(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
多発性骨髄腫の治療のための、(i) 配列
【化１】
0006426093.tif 000090
のHCDR1、配列
【化２】
0006426093.tif 000091
のHCDR2、配列
【化３】
0006426093.tif 000092
のHCDR3、配列
【化４】
0006426093.tif 000093
のLCDR1、配列
【化５】
0006426093.tif 000094
のLCDR2、及び配列
【化６】
0006426093.tif 000095
のLCDR3を含む、CD38に対して特異的な抗体と、(ii) メルファランとの相乗的組み合わせを含む、組み合わせ医薬。
【請求項２】
前記抗体が、配列
【化７】
0006426093.tif 000096
の可変重鎖と、配列
【化８】
0006426093.tif 000097
の可変軽鎖とを含む、請求項1記載の組み合わせ医薬。
【請求項３】
前記CD38に対して特異的な抗体とメルファランとが、別々に投与される、請求項1記載の組み合わせ医薬。
【請求項４】
メルファランが、前記CD38に対して特異的な抗体の投与の前に投与される、請求項3記載の組み合わせ医薬。
【請求項５】
メルファランが、前記CD38に対して特異的な抗体の投与の72時間前に投与される、請求項4記載の組み合わせ医薬。
【請求項６】
多発性骨髄腫の治療のための医薬を製造するための、(i) 配列
【化９】
0006426093.tif 000098
のHCDR1、配列
【化１０】
0006426093.tif 000099
のHCDR2、配列
【化１１】
0006426093.tif 000100
のHCDR3、配列
【化１２】
0006426093.tif 000101
のLCDR1、配列
【化１３】
0006426093.tif 000102
のLCDR2、及び配列
【化１４】
0006426093.tif 000103
のLCDR3を含む、CD38に対して特異的な抗体と、(ii) メルファランとの相乗的組み合わせの使用。
【請求項７】
前記抗体が、配列
【化１５】
0006426093.tif 000104
の可変重鎖と、配列
【化１６】
0006426093.tif 000105
の可変軽鎖とを含む、請求項6記載の使用。
【請求項８】
前記CD38に対して特異的な抗体とメルファランとが、別々に投与される、請求項6記載の使用。
【請求項９】
メルファランが、前記CD38に対して特異的な抗体の投与の前に投与される、請求項8記載の使用。
【請求項１０】
メルファランが、前記CD38に対して特異的な抗体の投与の72時間前に投与される、請求項9記載の使用。
【請求項１１】
多発性骨髄腫の治療に用いるキットであって、(i) 配列
【化１７】
0006426093.tif 000106
のHCDR1、配列
【化１８】
0006426093.tif 000107
のHCDR2、配列
【化１９】
0006426093.tif 000108
のHCDR3、配列
【化２０】
0006426093.tif 000109
のLCDR1、配列
【化２１】
0006426093.tif 000110
のLCDR2、及び配列
【化２２】
0006426093.tif 000111
のLCDR3を含む、CD38に対して特異的な抗体、及び(ii) メルファランを含む医薬組成物を含む、前記キット。
【請求項１２】
メルファランと組み合わせてCD38に対して特異的な抗体を使用することにより、多発性骨髄腫を治療するためのキットであって、(i) 配列
【化２３】
0006426093.tif 000112
のHCDR1、配列
【化２４】
0006426093.tif 000113
のHCDR2、配列
【化２５】
0006426093.tif 000114
のHCDR3、配列
【化２６】
0006426093.tif 000115
のLCDR1、配列
【化２７】
0006426093.tif 000116
のLCDR2、及び配列
【化２８】
0006426093.tif 000117
のLCDR3を含む、CD38に対して特異的な抗体を含む医薬組成物と、 (ii) 該医薬組成物をメルファランとともに投与する旨の指示書を含む、前記キット。
【請求項１３】
メルファランと組み合わせて多発性骨髄腫を治療するための医薬の製造における、(i) 配列
【化２９】
0006426093.tif 000118
のHCDR1、配列
【化３０】
0006426093.tif 000119
のHCDR2、配列
【化３１】
0006426093.tif 000120
のHCDR3、配列
【化３２】
0006426093.tif 000121
のLCDR1、配列
【化３３】
0006426093.tif 000122
のLCDR2、及び配列
【化３４】
0006426093.tif 000123
のLCDR3を含む、CD38に対して特異的な抗体の使用。
【請求項１４】
多発性骨髄腫の治療のための医薬であって、(i) 配列
【化３５】
0006426093.tif 000124
のHCDR1、配列
【化３６】
0006426093.tif 000125
のHCDR2、配列
【化３７】
0006426093.tif 000126
のHCDR3、配列
【化３８】
0006426093.tif 000127
のLCDR1、配列
【化３９】
0006426093.tif 000128
のLCDR2、及び配列
【化４０】
0006426093.tif 000129
のLCDR3を含む、CD38に対して特異的な抗体と、(ii) メルファランとの組み合わせを含む、前記医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、その開示の全体が参照によって本明細書に組み込まれる2012年9月25日に出願された米国仮特許出願第61/705,172号及び2013年3月8日に出願された米国仮特許出願第61/774,595号に対する優先権を主張する。
【０００２】
(分野)
本開示は、抗CD38抗体とメルファランとの医薬としての組み合わせを記載する。
【背景技術】
【０００３】
(背景)
多発性骨髄腫は、増殖指数が低く寿命が延長された分泌性の血漿細胞の、骨髄における潜在的な蓄積を特徴とするB細胞悪性腫瘍である。この疾患は、最終的には骨及び骨髄を攻撃し、骨格系全体を通した多発性の腫瘍及び病変となる。
【０００４】
すべての癌の約1%、及びすべての造血器腫瘍の10%強は、多発性骨髄腫(MM)に起因する可能性がある。MMの発生率は、高齢集団において増大し、診断時の年齢の中央値は、約61歳である。多発性骨髄腫のための現在利用可能な治療法としては、ビンクリスチン、BCNU、メルファラン、シクロホスファミド、アドリアマイシン、及びプレドニゾン又はデキサメタゾン、幹細胞移植、Thalomid(登録商標)(サリドマイド)、Velcade(登録商標)(ボルテゾミブ)、Aredia(登録商標)(パミドロネート)、及びZometa(登録商標)(ゾレドロン酸)などの化学療法が挙げられる。化学療法薬の組み合わせを含む現在の治療プロトコルは、約5％の完全寛解率をもたらすに過ぎず、生存期間中央値は、診断の時点から約36〜48ヶ月である。高用量の化学療法、それに続く自己骨髄又は末梢血単核細胞移植を使用する最近の進歩によって、完全寛解率及び寛解持続期間は増大している。全生存期間はわずかに延長しているものの、治癒のエビデンスは得られていない。最終的に、MM患者は、インターフェロンα(IFN-α)を単独で用いる又はステロイドと組み合わせて用いる維持療法下であっても、再発することが多い。
【０００５】
CD38は、こうした悪性の血漿細胞上に発現する抗原の例である。CD38の機能としては、接着及びシグナル伝達事象における受容体仲介と、(エクト型-)酵素活性との両方が挙げられる。エクト型酵素としてのCD38は、環状ADP-リボース(cADPR)及びADPRの、またニコチンアミド及びニコチン酸アデニンジヌクオチドリン酸(NAADP)の形成のための基質として、NAD+を使用する。cADPR及びNAADPは、Ca2+動員のためのセカンドメッセンジャーとして作用することが示されている。CD38は、NAD+をcADPRに変換することによって、細胞外のNAD+濃度を、ひいてはNAD誘発細胞死(NCID)の調節による細胞生存を調節する。Ca2+を介するシグナリングに加えて、T及びB細胞上の抗原-受容体複合体又は他のタイプの受容体複合体(例えばMHC分子)とのクロストークを介するCD38シグナリングが発生し、このようにして、いくつかの細胞応答に、またIgGの転換及び分泌に関与する。
【０００６】
今日、CD38を標的にする様々な手法が、当技術分野で開示されている。例えば、CD38に対して特異的な抗体が、WO1999/62526(Mayo Foundation); WO200206347(Crucell Holland); US2002164788(Jonathan Ellis)(参照によってその全体を組み込む); WO2005/103083、US出願番号第10/588,568号(参照によってその全体を組み込む)、WO2006/125640、US出願番号第11/920,830号(参照によってその全体を組み込む)、及びWO2007/042309、US出願番号第12/089,806号(参照によってその全体を組み込む)(MorphoSys AG); WO2006099875、US出願番号第11/886,932号(Genmab)(参照によってその全体を組み込む); 並びにWO08/047242、US出願番号第12/441,466号(参照によってその全体を組み込む)(Sanofi-Aventis)に記載されている。しかし、CD38抗体の有効性を向上させるために、CD38に対して特異的な抗体と他の薬剤との様々な組み合わせ療法が、例えばWO200040265、US出願番号第09/226,895号(参照によってその全体を組み込む)(Research Development Foundation); WO2006099875及びWO2008037257、US出願番号第11/886,932号及び第12/442,808号(参照によってその全体を組み込む)(Genmab); WO2012/041800(MorphoSys AG)及びWO2010061360、US出願番号第13/131,389号(参照によってその全体を組み込む)、WO2010061359、US出願番号第13130867号(参照によってその全体を組み込む)、WO2010061358、US出願番号第13130865号(参照によってその全体を組み込む)、及びWO2010061357、US出願番号第13/130,862号(参照によってその全体を組み込む)(Sanofi Aventis)(これらはすべて、参照によってその全体を組み込む)に、既に開示されている。
【０００７】
しかし、CD38を発現している腫瘍を伴う多くの形態の癌は、依然として予後不良であり、現在の治療法は十分ではない。したがって、こうした形態の癌を治療するための改良された方法の必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００８】
(概要)
驚いたことに、特定の抗CD38抗体とメルファランとの組み合わせが、臨床的に意義のある多発性骨髄腫インビボモデルにおける相乗的レベルの骨融解の減少を示すことが判明した。この組み合わせは、その驚くべき相乗効果のおかげで、ヒトにおける多発性骨髄腫の治療のための改良された有望な手法を提供する。
【０００９】
一態様では、本開示は、CD38に対して特異的な抗体とメルファランとの相乗的組み合わせに関する。別の態様では、本開示は、CD38に対して特異的な抗体とナイトロジェンマスタードアルキル化剤とを含む医薬組成物に関する。こうした組み合わせは、多発性骨髄腫などの、腫瘍細胞を伴う癌の治療に有用である。
【００１０】
メルファランは、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤であり、したがって、シクロホスファミド、メクロレタミン、ウラムスチン、クロラムブシル、イホスファミド、又はベンダムスチンなどの他のナイトロジェンマスタードアルキル化剤も、抗CD38抗体と組み合わせて使用した場合に相乗効果をもたらす可能性がある。
【００１１】
別の態様は、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、及び/又は急性リンパ性白血病の治療における、抗CD38抗体とナイトロジェンマスタードアルキル化剤との相乗的組み合わせの使用を含む。
【００１２】
本開示のある態様は、CD38に対して特異的な抗体が、配列
【化１】
0006426093.tif 000002
のHCDR1、配列
【化２】
0006426093.tif 000003
のHCDR2、配列
【化３】
0006426093.tif 000004
のHCDR3、配列
【化４】
0006426093.tif 000005
のLCDR1、配列
【化５】
0006426093.tif 000006
のLCDR2、及び配列
【化６】
0006426093.tif 000007
のLCDR3を含む、メルファランとの組み合わせを含む。好ましい態様では、該組み合わせは、多発性骨髄腫の治療のために使用される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図1は、実施例3に記載した研究群のそれぞれのMicroCT Scan平均/総骨体積を示す。すべての群において、3.0mg/kgのMOR03087と4.0mg/kgのメルファランを使用した。
【図２】図2は、実施例3に記載した研究群のそれぞれのMicroCT Scan平均/総骨体積を示す。すべての群において、3.0mg/kgのMOR03087と8.0mg/kgのメルファランを使用した。
【図３】図3は、CD38抗体(MOR03087)及びメルファラン及びこれらの組み合わせを使用した、同所性骨溶解モデル由来のマウスから単離された血清中の平均タンパク質M濃度を示す。
【図４】図4は、MOR202のアミノ酸配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
(詳細な説明)
(定義)
「医薬組成物」は、活性な薬剤、例えばヒトにおける治療的使用のための抗体を少なくとも含む。医薬組成物はまた、活性な薬剤、例えばヒトにおける治療的使用のための抗体と、ナイトロジェンマスタードとの組み合わせを含む。医薬組成物は、許容し得る担体又は賦形剤を含むことができる。
【００１５】
「投与される」又は「投与」には、限定はされないが、例えば、静脈内、筋肉内、皮内若しくは皮下経路、又は粘膜経路などの、例えば、鼻内スプレー若しくは吸入用のエアロゾルとしての、又は摂取可能な液剤、カプセル剤、若しくは錠剤としての、注射可能な形態による送達が含まれる。
【００１６】
「相乗効果」、「相乗性」、又は「相乗的活性」は、組み合わせの、予測される相加的効果を超える効果を意味する。組み合わせの「相乗効果」、「相乗性」、又は「相乗的活性」は、本明細書では、Clarkeらの方法によって決定される。Clarkeらの文献、「乳癌及び他のモデルにおけるインビボでの実験的細胞毒の研究における実験設計及び終点分析上の問題(Issues in experimental design and endpoint analysis in the study of experimental cytotoxic agents in vivo in breast cancer and other models)」、Breast Cancer Research and Treatment 46:255-278(1997)(参照によってその全体を組み込む)を参照のこと。
【００１７】
用語「抗体」は、IgG、IgM、IgA、IgD、及びIgEなどのあらゆるアイソタイプを含めたモノクローナル抗体を意味する。IgG抗体は、ジスルフィド結合によって連結された2つの同一の重鎖と2つの同一の軽鎖からなる。各重鎖及び軽鎖は、定常領域と可変領域を含有する。各可変領域は、抗原のエピトープとの結合を主として担う「相補性決定領域」(「CDR」)又は「超可変領域」と呼ばれる3つの部分を含有する。これらの部分は、N末端から順に番号付けされ、CDR1、CDR2、及びCDR3と呼ばれる。CDRの外側の可変領域の、より高度に保存される部分は、「骨格領域」と呼ばれる。「抗体フラグメント」は、Fv、scFv、dsFv、Fab、Fab' F(ab')2フラグメント、又は少なくとも1つの可変重鎖又は可変軽鎖(それぞれがCDR及び骨格領域を含有する)を含有する他のフラグメントを意味する。「抗原結合フラグメント」は、対象の抗原、例えばCD38と特異的に結合する抗体フラグメントである。
【００１８】
用語「モノクローナル抗体」とは、本明細書で使用する場合、単一分子組成の抗体分子の調製物をいう。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示す。
【００１９】
「VH」とは、抗体又は抗体フラグメントの免疫グロブリン重鎖の可変領域をいう。「VL」とは、抗体又は抗体フラグメントの免疫グロブリン軽鎖の可変領域をいう。
【００２０】
用語「CD38」とは、CD38として公知のタンパク質をいう。ヒトCD38は、以下のアミノ酸配列を有する:
【化７】
0006426093.tif 000008
【００２１】
抗CD38抗体である「MOR202」のアミノ酸配列及びDNA配列を、図4に提供する。「MOR202」と「MOR03087」は、図4に示す抗体を記載するための同義語として使用される。MOR03087は、米国特許第8,088,896号(参照によってその全体を組み込む)に開示されている。
【００２２】
用語「エピトープ」とは、免疫グロブリン又はT細胞受容体によって特異的に認識される又は前記分子と相互作用する、分子の領域をいう。一般に、エピトープは、アミノ酸又は炭水化物又は糖の側鎖などの、分子の化学的に活性な表面を分類するものであり、一般に、特定の三次元の構造特性並びに特定の電荷特性を有することができる。
【００２３】
用語「交差競合する(cross-compete)」とは、抗原の特定の領域と結合する能力を共に有する抗体又は他の結合因子をいう。本開示では、「交差競合的」である抗体又は他の結合因子は、標準の競合結合分析において、CD38に対する別の抗体又は他の結合因子の結合を妨げる能力を有する。こうした抗体は、非限定的な理論によって、CD38タンパク質上の、それと競合する抗体と同一の又は関連する又は近い(例えば、構造的に類似の又は空間的に隣接する)エピトープと結合することができる。
【００２４】
交差競合は、抗体Aが、抗体Bの結合を、前記抗体の片方を欠く陽性対照と比較して少なくとも60%、具体的には少なくとも70%、より具体的には少なくとも80%低下させる場合に、及びその逆の場合に存在する。当業者にはわかるように、競合は、様々な分析設定において評価することができる。ある適切な分析は、(例えば、BIAcore 3000装置(Biacore社、Uppsala、Sweden)を使用することによる)Biacore技術の使用を含む。これは、表面プラズモン共鳴技術を使用して、相互作用の程度を測定することができる。交差競合を測定するための別の分析は、ELISAに基づく手法を使用する(例えば実施例4)。さらに、抗体を「ビニングする(binning)」ための、その交差競合に基づくハイスループットプロセスは、国際特許出願WO2003/48731に記載されている。交差競合は、調べられる抗体が、MOR202のCD38への結合を、60%以上、具体的には70%以上、より具体的には80%以上低下させる場合に、又はMOR202が、前記抗体のCD38への結合を、60%以上、具体的には70%以上、より具体的には80%以上低下させる場合に存在する。用語「ナイトロジェンマスタード」又は「ナイトロジェンマスタードアルキル化剤」としては、本明細書で使用する場合、限定はされないが、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、メクロレタミン、ウラムスチン、クロラムブシル、又はベンダムスチンが挙げられる。シクロホスファミドは、例えば、それが(例えばCYCLOSTIN(登録商標);及びHOLOXAN(登録商標)としてのイホスファミドの商標で)販売されている形態で投与することができる。メルファランは現在、多発性骨髄腫の治療のために、Alkeran(登録商標)として販売されている。メルファランはさらに、別の名前、アラニンナイトロジェンマスタード、L-フェニルアラニンマスタード、L-サルコリシン、L-サルコリシンフェニルアラニンマスタード、L-サルコリシンフェニルアラニンマスタード、フェニルアラニンナイトロジェンマスタード、又は省略形L-PAMで公知である。メルファランは、抗悪性腫瘍活性を有するナイトロジェンマスタードのフェニルアラニン誘導体であり、また、グアニンのN7位置でDNAをアルキル化してDNA鎖間架橋結合を誘発し、DNA及びRNA合成の阻害及び分裂腫瘍細胞と非分裂腫瘍細胞との両方に対する細胞毒性をもたらすことが記載されている。メルファランは、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤のクラスに属する。
【００２５】
化合物又は組み合わせの「治療有効量」とは、所与の疾患又は障害及びその合併症の臨床症状を治療する、軽減する、又はある程度停止させるのに十分な量をいう。特定の治療目的のために有効な量は、対象の体重及び全身状態だけでなく、疾患又は傷害の重症度に依存することとなる。適切な投薬量の決定は、慣例的な実験を使用して、値のマトリックスを構築し、そのマトリックスにおける異なる点を試験する(これらはすべて、熟練の医師又は臨床科学者の通常の技術の範囲内である)ことによって実現できることを理解されたい。
【００２６】
本開示は、組み合わせ、医薬品、及び記載した組み合わせを含有する医薬組成物に関する。
【００２７】
ある態様では、該組み合わせは、CD38に対して特異的な抗体とナイトロジェンマスタードとを含む。一実施態様では、ナイトロジェンマスタードは、メルファランである。ある態様では、該組み合わせは、相乗的である。
【００２８】
一実施態様では、CD38に対して特異的な抗体は、配列
【化８】
0006426093.tif 000009
のHCDR1、配列
【化９】
0006426093.tif 000010
のHCDR2、配列
【化１０】
0006426093.tif 000011
のHCDR3、配列
【化１１】
0006426093.tif 000012
のLCDR1、配列
【化１２】
0006426093.tif 000013
のLCDR2、及び配列
【化１３】
0006426093.tif 000014
のLCDR3を含む。
【００２９】
一実施態様では、抗体は、配列
【化１４】
0006426093.tif 000015
の可変重鎖と、配列
【化１５】
0006426093.tif 000016
の可変軽鎖とを含む。
【００３０】
ある態様では、該組み合わせは、癌、例えば腫瘍細胞を伴う癌の治療のために有用である。一実施態様では、腫瘍細胞を伴う癌は、多発性骨髄腫を含む。さらなる実施態様では、癌は、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、及び急性リンパ性白血病から選択される。
【００３１】
一実施態様では、抗体は、モノクローナル抗体である。一実施態様では、抗体は、IgG1である。
【００３２】
ある態様では、該組み合わせは、CD38に対して特異的な抗体フラグメントを含む。一実施態様では、CD38に対して特異的な抗体フラグメントは、配列
【化１６】
0006426093.tif 000017
のHCDR1、配列
【化１７】
0006426093.tif 000018
のHCDR2、配列
【化１８】
0006426093.tif 000019
のHCDR3、配列
【化１９】
0006426093.tif 000020
のLCDR1、配列
【化２０】
0006426093.tif 000021
のLCDR2、及び配列
【化２１】
0006426093.tif 000022
のLCDR3を含む。
【００３３】
一実施態様では、抗体フラグメントは、配列
【化２２】
0006426093.tif 000023
の可変重鎖と、配列
【化２３】
0006426093.tif 000024
の可変軽鎖とを含む。
【００３４】
一実施態様では、抗体フラグメントは、Fv、scFv、dsFv、Fab、Fab'、及びF(ab')2フラグメントから選択される。
【００３５】
本発明の相乗的組み合わせの2つの成分、例えばCD38に対して特異的な抗体とメルファランは、共に、別々に、又は同時に若しくは異なる時間に投与することができる。該組み合わせは、構成要素の物理的関連によって得られるものに、また、同時であり得る又はある期間を空けることができる別々の投与を可能にするものに限定されない。共に投与される場合、2つの成分を共に、医薬としての許容し得る担体又は賦形剤を含むことができる1つの医薬組成物に製剤化することができる。或いは、2つの成分を、異なる医薬組成物に製剤化することも可能である。この場合、2つの成分は、同時に又は続いて投与することができる。一実施態様では、メルファランは、CD38に対して特異的な抗体(例えばMOR202)の投与の前に及び/又は投与とは別に投与される。さらなる実施態様では、メルファランは、CD38に対して特異的な抗体(例えばMOR202)の投与の少なくとも72時間前に投与される。
【００３６】
ある態様では、医薬組成物は、静脈内又は皮下に投与される。ある態様では、医薬組成物は、治療有効量で投与される。
【００３７】
ある態様では、医薬組成物は、医薬として許容し得る無菌の液剤又は懸濁剤である。無菌の水溶液は、活性成分の水溶液から構成され得る。
【００３８】
(実施態様)
本開示のある態様は、多発性骨髄腫の治療のための、配列
【化２４】
0006426093.tif 000025
のHCDR1、配列
【化２５】
0006426093.tif 000026
のHCDR2、配列
【化２６】
0006426093.tif 000027
のHCDR3、配列
【化２７】
0006426093.tif 000028
のLCDR1、配列
【化２８】
0006426093.tif 000029
のLCDR2、及び配列
【化２９】
0006426093.tif 000030
のLCDR3を含むCD38に対して特異的な抗体と、メルファランとの相乗的組み合わせを含む。
【００３９】
さらなる実施態様は、多発性骨髄腫の治療のための、CD38に対して特異的な抗体(ここでは、該抗体は、配列
【化３０】
0006426093.tif 000031
の可変重鎖と、配列
【化３１】
0006426093.tif 000032
の可変軽鎖とを含む)と、メルファランとの相乗的組み合わせを含む。
【００４０】
別の態様は、CD38に対して特異的な抗体とナイトロジェンマスタードアルキル化剤との組み合わせを含む。さらなる実施態様では、該組み合わせは、限定はされないが、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン(ALKERAN(登録商標))、ベンダムスチン(TREAKISYM(登録商標)、RIBOMUSTIN(登録商標)、及びTREANDA(登録商標))、メクロレタミン、ウラムスチン、並びにクロラムブシルを含む群から選択される、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤を含む。一実施態様では、ナイトロジェンマスタードは、メルファランである。
【００４１】
別の態様は、配列
【化３２】
0006426093.tif 000033
のHCDR1、配列
【化３３】
0006426093.tif 000034
のHCDR2、配列
【化３４】
0006426093.tif 000035
のHCDR3、配列
【化３５】
0006426093.tif 000036
のLCDR1、配列
【化３６】
0006426093.tif 000037
のLCDR2、及び配列
【化３７】
0006426093.tif 000038
のLCDR3を含む抗体と交差競合するCD38に対して特異的である抗体と、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤との組み合わせを含む。さらなる実施態様では、該組み合わせは、限定はされないが、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン(ALKERAN(登録商標))、ベンダムスチン(TREAKISYM(登録商標)、RIBOMUSTIN(登録商標)、及びTREANDA(登録商標))、メクロレタミン、ウラムスチン、並びにクロラムブシルを含む群から選択される、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤を含む。一実施態様では、ナイトロジェンマスタードは、メルファランである。
【００４２】
別の態様は、配列
【化３８】
0006426093.tif 000039
のHCDR1、配列
【化３９】
0006426093.tif 000040
のHCDR2、配列
【化４０】
0006426093.tif 000041
のHCDR3、配列
【化４１】
0006426093.tif 000042
のLCDR1、配列
【化４２】
0006426093.tif 000043
のLCDR2、及び配列
【化４３】
0006426093.tif 000044
のLCDR3を含むCD38に対して特異的な抗体と、メルファランとを含む組み合わせを含む。一実施態様では、メルファランは、CD38に対して特異的な抗体の投与の前に投与される。さらなる実施態様では、メルファランは、CD38に対して特異的な抗体の投与の72時間前に投与される。
【００４３】
さらなる実施態様では、該組み合わせは、配列
【化４４】
0006426093.tif 000045
のHCDR1、配列
【化４５】
0006426093.tif 000046
のHCDR2、配列
【化４６】
0006426093.tif 000047
のHCDR3、配列
【化４７】
0006426093.tif 000048
のLCDR1、配列
【化４８】
0006426093.tif 000049
のLCDR2、及び配列
【化４９】
0006426093.tif 000050
のLCDR3を含むCD38に対して特異的な抗体と、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤とを含む。一実施態様では、ナイトロジェンマスタードは、メルファランである。
【００４４】
別の態様は、治療の必要がある個人における多発性骨髄腫を治療する方法であって、多発性骨髄腫を有する個人への、配列
【化５０】
0006426093.tif 000051
のHCDR1、配列
【化５１】
0006426093.tif 000052
のHCDR2、配列
【化５２】
0006426093.tif 000053
のHCDR3、配列
【化５３】
0006426093.tif 000054
のLCDR1、配列
【化５４】
0006426093.tif 000055
のLCDR2、及び配列
【化５５】
0006426093.tif 000056
のLCDR3を含むCD38に対して特異的な抗体と、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤との投与を含む前記方法を含む。さらなる実施態様では、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤は、限定はされないが、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン(Alkeran(登録商標))、メクロレタミン、ベンダムスチン(TREAKISYM(登録商標)、RIBOMUSTIN(登録商標)、及びTREANDA(登録商標))、ウラムスチン、並びにクロラムブシルを含む群から選択される。一実施態様では、ナイトロジェンマスタードは、メルファランである。
【００４５】
別の態様は、治療の必要がある個人における多発性骨髄腫を治療する方法であって、多発性骨髄腫を有する個人への、配列
【化５６】
0006426093.tif 000057
のHCDR1、配列
【化５７】
0006426093.tif 000058
のHCDR2、配列
【化５８】
0006426093.tif 000059
のHCDR3、配列
【化５９】
0006426093.tif 000060
のLCDR1、配列
【化６０】
0006426093.tif 000061
のLCDR2、及び配列
【化６１】
0006426093.tif 000062
のLCDR3を含むCD38に対して特異的な抗体と、メルファランとの投与を含む前記方法を含む。
【００４６】
別の態様は、治療の必要がある個人における多発性骨髄腫を治療する方法であって、多発性骨髄腫を有する個人への、配列
【化６２】
0006426093.tif 000063
のHCDR1、配列
【化６３】
0006426093.tif 000064
のHCDR2、配列
【化６４】
0006426093.tif 000065
のHCDR3、配列
【化６５】
0006426093.tif 000066
のLCDR1、配列
【化６６】
0006426093.tif 000067
のLCDR2、及び配列
【化６７】
0006426093.tif 000068
のLCDR3を含む抗体と交差競合するCD38に対して特異的である抗体と、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤との投与を含む前記方法を含む。さらなる実施態様では、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤は、限定はされないが、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン(Alkeran(登録商標))、ベンダムスチン(TREAKISYM(登録商標)、RIBOMUSTIN(登録商標)、及びTREANDA(登録商標))、メクロレタミン、ウラムスチン、並びにクロラムブシルを含む群から選択される。一実施態様では、ナイトロジェンマスタードは、メルファランである。
【００４７】
別の態様は、多発性骨髄腫の治療のための、配列
【化６８】
0006426093.tif 000069
のHCDR1、配列
【化６９】
0006426093.tif 000070
のHCDR2、配列
【化７０】
0006426093.tif 000071
のHCDR3、配列
【化７１】
0006426093.tif 000072
のLCDR1、配列
【化７２】
0006426093.tif 000073
のLCDR2、及び配列
【化７３】
0006426093.tif 000074
のLCDR3を含む抗体と交差競合するCD38に対して特異的である抗体と、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤との組み合わせを含む。さらなる実施態様では、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤は、限定はされないが、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン(Alkeran(登録商標))、メクロレタミン、ベンダムスチン(TREAKISYM(登録商標)、RIBOMUSTIN(登録商標)、及びTREANDA(登録商標))、ウラムスチン、並びにクロラムブシルを含む群から選択される。さらなる実施態様では、該組み合わせは、相乗的組み合わせである。
【００４８】
別の態様は、多発性骨髄腫の治療のための、配列
【化７４】
0006426093.tif 000075
のHCDR1、配列
【化７５】
0006426093.tif 000076
のHCDR2、配列
【化７６】
0006426093.tif 000077
のHCDR3、配列
【化７７】
0006426093.tif 000078
のLCDR1、配列
【化７８】
0006426093.tif 000079
のLCDR2、及び配列
【化７９】
0006426093.tif 000080
のLCDR3を含む抗体と交差競合するCD38に対して特異的である抗体と、そのメルファランとの組み合わせを含む。さらなる実施態様では、該組み合わせは、相乗的組み合わせである。
【００４９】
別の態様は、多発性骨髄腫の治療のための、配列
【化８０】
0006426093.tif 000081
のHCDR1、配列
【化８１】
0006426093.tif 000082
のHCDR2、配列
【化８２】
0006426093.tif 000083
のHCDR3、配列
【化８３】
0006426093.tif 000084
のLCDR1、配列
【化８４】
0006426093.tif 000085
のLCDR2、及び配列
【化８５】
0006426093.tif 000086
のLCDR3を含む抗体と同じエピトープと結合するCD38に対して特異的である抗体と、メルファランとの組み合わせを含む。
【００５０】
別の態様では、組み合わせの成分、すなわち、CD38に対して特異的な抗体とナイトロジェンマスタードアルキル化剤は、別々に投与される。一実施態様では、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤は、CD38に対して特異的な抗体の投与の前に投与される。さらなる実施態様では、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤は、CD38に対して特異的な抗体の投与の72時間前に投与される。
【００５１】
別の態様では、組み合わせの成分、すなわち、CD38に対して特異的な抗体とメルファランは、別々に投与される。一実施態様では、メルファランは、CD38に対して特異的な抗体の投与の前に投与される。さらなる実施態様では、メルファランは、CD38に対して特異的な抗体の投与の72時間前に投与される。
【００５２】
一実施態様では、該組み合わせは、腫瘍細胞を伴う癌の治療のために使用される。さらなる実施態様では、癌は、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、及び急性リンパ性白血病から選択される。
【実施例】
【００５３】
実施例1:様々な細胞株の表面上でのCD38発現。表1の細胞株を、CD38発現のレベルについて試験した。
【表１】
0006426093.tif 000087
【００５４】
細胞を、CD38に対して特異的である直接標識型のQuantiBRITETM CD38-PE抗体(Becton Dickinson社、Clone HB7、CAT #342371)で染色した。細胞あたりの相乗平均(GeoMean)を測定するフローサイトメトリーに基づくQuantiBRITETMシステムを使用して「細胞あたりの抗体結合(Antibodies Bound Per Cell)」(ABC’s)を決定した。測定されたGeoMeanの、細胞あたりの対応するABC量への変換は、GraphPad PRISM(商標)ソフトウェアを用いて行った。QuantiBRITE(商標)CD38-PEは、抗体あたり1つのPE分子を有するので、ABC値は、細胞あたりのCD38分子の数と相関関係があると考えられる。結果を表2に示す。
【表２】
0006426093.tif 000088
【００５５】
(実施例3:同所性骨溶解モデルにおけるMOR202とメルファランとの相乗的組み合わせ)
全体としては、70匹の雌のSCIDマウスを分析して、ヒト多発性骨髄腫NCI-H929細胞に対するメルファランとMOR03087(単独及び組み合わせ)の有効性を決定した。
【００５６】
静脈内に投与するために、メルファランと共に提供される希釈溶媒(クエン酸ナトリウム、プロピレングリコール、エタノール(96%)、及び水)を提供した。凍結乾燥粉末として供給されているメルファラン(バイアルあたり50mg)を、5mL希釈溶媒で再構成し、静脈内投与のために、滅菌生理食塩水でさらに希釈した。
【００５７】
腹腔内投与のために、MOR202を最終の緩衝液に入れたものを調製した。
【００５８】
-7日目に、70匹の雌のSCIDマウスすべての右の脛骨に、27ゲージの2分の1インチ針と50pl Hamiltonシリンジを使用して、2.5×106個のNCI-H929細胞(5pl中)を同所的に接種した。
【００５９】
-4日目、すなわち接種の3日後に、60匹の動物を、体重に基づいて10匹の6群に無作為化し、動物達を互いに馴化させた。研究の期間を通じて、すべての体重評価について、-4日目を基準として使用した。-2日目に、追加の体重測定を行った。
【００６０】
治療は、メルファラン/ビヒクル対照で治療される群については、-1日目(接種の6日後)、MOR03087で治療される群については0日目から開始し、6週間継続した。
【００６１】
メルファラン(4mg/kg又は8mg/kg)は、6週間、週に3回静脈内投与した。MOR202(3mg/kg)は、6週間、週に3回腹腔内投与した。ビヒクル群では、希釈溶媒を、週に2回投与した。
【００６２】
分析のために、各群内のすべてのマウスに、2つの時点、すなわち、メルファランの4回目及び8回目の投与の15〜30分後、及びMOR03087の5回目及び11回目の投与の25時間後に、血清の調製のために、後眼窩採血(retro-orbital bleedings)を実施した。試料を、3本のバイアル(25uL+25uL+残り)に分注し、-80℃で保管した。
【００６３】
週に3回、最初の時点から+/-1時間の時点で、体重測定を行った。治療期間は6週であり、その後、研究を終了することとなる。
【００６４】
研究の終了時(42日目)に、血清の調製のために、すべての動物からの心臓端(cardiac end)採血を実施した。さらに、すべての動物から、左右の脛骨を切除し、microCT分析のために、10%中性緩衝ホルマリン中で固定した。microCT分析のそれぞれの結果を、図1(4mg/kgメルファラン)及び図2(8mg/kgメルファラン)に示す。どちらの実験設定においても、メルファランとMOR202は、組み合わせられた場合に、相乗性に基づく優れた効果が認められた。MOR202とメルファランを使用する組み合わせ療法の相乗効果を実証するための統計的計算を、Clarke定理を使用して実施した。これを表3にまとめる。メルファランは単独で、既に骨融解を完全に低下させていたので(図2)、8mg/kgを使用する実験設定については、相乗効果計算の分析は不必要であった。
【００６５】
(Clarkeらの相乗性)
相乗性は、Clarkeらの文献、「乳癌及び他のモデルにおけるインビボでの実験的細胞毒の研究における実験設計及び終点分析上の問題(Issues in experimental design and endpoint analysis in the study of experimental cytotoxic agents in vivo in breast cancer and other models)」、Breast Cancer Research and Treatment 46:255-278(1997)(参照によってその全体を組み込む)に記載されている方法を使用して決定した。
【００６６】
データを、以下の方式で分析する:
拮抗的=(AB)/C＜(A/C)×(B/C)
相加的(AB)/C=(A/C)×(B/C)
相乗的=(AB)/C＞(A/C)×(B/C)
ここでは、Aは治療Iに対する応答であり;Bは治療2に対する応答であり;Cはビヒクルに対する応答であり;ABはAとBの治療の組み合わせである。
【表３】
0006426093.tif 000089
【００６７】
結論:Clarkeらに従うと、16.9((A/C)×(B/C))は、12.1((AB)/C)よりも大きいので、MOR03087とメルファランとの相乗効果が実証される。
【００６８】
(実施例3:同所性骨溶解モデルの42日目のマウスから単離された血清中のM-タンパク質濃度の検出)
さらに、研究の終了時に単離した血清を、ELISAによって、タンパク質M含有量について分析した。希釈溶媒のみを与えられたマウスから単離した血清とは対照的に、メルファラン、MOR202、又はこれらの組み合わせで治療したマウスから単離した血清では、タンパク質M濃度は有意に低下していた。結果を図3にまとめて示す。
【００６９】
(実施例4: Elisaに基づく交差競合分析)
抗CD38抗体又は別のCD38結合因子の交差競合は、以下の標準の手順に従ってELISA分析を使用することによって検出することができる。
【００７０】
ELISA分析の一般原理は、ELISAプレートのウェル上に抗CD38抗体をコーティングすることを含む。次いで、過剰量の第2の交差競合的な可能性のある抗CD38抗体を溶液中に添加する(すなわちELISAプレートには結合させない)。続いて、限られた量のCD38-Fcを次いで、ウェルに添加する。
【００７１】
ウェル上にコーティングされる抗体と、溶液中の抗体は、限られた数のCD38分子の結合に関して競合することとなる。次いで、プレートを洗浄して、コーティングされた抗体と結合していないCD38分子を除去し、また、第2の溶液相抗体、並びに第2の溶液相抗体とCD38から形成されるあらゆる複合体を除去する。次いで、適切なCD38検出試薬を使用して、結合したCD38の量を測定する。したがって、CD38を、適切なタグ特異的抗体を介して検出することが可能な、例えばFc、Flagなどのようなタグと融合させることができる。
【００７２】
コーティングした抗体に対して交差競合的である溶液中の抗体は、コーティングした抗体が結合することができるCD38分子の数を、コーティングした抗体が第2の溶液相抗体の非存在下で結合することができるCd38分子の数よりも減少させることができるであろう。
【００７３】
この分析は、Ab-X及びAb-Yと呼ばれている2種の抗体について、さらに以下に、より詳細に記載されている。Ab-Xが、固定化抗体に選ばれる場合、これを、ELISAプレートのウェル上にコーティングし、その後、このプレートを適切なブロッキング溶液でブロッキングして、その後添加される試薬の非特異的な結合を最小限にする。次いで、このELISAプレートに、ELISAプレートのコーティング中に、ウェルあたりのAb-Y CD38結合部位のモルが、ウェルあたりの使用されるAb-X CD38結合部位のモルの少なくとも10倍になるように、過剰量のAb-Yを添加する。次いで、ウェルあたりの添加されるCD38のモルが、各ウェルをコーティングするために使用されるAb-X CD38結合部位のモルの少なくとも25分の1になるように、CD38を添加する。適切なインキュベーション期間後に、ELISAプレートを洗浄し、CD38検出試薬を添加して、コーティングされた抗CD38抗体(この場合にはAb-X)が特異的に結合するCD38分子の量を測定する。この分析に対するバックグラウンドシグナルは、コーティングされた抗体(この場合にはAb-X)、第2の溶液相抗体(この場合にはAb-Y)、緩衝液のみ(すなわちCD38無し)、及びCD38検出試薬を含むウェルにおいて得られるシグナルと定義される。この分析に対する陽性対照シグナルは、コーティングされた抗体(この場合にはAb-X)、第2の溶液相抗体緩衝液のみ(すなわち第2の溶液相抗体無し)、CD38、及びCD38検出試薬を含むウェルにおいて得られるシグナルと定義される。ELISA分析は、陽性対照シグナルが、バックグラウンドシグナルの少なくとも6倍であるような様式で実施される必要がある。
【００７４】
コーティング抗体として使用する抗体、及び第2の(競合)抗体として使用する抗体の選択に起因する、あらゆる人為的結果(例えば、CD38に対するAb-XとAb-Yとの間の有意差のある親和性)を避けるために、交差ブロッキング(cross-blocking)分析は、2つのフォーマットで実施される必要がある:1)フォーマット1は、Ab-XがELISAプレート上にコーティングされる抗体であり、かつAb-Yが溶液中にある競合抗体である場合である、また、2)フォーマット2は、Ab-YがELISAプレート上にコーティングされる抗体であり、かつAb-Xが溶液中にある競合抗体である場合である。
【図１】
0006426093.tif 000130
【図２】
0006426093.tif 000131
【図３】
0006426093.tif 000132
【図４】
0006426093.tif 000133
【配列表】
0006426093000001.app