(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＤ４７に結合する単離されたモノクローナル抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントであって、細胞の有意のレベルの凝集を引き起こさず、下記の可変重（ＶＨ）鎖又は可変軽（ＶＬ）鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメント：
ｉ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号５３を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列、
ｉｉ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号６７を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号６９を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列、
ｉｉｉ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号６７を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号７０を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｉｖ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号６８を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｖ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号７２を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号５３を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号７１を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｖｉ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号７２を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号６８を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｖｉｉ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号７２を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号６８を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号７１を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｖｉｉｉ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号７６を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号６８を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｉｘ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号７６を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号６８を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号７１を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｘ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号７７を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号５３を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｘｉ．配列番号５７を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号５３を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｘｉｉ．配列番号６０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号５３を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｘｉｉｉ．配列番号６１を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列；配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列；配列番号５３を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列；配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列；配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；又は
ｘｉｖ．配列番号６２を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号５３を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列。
【請求項２】
ヒトＣＤ４７に結合する単離されたモノクローナル抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントであって、細胞の有意のレベルの凝集を引き起こさず、下記の可変重（ＶＨ）鎖又は可変軽（ＶＬ）鎖を含む抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメント：
ｉ．配列番号５を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３１を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｉｉ．配列番号５を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３２を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｉｉｉ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３３を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｉｖ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３４を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｖ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｖｉ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３６を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｖｉｉ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３７を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｖｉｉｉ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３８を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｉｘ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３９を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号４３を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｉ．配列番号８を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３９を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｉｉ．配列番号１１を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号４２を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｉｉｉ．配列番号１１を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号４３を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｉｖ．配列番号１１を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号４４を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｖ．配列番号１１を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号４７を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｖｉ．配列番号１５を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号４３を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｖｉｉ．配列番号１５を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号４４を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｖｉｉｉ．配列番号１６を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｉｖ．配列番号１７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｘ．配列番号２０を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｘｉ．配列番号２１を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｘｉｉ．配列番号２２を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｘｉｉｉ．配列番号２７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｘｉｖ．配列番号２８を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｘｖ．配列番号２９を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；又は
ｘｘｖｉ．配列番号３０を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列。
【請求項３】
ヒトＣＤ４７に結合する単離されたモノクローナル抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントであって、細胞の有意のレベルの凝集を引き起こさず、下記の可変重（ＶＨ）鎖又は可変軽（ＶＬ）鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメント：
ｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号５を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３１を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号５を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３２を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｉｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３３を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｉｖ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３４を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｖ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｖｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３６を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｖｉｉ．Ｈ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３７を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｖｉｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３８を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｉｘ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３９を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４３を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号８を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３９を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１１を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４２を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｉｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１１を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４３を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｉｖ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１１を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４４を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｖ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１１を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４７を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｖｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１５を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４３を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｖｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１５を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４４を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｖｉｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１６を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｉｘ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｘ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２０を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｘｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２１を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｘｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２２を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｘｉｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｘｉｖ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２８を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｖ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２９を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；又は
ｘｖｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３０を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。
【請求項４】
当該抗体はキメラ又はヒト化抗体であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体又は免疫学的に活性なフラグメント。
【請求項５】
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＣＤ４７がシグナル制御タンパク質α（SIRPα）と相互作用することを妨げること；又は、
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＣＤ４７発現細胞のマクロファージ媒介食作用を促進すること
を特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体又は免疫学的に活性なフラグメント。
【請求項６】
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＩｇＧ１アイソタイプ、ＩｇＧ２アイソタイプ、ＩｇＧ３アイソタイプ、及びＩｇＧ４アイソタイプからなる群から選択されるＩｇＧアイソタイプであること
を特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体又は免疫学的に活性なフラグメント。
【請求項７】
頭部が側面へ配向するように当該抗体はＣＤ４７に結合し、当該抗体のＶＨ鎖は、ＣＤ４７発現細胞の膜の近くに位置し、そして当該抗体のＶＬ鎖は、ＣＤ４７上のＳＩＲＰα結合部位を塞ぐこと；又は、
当該抗体のＶＬ鎖は、ＣＤ４７発現細胞の膜の近くに位置し、そして当該抗体のＶＨ鎖は、ＣＤ４７上のＳＩＲＰα結合部位を塞ぐこと
を特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体又は免疫学的に活性なフラグメント。
【請求項８】
当該抗体がＣＤ４７上の不連続なエピトープに結合することを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体又は免疫学的に活性なフラグメント。
【請求項９】
単離された抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントであって、当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ヒトＣＤ４７への結合に関して請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体と競合することを特徴とする単離された抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメント。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメント及び担体を含む医薬的な組成物。
【請求項１１】
対象における癌の兆候又は他の腫瘍性状態を緩和するのに使用するための請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントを含む医薬的な組成物。
【請求項１２】
前記緩和が、必要とする対象に、当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントを投与し及び化学療法を行うことにより行われることを特徴とする請求項１１に記載の医薬的な組成物。
【請求項１３】
前記化学療法が放射線療法であることを特徴とする請求項１２に記載の医薬的な組成物。
【請求項１４】
当該対象がヒトであることを特徴とする請求項１１に記載の医薬的な組成物。
【発明の詳細な説明】
【関連する出願】
【０００１】
本出願は、２０１２年２月６日に出願された米国仮出願番号６１／５９５，２１６及び、２０１２年６月１４日に出願された米国仮出願番号６１／６５９，７５２に対する３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（e）の優先権の利益を主張する。これらの出願のそれぞれは、その全てが本願に引用により組み込まれる。
【技術分野】
【０００２】
この発明は、一般的に、ＣＤ４７を認識するモノクローナル抗体に関連し、より特別には、ヒト赤血球の有意の（significant）レベルの赤血球凝集（hemagglutination）を引き起こさないＣＤ４７抗体に関連し、これらの抗体を発生させる方法、及び、これらのモノクローナル抗体を治療として使用する方法に関連する。
【背景技術】
【０００３】
インテグリン関連タンパク質（IAP）、卵巣癌抗原ＯＡ３、Ｒｈ関連抗原及びＭＥＲ６としても知られるＣＤ４７は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する複数回膜貫通レセプター（multi-spanning transmembrane receptor）である。ＣＤ４７の発現及び／又は活性は、多くの疾病及び疾患に関連している。それ故、ＣＤ４７をターゲットにした治療に関する必要性が存在する。
［先行技術文献］
［非特許文献］
［非特許文献１］Chan et al., 2009 Proc Natl Acad Sci USA, 106(33): 14016-21
【０００４】
［発明の概要］
本発明は、ＣＤ４７、特にヒトＣＤ４７を認識し及びこれに結合するモノクローナル抗体を提供する。本発明の抗体は、ＣＤ４７発現、活性及び／又はシグナリングを例えばブロック、阻害、減少、拮抗（ないしアンタゴナイズ、antagonizing）、中和、又はその他干渉するという調節（modulate）することを可能にし、そしてこれらの抗体は、本願において、赤血球（erythrocyte）とも称されるヒト赤血球（human red blood cells）の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさない。しかしながら、本発明の抗体の細胞表面上のＣＤ４７に結合し、及び細胞のクランピング現象（cellular clumping phenomenon）を引き起こさない能力は、赤血球に限定されない。本発明の抗体は、ＣＤ４７陽性細胞のクランピングを促進することがない仕方でＣＤ４７に一意的に（uniquely）結合する。本発明の抗体及びその誘導体は、例えば、ＣＤ４７及びＳＩＲＰα（シグナル制御タンパク質α、signal-regulatory-protein α）の間の相互作用をブロック、阻害、減少、拮抗、中和又はその他干渉するという調節ができ、そしてこれらの抗体は、ヒト赤血球の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさない。本願で提供される抗体は、「ＣＤ４７抗体」として総合的に（collectively）称される。本発明のＣＤ４７抗体はヒト赤血球の赤血球凝集を引き起こす、従来の（existing）ＣＤ４７抗体を超える重要な改良である（例えば、Kikuchi Y, Uno S, Yoshimura Y et al. A bivalent single-chain Fv fragment against CD47 induces apoptosis for leukemic cells. Biochem Biophys Res Commun 2004; 315: 912-8を参照）。例えば、本発明のＣＤ４７抗体は、以下に詳細に記載されるように、従来のＣＤ４７抗体であるＢ６Ｈ１２、ＢＲＣ１２６、及びＣＣ２Ｃ６（これらのそれぞれは、ＳＩＲＰαをブロックするが、ＲＢＣの赤血球凝集を引き起こす）を超える重要な改良である。本願発明の完全（full）ＩｇＧ  ＣＤ４７抗体（例えば、表１に提示されるものを含む２Ａ１及びそのヒト化誘導体）は、有意のレベルで細胞を凝集させない。例えば、本発明のＣＤ４７抗体は、赤血球（RBCs）を赤血球凝集しない。ＳＩＲＰαをブロックし、そして、有意のレベルの凝集を引き起こさない完全ＩｇＧ形式の第一のＣＤ４７抗体が本願に記載される。
【０００５】
本発明のＣＤ４７抗体は、非限定的な例として、有効な抗腫瘍活性と並び、赤血球の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさずに、ＣＤ４７及びそのリガンドであるＳＩＲＰαの間の相互作用を有効にブロックするというような多くの望ましい特徴を示す。例えば、本発明のＣＤ４７抗体は、本願に記載されるＣＤ４７抗体の不在下でのＣＤ４７及びＳＩＲＰαの間の相互作用のレベルと比較して、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９５％、又は、少なくとも９９％ＣＤ４７及びＳＩＲＰαの間の相互作用をブロックする。
【０００６】
本発明のＣＤ４７抗体は、細胞の有意のレベルの凝集を引き起こさず、例えば、本発明のＣＤ４７抗体は、赤血球の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさない。いくつかのケースにおいて、細胞の有意のレベルの凝集は、従来のＣＤ４７抗体の存在下における凝集のレベルを対照とする。１つの側面（ないし視点）において、本発明のＣＤ４７抗体の存在下における凝集のレベルは、従来のＣＤ４７抗体の存在下における凝集のレベルと比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は、少なくとも９９％だけ減少する。いくつかの実施形態において、仮に本発明のＣＤ４７抗体の存在下における凝集のレベルが、従来のＣＤ４７抗体の存在下における凝集のレベルと比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は、少なくとも９９％だけ減少する場合に、本発明のＣＤ４７抗体は有意のレベルの凝集を引き起こさない。他の実施形態において、仮に本発明のＣＤ４７抗体の存在下における凝集のレベルが、ＣＤ４７抗体である１Ｂ４（これは、それぞれＳＥＱ  ＩＤ番号８０及びＳＥＱ  ＩＤ番号８１で提示される可変重鎖及び可変軽鎖配列を含む）の存在下における凝集のレベルと比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は、少なくとも９９％だけ減少する場合に、本発明のＣＤ４７抗体は有意のレベルの凝集を引き起こさない。好ましくは、本発明のＣＤ４７抗体は、１０ｐＭ及び１０μＭの間の抗体濃度、例えば、５０ｐＭ、１００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭ、又は５μＭの抗体濃度で細胞の有意のレベルの凝集を引き起こさない。
【０００７】
本発明の抗体はまた、その技術分野で知られる抗体と比較して、腫瘍モデルにおいて、より有意に有効である。例えば、本発明のＣＤ４７抗体の存在下における、マクロファージの腫瘍細胞を貪食（phagocytose）する能力は、従来のＣＤ４７抗体の存在下でのマクロファージの腫瘍細胞を貪食する能力と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９９％だけ増加する。
【０００８】
当業者は、過度の実験をせずに、例えば、ＲＢＣの赤血球凝集のレベルのような、凝集のレベルを定量することが可能であると認識するだろう。例えば、当業者は、下記の実施例に記載されるように、本発明のＣＤ４７抗体の存在下で赤血球凝集アッセイを行った後に、ＲＢＣドット（dot）の領域を測定することにより、赤血球凝集のレベルが確認されることを認識するだろう。いくつかのケースにおいて、本発明のＣＤ４７抗体の存在下のＲＢＣドットの領域は、ＣＤ４７抗体の不在下、すなわち赤血球凝集がゼロである場合の、ＲＢＣドットの領域と比較される。このようにして、赤血球凝集は、基線対照（baseline control）に対して、定量化される。より大きいＲＢＣドット領域は、赤血球凝集のより高いレベルに対応する。あるいは、ＲＢＣドットの密度測定はまた、赤血球凝集の定量に利用されても良い。
【０００９】
本願に記載されるＣＤ４７抗体は、癌の兆候又は他の腫瘍性状態（neoplastic condition）を治療し、その進行を遅らせ、その再発を防止し、又は緩和するのに有用である。例えば、本願に記載されるＣＤ４７抗体は、血液悪性疾患及び／又は腫瘍、例えば、血液悪性疾患及び／又は腫瘍を治療するのに有用である。例えば、本願に記載されるＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７＋（陽性）腫瘍を治療するのに有用である。非限定的な例として、本願に記載されるＣＤ４７抗体は、非ホジキンスリンパ腫（NHL）、急性リンパ性白血病（ALL）、急性骨髄性白血病（AML）、慢性リンパ球性白血病（CLL）、慢性骨髄性白血病（CML）、多発性骨髄腫（MM）、乳癌、卵巣癌、頭部及び首部の癌、膀胱癌、メラノーマ、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、平滑筋腫、平滑筋肉腫、神経膠腫、グリア芽腫、等の治療に有用である。固形腫瘍は、例えば、乳腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、メラノーマ腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、頭部及び首部腫瘍、膀胱腫瘍、食道腫瘍、肝腫瘍、及び腎腫瘍を含む。
【００１０】
本願に使用される場合、「血液癌（hematological cancer）」は、血液の癌を意味し、白血病、リンパ腫及び骨髄腫などを含む。「白血病」は、感染と戦うことに効果の無いとても多くの白血球が作られ、その結果、血小板及び赤血球のような血液を作り上げる他のパーツを押しのける（crowding out）血液の癌を意味する。白血病のケースは、急性又は慢性とに分類されることが分かっている。白血病のある形態は、非限定的な例として、急性リンパ性白血病（ALL）；急性骨髄性白血病（AML）；慢性リンパ球性白血病（CLL）；慢性骨髄性白血病（CML）；骨髄増殖性疾患／腫瘍（MPDS）；及び骨髄異形成症候群を含む。「リンパ腫」は、ホジキンスリンパ腫、非活動的（indolent）及び活動的（aggressive）非ホジキンスリンパ腫、バーキットリンパ腫（Burkitt’s lymphoma）、及び濾胞性リンパ腫(小細胞及び大細胞)などを意味し得る。骨髄腫は、多発性骨髄腫（MM）、巨細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫、及び軽鎖又はベンス‐ジョーンス骨髄腫（Bence-Jones myeloma）を意味し得る。
【００１１】
例示的な本発明のモノクローナル抗体は、例えば、本願に記載される抗体を含む。例示的な抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５−３０から選択される可変重鎖及び、ＳＥＱ  ＩＤ番号：３１−４７から選択される可変軽鎖を有する抗体を含む。抗体はまた、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５−３０のうち少なくとも１つに規定される配列と同一（identical）である可変重鎖及び、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上、ＳＥＱ  ＩＤ番号：３１−４７のうち少なくとも１つに規定される配列と同一である可変軽鎖を有する抗体を含む。好ましくは、抗体は、ヒトＣＤ４７を認識し及びこれに結合し、そして、ヒト赤血球の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさない。これらの抗体は、本願においてＣＤ４７抗体としてそれぞれ言及される。ＣＤ４７抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体、並びに、ヒト化モノクローナル抗体及びキメラ抗体を含む。これらの抗体は、ヒトＣＤ４７に関する特異性を表し、そして、これらは、赤血球の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさずに、ＣＤ４７発現、活性及び／又はシグナリングを例えば、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はその他干渉するような調節を表している。
【００１２】
本願で提供されるＣＤ４７抗体は、例えば、ＣＤ４７発現を阻害し（例えば、ＣＤ４７の細胞表面発現を阻害する）、ＣＤ４７活性及び／又はシグナリングを阻害することにより、又は、ＣＤ４７及びＳＩＲＰαの間の相互作用と干渉することにより阻害活性を示す。
本願で提供される抗体は、ＣＤ４７（例えば、ヒトＣＤ４７）に結合し又はその他それと相互作用する際に、完全に又は部分的にＣＤ４７発現又は活性を減少させ又はその他調節する。抗体とヒトＣＤ４７ポリペプチド及び／又はペプチドの間の相互作用に際し、ＣＤ４７の生物学的な機能の減少又は調節は完全であり、十分であり、又は部分的である。本願に記載される抗体との相互作用（例えば結合）の不在下でのＣＤ４７発現又は活性のレベルと比較して、少なくとも９５％だけ、例えば、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％だけ、抗体存在下でＣＤ４７発現又は活性のレベルが減少する場合、抗体はＣＤ４７発現又は活性を完全に阻害すると考えられる。本願に記載されるＣＤ４７抗体との結合の不在下でのＣＤ４７発現又は活性のレベルと比較して、少なくとも５０％だけ、例えば、５５％、６０％、７５％、８０％、８５％又は９０％だけＣＤ４７抗体の存在下でのＣＤ４７発現又は活性のレベルが減少する場合、ＣＤ４７抗体はＣＤ４７発現又は活性を十分に阻害すると考えられる。本願に記載される抗体との相互作用（例えば結合）の不在下でのＣＤ４７発現又は活性のレベルと比較して、９５％未満だけ、例えば、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％又は９０％だけ抗体の存在下でのＣＤ４７発現又は活性のレベルが減少する場合、抗体はＣＤ４７発現又は活性を部分的に阻害すると考えられる。
【００１３】
本発明の抗体はまた、ＣＤ４７に特異的に結合するモノクローナル抗体を含み、抗体は有意のレベルの凝集（例えば赤血球の赤血球凝集（「RBCの赤血球凝集」））を引き起こさない。本発明の抗体は、ＣＤ４７陽性細胞のクランピングを促進することがない仕方で一意的にＣＤ４７に結合する。しかしながら、本発明の抗体の細胞表面上のＣＤ４７に結合する能力、及び細胞のクランピング現象（cellular clumping phenomenon）を引き起こさない能力は、赤血球に限定されるものではない。
【００１４】
本発明に係る医薬的な組成物は、本発明の抗体及び担体を含むことができる。これらの医薬的な組成物は、例えば検査キットのようなキットに含まれることができる。
【００１５】
本発明は、ＣＤ４７に結合するモノクローナル抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントを提供し、抗体は投与後の細胞の有意のレベルの凝集を引き起こさない（例えば抗体は投与後に赤血球の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさない）。いくつかの実施形態において、抗体はキメラ、ヒト化、又は完全ヒト［抗体］である。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントは、ＣＤ４７が、ＳＩＲＰαと相互作用するのを妨げる。抗体の存在下におけるＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用のレベルが、抗体との相互作用、例えば抗体との結合、の不在下のＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用のレベルと比較して、少なくとも９５％だけ、例えば、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％だけ減少する場合に、抗体は、ＣＤ４７及びＳＩＲＰαの相互作用を完全に阻害すると考えられる。抗体の存在下におけるＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用のレベルが、抗体との相互作用、例えば抗体との結合、の不在下のＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用のレベルと比較して、９５％未満だけ、例えば、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％又は９０％だけ減少する場合に、抗体は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用を部分的に阻害すると考えられる。
【００１６】
対象における癌を治療し又は防止するのに十分な抗体の量は、例えば、ＣＤ４７シグナリングを減少させるのに十分な量である（例えば、Yamauchi et al., 2013 Blood, Jan 4. [印刷物に先駆けた電子版]; Soto-Pantoja et al., 2013 Expert Opin Ther Targets, 17: 89-103; Irandoust et al., 2013 PLoS One,  電子版 Jan 8; Chao et al., 2012 Curr Opin Immunol, 24 :225-32; Theocharides et al., 2012 J Exp Med, 209(10): 1883-99; Csanyi et al., 2012 Arterioscler Thromb Vasc Biol, 32: 2966-73; Maxhimer et al., 2009 Sci Transl Med, 1: 3ra7; Sarfati et al., 2008 Curr Drug Targets, 9: 842-850; Miyashita et al., 2004 Mol Biol Cell, 15: 3950-3963; E.J. Brown and W.A. Frazier, 2001 Trends Cell Biol, 11: 130-135; Oldenborg et al.,  2001 J Exp Med, 193: 855-862; Blazar et al., 2001 J Exp Med, 194: 541-549; Oldenborg et al., 2000 Science, 288: 2051-2054;及び Gao et al., 1996 J Biol Chem, 271: 21-24を参照）。例えば、対象における癌を治療し又は防止するのに十分な抗体の量は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαシグナリング軸（signaling axis）におけるＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用によって発生するマクロファージにおける食作用阻害シグナル（phagocytic inhibitory signal）を減少させるのに十分な量である、すなわち本発明の抗体は、ＣＤ４７発現細胞のマクロファージ媒介食作用を促進させる。本願で使用される場合、用語「減少させる」は、本発明の抗体の存在下での減少したＣＤ４７シグナリングを意味する。本発明のＣＤ４７抗体の存在下でのＣＤ４７シグナリングのレベルが、ＣＤ４７シグナリングのコントロールレベル（すなわち、抗体の不在下でのＣＤ４７シグナリングのレベル）より、５％、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９９％以上又は１００％低い場合に、ＣＤ４７媒介シグナリングは減少する。非限定的な例として、下流の遺伝子活性の測定、及び／又はＣＤ４７活性に反応するルシフェラーゼレポーターアッセイのような、様々な標準的な技術のうち任意のものを使用してＣＤ４７シグナリングのレベルは測定される。当業者は、ＣＤ４７シグナリングのレベルが、例えば、市販され利用できるキットを含む様々なアッセイを使用して測定され得ることを認識するだろう。
【００１７】
いくつかの実施形態において、抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントは、ＩｇＧアイソタイプである。いくつかの実施形態において、抗体の定常領域は、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ１アイソタイプである。
0006273212.tif 000002
【００１８】
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ１定常領域は、抗体のグリコシル化を妨げるようにアミノ酸Ａｓｎ２９７（四角で囲まれたもの、Ｋａｂａｔナンバリング）において修飾される（modified）（例えば、Ａｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ））。いくつかの実施形態において、抗体の定常領域は、Ｆｃレセプターの相互作用を変化させるようにアミノ酸Ｌｅｕ２３５（Ｋａｂａｔナンバリング）において修飾される（例えば、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）又はＬｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３５Ａ））。いくつかの実施形態において、抗体の定常領域は、Ｆｃレセプターの相互作用を変化させるようにアミノ酸Ｌｅｕ２３４（Ｋａｂａｔナンバリング）において修飾される（例えば、Ｌｅｕ２３４Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ））。いくつかの実施形態において、抗体の定常領域は、アミノ酸２３４及び２３５の両方において変化させられる(例えば、Ｌｅｕ２３４Ａｌａ及びＬｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）（Kabat et al 1991 Sequences of Proteins of Immunological InterestのＥＵインデックス）)。
【００１９】
いくつかの実施形態において、抗体の定常領域は、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ２アイソタイプである。
0006273212.tif 000003
【００２０】
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ２定常領域は、抗体のグリコシル化を妨げるように、アミノ酸Ａｓｎ２９７（四角で囲まれたもの、Ｋａｂａｔナンバリング）において修飾される（例えば、Ａｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ））。
【００２１】
いくつかの実施形態において、抗体の定常領域は、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ３アイソタイプである。
0006273212.tif 000004
【００２２】
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ３定常領域は、抗体のグリコシル化を妨げるようにアミノ酸Ａｓｎ２９７（四角で囲まれたもの、Ｋａｂａｔナンバリング）において修飾される（例えば、Ａｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ））。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ３定常領域は、半減期の延ばすように、アミノ酸４３５において修飾される（例えば、Ａｒｇ４３５Ｈｉｓ（Ｒ４３５Ｈ）（Kabat et al 1991 Sequences of Proteins of Immunological InterestのＥＵインデックス））。
【００２３】
いつかの実施形態において、抗体の定常領域は、以下のアミノ酸配列を有するヒトＩｇＧ４アイソタイプである。
0006273212.tif 000005
【００２４】
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ４定常領域は、鎖交換（strand exchange）を妨げ、又は減少させるようにヒンジ領域内で修飾される（例えば、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ（Ｓ２２８Ｐ））。他の実施形態において、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃレセプター相互作用を変化させるように、アミノ酸２３５において修飾される（例えば、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ））。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ４定常領域は、ヒンジ内で、及びアミノ酸２３５において修飾される（例えば、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ及びＬｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ））。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ４定常領域は、抗体のグリコシル化を妨げるように、アミノ酸Ａｓｎ２９７（Ｋａｂａｔナンバリング）において修飾される（例えば、Ａｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ））（Kabat et al 1991 Sequences of Proteins of Immunological InterestのＥＵインデックス）。
【００２５】
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ定常領域は、ＦｃＲｎ結合を増加させるように修飾される。ＦｃＲｎへの結合を増加させるＦｃ変異体の例は、Ｍｅｔ２５２Ｔｙｒ、Ｓｅｒ２５４Ｔｈｒ、Ｔｈｒ２５６Ｇｌｕ（それぞれＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ）（Ｋａｂａｔナンバリング、Dall’Acqua et al 2006, J. Biol Chem Vol 281(33) 23514-23524）、又はＭｅｔ４２８Ｌｅｕ及びＡｓｎ４３４Ｓｅｒ（Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ）（Zalevsky et al  2010 Nature Biotech, Vol 28(2) 157-159）である。（Kabat et al 1991 Sequences of Proteins of Immunological InterestのＥＵインデックス）。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ定常領域は、抗体依存細胞性細胞毒性（ADCC）及び／又は相補的依存性細胞毒性（CDC）を変化させるように修飾される、例えば、Natsume et al., 2008 Cancer Res, 68(10): 3863-72; Idusogie et al., 2001 J Immunol, 166(4): 2571-5; Moore et al., 2010 mAbs, 2(2): 181-189; Lazar et al., 2006 PNAS, 103(11): 4005-4010, Shields et al., 2001 JBC, 276( 9): 6591-6604; Stavenhagen et al., 2007 Cancer Res, 67(18): 8882-8890; Stavenhagen et al., 2008 Advan. Enzyme Regul., 48: 152-164; Alegre et al, 1992 J Immunol, 148: 3461-3468;に記載され、Kaneko and Niwa, 2011 Biodrugs, 25(1):1-11で論評されるアミノ酸修飾である。
【００２６】
いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ定常領域は、ヘテロ二量化を誘導するように修飾される。例えば、ＣＨ３ドメイン内のＴｈｒ３６６にアミノ酸修飾を有することは、［この部位が］より嵩張った（bulky）アミノ酸（例えば、Ｔｒｙ（Ｔ３６６Ｗ））で置換されている場合、Ｔｈｒ３６６、Ｌｅｕ３６８、及び、Ｔｙｒ４０７の位置で嵩張りがより小さいアミノ酸（例えば、それぞれＳｅｒ、Ａｌａ、及びＶａｌ）へのアミノ酸修飾を有する第二のＣＨ３ドメインと好ましく対になることを可能にする（Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）。ＣＨ３修飾を介するヘテロ二量化は、例えば、反対のＣＨ３ドメイン上のＳｅｒ３５４のＣｙｓへの変更（Ｓ３５４Ｃ）、及びＹ３４９のＣｙｓへの変更（Ｙ３４９Ｃ）によるジスルフィド結合の導入によりさらに安定化されることができる（Carter, 2001 Journal of Immunological Methods, 248: 7-15で論評される）。
【００２７】
本発明はまた、ＣＤ４７に結合する１以上のモノクローナル抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントをふくむ医薬的な組成物であり、抗体が投与後に赤血球の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさないものを提供する。
【００２８】
赤血球凝集（hemagglutination）は、同型の相互作用（homotypic interaction）の例であり、２つのＣＤ４７発現細胞において、二価のＣＤ４７結合物（binding entity）で処置された場合に、凝集又はクランプが引き起こされる。本発明の抗体の、細胞表面上のＣＤ４７に結合する能力、及び細胞クランプ現象を引き起こさない能力は、赤血球に限定されるものではない。本発明の抗体は、ＣＤ４７陽性細胞系（例えば、Daudi細胞）のクランピングを促進することがないようにＣＤ４７に一意的に結合すると観察されている。
【００２９】
いくつかのケースにおいて、抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５−３０から成る群より選択される可変重（VH）鎖領域を含む。抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：３１−４７から成る群より選択される可変軽（VL）鎖領域を任意に含む。いくつかのケースにおいて、抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５−３０から成る群より選択されるＶＨ鎖領域及び、ＳＥＱ  ＩＤ番号：３１−４７から成る群より選択されるＶＬ鎖領域を含む。本発明の抗体はまた、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％以上、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５−３０の内の少なくとも１つに規定される配列と同一である可変重鎖及び、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％以上、ＳＥＱ  ＩＤ番号：３１−４７の内の少なくとも１つに規定される配列と同一である可変軽鎖を有する抗体を含む。他の側面において、抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：３１−３９、４２、４３、４４、及び４７の内の任意の１つで提示されるＶＬ領域と対になるＳＥＱ  ＩＤ番号：５、７、８、１１、１５−１７、２０−２２、及び２７−３０の内の任意の１つで提示されるＶＨ領域を含む。また別の実施形態において、抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：３１、３２、３５、４０、４１、４２、４３、４４及び４７の内の任意の１つで提示されるＶＬ領域と対になるＳＥＱ  ＩＤ番号：５、７、８、１１、１２、１５−１７、２０−２２、及び２７−３０の内の任意の１つで提示されるＶＨ領域を含む。更に別の側面において、抗体は、表１に挙げられる組み合わせから選択されるＶＨ鎖領域及びＶＬ鎖領域の組み合わせを含む。
【００３０】
いくつかの実施形態において、ＣＤ４７抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５０、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５７、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５８、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５９、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６０、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６１、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６２、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６３、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６４、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６５、又はＳＥＱ  ＩＤ番号：６６に規定されるＶＨ相補性決定領域１（CDR１）配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５１、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７２、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７３、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７４、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７５、又はＳＥＱ  ＩＤ番号：７６に規定されるＶＨ  ＣＤＲ２配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５２又は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７７に規定されるＶＨ  ＣＤＲ３配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５３、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６７、又はＳＥＱ  ＩＤ番号：６８に規定されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５４、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６９、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７０、又はＳＥＱ  ＩＤ番号：７１に規定されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及びＳＥＱ  ＩＤ番号：５５に規定されるＶＬ  ＣＤＲ３配列を含む。例えば、抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５０に規定されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５１に規定されるＶＨ  ＣＤＲ２配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５２に規定されるＶＨ  ＣＤＲ３配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５３に規定されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５４に規定されるＶＬ  ＣＤＲ２配列、及び、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５５に規定されるＶＬ  ＣＤＲ３配列を含む。他の実施例において、抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントは、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５０に規定されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７２に規定されるＶＨ  ＣＤＲ２配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５２に規定されるＶＨ  ＣＤＲ３配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５３に規定されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７１に規定されるＶＬ  ＣＤＲ２配列、及び、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５５に規定されるＶＬ  ＣＤＲ３配列を含む。
【００３１】
１つの実施形態において、頭部が側面へ配向するように（in a head to side orientation）本発明の抗体がＣＤ４７に結合し、この配向状態ではＣＤ４７発現細胞の膜の近くに重鎖が位置され、軽鎖がＣＤ４７上のＳＩＲＰα結合部位を塞ぐ。他の実施形態において、頭部が側面へ配向するように本発明の抗体がＣＤ４７に結合し、この配向状態ではＣＤ４７発現細胞の膜の近くに軽鎖が位置され、重鎖がＣＤ４７上のＳＩＲＰα結合部位を塞ぐ。
【００３２】
ＳＥＱ  ＩＤ番号：１４７（すなわち、シグナル配列（アミノ酸１−１８）を除いたＳＥＱ  ＩＤ番号：４８）に従って番号付けされた場合、ＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７の１−１１６のアミノ酸残基の内の任意の１つを含むエピトープに結合する。例えば、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１４７に従って番号付けされた場合、本発明の抗体は、ＣＤ４７のアミノ酸残基Ｑ３１、Ｎ３２、Ｔ３３、Ｔ３４、Ｅ３５、Ｖ３６、Ｙ３７、Ｖ３８、Ｋ３９、Ｗ４０、Ｋ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｇ４４、Ｒ４５、Ｄ４６、Ｉ４７、Ｙ４８、Ｔ４９、Ｆ５０、Ｄ５１、Ｇ５２、Ａ５３、Ｌ５４、Ｎ５５、Ｋ５６、Ｓ５７、Ｔ５８、Ｖ５９、Ｐ６０、Ｔ６１、Ｄ６２、Ｆ６３、Ｓ６４、Ｓ６５、Ａ６６、Ｋ６７、Ｉ６８、Ｅ６９、Ｖ７０、Ｓ７１、Ｑ７２、Ｌ７３、Ｌ７４、Ｋ７５、Ｇ７６、Ｄ７７、Ａ７８、Ｓ７９、Ｌ８０、Ｋ８１、Ｍ８２、Ｄ８３、Ｋ８４、Ｓ８５、Ｄ８６、Ａ８７、Ｖ８８、Ｓ８９、Ｈ９０、Ｔ９１、Ｇ９２、Ｎ９３、Ｙ９４、Ｔ９５、Ｃ９６、Ｅ９７、Ｖ９８、Ｔ９９、Ｅ１００、Ｌ１０１、Ｔ１０２、Ｒ１０３、Ｅ１０４、Ｇ１０５、Ｅ１０６、Ｔ１０７、Ｉ１０８、Ｉ１０９、及びＥ１１０の１つ以上を含むエピトープに結合する。
【００３３】
いくつかのケースにおいて、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１４７に従って番号付けされた場合、本発明の抗体は、ＣＤ４７のアミノ酸残基Ｙ３７、Ｖ３８、Ｋ３９、Ｗ４０、Ｋ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｇ４４、Ｒ４５、Ｄ４６、Ｉ４７、Ｙ４８、Ｔ４９、Ｆ５０、及びＤ５１の内の１つ以上を含む不連続なエピトープに結合する。例えば、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１４７に従って番号付けされた場合、本発明の抗体は、ＣＤ４７のアミノ酸残基Ｙ３７、Ｋ３９、Ｋ４１、Ｋ４３、Ｇ４４、Ｒ４５、Ｄ４６、Ｄ５１、Ｈ９０、Ｎ９３、Ｅ９７、Ｔ９９、Ｅ１０４、又はＥ１０６を含む不連続なエピトープに結合する。例えば、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１４７に従って番号付けされた場合、本発明の抗体は、少なくともＣＤ４７のＫＧＲＤ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：５６）ループ（残基４３−４６）の残基を含む不連続なエピトープに結合する。例えば、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１４７に従って番号付けされた場合、本発明の抗体は、少なくともＣＤ４７のＹ３７、Ｋ３９、Ｋ４１、ＫＧＲＤ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：５６）ループ（残基４３−４６）、Ｄ５１、Ｈ９０、Ｎ９３、Ｅ９７、Ｔ９９、Ｅ１０４、及びＥ１０６の残基を含む不連続なエピトープに結合する。例えば、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１４７に従って番号付けされた場合、本発明の抗体は、ＣＤ４７のＹ３７、Ｋ３９、Ｋ４１、ＫＧＲＤ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：５６）ループ（残基４３−４６）、Ｄ５１、Ｈ９０、Ｎ９３、Ｅ９７、Ｔ９９、Ｅ１０４、及びＥ１０６の残基を含む不連続なエピトープに結合する。
【００３４】
本願に記載されるＣＤ４７抗体のＶＨ領域は、ＣＤ４７のＫＧＲＤ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：５６）ループへの結合に基本的（primarily）に関与する。従って、本発明の抗体が結合する特有の（unique）エピトープは、ＣＤ４７の側面にある。当該技術分野で知られる従来のＣＤ４７抗体とは反対に、膜近傍位置（membrane proximal position）における本願に記載されるＣＤ４７抗体のＶＨドメインの配向（orientation）は、抗体が隣接した細胞上のＣＤ４７分子に橋絡することができないように抗体を拘束（constrain）することにより（例えば赤血球の赤血球凝集のような）細胞クランピングを妨げるこれらの抗体の決定的（critical）な特徴である。加えて、本願に記載されるＣＤ４７抗体のＶＫドメインは、Ｙ３７、Ｔ１０２、及びＥ１０４のような、ＳＩＲＰα結合に関与する、頂点の残基（apical residues）と相互作用するので、ＣＤ４７に結合するＳＩＲＰαを物理的に締め出すのは基本的にＶＫドメインである。
【００３５】
ＣＤ４７がＳＩＲＰαと相互作用するのを妨げるための本願に記載されるＣＤ４７抗体と競合する単離された抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントもまた提供される。
【００３６】
本発明は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１４７に従って番号付けされた場合、ＣＤ４７のアミノ酸残基Ｙ３７、Ｋ３９、Ｋ４１、Ｋ４３、Ｇ４４、Ｒ４５、Ｄ４６、Ｄ５１、Ｈ９０、Ｎ９３、Ｅ９７、Ｔ９９、Ｅ１０４、及びＥ１０６を含むポリペプチドを提供する。ＳＥＱ  ＩＤ番号：１４７に従って番号付けされた場合、ＣＤ４７のアミノ酸残基１−１１６の内の任意の１つを含むポリペプチドもまた提供される。例えば、ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１４７に従って番号付けされた場合、ＣＤ４７のＱ３１、Ｎ３２、Ｔ３３、Ｔ３４、Ｅ３５、Ｖ３６、Ｙ３７、Ｖ３８、Ｋ３９、Ｗ４０、Ｋ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｇ４４、Ｒ４５、Ｄ４６、Ｉ４７、Ｙ４８、Ｔ４９、Ｆ５０、Ｄ５１、Ｇ５２、Ａ５３、Ｌ５４、Ｎ５５、Ｋ５６、Ｓ５７、Ｔ５８、Ｖ５９、Ｐ６０、Ｔ６１、Ｄ６２、Ｆ６３、Ｓ６４、Ｓ６５、Ａ６６、Ｋ６７、Ｉ６８、Ｅ６９、Ｖ７０、Ｓ７１、Ｑ７２、Ｌ７３、Ｌ７４、Ｋ７５、Ｇ７６、Ｄ７７、Ａ７８、Ｓ７９、Ｌ８０、Ｋ８１、Ｍ８２、Ｄ８３、Ｋ８４、Ｓ８５、Ｄ８６、Ａ８７、Ｖ８８、Ｓ８９、Ｈ９０、Ｔ９１、Ｇ９２、Ｎ９３、Ｙ９４、Ｔ９５、Ｃ９６、Ｅ９７、Ｖ９８、Ｔ９９、Ｅ１００、Ｌ１０１、Ｔ１０２、Ｒ１０３、Ｅ１０４、Ｇ１０５、Ｅ１０６、Ｔ１０７、Ｉ１０８、Ｉ１０９、及びＥ１１０の１つ以上のアミノ酸残基を含む。抗原（例えば、ＣＤ４７抗体と結合する抗原）として、このポリペプチドを使用する方法もまた提供される。
【００３７】
本願発明は、投与を必要とする対象に、ＣＤ４７に結合する１つ以上のモノクローナル抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントを投与することにより癌の兆候又は他の腫瘍性状態を緩和する方法を提供し、抗体は、投与後に赤血球の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさない。抗体は、対象における癌の兆候又は他の腫瘍性状態を緩和するのに十分な量で投与される。いくつかの実施形態において、対象はヒトである。いくつかの実施形態において、抗体はキメラ、ヒト化、又は完全ヒト［抗体］である。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントは、ＣＤ４７がＳＩＲＰαと相互作用することを妨げる。いくつかの実施形態において、抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントは、ＩｇＧ１アイソタイプ、ＩｇＧ２アイソタイプ、ＩｇＧ３アイソタイプ、及びＩｇＧ４アイソタイプから成る群より選択されるＩｇＧアイソタイプである。いくつかの実施形態において、抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントは、ＩｇＧ４Ｐ及びＩｇＧ４ＰＥから選択されるＩｇＧアイソタイプである。
【００３８】
いくつかの実施形態において、本願に記載されるＣＤ４７抗体は、１つ以上の追加の薬剤又は追加の薬剤の組み合わせと共に使用される。適切な追加の薬剤は、意図される用途、例えば癌、のための現在の医薬的な及び／又は外科的治療を含む。例えば、ＣＤ４７抗体は、１つ以上の追加の化学療法剤又は抗腫瘍剤と共に使用され得る。代わりに、追加的な化学療法剤は、放射線療法である。いくつかの実施形態において、化学療法剤は、細胞死誘導剤である。いくつかの実施形態において、化学療法剤は、例えば、ホスファチヂルセリン（ＰＳ）の細胞表面露出をもたらす、細胞膜を非対称に横断するリン脂質の喪失を誘導する。いくつかの実施形態において、化学療法剤は、小胞体（ＥＲ）ストレスを誘導する。いくつかの実施形態において、化学療法剤は、プロテアソーム阻害剤である。いくつかの実施形態において、化学療法剤は、細胞表面へのＥＲタンパク質の転移（translocation）を誘導する。いくつかの実施形態において、化学療法剤は、カルレチキュリンの転移及び細胞表面露出を誘導する。
【００３９】
いくつかの実施形態において、ＣＤ４７抗体及び追加的な薬剤は、単一の治療的な組成物に調製され、及びＣＤ４７抗体及び追加的な薬剤は、同時に投与される。あるいは、ＣＤ４７抗体及び追加的な薬剤はお互いに分離され、例えば、そのそれぞれは別個の治療的な組成物に調製され、及び、ＣＤ４７抗体及び追加的な薬剤は同時に投与され、又はＣＤ４７抗体及び追加的な薬剤は、治療レジメンの間の異なった時間に投与される。例えば、ＣＤ４７抗体は追加的な薬剤の投与の前に投与され、ＣＤ４７抗体は追加的な薬剤の投与の後に投与され、又は、ＣＤ４７抗体及び追加的な薬剤は交互の形（alternating fashion）で投与される。本願に記載される場合、ＣＤ４７抗体及び追加的な薬剤は単回投与で又は反復投与で投与される。
【００４０】
当業者は、本発明の抗体が様々な用途を有することを認識するだろう。例えば、本発明の抗体は、療法剤として、診断キットの薬剤として又は診断ツールとして、又は、治療的な試薬を発生させるための競合アッセイ（competition assay）の試薬として使用される。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１Ａ】図１Ａは、フローサイトメトリーによって評価した、ハイブリドーマ上清内の抗体によるＤａｕｄｉ細胞へのＣＤ４７の結合を示すグラフである。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ＥＬＩＳＡによって測定した、ハイブリドーマ上清内のいくつかのＣＤ４７抗体の、組み換えヒトＳＩＲＰαの組み換えヒトＣＤ４７への結合をブロックする能力を示すグラフである。
【００４２】
【図２Ａ】図２Ａは、フローサイトメトリーによって解析した、ラージ（Raji）細胞（バーキットリンパ腫由来のリンパ芽球細胞の培養系統）に対する精製ネズミＣＤ４７抗体の結合を示す一連のグラフである。
【図２Ｂ】図２Ｂは、フローサイトメトリーによって解析したＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞、ＣＤ４７ポジティブなヒトＴ細胞リンパ芽球様細胞系統を示す一連のグラフである。図２Ａ及び２Ｂの実験は、本発明のネズミ抗体の結合と、商業的に入手可能なＣＤ４７抗体、Ｂ６Ｈ１２及び２Ｄ３とを比較する。
【００４３】
【図３Ａ】図３Ａは、組み換えヒトタンパク質を用いたＥＬＩＳＡを使用した、ＣＤ４７抗体のＳＩＲＰα結合をブロックするキャパシティを示す一連のグラフである。
【図３Ｂ】図３Ｂは、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞及び組み換えヒトＳＩＲＰαタンパク質を使用したフローサイトメトリーによる、ＣＤ４７抗体のＳＩＲＰα結合をブロックするキャパシティを示す一連のグラフである。
【００４４】
図４は、ＣＤ４７抗体によるＲＢＣの赤血球凝集を示す一連の写真、グラフ及び表である。ＲＢＣの赤血球凝集はウェル内にぼんやりしたものの出現によって証明され、その一方で非凝集化ＲＢＣはドット状（punctate）として表れる。
【図４Ａ】図４Ａは、テストした全ての濃度において２Ａ１抗体が赤血球凝集を全く引き起こさないことを示す。赤血球凝集インデックスがグラフ中に表される。
【図４Ｂ】図４Ｂは、多くのＣＤ４７抗体の中で２Ａ１が、ＲＢＣ凝集を引き起こさないという点でまれ（レア）であることを示す。ヒトキメラ型バージョンの２Ａ１（２Ａ１−ｘｉ）による凝集活性が欠落していることも示される。
【図４Ｃ】図４Ｃは、ＣＤ４７モノクローナル抗体２Ｄ３（ＳＩＲＰαをブロックしない）が赤血球凝集を引き起こさないことを示す。
【図４Ｄ】図４Ｄは、高濃度範囲のＣＤ４７抗体での赤血球凝集アッセイを示し、プロゾーン効果を実証する。赤血球凝集インデックスがグラフ中に表わされる。
【図４Ｅ】図４Ｅは、ＣＤ４７抗体１Ｂ４による赤血球凝集がより狭い濃度範囲で行われることを示すが、この効果は２Ａ１結合には存在しない。
【図４Ｆ】図４Ｆは、２Ａ１、キメラ型２Ａ１（２Ａ１−ｘｉ）及びヒト化変異体が赤血球凝集を引き起こさないことを示す。ほとんどの実験において、９Ｅ４抗体及び市販のＢ６Ｈ１２抗体を赤血球凝集のポジティブコントロールとして使用した。図４Ａ〜Ｆのアッセイで使用した他の商業的に入手可能な抗体は、ＳＩＲＰαブロッキング抗体、ＢＲＣ１２６及びＣＣ２Ｃ６、及び非ＳＩＲＰαブロッキング抗体２Ｄ３であった。
【００４５】
【図５】図５は、フローサイトメトリーによって評価したカニクイザル（ｃｙｎｏ）Ｂ細胞及びラージに対して結合する２Ａ１及びＢ６Ｈ１２を示すグラフである。２Ａ１は、Ｂ６Ｈ１２のように、ヒト及びｃｙｎｏＣＤ４７に対して同等の親和性で結合するが、Ｂ６Ｈ１２は、ヒト及びｃｙｎｏＣＤ４７の両方に対して２Ａ１に比べてより低い親和性を有した。
【００４６】
【図６】図６は、フローサイトメトリーによって評価した、２Ａ１、２Ａ１−ｘｉ及びＢ６Ｈ１２のラージ細胞に対する結合を示すグラフである。重要なことに、グラフは、重鎖可変領域（ＶＨ）配列及び軽鎖可変領域（ＶＬ）配列が、２Ａ１のキメラ型バージョンに正確に反映（elucidated）されたことを示す。
【００４７】
【図７Ａ】図７Ａは、２Ａ１のヒト化変異体のラージ細胞に対する結合を示す。図７Ａ〜Ｊにおいて、２Ａ１−ｘｉは、ほとんどのグラフの内部コントロールとして使用した。重鎖及び軽鎖の多数の組み合わせを実施例８に記載したようにテストした。
【図７Ｂ】図７Ｂは、２Ａ１のヒト化変異体のラージ細胞に対する結合を示す。
【図７Ｃ】図７Ｃは、２Ａ１のヒト化変異体のラージ細胞に対する結合を示す。
【図７Ｄ】図７Ｄは、２Ａ１のヒト化変異体のラージ細胞に対する結合を示す。
【図７Ｅ】図７Ｅは、２Ａ１のヒト化変異体のラージ細胞に対する結合を示す。
【図７Ｆ】図７Ｆは、２Ａ１のヒト化変異体のラージ細胞に対する結合を示す。
【図７Ｇ】図７Ｇは、２Ａ１のヒト化変異体のラージ細胞に対する結合を示す。
【図７Ｈ】図７Ｈは、２Ａ１のヒト化変異体のラージ細胞に対する結合を示す。
【図７Ｉ】図７Ｉは、２Ａ１のヒト化変異体のラージ細胞に対する結合を示す。
【図７Ｊ】図７Ｊは、２Ａ１のヒト化変異体のラージ細胞に対する結合を示す。
【００４８】
【図８Ａ】図８Ａは、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラムを用いたＡＫＴＡ  ＦＬＰＣを使用した分子篩クロマトグラフィからの追跡のイメージである。ＡＢ６．１２抗体のＩｇＧ１、ＩｇＧ４Ｐ、及びＩｇＧ４ＰＥ変異体が示される。３つの変異体全てが、９７％超でモノマーである。
【図８Ｂ】図８Ｂは、還元状態（Ｒ）及び非還元状態（ＮＲ）の多数の２Ａ１のヒト化変異体をＳＤＳ−ＰＡＧＥして、クーマシーブルー染色したゲルの写真である。
【００４９】
図９は、ヒト単球由来のマクロファージ（ＭＤＭ）によるヒト腫瘍細胞系統の食作用を促進するＣＤ４７抗体の能力を示す一連のグラフである。
【図９Ａ】図９Ａは、食作用インデックスを示すグラフであり、ここで使用した抗体は、市販の抗体Ｂ６Ｈ１２、ネズミ２Ａ１抗体、ヒト化変異体ＡＢ２．０５抗体、及び非ブロッキング性の市販の抗体２Ｄ３である。
【図９Ｂ】図９Ｂは、食作用インデックスを示すグラフであり、ここで使用した抗体は、市販の抗体Ｂ６Ｈ１２、ヒト化抗体ＡＢ２．０５（ヒトＩｇＧ１）、及び、ヒト化抗体ＡＢ６．１２のＩｇＧ１、ＩｇＧ４Ｐ、ＩｇＧ４ＰＥ変異体である。これらの実験においてＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞をＣＤ４７ターゲット細胞系統として使用した。
【００５０】
図１０は、ラージの腫瘍モデルにおけるＣＤ４７抗体の抗腫瘍効果を示す一連のグラフである。
【図１０Ａ】図１０Ａは、ネズミ抗体９Ｅ４、１Ｂ４、２Ａ１、及び市販の抗体Ｂ６Ｈ１２の効果を示すグラフである。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、ネズミ２Ａ１抗体と共に、ヒト化抗体ＡＢ６．１２のＩｇＧ１、ＩｇＧ４Ｐ、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプの効果を示すグラフである。両方のモデルにおいて、１週間あたりに３回、２００μｇずつ抗体でマウスを処置した。
【００５１】
【図１１Ａ】図１１Ａは、ＣＤ４７−ＩｇＶとＳＩＲＰα−ＩｇＶドメインの共結晶複合体（co-crystal complex、タンパク質データバンク（ＰＤＢ）引用番号２ＪＪＳ）のグラフィック表現である。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、ＣＤ４７−ＩｇＶとＳＩＲＰα−ＩｇＶドメインとＢ６Ｈ１２の共結晶複合体のグラフィック表現である。
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、ＣＤ４７−ＩｇＶとＳＩＲＰα−ＩｇＶドメインと２Ａ１の共結晶複合体のグラフィック表現である。２Ａ１及びＢ６Ｈ１２は、ＣＤ４７に対し非常に異なる配向（複数）でかつ別個のエピトープ（複数）で結合し、両者はＳＩＲＰα結合部位と重複する。２Ａ１抗体は頭部が側面へ配向するように（in a head to side orientation）、ＣＤ４７タンパク質に対し結合する。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
［好ましい実施形態］
本発明は以下の好ましい実施形態も有する。
［形態１］
ＣＤ４７に結合する単離されたモノクローナル抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントであって、当該抗体が、投与後に細胞の有意のレベルの凝集を引き起こさないことを特徴とする、ＣＤ４７に結合する単離されたモノクローナル抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメント。
［形態２］
当該抗体はキメラ、ヒト化、又は完全ヒト抗体であることを特徴とする形態１に記載の抗体。
［形態３］
当該ＣＤ４７がヒトのＣＤ４７であることを特徴とする形態１に記載の抗体。
［形態４］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＣＤ４７がシグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰα）と相互作用することを妨げることを特徴とする形態１に記載の抗体。
［形態５］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＣＤ４７発現細胞のマクロファージ媒介食作用を促進することを特徴とする形態４に記載の抗体。
［形態６］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＩｇＧ１アイソタイプ、ＩｇＧ２アイソタイプ、ＩｇＧ３アイソタイプ、及びＩｇＧ４アイソタイプからなる群から選択されるＩｇＧアイソタイプであることを特徴とする形態１に記載の抗体。
［形態７］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５−３０からなる群から選択される可変重（VH）鎖領域を含むことを特徴とする形態１に記載の抗体。
［形態８］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＳＥＱ  ＩＤ番号：３１−４７からなる群から選択される可変軽（VL）鎖領域を含むことを特徴とする形態１に記載の抗体。
［形態９］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５−３０の内の任意の１つで提示されるＶＨ領域及び、ＳＥＱ  ＩＤ番号：３１−４７の内の任意の１つで提示されるＶＬ領域を含むことを特徴とする形態１に記載の抗体。
［形態１０］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＳＥＱ  ＩＤ番号：３１、３２、３５、４０、４１、４２、４３、４４、及び４７の内の任意の１つで提示されるＶＬ領域と対になるＳＥＱ  ＩＤ番号：５、７、８、１１、１２、１５−１７、２０−２２及び２７−３０の内の任意の１つで提示されるＶＨ領域を含むことを特徴とする形態９に記載の抗体。
［形態１１］
当該抗体が、表１に列挙される組み合わせから選択されるＶＨ鎖領域及びＶＬ鎖領域の組み合わせを含むことを特徴とする形態９に記載の抗体。
［形態１２］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５０、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５７、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５８、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５９、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６０、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６１、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６２、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６３、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６４、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６５、又はＳＥＱ  ＩＤ番号：６６に規定されるＶＨ相補性決定領域１（CDR１）配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５１、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７２、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７３、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７４、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７５、又はＳＥＱ  ＩＤ番号：７６に規定されるＶＨ  ＣＤＲ２配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５２又は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７７に規定されるＶＨ  ＣＤＲ３配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５３、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６７、又はＳＥＱ  ＩＤ番号：６８に規定されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５４、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６９、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７０、又はＳＥＱ  ＩＤ番号：７１に規定されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及びＳＥＱ  ＩＤ番号：５５に規定されるＶＬ  ＣＤＲ３配列を含むことを特徴とする形態１に記載の抗体。
［形態１３］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５０に規定されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５１に規定されるＶＨ  ＣＤＲ２配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５２に規定されるＶＨ  ＣＤＲ３配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５３に規定されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５４に規定されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及びＳＥＱ  ＩＤ番号：５５に規定されるＶＬ  ＣＤＲ３配列を含むことを特徴とする形態１２に記載の抗体。
［形態１４］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５０に規定されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７２に規定されるＶＨ  ＣＤＲ２配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５２に規定されるＶＨ  ＣＤＲ３配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５３に規定されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７１に規定されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及びＳＥＱ  ＩＤ番号：５５に規定されるＶＬ  ＣＤＲ３配列を含むことを特徴とする形態１２に記載の抗体。
［形態１５］
頭部が側面へ配向するように当該抗体はＣＤ４７に結合し、当該抗体のＶＨ鎖は、ＣＤ４７発現細胞の膜の近くに位置し、そして当該抗体のＶＬ鎖は、ＣＤ４７上のＳＩＲＰα結合部位を塞ぐことを特徴とする形態１に記載の抗体。
［形態１６］
頭部が側面へ配向するように当該抗体はＣＤ４７に結合し、当該抗体のＶＬ鎖は、ＣＤ４７発現細胞の膜の近くに位置し、そして当該抗体のＶＨ鎖は、ＣＤ４７上のＳＩＲＰα結合部位を塞ぐことを特徴とする形態１に記載の抗体。
［形態１７］
当該抗体がＣＤ４７上の不連続なエピトープに結合することを特徴とする形態１に記載の抗体。
［形態１８］
当該抗体がＳＥＱ  ＩＤ番号：５６を含むＣＤ４７ループに結合することを特徴とする形態１７に記載の抗体。
［形態１９］
ＳＥＱ  ＩＤ番号：１４７に従って番号付けされた場合、当該不連続なエピトープが、ＣＤ４７のアミノ酸残基Ｙ３７、Ｋ３９、Ｋ４１、Ｋ４３、Ｇ４４、Ｒ４５、Ｄ４６、Ｄ５１、Ｈ９０、Ｎ９３、Ｅ９７、Ｔ９９、Ｅ１０４、又はＥ１０６を含むことを特徴とする形態１７に記載の抗体。
［形態２０］
当該抗体が、投与後に、赤血球の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさないことを特徴とする形態１に記載の抗体。
［形態２１］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＩｇＧ４Ｐ及びＩｇＧＰＥから選択されるＩｇＧアイソタイプであることを特徴とする形態１に記載の抗体。
［形態２２］
単離された抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントであって、当該抗体が、ＣＤ４７がＳＩＲＰαと相互作用することを妨げるために形態１から２１の内のいずれかの抗体と競合することを特徴とする単離された抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメント。
［形態２３］
ＳＥＱ  ＩＤ番号：１４７に従って番号付けされた場合、ＣＤ４７のアミノ酸残基Ｙ３７、Ｋ３９、Ｋ４１、Ｋ４３、Ｇ４４、Ｒ４５、Ｄ４６、Ｄ５１、Ｈ９０、Ｎ９３、Ｅ９７、Ｔ９９、Ｅ１０４、及びＥ１０６を含むポリペプチド。
［形態２４］
形態１に記載の抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメント及び担体を含む医薬的な組成物。
［形態２５］
癌の兆候又は他の腫瘍性状態を緩和する方法であって、当該方法は、形態１に記載の抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントを、それが必要な対象に、当該対象において癌の兆候又は他の腫瘍性状態を緩和するのに十分な量で投与することを含む方法。
［形態２６］
当該対象がヒトであることを特徴とする形態２５に記載の方法。
［形態２７］
当該抗体が、キメラ、ヒト化、又は完全ヒト抗体であることを特徴とする形態２５に記載の方法。
［形態２８］
当該ＣＤ４７がヒトのＣＤ４７であることを特徴とする形態２５に記載の方法。
［形態２９］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＣＤ４７がＳＩＲＰαと相互作用することを妨げることを特徴とする形態２５に記載の方法。
［形態３０］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＩｇＧ１アイソタイプ、ＩｇＧ２アイソタイプ、ＩｇＧ３アイソタイプ、及びＩｇＧ４アイソタイプからなる群から選択されるＩｇＧアイソタイプであることを特徴とする形態２５に記載の方法。
［形態３１］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＩｇＧ４Ｐ及びＩｇＧＰＥから選択されるＩｇＧアイソタイプであることを特徴とする形態２５に記載の方法。
［形態３２］
化学療法を行うことを更に含む形態２５に記載の方法。
［形態３３］
前記化学療法が、放射線療法であることを特徴とする形態３２に記載の方法。
また、本発明は以下のさらに好ましい実施形態も有する。
［形態３４］
ＣＤ４７に結合する単離されたモノクローナル抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントであって、当該抗体は、投与後に細胞の有意のレベルの凝集を引き起こさないことを特徴とする、ＣＤ４７に結合する単離されたモノクローナル抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが好ましい。
［形態３５］
当該抗体はキメラ、ヒト化、又は完全ヒト抗体であることを特徴とする抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが好ましい。
［形態３６］
当該ＣＤ４７がヒトのＣＤ４７であることを特徴とする抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが好ましい。
［形態３７］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＣＤ４７がシグナル制御タンパク質α（SIRPα）と相互作用することを妨げること；又は、
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＣＤ４７発現細胞のマクロファージ媒介食作用を促進すること
を特徴とする抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが好ましい。
［形態３８］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＩｇＧ１アイソタイプ、ＩｇＧ２アイソタイプ、ＩｇＧ３アイソタイプ、及びＩｇＧ４アイソタイプからなる群から選択されるＩｇＧアイソタイプであること
を特徴とする抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが好ましい。
［形態３９］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５−３０からなる群から選択される可変重（VH）鎖領域、及び／又は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：３１−４７からなる群から選択される可変軽（VL）鎖領域を含むこと
を特徴とする抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが好ましい。
［形態４０］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＳＥＱ  ＩＤ番号：３１、３２、３５、４０、４１、４２、４３、４４、及び４７の内の任意の１つで提示されるＶＬ領域と対になるＳＥＱ  ＩＤ番号：５、７、８、１１、１２、１５−１７、２０−２２及び２７−３０の内の任意の１つで提示されるＶＨ領域を含む；又は、
当該抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが、表１に列挙される組み合わせから選択されるＶＨ鎖領域及びＶＬ鎖領域の組み合わせを含むこと
を特徴とする抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが好ましい。
［形態４１］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５０、ＳＥＱＩＤ番号：５７、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５８、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５９、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６０、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６１、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６２、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６３、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６４、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６５、又はＳＥＱ  ＩＤ番号：６６に規定されるＶＨ相補性決定領域１（CDR１）配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５１、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７２、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７３、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７４、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７５、又はＳＥＱ  ＩＤ番号：７６に規定されるＶＨ  ＣＤＲ２配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５２又は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７７に規定されるＶＨ  ＣＤＲ３配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５３、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６７、又はＳＥＱ  ＩＤ番号：６８に規定されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５４、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６９、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７０、又はＳＥＱ  ＩＤ番号：７１に規定されるＶＬ  ＣＤＲ２配列、及びＳＥＱ  ＩＤ番号：５５に規定されるＶＬ  ＣＤＲ３配列
を含むことを特徴とする抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが好ましい。
［形態４２］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５０に規定されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５１に規定されるＶＨ  ＣＤＲ２配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５２に規定されるＶＨ  ＣＤＲ３配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５３に規定されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５４に規定されるＶＬ  ＣＤＲ２配列、及びＳＥＱ  ＩＤ番号：５５に規定されるＶＬ  ＣＤＲ３配列
を含むことを特徴とする抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが好ましい。
［形態４３］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５０に規定されるＶＨ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７２に規定されるＶＨ  ＣＤＲ２配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５２に規定されるＶＨ  ＣＤＲ３配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５３に規定されるＶＬ  ＣＤＲ１配列、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７１に規定されるＶＬ  ＣＤＲ２配列及びＳＥＱ  ＩＤ番号：５５に規定されるＶＬ  ＣＤＲ３配列
を含むことを特徴とする抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが好ましい。
［形態４４］
頭部が側面へ配向するように当該抗体はＣＤ４７に結合し、当該抗体のＶＨ鎖は、ＣＤ４７発現細胞の膜の近くに位置し、そして当該抗体のＶＬ鎖は、ＣＤ４７上のＳＩＲＰα結合部位を塞ぐこと；又は、
当該抗体のＶＬ鎖は、ＣＤ４７発現細胞の膜の近くに位置し、そして当該抗体のＶＨ鎖は、ＣＤ４７上のＳＩＲＰα結合部位を塞ぐこと
を特徴とする抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが好ましい。
［形態４５］
当該抗体がＣＤ４７上の不連続なエピトープに結合することを特徴とする抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが好ましい。
［形態４６］
当該抗体がＳＥＱ  ＩＤ番号：５６を含むＣＤ４７ループに結合すること；又は、
ＳＥＱ  ＩＤ番号：１４７に従って番号付けされた場合、当該不連続なエピトープが、ＣＤ４７のアミノ酸残基Ｙ３７、Ｋ３９、Ｋ４１、Ｋ４３、Ｇ４４、Ｒ４５、Ｄ４６、Ｄ５１、Ｈ９０、Ｎ９３、Ｅ９７、Ｔ９９、Ｅ１０４、又はＥ１０６を含むこと
を特徴とする抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが好ましい。
［形態４７］
当該抗体が、投与後に、赤血球の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさないことを特徴とする抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが好ましい。
［形態４８］
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＩｇＧ４Ｐ及びＩｇＧＰＥから選択されるＩｇＧアイソタイプであることを特徴とする抗体又は免疫学的に活性なフラグメントが好ましい。
［形態４９］
単離された抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントであって、当該抗体が、ＣＤ４７がＳＩＲＰαと相互作用することを妨げるために形態に係る抗体と競合することを特徴とする単離された抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが好ましい。
［形態５０］
ＳＥＱ  ＩＤ番号：１４７に従って番号付けされた場合、ＣＤ４７のアミノ酸残基Ｙ３７、Ｋ３９、Ｋ４１、Ｋ４３、Ｇ４４、Ｒ４５、Ｄ４６、Ｄ５１、Ｈ９０、Ｎ９３、Ｅ９７、Ｔ９９、Ｅ１０４、及びＥ１０６を含むポリペプチドが好ましい。
［形態５１］
形態に係る抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメント及び担体を含む医薬的な組成物が好ましい。
［形態５２］
癌の兆候又は他の腫瘍性状態を緩和するのに使用するための形態に係る抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントを含む医薬的な組成物が好ましい。
［形態５３］
前記緩和が、必要とする対象に、当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントを投与し及び化学療法を行うことにより行われることを特徴とする医薬的な組成物が好ましい。
［形態５４］
前記化学療法が放射線療法であることを特徴とする医薬的な組成物が好ましい。
本発明は、ヒトＣＤ４７を含むＣＤ４７に特異的に結合するモノクローナル抗体を提供する。これらの抗体は、本願においてＣＤ４７抗体と集合的に称される。
【００５３】
免疫グロブリンスーパーファミリーに属する複数回膜貫通レセプターであるＣＤ４７は、マクロファージのＳＩＲＰα（シグナル制御タンパク質α）と相互作用し、その結果食作用を抑制する。この経路を取り入れた（co-opt）癌細胞は、食作用を回避する。以下に詳細に記載するように、これは、腫瘍免疫回避の新しいメカニズムであり、そして、治療的にＣＤ４７をターゲットにすることは、多くの癌において、広範囲な応用を有する。
【００５４】
ＣＤ４７の発現は、非ホジキンスリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、卵巣癌、神経膠腫、グリア芽腫などを含む多くの異なった悪性腫瘍において、悪い臨床結果と関連する。加えて、ＣＤ４７は、白血病、固形腫瘍の両方において、癌幹細胞マーカーとして同定されている（Jaiswal et al., 2009 Cell, 138(2): 271-85; Chan et al., 2009 Proc Natl Acad Sci USA, 106(33): 14016-21; Chan et al., 2010 Curr Opin Urol, 20(5): 393-7; Majeti R et al., 2011 Oncogene, 30(9): 1009-19）。
【００５５】
ＣＤ４７をブロックする抗体は、多重インビボ腫瘍モデルにおいて、抗腫瘍活性を示している。更には、これらの抗体は、腫瘍モデルにおいてリツキサン（登録商標）及びハーセプチン（登録商標）を含む他の治療的な抗体と相乗作用をすることが示されている。ＣＤ４７のＳＩＲＰαとの相互作用をブロックすることは、マクロファージによるＣＤ４７発現細胞の食作用を促進させることができる（Chao et al., 2012 Curr Opin Immunol, 24(2): 225-32に総説される）。ＣＤ４７を欠損しているマウスは放射線療法に著しく耐性であり、放射線療法と組み合わせてＣＤ４７をターゲットとする役割（role）を示唆する（Isenberg et al., 2008 Am J Pathol, 173(4): 1100-1112; Maxhimer et al., 2009 Sci Transl Med, 1(3): 3ra7）。更には、これらマウスにおける同系の腫瘍モデルは、野生型マウスと比較して減少した骨への転移を示す（Uluckan et al., 2009 Cancer Res, 69(7): 3196-204）。
【００５６】
多くのＣＤ４７抗体は、ヒト赤血球の赤血球凝集を引き起こすことが報告されていることは重要である。赤血球凝集は、同型の相互作用（homotypic interaction）の例であり、２つのＣＤ４７発現細胞が、二価のＣＤ４７結合体（binding entity）で処置された場合に、凝集又はクランプをもたらす。例えば、完全ＩｇＧ又はＦ（ａｂ‘）２としてのＣＤ４７抗体、ＭＡＢＬは、赤血球の赤血球凝集を引き起こすことが報告されており、そして、ＭＡＢＬがｓｃＦｖまたは二価のｓｃＦｖに変換された場合にのみ、この効果は軽減した。（例えば、Uno S, Kinoshita Y, Azuma Y et al. Antitumor activity of a monoclonal antibody against CD47 in xenograft models of human leukemia. Oncol Rep 2007; 17: 1189-94; Kikuchi Y, Uno S, Yoshimura Y et al. A bivalent single-chain Fv fragment against CD47 induces apoptosis for leukemic cells. Biochem Biophys Res Commun 2004; 315: 912-8を参照。）Ｂ６Ｈ１２、ＢＲＣ１２６、及びＣＣ２Ｃ６を含む他の既知のＣＤ４７抗体もまた、以下に詳細に記載するように、ＲＢＣの赤血球凝集を引き起こす。従って、細胞の凝集は、従来の完全ＩｇＧ抗体でＣＤ４７を治療的にターゲットとすることの主要な制限を表す。
【００５７】
更には、ＣＤ４７抗体の重要な特徴は、マクロファージによるＣＤ４７発現細胞の食作用を促進するためＣＤ４７及びＳＩＲＰαの相互作用をブロックする能力である。多くの従来のＣＤ４７抗体はＳＩＲＰαをブロックする；しかしながら、本願に記載される発明前は、ＳＩＲＰαをブロックした従来の抗体は、上記のように、望まれない赤血球凝集の副作用を引き起こした。２Ｄ３のような他の従来の抗体は、赤血球凝集を引き起こさず；しかしながら、これらの抗体はまた、ＳＩＲＰαをブロックせず、それらは食作用の促進に関して無効である。従って、本願に記載される発明前は、細胞クランプを引き起こさないでＳＩＲＰαをブロックしたＣＤ４７抗体を特定することが差し迫って必要とされていた。
【００５８】
本発明のＣＤ４７抗体は、赤血球凝集という望まれない効果を回避し、その結果、ＣＤ４７を治療的にターゲットとする有効性を増加させ、かつ、ＣＤ４７のＳＩＲＰαとの相互作用をブロックする能力を維持し、その結果、ＣＤ４７発現細胞の食作用を促進させる。特に、本発明の完全ＩｇＧ  ＣＤ４７抗体（例えば、表１で提示されるものを含む２Ａ１及びそのヒト化誘導体）は有意（significant）のレベルで細胞を凝集させない。例えば、本発明のＣＤ４７抗体は、有意のレベルでＲＢＣを赤血球凝集させない。本願に記載されるものは、ＳＩＲＰαをブロックする完全ＩｇＧ形式での初めてのＣＤ４７抗体であり、有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさないものである。まとめると、本発明の抗体（例えば、２Ａ１抗体及びそのヒト化誘導体）は、ＳＩＲＰαをブロックする能力に関して従来のＣＤ４７抗体の間ではユニーク（unique）であり、有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさない。
【００５９】
本発明のＣＤ４７抗体は、非限定的な例として、赤血球の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさずに又はその他赤血球の赤血球凝集を調節する（modulate）こと無しに、ＣＤ４７とそのリガンドであるＳＩＲＰαの間の相互作用の有効な（potent）ブロック並びに有効な抗腫瘍活性というような多数の望まれる特徴を示す。例えば、本発明のＣＤ４７抗体は、本願に記載されるＣＤ４７抗体の不在下におけるＣＤ４７とＳＩＲＰαの間の相互作用のレベルと比較して、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％のＣＤ４７とＳＩＲＰαの間の相互作用をブロックする。本発明のＣＤ４７抗体は、有意のレベルの細胞の凝集を引き起こさない、例えば、本発明のＣＤ４７抗体は、赤血球の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさない。例えば、本発明のＣＤ４７抗体の存在下での凝集のレベルは、従来のＣＤ４７抗体の存在下における凝集のレベルと比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は少なくとも９９％だけ減少する。いくつかの実施形態において、仮に本発明のＣＤ４７抗体の存在下における凝集のレベルが、ＣＤ４７抗体である１Ｂ４（ＳＥＱ  ＩＤ番号８０及びＳＥＱ  ＩＤ番号８１のそれぞれにおいて提示される可変重鎖及び可変軽鎖配列を含む）存在下における凝集のレベルと比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は、少なくとも９９％だけ減少する場合に、本願発明のＣＤ４７抗体は、有意のレベルの凝集を引き起こさない。本発明の抗体はまた、その技術分野で知られる抗体と比較して、腫瘍モデルにおいて著しくより有効である。例えば、本発明のＣＤ４７抗体の存在下において、腫瘍細胞を貪食するマクロファージの能力は、従来のＣＤ４７抗体の存在下での腫瘍細胞を貪食するマクロファージの能力と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、又は少なくとも９９％だけ増加する。
【００６０】
当業者は、過度の実験をせずに、例えば、ＲＢＣの赤血球凝集のレベルのような、凝集のレベルを定量することが可能であると認識するだろう。例えば、当業者は、下記の実施例に記載されるように、本発明のＣＤ４７抗体の存在下で赤血球凝集アッセイを行った後に、ＲＢＣドットの領域を測定することにより、赤血球凝集のレベルが確認されることを認識するだろう。いくつかのケースにおいて、本発明のＣＤ４７抗体の存在下でのＲＢＣドットの領域は、ＣＤ４７抗体の不在下、すなわち赤血球凝集がゼロである場合の、ＲＢＣドットの領域と比較される。このように、赤血球凝集は、基線対照に対して、定量化される。より大きいＲＢＣドット領域は、赤血球凝集のより高いレベルに対応する。あるいは、ＲＢＣドットの密度測定はまた、赤血球凝集の定量に利用することができる。
【００６１】
本発明のＣＤ４７抗体は、ヒトＣＤ４７に結合し、そしてそれのＳＩＲＰαとの相互作用をブロックする（図１Ｂ、３、及び７Ｊ）。これらの抗体は、ヒト赤血球の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさない（図４）。これらの抗体は、マクロファージによる腫瘍細胞の食作用を促進することができる（図９）。更には、ＣＤ４７抗体は、ヒトリンパ腫のマウスモデルにおいて、有効な抗腫瘍活性を表す（図１０）。従って、本発明のＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７を治療的にターゲットとすることに関する主要な制限要因を回避する。その結果、本発明のＣＤ４７抗体は、多数種の癌の治療において、非常に重要な位置にある。
【００６２】
ヒトＣＤ４７に特異的に結合する本発明の抗体は、赤血球の有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさず、又は赤血球の赤血球凝集をその他に調節することなく、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαの間の相互作用をブロック、阻害、破壊、又はその他調節する。
【００６３】
本発明の抗体は、１μＭ以下（１μＭ≧）、例えば、１００ｎＭ以下（１００ｎＭ≧）、好ましくは、１０ｎＭ以下（１０ｎＭ≧）、及びさらに好ましくは１ｎＭ以下（１ｎＭ≧）の平衡結合定数（Ｋｄ）でＣＤ４７エピトープに結合する。例えば、本願で提供されるＣＤ４７抗体は、およそ、１ｎＭ以下（１ｎＭ≧）から約１ｐＭの間の範囲のＫｄを表す。
【００６４】
本発明のＣＤ４７抗体は、広く分布するＣＤ４７の機能的な活性を調節、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はその他干渉するのに役立つ。ＣＤ４７の機能的な活性は、例えば、ＳＩＲＰαとの相互作用を介するシグナリング、細胞外マトリクスへの細胞接着の際の細胞内カルシウム濃度を調節（例えば増加）すること、トロンボスポンジン（thrombospondin）のＣ末端細胞結合ドメインと相互作用すること、フィブリノーゲンと相互作用すること、及び様々なインテグリンと相互作用することを含む。例えば、ＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７のＳＩＲＰαへの結合を部分的に又は完全に調節、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はその他干渉することにより、ＣＤ４７の機能的な活性を完全に又は部分的に阻害する。
【００６５】
ＣＤ４７抗体の存在下でのＣＤ４７の機能的な活性のレベルが、本願に記載されるＣＤ４７抗体との結合の不在下でのＣＤ４７の機能的な活性のレベルと比較して、少なくとも９５％だけ、例えば、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％だけ減少する場合、ＣＤ４７抗体はＣＤ４７の機能的な活性を完全に調節、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はその他干渉すると考えられる。ＣＤ４７抗体の存在下でのＣＤ４７活性のレベルが、本願に記載されるＣＤ４７抗体との結合の不在下でのＣＤ４７活性のレベルと比較して、少なくとも５０％だけ、例えば、５５％、６０％、７５％、８０％、８５％又は９０％だけ減少する場合、ＣＤ４７抗体はＣＤ４７の機能的な活性を十分にブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はその他干渉すると考えられる。ＣＤ４７抗体の存在下でのＣＤ４７活性のレベルが、本願に記載されるＣＤ４７抗体との結合の不在下でのＣＤ４７活性のレベルと比較して、９５％未満だけ、例えば、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％又は９０％だけ減少する場合に、ＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７の機能的な活性を部分的に調節、ブロック、阻害、減少、拮抗、中和、又はその他干渉すると考えられる。
【００６６】
[定義]
格別に定義されない限り、本発明に関連して使用される科学的及び技術的な用語は、当業者により一般的に理解される意味を有するべきである。更には、格別に文脈により要求されない限り、単数の用語は複数の場合を含むものとし、そして複数の用語は単数の場合を含むものとする。一般的に、本願に記載される細胞及び組織培養、分子生物学及び、タンパク質及びオリゴ又はポリヌクレオチド化学及び、ハイブリダイゼーションと関連して利用される用語（ないし命名法、nomenclatures）、及びそれらの技術は、その技術分野で良く知られ、そして一般的に使用される。標準的な技術は、組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、及び組織培養及び形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）に関して使用される。酵素学的な反応及び精製技術は、製造者の仕様書に従って行われ、又はその技術分野で一般的に行われるように、又は本願に記載されるように行われる。前述の技術及び手順は、その技術分野で良く知られる従来の方法に従って一般的に行われ、そして、本明細書を通して引用されそして議論される、様々な一般的なそしてより専門的な参考文献に記載されるように行われる。例えば、Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第二版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989))を参照する。本願に記載される分析化学、有機合成化学、並びに医薬の及び医薬的な化学に関連して利用される用語（ないし命名法）、及びそれらの研究室手順と技術は、その技術分野で良く知られ、及び一般的に使用されるものである。標準的な技術は、化学的な合成、化学的なアッセイ、医薬的な調製、製剤化、及び輸送、及び患者の治療に関して使用される。
【００６７】
本開示に従って利用される場合、次の用語は、格別に指示されない限り、以下の意味を有すると理解されるべきである。
【００６８】
本願で使用される場合、用語ＣＤ４７、インテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）、卵巣癌抗原ＯＡ３、Ｒｈ関連抗原及びＭＥＲ６は、同義的であり、そして、区別しないで用いられて良い。
【００６９】
用語赤血球（red blood cell）（1又は複数）及び、赤血球（erythrocyte）（１又は複数）は同義的であり、本願において、区別しないで用いられる。
【００７０】
用語凝集（agglutination）は、細胞クランピングを意味するが、用語赤血球凝集（hemagglutination）は、細胞の特別なサブセット（すなわち、赤血球）のクランピングを意味する。従って、赤血球凝集は、凝集の１つのタイプである。
【００７１】
本願で使用される場合、用語「抗体」は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫学的に活性な部分を意味し、すなわち、抗原に特異的に結合する（［抗原と］免疫反応する）抗原結合部位を含む分子である。「特異的に結合する」又は「と免疫反応する」、又は「に向けられる」により、抗体が、所望の抗原の１つ以上の抗原決定基と反応し、そして他のポリペプチドと反応しないか又はかなり低い親和性（Ｋｄ＞１０−６）で結合することが意味される。抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ｄＡｂ（ドメイン抗体）、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ‘及びＦ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びＦａｂ発現ライブラリを含み、これらに限定されない。
【００７２】
基本的な抗体構造ユニットは、四量体を含むことが知られている。各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの相同対（identical pair）から成り、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの「重」鎖（約５０−７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識に基本的に関与する（primarily responsible）約１００から１１０以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に基本的に関与する定常領域を規定する。一般的に、ヒトから得られる抗体分子は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ及びＩｇＤのクラスのいずれかに関連し、分子に存在する重鎖の性質(nature)によりお互いに異なる。あるクラスは、同様に、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２などのサブクラスを有する。更には、ヒトにおいて、軽鎖は、カッパ鎖又はラムダ鎖であって良い。
【００７３】
本願で用いられる場合、用語「モノクローナル抗体」（ＭＡｂ）又は「モノクローナル抗体組成物」は、特有の軽鎖遺伝子産物及び特有の重鎖遺伝子産物からなる抗体分子のただ１つの分子種（molecular species）を含む抗体分子の集団を意味する。特に、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）は、集団の全ての分子において同一である。ＭＡｂは、抗原の特別なエピトープに対する特有の結合親和性によって特徴付けられる、抗原の特別なエピトープとの免疫反応が可能である抗原結合部位を含む。
【００７４】
一般的に、ヒトから得られる抗体分子は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ及びＩｇＤのクラスのいずれかに関連し、分子に存在する重鎖の性質によりお互いに異なる。あるクラスは、同様に、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２などのサブクラスを有する。更には、ヒトにおいて、軽鎖は、カッパ鎖又はラムダ鎖であって良い。
【００７５】
用語「抗原結合部位」又は「結合部分」は、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の一部分を意味する。抗原結合部位は、重（「Ｈ」）鎖及び軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基により形成される。重鎖及び軽鎖のＶ領域内の高度に多肢的（divergent）な３つのストレッチ（stretch）は、「超可変領域」と称され、「フレームワーク領域（framework regions）」又は「ＦＲｓ」として知られる、より保存された近傍ストレッチの間に置かれる。従って、用語「ＦＲ」は、免疫グロブリンにおける超可変領域の間に自然（naturally）に見出され、及びそれらに隣接するアミノ酸配列を意味する。抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域及び重鎖の３つの超可変領域は、３次元空間においてお互いに関連して配置され、抗原結合表面を形成する。抗原に結合する（antigen-binding）表面は、被結合（bound）抗原の３次元表面に相補的であり、そして重鎖及び軽鎖のそれぞれの３つの超可変領域は「相補性決定領域」又は「ＣＤＲｓ」と称される。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、免疫学的に重要なタンパク質のＫａｂａｔ配列の定義に従う（National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987及び1991)）、又はChothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)、Chothia et al. Nature 342:878-883 (1989)。
【００７６】
本願で使用される場合、用語「エピトープ」は、免疫グロブリン又はそのフラグメント、又はＴ細胞レセプターに特異的に結合できる任意のタンパク質決定基（protein determinant）を含む。用語「エピトープ」は、免疫グロブリン又はＴ細胞レセプターに特異的に結合することができる任意のタンパク質決定基を含む。エピトープの決定基は通常、アミノ酸又は糖側鎖のような分子の化学的に活性な表面グルーピング（chemically active surface groupings）からなり、そして通常、特異的な電荷特性だけでなく、特異的な３次元構造特性を有する。かい離定数が１μＭ以下（１μＭ≧）、例えば、１００ｎＭ以下（１００ｎＭ≧）、好ましくは１０ｎＭ以下（１０ｎＭ≧）及びより好ましくは１ｎＭ以下（１ｎＭ≧）である場合に、抗体は抗原に特異的に結合すると言われる。
【００７７】
本願で使用される場合、用語「免疫学的な結合」及び「免疫学的な結合特性」は、免疫グロブリン分子と、免疫グロブリンが特異的である抗原の間に生じるタイプの非共有的な相互作用を意味する。免疫学的な結合相互作用の強度ないし親和性は、相互作用のかい離定数（Ｋｄ）によって表現され得、より小さいＫｄは、より大きな親和性を表す。選択されるポリペプチドの免疫学的な結合特性は、その技術分野で良く知られる方法を使用して定量され得る。そのような方法の１つは、抗原結合部位／抗原複合体形成及びかい離の速度（ないし比率、rate）を測定する必要があり、これら速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、及び、双方向への速度に等しく影響する幾何学的なパラメータに依存する。従って、「オンの速度定数」（ｋｏｎ）及び「オフの速度定数」（ｋｏｆｆ）の両方は、結合（ないし会合、association）及びかい離の濃度及び現実の速度の計算により決定することができる。（Nature 361:186-87 (1993)参照）。ｋｏｆｆ／ｋｏｎの割合は、親和性に関係しない全てのパラメータの除外（cancellation）を可能にし、そしてかい離定数Ｋｄに等しい。（一般的に、Davies et al. (1990) Annual Rev Biochem 59:439-473を参照）。放射性リガンド結合アッセイ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、フローサイトメトリー結合アッセイ、又は当業者に知られる類似のアッセイのようなアッセイにより測定された場合、平衡結合定数（Ｋｄ）が、１μＭ以下（１μＭ≧）であり、好ましくは、１００ｎＭ以下（１００ｎＭ≧）であり、さらに好ましくは１０ｎＭ以下（１０ｎＭ≧）であり、もっとも好ましくは１００ｐＭ以下（１００ｐＭ≧）から約１ｐＭである場合に、本発明の抗体は、ＣＤ４７に特異的に結合すると言われる。
【００７８】
本願で使用される場合、用語「単離されたポリヌクレオチド」は、ゲノム、ｃＤＮＡ、又は合成起点又はいくつかのそれらの組み合わせのポリヌクレオチドを意味するべきであり、その起源に由来して、「単離されたポリヌクレオチド」は、（１）天然において「単離されたポリヌクレオチド」が見出されるポリヌクレオチドの全て又は部分と結合（associated）せず、（２）天然においてそれと連結（link）しないポリヌクレオチドに機能可能に（operably）連結し、又は、（３）より長い配列の部分として天然において生じない。
【００７９】
用語「単離されたタンパク質」は、本願においては、ｃＤＮＡ、組み換えＲＮＡ、又は合成起点又はいくつかのそれらの組み合わせのタンパク質を意味し、その起源（origin）に由来して又は、由来（derivation）のソースにより、「単離されたタンパク質」は、（１）天然に見られるタンパク質と結合しない、（２）同一のソースからの他のタンパク質を含んでいない（例えば、海洋タンパク質を含んでいない）、（３）異なる種からの細胞により発現される、又は、（４）天然に生じない。
【００８０】
用語「ポリペプチド」は、天然のタンパク質フラグメント、又はポリペプチド配列のアナログを意味するように属を示す（generic）用語として本願で使用される。従って、天然のタンパク質フラグメント、及びアナログは、ポリペプチド属（polypeptide genus）の種（species）である。
【００８１】
本願で使用され、対象に適用される場合、用語「天然に生じる」は、対象が天然に見出され得るという現実を意味する。例えば、天然のソースから単離され得る生命体（ウイルスを含む）に存在し、そして研究室で又は格別にヒトにより意図的に修飾（modify）されるポリペプチド又はポリヌクレオチド配列は、天然に生じるものである。
【００８２】
本願に用いられる場合、用語「機能可能に（operably）連結する」は、意図される仕方で組成物が機能できるような関係でのそのように記載される組成物の位置を意味する。「機能可能に」コーディング配列に［連結する］制御配列は、制御配列と適合する（compatible with）条件下でコーディング配列の発現が達成されるように結合される。
【００８３】
本願で使用される場合、用語「制御配列（control sequence）」は、それらが結合される、コーディング配列の発現及びプロセシングをもたらすのに必要であるポリヌクレオチド配列を意味する。その様な制御配列の特質は、原核生物の宿主生命体に依存して異なり、その様な制御配列は、一般的にプロモータ、リボソーム結合部位及び真核生物の転写終結配列を含み、一般的に、その様な制御配列は、プロモータ、及び転写終結配列を含む。用語「制御配列」は、少なくとも、その存在が発現及びプロセシングに必須である全ての要素を含むことを意図し、そしてまた、その存在が有利である追加の要素、例えば、リーダー配列及び融合パートナー配列(fusion partner sequence)を含むことができる。用語「ポリヌクレオチド」は、本願で言及される場合、少なくとも１０塩基長のヌクレオチドの重合ホウ素（polymeric boron）、リボヌクレオチド又はデオキシヌクレオチドのいずれか、又は、ヌクレオチドのどちらかのタイプの修飾された形態を意味する。この用語は、ＤＮＡの一本鎖及び二本鎖の形態を含む。
【００８４】
用語「オリゴヌクレオチド」は、本願において、天然に生じるヌクレオチド及び、天然に生じ及び非天然に生じるオリゴヌクレオチド連結によってお互いに連結される、修飾されたヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、一般的に２００塩基以下の長さを含むポリヌクレオチドサブセットである。好ましくは、オリゴヌクレオチドは、長さ１０から６０塩基であり、もっとも好ましくは、長さ１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０から４０塩基である。オリゴヌクレオチドは、多くの場合、例えばプローブでは一本鎖であるが、例えば、遺伝子変異体の構築における使用では、オリゴヌクレオチドは二本鎖であってよい。本発明のオリゴヌクレオチドは、センス又はアンチセンスのどちらかのオリゴヌクレオチドである。
【００８５】
本願で言及される用語「天然に生じるヌクレオチド」は、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドを含む。本願で言及される用語「修飾されたヌクレオチド」は、修飾された又は置換された糖類などを有するヌクレオチド含む。本願において言及される用語「オリゴヌクレオチド連結」は、フォスフォロチオアート、フォスフォロジチオアート、フォスフォロセレロアート（phosphoroselerloate）、フォスフォロジセレノアート（phosphorodiselenoate）、フォスフォロアニロチオアート（phosphoroanilothioate）、フォスホラニラダート（phoshoraniladate）、フォスフォロニミダート（phosphoronmidate）等のようなオリゴヌクレオチド連結を含む。例えば、LaPlanche et al. Nucl. Acids Res. 14:9081 (1986); Stec et al. J. Am. Chem. Soc. 106:6077 (1984), Stein et al. Nucl. Acids Res. 16:3209 (1988), Zon et al. Anti Cancer Drug Design 6:539 (1991); Zon et al. Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed., Oxford University Press, Oxford England (1991)); Stec et al. 米国特許番号 5,151,510; Uhlmann and Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990)を参照する。オリゴヌクレオチドは、所望すれば検出のためのラベルを含むことができる。
【００８６】
本願において言及される用語「選択的にハイブリダイズする（selectively hybridize）」は、検出可能にかつ特異的に結合することを意味する。本発明に関連するポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド及びそれらのフラグメントは、ハイブリダイゼーション及び、非特異的な核酸への検出可能な結合のかなりの量を最小化する洗浄条件下で核酸鎖に選択的にハイブリダイズする。高ストリンジェンシーな条件（high stringency conditions）は、その技術分野において知られ、そして本願で検討されるような選択的ハイブリダイゼーション条件を達成するために使用され得る。一般的に、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、及び本発明のフラグメント及び目的の核酸配列の間の核酸配列ホモロジーは、少なくとも８０％であろうし、より典型的には、少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％、及び１００％の好ましく増加したホモロジーを有するだろう。２つのアミノ酸配列は、それらの配列の間で部分的な又は完全な一致がある場合に、相同（homologous）である。例えば、８５％のホモロジーは、２つの配列が最大のマッチング（matching）で整列した場合に８５％のアミノ酸が同一であることを意味する。（マッチしている２つの配列のどちらかにおける）ギャップは、５以下のマッチングギャップ（matching gap）長を最小とするようになるのが好ましく、２以下にすることがより好ましい。２つのタンパク質配列（又は、少なくとも３０アミノ酸の長さのそれら由来のポリペプチド配列）が、変異体データマトリクス及び６以上のギャップペナルティを使用するＡＬＩＧＮプログラムを使用して、（標準偏差ユニットにおいて）５より大きい整列スコアを有している場合、代わりに及び好ましくは、この用語が本願で使用される場合においては、２つのタンパク質配列（又は、少なくとも３０アミノ酸の長さのそれら由来のポリペプチド配列）は相同である。Dayhoff, M.O., in Atlas of Protein Sequence and Structure, pp. 101-110 (５巻, National Biomedical Research Foundation (1972)) 及びこの巻の追補２、ｐｐ. １−１０を参照する。ＡＬＩＧＮプログラムを使用して最適に整列させたとき、それらのアミノ酸が５０％以上同一である場合に、２つの配列又はその部分はより好ましく相同である。用語「に対応する（ないしに相当する、corresponds to）」は、本願において、ポリヌクレオチド配列が参照ポリヌクレオチド配列の全て又は一部分に相同（すなわち、同一であり、厳密に進化的に関連しない）であるという意味で使用され、又は、ポリペプチド配列が参照ポリペプチド配列と同一であるという意味で使用される。対照的に、用語「と相補的である」は、本願において、相補的な配列が、参照ポリヌクレオチド配列の全て又は一部分に相同であるという意味で使用される。例示のために、ヌクレオチド配列「ＴＡＴＡＣ」は、参照配列「ＴＡＴＡＣ」と対応し、そして、参照配列「ＧＴＡＴＡ」と相補的である。
【００８７】
次の用語は、２つ以上のポリヌクレオチド又はアミノ酸配列の間の配列関連性を記載するのに用いられる：「参照配列」、「比較ウィンドウ（comparison window）」、「配列同一性」、「配列同一性のパーセンテージ」、及び「実質的な同一性」。「参照配列」は、配列比較のための基礎として用いられる定義された配列であり、参照配列は、例えば、全長の（full-length）ｃＤＮＡのセグメント又は、配列リストにある遺伝子配列のセグメントのようなより大きな配列のサブセットであり得又は、完全なｃＤＮＡ又は遺伝子配列を含むことができる。一般的に、参照配列は、少なくとも１８ヌクレオチド又は６アミノ酸の長さであり、しばしば、少なくとも２４ヌクレオチド又は８アミノ酸の長さであり、そして多くの場合、少なくとも４８ヌクレオチド又は１６アミノ酸の長さである。２つのポリヌクレオチド又はアミノ酸配列は、それぞれ、（１）２つの分子の間で類似である配列（すなわち、完全なポリヌクレオチド又はアミノ酸配列の一部分）を含んで良く、そして（２）、２つのポリヌクレオチド又はアミノ酸配列の間で相違する（divergent）配列を更に含んで良く、２つ（又はそれ以上）の分子の間の配列比較は、典型的には、「比較ウィンドウ」にわたって２つの分子の配列を比較することにより行われ、そして配列類似性の局所領域（local region）を同定及び比較する。本願で使用される場合「比較ウィンドウ」は、少なくとも１８の隣接したヌクレオチド位置又は６アミノ酸の概念セグメント（conceptual segment）を意味し、ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列は、少なくとも１８の隣接したヌクレオチド又は６アミノ酸配列の参照配列と比較することができ、そして、比較ウィンドウのポリヌクレオチド配列の部分は、２つの配列の最適なアラインメント（ないし整列、alignment）のための参照配列（これは、付加又は削除を含まない）と比較して２０パーセント以下の付加、削除、置換など（すなわちギャップ）を含み得る。比較ウィンドウを整列させるための最適なアラインメントは、Smith and Waterman Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)の局所ホモロジーアルゴリズムにより、Needleman and Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970)のホモロジーアラインメントアルゴリズムにより、Pearson and Lipman Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 85:2444 (1988)の類似法に関する検索により、これらアルゴリズムのコンピュータ化された実施（Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0, (Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.)におけるGAP、 BESTFIT、 FASTA、及び TFASTA、Geneworks、 又はMacVector software packages）により、又は、検査により行われて良く、そして、様々な方法により生じたもっともよいアラインメント（すなわち、比較ウィンドウにわたり、ホモロジーの最も高いパーセンテージをもたらす）が選択される。
【００８８】
用語「配列同一性」は、比較ウィンドウにわたって２つのポリヌクレオチド又はアミノ酸配列が（すなわち、ヌクレオチドとヌクレオチド又は残基と残基基準で）同一であることを意味する。用語「配列同一性のパーセンテージ」は、比較ウィンドウにわたって２つの最適に整列された配列を比較し、両方の配列において、同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、ＵまたはＩ）又は残基が生ずる位置の数を決定し、マッチした位置の数を得て、マッチした位置の数を比較ウィンドウにおける位置の総数（すなわちウィンドウの大きさ）で割り、そして結果に１００を掛けて、配列同一性のパーセンテージを得ることにより計算される。本願で使用される場合、用語「実質的な同一性」は、ポリヌクレオチド又はアミノ酸配列の特徴を示し、ポリヌクレオチド又はアミノ酸は、少なくとも１８ヌクレオチド（６アミノ酸）位置の比較ウィンドウにわたって、頻繁には少なくとも２４−４８ヌクレオチド（８−１６アミノ酸）位置のウィンドウにわたって、参照配列と比較した場合、少なくとも８５パーセントの配列同一性、好ましくは少なくとも９０から９５パーセントの配列同一性、より通常には、少なくとも９９パーセント配列同一性を有する配列を含み、配列同一性のパーセンテージは、比較ウィンドウにわたって、参照配列を、参照配列の総計２０パーセント以下の欠損又は付加を含み得る配列と比較することにより計算される。参照配列は、より大きな配列のサブセットであり得る。
【００８９】
本願で使用される場合、２０の従来型のアミノ酸及びその省略表記は、従来型の用途に従う。Immunology - A Synthesis (第二版、 E.S. Golub and D.R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland7 Mass. (1991))を参照する。２０の従来型のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）、α−、α−２基置換のアミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸及び他の非従来型のアミノ酸のような非天然のアミノ酸はまた、本発明のポリペプチドに適切な要素であり得る。非従来型アミノ酸の例は、４ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸塩、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリシン、ε−Ｎ−アセチルリシン、Ｏ−フォスフォセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−フォルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリシン、σ−Ｎ−メチルアルギニン、及び他の類似のアミノ酸及びイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）を含む。本願で使用されるポリペプチド表記において、標準の用途及び慣習に従って、左側方向はアミノ末端方向であり、そして右側方向は、カルボキシ末端方向である。
【００９０】
同様に、格別に特定されない限り、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左側末端は、５’末端であり、二重鎖ポリヌクレオチド配列の左側方向は５’方向と称される。新生ＲＮＡ転写産物の５’から３’付加の方向は転写方向と称され、ＲＮＡ転写産物の５’から５’末端であり、ＲＮＡと同一の配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域は、「上流配列」と称され、ＲＮＡ転写産物の３’から３’末端であり、ＲＮＡと同一の配列を有するＤＮＡ鎖上の配列領域は、「下流配列」と称される。
【００９１】
ポリペプチドに適用される場合、用語「実質的な同一性」は、既定のギャップウェイト（gap weights）を使用するプログラムＧＡＰ又はＢＥＳＴＦＩＴによるなどして最適に整列させた場合、２つのペプチド配列は、少なくとも８０パーセント配列同一性、好ましくは、少なくとも９０パーセント配列同一性、より好ましくは、少なくとも９５パーセント配列同一性、及びもっとも好ましくは、少なくとも９９パーセント配列同一性を共有することを意味する。
【００９２】
好ましくは、同一でない残基位置は、保存的なアミノ酸置換により異なる。
【００９３】
保存的なアミノ酸置換は、類似の側鎖を有する残基の互換性に関連する。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンである；脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は、セリン及びトレオニンである；アミド含有側鎖を有するアミノ酸の群は、アスパラギン及びグルタミンである；芳香族側鎖を有するアミノ酸の群はフェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンである；塩基性側鎖を有するアミノ酸の群は、リシン、アルギニン、及びヒスチジンである；及び、硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群は、システイン及びメチオニンである。好ましい保存的なアミノ酸置換群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン  バリン、グルタミン［酸］−アスパラギン［酸］、及びアスパラギン−グルタミンである。
【００９４】
本願で議論される場合、抗体又は免疫グロブリン分子のアミノ酸配列におけるわずかなバリエーションは、本願発明により包含されることが検討され、アミノ酸配列におけるバリエーションが、少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、及びもっとも好ましくは９９％を維持することを提供する。特に、保存的なアミノ酸置換が考えられる。保存的な置換は、アミノ酸の側鎖に関するアミノ酸ファミリー内で行われるものである。遺伝学的にコードされるアミノ酸は、一般的に、（１）酸性アミノ酸であるアスパラギン酸、グルタミン酸；（２）塩基性アミノ酸である、リシン、アルギニン、ヒスチジン；（３）非極性アミノ酸であるアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、及び（４）非荷電極性アミノ酸であるグリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシンのファミリーに分けられる。親水性アミノ酸は、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リシン、セリン、及びトレオニンを含む。疎水性アミノ酸は、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシン及びバリンを含む。アミノ酸の他のファミリーは、（ｉ）脂肪族ヒドロキシファミリーであるセリン及びスレオニン；（ｉｉ）アミド含有ファミリーであるアスパラギン及びグルタミン；（ｉｉｉ）脂肪族ファミリーであるアラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン；及び（ｉｖ）芳香族ファミリーであるフェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシンを含む。例えば、ロイシンのイソロイシン又はバリンでの分離した置換、アスパラギン酸のグルタミン酸での［分離した置換］、スレオニンのセリンでの［分離した置換］、又は、アミノ酸の構造的に関連するアミノ酸での類似の置換は、特に、置換がフレームワーク部位内のアミノ酸を含まない場合、結果の分子の結合又は性質における主要な効果を有さないだろうことを期待することが妥当である。アミノ酸変更が機能的なペプチドをもたらすかどうかは、ポリペプチド誘導体の特異的な活性をアッセイすることにより容易く決定され得る。アッセイは、本願に詳細に記載される。抗体又は免疫グロブリン分子のフラグメント又はアナログは、当業者により容易く調製され得る。好ましいフラグメント又はアナログのアミノ末端及びカルボキシ末端は、機能的なドメインの隣接の境界に生じる。構造的な及び機能的なドメインは、公開の又は自己の（proprietary）配列データベースとヌクレオチド及び／又はアミノ酸配列データの比較により同定され得る。好ましくは、コンピュータ化された比較法が、既知の構造及び／又は機能を有する他のタンパク質で生じる配列モチーフ又は予想されるタンパク質コンフォメーション（conformation）ドメインを同定するのに使用される。既知の３次元構造に折りたたまれるタンパク質配列を同定する方法が知られている。Bowie et al. Science 253:164 (1991)。従って、前述の実施例は、当業者が、本発明に一致する構造的な及び機能的なドメインを定義するのに使用され得る配列モチーフ及び構造的なコンフォメーションを認��できることを表す。
【００９５】
好ましいアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解への感受性を減少させる、（２）酸化への感受性を減少させる、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させる、（４）結合親和性を変化させる、及び、（５）そのようなアナログの他の物理化学的な又は機能的な性質を授与する又は修正するものである。アナログは、天然に生ずるペプチド配列以外の配列の様々な突然変異タンパク質（mutein）を含むことができる。例えば、単一の又は多重の（multiple）アミノ酸置換（好ましくは保存的なアミノ酸置換）は、（好ましくは、分子間接触を形成するドメイン（１または複数）の外側のポリペプチドの部分において）天然に生じる配列において行われ得る。保存的なアミノ酸置換は、親である配列の構造的な特徴を実質的に変化させるべきではない（例えば、アミノ酸置換は、親の配列において生ずるヘリックスを壊す傾向であるべきではなく、又は、親の配列を特徴付ける二次構造の他のタイプを破壊する傾向であるべきではない）。技術分野で認識されるポリペプチドの二次構造または三次構造の例は、Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H.  Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure (C. Branden and J.  Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991))；及びThornton et al. Nature 354:105 (1991)に記載される。
【００９６】
本願で使用される場合、用語「ポリペプチドフラグメント」は、アミノ末端及び／又はカルボキシ末端欠損を有するポリペプチドを意味するが、残余のアミノ酸配列は、例えば、全長ｃＤＮＡ配列から推定される天然に生ずる配列における対応する位置と同一である。フラグメントは典型的には、少なくとも５、６、８又は１０アミノ酸長であり、好ましくは、少なくとも１４アミノ酸長、さらに好ましくは少なくとも２０アミノ酸長、通常は、少なくとも５０アミノ酸長であり、そしてさらに好ましくは少なくとも７０アミノ酸長である。本願で使用される場合、用語「アナログ」は、推定されるアミノ酸配列の一部分に実質的な同一性を有する、そして適切な結合条件下でＣＤ４７に特異的な結合を有する少なくとも２５アミノ酸のセグメントからなるポリペプチドを意味する。典型的に、ポリペプチドアナログは、天然に生じる配列に対する保存的なアミノ酸置換（又は付加若しくは削除）を含む。アナログは典型的に、少なくとも２０アミノ酸長、好ましくは少なくとも５０アミノ酸長又はそれ以上、であり、そして、多くの場合、全長の天然に生じるポリペプチドと同じくらいの長さであり得る。
【００９７】
ペプチドアナログは、鋳型ペプチドの性質と類似した性質を有する非ペプチド薬として製薬業界において一般的に使用される。非ペプチド組成物のこれらのタイプは、「ペプチド−模倣剤（peptide mimetics）」又は「ペプチド模倣剤（peptidomimetics）」と称される。Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986), Veber and Freidinger TINS p.392 (1985)；及び Evans et al. J. Med. Chem. 30:1229 (1987)。そのような化合物は、通常、コンピュータ化された分子モデリングを用いて開発される。治療的に有用なペプチドと構造的に類似のペプチド模倣剤は、同等の治療的な効果又は予防効果を生じさせるために使用され得る。一般的に、ペプチド模倣剤は、ヒト抗体のようなパラダイム（paradigm）ポリペプチド（すなわち、生化学的な性質又は医薬的な活性を有するポリペプチド）に構造的に類似し、その技術分野で良く知られた方法により−−ＣＨ２ＮＨ−−、−−ＣＨ２Ｓ−、−−ＣＨ２−ＣＨ２−−、−−ＣＨ＝ＣＨ−−（シス及びトランス）、−−ＣＯＣＨ２−−、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−−、及び−ＣＨ２ＳＯ−−から成る群より選択される連結により任意に置換された１つ以上のペプチド連結を有する。コンセンサス配列の１つ以上のアミノ酸の、同じタイプのＤ−アミノ酸での体系的な置換（例えば、Ｌ−リシンの代わりのＤ−リシン）は、より安定なペプチドを生じさせるのに使用され得る。加えて、コンセンサス配列又は実質的に同一であるコンセンサス配列バリエーションを含む拘束された（constrained）ペプチドは、例えば、ペプチドを環状化する分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内在システイン残基を付加することによって、その技術分野で知られた方法によって生じ得る（Rizo and Gierasch Ann. Rev. Biochem. 61:387 (1992)）。
【００９８】
用語「剤」は、化合物、化合物の混合物、生物学的なマクロ分子、又は生物学的な材料から作られる抽出物を意味して本願で使用される。
【００９９】
本願で用いられる場合、用語「ラベル」又は「ラベルされた」は、例えば、放射線ラベルされたアミノ酸の取り込み又は、印のあるアビジン（例えば、蛍光マーカー又は光学的な方法もしくは熱量測定法により検出され得る酵素学的な活性を含むストレプトアビジン）により検出され得るビオチニルモイエティ（biotinyl moieties）のポリペプチドへの取り付けによる検出可能なマーカーの取り込みを意味する。ある状況において、ラベル又はマーカーはまた治療的であり得る。ポリペプチド及びグリコタンパク質をラベルする様々な方法が、その技術分野で知られ、そして使用され得る。ポリペプチドに関するラベルの例は、次のものを制限せずに含む：放射線同位体又は放射線核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光ラベル（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体（lanthanide phosphors））、酵素ラベル（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ｐ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリフォスファターゼ）、化学発光、ビオチニル群（biotinyl groups）、二次レポーターにより認識される予め決定されたポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体に関する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）。いくつかの実施形態において、ラベルは、様々な長さのスペーサー腕（spacer arm）により取り付けられ、潜在的な立体障害を減少させる。本願で使用される場合、用語「医薬的な薬剤（agent）又は薬剤（drug）」は、患者に適切に投与される場合、所望の治療的な効果を含むことができる化合物又は組成物を意味する。
【０１００】
用語「抗腫瘍剤（antineoplastic agent）」は、本願において、ヒトにおける腫瘍、（例えば癌腫、肉腫、リンパ腫、又は白血病のような）特に悪性（癌の）病変の発達ないし進行を阻害する機能的な性質を有する薬剤を意味する。転移の阻害はしばしば、抗腫瘍剤の性質である。
【０１０１】
本願における他の化学用語は、The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (Parker, S., Ed., McGraw-Hill, San Francisco (1985))により例示されるように、その技術分野の従来型の用途に従って用いられる。
【０１０２】
本願で使用される場合、「十分に（ないし実質的に、substantially）純粋」は、目的の種が［組成物において］優勢な種である（すなわち、モル基準(molar basis)で、組成物中において他の個々の種よりも、豊富である）、そして好ましくは、十分に精製されたフラクションが組成物であることを意味し、目的の種は、［組成物における］全てのマクロ分子種の（モル基準で）少なくとも約５０パーセントを含む。
【０１０３】
一般的に、十分に純粋な組成物は、組成物中にある全てのマクロ分子種の約８０パーセントを上回り、より好ましくは約８５％、９０％、９５％、及び９９％を上回って含むだろう。もっとも好ましくは、目的の種は、本質的な等質性（homogeneity）（混入種が、従来型の検出方法により組成物中に検出されない）を有するように精製され、組成物は、本質的に、単一のマクロ分子種からなる。
【０１０４】
ＣＤ４７抗体
本発明のモノクローナル抗体は、ＣＤ４７に結合し、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を阻害し、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα媒介シグナリングを減少させ、食作用を促進し、及び、腫瘍成長及び／又は転移を阻害する能力を有する。例えば、実施例において本願に記載される細胞アッセイを用いて阻害は決定される。
【０１０５】
本発明の例示的な抗体は、２Ａ１抗体、２Ａ１のキメラ版、及び２Ａ１のヒト化変異体を含む。本発明の例示的な抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５−３０から選択される可変重（ＶＨ）鎖を有し、及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３１−４７から選択される可変軽（ＶＬ）鎖を有する抗体を含む。特に、例示的な抗体は、表１で提示されるものを含む。
表１
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【０１０６】
本願に記載されるＣＤ４７抗体と同じエピトープに結合する抗体も本発明に含まれる。例えば、本発明の抗体は、ヒトＣＤ４７の１つ以上のアミノ酸残基を含むエピトープに特異的に結合する（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Q08722.1を参照）。
【０１０７】
例示的なヒトＣＤ４７のアミノ酸配列は、以下に提示される（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Q08722.1 (GI:1171879)、引用により本願に組み込まれる）。シグナル配列（アミノ酸１−１８）には下線が引かれている。
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【０１０８】
明確にするために、シグナル配列を除いた例示的なヒトＣＤ４７アミノ酸配列が以下に提示される。
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【０１０９】
例示的なヒトＣＤ４７−ＩｇＶドメインのアミノ酸配列が以下に提示される。
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【０１１０】
本発明の例示的なモノクローナル抗体は、例えば、以下の配列に表される可変重鎖領域（ＶＨ）及び／又は可変軽（ＶＬ）鎖領域を有するヒト化抗体を含む。
【０１１１】
ＣＤ４７抗体の可変重（ＶＨ）鎖領域は以下に提示される。ＣＤ４７抗体のＶＨ鎖の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）は以下にハイライトされる。いくつかの実施形態において、ＶＨ  ＣＤＲ１アミノ酸配列は、ＧＦＮＩＫＤＹＹＬＨ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：５０）、ＧＹＴＦＴＹＹＹＬＨ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：５７）、ＧＦＴＦＴＹＹＹＬＨ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：５８）、ＧＹＮＦＴＹＹＹＬＨ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：５９）、ＧＹＴＩＴＹＹＹＬＨ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：６０）、ＧＹＴＦＫＹＹＹＬＨ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：６１）、ＧＹＴＦＴＤＹＹＬＨ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：６２）、ＧＦＴＦＴＤＹＹＬＨ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：６３）、ＧＦＴＩＴＤＹＹＬＨ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：６４）、ＧＹＴＦＫＤＹＹＬＨ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：６５）、又はＧＦＴＦＫＤＹＹＬＨ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：６６）である。いくつかの実施形態において、ＶＨ  ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、ＷＩＤＰＤＮＧＤＴＥ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：５１）、ＷＩＤＰＤＱＧＤＴＥ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：７２）、ＷＩＤＰＤＹＧＤＴＥ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：７３）、ＷＩＤＰＤＳＧＤＴＥ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：７４）、ＷＩＤＰＤＮＡＤＴＥ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：７５）、又はＷＩＤＰＤＮＴＤＴＥ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：７６）である。いくつかの実施形態において、ＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＮＡＡＹＧＳＳＳＹＰＭＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：５２）又は、ＮＡＡＹＧＳＳＰＹＰＭＤＹ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：７７）である。
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【０１１２】
ＣＤ４７抗体の可変軽（ＶＬ）鎖領域は以下に提示される。ＣＤ４７抗体のＶＬ鎖のＣＤＲは、以下にハイライトされる。いくつかの実施形態において、ＶＬ  ＣＤＲ１のアミノ酸配列は、ＫＡＳＱＤＩＨＲＹＬＳ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：５３）、ＲＡＳＱＤＩＨＲＹＬＡ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：６７）、又はＲＡＲＱＧＩＨＲＹＬＳ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：６８）である。いくつかの実施形態において、ＶＬ  ＣＤＲ２のアミノ酸配列は、ＲＡＮＲＬＶＤ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：５４）、ＲＡＮＲＬＱＳ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：６９）、ＲＡＮＲＲＡＴ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：７０）、又はＲＡＮＲＬＶＳ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：７１）である。いくつかの実施形態において、ＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列は、ＬＱＹＤＥＦＰＹＴ（ＳＥＱ  ＩＤ番号：５５）である。
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【０１１３】
いくつかのケースにおいて、本願に記載されるＣＤ４７抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５−３０から選択される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３１−４７から選択される可変軽鎖領域を含む。例示的なＣＤ４７抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３１に規定される可変軽鎖領域；ＳＥＱ  ＩＤ番号：７に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３５に規定される可変軽鎖領域；ＳＥＱ  ＩＤ番号：１１に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：４２に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３２に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３３に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３４に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３６に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３７に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３８に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：２９に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３５に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：３０に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３５に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：４３に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１１に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：４３に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１１に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：４７に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１５に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：４３に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１５に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：４４に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１１に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：４４に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：２２に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３５に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３９に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：８に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３９に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１６に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３５に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：２０に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３５に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：２１に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３５に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：１７に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３５に規定される可変軽鎖領域、ＳＥＱ  ＩＤ番号：２８に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３５に規定される可変軽鎖領域、又はＳＥＱ  ＩＤ番号：２７に規定される可変重鎖領域及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３５に規定される可変軽鎖領域を含む。
【０１１４】
本願に記載されるＣＤ４７抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：３１−４７で提示されるＶＬ領域の内の任意の１つと対を形成するＳＥＱ  ＩＤ番号：５−３０で提示されるＶＨ領域の内の任意の１つを含む。特に、本願に記載されるＣＤ４７抗体はＳＥＱ  ＩＤ番号：３１−３９、４２、４３、４４、及び４７で提示されるＶＬ領域の内の任意の１つと対と形成するＳＥＱ  ＩＤ番号：５、７、８、１１、１５−１７、２０−２２、及び２７−３０で提示されるＶＨ領域の内の任意の１つを含む。
【０１１５】
本願に記載されるＣＤ４７抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５０、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５７、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５８、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５９、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６０、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６１、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６２、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６３、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６４、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６５、及びＳＥＱ  ＩＤ番号：６６で提示されるＶＨ  ＣＤＲ１領域の内の任意の１つ、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５１、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７２、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７３、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７４、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７５、及びＳＥＱ  ＩＤ番号：７６で提示されるＶＨ  ＣＤＲ２領域の内の任意の１つ、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５２及びＳＥＱ  ＩＤ番号：７７で提示されるＶＨ  ＣＤＲ３領域の内の任意の１つ、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５３、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６７、及びＳＥＱ  ＩＤ番号：６８で提示されるＶＬ  ＣＤＲ１領域の内の任意の１つ、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５４、ＳＥＱ  ＩＤ番号：６９、ＳＥＱ  ＩＤ番号：７０、及びＳＥＱ  ＩＤ番号：７１で提示されるＶＬ  ＣＤＲ２領域の内の任意の１つ、及び、ＳＥＱ  ＩＤ番号：５５で提示されるＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む。
【０１１６】
当業者は、過度の実験を行うことなく、モノクローナル抗体が、本願発明のモノクローナル抗体がＣＤ４７に結合するのを妨げるかどうかを確認することによって、モノクローナル抗体が、本発明のモノクローナル抗体（例えば、２Ａ１抗体、又はＳＥＱ  ＩＤ番号：５−３１から選択される可変重鎖及びＳＥＱ  ＩＤ番号：３１−４７から選択される可変軽鎖を有する抗体）と同一の特異性を持つかどうかを決定することが可能であることを認識するだろう。本発明のモノクローナル抗体による結合の減少によって表されるように、テストされるモノクローナル抗体が本発明のモノクローナル抗体と競合する場合、２つのモノクローナル抗体は、同一の又は密接に関連するエピトープに結合する。
【０１１７】
モノクローナル抗体が、本発明のモノクローナル抗体の特異性を有するかどうかを決定するための代わりの方法は、本発明のモノクローナル抗体を、（本発明のモノクローナル抗体と正常に反応する）可溶性ＣＤ４７タンパク質と共に前インキュベート（pre-incubate）し、そして、テストされるモノクローナル抗体が、ＣＤ４７への結合の能力に関して阻害されるかどうかの決定に供することである。テストされるモノクローナル抗体が阻害される場合には、おそらく、本発明のモノクローナル抗体と同一又は機能的に同等のエピトープ特異性を有する。
【０１１８】
本発明の抗体
本発明のモノクローナル抗体のスクリーニングは、例えば、ＣＤ４７媒介性シグナリング及び／又はＣＤ４７／ＳＩＲＰα媒介性シグナリングを測定すること、及び、テストモノクローナル抗体がＣＤ４７媒介性シグナリング及び／又はＣＤ４７／ＳＩＲＰα媒介性シグナリングを、調節、ブロック、阻害、減少、拮抗（アンタゴナイズ）、中和又は干渉できるか否かを決定することによっても実行され得る。これらのアッセイは、競合的結合アッセイを含むことができる。さらに、これらのアッセイは、生物学的読出情報（biologic readout）、例えば、実施例９（図９）に記載されるように、マクロファージによるＣＤ４７発現細胞の食作用（ファゴサイトーシス）を促進する能力、を測定することができる。
【０１１９】
ＣＤ４７、又は、その誘導体、フラグメント、アナログ、ホモログ又はオーソログに対するモノクローナル抗体を生成するために、本発明の技術分野において公知の種々の手法が使用され得る（例えば、Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow E, and Lane D, 1988, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NYを参照、該文献は引用によって本願に組み込まれる）。完全なヒト型抗体は抗体分子であり、軽鎖及び重鎖の両方の全体配列（ＣＤＲｓを含む）はヒト遺伝子に由来する。そのような抗体は、本願において「ヒト抗体」又は「完全ヒト抗体」と命名される。ヒトモノクローナル抗体は、例えば、以下に提供される実施例に記載した手法を使用して調製される。ヒトモノクローナル抗体は、ヒトモノクローナル抗体を生成するためのトリオーマ技法；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法（Kozbor, et al., 1983 Immunol Today 4: 72を参照）；及びＥＢＶハイブリドーマ技法を使用することによっても調製され得る（Cole, et al., 1985 In: MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96を参照）。ヒトモノクローナル抗体が利用され得るし、ヒトハイブリドーマを使用することによって（Cote, et al., 1983. Proc Natl Acad Sci USA 80: 2026-2030を参照）、又はインビトロにおいてヒトＢ細胞をエプスタイン・バーウイルスで形質転換することによって生成され得る（see Cole, et al., 1985 In: MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96を参照）。
【０１２０】
抗体は、タンパク質Ａ又はタンパク質Ｇを使用するアフィニティークロマトグラフィなどを使用してよく知られた技術によって精製され、先ず免疫血清のＩｇＧ分画が提供される。その後に、又はその代わりに、探索される免疫グロブリンのターゲット又はそのエピトープである特異的な抗原をカラムに固定して、免疫アフィニティークロマトグラフィによって免疫特異的抗体が精製され得る。免疫グロブリンの精製は、例えば、D. Wilkinson（The Scientist, The Scientist, Inc.によって出版された, Philadelphia PA, Vol. 14, No. 8 (２０００年４月１７日), pp. 25-28）によって議論される。
【０１２１】
本発明のＣＤ４７抗体はモノクローナル抗体である。ＣＤ４７媒介性細胞シグナリング及び／又はＣＤ４７／ＳＩＲＰα媒介性細胞シグナリングを調節、ブロック、阻害、減少、拮抗（アンタゴナイズ）、中和又はその他干渉するモノクローナル抗体は、例えば、メンブレン結合型ＣＤ４７及び／又は可溶型ＣＤ４７（例えば、ヒトのＣＤ４７又は免疫原性のフラグメント、誘導体又はその変異体など）で動物を免疫化することによって生成される。あるいは、ＣＤ４７を発現して形質導入された細胞の表面に出現させる（ないし所望の機能をもたせる：associated）ようなＣＤ４７をコードする核酸分子を含むベクターが形質導入された細胞で動物は免疫化される。あるいは、抗体は、ＣＤ４７に結合する抗体又はＣＤ４７に結合するための抗原結合ドメイン配列を含むライブラリをスクリーニングすることによって取得される。このライブラリは、例えば、バクテリオファージにおいて、集合した（assembled）ファージ粒子の表面上に発現するバクテリオファージコートタンパク質に対するタンパク質融合物又はペプチド融合物として、そしてファージ粒子内に含まれるコードＤＮＡ配列（すなわち、「ファージディスプレイライブラリ」）として調製される。骨髄腫／Ｂ細胞の融合に由来するハイブリドーマは、次にＣＤ４７への反応性に関してスクリーニングされる。
【０１２２】
モノクローナル抗体は、例えば、Kohler and Milstein, Nature, 256:495 (1975)などに記載されるようなハイブリドーマ技法を使用して調製される。ハイブリドーマ技法において、マウス、ハムスター、又は他の適切な宿主動物は、典型的には免疫剤で免疫化されて、免疫剤に対して特異的に結合するであろう抗体を産生するか、又は該抗体を産生することが可能なリンパ球を誘発する。あるいは、ハイブリドーマはインビトロで免疫化され得る。
【０１２３】
免疫剤は、典型的にはタンパク質抗原、そのフラグメント又はその融合タンパク質を含むだろう。一般的には、ヒト由来の細胞が望まれる場合には末梢血液リンパ球が使用されるか、ヒト以外の哺乳類のソースが望まれる場合には脾臓細胞又はリンパ節細胞が使用されるかのいずれかである。次に、ポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を使用してリンパ球を不死化細胞系統と融合させ、ハイブリドーマ細胞が生成される（Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, (1986) pp. 59-103）。不死化細胞系統は、通常、形質転換哺乳類細胞であり、特にげっ歯類、ウシ及びヒト由来の細胞の骨髄腫である。通常、ラット又はマウス骨髄腫細胞系統が採用される。ハイブリドーマ細胞は、適切な培養液（好ましくは融合していない不死化細胞の成長又は生存を阻害する１以上の物質を含む）において培養され得る。例えば、親細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠損している場合には、ハイブリドーマのための培養液は典型的にはヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む（「ＨＡＴ培地」）だろう（これらの物質はＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を阻害する）。
【０１２４】
好ましい不死化細胞系統は、効率的に融合し、選択した抗体産生細胞による抗体の安定で高レベルの発現を支持し、かつＨＡＴ培地などの培地に対して感受性である。より好ましい不死化細胞系統はネズミ骨髄腫系統であり、例えば、Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California and the American Type Culture Collection, Manassas, Virginiaから取得され得る。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系統も、モノクローナル抗体の産生に関する記載がある（Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, (1987) pp. 51-63を参照）。
【０１２５】
ハイブリドーマ細胞を培養する培養液は、次いで抗原に対するモノクローナル抗体の存在に関してアッセイされ得る。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性が免疫沈降アッセイ又はインビトロ結合アッセイ（放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）など）によって決定される。そのような技術及びアッセイは、本発明の技術分野において知られている。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Munson and Pollard, Anal. Biochem., 107:220 (1980)のスキャチャード解析によって決定され得る。さらに、モノクローナル抗体の治療上の適用において、ターゲット抗原に関する高度な特異性及び高い結合親和性を有する抗体を同定することは重要である。
【０１２６】
所望のハイブリドーマ細胞を同定した後に、クローンは限界希釈法によってサブクローニングされ、標準的方法によって成長させられる（Goding, Monoclonal Antibodies:  Principles and Practice, Academic Press, (1986) pp. 59-103を参照）。この目的のための適切な培養液は、例えば、ダルベッコ改変イーグル培地及びＲＰＭＩ−１６４０培地を含む。あるいは、ハイブリドーマ細胞を哺乳類の腹水（ascites）としてインビボで成長させられ得る。
【０１２７】
サブクローニングによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、タンパク質Ａ−セファロース、ヒドロキシルアパタイクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティークロマトグラフィなどの従来の免疫グロブリン精製法によって培養液又は腹水流動体から単離又は精製され得る。
【０１２８】
モノクローナル抗体は、米国特許出願４，８１６，５６７号に記載される方法などの組み換えＤＮＡ法によって作製され得る。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手法を使用して（例えば、ネズミ抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離及びシーケンスされ得る。本発明のハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましいソース（入手元）としての役割を果たす。一度単離されると、ＤＮＡは発現ベクターに入れることができ、次に発現ベクターをチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）２９３細胞、サルＣＯＳ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０、ＹＢ２／０、又は骨髄腫細胞などの宿主細胞あるいは他に免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞に形質導入して、組み換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成物が得られる。相同性のネズミの配列をヒト重鎖及び軽鎖の定常ドメインのコード配列で置換すること（米国特許４，８１６，５６７号；Morrison, Nature 368, 812-13 (1994)を参照）、又は免疫グロブリンをコードする配列の全部又は一部を非免疫グロブリンポリペプチド共有結合させることによってＤＮＡを改変することもできる。本発明の抗体の定常ドメインは、そのような非免疫グロブリンポリペプチドで置換され得るし、又は本発明の抗体の１つの抗原組み合わせサイトの可変ドメインを置換してキメラ型二価抗体が作製され得る。
【０１２９】
ヒト抗体及び抗体のヒトへの適合化
本発明のモノクローナル抗体は、完全ヒト型抗体又はヒト化抗体を含む。これらの抗体は、投与された免疫グロブリンに対するヒトの免疫応答を発生させないため、ヒトへの投与に適する。
【０１３０】
ＣＤ４７抗体は、例えば、以下に提供される実施例に記載した手法を使用して生成される。例えば、本発明のＣＤ４７抗体は、マウスにおける改変ＲＩＭＭＳ（Repetitive Immunization Multiple Sites）免疫手法、及びその後のハイブリドーマ生成を使用して同定される。
【０１３１】
他の代わりの方法において、ＣＤ４７抗体は、例えば、ヒト配列のみを含む抗体を使用するファージ−ディスプレイ法を使用して開発される。そのようなアプローチは、本発明の技術分野、例えば、ＷＯ９２／０１０４７号及び米国特許６，５２１，４０４号において公知である（これらの文献は引用によって本願に組み込まれる）。このアプローチにおいて、軽鎖及び重鎖のランダムなペアを保有（carry）するファージのコンビナトリアルライブラリが、ＣＤ４７又はそのフラグメントの天然又は組み換えソースを使用してスクリーニングされる。他のアプローチにおいて、ＣＤ４７抗体は、ヒトＣＤ４７タンパク質でトランスジェニック非ヒト動物を免疫化する１ステップを少なくとも含むプロセスによって生成することができる。このアプローチにおいて、この異種性（xenogenic）非ヒト動物の内来性（endogenous）重鎖及び／又はカッパ（κ）軽鎖遺伝子座（loci）のいくつかは無能にされており、抗原に対する応答において、免疫グロブリンをコードする遺伝子を生成することに必要な再アレンジを実行することができない。更に、少なくとも１つのヒト重鎖ローカス及び少なくとも１つのヒト軽鎖ローカスが、動物に安定的に形質導入されている。従って、投与された抗原に対する応答において、ヒト遺伝子座の再アレンジによって抗原に対して免疫特異的なヒト可変領域をコードする遺伝子が提供される。従って、免疫化の際に、ゼノマウスは完全ヒト免疫グロブリンを分泌するＢ細胞を産出する。
【０１３２】
本発明の技術分野において多種多様な技術が、異種性非ヒト動物の産生に関して知られている。例えば、米国特許６，０７５，１８１号及び６，１５０，５８４号を参照（これらの文献の全体が引用によって本願に組み込まれる）。この一般的な手法は、１９９４年に公開された第１のゼノマウス（商標）ストレインの産生に関連して実証されている。Green et al. Nature Genetics 7:13-21 (1994)も参照（この文献の全体が引用によって本願に組み込まれる）。米国特許６，１６２，９６３号；６，１５０，５８４号；６，１１４，５９８号；６，０７５，１８１号；及び５，９３９，５９８号及び日本特許３０６８１８０Ｂ２号、３０６８５０６Ｂ２号、及び３０６８５０７Ｂ２号及びヨーロッパ特許ＥＰ０４６３１５１Ｂ１号及び国際特許出願ＷＯ９４／０２６０２号、ＷＯ９６／３４０９６号、ＷＯ９８／２４８９３号、ＷＯ００／７６３１０号及び関連ファミリーのメンバーも参照。
【０１３３】
代わりのアプローチにおいて、他は、異種性のＩｇローカスをＩｇローカス由来の断片（個々の遺伝子）を含むことによって模倣する「ミニローカス」アプローチを利用している。従って、１つ以上のＶＨ遺伝子、１以上のＤＨ遺伝子、１以上のＪＨ遺伝子、ｍｕ定常領域、及び第２の定常領域（好ましくはガンマ定常領域）が、動物へ挿入するための構築物に挿入形成される。例えば、米国特許５，５４５，８０６号；５，５４５，８０７号；５，５９１，６６９号；５，６１２，２０５号；５，６２５，８２５号；５，６２５，１２６号；５，６３３，４２５号；５，６４３，７６３号；５，６６１，０１６号；５，７２１，３６７号；５，７７０，４２９号；５，７８９，２１５号；５，７８９，６５０号；５，８１４，３１８号；５，８７７，３９７号；５，８７４，２９９号；６，０２３，０１０号；及び６，２５５，４５８号；及びヨーロッパ特許０５４６０７３Ｂ１号；及び国際特許出願ＷＯ９２／０３９１８号、ＷＯ９２／２２６４５号、ＷＯ９２／２２６４７号、ＷＯ９２／２２６７０号、ＷＯ９３／１２２２７号、ＷＯ９４／００５６９号、ＷＯ９４／２５５８５号、ＷＯ９６／１４４３６号、ＷＯ９７／１３８５２号、及びＷＯ９８／２４８８４号及び関連ファミリーのメンバーを参照。
【０１３４】
大きい染色体の断片又は染色体全体が導入されているマイクロセル融合体を介したマウスからのヒト抗体の産生も実証されている。ヨーロッパ特許出願７７３  ２８８及び８４３  ９６１を参照。
【０１３５】
ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答は、産業をキメラ型あるいはその他ヒト化抗体を調製することに導いている。キメラ型抗体はヒト定常領域及び免疫可変領域を有するが、特に抗体の慢性的利用又はマルチドーズ利用において、ある程度のヒト抗キメラ型抗体（ＨＡＣＡ）応答が観察されるであろうことが予想される。従って、ＨＡＭＡ又はＨＡＣＡ応答に対する心配（concerns）及び／又は影響を無にする、あるいは軽減するために、完全ヒト型のＣＤ４７に対する抗体を提供することが望まれている。 
【０１３６】
減少した免疫原性を有する抗体の生成は、ヒトへの適合化、キメラ化及び適切なライブラリを使用するディスプレイ法を介しても達成される。ネズミ抗体又は他の種由来の抗体を本発明の技術分野において公知の技術を使用してヒト化又はプリマタイズ（primatized）することができることが分かるだろう。例えば、Winter and Harris Immunol Today 14:43 46 (1993)及びWright et al. Crit, Reviews in Immunol. 12125-168 (1992)を参照。目的の抗体は、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ヒンジドメイン及び／又はフレームワークドメインを対応するヒト配列で置換するように組み換えＤＮＡ法によって遺伝子操作することができる（ＷＯ９２１０２１９０号及び米国特許５，５３０，１０１号；５，５８５，０８９号；５，６９３，７６１号；５，６９３，７９２号；５，７１４，３５０号；及び５，７７７，０８５号を参照）。キメラ型免疫グロブリン遺伝子の構築のためにＩｇのｃＤＮＡを使用することも本発明の技術分野において知られている（Liu et al. P.N.A.S. 84:3439 (1987) and J. Immunol. 139:3521 (1987)）。ｍＲＮＡは、抗体を産生するハイブリドーマ又は他の細胞から単離されて、ｃＤＮＡを生成することに使用される。目的のｃＤＮＡは、特異的なプライマーを使用するポリメラーゼ連鎖反応によって増幅することができる（米国特許４，６８３，１９５号及び４，６８３，２０２号）。あるいは、目的の配列を単離するためにライブラリが作成され、そしてスクリーニングされる。次に、抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列を、ヒト定常領域配列に融合させる。ヒト定常領域の遺伝子の配列は、Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of immunological Interest, N.I.H. publication no. 91-3242において見つけることができる。ヒトＣ領域の遺伝子は、既知のクローンから容易に利用可能である。アイソタイプの選択は、補体結合反応又は抗体依存的細胞毒性における活性などの所望のエフェクタの機能によってガイドされるだろう。好ましいアイソタイプはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４である。ヒト軽鎖定常領域（カッパ（κ）又はラムダ（λ））の何れかが使用される。次に、キメラ型ヒト化抗体を従来の方法によって発現する。 
【０１３７】
Ｆｖ、Ｆ（ａｂ’）２及びＦａｂなどの抗体フラグメントを、例えば、プロテアーゼ又は化学的切断による無処置のタンパク質の切断によって調製することができる。あるいは、トランケーションした（端部を切除した：truncated）遺伝子が設計される。例えば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの一部分をコードするキメラ遺伝子は、Ｈ鎖のＣＨ１ドメイン及びヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含み、その後にはトランケーションした分子を産生するように、翻訳停止コドンが続くだろう。
【０１３８】
Ｈ鎖及びＬ鎖のＪ領域のコンセンサス配列を使用してプライマーとして使用するオリゴヌクレオチドを設計して、その後のＶ領域セグメントとヒトＣ領域セグメントとの連結に有用な制限サイトをＪ領域へ導入することができる。Ｃ領域のｃＤＮＡは、ヒト配列における類似の（アナログな）位置に制限サイトを配置する部位特異的突然変異誘発によって改変することができる。
【０１３９】
発現ベクターは、プラスミド、レトロウィルス、ＹＡＣｓ、ＥＢＶ由来のエピソーム、及び同様のものを含む。便利なベクターは、機能的に完全なヒトＣＨ又はＣＬ免疫グロブリン配列をコードし、ＶＨ又はＶＬ配列のいずれかを容易に挿入かつ発現できるように遺伝子操作される適切な制限サイトを有するよう設計されたものである。そのようなベクターでは、挿入されたＪ領域内のスプライス提供者サイトとヒトＣ領域の前方のスプライス受容者サイトとの間において通常スプライシングが生じ、そしてヒトＣＨエクソン内で生じるスプライス領域においてもスプライシングが生じる。ポリアデニル化及び転写の終了が、コード領域の下流における天然の染色体サイトで生じる。結果として生じるキメラ型抗体は、レトロウィルスＬＴＲｓ（例えば、ＳＶ−４０初期（early）プロモーター）を含むいずれかの強力なプロモーターに結合することができる（Okayama et al., Mol. Cell. Bio. 3:280 (1983)), Rous sarcoma virus LTR (Gorman et al. P.N.A.S. 79:6777 (1982)), 及び moloney murine leukemia virus LTR (Grosschedl et al. Cell 41:885 (1985)）。以下で分かるように、天然のＩｇプロモーター及び同様のものも使用することができる。
【０１４０】
更に、ヒト抗体又は他の種由来の抗体は、ファージディスプレイ、レトロウィルスディスプレイ、リボソームディスプレイ、及び他の技術（これらに限定されない）を含むディスプレイ型技術を介して、本発明の技術分野において良く知られた技術を使用して生成することができ、結果として生じる分子を親和性成熟などの追加の成熟化に供することができる（そのような技術は当該技術分野において良く知られている）。Wright et al. Crit, Reviews in Immunol. 12125-168 (1992), Hanes and Pluckthun PNAS USA 94:4937-4942 (1997) (ribosomal display), Parmley and Smith Gene 73:305-318 (1988) (phage display), Scott, TIBS, vol. 17:241-245 (1992), Cwirla et al. PNAS USA 87:6378-6382 (1990), Russel et al. Nucl. Acids Research 21:1081-1085 (1993), Hoganboom et al. Immunol. Reviews 130:43-68 (1992), Chiswell and McCafferty TIBTECH; 10:80-8A (1992),及び米国特許５，７３３，７４３号。ディスプレイ技術をヒトでない抗体を生成するために利用する場合には、そのような抗体を上述のようにヒト化することもできる。
【０１４１】
これらの技術を使用して、ＣＤ４７発現細胞、可溶性の形状のＣＤ４７、それらのエピトープ又はペプチド及びそれらに対する発現ライブラリ（例えば、米国特許５，７０３，０５７号参照）に対する抗体を生成することができ、その後に本願に記載の活性について上述のようにスクリーニングすることができる。
【０１４２】
本発明のＣＤ４７抗体は、上記の１本鎖抗体をコードするＤＮＡセグメントを含むベクターによって発現することができる。
【０１４３】
これらは、ベクター、リポソーム、裸のＤＮＡ、アジュバント−支援型ＤＮＡ、遺伝子銃、カテーテルなどを含むことができる。ベクターは、ターゲッティングモイエティ（部分）（例えば、細胞の表面受容体に対するリガンド）及び核酸結合モイエティ（例えば ポリリシン）を含むＷＯ９３／６４７０１などに記載した化学コンジュゲート、ウィルスベクター（例えば ＤＮＡ又はＲＮＡウィルスベクター）、ターゲットモイエティ及び核酸結合モイエティ（例えば、プロタミン）を含む融合タンパク質（例えば、ターゲット細胞に特異的な抗体）であるＰＣＴ／ＵＳ９５／０２１４０（ＷＯ９５／２２６１８）に記載したような融合タンパク質、プラスミド、ファージなどである。ベクターは、染色体、非染色体又は合成のものであり得る。 
【０１４４】
好ましいベクターは、ウィルスベクター、融合タンパク質及び化学コンジュゲート物を含む。レトロウィルスベクターは、モロニーネズミの白血病ウィルスを含む。ＤＮＡウィルスベクターが好ましい。これらのベクターは、オルソポックス又はアビポックスベクターなどのｐｏｘベクター、単純ヘルペスウィルスＩ型（ＨＳＶ）ベクターなどのヘルペスウイルスベクター（Geller, A. I. et al., J. Neurochem, 64:487 (1995); Lim, F., et al., in DNA Cloning: Mammalian Systems, D. Glover, Ed. (Oxford Univ. Press, Oxford England) (1995); Geller, A. I. et al., Proc Natl. Acad. Sci.: U.S.A. 90:7603 (1993); Geller, A. I., et al., Proc Natl. Acad. Sci USA 87:1149 (1990)参照）、アデノウィルスベクター (LeGal LaSalle et al., Science, 259:988 (1993); Davidson, et al., Nat. Genet 3:219 (1993); Yang, et al., J. Virol. 69:2004 (1995) 参照）及びアデノ関連ウイルスベクター（Kaplitt, M. G., et al., Nat. Genet. 8:148 (1994)参照）を含む。
【０１４５】
ｐｏｘウィルスベクターは、遺伝子を細胞質へ導入する。アビポックスウィルスベクターは、結果的に短期間のみ核酸を発現する。アデノウィルスベクター、アデノ随伴ウィルスベクター及びヘルペスシンプレックスウイルス（ＨＳＶ）ベクターが、神経細胞へ核酸を導入することに好ましい。アデノウィルスベクターは、結果的にアデノ随伴ウィルス（約４ヶ月間）よりも短期間で発現（約２ヶ月間）し、これは、また、ＨＳＶベクターよりも短い。選択される特定のベクターは、ターゲット細胞及び処置される状態に依存するだろう。導入は標準的技術（例えば、感染、形質導入（トランスフェクション、トランスダクション）又はトランスフォーメーション）によって実行することができる。遺伝子転写のモードの例は、例えば、裸のＤＮＡ、ＣａＰＯ４沈殿、ＤＥＡＥデキストラン、電気穿孔処理、プロトプラスト融合、リポフェクション、細胞マイクロインジェクション、及びウィルスベクターを含む。
【０１４６】
ベクターは、いずれかの所望のターゲット細胞を本質的にターゲットするように採用することができる。例えば、三次元的定位置注射（stereotaxic injection）を使用して、ベクター（例えばアデノウィルス、ＨＳＶ）を直接的に所望の位置へ指向させることができる。更に、粒子を脳室内への（ｉｃｖ）注入ＳｙｎｃｈｒｏＭｅｄ注入システムなどのミニポンプ注入システムを使用して送達することができる。バルクフローに基づく方法（対流（convection）と称される）も、大きい分子を脳の拡張領域（extended areas）へ送達する際に有効であることが証明されており、ターゲット細胞へベクターを送達することに有用であり得る。（Bobo et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:2076-2080 (1994); Morrison et al., Am. J. Physiol. 266:292-305 (1994)参照）。使用することが可能な他の方法は、カテーテル、静脈内、非経口、腹腔内及び皮下注射、及び経口又は他の既知の投与経路を含む。
【０１４７】
これらのベクターを、多種多様な仕方で使用することができる多量の抗体の発現に使用することができる。例えば、サンプル中のＣＤ４７の存在を検出することに使用することができる。抗体は、ＣＤ４７−相互作用、及び／又はＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用及びＣＤ４７／ＳＩＲＰα媒介性シグナリングに結合して破壊を試みることにも使用することができる。
【０１４８】
本発明の抗原タンパク質に特異的な１本鎖抗体の生成に技術を提供することができる（例えば、米国特許４，９４６，７７８号参照）。更に、タンパク質、誘導体、フラグメント、アナログ又はそれらのホモログの所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂフラグメントの急速でかつ有効な同定を許容するように、Ｆａｂ発現ライブラリの構築に方法を適用することができる（例えば、Huse, et al., 1989 Science 246: 1275-1281参照）。タンパク質抗原に対するイディオタイプを含む抗体フラグメントを、本発明の技術分野において知られた技術によって生成することができ、（ｉ）抗体分子のペプシン消化によって生成されるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することによって生成されるＦａｂフラグメント；（ｉｉｉ）パパイン及び還元剤を用いた抗体分子の処理によって生成されるＦａｂフラグメント及び（ｉｖ）Ｆｖフラグメントを含むが、それらに限定されない。
【０１４９】
本発明は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２ＣＤ４７フラグメント、１本鎖ＣＤ４７抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ナノボディ又はＶＨＨｓ）、二重特異性ＣＤ４７抗体、及びヘテロコンジュゲートＣＤ４７抗体も含む。
【０１５０】
二重特異性の抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に結合特異性を有する抗体である。本発明の場合には、結合特異性の１つはＣＤ４７についてのものである。第２の結合ターゲットは、いずれかの他の抗原であり、有利には、細胞表面タンパク質又は受容体又は受容体サブユニットである。
【０１５１】
二重特異性の抗体を生成する方法は、本発明の技術分野において知られている。伝統的には、二重特異性の抗体の組み換え生成は、免疫グロブリン重鎖／軽鎖の２つのペアの共発現に基づき、２つの重鎖は異なる特異性を有する（Milstein and Cuello, Nature, 305:537-539 (1983)）。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖のランダムな品揃え（assortment）の理由で、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は１０個の異なる抗体分子の潜在的混合物を生成し、１つのみが正しい二重特異性の構造を有する。正しい分子の精製は、通常、アフィニティークロマトグラフィステップによって達成される。類似の手法は１９９３年５月１３日に公開されたＷＯ９３／０８８２９及びTraunecker et al., EMBO J., 10:3655-3659 (1991) に開示されている。
【０１５２】
所望の結合特異性（抗体抗原組み合わせサイト）を有する抗体可変ドメインを、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合させることができる。好ましくは、融合は、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域の少なくとも部分を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。少なくとも１つの融合に存在する軽鎖結合に必要なサイトを含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合物をコードするＤＮＡｓ、及び所望するならば免疫グロブリン軽鎖は、個別の発現ベクターに挿入し、適切な宿主生命体へ共形質導入される。二重特異性の抗体の生成の更なる詳細は、例えば、Suresh et al., Methods in Enzymology, 121:210 (1986)を参照されたい。
【０１５３】
ＷＯ９６／２７０１１に記載した他のアプローチに従って、１つのペアの抗体分子の間のインターフェイスは、組み換え細胞培養液から回収されるヘテロ二量体のパーセンテージを最大にするように遺伝子操作され得る。好ましいインターフェイスは、抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部分を含む。この方法において、第１の抗体分子インターフェイス由来の１つ以上の小さいアミノ酸側鎖は、より大きい側鎖（例えばチロシン又はトリプトファン）で置き換えられる。大きいアミノ酸側鎖をより小さいもの（例えば アラニン又はスレオニン）で置き換えることによって、大きい側鎖（単数又は複数）と同一の又は類似のサイズの代償的な「空洞」が第２の抗体分子のインターフェイスに作製される。このことは、ホモ二量体などの他の不所望の最終製造物を上回るようにヘテロ二量体の産出量を増加させるメカニズムを提供する。
【０１５４】
二重特異性の抗体は、全長抗体又は抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製され得る。抗体フラグメントから二重特異性の抗体を生成する技術は文献に記載されている。例えば、二重特異性の抗体は、化学結合を使用して調製され得る。Brennan et al., Science 229:81 (1985)は、手法を開示し、ここでは無処置の抗体はタンパク分解的に開裂されて、産出するＦ（ａｂ’）２フラグメントを生成する。これらのフラグメントは、ジチオール錯体化剤亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元されて、近隣のジチオールを安定させて、分子間のジスルフィド形成を防止する。次に、生成されたＦａｂ’フラグメントは、チオニトロベンゾアート（ＴＮＢ）誘導体へ転換される。Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つは、次に、メルカプトエチルアミンを用いた還元によってＦａｂ’−チオールへ再転換され、そして等モーラー量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合されて二重特異性の抗体を形成する。生成された二重特異性の抗体は、酵素の選択的な固定のための薬剤として使用され得る。
【０１５５】
更に、Ｆａｂ’フラグメントは、大腸菌から直接的に回収され得るし、化学的にカップル化されて二重特異性の抗体を形成し得る。Shalaby et al., J. Exp. Med. 175:217-225 (1992)は、完全なヒト型化二重特異性の抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の生成を開示する。各Ｆａｂ’フラグメントは大腸菌から別々に分泌され、そして二重特異性の抗体を形成するようにインビトロの指定的ないし指向された（directed）化学カップリングに供された。従って、生成された二重特異性の抗体は、ＥｒｂＢ２受容体を過剰発現する細胞及びノーマルヒトＴ細胞に対して結合することができ、そして、ヒト胸部腫瘍ターゲットに対するヒト細胞毒性のリンパ球の溶解活性を引き起こすことができた。
【０１５６】
組み換え細胞培養液から直接的に二重特異性の抗体フラグメントを作製及び単離することに関する種々の技術も記載されている。例えば、二重特異性抗体はロイシンジッパーを使用して生成されている。Kostelny et al., J. Immunol. 148(5):1547-1553 (1992)。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドは、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分が連結された。抗体ホモ二量体は、モノマーを形成するようにヒンジ領域において還元され、そして次に抗体ヘテロ二量体を形成するように再び酸化される。この方法は、抗体ホモ二量体の生成にも利用され得る。Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)に記載される「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体フラグメントを作製する代わりのメカニズムを提供している。フラグメントは、同一の鎖の２つのドメインの間のペアリングを許容するには短かすぎるリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。従って、１つのフラグメントのＶＨ及びＶＬドメインは、他のフラグメントの相補的なＶＬ及びＶＨドメインを強制的にペアにし、それによって２つの抗原結合部位を形成する。１本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用によって二重特異性の抗体フラグメントを作製する他の手法も報告されている。Gruber et al., J. Immunol. 152:5368 (1994)参照。
【０１５７】
２つを上回る結合価を有する抗体が考えられる。例えば、三重特異性抗体が調製され得る。Tutt et al., J. Immunol. 147:60 (1991)。
【０１５８】
二重特異性の抗体の例は、２つの異なるエピトープ（そのうちの少なくとも一方は本発明のタンパク質抗原を起源とする）に結合することができる。あるいは、免疫グロブリン分子の抗抗原性(anti-antigenic)のアームは、特定の抗原を発現する細胞に対する細胞の防御メカニズムに焦点を当てるようにＴ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８、又はＢ７）又はＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）などのＩｇＧに関するＦｃ受容体（ＦｃγＲ）のような白血球上のトリガー分子に対して結合するアームと組み合わせられ得る。二重特異性の抗体も、細胞毒性の薬剤を特定の抗原を発現する細胞に対して指向させるために使用され得る。これらの抗体は、抗原結合性アーム及びＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡ又はＴＥＴＡなどの細胞毒性剤又は放射性核種キレート剤を結合するアームを有する。目的の他の二重特異性の抗体は、本願に記載のタンパク質抗原を結合し、そして更に組織因子（ＴＦ）を結合する。
【０１５９】
ヘテロコンジュゲート抗体も、本発明の範囲内である。ヘテロコンジュゲート抗体は、２つの共有結合した抗体を含む。そのような抗体は、例えば、免疫システム細胞が不所望の細胞（米国特許４，６７６，９８０号参照）及びＩＶ感染の処置（ＷＯ９１／００３６０号；ＷＯ９２／２００３７３号；ＥＰ０３０８９号参照）をターゲットすることが提案されている。抗体は、クロスリンキング剤に関連するものを含む、合成タンパク質化学における既知の方法を使用してインビトロで調製され得ることが考慮される。例えば、イムノトキシンは、ジスルフィド交換反応を使用して又はチオエーテル結合を形成することによって構築され得る。この目的のための適切な試薬の例は、イミノチオレート及びメチル−４−メルカプトブチルイミデート、例えば、米国特許４，６７６，９８０号に開示されたものを含む。
【０１６０】
本発明の抗体をエフェクター機能に関して、例えば、異常なＣＤ４７シグナリングと関連した病気及び疾患の処置における抗体の有効性を増強するように改変することが望まれ得る。例えば、システイン残基（単数又は複数）はＦｃ領域へ導入され得るし、それによってこの領域における鎖間のジスルフィド結合形成を許容する。従って、産出されるホモ二量体抗体は、改善された内部移行能力及び／又は増加した補体媒性細胞致死性及び抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を有することができる（Caron et al., J. Exp Med., 176: 1191-1195 (1992) 及び Shopes, J. Immunol., 148: 2918-2922 (1992)参照）。あるいは、抗体は、２重のＦｃ領域を有するように遺伝子操作され得るし、それによって増強された体溶解能力及びＡＤＣＣ能力を有することができる（Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design, 3: 219-230 (1989)）。
【０１６１】
本発明は、トキシン（例えば、細菌、真菌、植物、又は動物オリジンの酵素的に活性なトキシン、又はそれらのフラグメント）、又は放射性同位体（すなわち、放射性コンジュゲート）などの細胞毒性の薬剤にコンジュゲートされた抗体を含む免疫コンジュゲートにも関連する。
【０１６２】
使用され得る酵素的に活性なトキシン及びそのフラグメントは、ジフテリア鎖、ジフテリアトキシンの非結合性活性フラグメント、エキソトキシン鎖（シュードモナスエルジノーサ由来）、リシン鎖、アブリン鎖、モデシン鎖、α−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンを含む。多種多様な放射性核種は、放射性物質コンジュゲート抗体の生成に利用可能である。例は、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ及び１８６Ｒｅを含む。
【０１６３】
抗体及び細胞毒性剤のコンジュゲートは、多種多様な二重機能タンパク質−カップリング剤（Ｎ−サクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、イミノチオレーン（ＩＴ）、イミドエステルの二重機能誘導体（ジメチルアジピミダートＨＣＬなど）、活性エステル（ジサクシニミジルスベラートなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（tolyene 2,6-diisocyanateなど）、及び二重活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）など）を使用して作製される。例えば、リシンイムノトキシンは、Vitetta et al., Science 238: 1098 (1987)に記載されるように調製され得る。炭素１４ラベルの１−イソチオシアナートベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体へのラジオヌクレオチドのコンジュゲーションのためのキレート剤の例である（ＷＯ９４／１１０２６参照）。
【０１６４】
本発明の分野における通常の知識を有する者は、多種多様な潜在的（possible）モイエティが本発明の結果として生じた抗体へカップル化され得ることを認識するだろう。（例えば、“Conjugate Vaccines”, Contributions to Microbiology and Immunology, J. M. Cruse and R. E. Lewis, Jr (eds), Carger Press, New York, (1989)参照、該文献の全体の内容は引用によって本願に組み込まれる）。
【０１６５】
カップリングは、抗体及び他のモイエティがそれらのそれぞれの活性を保持する限り、２つの分子を結合するいずれかの化学反応によって達成され得る。この連結は、多くの化学的メカニズム（例えば、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合及び錯体形成）を含むことができる。しかしながら、好ましい結合は、共有結合である。共有結合は、存在する側鎖の直接的な凝縮又は外部の架橋分子の組み込みの何れかによって達成され得る。多くの二価の又は多価の連結剤は、タンパク質分子（本発明の抗体）と他の分子をカップリングすることにおいて有用である。例えば、代表的なカップリング剤は、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアナート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼン及びヘキサメチレンジアミンなどの有機化合物を含むことができる。このリストは、本発明の技術分野において知られた種々のクラスのカップリング剤を網羅的に示すものでは無く、むしろより一般的なカップリング剤の例である（Killen and Lindstrom, Jour. Immun. 133:1335-2549 (1984); Jansen et al., Immunological Reviews 62:185-216 (1982); 及び Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)など参照）。
【０１６６】
好ましいリンカーは、文献に記載されている（例えば、ＭＢＳ（Ｍ−マレインイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）の使用を記載するRamakrishnan, S. et al., Cancer Res. 44:201-208 (1984) 参照）。オリゴペプチドリンカーによって抗体にカップル化されるハロゲン化アセチルヒドラジド誘導体の使用を記載する米国特許５，０３０，７１９号も参照。特に好ましいリンカーは、（ｉ）ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）カルボジイミドヒドロクロリド；（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４−サクシニミジルオキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジル−ジチオ）−トルエン（Pierce Chem. Co., Cat #21651G）；（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（サクシニミジル−６［３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノエート（Pierce Chem. Co. Cat. #2165-G）；（ｉｖ）スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ（スルホサクシニミジル６［３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド］ヘキサノエート（Pierce Chem. Co. Cat. #2165-G）；及び（ｖ）ＥＤＣに対してコンジュゲートされるスルホ−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスルホ−スクシンイミド：Pierce Chem. Co., Cat. #24510）を含む。
【０１６７】
上記のリンカーは、異なる性質（attributes）を有する構成要素を含み、従って、異なる生理化学的特徴を有するコンジュゲートへ導く。例えば、アルキルカルボキシラートのスルホ−ＮＨＳエステルは、芳香族カルボキシラートのスルホ−ＮＨＳエステルより安定である。リンカーを含むＮＨＳ−エステルは、スルホ−ＮＨＳエステルよりも低可溶性である。更に、リンカーＳＭＰＴは、立体的に邪魔されたジスルフィド結合を含み、増加した安定性を有するコンジュゲートを形成することができる。ジスルフィド結合はインビトロで開裂されるので、一般的にはジスルフィド結合は、他の結合よりも不安定であり、そのため、取得可能なコンジュゲートは少ない。スルホ−ＮＨＳ、特に、カルボジイミドカップリングの安定性を増強することができる。スルホ−ＮＨＳと組み合せて使用した場合には、カルボジイミドカップリング（ＥＤＣなど）は、カルボジイミドカップリング反応単独よりも加水分解に対してより抵抗性のエステルを形成する。
【０１６８】
本願に開示された抗体は、免疫リポソームとしても製剤化され得る。抗体を含むリポソームは、Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688 (1985); Hwang et al., Proc. Natl  Acad. Sci. USA, 77: 4030 (1980);及び米国特許４，４８５，０４５号及び４，５４４，５４５号などに記載された本発明の技術分野において知られた方法によって調製される。延長された循環時間を有するリポソームは、米国特許５，０１３，５５６号に開示されている。
【０１６９】
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、及びＰＥＧ−誘導体化フォスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物で逆相蒸発法によって生成され得る。リポソームは、定義されたポア（pore）サイズのフィルターを介して押し出されて、所望の直径を有するリポソームが生成される。本発明の抗体のＦａｂ’フラグメントは、Martin et al., J. Biol. Chem., 257: 286-288 (1982)に記載されるように、ジスルフィドインターチェンジ反応を介してリポソームに対してコンジュゲートされ得る。
【０１７０】
ＣＤ４７に対する抗体の使用
本発明に記載の治療物質（entities）の投与は、改善された転写、送達、耐性、及び同様のものを提供するために、適切な担体、賦形剤、及び製剤へ組み込まれる他の薬剤と一緒に投与されるだろう。多数の適切な製剤を、全ての薬剤師に知られている処方書（Remington’s Pharmaceutical Sciences (15th ed, Mack Publishing Company, Easton, PA (1975)), 特にその中のBlaug, Seymour,による第８７章）に見出すことができる。例えば、これらの製剤は、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性又はアニオン性の）を含む小胞（Lipofectin（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、油中水及び水中油エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、及びカーボワックスを含む半固体混合物を含む。上述の混合物のいずれかは、本発明に記載の処置及び治療に適切であり得るが、ただし、製剤中の有効成分は製剤によって失活せず、製剤は生理学的に両立でき、かつ、投与経路を許容可能である。Baldrick P. “Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance.” Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000), Wang W. “Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals.” Int. J. Pharm. 203(1-2):1-60 (2000), Charman WN “Lipids, lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts.” J Pharm Sci. 89(8):967-78 (2000), Powell et al. “Compendium of excipients for parenteral formulations” PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311 (1998) 及び薬剤師に良く知られている製剤、賦形剤及び担体に関連した更なる情報に関するそれらの中の引用文献も参照。
【０１７１】
１つの実施形態において、本発明の抗体（本発明のモノクローナル抗体を含む）は、療法剤として使用され得る。そのような薬剤は、一般的には、対象における異常な（aberrant）ＣＤ４７発現、活性及び／又はシグナリングと関連した病気又は病態の診断、予知、モニタ、処置、緩和、及び／又は防止に採用されるだろう。治療レジメンは、対象（例えば、異常なＣＤ４７発現、活性及び／又はシグナリングと関連した病気又は疾患（例えば、癌又は他の腫瘍性の疾患）を患う（又は発症するリスクがある）ヒト患者）を、標準的方法を使用して同定することによって実行される。抗体の調製は、好ましくはそのターゲット抗原に対する高い特異性及び高い親和性を有するものが対象に投与され、一般的にはそのターゲットとの結合に起因して効果を有するだろう。当該抗体の投与は、ターゲット（例えば、ＣＤ４７）の発現、活性及び／又はシグナリング機能を抑制又は阻害（ないし阻止）又は干渉し得る。当該抗体の投与は、ターゲット（例えば、ＣＤ４７）と、それがナチュラルに結合する内来性リガンド（例えば、ＳＩＲＰα）との結合を抑制又は阻害又は干渉し得る。例えば、当該抗体は、ターゲットに対して結合し、そしてＣＤ４７の発現、活性及び／又はシグナリングを調節、ブロック、阻止、減少、拮抗（アンタゴナイズ）、中和、又は干渉する。
【０１７２】
異常なＣＤ４７発現、活性及び／又はシグナリングに関連した病気又は疾患は、血液性の癌及び／又は固形腫瘍を含むがそれらの例に限定されない。血液系の癌は、例えば、白血病、リンパ腫及び骨髄腫を含む。ある形態の白血病は、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；骨髄増殖性疾患／腫瘍（ＭＰＤＳ）；及び骨髄形成異常症候群を含むがそれらの例に限定されない。ある形態のリンパ腫は、ホジキンリンパ腫、非活動的（indolent）及び活動的（aggressive）の両方の非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、及び濾胞性リンパ腫（小細胞及び大細胞）を含むがそれらの例に限定されない。ある形態の骨髄腫は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、大細胞骨髄腫、重鎖骨髄腫、及び軽鎖又はベンス・ジョーンズ骨髄腫を含む、がそれらの例に限定されない。固形腫瘍は、例えば、胸部腫瘍、卵巣腫瘍、肺腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、メラノーマ腫瘍、直腸・結腸腫瘍、肺腫瘍、頭及び頚部腫瘍、膀胱腫瘍、食道腫瘍、肝臓腫瘍、及び腎臓腫瘍を含む。
【０１７３】
癌及び他の腫瘍性の疾患と関連した症状は、例えば、炎症、発熱、一般的な倦怠感、発熱、痛み、しばしば炎症を起こした領域に局在化し、食欲低下、体重減少、浮腫、頭痛、疲労、発疹、貧血症、筋力低下、筋肉疲労及び例えば、腹痛、下痢又は便秘などの腹部の症状を含む。
【０１７４】
本発明の抗体の治療有効量は、一般的には客観的に治療を達成するために必要な量に関連する。上記のように、これは、抗体とそのターゲット抗原の間の（あるケースではターゲットの機能に干渉する）結合相互作用であり得る。投与される必要量は、更に、その特異的な抗原に対する抗体の結合親和性に依存し、投与された抗体がそれを投与されたフリー体積の他対象（the free volume other subject）から枯渇する速度（rate）にも依存するだろう。本発明の抗体又は抗体フラグメントの治療有効投与量の通常範囲は、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重から約１００ｍｇ／ｋｇ体重であり得るが、この例に限定されない。通常投与頻度は、１日２回から１週間に１回に渡り得る。
【０１７５】
処置の有効性は、特定の炎症性関連性疾患の診断又は処置に関するいずれかの既知の方法と関連して決定される。１以上の炎症性関連疾患の症状の緩和は、抗体が臨床上の利益をもたらすことを示す。
【０１７６】
所望の特異性を有する抗体のスクリーニング方法は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）及び他の本発明の技術分野における既知の免疫媒介性の技術を含むがそれらに限定されない。
【０１７７】
他の実施形態において、ＣＤ４７に対する抗体は、ＣＤ４７の局在化及び／又は定量に関連する本発明の技術分野における既知の方法において使用される（例えば、適切な生理学的なサンプル内のＣＤ４７、及び／又は、ＣＤ４７及びＳＩＲＰαの両方のレベルの測定における使用、診断方法における使用、タンパク質イメージングにおける使用及び同様のもの）。所与の実施形態において、ＣＤ４７に対して特異的な抗体、又はその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログ（抗体由来の抗原結合ドメインを含む）は、薬学的に活性な化合物（以降では「療法剤（Therapeutics）」と称される）として利用される。
【０１７８】
他の実施形態において、ＣＤ４７に特異的な抗体は、免疫親和性、クロマトグラフィ又は免疫沈降などの標準的技術によってＣＤ４７ポリペプチドを単離することに使用され得る。ＣＤ４７タンパク質に対する抗体（又はそのフラグメント）は、例えば、所与の処置レジメンの効果を決定するための臨床上のテスト手法の一部分として、組織内のタンパク質レベルをモニタすることに診断上使用され得る。検出は、抗体と検出可能な物質とをカップリング（すなわち、物理的に連結：link）することによって促進され得る。検出可能な物質の例は、種々の酵素、補因子基（prosthetic groups）、蛍光材、発光材、生物発光材、及び放射性物質を含む。適切な酵素の例は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼを含み；適切な補因子基複合体の例は、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンを含み；適切な蛍光材料の例は、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド又はフィコエリトリンを含み；発光材料の例は、ルミノールを含み；生物発光材料の例は、ルシフェラーゼ、ルシフェリン及びエクオリンを含み；そして、適切な放射性物質の例は、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ又は３Ｈを含む。
【０１７９】
更なる他の実施形態において、本発明の抗体は、サンプル中のＣＤ４７、及び／又は、ＣＤ４７及びＳＩＲＰαタンパク質（又はそのタンパク質フラグメント）の両方の存在を検出するための薬剤として使用され得る。いくつかの実施形態において、抗体は検出可能なラベルを含む。抗体は、ポリクローナルであるか、又はより好ましくはモノクローナルである。無処置の（完全な：intact）抗体、又はそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、又はＦ（ａｂ’）２）が使用される。プローブ又は抗体に関して、用語「ラベルされる」とは、検出可能な物質とプローブ又は抗体とをカップリング（すなわち、物理的に連結）することによるプローブ又は抗体の直接的なラベリング、及び、直接的にラベルされている他の試薬との反応によるプローブ又は抗体の間接的なラベリングを含むことが意図される。間接的なラベリングの例は、蛍光ラベルされている二次抗体を使用した一次抗体の検出、及び、ビオチンでのＤＮＡプローブの末端ラベリング（蛍光ラベルされているストレプトアビジンで検出され得るように）を含む。用語「生物サンプル」は、対象から単離された組織、細胞及び生物学的流動体、そして、対象に存在する組織、細胞及び流動体を含むことが意図される。従って、用語「生物サンプル」の使用には、血液、及び血清、血漿又はリンパを含む血液の分画又は構成要素が含まれる。すなわち、本発明の検出方法は、インビトロ及びインビボの生物サンプル内の解析対象物（ｍＲＮＡ、タンパク質又はゲノムＤＮＡ）を検出することに使用され得る。例えば、インビトロでの解析対象物（ｍＲＮＡ）の検出に関する技術は、ノーザンハイブリダイズゼーション及びインサイチュハイブリダイズゼーションを含む。インビトロでの解析対象物（タンパク質）の検出に関する技術は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡｓ）、ウェスタンブロット、免疫沈降及び免疫蛍光法を含む。インビトロでの解析対象物（ゲノムＤＮＡ）の検出に関する技術は、サザンハイブリダイズゼーションを含む。免疫アッセイを実行する手法は、例えば、「ELISA: Theory and Practice: Methods in Molecular Biology」, Vol. 42, J. R. Crowther (Ed.) Human Press, Totowa, NJ, 1995; 「Immunoassay」, E. Diamandis and T. Christopoulus, Academic Press, Inc., San Diego, CA, 1996; 及び「Practice and Theory of Enzyme Immunoassays」, P. Tijssen, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, 1985に開示されている。更に、インビボでの解析対象物（タンパク質）の検出に関する技術は、対象へ、ラベルされた抗解析対象タンパク質抗体を導入することを含む。例えば、抗体は、対象内での存在及び位置が標準の画像処理技術によって検出され得る放射性マーカーでラベルされ得る。
【０１８０】
ＣＤ４７抗体の治療上の投与及び製剤
本発明の抗体（本願において「活性化合物」とも称される）、及びその誘導体、フラグメント、アナログ及びホモログは、投与に適する医薬組成物へ組み込まれ得る。そのような組成物の調製に関する原則及び考察、並びに、構成要素の選択のガイダンスは、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences: The Science And Practice Of Pharmacy 19th ed. (Alfonso R. Gennaro, et al., editors) Mack Pub. Co., Easton, Pa.: 1995; Drug Absorption Enhancement: Concepts, Possibilities, Limitations, And Trends,  Harwood Academic Publishers, Langhorne, Pa.,  1994;及び Peptide And Protein Drug Delivery (Advances In Parenteral Sciences, Vol. 4), 1991, M. Dekker,  New Yorkにおいて提供される。
【０１８１】
そのような組成物は、典型的には抗体及び医薬的に許容可能な担体を含む。抗体フラグメントが使用される場合には、ターゲットタンパク質の結合ドメインに対して特異的に結合する最小の阻害性フラグメントが好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、ペプチド分子は、ターゲットタンパク質配列に対して結合する能力を有するように設計され得る。そのようなペプチドは、化学的に合成され、及び／又は組み換えＤＮＡテクノロジーによって生成され得る（例えば、Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7889-7893 (1993)参照）。
【０１８２】
本願において使用した用語「医薬的に許容可能な担体」は、医薬投与と両立可能な溶媒、分散媒、コーティング剤、抗細菌剤、抗真菌剤、等張剤、吸収遅延剤、及び同様のものの、いずれか及び全てを含むことが意図される。適切な担体は、本発明の分野における標準引用文献であるRemington’s Pharmaceutical Sciencesの最新版に記載されている（該文献は引用によって本願に組み込まれる）。そのような担体又は希釈液の好ましい例は、水、生理食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンを含むがそれらに限定されない。リポソーム、及び不揮発性油などの非水性ビヒクルも、使用され得る。医薬的活性物質のためのそのような培地及び薬剤の使用は、本発明の技術分野において良く知られている。いずれかの従来の培地又は薬剤が活性化合物と両立しない（インコンパチブル）場合を除き、組成物におけるその使用が考慮される。
【０１８３】
インビボの投与に使用される製剤は無菌状態でなければならない。これは無菌濾過メンブレンを介した濾過によって容易に達成される。
【０１８４】
本発明の医薬組成物は、その意図した投与経路で両立できる（コンパチブル）ように製剤化される。投与経路の例は、非経口、例えば、静脈内、真皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮的な（すなわち、局所的な）、経粘膜、及び直腸内の投与を含む。非経口、真皮内又は皮下の適用のために使用される溶液又は懸濁液は、以下の構成要素を含むことができる：注射用水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒などの無菌希釈液；ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗細菌剤；アスコルビン酸又は重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤；アセタート、クエン酸又はホスファートなどのバッファ、及び塩化ナトリウム又はデキストロースなどの浸透圧を調節するための薬剤。ｐＨは、臭化水素酸又は水酸化ナトリウムなどの酸又は塩基で調節され得る。非経口の調製物は、アンプル、使い捨て可能なシリンジ又はガラス又はプラスチック製の複数回投与バイアルに封入され得る。
【０１８５】
注射使用に適する医薬組成物は、無菌水溶液（水溶性）、無菌分散剤及び無菌注射溶液又は分散剤の即席調製物のための無菌粉末を含む。静脈内投与のために、適切な担体は、生理食塩水、静菌水（bacteriostatic water）、Cremophor EL（商標）（BASF, Parsippany, N.J.）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。全てのケースにおいて、組成物は無菌状態でなければならず、かつ、注射器充填容易性（easy syringeability）が存在する程度の流動体であるべきである。それは、製造状態及び貯留状態の下で安定でなければならず、かつ、細菌及び真菌などの微生物の異物混入（コンタミネーション）作用に対して保存されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール、及び同様のもの）、及びそれらの適切な混合物を含む溶媒又は分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散剤のケースでは必要とされる粒子サイズの維持によって、そして、界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の予防は、種々の抗細菌剤及び抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール、及び同様のもの）によって達成され得る。多くのケースにおいて、組成物中に等張剤（例えば、糖、ポリアルコール、マンニトール（manitol）など、ソルビトール、塩化ナトリウム）を含むことが好ましい。注射可能な組成物の延長された吸収は、吸収を遅延させる薬剤（例えば、アルミニウムモノステアラート及びゼラチン）を組成物に含ませることによってもたらされ得る。
【０１８６】
無菌注射溶液は、適切な溶媒中の必要量の活性化合物と、上記に列挙される成分の１つ又は組み合わせと、を組み合わせることによって調製され得るし、必要であればその後に濾過滅菌処理に供される。一般的には、分散剤は、基本的な分散媒及び上記に列挙したもの以外の必要とされる他の成分を含む無菌ビヒクルへ、活性化合物を入れることによって調製される。無菌注射液の調製のための無菌粉末の場合には、調製方法は、その無菌濾過済の溶液から有効成分プラスいずれかの追加の所望の成分の粉末をもたらす減圧乾燥及び凍結乾燥である。
【０１８７】
経口組成物は、一般的には不活性成分希釈液又は食用の担体を含む。それらは、ゼラチンカプセルに封入されるか、又は錠剤へ圧縮され得る。経口の治療上の投与の目的のために、活性化合物は、賦形剤と一緒に組み込まれ得るし、錠剤、トローチ、又はカプセルの形状で使用され得る。経口の組成物は、口腔洗浄剤としての使用のための流動性担体を使用しても調製され得るし（ここで流動性担体中の化合物は、経口適用され、洗口され（swished）、そして吐き出されるか又は飲み込まれる）。医薬的に両立可能な結合剤及び／又はアジュバント材は、組成物の一部分として含まれ得る。錠剤、丸薬、カプセル、トローチ及び同様のものは、以下の成分のいずれか又は類似の特質の化合物をふくむことができる：微結晶性セルロース、トラガントガム又はゼラチンなどの結合剤；デンプン又はラクトースなどの賦形剤；アルギン酸、Primogel又はコーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム又はステロート（Sterotes）などの潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素などの潤滑剤；スクロース又はサッカリンなどの甘味料；又はペパーミント、サルチル酸メチル又はオレンジフレーバーなどの香味料。
【０１８８】
吸入による投与のために、化合物は、適切な噴霧剤（例えば、二酸化炭素などのガス）を含む被加圧容器、ディスペンサー又は噴霧器からエアロゾルスプレーの形状で送達される。
【０１８９】
全身性の投与は、経粘膜的又は経皮的手段によるものでもあり得る。経粘膜的又は経皮的な投与のために、浸透するバリアにする浸透剤が製剤に使用される。そのような浸透剤は、一般的には本発明の技術分野において知られており、例えば、経粘膜的な投与のための、洗剤、胆汁塩、及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜的な投与は、鼻用スプレー又は座薬の使用を介して達成され得る。経皮投与のために、活性化合物は、本発明の技術分野において一般的に知られているように、軟膏（ointments、salves）、ゲル、又はクリームへ製剤化される。
【０１９０】
化合物は、座薬（例えば、ココアバター及び他のグリセリドなどの従来の座薬ベースと一緒に）、又は直腸内送達のための支持浣腸剤の形状でも調製され得る。
【０１９１】
１つの実施形態において、活性化合物は、身体からの急速な脱離から化合物を保護するだろう担体と一緒に調製され（維持型／コントロール型放出製剤など）、移植及びマイクロカプセル化した送達システムを含む。生分解性、生体適合性ポリマー（エチレンビニルアセタート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸など）が、使用され得る。そのような製剤の調製方法は、本発明の技術分野における通常の知識を有する者には明らかであるだろう。
【０１９２】
例えば、有効成分は、例えば、コアセルベーション技術によって又は界面のポリマー化によって調製されるマイクロカプセル（コロイド状の薬剤送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、ミクロエマルジョン、ナノ−粒子、及びナノカプセル）において又はマクロエマルジョンにおいて、それぞれ、例えば、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリル酸）マイクロカプセル、に封入され得る。
【０１９３】
維持放出調製物が調整され得る。維持放出調製物の適切な例は、抗体を含む固形疎水性ポリマーの半透過性のマトリックスを含み、該マトリックスは造形品（例えば、フィルム又はマイクロカプセル）の形状である。維持放出マトリックスの例は、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリル酸）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸及びγエチル−Ｌ−グルタミン酸のコポリマー、非分解性エチレン−ビニルアセタート、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー（例えば、LUPRON DEPOT（商標）など）（乳酸−グリコール酸コポリマー及び酢酸リュープロリドを含む注射可能なミクロスフェア）、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸を含む。１００日間を上回る分子の放出を可能にするエチレン−ビニルアセタート及び乳酸−グリコール酸などのポリマーの一方で、あるヒドロゲルは、より短い期間にタンパク質を放出する。
【０１９４】
材料は、Alza Corporation and Nova Pharmaceuticals, Inc.からも商業的に取得され得る。リポソーム性懸濁液（ウィルス性抗原に対するモノクローナル抗体で感染細胞に対してターゲットされたリポソームを含む）は医薬的に許容可能な担体としても使用され得る。これらは、本発明の技術分野における通常の知識を有する者に知られている（例えば、米国特許４，５２２，８１１号に記載されている）方法に従って調製され得る。
【０１９５】
投与容易性及び投与量均一性のために経口又は非経口の組成物を投与ユニット形状へ製剤化することは、特に有利である。本願において使用した「投与ユニット形状」とは、処置される対象のための投与単位として適した物理的に別々のユニットを意味する。各ユニットは、必要とされる医薬担体と関連して所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の投与ユニット形状の詳細は、活性化合物のユニークな特徴、達成される特定の治療効果、そのような個人の処置のための活性化合物の混合の技術分野に固有の限定によって規定され、かつ直接的に依存する。
【０１９６】
医薬組成物は、投与指示書と一緒に容器、パック又はディスペンサーに含まれ得る。
【０１９７】
製剤は、処置される特定の症状の必要性に応じて１つを上回る活性化合物（好ましくは互いに不利に影響しない相補的な活性を有するもの）を含むこともできる。その代わりに、又は更に、組成物は、例えば、細胞毒性の薬剤、サイトカイン、化学療法剤、又は成長−阻害性の薬剤などのその機能を増強する薬剤を含むことができる。そのような分子は、意図した目的に有効な量の組み合わせで適切に存在する。
【０１９８】
１つの実施形態において、活性化合物は、すなわち、他の薬剤（例えば、病理学的な状態又は疾患（種々の形態の癌、自己免疫疾患及び炎症性疾患など）の処置に有用な療法剤）と組み合わせて、組み合わせ療法で投与される。この文脈において用語「組み合わせ」とは、実質的に同時期（同時又は順次継続的の何れか）で施されることを意味する。順次継続的に施される場合には、第２化合物の投与の開始（オンセット）時に、２つの化合物の第１化合物が、好ましくは、処置サイトにおいて有効な濃度検出可能なままである。
【０１９９】
例えば、組み合わせ療法は、以下により詳細に記載されるように、１以上の追加の療法剤（例えば、１以上のサイトカイン及び増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症性剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、及び／又は細胞毒性又は細胞分裂抑制剤）と一緒に共製剤化及び／又は共投与される、本発明の１以上の抗体を含むことができる。そのような組み合わせ療法は、より低い投与量の投与される療法剤を有利に利用することができ、そのため、種々の単独療法と関連した毒性又は合併症を回避することが可能である。
【０２００】
本発明の抗体と組み合わせて使用される好ましい療法剤は、炎症性の応答の異なるステージで干渉する薬剤である。１つの実施形態において、本願に記載の１以上の抗体は、１以上の追加の薬剤（他のサイトカイン又は増殖因子アンタゴニスト（例えば、可溶性受容体、ペプチド阻害剤、小分子、リガンド融合物）；又は他のターゲットに対して結合するその抗体又は抗原結合フラグメント（例えば、他のサイトカイン又は増殖因子、それらの受容体、又は他の細胞表面分子に対して結合する抗体）；及びその抗炎症性サイトカイン又はアゴニストなど）と一緒に共製剤化及び／又は共投与され得る。
【０２０１】
他の実施形態において、本発明の抗体は、自己免疫疾患、炎症性疾患などに対するワクチンアジュバントとして使用される。これらのタイプの疾患の処置のためのアジュバントの組み合わせは、ターゲットされた自己抗原、すなわち、自己免疫に関与する自己抗原（例えば、ミエリン塩基性たんぱく質）；炎症性自己抗原（例えば、アミロイドペプチドタンパク質）又は移植抗原（例えば、同種抗原）に由来する多種多様な抗原との組み合わせでの使用に適する。抗原は、以下のいずれかのタンパク質及びフラグメントに由来したペプチド又はポリペプチドを含むことができる：サッカライド、タンパク質、ポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド、自己抗原、アミロイドペプチドタンパク質、移植抗原、アレルゲン又は他のマクロ分子構成要素。いくつかの例において、１を上回る抗原は抗原性組成物に含まれる。
【０２０２】
他の療法剤の設計及び生成
本発明に従って、及び、ＣＤ４７に関して本願において生成されかつ特徴付けられた抗体の活性に基づいて、抗体モイエティを越えた他の治療上のモダリティの設計が促進される。そのようなモダリティは、二重特異性抗体などの先進的（advanced）抗体療法剤、イムノトキシン、及び放射標識療法剤、ペプチド療法剤、遺伝子治療、特に細胞内抗体、アンチセンス療法剤及び小分子の生成を含むがそれらに限定されない。
【０２０３】
例えば、二重特異性抗体に関して、以下のものを含む二重特異性の抗体が生成され得る：（ｉ）２抗体：ＣＤ４７に対する特異性を有するもの及び第２の分子に対する他のものが一体的にコンジュゲートされる、（ｉｉ）単一の抗体：ＣＤ４７に対して特異的な第１の鎖と、第２の分子に対して特異的な第２の鎖とを有する、又は（ｉｉｉ）１本鎖抗体：ＣＤ４７及び第２の分子に対して特異性を有する。そのような二重特異性の抗体は公知技術を使用して生成される。（ｉ）及び（ｉｉ）に関しては、例えば、Fanger et al. Immunol Methods 4:72-81 (1994)及びWright et al. Crit, Reviews in Immunol. 12125-168 (1992)を参照。（ｉｉｉ）に関しては、例えば、Traunecker et al. Int. J. Cancer (Suppl.) 7:51-52 (1992)を参照。
【０２０４】
イムノトキシンに関しては、抗体は、イムノトキシンとして作用するように、本発明の技術分野において良く知られた技術を利用して改変され得る。例えば、Vitetta Immunol Today 14:252 (1993)を参照。米国特許５，１９４，５９４も参照。放射標識抗体の調製に関してはそのような改変抗体も、本発明の技術分野において良く知られた技術を利用して容易に調製され得る。例えば、Junghans et al. in Cancer Chemotherapy and Biotherapy 655-686 (2d edition, Chafner and Longo, eds., Lippincott Raven (1996))を参照。米国特許４，６８１，５８１号、４，７３５，２１０号、５，１０１，８２７号、５，１０２，９９０号（ＲＥ３５，５００）、５，６４８，４７１号、及び５，６９７，９０２号も参照。イムノトキシン及び放射標識分子の各々は、ＣＤ４７を発現する細胞を殺す傾向があるだろう。
【０２０５】
治療ペプチドの生成に関しては、ＣＤ４７及びそれに対する抗体（本発明の抗体など）に関連した構造情報の利用又はペプチドライブラリのスクリーニングを介して、治療ペプチドは、ＣＤ４７に対して指向するように（directed）生成され得る。ペプチド療法剤のデザイン及びスクリーニングに関しては、Houghten et al. Biotechniques 13:412-421 (1992), Houghten PNAS USA 82:5131-5135 (1985), Pinalla et al. Biotechniques 13:901-905 (1992), Blake and Litzi-Davis BioConjugate Chem. 3:510-513 (1992)において議論される。イムノトキシン及び放射標識分子も調製され得るし、ペプチドモイエティに関しては抗体に関して上記議論したように類似の様式で調製され得る。ＣＤ４７分子（又はある形状（スプライスバリアントなど）又はその他の（alternate）形状）は、病気のプロセスにおいて機能的に活性であると仮定すれば、従来の技術を介して、遺伝子及びそれに対するアンチセンス療法剤を設計することもできよう。そのようなモダリティは、ＣＤ４７の機能を調節するために利用され得る。それに関しては、本発明の抗体は、それに関連した機能アッセイの設計及び使用を容易にする。アンチセンス療法剤に関する設計及び手法は、国際特許出願ＷＯ９４／２９４４４において詳細に議論されている。遺伝子治療に関する設計及び手法は良く知られている。しかしながら、特に、細胞内抗体に関連する遺伝子治療技術の使用は、特に有利であることが証明できるであろう。例えば、Chen et al. Human Gene Therapy 5:595-601 (1994)及びMarasco Gene Therapy 4:11-15 (1997)を参照。遺伝子療法剤の一般的な設計及び遺伝子療法剤に関する考察は、国際特許出願ＷＯ９７／３８１３７においても議論される。
【０２０６】
ＣＤ４７分子の構造、ＣＤ４７分子と本発明に記載の他の分子（ＳＩＲＰα及び／又は本発明の抗体など）との相互作用及びその他から収集した知識は、更なる治療モダリティを合理的に設計することに利用されることができる。この点に関し、合理的な薬剤設計技術（Ｘ線結晶学、コンピュータ支援型（又はアシスト型）分子モデリング（ＣＡＭＭ）、構造−活性の量的又は質的関係（ＱＳＡＲ）及び類似技術など）が、薬剤発見の試みに焦点をあてることに利用され得る。合理的な設計は、ＩＬ−６Ｒｃの活性を改変又は調節することに使用され得る分子又はその特異的な形状と相互作用するタンパク質又は合成構造の予測を許容する。そのような構造は、生物学的システムにおいて化学合成又は発現され得る。このアプローチは、Capsey et al. Genetically Engineered Human Therapeutic Drugs (Stockton Press, NY (1988))において総論（レビュー）されている。更に、コンビナトリアルライブラリが設計及び合成され得るし、高スループットスクリーニング試行（efforts）などのスクリーニングプログラムにおいて使用され得る。
【０２０７】
スクリーニング方法
本発明は、調節因子、すなわち、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの結合を調節又は干渉する候補化合物、テスト化合物又は薬剤（例えば、ペプチド、ペプチド模倣物、小分子又は他の薬剤）、又は、ＣＤ４７及び／又はＣＤ４７−ＳＩＲＰαのシグナリング機能を調節又は干渉する候補化合物、テスト化合物又は薬剤、を同定する方法（本願において「スクリーニングアッセイ」とも称される）を提供する。異常なＣＤ４７及び／又はＣＤ４７−ＳＩＲＰαの発現、活性及び／又はシグナリングに関連した疾患を処置することに有用な化合物を同定する方法も提供される。スクリーニング方法は、既知のもの、本発明の技術分野において使用されているもの、又は本願に記載のものを含むことができる。例えば、ＣＤ４７はマイクロタイタープレートに固定され得るし、そして、ＳＩＲＰαの存在下で候補又はテスト化合物（例えば、ＣＤ４７抗体）と一緒にインキュベートされ得る。その後に、結合したＳＩＲＰαは二次抗体を使用して検出され得るし、そして、吸光度はプレートリーダー上で検出され得る。
【０２０８】
マクロファージによる腫瘍細胞の食作用を促進することが可能な化合物を同定する方法も提供される。これらの方法は、既知のもの、本発明の技術分野において使用されているもの、又は本願に記載のものを含むことができる。例えば、マクロファージは、候補化合物（例えば、ＣＤ４７抗体）の存在下で、ラベルされた腫瘍細胞と一緒にインキュベートされる。ある期間の経過後に、マクロファージは腫瘍ラベルの内部移行に関して観察されて、食作用が同定され得る。これらの方法（例えば、ＳＩＲＰαブロッキングアッセイ及び食作用アッセイ）に関する更なる詳細は、実施例において提供される。
【０２０９】
本発明は、本願に記載のスクリーニングアッセイにおいて同定された化合物も含む。
【０２１０】
１つの実施形態において、本発明は、ＣＤ４７のシグナリング機能を調節する候補又はテスト化合物をスクリーニングするアッセイを提供する。本発明のテスト化合物は、本発明の技術分野において知られたコンビナトリアルライブラリ法（生物学的ライブラリ；空間的にアドレス可能な平行な固相又は液相ライブラリ；デコンボリューションを必要とする合成ライブラリ法；「１ビーズ１化合物」ライブラリ法；及びアフィニティークロマトグラフィセレクションを使用する合成ライブラリ法を含む）における多数のアプローチのいずれかを使用して取得することができる。生物学的ライブラリによるアプローチはペプチドライブラリに限定されるが、他の４つのアプローチは、ペプチド、非ペプチドオリゴマー又は化合物の小分子ライブラリへ適用可能である（例えば、Lam, 1997. Anticancer Drug Design 12: 145参照）。
【０２１１】
本願において使用した「小分子（small molecule）」とは、約５ｋＤ未満、及び最も好ましくは約４ｋＤ未満の分子量を有する組成物を意味することが意図される。小分子は、例えば、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣物、炭水化物、脂質、他の有機分子又は無機分子であり得る。化学混合物及び／又は生物混合物（真菌、細菌、又は藻類抽出物）などのライブラリは本発明の技術分野において知られており、本発明のいずれかのアッセイを用いてスクリーニングされ得る。
【０２１２】
分子ライブラリの合成方法の例は、例えば、DeWitt, et al., 1993. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90: 6909; Erb, et al., 1994. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91: 11422; Zuckermann, et al., 1994. J. Med. Chem. 37: 2678; Cho, et al., 1993. Science 261: 1303; Carrell, et al., 1994. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33: 2059; Carell, et al., 1994. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33: 2061;及びGallop, et al., 1994. J. Med. Chem. 37: 1233において見出され得る。
【０２１３】
化合物のライブラリは、溶液中（例えば、Houghten, 1992. Biotechniques 13: 412-421参照）、ビーズ上（Lam, 1991. Nature 354: 82-84参照）、チップ上（Fodor, 1993. Nature 364: 555-556参照）、細菌中（米国特許５，２２３，４０９号）、胞子中（米国特許５，２３３，４０９号）、プラスミド中（Cull, et al., 1992. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 1865-1869参照）又はファージ上（Scott and Smith, 1990. Science 249: 386-390; Devlin, 1990. Science 249: 404-406; Cwirla, et al., 1990. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87: 6378-6382; Felici, 1991. J. Mol. Biol. 222: 301-310；及び米国特許５，２３３，４０９号参照）において提供され得る。
【０２１４】
１つの実施形態において、候補化合物が抗体抗原複合体へ導入され、そして候補化合物が抗体抗原複合体を破壊（ないし分解：disrupt）するか否かが決定される（ここでは、この複合体の破壊（分解）は、ＣＤ４７のシグナリング機能及び／又はＣＤ４７とＳＩＲＰαの間の相互作用を調節する候補化合物を示す）。他の実施形態において、本発明の可溶性ＣＤ４７及び／又はＣＤ４７及びＳＩＲＰαタンパク質の両方が提供され、そして、少なくとも１つの中和するモノクローナル抗体へ暴露される。抗体抗原複合体の形成が検出され、そして、１以上の候補化合物が複合体へ導入される。１以上の候補化合物の導入後に抗体抗原複合体が破壊（分解）される場合には、候補化合物は、異常なＣＤ４７及び／又はＣＤ４７−ＳＩＲＰαシグナリングと関連する疾患を処置することに有用である。
【０２１５】
抗体抗原複合体を干渉又は破壊（分解）するテスト化合物の能力の決定は、例えば、テスト化合物と抗原又はその生物学的活性部分との結合が複合体中のラベルされた化合物を検出することによって決定され得るように、テスト化合物と放射線同位体又は酵素ラベルとをカップリングすることによって達成され得る。例えば、テスト化合物は、直接的又は間接的の何れかで１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ又は３Ｈでラベルされ、そして、放射線同位体は、電磁波放出の直接的なカウント又はシンチレーションカウントによって検出され得る。あるいは、テスト化合物は、例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、又はルシフェラーゼで酵素的にラベルされ、そして、酵素ラベルは適切な基質から生成物への転換の決定によって検出され得る。
【０２１６】
１つの実施形態において、アッセイは、抗体抗原複合体とテスト化合物とを接触させること、及び、テスト化合物の抗原と相互作用する能力、又は存在する抗体抗原複合体を破壊（分解）する能力を決定することを含む。この実施形態において、テスト化合物の抗原と相互作用する能力及び／又抗体抗原複合体を破壊（分解）する能力の決定は、テスト化合物の能力（抗体と比較した場合に、抗原又はその生物学的活性部分に対して優先的に結合する能力）を決定することを含む。
【０２１７】
他の実施形態において、アッセイは、抗体抗原複合体とテスト化合物とを接触させること、及び、テスト化合物の抗体抗原複合体を調節する能力を決定することを含む。テスト化合物の抗体抗原複合体を調節する能力の決定は、例えば、テスト化合物の存在下で、抗原の抗体に対して結合する能力又は抗体と相互作用する能力を決定することによって達成され得る。
【０２１８】
本発明の技術分野における通常の知識を有する者は、本願に開示されたいずれかのスクリーニング方法において、抗体が、ＣＤ４７の活性及び／又はシグナリングを調節又は干渉する中和性抗体であり得ることを認識するだろう。
【０２１９】
本願に開示されたスクリーニング方法は、細胞ベースのアッセイ又は無細胞アッセイとして実行され得る。本発明の無細胞アッセイは、可溶性形状又はメンブレン結合形状の何れかのＣＤ４７及びそのフラグメントの使用に従う。メンブレン結合形状のＣＤ４７を含む無細胞アッセイのケースにおいて、メンブレン結合形状のタンパク質を溶液中に維持する溶剤を利用することが望まれ得る。そのような溶剤の例は、ｎ−オクチルグルコシド、ｎ−ドデシルグルコシド、ｎ−ドデシルマルトシド、オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド、デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１１４、Ｔｈｅｓｉｔ（登録商標）、イソポリデシルポリ（エチレングリコールエーテル）ｎ、Ｎ−ドデシル−Ｎ、Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホナート、３−（３−コラミドプロピル）ジメチルアミニオ−１−プロパンスルホナート（ＣＨＡＰＳ）、又は３−（３−コラミドプロピル）ジメチルアミニオ−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホナート（ＣＨＡＰＳＯ）などの非イオン洗剤を含む。
【０２２０】
１つを上回る実施形態において、抗体又は抗原の何れかを固定して、候補化合物の導入の後に複合体形状のものと、非複合体形状のものの一方又は両方との区別を促進すること、そして、アッセイを自動化することが望まれ得る。候補化合物の存在下及び不在下での抗体抗原複合体の観察は、いずれかの反応物を容れることに適した容器中で達成され得る。そのような容器の例は、マイクロタイタープレート、テストチューブ及びマイクロ遠心分離チューブを含む。１つの実施形態において、タンパク質の一方又は両方がマトリックスに結合することを許容するドメインを加える融合タンパク質が提供され得る。例えば、ＧＳＴ−抗体融合タンパク質又はＧＳＴ−抗原融合タンパク質は、グルタチオンセファロースビーズ（Sigma Chemical, St. Louis, MO）又はグルタチオン誘導体化マイクロタイタープレートに吸着させられ、次にテスト化合物と組み合わせられ、そして混合物は複合体形成が行われる条件下で（例えば、生理的状態の塩及びｐＨで）インキュベートされ得る。インキュベーションに続いて、ビーズ又はマイクロタイタープレートのウェルは洗浄されて（ビーズのケースではマトリックスは固定される）、非結合性の構成要素が除去され、複合体が直接的又は間接的の何れかで決定される。あるいは、複合体がマトリックスから分離され得るし、そして、抗体抗原複合体形成のレベルが標準的技術を使用して決定され得る。
【０２２１】
マトリックス上へのタンパク質の固定に関する他の技術は、本発明のスクリーニングアッセイも使用され得る。例えば、抗体（例えば、２Ａ１抗体、又はＳＥＱＩＤ番号：５〜３０から選択される重鎖可変領域を有する抗体及びＳＥＱＩＤ番号：３１〜４７から選択される軽鎖可変領域）又は抗原（例えば、ＣＤ４７タンパク質）の何れかが、ビオチン及びストレプトアビジンのコンジュゲーションを利用して固定され得る。ビオチン標識化抗体又は抗原分子は、本発明の技術分野における公知技術（例えば、ビオチン標識化キット、Pierce Chemicals, Rockford, Ill）を使用してビオチン−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド）から調製され得るし、かつストレプトアビジン−コーティングされた９６ウェルプレート（Pierce Chemical）のウェルに固定され得る。あるいは、目的の抗体又は抗原とは反応性であるが目的の抗体抗原複合体の形成に干渉しない他の抗体はプレートのウェルに誘導体化され得るし、非結合性抗体又は抗原は抗体コンジュゲーションによってウェルにトラップされた。そのような複合体を検出する方法は、ＧＳＴ固定複合体に関して記載されたものに加えて、抗体又は抗原と反応性のそのような他の抗体を使用する複合体の免疫検出を含む。
【０２２２】
本発明は、更に、上述のいずれかのスクリーニングアッセイによって同定される新規な薬剤及び本願に記載の処置のためのその使用に関する。
【０２２３】
診断用及び予防用の製剤
本発明のＣＤ４７ＭＡｂｓは、診断用及び予防用の製剤に使用される。１つの実施形態において、本発明のＣＤ４７ＭＡｂは、１以上の上述の病気（例えば、癌又は他の腫瘍性の状態など（これらに限定されない））を発生するリスクを有する患者へ投与される。上述の癌又は他の腫瘍性の状態の１以上の患者徴候又は器官徴候は、遺伝子型、血清又は生化学マーカーを使用して決定され得る。
【０２２４】
本発明の他の実施形態において、ＣＤ４７抗体は、１以上の上述の病気（例えば、癌又は他の腫瘍性の状態など（これらに限定されない））と関連した臨床上の徴候で診断されたヒト個人に対して投与される。診断の際に、ＣＤ４７抗体は、１以上の上述の病気と関連した臨床上の徴候の影響を軽減又は逆行させるために投与される。
【０２２５】
本発明の抗体は、患者のサンプルにおけるＣＤ４７及び／又はＳＩＲＰの検出にも有用であり、従って診断剤としても有用である。例えば、本発明のＣＤ４７抗体は、患者のサンプルにおけるＣＤ４７及び／又はＳＩＲＰαレベルを検出するために、インビトロアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡにおいて使用される。
【０２２６】
１つの実施形態において、本発明のＣＤ４７抗体は、固形支持体（例えば、マイクロタイタープレートのウェル（単数又は複数））に固定される。固定された抗体は、テストサンプル中に存在し得るいずれかのＣＤ４７及び／又はＳＩＲＰαについてのキャプチャー抗体としての役割を果たす。固定された抗体を患者サンプルに接触させる前に、固形支持体は、乳たんぱく質又はアルブミンなどのブロッキング剤でリンス及び処置され、解析対象物の非特異的な吸着を防止する。
【０２２７】
その後にウェルは、抗原を含む可能性が疑われるテストサンプルか、又は標準の量の抗原を含む溶液で処置される。そのようなサンプルは、例えば、病気の診断が下りると考えられる循環抗原のレベルを有する可能性が疑われる対象からの血清サンプルである。テストサンプル又は標準をリンスして除去した後に、固形支持体は検出可能な程度にラベルされた二次抗体で処置される。ラベルされた二次抗体は、検出抗体としての役割を果たす。検出可能なレベルのラベルが測定され、標準のサンプルから発展した標準曲線と比較することによって、テストサンプル中のＣＤ４７及び／又はＳＩＲＰα濃度が決定される。
【０２２８】
インビトロ診断アッセイにおいて本発明のＣＤ４７抗体を使用して得られた結果に基づいて、ＣＤ４７及び／又はＳＩＲＰαの発現レベルに基づいて、対象における病気（例えば、虚血、自己免疫性又は炎症性の疾患と関連した臨床上の徴候）のステージを評価することが可能であるだろう。所与の病気に関して、血液のサンプルは、病気の進行における種々のステージ、及び／又は、病気の治療処置における種々のポイントにおいて、診断される対象から取得される。進行又は治療の各ステージについての統計的に有意な結果を提供するサンプルの個体群を使用して、各ステージの特徴が考察され得る抗原の濃度の範囲が示される。
【０２２９】
本願に引用される全ての出版物及び特許文献は、そのような出版又は文献の各々が引用によって本願に組み込まれることが具体的に及び個々に示されているものとして、引用によって本願に組み込まれる。出版及び特許文献の引用は、いずれのものが適切な先行技術であるかの認定を意図するものでは無く、又は内容又は日が同じものであることの認定を構成するものでは無い。本発明は、今、記載によって述べられているが、本発明の技術分野における通常の知識を有するものは、本発明が多種多様な実施形態で実施され得ること、及び上述の記載及び以下の実施例が図示及び請求の範囲の限定の目的のものでは無いことを認識するだろう。
【実施例】
【０２３０】
以下の実施例（実行した実験及び達成された結果を含む）は、例示的な目的でのみ提供され、本発明を限定するものとして解釈されるべきものではない。
【０２３１】
実施例１：ＣＤ４７抗体の生成及び選択
ＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７−ＩｇＶ（免疫グロビン様可変型）を示す組み換えタンパク質でマウスを免疫化して、複数サイトで改変急速免疫化法を実行することによって生成した（Kilpatrick et al. (1997) Rapid development of affinity matured monoclonal antibodies using RIMMS. Hybridoma 16, 381-389）。更に、免疫化した群の半数のマウスには、抗マウスＧＩＴＲアゴニスト抗体、ＤＴＡ−１の単回注射を受けさせた。免疫化スケジュールの後に、全てのマウス（ＤＴＡ−１処置した及び未処置の）からリンパ節を収集してバラバラにし、それによってＢ細胞の単離及びその後のマウス骨髄腫細胞系統への融合ができるようにした。ハイブリドーマ上清を、ＥＬＩＳＡ及びフローサイトメトリーによって（図１Ａ）、Ｄａｕｄｉ（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−２１３）細胞のＣＤ４７への結合に関してスクリーニングした。ハイブリドーマ上清は、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用をブロックする能力に関しても解析した（図１Ｂ）。組み換えＣＤ４７をＭｅｄｉｓｏｒｐ（ＮＵＮＣ）マイクロタイタープレートに固定し、その後、ヒトＩｇＧのＦｃドメインに融合した組み換えヒトＳＩＲＰα−ＥＣＤの存在下でハイブリドーマ上清と一緒にインキュベートした。ＨＲＰコンジュゲート型抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異的二次抗体（Jackson Immuno Research）を使用し、プレートリーダーにおいて検出される吸光度６５０ｎｍで、結合したＳＩＲＰαを検出した。
【０２３２】
実施例２：ＣＤ４７抗体の特徴付け
本発明のネズミＣＤ４７抗体の例は、図２に示される。ＳＩＲＰαブロッキングＣＤ４７抗体の親和性ランキング付けを、ラージ細胞（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−８６）（図２Ａ）及びＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−１１９）（図２Ｂ）に対するフローサイトメトリーによって実行した。結合したＣＤ４７抗体をＦＩＴＣコンジュゲート型抗マウスＩｇＧ二次抗体（Jackson ImmunoResearch）を使用して検出した。本発明の技術分野において知られるＣＤ４７抗体（Ｂ６Ｈ１２）をポジティブコントロールとして含ませた（例えば、米国特許５，０５７，６０４号参照）。図２Ｂにおいて、Ｂ６Ｈ１２及び２Ｄ３（商業的に入手可能な非ＳＩＲＰαブロッキング抗体）の両方と、本願において生成した抗体とを比較した。本発明の抗体は、Ｂ６Ｈ１２及び２Ｄ３抗体と比較して、内来性（細胞表面）形状のＣＤ４７に対するより高い親和性を示す。
【０２３３】
実施例３：ＣＤ４７抗体のＳＩＲＰαブロッキング活性
ＣＤ４７抗体によるＳＩＲＰαブロッキングの力価を、組み換えＨｉｓタグ−ＣＤ４７ＩｇＶをＭｅｄｉｓｏｒｐマイクロタイタープレートに固定したＥＬＩＳＡによって測定した。ヒトＩｇＧのＦｃドメインに融合した組み換えＳＩＲＰαの結合を、漸増するＣＤ４７抗体の存在下でモニタした。結合したＳＩＲＰαを、ＨＲＰコンジュゲート型抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）二次抗体（Jackson ImmunoResearch）を使用して測定した。本発明の抗体は、Ｂ６Ｈ１２抗体と比較して、増強されたＳＩＲＰαブロッキングの力価を示す。図３Ａは、ＥＬＩＳＡベースのＳＩＲＰαブロッキングアッセイの代表的なデータを示す。
【０２３４】
ＣＤ４７抗体を、組み換えＳＩＲＰαの細胞表面ＣＤ４７に対する結合をブロックする、それらの能力に関してフローサイトメトリーによって解析した。アッセイにおいて、ＣＣＲＦ−ＣＥＭ（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−１１９）細胞をＣＤ４７のソースとして使用し、ヒトＩｇＧのＦｃドメインに融合した組み換えＳＩＲＰαの結合を漸増するＣＤ４７抗体の存在下でモニタした。結合したＳＩＲＰαを、ＡＰＣコンジュゲート型抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）二次抗体（Jackson ImmunoResearch）を使用して測定した（図３Ｂ）。Ｂ６Ｈ１２及び商業的に入手可能な非ＳＩＲＰαブロッキングＣＤ４７抗体２Ｄ３を、それぞれポジティブコントロール及びネガティブコントロールとして使用した。
【０２３５】
実施例４：ＣＤ４７抗体媒介性のホモタイプ相互作用
ＳＩＲＰαブロッキングＣＤ４７抗体を、細胞のクラスタリング（ＣＤ４７ポジティブな細胞の間のホモタイプ相互作用として知られている）を誘導するそれらの能力について解析した。Ｄａｕｄｉ及びラージ細胞をＣＤ４７発現細胞系統の候補として使用した。検査した抗体の中で、本発明の２Ａ１抗体のみが、ＣＤ４７発現細胞のホモタイプ相互作用を引き起こさないＳＩＲＰαブロッキング抗体であった。
【０２３６】
実施例５：ＣＤ４７抗体の赤血球凝集活性
ホモタイプ相互作用の一例は、ＲＢＣの凝集によって表わされる赤血球凝集である。ＣＤ４７抗体は、ヒトＲＢＣの沈降（settling）を防止する抗体の能力によって観察されるＲＢＣ凝集についてスクリーニングした。予想されなかったことに、２Ａ１抗体は、赤血球凝集を引き起こすことができないが、その一方で高い親和性とＳＩＲＰαをブロックする能力を有するという点で、他のＣＤ４７抗体の中でユニークであることが分かった。減少した赤血球凝集を示す他の抗体は、ＳＩＲＰαのＣＤ４７への結合をブロックしなかった。
【０２３７】
ＣＤ４７抗体の赤血球凝集キャパシティを評価するために、ヒトＲＢＣをＰＢＳ中に１０％まで希釈し、丸底９６ウェルプレートにおいてＣＤ４７抗体の力価測定をしつつ３７℃で２〜６時間インキュベートした。赤血球凝集の証拠は、非赤血球凝集ＲＢＣの赤いドット（a punctuate red dot）に比べてぼんやりと現れる、非沈降ＲＢＣの存在によって示された。予想されなかったことに、図４Ａに示すように、本発明のＣＤ４７抗体、特に本願において２Ａ１と称される抗体は、赤血球凝集活性を示さなかった。グラフは赤血球凝集アッセイの定量を示し、表示値「赤血球凝集インデックス」は、抗体存在下でのＲＢＣペレットの面積を抗体不在下での面積に対して規格化して定量化することによって決定した。
【０２３８】
ネズミ９Ｅ４抗体は、テストした全ての濃度でも最も強い（profound）赤血球凝集を引き起こした。従って、９Ｅ４抗体は、ＣＤ４７に結合するとともに、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用をブロックするが、しかしながら、９Ｅ４抗体は、強い赤血球凝集を引き起こす。
【０２３９】
９Ｅ４抗体のＶＨ鎖領域は以下に提示される。
EVQLRQSGPELVKPGASVKISCKASGYSFTDYYMYWVKQSRVRSLAWIGRINPYTGATGYDQNFKDKASLIVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCARGRNRYDGWFAYWGQGTLVTV（ＳＥＱＩＤ番号：７８）
【０２４０】
９Ｅ４抗体のＶＬ鎖領域は以下に提示される。
EIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLDQEDIATYFCQQGNALPPTFGGGTNLEIK（ＳＥＱＩＤ番号：７９）
【０２４１】
コントロール抗体Ｂ６Ｈ１２は、ＳＩＲＰαブロッキングＣＤ４７抗体に関して予測される赤血球凝集を引き起こした。
【０２４２】
２Ａ１抗体の非赤血球凝集活性のユニークさを検査するために、多数の他のＣＤ４７抗体をＲＢＣ赤血球凝集アッセイにおいてスクリーニングした（図４Ｂ）。このアッセイには、ネズミ２Ａ１の重鎖可変領域、アミノ酸１０６が改変された（すなわち、Ｍ１０６Ｉ）ネズミ２Ａ１の軽鎖可変領域、及びヒトＩｇＧ１及びヒトＩｇカッパの定常領域からなる、キメラ型バージョンの２Ａ１抗体（２Ａ１−ｘｉ）が含まれる。２Ａ１抗体及び２Ａ１−ｘｉ抗体のＶＨ及びＶＬ領域の配列は表１において提示される。抗体は、１２．５、２５、５０、及び１００ｎＭでテストした。予想されなかったことに、２Ａ１は、図４Ｂにおいて検査したＣＤ４７抗体の中でまれ（レア）なものであった。すなわち、図４Ｂにおいて、２Ａ１のみが、赤血球凝集活性が無い抗体、又は低減した赤血球凝集活性を有する抗体であった。図４Ｅは、２Ａ１、キメラ型２Ａ１（２Ａ１−ｘｉ）、及びヒト化変異体が赤血球凝集を引き起こさないことを示す。
【０２４３】
図４Ｃは、ＲＢＣ赤血球凝集アッセイにおける追加のＣＤ４７抗体のスクリーニングの結果を示す。図４Ｃに示すように、商業的に入手可能なＣＤ４７モノクローナル抗体２Ｄ３（ＳＩＲＰαをブロックしない）は赤血球凝集を引き起こさなかった。しかしながら、他の商業的に入手可能なＳＩＲＰαをブロックするＣＤ４７抗体（例えば、ＣＣ２Ｃ６、ＢＲＣ１２６、及びＢ６Ｈ１２）は、赤血球凝集を引き起こした（図４Ｃ）。従って、本願に記載の発明前において、ＳＩＲＰαをブロックした従来の抗体は赤血球凝集を引き起こしたが、その一方で、２Ｄ３などのＳＩＲＰαをブロックしない従来の抗体は赤血球凝集を引き起こさなかった。これらを総合して本発明の抗体（例えば、２Ａ１抗体及びそのヒト化誘導体）は、既存のＣＤ４７抗体の中では、ＳＩＲＰαをブロックするが赤血球凝集を引き起こさないというそれらの能力においてユニークである。
【０２４４】
高濃度範囲の選択したＣＤ４７抗体を、赤血球凝集アッセイにおいて再テストした（図４Ｄ）。このアッセイでは、Ｂ６Ｈ１２及び９Ｅ４による赤血球凝集のプロゾーン効果（抗体濃度が高すぎて抗原と凝集反応を起こさない状態）が示され、赤血球凝集はテストした濃度範囲の高い端部及び低い端部で低減した。赤血球凝集インデックスのグラフ表示でも、プロゾーン効果が目立つ。プロゾーン効果は、図４Ｃ及び図４Ｅでも明確であった。重要なことに、マウス２Ａ１及びキメラ型２Ａ１のＣＤ４７抗体は、全ての濃度で赤血球凝集活性を示さなかった。
【０２４５】
図４Ｅにおいて示すように、ネズミの１Ｂ４抗体は、狭い範囲での赤血球凝集を示した。
【０２４６】
１Ｂ４抗体のＶＨ鎖領域は以下に提示される。
QIQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYYIHWVKQRPGQGLEWIGWIYPGSGNTKYNERFKGKATLTVATSSSTAYMQLSSLTSEDTAVYFCARREEDYFDYWGQGTLVTV（ＳＥＱＩＤ番号：８０）
【０２４７】
１Ｂ４抗体のＶＬ鎖領域は以下に提示される。
DIVMSQSPSSLAVSVGEKVTMSCKSSQSLLYSSNQKNYLTWYQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYSYPLTFGAGTKLEIK（ＳＥＱＩＤ番号：８１）
【０２４８】
ネズミの２Ａ１に由来したヒト化抗体の赤血球凝集キャパシティは上記のようにテストした。重要なことに、代表的なヒト化抗体ＡＢ６．１２の多数のヒトＩｇＧアイソタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ４−Ｓ２２８Ｐ及びＩｇＧ４−Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ）は、ＲＢＣ赤血球凝集をほとんど引き起こさなかった。２Ａ１及び２Ａ１−ｘｉを非赤血球凝集抗体のコントロールとして含み、その一方で、Ｂ６Ｈ１２及び９Ｅ４を赤血球凝集のポジティブコントロールとして含んだ（図４Ｆ）。
【０２４９】
実施例６：カニクイザルＣＤ４７に対する結合
カニクイザル（ｃｙｎｏ）のＣＤ４７に対して結合するネズミ２Ａ１の能力を評価した。Ｂ６Ｈ１２抗体は、ｃｙｎｏＣＤ４７と交差反応性であることが以前に報告されており、アッセイ中ではｃｙｎｏＣＤ４７の存在に関するポジティブコントロールとして使用した。カニクイザルＣＤ４７に対する２Ａ１の結合を測定する実験は、カニクイザルＢ細胞及びヒト細胞のＣＤ４７に対する２Ａ１の結合を比較するように設計され、ここではラージ細胞系統をヒトのＣＤ４７ポジティブな細胞として使用した。カニクイザルの末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣｓ）を、ficoll-paque勾配遠心分離によって、カニクイザルの全血から単離した。カニクイザル及びヒトＢ細胞（ラージ）を１０μｇ／ｍＬのヒトＣＤ２０抗体オファツムマブ（Arzerra）でラベルし、ネズミＣＤ４７抗体２Ａ１又はＢ６Ｈ１２の希釈シリーズと反応させた。ヒトＣＤ２０抗体でラベルされたＢ細胞はＤｙＬｉｔｅ６４９にコンジュゲートしたポリクローナル抗ヒト抗体で検出し、その一方で、ＣＤ４７ネズミ抗体はＤｙＬｉｔｅ４８８にコンジュゲートしたポリクローナル抗マウス抗体で検出した。細胞はフローサイトメトリーによって解析した。先ずＦＳＣ及びＳＳＣによって生細胞をゲートオンし、次にＦＬ４ポジティブ（ＣＤ２０ポジティブ）な細胞をゲートオンし、そして、最後にＦＬ１（ＣＤ４７ポジティブ）の中央値を測定した。データは、各濃度におけるシグナルを各細胞集団に対する各抗体の最大シグナルで除算することによって規格化した。図５に示す規格化後の結果は、２Ａ１がｃｙｎｏＣＤ４７と交差反応すること、及びヒトＣＤ４７と比較して同等の親和性を有することを示す。上記の結果と整合して、Ｂ６Ｈ１２は、ラージ及びカニクイザルＢ細胞の両方の細胞表面ＣＤ４７に関して、本発明の抗体と比較してより低い親和性を有した。
【０２５０】
実施例７：キメラ型抗体の生成
ネズミ２Ａ１抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）の配列を同定するために、リボ核酸（ＲＮＡ）をハイブリドーマから単離し、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）（Phusion RT-PCR Kit Thermo Scientific）において利用して、ファーストストランドｃＤＮＡを生成した。ＶＨ及びＶＬ両方のネズミ抗体リーダ配列の完全レパートリーをカバーする変性プライマーセットを、ＰＣＲにおいて使用した。ここでは、ファーストストランドｃＤＮＡは、鋳型としての役割を果たした。
【０２５１】
フォワードプライマー（ネズミＩｇＧリーダ）は、以下に提示される。
0006273212.tif 000014
【０２５２】
リバースプライマー（ネズミＩｇＧ定常領域）は、以下に提示される。
0006273212.tif 000015
【０２５３】
フォワードプライマー（ネズミＩｇカッパ（κ）リーダ）は以下に提示される。
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【０２５４】
リバースプライマー（ネズミＩｇカッパ（κ）定常領域）は、以下に提示される。
0006273212.tif 000017
【０２５５】
増幅したＶＨ及びＶＬを、その後、適切な抗体分泌配列、ならびにヒトＩｇＧ１及びＩｇカッパ（κ）定常領域をそれぞれ含むベクター（複数）にインフレーム（in-frame）でクローン化して、ネズミ：ヒトキメラ型ＤＮＡ構築物を生成した。これらの構築物を、２９３Freestyle細胞（Life Technologies）に共形質導入し、そして結果として生じた抗体をプロテイン−Ａクロマトグラフィによって細胞培養上清から精製した。正しいＶＨ及びＶＬ配列が同定されていることを決定するために、キメラ型２Ａ１（２Ａ１−ｘｉと称される）を用いてラージ細胞のＣＤ４７に対する結合アッセイを行い、フローサイトメトリーによってネズミ親２Ａ１抗体と比較した（図６）。このアッセイでは、Ｂ６Ｈ１２もポジティブコントロールとして含んだ。結合した２Ａ１−ｘｉは、ＦＩＴＣ−コンジュゲート型抗ヒトＩｇＧ二次抗体を使用して検出した。結合した２Ａ１及びＢ６Ｈ１２は、ＦＩＴＣ−コンジュゲート型抗マウスＩｇＧ二次抗体を使用して検出した。見かけ上の親和性を、種々の抗体濃度における蛍光輝度の中央値の非線形モデル（non-linear fit、Prism Graphpad Software）によって決定した（表２）。２Ａ１−ｘｉ抗体は、ネズミの２Ａ１抗体と同等の細胞表面ＣＤ４７に対する結合親和性を有しており、ＶＨ及びＶＬ配列が適切に同定されていることが実証される。
表２
0006273212.tif 000018
【０２５６】
実施例８：抗体のヒトへの適合化
ネズミ２Ａ１ＣＤ４７抗体をヒト化して、ヒト患者に投与されたときの免疫原性のポテンシャル（潜在的可能性）を低減させた。２Ａ１のＶＨ及びＶＬ領域の配列を、ＩＭＧＴデータバンク内のヒト抗体配列と比較した。その後、タンパク質データバンク（ＰＤＢ）内で最も密接に関連したヒト化抗体及びヒト抗体の既知の構造を使用して２Ａ１のＶＨ領域及びＶＬ領域の構造モデルを作成した。２Ａ１抗体の重鎖及び軽鎖両方の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を固定し、ネズミのフレームワーク（複数）をＣＤＲの適切な向きを維持している可能性が最も高い多数のヒトフレームワークで置き換えた。各ヒト化２Ａ１変異体に対応する構築物を遺伝子合成によって作製し、適切な分泌配列、ならびにヒトＩｇＧ１及びＩｇカッパ（κ）定常領域を含むベクターにインフレームでクローン化した。種々のヒト化重鎖及び軽鎖の組み合わせを２９３Freestyle細胞（Life Technologies）に共形質導入し、結果として生じた抗体をプロテイン−Ａクロマトグラフィによって細胞培養上清から精製した。
【０２５７】
ヒト化抗体は、フローサイトメトリーによって、ラージ細胞に結合するそれらの能力に関してテストした（図７）。２Ａ１−ｘｉ抗体を、これらのアッセイのほとんどにおいて、結合親和性のベンチマークをセットするコントロールとして使用した。ヒト化抗体を更に最適化して発現を増強し、そして、異性化サイト及び脱アミドサイトのポテンシャルを含む問題があるサイトを減らした。ネズミ２Ａ１抗体由来の最適化したヒト化抗体の例はＡＢ６．１２抗体と称され、２Ａ１−ｘｉ抗体と非常に類似の結合親和性を示す（図７Ｈ；表３）。見かけ上の親和性を、種々の抗体濃度における蛍光輝度の中央値の非線形モデル（Prism Graphpad Software）によって決定した。
表３
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【０２５８】
その後、ＡＢ６．１２抗体を、重鎖の定常ドメインを置き換えることによって、ＩｇＧ１から他のヒトＩｇＧアイソタイプへ転換した。図７Ｉに示すように、ＩｇＧアイソタイプからヒンジ安定化バージョンのＩｇＧ４（ＩｇＧ４Ｐ：Ｓ２２８Ｐ）への変更、及びヒンジ安定型ＩｇＧ４のＦｃ受容体結合性低下型変異体（ＩｇＧ４Ｐe：Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ）への変更は、細胞表面ＣＤ４７に対するヒト化抗体の結合親和性を変化させなかった（図７Ｉ；表４）。見かけ上の親和性は、種々の抗体濃度における蛍光輝度の中央値の非線形モデル（Prism Graphpad Software）によって決定した。
表４
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【０２５９】
ヒトへの適合化プロセスの全体に渡って、ＣＤ４７抗体をテストして、ＳＩＲＰαブロッキング機能は無傷であることを確証した。実施例３に記載のフローサイトメトリーベースの方法を使用した図７Ｊに示すように、ヒト化抗体（ＡＢ６．１２）の複数のＩｇＧアイソタイプは、ＳＩＲＰα：ＣＤ４７相互作用をブロックした。ＣＤ４７抗体の例及びそれらの対応するＶＨ領域及びＶＬ領域は、表１に提示されたものを含む。
【０２６０】
ヒトへの適合化プロセスを通じて、いくつかの実施形態において、ＶＨのＣＤＲ３（ＳＥＱＩＤ番号：５２又はＳＥＱＩＤ番号：７７）の開始位置におけるアミノ酸配列モチーフ「ＮＡ」が本願に記載のＣＤ４７抗体の結合性に重要であることが決定された。いくつかの実施形態において、ＶＨのＣＤＲ３（ＳＥＱＩＤ番号：５２又はＳＥＱＩＤ番号：７７）の開始位置におけるアミノ酸残基「ＮＡ」が存在しない場合に、本発明のＣＤ４７抗体は、それらのターゲットに対して結合しないか、又はアミノ酸残基「ＮＡ」が存在する場合のものよりも低い親和性でそれらのターゲットに対して結合する。例えば、「ＮＡ」モチーフを、より限界構造性の（Canonical）モチーフ「ＡＲ」又は「ＡＴ」へ変更した場合には、結合が実質的に減少した（すなわち、１０倍より大きく）。他の実施形態において、ＶＨのＣＤＲ３（ＳＥＱＩＤ番号：５２又はＳＥＱＩＤ番号：７７）の開始位置におけるアミノ酸残基「ＮＡ」が存在しない場合に、本発明のＣＤ４７抗体は、アミノ酸残基「ＮＡ」が存在する場合のものと同等の親和性でそれらのターゲットに対して結合する。
【０２６１】
本発明の技術分野における通常の知識を有する者は、過度の実験をせずに、本発明のＣＤ４７抗体の配列におけるアミノ酸置換が、実質的に同一の機能を有する抗体、例えば、ＳＩＲＰαをブロックするが、有意のレベルの赤血球凝集を引き起こさないという能力を有するＣＤ４７抗体をもたらすであろうと、決定することができると認識するだろう。
【０２６２】
ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００カラムを用いたＡＫＴＡ  ＦＬＰＣを使用した分子篩クロマトグラフィによる追跡のイメージ（画像）が図８Ａに示される。ＡＢ６．１２抗体のＩｇＧ１、ＩｇＧ４Ｐ、及びＩｇＧ４ＰＥ変異体が示される。３つの変異体全てが、９８％超でモノマーであった。図８Ｂは、分解状態（reducing condition）（Ｒ）及び非分解状態（ＮＲ）の多数の２Ａ１のヒト化変異体をＳＤＳ−ＰＡＧＥして、クーマシーブルー染色したゲルの写真である。
【０２６３】
実施例９：ＣＤ４７抗体は腫瘍細胞系統の食作用を促進する
ＣＤ４７は、腫瘍細胞でアップレギュレートされる細胞表面受容体であり、またその天然のリガンドＳＩＲＰαとの相互作用を介して免疫回避に寄与すると考えられる。ＣＤ４７とマクロファージのＳＩＲＰαとのライゲーションは、食細胞活性の減少をもたらす。以下に詳細に記載するように、２Ａ１抗体及びそのバリエーションの、ＣＤ４７結合及びＳＩＲＰαブロッキング活性は、ヒトマクロファージの存在下での腫瘍細胞食作用を促進するか否かが決定された。
【０２６４】
ＰＢＭＣｓはヒト血液から単離され、単球はＡＩＭ−Ｖ培地（Life Technologies）中で７日間インキュベートすることによってマクロファージへ分化させた。これらの単球由来のマクロファージ（ＭＤＭｓ）は接着性になり、他の細胞を洗浄によって除くことができるようになる。ＭＤＭｓを掻き集めて、１２ウェル皿に再び蒔き、２４時間接着を許容した。ヒト腫瘍細胞系統ＣＣＲＦ−ＣＥＭを、その高いＣＤ４７発現の理由でターゲット細胞タイプとして選択した。ＣＣＲＦ−ＣＥＭ細胞を、０．３μＭのＣＦＳＥで、３７℃で１５分間ラベルし、次に、洗浄して、４：１（食細胞あたりの腫瘍細胞）の割合でＭＤＭｓに加え、そして、ＣＤ４７抗体を種々の濃度で加えた。ターゲット細胞の食作用は、３時間許容した。その後に、非被捕食ターゲット細胞をＰＢＳで洗浄して除いた。残りの食細胞を掻き集めて、ＤｙＬｉｔｅ６４９（Biolegend）にコンジュゲートしたマクロファージマーカーＣＤ１４に対する抗体を用いて染色し、そしてフローサイトメトリーによって解析した。食作用は、ＦＬ４ポジティブ（ＣＤ１４＋）な生細胞をゲートオンし、次にＦＬ１（ＣＦＳＥ＋）ポジティブな細胞のパーセントを評価することによって測定した。
【０２６５】
図９は、ＣＤ４７抗体２Ａ１及びそのヒト化変異体が、ＭＤＭｓによる腫瘍細胞の食作用を投与量依存的に増加することを示す。抗体２Ａ１及びヒト化変異体ＡＢ２．０５は、６６．７ｐＭで腫瘍細胞の食作用を誘導するそれらの能力においてユニークであり、その一方では、Ｂ６Ｈ１２はその濃度では活性を有さなかった（図９Ａ）。図９Ｂは、どのように２Ａ１、及びヒト化変異体ＡＢ２．０５、ＡＢ６．１２−ＩｇＧ１、ＡＢ６．１２−ＩｇＧ４Ｐ、及びＡＢ６．１２−ＩｇＧ４ＰＥが全て０．３μｇ／ｍＬ又は２ｎＭで最大の食作用を誘導するかを示すとともに、その一方ではＢ６Ｈ１２はより高い濃度を必要とすることを示す。このデータは、ＣＤ４７抗体、２Ａ１（及びそれに由来するヒト化変異体）がＣＤ４７ポジティブな腫瘍細胞のマクロファージ媒介性食作用を誘導することを実証する。この実施例において、ＣＣＦＲ−ＣＥＭ細胞は、ＣＤ４７ポジティブなターゲット細胞として用いた。
【０２６６】
実施例１０：ＣＤ４７抗体の抗腫瘍活性
ネズミＣＤ４７抗体の抗腫瘍活性を、ラージリンパ腫モデルで評価した。ラージ細胞をＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの皮下に移植し、５つの群に無作為にグループ分けした（各群あたり１０匹のマウス、０日目）。群１：ビヒクル（バッファのみ）；群２：Ｂ６Ｈ１２（ポジティブコントロール）；群３：１Ｂ４；群４：２Ａ１；及び群５：９Ｅ４。各抗体又はビヒクル（バッファのみ）での処置は、腫瘍が触知可能な時（５０ｍｍ３、１３日目）に開始し、それらの腫瘍の体積が約１５００ｍｍ３に到着した時にマウスを安楽死させた。腫瘍の体積は、１週間あたりに３回測定した。抗体は、３週間にわたって、１週間あたりに３回、２００μｇずつ静脈内に（ＩＶ）に投与した（マウスあたりに合計９回の投与）。処置は、１３日目に開始し、そして及び３２日目に終えた。
【０２６７】
図１０Ａに示すように、本発明のＣＤ４７抗体、特に２Ａ１抗体は、この動物のリンパ腫モデルにおいて抗腫瘍活性を示した。腫瘍の体積が１５００ｍｍ３に到達するまでに、群１（ビヒクルのみ）は〜２５日間を必要とし；群２（Ｂ６Ｈ１２．２）は〜４５日間を必要とし；群３（１Ｂ４）は〜３７日間を必要とし；群４（２Ａ１）は〜８５日間を必要とし；そして、群５（９Ｅ４）は〜４０日間を必要とした。これらのデータは、抗体２Ａ１が、テストした全てのＣＤ４７結合抗体（ＣＤ４７に結合し、ＣＤ４７のＳＩＲＰαとの相互作用をブロックし、そしてヒトの癌のマウスモデルにおける腫瘍形成を抑制することが知られているＢ６Ｈ１２を含む）よりも顕著に強力であったことを示す。予想されなかったことに、これらのＣＤ４７抗体の腫瘍抑制活性は、公開されたデータに基づいて予想されるＣＤ４７に結合するそれらの力価、又はＣＤ４７のＳＩＲＰαとの相互作用をブロックするそれらの力価と相関しなかった。
【０２６８】
実施例２及び３に記載したように、２Ａ１、１Ｂ４及び９Ｅ４は、ＣＤ４７に対する類似の親和性を有するとともに、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のブロックに関して類似の力価を有した。更に、この研究においてを使用した全ての抗体は同一のマウスＩｇＧ１ドメインからなるので、２Ａ１の増強された効果を、記載した抗体のＦｃドメインにおける差によって説明することができない。従って、特有の組成に加え、２Ａ１抗体は、ＣＤ４７発現細胞（例えば、赤血球）の間のホモタイプ相互作用を誘導することができないこと、及び増強されたＣＤ４７への結合又はＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のブロックについての増強された能力によっては説明できない増強された腫瘍抑制活性を含む、予想されずかつユニークな特徴を有する。
【０２６９】
ヒト化２Ａ１抗体がそれらの抗腫瘍活性を維持していることを確認するために、類似のラージ腫瘍研究を実行した。研究デザインは、上述のものと同様であった。ラージ細胞をＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの皮下に移植し、そして５つの群に無作為にグループ分けした（群あたりに１０匹のマウス、０日目）。この研究において、抗体を３週間にわたって１週間あたりに３回、２００μｇずつ腹腔内（ＩＰ）に投与し（マウスあたり合計９回の投与）、そして腫瘍体積を１週間あたりに３回測定した。しかしながら、この研究に関しては、マウスＩｇＧ１２Ａ１抗体（群２）をヒト化誘導体、ＡＢ６．１２と比較した。この研究に関しては、ＡＢ６．１２を、ヒトＩｇＧ１（群３）、ヒトＩｇＧ４Ｐ（群４）及びヒトＩｇＧ４ＰＥ（群４）に構築した（実施例８に記載したように）。従って、この実験は、その腫瘍抑制活性及び多くの抗体の抗腫瘍活性に寄与する本発明の技術分野において知られたＦｃドメインエフェクター機能の潜在的役割に対する２Ａ１のヒトへの適合化の影響を検討する（アドレスする）ように設計された。ヒトＩｇＧ１がヒトＩｇＧ４Ｐと比較してより顕著なエフェクター機能を有することは、良く報告されている。ＩｇＧ４ＰＥは、エフェクター機能を更に減少するように開発した。図１０Ｂに示され得るように、２Ａ１のヒトへの適合化は、２Ａ１の抗腫瘍活性を低減させず、実際にはそれを増強し得た。ＡＢ６．１２−ｈＩｇＧ１、ＡＢ６．１２−ｈＩｇＧ４Ｐ、及びＡＢ６．１２−ｈＩｇＧ４ＰＥは、全て、類似の抗腫瘍活性がマウス２Ａ１（２Ａ１ｍＩｇＧ）よりも顕著に大きく表れることを示した。この結果は、２Ａ１ｍＩｇＧ１、ＡＢ６．１２−ｈＩｇＧ１、ＡＢ６．１２−ｈＩｇＧ４Ｐ及びＡＢ６．１２−ｈＩｇＧ４ＰＥが類似のＣＤ４７結合活性及びＳＩＲＰαブロッキング活性を有するので、予想されないものである。更に、ＡＢ６．１２−ｈＩｇＧ１、ＡＢ６．１２−ｈＩｇＧ４Ｐ及びＡＢ６．１２−ｈＩｇＧ４ＰＥが類似の抗腫瘍活性を有するので、エフェクター機能がヒト化２Ａ１抗体ＡＢ６．１２の効果の役割を果たすものと見受けられる。
【０２７０】
実施例１１：ＣＤ４７抗体のＣＤ４７との共結晶化
ＣＤ４７は、６つのサイトにおいて高度にグリコシル化された単一の細胞外ＩｇＶ（免疫グロビン様可変型）ドメインを有する５回膜貫通型タンパク質である。ＣＤ４７−ＩｇＶドメインの構造は、ＳＩＲＰαのＩｇＶドメイン（その天然のリガンド）との複合体（complex）において解明されている（タンパク質データバンク（ＰＤＢ）引用番号２ＪＪＳ； Hatherley et al., 2008 Mol Cell, 25;31(2): 266-77（図１１Ａ））。この構造は、ＣＤ４７のＮ末端のピログルタミン酸を含む頂端エピトープ（apical epitope）上のＣＤ４７−ＩｇＶに対して結合するＳＩＲＰα−ＩｇＶを示す。この構造は、どのように細胞表面膜貫通型タンパク質の両者が、頭と頭が向き合う配向で隣接する細胞と有効に（productively）相互作用するかを十分に説明する。Ｂ６Ｈ１２のＦａｂとの複合体におけるＣＤ４７−ＩｇＶのＸ線結晶学的構造は、図１１Ｂに示される。明瞭化のために、Ｆａｂの定常領域（ＣＨ１及びＣＬ）は図中で省略されており、ＦＶ（ＶＨ及びＶＬ）のみが示されている。これは、頂端結合部位を示しており、細胞膜から非常に離れた末端部の表面上にこの抗体が位置することを示した（図１１Ｂ）。Ｂ６Ｈ１２によるＳＩＲＰαブロッキングのメカニズムはこの構造から明らかである。配向を示す目的で、細胞膜の相対位置は、図１１において、破線（dashed line）で示される。
【０２７１】
本発明の抗体のターゲットエピトープを決定するために、ＣＤ４７−ＩｇＶドメイン及び２Ａ１−ｘｉのＦａｂ（ヒトＣＨ１及びＣＬドメインを有するキメラ型抗体）の共複合体（co-complex）のＸ線結晶構造を決定した（図１１Ｃ）。明瞭化のために、Ｆａｂの定常領域（ＣＨ１及びＣＬ）は図中で省略されており、ＦＶ（ＶＨ及びＶＬ）のみが示されている。以前に決定された頭と頭とが向き合うように配向するＣＤ４７とＳＩＲＰαの結合構造（図１１Ａ）及びＢ６Ｈ１２抗体がメンブレン（膜）から離れた頂端部に位置する構造（図１１Ｂ）とは異なり、ＣＤ４７との複合体における２Ａ１の構造は、ＣＤ４７に対する抗体の結合がメンブレン（膜）の近くに位置するように示され、予想されずかつユニークな頭と側面とが向き合う配向（head to side orientation）であることが判明した（図１１Ｃ）。ＣＤ４７上の２Ａ１エピトープは不連続であり、ＳＥＱＩＤ番号：１４７（すなわち、シグナル配列（アミノ酸１〜１８）を除いたＳＥＱＩＤ番号：４８）に従って番号付けした場合に、ＣＤ４７の残基Ｙ３７、Ｋ３９、Ｋ４１、ＫＧＲＤ（ＳＥＱＩＤ番号：５６）ループ（残基４３〜４６）、Ｄ５１、Ｈ９０、Ｎ９３、Ｅ９７、Ｔ９９、Ｅ１０４、及びＥ１０６を含む。ＣＤ４７に結合した２Ａ１の構造は、ＶＨがＣＤ４７のＫＧＲＤ（ＳＥＱＩＤ番号：５６）ループに対する結合に基本的に関与し、その一方では、ＶＫドメインが、Ｙ３７、Ｔ１０２、及びＥ１０４を含む頂端部の残基（ＳＩＲＰα結合に関与する）と相互作用することも明らかにする。従って、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの結合を物理的に不可能にするものは、基本的にＶＫドメインである。これらの構造研究は、２Ａ１が結合するユニークなエピトープがＣＤ４７の側面に存在することを示唆する。本発明の技術分野において知られたＣＤ４７抗体と対照的に、メンブレンの近傍の位置での２Ａ１ＶＨ領域の配向は、この抗体が隣接する細胞先のＣＤ４７分子へ架橋できないように拘束することによって有意のレベルの赤血球の赤血球凝集を阻止するというこの抗体の決定的な性質である。
なお本発明は、以下のようにも記載される。
（付記１）
ヒトＣＤ４７に結合する単離されたモノクローナル抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントであって、細胞の有意のレベルの凝集を引き起こさず、下記の可変重（ＶＨ）鎖又は可変軽（ＶＬ）鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメント：
ｉ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号５３を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列、
ｉｉ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号６７を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号６９を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列、
ｉｉｉ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号６７を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号７０を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｉｖ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号６８を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｖ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号７２を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号５３を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号７１を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｖｉ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号７２を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号６８を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｖｉｉ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号７２を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号６８を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号７１を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｖｉｉｉ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号７６を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号６８を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｉｘ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号７６を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号６８を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号７１を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｘ．配列番号５０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号７７を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号５３を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｘｉ．配列番号５７を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号５３を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｘｉｉ．配列番号６０を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号５３を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；
ｘｉｉｉ．配列番号６１を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列；配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列；配列番号５３を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列；配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列；配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列；又は
ｘｉｖ．配列番号６２を有するＶＨ−ＣＤＲ１配列、配列番号５１を有するＶＨ−ＣＤＲ２配列、配列番号５２を有するＶＨ−ＣＤＲ３配列、配列番号５３を有するＶＬ−ＣＤＲ１配列、配列番号５４を有するＶＬ−ＣＤＲ２配列、配列番号５５を有するＶＬ−ＣＤＲ３配列。
（付記２）
ヒトＣＤ４７に結合する単離されたモノクローナル抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントであって、細胞の有意のレベルの凝集を引き起こさず、下記の可変重（ＶＨ）鎖又は可変軽（ＶＬ）鎖を含む抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメント：
ｉ．配列番号５を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３１を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｉｉ．配列番号５を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３２を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｉｉｉ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３３を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｉｖ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３４を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｖ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｖｉ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３６を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｖｉｉ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３７を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｖｉｉｉ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３８を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｉｘ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３９を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘ．配列番号７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号４３を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｉ．配列番号８を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３９を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｉｉ．配列番号１１を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号４２を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｉｉｉ．配列番号１１を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号４３を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｉｖ．配列番号１１を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号４４を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｖ．配列番号１１を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号４７を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｖｉ．配列番号１５を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号４３を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｖｉｉ．配列番号１５を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号４４を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｖｉｉｉ．配列番号１６を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｉｖ．配列番号１７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｘ．配列番号２０を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｘｉ．配列番号２１を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｘｉｉ．配列番号２２を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｘｉｉｉ．配列番号２７を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｘｉｖ．配列番号２８を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；
ｘｘｖ．配列番号２９を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列；又は
ｘｘｖｉ．配列番号３０を有するＶＨ鎖領域の配列、及び配列番号３５を有するＶＬ鎖領域の配列。
（付記３）
ヒトＣＤ４７に結合する単離されたモノクローナル抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントであって、細胞の有意のレベルの凝集を引き起こさず、下記の可変重（ＶＨ）鎖又は可変軽（ＶＬ）鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメント：
ｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号５を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３１を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号５を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３２を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｉｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３３を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｉｖ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３４を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｖ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｖｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３６を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｖｉｉ．Ｈ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３７を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｖｉｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３８を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｉｘ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３９を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４３を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号８を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３９を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１１を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４２を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｉｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１１を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４３を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｉｖ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１１を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４４を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｖ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１１を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４７を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｖｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１５を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４３を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｖｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１５を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号４４を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｖｉｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１６を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｉｘ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号１７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｘ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２０を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｘｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２１を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｘｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２２を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｘｉｉｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２７を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｘｉｖ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２８を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；
ｘｖ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号２９を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む；又は
ｘｖｉ．ＶＨ−ＣＤＲ１、ＶＨ−ＣＤＲ２及びＶＨ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３０を有するＶＨ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含み、かつ、ＶＬ−ＣＤＲ１、ＶＬ−ＣＤＲ２及びＶＬ−ＣＤＲ３が、それぞれ、配列番号３５を有するＶＬ鎖領域内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。
（付記４）
当該抗体はキメラ又はヒト化抗体であることを特徴とする付記１〜３のいずれか１つに記載の抗体又は免疫学的に活性なフラグメント。
（付記５）
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＣＤ４７がシグナル制御タンパク質α（SIRPα）と相互作用することを妨げること；又は、
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＣＤ４７発現細胞のマクロファージ媒介食作用を促進すること
を特徴とする付記１〜４のいずれか１つに記載の抗体又は免疫学的に活性なフラグメント。
（付記６）
当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ＩｇＧ１アイソタイプ、ＩｇＧ２アイソタイプ、ＩｇＧ３アイソタイプ、及びＩｇＧ４アイソタイプからなる群から選択されるＩｇＧアイソタイプであること
を特徴とする付記１〜５のいずれか１つに記載の抗体又は免疫学的に活性なフラグメント。
（付記７）
頭部が側面へ配向するように当該抗体はＣＤ４７に結合し、当該抗体のＶＨ鎖は、ＣＤ４７発現細胞の膜の近くに位置し、そして当該抗体のＶＬ鎖は、ＣＤ４７上のＳＩＲＰα結合部位を塞ぐこと；又は、
当該抗体のＶＬ鎖は、ＣＤ４７発現細胞の膜の近くに位置し、そして当該抗体のＶＨ鎖は、ＣＤ４７上のＳＩＲＰα結合部位を塞ぐこと
を特徴とする付記１〜６のいずれか１つに記載の抗体又は免疫学的に活性なフラグメント。
（付記８）
当該抗体がＣＤ４７上の不連続なエピトープに結合することを特徴とする付記１〜７のいずれか１つに記載の抗体又は免疫学的に活性なフラグメント。
（付記９）
単離された抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントであって、当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントが、ヒトＣＤ４７への結合に関して付記１〜８のいずれか１つに記載の抗体と競合することを特徴とする単離された抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメント。
（付記１０）
付記１〜９のいずれか１つに記載の抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメント及び担体を含む医薬的な組成物。
（付記１１）
対象における癌の兆候又は他の腫瘍性状態を緩和するのに使用するための付記１〜９のいずれか１つに記載の抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントを含む医薬的な組成物。
（付記１２）
前記緩和が、必要とする対象に、当該抗体又は免疫学的に活性なそのフラグメントを投与し及び化学療法を行うことにより行われることを特徴とする付記１１に記載の医薬的な組成物。
（付記１３）
前記化学療法が放射線療法であることを特徴とする付記１２に記載の医薬的な組成物。
（付記１４）
当該対象がヒトであることを特徴とする付記１１に記載の医薬的な組成物。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図７Ｇ】
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【図７Ｈ】
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【図７Ｉ】
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【図７Ｊ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【配列表】
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