(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
クレアチンエステルまたはその誘導体を調製する方法であって、２個のアミノ基が保護されているクレアチニンを、少なくとも１つのアルコール官能基を有する、式（Ｉ）：
Ｒ’−ＯＨ（Ｉ）
［式中、Ｒ’は、少なくとも４個の炭素原子を含有する炭化水素ラジカルを表す］
の分子と反応させることからなる少なくとも１つのステップを含み、
クレアチンエステルの誘導体が、メチルグアニジニル基の窒素原子に結合する水素原子のうち少なくとも１個がカルボン酸基（−ＣＯＯＨ）によって置換されているクレアチンエステルであり、
２個のアミノ基が保護されているクレアチニンが、２個の窒素原子を置換する２個の水素原子が同一または異なる２つの保護基によって置換されているクレアチニンである、方法。
【請求項２】
ラジカルＲ’が、４〜３０個の炭素原子を有するアルキルラジカル、４〜３０個の炭素原子を有するアルケニルラジカルおよび６〜３０個の炭素原子を有するアリールラジカルからなる群において選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ラジカルＲ’が、以下の式（ＶＩＩＩ）：
−ＣＨ２−Ｒ’１（ＶＩＩＩ）
［式中、Ｒ’１は、少なくとも３個の炭素原子を含有する炭化水素基である］
によって表される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ラジカルＲ’が、置換または非置換グルコシルラジカルであり、
置換グルコシルラジカルが、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチルおよびニトロから選択される１つまたは複数の置換基で置換されたグルコシルラジカルである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
以下からなる連続ステップを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
ａ）クレアチニンを保護基を導入する試薬と反応させて、２個のアミノ基が保護されているクレアチニンを得るステップ、
ｂ）ステップ（ａ）から得られた２個のアミノ基が保護されているクレアチニンを、少なくとも１つのアルコール官能基を有する、式（Ｉ）の分子と反応させて、２個のアミノ基が保護されているクレアチンエステルを得るステップと、
ｃ）ステップ（ｂ）で得られた２個のアミノ基が保護されているクレアチンエステルを脱保護して、前記クレアチンエステルまたはその誘導体を得るステップ。
【請求項６】
前記保護基を導入する試薬が、式（ＸＶ）：
Ｃｌ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ４（ＸＶ）
［式中、ラジカルＲ４は、炭化水素基を表す］
である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ステップ（ａ）で提供されるクレアチニンおよび保護基を導入する試薬を含有する溶液中の溶媒が、ジクロロメタン（ＤＣＭ）である、請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
ステップ（ａ）で提供されるクレアチニンおよび保護基を導入する試薬を含有する溶液中の溶媒が、無水ＤＣＭである、請求項５から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ステップ（ａ）で提供されるクレアチニンおよび保護基を導入する試薬を含有する溶液が、ヒューニッヒ塩基またはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＰＡ）を含有する、請求項５から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ステップ（ｂ）で、２個のアミノ基が保護されているクレアチニンの１当量に対して、当量で表される少なくとも１つのアルコール官能基を有する、式（Ｉ）の分子の量が、１から１５の間からなる、請求項５から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（ｂ）で、２個のアミノ基が保護されているクレアチニンの１当量に対して、当量で表される少なくとも１つのアルコール官能基を有する、式（Ｉ）の分子の量が、１から１０の間からなる、請求項５から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ステップ（ｂ）が、１〜２０時間の間実施される、請求項５から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ステップ（ｂ）が、２〜１６時間の間実施される、請求項５から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ステップ（ｂ）が、２〜１０時間の間実施される、請求項５から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ステップ（ｂ）が、６０から１００℃の間からなる温度で実施される、請求項５から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ステップ（ｂ）が、７０から９０℃の間からなる温度で実施される、請求項５から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ステップ（ｂ）が、およそ８０℃（すなわち、８０℃±５℃）で実施される、請求項５から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）を有する化合物またはその塩。
：
（ＮＨ２）−Ｃ（ＮＨ）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＯＯＲ’（ＩＩＩ）または
（ＮＲ２Ｒ３）−Ｃ（ＮＲ１）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＯＯＲ’（ＩＶ）
［式中、
−同一または異なるラジカルＲ１、Ｒ２およびＲ３は、水素原子またはカルボン酸基を表し、ラジカルＲ１、Ｒ２およびＲ３の中の少なくとも１つは、カルボン酸基であり、
−ラジカルＲ’は、置換または非置換グルコシルラジカルであり、置換グルコシルラジカルが、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチルおよびニトロから選択される１つまたは複数の置換基で置換されたグルコシルラジカルである］
【請求項１９】
許容されるビヒクル中に、請求項１８に記載の少なくとも１種の化合物を含む組成物であって、食品添加物または栄養補助剤である組成物。
【請求項２０】
許容される医薬ビヒクル中に、請求項１８に記載の少なくとも１種の化合物を含む医薬組成物、診断用組成物またはイメージング組成物。
【請求項２１】
医学において使用するための請求項１８記載の化合物。
【請求項２２】
パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、神経筋障害、低酸素症、卒中などの虚血性脳疾患、心疾患、筋ジストロフィー、皮膚障害および炎症からなる群において選択される少なくとも１種の疾患、障害または症状の治療または予防のための、請求項１８記載の化合物。
【請求項２３】
脳クレアチン欠乏性輸送体疾患を治療するための、請求項１８記載の化合物。
【請求項２４】
医学において使用するための請求項２０に記載の組成物。
【請求項２５】
パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、神経筋障害、低酸素症、卒中などの虚血性脳疾患、心疾患、筋ジストロフィー、皮膚障害および炎症からなる群において選択される少なくとも１種の疾患、障害または症状の治療または予防のための、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２６】
脳クレアチン欠乏性輸送体疾患を治療するための、請求項２０に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クレアチン誘導体のドメインおよび、とりわけ、クレアチン脂肪エステルに属する。
【０００２】
より詳しくは、本発明は、アルコール官能基を有する分子を使用して、ジ保護クレアチニンで開環ステップを実施することによってクレアチン脂肪エステルを調製する（または製造する）方法に関する。
【０００３】
本発明はまた、そのように調製された特定のクレアチン脂肪エステルおよび研究、治療、イメージングまたは診断におけるこれらの新規クレアチン脂肪エステルの種々の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
クレアチンは、ほとんどの脊椎動物において肝臓および腎臓によって天然に産生される内因性栄養素である。クレアチンの使用は、筋肉量を増大し、筋肉の能力を増強するための栄養補助剤としての使用、ならびに限定するものではないが、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、種々の神経筋障害、低酸素症および卒中などの虚血性脳疾患、心疾患、種々の筋ジストロフィー［１］および種々の皮膚障害［２］などの種々の障害の治療における新たな適用における使用を含め多数ある。クレアチンはまた、抗炎症薬［３］としても使用され得る。とりわけ、クレアチンの局所投与は、皮膚を通る吸収によって達成され得る［４］。
【０００５】
通常、クレアチンは、特定の受容体によって筋肉細胞中に取り込まれ、クレアチンキナーゼによってホスホクレアチンに変換される。骨格筋および心筋を含めた筋肉細胞は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）のアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）への変換から放出される細胞エネルギーを利用することによって機能する。筋肉細胞中のホスホクレアチンの量は、筋肉が活性から回復し、ＡＴＰを再生するのにかかる時間量を左右する。ホスホクレアチンは、ＡＴＰの再生および筋肉の持続的使用に必要なリン酸の迅速に利用できる供給源である。例えば、筋肉を伸長および収縮するために使用されるエネルギーは、ＡＴＰによって供給される。ＡＴＰは、筋肉を収縮するために必要なエネルギーを放出するためにリン酸ラジカルを切断することによって筋肉中で代謝される。アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）は、この代謝の副生成物として形成される。
【０００６】
ＡＴＰの最も一般的な供給源は、グリコーゲンおよびクレアチンリン酸からである。クレアチンリン酸は、グリコーゲンを使用して通常達成されるものよりも速い速度でＡＴＰを再合成できるので、リン酸の容易な供給源として好都合である。したがって、筋肉中のクレアチンの量を増大することが、ホスホクレアチンの筋肉貯蔵を増大し、筋肉の能力を増大し、筋肉量を増大すると証明されている。
【０００７】
しかし、クレアチン自体は、水溶液に難溶性である（約１０〜１５ｍｇ／ｍｌ）。さらに、クレアチンは、胃腸（ＧＩ）管から十分に吸収されない。実際、クレアチンは、ＧＩ管から１４％以下の吸収率しか有さないと推定されている。クレアチンはまた、幾分かは、（ｉ）低い親油性、従って、不十分な膜透過性および（ｉｉ）胃の酸性環境下でのクレアチニンへの迅速な変換のために、低い経口バイオアベイラビリティを有する［５］。したがって、現在の製品は、有効であるために、多量の、通常、５グラム以上のクレアチンの投与を必要とするが、これは、膨満感、胃腸（ＧＩ）障害、下痢などのような副作用を引き起こす。
【０００８】
クレアチンの代謝の欠陥として、その生合成の酵素の欠陥（劣性常染色体伝達のＡＧＡＴおよびＧＡＭＴの欠陥）およびその脳内輸送の欠陥（Ｘと関連する、遺伝子ＳＬＣ６Ａ８／ＣＴ１）が挙げられる。この疾患の罹患率は、未知病因のすべてのＸ連鎖精神遅滞のおよそ２％である。これらの欠陥は、言語に有病率を有する重度の遅れ、錐体外路症候群、挙動の障害および特定の場合には、てんかんをもたらす。この疾患は、大抵の場合、小児期に現れるが、成人症例が最近報告された。
【０００９】
クレアチンによる治療に対する応答は、クレアチンの合成における欠陥の場合においてのみ都合がよいと思われ、クレアチンの脳内輸送における欠陥の場合にはそうではない。実際、この場合には、その前駆体Ｌ−アルギニンおよびＬ−グリシンと関連する経口投与による２年の治療クレアチンの知見が、脳内クレアチンレベルの真の改善も増大も示さなかった。したがって、これは、血液脳関門（ＢＢＢ）でのクレアチンの機能的輸送体の不在が、大脳機能に影響を及ぼす脳へのクレアチンの侵入を防ぐ臨床的状況である。したがって、この大脳代謝疾患の薬理学的最適化のための新規戦略の良好な定義および評価が、今日非常に必要とされている。
【００１０】
これらの疾患および上記の欠点および副作用は、種々の細胞および生体液中に見られる内因性エステラーゼによってクレアチンに変換されるクレアチンエステルの投与によって避けられ得る［１］。クレアチンエステルは、クレアチンよりも親油性であり、従って、より大きなバイオアベイラビリティを有する。さらに、クレアチンのカルボン酸官能基は、クレアチンエステルにおけるエステル化によってマスクされ、それによって、望まれない生成物クレアチニンの形成が防がれる。
【００１１】
特許および特許出願に記載されるすべてのクレアチン脂肪エステル法は、クレアチンのアルコールとのブレンステッド酸触媒による反応を含む。クレアチンエステルは、塩酸ガス触媒によるクレアチンのアルコールとの反応によって形成され得る［６］。クレアチン脂肪エステルはまた、酸性触媒のその場酸生成による直接合成から形成され得る［７−８］。特許出願［７］は、この合成によって得ることができるいくつかのクレアチンエステルを開示している（段落［００２２］）。これらのクレアチンエステルでは、エステル官能基の酸素原子を置換するヒドロカルビル基は、１〜２５個の炭素原子を含み得る。
【００１２】
その他のクレアチン誘導体が、先行技術において開示されている。クレアチン脂肪酸無水物は、クレアチンの脂肪酸アシルハロゲン化物との直接反応によって調製される［９］。クレアチニルアミドは、クレアチニルアミノ酸を製造するサルコシンペプチドのグアニジニル化によって製造される［１０］。クレアチニンのグアニジル基と脂肪酸の間のアミド結合もまた記載されている［１１］。それにもかかわらず、本発明者らの手では、これらの特許および特許出願に従う脂肪無水物(fatty anhydrides)としての脂肪エステルの調製は、極めて不十分な収率しかもたらさない。これらの方法は、ＥｔＯＨ、ｎＰｒＯＨおよびｎＢｕＯＨなどの低分子量のアルコールによく適応しているが、脂肪、長鎖アルコールの場合には、収率が著しく低下する。
【００１３】
クレアチン脂肪エステルの効率的な製造を可能にするプロセスに対する必要性が存在することは明確である。実際、クレアチン脂肪エステルの効率的な合成は、治療および診断の分野における重大な進歩であろう。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、上記で列挙した技術問題を解決し、上記の必要性に対する解決策を提供する。実際、本発明者らは、４５％の全体的収率を有する、脂肪アルコールを使用するクレアチン脂肪エステルの製造を記載する。このプロセスの効率は、文献においてこれまでに記載されたものよりも高く、既知技術によって調製することが困難であるクレアチン誘導体を得ることを可能にする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
さらに、本発明による合成は安価であり、治療必要性に対してマルチグラムスケールで適用され得る。
【００１６】
次いで、本発明の調製方法は、任意の脂肪アルコールによって実施され得るが、少なくとも１つのアルコール官能基を有する任意の分子、例えば、グルコースによっても実施され得る。
【００１７】
より詳しくは、本発明は、ジ保護クレアチニンを、少なくとも１つのアルコール官能基を有し、式（Ｉ）：
Ｒ’−ＯＨ（Ｉ）
［式中、Ｒ’は、少なくとも４個の炭素原子を含有する炭化水素ラジカルを表す］
の分子と反応させることからなる少なくとも１つのステップを含む、クレアチン脂肪エステルまたはその誘導体を調製する方法に関する。
【００１８】
進行し、続くものでは、クレアチン（２−１（メチルグアニジノ）酢酸）は、以下の式（ＩＩ）によって表される。
【００１９】
【化１】
0006403671.tif 000002
【００２０】
クレアチンはまた、以下の式（ＩＩ’）：
（ＮＨ２）−Ｃ（ＮＨ）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＯＯＨ（ＩＩ’）
によって表され得る。
【００２１】
本発明では、クレアチン脂肪エステルは、式（ＩＩＩ）：
（ＮＨ２）−Ｃ（ＮＨ）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＯＯＲ’（ＩＩＩ）
［式中、Ｒ’は、少なくとも４個の炭素原子を含有する炭化水素ラジカルを表す］
によって表される。
【００２２】
本発明では、クレアチン脂肪エステル誘導体は、メチルグアニジニル基の水素原子のうち少なくとも１個が、カルボン酸基（−ＣＯＯＨ）によって置換されているクレアチン脂肪エステルである。クレアチン誘導体は、以下の式（ＩＶ）：
（ＮＲ２Ｒ３）−Ｃ（ＮＲ１）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＯＯＲ’（ＩＶ）
［式中、ラジカルＲ’は、少なくとも４個の炭素原子を含有する炭化水素ラジカルを表し、同一または異なるラジカルＲ１、Ｒ２およびＲ３は、水素原子またはカルボン酸基を表し、ラジカルＲ１、Ｒ２およびＲ３のうち少なくとも１つは、カルボン酸基である］
によって表されることが有利である。
【００２３】
特に、式（ＩＶ）によって表されるクレアチン誘導体では、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の中で１つのラジカルのみが、カルボン酸基であり、２つのその他のラジカルは、水素原子である。より詳しくは、ラジカルＲ１は、カルボン酸基であり、ラジカルＲ２およびＲ３は、水素原子である。この場合には、クレアチン誘導体は、以下の式（Ｖ）：
（ＮＨ２）−Ｃ（Ｎ（ＣＯＯＨ））−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＯＯＲ’（Ｖ）
［式中、ラジカルＲ’は、少なくとも４個の炭素原子を含有する炭化水素ラジカルを表す」
のものである。
【００２４】
進行し、続くものでは、クレアチニン（２−イミノ−１メチルイミダゾリジン−４−オン）は、以下の式（ＶＩ）によって表される。：
【００２５】
【化２】
0006403671.tif 000003
【００２６】
本発明では、ジ保護クレアチニンは、２個の窒素原子を置換する２個の水素原子が、同一または異なる２つの保護基によって置換されているクレアチニンである。保護は、クレアチニンの第３の窒素原子を置換するメチル基によって保持されないということは明らかである。ジ保護クレアチニンでは、２つの保護基が同一であることが有利である。
【００２７】
当業者に公知の任意の適合する保護基が、本発明に関連して使用され得る。
【００２８】
有利なことに、本発明において実施される保護基は、式（ＶＩＩ）：
−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ４（ＶＩＩ）
［式中、ラジカルＲ４は、炭化水素基を表す］
によって表される。
【００２９】
炭化水素基Ｒ４は、１〜２０個の炭素原子を有するアルキルラジカル、２〜２０個の炭素原子を有するアルケニルラジカル、１〜２０個の炭素原子を有するアルコキシラジカル、６〜２０個の炭素原子を有するアリールラジカルおよび６〜２０個の炭素原子を有するアリールオキシラジカルなどの１〜２０個の炭素原子を有する炭化水素基である。
【００３０】
本発明の範囲内で、別段の指示がない限り、≪１〜２０個の炭素原子を有するアルキル基≫によって、１〜２０個の炭素原子を有する、とりわけ、１〜１５個の炭素原子を有する、特に、１〜１０個の炭素原子を有する、所望により置換されていてもよい、直鎖、分枝または環状（ヘテロ）アルキル基を意味し、ヘテロアルキル基のヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、ＰまたはＳである。
【００３１】
本発明の範囲内で、《２〜２０個の炭素原子を有するアルケニル基≫とは、２〜２０個の炭素原子を有する、とりわけ、２〜１５個の炭素原子を有する、特に、２〜１０個の炭素原子を有する、所望により置換されていてもよい直鎖、分岐または環状（ヘテロ）アルケニル基を意味し、ヘテロアルケニル基のヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、ＰまたはＳである。
【００３２】
本発明の範囲内で、≪１〜２０個の炭素原子を有するアルコキシ基≫とは、先に定義されるような１〜２０個の炭素原子を有するアルキルで置換された酸素原子を意味する。
【００３３】
本発明の範囲内で、≪６〜２０個の炭素原子を有するアリール基≫とは、６〜２０個の炭素原子、とりわけ、６〜１４個の炭素原子、特に、６〜８個の炭素原子を有し、所望により置換されていてもよい、単環式または多環式（ヘテロ）芳香族基を意味し、複素芳香族基のヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、ＰまたはＳである。
【００３４】
本発明の範囲内で、≪６〜２０個の炭素原子を有するアリールオキシ基≫とは、先に定義されたような６〜２０個の炭素原子を有するアリールで置換された酸素原子を意味する。
【００３５】
本発明の範囲内で、≪所望により置換されていてもよい≫とは、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、トリフルオロメチルまたはニトロから選択される１つまたは複数の基で置換され得るラジカルを意味する。
【００３６】
本発明の範囲内で、≪ハロゲン≫とは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。
【００３７】
特に、本発明において実施される保護基Ｒ４は、所望により置換されていてもよいベンゾイル基、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）基およびフルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）基からなる群から選択される。より詳しくは、本発明において実施される保護基は、所望により置換されていてもよいベンゾイル基、とりわけ、ベンゾイル基である。
【００３８】
少なくとも１つのアルコール官能基を有する、式（Ｉ）の分子中に、式（ＩＩＩ）のクレアチン脂肪エステル中に、および式（ＩＶ）または（Ｖ）のクレアチン脂肪エステル誘導体中に存在するラジカルＲ’は、少なくとも４個の炭素原子を含有する炭化水素ラジカルである。ラジカルＲ’は、４〜３０個の炭素原子を有するアルキルラジカル、４〜３０個の炭素原子を有するアルケニルラジカルおよび６〜３０個の炭素原子を有するアリールラジカルからなる群において選択されることが有利である。
【００３９】
本発明の範囲内で、別段の指示がない限り、≪４〜３０個の炭素原子を有するアルキル基≫とは、４〜３０個の炭素原子を有する、とりわけ、４〜２５個の炭素原子、特に、４〜２０個の炭素原子を有する、所望により置換されていてもよい、直鎖、分枝または環状（ヘテロ）アルキル基を意味し、ヘテロアルキル基のヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、ＰまたはＳである。
【００４０】
本発明の範囲内で、≪４〜３０個の炭素原子を有するアルケニル基≫とは、４〜３０個の炭素原子を有する、とりわけ、４〜２５個の炭素原子を有する、特に、４〜２０個の炭素原子を有する、所望により置換されていてもよい、直鎖、分枝または環状（ヘテロ）アルケニル基を意味し、ヘテロアルケニル基のヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、ＰまたはＳである。
【００４１】
本発明の範囲内で、≪６〜３０個の炭素原子を有するアリール基≫とは、６〜３０個の炭素原子、とりわけ、６〜２５個の炭素原子、特に、６〜２０個の炭素原子を有する、所望により置換されていてもよい、単環式または多環式（ヘテロ）芳香族基を意味し、複素芳香族基のヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、ＰまたはＳである。
【００４２】
本発明の第１の特定の実施形態では、少なくとも１つのアルコール官能基を有する、式（Ｉ）の分子中に、式（ＩＩＩ）のクレアチン脂肪エステル中に、および式（ＩＶ）または（Ｖ）のクレアチン脂肪エステル誘導体中に存在するラジカルＲ’は、以下の式（ＶＩＩＩ）：
−ＣＨ２−Ｒ’１（ＶＩＩＩ）
［式中、Ｒ’１は、少なくとも３個の炭素原子を含有する炭化水素ラジカルである］
によって表される。ラジカルＲ’１は、３〜３０個の炭素原子を有するアルキルラジカル、３〜３０個の炭素原子を有するアルケニルラジカルおよび６〜３０個の炭素原子を有するアリールラジカルからなる群において選択されることが有利である。
【００４３】
本発明の範囲内で、別段の指示がない限り、≪３〜３０個の炭素原子を有するアルキル基≫とは、３〜３０個の炭素原子を有する、とりわけ、３〜２５個の炭素原子を有する、特に、３〜２０個の炭素原子を有する、所望により置換されていてもよい、直鎖、分岐または環状（ヘテロ）アルキル基を意味し、ヘテロアルキル基のヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、ＰまたはＳである。
【００４４】
本発明の範囲内で、≪３〜３０個の炭素原子を有するアルケニル基≫とは、３〜３０個の炭素原子を有する、とりわけ、３〜２５個の炭素原子を有する、特に、３〜２０個の炭素原子を有する、所望により置換されていてもよい、直鎖、分岐または環状（ヘテロ）アルケニル基を意味し、ヘテロアルケニル基のヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、ＰまたはＳである。
【００４５】
本発明の第２の特定の実施形態では、少なくとも１つのアルコール官能基を有する、式（Ｉ）の分子中に、式（ＩＩＩ）のクレアチン脂肪エステル中に、および式（ＩＶ）または（Ｖ）のクレアチン脂肪エステル誘導体中に存在するラジカルＲ’は、所望により置換されていてもよいグルコシルラジカルである。
【００４６】
続くものでは、グルコースは、以下のフィッシャーの式（ＩＸ）：
Ｏ＝ＣＨ−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−ＣＨ２ＯＨ（ＩＸ）
によって表され得る。
【００４７】
あるいは、グルコースは、式（Ｘ）によって表され得る。：
【００４８】
【化３】
0006403671.tif 000004
【００４９】
≪グルコシルラジカル≫とは、そのヒドロキシル基の１つの排除によるグルコースに由来する式Ｃ６Ｈ１１Ｏ５のラジカルを意味する。排除されるヒドロキシル基は、５個の炭素原子Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４またはＣ６（炭素命名法は、式（Ｘ）を参照する）のうち１個によって保持され得る。
【００５０】
≪置換されたグルコシルラジカル≫とは、アルキル基、アリール基、アルコキシ基、ハロゲン、シアノ、トリフルオロメチルまたはニトロから選択される１つまたは複数の置換基で置換されたグルコシルラジカルを意味する。
【００５１】
第１の実施形態では、排除されるヒドロキシル基は、炭素原子Ｃ６の１つであり、従って、グルコシルラジカルは、以下の式（ＸＩ）によって表され得る。：
【００５２】
【化４】
0006403671.tif 000005
【００５３】
この第１の実施形態では、置換されたグルコシルラジカルは、以下の式（ＸＩＩ）によって表され得る。：
【００５４】
【化５】
0006403671.tif 000006
【００５５】
［式中、同一または異なるラジカルＲ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、先に定義されるような置換基を表す］
【００５６】
ラジカルＲ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、同一基である、とりわけ、各々がベンジル基を表すことが有利である。
【００５７】
あるいは、ラジカルＲ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は、各々、メチル基またはエチル基などのアルキル基およびベンジル基などのアリール基から選択される基を表す。特に、ラジカルＲ５は、メチル基であり、ラジカルＲ６、Ｒ７およびＲ８は、ベンジル基である。
【００５８】
第２の実施形態では、排除されるヒドロキシル基は、炭素原子Ｃ１のうちの１つであり、従って、グルコシルラジカルは、以下の式（ＸＩＩＩ）によって表され得る。：
【００５９】
【化６】
0006403671.tif 000007
【００６０】
この第２の実施形態では、置換されたグルコシルラジカルは、以下の式（ＸＩＶ）によって表され得る。：
【００６１】
【化７】
0006403671.tif 000008
【００６２】
［式中、同一または異なる、ラジカルＲ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、先に定義されるような置換基を表す］
【００６３】
ラジカルＲ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２が、同一基であり、とりわけ、各々がベンジル基を表すことが有利である。
【００６４】
あるいは、ラジカルＲ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は、各々、メチル基またはエチル基などのアルキル基およびベンジル基などのアリール基から選択される基を表す。
【００６５】
本発明では、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ’）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）および（ＸＩＶ）の化合物は、有利には、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２５、ヨウ素−１２６、ヨウ素−１３３、ヨウ素−１３１、ヨウ素−１２４、インジウム−１１１、インジウム−１１３ｍ、臭素−７７、臭素−７６、ガリウム−６７、ガリウム−６８、ルテニウム−９５、ルテニウム−９７、テクネチウム−９９ｍ、フッ素−１９、フッ素−１８、炭素−１３、炭素−１１、窒素−１５、窒素−１３、酸素−１７、酸素−１５、酸素−１４、スカンジウム−４７、テルル−１２２ｍ、ツリウム−１６５、イットリウム−１９９、銅−６４、銅−６２、ガドリニウム(gadolidium)−６８およびルビジウム−８２から選択される１種または複数の放射性同位元素を示し得る。
【００６６】
本発明によるクレアチン脂肪エステルまたはその誘導体を調製する方法は、以下の
ａ）先に定義されるように、クレアチニンを保護物質と反応させて、ジ保護クレアチニンを得るステップと、
ｂ）ステップ（ａ）から得られたジ保護クレアチニンを、先に定義されるような少なくとも１つのアルコール官能基を有する、式（Ｉ）の分子と反応させて、ジ保護クレアチン脂肪エステルを得るステップと、
ｃ）ステップ（ｂ）で得られたジ保護クレアチン脂肪エステルまたはその誘導体を脱保護して、先に定義されるような前記クレアチン脂肪エステルまたはその誘導体を得るステップと
からなる連続ステップを含むことが有利である。
【００６７】
本発明による調製方法のステップ（ａ）は、クレアチニンのグアニジン基を保護するステップからなる。
【００６８】
この保護は、当業者に公知の任意の保護法によって実施され得る。後者は、クレアチニンに導入される保護基に応じて、最も適当な保護物質および実験条件を選択する方法を承知するであろう。
【００６９】
すでに説明したように、クレアチニンのグアニジン基を保護する基は、式（ＶＩ）のものであることが有利である。これらの条件では、ステップ（ａ）は、クレアチニンを、これまでに定義されたような保護基を生成可能である保護物質と接触させて、ジ保護クレアチニンを得るステップからなる。このような保護物質は、式（ＸＶ）：
Ｃｌ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ４（ＸＶ）
［式中、ラジカルＲ４は、これまでに定義されるような炭化水素基を表す］
のものであることが有利である。
【００７０】
ステップ（ａ）は、当業者に公知の任意の保護法によって実施され得る。後者は、使用される保護物質に応じて、最も適当な保護の方法を選択する方法を承知するであろう。
【００７１】
例えば、このような保護物質が式（ＸＶ）のものである場合には、クレアチニンおよびこの保護物質を含有する溶液中の溶媒は、通常、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、とりわけ、無水ＤＣＭである。この溶液はまた、ジ保護クレアチニンの形成を促進できる任意の化学物質も含有できる。例えば、このような促進性化学物質は、ヒューニッヒ塩基またはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＰＡ）であり得る。クレアチニンの１当量に対して、実施される溶液は、１．５から７当量の間、とりわけ、２から４当量の間の保護物質を含有できる。同様に、クレアチニンの１当量に対して、実施される溶液は、１．５から７当量の間、とりわけ、２から４当量の間のＤＩＥＰＡを含有できる。当量で表される保護物質の、およびＤＩＥＰＡの量は、実施される溶液中で同一であることが有利である。
【００７２】
ステップ（ａ）は、不活性雰囲気下で、例えば、窒素下で実施され得る。
【００７３】
本発明による方法のステップ（ａ）の間に実施される溶液は、クレアチニンおよび保護物質が一緒に反応するために撹拌され得る。この目的のために、撹拌を可能にする任意の機械技術が使用され得る。このような技術の例として、手作業での撹拌、超音波を用いる処置、機械的撹拌またはこのような技術の組合せが挙げられ得る。これらの技術は、マグネチックスターラの、および磁化バーまたは超音波浴の、または棒、羽根、プロペラなどを有する機械的撹拌機の使用を必要とし得る。この撹拌は、０から１０℃の間、とりわけ、２から６℃の間からなる温度で１分から１時間、とりわけ、１５から４５分持続し、８から４０℃、とりわけ、１２から３０℃の間、特に、室温（ＲＴ）（すなわち、２０℃±４℃）で６から１８時間の間、とりわけ、１０から１５時間の間継続できる。
【００７４】
ステップ（ａ）後に得られたジ保護クレアチニンは容易に精製される。実際、ひとたび、本発明の方法のステップ（ａ）が達成されると、このように得られたジ保護クレアチニンは、当業者に公知の任意の精製技術によってステップ（ｂ）の前に精製され得る。限定されない例として、クロマトグラフィー、フラッシュクロマトグラフィー、シリカゲルでの、とりわけ、ヘプタン／酢酸エチル勾配を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー、半分取ＨＰＬＣなどが言及され得る。
【００７５】
本発明の方法では、ステップ（ｂ）は、ジ保護クレアチン脂肪エステルを製造することからなり、これは、ジ保護クレアチニンを、先に定義されるような少なくとも１つのアルコール官能基を有する、式（Ｉ）の分子と反応させることによって実施される。反応は、ジ保護クレアチニンへの式（Ｉ）の分子の求核付加からなる。
【００７６】
特定の実施形態では、ステップ（ｂ）の間に実施される溶媒溶液は、少なくとも１つのアルコール官能基を有する、式（Ｉ）の分子である。ステップ（ｂ）は、溶媒を伴わずに実施されるということもあるが、これは、少なくとも１つのアルコール官能基を有する、式（Ｉ）の分子以外の任意のその他の溶媒を伴わないことを意味する。
【００７７】
あるいは、さらなる溶媒が、ジ保護クレアチニンおよび少なくとも１つのアルコール官能基を有する、式（Ｉ）の分子を含有する溶液に加え得る。使用可能なさらなる溶媒の例については、トルエンを挙げることができる。
【００７８】
ステップ（ｂ）で実施される溶液において、ジ保護クレアチニンの１当量に対して、当量で表される、少なくとも１つのアルコール官能基を有する、式（Ｉ）の分子の量は、１から１５の間、とりわけ、１から１０の間からなる。本明細書において以下の表５は、少なくとも１つのアルコール官能基を有する、式（Ｉ）の種々の分子および本発明のステップ（ｂ）で使用されるその量を示す。
【００７９】
ステップ（ｂ）は、１から２０時間の間、とりわけ、２から１６時間の間、特に、２から１０時間の間実施される。通常、約３時間（すなわち、３時間±３０分）、約４時間（すなわち、４時間±３０分）、約５時間（すなわち、５時間±３０分）または約６時間（すなわち、６時間±１時間）の間実施され得る。このステップ（ｂ）は、大気圧下、６０から１００℃、とりわけ、７０から９０℃の間、特に、およそ８０℃（すなわち、８０℃±５℃）からなる温度で実施される。
【００８０】
ひとたび、本発明の方法のステップ（ｂ）が達成されると、このように得られたジ保護クレアチンエステルは、当業者に公知の任意の精製技術によってステップ（ｂ）の前に精製され得る。限定されない例として、クロマトグラフィー、フラッシュクロマトグラフィー、シリカゲルでの、とりわけ、ヘプタン／酢酸エチル勾配を用いるシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー、半分取ＨＰＬＣなどが言及され得る。
【００８１】
ジ保護クレアチン脂肪エステルの構造および純度は、シリカゲルでの精製後に、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、特に、１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲ、赤外分光法（ＩＲ分光法）および／または融点決定によって決定される。
【００８２】
脱保護ステップ（ｃ）は、ステップ（ｂ）において得られたジ保護クレアチン脂肪エステルから、式（ＩＩＩ）のクレアチン脂肪エステルに、または式（ＩＶ）もしくは（Ｖ）のクレアチン脂肪エステル誘導体にするために実施される。
【００８３】
ジ保護クレアチン脂肪エステルのアミン官能基の保護基の排除、すなわち、脱保護は、当業者に公知の任意の脱保護法によって実施され得る。後者は、使用される保護基に応じて、最も適当な脱保護法を選択する方法を承知するであろう。
【００８４】
保護基が式（ＶＩＩ）の化合物である場合には、ステップ（ｃ）は、アルミナまたは木炭上に担持されたパラジウムの存在下で水素によって達成されることが有利である。この反応は、ジクロロエタン（ＤＣＥ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、アセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ）またはＤＣＭおよび低級アルコール混合物から選択される溶媒中で実施されることが有利である。「低級アルコール」とは、本発明の関連では、１〜３個の炭素原子を有する脂肪族アルコール、例えば、メタノール、エタノールおよびプロパノールを意味する。より詳しくは、脱保護ステップ（ｃ）において溶媒として使用されるＤＣＭ／低級アルコールの混合物は、ＤＣＭ／メタノール混合物である。
【００８５】
この脱保護ステップ（ｃ）は、１〜６時間の間、とりわけ、２〜４時間の間、特に、約３時間（すなわち、３時間±３０分）実施される。この脱保護ステップ（ｃ）はまた、大気圧下、８から４０℃、とりわけ、１２から３０℃の間からなる温度、特に、室温（ＲＴ）（すなわち、２０℃±４℃）で実施される。
【００８６】
特定の実施形態では、脱保護ステップ（ｃ）は、第１の脱保護ステップと同一または異なる条件において少なくとも１回反復され得る。第１のステップ（ｃ）を実施した後にモノ保護クレアチン脂肪エステルが得られる場合には、このような反復が必要であり得る。
【００８７】
本発明の特定の実施形態に従ってクレアチンエステルを調製するために実施される化学反応が、スキーム１に表わされている。
【００８８】
【化８】
0006403671.tif 000009
【００８９】
本発明はまた、本発明の方法によって、より詳しくは、式Ｒ’−ＯＨのアルコールがグルコースまたは置換グルコースである方法によって調製され得る化合物に関する。
【００９０】
言い換えれば、本発明の化合物は、式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）または（Ｖ）：
（ＮＨ２）−Ｃ（ＮＨ）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＯＯＲ’（ＩＩＩ）、
（ＮＲ２Ｒ３）−Ｃ（ＮＲ１）−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＯＯＲ’（ＩＶ）または
（ＮＨ２）−Ｃ（Ｎ（ＣＯＯＨ））−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＯＯＲ’（Ｖ）
［式中、
−同一または異なるラジカルＲ１、Ｒ２およびＲ３は、水素原子またはカルボン酸基を表し、ラジカルＲ１、Ｒ２およびＲ３の中の少なくとも１つは、カルボン酸基であり、
−ラジカルＲ’は、所望により置換されていてもよいグルコシルラジカルである］
の化合物またはその塩である。
【００９１】
ラジカルＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ’のすべての異なる実施形態は、本発明による化合物に適用する。
【００９２】
本発明の関連において、「塩」とは、酸付加塩および塩基付加塩を指す。このような塩は、従来手段によって、例えば、任意選択で、塩が不溶性である溶媒中での、または媒体中での、遊離酸の形態または遊離塩基の形態の本発明の化合物の、１または数当量の適当な酸または塩基との反応によって、次いで、従来技術を使用することによって（例えば、真空において、または凍結乾燥することによって）前記溶媒または前記媒体を抽出することによって形成され得る。塩はまた、塩の形態の本発明の化合物の対イオンを、別の対イオンと置換することによって、例えば、適当なイオン交換樹脂を使用することによって調製され得る。
【００９３】
特に、ヒトまたは動物の身体に投与されるという目的では、本発明の化合物の塩は、医薬上許容される塩であることが有利である。
【００９４】
特に、本発明の化合物が、塩の形態である場合には、後者は、アルカリ金属の塩、特に、ナトリウムもしくはカリウム塩またはアルカリ土類金属の塩、特に、マグネシウムもしくはカルシウムまたはさらに有機アミドを有する、より詳しくは、アルギニンもしくはリシンなどのアミノ酸を有する塩である。
【００９５】
アミン官能基を有する本発明の化合物が、このアミンの塩の形態である場合には、塩は、例えば、塩酸、硫酸または臭化水素酸などの無機酸の塩または例えば、酢酸、ギ酸、トリフリン酸、酒石酸(tartatic acid)、シュウ酸、クエン酸、トリフルオロ酢酸またはメタンスルホン酸などの有機塩の形態である。
【００９６】
さらに、本発明は、適当なビヒクル中に、先に開示されるものなどの本発明の少なくとも１種の化合物を含む組成物に関する。ビヒクルは、組成物用途に応じて変わり、当業者は、発明的努力を伴わずに最も適当なビヒクルを使用できる。
【００９７】
すでに説明したように、クレアチンは、生物を強化し、筋肉量を増大し、筋肉の能力を増強するための栄養補助剤として使用され得る。実際、クレアチン補充は、例えば、骨格筋または心筋などの筋肉に対して正の生理学的効果をもたらし得る。結果として、本発明による組成物は、食品添加物または栄養補助剤であり得る。本発明の組成物は、動物にとって、または例えば、スポーツマン（ウーマン）、高齢者、小児、１０代の若者または菜食主義者などのヒトにとって有用であり得る。
【００９８】
このような用途に関するさらなる情報は、［１０−１１］に見い出され得る。
【００９９】
本発明は、さらに、適当な医薬ビヒクル中に、これまでに開示されたものなどの本発明の少なくとも１種の化合物を含む医薬組成物、診断用組成物またはイメージング組成物に関する。
【０１００】
本発明に関連して、「許容される医薬ビヒクル」とは、当業者に公知の１種または数種の従来の医薬添加物、賦形剤、バッファー、希釈剤および／または補助剤を指す。
【０１０１】
本発明のクレアチン脂肪エステルおよびその誘導体は、脳クレアチン欠乏性輸送体疾患治療のための新規療法を提供する。さらに、いくつかのその他の病理が、これらの有望な予備結果の観点の下で調査され得る。
【０１０２】
溶質大キャリヤー輸送体（Ｓｏｌｕｔｅ  Ｌａｒｇｅ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）（ＳＬＣ６Ａ８）の関与を伴わずにｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでＢＢＢを通過できるこのような誘導体の使用も開示される。その結果、クレアチン欠乏性輸送体を有する患者においてＢＢＢによって正常に排除されるクレアチンが、脳内皮細胞内のクレアチン脂肪エステルの切断(clivage)後に製造され、脳柔組織中に放出され得る。また、ｉｎ  ｖｉｖｏで使用可能である可能性がある、クレアチン脂肪エステルの可能性あるベクター化も開示される。
【０１０３】
したがって、本発明の化合物および組成物は、医薬において、とりわけ、治療用医薬において、医学的診断において、および陽電子放射型断層撮影（ＰＥＴ）などによる医学的イメージングにおいて使用され得る。実際、クレアチン脂肪エステルまたはその誘導体のクレアチン部分および／または脂肪エステル部分が、先に開示されたような放射性同位元素を提示できるという事実は、診断において、またイメージングにおいて有用であり得る。例えば、本発明の化合物中に存在するグルコシルラジカルは、医学的イメージングにおいて、より詳しくは、ＰＥＴにおいて使用するために、１８Ｆのような少なくとも１種の放射性同位元素によって置換され得る。
【０１０４】
本発明の化合物および医療組成物は、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、神経筋障害、低酸素症、卒中などの虚血性脳疾患、心疾患、筋ジストロフィー、皮膚障害および炎症からなる群において選択される少なくとも１種の疾患、障害または状態の治療または予防のために使用され得る。
【０１０５】
本発明の化合物および医療組成物は、脳クレアチン欠乏性輸送体疾患の治療のために使用され得る。
【０１０６】
言い換えれば、本発明は、本発明の化合物の、または本発明の組成物の治療量を必要とする対象に投与することからなる、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、神経筋障害、低酸素症、卒中などの虚血性脳疾患、心疾患、筋ジストロフィー、皮膚障害および炎症からなる群において選択される、少なくとも１種の疾患、障害または状態を治療または予防するための方法に関する。
【０１０７】
本発明はまた、本発明の化合物の、または本発明の組成物の治療量を必要とする対象に投与することからなる、脳クレアチン欠乏性輸送体疾患を治療するための方法に関する。
【０１０８】
このような治療法に関するさらなる情報は、［１−４］に見い出され得る。
【０１０９】
本発明のその他の特徴および利点は、添付の図を参照して、例示として示され、制限ではない以下の実施例を読んだ時点で当業者にさらに明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【０１１０】
【図１】ＢＢＢを通るクレアチン脂肪エステルＣ１８の転位置を示す図である。
【図２】Ｃ１８のクレアチンへの変換を示す図である。
【図３】ＢＢＢを通るクレアチン脂肪エステルＣ２の転位置を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０１１１】
すべての試薬は、Ａｌｄｒｉｃｈ（シュテインハイム、ドイツ国）から購入した。ＴＬＣは、特定の溶媒系を使用してＭｅｒｃｋ  Ｆ２５４プレートで実施した。分析および分取ＬＣ／ＭＳをＷａｔｅｒｓ  Ａｕｔｏｐｕｒｉｆｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＳＣＢＭ）で実施した。標的の生物学的評価は、ｙｙｙ（ＳＰＩ）で実施した。１Ｈおよび１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ分光計で４００ＭＨｚで記録した。
【０１１２】
Ｉ．比較予備結果
Ｉ．１．クレアチンからのエステルの直接合成。
本発明者らは、［７−８］に開示された手順を用いてクレアチンステアロイルエステルを調製しようとした。結果は、表１に示されている。
【０１１３】
【表１】
0006403671.tif 000010
【０１１４】
Ｉ．２．クレアチンの保護
本発明者らは、保護されたクレアチンを使用することによってクレアチン脂肪エステルを調製しようとした。［１２−１３］に従ってクレアチン上で２つの保護基（ＰＧ）を発生させた（表２参照のこと）（スキーム２を参照のこと）。
【０１１５】
【化９】
0006403671.tif 000011
【０１１６】
【表２】
0006403671.tif 000012
【０１１７】
クレアチンを用いて、モノ保護誘導体のみが製造された。残念なことに(Unfortunatly)この化合物は、合成の次のステップに対して反応性がなかった。さらに、本発明者らは、メチレンへのクロロアセチルの付加によって得られた、有用ではない新規化合物を単離した。
【０１１８】
さらに、ＦＭＯＣ基を用いる合成は、反応媒体中での自己環化後にジ保護クレアチニンをとなった。
【０１１９】
Ｉ．３．モノ保護されたクレアチンからのエステルの合成。
プロトコールおよび収率が、表３にまとめられている。
【０１２０】
【表３】
0006403671.tif 000013
【０１２１】
保護されたクレアチンでのトリクロロベンゾイルクロリドによるクレアチンの酸性官能基の活性化を用いる場合でさえ、極めて不十分な収率しか得られなかった。
【０１２２】
ＩＩ．本発明によるクレアチンステアロイルエステルの合成
ＩＩ．１．一般的手順
この合成は、ステアロイルアルコールによってジ保護クレアチニン、（Ｚ２）−クレアチニンの環を開くことと、それに続く、水素／Ｐｄ下での脱保護によって実施される。本明細書において以下、スキーム３は、クレアチンステアロイルエステル調製の合成順序を示す：
【０１２３】
【化１０】
0006403671.tif 000014
【０１２４】
Ａ．（Ｚ２）−クレアチニン
窒素下で、１００ｍｌの無水ジクロロメタン中、クレアチニン（１．１２４ｇ−１当量）を有するジイソプロピルエチルアミン（５．２ｍｌ−３当量）の溶液に、クロロギ酸ベンゾイル（４．２ｍｌ−３当量）を加えた。クロロギ酸ベンゾイルは、氷浴中に滴加する。混合物を、氷浴中で３０分および室温で一晩、撹拌しながら反応させる。
反応は、ＣＣＭ（シリカ、ヘプタン／酢酸エチル）およびＬＣ／ＭＳによって管理する。反応媒体を、ジクロロメタンおよび水の添加によって抽出する。ジクロロメタン相を、水で３回洗浄し、硫酸マグネシウムによって乾燥した。
ジクロロメタン溶液を、真空下での蒸発によって濃縮し、結晶化させる。３．２５ｇの粗（Ｚ２）−クレアチニンが得られる（８７％）。（Ｚ２）−クレアチニンは、構造の決定のためにシリカゲル（ヘプタン／酢酸エチル勾配）上で精製され得る。粗生成物を使用して、エステル化ステップを実施する。
【０１２５】
Ｂ．（Ｚ２）−クレアチンステアロイルエステル
８０℃に加熱した試験管中でステアロイルアルコール(alcool)（０．５ｇ−２当量）を、１当量の粗（Ｚ２）−クレアチニンと５時間反応させる。反応を、ＣＣＭ（シリカ、ヘプタン／酢酸エチル）およびＬＣ／ＭＳによってモニタリングする。
粗（Ｚ２）−クレアチンステアロイルエステルを、シリカゲル（ヘプタン／酢酸エチル勾配）上で精製し、２８６ｍｇの純粋な（Ｚ２）−クレアチンステアロイルエステルを５０％の収率で得る。
【０１２６】
Ｃ．クレアチンステアロイルエステル
純粋な（Ｚ２）−クレアチンステアロイルエステル（１４０ｍｇ）を、窒素下で無水ジクロロメタン／メタノール溶液（６ｍｌ／１２ｍｌ）中に溶解する。Ｐｄ／Ａｌ２Ｏ３  ５％（２０ｍｇ）を加える。反応混合物を、真空下で脱気し、パージされるよう凍結し、真空を水素によって破壊する。水素を用いるパージを３回行う。次いで、媒体を室温にし、激しい撹拌下で反応させる。
【０１２７】
反応を、ＣＣＭ（シリカ、ヘプタン／酢酸エチル）およびＬＣ／ＭＳによってモニタリングする。反応が完了した時点で、一般には、３時間後に、０．５μｍフィルターでの濾過によって、クレアチンステアロイルエステル溶液が得られる。
【０１２８】
クレアチンステアロイルエステル溶液を真空下で蒸発させると、７５ｍｇ（定量的収量）が得られる。
【０１２９】
ＩＩ．２．本発明の方法の変法。
Ａ．クレアチニンの保護。
【０１３０】
【化１１】
0006403671.tif 000015
【０１３１】
【表４】
0006403671.tif 000016
【０１３２】
種々の保護試薬を試験して、保護されたクレアチニンを調製した。結果は、表４に示されている。
【０１３３】
クレアチニンのＢｏｃ２Ｏとの反応は、水性条件下で極めて不十分な収率を示し、無水条件下でのＢｏｃ２Ｏとの反応は、メチレンへのＢｏｃ基の付加によって、３つのＢｏｃ官能基を有する新規の有用ではない化合物をもたらし、４３％の単離収率を有していた。
【０１３４】
幸運にも、クロロギ酸ベンゾイル（ＺＣｌ）を用いる反応によって、ヘキサン中での結晶化後に、８７％の「粗」生成物として使用されるジ保護クレアチニンが得られた。
【０１３５】
Ｂ．ジ保護クレアチニンへのアルコールの求核付加。
アルコール基を有する種々の分子を、ジ保護クレアチニンへの求核付加について試験した。結果は、表５に示されている。
【０１３６】
【表５】
0006403671.tif 000017
【０１３７】
表５では、「Ｃ１８  ｒａｄ」とは、１４Ｃ標識された化合物を意味し、「Ｃ１８  ｉｎｓ」は、不飽和を示すＣ１８脂肪鎖を意味し、「Ｚ３、ＯＭｅ  Ｇｌｕ  Ｃ６−ＯＨ」とは、炭素原子１、２、３および４によって保持される４つのアルコール基のうち３つが、保護されており、一方で、炭素原子６によって保持されるアルコール基は遊離しており、本発明の方法における開環ステップの間に反応するグルコースを意味する。
【０１３８】
アルコールの求核付加は、溶媒としてアルコールを使用し、室温で、メタノール中で自発的に起こる。粗ジ保護物は、おそらくは、酸性不純物が付加を触媒するために、良好な反応性を示した。
【０１３９】
脂肪鎖の長さを増大することは、最高８０℃に加熱しながら反応させることを必要とした。反応時間は約３時間とした。反応時間を増大することは、過剰のアルコールによる１種の保護基の脱保護およびエステル転移反応によって得られる化合物として、所望の化合物を分解して、副次的化合物を提供できる。
【０１４０】
最後に、本発明者らは、８から１８個の間の炭素からなる鎖長を有する脂肪族アルコールの付加について４５％の収率を得た。
【０１４１】
Ｃ．（Ｚ２）クレアチン脂肪エステルの脱保護
Ｚ基の脱保護は、その極めて極性の特徴について周知であるグアニジン官能基の回復につながる。
【０１４２】
アルミナ上のパラジウムは、目的生成物の回収が、より少ない量のメタノールによって触媒を洗浄するステップを必要とするので、木炭上のパラジウムよりも好ましかった。
【０１４３】
クレアチニンは、本発明者らの誘導体の環化の傾向のために副生成物として体系的に得られた。クレアチニンは、逆相カラムで容易に排除される。短い脂肪鎖の脱保護は、自己環化によるクレアチニンの形成が完了し、クレアチンエステルを得ることができなかったために不成功に終わった。
【０１４４】
脱保護に関する結果は、表６に示されている。
【０１４５】
【表６】
0006403671.tif 000018
【０１４６】
本発明者らは、使用される溶媒およびＤＣＭ／メタノールまたはアセトニトリルの割合に応じて、ＬＣ／ＭＳ分取クロマトグラフィーによって単離されるクレアチン脂肪エステル（＋４４）の炭酸塩化形態を製造した。
【０１４７】
不飽和化合物（Ｃ１８  ｉｎｓ）の脱保護によって、飽和類似体が得られた。これらの化合物には、ＴＭＳＩ／ＣＨ３ＣＮを用いる方法が使用されなくてはならない。
【０１４８】
表６では、「０％（モノ）」は、モノ保護されたクレアチン脂肪エステルが得られたことおよび脱保護形態を調製するにはさらなる脱保護ステップが必要であったことを意味する。
【０１４９】
最後に、調製された化合物は、水または生物学的媒体に可溶性ではないか、または難溶性であり、また、有機溶液中では、安定でないか、または不十分にしか安定でない。それらは、固体形態で保存されなければならず、その使用の直前に、生物学的プロトコールを開始した。
【０１５０】
それが、本発明者らが、保護されたグルコースとの反応によって、より親水性のエステルを開発することを決意した理由である。このような化合物では、グルコース部分は、特に、ＢＢＢを通るクレアチン誘導体の輸送に都合がよいリガンドとして作用する。
【０１５１】
ＩＩＩ．ｉｎ−ｖｉｔｒｏ細胞ベースＢＢＢモデルを越えるクレアチン脂肪エステルの転位置。
脂肪エステルの透過性を評価するために使用されるｉｎ−ｖｉｔｒｏ細胞ベースＢＢＢモデルは、グリア細胞および脳内皮細胞の同時培養からなる。
【０１５２】
輸送バッファー（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５．２ｍＭ  ＫＣｌ、２．２ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、６ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、２．８ｍＭ  グルコースおよび５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ）を添加する：側底チャンバー（大脳柔組織に相当する）に１５００μｌおよび頂端部チャンバー（血液に相当する）に５００μｌ。
【０１５３】
脂肪エステルを頂端部コンパートメントに入れる。６０分後、薬物濃度測定のために頂端部および側底チャンバーからアリコートを採取する。ＢＢＢを通過した初期投与量からの薬物のパーセンテージは、以下の通りに算出する：Ｐ（％）＝［（Ｂｆ×１５００）／（Ａ０×５００）］×１００［式中、Ｂｆは、エンドポイントでの側底コンパートメント中の試験化合物の量であり、Ａ０は、時点０での頂端部コンパートメント中の初期量である］。
【０１５４】
クレアチン脂肪エステルとともに６０分インキュベートした後、本発明者らは、脂肪エステルＣ２ではなくＣ１８が、血液脳関門を通る良好な透過性を示すことに気付いた。
【０１５５】
実際、クレアチン脂肪エステルＣ１８の場合には、クレアチンステアロイルエステルの細胞内レベルは、細胞をこの化合物とともにインキュベートした後に脳内皮細胞内で増大した（図１）。とりわけ、クレアチンステアロイルエステルのこのおびただしい増大は、脳内皮細胞内の見かけのクレアチン含量（約７００ｎＭ）ならびに基底コンパートメントにおける見かけのクレアチン含量（約３１ｎＭ）と著しく一致しており（図２）、これは、得られたクレアチンと脳柔組織の細胞（例えば、神経細胞）との可能性ある相互作用を示唆する。
【０１５６】
クレアチン脂肪エステルＣ２の場合には、本発明者らは、脳内皮細胞内またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞ベース血液脳関門モデルの基底コンパートメントにおけるこの化合物の転位置を見出さなかった。本発明者らは、細胞内または脳柔組織コンパートメントにおける見かけのクレアチン含量の証拠を見出さなかった（図３）。
【０１５７】
まとめると、本知見は、クレアチン脂肪エステル間の、ＢＢＢを通る異なる転位置を初めて報告する。要約すると、本発明者らは、クレアチン脂肪エステルの投与後の脳内皮細胞および脳柔組織コンパートメント内のクレアチンを得るための設計分子戦略の有用性の初めての証拠を示す。したがって、クレアチン脂肪エステルは、クレアチン欠乏性輸送体の治療において有用な新規薬物の開発のための有望な候補に相当し得る。
参考文献
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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