(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
長径の長さが１００μｍ以下の結晶のみからなり、かつＡ晶、Ｂ晶、Ｄ晶、Ｇ晶、及び非晶質体の含有量が７重量％以下である２−［３−シアノ−４−（２−メチルプロポキシ）フェニル] −４−メチルチアゾール−５−カルボン酸のＣ晶の微粉化物。
【請求項２】
Ｄ５０が２５μｍ以下である請求項１に記載のＣ晶の微粉化物。
【請求項３】
Ｄ９０が５０μｍ以下である請求項１又は２に記載のＣ晶の微粉化物。
【請求項４】
嵩密度が０．２０ｇ／ｍｌ以上である請求項１〜３のいずれか１項に記載のＣ晶の微粉化物。
【請求項５】
タップ密度が０．３０ｇ／ｍｌ以上である請求項１〜４のいずれか１項に記載のＣ晶の微粉化物。
【請求項６】
日本薬局方第２液に対する溶解速度が０．５ｍｇ／ｍｌ／ｍｉｎ以上であるか、又は、ｐＨ５．５のＭｃＩｌｖａｉｎｅ緩衝液に対する溶解速度が１３μｇ／ｍｌ／ｍｉｎ以上である、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＣ晶の微粉化物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のＣ晶の微粉化物を有効成分として含有する固形製剤。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載のＣ晶の徴粉化物を、有効成分である２−［３−シアノ−４−（２−メチルプロポキシ）フェニル] −４−メチルチアゾール−５−カルボン酸の総量の３０％以上の含有量で含有する固形製剤。
【請求項９】
錠剤の形態である請求項７又は８のいずれか一項に記載の固形製剤。
【請求項１０】
請求項１〜６記載の微粉末Ｃ晶、賦形剤、結合剤、及び崩壊剤を含有する、痛風または高尿酸血症治療用の錠剤であって、
該賦形剤が乳糖、無水乳糖、結晶セルロース、トウモロコシデンプン、アルファー化デンプン、部分アルファー化デンプン、Ｄ−マンニトール及びリン酸水素カルシウムから選ばれる１種以上であり、
該結合剤が、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、及びポリビニルピロリドンから選ばれる１種以上であり、崩壊剤がカルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム及びクロスポビドンから選ばれる１種以上である錠剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高い安定性、溶出性、嵩密度、タップ密度及びハンドリング性を有する2-[3-シアノ-4-(2-メチルプロポキシ)フェニル]-4-メチルチアゾール-5-カルボン酸の微粉化結晶、並びに、これを有効成分として含む、痛風、高尿酸血症及び慢性腎臓病の予防及び又は治療のために用いる安定性及び溶出性に優れた固形製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
下記式で示される2-[3-シアノ-4-(2-メチルプロポキシ)フェニル]-4-メチルチアゾール-5-カルボン酸(一般名：フェブキソスタット：febuxostat、国際公開WO92/9279)は非プリン型のキサンチンオキシダーゼ阻害薬であり、日本国においては、帝人ファーマ株式会社から「フェブリク（登録商標）錠」の商品名で2011年より痛風及び高尿酸血症の治療薬として錠剤の形態で製造及び販売されて臨床使用されている（以下、2-[3-シアノ-4-(2-メチルプロポキシ)フェニル]-4-メチルチアゾール-5-カルボン酸を「フェブキソスタット」という。以下、フェブリク（登録商標）錠を「F錠」ともいう。）。
【０００３】
【化１】
0006408642.tif 000002
【０００４】
フェブキソスタットに関しては結晶多形の存在が知られており、特許第3547707号公報にはA晶、B晶およびC晶、メタノール和物であるD晶、水和物であるG晶（BH晶ともいう）として特定される5種類の結晶物質、並びに非晶質体（後述の特許第4084309号公報においてはE晶ともいう）が開示されている。それらのうち、長期保存による晶形維持の観点からA晶、C晶、及びG晶（BH晶）が有用であることが上記刊行物に具体的に示されており(同公報の実施例10)、工業的優位性からはA晶が好ましいとされている(同公報の第9頁3〜5行)。この理由から、A晶についてはいくつかの選択的製造方法が報告されている(特開2003-261548号公報、特開2011-20950号公報、及び国際公開WO2007/148787)。
【０００５】
フェブキソスタットの製剤化に関しては、特許第4084309号公報の参考例１に、これらの結晶形の中で、A晶、C晶及びG晶が最も物理的安定性に優れることが記載されており、また、同公報の実施例1及び実施例3において、フェブキソスタットのA晶を湿式造粒して得られる錠剤は、ばらつきが少なく均一な溶出プロファイルを示すことを確認して、平均粒子径が12.9μm以上26.2μm以下のA晶、乳糖及び部分アルファー化デンプンから選ばれる賦形剤、結合剤であるヒドロキシプロピルセルロース、及び崩壊剤を含有する錠剤を提案している(特許第4084309号公報の請求項1)。一方で、同公報の比較例1及び比較例6において、フェブキソスタットのC晶を同様に湿式造粒して得られる錠剤は、溶出が遅いうえにばらつきが大きく不均一な溶出プロファイルを示すことが記載されている（特許第4084309号公報の第3頁1〜4行を参照)。
なお、同公報において錠剤の製造に用いているA晶は、衝撃式粉砕機であるサンプルミル又はインパクトミルを用いた粉砕物である (同特許公報の表7の粒子2及び3、並びに表3)。
【０００６】
一方、C晶については、長期保存による晶形維持の観点から有用であることが具体的に示されており(特許第3547707号公報の実施例10)、さらに同公報の図1のI領域での通常の操作範囲では安定な結晶であり、通常の保管条件(75％相対湿度、25℃など)では長期に保持され、かつ化学的にも安定であると説明されている(同公報第8頁41〜43行)。このC晶は特許第3547707号公報に示された図4の粉末X線回折図及び同公報に開示された2θのピーク位置(6.62°、10.82°、13.36°、15.52°、16.74°、17.40°、18.00°、18.70°、20.16°、20.62°、21.90°、23.50°、24.78°、25.18°、34.08°、36.72°、及び38.04°)、同公報の図15の赤外吸収スペクトル、固体15N-NMRのピーク位置（210ppm及び282ppmの鋭いシングルピーク）及び固体13C-NMRの20ppmの位置に現れるほぼ等価なトリプレットピーク（特許第4084309号公報の参考例3）から当業者が容易に特定可能な物質である。
【０００７】
このC晶は、特許第3547707号公報の一般的説明によれば、溶媒媒介転移を用いて、通常はメタノール/水の混合溶液に溶解度以上の任意の結晶を懸濁させ、これに少量のC晶を添加して加熱攪拌することにより製造できるとされている(特許第3547707号公報第7頁39行〜第8頁1行)。そして、同公報の8頁37行〜39行に記載されているとおり「この晶形への溶媒媒介転移は、条件にもよるが通常数日を要し、このままではＣ晶を工業的に再現性よく製造することは難しい」ため、同公報の実施例2には種晶としてC晶を添加する方法が示されている。しかしながら、種晶として用いるC晶をどのような手段で入手したのかは同公報には全く教示ないし示唆がない。従って、C晶は上記公報に物質としては明確に特定されているものの、種晶として用いるC晶が入手できない状態にあっては当業者といえども同明細書に開示された方法のみからはC晶を製造することは不可能である。
【０００８】
一方、非特許文献1〜8には、A晶、B晶、C晶、D晶およびＢＨ晶（特許3547707号のG晶と同じ）の中でC晶が最も安定であることが繰り返し述べられており（例えば非特許文献4の1156頁右欄最下行）、A晶、D晶、BH晶のいずれからもC晶に転移しうることが記載されている。また、非特許文献1〜8においては、溶媒媒介転移によって、C晶の種晶を加えずにC晶を作製する方法の詳細な条件が記載されており、メタノールと水の体積比が7:3の溶媒中で絶対温度323度（49.85℃）に設定することによって、2〜3日以内にA晶からC晶が得られることが記載されている（例えば、非特許文献１の段落1.3及び2.3、ならびに、非特許文献2の段落2.3および682頁左欄7行〜25行）。したがって、非特許文献1〜8に記載の方法に基づけば、2〜3日以内に、溶媒媒介転移によって、C晶の種晶を用いずにC晶を作製することが可能である。
【０００９】
さらに、国際公開WO2012/131590（特許文献7）においては、メタノール又はエタノールなどの低級アルコール存在下に、2-(3-ホルミル- 4-イソブトキシフェニル)-4-メチルチアゾール-5-カルボン酸エチルエステルに炭酸カリウム、炭酸セシウム、炭酸ナトリウムなどの炭酸アルカリ金属を作用させることによりエステル結合を加水分解して2-(3-ホルミル- 4-イソブトキシフェニル)-4-メチルチアゾール-5-カルボン酸を製造し、続いてギ酸の中で、ギ酸ナトリウム及びヒドロキシルアミン塩酸塩を作用させて得た反応生成物に60℃以上の水を加えた後に室温まで冷却することにより、工業的に再現性良くフェブキソスタットのC晶を得ることのできる方法を開示しているので、国際公開WO2012/131590の記載に基づけば、C晶の種晶を用いずにC晶を作製することが可能である（国際公開WO2012/131590のClaim 4及びExample 4を参照）。
【００１０】
また、C晶の種晶は、北京連本医薬化学技術有限公司（Beijing Lianben Pharm-chemicals Tech.Co., Ltd.）から購入可能であり、非特許文献1〜8の著者である北村光孝氏、特許文献１の出願人である帝人株式会社、特許文献７の出願人であるサンド社および本願の出願人である日本ケミファ株式会社において保有していることからも明らかなとおり、本願の出願時点においては容易に入手可能となっている。
【００１１】
また、各結晶形の日本薬局方の崩壊試験用の第2液への溶解速度を比較するとE晶（つまり非晶質）＞A晶＞B晶＞D晶＞G晶＞C晶の順であり、溶解速度の点でC晶が最も劣ること、及びC晶の溶解速度(0.0694 mg/cm2/min)はA晶(0.1434 mg/cm2/min）の1/2以下であることが報告されている(特許第4084309号公報の参考例2)。
【００１２】
ところで、特許第4084309号公報には、WO1999/065885号公報（特許3547707号）の方法によってC晶を作製した旨が記載されており、WO1999/065885号公報（特許3547707号）の方法は、メタノールと水の混合溶媒中から晶出してC晶を作製する方法のみが開示されていることから、特許第4084309号ではメタノールと水の混合溶媒中から晶出したC晶を用いていると考えられる。また、特許第4084309号の出願日以前には、メタノールと水の混合溶媒中から晶出する方法以外のC晶の製造方法は知られていない。
【００１３】
特許第4084309号公報の比較例1によれば、同公報で用いているメタノールと水の混合溶媒中から晶出して作製したC晶を用いて湿式造粒法によって製造した錠剤を固体13C-NMRで測定すると20ppmの位置に鈍いピークを示したことから非晶質体（E晶）を含有しているとの考察がなされている。この製剤を40℃/75%RHで保管すると非晶質体（E晶）の一部がG晶に転移すると述べられるとともに(同公報の比較例5)、pH5.5の McIlvaine緩衝液に対する溶出率が低下し、溶出率のばらつきが若干上昇したことも報告されている(同公報の表4)。このように、特許第4084309号公報で用いているメタノールと水の混合溶媒中から晶出させて作製したC晶を用いて錠剤を製造した場合には、非晶質体化及び非晶質体化を介した結晶形の転移が懸念される。
【００１４】
なお、WO1992/009279号公報（特許2725886号)の実施例76にも、フェブキソスタットをエタノール中で再結晶させる方法が記載されているが、得られた結晶の結晶形は記載されていない。
【００１５】
なお、フェブキソスタットの結晶多形及び多形の相互転移などについては北村らによる一連の詳細な報告がある(Journal of Chemical Engineering of Japan, Vol.35, No.11, pp.1116-1122, 2002（非特許文献1）; Journal of Crystal Growth, Vol.236, pp.676-686, 2002（非特許文献2）; Journal of Crystal Growth, Vol.257, pp.177-184, 2003（非特許文献3）; Crystal Growth & Design, Vol.4, No.6, pp.1153-1159, 2004（非特許文献4）; Pure Appl. Chem., Vol.77, No.3, pp.581-591, 2005（非特許文献5）;  Crystal Growth & Design, Vol.6, No.5, pp.1214-1218, 2006（非特許文献6）; Cryst. Eng. Comm., Vol.11, pp.949-964, 2009（非特許文献7）；及び「多形現象のメカニズムと多形制御」北村光孝，株式会社アイピーシー，2010年，第6章，第8章，第9章（非特許文献8）)。C晶についてはJournal of Chemical Engineering of Japan, 35, No.11, pp.1116-1122, 2002（非特許文献1）の「2.3. Crystallization」の項やJournal of Crystal Growth, Vol.236, pp.676-686, 2002（非特許文献２）に結晶化の具体的方法が開示されており、C晶が安定形であり、A晶が準安定形であるとの教示もある。
【００１６】
ただし、これらの文献に記載されたフェブキソスタットのC晶は、非特許文献8の第9章に記載されているもの以外は、すべて、メタノールと水の混合溶媒から晶出させたか、他の結晶形から転移させて得られたものである。これらの方法で得られたフェブキソスタットのC晶の嵩密度、タップ密度、安息角、ハンドリング性については報告されていない。
【００１７】
なお、一般に、非晶質体は結晶に比べて不安定であり、他の結晶形への転移も生じやすいことから、非晶質体の生成は避けるべきであるので、非晶質体の標品として用いることのできる実質的に非晶質体のみからなるフェブキソスタットが求められている。この点、特許3547707号の実施例9には、「D晶を80℃、2mmHgにて4時間加熱減圧乾燥」することによるフェブキソスタットの非晶質体の製造方法が記載されているが、「非晶質体の標品として用いることのできる実質的に非晶質体のみからなるフェブキソスタット」であることは記載されていない。したがって、実質的に非晶質体のみからなるフェブキソスタットの具体的な製造方法が求められている。さらに、一般に非晶質体の含有割合を定量することは困難であり、フェブキソスタット原薬中の非晶質体の割合の定量方法は知られていない。
【００１８】
また、特許第3547707号公報においてG晶と呼ばれる結晶形は、上記の非特許文献においてはBH晶と呼ばれており、BH晶からメタノールと水の混合溶媒中での結晶転移により調製したC晶は長軸の長さが200μmを超え、数μmの横幅を有する柱状晶であることが明らかにされている(非特許文献２のFig.6(c))。また、特許第4084309号公報には、C晶は安定形であるものの（同公報の表1）、原薬の溶解速度および錠剤からの溶出速度が遅いことが記載されている（同公報の表2および表4）。
【００１９】
上記の他、フェブキソスタットのC晶をアセトニトリルから晶出させる方法は、非特許文献8の第9章及び非特許文献10に記載されてはいるものの、同文献には、得られたC晶の大きさ、形状、嵩密度、安息角、他の結晶形や非晶質の混入の有無、並びに、原薬の溶解特性もしくは製剤からの溶出特性は記載されていない。さらに、非特許文献8の第9章の図9-5には、アセトニトリル溶媒中から25℃でC晶を析出させたことが記載されている。同文献には、同文献に記載されたC晶の示差熱分析スペクトルは、「融解と考えられる大きな吸熱ピークの前に、吸熱ピークと小さな発熱ピークが観察される」ものであり、「吸熱ピークと小さな発熱ピーク」は「まずC型が融解し、その融液中からA型が析出し、さらに温度が上昇することによりA型が融解する」ことによる「融液媒介転移」と考えられると考察されているように、非特許文献8に記載されたC晶は依然として結晶転移しうる不安定なものであると考えられる。
【００２０】
さらに、フェブキソスタットのC晶の粉砕方法、粉砕条件及び粉砕物の性質を検討した先行技術は知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２１】
【特許文献１】国際公開WO92/9279
【特許文献２】特許第3547707号公報
【特許文献３】特開2003-261548号公報
【特許文献４】特開2011-20950号公報
【特許文献５】国際公開WO2007/148787
【特許文献６】特許第4084309号公報
【特許文献７】国際公開WO2012/131590
【非特許文献】
【００２２】
【非特許文献１】Journal of Chemical Engineering of Japan, Vol.35, No.11, pp.1116-1122, 2002
【非特許文献２】Journal of Crystal Growth, Vol.236, pp.676-686, 2002
【非特許文献３】Journal of Crystal Growth, Vol.257, pp.177-184, 2003
【非特許文献４】Crystal Growth & Design, Vol.4, No.6, pp.1153-1159, 2004
【非特許文献５】Pure Appl. Chem., Vol.77, No.3, pp.581-591, 2005
【非特許文献６】Crystal Growth & Design, Vol.6, No.5, pp.1214-1218, 2006
【非特許文献７】Cryst. Eng. Comm., Vol.11, pp.949-964, 2009
【非特許文献８】多形現象のメカニズムと多形制御」北村光孝，株式会社アイピーシー，2010年，第6章，第8章及び第9章
【非特許文献９】Journal of Biological Chemistry, Vol.278, No.3, 1848-1855, 2003
【非特許文献１０】Industrial & Engineering Chemistry Research, Vol.51, Issue 39, 12814-12820, 201
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
本発明の課題は、高い安定性と高い溶出性を兼ね備えるフェブキソスタットの結晶を提供することである。具体的には、溶出試験液もしくは崩壊試験液（例えば、日本薬局方の溶出試験第2液もしくは崩壊試験第2液）に対して、より溶解速度の速いフェブキソスタットの結晶の製造方法を提供することが本発明の課題である。
【００２４】
また、本発明の課題は、非晶質体を含有しないフェブキソスタットの結晶を提供することである。本発明の課題は、小さい粒子サイズで狭い範囲に分布する良好な粒度分布を有するフェブキソスタットの結晶を提供することである。
【００２５】
さらに、本発明の課題は、溶媒残量が医薬品製造上の問題にならない程度に十分低いフェブキソスタットの結晶を提供することである。
【００２６】
さらにまた、本発明の課題は、高い嵩密度と高いタップ密度を有するフェブキソスタットの結晶を提供することである。
【００２７】
加えて、本発明の課題は、綿状とならず、低い安息角を有し、ハンドリングに優れるフェブキソスタットの結晶を提供することである。
【００２８】
そして、本発明の課題は、これらの性質の一又は二以上を有するフェブキソスタットの結晶を有効成分として含む、痛風、高尿酸血症及び慢性腎臓病の予防及び又は治療のための安定性及び溶出性に優れた固形製剤を提供することである。
【００２９】
さらに、本発明の課題は、フェブキソスタットの結晶を有効成分として含む痛風及び高尿酸血症の予防及び又は治療のために用いる固形製剤であって、安定性に優れ、溶出速度が十分に速く、かつ溶出特性のばらつきが少ない固形製剤を提供することにある。
【００３０】
したがって、本発明の最終的な課題は、高い安定性と高い溶出性を兼ね備えるのみならず、非晶質体を含有せず、小さい粒子サイズで狭い範囲に分布する良好な粒度分布を有し、溶媒残量が医薬品製造上の問題にならない程度に十分低く、高い嵩密度と高いタップ密度を有し、綿状とならず、低い安息角を有し、ハンドリングに優れるという性質の一又は二以上を備えた、フェブキソスタットの小型化結晶及び／又はこれらの微粉化物、並びに、これを有効成分として含む、痛風、高尿酸血症及び慢性腎臓病の予防及び又は治療のための固形製剤であって、安定性に優れ、溶出速度が十分に速く、かつ溶出特性のばらつきが少ない固形製剤を提供することである。
【００３１】
本発明の発明者は、上記課題解決のために、最も安定な結晶形であると考えられているものの、原薬としての溶解性及び錠剤からの溶出性が悪く、製造に時間がかかるために再現性良く工業的に生産することには適さないと考えられてきたフェブキソスタットのC晶に着目して、これを克服するために種々検討する過程で、メタノールと水の混合溶媒中から晶出する従来の方法で製造した粉砕していないフェブキソスタットのC晶（以下、「メタノール水C晶」ともいう。）は、綿状の粉体であり、医薬品の原薬として用いるには、安息角が測定不能なほど流動性が悪く、嵩密度も測定不能なほど低く、タップ密度も低すぎるという課題を見出した。
【００３２】
また、本発明の発明者は、メタノールと水の混合溶媒中から晶出して得たフェブキソスタットのC晶の欠点を克服するために、アセトニトリルから晶出させて製造したフェブキソスタットのC晶の性質を検討する過程で、アセトニトリルから晶出させて製造したフェブキソスタットのC晶（以下、「アセトニトリルC晶」ともいう。）は、そのままでは、依然として溶解性が不十分であり、嵩密度が低い水準であり、ハンドリングも不十分であり、アセトニトリルの残留溶媒が高めであるという解決すべき課題を見出した。
【００３３】
さらに、アセトニトリルから晶出させて製造したフェブキソスタットのC晶の粉砕方法及び粉砕条件を種々検討する過程で、アセトニトリルから晶出させたC晶を、乳鉢粉砕、ボールミル粉砕、サンプルミル粉砕すると、非晶質体化または結晶転移が生じるとともに、粒子径が大きくなり、粒度分布も広くなるという問題点を見出した。
【００３４】
なお、１９９８年に厚生省から通知された「医薬品の残留溶媒ガイドラインについて」においては、「医薬品中の残留量を規制すべき溶媒」であるクラス2の溶媒に分類されており、その濃度限度値は410ppmとされていることから、アセトニトリルの残留濃度が410ppmよりも十分に低いフェブキソスタットのC晶の製造方法を確立することが課題とされている。
【００３５】
したがって、本発明の課題は、高い溶出性と高い安定性を有するのみならず、非晶質体を含有せず、小さい粒子サイズで狭い範囲に分布する良好な粒度分布を有し、溶媒残量が医薬品製造上の問題にならない程度に十分低く、高い嵩密度と高いタップ密度を有し、綿状とならず、低い安息角を有し、ハンドリングに優れるという性質の一又は二以上を備えた、フェブキソスタットの結晶、可能であれば、並びに、これを有効成分として含む、痛風、高尿酸血症及び慢性腎臓病の予防及び又は治療のための、安定性に優れ、溶出速度が十分に速く、かつ溶出特性のばらつきが少ない固形製剤を提供することである。
【００３６】
また、本発明の課題は、実質的に非晶質体のみからなるフェブキソスタット、及びその製造方法、並びに、フェブキソスタットの非晶質体の定量方法を提供することである。実質的に非晶質体のみからなるフェブキソスタットは、溶出性に優れていることが知られており、製剤上の工夫によって、安定な固形製剤の製造に用いることができる可能性がある。また、一般的には非晶質体の生成は望ましくないとされていることから、フェブキソスタットの非晶質体の定量方法を提供することが望まれている。
【課題を解決するための手段】
【００３７】
本発明者らは、試行錯誤を重ねて鋭意検討した結果、フェブキソスタットをアセトニトリルから晶出させてC晶を製造すること、及び、アセトニトリルから晶出させたC晶をジェットミル粉砕することによって、上記の課題を解決できることを見出した。
【００３８】
すなわち、本発明者らは、上記の課題を解決するため、まず、北村らの方法(Journal of Chemical Engineering of Japan, Vol.35, No.11, pp.1116-1122, 2002の「2.3. Crystallization」の項に記載された結晶化方法)および非特許文献8の第9章に記載された方法に従って工業的に安定にC晶を製造できるか否かを検討したところ、意外にも、フェブキソスタットをアセトニトリルから晶出させることにより、加熱攪拌などの操作を行うことなく、極めて再現性よく効率的に純粋なC晶を製造できることを見出した（以下、アセトニトリルから晶出させて得た未粉砕のC晶を「未粉砕のアセトニトリルC晶」という。）。この方法においては、C晶の種晶を添加しなくてもC晶を製造できるが、C晶の種晶を添加すれば、より再現性良くC晶を製造することができる。
【００３９】
上記のC晶の製造方法はC晶を安定に大量生産するための工業的製法として利用可能であり、さらにC晶は安定性に優れる結晶形である (特許第3547707号公報第8頁41〜43行)。
【００４０】
また、本発明者らは、アセトニトリルから晶出させたC晶は、他の結晶形や非晶質体への転移が極めて生じにくい安定な産物であることを見出した。
また、メタノールと水の混合溶媒から晶出させたC晶よりも柱状晶の長軸の長さが少なくとも5分の1以下である、より小さな結晶であることを見出した。すなわち、従来知られていたメタノールと水の混合溶媒中から晶出したC晶は、長軸の長さが1000μmを超える柱状結晶であるのに対して（図11、図17〜図19）、驚くべきことに、アセトニトリルから晶出させたC晶は、平均粒径20.483μm、200μm以下の粒度分布に収まる柱状結晶からなることがわかった（図12、図20〜図22）。一般に、同じ体積の立体を縮尺N分の1の小さい立体に分けた場合の表面積がN倍になることを考えれば、アセトニトリルから晶出させたC晶の長さは、メタノールと水の混合溶媒中から晶出したC晶の長さの少なくとも5分の１以下であることから、その比表面積は5倍以上であると考えられるので、単純に考えれば少なくとも5倍以上の溶出速度を有することが期待できる。
【００４１】
さらに、アセトニトリルから晶出させたC晶は、メタノールと水の混合溶媒から晶出させたC晶の３倍以上のタップ密度を有する充填性の改善された結晶であることを見出した。
【００４２】
しかしながら、本発明者らは、アセトニトリルから晶出させたC晶をもってしても、依然として嵩密度は不十分な水準の充填性であり、また、アセトニトリル残量が医薬品としての許容量の約2分の1の水準であるので余裕が少なく、さらに錠剤化した場合の溶出速度及び平衡化後の溶出率が不十分であるという問題を有していることをも併せて見出した。
【００４３】
そこで、本発明者らは、アセトニトリルC晶を微粉化する方法を種々検討し、上記の問題を解決できないか試行錯誤を行った。その結果、乳鉢による粉砕、ハンマーミルによる粉砕、サンプルミルによる粉砕などの機械的な衝撃による粉砕方法では、微粉化の程度に限界があり、大きい粒子サイズで広い範囲に分布する望ましくない粒度分布を示すとともに、非晶質化及び／又は結晶転移が生じることを見出した一方で、アセトニトリルC晶をジェットミル粉砕することにより、約3.365μmの平均粒子径、及び／又は、長径が約20μm 以下の粒度分布に収まる粒状物からなるC晶が得られることを見出した（図13、図23〜図25；以下、ジェットミル粉砕したアセトニトリルC晶を「アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物」という。）。
【００４４】
これは、従来技術のメタノール水C晶（非特許文献2のFig.6(c)；本願の図17〜図19）が、長軸の長さが1000μmを超える柱状晶であることに比べると、著しく微粉化されたC晶である。また、未粉砕のアセトニトリルC晶が平均粒径20.483μm、200μm以下の粒度分布に収まる柱状結晶であることに比べても、やはり優れて微粉化されたC晶である。一般に、同じ体積の立体を縮尺N分の1の小さい立体に分けた場合の表面積がN倍になることを考えれば、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物は、その長径が、未粉砕のアセトニトリルC晶の平均6.1分の1以下の長さであるから、その比表面積は6.1倍であると考えられるので、単純に考えれば6.1倍の溶出速度を有することが期待できる。
【００４５】
実際、pH5.5のMcIlvain緩衝液、pH6.8の溶出試験第2液、水のいずれに対しても、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物は、未粉砕のアセトニトリルC晶よりも高い溶出率を示した（図26）。これらに溶液に対する、未粉砕のアセトニトリルC晶、及び、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の溶出率は、市販のA晶と同等以上に、ばらつきが少なかった。
【００４６】
また、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物は実質的に非晶質体を含有せず、他の結晶形や非晶質体への転移が極めて生じにくい安定な物質であることが、粉末X線回折スペクトル、赤外吸収スペクトル及び示差操作熱量スペクトルによって確認された。
【００４７】
さらに、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を有効成分として用いた錠剤は、未粉砕のアセトニトリルC晶に比べて、pH5.5のMcIlvain緩衝液への溶出速度が顕著に改善し、かつ、溶出特性にばらつきを生じない固形製剤を提供できることを見出した（図27）。フェブキソスタットのアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を有効成分として用いた錠剤のpH5.5のMcIlvain緩衝液への溶出速度は、臨床使用されているフェブリク錠（登録商標）よりも早く、かつ、60分後には約95％が溶出する優れた固形製剤である。
【００４８】
また、本発明の課題は、実質的に非晶質体のみからなるフェブキソスタット、及びその製造方法、並びに、フェブキソスタットの非晶質体の定量方法を提供することである。実質的に非晶質体のみからなるフェブキソスタットは、溶出性に優れていることが知られており、製剤上の工夫によって、安定な固形製剤の製造に用いることができる可能性がある。また、一般的には非晶質体の生成は望ましくないとされていることから、フェブキソスタットの非晶質体の定量方法を提供することが望まれている。
【発明の効果】
【００４９】
本発明により、高い安定性と高い溶出性を兼ね備えたフェブキソスタットの小型化結晶及びその微粉化物が提供される。本発明により提供されるフェブキソスタットの小型化結晶及びその微粉化物は、非晶質体を含有せず、したがって、非晶質体を経由した他の結晶形態への転移も生じないので長期にわたって安定に保たれる。また、本発明により、溶媒残量が医薬品製造上の問題にならない程度に十分低い、フェブキソスタットの小型化結晶の微粉化物が提供される。また、本発明により、高い嵩密度及び／またはタップ密度を有するフェブキソスタットの小型化結晶及びその微粉化物が提供される。さらに、本発明により、小さい粒子サイズで狭い範囲に分布する良好な粒度分布を有するフェブキソスタットの小型化結晶及びその微粉化物が提供される。さらにまた、本発明により、小さな安息角及び／又は優れたハンドリング性を有するフェブキソスタットの小型化結晶及びその微粉化物が提供される。さらに、驚くべきことに、アセトニトリルから晶出させた小型化C晶を用いれば、原薬の粉砕工程を経ずに、直接製剤化することもできる。そして、本発明により、前記の優れた性質の一又は二以上を備えたフェブキソスタットの小型化結晶及びその微粉化物を有効成分として含有する、痛風、高尿酸血症、慢性腎臓病の予防及び又は治療のための、安定性及び溶出性に優れ、かつ溶出特性のばらつきが少ない固形製剤を提供することができる。
【００５０】
加えて、本発明により、実質的に非晶質体のみからなるフェブキソスタット、及びその製造方法、並びに、フェブキソスタットの非晶質体の定量方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】例2で得たG晶の粉末X線回折スペクトルである。6.86°、8.36°、9.60°、11.76°、15.94°の回折角に強いピークを有する、G晶に特徴的な粉末X線回折スペクトルが得られた（例6）。
【図２】例4で得た未粉砕のメタノール水C晶の粉末X線回折スペクトルである。6.62°、10.82°、13.36°、15.52°、25.18°の回折角に強いピークを有する、C晶に特徴的な粉末X線回折スペクトルが得られた（例6）。
【図３】例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶の粉末X線回折スペクトルである。6.62°、10.82°、13.36°、15.52°、25.18°の回折角に強いピークを有する、C晶に特徴的な粉末X線回折スペクトルが得られた（例6）。
【図４】例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の粉末X線回折スペクトルである。6.62°、10.82°、13.36°、15.52°、25.18°の回折角に強いピークを有する、C晶に特徴的な粉末X線回折スペクトルが得られた（例6）。
【図５】例4で得た未粉砕のメタノール水C晶の赤外吸収スペクトルである。1703cm-1付近及び2240 cm -1付近にピークを有する、C晶に特徴的な赤外吸収スペクトルが得られた（例7）。
【図６】例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶の赤外吸収スペクトルである。1703cm-1付近及び2240 cm -1付近にピークを有する、C晶に特徴的な赤外吸収スペクトルが得られた（例7）。
【図７】例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の赤外吸収スペクトルである。1703cm-1付近及び2240cm -1付近にピークを有する、C晶に特徴的な赤外吸収スペクトルが得られた（例7）。
【００５２】
【図８】例4で得た未粉砕のメタノール水C晶の示差走査熱量測定スペクトルである。約201℃〜約202℃付近にのみ単一のピークを有する、純粋なC晶に特徴的な赤外吸収スペクトルが得られた（例8）。
【図９】例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶の示差走査熱量測定スペクトルである。約201℃〜約202℃付近にのみ単一のピークを有する、純粋なC晶に特徴的な赤外吸収スペクトルが得られた（例8）。
【図１０】例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の示差走査熱量測定スペクトルである。約201℃〜約202℃付近にのみ単一のピークを有する、純粋なC晶に特徴的な赤外吸収スペクトルが得られた（例8）。
【図１１】例4で得た未粉砕のメタノール水C晶の粒度分布を示す図50よびデータである。未粉砕のメタノール水C晶のD50は36.819μm、D90は133.348μmであった（例9）。
【図１２】例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶の粒度分布を示す図およびデータである。未粉砕のアセトニトリルC晶のD50は20.483μm、D90は73.755μmであった（例9）。
【図１３】例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgf）の粒度分布を示す図Xおよびデータである。アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物のD50は3.637μm、D90は7.346μmであり、0.4μm〜20μmの粒子径範囲にほぼすべての粒子が収まるシャープな粒度分布を示した（例9）。
【図１４】例11で得たアセトニトリルC晶のボールミル粉砕物（60分間粉砕物）の粉末X線回折スペクトルである。非晶質体に特徴的な平坦化した粉末X線回折スペクトルが得られた。
【００５３】
【図１５】例11で得たアセトニトリルC晶のボールミル粉砕物（60分間粉砕物）の赤外吸収スペクトルである。1688cm -1付近及び2230cm -1付近にピークを有する非晶質体に特徴的な赤外吸収スペクトルが得られた。
【図１６】例11で得たアセトニトリルC晶のボールミル粉砕物（60分間粉砕物）の示差走査熱量測定スペクトルである。ボールミル粉砕によって約201℃〜約202℃の吸熱ピークが消失するとともに、約210℃の強い吸熱ピークと約84.6℃近辺の発熱ピークが現れた。
【図１７】例4で得たメタノール水C晶（未粉砕）のC晶の走査電子顕微鏡写真（倍率100倍）である。写真の下の横棒の全長が1000μm（1mm）の長さを示し、横棒の目盛が100μmの長さを示す。柱径約20μm前後、長さ1000μm以上の柱状晶が観察された（例14）。
【図１８】例4で得たメタノール水C晶（未粉砕）の走査電子顕微鏡写真（倍率80倍）である。写真の下の横棒の全長が1000μm（1mm）の長さを示し、横棒の目盛が100μmの長さを示す。柱径約20μm前後、長さ1000μm以上の柱状晶が観察された（例14）。
【図１９】例4で得たメタノール水C晶（未粉砕）の走査電子顕微鏡写真（倍率80倍）である。写真の下の横棒の全長が1000μm（1mm）の長さを示し、横棒の目盛が100μmの長さを示す。柱径約20μm前後、長さ1000μm以上の柱状晶が観察された（例14）。
【００５４】
【図２０】例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶の走査電子顕微鏡写真（倍率500倍）である。写真の下の横棒の全長が200μmの長さを示し、横棒の目盛が20μmの長さを示す。柱径約6μm前後、長さ約20μm前後の柱状晶が観察された（例14）。
【図２１】例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶の走査電子顕微鏡写真（倍率500倍）である。写真の下の横棒の全長が200μmの長さを示し、横棒の目盛が20μmの長さを示す。柱径約6μm前後、長さ約20μm前後の柱状晶が観察された（例14）。
【図２２】例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶の走査電子顕微鏡写真（倍率500倍）である。写真の下の横棒の全長が200μmの長さを示し、横棒の目盛が20μmの長さを示す。柱径約6μm前後、長さ約20μm前後の柱状晶が観察された（例14）。
【図２３】例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の走査電子顕微鏡写真（倍率4000倍）である。写真の下の横棒の全長が20μmの長さを示し、横棒の目盛が2μmの長さを示す。もはや柱状晶の形状を維持しておらず、多少は短径と長径の長さの差はあっても、概ね1.5μｍ〜6.5μｍの径を有する粒状物であった（例14）。
【図２４】例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の走査電子顕微鏡写真（倍率4000倍）である。写真の下の横棒の全長が20μmの長さを示し、横棒の目盛が2μmの長さを示す。もはや柱状晶の形状を維持しておらず、多少は短径と長径の長さの差はあっても、概ね1.5μｍ〜6.5μｍの径を有する粒状物であった（例14）。
【００５５】
【図２５】例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の走査電子顕微鏡写真（倍率4000倍）である。写真の下の横棒の全長が20μmの長さを示し、横棒の目盛が2μmの長さを示す。もはや柱状晶の形状を維持しておらず、多少は短径と長径の長さの差はあっても、概ね1.5μｍ〜6.5μｍの径を有する粒状物であった（例14）。
【図２６】アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物(粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgf)の各種試験液（溶出試験第1液(pH1.2)、pH5.5のMcllvaine緩衝液、溶出試験第2液(pH6.8)、及び水）への溶解速度を測定し、未粉砕のアセトニトリルC晶の溶解速度、及び市販のA晶の溶解速度と対比した図である。いずれの試験液に対しても、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物は、A晶と同等かA晶以上の溶出速度を示す優れた原薬であることがわかった。（例17）
【図２７】アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を有効成分として含有する錠剤の、Mcllvaine緩衝液（pH5.5）に対する溶出速度を測定し、未粉砕のアセトニトリルC晶を含む錠剤、市販のA晶を含む錠剤、F錠、フィルムコーティング剥離したF錠の溶出速度と対比した図である。アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を含む錠剤は、C晶であるにもかかわらず、いずれの錠剤よりも速い溶出速度を示し、60分後の時点では、A晶を含む錠剤、F錠（登録商標）及びフィルムコーティング剥離したF錠（登録商標）のいずれとも同等の約95％の溶出率を示す優れた錠剤であることが確認できた(例18)。
【図２８】アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を、褐色ガラス瓶に入れて蓋をするか、ポリエチレン袋に入れて口を閉じて、長期保存条件下においた場合に、6ヶ月まで不純物の量が増加しないことを確認した図である。アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物は優れた保存安定性を有することが確認できた（例19参照）。
【図２９】アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を、褐色ガラス瓶に入れて蓋をするか、ポリエチレン袋に入れて口を閉じて、加速条件下においた場合に6ヶ月まで不純物の量が増加しないことを確認した図である。アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物は優れた保存安定性を有することが確認できた（例19参照）。
【図３０】アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を、褐色ガラス瓶に入れて蓋をするか、ポリエチレン袋に入れて口を閉じて、長期保存条件下または加速条件下においた場合に3ヶ月の時点で結晶転移が生じていないことを確認した図である。アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物は優れた保存安定性を有することが確認できた（例19参照）。
【図３１】アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を用いて製造した試作錠（素錠およびフィルムコーティング錠）、及びF錠を、褐色ガラス瓶に入れて蓋をするか、ポリエチレン袋に入れて口を閉じて、加速条件下においた場合に3ヶ月まで不純物の量が増加しないことを確認した図である。アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を用いて製造した試作錠は、F錠と同等の保存安定性を有することが確認された（例20参照）。
【図３２】アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を用いて製造した試作錠（素錠およびフィルムコーティング錠）、及びF錠を、褐色ガラス瓶に入れて蓋をするか、ポリエチレン袋に入れて口を閉じて、苛酷条件下においた場合に3ヶ月まで不純物の量が増加しないことを確認した図である。アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を用いて製造した試作錠は、F錠と同等の保存安定性を有することが確認された（例20参照）。
【図３３】アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を用いて製造した試作錠（フィルムコーティング錠）及びF錠（20mg錠）の日本薬局方の溶出試験第1液（pH1.2）：図33左上、McIlvain緩衝液（pH5.0）：図33右下、溶出試験第2液（pH6.8）：図33左下、精製水：図33右上に対する溶出性を示した図である。いずれの条件においても、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を用いて作製した試作FC錠（MeCN粉砕）（20mg錠）の試験液への溶出率は、F錠（20mg錠）の溶出率とほぼ同じか若干上回っており、良好な溶出特性を示した。
【図３４】未粉砕のメタノール水C晶の性状を示す外観写真である。未粉砕のメタノール水C晶（例23参照）は、ふわふわした綿毛状の嵩高い塊であり、未粉砕のA晶よりも大きな1mmを超えるサイズの針状晶が目視で確認できた（例23参照）。未粉砕のメタノール水C晶の安息角の測定は困難であることが一目で理解できる。
【図３５】未粉砕のアセトニトリルC晶の性状を示す外観写真である。未粉砕のアセトニトリルC晶（例23参照）は、やや嵩高い塊を形成する傾向があるが、未粉砕のメタノール水C晶よりも小さく、かつ、未粉砕のメタノール水C晶よりも密度の高い塊であった。未粉砕のアセトニトリルC晶の塊の周囲を良く目を凝らして見ると、小さな針状晶らしきものが確認できた。
【図３６】アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の性状を示す外観写真である（例23参照）。アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（図36）も、塊を形成する傾向があった。写真では塊が見えるが、スパーテル等で突つくと軽く崩れるきめ細かい粉である。
【図３７】アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物をプラスチックスプーンで均した図である。容易に平らになり、きめ細かな微粒子が寄り集まっていることがわかった（例23参照）。
【図３８】アセトニトリルC晶のボールミル粉砕物の性状を示す外観写真である（例23参照）。アセトニトリルC晶のボールミル粉砕物（図38）も、塊を形成する傾向があったが、針状晶らしき構造は見えず、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物と同様にプラスチックスプーンで均すと、容易に平らになり、崩れやすいきめ細かな微粒子が寄り集まっていることがわかった。  アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（図36）とアセトニトリルC晶のボールミル粉砕物（図38）は、写真では塊を形成してはいるが、とても崩れやすい塊であり、スパーテルで掬い取った際の粉の動きはコーンスターチ（図39）や片栗粉（図40）の粉の動きにとてもよく似ていた。
【図３９】コーンスターチの性状を示す外観写真である（例23参照）。
【図４０】片栗粉の性状を示す外観写真である（例23参照）。
【図４１】C晶原体及びC晶製剤の13C固体NMRチャートである。A晶原体及びA晶製剤には存在せず、C晶原体及びC晶製剤には共通して存在するいくつかの特徴的なピークがあることがわかる。
【図４２】ラマン分析によってC晶を、A晶及び各添加剤と区別できることを示すスペクトル図である。C晶は約1695 shift/cm-1のピークによって、A晶及び添加物と区別できることが確認できた。
【図４３】ラマン分析によってC晶を、A晶及び各添加剤と区別できることを示すスペクトル図。C晶は約1695 shift/cm-1のピークによって、A晶及び各添加剤と区別でき、A晶は、約1450 shift/cm-1、約1330 shift/cm-1のピークによって、C晶及び各添加剤と区別できることが確認できた。
【図４４】C晶のラマンイメージングの画像である。直径10μm以下のC晶の粒子が無数に確認できた。
【図４５】C晶のラマンイメージングの粒子解析の結果である。原点から横軸の20の目盛まで順に4本の棒があるのは左から順に0〜5μmのC晶の数、5〜10μmのC晶の数、10〜15μmのC晶の数、15〜20μmのC晶の数をそれぞれ示す。C晶の粒子の大半が5μm以下であることが確認できた。
【図４６】未粉砕のメタノール水C晶の共焦点レーザー蛍光顕微鏡写真である。右側の図は同じ視野の微分干渉撮影写真である。未粉砕のメタノール水C晶には1mmを超えるサイズの結晶も多数みられた。
【図４７】未粉砕のアセトニトリルC晶の共焦点レーザー蛍光顕微鏡写真。右側の図は同じ視野の微分干渉撮影写真である。長軸の長さが約10μm 〜20μmの針状晶が多数蛍光観察された。
【図４８】アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の共焦点レーザー蛍光顕微鏡写真。右側の図は同じ視野の微分干渉撮影写真である。図23〜図25の走査電子顕微鏡写真と同様に直径3μm前後の粒子が多数寄り集まっていることが確認できた。
【図４９】アセトニトリルC晶のボールミル粉砕物の共焦点レーザー蛍光顕微鏡写真。右側の図は同じ視野の微分干渉撮影写真である。丸みを帯びた様々な大きさの蛍光粒子が観察された。
【図５０】プラセボ錠の共焦点レーザー蛍光顕微鏡写真。右側の図は同じ視野の微分干渉撮影写真である。蛍光は観察されなかった。
【図５１】未粉砕のアセトニトリルC晶を用いて作製した試作錠の共焦点レーザー蛍光顕微鏡写真。右側の図は同じ視野の微分干渉撮影写真である。多数の直径5μm前後の蛍光を発する粒子が観察されたことは、未粉砕のアセトニトリルC晶が際立って大きい比表面積を有することとも符合する。未粉砕のアセトニトリルC晶を用いた固形製剤は、良好な溶出特性を具えていることが理解できる。
【図５２】アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を用いて作製した試作錠の共焦点レーザー蛍光顕微鏡写真。右側の図は同じ視野の微分干渉撮影写真である。直径2〜3μm前後のほぼ均一な大きさの蛍光を発する粒子が観察された。
【図５３】アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を用いて作製した試作錠の共焦点レーザー蛍光顕微鏡写真。右側の図は同じ視野の微分干渉撮影写真である。直径2〜3μm前後のほぼ均一な大きさの蛍光を発する粒子が観察された。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
フェブキソスタットのC晶(本明細書では特許第3547707号公報の開示に合わせてこの結晶を「C晶」と呼ぶが、「C形結晶」などと呼ばれる場合もある)は、例えばJournal of Chemical Engineering of Japan, Vol.35, No.11, pp.1116-1122, 2002の「2.3. Crystallization」の項に記載された結晶化方法に従って製造することができる。得られた結晶がC晶であることは、特許第3547707号公報に示された図4の粉末X線回折図から当業者が容易に同定可能である。同定のためには、必要に応じて同公報に開示された2θのピーク位置(Cuを線源とする1.54オングストロームの波長のCuKα放射線を用いた場合の回折角で6.62°、10.82°、13.36°、15.52°、16.74°、17.40°、18.00°、18.70°、20.16°、20.62°、21.90°、23.50°、24.78°、25.18°、34.08°、36.72°、及び38.04°のうちのいずれか1つ又は2つ以上、好ましくは同公報の図4に示される高強度のピークとして13.36°及び/又は15.52°のピーク位置)、及び同公報の図9の赤外吸収スペクトルを参照することもできる。
【００５７】
フェブキソスタットのC晶は、1.54オングストロームの波長のCuKα放射線（放射光）を用いた粉末X線回折において、好ましくは6.62°の回折角にピークを有し12.8°の回折角にピークを有さない結晶として特定され、より好ましくは6.62°、13.36°及び15.52°の回折角にピークを有する結晶として特定され、さらにこのましくは、6.62°、10.82°、13.36°、15.52°及び25.18°の回折角にピークを有する結晶として特定され、もっとも好ましくは6.62°、10.82°、13.36°、15.52°、16.74°、17.40°、18.00°、18.70°、20.16°、20.62°、21.90°、23.50°、24.78°、25.18°、34.08°、36.72°、及び38.04°の回折角にピークを有する結晶として特定される。
【００５８】
この場合の回折角の誤差範囲は、粉末X線回折測定装置が適正に構成されていることを条件として、±0.2°以内である。
また、回折角2θは照射する放射光の波長λによって変わるが、放射光の波長λと回折角2θの間には、ブラッグの式（nλ＝2dsin(θ)）の関係が成立する。なお、ここで、d は結晶面の間隔、θ は結晶面とX線が成す角度、λ はX線の波長、n は整数である。したがって、放射光の波長λと回折角2θは一対一に対応し、相互に一意に変換可能である。すなわち、ある放射光の波長λ1を照射したときにA1の回折角が観察されるのであれば、異なる波長の波長λ2を照射したときに観察されるべき回折角A2を計算で求めることができる。
【００５９】
したがって、本発明において、粉末X線回折測定装置よって結晶形を同定する手段は、CuKα放射線を用いて測定した粉末X線回折による回折角の同定に限定されず、異なる波長の放射光を用いても良い。例えば、サイクロトロン等を用いた場合には、波長0.75オングストロームの放射光や波長1.0オングストロームの放射光を用いることもできる。その場合、ブラッグの式を用いて変換された回折角を、ブラッグの式を用いて変換された誤差範囲内に同定することによって、結晶形を同定することができる。
【００６０】
あるいは、フェブキソスタットのC晶は、特許第3547707号公報の図9の赤外吸収スペクトル、あるいは、非特許文献2のFig.3のFT-IRスペクトルから当業者が容易に特定可能な物質である。具体的には、フェブキソスタットのC晶は、赤外吸収スペクトルにおいて、1219cm-1付近、1269cm-1付近、1296cm-1付近、1703cm-1付近、2240cm-1付近に特徴的なピークを有する。
また、あるいは、フェブキソスタットのC晶は、固体15N-NMRにおいて、210ppm及び282ppmに鋭いシングルピークを有する結晶形として、または、固体13C-NMRにおいて、約20ppmにほぼ等価なトリプレットピークを有する結晶形として当業者が容易に特定可能な物質である（特許第4084309号公報の参考例3を参照）。
【００６１】
特許第3547707号公報に開示されるように、フェブキソスタットについては、A晶、B晶、C晶、D晶、及びG晶（BH晶）の存在が知られている。同公報におけるこれらの結晶について開示の全てを参照により本明細書の開示として含める。一般的には、A晶については同公報の図2に示される粉末X線回折チャートにおける2本の高強度ピークの2θのいずれか又は両方(12.80°及び/又は7.18°)、B晶については同公報の図3に示される粉末X線回折チャートにおける2本の高強度ピークの2θのいずれか又は両方(11.50°及び/又は15.76°)、D晶については同公報の図5に示される粉末X線回折チャートにおける4本の高強度ピークの2θのいずれか1つ又は2つ以上(8.32°、9.68°、12.92°及び17.34°) 、G晶については同公報の図6に示される粉末X線回折チャートにおける5本の高強度ピークの2θのいずれか1つ又は2つ以上(6.86°、8.36°、9.60°、11.76°及び/又は15.94°)をそれぞれ特徴的ピークとして利用することができる。一般的には、A晶、B晶、D晶、及びG晶についての上記の高強度ピークのいずれの位置にもピークが検出されず、13.36°及び/又は15.52°の位置に高強度のピークが検出される場合にはC晶として同定することができる。なお、粉末X線回折チャートにおける2θの測定誤差は一般的には0.2°以下程度である。
【００６２】
フェブキソスタットのC晶は示差走査熱量測定(DSC)で約201℃〜約202℃に単一の吸熱ピークを示すが、C晶に非晶質体が含まれている場合には示差走査熱量測定における加熱により非晶質体が他の結晶形、例えばA晶などに変化して約201℃〜約202℃と異なる吸熱ピークを与える場合がある。例えば、示差走査熱量測定で約201℃〜約202℃に単一の吸熱ピークを与えるC晶をメノウ乳鉢で粉砕して示差走査熱量測定を行うと210℃に小さなピークが発生する場合があり、粉砕の程度に比例して210℃のピークが強くなり、80℃付近に発熱ピークが認められる場合がある。
【００６３】
北村の報告(Crystal Growth & Design, 4, pp.1153-1159, 2004（非特許文献4）)において、フェブキソスタットのC晶では複数のピークを与えるとされているが(p.1155のFig. 4bの「c form」)、これはメノウ乳鉢で粉砕することによりC晶の一部が非晶質体化し、示差走査熱量測定の加熱条件でこの非晶質体からA晶などの他の結晶形を生成したり、他の結晶形への熱転移を起こすことが理由であると考えられ、本来、C晶は約201℃〜約202℃に単一の吸熱ピークを与える結晶であると理解される。
【００６４】
本発明のフェブキソスタットのC晶の製造方法によれば、好ましくは約200℃〜約203℃、より好ましくは約201℃〜約202℃にのみ単一のピークを有する示差走査熱量測定スペクトルを示すC晶を製造することができる（図9及び図10）。つまり、本発明の方法によれば、融液媒介転移を示さない純粋なフェブキソスタットのC晶を得ることができる。
【００６５】
上記の観点から、フェブキソスタットのC晶から他の結晶形への転移を生じさせないために、フェブキソスタットの小型化C晶、及びフェブキソスタットの小型化C晶の微粉化物は実質的に非晶質体を含まないことが好ましい。
【００６６】
一般的には、フェブキソスタットの小型化C晶、及びその微粉化物に含まれる非晶質体、A晶、B晶、D晶又はG晶の割合は約7質量％以下、好ましくは約5質量％以下、より好ましくは約3質量％以下、さらに好ましくは約1％以下、さらにより好ましくは約0.1％以下、もっとも好ましくは実質的に0％である。なお、フェブキソスタットの小型化C晶、及びその微粉化物に他の結晶形(A晶、B晶、D晶、及びG晶)が混入していないことは、例えば、C晶粉砕物の粉末X線回折チャートにおいて上記に説明したA晶、B晶、D晶、及びG晶の上記の高強度ピークがいずれも検出されないことにより確認することができる。
【００６７】
本発明のフェブキソスタットの小型化C晶の長軸の長さは、約200 μm以下、好ましくは約 100 μm以下、より好ましくは約50 μm以下、さらに好ましくは約30μm以下、さらにより好ましくは約 20 μm以下、もっとも好ましくは約10 μm以下である。
【００６８】
本発明のフェブキソスタットの小型化C晶の粒度は、積算粒度分布(体積基準)が50%となる粒径（D50またはメディアン径）が約100μm以下、好ましくは約50μm以下、より好ましくは約20μm以下、さらに好ましくは約10μm以下、よりさらに好ましくは約5μm以下、もっとも好ましくは約3.6μm以下であり、積算粒度分布(体積基準)が90%となる粒径（D90）が約200μm以下、好ましくは約100μm以下、より好ましくは約50μm以下、さらに好ましくは約20μm以下、もっとも好ましくは約10μm以下である。
【００６９】
本発明のフェブキソスタットの小型化C晶は、積算粒度分布(体積基準)が50%となる粒径（D50またはメディアン径）が約21μm以下、及び／又は、積算粒度分布(体積基準)が90%となる粒径（D90）が74μm以下の小型化C晶が得られるのであれば特に限定されず、いかなる手段を採用しても良いが、上記のとおり、粉砕後のC晶粉砕物が実質的に非晶質体を含まない粉砕物であることが好ましいことから、粉砕に際してC晶を実質的に非晶質体化しない手段を採用することが好ましい。
【００７０】
本発明のフェブキソスタットの小型化C晶の定容量法による嵩密度は、好ましくは約0.15g/ml以上であり、より好ましくは約0.20 g/ml以上であり、さらに好ましくは約0.25 g/ml以上である。本発明のフェブキソスタットの小型化C晶の定容量法によるタップ密度は、好ましくは約0.20g/ml以上であり、より好ましくは約0.25 g/ml以上であり、さらに好ましくは約0.30 g/ml以上であり、最も好ましくは約0.34 g/ml以上である。
【００７１】
このようなフェブキソスタットの小型化C晶を得るための方法としては、メタノールと混合溶媒以外の溶媒から晶出させることができるが、アセトニトリルまたはアセトニトリルとプロパノール等との混合溶媒から晶出させることが望ましく、フェブキソスタットをアセトニトリル中に懸濁して室温で撹拌することがより望ましい。晶出させるための撹拌時間としては約4時間〜約16時間が望ましい。本発明の、フェブキソスタットの小型化C晶は、C晶の種晶を加えなくても製造できるが、短時間で確実に製造するためには種晶を加えることが望ましい。C晶の種晶は背景技術で述べた公知の方法により製造することができ、また、試験研究用に種々の原薬メーカー等から入手することもできる。
【００７２】
さらに別の観点からは、本発明により、フェブキソスタットの小型化C晶の製造方法であって、G晶を原料としてアセトニトリルからC晶を晶出させる工程を含む方法、及びフェブキソスタットの小型化C晶であって、G晶を原料としてをアセトニトリルからC晶を晶出させる工程により得ることができるC晶が提供される。この発明の好ましい態様によれば、示差走査熱量測定で好ましく約200℃〜約203℃、より好ましくは約201℃〜約202℃に単一の吸熱ピークを有する上記の小型化C晶が提供される。
【００７３】
フェブキソスタットの小型化C晶の日本薬局方第2液に対する溶解速度は、例えば、特許第4084309号の参考例2、又は本明細書の例17に記載した方法に従って測定することができ、約0.10 mg/cm2/min、好ましくは約0.14 mg/cm2/min以上である。あるいは、フェブキソスタットの小型化C晶の日本薬局方第2液に対する溶解速度は、約0.5mg/ml/min以上、好ましくは、約0.6 mg/ml/min以上である。または、フェブキソスタットの小型化C晶のpH5.5のMcIlvaine緩衝液に対する溶解速度は、約13μg/ml/min以上、好ましくは、約14μg/ml/min以上である。また、フェブキソスタットの小型化C晶の質量当たりの表面積がメタノールと水の混合溶媒から析出したC晶の質量当たりの表面積に比べて、5倍以上増加していることが好ましい。
【００７４】
本発明のフェブキソスタットの小型化C晶の微粉化物の長径は、約100 μm以下、好ましくは約 50 μm以下、より好ましくは約20 μm以下、さらに好ましくは約10μm以下、よりさらに好ましくは約 5 μm以下、もっとも好ましくは約2μm以下である。
【００７５】
本発明のフェブキソスタットの小型化C晶の微粉化物は、好ましくは結晶全体の約80％以上、さらに好ましくは約90％以上、さらに好ましくは約95％以上、もっとも好ましくは実質的に100%の結晶において長軸の長さが約20 μm以下となるような粉砕物として得ることができる。
【００７６】
また、本発明のフェブキソスタットの小型化C晶微粉化物は、その長径が約 100 μm以下、好ましくは約50 μm以下、より好ましくは約30μm以下、さらに好ましくは約20μm以下、よりさらに好ましくは約10μm以下、もっとも好ましくは約5μm以下である。
【００７７】
フェブキソスタットの小型化C晶の微粉化物の積算粒度分布(体積基準)が50%となる粒径(D50)は、約25μm以下、好ましくは約10μm以下、より好ましくは約7μm以下、さらに好ましくは約5μm以下、よりさらに好ましくは約4μm以下、もっとも好ましくは約3μm以下であり、積算粒度分布(体積基準)が90%となる粒径(D90)が50μm以下、好ましくは約20μm以下、より好ましくは約10μm以下、さらに好ましくは約8μm以下、よりさらに好ましくは約7μm以下、もっとも好ましくは約6μm以下である。
【００７８】
本発明のフェブキソスタットの小型化C晶の微粉化物の定容量法による嵩密度は、好ましくは約0.20g/ml以上であり、より好ましくは0.30 g/ml以上であり、さらに好ましくは0.40 g/ml以上である。本発明のフェブキソスタットの小型化C晶の微粉化物の定容量法によるタップ密度は、好ましくは約0.30g/ml以上であり、より好ましくは0.40 g/ml以上であり、さらに好ましくは0.50 g/ml以上であり、最も好ましくは0.60 g/ml以上である。
【００７９】
本発明のフェブキソスタットの小型化C晶の微粉化物を得るための粉砕手段としては、積算粒度分布(体積基準)が50%となる粒径（D50またはメディアン径）が4μm以下、及び／又は、積算粒度分布(体積基準)が90%となる粒径（D90）が8μm以下の小型化C晶が得られるのであれば特に限定されず、いかなる手段を採用しても良いが、上記のとおり、粉砕後のC晶粉砕物が実質的に非晶質体を含まない粉砕物であることが好ましいことから、粉砕に際してC晶を実質的に非晶質体化しない手段を採用することが好ましい。
【００８０】
このような粉砕手段としては、例えば、流体式粉砕(気流式粉砕) または溶媒中における湿式粉砕を採用することができ、流体式粉砕に先立って粗粉砕工程を採用することもでき、乾式粉砕と組み合わせることも可能である。また、積算粒度分布(体積基準)が50%となる粒径（D50またはメディアン径）が4μm以下、及び／又は、積算粒度分布(体積基準)が90%となる粒径（D90）が8μm以下の小型化C晶が得られるのであれば、粉砕手段は不要である。流体式粉砕としては、ジェットミル粉砕またはツインインペラ対向気流乾式粉砕が望ましく、ジェットミル粉砕がより望ましい。
【００８１】
湿式粉砕とは、貧溶媒中に懸濁した結晶に衝撃を加えて粉砕する方法であり、例えば、湿式ボールミル（ビーズミル）では、ジルコニア製容器に材料、液体、ジルコニアボール等の粉砕メディアを入れて、粉砕メディアの衝突によって材料の粉砕を行うことができる。溶媒中で粉砕することから、熱の発生を抑えつつ微粉砕可能である点で優れている粉砕方法であるので、本発明の粉砕手段として用いることができる。
【００８２】
ジェットミル粉砕とは、粉砕したい物を高速気流に乗せて密閉空間に送り込み、気流ごと互いに衝突させることにより微粉砕する粉砕方法である。ジェットミル粉砕は、発熱を抑えつつ瞬時に微粉化できるので、工業生産に適している。ツインインペラ対向気流乾式粉砕（ドライバースト粉砕）とは、密閉された空間内において、近接して向かい合う歯車状の構造物である一対のインペラを互いに逆方向に高速回転させた状態で、一方のインペラの側から粉砕したい物を投入して他方のインペラの側へ送り込み、他方のインペラを通過した後に回収することにより、一対のインペラの間で発生する高速な対向気流中での衝突によって粉砕する装置であり、シャープな粒度分布で微粉砕することができる。これらの流体式粉砕(気流式粉砕)は、安定した粒度分布を与えること、及びC晶粉砕物に非晶質体が混入しない点で本発明において好ましい粉砕手段である。
【００８３】
気流式粉砕又は湿式粉砕は、通常は室温下で行うことができ、ジェットミルを用いる場合には粉砕圧力を例えば0.5〜5 kgf、好ましくは1〜3 kgf、供給圧力を1〜6 kgf、好ましくは2〜4 kgf程度で行えばよい。
【００８４】
粉砕手段として、例えば摩砕を伴う乳鉢やボールミルなどのタンブラー式粉砕機(媒体式)を用いることもできるが、微粉化に限界があり、長時間操作すると粒度分布が悪化し、非晶質体が混入する場合がある。また、ハンマーの高速回転を基本原理とするハンマーミルなどの衝撃式粉砕機(高速回転式)や、その一種であるサンプルミルを使用することもできるが、粉砕を長時間行うと粒度分布が悪化し、非晶質体化及び／又は結晶転移が生じる場合があるので、好ましくなく、衝撃式粉砕機(高速回転式)を用いる場合には短時間に粉砕を完了することが望ましい。
【００８５】
フェブキソスタットの小型化C晶の微粉化物の日本薬局方第2液に対する溶出速度は、例えば、特許第4084309号の参考例2、又は本明細書の例17に記載した方法に従って測定することができ、約0.10 mg/cm2/min、好ましくは約0.14 mg/cm2/min以上である。あるいは、フェブキソスタットの小型化C晶の微粉化物の日本薬局方第2液に対する溶解速度は、約0.5mg/ml/min以上、好ましくは、約0.6 mg/ml/min以上である。または、フェブキソスタットの小型化C晶の微粉化物のpH5.5のMcIlvaine緩衝液に対する溶解速度は、約13μg/ml/min以上、好ましくは、約14μg/ml/min以上である。また、フェブキソスタットの小型化C晶の質量当たりの表面積がメタノールと水の混合溶媒から析出したC晶の質量当たりの表面積に比べて、5倍以上増加していることが好ましい。
【００８６】
別の観点からは、本発明により、フェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物の製造方法であって、柱状晶であるC晶の長軸の長さが約100 μm以下、好ましくは約50μm以下、さらに好ましくは約20μm以下、もっとも好ましくは約10μm以下となるように粉砕してフェブキソスタットのC晶の微粉化物を調製する工程を含む方法が提供される。
【００８７】
なお、本発明においては、フェブキソスタットのC晶は柱状晶として得られ、フェブキソスタットの小型化C晶の微粉化物は柱状晶の晶癖をとどめない粒状物であることから、以下、柱状晶の長軸も含めて最も長い径を長径と呼び、柱状晶の端部の短径も含めて最も短い径を短径と呼ぶ。
【００８８】
これらの条件を満足するフェブキソスタットの小型化C晶の微粉化物を本発明の固形製剤において特に好ましく使用することができる。
このようにして得たフェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物を固形成分の有効成分として用いることにより、長期にわたり安定で、かつ溶出速度が顕著に改善し、溶出特性にばらつきを生じない固形製剤を提供することができる。
【００８９】
本発明の固形製剤は、小型化C晶又はC晶の微粉化物を、有効成分である2-[3-シアノ-4-(2-メチルプロポキシ)フェニル]-4-メチルチアゾール-5-カルボン酸（すなわちフェブキソスタット）の総量の少なくとも30％以上、好ましくは50％以上、より好ましくは70％以上、さらに好ましくは90％以上、よりさらに好ましくは95％以上、もっとも好ましくは好ましくは99％以上の含有量で含有することにより、長期にわたり安定で、かつ溶出速度が顕著に改善し、溶出特性にばらつきを生じない固形製剤を提供することができる。
なお、フェブキソスタットの含有量は、重量で特定することができるが、粒子の重量は粒子の体積または粒子数に応じて定まることから、フェブキソスタット粒子の体積または粒子数で特定しても良い。フェブキソスタット粒子の体積及び粒子数は蛍光顕微鏡写真や顕微ラマン画像から算出することができる。したがって、小型化C晶又はC晶の微粉化物の含有量は、蛍光顕微鏡写真や顕微ラマン画像から算出して決定することができる。
【００９０】
好ましい態様によれば、本発明により、フェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物が実質的にA晶を含まない上記の固形製剤；フェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物が実質的にG晶を含まない上記の固形製剤；フェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物が実質的に非晶質体を含まない上記の固形製剤；フェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物に含まれる非晶質体が7重量％以下である上記の固形製剤； G晶を原料としてアセトニトリルから晶出させて製造したフェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物を含有する上記の固形製剤；示差走査熱量測定で好ましく約200℃〜約203℃、より好ましくは約201℃〜約202℃に単一の吸熱ピークを有するフェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物を含有する上記の固形製剤；及び、錠剤の形態である上記の固形製剤が提供される。
【００９１】
別の観点からは、本発明により、フェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物を有効成分として含む固形製剤の製造方法であって、長径が約200 μm以下、好ましくは約 100 μm以下、より好ましくは約50 μm以下、さらに好ましくは約30μm以下または約20μm以下、さらにより好ましくは約 10 μm以下、もっとも好ましくは約5 μm以下となるようフェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物を調製する工程を含む方法が提供される。
【００９２】
また別の観点からは、本発明により、フェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物を有効成分として含む固形製剤の製造方法であって、アセトニトリルから晶出したC晶をそのまま原薬として用い、強い負荷のかかる造粒手段を用いて造粒することによって、フェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物を有効成分として含む固形製剤の製造方法が提供される。具体的には、湿式造粒、乾式造粒または手造粒のような機械的負荷のかかる造粒方法を用いて、繰り返し造粒するか、または通常の造粒時間よりも長時間かけて造粒することによって、造粒と同時に、フェブキソスタットのC晶を小型化又は微粉化し、フェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物を有効成分として含む固形製剤を製造することができる。
【００９３】
また、本発明により、フェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物を有効成分として含む固形製剤の製造方法であって、長径が約100 μm以下、好ましくは約 50 μm以下、より好ましくは約20 μm以下、さらに好ましくは約10μm以下、さらにより好ましくは約 5 μm以下となるようフェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物を有効成分として含有する固形製剤の製造のための上記のフェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物の使用も本発明により提供される。
【００９４】
本発明の形製剤において好ましく使用することができるフェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物の質量当たりの表面積は、粉砕前のフェブキソスタットの小型化C晶の質量当たりの表面積に比べて少なくとも約3倍以上、好ましくは約6倍以上、より好ましくは約10倍以上、よりさらに好ましくは約30倍以上増加していることが好ましい。
【００９５】
フェブキソスタットの小型化C晶、及びその微粉化物の走査電子顕微鏡写真の一例をそれぞれ図20〜図22及び図23〜図25に示した。フェブキソスタットの小型化C晶、及びその微粉化物は、たとえ、固形製剤中に含まれていたとしても顕微鏡下で観察する手法などの画像解析法により、その形状及び大きさを容易に観測することができる。この手法は例えば錠剤を圧縮成型した後の錠剤中に含まれるC晶粉砕物の様子を観察するために用いることもでき、例えば蛍光顕微鏡下において結晶の長軸の長さや平均長を測定することができる。具体的には、非特許文献9の中ではTEI-6720と呼ばれているフェブキソスタットの蛍光観察については、励起波長314nm、蛍光波長390nmで蛍光観察できることが同文献の1849頁右欄最下行に記載されていることから、共焦点蛍光顕微鏡を用いて、励起波長314nm、蛍光波長390nmで観察することにより錠剤中に含まれるフェブキソスタットの結晶の大きさを測定することができ、その結晶がC晶であることは、粉末X線回折スペクトル、固体15N-NMR、顕微ラマンを測定することによって決定することができる。
【００９６】
本発明の固形製剤に含まれるフェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物の含有量は、一般的には固形製剤100重量部に対して1重量部から50重量部程度の範囲である。フェブキソスタットの結晶を含む固形製剤の製造方法は特許第4084309号公報の第3頁34行〜第5頁9行に具体的に説明されている。上記公報の該当部分の開示を参照により本明細書の開示として含める。
【００９７】
一般的に医薬の製剤化において当業界で汎用される製剤用添加物を1種又は2種以上使用することができる。例えば、乳糖、無水乳糖、結晶セルロース、トウモロコシデンプン、アルファー化デンプン、部分アルファー化デンプン、D−マンニトール、又はリン酸水素カルシウムなどの賦形剤、カルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、又はクロスポビドンなどの崩壊剤、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはポリビニルピロリドンなどの結合剤を用いることができる。賦形剤の使用量は、例えば固形製剤100重量部に対して50〜98重量部程度であり、崩壊剤の使用量は、例えば固形製剤100重量部に対して1〜25重量部程度であり、結合剤の使用量は、例えば固形製剤100重量部に対して0.5〜25重量部程度であるが、これらの量に限定されることはない。必要に応じて、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、可塑剤、希釈剤、着色剤、保存剤、防腐剤、又は嬌臭剤等の製剤用添加物を1種又は2種以上用いてもよい。
【００９８】
本発明の固形製剤の形態は特に限定されないが、錠剤の形態が好ましい。錠剤は、一般的にはC晶粉砕物に賦形剤及び崩壊剤を添加した混合物を圧縮成形することにより製造することができる。例えば、フェブキソスタットの小型化C晶又はその微粉化物を含む上記混合物を直接打錠することにより錠剤を製造することができ、あるいはスラッグマシンやローラーコンパクターなどを用いた乾式造粒により錠剤用顆粒を製造した後にて圧縮成型する方法、又は水やエタノールを用い、必要に応じて結合剤の溶液を用いて湿式造粒により錠剤用顆粒を製造した後に圧縮成型する方法などを採用してもよい。錠剤には必要に応じて糖衣や腸溶コーティングなどのコーティングを施すこともできる。
【００９９】
本発明の固形製剤は、一般的には一日量として0.8〜50 mgとなるように一日あたり1〜3回程度の頻度で投与されるように単位投与形態として提供されることが好ましい。本発明の固形製剤は、キサンチンオキシターゼ阻害剤、尿酸低下剤、痛風治療剤、高尿酸血症治療剤、及び慢性腎疾患治療剤として用いることができ、痛風、高尿酸血症、及び慢性腎疾患の予防及び／又は治療に使用することができる。
【０１００】
また、本発明により、ボールミル粉砕によるフェブキソスタットの非晶質体の製造方法、及び、実質的に非晶質体のみからなるフェブキソスタットが提供される。
【０１０１】
本発明において、実質的に非晶質体のみからなるフェブキソスタットとは、90％以上、好ましくは95％以上、より好ましくは99%以上、もっとも好ましくは100％非晶質体のみからなるフェブキソスタットである。
【０１０２】
本発明の実質的に非晶質体のみからなるフェブキソスタットの製造方法は、結晶を含有するフェブキソスタット原薬をボールミル粉砕することによって製造することができる。ここで、ボールミル粉砕は、遊星ボールミルを用いることが好ましく、粉砕条件は400rpm以上で行うことが好ましい。また、粉砕時間は60分以上行うことが好ましい。これらの方法により、本発明の、ほぼ実質的に非晶質体のみからなるフェブキソスタットが提供される。
【０１０３】
また、フェブキソスタットではメタノール溶媒和物であるD晶を加熱・減圧乾燥するか、あるいは粉砕することによって非晶質体を調製できることから、C晶をボールミルで長時間粉砕した粉砕品を標準品として示差走査熱量スペクトル上のピーク面積比により非晶質体を定量することができる。具体的には、示差走査熱量スペクトル上の150℃以下の発熱ピークの面積比を指標としてC晶に混入する非晶質体の含量を定量することができ、この方法を実施例に具体的に示した。
【０１０４】
また、本願の発明者は、示差走査熱量測定において、150℃以下の領域に現れる発熱ピークの発熱ピーク量(J/g)と非晶質体のフェブキソスタットの量とが正比例の関係にあることを見出したことから、150℃以下の領域に現れる発熱ピークの発熱ピーク量(J/g)に基づいて、フェブキソスタット試料中の非晶質体の含有率を測定する方法の発明が提供される。
【０１０５】
フェブキソスタット原薬中の非晶質体の含有率を測定する方法の発明は、例えば、次の工程によって提供される。
（1）フェブキソスタット試料を示差走査熱量測定する工程、
（2）150℃以下の領域に現れる発熱ピークの発熱ピーク量(J/g)を定量する工程、
（3）次式：y = 6.0675x  のｘに前記工程(2)で得られた値を代入してフェブキソスタット試料中の非晶質体の含有率ｙを算出する工程、
ただし、ここで、式中、ｘは示差走査熱量測定における150℃以下の発熱ピーク量(J/g)を表し、ｙは非晶質体の含有率(質量％)を表す。
本発明のフェブキソスタット試料中の非晶質体の含有率を測定する方法で用いられる式における定数は、測定条件及び定量方法によって適宜変更して用いることができる。
【実施例】
【０１０６】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。
【０１０７】
例1：フェブキソスタットエチルエステルの製造
２−［３−ホルミル−４−（2−メチルプロポキシ）フェニル］−４−メチルチアゾール−５−カルボン酸エチル（10.0 g, 28.8 mmol）を90%ギ酸（70 ml）に懸濁後、塩酸ヒドロキシルアミン（2.41 g, 34.7 mmol）及びギ酸ナトリウム（3.14 g, 46.2 mmol）を加え、４時間加熱還流した。水を加え、析出した結晶をろ取後、水で洗浄し、表題化合物の粗結晶（ウェット状態）を得た。この粗結晶をメタノールに懸濁させ、室温で撹拌後、結晶をろ取し、メタノールで洗浄した。更に得られた結晶をジクロロメタンに溶出し、不溶物をろ過後、メタノールを加え撹拌した。析出した結晶をろ取し、メタノールで洗浄後、室温で減圧乾燥して表題化合物（8.31 g, 収率83.9%）を白色結晶性粉末として得た。
【０１０８】
下記の高速液体クロマトグラフィー （HPLC）条件における原料化合物及び表題化合物の保持時間はそれぞれ約9.7 min、約13 minであった。
検出器：紫外線吸光光度計(測定波長：320 nm)
カラム：L-column ODS 4.6×250 mm
移動相：50 mM KH2PO4/アセトニトリル=1/3
流量：1 ml/min
カラム温度：40℃
【０１０９】
例2：フェブキソスタットのG晶の製造
例1で得たフェブキソスタットエチルエステル（8.00 g, 23.2 mmol）をエタノール（32 ml）及びテトラヒドロフラン（32 ml）の混合溶液に懸濁後、水酸化カリウム（1.84 g, 27.9 mmol）の水（1.84 ml）／エタノール（16 ml）溶液を加え、50 ℃で3.5時間加熱撹拌した。水を加え、不溶物をろ過後、ろ液に1 mol/L塩酸を加えた。析出した結晶をろ取し、水で洗浄後、40℃で一晩減圧乾燥した。表題化合物の湿結晶7.90 g（理論収量7.77g）を得た。粉末X線回折スペクトルを測定して、この結晶がG晶であることを確認した（図１）。
【０１１０】
例3：アセトニトリルを用いた、フェブキソスタットのC晶の製造。
上述のG晶の一部を採取して、これにC晶の種晶（Journal of Chemical Engineering of Japan, 35, pp.1116-1122, 2002の「2.3. Crystallization」の項に記載された結晶化方法により製造して粉末X線回折スペクトル及び赤外吸収スペクトルにより同定したもの、19.5 mg）を添加し、アセトニトリル（117 ml）を加え、更にC晶の種晶（19.5 mg）を追加した。室温で一晩撹拌後、結晶をろ取し、アセトニトリルで洗浄した。得られた結晶を一晩風乾後、80℃で48時間減圧乾燥して表題化合物のC晶（6.69 g, 収率91%）を白色結晶性粉末として得た（以下、このC晶を「アセトニトリルC晶」と呼ぶ）。
【０１１１】
得られた白色結晶性粉末に含まれる不純物は上記(a)のHPLC条件のピーク面積比において個々の不純物の最大で0.1以下、総量で0.5％以下であり、白色結晶性粉末のピーク面積比は99.8%であった。
【０１１２】
例4：メタノールと水の混合溶媒を用いた、フェブキソスタットのC晶の製造。
フェブキソスタットのG晶（20.0 g）をメタノール／水（1050 ml / 450 ml）に懸濁後、フェブキソスタットのC晶の種晶（50 mg）を加え、50℃で12時間加熱撹拌した。室温まで放冷後、析出物を濾過し、80℃で16時間減圧乾燥した。得られた粉末は粉末X線回折スペクトル、赤外分光スペクトルよりフェブキソスタットのC晶であることを確認した（以下、このC晶を「メタノール水C晶」と呼ぶ）。
【０１１３】
例5
例3で得たアセトニトリルC晶(190 g)をジェットミル(100型／パウレック社製)で粉砕した。粉砕圧力1kgf・供給圧力2kgf、粉砕圧力2kgf・供給圧力3kgf及び粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgfのいずれの条件でも良好に微粉化された。
【０１１４】
これらのアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物中のアセトニトリル残留量を測定したところ、いずれも約100 ppmであり、粉砕前のアセトニトリル残留量(200 ppm)に比べてアセトニトリルの残留濃度が約2分の1に減少した。なお、１９９８年に厚生省から通知された「医薬品の残留溶媒ガイドラインについて」におけるアセトニトリル残留量の許容濃度は410ppmであるので、200ppmのアセトニトリルが残留している場合には、許容濃度の2分の1のアセトニトリル濃度であるので許容濃度ぎりぎりであるが、約100ppmの残留アセトニトリル濃度であれば、許容濃度の4分の1の濃度であるので、許容限度を超えるリスクがかなり低くなる点で、大きなメリットがある。
【０１１５】
例6：粉末X線回折スペクトルの測定
試料約100 mgを標準的試料ホルダーに緩く詰め込み、スライドガラスで平滑にし、ブルカーエイエックスエス(Bruker AXS)卓上型X線回折装置D2 PHASER（CuKα放射線）を用いて回折パターンを測定した。回折パターンを管電圧＝30kV、管電流＝10mA、ロックドカップル走査(locked-couple scan)、スリット0.6mm、スキャッター0.5mm、2θ範囲＝4から40°、ステップサイズ＝0.02°、及びステップ時間＝0.5秒として収集した。DIFFRAC.SUITE version2 2.2.59.0及びDUFFRAC.EVA version 2.1の各ソフトウェアをデータ収集及び分析のために用いた。
【０１１６】
粉末X線回折スペクトルを測定した結果を図１〜4に示す。例2で得たG晶の粉末X線回折スペクトルを図１に、例4で得た未粉砕のメタノール水C晶の粉末X線回折スペクトルを図2に、例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶の粉末X線回折スペクトルを図3に、例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（粉砕圧力3kgf、供給圧力4kgf）の粉末X線回折スペクトルを図4に夫々示す。未粉砕のアセトニトリルC晶（図3）及びアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（図4）は、いずれも、6.62°、13.36°、15.52°の回折角にピークを有するC晶に特徴的な粉末X線回折スペクトルを示し、他の結晶形や非晶質体の混入は認められなかった。なお、例4で得た未粉砕のメタノール水C晶についても、同様に、6.62°、13.36°、15.52°の回折角にピークを有するC晶の粉末X線回折スペクトルを示し、他の結晶形や非晶質体の混入は認められなかった。
【０１１７】
例7：赤外吸収スペクトルの測定
試料約2 mgをメノウ鉢で粉末とし、これに赤外吸収スペクトル用臭化カリウム0.20 gを加え、速やかにすり混ぜた後、錠剤成型器に入れて加圧製錠し、堀場(HORIBA)フーリエ変換赤外分光光度計FT-720を用いて赤外吸収スペクトルを測定した。スペクトルはスキャン回数＝10、走査速度＝2.5、分解能＝4、測定範囲＝400から4000cm-1として収集した。HORIBA FT-IR for Windows（登録商標） version 4.07ソフトウェアをデータ収集及び分析のために用いた。
【０１１８】
赤外吸収スペクトルを測定した結果を図5、図6及び図7に示す。例4で得た未粉砕のメタノール水C晶（図5）、例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶（図6）、例5で得たジェットミル粉砕（粉砕圧力3kgf、供給圧力4kgf）後のアセトニトリルC晶（図7）のいずれも、1703cm-1付近及び2240cm -1付近にピークを有する、C晶に特徴的な赤外吸収スペクトルを示し、他の結晶形や非晶質体の混入は認められなかった。例4で得た未粉砕のメタノール水C晶についても同様に、C晶に特徴的な赤外吸収スペクトルを示し、他の結晶形や非晶質体の混入は認められなかった。
【０１１９】
例8：示差走査熱量スペクトルの測定
試料約2 mgを試料容器(アルミニウム製、φ5×2.5mm、50μL)に充てんし、リガク(Rigaku)Therm plus EVOシリーズ高感度示差走査熱量計DSC8230を用いて、加熱速度10℃/分、大気圧下で示差走査熱量(DSC)を測定した。Rigaku Thermo plus EVO version 1.006-6ソフトウェアをデータ収集及び分析のために用いた。
示差走査熱量スペクトルを測定した結果を図9、図8及び図10に示す。例4で得た未粉砕のメタノール水C晶（図8）、例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶（図9）、例5で得たジェットミル粉砕（粉砕圧力3kgf、供給圧力4kgf）後のアセトニトリルC晶（図10）のいずれも、約201℃〜約202℃に単一ピークを示したことから、他の結晶形や非晶質体の混入は認められなかった。例4で得た未粉砕のメタノール水C晶についても同様に、約201℃〜約202℃に単一ピークを示し、他の結晶形や非晶質体の混入は認められなかった。
【０１２０】
同様に、例5においてジェットミル粉砕の条件を変えて得られたアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の示差走査熱量の測定結果のまとめを表1に示す。ジェットミル粉砕条件は、粉砕圧力1kgf・供給圧力2kgf、粉砕圧力2kgf・供給圧力3kgf及び粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgfの3条件である。いずれの条件で粉砕しても、約201℃〜約202℃に単一の吸熱ピークを示したことから、非晶質体や他の結晶形を含まない純粋なC晶であることが確認できた。
【０１２１】
【表１】
0006408642.tif 000003
【０１２２】
例9：粒度分布の測定
試料約2 mgを0.2％ Aerosol OTを含むn-ヘキサンに添加し、30秒間超音波を照射して分散した。この分散液を用いて、島津（Shimadzu）レーザ回折式粒子径分布測定装置SALD‐2200により粒度分布(D50及びD90)を測定した。Shimadzu WingSALD-2200 version 1.02ソフトウェアをデータ収集及び分析のために用いた。
図11は、未粉砕のメタノール水C晶の粒度分布を示す図およびデータである。未粉砕のアセトニトリルC晶のD50は36.819μm、D90は133.348μmであった。
図12は、未粉砕のアセトニトリルC晶の粒度分布を示す図およびデータである。未粉砕のアセトニトリルC晶のD50は20.483μm、D90は73.755μmであった。
【０１２３】
図13は、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgf）の粒度分布を示す図およびデータである。粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgfでジェットミル粉砕したアセトニトリルC晶のD50は3.637μm、D90は7.346μmであった。これらの結果から、未粉砕のアセトニトリルC晶に比べて5分の1以下のD50、及び、10分の1以下のD90を示すこと、並びに、1μm〜10μmの粒子径の間に90％以上の粒子が分布するより均一な粒度分布を示すことがわかった。
【０１２４】
同様に、例5においてジェットミル粉砕の条件を変えて得られたアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の粒度分布の測定結果のまとめを表2に示す。ジェットミル粉砕条件は、粉砕圧力1kgf・供給圧力2kgf、粉砕圧力2kgf・供給圧力3kgf及び粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgfの3条件である。いずれの条件で粉砕しても、D90が10μm未満である十分に小さい粒度を示したが、これら3条件の中では、粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgfの条件でジェットミル粉砕した場合に最も小さい粒子径の粉砕物が得られることが確認できた。
【０１２５】
【表２】
0006408642.tif 000004
【０１２６】
例10：乳鉢による粉砕
例3で得られたアセトニトリルC晶の未粉砕物（5 g）を磁製乳鉢（直径13 cm）、磁製乳棒（長さ15 cm、重量154 g）で強く粉砕し、経時的に粉砕物のサンプリングを行い、示差走査熱量測定および粒度分布を測定した（表3）。
示差走査熱量測定の結果、乳鉢で粉砕すると、10分後には約210℃に吸熱ピークが現れることから、C晶以外の結晶形への転移が認められた。また、30分後には、150℃以下に発熱ピークが現れたことから、非晶質体の混入も確認された。さらに、30分間にわたって乳鉢粉砕したアセトニトリルC晶の粒度は、10分間にわたって乳鉢粉砕したアセトニトリルC晶の粒度に比べて、明らかに粒子径が増大していた。メノウ乳鉢およびメノウ乳棒によって粉砕を行っても同様の結果が得られた。
【０１２７】
【表３】
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【０１２８】
例11：ボールミルによる粉砕
例3で得られたアセトニトリルC晶の未粉砕物（15 g）を遊星ボールミル（PM100／Retsch社製 ：125 ml容器／20 mmボール6個／回転数400 rpm）で粉砕し、経時的に粉砕物のサンプリングを行い、示差走査熱量測定および粒度分布を測定した（表4）。
示差走査熱量測定の結果、ボールミル粉砕すると約210℃の吸熱ピークは30分後〜60分後で最大になったこと、及び、150℃以下に現れる発熱ピークは60分間の間、ボールミルによる粉砕時間に依存して増え続けたこと、及び、60分後にはC晶に特徴的な約201℃〜約202℃付近に現れる吸熱ピークが消失することから、ボールミル粉砕によって、C晶が消失して非晶質体化したことが確認できた。さらに、粒度分布もボールミルによる粉砕時間に依存して増大し続けたことがわかった。なお、以下、60分間ボールミルで粉砕したアセトニトリルC晶を「アセトニトリルC晶のボールミル粉砕物」ということにする。
【０１２９】
【表４】
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【０１３０】
また、アセトニトリルC晶を60分間ボールミル粉砕した後の粉砕物の粉末X線回折スペクトル（図14）、赤外分光スペクトル（図15）、示差走査熱量測定スペクトル（図16）を示す。
アセトニトリルC晶のボールミル粉砕物の示差走査熱量測定スペクトル（表4、図16）では、C晶に特徴的な約201℃〜約203℃の吸熱ピークが消失しているとともに、84.5℃付近に発熱ピークがあることから、C晶が消失していること及び非晶質が生じていることがわかった。また、粉末X線回折スペクトル（図14）は明らかに平坦化した非晶質体に特徴的なスペクトルを示していた。これらの結果から、アセトニトリルC晶を60分間ボールミル粉砕した粉砕物の粉末は、実質的に非晶質体のみからなると考えられた。
【０１３１】
アセトニトリルC晶のボールミル粉砕物の赤外分光スペクトル（図15）は、非晶質体に特徴的な位置にピークが現れていた（特許3547707号の図16を参照）。さらに、示差走査熱量測定スペクトル（図16）では、未粉砕のアセトニトリルC晶では約201℃〜約202℃にのみ単一の吸熱ピークを有していたのに対して、ボールミル粉砕によって約201℃〜約202℃の吸熱ピークが消失するとともに、アセトニトリルC晶のボールミル粉砕物では、約210℃に強い吸熱ピークが現れるとともに、150℃以下の位置、具体的には、図16の約84.6℃近辺の位置に発熱ピークが現れていた。
【０１３２】
例12：サンプルミルによる粉砕、および、ハンマーミルによる粉砕
実施例１のC晶（15 g）を、ハンマーの高速回転による衝撃で粉砕を行うサンプルミル（SM-1／アズワン社製）で粉砕し、経時的に粉砕物のサンプリングを行い、示差走査熱量測定および粒度分布を測定した（表5）。
示差走査熱量測定の結果、サンプルミル粉砕によって150℃以下の発熱ピークは生じなかったものの、アセトニトリルC晶が有さない約210℃の吸熱ピークは粉砕時間に依存して増大し続け240分後には-44.106 J/gに達したことから、サンプルミル粉砕によって、他の結晶形への転移が進行したことがわかった。さらに、粒度分布も、未粉砕のアセトニトリルC晶のD50（20.483μm）及びD90（73.755μm）に比べて細かくはなったものの、サンプルミル粉砕を240分間行った後の粒度分布は、D50で11.281μm、D90で29.768μmに過ぎず、D50が60分後、120分後、240分後でほぼ同じであったことから、サンプルミル粉砕による微粉化の程度には限界があることがわかった。
【０１３３】
【表５】
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【０１３４】
市販のA晶（D50  19μm；北京連本医薬化学技術有限公司／Beijing Lianben Pharm-chemicals Tech.Co., Ltd.から購入したもの）をハンマーミル（大徳薬機製、DF-15）を用いて12000 rpmの回転数で瞬時に粉砕した。ハンマーミルで粉砕したA晶（以下、「A晶のハンマーミル粉砕物」という。）は、例22の比表面積の測定に用いた。
【０１３５】
例13：示差走査熱量測定による非晶質体の定量法の確立
非晶質体の定量法の確立のためのフェブキソスタットの非晶質体の標品として、例11でアセトニトリルC晶をボールミルで60分間粉砕して得られたものを用いた。
アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgf）に、1、2.5、5、10、25、及び50％相当量の非晶質体(C晶を遊星ボールミルで60分間粉砕して調製したもの)を添加して総量約200 mgとし、袋混合した調製物について示差走査熱量測定における挙動変化を測定した。
【０１３６】
非晶質体の混合物は1％以上の非晶質体が存在すると210℃付近に吸熱ピークを示し、非晶質体混合割合の増加とともに増大した。一方、C晶に特徴的な約201℃〜約202℃に現れる吸熱ピークは、非晶質体混合割合の増加とともに減少し、非晶質体混合割合が100％になると消失した。非晶質体の混合割合と200℃以上の吸熱及び発熱ピークのピーク強度との間に線形性は認められなかった。一方、150℃以下の再結晶化に伴う発熱ピーク量（J/g）は非晶質体の含有割合に応じて直線的に増加することが確認され、非晶質体の含有割合の定量が可能であった。C晶及び非晶質体の混合物の示差走査熱量測定結果のまとめを表6に示す。約150℃以下に現れる発熱ピークの発熱ピーク量（J/g）をｘ、非晶質体の割合をｙとしたときの直線回帰式は、[y = 6.0675x]であり、相関係数（r）は0.995であった。
【０１３７】
【表６】
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【０１３８】
例14：走査電子顕微鏡による結晶の観察
日立製の電子顕微鏡（TM3000 Miniscope／HITACHI）を用いて例3、例4、例5で得た各結晶の走査電子顕微鏡写真を撮影した。
例4で得たメタノール水C晶（未粉砕）の走査電子顕微鏡写真を撮影したところ、柱状晶であり、柱の柱径は約20μｍ前後、柱の長さは1000μｍを超えることが確認できた。その代表的な写真を図17〜図19に示す。一部の結晶は、より細い柱状晶が寄り添っているように観察されることから、裂けやすい柱状晶であることが窺える。なお、図17の写真の倍率は100倍、図18及び図19の写真の倍率は80倍である。図17〜図19の電子顕微鏡写真の下の横棒は1ｍｍ（1000μｍ）の縮尺を示し、横棒の上の目盛は0.1ｍｍ（100μｍ）の間隔を示す。
【０１３９】
例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶を走査電子顕微鏡写真で観察したところ、メタノール水C晶よりも短く、かつ、柱の柱径に対する柱の長さの比が小さい柱状晶であり、柱の柱径が6μｍ前後、柱の長さが20μｍ前後であることが確認できた。その代表的な写真を図20〜図22に示す。図20〜図22の写真の倍率は500倍である。図20〜図22の写真の下の横棒は200μｍの縮尺を示し、横棒の上の目盛は20μｍの間隔を示す。
【０１４０】
例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を走査電子顕微鏡写真で観察したところ、さらに小さく粉砕されており、もはや、柱状晶の形状を維持しておらず、多少は短径と長径の長さの差はあっても、概ね1.5μｍ〜6.5μｍの径を有する粒状であることが確認できた。その代表的な写真を図23〜図25に示す。図23〜図25の写真の下の横棒は20μｍの縮尺を示し、横棒の上の目盛は2μｍの間隔を示す。
【０１４１】
例15：走査電子顕微鏡写真に写った結晶の大きさの測定
未粉砕のアセトニトリルC晶、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgf）の夫々について、走査電子顕微鏡写真に写っている結晶の長さを測定した。未粉砕のアセトニトリルC晶は柱状晶であるので、柱の長さを測定した。一方、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物は粒状であるので、長径の長さを測定した。測定した結晶の数は、各群430個である。その結果を表7に示す。未粉砕のアセトニトリルC晶の長径の長さの平均値は17.32μmであるのに対して、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の長径の平均値は2.96μmであり、未粉砕のアセトニトリルC晶の長径の長さの平均値の約17％の長さになっていた。なお、粉砕していないメタノール水C晶の長径の長さについては、統計解析可能な個数の結晶の長さを測定してはいないものの、図17〜図19の電子顕微鏡写真には1mmを超える長さの柱状晶が多数観察されることから、少なくとも、未粉砕のアセトニトリルC晶の長さの5倍以上、おそらくは10倍以上の平均長を有することは明らかと考えられた。
【０１４２】
【表７】
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【０１４３】
例16：かさ密度及びタップ密度の測定
例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶、例4で得たメタノール水C晶、例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgf）、市販のA晶（D50  19μm；北京連本医薬化学技術有限公司／Beijing Lianben Pharm-chemicals Tech.Co., Ltd.から購入したもの）、前記の市販のA晶を例12と同様にハンマーミル（大徳薬機製、DF-15）で粉砕した試料の夫々について、定容量法によって、かさ密度及びタップ密度を測定した。かさ密度及びタップ密度は以下の方法で求めた。
【０１４４】
＜定容量法による嵩密度の測定法＞
定容量法による嵩密度は、次式により計算した。
定容量法による嵩密度（g/ml）＝（MT1−M0）／V
ここで、式の右辺の変数は、次のとおりである。
MT1：  タップ前の紛体と測定用容器の合計質量（g）
M0：  測定用容器の質量（g）
V：   測定用容器の容量（ml）
【０１４５】
＜定容量法によるタップ密度の測定法＞
定容量法によるタップ密度は、次式により計算した。
定容量法によるタップ密度（g/ml）＝（MT2−M0）／V
ここで、式の右辺の変数は、次のとおりである。
MT2：  タップ後の紛体と測定用容器の合計質量（g）
M0：  測定用容器の質量（g）
V：   測定用容器の容量（ml）
【０１４６】
右辺の変数は、次のように測定した。
かさ比重測定器（容量25 ml、JIS Z 2504／筒井理化学器械）の重量（M0）を測定後、測定器の上部から、測定器内にあふれるまで結晶を入れ、測定器内が結晶で十分に満たされたのを確認後、測定器上部に堆積した過剰量の結晶をスパーテルで擦りきり、全体の重量（MT1）を量った。
この測定器を手で30回程度タッピングし、再び測定器上部からあふれるまで結晶を入れる。この工程を数回繰り返し、測定器内が結晶で十分に満たされたのを確認後、スパーテルで擦りきり、全体の質量（MT2）を量った。
これらの変数を上記の式に与えて定容量法による嵩密度及び定容量法によるタップ密度を算出した（表8）。
【０１４７】
例4で得た未粉砕のメタノール水C晶及び市販のA晶については、紛体が綿状であるために、容器内に大きな空隙ができてしまうとともに、容器の上に盛り上げってしまうため、定容量法による嵩密度は測定できなかった。
例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶のタップ密度は、例4で得た未粉砕のメタノール水C晶のタップ密度と比べて3.1倍高かった。また、例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶のタップ密度は、市販のA晶のタップ密度と比べて2.4倍高かった。
【０１４８】
【表８】
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【０１４９】
例17：アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の溶解速度
例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物(粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgf)の溶解速度を例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶及び市販のA晶(D50=19μm；Beijing Lianben Pharm-chemicals Tech.Co., Ltd. ／北京連本医薬化学技術有限公司より購入)と比較した。なお、例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶は、目開き16メッシュの篩過品を用いた。試料100mg及びマグネット撹拌子（スターラーバー）を200 mlのコニカルビーカーに入れ、溶出試験第1液(pH1.2)、pH5.5 のMcllvaine緩衝液、溶出試験第2液(pH6.8)、及び水をそれぞれ100 mlを加え、ヤマト科学(Yamato)製マグミキサーM-41を用い、毎分500回転で撹拌した。経時的に試験液の一部を採取し、フィルターでろ過して試料溶液とし、標準溶液に対して吸光度測定法(測定波長317nm)により試験した。
【０１５０】
試験結果を図26に示す。溶出試験第1液(pH1.2) に対する、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の3分後及び5分後の溶解速度は、A晶よりも速かった。また、水に対する、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の1分後〜10分後の溶解速度は、A晶よりも未粉砕のアセトニトリルC晶よりも速かった。さらに、pH5.5 のMcIlvaine緩衝液及び溶出試験第2液(pH6.8)に対する、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の溶解速度および溶解量は、未粉砕のアセトニトリルC晶と比較して高値を示し、市販のA晶と同等であった。
これらの結果から、溶出試験第1液(pH1.2)、pH5.5 のMcIlvaine緩衝液、溶出試験第2液(pH6.8)、及び水のいずれに対しても、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物は、市販のA晶と同等か市販のA晶以上の溶解速度を示す優れた原薬であることがわかった。
【０１５１】
例18：アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を含む錠剤の溶出速度
例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物 (粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgf)を用いて特許4084309号明細書の実施例1の処方に従って錠剤を製造した。例3で得た未粉砕C晶(目開き16メッシュの篩過品)又はA晶(D50=19μm，Beijing Lianben Pharm-chemicals Tech.Co., Ltd.／北京連本医薬化学技術有限公司より購入)を用いて同様に錠剤を製造して溶出プロファイルを比較した。各結晶50.0 g、乳糖水和物(SuperTab 11SD、DFE Pharma 製) 183.8 g、部分アルファー化デンプン(PC-10、旭化成ケミカルズ製) 37.5 g、ヒドロキシプロピルセルロース(HPC-SL、日本曹達製) 7.5 g、クロスカルメロースナトリウム(ND-200、旭化成ケミカルズ製) 31.3 gを乳鉢を使用して混合した。精製水93 gを混合末に加えて練合した。得られた湿潤顆粒を8号メッシュで整粒した後、50℃で通風乾燥させ、顆粒を得た。得られた顆粒を22号メッシュで整粒した後、篩過顆粒290 gにステアリン酸マグネシウム(太平化学産業製) 9.4 gをポリ袋にて混合し、打錠用顆粒を得た。この打錠用顆粒をロータリー式打錠機(VELA5、菊水製作所製、打錠圧2500kgf/cm2)で打錠し7 mm径の錠剤を得た。
【０１５２】
試験液としてpH5.5のMcIlvaine緩衝液900mlを用い、パドル法により毎分60回転で富山産業(Toyama)恒温水槽式溶出試験器NTR-6200Aを用いて撹拌した。5分間、10分間、15分間、30分間、45分間、60分間の各時間攪拌後に試験液をフィルターでろ過して試料溶液とし、標準溶液に対して吸光度測定法（測定波長317nm）によりフェブキソスタットの濃度を測定した。例5で得られたアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を含む錠剤は、全ての撹拌時間において、未粉砕のアセトニトリルC晶を含む錠剤よりも早い溶出を示し、60分攪拌後には、未粉砕のアセトニトリルC晶と比較して約20%高い溶出率を示した。また、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を含む錠剤は、撹拌開始から5分後、10分後及び15分後の時点において、A晶を含む錠剤、F錠、フィルムコーティング剥離したF錠のいずれと比較しても、より速い溶出速度を示し、最終的にこれらのA晶を含有する錠剤と同等の約95％の溶出率を示した(図27)。
【０１５３】
例19：アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の安定性試験
例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（粉砕圧力3kgf、供給圧力4kgf）を褐色ガラス瓶（蓋はポリエチレンの中蓋が付いたポリプロピレン製。）または厚さ0.04mmのポリエチレン袋に入れて密封し、長期保存試験（25℃±2℃／60％RH±5％）、および、加速試験（40℃±2℃／75％RH±5％）の各条件下での安定性を検討した。  安定性の測定は、乾燥減量、HPLCによる純度試験および粉末X線回折を測定することにより行った。
【０１５４】
アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の乾燥減量：
乾燥減量とは、文字通り、乾燥による重量変化の試験である。乾燥減量の測定は、アセトニトリルC晶1グラムを長期保存試験条件で3ヶ月保存した場合と、加速試験条件で1ヶ月および3ヶ月保存した場合の夫々について、その乾燥減量測定した。測定は、乾燥機（IKEDA RIKA AUTOMATIC OVEN DEK）を用いて105℃で2時間乾燥させたときの質量を天秤にて測定することにより行った。
表9に示すように、３ヶ月までの加速試験と長期保存試験において、問題となるレベルの乾燥減量は観察されなかった。
【０１５５】
【表９】
0006408642.tif 000011
【０１５６】
アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の純度試験：
HPLCによる純度試験は、長期保存試験条件で3ヶ月および6ヶ月保存した場合と、加速試験条件で1ヶ月、3ヶ月および6ヶ月保存した場合について測定した。
まず、測定試料10mgを移動相25mLに溶かし、試料溶液とした。この試料溶液を1mL分取し、移動相を加えて200mLとし、標準溶液とした。試料溶液及び標準溶液、10μLずつを正確とり、次の条件で液体クロマトグラフィーにより試験を行った。試料溶液中のフェブキソスタットのピーク面積と、類縁物質のピーク面積の比により純度を算出した。長期保存条件下においても（図28）、加速条件下においても（図29）、６ヶ月の保存期間中、不純物の総量はフェブキソスタットの約0.05％で一定しており、不純物の総量の変化は見られなかった。同様に、個々の不純物の中で最もピーク面積の大きな不純物（保持時間2.6min）は、長期保存条件下においても、加速条件下においても、６ヶ月の保存期間中、約0.035％で一定しており、最も多く含まれる不純物の量に変化は見られなかった。このように、長期保存条件および加速条件の夫々において、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物中に不純物の増加は認められなかった。
【０１５７】
試験条件
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：320nm）
カラム：内径4.6mm、長さ15cmのステンレス管に粒子径5μmのオクタデシルシリル化シリカゲルが充填された市販のカラムを用いた。
カラム温度：40℃
移動相：アセトニトリル/pH2.0の0.1mol/Lリン酸二水素カリウム液を2倍に希釈した液＝13/7
流量：フェブキソスタットの保持時間が約5分になるように調整する（約1mL/min）。
面積測定範囲：フェブキソスタットの保持時間の約6倍の範囲
【０１５８】
測定機器
SHIMADZU  高速液体クロマトグラフ装置
ポンプ          ：LC-20AD
オートサンプラー ：SIL-20ACHT
UV検出器        ：SPD-M20A
カラムオーブン   ：CTO-20AC
デガッサ         ：DGU-20A3R
【０１５９】
アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の粉末X線回折：
粉末X線回折は、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物をポリエチレン袋中に密封した試料、および、同じ試料を褐色ガラス瓶に入れた試料の夫々について、長期保存試験条件と加速試験条件の夫々について3ヶ月保存したサンプルを測定した。測定方法は、例6と同様であった。
図30に示すように、ポリエチレン袋中に密封して加速条件下で３ヶ月保存した場合、褐色ガラス瓶に入れて加速条件下で３ヶ月保存した場合、ポリエチレン袋中に密封して長期保存下で３ヶ月保存した場合、褐色ガラス瓶に入れて長期保存条件下で３ヶ月保存した場合、のいずれも、粉末X線回折チャートにおけるピークの位置及び強度に変化はないことから、保存期間中に結晶形に変化はなかったことが確認できた。
【０１６０】
例20：アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を用いた試作錠の安定性
例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（粉砕圧力3kgf、供給圧力4kgf）を用いて20mgのフェブキソスタットを含有する素錠（以下、「試作素錠（MeCN粉砕）」という。）とフィルムコーティング錠（以下、「試作FC錠（MeCN粉砕）」という。）を作製し、夫々について、加速試験（40℃±2℃／75％RH±5％）、および、苛酷試験（60℃±2℃／湿度コントロールなし）の各条件下での安定性を検討した。測定項目としては、硬度、重量、溶出性及び純度を測定した。なお、比較のため、FC錠である市販のF錠（10mg錠：ロット番号5051及び5049、20mg錠：ロット番号6062及び6056、40mg錠：ロット番号8016）についても同じ測定を行った。
【０１６１】
素錠の作製は、以下のように行った。まず、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物70.0g、乳糖水和物263.9g、部分アルファー化デンプン64.8g、ヒドロキシプロピルセルロース10.5g、を撹拌混合造粒装置（VG-5、パウレック製）を使用して混合した。次に、精製水102gを混合末に加えて練合した。得られた湿潤顆粒を湿式乾式整粒機（QC-197s、パウレック製）φ4.75mmを使用して整粒した後、50℃で通風乾燥させ、顆粒を得た。得られた顆粒を湿式乾式整粒機（QC-197s、パウレック製）φ1.1mmで整粒した後、篩過顆粒185gにクロスカルメロースナトリウム11.9gをポリ袋にて混合した後、ステアリン酸マグネシウム1gをポリ袋にて混合し、打錠用顆粒を得た。この打錠用顆粒をロータリー式打錠機（VELA5、菊水製作所製、打錠圧2500kgf/cm2）で打錠し7mm径の素錠（重量125mg）を得た。
【０１６２】
フィルムコーティング錠の作製は、以下のように行った。まず、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物70.0g、乳糖水和物263.9g、部分アルファー化デンプン64.8g、ヒドロキシプロピルセルロース10.5gを撹拌混合造粒装置（VG-5、パウレック製）を使用して混合した。次に、精製水102gを混合末に加えて練合した。得られた湿潤顆粒を湿式乾式整粒機（QC-197s、パウレック製）φ4.75mmを使用して整粒した後、50℃で通風乾燥させ、顆粒を得た。得られた顆粒を湿式乾式整粒機（QC-197s、パウレック製）φ1.1mmで整粒した後、篩過顆粒185gにクロスカルメロースナトリウム11.9gをポリ袋にて混合した後、ステアリン酸マグネシウム1gをポリ袋にて混合し、打錠用顆粒を得た。この打錠用顆粒をロータリー式打錠機（VELA5、菊水製作所製、打錠圧2500kgf/cm2）で打錠し7mm径の素錠（重量125mg）を得た。次に、ヒプロメロース25.2g、2.8gのマクロゴール6000を精製水289.6gに溶解し、コーティング液を作製した。得られた素錠に、調製したコーティング液を自動コーティング装置を用いて、給気70℃にて7mg/錠の被覆を行い、フィルムコート錠を得た。
【０１６３】
試作錠の硬度試験：
試作素錠（MeCN粉砕）（20mg錠）、試作FC錠（MeCN粉砕）（20mg錠）、F錠（10mg錠、20mg錠、40mg錠）の夫々について、長期保存条件（３ヶ月、６ヶ月）、加速条件（１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月）及び苛酷条件（１ヶ月、３ヶ月）で保存した後の硬度をOKADA SEIKO PC-30を用いて測定し、測定開始時の硬度と比較した（表10）。ただし、表中、「-」と表示されている条件での測定は行っていない。試作素錠（MeCN粉砕）も、試作FC錠（MeCN粉砕）も、F錠に対して遜色ない十分な硬度を有し、保存による硬度の低下は見られなかった。
【０１６４】
【表１０】
0006408642.tif 000012
※  硬度の単位はニュートン（N）である。
【０１６５】
試作錠の重量変化：
試作素錠(MeCN粉砕)（20mg錠）、試作FC錠(MeCN粉砕)（20mg錠）、F錠（10mg錠、20mg錠、40mg錠）の夫々について、長期保存条件（３ヶ月、６ヶ月）、加速条件（１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月）及び苛酷条件（１ヶ月、３ヶ月）で保存した後の重量の変化を測定し、測定開始時の重量と比較した（表11）。ただし、表中、「-」と表示されている条件での測定は行っていない。試作素錠(MeCN粉砕)も、試作FC錠(MeCN粉砕)も、F錠と同様に、重量の変化は3％未満であり、保存期間中を通じて問題となるレベルの重量変化は認められなかった。
【０１６６】
【表１１】
0006408642.tif 000013
※  重量の単位はミリグラム（mg）である。
【０１６７】
試作錠の溶出性：
試作素錠（MeCN粉砕）（20mg錠）、試作FC錠（MeCN粉砕）（20mg錠）、F錠（10mg錠、20mg錠、40mg錠）の夫々について、長期保存条件（３ヶ月、６ヶ月）、加速条件（１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月）及び苛酷条件（１ヶ月、３ヶ月）で保存した後に、日本薬局方の溶出試験第２液（ｐH6.8）中でパドル速度50rpmで30分間撹拌した後の溶出率を、紫外可視分光光度計を用いて測定し、測定開始時の溶出率と比較した（表12）。ただし、表中、「-」と表示されている条件での測定は行っていない。試作素錠（MeCN粉砕）も、試作FC錠（MeCN粉砕）も、F錠と同様に、94％以上の溶出率が保たれており、保存期間中を通じて問題となるレベルの溶出率の変化は認められなかった。
【０１６８】
【表１２】
0006408642.tif 000014
※  溶出率の単位はパーセント（%）である。
【０１６９】
試作錠の純度試験：
試作素錠（MeCN粉砕）（20mg錠）、試作FC錠（MeCN粉砕）（20mg錠）、F錠（10mg錠、20mg錠、40mg錠）の夫々について、加速条件（１ヶ月、３ヶ月）及び苛酷条件（１ヶ月、３ヶ月）で保存した後に、例19の純度試験と同様の方法で不純物の量を経時的に測定した（図31、図32）。ただし、F錠（10mg錠、20mg錠、40mg錠）については、加速条件下でのみ6ヶ月まで測定した。なお、錠剤からの抽出は、1錠を取り原薬10mgに対して移動相25mL相当量に溶解分散し、試料溶液とした。この試料溶液を1mL分取し、移動相を加えて200mLとし、標準溶液とした．加速条件下においても（図31）、苛酷条件下においても（図32）、試作素錠（MeCN粉砕）、試作FC錠（MeCN粉砕）ともに、F錠と同様に、３ヶ月の保存期間中、不純物の総量はフェブキソスタットの総量の0.1％以下であり、不純物の総量の変化は見られなかった。同様に、個々の不純物の中で最もピーク面積の大きな不純物（保持時間2.6min）は、加速条件下においても、苛酷条件下においても、３ヶ月の保存期間中、0.040％未満の水準で一定しており、最も多く含まれる不純物の量に変化は見られなかった。このように、加速条件および苛酷条件の夫々において、試作素錠（MeCN粉砕）（20mg錠）及び試作FC錠（MeCN粉砕）（20mg錠）に含まれる不純物の増加は認められなかった。
【０１７０】
例21：試作FC錠（MeCN粉砕）の溶出試験
例20で作製した試作FC錠（MeCN粉砕）（20mg錠）について、日本薬局方の溶出試験第1液（pH1.2）、McIlvain緩衝液（pH5.0）、溶出試験第2液（pH6.8）、精製水に対する溶出試験を行って、F錠（20mg錠）の溶出特性と対比した（図33）。なお、溶出試験方法は例18と同様の方法で行った。
いずれの条件においても、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を用いて作製した試作FC錠（MeCN粉砕）（20mg錠）の試験液への溶出率は、F錠（20mg錠）の溶出率とほぼ同じか若干上回っており、良好な溶出特性を示した（図33）。
【０１７１】
例22：比表面積の測定
例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶、例4で得たメタノール水C晶、例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgf）、例12で調製したA晶のハンマーミル粉砕物の夫々について、BET多点法を用いて比表面積を測定した。BET法は、低温において窒素やクリプトンなどの気体を固体の表面に単分子層で吸着させ、その吸着気体量を測定して夫々の分子の占める面積から固体の表面積を求める方法である。
【０１７２】
BET多点法による比表面積測定の測定機器及び測定条件は次のとおりであった。
測定機器：      4連式比表面積・細孔分布測定装置  NOVA-4200e型(Quantachrome社製)
使用ガス：      窒素ガス
冷媒（温度）：  液体窒素(77.35K)
前処理条件：    110℃、6Hr以上真空脱気
測定相対圧力：  0.05<P/P0<0.3
【０１７３】
【表１３】
0006408642.tif 000015
【０１７４】
表13に示すように、未粉砕のメタノール水C晶の表面積は0.172 m2/gに過ぎなかったものが、未粉砕のアセトニトリルC晶の表面積は5.757 m2/gに増加し、33.5倍に面積が増加していた。未粉砕のメタノール水C晶は、日本薬局方への崩壊試験用第2液への溶解速度がA晶の1/2以下であることが問題であったが、未粉砕のアセトニトリルC晶は未粉砕のメタノール水C晶の33.5倍も大きな表面積を有するので、溶出性に優れることが容易に理解できる。
そして、さらにこれをジェットミル粉砕することにより、表面積は9.001 m2/gに増加し、未粉砕のアセトニトリルC晶の表面積の1.6倍に表面積が増加した。未粉砕のメタノール水C晶とアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の表面積を対比すると、表面積は実に52.3倍に表面積が増加していた。アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物の表面積は、市販のA晶をハンマーミルで粉砕した試料の表面積の約1.2倍あることからわかるように、大きな表面積を有することが確認できた。アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物は未粉砕のメタノール水C晶の52.3倍も大きな表面積を有するので、とても溶出性に優れることが容易に理解できる。
【０１７５】
例23：原薬の外観 
例3で得た未粉砕のアセトニトリルC晶、例4で得たメタノール水C晶、例5で得たアセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（粉砕圧力3kgf・供給圧力4kgf）、アセトニトリルC晶のボールミル粉砕物、未粉砕のA晶（例12および例16を参照）の夫々について、安息角の測定を試みたが、安息角が測定できないほどに流動性の悪い紛体であった。
そこで、安息角を測定する代わりに、各試料を肉眼視したときの外観を撮影した。
【０１７６】
未粉砕のメタノール水C晶（図34）は、ふわふわした綿毛状の嵩高い塊であり、未粉砕のA晶よりも大きな1mmを超えるサイズの針状晶が目視で確認できた。
未粉砕のアセトニトリルC晶（図35）は、やや嵩高い塊を形成する傾向があるが、未粉砕のメタノール水C晶よりも小さく、かつ、未粉砕のメタノール水C晶よりも密度の高い塊であった。未粉砕のアセトニトリルC晶の塊の周囲を良く目を凝らして見ると、小さな針状晶らしきものが確認できた。
【０１７７】
アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（図36）も、塊を形成する傾向があったが、針状晶らしき構造は見えず、プラスチックスプーンで均すと、容易に平らになり、きめ細かな微粒子が寄り集まっていることがわかった（図37）。
アセトニトリルC晶のボールミル粉砕物（図38）も、塊を形成する傾向があったが、針状晶らしき構造は見えず、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物と同様にプラスチックスプーンで均すと、容易に平らになり、崩れやすいきめ細かな微粒子が寄り集まっていることがわかった。
アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（図36）とアセトニトリルC晶のボールミル粉砕物（図38）は、写真では塊を形成してはいるが、とても崩れやすい塊であり、スパーテルで掬い取った際の粉の動きはコーンスターチ（図39）や片栗粉（図40）の粉の動きにとてもよく似ていた。アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物は、優れたハンドリング性を有することが確認できた。
【０１７８】
例24：13C固体NMRによる結晶形の同定 
A晶を含有する製剤は（以下、「A晶製剤」という。）、及び、例20で作製した未粉砕のアセトニトリルC晶を含有する素錠（以下、「C晶製剤」という。）の13C固体NMRを測定するとともに、例12で調製したA晶のハンマーミル粉砕物（以下、「A晶原体」という。）、及び、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（以下、「C晶原体」という。）の13C固体NMRを測定して対比し、製剤中に含まれるフェブキソスタット原薬の結晶形を確認した。
なお、A晶を含有する製剤、及び、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を含有する素錠については、ラップでくるんで軽く小槌で数回たたいて粉砕した試料を測定に用いた。
また、A晶製剤は、次のように作製した。まず、市販のA晶（D50  19μm；北京連本医薬化学技術有限公司／Beijing Lianben Pharm-chemicals Tech.Co., Ltd.から購入したもの）20.0g、乳糖水和物75.4g、部分α化デンプン18.5g、ヒドロキシプロピルセルロース3.0gを乳鉢を使用して混合した。次に、精製水36.6gを混合末に加えて練合した。得られた湿潤顆粒を14号メッシュで整粒した後、50℃で通風乾燥させ、顆粒を得た。得られた顆粒を20号メッシュで整粒した後、篩過顆粒116.9gにクロスカルメロースナトリウム7.5g、ステアリン酸マグネシウム0.6gをポリ袋にて混合し、打錠用顆粒を得た。この打錠用顆粒をロータリー式打錠機（VELA5、菊水製作所製、打錠圧2500kgf/cm2）で打錠し、重量125mg、7mm径の素錠を得た。
固体NMRの測定は、13C（100.5MHz）の核種を用い、各試料約49μlを直径3.2mmの固体NMR試料管に詰めて、室温で、15ｋHzの回転速度で測定した。測定機器及び測定条件は下記のとおりであった。
【０１７９】
測定機器：  JNM-ECA600II
測定プローブ：  3.2mm  CPMASプローブ
13C-CPMAS測定条件：
・測定モード cpmas_toss.jxp コンタクトタイム 2ms
・取込時間 33.9ms 待ち時間 3.5sec 積算回数 2200回(原薬)および8800回(製剤)
・ウィンドウ関数 EXPモード BF=20Hz
（Tossモードを使用してSSBを消去）
＊化学シフトの基準はアダマンタンの信号（13C=29.5ppm）でシムZ0を調整した。
【０１８０】
図41に示すように、C晶原体及びC晶製剤の13C固体NMRチャートでは、約20ppmにほぼ等価なトリプレットピーク（特許第4084309号公報の参考例3を参照）を有する一方で、A晶原体及びA晶製剤の13C固体NMRチャートには、これらのピークが存在しなかったので、C晶の原薬を用いて湿式造粒して製造した錠剤中の結晶形がC晶のまま、結晶転移を生じていないことを、13C固体NMRによって確認することができた。また、A晶原体及びA晶製剤の13C固体NMRチャートでは、約19ppmにほぼ等価なダブルピークを有する一方で、C晶原体及びC晶製剤の13C固体NMRチャートには、これらのピークが存在しなかったので、A晶の原薬を用いて製造した錠剤中の結晶形がA晶のまま、結晶転移を生じていないことを、13C固体NMRによって確認することができた。
【０１８１】
なお、同様に、図41のチャートから、A晶原体及びA晶製剤の13C固体NMRチャートには存在せずに、C晶原体及びC晶製剤の13C固体NMRチャートには存在するC晶に特徴的なピークとして、約28.5ppmのシングルピーク（A晶原体及びA晶製剤ではダブルピークとなっている）、約100ppmのシングルピーク、約114ppmのシングルピーク（A晶原体及びA晶製剤ではダブルピークとなっている）、約125ppmのシングルピーク、約131ppmのシングルピーク（A晶原体及びA晶製剤ではダブルピークとなっている）、約135ppmのシングルピーク、及び、約159ppmのシングルピーク、約167ppmのシングルピークが存在するので、これらのピークを手がかりとして、錠剤中のC晶を容易に同定することが可能である。
【０１８２】
さらに、図41のチャートから、C晶原体及びC晶製剤の13C固体NMRチャートには存在せずに、A晶原体及びA晶製剤の13C固体NMRチャートには存在するA晶に特徴的なピークとして、約19 ppmのダブルピーク、約102ppmのシングルピーク、約120ppmのダブルピーク、約126ppmのダブルピーク、約130ppm〜約132ppmのダブルピーク、約134ppmのダブルピーク、約162ppmのシングルピーク、約168.5ppmのシングルピーク（右側に肩を伴う）、が存在するので、これらのピークを手がかりとして、錠剤中のA晶を同定することも容易である。
【０１８３】
例25：ラマン顕微鏡による観察
錠剤中のフェブキソスタットのC晶の結晶形、形態及び大きさをラマン顕微鏡を用いて観察した。
事前に、Renishaw社のinVia Reflex/StreamLineを用いて、フェブキソスタットのA晶及び試作錠（MeCN）の製造に用いた各成分のラマンスペクトルを確認した。その結果、C晶は約1695 shift/cm-1のピークによって、A晶及び各添加剤と区別できることがわかった（図42及び図43）。また、A晶は、約1450 shift/cm-1、約1330 shift/cm-1のピークによって、C晶及び各添加剤と区別できることがわかった（図42及び図43）。
ラマン顕微鏡はRenishaw社の顕微レーザーラマン分光装置inVia Reflex/StreamLineを用い、ラマンイメージングを測定した。    
測定条件は、下記のとおりであった。
励起波長          785nm STline
レーザー出力      50%(45mW/line)
露光時間          0.88sec/line
グレーティング    1200l/mm
マッピングエリア  1000×1000um(1.2umstep)
取得スペクトル    695556(5h45m)
対物レンズ        X50
例20で作製した試作FC錠（MeCN粉砕）（20mg錠）の表面を切削し観察した。
【０１８４】
C晶のラマンイメージングの画像及び粒子解析の結果を夫々図44と図45に示す。顕微鏡画像（図44）から、少なくとも直径10μm未満のC晶の微細な粒子が多数確認できた。また、粒子解析の結果（図45）から、直径5μm以下の粒子（図45の左端のX軸の隣の棒）が大多数であることが確認できた。C晶の粒子が多数密集している場合には、画像だけでは、大きな粒子のように見えてしまうことは容易に想定できるので、ほとんどのC晶の粒子は直径5μm以下であると考えられた。走査型電子顕微鏡型の顕微ラマン装置（例えばRenishaw社の「ラマン複合システム SEM ラマン」）を用いれば、密集している粒子を峻別して観察確認可能であろうと考えられた。
【０１８５】
例26：共焦点レーザー蛍光顕微鏡による観察
フェブキソスタットは、励起波長314nm、蛍光波長390nmで蛍光観察できることが非特許文献9に記載されていることから、実際に、錠剤中に含まれるフェブキソスタット原薬の形態及び大きさを観察することが可能かどうかを検証した。
共焦点レーザー蛍光顕微鏡は、Leica社製のTCS-SP5を用いた。試料は紫外光で励起すると蛍光を発することが予備実験で分かっていたので、405nmの励起光を用いて蛍光を観察した。TCS-SP5では、405nmの単一波長の励起光を半導体レーザーを用いて発生させるため、励起フィルターは不要である。今回の観察では、COHERENT社製の小型ダイオードレーザモジュールを用いて405nmの励起光を発生させた。また、TCS-SP5では、ダイクロイックミラーの機能を果たすものとして、SP5専用に設計されたライカ製ビームスプリッターを用いた。TCS-SP5は、蛍光波長をプリズムと可動式のスライダーを用いて分光してスキャンするため5nm単位で蛍光波長の自由な設定ができる。
【０１８６】
なお、フェブキソスタットについて非特許文献9に記載されている励起波長314nm、蛍光波長390nmは、いずれも、レンズを透過しにくい400nm以下の紫外波長域に属するため、蛍光顕微鏡観察を行うためには、より可視波長域の光で観察することが望ましい。
そして、一般に、ある物質の励起波長と蛍光波長は、一定の幅を有していることが多いため、蛍光顕微鏡観察を行うに先立つ予備検討として、まず、各結晶を可視波長域ぎりぎりの405nmの光で励起したときの蛍光スペクトル特性を確認した。
【０１８７】
なお、蛍光スペクトル特性の確認は、TCS-SP5を用いたλスキャンにより、単一の光学断層像について、405 nmの励起光（出力レベルが15、25、あるいは35%）を照射し、蛍光を410 nmから781.7 nmの範囲で、スリット幅5 nmで、5.9 nm間隔で検出した。画像フォーマットは、512 x 512pixel、スキャン速度は400 Hz、シグナルの平均化はラインモード2で行った。
【０１８８】
その結果、未粉砕のメタノール水C晶、未粉砕のアセトニトリルC晶、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物、アセトニトリルC晶のボールミル粉砕物のいずれの試料についても、405nm（出力レベルが15%あるいは20%）の励起波長に対して420nm〜600nmの波長域に強い蛍光を発することを確認したので、以後の蛍光顕微鏡観察は励起波長405nm、蛍光波長420nm〜600nmで観察を行うことにした。
【０１８９】
なお、比較のため緑色蛍光および赤色蛍光も測定した。緑色蛍光に関しては、励起波長は488 nm（出力レベル10%）、蛍光は500-550nmの波長域で取得し、赤色蛍光に関しては、励起波長は543 nm（出力レベル40%）、蛍光は555-620nmの波長域で取得した。蛍光検出器は高感度蛍光検出器HyDを用いた。検出感度については、青色蛍光、緑色蛍光、赤色蛍光のいずれの場合も、HyDの取得ゲインは100%とした。Z-stackは、対物レンズが20倍、25倍、63倍、100倍の場合に、光学断層像の間隔をそれぞれ2.5 μm、1μm、0.5μm、あるいは0.5μmとして観察し、最大投影法で行った。スキャン速度は200 Hz、シグナルの平均化はラインモード3で行った。画像フォーマットは、512 x 512 pixelあるいは1024 x 1024 pixelとした。Photon counting modeでは、スキャン速度は10 Hz、シグナルの平均化はラインモード1で行った。
その結果、緑色蛍光および赤色蛍光では、ほとんど蛍光はみられないことを確認した。
【０１９０】
共焦点レーザー蛍光顕微鏡観察は、(1)未粉砕のメタノール水C晶、(2)未粉砕のアセトニトリルC晶、(3)アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物、(4)アセトニトリルC晶のボールミル粉砕物、(5)未粉砕のアセトニトリルC晶を用いて作製した試作錠、(6)アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を用いて作製した試作錠、(7)プラセボ錠、(8)乳糖水和物、(9)部分α化デンプン、(10)ヒドロキシプロピルセルロース、(11)クロスカルメロースナトリウム、(12)ステアリン酸マグネシウム、(13)ヒプロメロース、(14)マクロゴール6000の夫々について行った。
【０１９１】
未粉砕のアセトニトリルC晶を用いて作製した試作錠（以下、「MeCN-C素錠」という。）は、次のようにして作製した。
まず、未粉砕のアセトニトリルC晶50.0g、乳糖水和物183.8g、部分アルファー化デンプン37.5g、ヒドロキシプロピルセルロース7.5g、クロスカルメロースナトリウム31.3gを乳鉢を使用して混合した。次に精製水93gを混合末に加えて練合した。得られた湿潤顆粒を8号メッシュで整粒した後、50℃で通風乾燥させ、顆粒を得た。得られた顆粒を22号メッシュで整粒した後、篩過顆粒290gにステアリン酸マグネシウム9.4gをポリ袋にて混合し、打錠用顆粒を得た。この打錠用顆粒をロータリー式打錠機（VELA5、菊水製作所製、打錠圧2500kgf/cm2）で打錠し7mm径のMeCN-C素錠を得た。MeCN-C素錠の重量は128mgであった。
【０１９２】
アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を用いて作製した試作錠（以下、「粉砕MeCN-C素錠」という。）は、次のようにして作製した。
まず、アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物70.0g、乳糖水和物263.9g、部分アルファー化デンプン64.8g、ヒドロキシプロピルセルロース10.5gを撹拌混合造粒装置（VG-5、パウレック製）を使用して混合した。次に精製水102gを混合末に加えて練合した。得られた湿潤顆粒を湿式乾式整粒機（QC-197s、パウレック製）φ4.75mmを使用して整粒した後、50℃で通風乾燥させ、顆粒を得た。得られた顆粒を湿式乾式整粒機（QC-197s、パウレック製）φ1.1mmで整粒した後、篩過顆粒185gにクロスカルメロースナトリウム11.9gをポリ袋にて混合した後、ステアリン酸マグネシウム1gをポリ袋にて混合し、打錠用顆粒を得た。この打錠用顆粒をロータリー式打錠機（VELA5、菊水製作所製、打錠圧2500kgf/cm2）で打錠し7mm径の粉砕MeCN-C素錠を得た。粉砕MeCN-C素錠の重量は125mgであった。
【０１９３】
プラセボ錠は、次のようにして作製した。
まず、乳糖水和物333.9g、部分α化デンプン64.8g、ヒドロキシプロピルセルロース10.5g、を撹拌混合造粒装置（VG-5、パウレック製）を使用して混合した。次に精製水102gを混合末に加えて練合した。得られた湿潤顆粒を湿式乾式整粒機（QC-197s、パウレック製）φ4.75mmを使用して整粒した後、50℃で通風乾燥させ、顆粒を得た。得られた顆粒をφ1.1mmを使用して整粒した後、篩過顆粒185gにクロスカルメロースナトリウム11.9gをポリ袋にて混合した後、ステアリン酸マグネシウム1gをポリ袋にて混合し、打錠用顆粒を得た。この打錠用顆粒をロータリー式打錠機（VELA5、菊水製作所製、打錠圧2500kgf/cm2）で打錠し7mm径のプラセボ錠を得た。プラセボ錠の重量は125mgであった。
【０１９４】
MeCN-C素錠、粉砕MeCN-C素錠、プラセボ錠の処方を表14に記載する。
【０１９５】
【表１４】
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※  表中の単位はミリグラム（mg）である。
【０１９６】
各結晶および添加剤についてはそのまま実験に使用した。一方、錠剤試料は、薬包紙に包んだ状態で、木槌で数回（5から7回）強打して、錠剤を粉砕し、粗粉砕物として実験に使用した。
観察は、各結晶、添加剤、および、錠剤の粗粉砕物を微量、スライドガラス（MATSUNAMI製）にのせ、共焦点レーザー蛍光顕微鏡（Leica社製、TCS SP5）により観察を行った。
【０１９７】
その結果、以下の観察結果を得た。図46〜図53はすべて白黒であるが、これらの図の右側の画像において、白い部分は、青い蛍光を発している。
(1)未粉砕のメタノール水C晶（図46）
未粉砕のメタノール水C晶については、図17〜図19の走査電子顕微鏡写真と同様の形状及び大きさの蛍光画像および微分干渉画像が観察された（図46）。図46の結晶は長軸の長さが約670μmの針状晶であるが、1mmを超える長さの針状晶も多数蛍光観察された。なお、針状晶の端部で特に蛍光が強かった。また、蛍光画像からもささくれ立った針状晶であることがわかった。長軸の中央部で蛍光の強い小さな点が観察されているのは、
【０１９８】
(2)未粉砕のアセトニトリルC晶（図47）
未粉砕のアセトニトリルC晶についても、図20〜図22の走査電子顕微鏡写真と同様の形状及び大きさの蛍光画像および微分干渉画像が観察された（図47）。図47左の図の右上の結晶は長軸の長さが約82μmの針状晶であるが、これは形状を判りやすく示すために大きめの結晶を選んで撮影したためであり、実際には、図47左の図の中央付近の結晶のように、長軸の長さが約10μm 〜20μmの針状晶が多数蛍光観察された。なお、針状晶の端部で特に蛍光が強かった。また、蛍光画像からもささくれ立った針状晶であることがわかった。
【０１９９】
(3)アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（図48）
アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物についても、図23〜図25の走査電子顕微鏡写真と同様の形状及び大きさの蛍光画像および微分干渉画像が観察された（図48）。矢印の先に直径3μm前後の蛍光を発する粒子が確認できた。図48左の蛍光画像の中央付近に、直径約17μmの蛍光体が観察されるが、実際には、直径3μm前後の蛍光を発する粒子が多数寄り集まっている構造物である。図23〜図25の走査電子顕微鏡写真において直径3μm前後の粒子が多数寄り集まっていることと同様の画像である。蛍光を発しているために輪郭がぼやけて直径約17μmの蛍光体のように見えているが、共焦点レーザー蛍光顕微鏡では、画面手前から奥に向かって多数の断層画像を取得しており、これらの断層画像を追ってゆくと、直径約17μmの蛍光体は実際には直径3μm前後の蛍光を発する粒子であることが確認できた。
【０２００】
(4)アセトニトリルC晶のボールミル粉砕物（図49）
アセトニトリルC晶のボールミル粉砕物については、直径約1μm〜約40μmに渡る様々な大きさの球状粒子の蛍光が観察された（図49左）。アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物（図48左）と異なるのは、アセトニトリルC晶のボールミル粉砕物の蛍光粒子は丸みを帯びていることと、粒子の大きさが実際に様々であることであった。
【０２０１】
(5)プラセボ錠（図50）
プラセボ錠では青色の蛍光は観察されなかった（図50左）。
(6)未粉砕のアセトニトリルC晶を用いて作製した試作錠
未粉砕のアセトニトリルC晶を用いて作製した試作錠については、多数の直径5μm前後の蛍光を発する粒子が観察された（図51左）。微分干渉画像と対比すると、添加物と思われる蛍光を発しない直径20μm〜50μm程度の物体の周囲に付着した状態で直径5μm前後の蛍光を発する粒子が観察されたことがわかった。蛍光を発しない直径20μm〜50μm程度の物体の周囲に直径5μm前後の蛍光を発する粒子が多数付着しているために、画像によっては、直径20μm〜50μm程度の一つの蛍光体のように観察される画像もあったが、画面手前から画像奥に向かって多数の断層画像をを追ってゆくと、実際には直径5μm前後の蛍光を発する粒子が蛍光を発しない物体に周囲に多数付着していたことがわかった。未粉砕のアセトニトリルC晶を用いて作製した試作錠は、造粒過程で未粉砕のアセトニトリルC晶が粉砕されたと考えられた。このように、未粉砕のアセトニトリルC晶は、造粒によって、十分に小さなな粒子粉砕され得るので、良好な保存安定性と溶出性を兼ね備えた製剤に適している優れた結晶であることが確認された。
【０２０２】
(7)アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を用いて作製した試作錠（図52、図53）
アセトニトリルC晶のジェットミル粉砕物を用いて作製した試作錠については、多数の直径2〜3μm前後のほぼ均一な大きさの蛍光を発する粒子が観察された（図52左、図53左）。微分干渉画像と対比すると、短径直径20μm〜30μm、長径50μm〜100μm程度の添加物と思われる蛍光を発しない物体の周囲に付着した状態で直径2〜3μm前後の蛍光を発する粒子が観察されたことがわかった。蛍光を発しない程度の物体の周囲に直径2〜3μm前後の蛍光を発する粒子が多数付着しているために、画像によっては、大きな一つの蛍光体のように観察される画像もあったが、画面手前から画像奥に向かって多数の断層画像をを追ってゆくと、実際には直径2〜3μm前後の蛍光を発する粒子が蛍光を発しない物体に周囲に多数付着していたことがわかった。
【０２０３】
添加剤
(7)プラセボ錠、(8)乳糖水和物、(9)部分α化デンプン、(10)ヒドロキシプロピルセルロース、(11)クロスカルメロースナトリウム、(12)ステアリン酸マグネシウム、(13)ヒプロメロース、(14)マクロゴール6000、の夫々についても、個々に、共焦点レーザー蛍光顕微鏡による観察を行ったが、いずれの添加剤も、405nmの励起光に対して蛍光は発しないことを確認した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
0006408642.tif 000023
【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
0006408642.tif 000063
【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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