(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（I）で表される化合物またはその塩を含むグルカゴン様ペプチド-1（GLP-1）分泌促進剤。
【化１】
0006399940.tif 000012
式（I）
（式（I）中、Rは、炭素数９〜１３の直鎖アルキル基を表す。）
【請求項２】
式（I）で表される化合物がN-カルボキシメチル-N-(1-オキソドデシル)グリシンである、請求項１に記載のGLP-1分泌促進剤。
【請求項３】
下記式（I）で表される化合物またはその塩を含むインスリン分泌促進剤。
【化２】
0006399940.tif 000013
式（I）
（式（I）中、Rは、炭素数９〜１３の直鎖アルキル基を表す。）
【請求項４】
式（I）で表される化合物がN-カルボキシメチル-N-(1-オキソドデシル)グリシンである、請求項３に記載のインスリン分泌促進剤。
【請求項５】
下記式（I）で表される化合物またはその塩を含む血糖値低減剤。
【化３】
0006399940.tif 000014
式（I）
（式（I）中、Rは、炭素数９〜１３の直鎖アルキル基を表す。）
【請求項６】
式（I）で表される化合物がN-カルボキシメチル-N-(1-オキソドデシル)グリシンである、請求項５に記載の血糖値低減剤。
【請求項７】
下記式（I）で表される化合物またはその塩を含む糖尿病予防剤または治療剤。
【化４】
0006399940.tif 000015
式（I）
（式（I）中、Rは、炭素数９〜１３の直鎖アルキル基を表す。）
【請求項８】
式（I）で表される化合物がN-カルボキシメチル-N-(1-オキソドデシル)グリシンである、請求項７に記載の糖尿病予防剤または治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルカゴン様ペプチド−１（GLP-1）分泌促進剤、インスリン分泌促進剤、血糖値低減剤、糖尿病予防剤または糖尿病治療剤、脂質代謝改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、その予備軍まで含めた患者数が約２０００万人といわれており、国が医療対策において特に重点をおいている５大疾病の一つである。糖尿病は、口渇や多飲等の高血糖自体による症状をおこすこともあるが、真に恐ろしいのは様々な合併症である。合併症としては、糖尿病神経障害、糖尿病網膜症、および糖尿病腎症が知られており、糖尿病治療の主な目的は、それら合併症を防ぐことにあるともいえる。
【０００３】
合併症の中で早期に出現するのは糖尿病神経障害であり、手足の先に痛みやしびれの症状が現れる。神経障害が進行すると、感覚が鈍くなるため、傷ややけどを負っても気付かず、そのまま感染症を伴う細胞壊死となり、手足を切断しなければならない事態を招きかねない。糖尿病網膜症は、緑内障と並ぶ成人の失明の主要な原因である。その初期症状はあまりないことが多いため、自覚症状を感じたときには網膜症がかなり進んでいることが多い。糖尿病性腎症は、高血糖により腎の糸球体が硬化して、老廃物を濾過する腎臓としての機能が損なわれることにより起こり、人工透析になる原因の第１位である。人工透析を受けるためには長時間病院に拘束されることになるため、日常生活に著しい負担となる。以上のように、糖尿病合併症は多岐に亘り、患者のクオリティオブライフを著しく損なうものである。よって、合併症を併発しないように糖尿病の治療を早期に行うこともさることながら、糖尿病にならないよう予防する必要性は依然として高い。
【０００４】
糖尿病の治療法としてはインスリン注射が知られているが、これは侵襲性が高く患者の負担が大きい。そのため、服用の負担が少ない様々な経口の糖尿病治療薬が開発されてきた。これまでに、速効型スルホニルウレア剤、グルコーストランスポーター（GLUT）阻害剤、ＧＬＰ−１等のインクレチン分泌促進剤、ＤＰＰ４阻害剤などの、インスリン分泌の促進やインクレチンの分解阻害等に作用する薬剤が開発されていた。しかし、副作用の問題や、常用による効果の低減等の問題があった。また、インスリン過剰分泌による低血糖等が問題となっており、そのような問題を解決する医薬の開発が望まれていた。
【０００５】
Ｇ蛋白共役型受容体（ＧＰＲ）１１９は、膵臓ランゲルハンス島β細胞と腸管L細胞（例えばNCI-H716, GLUTag株）で強い発現が確認される（非特許文献１、２）GαS タンパク質共役型のGタンパク質共役受容体であり、β細胞におけるグルコース依存性のインスリン分泌促進作用と、腸内分泌細胞におけるグルカゴン様ペプチド-1（GLP-1）やグルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド（GIP）等のインクレチンホルモンの分泌促進作用に関与している。そのため、ＧＰＲ１１９に対するアゴニストは、糖尿病治療薬となる可能性がある。ＧＰＲ１１９アゴニストは、分解酵素の阻害剤等と違い、直接血糖値低減に働きかけるため、常用しても効果の低減が少ない。さらに、血糖値が上昇したときにのみ効果を発揮するため、低血糖等の副作用も少ない。ＧＰＲ１１９については、受容体が発見されてから精力的にアゴニストの探索がなされてきたが（特許文献１、非特許文献３）、現在まで実用化されたものはない。
【０００６】
また、内因性脂質である脂肪酸ヒドロキシ化脂肪酸（ＦＡＨＦＡ：fatty acid esters
of hydroxy fatty acids）は、II型糖尿病を治療し得る旨が報告されている（非特許文献４）。しかし、脂肪酸の分岐部分にＮ（窒素）を有するものが同様の作用を有する旨は、
これまでに報告されていない。
【０００７】
Ｇ蛋白共役型受容体（ＧＰＲ）１２０は、脂肪細胞（例えば3T3-L1株）や腸管L細胞（例えばNCI-H716株）上で発現し（非特許文献５）、インクレチンホルモンであるGLP-1やCCKの分泌を促進し、血糖の制御や食欲の調節に関与している（非特許文献６、７）。また脂肪細胞の分化に必須であり脂肪細胞の成熟を促進するタンパク質として機能していることが報告されている。そのためＧＰＲ１２０に対するアゴニストは、糖尿病治療薬および脂質代謝改善薬となる可能性がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１３−０６３９１３号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】吉田茂,新規2型糖尿病治療薬としてのGPR119アゴニスト,日薬理誌,136,259-264(2010)
【非特許文献２】Zhi-Liang Chu, Chris Carroll, Jean Alfonso, Veronica Gutierrez, Hongmei He, Annette Lucman, Melinda Pedraza, Helen Mondala, Hui Gao, Didier Bagnol, Ruoping Chen, Robert M. Jones, Dominic P. Behan, and James Leonard, A Role for Intestinal Endocrine Cell-Expressed G Protein-Coupled Receptor 119 in Glycemic Control by Enhancing Glucagon-Like Peptide-1 and Glucose-Dependent Insulinotropic Peptide Release, Endocrinology. 2008 May;149(5):2038-47
【非特許文献３】Kogure R, et al., Biochem Biophys Res Commun. 2011 Dec 9; 416(1-2): 58-63.
【非特許文献４】Yore MM, et al., Cell. 2014 Oct 9;159(2):318-32.
【非特許文献５】Veera R. Konda, Anuradha Desai, Gary Darland, Irene O.C.M. Vroegrijk, Janna A. van Diepen, Peter J. Voshol, Jeffrey S. Bland and Matthew L. Tripp,; ETA060 activates omega-3 fatty acid receptor GPR120, reduces weight gain, and increases insulin sensitivity in high-fat diet fed mice, The FASEB Journal. 2012;26:125.7
【非特許文献６】Hirasawa, A., Tsumaya, K., Awaji, T. et al.: Free fatty acids regulate gut incretin glucagon-like peptide-1 secretion through GPR120. Nat. Med., 11, 90-94 (2005)
【非特許文献７】Tanaka, T., Katsuma, S., Adachi, T. et al.: Free fatty acids induce cholecystokinin secretion through GPR120. Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol., 377, 523-527 (2008)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、新規なGLP-1分泌促進剤、インスリン分泌促進剤、血糖値低減剤、糖尿病予防剤、糖尿病治療剤、及び脂質代謝改善剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、式（I）で表される化合物がGLP-1分泌促進作用を有し、それによりインスリン分泌促進剤、血糖値低減剤、糖尿病予防剤、糖尿病治療剤、及び脂質代謝改善剤として使用しうることを見出し、本発明を完成させた。
【００１２】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
［１］下記式（I）で表される化合物またはその塩を含むグルカゴン様ペプチド-1（GLP-1
）分泌促進剤。
【化１】
0006399940.tif 000002
式（I）
（式（I）中、Rは、水素原子を表すか、又は、水酸基、アミノ基もしくはアリール基から選ばれる置換基を有していてもよい、炭素数１〜２０の炭化水素基を表す。）
［２］前記式（I）のRは、炭素数５〜１５の炭化水素基を表す、［１］に記載のGLP-1分泌促進剤。
［３］式（I）で表される化合物がN-カルボキシメチル-N-(1-オキソドデシル)グリシンである、［１］または［２］に記載のGLP-1分泌促進剤。
［４］下記式（I）で表される化合物またはその塩を含むインスリン分泌促進剤。
【化２】
0006399940.tif 000003
式（I）
（式（I）中、Rは、水素原子を表すか、又は、水酸基、アミノ基もしくはアリール基から選ばれる置換基を有していてもよい、炭素数１〜２０の炭化水素基を表す。）
［５］GPR119又はGPR120の活性化により、または、GLP-1が膵臓ランゲルハンス島β細胞に働きかけることにより、インスリン分泌を促進するためのものである、［４］に記載のインスリン分泌促進剤。
［６］下記式（I）で表される化合物またはその塩を含む血糖値低減剤。
【化３】
0006399940.tif 000004
式（I）
（式（I）中、Rは、水素原子を表すか、又は、水酸基、アミノ基もしくはアリール基から選ばれる置換基を有していてもよい、炭素数１〜２０の炭化水素基を表す。）
［７］下記式（I）で表される化合物またはその塩を含む糖尿病予防剤または治療剤。
【化４】
0006399940.tif 000005
式（I）
（式（I）中、Rは、水素原子を表すか、又は、水酸基、アミノ基もしくはアリール基から選ばれる置換基を有していてもよい、炭素数１〜２０の炭化水素基を表す。）
［８］下記式（I）で表される化合物またはその塩を含む脂質代謝改善剤。
【化５】
0006399940.tif 000006
式（I）
（式（I）中、Rは、水素原子を表すか、又は、水酸基、アミノ基もしくはアリール基から選ばれる置換基を有していてもよい、炭素数１〜２０の炭化水素基を表す。）
［９］下記式（I）で表される化合物またはその塩を含むインクレチン産生促進剤。
【化６】
0006399940.tif 000007
式（I）
（式（I）中、Rは、水素原子を表すか、又は、水酸基、アミノ基もしくはアリール基から選ばれる置換基を有していてもよい、炭素数１〜２０の炭化水素基を表す。）
［１０］下記式（I）で表される化合物またはその塩を含むＧＰＲ１１９および又はＧＰＲ１２０作用薬。
【化７】
0006399940.tif 000008
式（I）
（式（I）中、Rは、水素原子を表すか、又は、水酸基、アミノ基もしくはアリール基から選ばれる置換基を有していてもよい、炭素数１〜２０の炭化水素基を表す。）
【００１３】
なお、本明細書において、「インスリン」という用語は、グルコース代謝を調節するポリペプチドホルモンを指す。インスリンは、インスリン感受性細胞のインスリン受容体に結合し、グルコース摂取を媒介する。インスリンは、Ｉ型糖尿病を治療するために使用され、ＩＩ型糖尿病を治療するためにも使用される場合がある。
また、「インクレチン」という用語は、食物摂取に応答してインスリン分泌を増大するホルモンのグループを指す。インクレチンは、ＧＬＰ−１およびＧＩＰを含む。
また、「ＧＬＰ−１」または「グルカゴン様ペプチド」という用語は、主に、Ｌ細胞により生成されるペプチドホルモンである。ＧＬＰ−１は、インスリン分泌を増大し、グルカゴン分泌を減少させ、ベータ細胞量およびインスリン遺伝子発現を増加し、胃における酸分泌および胃内容排出を阻害し、満腹度を増加することにより食物摂取を減少させる。
また、「作用薬」という用語は、受容体に結合し、細胞での応答を誘発する化合物を指す。「作用薬」は、例えば、ホルモン等の内因性リガンドの作用を模倣し、内因性リガンドにより生成されるものと同様の生理学的応答を引き起こす。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の式（I）で表される化合物は、GLP-1分泌促進作用を有する。従って、本発明の式（I）で表される化合物またはその塩は、GLP-1分泌促進剤、インスリン分泌促進剤、血糖値低減剤、糖尿病予防剤または治療剤、脂質代謝改善剤、インクレチン産生促進剤、ＧＰＲ１１９およびまたはＧＰＲ１２０作動薬等の医薬の成分として好適である。そして、GLP-1によるインスリン分泌促進作用は、グルコース依存性であることが知られているから、本発明の式（I）で表される化合物またはその塩は、摂食時などの高血糖条件下のみで血糖値の上昇を抑え、空腹時などの比較的低血糖条件下では過度な低血糖を引き起こす危険性が小さいものであり、その点で安全性が高いといえる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】ヒト十二指腸腺癌細胞株HuTu80における被検化合物のGLP-1分泌促進作用を示すグラフ。
【図２】ヒト腸管Ｌ細胞株ＮＣＩ−Ｈ７１６における被検化合物のGLP-1分泌促進作用を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の化合物は、下記式（I）で表される。
【化８】
0006399940.tif 000009
式（I）
式（I）中、Rは、水素原子を表すか、又は、水酸基、アミノ基もしくはアリール基から選ばれる置換基を有していてもよい、炭素数１〜２０の炭化水素基を表す。
【００１７】
上記アリール基には、アリール基およびヘテロアリール基が含まれる。アリール基は置換または無置換のアリール基を意味し、好ましくはフェニル基である。アリール基の置換
基としては、ハロゲン原子、アルコキシ基、アルキル基、水酸基が好ましい。ヘテロアリール基は置換または無置換のヘテロアリール基を意味し、ピリジル基、ピラジル基、ピリミジル基、ピラゾリル基、ピロリル基、イソキサゾリル基、イソチアゾリル基、インドリル基、キノリル基、イソキノリル基、ベンゾイミダゾリル基、イミダゾリル基等が好ましく挙げられる。ヘテロアリール基の置換基としては、ハロゲン原子、アルコキシ基、アルキル基、水酸基が好ましい。
【００１８】
上記炭化水素基は、炭素数が１〜２０、好ましくは炭素数５〜１５、より好ましくは炭素数９〜１３である。該炭化水素基は、直鎖であっても分岐鎖であってもよく、また、環状であってもよいが、直鎖アルキル基が好ましい。また、該炭化水素基は、飽和であっても不飽和であってもよいが、飽和のものが好ましい。
【００１９】
本発明における式（I）で表される化合物としては、下記式（II）で表される化合物であるN-カルボキシメチル-N-(1-オキソドデシル)グリシン（Cas.No. 3775-51-7）が好ましい。
【化９】
0006399940.tif 000010
式（II）
【００２０】
また、本発明は、上記式（I）で表される化合物の塩も含む。当該塩には、薬学的に許容される種々の塩が含まれ、具体的には、塩酸塩、硫酸塩、燐酸塩、マロン酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、酢酸塩、トシル酸塩、カンシル酸塩、リンゴ酸塩等が挙げられる。
【００２１】
上記式（I）で表される化合物またはその塩は、常法に従った有機化学合成により得られたものでもよいし、植物や微生物等の天然物から抽出・分離精製をして得られたものでもよい。また、市販されている化合物を用いてもよい。
【００２２】
本発明の式（I）で表される化合物は、下記実施例において示されるように、GLP-1分泌促進作用を有する。GLP-1はグルコース依存性のインスリン分泌を促進し血糖値を低減させることが知られているから、本発明の式（I）で表される化合物またはその塩は、インスリン分泌不足、GLP-1分泌不足または高血糖と関連する種々の疾患に対する医薬として用いることができる。当該疾患としては、たとえば、糖尿病、肥満、高血圧、高脂血症等が挙げられる。糖尿病は、例えば、国立国際医療研究センター病院発行の糖尿病標準診療マニュアルにおいて定義される糖尿病診断基準等により診断することができる。本発明の式（I）で表される化合物またはその塩は、低血糖条件下で過度な低血糖を引き起こす危険性が小さく安全性が高いため、糖尿病と診断された患者だけでなく、血糖値が高めで糖尿病が疑われる患者にも、予防の意味で投与することが可能である。
【００２３】
本発明の剤の剤形は特に限定されず、治療目的に応じて適宜選択できる。具体的には、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、注射剤、貼付剤等が挙げられる。
【００２４】
本発明の剤は、上記式（I）で表される化合物またはその塩以外の有効成分を含有していてもよい。たとえば、SU剤等のインスリン分泌促進剤、DPP-４阻害剤、糖吸収遅延剤、またはインスリン抵抗性改善剤等を、式（I）で表される化合物またはその塩と共に１つ
の剤に含めてもよいし、両者を別々の剤に配合したものを１つのキットとしてもよい。
また、本発明の剤の製剤化の際、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、保存剤、矯味矯臭剤、希釈剤等の製剤化に必要な添加剤を加えてもよい。
【００２５】
本発明の剤は、式（I）で表される化合物またはその塩の薬物動態を改善するような処方設計、たとえば、リポソーム等への包埋を施すことが好ましい。リポソームは、二重の脂質層からなるものであるが、該脂質層が一層のもの、または二層以上の多重層になったものの、いずれも使用することができる。リポソームの構成成分としては、フォスファチジルコリン、コレステロール、フォスファチジルエタノールアミン、さらに電荷をあたえる物質としてのフォスファチジン酸等が用いられる。
【００２６】
本発明の剤の投与方法は、経口的投与、非経口投与の何れであってもよい。また、本発明の剤の投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別等に応じて決定されるが、一般的には、有効成分量として成人一日あたり１０μg／ｋｇから１０００mg／ｋｇ程度の範囲であり、好ましくは１００μｇ／ｋｇから１００mg／ｋｇ程度の範囲である。
【実施例】
【００２７】
以下に、実施例を挙げて、本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明が、これら実施例にのみ、限定を受けないことは言うまでもない。
【００２８】
＜ヒト十二指腸腺癌細胞株HuTu80、およびヒト腸管Ｌ細胞株ＮＣＩ−Ｈ７１６におけるGLP-1分泌促進作用＞
被検化合物がin vitroでGLP-1の分泌を促進するか否かを、非特許文献３に記載の方法に従って、ヒト十二指腸腺癌細胞株HuTu80（ＡＴＣＣ ＨＴＢ−４０：住商ファーマより入手）を用いて検証した。さらにGPR119,120の発現が報告されている別の細胞（ヒト腸管Ｌ細胞株ＮＣＩ−Ｈ７１６（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−２５１：住商ファーマより入手））でも検証した。
被検化合物A（Cas. No.3775-51-7）は、Labotest社（ドイツ）より購入した。被検化合物Aの構造式を、下記式（II）により示す。
【化１０】
0006399940.tif 000011
式（II）
【００２９】
HuTu80は、不活化ウシ胎児血清を10%（v/v）添加したDulbecco’s modified Eagle’s medium（DMEM）を用いて、5%CO2、95%空気の加湿雰囲気下で、37℃で培養された。GLP-1分泌の測定のために、HuTu80を、96ウェルプレートに4×104／ウェルで播種し、上記の条件で培養した。培養２、３日後に、細胞をKrebs-Ringer buffer(KRB; 125mM NaCl, 5mM NaCO3, 5.9mM KCl, 1.28mM CaCl2・2H2O, 25mM HEPES(pH7.4), 1.2mM MgSO4・7H2O, BSA(ROCKLAND社  ８００−６５６−７６２５) １w/v％）で２回洗浄した。DMSOにて22mM溶液に希釈された被検化合物Aを、最終濃度が100μM、10μM、1μMとなるように上記DMEMで希釈して、洗浄後の細胞に滴下し、上記の条件で培養した。
培養２時間後に細胞の上清を採取し、active GLP-1 ELISA アッセイキット（シバヤギ、日本）を使用して、上清中のGLP-1を測定した。測定は３回行われた。測定結果は、３回測定の平均値で示す（図１）。
【００３０】
図１は、被検化合物Aの添加により、ヒト十二指腸腺癌細胞株HuTu80からのGLP-1分泌作
用が促進されたことを示す。当該作用は、投与量依存的であった。GLP-1はインスリン分泌作用を促進することが知られていることから、被検化合物Aの投与により、GLP-1分泌作用が促進され、それによってインスリン分泌作用が促進されることが理解できる。
【００３１】
NCI-H716は、ウシ胎児血清を10%（v/v）添加したRPMI-1640を用いて、5%CO2、95%空気の加湿雰囲気下で、37℃で培養された。GLP-1分泌の測定のために、NCI-H716を、96ウェルプレートに4×104／ウェルで播種し、上記の条件で培養した。培養２、３日後に、細胞をKrebs-Ringer buffer(KRB; 125mM NaCl, 5mM NaCO3, 5.9mM KCl, 1.28mM CaCl2・2H2O,
25mM HEPES(pH7.4), 1.2mM MgSO4・7H2O, BSA(ROCKLAND社  ８００−６５６−７６２５)
１w/v％）で２回洗浄した。被検化合物Aを、最終濃度が100pM、10pM、1pMとなるように上記KRBで希釈して、洗浄後の細胞に滴下し、上記の条件で培養した。非特許文献２を参考に、Forskolin (フォーカスバイオモレキュールズ社製、10-2073 ) 1μMをKRBで希釈して、同様に洗浄後の細胞に滴下し陽性対照とした。
培養２時間後に細胞の上清を採取し、active GLP-1 ELISA アッセイキット（シバヤギ、日本）を使用して、上清中のGLP-1を測定した。測定は３回行われた。測定結果は、３回測定の平均値で示す（図２）。
【００３２】
図２は、被検化合物Aの添加により、ヒト腸管細胞株NCI-H716からのGLP-1分泌作用が促進されたことを示す。当該作用は、投与量依存的であった。さらに100pM濃度において、陽性対照であるForskolin 1μMよりも強いGLP-１分泌促進効果が見られた。GLP-1はインスリン分泌作用を促進することが知られていることから、被検化合物Aの投与により、GLP-1分泌作用が促進され、それによってインスリン分泌作用が促進されることが理解できる。
【産業上の利用可能性】
【００３３】
本発明の式（I）で表される化合物またはその塩は、GLP-1分泌促進作用を有し、GLP-1分泌促進剤、インスリン分泌促進剤、血糖値低減剤、糖尿病予防剤、糖尿病治療剤、及び脂質代謝改善剤の成分として使用可能である。本発明の式（I）で表される化合物またはその塩は、摂食時などの高血糖条件下のみで血糖値の上昇を抑えるため、空腹時などの比較的低血糖条件下で、過度な低血糖を引き起こす危険性が小さく、安全性が高い。
【図１】
0006399940.tif 000016
【図２】
0006399940.tif 000017