(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
上面および底面を有するフィルター膜と、
フレームであって、
前記フィルター膜に外接し、上方に延びる側壁であって、前記側壁の内部に形成された溝を備える前記側壁、および
前記フィルター膜の前記底面に隣接して配置される前記フレームの底面
を有する前記フレームと、
カバーであって、
中心部部分、および
下方に延びる側壁を有し、前記中心部分に外接するフランジであって、前記フレームの前記溝に嵌め合い係合するよう構成されたリップ部分を有する前記フランジ
を有する前記カバーと
を備え、
前記フィルター膜、フレームおよびカバーは、切片化のためにスライス可能である、前記生物学的フィルターシステム。
【請求項２】
前記中心部分は隆起した表面を有する、請求項１に記載の生物学的フィルターシステム。
【請求項３】
前記隆起した表面はドームである、請求項２に記載の生物学的フィルターシステム。
【請求項４】
前記隆起した表面は、前記フランジの平面の下に配置される先端を有するドームを有する、請求項３に記載の生物学的フィルターシステム。
【請求項５】
前記フレームの前記底面は、前記側壁間に垂直に延び、複数の孔を備える、請求項１に記載の生物学的フィルターシステム。
【請求項６】
前記カバーの側壁は複数のリブを備える、請求項１に記載の生物学的フィルターシステム。
【請求項７】
前記フレームの少なくとも一部は波状のピーク部および谷部を備える、請求項１に記載の生物学的フィルターシステム。
【請求項８】
前記フレームの少なくとも一部は平坦な表面を備える、請求項１に記載の生物学的フィルターシステム。
【請求項９】
前記フレームはワックスから構成される、請求項１に記載の生物学的フィルターシステム。
【請求項１０】
前記フランジは、前記フレームの前記溝と係合する前記リップ部分を有し、生体試料の収集後に該生体試料を保持する密封を形成する、請求項１に記載の生物学的フィルターシステム。
【請求項１１】
前記フレームは、底部における径方向内側に突出するリップを有して形成されている、請求項１に記載の生物学的フィルターシステム。
【請求項１２】
前記フィルター膜の前記底面は、前記フレームの前記底面と実質的に面一または同一平面である、請求項１に記載の生物学的フィルターシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年３月２９日出願の米国仮出願第６１／８０６，６６７号および２０１２年１１月２０日出願の米国仮出願第６１／７２８，６８２号に対する優先権を主張する。これらの内容は全体として本明細書に参考として組み込まれる。
【０００２】
開示される主題は、診断検査および処置のために細胞を調製するためのシステムおよび方法に関する。特に、開示される主題は、細胞ブロックを調製するための細胞ブロック装置および方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
医療は、侵襲性がより低く、より個人に合わせたものとなっている。例えば、肺または膵臓に腫瘤を持つ患者は、病変が腫瘍性であるか否かを明らかにするために、必ずしも手術を受けるわけではない。代わりに、ＣＴスキャンおよび／または超音波検査を用いて細い針を関心部位に局在させた後に、この細い針を用いて細胞を吸引することを伴う微細針吸引（ＦＮＡ）と呼ばれる方法によって、病変から微小な細胞の試料を収集する。ＦＮＡを行う際には、切開が行われることもなく、採血後の刺創と同様に生検部位が目立つこともなく、これにより、外来処置が可能となり、入院の必要性がなくなる。顕微鏡下で細胞を観察することにより、病理学者は、良性または悪性の診断を宣告する。かつては、治療選択肢が限られており、塗抹標本に対して行われる悪性の診断で十分であり、治療が引き続き行われた。最近では、補助検査により、腫瘍およびより効果的となる可能性の高い治療選択肢に関するより多くの情報が提供される。低侵襲的処置や個人に合わせた治療選択肢がより良い患者ケアを提供する一方で、さらに小さな組織試料に対してより高いレベルの情報を与えることが課題であり、これは、より重い負担を病理学者に課し、患者に影響を与えている。
【０００４】
関連する質問に答える補助検査は、細胞ブロック、可能であればＦＮＡ試料から形成された細胞ペレットに対して頻繁に行われる。検査室は、いくつかの「自家製」の方法の１つを頻繁に用いているが、現在のところ、細胞ブロックの調製に関する一般に認められた検査室規格は存在しない。大きな試料の場合は、細胞ブロックの形成は簡単であるが、より小さな試料の場合、「自家製」の方法では、失敗する、あるいは、最適ではない細胞ブロックが生じる可能性がある。したがって、治療決定に影響を及ぼす答えを臨床医に提供する、低コストで効率的に細胞ブロックを調製するための標準化された装置および方法を開発する必要性が高まっている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
開示される主題の目的および利点は、以下の記述に明記され、また以下の記述から明らかとなり、開示される主題の実施によっても理解されるであろう。開示される主題のさらなる利点は、明細書および特許請求の範囲に具体的に示された方法およびシステムによって、ならびに添付の図面から、実現され得られるであろう。
【０００６】
これらおよび他の利点を実現するために、本明細書に具体的に示し、大まかに記載するような開示される主題の目的によれば、開示される主題の一態様は、医療装置、例えば、細胞ブロック装置を含む。このような細胞ブロック装置は、生体試料（例えば、細胞組織、血液、および／または粘液）を収集し、凝集ペレットへと凝縮させ、それを任意の血清および固定液または分析を行うために細胞を保存するため添加した溶液から分離させるのに有用である。いくつかの実施形態では、医療装置は、上面および底面を有するフィルター膜と、フィルター膜に外接する上方に延びる側壁を有するフレームとを含む生物学的フィルターを備え、該側壁はその内部に配置されるチャネルを含む。フレームの底面はフィルター膜の底面付近に配置され、フィルター膜およびフレームは（例えば、複数のピースにスライスされて）切片化可能である。カバーは下方に延びる側壁および中心部分を有するフランジを有して提供され得、該中心部分はフランジの下に配置される先端を有する隆起した（例えば、ドームの）表面を有する。また、カバーフランジはリップ部分を備え、リップ部分はフレームチャネルと嵌め合い係合するように構成される。また、フレームの底面は複数の孔を備えることができる。いくつかの実施形態では、縁がワックスで構成され、波状のピーク部および谷部ならびに平坦な表面を備える。また、カバー側壁は複数の垂直リブを備える。
【０００７】
別の実施形態では、生物学的フィルターは、上面および底面を有する第１のフィルター膜と、上面および底面を有する第２のフィルター膜を備える。フレームはさらに、第１のフィルター膜および第２のフィルター膜に外接する上方に延びる側壁と、第１のフィルター膜の底面と実質的に同一平面に配置されたフレームの底面と、第２のフィルター膜の上面と実質的に同一平面に配置されたフレームの上面とを有して提供され、第１のフィルター膜および第２のフィルター膜ならびにフレームは切片化可能である。入口付近のフレーム側壁の内面にバルブが配置されるフレームの側壁に入口が配置される。バルブは閉位置に付勢される。
【０００８】
別の実施形態では、医療装置は、それらの間の内部空間を規定する近位端および遠位端を有する試料投入チャンバと、試料投入チャンバの遠位端に配置されるフィルター膜と、試料投入チャンバ内に配置され、閉位置に付勢されて試料投入チャンバとフィルター膜との間の流体連通を防ぐ、バルブステムとを備える。また、クランプが提供され、フィルター膜はクランプによって保持される。クランプは、少なくとも１つの孔を有する底面および側壁を備え、クランプは螺合により試料投入チャンバに取り付けられる。さらに、バルブステムは試料投入チャンバを超えて近位方向に延び、ばねを受容する孔を備える。ばねは試料投入チャンバの近位端を横切って延び、その側壁と係合する。さらに、バルブステムの近位端と係合してバルブを開き、試料投入チャンバとフィルター膜とを流体連通可能にするキャップが提供される。試料投入チャンバの遠位端は、閉位置にあるときにバルブステムが試料投入チャンバの側壁と嵌め合い係合するように、近位端よりも幅狭な開口部を有する。
【０００９】
また、装置またはその選択部品は使い捨てであり得るか、または繰り返し使用し洗浄するように設計され得る。
【００１０】
上記の概略的記述および以下の詳細な説明は両方とも例示的なものであり、特許請求される開示される主題のさらなる説明を行うことを意図したものであると理解すべきである。
【００１１】
本明細書に組み込まれ、本明細書の一部を構成する添付図面は、開示される主題の方法およびシステムを例示し、これらのさらなる理解をもたらすために含まれる。本明細書とともに図面は開示される主題の原理を説明するのに役立つ。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】開示される主題の例示的実施形態を示す概略図である。
【図２】図１の開示される主題の分解図を示す概略図である。
【図３】平面図視点からの、フィルター膜および基部部材を備えるフィルターアセンブリの概要図である。
【図４】開示される主題のフィルターアセンブリの一実施形態の概略図である。
【図５】開示される主題のフィルター膜の別の例示的実施形態の概略図である。
【図６】図５のベローズ付フィルター膜および基部部材を備えた、開示される主題のフィルターアセンブリの例示的実施形態の概略図である。
【図７】フィルター膜およびベローズ付基部部材を備えた、開示される主題のフィルターアセンブリの別の例示的実施形態の概略図である。
【図８Ａ】開示される主題に係るフィルターアセンブリおよび圧縮カバーの透視図を示す概略図である。
【図８Ｂ】開示される主題に係るフィルターアセンブリおよび圧縮カバーの透視図を示す概略図である。
【図８Ｃ】開示される主題に係るフィルターアセンブリおよび圧縮カバーの透視図を示す概略図である。
【図８Ｄ】開示される主題に係るフィルターアセンブリおよび圧縮カバーの透視図を示す概略図である。
【図９Ａ】開示される主題の代替的な例示的実施形態の分解図である。
【図９Ｂ】図９Ａの組立てた実施形態を示す概略図である。
【図９Ｃ】開示される主題の代替的な例示的実施形態の断面図である。
【図９Ｄ】図９Ｃの実施形態に係る管状部材の概略図である。
【図１０Ａ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の概略図である。
【図１０Ｂ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の概略図である。
【図１０Ｃ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の概略図である。
【図１０Ｄ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の概略図である。
【図１０Ｅ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の概略図である。
【図１０Ｆ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の概略図である。
【図１０Ｇ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の概略図である。
【図１０Ｈ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の概略図である。
【図１１Ａ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の概略図である。
【図１１Ｂ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の概略図である。
【図１１Ｃ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の概略図である。
【図１１Ｄ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の断面図である。
【図１２Ａ】開示される主題の代替的な例示的実施形態の分解図である。
【図１２Ｂ】図１２Ａの組立てた実施形態を示す概略図である。
【図１３Ａ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の断面図である。
【図１３Ｂ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の断面図である。
【図１３Ｃ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の断面図である。
【図１３Ｄ】開示される主題のフィルター膜の別の実施形態の断面図である。
【図１４Ａ】開示される主題の代替的な例示的実施形態の分解図である。
【図１４Ｂ】図１４Ａの組立てた実施形態を示す概略図である。
【図１４Ｃ】図１４Ｂの組立てた実施形態を示す断面図である。
【図１５】開示される主題のプロセスのフロー図である。
【図１６】開示される主題の代替的な例示的実施形態の分解図である。
【図１７Ａ】開示される主題の代替的な例示的実施形態の概略図である。
【図１７Ｂ】図１７Ａの組立てた実施形態を示す平面断面図である。
【図１７Ｃ】図１７Ａの組立てた実施形態を示す平面断面図である。
【図１７Ｄ】図１７Ａの組立てた実施形態を示す平面断面図である。
【図１８】開示される主題の代替的な例示的実施形態を示す概略図である。
【図１９Ａ】開示される主題の代替的な例示的実施形態の概略図である。
【図１９Ｂ】開示される主題の代替的な例示的実施形態の概略図であり、断面図の拡大図を示す。
【図２０Ａ】図１９Ａ〜Ｂの実施形態の概略図であり、分解図を示す。
【図２０Ｂ】図１９Ａ〜Ｂの実施形態の概略図であり、部分的に組立てた図を示す。
【図２０Ｃ】図１９Ａ〜Ｂの実施形態の概略図であり、部分的に組立てた図を示す。
【図２０Ｄ】図１９Ａ〜Ｂの実施形態の概略図であり、完全に組立てた図を示す。
【図２１】真空機構を描写する、開示される主題の代替的な例示的実施形態の概略図である。
【図２２】真空機構を描写する、開示される主題の代替的な例示的実施形態の概略図である。
【図２３Ａ】開示される主題の代替的な例示的実施形態の断面図である。
【図２３Ｂ】開示される主題の代替的な例示的実施形態の断面図である。
【図２４Ａ】閉鎖構成における開示される主題の例示的実施形態の１５ｍＬの試料保持チャンバの概略図である。
【図２４Ｂ】開放構成における開示される主題の例示的実施形態の１５ｍＬの試料保持チャンバの概略図である。
【図２５】開示される主題の例示的実施形態の濾過挿入物の概略図である。
【図２６】開示される主題の例示的実施形態に係る図２５のフィルター膜の保管用コンテナの概略図である。
【図２７Ａ】開示される主題の例示的実施形態に係る５０ｍＬチューブ内の、図２４Ａ〜Ｂの試料保持チャンバおよび図２５のフィルター膜のアセンブリの概略図である。
【図２７Ｂ】開示される主題の例示的実施形態に係る５０ｍＬチューブ内の、図２４Ａ〜Ｂの試料保持チャンバおよび図２５のフィルター膜のアセンブリの概略図である。
【図２７Ｃ】開示される主題の例示的実施形態に係る５０ｍＬチューブ内の、図２４Ａ〜Ｂの試料保持チャンバおよび図２５のフィルター膜のアセンブリの概略図である。
【図２７Ｄ】開示される主題の例示的実施形態に係る５０ｍＬチューブ内の、図２４Ａ〜Ｂの試料保持チャンバおよび図２５のフィルター膜のアセンブリの概略図である。
【図２７Ｅ】開示される主題の例示的実施形態に係る５０ｍＬチューブ内の、図２４Ａ〜Ｂの試料保持チャンバおよび図２５のフィルター膜のアセンブリの概略図である。
【図２７Ｆ】開示される主題の例示的実施形態に係る５０ｍＬチューブ内の、図２４Ａ〜Ｂの試料保持チャンバおよび図２５のフィルター膜のアセンブリの概略図である。
【図２８Ａ】開示される主題の例示的実施形態に係る５０ｍＬチューブ内の、図２４Ａ〜Ｂの試料保持チャンバおよび図２５のフィルター膜のアセンブリの概略図である。
【図２８Ｂ】開示される主題の例示的実施形態に係る５０ｍＬチューブ内の、図２４Ａ〜Ｂの試料保持チャンバおよび図２５のフィルター膜のアセンブリの概略図である。
【図２８Ｃ】開示される主題の例示的実施形態に係る５０ｍＬチューブ内の、図２４Ａ〜Ｂの試料保持チャンバおよび図２５のフィルター膜のアセンブリの概略図である。
【図２８Ｄ】開示される主題の例示的実施形態に係る５０ｍＬチューブ内の、図２４Ａ〜Ｂの試料保持チャンバおよび図２５のフィルター膜のアセンブリの概略図である。
【図２８Ｅ】開示される主題の例示的実施形態に係る５０ｍＬチューブ内の、図２４Ａ〜Ｂの試料保持チャンバおよび図２５のフィルター膜のアセンブリの概略図である。
【図２９】開示される主題の代替的な例示的実施形態の分解部品図である。
【図３０Ａ】図２９の部品のアセンブリの種々の段階の概略図である。
【図３０Ｂ】図２９の部品のアセンブリの種々の段階の概略図である。
【図３０Ｃ】図２９の部品のアセンブリの種々の段階の概略図である。
【図３１Ａ】開示される主題に係る図３０Ｃの実施形態の種々の濾過段階の概略図である。
【図３１Ｂ】開示される主題に係る図３０Ｃの実施形態の種々の濾過段階の概略図である。
【図３１Ｃ】開示される主題に係る図３０Ｃの実施形態の種々の濾過段階の概略図である。
【図３１Ｄ】開示される主題に係る図３０Ｃの実施形態の種々の濾過段階の概略図である。
【図３２】開示される主題の例示的実施形態に係るフィルター膜の保管用コンテナの分解部品図である。
【図３３Ａ】開示される主題に係る図３２のフィルター膜の種々の処理段階の概略図である。
【図３３Ｂ】開示される主題に係る図３２のフィルター膜の種々の処理段階の概略図である。
【図３３Ｃ】開示される主題に係る図３２のフィルター膜の種々の処理段階の概略図である。
【図３３Ｄ】開示される主題に係る図３２のフィルター膜の種々の処理段階の概略図である。
【図３４】図３２の組立てた保管用コンテナの断面図である。
【図３５Ａ】開示される主題に係る図３２のフィルター膜の種々の包埋段階の概略図である。
【図３５Ｂ】開示される主題に係る図３２のフィルター膜の種々の包埋段階の概略図である。
【図３５Ｃ】開示される主題に係る図３２のフィルター膜の種々の包埋段階の概略図である。
【図３５Ｄ】開示される主題に係る図３２のフィルター膜の種々の包埋段階の概略図である。
【図３６Ａ】開示される主題に係る図３２のフィルター膜の種々の切片化段階の概略図である。
【図３６Ｂ】開示される主題に係る図３２のフィルター膜の種々の切片化段階の概略図である。
【図３６Ｃ】開示される主題に係る図３２のフィルター膜の種々の切片化段階の概略図である。
【図３６Ｄ】開示される主題に係る図３２のフィルター膜の種々の切片化段階の概略図である。
【図３６Ｅ】開示される主題に係る図３２のフィルター膜の種々の切片化段階の概略図である。
【図３６Ｆ】開示される主題に係る図３２のフィルター膜の種々の切片化段階の概略図である。
【図３７Ａ】開示される主題の代替的クランピングキャップの実施形態の概略拡大図である。
【図３７Ｂ】開示される主題の代替的クランピングキャップの実施形態の概略拡大図である。
【図３８】開示される主題の代替的クランピングキャップの実施形態の概略拡大図である。
【図３９Ａ】開示される主題の代替的クランピングキャップの実施形態の概略拡大図である。
【図３９Ｂ】開示される主題の代替的クランピングキャップの実施形態の概略拡大図である。
【図４０】開示される主題の代替的チューブの実施形態の概略拡大図である。
【図４１】開示される主題に係る濾過後キャップの実施形態の概略分解部品図である。
【図４２Ａ】図４１の濾過後キャップの概略図である。
【図４２Ｂ】図４１の濾過後キャップの概略図である。
【図４３Ａ】開示される主題の代替的な濾過後キャップの実施形態の概略図である。
【図４３Ｂ】開示される主題の代替的な濾過後キャップの実施形態の概略図である。
【図４４】開示される主題に係るフィルター膜およびカバーの別の実施形態の概略的分解部品図である。
【図４５】開示される主題に係るフィルター膜およびカバーの別の実施形態の概略的分解部品図である。
【図４５Ａ】図４５のフィルター膜およびカバーの断面分解図である。
【図４６】図４５の組立てたフィルター膜およびカバーの組立図である。
【図４６Ａ】図４５の組立てたフィルター膜およびカバーの断面図である。
【図４７】開示される主題に係るフィルター膜の代替的実施形態である。
【図４８】開示される主題に係るフィルター膜の代替的実施形態である。
【図４９】開示される主題に係るフィルター膜の代替的実施形態である。
【図５０】開示される主題に係るフィルター膜の代替的実施形態である。
【図５１】開示される主題に係るフィルター膜の代替的実施形態である。
【図５１Ａ】開示される主題に係るフィルター膜の代替的実施形態である。
【図５２】開示される主題に係る濾過アセンブリの別の実施形態である。
【図５３】図５２の実施形態の断面図である。
【図５３Ａ】図５２の実施形態の断面図である。
【図５３Ｂ】図５２の実施形態の断面図である。
【図５４】開示される主題に係るクランプ部品の概略図である。
【図５５】開示される主題に係る濾過アセンブリの追加の実施形態である。
【図５６】開示される主題に係る濾過アセンブリの追加の実施形態である。
【図５６Ａ】開示される主題に係る濾過アセンブリの追加の実施形態である。
【図５７】開示される主題に係るカバー部材の追加の実施形態である。
【図５８】開示される主題に係るカバー部材の追加の実施形態である。
【図５９】開示される主題に係る濾過アセンブリの追加の実施形態である。
【図６０】開示される主題に係るフィルター膜の追加の実施形態である。
【図６１】開示される主題に係るフィルター膜の追加の実施形態である。
【図６１Ａ】図６０の実施形態の断面図である。
【図６２】開示される主題の例示的実施形態に係るフィルター膜の保管用コンテナの概略図である。
【図６２Ａ】図６２の実施形態の断面図である。
【図６３】図６２の実施形態に係るフィルター膜の概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
ここで開示される主題の選択実施形態に詳細に言及するが、これらの例は添付の図面に示される。開示される主題の方法および対応する工程をシステムの詳細な説明と併せて記述する。
【００１４】
開示される主題のさまざまな実施形態によると、上述にまとめられ、またさらに下記に説明されるように、生体試料の細胞から液体成分または固体粒子成分を収集し分離する装置が提供される。本明細書に開示される例示的実施形態は微細針吸引を包含するが、開示される主題の装置および方法はこの例示的実施形態に限定されておらず、任意の体液または試料の収集および分離のために利用可能であるように当業者に理解されるであろう。一例示的実施形態において、使い捨て細胞ブロック装置ならびに、例えば腫瘍診断、良性診断、および研究開発分析を含む他の補助検査のためにこの装置を使用する方法が提供される。本明細書で使用する場合、用語「細胞ブロック」とは、パラフィンワックスなどであるがこれに限定されない媒質に包埋される生体試料の細胞または固体粒子の凝縮を意味する。細胞が包埋された媒質の薄切片が、細胞ブロックのフィルター膜からスライスまたは切片化されて顕微鏡での分析のためにスライドガラスにマウントするか、または他の分析のために細胞ブロックからスライスされる。例えば、細胞および細胞外環境の可視化により、収集した細胞が良性か悪性かを決定するための情報が提供され得る。あるいは、スライスにより微小細胞分析のための細胞物質（ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質）が提供される。本明細書に開示される特定の実施形態は、さらなる診断／検査のための生体試料中の組織または固体粒子成分の収集を中心とするが、開示される装置および方法は、生体試料の流体成分がさらなる診断／検査の対象となる適用例にも等しく適用可能であることが当業者には理解されるであろう。
【００１５】
一例示的実施形態では、装置は図１に概略的に示されている細胞ブロック装置１００として構成される。細胞ブロック装置１００は細長管状体１１０およびフィルターアセンブリ１２０を備える。細長管状体１１０は近位端１１２および遠位端１１４を有する。いくつかの実施形態において、細長管状体１１０は、近位端にて第１の直径（ｄ１）および遠位端にて第２の直径（ｄ２）を有し、第２の直径は第１の直径よりも小さい。細長管状体１１０の近位端１１２と遠位端１１４との間に配置された区画１１８は、細長管状体１１０の概ね円錐形の遠位区画を規定するように、その長さに沿って小さくなる直径を有する。いくつかの実施形態では、細長管状体が１１８にて直径の段または急な絞りを含むように、ゆるやかではないテーパを提供され得る。種々の好適な容積が細長管状体１１０には使用可能である。限定しないが例示のため、好適な容積としては、約１５ｍｌ〜約５０ｍｌまたは標準もしくは他の遠心分離器に嵌まる任意の他のサイズが挙げられる。しかし、当業者には、別のサイズが開示される主題の範囲内であると理解されるであろう。細長管状体は従来の遠心分離器に嵌まるようにサイズ決めされる。このようにして、細胞ブロック装置は、例えば微細針吸引技法により得た生体試料を収容する針から生体試料を受け取ることができ、生体試料中の細胞をいかなる液体からも分離して、遠心分離によって細胞を単離し固めて凝縮ペレットにするために、遠心分離器内に配置され得る。生体試料を受容し、生体試料を各成分部分に分離するのに同じユニットを使用することによって、試料サイズの損失が低減され、複数成分のやりとりによる汚染リスクを低減する。いくつかの実施形態においては、細長管状体は、約１，２００〜約１６，０００ＲＣＦの相対遠心力に好適である。例えば、１２，０００ＲＣＦ、１，２００ＲＣＦ、１６，０００ＲＣＦ、２，０００ＲＣＦ、９，４００ＲＣＦ、７，５００ＲＣＦである。さらなる例示として、一実施形態では、細長管状部材は、容積が１５ｍｌであり、１，２００ＲＣＦまたは１２，０００ＲＣＦでの遠心分離に適している。他の実施形態では、例えば、細長管状部材は、容積が５０ｍｌであり、１６，０００ＲＣＦまたは２，０００ＲＣＦまたは９，４００ＲＣＦでの遠心分離に適している。デバイスの細長管状体は、さまざまな材料、特にさまざまなポリマー、例えば、ポリプロピレンおよび／またはポリスチレンから形成することができる。さらに、細長管状体、フィルターアセンブリまたは後述する圧縮カバーに使用する材料は生分解性材料であることができる。
【００１６】
図２を参照すると、細長管状体１１０は本体の近位端に開口部１１３を規定する。いくつかの実施形態では、開口部１１３は蓋１３０により閉鎖される。蓋は、細長管状体１１０の近位区画に配置されるねじ山１１６に係合するように、ねじ山（図示せず）を有して構成され得る。しかし、当業者に理解されるように、その他の好適な方法および特徴、例えば締まり嵌めまたは他の係合方法を使用して、蓋１３０と細長管状体１１０を係合することができる。一実施形態では、蓋は自己密封または再密封可能材料から形成されるストッパであることができる。この関連で、蓋１３０は、針により穴を開けられて、針から細長管状体内部へ生体試料を移すことができる。生体試料が入れられ針を蓋１３０から取り除いた後、材料は針を入れたことによって作られた穴を自己密封する。図２に示す例示的実施形態では、構造体は、細長管状体１１０の最遠位端１１６にフィルターアセンブリ１２０が係合できるように構成される。一実施形態では、くびれ部１１６の材料は厚くなった壁を有し、フィルターアセンブリ１２０がしっかりと細長管状部材１１０に係合できるようにする。また、くびれ部１１６の外側表面は、１つのねじ山または複数のねじ山を有して構成されて、基部部材１２４が細長管状体１１０にしっかり係合できるようにする。
【００１７】
いくつかの実施形態では、細長管状体には固定液が予め充填されている。本明細書で使用する場合、「固定液」とは、化合物、例えば、細胞保存用のホルマリン、エタノール、メタノール、ＲＰＭＩ、生理食塩水を意味する。
【００１８】
図３を参照すると、主題に係るフィルターアセンブリ１２０の平面図が提供される。例示的実施形態において、フィルターアセンブリ１２０は非多孔性部材等の基部部材１２４および基部部材の本体内に配置されるフィルター膜１２２を備える。したがって、一実施形態では、フィルターアセンブリは取り外し可能である。また、フィルター膜１２２およびその縁（またはフレーム）を含むフィルターアセンブリ全体は、スライドガラスにマウントして顕微鏡で分析するかまたは微小細胞（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡおよび／またはタンパク質）分析等の他の分析をするために、分割可能である、すなわち、断片または「区画」にカットまたはスライスできる。図４に示すように、フィルター膜１２２は、基部部材１２４により規定される内部空間に滑り込むことができるように、基部部材１２４より十分小さくなるようにサイズ決めされる。いくつかの実施形態では、フィルター膜は、パラフィン、パラホルム、プラスチック、ゴムまたは発泡体から形成される側壁を含む。図１に示される例示的実施形態に戻ると、フィルターアセンブリ１２０は細長管状部材の遠位端と結合または連結する。この点において、基部部材１２４はねじ山または他のいくつかの係合部材を有して構成されて細長管状体１１０の遠位部分と係合でき、フィルター膜１２２部材は細長管状部材の遠位端と、例えば締まり嵌めにより係合するようにサイズ決めされ得る。フィルター膜と細長管状体の内面との係合により、フィルター膜周辺部周りの漏れを防ぐ密封が提供される。したがって、細長管状体の遠位部分内のいかなる流体も、フィルター膜をまず通過しこれにより濾過されねばならない。したがって、この例示的実施形態では、フィルター膜１２２は細長部材の遠位部分（例えば、くびれ部）により摺動可能に受容され得る。フィルターアセンブリ１２０は細長管状体から着脱可能である。下記で詳細に記述されるように、取り外されたフィルターアセンブリ１２０およびその内容物は、圧縮カバー２００によって封入可能である（図８に図示の通り）。
【００１９】
フィルター膜１２２は生体試料の細胞または細胞成分を維持するのに十分であるが、液体および固定液は通過するような孔度である。いくつかの実施形態では、液体は固定液である。しかし、その他の実施形態では、液体および固定液は混合物であってもよい。例示のため、限定はしないが、いくつかの実施形態では、フィルター膜１２２は約０．４μｍ〜約５μｍの細孔を有する。細孔密度は約１×１０８〜約６×１０５細孔／ｃｍ２であることができる。したがって、いくつかの実施形態では、フィルター膜は５．０μｍの孔度および６×１０５細孔／ｃｍ２の細孔密度を有する。その他の実施形態では、フィルター膜は５．０μｍの孔度および１×１０８の細孔密度を有する。しかし、好適な孔度および細孔密度は捕捉標的となる細胞に応じて選択できる。いくつかの実施形態では、フィルター膜は約９〜約１００μｍ、例えば１７μｍの厚さを有する。特定の範囲が例示目的のため与えられるが、当業者には、別のサイズが開示される主題の範囲内であると理解されるであろう。好適な材料を使用して、フィルター膜を形成することができる。例えば、一実施形態では、フィルター膜はポリエチレンテレフタレートから形成される。
【００２０】
図４に示すように、フィルター膜１２２は平面状底面１２６と、平面状底面１２６周辺部周りに上方に延びる壁１２８とを有する。いくつかの実施形態では、上方に延びる壁は平坦な表面を有し得る。あるいは、図５に概略的に示すように、フィルター膜２２２は、１つまたは複数のベローズ２２９または複数のねじ山を有する上方に延びる壁２２８を含むことができる。代替的実施形態では、図７に概略的に図示されているように、フィルターアセンブリ３２０は、ベローズを備えた上方に延びる壁を有する基部部材３２４と、平面状側壁を有するフィルター膜３２２とを含むことができる。いくつかの実施形態では、ベローズにより、基部部材またはフィルター膜が試料サイズに適応する能力が提供される。ベローズ付側壁は細胞を圧縮してタブレットにし、これによりさらに細胞の均一な分布が容易になる。例えば、場合によっては、試料が小さいほど、圧縮ペレットを形成するためにベローズが大きく広がる。フィルター膜および基部部材により、固定および処理のために必須である流体は基部部材内に入れられるが細胞は通過させない。したがって、細胞はフィルター膜に残る。
【００２１】
例示的実施形態のフィルターアセンブリは２つの別個の部材（すなわち、フィルター膜および基部部材）として図示されているが、別の構成（例えば、一体形成された一体型フィルターアセンブリ）が開示される主題の範囲内であると当業者には理解されるであろう。
【００２２】
組み合わせた細胞がパラフィンに包埋され、診断および補助検査のために、フィルターアセンブリ内またはこれとは別個にスライスにカットされる。換言すれば、フィルター膜の構造特性により、刃は膜および基部部材が裂けたり剥離したりすることなく膜および基部部材をスライスできるため、膜内または膜に保持されたペレットを汚染するかまたは傷つけることがある不必要な破片が出ない。また、フィルターアセンブリはその形態および配向標識（下記でさらに詳細に記述される）を維持する十分な剛性を有するが、切刃を傷つけないように十分に展性かつ可撓性である。
【００２３】
このように、ここで開示される主題は、細胞ブロックを調製する方法を提供する。この方法では、従来技術のもとでの８回の移送を含む種々の処置工程中に起こり得る粒子損失および相互汚染のリスクをなくすために、フィルターアセンブリは処理中ずっと検体とともにある。また、開示される主題は試料を処理する標準化技術を提供する。この技術によって病理学的評価に対するより高い一貫性および精度が得られる。いくつかの実施形態では、本方法は、生体試料を本明細書に記載されている細胞ブロック装置に導入することを含む。生体試料が入った細胞ブロック装置は遠心分離器内に配置され、生体試料を十分な時間遠心分離して細胞または組織を液体成分から分離し、ペレットを形成する。再び、例示のため限定はしないが、生体試料は、約１，２００〜約１６，０００ＲＣＦの相対遠心力で約５〜１０分間、または収集した生体試料の性質および量に応じてそれ以上の時間遠心分離することができる。特定の範囲が例示目的のため与えられるが、当業者には、別の遠心分離時間も開示される主題の範囲内であると理解されるであろう。
【００２４】
その後、ペレットを、例えばカセットにて処理するが、任意の別の好適なハウジングが利用可能である。カセットをホルマリンに入れて組織処理装置内に配置し、複数の工程（いかなる水溶液も除去する脱水、その後の脱水剤除去、最後にパラフィン等の包埋剤による浸潤を含む）を通して処理する。細胞ペレットの処理時間は組織処理装置により異なる。一実施形態では、処理時間は約３時間未満である。次に、処理済みペレットは媒質に包埋され細胞ブロックを形成する。媒質は例えば、パラフィン、パラホルム等であることができる。種々の材料が包埋工程にて使用可能である。
【００２５】
開示される主題の別の態様によると、バッチ処理を介して約３時間未満で複数の細胞ブロックを同時に形成することができる。かかるバッチ処理用途では、複数の細胞ブロック装置（各々が内部空間を有する細長管状体を備える）が、細長管状体の内部空間と連通して配置される、対応する着脱可能なフィルターアセンブリと連結される。前述したように、いくつかの実施形態では、フィルターアセンブリは、細長管状体の遠位端と係合するように構成される基部部材と、約０．４μｍ〜約１０．０μｍの孔度を有する膜とを備える。例示的範囲が例示を目的として提供されるが、当業者には、別のサイズが開示される主題の範囲内であると理解されるであろう。同じであるかまたは異なる複数の生体試料を細胞ブロック装置内に導入することができる。細長管状体は相互に連結されるかまたは別個のユニットであり得る。細長管状体は各々、細胞ブロック装置の複数の細長管状体を受容するために複数のレセプタクルを有して構成されている遠心分離装置に十分に収まるようにサイズ決めされる。遠心分離サイクルが完了すると、各細胞ブロック装置内の生体試料は、個々の処理または複数の細胞ブロックへの包埋の準備が整った細胞ペレットを形成する。したがって、本明細書に開示される方法は細胞ブロックのアレイを得ることができる。
【００２６】
主題の別の態様によると、本明細書に開示される装置およびシステムは、キットかまたはユニットとして機能するように設計された別個の構成要素の集合体として構成され得る。キットは、限定されることはないが微細吸引針等の針と、上記の細胞ブロック装置とを含む。いくつかの実施形態では、細長管状部材には固定液が予め充填されている。キットは、第２の交換可能なフィルターアセンブリを備えてもよい。図６を参照すると、第２のフィルターアセンブリ２２０は、基部部材２２４と、平面状底面およびフィルター膜の平面状底面から上方に延びる壁を有するフィルター膜２２２とを備えていてもよい。上方に延びる壁は、１つまたは複数のベローズ２２９または複数のねじ山を有してもよい。別の実施形態では、大量の液体または血液と関係しない試料用の１つまたは複数のフィルターアセンブリを提供するキットが提供される。次に、フィルターアセンブリに密封された組織は、ＦＮＡまたは生検を行う臨床医のために、ホルマリンのコンテナ内に配置してもよい。このような場合には、例えば、検体は管状構造体内で遠心分離される必要はない。代わりに、検体をフィルターアセンブリ内に包埋し、直接組織学を受けさせてもよい。
【００２７】
さらに別の実施形態では、図８Ａおよび図８Ｂに示すように、圧縮カバー４００を備えたフィルターアセンブリ１２０（上記のような）が提供される。図８Ａに示すように、フィルターアセンブリ１２０は、組織試料３１０を含み得る。圧縮カバー４００は、フィルターアセンブリ１２０内に配置され、内容物が密封状態で封入されるように、フィルターアセンブリを閉じることができる。この点で、圧縮カバーは、キャップとして機能する平面状上面４１０を備えて構成されてもよい。圧縮カバー４００は、平面状底面および側壁４１２を備える。図示されるように、側壁４１２は、収縮および拡張可能な複数のベローズ４３０を備えていてもよい。収縮状態（図８Ｂに示す）では、フィルターアセンブリ１２０内に入れられた試料３１０に対して圧縮力が作用する。圧縮力の発生を促進する上記の構造的特徴に加えて、またはその代わりに、カバーは、収集した試料およびフィルター膜に作用する圧縮力を向上させる固有の圧縮および拡張特性を持つエラストマー材料から形成されてもよい。試料３１０に対する圧力の付与により、試料が凝縮し、拘束される。加えて、圧縮カバーは、細胞の均一な分布を促進し、パラフィンが試料３１０に浸透することにも役立ち、これにより、組織試料の細胞の包埋が改善される。さらに、圧縮カバー４００は、外的環境からフィルターアセンブリを隔絶することにより、収集した組織試料の完全性を維持する役目を果たす。
【００２８】
圧縮カバーは、フィルターアセンブリのフィルター膜材料と同じフィルター膜材料から形成された平面を有し得る。例えば、ある実施形態では、圧縮カバーは、フィルターアセンブリ１２０のフィルター膜１２２と同様の細孔サイズ、厚さおよび密度であり得るフィルター膜によって覆われている。別の例では、圧縮カバーは、約０．４μｍ〜約１０．０μｍの孔度を持つ平面を有する。例示的範囲が例示を目的として提供されるが、当業者には、別のサイズが開示される主題の範囲内であると理解されるであろう。圧縮カバーの使用は、組織を凝縮させ、余分な液体を除去し、すべての細胞を包含させるためのより複雑な器具や処理（例えば、油圧式、真空式、および空気圧式レギュレータ）の必要性を排除する点で有利である。
【００２９】
図８Ａ〜図８Ｂは、概ね円形の圧縮カバーを図示しているが、所望であれば、ボウル形（図８Ｃ）または楕円ディスク形（図８Ｄ）等の別の形状を用いてもよい。同様に、代替的実施形態では、収集した試料にあるパターンまたは不均一な分布をカバーが与えられるように非平面の底面または上面を有するカバー、ならびにフィルター膜とは異なる直径を有するカバーを備えることができる。また、カバーは、フィルター膜上に試料を係止させるかまたは保持するために、フィルターアセンブリ上の対応する構造と係合する保持機構（例えば、ラッチ、さね継ぎ等）を備えることができる。このような封入は、収集した試料を破片が汚染することを防止し、所望であれば収集した試料の保管および／または輸送を容易にする点で有利である。
【００３０】
フィルターアセンブリ１２０および圧縮カバー４００は共に、例えば生検等の非ＦＮＡ検体に使用することができる。例えば、検体は、臨床医が患者から組織を除去した際に直接フィルターアセンブリ内に配置してもよい（後で病理検査室の職員が取り扱えるようにホルマリンの瓶に組織の遊離した断片を配置する代わりに）。このような適用は、（１）組織を複数回移動させて取り扱う場合に起こり得る相互汚染の危険性を排除し、（２）複数回の移動による微小な組織断片の損失を排除し、（３）例えば検体が不注意で発見されなかったために、検体をホルマリンの瓶内に置き去りにしてしまうことを防止する点で有利である。典型的には、組織試料は、顕微鏡検査のためにカットされる準備が整うまでに、異なる媒質および／またはコンテナから複数回移動される。本明細書に開示のフィルターアセンブリおよび圧縮カバーは、このような手順の欠点を克服するように機能する。
【００３１】
別の実施形態例では、図９Ａ〜図９Ｂに描写するように、細長管状体は、複数のピース５１０ａ、５１０ｂから構成されてもよく、フィルター膜５２２は、ピース５１０ａと５１０ｂとの間、例えば組立てた細長管状体の中間点に配置されてもよい。以下に開示する例示的実施形態ではフィルター膜のみに具体的に言及する場合があるが、所望であれば、カバーおよびフィルター膜を有する基部部材を含めることが、開示される主題の範囲内にあることを理解されたい。図９Ａ〜図９Ｂのこの例示的実施形態では、フィルター膜５２２は、２つの管状部分５１０ａと５１０ｂとの間にクランプされ、遠心分離中に液体が５１０ａから５１０ｂへと通過する際に粒子状物質を捕捉する。下側の管状部材５１０ｂは、上端に近接して、内部にフィルター膜５２２を収納するためのリップまたは凹部を有して構成されてもよい。あるいは、上側の管状部材５１０ａは、内部にフィルター膜５２２を収納するシェルフまたはフランジ（以下にさらに詳細に説明する）等の支持部材を有して構成されてもよい。フィルター膜を管状体の中間点に位置付けることは、このような構成により、フィルター膜の上部に配置されたリザーバがフィルター膜の下部のリザーバと等しいサイズを有し、したがって、同量の流体を各リザーバに収容することができる点で有利である。しかしながら、管状部分５１０ａまたは５１０ｂの上部または底部に近い別の場所にフィルター膜を配置してもよく、これは開示された主題の範囲内である。
【００３２】
細長管状ピース５１０ａ、５１０ｂは、例えば、締まり嵌め、またはそれぞれの内側壁と外側壁との螺合によって取り付けられてもよい。図９Ａ〜図９Ｂに図示した例示的実施形態は、上側の管状部材５１０ａを雄型部品とし、下側の管状部材５１０Ｂを雌型部品として描写しているが、これらの構成は所望であれば逆でもよい。加えて、または代替的に、管状部材は、等しい内径および外径を有して形成され、任意の好適なデバイス、例えば磁石によって結合され得る。
【００３３】
別の例示的実施形態では、チューブピース５１０ａ、５１０ｂは、図９Ｃに示すように、一方のピースが少なくとも部分的に他方の内部に入れ子状に収納されるように構成され得る。図９Ｃに示す実施形態では、上側のチューブ５１０ａは、５２２’において適合するフィルターアセンブリ用の台と、下側のチューブ部分５１０ｂに形成された内側に向かって突出するリップまたはシェルフ５１２ｂに支えられるように構成された外接シェルフまたはリップ５１２ａとを備えた底部分を有することができる。加えて、または代替的に、内側に向かって突出するシェルフ５１２ａは、フィルター膜を受けることもできる。さらに、突出するシェルフ５１２ａ、５１２ｂの寸法は共に、断面厚さと、異なるサイズのフィルター膜を収納できるように径方向にリップが突出する距離とに関して変化し得る。細長管状ピース５１０ａ、５１０ｂは、締まり嵌め、それぞれの内側壁と外側壁間での螺合、またはシェルフ５１２ａおよび５１２ｂ間の嵌め合い係合によって取り付けられ得る。
【００３４】
２つの細長管状部材を備えたいくつかの実施形態においては、内側の管状部材５１０ａは、図９Ｄに示すように、管状部材の長手方向軸に沿って延在する側壁に形成されたスロットまたはチャネルを有して形成されてもよい。このスロットは、フィルター膜を収納するようにサイズ決めされ、遠心分離処理後に、２つの細長管状部材を分解する必要なしに、迅速にフィルター膜を除去することを可能にする。図９Ｄの例示的実施形態は垂直なスロットを描写しているが、別の設計（千鳥状または曲がった経路等）も開示される主題の範囲内である。このような曲がった経路の設計は、フィルター膜の慎重で注意深い除去を必要とし、その結果、遠心分離処理後のフィルター膜の過失による除去や取り外しを防止する点で有利となり得る。
【００３５】
図８Ａ〜図８Ｄに関して上記に説明したように、開示される主題のいくつかの実施形態は、フィルター膜上の収集された試料の凝縮および単離を促進するために圧縮カバーまたはキャップを用いることができる。例えば、図１０Ａのフィルター膜５２２は、図１０Ｂ〜図１０Ｄに示すように、フィルター膜５２２と嵌め合い係合するカバー６００を収納するように構成され得る。図１０Ｄに描写した矢印によって示すように、カバー６００は、脱水、除去、浸潤等の後続の工程のために粒子状物質を凝縮し、拘束するための圧縮力を付与することができる。カバー６００によって作用する圧縮力は、技術者によって、またはばね式プランジャ等の外部デバイス（不図示）によって与えることができる。
【００３６】
ここで開示される主題の一態様によれば、フィルター膜５２２は、図１１Ｂ〜図１１Ｃに示すように、この例示的実施形態においてはローマ数字標識として示される位置合わせ特徴を備える。この標識により、使用者が簡単かつ正確に特定の関心領域（例えば場所「ＩＩＩ」または「３時の位置」）を参照することが可能となる。加えて、この標識により、フィルター膜の異なるスライスを要望通りに互いに配向させることが可能となり、フィルター膜５２２が反転した、または裏返しになったか否かを証明することが可能となる。フィルター膜５２２は、図１１Ａに示すように、その外周周りに交互のピーク部５２２ａおよび谷部５２２ｂを有して形成されることにより、表面積を増加させ、遠心分離工程および後続の切片化（すなわちカッティング）の間、より高い安定性および信頼性を提供することができる。この標識に加えて、フィルター膜の縁（すなわち、フレーム）は、多孔質のフィルター部分よりも厚く形成され、管状体の内面との密封を形成するガスケットとして機能することができる。さらに、この縁部分は、内側の多孔質材料上に収集された試料の特定の関心領域を簡単に識別するための視覚的補助としてさらに機能する不透明材料から形成されてもよい。さらに、フィルター膜のこの縁部分は、切刃が過度の力なしにフィルター膜を簡単にスライスすることを可能にし、その結果、フィルター膜の望ましくない座屈、刃の損傷、またはフィルター膜が裂けたり剥離したりすることを解消できる多孔質材料、例えば、連続気泡発泡体または発泡ゴムから形成されてもよい。加えて、フィルター膜は、フィルターアセンブリの残りの部分とは別に形成され得る（例えば、流体／組織の収集した試料から組織または細胞ブロックを分離させるように機能する多孔質フィルター膜は、図１０Ａに示すような起伏構造および標識を有する周囲フレームとは別個のものであり得る）。多孔質フィルター膜は、接着剤または超音波溶接によって周囲構造に取り付けてもよい。
【００３７】
さらにフィルター膜（または存在すればアセンブリ）の構造に関して、上記に開示したように、フィルター膜（または存在すればアセンブリ）の周辺部に形成されたピーク部および谷部によってもたらされる表面積の増加により、フィルター膜の包埋媒質（例えばワックス）との一体化および固定の向上が促進される。ピーク部および谷部の数は、要望通りに変更でき、実施形態によっては、ピーク部および谷部は、鈍角の丸みを帯びたエッジ（図１０Ａ〜図１０Ｄ）として構成されるが、実施形態によっては、ピーク部および谷部は、鋭角の頂点（図１０Ｅ〜図１０Ｆ）として形成される。加えて、あるいは代替的に、フィルター膜５２２（または存在すればアセンブリ）は、図１０Ｆ〜図１０Ｇに示すように、フィルター膜が包埋媒質と係合する表面積を同様に増加させる凹部５３２を有して形成され得る。他の実施形態では、フィルター膜は、同様に包埋媒質と係合する表面積を増加させる円筒状のポスト５３０（図１０Ｅ）またはリブ５３４（図１０Ｇ）等の表面特徴を有して形成することができる。加えて、あるいは代替的に、図１０Ｈに示すように、フィルター膜は、包埋媒質がフィルター膜および／またはアセンブリ全体に浸透し、浸潤することを可能にする多孔質部材、例えば発泡体として形成され得る。これらの実施形態の各々において、フィルター膜とワックスとの係合および一体化の向上の結果、より高い信頼性と一貫性のある切片化が行える。さらに、フィルター膜の表面積を増加させるための上記のさまざまな構造的特徴（例えば、ピーク部／谷部、穴、リブ、多孔質発泡体）により、使用者が組立て、切片化、および／または診断装置（例えば顕微鏡）内への配置を行う際に、フィルター膜を選択的に配向させることも可能となる。
【００３８】
図１０〜図１１Ｃに示されるフィルター膜の特定の例示的実施形態は、半剛性材料から形成された概ね円形のフィルター膜を描写しているが、別の構成のフィルター膜形状および構造も開示される主題の範囲内である。例えば、フィルター膜は、図１１Ｄに示すように、可撓性のある袋状部材として構成されてもよい。袋状フィルター膜は、上記のような所望の孔度を有して作られ、遠心分離処理中に生成される力の下で必要に応じて膜が変形することを可能にする無定形状を提供し、これにより、剛性のフィルター膜が用いられた場合に装置の他の構成部品に付与され得る圧力の一部を取り除くことができる。加えて、このような可撓性のある袋状フィルターの実施形態は、無定形フィルターがさまざまな量の細胞を収容できる点で、より高い設計自由度を許容する。さらに、無定形袋状構造により、生体試料が通過する表面積が効果的に増加し、それによって今度は濾過処理が促進され、細胞検体の適用においてフィルター膜を詰まらせるリスクが最小限に抑えられる。図１１Ｄに描写した例示的実施形態は、以下にさらに詳細に説明する構造的補強特徴も備えたフィルター膜を示している。
【００３９】
ある代替的実施形態では、図１２Ａ〜図１２Ｂに描写するように、単一の細長管状体６１０は、内部に配置されるシーリングプランジャ６１２および６１４と、プランジャ間に配置されるフィルター膜６２２とを備えてもよい。プランジャは、管状体６１０の端部間の懸架位置、例えば管状体６１０の中間点でフィルター膜６２２を支持し、管状体６１０内の上部および下部リザーバを密封するプランジャに外接する径方向フランジを有する。この密封により、遠心分離中に流体がリザーバ間を移動することが禁じられ、その結果、すべての液体がフィルター膜６２２を通過することが強制される。上記のように、フィルター膜を管状体の中間点に位置付けることは、サイズが等しく、内部に入れられる流体の量が等しいリザーバが提供されるという点で有利である。しかしながら、プランジャ６１２、６１４は、要望通りに管状体６１０に沿った任意の地点にフィルター膜を位置付けるようにサイズ決めされてもよい。
【００４０】
いくつかの実施形態では、フィルター膜は、構造的補強特徴を備え得る。図１３Ａに示す例示的実施形態では、ボウル状フィルター膜６２２（断面図で示す）は、図１３Ｂに示すように、フィルター膜を収納する細長いチューブ６１０内の対応するシェルフまたはリップと係合するようにサイズ決めされた径方向に外側に向かって延在する突起部またはシェルフ６２２ａを備える。これらの径方向に外側に向かって延在する突起部またはシェルフ６２２ａは、フィルター膜の側壁を強固にし、遠心分離処理中に生じる力の一部を吸収する。いくつかの実施形態においては、細長いチューブ部材６１０のシェルフ６１２ｂは、図１３Ｃに示すように、より大きな表面積（例えばボウル状フィルター膜の側壁）にわたってフィルター膜のシェルフ６２２ａと係合するように形成される。このフィルター膜と細長管状部材との係合面積の増加により、遠心分離処理中にフィルター膜に対するさらなる支持が提供される。さらに、構造的補強特徴６２２ａおよび６１２ｂにより、単一の細長管状部材６１０の内部にフィルター膜を確実に位置付けることができる。これは、部品および開示される主題の方法の実行に必要な組立て／分解工程の総数を減少させる点で有利となり得る。
【００４１】
加えて、あるいは代替的に、構造的補強特徴は、図１３Ｄに示すように、フィルター膜の底部に配置され、フィルター膜６２２の長さ、例えば直径にわたって延在する支柱６２２ｂを備えていてもよい。これらの支柱６２２ｂは、フィルター膜が遠心分離処理に関連する力にさらされた際に撓んだり破損したりすることを防止する。本明細書に開示するこれらの構造的補強特徴は、フィルター膜と一体形成してもよく、あるいは、フィルター膜の下に位置付けられる別個の挿入物として形成されてもよい。
【００４２】
加えて、細長いチューブ部材の開口部上に延在するハンドル（不図示）をフィルター膜に組み込むことにより、膜を簡単に除去できるようにする。この場合、操作者は、収集した細胞試料の上部に間隔を空けた位置にあるハンドルを握ることにより、試料の汚染または過失による損失のリスクを排除することができる。いくつかの実施形態では、ハンドルは、上記で説明し、図９Ｄに示すような管状体に形成されたスロットを通って径方向に外側に向かって延在してもよい。
【００４３】
別の例示的実施形態では、図１４Ａ〜図１４Ｃに示すように、試料投入チャンバ７０２およびフィルター膜７２２は、支持ポスト７０４上に配置され、単一の細長管状体７１０内に収納される。支持ポスト７０４は、フィルター膜の下に配置され、チューブ７１０の端部間の懸架位置、例えばチューブ７１０の中間点にフィルター膜７２２を位置付けるように長手方向に延在する。フィルター膜７２２は、細長管状部材７１０内の上部および下部リザーバを密封する、径方向に延在する縁部分、例えばフランジを備え得る。この密封により、遠心分離中のリザーバ間の流体の移動が禁じられ、その結果、全物質がフィルター膜を通過することを強制される。上記のように、フィルター膜をチューブの中間点に位置付けることは、このような構成の結果、等しいサイズのリザーバが得られる点で有利である。しかしながら、フィルター膜の別の位置も開示される主題の範囲内である。
【００４４】
支持ポスト７０４は、長手方向に延在するスロットまたはチャネル７０５を備えていてもよい。これらのスロットは、フィルター膜の下に位置する液体が遠心分離処理中に形成される下部リザーバ内で自由に移動することにより、濃縮液でポケットまたは気泡が集まるのを回避することを可能にする通路として機能する。加えて、あるいは代替的に、スロットは、不連続な局部的開口部、例えば円形孔として構成され得る。図１４Ａ〜図１４Ｃに描写した実施形態のさらなる利点は、既存の遠心分離器チューブに適合するように容易に構成可能で、その結果、高価または複雑な改造作業を回避できる点である。流体の通過を可能にすることに加えて、スロット７０５は、支持ポスト７０４の撓みを許容することにより、装置の組立ての際にさまざまなピースの長さにおける相違（例えば製造公差によるもの）の補償および調整を行う。すなわち、構成部品７０２、７２２、および７０４は、チューブ７１０の内部に配置され、キャップがチューブの上部に取り付けられる際に圧縮される。スロット７０５は、屈曲できることによりフィルター膜／アセンブリが高さの変動範囲内で圧縮可能となるばね作用を提供する。
【００４５】
開示される主題の別の態様によれば、本明細書に開示するシステムは、図１５に示すように、従来の先行技術（参照符号１０で示す）と比較して、ここで開示される主題（参照符号２０で示す）の工程数を減少させる向上したＦＮＡ処理プロトコルを可能にする。
【００４６】
病理学的視点から、医師は典型的にはフィルター膜によって収集した細胞の検査に関心を持ち、一方、診断的、生化学的、および分子的視点から、医師は典型的にはフィルター膜を通過した液体または「上清」の検査に関心を持つ。その結果、場合によっては、試料の両部分（すなわち、細胞および上清）を保持し、２つの異なる検査室に送る必要がある。したがって、開示される主題の別の態様によれば、並行処理のために上清はチューブ内に確保しながら、収集した細胞試料を有したフィルター膜を除去することができる。図１６に示す例示的実施形態では、遠心分離処理を行った後では、シェルフ８１２の上に載るフィルター膜（不図示）によって試料細胞が保持され、流体または上清は、下側の管状部材８１０ｂ内に含まれる。
【００４７】
細長管状部材８１０ａ（流体の上清を２つのチューブ８１０ａ、８１０ｂの両方に充填した状態で、フィルター膜および収集した細胞試料を除去することが望ましい場合）または細長管状部材８１０ｂ（流体の上清をチューブ８１０ｂにのみ充填した状態で、フィルター膜および収集した細胞試料を除去することが望ましい場合）の上部と係合する第１のキャップ８３０ａを設ける。細長管状部材８１０ｂの底部と係合する第２のキャップ８３０ｂを設ける。いくつかの実施形態では、第２のキャップ８３０ｂは、管状部材８１０ｂにヒンジ式に取り付けられ、開位置および閉位置間の旋回が許容される。これにより、上記のフィルターアセンブリによって妨害されない流体の制御された迅速な取り出しが可能となる。
【００４８】
第１のキャップ８３０ａは、単一のキャップを複数のチューブサイズに使用できるように、内側ねじおよび外側ねじの両方を備えて構成され得る（すなわち、径が小さいチューブの場合は雄係合で、径が大きいチューブの場合は雌係合）。開示した管状構成（例えば１個のピース、２個のピース、入れ子式収納等）のいずれに対しても、任意の所望のサイズで、開示したキャップ構成を使用可能であることを理解されたい。さらに、いくつかの実施形態においては、装置の使用に先立って、チューブに対してキャップ８３０ａを締めると、フィルター膜をさらに圧縮するように圧縮力が付与され、それによって、遠心分離処理中に漏れ止め密封が確実に形成（フィルター膜と管状体の内面との間に）されるように、開示される主題の構成部品をサイズ決めする。同様に、チューブ内にフィルターアセンブリの構成部品を挿入する際に、使用者は、フィルターアセンブリの構成部品とチューブの側壁との間に保たれる摩擦力が密封を生じさせ、この密封によって、遠心分離前にフィルター膜を通過する望ましくない漏れを心配することなく使用者が中身をチューブに注ぐことができるようにアセンブリを圧縮できる。
【００４９】
図１７Ａは、第１の細長管状体９１０ａが第２の細長管状体９１０ｂ内に完全に挿入される、開示される主題の別の例示的実施形態を描写する。フィルター膜は、第１の（または内側の）細長管状体９１０ａ内に挿入され、第１の（または内側の）細長管状体９１０ａの対応する内側に向かって突出するシェルフによって受けられる外側に向かって突出するシェルフの形態の構造的補強部材を備える。上記のように、第１の細長管状体９１０ａは、チューブの側壁に形成された長手方向に延在するスロットを備え得る。これらのスロットは、フィルター膜を保持するシェルフの位置（例えば、チューブ９１０ａの中間点）から上方にコンテナの上部まで延在する。図１７Ｂ〜図１７Ｄは、図１７Ａに指定したような細長管状体の長さに沿ったそれぞれの位置９１０ａ’、９１０ａ’’、および９１０ａ’’’における第１の細長管状体９１０ａの断面の上面図を描写する。上方に延在するスロットは、フィルター膜を簡単に第１のチューブ９１０ａ内に配置でき、かつフィルター膜９２２を細長管状体９１０の外側からつかみ（例えば、存在する場合は上記のハンドルを用いて）、フィルター膜を上にスライドさせてチューブ９１０ａから出すことによって、フィルター膜を第１のチューブ９１０ａ内から容易に除去できる点で有利である。図１７Ａ〜図１７Ｄに描写する実施形態のさらなる利点は、既存の遠心分離器チューブに適合するように容易に構成可能で、その結果、高価または複雑な改造作業を回避できる点である。
【００５０】
別の実施形態では、図１８に描写するように、細長管状体１０１０は、第２の細長管状体（不図示）内に挿入されるように設計される。細長管状体１０１０は、内部に挿入された際に第２の細長管状体の上部と係合するように構成された構造的保持特徴１０１２（例えば、フランジまたはレッジ）を有する近位端または上端を備える。構造的保持特徴１０１２は、カールする、または第２の細長管状体に形成されたリップに重なるように延在することにより、よりしっかりとした結合を提供できる。細長管状体１０１０の遠位端または下端において、細長管状体１０１０に対して、１０１５において閉鎖機構（例えばキャップ）１０１４をヒンジ式に取り付ける。その結果、閉鎖機構１０１４は、開位置および閉位置間で旋回可能である。フィルター膜またはアセンブリ（不図示）を細長管状体１０１０の遠位端１０１３に位置付け、閉鎖機構１０１４を開位置（図１８に描写するような）から閉位置（不図示）へと回転させることによって、この位置にしっかりと保持することができる。濾過処理を開始するべく、閉鎖機構１０１４を閉位置に固定し、内部にフィルター膜／アセンブリを保持するために、係止機構（例えば突起部）１０１６を細長管状体１０１０の遠位端上に備えてもよい。図１８に描写する実施形態では、閉鎖機構１０１４は、スナップフィット係合で係止機構１０１６を収納するスロットを備える。濾過処理が完了すると、使用者は、細長管状体１０１０の下側に向かって延在するタブを強く握ることによって、係止機構１０１６の偏位を生じさせ、閉鎖機構１０１４内のスロットから係止機構１０１６を解除させることができる。
【００５１】
さらに別の実施形態では、濾過表面積を増加させ、その結果、所望の濾過量に必要なサイクル時間全体を減少させると同時に、目詰まりを最小限に抑えるクロスフロー濾過を用いる別の形状が提供される。図１９Ａ〜図１９Ｂに描写した構造は、アセンブリ用に構成可能で、第２の細長管状体（不図示）の内部に配置可能な細長管状体１１１０および下部の支持部材１７０４を備える。また、支持部材１７０４は、図１４Ａ〜図１４Ｃに関して上記に開示したスロット７０５と同様に機能するスロットまたはチャネル１７０５を備える。フィルター膜１１２０（または別個の構成部品として構成される場合はアセンブリ）は、２つの濾過面、すなわち上面１１２２および下面１１２３（図２０Ａを参照）を含む。上側濾過面１１２２は、ハウジングまたは縁部分１１２４内に収納されるようにサイズ決めされる。下側濾過面１１２３は、ハウジング１１２４と等しい外径を有するようにサイズ決めされる。
【００５２】
細長管状体１１１０は、フィルター膜１１２０の上面と下面との間に規定される濾過空間内に延在する縮径（近位開口部または口に対して）出口１１１２を生じさせる内部テーパを有する。出口は、開口部においてノッチまたは凹部等の非平面１１１３を備える。したがって、組立てた際に、出口１１１２の一部のみが下側濾過面１１２０と係合し、その結果、出ていく流体に対して最も抵抗の少ない経路を提示する横方向ポートまたは凹部が得られる。結果的に、流体が出口から出る際に、出口における非均一面１１１３は、フィルター面にわたって流れの一部を横断方向または接線方向に指向させる（図１９Ｂに矢印で示す）力を出ていく流体に与える。細長管状体１１１０および／または下部の支持部材１７０４は、流体がこの装置から出て、主要遠心分離器チューブ（不図示）に入ることを可能にするサイドポート１１１４も備える。
【００５３】
開示される主題の別の態様によれば、従来の遠心分離処理に対する代替として、本明細書に開示した装置と連携して用いられる濾過力は、吸引力によって提供することができる。限定ではなく例示目的で、図２１〜図２２は、駆動力が注射器（図２１）または真空源（図２２）を用いて提供されるいくつかの実施形態を示している。例えば、支持部材７２２（図１４Ａ〜図１４Ｃに関して上記に開示）は、外付け注射器２０００と密封状態で連結されるテーパ状開口部を有して構成され得る。その場合、使用者は注射器のプランジャを後ろに引いて、細長管状体７０２からフィルター膜７２２を通して注射筒内へと流体を引き出すことができる。同様に、図２２に描写するように、外付け真空源を支持部材７０４に連結させ、細長管状体７０２からフィルター膜７２２を通して真空のレセプタクルまたはリザーバ２００１内へと流体を引き出すように作動させることができる。
【００５４】
一例示的実施形態では、装置は図２３Ａ〜図２３Ｂに概略的に示されている細胞ブロック装置２３００として構成される。細胞ブロック装置２３００は細長管状体２３１０および試料投入チャンバ２３２０を備える。細長管状体２３１０は近位端２３１２および遠位端２３１４を有する。いくつかの実施形態では、細長管状体２３１０は、近位端にて第１の直径（ｄ１）および遠位端にて第２の直径（ｄ２）を有し、第２の直径は第１の直径よりも小さい。細長管状体２３１０の近位端２３１２と遠位端２３１４との間に配置された区画２３１８は、細長管状部材２３１０の概ね円錐形の遠位区画を規定するように、その長さに沿って小さくなる直径を有する。いくつかの実施形態では、細長管状体が２３１８にて段または急な絞りを含むように、ゆるやかではないテーパを提供され得る。カバー２３３０は細長管状体２３１０の近位端に脱着可能に配置される。フィルター膜（または濾過挿入物）２３４０（フィルター膜単独、または例えば図４〜図８および図１０〜図１１における上述のようなアセンブリであり得る）は細長管状体２３１０内の試料投入チャンバ２３２０に配置される。種々の好適な容積が細長管状体２３１０には使用可能である。限定しないが例示のため、好適な容積としては、約１５ｍｌ〜約５０ｍｌまたは標準もしくは他の遠心分離器に嵌まる任意の他のサイズが挙げられる。種々の好適な容積が試料投入チャンバ２３２０には使用可能である。限定しないが例示のため、好適な容積としては、約１５ｍｌ〜約５０ｍｌまたは細長管状体２３１０に嵌まる任意の他のサイズが挙げられる。しかし、当業者には、別のサイズが開示される主題の範囲内であると理解されるであろう。細長管状体は従来の遠心分離器に嵌まるようにサイズ決めされる。このようにして、細胞ブロック装置は、例えば微細針吸引技法により得た生体試料を収容する針から生体試料を受け取ることができ、生体試料中の細胞をいかなる液体からも分離して、遠心分離によって細胞を単離し固めて凝縮ペレットにするために、遠心分離器内に配置される。生体試料を受容し、生体試料を各成分部分に分離するのに同じユニットを使用することによって、試料サイズの損失が低減され、複数成分のやりとりによる汚染リスクを低減する。いくつかの実施形態においては、細長管状体は、約１，２００〜約１６，０００ＲＣＦの相対遠心力に好適である。例えば、１２，０００ＲＣＦ、１，２００ＲＣＦ、１６，０００ＲＣＦ、２，０００ＲＣＦ、９，４００ＲＣＦ、７，５００ＲＣＦである。さらなる例示として、一実施形態では、細長管状部材は、容積が１５ｍｌであり、１，２００ＲＣＦまたは１２，０００ＲＣＦでの遠心分離に適している。他の実施形態では、例えば、細長管状部材は、容積が５０ｍｌであり、１６，０００ＲＣＦまたは２，０００ＲＣＦまたは９，４００ＲＣＦでの遠心分離に適している。デバイスの細長管状体は、さまざまな材料、特にさまざまなポリマー、例えば、ポリプロピレンおよび／またはポリスチレンから形成することができる。さらに、細長管状体、試料投入チャンバまたはカバーに使用する材料は生分解性材料であり得る。
【００５５】
一例示的実施形態では、図２４Ａ〜図２４Ｂに示すように、試料投入チャンバ２３２０は細長管状体２３１０内に挿入されるように設計される。試料投入チャンバ２３２０は、内部に挿入された際に細長管状体２３１０の上部と係合するように構成された構造的保持特徴２４１２（例えば、フランジまたはレッジ）を有する近位端または上端を備える。構造的保持特徴２４１２は、カールする、または細長管状体２３１０に形成されたリップに重なるように延在することにより、よりしっかりとした結合を提供できる。試料投入チャンバ２３２０の遠位端または下端において、試料投入チャンバ２３２０に対して、２４１５において閉鎖機構（例えば、キャップ）２４１４をヒンジ式に（例えば、リビングヒンジよって）取り付ける。したがって、閉鎖機構２４１４は開位置（図２４Ｂに描写される）と閉位置（図２４Ａ）間で旋回できる。フィルター膜２３４０（不図示）を試料投入チャンバ２３２０の遠位端２４１３に位置付け、閉鎖機構２４１４を開位置（図２４Ｂに描写するような）から閉位置（図２４Ａに描写するような）へと回転させることによって、この位置にしっかりと保持することができる。濾過処理を開始するべく、閉鎖機構２４１４を閉位置に固定し、フィルター膜２３４０を保持するために、係止機構（例えば突起部）２４１６を試料投入チャンバ２３２０の遠位端上に備えてもよい。図２４Ａ〜図２４Ｂに描写する実施形態では、閉鎖機構２４１４は、スナップフィット係合で係止機構２４１６を収納するスロットを備える。代替的実施形態（不図示）では、閉鎖機構２４１４は試料投入チャンバ２３２０に取り付けられず、係止機構２４１６と係脱および係合することにより開閉されてよい。濾過処理が完了すると、使用者は、試料投入チャンバ２３２０の下側に向かって延在するタブを強く握ることによって、係止機構２４１６の偏位を生じさせ、閉鎖機構２４１４内のスロットから係止機構２４１６を解除させることができる。
【００５６】
ここで開示される主題の一態様によると、フィルター膜２３４０は、図２５に示すように、その外周周りに交互のピーク部および谷部を有して形成されることにより、表面積を増加させ、遠心分離工程および後続の切片化（すなわちカッティング）の間、より高い安定性および信頼性を提供することができる。フィルター膜の縁（すなわち、フレーム）は、多孔質のフィルター部分よりも厚く形成され、試料投入チャンバ２３２０の内面との密封を形成するガスケットとして機能することができる。さらに、この縁部分は、内側の多孔質材料上に収集された試料の特定の関心領域を簡単に識別するための視覚的補助としてさらに機能する不透明材料から形成されてもよい。さらに、フィルター膜のこの縁部分は、切刃が過度の力なしにフィルター膜を簡単にスライスすることを可能にし、その結果、フィルター膜の望ましくない座屈、刃の損傷、またはフィルター膜が裂けたり剥離したりすることを解消できる多孔質材料、例えば、連続気泡発泡体または発泡ゴムから形成されてもよい。加えて、フィルター膜は、フィルターアセンブリの残りの部分とは別に形成され得る（例えば、流体／組織の収集した試料から組織または細胞ブロックを分離させるように機能する多孔質フィルター膜は、図１０Ａに示すような起伏構造および標識を有する周囲フレームとは別個のものでもよい）。多孔質フィルター膜は、接着剤または超音波溶接によって周囲構造に取り付けてもよい。
【００５７】
ここで開示される主題の一態様によると、コンテナ２６００は図２６に描写されるようにフィルター膜２３４０を収容するように構成される。コンテナ２６００は、実質的に直線構成で、ヒンジ留めされる上面、固定される底面および４つの垂直辺を有する。上面および底面は、一連の規則的間隔を空けたスロットにより穿孔され格子を形成する。上面はヒンジによりコンテナの一辺に取り付けられる。ヒンジとは反対側の辺は、ヒンジと反対側の上面のエッジに配置されるタブにアクセス可能なようにコンテナの中心線に向けて傾いている。コンテナ２６００はフィルター膜２３４０の保管のために使用される。コンテナ２６００の格子により、フィルター膜２３４０を洗浄するために空気、水または洗浄液を通過させることができる。
【００５８】
図２７Ａ〜図２７Ｆは開示される主題の例示的実施形態に係る細胞ブロック装置２３００のアセンブリを描写する。フィルター膜２３４０は試料投入チャンバ２３２０の遠位端に配置され（図２７Ａ）、閉鎖機構２４１４を使用して所定位置に固定される。カバー２３３０は細長管状体２３１０から取り外される（図２７Ｂ）。試料投入チャンバ２３２０は細長管状体２３１０内に配置され（図２７Ｃ）、構造的保持特徴２４１２によって細長管状体２３１０の上部に所定位置で保持される。生体試料が試料投入チャンバ２３２０内に入れられ（図２７Ｄ）、カバー２３３０を細長管状体２３１０に戻す（図２７Ｅ）。遠心分離器の回転後、生体試料の液体部分は細長管状体２３１０の遠位端に集まる（図２７Ｆ）。
【００５９】
図２８Ａ〜図２８Ｅは開示される主題の例示的実施形態に係る細胞ブロック装置２３００のアセンブリを描写する。フィルター膜２３４０は試料投入チャンバ２３２０の遠位端に配置され（図２８Ａ）、閉鎖機構２４１４を使用して所定位置に固定される。カバー２３３０は細長管状体２３１０から取り外される（図２８Ｂ）。生体試料を試料投入チャンバ２３２０に入れ、試料投入チャンバ２３２０を細長管状体２３１０内に配置し、カバー２３３０を細長管状体２３１０に戻す（図２８Ｃ〜図２８Ｄ）。遠心分離器の回転後、生体試料の液体部分は細長管状体２３１０の遠位端に集まる（図２８Ｅ）。
【００６０】
別の例示的実施形態では、装置は図２９に概略的に示されている細胞ブロック装置２９００として構成される。細胞ブロック装置２９００は細長管状体２９１０および試料投入チャンバ２９２０を備える。細長管状体２９１０は近位端２９１２および遠位端２９１４を有する。いくつかの実施形態では、細長管状体２９１０は、近位端にて第１の直径（ｄ１）および遠位端にて第２の直径（ｄ２）を有し、第２の直径は第１の直径よりも小さい。細長管状体２９１０の近位端２９１２と遠位端２９１４との間に配置された区画２９１８は、細長管状体２９１０の概ね円錐形の遠位区画を規定するように、その長さに沿って小さくなる直径を有する。いくつかの実施形態では、細長管状体が２９１８にて段または急な絞りを含むように、ゆるやかではないテーパを提供され得る。カバー２９３０は細長管状体２９１０の近位端に脱着可能に配置される。フィルター膜２９４０は細長管状体２３１０内の試料投入チャンバ２９２０に配置される。代替的実施形態に関連して先に記載した通り、種々の好適な容積が細長管状体２９１０および試料投入チャンバ２９２０に利用可能である。例示のため限定はしないが、好適な容積としては、約１５ｍｌ〜約５０ｍｌまたは標準もしくは他の遠心分離器に嵌まる任意の他のサイズが挙げられる。
【００６１】
先に記載した通り、細長管状体は遠心分離器に嵌まるようにサイズ決めされ、細胞ブロック装置は、例えば微細針吸引技法により得た生体試料を収容する針から生体試料を受け取ることができ、生体試料中の細胞を液体から分離して、遠心分離によって細胞を単離し固めて凝縮ペレットにするために、遠心分離器内に配置される。前述の実施形態と同様に、デバイスの細長管状体は、さまざまな材料、特にさまざまなポリマー、例えば、ポリプロピレンおよび／またはポリスチレンから形成することができる。さらに、細長管状体、試料投入チャンバまたはカバーに使用する材料は生分解性材料であり得る。
【００６２】
図２９および図３０Ａ〜図３０Ｃに描写される実施形態では、試料投入チャンバ２９２０は細長管状体２９１０内に挿入されるように設計される。試料投入チャンバ２９２０は、内部に挿入された際に細長管状体２９１０の上部と係合するように構成された構造的保持特徴２９１２（例えば、フランジまたはレッジ）を有する近位端または上端を備える。構造的保持特徴２９１２は、カールする、または細長管状体２９１０に形成されたリップに重なるように延在することにより、よりしっかりとした結合を提供できる。図４０に示す例示的実施形態では、リップ２９１２は、遠心分離プロセスの間真空の形成を防ぐための真空逃がし機構として機能する凹部またはノッチを備え得る。図２９および図３０Ａ〜図３０Ｃを再度参照すると、投入チャンバが概ね円筒形の外観を保持しながら内部にテーパを有するように、試料投入チャンバ２９２０の遠位端または下端２９２４は、減少する内径および実質的に一定の外径を有して構成され得る。試料投入チャンバの遠位部分２９２４は、クランプ２９５０（下記でさらに詳述する）の相補的な締結特徴と嵌め合い係合するために外側に複数の締結特徴（例えば、ねじ、突起部、凹部等）を備えることができる。さらに、遠位部分が凹んで、組立てたときにクランプ２９５０が試料投入チューブ２９２０と面一（同一平面上）嵌合を形成するように、遠位部分２９２４の外径は試料投入チューブ２９２０の残りの直径よりも小さくなり得る。
【００６３】
前述の実施形態と同様に、フィルター膜２９４０は、その外周周りに交互のピーク部および谷部を有して形成されることにより、表面積を増加させ、遠心分離工程および後続の切片化（すなわちカッティング）の間、より高い安定性および信頼性を提供することができる。フィルター膜の縁（すなわち、フレーム）は、多孔質のフィルター部分よりも厚く形成され、試料投入チャンバ２９２０の内面との密封を形成するガスケットとして機能することができる。さらに、この縁部分は、内側の多孔質材料上に収集された試料の特定の関心領域を簡単に識別するための視覚的補助としてさらに機能する不透明材料から形成されてもよい。さらに、フィルター膜のこの縁部分は、切刃が過度の力なしにフィルター膜を簡単にスライスすることを可能にし、その結果、フィルター膜の望ましくない座屈、刃の損傷、またはフィルター膜が裂けたり剥離したりすることを解消できる多孔質材料、例えば、連続気泡発泡体または発泡ゴムから形成されてもよい。加えて、フィルター膜は、フィルターアセンブリの残りの部分とは別に形成され得る（例えば、流体／組織の収集した試料から組織または細胞ブロックを分離させるように機能する多孔質フィルター膜は、図１０Ａに示すような起伏構造および標識を有する周囲フレームとは別個のものでもよい）。多孔質フィルター膜は、接着剤または超音波溶接によって周囲構造に取り付けてもよい。
【００６４】
図２９の例示的実施形態には濾過後キャップ２９６０も備えられる。この濾過後キャップ２９６０は、収集した試料をさらなる処理のためにフィルター膜２９４０内に密封して収容するために、フィルター膜２９４０内に形成される凹部内に挿入され得る。図２９の例示的実施形態は円筒形の濾過後キャップ２９６０を描写しているが、さまざまなサイズおよび／または形状が所望される通りに利用でき、濾過後キャップ２９６０のサイズ／形状を決定するのはフィルター膜２９４０の寸法であることが理解されよう。図４１〜図４２Ｂに示す例示的実施形態では、濾過後キャップ４１６０は、発泡体部分４１６２と、フィルター部分４１６６の上に配置されるワックスまたは低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）部分４１６４とを備える（図４１）。発泡体４１６２にはワックス４１６４が浸潤でき（図４２Ａ）、このサブアセンブリはフィルター４１６６に溶接され得る（図４２Ｂ）。図４３Ａ〜図４３Ｂに示す実施形態では、フィルター部分は省略され、濾過後キャップ４３６０は発泡体４３６２およびワックス／ＬＤＰＥ部分４３６４を備える。いくつかの実施形態において、ワックスは低密度ポリエチレン（ＬＤＰＥ）と混合されて、切片化を容易にするために包埋パラフィンワックスと同様の性質を有する材料（部分４１６４と濾過挿入物２９４０のために使用され得る）を形成するが、組織処理中に収集した細胞ブロックの一体性を維持するため高い融解温度を示す。
【００６５】
図３０Ａ〜図３０Ｃに示すように、濾過挿入物２９４０はクランプ２９５０内に配置され、クランプ２９５０は試料投入チャンバ２９２０の遠位端に取り付けられる（図３０Ｂ参照）。このサブアセンブリが次に細長管状体２９１０内に配置されることで、近位端にて生体試料を受け取る準備ができる（図３０Ｃ参照）。クランプ２９５０は、遠心分離処理の間液体が容易に通過できるように、内部に少なくとも１つの孔２９５３を有する平面状底面を有して構成され得る。図２９に最も良く示されるように、クランプ２９５０は、平面状底面から上方に延びる２つの側壁２９５２、２９５４をさらに備える。上述したように、側壁は、試料投入チャンバの遠位部分２９２４の外面の締結特徴と取り外し可能に係合するように構成される、締結特徴（例えば、ねじ、突起部、凹部等）を内面に備える。側壁は試料投入チャンバ２９２０の輪郭と一致する曲率半径を有する弓状形状を有して構成される。凹部または開口部は２つの側壁２９５２、２９５４間に配置され、これによりクランプ２９５０に対してフィルター膜２９４０の挿入および除去を容易にするために濾過挿入物２９４０への容易なアクセスが可能になる。
【００６６】
図２９〜図３０Ｃに関して先に記載した通り、クランプ部材２９５０を再度参照すると、２つの弓状の側壁２９５２、２９５４は、試料投入チャンバ２９２０の相補的な締結特徴と係合する締結特徴を備える。図３７〜図３８の例示的実施形態において、フィルター膜２９４０は、側壁２９５２、２９５４間の指アクセススロットまたは開口部を介してクランプ２９５０内に配置される。その後、クランプは、クランプ２９５０を時計回りまたは反時計回りにひねるかまたはねじることによる螺合を介して、しっかりと試料投入チャンバ２９２０に連結される。図３８の例示的実施形態では、クランプはラチェット係合（すなわち、回転および並進運動の組み合わせ）を介して投入チャンバ２９２０にしっかりと連結される。すなわち、操作者はクランプを上向きにまたは試料投入チャンバ２９２０に向かって押すと同時にクランプ２９５０を時計回りまたは反時計回りにひねる。図３９Ａ〜図３９Ｂの代替的実施形態では、側壁３９５２、３９５４は下方に延びるタブを備え、濾過プロセスが完了すると、操作者は、このタブを強く握ることによって、フィルター膜２９４０の偏位を生じさせ（図３９Ａ）、クランプ２９５０内のスロットからフィルター膜２９４０を解除させることができる。
【００６７】
図３１Ａ〜図３１Ｄは種々の濾過プロセスの段階を描写する。濾過デバイスの組立て（図３０Ｃおよび図３１Ａ）後、生体試料が試料投入チャンバ２９２０内に入れられ（図３１Ｂ）、カバー２９３０を細長管状体２９１０に戻す（図３１Ｃ）。遠心分離器を回した後、生体試料の液体部分は細長管状体２９１０の遠位端に集まる一方、細胞はフィルター膜２９４０内に収集される（図３１Ｄ）。
【００６８】
開示される主題の一態様によると、図３２に示すように、コンテナ３２００はフィルター膜２９４０（存在する場合、濾過後キャップ２９６０も）を収容するように構成される。これらのコンテナ３２００はフィルター膜２９４０を保持するための便利で安全な保管機構として機能するという点で有利であり、フィルター膜２９４０は捕捉された細胞を収容し、濾過挿入物２９４０（および捕捉された細胞）の追加の処理を容易にする。図３２〜図３４に描写される実施形態では、コンテナ３２００は、実質的に直線構成で、上面３２１０および４つの垂直辺を備えた底面３２２０を有する。上面および底面は、一連の規則的間隔を空けたスロットにより穿孔され格子を形成する。上面はヒンジによりコンテナの一辺に取り付けられる。ヒンジとは反対側の辺は、ヒンジと反対側の上面のエッジに配置されるタブにアクセス可能なようにコンテナの中心線に向けて傾いている。上面３２１０は底面３２２０に着脱可能に取り付けられ得るか、または所望の通り、例えばリビングヒンジを介して永久的に取り付けられ得る。あるいは、上面がコンテナ３２００を開閉するように底面３２２０に対して直線的に並進移動するかまたは摺動するように、上面３２１０はさね継ぎにより底面３２２０に取り付けられ得る。コンテナ３２００の格子により、フィルター膜２９４０を洗浄するために空気、水または洗浄液を通過させられる。
【００６９】
図３３Ａ〜図３３Ｄに示すように、遠心分離プロセスの後、細胞はフィルター膜２９４０内に収集され、濾過後キャップ２９６０はフィルター膜２９４０内に挿入され得る（図３３Ａ）。次いで、フィルター膜２９４０およびキャップ２９６０がコンテナ３２００内に挿入され（図３３Ｂ）、上面３２１０はコンテナ３２００を閉鎖するように回転される（図３３Ｃ〜図３３Ｄ）。コンテナ３２００内のキャビティは、コンテナ３２００の閉鎖時に上面３２１０が濾過挿入物２９４０およびキャップ２９６０を圧迫するようにサイズ決めされ得る。これは、図３４に示すように、フィルター膜２９４０内に収集された細胞のさらなる拘束および圧縮に役に立つ。
【００７０】
開示される主題の別の態様によると、図３５Ａに示すように、追加の処理のためにフィルター膜２９４０を包埋すべくモールド３５００が提供される。操作中、フィルター膜２９４０はコンテナ３２００（図３３Ａ〜図３３Ｄに示す）から取り除かれ、モールド３５００内に配置される。コンテナ３２００と同様に、モールドは、ヒンジまたはさね継ぎアセンブリにより密封するように係合され得る上部３５１０および底部３５２０を備える。底部３５２０は、濾過挿入物２９４０を収納するための凹部または区画３５２２を備える（図３５Ｂ）。液体またはワックス（例えば、パラフィン）がモールド内に配置され、凹部３２５０内のフィルター膜２９４０を取り囲む（図３５Ｃ）。その後、パラフィンに封入されたフィルター膜２９４０がモールド３５００から取り外される。図３５Ｄに示す実施形態では、底部３５２０は外されており、上部３５１０は封入された濾過挿入物２９４０に結合される。このことは、上部３５１０が操作者にとってハンドルとして機能して、封入されたフィルター膜２９４０に直接触れずに、切片化（下に説明する）のために封入されたフィルター膜２９４０を操作し再配置でき、これにより収集した細胞の一体性を保つことができるという点で有利であり得る。
【００７１】
開示される主題の別の態様によると、（収集した細胞「Ｃ」およびキャップ２９６０を覆う）封入されたフィルター膜２９４０に追加の処理、例えば図３６Ａ〜図３６Ｆに示す切片化等を行う。フィルター膜は、さらなる試験（例えば、電子顕微鏡）のために切片２９４０’にスライスまたはカッティングするデバイス（不図示）に載せられ得る（図３６Ｃ）。このプロセスは、収集した細胞のブロック全体が切片化／スライスされるまで続けることができる。さらに、フィルター膜２９４０は、切片化／スライス工程により細胞ブロック「Ｃ」が完全に切断された（ｔｒａｖｅｒｓｅｄ）ことを示すキャップ２９６０の（濾過挿入物２９４０とは）異なる色（または他の好適な標識）を操作者が認識することで、細胞ブロック全体の切片化／スライスが完了したときに操作者に知らせるように設計される（図３６Ｄ）。スライス２９４０’（細胞「Ｃ」およびパラフィンワックス「Ｗ」を含む）はさらなる検査のためにスライド３６００に載せられる（図３６Ｅ）。さらに、スライドはパラフィンワックスが融解または溶解するように加熱され、それにより検査用のスライドに細胞のみを残すことができる（図３６Ｆ）。
【００７２】
前述の実施形態と同様に、フィルター膜４４４０は、その外周周りに延在する拡大した縁（またはフレーム）を有して形成されることにより、表面積を増加させ、遠心分離工程および後続の切片化（すなわちカッティング）の間、より高い安定性および信頼性を提供することができる。したがって、本開示は、複数回切片化またはカッティングされて単一の生体試料から複数のスライス（したがって、顕微鏡による観察のためのスライド）を提供できるフィルター膜を提供する。
【００７３】
図４４〜図４６に示すように、フィルター膜の縁（またはフレーム）は多孔質フィルター部分（明瞭さのためこれらの図では省略される）よりも大きな厚さを有して形成され得る。さらに、この縁部分は、内側の多孔質材料上に収集された試料の特定の関心領域を簡単に識別するための視覚的補助としてさらに機能する不透明材料から形成されてもよい。多孔質フィルターおよびフィルター膜の縁を製作するのに多種多様な材料を用いることができる。例示のため限定はしないが、多孔質フィルターはポリエチレンテレフタレートまたはポリカーボネートフィルムで形成することができ、米国特許第４，５１８，２８８号（その全文が参考として本明細書に組み込まれる）に開示するように、フィルター膜の縁部分は機械加工可能なワックスで形成することができる。ワックスによって切刃がフィルターの縁を過剰な力なしで簡単にスライスでき、それによってフィルター膜の好ましくない座屈、刃の損傷、またはフィルター膜が裂けたり剥離したりすることを解消する（そのため、収集した試料の汚染を防ぐ）。また、縁は、収集した流体／組織の試料から組織または細胞ブロックを分離するように機能する多孔質フィルター膜とは別に形成することができる。そのような実施形態では、多孔質フィルター膜は、接着剤、ホットプレート、赤外線、レーザまたは超音波溶接によって周囲構造に取り付けてもよい。あるいは、縁および多孔質フィルター膜は一体型部品として一体形成され得る。また、縁は底部における径方向内側に突出するリップを有して形成することができる（図４６Ａおよび図５１Ａに最も良く示す）。多孔質膜はこのリップに沿って縁に結合される。
【００７４】
図４５〜図４８に示すように、フィルター膜の縁は、内部に溝またはスロット４４４２を有する上方に延びる側壁を有して形成される。カバー４４６０は、（生体試料の収集後）フィルター膜の縁のスロット４４４２と嵌め合い係合して、その間に密封を形成し、しっかりと生体試料を保持するように構成される相補的なフランジ４４６２を有して構成される。先に記載した通り、フィルター膜の周辺部に形成された波状のピーク部および谷部により提供された表面積の増加によって、包埋媒質（例えば、ワックス）との一体性およびフィルター膜の改善された固定を促進する。ピーク部および谷部の数は所望により変えることができ、いくつかの実施形態において、人間工学的魅力を増し、技術者によるフィルター膜の取り扱いを容易にするため、側面部分は実質的に平坦（または平面状）である。
【００７５】
カバー４４６０は隆起した表面（例えば、半球形ドーム）４４６６を有して形成され得、カバーをフィルター膜の縁４４４０内に圧縮したときにフィルター膜（および収集した試料）内に保持された一切の空気の脱気を可能にし制御する。また、カバーは、径方向内側の表面に垂直リブ４４６８を有して形成されて、剛性を増し均一な径方向の収縮を容易にできる、下方に延びる側壁を有する。図４５に示す例示的実施形態では、先端がカバーフランジ４４６２の平面から（下に）ずれるように、カバー側壁は隆起した表面４４６６の先端の（側壁に対する）高さよりも大きい距離だけ下方に延びる。
【００７６】
いくつかの実施形態では、図４７〜図４８に示すように、フィルター膜４７４０は、異なるウェルまたはチャンバとして機能する複数の孔４７４５を備える底面を有して形成され得る。使用時には、収集した細胞ブロックが複数のウェル／チャンバに分けられて、単一の生体試料がフィルター膜に（例えば、遠心分離を介して）分配されるであろう。このことにより、同一の生体試料に基づいて複数の試験および分析を（例えば、異なる設備で、または異なる時間に）行うことが可能になる。図示される例示的実施形態は７つの孔を描写しているが、孔の数、サイズおよび位置決めは所望に応じて異なり得る。
【００７７】
図４８に示すように、フィルター膜はカバー（不図示）を受容するための溝４７４２を有する縁を備える。ここで、カバーは平らなまたは平坦な表面を有して形成され、収集した試料の圧縮を容易にでき、それによって試料を、各孔４７４５内に位置する対応するフィルター膜（不図示）内に押し込む。加えてまたは代替的に、フィルター膜４４４０を封入材料（例えば、ＨｉｓｔｏＧｅｌ）で封入することにより、収集した試料をフィルター膜４７４０に保持できる。
【００７８】
開示される主題の別の態様によると、フィルター膜は遠心分離プロセスを利用することなく、生体試料から細胞ブロックを収集し形成するために提供される。図４９〜図５１Ａに示すように、フィルター膜４９４０には２つの多孔質フィルターメッシュ４９６６が備えられ、１つはフィルター膜の縁の上面と実質的に面一であるかまたは同一平面上であり、もう１つはフィルター膜の縁の底面と実質的に面一であるかまたは同一平面上である（図５１Ａに最も良く示される）。あるいは、多孔質フィルターは縁に隣接して配置され得る。この点に関しては、フィルター膜４９４０は収集試料用の一体成形型被保持物チャンバとして機能する。フィルター膜の縁は、側壁から径方向内側に延びる上部リップまたは下部リップを有して形成することができる。また、一方向バルブ（例えば、板ばねバルブ）４９７０は、側壁の縁の、上部リップと下部リップとの間の内面に配置される。一方向バルブは閉位置に付勢され、チャンバ外側（すなわち、フィルター膜４９４０の外部）からの圧力がチャンバ内の圧力を超えると、開位置に偏位される。操作中、技術者は生体試料を送達デバイス（例えば、ポンプまたは図５０に示されるような注射器）により、フィルター膜の縁の側壁に配置される入口４９５０を通して注入することができる。内部に注入される生体試料の量が増加するにつれ、チャンバ内の圧力が高まる。この内部圧力と引力により、生体試料を多孔質フィルター膜４９６６に通して、チャンバ内に細胞ブロック被保持物を残す。
【００７９】
開示される主題の別の態様によると、図５２〜図５４に描写されるように、試料投入チャンバ５２２０は細長管状体５２１０内に挿入されるように設計される（図５３参照）。試料投入チャンバ５２２０は、内部に挿入された際に細長管状体５２１０の上部と係合するように構成された構造的保持特徴５２１２（例えば、フランジまたはレッジ）を有する近位端または上端を備える。構造的保持特徴５２１２は、カールする、または細長管状体５２１０に形成されたリップに重なるように延在することにより、よりしっかりとした結合を提供できる。投入チャンバが概ね円筒形の外観を保持しながら内部にテーパを有するように、試料投入チャンバ５２２０の遠位端または下端５２２４は、減少する内径および実質的に一定の外径を有して構成され得る。試料投入チャンバの遠位部分５２２４は、クランプ５２５０の相補的な締結特徴と嵌め合い係合するために外側に複数の締結特徴（例えば、ねじ、突起部、凹部等）を備えることができる（下記でさらに詳述する）。さらに、遠位部分が凹んで、組立てたときにクランプ５２５０が試料投入チューブ５２２０と面一（同一平面上）嵌合を形成することができるように、遠位部分５２２４の外径は試料投入チューブ５２２０の残りの直径よりも小さくなり得る。
【００８０】
フィルター膜５２４０はクランプ５２５０内に配置され、クランプ５２５０は試料投入チャンバ５２２０の遠位端に取り付けられる（図５３参照）。このサブアセンブリが次に細長管状体５２１０内に配置されることで、近位端にて生体試料を受け取る準備ができる。クランプ５２５０は、遠心分離処理の間液体が容易に通過できるように、内部に少なくとも１つの孔５２５３を有する平面状底面を有して構成され得る。図２９に最も良く示すように、クランプ５２５０は平面状底面から上方に延びる側壁をさらに備え、平面状底面は内面に締結特徴（例えば、ねじ、突起部、凹部等）を備え、内面は、試料投入チャンバの遠位部分５２２４の外面の締結特徴と取り外し可能に係合するように構成される。側壁は試料投入チャンバ５２２０の輪郭と一致する曲率半径を有する弓状形状を有して構成される。
【００８１】
図５２〜図５４の例示的実施形態において、フィルター膜５２４０はクランプ５２５０内に配置される。その後、クランプは、クランプ５２５０を時計回りまたは反時計回りにひねるかまたはねじることによる螺合を介して、しっかりと試料投入チャンバ５２２０に連結される。例示的実施形態では、クランプはラチェット係合（すなわち、回転および並進運動の組み合わせ）を介して投入チャンバ５２２０にしっかりと連結される。すなわち、操作者はクランプを上向きにまたは試料投入チャンバ５２２０に向かって押すと同時にクランプ５２５０を時計回りまたは反時計回りにひねる。
【００８２】
フィルター膜５２４０は、上方に延びる側壁の上部に（図４４〜図４８にさらに詳細に示すような）スロットまたは溝５２４２を有して形成される。この溝は試料投入チャンバ５２２０の遠位端を嵌合して受容するように構成されている（図５３Ｂに最も良く示す）。
【００８３】
試料投入チャンバ５２２０内にはバルブステム５２６０も備えられる。バルブステム５２６０は閉位置に付勢され（図５２に示す）、試料投入チャンバ５２２０とフィルター膜５２４０との流体連通を防止する。図５３Ｂに示すように、バルブステム５２６０の遠位端は、Ｏ−リング（明瞭さのため不図示）を保持するためのスロットまたは溝５２６２を有する球根状部分を備える。閉位置にあるとき、ステムバルブ５２６２の球根状端部は試料投入チャンバ５２２０のテーパ付側壁に密封係合する。この密封により生体試料は試料投入チャンバ内に配置され得、遠心分離プロセスを行うために、試料は一切、試料投入チャンバを出てフィルター膜５２４０を通過しない。したがって、生体試料は遠心分離プロセス中に分離されるかまたは層化され（すなわち、流体内容物が固体内容物の上になる）、ステムバルブ５２６０が開いても、解放されてフィルター膜と連通するかまたはフィルター膜を通過するだけである。
【００８４】
試料投入チャンバ５２２０（および外部チューブ５２１０）に支持キャップ５２３０を置くとステムバルブ５２６０が開く。キャップ５２３０によって加えられる下向きの力はばね５２７０の偏向に勝り（図５３Ａ参照）、ステムバルブの球根状遠位端５２６２を試料投入チャンバ５２２０のテーパ付側壁との係合から外すことが可能になる。図５３Ａに示すように、ばね５２７０は、例えば試料投入チャンバの口に位置するフランジ内の、試料投入チャンバ５２２０の側壁と係合する端部を有する。さらに、ばね５２７０（ステムバルブとは別個の部品またはステムバルブと一体形成され得る）は、その配置を行うために孔を通ってステムバルブ５２６０内に延びる。同様に、支持キャップ５２３０を取り外すと、ステムバルブの球根状遠位端５２６２が再び試料投入チャンバ５２２０のテーパ付側壁と係合するように、ばね５２７０はステムバルブ５２６０を上方に移動させるその付勢された位置に戻る。
【００８５】
その他の実施形態では、上述のステムバルブの代わりに、ストップコックバルブまたはボールバルブを利用して、試料投入チャンバ５２２０内に生体試料を保持することができる。あるいは、図５５に示すように、バルブが開いた半円（例えば、孔）５５６０’および中実の半円を有し得る場合、回転円板バルブ５５６０を利用できる。試料投入チャンバ５５２０は、試料投入チャンバの遠位端の開口部５５２０’のサイズを小さくする内部テーパを有して形成できる。閉位置にあるとき、中実の半円は、試料投入チャンバの内腔または孔５５２０’と位置合わせされるため、下にあるフィルター膜５５４０との流体連通を防ぐ。回転時、内腔またはキャビティ内の内容物が下にあるフィルター膜５５４０と流体連通することができるように、円板バルブ孔５５６０’は試料投入チャンバの開口部５５２０’と位置合わせされる。例示的実施形態は流体流れが可能なように単一の半球形孔を有する円形のバルブを描写するが、代替的な孔の形状、サイズおよび数が所望に応じて提供され得ることを理解すべきである。摺動円板バルブの表面積が大きくなれば大きくなるほど、試料投入チャンバを通りフィルター膜に入る流れを妨げる。
【００８６】
同様に、図５６に示すように、バルブが中央孔５６６０ｂ’および中実部材５６６０ａを有することができる場合、摺動バルブを用いることができる。試料投入チャンバ５６２０は、試料投入チャンバの遠位端にて開口部５６２０’のサイズを小さくする内部テーパを有して形成できる。閉位置にあるとき、中実部材５６６０ａは孔５６６０ｂ’の上を覆うかまたは塞ぐため、下にあるフィルター膜５６４０との流体連通を防ぐ。中実部材５６６０ａを並進させると、（試料投入チャンバの開口部５６２０’と位置合わせされた）摺動バルブ孔５６６０ｂ’が塞がれなくなるため、試料投入チャンバ５６２０内の内容物は下にあるフィルター膜５６４０と流体連通可能になる。例示的実施形態は流体流れが可能なように単一の中央に位置する孔を有する円形のバルブを描写するが、代替的な孔の形状、サイズおよび数が所望に応じて提供され得ることを理解すべきである。例えば、図５６Ａは、孔が三日月形状で形成される代替的実施形態の例示的な描写である。
【００８７】
フィルター膜に取り付けられ生体試料を均一な細胞ブロックに圧縮できるカバーを再度参照すると、（図５７〜図５８に示す）いくつかの実施形態では、カバーは２つのピースから成る部品５７６０ａ、５７６０ｂとして構成され得る。上部ピース５７６０ａは入れ子式にフィルター膜に結合されて、上部ピースを下部ピース５７６０ｂ、したがって下にあるフィルター膜に保持されている生体試料に配置でき、圧縮して細胞ブロックの形成を促進する。２つのピースから成るカバーの実施形態は、下部ピース５７６０ｂ内のチャネルと係合する突起部を上部ピース５７６０ａが備えて上部ピースと下部ピースの相対移動を可能にするさね継ぎにより組立てることができる。
【００８８】
開示される主題の別の態様によると、試料投入チャンバは図５９に示すようなサブチャンバ５９２０’のアレイを備えることができる。各サブチャンバ５９２０’を使用して、異なる検体／ドナーからの生体試料を収納できる。同様に、複数の異なる細胞ブロックが１回の遠心分離サイクルにおいて異なる検体から形成できるように、フィルター膜５９４０は、軸方向にサブチャンバ５９２０’と位置合わせされる一致孔５９４０’を有して形成することができる。
【００８９】
本開示の一体成形型被保持物チャンバ（すなわち、非遠心分離用途）を再度参照すると、図４９〜図５１Ａに関して前述したように、別の実施形態では、図５１Ａのバルブ４９７０構成の代わりに膜を設けることができる。図６０〜図６１Ａに示すように、一体成形型被保持物チャンバ６１４０は、縁を画定する直立側壁を有する正方形部材として形成され得る。フィルター膜の縁は、側壁から内側に延びる上部リップまたは下部リップを有して形成することができる。また、フィルター膜６１４０には２つの多孔質フィルターメッシュ（不図示）が備えられ、１つはフィルター膜の縁の上面と実質的に面一であるかまたは同一平面上であり（内向きに延びる縁のリップに沿って取り付けられる）、もう１つはフィルター膜の縁の底面と実質的に面一であるかまたは同一平面上である。いくつかの実施形態では、密封リング６１４２は内向きに延びる縁のリップに沿って設けられ、多孔質フィルターメッシュの縁への結合を容易にできる。この点に関しては、フィルター膜６１４０は収集試料用の一体成形型被保持物チャンバとして機能する。側壁のうち少なくとも１つは、固定液を含む生体試料がチャンバ内に（例えば、注射器により）駆動される入口６１５０を備える。膜６１７０は縁の側壁の、上部リップと下部リップの間の内面に配置され、被保持物チャンバ６１４０の中心に内向きに突出する。また、キャビティまたはリザーバ６１７２が膜６１７０に隣接して設けられる。試料および固定液が入口６１５０に注入されると、圧力が高まり薄い壁膜６１７２を変位させて溶液がリザーバ６１７２から膜壁６１７２を通って内部チャンバに入るまで、溶液はキャビティ６１７２に溜まる。内部に注入される生体試料の量が増加するにつれ、チャンバ内の圧力が高まる。この内部圧力と引力により、生体試料を多孔質フィルター膜（不図示）に通して、チャンバ内に細胞ブロック被保持物を残す。リザーバ内の圧力が低下するにつれ、膜壁６１７２は、リザーバ６１７２と内部チャンバ間の流れを防止する密封を形成する静止状態に戻る。上述したように、この一体成形型被保持物チャンバは、被保持物チャンバの切片化またはカッティングを可能にする材料で構成される。
【００９０】
開示される主題の一態様によると、図３２〜図３６Ｆのコンテナ３２００と同様に、被保持物チャンバのフィルター膜６２４０はカセットまたはコンテナ６２００内に収容または格納され得る。図６２〜図６２Ａに描写される実施形態では、コンテナ６２００それ自体（フィルター膜６２４０および内部に収集した細胞を有する）は、底部６２０２および蓋６２０１を備えた容器に保持され得る。また、コンテナ６２００（フィルター膜６２４０および内部に収集した細胞を有する）は、スリーブ６２０３、６２０４により直立に容器内に格納され得る。
【００９１】
コンテナ６２００は実質的に矩形であり、上面および底面、３つの垂直辺ならびに１つのスロープ付辺を有する。上面および底面は、一連の規則的間隔を空けたスロットにより穿孔され格子を形成する。上面はヒンジによりコンテナの一辺に取り付けられる。上面は底面に着脱可能に取り付けられ得るか、または所望の通り、例えばリビングヒンジを介して永久的に取り付けられ得る。あるいは、上面がコンテナ６２００を開閉するように底面に対して直線的に並進移動するかまたは摺動するように、上面はさね継ぎにより底面に取り付けられ得る。コンテナ６２００の格子により、フィルター膜６２４０を洗浄するために空気、水または洗浄液を通過させることができる。
【００９２】
図６２〜図６３に示すように、コンテナは図６０〜図６１Ａで実施され記載されているフィルター膜被保持物チャンバを収納するように構成される。したがって、フィルター膜６２４０は、リザーバ６２７２および膜６２７０を備える（図６３参照）。コンテナ６２００は、フィルター膜６２４０の側壁の入口６２５０と位置合わせされるポート６２５５（例えば、ルアーポート）を備える。技術者は注射器またはポンプをコンテナポート６２５５に接続して、生体試料をフィルター膜の入口を通してリザーバ６２７２内に注入し、最終的に、濾過プロセスを行うことが可能な膜６２７０を通すことができる。コンテナ６２００は追加の処理、例えば図３２〜図３６Ｆに関して上述されたようなパラフィンワックスの注入および成形を行うこともできる。
【００９３】
これらの実施形態で特定される種々の部品は、各部品が容易に取り外せる（すなわち、破損することなく着脱可能な）ように組立てられる個々の部材であり得る。このような構成は、遠心分離プロセスの準備において迅速な組立て、ならびにフィルター膜およびその上に配置された収集された細胞試料に迅速にアクセスできるようにその後の分解が可能となるという点で有利である。この容易に取り外し可能な特徴によって、部品および密封の破砕または破壊を必要とする永久的または溶接された接続、ならびにフィルターおよび収集された細胞試料にアクセスするためのそのような作業に伴う破片による汚染リスクを回避する。
【００９４】
いくつかの実施形態では、細胞ブロック装置および部品は色分けされる。例えば、フィルターアセンブリは、検査室の作業員または臨床医が容易にフィルターアセンブリ内の試料の種類を特定できるように、色分けされ得る。例示のため限定はしないが、フィルターアセンブリの材料は、肝臓試料を表すのに紫色、肺試料を表すのに青色であり得る。フィルターアセンブリまたは細長管状体の色分けは、標識として機能する圧縮カバーと合わせることが可能である。
【００９５】
本明細書に記載される主題は記載された特定の実施形態に限定されず、当然ながら異なり得ることが理解されよう。例えば、上述の例示的実施形態は微細針吸引用途に限定されない。その代わりに、開示される主題はさらなる臨床設定、例えば、小さな外科的生検材料（２ｃｍ未満）の処理、研究所においては血液で希釈した骨髄から細胞の単離、人工組織の小さな試料の分析、および脊柱の細胞の純化に適用できる。したがって、要約書または発明の概要に含まれるものはすべて、本開示の範囲を限定するものと理解されるべきではない。本明細書で使用する用語は、特定の実施形態を説明する目的のみのためであり、限定することを目的としたものではないことがさらに理解されよう。値の範囲が与えられる場合、その範囲の上限と下限の中間の各値、および規定の範囲内における任意の他の規定のまたは中間の値が開示される主題に含まれることが理解される。
【００９６】
特に定義しない限り、本明細書で用いるすべての技術的および科学的用語は、この開示される主題の属する分野における当業者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または同等の任意の方法および材料が、この開示される主題の実践または試験に用いることができるが、本開示は明確に特定の例示的方法および材料に言及し得る。
【００９７】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、その文脈にて別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を包含する。
【００９８】
本開示を読めば当業者には明らかなように、本明細書に記載され、示される個々の各実施形態は、この開示される主題の範囲または趣旨から逸脱することなく他のいくつかの実施形態のいずれかの特徴とは容易に分離できる、または組み合わせられるそれぞれの構成要素および特徴を有する。
【００９９】
種々の変更および変形形態が、開示される主題の趣旨または範囲を逸脱することなく開示される主題の方法およびシステムにてなされ得ることが当業者には明白である。したがって、開示される主題は、添付の特許請求の範囲およびそれらの均等物の範囲内の変更および変形形態を包含することを意図する。
なお、本発明には以下の態様が含まれることを付記する。
［１］
上面および底面を有するフィルター膜と、
縁であって、
前記フィルター膜に外接し、その内部に配置される溝を備える、上方に延びる側壁、および
前記フィルター膜の前記底面に隣接して配置される前記縁の底面を有する縁と
を備え、
前記フィルター膜および縁は切片化可能である、生物学的フィルター。
［２］
下方に延びる側壁および中心部分を有するフランジを有するカバーをさらに含み、前記中心部分は隆起した表面を有する、［１］に記載の生物学的フィルター。
［３］
前記隆起した表面はドームである、［２］に記載の生物学的フィルター。
［４］
前記隆起した表面は、前記フランジの下に配置される先端を有する、［３］に記載の生物学的フィルター。
［５］
前記カバーのフランジはリップ部分を備え、前記リップ部分は前記縁の溝に嵌め合い係合するように構成される、［２］に記載の生物学的フィルター。
［６］
前記縁の前記底面は前記側壁間に垂直に延び、複数の孔を備える、［２］に記載の生物学的フィルター。
［７］
前記カバーの側壁は複数のリブを備える、［１］に記載の生物学的フィルター。
［８］
前記縁の少なくとも一部は波状のピーク部および谷部を備える、［１］に記載の生物学的フィルター。
［９］
前記縁の少なくとも一部は平坦な表面を備える、［１］に記載の生物学的フィルター。
［１０］
前記縁はワックスから構成される、［１］に記載の生物学的フィルター。
［１１］
それらの間の内部空間を規定する近位端および遠位端を有する試料投入チャンバと、
前記試料投入チャンバの前記遠位端に配置されるフィルター膜と、
前記試料投入チャンバ内に配置され、閉鎖位置に付勢されて前記試料投入チャンバと前記フィルター膜との間の流体連通を防ぐ、バルブステムと
を備える医療装置。
［１２］
クランプをさらに備え、前記フィルター膜は前記クランプにより保持される、［１１］に記載の医療装置。
［１３］
前記クランプは、少なくとも１つの孔を有する底面および側壁を備える、［１２］に記載の医療装置。
［１４］
前記クランプは螺合により前記試料投入チャンバに取り付けられる、［１２］に記載の医療装置。
［１５］
前記バルブステムは、前記試料投入チャンバを超えて近位方向に延びる、［１１］に記載の医療装置。
［１６］
前記バルブステムはばねを受容するための孔を備える、［１１］に記載の医療装置。
［１７］
前記ばねは前記試料投入チャンバの前記近位端を横切って延び、前記側壁と係合する、［１６］に記載の医療装置。
［１８］
キャップをさらに備え、前記キャップは前記バルブステムの近位端と係合して前記バルブを開き、前記試料投入チャンバと前記フィルター膜とを流体連通可能にする、［１１］に記載の医療装置。
［１９］
前記試料投入チャンバの前記遠位端は、前記近位端よりも幅狭の開口部を有する、［１１］に記載の医療装置。
［２０］
前記バルブステムは、前記閉鎖位置にあるとき、前記試料投入チャンバの前記側壁と嵌め合い係合する、［１１］に記載の医療装置。
【符号の説明】
【０１００】
１００  細胞ブロック装置
１１０  細長管状部材、細長管状体
１１２  近位端
１１３  開口部
１１４  遠位端
１１６  ねじ山、くびれ部
１１８  区画
１２０  フィルターアセンブリ
１２２  フィルター膜
１２４  基部部材
１２６  平面状底面
１２８  上方に延びる壁
１３０  蓋
２００  圧縮カバー
２２０  第２のフィルターアセンブリ
２２２  フィルター膜
２２４  基部部材
２２８  上方に延びる壁
２２９  ベローズ
３１０  試料
３２０  フィルターアセンブリ
３２２  フィルター膜
３２４  基部部材
４００  圧縮カバー
４１０  平面状上面
４１２  側壁
４３０  ベローズ
５１０Ｂ  管状部材
５１０ａ  管状部材、細長管状ピース
５１０ｂ  管状部材、細長管状ピース
５１２ａ  シェルフ、リップ
５１２ｂ  シェルフ、リップ
５２２  フィルター膜
５２２ａ  ピーク部
５２２ｂ  谷部
５３０  ポスト
５３２  凹部
５３４  リブ
６００  カバー
６１０  管状体、細長管状部材
６１２  プランジャ
６１２ｂ  シェルフ
６１４  プランジャ
６２２  フィルター膜
６２２ａ  構造的補強特徴、シェルフ
６２２ｂ  支柱
７０２  試料投入チャンバ、細長管状体
７０４  支持ポスト、支持部材
７０５  チャネル、スロット
７１０  細長管状部材、細長管状体、チューブ
７２２  支持部材、構成部品、フィルター膜
８１０ａ  チューブ、細長管状部材
８１０ｂ  チューブ、細長管状部材
８１２  シェルフ
８３０ａ  第１のキャップ
８３０ｂ  第２のキャップ
９１０  細長管状体
９１０ａ  第１のチューブ、第１の細長管状体
９１０ａ’  位置
９１０ａ’’  位置
９１０ａ’’’  位置
９１０ｂ  第２の細長管状体
９２２  フィルター膜
１０１０  細長管状体
１０１２  構造的保持特徴
１０１３  遠位端
１０１４  閉鎖機構
１０１６  係止機構
１１１０  細長管状体
１１１２  出口
１１１３  非平面
１１１４  サイドポート
１１２０  フィルター膜、下側濾過面
１１２２  上側濾過面、上面
１１２３  下側濾過面、下面
１１２４  縁部分、ハウジング
１７０４  支持部材
１７０５  チャネル
２０００  外付け注射器
２００１  リザーバ
２３００  細胞ブロック装置
２３１０  細長管状体
２３１２  近位端
２３１４  遠位端
２３１８  区画
２３２０  細長管状体、試料投入チャンバ
２３３０  カバー
２３４０  フィルター膜、フィルターアセンブリ
２４１２  構造的保持特徴
２４１３  遠位端
２４１４  閉鎖機構
２４１６  係止機構
２６００  コンテナ
２９００  細胞ブロック装置
２９１０  細長管状体
２９１２  構造的保持特徴、リップ、近位端
２９１４  遠位端
２９１８  区画
２９２０  試料投入チャンバ、試料投入チューブ
２９２４  遠位部分、下端
２９３０  カバー
２９４０  濾過挿入物、フィルター膜
２９４０’  切片、スライス
２９５０  クランプ部材
２９５２  側壁
２９５３  孔
２９５４  側壁
２９６０  濾過後キャップ
３２００  コンテナ
３２１０  上面
３２２０  底面
３５００  モールド
３５１０  上部
３５２０  底部
３５２２  区画
３６００  スライド
３９５２  側壁
３９５４  側壁
４１６０  濾過後キャップ
４１６２  発泡体
４１６４  ワックス
４１６６  フィルター
４３６０  濾過後キャップ
４３６２  発泡体
４３６４  ワックス／ＬＤＰＥ部分
４４４０  フィルター膜
４４４２  スロット
４４６０  カバー
４４６２  フランジ
４４６６  表面
４４６８  垂直リブ
４７４０  フィルター膜
４７４２  溝
４７４５  孔
４９４０  フィルター膜
４９５０  入口
４９６６  多孔質フィルター膜、多孔質フィルターメッシュ
４９７０  バルブ
５２１０  細長管状体、外部チューブ
５２１２  構造的保持特徴
５２２０  試料投入チューブ、試料投入チャンバ、管状体
５２２４  下端、遠位部分
５２３０  支持キャップ
５２４０  フィルター膜
５２４２  溝
５２５０  クランプ
５２５３  孔
５２６０  ステムバルブ、バルブステム
５２６２  球根状遠位端、ステムバルブ
５２７０  ばね
５５２０  試料投入チャンバ
５５２０’  孔、開口部
５５４０  フィルター膜
５５６０  回転円板バルブ
５５６０’  円板バルブ孔
５６２０  試料投入チャンバ
５６２０’  開口部
５６４０  フィルター膜
５６６０ａ  中実部材
５６６０ｂ’  摺動バルブ孔、中央孔
５７６０ａ  上部ピース
５７６０ｂ  下部ピース
５９２０’  サブチャンバ
５９４０  フィルター膜
５９４０’  一致孔
６１４０  一体成形型被保持物チャンバ、フィルター膜
６１４２  密封リング
６１５０  入口
６１７０  膜
６１７２  薄い壁膜、リザーバ、キャビティ、膜壁
６２００  コンテナ、容器
６２０１  蓋
６２０２  底部
６２０３  スリーブ
６２０４  スリーブ
６２４０  フィルター膜
６２５０  入口
６２５５  コンテナポート
６２７０  膜
６２７２  リザーバ
【図１】
0006392769.tif 000002
【図２】
0006392769.tif 000003
【図３】
0006392769.tif 000004
【図４】
0006392769.tif 000005
【図５】
0006392769.tif 000006
【図６】
0006392769.tif 000007
【図７】
0006392769.tif 000008
【図８Ａ】
0006392769.tif 000009
【図８Ｂ】
0006392769.tif 000010
【図８Ｃ】
0006392769.tif 000011
【図８Ｄ】
0006392769.tif 000012
【図９Ａ】
0006392769.tif 000013
【図９Ｂ】
0006392769.tif 000014
【図９Ｃ】
0006392769.tif 000015
【図９Ｄ】
0006392769.tif 000016
【図１０Ａ】
0006392769.tif 000017
【図１０Ｂ】
0006392769.tif 000018
【図１０Ｃ】
0006392769.tif 000019
【図１０Ｄ】
0006392769.tif 000020
【図１０Ｅ】
0006392769.tif 000021
【図１０Ｆ】
0006392769.tif 000022
【図１０Ｇ】
0006392769.tif 000023
【図１０Ｈ】
0006392769.tif 000024
【図１１Ａ】
0006392769.tif 000025
【図１１Ｂ】
0006392769.tif 000026
【図１１Ｃ】
0006392769.tif 000027
【図１１Ｄ】
0006392769.tif 000028
【図１２Ａ】
0006392769.tif 000029
【図１２Ｂ】
0006392769.tif 000030
【図１３Ａ】
0006392769.tif 000031
【図１３Ｂ】
0006392769.tif 000032
【図１３Ｃ】
0006392769.tif 000033
【図１３Ｄ】
0006392769.tif 000034
【図１４Ａ】
0006392769.tif 000035
【図１４Ｂ】
0006392769.tif 000036
【図１４Ｃ】
0006392769.tif 000037
【図１５】
0006392769.tif 000038
【図１６】
0006392769.tif 000039
【図１７Ａ】
0006392769.tif 000040
【図１７Ｂ】
0006392769.tif 000041
【図１７Ｃ】
0006392769.tif 000042
【図１７Ｄ】
0006392769.tif 000043
【図１８】
0006392769.tif 000044
【図１９Ａ】
0006392769.tif 000045
【図１９Ｂ】
0006392769.tif 000046
【図２０Ａ】
0006392769.tif 000047
【図２０Ｂ】
0006392769.tif 000048
【図２０Ｃ】
0006392769.tif 000049
【図２０Ｄ】
0006392769.tif 000050
【図２１】
0006392769.tif 000051
【図２２】
0006392769.tif 000052
【図２３Ａ】
0006392769.tif 000053
【図２３Ｂ】
0006392769.tif 000054
【図２４Ａ】
0006392769.tif 000055
【図２４Ｂ】
0006392769.tif 000056
【図２５】
0006392769.tif 000057
【図２６】
0006392769.tif 000058
【図２７Ａ】
0006392769.tif 000059
【図２７Ｂ】
0006392769.tif 000060
【図２７Ｃ】
0006392769.tif 000061
【図２７Ｄ】
0006392769.tif 000062
【図２７Ｅ】
0006392769.tif 000063
【図２７Ｆ】
0006392769.tif 000064
【図２８Ａ】
0006392769.tif 000065
【図２８Ｂ】
0006392769.tif 000066
【図２８Ｃ】
0006392769.tif 000067
【図２８Ｄ】
0006392769.tif 000068
【図２８Ｅ】
0006392769.tif 000069
【図２９】
0006392769.tif 000070
【図３０Ａ】
0006392769.tif 000071
【図３０Ｂ】
0006392769.tif 000072
【図３０Ｃ】
0006392769.tif 000073
【図３１Ａ】
0006392769.tif 000074
【図３１Ｂ】
0006392769.tif 000075
【図３１Ｃ】
0006392769.tif 000076
【図３１Ｄ】
0006392769.tif 000077
【図３２】
0006392769.tif 000078
【図３３Ａ】
0006392769.tif 000079
【図３３Ｂ】
0006392769.tif 000080
【図３３Ｃ】
0006392769.tif 000081
【図３３Ｄ】
0006392769.tif 000082
【図３４】
0006392769.tif 000083
【図３５Ａ】
0006392769.tif 000084
【図３５Ｂ】
0006392769.tif 000085
【図３５Ｃ】
0006392769.tif 000086
【図３５Ｄ】
0006392769.tif 000087
【図３６Ａ】
0006392769.tif 000088
【図３６Ｂ】
0006392769.tif 000089
【図３６Ｃ】
0006392769.tif 000090
【図３６Ｄ】
0006392769.tif 000091
【図３６Ｅ】
0006392769.tif 000092
【図３６Ｆ】
0006392769.tif 000093
【図３７Ａ】
0006392769.tif 000094
【図３７Ｂ】
0006392769.tif 000095
【図３８】
0006392769.tif 000096
【図３９Ａ】
0006392769.tif 000097
【図３９Ｂ】
0006392769.tif 000098
【図４０】
0006392769.tif 000099
【図４１】
0006392769.tif 000100
【図４２Ａ】
0006392769.tif 000101
【図４２Ｂ】
0006392769.tif 000102
【図４３Ａ】
0006392769.tif 000103
【図４３Ｂ】
0006392769.tif 000104
【図４４】
0006392769.tif 000105
【図４５】
0006392769.tif 000106
【図４５Ａ】
0006392769.tif 000107
【図４６】
0006392769.tif 000108
【図４６Ａ】
0006392769.tif 000109
【図４７】
0006392769.tif 000110
【図４８】
0006392769.tif 000111
【図４９】
0006392769.tif 000112
【図５０】
0006392769.tif 000113
【図５１】
0006392769.tif 000114
【図５１Ａ】
0006392769.tif 000115
【図５２】
0006392769.tif 000116
【図５３】
0006392769.tif 000117
【図５３Ａ】
0006392769.tif 000118
【図５３Ｂ】
0006392769.tif 000119
【図５４】
0006392769.tif 000120
【図５５】
0006392769.tif 000121
【図５６】
0006392769.tif 000122
【図５６Ａ】
0006392769.tif 000123
【図５７】
0006392769.tif 000124
【図５８】
0006392769.tif 000125
【図５９】
0006392769.tif 000126
【図６０】
0006392769.tif 000127
【図６１】
0006392769.tif 000128
【図６１Ａ】
0006392769.tif 000129
【図６２】
0006392769.tif 000130
【図６２Ａ】
0006392769.tif 000131
【図６３】
0006392769.tif 000132