(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
痛風緩和・治療薬物を調製するために用いられる医薬組成物の使用であって、前記医薬組成物が活性成分としてｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリドとを含み、ｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリドとの重量比が１０：９０〜８５：１５である、医薬組成物の使用。
【請求項２】
ｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリドとの重量比が５０：５０である、請求項１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３】
ｐ−クマリルジアセテートが化学合成または植物から抽出して得られる、請求項１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項４】
ｐ−クマリルジアセテートがナンキョウ（Ａｌｐｉｎｉａ  ｇａｌａｎｇａ）植物から抽出して得られる、請求項３に記載の医薬組成物の使用。
【請求項５】
オバトジオリドが化学合成または植物から抽出して得られる、請求項１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項６】
オバトジオリドがブソロイバナ（Ａｎｉｓｏｍｅｌｅｓ  ｉｎｄｉｃａ）植物から抽出して得られる、請求項５に記載の医薬組成物の使用。
【請求項７】
ｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリドとを含む医薬組成物であって、ｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリドとの重量比が１０：９０〜８５：１５である、痛風を緩和または治療する医薬組成物。
【請求項８】
ｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリドとの重量比が５０：５０である、請求項７に記載の痛風を緩和または治療する医薬組成物。
【請求項９】
ｐ−クマリルジアセテートが化学合成または植物から抽出して得られる、請求項７に記載の痛風を緩和または治療する医薬組成物。
【請求項１０】
ｐ−クマリルジアセテートがナンキョウ植物から抽出して得られる、請求項９に記載の痛風を緩和または治療する医薬組成物。
【請求項１１】
オバトジオリドが化学合成または植物から抽出して得られる、請求項７に記載の痛風を緩和または治療する医薬組成物。
【請求項１２】
オバトジオリドがブソロイバナ植物から抽出して得られる、請求項１１に記載の痛風を緩和または治療する医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬組成物に関し、特に、痛風を治療または緩和するための医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
痛風はよく見られる代謝疾患の１つであり、尿酸結晶が足指、足首、膝、腕関節、手指、肘などの関節に沈着して、この関節の炎症現象を招くことを特徴とするものである。より詳しく言えば、血液中の尿酸塩濃度が上述腎臓の代謝できる閾値を超えると、過剰の尿酸塩による結晶（あるいは、痛風結節（ｔｏｐｈｉ）とも言う）が関節部に溜まって、さらに急性関節炎、及び関節とその周囲の炎症現象を引き起こしてしまう。今まで、痛風治療薬物は大体、非ステロイド性消炎鎮痛薬（ＮＳＡＩＤs）、コルチコステロイド（ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｓ）、コルヒチン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ）、および尿酸低下薬物などの４つの種類に分けれており、痛風急性期が発作している時の治療法は通常にコルヒチン、非ステロイド性消炎鎮痛薬またはコルチコステロイドを採用するが、これらの薬物がかなり多くの副作用を有する。従って、副作用が低く且つ調製しやすい痛風治療薬物を切に求めている。
【発明の概要】
【０００３】
本発明は、痛風緩和・治療薬物を調製するために用いられる医薬組成物の使用であって、前記医薬組成物が活性成分としてｐ−クマリルジアセテート（ｐ−ｃｏｕｍａｒｙｌ  ｄｉａｃｅｔａｔｅ）を含む、医薬組成物の使用を提供する。
【０００４】
本発明は、ｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリド（ｏｖａｔｏｄｉｏｌｉｄｅ）とを含む医薬組成物であって、ｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリドとの重量比が１０：９０〜８５：１５である、痛風を緩和または治療する医薬組成物を提供する。
【０００５】
本発明のｐ−クマリルジアセテートを含有する組成物は、痛風を緩和または治療することに確実に有用であり、そして、さらにオバトジオリドと配合して使用される時に、その効果が一層顕著になって、痛風緩和・治療薬物として開発される甲斐が実にある。
【０００６】
本発明の上述特徴及び利点をよりはっきりと分かりやすくするために、下に実施例を特に挙げて、添付図面を結合させて以下の通りに詳しくて説明する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】本発明実施例で調製されるｐ−クマリルジアセテートの高速液体クロマトグラムである。
【図２】本発明実施例で調製されるオバトジオリドの高速液体クロマトグラムである。
【図３】本発明の一実施例において異なる試験サンプルを適用して測定されたインターロイキン−１β分泌量のヒストグラムである。
【図４】本発明の一実施例において異なる試験サンプルを適用して測定されたインターロイキン−６分泌量のヒストグラムである。
【図５】本発明の他の実施例において異なる試験サンプルを適用して測定されたインターロイキン−１β分泌量のヒストグラムである。
【図６】本発明の他の実施例において異なる試験サンプルを適用して測定されたインターロイキン−６分泌量のヒストグラムである。
【図７】本発明の別の実施例において異なる試験サンプルを適用して測定されたインターロイキン−１β分泌量のヒストグラムである。
【図８】本発明の別の実施例において異なる試験サンプルを適用して測定されたインターロイキン−６分泌量のヒストグラムである。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明の一実施例によれば、本発明は、活性成分として少なくともｐ−クマリルジアセテート（ｐ−ｃｏｕｍａｒｙｌ  ｄｉａｃｅｔａｔｅ，ＣＤＡ）を含む、痛風を緩和または治療するために用いれる医薬組成物を提供する。
【０００９】
ｐ−クマリルジアセテート（ｐ−ｃｏｕｍａｒｙｌ  ｄｉａｃｅｔａｔｅ，ＣＤＡ）としては、その化学式が「Ｃ１３Ｈ１４Ｏ４」であり、フルネームが「４−（３−アセトキシ−プロペニル）−フェニルアセテート（４−（３−ａｃｅｔｏｘｙ−  ｐｒｏｐｅｎｙｌ）−ｐｈｅｎｙｌ  ａｃｅｔａｔｅ）」であり、構造式が下式（１）、またはそのシス構造である。
【００１０】
【化１】
0006261770.tif 000002
【００１１】
ｐ−クマリルジアセテートは化学合成によって作成できるものであり、発表された文献「Ａ  Ｍｉｌｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｏｕｍａｒｙｌ，  Ｃｏｎｉｆｅｒｙｌ，  Ｓｉｎａｐｙｌ  Ａｌｄｅｈｙｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｌｃｏｈｏｌｓ」、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ−ｓｔｕｔｔｇａｒｔ  ０１／１９９４；  １９９４（０４）：３６９−３７１．  ＤＯＩ：１０．１０５５／ｓ−１９９４−２５４７７  （Ｎｉｃｏｌａｓ  Ｄａｕｂｒｅｓｓｅ，  Ｃｈａｒｌｅｔｔｅ  Ｆｒａｎｃｅｓｃｈ，  Ｆａｒｉｄａ  ＭｈａｍｄｉとＣｈｒｉｓｔｉａｎ  Ｒｏｌａｎｄｏ著）を参考できるが、ここで贅言しない。
【００１２】
当然に、ｐ−クマリルジアセテートは植物から抽出して得られることもできて、例えば、ナンキョウ（Ａｌｐｉｎｉａ ｇａｌａｎｇａ）から抽出して得られることができる。
【００１３】
本発明の一実施例はナンキョウを利用して抽出し、その抽出方式が有機溶媒でナンキョウの根部に対して抽出するものである。本発明の抽出に使用される溶媒は、炭素数４−１０（Ｃ４−１０）の飽和アルカン類であっても良いし、直鎖または分岐鎖の飽和アルカン類であっても、単一種類の飽和アルカン類または多種の飽和アルカン類の混合であっても良い。あるいは、本発明の抽出に使用される溶媒は、炭素数４−１０（Ｃ４−１０）の不飽和アルケン類または不飽和アルキン類であっても良いし、直鎖または分岐鎖の不飽和アルケン類または不飽和アルキン類であっても、単一種類の不飽和アルケン類または不飽和アルキン類であっても、さらに混合された多種の不飽和アルケン類または不飽和アルキン類であっても良い。本発明の抽出に使用される溶媒は、Ｃ４−１０のアルカン、アルケン及びアルキンの混合物であっても良い。本発明の一実施例では、抽出溶媒としてヘプタンを採用し、ヘプタンの濃度が例えば、９５％体積百分率濃度（ｖ／ｖ）または１００％体積百分率濃度（ｖ／ｖ）であっても良い。
【００１４】
抽出温度と時間は特別な制限がなく、使用される溶媒の性質などの条件によって決めばよい。本発明の一実施例において、その抽出温度が室温であっても良く、抽出時間が７２時間であっても良い。
【００１５】
本発明の抽出方式は、純度が比較的に高い抽出物を取得するために精製工程をさらに含んでも良い。精製工程は活性炭によって脱色精製するものであっても良い。
【００１６】
本発明の抽出物はまた、抽出工程と精製工程を繰り返すことで純度が比較的に高い抽出物を取得しても良い。
【００１７】
本発明の一実施例によれば、本発明は、活性成分として、少なくともｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリド（ｏｖａｔｏｄｉｏｌｉｄｅ）とを含む医薬組成物を提供する。
【００１８】
オバトジオリド（ｏｖａｔｏｄｉｏｌｉｄｅ）としては、その化学式がＣ２０Ｈ２４Ｏ４であり、フルネームが３，７，１１，１５（１７）−センブラテトラエン−１６，２：１９，６−ジオリド  ３４８４−３７−５（３Ｅ，１２Ｅ）−３，１２−ジメチル−８−メチレン−６，１８−ジオキサ−トリシクロ［１４．２．１．０．５，９］ノナデカ−３，１２，１６（１９）−トリエン−７，１７−ジオン）（３，７，１１，１５（１７）−Ｃｅｍｂｒａｔｅｔｒａｅｎｅ−１６，２：１９，６−ｄｉｏｌｉｄｅ  ３４８４−３７−５（３Ｅ，１２Ｅ）−３，１２−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−８−ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ−６，１８−ｄｉｏｘａ−ｔｒｉｃｙｃｌｏ［１４．２．１．０．５，９］ｎｏｎａｄｅｃａ−３，１２，１６（１９）−ｔｒｉｅｎｅ−７，１７−ｄｉｏｎｅ）であり、構造式が下式（２）に示すようなものである。
【００１９】
【化２】
0006261770.tif 000003
【００２０】
オバトジオリドは、化学合成または植物から抽出して得られることができて、例えばブソロイバナ（Ａｎｉｓｏｍｅｌｅｓ ｉｎｄｉｃａ）から抽出して得られることができる。ブソロイバナを例として、その抽出方式は、有機溶媒でブソロイバナの根、莖、葉、花または植物全体に対して抽出するものであっても良い。本発明に使用される極性溶媒は、Ｃ１−Ｃ１２アルコール類、Ｃ２−Ｃ５アセテート類、Ｃ５−Ｃ６アルカン類またはこれらの組み合わせ、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、２−ブタノール、ｔｅｒ−ブタノール、１，３−ブタンジオール、１，４−ブタンジオール、ペンタノール、イソペンタノール、２，３−ペンタンジオール、２，４−ペンタンジオール、シクロペンタノール、ヘキサノール、シクロヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール、ノナノール、デカノール、ウンデカノール、ドデカノル、エチルアセテート、プロピルアセテート、ペンチルアセテート、ｎ−ペンタン、シクロペンタン、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサンまたはこれらの組み合わせからなるが、これらに限らない。本発明の一実施例では、抽出溶媒としてエタノールを採用している。エタノールの濃度は５０％〜９５％体積百分率濃度（ｖ／ｖ）または７５％〜９５％体積百分率濃度（ｖ／ｖ）であっても良い。
【００２１】
抽出温度と時間は特別な制限がなく、使用される溶媒の性質などの条件によって決めばよい。本発明の一実施例において、その抽出温度が５０〜８０℃または７０〜８０℃であっても良く、抽出時間が２〜４時間であっても良い。
【００２２】
本発明の抽出物は、純度が比較的に高い抽出物を取得するために精製工程をさらに経ても良い。精製工程はカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ガスクロマトグラフィー、イオン交換法などであっても良いが、シリカで充填されたカラムクロマトグラフィーが好ましい。
【００２３】
本発明の抽出物は、抽出工程と精製工程を繰り返すことで純度が比較的に高い抽出物を取得しても良い。
【００２４】
本発明の医薬組成物はまた、医薬的に許容され得るビヒクルをさらに含んでも良く、その医薬的に許容され得るビヒクルとは、非毒性の固体、半固体または液体のフィラー、希釈剤、封入材料、配合助剤またはいかなる周知タイプの添加剤、賦形剤、防腐剤、矯味剤などを指す。医薬的に受け容れるビヒクルは、使用される用量および濃度で、使用者に対し、基本的に非毒性であり、配合における他の成分と相溶している。具体的に、例えば澱粉、コンスターチ、ラクトース、デキストリン、シクロデキストリン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ゼラチン、ガム（ｇｕｍ）、寒天、グアーガム（ｇｕａｒ）、ペクチン、アラビアゴム、トラガカント（ｔｒａｇａｃａｎｔｈ）、カラギーナン（ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ）または類似の添加剤である。
【００２５】
本発明の医薬組成物は任意の形にしても良く、投与経路に応じて適当に剤型を設計られ、例えば、錠剤、カプセル剤、糖衣錠、散剤、顆粒剤、シロップ、懸濁剤、坐剤、パップ剤などであっても良い。投与経路は、経口、肛門投与、吸入性投薬、局部投薬、経皮投薬などの方式を含んでも良い。本発明の医薬組成物は、水溶液、ヒドロゲル、水性、油性、水中油型あるいは油中水型エマルジョン／クリーム、ペースト状マトリックス、ペースト状貼布などのような外用組成物の形に調製されても良い。本発明の組成物における活性化合物は、その薬学的に受け容れる塩類の形で投薬されても良いし、またはそのほかの薬物活性がある痛風症状を緩和・治療可能な化学物質と適当な共用や組合せの方式で適用されても良い。
【００２６】
本発明の医薬組成物は少なくとも有効用量の一種または多種の活性物質を含み、そしてそれぞれの活性物質の用量や各成分の比例が本発明の下記実施例に示されるものに限らなく、医薬的に受け容れるビヒクルと自由に配合できる。「有効用量」とは、被験対象の治療または緩和しようとする病症に対して理想的な効果が生じることに十分である化合物の量を広く指す。精確な用量は治療目的に従って異なるようになり、そして従業者は公知の技術によって上述用量を確定できる。例えば、医者または担当者は患者の体重、年齢、患部の症状、生理的状況、投与経路などの条件に応じて適当に調合する。
【００２７】
本発明の一実施例において、その医薬組成物は活性成分として少なくともｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリドとを含み、ここで、このｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリドとの重量比が１０：９０〜８５：１５、１５：８５〜８０：２０、または２０：８０〜６５：３５である。別の実施例において、そのｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリドとの重量比が５０：５０である。
【００２８】
ここで引用される文献は参考として本文に取り込まれる。本発明の具体的な実施態様について以下のように詳しくて説明するが、以下の実施例は本発明の技術内容をさらに発明するだけに用いられ、それによって本発明の発明範疇を制限してはいけない。
【００２９】
実施例１  ｐ−クマリルジアセテート（実験略号：ＡＧ０４−ＲＡ１）の調製
４キロのナンキョウ植物の根部を磨り砕い、３０リットルのヘプタンを加えて、常温で７２時間撹拌し、次に、カスと濾液を濾過・分離させて、さらに濾液に活性炭を加えることで脱色精製に寄与し、次に蒸留によって濾液中のヘプタンを除去したところ、淡黄色の液体５７．５６グラムを取得し得る。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって分析し、ここで分析カラムが逆相クロマトグラフィーＣ１８カラムであり、４９％体積百分率濃度（ｖ／ｖ）のアセトニトリル及び５１％体積百分率濃度（ｖ／ｖ）の０．０５％体積百分率濃度（ｖ／ｖ）のトリフルオロ酢酸水溶液の移動相で勾配溶離する。図１は本発明実施例に従って調製されたｐ−クマリルジアセテートの高速液体クロマトグラムである。これにｐ−クマリルジアセテートの含有量と純度が含まれており、図１を参照すると、その純度が約８０〜９５％重量百分率濃度（ｗ／ｗ）である。さらに再結晶したところ、白色の結晶が得られ、その純度は９９％重量百分率濃度（ｗ／ｗ）（高純度と定義される）に達することができる。
【００３０】
実施例２  オバトジオリド（実験略号：ＡＧ０２−ＲＡ１）の調製
（ブソロイバナ）ミソナオシ植物の全体を採取して１キロに粉砕・混合し、８０％体積百分率濃度（ｖ／ｖ）のエタノール水溶液で抽出する。抽出された液体を無水の状態に濃縮し、１−３倍の体積のメタノールをさらに加える。不溶的な固体を濾過・分離させて、濾液を採取して３倍の体積の水で希釈し、総体積の１／３のエチルアセテートとｎ−ヘプタンの溶液で少なくとも３回抽出した。有機層溶液を無水の状態に濃縮したところ、ＡＧ０２含有量が４０〜６０％重量百分率濃度（ｗ／ｗ）である粗抽出物を取得し得る。さらに、この粗抽出物を６−１２倍の固体重量のメタノールで溶解させて、またさらに１〜３％重量百分率濃度（ｗ／ｗ）の活性炭で脱色し、最後にメタノール溶液を無水の状態に濃縮すると、７０〜９０％重量百分率濃度（ｗ／ｗ）のＡＧ０２−ＲＡ１含有混合物を取得し得る。さらに再結晶したところ、白色の結晶が得られ、その純度は９８．１％重量百分率濃度（ｗ／ｗ）（高純度と定義される）に達することができる。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって分析し、ここで分析カラムが逆相クロマトグラフィーＣ１８カラムであり、４９％体積百分率濃度（ｖ／ｖ）のアセトニトリル及び５１％体積百分率濃度（ｖ／ｖ）の０．０５％体積百分率濃度（ｖ／ｖ）のトリフルオロ酢酸水溶液の移動相で勾配溶離する。図２は本発明実施例に従って調製されたオバトジオリドの高速液体クロマトグラムである。
【００３１】
実施例３  ｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリドによる組成物（実験略号：ＡＧＴ）の調製
実施例２で調製されたＡＧ０２−ＲＡ１（２．５〜５％重量百分率濃度（ｗ／ｗ））及び実施例１で調製されたのＡＧ０４−ＲＡ１（１％〜５％重量百分率濃度（ｗ／ｗ））を採取して、エタノール（エタノールの最終的な濃度は１０％重量百分率濃度（ｗ／ｗ））に溶かし、次にこれをポリエチレングリコール混合液（ｐｏｌｙ  ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ（ＭＷ  ４０００）とｐｏｌｙ  ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ（ＭＷ  ４００）を加熱した後、４０−８０℃で混合したもの）と混合させて、室温まで撹拌して温度を下げたところ、この組成物が得られる。表１は、比例及び純度が異なるＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１の組成実施例を示す表である。番号７は再結晶された高純度のＡＧ０２−ＲＡ１（純度：９８．１％）とＡＧ０４−ＲＡ１（純度：９９％）を使用する以外、残りはいずれも実施例１と実施例２で抽出して得られたＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１を使用する。番号８はペースト状マトリックス材料のみを含有する空白対照組である。
【００３２】
【表１】
0006261770.tif 000004
【００３３】
実施例４  動物モデルにおけるｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリドによる組成物の活性の評価
偽滑膜腔のマウス動物モデル（Ｍｏｕｓｅ  Ａｉｒ  ｐｏｕｃｈ  ｍｏｄｅｌ）：偽滑膜腔のマウス動物モデルは、発表された文献「Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｓ１００Ａ８  ａｎｄ  Ｓ１００Ａ９  ｉｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｍｏｎｏｓｏｄｉｕｍ  ｕｒａｔｅ  ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ  ｃｒｙｓｔａｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｉｒ−ｐｏｕｃｈ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ｇｏｕｔｙ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ」、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．  ２００３  Ａｕｇ；４８（８）：２３１０−２０．の実験方法を参考して行われる。この文献の全文は参考として本願説明に取り込まれる。
【００３４】
実験の前に、予め鼠に背中の毛を取り除いてある。Ｄａｙ  ０に、皮下注射の方式で、鼠ごとに背中から０．２２μｍのマイクロフェルター（ｍｉｃｒｏｆｉｌｔｅｒ）で濾過された無菌空気を注入して（２ｍｌ／鼠）、一つの偽滑膜腔（ｐｓｅｕｄｏｓｙｎｏｖｉａｌ  ｃａｖｉｔｙ）が形成される。Ｄａｙ  ３に、鼠ごとにもう一回の空気補強（ａｉｒ  ｂｏｏｓｔｅｒ）を付与して（３ｍｌ／鼠）、そのエアパウチ（ａｉｒ−ｐｏｕｃｈ）が膨れていることを保持しつつ、各組の間に鼠の平均体重が同じように秤量・分組する。Ｄａｙ  ６に、エアパウチに尿酸一ナトリウム（ｍｏｎｏｓｏｄｉｕｍ  ｕｒａｔｅ，ＭＳＵ）結晶の懸濁液を注射する（５ｍｇ／２ｍｌ／鼠）。経皮吸収（ｔｏｐｉｃａｌ  ｕｓｅ）の軟膏はＭＳＵ刺激の１５時間前に塗抹して投薬される（１００ｍｇ軟膏／鼠）。ＭＳＵ注射後の特定時間（５時間）に、過量の二酸化炭素で鼠を安楽死させて、エアパウチに鼠ごとに２ｍｌＰＢＳを注入し、エアパウチを気をつけて挟み切って、エアパウチの中の滲出液（ｅｘｕｄａｔｅ）を収集する。滲出液を１，０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心して、上澄み液を取出して９６穴丸底プレートに置き、−２０℃で保存する。ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから購入した）を使用して、この滲出液におけるＩＬ−１βとＩＬ−６の含有量を分析する。沈殿物を再懸濁させた後、１ｍｌ赤血球溶解バッファー（ＲＢＣ  ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒ）を１分間作用させることで、赤血球の細胞を除去し、その後、１ｍｌＰＢＳを加えて反応を終止させ、１，０００ｒｐｍ、２５℃で５分間遠心後、上澄み液を捨て、さらに１ｍｌＰＢＳで細胞を再懸濁させて、濾過膜（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ  １００  μｍ  Ｎｙｌｏｎ  ｆｉｌｔｅｒ  ｓｔｒａｉｎｅｒ）で細胞懸濁液を濾過した後、後続の細胞数測定や分化抗原マーカー（ＣＤ  ｍａｒｋｅｒｓ）のマークが行われるように、細胞を多数個のチューブに積み分けり（０．２５ｍｌ／チューブ）、各種の細胞数測定及び分析はフローサイトメーターで行われる。
【００３５】
本実験は、ＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１が単独でまたは組み合わせて使用される場合の抗痛風治療効果を検討するために、それぞれＡＧ０２−ＲＡ１単独、ＡＧ０４−ＲＡ１単独及びＡＧ０２−ＲＡ１：ＡＧ０４−ＲＡ１の比例が５０：５０である合成配合（表１の番号１、２、３で示すような配合）をテストする。配合に含まれるＡＧ０２−ＲＡ１及び／またはＡＧ０４−ＲＡ１の総重量は５ｍｇで、試験ペースト状サンプルの総重量の約５％を占める。例えば、試験サンプル全体の重量１００ｍｇで、番号１のサンプルにはＡＧ０２−ＲＡ１を５ｍｇ、番号２のサンプルにはＡＧ０４−ＲＡ１を５ｍｇ、番号３のサンプルにはＡＧ０２−ＲＡ１を２．５ｍｇ及びＡＧ０４−ＲＡ１を２．５ｍｇ含む。
【００３６】
結果は以下の通りである。実験結果から見れば、下記表２には、ＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１が単独で及び一緒に使用される場合について、白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）表面抗原によって測定された白血球の細胞密度（ＣＤ４５＋）の結果が示されている。結果によると、白血球の細胞数の抑制について、ＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１がそれぞれ２．５ｍｇで一緒に使用される場合に白血球数の抑制に対する効果が最も良いことは明らかである。
【００３７】
【表２】
0006261770.tif 000005
【００３８】
実験結果から見れば、下記表３には、ＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１が単独で及び一緒に使用される場合について、好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ）表面抗原によって測定された好中球の細胞密度（ＣＤ４５＋／Ｌｙ６Ｇ＋）の結果が示されている。結果によると、好中球の細胞数の抑制について、ＡＧ０２−ＲＡ１が単独で５ｍｇ使用される場合に好中球数の抑制に対する効果が最も良く、次に、ＡＧ０４−ＲＡ１が単独で５ｍｇ使用される場合に好中球数の抑制に対する効果も悪くないことは明らかである。
【００３９】
【表３】
0006261770.tif 000006
【００４０】
図３と４は、抗痛風可能な治療効果を検討するように、異なる試験サンプルを適用することでそれぞれ検知されたインターロイキン−１β（ｍＩＬ−１β）分泌量とインターロイキン−６（ｍＩＬ−６）分泌量をヒストグラムで示されるものである。図３−４に示されたパーセントは抑制率（％）であり、そして図面における＊は当該組と空白対照組とを比較すると顕著な差異（Ｐ＜０．０５）があることを表す。インターロイキン−１βは痛みと明らかな相関関係にあることが知られており、痛風症状に関して主に監視される指標の一つであり、結果によると、インターロイキン−１βの抑制についてもまたはインターロイキン−６の抑制についても、ＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１がそれぞれ２．５ｍｇで一緒に使用される場合にインターロイキン−１βの抑制及びインターロイキン−６の抑制に対する効果が最も良く、抑制率がそれぞれ７０％と８０％であることは明らかである。次に、ＡＧ０４−ＲＡ１が単独で５ｍｇ使用される場合にも良い抑制効果がある（抑制率＞５０％）。
【００４１】
実施例５  動物モデルにおけるｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリドによる組成物の比例配分の活性の評価
方法としては実施例４の動物モデルを参考し、繰り返して説明しないが、テストするものだけを実施例４の各比例の組み合わせに変わって活性の評価を行って、その結果は以下の通りである。前の実験では、ＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１が一緒に使用される場合の効果が単独で使用される場合より良いことが検出された。次に、下記実験では、ＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１の異なる比例の組み合わせ（表１の番号４、５、６で示すような配合）での抗痛風治療効果を検討し、最も良い比例配分と有効な比例配分の範囲を見つけるように、それぞれＡＧ０２−ＲＡ１：ＡＧ０４−ＲＡ１の比例が８０：２０、７５：２５、５０：５０である比例配分をテストする。例えば、試験サンプル全体の重量１００ｍｇで、番号４のサンプルにはＡＧ０２−ＲＡ１を４ｍｇ、及びＡＧ０４−ＲＡ１を１ｍｇ含み、そして、含まれるＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１の総重量が５ｍｇで、試験ペースト状サンプルの総重量の約５％を占める。そのほかの番号の重量比を類推する。
【００４２】
下記表４には、ＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１が異なる比例で一緒に使用される場合について、白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）表面抗原によって測定された白血球の細胞密度（ＣＤ４５＋）の結果が示されている。結果によると、白血球数の抑制について、一緒に使用されるＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１の比例が８０：２０及び７５：２５である比例配分も有効範囲に属しており、抑制効果が受け容れる範囲に属することは明らかである。
【００４３】
【表４】
0006261770.tif 000007
【００４４】
実験結果から見れば、下記表５には、ＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１が異なる比例で一緒に使用される場合について、好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ）表面抗原によって測定された好中球の細胞密度（ＣＤ４５＋／Ｌｙ６Ｇ＋）の結果が示されている。結果によると、好中球の細胞数の抑制について、一緒に使用されるＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１の比例が８０：２０及び７５：２５である比例配分も有効範囲に属しており、抑制効果が受け容れる範囲に属することは明らかである。
【００４５】
【表５】
0006261770.tif 000008
【００４６】
図５と図６は、抗痛風可能な治療効果を検討するように、異なる試験サンプルを適用することでそれぞれ検知されたインターロイキン−１β（ｍＩＬ−１β）分泌量とインターロイキン−６（ｍＩＬ−６）分泌量をヒストグラムで示されるものである。図５−６に示されたパーセントは抑制率（％）である。結果によると、インターロイキン−１βの抑制についてもまたはインターロイキン−６の抑制についても、一緒に使用されるＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１の比例が８０：２０及び７５：２５である比例配分も有効範囲に属しており、抑制効果が受け容れる範囲に属することは明らかである。つまり、ＡＧ０４−ＲＡ１が占める比例は２０％と低い場合には、抑制機能がある範囲にも属す。
【００４７】
実施例６  動物モデルにおけるｐ−クマリルジアセテートとオバトジオリドによる組成物の純度の活性の評価
方法としては実施例４の動物モデルを参考し、繰り返して説明しないが、その結果は以下の通りである。前述の実験では、配合にＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１を一緒に使用すれば極めて良い抗痛風効果を有することが検出されており、さらに、使用されるＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１の純度についてその抗痛風治療効果を評価する。本実験は異なる純度のＡＧ０２−ＲＡ１：ＡＧ０４−ＲＡ１の比例が５０：５０である合成配合（表１の番号６、７で示すような配合）についてその抗痛風治療効果を比較する。
【００４８】
テストの結果は以下の通りである。下記表６には、異なる純度のＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１を一緒に使用する場合について、白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）表面抗原によって測定された白血球の細胞密度（ＣＤ４５＋）の結果が示されている。結果によると、白血球数の抑制について、ＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１の純度が高いほど、その抑制効果が良いことは明らかである。
【００４９】
【表６】
0006261770.tif 000009
【００５０】
実験結果から見れば、下記表７には、異なる純度のＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１を一緒に使用する場合について、好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ）表面抗原によって測定された好中球の細胞密度（ＣＤ４５＋／Ｌｙ６Ｇ＋）の結果が示されている。結果によると、好中球の細胞数の抑制について、ＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１の純度が高いほど、その抑制効果が良いことは明らかである。
【００５１】
【表７】
0006261770.tif 000010
【００５２】
図７と図８は、抗痛風可能な治療効果を検討するように、異なる試験サンプルを適用することでそれぞれ検知されたインターロイキン−１β（ｍＩＬ−１β）分泌量とインターロイキン−６（ｍＩＬ−６）分泌量をヒストグラムで示されるものである。図７−８に示されたパーセントは抑制率（％）であり、そして図面における＊は当該組と空白対照組とを比較すると顕著な差異（Ｐ＜０．０５）があることを表す。図７−８の結果によると、インターロイキン−１βの抑制についてもまたはインターロイキン−６の抑制についても、ＡＧ０２−ＲＡ１とＡＧ０４−ＲＡ１の純度が高いほど、その抑制効果が良いことは明らかである。
【００５３】
以上によって、本発明の実験によれば、ｐ−クマリルジアセテートを含有する組成物は、痛風を緩和または治療することに確実に有用であり、そして、さらにオバトジオリドと配合して使用される時に、その効果が一層顕著であることが確認されると分かる。本発明の組成物は痛風緩和・治療薬物として開発される甲斐が実にあることが発現される。
【００５４】
本発明で提供される組成物は、その用量や各成分の比例が本発明実施例に示されるものに限らないとともに、医薬的に受け容れるビヒクルまたはそのほかの化学薬品と自由に配合できる。
【００５５】
本発明は実施例によって以上のように実施されたが、これが本発明を限定するために用いられることなく、いかなる当業者が本発明の精神と範囲から逸脱することなく若干の変更及び修飾することができることが当然であるので、本発明で保護される範囲は下に添付された特許請求の範囲によって定義されたものを基準にすべきである。
【図１】
0006261770.tif 000011
【図２】
0006261770.tif 000012
【図３】
0006261770.tif 000013
【図４】
0006261770.tif 000014
【図５】
0006261770.tif 000015
【図６】
0006261770.tif 000016
【図７】
0006261770.tif 000017
【図８】
0006261770.tif 000018