(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも８〜多くとも１５のデキストロース当量（ＤＥ）、及び少なくとも１７００〜多くとも３０００ダルトンの重量平均分子量すなわちＭｗを有する多分岐マルトデキストリンであって、
−  少なくとも３０％〜多くとも４５％の１→６グルコシド結合含有率；
−  少なくとも７５％〜多くとも１００％の、ＡＯＡＣ法第２００１−０３号により決定される可溶性難消化性繊維含有率；
ならびに
−  ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、標準的マルトデキストリンのα−アミラーゼ加水分解の８０％〜９０％の低減、および
−  ｉｎ  ｓｉｔｕで、標準的マルトデキストリンの腸管消化活性の３０％〜４５％の低減
をもたらす血糖降下能力；
を有すること特徴とする、多分岐マルトデキストリン。
【請求項２】
少なくとも８〜多くとも１２のＤＥ、及び少なくとも２５００〜多くとも３０００ダルトンのＭｗを有し、以下：
−  少なくとも３０％〜多くとも３５％の１→６グルコシド結合含有率、
−  少なくとも７５％〜多くとも８０％の、ＡＯＡＣ法第２００１−０３号に従い決定される可溶性難消化性繊維含有率
を特徴とする、請求項１に記載の多分岐マルトデキストリン。
【請求項３】
少なくとも１２〜多くとも１５のＤＥ、及び少なくとも１７００〜多くとも２５００ダルトンのＭｗを有し、以下：
−  少なくとも３５％〜多くとも４５％の１→６グルコシド結合含有率、
−  少なくとも８０％〜多くとも１００％の、ＡＯＡＣ法第２００１−０３号に従い決定される可溶性難消化性繊維含有率
を特徴とする、請求項１に記載の多分岐マルトデキストリン。
【請求項４】
以下：
ａ．水分含有率が５％未満の脱水した酸性化デンプンを調製するステップ、
ｂ．このようにして脱水した酸性化デンプンを温度１２０〜３００℃で薄層反応器内にて処理するステップ、
ｃ．得られた分岐デンプン誘導体を集収、精製し、好ましくは濃縮するステップ、
ｄ．前記分岐デンプン誘導体の分子分別を実施して、以下：
ｉ．Ｍｎ２５０〜４００ｇ／モル、
ｉｉ．多分散指数２〜３、
ｉｉｉ．還元糖含有率２０％〜３０％、
ｉｖ．１→６グルコシド結合含有率３０％〜３５％
を有する画分を取得するステップ、
ｅ．任意選択で、得られた低分子量画分をアミログルコシダーゼで処理するステップ、
ｆ．得られた溶液をクロマトグラフィーカラムで処理することにより、重合度が１及び２のオリゴマーを排除するステップ、
ｇ．得られた多分岐マルトデキストリンを回収するステップ
を特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の多分岐マルトデキストリンを製造する方法。
【請求項５】
食品又は医薬品の製造を目的とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の、又は請求項４の方法により得られる多分岐マルトデキストリンの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、低分子量、すなわち、８〜１５のデキストロース当量（ＤＥ)および１７００〜３０００ダルトンの分子量すなわちＭｗを有する、新規の多分岐マルトデキストリンに関し、これは、その特有の１→６グルコシド結合含有率、その可溶性難消化性繊維含有率、とりわけ、その顕著な血糖降下特性を特徴とする。
【０００２】
さらに詳細には、これら新規の多分岐マルトデキストリンは、３０％〜４５％の１→６グルコシド結合含有率、７５％〜１００％（ＡＯＡＣ法第２００１−０３号による）の可溶性難消化性繊維含有率、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｓｉｔｕの両方で、標準的マルトデキストリンの消化に対する防御作用によって表される顕著な血糖降下特性を有する。
【背景技術】
【０００３】
本発明の目的のために、「標準的マルトデキストリン」は、グルコースと、主に、わずか４％〜５％のα−１，６グルコシド結合で、α−１，４結合したグルコースポリマーの精製および濃縮混合物として定義され、これらは、可変の分子量を有し、完全に水溶性であり、弱い還元力を有する。
【０００４】
これらの標準的マルトデキストリンは、通常、穀物デンプンまたは塊茎状植物デンプンの酸性化水分解または酵素加水分解により生成される。標準的マルトデキストリンの分類は、主として、デキストロース当量すなわちＤ．Ｅ．（Ｄｅｘｔｒｏｓｅ  Ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ）の概念により従来表現される、その還元力の測定値に基づいて行われる。この点に関して具体的には、Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＣｏｄｅｘのＭｏｎｏｇｒａｐｈ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃａｔｉｏｎｓで見直されたマルトデキストリンの定義では、Ｄ．Ｅ．値は２０以下であるべきであると規定している。
【０００５】
本発明の目的のために、標準的マルトデキストリンと比較して、本発明の多分岐マルトデキストリンによって表される「防御作用」は、標準的マルトデキストリンと混合した場合、以下：
−  ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、前記標準的マルトデキストリンのα−アミラーゼ加水分解を８０％〜９０％低減することができる能力；
−  腸内のｉｎ  ｓｉｔｕで、上記マルトデキストリンの腸内消化活性を３０％〜４５％低減することができる能力
をもたらす。
【０００６】
炭水化物、例えば、標準的マルトデキストリンの消化および吸収に作用することにより、本発明の多分岐マルトデキストリンは、食事後（食後）の血糖の上昇、さらにはインスリンの分泌も遅らせ、これにより低減させる。
【０００７】
ゆえに、この作用は、糖尿病患者が、その血糖の制御を改善するのを助けることができる。
【０００８】
従って、本発明は、様々な産業分野、特に、食品及び製薬産業で用いることができる、上記のような多分岐マルトデキストリンを含む組成物に関する。
【０００９】
最後に、本発明は、前記多分岐マルトデキストリンを生産する方法に関する。
【００１０】
しばらく前から、適切な繊維豊富な食物の定義にかなりの関心が向けられてきた。実際、食物に繊維を取り込むことは、健康面で有益な効果を有することが認められている。
【００１１】
食物繊維は、多くの場合、その可溶性に応じて、不溶性及び可溶性繊維に分類される。
【００１２】
これら２つのタイプの繊維は、繊維含有食品に様々な割合で存在している。オーツ、オオムギ、果実、新鮮な野菜及び乾燥野菜（マメ、レンズマメ、ヒヨコマメ）は、可溶性繊維の優れた供給源であり、また、全穀物及び全粒パンは、不溶性繊維が豊富である。
【００１３】
セルロース、レジスタントスターチ、トウモロコシ繊維（ビール粕）またはダイズ繊維などの不溶性繊維は、胃腸管において本質的に力学的な役割を有する。
【００１４】
これらは、腸内細菌叢によりほんのわずかに発酵するにすぎず、バラスト効果によって腸通過時間の短縮に寄与する。
【００１５】
不溶性繊維は、このように、便の重量を増加し、腸通過時間を短縮することにより、便秘の予防に寄与する。
【００１６】
ヒトの腸内酵素によって消化することができないペクチン及びイヌリンなどの可溶性繊維は、腸内細菌叢により発酵する。この発酵によって大腸内に短鎖脂肪酸が放出されるが、これには、大腸のｐＨを低下させて、その結果、病原菌の発生を制限し、有益な細菌の発生を刺激する作用がある。
【００１７】
短鎖脂肪酸はまた、大腸の細胞のための重要なエネルギー源を構成し、腸の癌性細胞の成長及び増殖を阻害する。
【００１８】
炭水化物及び脂質代謝への食物繊維の有益な作用を説明するために多くのメカニズムが援用されており；これらは互いに排他的ではない。
【００１９】
食後の血糖に対する可溶性繊維の即時効果は、食物繊維の作用についての「力学的」説明を付与した：
−  食物塊の粘度を増加することによる、胃内容排出時間の延長；
−  小腸内の食物への消化酵素の作用に対する希釈及びバリア効果；
−  小腸を覆う粘膜層の増加、これによる、栄養素吸収時間の遅延；
−  口から腸に至るまでの時間の増加による栄養素吸収の拡大。
【００２０】
最初の研究（１９７０年代末に遡る）によって、糖尿病患者に炭水化物及び繊維が豊富な食物を与えると、血糖バランスが改善し、患者のインスリン必要性が低減することが実証されたが、これは、その時代の食事及び栄養療法傾向に反するものであった。
【００２１】
食後の血糖及びインスリン血症に対する食物繊維の短期作用については、広く文献に記載され、首尾一貫している：食物繊維は、インスリン治療、非インスリン依存性及び耐糖能障害糖尿病被験者並びに健康な被験者における食後の血糖上昇に影響を与える。この作用は、可溶性繊維に関するものであるだけに、一層明らかである。
【００２２】
従って、多くの研究から、複合糖質（多糖、デンプン）と良好な大腸生理機能との間に関係性があるという結果が得られる。
【００２３】
これらの複合糖質が血糖の制御にもたらす影響は、小腸では消化されないレジスタントスターチの変転を通して研究されており、従って、大腸の健康に極めて有利である。
【００２４】
それらの機能的作用の標的は、通常、これらを発酵させる大腸細菌叢（そのためにこれらは特異的かつ選択的物質として作用する）、胃腸生理機能、特に大腸によって行われる機能、免疫系、鉱物の生体利用能及び脂質代謝である。
【００２５】
従って、可溶性繊維について、以下のことが明らかである：
−  胃内容排出を遅らせる；
−  早期に満腹感を与える；
−  小腸における炭水化物（及びまた脂質）の吸収速度を減じる。
【００２６】
通常、可溶性繊維に分類される化合物は、フルクトオリゴ糖及びトランスガラクトオリゴ糖であるが、ラクツロース、イソマルトオリゴ糖、ダイズ抽出オリゴ糖、キシロオリゴ糖なども挙げられる。
【００２７】
例えば、フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）は、短鎖フルクトース単位ポリマーであり、これらは、ヒトにおいて小腸で加水分解されないが、大腸の常在細菌叢により分解される。
【００２８】
ＦＯＳは、主にヒト及び動物の腸の内生乳酸菌及びビフィズス菌の増殖を誘導する。
【００２９】
主に植物から抽出された上記の化合物と並んで、デンプン又はその部分的若しくは完全な加水分解産物から得られる分子がある。
【００３０】
例えば、ポリデキストロースは、ソルビトール及び適切な酸触媒（クエン酸など）の存在下及び高温で、グルコースのランダム重合により合成される。
【００３１】
ポリデキストロースは、充填材及び低カロリー成分として食物中に広く用いられている。ポリデキストロースは、小腸では消化も吸収もされず、かなりの割合が便に見出される。
【００３２】
ポリデキストロースは、このように特定の細菌叢による乳酸の消費を促進し、ＦＯＳにより誘導される過剰生産を平衡させるため、ＦＯＳと併用されることが多い。
【００３３】
しかし、従来の技術においても、食物繊維の特性を付与することにより、レジスタントスターチを取得するように、デンプンを処理するために開発された技術がいくつか知られている（Ｅｎｇｌｙｓｔ ａｎｄ Ｃｕｍｍｉｎｇｓ ｉｎ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１９８７年，ｖｏｌｕｍｅ  ４５  ｐｐ．４２３−４３１）。
【００３４】
このように、デンプンは、従来、高温で食用酸により処理されている。この熱処理により、酸の量、デンプンの水分、及び用いた温度範囲に応じて、ピロデキストリン、白色デキストリン又は黄色デキストリンタイプのデンプン誘導体が生成され、これらのデンプン誘導体は、ヒトの小腸内での消化及び吸収に対して耐性である。
【００３５】
実際に、標準的な消化性マルトデキストリン及びデンプンには、α−１，４及びα−１，６タイプのグルコシド結合しかないが、酸性条件下かつ低水分での熱処理により、１，２及び１，３タイプの非定型結合（α又はβアノマー異性）を生成し、これらはヒトの消化酵素により加水分解されない。
【００３６】
上記の物理的処理には、得られるデンプン誘導体の食物繊維性を強化するために、酵素処理を追加することが多い。
【００３７】
従って、例えば、欧州特許第３６８，４５１号明細書及び米国許第５，２６４，５６８号明細書には、高温の溶液中のデキストリン又はポリデキストリンに対するα−アミラーゼ又は複数のα−アミラーゼの連続的な作用により、食物繊維特性が強化されたピロデキストリンを製造する方法が記載されている。
【００３８】
欧州特許第５３０，１１１号明細書は、特殊な条件下で脱水酸性化したコーンスターチの押し出しによって得られる難消化性デキストリンを記載している。この処理に耐熱性α−アミラーゼの作用を追加することができる。
【００３９】
本出願人企業自身も、その特許出願：欧州特許第１，００６，１２８号明細書に、１５％〜３５％の１，６グルコシド結合、２０％未満の還元糖含有率、５未満の多分散指数、及び多くとも４５００ｇ／モルの数平均分子量Ｍｎを有する「分岐マルトデキストリン」を記載している。
【００４０】
これらの分岐マルトデキストリンは、天然でとりわけ難消化性であり、その結果、小腸内でのそれらの同化を妨げることからその発熱量が減少し、難消化性繊維の供給源となる。
【００４１】
繊維は様々なＡＯＡＣ法に従ってアッセイできることに留意すべきである。例として、フルクタン、ＦＯＳ及びイヌリンについてのＡＯＡＣ法９９７．０８及び９９９．０３、ポリデキストロースについてのＡＯＡＣ法２０００．１１、分岐マルトデキストリンに含まれる繊維をアッセイするためのＡＯＡＣ法２００１．０３、あるいは、ＧＯＳ、並びにまた油性植物又はタンパク質生成植物由来の可溶性オリゴ糖についてのＡＯＡＣ法２００１．０２が挙げられる。
【００４２】
これらの複合糖質は、それらを難消化性にするが、大腸の有益な細菌により発酵可能なそれら自体の性質により、血糖に影響をもたらすことから、小腸バリアの統合性に寄与する。
【００４３】
従って、当該技術分野の当業者は、その固有の特性のために、こうした一連の物質を使用している。
【００４４】
このように、この難消化性は、例えば、欧州特許第４４３，７８９号明細書において、血糖レベルに影響を与えることなく、インスリン分泌を低減することにより、血糖を調節する食物組成物を提供する手段として開発されている。
【００４５】
しかし、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．，２００９，８９，１１４−２５に発表されたＬｉｖｅｓｅｙ，Ｇ及びＴａｇａｍｉ，Ｈによる研究にあるように、食後の血糖に対するレジスタントマルトデキストリンの作用を説明することができるものとして完全に概略的に挙げられた６つのメカニズムの１つは、酵素による阻害であり得るとしても、難消化性を本来有し、しかも、特に、食物への消化酵素の作用に対するバリア剤として作用することができる低分子量化合物を提供するための研究はほとんど実施されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００４６】
以上述べた全てのことから、本出願人の知る限りでは、炭水化物消化の低減によるこのような血糖降下作用を有する低分子量で、多分岐の多糖はないことになる。
【課題を解決するための手段】
【００４７】
本出願人は、名誉なことに、相当量の研究の結果、特にこのバリア効果を有する新規の多分岐マルトデキストリンを考案し、生成した。
【００４８】
本発明の多分岐マルトデキストリンは、従来技術のもの（本出願人が自身の以前の特許出願において既に提案し、記載した他の低分子量分岐マルトデキストリンも含む）と明らかに異なるという意味で新規ファミリーを成す。
【００４９】
本発明の目的のために、「分岐マルトデキストリン」という用語は、本出願人が所有者である欧州特許第１，００６，１２８号明細書に記載されているマルトデキストリンを意味するものとする。
【００５０】
より具体的には、本発明の多分岐マルトデキストリンは、少なくとも８〜多くとも１５のデキストロース当量（ＤＥ）、及び少なくとも１７００〜多くとも３０００ダルトンの分子量すなわちＭｗを有する。
【００５１】
これらは、特に、以下を特徴とする：
−  少なくとも３０％〜多くとも４５％の１→６グルコシド結合含有率、
−  少なくとも７５％〜多くとも１００％の、ＡＯＡＣ法第２００１−０３号により決定される可溶性難消化性繊維含有率、および
−  下記のことをもたらす、試験Ａにより表される血糖降下能力：
−  ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、標準的マルトデキストリンのα−アミラーゼ加水分解の８０％〜９０％の低減、
−  ｉｎ  ｓｉｔｕで、標準的マルトデキストリンの腸管消化活性の３０％〜４５％の低減。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
本発明による製剤の第１ファミリーは、ＤＥが少なくとも８〜多くとも１２であり、Ｍｗが少なくとも２５００〜多くとも３０００ダルトンの多分岐マルトデキストリンから構成され、以下を特徴とする：
−  少なくとも３０％〜多くとも３５％の１→６グルコシド結合含有率、
−  少なくとも７５％〜多くとも８０％の、ＡＯＡＣ法第２００１−０３号に従い決定される可溶性難消化性繊維含有率。
【００５３】
本発明による製剤の第２ファミリーは、ＤＥが少なくとも１２〜多くとも１５であり、Ｍｗが少なくとも１７００〜多くとも２５００ダルトンの多分岐マルトデキストリンから構成され、以下を特徴とする：
−  少なくとも３５％〜多くとも４５％の１→６グルコシド結合含有率、
−  少なくとも８０％〜多くとも１００％の、ＡＯＡＣ法第２００１−０３号に従い決定される可溶性難消化性繊維含有率。
【００５４】
本発明の多分岐マルトデキストリンは、何よりもまず、そのＤＥ及びその分子量によって特徴付けられる。
【００５５】
既述したように、本出願人は、その特許出願：欧州特許第１，００６，１２８号明細書に、１５％〜３５％の１，６グルコシド結合、２０％未満の還元糖含有率、５未満の多分散指数、及び４５００ｇ／モル以下の数平均分子量Ｍｎを有する「分岐マルトデキストリン」を開発し、記載している。
【００５６】
本発明の多分岐マルトデキストリンは、そのＤＥ及びその分子量により、上記のファミリーの分岐マルトデキストリンに類似している。
【００５７】
ＤＥ及び分子量（Ｍｗ）の解析パラメータは、また、当業者には公知の任意の方法で決定される：
−  デキストロース当量を決定する方法は、例えば、Ｌａｎｅ−Ｅｙｎｏｎ定滴定法（１９２３，Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｄｕｃｉｎｇ  ｓｕｇａｒｓ  ｂｙ  ｍｅａｎｓ  ｏｆ  Ｆｅｈｌｉｎｇ’ｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｂｌｕｅ  ａｓ  ｉｎｔｅｒｎａｌ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ．Ｊ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｄ．Ｔｒａｎｓ．３２−３６）であり；
−  Ｍｗ値は、固定層の細孔への貫入又は非貫入による、そのサイズに応じた溶質の分子の選択的保持に基づく、サイズ排除クロマトグラフィーによって測定する。
【００５８】
従って、本発明の多分岐マルトデキストリンは、１７００〜３０００ダルトンの低分子量の場合、８〜１５の値に限定されるＤＥを有する。
【００５９】
上記以外にも、またこれが欧州特許第１，００６，１２８号明細書の分岐マルトデキストリンと違う点であるが、本発明の多分岐マルトデキストリンは、
−  ３０％〜４５％の、全体的により高い１→６グルコシド結合含有率、
−  ７５％〜１００％（ＡＯＡＣ法第２００１−０３号による）の、高い可溶性難消化性繊維含有率、ならびに特に、
−  顕著な血糖降下特性
を有する。
【００６０】
１→２、１→３、１→４、及び１→６グルコシド結合含有率の決定は、Ｈａｋｏｍｏｒｉ，Ｓ．１９６４，Ｊ．Ｂｉｏｌ，Ｃｈｅｍ，５５，２０５に記載の従来のメチル化技術に従って決定する。
【００６１】
血糖降下特性に関して、これらは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｓｉｔｕでの酵素消化試験を実施することによって決定され、これにより、本発明の多分岐マルトデキストリンが、標準的マルトデキストリンの消化を低減する能力の測定が可能になる。
【００６２】
その「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」成分に関して、この試験は、本発明の多分岐マルトデキストリンの存在下で、標準的マルトデキストリンに対するブタ膵臓α−アミラーゼの作用により放出される還元糖の量を経時的に測定することからなる。
【００６３】
その手順は以下の通りである：
−  ２５０ｍｌビーカーにおいて、Ｇｌｕｃｉｄｅｘ  ６の商品名で本出願人により販売されているタイプの標準的マルトデキストリンを正確に５０．０ｇ計量し、
−  試験しようとする多分岐マルトデキストリンを正確に５．０ｇ計量し、これらをビーカーに導入し、
−  １５０ｍｌの脱塩水で可溶化させ、
−  必要であれば、ｐＨを５の値に調整し、
−  ２５０ｍｌ容量のフラスコに移し、少量の水でビーカーをすすいだ後、フラスコを脱塩水で２５０ｍｌに調節し、
−  ５００ｍｌの三角フラスコに移し、
−  ３７℃のインキュベータ内に配置し、
−  参照番号Ａ３１７６（タイプＶＩ−Ｂ、≧１０単位／ｍｇ固体）でＳｉｇｍａにより販売されているブタ膵臓α−アミラーゼ２５ｍｇを添加し、
−  ３時間、６時間、及び２４時間の反応時点で５０ｍｌの溶液を取り出し、８５℃の水浴中で１０分不活性化させ、
−  Ｇａｂｒｉｅｌ  Ｂｅｒｔｒａｎｄの方法（“Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ｄｅｓ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｑｕｅｓ”［“Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ”］，ｖｏｌ．１４，Ｎｏ．１，Ｊａｎ．１９０７）に従い還元糖含量を測定する。
【００６４】
測定は対照（α−アミラーゼを単独で用いたＧｌｕｃｉｄｅｘ（登録商標）の消化）についても実施し、このｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験の結果を、対照に対するα−アミラーゼ活性の％として表す。
【００６５】
以下に例示するように、本発明の多分岐マルトデキストリンは、このようにして、膵臓α−アミラーゼによるＧｌｕｃｉｄｅｘ（登録商標）６の加水分解を８０％〜９０％低減することに成功している。
【００６６】
比較として、欧州特許第１，００６，１２８号明細書において本出願人が開発した分岐マルトデキストリンは、膵臓α−アミラーゼによるＧｌｕｃｉｄｅｘ（登録商標）６の加水分解を３０％〜５０％しか低減することに成功していない。
【００６７】
その「ｉｎ  ｓｉｔｕ」成分に関して、この試験は、ラットにおいて連続的腸管潅流を実施して、標準的マルトデキストリン加水分解のパーセンテージを計算することからなる。
【００６８】
その手順は以下の通りである。
【００６９】
体重約３００〜３５０ｇの、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙからの事前に麻酔したＯＦＡラットの小腸を十二指腸及び回腸の位置で潅流する。
【００７０】
一定の流れが循環する閉じた回路を形成する。
【００７１】
流れを蠕動ポンプにより供給する。
【００７２】
試験しようとする生成物の溶液を回路に注入する。
【００７３】
分子量が４０００前後のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）をこの溶液に添加する。前記ポリエチレングリコールを腸内の水移動のマーカーとして用いる。
【００７４】
２時間の潅流の間、腸管流出液をサンプリングする。
【００７５】
完全な酸性加水分解の後、ＰＥＧ比について調節した（潅流の前及び後）腸管流出液中で検定したグルコースの量から、試験生成物の加水分解のパーセンテージを算出することができる。
【００７６】
詳細なプロトコルは以下の通りである：
−  生理学的食塩水（０．１５Ｍ  ＮａＣｌ）中にｐＨ７、４．６８ｇ／ｌのＲａｌ（登録商標）バッファー溶液を調製し、
−  バッファー溶液中１％のＰＥＧ４０００溶液を調製し、
−  緩衝ＰＥＧ４０００溶液中１０ｇ／ｌで、試験しようとする製剤の、潅流用溶液を調製し、
−  動物を２４時間絶食させ、
−  動物をイソフルランで麻酔し、
−  開腹術を実施し、
−  内径２ｍｍのシリコーンチューブを用いて、十二指腸及び回腸（盲腸から約５ｃｍ）を潅流し、
−  動物の体温を３７℃に設定したホットプレート上で維持し、
−  この閉じた回路に、潅流しようとする溶液３０ｍｌを導入し、
−  １ｍｌ／分に設定した蠕動ポンプを始動させ、
−  ３０、６０及び１２０分でサンプルを採取する。
【００７７】
次に、以下のようにして解析を実施する：
−  初期潅流液（Ｐｏ）及び流出液（Ｐｔ）についてＰＥＧアッセイを実施し、
−  流出液中のグルコース（ＦＧｔ＝時点ｔでの遊離グルコース）を検定し、
−  生成物の初期サンプル及び流出液に対して完全な酸性加水分解を実施し、
−  グルコース（ＴＧｏ：時点０での総グルコース−ＴＧｔ：時点ｔでの総グルコース）を検定する。
【００７８】
用いる式は、以下の通りである：
−  分岐グルコース（ｇ／ｌ）＝ＢＧ＝ＴＧｔ−ＦＧｔ
−  腸管腔内の水移動に関して調節した分岐グルコース（ＢＧ’）：
【数１】
0006291425.tif 000002
−  試験した製剤の加水分解パーセンテージ
【数２】
0006291425.tif 000003
【００７９】
以下に例示するように、本発明の多分岐マルトデキストリンは、腸管潅流の終了時に、Ｇｌｕｃｉｄｅｘ（登録商標）６の加水分解を３０％〜４５％低減することに成功している。
【００８０】
本発明の多分岐マルトデキストリンを調製するために、下記のステップを連続して実施する：
ａ．水分含有率が５％未満、好ましくは４％以下の脱水した酸性化デンプンを調製し、
ｂ．このようにして脱水した酸性化デンプンを温度１２０〜３００℃、好ましくは１５０〜２００℃で薄層反応器内にて処理し、
ｃ．得られた分岐デンプン誘導体を集収、精製した後、好ましくは濃縮し、
ｄ．前記分岐デンプン誘導体の分子分別を実施して、以下：
ｉ．Ｍｎ２５０〜４００ｇ／モル、
ｉｉ．多分散指数２〜３、
ｉｉｉ．還元糖含有率２０％〜３０％、
ｉｖ．１→６グルコシド結合含有率３０％〜３５％
を有する画分を取得し、
ｅ．任意選択で、得られた低分子量画分をアミログルコシダーゼで処理し、
ｆ．得られた溶液をクロマトグラフィーカラムで処理することにより、重合度が１及び２のオリゴマーを排除し、
ｇ．得られた多分岐マルトデキストリンを回収する。
【００８１】
本発明の方法の最初の４つのステップ（ステップａ．〜ステップｄ．）により低分子量画分が調製されるが、これらのステップについては、当業者が利用可能な任意の方法をここで用いることができる。
【００８２】
しかし、本出願人は、その特許出願：欧州特許第１，００６，１２８号明細書に記載されているものを用いることを推奨し、上記ステップは、参照として、本明細書に含まれる（より具体的には、欧州特許第１，００６，１２８号明細書の実施例２のステップ、その後に、グルコースオキシダーゼを用いて、グルコースを排除するステップを実施する）。
【００８３】
次に、以下：
ｉ．Ｍｎ２５０〜４００ｇ／モル、
ｉｉ．多分散指数２〜３、
ｉｉｉ．還元糖含有率２０％〜３０％、
ｉｖ．１→６グルコシド結合含有率３０％〜３５％
を有する低分子量画分を、６プレート構成で、粒度２５０〜３５０μｍを有する、カリウム形態のＰｕｒｏｌｉｔｅ  Ｃ１４５マクロ孔質カチオン樹脂上でのクロマトグラフィーカラムの第４プレートの位置で単離する。
【００８４】
本発明の方法の第５ステップ（ステップｅ）は、任意選択であり、得られた低分子量画分をアミログルコシダーゼで処理することを含む。
【００８５】
この酵素処理の目的は、難消化性グルコシド結合含有率を最適化するように、主として、得られた生成物の線状構造（α１→４グルコシド結合）を加水分解することである。
【００８６】
後に例示するように、ｐＨ４．５、乾燥基準で０．５％の割合のＯｐｔｉｄｅｘ  Ｌ３００Ａタイプのアミログルコシダーゼ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ社製）を用いた５〜１０時間、好ましくは８時間の処理を選択する。
【００８７】
本発明の方法の第６ステップ（ステップｆ）は、重合度が１及び２のオリゴマーを排除するように、得られた溶液をクロマトグラフィーカラムで処理することからなる。
【００８８】
このステップは、当業者には公知の任意の手段により、例えば、三菱（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）社により販売されているナトリウム形態のＤｉａｉｏｎ  ＵＢＲ  ３５Ｋ樹脂上でのクロマトグラフィーによって実施することができる。
【００８９】
４０％の重量収率は、以下に例示するように、ＤＰ１＋ＤＰ２の含有率を乾燥基準で＜６％、好ましくは乾燥基準で＜０．５％の値に限定することを可能にする。
【００９０】
本発明の方法の最後のステップは、得られた多分岐マルトデキストリンを最終的に回収することからなる。
【００９１】
本発明は、以下に示す実施例により、さらに明瞭に理解されよう。尚、これらの実施例は、例示を意図し、非制限的である。
【実施例】
【００９２】
実施例１：本発明の多分岐マルトデキストリンの調製
コムギデンプンを１９．６ｍｅｑ  Ｈ＋／ｋｇ（乾燥）の割合の塩酸で酸性化した後、残留水分含有率が４％になるまで乾燥させる。
【００９３】
この原材料を、温度１８０℃に維持したＢｕｅｓｓ  ＰＲ  ４６ニーダに、流量２０ｋｇ／時、滞留時間５秒で導入する。
【００９４】
１５℃の冷水を噴霧することにより、反応を急速に停止した。
【００９５】
濾過による精製、ならびに吸着樹脂とカチオン及びアニオン樹脂上での退色後、得られた分岐デンプン誘導体を固形分５０％に戻す。
【００９６】
得られた生成物を、７５℃に維持した２００リットルの６プレート構成、粒度２５０〜３５０μｍ、カリウム形態のＰｕｒｏｌｉｔｅ  Ｃ  １４５マクロ孔質強力カチオン樹脂上でのクロマトグラフィーに付す。
【００９７】
分岐デンプン誘導体シロップ及び溶出水の供給流量を、第１及び第３プレートの位置でそれぞれ６０ｌ／時及び４００ｌ／時に設定する。第２プレート及び第４プレートの出力流量の選択により、高分子量及び低分子量分岐マルトデキストリン画分の取得が条件付けられる。
【００９８】
第４プレートの出力流量を１４０ｌ／時に設定する。３０％の収率を設定したクロマトグラフィーパラメータの調節により、４００ｇ／モルのＭｎを有する画分を取得する（収率は、本明細書において、クロマトグラフィー系に導入される固体に対する、上記高分子量画分から抽出された固体の割合として理解される）。
【００９９】
クロマトグラフィー後の低分子量画分（生成物（Ａ））の解析の結果を以下の表Ｉにまとめて分類する。
【０１００】
【表１】
0006291425.tif 000004
【０１０１】
ＤＰ１及びＤＰ２分子の排除は、これらの低分子量画分をＮａ＋形態のＵＢＲ３５Ｋクロマトグラフィーカラムに通過させることにより実施する。
【０１０２】
重量収率は５０％と推定される。
【０１０３】
得られた生成物をカチオン（Ｐｕｒｏｌｉｔｅ製のＣ１５０）及びアニオン（Ｒｏｈｍ  ＆  Ｈａａｓ製のＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲＡ  ９１０）樹脂で脱塩した後、任意選択で粉末にする。
【０１０４】
本発明の多分岐マルトデキストリン（生成物（Ｂ））の解析結果を以下のＩＩにまとめて分類する。
【０１０５】
【表２】
0006291425.tif 000005
【０１０６】
また、アミログルコシダーゼ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ社製のＯｐｔｉｄｅｘ（登録商標）Ｌ３００Ａ；乾燥基準で０．５％、ｐＨ４．５、６０℃で８時間）で前処理した生成物（Ａ）についてＤＰ１及びＤＰ２分子の排除も実施する。
【０１０７】
本発明の多分岐マルトデキストリン（生成物（Ｃ））の解析結果を以下のＩＩＩにまとめて分類する。
【０１０８】
【表３】
0006291425.tif 000006
【０１０９】
このようにして、アミログルコシダーゼでの処理と、これに続くＤＰ１及びＤＰ２分子の排除により、ＡＯＡＣ繊維含有が強化された多分岐マルトデキストリンを得ることができる。
【０１１０】
実施例２：本発明の多分岐マルトデキストリンの血糖降下作用の測定
従って、標準マルトデキストリンのαアミラーゼ加水分解を阻害する作用のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの、及び標準マルトデキストリンの腸管消化への阻害作用のｉｎ  ｓｉｔｕでの評価を、実施例１に記載した方法に従い調製した２つの生成物について実施した。
【０１１１】
実施例１の多分岐マルトデキストリン（Ｂ）及び（Ｃ）の存在下で、Ｇｌｕｃｉｄｅｘ（登録商標）６に対するブタ膵臓α−アミラーゼ活性の阻害率の結果を以下の表に示す。
【０１１２】
本出願人による欧州特許第１，００６，１２８号明細書の教示に従って調製したものに一致する分岐マルトデキストリン（商品名Ｎｕｔｒｉｏｓｅ（登録商標）ＦＢ１０で本出願人から販売されている）及び市販の製品も対照として試験する。
【０１１３】
情報として、Ｎｕｔｒｉｏｓｅ（登録商標）ＦＢ１０は、以下の特徴を有する：
−  ＤＥ：１０
−  Ｍｗ：３９９６ダルトン
−  １→６グルコシド結合含有率：３３％。
【０１１４】
ポリデキストロース（商品名Ｌｉｔｅｓｓｅ（登録商標）で販売されている）については、以下の特徴を有する：
−  ＤＥ：８
−  Ｍｗ：１７００ダルトン
−  １→６グルコシド結合含有率：４２％。
【０１１５】
【表４】
0006291425.tif 000007
【０１１６】
上に記載した試験に従い実施する腸管消化の阻害の測定については、１０ｇ／ｌのＧｌｕｃｉｄｅｘ（登録商標）６、１０ｇ／ｌの生成物（Ｂ）及び１０ｇ／ｌの生成物（Ｃ）について実施する。
【０１１７】
時間経過により達成される加水分解％の結果を以下の表に記載する。
【０１１８】
【表５】
0006291425.tif 000008
【０１１９】
生成物（Ｂ）により、Ｇｌｕｃｉｄｅｘ（登録商標）６の加水分解を制限することができる。腸管潅流の終了時に、Ｇｌｕｃｉｄｅｘ（登録商標）６の加水分解率は、Ｇｌｕｃｉｄｅｘ（登録商標）６を単独で試験して得られた９８．０％に比べ、６３．９％である。
【０１２０】
【表６】
0006291425.tif 000009
【０１２１】
生成物（Ｃ）により、Ｇｌｕｃｉｄｅｘ（登録商標）６の加水分解を制限することができる。腸管潅流の終了時に、Ｇｌｕｃｉｄｅｘ（登録商標）６の加水分解率は、Ｇｌｕｃｉｄｅｘ（登録商標）６を単独で試験して得られた１００．５％に比べ、５６．９％である。