(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リスペリドンに結合する抗体又はその結合断片を産生する方法であって、
（ｉ）抗体産生のための非ヒト宿主を選択すること、及び
（ｉｉ）前記宿主に、式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートを接種すること
を含み、前記宿主が、リスペリドンに結合する抗体又はその結合断片を産生する、
前記方法。
【化１】
0006374387.tif 000051
（式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【化２】
0006374387.tif 000052
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり、
ここで、
Ｚは、−Ｎ（Ｒ4）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ヘテロアルキル−からなる群から選択され、
Ｒ4は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基、又は置換若しくは非置換アリール基であり、
Ｙは、有機スペーサ基であり、
Ｇは、担体に結合することができる官能性連結基であり、
ｐは、０又は１であり、
ｒは、１、２、３、４、又は５であり、
ｍは、１、２、３、４、又は５であり、
ｎは、１、２、３、４、又は５である。）
【請求項２】
リスペリドンに結合するモノクローナル抗体を産生することができるハイブリドーマ細胞株を産生する方法であって、
（ｉ）抗体産生のための非ヒト宿主を選択すること、
（ｉｉ）前記宿主に、式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートを接種すること、
（ｉｉｉ）前記接種された宿主由来の細胞株を、連続的に分裂している細胞と融合させて、リスペリドンに結合するモノクローナル抗体を産生することができる融合細胞を作製すること、及び
（ｉｖ）ハイブリドーマ細胞株を得るために、前記融合細胞をクローニングすること
を含む、前記方法。
【化３】
0006374387.tif 000053
（式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【化４】
0006374387.tif 000054
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり、
ここで、
Ｚは、−Ｎ（Ｒ4）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ヘテロアルキル−からなる群から選択され、
Ｒ4は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基、又は置換若しくは非置換アリール基であり、
Ｙは、有機スペーサ基であり、
Ｇは、担体に結合することができる官能性連結基であり、
ｐは、０又は１であり、
ｒは、１、２、３、４、又は５であり、
ｍは、１、２、３、４、又は５であり、
ｎは、１、２、３、４、又は５である。）
【請求項３】
サンプル中のリスペリドンを検出する方法であって、
（ｉ）請求項１に記載の方法を実施してリスペリドンに結合する抗体又はその結合断片を産生し、サンプルを、検出可能なマーカーで標識された該抗体又はその結合断片と接触させることであって、前記標識された抗体又はその結合断片と前記サンプル中に存在するリスペリドンとが、標識された複合体を形成するように、当該接触をさせること、及び
（ｉｉ）前記サンプル中のリスペリドンを検出するために、前記標識された複合体を検出すること
を含む、前記方法。
【請求項４】
サンプル中のリスペリドンを検出するための競合的イムノアッセイ方法であって、
（ｉ）請求項１に記載の方法を実施してリスペリドンに結合する抗体又はその結合断片を産生し、サンプルを、該抗体又はその結合断片と、リスペリドン又はリスペリドンの競合的結合パートナーとに接触させることであって、前記抗体又はその結合断片及び前記リスペリドン又はその競合的結合パートナーのうちの１つが、検出可能なマーカーで標識され、サンプル中のリスペリドンが、前記抗体又はその結合断片への結合に対して、前記リスペリドン又はその競合的結合パートナーと競合するように、当該接触をさせること、及び
（ｉｉ）サンプル中のリスペリドンを検出するために、前記標識を検出すること
を含む、前記方法。
【請求項５】
前記リスペリドン又はその競合的結合パートナーが、前記検出可能なマーカーで標識されたものである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体又はその結合断片が、検出可能なマーカーで標識されたものである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記イムノアッセイが、側方流動アッセイ装置において行われ、前記サンプルが、前記装置に適用される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
リスペリドンに加えて１つ以上の検体の存在を検出することを更に含む、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項９】
前記１つ以上の検体が、リスペリドン以外の抗精神病薬である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
リスペリドン以外の前記抗精神病薬が、パリペリドン、クエチアピン、オランザピン、アリピプラゾール、及びそれらの代謝産物からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記リスペリドンの検出が、処方されたリスペリドン療法の患者の順守の指標である、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項１２】
前記リスペリドンの検出が、患者が経口リスペリドンのレジメンから注入可能な抗精神病薬のレジメンに切り替えられるべきかどうかの判定を補助するために使用される、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項１３】
前記リスペリドンの検出が、有効又は安全な薬物レベルの到達又は維持を確実にするために、経口又は注入可能なリスペリドンの用量レベル又は投薬間隔を増加又は減少させるべきかどうかの判定を補助するために使用される、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項１４】
前記リスペリドンの検出が、最小のｐＫレベルの到達の証拠を提供することにより、リスペリドン療法の開始における補助となるものである、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項１５】
前記リスペリドンの検出が、複数の製剤中又は複数の源からのリスペリドンの生物学的同等性の判定を補助するために使用される、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項１６】
前記リスペリドンの検出が、多剤投与及び潜在的な薬物−薬物相互作用の影響を評価するために使用される、請求項３又は４に記載の方法。
【請求項１７】
前記リスペリドンの検出が、患者が臨床治験から除外されるべきか、又はそれに含まれるべきかの指標であり、かつ臨床治験の投薬要件の順守のその後のモニタリングにおける補助となるものである、請求項３又は４に記載の方法。                                                                 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，６１５号の利益を主張するものである。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、イムノアッセイの分野、具体的には、リスペリドンの検出のためにイムノアッセイに使用することができるリスペリドンに結合する抗体に関する。
【背景技術】
【０００３】
統合失調症は、慢性かつ消耗性の精神障害であり、世界人口の約０．４５〜１％が罹患している（ｖａｎ  Ｏｓ，Ｊ．；Ｋａｐｕｒ，Ｓ．「Ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ」Ｌａｎｃｅｔ  ２００９，３７４，６３５〜６４５）。治療の主な目的は、精神病の症状から持続的寛解を達成し、再発のリスク及び影響を低減し、患者の機能及び全体的な生活の質を向上することである。統合失調症に罹患している多くの患者は、抗精神病薬の投薬により症状の安定を得ることができるにもかかわらず、投薬の順守不足が、連日投与した経口投薬による再発の一般的な理由である。非順守の結果を調査するいくつかの研究（Ａｂｄｅｌ−Ｂａｋｉ，Ａ．；Ｏｕｅｌｌｅｔ−Ｐｌａｍｏｎｄｏｎ，Ｃ．；Ｍａｌｌａ，Ａ．「Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｆｉｒｓｔ−Ｅｐｉｓｏｄｅ  Ｐｓｙｃｈｏｓｉｓ」Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｆｆｅｃｔｉｖｅ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ２０１２，１３８，Ｓ３〜Ｓ１４）は、処方されたように薬物治療を行わない統合失調症に罹患している患者は再発、入院、及び自殺の割合がより高く、死亡率が増加することを示している。統合失調症に罹患している患者の４０〜７５％が連日経口投与のレジメンに従うことが困難であることが推測される（Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｊ．Ａ．；Ｓｔｒｏｕｐ，Ｔ．Ｓ．；ＭｃＥｖｏｙ，Ｊ．Ｐ．；Ｓｗａｒｔｚ，Ｍ．Ｓ．；Ｒｏｓｅｎｈｅｃｋ，Ｒ．Ａ．；Ｐｅｒｋｉｎｓ，Ｄ．Ｏ．；Ｋｅｅｆｅ，Ｒ．Ｓ．Ｅ．；Ｄａｖｉｓ，Ｓ．Ｍ．；Ｄａｖｉｓ，Ｃ．Ｅ．；Ｌｅｂｏｗｉｔｚ，Ｂ．Ｄ．；Ｓｅｖｅｒｅ，Ｊ．；Ｈｓｉａｏ，Ｊ．Ｋ．「Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｐｙｓｃｈｏｔｉｃ  Ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ」Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２００５，３５３（１２），１２０９〜１２２３）。
【０００４】
治療薬物モニタリング（ＴＤＭ）は、治療モニタリング及び治療最適化のための、抗精神病薬を含む薬物の血清又は血漿濃度の定量化である。そのようなモニタリングは、例えば、薬物治療レジメンに従わない、治療用量に達していない、治療用量で反応していない、準最適な忍容性を有する、薬物動態学的な薬物−薬物相互作用を有する、又は不適切な血漿濃度をもたらす異常代謝を有する、患者の識別を可能にする。抗精神病薬を吸収、分配、代謝、及び排出する患者の能力において、考慮すべき個人の変動性がある。そのような差は、併発症、年齢、併用薬、又は遺伝的特徴により生じ得る。異なる薬物製剤はまた、抗精神病薬の代謝にも影響を及ぼし得る。ＴＤＭは、個々の患者に対する用量の最適化を可能にし、治療結果及び機能結果を向上する。ＴＤＭは、処方する医師が、処方した投与量の順守及び有効な血清濃度の達成を確実にすることを更に可能にする。
【０００５】
これまで、抗精神病薬の血清又は血漿濃度のレベルを判定するための方法は、紫外線又は質量分析法検出による液体クロマトグラフィー（ＬＣ）の使用、及びラジオイムノアッセイを伴う（例えば、Ｗｏｅｓｔｅｎｂｏｒｇｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０「Ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｓｏｍｅ  ｒｅｃｅｎｔｌｙ  ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ  ＲＩＡ’ｓ」ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｕｒｖｅｙｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓ  ２０：２４１〜２４６．Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ，Ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  Ａｎｔｉ−ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ  Ａｇｅｎｔｓ、Ｈｅｙｋａｎｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  Ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ：Ａ  Ｓｕｍｍａｒｙ」，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ５５／５，ｓｕｐｐｌ：１３〜１７、Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３「Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｔｉ−ｐｓｙｃｈｏｔｉｃ  ａｇｅｎｔ  ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｒｏｌａｃｔｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ」，Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ  ５４：２５７〜２６８を参照のこと）。ラジオイムノアッセイは、リスペリドン及びパリペリドンのうちの１つ又はその両方を検出する。米国特許第８，０８８，５９４号において、Ｓａｌａｍｏｎｅらは、リスペリドン及びパリペリドンの両方を検出するが、薬理学的に不活性な代謝産物を検出しない抗体を使用した、リスペリドンに対する競合的イムノアッセイを開示する。競合的イムノアッセイに使用される抗体は、特定の免疫原に対して開発されている。ＩＤ  Ｌａｂｓ  Ｉｎｃ．（Ｌｏｎｄｏｎ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）は、別の抗精神病薬であるオランザピンのためのＥＬＩＳＡを市販しており、これもまた、競合形式を使用する。使用説明書は、アッセイがスクリーニングのために設計され、法医学又は研究での使用を意図するが、特に、治療での使用を意図しないことを示す。この説明書は、全ての陽性サンプルがガスクロマトグラフィー／質量分析法（ＧＣ−ＭＳ）で確認されるべきであることを推奨し、使用される抗体がオランザピン及びクロザピンを検出することを示す（ＩＤ  Ｌａｂｓ  Ｉｎｃ．，「Ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓ  Ｆｏｒ  Ｕｓｅ  Ｄａｔａ  Ｓｈｅｅｔ  ＩＤＥＬ−Ｆ０８３」，Ｒｅｖ．Ｄａｔｅ  Ａｕｇ．８，２０１１を参照のこと）。一部のこれらの方法、即ち、ＨＰＬＣ及びＧＣ／ＭＳは、高価かつ労働集約的であり得、一般的に、適切な設備を有する大規模な又は特殊な研究室内でのみ行われる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
抗精神病薬のレベルを判定するための他の方法、特に、処方する医師の診察室内で行うことができ（その結果、個々の患者に対する治療をより迅速に調整することができる）、及びＬＣ若しくはＧＣ／ＭＳ設備を欠いている、又は迅速な試験結果を必要とする他の医療機関において行うことができる方法が必要である。
【０００７】
リスペリドンは、
【０００８】
【化１】
0006374387.tif 000002
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、リスペリドンに結合し、（ｉ）式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体又はその結合断片に関する。
【００１０】
【化２】
0006374387.tif 000003
式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００１１】
【化３】
0006374387.tif 000004
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり、
ここで、
Ｚは、
−Ｎ（Ｒ4）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ヘテロアルキル−からなる群から選択され、
Ｒ4は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基、又は置換若しくは非置換アリール基であり、
Ｙは、有機スペーサ基であり、
Ｇは、担体に結合することができる官能性連結基であり、
ｐは、０又は１であり、
ｒは、１、２、３、４、又は５であり、
ｍは、１、２、３、４、又は５であり、
ｎは、１、２、３、４、又は５である。
【００１２】
本発明の抗体の現在好ましい実施形態は、式ＩＩ及び式ＩＩＩを有する化合物に対して産生される、５−５及び５−９に指定される抗体、並びに式ＩＶを有する化合物に対して産生される、２Ａ−５に指定される抗体である。他の好適な免疫原は、式Ｖ及びＶＩを有する化合物である。
【００１３】
【化４】
0006374387.tif 000005
【００１４】
本発明の抗体は、アッセイキット及びアッセイ装置において提供され得、現在好ましい装置は、ポイントオブケア分析を提供する側方流動アッセイ装置である。
【００１５】
本発明は、リスペリドンに結合する抗体を産生する方法を更に提供し、本方法は、（ｉ）抗体産生のための宿主細胞を選択すること、及び（ｉｉ）宿主に、式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートを接種することを含み、この宿主が、リスペリドンに結合する抗体を産生する。リスペリドンに結合するモノクローナル抗体を産生することができるハイブリドーマ細胞株を産生する方法が、更に提供される。本方法は、（ｉ）抗体産生のための宿主を選択すること、（ｉｉ）宿主に、式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートを接種すること、（ｉｉｉ）接種された宿主由来の細胞株を、連続的に分裂している細胞と融合させて、リスペリドンに結合するモノクローナル抗体を産生することができる融合細胞を作製すること、及び（ｉｖ）ハイブリドーマ細胞株を得るために、融合細胞をクローニングすることを含む。
【００１６】
本発明は、サンプル中のリスペリドンを検出する方法を更に提供する。本方法は、（ｉ）サンプルを、検出可能なマーカーで標識された本発明に従う抗体と接触させることであって、標識された抗体とサンプル中に存在するリスペリドンとが、標識された複合体を形成するように、当該接触をさせること、及び（ｉｉ）サンプル中のリスペリドンを検出するために、標識された複合体を検出することを含む。
【００１７】
サンプル中のリスペリドンを検出するための競合的イムノアッセイ方法が更に提供される。本方法は、（ｉ）サンプルを、本発明に従う抗体と、リスペリドン又はリスペリドンの競合的結合パートナーとに接触させることであって、抗体及びリスペリドン又はその競合的結合パートナーのうちの１つが、検出可能なマーカーで標識され、サンプル中のリスペリドンが、抗体への結合に対して、リスペリドン又はその競合的結合パートナーと競合するように、当該接触をさせること、及び（ｉｉ）サンプル中のリスペリドンを検出するために、標識を検出することを含む。
【００１８】
本発明の更なる目的、特徴及び利点が、以下の好ましい実施形態の詳細な考察から、当業者に明白となるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ハイブリドーマ５−９で生成された競合的ＥＬＩＳＡの結果を示す。
【図２】ハイブリドーマ５−９で生成された競合的ＥＬＩＳＡの結果を示す。
【図３】リスペリドン／パリペリドンのクローン２Ａ５で生成された競合的ＥＬＩＳＡの結果を示す。
【図４】側方流動アッセイ装置において使用される競合的イムノアッセイ形式を示す。
【図５】リスペリドン／パリペリドンのクローン５−９で生成された典型的な用量反応曲線を示す。
【図６】本発明に従う側方流動アッセイ装置のチップ設計を示す。
【図７】抗体５Ｃ７及び標識されたアリピプラゾールの競合的結合パートナーで生成されたアリピプラゾールの陽性対照に対する典型的な用量反応曲線を示す。
【図８】抗体４Ｇ９−１及び標識されたオランザピンの競合的結合パートナーで生成されたオランザピンの陽性対照に対する典型的な用量反応曲線を示す。
【図９】抗体１１及び標識されたクエチアピンの競合的結合パートナーで生成されたクエチアピンの陽性対照に対する典型的な用量反応曲線を示す。
【図１０】抗体５−９及び標識されたリスペリドンの競合的結合パートナーで生成されたリスペリドンの陽性対照に対する典型的な用量反応曲線を示す。
【図１１】標識されたアリピプラゾールの競合的結合パートナーの存在下で、アリピプラゾール抗体５Ｃ７で生成されたアリピプラゾールを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、それぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、オランザピン、クエチアピン、又はリスペリドンに対する用量反応曲線はない。
【図１２】標識されたオランザピンの競合的結合パートナーの存在下で、オランザピン抗体４Ｇ９−１で生成されたオランザピンを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、それぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、アリピプラゾール、クエチアピン、又はリスペリドンに対する用量反応曲線はない。
【図１３】標識されたクエチアピンの競合的結合パートナーの存在下で、クエチアピン抗体１１で生成されたクエチアピンを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、それぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、アリピプラゾール、オランザピン、又はリスペリドンに対する用量反応曲線はない。
【図１４】標識されたリスペリドンの競合的結合パートナーの存在下で、リスペリドン抗体５−９で生成されたリスペリドンを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、それぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、アリピプラゾール、オランザピン、又はクエチアピンに対する用量反応曲線はない。
【図１５】標識されたアリピプラゾールの競合的結合パートナーの存在下で、アリピプラゾール抗体５Ｃ７で生成されたアリピプラゾールを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、抗体及びそれぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、オランザピン、クエチアピン、又はリスペリドンに対する用量反応曲線はない。
【図１６】標識されたオランザピンの競合的結合パートナーの存在下で、オランザピン抗体４Ｇ９−１で生成されたオランザピンを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、抗体及びそれぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、アリピプラゾール、クエチアピン、又はリスペリドンに対する用量反応曲線はない。
【図１７】標識されたクエチアピンの競合的結合パートナーの存在下で、クエチアピン抗体１１で生成されたクエチアピンを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、抗体及びそれぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、アリピプラゾール、オランザピン、又はリスペリドンに対する用量反応曲線はない。
【図１８】標識されたリスペリドン競合的結合パートナーの存在下で、リスペリドン抗体５−９で生成されたリスペリドンを含有するサンプルについての典型的な用量反応曲線を示し、抗体及びそれぞれについて標識された競合的結合パートナーの存在下での、アリピプラゾール、オランザピン、又はクエチアピンに対する用量反応曲線はない。
【図１９】多重形式で生成されたアリピプラゾールの用量反応曲線に対する、陽性対照として生成されたアリピプラゾールの用量反応曲線の比較を示す。
【図２０】多重形式で生成されたオランザピンの用量反応曲線に対する、陽性対照として生成されたオランザピンの用量反応曲線の比較を示す。
【図２１】多重形式で生成されたクエチアピンの用量反応曲線に対する、陽性対照として生成されたクエチアピンの用量反応曲線の比較を示す。
【図２２】多重形式で生成されたリスペリドンの用量反応曲線に対する、陽性対照として生成されたリスペリドンの用量反応曲線の比較を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、リスペリドンに結合する単離された抗体を提供する。本発明は、抗体を含むアッセイキット及びアッセイ装置を提供する。また、抗体を産生する方法及び抗体を産生することができるハイブリドーマ細胞株を産生する方法も提供する。競合的イムノアッセイ方法を含む、サンプル中のリスペリドンを検出する方法が更に提供される。
【００２１】
一実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体又はその結合断片を目的とする。
【００２２】
【化５】
0006374387.tif 000006
式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００２３】
【化６】
0006374387.tif 000007
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり、
ここで、
Ｚは、
−Ｎ（Ｒ4）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ヘテロアルキル−からなる群から選択され、
Ｒ4は、Ｈ、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基、又は置換若しくは非置換アリール基であり、
Ｙは、有機スペーサ基であり、
Ｇは、担体に結合することができる官能性連結基であり、
ｐは、０又は１であり、
ｒは、１、２、３、４、又は５であり、
ｍは、１、２、３、４、又は５であり、
ｎは、１、２、３、４、又は５である。
【００２４】
更なる実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体又はその結合断片を目的とし、式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００２５】
【化７】
0006374387.tif 000008
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり、
ここで、
Ｚは、Ｏであり、
Ｙは、有機スペーサ基であり、
Ｇは、担体に結合することができる官能性連結基であり、
ｐは、０又は１であり、
ｒは、１、２、３、４、又は５であり、
ｍは、１、２、３、４、又は５であり、
ｎは、１、２、３、４、又は５である。
【００２６】
更なる実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体又はその結合断片を目的とし、式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００２７】
【化８】
0006374387.tif 000009
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり、
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨであり、
Ｙは、有機スペーサ基であり、
Ｇは、担体に結合することができる官能性連結基であり、
ｐは、０又は１であり、
ｒは、１、２、３、４、又は５であり、
ｍは、１、２、３、４、又は５であり、
ｎは、１、２、３、４、又は５である。
【００２８】
更なる実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体又はその結合断片を目的とし、式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００２９】
【化９】
0006374387.tif 000010
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈ、又はＺ−（Ｙ）p−Ｇであり、
ここで、
Ｚは、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨであり、
Ｙは、有機スペーサ基であり、
Ｇは、担体に結合することができる官能性連結基であり、
ｐは１であり、
ｒは２であり、
ｍは、１、２、３、４、又は５であり、
ｎは、１、２、３、４、又は５である。
【００３０】
更なる実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体又はその結合断片を目的とし、式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2、
【００３１】
【化１０】
0006374387.tif 000011
又は
Ｏ（ＣＨ2）rＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ2）mＣＯ2Ｈであり、
式中、
ｒは２であり、
ｍは、１、２、３、又は４であり、
ｎは、１又は２である。
【００３２】
更なる実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体又はその結合断片を目的とし、式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ2は、Ｏ（ＣＨ2）rＮＨ2又は
【００３３】
【化１１】
0006374387.tif 000012
であり、
式中、ｒは２であり、
ｍは１である。
【００３４】
好ましい実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式ＶＩＩの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体又はその結合断片を目的とする。
【００３５】
【化１２】
0006374387.tif 000013
【００３６】
好ましい実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、かつ（ｉ）式ＶＩＩＩの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体又はその結合断片を目的とする。
【００３７】
【化１３】
0006374387.tif 000014
【００３８】
好ましい実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、（ｉ）式ＩＸの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体又はその結合断片を目的とする。
【００３９】
【化１４】
0006374387.tif 000015
【００４０】
好ましい実施形態において、本発明は、リスペリドンに結合し、（ｉ）式Ｘの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体により結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する、単離された抗体又はその結合断片を目的とする。
【００４１】
【化１５】
0006374387.tif 000016
【００４２】
好ましくは、本発明の抗体は、式Ｉ、式ＶＩＩ、式ＶＩＩＩ、式ＩＸ、及び式Ｘの化合物から選択される化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生される。
【００４３】
上記の式により説明される化合物、及び化合物と免疫原性担体により形成されるコンジュゲートの更なる詳細は、以下の「化合物、コンジュゲート、及び免疫原」と題する項に提供される。
【００４４】
本発明の抗体の更なる詳細は、以下の「抗体」と題する項に提供される。
【００４５】
本発明は、抗体を備えるアッセイキット、及び抗体を備えるアッセイ装置を更に提供する。好ましくは、アッセイ装置は、側方流動アッセイ装置である。アッセイキット及びアッセイ装置の更なる詳細は、以下の「アッセイキット及び装置」と題する項に提供される。
【００４６】
本発明は、リスペリドンに結合する抗体を産生する方法を更に提供し、本方法は、（ｉ）抗体産生のための宿主細胞を選択すること、及び（ｉｉ）宿主に、式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートを接種することを含み、この宿主は、リスペリドンに結合する抗体を産生する。更なる実施形態において、本方法において使用されるコンジュゲートは、式ＶＩＩ、式ＶＩＩＩ、式ＩＸ、及び式Ｘの化合物から選択される化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートであり得る。本発明の抗体の産生における更なる詳細は、以下の「抗体」と題する項に提供される。
【００４７】
リスペリドンに結合するモノクローナル抗体を産生することができるハイブリドーマ細胞株を産生する方法が、更に提供される。本方法は、（ｉ）抗体産生のための宿主を選択すること、（ｉｉ）宿主に、式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートを接種すること、（ｉｉｉ）接種された宿主由来の細胞株を、連続的に分裂している細胞と融合させて、リスペリドンに結合するモノクローナル抗体を産生することができる融合細胞を作製すること、及び（ｉｖ）ハイブリドーマ細胞株を得るために、融合細胞をクローニングすることを含む。更なる実施形態において、本方法において使用されるコンジュゲートは、式ＶＩＩ、式ＶＩＩＩ、式ＩＸ、及び式Ｘの化合物から選択される化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートであり得る。本発明に従うハイブリドーマの産生の更なる詳細は、以下の「抗体」と題する項に提供される。
【００４８】
本発明は、サンプル中のリスペリドンを検出する方法を更に提供する。本方法は、（ｉ）サンプルを、検出可能なマーカーで標識された本発明に従う抗体と接触させることであって、標識された抗体とサンプル中に存在するリスペリドンとが、標識された複合体を形成するように、当該接触をさせること、及び（ｉｉ）サンプル中のリスペリドンを検出するために、標識された複合体を検出することを含む。本発明に従うリスペリドンを検出する方法の更なる詳細は、以下の「イムノアッセイ」と題する項に提供される。
【００４９】
サンプル中のリスペリドンを検出するための競合的イムノアッセイ方法が更に提供される。本方法は、（ｉ）サンプルを、本発明に従う抗体と、リスペリドン又はリスペリドンの競合的結合パートナーとに接触させることであって、抗体及びリスペリドン又はその競合的結合パートナーのうちの１つが、検出可能なマーカーで標識され、サンプル中のリスペリドンが、抗体への結合に対して、リスペリドン又はその競合的結合パートナーと競合するように、当該接触をさせること、及び（ｉｉ）サンプル中のリスペリドンを検出するために、標識を検出することを含む。本発明に従うリスペリドンを検出する競合的イムノアッセイ方法の更なる詳細は、以下の「イムノアッセイ」と題する項に提供される。
【００５０】
本発明の好ましい実施形態において、リスペリドンの検出は、リスペリドンに加えて１つ以上の検体の検出を伴う。好ましくは、１つ以上の検体は、リスペリドン以外の抗精神病薬、より好ましくは、リスペリドン以外の抗精神病薬は、アリピプラゾール、パリペリドン、クエチアピン、オランザピン、及びその代謝産物からなる群から選択される。
【００５１】
上述のように、本発明の抗体は、患者サンプル中の抗精神病薬の存在及び／又はその量を検出するためのアッセイにおいて使用することができる。そのような検出は、治療薬物モニタリングが、それらの利益の全てを可能にする。抗精神病薬のレベルの検出は、多くの目的のために有用であり得、これらのそれぞれは、本発明の別の実施形態を表し、処方された治療薬の患者の順守又は服薬遵守の判定、患者が経口抗精神病薬レジメンから持続性のある注入可能な抗精神病薬レジメンに切り替えるべきかどうかを判定するための決定ツールとしての使用、有効又は安全な薬物レベルの到達又は維持を確実にするために、経口又は注入可能な抗精神病薬の用量レベル又は投薬間隔を増加させるべきか、又は減少させるべきかどうかを判定するための決定ツールとしての使用、最小のｐＫレベルの到達の証拠を提供することによる抗精神病薬の開始における補助となるものとしての使用、複数の製剤中又は複数の源からの抗精神病薬の生物学的同等性を判定するための使用、多剤投与及び潜在的な薬物−薬物相互作用の影響を評価するための使用、並びに患者が臨床治験から除外されるべきか、又は含まれるべきかの指標、及び臨床治験の投薬要件の順守のその後のモニタリングにおける補助となるものとしての使用が含まれる。
【００５２】
化合物、コンジュゲート、及び免疫原
化合物、コンジュゲート、及び免疫原に関して、以下の略語が使用される：ＡＭＡＳはＮ−（α−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステル；ＢＴＧはウシサイログロブリン；Ｂｕ３Ｎはトリブチルアミン；ＤＣＣはジクロロヘキシルカルボジイミド；ＤＣＭはジクロロメタン；ＤＩＥＡはジイソプロピルエチルアミン；ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；ＥＤＴＡはエチレンジアミンテトラ酢酸；ＫＬＨはキーホールリンペットヘモシアニン；ＳＡＴＡはＮ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテート；ＴＥＡはトリエチルアミン；ＴＨＦはテトラヒドロフラン；ＴＦＡはトリフルオロ酢酸；Ｅｔ３Ｎはトリエチルアミン；ＴＢＤＭＳはｔ−ブチルジメチルシリル；ＤＩＣはジイソプロピルカルボジイミド；ＤＭＡＰはＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン；ＥＤＣは１−エチル−３（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩；ＮＨＳはＮ−ヒドロキシスクシンイミド；ＴＦＰはテトラフルオロフェニル；ＰＮＰはｐ−ニトロフェニル；ＴＢＴＵはＯ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート；ＨＯＢＴはＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール；ＤＥＰＢＴは３−（ジエトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−ベンゾトラジン−４（３Ｈ）−オン；ＢＯＰ−Ｃｌはビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホン酸クロリド；ＤＴＴはジチオエリトリトール。
【００５３】
用語「コンジュゲート」は、別々の部分と一緒に接合することで形成される任意の物質を指す。代表的なコンジュゲートには、式Ｉの化合物等の小分子を、担体又はポリアミンポリマー、特にタンパク質等の大分子と一緒に接合することにより形成されるものが含まれる。コンジュゲートにおいて、小分子は、大分子上の１つ以上の活性部位で接合することができる。
【００５４】
用語「ハプテン」は、部分的又は不完全な抗原を指す。ハプテンは、抗体形成を刺激することはできないが、抗体と反応するタンパク質を含まない物質である。抗体は、高分子量の免疫原性担体にハプテンを結合し、この結合した生成物、即ち、免疫原をヒト又は動物対象に注射することにより形成される。
【００５５】
用語「免疫原」は、生物体において免疫応答を誘発する、生じる、又は生成し得る物質を指す。
【００５６】
本明細書で使用される場合、「免疫原性担体」は、免疫原性物質、一般的に、ハプテンと１つ以上の位置で結合し、それにより、これらのハプテンと結合し得る抗体の産生を可能にするタンパク質である。免疫原性担体物質の例としては、タンパク質、糖タンパク質、複合ポリアミノ−多糖類、粒子、及び外来物質として認識され、結果として宿主から免疫学的な応答を誘発する核酸が挙げられるが、これらに限定されない。ポリアミノ−多糖類は、この調製に関して知られている従来の手段のいずれかを使用して多糖類から調製され得る。
【００５７】
アルブミン、血清タンパク質、リポタンパク質等を含むが、これらに限定されない、様々な型のタンパク質が、免疫原性担体として使用され得る。例示的なタンパク質には、ウシ血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、卵オボアルブミン、ウシチログロブリン、第Ｖ画分ヒト血清アルブミン、ウサギアルブミン、カボチャ種子グロブリン、ジフテリア毒素、テタヌス毒素、ボチリヌス毒素、サクシニル化タンパク質、及びポリリシン等の合成ポリ（アミノ酸）が含まれる。
【００５８】
免疫原性担体はまた、ポリアミノ−多糖類を含み得、これらは、単糖類の反復的な縮合により構築された、高分子量のポリマーである。多糖類の例は、デンプン、グリコーゲン、セルロース、アラビアガム等の炭水化物ガム、寒天等である。多糖類はまた、ポリ（アミノ酸）残基及び／又は脂質残基も含有する。
【００５９】
免疫原性担体はまた、単独の又は上述のポリ（アミノ酸）又は多糖類のうちの１つにコンジュゲートされているポリ（核酸）であり得る。
【００６０】
免疫原性担体はまた、固体粒子も含むことができる。粒子は、一般に、直径が少なくとも約０．０２マイクロメートル（μｍ）で約１００μｍ以下、通常、約０．０５μｍ〜１０μｍである。粒子は、最適には水に近似する密度、一般に約０．７〜１．５ｇ／ｍＬの、有機又は無機の膨張可能又は非膨張可能な多孔質又は非多孔質の粒子であり得、透明、部分的透明、又は不透明な材料から構成され得る。粒子は、細胞及び微生物等の生物学的材料であり得、非限定的な例として、赤血球、白血球、リンパ球、ハイブリドーマ、ストレプ卜コッカス属、スタヒロコッカスアウレウス、大腸菌、及びウイルス等が挙げられる。粒子はまた、有機及び無機ポリマー、リポソーム、ラテックス、リン脂質小胞、又はリポタンパク質からも構成され得る。
【００６１】
用語「誘導体」は、１つ以上の化学反応により親化合物から作られた化学化合物又は分子を指す。
【００６２】
化学化合物の用語「類似体」は、炭素原子鎖及び参照化合物と同じ特定の官能基を含有する化学化合物を指すが、類似体の炭素鎖は、参照化合物の鎖よりも長い又は短い。
【００６３】
「標識」、「検出分子」、「レポーター」、又は「検出可能なマーカー」は、検出可能なシグナルを生成する又は誘発されて生成することができる任意の分子である。標識は、検体、免疫原、抗体、受容体等の別の分子、又はリガンド等の受容体に結合することができる分子、特にハプテン又は抗体にコンジュゲートさせることができる。標識は、連結又は架橋部分により直接的又は間接的に結合させることができる。標識の非限定的な例としては、放射能アイソトープ（例えば、125Ｉ）、酵素（例えば、β−ガラクトシダーゼ、ペルオキシダーゼ）、酵素断片、酵素基質、酵素阻害剤、コエンザイム、触媒、フルオロフォア（例えば、ローダミン、フルオレセインイソチオシアネート、若しくはＦＩＴＣ、若しくはＤｙｌｉｇｈｔ  ６４９）、染料、化学発光物質及び発光物質（例えば、ジオキセタン、ルシフェリン）、又は増感剤が挙げられる。
【００６４】
本明細書で使用される場合、「スペーサ」は、官能性連結基を介してハプテン、担体、免疫原、標識、又は結合パートナー等の２つ以上の部分構造体を接続する化学構造の部分を指す。これらのスペーサ基は、一般的に存在する原子からなり、有機化合物に一般的に見られる方法で組み立てられるため、「有機スペーサ基」として称され得る。スペーサを組み立てるために使用される化学的成分は、本出願において以下に記載される。好ましいスペーサの中には、直鎖状又は分枝状の飽和又は不飽和炭素鎖がある。これらの炭素鎖はまた、鎖内に１つ以上のヘテロ原子、鎖内に又は鎖の末端で任意の炭素原子の１つ以上の水素を置き換える１つ以上のヘテロ原子も含み得る。「ヘテロ原子」とは、酸素、窒素、リン、及び硫黄からなる群から選択される炭素以外の原子を意味し、この窒素、リン、及び硫黄原子は、任意の酸化状態で存在し得、炭素若しくはそれらに結合する他のヘテロ原子を有し得る。スペーサはまた、鎖の一部として、又は鎖の中の原子のうちの１つの上の置き換えとして環式又は芳香族基も含み得る。
【００６５】
スペーサ基の原子の数は、水素以外の原子を計数することにより決定される。スペーサ基の内部の鎖の原子の数は、接続されている部分構造体の間の最短経路に沿って水素以外の原子の数を計数することにより決定される。好ましい鎖の長さは、１〜２０個の原子である。
【００６６】
「官能性連結基」とは、ハプテンに存在する反応基を指し、別の部分（標識若しくは担体等）を用いて、ハプテンのコンジュゲートを生成するために共有化学結合の形成を通して、ハプテン部分を別の部分に連結し得る利用可能な反応部位を提供するために使用され得る。ハプテンは、このようにして、ビオチン等の部分に連結して、競合的結合パートナーを形成し得る。
【００６７】
スペーサ基を使用して、ハプテンを担体に連結し得る。異なる長さのスペーサにより、抗体形成プロセスの最適化のために免疫化される動物又はヒトの免疫系への提示のために担体とは異なる距離を有するハプテンを結合させることができる。ハプテン分子中の異なる位置への結合により、抗体認識に影響を及ぼす免疫系にハプテン上の特定部位を示す機会を与える。スペーサは、水性培地中でより可溶性であるハプテン誘導体を作製するために親和性可溶化基を含み得る。親水性可溶化基の例としては、ポリオキシアルキルオキシ基、例えば、ポリエチレングリコール鎖、ヒドロキシル基、カルボキシレート基、及びスルホネート基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６８】
用語「求核基」又は「求核剤」は、電子対を提供して、反応において化学結合を形成する種を指す。用語「求電子性基」又は「求電子剤」は、求電子剤から電子対を受容して、反応において化学結合を形成する種を指す。
【００６９】
用語「置換」は、親分子上の任意の位置で炭素原子上の水素原子の代わりに、１個の原子又は原子群の置換を指す。置換基の非限定的な例には、ハロゲン原子、アミノ基、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アルキル基、アリール基、ヘテロアルキル基、ヘテロアリール基、シアノ基、アルコキシ基、ニトロ基、アルデヒド基、及びケトン基が挙げられる。
【００７０】
用語「アルキル」は、別途記載のない限り、最高で１２個の炭素原子の飽和又は不飽和の直鎖及び分枝鎖ラジカルを指し、具体的には、飽和の任意の程度又はレベルを有するラジカルを含むことが意図される。アルキルとしては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、オクチル、２，２，４−トリメチルペンチル、ノニル、デシル、ウンデシル、及びドデシルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７１】
用語「シクロアルキル」は、３〜１０個の炭素原子からなる飽和又は部分的に不飽和の単環式又は二環式の炭化水素環ラジカルを指す。アルキル置換基は、任意に、環上に存在し得る。例としては、シクロプロピル、１，１−ジメチルシクロブチル、１，２，３−トリメチルシクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロヘキセニルが挙げられる。
【００７２】
用語「ヘテロアルキル」は、鎖内に１つ以上のヘテロ原子を含むアルキル基を指し、１つ以上のヘテロ原子は鎖内又は鎖の末端で任意の炭素原子に１つ以上の水素を置換する。
【００７３】
用語「アミノアルキル」は、アルキル鎖に沿って任意の炭素原子に結合される少なくとも第１級又は２級アミノ基を指す。
【００７４】
用語「アルコキシ」は、別途記載のない限り、酸素原子に結合される最高で１２個の炭素原子の直鎖及び分枝鎖ラジカルを指す。例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、及びブトキシが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７５】
用語「アルコキシアルキル」は、アルキル鎖に沿って任意の炭素原子に結合される少なくとも１つのアルコキシ基を指す。
【００７６】
用語「チオアルキル」は、アルキル鎖に沿って任意の炭素原子に結合される少なくとも１つの硫黄基を指す。硫黄基は、いずれかの酸化状態であり得、スルホキシド、スルホン、及び硫酸塩を含む。
【００７７】
用語「カルボキシレート基」には、カルボン酸、アルキル、シクロアルキル、アリール、又はアラルキルカルボキシレートエステルが含まれる。
【００７８】
用語「アルキルカルボニル」は、アルキル鎖に沿って任意の炭素原子に結合されるカルボニル基を有する基を指す。
【００７９】
用語「ヘテロアリール」は、５員〜７員の単環式、又は８員〜１０員の二環式芳香環ラジカルを指し、これらの任意の環は、Ｎ、Ｏ、又はＳから選択される１〜４個のヘテロ原子からなり得、窒素及び硫黄原子は、許容されるいずれかの酸化状態で存在し得る。例としては、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリル、キノリニル、チアゾリル、及びチエニルが挙げられる。
【００８０】
用語「アリール」は、環内に６〜１２個の炭素を含有する単環式又は二環式芳香環ラジカルを指す。アルキル置換基は、任意に、環上に存在し得る。例としては、フェニル、ビフェニル、及びナフタレン（napththalene）が挙げられる。
【００８１】
用語「アラルキル」は、アリール置換基を含有するＣ1〜6アルキル基を指す。例としては、ベンジル、フェニルエチル、又は２−ナフチルメチルが挙げられる。
【００８２】
用語「アシル」は、基−Ｃ（Ｏ）Ｒaを指し、式中、Ｒaは、水素、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アラルキル、及びヘテロアリールである。「アシル化剤」は、分子に−Ｃ（Ｏ）Ｒa基を添加する。
【００８３】
用語「スルホニル」は、基−Ｓ（Ｏ）2Ｒbを指し、式中、Ｒbは、水素、アルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、ハロアルキル、アリール、アラルキル、及びヘテロアリールである。「スルホニル化剤」は、分子に−Ｓ（Ｏ）2Ｒa基を添加する。
【００８４】
担体部分へのハプタンの結合のための反応性官能性連結基を担持するスペーサは、様々な方法により調製され得る。このスペーサは、ハプテンと担体との選択的な逐次反応を可能にするようにいずれかの末端で基と特異的に官能化されるか又は活性化される分子を使用して形成され得るが、同じ反応性部分は、両末端でも使用され得る。ハプテンと担体に結合されるべき官能性連結基との反応のために選択される基は、ハプテンとハプテンが結合される担体の官能性基の種類により判定される。スペーサ並びにハプテン及び担体への結合の方法としては、Ｂｒｉｎｋｌｅｙ，Ｍ．，Ａ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１９９２，３：２〜１３，Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇｒｅｇ  Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，．Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ，２００８及びＴｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ３７４７  Ｎ  Ｍｅｒｉｄｉａｎ  Ｒｄ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ  ＵＳＡ  ６１１０１，ｐｈ  ８００−８７４−３７２３、又はｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｉｅｒｃｅｎｅｔ．ｃｏｍ／からダウンロード若しくはハードコピーの要求で利用可能、及びその中の参考文献により記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない。スペーサ基の形成のための多くの特異的に活性化された分子は、供給メーカー、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから市販されている。
【００８５】
アミノ基を担持するハプテンについては、ハプテンへのスペーサの結合モードには、ハプテン上のアミンとハロゲン化アシル又は活性エステルを担持するスペーサ構築ブロックとの反応が含まれる。「活性エステル」は、安定した連結を形成する緩やかな条件下で、求核基、例えば、アミノ基との反応を行うエステルとして定義される。安定した連結は、例えば、その後の合成工程、免疫原としての使用、又は生化学的アッセイにおいて、更なる使用の条件下で、無傷の状態のままでいるものとして定義される。安定した連結の好ましい例は、アミド結合である。活性エステル及び形成の方法は、Ｂｅｎｏｉｔｏｎ，Ｎ．Ｌ．，ｉｎ  Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｔｈｉｅｍｅ  Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｖｏｌ  Ｅ２２  ｓｅｃｔｉｏｎ  ３．２：４４３及びＢｅｎｏｉｔｏｎ，Ｎ．Ｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔａｙｌｏｒ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｃｉｓ，ＮＹ，２００６により記載される。好ましい活性エステルとしては、ｐ−ニトロフェニルエステル（ＰＮＰ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）、及びテトラフルオロフェニルエステル（ＴＦＰ）が挙げられる。ハロゲン化アシルは、当業者に知られている多くの方法、例えば、カルボン酸と塩化チオニル又は塩化オキサリルとの反応により調製され得る、Ｆｉｅｓｅｒ，Ｌ．Ｆ．ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ，Ｍ．Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，１９６７及びその中の参考文献を参照のこと。これらは、Ｗｕ  ｅｔ．ａｌ，Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００４，６（２４）：４４０７により記載される活性二官能性スペーサにも使用され得るｐ−ニトロフェニルエステル（ＰＮＰ）等の他の活性エステルに変換され得る。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルは、非プロトン性溶媒中のトリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基の存在下で、国際公開第ＷＯ２０１２０１２５９５号の実施例３５に記載される無水条件下で、Ｎ，Ｎ−ジスクシンイミジルカーボネート（ＣＡＳ  ７４１２４−７９−１）と化合物のカルボン酸との反応により、あるいは、無水条件下で、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド及びジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）又は他の脱水剤を使用することにより調製され得る。テトラフルオロフェニルエステル（ＴＦＰ）は、非プロトン性溶媒中のトリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン等の有機塩基の存在下で、Ｗｉｌｂｕｒ，ｅｔ．ａｌ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，２００４，１５（１）：２０３により報告される無水条件下で、カルボン酸と２，３，５，６−テトラフルオロフェニルトリフルオロアセテートとの反応により調製され得る。当業者により、とりわけ、表１に示されるスペーサが、既知の方法を使用して得ることができ、通常の反応条件の最適化のために使用するアミノを担持するハプテンに結合させることできることを認識されよう。これらのスペーサは、担体におけるチオール基へのハプテンの結合を可能にする。
【００８６】
【表１】
0006374387.tif 000017
【００８７】
カップリング剤の存在下で、ハプテン上のアミンとスペーサ構築ブロック上のカルボン酸官能基の直接カップリングはまた、結合モードとして使用され得る。好ましい試薬は、ペプチド合成において一般的に使用されるものである。ペプチドカップリング試薬としては、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ，ＣＡＳ  ＃１２５７００−６７−６）（Ｐｒｕｈｓ，Ｓ．，Ｏｒｇ．Ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．２００６，１０：４４１を参照のこと）、カルボジイミド脱水剤を含むＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ，ＣＡＳ  ＃２５９２−９５−２）、例えば、Ｎ−Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、又は１−エチル−３（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（Ｋｏｎｉｇ  Ｗ．，Ｇｅｉｇｅｒ，Ｒ．Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．，１９７０，１０３（３）：７８８を参照のこと）、３−（ジエトキシホスホリルオキシ）−１，２，３−ベンゾトラジン−４（３Ｈ）−オン（ＤＥＰＢＴ，ＣＡＳ＃１６５５３４−４３−０）（Ｌｉｕ，Ｈ．ｅｔ．ａｌ．，Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００２，１３（７）：６０１を参照のこと）、ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホニッククロリド（ＢＯＰ−Ｃｌ，ＣＡＳ  ＃６８６４１−４９−６）（Ｄｉａｇｏ−Ｍｅｓｅｇｕｅｒ，Ｊ  ｅｔ．ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９８０，７：５４７〜５１、及びＢｅｎｏｉｔｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，２００５，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２により詳述されるもの、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ａａｐｐｔｅｃ），６３０９  Ｓｈｅｐａｒｄｓｖｉｌｌｅ  Ｒｄ．，Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ  ＫＹ  ４０２２８，ｐｈ  ８８８  ６９２  ９１１１により提供される技術告示、ｗｗｗ．ａａｐｐｔｅｃ．ｃｏｍ、及びその中の参考文献を参照のこと）等が挙げられるが、これらに限定されない。これらの方法は、スペーサにハプテンを結合する安定したアミド連結を形成する。既知の方法を使用して得ることができ、上に記載及び言及される方法を利用する通常の反応条件の最適化のために使用するアミノを担持するハプテンに結合させることできるスペーサの例を、表２に示すが、表２中のものに限定されない。これらのスペーサは、担体におけるチオール基へのハプテンの結合を可能にする。
【００８８】
【表２】
0006374387.tif 000018
【００８９】
スペーサはまた、段階的な様式で、ハプテンへの適切な化学基の逐次結合により構成され得、担体に結合することができる官能性連結基を形成する工程が含まれる。一般的な反応スキームの下の例示的な例を参照のこと。
【００９０】
更に、ハプテンが求核基、例えば、スペーサの結合〜点になるであろうチオール基、アミノ基、又はヒドロキシル基を有する場合、スペーサはまた、チオール基、アミン基、又はヒドロキシル基のアルキル化により構成され得る。置換反応を行うことができる部分で適切に置換される任意のアルキル基、例えば、ハロゲン化アルキル、又はｐ−トルエンスルホネート等のスルホン酸エステルは、スペーサを結合させるために使用され得る。アルキル化反応の多くの例は、当業者には知られており、特定の例は、一般の化学文献において見出され、通常の実験を通して最適化され得る。多くの参考文献によるアルキル化反応の考察は、Ｃｈａｐｔｅｒ  １０  ｏｆ  Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．，ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．ＮＹ，２００１において見出され得る。他の連結はまた、求核部分、例えば、ハプテン上のアミンと、尿素を形成するためのイソシアネートとの反応、又はチオ尿素連結を形成するためのイソチオシアネートとの反応を使用され得る、Ｌｉ，Ｚ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ，Ｓｕｌｆｕｒ  ａｎｄ  Ｓｉｌｉｃｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ，２００３，１７８（２）：２９３〜２９７を参照のこと。スペーサを、ヒドロキシル基を担持するハプテンに結合させて、イソシアネート基との反応により、カルバメート又はウレタン連結を形成し得る。スペーサは、ある末端上でイソシアネート官能性基と、担体と反応させることができる官能性連結基と特異的に活性化され得る、Ａｎｎｕｎｚｉａｔｏ，Ｍ．Ｅ．，Ｐａｔｅｌ，Ｕ．Ｓ．，Ｒａｎａｄｅ，Ｍ．ａｎｄ  Ｐａｌｕｍｂｏ，Ｐ．Ｓ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，１９９３，４：２１２〜２１８を参照のこと。
【００９１】
カルボン酸基を担持するハプテンについては、ハプテンへのスペーサ部分の結合モードには、ハロゲン化アルキル若しくは活性エステルとしてカルボン酸基の活性化が含まれ、この例を表３に示し、この調製は、上述されており、続いて、アミド、ヒドラジド、ジアシルヒドラジン、若しくはエステル連結を形成するために、スペーサ部分上でのアミノ（−ＮＨ2−）、ヒドラジノ（−ＮＨ−ＮＨ2−）、ヒドラジド（−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＮＨ2−）、又はヒドロキシル基（−ＯＨ）との反応、あるいはスペーサ部分上での又は上述されるペプチドカップリング試薬及び／若しくはカルボジイミド脱水剤により担体上での直接的な、アミノ基とのカルボン酸基の直接カップリングが含まれ、これらの例を表４及び５に示す。活性化エステルの形成及びペプチドカップリング剤の使用のために上に言及される参考文献に見出される手順は、スペーサ構築ブロックへのカルボンサンを担持するハプテン、及び通常の反応条件の最適化のために使用する利用可能なアミノ基とのタンパク質担体の結合のために使用され得る。
【００９２】
【表３】
0006374387.tif 000019
【００９３】
【表４】
0006374387.tif 000020
【００９４】
【表５】
0006374387.tif 000021
【００９５】
他の求電子基は、スペーサ、例えば、ハロゲン化スルホニル
【００９６】
【化１６】
0006374387.tif 000022
又は、求電子リン基、例えば、
【００９７】
【化１７】
0006374387.tif 000023
【００９８】
Ｍａｌａｃｈｏｗｓｋｉ，Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｐ．，Ｃｏｗａｒｄ，Ｊａｍｅｓ  Ｋ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９４，５９（２５）：７６１６を参照のこと、
又は
【００９９】
【化１８】
0006374387.tif 000024
である、Ｒcは、アルキル、シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキルである、スペーサに結合させるために、ハプテン上に存在し得る。
【０１００】
Ａｌｉｏｕａｎｅ，Ｌ．，ｅｔ．ａｌ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１１，５２（２８）：８６８１を参照のこと。
【０１０１】
アルデヒド基又はケトン基を担持するハプテンは、アシルヒドラゾンを形成するためのスペーサ上でのヒドラジド基Ｈ2Ｎ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−との反応が含まれるが、これに限定されない方法を使用して、スペーサに結合させ得る、Ｃｈａｍｏｗ，Ｓ．Ｍ．，Ｋｏｇａｎ，Ｔ．Ｐ．，Ｐｅｅｒｓ，Ｄ．Ｈ．，Ｈａｓｔｉｎｇｓ，Ｒ．Ｃ．，Ｂｙｒｎ，Ｒ．Ａ．ａｎｄ  Ａｓｋｅｎａｓｚｉ，Ａ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９２，２６７（２２）：１５９１６を参照のこと。担体上でのチオール基への結合を可能にする二官能性ヒドラジドスペーサ基の例を表６に示す。
【０１０２】
【表６】
0006374387.tif 000025
【０１０３】
ハプテンはまた、担体と反応し得るチオール基を含有し得るが、但し、この担体は、チオールと反応し得る基を提供するために修飾されるものとする。担体基は、担体上のアミノ基と、Ｎ−スクシンイミジルマレイミドアセテート（ＡＭＡＳ，ＣＡＳ  ＃５５７５０−６１−３）、スクシンイミジルヨードアセテート（ＣＡＳ＃  １５１１９９−８１−４）との反応、又は担体へのハプテンの結合をもたらす反応を行い得る基を導入するために、表１に示される二官能性スペーサ基のうちのいずれかによる、マレイミド官能性基を含有する基の結合が含まれるが、これに限定されない、方法により修飾され得る。
【０１０４】
担体との結合を形成することができる官能性連結基は、安定した連結を形成することができる任意の基であり得、担体上で多くの異なる基と反応し得る。官能性連結基は、好ましくは、担体上でアミノ基、カルボン酸基、若しくはチオール基、又はその誘導体と反応し得る。官能性連結基の非限定的な例は、カルボン酸基、ハロゲン化アシル、活性エステル（上で定義されるように）、イソシアネート、イソチオシアネート、ハロゲン化アルキル、アミノ基、チオール基、マレイミド基、アクリル酸基（Ｈ2Ｃ＝ＣＨ−Ｃ（Ｏ）−）、又はビニルスルホン基Ｈ2Ｃ＝ＣＨ−ＳＯ2−）である、Ｐａｒｋ，Ｊ．Ｗ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，２０１２，２３（３）：３５０を参照のこと。官能性連結基は、ハプテンと段階的に反応し得る特異的に活性化したスペーサ構築ブロックの一部として存在し得、得られたハプテン誘導体は、担体と反応し得る。あるいは、ハプテンは、その後の反応により官能性連結基に形質転換され得る前駆体基を担持するスペーサで誘導体化され得る。スペーサ上の官能性連結基がアミン又はカルボン酸基であるとき、担体上のカルボン酸基又はアミンとのカップリング反応は、これらの試薬について上で言及される参考文献の手順に従って、ペプチドカップリング試薬の使用を通して直接行われ得る。
【０１０５】
特定のジスルフィド基、例えば、ピリジルジスルフィドは、スペーサ上で官能性連結基として使用され得、担体上でチオール基との交換を行い、混合ジスルフィド結合を形成し得る、Ｇｈｅｔｉｅ，Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，１９９０，１：２４〜３１を参照のこと。これらのスペーサは、アミンを担持するハプテンと、ピリジルジスルフィド基を担持するスペーサに結合される活性エステルとの反応により結合され得、これらの例には、表７に示されるものが含まれるが、これらに限定されない。
【０１０６】
【表７】
0006374387.tif 000026
【０１０７】
ほとんどの場合、担体は、タンパク質であり、アミン反応性官能性連結基による反応により直接、又はＮ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ、ＣＡＳ  ７６９３１−９３−６）若しくはその類似体を含むチオール含有基で誘導体化した後、ヒドロキシルアミンによりアセテート基を開裂し、ハプテン上での官能性連結基との反応のためにチオール基を曝露することにより、リシン残基のε−アミノ基が、結合のために使用され得る。チオール基はまた、２−メルカプトエチルアミン、Ｂｉｌａｈ，Ｍ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１０，８０（１）：４９を参照のこと、ホスフィン試薬、Ｋｉｒｌｅｙ，Ｔ．Ｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８９，１８０（２）：２３１を参照のこと、又はジチオエリトリトール（ＤＴＴ，ＣＡＳ  ３４８３−１２−３）Ｃｌｅｌａｎｄ，Ｗ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９６４，３：４８０〜４８２を参照のこと、が含まれるが、これらに限定されない、緩和な還元試薬を用いて、タンパク質担体内でのジスルフィド結合の還元により担体に導入され得る。
【０１０８】
一般的な反応スキーム
本発明に従う抗体を産生するために有用な化合物は、以下に記載される一般的な合成方法に従って合成することができる。式（Ｉ）の化合物は、当業者に既知の方法により調製することができる。以下の反応スキームは、本発明の代表的な実施例であるということのみを意味し、本発明の限定であることは全く意味しない。
【０１０９】
リスペリドンの親環構造へのスペーサの結合は、スキーム１に示されるシリル保護された出発化合物の使用を通して達成され得、この調製は、実施例１に記載される。Ｎ保護したハロアルキル誘導体によるアルキル化もまた、実施例１に記載される。鎖の長さが異なるＮ保護したハロアルキル誘導体は、市販されているか、又は当業者には知られている標準的な有機反応により作製され得る。ｒの好ましい値は、１〜５である。実施例１に記載される脱保護は、更に精緻化して、更なるスペーサ原子を結合させ得るか、又は担体に直接連結され得る、アミノ化合物を提供し得る。最終生成物においてヒドロキシル基を欠いているアミノ化合物の誘導体は、実施例３に記載されるように作製され得る。
【０１１０】
【化１９】
0006374387.tif 000027
【０１１１】
リスペリドンのアルキル化はまた、チオール、例えば、３−メルカプトメチルプロピオネートを使用し、Ｗａｎｇ，Ｊ．，Ｌ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１０，２０：７１５９の方法を使用して達成され得、これには、スキーム２に示されるように、ＤＭＦ中のＫ2ＣＯ3を使用し、続いて、水性ＴＨＦ中のＮａＯＨにより加水分解して、担体に直接結合させ得るか、又は更に精緻化して、スペーサ部分を延在させ得るカルボキシ基で終端するチオアルキル連結を担持するハプテンの類似体を提供し得る。また、米国特許第２０１１０２４５２２４号の中間体５３５を作製するために使用される方法に従って、スキーム２に示されるように、アミンによるアルキル化を行ってもよい。スキーム２のアミノアルキル又はチオアルキル類似体（Ｒ１がＯＨ又はＨである）の変形は、熟練した科学者による上述の参考文献に教示される通常の化学手順の最適化により作製され得る。
【０１１２】
【化２０】
0006374387.tif 000028
【０１１３】
スキーム３に示される出発化合物のフェノール性ヒドロキシル基（式中、Ｒ1はＨ又はシリル保護アルコールである）は、担体への結合に対して、官能性連結基を担持する基の導入部位であり得る。フェノール性化合物は、スキーム３に示され、米国特許第２００６０２５１５９２号に記載されるように、無水コハク酸と直接反応させて、カルボキシを担持する中間体を得られ得るか、又はスキーム４に示されるように、本開示の他の箇所に提供されるＡｎｎｕｎｚｉａｔｏの参考文献に従って、イソシアネート二官能性スペーサと反応させて、チオール反応性官能性リンカーを担持するハプテンを得られ得る。その後の実施例に記載されるように、Ｒ1がシリル保護アルコールである場合、脱保護が必要とされる。
【０１１４】
【化２１】
0006374387.tif 000029
【０１１５】
スキーム５は、実施例１及び２等のアルキルアミン基で終端するスペーサを有するハプテンが、どのようにしてマレイミド基で更に官能化され得るかを示す。マレイミドは、当該技術分野において既知の任意の方法により導入され得る。例えば、ジクロロメタン等の溶媒中のＮ−マレオイル置換アルキルアミノ酸と、ジイソプロピルエチルアミン及びジエチルシアノホスホネート等のカップリング試薬との反応により、ハプテン上にマレイミドで官能化されたスペーサを得る。トリブチルアミン等の塩基の存在下で、室温で約１時間、リスペリドン由来アミンと、ＤＭＦ等の溶媒中の２，５−ジオキソピロリジン−１−イル２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）アセテート等のアルキル−マレイミドで官能化された基との反応により、マレイミドで官能化されたスペーサを有するハプテンを産生する。
【０１１６】
【化２２】
0006374387.tif 000030
【０１１７】
スキーム６に示されるように、無水コハク酸又はグルタル酸無水物等の環式無水化合物との反応により、アルキルアミン基で終端するスペーサを有するハプテンは、精緻化され得る。ＴＨＦ等の溶媒中、室温で一晩、この反応は行われ得る。
【０１１８】
【化２３】
0006374387.tif 000031
【０１１９】
マレイミドで官能化されたハプテンは、スキーム７に示される方法に従ってタンパク質にコンジュゲートされ得る。Ｎ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）によるε−窒素のアシル化、続いて、ヒドロキシルアミンによるＳ−アセチル基の加水分解によるタンパク質リシン残基の活性化により、求核スルフヒドリル基を生成する。スルフヒドリルで活性化したタンパク質とマレイミドで誘導体化されたハプテン（一般スキーム５に記載されるように調製した）とのコンジュゲーションは、マイケル付加反応により発生する。好適なタンパク質は、当業者には既知であり、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシサイログロブリン、及びオボアルブミンが含まれる。
【０１２０】
【化２４】
0006374387.tif 000032
【０１２１】
カルボン酸で官能化されたハプテンは、スキーム８に示される方法に従ってタンパク質にコンジュゲートされ得る。ＤＭＦ等の溶媒中、約２０℃の室温で、約１８時間、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドと、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）等の好適なカップリング剤と、トリブチルアミン等の塩基との反応により、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド離脱基でカルボン酸を活性化する。次いで、ｐＨ  ７．５のリン酸緩衝液等の溶媒中、約２０℃で、約２．５時間、活性化したスペーサ及びハプテンを、タンパク質にコンジュゲートされ得る。好適なタンパク質は、当業者には既知であり、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシサイログロブリン、及びオボアルブミンが含まれる。
【０１２２】
抗体
本発明は、リスペリドンに結合し、（ｉ）式Ｉの化合物と免疫原性担体とのコンジュゲートに応答して産生されるか、又は（ｉｉ）（ｉ）の抗体より結合されるエピトープと同じであるエピトープに対して競合する単離された抗体又はその結合断片を目的とする。用語「抗体」は、抗原又はその部分に結合することができる（本発明に従って、抗精神病薬又はその代謝産物に結合することができる）特異的タンパク質を指す。抗体は、注射により、宿主、例えば、動物又はヒトに導入され得る免疫原に応答して産生される。一般的用語「抗体」は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、及び抗体断片が含まれる。
【０１２３】
「抗体」又は「抗原結合抗体断片」は、結合に対して無傷抗体と競合する、無傷抗体、又はその断片を指す。一般的に言えば、抗体又は抗原結合抗体断片は、解離定数が、１μＭ以下、好ましくは、１００ｎＭ以下、最も好ましくは、１０ｎＭ以下であるときに、抗原と特異的に結合すると言われている。結合は、当業者に知られている方法により測定することができ、一例は、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）計器の使用である。
【０１２４】
抗体断片は、無傷抗体の一部、好ましくは、無傷抗体の抗原結合又は可変領域を含む。結合断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、及びＦｖ断片、ダイアボディ、線状抗体、一本鎖抗体分子、並びに抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれる。「二重特異性」又は「二官能性」抗体以外の抗体は、その結合部位のそれぞれが同一であることが理解される。
【０１２５】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」は、免疫グロブリン又はＴ細胞受容体への特異的結合が可能な任意のタンパク質決定基を含む。エピトープの決定基は通常、アミノ酸又は糖側鎖等の分子の化学的に活性な表面基からなり、かつ、通常、特定の三次元構造特性並びに特定の電荷特性を有する。２つの抗体は、当業者によく知られている方法のうちのいずれか（例えば、上で言及されるＢＩＡｃｏｒｅ（商標）方法）により、ある抗体が競合的結合アッセイにおいて第２の抗体と競合することが示される場合、「同じエピトープを結合する」と言われる。ハプテン（リスペリドン又は他の抗精神病薬等）に関して、抗体は、ハプテンを免疫原性担体にコンジュゲートすることにより非抗原性ハプテン分子に対して産生され得る。次いで、ハプテンにより定義される「エピトープ」として認識する抗体が産生される。
【０１２６】
抗体の文脈において使用される場合、「単離された」とは、任意の自然状態から「人工により」変化させる、即ち、それが自然に生じる場合、変化させるか、又はその元の環境から除去される、又はその両方であることを意味する。例えば、その自然状態で生きている動物に自然に存在する自然発生抗体は、「単離され」ないが、その用語が本明細書に使用されるように、その自然状態の共存する材料から切り離された同じ抗体が「単離される」。抗体は、自然発生の組成物ではない、イムノアッセイ試薬等の組成物に生じ得、それが本明細書に使用されるように、その用語の意味内で単離された抗体をその中に維持する。
【０１２７】
「交差反応性」とは、抗体と、その抗体を誘発させるために使用されなかった抗原との反応を指す。
【０１２８】
好ましくは、本発明の抗体は、薬物及び任意の所望の薬理学的に活性な代謝産物と結合するであろう。本発明の化合物への免疫原性担体の結合の位置を変化させることにより、代謝産物による選択性及び交差反応性は、抗体に改変され得る。リスペリドンについては、９−ヒドロキシリスペリドン（パリペリドン、抗精神病薬としても投与される）、７−ヒドロキシリスペリドン、及びＮ−デアルキルリスペリドン等のリスペリドンによる交差反応性は、望ましい、又は望ましくない場合がある。リスペリドン及びパリペリドンと交差反応する抗体は、望ましくあり得、７−ヒドロキシリスペリドにもＮ−デアルキルリスペリドンにも反応せず、そのため、リスペリドン及びその主な薬理学的に活性な代謝産物を検出する。あるいは、薬理学的に活性な代謝産物、リスペリドン及びパリペリドンを別々に検出することが望ましくあり得るが、依然として、不活性な代謝産物、７−ヒドロキシリスペリドン及びＮ−デアルキルリスペリドンを検出しない。これらの薬物及び／又は代謝産物の複数のものを検出する抗体が産生され得るか、それぞれを別々に検出する抗体が産生され得る（そのため、「特異的な結合」特性を定義する）。抗体は、１つ以上の化合物の結合が等モル又は実質的に等モルであるとき、１つ以上の化合物を特異的に結合する。
【０１２９】
そのような抗体を産生する方法は、宿主に本明細書に記載のコンジュゲートを接種することを含む。好適な宿主としては、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギ、ニワトリ、ロバ、ウマ、サル、チンパンジー、オランウータン、ゴリラ、ヒト、及び成熟免疫応答を呈し得る任意の種が挙げられるが、これらに限定されない。免疫化手順は、当該技術分野で十分に確立されており、多くの専門書及び刊行物、例えば、Ｄａｖｉｄ  Ｗｉｌｄにより編集された「Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ，２０００）及びそこに引用されている参考文献に記載されている。
【０１３０】
好ましくは、本発明の特徴を具現化した免疫原は、アジュバントと組み合わせて、宿主対象、例えば、動物又はヒト対象に投与される。好適なアジュバントとしては、フロイントアジュバント、粉末水酸化アルミニウム（ミョウバン）、百日咳菌と組み合わせた水酸化アルミニウム、及びモノホスホリルリピドＡ−合成トレハロースジコリノミコレート（ＭＰＬ−ＴＤＭ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３１】
典型的には、免疫原又は免疫原とアジュバントとの組み合わせは、１回若しくは複数回の皮下注射又は腹腔内注射により、哺乳動物宿主に注入される。好ましくは、免疫化計画は、少なくとも１週間かけて、より好ましくは、２週間以上かけて行う。このようにして産生されたポリクローナル抗体は、当該技術分野でよく知られている方法を利用して単離及び精製することができる。
【０１３２】
モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎの十分に確立されたハイブリドーマ法、例えば、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５〜４９７（１９７５）により産生することができる。ハイブリドーマ法は、典型的には、宿主又は宿主に由来するリンパ球を免疫化することと、リンパ球を分泌するか又はリンパ球を分泌する能力を有するモノクローナル抗体を採取することと、不死化細胞にリンパ球を融合させることと、所望のモノクローナル抗体を分泌する細胞の選択することと、を含む。
【０１３３】
宿主を免疫化することにより、免疫原に特異的な抗体を産生するか、又は産生し得るリンパ球を惹起することができる。あるいは、リンパ球をインビトロで免疫化することもできる。ヒト細胞が望ましい場合、末梢血リンパ球を使用することができるが、他の哺乳動物源に由来する脾臓細胞又はリンパ球が好ましい。
【０１３４】
リンパ球を不死化細胞系に融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成することができ、このプロセスは、融合剤、例えば、ポリエチレングリコールの使用により容易に行うことができる。例示として、トランスフォーメーションにより不死化された突然変異型の齧歯動物、ウシ、又はヒトの骨髄腫細胞を使用することができる。非融合不死化細胞に対して実質的に純粋なハイブリドーマ細胞集団が好ましい。したがって、融合後、例えば、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）が欠如している突然変異骨髄腫細胞を使用することにより、非融合不死化細胞の増殖又は生存を阻害する好適な培地中で、細胞を増殖させることができる。その場合、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを、培地（ＨＡＴ培地）に添加して、ハイブリドーマの増殖を可能にした状態で、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防止することができる。
【０１３５】
好ましくは、不死化細胞は、効率的に融合し、ＨＡＴのような培地中における選択により混合集団から単離することが可能であり、融合後、安定かつ高レベルの抗体発現を支持する。好ましい不死化細胞系には、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡから入手可能な骨髄腫細胞系が含まれる。
【０１３６】
ハイブリドーマ細胞は典型的には細胞外に抗体を分泌するため、抗精神病薬に特異的なモノクローナル抗体の存在について培養培地をアッセイすることができる。免疫沈降アッセイ又はインビトロ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又は酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して、モノクローナル抗体の結合特異性を測定することができる。
【０１３７】
モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞は、限界希釈手順により単一クローンとして単離し、継代培養することができる。好適な培養培地としては、ダルベッコ変法イーグル培地、ＲＰＭＩ−１６４０、及び無ポリペプチド培地、低ポリペプチド培地、又は無血清培地、例えば、Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤから入手可能なＵｌｔｒａ  ＤＯＭＡ  ＰＦ若しくはＨＬ−１が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、ハイブリドーマ細胞を腹水としてインビボで増殖させることもできる。
【０１３８】
モノクローナル抗体は、ポリペプチドＡ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、硫酸アンモニウム沈澱、及びアフィニティクロマトグラフィーが含まれるが、これらに限定されない、従来の免疫グロブリン（Ｉｇ）精製手順により、培養培地又は腹水から単離及び／又は精製することができる。
【０１３９】
モノクローナル抗体はまた、米国特許第４，１６６，４５２号に記載されるような組み換え法により産生することもできる。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して、例えば、マウス重鎖及び軽鎖抗体遺伝子に特異的に結合するオリゴヌクレオチドプローブを使用して、好ましくは、抗精神病薬に特異的な抗体を分泌するモノクローナル抗体ハイブリドーマ細胞系から単離されたＤＮＡをプローブするために、単離及び配列決定することができる。
【０１４０】
抗精神病薬に対して特異的な結合部位を含む抗体断片もまた、産生され得る。そのような断片としては、抗体分子のペプシン消化により産生され得るＦ（ａｂ’）2断片、及びＦ（ａｂ’）2断片のジスルフィド架橋を還元することにより産生され得るＦａｂ断片が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、Ｆａｂ発現ライブラリーを構成して、所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片の迅速かつ容易な特定を可能にし得る（Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１２７０〜１２８１（１９８９））。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びＳｃＦｖ抗体断片は全て、大腸菌に発現し、それから分泌し得、多量のこれらの断片の産生を可能にする。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、大腸菌から直接回収され、化学的に結合して、Ｆ（ａｂ’）2断片を形成し得る（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３〜１６７（１９９２））。抗体断片の産生のための他の技術は、当業者には既知である。また、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）も構想される（米国特許第５，７６１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照のこと）。Ｆｖ及びｓＦｖ断片は、定常領域を欠いている無傷混合部位を有する唯一の種であり、そのため、非特異的結合の減少を示す可能性がある。例えば、抗体断片はまた、例えば、米国特許第５，６４２，８７０号に記載されるような「直鎖抗体」であり得る。そのような直鎖抗体断片は、単一特異的であっても、二重特異的であってもよい。
【０１４１】
アッセイキット及び装置
上述の抗体を含むアッセイキット（試薬キットとも称される）もまた、提供され得る。代表的な試薬キットは、抗精神病薬、リスペリドンに結合する抗体、標識部分に結合される抗精神病薬の類似体若しくはその誘導体を含む複合体を含み得、任意に、既知の量の抗精神病薬若しくは関連標準を含む１つ以上の較正器も含み得る。
【０１４２】
句「アッセイキット」は、アッセイを行う際に使用される材料及び試薬のアセンブリを指す。試薬は、それらの交差反応性及び安定性に応じて、同一又は別箇の容器にて、液体又は凍結乾燥形態で、パッケージ化された組み合わせで提供することができる。キットで提供される試薬の量及び割合を、特定の用途に対する最適な結果をもたらすように選択することができる。本発明の特徴を具現化するアッセイキットは、リスペリドンに結合する抗体を含む。キットは、リスペリドンの競合的結合パートナー、並びに較正及び対照材料を更に含み得る。
【０１４３】
句「較正及び対照材料」は、既知の量の検体を含有する任意の標準又は対照材料を指す。検体及び対応する較正材料を含有する疑いがあるサンプルは、同様の条件下でアッセイされる。検体の濃度は、未知の被検物について得られた結果と、標準について得られた結果とを比較することによって計算される。これは、一般には、較正曲線を作成することによって行われる。
【０１４４】
本発明の特徴を具現化する抗体は、キット、容器、パック、又はディスペンサー内に、それらの利用についての取扱説明書と共に含まれ得る。抗体がキット内に供給される場合、イムノアッセイの異なる成分は、別箇の容器内にパッケージ化され得るか、又は使用前に混合され得る。成分のそのようなパッケージ化は、活性成分の機能を実質的に低下させることなく、長期間保存を可能にし得る。更に、試薬は、不活性環境下で、例えば、窒素ガス、アルゴンガス等の正圧下でパッケージ化することができ、これは、空気及び／又は水分に敏感な試薬に特に好ましい。
【０１４５】
本発明の特徴を具現化するキット内に含まれる試薬は、異なる成分の活性が実質的に保持されるが、成分自体が容器の材料により実質的に吸着又は改変されないように、全ての方式の容器内に供給することができる。好適な容器としては、アンプル、ボトル、試験管、バイアル、フラスコ、シリンジ、エンベロープ（例えば、ホイルでライニングされた）等が挙げられるが、これらに限定されない。容器は、ガラス、有機ポリマー（例えば、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリエチレン等）、セラミック、金属（例えば、アルミニウム）、金属合金（例えば、スチール）、コルク等が挙げられるが、これらに限定されない任意の好適な材料で構成され得る。加えて、容器は、セプタムにより提供され得るような、例えば、針によりアクセスするための１つ以上の滅菌アクセスポートを備え得る。セプタムの好ましい材料には、ゴム及びＤｕＰｏｎｔ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）により商品名ＴＥＦＬＯＮ（登録商標）として販売されているタイプのポリテトラフルオロエチレンが挙げられる。加えて、容器は、成分を混合できるように取り外すことができるパーティション又は膜により仕切られた２つ以上のコンパートメントを備え得る。
【０１４６】
本発明の特徴を具現化する試薬キットはまた、取扱説明書と共に供給され得る。取扱説明書は、例えば、紙面上等に印刷されたもの及び／又は電子可読媒体として供給されたものであってもよい。あるいは、取扱説明書は、例えば、キットの製造業者若しくは販売業者により指定されたインターネットウェブサイトにユーザーを案内することにより、及び／又は電子メールを介して、提供され得る。
【０１４７】
抗体はまた、アッセイ装置の一部として提供され得る。そのようなアッセイ装置は、側方流動アッセイ装置を含む。一般的な種類の使い捨て側方流動アッセイ装置は、液体サンプルを受ける区画又は領域、コンジュゲート区画、及び反応区画を含む。これらのアッセイ装置は一般に、側方流動試験ストリップとして既知である。これらは、毛管流を支持し得る、流体流の経路を画定する多孔質材料、例えば、ニトロセルロースを利用する。例としては、米国特許第５，５５９，０４１号、同第５，７１４，３８９号、同第５，１２０，６４３号、及び同第６，２２８，６６０号に示されるものが挙げられ、これらは本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。
【０１４８】
アッセイ装置の別の種類は、毛管流を誘発させるように突起部を有する非多孔質アッセイ装置である。このようなアッセイ装置の例としては、ＰＣＴ国際公開第２００３／１０３８３５号、同第２００５／０８９０８２号、同第２００５／１１８１３９号、及び同第２００６／１３７７８５号に開示される、開いた側方流動装置が挙げられ、これらは全て、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。
【０１４９】
非多孔質アッセイ装置において、アッセイ装置は、一般的に、少なくとも１つのサンプル添加区画、少なくとも１つのコンジュゲート区画、少なくとも１つの反応区画、及び少なくとも１つの吸上区画を有する。区画は、サンプル添加区画から吸上区画までサンプルが流れる流路を形成する。任意で装置に堆積される（例えば、コーティングにより）検体に結合することができる、反応区画内の抗体等の捕捉要素、及びコンジュゲート区画内で装置に堆積される検体の濃度の判定を可能にする反応に関与することができる標識されたコンジュゲート材料も含み、この場合、標識されたコンジュゲート材料は反応区画内の検出のための標識を有する。サンプルがコンジュゲート区画を通って流れる際に、コンジュゲート材料は溶解して、反応区画へと下流に流れる溶解した標識されたコンジュゲート材料及びサンプルのコンジュゲートプルームを形成する。コンジュゲートプルームが反応区画へと流れると、コンジュゲート材料が、例えば、コンジュゲート材料と検体の複合体を介して（「サンドイッチ」アッセイにおいて）、又は直接的に（「競合」アッセイにおいて）捕捉要素により捕捉される。拘束されない溶解したコンジュゲート材料は、反応区画を通過して少なくとも１つの吸上区画へと流される。そのような装置は、流路において、突起部又はマイクロ柱を含み得る。
【０１５０】
米国特許出願公開第２００６０２８９７８７Ａ１号、及び同第２００７０２３１８８３Ａ１号、並びに米国特許第７，４１６，７００号、及び同第６，１３９，８００号（これらは全て、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる）は、反応区画内において結合したコンジュゲート材料を検出することができる。一般的な標識としては、蛍光染料を励起し、蛍光染料を検出することができる検出器を組み込む器具により検出され得る、蛍光染料が挙げられる。
【０１５１】
イムノアッセイ
このようにして産生された抗体は、抗精神病薬を認識／結合するためにイムノアッセイに使用され、それにより、患者サンプル中の薬物の存在及び／又は量を検出することができる。好ましくは、アッセイ形式は、競合的イムノアッセイ形式である。そのようなアッセイ形式及び他のアッセイは、Ｈａｍｐｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＡＰＳ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ  １９９０）及びＭａｄｄｏｘ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５８：１２１１１，１９８３）における他の箇所において記載されている。
【０１５２】
用語「検体」は、任意の物質又は物質の群を指し、これらの存在又は量は判定されるべきである。代表的な抗精神病薬検体としては、リスペリドン、パリペリドン、オランザピン、アリピプラゾール、及びクエチアピンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５３】
用語「競合的結合パートナー」は、抗体への結合親和性に関して検体と同様に挙動する、競合的イムノアッセイに使用され得るような物質、又は物質の群を指す。代表的な競合的結合パートナーとしては、抗精神病薬誘導体等が挙げられるが、これに限定されない。
【０１５４】
検体と共に使用される場合、用語「検出すること」は、任意の定量的、半定量的、又は定質的方法、並びに一般に、検体、とりわけ、抗精神病薬を判定するための全ての他の方法を指す。例えば、サンプル中の抗精神病薬の存在又は非存在を単に検出する方法は本発明の範囲内にあり、また、サンプル中の抗精神病薬の量又は濃度についてのデータを提供する方法もある。用語「検出すること」、「判定すること」、及び「特定すること」等は、本明細書で同意語として使用され、全てが本発明の範囲内にある。
【０１５５】
本発明の好ましい実施形態は、競合的イムノアッセイであり、抗精神病薬に結合する抗体、又は薬物若しくはその競合的結合パートナーは、それぞれ、固体支持体（側方流動アッセイ装置内の反応区画等）、及び標識された薬物若しくはその競合的結合パートナー、又は標識された抗体に結合し、宿主由来のサンプルは、固体支持体の上を通過し、固体支持体に結合した検出された標識の量は、サンプル中のある量の薬物に相関させることができる。
【０１５６】
検体、例えば、抗精神病薬を含有する疑いがある任意のサンプルは、本発明の好ましい実施形態の方法に従って分析することができる。サンプルは、必要に応じて前処理することができ、アッセイを妨げない任意の好都合な培地中に調製することができる。好ましくは、サンプルは、宿主由来の体液、最も好ましくは、血漿又は血清等の水性培地を含む。
【０１５７】
抗体を使用するイムノアッセイの全ての様式が本発明の好ましい実施形態に従って使用するために企図され、これには、抗体が固相に結合されるアッセイ、及び抗体が液体培地中にあるアッセイが含まれる。本発明の特徴を具現化する抗体を使用する検体を検出するために使用することができるイムノアッセイの方法としては、サンプル中の標識された検体（検体類似体）及び検体が、抗体に対して競合する競合的（試薬を限定した）アッセイ、及び抗体が検出される一部位イムノメトリックアッセイ等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５８】
本発明を以下の実施例により更に説明する。本実施例は、特定の実施形態を参照することにより本発明を単に例示するためだけに提供される。本発明のある特定の態様を示すが、これらの例示は、開示される本発明の範囲を限定せず、又は制限しない。
【０１５９】
詳述されることを除いて、当業者によく知られ、常用である標準技術を使用する全ての実施例が実施される。以下の実施例の常用の分子生物学技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）等の標準実験室的なマニュアルに記載されるように、実施することができる。
【０１６０】
同時係属出願の表題「Ｈａｐｔｅｎｓ  ｏｆ  Ａｒｉｐｉｐｒａｚｏｌｅ」（代理人整理番号ＰＲＤ３２６５ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，４５０号）、「Ｈａｐｔｅｎｓ  ｏｆ  Ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ」（代理人整理番号ＰＲＤ３２６６ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，４５４号）、「Ｈａｐｔｅｎｓ  ｏｆ  Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏｎｅ」（代理人整理番号ＰＲＤ３２６７ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，４５９号）、「Ｈａｐｔｅｎｓ  ｏｆ  Ｑｕｅｔｉａｐｉｎｅ」（代理人整理番号ＰＲＤ３２６８ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，４６２号）、「Ｈａｐｔｅｎｓ  ｏｆ  Ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ  ａｎｄ  Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏｎｅ」（代理人整理番号ＰＲＤ３２６９ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，４６９号）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ａｒｉｐｉｐｒａｚｏｌｅ  Ｈａｐｔｅｎｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１２８ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，５４４号）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ  Ｈａｐｔｅｎｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１３２ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，５７２号）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏｎｅ  Ｈａｐｔｅｎｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１２６ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，６３４号）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｑｕｅｔｉａｐｉｎｅ  Ｈａｐｔｅｎｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１３４ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，５９８号）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ａｒｉｐｉｐｒａｚｏｌｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１２９ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，５２２号）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｏｌａｎｚａｐｉｎｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１３３ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，６４５号）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｐａｌｉｐｅｒｉｄｏｎｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１２７ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，６９２号）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｑｕｅｔｉａｐｉｎｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１３５ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，６５９号）、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１３１ＵＳＰＳＰ、２０１２年８月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／６９１，６７５号）、及び「Ａｎｔｉｂ���ｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｒｉｓｐｅｒｉｄｏｎｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（代理人整理番号ＣＤＳ５１４５ＵＳＰＳＰ、２０１３年３月１５日に出願された米国仮特許出願第６１／７９０，８８０号）は全て、参照することによりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０１６１】
（実施例１）
工程Ａ
９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（２−クロロエチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
【０１６２】
【化２５】
0006374387.tif 000033
【０１６３】
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の３−（２−クロロエチル）−９−ヒドロキシ−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（１．０ｇ、４．１２ｍｍｏｌ）の溶液を、１Ｈ−イミダゾール（７０１．２４ｍｇ、６４．６６ｍｍｏｌ）で処理し、続いて、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のｔ−ブチルジメチルクロロシラン（６８３．１２ｍｇ、４．５３ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。室温で１８時間撹拌した後、この溶媒を真空下で除去し、炭酸カリウムをスパチュラで添加して、残渣をジクロロメタン／水（１０ｍＬ／１０ｍＬ）中に取り込んだ。水層をジクロロメタン（１０ｍＬで３回）で抽出した。合わせた有機画分をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、この溶媒を真空下で除去した。粗混合物を更なる精製を行わずに次の工程で使用した。（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）３５７）。
【０１６４】
工程Ｂ
９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
【０１６５】
【化２６】
0006374387.tif 000034
【０１６６】
メタノール（２５ｍＬ）及びジイソプロピルエチルアミン（７３２．８３μＬ、４．２０ｍｍｏｌ）中の、上述の工程に記載されるように調製した９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（２−クロロエチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（０．５ｇ、１．４０ｍｍｏｌ）の溶液を、３−（ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−オール塩酸塩（３７４．６２ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）で処理し、反応混合物をアルゴン下、６０℃で１７時間撹拌した。ジイソプロピルエチルアミン（７３２．８３μＬ、４．２０ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を、６０℃で４時間更に撹拌した。反応混合物を真空下で蒸発させ、残渣を水（２５ｍＬ）中に取り込み、クロロホルム（３×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ4で乾燥させ、濾過し、この溶媒を真空下で除去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール（９８／２）で溶出）により精製して、表題化合物を得た（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）５３９）。
【０１６７】
工程Ｃ
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（（３−（１−（２−（９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）カルバミン酸塩
【０１６８】
【化２７】
0006374387.tif 000035
【０１６９】
アセトン（０．５ｍＬ）及びＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の、上述の工程に記載されるように調製した９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（５０ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ）の溶液を、炭酸カリウム（３３．３ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）及びＮ−Ｂｏｃ−２−ブロモアミノエタン（２７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）で処理し、反応混合物をアルゴン下、６０℃で１７時間撹拌した。反応混合物を減圧下で、４０℃で蒸発させ、水（１０ｍＬ）中に溶解し、ジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、この溶媒を蒸発させて、粗表題化合物を得た。（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）６８２）。
【０１７０】
工程Ｄ
３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキシ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−９−ヒドロキシ−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
【０１７１】
【化２８】
0006374387.tif 000036
ＨＣｌ／イソプロパノール（１０ｍＬ，５Ｎ）中の、上述の工程に記載されるように調製したｔｅｒｔ−ブチル（２−（（３−（１−（２−（９−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）カルバミン酸塩（７０ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）の溶液を、６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で、４０℃で蒸発させ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）中に慎重に溶解し、ジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、減圧下で、４０℃で蒸発させた。水層はなお、生成物を含有したため、減圧下で、４０℃で水層を蒸発乾固させることにより回収した。水層から得られた残渣を水中に再溶解し、調整済みのＷａｔｅｒｓ  Ｏａｓｉｓ  ＳＰＥ（６ｃｃ）カラムに取り込み、その後、メタノールで溶出した。メタノール溶出画分をジクロロメタン抽出物の残渣と合わせ、減圧下で、４０℃で蒸発乾固して、副生成物とともに、表題化合物を得（ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）４６８、副生成物は、５％  ９−ヒドロキシ−３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オンであった（Ｍ＋１）４２５）。この混合物を、更なる精製を行わずに次の工程に使用した。
【０１７２】
（実施例２）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド
【０１７３】
【化２９】
0006374387.tif 000037
【０１７４】
２１５μＬのＤＭＦ及び４．３μＬのトリブチルアミン中の、実施例１に記載されるように調製した３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキシ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−９−ヒドロキシ−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（４．０ｍｇ、８．５μモル）の溶液に、２１４μＬのＮ−（α−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステルのＤＭＦ溶液（ＡＭＡＳ、１０ｍｇ／ｍＬ、２．１ｍｇ、８．５μモル）を添加した。得られた溶液を２０℃で６０分間撹拌し、次いで、チオール活性化タンパク質による抱合反応においてそのまま使用した。
【０１７５】
（実施例３）
工程Ａ
３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
【０１７６】
【化３０】
0006374387.tif 000038
【０１７７】
ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の３−（２−クロロエチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（１４．４ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、３−（ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−オール（１４．０ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１６．０ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、及びヨウ化カリウム（スパチュラポイント）の溶液を、８０℃で５時間撹拌した。この混合物を室温まで冷却し、水を添加した。沈殿物を濾過により除去し、濾液をクロロホルム（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をイソプロピルアルコール（７０ｍＬ）で結晶化し、濾過し、イソプロパノール／ジイソプロピルエーテル５０／５０の混合物（１０ｍＬ）で洗浄した。残渣を１００℃で一晩乾燥させ、表題化合物を得、更なる精製を行わずに次の工程で使用した。
【０１７８】
工程Ｂ
３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキシ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン
【０１７９】
【化３１】
0006374387.tif 000039
【０１８０】
ＤＭＦ（５０ｍＬ）及びアセトン（５０ｍＬ）中の、上述の工程に記載されるように調製した３−（２−（４−（６−ヒドロキシベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（６．６ｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）の溶液を、炭酸カリウム（３．０ｇ、０．０３ｍｍｏｌ）及びエチル（２−ブロモエチル）カルバミン酸塩（２．４ｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）で処理した。６０℃で一晩撹拌した後、反応混合物を水（１５０ｍＬ）中に注ぎ入れ、クロロホルム（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール（９０／１０）で溶出により精製した。合わせた画分をＨＢｒ（１５０ｍＬ、４８％）で処理し、３０分間加熱還流した。この混合物を室温まで冷却し、水酸化アンモニウム（Ｈ2Ｏ中２８％  ＮＨ3）を用いて塩基性にし、クロロホルム（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール（９０／１０〜５０／５０）で勾配溶出により精製して、固体を得、これをイソプロパノール（５０ｍＬ）中に溶解し、イソプロパノール／ＨＣｌで処理した。沈殿物を濾過により除去し、ｉＰｒＯＨ／ジイソプロピルエーテル（５０／５０、３×２０ｍＬ）で洗浄した。沈殿物を真空下で乾燥させて、表題化合物を得た。ＥＳＩ−ＭＳ（Ｍ＋１）４５２。1Ｈ  ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）・ｐｐｍ  １．７６〜１．８５（ｍ，１Ｈ）１．８７〜１．９６（ｍ，１Ｈ）２．１９（ｄ，Ｊ＝１２．８１Ｈｚ，１Ｈ）２．３７〜２．４８（ｍ，４Ｈ）２．９８〜３．１０（ｍ，３Ｈ）３．１０〜３．２８（ｍ，５Ｈ）３．３７〜３．４６（ｍ，３Ｈ）３．７２（ｄ，Ｊ＝１１．３４Ｈｚ，３Ｈ）３．７９〜３．８５（ｍ，２Ｈ）４．３１（ｔ，Ｊ＝４．９４Ｈｚ，１Ｈ）７．０５（ｄｄ，Ｊ＝８．７８，１．８３Ｈｚ，１Ｈ）７．３５〜７．３９（ｍ，１Ｈ）８．０８（ｄ，Ｊ＝８．７８Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１８１】
（実施例４）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド
【０１８２】
【化３２】
0006374387.tif 000040
【０１８３】
１８５μＬのＤＭＦ及び３．７μＬのトリブチルアミン中の、実施例３に記載されるように調製した３−（２−（４−（６−（２−アミノエトキシ）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）エチル）−２−メチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−４−オン（３．４ｍｇ、７．５８μモル）の溶液に、１９０μＬのＮ−（α−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ、１０ｍｇ／ｍＬ、１．９ｍｇ、７．５８μモル）のＤＭＦ溶液に添加した。得られた溶液を２０℃で９０分間撹拌し、次いで、チオール活性化タンパク質による抱合反応においてそのまま使用した。
【０１８４】
（実施例５）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド−キーホールリンペットヘモシアニン−コンジュゲート
【０１８５】
工程Ａ
１００ｍＭリン酸緩衝液、０．４６Ｍ塩化ナトリウム中の４．２２ｍＬのキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ、１８．０ｍｇ、０．１８μモル）の溶液に、ｐＨ  ７．４で、８３．２μＬのＮ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテオートのＤＭＦ溶液（ＳＡＴＡ、２５ｍｇ／ｍＬ、２．１ｍｇ、９．０μモル）を添加した。得られた溶液を、ローラーミキサー上で２０℃で１時間インキュベートした。１００ｍＭリン酸緩衝液、０．４６Ｍ塩化ナトリウム、５ｍＭ  ＥＤＴＡを使用して、この反応物を、ｐＨ  ６．０で、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラム上で精製した。
【０１８６】
工程Ｂ
工程Ａに記載されるように調製した９．３７ｍＬのＫＬＨ−ＳＡＴＡ溶液（１７．１ｍｇ、０．１７１μモル）に、ｐＨ  ７．０で、９３７μＬの２．５Ｍヒドロキシルアミン、５０ｍＭ  ＥＤＴＡを添加した。得られた溶液を、ローラーミキサー上で、２０℃で４０分間インキュベートした。この反応物をマレイミド活性化ハプテンによる抱合反応においてそのまま使用した。
【０１８７】
工程Ｃ
工程Ｂに記載されるように調製した一分量の得られたＫＬＨ−ＳＨ溶液（３．４ｍＬ、０．０５８μモル）に、実施例２に記載されるように調製した一分量の２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液（２８２．８μＬ、５．０μモル）を添加した。得られた混濁混合物を、ローラーミキサー上で２０℃で３時間インキュベートした。この反応物を、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾過し、次いで、ｐＨ７．４で、１００ｍＭリン酸緩衝液、０．４６Ｍ塩化ナトリウムを使用して、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラム上で精製した。
【０１８８】
（実施例６）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド−ウシサイログロブリン−コンジュゲート
【０１８９】
工程Ａ
１００ｍＭリン酸緩衝液中の１．０ｍＬのウシサイログロブリン（ＢＴＧ、９．３ｍｇ、０．０１４μモル）の溶液に、ｐＨ  ７．５で、１３２μＬのＮ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテオートのＤＭＦ溶液（ＳＡＴＡ、２５ｍｇ／ｍＬ、３．３ｍｇ、１４．１μモル）を添加した。得られた溶液を、ローラーミキサー上で２０℃で１時間インキュベートした。１００ｍＭリン酸緩衝液、５ｍＭ  ＥＤＴＡを使用して、この反応物を、ｐＨ  ６．０で、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラム上で精製した。
【０１９０】
工程Ｂ
工程Ａに記載される調製した２．１１ｍＬのＢＴＧ−ＳＡＴＡ溶液（７．４ｍｇ、０．０１１μモル）に、ｐＨ  ７．０で、２１１μＬの２．５Ｍヒドロキシルアミン、５０ｍＭ  ＥＤＴＡを添加した。得られた溶液を、ローラーミキサー上で２０℃で６０分間インキュベートした。この反応物をマレイミド活性化ハプテンによる抱合反応においてそのまま使用した。
【０１９１】
工程Ｃ
工程Ｂに記載されるように調製した一分量の得られたＢＴＧ−ＳＨ溶液（２．３ｍＬ、０．０１１μモル）に、実施例２に記載されるように調製した一分量の２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（９−ヒドロキシ−２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液（２８０．４μＬ、５．５μモル）を添加した。得られた混濁混合物を、ローラーミキサー上で２０℃で２．５時間インキュベートした。この反応物を、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾過し、次いで、ｐＨ  ７．４で、１００ｍＭリン酸緩衝液、０．１４Ｍ塩化ナトリウムを使用して、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラム上で精製した。
【０１９２】
（実施例７）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド−キーホールリンペットヘモシアニン−コンジュゲート
【０１９３】
実施例５の工程Ｂに記載されるように調製した一分量のＫＬＨ−ＳＨ溶液（１．５ｍＬ、０．０２５μモル）に、実施例４に記載されるように調製した一分量の２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液（１１３μＬ、２．２６μモル）を添加した。得られた混濁混合物を、ローラーミキサー上で２０℃で２．５時間インキュベートした。この反応物を、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾過し、次いで、ｐＨ  ７．４で、１００ｍＭリン酸緩衝液、０．４６Ｍ塩化ナトリウムを使用して、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラム上で精製した。
【０１９４】
（実施例８）
２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド−ウシサイログロブリン−コンジュゲート
【０１９５】
実施例６の工程Ｂに記載されるように調製した一分量のＢＴＧ−ＳＨ溶液（０．６３ｍＬ、０．００３３μモル）に、実施例４に記載されるように調製した一分量の２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−Ｎ−（２−（（３−（１−（２−（２−メチル−４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−４Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピリミジン−３−イル）エチル）ピペリジン−４−イル）ベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−６−イル）オキシ）エチル）アセトアミド溶液（８０μＬ、１．６μモル）を添加した。得られた混濁混合物を、ローラーミキサー上で２０℃で２．５時間インキュベートした。この反応物を、０．２μｍシリンジフィルターを通して濾過し、次いで、ｐＨ  ７．４で、１００ｍＭリン酸緩衝液、０．１４Ｍ塩化ナトリウムを使用して、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラム上で精製した。
【０１９６】
（実施例９）
リスペリドン／パリペリドンにおける競合的イムノアッセイ、並びにアリピプラゾール、オランザピン、クエチアピン、及びリスペリドン／パリペリドンにおけるマルチプレックス競合的イムノアッセイ
【０１９７】
パリペリドン／リスペリドン免疫原を用いた一連の免疫付与後、マウス尾出血を、ＥＬＩＳＡを使用して、反応性について試験した。ハイブリドーマ上清もまた試験し、下の表８及び９に示されるＥＬＩＳＡデータは、いくつかのハイブリドーマの反応性を示す（融合パートナーはＮＳＯ細胞であった）。表９に示されるように、ハイブリドーマ２Ａ５及び５Ｇ１１の反応性が見られた。
【０１９８】
【表８】
0006374387.tif 000041
【０１９９】
【表９】
0006374387.tif 000042
【０２００】
ＥＬＩＳＡ反応性によりクローンが特定された後、競合ＥＬＩＳＡは、類似の化合物に近い親和性及び交差反応性に達した。図１及び２は、ハイブリドーマサブクローンサブクローン５＿９からのＥＬＩＳＡの交差反応性の結果を示す。データは、リスペリドン、並びにその代謝産物のパリペリドン及び７−ヒドロキシリスペリドンへの反応性を示す。
【０２０１】
上清はまた、このシグナルがリスペリドン又はパリペリドンのいずれかに対して特異的であるかどうかを判定するために、競合ＥＬＩＳＡにより試験された。図３は、ハイブリドーマサブクローン２Ａ５からの結果を示す。データは、リスペリドン及びパリペリドンの両方への反応性を示す。
【０２０２】
図４は、側方流動アッセイ装置に使用される競合的イムノアッセイ形式を示し、捕捉抗体であるリスペリドン／パリペリドンクローン５−９を、フルオロフォアにコンジュゲートされたリスペリドンからなる検出コンジュゲートと共にチップ上に堆積させた。図４に示されるようなこの競合的形式において、低レベルの検体（パリペリドン）は、高いシグナルを生じ、一方、高レベルの検体（パリペリドン）は、低いシグナルを生じる。サンプル中のパリペリドンの量は、薬物が存在しない対照サンプルと比較して、蛍光の消失から計算することができる。リスペリドン／パリペリドンクローン５−９により生成された典型的な用量反応曲線を図５に示す。
【０２０３】
図６は、本発明の一実施形態に従う側方流動アッセイ装置のチップ設計を示す。装置は、サンプルを受容するための区画又は領域、コンジュゲート区画（所望の標識された競合的結合パートナー（複数を含む）を含む）、及び反応区画（反応区画内の８つの領域を示す、それぞれの領域は、別々の所望の抗体を含むことができる）を含む。サンプルは、コンジュゲート区画を通ってサンプル区画から反応区画に流れる。
【０２０４】
図７〜１０は、反応区画２内に堆積した抗体５Ｃ７及びコンジュゲート区画内の標識されたアリピプラゾール競合的結合パートナーで生成されたアリピプラゾール陽性対照（アリピプラゾールを含有するサンプル）（図７）、反応区画４内に堆積した抗体４Ｇ９−１及びコンジュゲート区画内の標識されたオランザピン競合的結合パートナーで生成されたオランザピン陽性対照（オランザピンを含有するサンプル）（図８）、反応区画６内に堆積した抗体１１及びコンジュゲート区画内の標識されたクエチアピン競合的結合パートナーで生成されたクエチアピン陽性対照（クエチアピンを含有するサンプル）（図９）、並びに反応区画８内に堆積した抗体５−９及びコンジュゲート区画内の標識されたリスペリドン競合的結合パートナーで生成されたリスペリドン陽性対照（リスペリドンを含有するサンプル）（図１０）についての典型的な用量反応曲線を示す。コンジュゲート区画内の標識された競合的結合パートナーは、抗体への結合に対して、サンプル中に存在する薬物と競合する。標識の量を検出し、サンプル中に存在する薬物の量の指標である（シグナルの量はサンプル中の薬物の量に反比例する−図４を参照のこと）。
【０２０５】
標識された競合的結合パートナーのコンジュゲートは反応区画内に堆積した抗体に結合しないことを確認するために、陰性対照は、薬物を含有しないサンプルを使用することにより行われた。表１０を参照すると、アリピプラゾールを含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたオランザピン、標識されたクエチアピン、及び標識されたリスペリドンを含有するが、標識されたアリピプラゾールは含有しない）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画２内にアリピプラゾール抗体（５Ｃ７）を再度含有する。下の表１０は、結果を示し、用量反応がなく、毛管現象により反応区画を通って移動するオランザピン、クエチアピン、及びリスペリドンのコンジュゲートがアリピプラゾール抗体に結合しないことを確認する。
【０２０６】
【表１０】
0006374387.tif 000043
【０２０７】
表１１を参照すると、オランザピンを含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾール、標識されたクエチアピン、及び標識されたリスペリドンを含有するが、標識されたオランザピンは含有しない）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画４内にオランザピン抗体（４Ｇ９−１）を再度含有する。下の表１１は、結果を示し、用量反応がなく、毛管現象により反応区画を通って移動するアリピプラゾール、クエチアピン、及びリスペリドンのコンジュゲートがオランザピン抗体に結合しないことを確認する。
【０２０８】
【表１１】
0006374387.tif 000044
【０２０９】
表１２を参照すると、クエチアピンを含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾール、標識されたオランザピン、及び標識されたリスペリドンを含有するが、標識されたクエチアピンは含有しない）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画６内にクエチアピン抗体（１１）を再度含有する。下の表１２は、結果を示し、用量反応がなく、毛管現象により反応区画を通って移動するアリピプラゾール、オランザピン、及びリスペリドンのコンジュゲートがクエチアピン抗体に結合しないことを確認する。
【０２１０】
【表１２】
0006374387.tif 000045
【０２１１】
表１３を参照すると、リスペリドンを含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾール、標識されたオランザピン、及び標識されたクエチアピンを含有するが、標識されたリスペリドンは含有しない）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画８内にリスペリドン抗体（５−９）を再度含有する。以下の表１３は、結果を示し、用量反応がなく、毛管現象により反応区画を通って移動するアリピプラゾール、オランザピン、及びクエチアピンのコンジュゲートがリスペリドン抗体に結合しないことを確認する。
【０２１２】
【表１３】
0006374387.tif 000046
【０２１３】
標識された競合的結合パートナーのコンジュゲートが反応区画内に堆積されたそれらのそれぞれの抗体にのみ結合することを確認するために、更なる陰性対照は、薬物を含有しないサンプルを再度使用することにより行った。表１４を参照すると、アリピプラゾールを含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾールを含有する）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画２内にアリピプラゾール抗体（５Ｃ７）、並びに反応区画４内にオランザピン抗体（４Ｇ９−１）、反応区画６内にクエチアピン抗体（１１）、及び反応区画８内にリスペリドン抗体（５−９）を再度含有する。以下の表１４は、結果を示し、アリピプラゾール抗体５Ｃ７（反応区画２内）を除いては、用量反応がないことを確認する。
【０２１４】
【表１４】
0006374387.tif 000047
【０２１５】
表１５を参照すると、オランザピンを含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたオランザピンを含有する）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画２内にアリピプラゾール抗体（５Ｃ７）、並びに反応区画４内にオランザピン抗体（４Ｇ９−１）、反応区画６内にクエチアピン抗体（１１）、及び反応区画８内にリスペリドン抗体（５−９）を再度含有する。下の表１５は、結果を示し、オランザピン抗体４Ｇ９−１（反応区画４内）を除いては、用量反応がないことを確認する。
【０２１６】
【表１５】
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【０２１７】
表１６を参照すると、クエチアピンを含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたクエチアピンを含有する）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画２内にアリピプラゾール抗体（５Ｃ７）、並びに反応区画４内にオランザピン抗体（４Ｇ９−１）、反応区画６内にクエチアピン抗体（１１）、及び反応区画８内にリスペリドン抗体（５−９）を再度含有する。下の表１６は、結果を示し、クエチアピン抗体１１（反応区画６内）を除いては、用量反応がないことを確認する。
【０２１８】
【表１６】
0006374387.tif 000049
【０２１９】
表１７を参照すると、リスペリドンを含有しないサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたリスペリドンを含有する）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画２内にアリピプラゾール抗体（５Ｃ７）、並びに反応区画４内にオランザピン抗体（４Ｇ９−１）、反応区画６内にクエチアピン抗体（１１）、及び反応区画８内にリスペリドン抗体（５−９）を再度含有する。下の表１７は、結果を示し、リスペリドン抗体５−９（反応区画８内）を除いては、用量反応がないことを確認する。
【０２２０】
【表１７】
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【０２２１】
上に示される結果は、標識された競合的結合パートナーのコンジュゲートが反応区画内のそれらのそれぞれの抗体にのみ結合することを確認する。
【０２２２】
図１１〜１４は、特定の抗体反応区画内の典型的な用量反応曲線、及び他のコンジュゲートの存在下で、それぞれの特定のアッセイについて低／高濃度の用量反応の証拠を示す。図１１において、アリピプラゾールを含有するサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾール、標識されたオランザピン、標識されたクエチアピン、及び標識されたリスペリドンを含有する）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画２内にアリピプラゾール抗体（５Ｃ７）を再度含有する。オランザピン、クエチアピン、又はリスペリドンについてではなく、アリピプラゾールのみについて図１１に示されるように、典型的な用量反応曲線を生成した。
【０２２３】
図１２において、オランザピンを含有するサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾール、標識されたオランザピン、標識されたクエチアピン、及び標識されたリスペリドンを含有する）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画４内にオランザピン抗体（４Ｇ９−１）を再度含有する。アリピプラゾール、クエチアピン、又はリスペリドンについてではなく、オランザピンのみについて図１２に示されるように、典型的な用量反応曲線を生成した。
【０２２４】
図１３において、クエチアピンを含有するサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾール、標識されたオランザピン、標識されたクエチアピン、及び標識されたリスペリドンを含有する）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画６内にクエチアピン抗体（１１）を再度含有する。アリピプラゾール、オランザピン、又はリスペリドンについてではなく、クエチアピンのみについて図１３に示されるように、典型的な用量反応曲線を生成した。
【０２２５】
図１４において、リスペリドンを含有するサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（この時、標識されたアリピプラゾール、標識されたオランザピン、標識されたクエチアピン、及び標識されたリスペリドンを含有する）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画８内にリスペリドン抗体（５−９）を再度含有する。アリピプラゾール、オランザピン、又はクエチアピンについてではなく、リスペリドンのみについて図１４に示されるように、典型的な用量反応曲線を生成した。
【０２２６】
図１５〜１８は、他のコンジュゲート及び抗体の存在下で、それぞれのアッセイについて典型的な用量反応曲線を示す。図１５において、アリピプラゾールを含有するサンプルは、サンプル区画内に堆積され、毛管現象によりコンジュゲート区画（標識されたアリピプラゾール、標識されたオランザピン、標識されたクエチアピン、及び標識されたリスペリドンを再度含有する）を通って反応区画に移動する。反応区画は、反応区画２内にアリピプラゾール抗体（５Ｃ７）、並びに反応区画４内にオランザピン抗体（４Ｇ９−１）、反応区画６内にクエチアピン抗体（１１）、及び反応区画８内にリスペリドン抗体（５−９）を再度含有する。図１５に示されるように、アリピプラゾールについて典型的な用量反応曲線を生成した。オランザピンを含有するサンプルがこのチップのサンプル区画内に堆積した場合、図１６に示されるように、オランザピンについて典型的な用量反応曲線を生成した。クエチアピンを含有するサンプルがこのチップのサンプル区画内に堆積した場合、図１７に示されるように、クエチアピンについて典型的な用量反応曲線を生成した。リスペリドンを含有するサンプルがこのチップのサンプル区画内に堆積した場合、図１８に示されるように、リスペリドンについて典型的な用量反応曲線を生成した。
【０２２７】
図１９〜２２は、多重形式で生成された用量反応曲線（図１５〜１８）に対する陽性対照として生成された用量反応曲線（図７〜１０）の比較を示す。アリピプラゾールについての比較を図１９に、オランザピンについては図２０に、クエチアピンについては図２１に、リスペリドンについては図２２に示す。これらの図は、陽性対照曲線が多重曲線に類似していることを示す。
【０２２８】
これらのデータは、本発明の側方流動アッセイ装置を使用し、ある携帯型のポイントオブケア装置において患者からの単一サンプルを使用して、複数の抗精神病薬を検出することができることを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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