(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ａ）で表される３β,５α,６β−トリヒドロキシステロイド化合物又はその薬学的に許容される塩の、低圧低酸素による高山病を治療又は予防する医薬組成物の製造のための使用。
【化１】
0006277289.tif 000008
（Ａ）
（式中、Ｒ１はＨ、炭素数１〜５の直鎖もしくは分岐アルキル基又は末端アルケニル基、又は−ＣＨ(ＣＨ３）(ＣＨ２）３ＣＨ(ＣＨ３）２である。）
【請求項２】
Ｒ１はＨである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｒ１は、−ＣＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ(ＣＨ３）２、−ＣＨ(ＣＨ２）３ＣＨ３、及び−ＣＨ(ＣＨ３）(ＣＨ２）３ＣＨ(ＣＨ３）２から選ばれる、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記高山病は急性高山病である、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記高山病の病状は高地脳浮腫を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記高地脳浮腫は、血管性浮腫である、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記高山病の病状はニューロン損傷である、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
前記ニューロン損傷は高地急性低圧低酸素によって引き起こす、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記ニューロン損傷は高地慢性低圧低酸素によって引き起こす、請求項７に記載の使用。
【請求項１０】
前記医薬組成物は、低圧低酸素による高山病を治療又は予防するための追加の活性成分を含む、請求項１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１４年４月２５日出願の中国特許出願第２０１４１０１７０２６３．７号の優先権を主張し、その開示の全体がここに参考として組み込まれる。
本発明は、化合物５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール及びその類似体の新規医薬用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
標高の上昇に伴って、大気圧及び酸素分圧が低くなり、吸気酸素分圧が低すぎると、動脈血酸素分圧の低下、酸素含有量の減少、組織への酸素供給不足を引き起こす。このような低圧低酸素（ｈｙｐｏｂａｒｉｃｈｙｐｏｘｉａ、ＨＨ）は、主として高原という特別な環境で発生するので、高地低酸素症（ｈｉｇｈ ａｌｔｉｔｕｄｅ ｈｙｐｏｘｉａ）とも呼ばれる。
【０００３】
個体は標高２，５００ｍ以上の地区に到達して急性低圧低酸素（Ａｃｕｔｅ Ｈｙｐｏｂａｒｉｃ Ｈｙｐｏｘｉａ）が生じるときに、このような環境の変化に適応できないと、高山病による頭痛（Ｈｉｇｈ−ａｌｔｉｔｕｄｅ ｈｅａｄａｃｈｅ、ＨＡＨ）、急性高山病（Ａｃｕｔｅｍｏｕｎｔａｉｎ ｓｉｃｋｎｅｓｓ、ＡＭＳ）が次々と発症することがあり、ＡＭＳからさらに高地脳浮腫（Ｈｉｇｈ ａｌｔｉｔｕｄｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｅｄｅｍａ、ＨＡＣＥ）及び高地肺水腫(Ｈｉｇｈ−ａｌｔｉｔｕｄｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｅｄｅｍａ、ＨＡＰＥ）に進展することもある。高山病は、その重症度によって主に頭痛、多弁、不眠、歩行障害、知能の低下、嗜眠、トランス、及び運動失調などの神経機能上の症状が現れることが大量に報告された。
【０００４】
現在、高山病薬に対する研究開発の構想は、主に、アセタゾールアミドなどの炭酸脱水酵素阻害薬に代表される酸素運搬能及びサイトカインを標的に向上させる医薬品、グルココルチコイド及び一部の酸化防止剤に代表される炎症反応を標的に向上させる医薬品である（非特許文献１）が、神経保護剤に属するものはない。
【０００５】
５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールは、新たに発見された神経保護剤(特許文献１）であり、その構造式は：
【０００６】
【化１】
0006277289.tif 000002
【０００７】
我々の研究によると、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール及びその類似体は、意外に、低圧低酸素処理の神経機能評価を著しく改善し、低圧低酸素による脳病理学的損傷から保護することで、低圧低酸素による高山病を効果的に予防、治療することができることを発見した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】中国特許第ＺＬ２０１０１０２２４１７３．３号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Wright A,Brearey S, Imray C. High hopes at high altitudes: pharmacotherapy for acutemountain sickness and high-altitude cerebral and pulmonary oedema. Expert OpinPharmacother 2008 Jan;9(1):119-27
【発明の概要】
【００１０】
本発明の目的は、下記の一般式（Ａ）で表される３β,５α,６β−トリヒドロキシステロイド化合物又はその薬学的に許容される塩の、低圧低酸素による高山病を治療又は予防する医薬組成物の製造のための使用を提供し、高山病の予防及び治療に新薬を提供することにある。
【００１１】
【化２】
0006277289.tif 000003
【００１２】
一般式（Ａ）中、Ｒ１はＨ、又は炭素数１〜５の直鎖もしくは分岐アルキル基又は末端アルケニル基である。
【００１３】
一実施形態において、一般式（Ａ）中、Ｒ１はＨであり、すなわち、上記化合物は、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール（本明細書及びその添付図面において「ＹＣ−６」とも略称される）である。
【００１４】
本発明の一実施形態において、上記高山病は、高地急性低圧低酸素（Ｈｉｇｈ−ａｌｔｉｔｕｄｅＡｃｕｔｅ Ｈｙｐｏｂａｒｉｃ Ｈｙｐｏｘｉａ）による急性高山病である。
【００１５】
本発明の別の実施形態において、上記高山病は、高地脳浮腫であり、具体的に、血管性浮腫である。
【００１６】
本発明の別の実施形態において、上記高山病は、ニューロン損傷であり、具体的に、ニューロン変性損傷（neurondegeneration damage）であり、高地急性低圧低酸素によるニューロン損傷及び高地慢性低圧低酸素（Ｈｉｇｈ−ａｌｔｉｔｕｄｅＣｈｒｏｎｉｃ Ｈｙｐｏｂａｒｉｃ Ｈｙｐｏｘｉａ）によるニューロン損傷を含む。
【００１７】
本発明の別の実施形態において、上記医薬組成物は、例えば、炭酸脱水酵素阻害薬（例えば、アセタゾールアミド）、グルココルチコイド、及び酸化防止剤などの、低圧低酸素による高山病を治療又は予防するための追加の活性成分を含む。
【００１８】
非ヒト霊長類の低圧低酸素動物モデルに対する研究によると、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールの処理は、低圧低酸素環境における実験動物の神経機能評価を著しく改善でき、低圧低酸素による神経機能障害に対して顕著な保護効果を有することが分かり、さらに、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールは、ＡＭＳ(Ｈｉｇｈ ａｌｔｉｔｕｄｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｅｄｅｍａ）及びＨＡＣＥ（Ｈｉｇｈ−ａｌｔｉｔｕｄｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｅｄｅｍａ）に対して予防及び治療の効果を有することが明らかになっている。
【００１９】
さらなる研究によると、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールは、低圧低酸素による脳含水率の上昇を著しく阻止することが分かり、電子顕微鏡形態学及びＨＥ染色病態解析から、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールは、低圧低酸素による血管原性脳浮腫及びニューロン空胞変性損傷（neuronalvacuolar degenerative injury）を軽減することで、高山病を予防又は治療することが明らかになっている。
【００２０】
別の実施形態において、Ｒ１は−ＣＨ(ＣＨ３）(ＣＨ２）３ＣＨ(ＣＨ３）２であり、すなわち、上記化合物はコレスタン−３β，５α，６β−トリオール（化合物Ｉ）である。研究によると、化合物Ｉは同様に、神経保護作用を有する(中国特許第ＺＬ２００８１０１９８７０３．４号）ことが分かる。類似して、我々は、当該化合物が同様に低圧低酸素による血管性浮腫及びニューロン変性損傷を効果的に軽減することで、高山病の予防又は治療に使用されることを発見した。化合物Ｉの構造式は下記に示される。
【００２１】
【化３】
0006277289.tif 000004
【００２２】
同様に類似して、一般式（Ａ）で表れるその他の化合物は、神経保護作用を有する(中国特許第ＺＬ２０１１１００６１２３５．８号）。類似して、我々は、これらの化合物が低圧低酸素による血管性浮腫を効果的に軽減し、脳含水率の上昇を低減し、低圧低酸素によるニューロン変性損傷から保護することで、高山病の予防又は治療に使用することを発見した。
【００２３】
具体的な実施形態において、Ｒ１は−ＣＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ(ＣＨ３）２、又は−ＣＨ(ＣＨ２）３ＣＨ３であり、すなわち、上記化合物は、それぞれ１７−プロピレン−アンドロスタン−３β,５α,６β−トリオール（化合物ＩＩ）、１７−イソプロピル−アンドロスタン−３β,５α,６β−トリオール（化合物ＩＩＩ）、１７−ブチル−アンドロスタン−３β,５α,６β−トリオール（化合物ＩＶ）である。
【００２４】
本発明の別の態様では、低圧低酸素による高山病を治療又は予防する方法であって、必要とする対象に有効量の一般式（Ａ）で表される３β,５α,６β−トリヒドロキシステロイド化合物又はその薬学的に許容される塩を投与することを含む方法を提供する。
【００２５】
【化４】
0006277289.tif 000005
【００２６】
一般式（Ａ）中、Ｒ１はＨ、又は炭素数１〜５の直鎖もしくは分岐アルキル基又は末端アルケニル基である。
【００２７】
一実施形態において、一般式（Ａ）中、Ｒ１はＨであり、すなわち、上記化合物は、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールである。別の実施形態において、Ｒ１は−ＣＨ(ＣＨ３）(ＣＨ２）３ＣＨ(ＣＨ３）２であり、すなわち、上記化合物はコレスタン−３β，５α，６β−トリオール（化合物Ｉ）である。他の実施形態において、Ｒ１は−ＣＨＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ(ＣＨ３）２、又は−ＣＨ(ＣＨ２）３ＣＨ３であり、すなわち、上記化合物は、それぞれ１７−プロピレン−アンドロスタン−３β,５α,６β−トリオール（化合物ＩＩ）、１７−イソプロピル−アンドロスタン−３β,５α,６β−トリオール（化合物ＩＩＩ）、１７−ブチル−アンドロスタン−３β,５α,６β−トリオール（化合物ＩＶ）である。
【００２８】
本発明の実施形態において、上記高山病は、急性高山病、高地脳浮腫、急性低圧低酸素によるニューロン損傷、及び慢性低圧低酸素によるニューロン損傷から選ばれる。
【００２９】
本発明の実施形態において、上記対象は哺乳動物、例えば、人間である。
【００３０】
５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール及びその類似体は、構造上の特徴が３β,５α,６β−トリヒドロキシステロイド系化合物であり、機能上の特徴が神経保護作用を有することである。本発明によれば、上記５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール類似体は、同様に低圧低酸素による高山病を効果的に予防又は治療できることが発見された。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールが急性低圧低酸素になったカニクイザルの神経機能障害を著しく改善することを示す。*：５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール処理群と溶媒対照群との比較、Ｐ＜０．０５。
【図２】図２は、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールが急性低圧低酸素になったカニクイザルの大脳皮質組織の血管性浮腫を軽減することを示す（透過型電子顕微鏡、３９００×）。Ｃｏｎ：平地対照群、Ｈ／Ｒ＋Ｖ：溶媒対照群、Ｈ／Ｒ＋ＹＣ−６：５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール処理群。太い矢印は大脳の前頭皮質組織における毛細血管を指し、細い矢印は血管周囲腔ＶＲＳを指す。
【図３】図３は、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールが低圧低酸素になったカニクイザルの大脳皮質ニューロン変性損傷を軽減することを示す（ＨＥ染色、４００×）。Ｃｏｎ：平地対照群、Ｈ／Ｒ＋Ｖ：溶媒対照群、Ｈ／Ｒ＋ＹＣ−６：５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール処理群。矢印は変性損傷のニューロンを指す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
以下、具体的な実施例により本発明をさらに説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。
【００３３】
＜５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールの新規用途の検証＞
１．動物
実験動物は、６歳〜６．５歳、体重６．８Ｋｇ〜７．５Ｋｇの健康雄カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）１７匹である。実験動物の使用は、動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ：ＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌＡｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）及び実験動物倫理委員会の承認を得て、実験方法は、動物保護、動物福祉及び倫理の原則・規定に従う。
【００３４】
１７匹の雄カニクイザルはランダムに３つのグループに分けられる（表１）。
【００３５】
（表１）実験動物グループ分けの説明
0006277289.tif 000006
【００３６】
２．主要設備及びパラメーター
高地環境模擬低圧室群は、高地環境を模擬する低温低圧実験プラットホームシステムであり、１０，０００ｍ以下の任意の標高、−３０℃以上の任意の温度における低温低圧環境を自動的に制御して模擬することができる。上昇速度が３ｍ／秒（０ｍ〜６，０００ｍ）であり、降下速度が２ｍ／秒（６，０００ｍ〜７，５００ｍ）であり、低圧室内温度が２２℃の恒温に保ち、平均気流速度が１５０ｍ３／ｈである。
【００３７】
３．カニクイザル急性低圧低酸素モデルの作製及び投与
（１）低圧室で７，５００ｍ標高を制御して模擬し、カニクイザルが急性低酸素になった。具体的には、動物舎で飼養するカニクイザルに識別タグを付けた後、それらのカニクイザルを低圧室に移して実験環境に適応させるように１日間飼養した。実験開始後に、低圧室内の気圧を調節することにより、３，０００ｍ、４，５００ｍ、６，０００ｍの標高を模擬して各模擬標高ごとに３０分間保持した後、７，５００ｍの標高を模擬して２４時間処理した。その後、設計の用量及び方法で投与を行った。７，５００ｍで４８時間処理した後、３ｍ／秒の速度で模擬標高を６，０００ｍまで降下した。動物をケタミンで麻酔した後、放血で殺処分し、解剖、サンプリング、固定した。平地対照群のカニクイザルは、評価、麻酔、殺処分、サンプリングするまで、模擬標高３５０ｍの動物舎で飼養される。
【００３８】
（２）５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール処理群の動物に対して、模擬標高３，０００ｍまで上昇して３０分間保持し、続いて、模擬標高４，５００ｍまで上昇して３０分間保持した後、１０ｍｇ／ｋｇの用量でブドウ糖生理食塩水で希釈した５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール１０ｍＬを静脈注射した。また、溶媒対照群に対して、単にブドウ糖生理食塩水１０ｍＬを静脈注射した。
【００３９】
（３）５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール処理群の動物に対して、低圧室において模擬標高６，０００ｍで３０分間保持した後、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール徐放剤を３０ｍｇ／ｋｇの用量で５箇所の骨格筋に筋肉注射した。また、急性高地低酸素モデル群に対して、単にブドウ糖生理食塩水１０ｍＬを静脈注射した。
【００４０】
（４）５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール処理群の動物に対して、低圧室において模擬標高７，５００ｍで２４時間保持した後、１０ｍｇ／ｋｇの用量でブドウ糖生理食塩水で希釈した５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール注射液１０ｍＬを１回で静脈注射し、また、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール徐放剤を３０ｍｇ／ｋｇの用量で５箇所の骨格筋に筋肉注射した。また、急性高地低酸素モデル群に対して、単にブドウ糖生理食塩水１０ｍＬを静脈注射した。
【００４１】
４．検出指標
４．１動物神経機能評価
本実験の特徴に応じて、動物を低圧室において模擬標高７，５００ｍで２４時間保持した後、３ｍ／秒の速度で模擬標高６，０００ｍまで降下した。その後、文献(ZHU Hua, LU Shan, FENG Ming, LI Qin, et al.，A Proved Neurological Deficit Scale of Non-human Primate, CHINESEJOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE, 2011, 21 (9): 58-62）記載の方法に従ってカニクイザルの神経機能評価を行って記録する。グループ分け情况を知らずかつ投与に関与していないトレーニングされた２人の観察者は、神経機能評価を行って記録し、平均点で採点した。
【００４２】
４．２左半球脳含水率の測定
文献(PatirH, Sarada SK, Singh S, Mathew T, Singh B, Bansal A. Quercetin as a prophylacticmeasure against high altitude cerebral edema. Free Radic Biol Med 2012Aug 15;53(4):659-68）に記載の方法に従って脳含水率を測定した。それぞれグループ分け情况を知らずかつ投与に関与していない実験者は、低圧室において模擬標高７，５００ｍで４８時間保持した実験サル（カニクイザル）と、平地対照群実験サルとを麻酔して放血で殺処分した後、サルの脳を迅速に摘出して左半球を切り出した。その左半球の湿重量を秤量した後、６０℃の乾燥器に放置して毎日の固定時間で脳重量を秤量し、脳重量の数値が変化しないときに終点脳重量を記録した。脳含水率＝（左半球湿重量−左半球乾燥重量）／左半球湿重量×１００％。
【００４３】
４．３大脳前頭皮質組織の透過型電子顕微鏡分析
実験サルの大脳前頭皮質組織を摘出した後、１ｍｍ３の脳ブロックに切り出して、２．５％グルタルアルデヒド電子顕微鏡固定液に固定した後、超薄切片を作製し、透過型電子顕微鏡でニューロンの形態及び血管の構造などを観察して分析した。
【００４４】
４．４大脳前頭皮質組織のＨＥ染色分析
実験サルの大脳前頭皮質組織を摘出した後、１ｃｍ３のブロックに切り出して、４％パラホルムアルデヒドに固定した。その後、通常のＨＥ染色ステップに従ってパラフィン包埋を行い、薄片にし、ヘマトキシリン・エオジン染色した後、顕微鏡で観察した。
【００４５】
４．５統計処理
実験結果は平均値±標準偏差で示され、ＳｉｇｍａＰｌｏｔソフトウェアにより統計的分析を行う。Ｐ＜０．０５の場合は、統計学的に有意である。
【００４６】
その結果、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールは、低圧低酸素環境でカニクイザルの神経機能を著しく保護することが分かった。実験サルは、低圧室において模擬標高６，０００ｍの環境下で３０分間保持された後、行動や活動が明らかに減少し、刺激に対する反応も低下する。模擬標高を７，５００ｍに上昇して２４時間保持した後、溶媒対照群のカニクイザルは、明らかな意識低下、行動や活動の大幅な減少を示すとともに、運動、感覚システムの機能障害を示し、神経機能評価の点数が３１．６±４．２である一方、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール処理群の動物は、神経機能評価の点数が２０．５±５．７（Ｐ＜０．０１）であり、神経機能に対する効果的な保護を示した（図１）。
【００４７】
５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールは、低圧低酸素環境におけるカニクイザル脳含水率の増加を著しく減少させる。脳含水率を計算、分析した結果、平地対照群カニクイザルの脳含水率が７６．１５５％である一方、低圧室において模擬標高７，５００ｍで４８時間処理した後、溶媒対照群カニクイザルの脳含水率が７６．７１４％（Ｐ＜０．０５）まで増加することを示した。７，５００ｍに上昇する前に５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールを投与して７，５００ｍで２４時間維持した後、さらに５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールを投与すると、カニクイザルの脳含水率が７６．２８３％（Ｐ＜０．０５）まで低下することから、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールの投与は急性高地低酸素環境におけるカニクイザル脳含水率の増加を抑制できることを示した（表２）。
【００４８】
（表２）５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールの、低圧低酸素環境にお
けるカニクイザル脳含水率への影響
0006277289.tif 000007
【００４９】
#：平地対照群との比較、Ｐ＜０．０５。*：溶媒対照群との比較、Ｐ＜０．０５。
【００５０】
５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールは、低圧低酸素による血管性浮腫を軽減する。透過型電子顕微鏡で観察する場合、平地対照群と比べて、溶媒対照群カニクイザルの大脳前頭皮質の毛細血管外に明かに広くなった血管周囲腔（Ｖｉｒｃｈｏｗ Ｒｏｂｉｎ Ｓｐａｃｅ、ＶＲＳ）が現れ、血管性浮腫液の多量の漏出が発生することを分かった。一方、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールで処理されたカニクイザルの脳組織血管周囲腔が正常になる傾向があるから、明かな血管性浮腫が発生しないことを示した（図２）。
【００５１】
５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールは、低圧低酸素処理によるニューロン変性損傷を軽減する。ＨＥ染色した後に観察した結果、溶媒対照群は、大脳前頭皮質組織の構造が明かに希薄化し、血管周辺に生じた浮腫液が管腔を圧迫するとともに、一部のニューロンの変性、細胞体の濃縮、核凝縮、細胞の空胞変性が発生する（矢印に示す）一方、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール処理群は、顕著な血管性浮腫が示されず、平地対照群に類似したニューロン空胞変性損傷の軽減が見られることから、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールは低圧低酸素環境でニューロンの保護作用を有することが分かった（図３）。
【００５２】
＜医薬組成物＞
本実施例では、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオールの注射剤及び徐放懸濁剤が使用されるが、低圧低酸素による高山病を予防又は治療する医薬品の剤形は、注射剤、徐放懸濁剤、経口カプセル剤(丸剤）、坐剤、皮下埋込み剤（ｓｕｂｄｅｒｍａｌｉｍｐｌａｎｔ）、及びプラスター剤などを含むが、これらに限定されない。
【００５３】
（１）５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール（ＹＣ−６）注射剤の製造
２０％ＨＰ−β−ＣＤ溶液の調製：ＨＰ−β−ＣＤを２０．０ｇ秤量し、生理食塩水８０ｍＬを加え、溶解するまで撹拌した。１００ｍｌになるように生理食塩水を加え、０．２２μｍミリポアフィルターで精密ろ過した後、１５ｍＬの遠心分離管に別々に入れ、４℃で密封保存した。
【００５４】
２ｍｇ／ｍｌＹＣ−６溶液の調製：ＨＰ−β−ＣＤを６．０ｇ秤量し、脱イオン水２４ｍＬを加え、溶解するまで撹拌した。ＹＣ−６を０．０６０ｇ秤量し、上記ＨＰ−β−ＣＤ溶液に加え、溶解するまで撹拌した。得られた溶液に塩化ナトリウム０．２７０ｇを加え、溶解するまで撹拌し、３０ｍＬになるように脱イオン水を添加した。０．２２μｍミリポアフィルターで精密ろ過した後、１．５ｍＬＥｐｐｅｎｄｏｒｆ ｔｕｂｅに別々に入れ、４℃で密封保存した。使用時に１０ｍｌ／ｋｇの液量で投与し、２０ｍｇ／ｋｇの投与量に換算する。
【００５５】
（２）５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール（ＹＣ−６）徐放剤の製造
徐放懸濁剤の処方：
ＹＣ−６          １２．５ｇ、
グリセリン        ３０ｍＬ、
ＨＰ−β−ＣＤ    ５０ｇ、
ＣＭＣ−Ｎａ      ０．４８ｇ、
注射用水          ２５０ｍＬになるように加えた。
【００５６】
製造方法：
０．８％ＣＭＣ−Ｎａ溶液の調製：ＣＭＣ−Ｎａを０．８ｇ秤量し、複数回に分けて撹拌しながら９０℃の水９０ｍＬに加えた。すべてのＣＭＣ−Ｎａが添加され溶解した後、室温まで放置し、１００ｍＬになるように水を加え、均一に撹拌した。３，０００ｒ／ｍｉｎで１５ｍｉｎ遠心分離し、上澄みを取り出した。
【００５７】
４０％ＨＰ−β−ＣＤ溶液の調製：ＨＰ−β−ＣＤを８０ｇ秤量し、約１００ｍＬ水に加え、溶解するまで撹拌し、２００ｍＬになるように水を添加した。
【００５８】
ＹＣ−６を約１２．５ｇ秤量し、乳鉢で均一な細粉に研磨した。さらに、グリセリン３０ｍＬを加え、細かいペースト状の乳白色潤滑液になるまで均一に研磨した。得られた乳白色潤滑液に４０％ＨＰ−β−ＣＤ水溶液１２５ｍＬを少しずつ研磨しながら添加した。過剰な泡の発生を防止するように０．８％ＣＭＣ−Ｎａ６０ｍＬを研磨しながら添加した。得られた研磨物をメスフラスコに移し、２５０ｍＬになるように注射用水を加え、均一になるまで振盪した。
【００５９】
＜５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール類似体の新規用途の検証＞
ＹＣ−６の代わりに上記化合物Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶを使用して、同じ条件で上記カニクイザル急性低圧低酸素モデルの実験を繰り返した。その結果、化合物ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶで処理されたカニクイザルは、同様に、神経機能の効果的な保護が得られ、脳含水率の増加が抑制され、明かな血管性浮腫が発生せず、顕著な血管性浮腫が見られないことを示した。これにより、５α−アンドロスタン−３β，５，６β−トリオール類似体、特に化合物Ｉ及び一般式（Ａ）を有する化合物（特に化合物ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ）は、同様に低圧低酸素による高山病を効果的に予防又は治療できることが分かった。
【００６０】
以上の説明は、本発明の好適な実施形態に過ぎず、本発明の保護範囲を限定するものではない。本発明の特許請求の範囲を逸脱しない範囲において、当業者は、本発明の開示内容に基づいて改良、修正を行うことができる。
【図１】
0006277289.tif 000009
【図２】
0006277289.tif 000010
【図３】
0006277289.tif 000011