(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）とを含む、イヌ血小板由来成長因子受容体α（ｃＰＤＧＦＲＡ）に結合するモノクローナル抗体であって、前記ＬＣＶＲは、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲは、ＣＤＲ  ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６であり、前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１８であり、前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号２０であり、前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号６であり、前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号８であり、前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１０である、モノクローナル抗体。
【請求項２】
軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）とを含み、前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号１４であり、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号４である、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項３】
軽鎖（ＬＣ）と重鎖（ＨＣ）とを含み、前記ＬＣのアミノ酸配列は配列番号１２であり、前記ＨＣのアミノ酸配列は配列番号１である、請求項１〜２のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項４】
療法に用いるための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５】
イヌ対象における骨肉腫の治療に用いるための、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
【発明の詳細な説明】
【発明の概要】
【０００１】
本発明は、免疫学及び癌の治療の分野に関する。より具体的には、本発明は、抗イヌ血小板由来成長因子受容体α（ｃＰＤＧＦＲＡ）抗体であってｃＰＤＧＦＲＡに対する抗体、及びイヌの骨肉腫（ＯＳＡ）などの特定の障害を治療するための使用方法に関する。
【０００２】
肉腫は、脂肪、血管、神経、骨、筋肉、深部皮膚組織、及び軟骨を含む、体の結合組織で通常発症する多様かつ比較的まれな種類の癌である。ＯＳＡは、イヌのすべての癌の約５％を占めるが、イヌ骨腫瘍の最も一般的な形態である。ＯＳＡは、ほとんどの場合、大型かつ巨大な品種の犬、典型的には中年または高齢の動物に発生する。それは、非常に侵攻性の形態の癌と考えられ、臨床的に有意な症例の９０％以上が、診断時までに既に微小転移している。イヌでは、治療選択肢には、放射線及び／または化学療法、ならびに四肢の切断が含まれる。種々の化学療法レジメンによる中央生存期間は、約１年であり、切断のみによる生存期間は、約３ヶ月である。残念なことに、イヌ骨肉腫の有効な治療は依然として分かりにくいままであり、それらを治療するのに有効である可能性があるより多くの異なる治療法が必要とされている。
【０００３】
ＰＤＧＦＲＡは、ヒトＯＳＡの７０〜８０％において過剰発現されるチロシンキナーゼ受容体であり、抗ＰＤＧＦＲΑモノクローナル抗体療法に好適な標的であり得る。イヌＯＳＡはヒトＯＳＡと同様の組織病理学的及び臨床的特徴を示すので、ｃＰＤＧＦＲΑはイヌのＯＳＡの好適な治療標的でもあり得る。免疫組織化学（ＩＨＣ）試験において、ｃＰＤＧＦＲＡが評価された症例の７８％で発現することが実証されている。さらに、そのリガンドイヌＰＤＧＦＡは、症例の４２％で発現することが示された（Ｍａｎｉｓｃａｌｃｏ、ｅｔ  ａｌ．、Ｖｅｔ  Ｊ．２０１３．１９５：４１）。
【０００４】
オララツマブ（ＩＭＣ−３Ｇ３とも称される）は、潜在的抗腫瘍活性を有するヒトＰＤＧＦＲＡに対する完全ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体である。オララツマブを使用することによる軟部肉腫の治療の成功は、例えば国際公開第ＷＯ２０１６／００３７８９号に見出すことができる。オララツマブは、選択的にヒトＰＤＧＦＲＡに結合し、そのリガンドであるＰＤＧＦの結合を遮断する。ＭＡＰＫ及びＰＩ３Ｋ経路を介したＰＤＧＦＲの下流のシグナル伝達が阻害され、血管新生及び腫瘍細胞増殖の阻害をもたらし得る。
【０００５】
オララツマブが完全ヒトモノクローナル抗体であることを考えると、イヌにおける、オララツマブまたは任意の他の完全ヒト抗体の慢性投与は、オララツマブによるイヌ対象のその後の各治療後にますます強い免疫応答をもたらす抗薬物抗体の発生を引き出す可能性が高いであろう。
【０００６】
したがって、本発明は、イヌ血小板由来成長因子受容体α（ｃＰＤＧＦＲＡ）に結合する、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）とを含むモノクローナル抗体であって、前記ＬＣＶＲは相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲは、ＣＤＲ  ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６であり、ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１８であり、ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号２０であり、ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号６であり、ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号８であり、ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１０である、モノクローナル抗体を提供する。
【０００７】
別の態様では、本発明は、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）とを含み、前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号１４であり、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号４である、モノクローナル抗体を提供する。
【０００８】
さらに別の態様では、本発明は、軽鎖（ＬＣ）と重鎖（ＨＣ）とを含み、前記ＬＣのアミノ酸配列は配列番号１２であり、前記ＨＣのアミノ酸配列は配列番号１であるモノクローナル抗体を提供する。
【０００９】
一態様において、本発明は、療法に用いるための抗ｃＰＤＧＦＲＡ抗体を開示する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、イヌ対象における骨肉腫の治療に用いるための抗ｃＰＤＧＦＲＡ抗体を開示する。
【００１１】
さらに別の態様において、本発明は、さらに、イヌ対象における骨肉腫の治療のための医薬の製造における本発明の抗体の使用に関する。
【００１２】
他に示されない限り、「抗体」（Ａｂ）という用語は、ジスルフィド結合によって相互連結された２つの重鎖（ＨＣ）及び２つの軽鎖（ＬＣ）を含む免疫グロブリン分子を指す。各鎖のアミノ末端部分は、その中に含まれる相補性決定領域（ＣＤＲ）を介した抗原認識を主に担う約１００〜約１１０アミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクタ機能を主に担う定常領域を画定する。
【００１３】
本明細書で使用する際、「相補性決定領域」及び「ＣＤＲ」という用語は、抗体またはその抗原結合フラグメントのＬＣポリペプチド及びＨＣポリペプチドの可変領域内に見出される非連続抗原結合部位を指す。
【００１４】
本明細書中で使用する際、「軽鎖可変領域」（ＬＣＶＲ）という用語は、相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列、ならびに軽鎖フレームワーク領域（ＬＦＲＷ）を含む抗体分子のＬＣの一部を指す。
【００１５】
本明細書中で使用する際、「重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）」という用語は、相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列、ならびに重鎖フレームワーク領域（ＨＦＲＷ）を含む抗体分子のＨＣの一部を指す。
【００１６】
ＣＤＲは、フレームワーク領域（「ＦＲＷ」）と呼ばれる、より保存されている領域に散在している。各ＬＣＶＲ及びＨＣＶＲは、ＦＲＷ１、ＣＤＲ１、ＦＲＷ２、ＣＤＲ２、ＦＲＷ３、ＣＤＲ３、ＦＲＷ４の順で、アミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲＷから構成される。軽鎖の３つのＣＤＲは「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３」と称され、ＨＣの３つのＣＤＲは「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３」と称される。ＣＤＲは、抗原と特異的な相互作用を形成する残基の大部分を含む。ＬＣＶＲ及びＨＣＶＲ領域内のＣＤＲアミノ酸残基の付番及び配置は、既知の慣例（例えば、Ｋａｂａｔ（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ（１９８７）及び／またはＮｏｒｔｈ（２０１１））に従う。本発明の異なる実施形態では、抗体のＦＲＷは、生殖系列配列と同一であってもよく、または天然もしくは人工的に修飾されていてもよい。
【００１７】
特定の実施形態では、本発明の抗ｃＰＤＧＦＲＡ  Ａｂは、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つまたは複数のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を変更することによって好都合に達成され得る。
【００１８】
本明細書で使用する際、「オララツマブ」という用語は、ヒトＰＤＧＦＲ、ヒトＰＤＧＦＲＡ、及び／またはヒトＰＤＧＲＦＡ／ＰＤＧＦＲＢヘテロダイマーに対する完全ヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体を指す。オララツマブはまた、本明細書では「ヒトオララツマブ」と称され得る。本明細書で使用する際、オララツマブのＨＣアミノ酸配列は、配列番号２６であり、オララツマブのＬＣアミノ酸配列は配列番号２８で表される。オララツマブのＨＣ及びＬＣアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号２７及び配列番号２８である。
【００１９】
本明細書で使用する際、「キット」という用語は、第１の容器がＫ９−６Ｎ６．２  Ａｂを含有し、第２の容器が薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含有する、少なくとも２つの別個の容器を含むパッケージを指す。本明細書で使用する際、「キット」という用語はまた、第１の容器はＫ９−６Ｎ６．２  Ａｂ、及び好ましくはリンパ腫以外の癌の治療のための抗体を含有する、少なくとも２つの別個の容器を含むパッケージを指す。「キット」はまた、これらの第１及び第２の容器の内容物のすべてまたは一部を癌患者に投与するための指示書を含むことができる。任意に、これらのキットはまた、既知の化学療法剤を含む組成物を含む第３の容器を含む。
【００２０】
本明細書で使用する際、「治療する」、「治療するため」、または「治療」という用語は、既存の症状、障害、状態または疾患の進行または重症度を抑制、減速、停止、軽減、または逆転させることを指す。
【００２１】
本明細書で使用する際、「有効量」という用語は、患者への単回投与または複数回投与時に、診断または治療下の患者において有効な応答を提供する抗ｃＰＤＧＦＲＡＡｂの量または用量を指す。
【００２２】
有効量は、既知の技術の使用によって、及び類似の状況下で得られた結果を観察することによって容易に決定することができる。患者の有効量を決定するには、患者の種または品種；そのサイズ、年齢、及び健康状態全般；関与する特定の疾患または障害；疾患または障害の程度または併発または重症度；個々の患者の応答；投与される特定の化合物；投与形態；投与された製剤のバイオアベイラビリティ特性；選択された投与レジメン；併用薬の使用；ならびに他の関連する状況、を含むがこれに限定されない、多くの要因が熟考される。
【００２３】
抗ｃＰＤＧＦＲＡ抗体
フレーム中のオララツマブの全ＨＣＶＲ（配列番号３１）を、イヌＩｇＢ重鎖定常領域（ＧＥＮＢＡＮＫ：ＡＡＬ３５３０２）にクローニングして単一ｃＤＮＡ配列（配列番号２３）を生成させることにより、Ｋ９−６Ｎ６．１と命名された抗ｃＰＤＧＦＲＡ抗体を作製した。さらに、フレーム中のオララツマブの全ＬＣＶＲ（配列番号３３）を、イヌカッパ軽鎖定常領域（ＧＥＮＢＡＮＫ：Ｅ０２９０６．１）にクローニングして、単一ｃＤＮＡ配列（配列番号２５）を生成させた。
【００２４】
Ｋ９−６Ｎ６．１は、完全ヒトオララツマブと同じ可変領域を含有する。表１に示されるように、オララツマブ及びＫ９−６Ｎ６．１は、ヒトＰＤＧＦＲＡへのオララツマブ結合の親和性よりも約１０倍低い親和性でｃＰＤＧＦＲＡに結合する。
【表１】
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【００２５】
高スループット突然変異誘発
突然変異誘発実験を行って、Ｋ９−６Ｎ６．１に由来する抗体を生成した。変異型オリゴヌクレオチドは、９６ウェルフォーマットのＥｘｃｅｌ設計テンプレート（５’トランケーション）を用いて生成し、それはＩｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓに発注した。突然変異誘発は、最適化されたＱｕｉｃｋ  Ｃｈａｎｇｅ反応プロトコルを用いて行った。簡潔には、９６ウェルプレートの各ウェル（突然変異誘発反応）は、Ｋ９−６Ｎ６．１のＨＣまたはＬＣの発現のための酵素消化ベクターＤＮＡ、ＫＯＤホットスタートポリメラーゼ、ＭｇＳＯ４、ｄＮＴＰ及び単一変異の生成のための種々のプライマーを含有した。プレートを次のプログラムを用いてＰＣＲ装置に入れた：９５℃で２分間、次いで９５℃で２０秒間２０サイクル、６０℃で１０秒間、６８℃で４分間、次いで６８℃で５分間の最終伸長。ＰＣＲの後、２μｌのＤｐｎＩ制限酵素及び反応緩衝液をＰＣＲ反応物に添加し、３７℃で１６時間インキュベートし、続いて７０℃で３０分間インキュベートしてＤｐｎＩを不活性化した。次いで、１μｌのＤＮＡを１０Ｇの化学的コンピテント細菌細胞（Ｌｕｃｉｇｅｎ）に形質転換した。９６ウェルプレートからのＤＮＡをＱｉａｇｅｎ  ９６ウェルＤＮＡ調製キットを用いて調製し、ＤＮＡ配列分析に供した。
【００２６】
合計２１０の単一点突然変異が生成された。突然変異誘発の効率は、無作為に選択したウェルについてのＤＮＡ配列分析によってモニターした。選択された２３のウェルのうち、３つのウェル（１３％）は、所望の突然変異の７５％（３７〜６５％）未満の取り込み率を有した。残りのウェルは７５〜１００％の所望の突然変異の取り込み率を示した。
【００２７】
単一の変異体及びプールのディープウェル発現
プールされた突然変異誘発反応または配列分析によって確認された単一のクローンからのＤＮＡのいずれかで形質転換された細菌からＤＮＡを調製した。細菌細胞を接種し、一晩増殖させた。ＤｉｒｅｃｔＰｒｅｐ  ９６  ＭｉｎｉＰｒｅｐ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号２７３６１）を使用して製造元の指示に従ってＤＮＡを調製した。配列確認の後、プールまたは単一のクローンからのＤＮＡを用いて、Ｅｘｐｉ２９３細胞を、親Ｋ９−６Ｎ６．１由来のＨＣまたはＬＣと同時トランスフェクトした。得られたＩｇＧ分子の発現をディープウェルプレート中で行った。
【００２８】
ＰｈｙＮｅｘｕｓチップ濃縮
トランスフェクション及びその後の細胞増殖の６日後、細胞培養物の上清を収集した。培養上清中の抗体を、ＢｉｏＭｅｋ自動液体ハンドリングシステムを用いてＰｈｙＮｅｘｕｓ  ＰｒｏＡ  Ｐｈｙｔｉｐカラムで濃縮した。抗体上清をカラムに充填し、プロテインＡ樹脂上に捕捉した。ＰＢＳで２回洗浄した後、抗体を９０μｌの０．１Ｍグリシン−ＨＣｌ（ｐＨ２．７）でカラムから溶出し、１０μｌのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）で中和した。抗体濃度は、既知の濃度の抗体標準を用いてＰｒｏＡセンサーでＯｃｔｅｔにより決定した。
【００２９】
予備スクリーニング
プールされたトランスフェクション及び親Ｋ９−６Ｎ６．１由来のすべての２１０の突然変異体を、単一点ＥＬＩＳＡを用いて結合及び遮断について評価した。プールされた突然変異誘発由来の濃縮した変異体のいくつかは、結合及び遮断活性の増加を示したが、他のものは、親Ｋ９−６Ｎ６．１と比較してｃＰＤＧＦＲＡへの結合の減少を示した。イヌ受容体との改善された相互作用を示す変異体から、結合及び遮断のための滴定アッセイを用いて、さらなる評価のために５４個のクローンを選択した。
【００３０】
結合活性及び遮断活性の確認
結合の評価では、ｃＰＤＧＦＲＡ−Ｆｃ（０．５μｇ／ｍｌで１００μｌ）でコーティングしたプレートに、段階希釈したＫ９−６Ｎ６．１変異体（濃縮または精製した）及び親抗体を添加し、室温で１時間インキュベートした。リガンドとの相互作用の遮断を評価するために、Ｋ９−６Ｎ６．１（濃縮または精製した）の段階希釈した変異体及び親Ｋ９−６Ｎ６．１抗体を一定量のビオチン化ｃＰＤＧＦＲＡ（０．０６２５μｇ／ｍｌ）と混合し、室温で１時間インキュベートした。混合物をイヌＰＤＧＦＡＡ（０．１２５μｇ／ｍｌ）で予めコーティングした９６ウェルプレートに移し、室温で２時間インキュベートした。次いで、プレートを洗浄し、検出抗体を添加し、結合量を上記のように決定した。
【００３１】
オララツマブを用いた結合及び遮断の評価のために、上記の方法を修正した。結合ＥＬＩＳＡにおいて、プレートを１００μｌの１μｇ／ｍｌのヒトＰＤＧＦＲＡでコーティングし、ＨＲＰ−タンパク質Ｌ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ）を検出に使用した。遮断アッセイでは、０．５μｇ／ｍｌのヒトＰＤＧＦＲＡ及び０．５μｇ／ｍｌのＰＤＧＦＡＡを使用した。プレートに結合したヒトＰＤＧＦＲＡを、ビオチン化抗ヒトＰＤＧＦＲＡ抗体（Ｒ＆Ｄ）で検出した。
【００３２】
結合アッセイ及び遮断アッセイを用いた突然変異体のスクリーニング（単一点ＥＬＩＳＡ）
最初に突然変異誘発由来の変異体を単一点ＥＬＩＳＡを用いてスクリーニングした。結合アッセイにおいて、０．５μｇ／ｍｌの濃縮抗体、Ｋ９−６Ｎ６．１変異体または親Ｋ９−６Ｎ６．１抗体のいずれかを、ｃＰＤＧＦＲＡ（０．５μｇ／ｍｌで１００μｌ）でコーティングしたプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートをＴｗｅｅｎ（登録商標）（ＰＢＳＴ）を含むリン酸緩衝生理食塩水で３回洗浄し、次いでヤギ抗イヌＦａｂ抗体／ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）共役体（Ｓｉｇｍａ）と共に、室温でさらに１時間インキュベートした。ＰＢＳＴで３回洗浄した後、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）ペルオキシダーゼ基質をプレートに添加した。４５０ｎｍでの吸光度をマイクロプレートリーダーを用いて読み取った。
【００３３】
遮断アッセイでは、濃縮した変異体または親抗体１５μｇ／ｍｌを最初に一定量のビオチン化ｃＰＤＧＦＲＡ（０．０６２５μｇ／ｍｌ）と混合し、室温で１時間インキュベートした。混合物をイヌＰＤＧＦＡＡ（０．１２５μｇ／ｍｌ）で予めコーティングした９６ウェルプレートに移し、室温で２時間インキュベートした。ＰＢＳＴで３回洗浄した後、プレートをＨＲＰ共役ストレプトアビジンと共に１時間インキュベートした。次いで、プレートを上記のように洗浄し、展開した。
【００３４】
有益な突然変異の同定
結合及び遮断の結果を分析し、ＥＣ５０（結合）及びＩＣ５０（遮断）値を計算した。親Ｋ９−６Ｎ６．１分子に対する各突然変異変異体の改善を評価するために、親ＥＣ５０またはＩＣ５０を、変異体ＥＣ５０またはＩＣ５０で除算したものとして、倍率の改善を計算した。
【００３５】
表２に示されるように、変異体の中で、ＨＣ−Ｙ１００Ｄ（クローン１Ｆ１２）は、イヌＰＤＧＦ−ＡＡのｃＰＤＧＦＲＡへの結合を遮断することにおいてほぼ１７倍の改善を示したが、結合はヒトＰＤＧＦＲＡに検出されなかった。しかし、ＬＣ、Ｓ２８Ａ（２Ａ２）の突然変異は、ヒトＰＤＧＦＲＡ及びｃＰＤＧＦＲＡの両方への結合を保持しながら、親抗体と比較して遮断活性において１３倍の改善を示した。ＬＣ−Ｓ２８Ａ（クローン２Ａ２）は、ＰＤＧＦＲＡへの結合を改善する突然変異である。ＨＣ−Ｙ１００Ｄ（１Ｆ１２）及びＬＣ−Ｓ２８Ａ（２Ａ２）の結合及び遮断活性の予想外の改善は、単一クローンを用いて確認した。
【表２】
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【００３６】
ＨＣ−Ｙ１００ＤとＬＣ−Ｓ２８Ａとの組み合わせ
Ｋ９−６Ｎ６．１変異体ＨＣ−Ｙ１００Ｄ及びＬＣ−Ｓ２８Ａの重鎖及び軽鎖を共発現させて、２つの突然変異の組み合わせの結合及び遮断への影響を決定した。簡潔には、ＨＣ−Ｙ１００Ｄ（１Ｆ１２）を有するＨＣ発現ベクターを、Ｓ２８Ａ（２Ａ２）突然変異を含むＬＣ発現ベクターとＨＥＫ２９３細胞に同時トランスフェクトした。タンパク質をＰｒｏＡカラムを用いて精製し、結合及び遮断アッセイで評価した。ＨＣ−Ｙ１００Ｄ及びＬＣ−Ｓ２８Ａ（クローン１Ｆ１２−２Ａ２）併用抗体のＩＣ５０は、１Ｆ１２よりも２倍の改善を示した。
【００３７】
親和性の評価
選択されたＫ９−６Ｎ６．１変異体のｃＰＤＧＦＲＡへの結合動力学を、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ２００装置（ＢＩＡｃｏｒｅ、Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いて測定した。簡潔には、ｃＰＤＧＦＲＡ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）−Ｆｃ融合タンパク質をセンサーチップ上に固定し、抗体を様々な濃度で注入した。各濃度でセンソグラムを得て、速度定数を決定するためにＢＩＡ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ３．０プログラムを用いて評価した。親和定数（ＫＤ）は、速度定数Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比から計算した。評価は、２５℃で行った。表３に示されるように、動態学的評価は、親Ｋ９−６Ｎ６．１より全体の親和性が改善され、１Ｆ１２（Ｙ１００Ｄ）では５倍、１Ｆ１２−２Ａ２（Ｙ１００Ｄ及びＳ２８Ａ）では１２倍を示した。
【表３】
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【００３８】
Ｋ９−６Ｎ６．１における脱アミド部位の除去
Ｋ９−６Ｎ６．１のＩｇＧ−Ｂ部分のアミノ酸配列は２３２位のアスパラギン残基を含み、続いて、グリシン、小さな柔軟な残基（Ｇ２３３）が続く。曝露されたタンパク質の領域におけるＮＧのペアリングは、しばしば高レベルの脱アミドを生じる。Ｋ９−６Ｎ６．１の生物物理学的評価により、生成された抗体の約２０％が、抗体のヒンジ領域におけるＮ２３２（アスパラギン２３２）の脱アミド化を受けていることが明らかになった。
【００３９】
Ｋ９−６Ｎ６．１の脱アミド化の発生を排除するために、Ｎ２３２をアスパラギン酸（Ｄ）、セリン（Ｓ）、またはグルタミン（Ｑ）に置換するために部位特異的突然変異誘発を使用した。置換は、アスパラギンのそれに対する側鎖の類似性に基づいており、サイズ、極性、及びタイプの検討を含んでいた。標準的な突然変異誘発プロトコルを用いた。突然変異は、ＤＮＡ配列決定によって確認した。突然変異した抗体を、一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を用いて発現させ、プロテインＡカラムで精製した。次いで、結合及び遮断アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて精製タンパク質を評価し、その結果を対照としての親Ｋ９−６Ｎ６．１と比較した。
【００４０】
Ｎ２３２Ｓの選択
表４に示されるように、３つのＮ２３２変異体はすべて、ＥＣ５０値は０．１９〜０．２１ｎＭの範囲であり、ＩＣ５０値は２７〜３６ｎＭにある、親Ｋ９−６Ｎ６．１の結合活性及び遮断活性を保持した。さらに、ｑＰＣＲ（定量的ポリメラーゼ連鎖反応）を用いて変異した抗体の熱安定性を評価した。結果は、親変異体Ｋ９−６Ｎ６．１と比較して、３つの変異体の熱安定性は変化しないことを示した。セリンは、アスパラギン酸及びグルタミンより翻訳後修飾を受ける可能性がより少ない。セリンは、２３２位のアスパラギンの代わりに選択された。
【表４】
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【００４１】
Ｋ９−６Ｎ６．１におけるＮ結合グリコシル化部位の除去
哺乳類の細胞は、抗体への翻訳後修飾を生じさせることができ、これは、典型的にはＮまたはＯ結合部位でのグリコシル化を含む。配列Ｎ−ｘ−Ｓ／Ｔは、しばしば翻訳後修飾によってグリコシル化が起こる部位である。モノクローナル抗体の場合、重鎖定常領域のＣＨ２領域内に典型的には単一のＮ−結合部位のみが存在する（典型的には、ヒトＩｇＧについてはＮ２９７である）。モノクローナル抗体では、このＮ結合グリコシル化の存在及び含量は、Ｆｃ受容体に結合し、免疫エフェクタ機能を媒介するその能力に寄与し得る。培養細胞における産生プロセスの結果、Ｎ−結合部位に付加されるグリカンの程度及び含量は変化でき、異種性及び産物の潜在的活性（エフェクタ機能が重要である場合）に寄与できる。
【００４２】
ＣＤＲ配列内のその位置及びグリコシル化の程度に依存して、モノクローナル抗体の可変領域内にさらなるＮ結合部位が存在するとその効力に影響を及ぼし、製造中の生成物の異種性にも寄与し得る。産生に使用される宿主細胞（例えば、マウスＮＳ０細胞）に依存して、これらの「Ｆａｂ」またはＶ領域グリコシル化部位は、免疫過敏反応を誘発し得る非定型グリカンで優先的にグリコシル化され得る。
【００４３】
Ｎ−結合部位の置換のために、Ｑ（グルタミン）は、グリコシル化のためのコンセンサス配列を除去する保存的アミノ酸置換として典型的に使用される。したがって、標準的な突然変異誘発技術を用いて、Ｋ９−６Ｎ６．１のＨＣＤＲ１内でＮ３０Ｑ残基置換を行った。Ｎ３０Ｑ置換は、親Ｋ９−６Ｎ６．１と比較して、受容体への結合に実質的に影響しなかった。
【００４４】
Ｋ９−６Ｎ６．２配列
Ｋ９−６Ｎ６．２はＫ９−６Ｎ６．１から誘導される。Ｋ９−６Ｎ６．２は、親和性を改善するＫ９−６Ｎ６．１親分子、ＶＨ−Ｙ１００Ｄ及びＶＬ−Ｓ２８Ａに対する２つの置換、ならびに安定性を増し、Ｋ９−６Ｎ６．１親抗体よりも翻訳後修飾が少ないＮ３０Ｑ及びＮ２３２Ｓの２つの置換を含む。
【００４５】
配列番号１は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＨＣのアミノ酸配列である。
【００４６】
配列番号２は、配列番号１に対応するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に対応し、またマウス重鎖リーダーのＤＮＡコード配列、ならびに制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩ及びＥｃｏＲＩのためのＤＮＡコード配列を含む。
【００４７】
配列番号３は、配列番号２の翻訳されたアミノ酸配列であり、Ｋ９−６Ｎ６．２のＨＣを含む。
【００４８】
配列番号４は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＨＣＶＲのアミノ酸配列である。
【００４９】
配列番号５は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＨＣＶＲをコードするヌクレオチド配列である。
【００５０】
配列番号６は、Ｋ９−６Ｎ６．２の重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
【００５１】
配列番号７は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＨＣＤＲ１アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
【００５２】
配列番号８は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列である。
【００５３】
配列番号９は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
【００５４】
配列番号１０は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＨＣＤＲ３アミノ酸配列である。
【００５５】
配列番号１１は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＨＣＤＲ３アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
【００５６】
配列番号１２は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＬＣアミノ酸配列である。
【００５７】
配列番号１３は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＬＣアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
【００５８】
配列番号１４は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＬＣＶＲアミノ酸配列である。
【００５９】
配列番号１５は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＬＣＶＲアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
【００６０】
配列番号１６は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＬＣＤＲ１アミノ酸配列である。
【００６１】
配列番号１７は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＬＣＤＲ１アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
【００６２】
配列番号１８は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＬＣＤＲ２アミノ酸配列である。
【００６３】
配列番号１９は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＬＣＤＲ２アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
【００６４】
配列番号２０は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＬＣＤＲ３アミノ酸配列である。
【００６５】
配列番号２１は、Ｋ９−６Ｎ６．２のＬＣＤＲ３アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
【００６６】
配列番号２２は、Ｋ９−６Ｎ６．１のＨＣアミノ酸配列である。
【００６７】
配列番号２３は、Ｋ９−６Ｎ６．１のＨＣアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
【００６８】
配列番号２４は、Ｋ９−６Ｎ６．１のＬＣアミノ酸配列である。
【００６９】
配列番号２５は、Ｋ９−６Ｎ６．１のＬＣアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
【００７０】
配列番号２６は、オララツマブのＨＣアミノ酸配列である。
【００７１】
配列番号２７は、オララツマブのＨＣアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
【００７２】
配列番号２８は、オララツマブのＬＣアミノ酸配列である。
【００７３】
配列番号２９は、オララツマブのＬＣアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
【００７４】
配列番号３０は、オララツマブのＨＣＶＲアミノ酸配列である。
【００７５】
配列番号３１は、オララツマブのＨＣＶＲアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
【００７６】
配列番号３２は、オララツマブのＬＣＶＲアミノ酸配列である。
【００７７】
配列番号３３は、オララツマブのＬＣＶＲアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
【００７８】
配列番号３４は、オララツマブのＨＣＤＲ１アミノ酸配列である。
【００７９】
配列番号３５は、オララツマブのＨＣＤＲ２アミノ酸配列である。
【００８０】
配列番号３６は、オララツマブのＨＣＤＲ３アミノ酸配列である。
【００８１】
配列番号３７は、オララツマブのＬＣＤＲ１アミノ酸配列である。
【００８２】
配列番号３８は、オララツマブのＬＣＤＲ２アミノ酸配列である。
【００８３】
配列番号３９は、オララツマブのＬＣＤＲ３アミノ酸配列である。
【００８４】
Ｋ９−６Ｎ６．２の作製方法
Ｋ９−６Ｎ６．２は、哺乳類細胞で使用するためのグルタミン合成酵素（ＧＳ）発現プラスミドを利用した発現のために設計された。重鎖及び軽鎖をコードするｃＤＮＡを、ウイルスＣＭＶプロモーター及びＳＶ４０転写ターミネーター及びポリアデニル化３’ＵＴＲによって調節される発現カセットにクローニングした。両方のカセットは、選択可能なＧＳマーカーの発現カセットと共に、単一のプラスミド上に含まれていた。Ｋ９−６Ｎ６．２に対し、脂質ベースのトランスフェクションプロセス（ＥｘｐｉＣＨＯ；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を利用して、ＣＨＯ細胞における一過性発現において、発現プラスミドを最初に評価した。細胞株生成のために、ＣＨＯ細胞を、Ｋ９−６Ｎ６．ｖ２発現ベクターとインヒビターメチオニンスルホキシミンの存在下でグルタミンを欠く培地中で選択されたクローンとによりエレクトロポレーションした。クローン選択の後、産生のために選択されたクローンが１ｇ／Ｌ以上に達した産生力価について細胞株を評価した。選択された産生ラインを拡大し、モノクローナル抗体Ｋ９−６Ｎ６．２の産生のために凍結細胞バンクを確立した。一過性または安定したトランスフェクションから産生された物質ついては、Ｋ９−６Ｎ６．２をＰｒｏ−Ａアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。  
【００８５】
配列
配列番号１は、Ｋ９−６Ｎ６．２の重鎖のアミノ酸配列である。
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＱＳＳＳＹＹＷＧＷＬＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＦＦＹＴＧＳＴＹＹＮＰＳＬＲＳＲＬＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＳＴＹＹＤＧＳＧＮＹＹＧＷＦＤＲＷＤＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＴＡＰＳＶＦＰＬＡＰＳＣＧＳＴＳＧＳＴＶＡＬＡＣＬＶＳＧＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＳＬＴＳＧＶＨＴＦＰＳＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＭＶＴＶＰＳＳＲＷＰＳＥＴＦＴＣＮＶＡＨＰＡＳＫＴＫＶＤＫＰＶＰＫＲＥＳＧＲＶＰＲＰＰＤＣＰＫＣＰＡＰＥＭＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＬＩＡＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＬＤＰＥＤＰＥＶＱＩＳＷＦＶＤＧＫＱＭＱＴＡＫＴＱＰＲＥＥＱＦＮＧＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＧＨＱＤＷＬＫＧＫＱＦＴＣＫＶＮＮＫＡＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＡＲＧＱＡＨＱＰＳＶＹＶＬＰＰＳＲＥＥＬＳＫＮＴＶＳＬＴＣＬＩＫＤＦＦＰＰＤＩＤＶＥＷＱＳＮＧＱＱＥＰＥＳＫＹＲＴＴＰＰＱＬＤＥＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＳＶＤＫＳＲＷＱＲＧＤＴＦＩ
【００８６】
配列番号２は、配列番号１に対応するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であり、また、マウス重鎖リーダーのＤＮＡコード配列、ならびに制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩ及びＥｃｏＲＩのＤＮＡコード配列を含む。
ＡＡＧＣＴＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＴＣＴＴＧＣＡＴＣＡＴＴＣＴＧＴＴＣＣＴＧＧＴＣＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＡＧＴＧＣＡＣＴＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＴＧＧＡＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＡＴＣＴＧＡＡＡＣＣＣＴＧＡＧＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＡＣＡＧＴＧＡＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＡＴＣＣＡＧＴＣＣＡＧＣＴＣＴＴＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＣＴＧＧＣＴＧＣＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＧＡＧＣＴＴＣＴＴＴＴＡＣＡＣＡＧＧＴＴＣＴＡＣＴＴＡＣＴＡＴＡＡＣＣＣＣＡＧＴＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＡＧＴＧＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＡＧＡＡＴＣＡＧＴＴＴＴＣＣＣＴＧＡＴＧＣＴＧＡＧＴＴＣＡＧＴＣＡＣＡＧＣＣＧＣＴＧＡＴＡＣＴＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＴＣＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＣＴＡＣＴＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＣＴＡＴＴＡＣＧＧＧＴＧＧＴＴＣＧＡＣＣＧＴＴＧＧＧＡＴＣＡＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＣＡＧＣＧＣＡＡＧＣＡＣＣＡＣＡＧＣＡＣＣＡＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＣＣＣＴＡＧＣＴＧＣＧＧＧＡＧＴＡＣＣＴＣＡＧＧＴＴＣＣＡＣＡＧＴＣＧＣＴＣＴＧＧＣＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＧＴＧＧＧＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＧＴＣＡＴＧＧＡＡＴＡＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＴＡＧＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＧＴＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＴＣＡＴＣＣＡＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＧＣＣＣＡＧＣＴＣＣＡＧＧＴＧＧＣＣＴＴＣＴＧＡＡＡＣＴＴＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＣＣＣＡＴＣＣＡＧＣＴＡＧＴＡＡＧＡＣＡＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＣＣＣＧＴＧＣＣＴＡＡＡＣＧＣＧＡＧＡＧＴＧＧＡＡＧＡＧＴＧＣＣＡＣＧＣＣＣＣＣＣＴＧＡＴＴＧＣＣＣＣＡＡＧＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＣＧＡＡＡＴＧＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＧＣＣＡＡＡＡＧＡＣＡＣＣＣＴＧＣＴＧＡＴＴＧＣＡＡＧＡＡＣＴＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＣＧＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＡＣＣＣＣＧＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＴＴＣＣＴＧＧＴＴＣＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＡＧＣＡＧＡＴＧＣＡＧＡＣＴＧＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＧＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＴＴＡＡＣＧＧＴＡＣＡＴＡＴＣＧＣＧＴＣＧＴＧＡＧＣＧＴＧＣＴＧＣＣＴＡＴＣＧＧＣＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＧＧＧＡＡＡＡＣＡＧＴＴＴＡＣＡＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＡＣＡＡＴＡＡＡＧＣＴＣＴＧＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＣＧＡＧＡＧＧＡＣＴＡＴＴＴＣＣＡＡＧＧＣＴＣＧＧＧＧＡＣＡＧＧＣＡＣＡＴＣＡＧＣＣＣＡＧＣＧＴＣＴＡＴＧＴＧＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＴＣＧＡＧＡＧＧＡＡＣＴＧＴＣＡＡＡＧＡＡＣＡＣＡＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＴＴＧＴＣＴＧＡＴＣＡＡＡＧＡＴＴＴＣＴＴＴＣＣＣＣＣＴＧＡＣＡＴＴＧＡＴＧＴＧＧＡＧＴＧＧＣＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＴＣＴＡＡＧＴＡＣＣＧＣＡＣＴＡＣＣＣＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＧＡＣＧＡＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＴＡＴＴＴＣＣＴＧＴＡＣＴＣＣＡＡＧＣＴＧＡＧＣＧＴＧＧＡＣＡＡＡＴＣＴＣＧＡＴＧＧＣＡＧＣＧＴＧＧＡＧＡＴＡＣＣＴＴＴＡＴＣＴＧＴＧＣＡＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＴＴＡＣＡＣＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＣＴＧＴＣＡＣＡＴＴＣＣＣＣＣＧＧＣＡＡＧＴＧＡＧＡＡＴＴＣ
【００８７】
配列番号３は、配列番号２の翻訳されたアミノ酸配列であり、Ｋ９−６Ｎ６．２の重鎖を含む。
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＱＳＳＳＹＹＷＧＷＬＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＦＦＹＴＧＳＴＹＹＮＰＳＬＲＳＲＬＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＳＴＹＹＤＧＳＧＮＹＹＧＷＦＤＲＷＤＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＴＡＰＳＶＦＰＬＡＰＳＣＧＳＴＳＧＳＴＶＡＬＡＣＬＶＳＧＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＳＬＴＳＧＶＨＴＦＰＳＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＭＶＴＶＰＳＳＲＷＰＳＥＴＦＴＣＮＶＡＨＰＡＳＫＴＫＶＤＫＰＶＰＫＲＥＳＧＲＶＰＲＰＰＤＣＰＫＣＰＡＰＥＭＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＬＩＡＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＬＤＰＥＤＰＥＶＱＩＳＷＦＶＤＧＫＱＭＱＴＡＫＴＱＰＲＥＥＱＦＮＧＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＧＨＱＤＷＬＫＧＫＱＦＴＣＫＶＮＮＫＡＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＡＲＧＱＡＨＱＰＳＶＹＶＬＰＰＳＲＥＥＬＳＫＮＴＶＳＬＴＣＬＩＫＤＦＦＰＰＤＩＤＶＥＷＱＳＮＧＱＱＥＰＥＳＫＹＲＴＴＰＰＱＬＤＥＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＳＶＤＫＳＲＷＱＲＧＤＴＦＩＣＡＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＥＳＬＳＨＳＰＧＫ
【００８８】
配列番号４は、Ｋ９−６Ｎ６．２の重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＱＳＳＳＹＹＷＧＷＬＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＦＦＹＴＧＳＴＹＹＮＰＳＬＲＳＲＬＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＳＴＹＹＤＧＳＧＮＹＹＧＷＦＤＲＷＤＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【００８９】
配列番号５は、Ｋ９−６Ｎ６．２の重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列である
ＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＴＧＧＡＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＡＴＣＴＧＡＡＡＣＣＣＴＧＡＧＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＡＣＡＧＴＧＡＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＡＴＣＣＡＧＴＣＣＡＧＣＴＣＴＴＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＣＴＧＧＣＴＧＣＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＧＡＧＣＴＴＣＴＴＴＴＡＣＡＣＡＧＧＴＴＣＴＡＣＴＴＡＣＴＡＴＡＡＣＣＣＣＡＧＴＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＡＧＴＧＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＡＧＡＡＴＣＡＧＴＴＴＴＣＣＣＴＧＡＴＧＣＴＧＡＧＴＴＣＡＧＴＣＡＣＡＧＣＣＧＣＴＧＡＴＡＣＴＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＴＣＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＣＴＡＣＴＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＣＴＡＴＴＡＣＧＧＧＴＧＧＴＴＣＧＡＣＣＧＴＴＧＧＧＡＴＣＡＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＣＡＧＣ
【００９０】
配列番号６は、Ｋ９−６Ｎ６．２の重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
ＴＶＳＧＧＳＩＱＳＳＳＹＹＷＧ
【００９１】
配列番号７は、Ｋ９−６Ｎ６．２の重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
ＡＣＡＧＴＧＡＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＡＴＣＣＡＧＴＣＣＡＧＣＴＣＴＴＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＣ
【００９２】
配列番号８は、Ｋ９−６Ｎ６．２の重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。
ＳＦＦＹＴＧＳＴＹＹＮＰＳＬＲＳ
【００９３】
配列番号９は、Ｋ９−６Ｎ６．２の重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
ＡＧＣＴＴＣＴＴＴＴＡＣＡＣＡＧＧＴＴＣＴＡＣＴＴＡＣＴＡＴＡＡＣＣＣＣＡＧＴＣＴＧＡＧＧＴＣＡ
【００９４】
配列番号１０は、Ｋ９−６Ｎ６．２の重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。
ＡＲＱＳＴＹＹＤＧＳＧＮＹＹＧＷＦＤＲ
【００９５】
配列番号１１は、Ｋ９−６Ｎ６．２の重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
ＧＣＴＣＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＣＴＡＣＴＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＣＴＡＴＴＡＣＧＧＧＴＧＧＴＴＣＧＡＣＣＧＴ
【００９６】
配列番号１２は、Ｋ９−６Ｎ６．２の軽鎖アミノ酸配列である。
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＡＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＡＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＮＤＡＱＰＡＶＹＬＦＱＰＳＰＤＱＬＨＴＧＳＡＳＶＶＣＬＬＮＳＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＶＤＧＶＩＱＤＴＧＩＱＥＳＶＴＥＱＤＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＭＳＳＴＥＹＬＳＨＥＬＹＳＣＥＩＴＨＫＳＬＰＳＴＬＩＫＳＦＱＲＳＥＣＱＲＶＤ
【００９７】
配列番号１３は、Ｋ９−６Ｎ６．２の軽鎖アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
ＡＡＧＣＴＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＴＴＧＧＴＣＣＴＧＣＡＴＣＡＴＴＣＴＧＴＴＣＣＴＧＧＴＧＧＣＣＡＣＣＧＣＴＡＣＡＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＧＣＧＡＡＡＴＣＧＴＣＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＣＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＧＴＣＴＧＴＣＡＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＧＴＣＧＣＧＣＴＴＣＣＣＡＧＧＣＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＴＡＣＣＴＧＧＣＡＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＡＡＧＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＡＣＣＧＡＧＣＡＡＣＡＧＧＧＡＴＴＣＣＡＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＣＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＴＧＡＣＴＴＴＡＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＣＣＧＡＡＧＡＴＴＴＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＧＣＧＧＡＧＣＡＡＣＴＧＧＣＣＣＣＣＴＧＣＡＴＴＴＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＴＡＡＡＣＧＣＡＡＴＧＡＣＧＣＡＣＡＧＣＣＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＣＴＧＴＴＣＣＡＧＣＣＡＡＧＴＣＣＣＧＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＴＡＣＡＧＧＣＴＣＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＣＴＧＴＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＴＴＴＴＡＴＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＴＣＡＡＴＧＴＧＡＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＧＧＡＧＴＣＡＴＣＣＡＧＧＡＴＡＣＴＧＧＧＡＴＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＧＴＣＡＣＣＧＡＡＣＡＧＧＡＣＡＡＡＧＡＴＴＣＴＡＣＡＴＡＴＡＧＴＣＴＧＴＣＡＴＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＣＴＡＣＣＧＡＧＴＡＣＣＴＧＡＧＴＣＡＣＧＡＡＣＴＧＴＡＴＴＣＡＴＧＣＧＡＧＡＴＣＡＣＴＣＡＴＡＡＧＴＣＡＣＴＧＣＣＣＴＣＣＡＣＣＣＴＧＡＴＴＡＡＧＴＣＣＴＴＣＣＡＧＡＧＧＴＣＴＧＡＧＴＧＴＣＡＧＣＧＧＧＴＧＧＡＴＴＧＡＧＡＡＴＴＣ
【００９８】
配列番号１４は、Ｋ９−６Ｎ６．２の軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＡＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＡＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【００９９】
配列番号１５は、Ｋ９−６Ｎ６．２の軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列である。
ＧＡＡＡＴＣＧＴＣＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＣＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＧＴＣＴＧＴＣＡＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＧＴＣＧＣＧＣＴＴＣＣＣＡＧＧＣＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＴＡＣＣＴＧＧＣＡＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＡＡＧＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＡＣＣＧＡＧＣＡＡＣＡＧＧＧＡＴＴＣＣＡＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＣＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＴＧＡＣＴＴＴＡＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＣＣＧＡＡＧＡＴＴＴＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＧＣＧＧＡＧＣＡＡＣＴＧＧＣＣＣＣＣＴＧＣＡＴＴＴＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＴＡＡＡ
【０１００】
配列番号１６は、Ｋ９−６Ｎ６．２の軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
ＲＡＳＱＡＶＳＳＹＬＡ
【０１０１】
配列番号１７は、Ｋ９−６Ｎ６．２の軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
ＣＧＣＧＣＴＴＣＣＣＡＧＧＣＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＴＡＣＣＴＧＧＣＡ
【０１０２】
配列番号１８は、Ｋ９−６Ｎ６．２の軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。
ＹＤＡＳＮＲＡＴ
【０１０３】
配列番号１９は、Ｋ９−６Ｎ６．２の軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
ＴＡＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＡＣＣＧＡＧＣＡＡＣＡ
【０１０４】
配列番号２０は、Ｋ９−６Ｎ６．２の軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。
ＱＱＲＳＮＷＰＰＡ
【０１０５】
配列番号２１は、Ｋ９−６Ｎ６．２の軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
ＣＡＧＣＡＧＣＧＧＡＧＣＡＡＣＴＧＧＣＣＣＣＣＴＧＣＡ
【０１０６】
配列番号２２は、Ｋ９−６Ｎ６．１の重鎖アミノ酸配列である。
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＮＳＳＳＹＹＷＧＷＬＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＦＦＹＴＧＳＴＹＹＮＰＳＬＲＳＲＬＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＳＴＹＹＹＧＳＧＮＹＹＧＷＦＤＲＷＤＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＴＡＰＳＶＦＰＬＡＰＳＣＧＳＴＳＧＳＴＶＡＬＡＣＬＶＳＧＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＳＬＴＳＧＶＨＴＦＰＳＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＭＶＴＶＰＳＳＲＷＰＳＥＴＦＴＣＮＶＡＨＰＡＳＫＴＫＶＤＫＰＶＰＫＲＥＮＧＲＶＰＲＰＰＤＣＰＫＣＰＡＰＥＭＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＬＩＡＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＬＤＰＥＤＰＥＶＱＩＳＷＦＶＤＧＫＱＭＱＴＡＫＴＱＰＲＥＥＱＦＮＧＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＧＨＱＤＷＬＫＧＫＱＦＴＣＫＶＮＮＫＡＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＡＲＧＱＡＨＱＰＳＶＹＶＬＰＰＳＲＥＥＬＳＫＮＴＶＳＬＴＣＬＩＫＤＦＦＰＰＤＩＤＶＥＷＱＳＮＧＱＱＥＰＥＳＫＹＲＴＴＰＰＱＬＤＥＤＧＳＹＦＬＹＳＫＬＳＶＤＫＳＲＷＱＲＧＤＴＦＩＣＡＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＥＳＬＳＨＳＰＧＫ
【０１０７】
配列番号２３は、Ｋ９−６Ｎ６．１の重鎖アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である
ＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＧＡＣＣＴＧＧＡＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＡＴＣＴＧＡＡＡＣＣＣＴＧＡＧＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＡＣＡＧＴＧＡＧＣＧＧＣＧＧＡＴＣＴＡＴＣＡＡＣＴＣＣＡＧＣＴＣＴＴＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＣＴＧＧＣＴＧＣＧＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＧＡＧＣＴＴＣＴＴＴＴＡＣＡＣＡＧＧＴＴＣＴＡＣＴＴＡＣＴＡＴＡＡＣＣＣＣＡＧＴＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＧＧＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＡＧＴＧＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＡＧＡＡＴＣＡＧＴＴＴＴＣＣＣＴＧＡＴＧＣＴＧＡＧＴＴＣＡＧＴＣＡＣＡＧＣＣＧＣＴＧＡＴＡＣＴＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＧＣＴＣＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＣＴＡＣＴＡＴＴＡＣＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＣＴＡＴＴＡＣＧＧＧＴＧＧＴＴＣＧＡＣＣＧＴＴＧＧＧＡＴＣＡＧＧＧＴＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＣＡＧＣＧＣＡＡＧＣＡＣＣＡＣＡＧＣＡＣＣＡＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＣＣＣＴＡＧＣＴＧＣＧＧＧＡＧＴＡＣＣＴＣＡＧＧＴＴＣＣＡＣＡＧＴＣＧＣＴＣＴＧＧＣＡＴＧＴＣＴＧＧＴＧＡＧＴＧＧＧＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴＧＴＣＡＴＧＧＡＡＴＡＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＴＡＧＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧＴＣＴＡＧＴＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＴＣＡＴＣＣＡＴＧＧＴＣＡＣＴＧＴＧＣＣＣＡＧＣＴＣＣＡＧＧＴＧＧＣＣＴＴＣＴＧＡＡＡＣＴＴＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＧＣＣＣＡＴＣＣＡＧＣＴＡＧＴＡＡＧＡＣＡＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＣＣＣＧＴＧＣＣＴＡＡＡＣＧＣＧＡＧＡＡＴＧＧＡＡＧＡＧＴＧＣＣＡＣＧＣＣＣＣＣＣＴＧＡＴＴＧＣＣＣＣＡＡＧＴＧＴＣＣＡＧＣＴＣＣＣＧＡＡＡＴＧＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＣＡＡＧＣＣＡＡＡＡＧＡＣＡＣＣＣＴＧＣＴＧＡＴＴＧＣＡＡＧＡＡＣＴＣＣＴＧＡＧＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＣＧＴＧＧＡＣＣＴＧＧＡＣＣＣＣＧＡＧＧＡＣＣＣＣＧＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＴＴＣＣＴＧＧＴＴＣＧＴＧＧＡＴＧＧＧＡＡＧＣＡＧＡＴＧＣＡＧＡＣＴＧＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＧＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＴＴＡＡＣＧＧＴＡＣＡＴＡＴＣＧＣＧＴＣＧＴＧＡＧＣＧＴＧＣＴＧＣＣＴＡＴＣＧＧＣＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＧＧＧＡＡＡＡＣＡＧＴＴＴＡＣＡＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＡＣＡＡＴＡＡＡＧＣＴＣＴＧＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＴＣＧＡＧＡＧＧＡＣＴＡＴＴＴＣＣＡＡＧＧＣＴＣＧＧＧＧＡＣＡＧＧＣＡＣＡＴＣＡＧＣＣＣＡＧＣＧＴＣＴＡＴＧＴＧＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＴＣＧＡＧＡＧＧＡＡＣＴＧＴＣＡＡＡＧＡＡＣＡＣＡＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＴＴＧＴＣＴＧＡＴＣＡＡＡＧＡＴＴＴＣＴＴＴＣＣＣＣＣＴＧＡＣＡＴＴＧＡＴＧＴＧＧＡＧＴＧＧＣＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＣＴＧＡＡＴＣＴＡＡＧＴＡＣＣＧＣＡＣＴＡＣＣＣＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＧＡＣＧＡＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＴＡＴＴＴＣＣＴＧＴＡＣＴＣＣＡＡＧＣＴＧＡＧＣＧＴＧＧＡＣＡＡＡＴＣＴＣＧＡＴＧＧＣＡＧＣＧＴＧＧＡＧＡＴＡＣＣＴＴＴＡＴＣＴＧＴＧＣＡＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＴＴＡＣＡＣＡＣＡＡＧＡＡＡＧＴＣＴＧＴＣＡＣＡＴＴＣＣＣＣＣＧＧＣＡＡＧ
【０１０８】
配列番号２４は、Ｋ９−６Ｎ６．１の軽鎖アミノ酸配列である。
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＡＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＮＤＡＱＰＡＶＹＬＦＱＰＳＰＤＱＬＨＴＧＳＡＳＶＶＣＬＬＮＳＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＶＤＧＶＩＱＤＴＧＩＱＥＳＶＴＥＱＤＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＭＳＳＴＥＹＬＳＨＥＬＹＳＣＥＩＴＨＫＳＬＰＳＴＬＩＫＳＦＱＲＳＥＣＱＲＶＤ
【０１０９】
配列番号２５は、Ｋ９−６Ｎ６．１の軽鎖アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
ＧＡＡＡＴＣＧＴＣＣＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＣＧＣＣＡＣＡＣＴＧＡＧＴＣＴＧＴＣＡＣＣＴＧＧＣＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＧＴＣＧＣＧＣＴＴＣＣＣＡＧＡＧＣＧＴＧＴＣＣＡＧＣＴＡＣＣＴＧＧＣＡＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＡＡＧＡＣＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＡＣＧＣＴＴＣＣＡＡＣＣＧＡＧＣＡＡＣＡＧＧＧＡＴＴＣＣＡＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＣＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＡＧＧＧＡＣＴＧＡＣＴＴＴＡＣＴＣＴＧＡＣＣＡＴＣＴＣＴＡＧＴＣＴＧＧＡＧＣＣＣＧＡＡＧＡＴＴＴＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＧＣＧＧＡＧＣＡＡＣＴＧＧＣＣＣＣＣＴＧＣＡＴＴＴＧＧＴＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＴＡＡＡＣＧＣＡＡＴＧＡＣＧＣＡＣＡＧＣＣＴＧＣＣＧＴＣＴＡＣＣＴＧＴＴＣＣＡＧＣＣＡＡＧＴＣＣＣＧＡＴＣＡＧＣＴＧＣＡＴＡＣＡＧＧＣＴＣＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＴＣＴＧＴＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＴＴＴＴＡＴＣＣＡＡＡＧＧＡＣＡＴＣＡＡＴＧＴＧＡＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＧＧＡＧＴＣＡＴＣＣＡＧＧＡＴＡＣＴＧＧＧＡＴＴＣＡＧＧＡＧＴＣＣＧＴＣＡＣＣＧＡＡＣＡＧＧＡＣＡＡＡＧＡＴＴＣＴＡＣＡＴＡＴＡＧＴＣＴＧＴＣＡＴＣＣＡＣＡＣＴＧＡＣＴＡＴＧＡＧＣＴＣＴＡＣＣＧＡＧＴＡＣＣＴＧＡＧＴＣＡＣＧＡＡＣＴＧＴＡＴＴＣＡＴＧＣＧＡＧＡＴＣＡＣＴＣＡＴＡＡＧＴＣＡＣＴＧＣＣＣＴＣＣＡＣＣＣＴＧＡＴＴＡＡＧＴＣＣＴＴＣＣＡＧＡＧＧＴＣＴＧＡＧＴＧＴＣＡＧＣＧＧＧＴＧＧＡＴ
【０１１０】
配列番号２６は、オララツマブの重鎖アミノ酸配列である。
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＮＳＳＳＹＹＷＧＷＬＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＦＦＹＴＧＳＴＹＹＮＰＳＬＲＳＲＬＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＳＴＹＹＹＧＳＧＮＹＹＧＷＦＤＲＷＤＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【０１１１】
配列番号２７は、オララツマブの重鎖アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
ＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＧＧＧＣＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＴＣＧＧＡＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＴＧＧＣＴＣＣＡＴＣＡＡＣＡＧＴＡＧＴＡＧＴＴＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＴＧＧＣＴＣＣＧＣＣＡＧＴＣＣＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＧＡＧＴＴＴＣＴＴＴＴＡＴＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣＧＴＣＣＣＴＣＡＧＧＡＧＴＣＧＡＣＴＣＡＣＣＡＴＡＴＣＣＧＴＡＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＴＧＣＴＧＡＧＴＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＡＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＣＡＧＴＣＣＡＣＧＴＡＴＴＡＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＧＧＧＡＡＴＴＡＴＴＡＴＧＧＣＴＧＧＴＴＣＧＡＣＣＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡ
【０１１２】
配列番号２８は、オララツマブの軽鎖オララツマブのアミノ酸配列である。
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＡＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【０１１３】
配列番号２９は、オララツマブの軽鎖アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧＣＡＧＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＡＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
【０１１４】
配列番号３０は、オララツマブの重鎖可変領域アミノ酸配列である。
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＮＳＳＳＹＹＷＧＷＬＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＦＦＹＴＧＳＴＹＹＮＰＳＬＲＳＲＬＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＱＳＴＹＹＹＧＳＧＮＹＹＧＷＦＤＲＷＤＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【０１１５】
配列番号３１は、オララツマブの重鎖可変領域アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
ＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＧＧＧＣＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＣＴＴＣＧＧＡＧＡＣＣＣＴＧＴＣＣＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＴＧＧＣＴＣＣＡＴＣＡＡＣＡＧＴＡＧＴＡＧＴＴＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＴＧＧＣＴＣＣＧＣＣＡＧＴＣＣＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＡＴＴＧＧＧＡＧＴＴＴＣＴＴＴＴＡＴＡＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣＧＴＣＣＣＴＣＡＧＧＡＧＴＣＧＡＣＴＣＡＣＣＡＴＡＴＣＣＧＴＡＧＡＣＡＣＧＴＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＴＧＣＴＧＡＧＴＴＣＴＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＡＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＣＡＧＴＣＣＡＣＧＴＡＴＴＡＣＴＡＴＧＧＴＴＣＧＧＧＧＡＡＴＴＡＴＴＡＴＧＧＣＴＧＧＴＴＣＧＡＣＣＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
【０１１６】
配列番号３２は、オララツマブの軽鎖可変領域アミノ酸配列である。
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＡＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
【０１１７】
配列番号３３は、オララツマブの軽鎖可変領域アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＡＧＣＡＧＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＡＣＡＧＧＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＣＣＡＧＣＣＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＡＧＡＧＣＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＡＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＧＣＣＴＣＣＧＧＣＧＴＴＣＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
【０１１８】
配列番号３４は、オララツマブの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
ＴＶＳＧＧＳＩＮＳＳＳＹＹＷＧ
【０１１９】
配列番号３５は、オララツマブの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。
ＳＦＦＹＴＧＳＴＹＹＮＰＳＬＲＳ
【０１２０】
配列番号３６は、オララツマブの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。
ＡＲＱＳＴＹＹＹＧＳＧＮＹＹＧＷＦＤＲ
【０１２１】
配列番号３７は、オララツマブの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。
ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ
【０１２２】
配列番号３８は、オララツマブの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。
ＹＤＡＳＮＲＡＴ
【０１２３】
配列番号３９は、オララツマブの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。
ＱＱＲＳＮＷＰＰＡ
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］  軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）とを含む、イヌ血小板由来成長因子受容体α（ｃＰＤＧＦＲＡ）に結合するモノクローナル抗体であって、前記ＬＣＶＲは、相補性決定領域（ＣＤＲ）ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、前記ＨＣＶＲは、ＣＤＲ  ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、前記ＬＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号１６であり、前記ＬＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号１８であり、前記ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号２０であり、前記ＨＣＤＲ１のアミノ酸配列は配列番号６であり、前記ＨＣＤＲ２のアミノ酸配列は配列番号８であり、前記ＨＣＤＲ３のアミノ酸配列は配列番号１０である、モノクローナル抗体。
［２］  軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）と重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）とを含み、前記ＬＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号１４であり、前記ＨＣＶＲのアミノ酸配列は配列番号４である、［１］に記載のモノクローナル抗体。
［３］  軽鎖（ＬＣ）と重鎖（ＨＣ）とを含み、前記ＬＣのアミノ酸配列は配列番号１２であり、前記ＨＣのアミノ酸配列は配列番号１である、［１］〜［２］のいずれかに記載のモノクローナル抗体。
［４］  療法に用いるための、［１］〜［３］のいずれかに記載の抗体。
［５］  イヌ対象における骨肉腫の治療に用いるための、［１］〜［３］のいずれかに記載の抗体。
［６］  前記抗体はＫ９−６Ｎ６．２である、［５］に記載の抗体。
【要約】
本発明は、イヌ血小板由来成長因子受容体αに対する抗イヌ血小板由来成長因子受容体α抗体に関する。
【選択図】なし【配列表】
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