(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
幼ブタのブタ流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）感染の治療方法であって、ナラシンを経口的に許容可能な担体と共に前記ブタに投与することを含む前記方法。
【請求項２】
前記経口的に許容可能な担体が動物飼料、動物飼料以外の液体組成物、および動物飼料以外の固形組成物からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ナラシンの濃度が、ナラシンおよび前記経口的に許容可能な担体を含む組成物に対して約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、および約６０ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
幼ブタのブタ流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）感染の治療方法であって、ナラシンを動物飼料と共に前記ブタに投与することを含み、ナラシンが前記動物飼料に対して約６０ｍｇ／ｋｇの濃度で存在する前記方法。
【請求項５】
幼ブタのＰＥＤＶ感染の治療薬の製造のためのナラシンの使用。
【請求項６】
ナラシンが、動物飼料、動物飼料以外の液体組成物、および動物飼料以外の固形組成物からなる群より選択される経口的に許容可能な担体との組成物の中に存在する、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
ナラシンが前記経口的に許容可能な担体に対して約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、および約６０ｍｇ／ｋｇの濃度で存在する、請求項５に記載の使用。
【請求項８】
幼ブタのＰＥＤＶ感染を治療するための組成物であって、ナラシンと経口的に許容可能な担体を含む前記組成物。
【請求項９】
前記経口的に許容可能な担体が動物飼料、動物飼料以外の液体組成物、および動物飼料以外の固形組成物からなる群より選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
ナラシンの濃度が、前記組成物に対して約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、および約６０ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される、請求項８に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、幼ブタ（nursery pig）をブタ流行性下痢ウイルス感染について治療するためのナラシン含有組成物およびナラシンの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、ブタ流行性下痢ウイルス（ＰＥＤＶ）感染に関連する症状の治療についての分野内にある。ＰＥＤＶは、感染したブタのうち最大で１００％の死亡率の原因となるが、より高齢のブタでは限定的な死亡率を有するコロナウイルスである。米国では毎日１００００頭を超える子豚がＰＥＤＶで死ぬこともある。したがって、ＰＥＤＶは豚肉製品の価格および入手しやすさに対して著しい経済的影響を有している。
【０００３】
米国では現在のところ２種類のＰＥＤＶワクチンが市販されている。両方のワクチンが妊娠中の雌ブタでの使用について認可されており、それによって雌ブタの乳汁中の抗体を介して受動免疫を養育中の子豚に提供することができる。しかしながら、これらのワクチンの効力はまだ実証されておらず、それらのワクチンは注射によって個体毎に雌ブタに投与されなければならず、そして母体由来の抗体のレベルは子豚の腸が巨大分子の吸収を終止した後に低下し始める。
【０００４】
ナラシンはストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）の種によって生産されるポリエーテルイオノフォアであり、ストレプトマイセス・ライディカス（Ｓ．  ｌｙｄｉｃｕｓ）およびストレプトマイセス・グラニュロルバー（Ｓ．  ｇｒａｎｕｌｏｒｕｂｅｒ）の培養物から精製され得る。ナラシンは肥育豚の体重増を向上させるために多くの国々で監督官庁によって認可されている。ナラシンは、デング熱の原因であるフラビウイルスを感染させた培養ヒト細胞に添加されるとそのウイルスの複製を阻害することが示されている（Ｌｏｗら著、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ誌、第１６巻：１２０３〜１８頁、２０１１年）。しかしながら、飼料と共に投与されるとき、ナラシンは飼料に対して約８３ｍｇ／ｋｇの濃度で提供されると、少なくともチアムリンが存在するときには幼ブタにとって有毒であることが報告されている。
【０００５】
ＰＥＤＶに対する新規の治療、特に離乳後のブタ、例えば幼ブタを保護することになる治療が必要とされている。一度に多数の動物に対して経口的に行うことができる治療も有利となる。ＰＥＤＶはエアロゾル化したウイルスによって伝播することが示されているので、感染したブタからのウイルスの排出を減少させることになる治療によってこのウイルスが原因の疾患の封じ込めが促進されることになる。
発明の概要
【０００６】
以上より、本発明は、幼ブタをＰＥＤＶ感染について治療する方法であって、ナラシンを経口的に許容可能な担体と共に前記ブタに投与することを含む前記方法を提供する。その経口的に許容可能な担体は動物飼料、動物飼料以外の液体組成物、および動物飼料以外の固形組成物からなる群より選択される。本方法において使用されるナラシンの濃度は、前記経口的に許容可能な担体に対して約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、または約６０ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される。本発明は、幼ブタをＰＥＤＶ感染について治療する方法であって、ナラシンを経口的に許容可能な担体と共に前記ブタに投与することを含み、その経口的に許容可能な担体が動物飼料、動物飼料以外の液体組成物、および動物飼料以外の固形組成物からなる群より選択され、且つ、ナラシンの濃度が、前記経口的に許容可能な担体に対して約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、および約６０ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される前記方法も提供する。
【０００７】
本発明は、幼ブタをＰＥＤＶ感染について治療する方法であって、ナラシンを動物飼料と共に前記ブタに投与することを含み、ナラシンの濃度が前記経口的に許容可能な担体に対して約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、または約６０ｍｇ／ｋｇであり得る前記方法も提供する。本発明は、幼ブタをＰＥＤＶ感染について治療する方法であって、ナラシンを動物飼料と共に前記ブタに投与することを含み、ナラシンの濃度が前記経口的に許容可能な担体に対して約６０ｍｇ／ｋｇである前記方法も提供する。
【０００８】
さらに、本発明は幼ブタのＰＥＤＶ感染の治療に使用されるナラシンを提供する。ナラシンは、例えば、限定されないが、動物飼料、動物飼料以外の液体組成物、または動物飼料以外の固形組成物などの経口的に許容可能な担体と共に組成物として幼ブタに提供され得る。この組成物中に存在するナラシンの濃度は前記経口的に許容可能な担体に対して約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、または約６０ｍｇ／ｋｇであり得る。本発明は、幼ブタのＰＥＤＶ感染の治療に使用されるナラシンであって、動物飼料と共に投与され、且つ、濃度が前記動物飼料に対して約３０ｍｇ／ｋｇから約６０ｍｇ／ｋｇである前記ナラシンも提供する。本発明は、幼ブタのＰＥＤＶ感染の治療に使用されるナラシンであって、動物飼料と共に投与され、且つ、濃度が前記動物飼料に対して約６０ｍｇ／ｋｇである前記ナラシンも提供する。
【０００９】
さらに、本発明は、経口的に許容可能な担体と共に幼ブタのＰＥＤＶ感染の治療に使用されるナラシンであって、前記経口的に許容可能な担体が動物飼料、動物飼料以外の液体組成物、または動物飼料以外の固形組成物を含み、且つ、濃度が前記経口的に許容可能な担体に対して約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、または約６０ｍｇ／ｋｇであり得る前記ナラシンを提供する。さらに、本発明は、動物飼料と共に幼ブタのＰＥＤＶ感染の治療に使用されるナラシンであって、濃度が前記動物飼料に対して約３０ｍｇ／ｋｇから約６０ｍｇ／ｋｇである前記ナラシンも提供する。さらに、本発明は、動物飼料と共に幼ブタのＰＥＤＶ感染の治療に使用されるナラシンであって、濃度が前記動物飼料に対して約６０ｍｇ／ｋｇである前記ナラシンも提供する。
【００１０】
さらに、本発明は、幼ブタのＰＥＤＶ感染を治療するための医薬の調製におけるナラシンの使用を提供する。その医薬は、例えば、限定されないが、動物飼料、動物飼料以外の液体組成物、または動物飼料以外の固形組成物などの経口的に許容可能な担体と共にナラシンを含む組成物であり得る。この組成物中に存在するナラシンの濃度は前記経口的に許容可能な担体に対して約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、または約６０ｍｇ／ｋｇであり得る。さらに、本発明は、幼ブタのＰＥＤＶ感染を治療するための医薬の調製におけるナラシンの使用であって、その医薬がナラシンと動物飼料であり、且つ、ナラシンの濃度が前記動物飼料に対して約３０ｍｇ／ｋｇから約６０ｍｇ／ｋｇである前記使用を提供する。さらに、本発明は、幼ブタのＰＥＤＶ感染を治療するための医薬の調製におけるナラシンの使用であって、その医薬がナラシンと動物飼料であり、且つ、ナラシンの濃度が前記動物飼料に対して約６０ｍｇ／ｋｇである前記使用を提供する。
【００１１】
さらに、本発明は、幼ブタに抗ウイルス作用を提供する組成物であって、ある濃度のナラシンと経口的に許容可能な担体を含む前記組成物を提供する。その経口的に許容可能な担体は動物飼料、動物飼料以外の液体組成物、または動物飼料以外の固形組成物を含み得る。上記組成物中のナラシンの濃度は前記組成物に対して約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、または約６０ｍｇ／ｋｇであり得る。さらに、本発明は、幼ブタに抗ウイルス作用を提供する組成物であって、ある濃度のナラシンと動物飼料を含み、ナラシンの濃度が前記動物飼料に対して約３０ｍｇ／ｋｇから約６０ｍｇ／ｋｇである前記組成物を提供する。さらに、本発明は、幼ブタに抗ウイルス作用を提供する組成物であって、ある濃度のナラシンと動物飼料を含み、ナラシンの濃度が前記動物飼料に対して約６０ｍｇ／ｋｇである前記組成物を提供する。
【００１２】
さらに、本発明は、ある濃度のナラシンと経口的に許容可能な担体を含む組成物であって、幼ブタに抗ウイルス作用を提供する組成物であり、前記経口的に許容可能な担体が動物飼料、動物飼料以外の液体組成物、および動物飼料以外の固形組成物からなる群より選択され、且つ、ナラシンの濃度が前記経口的に許容可能な担体に対して約３０ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、および約６０ｍｇ／ｋｇであり得る前記組成物を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
グラム陽性細菌、嫌気性細菌および真菌に対する有用な治療薬としての、抗コクシジウム薬としての、および反芻動物における飼料利用を向上させるための薬剤としてのナラシン、およびナラシンの作製方法および使用方法が米国特許第４０３８３８４号明細書（１９７７年７月２６日に公開）、米国特許第４３０９５０４号明細書（１９８２年１月５日に公開）、および米国特許第４３４２８２９号明細書（１９８２年８月３日に公開）に列挙されている。Ｂｅｒｇら著、Ｊ．  Ａｎｔｉｂｉｏｔ．誌、第３１巻：１〜６頁（１９７８年）および“Ｎａｒａｓｉｎ，  ａ  ｎｅｗ  ｐｏｌｙｅｔｈｅｒ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ：  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ａｎｄ  ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ、第３８章、４７１〜４８５頁、第１８巻、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ［微生物学学会の出版物（１９７７年）］も参照されたい。
【００１４】
本明細書において使用される場合、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療するため（ｔｏ  ｔｒｅａｔ）」、または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は既存の症状、障害、状態、または疾患を抑止すること、遅らせること、止めること、抑制すること、改善すること、またはそれの進行もしくは重症度を元に戻すことを含む。治療は予防的または治療的に適用され得る。
【００１５】
本明細書において使用される場合、「幼ブタ（nursery pig）」は、離乳したが、まだ肥育豚ではないブタである。ブタの離乳は約３週齢（約２１日齢）で起こることが典型的であるが、それは早くても１週齢（約７日齢）および遅くても６週齢（約４２日齢）で起こり得る。離乳したブタはもう生命維持のために雌ブタの乳汁だけに頼ることはなく、むしろ固形飼料組成物を消費する。
【００１６】
本明細書において使用される場合、「肥育豚」は少なくとも約５０ポンドの体重のブタ、または約１０週齢のブタである。「肥育（ｇｒｏｗｉｎｇ−ｆｉｎｉｓｈｉｎｇ）」、「肥育（ｇｒｏｗ−ｆｉｎｉｓｈ）」および「肥育（ｇｒｏｗｅｒ−ｆｉｎｉｓｈｅｒ）」という用語は同義語である。「ブタ」という用語はイノシシ属のあらゆるメンバーを含む。
【００１７】
本明細書において使用される場合、「動物飼料」には、栄養価のために家畜によって消費される食用可能な物質が含まれる。動物飼料には飼料、例えば動物の栄養要求に合う組成物が含まれ、動物の栄養要求に合わない組成物も含まれる。
【００１８】
一実施形態ではその組成物はナラシン用の経口的に許容可能な担体を含む。「経口的に許容可能な担体」には経口投与に適切なあらゆる生理学的に許容可能な担体が含まれる。経口的に許容可能な担体には、限定されないが、動物飼料製品中での使用に適切な、および／または動物への経口投与に適切な動物飼料組成物、水性組成物、および液体組成物および固形組成物が含まれる。適切な担体が当技術分野において知られており、それらには米国特許第６７８０６２８号明細書に記載されるものが含まれる。
【００１９】
次の実験例は幼ブタにおけるウイルスの排出を減少させるための、またはウイルス感染の症状を改善するためのナラシンの使用を例示している。本発明はこの特定の例示的実施例またはどの好ましい実施形態にも限定されず、且つ、本発明はブタ生殖器呼吸器症候群（ＰＲＲＳ）ウイルス、ブタサーコウイルス（ＰＣＶ）、またはブタコロナウイルスなどの他のウイルスの治療に適用可能である。
【実施例】
【００２０】
実験計画
実験施設にＰＥＤＶ感染が無い８１匹の離乳期（２１．８±０．６日）の商業的な交雑種の子豚（ウィルソン・プレーリービュー・ファーム、バーリントン、ウィスコンシン）が到着し、６匹が曝露前期間（７日前から０日目）の間に潜在的な交換用の動物として使用された。６匹の子豚を０日目のＰＥＤＶ曝露の直前に取り除かれ、小屋当たり５匹の子豚を含む１５の小屋（ｎ＝７５動物）を設定した。処置当たり５つの小屋があった。ブロック内の残りのセンチネル子豚について、一方の性別の総計で３９匹の子豚と他方の性別の３６匹の子豚を使用した。処置群当たり５つの小屋（２５匹の子豚）を使用することによって成長能力とウイルス排出の発生について処置群間で有意差（Ｐ＜０．１０）が検出されると推定した。
【００２１】
７５匹の子豚を対照（イオノフォア無し）、ナラシン（３０ｍｇ／ｋｇ）およびナラシン（６０ｍｇ／ｋｇ）の３つの処置群に無作為に割り当てた。それらの子豚は環境に順応し、０日目でのＰＥＤＶによる曝露の前の７日間にわたって毎日給餌された。処置は曝露後に１４日間にわたって継続した。それらの３つの処置群のブタに４×１０４ＴＣＩＤ５０／ｍＬのＰＥＤＶ単離物ＰＥＤＶ／ＵＳＡ／ＮＣ／２０１３／４９４６９（アイオワ州立大学獣医学部）を経口投与した。臨床パラメーター、下痢についての臨床スコア、鬱とやせ細り、食物消費率、および体重変化率の変化についてそれらの子豚を毎日モニターし、且つ、ウイルスの排出を測定するためにウイルススワブを毎日採取した。
【００２２】
統計的方法
ウイルス排出値をＳＡＳ社のＲＭＡＮＯＶＡおよびＰＲＯＣ  ＭＩＸＥＤ法（ＳＡＳ社、ケーリー、ノースカロライナ州）によって評価した。他の分析変数には成長能力データ（毎日の体重増の平均値すなわちＡＤＧ、毎日の飼料摂取量の平均値すなわちＡＤＦＩ、および飼料効率（単位飼料消費量当たりの単位体重増）すなわちＧ：Ｆ）、下痢の発生率と重症度、鬱、およびやせ細りのスコア、および腸組織学スコアおよび免疫組織化学が含まれた。成長能力の結果の分析は一般化線形混合モデルとＳＡＳ社のＰＲＯＣ  ＭＩＸＥＤ法を使用して実施された。
【００２３】
スコアデータ（下痢、鬱、およびやせ細り）の発生率と重症度を日々の頻度と平均スコアによってまとめた。
【００２４】
食物製剤
食物製剤をＰｒｏｖｉｍｉ社（ルイスバーグ、オハイオ州）において製造し、食事形状で与えた。食物の組成がミネソタバレー・テスティングラボラトリーズ社（ニューアルム、ミネソタ州）によって分析され、栄養分析値が製剤レベルに等しいことが分かった。ナラシンレベルはコーヴァンス・ラボラトリーズ社（グリーンフィールド、インディアナ州）によって分析され、それらのナラシンレベルはそれぞれ０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、および６０ｍｇ／ｋｇという製剤レベルに等しい０ｍｇ／ｋｇ、２９．８ｍｇ／ｋｇ、および６４．１ｍｇ／ｋｇであることが分かった。
【００２５】
それらの実験用食物にラクトパミン（仕上げ期飼料添加薬）は検出されなかった。
【００２６】
成長能力
平均体重（ＢＷ）、毎日の体重増の平均値（ＡＤＧ）、毎日の飼料摂取量の平均値（ＡＤＦＩ）、飼料効率（Ｇ：Ｆ）、および飼料転換率（Ｆ：Ｇ）に対するナラシン内包レベルの効果が表１に示されている。
【００２７】
３０ｍｇ／ｋｇと６０ｍｇ／ｋｇのナラシンの給餌によって全体的なＡＤＧ（それぞれ７．７％および７．７％）およびＧ：Ｆ（それぞれ７．９％および５．９％）が対照（０ｍｇ／ｋｇ）と比較して数の上では増加した。
【表１】
0006276469.tif 000002
【００２８】
６０ｍｇ／ｋｇのナラシンの給餌によって７日前から０日目の期間においてＡＤＧ（１８．８％）が減少した（Ｐ＜０．１０）が、３０ｍｇ／ｋｇと６０ｍｇ／ｋｇのナラシンの給餌によって０日目から５日目の期間（表１）におけるＡＤＧ（それぞれ５８．３％および１００％）が対照と比較して増加した（Ｐ＜０．１０）。加えて、３０ｍｇ／ｋｇではなく６０ｍｇ／ｋｇのナラシンの給餌によって０日目から５日目の期間（７８．７％）においてＧ：Ｆが０ｍｇ／ｋｇのナラシンと比較して増加した（Ｐ＜０．１０）。５日目から１４日目の期間ではＡＤＧ、ＡＤＦＩ、Ｇ：Ｆ、またはＦ：Ｇについて統計学的な差が存在しなかった。全体的な（０日目から１４日目）成長能力に対してナラシンレベルは何の効果もなかった（Ｐ＞０．１０）。
【００２９】
臨床スコアリング
表２は下痢、鬱、およびやせ細りを測定するために使用されたスコアリングシステムを示している。表３は０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、または６０ｍｇ／ｋｇのナラシンが食餌に含まれた幼ブタにおける下痢、鬱、およびやせ細りの平均スコアを比較している。
【表２】
0006276469.tif 000003
【００３０】
１４日間の期間にわたって測定された下痢スコアの平均値はナラシンレベルの上昇によって数の上では減少した（０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、および６０ｍｇ／ｋｇについてそれぞれ１．４９、１．４５、および１．３７）。下痢の重症度はナラシンレベルの上昇によって低下した（０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、および６０ｍｇ／ｋｇについてそれぞれ３．１６、２．７２、および２．４８；表３）。
【００３１】
１４日間の期間にわたって測定された鬱スコアの平均値はナラシンレベルに影響されなかったが、動物で観察された鬱の低い発生率に留意されたい（０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、および６０ｍｇ／ｋｇのナラシンについてそれぞれ５匹、４匹、および３匹の動物）。その条件を示す比較的に少ない動物に基づいたものではあるが、鬱の重症度はナラシンレベルの上昇によって低下した（表３）。
【００３２】
１４日間の期間にわたって測定されたやせ細りスコアの平均値または重症度に対するナラシンレベルの効果はほとんどなかった（表３）。
【表３】
0006276469.tif 000004
【００３３】
ウイルス排出
幼ブタの日内ウイルス排出（表４）およびＰＥＤＶを排出している幼ブタのパーセンテージ（表５）に対すナラシンレベル（０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ）の効果が比較されている。試験０日目から１４日目まで毎日検査時に全てのブタから糞スワブを収集した。各試料にブタ個体識別コード、小屋番号、および試料採取日をラベルした。全ての試料を収集時に凍結し、分析のために必要とされるまで貯蔵した。０日目、１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、および１４日目に収集された糞スワブ試料だけを分析に送った。糞スワブ試料をアイオワ州立獣医診断検査室（ＩＳＶＤＬ）に送り、ＰＥＤＶのウイルス排出を判定するためにリアルタイムＲＴ−ＰＣＲを使用してそれらの試料を分析した。
【００３４】
対照と比較すると、３０ｍｇ／ｋｇのナラシンを給餌されたブタは試験２日目と３日目により低い（Ｐ＜０．１０）ウイルス排出を有し、試験７日まで数の上では一貫してより低いウイルス排出を有した。６０ｍｇ／ｋｇのナラシンを給餌されたブタは試験２日目、３日目、４日目、５日目、および６日目により低い（Ｐ＜０．１０）ウイルス排出を有し、試験７日目および８日目に数の上ではより低いウイルス排出を有した（表４）。
【００３５】
ＰＥＤＶを排出するブタのパーセンテージに対するナラシンレベルの効果はなかった（Ｐ＞０．１０）が、排出期間は概ねナラシンレベルが上昇すると減少した。
【表４】
0006276469.tif 000005
【００３６】
組織学
腸組織学スコアおよび免疫組織化学に対するナラシン内包レベルの効果を分析した。差は有意ではなかった（Ｐ＞０．０５）が、ナラシンレベルが０ｍｇ／ｋｇから上昇する（３０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ）につれ組織学スコアは２から０へ減少し、一方で免疫組織化学スコアは６０ｍｇ／ｋｇのレベルでのみ（３から２へ）減少した。