(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
初期過多放出が減少された薬物負荷高分子微小粒子を製造するための方法であって、
高分子及び薬物を溶媒に溶解させる工程；
前記高分子及び前記薬物を微小粒子へと凝集させて、薬物負荷高分子微小粒子を製造する工程；
前記凝集させた薬物負荷高分子微小粒子をＣ１〜Ｃ６低級炭素アルコールのアルコール水溶液と接触させ、それにより、前記高分子のガラス転移温度（Ｔｇ）を、低減されたガラス転移温度（ＴｇΔ）まで下げる工程；及び
前記アルコール水溶液との接触工程の前又は後に、前記薬物負荷高分子微小粒子を、前記高分子のＴｇΔよりも高い温度に加熱する工程
を含み、
前記Ｃ１〜Ｃ６低級炭素アルコールが、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ペンタノール、及びヘキサノールからなる群から選択され、
前記アルコール水溶液中の前記アルコールの濃度が１０％〜５０％（ｖ／ｖ）であり、
前記高分子のＴｇΔより高い温度が、ＴｇΔ＋５℃〜ＴｇΔ＋４０℃の範囲であり、２８℃〜６３℃の範囲である前記製造方法。
【請求項２】
（ｉ）高分子、薬物、及び分散溶媒を含む、Ｏ／Ｗ型、Ｏ／Ｏ型、又はＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを調製し；そして、
（ｉｉ）前記エマルションを高分子微小粒子に凝集させる
ことを含む工程により、前記工程（ａ）の薬物負荷高分子微小粒子を製造する、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
（ｉ）高分子及び薬物を溶媒中に溶解させ；
（ｉｉ）前記（ｉ）の溶媒を加熱された空気中に噴霧し；そして、
（ｉｉｉ）前記高分子及び前記薬物を固化させ、微小粒子に凝集させる
ことを含む工程により、前記工程（ａ）の薬物負荷高分子微小粒子を製造する、請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
（ｉ）高分子及び薬物を含む有機溶媒に非溶媒を添加して、相分離を誘導し；
（ｉｉ）分離された相を有する前記混合物を追加の非溶媒に移し；そして、
（ｉｉｉ）前記高分子及び前記薬物を固化させ、微小粒子に凝集させる
ことを含む工程により、前記工程（ａ）の薬物負荷高分子微小粒子を製造する、請求項１に記載の製造方法。
【請求項５】
前記高分子が、ポリ乳酸、ポリラクチド、乳酸−グリコール酸共重合体、ポリラクチド−コ−グリコライド（ＰＬＧＡ）、ポリホスファゼン、ポリイミノカーボネート、ポリリン酸エステル、ポリ無水物、ポリオルトエステル、乳酸−カプロラクトンコポリマー、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシバレラート、ポリヒドロキシブチラート、ポリアミノ酸、乳酸−アミノ酸コポリマー、及びこれらの混合物からなる群より選択される、請求項１に記載の製造方法。
【請求項６】
前記薬物が、プロゲステロン、ハロペリドール、チオチキセン、オランザピン、クロザピン、ブロムペリドール、ピモジド、リスペリドン、ジプラシドン、ジアゼプマ、エチルロフラゼペート、アルプラゾラム、ネモナプリド、フルオキセチン、セルトラリン、ベンラファキシン、ドネペジル、タクリン、ガランタミン、リバスティグミン、セレギリン、ロピニロール、ペルゴリド、トリヘキシフェニジル、ブロモクリプチン、ベンズトロピン、コルヒチン、ノルダゼパム、エチゾラム、ブロムアゼパム、クロチアゼパム、メキサゾラム、ブスピロン、ゴセレリンアセテート、ソマトトロピン、酢酸ロイプロリド、オクトレオチド、セトロレリクス、酢酸サンドスタチン、ゴナドトロピン、フルコナゾール、イトラコナゾール、ミゾリビン、シクロスポリン、タクロリムス、ナロキソン、ナルトレキソン、クラドリビン、クロラムブシル、トレチノイン、カルムスチン、アナグレリド、ドキソルビシン、アナストロゾール、イダルビシン、シスプラチン、ダクチノマイシン、ドセタキセル、パクリタキセル、ラルチトレキセド、エピルビシン、レトロゾール、メフロキン、プリマキン、オキシブチニン、トルテロジン、アリルエストレノール、ロボスタチン、シンバスタチン、プロバスタチン、アトロバスタチン、アレンドロネート、サルカトニン、ラロキシフェン、オキサドロロン、抱合卵胞ホルモン、エストラジオール、エストラジオールバレラート、エストラジオールベンゾエート、エチニルエストラジオール、エトノゲストレル、レボノルゲストレル、チボロン、ノルエチステロン、及びピロキシカムからなる群より選択され、インターロイキン、インターフェロン、腫瘍壊死因子、インスリン、グルカゴン、成長ホルモン、ゴナドトロピン、オキシトシン、甲状腺刺激ホルモン、副甲状腺ホルモン、カルシトニン、コロニー刺激因子、エリスロポエチン、トロンボポエチン、インスリン類似成長因子、上皮細胞成長因子、血小板由来成長因子、形質転換成長因子、繊維芽細胞成長因子、血管内皮細胞成長因子、及び骨形成タンパク質などの、タンパク質又は核酸の巨大分子であってもよい、請求項１に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１１年５月２０日に出願された大韓民国特許出願第１０−２０１１−００４８１０５号に基づく優先権及び利益を主張する。当該出願は、本明細書中に完全に記載されているかのごとく、すべての目的のために参照により援用する。
【０００２】
本発明は、初期過多放出が減少された高分子微小粒子の製造方法及びその方法により製造された高分子微小粒子に関する。より特定的には、本発明は、高分子微小粒子をアルコール水溶液と接触させる工程を含む、初期過多放出が減少された薬物負荷高分子微小粒子の製造方法、前記方法により製造された高分子微小粒子、及び前記高分子微小粒子の薬物伝達のための使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
水溶液、懸濁液、及びエマルションのような従来の注射可能な剤形は、投与後に速やかに体から除去されるので、慢性疾患治療のためには頻繁な注射投与が本質的に必要である。マイクロカプセル化は、この問題点を解決するために開発され、高分子化合物からなるミクロスフェア（本明細書中において、ミクロスフェアという用語には、ナノスフェアが含まれる）に薬物を封入させるための製造プロセスを指す。ミクロスフェアは、通常、μｍ単位の大きさであり、ヒトや動物に筋肉又は皮下注射で投与可能である。さらに、ミクロスフェアは、多様な薬物放出速度を有するように製造することができ、その結果、薬物伝達期間を制御することができる。したがって、治療薬物をただ１回投与するだけでも、その有効濃度を長時間維持することができ、治療薬物の総投与量を最小限にして、患者の薬物順応度を向上させることができる。このため、世界の有数の製薬会社が薬物を負荷させたミクロスフェアの製造に多大な関心を示している。
【０００４】
しかしながら、持続放出型剤形である微小粒子系において、多くの場合、高い初期薬物放出、つまり、初期過多放出が起こる。これは、微小粒子の表面及び内部に存在する水が満された空隙とこれらを連結する水チャンネルを通じて、薬物が速かに拡散することが原因である。このような初期過多放出は、毒性反応を始めとする副作用を起こすことがある。これゆえ、微小粒子系の開発において、このような初期過多放出を無くすか、少なくとも最小限にすることが必要である。
【０００５】
このような理由で、初期過多放出を減少させようとする数多くの試み、例えば、製造した微小粒子を別の物質でコーティングする、微小粒子を別の調節型放出系（ヒドロゲル等）内に挿入する、剤形を調節する、製造プロセスを調節する、微小粒子表面の薬物を溶媒で洗浄して除去するなどといった試みがなされている。
【０００６】
このような方法はそれぞれ下記のような短所／限界を有している。
【０００７】
微小粒子のコーティングや微小粒子の他の調節型放出系（ヒドロゲル等）への挿入は、追加的な物質及び追加的なプロセスが必要となる。これにより、経済性が相対的に低下し、製品開発プロセスが複雑になる。また、微小粒子は注射であるから、これらの方法において使用すべき追加的な物質は極めて制限されるという限界がある。
【０００８】
剤形又は製造プロセスの調節を通じて初期過多放出を減少させようとする場合、調節により、通常、全体の放出プロファイルまで変化する。これゆえ、初期過多放出を減少させるとともに、必要な時間、一定して持続されるプロファイルを得ることは極めて難しい。また、多くの努力の末に必要とするプロファイルが得られたとしても、そのプロファイルは、調節された剤形又は調節された製造プロセスにおける特定の薬物又は特定の高分子にのみ利用可能なだけである。これゆえ、新たな薬物又は新たな高分子について、完全に新規な方法を見出だして適用する必要がある。
【０００９】
溶媒で微小粒子表面の薬物を洗浄して除去する方法は、主に、親水性の薬物に対して使用されてきた。微小粒子を製造するための方法のなかで、Ｏ／Ｗ及びＷ／Ｏ／Ｗ製造方法では、高分子を有機溶媒に溶かし、水溶性溶液中に乳化させ硬化させる。これゆえ、親水性薬物の場合、親水性薬物は外部の水溶性相に出ようとする傾向があるため、微小粒子の表面に多量の薬物が存在する場合が多く発生する。このことが、高い初期薬物放出を引き起こす。この方法では、最終剤形の初期過多放出を減少させるように、表面に多量に存在するこのような薬物を予め水で洗浄して除去する。親水性薬物でのこの方法の効果が報告されている。しかし、疎水性薬物の場合には、この薬物を洗浄するために有機溶媒が必要である。有機溶媒は、主として、微小粒子の原材料（ＰＬＧＡ（poly-lactic-co-glycolic  acid）、ＰＬＡ（poly-lactic  acid）等）において溶媒として使用され、微小粒子構造の破壊をもたらす。これゆえ、使用することができない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明者らは、液滴形成（相分離）、噴霧乾燥、溶媒蒸発／抽出、溶媒アンモノリシス（又は加水分解）などにより製造されるＰＬＧＡ及びＰＬＡ微小粒子に適用可能な、初期過多放出を減少させる方法を開発するために研究した。また、本発明者らは、親水性薬物を含有する微小粒子ばかりでなく、疎水性薬物を含有する微小粒子にも適用可能な、初期過多放出を減少させる方法を開発するために研究した。その結果、本発明者らは、高分子微小粒子をアルコール及び水の混合物で処理する場合、微小粒子の内部空隙が減少し、粒子が密集化されて、初期過多放出が有意に減少したことを確認した。この知見に基づいて、本発明者らは本発明を完成した。
【００１１】
したがって、本発明の目的は、初期薬物放出が減少された高分子微小粒子を製造する新規な方法を提供することである。さらに、本発明の目的は、多様な方法を通じて製造される高分子微小粒子の初期薬物放出を減少させる方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
この目的を達成するために、初期過多放出が減少された薬物負荷高分子微小粒子を製造するための方法は、次の工程：（ａ）薬物を負荷させた高分子微小粒子を製造する工程；及び（ｂ）薬物を負荷させた高分子微小粒子をアルコール水溶液と接触させる工程を含む。
【００１３】
本発明の他の目的を達成するために、本発明は、本発明の方法により製造される、初期過多放出が減少された薬物負荷高分子微小粒子を提供する。
【００１４】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明は、本発明の方法により製造される、初期過多放出が減少された薬物負荷高分子微小粒子を有効成分として含む薬物伝達用組成物を提供する。
【００１５】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明は、本発明の方法により製造される、初期過多放出が減少された薬物負荷高分子微小粒子を、それを必要とする対象に有効量で投与することを含む薬物伝達方法を提供する。
【００１６】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明は、本発明の方法により製造される、初期過多放出が減少された薬物負荷高分子微小粒子の、薬物伝達用製剤を製造するための使用を提供する。
【００１７】
他の定義がない限り、本明細書に使用された全ての技術的及び科学的用語は、当業者らにより一般的に理解されるものと同一の意味を有する。次の参考文献は、本発明の明細書に使用された種々の用語の一般的な定義を提供する：Singleton  et  al.,  DICTONARY  OF  MICROBIOLOGY  AND  MOLECULARBIOLOTY（2ded.1994）；  THE  CAMBRIDGE  DICTONARY  OF  SCIENCE  AND  TECHNOLOGY（Waalkered.,1988）；及びHale＆Marham,  THE  HARPER  COLLINS  DICTONARY  OF  BIOLOGY。
【００１８】
以下、本発明の内容をより詳細に説明する。
本発明の高分子微小粒子の製造方法は、初期過多放出が減少された薬物負荷高分子微小粒子を製造するための方法は、次の工程：
（ａ）薬物が負荷された高分子微小粒子を製造する工程；及び
（ｂ）高分子のＴｇをＴｇΔまで下げるために、薬物が負荷された高分子微小粒子をアルコール水溶液と接触させる工程
を含む。
【００１９】
本発明の初期過多放出が減少された薬物負荷高分子微小粒子の製造方法は、アルコール水溶液と接触させる工程の前に、高分子微小粒子を製造する工程を含む。ここで、高分子微小粒子の製造は、当技術分野において既知の慣用的な方法によって実施することができる。
【００２０】
好ましくは、i）エマルションによる溶媒蒸発／抽出方法又は溶媒アンモノリシス（又は加水分解）方法、ii）噴霧乾燥を用いる方法、又はiii）相分離を用いる方法、を使用できる。より好ましくは、i）高分子化合物、薬物、及び分散溶媒を含む、Ｏ／Ｗ（水中油）型、Ｏ／Ｏ（油中油）型、又はＷ／Ｏ／Ｗ（水中油中水）型エマルションを製造して、これを微小粒子へと凝集させる方法、ii）高分子化合物及び薬物を含む有機溶媒を加熱された空気中に噴霧することにより、高分子を固化させて、微小粒子へと凝集させる方法、又はiii）高分子化合物及び薬物を含む有機溶媒に非溶媒を添加することにより相分離を誘導し、これを追加的な非溶媒に移して、高分子を固化させて微小粒子へと凝集させる方法を使用して、高分子微小粒子を製造することができる。
【００２１】
より具体的には、エマルションを製造してこれを高分子微小粒子へと凝集させることにより高分子微小粒子を製造する方法において、まず、高分子、薬物、及び分散溶媒を含むＯ／Ｗ、Ｏ／Ｏ、又はＷ／Ｏ／Ｗエマルションを製造する。
【００２２】
エマルションの製造は、当技術分野において既知の慣用的な方法を実施することができる。より具体的には、Ｏ／Ｗ又はＯ／Ｏエマルションは、高分子化合物及び薬物を含む分散相を分散溶媒に添加することにより製造することができる。一方、Ｗ／Ｏ／Ｗエマルションは、薬物が溶解された水溶液を高分子化合物が溶解された溶媒に乳化させＷ／Ｏエマルションを製造し、これを分散溶媒に添加することにより、製造することができる。
【００２３】
このような薬物含有高分子微小粒子において、エマルションは、溶媒蒸発法又は溶媒抽出法により微小粒子へと凝集させるか、又は、アンモノリシス又は加水分解により微小粒子へと凝集させる。アンモノリシス又は加水分解によるエマルションの製造では、水不溶性である有機溶媒を更に含め、アンモニア（アンモノリシスプロセス）又は酸若しくは塩基（加水分解プロセス）の添加により、アンモノリシス又は加水分解により水不溶性有機溶媒が水溶性溶媒へと転化する。
【００２４】
溶媒蒸発法は、これに制限されるものではないが、例えば、米国特許第6,471,996号、第5,985,309号、及び第5,271,945号に開示された方法を含むことができる。かかる方法において、高分子化合物が溶解された有機溶媒に薬物を分散又は溶解し、Ｏ／Ｗ（水中油）エマルションを製造するために、水などの分散媒に乳化させ、エマルション中の有機溶媒を分散媒中に拡散させ、薬物含有高分子微小粒子を形成するために空気／水界面を通じて有機溶媒を蒸発させる。
【００２５】
溶媒抽出法は、大量の可溶化溶媒を使用することにより有機溶媒をエマルション滴中に効果的に抽出する方法のように、薬物含有高分子微小粒子の製造に使用される慣用的な溶媒抽出を含む。
【００２６】
さらに、溶媒蒸発法と溶媒抽出法の両方を使用する方法として、例えば、米国特許第4,389,840号、第4,530,840号、第6,544,559号、第6,368,632号、及び第6,572,894号などに開示された方法を使用できる。
【００２７】
アンモノリシスによる凝集においては、例えば、大韓民国特許第918092号に開示された方法を使用できる。かかる方法では、水不溶性有機溶媒が含まれた、Ｏ／Ｗ、Ｗ／Ｏ／Ｗ、又はＯ／Ｏエマルションにおいて、このエマルションにアンモニアを添加することによりアンモノリシスを誘導し、同時に、水不溶性有機溶媒を水溶性溶媒に転化させて、微小粒子を凝集させる。
【００２８】
加水分解による凝集においては、例えば、大韓民国特許出願第2009-109809号、及び第2010-70407号に開示された方法を使用できる。かかる方法では、水不溶性有機溶媒を含むＯ／Ｗ、Ｗ／Ｏ／Ｗ、又はＯ／Ｏエマルションにおいて、このエマルションに塩基（ＮａＯＨ、ＬｉＯＨ、ＫＯＨなど）又は酸（ＨＣｌ、Ｈ２ＳＯ４など）溶液を添加して、加水分解（エステルの加水分解の一種）を誘導し、同時に、水不溶性有機溶媒を水溶性溶媒へと転化させて、微小粒子を凝集させる。
【００２９】
噴霧乾燥により高分子微小粒子を製造する方法においては、高分子化合物を揮発性有機溶媒中に溶解させて、薬物をこの高分子溶液中に溶解又は分散させる。この溶液（又は分散液）を加熱された空気中に噴霧すれば、溶媒が瞬間的に蒸発し、高分子が固化され、高分子微小粒子が形成される。
【００３０】
相分離（液滴形成）により高分子微小粒子を製造する方法においては、高分子化合物を有機溶媒中に溶解した後、薬物をこの高分子溶液中に溶解させるか、又は個体粉末状態で分散させるか、又は水中に溶解させて、有機溶媒中に分散させる。この溶液（又は分散液）に非溶媒を少しずつ添加して、溶液において相分離を誘導する。次いで、この溶液を追加的な非溶媒に移すことにより、高分子を固化させて、高分子微小粒子を形成させる。
【００３１】
換言すれば、本発明の初期過多放出が減少された薬物負荷高分子微小粒子を製造する方法は、次の工程：（ａ）高分子及び薬物を溶媒中に溶解させて、これを微小粒子へと凝集させる工程；及び（ｂ）高分子化合物のＴｇをＴｇΔまで下げるように、凝集させた高分子微小粒子をアルコール水溶液と接触させる工程を含むことを特徴とする。
【００３２】
本発明の製造方法において使用される高分子化合物は、当技術分野において既知の高分子化合物である限り、何ら限定はない。好ましくは、高分子化合物は、ポリ乳酸、ポリラクチド、乳酸−グリコール酸共重合体、ポリラクチド−コ−グリコライド（ＰＬＧＡ）、ポリホスファゼン、ポリイミノカーボネート、ポリリン酸エステル、ポリ無水物、ポリオルトエステル、乳酸−カプロラクトンコポリマー、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシバレラート、ポリヒドロキシブチラート、ポリアミノ酸、乳酸−アミノ酸コポリマー、及びこれらの混合物からなる群から選択することができる。
【００３３】
本発明に使用される薬物は、親水性薬物と疎水性薬物を全て含むことができ、高分子微小粒子に封入することができれば、制限なく使用することができる。かかる薬物の例は、プロゲステロン、ハロペリドール、チオチキセン、オランザピン、クロザピン、ブロムペリドール、ピモジド、リスペリドン、ジプラシドン、ジアゼプマ、エチルロフラゼペート、アルプラゾラム、ネモナプリド、フルオキセチン、セルトラリン、ベンラファキシン、ドネペジル、タクリン、ガランタミン、リバスティグミン、セレギリン、ロピニロール、ペルゴリド、トリヘキシフェニジル、ブロモクリプチン、ベンズトロピン、コルヒチン、ノルダゼパム、エチゾラム、ブロムアゼパム、クロチアゼパム、メキサゾラム、ブスピロン、ゴセレリンアセテート、ソマトトロピン、酢酸ロイプロリド、オクトレオチド、セトロレリクス、酢酸サンドスタチン、ゴナドトロピン、フルコナゾール、イトラコナゾール、ミゾリビン、シクロスポリン、タクロリムス、ナロキソン、ナルトレキソン、クラドリビン、クロラムブシル、トレチノイン、カルムスチン、アナグレリド、ドキソルビシン、アナストロゾール、イダルビシン、シスプラチン、ダクチノマイシン、ドセタキセル、パクリタキセル、ラルチトレキセド、エピルビシン、レトロゾール、メフロキン、プリマキン、オキシブチニン、トルテロジン、アリルエストレノール、ロボスタチン、シンバスタチン、プロバスタチン、アトロバスタチン、アレンドロネート、サルカトニン、ラロキシフェン、オキサドロロン、抱合卵胞ホルモン、エストラジオール、エストラジオールバレラート、エストラジオールベンゾエート、エチニルエストラジオール、エトノゲストレル、レボノルゲストレル、チボロン、ノルエチステロン、及びピロキシカムを含み、また、インターロイキン、インターフェロン、腫瘍壊死因子、インスリン、グルカゴン、成長ホルモン、ゴナドトロピン、オキシトシン、甲状腺刺激ホルモン、副甲状腺ホルモン、カルシトニン、コロニー刺激因子、エリスロポエチン、トロンボポエチン、インスリン類似成長因子、上皮細胞成長因子、血小板由来成長因子、形質転換成長因子、繊維芽細胞成長因子、血管内皮細胞成長因子、及び骨形成タンパク質などの、タンパク質又は核酸の巨大分子であってもよい。
【００３４】
本発明の初期過多放出が減少された薬物封入高分子微小粒子の製造方法は、溶媒蒸発／抽出、溶媒アンモノリシス（又は加水分解）、噴霧乾燥、相分離（液滴形成）などの慣用的な方法により、高分子微小粒子をアルコール水溶液と接触させる工程を含むことを特徴とする。
【００３５】
高分子微小粒子を製造するための本発明の方法において、アルコール水溶液は、６０％（ｖ／ｖ）以下のアルコール水溶液であることができる。好ましくは、０％〜６０％（ｖ／ｖ）のアルコール水溶液であることができ、より好ましくは、０％〜５０％（ｖ／ｖ）、１％〜５０％（ｖ／ｖ）のアルコール水溶液であることができ、さらにより好ましくは、５％〜５０％（ｖ／ｖ）のアルコール水溶液であることができ、最も好ましくは、１０％〜４０％（ｖ／ｖ）のアルコール水溶液であることができる。アルコール水溶液におけるアルコール含量の下限は、０．００１、０．０１、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０％であることができ、上限は、６０、５９、５８、５７、５６、５５、５４、５３、５２、５１、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０％であることができる。
【００３６】
本発明において使用されるアルコールは、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ペンタノール、及びヘキサノールなどの、Ｃ１〜Ｃ６の低級炭素アルコールであることができる。好ましくは、エタノールであることができる。
【００３７】
処理に使用されるアルコール水溶液において、Ｗ／Ｏ／Ｗ法により表面空隙が多く存在する場合には、アルコールは、好ましくは、６０％（体積％）以下含まれ、Ｏ／Ｗ法により表面空隙が少なく存在する場合には、４０％（体積％）未満である。アルコール水溶液においてアルコールが上述の範囲又はそれより多い量で含まれると、高分子微小粒子の球形の形態を維持することができない。代わりに、全体として凝集する場合がある。さらに、アルコールが上述の範囲又はそれより少ない量である場合、初期薬物放出効果が十分に達成されない場合がある。
【００３８】
このようなアルコールの処理により、高分子微小粒子内の高分子のＴｇが減少される（減少されたＴｇ＝ＴｇΔ）。これゆえ、高分子微小粒子の表面／内部の空隙構造が閉止するか又は充填され、これにより、高分子微小粒子がより稠密になる効果が達成される。この際、減少されたＴｇ（ＴｇΔ）はアルコールの処理がなされる反応温度に等しい、又はこれより低いか若しくは高い場合がある。ＴｇΔが反応温度に比べて低いか、又は予め決められた温度（例えば、０℃より大きく５℃以下の任意の値、好ましくは１、２、３、４、又は５℃）以下に低い場合、以下に説明するような昇温工程が必要ではない場合がある。さらに、ＴｇΔが反応温度に等しいか又はそれより高い場合、以下に説明するような昇温工程が追加されることが好ましい。このような効果により、高分子微小粒子内の薬物が外部に流出することを可能とする構造が減少する。これが初期過多放出を減少する効果をもたらすものと考えられる。本発明の比較例２において、アルコール処理により高分子微小粒子の粒径が減少することに基づいて、このような効果が確認された。
【００３９】
一方、本発明の初期過多放出が減少された薬物負荷高分子微小粒子の製造方法は、薬物負荷高分子微小粒子を、高分子のＴｇΔより高い温度のアルコール水溶液と接触させる工程をさらに含むことができる。
【００４０】
言い換えれば、かかる方法は、次の工程：（ａ）高分子及び薬物を溶媒に溶解させて、これを微小粒子へと凝集させる工程；（ｂ）凝集させた高分子微小粒子を微小粒子内の高分子のＴｇΔより高い温度に昇温する工程；及び（ｃ）高分子化合物のＴｇをＴｇΔまで下げるように、凝集させた高分子微小粒子をアルコール水溶液と接触させる工程を含むことができる。
【００４１】
さらに、昇温工程をアルコール水溶液と接触させた後に実施することができる。
言い換えれば、かかる方法は、次の工程：（ａ）高分子及び薬物を溶媒に溶解させて、これを微小粒子へと凝集させる工程；（ｂ）高分子化合物のＴｇをＴｇΔまで下げるように、凝集させた高分子微小粒子をアルコール水溶液と接触させる工程；（ｃ）凝集させた高分子微小粒子を微小粒子内の高分子のＴｇΔより高い温度に昇温する工程を含むことができる。
【００４２】
かかる温度は、ＴｇΔ温度より４℃高い温度から、ＴｇΔ温度より５０℃高い温度までの範囲であることができる。言い換えれば、ＴｇΔ＋４℃〜ＴｇΔ＋５０℃の範囲であることができる。好ましくは、ＴｇΔ＋４℃〜ＴｇΔ＋４０℃の範囲であることができる。
【００４３】
温度がＴｇΔ＋４℃未満であると効果を達成することができず、温度がＴｇΔ＋５０℃よりも高いと微小粒子の形態が壊れる可能性がある。
【００４４】
温度をＴｇΔ温度より高い温度まで上げた後、アルコール水溶液との接触を実施して、高分子微小粒子の凝集後の初期薬物放出を減少させる。このプロセスは昇温工程無しで終了することができる。さもなければ、昇温工程及び処理工程を連続して実施してもよい。さらに、例えば、洗浄工程及び乾燥工程などの追加の工程を、これまでに述べた工程の各々の前、間、又は後に含むことができる。
【００４５】
本発明の製造方法において、高分子微小粒子の処理は、予め定められた温度範囲で予め定められた時間の間、高分子微小粒子をアルコール水溶液と接触させることにより、実施することができる。例えば、かかる処理は、高分子微小粒子をアルコール水溶液中に置くか、又は浸漬することにより実施することができる。
【００４６】
接触時間は、高分子化合物の種類、アルコール水溶液の濃度、接触温度などによって異なる。例えば、接触は、０秒より長く４８時間以下の間、実施することができる。
【００４７】
さらに、アルコール水溶液と接触させることのみによっては、初期薬物放出が減少しないか、又は十分に減少しない場合は、高分子化合物のＴｇが反応温度以下に落ちない場合（つまり、ＴｇΔ＞反応温度）に起こる。これゆえ、昇温後の処理工程において、温度を高分子化合物のＴｇΔ温度より高い温度に昇温して、続いて０秒より長く４８時間以下の間、追加の処理工程を行うことができる。
【００４８】
Ｔｇは、高分子化合物において分子が活性を有し動き始める温度である、ガラス転移温度を示す。一般に、固相における低分子量物質は、加熱により固相から液相へと相転移する。一方、固相における高分子は、加熱により、物性の変化により液相ではなく柔軟な状態に置かれる。このような変化を引き起こす温度をＴｇと称する。使用する高分子化合物の種類及び組み合わせによって、それぞれのＴｇ値は変動しうる。例えば、高分子微小粒子の製造においてしばしば使用されるＰＬＧＡ及びＰＬＡ高分子は、製造社（lakeshore）のデータに基づき以下の表１に示す約５０℃のＴｇを有する。
【００４９】
【表１】
0006318271.tif 000002
【００５０】
Ｔｇは、各高分子化合物の種類又は含量にしたがって、製造社情報、又はＤＳＣ若しくはＴＧＡ法（Macromol.  Res.,  Vol.19,  No.11,（2011）;  C.  G.  Park  et  al.,  AAPS  PharmSciTech,  Vol.9,  No.4,  December（2008）;  Dorati  et  al.）による測定により、確認することができ、これは当業者に自明なことである。
【００５１】
さらに、処理時間は、４８時間以下であることができ、好ましくは、２４時間以下であることができる。処理時間が過度に長いと、微小粒子の内部の薬物がエタノール水溶液に抜け出す。これにより、微小粒子内部の薬物含量が減少する場合がある。処理時間の下限は、０．００１、０．０１、０．１、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０秒、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５分、１時間であることができ、上限は、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４時間であることができる。
【００５２】
一方、本発明は、高分子微小粒子を製造する本発明の方法によって製造された高分子微小粒子を提供する。本発明の高分子微小粒子は、初期薬物放出が有意に減少されており、これにより、初期薬物放出により引き起こされる副作用を有意に減少させることができる。
【００５３】
さらに、本発明の高分子微小粒子を使用する場合、高分子微小粒子に含まれる薬物を効果的に伝達できる。これゆえ、本発明は、本発明の製造方法により製造される高分子微小粒子を有効成分として含む薬物伝達用組成物を提供する。本発明の薬物伝達用組成物は、１〜９９％（ｗ／ｗ）の量の本発明の製造方法により製造された高分子微小粒子と、９９％〜１％（ｗ／ｗ）の量のその担体を含むことができる。
【００５４】
本発明の薬物伝達用組成物に含まれる薬物は、疾患によって変えることができ、これは当業者が容易に理解することができる。
【００５５】
参考に、本明細書中に述べた核酸及びタンパク質に関する手法は、下記の文献に十分に記載されている（Maniatis  et  al.,  Molecular  Coning:  A  Laboratory  Manual,  Cold  Spring  Harbor  Laboratory,  Cold  Spring  Harbor,  N.Y.（1982）;  Sambrook  et  al.,  Molecular  Cloning:  A  Laboratory  Manual,  2d  Ed.,  Cold  Spring  Harbor  Laboratory  Press（1989）;  Deutscher,  M.,  Guide  to  Protein  Purification  Methods  Enzymology,  vol.182.  Academic  Press.  Inc.,  San  Diego,  CA（1990））。
【００５６】
比較例において、Ｏ／Ｗ法により製造された微小粒子をアルコール水溶液の処理方法に供した場合、Ｗ／Ｏ／Ｗ法により製造された微小粒子と異なり、微小粒子が凝集し、形態が壊れ、一塊にかたまるか、又は初期過多放出減少効果を示すことができなかった。
【００５７】
したがって、微小粒子における凝集の問題を解決するために、本発明の一実施例では、処理においてエタノールの含量を変動させた。その結果、エタノール比が４０％以上の場合には、処理の直後に、微小粒子が凝集してかたまったが、エタノール比が４０％未満の場合には、微小粒子は凝集せず、それらの元の球形粒子構造が維持された。さらに、エタノール処理に伴うＴｇΔが確認された。
【００５８】
他の比較例においては、凝集が起こらない範囲内で、エタノール濃度の変化による初期過多放出に及ぼす効果が確認された。結果として、エタノール／水比が２：８の処理では、初期薬物放出が減少されず、３：７の処理により、初期薬物放出が多少減少した。しかしながら、減少の程度は、目的に十分に果たすほどに有意な効果をもたらさなかった。
【００５９】
したがって、初期過多放出の減少の程度が目的を果たさないという問題を解決するために、本発明の他の実施例を実施した。ここでは、初期過多放出の不十分な減少は、エタノール水溶液を用いた処理によるＴｇ減少効果が十分でなかったことによるものと考えられた。これゆえ、不十分なＴｇ減少を解決するために、逆に、反応温度そのものを、エタノール水溶液を用いた処理により減少された、Ｔｇ（ＴｇΔ）以上に上げる場合に、放出減少効果を達成することができる。次いで、４０℃でのエタノール−水混合物による処理を追加で実施する場合に、処理していない場合と比較して、初期過多放出を約４０％〜６５％程度減少できることがわかった。
【００６０】
本発明の他の実施例では、使用する高分子のＴｇΔ以上の温度における処理による放出減少効果を確認するために、エタノール対水の比が２：８の混合物による処理をＴｇΔ＋５℃又はＴｇΔ＋４０℃の処理温度で３０分間実施した。その結果、各処理温度にて、初期過多放出を減少できることを確認した。
【００６１】
本発明の他の実施例では、エタノール：水の混合物の濃度による効果を確認した。その結果、１０％〜５０％の範囲で、初期過多放出を減少できることが分かった。
【００６２】
本発明のさらに他の実施例では、粒子の大きさ、処理時間、高分子化合物の濃度を変えて製造された種々の状態の高分子微小粒子に対して、エタノール水溶液におる処理が、初期過多放出の減少効果を達成するための一般的な方法であるかどうかを確認した。その結果、全ての高分子微小粒子が高い初期過多放出の減少効果を示すことが分かった。
【００６３】
本発明のさらに他の実施例では、エタノール水溶液による処理の間、温度における変化が初期過多放出に影響を及ぼすかどうかを確認した。その結果、Ｔｇより低い温度での処理だけでは初期薬物放出の減少効果を示すことができない組成の場合には、ＴｇΔより高い温度でのみの処理による初期薬物放出の減少効果を達成できないことが分かった。さらに、初期過多放出率の減少効果は、Ｔｇより低い室温での処理後、ＴｇΔより高い４０℃の温度での処理を実施した場合にのみ達成できることが分かった。
【００６４】
言い換えれば、高分子化合物のＴｇが低いためにエタノール水溶液による処理だけでＴｇが反応温度（実施例では室温）以下に低下する（すなわち、ＴｇΔ＜反応温度）、例えば、使用される高分子の分子量が小さい場合）一の高分子組成、例えば、低分子量の高分子を有する組成では、反応温度での処理のみで初期薬物放出の減少効果を示すことができる。しかし、高分子組成物のＴｇが高いために（すなわち、ＴｇΔ＞反応温度）エタノール水溶液の処理だけではＴｇが反応温度（実施例では室温）以下には低下しない他の高分子組成、例えば、高い分子量の高分子を有する組成では、反応温度を上げた処理工程を追加することにより、初期薬物放出の減少効果を示すことができる。
【発明の効果】
【００６５】
したがって、本発明は、初期薬物放出が減少された高分子微小粒子を製造する新規な方法を提供する。本発明の製造方法は、薬物の過度な放出によって引き起こされるさまざまな副作用を防ぐことができる新規な剤形の薬物を製造するのに有用である。
【図面の簡単な説明】
【００６６】
【図１】図１は、溶媒内の高分子の濃度を１５％にして製造された微小粒子の初期過多放出率の測定結果を示す。
【図２】図２は、温度条件の変化によるエタノール混合物を用いた処理が初期過多放出に及ぼす影響の測定結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００６７】
以下、本発明を実施例により詳細に説明する。
【００６８】
ただし、下記実施例は本発明を例示するのみであり、本発明の内容は下記実施例に限定されるものではない。
【００６９】
<比較例１>
従来の方法による微小粒子の製造及び初期過多放出率の測定
【００７０】
１−１．高分子微小粒子の製造及び高濃度のエタノール処理
１５％（ｗ／ｖ）のＰＬＡ  ２Ｅを含有するギ酸エチル溶液と０．５ｗｔ％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）水溶液を混合した後、撹拌してＯ／Ｗエマルションを製造した。製造されたエマルションをＮａＯＨ溶液と反応させて、蒸留水（ＤＷ）を添加した。分散及びろ過の後、微小粒子を回収した。回収された微小粒子を０．１ｗｔ％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）水溶液に再分散させ、次いでろ過した。次いで、微小粒子を回収して、乾燥させた（本段落の方法をＦ０７２と指称し、以下、類似したやり方で製造方法を記号で指称する）。
【００７１】
製造された大きさ８３．６μｍの微小粒子をエタノール：水の比＝５：５（ｖ／ｖ）の混合液６７ｍｌに入れてよく混ぜた。その結果、１分もたたない内に微小粒子が凝集されながら形態が壊れて一塊になり、初期過多放出は測定することができなかった。
【００７２】
１−２．高分子微小粒子の製造及び低温での処理
１０％（ｗ／ｖ）のＰＬＡ  ４．５Ｅを含有するギ酸エチル溶液と０．５ｗｔ％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）水溶液を混合し、撹拌してＯ／Ｗエマルションを製造した。製造されたエマルションをＮａＯＨ溶液と反応させて、蒸留水（ＤＷ）を添加した。分散及びろ過の後、微小粒子を回収した。回収された微小粒子を０．１ｗｔ％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）水溶液に再分散させ、次いでろ過した。次いで、微小粒子を回収して乾燥した（Ｆ１０４−１と指称）。
【００７３】
製造された大きさ８０．４μｍの微小粒子を、エタノール：水の比＝２：８（ｖ／ｖ）の混合物を有する溶液で、室温（ＴｇΔより低い温度）にて６０分間処理した。次いで、ろ過し、微小粒子を回収し、回収された微小粒子を凍結乾燥機で乾燥させた（Ｆ１０４−２と指称）。
【００７４】
微小粒子を回収して、薬物の初期過多放出を測定した。結果として、以下の表２に示すとおり、初期過多放出は減少しなかったことが分った。
【００７５】
初期過多放出の測定は、次のように実施した：マイクロスフェアを透析膜に入れて、３７℃ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）に漬けて、１００ｒｐｍで連続的に撹拌しながら放出させた。予め決められた時間（６時間又は２４時間）経過後、放出された薬物の量をＵＰＬＣ（超高性能液体クロマトグラフィー）により測定した。
【００７６】
【表２】
0006318271.tif 000003
【００７７】
<実施例１>
エタノール濃度による本発明の微小粒子の製造
【００７８】
１−１．エタノール濃度による高分子微小粒子の製造
微小粒子の凝集がエタノール濃度によって影響を受けるか否かを確認するために、エタノール濃度を変動させて以下の実験を行った。
【００７９】
ＰＬＡ  ２Ｅ高分子により製造された大きさ８３．６μｍの微小粒子（製造条件：Ｆ０７２）とＰＬＡ  ４．５Ｅ高分子により製造された大きさ８０．４μｍの微小粒子（製造条件：Ｆ１０４−１）を、エタノール：水の比をそれぞれ１:９、２：８、３：７、４：６、５：５にした混合物６７ｍｌにより処理した。その結果、エタノール比が４０％以上の場合、つまり、エタノール：水の比が４：６及び５：５の混合物により処理した場合、２種の微小粒子の両方が凝集され、かたまった。一方、エタノール比が４０％未満の場合には、処理して６０分が過ぎても微小粒子は凝集されず、それらの元の球形粒子構造が維持された。
【００８０】
別の実験において、Ｗ／Ｏ／Ｗ法により製造された微小粒子の場合には、エタノール比が５０％になっても微小粒子が凝集されない反面、これまでに説明したとおり、Ｏ／Ｗ法により製造された微小粒子の場合には、エタノール比が４０％以上になると微小粒子が凝集された。
【００８１】
このような相違の原因は次のように理解された。Ｗ／Ｏ／Ｗ法で製造された微小粒子においては、表面空隙が多く存在する一方、Ｏ／Ｗ法で製造された微小粒子においては、表面空隙が存在しない。表面空隙の存在有無によって、微小粒子表面に含まれた水分子の量が変動する。この水分子の相違によりＴｇの相違を生み、高分子の柔らかさの程度の相違につながると思われる。これゆえ、このような相違により粒子の凝集の程度が相違すると理解された。
【００８２】
したがって、Ｏ／Ｗ法で製造された微小粒子は、Ｗ／Ｏ／Ｗ法で製造された微小粒子とは異なる物性を示すことから、効果的な具体的処理条件を見出だす必要があった。
【００８３】
１−２．高分子微小粒子の製造及びエタノール処理によるＴｇΔ
１５％（ｗ／ｖ）のＰＬＡ  ２Ｅ又はＰＬＡ  ４．５Ｅ又はＰＬＧＡ  ７５２５  ７Ｅを含有するギ酸エチル溶液と０．５ｗｔ％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）水溶液を混合し、撹拌してＯ／Ｗエマルションを製造した。製造されたエマルションをＮａＯＨ溶液と反応させ、蒸留水（ＤＷ）を添加した。分散及びろ過の後、微小粒子を回収した。回収された微小粒子を０．１ｗｔ％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）水溶液に分散させてろ過した（ＰＬＡ  ２Ｅ使用：Ｐ４と指称、ＰＬＡ  ４．５Ｅ使用：Ｐ５と指称、ＰＬＧＡ  ７５２５  ７Ｅ使用：Ｐ６と指称）。
【００８４】
製造された微小粒子を、エタノール：水の比が１：９、２：８、４：６又は５：５の混合液５０ｍｌに入れ、充分に撹拌した。ろ過により、湿潤状態の微小粒子を回収し、ＤＳＣによりＴｇΔ値を測定した。結果を以下の表３に示す。
【００８５】
【表３】
0006318271.tif 000004
【００８６】
<比較例２>
Ｏ／Ｗ法で製造した微小粒子の初期過多放出率の測定
【００８７】
アナストロゾール（親水性薬物）と１０％（ｗ／ｖ）のＰＬＡ  ４．５Ｅを含有するギ酸エチル溶液と、０．５ｗｔ％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）水溶液を混合し、撹拌してＯ／Ｗエマルションを製造した。製造されたエマルションをＮａＯＨ溶液と反応させて、蒸留水（ＤＷ）を添加した。分散及びろ過の後、微小粒子を回収した。回収された微小粒子を０．１ｗｔ％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）水溶液に再分散させ、微小粒子をろ過した。次いで、微小粒子を回収し、乾燥した（Ｆ１０４−５と指称）。
【００８８】
製造された微小粒子を、エタノール：水の比が２：８及び３：７である混合物を有する溶液（エタノール混合物とも指称）で室温にて６０分間処理した。次いで、ろ過し、微小粒子を回収し、乾燥した（それぞれ、Ｆ１０４−６、Ｆ１０４−８と指称）。このように製造された大きさ８１．２μｍのアナストロゾール（親水性薬物）を含有する微小粒子を回収して、初期過多放出率を測定した。
【００８９】
その結果、以下の表４のとおり、エタノール：水の比が２：８の混合物の処理によっては初期薬物放出が減少されず、比が３：７の混合物の処理によって、統計的に意義はないが、放出を一定程度減少させた。これゆえ、エタノール比を高めることにより初期過多放出を減らせるものと期待されるが、３：７の比での初期過多放出率の減少効果は、十分ではなかった。さらに、エタノール比を高めてエタノール：水の比が４：６になると、既に粒子が凝集された。したがって、Ｗ／Ｏ／Ｗ法などで製造された表面空隙が多数存在する微小粒子では、室温でのエタノール水溶液の処理だけでは効果的でなく、また、Ｏ／Ｗ法により製造された表面空隙がほとんど無い微小粒子においても効果的で無いことが分かった。これゆえ、改善が必要であることが分かった。
【００９０】
【表４】
0006318271.tif 000005
【００９１】
一方、粒径に注目すれば、放出減少効果があった３：７処理での粒径は、放出減少効果がなかった２：８処理より粒径が小さかった。これは、ＰＬＡのＴｇがエタノール−水混合物により低くなり、ＰＬＡを柔らかくしたためである。これゆえ、微小粒子内部の空隙及びチャンネルなどが崩壊されながら、微小粒子が稠密になり、微小粒子の大きさが小さくなった。
【００９２】
<実施例２>
Ｔｇ以上の追加の温度条件による微小粒子の製造及び初期放出率の測定
【００９３】
使用される高分子のＴｇが比較的低く、エタノール−水混合物の処理によりＴｇが室温以下（実験条件）に低下すると、初期過多放出を減少させる効果を達成することができる。一方、使用する高分子のＴｇが比較的高い場合は、この実験におけるエタノール：水の比が２：８での処理によっては、ＰＬＡのＴｇを室温以下（実験条件）に減少させる効果が不十分であった。
【００９４】
したがって、不十分であったＴｇの減少を解決するために、反応温度をＴｇΔ以上に上昇させた場合に、放出減少効果を達成できることが確認された。これゆえ、微小粒子の製造において、エタノール−水混合物を４０℃での処理を追加で実施した。次いで、初期過多放出率を測定した。
【００９５】
このために、４０℃でのエタノール−水の混合物の処理を追加で実施したことを除いては、比較例２に説明したのと同一な方法（Ｆ１０４−６とＦ１０４−８）において、微小粒子を製造した。つまり、エタノール：水の比が２：８の混合物により６０分間処理した後に、同一な混合物の処理温度を４０℃に昇温して、処理をさらに６０分間実施した（Ｆ１０４−７と指称）。また、エタノール：水の比が３：７の混合物を用いた処理を同じやり方で実施した（Ｆ１０４−９と指称）。
【００９６】
その結果、以下の表５に示したとおり、エタノール−水混合物の処理温度を高分子のＴｇΔ以上に上げた場合に、初期過多放出を約５１％から６５％減少できることが分った。
【００９７】
【表５】
0006318271.tif 000006
【００９８】
<実施例３>
ＴｇΔ以上の温度での微小粒子の製造及び初期過多放出率の測定
【００９９】
使用する高分子のＴｇΔ以上の温度における放出減少効果を確認するために、エタノール：水の比が２：８の混合物の処理温度を２８℃（ＴｇΔ＋５℃）、６３℃（ＴｇΔ＋４０℃）にし、処理時間を３０分間にしたことを除いては、実施例１−２（Ｐ４）に説明したものと同一な方法で微小粒子を製造した（２８℃処理はＰ４−１と指称、６３℃処理はＰ４−２と指称）。それぞれの温度で処理した後、初期過多放出が減少するかどうかを調べた。
【０１００】
その結果、以下の表６のとおり、エタノール−水の混合物の処理温度をＴｇΔ以上に上げた場合に、初期過多放出を減少できることを確認した。
【０１０１】
【表６】
0006318271.tif 000007
【０１０２】
<実施例４>
エタノール混合物濃度による微小粒子の製造及び初期過多放出率の測定
【０１０３】
エタノール−水の混合物の濃度によって、初期過多放出の程度が変動する可能性がある。エタノール処理濃度を変化させた（Ｐ４−１：エタノール濃度１０％、Ｐ４−２：エタノール濃度２０％、Ｐ６−１：エタノール濃度４０％、Ｐ６−２：エタノール濃度５０％）ことを除いては、実施例１−２に説明したものと同一な方法（Ｐ４、Ｐ６）で微小粒子を製造した。次いで、それぞれの条件により製造された微小粒子について、初期過多放出が減少されるか否かを調べた。
【０１０４】
その結果、以下の表７のとおり、エタノール−水の混合物の濃度が１０％、２０％、４０％、５０％の溶液で微小粒子を処理した場合に、初期過多放出が減少することを確認した。
【０１０５】
【表７】
0006318271.tif 000008
【０１０６】
<実施例５>
粒径による微小粒子の製造及び初期過多放出率の測定
【０１０７】
初期過多放出の程度は微小粒子の大きさによって変動する場合がある。これゆえ、撹拌速度を変更した（Ｆ１０４−５：５５０ｒｐｍ、Ｆ１０５−１：１０００ｒｐｍ）ことを除いては、実施例２に説明したものと同一のやり方で、異なる粒径の微小粒子を製造した。それぞれの条件により製造された微小粒子を、それぞれエタノール：水の比が２：８の混合物で室温にて処理し、次いで、４０℃で６０分間処理した。次いで、初期過多放出が減少するか否かを調べた。
その結果、以下の表８のとおり、粒径に関係なく、約４０〜５０％の初期過多放出率の減少効果が得られることが分かった。
【０１０８】
【表８】
0006318271.tif 000009
【０１０９】
<実施例６>
処理時間による微小粒子の製造及び初期放出率の測定
【０１１０】
微小粒子の初期過多放出率が、Ｔｇより高い反応温度での処理時間により影響を受けるか否かを確認するために、４０℃での処理時間を２０分又は６０分にしたことを除いては、実施例５に説明したもの（Ｆ１０５−１）と同一のやり方で微小粒子を製造した。次いで、初期過多放出率を測定した。
【０１１１】
その結果、以下の表９のとおり、エタノール−水の混合物の室温での処理の後に４０℃での処理を２０分及び６０分実施したどちらの場合においても、初期過多放出の減少効果が得られた。
【０１１２】
【表９】
0006318271.tif 000010
【０１１３】
<実施例７>
剤形変化による微小粒子の初期過多放出率の測定
【０１１４】
高分子の濃度変化など、剤形における変化により、エタノール水溶液処理による初期過多放出率の減少効果が影響を受けるか否かを確認するために、有機溶媒内の高分子の濃度を１５％（ｗ／ｖ）にして、添加物を変動させたことを除いては、実施例２に説明したものと同一のやり方で、表１０に記載した組成／処理条件により微小粒子を製造した。次いで、初期過多放出率を測定した（Ｆ１０５−５、Ｆ１０５−３、Ｆ１０５−６と指称。各方法の具体的な条件は以下の表１０に記載する。）。
【０１１５】
【表１０】
0006318271.tif 000011
【０１１６】
その結果、図１に示すとおり、剤形が変化しても、エタノール混合物の処理により初期薬物放出の減少効果を達成できることが分かった。
【０１１７】
<実施例８>
温度条件による微小粒子の製造及び初期過多放出率の測定
【０１１８】
エタノール混合物の処理における温度条件の変化が初期過多放出に影響を及ぼすか否かを確認するために、実施例７に説明するものと同一なやり方で、表１１で記載した組成／処理条件によって微小粒子を製造した。次いで、初期過多放出率を測定した。
【０１１９】
【表１１】
0006318271.tif 000012
【０１２０】
その結果、図２に示すとおり、エタノール混合物の処理を室温又は４０℃のいずれか一の温度にて実施した場合は、初期薬物放出減少効果を達成できない。したがって、高いＴｇを有する高分子によりＯ／Ｗ法で製造された非空隙微小粒子の場合には、室温でのエタノール水溶液の処理だけでは、初期過多放出率を減少させることができない。さらに、この処理だけでは、４０℃以上の上昇させた温度での初期過多放出率を減少させることができない。これゆえ、Ｔｇより低い温度での処理後、ＴｇΔ以上の温度での処理を実施した場合にのみ、初期過多放出率の減少効果を達成できることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【０１２１】
これまでに説明したとおり、本発明は、初期薬物放出を減少させた高分子微小粒子を製造する新規な方法を提供する。本発明の方法は、薬物の過度な放出により引き起こされる種々の副作用を防ぐことができる、新規な剤形の薬物を製造するのに有用である。
【図１】
0006318271.tif 000013
【図２】
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