(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）式Ｉで表されるセミフッ化化合物：
ＣＦ３−（ＣＦ２）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−ＣＨ３    （Ｉ）
（式中、ｘは１乃至８の整数を表し、及びｙは２乃至１０の整数を表す。）
ｂ）２０℃にて前記セミフッ化化合物と混和可能である、トリグリセリド；及び
ｃ）乳化剤、
を含む水性エマルション。
【請求項２】
前記セミフッ化化合物が、ペルフルオロヘキシルオクタン（Ｆ６Ｈ８）及び／又はペルフルオロブチルペンタン（Ｆ４Ｈ５）である、請求項１に記載のエマルション。
【請求項３】
前記セミフッ化炭素化合物ａ）及び、前記トリグリセリドｂ）の量が、エマルションの総質量に基いて、５乃至４０質量％の範囲である、請求項１又は請求項２に記載のエマルション。
【請求項４】
前記セミフッ化炭素化合物ａ）及び、前記トリグリセリドｂ）の量が、エマルションの総質量に基いて、１０乃至３０質量％の範囲である、請求項３に記載のエマルション。
【請求項５】
前記セミフッ化炭素化合物ａ）及び、前記トリグリセリドｂ）の量が、エマルションの総質量に基いて、１５乃至２５質量％の範囲である、請求項４に記載のエマルション。
【請求項６】
前記トリグリセリドｂ）が中鎖トリグリセリドである、請求項３乃至請求項５のうちいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項７】
前記セミフッ化炭素化合物ａ）と、前記トリグリセリドｂ）の質量比が、１：２０乃至１：０．２０の範囲である、請求項１乃至請求項６のうち何れか一項に記載のエマルション。
【請求項８】
前記セミフッ化炭素化合物ａ）と、前記トリグリセリドｂ）の質量比が、１：１５乃至１：０．２５の範囲である、請求項７に記載のエマルション。
【請求項９】
前記セミフッ化炭素化合物ａ）と、前記トリグリセリドｂ）の質量比が、１：１０乃至１：０．３０の範囲である、請求項８に記載のエマルション。
【請求項１０】
前記セミフッ化炭素化合物ａ）と、前記トリグリセリドｂ）の質量比が、１：４乃至１：０．３５の範囲である、請求項９に記載のエマルション。
【請求項１１】
前記セミフッ化炭素化合物ａ）と、前記トリグリセリドｂ）の質量比が、１：２乃至１：０．４の範囲である、請求項１０に記載のエマルション。
【請求項１２】
前記トリグリセリドｂ）が中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）である、請求項７乃至請求項１１のうちいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項１３】
造影剤（ｃｏｎｔｒａｓｔ  ａｇｅｎｔ）又はコントラスト増強剤（ｃｏｎｔｒａｓｔ  ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）としての使用のための、請求項１乃至請求項１２のうち何れか一項に記載のエマルション。
【請求項１４】
ＭＲ技術を利用するイメージング法を用いる、診断検出（ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）のためのコントラスト増強剤又は造影剤としての使用のための、請求項１乃至請求項１３のうち何れか一項に記載のエマルション。
【請求項１５】
１９Ｆ同位体の核磁気共鳴測定に基づくイメージング法を用いる、梗塞の周辺の炎症反応、心筋梗塞、脳卒中；臓器の炎症、心筋炎、脳炎、髄膜炎；消化管の炎症、クローン病；血管の炎症、動脈硬化、不安定プラーク；膿瘍並びにまた関節炎の検出、からなる群から選択される炎症過程の、診断検出における使用のための、請求項１乃至請求項１３のうち何れか一項に記載のエマルション。
【請求項１６】
心筋、動脈及び静脈等の心血管系；脳卒中又は腫瘍などの神経学で見られる血管系の炎症及び変性過程に至る、心筋梗塞、心筋炎、アテローム性動脈硬化症、及び血栓症のような疾患経過に生ずる炎症反応；血栓症、炎症、サルコイドーシス等の呼吸器系学（ｐｕｌｍｏｌｏｇｙ；プルモロジー）；腫瘍、クローン病等の炎症性腸疾患などの消化器病学；及び高安動脈炎などの血管の自己免疫疾患などのリウマチ学の、非侵襲のイメージング法に基づく、診断検出における使用のための、請求項１乃至請求項１３のうち何れか一項に記載のエマルション。
【請求項１７】
磁気共鳴イメージング法におけるコントラスト増強剤又は造影剤である、請求項１乃至請求項１３のうち何れか一項に記載のエマルション。
【請求項１８】
請求項１乃至請求項１７のうち何れか一項に記載のエマルションを製造する方法であって、
ａ）  ・式Ｉで表されるセミフッ化化合物
ＣＦ３−（ＣＦ２）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−ＣＨ３    （Ｉ）
（式中、ｘは１乃至８の整数を表し、及びｙは２乃至１０の整数を表す。）
・２０℃にて前記セミフッ化化合物と混和可能である、トリグリセリド；
・乳化剤；及び
・水
を混合することにより、混合物を調製する工程；
ｂ）  工程ａ）にて得られた混合物を均質化させる工程；及び
ｃ）  所望によりエマルションを殺菌する工程
を含む方法。
【請求項１９】
以下の工程を含む、請求項１８に記載の方法。
ａ）
ａ−１）水及び乳化剤を含む混合物を調製する工程、
ａ−２）セミフッ化化合物及びトリグリセリドを含有する均質化混合物を調製する工程、ａ−３）工程ａ−１）で得られた混合物を工程ａ−２）で得られた混合物と組み合わせる工程により混合物を調製する工程；及び
ｂ）工程ａ）で得られた混合物を均質化させる工程。
【請求項２０】
前記ｂ）工程が、工程ａ）で得られた混合物を高圧ホモジナイザーで均質化させる工程である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
請求項１乃至請求項１７のうち何れか一項に記載のエマルション中の、
式Ｉ：
ＣＦ３−（ＣＦ２）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−ＣＨ３    （Ｉ）
（式中、ｘは１乃至８の整数を表し、及びｙは２乃至１０の整数を表す。）
で表されるセミフッ化化合物を検出する方法であって、
該方法は、
−交流磁場を照射する工程、
−検査される試料による照射された磁場の吸収を検出する工程；を含み、
前記交流磁場の周波数がＨ・４０．０５６５０ＭＨｚ／Ｔ乃至Ｈ・４０．０６１５０ＭＨｚ／Ｔ（Ｈはテスラによる磁場の強さを表す）の間であることを特徴とする、
方法。
【請求項２２】
検査される試料中で、
請求項１乃至請求項１７のうち何れか一項に記載のエマルション中の式Ｉ：
ＣＦ３−（ＣＦ２）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−ＣＨ３    （Ｉ）
（式中、ｘは１乃至８の整数を表し、及びｙは２乃至１０の整数を表す。）
で表されるセミフッ化化合物を検出する方法であって、
該方法は以下の方法工程：
−交流磁場を照射する工程、
−検査される試料による照射された磁場の吸収を検出する工程；
を含み、
以下の方法工程：
−少なくともひとつの１９Ｆ−フッ素プロトンイメージを、１Ｈプロトンイメージ上に重ねあわせる工程
（ここで、１Ｈプロトンイメージをグレースケールイメージで表示し、
１９Ｆフッ素イメージをカラーグラデーション（色勾配）を用いて表示し、
このカラーグラデーション（色勾配）の一端が低濃度の１９Ｆを示し、
このカラーグラデーション（色勾配）のもう一端が高濃度の１９Ｆを示す）
を特徴とする、方法。
【請求項２３】
−検査されない第二試料中の１９Ｆフッ素プロトンにより励起された妨害シグナル（信号）を、以下の方法工程：
−  第一ピクセル（画素）中のフッ素濃度の値を、この第一ピクセル周囲の三次元空間における全ピクセルの値と比較する工程、
（ここで、２つの隣接したピクセルのフッ素濃度値の間の相違が閾値を下回る場合、これ
ら２つのピクセルはピクセルのクラスタ（一群）に属するとみなされる。）
−  前記クラスタが検査される試料を示すものでない場合、この妨害ピクセルクラスタを得られたイメージから除去する工程；
により除外する工程を含むことを特徴とする、
請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
患者の血流内に溶解するように事前に投与され、非侵襲性のイメージング法により画像を獲得するための、請求項１乃至請求項１７のうち何れか一項に記載のエマルション。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定のセミフッ化炭素化合物、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）及び乳化剤を含有する水性エマルション、並びに、前記エマルションの造影剤又はコントラスト増強剤としての使用に関する。さらに本発明は、ＭＲイメージングを用いた炎症病的状態を診断検出するための前記エマルションの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症性疾患は、世界規模での罹患率及び死亡率の極めて重大な原因である。急性炎症性疾患（大部分は病原菌によって引き起こされる）のための、効果的な診断法及び治療法は多くの場合に存在するものの、慢性炎症性疾患の診断は最も難しく、そしてそれらの治療は、症状の対策に限られる。例えば心エコー検査、コンピュータ断層撮影法、及び核磁気共鳴分光法などの非侵襲イメージング法（画像法）は、詳細な解剖学的情報を提供し、そして、それにより、臓器の機能を評価するための有益な方法である。しかしこれまで、高い空間分解能にて、明瞭に炎症過程を検出する方法は挙げられていない。
【０００３】
ネイチャーバイオテクノロジー（ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．８、２００５年８月、ｐ９８３−９８７）において、アレンスらは、免疫療法細胞の追跡方法を記載する。ペルフルオロ−１５−クラウン−５エーテルの核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）により、生体内で、免疫療法の関連性を有する細胞の検出を試みている。彼らは、生体外でペルフルオロ−１５−クラウン−５エーテルでチャージさせた樹枝状細胞を用いた。その後、マウス組織内への注射後、或いは、マウスの血管内注射後に、それらの結末を生体内で検査した。国際公開第２００５／０７２７８０号及び国際公開第０３／０７５７４７号は、類似の試験に関する。メディカ  ムンディ（４７／１、２００３年４月、ｐ．３４−３９）において、Ｇ．Ｍ．ランザらは、標的細胞のための常磁性ナノ粒子の使用を記載する。この方法において、常磁性ナノ粒子は、１Ｈ磁気共鳴イメージのシグナル（信号）消滅を生じさせるために使用される。１９Ｆでチャージされたビヒクルが、プローブとして使用される。
【０００４】
国際公開第２００５／０７２７８０号は、ペルフルオロ炭素を用いた単離（分離）細胞の生体外ラベリング（標識化）に関する。生体外にてペルフルオロ炭素でラベルされた単離細胞は、注射（投与）後に生体内での細胞の移行を研究するのに適している。オク、ナオトら（バイオキミカ  エト  バイオフィジカ  アクタ  １２８０（１９９６）、１４９−１５４）は、“リポソーム型トラフィッキング（輸送）”の研究のための、１８Ｆ−ラベル化グルコースでチャージしたリポソームの使用に関する。該研究は、ＰＥＴ診断法にて実施される。
【０００５】
米国特許公開第２００９−０２８００５５号公報は、イメージング法に使用する診断目的のペルフルオロオクチルブロミドの使用を開示する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、イメージング法により、炎症過程等の、特に病的状態の可視化を可能にする方法、そしてそれにより、病変部位の認識を可能にする方法を提供することを目的とする。
【０００７】
本発明のさらなる目的は、心血管疾患の特異診断のための、特に、心血管系の炎症過程の診断のための、より特に、心筋炎又は炎症性心筋症の診断のための、フッ化炭素ベースの診断薬の提供である。
【０００８】
本発明のさらなる目的は、磁気共鳴分光法に使用可能であり、そして殺菌などのストレス条件下であっても安定に保存できる、生体適合性の水中油型エマルションの提供である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の第一の態様は、
ａ）式Ｉで表されるセミフッ化化合物：
ＣＦ３−（ＣＦ２）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−ＣＨ３    （Ｉ）
（式中、ｘは１乃至８の整数を表し、及びｙは２乃至１０の整数を表す。）
ｂ）２０℃にて前記セミフッ化化合物と混和可能である、トリグリセリド；及び
ｃ）乳化剤、
を含む水性エマルションである。
【００１０】
本発明のさらなる具体的な態様は、
ａ）式Ｉで表されるセミフッ化化合物：
ＣＦ３−（ＣＦ２）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−ＣＨ３    （Ｉ）
（式中、ｘは１乃至８の整数を表し、及びｙは２乃至１０の整数を表す。）
ｂ）中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）；及び
ｃ）乳化剤、
を含む水性エマルションである。
【００１１】
本発明のエマルションは、好ましくは、セミフッ化化合物を必須に含有する、水中油型エマルションである。
【００１２】
本発明で意味するところのセミフッ化化合物は、セミフッ化アルカン類である。セミフッ化アルカン類は、フッ化炭素及び炭化水素部分を含む。一般に、セミフッ化アルカン類は、以下の命名法に従う：ＦＸＨＹ、式中、Ｘはフッ素原子で置換された炭素原子の数を表し、Ｙは水素原子で置換された炭素原子の数を表す。例えば、ペルフルオロヘキシルオクタンは、式：Ｆ６Ｈ８で表される。
【００１３】
Ｆ６Ｈ８は、下記式で示される。
【化１】
0006356780.tif 000002
【００１４】
本発明のエマルションに適するセミフッ化化合物は、式（Ｉ）に反映される。
ＣＦ３−（ＣＦ２）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−ＣＨ３    （Ｉ）
（式中、ｘは１乃至８の整数を表し、及びｙは１乃至１０の整数を表す。）
【００１５】
一実施態様において、式（Ｉ）中のｘは、２乃至６の範囲、好ましくは３乃至６の範囲、より好ましくは４乃至６の範囲であり、特にｘは５である。
【００１６】
さらに好ましい実施態様において、式（Ｉ）中のｙは、２乃至９の範囲、好ましくは３乃至８の範囲、より好ましくは５乃至８の範囲、さらに好ましくは６乃至８の範囲であり
、特にｙは７である。
【００１７】
イメージング（画像）の観点から良好な結果及びエマルションの安定性は、式中のｙがｘより大きい値である式（Ｉ）で表されるセミフッ化化合物を用いて達成可能である。
【００１８】
特に好ましいセミフッ化化合物は、ペルフルオロヘキシルオクタン（Ｆ６Ｈ８）及び／又はペルフルオロブチルペンタン（Ｆ４Ｈ５）である。
【００１９】
さらなる本発明の成分は、２０℃でセミフッ化化合物と混和可能である、トリグリセリド（以下化合物ｂ）ともいう）である。
【００２０】
本発明の目的の範囲内にて、温度２０℃の場合に、前記トリグリセリド（成分ｂ））は、セミフッ化化合物（成分ａ））と混和可能であり、そして混合及びその後の２０℃で２４時間保存後に、成分ａ）と成分ｂ）が別の連続相を形成しない。
【００２１】
好ましい実施態様において、成分ｂ）は成分ａ）と任意の比率にて混和可能である。特に、成分ａ）と成分ｂ）は、質量比にて、成分ａ）と成分ｂ）が１：２０乃至１：０．７、好ましくは１：１５乃至１：０．８、より好ましくは１：１０乃至１：０．９、さらに好ましくは１：４乃至１：１、特に１：２乃至１：１で、混和可能である。
【００２２】
別の実施態様において、成分ａ）と成分ｂ）の質量比は、１：２０乃至１：０．２０、好ましくは１：１５乃至１：０．２５、より好ましくは１：１０乃至１：０．３０、さらに好ましくは１：４乃至１：０．３５、特に１：２乃至１：０．４である。
【００２３】
好ましい実施態様において、セミフッ化化合物と混和可能なトリグリセリドは、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）である。
【００２４】
具体的な実施態様において、成分ａ）、好ましくはＦ６Ｈ８と、ＭＣＴの質量比は、４：１乃至１：４の範囲、特に３：２乃至２：３の範囲である。
【００２５】
本明細書に記載の水性エマルションにおける油は、好ましくは中鎖トリグリセリドを含む。“中鎖トリグリセリド”（ＭＣＴｓ）は、天然由来の或いは合成であり得るトリグリセリド油の分類（クラス）である。ＭＣＴｓは炭素原子数６乃至１４、好ましくは炭素原子数６乃至１２、特に炭素原子数８乃至１０の長さの脂肪酸から形成される。ＭＣＴは、カプリル酸（例えば、ＭＣＴの約５０質量％乃至約８０質量％の量で）、すなわち８−炭素飽和ＦＡ（脂肪酸）（８：０）を含み得る。ＭＣＴは、カプリン酸（例えば、ＭＣＴの約２０質量％乃至約５０質量％の量で）、すなわち１０−炭素飽和ＦＡ（脂肪酸）（１０：０）を含み得る。例えば中鎖トリグリセリドは、中鎖トリグリセリドの少なくとも９０質量％の量で、カプリル酸及びカプリン酸のトリグリセリドを含み得る。この開示において使用するＭＣＴの説明は、例えば、ＥＰモノグラフ（ヨーロッパ薬局方論文）０８６８、表題“トリグリセリド、中鎖”（トリグリセリド飽和媒体（Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄａ
ｓａｔｕｒａｔｅ  ｍｅｄｉａ）（ヨーロッパ薬局方０８６８、２００８）の要件を満たし得る。
【００２６】
本発明のさらなる態様によれば、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）は、以下に規定されるカルボン酸でエステル化されたグリセロールである：カプロン酸  ２質量％以下の量；カプリル酸  約５０乃至約８０質量％の範囲の量；カプリン酸  約２０乃至約５０質量％の範囲の量；ラウリン酸  ３質量％以下の量；ミリスチン酸  １質量％以下の量  （質量％は脂肪酸の総質量に基づく）。
【００２７】
中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）は、セミフッ化化合物にとって優れた溶媒である。本発明によれば、一種以上のＭＣＴ’ｓが使用され得る。ＭＣＴは、例えばミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）８１２（サソール（ＳＡＳＯＬ）ゲーエムベーハー、ドイツ）、或いは、クロダモール（ＣＲＯＤＡＭＯＬ）ＧＴＣＣ−ＰＮ（クローダ（Ｃｒｏｄａ）インク、ニュージャージー）として市販されている。
【００２８】
本発明の別の好ましい実施態様によれば、エマルションは、７、９及び１１の炭素原子を有する脂肪酸の群から選択される脂肪酸を少なくとも５０質量％含む脂肪酸でエステル化されたグリセロールで構成されるＭＣＴを含む。好ましくはトリヘプタノイン（ｔｒｉｐｈｅｐｔａｎｏｉｎ）である。
【００２９】
本発明のエマルションにおけるトリグリセリドｂ）、好ましくは、中鎖トリグリセリドの量は、エマルションの総質量に基いて、２乃至４０質量％、好ましくは５乃至２５質量％、そして最も好ましくは８乃至１８質量％（ｗｔ％）の範囲であり得る。
【００３０】
本発明の好ましい態様において、セミフッ化化合物ａ）、及びトリグリセリドｂ）、好ましくは中鎖トリグリセリドの量は、エマルションの総質量に基いて、５乃至４０質量％、好ましくは１０乃至３０質量％、特に１５乃至２５質量％、とりわけ１８乃至２２質量％の範囲、例えば約２０質量％である。
【００３１】
セミフッ化炭素化合物ａ）対トリグリセリド、好ましくは中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）との質量比を、１：２０乃至１：０．７、好ましくは１：１５乃至１：０．８、より好ましくは１：１０乃至１：０．９、より好ましくは１：４乃至１：１、特に１：２乃至１：１の範囲、例えば約１：１．５とした場合、セミフッ化化合物の高い濃度と非常に長期間の安定性との優れたバランスを獲得できる。
【００３２】
別の実施態様において、成分ａ）と成分ｂ）ｓの質量比は１：２０乃至１：０．２０、好ましくは１：１５乃至１：０．２５、より好ましくは１：１０乃至１：０．３０、さらに好ましくは１：４乃至１：０．３５、特に１：２乃至１：０．４である。
【００３３】
本発明のエマルションは、セミフッ化化合物及び好ましくは中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）を含む。本発明の一態様によれば、エマルションの油成分は、２０℃で均質（均一）な溶液を形成する。ＭＣＴとＦ６Ｈ８などのセミフッ化化合物は２０℃で混和可能であり、そのため均質な溶液を形成する。油相は、植物油又は魚油等のマリンオイルに基づく長鎖脂肪酸トリグリセリドなどのさらなる油成分を含み得る。さらなる油成分の量は、好ましくは、完全に混和可能な油相が維持できるように調整される。一般に、セミフッ化化合物とトリグリセリドｂ）、好ましくはＭＣＴとは異なる油成分の量は、５０質量％未満、好ましくは４０質量％未満、より好ましくは３０質量％未満、さらに好ましくは２０質量％未満、特に１０質量％未満、とりわけ５質量％未満であり、或いは本質的に含まれておらず、ここで量は油成分の総質量に基づく。
【００３４】
本発明のエマルション中のＭＣＴと長鎖トリグリセリド（ＬＣＴ）の質量比は、一般に、１：１乃至１００００：１  又はそれ以上の範囲、好ましくは、３：２乃至１０００：１の範囲、より好ましくは３：１乃至５００：１の範囲、特に５：１乃至２００：１である。
【００３５】
本発明のエマルション中に存在し得、そしてＭＣＴとは異なる油は、“長鎖トリグリセリド”（ＬＣＴ）から選択され得る。
【００３６】
特定の実施態様において、油は植物油を含み得る。“植物油”は種又は木の実由来の油
を言及する。植物油は、概して、３つの脂肪酸（油源に応じて、通常１４乃至２２の炭素鎖長であり、種々の数と位置に不飽和結合を有する）が、グリセロールの３つのヒドロキシ基とのエステル結合を形成する際に形成される、“長鎖トリグリセリド”（ＬＣＴｓ）である。特定の実施態様において、高精製グレード（“超精製”とも呼ばれる）の植物油は、安全性と水中油型エマルションの安定性を確保するために使用される。特定の実施態様において、植物油の制御された水素化により製造される水素化（水添）植物油が、使用され得る。
【００３７】
典型的な植物油としては、但し限定されないが、アーモンド油、ババス油、クロフサスグリ種油、ルリジサ油、キャノーラ油、ひまし油、ココナッツ油、コーン油、綿実油、オリーブ油、ピーナッツ油、ヤシ油、パーム核油、菜種油、紅花油、大豆油、ひまわり油、及びごま油が挙げられる。これら油の水素化及び／又は、或いは、部分水素化形態もまた使用され得る。特定の実施態様において、油はさらに紅花油、ごま油、コーン油、オリーブ油及び／又は大豆油を含む。より特定の実施態様において、油はさらに紅花油及び／又は大豆油を含む。
【００３８】
油が更に大豆油を含む特定の実施態様において、大豆油は９乃至１３％のパルミチン酸含量（ｗｔ．／ｗｔ）、２．５％乃至５％のステアリン酸含量、１７％乃至３０％のオレイン酸含量、４８％乃至５８％のリノール酸含量、及び５％乃至１１％のリノレン酸含量を有し得る。
【００３９】
さらに、特定の実施態様において、本発明の水性エマルションは、構造化トリグリセリドを含み得る。本明細書において使用される“構造化トリグリセリド”は、６乃至１２の炭素原子の炭素鎖長を有する少なくとも１つの脂肪酸群と、１２より多い炭素単位の炭素鎖長を有する少なくとも１つの脂肪酸群とを有する、トリグリセリド又はトリグリセリドの混合物を含む、トリグリセリドである。
【００４０】
本発明のエマルションのさらなる成分は、乳化剤である。好ましくは、乳化剤は、リン脂質、脂肪酸塩などの両性及びイオン性界面活性剤からなる群から選択される。
【００４１】
乳化剤はエマルション中に、エマルションの総質量に基いて、最大１０ｗｔ％までの量で、好ましくは０．５乃至５質量％の量で存在し得る。
【００４２】
好ましくは、乳化剤はリン脂質又はリン脂質の混合物である。
【００４３】
一態様において、乳化剤は、レシチン、好ましくは天然に存在するレシチン、例えば大豆レシチン、エッグレシチン、ひまわり油レシチン、スフィンゴシン、ガングリオシド、フィトスフィンゴシン、及びそれらの組み合わせを含み得る。レシチンの制御された水素化生成物などの水素化レシチンもまた、乳化剤において更に使用され得る。
【００４４】
本発明において有用な例示リン脂質としては、但し限定されないが、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、リゾ−ホスファチジルコリン、及びそれらの混合物が挙げられる。組成物のリン脂質成分は、一種のリン脂質或いは数種のリン脂質の混合物であり得る。非経口投与、特に静脈内投与が可能であれば、使用されるリン脂質は、天然物又は合成物としてよい。
【００４５】
完全に網羅しているわけではないが、乳化剤中に更に存在し得る好適なリン脂質の一覧を以下に示す：１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸、ナトリウム塩（ＤＭＰＡ、Ｎａ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸、ナトリウム塩（ＤＰＰＡ、Ｎａ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ
−３−ホスファチジン酸、ナトリウム塩（ＤＳＰＡ、Ｎａ）等のホスファチジン酸類；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）等のホスホコリン類；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）等のホスホエタノールアミン類；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＤＬＰＧ、Ｎａ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＤＭＰＧ、Ｎａ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール、アンモニウム塩（ＤＭＰ−ｓｎ−１−Ｇ、ＮＨ４）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＤＰＰＧ、Ｎａ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＤＳＰＧ、Ｎａ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール、ナトリウム塩（ＤＳＰ−ｓｎ−１Ｇ、Ｎａ）等のホスホグリセロール類；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン、ナトリウム塩（ＤＰＰＳ、Ｎａ）等のホスホセリン類；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＰＯＰＧ、Ｎａ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、アンモニウム塩（ＰＯＰＧ、ＮＨ４）、等の混合鎖リン脂質；１−パルミトイル−２−リゾ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｐ−リゾ−ＰＣ）、１−ステアロイル−２−リゾ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｓ−リゾ−ＰＣ）等のリゾリン脂質；Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−ＭＰＥＧ−２０００−ＤＰＰＥ、ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール５０００）−ＭＰＥＧ−５０００−ＤＳＰＥ、ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール５０００）−ＭＰＥＧ−５０００−ＤＰＰＥ、ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール７５０）−ＭＰＥＧ−７５０−ＤＳＰＥ、ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−ＭＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ、ナトリウム塩等のペグ化リン脂質。
【００４６】
一実施態様において、本発明のエマルション中のリン脂質の量は、組成物の総質量に基いて、０．１乃至３０質量％の範囲内である。特定の実施態様において、リン脂質は、０．５乃至１５質量％、例えば０．８乃至１０質量％、例えば１乃至５質量％の範囲内で存在し得る。
【００４７】
例示的な実施態様において、本発明の水性エマルション中のリン脂質の量は、エマルションの総質量に基いて、最大１０質量％（ｗｔ％）まで、好ましくは０．５乃至５質量％である。
【００４８】
一実施態様において、乳化剤は、６０−８０％ｗｔ／ｗｔ、例えば６７％ｗｔ／ｗｔのホスファチジルコリン；１０−２０％ｗｔ／ｗｔ、例えば１５％ｗｔ．／ｗｔのホスファチジルエタノールアミン；＜＝３％ｗｔ／ｗｔ、例えば２％ｗｔ／ｗｔのスフィンゴミエリン；そして＜＝３％ｗｔ／ｗｔ、例えば１％ｗｔ／ｗｔのリゾホスファチジルコリンを含む、エッグレシチンを含む。
【００４９】
“エッグレシチンＰＬ９０”（フレゼニウス  カービ  アーベー）は上記リン脂質含量内容を有するエッグレシチンの一例である。
【００５０】
特に、優れた結果は、
約８０乃至約８５ｗｔ％のホスファチジルコリン；
約７．０乃至約９．５ｗｔ％のホスファチジルエタノールアミン；
３ｗｔ％未満のリゾホスファチジルコリン；
０．５ｗｔ％未満のリゾホスファチジルエタノールアミン；及び
約２乃至約３％ｗｔ％のスフィンゴミエリン
を含む、レシチンを含有する乳化剤にて達成され得る。
【００５１】
本発明の好ましい実施態様によれば、乳化剤は、リン脂質及び糖脂質の混合物を含む。驚くべきことに、リン脂質と糖脂質の混合物が、さらに高温（４０℃）でのエマルションの保存安定性を改善することが見出された。特に、これら混合物は、エマルションの殺菌といったストレス条件下であってもエマルションを安定化させる。本発明のエマルションは、通常、例えば回転式オートクレーブ中、圧力２ｂａｒにて、１２１℃で１５分間殺菌される。
【００５２】
糖脂質は、炭水化物が結合した脂質である。糖脂質は一種以上のモノ或いはオリゴサッカリド（単糖類）が脂質に結合されてなる、リンを含まない細胞膜の膜脂質である。該脂質は、エステル結合を介してグリセロールと結合するか、アミド結合を介してスフィンゴシンと結合する脂肪酸である。
【００５３】
好ましい実施態様において、本発明のエマルションはさらに糖脂質を含有し、好ましくは、モノガラクトシルジグリセリド、又は、スフィンゴ糖脂質、又は、セレブロシドなどのグリセロ糖脂質から選択される。
【００５４】
好ましい実施態様において、糖脂質及びリン脂質の合計総質量に基いて、糖脂質は５乃至３０ｗｔ％、好ましくは１０乃至２８ｗｔ％の量である。リン脂質と糖脂質の混合物は、リポイドゲーエムベーハー、ドイツからＬｉｐｏｉｄ  Ｓ  ７５として市販されている。
【００５５】
特に好ましい実施態様において、乳化剤は、約６８乃至約７３質量％のホスファチジルコリン；約７乃至１０質量％のホスファチジルエタノールアミン；約３質量％未満のリゾホスファチジルコリン；及び約１４乃至約２５質量％の糖脂質を含む（全ての質量は、糖脂質及びリン脂質の合計総質量に基づく）。
【００５６】
エマルションは、好ましくは、０．５乃至５質量％、より好ましくは１．０乃至４．０質量％の乳化剤を含む（量はエマルションの総質量に基づく）。
【００５７】
本発明のエマルションは、好ましくは、水相が連続相であり、油相が非連続相である、水中油型エマルションである。
【００５８】
上述したように、本発明の水中油型エマルションは、さらに、水性媒体を含む。“水性媒体”又は“水相”は、水を含有する液体を言及する。いくつかの実施態様において、水性媒体は水及び／又は水性緩衝溶液である。
【００５９】
本発明の水性エマルション、好ましくは水中油型エマルションは、エマルションの総質量に基いて、７０乃至９８ｗｔ％、好ましくは７０乃至９０ｗｔ％の水を含み得る。
【００６０】
いくつかの実施態様において、エマルションは、０乃至４ｍＭ、好ましくは０．５乃至３ｍＭの生理学的適合性の緩衝液を含み得る。
【００６１】
いくつかの実施態様において、本発明による水性エマルションは、所望により、補助界面活性剤を含む。本発明のエマルションにおける使用に適する補助界面活性剤は、脂質エマルションの凝集及び／又は合体を防止するものである。例示的な補助界面活性剤は、但し限定されないが、コレステロール、オレイン酸、オレイン酸塩、トゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０（モノオレイン酸ＰＥＧ溶液）、ＨＣＯ−６０、ソルトール（Ｓｏｌｕｔｏｌ）Ｈ１５（ポリオキシエチレン−６６０−ヒドロキシステアレート）、ＰＥＧ−４００（ポリエチレングリコール）、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）（Ｆ６８）（ＢＡＳＦ）、クレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬ（ポリオキシエチレン−３５−リシノレート）又は、デオキシコール酸などの胆汁酸の塩が挙げられる。他の実施態様において、補助界面活性剤は、例えば炭素原子数１６乃至２０の脂肪酸、それらの塩、及び／それらの混合物、或いは、炭素原子数１８の脂肪酸、それらの塩、及び／又はそれらの混合物などの、炭素原子数１２乃至２２の脂肪酸、それらの塩、及び／又はそれらの混合物からなる群から選択される。特定の実施態様において、脂肪酸はモノ不飽和である。
【００６２】
いくつかの実施態様において、補助界面活性剤は、０．００５％以上、０．０１％以上、或いは、０．０２％以上の量（ｗｔ％）でエマルション中に存在し得る。これら任意の実施態様に従い、補助界面活性剤は、４％以下、１％以下、又は０．０４％以下の量（ｗｔ％）で存在し得る。特定の実施態様において、補助界面活性剤は、パルミチン酸、オレイン酸又はステアリン酸等の長鎖脂肪酸、或いはそれらのアルカリ塩からなる群から選択される。オレイン酸塩及び／又はオレイン酸、特にオレイン酸ナトリウムが、特に好適な補助界面活性剤である。
【００６３】
ある実施態様において、補助界面活性剤はオレイン酸塩及び／又はオレイン酸であり、補助界面活性剤は、０．００５ｗｔ％以上、０．０１ｗｔ％以上、又は０．０２ｗｔ％以上の量（ｗｔ％）で存在し得る。これら任意の実施態様に従い、補助界面活性剤は、０．５ｗｔ％以下、０．２ｗｔ％以下、０．１ｗｔ％以下、又は０．０５ｗｔ％以下の量（ｗｔ％）で存在し得る。特定の実施態様において、補助界面活性剤はオレイン酸ナトリウムであり、０．０３ｗｔ％（０．３ｇ／ｌ）の量で存在する。本明細書に記載のエマルションは、非経口注入、例えば静脈注入に適し得る。特定の実施態様において、特定の補助界面活性剤の濃度は、従って、炎症、サイトクロームＰ４５０抑制等の副作用を防止するために最小量におさえられる。特定の実施態様において、プルロニックＦ６８（ポリ（エチレングリコール）−１３−ポリ（プロピレングリコール  コ−プロピレングリコール）は、０．７ｗｔ％未満、或いは０．５ｗｔ％未満の量で存在する。別の特定の実施態様において、ソルトール−ＨＳ（マクロゴール−１５−ヒドロキシステアレート）は１．２ｗｔ％未満の量で、又は１ｗｔ％未満の量で存在する。
【００６４】
本発明の水中油型エマルションは、等張化剤を含み得る。前記等張化剤は、２００−１００ｍＯｓｍ／ｋｇ、好ましくは２２０乃至８００ｍＯｓｍ／ｋｇ、特に２５０乃至６００ｍＯｓｍ／ｋｇ範囲のオスモル濃度を有し得る。
【００６５】
本発明の特定の実施態様に従い、エマルションは、等張及び等浸透圧であり得る。該組成物は、２２０−６００ｍＯｓｍ／ｋｇ、又は２３０−３６０ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有し得る。
【００６６】
好適な等張化剤としては、塩化カリウム又は塩化ナトリウム、トレハロース、スクロース、ソルビトール、グリセロール、グルコース、キシリトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、アルブミン、アミノ酸及びそれらの混合物が挙げられる。特定の実施態様において、２７０乃至３３０ｍＯｓｍ／ｋｇ、例えば、２８０乃至３００ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度が、浸透圧をも増加させる添加剤、例えばグリ
セロール、デキストロース、ラクトース、ソルビトール又はスクロールで獲得できる。
【００６７】
一実施態様において、等張化剤は、生理学的適合性のポリオール、例えばグリセロール、ソルビトール又はキシリトールである。特定の実施態様において、等張化剤はグリセロールである。
【００６８】
よって、さらなる本発明の態様によれば、エマルションはさらに等張化剤、好ましくはグリセロールを含有する。
【００６９】
等張化剤は、エマルションの総質量に基いて、０．１乃至１０ｗｔ％、好ましくは０．５乃至８ｗｔ％、より好ましくは１乃至５ｗｔ％の範囲の量で存在し得る。
【００７０】
等張化剤は、一般に、有害な生物学的効果を有さず、但し、等浸透圧性及び／又は等張性組成物を提供するのに十分な量で使用される。グリセロールが等張化剤であるとき、グリセロールは、２乃至５％（ｗｔ％）、例えば２．１％乃至２．９％（ｗｔ％）、例えば２．３％乃至２．７％の量で存在し得る。特定の実施態様において、本発明のエマルションは、２．５％（２５ｇ／ｌ）のグリセロールを含む。さらなる実施態様において、等張化剤は、エマルションの総質量に基いて、２．５ｗｔ％以上の量で存在する。
【００７１】
いくつかの実施態様において、本発明によるエマルションは、ｐＨ６．０乃至ｐＨ９．０、例えばｐＨ６．５乃至ｐＨ８．５、例えばｐＨ７．５乃至８．５、例えば８．０乃至８．５の範囲内のｐＨを有する。別の実施態様において、ｐＨは５．０乃至９．０の範囲である。組成物のｐＨは、例えば、脂肪酸のマイナス電荷を中和する適切な塩基の使用、適切な緩衝液、或いはそれらの組み合わせの使用といった従来技術の方法により調整し得る。種々の塩基及び緩衝液が、本発明のエマルションへの使用に適する。エマルションへの緩衝液の添加は、最終ｐＨだけでなく、エマルションのイオン強度にも影響を与えることは、当業者であれば理解し得るであろう。高いイオン強度の緩衝液は、エマルションのゼータポテンシャルに対して負の影響を与え得、そのため望ましくない。特定の実施態様において、ｐＨは水酸化ナトリウム、例えば０．１Ｎの水酸化ナトリウム或いは１Ｎの水酸化ナトリウムの添加により望ましい値に調整される。酸化過程に対して本発明のエマルションをさらに安定化させるために、抗酸化剤を存在させ得る。好ましい実施態様において、エマルションはさらに抗酸化剤、好ましくはα−トコフェロールを含む。
【００７２】
本発明によるエマルションは、所望により、一種以上の薬物学的に許容される添加剤、例えば、酸性化剤、アルカリ化剤、結合剤、キレート剤、錯化剤、可溶化剤、消毒剤、防腐剤（抗菌剤及び抗酸化剤を含む）、懸濁化剤、安定化剤、湿潤剤、粘度変性剤、溶媒、抗凍結剤、希釈剤、潤滑剤、及びその他の生体適合性物質又は治療薬を含む。特定の実施態様において、前記添加剤は、エマルションのさらなる安定化、或いは、本発明のエマルションを生体適合化させる手助けをする。
【００７３】
本発明の好ましい実施態様によれば、２５℃での油相の密度は、特にトリグリセリドｂ）、好ましくはＭＣＴと、セミフッ化化合物とからなる混合物の密度、０．９乃至１．１ｇ／ｃｍ３の範囲、より好ましくは、０．９５乃至１．０５ｇ／ｃｍ３、或いは約０．９５乃至約１．１０ｇ／ｃｍ３の範囲である。さらなる本発明の態様において、油相の密度は、水相の密度から１０％以上、好ましくは５％以上、特に３％以上外れない。連続相である水相は全ての添加剤を含み、非連続相である油相は全ての成分を含む。
【００７４】
優れた診断結果は、ナノ範囲の油滴サイズを有するエマルションを用いて実現できることが見出された。本発明の好ましい態様によれば、非連続相の粒子は、２５℃での光子相関分光法（ＰＣＳ）による測定で、好ましくは１乃至５００ｎｍ、より好ましくは１０乃
至４００ｎｍ、さらに好ましくは５０乃至３５０ｎｍの範囲の平均粒子径を有する。
【００７５】
本発明のさらなる実施態様は、本発明のエマルションの薬剤としての使用である。
【００７６】
本発明のエマルション中に存在するセミフッ化化合物は、細胞が特異的にラベル化（標識化）されるように単球／マクロファージによって取り込まれ、イメージング法の診断に利用することが可能となることが見出された。驚くべきことに、特に心血管系の炎症過程及びリンパ節の可視化の診断可能性が見出された。
【００７７】
よって、本発明のエマルションは、造影剤或いはコントラスト増強剤としての使用に適する。特に核磁気共鳴画像技術に対して、前記エマルションは、エマルションの前記セミフッ化炭素化合物が特に豊富であり、そして炎症組織に分布するために適している。
【００７８】
本発明の別の態様は、ＭＲ−技術を利用するイメージング法を用いる、診断検出のためのコントラスト増強剤又は造影剤としての使用のための本発明のエマルションである。
【００７９】
本発明のさらなる実施態様は、イメージング法、特に１９Ｆ同位体の核磁気共鳴測定に基づくイメージング法を用いる、画像検出のための造影剤としての使用のための本発明のエマルションである。
【００８０】
対応する測定値の評価とそれらのイメージへの変換は、例えば以下から分かるように、当業者に既知である：
ハッケ（Ｈａａｃｋｅ）Ｍ  Ｅ、ブラウン  Ｗ  Ｒ、トンプソン  Ｍ  Ｒ、フェンカセタン（Ｖｅｎｋａｓｅｔａｎ）Ｒ：磁気共鳴イメージング−物理的原理及びシークエンス設計、ウィリー（Ｗｉｌｅｙ）、ニューヨーク、１９９９；
ユ（Ｙｕ）  Ｊ  Ｘ、カディバカー（Ｋａｄｉｂａｇｋａｒ）Ｖ  Ｄ、クイ（Ｃｕｉ）Ｗ、マソン（Ｍａｓｏｎ）Ｒ  Ｐ．１９Ｆ：磁気共鳴を用いる非侵襲的な生理学及び薬理学のための多目的レポーター；Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．１２：８１９−４８、２００５；
ウェルニク（Ｗｅｒｎｉｃｋ）Ｍ  Ｎ、アーズボルド（Ａａｒｓｖｏｌｄ）Ｊ  Ｎ  エミッショントモグラフィー：ＰＥＴ及びＳＰＥＣＴの基本、アカデミックプレス、ロンドン、２００４。
【００８１】
エマルションは特に炎症過程の検出に適する。本発明のさらなる態様によれば、エマルションは、１９Ｆ同位体の核磁気共鳴測定に基づくイメージング法を用いる、梗塞の周辺の炎症反応、例えば心筋梗塞、脳卒中；臓器の炎症、例えば心筋炎、脳炎、髄膜炎；多発性硬化症；消化管の炎症、例えばクローン病；血管の炎症、例えば動脈硬化、特に不安定プラーク；膿瘍並びにまた関節炎の検出、からなる群から選択される炎症過程の、診断検出のためのものである。
【００８２】
本発明の別の態様において、エマルションは、心筋、動脈及び静脈等の心血管系；脳卒中又は腫瘍などの神経学で見られる血管系の炎症及び変性に至る、心筋梗塞、心筋炎、アテローム性動脈硬化症、及び血栓症のような疾患経過に生ずる炎症反応；血栓症、炎症、サルコイドーシス等の呼吸器系学（ｐｕｌｍｏｌｏｇｙ；プルモロジー）；腫瘍、クローン病等の炎症性腸疾患などの消化器病学；及び高安動脈炎などの血管の自己免疫疾患などのリウマチ学の、非侵襲のイメージング法に基づく、診断検出において使用される。
【００８３】
本発明のさらなる実施態様は、患者の血流内に溶解するように、事前に本発明のエマルションを投与された患者に対する非侵襲の画像イメージング法を獲得する工程を含む方法に関する。
【００８４】
好ましくは、非侵襲のイメージング法はＭＲイメージング法である。
【００８５】
本発明の方法のさらなる好ましい態様において、イメージング法は、１９Ｆ同位体又は１９Ｆ同位体及び１Ｈ同位体の核磁気共鳴の測定に基づく。
【００８６】
フッ化化合物中の１９Ｆ及び／又は１８Ｆ同位体の存在は、既に知られており病院内で使用される装置、すなわち１９Ｆ同位体を用いた核磁気共鳴分光法の使用及び／又は、１８Ｆ同位体の陽電子放射分光法の使用における利点を可能にする。
【００８７】
本発明によるエマルションの使用により、下記の病的状態を特に検出できる：
１）リンパ節及びその病的増大の可視化
ａ）リンパ節に直接影響を与えるガン：ホジキン病、非ホジキンリンパ腫；
ｂ）腫瘍転移、例えば乳がんからの；
ｃ）ウィルス及び細菌感染、例えば、梅毒、結核；
２）境界域の炎症反応
ａ）梗塞、例えば心筋梗塞、脳卒中；
ｂ）腫瘍；
３）臓器の炎症：心筋炎、脳炎、髄膜炎（脳髄膜及び脊髄膜）；
４）多発性硬化症；
５）消化管の炎症、例えばクローン病；
６）血管の炎症、例えば動脈硬化、特に所謂“不安定プラーク”；
７）膿瘍の検出；
８）関節炎の検出。
【００８８】
本発明のエマルションは、通常、イメージング法を始める前に非経口投与される。好ましい実施態様において、エマルションは、静脈内又は関節内に投与される。
【００８９】
本発明のさらなる態様は、炎症過程を検出する方法であって：
（ａ）本発明のエマルションを、それらを必要としている患者に投与する工程；及び
（ｂ）前記患者におけるフッ素含有化合物をイメージングする工程；を含み、
前記炎症過程は、好ましくは下記からなる群から選択される：リンパ節に直接影響を与えるガン；境界域の梗塞又は腫瘍の炎症過程；臓器の炎症；多発性硬化症；消化管の炎症；血管の炎症；関節炎；及び膿瘍。
【００９０】
本発明のさらなる実施態様は、以下の工程を含む本発明のエマルションを製造する方法である：
ｉ）
ａ）式Ｉで表されるセミフッ化化合物
ＣＦ３−（ＣＦ２）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−ＣＨ３    （Ｉ）
（式中、ｘは１乃至８の整数を表し、及びｙは２乃至１０の整数を表す。）
ｂ）２０℃にて前記セミフッ化化合物と混和可能であるトリグリセリド、好ましくは中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）及び
ｃ）乳化剤、及び
ｄ）水；
を含む混合物を提供する工程；及び
ｉｉ）前記混合物を均質化させる工程、好ましくは高圧ホモジナイザーで均質化させる工程；
ｉｉｉ）所望によりエマルションを殺菌する工程。
【００９１】
さらなる別の態様において、前記製法は以下の工程を含む：
ｉ）セミフッ化化合物をトリグリセリドｂ）、好ましくは中鎖トリグリセリドに溶解する工程；及び
ｉｉ）好ましくは乳化剤の存在下、水相中に油相を乳化させる工程。
【００９２】
特定の実施態様によれば、前記水性組成物が油性組成物と組み合わせられる前に、該水性組成物は、均質化懸濁液を生成するように、均質化される。
【００９３】
特定の実施態様において、均質化は、３５０ｂａｒ以上、又は３７０ｂａｒ以上にて、実施される。
【００９４】
特定の実施態様において、エマルションを製造する方法は、乳化剤を（オイル中よりむしろ）水性媒体に溶解する工程、油相を水相に（その逆よりはむしろ）添加する工程、そして３５０ｂａｒ以上で均質化させる工程を含む。これらの工程は、粒子サイズ並びにエマルションの安定性に関して有利な特性を有するエマルションにつながる。
【００９５】
別の特定の実施態様において、エマルションは密封容器に詰められ、少なくとも１２１℃（例えば１２１℃乃至１２３℃）、最短１５分間の保持時間の熱処理などにより、殺菌される。オートクレーブプログラムは回転周期であり得る。
【００９６】
本発明のさらなる実施態様は、本発明のエマルションを含有するコンテナである。コンテナの材料は、好ましくは、ガラス及び有機ポリマー及びそれらの混合物からなる群から選択される。好ましい有機ポリマーは、ポリエチレン及び／又はポリプロピレンである。
【００９７】
本発明の製造方法の好ましい実施態様において、前記方法は以下の工程を含む：
ａ）
ａ−１）水及び乳化剤を含む混合物を調製する工程、
ａ−２）セミフッ化化合物及びトリグリセリドを含有する均質化混合物を調製する工程、ａ−３）工程ａ−１）で得られた混合物を工程ａ−２）で得られた混合物と組み合わせる工程
により、混合物を調製する工程；及び
ｂ）工程ａ）で得られた混合物を均質化させる工程であって、
好ましくは、工程ａ）で得られた混合物を高圧ホモジナイザーで均質化させる工程。
【００９８】
本発明のエマルションを製造する方法の特に好ましい実施態様において、前記方法は、以下の工程を含む：
ａ）
ａ−１）エマルションの水溶性成分の混合物、好ましくは、水、乳化剤及び等張化剤を含む混合物、特に、水、リン脂質、オレイン酸ナトリウム及びグリセロールを含有する混合物を調製する工程、
ａ−２）エマルションの油溶性成分を含む均質化混合物、好ましくはセミフッ化化合物、トリグリセリド及び抗酸化剤を含む混合物、より好ましくは、Ｆ６Ｈ８、ＭＣＴ及びα−トコフェロールを含有する混合物を調製する工程、
ａ−３）工程ａ−１）で得られた混合物を工程ａ−２）で得られた混合物と組み合わせる工程；
により混合物を調製する工程；
ｂ）工程ａ）で得られた混合物を均質化してプレエマルションを調製する工程
ｃ）工程ｂ）で得られた混合物を高圧ホモジナイザーでさらに均質化する工程。
【００９９】
驚くべきことに、工程ｂ）及び工程ｃ）において、好ましくは３０乃至７０℃、より好
ましくは４０乃至６０℃の温度範囲でエマルションを均質化することにより、最もよい結果が得られることが見出された。
【０１００】
製造方法のさらに好ましい実施態様において、エマルションを、好ましくは、少なくとも１２１℃で最短１５分間の加熱により殺菌する工程ｄ）が提供される。
【０１０１】
エマルションの好ましい量及び成分は、本発明のエマルションとあわせて言及される。
【０１０２】
本発明のさらなる態様は、磁気共鳴断層撮影（トモグラフ）を実施する方法である。この方法において、交流磁場が照射され、検査される試料による照射された磁場の吸収が検出される。これら方法の工程は、磁気共鳴断層撮影の通常の操作に対応する。本発明の方法は、本発明のエマルション中の下記式Ｉ：
ＣＦ３−（ＣＦ２）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−ＣＨ３    （Ｉ）
（式中、ｘは１乃至８の整数を表し、及びｙは２乃至１０の整数を表す。）
で表されるセミフッ化化合物の検出に役立つ。
【０１０３】
本発明の方法は、交流磁場の周波数がＢ×４０．０４５６００ＭＨｚ／Ｔ乃至Ｂ×４０．０６５６００ＭＨｚ／Ｔ（Ｂはテスラによる磁場の強さである）であることを特徴とする。
【０１０４】
交流磁場に関して上述の周波数を得るために、下記の方法の工程が実施される：
【０１０５】
まず、交流磁場の周波数をＢ×４０．０５５６０ＭＨｚ／Ｔで選択する。フッ素原子を含む未知化合物を検出するために、広い励起及び受信バンド幅（例えば＋／−５ｋＨｚ）が使用される。この励起バンドの中央は、フッ素原子のコアの励起周波数である（４０．０５５６０ＭＨｚ／Ｔ）。この周波数は、ゼロ位置として定義される。
【０１０６】
励起の間、フッ素含有の未知化合物の特徴的なスペクトルが、特定のオフセット周波数で現れる。そうでない場合、選択されたバンド幅（例えば＋／−５ｋＨｚ）を広げる必要がある。
【０１０７】
特有のスペクトルが特定の周波数で検出された後、励起スペクトルを、適切なオフセット周波数の選択により、オフセット（補正）する。発明者らは、＋／−１００Ｈｚ乃至＋／−１００００Ｈｚのオフセット周波数が適切であることを見出した。前記周波数の選択により、励起及び受信バンド幅を大幅に狭めることができ、よってノイズが低減でき、その結果、よりよい信号対雑音比が得られる。
【０１０８】
本発明のさらなる態様は、検査される試料中で、本発明のエマルション中の下記式Ｉ：ＣＦ３−（ＣＦ２）ｘ−（ＣＨ２）ｙ−ＣＨ３    （Ｉ）
（式中、ｘは１乃至８の整数を表し、及びｙは２乃至１０の整数を表す。）
で表されるセミフッ化化合物を検出する方法に関する。この方法は、交流磁場が照射され、検査される試料による照射された磁場の吸収が検出される。これらの工程は、磁気共鳴断層撮影の通常の操作に対応する。
【０１０９】
本発明によれば、少なくともひとつの１９Ｆフッ素プロトンイメージを、１Ｈプロトンイメージ上に重ねあわせる。ここで１Ｈプロトンイメージは、グレイスケールイメージとして表示され、１９Ｆフッ素プロトンイメージは、カラーグラデーションを用いて表示され、カラーグラデーションの一端が低濃度の１９Ｆフッ素プロトンを示し、このカラーグラデーションのもう一端が高濃度の１９Ｆフッ素プロトンを示す。
【０１１０】
これらの方法工程は、例えば、検出されたフッ素シグナルを患者の体の特定部分に帰属させるために使用される。この目的に関して、よりよい結果を得るために、１９Ｆボリュームと１Ｈボリュームを挿入することができる。説明した通り、１Ｈプロトンイメージはグレースケールイメージとして表示され、一方で１９Ｆフッ素プロトンイメージは、例えば、黒色から緑色に変化するカラーグラデーションにて、或いは、例えば青色から赤色に変化するカラーグラデションにて、表示される。
【０１１１】
第一に、３次元映像が生成される。しかしその後、検査される試料の横断面を示す、各レイヤーの２次元イメージが生成されることが好ましい。最大強度投影値（ＭＩＰ’ｓ）が算出されることが好ましい。これら２次元レイヤーイメージは、造影剤が存在する解剖学的構造の内部を総合的に示す。
【０１１２】
本発明の好ましい実施態様において、検査されない第二試料中の１９Ｆフッ素プロトンによって生成された妨害信号は、除外される。前記妨害信号は、例えば、患者の肝臓或いは脾臓中の造影剤によって生成される。肝臓は心臓の非常に近くに存在しているため、例えば患者の心臓領域内の炎症の検出を試みるイメージング工程の間、肝臓中の造影剤は、非常に強い妨害信号を引き起こし得る。
【０１１３】
前記妨害信号を除外するために、第一ピクセルのフッ素濃度に関する値と、この第一ピクセル周辺の３次元空間の全ての近傍ピクセルの値とを比較することが可能である。これによって、２つの近接したピクセルのフッ素濃度に関する値の相違が閾値を下回る場合、これら２つのピクセルは、ピクセルクラスタに属する、例えば患者の肝臓に属するとみなされる。このクラスタが検査される試料（この場合、患者の心臓）を示すものでない場合、この妨害ピクセルクラスタは、得られたイメージから除去できる。この妨害クラスタの除去は、例えば手作業で実施可能である。
【０１１４】
１９Ｆフッ素イメージを１Ｈプロトンイメージと重ね合わせるとき、これらイメージは、測定配置を変えずに得られるものであることが好ましく、これは、双方のデータセットが、同じボリューム値からの同じ信号を含むことを意味する。
【０１１５】
１９フッ素プロトンイメージに存在し得るノイズは、異なる取得値を平均化することにより抑制できる。ノイズの標準偏差σが測定され、それにより、検出されるシグナルに関する閾値として３・σ又は５・σが使用され得る。これは、ノイズの標準偏差に比べて３倍高いシグナルのみが“本当の”シグナルであると認められることを意味する。この閾値は、得られたイメージをノイズ量に適合することができるように、使用者によって変化させ得る。最後に挙げた方法工程は、１Ｈプロトンイメージには、これらがより高いＳＮＲを有しているため、適用しないほうが好ましい。
【０１１６】
最後に挙げた発明の文脈中で議論された全ての方法工程は、基本的に信号処理工程と関連し、それ故、どんな時及び場所でも、データ取得プロセスから独立して実施され得る。とりわけ、これら方法工程の実施には、患者身体の存在は要求されない。
【０１１７】
本発明の方法にて使用されるエマルションの好ましい実施態様は、本発明のエマルションとあわせて記載される。
【０１１８】
以下、本発明を実施例によってさらに説明する：
【図面の簡単な説明】
【０１１９】
【図１】図１は、表２（例１乃至例３）並びに比較例９に関するデータを反映した保存安定性試験のデータ（ＺＡｖｅｒａｇｅ（平均粒子径）及びＰ．Ｉ．（多分散性指標））を示す図である。
【図２】（図２に挿入されている）図１Ａは、例１乃至例３並びに比較例９によるエマルションの粒子成長増加率を示す図である。
【図３】（図３に挿入されている）図１Ｂは、セミフッ化化合物Ｆ６Ｈ８の濃度における、粒子成長増加率の依存関係を示す図である。
【図４】（図４に挿入されている）図１Ｃは、ＭＣＴとＦ６Ｈ８の異なる混合物における（Ｆ６Ｈ８の濃度に対する）密度測定の結果を示す図である。
【図５】（図５に挿入されている）図２は、表６を反映した保存安定性試験のデータ（ＺＡｖｅｒａｇｅ（平均粒子径）及びＰ．Ｉ．（多分散性指標））を示す図であり、左半分には比較例１乃至４によるエマルションのデータを、右半分には比較例５乃至８によるエマルションのデータを、それぞれ示す。
【図６】（図６に挿入されている）図３は、表８を反映した保存安定性試験のデータ（ＺＡｖｅｒａｇｅ（平均粒子径）及びＰ．Ｉ．（多分散性指標））を示す図であり、左部分には例４によるエマルションのデータを、右部分には例５によるエマルションのデータを、それぞれ示す。
【図７】（図７に挿入されている）図３Ａは、例４によるエマルションの３つの試料の試験結果（１６８日、４０℃で保存：ＺＡｖｅｒａｇｅ（平均粒子径）及びＰ．Ｉ．（多分散性指標））を示す図である。
【図８】（図８に挿入されている）図４は、例５によるエマルションの３つの試料の試験結果（１６８日、４０℃で保存：ＺＡｖｅｒａｇｅ（平均粒子径）及びＰ．Ｉ．（多分散性指標））を示す図である。
【図９】（図９に挿入されている）図４Ａは、例６によるエマルションの試験結果（１２１℃で１５分間オートクレーブで殺菌、その後４０℃で保存：ＺＡｖｅｒａｇｅ（平均粒子径）及びＰ．Ｉ．（多分散性指標））を示す図である。
【図１０】（図１０に挿入されている）図５は、標的組織として心臓の、血液プール中の、本発明のエマルション６を示す図であって、ラットからの全データセット（Ａ）、演算により除去された肝臓（Ｂ）、完全３Ｄデータセット（Ｃ）、拡大詳細図としての心臓（Ｄ）を示す。
【図１１】（図１１に挿入されている）図６は、（Ａ）例６のエマルションの適用２４時間後、同じ配置での、着色１９Ｆ画像（１Ｈ／１９Ｆ）を重ね合わせた、生体内の心筋領域のラット胸部の横断面のＴ２加重ＭＲＩ画像（１．５テスラ、フィリップス）、（Ｂ）心筋の梗塞のレベル、並びに、手術によって生じた心膜と肋骨間の癒着部分における、フッ素含有造影剤の濃縮を示す、心筋の１Ｈ／１９Ｆ画像の拡大詳細図、及び（Ｃ）梗塞領域近傍の心膜（緑色輪郭）の、強く顕著な炎症を示す、ラット心臓の原位置の記録、をそれぞれ示す図である。
【図１２】（図１２に挿入されている）図７は、（Ａ）例６のエマルションの適用２４時間後、同じ配置での、着色１９Ｆ画像（１Ｈ／１９Ｆ）を重ねあわせた、生体内の心筋領域のラット胸部の横断面のＴ２加重ＭＲＩ画像（１．５テスラ、フィリップス）、（Ｂ）心筋の梗塞のレベル、並びに、手術によって生じた心膜と肋骨間の癒着部分における、フッ素含有造影剤の濃縮を示す、心筋の１Ｈ／１９Ｆ画像の拡大詳細図、及び、（Ｃ）Ａ下での、梗塞ラット心筋の典型的な組織短軸切片［７μｍ］のＨＥ染色、をそれぞれ示す図である。
【図１３】（図１３に挿入されている）図８は、心筋梗塞モデルのタイムラインを示す図である。
【図１４】（図１４に挿入されている）図９は、心筋炎モデルのタイムラインを示す図である。
【図１５】（図１５に挿入されている）図１０は、例６の組成物で処理した梗塞（モデル）動物のＭＲ結果を示す図である。
【図１６】（図１６に挿入されている）図１１は、乳化剤をペグ化リン脂質に置き換えた以外には例６に記載されたエマルションで処理した心筋炎（モデル）の動物のＭＲ結果を示す図である。
【実施例】
【０１２０】
実施例セクションのエマルションは、一般に以下の通りに調製された。
１）乳化剤を水と混合する工程；
２）ＭＣＴ、フッ化化合物及び所望によりα−トコフェロールなどの疎水性成分の混合物を調製する工程；
３）工程１）で得られた水性混合物を工程２）の油混合物に加える工程；
４）Ｐａｎｄａ（登録商標）Ｐｌｕｓ  ２０００高圧ホモジナイザー中、７００ｂａｒで３回、並びに１０００ｂａｒで２回、エマルションを高圧ホモジナイザーで均質化させる工程。
【０１２１】
表１は、水中油型エマルション組成物を示し、表２は２０℃におけるそれぞれの保存安定性データを示す。表中に示される量は、エマルションの総質量に基づく質量％（ｗｔ％）である。
【０１２２】
【表１】
0006356780.tif 000003
【０１２３】
【表２】
0006356780.tif 000004
【０１２４】
平均粒子径（ＺＡｖｅｒａｇｅ）及び多分散性指標（Ｐ．Ｉ．）は、光子相関分光法（ＰＣＳ）によって算出した。
【０１２５】
図１は、表２並びに比較例９に関するデータを反映した保存安定性試験のデータを示す。
【０１２６】
図１Ａは、例１乃至例３並びに比較例９によるエマルションの粒子成長を示す。粒子成長測定は、エマルション調製後、直ちに開始した。
【０１２７】
図１Ａは、２８日以内の油滴の平均粒子径が、例１に関して約１１％、例２に関して約１５％、例３に関して約１７％、そして比較例９に関して約２３％増加したことを示す。粒子成長の増加が大きくなるほど、セミフッ化化合物の濃度が高くなる。
【０１２８】
図１Ｂは、セミフッ化化合物Ｆ６Ｈ８の濃度における、粒子成長増加の依存関係を示す。
【０１２９】
表２Ａは、図１、図１Ａ及び図１Ｂに示すデータを反映したものである。保存試験は２０℃で実施した。
【０１３０】
【表３】
0006356780.tif 000005
【０１３１】
高濃度のセミフッ化化合物（ＭＲ測定において優れたコントラストを得るのに必要とされる）と、エマルションの保存安定性の最適なバランスは、油滴の密度（ＭＣＴ及びセミフッ化化合物）が水相の密度とほぼ同じである場合に達成される。油相の密度を水相の密度に合わせることにより、エマルションの安定性を損なう液滴の合体現象並びに沈殿現象を減少できる。
【０１３２】
図１Ｃは、ＭＣＴ及びＦ６Ｈ８の異なる混合物における密度測定の結果を示す。
【０１３３】
約３８．５ｗｔ％のＦ６Ｈ８及び約６１．５ｗｔ％のＭＣＴ（油相の総質量に基づく質量）において、油混合物の密度は、水相の密度と一致する。
【０１３４】
比較例１−８、９Ａ及び１０−１２
ペルフルオロオクチルブロミド（ＰＦＯＢ）は、磁気共鳴分光法に関する既知の造影剤である。ＰＦＯＢはＭＣＴに溶解できないことが知られている。従って、エマルションは、ＰＦＯＢが、ＰＯＦＢを溶解可能なペルフルオロデシルブロミド（ＰＦＤＢ）によって安定化されるように、調製される。
【０１３５】
表３及び表４は、比較例１−８、９Ａ及び１０−１２の水中油型エマルション組成物を示し、表６は２０℃におけるそれぞれの保存安定性データを示す。表２及び表４中に示される量は、エマルションの総質量に基づく質量％（ｗｔ％）である。
【０１３６】
【表４】
0006356780.tif 000006
【０１３７】
【表５】
0006356780.tif 000007
【０１３８】
【表６】
0006356780.tif 000008
【０１３９】
【表７】
0006356780.tif 000009
【０１４０】
図２は、表６を反映した保存安定性試験のデータを示す。図２の左部分には、比較例１乃至４によるエマルションのデータが、右部分には比較例５乃至８によるエマルションの
データが描写される。
図２Ａは、例９Ａ及び１０乃至１２に関する保存安定性試験のデータを示す。
【０１４１】
表６及び図２並びに図２Ａに示すように、比較例１乃至８、９Ａ及び１０乃至１２のエマルションは、２８日の保存期間にわたって、平均粒子サイズの顕著な増加を示した。
【０１４２】
対照的に、本発明の例１乃至例３によるエマルションは、はるかに保存安定性である。２８日間の保存期間の間、エマルションの平均粒子サイズにおいて僅かな増加のみが観測された（図１及び表３）。
【０１４３】
異なる乳化剤を用いた試験
本発明のエマルションは、乳化剤の選択によって、さらに安定化可能であることが、驚くべきことに見出された。
【０１４４】
Ｌｉｐｉｄ  Ｓ  ＰＣ−３乳化剤は、より安定的でないと認められ（図２）、本発明のエマルションに関してはさらに試験されなかった。
【０１４５】
表７は、例４及び例５による本発明のエマルションを示す。
【０１４６】
【表８】
0006356780.tif 000010
【０１４７】
殺菌条件がエマルションの安定性に影響を与えるかどうか、例４及び例５によるエマルションをさらに分析した。エマルションを回転式オートクレーブ中で殺菌し、殺菌していないエマルションと比較した（殺菌条件：１２１℃、１５分間、２ｂａｒにて）。
【０１４８】
表８は、例４及び例５によるエマルションの殺菌なし及び殺菌後の安定性データを示す。
【０１４９】
【表９】
0006356780.tif 000011
【０１５０】
図３は、表８を反映した保存安定性試験のデータを示す。図３の左部分には、例４によるエマルションのデータが、右部分には例５によるエマルションのデータが描写される。
【０１５１】
図３及び表８は、例５によるエマルションが、例４のエマルションよりもより安定であることを示す。例５によるエマルションはまた、エマルションが回転式オートクレーブ中で殺菌された後も、より安定である。
【０１５２】
さらに、例４及び例５のエマルションを、１６８日、４０℃で保存した。驚くべきことに、例５のエマルションは、温度４０℃の保存であっても、物理的安定性に顕著な変化はなかった（図４）。
【０１５３】
図４は、例５によるエマルションの３つの試料の試験結果を示す。
【０１５４】
図３Ａは、例４によるエマルションの３つの試料の試験結果を示す。
【０１５５】
本発明の例６：
【表１０】
0006356780.tif 000012
【０１５６】
例６によるエマルションを、Ｆ６Ｈ８、ＭＣＴ及びα−トコフェロールの均質化混合物を５０℃で調製することによって準備した。別に、乳化剤Ｌｉｐｏｉｄ  Ｓ  ７５及び共乳化剤オレイン酸ナトリウムを、グリセロール及び水ともに一緒にした混合物を、ロータ／ステータ混合装置（Ｕｌｔｒａ  ｔｕｒｒａｘ）にて５０℃、１５０００ｒｐｍで２０分間混合した。続いて、ＭＣＴ、Ｆ６Ｈ８及びα−トコフェロールを含む混合物を、水性混合物に入れ、５０℃、Ｕｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘ（タイプＴ２５、ＩＫＡ）で、２００００ｒｐｍにて２０分間均質化させた。続いて得られたプレエマルションを、高圧ホモジナイザー（ＡＰＶタイプ１０００／２０００）にてさらに均質化させた［５００ｂａｒ及び続いて６０ｂａｒで５サイクル］。
【０１５７】
得られたエマルションを、続いて、１２１℃で１５分間、オートクレーブで殺菌した。
【０１５８】
驚くべきことに、例６のエマルションは、温度４０℃での保存であっても、３ヶ月後においても、物理学的安定性は顕著に変化しなかった（図４Ａ）。
【０１５９】
図４Ａは、例６によるエマルションの試験結果を示す。
【０１６０】
例６のエマルション組成物は、生体内ＭＲＩ測定に使用される。
【０１６１】
Ｆ６Ｈ８／ＭＣＴエマルションがＭＲＩ法により生体内で可視化され、標的組織内で検出されるかどうかを確認するために、第一薬物動態試験を実施した。
【０１６２】
図５に典型的な方法にての血液プール効果を示す。
【０１６３】
図５は、標的組織として心臓の、血液プール中の、本発明のエマルション６を示す。典型的な３Ｄ再構築である解剖学的Ｔ２  ＴＳＥ及び、着色３Ｄ  １９Ｆシークエンスは、通常、演算により除去された肝臓（Ｂ）とともに全データセット（Ａ）として、ラットからの１つのデータセットに再構成される。下の段に、完全３Ｄデータセット（Ｃ）とともに拡大詳細図としての心臓（Ｄ）を示す。
【０１６４】
このようにして、本発明によるエマルションが、生体内で、心筋を可視化できることが示された。さらに、ＭＲＩにおける梗塞の表示を試験した。結果を下記図６に示す。
【０１６５】
図６は：
（Ａ）例６のエマルションの適用２４時間後、同じ配置での、着色１９Ｆ画像（１Ｈ／１９Ｆ）を重ね合わせた、生体内の心筋領域のラット胸部の横断面のＴ２加重ＭＲＩ画像（１．５テスラ、フィリップス）。
（Ｂ）心筋の梗塞のレベル、並びに、手術によって生じた心膜と肋骨間の癒着部分における、フッ素含有造影剤の濃縮を示す、心筋の１Ｈ／１９Ｆ画像の拡大詳細図。
（Ｃ）梗塞領域近傍の心膜（緑色輪郭）の、強く顕著な炎症を示す、ラット心臓の原位置の記録。
を示す。
【０１６６】
よって、造影剤は梗塞領域で濃縮されることが見出された。さらにＭＲＩ画像を組織切片と比較し、図７に示す。
【０１６７】
図７は：
（Ａ）例６のエマルションの適用２４時間後、同じ配置での、着色１９Ｆ画像（１Ｈ／１９Ｆ）を重ねあわせた、生体内の心筋領域のラット胸部の横断面のＴ２加重ＭＲＩ画像（１．５テスラ、フィリップス）。
（Ｂ）心筋の梗塞のレベル、並びに、手術によって生じた心膜と肋骨間の癒着部分における、フッ素含有造影剤の濃縮を示す、心筋の１Ｈ／１９Ｆ画像の拡大詳細図。
（Ｃ）Ａ下での、梗塞ラット心筋の典型的な組織短軸切片［７μｍ］のＨＥ染色。
を示す。梗塞心筋領域は、ＨＥ染色の青色で示される。
【０１６８】
エマルションを、２モデルにて試験した：
図８に反映される、心筋梗塞モデルのタイムライン；並びに、
図９に反映される、心筋炎モデル。
【０１６９】
梗塞の誘導
動物として、体重２００乃至３５０ｇのＳＤラットを使用した。
【０１７０】
麻酔：
これらの動物を、麻酔ボックス内でイソフルラン吸入により鎮静させ、その後筋肉内注射による麻酔をかけた。麻酔の間でさえも、痛みからの解放を確実にする麻酔が保証される。そのため動物は、麻酔及び鎮痛剤の混合物を受けた。筋肉内  ０．１５ｍｇ／ｋｇのメデトミジン＋０．０５ｍｇ／ｋｇのフェンタニル＋２．０ｍｇ／ｋｇのミダゾラム；拮抗は、０．７５ｍｇ／ｋｇアチパメゾール＋０．１２ｍｇ／ｋｇナロキサン＋０．２ｍｋｇ  皮下で行われた。フルニキシン（２．５ｍｇ／ｋｇ皮下）における我々の事前の経験より、我々は、術後疼痛治療のための製剤としてそれを採用した。治療が失敗した場合、我々は、ブプレノルフィン（０．０５ｍｇ／ｋｇ皮下）を用いた鎮痛療法の変更を考慮する必要がある。
【０１７１】
続いて、動物は、その後の挿管の間、血液循環を補助し、迷走神経の刺激に対し保護するために、筋肉内のアトロピン投与を受けた。
【０１７２】
循環器疾患におけるフッ素ベースの造影剤：
メデトミジンの使用は基本的に健康な心血管系を有する動物にのみ推奨される場合であっても、それは、健康で若い動物（計画される心胸郭測定が約２００ｇの体重を有する動物で実施される）において、フランク・スターリングメカニズムがまだ完全に成熟していないことが期待される。従って、メデトミジンの中央−反交感神経活動亢進活性によって媒介される徐脈は、上昇拍出量によって十分に相殺されない場合がある。アトロピンの投
与は、心仕事量の増加を引き起こす。しかしながら、末梢α２レセプター刺激によって引き起こされた血管収縮は、冠血流量（並びに脳血流量及び腎血流量）を実質的に変化させず、そのため特定の心臓負荷はここでは想定されず、血液循環の全体的状況に関するアトロピンの変時作用が支配的であるとされる。一過性高血圧性の循環条件は、術後の臨床観察に応じて、良好な耐容性を示すと考えられている。さらに、常に冠状動脈結紮を要し、そしてその心臓のポンプ性能に対する推定される影響（急性効果）が考慮される。しかしながら、手動操作の複雑性及び試験動物における冠動脈組織の差異により、普遍的法則を策定することはできない。
【０１７３】
メデトミジンの術後拮抗の直後に高血圧効果は低下し、その結果、妥当な制限内で、とりわけ、制御可能な範囲内で、高血圧の継続が続けられる。
【０１７４】
手術措置の状況で動物は挿管されるため、一方では（継続的な徐脈とともに）迷走神経刺激のリスクが、他方では過流涎の場合において複雑化した挿管のリスクが存在する；後者はまた我々自身の経験と一致する。これらのリスクは、アトロピンの術前投与によって減少させることができる。
【０１７５】
概して、術前アトロピン投与の兆候が見出された。
【０１７６】
耐性ステージ開始後、ラットを剃毛し、左側を消毒した。
【０１７７】
ラットを続いて、１分間当たり７５−８０拍の周期、及び、１回換気量（呼吸量）２．０ｍＬ（ラット重量２００−２５０ｇに対して）に設定された呼吸ポンプに接続した。人工呼吸は動物にとって別の介入を常に意味することから、開胸開始の前ギリギリに、動物を呼吸ポンプに接続することが望ましい。
【０１７８】
呼吸ポンプ接続後、第５及び第６肋骨のレベルでカーブ鉗子で胸部を開いた。肺は非常に容易に傷つけられ得るため、これは最大限の注意を払って実施すべきである。開創器が適合するように、胸腔を約１．０ｃｍ乃至１．５ｃｍの長さで開いた。所望により対応する軟組織の切開により、十分に大きな操作（手術）領域を創りだすとすぐに、左冠状動脈経路を検出せねばならない。それは肺動脈幹と左心耳の間の大動脈を起源とし、心外膜脂肪系によって容易に認識される。しかし、ラットの冠状血管は表面的にではなく心筋層内に伸びているため、左冠状動脈はしばしば見い出せないか或いは部分的にのみしか見いだせない。左冠状動脈の主枝、即ちＬＡＤ（左前下行枝）は、実質的に、大動脈基部から心臓の先端まで真っ直ぐに伸びている。ＬＡＤの一方の近位側枝（Ｄ１又はＤ２）を冠状動脈結紮により遮断した。Ｄ１又はＤ２側枝の縫合結紮は、シングルノット（単結紮）構造により達成した。（基部）ＬＡＤ自身の閉塞も、極めてまれにしか動物には存続しない、梗塞シナリオの拡張を引き起こす。その後、胸郭を２層（肋骨及び皮膚縫合）で閉じた。肋骨を２つまたは３つの単結紮縫合で閉じた。胸部筋肉は、それぞれ互いの上に配置されているに過ぎない。皮膚の縫い目を連続グローバー縫合で閉じた。
【０１７９】
結紮３日後、フッ化炭素含有エマルションを動物に投与した。さらに２４時間後、ＭＲＩ分析を実施した（図８参照）。
【０１８０】
６日間の全ての試験に亘って、１２時間毎に全ての動物に鎮痛を与えた：体重に対してフルニキシン（フィナジン）２．５ｍｇ／ｋｇ、皮下注射。
【０１８１】
体重及び行動などの変化の一般データを、週に２度、全ての動物から取得した。
【０１８２】
梗塞の手術：
これら動物を、麻酔ボックス内でイソフルラン吸入により鎮静させた後、ドミトール（Ｄｏｍｉｔｏｒ）（登録商標）／トルミカム（Ｄｏｒｍｉｃｕｍ）の混合溶液の筋肉内注射（体重１ｋｇあたり０．３ｇのメデトミジン及び４ｍｇのミダゾラム）によって麻酔をかけた。その後動物は、循環を補助し迷走神経刺激に対して保護するために、その後の挿管の間、アトロピン投与を受けた（体重１ｋｇ当たり０．０１ｍｇアトロピン、皮下注射）。
【０１８３】
ＭＲＩ試験：
これら動物は吸入麻酔のみを受けた（酸素＋イソフルラン２．０％）。後者は十分に許容され、動物はその後、長期間の覚醒相を有しなかった（長い時間覚醒しなかった）。
【０１８４】
麻酔の間、動物はフッ素ベースの造影剤を尾静脈を介して投与された。
【０１８５】
心筋の炎症モデル：
全ての動物は、連続６週間に渡って、週一度のドキソルビシン又は等張食塩水溶液の点滴投与を受けた。各投与を全身麻酔下で達成した。最後の投与から１週間後、本発明のエマルションを動物に投与した。２４時間後、ＭＲＩ分析を実施した。
【０１８６】
乳化剤をペグ−リン脂質に置き換えて、例６によるエマルションを変性した。エマルション液滴のｏｐｓｏｎａｔｉｏｎ（オプソニン化）が顕著に減少することが見出された。この効果のため、炎症領域中のフッ化炭素化合物（Ｆ６Ｈ８）の量が、検出限界を下回ることが予想される。しかし、驚くべきことに、心筋炎でさえも、図１１に示すように画像化されることが見出された。
【０１８７】
ＭＲＩ試験の日に、動物は吸入麻酔を受けた（イソフルラン及び酸素混合物１．５％−２．５％）。さらに、動物は、それらが属するグループに応じて、試験の間、フッ素ベースの造影剤化合物  １回分を、尾静脈を介して投与された。最後のＭＲＩ試験の後、それぞれの動物を、イソフルランの過剰投与によって屠殺し、その後臓器を除去した。
【０１８８】
全ての動物はさらに鎮痛を得た。ごく僅かな抗炎症作用を有するため、この目的のために、パラセタモール  ＡＬを採用した。動物は、全試験期間に渡って、体重の１５０ｍｇ／ｋｇの容量で、飲料水を介してパラセタノールを受けた。
【０１８９】
例えば体重及び行動といった変化の一般データを、全ての動物から毎日収集した。
【０１９０】
心筋炎の誘導：
動物は吸入麻酔のみを受けた（酸素＋イソフルラン２．０％＋笑気ガス）。後者は十分に許容され、その後、覚醒相の延長をもたらさなかった（長い時間覚醒しなかった）。麻酔の開始とともに、動物は、対応する鎮静を得た。
【０１９１】
ＭＲＩ試験：
動物は吸入麻酔のみを受けた（酸素＋イソフルラン２．０％）。後者は十分に許容され、その後、覚醒相の延長をもたらさなかった（長い時間覚醒しなかった）。麻酔の間、動物は、フッ素ベースの造影剤を尾静脈を介して投与された。
【０１９２】
ＭＲ結果
例６の組成物で処理した梗塞動物のＭＲ結果を、図１０に反映し、乳化剤をペグ化リン脂質に置き換えた以外には例６に記載されたエマルションで処理した心筋炎の動物のＭＲ結果を、図１１に反映する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０１９３】
【特許文献１】国際公開第２００５／０７２７８０号
【特許文献２】国際公開第０３／０７５７４７号
【特許文献３】米国特許公開第２００９−０２８００５５号公報
【非特許文献】
【０１９４】
【非特許文献１】アレンスら、ネイチャーバイオテクノロジー（ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．８、２００５年８月、ｐ９８３−９８７）
【非特許文献２】Ｇ．Ｍ．ランザら、メディカ  ムンディ（４７／１、２００３年４月、ｐ．３４−３９）
【非特許文献３】。オク、ナオトら（バイオキミカ  エト  バイオフィジカ  アクタ  １２８０（１９９６）、１４９−１５４）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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