(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体のバッチを製造するための製造の方法であって、該方法は以下：
式（Ａ）で表される化合物を重合させ、式（Ｉ）で表される繰り返し単位を有するポリマーを形成すること、式中Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキル、任意に置換されたフェニルおよび任意に置換されたベンジルからなる群から選択され；
【化１】
0006262334.tif 000023
式（Ｉ）で表される繰り返し単位のアルカリ金属塩を形成すること；
式（Ｉ）で表される繰り返し単位のアルカリ金属塩を式（Ｂ）で表される化合物と反応させ、式（ＩＩ）で表される繰り返し単位を有するポリマーを形成すること、式中各Ｒ２は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、任意に置換されたフェニルおよび任意に置換されたベンジルからなる群からから選択され；
【化２】
0006262334.tif 000024
式（ＩＩ）で表される繰り返し単位からＲ２基を除去し、式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位を有するポリマーを形成すること；および
【化３】
0006262334.tif 000025
抗がん剤を式（ＩＩＩ）で表される一部の繰り返し単位と反応させ、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体を形成すること、ここでポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体が、式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位：
【化４】
0006262334.tif 000026
を含み、式中：
各Ｒ３は、独立して、水素またはアルカリ金属であり；および
各Ｒ４は、独立して、水素、アルカリ金属または抗がん剤であり、ただし少なくとも１つのＲ４が抗がん剤である、
を含み；
ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の少なくとも３バッチが製造され；
各バッチが、約１．０ｋｇ超または約１．０ｋｇと等しい量のポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体を提供し；および
ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチが、互いのバッチと比較して±１０ｋＤａ以内である重量平均分子量を有する、前記方法。
【請求項２】
ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチが、互いのバッチと比較して±２ｋＤａ以内である重量平均分子量を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチが、２．０未満の多分散性指数を有する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチが、約１．２〜約２．０の範囲の多分散性指数を有する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチが、０．２５ＥＵ／ｍｇ未満のエンドトキシン含有量を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチが、０．１０ＥＵ／ｍｇ未満のエンドトキシン含有量を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチが、約１０ｋＤａ〜約１５０ｋＤａの範囲の重量平均分子量を有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチが、約６０ｋＤａ〜約１００ｋＤａの範囲の重量平均分子量を有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体が、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体に対する抗がん剤の質量比に基づき、約５％〜約５０％（重量／重量）の抗がん剤を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体が、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体に対する抗がん剤の質量比に基づき、約３０％〜約４０％（重量／重量）の抗がん剤を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
各Ｒ１が、酸性溶液を使用して切断され、およびアルカリ金属塩が、アルカリ金属塩基を使用して形成される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
アルカリ金属塩基が、アルカリ金属重炭酸塩、アルカリ金属炭酸塩またはアルカリ金属水酸化物である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
アルカリ金属重炭酸塩が、重炭酸ナトリウムである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
アルカリ金属水酸化物が、水酸化ナトリウムである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
酸性溶液が、１種または２種以上の酸を含む、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
酸性溶液が、少なくとも２種の酸を含む、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
１種または２種以上の酸または少なくとも２種の酸が、独立して、塩酸、臭化水素酸、硝酸、亜硝酸、硫酸、スルホン酸、酢酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸、クロロ酢酸、グリオキシル酸、シュウ酸、グリコール酸、リン酸、亜リン酸、マロン酸およびトリフルオロ酢酸から選択される、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
酸性溶液が、臭化水素酸および酢酸を含む、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
式（Ｉ）で表される繰り返し単位のアルカリ金属塩を式（Ｂ）で表される化合物と反応させることが、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１，１’−カルボニル−ジイミダゾール（ＣＤＩ）、炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）、Ｎ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル−メチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスファートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）、２−［（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）、２−［（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＣＴＵ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（PyBOP（登録商標））、ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（PyBroP（登録商標））、２−［（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）およびベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）からなる群から選択されるカップリング剤をさらに含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
Ｒ２基が、酸または塩基を使用して加水分解によって除去される、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
酸が、塩酸、臭化水素酸、硝酸、亜硝酸、硫酸、スルホン酸、酢酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸、クロロ酢酸、グリオキシル酸、シュウ酸、グリコール酸、リン酸、亜リン酸、マロン酸およびトリフルオロ酢酸から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
酸がトリフルオロ酢酸である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
塩基が、水酸化ナトリウム、アンモニア、水酸化カリウムおよび水酸化リチウムから選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
抗がん剤が、タキサン、カンプトテシンおよびドキソルビシンから選択される、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
タキサンが、パクリタキセルおよびドセタキセルからなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
パクリタキセルが、式（Ｖ）で表される繰り返し単位に、Ｃ２’炭素に付加された酸素原子において、結合されている、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
パクリタキセルが、式（Ｖ）で表される繰り返し単位に、Ｃ７炭素に付加された酸素原子において、結合されている、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
抗がん剤を式（ＩＩＩ）で表される一部の繰り返し単位と反応させることが、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１，１’−カルボニル−ジイミダゾール（ＣＤＩ）、炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）、Ｎ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル−メチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスファートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）、２−［（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）、２−［（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＣＴＵ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（PyBOP（登録商標））、ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（PyBroP（登録商標））、２−［（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）およびベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）からなる群から選択されるカップリング剤をさらに含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
抗がん剤を式（ＩＩＩ）で表される一部の繰り返し単位と反応させることが、触媒をさらに含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
触媒が、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
Ｒ１が、Ｃ１〜６アルキルである、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
Ｒ１が、任意に置換されたフェニルである、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
Ｒ１が、任意に置換されたベンジルである、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
Ｒ２が、Ｃ１〜６アルキルである、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
Ｒ２が、任意に置換されたフェニルである、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
Ｒ２が、任意に置換されたベンジルである、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
各Ｒ３が、水素である、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
各Ｒ３が、アルカリ金属である、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
１つのＲ４が水素であり、および、その他のＲ４が抗がん剤である、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
１つのＲ４がアルカリ金属であり、および、その他のＲ４が抗がん剤である、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
アルカリ金属がナトリウムである、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
式（１）で表される化合物をトリホスゲンまたはホスゲンと反応させ、式（Ａ）で表される化合物を形成することをさらに含み、ここで、式（１）で表される化合物が構造：
【化５】
0006262334.tif 000027
を有する、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体が、約８０モル％〜約９９モル％の式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位を含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体が、式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位からなるか、または本質的にそれらからなる、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
背景
分野
本出願は一般的に、生体適合性の水溶性ポリマー結合体を作製する方法に関する。特に、本出願は、様々な薬剤送達用途に有用であり得るポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）結合体を作製する大規模な方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
説明
アミノ酸ベースのポリマーは、新規な生体材料の潜在的な供給源として考えられてきた。良好な生体適合性を有するポリアミノ酸は、低分子量化合物を送達するために検討されてきた。比較的少数のポリグルタミン酸およびコポリマーが、薬剤送達用の候補材料として特定されている。
【発明の概要】
【０００３】
概要
本明細書に記載のいくつかの態様は、一般に、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体のバッチを製造するための製造の方法に関するものであって、該方法は、式（Ａ）で表される化合物を重合させ、式（Ｉ）で表される繰り返し単位を有するポリマーを形成すること、式中Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキル、任意に置換されたフェニルおよび任意に置換されたベンジルから選択することができ；
【化１】
0006262334.tif 000002
式（Ｉ）で表される繰り返し単位のアルカリ金属塩を形成すること；式（Ｉ）で表される繰り返し単位のアルカリ金属塩を式（Ｂ）で表される化合物と反応させ、式（ＩＩ）で表される繰り返し単位を有するポリマーを形成すること、式中各Ｒ２は、Ｃ１〜６アルキル、任意に置換されたフェニルおよび任意に置換されたベンジルから独立して選択することができ；
【化２】
0006262334.tif 000003
式（ＩＩ）で表される繰り返し単位からＲ２基を除去し、式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位を有するポリマーを形成すること；および
【化３】
0006262334.tif 000004
抗がん剤を式（ＩＩＩ）で表される一部の繰り返し単位と反応させ、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体を形成すること、ここでポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体は、式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位：
【化４】
0006262334.tif 000005
を含むことができ、
式中：各Ｒ３は、独立して、水素またはアルカリ金属であり得；および各Ｒ４は、少なくとも１つのＲ４が抗がん剤である場合、独立して、水素、アルカリ金属または抗がん剤であり得る、
を含むことができ；ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の少なくとも３つのバッチが製造され；各バッチが、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の約３００グラム超または約３００グラムと等しい量を提供することができ；および、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチが、互いのバッチと比較してある数値範囲内のｋＤａである重量平均分子量、同様の多分散性および低エンドトキシン含有量から選択される１または２以上の特性を有する。
【０００４】
詳細な説明
特に定義しない限り、本明細書中で使用されるすべての技術的および科学的な用語は、当業者に共通して理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中で参照されたすべての特許、出願、公開された出願および他の刊行物は、特に明記しない限り、それらの全体が参照によって組み込まれる。用語について複数の定義が存在する場合、特に明記しない限り、この節のものが優先する。
【０００５】
用語「ポリマー結合体」は、本明細書中でその通常の意味で使用され、したがって、１または２以上の種類の生物学的に活性な剤または薬剤、例えばパクリタキセルなど、に付加されたポリマーを含む。例えば、本明細書中に記載されたＰＧＧＡ−ＰＴＸは、ポリ−（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）（ＰＧＧＡ）がパクリタキセル（ＰＴＸ）に付加されたポリマー結合体である。ポリマー（例えば、ＰＧＧＡ）は、生物学的に活性な剤または薬剤（例えば、ＰＴＸ）に直接的に付加されてもよく、またはリンカー基を介して付加されてもよい。リンカー基は、比較的小さな化学的部分、例えばエステルまたはアミド結合など、であってもよく、またはより大きい化学的部分、例えばアルキルエステル結合またはアルキレンオキシド結合、であってもよい。
【０００６】
本明細書中で使用されるとおり、「Ｃｍ〜Ｃｎ」、式中「ｍ」および「ｎ」は、基における炭素原子の数または環（単数または複数）における炭素の数を示す整数である。すなわち、基または環は、「ｍ」〜「ｎ」、両端を含む、の炭素原子を含有することができる。したがって、例えば、「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」基は、１〜４個の炭素を有するすべてのアルキル基、すなわち、ＣＨ３−、ＣＨ３ＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−、（ＣＨ３）２ＣＨ−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−、ＣＨ３ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−および（ＣＨ３）３Ｃ−を示す。「ｍ」および「ｎ」が指定されない場合、本明細書中で提供される定義における最も広い範囲が想定されるべきである。
【０００７】
本明細書中で使用されるとおり、「アルキル」は、直鎖または分枝の完全飽和（二重結合または三重結合が存在しない）炭化水素基、例えば一般式−ＣｎＨ２ｎ＋１、を示す。アルキル基は、１〜５０個の炭素原子を有してもよい（それが本明細書中で出現するたびに、数値範囲、例えば「１〜５０」など、は与えられた範囲における各整数を示し；例えば「１〜５０個の炭素原子」は、アルキル基が１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子など、５０個までおよび５０個を含む炭素原子からなってもよいことを意味するが、本定義は用語「アルキル」、ここで数値範囲は指定されていない、の出現もまたカバーする）。アルキル基は、１〜３０個の炭素原子を有する中型のアルキルでもあってもよい。アルキル基は、１〜５個の炭素原子を有する低級アルキルでもあり得るであろう。化合物のアルキル基は、「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」または同様な指定として指定してもよい。ほんの一例として、「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」は、１〜４個の炭素原子がアルキル鎖において存在すること、すなわち、アルキル鎖がメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔ−ブチルからなる群から選択されることを示す。典型的なアルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、第三級ブチル、ペンチル、ヘキシルなどを含むが、これらに限定されない。
【０００８】
アルキル基は、置換または非置換されてもよい。置換されたとき、置換基（単数または複数）は、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、ヘテロアラルキル、（ヘテロアリシクリル）アルキル、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ、アシル、エステル、メルカプト、シアノ、ハロゲン、カルボニル、チオカルボニル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｎ−スルホンアミド、Ｃ−カルボキシ、保護されたＣ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、イソシアナート、チオシアナート、イソチオシアナート、ニトロ、シリル、スルフェニル、スルフィニル、スルホニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、トリハロメタンスルホニル、トリハロメタンスルホンアミド、および、単置換および二置換されたアミノ基を含むアミノ、および、それらの保護された誘導体から個別におよび独立して選択される１または２以上の基（単数または複数）である。
【０００９】
本明細書中で使用されるとおり、「アリール」は、すべての環において完全に非局在化したパイ電子系を有する炭化水素単環式または多環式芳香族環系を示す。アリール基の例は、ベンゼン（フェニル）、ナフタレンおよびアズレンを含むが、これらに限定されない。アリール基の環（単数または複数）は、５〜５０個の炭素原子を有してもよい。アリール基は、置換されているか、または非置換であってもよい。
【００１０】
本明細書中で使用されるとおり、「アラルキル」および「アリール（アルキル）」は、置換基として低級アルキレン基を介して結合したアリール基を示す。アラルキルの低級アルキレンおよびアリール基は、置換されているか、または非置換であってもよい。例として、ベンジル、２−フェニルアルキル、３−フェニルアルキルおよびナフチルアルキルを含むが、これらに限定されない。
【００１１】
特に断りのない限り、置換基が「任意に置換された」または「置換された」ものであるとき、それは、置換基が、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリシクリル、アラルキル、ヘテロアラルキル、（ヘテロアリシクリル）アルキル、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アシル、エステル、メルカプト、シアノ、ハロゲン、カルボニル、チオカルボニル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｎ−スルホンアミド、Ｃ−カルボキシ、保護されたＣ−カルボキシ、Ｏ−カルボキシ、イソシアナート、チオシアナート、イソチオシアナート、ニトロ、シリル、スルフェニル、スルフィニル、スルホニル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、トリハロメタンスルホニル、トリハロメタンスルホンアミド、および、単置換および二置換されたアミノ基を含むアミノ、および、それらの保護された誘導体から個別におよび独立して選択される１種または２種以上の基（単数または複数）で置換されてもよい基であることを意味する。上記の置換基の保護誘導体を形成し得る保護基は当業者に知られており、参考文献、例えばGreene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley & Sons, New York, NY, 1999、当該文献はその全体が参照によって組み込まれる、などにおいて見つけることができる。
【００１２】
本明細書中に記載された１または２以上のキラル中心を有するあらゆる化合物において、絶対立体化学が明確に示されていない場合、各中心は独立してＲ配置またはＳ配置またはその混合物であってもよいと理解される。次いで、本明細書中で提供された化合物は、鏡像異性的に純粋であってもよく、または立体異性の混合物であってもよい。さらに、ＥまたはＺとして定義することができる幾何異性体を生じる１または２以上の二重結合（単数または複数）を有するあらゆる化合物において、各二重結合は独立してＥまたはＺまたはそれらの混合物であってもよいと理解される。同様に、すべての互変異性型もまた含まれることが意図される。
【００１３】
本明細書中で使用されるとおり、あらゆる保護基、アミノ酸および他の化合物の略称は、特に断りのない限り、それらの共通の使用、認識された略称、またはIUPAC-IUP Commission on Biochemical Nomenclature（Biochem. 11:942-944 (1972)を参照）に従う。
【００１４】
本明細書に記載のいくつかの態様は、一般に、式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位を含むことができるポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の複数のバッチを製造するための製造の方法に関するものであり、各バッチは、約３００グラム超または約３００グラムと等しい量で提供することができ、および、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチは、互いのバッチと比較してある数値範囲内のｋＤａである重量平均分子量、同様の多分散性および低エンドトキシン含有量から選択される１または２以上の特性を有する。
【００１５】
本明細書中に記載された方法は、本明細書中で記載されたポリマー結合体（例えば、式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位を含むポリマー結合体）を製造するために大規模に使用することができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載された方法は、約３００グラム超の量でポリマー結合体の単一のバッチを製造するために使用することができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載された方法は、約０．８キログラム超の量でポリマー結合体の単一のバッチを製造するために使用することができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載された方法は、約１．０キログラム超の量でポリマー結合体の単一のバッチを製造するために使用することができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載された方法は、約３００グラム〜約１．５キログラムの範囲の量でポリマー結合体の単一のバッチ製造するために使用することができる。他の態様において、本明細書に記載の方法は、約０．５ｋｇ〜約５キログラムの範囲の量でポリマー結合体の単一のバッチを製造するために使用することができる。さらに他の態様において、本明細書中に記載された方法は、約０．８キログラム〜約３キログラムの範囲の量でポリマー結合体の単一のバッチを製造するために使用することができる。
【００１６】
本明細書に記載の方法は、ポリマー結合体（例えば、式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位を含むポリマー結合体）の高度に一貫性のあるバッチを提供することができる。本明細書に記載のいくつかの態様は、一般に、本明細書中で記載されたポリマー結合体（例えば、式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位を含むポリマー結合体）のバッチを製造することを含むことができる高度に再現可能な製造の方法に関するものであり、ここでポリマー結合体の各バッチは、互いのバッチと比較してある数値範囲内のｋＤａである重量平均分子量、同様の多分散性および／または低エンドトキシン含有量を有する。例えば、５バッチのポリマー結合体は、本明細書中に記載された方法を使用して製造され、ここで５バッチの各々は、それぞれ７０ｋＤａ、７６ｋＤａ、７２ｋＤａ、７７ｋＤａおよび７８ｋＤａの重量平均分子量、および互いに±８ｋＤａ以内の重量平均分子量を有する。いくつかの態様において、ポリマー結合体の少なくとも３バッチを製造することができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体の少なくとも１０バッチを製造することができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体の少なくとも２５バッチを製造することができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体の３〜１００の範囲のバッチを製造することができる。
【００１７】
いくつかの態様において、ポリマー結合体のバッチは、互いの±１０ｋＤａ以内の重量平均分子量を有することができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体のバッチは、互いの±５ｋＤａ以内の重量平均分子量を有することができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体のバッチは、互いの±２ｋＤａ以内の重量平均分子量を有することができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体のバッチは、互いの±１ｋＤａ以内の重量平均分子量を有することができる。
【００１８】
ポリマー結合体の様々な分子量は、本明細書中に記載された方法から得ることができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載された方法から得られたポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチは、約１０ｋＤａ〜約１５０ｋＤａの範囲において重量平均分子量を有することができる。他の態様において、本明細書中に記載された方法から得られたポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチは、約３０ｋＤａ〜約１２０ｋＤａの範囲において重量平均分子量を有することができる。さらに他の態様において、本明細書中に記載された方法から得られたポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチは、約６０ｋＤａ〜約１００ｋＤａの範囲において重量平均分子量を有することができる。さらに他の態様において、本明細書中に記載された方法から得られたポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチは、約１００ｋＤａと等しいかまたは約１００ｋＤａ未満の重量平均分子量を有することができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載された方法から得られたポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体の各バッチは、約６０ｋＤａと等しいかまたは約６０ｋＤ超の重量平均分子量を有することができる。
【００１９】
本明細書中で記載されたポリマー結合体を製造する方法は、狭い多分散性指数を有するポリマー結合体（例えば、式（ＩＶ）および（Ｖ）で表される繰り返し単位を含むポリマー結合体）を提供することができる。例えば、いくつかの態様において、本明細書中に記載された方法から得られたバッチのポリマー結合体（例えば、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体）の多分散性指数は、２．０未満であり得る。いくつかの態様において、本明細書中に記載された方法から得られたポリマー結合体の各バッチは、１．７未満の多分散性指数であり得る。いくつかの態様において、本明細書中に記載された方法から得られたポリマー結合体の各バッチは、１．５未満の多分散性指数であり得る。他の態様において、本明細書中に記載された方法から得られたポリマー結合体の各バッチは、約１．０〜約２．０の範囲の多分散性指数であり得る。いくつかの態様において、本明細書中に記載された方法から得られたポリマー結合体の各バッチは、１．０〜１．５の範囲の多分散性指数であり得る。いくつかの態様において、ポリマー結合体のバッチは、互いに±０．５以内の多分散性を有することができる。他の態様において、ポリマー結合体のバッチは、互いに±０．１以内の多分散性を有することができる。さらに他の態様において、ポリマー結合体のバッチは、互いに±０．０５以内の多分散性を有することができる。
【００２０】
さらに、本明細書中で記載されたポリマー結合体（例えば、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体）を製造する方法は、低エンドトキシン含有量を有するポリマー結合体を提供することができる。エンドトキシン、リポポリサッカリド（ＬＰＳ）とも称される、は商業的に入手可能なタンパク質または生物学的に活性な物質において見出された混入物である。組み換えタンパク質の製造における少量のエンドトキシンの存在は、宿主生物における副作用、例えばエンドトキシンショック、組織傷害、およびさらに死など、を生じさせ得る。これらの副作用のために、生物学的製品および医薬製品において存在するエンドトキシンの量を低減することは望ましい。いくつかの態様において、本明細書中に記載された方法は、０．２５ＥＵ／ｍｇ未満のエンドトキシン含有量を有するポリマー結合体（例えば、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体）のバッチを提供することができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載された方法は、０．２０ＥＵ／ｍｇ未満のエンドトキシン含有量を有するポリマー結合体のバッチを提供することができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載された方法は、０．１５ＥＵ／ｍｇ未満のエンドトキシン含有量を有するポリマー結合体のバッチを提供することができる。いくつかの態様において、本明細書中に記載された方法は、０．１ＥＵ／ｍｇ未満のエンドトキシン含有量を有するポリマー結合体（例えば、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体）のバッチを提供することができる。エンドトキシン含有量を測定するための方法は、当業者に知られている。一例は、カブトガニ血球抽出成分（ＬＡＬ）アッセイである。いくつかの態様において、本段落のそれらを含む、本明細書中で記載されたポリマー結合体（例えば、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体）に存在するエンドトキシンの量は、ＬＡＬアッセイを使用して測定することができる。
【００２１】
ポリマー結合体における式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位のパーセンテージは、繰り返し単位の総数に基づき、広い範囲にわたって変わり得る。いくつかの態様において、式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位のパーセンテージは、ポリマー結合体における繰り返し単位の総モルに基づき、約８０モル％〜約９９モル％の範囲であり得る。他の態様において、式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位のパーセンテージは、ポリマー結合体における繰り返し単位の総モルに基づき、約９０モル％〜約９９モル％の範囲であり得る。さらに他の態様において、式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位のパーセンテージは、ポリマー結合体における繰り返し単位の総モルに基づき、約９５モル％〜約９９モル％の範囲であり得る。さらに他の態様において、式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位のパーセンテージは、ポリマー結合体における繰り返し単位の総モルに基づき、約９９モル％超のものであり得る。いくつかの態様において、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体は、式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位からなり得るか、または本質的になり得る。
【００２２】
いくつかの態様において、本明細書中に記載されたポリマー結合体は、アルカリ金属を含むことができる。アルカリ金属の例は、リチウム（Ｌｉ）、ナトリウム（Ｎａ）、カリウム（Ｋ）、ルビジウム（Ｒｂ）およびセシウム（Ｃｓ）を含む。いくつかの態様において、アルカリ金属はナトリウムであり得る。
【００２３】
いくつかの態様において、ポリマー結合体は、酸性型であり得る。他の態様において、ポリマー結合体は、アルカリ金属塩の形態であり得る。いくつかの態様において、Ｒ３基の少なくとも９０％は水素であり得、抗がん剤ではないＲ４基の少なくとも９０％は水素であり得る。いくつかの態様において、Ｒ３基の少なくとも９５％は水素であり得、抗がん剤ではないＲ４基の少なくとも９５％は水素であり得る。いくつかの態様において、Ｒ３基の９８％超は水素であり得、抗がん剤ではないＲ４基の９８％超は水素であり得る。他の態様において、Ｒ３基の少なくとも９０％はアルカリ金属であり得、抗がん剤ではないＲ４基の少なくとも９０％は、アルカリ金属であり得る。他の態様において、Ｒ３基の少なくとも９５％はアルカリ金属であり得、抗がん剤ではないＲ４基の少なくとも９５％はアルカリ金属であり得る。他の態様において、Ｒ３基の９８％超はアルカリ金属であり得、抗がん剤ではないＲ４基の９８％超はアルカリ金属であり得る。
【００２４】
様々な抗がん剤をポリマーに付加し、ポリマー結合体を形成することができる。いくつかの態様において、抗がん剤は、タキサン、カンプトテカおよびアントラサイクリンから選択することができる。いくつかの態様において、カンプトテカは、カンプトテシンであり得る。いくつかの態様において、アントラサイクリンはドキソルビシンであり得る。タキサンの例は、パクリタキセルおよびドセタキセルを含むが、これらに限定されない。いくつかの態様において、タキサンはパクリタキセルであり得る。いくつかの態様において、抗がん剤がパクリタキセルであるとき、パクリタキセルを、式（Ｖ）で表される繰り返し単位においてＣ２’炭素に付加された酸素原子に付加することができる。他の態様において、パクリタキセルを、式（Ｖ）で表される繰り返し単位においてＣ７炭素に付加された酸素原子に付加することができる。
【００２５】
ポリマー結合体において存在する抗がん剤の量は、広い範囲にわたって変化し得る。いくつかの態様において、ポリマー結合体は、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体に対する抗がん剤の質量比に基づき、抗がん剤の約５％〜約５０％（重量／重量）の範囲において抗がん剤の総量を含むことができる。他の態様において、ポリマー結合体は、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体に対する抗がん剤の質量比に基づき、抗がん剤の約１０％〜約４０％（重量／重量）の範囲において抗がん剤の総量を含むことができる。さらに他の態様において、ポリマー結合体は、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体に対する抗がん剤の質量比に基づき、抗がん剤の約２０％〜約４０％（重量／重量）の範囲において抗がん剤の総量を含むことができる。さらに他の態様において、ポリマー結合体は、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体に対する抗がん剤の質量比に基づき、抗がん剤の約３０％〜約４０％（重量／重量）の範囲において抗がん剤の総量を含むことができる。
【００２６】
本明細書中で記載されたポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体において存在する式（ＩＶ）および（Ｖ）で表される繰り返し単位の総数は変化し得る。ポリマー結合体における式（ＩＶ）および（Ｖ）で表される繰り返し単位の総数は、広い範囲、例えば約４０〜約１，０００の範囲または約５０〜約５００の範囲など、にわたって変化し得る。
【００２７】
いくつかの態様において、本明細書中に記載されたポリマー結合体は、ポリマー結合体がコポリマー結合体であるように、式（ＩＶ）および（Ｖ）で表されない他の繰り返し単位を含むことができる。広く多様な他の繰り返し単位は、本明細書中で記載されたポリマー結合体に含まれてもよい。好適な繰り返し単位の例は、以下：
【化５】
0006262334.tif 000006
であって、式中Ｒ５は、水素またはアルカリ金属（例えば、本明細書中に記載されたアルカリ金属）であり得る。
【００２８】
本明細書中に記載されるとおり、ポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）−抗がん剤結合体は、式（Ａ）で表される化合物から製造することができる。式（Ａ）で表される化合物は、当業者に知られたものを含む様々な方法を使用して製造することができる。当業者は、式（Ａ）で表される化合物がα−アミノ酸−Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）−エステルであることを理解する。いくつかの態様において、式（Ａ）で表される化合物を式（１）：
【化６】
0006262334.tif 000007
で表される化合物から製造することができ、
式中Ｒ１は、Ｃ１〜６アルキル、任意に置換されたフェニルおよび任意に置換されたベンジルから選択することができる。式（１）で表される化合物から式（Ａ）で表される化合物を製造するための好適な試薬の例は、トリホスゲンおよびホスゲンを含む。反応は、１または２以上の好適な溶媒、例えば水混和性の溶媒（単数または複数）において行うことができる。いくつかの態様において、溶媒はテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）であり得る。
【化７】
0006262334.tif 000008
【００２９】
式（Ａ）で表される化合物を重合し、式（Ｉ）で表される繰り返し単位を有するポリマーを形成することができる。式（Ａ）で表される化合物の重合は、求核試薬、塩基および／または遷移金属錯体によって開始することができる。いくつかの態様において、開始剤は、アミン（例えば第一級アミン、第二級アミンおよび／または第三級アミンなど）であり得る。他の態様において、開始剤は、アルコキシド（例えば、ＮａＯＭｅ）であり得る。ポリマーは、求核開環連鎖成長(nucleophilic ring-opening chain growth)方法を介して、および／または、式（Ａ）で表される化合物を脱保護し、前記連鎖成長方法を開始する求核試薬を形成することによって、形成することができる。ＮＣＡの重合は、いくつかの障害、例えば連鎖停止および／または連鎖移動などの副反応の存在を含む、を有する。これらの副反応は、得られたポリマーの分子量を制御し、および／または広い重量分布を提供する能力を阻害することができる。さらに、ＮＣＡ開始材料における不純物は、ポリマー連鎖を停止させることによって重合化に干渉し得る。不純物の例は、酸、酸塩化物およびイソシアン酸の痕跡(trace)を含む。
【化８】
0006262334.tif 000009
【００３０】
いくつかの態様において、式（Ａ）で表される化合物のＲ１および／または式（Ｉ）で表される繰り返し単位は、Ｃ１〜６アルキルであり得る。他の態様において、式（Ａ）で表される化合物のＲ１および／または式（Ｉ）で表される繰り返し単位は、任意に置換されたフェニルであり得る。さらに他の態様において、式（Ａ）で表される化合物のＲ１および／または式（Ｉ）で表される繰り返し単位は、任意に置換されたベンジルであり得る。
【００３１】
Ｒ１基は、様々な方法によって除去できる。例えば、Ｒ１は、酸性溶液を使用して切断することができる。いくつかの態様において、酸性溶液は、１種または２種以上の酸を含むことができる。いくつかの態様において、酸性溶液は、少なくとも２種の酸を含むことができる。例として、酸性溶液は、臭化水素酸および酢酸の溶液であり得る。他の態様において、酸性溶液は１種の酸を含むことができる。Ｒ１基を除去するための好適な酸は以下を含むが、これらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、硝酸、亜硝酸、硫酸、スルホン酸、酢酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸、クロロ酢酸、グリオキシル酸、シュウ酸、グリコール酸、リン酸、亜リン酸、マロン酸およびトリフルオロ酢酸。
【００３２】
ポリ（グルタミン）酸（ＰＧＡ）のアルカリ金属塩は、アルカリ金属塩基を使用して形成することができる。いくつかの態様において、形成することができるＰＧＡのアルカリ金属塩は、ポリ（グルタマートナトリウム塩）（ＰＧＡ−Ｎａ）である。様々なアルカリ金属塩基を使用することができる。好適なアルカリ金属塩基の例は、アルカリ金属重炭酸塩、アルカリ金属炭酸塩およびアルカリ金属水酸化物を含む。いくつかの態様において、アルカリ金属塩基は、重炭酸ナトリウムであり得る。他の態様において、アルカリ金属塩基は、水酸化ナトリウムであり得る。
【化９】
0006262334.tif 000010
式中Ｍ＋は、アルカリ金属である。
【００３３】
ポリ（グルタミル−グルタマート）（ＰＧＧＡ）の形成は、様々な方法を使用して達成できる。いくつかの態様において、式（Ｂ）で表される化合物は、式（Ｉ）で表される繰り返し単位を有するポリマーと反応させ、式（ＩＩ）で表される繰り返し単位を含むことができるポリマーを形成することができ、式中各Ｒ２は、独立して、Ｃ１〜６アルキル、任意に置換されたフェニルおよび任意に置換されたベンジルから選択することができる。いくつかの態様において、Ｒ２は、Ｃ１〜６アルキルであり得る。例えば、Ｒ２はｔ−ブチルであり得る。他の態様において、Ｒ２は任意に置換されたフェニルであり得る。さらに他の態様において、Ｒ２は任意に置換されたベンジルであり得る。
【化１０】
0006262334.tif 000011
【００３４】
本明細書中で議論されるとおり、ポリマー結合体は、式（ＩＶ）および（Ｖ）で表される繰り返し単位の他に他の繰り返し単位、例えば式（ＶＩ）で表される繰り返し単位を含むことができる。式（ＩＶ）、（Ｖ）および（ＶＩ）で表される繰り返し単位を含むポリマーを形成するための１つの方法は、式（Ｉ）で表される繰り返し単位を含むポリマーのアルカリ金属塩を式（Ｂ）で表される化合物の１．０当量未満と反応させることによるものである。例えば、式（Ｉ）で表される繰り返し単位を含むポリマーのアルカリ金属塩は、式（Ｂ）で表される化合物の０．８５当量と反応させることができる。
【００３５】
いくつかの態様において、式（Ｉ）で表される繰り返し単位を含むことができるポリマーのアルカリ金属塩の式（Ｂ）で表される化合物との反応は、カップリング剤の使用をさらに含むことができる。好適なカップリング試薬の例は、以下を含む：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１，１’−カルボニル−ジイミダゾール（ＣＤＩ）、炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）、Ｎ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル−メチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスファートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）、２−［（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）、２−［（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＣＴＵ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（PyBOP（登録商標））、ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（PyBroP（登録商標））、２−［（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムテトラフルオロホウ酸（ＴＢＴＵ）およびベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）。反応は、好適な溶媒、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ−メチル−２−ピリドン（ＮＭＰ）およびＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）などにおいて行うことができる。いくつかの態様において、溶媒はＤＭＦであり得る。
【００３６】
式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位を有するポリマーは、式（ＩＩ）で表される繰り返し単位からＲ２基を除去することによって得ることができる。様々な方法および条件は、Ｒ２基を除去するために使用することができる。例えば、Ｒ２基は、酸または塩基を使用して加水分解によって除去することができる。好適な酸は、塩酸、臭化水素酸、硝酸、亜硝酸、硫酸、スルホン酸、酢酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸、クロロ酢酸、グリオキシル酸、シュウ酸、グリコール酸、リン酸、亜リン酸、マロン酸およびトリフルオロ酢酸を含むが、これらに限定されない。いくつかの態様において、Ｒ２基は、トリフルオロ酢酸を使用して除去することができる。好適な塩基は、水酸化ナトリウム、アンモニア、水酸化カリウムおよび水酸化リチウムを含むが、これらに限定されない。
【化１１】
0006262334.tif 000012
【００３７】
ポリマー結合体（例えば、式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位を含むポリマー結合体）は、抗がん剤を式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位の部分と反応させることによって形成することができる。本明細書中で提供されるとおり、抗がん剤は、タキサン、カンプトテシン、およびドキソルビシンから選択することができる。式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位に結合することができるタキサンの例は、パクリタキセルおよびドセタキセルを含む。
【化１２】
0006262334.tif 000013
【００３８】
抗がん剤は、多くの種々の方法でポリマーに結合してもよい。いくつかの態様において、抗がん剤は、剤の酸素、硫黄、窒素および／または炭素原子を通じてポリマーに直接的に付加することができる。例えば、抗がん剤は、式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位に直接的に付加し、式（Ｖ）で表される繰り返しを形成することができる。他の態様において、抗がん剤は、リンカー基をさらに含むことができる。リンカー基は、抗がん剤をポリマーに付加させる基である。いくつかの態様において、抗がん剤は、リンカー基を介して式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位に付加し、式（Ｖ）で表される繰り返し単位を形成することができる。リンカー基は、比較的小さくてもよい。例えば、リンカー基は、アミン、アミド、エーテル、エステル、ヒドロキシル基、カルボニル基またはチオール基を含んでもよい。代替的に、リンカー基は、比較的大きくてもよい。例えば、リンカー基は、アルキル基、アルコキシ基、アリール基、アリール（Ｃ１〜６アルキル）基、ヘテロアリール基またはヘテロアリール（Ｃ１〜６アルキル）基を含んでもよい。一態様において、リンカーは、−ＮＨ（ＣＨ２）１〜４−ＮＨ−であり得る。いくつかの態様において、リンカーは、−（ＣＨ２）１〜４−アリール−ＮＨ−であり得る。リンカー基は、あらゆる好適な位置で抗がん剤に付加することができる。例えば、リンカー基は、抗がん剤の炭素における水素の場所において付加することができる。リンカー基は、当業者に知られた方法を使用して抗がん剤に加えることができる。いくつかの態様において、抗がん剤がパクリタキセルであるとき、パクリタキセルは、式（Ｖ）で表される繰り返し単位のＣ２’炭素に付加された酸素原子を介して結合することができる。いくつかの態様において、抗がん剤がパクリタキセルであるとき、パクリタキセルは、式（Ｖ）で表される繰り返し単位のＣ７炭素に付加された酸素原子を介して結合することができる。
【００３９】
抗がん剤は、様々な方法を使用して式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位に結合することができる。いくつかの態様において、式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位を含むポリマーは、溶媒に少なくとも部分的に溶解することができる。好適な溶媒の例は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ−メチル−２−ピリドン（ＮＭＰ）、およびＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）を含むが、これらに限定されない。いくつかの態様において、溶媒はＤＭＦであり得る。式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位を含むポリマーの溶液は、抗がん剤と組み合わせることができる。いくつかの態様において、カップリング剤は、式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位および抗がん剤を含むポリマーの溶液と組み合わせることもできる。カップリング剤の非限定的な列記は、以下を含む：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１，１’−カルボニル−ジイミダゾール（ＣＤＩ）、炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）、Ｎ−［（ジメチルアミノ）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ−［４，５−ｂ］ピリジン−１−イル−メチレン］−Ｎ−メチルメタンアミニウムヘキサフルオロホスファートＮ−オキシド（ＨＡＴＵ）、２−［（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）、２−［（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＣＴＵ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（PyBOP（登録商標））、ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸（PyBroP（登録商標））、２−［（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）およびベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）。いくつかの態様において、カップリング剤はＥＤＣであり得る。いくつかの態様において、触媒は、式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位および抗がん剤を含むポリマーの溶液と組み合わせることもできる。好適な触媒の一例は、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）である。
【００４０】
ポリマー結合体（例えば、式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位を含むポリマー結合体）は、酸性型またはアルカリ金属塩の形態で得ることができる。式（ＩＶ）で表される繰り返し単位および式（Ｖ）で表される繰り返し単位を含むポリマーの酸型およびアルカリ金属塩型の例は、本明細書中で示されている。
【化１３】
0006262334.tif 000014
【００４１】
酸性型は、酸を使用して得ることができる。例えば、式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位のポリマーおよび抗がん剤の溶液は、酸と組み合わせることができる。好適な酸は、塩酸、臭化水素酸、硝酸、亜硝酸、硫酸、スルホン酸、酢酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸、クロロ酢酸、グリオキシル酸、シュウ酸、グリコール酸、リン酸、亜リン酸、マロン酸およびトリフルオロ酢酸を含むが、これらに限定されない。いくつかの態様において、酸はＨＣｌであり得る。ポリマー結合体の酸性型は、酸性型を好適なアルカリ金属塩基、例えば本明細書中に記載されたものなどと反応させることによってアルカリ金属塩の形態に変換することができる。いくつかの態様において、塩基は重炭酸ナトリウムであり得る。ポリマー結合体は、様々な方法を使用して単離することができる。例えば、ポリマー結合体は、遠心分離または濾過によって単離することができる。
【００４２】
ポリマー結合体は、様々な方法によって精製することができる。いくつかの態様において、ポリマー結合体（例えば、ＰＧＧＡ−ＰＴＸ）は、好適な溶媒にポリマー結合体を溶解させ、次いで得られた混合物を溶液に加えることによって精製することができる。いくつかの態様において、好適な溶媒はＤＭＦであり得る。いくつかの態様において、溶液は、酸性溶液、例えばＨＣｌ溶液などであり得る。ポリマー結合体は、本明細書中に記載された１または２以上の方法を使用して単離することができ、次いで１または２以上の溶媒系で洗浄する。いくつかの態様において、１または２以上の溶媒系は、ＨＣｌの溶液（例えば、０．２Ｎ  ＨＣｌ）および水（例えばＭｉｌｌｉＱ水など）であり得る。
【００４３】
本明細書中に記載されたあらゆる態様において、ポリマーおよび／またはポリマー結合体は、当業者に知られた方法を使用して乾燥することができる。例えば、ポリマーおよび／またはポリマー結合体は、風乾、真空乾燥および／または凍結乾燥することができる。
例
例１
（５−ベンジルエステルグルタミン酸−Ｎ−カルボキシ無水物）（ＮＣＡ−エステル）の合成
【化１４】
0006262334.tif 000015
【００４４】
１００ＬのＲｏｔ−エバポレート系に対して、γ−ベンジル−Ｌ−グルタマート（３．０ｋｇ）および無水ＴＨＦ（３０Ｌ）を加えた。混合物を窒素雰囲気下で１０分間撹拌した。トリホスゲン（１．５ｋｇ）を一度に加え、混合物を窒素雰囲気下５０℃で４時間撹拌した。次いで撹拌を停止させ、混合物を室温まで冷却した。Ｎ−ヘキサン（５０Ｌ）を撹拌しながら加えた。添加が完了した後、混合物を３０分間撹拌し、得られた懸濁液を−２０℃で２４時間保存した。産物を濾過によって白色沈殿として単離した。次いで産物をｎ−ヘキサンで洗浄し、過剰なトリホスゲンを除去した。産物を酢酸およびｎ−ヘキサンから再結晶化し、ＮＣＡ−エステル（２．６ｋｇ、収量７８％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2.11 (m, 1H), 2.13 (m, 1H), 2.58 (m, 2H), 4.36 (m, 1H), 5.12 (s, 2H), 6.61 (s, 1H), 7.35 (m, 5H)。
例２
ポリ−Ｌ−グルタマートベンジルエステル（ＰＧＡ−Ｂｎエステル）の合成
【化１５】
0006262334.tif 000016
【００４５】
１００Ｌのリアクターにおける無水ジオキサン（３７Ｌ）の溶液に対して、ＮＣＡ−エステル（３．０ｋｇ）を加えた。前記固体が溶解するまで混合物を撹拌した。ジオキサン（２３２５ｍＬ）を有する無水ＭｅＯＨ（２３２．５ｍＬ）におけるＮａＯＭｅ（１２．３２ｇ）の溶液を室温で勢いよく撹拌しながら一度に加えた。１時間後、混合物を室温で７２時間静置し、濃厚、透明、無色、粘性の溶液を得た。この溶液を撹拌しながらゆっくりとＥｔＯＨ（４００Ｌ）へ注いだ。繊維性ポリマーを濾過によって単離し、ＥｔＯＨ（３×１０Ｌ）で洗浄した。次いでポリマーを細かく裂き、室温で終夜風乾した。ポリマーをさらに高真空下で終夜乾燥し、白色の繊維性固体（２．２２ｋｇ、８９％）として産物を得た。1H NMR (400 MHz, d-TFA) δ: 6.67 (m, 5H), 4.57-4.48 (m, 2H), 4.12 (m, 1H), 1.90 (m, 2H), 1.59 (m,1H), 1.40 (m, 1H)。
例３
ポリ−Ｌ−グルタマートベンジルエステル（ＰＧＡ−Ｎａ塩）の合成
【化１６】
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【００４６】
テフロンコ−ティングされた撹拌棒を備えた乾燥した１００Ｌリアクター中のジクロロ酢酸（４０Ｌ）に対して、ＰＧＡ−Ｂｎエステル（１．０ｋｇ）を加えた。溶液を窒素雰囲気下で２８．０oＣで終夜保持した。透明な粘性溶液が形成された。次いでＨＢｒ溶液（ＨＯＡｃ中３３％）（３．５Ｌ）を一度に加えた。混合物を予め決めておいた時間、この場合は約４時間、撹拌した。熱を除去し、（−２０℃まで予め冷却された）ヘキサン（４０Ｌ）を一度に加えた。ＰＧＡは白色の固体として沈殿した。３０分後に撹拌を停止し、混合物を室温で３０分間静置した。上清を、カニューレを使用して真空によって除去した。沈殿物をアセトン（４０Ｌ）で３０分間懸濁および撹拌した。繊維性ポリマーを濾過によって単離し、産物をアセトン（３×１０Ｌ）で洗浄し、１時間風乾した。
【００４７】
得られた残基を１ＮのＮａＨＣＯ３（ａｑ）（１２Ｌ）を含有する５０Ｌフラスコへ移した。混合物を前記固体が溶解するまで終夜撹拌した。溶液を濾過し、透明な溶液を得、次いで接線流濾過（ＴＦＦ）システムによって精製した。産物を凍結乾燥し、ＰＧＡ−Ｎａ塩（１．０４ｋｇ、９３％）を得た。1H NMR (400 MHz, D2O) δ: 4.25-4.20 (m, 1H), 2.27-2.09 (m, 2H), 2.00-1.79 (m, 2H)。
例４
ポリ−（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）ｔ−ブチルエステル（ＰＧＧＡ−エステル）の合成
【化１７】
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【００４８】
１００Ｌリアクター中の無水ＤＭＦ（２５Ｌ）の溶液に対して、ＰＧＡ−Ｎａ塩（５００ｇ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。Ｌ−グルタミン酸ジ−ｔ−ブチルエステル塩酸塩（Ｈ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）２．ＨＣｌ）（１９５９ｇ）、ＨＯＢｔ（６０８ｇ）およびＥＤＣ（１９０４ｇ）を勢いよく撹拌しながら順序通り加えた。混合物を室温で３６時間撹拌し、次いで混合物を、ＭｉｌｌｉＱ水（４０Ｌ）を含有する１００Ｌフラスコへゆっくりと注いだ。混合物を３０分間撹拌した。産物を濾過によって単離し、ＭｉｌｌｉＱ水で洗浄し、精製されたＰＧＧ−エステル（１．２ｋｇ、９２％）を白色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.80 (bs, 1H), 8.47 (bs, 1H), 4.46 (bs, 1H), 4.09 (bs, 1H), 2.39-2.24 (m, 4H), 1.93-1.62 (m, 4H), 1.57-1.25 (m, 18H)。
例５
ポリ−（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）（ＰＧＧＡ−酸）の合成
【化１８】
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【００４９】
５０ＬのＲｏｔ−ｖａｐｏｒフラスコに対して、ＰＧＧＡ−エステル（１１００ｇ）およびＴＦＡ（８．８Ｌ）を加えた。混合物を室温で４時間撹拌した。次いでＴＦＡを減圧下４０℃で除去し、淡黄色のガラス状のフィルムを形成した。残渣をＴＦＡ（４．４）中に再溶解し、混合物を１６時間撹拌した。ＴＦＡを減圧下４０℃で除去し、残渣をＭｉｌｌｉＱ水（５０Ｌ）中に溶解し、淡黄色の溶液を得た。溶液を吸引濾過によって濾過し、濾過液をＭｉｌｌｉＱ水で１５０Ｌまで希釈した。溶液を次いでＴＦＦシステムによって透析した。溶液を凍結乾燥し、白色の固体として精製されたＰＧＧＡ酸（６９０ｇ、９４％）を得た。1H NMR (400 MHz, D2O) δ: 8.45 (bs, 1H), 4.38 (bs, 1H), 4.14 (bs, 1H), 2.43 (m, 4H), 2.15 (m, 2H), 1.94 (m, 2H)。
例６
ポリ−（γ−Ｌ−グルタミル−グルタマート）−ＰＴＸ結合体（ＰＧＧＡ−ＰＴＸ）の合成
【化１９】
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【００５０】
１００Ｌのリアクター中の無水ＤＭＦ（５０Ｌ）の溶液に対して、ＰＧＧＡ−酸（１ｋｇ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、透明な溶液が形成された。ＥＤＣ（９６６ｇ）およびＤＭＡＰ（１４２ｇ）を勢いよく撹拌しながら順序通り加えた。混合物を窒素雰囲気下で１時間撹拌した。透明な溶液が形成された。ＰＴＸ（５３８．５ｇ）を一度に加え、得られた溶液を周囲温度で２８時間撹拌した。
【００５１】
次いで混合物を撹拌しながらゆっくりと０．２ＮのＨＣｌ溶液（１２０Ｌ）に注いだ。３０分間の撹拌後、酸性型のＰＧＧＡ−ＰＴＸを遠心分離によって単離した。産物を０．２ＮのＨＣｌおよびＭｉｌｌｉＱ水で洗浄し、白色の固体として粗産物を得た。
【００５２】
酸性型の粗ＰＧＧＡ−ＰＴＸを無水ＤＭＦ（２６Ｌ）中に撹拌しながら溶解し、透明な溶液を形成させた。溶液を撹拌しながらゆっくりと０．２ＮのＨＣｌ溶液（６９Ｌ）中に注いだ。３０分間の撹拌の後、酸性型のＰＧＧＡ−ＰＴＸを遠心分離によって単離した。産物を０．２ＮのＨＣｌおよびＭｉｌｌｉＱ水で洗浄し、精製された酸性型のＰＧＧＡ−ＰＴＸを白色の固体として得た。
【００５３】
精製された酸型のＰＧＧＡ−ＰＴＸをゆっくりと０．３ＮのＮａＨＣＯ３（ａｑ）溶液（１２０Ｌ）に移した。混合物を固体が溶解するまで終夜撹拌した。溶液のｐＨを重炭酸ナトリウムまたは１ＨのＨＣｌのいずれかを使用して、８．３〜８．５の範囲のｐＨまで調節した。溶液を濾過し、透明な溶液を得、次いでＴＦＦシステムによって精製した。産物を凍結乾燥し、ＰＧＧＡ−ＰＴＸ（１．５ｋｇ、９７％）を得た。1H NMR (400 MHz, D2O) δ: 7.95-7.30 (m, 16H), 5.85-4.85 (m, 4H), 4.45-4.01 (m, 18H), 3.03-2.79 (m, 23H), 2.29-1.51 (m, 85H), 1.05 (m, 6H)。
【００５４】
表１は、３００グラム超の規模において本明細書中に記載された方法から得られたＰＧＧＡ−ＰＴＸの３分離バッチの一覧である。
【表１】
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【００５５】
表１に示されるとおり、本明細書中に記載された方法は、一貫性のある重量平均分子量、低エンドトキシン含有量、狭い範囲の多分散性指数および集中した薬剤負荷を有する、３００グラム超の量のポリ（Ｌ−γ−グルタミル−グルタマート）抗がん剤結合体を提供する。
【００５６】
表２は、３〜１０グラムの規模において本明細書中に記載された方法から得られたＰＧＧＡ−ＰＴＸの７分離バッチの一覧である。
【表２】
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【００５７】
表２に示されるとおり、３００グラム未満の規模において、重量平均分子量は３５ｋＤａ超で異なる。表１〜表２の比較は、本明細書中に記載された方法が、一貫性のある重量平均分子量、低エンドトキシン含有量、狭い範囲の多分散性指数および集中した薬剤負荷を有するポリマー結合体のバッチを大規模に生産することを示す。
【００５８】
上記は明瞭さと理解の目的のために例示および例によっていくらか詳細に記載されているが、多数および様々な変更が本開示の精神から逸脱することなく行うことができることは、当業者によって理解されるであろう。したがって、本明細書中で開示された形態は例示に過ぎず、本開示の範囲を限定するものではなく、むしろ本発明の真の範囲および精神とともにすべての変更および代替物を含むことが理解されるべきである。