(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞を含む体液における標的分子の存在を決定する方法であって、
溶解物を生成するために前記体液における細胞を溶解させるステップ、
前記溶解物を、第１の検出分子を有する粒子と混ぜ合わせるステップ、
第１の検出分子を介して標的分子を前記粒子に結合させるステップ、
第２の検出分子を有した基板を前記溶解物に曝露するステップ、
第２の検出分子を介して標的分子を前記基板に結合させるステップ、
前記基板に付着した粒子を検出するステップ、
を含み、
前記体液の細胞は、カートリッジの第１の位置において溶解され、
前記溶解物は、前記カートリッジの第２の位置において前記粒子と混ぜ合わされ、
前記第１の位置及び前記第２の位置は、弁を含むチャネルによって接続され、
前記弁は、前記体液が前記第１の位置に入ってから特定の時間の後で開く、方法。
【請求項２】
前記細胞は、１つの界面活性剤又は複数の界面活性剤の混合物によって溶解される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記界面活性剤は、Ｎｏｎｉｄｅｔ−Ｐ４０、Ｎｏｎｉｄｅｔ−Ｐ４０代用品、スクロースモノラウラート、Ｃｈｅｍａｌ  ＬＡ−９及びＴｒｉｔｏｎＸ１００のうち少なくとも１つを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
タンパク質及び炭水化物の非存在下で、少なくとも塩が前記界面活性剤に添加される、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞が、物理的溶解方法によって溶解される、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記体液の細胞の溶解の開始から特定の時間の後、前記溶解物は前記粒子と混ぜ合わされ、且つ／或いは、前記基板は前記溶解物に曝露される、請求項１乃至５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記基板は、前記第２の位置において前記溶解物に曝露される、請求項１乃至６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記溶解された細胞から放出される物質を結合させるために、前記溶解物に結合剤を添加するステップ、
をさらに含む、請求項１乃至７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記標的分子は、特定のタイプのタンパク質である、請求項１乃至８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記体液は血液を含む、請求項１乃至９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記粒子は磁気粒子であり、
当該方法は、
磁力によって前記基板の方向に前記磁気粒子を動かすステップ、
反対の磁力によって、前記基板に付着していない磁気粒子を取り除くステップ、
前記粒子により反射された放射物を検出することによって、前記基板に付着した前記磁気粒子を検出するステップ、
を含む、請求項１乃至１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
分析装置内に挿入するためのカートリッジであって、
体液における細胞を溶解させるための界面活性剤、
第１の検出分子を有した粒子、
第２の検出分子を有した基板、
第１の空洞及び第２の空洞、
を含み、
前記界面活性剤は、前記第１の空洞内に配置され、
前記粒子は、前記第２の空洞内に配置され、
前記第１の空洞及び前記第２の空洞は、弁を含むチャネルによって接続され、
前記弁は、前記体液が前記第１の空洞に入ってから特定の時間の後で開く、カートリッジ。
【請求項１３】
前記基板は、前記第２の空洞内に配置される、請求項１２に記載のカートリッジ。
【請求項１４】
請求項１乃至１１のいずれか一項に記載の方法を行うために適応される分析装置。
【請求項１５】
請求項１２又は１３に記載のカートリッジを受けるためのスロット、
を含む、請求項１４に記載の分析装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞を含む体液における標的分子の存在を決定する方法、分析装置、及び、分析装置に対するカートリッジに関する。
【背景技術】
【０００２】
血液のような体液における標的分子の検出は、多くの検出技術にとって挑戦であり得る。特に、蛍光及び比色分析等の光学技術は、赤血球が高い光学的バックグラウンド（例えば、自己蛍光、高吸収等）を生じるという不利益を有し得る。ＦＴＩＲ（内部全反射）技術のような近接場光学技術は、これらのタイプの光学干渉に対して感受性がより低くあり得る。ＦＴＩＲ技術と共に、磁気粒子を、基板表面に結合した標的分子を検出するために使用してもよく、ここで、磁気粒子は、磁場を用いて基板まで導かれてもよい。しかし、磁気粒子を使用する場合、磁気粒子は、血液細胞に非可逆的に付着する傾向を有することがあり、さらに、赤血球は、基板表面上の空間を占めるため、磁気作動プロセスに干渉し得る、及び、磁気粒子が結合するのを不可能にし得る。
【０００３】
最も一般的な、血液細胞を取り除く方法は、遠心力又は分離技術（例えばフィルタ、直接捕獲等）を介して血液細胞を取り除くことである。結果は、分析を行うのがより容易であり得る透明な血漿マトリクスである。
【０００４】
血液を遠心分離することによって、最高品質の血漿を得ることができる。これは、しかし、ほとんどの場合、可動部分を有するモーターの使用を要求する。可動部分、高い電力消費量で高価な部分を回避するために、ほとんどのポイントオブケアの分析装置は、費用のかからないシンプルな解決策としてフィルタを利用する。フィルタを使用することは、標的分子の吸着（いわゆる保持）が観察されることが多くある大きな表面領域を有し得るという不利益を有し得る。従って、検出されることになる標的分子のタイプ毎に、標的分子がフィルタに結合することができないように、通常はタンパク質を用いて、フィルタを阻止するよう化学的措置を取らなくてはいけないことがある。しかし、検出されることになる新たなタイプの標的分子毎に、アッセイに干渉しないブロッキング分子を見つけなければいけないことがあり、それは、全てのケースにおいて可能であるわけではなく、場合によっては、少量の保持を観察し得る。高い感受性及び高い精度の分析決定に対して、フィルタの使用は上記の理由から適切ではないことがある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ポイントオブケアにて行うことができる、シンプルで費用のかからない且つ正確な、標的分子を検出する方法を提供することが本発明の目的であり得る。特に、本発明の目的は、ポイントオブケアによって行うことができるそのような方法、及び／又は、ハンドヘルドの分析装置を提供して、遠心分離技術を使用する中央研究所の分析機器において観察される性能を達成することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
この目的は、独立請求項の発明特定事項によって達成される。さらなる例証的な実施形態が、従属請求項及び以下の説明から明らかである。
【０００７】
本発明の一態様は、細胞を含む体液における、例えば血液における標的分子の存在又はその量を決定する方法に関する。
【０００８】
本発明の一実施形態によると、当該方法は、溶解物を生成するために体液における細胞を溶解させるステップ、溶解物を、第１の検出分子を有する粒子と混ぜ合わせるステップ、第１の検出分子を介して標的分子を粒子に結合させるステップ、第２の検出分子を有した基板を溶解物に曝露するステップ、第２の検出分子を介して標的分子を基板に結合させるステップ、基板に付着した粒子を検出するステップを含む。
【０００９】
当該方法は、生物学的標的分子、特に、血液中のタンパク質の直接検出に対して使用することができる。体液の試料が第一に溶解され、その後、その溶解物を直接使用して、例えば磁気粒子及び基板を用いた磁気ラベルアッセイにおいて、標的分子の濃度を決定することができるということを、本発明の要点として見ることができる。特に、標的分子の分析的決定を、溶解物において直接（特に、体液又は溶解物のいかなる成分も取り除くことなく）行ってもよい。
【００１０】
標的分子の濃度は、例えばＦＴＩＲ技術等の光学検出技術を用いて決定してもよく、そこでは、標的分子の濃度は、結合した磁気粒子を有した基板から反射された光から決定される。ＦＴＩＲ技術及び／又は磁気ラベル技術は、細胞からの干渉が存在しないように、全血試料において直接行ってもよい。
【００１１】
本発明のさらなる態様は分析装置に関し、該分析装置を用いて、上記及び以下に記載される方法を行うことができ、さらに、本発明のさらなる態様は、分析装置に挿入するための使い捨てカートリッジに関する。
【００１２】
上記及び以下に記載される分析装置並びに／又はカートリッジの特徴は、上記及び以下に記載される方法の特徴であってもよく、さらに逆もまた同様であるということが理解されなくてはならない。
【００１３】
本発明の一実施形態によると、当該カートリッジは、体液における細胞を溶解させるための界面活性剤、第１の検出分子を有した粒子、及び、第２の検出分子を有した基板を含む。上記及び以下に記載されるように、体液の試料は、カートリッジ内に置き、界面活性剤によって溶解し、さらに、分析装置において分析することができる。
【００１４】
本発明の上記及び他の態様は、以下に記載の実施形態から明らかになり、さらに、該実施形態を参考にして解明される。
【００１５】
以下において、本発明の実施形態が、付随の図面を参考にしてより詳細に記載される。
【００１６】
原則として、図において、同一の部分には同じ参照記号が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の一実施形態による分析装置の概略図である。
【図２】本発明の一実施形態によるカートリッジの概略図である。
【図３】本発明の一実施形態による、カートリッジが挿入された分析装置の詳細図である。
【図４】本発明の一実施形態による標的分子を検出するための方法に対する流れ図である。
【図５】本発明の一実施形態による標的分子を有さない血液試料を溶解させることによって引き起こされる検出信号の変化を示したグラフである。
【図６】本発明の一実施形態による標的分子を有する血液試料を溶解させることによって引き起こされる検出信号の変化を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
図１は、例えば医師のオフィス、病院のベッドのかたわら、救急車及び患者の家等、ポイントオブケアにて使用することができるハンドヘルドの分析装置１０を概略的に示している。ハンドヘルドの分析装置は、検査室の環境外での迅速な医療診断に対して使用することができる。
【００１９】
ハンドヘルドの分析装置は、使い捨てカートリッジ１４を受けるためのスロット１２を有する。患者から採取された血液のような体液の試料１６は、カートリッジ１４上に置くことができる。カートリッジ１４は、分析装置１０におけるスロット１２内に挿入することができる。試料１６は、分析装置１０によって分析することができ、さらに、結果は、分析装置１０のディスプレイ１８上に直接表示することができる。
【００２０】
図２は、カートリッジ１４を概略的に示している。カートリッジ１４は、体液の試料１６を受けるための第１の空洞又は注入口２６、毛管輸送チャネル２８、体液１６を分析するための第２の空洞又は試料チャンバ３０、及び、通気口３２を含む。図３に関して、カートリッジ１４は上部２０及び底部２２を含んでもよく、射出成形プラスチックから製造することができる。２つの部分２０、２２を接着テープ２４を用いて共に付着して、カートリッジ１４を形成してもよい。
【００２１】
第１の空洞２６は注入口２６として形成してもよく、その中には、溶解化学物質（界面活性剤）を置くことができる。
【００２２】
本発明の一実施形態によると、カートリッジ１４は、特に、第１の空洞２６において、体液１６における細胞を溶解させるための界面活性剤を含む。
【００２３】
本発明の一実施形態によると、当該カートリッジは、チャネル２８によって接続される第１の空洞２６及び第２の空洞３０を含む。
【００２４】
本発明の一実施形態によると、界面活性剤は、第１の空洞２６内に配置される。
【００２５】
本発明の一実施形態によると、当該カートリッジは、チャネル２８内に弁３４を含む。チャネル２８は、体液の試料１６が注入口２６上に置かれてから特定の時間の後に開く弁３４を含んでもよい。例えば、弁３４は、磁気的、電気的及び／又は流体的に作動して放出してもよい。
【００２６】
本発明の一実施形態によると、弁３４は、体液１６が第１の空洞２６に入ってから特定の時間の後に開くように適応される。
【００２７】
チャネル２８は、例えば静的なマイクロフルイディック構造体、機械的、磁気的、電気的及び／又は光学的な力によって駆動される混合構造体等の混合構造体３５を含んでもよい。混合構造体３５は、急速な溶解のために、溶解剤が血液において迅速に分布するのを可能にすることができる。これは、弁３４、又は、すぐに閉じるチャネルの端の弁のみの必要性を排除することができる。混合構造体３５は、アッセイと同時に溶解が行われる場合、アッセイを有した第１の空洞２６内、チャネル２８内、及び／又は、空洞３０内に含有されてもよい。
【００２８】
図３は、分析装置１０内に挿入されるカートリッジ１４の第２の空洞３０を通る断面図を概略的に示している。第２の空洞３０において、特定のタイプの標的分子に結合するよう適応させることができる第１の検出分子を含む磁気粒子３６が配置されている。磁気粒子３６は、例えば磁場を用いて動くことができる等、磁場に対して反応するいかなるタイプの粒子であってもよいということに留意しなくてはならい。粒子３６は、ナノ粒子であってもよい。
【００２９】
第２の空洞３０は、第２の検出分子を含む基板表面３８を含み、第２の検出分子も、特定のタイプの標的分子に結合するよう適応させることができる。
【００３０】
第１の検出分子及び第２の検出分子は、同じタイプのものであってもよく、又は、異なるタイプのものであってもよい。
【００３１】
検出分子は、例えば抗体、アプタマー、アンチセンス核酸及び／又は抗体断片等、いかなるタイプの特異的結合種であってもよい。
【００３２】
本発明の一実施形態によると、カートリッジ１４は、第１の検出分子を有した、例えば磁気粒子３６等の粒子３６、及び、第２の検出分子を有した基板３８を含む。
【００３３】
本発明の一実施形態によると、粒子３６及び基板３８は、第２の空洞３０内に配置される。
【００３４】
第１の空洞２６からの溶解された体液１７又は溶解物１７が、チャネル２８を介して第２の空洞３０に入る場合、溶解された体液１７における標的分子は、第１の結合分子を介して磁気粒子３６に、さらに、第２の検出分子を介して基板表面３８に結合する。そのような方法で、磁気粒子３６は、基板表面３８に結合される。基板表面３８に結合された磁気粒子３６の量は、体液１６における標的分子の量に依存する。
【００３５】
基板表面３８への結合反応を支持するために、分析装置１０は、基板表面３８に向けて、及び、基板表面から磁気粒子３６を動かす２つの制御可能な電磁石４０、４２を含む。２つの磁石４０、４２は、カートリッジ１４、特に第２の空洞３０の上下にそれぞれ置かれる。
【００３６】
磁気粒子３６を検出するために、分析装置１０は、例えばＬＥＤ等の光源４４、及び、例えばＣＣＤカメラ等の光検出器４６を有する。光源４２は、カートリッジの底部２２を通して基板表面３８上に光のビームを照射する。光のビームは、少なくとも部分的に反射され、さらに、光検出器４６上に向けられる。反射の程度から、基板表面に結合した磁気粒子３６の量、従って間接的に、体液１６における標的分子の量を決定することができる。基板表面３８に結合した磁気粒子３６が無いと、光は体液１６とカートリッジ１４の底部２２との境界にて完全に反射される。さらに、指数関数的に減衰し、且つ、サブ波長距離だけ溶解された体液１７に浸透するエバネッセント場が生じる。磁気粒子３８が存在する場合、該粒子は、エバネッセント場の一部を吸収且つ拡散し、さらに、光の全反射を妨害し、その結果、反射した光の強度を下げる。この技術を、内部全反射（ＦＴＩＲ）と呼ぶことができる。
【００３７】
図４は、図１から３に関して説明されることになる、体液における標的分子を検出するための方法に対する流れ図を示している。
【００３８】
例えば、体液１６は全血、すなわち、いかなる成分も取り除かれていない血液であってもよい。
【００３９】
本発明の一実施形態によると、体液１６は、血液を含むか又は血液である。
【００４０】
本発明の一実施形態によると、標的分子は、特定のタイプのタンパク質である。
【００４１】
本発明の一実施形態によると、標的分子は、心筋トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）、心筋トロポニンＴ、ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）、ミオグロビン、クレアチンキナーゼＭＢ、ｄ−ダイマー、プロカルシトニン及び副甲状腺ホルモンのうちの少なくとも１つである。
【００４２】
ステップ１００において、体液１６の試料が、カートリッジの注入口２６、第１のチャンバ又は第１の空洞２６にて提供され置かれる。カートリッジ１４は、カートリッジ１４内に体液１６を置いた後すぐに、分析装置１０のスロット１２内に挿入することができる。
【００４３】
ステップ１０２において、体液１６が溶解される。例えば、第１の空洞２６内の界面活性剤が、体液１６における細胞を溶解させることができる。
【００４４】
本発明の一実施形態によると、当該方法は、溶解物１７を生じるために体液１６における細胞を溶解させるステップを含む。溶解は、細胞が破壊されるプロセスとして定義することができる。結果として生じる溶解物においてアッセイが行われる前に細胞が溶解するということが可能であり得る。しかし、溶解及びアッセイは同時に行われてもよい。
【００４５】
本発明の一実施形態によると、細胞は、界面活性剤によって溶解される。界面活性剤は、細胞を溶解させるように適応されたいかなる物質であってもよい。
【００４６】
溶解化学物質（界面活性剤）は、吸着としての方法を使用して、（例えば無機（例えばガラス）及び有機（例えばプラスチック）の）カートリッジ１４の種々の表面上に固定化することができる。界面活性剤は、（カートリッジ全体を通して又は第１の空洞２６にて）例えば凝固防止剤と共に、乾燥した形状で存在してもよい。界面活性剤は磁気粒子３６と共に存在してもよく、同様に乾燥した形状で存在してもよい。界面活性剤は、試料を置いた後迅速に体液１６を界面活性剤に直接曝露することができるように、カートリッジ１４のマイクロフルイディック構造体内に固定化することができる。
【００４７】
本発明の一実施形態によると、界面活性剤は、Ｎｏｎｉｄｅｔ−Ｐ４０、Ｎｏｎｉｄｅｔ−Ｐ４０代用品、スクロースモノラウラート、Ｃｈｅｍａｌ  ＬＡ−９及びＴｒｉｔｏｎＸ１００のうち少なくとも１つを含む。これらの界面活性剤は、赤血球を溶解させるのに非常に効果的であり得る。特に、ｃＴｎＩアッセイとのわずかな干渉のみが観察される。
【００４８】
或いは又は加えて、本発明の一実施形態によると、細胞は、物理的溶解方法によって溶解される。例えば、細胞は、超音波処理によって、すなわち、細胞を超音波に曝露することによって溶解してもよい。例えば、分析装置は、超音波を生成するように適応させてもよい。
【００４９】
一般に、細胞の溶解は、機械的技術（例えば、制限されたチャネルにおけるガラス粒子、超音波、剪断の添加）、電気的技術（高電圧）、熱的技術及び化学的技術（高い浸透圧、界面活性剤、酵素）を含む多数の技術を使用することによって成し遂げることができる。
【００５０】
任意のステップ１０４において、さらなる薬剤を、溶解した細胞から放出された物質を結合させるために使用してもよい。例えば、ノンアッセイ（ｎｏｎ−ａｓｓａｙ）磁気粒子を、第１のチャンバ又は空洞２６に添加して、細胞から放出され得るいかなる生物学的に干渉する物質（例えば、タンパク質、核酸）も取り除いてよい。ノンアッセイ磁気粒子は、干渉分子（抗タンパク質抗体、核酸に対する電荷を持ったシリカ表面等）に結合することができる結合部分を含有してもよい。ノンアッセイ磁気粒子は、溶解の間又は溶解の後に添加してもよい。精製された溶解物１７が、アッセイ粒子３８を含有するチャンバ又は空洞３０に入るのを可能にされる場合に、磁場を使用して、第１のチャンバ又は空洞２６においてノンアッセイ粒子を保持することができる。この磁場は、分析装置１０によって生じることができる。
【００５１】
本発明の一実施形態によると、当該方法は、溶解した細胞から放出された物質を結合させるために、例えばノンアッセイ磁気粒子等の結合剤を溶解物１７に添加するステップを含む。
【００５２】
任意のステップ１０６において、弁３４は、第２の空洞３０まで溶解物を放出するように開く。弁３４は、固定（ｐｅｒｍａｎｅｎｔ）のマイクロフルイディック弁（磁気的、電気的、流体的に作動されて放出する）又は半固定（ｓｅｍｉ  ｐｅｒｍａｎｅｎｔ）の弁であってもよい。弁３４は、例えばプラスチックのカートリッジ１４に直接射出成形される疎水性の受動的な構造体を含む疎水性の弁であってもよい。疎水性の弁３４は、体液１６からのタンパク質が当該構造体に吸着するに従い、ゆっくり親水性になってもよい。固定された特定時間の後、構造体の接触角は、体液１６（又は溶解物１７）が通過するのを可能にされるようにある。この時間は、約１分から数分のものであってもよい。特定の時間は、試料１６からの大量のタンパク質の添加又は除去によって、及び、構造体を調節することによって、調整することができる。特定の時間は、溶解物１７が第２の空洞３０まで放出される前に、全細胞が第１の空洞２６において溶解されるように選んでもよい。
【００５３】
一般に、第１の空洞２６及び第２の空洞３０は、体液１６が第１の空洞２６に入った後、例えば１分未満等、特定の時間分互いから離される。
【００５４】
本発明の一実施形態によると、溶解物１７は、体液１６の細胞の溶解が開始されてから特定時間の後、粒子３８と混ぜ合わされる。さらに、基板３８を、特定時間の後、溶解物１７に曝露させてもよい。
【００５５】
ステップ１０８において、溶解物１７は、第１の空洞２６から第２の空洞３０まで、チャネル２８を介して、例えば毛管輸送によって運ばれる。体液試料１６は、第一に、別の空洞又はチャンバ２６内で溶解することができ、次に、溶解物は、磁気粒子３８が存在する第２の空洞又はチャンバ３０まで輸送される。アッセイは、第２のチャンバ３０内、又は、後のチャンバ内で行われてもよい。磁気粒子３８は細胞に結合して、粒子３８の不可逆的な集合を生じ得るため、細胞は、磁気粒子３８に曝露させる前に溶解させてもよい。
【００５６】
本発明の一実施形態によると、当該方法は、溶解物１６を、第１の検出分子を有した粒子３６と混ぜ合わせるステップを含む。
【００５７】
本発明の一実施形態によると、当該方法は、第２の検出分子を有した基板３８を溶解物１７に曝露するステップを含む。
【００５８】
本発明の一実施形態によると、体液１６の細胞は、例えば第１の空洞２６等の第１の位置２６にて溶解され、さらに、第１の位置２６とは異なる、例えば第２の空洞３０等の第２の位置３０にて、溶解物１７は粒子３６と混ぜ合わされ、且つ／或いは、基板３８は溶解物１７に曝露される。
【００５９】
或いは、溶解物１７は、例えばカートリッジ１４の１つの空洞又はチャンバにおいて等、同じ位置にて生成及び分析してもよい。
【００６０】
ステップ１１０において、第２の空洞内の磁気粒子３６及び基板３８は、溶解物１７における標的分子に結合する。磁気粒子３６は、特異的な標的分子に対するラベルとして見ることができる。
【００６１】
本発明の一実施形態によると、当該方法は、粒子３６に付着することができる第１の検出分子を介して標的分子を粒子３６に結合させるステップを含む。
【００６２】
本発明の一実施形態によると、当該方法は、基板３８に付着することができる第２の検出分子を介して標的分子を基板３８に結合させるステップを含む。
【００６３】
結合は、標的分子を介して粒子３６を基板表面３８に連結する鎖を形成する中間結合分子（例えばストレプトアビジン、ビオチン等）によって促進することができる。
【００６４】
磁気粒子は、上記のように磁場によって動かすことができる。
【００６５】
本発明の一実施形態によると、当該方法は、下の磁石４２により生成することができる磁力によって基板３８の方向に磁気粒子３６を動かすステップを含む。
【００６６】
本発明の一実施形態によると、当該方法は、上の磁石４０により生成することができる反対の磁力によって、基板３８に付着していない磁気粒子３６を取り除くステップを含む。
【００６７】
ステップ１１２において、溶解物１７における標的分子の量は、上記のように検出される。
【００６８】
本発明の一実施形態によると、当該方法は、基板３６に付着した、例えば磁気粒子３６等の粒子３６を検出するステップを含む。
【００６９】
本発明の一実施形態によると、当該方法は、粒子によって反射された放射物を検出することによって、基板３８に付着した磁気粒子３６を検出するステップを含む。
【００７０】
図５は、標的分子を有さないヒトの血液試料を溶解させることによって引き起こされる検出信号の変化を有したグラフを示し、さらに、図６は、ｃＴｎＩの形状の標的分子を含有するヒトの血液試料１６を溶解させることによって引き起こされる検出信号の変化を有したグラフを示している。
【００７１】
グラフの縦軸は、第２の空洞３０が参照流体で満たされた場合に生成される参照信号に対してパーセントで表された検出器４６の信号の変化を示している。
【００７２】
それぞれのバーが、異なって処理された血液１６に対する検出された信号を示している。第１のバー２００は、遠心分離された血液１６からの血漿に対する信号であり、参照として使用することができる。第２のバー２０２は、超音波処理によって溶解された血液１６に対する信号である。他のバー２０４、２０６、２０８、２１０、２１２は、それぞれ界面活性剤Ｎｏｎｉｄｅｔ−Ｐ４０、Ｎｏｎｉｄｅｔ−Ｐ４０代用品、スクロースモノラウラート、Ｃｈｅｍａｌ  ＬＡ−９及びＴｒｉｔｏｎＸ１００（ｐＨ７．４の１ｘリン酸緩衝食塩水中１％）で溶解された全血に対する信号である。
【００７３】
２０２の場合、２ｍｍプローブを使用して４０％振幅にて５秒間、血液を超音波処理した。２０４から２１２の場合、１：１の比で界面活性剤を血液に添加し、さらに、１分間室温にてインキュベートした。
【００７４】
信号２０２から２１２を生成するために、使い捨てカートリッジ１４は、トレーサー抗ｃＴｎＩ抗体で被覆された乾燥した５００ｎｍ磁気粒子、及び、ＨＥＰＥＳ、スクロース、ＢＳＡ、ＫＢｒ及びＫＣｌから成る乾燥した緩衝液を第２の空洞３０内に含有した。ｃＴｎＩアッセイを、溶解物１７との磁気粒子３６の１分間のインキュベーション、及び、捕獲抗ｃＴｎＩ抗体が結合している基板表面３８での磁気粒子３６の４分間のパルス作動から成る磁気作動プロトコルを使用して行った。表面３８に結合した磁気粒子３８を、内部全反射を使用して検出した。与えられた信号は、結合していない磁気粒子３６が、磁力によって基板表面３８から取り除かれた後のものである。
【００７５】
図５及び６からのバーから見ることができるように、超音波処理による、又は、界面活性剤Ｎｏｎｉｄｅｔ−Ｐ４０、Ｎｏｎｉｄｅｔ−Ｐ４０代用品、スクロースモノラウラート、Ｃｈｅｍａｌ  ＬＡ−９及びＴｒｉｔｏｎＸ１００を用いた血液の溶解後、ｃＴｎＩアッセイは依然として機能し得る。
【００７６】
要約すると、第一に、例えば血液試料１６等の体液試料１６における細胞を溶解することによって、磁気粒子３６を用いたアッセイを、低い干渉のレベルで、溶解した試料１７において直接行うことができる。溶解物１７を直接使用し、磁気粒子３６を用いたイムノアッセイを使用して標的分子の濃度を決定することができる。そのような方法において、いかなる分析物も失うことはできず、さらに、発生し得る磁気粒子３６との細胞の干渉は全く無いか、又は、微量のみである。屈折率の変化に対してのみ感受性があり、且つ、色、蛍光等に対して非感受性であり得るＦＴＩＲ技術を、直接検出に使用することができる。大きな細胞の立体障害は回避することができ、さらに、細胞への磁気粒子３６の結合は存在し得ない。
【００７７】
本発明は、図面及び上記の説明において詳細に例示及び記述されてきたけれども、そのような例示及び記述は、例示的又は例証的であり、拘束性はないと考慮されることになる。本発明は、開示された実施形態に限定されない。開示された実施形態に対する他の変化は、請求された発明を実行する際に、図面、明細書、及び付随の特許請求の範囲の調査から当業者により理解される及びもたらすことができる。特許請求の範囲において、「含む」という用語は、他の要素又はステップを除外せず、不定冠詞はその複数形を除外しない。１つのプロセッサ若しくはコントローラ又は他のユニットは、特許請求の範囲内に列挙されたいくつかの項目の機能を満たすことができる。特定の手段が互いに異なる従属項において記載されているという単なる事実は、これらの手段の組合せを役立つよう使用することができないと示しているわけではない。特許請求の範囲におけるいかなる参照番号も、その範囲を限定するとして解釈されるべきではない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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