(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
マンゴスチン抽出物、プロポリス、塩化リゾチーム、大豆不けん化物、ビタミンＣ、キシリトール、ビタミンＥ及び分子カプセルコーティング剤としてガンマ−シクロデキストリンを含み、
前記マンゴスチン抽出物が、マンゴスチン果皮の、水、炭素数１〜６のアルコール、および水と炭素数１〜６のアルコールとの混合溶媒からなる群より選択された１種以上の溶媒の抽出物であり、
アルファ−マンゴスチンを７．５〜９．０ｍｇ／１投与単位の含量で含む、
１日１回投与用のプレボテラインターメディア及び／又はフゾバクテリウムヌクレアタムによる歯周疾患の予防または治療用薬学組成物。
【請求項２】
前記炭素数１〜６のアルコールは、エタノールであることを特徴とする請求項１に記載の歯周疾患の予防または治療用薬学組成物。
【請求項３】
前記マンゴスチン抽出物は、全組成物の重量に対して３０〜５０重量％含まれるものである請求項１に記載の歯周疾患の予防または治療用薬学組成物。
【請求項４】
全組成物の重量に対して、プロポリス１５〜２５重量％、塩化リゾチーム１０〜２０重量％、大豆不けん化物７〜１３重量％、ビタミンＣ３〜１０重量％、キシリトール１〜７重量％およびビタミンＥ０．５〜２重量％を含むことを特徴とする請求項１に記載の歯周疾患の予防または治療用薬学組成物。
【請求項５】
海藻粉末、乾燥酵母およびクロム酵母からなる群より選択される１種以上の成分を追加的に含むものである請求項１に記載の歯周疾患の予防または治療用薬学組成物。
【請求項６】
薬学的に許容可能な担体をさらに含むものである請求項１に記載の歯周疾患の予防または治療用薬学組成物。
【請求項７】
マンゴスチン抽出物、プロポリス、塩化リゾチーム、大豆不けん化物、ビタミンＣ、キシリトール、ビタミンＥ及び分子カプセルコーティング剤としてガンマ−シクロデキストリンを含み、
前記マンゴスチン抽出物が、マンゴスチン果皮の、水、炭素数１〜６のアルコール、および水と炭素数１〜６のアルコールとの混合溶媒からなる群より選択された１種以上の溶媒の抽出物であり、
アルファ−マンゴスチンを７．５〜９．０ｍｇ／１投与単位の含量で含む、
１日１回投与用のプレボテラインターメディア及び／又はフゾバクテリウムヌクレアタムによる歯周疾患の予防または改善用食品組成物。
【請求項８】
前記炭素数１〜６のアルコールは、エタノールであることを特徴とする請求項７に記載の歯周疾患の予防または改善用食品組成物。
【請求項９】
前記マンゴスチン抽出物は、全組成物の重量に対して３０〜５０重量％含まれるものである請求項７に記載の歯周疾患の予防または改善用食品組成物。
【請求項１０】
全組成物の重量に対して、プロポリス１５〜２５重量％、塩化リゾチーム１０〜２０重量％、大豆不けん化物７〜１３重量％、ビタミンＣ３〜１０重量％、キシリトール１〜７％およびビタミンＥ０．５〜２重量％を含むことを特徴とする請求項７に記載の歯周疾患の予防または改善用食品組成物。
【請求項１１】
海藻粉末、乾燥酵母およびクロム酵母からなる群より選択される１種以上の成分を追加的に含むものである請求項７に記載の歯周疾患の予防または改善用食品組成物。
【請求項１２】
マンゴスチン抽出物、プロポリス、塩化リゾチーム、大豆不けん化物、ビタミンＣ、キシリトール、ビタミンＥ及び分子カプセルコーティング剤としてガンマ−シクロデキストリンを含み、
前記マンゴスチン抽出物が、マンゴスチン果皮の、水、炭素数１〜６のアルコール、および水と炭素数１〜６のアルコールとの混合溶媒からなる群より選択された１種以上の溶媒の抽出物であり、
アルファ−マンゴスチンを７．５〜９．０ｍｇ／１投与単位の含量で含む、
１日１回投与用のプレボテラインターメディア及び／又はフゾバクテリウムヌクレアタムによる歯周疾患の予防または改善用口腔衛生組成物。
【請求項１３】
前記組成物の剤形が、歯磨き粉、口腔清浄剤、口腔洗浄剤または歯茎マッサージクリームである請求項１２に記載の歯周疾患の予防または改善用口腔衛生組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優れた抗炎症効果を示すマンゴスチン抽出物またはその有効成分を含む歯周疾患の改善または予防用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
歯周疾患は俗に歯周炎ともいい、細菌の複合的な感染（ｍｉｘｅｄ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）による歯周組織の破壊を伴う炎症疾患をいい、歯肉出血と腫脹、歯周嚢の形成、付着歯肉の喪失、歯槽骨の破壊および口臭といった多様な臨床的な症状を示し、歯喪失およびインプラント失敗の主な原因とされている。
【０００３】
このような歯周疾患は、一般に虫歯と呼ばれるう蝕症（ｄｅｎｔａｌ ｃａｒｉｅｓ）と比較して、口腔内の発生組織、原因菌種および発病メカニズムの面で非常に異なる疾患といえる。具体的には、う蝕症は歯に発生するものであり、歯周疾患は歯周組織（セメント質、歯肉、歯周靭帯、歯槽骨）に発生する疾患であり、う蝕症はｍｕｔａｎｓグループ連鎖状球菌を含む糖質発酵代謝によって有機酸（主に乳酸）を発現する細菌種がその原因菌種であるのに対し、歯周疾患は主にグラム陰性嫌気性細菌によって発病する。つまり、う蝕症は酸性の状態で発生するのに対し、歯周疾患は塩基性の状態で発生する疾患であり、これは、グラム陰性嫌気性細菌では糖質代謝よりは窒素代謝がより活発に起こるからである。このため、歯周疾患が発生する部分に歯石が多くできるのである。
【０００４】
このような歯周疾患は、一般に様々な局所的および全身的要因によって発病することが知られており、局所的要因のうち最も重要なのは歯面細菌膜で、この歯面細菌膜内には、現在まで約５００余りの細菌種が存在し、一種のバイオフィルム（ｂｉｏｆｉｌｍ）を形成していることが知られている。前記かかる細菌種のうち主要歯周疾患の原因菌種としては、フゾバクテリウムヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）をはじめとして、ポルフィロモナスジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）、プレボテラインターメディア（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、パルビモナスミクラ（Ｐａｒｖｉｍｏｎａｓ ｍｉｃｒａ；Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｉｃｒｏｓとも呼ばれる）、およびアグリゲイティバクターアクチノミセテムコミタンス（Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ；Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓとも呼ばれる）などが知られている。
【０００５】
このような歯周疾患病原菌による自然免疫反応および歯槽骨破壊機序は次の通りである。
【０００６】
ヒト歯肉上皮細胞（ｇｉｎｇｉｖａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ）は、一次的に細菌の侵入を防ぐ物理的障壁の機能をし、抗細菌ペプチド（ｈｕｍａｎ ｂｅｔａ ｄｅｆｅｎｓｉｎｓおよびＬＬ−３７など）を分泌するが、このように、ヒト歯肉上皮から分泌される抗細菌ペプチドのディフェンシン類（ｄｅｆｅｎｓｉｎｓ）およびＬＬ−３７に対する感受性調査を行った結果、病原性が強い細菌種（Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓおよびＰ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）は前記抗細菌ペプチドに対する感受性が高いのに対し、病原性が少ない菌種（Ｓ．ｍｕｔａｎｓなど）をはじめとするＦ．ｎｕｃｌｅａｔｕｍは少ない濃度で死滅すると報告されている。
【０００７】
また、ヒト歯肉上皮細胞は、歯周疾患原因菌によってＩｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−８（ＩＬ−８）およびＩＬ−１αなどのサイトカインおよびケモカインを分泌して自然免疫反応を誘導してこれらの細菌を除去しようとするが、歯面細菌膜内の口腔微生物によって一次防御膜の歯肉上皮細胞が破壊されると、自然免疫反応だけでなく適応免疫反応も活性化され、病原体が除去されない場合、歯周組織の破壊が促進される。
【０００８】
さらに、細菌感染から好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ）と抗体によって歯肉上皮の連続性が防御されるが、具体的には、抗体によって細菌の毒素が中和され、補体活性によって細菌がオプソニン化（ｏｐｓｏｎｉｚａｔｉｏｎ）されると、大食細胞によって細菌が除去される。しかし、歯肉上皮細胞の連続性が破壊されると、細菌または細菌の産物［ＬＰＳ、ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ ｃｈｏｌｉｎｅ、ｐｒｏｔｅａｓｌｅｕｋｏｔｏｘｉｎ、ｃｙｔｏｌｅｔｈａｌ ｄｉｓｔｅｎｄｉｎｇｔｏｘｉｎ（ＣＤＴ）など］が歯周組織内に流入して、免疫反応を誘導し、リンパ球、大食細胞などによって、インターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−６、プロスタグランジンＥ２（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎＥ２、ＰＧＥ２）および腫瘍壊死因子（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ（ＴＮＦ）−α）などの免疫媒介分子が分泌され、歯肉上皮細胞、歯周靭帯、上皮細胞、骨芽細胞などからｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒκＢ ｌｉｇａｎｄ（ＲＡＮＫＬ）オステオプロテゲリン（ｏｓｔｅｏｐｒｏｔｅｇｅｒｉｎ、ＯＰＧ）が分泌されて破骨芽細胞の分化を調節する。この時、ヒトの歯周靭帯線維芽細胞は、ＩＬ−１に反応してＲＡＮＫＬの発現を増加させ、ＯＰＧの発現を減少させて、破骨芽細胞の分化を促進させて歯槽骨の破壊に関与する。
【０００９】
反面、歯肉線維芽細胞は、ＩＬ−１に反応してＯＰＧの発現を促進して破骨芽細胞の分化を抑制する。
【００１０】
一方、Ａ．ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓのＬＰＳは、歯周靭帯細胞のＴＬＲ−４に結合してｐ３８ＭＡＰＫ経路を活性化してＲＡＮＫＬの発現を増加させて、破骨芽細胞の分化を増加させ、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓは、Ｌｙｓ−ｇｉｎｇｉｐａｉｎによって歯周靭帯細胞からＲＡＮＫＬの発現を増加させる。
【００１１】
しかし、歯周疾患が複数の細菌種による混合感染によって発生する疾患であるにもかかわらず、ほとんどの研究が単一細菌種に対する自然免疫研究のみ進められている。
【００１２】
現在、歯周疾患の治療には、患者の口腔衛生改善、非外科的治療および外科的治療（歯石除去術、ルートプレーニング、歯肉切除術、新付着を応用した歯周組織の再生術）が利用されている。最も効果的な治療である外科的治療方法は、治療のために歯科に行かなければならないという煩わしさと、病気の予防よりは病気がある程度進んだ時に行うとの限界性から、歯周疾患に対する治療が効果的に行われず、歯周疾患はほとんど慢性疾患へ進む。付加的な治療として全身的な抗生剤の服用と局所徐放型製剤が使用されてきたが、不必要な部位にも薬物が過度に多く伝達されてそれによる副作用と、最近使用される抗生剤への耐性を示す歯周疾患菌が分離された例が報告されていて、深刻な問題点を抱えている。
【００１３】
特に、韓国の場合、健康保険審査評価院の『２０１３年診療費統計指標』によれば、歯周疾患で歯科を訪れた人が１０００万人を超え、２００４年に比べて約２倍増加し、急性上気道炎（風邪）を除いて韓国人が最もよくかかっている疾患であるにもかかわらず、現在代表的な歯周疾患の治療剤として知られているイガタン（Ｒ）およびインサドル（Ｒ）などの薬物が、実際に歯周疾患に対する直接的な効果を有するものではない単なる健康食品または補助剤の水準に過ぎないという報告が相次いでいる。
【００１４】
このような外科的治療の限界性と抗生剤使用の問題点を補完し、歯周疾患の予防および治療効果を向上させるための代替物質の開発のために、天然植物抽出物を用いた抗菌活性を調べようとする研究が進められてきている。
【００１５】
一例として、天然抽出物の赤ショウガ根（Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ．Ｒｅｓ．２２，１４４６−１４４９，２００８）、南アフリカの薬用植物、蓮の葉（Ｌｉ ａｎｄ Ｘｕ，Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．Ｖｏｌ３１，Ｎｏ．５，６４０−６４４，２００８）などで歯周疾患原因菌に対する抗菌活性を測定して高い抗菌力を有する物質が開発されており、また、最近、甘草抽出物から分離された物質をＡ．ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓとＰ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの細胞壁に存在する内毒素物質のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）に炎症物質のｉＮＯＳとＣＯＸ−２を投入した後、これにＧＣＳＢ−５を処理すると、炎症を起こす過程に関与する細胞内の信号伝達物質（ＡｋｔとＮＦ−ｋＢ）の活性化が減少して痛みとむくみが治まることを確認したものの（Ｂｏｄｅｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ．Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．９，２００８）、まだ歯周疾患に効果的な天然植物由来の治療剤または健康機能食品が本格的に市販されていない。
【００１６】
一方、マンゴスチン（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｍａｎｇｏｓｔａｎａ）は、マレーシア原産のムクロジ目ミツバウツギ科に属する双子葉植物の果実で平らなボール状のピンポン球よりやや大きいサイズの果実を結ぶ。マンゴスチンの果実は、ポリフェノールの一種であるキサントン（ｘａｎｔｈｏｎｅ）という代表的な抗酸化剤成分を含有していて、優れた抗酸化力を有することが知られており、タイをはじめとする東南アジアでは、古くから民間薬として炎症や創傷といった傷の治療などに使用されてきたことが知られている。
【００１７】
さらに、マンゴスチンのその他の利用法として、マンゴスチンの果皮について、日本国特開平６−９８７３８号公報および特開平７−１４７９５１号公報に食品用保存剤、特開平５−１７３６５号公報に５α−レダクターゼ阻害剤、特開平７−２５０６５８号公報に抗菌剤、特開平８−２０８５０１号公報には抗ヘリコバクター・ピロリ薬、特開平９−８７１５５号公報には紫外線吸収剤、特開平１０−１２０５８６号公報にはセリンプロテアーゼ阻害剤が記載されている。
【００１８】
また、マンゴスチン果皮の水溶性抽出物については、日本国特開平４−２４４００４号公報に肥満細胞からのヒスタミン遊離抑制作用による美白・抗炎症作用、マンゴスチンの果皮の極性溶媒抽出物およびアルファ−マンゴスチン、ガンマ−マンゴスチンについては、日本国特開平１０−７２３５７号公報にヒスタミンおよびセロトニンに対する拮抗作用による抗アレルギー作用が記載されているが、マンゴスチン抽出物およびこれから分離された物質に対する歯周疾患に関連する効果は全く開示されていない。
【００１９】
このような背景の下、本発明者らは、天然物に基づく歯周疾患の予防、改善および治療に優れた効果を示す医薬および食品組成物を開発すべく鋭意研究し、その結果、マンゴスチン抽出物およびこれから分離したアルファ−マンゴスチン、ガンマ−マンゴスチンが歯周疾患原因菌に対する抗菌効果および抗炎効果が非常に優れていることを確認して、本発明を完成した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
本発明の一つの目的は、抗菌および抗炎効果が同時に優れた歯周疾患の予防または治療用医薬組成物を提供することである。
【００２１】
本発明のもう一つの目的は、抗菌および抗炎効果が同時に優れた歯周疾患の予防または改善用食品組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
上記の目的を達成するための一つの態様として、本発明は、マンゴスチン抽出物を含む歯周疾患の予防または治療用医薬組成物を提供する。
【００２３】
もう一つの態様として、本発明は、アルファ−マンゴスチンおよびガンマ−マンゴスチンからなる群より選択される１種以上を含む歯周疾患の予防または治療用医薬組成物を提供する。
【００２４】
もう一つの態様として、本発明は、マンゴスチン抽出物を含む歯周疾患の予防または改善用食品組成物を提供する。
【００２５】
もう一つの態様として、本発明は、アルファ−マンゴスチンおよびガンマ−マンゴスチンからなる群より選択される１種以上を含む歯周疾患の予防または改善用食品組成物を提供する。
【発明の効果】
【００２６】
本発明の組成物は、マンゴスチン抽出物またはこれから分離されたアルファ−マンゴスチンまたはガンママンゴスチンを含むことによって、歯周疾患原因菌に対する優れた抗菌および抗炎効果を示すので、歯周疾患の予防、改善または治療用途用医薬、食品に広範囲に使用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】本発明に係るマンゴスチン抽出物を含む組成物をナノカプセル形態に剤形化した場合の構造を示すものである。
【図２】本発明の組成物に含まれるマンゴスチン抽出物のプレボテラインターメディアＫＣＯＭ１１０７に対するＭＢＣ試験の結果を示す写真である。
【図３】本発明の組成物に含まれるマンゴスチン抽出物のフゾバクテリウムヌクレアタムｓｕｂｓｐ．Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｕｍ ＫＣＯＭ１２３２に対するＭＢＣ試験の結果を示す写真である。
【図４】本発明の組成物に含まれるマンゴスチン抽出物のアグリゲイティバクターアクチノミセテムコミタンスＫＣＯＭ１３０６に対するＭＢＣ試験の結果を示す写真である。
【図５】本発明の組成物に含まれるマンゴスチン抽出物のポルフィロモナスジンジバリスＡＴＣＣ３３２７７Ｔに対するＭＢＣ試験の結果を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
【００２９】
本発明は、マンゴスチン抽出物を含む歯周疾患の予防または治療用医薬組成物を提供する。
【００３０】
また、本発明は、マンゴスチン抽出物を含む歯周疾患の予防または改善用食品または食品添加用組成物、口腔組成物を提供する。
【００３１】
本発明に係る組成物に含まれるマンゴスチン抽出物は、マレーシア、タイ、ベトナム本研究に使用された原料は、マレーシア、タイ、ベトナム、インドネシアなどに分布した熱帯果物のマンゴスチン（Ｇａｒｃｉｎｉａ Ｍａｎｇｏｓｔａｎａ）から製造されるもので、前記マンゴスチンは約４０種余りのキサントン成分が含有されていることが知られていて、単一果物類としては相当量のキサントン成分が含有されている。
【００３２】
前記マンゴスチン抽出物は、市販のものを購入するか、医薬または食品業界に通常知られた抽出方法および抽出溶媒を制限なく適宜選択して製造することができる。通常の抽出方法は、超音波抽出法、ろ過法および還流抽出法などを含んでもよいが、これに限定されない。好ましくは、マンゴスチンを、水および炭素数１〜６の低級アルコールからなる群より選択される１種以上の抽出溶媒を用いて抽出することができる。より好ましくは、前記マンゴスチン抽出物のうち、歯周疾患に対する有効成分のアルファ−マンゴスチンとガンマ−マンゴスチンは脂溶性物質であるため、例えば、５０〜１００％未満のエタノール水溶液のような水およびエタノールの含水有機溶媒またはエタノール溶媒を使用することができる。具体的な一つの態様として、本発明で使用されるマンゴスチン抽出物は、マンゴスチン１重量部に５０〜１００％未満のエタノール水溶液３〜５重量部を混合して、６０〜８０℃の温度区間で還流させながら８〜１０時間抽出した後、抽出された液をろ過フィルタなどを用いて減圧ろ過するといった適切なろ過方法によってろ過した後、このろ液を、４０〜６０℃の温度区間、真空度０．２〜０．５気圧の条件で抽出溶媒を除去して、マンゴスチン抽出物を得ることができる。
【００３３】
さらに、このようなアルファ−マンゴスチンとガンマ−マンゴスチンは脂溶性を有しているため、効果的な製剤化および体内吸収のために水に対する溶解度を高める水溶化工程により、抱接化合物（ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）形態の水溶性マンゴスチン分子カプセル（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）形態に製造される。
【００３４】
具体的な一つの態様として、前記のような脂溶性のマンゴスチン抽出物の水溶性、安定性および体内吸収率増進のための水溶性マンゴスチン分子カプセルの製造のために、マンゴスチン抽出物を、必要に応じて、以下に説明する追加の有効物質（例えば、プロポリス、大豆不けん化物、リゾチーム、ビタミンＣ）と共に、シクロデキストリン、好ましくはガンマ−シクロデキストリンのような抱接化合物を介して抱接させて分子カプセル化することができる。好ましくは、脂溶性マンゴスチン抽出物１重量部にガンマ−シクロデキストリン０．２〜０．５重量部を混合して、６０〜８０℃の温度区間で０．３気圧〜０．５気圧の範囲でマンゴスチン抽出物を抱接させることができる。必要な場合、抱接されたマンゴスチン抽出物をさらに安定化するためにアルギニン０．１重量部を追加的に添加して、４℃以下で４時間〜８時間保管して安定化させることができ、凍結乾燥などにより顆粒化してもよい。
【００３５】
このように水溶化された水溶性マンゴスチン分子カプセルは、下記の図１に示されている構造を有する分子カプセル形態で示され、約５０〜１５０ｎｍの粒径を有してもよい。
【００３６】
好ましい一つの態様として、前記マンゴスチン抽出物は、歯周疾患の予防、改善および治療に対する有効成分としてそれぞれ下記化学式１および２の構造を有するキサントン成分のアルファ−マンゴスチンおよびガンマ−マンゴスチンからなる群より選択される１種以上の成分を含むことができる。より好ましくは、本発明に係る組成物は、前記アルファ−マンゴスチンおよびガンマ−マンゴスチンを共に含むことができ、好ましくは、アルファ−マンゴスチン：ガンマ−マンゴスチンが１：１〜５：１、より好ましくは２：１〜４：１、最も好ましくは８．７５：２．５４の含有量比で含まれる。前記範囲において、本発明に係る組成物は優れた水準の歯周疾患の予防、改善および治療効果を示す。
［化学式１］
0006387467.tif 000002
［化学式２］
0006387467.tif 000003
【００３７】
具体的な一態様として、本発明に係る組成物には、前記マンゴスチン抽出物が全組成物の重量を基準として３０〜５０重量％含まれる。
【００３８】
好ましい一態様として、本発明に係る組成物は、歯周疾患に対する相乗的な効果を付与するために、プロポリス、塩化リゾチーム、大豆不けん化物、ビタミンＣ、キシリトール、およびビタミンＥからなる群より選択される１種以上の歯周疾患に対する有効成分を追加的に含むことができる。
【００３９】
前記「プロポリス」は、蜜蜂が自らの生存と繁殖のために様々な植物から取り出した樹脂のような物質に自らの唾と酵素などを混ぜて作った物質で、フラボン（例えば、クリシン、テクトクリシン、ガランギン）またはフラバノン（例えば、クェルセチン、ピノストロビン）のようなフラボノイド類物質、安息香酸、クマリンベンジルエステルなどの芳香族酸、チアミン酸、ピノバンクシン、ピノセムブリンなどのような多様な成分を含み、抗菌、抗眞菌、胃炎および胃潰瘍の治療効果、鎮痛効果、血圧降下および血糖維持効果、心臓血管保護効果、歯保護効果などを示す。好ましくは、前記プロポリスは、本発明に係る組成物の全重量対比１５〜２５重量％含まれる。
【００４０】
前記「大豆不けん化物」は、大豆油に存在する成分で疎水性であり、水酸化カリウムのような強塩基成分と反応して可溶性石鹸を作らない純粋化合物を意味し、植物性ステロール（ｐｈｙｔｏｓｔｅｒｏｌ）を含む。具体的には、前記大豆不けん化物は、ベータ−シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、レスベラトロール、リグナン、ゲニステインイソフラボン、レシチン、ホスファチジルコリン、スフィンゴ脂質、ホスファチジルセリンのような成分を含む。好ましくは、前記大豆不けん化物は、本発明に係る組成物の全重量対比７〜１３重量％含まれる。このような大豆不けん化物は、柔らかくて白色の粉であり、特有の匂いがあり、水やアルコールに溶けず、体積が大きくて一般のカプセルに高容量に含む場合、充填がうまくいかないだけでなく、充填時の摩擦熱によって溶けてしまい、全組成物の原料がよく結合されず製剤化が難しいという欠点を有する。したがって、好ましい態様として、本発明に含まれる大豆不けん化物は、他の組成物の構成成分とは別途に顆粒化されて組成物に含まれる。さらに、他の好ましい態様として、このような顆粒化のために、様々な添加剤のうち、特に酒精を含めて顆粒化することが、容易な製剤化のために好ましい。酒精は、必要に応じて多様な濃度のものを使用することができるが、好ましくは９９．９％（ｖ／ｖ）のものを使用することができ、大豆不けん化物との重量比として大豆不けん化物：酒精＝５：１〜１：１で使用することができる。より好ましくは、大豆不けん化物：酒精の重量比は１７：４．４であってもよい。
【００４１】
前記「塩化リゾチーム」は、バクテリアの細胞壁を切断する酵素であって、主に卵白から抽出して製造され、歯茎疾患の原因となる細菌およびウイルスの細胞壁の不溶性多糖類を可溶性多糖類に変形させて抗菌作用をし、炎症部位で消炎作用を示して発赤、腫脹、痛みなどを抑制し、膿を分解、排出させ、炎症部位の組織修復を促進させて炎症を治癒するだけでなく、抗ヘパリン作用で歯茎出血を防止する作用を示す。好ましくは、前記塩化リゾチームは、本発明に係る組成物の全重量対比１０〜２０重量％含まれる。
【００４２】
前記「ビタミンＣ」は抗酸化剤で、体内の自由ラジカルを除去して細胞の損傷を防止し、コラーゲンの合成を促進させて傷部位の組織を速やかに再生させ、血管壁を強化しトロンビンの作用を復活させて歯茎出血を予防する作用をする。好ましくは、前記ビタミンＣは、本発明に係る組成物の全重量対比３〜１０重量％含まれる。
【００４３】
前記「ビタミンＥ」は、細胞膜の安定化による抗酸化作用、微細循環改善作用などにより組織の損傷を防止するもので、本発明に係る組成物の全重量対比０．５〜２重量％含まれる。
【００４４】
前記「キシリトール」は、シラカバや柏から抽出した糖アルコール系天然甘味料で五炭糖構造によって虫歯菌の増殖を防止可能な物質であって、本発明に係る組成物の全重量対比１〜７重量％含まれる。
【００４５】
より好ましくは、本発明に係る組成物は、前記追加の成分のほか、海藻粉末、乾燥酵母およびクロム酵母からなる群より選択される１種以上の成分をさらに含んでもよい。
【００４６】
一方、前記マンゴスチン抽出物において歯周疾患に対する予防、改善または治療効果を示す有効物質は、前記アルファ−マンゴスチンおよび／またはガンマ−マンゴスチンであるため、本発明に係る組成物は、マンゴスチン抽出物自体の代わりに、前記アルファ−マンゴスチンおよびガンマ−マンゴスチンからなる群より選択される１種以上を薬理成分として含むことができる。このように、アルファ−マンゴスチンおよび／またはガンマ−マンゴスチンを含む場合にも、前記マンゴスチン抽出物を薬理成分とする場合と同様に、追加の成分を含むことができる。
【００４７】
本発明の組成物は、投与のために、前記記載した有効成分のほか、追加的に薬学的に許容可能な担体を１種以上含む。本発明において、「薬学的に許容可能な担体」は、投与用薬剤学的活性化合物を剤形化する場合に有用で使用条件下で事実上非毒性および非敏感性である公知の薬学的賦形剤を意味する。このような賦形剤の正確な比率は、活性化合物の溶解度と化学的特性、選択された投与経路だけでなく、標準薬剤学的慣行によって決定される。
【００４８】
本発明の薬学的組成物は、適合かつ生理学的に許容される賦形剤、崩壊剤、甘味剤、結合剤、被覆剤、膨張剤、潤滑剤、滑沢剤、香味剤などのような補助剤を用いて、所望の投与方法に適した形態に製剤化される。
【００４９】
前記薬学的組成物はこれに制限されるわけではないが、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、散剤、注射剤または液剤の形態に製剤化される。
【００５０】
薬学組成物の剤形および薬剤学的に許容される担体は、当業界で公知の技術により適宜選択してもよいし、例えば、下記の文献を参照することができる：［Ｕｒｑｕｈａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ，１６：３６７，１９８０］；［Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＤＯＳＡＧＥ ＦＯＲＭＳ−ＤＩＳＰＥＲＳＥ ＳＹＳＴＥＭＳ，２ｎｄ ｅｄ．，ｖｏｌ．３，１９９８］；［Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＤＯＳＡＧＥ ＦＯＲＭＳ＆ＤＲＵＧ ＤＥＬＩＶＥＲＹ ＳＹＳＴＥＭＳ，７ｔｈ ｅｄ．，２０００］；［Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ，ＴＨＥ ＥＸＴＲＡ ＰＨＡＲＭＡＣＯＰＥＩＡ，３１ｓｔ ｅｄ．］；［Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１６ｔｈ−２０ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎｓ］；［ＴＨＥ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ ＢＡＳＩＳ ＯＦ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ，Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ，ｅｄｓ．，９ｔｈ ｅｄ．，１９９６］；［Ｗｉｌｓｏｎ ａｎｄ Ｇｉｓｖｏｌｄｓ’ ＴＥＸＴＢＯＯＫ ＯＦ ＯＲＧＡＮＩＣ ＭＥＤＩＣＩＮＡＬ ＡＮＤ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，Ｄｅｌｇａｄｏ ａｎｄ Ｒｅｍｅｒｓ，ｅｄｓ．，１０ｔｈ ｅｄ．，１９９８］。
【００５１】
本発明の組成物は、目的の方法により経口投与するか、非経口投与（例えば、静脈内、皮下、腹腔内または局所に適用）することができ、投与量は、個体の体重、年齢、性別、健康状態、食事、投与時間、投与方法、排泄率および疾患の重症度などによりその範囲が多様である。前記マンゴスチン抽出物の１日投与量は約６０〜９０ｍｇであり、アルファ−マンゴスチンの１日投与量は成人基準で約７．５〜９．０ｍｇであり、ガンマ−マンゴスチンは０．９〜１．２ｍｇであり、１日１回から数回に分けて投与することが好ましい。
【００５２】
本発明に係る組成物が食品用として用いられる場合、前記食品用組成物は、健康機能食品としてそれ自体で剤形化を経て使用されるか、健康機能食品の添加物として他の健康機能食品に含まれてもよい。健康機能食品とは、疾病の予防または改善、生体防御、免疫、病後の回復、老化抑制など生体調節機能を有する食品を指し、長期的に服用した時、人体に無害でなければならない。有効成分の混合量は、使用目的（予防、健康または治療的処置）により好適に決定可能である。
【００５３】
前記食品の種類には特別な制限はない。前記物質を添加できる食品の例としては、肉類、ソーセージ、パン、チョコレート、キャンディ類、スナック類、お菓子類、ピザ、ラーメン、その他の麺類、ガム類、アイスクリーム類を含む酪農製品、各種スープ、飲料水、お茶、ドリンク剤、アルコール飲料およびビタミン複合剤などがあり、通常の意味での健康機能食品を全て含む。
【００５４】
本発明の食品用組成物は、食品または食品添加物の製造に使用される通常の成分、具体的には、香味剤；天然炭水化物としてブドウ糖、果糖のようなモノサッカライド、マルトース、スクロースのようなジサッカライド、およびデキストリン、シクロデキストリンのような天然甘味剤や、サッカリン、アスパルタムのような合成甘味剤；栄養剤；ビタミン；電解質；着色剤；有機酸；保護性コロイド増粘剤；ｐＨ調整剤；安定化剤；防腐剤；グリセリン；アルコール；炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含むことができる。
【００５５】
本発明に係る組成物は、口腔衛生のための口腔用組成物として使用されてもよい。この場合、歯磨き粉、口腔清浄剤、口腔洗浄剤、口腔マッサージクリームなどの剤形を有してもよい。また、本発明で提供する口腔用組成物の配合成分は、上述した成分以外にも、組成物の用途と種類によって多様に配合して使用可能である。
【実施例】
【００５６】
以下、本発明を実施例によって詳細に説明する。ただし、下記の実施例は本発明を例示するものに過ぎず、本発明が下記の実施例によって限定されるものではない。
【００５７】
以下、本発明の理解のために実施例を挙げて詳細に説明する。ただし、下記の実施例は本発明の内容を例示するものに過ぎず、本発明の範囲が下記の実施例に限定されるものではない。本発明の実施例は、当業界における平均的な知識を有する者に本発明をより完全に説明するために提供されるものである。
【００５８】
＜製造例１＞マンゴスチン果皮（Ｐｅｒｉｃａｒｐ）粉砕物の製造
マンゴスチン果皮（Ｐｅｒｉｃａｒｐ）１ｋｇを、２５℃の換気ドライオーブンで乾燥させて水分含有量１０％以下の乾燥物２５０ｇにした後、これを破砕機を用いて粉砕して、粒子サイズ４００ｍｅｓｈ〜５００ｍｅｓｈのマンゴスチン果皮粉砕物２３０ｇを得た。
【００５９】
有効成分の含有量は、下記の条件でＨＰＬＣで分析した。
ＨＰＬＣ分析条件
Ｃｏｌｕｍｎ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８、２５０×４．６ｎｍ（５ｕｍ）
−Ｓｏｌｖｅｎｔ：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ：ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ＝９０％：１０％：０．１％
−Ｄｅｔｅｃｔｏｒ：ＵＶ／ＶＩＳ、２５４ｎｍ
−Ｆｌｏｗ ｒａｔｅ：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
−Ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐ．：Ｈｅａｔｉｎｇ Ｏｖｅｎ（３５℃）
分析の結果、マンゴスチン果皮４００ｍｅｓｈ〜５００ｍｅｓｈの粉砕物中、アルファ−マンゴスチンの含有量は３．０±１．０％であり、ガンマ−マンゴスチンの含有量は０．２±０．０５％と確認された。
【００６０】
＜製造例２＞アルファ−マンゴスチンおよびガンマ−マンゴスチンを含有するマンゴスチン抽出物の製造
前記製造例１によるマンゴスチン果皮粉砕物の製造工程で得られたマンゴスチン果皮粉砕物１ｋｇを、２０Ｌ反応槽で１０Ｌのエタノールを用いて、６０℃の条件で４時間抽出した後、１．０μｍのろ過紙を用いてろ過し、そのろ液を４０℃で減圧濃縮して、１５０ｇの濃縮物を得た。
【００６１】
この濃縮物１５０ｇに９９％エタノール３００ｇを入れて、７０℃昇温させて完全に溶解させた後、４℃まで０．０５℃／ｍｉｎの冷却速度で徐々に結晶化すると結晶体が析出するが、この時、析出された結晶体をろ過する。
【００６２】
これを真空乾燥（真空条件：５０℃、０．３気圧、８時間）および均一化して、最終的なマンゴスチン果皮抽出物１０５ｇを得た。これを製造例１と同一の条件下でＨＰＬＣ分析した結果、アルファ−マンゴスチンおよびガンマ−マンゴスチンの含有量は次の表１に記載された通りである。
【表１】
0006387467.tif 000004
【００６３】
＜製造例３＞水溶性マンゴスチン分子カプセルの製造
下記表２に記載された配合比率に応じてマンゴスチン抽出物が可溶化された水溶性マンゴスチン分子カプセルを製造した。具体的には、＜製造例２＞の方法で得られた脂溶性マンゴスチン抽出物１５０ｇにガンマ−シクロデキストリン４５ｇを混合して、７０℃の温度、０．４気圧の真空下、撹拌速度１０００ｒｐｍで２時間撹拌して、マンゴスチン抽出物を抱接させた。抱接されたマンゴスチン抽出物をさらに安定化するためにアルギニン２２ｇを添加して、４℃以下で６時間保管してカプセルの相安定化を行う。その後、この溶液を凍結乾燥（−４０℃から４０℃昇温、昇温条件：１℃／ｈｒ）により粉末化した。
【００６４】
以上のように製造された水溶性マンゴスチン分子カプセルの指標物質としてのアルファ−、ガンマ−マンゴスチンの含有量を、製造例１の測定方法と同様の方法によって測定した結果、表３のような含有量のアルファ、ガンマ−マンゴスチンが含まれていることが確認された。
【表２】
0006387467.tif 000005
【表３】
0006387467.tif 000006
【００６５】
＜製造例４＞水溶性マンゴスチン組成物の製造
製造例３で製造された水溶性マンゴスチン粉末４３０ｇに、プロポリス抽出物２１０ｇ（液状）、大豆不けん化物１２０ｇ、塩化リゾチーム１５０ｇ、ビタミンＣ５０ｇ、ビタミンＥ１０ｇ、キシリトール３０ｇを入れて、粉末混合器に入れてよく混合した後、真空乾燥機（６０℃、０．４気圧、８時間）でよく乾燥後、粉砕して粉末に製造する。
【表４】
0006387467.tif 000007
【００６６】
このように製造された組成物を用いて、錠剤（ｔａｂｌｅｔ）、軟質および硬質カプセル、液状パウチ、液状バイアル、顆粒剤スチックなどあらゆる食品剤形に適用可能である。
【００６７】
＜実施例１＞マンゴスチン抽出物のストレプトコッカスミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ ＡＴＣＣ２５１７５）に対する抗菌性測定
一般に、新規の抗菌剤が開発された時、その抗菌剤の有用性を判定する基準となる試験方法として、最小抑制濃度（ｍｉｎｉｍｕｍ ｌｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ：以下、ＭＩＣという）試験と時間対比の殺菌力（ｔｉｍｅ−ｋｉｌｌ ａｓｓａｙ）試験とがある。
【００６８】
ＭＩＣ ＴＥＳＴは、菌が良く育たない最小阻害濃度、つまり、目的の抗菌効能を得るための抗菌剤の最小使用量を決定する試験方法であり、Ｔｉｍｅ−Ｋｉｌｌ ａｓｓａｙ試験は、一定時間範囲の間に目的の効能を維持させられる抗菌剤の使用量を決定する試験方法で、マンゴスチン抽出物がストレプトコッカスミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｃｃｕｓ Ｍｕｔａｎｓ ＡＴＣＣ１５１７５）に対してどのくらいに増殖抑制効能があるかを試験するために各試験を行った。
【００６９】
（１）ストレプトコッカスミュータンスに対するＭＩＣ試験
ストレプトコッカスミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ ＡＴＣＣ２５１７５）に対するＭＩＣ試験は、米国の臨床試験標準方法であるＮＣＣＬＳ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ）により進行させた。マンゴスチン抽出物がストレプトコッカスミュータンス菌に対する抗菌性を比較試験するために、それぞれの分析試料を、次の表５のように、各分析試料の濃度が０、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０ｕｌとなり、使用するストレプトコッカスミュータンス菌の濃度が５０重量％の比率として最終的に１×１０５となるようにし、分析試料溶解剤として使用されたＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）の濃度が最終的に１重量％となるようにし、残りの４０重量％をＢＨＩ培地（Ｂｒａｉｎ ｈｅａｒｔ ｉｎｆｕｓｉｏｎ：Ｐｅｐｔｉｃ Ｄｉｇｅｓｔ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ ｔｉｓｓｕｅ、Ｓｏｄｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ、Ｄｅｘｔｒｏｓｅ、Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｄｉｇｅｓｔ ｏｆ Ｇｅｌａｔｉｏｎ、Ｄｉｓｏｄｉｕｍ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、Ｆｉｎａｌ ＰＨ７．４＋−０．２；Ｄｉｆｃｏ社）を加えて製造した後、試験に使用した。
【００７０】
分析試料としては、製造例２の方法により製造されたマンゴスチン抽出物と、製造例１で製造されたマンゴスチンの皮粉砕物に９９％以上のエタノールを入れて溶解させた後、これを冷却させて得たアルファおよびガンマ−マンゴスチンを使用した。
【表５】
0006387467.tif 000008
【００７１】
前記試料をマイクロチューブに添加して（ｄｕｐｌｃａｔｅ）、３７℃で２４時間培養した後、５５０ｎｍでの吸光度を測定して生長抑制程度を観察し、その結果は次の表６の通りである。
【表６】
0006387467.tif 000009
【００７２】
前記表６から確認できるように、マンゴスチン抽出物とこれから分離されたアルファ−およびガンマ−マンゴスチンは、非常に低濃度でも歯周疾患関連の病原菌であるストレプトコッカスミュータンス菌に対する抗菌活性を示す。特に、アルファ−マンゴスチンの場合、単に１．０ｕｇ／ｍｌでも抗菌活性を示すので、歯周疾患の予防、改善および治療に最も優れた効果を示すと判断される。
【００７３】
（２）ストレプトコッカスミュータンスに対するＴｉｍｅ−ｋｉｌｌ ａｓｓａｙ試験
ストレプトコッカスミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ ＡＴＣＣ２５１７５）に対する分析試料のＴｉｍｅ−ｋｉｌｌ ａｓｓａｙ実験は、ＮＣＣＬＳ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ）に基づく方法のうち、ＭｃＦａｒｌａｎｄ Ｓｔａｎｄａｒｄにより最初Ｏ．Ｄ５５０ｎｍ値対比の菌数を換算する方法によって施行した。
【００７４】
分析試料溶解剤として使用されたＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）の濃度が最終的に１重量％となるようにし、残りの４０重量％をＢＨＩ培地に加えて製造した後、試験に使用した。
【００７５】
具体的には、製造例２で製造されたマンゴスチン抽出物１０ｍｇを付加して１０，０００ｕｇ／ｍｌに製造する。この時、分析試料溶解剤として使用されたＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）の濃度が最終的に１０重量％となるようにし、残りの４０重量％をＢＨＩ培地を加えて製造した後、試験に使用した。このように製造された１０，０００ｕｇ／ｍｌのマンゴスチン抽出物を、次の表７のような組成比に応じてマンゴスチン抽出物の最終濃度がそれぞれ１０、１００、１０００ｕｇ／ｍｌとなるように希釈して試験液を製造した。使用される菌株のＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ ＡＴＣＣ２５１７５は、重量５０％の比率として最終的に１×１０５ＣＦＵ／ｍｌとなるように調整した。
【表７】
0006387467.tif 000010
【００７６】
以降、前記表７のように濃度別比率で作った試験液１００μｌを、ＭＩＣ実験と同一の条件で培養しながら、それぞれＤｉｒｅｃｔ、１０分、３０分の間隔で試験液の一定液を取って固体ＢＨＩ培地に塗抹し、３７℃で４８時間培養後、集落を形成した菌数を数え、その結果を下記表８に記載した。
【表８】
0006387467.tif 000011
【００７７】
以上のように、本発明に係るマンゴスチン抽出物を用いる場合、極めて低濃度の１０ｕｇ／ｍｌでも、処理直後から歯周疾患に関連するストレプトコッカスミュータンス菌が１０％以上死滅し、特に、１０００ｕｇ／ｍｌを用いた場合、処理直後に約４０％程度の死滅率を示すだけでなく、１０分後には９０％以上、３０分後にはほとんどの菌が死滅することを確認することができた。
【００７８】
＜実施例２＞マンゴスチン抽出物のポルフィロモナスジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ ＣＣＡＲＭ０１４５）に対する抗菌性測定
ポルフィロモナスジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ ＣＣＡＲＭ０１４５）に対するＭＩＣ実験は、ＮＣＣＬＳ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ、１９９７）の固体培地希釈法（Ａｇａｒ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ）により行われた。
【００７９】
具体的には、試験菌液は、Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ ｓｏｙ ａｇａｒ（ＴＳＡ）に、綿羊血液５％、ｈｅｍｉｎ５μｇ／ｍｌとｍｅｎａｄｉｏｎｅ０．５μｇ／ｍｌを添加した培地で対数期まで活性された菌株を、ＭａｃＦａｒｌａｎｄ ｓｔａｎｄａｒｄに準じて吸光度（Ｏ．Ｄ５５０ｎｍ）０．５で懸濁して準備した。
【００８０】
培地は、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ａｇａｒに、溶血綿羊血液５％、ｈｅｍｉｎ５μｇ／ｍｌとｖｉｔａｍｉｎ Ｋ１ １μｇ／ｍｌを添加した培地に、各試料を倍数希釈して混合して、培地内の最終濃度が０．２５μｇ／ｍｌ〜１２８μｇ／ｍｌとなるように準備した。
【００８１】
前記培地に約５ｘ１０５ＣＦＵ／ｓｐｏｔの試験菌液を接種して、ＧａｓＰａｋ ＥＺ Ａｎａｅｒｏｂｉｃ ｃｏｎｔａｉｎｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｅｃｔｏｎ、Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｓｐａｒｋｓ、ＭＤ、ＵＳＡ）を用いた嫌気条件下、３５℃で４８時間培養した。
【００８２】
その結果、本発明に係るマンゴスチン抽出物は、ポルフィロモナスジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ ＣＣＡＲＭ０１４５）約１２０μｇ／ｍｌのＭＩＣを示すことを確認した。
【００８３】
＜実施例３＞多様な歯周疾患菌種に対するマンゴスチン抽出物の抗菌性測定
本発明に係るマンゴスチン抽出物の抗菌性をより詳細に測定するために、韓国人の口腔から分離同定された歯周疾患原因菌であるＰｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ ＫＣＯＭ１１０７、Ｆｕｓｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ ｓｕｂｓｐ．ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｕｍ ＫＣＯＭ１２３２、Ａｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ ＫＣＯＭ１３０６およびＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ ＡＴＣＣ３３２７７Ｔを対象に最小殺菌濃度（Ｍｉｎｉｍｕｍ ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＭＢＣ））を測定して、マンゴスチン果皮抽出物の抗菌性を測定した。
【００８４】
前記菌株は、いずれも韓国口腔微生物資源（Ｋｏｒｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｏｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｗａｎｇｊｕ、Ｋｏｒｅａ）またはＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）から分譲されて使用した。
【００８５】
前記菌株を、Ｔｒｙｐｔｉｃ Ｓｏｙ ｂｒｏｔｈに、０．５％ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ、０．０５％ｃｙｓｔｅｉｎｅ ＨＣｌ−Ｈ２Ｏ、０．５ｍｇ／ｍｌ ｈｅｍｉｎおよび２ｕｇ／ｍｌ ｖｉｔａｍｉｎ Ｋ１が含まれている培地に接種して、３７℃のａｎａｅｒｏｂｉｃ ｃｈａｍｂｅｒ（Ｂａｃｔｒｏｎ Ｉ、Ｓｈｅｌｄｏｎ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｉｎｃ．，Ｃｏｒｎｅｌｉｕｓ、ＯＲ、ＵＳＡ）と嫌気性条件（１０％Ｈ２、５％ＣＯ２、８５％Ｎ２）で培養した。
【００８６】
ＭＢＣ測定は、Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＣＬＳＩ）［１］で提示した微細希釈（ｍｉｃｒｏ−ｄｉｌｕｔｉｏｎ）法を変形して使用した。細菌を先に紹介した培地に接種して、３７℃で２４時間細菌培養器で培養した後、１×１０６ＣＦＵ／ｍｌとなるように希釈して９６−ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに分注した。
【００８７】
分析物質として、製造例２で製造されたマンゴスチン抽出物を、前記表７の実験群に記載された組成（ＭＢＬ−Ｗｍｇ０１）、そして前記表２のように製造された水溶性マンゴスチン抽出物分子カプセルを、それぞれ前記表７の実験群に記載された組成（ＭＢＬ−Ｗｍｇ０２）として、２０００ｕｇ／ｍｌから２倍ずつ８段階希釈するように細菌培養液に添加した。
【００８８】
この時、陰性対照群は、細菌培養液のみ使用したものとし、陽性対照群は、市中で販売されている洗口剤（リステリン（Ｒ）、ジョンソンエンドジョンソン）を使用した。これらを９６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅに２００ｕｌずつ分注した後、３７℃で４８時間培養した後、細菌培養液から１０ｕｌを取って寒天培地に塗抹し、３７℃で４８時間培養した後、形成された群落を確認して１００％細菌が育たない最小濃度として決定した。各反応は３回繰り返し実施した。その結果を下記表９および図２〜図５に示した。
【表９】
0006387467.tif 000012
【００８９】
前記表９の結果からも分かるように、水溶性マンゴスチン抽出物分子カプセル（ＭＢＬ−Ｗｍｇ０２）は、マンゴスチン抽出物（ＭＢＬ−Ｗｍｇ０１）より歯周疾患の主要原因菌種に属するＰｒｅｖｏｔｅｌｌａ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ ＫＣＯＭ１１０７、Ｆｕｓｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ ｓｕｂｓｐ．ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｕｍ ＫＣＯＭ１２３２およびＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ ＡＴＣＣ３３２７７Ｔに対して、それぞれ１６倍、４倍および２倍強い抗菌効果を示した。しかし、両物質ともＡｇｇｒｅｇａｔｉｂａｃｔｅｒ ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ ＫＣＯＭ１３０６に対しては、本実験に使用した最高濃度（２ｍｇ／ｍｌ）以下では抗菌能を示さなかった。
【００９０】
Ａ．ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ菌種が、思春期前の歯周炎といった特殊な歯周疾患に主な病原性菌種であり、ほとんどの歯周疾患に属する成人性歯周炎ではＰ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｆ．ｎｕｃｌｅａｔｕｍおよびＰ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓが主要病原性細菌種に属する点を考慮する時、本発明に係るマンゴスチン果皮抽出物のＭＢＬ−Ｗｍｇ０１とＭＢＬ−Ｗｍｇ０２はそれぞれ２．０ｍｇ／ｍｌおよび２５０μｇ／ｍｌの濃度以上で歯周疾患の予防のための食品添加剤、口腔衛生用品（歯磨き粉、洗口剤など）および健康機能食品に非常に効果的に使用可能である。
【００９１】
以上、本発明の特定部分を詳細に記述しており、当業界における通常の知識を有する者にとって、このような具体的な記述は単に好ましい実施例に過ぎず、これによって本発明の範囲が制限されるわけではない点は明らかであろう。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付した請求項とそれらの等価物によって定義されるというべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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