(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）抗原の、百日咳トキソイド（ＰＴ）と、線維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）と、２型および３型の線毛（ＦＩＭ）と、を含む無細胞百日咳（ａＰ）ワクチン組成物であって、
１０〜２５μｇ／ヒト用量のＰＴ及び１０〜２５μｇ／ヒト用量のＦＨＡを含み、ＦＩＭが１２〜１００μｇ／ヒト用量の量で存在する、無細胞百日咳（ａＰ）ワクチン組成物。
【請求項２】
ＦＩＭが１５〜６０μｇ／ヒト用量の量で存在する、請求項１に記載のａＰ組成物。
【請求項３】
ＦＩＭが２０〜６０μｇ／ヒト用量の量で存在する、請求項１または２に記載のａＰ組成物。
【請求項４】
ＦＩＭが２０〜５０μｇ／ヒト用量の量で存在する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のａＰ組成物。
【請求項５】
ＦＩＭが２０〜２５μｇ／ヒト用量の量で存在する、請求項１〜４のいずれか一項に記載のａＰ組成物。
【請求項６】
ペルタクチン（ＰＲＮ）をさらに含み、ＰＲＮが３〜８μｇ／ヒト用量の量で存在する、請求項１〜５のいずれか一項に記載のａＰワクチン組成物。
【請求項７】
ＰＴが遺伝学的に解毒されている、請求項１〜６のいずれか一項に記載のａＰワクチン組成物。
【請求項８】
Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）以外の１種以上の病原体に由来する抗原をさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
破傷風トキソイドとジフテリアトキソイドとを含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
ａ）ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈｅａｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）（Ｈｉｂ）オリゴ糖または多糖コンジュゲート、
ｂ）Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、および
ｃ）不活性化ポリオウイルス（ＩＰＶ）、の１つ以上を含む、請求項８または９に記載の組成物。
【請求項１１】
アジュバントをさらに含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記アジュバントが、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、またはそれらの組合せを含む、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
被験体にボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）に対するワクチン接種をするための医薬の製造のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１４】
ボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）のＰＲＮ陰性株の感染により引き起こされる百日咳から被験体を防御するための医薬の製造のための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘルスケアの分野に関する。より特定的には、無細胞百日咳ワクチンの分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
ボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）は、百日咳の原因因子である。１９４０年代における死滅全細胞Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（ｗＰ）ワクチンの導入により、子供および乳児において百日咳の罹患率および死亡率の低減に成功してきた［ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｖａｃｃｉｎｅｓ／ｐｕｂｓ／ｐｉｎｋｂｏｏｋ／ｄｏｗｎｌｏａｄｓ／ｐｅｒｔ．ｐｄｆ、Ｂｉｓｇａｒｄ，Ｋ．Ｍ．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｖａｃｃｉｎｅｓ／ｐｕｂｓ／ｐｅｒｔｕｓｓｉｓｇｕｉｄｅ／ｄｏｗｎｌｏａｄｓ／ｃｈａｐｔｅｒ１．ｐｄｆ．２０００、Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｋ．Ｍ．＆Ｄｅｃｋｅｒ，Ｍ．Ｄ．Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ（Ｐｌｏｔｋｉｎ，Ｓ．Ａ．，Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ，Ｗ．Ａ．＆Ｏｆｆｉｔ，Ｐ．Ａ．編）  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００８．４６７−５１７（この教科書は、これ以降では「Ｖａｃｃｉｎｅｓ，Ｐｌｏｔｋｉｎ  ２００８」として参照される）］。それにもかかわらず、世界中で、百日咳は、子供において重要な問題を残している。ＷＨＯによる推定値から、２００８年に約１６００万例の百日咳が発生し、この疾患が原因で約１９５，０００人の子供が死亡したことが示唆される。
【０００３】
１９９０年代以降、ｗＰワクチンは、ほとんどの高所得国で、より最近ではいくつかの中所得国で、無細胞百日咳（ａＰ）ワクチンに置き換えられてきた。高リスクの発熱（≧３８℃）、注射部位における反応原性、ならびにそれほどでもないが痙攣および筋緊張低下−反応性低下発作を伴うｗＰワクチンと比べて、無細胞百日咳ワクチンは、比較的少ない副作用を誘発する［Ｚｈａｎｇ，Ｃｏｃｈｒａｎｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｓｙｓｔ  Ｒｅｖ  ２０１１］。
【０００４】
ａＰワクチン導入の１０〜２０年後、米国、英国、オーストラリア、ノルウェー、およびオランダをはじめとするいくつかの国により、青年および成人における百日咳の届け出の上昇が報告されてきた。可能な説明としては、診断および調査の改善、ワクチンに対する循環Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株の順応、および／またはａＰワクチンに伴う漸減免疫の増加が挙げられる［Ｔａｎａｋａ，Ｊａｍａ  ２００３，２９０：２９６８−２９７５、Ｓａｔｏｈ，Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ２０１０，３３：ｅ８１−８８、Ｚｅｐｐ，Ｌａｎｃｅｔ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ２０１１、Ｄｅ  Ｇｒｅｅｆｆ，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１０，：ｅ１４１８３、Ｔａｎ，Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  Ｊ  ２００５，２４（５  Ｓｕｐｐｌ）：Ｓ１０−１８］。
【０００５】
現在、許可されたａＰワクチンはすべて、最小１つただしほとんどが複数の最大５つまでの（解毒された）Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）病原性因子からなる。ａＰワクチンはすべて、百日咳トキソイド（ＰＴ）を含有する。多成分ａＰワクチンは、少なくとも、ＰＴとＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）表面アドヘシン線維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）とを含む。価数の増加に伴って、アドヘシンペルタクチン（ＰＲＮ）ならびに２型および３型の線毛（ＦＩＭ２およびＦＩＭ３、本明細書ではまとめてＦＩＭまたはＦＩＭ２／３として参照される）がさらに１つ以上存在する［Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｉｎ：Ｖａｃｃｉｎｅｓ，Ｐｌｏｔｋｉｎ，２００８．４６７−５１７］。
【０００６】
国際公開第９６／３４８８３号パンフレットには、１〜１０μｇ／ヒト用量の量のＦＩＭが記載され、ａＰワクチンで１０および５μｇ／ヒト用量の用量が例示されているが、実際には５μｇ／ヒト用量の用量のみが試験され、試験ワクチンが有効であるとみなされたにすぎない。
【０００７】
ａＰ５ワクチン（５つの成分ＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、ＦＩＭ２／３を有する無細胞百日咳ワクチンであり、ＤＴａＰ５は、破傷風トキソイドおよびジフテリアトキソイドをさらに含むａＰ５ワクチンである）は、現在入手しうる最も有効なａＰワクチンであると一般に考えられている。市販の登録ａＰ５ワクチン中に存在するａＰ成分の個々の量は、（マイクログラム／ヒト用量単位で）ＰＴが２．５〜２０、ＦＨＡが５〜２０、ＰＲＮが３、かつＦＩＭが５である。
【０００８】
１９９０年代中期に欧州で行われた無細胞百日咳ワクチン有効性試験のいくつかでは、個々のａＰワクチン成分に対して防御の免疫相関因子を決定する努力がなされた。スウェーデンにおけるＤＴａＰ５（ＰＴ＋ＦＨＡ＋ＰＲＮ＋ＦＩＭ２／３）試験のデータを用いて、臨床的防御と、ＰＲＮ、ＦＩＭ２、およびＰＴに対するＩｇＧ抗体の暴露前の血清中の存在と、の間で統計的に有意な相関が実証されたが、ＦＨＡに対する相関は実証されなかった［Ｓｔｏｒｓａｅｔｅｒ，Ｖａｃｃｉｎｅ  １９９８，１６：１９０７−１９１６］。ＦＩＭ３は、ＤＴａＰ５内の非防御成分であると思われる［Ｐｏｏｌｍａｎ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ２００７，６：４７−５６］。
【０００９】
独国におけるワクチン試験で被験体から捕集された血清により、防御と相関するＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、およびＦＩＭ２に対する抗体の特異的レベルの推定が可能であったが、ＰＲＮおよびＰＴに対する抗体のみが、防御と有意に相関付けられたにすぎなかった［Ｓｔｅｈｒ，１９９８，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １０１：１−１１、Ｃｈｅｒｒｙ，１９９８，Ｖａｃｃｉｎｅ  １６：１９０１−１９０６］。それに加えて、前臨床研究から、ネズミ鼻腔内感染モデルにおいてＰＲＮの添加がＰＴとＦＨＡとを含有するワクチンにより付与される防護レベルを向上させること［Ｇｕｉｓｏ，１９９９，Ｖａｃｃｉｎｅ  １７：２３６６−２３７６；ＤｅＮｏｅｌ，２００５，Ｖａｃｃｉｎｅ  ２３：５３３３−５３４１］、およびＰＲＮに対する抗体がＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）のオプソニン食作用にきわめて重要であること［Ｈｅｌｌｗｉｇ，２００３，ＪＩＤ  １８８：７３８−７４２］が示されている。まとめると、これらのデータから、ＰＴおよびＰＲＮは、現在の無細胞百日咳ワクチン中の主要な防御抗原であることが示唆される。
【００１０】
プロスペクティブａＰワクチン有効性試験の一部として、参加者から得られた逐次血清サンプルで、ＰＴ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、およびＦＩＭ２／３に対する防御ＩｇＧを１８ヶ月間にわたり測定した。１８ヶ月間にわたり、ＰＴに対するＩｇＧの減衰パーセントが最も高く（幾何平均ＩｇＧ力価の７３％の低減）、ＰＲＮ、ＦＨＡ、およびＦＩＭに対する抗体の低減パーセントよりも有意に高かった。これとは対照的に、ＰＲＮに対するＩｇＧ抗体は、最も低い減衰率を有していた（幾何平均ＩｇＧ力価の５６％の低減）［Ｌｅ，２００４，ＪＩＤ，１９０：５３５−５４４］。
【００１１】
１）ＰＴおよびＰＲＮが、ａＰワクチン中の主要な防御抗原であり、かつ２）ＰＴに対する抗体が、ＰＲＮに対する抗体よりも有意に高い減衰率を有するという２つの観測結果を組み合わせると、抗ＰＲＮ抗体が、Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）感染に対するａＰ媒介長期防護を提供するうえできわめて重要であることが浮き彫りになる。
【００１２】
しかしながら、世界中で、たとえば、フランス、日本、オランダ、米国、フィンランド、ノルウェー、およびスウェーデンで、ＰＲＮを発現しないＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株の出現が、過去数年間観測されてきた［Ｂｏｕｃｈｅｚ，２００９，Ｖａｃｃｉｎｅ  ２７：６０３４−４１、Ｈｅｇｅｒｌｅ，２０１２，Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．１８：Ｅ３４０−３４６、Ｏｔｓｕｋａ，２０１２，ＰｌｏＳ  Ｏｎｅ  ７：ｅ３１９８５、Ａｄｖａｎｉ，２０１３，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏ  ５１：４２２−４２８］。米国における最近の研究から、２０１１年〜２０１２年の間にＰｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａで入院した子供の検体から培養されたＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）の１２個の単離株のうち１１個は、実際にＰＲＮ陰性であることが示された［Ｑｕｅｅｎａｎ，２０１３，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．３６８：５８３−４］。この株の順応が主にワクチン駆動であるかは、現在のところ、分かっていない。これらのＰＲＮ陰性株は、とくに抗ＰＴ力価が低下した場合、ワクチン誘導免疫を回避でき、このことが、Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）疾患の増加が観測されたことに寄与してきた可能性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
したがって、現在許可されている市販のａＰワクチンは、とくに新たに出現するＰＲＮ陰性株に対して、有効性が不十分であると思われる。とくにそのようなＰＲＮ陰性Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株に対して、改善された有効性を有するさらなるａＰワクチンの必要性が残っている。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、驚くべきことに、高用量のＦＩＭ２／３を含むａＰワクチンが、ＰＲＮ陰性Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株に対する有意に改善された防護を示すことを見いだした。本発明は、Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）抗原の、百日咳トキソイド（ＰＴ）と、線維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）と、２型および３型の線毛（ＦＩＭ）と、任意選択でペルタクチン（ＰＲＮ）と、を含む無細胞百日咳（ａＰ）ワクチン組成物を提供する。ここで、ＦＩＭは、１２〜１００μｇ／ヒト用量の量で存在する。
【００１５】
特定の実施形態では、ＦＩＭは、１５〜８０、１５〜６０、２０〜６０、もしくは１２〜５０、１５〜５０、２０〜５０、２０〜３０、２０〜２５、もしくは１２〜３０、もしくは１２〜２５、または約１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、もしくは２５μｇ／ヒト用量の量で存在する。
【００１６】
好ましい実施形態では、本発明に係るａＰワクチンは、ペルタクチン（ＰＲＮ）を含む。
【００１７】
特定の実施形態では、ＰＴは、遺伝学的に解毒される。
【００１８】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）以外の１種以上の病原体由来の抗原をさらに含む。
【００１９】
特定の実施形態では、組成物は、ａ）破傷風トキソイド、ｂ）ジフテリアトキソイド、ｃ）ｂ型ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）（Ｈｉｂ）オリゴ糖または多糖コンジュゲート、ｄ）Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢＳＡｇ）、およびｅ）不活性化ポリオウイルス（ＩＰＶ）の１つ以上を含む。特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、本発明に係る無細胞百日咳ワクチン組成物と、破傷風トキソイドと、ジフテリアトキソイドと、を含む。
【００２０】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、アジュバントをさらに含む。特定の実施形態では、アジュバントは、アルミニウム塩、たとえば、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、またはリン酸アルミニウムと水酸化アルミニウムの両方を含む。
【００２１】
本発明はまた、本発明に係る組成物を被験体に投与することを含む、被験体においてＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）に対する免疫反応を誘導するかまたは被験体にＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）に対するワクチンを接種する方法を提供する。
【００２２】
本発明はまた、本発明に係る組成物を被験体に投与することを含む、Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）のＰＲＮ陰性株の感染により引き起こされる百日咳から被験体を防御する方法を提供する。
【００２３】
本発明はまた、組成物を被験体に投与することにより、被験体においてＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）に対する免疫反応を誘導するのにまたは被験体にＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）に対するワクチンを接種するのに、使用するための、本発明に係る組成物を提供する。本発明はまた、組成物を被験体に投与することにより、被験体においてＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）に対する免疫反応を誘導するためのまたは被験体にＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）に対するワクチンを接種するための、医薬を調製するための、本発明に係る組成物を提供する。特定の実施形態では、免疫反応が望まれるＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）は、ＰＲＮ陰性株を含む。
【００２４】
本発明はまた、次のボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）抗原、すなわち、百日咳トキソイド（ＰＴ）と、線維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）と、２型および３型の線毛（ＦＩＭ）と、任意選択でペルタクチン（ＰＲＮ）と、を被験体に投与することを含む、ボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、任意選択で、ボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）のＰＲＮ陰性株に対するワクチンをヒト被験体に接種する方法を提供する。ここで、ＦＩＭは、１２〜１００μｇの量で投与される。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ＤＴａＰ５ワクチン（ａＰ５）またはａＰ５＋ＦＩＭを接種したマウスにおける鼻腔内チャレンジ後の０、２、５、および８日目のＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）の平均ｌｏｇ１０ＣＦＵ／肺。マウスに４および７週齢でワクチンを接種し、９週間でＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）の次の異なる株を鼻腔内にチャレンジした。ＷＨＯ１８３２３（図１Ａ）、臨床ＰＲＮ陰性単離株ＰＲＮ−ＳＴＯＰ（図１Ｂ）、および臨床ＰＲＮ陰性単離株ＰＲＮ−ＩＳ（図１Ｃ）。＊ｐ＜０．０５（ウィルコクソン正確検定を用いてａＰ５およびａＰ５＋ＦＩＭのワクチン接種後の各特定の時点の平均ｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数を比較する）。＃ｐ＜０．０１（共分散分析を用いてａＰ５およびａＰ５＋ＦＩＭのワクチン接種後の０日目〜８日目のｌｏｇ１０ＣＦＵ反応−時間プロファイルを比較する）。
【図２】４および７週齢で漸増量のＦＩＭが添加されたａＰ２ワクチンを１／１０ヒト用量で接種した９週間後にＰＲＮ陰性Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株Ｉ１９５をチャレンジしたマウスの肺の平均ｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数。詳細については実施例２を参照されたい。
【図３】４および７週齢で５μｇのＦＩＭが添加されたまたは添加されていないａＰ５ワクチンを１／１０ヒト用量で接種した９週間後にＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）の４つの株をチャレンジしてから５日後のマウスの肺の平均ｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数。詳細については実施例３を参照されたい。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明は、解毒されたボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）病原性因子、特定的には、百日咳トキソイド（ＰＴ）と、線維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）と、２型および３型の線毛（ＦＩＭ）と、任意選択でペルタクチン（ＰＲＮ）と、を含む組成物に関する。ここで、ＦＩＭは、１２〜１００μｇ／ヒト用量の量で存在する。そのような組成物は、無細胞百日咳（ａＰ）ワクチンとして使用可能であり、驚くべきことに、本明細書では現在入手可能なクラス最高のａＰ５ワクチンよりも有効であることが実証される。
【００２７】
特定的には、ＦＩＭの用量をこの成分に対してこれまでに記載された推奨投与量と比較して増加させると、市販のａＰ５ワクチンおよび他の市販のａＰワクチンと比較して、Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）の新たに出現するＰＲＮ陰性株に対するワクチンの有効性が改善される。これは、きわめて驚くべきことである。なぜなら、先行技術では、ＦＩＭ／ヒト用量の量を推奨の５μｇよりも増加させるという提案はなんらなされておらず、しかも、当技術分野では、この成分の量を増加させても有効性は改善されないという提案が実際になされているからである。
【００２８】
ワクチン中のＦＩＭの投与量を増加させる効果は、たとえば、ヒトモデルおよび動物モデルで研究されてきた。１７〜１９ヶ月齢の乳児では、１０μｇのＰＴ、５μｇのＦＨＡ、３μｇのＰＲＮ、および５μｇのＦＩＭ２／３を含むかまたはこれらの抗原すべてを２倍量で含むかのいずれかの２つの５成分ａＰワクチン間で、免疫化後の有害反応の頻度、抗体力価、または平均力価増加倍率に差は存在しないことが示された（Ｈａｌｐｅｒｉｎ，Ａｒｃｈ  Ｐｅｄｉ  Ａｄｏｌ  Ｍｅｄ  １９９４，１４８：１２２０−１２２４）。
【００２９】
動物モデルでは、異なる量のＦＩＭを含有する３種類の百日咳ワクチンをマウスに接種した時、体重、脾臓重量、末梢白血球数、および肺からのＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）のクリアランスに差は存在しないことが判明した（Ｍｏｒｏｋｕｍａ，Ｄｅｖｅｌ  Ｂｉｏｌ  Ｓｔａｎｄ  １９９１，７３：２２３−２３２）。
【００３０】
他の研究から、高用量（２０μｇ）または低用量（４μｇ）のいずれかの組換えＦＩＭ２またはＦＩＭ３を摂取したマウス間でＩｇＧ抗体レベルに差は存在しないことが示された。鼻腔内チャレンジの７日後、対照マウス、ＦＩＭ２のワクチンが接種されたマウス、またはＦＩＭ３のワクチンが接種されたマウスの肺の細菌負荷量に差は存在しなかった（Ｘｕ，ＢＭＣ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２００９，９：２７４−２８１）。
【００３１】
したがって、マウス鼻咽頭チャレンジモデルで高用量のＦＩＭを用いるとワクチン接種の有効性が増加するという本発明者らの知見は、きわめて驚くべきことである。
【００３２】
このように、先行技術では、ａＰワクチン中のＦＩＭの量を通常量よりも増加させると、新たに出現するＰＲＮ陰性突然変異株に対する有効性が改善されるという示唆も提案もなされていない。
【００３３】
本明細書で用いられる「ヒト用量」（ときには「単回ヒト用量」として参照される）とは、単回投与でヒトに投与されるワクチンの量を意味する。典型的には、この量は、０．１〜２ｍｌ、たとえば、０．２〜１ｍｌ、典型的には０．５ｍｌの量で存在する。したがって、指示量は、たとえば、マイクログラム／０．５ｍｌバルクワクチン単位の濃度で存在する。したがって、特定の実施形態では、（単回）ヒト用量は、０．５ｍｌに等しい。
【００３４】
市販されているまたは市販されていたいくつかのａＰワクチンの成分は、“Ｖａｃｃｉｎｅｓ．第５版Ｓ．Ｐｌｏｔｋｉｎ，Ｗ．Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ，Ｐ．Ｏｆｆｉｔ，２００８，第２１章第２節”Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ｖａｃｃｉｎｅｓ”，Ｋ．Ｍ．Ｅｄｗａｒｄｓ＆Ｍ．Ｄ．Ｄｅｃｋｅｒ．ｐ．４６７−５１７の表２１−３および２１−４（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。本発明に係るａＰワクチン組成物は、ＰＴとＦＨＡとＦＩＭ２／３と好ましくはＰＲＮとを含む。これらの成分は、種々の市販のａＰワクチン中の標準的成分であり、さまざまな製造業者から入手可能であり（たとえば、Ｖａｃｃｉｎｅｓ，Ｐｌｏｔｋｉｎ  ２００８の第２１章の表２１−３を参照されたい）、たとえば、Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ（Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から市販されている。本発明に係る組成物は、百日咳トキソイド（ＰＴ）としても知られる解毒された百日咳毒素を含む。ＰＴは、化学的または遺伝学的に解毒可能である。化学的解毒は、たとえば、さまざまな従来の化学的解毒方法のいずれか、たとえば、ホルムアルデヒド、過酸化水素、テトラニトロメタン、またはグルタルアルデヒドによる処理により、行われる。たとえば、解毒は、国際公開第９６／３４８８３号パンフレットの第１７頁および実施例３（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように行うことが可能である。特定の好ましい実施形態では、ＰＴは、遺伝学的に解毒される。これは、百日咳毒素の触媒サブユニットＳ１の酵素活性を不活性化するように百日咳毒素遺伝子に突然変異を起こすことにより行うことが可能であり、たとえば、米国特許第７，１４４，５７６号明細書、米国特許第７，６６６，４３６号明細書、および米国特許第７，４２７，４０４号明細書に記載されている。百日咳毒素を解毒するのにとくに有利な突然変異は、たとえば、米国特許第７，４２７，４０４号明細書（参照により本明細書に組み込まれる）に提供されている。とくに有利な実施形態は、Ｓ１サブユニット中の百日咳ホロ毒素アミノ酸配列のアミノ酸残基Ｇｌｕ１２９がＧｌｙにより置換（Ｅ１２９Ｇ）され、かつＡｒｇ９がＬｙｓにより置換（Ｒ９Ｋ）された百日咳毒素である（米国特許第７，４２７，４０４号明細書、Ｂｕａｓｒｉ，ＢＭＣ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２０１２，１２：６１）。そのような遺伝学的に解毒されたＰＴ（Ｅ１２９Ｇ、Ｒ９Ｋ）はまた、適宜、このＰＴの産生の増強を示す遺伝子工学操作された株から単離可能である［Ｂｕａｓｒｉ，２０１２，上掲］。遺伝学的に解毒された突然変異体を使用する利点は、解毒のために危険な化学物質をまったくもしくはそれほど使用する必要がないこと、ＰＴ抗原のエピトープの保存性が改善されること、したがって、それに対する免疫反応が良くなること、および／またはより少量の抗原をワクチンで使用可能であることである。他の実施形態では、ＰＴは、化学的に解毒される。化学的または遺伝学的に解毒されたＰＴは、ａＰワクチンで広範に使用されている（たとえば、Ｖａｃｃｉｎｅｓ，Ｐｌｏｔｋｉｎ  ２００８の第２１章の表２１−３を参照されたい）。ＰＴは、たとえば、国���公開第９６／３４８８３号パンフレットの第１６頁および実施例２（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように取得および精製が可能である。ＰＴはまた、たとえば、米国特許第５０８５８６２号明細書、国際公開第９６／３４６２３号パンフレット、米国特許第４７０５８６８号明細書、欧州特許第０３３６７３６号明細書、国際公開第９１１５５０５号パンフレット、欧州特許第０３０６３１８号明細書、欧州特許第０３２２５３３号明細書、欧州特許第０３９６９６４号明細書、欧州特許第０２７５６８９号明細書、国際公開第９１／１２０２０号パンフレット、欧州特許第０４２７４６２号明細書、国際公開第９８１９７０２号パンフレット、および米国特許第４７８４５８９号明細書（それぞれ参照により本明細書に組み込まれる）に記載の方法を用いて、取得可能である。
【００３５】
化学的または遺伝学的に解毒されたＰＴは、種々の供給業者から入手可能である。特定の実施形態では、本発明に係るワクチン中のＰＴの量は、２〜５０μｇ、５〜４０μｇ、１０〜３０μｇ、または２０〜２５μｇ／ヒト用量（典型的には０．５ｍｌ）である。
【００３６】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）の６９ｋＤの外膜タンパク質であるペルタクチン（ＰＲＮ）（したがって、ときには６９Ｋ抗原として参照される）を含む。ＰＲＮは、たとえば、国際公開第９６／３４８８３号パンフレットの第１８〜１９頁および実施例２（参照により本明細書に組み込まれる）に記載のように取得および精製が可能である。また、たとえば、欧州特許第０１６２６３９号明細書、欧州特許第０４８４６２１号明細書、米国特許第６４４４２１１号明細書、米国特許第５２７６１４２号明細書、米国特許第５１０１０１４号明細書、欧州特許第０３３６７３６号明細書、国際公開第９６／３４６２３号パンフレット、国際公開第９０／１６６５１号パンフレット、および国際公開第９０／５６０７６号パンフレット（いずれも参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように取得することも可能である。ＰＲＮはまた、たとえば、［Ｂｕａｓｒｉ，２０１２，上掲］に記載されるように、適宜、高レベルのＰＲＮを発現するように遺伝子工学操作されたＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株から単離することも可能である。
【００３７】
特定の実施形態では、本発明に係るワクチン中のＰＲＮの量は、０．５〜１００μｇ、１〜５０μｇ、２〜２０μｇ、３〜３０μｇ、５〜２０μｇ、または６〜１０μｇ／ヒト用量（典型的には０．５ｍｌ）である［たとえば、欧州特許第０９２８１９８号明細書を参照されたい］。
【００３８】
本発明に係る組成物は、気道の宿主腺毛上皮細胞へのＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）の接着に重要なＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）の主要な２３０ｋＤａアドヘシンでありかつ市販の多価ａＰワクチンの確立された成分である、線維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）を含む。ＦＨＡは、たとえば、国際公開第９６／３４８８３号パンフレットの第１７〜１８頁および実施例２（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように取得および精製が可能である。ＦＨＡはまた、たとえば、国際公開第９０１３３１３号パンフレット、欧州特許第０４８４６２１号明細書、国際公開第９６３４６２３号パンフレット、欧州特許第０３３６７３６号明細書、国際公開第９１１５５０５号パンフレット、米国特許第４７８４５８９号明細書、および国際公開第９００４６４１号パンフレット（いずれも参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように取得可能である。
【００３９】
特定の実施形態では、本発明に係るワクチン中のＦＨＡの量は、２〜５０μｇ、５〜４０μｇ、１０〜３０μｇ、または２０〜２５μｇ／ヒト用量（典型的には０．５ｍｌ）である。
【００４０】
本発明に係る組成物は、線毛２および３または凝集原２および３またはＡｇｇ２および３としても参照される線毛凝集原２および３を含む（本明細書では、混合物としてのＦＩＭ２とＦＩＭ３との組合せである、ＦＩＭ２およびＦＩＭ３としてまたは「ＦＩＭ」もしくは「ＦＩＭ２／３」として参照される）。典型的には、本発明に係る組成物では、ＦＩＭ２対ＦＩＭ３の重量比は、約１：３〜約３：１、たとえば、約１：１〜約３：１、たとえば、約１．５：１〜約２：１である。ＦＩＭの調製は、国際公開第９６／３４８８３号パンフレットの第１２〜１３頁および実施例２（参照により本明細書に組み込まれる）に詳細に記載されている。ＦＩＭはまた、たとえば、国際公開第９６３４６２３号パンフレット、米国特許第４７８４５８９号明細書、米国特許第６４７５７５４号明細書、欧州特許第０５５５８９４号明細書、国際公開第９８５８６６８号パンフレット、および国際公開第０２０７７６４号パンフレット（いずれも参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように取得可能である。
【００４１】
本発明に係るワクチン中のＦＩＭの量は、１２〜１００μｇ／ヒト用量（典型的には０．５ｍｌ）である。特定の実施形態では、この量は、１２〜５０μｇまたは１２〜３０μｇ／ヒト用量（典型的には０．５ｍｌ）である。本発明の好ましい実施形態では、ＦＩＭの量は、少なくとも１５μｇ／ヒト用量（典型的には０．５ｍｌ）である。特定の実施形態では、この量は、１５〜１００μｇ、１５〜８０μｇ、１５〜６０μｇ、１５〜５０μｇ、１５〜３０μｇ、または１５〜２５μｇ／ヒト用量（典型的には０．５ｍｌ）である。本発明の好ましい実施形態では、ＦＩＭの量は、少なくとも２０μｇ／ヒト用量（典型的には０．５ｍｌ）である。特定の実施形態では、この量は、２０〜１００μｇ、２０〜８０μｇ、２０〜６０μｇ、２０〜５０μｇ、２０〜３０μｇ、２０〜２５μｇ、または２５〜５０μｇ／ヒト用量（典型的には０．５ｍｌ）である。
【００４２】
ＦＩＭは、Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）から単離可能であるか、または組換え産生可能であるか、または、たとえば、Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ（Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｌｉｓｔｌａｂｓ．ｃｏｍ，オンラインカタログの製品番号１８６）から市販品として入手可能である。
【００４３】
特定の好ましい実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ヒト用量あたり（または０．５ｍｌバルクワクチンあたり）、１０〜２５μｇのＰＴと、１０〜２５μｇのＦＨＡと、３〜８μｇのＰＲＮと、１２〜５０μｇのＦＩＭと、を含む。特定の好ましい実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ヒト用量あたり（または０．５ｍｌバルクワクチンあたり）、２０〜２５μｇのＰＴと、２０〜２５μｇのＦＨＡと、３〜８μｇのＰＲＮと、１２〜５０μｇのＦＩＭと、を含む。特定の好ましい実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ヒト用量あたり（または０．５ｍｌバルクワクチンあたり）、２０〜２５μｇのＰＴと、２０〜２５μｇのＦＨＡと、３〜８μｇのＰＲＮと、１２〜２５μｇのＦＩＭと、を含む。特定の実施形態では、本発明は、ヒト用量あたり（または０．５ｍｌバルクワクチンあたり）、約２０μｇのＰＴと、約２０μｇのＦＨＡと、約３μｇのＰＲＮと、約１５〜２０μｇのＦＩＭと、を含むワクチンを提供する。
【００４４】
本発明に係るワクチンを調製する単純な一方法は、市販のａＰ５ワクチンに市販のＦＩＭを添加することである。本発明に係るワクチンはまた、ＰＴとＦＨＡとを含むがＦＩＭを含まない市販のａＰワクチン（ａＰ２）、またはＰＴとＦＨＡとＰＲＮとを含むがＦＩＭを含まない市販のａＰワクチン（ａＰ３）に、ＦＩＭを添加することにより、単純に調製可能である。特定の実施形態では、所望により、最初に、アジュバント、たとえば、水酸化アルミニウムおよび／またはリン酸アルミニウムに、ＦＩＭを吸着させ、その後、他方成分に添加しうる。他の実施形態では、ＦＩＭは、アジュバント化への事前の吸着を行うことなく他の成分に添加される。
【００４５】
本開示で用いられる数値に対する「約」という用語は、その値±１０％を意味する。
【００４６】
本発明に係る組成物は、特定の実施形態では、たとえば、組合せワクチンを取得すべく非百日咳タンパク質成分をも含みうる［Ｄｅｃｋｅｒ，Ｍ．Ｄ．，Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｋ．Ｍ．＆Ｂｏｇａｅｒｔｓ，Ｈ．Ｈ．Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ（Ｐｌｏｔｋｉｎ，Ｓ．，Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ，Ｗ．Ａ．＆Ｏｆｆｉｔ，Ｐ．Ａ．編）Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００８．１０６９−１１０１］。したがって、特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）以外の１種以上の病原体から得られる抗原をさらに含みうる。特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、次のもの、すなわち、破傷風トキソイド（ＴＴ）、ジフテリアトキソイド（ＤＴ）、ｂ型ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）オリゴ糖または多糖コンジュゲート（Ｈｉｂ）、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、不活性化ポリオウイルス（ＩＰＶ）の１つ以上を含む。
【００４７】
そのような非百日咳成分を有するａＰの組合せワクチンは、公知であり、広範に使用されている。組合せワクチンの調製は、たとえば、国際公開第２０１０／０４６９３５号パンフレット、米国特許第６０１３２６４号明細書、国際公開第２００７／０５４８２０号パンフレット、国際公開第９８／０００１６７号パンフレット、および欧州特許第１９４６７６９号明細書（すべて参照により組み込まれる）に記載されている。
【００４８】
特定の実施形態では、本発明に係るａＰ５（またはａＰ４：ＰＴ、ＦＨＡ、ＦＩＭ２／３）は、ＤＴおよびＴＴをさらに含む組成物で存在し、したがって、本発明に係るＤＴａＰ５（またはＤＴａＰ４）ワクチンを提供する。ＤＴａＰ５ワクチンは、ジフテリア、破傷風、および百日咳を予防するために広範に使用されている。本発明に係るワクチンは、以前に記載のＤＴａＰ５ワクチンよりも多量のＦＩＭを有し、従来のＤＴａＰ５ワクチンよりもＰＲＮ陰性Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株に対して有効である。
【００４９】
ＤＴの単離、精製、および解毒を行う一方法は、国際公開第９６／３４８８３号パンフレットの第３３〜３４頁（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ＤＴはまた、たとえば、米国特許第４７０９０１７号明細書、米国特許第５８４３７１１号明細書、米国特許第５６０１８２７号明細書、米国特許第５９１７０１７号明細書、および国際公開第９６／３４６２３号パンフレット（すべて参照により組み込まれる）に記載されるように取得可能である。
【００５０】
ＴＴの単離、精製、および解毒を行う一方法は、国際公開第９６／３４８８３号パンフレットの第３４〜３６頁（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ＴＴはまた、たとえば、欧州特許第０２０９２８１号明細書、欧州特許第０４７８６０２号明細書、および国際公開第９６／３４６２３号パンフレット（すべて参照により組み込まれる）に記載されるように取得可能である。
【００５１】
Ｈｉｂオリゴ糖または多糖コンジュゲートは、たとえば、国際公開第２００７／０５４８２０号パンフレット、国際公開第２００４／１１０４８０号パンフレット、米国特許第６３３３０３６号明細書、国際公開第２０１０／０４６９３５号パンフレット、米国特許第４３７２９４５号明細書、米国特許第４４７４７５７号明細書、国際公開第９５／０８３４８号パンフレット、国際公開第２０１０／０４６９３５号パンフレット、米国特許第４６７３５７４号明細書、欧州特許第０１６１１８８号明細書、欧州特許第０２０８３７５号明細書、および欧州特許第０４７７５０８号明細書（すべて参照により組み込まれる）に記載されるように取得可能である。Ｈｉｂ抗原は、たとえば、Ｈｉｂの莢膜多糖、またはこの多糖もしくはその誘導オリゴ糖と、担体タンパク質、たとえば、ＤＴ、ＴＴ、もしくはＣＲＭ１９７（コリネバクテリウム・ジフテリア（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）Ｃ７（ｂ１９７）から単離されたジフテリア毒素の非毒性変異体）と、のコンジュゲートでありうる。
【００５２】
ＨＢｓＡｇは、たとえば、欧州特許第０２２６８４６号明細書、欧州特許第０２９９１０８号明細書、米国特許第６０１３２６４号明細書、国際公開第２００７／０５４８２０号パンフレット、国際公開第２０１０／０４６９３５号パンフレット、および国際公開第９３２４１４８号パンフレット（すべて参照により組み込まれる）に記載されるように取得可能である。
【００５３】
ＩＰＶは、１つのタイプのポリオウイルス（１型、２型、もしくは３型）を含有する１価、（２つのタイプのポリオウイルス、たとえば、１型と２型、１型と３型、または２型と３型を含有する）２価、または（３つのタイプのポリオウイルス、すなわち、１型と２型と３型を含有する）３価でありうる。好ましくは、本発明に係るＩＰＶは、不活性化ポリオウイルスの１型、２型、および３型を含有する。ＩＰＶは、たとえば、米国特許第４５２５３４９号明細書および国際公開第２０１１／００６８２３号パンフレット（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように取得可能である。
【００５４】
これらの非百日咳成分は、種々の製造業者から入手可能である。例は、［“Ｖａｃｃｉｎｅｓ．”第５版Ｓ．Ｐｌｏｔｋｉｎ，Ｗ．Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ，Ｐ．Ｏｆｆｉｔ，２００８，第３８章第２節（“Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｖａｃｃｉｎｅｓ”，Ｍ．Ｄ．Ｄｅｃｋｅｒ，Ｋ．Ｍ．Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｈ．Ｈ．Ｂｏｇａｅｒｔｓ，ｐ１０６９−１１０１）］に記載されている。
【００５５】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、以上に記載の実施形態のいずれか１つに記載の百日咳成分を含む組成物（ａＰ５またはａＰ４ワクチン）（すなわち、１２〜１００μｇのＦＩＭ／ヒト用量と、ＰＴと、ＦＨＡと、任意選択でＰＲＮと、を含み、これ以降では、「本発明に係るａＰ」または簡潔さを期して「ａＰ５＊」として参照される）と、ＤＴと、を含む。
【００５６】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、本発明に係るａＰとＴＴとを含む。
【００５７】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、本発明に係るａＰとＩＰＶとを含む（本明細書では「ａＰ５＊−ＩＰＶ」として参照される）。
【００５８】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、本発明に係るａＰとＤＴとＴＴとを含む（本明細書では「ＤＴａＰ５＊」として参照される）。
【００５９】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、本発明に係るａＰとＤＴとＴＴとＨｉｂとを含む（本明細書では「ＤＴａＰ５＊−Ｈｉｂとして参照される）。
【００６０】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、本発明に係るａＰとＤＴとＴＴとＩＰＶとを含む（本明細書では「ＤＴａＰ５＊−ＩＰＶ」として参照される）。
【００６１】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、本発明に係るａＰとＤＴとＴＴとＨＢＳＡｇとを含む（本明細書では「ＤＴａＰ５＊−ＨｅｐＢ」として参照される）。
【００６２】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、本発明に係るａＰとＤＴとＴＴとＨｉｂとＨＢＳＡｇとを含む（本明細書では「ＤＴａＰ５＊−Ｈｉｂ−ＨｅｐＢ」として参照される）。
【００６３】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、本発明に係るａＰとＤＴとＴＴとＨｉｂとＩＰＶとを含む（本明細書では「ＤＴａＰ５＊−Ｈｉｂ−ＩＰＶ」として参照される）。
【００６４】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、本発明に係るａＰとＤＴとＴＴとＨＢＳＡｇとＩＰＶとを含む（本明細書では「ＤＴａＰ５＊−ＨｅｐＢ−ＩＰＶ」として参照される）。
【００６５】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、本発明に係るａＰとＤＴとＴＴとＨｉｂとＨＢＳＡｇとＩＰＶを含む（本明細書では「ＤＴａＰ５＊−Ｈｉｂ−ＨｅｐＢ−ＩＰＶ」として参照される）。
【００６６】
任意選択で、さらなる非百日咳成分、たとえば、髄膜炎菌および／または肺炎球菌に由来する抗原など、組合せワクチンでａＰと組み合わされることのある成分を添加しうる。
【００６７】
組合せワクチンでは、非百日咳成分の量は、さまざまでありうる。一般的には、個別ワクチンまたは組合せワクチンに典型的に存在するこれらの成分の量を本発明に従って使用することが可能である。たとえば、種々の成分および組合せワクチンについては、“Ｖａｃｃｉｎｅｓ．”第５版Ｓ．Ｐｌｏｔｋｉｎ，Ｗ．Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ，Ｐ．Ｏｆｆｉｔ，２００８，第２節を参照されたい。とくに、第３８章には、ａＰワクチンと上述した成分とを含む組合せワクチンが記載されており［Ｄｅｃｋｅｒ，ｐｐ１０６９−１１０１］、第１０章には、ＤＴが記載されており［Ｖｉｔｅｋ，ｐｐ１３９−１５６］、第３１章には、ＴＴが記載されており［Ｗａｓｓｉｌａｋ，ｐｐ８０５−８４０］、第２５章には、ＩＰＶワクチンが記載されており［Ｐｌｏｔｋｉｎ，ｐｐ６０５−６３０］、第１１章には、Ｈｉｂワクチンが記載されており［Ｃｈａｎｄｒａｎ，ｐｐ１５７−１７６］、そして第１３章には、Ｂ型肝炎ワクチンが記載されている（ＨＢｓＡｇに基づく）［Ｍａｓｔ，ｐｐ２０５−２４２］（すべて参照により組み込まれる）。用量あたりの抗原の好適量の例（ＤＴおよびＴＴの量をＩＵ単位またはＬｆ単位（凝集単位）で表すこともまた、一般的であるが（たとえば、［Ｄｅｃｋｅｒ，Ｉｎ：Ｖａｃｃｉｎｅｓ，ｐｐ１０６９−１１０１，上掲］を参照されたい）、ここでは、マイクログラムで表す）は、たとえば、１〜１００μｇ、たとえば、２〜４０μｇ、たとえば、６〜２５μｇ、たとえば、１５〜２５μｇのＤＴ、１〜５０μｇ、たとえば、２〜２０μｇ、たとえば、５〜１０μｇのＴＴ、１〜１００μｇ、たとえば、３〜４０μｇのＨＢｓＡｇタンパク質／ミリリットル、０．１〜１００μｇ、たとえば、０．２〜５０μｇ、たとえば、１〜２５μｇ、たとえば、２〜１０μｇの、担体タンパク質にコンジュゲートされた形態のＨｉｂ莢膜多糖またはそのオリゴ糖であろう。ただし、これらに限定されるものではない。野生型由来ＩＰＶ含有産物（ｗｔ−ＩＰＶ）は、一般的には、１型、２型、および３型のポリオウイルスに対して、それぞれ、４０−８−３２Ｄ抗原単位／用量を含有するように製剤化される。しかしながら、これらの量もまた、変化させることが可能であり、たとえば、１型のＩＰＶに対して１０〜２０Ｄ抗原単位などのより少ない量を使用することが可能であり、２型および３型のＩＰＶに対しても、量を変化させることが可能である（たとえば、欧州特許第２０６６３４４号明細書を参照されたい）。
【００６８】
また、意図される使用に従って、量を変化させることが可能であり、たとえば、特定の実施形態では、ブースターワクチンは、プライムワクチンよりも少ない単位の特定の成分を含有しうる。本発明に係る組成物中のタンパク質成分は、適格被験体への投与時に免疫反応を誘導することが意図される。タンパク質またはその突然変異体、たとえば、トキソイドが本明細書で参照される場合、常に、タンパク質の一部もまた使用可能であり、免疫反応の誘導に関して等価な性質またはいくつかの場合には好ましい性質を有しうることは、当業者には明らかであろう。さらに、タンパク質は、（追加の）突然変異、たとえば、欠失、挿入、置換などを含有しうる。したがって、指示タンパク質成分の免疫原性フラグメントおよび変異体は、本明細書の指示タンパク質の意味に含まれる。
【００６９】
本発明に係る組成物は、適格被験体への投与時に組成物中の１つ以上の成分に対する免疫反応を発生する無細胞百日咳ワクチンとしてまたは組合せワクチンの成分として、使用可能である。免疫反応は、細胞性反応および／または体液性反応を含みうる。そのような免疫反応は、好ましくは、病原体の感染に対してもしくは疾患に対して防御を行うか、またはそれぞれの成分が由来する病原体により引き起こされる症状の重症度を少なくとも低減する（すなわち、いずれの場合も、好ましくは、Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）に対して、好ましくは、そのＰＲＮ陰性突然変異株に対しても）。したがって、本発明に係る組成物は、好適には、ワクチンとして参照可能である。ワクチンの用量とは、被験体への単回投与で投与される量のことである。被験体は、好適には、動物またはヒトでありうる。また、特定の好ましい実施形態では、被験体は、ヒトである。多くのワクチンは、好適には、実際には好ましくは、個体においてブースト効果を得るのに十分な時間間隔で、たとえば、少なくとも４週間、数年間、約２０年間までの投与間の間隔で、同一個体に２回以上投与される。ナイーブ乳児に対しては、通常、複数回の免疫が施される。本発明に係る組成物はまた、２回以上投与されうる。たとえば、一実施形態では、少なくとも４週間の間隔で、たとえば、１ヶ月間または２ヶ月間の各投与間の間隔で、２回、３回、またはそれ以上の回数で、投与されうるが、これに限定されるものではない。一例は、ＥＰＩスケジュールに基づく６週齢、１０週齢、および１４週齢での投与であるが、これに限定されるものではないである。他のレジメンは、２ヶ月齢、４ヶ月齢、６ヶ月齢であろう。特定の実施形態では、ブースターワクチン接種は、１０〜２０年後、たとえば、青年期に、施される。さらに、１０年ごとのブースターワクチン接種が施されうる。特定の実施形態では、本発明に係るａＰは、生後１年目に２回または３回投与され、生後２年目にさらなるブーストが投与され、４〜５歳でさらなるブースターが投与され、その後、約１２歳で青年期ブーストが投与される。また、Ｔｄ（青年に施されるＴＴ−ＤＴ含有ワクチン）ブースター推奨基準に従いうる。すなわち、１０年間ごと行い、無細胞百日咳成分が本発明に係るａＰであるＴｄａｐでＴｄを置き換えうる。しかしながら、異なる国家当局による市販のａＰワクチンの免疫スケジュール（レジメン）が多種多様であることから明らかなように、好適には、本発明に係るａＰワクチンのワクチン接種スキームを変化させうることは、当業者には明らかであろう（たとえば、表２１−５，“Ｖａｃｃｉｎｅｓ．”第５版．Ｓ．Ｐｌｏｔｋｉｎ，Ｗ．Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ，Ｐ．Ｏｆｆｉｔ，２００８，第２１章第２節“Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ｖａｃｃｉｎｅｓ”，Ｋ．Ｍ．Ｅｄｗａｒｄｓ＆Ｍ．Ｄ．Ｄｅｃｋｅｒ．ｐ．４６７−５１７）。
【００７０】
本発明に係る組成物はまた、他のワクチンによりすでにワクチン接種された集団に対するブースターワクチンとしても、好適に使用されうる。他のワクチンは、本発明に係るワクチンとは異なる組成のｗＰもしくはａＰワクチン、または本発明に係るワクチンとは異なる組成のｗＰもしくはａＰを含む組合せワクチンである。そのようなブースターは、たとえば、１０年間を超えてＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）に対するワクチンが接種されていない成人または高齢者のワクチン接種にも使用されうる。そのようなブースターワクチン接種を、たとえば、５年ごと、１０年ごと、または１５年ごとに約１回繰り返すことが有用でありうる。また、以前のＴｄａｐ履歴に関係なく、妊娠するたびに妊婦に破傷風トキソイド、弱毒化ジフテリアトキソイド、および無細胞百日咳ワクチン（Ｔｄａｐ）を投与することが推奨されてきた。特定の実施形態では、本発明に係るａＰは、たとえば、ａＰとしてまたはＴｄａｐとして、乳児、子供、青年、成人、高齢者、または妊婦に投与される。
【００７１】
本発明に係る組成物は、医薬組成物である。そのような組成物は、本発明に係る組成物と、典型的には薬学的に許容可能な担体または賦形剤と、を含む。本発明との関連では、「薬学的に許容可能」という用語は、担体または賦形剤が、利用した投与量および濃度で、投与された被験体において望ましくない影響や有害な影響を引き起こさないことを意味する。そのような薬学的に許容可能な担体および賦形剤は、当技術分野で周知である［Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ．Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｓｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ  １９９０、Ｆｒｏｋｊａｅｒ，Ｓ．＆Ｈｏｖｇａａｒｄ，Ｌ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，２０００、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  ２０００］。組成物は、好ましくは、無菌溶液として製剤化され投与される。無菌溶液は、無菌濾過によりまたは当技術分野でそれ自体公知の他の方法により、調製される。次いで、その溶液を凍結乾燥可能であるか、または医薬投与容器中に充填可能である。溶液のｐＨは、一般的には、ｐＨ３．０〜９．５、たとえば、ｐＨ５．０〜７．５の範囲内である。組成物の成分は、典型的には、好適な薬学的に許容可能な緩衝剤を有する溶液中に存在し、溶液はまた、塩を含有しうる。特定の実施形態では、界面活性剤が存在する。特定の実施形態では、ワクチンは、注射用製剤の形態に製剤化されうる。これらの製剤は、有効量のタンパク質成分を含有し、無菌の液体溶液、液体懸濁液、または凍結乾燥物のいずれかであり、任意選択で、安定化剤または賦形剤を含有する。ａＰワクチンまたは組合せワクチンの貯蔵および医薬投与に好適な製剤のいくつかの例は、公知である（たとえば、［”Ｖａｃｃｉｎｅｓ．”第５版．Ｓ．Ｐｌｏｔｋｉｎ，ｅｔ  ａｌ，上掲］の表２１−３および２１−４）。好適な希釈剤の例は、ＰＢＳまたは生理食塩水である。任意選択で、保存剤、たとえば、フェノキシエタノール、チメロサール、またはパラベンが存在しうる。保存剤が存在する場合、好ましくは、低レベルで存在する。組合せワクチンがＩＰＶを含む場合、チメロサールの使用は、好ましくは、回避される。なぜなら、チメロサールは、ＩＰＶ成分の効力の喪失を引き起こすおそれがあるからである（たとえば、Ｓａｗｙｅｒ  ＬＡ，１９９４，Ｖａｃｃｉｎｅ  １２：８５１−８５６、欧州特許第２０６６３４４号明細書を参照されたい）。任意選択で微量成分として存在しうるさらなる成分は、ポリソルベート−８０、ゼラチン、および化学的トキソイド化のレムナント（たとえば、ＰＴが化学的トキソイド化される場合）、たとえば、グルタルアルデヒド、ホルムアルデヒドである。
【００７２】
好ましくは、本発明に係るワクチンは、２〜８℃で貯蔵される。
【００７３】
特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、１種以上のアジュバントをさらに含む。適用される抗原決定基に対する免疫反応をさらに増加させるアジュバントは、当技術分野で公知である（たとえば、アジュバントに関するレビューについては、Ｍｏｎｔｏｍｏｌｉ，２０１１，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  １０：１０５３−１０６１を参照されたい）。好適なアジュバントの例としては、アルミニウム塩、たとえば、水酸化アルミニウムおよび／またはリン酸アルミニウム、油エマルジョン組成物（または水中油型組成物）、たとえば、スクアレン−水エマルジョンを含めて、ＭＦ５９など（たとえば、国際公開第９０／１４８３７号パンフレットを参照されたい）、サポニン配合物、たとえば、ＱＳ２１および免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）など（たとえば、米国特許第５，０５７，５４０号明細書、国際公開第９０／０３１８４号パンフレット、国際公開第９６／１１７１１号パンフレット、国際公開第２００４／００４７６２号パンフレット、国際公開第２００５／００２６２０号パンフレットを参照されたい）、トール様レセプター（ＴＬＲ）アゴニスト、たとえば、ＴＬＲ７アゴニスト（たとえば、国際公開第２０１２／１１７３７７号パンフレット、第１５〜１８頁などを参照されたい）、たとえば、ＴＬＲアゴニストが吸着されうる水酸化アルミニウムなどのアルミニウム塩との組合せ、細菌または微生物の誘導体、たとえば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）、ＣｐＧモチーフ含有オリゴヌクレオチド、ＡＤＰリボシル化細菌毒素またはその突然変異体、たとえば、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）熱不安定性エンテロトキシンＬＴ、コレラ毒素ＣＴなどが挙げられる。たとえば、ＰＴおよび破傷風トキソイドはまた、特有のアジュバント性を有する。特定の実施形態では、本発明に係る組成物は、０．０５〜５ｍｇ、たとえば、０．０７５〜１．０ｍｇのアルミニウム含有量／用量の濃度で、たとえば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、リン酸カリウムアルミニウム、またはそれらの組合せの形態で、アジュバントとしてアルミニウムを含む。
【００７４】
他の実施形態では、本発明で使用される組成物は、さらなるアジュバントを含まない。
【００７５】
好ましくは、本発明に係るワクチン組成物は、アジュバントを含む。特定の好ましい実施形態では、アジュバントは、アルミニウム塩、たとえば、リン酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、またはそれらの組合せである。好ましくは、ａＰ抗原の１つ以上またはすべてが、アルミニウム塩上に吸着される。他の抗原もまた、アルミニウム塩上に吸着されうる。特定の実施形態では、ａＰ抗原の１つ以上またはすべて（ＰＴ、ＦＨＡ、ＦＩＭ、存在する場合ＰＲＮ）が、水酸化アルミニウム上に吸着される。特定の実施形態では、ａＰ抗原の１つ以上またはすべて（ＰＴ、ＦＨＡ、ＦＩＭ、存在する場合ＰＲＮ）が、リン酸アルミニウム上に吸着される。ａＰワクチンおよびアルミニウム塩とのａＰ組合せワクチンの製剤は、たとえば、［Ｄｅｎｏｅｌ，２００２，Ｖａｃｃｉｎｅ  ２０：２５５１−２５５５］に記載されている。典型的には、個々の成分は、アルミニウム塩上に個別に吸着され、その後、成分は、混合されてワクチン製剤を形成する。また、これにより、特定の成分が、第１のアルミニウム塩［たとえば、Ａｌ（ＰＯ）４］上に吸着され、一方、他の成分が第２のアルミニウム塩［たとえば、Ａｌ（ＯＨ）３］上に吸着されたワクチンを調製することが可能である。また、組合せワクチンの他の成分は、アルミニウム塩上に吸着されうる。たとえば、ＤＴおよびＴＴは、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムまたはこれらの組合せ上に吸着されうる。ＤＴおよびＴＴの成分は、ａＰ成分と同一のまたは異なるアルミニウム塩に吸着されうる。価数を増加させた組合せワクチンのさらなる成分もまた、アルミニウム塩上に吸着されうる。たとえば、ＨＢｓＡｇ、Ｈｉｂ、および／またはＩＰＶは、アルミニウム塩上に吸着されることもあれば、吸着されないこともある。特定の好ましい実施形態では、組合せワクチンがＨＢｓＡｇを含む場合、ＨＢｓＡｇは、リン酸アルミニウム上に吸着される（たとえば、国際公開第９３／２４１４８号パンフレットを参照されたい）。組合せワクチンにＨｉｂが含まれ、かつ特定の他の成分、たとえば、ＤＴ、ＴＴ、またはａＰの１つ以上が、水酸化アルミニウム上に吸着される場合、干渉のリスク（Ｈｉｂ成分の有効性の低減）は、たとえば、Ｈｉｂをリン酸アルミニウム上に吸着させることにより、またはアルミニウムアジュバント上に吸着されないＨｉｂを使用して、Ｈｉｂを同時に（すなわち、投与直前に）添加するか、または国際公開第９９／４８５２５号パンフレットに詳細に記載されるように、水酸化アルミニウムアジュバントがあらかじめ飽和されるようにアジュバント水酸化アルミニウム上に吸着された他の成分と混合して、これを他の成分と組み合わせることにより、低減されうる。したがって、当業者であれば、本発明に係る組合せワクチンを好適に製剤化する種々の方法に気付く。
【００７６】
特定の実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ＰＴと、ＦＨＡと、ＦＩＭ２／３と、水酸化アルミニウムと、任意選択でＰＲＮと、を含む。特定の実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ＰＴと、ＦＨＡと、ＦＩＭ２／３と、リン酸アルミニウムと、任意選択でＰＲＮと、を含む。特定の実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ＰＴと、ＦＨＡと、ＦＩＭ２／３と、水酸化アルミニウムと、リン酸アルミニウムと、任意選択でＰＲＮと、を含む。特定の実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ＤＴａＰ５＊と、水酸化アルミニウムと、を含む。特定の実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ＤＴａＰ５＊と、リン酸アルミニウムと、を含む。特定の実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ＤＴａＰ５＊と、水酸化アルミニウムと、リン酸アルミニウムと、を含む。特定の実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ａＰ５＊−ＩＰＶと、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムと、を含む。特定の実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ＤＴａＰ５＊−ＩＰＶと、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムと、を含む。特定の実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ＤＴａＰ５＊−Ｈｉｂと、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムと、を含む。特定の実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ＤＴａＰ５＊−ＨｅｐＢと、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムと、を含む。特定の実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ＤＴａＰ５＊−Ｈｉｂ−ＨｅｐＢと、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムと、を含む。特定の実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ＤＴａＰ５＊−Ｈｉｂ−ＩＰＶと、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムと、を含む。特定の実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ＤＴａＰ５＊−ＨｅｐＢ−ＩＰＶと、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムと、を含む。特定の実施形態では、本発明に係るワクチン組成物は、ＤＴａＰ５＊−Ｈｉｂ−ＨｅｐＢ−ＩＰＶと、水酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムと、を含む。
【００７７】
本発明に係る組成物の投与は、標準的投与経路を用いて実施可能である。実施形態は、たとえば、真皮内、筋肉内、経皮、鼻腔内などへの注射による非経口投与を含むが、これらに限定されるものではない。一実施形態では、ワクチンは、大腿または三角筋への筋肉内注射により投与される。当業者であれば、ワクチン中の抗原の少なくとも１つに対する免疫反応を誘導するために本発明に係るワクチンを投与する種々の可能性が分かる。一般的には、百日咳ワクチンの標準用量は、大腿前外側部または必要であれば三角筋の筋肉内に投与される０．５ｍＬである。しかしながら、１回の投与時に患者に提供される組成物中の成分の量は、当業者に公知のように、変化させることが可能である。また、アジュバントは、使用する場合、送達システムに適合化させることが可能である。
【００７８】
百日咳に対するワクチン接種では単一組成物を有することが好ましいが、本明細書に記載の本発明の効果はまた、ａＰワクチンの成分、すなわち、ＰＴ、ＦＨＡ、ＦＩＭ、および任意選択でＰＲＮを１２〜１００μｇのヒト用量で接種することにより得ることも可能であることは、当業者であれば気付くであろう。この場合、成分は、必ずしもすべてが同一の組成物中に存在しているわけではなく、たとえば、ＦＩＭ（の一部）は、個別の組成物中に存在する。たとえば、市販のａＰワクチン（０〜５μｇ／ヒト用量の用量でＦＩＭを有する）は、１２〜１００μｇ、たとえば、１５〜８０μｇ、２０〜６０μｇ、２０〜５０μｇ、または２０〜２５μｇのＦＩＭの全投与用量に対する個別成分としてＦＩＭを共投与することにより、たとえば、ＰＴ、ＦＨＡ、任意選択で５μｇの用量のＦＩＭ、および任意選択でＰＲＮを含む第１のａＰワクチン組成物を注射し、そして１２〜１００μｇ、たとえば、１５〜８０μｇ、２０〜６０μｇ、２０〜５０μｇ、または２０〜２５μｇのＦＩＭの全投与量を補完するようにＦＩＭ（の残りの部分）を含む個別の組成物を注射することにより、補完可能である。そのような実施形態では、共投与とは、個別の組成物が、１時間以内、好ましくは数分間以内の投与間隔で投与（たとえば、注射）されること、好ましくは、本質的に同時に投与されること（たとえば、共注射または逐次注射により）を意味する。他の選択肢として、１回の注射（本発明に係る組成物である組成物を用いて）で十分であるように、化合物を投与直前に混合しうる。したがって、本発明はまた、次のボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）抗原、すなわち、百日咳トキソイド（ＰＴ）と、線維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）と、２型および３型の線毛（ＦＩＭ）と、任意選択でペルタクチン（ＰＲＮ）と、を被験体に投与することを含む、ボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、任意選択で、ボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）のＰＲＮ陰性株に対するワクチンをヒト被験体に接種する方法を提供する。ここで、ＦＩＭは、１２〜１００μｇの量で投与される。好ましい実施形態では、これは、本発明に係る単一組成物を投与することにより行われる。
【００７９】
以下の実施例で本発明をさらに説明する。実施例は、本発明をなんら限定するものではない。それらは、本発明を明確化する役割を果たす。
【実施例】
【００８０】
実施例１．ａＰ５ワクチン中のＦＩＭが高用量であるとＰＲＮ陰性Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）に対する防護が改善される
方法：
ａＰワクチンの臨床的有効性と相関する検証されたマウスボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）肺チャレンジモデル（Ｇｕｉｓｏ，１９９９，Ｖａｃｃｉｎｅ  １７；２３６６−２３７６、Ｄｅｎｏｅｌ，２００５，Ｖａｃｃｉｎｅ  ２３：５３３３−５３４１、Ｇｏｄｆｒｏｉｄ，２００４，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２９４；２６９−２７６）を用いて、２μｇの精製ＦＩＭ２／３抗原（Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ）が添加されたまたは添加されていないヒト用量の１／４の許可された５成分無細胞百日咳ワクチン（ＡＤＡＣＥＬ（商標），Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒ；この実施例ではさらにａＰ５として参照される）の有効性を試験した。各０．５ｍＬ用量のＡＤＡＣＥＬ（商標）は、５Ｌｆの破傷風トキソイド、２Ｌｆのジフテリアトキソイド、および５つの無細胞百日咳抗原（２．５μｇの解毒された百日咳毒素、５μｇの線維状ヘマグルチニン、３μｇのペルタクチン、および５μｇの２型および３型の線毛）を含有する。簡潔に述べると、４および７週齢でＦＩＭ２／３抗原を用いてまたは用いずにヒト用量の１／４でａＰ５を雌Ｂａｌｂ／ｃマウスの皮下に接種した。したがって、動物は、１．２５μｇのＦＩＭ２／３（ａＰ５群）または３．２５μｇのＦＩＭ２／３（ａＰ５＋ＦＩＭ群）（それぞれ、ヒトでは５μｇおよび１３μｇに等しい）のいずれかを摂取した。９週齢で、マウスの鼻腔内に約１０６ｃｆｕのＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）ＷＨＯ１８３２３（ペルタクチン陽性株）、ペルタクチン陰性株ＰＲＮ−ＳＴＯＰ、およびペルタクチン陰性株ＰＲＮ−ＩＳ［Ｑｕｅｅｎａｎ，２０１３，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．３６８：５８３−４］をチャレンジした。チャレンジの２時間後、２日後、５日後、および８日後（ｎ＝５／群）、段階希釈の肺ホモジネートをプレーティングした後、ボルデー・ジャング寒天プレート上で成長させたＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）コロニーをカウントすることにより、肺クリアランスを決定した。
【００８１】
結果：
ＦＩＭ２／３抗原が添加されたまたは添加されていないａＰ５ワクチンの接種後の治療反応−経時プロファイルを図１に示す。ａＰ５またはａＰ５＋ＦＩＭのワクチンが接種されたマウス間で５日目および８日目の平均ｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数の統計的有意差を試験するために、ウィルコクソン正確検定を使用した。それに加えて、治療反応経時（０日目から８日目まで）プロファイルデータを共分散分析によりモデリングした（Ｍｉｌｌｉｋｅｎ  ＧＡ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｏｖａｒｉａｎｃｅ，カンザス州立大学（Ｋａｎｓａｓ  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）統計学部（Ｄｅｐｔ  ｏｆ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ），１９８９．、ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ．，ＳＡＳ／ＳＴＡＴ  Ｕｓｅｒ’ｓ  Ｇｕｉｄｅ，バージョン６，第４版，第２巻Ｃａｒｙ，ＮＣ：ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ．，１９８９）。
【００８２】
Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）ＷＨＯ１８３２３株（ＰＲＮ陽性株、図１Ａ）では、片側ウィルコクソン正確ノンパラメトリック検定を用いた５日目のｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数の差の比較から、ａＰ５＋ＦＩＭによるワクチン接種後の平均ｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数が、ａＰ５単独によるワクチン接種後のものよりも有意に低いことが示された（ｐ＜０．０５）。サンプル治療反応−時間プロファイルデータのモデリングでは、傾き項として日数を、二次曲率項として日数×日数を用いた共分散分析による当てはめから、０日目から８日目まで治療反応の統計的有意差は示されなかった。
【００８３】
Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）ＰＲＮ−ＳＴＯＰ株のチャレンジ後（図１Ｂ）、片側ウィルコクソン正確ノンパラメトリック検定を用いた５日目のｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数の差の比較から、ａＰ５＋ＦＩＭによるワクチン接種後の平均ｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数が、ａＰ５単独によるワクチン接種後のものよりも有意に低いことが示された（ｐ＜０．０２）。サンプル治療反応−時間プロファイルデータのモデリングでは、共分散分析モデルによる当てはめから、０日目から８日目まで治療反応の統計的有意差は示されなかった。
【００８４】
Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）ＰＲＮ−ＩＳ株（図１Ｃ）では、片側ウィルコクソン正確ノンパラメトリック検定を用いた５日目のｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数の差の比較から、ワクチン治療間で有意差は示唆されなかった。８日目、ウィルコクソン正確ノンパラメトリック検定を用いて、ａＰ５＋ＦＩＭによるワクチン接種後の平均ｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数が、ａＰ５単独によるワクチン接種後の平均ｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数と比較して、低い傾向があった（Ｐ＜０．０８）。ウィルコクソン正確検定の漸近アナログから、８日目に顕著なワクチン差が示された（ｐ＜０．０３）。サンプル治療反応−時間プロファイルデータのモデリングでは、傾き項として日数を、二次曲率項として日数×日数×ｔｒｔを用いた共分散分析による当てはめから、０日目から８日目まで治療反応の差は示唆されなかった。
【００８５】
治療効果の差を試験するために、０日目から８日目までの治療プロファイル間の線型対比を行ったところ、ａＰ５＋ＦＩＭによるワクチン接種後の平均ｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数が、ａＰ５単独によるワクチン接種後に測定されたものよりも有意に低いことが示唆された（ｐ＜０．０１）。
【００８６】
要約すると、これらの結果から、ヒト用量の１／４のＡｄａｃｅｌワクチンに２μｇのＦＩＭ２／３を添加すると、マウス鼻咽頭チャレンジモデルにおいて、ＰＲＮ陰性Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）単離株に対するこのワクチンの有効性が有意に増加することが示される。この知見は、驚くべきことである。なぜなら、百日咳ワクチン中のＦＩＭの量の増加により、その有効性が増加するという提案は、これまでなんらなされてこなかったからである。この結果は、現在出現しつつある世界中で疾患を引き起こしているＰＲＮ陰性株との関連で、とくに重要である。
【００８７】
実施例２．マウスチャレンジモデルにおけるＦＩＭ添加後のワクチンの有効性の増加は用量依存的である
方法：
ＦＩＭの用量の増加がワクチンの有効性の増加と相関するか、このことから効果がＦＩＭ特異的であることが示されるかを調べるために、以上に記載の検証されたマウスボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）肺チャレンジモデルを使用した。ＦＩＭ２／３（Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ；さらにＦＩＭとして参照される材料）の添加を行ってまたは行わずに、１／１０ヒト用量の許可された２成分ａＰワクチン（ＰＥＮＴＡＶＡＣ（登録商標），Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒ  ＭＳＤ；これ以降ではａＰ２として参照されるワクチン）を動物に接種した。各ヒト０．５ｍＬ用量のＰＥＮＴＡＶＡＣ（登録商標）は、（少なくとも）４０ＩＵの破傷風トキソイド（ＴＴ）、（少なくとも）３０ＩＵのジフテリアトキソイド（ＤＴ）、それぞれ４０、８、および３２Ｄ抗原単位の１型、２型、および３型の不活性化ポリオウイルス（ＩＰＶ）、ＴＴにコンジュゲートされた１０μｇのＢ型Ｈ．インフルエンザ（Ｈ．Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）多糖（Ｈｉｂ−ＴＴ）、および２つの無細胞百日咳抗原（２５μｇの解毒された百日咳毒素（ＰＴ）および２５μｇの線維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ））を含有する。５、１０、１５、２０、２５、または５０μｇのＦＩＭ／ヒト用量にそれぞれ対応する０．５、１．０、１．５、２．０、２．５または５．０μｇのＦＩＭを水酸化アルミニウムに吸着させ、許可されたａＰ２ワクチンと共投与した（個別の注射として）（したがって、本発明に係る高用量のＦＩＭを有するａＰワクチンを模倣して）。９週齢で、マウスの鼻腔内に約１０６ｃｆｕのＰＲＮ陰性Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株（Ｉ１９５）をチャレンジした。２時間（ｎ＝５／群）および５日間（ｎ＝１０／群）で、段階希釈の肺ホモジネートをプレーティングした後、ボルデー・ジャング寒天プレート上で成長させたＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）コロニーをカウントすることにより、肺クリアランスを決定した。
【００８８】
結果：
ワクチンを接種したマウスの肺から培養されたＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）コロニーの数の用量依存的減少が、漸増量のＦＩＭを用いて観測された。同様に、ワクチンを接種したマウスの肺から培養されたＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）コロニーの数の用量依存的減少が、１／２５稀釈および漸増量のＦＩＭを用いてワクチンを接種したマウスで観測された。図２は、Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株Ｉ１９５によるチャレンジの５日後、漸増量のＦＩＭの存在下で１／１０ヒト用量のａＰ２ワクチンを接種したマウスの肺から得られたｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数を示している。表１は、ＦＩＭを用いてまたは用いずに１／１０ヒト用量でａＰ２ワクチンを接種した後の平均ｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数を比較して、平均ｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数およびマン・ホイットニー法（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を用いて計算されたｐ値を示している。２μｇ以上のＦＩＭを１／１０ヒト用量のａＰ２に添加した後（２０μｇのヒト用量等価量）、ワクチンの有効性が有意に増加した。
【００８９】
結論：
ワクチンの有効性に及ぼすＦＩＭ用量の増加の用量依存的影響から、この影響がＦＩＭに特異的であることが実証される。それに加えて、高用量のＦＩＭを含むワクチンは、現在市販されているａＰ５ワクチン中に存在する最大量のＦＩＭ（５μｇ／ヒト用量）を含有するワクチンよりも有効である。このことは、１０μｇ／ヒト用量を超えてａＰワクチン中のＦＩＭの用量を増加させると有効性が改善されることを示した実施例１の知見と一致し、この知見を異なるａＰワクチンおよび追加のＰＲＮ陰性百日咳菌株にまでさらに拡張する。
【００９０】
実施例３．ＦＩＭが添加されたａＰ５ワクチンの有効性の増加は複数のＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株に対しても観測される
方法：
以上に記載の検証されたマウスボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）肺チャレンジモデルを用いて、ＦＩＭの用量の増加がさまざまなＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株に対するワクチンの有効性を改善するかを調べた。５０μｇ／ヒト用量に対応する５μｇのＦＩＭ（Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ）を添加してまたは添加せずに（水酸化アルミニウムへの吸着後、個別の注射として）、１／１０ヒト用量のＡＤＡＣＥＬ（登録商標）（Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒ；ヒト用量あたり２．５μｇのＰＴ、５μｇのＦＨＡ、３μｇのＰＲＮ、および５μｇのＦＩＭ２／３を含有する（実施例１をも参照されたい）；本明細書ではａＰ５として参照される）またはＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ；ヒト用量あたり５Ｌｆの破傷風トキソイド、２．５Ｌｆのジフテリアトキソイド、８μｇのＰＴ、８μｇのＦＨＡ、および２．５μｇのＰＲＮを含有する；本明細書ではａＰ３として参照される）を使用した。４および７週齢でワクチンが接種された動物に、９週齢で、次のＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株、すなわち、ＷＨＯ１８３２３（ＰＲＮ陽性）、２４４２２（ＰＲＮ陰性）、２４４２１（ＰＲＮ陰性）、またはＩ１９５（ＰＲＮ陰性）の１つをチャレンジした。２時間（ｎ＝５／群）および５日間（ｎ＝１０／群）で、段階希釈の肺ホモジネートをプレーティングした後、ボルデー・ジャング寒天プレート上で成長させたＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）コロニーをカウントすることにより、肺クリアランスを決定した。
【００９１】
結果：
５μｇのＦＩＭを１／１０ヒト用量のａＰ５に添加したところ、すべてのＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株に対するワクチンの有効性が改善され、試験された百日咳菌株の３つ（ＷＨＯ１８３２３（ｐ＝０．０４）、ＰＲＮ−２４４２１（ｐ＝０．０３）、およびＰＲＮ−Ｉ１９５（ｐ＝０．００１））に対して統計的有意性に達した（図３、表２）。
【００９２】
この実験はまた、ａＰ３（１／１０ヒト用量）を用いて行われた。チャレンジ株の３つ（ＷＨＯ１８３２３、２４４２２、および２４４２１）では、ＦＩＭの添加後の低減は、このａＰ３ワクチン（ＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標））を用いて観測されなかったが、このことは、この特定のａＰ３を用いて、ＦＩＭなしで投与した場合、これらのチャレンジ株ですでに高い有効性が観測されたことにより、おそらく部分的には説明されよう。しかしながら、Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株Ｉ１９５をチャレンジした場合、ＦＩＭをこのａＰ３に添加することにより、ｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数の有意な低減が観測された。
【００９３】
全体的に、これらのデータから、高用量のＦＩＭを有するワクチンは、一連の百日咳菌株に対する改善された有効性を有することが示唆される。
【００９４】
結論：
高レベルのＦＩＭを市販のａＰ５ワクチンと組み合わせて免疫した後、一群のＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株に対する有効性の増加が観測されたことから、異なる百日咳菌株に対しても高ＦＩＭ用量の利点が観測されることが示唆される。したがって、本発明に係る高用量のＦＩＭを含むワクチンは、百日咳疾患率の減少に寄与できるであろう。
【００９５】
実施例４．現在市販されているさまざまなａＰワクチンにＦＩＭを添加することによる有効性の増加
方法：
以上に記載の検証されたマウスボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）肺チャレンジモデルを用いて、ＦＩＭ（Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ）の用量の増加により、ＡＤＡＣＥＬ（登録商標）（Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒ；ヒト用量あたりａＰ成分として２．５μｇのＰＴ、５μｇのＦＨＡ、３μｇのＰＲＮ、および５μｇのＦＩＭ２＋３を含有する）、ＰＥＮＴＡＶＡＣ（登録商標）（Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒ  ＭＳＤ；ヒト用量あたりａＰ成分として２５μｇのＰＴおよび２５μｇのＦＨＡを含有する）、またはＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ；ヒト用量あたりａＰ成分として８μｇのＰＴ、８μｇのＦＨＡ、および２．５μｇのＰＲＮを含有する）のワクチンの有効性が改善されるかを調べた。
【００９６】
５μｇのＦＩＭを市販のワクチンに添加してまたは添加せずに（ヒト用量あたり５０μｇのＦＩＭを添加することに対応する）、４および７週齢で１／１０ヒト用量のワクチンをマウスに接種し、９週齢でＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）ペルタクチン陰性株Ｉ１９５をチャレンジし、そしてチャレンジの５日後、ボルデー・ジャング寒天プレート上で成長させたＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）コロニーをカウントすることにより、肺クリアランスを決定した（ｎ＝１０／群）。
【００９７】
結果：
３つのワクチンすべてにおいて、市販のワクチンを単独で接種した後の平均ｌｏｇ１０ＣＦＵカウント数と比較して、ＦＩＭの添加により平均ｌｏｇ１０ＣＦＵカウントは有意に低下した（表３）。
【００９８】
結論：
ＦＩＭの添加後、３つのワクチンの有効性はすべて、有意に改善された。このことから、ＦＩＭの効果は、さまざまな量の百日咳抗原とさまざまな量のＦＩＭとを含有する一連の市販のａＰワクチンに一般化可能であることが示唆される。すでにＦＩＭを含むワクチン（ＡＤＡＣＥＬ（登録商標））またはＦＩＭを含まないワクチン（ＰＥＮＴＡＶＡＣ（登録商標）もしくはＢＯＯＳＴＲＩＸ（登録商標））の有効性が改善されることから、ワクチンの有効性に寄与するのは、ＦＩＭの存在だけでなく、ＦＩＭの用量もまた、重要であることが示される。
【００９９】
実施例５．高用量のＦＩＭを含むワクチンを接種した後の広範にわたる百日咳菌株に対する抗ＦＩＭ抗体機能の増加
百日咳菌成分に対する抗体の機能活性は、とくに、毒素中和や細菌凝集などの機能活性をそれぞれ有する抗体を誘導することが知られるＰＴおよびＦＩＭを含有する新しい製剤を評価する場合、考慮すべき重要な追加のパラメーターとして同定されてきた。全細胞Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）凝集抗体を測定するアッセイが確立されている。百日咳ワクチンの防御効果と直接相関することが見いだされている機能閾値は存在しないが、それにもかかわらず、それらは、新しいワクチン製剤と、安全かつ有効であることが明らかにされているものと、の全体比較の一部として、決定すべき重要な免疫パラメーターである（ａＰワクチンに対するＷＨＯ推奨草案ＷＨＯ／ＢＳ／２０１１．２１５８、セクションＣ．２．１．２より）。したがって、ＦＩＭ含有ａＰワクチンに対するそのようなアッセイの妥当性を考慮して、凝集アッセイを用いて、種々のＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株に対して本発明に係るワクチンをさらに試験した。
【０１００】
方法：
ＦＩＭ（Ｌｉｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ）の添加を行ってまたは行わずに、１／１０ヒト用量のＰＥＮＴＡＶＡＣ（登録商標）（Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒ  ＭＳＤ；ａＰ抗原としてヒト用量あたり２５μｇのＰＴおよび２５μｇのＦＨＡを含有する；本明細書ではａＰ２として参照される）を用いて、４および７週齢でワクチンが接種されたマウスから血清を捕集した。ヒト用量あたりそれぞれ５または２０μｇのＦＩＭに対応する量の０．５または２．０μｇのＦＩＭを水酸化アルミニウムに吸着させ、市販のａＰ２ワクチンと共投与した（個別の注射として）。９週目、５匹の動物／投与群を屠殺し、最終採血から単離された血清を抗ＦＩＭ（機能性）抗体レベルの研究のためにプールした。ＦＩＭに対する機能性抗体反応を評価するために、凝集アッセイを行った。このアッセイでは、試験血清中に機能性抗体が存在すると、Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）と混合したときに抗原／抗体複合体が形成される。陽性凝集は、抗原／抗体複合体の存在に起因してウェル内の不透明溶液の存在として定義される。陰性凝集は、ウェルの底部の明確な細菌沈降物として観測される。簡潔に述べると、５０μｌの試験血清をＰＢＳ中に段階希釈し、１．０のＯＤ６００のＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）懸濁液５０μｌと混合した。この混合物を一晩インキュベートし、翌日、反転鏡を用いて細菌沈降物の存在または不在を決定した。凝集力価は、完全凝集をもたらす最大希釈として定義される。
【０１０１】
マウスのワクチン接種により誘導された抗ＦＩＭ抗体が一群のＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株に対して機能性であるかを調べるために、血清が１０個の異なるＦＩＭ発現Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株に凝集する能力を有するかを試験した。一群の３０個の最近の臨床Ｂ．ペルツッシス単離株（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（ＰｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａのＳｔ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ｆｏｒ  ＣｈｉｌｄｒｅｎのＡｌａｎ  Ｅｖａｎｇｅｌｉｓｔａ博士により親切にも提供された）から、２４個の単離株は、陽性対照の市販の抗ＦＩＭモノクローナル抗体（０６／１２８，ＮＩＢＳＣ，ＵＫ）との明確な凝集リードアウトを示したことから、これらの株がＦＩＭ抗原を発現することが確認される。マウス血清を試験するために、この一群の２４個の株から５個のＰＲＮ陰性株および５個のＰＲＮ陽性株を選択した。
【０１０２】
結果：
ＦＩＭの存在下でワクチンを接種したところ、機能性抗体力価が誘導された。ＦＩＭの存在下でワクチンが接種されたマウスの６個のマウス血清プールのすべてで、１０個のＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株すべてに対して、陽性凝集が観測された。ＦＩＭを含まない、ワクチンが接種されていない対照群および１／１０ヒト用量のａＰ２のみが接種された群は、なんら凝集を示さなかった（表４）。検証されたマウスボルデテラ・ペルツッシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）肺チャレンジモデルにおいて、高用量のＦＩＭが、低用量のＦＩＭよりも有効であることが示されたが（実施例２）、明確なＦＩＭ用量−反応相関（他のＦＩＭ用量に関してはデータが示されていない）が存在しなかったので、おそらく、ＷＨＯ標準アッセイの限界であり、凝集の小さな差を検出するのに十分な感度でないためと思われる。
【０１０３】
結論：
ＦＩＭの存在下で市販のワクチンを接種すると、ＰＲＮ陰性株またはＰＲＮ陽性株のいずれでも、広範なＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株に対する機能性抗体が誘導される。この知見から示唆されるように、高用量のＦＩＭを含むワクチンは、広範なＢ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）株により引き起こされる百日咳疾患を低減するのに有効であろう。
【０１０４】
【表１】
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【０１０５】
【表２】
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【０１０６】
【表３】
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【０１０７】
【表４】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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