(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
重量パーセント基準で下記材料から構成される漢方薬組成物：３０％〜８０％のフェノール酸誘導体、２％〜１０％のタンシノン及び１５％〜６０％のサポニンであって、
前記フェノール酸誘導体が重量部基準で下記成分から構成され、
ダンシェンス：プロトカテク酸：プロトカテクアルデヒド：コーヒー酸：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：サルビアノール酸Ｇ異性体：サルビアノール酸Ｇ：サルビアノール酸Ｄ＝（２〜６）：（０．０１〜０．０５）：（１〜３）：（０．０１〜０．０６）：（０．５〜２）：（０．２〜１）：（０．０５〜０．３）：（０．５〜２）：（０．２〜１）：（０．１〜０．５）：（０．１〜０．５）：（０．２〜１）；
前記タンシノンが重量部基準で下記成分から構成され、
ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ：ダンシェンキシンクンＤ＝（０．０１〜０．０５）：（０．０５〜０．１）：（０．０２〜０．１）：（０．１〜０．５）：（０．１〜０．５）；
前記サポニンが重量部基準で下記成分から構成され、
パナックス・ノトギンセンのサポニンＲ１：ジンセノシドＲｇ１及び／又はＲｅ及び／又はＲｈ２：ジンセノシドＲｂ１：ジンセノシドＲｈ１−Ｓ：ジンセノシドＲｄ及び／又はＲｈ１−Ｒ＝（０．１〜０．５）：（１〜４）：（１〜４）：（０．２〜０．７）：（０．２〜０．７）；かつ
前記漢方薬組成物は急性心筋梗塞及び急性心筋虚血を治療するための漢方薬組成物である、漢方薬組成物。
【請求項２】
重量パーセント基準で下記材料から構成される、請求項１に記載の組成物：５０％〜７０％のフェノール酸誘導体、２％〜６％のタンシノン及び２５％〜４５％のサポニン。
【請求項３】
重量パーセント基準で下記材料から構成される、請求項１に記載の組成物：６６％のフェノール酸誘導体、３％のタンシノン及び３１％のサポニン。
【請求項４】
前記フェノール酸誘導体が重量部基準で下記成分から構成される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物：
ダンシェンス：プロトカテク酸：プロトカテクアルデヒド：コーヒー酸：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：サルビアノール酸Ｇ異性体：サルビアノール酸Ｇ：サルビアノール酸Ｄ＝（３．３１〜４．８２）：（０．０２〜０．０３）：（１．１７〜１．５４）：（０．０３〜０．０４）：（０．８６〜１．１３）：（０．４８〜０．６３）：（０．１２〜０．１６）：（１〜２）：（０．４４〜０．５８）：（０．２７〜０．３６）：（０．２９〜０．３８）：（０．５４〜０．６４）。
【請求項５】
前記タンシノンが重量部基準で下記成分から構成される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物：
ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ：ダンシェンキシンクンＤ＝（０．０２〜０．０３）：（０．０６〜０．０７）：（０．０４〜０．０６）：（０．２１〜０．２７）：（０．２２〜０．２８）。
【請求項６】
前記サポニンが重量部基準で下記成分から構成される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物：
パナックス・ノトギンセンのサポニンＲ１：ジンセノシドＲｇ１及び／又はＲｅ及び／又はＲｈ２：ジンセノシドＲｂ１：ジンセノシドＲｈ１−Ｓ：ジンセノシドＲｄ及び／又はＲｈ１−Ｒ＝（０．２〜０．３）：（１．９〜３．０）：（１．９〜３．０）：（０．４８〜０．５１）：（０．４７〜０．６２）。
【請求項７】
前記ジンセノシドＲｇ１とジンセノシドＲｅとが重量部基準で（１６〜１７）：１の比にて共存している、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の漢方薬組成物と薬学的に許容可能な担体とを含む、急性心筋梗塞及び急性心筋虚血を治療するための製剤。
【請求項９】
前記製剤における前記組成物の重量パーセントが０．１％〜９９．９％であり、残りは該薬学的に許容可能な担体である、請求項８に記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医学分野に関する。更に特に本発明は心血管疾患を治療するための漢方薬組成物及びその製剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
生活水準の向上、世界的な人口高齢化及び発症集団の低年齢化に伴い、脳や心臓血管の疾患を有する患者が年々増大している。これは人の健康を害する２番目に大きな疾患となっている。狭心症は一過性心筋虚血及び低酸素により引き起こされる、胸部痛及び胸部不快感を特徴とする臨床症候群である。冠動脈心疾患（ＣＨＤ）狭心症は、狭心症の患者の約９０％を占める、冠動脈硬化又は痙攣が原因となって心筋虚血及び低酸素により誘発される狭心症を意味する。
【０００３】
現在、狭心症を治療する方法は血管の拡張、血液粘度の低下及び血小板の凝集阻害、並びに抗凝血が主流になっている。伝統的に、その化学薬品には、硝酸塩、亜硝酸塩、β−受容体遮断薬及びカルシウム拮抗薬が含まれる。しかしながら、その強い毒性及び副作用から、これらの薬物は長時間の使用には適さない。加えて、それらのほとんどが疾患の進行には効果のない対症療法に焦点を当てたものである。ニトログリセリンの投与後に頭痛、拍動性頭痛、心拍数の上昇及び更には卒倒等の症状がある場合もある（非特許文献１を参照されたい）。最近になって、ニトログリセリンには、重度の低血圧を誘発し（非特許文献２、非特許文献３を参照されたい）、耐性が生じやすい（非特許文献４を参照されたい）という問題があることが報告された。したがって、このことからニトログリセリンの臨床への適用が妨げられている。
【０００４】
漢方薬のフェノール酸誘導体は、薬用植物、例えばスイカズラ（ロニセラ・ジャポニカ・サンブ（Lonicera japonica Thunb．））、ルブス・クラテギホリウス（Rubus crataegifolius：クマイチゴ）（バラ科）の根、キク科のタンポポ及びトウサンカ（breviscpini）、シソ科のサルビア・オフィキナリス（Salvia officinalis：セージ）、カナリウム・ベンガレンス（Canarium bengalense：方欖）（カンラン科）及びセリ科のアンジェリカ・シネンシス（Angelica Sinensis：カラトウキ）、及びリゾマ・リグシテシ・チュアニクシオング（RhizomaLigustici Chuanxiong：センキュウ）等に広く分布している。これらの植物のフェノール酸誘導体における、例えばフリーラジカルの捕捉、抗炎症、抗ウイルス、免疫調節、抗凝血及び抗腫瘍等の薬理学的活性に益々注目が集まっている。通常、フェノール酸誘導体は下記のように分類される：安息香酸系フェノール酸、例えばジオスコレア・ブルビフェラＬ（Dioscorea bulbifera L：ニガカシュウ）及びタンポポ由来のもの；桂皮酸系フェノール酸、例えばアンジェラ・シネンシス（オリバー）、リゾマ・リグシテシ・チュアニクシオング及びタンポポの水溶性抽出物中の主な生体有効成分であるフェルラ酸；サルビアエ・ミルチオルヒザエ・ブンゲ（Salviae Miltiorrhizae Bge：タンジン）（シソ科）から単離されるリトスペルミン酸；フェニル酢酸系フェノール酸、例えばタンポポ及びフォルシシア・サスペンサ（Forsythia suspense：レンギョウ）に見られるｐ−ヒドロキシフェニル酢酸。
【０００５】
タンシノン（総タンシノンとしても知られる）はサルビアエ・ミルチオルヒザエ・ブンゲ（シソ科）の根から抽出された静菌性の脂溶性フェナントラキノンである。１０種を超える化合物が同定されており、これらにはタンシノンＩ、タンシノンＩＩＡ、タンシノンＩＩＢ、クリプトタンシノン及びイソクリプトタンシノン等が含まれる。これらの中でもクリプトタンシノン、ジヒドロタンシノンＩＩ、ヒドロキシタンシノン、タンシノン酸メチル及びタンシノンＩＩＢの５つの化合物が、抗菌効果、並びに抗炎症及び解熱の効果を有することが確認されている。タンシノンＩＩＡのスルホン化生成物であるタンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムは、水溶性であり、僅かな副作用にて狭心症を治療する重大な効果を有することが臨床的に証明されている。タンシノンＩＩＡスルホン酸ナトリウムによる冠動脈心疾患（ＣＨＤ）を治療する新たな薬物への開発が進められている。総タンシノンにおいて、抗菌、炎症の低減、淤血の除去による血液の活性化、及び創傷修復の促進という多重効果が見出され、長期の投与後でも重大な副作用はない。
【０００６】
サポニンはトリテルペン又はスピロスタンアグリコンを含み、主に陸上高等植物に分布しているグルコシドである。多くの漢方薬草、例えばチョウセンニンジン、キキョウ及びミシマサイコにおける主成分にサポニンが含まれている。サポニンは、抗癌、腫瘍細胞の増殖抑制、アポトーシス誘導、癌細胞シグナル伝達への影響、並びに腫瘍血管新生及び腫瘍細胞の転移の阻害という生体活性を有することが確認されている。また、サポニンは血糖及び血中脂質の低下、抗ウイルス、並びに免疫調節の効果を有し、国内外において最も一般的な研究対象となっている。
【０００７】
ラディックス・サルビアエ・ミルチオルヒザエ（Radix Salviae Miltiorrhizae：タンジン）は苦味があり、薬性は微寒であり、サルビア・ミリチオルヒザ・ブンゲ（Salvia militiorrhiza Bunge：タンジン）の根から得られる。ラディックス・サルビアエ・ミルチオルヒザエは帰心経及び帰肝経であり（心経及び肝経に効き）、淤血の除去により疼痛を止め、血液の活性化により血液循環を促し、不穏状態の緩和により精神を落ち着かせる等の機能を有する。最近の薬理研究において示されているように、ラディックス・サルビアエ・ミルチオルヒザエには、冠動脈の拡張、微小循環の改善、心臓の保護、血小板の凝集の阻害及び除去、生物の無酸素に対する抵抗力の増強、並びに抗肝炎、抗腫瘍及び抗ウイルスの効果がある。２００１年に、中国医学科学院医薬研究所により、水溶性の生体有効成分がサルビアノール酸Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、リトスペルミン酸、ロスマリン酸及びイソサルビアノール酸Ｃを含むラディックス・サルビアエ・ミルチオルヒザエ及び同じ属の植物において見出された合計１３種のフェノール酸にのぼること（非特許文献５を参照されたい）、並びにそれらの薬理効果が報告された。２００２年には、サルビアノール酸Ｋが構造的に同定された（非特許文献６を参照されたい）。ラディックス・サルビアエ・ミルチオルヒザエにおける水溶性の生体有効成分は海外でも研究されてきた。１９９９年に、抗ＨＩＶインテグラーゼ及び他のウイルスにおける１３種のサルビアノール酸の生体活性についての研究が米国のジョージタウン大学により行なわれ、米国特許に申請された。ラディックス・サルビアエ・ミルチオルヒザエは商業的に開発する価値のある潜在性の非常に高い薬用植物であることが示されてきた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】New Pharmaceutics, 14th edition, p264
【非特許文献２】China Journal of Morden Medicine, 1997, 7 (4): 42
【非特許文献３】Shanxi Medicine Journal, 1996, 25(2) 315
【非特許文献４】Nanfang Journal of Nursing, 1996, 3(5):7-9
【非特許文献５】Bulletin of Medical Research, 2001, 30(7)
【非特許文献６】Journal of Xinjiang Medical University, 2002, 25(3)
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の目的は急性心筋梗塞及び急性心筋虚血を治療するための漢方薬組成物を提供することである。上記組成物は重量パーセント基準で下記材料から構成される：３０％〜８０％のフェノール酸誘導体、２％〜１０％のタンシノン及び１５％〜６０％のサポニン。
【００１０】
ここで、フェノール酸誘導体は重量部基準で下記成分から構成される：
ダンシェンス：プロトカテク酸：プロトカテクアルデヒド：コーヒー酸：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：サルビアノール酸Ｇ異性体：サルビアノール酸Ｇ：サルビアノール酸Ｄ＝（２〜６）：（０．０１〜０．０５）：（１〜３）：（０．０１〜０．０６）：（０．５〜２）：（０．２〜１）：（０．０５〜０．３）：（０．５〜２）：（０．２〜１）：（０．１〜０．５）：（０．１〜０．５）：（０．２〜１）。
【００１１】
上記タンシノンは重量部基準で下記成分から構成される：
ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ：ダンシェンキシンクンＤ＝（０．０１〜０．０５）：（０．０５〜０．１）：（０．０２〜０．１）：（０．１〜０．５）：（０．１〜０．５）。
【００１２】
上記サポニンは重量部基準で下記成分から構成される：
パナックス・ノトギンセン（Panax Notoginseng：サンシチニンジン）サポニンＲ１：ジンセノシドＲｇ１及び／又はＲｅ及び／又はＲｈ２：ジンセノシドＲｂ１：ジンセノシドＲｈ１−Ｓ：ジンセノシドＲｄ及び／又はＲｈ１−Ｒ＝（０．１〜０．５）：（１〜４）：（１〜４）：（０．２〜０．７）：（０．２〜０．７）。
【００１３】
本発明の一実施の形態では、上記組成物を様々な種類の製剤、例えば注射剤、錠剤、カプセル剤、滴丸剤及び微小滴丸剤等に調製することができる。
【００１４】
特に本発明は下記のような技術的解決策を含む：
１．  重量パーセント基準で下記材料から構成される漢方薬組成物：３０％〜８０％のフェノール酸誘導体、２％〜１０％のタンシノン及び１５％〜６０％のサポニン。
２．  重量パーセント基準で下記材料から構成される、項１に記載の組成物：５０％〜７０％のフェノール酸誘導体、２％〜６％のタンシノン及び２５％〜４５％のサポニン。
３．  重量パーセント基準で下記材料から構成される、項１に記載の組成物：６６％のフェノール酸誘導体、３％のタンシノン及び３１％のサポニン。
４．  上記フェノール酸誘導体が重量部基準で下記成分から構成される、項１〜３のいずれか一項に記載の組成物：
ダンシェンス：プロトカテク酸：プロトカテクアルデヒド：コーヒー酸：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：サルビアノール酸Ｇ異性体：サルビアノール酸Ｇ：サルビアノール酸Ｄ＝（２〜６）：（０．０１〜０．０５）：（１〜３）：（０．０１〜０．０６）：（０．５〜２）：（０．２〜１）：（０．０５〜０．３）：（０．５〜２）：（０．２〜１）：（０．１〜０．５）：（０．１〜０．５）：（０．２〜１）。
５．  上記フェノール酸誘導体が重量部基準で下記成分から構成される、項４に記載の組成物：
ダンシェンス：プロトカテク酸：プロトカテクアルデヒド：コーヒー酸：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：サルビアノール酸Ｇ異性体：サルビアノール酸Ｇ：サルビアノール酸Ｄ＝（３．３１〜４．８２）：（０．０２〜０．０３）：（１．１７〜１．５４）：（０．０３〜０．０４）：（０．８６〜１．１３）：（０．４８〜０．６３）：（０．１２〜０．１６）：（１〜２）：（０．４４〜０．５８）：（０．２７〜０．３６）：（０．２９〜０．３８）：（０．５４〜０．６４）。
６．  上記フェノール酸誘導体が重量部基準で下記成分から構成される、項１〜３のいずれか一項に記載の組成物：
ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ＝（３〜５）：（１〜２）：（０．５〜２）：（０．３〜０．８）：（０．１〜０．５）：（０．３〜１．５）：（０．１〜０．３）：（０．５〜２）：（０．５〜１．５）。
７．  上記フェノール酸誘導体が重量部基準で下記成分から構成される、項６に記載の組成物：
ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ＝３．５２：１．３８：１．１：０．５８：０．３３：０．７９：０．１７：１．３２：０．９３。
８．  上記タンシノンが重量部基準で下記成分から構成される、項１〜７のいずれか一項に記載の組成物：
ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ：ダンシェンキシンクンＤ＝（０．０１〜０．０５）：（０．０５〜０．１）：（０．０２〜０．１）：（０．１〜０．５）：（０．１〜０．５）。
９．  上記タンシノンが重量部基準で下記成分から構成される、項８に記載の組成物：
ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ：ダンシェンキシンクンＤ＝（０．０２〜０．０３）：（０．０６〜０．０７）：（０．０４〜０．０６）：（０．２１〜０．２７）：（０．２２〜０．２８）。
１０．  上記タンシノンが重量部基準で下記成分から構成される、項１〜７のいずれか一項に記載の組成物：
ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ＝（０．０１〜０．０５）：（０．０５〜０．１）：（０．０２〜０．１）：（０．１〜０．５）。
１１．  上記タンシノンが重量部基準で下記成分から構成される、項１０に記載の組成物：
ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ＝０．０３：０．０８：０．０３：０．２６。
１２．  上記サポニンが重量部基準で下記成分から構成される、項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物：
パナックス・ノトギンセンのサポニンＲ１：ジンセノシドＲｇ１及び／又はＲｅ及び／又はＲｈ２：ジンセノシドＲｂ１：ジンセノシドＲｈ１−Ｓ：ジンセノシドＲｄ及び／又はＲｈ１−Ｒ＝（０．１〜０．５）：（１〜４）：（１〜４）：（０．２〜０．７）：（０．２〜０．７）。
１３．  上記サポニンが重量部基準で下記成分から構成される、項１２に記載の組成物：
パナックス・ノトギンセンのサポニンＲ１：ジンセノシドＲｇ１及び／又はＲｅ及び／又はＲｈ２：ジンセノシドＲｂ１：ジンセノシドＲｈ１−Ｓ：ジンセノシドＲｄ及び／又はＲｈ１−Ｒ＝（０．２〜０．３）：（１．９〜３．０）：（１．９〜３．０）：（０．４８〜０．５１）：（０．４７〜０．６２）。
１４．  上記ジンセノシドＲｇ１とジンセノシドＲｅとが重量部基準で（１６〜１７）：１の比にて共存している、項１３に記載の組成物。
１５．  項１〜１４のいずれか一項に記載の漢方薬組成物と薬学的に許容可能な担体とを含む製剤であって、好ましくは該製剤における該組成物の重量パーセントが０．１％〜９９．９％であり、残りは該薬学的に許容可能な担体である、製剤。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１Ａ】（Ｒ）−サルビアノール酸Ｔの高分解能質量分析法の図である。
【図１Ｂ】（Ｓ）−サルビアノール酸Ｔの高分解能質量分析法の図である。
【図２Ａ】（Ｒ）−サルビアノール酸Ｔの１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）の図である。
【図２Ｂ】（Ｓ）−サルビアノール酸Ｔの１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）の図である。
【図３Ａ】（Ｒ）−サルビアノール酸Ｔの１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）の図である。
【図３Ｂ】（Ｓ）−サルビアノール酸Ｔの１３Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）の図である。
【図４Ａ】（Ｒ）−サルビアノール酸ＴのＤＥＰＴの図である。
【図４Ｂ】（Ｓ）−サルビアノール酸ＴのＤＥＰＴの図である。
【図５Ａ】（Ｒ）−サルビアノール酸ＴのＣＯＳＹの図である。
【図５Ｂ】（Ｓ）−サルビアノール酸ＴのＣＯＳＹの図である。
【図６Ａ】（Ｒ）−サルビアノール酸ＴのＲＯＥＳＹの図である。
【図６Ｂ】（Ｓ）−サルビアノール酸ＴのＲＯＥＳＹの図である。
【図７Ａ】（Ｒ）−サルビアノール酸ＴのＨＳＱＣの図である。
【図７Ｂ】（Ｓ）−サルビアノール酸ＴのＨＳＱＣの図である。
【図８Ａ】（Ｒ）−サルビアノール酸ＴのＨＭＢＣの図である。
【図８Ｂ】（Ｓ）−サルビアノール酸ＴのＨＭＢＣの図である。
【図９】サルビアノール酸ＴのＣＤの図である。Ａ：（Ｒ）−サルビアノール酸Ｔ、Ｂ：（Ｓ）−サルビアノール酸Ｔ
【図１０】サルビアノール酸ＴについてＣＤの図とＥＣＤ模擬スペクトルとを比較した図である。Ａ：（Ｒ）−サルビアノール酸Ｔ、Ｂ：（Ｓ）−サルビアノール酸Ｔ
【図１１】図１１Ａ：ＴＴＣ染色した心臓の図である。図１１Ｂ：心筋梗塞のサイズの図である。図１１Ｃ：ＣＫ−ＭＢの血清中濃度の図である。図１１Ｄ：ＬＤＨの血清中濃度の図である。図１１Ｅ：ＴＮＦ−αの濃度の図である。図１１Ｆ：心臓拡張期圧の図である。図１１Ｇ：心臓収縮期圧の図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の一実施形態では、本発明は漢方薬組成物を提供する。該組成物は重量パーセント基準で下記材料から構成される：３０％〜８０％のフェノール酸誘導体、２％〜１０％のタンシノン及び１５％〜６０％のサポニン。好ましくは、該組成物は重量パーセント基準で下記材料から構成される：５０％〜７０％のフェノール酸誘導体、２％〜６％のタンシノン及び２５％〜４５％のサポニン。更に好ましくは、該組成物は重量パーセント基準で下記材料から構成される：６６％のフェノール酸誘導体、３％のタンシノン及び３１％のサポニン。
【００１７】
上記フェノール酸誘導体は重量部基準で下記成分から構成される：
ダンシェンス：プロトカテク酸：プロトカテクアルデヒド：コーヒー酸：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：サルビアノール酸Ｇ異性体：サルビアノール酸Ｇ：サルビアノール酸Ｄ＝（２〜６）：（０．０１〜０．０５）：（１〜３）：（０．０１〜０．０６）：（０．５〜２）：（０．２〜１）：（０．０５〜０．３）：（０．５〜２）：（０．２〜１）：（０．１〜０．５）：（０．１〜０．５）：（０．２〜１）。
【００１８】
好ましくは上記フェノール酸誘導体が重量部基準で下記成分から構成される：
ダンシェンス：プロトカテク酸：プロトカテクアルデヒド：コーヒー酸：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：サルビアノール酸Ｇ異性体：サルビアノール酸Ｇ：サルビアノール酸Ｄ＝（３．３１〜４．８２）：（０．０２〜０．０３）：（１．１７〜１．５４）：（０．０３〜０．０４）：（０．８６〜１．１３）：（０．４８〜０．６３）：（０．１２〜０．１６）：（１〜２）：（０．４４〜０．５８）：（０．２７〜０．３６）：（０．２９〜０．３８）：（０．５４〜０．６４）。
【００１９】
代替的には上記フェノール酸誘導体が重量部基準で下記成分から構成される：
ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ＝（３〜５）：（１〜２）：（０．５〜２）：（０．３〜０．８）：（０．１〜０．５）：（０．３〜１．５）：（０．１〜０．３）：（０．５〜２）：（０．５〜１．５）。
【００２０】
好ましくは上記フェノール酸誘導体が重量部基準で下記成分から構成される：
ダンシェンス：プロトカテクアルデヒド：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：サルビアノール酸Ｄ：サルビアノール酸Ｇ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ＝３．５２：１．３８：１．１：０．５８：０．３３：０．７９：０．１７：１．３２：０．９３。
【００２１】
本発明の一実施形態では、黄色の粉末であるサルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔは、サルビア・ミルチオルヒザ・ブンゲの根に由来するものである。サルビアノール酸Ｕ及びサルビアノール酸Ｔは組み合わせて使用するのが好ましく、下記方法により調製される。
【００２２】
抽出：粉砕したサルビアエ・ミルチオルヒザエ粗薬を水で２回煎じる。１回目はアルカリ条件下にて２時間抽出を行い濾過し、２回目は１時間抽出を行い濾過し、得られた濾液を濃縮し冷却して、そこにアルコールを添加し静置して、上清を得た後、その上清を濾過し、アルコールを回収して、抽出物を得る。
【００２３】
サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔは下記方法によって分離する：
（ａ）．同量の水をアルコール沈殿濃縮液に添加し、ＡＢ−８マクロ多孔質吸着樹脂を用いて分離し、水で溶離して溶離液を回収し、
（ｂ）．溶離液のｐＨ値を調整し、再びＡＢ−８マクロ多孔質吸着樹脂を用いて分離し、酸性水で溶離して得られた溶離液を除く。樹脂を５０％エタノールで溶離し、溶離液を回収した後、その溶離液を濃縮することで乾燥抽出物にし、
（ｃ）．乾燥抽出物を溶解し、ポリアミドカラムクロマトグラフィを用いて分離し、５０％エタノールで溶離して溶離液を回収した後、その溶離物を濃縮することで濃縮抽出物にし、
（ｄ）．濃縮抽出物を溶解し、ＭＣＩクロマトグラフィカラムを用いて脱色し、２０％エタノールで溶離して溶離液を回収し、その後濃縮、凍結乾燥を行うことでサルビアノール酸Ｕ／Ｔの混合物を得る（純度９５％）。
【００２４】
上記サルビアノール酸Ｕ及びサルビアノール酸Ｔは下記方法により分ける：
サルビアノール酸Ｕ／Ｔの混合物を溶解し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０デキストランゲルカラムに加え、２０％エタノールで溶離し、ＨＰＬＣを用いてモニタリングすることによりサルビアノール酸Ｕ及びサルビアノール酸Ｔの画分をそれぞれ回収する。溶離液を濃縮することでエタノールを完全に除き、凍結乾燥することでサルビアノール酸Ｕ及びサルビアノール酸Ｔをそれぞれ得る（純度９０％）。
【００２５】
本発明の一実施形態では、ダンシェンス、プロトカテクアルデヒド、プロトカテク酸、コーヒー酸、リトスペルミン酸、ロスマリン酸、サルビアノール酸Ｂ、サルビアノール酸Ａ、サルビアノール酸Ｇ異性体、サルビアノール酸Ｇ及びサルビアノール酸Ｄを従来技術において既知の方法により調製する。上述の成分は単一化合物、参照標準の状態のいずれかで、又は漢方薬を抽出及び精製することにより使用される。該成分の純度は９０％以上である。
【００２６】
サルビアノール酸Ｇ異性体の調製：
Ｃ１８を充填剤として使用する。複合サルビア抽出物を水に溶解し、水（０．０２％ギ酸）及びアセトニトリル（０．０２％ギ酸）をそれぞれ溶離液Ａ及び溶離液Ｂとして使用し、下記勾配条件に従って溶離する。
【００２７】
【表１】
0006372897.tif 000002
【００２８】
クロマトグラム上でのサルビアノール酸Ｇ異性体のピーク時間は約３０分であり、溶離液を回収し、減圧濃縮して乾燥することで、サルビアノール酸Ｇ異性体の単一化合物を或る特定純度にて得る。
【００２９】
本発明の一実施形態では、上記タンシノンが重量部基準で下記成分から構成される：
ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ：ダンシェンキシンクンＤ＝（０．０１〜０．０５）：（０．０５〜０．１）：（０．０２〜０．１）：（０．１〜０．５）：（０．１〜０．５）。
【００３０】
好ましくは上記タンシノンが重量部基準で下記成分から構成される：
ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ：ダンシェンキシンクンＤ＝（０．０２〜０．０３）：（０．０６〜０．０７）：（０．０４〜０．０６）：（０．２１〜０．２７）：（０．２２〜０．２８）。
【００３１】
代替的には上記タンシノンが重量部基準で下記成分から構成される：
ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ＝（０．０１〜０．０５）：（０．０５〜０．１）：（０．０２〜０．１）：（０．１〜０．５）。
【００３２】
好ましくは上記タンシノンが重量部基準で下記成分から構成される：
ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ＝０．０３：０．０８：０．０３：０．２６。
【００３３】
本発明の一実施形態では、ジヒドロタンシノンＩ、タンシノンＩ、クリプトタンシノン、タンシノンＩＩＡ及びダンシェンキシンクンＤを従来技術において既知の方法により調製する。上述の成分は単一化合物、参照標準の状態のいずれかで、又は漢方薬を抽出及び精製することにより使用される。該成分の純度は９０％以上である。
【００３４】
本発明の一実施形態では、上記サポニンが重量部基準で下記成分から構成される：
パナックス・ノトギンセンのサポニンＲ１：ジンセノシドＲｇ１及び／又はＲｅ及び／又はＲｈ２：ジンセノシドＲｂ１：ジンセノシドＲｈ１−Ｓ：ジンセノシドＲｄ及び／又はＲｈ１−Ｒ＝（０．１〜０．５）：（１〜４）：（１〜４）：（０．２〜０．７）：（０．２〜０．７）。
【００３５】
好ましくは上記サポニンが重量部基準で下記成分から構成される：
パナックス・ノトギンセンのサポニンＲ１：ジンセノシドＲｇ１及び／又はＲｅ及び／又はＲｈ２：ジンセノシドＲｂ１：ジンセノシドＲｈ１−Ｓ：ジンセノシドＲｄ及び／又はＲｈ１−Ｒ＝（０．２〜０．３）：（１．９〜３．０）：（１．９〜３．０）：（０．４８〜０．５１）：（０．４７〜０．６２）。
【００３６】
本発明の好ましい実施形態では、上記ジンセノシドＲｇ１、Ｒｅ及びＲｈ２は同時に又は２つ以上の形態を組み合わせて存在することができ、同様にジンセノシドＲｄ又はＲｈ１−Ｒも同時に存在することができる。ジンセノシドＲｇ１及びＲｅは（１６〜１７）：１の重量比にて共存するのが好ましい。
【００３７】
本発明の一実施形態では、上記ジンセノシドＲｇ１（又はＲｅ又はＲｈ２）、ジンセノシドＲｂ１、ジンセノシドＲｈ１−Ｓ及びジンセノシドＲｄ（又はＲｈ１−Ｒ）を従来技術において既知の方法により調製する。上述の成分は単一化合物、参照標準の状態のいずれかで、又は漢方薬を抽出及び精製することにより使用される。該成分の純度は９０％以上である。
【００３８】
本発明の一実施形態では、サルビアノール酸の新たな化合物の構造を、物理化学的特性、高分解能質量分析法（ＱＦＴ−ＥＳＩ）、エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＤＥＰＴ、ＣＯＳＹ、ＨＭＢＣ、ＨＭＱＣ及びＣＤ（図１〜図１０）により特定した。
【００３９】
本発明は下記のような一般式（Ｉ）により表される新たな化合物に関する：
【００４０】
【化１】
0006372897.tif 000003
【００４１】
１Ｈ−ＮＭＲでは、δ  ４．９３（１Ｈ，ｄｄ，８．０、４．５Ｈｚ）に酸素と結合したメテニルプロトンの１シグナル；δ  ６．８５（１Ｈ，ｄ，８．５Ｈｚ）、δ  ７．３１（１Ｈ，ｄ，８．５Ｈｚ）、δ  ７．４１（１Ｈ，ｄ，１５．５Ｈｚ）、δ  ６．２７（１Ｈ，ｄ，１５．５Ｈｚ）、δ  ６．６２（１Ｈ，ｓ）、δ  ６．６３（１Ｈ，ｄ，８．０Ｈｚ）、δ  ６．４７（１Ｈ，ｄ，８．０Ｈｚ）、δ  ６．４４（１Ｈ，ｄ，２．０Ｈｚ）、δ  ６．５５（１Ｈ，ｄ，８．５Ｈｚ）、δ  ６．４３（１Ｈ，ｄｄ，８．５、２．０Ｈｚ）、δ  ７．６９（１Ｈ，ｓ）に芳香族プロトンの１１シグナル；δ  ２．８９（２Ｈ，ｄｄｄ，１４．０、８．０、４．５Ｈｚ）に脂肪族プロトンの２シグナルが示されている。
【００４２】
炭素−１３核磁気共鳴１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルでは、δ  ３６．０に１つの脂肪族炭素シグナル、δ  ７２．８に酸素と結合したメテニル炭素の１シグナル、δ  １６６．０、δ  １７０．６、δ  １６８．４にカルボニル炭素の３シグナル、及びδ  １２３．７、δ  １２６．４、δ  １４２．９、δ  １４７．７、δ  １１５．０、δ  １１８．４、δ  １４３．７、δ  １１３．９、δ  １２７．１、δ  １１６．５、δ  １４３．９、δ  １４４．８、δ  １１５．５、δ  １２０．０、δ  １２６．０、δ  １１７．３、δ  １４４．８、δ  １４７．２、δ  １１５．３、δ  １２２．９、δ  １４１．１、δ  １２３．４に二重結合炭素の２２シグナルを含む２７の炭素シグナルが示されている。
【００４３】
本発明の一実施形態では、上記の本発明の化合物には−１５７．５度及び１９６．６度にそれぞれ旋光度を有する２つの異性体がある。Ｓ／Ｒ配置と定められたＣ−８’絶対配置を有する化合物を分子最適設計によって得て、（２ｄ，ｐ）基底関数系によるＴＤ−ＳＣＦを含むＢＰＶ８６法により算出することで、結果と化合物の実験ＣＤスペクトルとの比較を読み取る。実質的にマッチしたＣＤスペクトルにより、本発明の化合物の２つの異性体におけるＣ−８’の絶対配置がＳ配置及びＲ配置であることが推測される（図１０を参照されたい）。本発明における化合物のＨＭＢＣによるスペクトルは下記のように表される。
【００４４】
【化２】
0006372897.tif 000004
【００４５】
上記サルビアノール酸Ｔは下記方法により調製される：
ａ）抽出：サルビアエ・ミルチオルヒザエ粗薬物又はサルビアエ・ミルチオルヒザエ粗薬物と他の粗薬物との混合物を水で抽出し、濾過して、濾液を濃縮し、アルコールを添加することで沈殿させ、上清を得た後、上清を濃縮することで抽出物を得て、
ｂ）分離：工程ａ）の抽出物を水に溶解させ、マクロ多孔質吸収樹脂に加え、樹脂を酸性溶液で溶離することで不純物を除いた後、エタノールで溶離することでエタノール溶離液を得て、エタノール溶離液を濃縮することで抽出物を得て、
ｃ）精製：工程ｂ）の抽出物を、高圧分取ＬＣを用いて精製する。固定相はＣ１８逆相シリカカラムであり、移動相は、２８０ｎｍの検出波長を用いた無勾配溶離法又は勾配溶離法によるアセトニトリル−水−ギ酸であり、ＨＰＬＣを用いて溶離の過程をモニタリングすることで、サルビアノール酸Ｔを含有する溶離液を回収し、濃縮することでサルビアノール酸Ｔを得る。
【００４６】
本発明の一実施形態では、上記漢方薬組成物の製剤が提供される。好ましい実施形態では、該漢方薬組成物は該製剤の０．１ｗｔ％〜９９．９ｗｔ％を占めることができ、残りは薬学的に許容可能な担体である。本発明の別の実施形態では、本組成物は単位剤形にて調製され、この単位剤形は個々の製剤、例えば複数の錠剤の中の各錠剤、複数のカプセル剤の中の各カプセル剤、経口液の入った各ボトル及び顆粒剤の入った各薬包等を指す。
【００４７】
本発明の一実施形態では、上記漢方薬組成物の製剤は経口、非経口（皮下、例えば注射又はリザーバタイプの錠剤；皮内；髄腔内；筋肉内、例えばリザーバ及び静脈内を含む）、直腸及び局所（例えば舌下）の投与に適している。しかしながら、最適な投与経路は患者の状態に左右される。
【００４８】
本発明の一実施形態では、上記の担体は漢方薬の組成物とともに投与される様々な種類の有機又は無機担体、例えば固形製剤に使用される賦形剤、滑沢剤、接着剤、崩壊剤及びコーティング剤、又は医薬添加剤、例えば着色剤及び甘味剤を指す。上記担体は、糖アルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、キシリトール；アミノ酸、例えば塩酸システイン、メチオニン、グリシン；ビタミンＣ；ＥＤＴＡ二ナトリウム、ＥＤＴＡカルシウム二ナトリウム塩；無機塩、例えば一価のアルカリ炭酸塩、酢酸塩、リン酸塩又はその水溶液、塩化ナトリウム、塩化カリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム；炭酸カルシウム、重炭酸カルシウム；ステアリン酸塩、例えばステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム；無機酸、例えば塩酸塩、硫酸、リン酸；酢酸；有機酸塩、例えば乳酸ナトリウム；オリゴ糖、多糖、セルロース及びその誘導体、例えばマルトース、グルコース、フルクトース、デキストラン、スクロース、ラクトース、シクロデキストリン（β−シクロデキストリン等）、デンプン；ケイ素誘導体；アルギン酸塩；ゼラチン；ＰＶＰ、グリセロール；寒天ゲル；界面活性剤、例えばＴｗｅｅｎ−８０；ＰＥＧ；リン脂質；カオリン；タルカムパウダー等から選択される。
【００４９】
本発明の一実施形態では、上記組成物は任意の薬学的に許容可能な剤形にて調製することができ、該剤形としては、糖衣錠、フィルムコート錠及び腸溶性錠剤等の錠剤；軟カプセル及び硬カプセル等のカプセル剤；経口液体溶液；口腔錠；顆粒剤；即席粉末剤（instant powder）；丸剤；散剤；軟膏及び硬膏等のペースト剤；分散剤（Dan）；懸濁剤；粉末剤；液剤；注射剤；坐剤；クリーム剤、軟膏、硬膏；噴霧剤；滴剤；滴丸剤；並びにパッチ剤；好ましくは経口投与剤形、例えばカプセル剤、錠剤、経口液剤、顆粒剤、丸剤、粉末剤、分散剤及び軟膏等；また好ましくは注射剤、例えば粉末注射剤、注射液、輸液等が挙げられる。本発明では、錠剤が最も好ましい。
【００５０】
本発明の一実施形態では、上記経口投与剤形として、一般的に使用される賦形剤、接着剤、充填剤、希釈剤、錠剤化剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、香味剤、湿潤剤を挙げることができる。必要に応じて錠剤をコーティングしてもよい。
【００５１】
上記充填剤の好適な例としては、セルロース、マンニトール、ラクトース及び他の類似の充填剤が挙げられる。
【００５２】
上記賦形剤の好ましい例としては、ラクトース、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトール、デンプン、例えばα−デンプン、デキストリン、結晶セルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アラビアゴム、アミロペクチンデンプン、軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム及びケイ酸アルミニウムマグネシウム等が挙げられる。
【００５３】
上記滑沢剤の好ましい例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、シリカゲル及びドデシル硫酸ナトリウム等が挙げられる。
【００５４】
上記接着剤の好ましい例としては、α−デンプン、ラクトース、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、糖、Ｄ−マンニトール、トレハロース、デキストリン、アミロペクチンデンプン、ＨＰＣ、ＨＰＭＣ及びピロリドンが挙げられる。
【００５５】
上記崩壊剤の好ましい例としては、ラクトース、糖、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、アミノアルキルナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、軽質無水ケイ酸、低置換ＨＰＣ、デンプン、ＰＶＰ及びデンプングリコール酸ナトリウムが挙げられる。
【００５６】
上記コーティング剤の好ましい例としては、ＨＰＭＣ、ＨＰＣ、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース及びポリビニルアルコール（ＰＶＡ）が挙げられる。
【００５７】
上記着色剤の好ましい例としては、水溶性食用タートラジン色素（食用赤色２号及び３号、食用黄色４号及び５号、食用青色１号及び２号等の食品色素）；不水溶性レーキ顔料（例えば上述の水溶性の食用タートラジン色素のアルミニウム塩）、及び天然色素（例えばβ−カロテン、クロロフィル及びベンガラ）等が挙げられる。
【００５８】
上記香味剤の好ましい例としては、サッカリンナトリウム、グリチルレチン酸、アスパルテーム及びステビオシド等が挙げられる。
【００５９】
錠剤を作製するための従来方法は、本発明の漢方薬組成物を１種又は複数種の薬学的に許容可能なビヒクルと混ぜ合わせた後、それを加圧又は成形することを含む。
【００６０】
本発明の組成物は経口液体製剤、例えば水溶性又は脂溶性の懸濁剤、液剤、乳剤、シロップ剤等にも配合することができる。また本発明の漢方薬組成物を乾燥生成物へと調製し、使用する前に水又は他の好適な担体に再度混合させてもよい。このような液体製剤には、懸濁剤、例えばソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル又は硬化食用脂；乳化剤、例えばレシチン、モノオレイン酸ソルビタン又はアラビアゴム；非水性担体（食用油を含む）、例えば扁桃油、精留ヤシ油、油性エステル、プロピレングリコール又はエタノール；及び防腐剤、例えばメチルパラベン、ニパソール（nipasol：プロピルパラベン）及びソルビン酸を含む従来の添加剤を含有させることができる。従来の香味剤又は着色剤を必要に応じて含ませてもよい。
【００６１】
非経口投与製剤としては水性及び非水性の滅菌注射液が挙げられ、任意にこれらの製剤に、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤及び等張剤等を含有させてもよい。また非経口投与製剤として水性及び非水性の滅菌懸濁液を挙げることができ、任意にこれらの製剤に懸濁化剤及び増粘剤を含有させてもよい。該製剤は封をしたアンプル及びバイアル等の単回用量又は複数回用量の容器内に保存することができ、この容器を凍結乾燥条件下において保管し、使用する前に滅菌液体担体、例えば注射用水にて再構成することができる。
【００６２】
直腸投与製剤は従来の坐薬基剤、例えばココアバター、ステアリン酸又は他のグリセリド若しくはエチレングリコールを含有する坐剤とすることができる。
【００６３】
口腔局所投与製剤、例えば口腔製剤又は舌下製剤としては、有効成分がスクロース及びアラビアゴム等の香味基剤に組み込まれているトローチ剤；更には有効成分がゼラチン及びグリセロール又はスクロース及びアラビアゴム等の基剤に組み込まれている芳香錠が挙げられる。
【００６４】
本発明の組成物をリザーバタイプの製剤へと配合することもでき、このような持続放出製剤は埋込み（例えば皮下埋込み又は筋肉内埋込み）又は筋肉内注射により投与することができる。これには本発明の漢方薬組成物を好適なポリマー、疎水性材料（例えば許容可能な油中のエマルション）若しくはイオン交換樹脂を用いて調製するか、又は微溶性の誘導体、例えば微溶性の塩へと調製することができる。
【００６５】
本発明の一実施形態では、本発明の組成物には心血管系に対する治療効果、特に冠動脈の拡張、血小板凝集阻害、血栓阻害及び抗急性心筋梗塞という治療効果がある。
【実施例】
【００６６】
実施形態
下記実施例は本発明の詳細な説明のために与えられているに過ぎず、何ら本発明の範囲を限定する意図はない。
【００６７】
実施例１
６６ｇのフェノール酸誘導体、３ｇのタンシノン及び３１ｇのサポニンを均一に混合することで本発明の組成物を調製した。該組成物において有効医薬成分（ＡＰＩ）が下記のように存在していた：２７ｇのダンシェンス、０．１６ｇのプロトカテク酸、９．３０ｇのプロトカテクアルデヒド、０．２４ｇのコーヒー酸、６．８４ｇのサルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ、３．６ｇのロスマリン酸、０．９ｇのリトスペルミン酸、５．８８ｇのサルビアノール酸Ｂ、３．５ｇのサルビアノール酸Ａ、２．１４ｇのサルビアノール酸Ｇ異性体、２．３１ｇのサルビアノール酸Ｇ、４．２９ｇのサルビアノール酸Ｄ、０．１ｇのジヒドロタンシノンＩ、０．３３ｇのタンシノンＩ、０．２２ｇのクリプトタンシノン、１．１４ｇのタンシノンＩＩＡ、１．１４ｇのダンシェンキシンクンＤ、１２．３８ｇのジンセノシドＲｇ１、Ｒｅ又はＲｈ２、１２．３８ｇのジンセノシドＲｂ１、３．１２ｇのジンセノシドＲｈ１−Ｓ、３．０６ｇのジンセノシドＲｄ又はＲｈ１−Ｒ、及び２．２９ｇのパナックス・ノトギンセンサポニンＲ１。
【００６８】
実施例２
６２ｇのフェノール酸誘導体、４ｇのタンシノン及び３４ｇのサポニンを均一に混合することで本発明の組成物を調製した。該組成物において有効医薬成分（ＡＰＩ）が下記のように存在していた：２６．５ｇのダンシェンス、０．１７ｇのプロトカテク酸、８．４７ｇのプロトカテクアルデヒド、０．２２ｇのコーヒー酸、６．２２ｇのサルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ、３．４７ｇのロスマリン酸、０．８８ｇのリトスペルミン酸、５．３９ｇのサルビアノール酸Ｂ、３．１９ｇのサルビアノール酸Ａ、１．９８ｇのサルビアノール酸Ｇ異性体、２．０９ｇのサルビアノール酸Ｇ、３．５２ｇのサルビアノール酸Ｄ、０．１７ｇのジヒドロタンシノンＩ、０．３９ｇのタンシノンＩ、０．３４ｇのクリプトタンシノン、１．５２ｇのタンシノンＩＩＡ、１．５６ｇのダンシェンキシンクンＤ、２３．５ｇのジンセノシドＲｇ１＋Ｒｅ、２３．５ｇのジンセノシドＲｂ１、４．７９ｇのジンセノシドＲｈ１−Ｓ、５．８３ｇのジンセノシドＲｄ又はＲｈ１−Ｒ、及び４．３６ｇのパナックス・ノトギンセンサポニンＲ１。
【００６９】
実施例３
６２ｇのフェノール酸誘導体、４ｇのタンシノン及び３４ｇのサポニンを均一に混合することで本発明の組成物を調製した。該組成物において有効医薬成分（ＡＰＩ）が下記のように存在していた：２５ｇのダンシェンス、１．２５ｇのプロトカテク酸、１２．５ｇのプロトカテクアルデヒド、１．２５ｇのコーヒー酸、６．２５ｇのサルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ、２．５ｇのロスマリン酸、０．６２５ｇのリトスペルミン酸、６．２５ｇのサルビアノール酸Ｂ、２．５ｇのサルビアノール酸Ａ、１．２５ｇのサルビアノール酸Ｇ異性体、０．１２５ｇのサルビアノール酸Ｇ、２．５ｇのサルビアノール酸Ｄ、０．１４ｇのジヒドロタンシノンＩ、０．７ｇのタンシノンＩ、０．２８ｇのクリプトタンシノン、１．４ｇのタンシノンＩＩＡ、１．４ｇのダンシェンキシンクンＤ、１４．１７ｇのジンセノシドＲｇ１＋Ｒｅ、１４．１７ｇのジンセノシドＲｂ１、２．８３ｇのジンセノシドＲｈ１−Ｓ、２．８３ｇのジンセノシドＲｄ又はＲｈ１−Ｒ、及び２．６２ｇのパナックス・ノトギンセンサポニンＲ１。
【００７０】
実施例４
６２ｇのフェノール酸誘導体、４ｇのタンシノン及び３４ｇのサポニンを均一に混合することで本発明の組成物を調製した。該組成物において上記フェノール酸誘導体には重量部基準で下記成分が含まれており：ダンシェンス：プロトカテク酸：プロトカテクアルデヒド：コーヒー酸：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：サルビアノール酸Ｇ異性体：サルビアノール酸Ｇ：サルビアノール酸Ｄ＝（２〜６）：（０．０１〜０．０５）：（１〜３）：（０．０１〜０．０６）：（０．５〜２）：（０．２〜１）：（０．０５〜０．３）：（０．５〜２）：（０．２〜１）：（０．１〜０．５）：（０．１〜０．５）：（０．２〜１）；上記タンシノンには重量部基準で下記成分が含まれており：ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ：ダンシェンキシンクンＤ＝（０．０１〜０．０５）：（０．０５〜０．１）：（０．０２〜０．１）：（０．１〜０．５）：（０．１〜０．５）；上記サポニンには重量部基準で下記成分が含まれていた：パナックス・ノトギンセンサポニンＲ１：ジンセノシドＲｇ１及び／又はＲｅ及び／又はＲｈ２：ジンセノシドＲｂ１：ジンセノシドＲｈ１−Ｓ：ジンセノシドＲｄ及び／又はＲｈ１−Ｒ＝（０．１〜０．５）：（１〜４）：（１〜４）：（０．２〜０．７）：（０．２〜０．７）。
【００７１】
実施例５
３０ｇのフェノール酸誘導体、１０ｇのタンシノン及び６０ｇのサポニンを均一に混合することで本発明の組成物を調製した。該組成物において上記フェノール酸誘導体には重量部基準で下記成分が含まれており：ダンシェンス：プロトカテク酸：プロトカテクアルデヒド：コーヒー酸：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：サルビアノール酸Ｇ異性体：サルビアノール酸Ｇ：サルビアノール酸Ｄ＝（２〜６）：（０．０１〜０．０５）：（１〜３）：（０．０１〜０．０６）：（０．５〜２）：（０．２〜１）：（０．０５〜０．３）：（０．５〜２）：（０．２〜１）：（０．１〜０．５）：（０．１〜０．５）：（０．２〜１）；上記タンシノンには重量部基準で下記成分が含まれており：ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ：ダンシェンキシンクンＤ＝（０．０１〜０．０５）：（０．０５〜０．１）：（０．０２〜０．１）：（０．１〜０．５）：（０．１〜０．５）；上記サポニンには重量部基準で下記成分が含まれていた：パナックス・ノトギンセンサポニンＲ１：ジンセノシドＲｇ１又はＲｅ又はＲｈ２：ジンセノシドＲｂ１：ジンセノシドＲｈ１−Ｓ：ジンセノシドＲｄ又はＲｈ１−Ｒ＝（０．１〜０．５）：（１〜４）：（１〜４）：（０．２〜０．７）：（０．２〜０．７）。
【００７２】
実施例６
８０ｇのフェノール酸誘導体、５ｇのタンシノン及び１５ｇのサポニンを均一に混合することで本発明の組成物を調製した。該組成物において上記フェノール酸誘導体には重量部基準で下記成分が含まれており：ダンシェンス：プロトカテク酸：プロトカテクアルデヒド：コーヒー酸：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：サルビアノール酸Ｇ異性体：サルビアノール酸Ｇ：サルビアノール酸Ｄ＝（３．３１〜４．８２）：（０．０２〜０．０３）：（１．１７〜１．５４）：（０．０３〜０．０４）：（０．８６〜１．１３）：（０．４８〜０．６３）：（０．１２〜０．１６）：（０．７４〜０．９８）：（０．４４〜０．５８）：（０．２７〜０．３６）：（０．２９〜０．３８）：（０．５４〜０．６４）；上記タンシノンには重量部基準で下記成分が含まれており：ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ：ダンシェンキシンクンＤ＝（０．０２〜０．０３）：（０．０６〜０．０７）：（０．０４〜０．０６）：（０．２１〜０．２７）：（０．２２〜０．２８）；上記サポニンには重量部基準で下記成分が含まれていた：パナックス・ノトギンセンサポニンＲ１：ジンセノシドＲｇ１（又はＲｅ又はＲｈ２）：ジンセノシドＲｂ１：ジンセノシドＲｈ１−Ｓ：ジンセノシドＲｄ（又はＲｈ１−Ｒ）＝（０．２〜０．３）：（１．９〜３．０）：（１．９〜３．０）：（０．４８〜０．５１）：（０．４７〜０．６２）。
【００７３】
実施例７
７０ｇのフェノール酸誘導体、２ｇのタンシノン及び２８ｇのサポニンを均一に混合することで本発明の組成物を調製した。該組成物において上記フェノール酸誘導体には重量部基準で下記成分が含まれており：ダンシェンス：プロトカテク酸：プロトカテクアルデヒド：コーヒー酸：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：サルビアノール酸Ｇ異性体：サルビアノール酸Ｇ：サルビアノール酸Ｄ＝（３．３１〜４．８２）：（０．０２〜０．０３）：（１．１７〜１．５４）：（０．０３〜０．０４）：（０．８６〜１．１３）：（０．４８〜０．６３）：（０．１２〜０．１６）：（０．７４〜０．９８）：（０．４４〜０．５８）：（０．２７〜０．３６）：（０．２９〜０．３８）：（０．５４〜０．６４）；上記タンシノンには重量部基準で下記成分が含まれており：ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ：ダンシェンキシンクンＤ＝（０．０２〜０．０３）：（０．０６〜０．０７）：（０．０４〜０．０６）：（０．２１〜０．２７）：（０．２２〜０．２８）；上記サポニンには重量部基準で下記成分が含まれていた：パナックス・ノトギンセンサポニンＲ１：ジンセノシドＲｇ１（又はＲｅ又はＲｈ２）：ジンセノシドＲｂ１：ジンセノシドＲｈ１−Ｓ：ジンセノシドＲｄ（又はＲｈ１−Ｒ）＝（０．２〜０．３）：（１．９〜３．０）：（１．９〜３．０）：（０．４８〜０．５１）：（０．４７〜０．６２）。
【００７４】
実施例８
５０ｇのフェノール酸誘導体、１０ｇのタンシノン及び４０ｇのサポニンを均一に混合することで本発明の組成物を調製した。
【００７５】
実施例９
５０ｇのフェノール酸誘導体、６ｇのタンシノン及び４４ｇのサポニンを均一に混合することで本発明の組成物を調製した。
【００７６】
実施例１０
６９ｇのフェノール酸誘導体、６ｇのタンシノン及び２５ｇのサポニンを均一に混合することで本発明の組成物を調製した。該組成物において上記フェノール酸誘導体には重量部基準で下記成分が含まれており：ダンシェンス：プロトカテク酸：プロトカテクアルデヒド：コーヒー酸：サルビアノール酸Ｕ＋サルビアノール酸Ｔ：ロスマリン酸：リトスペルミン酸：サルビアノール酸Ｂ：サルビアノール酸Ａ：サルビアノール酸Ｇ異性体：サルビアノール酸Ｇ：サルビアノール酸Ｄ＝（３．３１〜４．８２）：（０．０２〜０．０３）：（１．１７〜１．５４）：（０．０３〜０．０４）：（０．８６〜１．１３）：（０．４８〜０．６３）：（０．１２〜０．１６）：（０．７４〜０．９８）：（０．４４〜０．５８）：（０．２７〜０．３６）：（０．２９〜０．３８）：（０．５４〜０．６４）；上記タンシノンには重量部基準で下記成分が含まれており：ジヒドロタンシノンＩ：タンシノンＩ：クリプトタンシノン：タンシノンＩＩＡ：ダンシェンキシンクンＤ＝（０．０２〜０．０３）：（０．０６〜０．０７）：（０．０４〜０．０６）：（０．２１〜０．２７）：（０．２２〜０．２８）；上記サポニンには重量部基準で下記成分が含まれていた：パナックス・ノトギンセンサポニンＲ１：ジンセノシドＲｇ１（又はＲｅ又はＲｈ２）：ジンセノシドＲｂ１：ジンセノシドＲｈ１−Ｓ：ジンセノシドＲｄ（又はＲｈ１−Ｒ）＝（０．２〜０．３）：（１．９〜３．０）：（１．９〜３．０）：（０．４８〜０．５１）：（０．４７〜０．６２）。
【００７７】
漢方薬組成物の調製
実施例１１
０．５ｇの実施例１の漢方薬組成物及び１０．５ｇのＰＥＧ−６０００を均一に混合し、加熱することにより溶融させ、滴下タンクに移した。液体を６℃〜８℃にて流動パラフィンに滴下し、残留パラフィンを除去することで４００個の滴丸剤を得た。
【００７８】
実施例１２
０．５ｇの実施例２の漢方薬組成物、４．５ｇのグルコース、０．９ｇのチオ硫酸ナトリウム及び１ｍｌの蒸留水を均一に混合し、凍結乾燥して、別々に充填することで、５００個の注射用の凍結乾燥粉末を得た。
【００７９】
実施例１３
０．５ｇの実施例２の漢方薬組成物、５．５ｇのマンニトール、０．９ｇのＥＤＴＡカルシウム二ナトリウム塩及び２ｍｌの蒸留水を均一に混合し、凍結乾燥して、別々に充填することで、３００個の注射用の凍結乾燥粉末を得た。
【００８０】
実施例１４
０．５ｇの実施例２の漢方薬組成物、５０ｇのデンプン及び５０ｇのスクロースを均一に混合し、造粒及び打錠を行うことで錠剤を得た。
【００８１】
実施例１５
０．５ｇの実施例２の漢方薬組成物、５０ｇのデンプン及び５０ｇのスクロースを均一に混合し、造粒して、カプセルに充填することでカプセル剤を得た。
【００８２】
サルビアノール酸Ｔ、（Ｓ）−サルビアノール酸Ｔ及び（Ｒ）−サルビアノール酸Ｔの調製
実施例１６
サルビア・ミリチオルヒザ（Salvia Militiorrhiza）を薬草煎煮器に移し、煎煮器にサルビア・ミリチオルヒザの量に対して６倍量の０．３％（ｗ／ｖ）の重炭酸ナトリウム水溶液を加え、２．５時間煎じ、濾過することで濾液を得た。濾液を濃縮することで、相対密度が１．２２（８０℃）の水性抽出物を得た。
【００８３】
水性抽出物に９５％（ｖ／ｖ）のエタノールを加え、最終エタノール含量を６０％（ｖ／ｖ）にし（２５℃）、２４時間静置することで、上清を得た。上清を減圧濃縮することで相対密度が１．３２（６０℃）のエタノール沈殿した抽出物を得た。
【００８４】
エタノール沈殿した抽出物を水に溶解させ、溶離液がほぼ無色になるまでＡＢ−８マクロ多孔質樹脂カラムに通し、塩酸水溶液（ｐＨ＝３．０）で溶離した。その後、カラム容量に対して５倍量の９５％（ｖ／ｖ）のエタノールを用いてカラムを溶離し、溶離液を濃縮することでアルコール臭のしない抽出物を得た。
【００８５】
これまでの工程により得られた抽出物を移動相（体積基準でアセトニトリル：水：ギ酸＝１５：８５：１）に溶解して、NOVASEPのＬＣ８０−６００動的軸高圧分取ＬＣを用いて精製した。Ｃ１８逆相クロマトグラフィカラム（１０μｍ、YMC Inc．）を固定相として用い、体積基準でアセトニトリル：水：ギ酸＝１５：８５：１の移動相を用いて定組成溶離を行った。流量は３００ｍＬ／分、検出波長は２８０ｎｍとした。溶離の過程を、ＨＰＬＣを用いてモニタリングして、２１．２分〜２４．０分の画分を回収し、ロータリーエバポレータを用いて濃縮乾固することで、サルビアノール酸Ｔを得た。
【００８６】
上記で得られたサルビアノール酸Ｔを移動相（体積基準でアセトニトリル：水：ギ酸＝１７：８３：１）に溶解して、WatersのＰｒｅｐ  ４００分取ＬＣを用いてキラル異性体分離を行った。クロマトグラフィカラムはＣＨＩＲＡＬＣＥＬ（商標）  ＯＤ−ＲＨ逆相キラルカラム（２５０ｍｍ×２０ｍｍ、５μｍ）とし、体積基準でアセトニトリル：水：ギ酸＝１７：８３：１の移動相を用いて定組成溶離を行った。流量は２５ｍＬ／分、検出波長は２８０ｎｍとした。溶離の過程を、ＨＰＬＣを用いることによりモニタリングし、１９．５分〜２１．１分の保持時間の（Ｓ）−サルビアノール酸Ｔ画分及び２３．９分〜２５．３分の保持時間の（Ｒ）−サルビアノール酸Ｔ画分を回収した。溶離液を、ロータリーエバポレータを用いて３０℃にて濃縮し、凍結乾燥することで（Ｓ）−サルビアノール酸Ｔ及び（Ｒ）−サルビアノール酸Ｔの純生成物を得た。
【００８７】
高分解能質量分析法を用いたところ、（Ｓ）−サルビアノール酸Ｔの準分子イオンピークはｍ／ｚ  ５３７．１０３３であり、（Ｒ）−サルビアノール酸Ｔの準分子イオンピークはｍ／ｚ  ５３７．１０３２であった。
【００８８】
（Ｓ）−サルビアノール酸Ｔ及び（Ｒ）−サルビアノール酸ＴについてのＮＭＲデータの帰属は下記表に示した。
【００８９】
【表２】
0006372897.tif 000005
【００９０】
【表３】
0006372897.tif 000006
【００９１】
試験例
１．  材料
動物：全ての動物の処置は中国薬科大学の動物倫理委員会により認可されたものであった。雄のスプラーグドーリー(Sprague-Dawley)ラット（体重：２５０ｇ〜３００ｇ）をAier Maite Technology Corporation（中国、蘇州）から購入した。ラットを湿度及び温度管理環境において１２時間明：１２時間暗サイクルにて飼育した。水及び標準実験餌は自由に与えた。
【００９２】
薬物及び試薬
サンプルは実施例１の方法により調製した。
【００９３】
２．  プロトコル
ラットを３群にランダムに割り当てた：処理群（ＣＰ）、心筋梗塞群（ＭＩ）及び偽処理群。
【００９４】
ＭＩは下記の手順により作製した：ラットに抱水クロラール（３００ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．）を用いて麻酔をかけ、１０ｍｌ／ｋｇの一回換気量及び１分当たり８０回の呼吸数にてレスピレータ（ＨＸ−１００Ｅ、Taimeng Co. Ltd.、中国）により換気を行った。左開胸を第４肋間腔にて行った後、ＭＩを左心耳の先から２ｍｍにてＬＡＤ動脈を結紮することにより誘発させた。偽手術ラットにはＬＡＤを結紮せずに同様の開胸を行った。手術前後で心電図を記録した。ＭＩは心電図におけるＳＴセグメントの上昇及び心外膜チアノーゼの出現により確認された。
【００９５】
処理群（ＣＰ）においてサンプル（２０ｍｇ／ｋｇの対応濃度、実施例１の方法により調製）をＭＩ前に３日間、経口投与によって１日１回与えた。偽処理群及びＭＩ群には生理食塩水のみを与えた。
【００９６】
６時間の虚血期間の終了時に、心臓機能を評価するためにカテーテルを左心室に挿入した。左心室拡張末期圧（ＬＶＥＤＰ）、左心室収縮期圧（ＬＶＳＰ）、＋ｄＰ／ｄｔ及び−ｄＰ／ｄｔを生物力学的実験系（ＢＬ４２０、Taimeng Co. Ltd.、中国）に亘って記録した。クレアチンキナーゼ−ＭＢ（ＣＫ−ＭＢ）及び乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）を含む心臓マーカー酵素を、市販キット（Jiancheng Bioengineering Institute、中国）を使用して試験し、心筋細胞損傷を推測した。血清中の腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）の濃度を市販のＥＬＩＳＡキット（R&D、米国）を使用して測定した。実験終了時に、心臓を摘出して、５つの切片へと切り出し、梗塞のサイズを２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ）染色を用いて測定することで、以前に報告されたように心筋損傷を評価した。切片を撮影し、リスク領域をＩｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ  ６ソフトウェアを用いて定量化した。
【００９７】
３．  結果
３．１  図１１ＡにＴＴＣ染色した心臓を示した。ＭＩ群と比較して、本発明の漢方薬組成物による前処理により梗塞のサイズを大幅に低減することができた（図１１Ｂ、処理群２９．４±４．０％対ＭＩ群５３．３±３．７％、ｐ＝０．００１６、ｎ＝５、一元配置ＡＮＯＶＡ、ダネット検定）。
【００９８】
３．２  ＭＩでは、ＣＫ及びＬＤＨの血清中濃度が大幅に上昇した（図１１Ｃ、図１１Ｄ）。本発明の組成物はＭＩで引き起こされる酵素の活性の上昇を抑えることができた（図１１Ｃ及び図１１Ｄ、処理群対ＭＩ群、Ｐ＜０．０００１、ＣＫ実験、Ｐ＜０．０００１  ＬＤＨ実験、ｎ＝８、一元配置ＡＮＯＶＡ、ダネット検定）。
【００９９】
３．３  ＭＩでは、ＴＮＦ−αの大幅な上昇が引き起こされた。本発明の組成物による前処理によって、ＴＮＦ−αの上昇を抑えることができた（図１１Ｅ、処理群対ＭＩ群、Ｐ＜０．０００１、ｎ＝８、一元配置ＡＮＯＶＡ、ダネット検定）。偽処理群と比較して、ＭＩ後にＬＶＥＤＰは上昇したが、ＬＶＳＰ、ＬＶ圧の最大上昇率（＋ｄＰ／ｄｔ）及びＬＶ圧の最大減少率（−ｄＰ／ｄｔ）は減少した（図１１Ｆ及び図１１Ｇ）。本発明の漢方薬組成物は心臓の拡張機能及び収縮機能に対する効果の大幅な改善を示した（図１１Ｆ及び図１１Ｇ）。
【図１Ａ】
0006372897.tif 000007
【図１Ｂ】
0006372897.tif 000008
【図２Ａ】
0006372897.tif 000009
【図２Ｂ】
0006372897.tif 000010
【図３Ａ】
0006372897.tif 000011
【図３Ｂ】
0006372897.tif 000012
【図４Ａ】
0006372897.tif 000013
【図４Ｂ】
0006372897.tif 000014
【図５Ａ】
0006372897.tif 000015
【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
0006372897.tif 000017
【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
0006372897.tif 000019
【図７Ｂ】
0006372897.tif 000020
【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
0006372897.tif 000024
【図１１】
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