(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＮ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ２、又はＨ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＤＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ２
を有するペプチドコンジュゲート、又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
請求項１に記載のペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物と、医薬的に許容される担体、賦形剤又はビヒクルとを含む、医薬組成物。
【請求項３】
（i）１型糖尿病、２型糖尿病、糖尿病前症、インスリン抵抗性症候群、耐糖能障害（ＩＧＴ）、高血中グルコースレベルに関連する疾患状態、高血糖、高血圧、アテローム発生性脂質異常症、動脈硬化症、冠状動脈性心臓疾患、末梢動脈疾患、脳卒中、微小血管疾患、胃疾患、メタボリック症候群、癌、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、及び腎不全から選択される疾患又は障害の治療；
（ii）β−細胞及び／又はその壊死の誘導；
（iii）膵島β−細胞の生存の誘導；
（iv）膵島でのβ−細胞アポトーシス及び／又はその壊死の抑制；
（v）膵島でのβ−細胞増殖の誘導；
（vi）体重増加の抑制又は体重減少の促進；
（vii）循環グルコースレベル、耐糖能、及び／又は循環コレステロールレベルの改善、循環ＬＤＬレベルの低下、及び／又はＨＤＬ／ＬＤＬ比の上昇；又は
（viii）過剰な体重により引き起こされるか又はこれを特徴とする症状の治療又は予防
のための、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
ヒト対象に使用するための、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
過剰な体重により引き起こされるか又はこれを特徴とする症状が、肥満、病的肥満、肥満関連炎症、肥満関連胆嚢疾患、及び肥満誘発性睡眠時無呼吸、メタボリック症候群、及び糖尿病前症から選択される、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項６】
該ペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物が、プロトンポンプ阻害剤との、又は糖尿病、肥満、脂質異常症、もしくは高血圧を治療するための物質との、併用療法の一部として投与される、請求項３〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
（i）糖尿病を治療又は予防するための該物質が、メトホルミン、スルホニル尿素、グリニド、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、グリタゾン、インスリン、又はインスリン類似体であり；
（ii）肥満を治療又は予防するための該物質が、グルカゴン様ペプチド−１アゴニスト、ペプチドＹＹもしくはその類似体、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）もしくはその類似体、カンナビノイド受容体１アンタゴニスト、リパーゼ阻害剤、メラノコルチン受容体４アゴニスト、又はメラニン濃縮ホルモン受容体１アンタゴニストであり；
（iii）高血圧を治療又は予防するための該物質が、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、利尿剤、ベータ遮断薬、又はカルシウムチャネル遮断薬であり；
（iv）脂質異常症を治療又は予防するための該物質が、スタチン、フィブラート、ナイアシン、及び／又はコレステロール吸収阻害であり；
（v）プロトンポンプ阻害剤が、ベンズイミダゾリル誘導体型又はイミダゾピリジン誘導体型の物質である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
請求項１に記載のペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物を合成法で製造する方法。
【請求項９】
対象者に、請求項１に記載のペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物、又は請求項２に記載の医薬組成物を送達するための、少なくとも１つの該ペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物、又は該医薬組成物を含む、装置。
【請求項１０】
請求項１に記載の少なくとも１つのペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物、又は請求項２に記載の医薬組成物と、包装材又は使用説明書とを含む、キット。
【請求項１１】
（i）１型糖尿病、２型糖尿病、糖尿病前症、インスリン抵抗性症候群、耐糖能障害（ＩＧＴ）、高血中グルコースレベルに関連する疾患状態、高血糖、高血圧、アテローム発生性脂質異常症、動脈硬化症、冠状動脈性心臓疾患、末梢動脈疾患、脳卒中、微小血管疾患、胃疾患、メタボリック症候群、癌、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、及び腎不全、から選択される疾患又は障害の治療；
（ii）β−細胞及び／又はその壊死の誘導；
（iii）膵島β−細胞の生存の誘導；
（iv）膵島でのβ−細胞アポトーシス及び／又はその壊死の抑制；
（v）膵島でのβ−細胞増殖の誘導；
（vi）体重増加の抑制又は体重減少の促進；
（vii）循環グルコースレベル、耐糖能、及び／又は循環コレステロールレベルの改善、循環ＬＤＬレベルの低下、及び／又はＨＤＬ／ＬＤＬ比の上昇；又は
（viii）過剰な体重により引き起こされるか又はこれを特徴とする症状の治療又は予防、
のための医薬の製造のための、請求項１に記載の少なくとも１つのペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用。
【請求項１２】
ヒト対象で使用するための、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
過剰な体重により引き起こされるか又はこれを特徴とする症状が、肥満、病的肥満、肥満関連炎症、肥満関連胆嚢疾患、及び肥満誘発性睡眠時無呼吸、メタボリック症候群、及び糖尿病前症から選択される、請求項１１に記載の使用。
【請求項１４】
該ペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物が、プロトンポンプ阻害剤との、又は糖尿病、肥満、脂質異常症、もしくは高血圧を治療するための物質との、併用療法の一部として投与される、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
（i）糖尿病を治療又は予防するための該物質が、メトホルミン、スルホニル尿素、グリニド、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、グリタゾン、インスリン、又はインスリン類似体であり；
（ii）肥満を治療又は予防するための該物質が、グルカゴン様ペプチド−１、ペプチドＹＹもしくはその類似体、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）もしくはその類似体、カンナビノイド受容体１アンタゴニスト、リパーゼ阻害剤、メラノコルチン受容体４アゴニスト、又はメラニン濃縮ホルモン受容体１アンタゴニストであり；
（iii）高血圧を治療又は予防するための該物質が、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、利尿剤、ベータ遮断薬、又はカルシウムチャネル遮断薬であり；
（iv）脂質異常症を治療又は予防するための該物質が、スタチン、フィブラート、ナイアシン、及び／又はコレステロール吸収阻害であり；
（v）プロトンポンプ阻害剤が、ベンズイミダゾリル誘導体型又はイミダゾピリジン誘導体型の物質である、請求項１４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は特に、いくつかのペプチドコンジュゲートと、糖尿病（１型及び／又は２型）と糖尿病関連疾患又は障害を含む種々の疾患又は障害の治療及び／又は予防におけるこのコンジュゲートの使用と、に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
糖尿病（特に１型及び２型糖尿病）は、２型糖尿病の発症の主要な原因であると考えられている肥満とともに、世界的に大きなかつ増大し続けている健康問題となっている。糖尿病に帰結する疾患又は障害は、心血管疾患と末梢血管疾患、微小血管と巨大血管合併症、卒中、及びおそらくある種の癌を含む。
【０００３】
糖尿病は、血中グルコースレベルの生理学的調節の欠陥により特徴づけられる。糖尿病につながる可能性がある基礎的症状には、内因性インスリン産生及び／又はインスリン抵抗性の付随的低下又は喪失（インスリンに対する感受性の低下）を伴う膵臓のβ細胞量と機能の低下又は喪失、すなわち血中グルコースレベルの充分な制御をもたらす内因性インスリンの能力の低下又は喪失である。
【０００４】
血中グルコースレベルを低下させる多くのホルモンは、消化管中の栄養物質の存在と吸収に応答して消化管粘膜により分泌される。これらには、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルコース依存性インスリン分泌刺激ペプチド（ＧＩＰ）、ガストリン、及びセクレチンがある。
【０００５】
ＧＬＰ−１［例えば、Orskov, Diabetologia 35: 701-711 (1992)を参照］は、１８０アミノ酸のペプチドであるプログルカゴンの組織プロセシングにより産生される［例えば、Drucker, Diabetes 47: 159-169 (1998)を参照］。プログルカゴンの全体の配列は、グルカゴンの２９アミノ酸配列と、ＧＬＰ−１の３６又は３７アミノ酸配列と、及びグルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２；インスリン分泌刺激ペプチド）の３４アミノ酸配列とを含有する。
【０００６】
血中グルコースレベルを低下させる別のペプチド群を構成するいわゆるエキセンジン（exendin）は、ＧＬＰ−１（７〜３６）とある程度の配列類似性（５３％）を有する［例えば、Goke et al., J. Biol. Chem. 268: 19650-19655 (1993)］。エキセンジンは、ドクトカゲ科種（Helodermatidae）（ドクトカゲ）の唾液中で発見されている。エキセンジン−３は、ヘロデルマ・ホリヅム（Heloderma horridum）（メキシコドクトカゲ）の唾液中に存在しており、エキセンジン−４は、ヘロデルマ・サスペクツム（Heloderma suspectum）（アメリカドクトカゲ）の唾液中に存在している。エキセンジン−３のアミノ酸配列とは２位と３位で異なるエキセンジン−４のアミノ酸配列は、
ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ−ＮＨ2である。
【０００７】
エキセンジン−４は、単離されたラットインスリノーマ細胞上の強力なＧＬＰ−１受容体アゴニストであることが報告されている［Goke et al., 前出］。ＷＯ９９／０７４０４は、糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスで全身投与されたエキセンジン−４が血中グルコースレベルを４０％低下させることを開示し、糖尿病ｏｂ／ｏｂマウスにおけるエキセンジン−４の１日１回の腹腔内注射の長期間の血中グルコースレベル低下作用も報告されている［Grieg et al., Diabetologia 42: 45-50 (1999)］。
【０００８】
米国特許第５，４２４，２８６号及びＷＯ９８／０５３５１は、エキセンジン−３、エキセンジン−４、及びエキセンジンアゴニストが、糖尿病の治療のために、胃の運動性を低下させ胃排出を遅延させるために、及び高血糖の予防のために、使用することができるを開示し、ＷＯ９８／３０２３１はさらに、これらが食物摂取を低下させるために使用できることを開示する。
【０００９】
ペプチドホルモンであるガストリンは、胃粘膜の細胞や十二指腸のＧ細胞から分泌され、ヒトでのこのホルモンの主要な生理的役割には、胃酸（すなわちＨＣｌ）の分泌の刺激と胃運動性の補助がある。ガストリンが、膵島新生における役割、すなわち膵島におけるインスリン分泌性β-細胞増殖の刺激［例えば、 Korc, M., J. Clin. Invest, 92: 1113-1114 (1993); Rooman et al. Diabetes 51: 686-690 (2002)］の役割を果たし、従って血中グルコースの制御に寄与している兆候がある。
【００１０】
ガストリンは、別の消化管ペプチドホルモンであるコレシストキニン（ＣＣＫ）と受容体を共有する。受容体ＣＣＫ−Ａ ＲとＣＣＫ−Ｂ Ｒは、ガストリンとＣＣＫ変種に対して異なる親和性を有する。ＣＣＫ−Ａ Ｒ（又はＣＣＫ Ｒ１）は硫酸化ＣＣＫの受容体として主に作用し、一方、ＣＣＫ−Ｂ Ｒ（又はＣＣＫ Ｒ２）は、ＣＣＫとガストリンの両方に等しく結合する。ＣＣＫ−Ｂ Ｒは、血漿中のＣＣＫと比較して、ガストリンのより高いレベルのために「ガストリン受容体」と見なされている［Foucaud et al. Reg. Peptides 145: 17-23 (2008)］。
【００１１】
ＣＣＫ−Ｂ Ｒは、リガンドが結合するといくつかの細胞内経路を開始させ、これが、ＣＣＫの多様な生物学的役割の理由であると見なされている。ＣＣＫ−Ｂ Ｒの下流の主要な経路は、ＭＡＰＫ（分裂促進因子活性化プロテインキナーゼ）又はＥＲＫ（細胞外調節キナーゼ）経路であり、これはまた、いくつかの増殖ホルモンにより活性化される。ＣＣＫ−Ｂ Ｒは膵臓で発現されるため、ガストリンは、この組織中で細胞増殖と膵島再生に寄与することができる。
【００１２】
ヒトでは、ガストリンは主に、３つの形態で存在する。すなわちガストリン３４、ガストリン１７、及びガストリン１４（問題の配列中のアミノ酸の総数を基準にして）。ガストリン６も同定されている。より短い形態は、C末端アミド化ガストリン３４の切断によって生成される。従ってガストリン１７は、ガストリン３４の最後の１７個のＣ末端残基（プロガストリン（５５〜７１）に対応）からなり、ガストリン１４は、ガストリン３４の最後の１４個のＣ末端残基（プロガストリン（５８〜７１）に対応）からなり、ガストリン６は、ガストリン３４の最後の６個のＣ末端残基（プロガストリン（６６〜７１）に対応）からなる。ヒトのガストリン１７では、Ｎ−末端アミノ酸残基は、ピログルタミン酸（ＰｙｒｏＧｌｕ）残基である。アミド化Ｃ末端の６アミノ酸は、ガストリンの主要な受容体結合残基である。
【発明の概要】
【００１３】
発明の概要
２つの共有的に結合又は連結したペプチド成分を含むいくつかのコンジュゲートが、例えば糖尿病（１型及び／又は２型糖尿病）と種々の他の糖尿病関連疾患又は障害の治療において、問題の２つの個々のペプチドの組合せの治療活性と比較して、予想外に高い治療活性を示すことがあることが、わかっている。
【００１４】
広い形態において、本発明は、ＧＬＰ−１受容体アゴニストとガストリン、特にＬｅｕ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、及びＴｈｒから選択されるガストリン１７中の１５位（ガストリン６中の４位に相当）での置換を有するガストリン、とのペプチドコンジュゲートを提供する。さらに詳しくは本発明は、エキセンジン−４とガストリンとのペプチドコンジュゲートを提供する。
【００１５】
従ってある態様において、本発明は、式Ｉ
Ｒ1−Ｚa−Ｌa−Ｙa−Ｒ2  （Ｉ）
［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、又はトリフルオロアセチルであり、
Ｒ2は、ＯＨ又はＮＨ2であり；そして
Ｚaは、式Ｉａ
Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｚ９−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｚ１２−Ｚ１３−Ｚ１４−Ｇｌｕ−Ｚ１６−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｚ２０−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ｚ２４−Ｚ２５−Ｌｅｕ−Ｚ２７−Ｚ２８  （Ｉａ）
（ここで、
Ｚ９は、Ａｓｐ及びＧｌｕから選択され、
Ｚ１２は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＯｒｎから選択され、
Ｚ１３は、Ｇｌｎ及びＴｙｒから選択され、
Ｚ１４は、Ｍｅｔ及びＬｅｕから選択され、
Ｚ１６は、Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、Ａｒｇ、Ｏｒｎ、及びＬｙｓから選択され、
Ｚ２０は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、及びＯｒｎから選択され、
Ｚ２４は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｏｒｎ、及びＧｌｕから選択され、
Ｚ２５は、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、及びＰｈｅから選択され、
Ｚ２７は、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、及びＯｒｎから選択され、
Ｚ２８は、Ａｓｎ及びＡｓｐから選択されるか、又は存在しない）
を有するペプチド配列であり、
Ｌaは、式Ｉｂ
Ｌ１−Ｌ２−Ｌ３−Ｌ４  （Ｉｂ）
（ここで、
Ｌ１は、Ｏｒｎ、８Ａｄｏ、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｎから選択されるか、又は存在せず、
Ｌ２は、Ｏｒｎ、８Ａｄｏ、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｎから選択されるか、又は存在せず、
Ｌ３は、Ｏｒｎ、８Ａｄｏ、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｎから選択されるか、又は存在せず、及び
Ｌ４は、Ｏｒｎ、８Ａｄｏ、Ｃｙｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｎから選択されるか、又は存在しない）
を有するペプチド配列であり、
Ｙaは、式Ｉｃ
Ｙ１２−Ｙ１３−Ｙ１４−Ｙ１５−Ａｓｐ−Ｙ１７  （ｌｃ）
（ここで、
Ｙ１２は、Ｔｙｒ及びＡｌａから選択されるか、又は存在せず、
Ｙ１３は、Ｇｌｙ及びＡｌａから選択されるか、又は存在せず、
Ｙ１４は、Ｔｒｐ、１Ｎａｌ及びＰｈｅから選択され；
Ｙ１５は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｔｈｒ、及びＰｈｅから選択され；及び
Ｙ１７は、Ｐｈｅ及び３−（３−ピリジル）−アラニンから選択される）
を有するペプチド配列であり、
ここで、式ＩａとＩｂ中のＬｙｓ、Ｏｒｎ、又はＣｙｓの少なくとも１つはさらに、親油性及び／又はビオチン性置換基に結合しているか、及び／又はペグ化されている］を有するペプチドコンジュゲートであるか、
又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【００１６】
さらなる態様において本発明は、Ｚaが式ＩＩａ
Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｚ９−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｚ１３−Ｚ１４−Ｇｌｕ−Ｚ１６−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｚ２５−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｚ２８  （ｌｌａ）
（ここで、
Ｚ９は、Ｇｌｕ及びＡｓｐから選択され、
Ｚ１３は、Ｇｌｎ及びＴｙｒから選択され、
Ｚ１４は、Ｍｅｔ及びＬｅｕから選択され、
Ｚ１６は、Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、及びＬｙｓから選択され、
Ｚ２５は、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｃｙｓ、及びＴｒｐから選択され、
Ｚ２８は、Ａｓｎ及びＡｓｐから選択されるか、又は存在しない）を有するペプチド配列であり、
Ｌaが、上記した式Ｉｂを有するペプチド配列であり、そして
Ｙaが、式ＩＩｃ
Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｙ１５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ  （ｌＩｃ）
（ここで、Ｙ１５は、Ｌｅｕ及びＴｈｒから選択される）を有するペプチド配列であり、
ここで、式ＩＩａのＺ１６位とＺ２５位のＬｙｓ残基の少なくとも１つはさらに、親油性及び／又はビオチン性置換基に結合しているか、及び／又はペグ化されている、式Ｉのペプチドコンジュゲート、
又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００１７】
具体的な態様において本発明は、式：
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮ−８Ａｄｏ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物１）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＬＫＮ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物２）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＬＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物３）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮ−８Ａｄｏ−Ｃ（ビオチン−Ｍａｌ）−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物４）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥ−Ｃ（ビオチン−Ｍａｌ）−ＬＫＮ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物５）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＬＥ−Ｃ（ビオチン−Ｍａｌ）−ＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物６）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＬＫ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物７）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＬＫ−８Ａｄｏ−ＱＱＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物８）、
を有するペプチドコンジュゲート、
又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物に関する。
【００１８】
他の態様において本発明は、式ＩＩＩ
Ｒ1−Ｚb−Ｌb−Ｙb−Ｒ2  （ＩＩＩ）
［式中、
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、アセチル、ホルミル、ベンゾイル、又はトリフルオロアセチルであり、
Ｒ2は、ＯＨ又はＮＨ2であり；そして
Ｚbは、式ＩＩＩａ
Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｚ２５−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｚ２８  （ＩＩＩａ）
（ここで、
Ｚ２５は、Ｐｈｅ及びＴｒｐから選択され、そして
Ｚ２８は、Ａｓｎ及びＡｓｐから選択されるか、又は存在しない）
を有するペプチド配列であり、
Ｌbは、式ＩＩＩｂ
Ｌ５−Ｌ６−Ｌ７−Ｌ８  （ＩＩＩｂ）
（ここで、
Ｌ５は、８Ａｄｏ、８Ａｏｃ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、及びＧｌｎから選択されるか、又は存在せず、
Ｌ６は、８Ａｄｏ、８Ａｏｃ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、及びＧｌｎから選択されるか、又は存在せず、
Ｌ７は、８Ａｄｏ、８Ａｏｃ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、及びＧｌｎから選択されるか、又は存在せず、
Ｌ８は、８Ａｄｏ、８Ａｏｃ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、及びＧｌｎから選択されるか、又は存在しない）
を有するペプチド配列であり、
Ｙbは、式ＩＩＩｃ
Ｙ１０−Ｙ１１−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｙ１５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ  （ＩＩｌｃ）
（ここで、
Ｙ１０は、Ｇｌｕであるか、又は存在せず、
Ｙ１１は、Ａｌａであるか、又は存在せず、そして
Ｙ１５は、Ｌｅｕ及びＴｈｒから選択される）
を有するペプチド配列である］を有するペプチドコンジュゲート、
又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供するが、
ただし、式ＩＩＩは、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2；
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2；
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2ではない。
【００１９】
さらなる態様において本発明は、
Ｚbが、式ＩＶａ
Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ｌｌｅ−Ｇｌｕ−Ｚ２５−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ  （ＩＶａ）
（ここで、Ｚ２５は、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、及びＴｒｐから選択される）を有するペプチド配列であり、
Ｌbが、上記した式ＩＩＩｂを有するペプチド配列であり、
Ｙbが、式ＩＶｃ
Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｙ１５−Ａｓｐ−Ｐｈｅ  （ＩＶｃ）
（ここで、Ｙ１５は、Ｌｅｕ及びＴｈｒから選択される）を有するペプチド配列である、式ＩＩＩのペプチドコンジュゲート、
又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００２０】
具体的な態様において本発明は、式：
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＱＱＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物９）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＱＱＥＡＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１０）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫ−８Ａｄｏ−ＱＱＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１１）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＤＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１２）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＡＡＡＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１３）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＧＧＧＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１４）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫ−８Ａｏｃ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１５）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＮＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１６）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＡＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１７）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＮ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１８）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＤ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１９）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＮＹＧＷＴＤＦ−ＮＨ2  （化合物２０）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＤＹＧＷＴＤＦ−ＮＨ2  （化合物２１）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物２２）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＤＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物２３）、
を有するペプチドコンジュゲート、
又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物に関する。
【００２１】
具体的な態様において、本発明のペプチドコンジュゲートは、標準的合成方法により、組換え発現系の使用により、又は他の任意の適切な方法により、製造することができる。すなわちこのコンジュゲートは、例えば
（ａ）標準的固相法又は液相法で、段階的にもしくは断片の組み立てにより、ペプチドコンジュゲートを合成し、最終的にペプチドコンジュゲート生成物を単離し精製する工程、
（ｂ）ペプチドコンジュゲートをコードする核酸構築体を宿主細胞中で発現させ、発現生成物を宿主細胞培養物から回収する工程、又は
（ｃ）ペプチドコンジュゲートをコードする核酸構築体の無細胞インビトロ発現を行い、抽出生成物を回収する工程、を含む方法、
又は（ａ）、（ｂ）、もしくは（ｃ）の方法の任意の組合せにより、ペプチドコンジュゲートの断片を得て、次にこれらの断片をペプチドコンジュゲートに結合させ、ペプチドコンジュゲートを回収する方法、を含む多くの方法により合成することができる。
【００２２】
本発明のさらなる態様には、糖尿病（１型及び／又は２型）及び種々の糖尿病関連症状、疾患又は障害を含む種々の症状、疾患又は障害の治療法がある。これらの態様は、本発明のペプチドコンジュゲート（遊離形態、又は医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の形態）、並びに本発明のペプチドコンジュゲート又は医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む医薬組成物の投与を含む。
【００２３】
ある態様において、本発明のペプチドコンジュゲートは、インスリン抵抗性、耐糖能異常、糖尿病前症、メタボリック症候群、空腹時グルコースレベルの上昇、高血中グルコースレベルに関連する疾患状態、高血糖症、１型及び／又は２型糖尿病、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、腎不全、高血圧症及び／又は脂質異常症（又はこれらの代謝及び心血管危険因子の組み合わせ）、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、大血管疾患、微小血管疾患、冠動脈性心疾患、末梢動脈病、及び脳卒中の治療用の薬剤として有用であり得る、これらはまた、病的肥満を含む、体重増加の防止、体重減少の促進、過剰な体重の減少及び／又は肥満症の治療（食欲、食物摂取頻度、食物摂取量、カロリー摂取、及び／又はエネルギー消費の調節により）、並びに、特に限定されないが、肥満関連炎症、肥満関連胆嚢疾患、及び肥満誘発性睡眠時無呼吸を含む関連する疾患、障害、及び健康状態の治療に有用であり得る。これらの条件下での本発明のペプチドコンジュゲートの効果は、体重に対する効果を通して全体的又は部分的に媒介され得るか、又はこれとは独立していてもよい。
【００２４】
本発明のさらなる態様には、糖尿病（１型及び／又は２型）及び種々の糖尿病関連症状、疾患又は障害を含む種々の症状、疾患又は障害の治療法がある。これらの態様は、本発明のペプチドコンジュゲート（遊離形態、又は医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の形態）、並びに本発明のペプチドコンジュゲート又は医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む医薬組成物の投与を含む。
【００２５】
ある態様において、本発明のペプチドコンジュゲートは、インスリン抵抗性、耐糖能異常、糖尿病前症、メタボリック症候群、空腹時グルコースレベルの上昇、高血中グルコースレベルに関連する疾患状態、高血糖症、１型及び／又は２型糖尿病、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、腎不全、高血圧症及び／又は脂質異常症（又はこれらの代謝及び心血管危険因子の組み合わせ）、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、大血管疾患、微小血管疾患、冠動脈性心疾患、末梢動脈病、及び脳卒中の治療用の薬剤として有用であり得る、これらはまた、病的肥満を含む、体重増加の防止、体重減少の促進、過剰な体重の減少及び／又は肥満症の治療（食欲、食物摂取頻度、食物摂取量、カロリー摂取、及び／又はエネルギー消費の調節により）、並びに、特に限定されないが、肥満関連炎症、肥満関連胆嚢疾患、及び肥満誘発性睡眠時無呼吸を含む関連する疾患、障害、及び健康状態の予防に有用であり得る。これらの条件下での本発明のペプチドコンジュゲートの効果は、体重に対する効果を通して全体的又は部分的に媒介され得るか、又はこれとは独立していてもよい。
【００２６】
本発明のさらなる形態は、以下の開示から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】３週間処置後の空腹時血中グルコースレベル。ｄｂ／ｄｂマウスにおいて、ビヒクル、リラグルチド（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）、及び化合物１８（３０及び１００ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）の１日１回のＳＣ投与で３週間処置後の空腹時血中グルコースレベルに対する作用。データは、平均値とＳＥＭで示される。統計：データは、１元配置ＡＮＯＶＡ後、ビヒクル又はリラグルチドに対してボンフェローニＭＣ検定により比較した：***ｐ＜０．００１対ビヒクル、##ｐ＜０．０１対リラグルチド。
【図２】４週間処置後に１週間の休薬後の空腹時血中グルコースレベル。ｄｂ／ｄｂマウスにおいて、ビヒクル、リラグルチド（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）、及び化合物１８（３０及び１００ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）の１日１回のＳＣ投与で、４週間処置後に１週間の休薬（ビヒクル処置）後の空腹時血中グルコースレベルに対する作用。データは、平均値とＳＥＭで示される。統計：データは、１元配置ＡＮＯＶＡ後、ビヒクル又はリラグルチドに対してボンフェローニＭＣ検定により比較した：**ｐ＜０．０１対ビヒクル、#ｐ＜０．０５対リラグルチド。
【図３】３週間処置後のＯＧＴＴ、ＡＵＣ。ｄｂ／ｄｂマウスにおいて、ビヒクル、リラグルチド（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）、及び化合物１８（３０及び１００ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）の１日１回のＳＣ投与で、３週間処置後の耐糖能に対する作用。データは、曲線下の面積（ＡＵＣ）とＳＥＭで示される。統計：データは、１元配置ＡＮＯＶＡ後、ビヒクル又はリラグルチドに対してボンフェローニＭＣ検定により比較した：***ｐ＜０．００１対ビヒクル、###ｐ＜０．００１対リラグルチド。
【図４】４週間処置＋１週間休薬後のＯＧＴＴ、ＡＵＣ。ｄｂ／ｄｂマウスにおいて、ビヒクル、リラグルチド（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）、及び化合物１８（３０及び１００ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）の１日１回のＳＣ投与で、４週間処置後に１週間の休薬（ビヒクル処置）後の耐糖能に対する作用。データは、曲線下の面積（ＡＵＣ）とＳＥＭで示される。統計：データは、１元配置ＡＮＯＶＡ後、ビヒクル又はリラグルチドに対してボンフェローニＭＣ検定により比較した：*ｐ＜０．０５、***ｐ＜０．００１対ビヒクル、###ｐ＜０．００１対リラグルチド。
【図５】４週間処置後のデルタ体重。ｄｂ／ｄｂマウスにおいて、ビヒクル、リラグルチド（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）、及び化合物１８（３０及び１００ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）の１日１回のＳＣ投与で、４週間処置後のデルタ（終了−開始）体重に対する作用。データは、平均値とＳＥＭで示される。統計：データは、１元配置ＡＮＯＶＡ後、ビヒクル又はリラグルチドに対してボンフェローニＭＣ検定により比較した：***ｐ＜０．００１対ビヒクル、##ｐ＜０．０１対リラグルチド。
【図６】５週間処置後の空腹時血中グルコースレベル。ＺＤＦラットにおいて、ビヒクル、リラグルチド（２×４０ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）、及び化合物１８（２×１０及び２×４０ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）の１日２回のＳＣ投与で、５週間処置後の空腹時血中グルコースレベルに対する作用。データは、平均とＳＥＭで示される。統計：データは、１元配置ＡＮＯＶＡ後、ビヒクル又はリラグルチドに対してボンフェローニＭＣ検定により比較した：**ｐ＜０．０１、***ｐ＜０．００１対ビヒクル、###ｐ＜０．００１対リラグルチド。
【図７】５週間処置のＯＧＴＴ、ＡＵＣ。ｄｂ／ｄｂマウスにおいて、ビヒクル、リラグルチド（２×４０ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）、及び化合物１８（２×１０及び２×４０ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）の１日１回のＳＣ投与で、５週間処置後の耐糖能に対する作用。データは、曲線下の面積（ＡＵＣ）とＳＥＭで示される。統計：データは、１元配置ＡＮＯＶＡ後、ビヒクル又はリラグルチドに対してボンフェローニＭＣ検定により比較した：***ｐ＜０．００１対ビヒクル、###ｐ＜０．００１対リラグルチド。
【図８】６週間処置のＨｂＡ１ｃレベル。ＺＤＦラットマウスにおいて、ビヒクル、リラグルチド（２×４０ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）、及び化合物１８（２×１０及び２×４０ｎｍｏｌ／ｋｇ／日）の１日２回のＳＣ投与で、６週間処置後のＨｂＡ１ｃレベルに対する作用。データは、平均値とＳＥＭで示される。統計：データは、１元配置ＡＮＯＶＡ後、ビヒクル又はリラグルチドに対してボンフェローニＭＣ検定により比較した：***ｐ＜０．００１対ビヒクル、#ｐ＜０．０５対リラグルチド。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
発明の詳細な説明
上記したように、本発明の１つの形態は以下の式を有するペプチドコンジュゲートに関する：
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮ−８Ａｄｏ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物１）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＬＫＮ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物２）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＬＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物３）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮ−８Ａｄｏ−Ｃ（ビオチン−Ｍａｌ）−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物４）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥ−Ｃ（ビオチン−Ｍａｌ）−ＬＫＮ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物５）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＬＥ−Ｃ（ビオチン−Ｍａｌ）−ＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物６）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＬＫ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物７）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＬＫ−８Ａｄｏ−ＱＱＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物８）。
【００２９】
さらに本発明の別の形態において、本発明は以下の式を有するペプチドコンジュゲートに関する：
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＱＱＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物９）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＱＱＥＡＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１０）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫ−８Ａｄｏ−ＱＱＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１１）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＤＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１２）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＡＡＡＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１３）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＧＧＧＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１４）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫ−８Ａｏｃ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１５）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＮＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１６）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＡＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１７）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＮ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１８）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＤ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物１９）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＮＹＧＷＴＤＦ−ＮＨ2  （化合物２０）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＤＹＧＷＴＤＦ−ＮＨ2  （化合物２１）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物２２）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＤＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物２３）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＥＡＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2  （化合物２４）。
【００３０】
さらに本発明の別の形態において、本発明は以下の式を有するペプチドコンジュゲートに関する：
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＮ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物２５）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＮ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物２６）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥ−（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＮＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物２７）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＮＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物２８）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物２９）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物３０）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物３１）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物３２）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＬＫ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物３３）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＬＫＱＱＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物３４）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＬＫ−Ｏｒｎ−Ｏｒｎ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物３５）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＬＫＮＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物３６）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥ−Ｋ（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）−ＬＫＤＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物３７）。
【００３１】
さらに本発明の別の形態において、本発明は以下の式を有するペプチドコンジュゲート：
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＣ（ＰＥＧ５Ｋ）ＬＫＮ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物３８）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＣ（ＰＥＧ１０Ｋ）ＬＫ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物３９）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＣ（ＰＥＧ２０Ｋ）ＬＫ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物４０）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＣ（ＰＥＧ４０Ｋ）ＬＫ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＬＤＦ−ＮＨ2（化合物４１）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＹＧＷＴＤＦ−ＯＨ（化合物４２）、
Ｈ−ＨＧＥＧＴＦＴＳＥＬＳＫＹＬＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＦＬＫＮ−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−ＹＧＷＴＤＦ−ＮＨ2（化合物４３）、
又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物に関する。
【００３２】
略語８Ａｄｏ、８Ａｏｃ、ヘキサデカノイル、イソＧｌｕ、Ｏｒｎ、及びビオチン−Ｍａｌは、それぞれ以下の天然には存在しないアミノ酸成分を示す：
８Ａｄｏ（又はＰｅｇ３）：−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ（Ｏ）−（８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸から誘導される）；
８Ａｏｃ：−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｃ（Ｏ）−（８−アミノオクタン酸から誘導される）；
ヘキサデカノイル：ＣＨ3−（ＣＨ2）14−Ｃ（Ｏ）−；
イソＧｌｕ：−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｃ（Ｏ）−；
Ｏｒｎ：オルニチン；及び
ビオチン−Ｍａｌ：ビオチン−マレイミド。
【００３３】
本発明のペプチドコンジュゲート中のリンカー成分の配向について、例えばリンカー成分−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−は、化学成分
−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ2−Ｃ（Ｏ）−
を示し、問題のリンカー成分の末端の−ＮＨ−・・・成分は、問題のペプチドコンジュゲートのＧＬＰ−１アゴニスト（例えばエキセンジン−４由来）成分に共有結合しており、問題のリンカー成分の右にある・・・−Ｃ（Ｏ）−成分は、問題のペプチドコンジュゲートのガストリン由来成分に結合している。
【００３４】
上記した本発明のペプチドコンジュゲートにおいて、エキセンジン−４（１〜２８）ペプチド配列成分は、ヘロデルマ・サスペクツム（Heloderma suspectum）エキセンジン−４配列の配列から誘導されるか、又はその類似体である。
【００３５】
本発明の文脈において用語「エキセンジン−４類似体」は、本来のエキセンジン−４配列の置換、末端切断、欠失、付加、又は結合から誘導されるペプチド配列として定義される。これは、特に限定されないが、本発明の置換物を含む。
【００３６】
同様に、コンジュゲート中の［Ｌｅｕ４］ガストリン６成分は、ヒトガストリンから合成的に得られる。
また同様に、コンジュゲート中の［Ｌｅｕ１５］ガストリン１７成分は、ヒトガストリンから合成的に得られる。
【００３７】
上記ペプチドコンジュゲート１〜４１の各１つ、すなわち化合物１又は化合物２又は化合物３・・・（など、化合物４１まで）又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物は、本発明のさらなる各形態を構成する。
【００３８】
本発明の文脈において、アミノ酸がその完全な名前（例えば、アラニン、アルギニンなど）で言及されない場合は、これらは、その常用の３文字及び／又は１文字略語（例えば、アラニンについてはＡｌａ又はＡ、アルギニンについてはＡｒｇ又はＲなど）で示される。
【００３９】
本発明の文脈において、用語「ペプチドコンジュゲート」は、第１のペプチド成分が、直接、又は結合性（すなわち、ブリッジ式又はスペース式）化学成分を介して、又は共有化学結合により、第２のペプチド成分への結合されている分子を指す。
【００４０】
本発明のペプチドコンジュゲートにおいて、エキセンジン−４又はＺ（Ｚa又はＺb）は、本来のエィチ・サスペクツム（H. suspectum）エキセンジン−４と少なくとも７５％の同一性、例えば、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有してもよい。
【００４１】
本発明のペプチドコンジュゲートにおいて、ガストリン又はＹ（Ｙa又はＹb）は、本来のヒトガストリン１７及び／又はガストリン６と少なくとも７０％の同一性、例えば、可能な場合は、少なくとも７５％、８０％、８３％、８５％、９０％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を有してもよい。
【００４２】
ある態様において本発明のポリペプチドは、可能な場合は、上記した配列の１つ又はそれ以上と少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％同一である、化合物番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、及び４１のいずれか１つに示したアミノ酸配列又はその機能性断片もしくは変種を含んでよい。アミノ酸置換は、例えば保存的置換でもよい。
【００４３】
本明細書において用語「保存的置換」は、１つ又はそれ以上のアミノ酸が別の生物学的に類似した残基により置換されることを示す。例には、例えば小アミノ酸、酸性アミノ酸、極性アミノ酸、塩基性アミノ酸、疎水性アミノ酸、及び芳香族アミノ酸などの、同様の特性を有するアミノ酸残基の置換がある。例えば、本発明の好適な態様において、Ｍｅｔ残基は、Ｍｅｔのバイオイソスター（bioisostere）であるが、Ｍｅｔとは反対に容易に酸化はされないノルロイシン（Ｎｌｅ）で置換される。内因性の哺乳動物ペプチドやタンパク質中には通常見出されない残基による保存的置換の別の例は、例えばオルニチン、カナバニン、アミノエチルシステイン、又は他の塩基性アミノ酸によるＡｒｇ又はｌｙｓの保存的置換であろう。ペプチドやタンパク質中の表現型的にサイレントな置換に関するさらなる情報については、Bowie et.al. Science 247, 1306-1310, 1990. Conservative substitutions of amino acids grouped by physicochemical properties. I: neutral, hydrophilic, II: acids and amides, III: basic, IV: hydrophobic, V: aromatic, bulky amino acidsを参照されたい。
【００４４】
【表１】
0006359972.tif 000002
【００４５】
ある態様において本発明のポリペプチドは、記載の配列の１つ又はそれ以上と比較して、多くても２０、１５、１０、９、８、７、６、４、３、２、又は１つのアミノ酸置換を有する機能性断片又はその変種を含んでよい。本発明のポリペプチドはさらに、シグナル配列有りでも無しでもよい。
ある態様において本発明のポリペプチドの１つ又はそれ以上のシステインは、他の残基（例えばセリン）で置換されてもよい。
【００４６】
ある態様において本発明のポリペプチドは、化合物番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１  、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、及び４１のいずれか１つに示したアミノ酸配列と、少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を共有する。
【００４７】
本発明の文脈において用語「医薬的に許容される塩」（本発明のペプチドコンジュゲートの医薬的に許容される塩）は、問題の塩が投与される患者又は対象者に対して有害ではない塩を示すことを意図する。これは適切には、酸付加塩及び塩基性塩から選択される塩でもよい。酸付加塩の例は、塩化物塩、クエン酸塩、及び酢酸塩を含むｌ．塩基性塩の例は、カチオンがアルカリ金属カチオン（例えば、ナトリウム又はカリウムイオン）、アルカリ土類金属カチオン（例えば、カルシウム又はマグネシウムイオン）、並びに置換アンモニウムイオン［例えばＮ（Ｒ1）（Ｒ2）（Ｒ3）（Ｒ4）+（ここで、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は独立に、典型的には水素、任意に置換されたＣ1-6−アルキル、又は任意に置換されたＣ2-6−アルケニルであろう）］から選択される。関連するＣ1-6−アルキル基の例は、メチル、エチル、１−プロピル、及び２−プロピル基を含む。関連する可能性のあるＣ2-6−アルケニル基の例は、エテニル、１−プロペニル、及び２−プロペニルを含む。医薬的に許容される塩の他の例は、"Remington's Pharmaceutical Sciences", 17th edition, Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, USA, 1985（及び、より最近の版）、"Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology", 3rd edition, James Swarbrick (Ed.) Informa Healthcare USA (Inc.), NY, USA, 2007、及び J. Pharm. Sci. 66: 2 (1977) に記載されている。
【００４８】
本発明の文脈において用語「溶媒和物」は、溶質（念のため、本発明のペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩）と溶媒との間で形成された一定の化学量論の複合体を指す。この点で溶媒は、例えば、水、エタノール、又は別の医薬的に許容される塩、典型的には小分子有機分子種、例えば、特に限定されないが、酢酸又は乳酸でもよい。問題の溶媒が水である時、このような溶媒和物は通常水和物と言われる。
【００４９】
本発明のいくつかの態様は、医薬として使用するための、又はその製造もしくは調製のための、本発明のペプチドコンジュゲートもしくはその医薬的に許容される塩、又は種々の疾患もしくは症状、例えば
１型糖尿病、２型糖尿病、糖尿病前症、インスリン抵抗性症候群、耐糖能障害（ＩＧＴ）、高血中グルコースレベルに関連する疾患状態、高血糖、高血圧、アテローム発生性脂質異常症、動脈硬化症（例えば、アテローム性動脈硬化症）、大血管疾患、冠状動脈性心臓疾患、末梢動脈疾患、脳卒中、微小血管疾患、胃疾患、メタボリック症候群、癌（例えば結腸癌）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、及び腎不全、
を治療又は予防するための方法における、その使用に関する。
【００５０】
この点で関連する可能性のあるさらなる疾患又は障害は、肥満、病的肥満、肥満関連炎症、肥満関連胆嚢疾患、及び肥満誘発性睡眠時無呼吸を含む。
いくつかの態様において、本発明の医薬は、その必要がある対象者の治療に使用するための医薬である。
【００５１】
さらなる形態において、本発明の医薬は、その必要がある対象者において、膵島新生（膵臓の膵島における新たなβ−細胞の形成を促進するための）を誘導するための医薬である。
さらなる形態において、本発明の医薬は、その必要がある対象者において、膵島中のβ−細胞の生存（例えば、膵島におけるβ−細胞の損失を防止するための）を誘導するための医薬である。
【００５２】
さらなる態様において、本発明の医薬は、その必要がある対象者において、膵島におけるβ−細胞の増殖（例えば、膵島中の既存のβ細胞の増殖を促進する）を誘導するための医薬である。
さらなる態様において、本発明の医薬は、その必要がある対象者において、上記のプロセス（すなわち膵島新生、膵島におけるβ−細胞の生存、及び／又は膵島中のβ−細胞の増殖）の任意の組合せを誘導するための医薬である。
【００５３】
医薬が、その必要がある対象者の膵島β−細胞の生存率を改善するために使用される、態様請求項３９のペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用。
【００５４】
さらに別の態様において、本発明の医薬は、その必要がある対象者において、膵島中のβ−細胞のアポトーシス及び／又は壊死を防ぐ（例えば、膵島中のβ−細胞の喪失を防ぐ）のに使用するための医薬である。
【００５５】
さらなる態様において、本発明の医薬は、その必要がある対象者において、血中のヘモグロビンｂ１Ａｃ（グリコシル化ヘモグロビン；ＨｂＡ１ｃ）レベルを低下させるのに使用するための医薬である。
【００５６】
本発明のさらなる形態は、その必要がある対象者において、本明細書に開示された症状の１つ又はそれ以上の治療用の医薬の製造又は調製における、本発明のペプチドコンジュゲートの使用に関する。
【００５７】
本発明のペプチドコンジュゲートはさらに、
その必要がある対象者において膵島の新生を誘導するための医薬の製造、
その必要がある対象者において膵島中のβ−細胞のアポトーシスを防止するための医薬の製造、
その必要がある対象者において膵島中のβ−細胞の生存を誘導するのに使用するための医薬の製造、
その必要がある対象者において膵臓のβ−細胞増殖を誘導するための医薬の製造、
その必要がある対象者の血中のヘモグロビンｂ１Ａｃ（グリコシル化ヘモグロビン；ＨｂＡ１ｃ）レベルを低下させるための医薬の製造、
及び／又はこれらの任意の組合せ、において、さらに使用し得る。
【００５８】
本発明の関連する追加の形態の１つは、本明細書に開示された症状、疾患又は障害の対応する治療法である。すなわち、本発明の１つのこのような追加の形態は、その必要がある対象者において、本明細書に開示された症状、疾患又は障害の１つ又はそれ以上の治療法であって、
本発明のペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量をその対象者に投与することを含む方法に関する。
【００５９】
本発明のさらなる態様は、その必要がある対象者において膵島の新生を誘導するための方法であって、本発明のペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量をその対象者に投与することを含む方法に関する。
【００６０】
本発明の追加の態様は、その必要がある対象者において膵島中のβ−細胞生存を促進する方法であって、本発明のペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量をその対象者に投与することを含む方法に関する。
【００６１】
本発明の追加の態様は、その必要がある対象者において膵島中のβ−細胞のアポトーシス及び／又は壊死を低下させるか又は防止するための方法であって、本発明のペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量をその対象者に投与することを含む方法に関する。
【００６２】
本発明の追加の態様は、その必要がある対象者において膵島中のβ−細胞の増殖を誘導するための方法であって、本発明のペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量をその対象者に投与することを含む方法に関する。
【００６３】
本発明の追加の態様は、上記プロセス（すなわち膵島新生、膵島中のβ−細胞の生存、及び／又は膵島中のβ−細胞の増殖）の任意の組合せを誘導するための方法であって、本発明のペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量をその対象者に投与することを含む方法に関する。
【００６４】
本発明の他の態様は、その必要がある対象者の血中のヘモグロビンｂ１Ａｃ（グリコシル化ヘモグロビン；ＨｂＡ１ｃ）レベルを低下させるための方法であって、本発明のペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量をその対象者に投与することを含む方法に関する。
【００６５】
本発明のさらに追加の態様は、以下に関する：
その必要がある対象者において、高血中グルコースレベルに関連する疾患状態の治療法、
その必要がある対象者において、血中グルコースレベルを低下させる方法、
その必要がある対象者において、インスリン放出を刺激する方法、
その必要がある対象者において、胃内容排出を調節する方法、及び
その必要がある対象者において、血漿脂質レベルを低下させる方法、
その必要がある対象者において、血圧を低下させる方法、
その必要がある対象者において、体重を低下させる方法。
【００６６】
本発明の後者の方法の各々において、方法は、本発明のペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療的有効量をその対象者に投与することを含む。
【００６７】
本発明の治療又は他の治療的介入の上記方法の文脈で使用される用語「治療的有効量」は、例えば確立された臨床的終点又は他のバイオマーカー（確立された又は実験的）により測定されるような、問題の治療又は他の治療的介入の対象である、具体的な疾患、障害、又は状態の臨床症状を治療、改善、緩和、又は部分的に阻止するのに充分な量を指す。治療的に関連する量は、治療又は予防されている適応症とこの治療的に関連する量が投与されている対象者とに基づいて、当業者により経験的に決定されてもよい。例えば、熟練作業者は、本明細書に記載の生物活性の臨床的に関連する指標の１つ又はそれ以上（例えば、血中グルコースレベル、インスリン放出、及び血漿脂質レベル）を測定することができる。熟練作業者は、インビトロ又はインビボ測定により、臨床的に関連する量を決定することができる。他の測定例は、体重増加、体重減少、及び血圧変化を含む。
【００６８】
これらの作用のいずれか又はすべてを実現するのに充分な量は、治療的有効量として定義される。投与された量及び投与方法は、最適な有効性を達成するように改変することができる。ある目的に有効な量は、特に、具体的な治療又は他の治療的介入の対象である疾患、障害、又は症状の重症度に、問題の対象者の体重及び全身状態に、食事に、可能性のある同時投与薬物に、及び医学分野の当業者に公知の他の要因に、依存するであろう。ヒトへの本発明のペプチドコンジュゲート又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の投与に最も適した適切な用量サイズ及び投与処方は、本発明により得られる結果に支配され、正しく計画された臨床治験で確認することができる。有効な投与量と治療プロトコールは、実験動物での低用量から開始して、次に作用を追跡しながら投与量を増加させて、また投与処方を全身性に変化させる、通常方法により決定してもよい。ある対象者について、最適な投与量を決定する時は、臨床家により、多くの要因を考慮することができる。このような考慮事項は、当業者に公知である。
【００６９】
本文脈において使用される用語「治療」及びその文法的変形（例えば、「治療される」、「治療する」）は、有効な又は所望の臨床的結果を得るためのアプローチを指す。本発明の目的において、有効な又は所望の臨床的結果は、特に限定されないが、検出可能でも検出不可能でも、症状の緩和、疾患の程度の縮小、疾患状態の安定化（すなわち、悪化はしていない）、疾患の進行の遅延又は減速、疾患状態の改善又は軽減、及び緩解（部分的又は全身的）を含む。「治療」はまた、たとえ治療を受けていなくても、予測される生存期間に対して、生存を延長させることを意味することもできる。すなわち治療の必要がある対象者は、問題の疾患又は障害にすでに罹患している対象者のこともある。用語「治療」は、治療の無い場合と比較して、病的状態又は症状の重症度の上昇（例えば、体重増加又は高血糖）の阻害又は低減を含み、必ずしも、関連する疾患、障害、又は症状の完全な停止を意味するものではない。
【００７０】
本文脈において使用される用語「予防する」及びその文法的変形（例えば、「予防される」、「予防している」、「予防する」）は、症状、疾患又は障害の出現を防ぐための、又はその病態を変更するためのアプローチを指す。従って「予防」は、予防的又は防止的措置を指してもよい。本発明の目的において、有効な又は所望の臨床的結果は、特に限定されないが、検出可能でも検出不可能でも、疾患の症状、進行、又は発症の予防又は減速を含む。従って予防の必要な対象者（例えば、ヒト）は、まだ問題の疾患又は障害に罹患していない対象者のこともある。従って用語「予防」は、治療の無い場合と比較して、疾患の発症を遅らせることを含み、必ずしも、関連する疾患、障害、又は症状の永続的な予防を意味するものではない。
【００７１】
本発明の文脈で使用される用語「アゴニスト」は、問題の受容体タイプを活性化する物質（リガンド）を指す。
【００７２】
本発明の文脈で使用される用語「ＧＬＰ−１受容体アゴニスト」（時に「ＧＬＰ−１アゴニスト」と呼ばれる）は、ヒトＧＬＰ−１受容体などのＧＬＰ−１受容体を活性化する物質（リガンド）を指す。ヒトＧＬＰ−１受容体を活性化する物質は、本来のＧＬＰ−１ペプチドホルモンであるＧＬＰ−１（７〜３７）、ＧＬＰ−１（７〜３６）アミド、オキシントモジュリン、エキセンジン−３、エキセンジン−４、グルカゴン、胃阻害性ポリペプチド（ＧＩＰ）、及びこれらの機能性ペプチド類似体と誘導体を含む。
【００７３】
本発明の文脈で使用される用語「アンタゴニスト」は、問題の受容体タイプに対してアゴニストとして機能する別の物質（リガンド）の作用を阻止、中和、又は妨害する物質（リガンド）を指す。
【００７４】
本発明のある態様において、上記した本発明の種々の形態に関連して言及される具体的な治療又は他の治療的介入の必要がある対象者は、哺乳動物である。さらなる態様において、哺乳動物はヒトである。
【００７５】
本発明の追加の態様は、本発明のペプチドコンジュゲート、又はその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物を、医薬的に許容し得る担体、賦形剤、又はビヒクルとともに含む医薬組成物に関する。
【００７６】
ペプチドコンジュゲートの合成
本発明のペプチドコンジュゲートは、標準的合成法により、組換え発現系の使用により、又は他の任意の適切な方法により、製造することができる。すなわち、このコンジュゲートは、例えば
（ａ）標準的な固相法又は液相法により、段階的に又は断片の組み立てにより、ペプチドコンジュゲートを合成し、最終ペプチドコンジュゲート生成物を単離し精製する方法、
（ｂ）ペプチドコンジュゲートをコードする核酸構築体を宿主細胞中で発現させ、宿主細胞培養物から発現生成物を回収する方法、又は
（ｃ）ペプチドコンジュゲートをコードする核酸構築体の無細胞インビトロ発現を行い、発現生成物を回収する方法、
を含む方法、
又は、（ａ）、（ｂ）、又は（ｃ）の方法の任意の組合せによりペプチドコンジュゲートの断片を得て、次にこれらの断片を連結してペプチドコンジュゲートを得て、ペプチドコンジュゲートを回収する方法、を含む多くの方法により合成することができる。
【００７７】
固相又は液相ペプチド合成により、本発明のコンジュゲートを合成することが好適となり得る。この文脈において、ＷＯ９８／１１１２５、特に、Fields, G.B. et al., "Principles and Practice of Solid-Phase Peptide Synthesis"のSynthetic Peptides中, Gregory A. Grant (Ed.), Oxford University Press（第２版、２００２年）、及びその中の合成例を参照してもよい。
【００７８】
本発明の化合物中のアミノ酸側鎖の１つ又はそれ以上は、親油性置換基にさらに結合されてもよい。親油性置換基は、アミノ酸側鎖中の原子に共有結合されてもよく、あるいはスペーサーによりアミノ酸側鎖に結合されてもよい。アミノ酸は、ペプチドＺの一部でもペプチドＬの一部でもよい。
【００７９】
理論に拘束されるつもりはないが、親油性置換基は血流中でアルブミンに結合し、こうして、本発明の化合物を酵素分解から保護し、これは化合物の半減期を延長させると考えられる。存在する時はスペーサーは、化合物と親油性置換基との間にスペースを提供し得る。
【００８０】
親油性置換基は、エステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、又はスルホンアミドを介して、アミノ酸側鎖又はスペーサーに結合することができる。従って、ある態様において、親油性置換基は、エステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、又はスルホンアミドの一部を形成するアシル基、スルホニル基、Ｎ原子、Ｏ原子、又はＳ原子を含むことは理解されるであろう。
【００８１】
好ましくは親油性置換基中のアシル基は、アミノ酸側鎖又はスペーサーとともにアミド又はエステルの一部を構成する。
【００８２】
親油性置換基は、４〜３０個のＣ原子、例えば少なくとも８又は１２個のＣ原子、及び好ましくは２４個のＣ原子もしくはそれ以下、又は２０個のＣ原子もしくはそれ以下を有する炭化水素鎖を含んでよい。炭化水素鎖は直鎖又は分岐してもよく、飽和又は不飽和でもよい。炭化水素鎖は、好ましくはアミノ酸側鎖又はスペーサーへの結合の一部を形成する成分、例えばアシル基、スルホニル基、Ｎ原子、Ｏ原子、又はＳ原子で置換されることは理解されるであろう。最も好ましくは炭化水素鎖はアシル基で置換され、従って炭化水素鎖は、アルカノイル基、例えばパルミトイル、カプロイル、ラウロイル、ミリストイル、又はステロイルの一部でもよい。
【００８３】
従って、親油性置換基は以下に示す式を有してもよい：
【００８４】
【化１】
0006359972.tif 000003
【００８５】
Ａは、例えばアシル基、スルホニル基、ＮＨ、Ｎ−アルキル、Ｏ原子、又はＳ原子、好ましくはアシルでもよい。ｎは３〜２９の整数である。ある態様において、ｎは少なくとも７であるか又は少なくとも１１である。ある態様において、ｎは２３又はそれ以下である。ある態様において、ｎは１９又はそれ以下である。
【００８６】
炭化水素鎖は、さらに置換されてよい。例えばこれは、ＮＨ2、ＯＨ、及びＣＯＯＨから選択される最大３個の置換基でさらに置換されてよい。炭化水素鎖がさらに置換される場合、これは好ましくは、１つのみの置換基でさらに置換される。あるいは又はさらに、炭化水素鎖は、例えば以下に示すようにシクロアルカン又はヘテロシクロアルカンを含んでよい。
【００８７】
【化２】
0006359972.tif 000004
【００８８】
ある態様において、シクロアルカン又はヘテロシクロアルカンは６員環である。ある好適な態様において、これはピペリジンである。
【００８９】
あるいは親油性置換基は、シクロペンタノフェナトレン骨格に基づき、これは部分的又は完全に不飽和又は飽和されてよい。この骨格中の炭素原子は、Ｍｅ又はＯＨで置換されてよい。例えば、親油性置換基は、コリル、デオキシコリル、又はリトコリルでもよい。
【００９０】
上記したように、親油性置換基は、スペーサーによりアミノ酸側鎖に結合してもよい。存在する場合、スペーサーは親油性置換基及びアミノ酸側鎖に結合される。スペーサーは、独立にエステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、又はスルホンアミドにより、親油性置換基及びアミノ酸側鎖に結合されてよい。従って、これは、アシル、スルホニル、Ｎ原子、Ｏ原子、又はＳ原子から独立に選択される２つの成分を含んでよい。スペーサーは以下の式を有してもよい：
【００９１】
【化３】
0006359972.tif 000005
【００９２】
（式中、ＢとＤはそれぞれ、アシル、スルホニル、ＮＨ、Ｎ−アルキル、Ｏ原子、又はＳ原子から独立に選択され、好ましくはアシル及びＮＨから選択される。好ましくは、ｎは１〜１０の整数、例えば１〜５の整数である。スペーサーは任意選択的に、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルキルアミン、Ｃ1-6アルキルヒドロキシ、及びＣ1-6アルキルカルボキシから選択される１つ又はそれ以上の置換基でさらに置換されてよい。
【００９３】
あるいは、スペーサーは、上記式の２つ又はそれ以上の繰り返し単位を有してもよい。Ｂ、Ｄ、及びｎは、それぞれ各繰り返し単位から独立に選択される。隣接する繰り返し単位は、各Ｂ及びＤ成分を介して互いに共有結合され得る。例えば、隣接繰り返し単位のＢ及びＤ成分は一緒に、エステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、又はスルホンアミドを形成することができる。スペーサーの各末端の遊離のＢ及びＤ単位は、上記したようにアミノ酸側鎖及び親油性置換基に結合される。
【００９４】
好ましくはスペーサーは、５又はそれ以下、４又はそれ以下、又は３又はそれ以下の繰り返し単位を有する。最も好ましくはスペーサーは、２つの繰り返し単位を有するか、又は単一の単位である。
【００９５】
スペーサー（又は、繰り返し単位を有する場合は、スペーサーの１つ又はそれ以上の繰り返し単位）は、例えば天然の又は非天然のアミノ酸でもよい。官能化側鎖を有するアミノ酸について、Ｂ及び／又はＤは、アミノ酸の側鎖内の成分でもよい。スペーサーは、任意の天然に存在する又は非天然のアミノ酸でもよい。例えば、スペーサー（又は、繰り返し単位を有する場合は、スペーサーの１つ又はそれ以上の繰り返し単位）は、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ｌｉｅ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｇｉｎ、Ａｓｎ、α−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ  Ｔｈｒ、Ｇａｂａ、Ａｉｂ、ｂＡｌａ、５−アミノペンタノイル、６−アミノヘキサノイル、７−アミノヘプタノイル、８−アミノオクタノイル、９−アミノノナノイル、又は１０−アミノデカノイルでもよい。
【００９６】
例えば、スペーサーは、γ−Ｇｌｕ、Ｇａｂａ、ｂ−Ａｌａ、及びα−Ｇｌｙから選択される単一のアミノ酸でもよい。
【００９７】
親油性置換基は、本発明の化合物中で任意のアミノ酸側鎖に結合することができる。好ましくはアミノ酸側鎖は、スペーサー又は親油性置換基とともに、エステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、又はスルホンアミドを形成するために、カルボキシ、ヒドロキシ、チオール、アミド、又はアミン基を含む。例えば、親油性置換基は、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ又はＤｂｕ、Ｄｐｒ又はＯｒｎに結合されてよい。好ましくは親油性置換基は、Ｌｙｓ又はＣｙｓに結合されてよい。しかし、本明細書に提供された式中でＬｙｓとして示された任意のアミノ酸は、親油性置換基が加えられる場合、Ｄｂｕ、Ｄｐｒ、又はＯｒｎにより置換されてよい。
【００９８】
親油性置換基とスペーサーの例は、以下の式で示される。
【００９９】
【化４】
0006359972.tif 000006
【０１００】
ここで、本発明の化合物からの（例えばＸからの）Ｌｙｓは、アミド成分を介してγ−Ｇｌｕ（スペーサー）に共有結合される。パルミトイルは、アミド成分を介してγ−Ｇｌｕに共有結合される。
【０１０１】
あるいは又はさらに、本発明の化合物中の１つ又はそれ以上のアミノ酸側鎖は、ビオチン性置換基にさらに結合されてよい。ビオチン性置換基は、アミノ酸側鎖中の原子に結合されるか、又はスペーサーによりアミノ酸側鎖に共有結合されてよい。アミノ酸は、ペプチドＺの一部又はペプチドＬの一部でもよい。
【０１０２】
理論に拘束されるつもりはないが、ビオチン性置換基は血流中でアルブミンに結合し、こうして本発明の化合物を酵素分解から保護し、これが本化合物の半減期を延長することができると考えられる。スペーサー（存在する時）は、本化合物とビオチン性置換基との間にスペースを提供するために使用される。
【０１０３】
ビオチン性置換基は、マレイミドエステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、又はスルホンアミドを介して、アミノ酸側鎖又はスペーサーに結合され得る。従って、好ましくはビオチン性置換基は、エステル、スルホニルエステル、チオエステル、アミド、又はスルホンアミドを形成する、マレイミド基、アシル基、スルホニル基、Ｎ原子、Ｏ原子、又はＳ原子を含む、ことが理解されるであろう。
【０１０４】
好適な態様において、スペーサーがペプチドに結合される前に、まずビオチン成分がスペーサーに結合される。リジン又はシステインの側鎖への結合を可能にするであろうスペーサー官能基を有する多くのビオチン−スペーサーコンジュゲートが市販されている。より好適な態様において、ビオチン−スペーサーコンジュゲートは、システイン側鎖上のスルフヒドリル基に選択的に結合できるマレイミド官能基を含有する。
【０１０５】
本発明に従って使用し得るビオチン性置換基の例は、以下を含む。
【０１０６】
【化５】
0006359972.tif 000007
【０１０７】
ビオチンは、ビタミンＨ又は補酵素Ｒとして知られており、水溶性Ｂ複合体ビタミン（ビタミンＢ７）である。これは、ある薬物の経口摂取を上昇させることが証明されている。
【０１０８】
あるいは又はさらに、本発明の化合物中の１つ又はそれ以上のアミノ酸側鎖は、溶解度及び／又はインビボの半減期（例えば、血漿中）及び／又はバイオアベイラビリティを上昇させるために、ポリマー成分に結合してもよい。このような修飾はまた、治療的タンパク質及びペプチドのクリアランス（例えば、腎クリアランス）を低下させることも知られている。
【０１０９】
ポリマー成分は、好ましくは水溶性（両新媒性又は親水性）、非毒性、及び薬理学的に不活性である。適切なポリマー成分は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧのホモポリマー又はコポリマー、ＰＥＧのモノメチル置換ポリマー（ｍＰＥＧ）、又はポリオキシエチレングリセロール（ＰＯＧ）を含む。例えば、Int. J. Hematology 68: 1 (1998); Bioconjugate Chem. 6: 150 (1995); 及び Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Sys. 9:249 (1992)を参照されたい。
【０１１０】
他の適切なポリマー成分は、ポリリジン、ポリアスパラギン酸、及びポリグルタミン酸などのポリアミノ酸を含む（例えば、Gombotz, et al. (1995), Bioconjugate Chem., vol. 6: 332-351 ; Hudecz, et al. (1992), Bioconjugate Chem., vol. 3: 49-57; Tsukada, et al. (1984), J. Natl. Cancer Inst., vol 73: 721-729; 及び Pratesi, et al. (1985), Br. J. Cancer, vol. 52: 841-848 を参照されたい。
【０１１１】
ポリマー成分は、直鎖であるか又は分岐していてもよい。これは、５００〜４０，０００Ｄａ、例えば５００〜１０，０００Ｄａ、１０００〜５０００Ｄａ、１０，０００〜２０，０００Ｄａ、又は２０，０００〜４０，０００Ｄａの分子量を有してもよい。
【０１１２】
本発明の化合物は、２つ又はそれ以上のこのような成分を含んでよく、この場合、このような成分のすべての総分子量は一般に上記範囲内に入るであろう。
【０１１３】
ポリマー成分は、アミノ酸側鎖のアミノ基、カルボキシル基、又はチオール基に結合され得る（共有結合により）。好適な例は、Ｃｙｓ残基のチオール基及びＬｙｓ残基のイプシロンアミノ基であり、Ａｓｐ及びＧｌｕ残基のカルボキシル基も使用できる。
【０１１４】
当業者は、これらの結合反応を実施するのに使用できる適切な技術を知っているであろう。例えば、メトキシ基を有するＰＥＧ成分は、Nektar Therapeitics AL.から市販されている試薬を使用して、マレイミド結合によりＣｙｓチオール基に結合することができる。適切な化学の詳細については、ＷＯ２００８／１０１０１７及び上記で引用した文献も参照されたい。
【０１１５】
本発明のある態様において、マレイミド官能化ＰＥＧは、システインの側鎖スルフヒドリル基に結合される。
【０１１６】
有効性
本発明のペプチドコンジュゲートは、エキセンジン−４の１つ又はそれ以上の生物活性とガストリンの１つ又はそれ以上の生物活性とを有する。
【０１１７】
ガストリン様成分Ｙ（Ｙa，Ｙb）及びリンカー成分Ｌ（Ｌa，Ｌb）の非存在下でのペプチドＺ（Ｚa，Ｚb）は、エキセンジン−４の１つ又はそれ以上の生物活性を有する。すなわち、化合物Ｒ1−Ｚ−Ｒ2は、エキセンジン−４の上記の１つ又はそれ以上の生物活性を有するであろう。
【０１１８】
エキセンジン−４様成分Ｚ（Ｚa，Ｚb）及びリンカー成分Ｌ（Ｌa，Ｌb）の非存在下でのペプチドＹ（Ｙa，Ｙb）は、ガストリンの１つ又はそれ以上の生物活性を有する。すなわち、化合物Ｒ1−Ｙ−Ｒ2は、ガストリンの上記の１つ又はそれ以上の生物活性を有するであろう。
【０１１９】
エキセンジン−４の生物活性は、ＧＬＰ−１受容体でのアゴニスト活性でもよい。ガストリンの生物活性は、ＣＣＫ−Ｂ受容体でのアゴニスト活性でもよい。
【０１２０】
好ましくはアゴニスト活性は、ヒトＧＬＰ−１受容体及び／又はヒトＣＣＫ−Ｂ受容体での活性である。「アゴニスト活性」は、細胞内サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）合成、又は関連受容体への結合時のｐＥＲＫリン酸化を誘導する能力を含んでよい。
【０１２１】
すなわち、ＧＬＰ−１又はＣＣＫ−Ｂ受容体への関連化合物の結合は、アゴニスト活性の指標として使用できるが、一般に、関連受容体へのその化合物の結合により引き起こされる細胞内シグナル伝達を測定する生物学的アッセイを使用することが好ましい。例えば、適切なアゴニストによるＧＬＰ−１受容体の活性化は、細胞のｃＡＭＰ生成を刺激するであろう。同様に、適切なアゴニストによるＣＣＫ−Ｂ受容体の活性化は、細胞のｐＥＲＫリン酸化を刺激するであろう。すなわち、これらの２つの受容体の１つを発現している適切な細胞中でのｃＡＭＰの産生又はＥＲＫ（ｐＥＲＫ）のリン酸化は、関連する受容体活性を追跡するのに使用することができる。従ってそれぞれが片方の受容体を発現し他方の受容体を発現しない細胞タイプの適切な対の使用は、両方のタイプの受容体に対するアゴニスト活性を測定するために使用することができる。
【０１２２】
当業者は、適切なアッセイフォーマットを知っており、例は以下に示される。アッセイは、ヒトＧＬＰ−１受容体（ＮＰ＿００２０５３．３  Ｇｌ：１６６７９５２８３）、及び／又はヒトＣＣＫ−Ｂ受容体（ＮＭ＿１７６８７５．３  Ｇｌ：３５６９９５８５１）を使用してもよい。前駆体タンパク質の配列が好ましい場合、アッセイは、シグナル配列が欠如した成熟タンパク質を使用してもよいことは、もちろん理解すべきである。
【０１２３】
好適な態様において、本発明のポリペプチドは、ＧＬＰ１−Ｒについて０．１ｎＭ未満のＥＣ50値を有してもよい。
好適な態様において、本発明のポリペプチドは、ＣＣＫＢ−Ｒについて１００ｎＭ未満のＥＣ50値を有してもよい。
好適な態様において、本発明のポリペプチドは、ＣＣＫＢ−Ｒについて５０ｎＭ未満のＥＣ50値を有してもよい。
ＥＣ50値は、実施例４に記載するように測定すべきである。
【０１２４】
治療的使用
本発明のペプチドコンジュゲートの使用はまた、その医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用を包含する。
【０１２５】
本発明のペプチドコンジュゲートは、糖尿病、特に１型及び／又は２型糖尿病、及び肥満を含む代謝疾患又は障害の魅力的な治療選択肢を提供し得る。
【０１２６】
糖尿病は、インスリン分泌、インスリン作用、又はこれらの両方の欠陥により生じる高血糖を特徴とする代謝疾患の群を含む。糖尿病の急性症状は、過剰な尿産生、その結果としての代償性のどの渇きと水分摂取の増加、かすみ目、原因不明の体重減少、倦怠感、及びエネルギー代謝の変化を含む。糖尿病の慢性高血糖は、様々な臓器、特に目（特に糖尿病性網膜症の形で）、腎臓（糖尿病性腎症の形態で）、神経（糖尿病性神経障害の形態で）、心臓、及び血管の長期的な損傷、機能不全、及び、ある場合には最終的な不全を引き起こし得る巨大血管及び微小血管合併症に関連している。糖尿病は、病原特性に基づいて、３つのクラス、すなわち、１型糖尿病、２型糖尿病、及び妊娠糖尿病に小分類される。
【０１２７】
１型糖尿病は、すべての糖尿病症例の５〜１０％を占め、インスリン分泌性膵臓β−細胞の自己免疫的破壊により引き起こされる。
２型糖尿病は、糖尿病症例の９０〜９５％を占め、代謝性疾患の複雑な組合せの結果である。２型糖尿病は、内因性インスリン産生及び／又は全身のインスリン感受性の結果であり、血漿グルコースレベルを診断閾値以下に維持するには不十分となる。
妊娠糖尿病は、妊娠中に特定される耐糖能異常のすべての程度を指す。
【０１２８】
糖尿病前症として知られている状態も認識されている。それは、例えば空腹時グルコースレベルの上昇及び耐糖能異常を含み、一般に、血中グルコースレベルが上昇する場合に発生する状態を指すが、糖尿病の臨床診断で確立されているレベルには達しないものである。
【０１２９】
２型糖尿病及び糖尿病前症を有する患者の大部分は、腹部肥満（腹部の内臓の周りに過剰な脂肪組織）、アテローム生成脂質異常症（動脈壁におけるプラーク蓄積を促進する、高トリグリセリドレベル、低ＨＤＬコレステロールレベル、及び／又は高ＬＤＬコレステロールレベルを含む血液脂肪障害）、血圧上昇（高血圧症）、血栓形成促進状態（例えば、血中の高フィブリノーゲン又はプラスミノーゲンアクチベーター阻害剤−１レベル）、及び炎症誘発性の状態（例えば、血中の上昇したＣ反応性タンパク質レベル）を含む、追加の代謝危険因子の高い罹患率のために、罹患率と死亡率のリスクが高い。
【０１３０】
逆に、肥満は、例えば、糖尿病前症、２型糖尿病、ある種の癌、閉塞性睡眠時無呼吸及び胆嚢疾患を発症するリスクを増加させる。
【０１３１】
脂質異常症は、心血管疾患のリスク上昇と関連している。血漿高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）濃度とアテローム動脈硬化性疾患のリスクとの間に逆相関が存在するため、ＨＤＬが臨床的に重要である。アテローム性動脈硬化プラークに保存されたコレステロールの大部分は、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）に由来し、従って、ＬＤＬ濃度の上昇は、アテローム性動脈硬化症と密接に関連している。ＨＤＬ／ＬＤＬ比は、特にアテローム性動脈硬化症及び冠動脈アテローム性動脈硬化症の臨床的リスクを評価するために用いられるパラメータである。
【０１３２】
理論に拘束されるつもりはないが、観察された活性が、個々のペプチド成分の対応する付加的（コンジュゲート化されていない）組合せを使用する時に観察されるものより顕著に高くなるように、本発明のペプチドコンジュゲートは、ＧＬＰ−１受容体アゴニストの生理学的作用とガストリンペプチドの生理学的作用（上記参照）とを予想外に組合せているように、思われる。従って本発明のペプチドコンジュゲートは、糖尿病前症、糖尿病（特に１型及び／又は２型糖尿病）及び糖尿病関連状態、例えば上記のような疾患又は障害の治療［膵島β−細胞生成（膵島新生）、従ってインスリン産生を促進する処置を含む］において特に有益であり、これは、血中グルコース濃度の制御に有益であろうと考えられる。従って本発明のペプチドコンジュゲートは、１型及び／又は２型糖尿病の疾患の進行を制限又は阻止するのに、特に有用となり得る。
【０１３３】
本発明のペプチドは、膵島中のβ−細胞の生存を促進しアポトーシスを阻害するために、さらに有用となり得る。ＧＬＰ−１及びガストリンの作用は、β−細胞増殖と成熟に対する作用を含むが、β−細胞アポトーシス及び／又は壊死及び新生の増強も含み、従って本発明のペプチドの作用は、このような作用、及び改善されたインスリン及びグルコース制御に対するその作用を含んでよい。
【０１３４】
従って本発明のペプチドコンジュゲートは、本明細書に記載の疾患、障害、又は症状の治療のための薬剤として有用であり得る。疾患、障害、又は症状の例は、インスリン抵抗性、グルコース不耐性、糖尿病前症、血中グルコースレベルの上昇に関連する疾患状態（例えば、空腹時血糖レベルの上昇）、１型及び／又は２型糖尿病、高血糖症、胃の疾患、メタボリック症候群、高血圧症及び／又は脂質異常症（又はこれらの代謝危険因子の組合せ）、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、冠動脈性心疾患、微小血管疾患、巨大血管疾患、末梢動脈疾患、脳卒中、癌（例えば結腸癌）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、及び腎不全を含む。
【０１３５】
治療効果の例は、体重増加の防止、体重減少の促進、過剰な体重の低減、及び／又は病的肥満を含む肥満症の治療（例えば、食欲、摂食、食物摂取、カロリー摂取、及び／又はエネルギー消費の制御により）、並びに関連する疾患、障害、及び健康状態（特に限定されないが、肥満関連炎症、肥満関連胆嚢疾患、及び肥満誘発性睡眠時無呼吸を含む）を含む。これらの条件下での本発明のペプチドコンジュゲートの効果は、体重に対する効果を介して全体的又は部分的に媒介され得るか、又はそれらから独立していてもよい。
【０１３６】
医薬組成物
以下において、本発明のペプチドコンジュゲートの１つ又はそれ以上を医薬組成物に含めることはまた、本発明のペプチドコンジュゲートの医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物を含めることを包含する。
【０１３７】
本発明のペプチドコンジュゲートは、保存の有無にかかわらず投与に適した医薬組成物として製剤化してもよく、これは、典型的には本発明の少なくとも１つのペプチド結合体の治療的有効量を、医薬的に許容し得る担体担体、賦形剤、又はビヒクルとともに含む。
【０１３８】
用語「医薬的に許容し得る担体」は、任意の標準的な医薬担体を含む。治療的使用のための医薬的に許容し得る担体は、製薬技術分野で周知であり、 "Remington's Pharmaceutical Sciences", 17th edition, Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, USA, 1985 に記載されている。例えば、わずかに酸性又は生理的ｐＨの無菌生理食塩水及びリン酸緩衝化生理食塩水を使用することができる。適切なｐＨ緩衝剤は、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、重炭酸アンモニウム、ジエタノールアミン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、又は酢酸塩（例えば酢酸ナトリウムとして）、又はこれらの混合物でもよい。この用語はさらに、ヒトを含む動物における使用のための、米国薬局方に記載されている任意の担体物質を包含する。
【０１３９】
本発明の医薬組成物は、単位剤型であってもよい。このような形態において組成物は、１つ又は複数の活性成分の適切な量を含む単位用量に分割される。単位剤型は、包装された製剤として提供することができ、包装は、個別量の製剤を含有し、例えば包装された錠剤、カプセル剤、又は粉末剤をバイアル又はアンプル中に含む。単位剤型はまた、それ自体で、例えばカプセル剤、カシェ剤又は錠剤であってもよく、又はこれらの包装形態のいずれかの適切な数であってもよい。単位剤型はまた、液相（典型的には水性）組成物を含有するペン装置の形態で、例えば単回用量の注射可能な形態で、提供することができる。組成物は、任意の適切な経路及び投与手段のために製剤化することができる。薬学的に許容される担体又は希釈剤は、例えば、経口、硝子体内、直腸、膣、鼻、局所経腸又は非経口（皮下（ＳＣ）、筋肉内（ＩＭ）、静脈内（ＩＶ）、皮内及び経皮を含む）投与、又は吸入による投与に適した製剤で使用されるものを含む。製剤は、便利には、単位剤型で提供することができ、医薬製剤の分野で当業者に公知の方法のいずれかによって調製することができる。
皮下又は経皮型の投与は、本発明のペプチドコンジュゲートに特に適している。
【０１４０】
本発明のさらなる形態は、本発明の医薬製剤を送達するために使用される装置、剤型、及び包装に関する。すなわち、本明細書に記載の安定な又は保存された製剤又は液剤における、少なくとも１つのペプチドコンジュゲート又は特定の部分もしくは変種は、ＳＣ又はＩＭ注射を含む種々の送達方法（経皮、肺、経粘膜、インプラント、浸透圧ポンプ、カートリッジ、マイクロポンプ、又は当該分野で公知のように当業者に公知の他の手段）を介して、本発明に従って患者に投与することができる。
【０１４１】
本発明のさらに別の形態は、経口製剤及び経口投与に関する。経口投与のための製剤は、腸壁の浸透性を人為的に上昇させるためのアジュバント（例えば、レゾルシノール、及びポリオキシエチレンオレイルエーテル及びｎ−ヘキサデシルポリエチレンエーテルなどの非イオン性界面活性剤）の同時投与、並びに、酵素的分解を阻害するための酵素阻害剤（例えば、膵臓トリプシン阻害剤、ジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＦＦ）、及びトラジロール）の同時投与に依存してもよい。経口投与のための固体剤型の活性成分化合物は、ショ糖、乳糖、セルロース、マンニトール、トレハロース、ラフィノース、マルチトール、デキストラン、デンプン、寒天、アルギネート、キチン、キトサン、ペクチン、トラガカントゴム、アラビアゴム、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、合成もしくは半合成ポリマー、及びグリセリドを含む少なくとも一つの添加剤と混合することができる。これらの剤型はまた、他のタイプの添加剤、例えば、不活性希釈剤、潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、パラベン）、保存剤（例えば、ソルビン酸、アスコルビン酸、α−トコフェロール）、抗酸化剤（例えばシステイン）、崩壊剤、結合剤、増粘剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、甘味剤、香味剤、芳香剤などを含有することができる。
【０１４２】
投与量
本発明の文脈において使用される本発明のペプチドコンジュゲートの典型的な用量は、約０．０００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、例えば約０．０００５〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日、約０．００１〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日、約０．００５〜約５ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１〜約１ｍｇ／ｋｇ／日、約０．０１５〜約０．１ｍｇ／ｋｇ／日の範囲が、１回又は複数回、例えば１〜３回投与されてよい。既にある程度上記したように、用いられる正確な用量は、特に、治療すべき疾患又は障害の性質及び重症度；治療すべき対象者の性別、年齢、体重、全身状態；治療を受けているか又は受ける予定の他の可能性のある付随する疾患又は障害；並びに、当該分野の医師に知られているであろう他の要因などに依存するであろう。
【０１４３】
本発明のペプチドコンジュゲートは、又は特定の対象者について所望の用量及び熟練した医師により選択される医薬組成物に依存して、連続的に（例えば、静脈内投与又は他の連続的な薬物投与法で）投与され得るか、間隔を置いて、典型的には一定の時間間隔で、対象者に投与することができる。
【０１４４】
一定の投与間隔は、ペプチドコンジュゲートの特定の投与製剤、バイオアベイラビリティ、及び薬物動態プロフィールに依存して、１日１回、１日２回、２日、３日、４日、５日、もしくは６日に１回、１週に１回もしくは２回、１月に１回もしくは２回、又は一定のさらに低頻度の投与間隔を含む。
【０１４５】
慢性の長期投与中のような特定の状況において、薬物療法を受けている対象者が、薬物のレベルを低下させるか又は服用を中止する（しばしば「休薬日」を取ると呼ばれる）ために、本発明のこのような規則的なペプチドコンジュゲートの投与処方を中断することが有利なことがある。休薬日は、長期の慢性治療中に薬剤に対する感受性を維持又は回復するのに、又は薬剤による対象者の長期慢性治療の望ましくない副作用を軽減するために、有用である。
【０１４６】
休薬日のタイミングは、定期的な投与処方のタイミングと休薬日を取るための目的に依存する（例えば、薬剤感受性を回復するために、及び／又は連続的な長期投与中の望ましくない副作用を軽減するため）。いくつかの態様において、休薬日は、薬剤の減少（例えば一定の時間間隔について治療上有効な量以下に）でもよい。他の態様において薬剤の投与は、投与が再開される前、これと同時に、又は異なる投与処方で、一定の期間で停止される（例えば、より低い又はより高い、用量及び／又は投与頻度で）。
すなわちペプチドコンジュゲートは、各休薬期で区切られた２回以上の投与期を含む投与処方を介して送達してもよい。
【０１４７】
各投与期中ペプチドコンジュゲートは、あらかじめ決められた投与パターンに従って治療的有効量で受容対象者に投与される。この投与パターンは、投与期中にわたって、受容対象者への薬剤の連続投与を含んでよい。あるいはこの投与パターンは、受容対象者へのペプチドコンジュゲートの複数回の投与を含んでよく、この投与は投与間隔により離れている。
【０１４８】
投与パターンは、１回の投与期に少なくとも２回の投与、１回の投与期に少なくとも５回の投与、１回の投与期に少なくとも１０回の投与、１回の投与期に少なくとも２０回の投与、１回の投与期に少なくとも３０回の投与、又はそれ以上を含んでよい。
【０１４９】
この投与間隔は、一定の投与間隔でもよく、これは、上記されたように、ペプチドコンジュゲートの特定の投与製剤、バイオアベイラビリティ、及び薬物動態プロフィールに依存して、１日１回、１日２回、２日、３日、４日、５日、もしくは６日に１回、１週に１回もしくは２回、１月に１回もしくは２回、又は一定のさらに低頻度の投与間隔でもよい。
【０１５０】
投与期の持続は、少なくとも２日間、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、又はそれ以上の期間を有してもよい。
【０１５１】
ある投与パターンが複数回の投与を含む場合、以後の休薬期の持続は、その投与パターンで使用される投与間隔より長い。投与間隔が不規則な場合、休薬期の持続は、投与期全体の投与間の平均間隔より長くてもよい。あるいは休薬日の持続は、投与期中の連続投与間の最も長い間隔より長くてもよい。
【０１５２】
休薬期の持続は、関連する投与間隔（又はその平均）の少なくとも２倍、関連する投与間隔又はその平均の少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍でもよい。
【０１５３】
これらの制約の中で、休薬期は、以前の投与期中の投与パターンに依存して、少なくとも２日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、又はそれ以上の持続期間を有してもよい。
【０１５４】
投与処方は、少なくとも２回の投与期を含む。連続的な投与期は、各休薬期により分離される。すなわち投与処方は、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、又は少なくとも３０の投与期、又はそれ以上を含んでよく、各々、休薬期により分離される。
【０１５５】
連続的投与期は、同じ投与パターンを使用してもよいが、これは、必ずしも所望でも必要でもない。しかし、本発明のペプチドコンジュゲートと組合せて他の薬物又は活性物質が投与される場合、典型的には同じ組合せの薬物又は活性物質が、連続投与期に投与される。ある態様において、受容対象者はヒトである。
【０１５６】
併用療法
上記したように、本発明のペプチドコンジュゲートへの以下の言及はまた、その医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物、並びに２つ以上の異なる本発明のペプチドコンジュゲートを含む組成物も包含することは、理解されるであろう。
【０１５７】
本発明のペプチドコンジュゲートは、併用療法の一部として、問題の疾患又は障害、例えば、糖尿病、肥満、メタボリック症候群、脂質異常症、又は高血圧の治療のための別の活性物質と共に投与してもよく、そのような場合、２つの活性剤は、一緒に投与されるか、又は別々に、例えば、同じ医薬組成物もしくは製剤中の成分として、又は別々の製剤として投与してもよい。
【０１５８】
従って本発明のペプチドコンジュゲートは、既知のタイプの抗糖尿病剤（特に限定されないが、メトホルミン、スルホニル尿素、グリニド、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、グリタゾン、又はインスリンもしくはインスリン類似体）と組み合わせて使用することができる。好適な態様において、本発明のペプチドコンジュゲートは、充分な血糖コントロールを達成するために、インスリン又はその類似体、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、スルホニル尿素、又はメトホルミン、特にスルホニル尿素又はメトホルミンと組合せて投与される。より好適な態様において、ペプチドコンジュゲートは、充分な血糖コントロールを達成するために、インスリン又はその類似体と組合せて投与される。適切なインスリン類似体の例は、特に限定されないが、Lantus（登録商標）、Novorapid（登録商標）、Humalog（登録商標）、Novomix（登録商標）、Actraphane（登録商標）HM, Levemir（登録商標）、Degludec（登録商標）、及びApidra（登録商標）を含む。この点で他の関連する抗糖尿病剤は、ＧＬＰ−１受容体アゴニスト、例えば、エキセナチド （Byetta（登録商標）；エキセンジン−４）、及び Byetta LAR（登録商標）、リキセンアチド （Lyxumia（登録商標））、及びリラグルチド （Victoza（登録商標）を含む。
【０１５９】
本発明のペプチドコンジュゲートはまた、既知のタイプの抗糖尿病剤［特に限定されないが、ペプチドＹＹもしくはその類似体、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）もしくはその類似体、カンナビノイド受容体１アンタゴニスト、リパーゼ阻害剤、ヒューマンprolsletペプチド（ＨＩＰ）、メラノコルチン受容体４アゴニスト、リラグルチド、Orlistat（登録商標）、及びSibutramine（登録商標）、又はメラニン濃縮ホルモン受容体１アンタゴニスト、ＣＣＫ、アミリン又はレプチン、及びこれらの類似体を含む］とともに使用することができる。
【０１６０】
本発明のペプチドコンジュゲートはさらに、既知のタイプの高血圧剤（特に限定されないが、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、アンギオテンシンＩＩ受容体遮断薬、利尿剤、ベータ遮断薬、又はカルシウムチャネル遮断薬を含む）とともに使用することができる。
【０１６１】
本発明のペプチドコンジュゲートはさらに、既知のタイプの抗脂質異常症薬（特に限定されないが、スタチン、フィブラート、ナイアシン、及び／又はコレステロール吸収阻害剤を含む）とともに使用することができる。
【０１６２】
本発明のペプチドコンジュゲートはまた、既知のタイプのプロトンポンプ阻害剤［特に限定されないが、ベンズイミダゾリル誘導体型又はイミダゾピリジン誘導体型の物質、例えばOmeprazole（登録商標）、Lansoprazole（登録商標）、Dexlansoprazole（登録商標）、Esomeprazole（登録商標）、Pantoprazole（登録商標）、Rabeprazole（登録商標）、Zolpidem（登録商標）、Alpidem（登録商標）、Saripidem（登録商標）、又はNecopidem（登録商標）を含む］とともに使用することができる。
【０１６３】
本発明のペプチドコンジュゲートはさらに、既知のタイプの抗炎症剤［特に限定されないが、
ステロイド及びコルチコステロイド、例えばベクロメタゾン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、プレドニゾン、デキサメタゾン、及びヒドロコルチゾン；
非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えばプロピオン酸誘導体（例えばアルミノプロフェン、ベノキサプロフェン、ブクロキシ酸、カルプロフェン、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドプロフェン、ケトプロフェン、ミプロフェン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピルプロフェン、プラノプロフェン、スプロフェン、チアプロフェン酸、及びチオキサプロフェン）；酢酸誘導体（例えばインドメタシン、アセメタシン、アルクロフェナック、クリダナク、ジクロフェナク、フェンクロフェナク、フェンクロジン酸、フェンチアザク、フロフェナク、イブフェナク、イソキセパク、オキスピナク、スリンダク、チオピナク、トルメチン、ジドメタシン、及びゾメピラック）；フェナム酸誘導体（例えばフルフェナム酸、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ニフルム酸、及びトルフェナム酸）；ビフェニルカルボン酸誘導体（例えばジフルニサル及びフルフェニサル）；オキシカム（例えばイソキシカム、ピロキシカム、スドキシカム、及びテノキシカム）；サリチル酸塩（例えばアセチルサリチル酸及びスルファサラジン）；及びピラゾロン（例えばアパゾン、ベズピペリロン、フェプラゾン、モフェブタゾン、オキシフェンブタゾン、及びフェニルブタゾン）；
ＣＯＸＩＩ阻害剤、例えばロフェコキシブ及びセレコキシブ；インターフェロンベータの調製物（例えば、インターフェロンベータ−１ａ又はインターフェロンベータ−１ｂ）；
及び、いくつかの他の化合物、例えば５−アミノサリチル酸、及び、これらののプロドラッグと薬学的に許容される塩］とともに使用することができる。
【０１６４】
メトホルミンは、抗炎症性を有する［Haffner et al. Diabetes 54: 1566-1572 (2005)を参照］ことも証明されており、従って、本発明の文脈において有用となり得る。
【０１６５】
以下の実施例は、本発明の特定の具体的な態様を示す。以下の実施例を詳細に説明したこと以外は、当業者に周知であり日常的である標準的な技術を用いて、行われた。これらの例は例示のみを目的とするものであり、本発明の条件又は範囲に関して完全に決定的であることを趣旨とするものではないことを理解すべきである。従ってこれらは、決して本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【０１６６】
実施例で使用する略語は次のとおりである：
ＮＭＰ：Ｎ−メチルピロリドン
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＦ：Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＨＡＴＵ：２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＥｔＯＨ：エタノール
Ｅｔ2Ｏ：ジエチルエーテル
８Ａｄｏ：８−アミノ−３，６−ジオキサオクタノイル
８Ａｏｃ：８−アミノオクタノイル
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＭＳ：質量分析法
ＩＢＭＸ：３−イソブチル−１−メチルキサンチン
ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン
ｃＡＭＰ：環状アデノシン一リン酸
ＤＭＥＭ：ダルベッコ改変イーグル培地
ＦＣＳ：ウシ胎児血清
ＨＥＰＥＳ：Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸
Ｐ−ＥＲＫ：リン酸化細胞外制御キナーゼ
ＰＢＳ：リン酸緩衝化生理食塩水
ＢＯＣ：ｔ−ブトキシカルボニル
ＮＥＰ：Ｎ−エチルピロリドン
リラグルチド：［Ａｒｇ３４，Ｌｙｓ２６（ヘキサデカノイル−イソＧｌｕ）］ＧＬＰ−１（７〜３７）
【実施例】
【０１６７】
化合物の合成
材料と方法
特に明記しない場合は、以下で使用される試薬と溶媒は、標準的な実験用試薬又は分析グレードで市販されており、さらに精製することなく使用された。
【０１６８】
本発明のペプチドコンジュゲートの合成のための一般的操作
標準的Ｆｍｏｃ化学を使用して、固相ペプチド合成をCEM Liberty Peptide Synthesizer上で行った。使用の前に、TentaGel（登録商標）S Ram 樹脂（１ｇ；０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）をＮＥＰ（１０ｍｌ）中で膨潤させ、ＤＣＭ及びＮＥＰを使用してチューブと反応槽との間を移動させた。ペプチド合成中の凝集を最小にするために使用されるジペプチドであるシュードプロリン、例えばＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ψ−Ｍｅ，Ｍｅ−Ｐｒｏ）−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（ψ−Ｍｅ，Ｍｅ−Ｐｒｏ）−ＯＨを適宜使用し、非天然のアミノ酸（すなわち、Ｆｍｏｃ−８Ａｄｏ−ＯＨ）を、一般的操作に変更を加えることなく使用した。
【０１６９】
カップリング：
ＮＥＰ／ＤＭＦ／ＤＣＭ（１：１：１；０．２Ｍ；５ｍｌ）中のＦｍｏｃ−アミノ酸をCEM Discover マイクロ波装置中の樹脂に、ＨＡＴＵ／ＤＭＦ（０．５Ｍ；２ｍｌ）及びＤＩＰＥＡ／ＮＥＰ（２．０Ｍ；１ｍｌ）と共に添加した。混合物を通して窒素を泡立てせながら、カップリング混合物を７５°Ｃまで５分間加熱した。続いて樹脂をＮＥＰで洗浄した（４ｘ１０ｍｌ）。
【０１７０】
脱保護：
最初の脱保護のためにピペリジン／ＮＥＰ（１／４（４部のＮＥＰに対する１部のピペリジンを示す）；１０ｍｌ）を樹脂に添加し、混合物をマイクロ波加熱した（４０℃；３０秒）。反応容器を排出し、ピペリジン／ＮＥＰ（１／４；１０ｍｌ）の２回目の量を添加し、再度加熱した（７５℃；３分）。続いて樹脂をＮＥＰで洗浄した（６ｘ１０ｍｌ）。
【０１７１】
切断：
樹脂をエタノール（３ｘ１０ｍｌ）及びＥジエチルエーテル（３ｘ１０ｍｌ）で洗浄し、一定の重量まで室温で（ｒ．ｔ．）乾燥した。ＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９５／５／５；４０ｍｌ、２ｈ；ｒ．ｔ．）を用いる処置によって、未精製のペプチドを樹脂から切断した。ＴＦＡの大半を減圧で除去し、未精製のペプチドを沈殿させ、ジエチルエーテルで３回洗浄し、室温で一定の重量まで乾燥した。
【０１７２】
精製と性状解析：
適切なカラムとフラクションコレクターを備えたPerSeptive Biosystems VISION Workstationを使用して、未精製のペプチドを分取用逆相ＨＰＬＣによって９０％超の純度まで精製し、緩衝液Ａ（０．１％ＴＦＡ、ａｑ．）及び緩衝液Ｂ（０．１％ＴＦＡ、９０％ＭｅＣＮ、ａｑ．）との勾配で実行した。分析用ＨＰＬＣ及びＭＳによって画分を分析し、関連画分をプールし凍結乾燥した。最終生成物をＨＰＬＣ及びＭＳによって性状解析した。
【０１７３】
実施例１
化合物２［Ｌｅｕ１４，Ｌｙｓ２５（ヘキサデカノイル−イソＧＬｕ）］エキセンジン−４（１〜２８）−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−［Ｌｅｕ４］ガストリン６の合成
CEM Liberty Peptide Synthesizer上で上記したTentaGel S Ram 樹脂（１．１３ｇ；０．２４ｍｍｏｌ／ｇ）とＦｍｏｃ化学を使用して、［Ｌｅｕ１４］エキセンジン−４（１〜２８）−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−［Ｌｅｕ４］ガストリン６を合成した。Ｆｍｏｃ−８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（Ｆｍｏｃ−８Ａｄｏ−ＯＨ）並びにＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）−ＯＨを、アシル化のために結合点で使用した。
【０１７４】
樹脂に結合し保護された線状ペプチドをＮＭＰ（３×２分）で洗浄した。固相に結合したペプチドのＮ末端を、ＤＣＭ（４ｍｌ）中のＢｏｃ2Ｏ（２６５ｍｇ）及びＤＩＥＡ（４７μｌ）を使用してＢｏｃ保護し、次にＮＭＰ（５×２分）で洗浄した。次にＤｄｅ保護基をヒドラジン水和物／ＮＥＰで（４／９６；２ｘ１５分）を使用して切断し、樹脂をＮＭＰ（５×２分）、ＤＩＥＡ／ＮＭＰ（１／９；３×５分）、及びＮＭＰ（８×２分）で洗浄した。合成は、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ及びヘキサデカン酸を使用して、上記のCEM Liberty Peptide Synthesizerで完了した。
【０１７５】
ペプチドを上記の樹脂から切断し、そしてGemini-NXカラム（５×２５ｃｍ；１０μｍ；Ｃ１８）上で、緩衝液Ａ（０．１％ＴＦＡ；ａｑ．）及び緩衝液Ｂ（０．１％ＴＦＡ、９０％ＭｅＣＮ；ａｑ．）の混合物の３５ｍｌ／分流量で精製を行った。生成物を３０％〜６５％の緩衝液Ｂで４７分間直線勾配で溶出し、フラクションコレクターによって画分（９ｍｌ）を採取した。関連画分を分析用ＨＰＬＣとＭＳによって分析し、プールし、白色粉末（３９ｍｇ）となるまで凍結乾燥し、これを、分析用ＨＰＬＣによって８１％純度として分析した。質量はＭＳにより測定すると、４６５５．５３Ｄａであった（計算値４６５５．４４Ｄａ）。
【０１７６】
実施例２
化合物６［Ｃｙｓ１６（ビオチン−Ｍａｌ），Ｌｅｕ１４］エキセンジン−４（１〜２８）−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−［Ｌｅｕ４］ガストリン６の合成
CEM Liberty Peptide Synthesizer上で上記した２部のTentaGel S Ram 樹脂（１．１２ｇ；０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）とＦｍｏｃ化学を使用して、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ψ−Ｍｅ，Ｍｅ−Ｐｒｏ）−ＯＨ及びＦｍｏｃ−８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（Ｆｍｏｃ−８Ａｄｏ−ＯＨ）を使用して、［Ｃｙｓ１６，Ｌｅｕ１４］エキセンジン−４（１〜２８）−８Ａｄｏ−８Ａｄｏ−［Ｌｅｕ４］ガストリン６を合成した。このペプチドを上記したように樹脂から切断した（部分１）。
【０１７７】
精製番号１：樹脂番号１からの未精製ペプチドを、Gemini-NXカラム（５×２５ｃｍ；１０μｍ；Ｃ１８）上で、緩衝液Ａ（０．１％ＴＦＡ；ａｑ．）及び緩衝液Ｂ（０．１％ＴＦＡ、９０％ＭｅＣＮ；ａｑ．）の混合物の３５ｍｌ／分流量で精製した。生成物を３０％〜６５％の緩衝液Ｂで４７分間直線勾配で溶出し、フラクションコレクターによって画分（９ｍｌ）を採取した。関連画分を分析用ＨＰＬＣとＭＳによって分析し、プールし、白色粉末（９０ｍｇ）となるまで凍結乾燥し、これを、分析用ＨＰＬＣによって６８％純度として分析した。
【０１７８】
精製番号２：精製番号１からの生成物を、Gemini-NXカラム（１０ｍｍ×２５ｃｍ；５μｍ；Ｃ１８）上で、緩衝液Ａ（０．１％ＴＦＡ；ａｑ．）及び緩衝液Ｂ（０．１％ＴＦＡ、９０％ＭｅＣＮ；ａｑ．）の混合物の４ｍｌ／分流量で精製した。生成物を３０％〜６０％の緩衝液Ｂで４７分間直線勾配で溶出し、フラクションコレクターによって画分（２ｍｌ）を採取した。関連画分を分析用ＨＰＬＣとＭＳによって分析し、プールし、白色粉末（２５ｍｇ）となるまで凍結乾燥し、これを、分析用ＨＰＬＣによって９１％純度として分析した。
【０１７９】
精製番号３：樹脂番号２からの未精製ペプチドを、Geminiカラム（５×２５ｃｍ；１０μｍ；Ｃ１８）上で、緩衝液Ａ（０．１％ＴＦＡ；ａｑ．）及び緩衝液Ｂ（０．１％ＴＦＡ、９０％ＭｅＣＮ；ａｑ．）の混合物の３５ｍｌ／分流量で精製した。生成物を３０％〜６５％の緩衝液Ｂで４７分間直線勾配で溶出し、フラクションコレクターによって画分（９ｍｌ）を採取した。関連画分を分析用ＨＰＬＣとＭＳによって分析し、プールし、白色粉末（１２９ｍｇ）となるまで凍結乾燥し、これを、分析用ＨＰＬＣによって７４％純度として分析した。
【０１８０】
精製番号４：精製番号２と３からの一緒にした生成物を、Gemini-NXカラム（１０ｍｍ×２５ｃｍ；５μｍ；Ｃ１８）上で、緩衝液Ａ（０．１％ＴＦＡ；ａｑ．）及び緩衝液Ｂ（０．１％ＴＦＡ、９０％ＭｅＣＮ；ａｑ．）の混合物の４ｍｌ／分流量で精製した。生成物を３０％〜５５％の緩衝液Ｂで４７分間直線勾配で溶出し、フラクションコレクターによって画分（２ｍｌ）を採取した。関連画分を分析用ＨＰＬＣとＭＳによって分析し、プールし、白色粉末（３２ｍｇ）となるまで凍結乾燥し、これを、分析用ＨＰＬＣによって７３％純度として分析し、別の白色粉末（１００ｍｇ）は分析用ＨＰＬＣにより６２％純度として分析した。
【０１８１】
精製番号５：精製番号４からの一緒にした生成物を、Gemini-NXカラム（１０ｍｍ×２５ｃｍ；５μｍ；Ｃ１８）上で、緩衝液Ａ（０．１％ＴＦＡ；ａｑ．）及び緩衝液Ｂ（０．１％ＴＦＡ、９０％ＭｅＣＮ；ａｑ．）の混合物の４ｍｌ／分流量で精製した。生成物を３０％〜５５％の緩衝液Ｂで４７分間直線勾配で溶出し、フラクションコレクターによって画分（２ｍｌ）を採取した。関連画分を分析用ＨＰＬＣとＭＳによって分析し、プールし、白色粉末（３０ｍｇ）となるまで凍結乾燥し、これを、分析用ＨＰＬＣによって９０％純度として分析した。質量はＭＳにより測定すると、４３２０．２４Ｄａであった（計算値４３２０．１２Ｄａ）。
【０１８２】
結合：精製番号５からの生成物を、ＰＢＳ緩衝液（６ｍｌ；ｐＨ７．４）に溶解して、濁った溶液を得た（ｐＨ６．２）。ビオチン−マレイミド（１０．７ｍｇ）をＤＭＳＯ（１．１ｍｌ）に溶解し、ペプチド溶液に加えた。反応を分析用ＨＰＬＣにより追跡し、３時間後Gemini-NXカラム（１０×２５ｃｍ；５μｍ；Ｃ１８）を使用して、緩衝液Ａ（０．１％ＴＦＡ；ａｑ．）及び緩衝液Ｂの混合物の４ｍｌ／分流量で精製した。生成物を６０％〜５５％の緩衝液Ｂで４７分間直線勾配で溶出し、フラクションコレクターによって画分（２ｍｌ）を採取した。関連画分を分析用ＨＰＬＣとＭＳによって分析し、プールし、白色粉末（１８ｍｇ）となるまで凍結乾燥し、これを、分析用ＨＰＬＣによって８４％純度として分析した。質量はＭＳにより測定すると、４７７１．３５Ｄａであった（計算値４７７１．３１Ｄａ）。
【０１８３】
実施例３
化合物９［Ｇｌｕ９，Ｌｅｕ１４，Ｐｈｅ２５，Ｔｙｒ１３］エキセンジン−４（１〜２７）−ＱＱ−［Ｌｅｕ４］ガストリン６の合成
このペプチドは、上記したようにCEM Liberty Peptide Synthesizer上でTentaGel S Ram 樹脂（１．１０ｇ；０．２５ｍｍｏｌ／ｇ）とＦｍｏｃ化学を使用して、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ（ψ−Ｍｅ，Ｍｅ−Ｐｒｏ）−ＯＨを使用して合成した。未精製ペプチドをGemini-NXカラム（５×２５ｃｍ；１０μｍ；Ｃ１８）上で、緩衝液Ａ（０．１％ＴＦＡ；ａｑ．）及び緩衝液Ｂ（０．１％ＴＦＡ、９０％ＭｅＣＮ；ａｑ．）の混合物の３５ｍｌ／分流量で精製した。生成物を２０％〜５０％の緩衝液Ｂで４７分間直線勾配で溶出し、フラクションコレクターによって画分（９ｍｌ）を採取した。関連画分を分析用ＨＰＬＣとＭＳによって分析し、プールし、白色粉末（１３７ｍｇ）となるまで凍結乾燥し、これを、分析用ＨＰＬＣによって７８％純度として分析した。質量はＭＳにより測定すると、４２０８．１１Ｄａであった（計算値４２０８．０９Ｄａ）。
【０１８４】
実施例４
本発明のペプチドコンジュゲートによるＧＬＰ−１受容体とガストリンＣＣＫ−Ｂ受容体のインビトロ活性化（ＥＣ50）
材料と方法
ヒトＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ−１ Ｒ）有効性アッセイ：
本発明のペプチドコンジュゲートのインビトロ作用を、Perkin-ElmerからのFlashPlate（登録商標）cAMPキットを使用して、ＧＬＰ−１（７〜３６）、エキセンジン−４（１〜３９）、又は本発明のコンジュゲートによる受容体の刺激後、ｃＡＭＰの誘導を測定することにより、評価した。簡単に説明すると、ヒトＧＬＰ−１ Ｒ（ＧＬＰ−１ ＲのｃＤＮＡのトランスフェクションと安定なクローンの選択により作成された安定な細胞株）を発現するＨＥＫ２９３細胞を、０．０１％ポリリジンで被覆した９６ウェルマイクロタイタープレートに４０，０００細胞／ウェルで接種し、１００μｌの増殖培地［ＤＭＥＭ、１０％ＦＣＳ、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）］中で一晩培養して増殖させた。分析の日に、増殖培地を取り出し、細胞を２００μｌのタイロード緩衝液［タイロード塩（０．６ｇ／ｌ）、１０ｍＭヘペス、ｐＨ７．４］で１回洗浄した。細胞を、上昇する濃度の試験化合物、１００μMのＩＢＭＸ、及び０．１％のＢＳＡを含有する１００μｌのタイロード緩衝液中で、３７℃で１５分インキュベートした。２５μｌの０．５Ｍ ＨＣｌの添加により反応を停止させ、氷上で６０分インキュベートした。方法のさらなる詳細については、ＷＯ２００８／１５２４０３を参照されたい。
【０１８５】
ＣＣＫ−Ｂ受容体（ＣＣＫ−Ｂ Ｒ）有効性アッセイ：
本発明のペプチドコンジュゲートと対照のガストリン１７類似体［Ｌｅｕ１５］ガストリン１７のインビトロ作用を、ヒトＣＣＫ−Ｂ Ｒ（高親和性ガストリン受容体；ＣＣＫ−Ｂ ＲのｃＤＮＡのトランスフェクションと安定なクローンの選択により作成された安定な細胞株）を安定に発現するＨＥＫ２９３細胞中でｐ−ＥＲＫを測定して（AlphaScreen（登録商標）SureFire p-ERKアッセイを使用して）推定した。ガストリン受容体有効性アッセイ（AlphaScreen（登録商標）SureFire p-ERKアッセイ）は、以下のように行った：１日目に、ＣＣＫ−Ｂ Ｒを発現する細胞を、ポリ−Ｄ−リジンで被覆した９６ウェルプレートウェル中の１００μｌの増殖培地［ＤＭＥＭ、１０％ＦＣＳ、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）］中で２０，０００細胞／ウェルで接種した。細胞をインキュベーター（３７℃、５％ＣＯ2）中で２日間インキュベートした。次に増殖培地を、ウェル当たり８０μｌの無血清培地［ＤＭＥＭ、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）］に添加し、細胞のインキュベーションをインキュベーター中で一晩続けた。分析の日に、上昇する濃度で化合物を２０μｌの無血清培地に加え、細胞を室温で５分インキュベートした。プレートを素早く上下にひっくり返して刺激培地を捨て、６０μｌの１×溶解緩衝液（SureFireアッセイキットから）をウェルに加えた。さらなる詳細については、ＷＯ２０１１／１３４４７１を参照されたい。
【０１８６】
本発明のペプチドコンジュゲートを上記アッセイ（すなわち、ヒトＧＬＰ−１ Ｒ活性化有効性、ヒトＣＣＫ−Ｂ Ｒ活性化有効性）で試験した。
ヒトＧＬＰ−１受容体（ｈＧＬＰ−１ Ｒ）活性化アッセイ中の陽性対照としてエキセンジン−４（１〜３９）を使用し、ヒトＣＣＫ−Ｂ受容体（ｈＣＣＫ−Ｂ Ｒ）活性化アッセイの陽性対照としてｈ［Ｌｅｕ１５］ガストリン１７を使用した。
【０１８７】
結果（ＥＣ50値、ｎＭ）は、以下の表１に要約される。
【０１８８】
【表２】
0006359972.tif 000008
【０１８９】
結果
上記表１に要約した結果は、本発明のペプチドコンジュゲートが、問題の２つの受容体の強力なアゴニストであること、及びこれらが非常によく似たレベルの活性を示すことを、示す。
【０１９０】
実施例５
マウス中の選択された化合物の薬物動態（ＰＫ）
方法
Ｃ５７ＢｌＬ／６Ｊマウスに、試験すべき各ペプチドの１００ｎｍｏｌ／ｋｇを単回皮下投与した。５分後及び３０分後、そして１、２、４、６、１６、及び２４時間後に、血液試料を採取した。各時点で、２匹のマウスから試料を取った。採血後直ちに、マウスを頸椎脱臼により安楽死させた。固相抽出（ＳＰＥ）後、血漿試料を液体クロマトグラフィー質量スペクトル法（ＭＣ−ＭＳ／ＭＳ）により分析した。
【０１９１】
【表３】
0006359972.tif 000009
【０１９２】
実施例６
３週間のインビボｄｂ／ｄｂマウス試験
ｄｂ／ｄｂマウスは、可能性のある治療候補のβ−細胞保存作用を評価するために、すでに使用されている［Rolin, B. et al., Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 283: E745-E752 (2002)］。いくつかの試験が、膵臓インスリン含量とβ−細胞質量との相関を証明している［Rolin, B. et al. (前出); Suarez-Pinzon, W.L. et al., Diabetes 54: 2596-2601 (2005); Suarez-Pinzon W.L. et al., Diabetes 57: 3281-3288 (2008)］。
【０１９３】
処置
ｄｂ／ｄｂマウスを、ＨｂＡ１ｃレベルに従って種々の処置群に群分けした。マウスは、全部で２１日間の皮下（ＳＣ）注射で毎日１回処理した。注射容量は５ｍｌ／ｋｇであった。試験中、体重（ＢＷ）を毎日記録し、ペプチドの体重補正用量を投与するために使用した。
【０１９４】
ＯＧＴＴ
１６日目に、経口耐糖能試験を動物に行った。グルコース投与の前（ｔ＝０で、ベースライン）と投与後２時間まで、血中グルコースを測定した。
【０１９５】
終了
終了時に、血中グルコースを測定し、血液試料をＨｂＡ１ｃレベルについて分析した。
【０１９６】
測定
全血グルコース濃度（ｍＭ）を、固定化グルコースオキシダーゼ法により測定した（Elite Autoanalyser, Bayer, Denmark）。血液試料は、Cobas c111 analyzer (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) を使用してＨｂＡ１ｃについて分析した。
【０１９７】
結果
エキセンジン−ガストリン２重アゴニスト化合物１８と化合物２３は両方とも、１６日間の処置後、空腹時血中グルコースレベルを低下させた。化合物１８は、空腹時血中グルコースレベルを化合物２３より大きく低下させた。両方の化合物とも、３週間の処置後ＨｂＡ１ｃの血漿レベルを低下させたが、化合物間に有意差はなかった（対応の無い両側ｔ−検定）。
【０１９８】
化合物１８と化合物２３は両方とも、１６日目に経口グルコースチャレンジ（表３）後に曲線下のグルコース濃度曲線面積（ＡＵＣ）を低下させ、化合物１８はグルコース濃度を化合物２３より大きく低下させた。
【０１９９】
最後に、化合物１８と化合物２３の両方とも、試験（表３）の３週間のコース中、体重を低下させ、化合物１８は体重増加を化合物２３よりも大きく低下させた。
【０２００】
【表４】
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【０２０１】
表３の凡例：
デルタＨｂＡ１ｃ：ｄｂ／ｄｂマウスの２１日間の処置後の、ビヒクル、化合物１８（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）及び化合物２３（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）のＳＣ投与のデルタＨｂＡ１ｃ（％）レベルに対する作用（試験の開始時のＨｂＡ１ｃのレベルから試験の終了時のＨｂＡ１ｃのレベルを引く）。データは、平均とＳＥＭで示される（ｎ＝１１／群）。（−）は、デルタＨｂＡ１ｃレベルが０．５％を超えることを示し、（＋）はデルタＨｂＡ１ｃレベルが０．２５％〜０．５％であることを示し、（＋＋）は、デルタＨｂＡ１ｃレベルが０％〜０．２５％であることを示し、（＋＋＋）は、デルタＨｂＡ１ｃレベルが０％未満であることを示す。
【０２０２】
ＯＧＴＴ曲線下の面積（ＡＵＣ）：ｄｂ／ｄｂマウスの１６日間の処置後のグルコース負荷後の、ビヒクル、化合物１８（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）及び化合物２３（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）のＳＣ投与の、曲線下の面積（ＡＵＣ）で測定した耐糖能に対する作用。データは、平均とＳＥＭで示される（ｎ＝１１／群）。（−）は、ＯＧＴＴ ＡＵＣが３０００ｍＭ＊分を超えることを示し、（＋）はＯＧＴＴ ＡＵＣが２０００〜３０００ｍＭ＊分であることを示し、（＋＋）は、ＯＧＴＴ ＡＵＣが１０００〜２０００ｍＭ＊分であることを示し、（＋＋＋）は、ＯＧＴＴ ＡＵＣが１０００ｍＭ＊分未満であることを示す。
【０２０３】
デルタＢＷ：ｄｂ／ｄｂマウスの２１日間の処置後の、ビヒクル、化合物１８（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）及び化合物２３（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）のＳＣ投与のデルタＢＷ（ｇ）レベル（試験の開始時のＢＷから試験の終了時のＢＷを引く）に対する作用。データは、平均とＳＥＭで示される（ｎ＝９〜１１／群）。（−）は、デルタＢＷが８ｇより大きいことを示し、（＋）はデルタＢＷが６〜８ｇであることを示し、（＋＋）は、デルタＢＷが４〜６ｇであることを示し、（＋＋＋）は、デルタＢＷが４ｇ未満であることを示す。
【０２０４】
空腹時ＢＧ：ｄｂ／ｄｂマウスの１６日間の処置後の、ビヒクル、化合物１８（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）及び化合物２３（１００ｎｍｏｌ／ｋｇ）の空腹時血中グルコース（ｎＭ）レベルに対する作用。データは、平均とＳＥＭで示される（ｎ＝１１／群）。（−）は、空腹時ＢＧが１２ｍＭより大きいことを示し、（＋）は空腹時ＢＧが８〜１２ｍＭであることを示し、（＋＋）は、空腹時ＢＧが６〜８ｍＭであることを示し、（＋＋＋）は、空腹時ＢＧが６ｍＭ未満であることを示す。
【０２０５】
実施例７
インビボｄｂ／ｄｂマウス試験：４週間の処置後に２週間の休薬
処置
ｄｂ／ｄｂマウスを、ＨｂＡ１ｃレベルに従って種々の処置群に群分けした。マウスは、全部で４週間の皮下（ＳＣ）注射で毎日１回処理し、次にビヒクルを２週間投与した。注射容量は５ｍｌ／ｋｇであった。試験中、体重（ＢＷ）を毎日記録し、ペプチドの体重補正用量を投与するために使用した。
【０２０６】
ＯＧＴＴ
３週間と５週間後に、経口耐糖能試験を動物に行った。グルコース投与の前（ｔ＝０で、ベースライン）と投与後２時間まで、血中グルコースを測定した。
【０２０７】
測定
全血グルコース濃度（ｍＭ）は、固定化グルコースオキシダーゼ法により測定した（Elite Autoanalyser, Bayer, Denmark）。
【０２０８】
結果
エキセンジン−ガストリン２重アゴニスト化合物１８は、３週間の処置後、ビヒクルと比較して空腹時血中グルコースレベルを低下させた。化合物１８は、空腹時血中グルコースレベルを等モル用量のリラグルチドより大きく低下させた（図１を参照）。４週間の処置後に１週間の休薬（ビヒクル投与）をすると、化合物１８は、ビヒクルと比較して空腹時血中グルコースレベルを有意に低下させた。化合物１８は、等モル用量のリラグルチドより、空腹時血中グルコースレベルを大きく低下させた（図２を参照）。
【０２０９】
化合物１８は、３週間の処置後の経口グルコースチャレンジ後に曲線下のグルコース濃度曲線面積（ＡＵＣ）を低下させ、化合物１８はグルコース濃度曲線面積（ＡＵＣ）をリラグルチドより大きく低下させた（図３を参照）。
【０２１０】
４週間の処置後に１週間の休薬（ビヒクル投与）をすると、化合物１８は、経口グルコースチャレンジ後に曲線下のグルコース濃度曲線面積（ＡＵＣ）を、ビヒクルと比較して有意に低下させた（図４を参照）。化合物１８はグルコース濃度曲線面積（ＡＵＣ）を等モル用量のリラグルチドより大きく低下させた。
【０２１１】
最後に、化合物１８は、本試験の４週間のコース中、体重増加を低下させ、化合物１８は体重増加を等モル用量のリラグルチドよりも大きく低下させた（図５を参照）。
【０２１２】
実施例８
インビボＺＤＦラット試験：６週間の処置
処置
ＺＤＦラットを、ＨｂＡ１ｃレベルに従って種々の処置群に群分けした。ラットは、全部で６週間の皮下（ＳＣ）注射で毎日２回処理し、注射容量は５ｍｌ／ｋｇであった。試験中、体重（ＢＷ）を毎日記録し、ペプチドの体重補正用量を投与するために使用した。
【０２１３】
ＯＧＴＴ
５週間後に、経口耐糖能試験を動物に行った。グルコース投与の前（ｔ＝０で、ベースライン）と投与後２時間まで、血中グルコースを測定した。
【０２１４】
終了
終了時に、血液試料をＨｂＡ１ｃレベルについて分析した。
【０２１５】
測定
全血グルコース濃度（ｍＭ）は、固定化グルコースオキシダーゼ法により測定した（Elite Autoanalyser, Bayer, Denmark）。
血液試料は、Cobas c111 analyzer (Roche Diagnostics, Mannheim, Germany) を使用してＨｂＡ１ｃについて分析した。
【０２１６】
結果
エキセンジン−ガストリン２重アゴニスト化合物１８は、５週間の処置後、ビヒクルと比較して空腹時血中グルコースレベルを低下させた。化合物１８は、空腹時血中グルコースレベルを等モル用量のリラグルチドより大きく低下させた（図６を参照）。
【０２１７】
化合物１８は、５週間の処置後の経口グルコースチャレンジ後に曲線下のグルコース濃度曲線面積（ＡＵＣ）を低下させ、化合物１８はグルコース濃度曲線面積（ＡＵＣ）をリラグルチドより大きく低下させた（図７を参照）。
【０２１８】
６週間後、化合物１８は、ビヒクルと比較してＨｂＡ１ｃレベルを有意に低下させた。化合物１８は、等モル用量のリラグルチドよりも、ＨｂＡ１ｃレベルを大きく低下させた（図８を参照）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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