炎、後天性血友病Ａ、スティル病、成人発症性スティル病、アミロイドＡ アミロイドーシス、リウマチ性多発筋痛症、脊椎関節炎（関節炎）、肺動脈高血圧症、移植片対宿主病、自己免疫性心筋炎、接触性過敏症（接触性皮膚炎）、胃食道逆流症、紅皮症、ベーチェット病、筋萎縮性側索硬化症、移植、視神経脊髄炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、悪性関節リウマチ、薬剤耐性慢性関節リウマチ、視神経脊髄炎、川崎病、多関節型または全身型若年性特発性関節炎、乾癬、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、キャッスルマン病、喘息、アレルギー性喘息、アレルギー性脳脊髄炎、関節炎、進行性慢性関節炎、反応性関節炎、乾癬性関節炎、腸炎性関節炎、変形性関節炎、リウマチ性疾患、脊椎関節症、強直性脊椎炎、ライター症候群、過敏症（気道過敏症および皮膚過敏症の両方を含む）、アレルギー、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、皮膚エリテマトーデス、癩性結節性紅斑、シェーグレン症候群、炎症性筋障害、軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、皮膚筋炎、スティーブン−ジョンソン症候群、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、特発性吸収不良、自己免疫炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群、内分泌性眼障害、強皮症、グレーブス病、サルコイドーシス、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、膣炎、直腸炎、インスリン依存性糖尿病、インスリン抵抗性糖尿病、若年性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、自己免疫性血液疾患、溶血性貧血、再生不良性貧血、純粋な赤血球貧血、特発性血小板減少症（ＩＴＰ）、自己免疫性ブドウ膜炎、ブドウ膜炎（前部および後部）、乾性角結膜炎、春季カタル、間質性肺線維症、糸球体腎炎（ネフローゼ症候群の有無）、特発性ネフローゼ症候群または微小変化型腎症、皮膚の炎症性疾患、角膜炎症、筋炎、骨インプラント、代謝障害、アテローム性動脈硬化症、脂質代謝異常、骨喪失、骨関節症、骨粗鬆症、閉塞性または炎症性気道疾患の歯周病、気管支炎、塵肺、肺気腫、急性および超急性炎症反応、急性感染、敗血症性ショック、内毒素性ショック、成人呼吸窮迫症候群、髄膜炎、肺炎、複合的代謝異常症候群（cachexia wasting syndrome）、脳卒中、ヘルペス性間質性角膜炎、ドライアイ疾患、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、ギラン・バレー症候群、スティッフマン症候群、橋本甲状腺炎、自己免疫性甲状腺炎、脳脊髄炎、急性リウマチ熱、交感性眼炎、グッドパスチャー症候群、全身性壊死性血管炎、抗リン脂質抗体症候群、アジソン病、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、疱疹状皮膚炎、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、アフタ性潰瘍、扁平苔癬、自己免疫性脱毛症、白斑症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、悪性貧血、感音難聴、突発性両側進行性感音難聴、多腺性自己免疫症候群Ｉ型またはＩＩ型、免疫不妊および免疫介在性不妊症。
【０１３７】
用語“接触（contacting）”とは、２つまたはそれ以上のものの間（例えば、融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）と標的、例えばＩＬ−１７ａおよび／またはＩＬ−６Ｒとの間）の直接的または間接的な相互作用を意味する。直接的相互作用の特定の例は結合である。本明細書で用いる“接触”は、溶液中、固相中、インビトロ、エクスビボ、細胞内またはインビボでの接触であり得る。インビボでの“接触”は、対象または患者に投与（administering, administration, to administer）または送達（deliveringもしくはdelivery）することを意図し得る。
【０１３８】
本発明の方法または使用において、本明細書に記載の融合ポリペプチドまたは組成物は、望ましくない、または異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、または炎症、または自己免疫応答、障害もしくは疾患、または上記の疾患によって引き起こされるか、もしくはそれに関連する１つもしくはそれ以上の有害な症状、障害、疾病、病理、疾患もしくは合併症の発症前、実質的に発症と同時、または発症後に投与され得る。従って、本発明の方法または使用は、上記の応答、障害もしくは疾患の開始、または該望ましくない、または異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、炎症または自己免疫応答、障害もしくは疾患により引き起こされるか、またはそれと関連する１つもしくはそれ以上の有害な症状、障害、疾病、病理、疾患もしくは合併症、の発症前（すなわち、予防）、それと同時またはその後に実施され得る。本明細書に記載の融合ポリペプチドまたは組成物を、有害な症状の発症前、発症と同時または発症直後に投与することは、該望ましくない、または異常な免疫応答、免疫障害、炎症応答、炎症または自己免疫応答、障害もしくは疾患により引き起こされるか、またはそれと関連する１つまたはそれ以上の有害な症状、障害、疾病、病理、疾患もしくは合併症の発生、頻度、重症度、進行、または持続時間を減少、低下、阻害、抑制、制限または制御することができる。
【０１３９】
本発明の方法または使用により、本発明の二重特異性融合ポリペプチドは、免疫抑制剤、抗炎症剤、または緩和療法剤などの第二の薬剤と組み合わせて製剤され、および／または投与され得る。本発明の融合ポリペプチドは、免疫抑制剤、抗炎症剤、または緩和療法剤などの第二の薬剤の投与前、その投与と同時、またはその投与後に投与されてよい。本発明の融合ポリペプチドは、免疫抑制剤、抗炎症剤、または緩和療法剤などの第二の薬剤と組み合わせて剤形化され得る。
【０１４０】
第二の薬剤の非限定的な例としては、抗炎症剤、例えばステロイド性および非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、ならびに抗炎症性生物製剤、例えば炎症応答もしくは症状を制限もしくは制御する抗体が含まれ得る。第二の薬剤(agent、drug)としては、免疫抑制性コルチコステロイド（ステロイド受容体アゴニスト）、例えばブデソニド、プレドニゾン、フルニソリド；抗炎症剤、例えばフルニソリドヒドロフルオロアルカン、エストロゲン、プロゲステロン、デキサメサゾンおよびロテプレドノール；ベータ−アゴニスト類（例えば、短時間または長時間作用型）、例えばバンブテロール、フォルモテロール、サルメテロール、アルブテロール；抗コリン作動薬、例えば臭化イプラトロピウム、臭化オキシトロピウム、クロモリンおよびカルシウムチャネル遮断薬；抗ヒスタミン剤、例えばテルフェナジン、アステミゾール、ヒドロキシジン、クロルフェニラミン、トリペレナミン、セチリジン、デスロラタジン、ミゾラスチン、フェキソフェナジン、オロパタジン塩酸塩、ノルアステミゾール、レボセチリジン、レボカバスチン、アゼラスチン、エバスチンおよびロラタジン；抗ロイコトリエン薬（例えば、抗システイニルロイコトリエン（ＣｙｓＬＴ））、例えばオキサトミド、モンテルカスト、ザフィルカストおよびジロートン；ホスホジエステラーゼ阻害剤（例えば、ＰＤＥ４サブタイプ）、例えばイブジラスト、シロミラスト、ＢＡＹ１９−８００４、テオフィリン（例えば、徐放剤）および他のキサンチン誘導体（例えば、ドキソフィリン）；トロンボキサンアンタゴニスト、例えばセラトロダスト、オザグレル塩酸塩およびラマトロバン；プロスタグランジンアンタゴニスト、例えばＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブおよびロフェコキシブ）、アスピリン；ならびに、カリウムチャネル開口薬が挙げられる。他の薬剤クラスのさらなる非限定的な例としては、免疫調節剤、例えば炎症促進性サイトカインアンタゴニスト、例えばＴＮＦαアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト、ａｋａ Ｅｎｂｒｅｌ(商標)）である、抗炎症剤；免疫細胞アンタゴニスト、例えばＢ細胞枯渇剤リツキシマブ、ならびにＴ細胞共刺激遮断薬アバタセプト（これは、関節リウマチの処置に使用されている）、ならびにサイトカインに結合する抗炎症性抗体、例えば抗ＩｇＥ（例えば、ｒｈｕＭＡｂ−Ｅ２５オマリズマブ）、および抗ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１６、ならびに増殖因子、例えば顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子が挙げられる。
【０１４１】
本明細書に記載の通り、二重特異性融合ポリペプチドを用いる本発明の方法または使用は、対象に検出可能な、または測定可能な治療上の利点または改善を提供することができる。
【０１４２】
治療上の利点または改善とは、対象への、任意の測定可能または検出可能な、客観的または主観的、過渡的、一時的、または長期的な利益、あるいは該応答、障害もしくは疾患、または該望ましくない、または異常な応答、障害もしくは疾患により引き起こされるか、またはそれと関連する１つもしくはそれ以上の有害な症状、障害、疾病、病理、疾患もしくは合併症の改善であり得る。治療上の利点および改善としては、望ましくない、または異常な応答、障害もしくは疾患の有害な症状の発生、頻度、重症度、進行または持続時間を減少、低下、阻害、抑制、制限または制御することが挙げられるが、これらに限定されない。治療上の利点および改善としてはまた、炎症および炎症応答、例えばＴ細胞、Ｂ細胞、自己抗体、免疫細胞浸潤もしくは動員、炎症促進性サイトカイン、リンホカインまたはケモカインの量または活性を減少、低下、阻害、抑制、制限または制御することが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４３】
本発明により、二重特異性融合ポリペプチドの有効量または十分量が対象に投与される。“有効量”または“十分量”は、単一または複数用量で、単独でまたは１つ以上の他の成分（薬物などの治療剤）、処置、プロトコル、または治療レジメン剤と組み合わせて、任意の期間の検出可能な応答（長期または短期）、任意の測定可能もしくは検出可能な程度または任意の期間（例えば、分、時間、日、月、年、または治癒（cured））の対象への予期されるもしくは所望の結果もしくは利点を提供する量を意味する。
【０１４４】
治療のための（例えば、改善する、または治療上の利点もしくは改善を提供する）、用語“有効量”または“十分量”は、一般に、１個、複数個または全ての有害な症状の応答、障害もしくは疾患、該応答、障害もしくは疾患の結果または合併症、例えば、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患により引き起こされるか、またはそれと関連する１つ以上の有害な症状、障害、疾病、病理、疾患もしくは合併症を、測定可能な程度であるが、細胞、組織または臓器の応答、障害もしくは疾患、またはその有害な症状の進行または悪化を減少、低下、阻害、抑制、制限もしくは制御させ、満足のいく結果をもたらすのに有効な量を意味する。
【０１４５】
有効量または十分量は、単回投与で提供されてよいがその必要はなく、複数回投与を必要としてもよく、かつ単独で、または別の組成物（例えば、薬剤）、処置、プロトコルもしくは治療レジメンと組み合わせて投与されてよいが、その必要はない。例えば、量は、対象の必要性、処置される応答、障害もしくは疾患のタイプ、状態および重症度または処置の副作用（もしあれば）により示されるところに従って、漸増することができる。加えて、有効量または十分量は、上記のさらなる用量、量または期間およびかかる用量を超える用量、またはさらなる組成物（例えば、複数の薬剤または薬物）、処置、プロトコルまたは治療レジメンが、所定の対象において有効または十分であるとみなされるように包含されてよいため、第二の組成物（例えば、別の薬剤または薬物）、処置、プロトコルまたは治療レジメンなしに、単一または複数用量で提供されたとき、有効または十分である必要はない。有効であると考えられる量には、別の処置、治療レジメンまたはプロトコルの使用の減少をもたらす量もまた含まれる。
【０１４６】
処置について一般には、幾人かの対象は、所定の処置により大きな応答、またはより小さな応答または無反応を示し得る。従って、有効量または十分量は、予防的または治療的に処置された対象毎に有効である必要はなく、また所定のグループまたは集団中の処置された対象の大部分に有効である必要もない。有効量または十分量は、特定の対象における有効性または十分性を意味し、グループまたは一般集団における有効性または十分性を意味しない。従って、適当な量は、処置される状態、所望の治療効果、ならびに個々の対象（例えば、対象のバイオアベイラビリティ、性別または年齢）によって変わる。
【０１４７】
用語“改善する”とは、対象の状態または基礎となる細胞応答の検出可能または測定可能な改善を意味する。検出可能または測定可能な改善としては、応答、障害もしくは疾患、例えば、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患、または該応答、障害もしくは疾患、例えば望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患により引き起こされるか、またはそれと関連する１個以上の有害な症状、障害、疾病、病態、疾患もしくは合併症の発生、頻度、重症度、進行または持続期間を主観的または客観的に減少、低下、阻害、抑制制限または制御し、または応答、障害もしくは疾患、例えば、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患を反転（reversal）させることが含まれる。そのような改善はまた、細胞レベルでも起こり得る。
【０１４８】
従って、成功した処置結果は、対象における、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患、または該望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患により引き起こされるか、またはその結果の１個以上の有害な症状を減少、低下、阻害、抑制、制限、制御、または予防する“治療効果”または“利点”をもたらし得る。従って、応答、障害もしくは疾患または有害な症状の１つ以上の根本的原因に影響を与える処置法は、有益であるとみなされる。望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患の悪化を減少または低下する、例えば安定化することもまた、成功した治療結果である。
【０１４９】
従って、治療上の利益または改善は、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患、または該望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患の何れか１個、ほとんど、または全ての有害な症状、合併症、結果または根本原因の完全な除去を必要としない。従って、満足のいく結果は、対象の応答、障害もしくは疾患における漸進的な改善があるとき、または応答、障害もしくは疾患（例えば、１つ以上の症状または合併症の安定化）、例えば望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患、または該望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患により引き起こされるか、またはそれと関連する１つ以上の有害な症状、障害、疾病、病理、疾患、または合併症の、短期または長期間に亘る（時間、日、週または月）、発生、頻度、重症度、進行または持続期間を部分的に減少、低下、阻害、抑制、制限、制御または予防があるとき、達成され得る。
【０１５０】
方法または使用、例えば、応答、障害もしくは疾患、例えば望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患の可能性のある治療上の利点または改善を提供する処置の有効性は、種々の方法により確認することができる。このような方法には、例えば、腫れ、痛み、発疹、頭痛、発熱、悪心、下痢、鼓腸、嗜眠、骨格関節の硬直、低下した可動性、発疹、または組織もしくは細胞損傷を測定するスコアが含まれる。Ｔ細胞またはＢ細胞活性化および／または分化、領域の細胞浸潤、領域への細胞集積または動員、抗体の産生、サイトカイン、リンホカイン、ケモカイン、インターフェロンおよびインターロイキン、細胞増殖および成熟因子に測定には、種々の免疫学的アッセイ、例えばＥＬＩＳＡが用いられる。細胞、組織または臓器損傷の程度を決定することは、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、超音波、分子造影、または分子超音波造影により確認することができる。骨格関節について、炎症は、患者自身の評価、圧痛関節数および腫脹関節数、および赤血球沈降速度（ＥＳＲ）またはＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）により評価することができる。胃腸管について、炎症は、例えば、内視鏡（結腸鏡検査、胃鏡検査、ＥＲＣＰ）により評価することができる。中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症について、脊椎穿刺中の細胞およびサイトカインは、例えば、炎症を反映する。
【０１５１】
用語“対象”は、動物、一般には、哺乳動物、例えばヒト、非ヒト霊長動物（例えば、サル、テナガザル、チンパンジー、オランウータンまたはマカクザル）、コンパニオン動物（例えば、イヌおよびネコ）、家畜（例えば、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジまたはブタ）または実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギまたはモルモット）を意味する。対象の例としては、動物疾患モデル、例えば、インビボ分析のための、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患（例えば、ＣＩＡ、ＢＸＳＢ、ＥＡＥおよびＳＣＩＤマウス）の動物が含まれる。
【０１５２】
処置のための適当な対象の例としては、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患を有するもの、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患の処置を受けているもの、ならびに望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患の処置または治療を受けたことのあるもの（望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患が寛解状態にいたる対象を含む）が含まれ得る。
【０１５３】
対象の例としては、以下の何れかを有するか、またはその危険性を有するものが含まれ得る：多発性筋炎、血管炎症候群、巨細胞性動脈炎、高安動脈炎、再発性多発軟骨炎、後天性血友病Ａ、スティル病、成人発症性スティル病、アミロイドＡ アミロイドーシス、リウマチ性多発筋痛症、脊椎関節炎（関節炎）、肺動脈高血圧症、移植片対宿主病、自己免疫性心筋炎、接触性過敏症（接触性皮膚炎）、胃食道逆流症、紅皮症、ベーチェット病、筋萎縮性側索硬化症、移植、視神経脊髄炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、悪性関節リウマチ、薬剤耐性慢性関節リウマチ、視神経脊髄炎、川崎病、多関節型または全身型若年性特発性関節炎、乾癬、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、キャッスルマン病、喘息、アレルギー性喘息、アレルギー性脳脊髄炎、関節炎、進行性慢性関節炎、反応性関節炎、乾癬性関節炎、腸炎性関節炎、変形性関節炎、リウマチ性疾患、脊椎関節症、強直性脊椎炎、ライター症候群、過敏症（気道過敏症および皮膚過敏症の両方を含む）、アレルギー、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、皮膚エリテマトーデス、癩性結節性紅斑、シェーグレン症候群、炎症性筋障害、軟骨炎、ウェゲナー肉芽腫症、皮膚筋炎、スティーブン−ジョンソン症候群、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、特発性吸収不良、自己免疫炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群、内分泌性眼障害、強皮症、グレーブス病、サルコイドーシス、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、膣炎、直腸炎、インスリン依存性糖尿病、インスリン抵抗性糖尿病、若年性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、自己免疫性血液疾患、溶血性貧血、再生不良性貧血、純粋な赤血球貧血、特発性血小板減少症（ＩＴＰ）、自己免疫性ブドウ膜炎、ブドウ膜炎（前部および後部）、乾性角結膜炎、春季カタル、間質性肺線維症、糸球体腎炎（ネフローゼ症候群の有無）、特発性ネフローゼ症候群または微小変化型腎症、皮膚の炎症性疾患、角膜炎症、筋炎、骨インプラント、代謝障害、アテローム性動脈硬化症、脂質代謝異常、骨喪失、骨関節症、骨粗鬆症、閉塞性または炎症性気道疾患の歯周病、気管支炎、塵肺、肺気腫、急性および超急性炎症反応、急性感染、敗血症性ショック、内毒素性ショック、成人呼吸窮迫症候群、髄膜炎、肺炎、複合的代謝異常症候群（cachexia wasting syndrome）、脳卒中、ヘルペス性間質性角膜炎、ドライアイ疾患、虹彩炎、結膜炎、角結膜炎、ギラン・バレー症候群、スティッフマン症候群、橋本甲状腺炎、自己免疫性甲状腺炎、脳脊髄炎、急性リウマチ熱、交感性眼炎、グッドパスチャー症候群、全身性壊死性血管炎、抗リン脂質抗体症候群、アジソン病、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、疱疹状皮膚炎、アトピー性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、アフタ性潰瘍、扁平苔癬、自己免疫性脱毛症、白斑症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、悪性貧血、感音難聴、突発性両側進行性感音難聴、多腺性自己免疫症候群Ｉ型またはＩＩ型、免疫不妊および免疫介在性不妊症。
【０１５４】
対象の例としては、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患の増加した危険性を有するものがさらに含まれ得る。候補対象は、例えば、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患を有するか、または望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患のための治療薬または薬剤で処置されている。候補対象はまた、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患の治療の利益を受けるか、またはそれを必要とする対象を含む。
【０１５５】
“危険性のある”対象は、一般に、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患の増加したリスク因子を有する。危険性のある対象の特定の例には、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患を有する対象が含まれ得る。危険性のある対象の例にはまた、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患の処置または治療を受けた対象が含まれ得る。危険性のある対象の例にはまた、家族歴（例えば、遺伝的素因）、性別、ライフスタイル（食事、喫煙）、職業（医療・臨床関係者、農畜産従事者）または環境因子（アレルゲン暴露）などの危険因子を有する対象が含まれ得る。
【０１５６】
本発明により、融合ポリペプチドを含む組成物は、投与の容易さおよび投与量の均一性のために単一の投与量形態でパッケージングされ得る。本明細書で用いる“単一の投与量形態”とは、単一用量処置（unitary dosage treatment）として適する物理的に異なる単位を意味する。各単位は、担体、賦形剤、希釈剤またはビークルと関連して、所望の処置または治療（例えば、有益な）効果をもたらすよう計算される、組成物の量を含む。単一の投与量形態は、用いる特定の組成物、処置する障害もしくは疾患、達成されるべき効果、および処置されるべき対象を含む複数の因子（これらに限定されない）によって変わる。例示的単位用量は、約２５−２５０、２５０−５００、５００−１，０００、１，０００−２，５００、２，５００−５，０００、５，０００−２５，０００または５，０００−５０，０００ｐｇの範囲；約５０−５００、５００−５，０００、５，０００−２５，０００または２５，０００−５０，０００ｎｇの範囲；約５０−５００、５００−５，０００、５，０００−２５，０００または２５，０００−５０，０００μｇの範囲；約２５−２５０、２５０−５００、５００−１，０００、１，０００−２，５００、２，５００−５，０００、５，０００−２５，０００または５，０００−５０，０００ｍｇの範囲；および、約１−５、５−１０、１０−２５、２５−５０、５０−１００、１００−２５０、２５０−５００、５００−１，０００、１，０００−２，５００または２，５００−５，０００グラムの範囲である。
【０１５７】
本明細書に記載の通り、融合ポリペプチドおよびその組成物は、種々の用量および量、ならびに頻度で、インビトロ、エクスビボで接触もしくは提供されるか、または対象または患者にインビボで投与もしくは送達され得る。例えば、融合ポリペプチドまたはその組成物は、単一のまたは複数の投与量として、例えば、有効量または十分量で、意図した効果を提供するために投与または送達され得る。例示的用量は、連日、隔日または断続的に、約２５−２５０、２５０−５００、５００−１，０００、１，０００−２，５００、２，５００−５，０００、５，０００−２５，０００または５，０００−５０，０００ｐｇ／ｋｇの範囲；約５０−５００、５００−５，０００、５，０００−２５，０００または２５，０００−５０，０００ｎｇ／ｋｇの範囲；約５０−５００、５００−５，０００、５，０００−２５，０００または２５，０００−５０，０００μｇ／ｋｇの範囲；および、約２５−２５０、２５０−５００、５００−１，０００、１，０００−２，５００、２，５００−５，０００、５，０００−２５，０００または５，０００−５０，０００ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【０１５８】
組成物の単一または複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の回数）の投与または投与量は、同日もしくは連日、隔日もしくは断続的に投与されてよい。例えば、融合ポリペプチドを含む組成物は、１日１回、２回、３回、４回またはそれ以上、隔日、隔週(bi-weekly)、毎週、毎月、隔月(bi-monthly)、または毎年投与されてよい。融合ポリペプチドを含む組成物は、任意の適当な時間、例えば、１時間以下、例えば、３０分以下、１５分以下、５分以下、または１分以下の時間に投与されてよい。
【０１５９】
融合ポリペプチドを含む組成物は、望ましくない、または異常な免疫応答、障害もしくは疾患、炎症性応答、障害もしくは疾患、炎症、自己免疫応答、障害もしくは疾患の症状または発症の前、それと実質的に同時に、またはそれから約１〜６０分以内、時間（例えば、１、２、３、４、５、６、８、１２、２４時間）以内、または日（１、２、３、４、５、６、７、７−１４、１４−２１、２１−２８、２８−４５、４５−６０もしくは６０−９０日）以内に対象に投与されてよい。
【０１６０】
融合ポリペプチドを含む組成物は、任意の経路で、全身投与または局所（regionalもしくはlocal）投与され得る。例えば、融合ポリペプチドを含む組成物は、注射、注入、経口（例えば、摂取または吸入）、局所、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、皮内、皮下、腔内、頭蓋内、経皮（局所）、非経腸的、例えば経粘膜または直腸内（浣腸）カテーテル、または眼内に、全身投与または局所（regionalもしくはlocal）投与され得る。（マイクロ）カプセル化された送達システムまたは投与用インプラントのパッケージにより投与される医薬製剤を含む、本発明の融合ポリペプチド、組成物、方法および使用。
【０１６１】
本発明はまた、本発明の融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）を含み、好適なパッケージング材にパッケージングされたキットを提供する。キットは、成分の説明書またはそこに含まれる成分の、インビトロ、インビボ、またはエクスビボでの使用のための指示書を含む、ラベルまたはパッケージング挿入文書を含んでいてよい。指示書の例としては、方法、処置プロトコルまたは治療レジメンのための指示が含まれる。
【０１６２】
キットは、構成要素の集合物（collection）、例えば、異なる二重特異性融合ポリペプチドをそれぞれ含む２種以上の組成物、または二重特異性融合ポリペプチドを含む組成物および別の治療的に有用な組成物（例えば、抗増殖剤または免疫増強剤）を含む組成物を含み得る。用語“パッケージング材”とは、キットの構成要素を含む物理的構造体を意味する。パッケージング材は、成分を滅菌状態で維持することができ、一般に、そのような目的で使用される材料（例えば、紙、段ボール、ガラス、プラスチック、ホイル、アンプル、バイアル、またはチューブ）で作製できる。
【０１６３】
キットは、ラベルまたは挿入文書を含み得る。ラベルまたは挿入文書は、“印刷物”、例えば、紙もしくはボール紙であってよく、または構成要素、キットもしくはパッケージング材（例えば、ボックス）に個別にもしくは貼付されるか、またはキットの構成要素を含むアンプル、チューブもしくはバイアルに添付されていてよい。ラベルまたは挿入文書は、コンピュータ可読媒体、ＣＤ−もしくはＤＶＤ−ＲＯＭ／ＲＡＭ、ＤＶＤ、ＭＰ３、磁気テープなどの光ディスク、またはＲＡＭおよびＲＯＭなどの電気記憶媒体または磁気／光記憶媒体、ＦＬＡＳＨ媒体もしくはメモリ型カードなどのこれらのハイブリッドであり得る。
【０１６４】
ラベルまたは挿入文書には、その中の１つ以上の要素、投与量、作用機序、薬物動態（ＰＫ）および薬力学（ＰＤ）を含む活性成分（複数可）の臨床薬理の識別情報が含まれ得る。ラベルまたは挿入文書は、製造者情報、ロット番号、製造場所および日付を識別する情報を含み得る。
【０１６５】
ラベルまたは挿入文書は、キットの構成要素が使用され得る状態、障害、疾患または症状に関する情報を含み得る。ラベルまたは挿入文書は、方法、処置プロトコルまたは治療レジメンにおけるキットの構成要素の１つ以上を使用するための、医師または対象に対する指示を含み得る。指示書は、投与量、頻度または期間、および本明細書に記載の方法、処置プロトコルまたは治療レジメンのいずれかを実施するための指示を含み得る。従って、本発明のキットは、本明細書に記載の方法および使用のいずれかを実施するためのラベルまたは指示をさらに含んでいてよい。
【０１６６】
ラベルまたは挿入文書は、予防的または治療的利益などの、構成要素が提供し得る何らかの利益に関する情報を含み得る。ラベルまたは挿入文書は、特定の組成物を使用することが適当ではない状況に鑑み、対象または医師に対する警告などの可能性の有る有害な副作用についての情報を含み得る。有害な副作用はまた、対象が、組成物と不適合であり得る１個またはそれ以上の他の薬剤を服用していた、服用する可能性がある、もしくは現在服用しているか、または対象が、組成物と不適合であり得る別の処置プロトコルまたは治療レジメンを受けていた、受け得る、もしくはそれを現在受けているとき起こり得るため、指示書は、かかる不適合性に関する情報を含み得る。
【０１６７】
キットは、他の構成要素をさらに含んでいてよい。キットの各構成要素は、個々の容器内に封入されていてよく、種々の容器の全てが単一のパッケージ内にあってよい。本発明のキットは、冷蔵貯蔵用に設計されてよい。本発明のキットはさらに、本発明の融合ポリペプチドを発現するか、または融合ポリペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞を含むように設計されてよい。キット内の細胞は、該細胞を使用する準備が整うまで適当な貯蔵条件下で維持され得る。例えば、１つ以上の細胞を含むキットは、該細胞を解凍し、増殖させることが可能なように、適当な細胞貯蔵媒体を含み得る。
【０１６８】
特に断らない限り、本明細書で用いる全ての技術用語および科学用語は、本発明の属する技術分野の当業者に通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同じかまたは同等の方法および材料を、本発明の実施または試験において使用することができるが、好適な方法および材料は、本明細書に記載されている。
【０１６９】
本明細書に記載される全ての特許出願、刊行物、特許および他の参考文献、ＧｅｎＢａｎｋの引用文献およびＡＴＣＣ引用文献は、引用によりその内容全体が本明細書中に包含される。矛盾する場合、定義を含む本明細書の記載を優先する。
【０１７０】
本明細書で用いる、単数表記は、他に明確に記載がない限り、複数の意味を含む。従って、例えば、“融合ポリペプチド（ＦｙｎｏｍＡｂ）”または“標的（例えば、ＩＬ−１７ａまたはＩＬ−６Ｒ）”なる記載は、単一または複数のかかる融合ポリペプチド、標的などを含み得る。
【０１７１】
本明細書で用いる通り、数値は、多くの場合、本明細書を通して範囲形式で示されている。範囲形式の使用は、単に便宜上および簡潔にするためであり、他に明確にこれと異なる記載がなされない限り、本発明の範囲に柔軟性のない限定として解釈されるべきではない。従って、範囲は、他に明確にこれと異なる記載がなされない限り、全ての可能性のある下位範囲、その範囲内の全ての個々の数値、ならびにかかる範囲内の整数および範囲内の数値または整数の分数を含む全ての数値または数値範囲を含む。この解釈は、範囲の広さに関わらず、本願明細書中の全て文脈に適用される。従って、例えば、９０−１００％の範囲との記載は、９１−９９％、９２−９８％、９３−９５％、９１−９８％、９１−９７％、９１−９６％、９１−９５％、９１−９４％、９１−９３％などを含む。９０−１００％の範囲との記載はまた、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９５％、９７％など、ならびに９１．１％、９１．２％、９１．３％、９１．４％、９１．５％など、９２．１％、９２．２％、９２．３％、９２．４％、９２．５％などを含む。
【０１７２】
さらに、１−５，０００倍の範囲との記載は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０倍など、ならびに１．１、１．２、１．３、１．４、１．５倍など、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５倍など、ならびにかかる範囲内の任意の数値範囲、例えば１−２、５−１０、１０−５０、５０−１００、１００−５００、１００−１０００、５００−１０００、１０００−２０００、１０００−５０００などを含む。さらなる例において、ＫＤ  １０−５Ｍから約ＫＤ  １０−１３Ｍの範囲との記載は、かかる数値内またはかかる数値値を含む、任意の数値または範囲を含む。
【０１７３】
また、本明細書で用いる一連の範囲は、本明細書を通して開示されている。一連の範囲の使用は、別の範囲を提供するために、上限および下限の範囲の組み合わせを含む。この解釈は、範囲の広さに関わらず、本願明細書中の全ての文脈で適用される。従って、例えば、一連の範囲、例えば５−１０、１０−２０、２０−３０、３０−４０、４０−５０、５０−７５、７５−１００、１００−１５０、１５０−２００などの記載は、例えば５−２０、５−３０、５−４０、５−５０、５−７５、５−１００、５−１５０、５−２００、および１０−３０、１０−４０、１０−５０、１０−７５、１０−１００、１０−１５０、１０−１７１、および２０−４０、２０−５０、２０−７５、２０−１００、２０−１５０、２０−２００などの範囲を含む。
【０１７４】
本発明は、一般的に、多数の態様を説明するために肯定的な言語を用いて本明細書に開示されている。本発明はまた、具体的には、特定の主題(subject matter)、例えば、物質または材料、方法の工程および条件、プロトコル、手順、アッセイまたは分析などを、完全にまたは部分的に除く態様を含む。従って、本発明は、一般に、本発明に明示的に包含されない局面を含まないことが本明細書中に記載されていなくても、当該局面は本明細書に開示されている。
【０１７５】
本発明の多数の態様が記載されている。それにも関わらず、種々の修飾が本発明の精神および範囲から逸脱することなくなされ得ることが理解され得る。従って、以下の実施例は、説明を意図し、特許請求の範囲に記載の本発明の範囲に限定することを意図しない。
【実施例】
【０１７６】
実施例１
本発明のＦｙｎ  ＳＨ３由来ポリペプチドは、モノクローナル溶解物ＥＬＩＳＡによって決定されるように、ＩＬ−１７Ａに結合する。
【０１７７】
方法
ＩＬ−１７ａに結合するフィノマーの製造方法は、ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０６９４８１に記載されている。要約すれば、ＩＬ−１７Ａに特異的なＦｙｎ−ＳＨ３由来結合タンパク質を、組み換えＩＬ−１７Ａ（R&D Systems）を抗原として用い、標準的ファージディスプレイを選択技術（Grabulovski D. et al., (2007) J Biol Chem 282, p. 3196−3204, Viti, F. et al. (2000) Methods Enzymol. 326, 480−505）として用いて単離した。本発明のＦｙｎ  ＳＨ３由来ポリペプチドである、ｎ−ｓｒｃ−ループ配列“ＳＴＨＥＹＥ”を含む１Ｌ３−Ｂ０９は、選択プロセス中に富化した。１Ｌ３−Ｂ０９はＩＬ−１７Ａに結合し、グリコシル化ＩＬ−１７Ａを非グリコシル化ＩＬ−１７Ａと同様によく阻害することが見出された。より高い親和性を有するＦｙｎ  ＳＨ３由来ＩＬ−１７Ａ結合剤を得るために、１Ｌ３−Ｂ０９を、親和性成熟のためのテンプレートとして用いた。ｎ−ｓｒｃ−ループ配列“ＳＴＨＥＹＥ”は、一定に保たれ、無作為化ＲＴ−ループレパートリー（（Ｘ１）（Ｘ２）（Ｘ３）（Ｘ４）（Ｘ５）（Ｘ６）として示される６個のアミノ酸残基）と組み合わされた。親和性成熟ライブラリ作製のプロセスは、無作為化ＲＴ−ループを有する天然のライブラリのクローニングについて記載したものと本質的に同じであった（Schlatterら、(2012) mAbs, 4(4) p. 497−50中の“library 0”）。
【０１７８】
天然および親和性成熟選択後、富化したＦｙｎ  ＳＨ３由来ポリペプチドを、溶解物ＥＬＩＳＡによりＩＬ−１７Ａへの結合についてスクリーニングした。Ｆｙｎ  ＳＨ３由来結合タンパク質をコードするＤＮＡを、得られた構築物がGrabulovskiらの文献（Grabulovski et al. (2007) JBC, 282, p. 3196−3204）に記載の通り、Ｃ末端ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを担持するように、細菌発現ベクターｐＱＥ１２（Qiagen）中にクローニングした。ポリペプチドを、９６ウェル形式で大腸菌の細胞質中で発現させ、１ウェル当たり２００μｌの清澄化した溶解物を、Ｂｅｒｔｓｃｈｉｎｇｅｒらの文献（Bertschinger et al. (2007) Protein Eng Des Sel 20(2): p. 57−68）に記載の通りに調製した。要約すれば、形質転換した細菌コロニーを寒天プレートから採取し、丸底９６ウェルプレート（Nunc, cat. no. 163320）中、１００μｇ／ｍｌアンピシリンおよび０．１％（ｗ／ｖ）グルコースを含む２０μｌの２ｘＹＴ培地中で増殖させた。タンパク質発現を、１ｍＭ  ＩＰＴＧ（Applichem, Germany）を添加することにより３７℃にて２００r.p.mで３時間増殖後に、誘導した。タンパク質は、ロータリーシェーカー（２００ r.p.m.、３０℃）中で一晩発現させた。次いで、９６ウェルプレートを１８００ｇで１０分間遠心し、上清を捨てた。細菌ペレットを、１ｍｇ／ｍｌのリゾチームを含む２００μｌの溶解バッファー（５０ｍＭ ＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ イミダゾール、ｐＨ８．０）に再懸濁し、氷上に３０分間置いた。その後、細菌細胞を水浴中で超音波処理（１０秒間６バースト）して溶解した後、１８００ｇで１０分間遠心した。モノクローナル細菌溶解物をＥＬＩＳＡに使用した：ビオチニル化ＩＬ−１７Ａ（ＨＥＫ  ＥＢＮＡ細胞中で自家製造、ビオチン化は、製造業者の指示書に従い、ＮＨＳ−ＰＥＯ４−ビオチン（Pierce）を用いて行った）を、ストレプトアビジンでコーティングしたウェル（StreptaWells, High Bind, Roche）上に固定化し、ＰＢＳ、２％ミルク（Rapilait, Migros, Switzerland）でブロッキング後、５０μｌの、６μｇ／ｍｌ抗−ｍｙｃ抗体９Ｅ１０（終濃度３μｇ／ｍｌ）を含むＰＢＳ、４％ミルクおよび５０μｌの細菌溶解物を適用した。１時間インキュベートし、洗浄後、結合したＦｙｎ  ＳＨ３由来ポリペプチドを、抗マウス−ＨＲＰ抗体複合体（Sigma）を用いて検出した。ペルオキシダーゼ活性の検出は、ＢＭブルーＰＯＤ基質（Roche）を添加することにより行い、反応を１Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を添加して停止させた。特異的に結合するＤＮＡ配列をＤＮＡ配列決定により確認した。
【０１７９】
結果
７つの代表的なＩＬ−１７Ａ結合フィノマー配列（配列番号１−７）の配列は以下の通りである：
配列番号１（１Ｌ３−Ｂ９）：ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＡＮＨＧＮＲＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ；
配列番号２（１１Ｌ０−Ｃ０６）：
ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＫＱＫＧＨＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ；
配列番号３（１１Ｌ５−Ｂ０６）：ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＡＲＧＱＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ；
配列番号４（１１Ｌ６−Ｆ０３）：ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＤＫＬＳＡＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ；
配列番号５（１１Ｌ９−Ｃ０９）：ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＥＳＶＳＷＳＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ；
配列番号６（１１Ｌ１０−Ａ０５）：ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＳＲＧＶＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ；および
配列番号７（１１Ｌ１１−Ａ０９）：ＧＶＴＬＦＶＡＬＹＤＹＳＲＫＳＮＬＤＬＳＦＨＫＧＥＫＦＱＩＬＳＴＨＥＹＥＤＷＷＥＡＲＳＬＴＴＧＥＴＧＹＩＰＳＮＹＶＡＰＶＤＳＩＱ。
【０１８０】
８つの異なるフィノマー−抗体（ＦｙｎｏｍＡｂ）融合体を、４つの別個の抗ＩＬ−１７Ａ結合フィノマーを、ＩＬ−６Ｒ結合抗体であるトシリズマブの、重鎖のＣ末端（ＣＯＶＡ８０１、ＣＯＶＡ８０３、ＣＯＶＡ８０５、ＣＯＶＡ８０７）または軽鎖のＣ末端（ＣＯＶＡ８０２、ＣＯＶＡ８０４、ＣＯＶＡ８０６、ＣＯＶＡ８０８）のいずれかと融合させることにより作製した（表１参照）。
【０１８１】
【表４】
0006345800.tif 000005
【０１８２】
試験は、生化学的および機能的特徴、ならびにこれらの異なるＦｙｎｏｍＡｂの薬物動態学的特性を評価する。ＣＯＶＡ８０１−８０８  ＦｙｎｏｍＡｂのいくつかの異なるロットを評価した。ＦｙｎｏｍＡｂを、ＣＨＯ細胞の一過性または安定なトランスフェクションのいずれかから製造した。マウスおよびカニクイザルのＰＫ試験のためのＦｙｎｏｍＡｂを、安定なＣＨＯ細胞株から産生した。
【０１８３】
実施例２
タンパク質発現および精製
ＦｙｎｏｍＡｂの４つの別個のロットを調製し、以下に記載の試験にて評価した。材料の２つのロットは、一過性トランスフェクトしたＣＨＯ細胞に由来した。実験室で作製した材料のロットは、以下に記載の通り、ロンザ発現ベクターを用いる安定なＣＨＯプールに由来した。
【０１８４】
Ａｃｔｅｍｒａ（トシリズマブ）の重鎖および軽鎖配列は、ＣＡＳデータベースから得られ、また、ＵＳ２０１１／００７６２７５Ａ１に記載の配列番号１５として確認された。該配列を改変して、アミノ酸３５６−３５８をＤＥＬからＥＥＭに変異させた。これは、Ｇ１ｍ１アロタイプからｎＧ１ｍ１への変異であり、潜在的に免疫原性を減少させ得る。
Ａｃｔｅｍｒａ（トシリズマブ）重鎖配列（配列番号８）（ＣＤＲを太字で示す）
【表５】
0006345800.tif 000006
Ａｃｔｅｍｒａ（トシリズマブ）軽鎖配列（配列番号９）（ＣＤＲを太字で示す）
【表６】
0006345800.tif 000007
【０１８５】
トシリズマブ重鎖および軽鎖についてのこれらの配列は、ＣＨＯ発現および遺伝子合成のためにコドン最適化された。シグナル配列は、各遺伝子の５’末端に付加された（Ｈｃ  ｓｓ＝ＭＥＷＳＷＶＦＬＦＦＬＳＶＴＴＧＶＨＳ；Ｌｃ  ｓｓ＝ＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣ）。ＦｙｎｏｍＡｂ融合タンパク質を、トシリズマブの重鎖または軽鎖のいずれかのＣ末端に４つのフィノマー配列のそれぞれを、間に１５アミノ酸リンカー（ＧＧＧＧＳｘ３）を有して配置することにより構築した。これは、８つのＦｙｎｏｍＡｂを生成するために必要な遺伝子を作製した。合成遺伝子を、Ｌｏｎｚａ  ｐＥＥ１２．４（重鎖）および６．４（軽鎖）ベクター中にクローニングした。次いで、これらのベクターを、トシリズマブの重鎖および軽鎖の組み合わせおよび全ての８つのＦｙｎｏｍＡｂ分子を発現する単一の発現ベクターを作製するために組み合わせた。
【０１８６】
【表７】
0006345800.tif 000008
【０１８７】
ＣＨＯ−Ｋ１−ＳＶ細胞に、８つのＦｙｎｏｍＡｂベクターおよびトシリズマブのそれぞれの直線化ＤＮＡをヌクレオフェクション（Ａｍａｘａ）した。これらの細胞を、ＭＳＸ選択に付し、培養物が回復するまで、対の静置フラスコ中で培養した。細胞を回収後、それらを振盪フラスコに移し、直ちに冷凍するか、または大規模タンパク質発現のための製造フラスコに拡大した。
【０１８８】
製造フラスコの最初のラウンドは、所内(in-house)でのマウスＰＫ試験のためおよびインビトロアッセイでの使用のために、材料を製造するために精製した。これらと同じプールの凍結培養物は、後に解凍し、より多くのタンパク質がカニクイザルＰＫ試験のために必要とされたときに拡大した。
【０１８９】
発現レベルを、ＡｌｐｈａＬＩＳＡおよびウェスタンブロットにより定量した。安定なプールの発現レベルは、約１００−５００ｍｇ／Ｌの範囲であった。製造フラスコを収穫前の１０日間培養し、濾過し、プロテアーゼ阻害剤と共に凍結させた。いくつかの低発現プールを、“冷却捕捉(cold captured)”し、分類し−細胞表面上の抗体を染色し、次いで、フローサイトメトリーによって細胞を選別し、培養および生成のために最高の産生細胞を捕捉した。安定なプールからの上清（０．５−８．０Ｌ）を、０．２μＭ真空フィルターを通して濾過して回収し、プロテアーゼ阻害剤錠（Ｓｉｇｍａ、ｃａｔ＃  Ｐ２７１４、１錠／１００ｍＬ  上清）を、冷凍または４℃での貯蔵前に添加した。
【０１９０】
全てのＦｙｎｏｍＡｂ産生細胞株の上清は、最初に、ＨｉＴｒａｐ  ＭａｂＳｅｌｅｃｔ  ＳｕＲｅ  カラム（１または５ｍＬカラム；複数のタンデム型のこともある）を用いて５−２０ｍＬ／分の流速で負荷して、無菌条件下で精製した。カラムは、ベースラインＡ２８０の読み取りが達成されるまでＰＢＳで洗浄し、その後、グリシン、ｐＨ３．０を用いて溶出した。
【０１９１】
各ＦｙｎｏｍＡｂについて作製されたＣＨＯの安定な材料の異なるロットをタンパク質収量と共に、表３に列記する。
【０１９２】
【表８】
0006345800.tif 000009
【０１９３】
実施例３
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を、各ＦｙｎｏｍＡｂおよびトシリズマブの３つの別個のロットで行った。５μｇの各タンパク質を、トリス−グリシンＳＤＳサンプルおよび泳動バッファーを用いて４−２０％トリス−グリシン勾配ゲル上で、還元および非還元の両方の条件下で、電気泳動した。ゲルを、クマシーブリリアントブルー（SimplyBlue SafeStain, Invitrogen）で一晩染色し、蒸留水で十分に透明になるまで脱染色した。結果を図１（一過性のＣＨＯ生成物のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析）、図２および３（マウスＰＫ試験のために作製された安定なＣＨＯ生成物のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析）に示す。
【０１９４】
実施例４
ＨＰＬＣ−ＳＥＣ分析
３つの別個のロットのＦｙｎｏｍＡｂを、ＨＰＬＣ−ＳＥＣ分析法により評価した。１ロットの一過性のＣＨＯ生成物、および他の２つのロットを、安定にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞株から内生的に産生した。１０μｇの各ＦｙｎｏｍＡｂタンパク質を、１ｍＬ／分の流速で移動相としてＰＢＳを用いて、Ｚｅｎｉｘ−Ｃ  ＳＥＣ−３００カラム（Sepax Technologies）上に、注入した。Ａ２８０での吸光度をモニターした。フィノマーの存在は、おそらく、固相とフィノマーとの間の二次的相互作用により、Ａｃｔｅｍｒａと比べて種々の程度にＦｙｎｏｍＡｂの溶出を遅らせた。可溶性の凝集が、ＦｙｎｏｍＡｂの主ピークの前に溶出するピークとして観察され、重鎖融合コンストラクトＣＯＶＡ８０１、ＣＯＶＡ８０３、ＣＯＶＡ８０５およびＣＯＶＡ８０７において最も明白である。
【０１９５】
軽鎖融合体（ＣＯＶＡ８０２、ＣＯＶＡ８０４、ＣＯＶＡ８０６およびＣＯＶＡ８０８ＦｙｎｏｍＡｂ）は、より明確なＳＥＣプロファイルを有し、ＣＯＶＡ８０４またはＣＯＶＡ８０６ ＦｙｎｏｍＡｂでは凝集は観察されなかった。これらのデータは、軽鎖融合体が、明確なＳＥＣプロファイルを有し、可溶性凝集がほとんどみられなかったことを示す、これまでのデータと一致している。
【０１９６】
実施例５
ヒトＩＬ−１７ＡおよびヒトＩＬ−６Ｒに対する親和性測定
ヒトＩＬ−１７ＡおよびヒトＩＬ−６ＲへのＦｙｎｏｍＡｂ結合の親和性および動態パラメーターを決定するために、抗ヒト抗体を、アミンカップリングでＧＬＭチップ上に結合させた。その後、ＣＯＶＡ８０１−８０８ ＦｙｎｏｍＡｂまたは対照抗体は、リガンドとして捕捉され、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−６Ｒのいずれかを分析物として流した。ＰＢＳＴを移動相として使用し、再生を１００ｍＭ  ＨＣｌの１５秒間注入によって達成した。セクキヌマブをＩＬ−１７Ａ結合の陽性対照として、およびＩＬ−６Ｒ結合の陰性対照として用いた。トシリズマブおよび／またはアクテムラを、ＩＬ−６Ｒ結合の陽性対照として、およびＩＬ−１７−Ａ結合の陰性対照として用いた。
【０１９７】
セクキヌマブを、ＩＬ−１７Ａ結合の陽性対照として、およびＩＬ−６Ｒ結合の陰性対照として用いた。セクキヌマブのＶＨ鎖およびＶＬ鎖は以下の通りである：
可変軽鎖（配列番号３３）
シグナル配列（下線）、可変ドメイン（ｋａｐｐａ）（太字）
【表９】
0006345800.tif 000010
可変重鎖（配列番号３４）
シグナル配列（下線）、可変ドメイン（ｋａｐｐａ）（太字）
【表１０】
0006345800.tif 000011
トシリズマブおよび／またはアクテムラを、ＩＬ−６Ｒ結合の陽性対照として、およびＩＬ−１７−Ａ結合の陰性対照として用いた。
【０１９８】
ＩＬ−１７Ａ結合
ＣＯＶＡ８０１−８０８  ＦｙｎｏｍＡｂによるＩＬ−１７Ａ結合ならびにセクキヌマブ（陽性対照および対照）およびトシリズマブまたはアクテムラ（陰性対照）についての代表的センサーグラムを図４に示す。各ＦｙｎｏｍＡｂおよびセクキヌマブの複数ロットについての複数の試験からの動態結合データの概要を表４にまとめた。示したセンサーグラムは、ＣＯＶＡ８０１−８０８、別個のロットのトシリズマブ（ｔｏｃ）、市販のＡｃｔｅｍｒａ、およびセクキヌマブ（ｓｅｃ）のものである。
【０１９９】
反応速度定数のフィッティング（Fit kinetics）は、他のデータ値とかなり一致しており、ほとんどの構築物はセクキヌマブに似た見かけのＫＤを有する。セクキヌマブデータセットでは見られないが、ＦｙｎｏｍＡｂデータセットでは１：１結合から大きくずれて見られる通り、ＩＬ−１７Ａへの結合の評価は、ＦｙｎｏｍＡｂとの複雑な結合によって困難となった。長時間解離相でより容易に観察される通り、ＩＬ−１７Ａのかなりの再結合が起こることが明らかである。従って、ＦｙｎｏｍＡｂ／ＩＬ−１７Ａ相互作用についての報告された動態および親和性の値は、慎重に解釈されるべきである。ＣＯＶＡ８０７およびＣＯＶＡ８０８はより低いＫＤ値を有したが、これらの２つのＦｙｎｏｍＡｂによるＩＬ−１７Ａの１：１結合からの大きな逸脱は、それらの見かけのより高い親和性を説明できる。本発明者等は、ＩＬ−１７Ａ機能的アッセイにおいて、ＣＯＶＡ８０７  ＦｙｎｏｍＡｂの劣った機能的活性を観察した（以下のＨＴ２９  ＩＬ−１７Ａ機能的アッセイデータ参照のこと）。
【０２００】
0006345800.tif 000012
【０２０１】
ＦｙｎｏｍＡｂ構築物と組み換えＩＬ−１７Ａホモ二量体の複雑な結合のために、簡易結合ＥＬＩＳＡを行い、ＣＯＶＡ８０４およびＣＯＶＡ８０６のヒトＩＬ−１７Ａへの特異性および相対的親和性を試験した。要約すれば、ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬの組み換えヒトＩＬ−１７Ａを、ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングし、次いで、ＢＳＡでブロッキングし、０−１０μｇ／ｍＬの試験抗体またはＦｙｎｏｍＡｂと共にインキュベートした。西洋ワサビペルオキシダーゼと結合させたヤギ−抗ヒト抗体を用いて、ＴＭＢを用いる結合を検出した。ＩＬ−１７Ａへの濃度依存的結合（concentration−response binding）の結果は、４つの試験において高い再現性があり、代表的な試験を図５に示す。ヒトＩＬ−１７Ａへの結合は、ＣＯＶＡ８０４（８０４）、ＣＯＶＡ８０６（８０６）およびセクキヌマブ（ｓｅｃ）についてＥＬＩＳＡにより評価した。アクテムラを、ＩＬ−１７Ａ結合の陰性対照として用いた。異なる構築物のＥＣ５０値は以下の通りである：セクキヌマブ＝０．３６±０．１２ｎＭ；ＣＯＶＡ８０４＝１．０２±０．２４ｎＭ；ＣＯＶＡ８０６＝０．９８±０．２３ｎＭ。従って、これらのデータは、ＦｙｎｏｍＡｂであるＣＯＶＡ８０４およびＣＯＶＡ８０６が、ＩＬ−１７Ａに対してセクキヌマブと同様の親和性を有することを示すＳＰＲデータを支持する。
【０２０２】
ＩＬ−６Ｒ結合
ＣＯＶＡ８０１−８０８ＦｙｎｏｍＡｂによるＩＬ−６Ｒ結合、ならびにトシリズマブおよびアクテムラ（陽性対照および対照）およびセクキヌマブ（陰性対照）についての代表的センサーグラムを図６に示す。ＳＰＲによるＦｙｎｏｍＡｂ／ＩＬ６Ｒ相互作用の評価は、顕著に再現性があり、該相互作用を、図６に示す古典的ラングミュアフィッティングを用いて容易にモデル化することができる。示されるセンサーグラムはＣＯＶＡ８０１−８０８、トシリズマブ（ｔｏｃ）の別個のロット、市販のＡｃｔｅｍｒａ、およびセクキヌマブ（ｓｅｃ）についてのものである。各ＦｙｎｏｍＡｂの複数ロットおよびトシリズマブについての複数試験からの動態結合データのまとめを、表５にまとめる。これらのデータは、軽鎖または重鎖のいずれかのＣ末端におけるフィノマーの存在が、親抗体へのＩＬ−６Ｒの結合に影響を及ぼさないことを示す。すべてのＦｙｎｏｍＡｂは、互いに、および親抗体トシリズマブと顕著に類似した結合動態を示す。
【０２０３】
【表１１】
0006345800.tif 000013
【０２０４】
実施例６
ＨＴ−２９  ＩＬ−１７Ａ阻害アッセイ
ヒトＩＬ−１７Ａに対するＣＯＶＡ８０１−８０８ＦｙｎｏｍＡｂの生物活性を評価するために、ＨＴ−２９細胞（ＡＴＣＣ、＃ＨＴＢ−３８）を、１００ｎＭ〜６ｐＭの範囲の種々の濃度の各ＦｙｎｏｍＡｂの存在下ＩＬ−１７Ａ（１．９ｎＭ）で刺激した。セクキヌマブを、ＩＬ−１７Ａ機能の遮断についての陽性対照として用いた。各条件について、２０，０００個の生細胞を添加し、３７℃、５％ＣＯ２にて、４８時間、平底９６ウェルプレート中でインキュベートした。各条件はデュプリケートで試験した。
【０２０５】
ＨＴ２９細胞をＩＬ１７Ａで刺激した結果、細胞上清中にＧｒｏαの産生および放出が認められた。その後、上清中のＧｒｏα濃度を、ＥＬＩＳＡにより、ＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  （ＤＹ２７５））を用いて測定した。ＥＬＩＳＡは、製造者の取扱説明書に従って行った（すべての抗体について１：２００で希釈使用した以外）。
【０２０６】
デュプリケートの結果平均値を標準偏差と共にプロットし、ＩＣ５０値をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）の４-パラメーター用量反応阻害機能を用いて計算した。ＣＯＶＡ８０１−８０８  ＦｙｎｏｍＡｂの３つの異なるロットを用いる複数の試験からの代表的なデータを図７−９に示す。代表的なデータから計算されるＩＣ５０値を表６に示す。全てのＦｙｎｏｍＡｂは、ＩＬ−１７Ａに対して対照セクキヌマブと同様の活性を示し、全てのＦｙｎｏｍＡｂは、高濃度で完全な遮断を達成することができた。ＣＯＶＡ８０６は一貫して、ＩＬ−１７Ａに対し最も強力な活性を示し、セクキヌマブよりも一貫してより強力であった。
【０２０７】
【表１２】
0006345800.tif 000014
【表１３】
0006345800.tif 000015
【表１４】
0006345800.tif 000016
【０２０８】
実施例７
ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−６Ｒ阻害アッセイ
ＣＯＶＡ８０１−８０８構築物において抗ＩＬ−６Ｒ部分の生物活性を評価するために、ＨＥＫ  Ｂｌｕｅ  ＩＬ−６細胞（Invivogen、ｈｋｂ−ｉｌ６）を、５００ｎＭ〜０．２ｎＭの範囲の種々の濃度のＦｙｎｏｍＡｂの存在下、ＩＬ−６（１５ｐＭ）で刺激した。阻害剤を、ＩＬ−６の添加前に３０分間、細胞と共に予めインキュベートした。対照として、培地のみ、またはＩＬ−６（１５ｐＭ）を含む培地を使用した。また、トシリズマブまたはアクテムラを、ＩＬ−６Ｒ遮断についての陽性対照として用いた。各サンプルについて、５０，０００個の生細胞を添加し、３７℃、５％ＣＯ２にて、９６ウェルプレートのウェル中で２０−２４時間インキュベートした。各条件をトリプリケートで試験した。
【０２０９】
細胞へのＩＬ−６の添加の結果、ＩＬ−６Ｒシグナル伝達経路が刺激され、ＳＴＡＴ３誘導性のＳＥＡＰレポーター遺伝子が活性化された。上清中のＳＥＡＰを、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）検出試薬（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ｈｂ−ｄｅｔ２）を、製造者の取扱説明書に従って使用して、測定した。
【０２１０】
トリプリケートの平均値の結果を、標準偏差を用いてプロットした。ＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）の４-パラメーター用量応答阻害機能を用いて計算した。ＣＯＶＡ８０１−８０８  ＦｙｎｏｍＡｂの３つの異なるロットを用いる複数の試験からの代表的なデータを図１０−１２に示す。代表的なデータから計算されるＩＣ５０値を表７に示す。全てのＦｙｎｏｍＡｂは、市販グレードのアクテムラおよびトシリズマブと同程度のＩＬ−６Ｒの遮断を示した。これらのデータは、他のデータと同様であり、トシリズマブ骨格Ａｂ上のＩＬ−１７Ａ結合フィノマーの存在が、これらのＦｙｎｏｍＡｂのＩＬ−６Ｒ遮断活性に影響を及ぼさないことを示す。
【０２１１】
【表１５】
0006345800.tif 000017
【表１６】
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【表１７】
0006345800.tif 000019
【０２１２】
実施例８
血清安定性アッセイ
ヒト血清中の各ＦｙｎｏｍＡｂの安定性を評価するために、ＣＯＶＡ８０１−８０８ＦｙｎｏｍＡｂをそれぞれ、９０％ヒト血清（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｈ４５２２）中で、６日間、３７℃にて、１０μｇ／ｍｌの濃度でインキュベートし、その後、サンドイッチＥＬＩＳＡにより、ＦｙｎｏｍＡｂが、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−６Ｒの両方への結合能を保持しているかどうかを評価した。サンドイッチＥＬＩＳＡを用いて、ＰＢＳまたはヒト血清中でのインキュベーション後のＦｙｎｏｍＡｂの同時結合を評価した。サンドイッチＥＬＩＳＡのセットアップを図１３に示す。
【０２１３】
要約すれば、ヒトＩＬ１７Ａを、ＰＢＳ中５μｇ／ｍｌにて、マキシソープ９６ウェルプレート上にコーティングし、ＦｙｎｏｍＡｂサンプルを、１％ ＢＳＡ／ＰＢＳＴで、５０ｎＭから０．００３ｎＭまで５倍に希釈して、プレートに添加した。その後、Ｈｉｓタグ付きヒトＩＬ−６Ｒを、ＦｙｎｏｍＡｂを含む各ウェルに添加し、抗Ｈｉｓ−ＨＲＰ  ｍＡｂを反応させた。次いで、プレートを洗浄し、ＴＭＢ基質（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｔ０４４０）を反応させ、酸で反応停止した。トリプリケートの平均値は、標準偏差によってプロットした（図１４参照）。
【０２１４】
より詳しくは、ＣＯＶＡ８０１−８０８ＦｙｎｏｍＡｂを、以下の条件下（ａ−ｄ）でインキュベートし、その後、ＥＬＩＳＡにて、図１０に示す通りに、二重結合活性の保持について評価した：ａ）ＰＢＳで希釈し、直ちにアッセイした（ＰＢＳ０日）、ｂ）ＰＢＳで希釈し、４℃で６日間貯蔵した（ＰＢＳ６日）、ｃ）９０％ヒト血清で希釈し、直ちにアッセイした（ヒト血清０日）、ｄ）９０％ヒト血清で希釈し、３７℃にて６日間インキュベートした（ヒト血清６日）。
【０２１５】
対照サンプルの別個のセットを、ＰＢＳ中、４℃にて６日間インキュベートした（ＰＢＳ６日）。対照サンプルの別のセットを、ヒト血清中で希釈し、直ちにアッセイに用いた（ヒト血清０日）。ヒト血清０日のサンプルの目的は、ヒト血清の存在が、その標的の両方に同時に結合するＦｙｎｏｍＡｂの能力に影響を与えるかどうかを評価することであった。図１４に示す通り、ヒト血清中での６日間の貯蔵で、ＦｙｎｏｍＡｂは、その結合活性を低減せず（ヒト血清０日と比較）、８つ全てのＦｙｎｏｍＡｂがヒト血清中で安定であることが示唆された。図１５に示す通り、ＣＯＶＡ８０４およびＣＯＶＡ８０６の二重結合活性は、ヒト血清の存在下で影響を受けなかった。
【０２１６】
実施例９
ＩＬ−６ＲおよびＩＬ−１７Ａの同時結合
データは、ＣＯＶＡ８０１−８０８  ＦｙｎｏｍＡｂのすべてが、同時にヒトＩＬ−１７ＡおよびヒトＩＬ−６Ｒに結合可能であったことを示した。
【０２１７】
細胞ベースのフローサイトメトリーアッセイを行い、ＣＯＶＡ８０１−８０８  ＦｙｎｏｍＡｂが、細胞表面上のＩＬ−６Ｒおよび可溶性ＩＬ−１７Ａに同時に結合できたことを実証した。このアッセイにおいて、表面上にヒトＩＬ−６Ｒを発現するＨＥＫ  Ｂｌｕｅ  ＩＬ−６細胞（Invivogen  ｈｋｂ−ｉｌ６）を使用した。要約すれば、ＣＯＶＡ８０１−８０８  ＦｙｎｏｍＡｂ（または、対照）をそれぞれ、３００ｎＭ〜５ｐＭの範囲の種々の濃度で、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＩＬ−６細胞（または、陰性対照としてＨＥＫ−２９３細胞）と共に６０分間インキュベートした。この一次インキュベーション後、ＩＬ−６Ｒへの構築物の結合を、Ａｌｅｘａ４８８  フルオロフォア（Invitrogen  Ａ１１０１３）と複合体形成した抗ヒト−ＩｇＧ抗体を用いて検出した。
【０２１８】
結果を図１６に示す。ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ−ＩＬ６細胞（ＩＬ６Ｒ＋）またはＨＥＫ−２９３細胞（ＩＬ６Ｒ−）を、示したＦｙｎｏｍＡｂと共にインキュベートし、次いで細胞表面に結合したＦｙｎｏｍＡｂを検出するために抗ヒトＩｇＧ−Ａｌｅｘａ４８８と共に、または同時結合を評価するためにビオチニル化ＩＬ−１７Ａ＋ストレプトアビジンＡＰＣと共に、インキュベートした。トシリズマブを、ＩＬ−６Ｒ結合の陽性対照およびＩＬ−１７Ａ結合の陰性対照として使用した。
【０２１９】
図１６Ａ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、Ｉ、Ｋ、ＭおよびＯのデータは、８つすべてのＦｙｎｏｍＡｂ構築物ならびにトシリズマブは、細胞表面上にヒトＩＬ−６Ｒを発現するＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＩＬ−６細胞に結合するが、細胞表面上にヒトＩＬ−６Ｒを発現しない対照ＨＥＫ−２９３細胞に結合するコンストラクトはないことを示す。細胞表面ＩＬ−６Ｒおよび可溶性ヒトＩＬ−１７Ａへの同時結合を検出するために、別の試験を、各コンストラクトとの一次インキュベーション後に、ビオチニル化ＩＬ−１７Ａ（Ｒ＆Ｄ  ３１７−ＩＬＢ）との二次インキュベーションを行い、その後、ストレプトアビジン−アロフィコシアニン（ＡＰＣ；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  １７−４３１７）と共にインキュベートして行った。図１６Ｂ、Ｄ、Ｆ、Ｈ、Ｊ、ＬおよびＰに示す通り、８つすべてのＦｙｎｏｍＡｂは、細胞表面ＩＬ−６Ｒおよび可溶性ＩＬ−１７Ａへの同時結合を示した。予期される通り、トシリズマブは、ＨＥＫ  Ｂｌｕｅ  ＩＬ−６細胞の細胞表面上に発現されるＩＬ−６Ｒに結合し得るが、可溶性ＩＬ−１７Ａには結合しなかった。
【０２２０】
実施例１０
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−６Ｒの両方の存在下での二重特異性ＦｙｎｏｍＡｂの機能的活性
図１５および１６のデータは、ＦｙｎｏｍＡｂがヒトＩＬ−１７ＡおよびヒトＩＬ−６Ｒに同時に結合し得ることを示す。しかしながら、ＦｙｎｏｍＡｂのｍＡｂ部分によるＩＬ−６Ｒの結合が、そのリガンドであるＩＬ−１７Ａを結合し、阻害するフィノマーの能力に影響を与えるかどうかは明らかではない。この問題を解くために、本発明者らは、可溶性ＩＬ−６Ｒの存在下でＨＴ−２９ ＩＬ−１７Ａ 機能的アッセイを行い、ＦｙｎｏｍＡｂによるＩＬ−６Ｒの結合が、ＩＬ−１７Ａに対するそれらの結合および機能的活性を低減するかどうかを確認した。ＨＴ−２９ ＩＬ−１７Ａ アッセイを、過剰量の可溶性ＩＬ−６Ｒの存在下および非存在下の両方で行ったこと以外は、上記のとおりに正確に行った。要約すれば、滴定量のＣＯＶＡ８０４またはＣＯＶＡ８０６を、過剰量の可溶性ＩＬ−６Ｒ（２０ｎＭ）の存在下または非存在下で、ＩＬ−１７Ａ（１．９ｎＭ）と混合し、その後、これらの混合物をＩＬ−１７Ａ応答性細胞株ＨＴ−２９に添加した。その後、４８時間後に、ＧＲＯαの放出を、上記のとおりＥＬＩＳＡにより測定した。セクキヌマブを、ＩＬ−１７Ａ遮断のための陽性対照として用いた。
【０２２１】
結果を図１７に示す。ＨＴ−２９細胞を、滴定量のＣＯＶＡ８０４またはＣＯＶＡ８０６の存在下、組み換えヒトＩＬ−１７Ａ単独（上パネル）またはヒトＩＬ−１７Ａおよび可溶性ヒトＩＬ−６Ｒ（下パネル）で刺激し、ＧＲＯα産生をＥＬＩＳＡにより評価した。セクキヌマブを、ＩＬ−１７Ａ遮断のための陽性対照として用いた。
【０２２２】
図１７および表８に示す通り、ＣＯＶＡ８０４およびＣＯＶＡ８０６は両方とも、過剰量の可溶性ＩＬ−６Ｒの存在下でＩＬ−１７Ａ誘導性ＧＲＯα産生の遮断を示し、同様のＩＣ５０値が、ＩＬ−６Ｒの存在下および非存在下で見られた。これらのデータは、ＩＬ−６Ｒの結合が、ＦｙｎｏｍＡｂのフィノマー部分のＩＬ−１７Ａを結合し、阻害する能力に影響を及ぼさないことを示唆している。
【０２２３】
【表１８】
0006345800.tif 000020
【０２２４】
同様の試験を行い、ＩＬ−１７Ａの存在下でのＦｙｎｏｍＡｂによるＩＬ−６Ｒの遮断を評価した（図１８参照）。ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＩＬ−６Ｒ  阻害アッセイを、２０ｎＭの組み換えヒトＩＬ−１７Ａの存在下および非存在下の両方で行ったこと以外は、上記のとおりに正確に行った。２０ｎＭ濃度を使用したのは、高濃度のＩＬ−１７Ａが、おそらく、この細胞株におけるＩＬ−６のＩＬ−１７Ａ誘導により、ＳＴＡＴ３誘導性ＳＥＡＰレポーター遺伝子の強力な活性化をもたらしたからである。要約すれば、ＨＥＫ  Ｂｌｕｅ  ＩＬ−６細胞を、種々の濃度のＦｙｎｏｍＡｂ  ＣＯＶＡ８０３またはＣＯＶＡ８０４の存在下で、ＩＬ−６（１５ｐＭ）で刺激した。阻害剤を、ＩＬ−６の添加前に、２０ｎＭのＩＬ−１７Ａの存在下または非存在下で３０分間、細胞と共にプレインキュベートした。ＣＯＶＡ８０３およびＣＯＶＡ８０４は、これらのＦｙｎｏｍＡｂが重鎖または軽鎖のいずれかに融合された同じフィノマーを含むために使用した。ＣＯＶＡ８０３およびＣＯＶＡ８０４を、ＩＬ−１７Ａの存在下または非存在下で、ＩＬ−６  シグナル伝達を阻止するそれらの能力についてトシリズマブ（所内で製造）と比較した。
【０２２５】
図１８および表９に示す通り、ＦｙｎｏｍＡｂおよびトシリズマブのＩＬ−６Ｒを仲介するシグナル伝達の阻止能力は、ＩＬ−１７Ａの存在に影響を受けなかった。同様のＩＣ５０値が、ＩＬ−１７Ａの存在下および非存在下で得られた。これらのデータは、ＦｙｎｏｍＡｂのフィノマー部分（親Ａｂの重鎖または軽鎖のいずれかに結合している）によるＩＬ−１７Ａの結合が、ＦｙｎｏｍＡｂのＩＬ−６Ｒと結合し、阻害する能力に影響を及ぼさないことを示唆している。
【０２２６】
【表１９】
0006345800.tif 000021
【０２２７】
実施例１１
フィノマーポリペプチドは、グリコシル化ヒトＩＬ−１７Ａに高親和性を有して結合する
本実施例は、ＩＬ−１７Ａ結合フィノマーポリペプチドの発現収量ならびにサイズ排除クロマトグラフィーおよび表面プラズモン共鳴試験によるこれらのポリペプチドの特徴付けを示す。
【０２２８】
親和性測定
親和性測定を、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ２００計器（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて行った。グリコシル化ＩＬ−１７Ａ（ＨＥＫ  ＥＢＮＡ細胞内で所内で製造）と単量体ＩＬ−１７Ａ結合フィノマーポリペプチドとの相互作用分析のために、シリーズＳ  ＣＭ５チップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、アミンカップリングキット（ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて固定化された２０００ＲＵ  ＩＬ−１７Ａと共に用いた。泳動バッファーは、０．０５％トゥイーン２０を含むＰＢＳであった。相互作用を、３０μｌ／分の流速および異なる濃度のＩＬ−１７Ａ結合フィノマーポリペプチドの注入で測定した。相互作用の全ての動態データを、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェアを用いて評価した。
【０２２９】
結合特性
結合特性を、選択されたＩＬ−１７Ａ結合フィノマーポリペプチドについての以下の解離定数（ＫＤ）を明らかにするＢＩＡｃｏｒｅチップ上のリアルタイム相互作用分析によって分析した。
【０２３０】
【表２０】
0006345800.tif 000022
【０２３１】
実施例１２
フィノマーポリペプチドは、グリコシル化ＩＬ−１７Ａを阻害する。
クローン１Ｌ３−Ｂ０９（配列番号１）およびＩＬ−１７Ａに最も高い結合親和性を有する５つのフィノマーポリペプチド（１１Ｌ０−Ｃ０６、１１Ｌ５−Ｂ０６、１１Ｌ６−Ｆ０３、１１Ｌ９−Ｃ０９、１１Ｌ１０−Ａ０５、配列番号２−６）を、それらのＩＬ−１７Ａ阻害能力について試験した。示したＩＬ−１７Ａ結合フィノマーポリペプチドの阻害活性を、種々の濃度のＩＬ−１７Ａ結合フィノマーポリペプチドの存在下または非存在下で、ヒト皮膚線維芽細胞を組み換えグリコシル化ＩＬ−１７Ａ（ＨＥＫ  ＥＢＮＡ細胞内で所内で製造）および組み換えＴＮＦα（Thermo Fisher Scientific）で刺激することにより試験した。細胞培養上清を、刺激の２４時間後に採取し、該上清中のＩＬ−６濃度をＥＬＩＳＡにより決定した。結果は、ＩＬ−１７Ａ結合フィノマーポリペプチドがグリコシル化ＩＬ−１７Ａを特異的に阻害できたことを示している。
【０２３２】
方法
エンドトキシン除去のために、タンパク質溶液をアクロディスクのムスタングＥメンブレン（ＶＷＲ）で３回濾過した。濾過後、タ阻害剤ＩＬ−１７Ａ結合フィノマーポリペプチドを含むンパク質溶液のエンドトキシンレベルは、Ｌｉｍｕｌｕｓ  ａｍｅｂｏｃｙｔｅ  ｌｙｓａｔｅ（ＬＡＬ）テスト（ＰＹＲＯＧＥＮＴ  Ｓｉｎｇｌｅ  ｔｅｓｔ  Ｇｅｌ  Ｃｌｏｔ  ＬＡＬ  アッセイ（Ｌｏｎｚａ））によって決定される通り、０．１ＥＵ／ｍｌ未満であった。約３９００個の正常ヒト皮膚線維芽細胞  （ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ、ＮＨＤＦ−ｃ、Ｃ１２３００）を含む１００μｌの細胞懸濁液を、１ウェル当たりに入れ（９６ウェルプレート、ＴＰＰまたはコーニング）、３７℃にて２４時間培養した（培地：線維芽細胞増殖培地Ｃ−２３０１０、ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ）。上清を吸引して除き、異なる濃度のＩＬ−１７Ａ結合フィノマーポリペプチドとＩＬ−１７ＡおよびＴＮＦαを含む培地（それぞれ終濃度１ｎｇ／ｍｌおよび５０ｐｇ／ｍｌ）とを混合後、１ウェル当たりに１００μｌの対応する溶液を添加した。対照として、ＰＢＳをＩＬ−１７Ａ／ＴＮＦαを含む培地（陽性対照＝“阻害剤なし”）および単一のサイトカインＩＬ−１７ＡまたはＴＮＦαのみを含む培地（後者は、“ＴＮＦα対照”ウェル）と混合した。陰性対照として、ＰＢＳを培地のみと混合した。比較のために、アッセイを非グリコシル化ＩＬ−１７Ａ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を同じ条件で用いて行った。３７℃にて２４時間インキュベーション後、上清をＥＬＩＳＡに入れ、ＩＬ−６濃度を決定するために、ＩＬ−６ＥＬＩＳＡキットを製造者の取扱説明書に従って用いて決定した（ＩＬ−６  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）。阻害割合をプロットし、ＩＣ５０値をＰｒｉｓｍ  ５ソフトウェアを用いて計算した。ＩＬ−１７Ａ阻害の割合を以下の式で求めた：
【表２１】
0006345800.tif 000023
【０２３３】
結果
正常ヒト皮膚線維芽細胞を、ＩＬ−１７Ａ／ＴＮＦαおよび異なる濃度の示したＩＬ−１７Ａ結合  フィノマーポリペプチドと共にインキュベートした。フィノマーポリペプチドは、グリコシル化ＩＬ−１７Ａを阻害することが明らかとなった。ＩＣ５０値を表１１に示す。
【０２３４】
【表２２】
0006345800.tif 000024
【０２３５】
グリコシル化および非グリコシル化ＩＬ−１７Ａの両方を阻害する示したＩＬ−１７Ａ結合フィノマーポリペプチドの用量依存的阻害曲線を図１９に示す。
【０２３６】
ＩＬ−１７Ａ結合フィノマーポリペプチドは、非グリコシル化ＩＬ−１７Ａと比較して同様の効力を有してグリコシル化ＩＬ−１７Ａを完全に阻害し得ることが見いだされた。これは、ＷＯ２０１１／０２３６８５に既報のＦｙｎ  ＳＨ３由来のＩＬ−１７Ａ結合ポリペプチドと比較して、有利な特性である。
【０２３７】
図２０は、ＷＯ２０１１／０２３６８５に記載のＦｙｎ  ＳＨ３由来のＩＬ−１７Ａ結合ポリペプチドの３つの例を示す。
【０２３８】
Ｆｙｎ  ＳＨ３由来のＩＬ−１７結合体２Ｃ１（ＷＯ２０１１／０２３６８５にて配列番号１０７）、Ｆｙｎ  ＳＨ３由来のＩＬ−１７結合体Ａ１＿２（ＷＯ２０１１／０２３６８５にて配列番号５３）およびＦｙｎ  ＳＨ３由来のＩＬ−１７結合体Ｂ１＿２（“Ｂ１”）（ＷＯ２０１１／０２３６８５にて配列番号３９）のいずれかは、高濃度であってもグリコシル化ＩＬ−１７Ａを完全に阻害せず、かつ／またはグリコシル化および非グリコシル化ＩＬ−１７Ａ間で阻害能力（ＩＣ５０値）に大きな差を示さない。
【０２３９】
実施例１３
実施例１３におけるデータは、ＷＯ２０１４／０４４７５８（ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０６９４８１）に記載されている。
【０２４０】
フィノマーポリペプチド１１Ｌ１１−Ａ０９は、グリコシル化ＩＬ−１７Ａを阻害する。
方法
フィノマー１１Ｌ１１−Ａ０９を、ＩＬ−１７Ａを阻害する能力について試験した。試験の条件は、他のフィノマーポリペプチドについて上記のものと同じであった。
【０２４１】
結果
正常ヒト皮膚線維芽細胞をＩＬ−１７Ａ／ＴＮＦαおよび異なる濃度のフィノマーポリペプチド１１Ｌ１１−Ａ０９と共にインキュベートした。１１Ｌ１１−Ａ０９は、グリコシル化ＩＬ−１７Ａを６６ｎＭのＩＣ５０値で阻害することが明らかとなった（表１２）。
【０２４２】
【表２３】
0006345800.tif 000025
【０２４３】
図２１は、フィノマーポリペプチド１１Ｌ１１−Ａ０９の用量依存的阻害曲線を示す。１１Ｌ１１−Ａ０９は、グリコシル化および非グリコシル化ＩＬ−１７Ａの両方を同等の効力および効果で阻害した。
【０２４４】
実施例１４
Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける薬物動態学的試験
ＣＯＶＡ８０１−８０８  ＦｙｎｏｍＡｂのランク付けをするために、８つすべてのＦｙｎｏｍＡｂの薬物動態学プロファイルをＣ５７ＢＬ／６マウスにおいて評価した。
【０２４５】
投与および採血
ＣＯＶＡ８０１、ＣＯＶＡ８０２、ＣＯＶＡ８０３、ＣＯＶＡ８０４、ＣＯＶＡ８０５、ＣＯＶＡ８０６、ＣＯＶＡ８０７、ＣＯＶＡ８０８で示されるＦｙｎｏｍＡｂおよびトシリズマブの薬物動態特性の決定を、単回の眼窩後部注射後の異なる時点で採取されたマウスの血清中の濃度をＥＬＩＳＡにより測定することにより行った。６週齢から８週齢の雌のＣ５６ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ＵＳＡ）に、個々の重量に基づいて１０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内注射した。各群は５匹のマウスから構成された。血液を、眼窩後部注射後３０分、６時間、２４時間、４８時間、９６時間、１４４時間、１９２時間、２４０時間、および２８８時間後に、静脈（尾静脈）から採取した。血液をclotting activator microvettes血液チューブ（ＣＢ３００、Ｓａｒｓｔｅｄｔ）に集め、血清を１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心して調製した。血清を分析まで−２０℃で貯蔵した。
【０２４６】
ＩＬ−６ＲおよびＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡ
試験したＦｙｎｏｍＡｂおよびトシリズマブの血清濃度を、固定化されたヒトＩＬ−１７アルファ（Cell signaling Technologies、８９２８ＢＦ）および組み換えヒトＩＬ−６Ｒアルファ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ。２２７−ＳＲ／ＣＦ）を用いてそれぞれ高結合Ｎｕｎｃ  ＥＬＩＳＡプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、４５６５３７）上でＥＬＩＳＡにより決定した。両方とも、ＰＢＳ中で一晩、４℃にて、５ｍｇ／ｍｌでコーティングされた。プレートをＰＢＳ＋０．０５％トゥイーン（ＰＢＳＴ）で洗浄し、ＰＢＳＴ中で１％に希釈したＢＳＡ（Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、３７５２５）で２時間ブロッキングした。各マウスおよび時間点について、血清の８００倍、４，０００倍および２０，０００倍希釈液を、ブロッカー希釈液（blocker diluent）に調製した。各ＦｙｎｏｍＡｂの対応する標準液を、２倍滴定値（４ｎＭ−０．０３１２５ｎＭ）の４ｎＭから開始するブロッカー希釈液での連続希釈液を作成して調製した。５０μｌの標準液（デュプリケート）および血清希釈液（トリプリケート）をプレートに添加し、ＲＴにて１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、５０μｌの、１：５，０００に希釈したペルオキシダーゼ−ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、１０９−０３５−００３）と共にＲＴにて１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄した。５０μｌのＴＭＢ液体基質（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｉｎｃ．、Ｔ０４４０−１Ｌ）を全てのウェルに添加した。プレートを３分間インキュベートし、５０μｌの停止液で反応停止させた。吸光度を４０５ｎＭで記録した（ＰＨＥＲＡｓｔａｒ  Ｐｌｕｓ）。
【０２４７】
データ分析
各マウスの血清濃度を、標準曲線および４パラメーターフィット分析（Ｘ値対数、Ｙ値線形）を用いて計算した。各時間点およびマウスについて、トリプリケートの平均血清濃度（ｎＭ）に対応する希釈率を掛けて、ｕｇ／ｍｌ濃度に変換した。標準偏差（ＳＴＤＥＶ）および％ＣＶ（変動係数）を、各時間点および３つの希釈率について計算した。最低％ＣＶおよび標準曲線の直線部分を示す最高値の１つの値を、各時間点の値として選択した。これらの値を薬物動態パラメーター分析に供した（Phoenix 64, WinNonlin 6.3）。半減期（時間）、曲線下面積（ＡＵＣ；ｈ＊ｕｇ／ｍｌ）、分布容積（Ｖｚ；ｍｌ）およびクリアランス（Ｃｌ；ｍｌ／時）を、非コンパートメントＰＫ分析、モデルタイプ：血漿（２００−２０２）、計算方法：線形台形  線形補間式を用いて計算した。各マウスについて標準曲線は、均一な重量計算およびベストフィットラムダＺ計算に基づき、回帰に少なくとも３データ点を必要とし、Ｃｍａｘは含まれなかった。
【０２４８】
結果
各ＦｙｎｏｍＡｂおよびトシリズマブの血清濃度および薬物動態パラメーターを、表１３−２１に示す。ＩＬ−６ＲおよびＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡの両方を、血清濃度およびＰＫパラメーターを計算するために用いたが、ＩＬ−６Ｒデータのみを本明細書に示す。しかしながら、同様の血清濃度およびＰＫパラメーターをＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡデータから決定した。したがって、２つの異なるＥＬＩＳＡ法についての血清濃度対時間曲線は、各ＦｙｎｏｍＡｂについて顕著によく似ている（図２２−２５参照）。このデータは、ＦｙｎｏｍＡｂがインビボで安定であり、そのＩＬ−６ＲおよびＩＬ−１７Ａの両方に結合する能力が保持されていることを示す。一般に、この薬物動態学試験の結果は、同じマウス系統における前のデータと一致している。
【０２４９】
表１３Ａおよび１３Ｂ：トシリズマブの血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。
【０２５０】
【表２４】
0006345800.tif 000026
【０２５１】
【表２５】
0006345800.tif 000027
【０２５２】
表１４Ａおよび１４Ｂ：ＣＯＶＡ８０１の血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。同様の血清濃度およびＰＫパラメーターを、ＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡから決定した。
【０２５３】
【表２６】
0006345800.tif 000028
【０２５４】
【表２７】
0006345800.tif 000029
【０２５５】
表１５Ａおよび１５Ｂ：ＣＯＶＡ８０２の血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。同様の血清濃度およびＰＫパラメーターを、ＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡから決定した。
【０２５６】
【表２８】
0006345800.tif 000030
【０２５７】
【表２９】
0006345800.tif 000031
【０２５８】
表１６Ａおよび１６Ｂ：ＣＯＶＡ８０３の血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。同様の血清濃度およびＰＫパラメーターを、ＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡから決定した。
【０２５９】
【表３０】
0006345800.tif 000032
【０２６０】
【表３１】
0006345800.tif 000033
【０２６１】
表１７Ａおよび１７Ｂ：ＣＯＶＡ８０４の血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。同様の血清濃度およびＰＫパラメーターを、ＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡから決定した。
【０２６２】
【表３２】
0006345800.tif 000034
【０２６３】
【表３３】
0006345800.tif 000035
【０２６４】
表１８Ａおよび１８Ｂ：ＣＯＶＡ８０５の血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。同様の血清濃度およびＰＫパラメーターを、ＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡから決定した。
【０２６５】
【表３４】
0006345800.tif 000036
【０２６６】
【表３５】
0006345800.tif 000037
【０２６７】
表１９Ａおよび１９Ｂ：ＣＯＶＡ８０６の血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。同様の血清濃度およびＰＫパラメーターを、ＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡから決定した。
【０２６８】
【表３６】
0006345800.tif 000038
【０２６９】
【表３７】
0006345800.tif 000039
【０２７０】
表２０Ａおよび２０Ｂ：ＣＯＶＡ８０７の血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。同様の血清濃度およびＰＫパラメーターを、ＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡから決定した。
【０２７１】
【表３８】
0006345800.tif 000040
【０２７２】
【表３９】
0006345800.tif 000041
【０２７３】
表２１Ａおよび２１Ｂ：ＣＯＶＡ８０８の血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。同様の血清濃度およびＰＫパラメーターを、ＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡから決定した。
【０２７４】
【表４０】
0006345800.tif 000042
【０２７５】
【表４１】
0006345800.tif 000043
【０２７６】
図２２は、ＣＯＶＡ８０１およびＣＯＶＡ８０２の経時平均血清濃度プロットを示す。
ＩＬ６ＲまたはＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡのいずれかにより決定されるように、平均血清濃度＋／−標準偏差（ＳＴＤＥＶ）は、ＣＯＶＡ８０１およびＣＯＶＡ８０２とコンパレータとしてのトシリズマブ（ＩＬ−６Ｒ  ＥＬＩＳＡ）について示す。
【０２７７】
図２３は、ＣＯＶＡ８０３およびＣＯＶＡ８０４の経時平均血清濃度プロットを示す。
ＩＬ６ＲまたはＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡのいずれかにより決定されるように、平均血清濃度＋／−標準偏差（ＳＴＤＥＶ）は、ＣＯＶＡ８０３およびＣＯＶＡ８０４とコンパレータとしてのトシリズマブ（ＩＬ−６Ｒ  ＥＬＩＳＡ）について示す。
【０２７８】
図２４は、ＣＯＶＡ８０５およびＣＯＶＡ８０６の経時平均血清濃度プロットを示す。
ＩＬ６ＲまたはＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡのいずれかにより決定されるように、平均血清濃度＋／−標準偏差（ＳＴＤＥＶ）は、ＣＯＶＡ８０５およびＣＯＶＡ８０６とコンパレータとしてのトシリズマブ（ＩＬ−６Ｒ  ＥＬＩＳＡ）について示す。
【０２７９】
図２５は、ＣＯＶＡ８０７およびＣＯＶＡ８０８の経時平均血清濃度プロットを示す。
ＩＬ６ＲまたはＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡのいずれかにより決定されるように、平均血清濃度＋／−標準偏差（ＳＴＤＥＶ）は、ＣＯＶＡ８０７およびＣＯＶＡ８０８とコンパレータとしてのトシリズマブ（ＩＬ−６Ｒ  ＥＬＩＳＡ）について示す。
【０２８０】
実施例１５
カニクイザルにおける薬物動態試験
投与、採血
ＣＯＶＡ８０１、ＣＯＶＡ８０２、ＣＯＶＡ８０３、ＣＯＶＡ８０４、ＣＯＶＡ８０６、ＣＯＶＡ８０８で示されるＦｙｎｏｍＡｂおよびトシリズマブの薬物動態特性の決定を、単回の静脈内注射後の異なる時間点で採取した、カニクイザル血清中のＥＬＩＳＡによる濃度測定により行った。オスおよびメスのサルに、個々の重量に基づいて、５ｍｇ／ｋｇ用量を静脈内注射した。各群は４匹のサルで構成された。静脈内注射後５分、３０分、２時間、６時間、２４時間、３日、４日、５日、７日、１０日、１３日、１７日、２２日および２７日に採血した。血液を任意の抗凝固剤を含まないチューブに集め、血清を１０，０００ｒｐｍで１−２分間遠心することにより調製した。血清を分析まで−８０℃にて貯蔵した。
【０２８１】
ＩＬ−６ＲおよびＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡ
試験ＦｙｎｏｍＡｂおよびトシリズマブの血清濃度を、マウスＰＫ試験について上記のものと同じプロトコルにしたがってＥＬＩＳＡにより決定した。
【０２８２】
データ分析
各サルの血清濃度を標準曲線および４パラメーターフィット分析（Ｘ値対数、Ｙ値線形）を用いて計算した。各時間点およびサルについて、デュプリケートの平均血清濃度（ｎＭ）に対応する希釈率を掛けて、ｕｇ／ｍｌ濃度に変換した。ＳＴＤＥＶおよび％ＣＶを、各時間点および３つの希釈率について計算した。最低％ＣＶおよび標準曲線の直線部分を示す最高値の１つの値を、各時間点の値として選択した。これらの値を薬物動態パラメーター分析に供した（Phoenix 64, WinNonlin 6.3）。半減期（時間）、曲線下面積（ＡＵＣ；ｈ＊ｕｇ／ｍｌ）、分布容積（Ｖｚ；ｍｌ）およびクリアランス（Ｃｌ；ｍｌ／時）を、非コンパートメントＰＫ分析、モデルタイプ：血漿（２００−２０２）、計算方法：線形台形  線形補間式を用いて計算した。各サルについて標準曲線は、均一な重量計算およびベストフィットラムダＺ計算に基づき、回帰に少なくとも３データ点を必要とし、Ｃｍａｘは含まれなかった。
【０２８３】
結果
各ＦｙｎｏｍＡｂおよびトシリズマブの血清濃度および薬物動態パラメーターを、表２２−２８に示す。ＩＬ−６ＲおよびＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡの両方を、血清濃度およびＰＫパラメーターを計算するために用いたが、ＩＬ−６Ｒデータのみを本明細書に示す。しかしながら、同様の血清濃度およびＰＫパラメーターをＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡデータから決定した。したがって、２つの異なるＥＬＩＳＡ法についての血清濃度対時間曲線は、各ＦｙｎｏｍＡｂについて顕著によく似ている（図２６−２９参照）。このデータは、ＦｙｎｏｍＡｂがインビボで安定であり、そのＩＬ−６ＲおよびＩＬ−１７Ａの両方に結合する能力が保持されていることを示す。
【０２８４】
一般に、ＦｙｎｏｍＡｂのいずれも循環系から迅速に排出されなかったとして、全てのＦｙｎｏｍＡｂが良好なＰＫプロファイルを示した。ＣＯＶＡ８０４は、トシリズマブと顕著に類似した最高のＡＵＣを有する最も好ましいＰＫプロファイルを有することが明らかとなった。
【０２８５】
表２２Ａ−２２Ｂ：カニクイザルにおけるトシリズマブの血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。
【０２８６】
【表４２】
0006345800.tif 000044
【０２８７】
【表４３】
0006345800.tif 000045
【０２８８】
表２３Ａ−２３Ｂ：カニクイザルにおけるＣＯＶＡ８０１の血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。同様の血清濃度およびＰＫパラメーターを、ＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡから決定した。
【０２８９】
【表４４】
0006345800.tif 000046
【０２９０】
【表４５】
0006345800.tif 000047
【０２９１】
表２４Ａ−２４Ｂ：カニクイザルにおけるＣＯＶＡ８０２の血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。同様の血清濃度およびＰＫパラメーターを、ＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡから決定した。
【０２９２】
【表４６】
0006345800.tif 000048
【０２９３】
【表４７】
0006345800.tif 000049
【０２９４】
表２５Ａ−２５Ｂ：カニクイザルにおけるＣＯＶＡ８０３の血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。同様の血清濃度およびＰＫパラメーターを、ＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡから決定した。
【０２９５】
【表４８】
0006345800.tif 000050
【０２９６】
【表４９】
0006345800.tif 000051
【０２９７】
表２６Ａ−２６Ｂ：カニクイザルにおけるＣＯＶＡ８０４の血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。同様の血清濃度およびＰＫパラメーターを、ＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡから決定した。
【０２９８】
【表５０】
0006345800.tif 000052
【０２９９】
【表５１】
0006345800.tif 000053
【０３００】
表２７Ａ−２７Ｂ：カニクイザルにおけるＣＯＶＡ８０６の血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。同様の血清濃度およびＰＫパラメーターを、ＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡから決定した。
【０３０１】
【表５２】
0006345800.tif 000054
【０３０２】
【表５３】
0006345800.tif 000055
【０３０３】
表２８Ａ−２８Ｂ：カニクイザルにおけるＣＯＶＡ８０８の血清濃度およびＰＫパラメーター。
Ａ）ＥＬＩＳＡにより決定された各時間点での血清濃度（ＩＬ−６Ｒ）を示す。平均値および標準偏差（ＳＴＤＥＶ）も示される。（Ｂ）半減期、分布容積（Ｖｚ）、クリアランス（Ｃｌ）および曲線下面積（ＡＵＣ）などの、重要な薬物動態パラメーターのまとめ。パラメーターは、Ａに示される血清濃度を用いて計算した。同様の血清濃度およびＰＫパラメーターを、ＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡから決定した。
【０３０４】
【表５４】
0006345800.tif 000056
【０３０５】
【表５５】
0006345800.tif 000057
【０３０６】
図２６は、カニクイザルにおけるＣＯＶＡ８０１およびＣＯＶＡ８０２の経時平均血清濃度プロットを示す。図２６において、ＩＬ６ＲまたはＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡのいずれかにより決定されるように、平均血清濃度＋／−標準偏差（ＳＴＤＥＶ）は、ＣＯＶＡ８０１およびＣＯＶＡ８０２とコンパレータとしてのトシリズマブ（ＩＬ−６Ｒ  ＥＬＩＳＡ）について示す。
【０３０７】
図２７は、カニクイザルにおけるＣＯＶＡ８０３およびＣＯＶＡ８０４の経時平均血清濃度プロットを示す。図２７において、ＩＬ６ＲまたはＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡのいずれかにより決定されるように、平均血清濃度＋／−標準偏差（ＳＴＤＥＶ）は、ＣＯＶＡ８０３およびＣＯＶＡ８０４とコンパレータとしてのトシリズマブ（ＩＬ−６Ｒ  ＥＬＩＳＡ）について示す。
【０３０８】
図２８は、カニクイザルにおけるＣＯＶＡ８０６の経時平均血清濃度プロットを示す。図２８において、ＩＬ６ＲまたはＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡのいずれかにより決定されるように、平均血清濃度＋／−標準偏差（ＳＴＤＥＶ）は、ＣＯＶＡ８０６とコンパレータとしてのトシリズマブ（ＩＬ−６Ｒ  ＥＬＩＳＡ）について示す。
【０３０９】
図２９は、カニクイザルにおけるＣＯＶＡ８０８の経時平均血清濃度プロットを示す。図２９において、ＩＬ６ＲまたはＩＬ−１７Ａ  ＥＬＩＳＡのいずれかにより決定されるように、平均血清濃度＋／−標準偏差（ＳＴＤＥＶ）は、ＣＯＶＡ８０８とコンパレータとしてのトシリズマブ（ＩＬ−６Ｒ  ＥＬＩＳＡ）について示す。
【０３１０】
実施例の概要
本明細書に記載されるデータは、８つ全てのＦｙｎｏｍＡｂが結合して、機能的にＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−６Ｒの両方を遮断し得ることを示している。８つ全てのコンストラクトは、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−６Ｒについて顕著に類似した親和性を有し、細胞ベースのアッセイにおいて類似の機能的活性を有し、そして軽鎖フィノマー融合体（ＦｙｎｏｍＡｂは、ＣＯＶＡ８０２、ＣＯＶＡ８０４、ＣＯＶＡ８０６およびＣＯＶＡ８０８として示す）は、良好なＳＥＣプロファイルを有し、かつ凝集する傾向が少なかった。
【図１】
0006345800.tif 000058
【図２Ａ】
0006345800.tif 000059
【図２Ｂ】
0006345800.tif 000060
【図２Ｃ】
0006345800.tif 000061
【図２Ｄ】
0006345800.tif 000062
【図３】
0006345800.tif 000063
【図４Ａ】
0006345800.tif 000064
【図４Ｂ】
0006345800.tif 000065
【図４Ｃ】
0006345800.tif 000066
【図４Ｄ】
0006345800.tif 000067
【図４Ｅ】
0006345800.tif 000068
【図４Ｆ】
0006345800.tif 000069
【図４Ｇ】
0006345800.tif 000070
【図４Ｈ】
0006345800.tif 000071
【図４Ｉ】
0006345800.tif 000072
【図４Ｊ】
0006345800.tif 000073
【図４Ｋ】
0006345800.tif 000074
【図４Ｌ】
0006345800.tif 000075
【図５】
0006345800.tif 000076
【図６Ａ】
0006345800.tif 000077
【図６Ｂ】
0006345800.tif 000078
【図６Ｃ】
0006345800.tif 000079
【図６Ｄ】
0006345800.tif 000080
【図６Ｅ】
0006345800.tif 000081
【図６Ｆ】
0006345800.tif 000082
【図６Ｇ】
0006345800.tif 000083
【図６Ｈ】
0006345800.tif 000084
【図６Ｉ】
0006345800.tif 000085
【図６Ｊ】
0006345800.tif 000086
【図６Ｋ】
0006345800.tif 000087
【図６Ｌ】
0006345800.tif 000088
【図７Ａ】
0006345800.tif 000089
【図７Ｂ】
0006345800.tif 000090
【図７Ｃ】
0006345800.tif 000091
【図７Ｄ】
0006345800.tif 000092
【図８Ａ】
0006345800.tif 000093
【図８Ｂ】
0006345800.tif 000094
【図８Ｃ】
0006345800.tif 000095
【図８Ｄ】
0006345800.tif 000096
【図９Ａ】
0006345800.tif 000097
【図９Ｂ】
0006345800.tif 000098
【図９Ｃ】
0006345800.tif 000099
【図１０Ａ】
0006345800.tif 000100
【図１０Ｂ】
0006345800.tif 000101
【図１０Ｃ】
0006345800.tif 000102
【図１０Ｄ】
0006345800.tif 000103
【図１０Ｅ】
0006345800.tif 000104
【図１０Ｆ】
0006345800.tif 000105
【図１０Ｇ】
0006345800.tif 000106
【図１０Ｈ】
0006345800.tif 000107
【図１０Ｉ】
0006345800.tif 000108
【図１１Ａ】
0006345800.tif 000109
【図１１Ｂ】
0006345800.tif 000110
【図１１Ｃ】
0006345800.tif 000111
【図１１Ｄ】
0006345800.tif 000112
【図１１Ｅ】
0006345800.tif 000113
【図１１Ｆ】
0006345800.tif 000114
【図１１Ｇ】
0006345800.tif 000115
【図１１Ｈ】
0006345800.tif 000116
【図１１Ｉ】
0006345800.tif 000117
【図１２Ａ】
0006345800.tif 000118
【図１２Ｂ】
0006345800.tif 000119
【図１２Ｃ】
0006345800.tif 000120
【図１３】
0006345800.tif 000121
【図１４Ａ】
0006345800.tif 000122
【図１４Ｂ】
0006345800.tif 000123
【図１４Ｃ】
0006345800.tif 000124
【図１４Ｄ】
0006345800.tif 000125
【図１４Ｅ】
0006345800.tif 000126
【図１４Ｆ】
0006345800.tif 000127
【図１４Ｇ】
0006345800.tif 000128
【図１４Ｈ】
0006345800.tif 000129
【図１５Ａ】
0006345800.tif 000130
【図１５Ｂ】
0006345800.tif 000131
【図１６Ａ】
0006345800.tif 000132
【図１６Ｂ】
0006345800.tif 000133
【図１６Ｃ】
0006345800.tif 000134
【図１６Ｄ】
0006345800.tif 000135
【図１６Ｅ】
0006345800.tif 000136
【図１６Ｆ】
0006345800.tif 000137
【図１６Ｇ】
0006345800.tif 000138
【図１６Ｈ】
0006345800.tif 000139
【図１６Ｉ】
0006345800.tif 000140
【図１６Ｊ】
0006345800.tif 000141
【図１６Ｋ】
0006345800.tif 000142
【図１６Ｌ】
0006345800.tif 000143
【図１６Ｍ】
0006345800.tif 000144
【図１６Ｎ】
0006345800.tif 000145
【図１６Ｏ】
0006345800.tif 000146
【図１６Ｐ】
0006345800.tif 000147
【図１７Ａ】
0006345800.tif 000148
【図１７Ｂ】
0006345800.tif 000149
【図１８Ａ】
0006345800.tif 000150
【図１８Ｂ】
0006345800.tif 000151
【図１８Ｃ】
0006345800.tif 000152
【図１９Ａ】
0006345800.tif 000153
【図１９Ｂ】
0006345800.tif 000154
【図１９Ｃ】
0006345800.tif 000155
【図１９Ｄ】
0006345800.tif 000156
【図１９Ｅ】
0006345800.tif 000157
【図１９Ｆ】
0006345800.tif 000158
【図２０】
0006345800.tif 000159
【図２１】
0006345800.tif 000160
【図２２】
0006345800.tif 000161
【図２３】
0006345800.tif 000162
【図２４】
0006345800.tif 000163
【図２５】
0006345800.tif 000164
【図２６】
0006345800.tif 000165
【図２７】
0006345800.tif 000166
【図２８】
0006345800.tif 000167
【図２９】
0006345800.tif 000168
【配列表】
0006345800000001.app