(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１（配列番号４０１）に特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、ここで該抗体又は抗原結合フラグメントが：（ａ）重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）；及び（ｂ）軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の３つのＣＤＲを含み、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３のアミノ酸配列がそれぞれ配列番号３６−３８−４０−４４−４６−４８に示される、上記単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
それぞれ配列番号３４／４２に示されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対又は少なくとも９０％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体又は抗原結合フラグメント。
【請求項３】
それぞれ配列番号３４／４２に示されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項２に記載の単離された抗体又は抗原結合フラグメント。
【請求項４】
ヒトＡＳＩＣ１を発現する細胞における酸誘導ＡＳＩＣ１媒介イオン電流を阻害する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合フラグメント、及び薬学的に許容しうる担体又は希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項６】
ヒト患者における疼痛の処置又は減弱における使用のための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合フラグメントを含む医薬組成物。
【請求項７】
疼痛が侵害受容性痛又は内臓痛である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
疼痛が、炎症、術後創、神経障害、骨折、熱傷、骨粗しょう症性骨折、骨癌、痛風、片頭痛、及び線維筋痛症からなる群から選択される状態に関連する、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項９】
疼痛が癌関連痛又は化学療法誘発痛である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
疼痛を処置又は減弱するための医薬の製造のための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体又はその抗原結合フラグメントの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトＡＳＩＣ１に特異的な抗体及びその抗原結合フラグメント、並びにその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
酸感受性イオンチャネル（ＡＳＩＣ）は、中枢及び末梢神経系において発現されるプロトン開口型（ｐｒｏｔｏｎ−ｇａｔｅｄ）カチオンチャネルである。ヒトにおけるＡＳＩＣファミリーには、ＡＳＩＣ１、ＡＳＩＣ２、ＡＳＩＣ３及びＡＳＩＣ４サブユニットが含まれ、これらはニューロン膜においてホモマルチマー又はヘテロマルチマーイオンチャネルへと配置される。ＡＳＩＣ１、ＡＳＩＣ２及びＡＳＩＣ３は、有毒な化学的、熱、及び高閾値機械的な刺激を検出することができる小型及び中型の侵害受容性感覚ニューロンにおいてかなり発現される。ＡＳＩＣ２及びＡＳＩＣ３はまた、低閾値機械受容器に大部分相当する大型ニューロンでも発現される。
【０００３】
ＡＳＩＣはＮａ+及びＣａ2+イオンに対して透過性であり、そしてｐＨ６．８〜４．０の範囲に及ぶ外部ｐＨ変化により活性化される。ＡＳＩＣは局所アシドーシスの感知において重要な役割を果たすと考えられている。局所組織アシドーシスは、疼痛及び炎症の特徴であり、そして炎症を起こした組織は頻繁に低ｐＨ（約４．７程度まで低い）を示す。ＡＳＩＣの遮断は、様々な障害及び状態の処置のための方法として提案されてきた。特にＡＳＩＣ１の遮断は、疼痛、神経変性疾患、及び精神疾患のような状態を処置するための手段として提案されてきた。
【０００４】
ＡＳＩＣ１の薬理的阻害剤としては、ＡＳＩＣ１ホモマーを特異的に阻害するタランチュラペプチド  プサルモトキシン（Ｐｓａｌｍｏｔｏｘｉｎ）−１（ＰｃＴｘ１）、並びに小分子の非選択的ＡＳＩＣ阻害剤アミロライド及びＡ−３１７５６７が挙げられる。イソギンチャクから単離された４０アミノ酸のペプチドトキシンＡＰＥＴｘ２は、ＡＳＩＣ３ホモマー、さらにはＡＳＩＣ３／１及びＡＳＩＣ３／２ヘテロマーを阻害することが示されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
現在、ＡＳＩＣを特異的に遮断する公知の抗体はない。従って、当該分野では、ＡＳＩＣシグナル伝達により媒介される疾患及び状態を処置するために使用することができる、抗ＡＳＩＣ１抗体のような新規なＡＳＩＣ阻害剤の必要性がある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の簡単な要旨
本発明は、例えば、細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１に特異的に結合する抗体を含む、ヒトＡＳＩＣ１に特異的に結合する抗体を提供する。特定の実施態様によれば、本発明の抗体は、ヒトＡＳＩＣ１を発現する細胞において酸誘導ＡＳＩＣ１媒介イオン電流を阻害する。本発明の抗体は、とりわけ、ＡＳＩＣ１媒介シグナル伝達を阻害するため、並びにＡＳＩＣ１活性及び／又はシグナル伝達により引き起こされるかこれらに関連する疾患及び障害を処置するために有用である。例えば、本発明の抗体は、疼痛及び関連状態の処置又は軽減のために患者に投与され得る。
【０００７】
本発明の抗体は、全長（例えば、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４抗体）であってもよく、又は抗原結合部分のみ（例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）2又はｓｃＦｖフラグメント）を含んでい
てもよく、そして例えば残留エフェクター機能を除くために機能に影響を及ぼすように改変されてもよい（Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５−１９３３）。
【０００８】
本発明は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、及び３８６からなる群より選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、抗体又は抗体の抗原結合フラグメントを提供する。
【０００９】
本発明はまた、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、及び３９４からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、抗体又は抗体の抗原結合フラグメントを提供する。
【００１０】
本発明はまた、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、及び３８６／３９４からなる群から選択されるＨＣＶＲ及びＬＣＶＲ（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）配列対を含む、抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。
【００１１】
本発明はまた、配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６、及び３９２からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有する重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）ドメイン；並びに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３８４、及び４００からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有する軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）ドメインを含む、抗体又は抗体の抗原結合フラグメントを提供する。
【００１２】
特定の実施態様において、抗体又は抗体の抗原結合部分は、配列番号８／１６、２４／３２、４０／４８、５６／６４、７２／８０、８８／９６、１０４／１１２、１２０／１２８、１３６／１４４、１５２／１６０、１６８／１７６、１８４／１９２、２００／２０８、２１６／２２４、２３２／２４０、２４８／２５６、２６４／２７２、２８０／２８８、２９６／３０４、３１２／３２０、３２８／３３６、３４４／３５２、３６０／３６８、３７６／３８４、及び３９２／４００からなる群から選択されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む。
【００１３】
本発明はまた、配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、及び３８８からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有する重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）ドメイン；配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、及び３９０からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有する重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）ドメイン；配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、及び３９６からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）ドメイン；並びに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、及び３９８からなる群から選択されるアミノ酸配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似の配列を有する軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）ドメインをさらに含む、抗体又はそのフラグメントを提供する。
【００１４】
本発明の特定の非限定的な例となる抗体及び抗原結合フラグメントは、配列番号４−６−８−１２−１４−１６（例えばＨ１Ｍ６７１２Ｎ）；２０−２２−２４−２８−３０−３２（例えばＨ１Ｍ６７１６Ｎ）；３６−３８−４０−４４−４６−４８  （例えばＨ１Ｍ６７１８Ｎ）；５２−５４−５６−６０−６２−６４  （例えばＨ１Ｍ７１０１Ｎ）；６８−７０−７２−７６−７８−８０  （例えばＨ２Ｍ７１０３Ｎ）；８４−８６−８８−９２−９４−９６  （例えばＨ３Ｍ６７１３Ｎ）；１００−１０２−１０４−１０８−１１０−１１２  （例えばＨ３Ｍ６７１５Ｎ）；１１６−１１８−１２０−１２４−１２６−１２８  （例えばＨ３Ｍ６７２０Ｎ）；１３２−１３４−１３６−１４０−１４２−１４４  （例えばＨ３Ｍ６７２１Ｎ）；１４８−１５０−１５２−１５６−１５８−１６０（例えば、Ｈ３Ｍ６７２１Ｎ２）；１６４−１６６−１６８−１７２−１７４−１７６
（例えばＨ３Ｍ６７２６Ｎ）；１８０−１８２−１８４−１８８−１９０−１９２（例えば、Ｈ３Ｍ６７６０Ｎ）；１９６−１９８−２００−２０４−２０６−２０８  （例えばＨ３Ｍ７１０２Ｎ）；２１２−２１４−２１６−２２０−２２２−２２４（例えばＨ３Ｍ７１１８Ｎ）；２２８−２３０−２３２−２３６−２３８−２４０  （例えばＨ４Ｈ６３６２Ｐ）；２４４−２４６−２４８−２５２−２５４−２５６（例えばＨ４Ｈ６３６３Ｐ）；２６０−２６２−２６４−２６８−２７０−２７２（例えばＨ４Ｈ６３６４Ｐ）；２７６−２７８−２８０−２８４−２８６−２８８（例えばＨ４Ｈ６３６６Ｐ）；２９２−２９４−２９６−３００−３０２−３０４（例えばＨ４Ｈ６３７２Ｐ）；３０８−３１０−３１２−３１６−３１８−３２０（例えばＨ４Ｈ６３７４Ｐ）；３２４−３２６−３２８−３３２−３３４−３３６（例えばＨ４Ｈ６３７５Ｐ）；３４０−３４２−３４４−３４８−３５０−３５２（例えばＨ４Ｈ６３７９Ｐ）；３５６−３５８−３６０−３６４−３６６−３６８  （例えばＨ４Ｈ６３８０Ｐ）；３７２−３７４−３７６−３８０−３８２−３８４  （例えばＨ４Ｈ６３８１Ｐ）；及び３８８−３９０−３９２−３９６−３９８−４００（例えばＨ４Ｈ６３８３Ｐ）からなる群から選択されるアミノ酸配列をそれぞれ有するＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３ドメインを含む。
【００１５】
関連する実施態様において、本発明は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、及び３８６／３９４からなる群から選択される重鎖及び軽鎖可変領域（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）配列内に含まれる重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲドメインを含む、ＡＳＩＣ１（例えば、細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１）に特異的に結合する、抗体又は抗体の抗原結合フラグメントを含む。ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するための方法及び技術は当該分野で周知であり、そして本明細書に開示される特定されたＨＣＶＲ及び／又はＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するために使用することができる。ＣＤＲの境界を同定するために使用され得る例となる慣例としては、例えばＫａｂａｔの定義、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、及びＡｂＭ定義が挙げられる。おおまかに言えば、Ｋａｂａｔの定義は配列可変性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａの定義は構造的ループ領域の位置に基づき、そしてＡｂＭ定義はＫａｂａｔアプローチとＣｈｏｔｈｉａアプローチとの折衷である。例えば、Ｋａｂａｔ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８（１９９７）；及びＭａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：９２６８−９２７２（１９８９）を参照のこと。公開データベースもまた抗体内のＣＤＲ配列を同定するために利用可能である。
【００１６】
別の局面において、本発明は、抗ＡＳＩＣ１抗体又はそのフラグメントをコードする核酸分子を提供する。本発明の核酸を保有する組換え発現ベクター、及びこのようなベクターが導入されている宿主細胞もまた本発明に包含され、抗体の産生を可能にする条件下でこの宿主細胞を培養し、そして産生された抗体を回収する方法もまた同様に本発明に包含される。
【００１７】
一実施態様において、本発明は、配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８９、３０５、３２１、３３７、３５３、３６９、及び３８５からなる群から選択される核酸配列、又はその少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有する実質的に同一の配列によりコードされるＨＣＶＲを含む、抗体又はそのフラグメントを提供する。
【００１８】
本発明はまた、配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、１８５、２０１、２１７、２３３、２４９、２６５、２８１、２９７、３１３、３２９、３４５、３６１、３７７、及び３９３からなる群から選択される核酸配列、又はその少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有する実質的に同一の配列によりコードされるＬＣＶＲを含む、抗体又はそのフラグメントを提供する。
【００１９】
本発明はまた、配列番号７、２３、３９、５５、７１、８７、１０３、１１９、１３５、１５１、１６７、１８３、１９９、２１５、２３１、２４７、２６３、２７９、２９５、３１１、３２７、３４３、３５９、３７５、及び３９１からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によりコードされるＨＣＤＲ３ドメイン；並びに配列番号１５、３１、４７、６３、７９、９５、１１１、１２７、１４３、１５９、１７５、１９１、２０７、２２３、２３９、２５５、２７１、２８７、３０３、３１９、３３５、３５１、３６７、３８３、及び３９９からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によりコードされるＬＣＤＲ３ドメインを含む、抗体又は抗体の抗原結合フラグメントを提供する。
【００２０】
本発明はまた、配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、１７９、１９５、２１１、２２７、２４３、２５９、２７５、２９１、３０７、３２３、３３９、３５５、３７１、及び３８７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によりコードされるＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、１８１、１９７、２１３、２２９、２４５、２６１、２７７、２９３、３０９、３２５、３４１、３５７、３７３、及び３８９からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によりコードされるＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号１１、２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、１７１、１８７、２０３、２１９、２３５、２５１、２６７、２８３、２９９、３１５、３３１、３４７、３６３、３７９、及び３９５からなる群から選択されるヌクレオチド配列、又は少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によりコードされるＬＣＤＲ１ドメイン；並びに配列番号１３、２９、４５、６１、７７、９３、１０９、１２５、１４１、１５７、１７３、１８９、２０５、２２１、２３７、２５３、２６９、２８５、３０１、３１７、３３３、３４９、３６５、３８１、及び３９７からなる群から選択されるヌクレオチド配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％の相同性を有するその実質的に同一の配列によりコードされるＬＣＤＲ２ドメインをさらに含む、抗体又はそのフラグメントを提供する。
【００２１】
特定の実施態様によれば、抗体又はそのフラグメントは、配列番号１及び９（例えばＨ１Ｍ６７１２Ｎ）、１７及び２５（例えばＨ１Ｍ６７１６Ｎ）、３３及び４１（例えばＨ１Ｍ６７１８Ｎ）、４９及び５７（例えばＨ１Ｍ７１０１Ｎ）、６５及び７３（例えばＨ２Ｍ７１０３Ｎ）、８１及び８９（例えばＨ３Ｍ６７１３Ｎ）、９７及び１０５（例えばＨ３Ｍ６７１５Ｎ）、１１３及び１２１（例えばＨ３Ｍ６７２０Ｎ）、１２９及び１３７（例えばＨ３Ｍ６７２１Ｎ）、１４５及び１５３（例えばＨ３Ｍ６７２１Ｎ２）、１６１及び１６９（例えばＨ３Ｍ６７２６Ｎ）、１７７及び１８５（例えばＨ３Ｍ６７６０Ｎ）、１９３及び２０１（例えばＨ３Ｍ７１０２Ｎ）、２０９及び２１７（例えばＨ３Ｍ７１１８Ｎ）、２２５及び２３３（例えばＨ４Ｈ６３６２Ｐ）、２４１及び２４９（例えばＨ４Ｈ６３６３Ｐ）、２５７及び２６５（例えばＨ４Ｈ６３６４Ｐ）、２７３及び２８１（例えばＨ４Ｈ６３６６Ｐ）、２８９及び２９７（例えばＨ４Ｈ６３７２Ｐ）、３０５及び３１３（例えばＨ４Ｈ６３７４Ｐ）、３２１及び３２９（例えばＨ４Ｈ６３７５Ｐ）、３３７及び３４５（例えばＨ４Ｈ６３７９Ｐ）、３５３及び３６１（例えばＨ４Ｈ６３８０Ｐ）、３６９及び３７７（例えばＨ４Ｈ６３８１Ｐ）、３８５及び３９３（例えばＨ４Ｈ６３８３Ｐ）の核酸配列によりコードされる重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲ配列を含む。
【００２２】
本発明は、改変されたグリコシル化パターンを有する抗ＡＳＩＣ１抗体を含む。いくつかの適用において、望ましくないグリコシル化部位を除去するための改変、又はオリゴ糖鎖に存在するフコース部分を欠失した抗体が有用であり得る。
【００２３】
別の局面において、本発明は、ＡＳＩＣ１（例えば、細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１）に特異的に結合する組換えヒト抗体又はそのフラグメント、及び薬学的に許容しうる担体を含む医薬組成物を提供する。関連する局面において、本発明は、抗ＡＳＩＣ１抗体と第二の治療剤との組み合わせである組成物を特徴とする。一実施態様において、第二の治療剤は、抗ＡＳＩＣ１抗体と有利に組み合わせられるいずれかの薬剤である。抗ＡＳＩＣ１抗体と有利に組み合わせられ得る例となる薬剤としては、限定することなく、ＡＳＩＣ１活性を阻害する他の薬剤（他の抗体またはその抗原結合フラグメント、ペプチド阻害剤、小分子アンタゴニストなどを含む）及び／又はＡＳＩＣ１に直接結合しないが、それにもかかわらず細胞においてＡＳＩＣ１媒介イオン電流を妨害するか、遮断するか又は減弱する他の薬剤が挙げられる。
【００２４】
さらに別の局面において、本発明は、本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体又は抗体の抗原結合部分を使用してＡＳＩＣ１媒介イオン電流を阻害する方法を提供し、ここで該治療方法は、治療有効量の、本発明の抗体又は抗体の抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を投与することを含む。処置される障害は、ＡＳＩＣ１媒介イオン電流の除去、阻害又は減少によって改善、寛解、阻害又は予防されるいずれかの疾患又は状態である。本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体又は抗体フラグメントは、酸誘導ＡＳＩＣ１媒介電流を遮断するように、又はそうでなければＡＳＩＣ１のシグナル伝達活性を阻害するように機能し得る。
【００２５】
本発明はまた、患者におけるＡＳＩＣ１媒介イオン電流と関連するかそれにより引き起こされる疾患又は障害の処置のための医薬の製造における、本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体又は抗体の抗原結合部分の使用を含む。
【００２６】
他の実施態様は、以下の詳細な説明を検討することにより明らかとなるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】図１は、抗ＡＳＩＣ１抗体（Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ）、又はアイソタイプコントロール抗体で処置されたマウスの、尾（パネルＡ）又は腓腹筋（パネルＢ）を機械的に挟むことに応答した引き込み（ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ）閾値を示す。結果を挟み（ｐｉｎｃｈ）に対する引き込み閾値に関してグラムで表す（マウスの各コホートについての平均±ＳＥＭ）。
【図２】図２は、抗ＡＳＩＣ１抗体（Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ）又はアイソタイプコントロールで処置されたマウスにおける酸性食塩水誘導筋肉痛覚過敏のベースラインからの引き込み閾値の変化パーセントを示す。
【図３】図３（パネルＡ及びＢ）は、抗ＡＳＩＣ１抗体（Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ、１０若しくは４０ｍｇ／ｋｇ  −  パネルＡ；又はＨ４Ｈ６７２１Ｎ２  １０若しくは３０ｍｇ／ｋｇ  −  パネルＢ）、又はアイソタイプコントロールで処置されたマウスにおけるカラゲナン誘導筋肉痛覚過敏のベースラインからの引き込み閾値の変化パーセントを示す。
【図４】図４は、アイソタイプコントロール抗体３０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）、Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ  ３０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）、又はガバペンチン１００ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）のいずれかで処置された、タキソールを投与されたマウスにおけるタキソール誘導機械的アロディニアの程度を経時的に示す。結果を、フォン・フライの刺激毛（Ｖｏｎ  Ｆｒｅｙ  ｆｉｂｅｒｓ）を使用して測定して（実施例１０に記載されるとおり）、引き込み閾値（ｇ）に関して表す。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
詳細な説明
本発明を記載する前に、当然のことながら、記載される特定の方法及び実験条件は変化し得るので、本発明はこのような方法及び条件に限定されない。また当然のことながら、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書において使用される用語は、特定の実施態様を記載する目的のみのためであり、限定することを意図されない。
【００２９】
別の定義がなければ、本明細書において使用される全ての技術的及び化学的な用語は、本発明が属する分野の当業者により一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書で使用される用語「約」は、特定の列挙される数値を参照して使用される場合、その値が列挙された値から１％以下だけ変動し得るということを意味する。例えば、本明細書で使用される表現「約１００」は９９及び１０１、並びにその間の全ての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）を含む。
【００３０】
本明細書に記載される方法及び材料と類似するか又はそれらと等価ないずれの方法及び材料も本発明の実施又は試験において使用され得るが、好ましい方法及び材料をここで記載する。
【００３１】
定義
本明細書で使用される表現「ＡＳＩＣ１」及び「ＡＳＩＣ１フラグメント」は、非ヒト種由来（例えば、「マウスＡＳＩＣ１」、「マウスＡＳＩＣ１フラグメント」、「サルＡＳＩＣ１」、「サルＡＳＩＣ１フラグメント」など）であると特定されていなければヒトＡＳＩＣ１タンパク質又はフラグメントを指す。ヒトＡＳＩＣ１は配列番号４０１に明記されるアミノ酸を有する。本明細書で使用される表現「ＡＳＩＣ１」は、ＡＳＩＣ１細胞外ドメインの可溶性フラグメント（例えば、配列番号４０１のアミノ酸６３〜４２４内に見られる少なくとも３０の連続したアミノ酸を含むか又はそれらからなるポリペプチド）、さらには細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１（本明細書以下で定義される用語のとおり）を含む。
【００３２】
本明細書で使用される「ＡＳＩＣ１に結合する抗体」又は「抗ＡＳＩＣ１抗体」は、ＡＳＩＣ１タンパク質の可溶性フラグメント（例えば、ＡＳＩＣ１の細胞外ドメインの一部）及び／又は細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１に結合する、抗体及びその抗原結合フラグメントを含む。表現「細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１」は、ＡＳＩＣ１タンパク質の少なくとも一部（例えば、配列番号４０１のアミノ酸６３〜４２４）が細胞膜の細胞外の側に露出されて、抗体の抗原結合部分に接近可能であるように、インビトロ又はインビボで細胞の表面上で発現される１つ又はそれ以上のＡＳＩＣ１タンパク質を意味する。「細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１」は、細胞膜における機能的ＡＳＩＣ１イオンチャネルの文脈内に含まれるＡＳＩＣ１タンパク質を含む。いくつかの例において、「細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１」は、細胞表面上でヘテロマルチマー（例えば、ＡＳＩＣ１／２、ＡＳＩＣ１／３又はＡＳＩＣ１／４ヘテロマルチマー）の一部として発現されるＡＳＩＣ１タンパク質として発現される。他の例において、「細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１」は、細胞表面上のホモマルチマーの一部として発現されたＡＳＩＣ１タンパク質である。さらに、「細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１」は、通常ＡＳＩＣ１タンパク質を発現する細胞の表面上に発現されたＡＳＩＣ１タンパク質を含むか、これらからなるものであり得る。あるいは、「細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１」は、通常はその表面上でヒトＡＳＩＣ１を発現しないが、その表面上でＡＳＩＣ１を発現するように人工的に操作された細胞の表面上で発現されたＡＳＩＣ１タンパク質を含んでいても、これらからなるものであってもよい。
【００３３】
本明細書で使用される用語「抗体」は、特定の抗原（例えば、ＡＳＩＣ１）に特異的に結合するかまたはそれと相互作用する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むいずれかの抗原結合分子又は分子複合体を意味する。用語「抗体」は、４つのポリペプチド鎖、ジスルフィド結合により相互接続した２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子、さらにはそのマルチマー（例えば、ＩｇＭ）を含む。各重鎖は重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶHと略される）及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣH１、ＣH２及びＣH３を含む。各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶLと略される）及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は１つのドメイン（ＣL１）を含む。ＶH及びＶL領域は、より保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる領域間に組み入れられた、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分され得る。各ＶH及びＶLは、以下の順序でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。本発明の異なる実施態様において、抗ＡＳＩＣ１抗体（又はその抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、又は天然若しくは人工的に改変されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ又はそれ以上のＣＤＲの比較（ｓｉｄｅ−ｂｙ−ｓｉｄｅ）解析に基づいて規定され得る。
【００３４】
本明細書で使用される用語「抗体」はまた、完全抗体分子の抗原結合フラグメントも含む。本明細書で使用される、抗体の「抗原結合部分」又は抗体の「抗原結合フラグメント」などの用語は、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、いずれかの天然に存在するか、酵素により得られるか、合成又は遺伝的に操作されたポリペプチド又は糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合フラグメントは、例えば完全抗体分子から、いずれかの適切な標準の技術、例えばタンパク質消化、又は抗体の可変ドメイン及び場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作及び発現を含む組換え遺伝子操作技術を使用して誘導され得る。このようなＤＮＡは公知であるか、かつ／又は例えば商業的供給源、ＤＮＡライブラリ（例えばファージ−抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能であるか、又は合成され得る。ＤＮＡは配列決定され、そして例えば、１つ若しくはそれ以上の可変ドメイン及び／若しくは定常ドメインを適切な構成に配置するため、又はコドンを導入し、システイン残基を作製し、アミノ酸を改変、付加若しくは欠失などするために、化学的に、又は分子生物学的技術を使用することにより操作され得る。
【００３５】
抗原結合フラグメントの非限定的な例としては：（ｉ）Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）Ｆｄフラグメント；（ｉｖ）Ｆｖフラグメント；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂフラグメント；及び（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、例えばＣＤＲ３ペプチド）を模倣したアミノ酸残基からなる最小認識単位、又は拘束性（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ）ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドが挙げられる。他の操作された分子、例えばドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ−グラフト化抗体、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、三重特異性抗体（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、四重特異性抗体（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）、ミニ抗体（ｍｉｎｉｂｏｄｉｅｓ）、ナノボディ（例えば一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小分子免疫薬（ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（ＳＭＩＰ）、及びサメ可変ＩｇＮＡＲドメインもまた本明細書で使用される表現「抗原結合フラグメント」内に包含される。
【００３６】
抗体の抗原結合フラグメントは、典型的には少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、いずれのサイズ又はアミノ酸組成のものでもよく、そして一般的には、１つ又はそれ以上のフレームワーク配列に隣接するか、又はそれらとインフレームである少なくとも１つのＣＤＲを含むだろう。ＶLドメインに伴ってＶHドメインを有する抗原結合フラグメントにおいて、ＶH及びＶLドメインは互いに対していずれかの適切な配置で位置づけられ得る。例えば、可変領域は二量体であり得、そしてＶH−ＶH、ＶH−ＶL又はＶL−ＶL二量体を含み得る。あるいは、抗体の抗原結合フラグメントは、モノマーのＶH又はＶLドメインを含み得る。
【００３７】
特定の実施態様において、抗体の抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合で連結された少なくとも１つの可変ドメインを含み得る。本発明の抗体の抗原結合フラグメント内に見られ得る可変ドメイン及び定常ドメインの非限定的な例となる構成としては：（ｉ）ＶH−ＣH１；（ｉｉ）ＶH−ＣH２；（ｉｉｉ）ＶH−ＣH３；（ｉｖ）ＶH−ＣH１−ＣH２；（ｖ）ＶH−ＣH１−ＣH２−ＣH３；（ｖｉ）ＶH−ＣH２−ＣH３；（ｖｉｉ）ＶH−ＣL；（ｖｉｉｉ）ＶL−ＣH１；（ｉｘ）ＶL−ＣH２；（ｘ）ＶL−ＣH３；（ｘｉ）ＶL−ＣH１−ＣH２；（ｘｉｉ）ＶL−ＣH１−ＣH２−ＣH３；（ｘｉｉｉ）ＶL−ＣH２−ＣH３；及び（ｘｉｖ）ＶL−ＣLが挙げられる。上に列挙された例となる構成のうちのいずれかを含めて可変ドメイン及び定常ドメインのいずれかの構成において、可変ドメイン及び定常ドメインは、互いに直接連結されていても、又は完全若しくは部分的ヒンジ若しくはリンカー領域によって連結されていてもよい。ヒンジ領域は、少なくとも２つ（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０又はそれ以上）のアミノ酸からなり、これらは単一のポリペプチド分子中の隣接する可変ドメイン及び／又は定常ドメイン間の可撓性又は半可撓性の連結を生じる。さらに、本発明の抗体の抗原結合フラグメントは、互いに、かつ／又は１つ若しくはそれ以上のモノマーＶH若しくはＶLドメインと非共有結合結合した（例えば、ジスルフィド結合により）、上で列挙された可変ドメイン及び定常ドメインの構成のいずれかのホモ二量体又はヘテロ二量体（又は他のマルチマー）を含み得る。
【００３８】
完全抗体分子と同様に、抗原結合フラグメントは単一特異性でも多重特異性（例えば、二重特異性）でもよい。抗体の多重特異性抗原結合フラグメントは、典型的には少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、ここで各可変ドメインは別々の抗原に、または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示される例となる二重特異性抗体形式を含めて、いずれの多重特異性抗体形式も、当該分野で利用可能な慣用の技術を使用して本発明の抗体の抗原結合フラグメントの状況における使用のために適合され得る。
【００３９】
本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことを意図される。本発明のヒト抗体は、例えばＣＤＲにおいて、特にＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列にコードされていないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位特異的変異誘発により導入された変異、又はインビボでの体細胞変異により導入された変異）を含み得る。しかし、本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、別の哺乳動物種（例えばマウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上に接合された抗体を含むことを意図されない。
【００４０】
本明細書で使用される用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段により製造、発現、作製又は単離された全てのヒト抗体、例えば宿主細胞中にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体（以下にさらに記載される）、組換え体から単離された抗体、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリ（以下にさらに記載される）、ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックな動物（例えばマウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５を参照のこと）、又はヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを含むいずれかの他の手段により製造、発現、作製若しくは単離された抗体を含むことを意図される。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域及び定常領域を有する。しかし特定の実施態様では、このような組換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発（又はヒトＩｇ配列に対してトランスジェニックな動物が使用される場合は、インビボ体細胞変異）を受け、従って組換え抗体のＶH及びＶL領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶH及びＶL配列由来であるかそれらに関連するが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内には天然で存在しないかもしれない。
【００４１】
ヒト抗体は、ヒンジ不均一性に関連する２つの形態で存在し得る。１つの形態において、免疫グロブリン分子は、二量体が鎖間重鎖ジスルフィド結合により結合された約１５０〜１６０ｋＤａの安定な４つの鎖の構築物を含む。２つ目の形態において、二量体は鎖間ジスルフィド結合を介して連結されておらず、共有結合でカップリングされた軽鎖及び重鎖から構成される約７５〜８０ｋＤａの分子が形成される（半抗体）。これらの形態はアフィニティ精製後でも分離することが非常に困難である。
【００４２】
様々なインタクトなＩｇＧアイソタイプにおける２つ目の形態の出現頻度は、限定されないが、抗体のヒンジ領域アイソタイプに関連する構造的差異に起因する。ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域における単一アミノ酸置換は、ヒトＩｇＧ１ヒンジを使用して典型的に観察されるレベルまで第二の形態の出現を有意に減少させ得る（Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３０：１０５）。本発明は、ヒンジ、ＣH２又はＣH３領域において１つ又はそれ以上の変異を有する抗体を包含し、これは例えば製造の際に所望の抗体形態の収量を改善するために望ましいかもしれない。
【００４３】
本明細書で使用される「単離された抗体」は、同定され、かつその天然の環境の少なくとも１つの構成要素から分離及び／又は回収された抗体を意味する。例えば、生物の少なくとも１つの構成要素から、又はその抗体が天然に存在するか若しくは天然で産生される組織若しくは細胞から分離されるか又は取り出された抗体は、本発明の目的で「単離された抗体」である。単離された抗体はまた、組換え細胞内のインサイチュの抗体を含む。単離された抗体は、少なくとも１つの精製又は単離工程を受けた抗体である。特定の実施態様によれば、単離された抗体は他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まないものであり得る。
【００４４】
本明細書で使用される「中和」又は「遮断」抗体は、ＡＳＩＣ１へのその結合が酸誘導ＡＳＩＣ１媒介イオン電流を減少させるか又は検出可能に阻害する抗体を指すことを意図される。ＡＳＩＣ１中和又は遮断抗体により引き起こされる阻害は、適切なアッセイを使用して検出可能であるかぎりは完全である必要はない。ＡＳＩＣ１阻害を検出するための例となるアッセイは本明細書の他所に記載される。
【００４５】
本明細書に開示される抗ＡＳＩＣ１抗体は、その抗体が由来する対応する生殖系列配列と比較して、重鎖及び軽鎖可変ドメインのフレームワーク及び／又はＣＤＲ領域中に１つ又はそれ以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／又は欠失を含み得る。このような変異は、本明細書に開示されるアミノ酸配列を、例えば公開抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列と比較することにより容易に確認され得る。本発明は、１つ又はそれ以上のフレームワーク及び／又はＣＤＲ領域内の１つ又はそれ以上のアミノ酸が、その抗体が由来する生殖系列配列の対応する残基に、又は別のヒト生殖系列配列の対応する残基に、又は対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換に変異されている（このような配列変更は本明細書において集合的に「生殖系列変異」と呼ばれる）、本明細書に開示されるアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体、及びその抗原結合フラグメントを含む。当業者は、本明細書に開示される重鎖及び軽鎖可変領域配列から始めて、１つ又はそれ以上の個々の生殖系列変異又はその組み合わせを含む多数の抗体及びその抗原結合フラグメントを容易に製造することができる。特定の実施態様において、ＶH及び／又はＶLドメイン内の全てのフレームワーク及び／又はＣＤＲ残基は、その抗体が由来する元の生殖系列配列中に見られる残基へと復帰突然変異される（ｍｕｔａｔｅｄ  ｂａｃｋ）。他の実施態様において、特定の残基のみ、例えば、ＦＲ１の最初の８アミノ酸内若しくはＦＲ４の最後の８アミノ酸内に見られる変異した残基のみ、又はＣＤＲ１、ＣＤＲ２若しくはＣＤＲ３内に見られる変異した残基のみを元の生殖系列配列へと復帰突然変異させる。他の実施態様において、１つ又はそれ以上のフレームワーク及び／又はＣＤＲ残基は、異なる生殖系列配列（すなわち、その抗体が元々由来する生殖系列配列と異なる生殖系列配列）の対応する残基へと変異される。さらに、本発明の抗体は、フレームワーク及び／又はＣＤＲ領域内に２つ又はそれ以上の生殖系列変異のいずれかの組み合わせを含み得、例えばここで、特定の個々の残基が特定の生殖系列配列の対応する残基に変異されるが、一方で元の生殖系列配列とは異なる特定の他の残基は維持されるか、又は異なる生殖系列配列の対応する残基へと変異される。一旦入手されれば、１つ又はそれ以上の生殖系列変異を含む抗体及び抗原結合フラグメントは、１つ又はそれ以上の所望の特性、例えば、改善された結合特異性、増加した結合親和性、改善又は増強されたアンタゴニスト又はアゴニストの生物学的特性（場合によって）、減少した免疫原性などについて容易に試験され得る。この一般的な方法で得られた抗体及び抗原結合フラグメントは本発明内に包含される。
【００４６】
本発明はまた、１つ又はそれ以上の保存的置換を有する、本明細書で開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／又はＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む抗体ＡＳＩＣ１抗体を含む。例えば、本発明は、例えば、１０又はそれ以下、８又はそれ以下、６又はそれ以下、４又はそれ以下などの、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／又はＣＤＲアミノ酸配列のいずれかに対する保存的アミノ酸置換を含むＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／又はＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＡＳＩＣ１抗体を包含する。
【００４７】
用語「エピトープ」は、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗体は１つより多くのエピトープを有し得る。従って、異なる抗体が抗原上の異なる領域に結合し得、そして異なる生物学的作用を有し得る。エピトープは立体構造的でも線状でもよい。立体構造的エピトープは、線状ポリペプチド鎖の異なるセグメントからの空間的に並置されたアミノ酸により生じる。線状エピトープは、ポリペプチド鎖中の隣接するアミノ酸残基により生じるものである。特定の状況において、エピトープは、抗原上に糖質、ホスホリル基、又はスルホニル基の部分を含み得る。
【００４８】
核酸又はそのフラグメントに言及する場合の用語「実質的同一性」又は「実質的に同一」は、適切なヌクレオチド挿入又は欠失と共に別の核酸（又はその相補鎖）と最適に整列された場合に、以下に考察されるようなＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ又はＧａｐのようないずれかの周知の配列同一性アルゴリズムにより測定して、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９５％、そしてより好ましくは少なくとも約９６％、９７％、９８％又は９９％におけるヌクレオチド配列同一性があることを示す。参照核酸分子に対して実質的同一性を有する核酸分子は、特定の場合において、参照核酸分子によりコードされるポリペプチドと同じか又は実質的に類似したアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし得る。
【００４９】
ポリペプチドに適用される用語「実質的類似性」又は「実質的に類似」は、２つのペプチド配列が、例えばデフォルトギャップ重み（ｗｅｉｇｈｔｓ）を使用してプログラムＧＡＰ又はＢＥＳＴＦＩＴにより最適に整列された場合に、少なくとも９５％の配列同一性、なおより好ましくは少なくとも９８％又は９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一でない残基位置は、保存的アミノ酸置換により異なる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似した化学特性（例えば電荷又は疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基で置換されたものである。一般的に、保存的アミノ酸置換はタンパク質の機能的特性を実質的に変更しない。２つ又はそれ以上のアミノ酸配列が保存的置換により互いに異なる場合において、配列同一性パーセント又は類似度は、置換の保存的性質を補正するために上方調整され得る。この調整を行うための手段は当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７−３３１を参照のこと。類似した化学特性を有する側鎖を有するアミノ酸のグループの例としては以下が挙げられる、（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン；（２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリン及びスレオニン；（３）アミド含有側鎖：アスパラギン及びグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、及びヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパラギン酸及びグルタミン酸、並びに（７）硫黄含有側鎖はシステイン及びメチオニンである。好ましい保存的アミノ酸置換グループは：バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸−アスパラギン酸、及びアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置換は、Ｇｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３−１４４５において開示されるＰＡＭ２５０対数尤度マトリクスにおいて正の値を有するいずれかの変化である。「中程度に保存的な」置換は、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリクスにおいて負でない値を有するいずれかの変化である。
【００５０】
ポリペプチドについての配列類似性（配列同一性とも呼ばれる）は、典型的には配列解析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、様々な置換、欠失、及び保存的アミノ酸置換を含む他の改変に割り当てられる類似性の尺度を使用して類似した配列を照合する。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、密接に関連したポリペプチド、例えば異なる生物種由来の相同ポリペプチドの間、又は野生型タンパク質とそのムテインとの間の配列相同性又は配列同一性を決定するためにデフォルトパラメータと共に使用され得るＧａｐ及びＢｅｓｔｆｉｔのようなプログラムを含む。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照のこと。ポリペプチド配列はまた、デフォルト又は推奨のパラメータ、ＧＣＧバージョン６．１におけるプログラムを使用してＦＡＳＴＡを使用して比較され得る。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３）は、クエリ配列と検索配列との間の最大オーバーラップの領域の整列及び配列同一性パーセントを提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）前出）。本発明の配列を異なる生物由来の多数の配列を含むデータベースと比較する場合に好ましい別のアルゴリズムは、デフォルトパラメータを使用する、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰ又はＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−４０２を参照のこと。
【００５１】
抗体の生物学的特徴
本発明は、細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１に特異的に結合する抗体を含む。本明細書で使用される場合、抗体が天然又は人工的にＡＳＩＣ１を発現する細胞に対して検出可能な結合を示すが、ＡＳＩＣ１を発現していない等価な細胞に対して検出可能な結合を示さない場合に、抗体は細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１に特異的に結合する。抗体が細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１に特異的に結合するか否かを決定するために使用され得る１つの例となるアッセイ形式は、本明細書において実施例３で説明されるような蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）である。表２に示されるように、ＡＳＩＣ１を発現する細胞に対する抗体の定性的にポジティブなＦＡＣＳ結合を使用して、細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１に特異的に結合すると抗体を同定することができる。ＦＡＣＳはまた、実施例３、表３に示されるように、ＥＣ50値の点から、ＡＳＩＣ１を発現する細胞に対する抗体の結合を定量的に評価するために使用され得る。従って、本発明の特定の実施態様によれば、実施例３のＦＡＣＳアッセイ形式又は実質的に同様のアッセイ形式で試験された場合に、抗体が約５ｎＭ又はそれ以下（例えば、約５．０ｎＭ、４．５ｎＭ、４．０ｎＭ、３．５ｎＭ、３．０ｎＭ、２．５ｎＭ、２．０ｎＭ、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１．０ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２００ｐＭ、１００ｐＭ、９０ｐＭ、８５ｐＭ、８０ｐＭ、７５ｐＭ、７０ｐＭ、又はそれ以下）のＥＣ50値を示す場合に、その抗体は「細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１に特異的に結合する」。
【００５２】
特定の実施態様によれば、本発明の抗体はまた（あるいは）、細胞表面で発現されたヒトＡＳＩＣ１における酸誘導ＡＳＩＣ１媒介イオン電流を阻害するように機能し得る。本明細書で使用される表現「酸誘導ＡＳＩＣ１媒介イオン電流を阻害する」は、酸誘導細胞イオン電流又は流動が検出及び／又は定量され得るアッセイにおいて、本発明の抗体を加えることが、抗体の不在下（例えば、非特異的ネガティブコントロール抗体の存在下）で観察されるイオン電流と比較して、酸誘導イオン電流を検出可能に減少させるか又は阻害することを意味する。抗体が「酸誘導ＡＳＩＣ１媒介イオン電流を阻害する」かどうかを決定するために使用され得る非限定的な例となるアッセイを本明細書の実施例４において説明する。この実施例において、低ｐＨ活性化カルシウム流を、抗ＡＳＩＣ１抗体の存在下でＡＳＩＣ１を発現している細胞において測定する（「ＦＬＩＰＲアッセイ」）。このアッセイ形式において使用する抗体の量を変化させることにより、低ｐＨ誘導イオン流の５０％を遮断するために必要な抗体の量を計算し、ＩＣ50値として表すことができる（例えば、実施例４、表５を参照のこと）。本発明は、上記のような、ｐＨ約５．０〜約６．０で（例えば、ｐＨ５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、又は６．０）でＦＬＩＰＲアッセイにおいて試験された場合、又は実質的に類似したアッセイにおいて試験された場合に、約１０ｎＭ未満のＩＣ50で酸誘導ＡＳＩＣ１媒介イオン電流を阻害する抗ＡＳＩＣ１抗体を含む。例えば、本発明は、上記のようなＦＬＩＰＲアッセイにおいてｐＨ５．５で試験された場合、又は実質的に類似したアッセイにおいて試験された場合に、約９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１ｎＭ、又はそれ以下よりも低いＩＣ50を示す抗ＡＳＩＣ１抗体を含む。
【００５３】
抗体が「酸誘導ＡＳＩＣ１媒介イオン電流を阻害する」か否かを決定するために使用され得る他の例となるアッセイ形式を、本明細書の実施例５及び６において説明する。これらの実施例において、自動化電位固定パッチクランプアッセイを使用して、抗体の不在下で（例えば、非特異的ネガティブコントロール抗体の存在下で）等価な状況下で観察された電流（ｃｕｒｒｅｎｔ  ｆｌｕｘ）と比較して、ＡＳＩＣ１を発現する細胞において酸性ｐＨで抗ＡＳＩＣ１抗体の存在下での電流の阻害を測定及び／又は評価する。電位固定パッチクランプアッセイにおいて約１ｎＭ〜約１００ｎＭの抗体濃度で、ｐＨ約５．０〜約６．０で（例えば、ｐＨ５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、又は６．０）で試験された場合に、抗体が少なくとも１０％の電流阻害（例えば、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又はそれ以上の電流阻害；例えば実施例５、表６を参照のこと）を生じる場合に、その抗体は「酸誘導ＡＳＩＣ１媒介イオン電流を阻害する」とみなされる。いくつかの場合において、本発明の抗体は、上記のようなパッチクランプアッセイ形式又は実質的に類似したアッセイにおいて試験された場合に、１０ｎＭ又はそれ以上（例えば、１００ｎＭ）で電流を完全に阻害する（１００％阻害）。
【００５４】
本発明はまた、様々な動物疼痛モデルにおいて疼痛反応を阻害するかまたは減少させる抗体を含む。本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体を特徴づけるために有用な例となる動物疼痛モデルは、本明細書の実施例７〜９において説明される。例えば、本発明は、マウスモデルにおける酸誘導内蔵痛に対する疼痛反応を減弱又は阻害する抗ＡＳＩＣ１抗体を含む（例えば、実施例７を参照のこと）。特に、本発明は、実施例７に示されるようなマウスモデル、又は実質的に同様のモデルに対して約１又は１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与された場合に、内臓痛反応（例えば、０．６％酢酸の腹腔内注射に応答した腹部収縮）の少なくとも２０％の阻害を示す抗ＡＳＩＣ１抗体を含む。特定の場合において、本発明の抗体の投与に起因する、疼痛反応の阻害パーセントは、実施例７のマウス動物疼痛モデル、または実質的に同様のモデルにおいて試験された場合に、約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、又はそれ以上ほども高くなり得る。本発明の抗ＡＳＩＣ抗体を特徴付けるために使用され得る他の動物疼痛モデルとしては、例えば、実施例８の機械的侵害受容性疼痛反応モデル、実施例９の筋肉痛モデル、及び当該分野で利用可能な他の同様の動物モデルが挙げられる。従って、本発明は、本明細書において例示される適切な動物モデルにおいて実証して、侵害性機械的刺激に応答した疼痛（例えば、実施例８を参照のこと）；及び／又は酸性食塩水若しくはカラゲナン誘導筋肉痛覚過敏（例えば実施例９を参照のこと）を減弱又は阻害することができる抗ＡＳＩＣ１抗体を含む。
【００５５】
エピトープマッピング及び関連技術
本発明は、ヒトＡＳＩＣ１の細胞外ドメイン（配列番号４０１のアミノ酸６３〜４２４）内に見られる１つ又はそれ以上のアミノ酸と相互作用する抗ＡＳＩＣ１抗体を含む。抗体が結合するエピトープは、ＡＳＩＣ１の細胞外ドメイン内に位置する３又はそれ以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０又はそれ以上）のアミノ酸の単一の連続した配列からなり得る。あるいは、エピトープは、ＡＳＩＣ１の細胞外ドメイン内に位置する複数の非連続アミノ酸（又はアミノ酸配列）からなり得る。
【００５６】
当業者に公知の様々な技術を使用して、抗体がポリペプチド又はタンパク質内の「１つ又はそれ以上のアミノ酸と相互作用する」か否かを決定し得る。例となる技術としては、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  （Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ．、ＮＹ）に記載されるような慣用の交差ブロック（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ）アッセイ、アラニンスキャニング変異解析、ペプチドブロット分析（Ｒｅｉｎｅｋｅ、２００４、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２４８：４４３−４６３）、及びペプチド切断分析が挙げられる。さらに、抗原のエピトープ切除、エピトープ抽出及び化学的修飾のような方法が使用され得る（Ｔｏｍｅｒ、２０００、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ９：４８７−４９６）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用され得る別の方法は、質量分析法により検出される水素／重水素交換である。大まかにに言えば、水素／重水素交換法は、目的のタンパク質を重水素で標識し、続いて抗体をその重水素標識タンパク質に結合させることを含む。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移して、抗体により保護された残基（これは重水素標識されたままである）を除く全ての残基において水素−重水素交換を起こさせる。抗体の解離後、標的タンパク質をプロテアーゼ切断及び質量分光分析にかけて、それにより、抗体が相互作用する特定のアミノ酸に対応する重水素標識された残基を明らかにする。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９）  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６７（２）：２５２−２５９；Ｅｎｇｅｎ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ  （２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ−２６５Ａを参照のこと。
【００５７】
本発明はさらに、本明細書に記載される具体的な例となる抗体（例えばＨ１Ｍ６７１２Ｎ、Ｈ１Ｍ６７１６Ｎ、Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ、Ｈ１Ｍ７１０１Ｎ、Ｈ２Ｍ７１０３Ｎ、Ｈ３Ｍ６７１３Ｎ、Ｈ３Ｍ６７１５Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２０Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２１Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２１Ｎ２、Ｈ３Ｍ６７２６Ｎ、Ｈ３Ｍ６７６０Ｎ、Ｈ３Ｍ７１０２Ｎ、Ｈ３Ｍ７１１８Ｎ、Ｈ４Ｈ６３６２Ｐ、Ｈ４Ｈ６３６３Ｐ、Ｈ４Ｈ６３６４Ｐ、Ｈ４Ｈ６３６６Ｐ、Ｈ４Ｈ６３７２Ｐ、Ｈ４Ｈ６３７４Ｐ、Ｈ４Ｈ６３７５Ｐ、Ｈ４Ｈ６３７９Ｐ、Ｈ４Ｈ６３８０Ｐ、Ｈ４Ｈ６３８１Ｐ、Ｈ４Ｈ６３８３Ｐなど）のいずれかと同じエピトープに結合する抗ＡＳＩＣ１抗体を含む。同様に、本発明はまた、ＡＳＩＣ１への結合、又は細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１への結合について、本明細書に記載された具体的な例となる抗体（例えばＨ１Ｍ６７１２Ｎ、Ｈ１Ｍ６７１６Ｎ、Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ、Ｈ１Ｍ７１０１Ｎ、Ｈ２Ｍ７１０３Ｎ、Ｈ３Ｍ６７１３Ｎ、Ｈ３Ｍ６７１５Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２０Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２１Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２１Ｎ２、Ｈ３Ｍ６７２６Ｎ、Ｈ３Ｍ６７６０Ｎ、Ｈ３Ｍ７１０２Ｎ、Ｈ３Ｍ７１１８Ｎ、Ｈ４Ｈ６３６２Ｐ、Ｈ４Ｈ６３６３Ｐ、Ｈ４Ｈ６３６４Ｐ、Ｈ４Ｈ６３６６Ｐ、Ｈ４Ｈ６３７２Ｐ、Ｈ４Ｈ６３７４Ｐ、Ｈ４Ｈ６３７５Ｐ、Ｈ４Ｈ６３７９Ｐ、Ｈ４Ｈ６３８０Ｐ、Ｈ４Ｈ６３８１Ｐ、Ｈ４Ｈ６３８３Ｐなど）のいずれかと競合する抗ＡＳＩＣ１抗体を含む。
【００５８】
当該分野で公知の慣用の方法を使用することにより、抗体が、参照抗ＡＳＩＣ１抗体と同じエピトープに結合するか、又は参照抗ＡＳＩＣ１抗体と結合について競合するかどうかを容易に決定することができる。例えば、試験抗体が本発明の参照抗ＡＳＩＣ１抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、参照抗体をＡＳＩＣ１タンパク質（例えば、細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１）に結合させる。次に、ＡＳＩＣ１分子に結合する試験抗体の能力を評価する。試験抗体が参照抗ＡＳＩＣ１抗体との飽和結合後にＡＳＩＣ１に結合することが出来る場合、その試験抗体は参照抗ＡＳＩＣ１抗体と異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。他方で、試験抗体が参照抗ＡＳＩＣ１抗体との飽和結合後にＡＳＩＣ１分子に結合する事ができない場合、その試験抗体は本発明の参照抗ＡＳＩＣ１抗体により結合されるエピトープと同じエピトープに結合するかもしれない。次いでさらなる慣用の実験（例えば、ペプチド変異及び結合解析）を行い、観察された試験抗体の結合の欠如が実際に参照抗体と同じエピトープへの結合に起因するか、又は立体的ブロック（又は別の現象）が観察された結合の欠如の原因であるかどうかを確認する。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ、フローサイトメトリー又は当該分野で利用可能ないずれかの他の定量的若しくは定性的な抗体結合アッセイを使用して行われ得る。本発明の特定の実施態様に従って、競合結合アッセイで測定して、１倍、５倍、１０倍、２０倍、又は１００倍過剰の一方の抗体が、他方の結合を少なくとも５０％だけ阻害するが、好ましくは７５％、９０％又は９９％も阻害する場合、２つの抗体は同じ（又は重なっている）エピトープに結合する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９０：５０：１４９５−１５０２を参照のこと）。あるいは、２つの抗体は、一方の抗体の結合を減少させるか又は排除する、抗原における本質的に全てのアミノ酸変異が他方の結合を減少させるか又は排除する場合に、同じエピトープに結合するとみなされる。２つの抗体は、一方の抗体の結合を減少させるか又は排除するアミノ酸変異のサブセットのみが他方の結合を減少させるか又は排除する場合に、「重なった（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ）エピトープ」を有するとみなされる。
【００５９】
抗体が結合について参照抗ＡＳＩＣ１抗体と競合するかどうかを決定するために、上記の結合方法論を２つの方向性で行う：第一の方向性では、参照抗体を、飽和条件下でＡＳＩＣ１分子（例えば、細胞表面で発現されたＡＳＩＣ１）に結合させ、続いて試験抗体のＡＳＩＣ１分子への結合を評価する。第二の方向性では、試験抗体を飽和条件下でＡＳＩＣ１分子に結合させ、続いて参照抗体のＡＳＩＣ１分子への結合を評価する。両方の方向性で、第一の（飽和）抗体のみがＡＳＩＣ１分子に結合することができる場合、試験抗体及び参照抗体はＡＳＩＣ１への結合について競合すると結論づけられる。当業者には当然のことながら、参照抗体と結合について競合する抗体は、必ずしも参照抗体と同じエピトープに結合しないかもしれないが、重なっているかまたは隣接するエピトープに結合することにより参照抗体の結合を立体的にブロックするかもしれない。
【００６０】
ヒト抗体の製造
完全ヒトモノクローナル抗体を含めてモノクローナル抗体を生成するための方法は当該分野で公知である。いずれかのこのような公知の方法を、本発明の状況において使用して、ヒトＡＳＩＣ１に特異的に結合するヒト抗体を製造することができる。
【００６１】
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥTM技術又はモノクローナル抗体を生成するためのいずれかの他の公知の方法を使用して、ヒト可変領域及びマウス定常領域を有する、ＡＳＩＣ１に対する高親和性キメラ抗体を最初に単離する。以下の実験項のように、抗体を特徴付けし、そして親和性、選択性、エピトープなどの所望の特徴について選択する。マウス定常領域を所望のヒト定常領域と置き換えて、本発明の完全ヒト抗体を生成する（例えば野生型又は改変されたＩｇＧ１又はＩｇＧ４）。選択される定常領域は特定の用途に従って変わり得るが、高親和性抗原結合及び標的特異性の特徴は可変領域にある。
【００６２】
生物学的等価体（Ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｔｓ）
本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体及び抗体フラグメントは、記載される抗体のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有するが、ヒトＡＳＩＣ１に結合する能力は保有しているタンパク質を包含する。このような変異体抗体及び抗体フラグメントは、親配列と比較した場合に１つ又はそれ以上の付加、欠失又は置換を含むが、記載される抗体の生物学的活性と本質的に等価な生物学的活性を示す。同様に、本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体をコードするＤＮＡ配列は、開示された配列と比較した場合にヌクレオチドの１つ又はそれ以上の付加、欠失、又は置換を含むが、本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体又は抗体フラグメントと本質的に生物学的に等価な抗ＡＳＩＣ１抗体又は抗体フラグメントをコードする配列を包含する。このような変異体アミノ酸及びＤＮＡ配列の例は上で考察される。
【００６３】
２つの抗原結合タンパク質、すなわち抗体は、例えばそれらが、単回用量又は複数回用量のいずれでも同様の実験条件下で同じモル用量で投与された場合に、それらの吸収の速度及び程度が有意な差異を示さない薬学的等価体又は薬学的代替物である場合に、生物学的に等価とみなされる。いくつかの抗体は、それらが吸収の程度において等価であるが、吸収速度は等価ではない場合に等価体又は薬学的代替物とみなされ、そしてこのような吸収速度の差異は意図的であり、そしてラベルに示され、例えば慢性使用での有効な身体薬物濃度を達成するために必須ではなく、そして試験される特定の薬物製品については医学上重要でないと考えられるので、なお生物学的等価であるとみなされ得る。
【００６４】
一実施態様において、２つの抗原結合タンパク質は、それらの安全性、純度、及び効力において臨床的に意味のある差異が無い場合は生物学的に等価である。
【００６５】
一実施態様において、２つの抗原結合タンパク質は、患者が、そのような切り替えをせず継続された治療と比較して、有害作用の危険性の予期される増加（免疫原性の臨床的に有意な変化、又は減少した有効性を含む）を伴わずに参照製品と生物学的製品とを１回又はそれ以上切り替えられ得る場合に、生物学的に等価である。
【００６６】
一実施態様において、２つの抗原結合タンパク質は、それらが両方とも、そのような機構が知られている程度まで、使用条件についての共通の作用機構により作用する場合に生物学的に等価である。
【００６７】
生物学的等価性は、インビボ及びインビトロの方法で実証され得る。生物学的等価性の測定としては、例えば（ａ）抗体又はその代謝物の濃度を血液、血漿、血清又は他の生体液において時間の関数として測定する、ヒト又は他の哺乳動物におけるインビボ試験；（ｂ）ヒトのインビボバイオアベイラビリティーデータと相関性が有り、かつ合理的に予測されるインビトロ試験；（ｃ）抗体（又はその標的）の急性薬理作用が時間の関数として測定される、ヒト又は他の哺乳動物におけるインビボ試験；及び（ｄ）抗体の安全性、有効性又はバイオアベイラビリティー若しくは生物学的透過性を確立する、十分に管理された臨床試験が挙げられる。
【００６８】
本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体の生物学的に等価な変異体は、例えば、生物学的活性に必要の無い末端又は内部の残基若しくは配列の様々な置換又は欠失を生じることにより構築され得る。例えば、生物学的活性に必須ではないシステイン残基は、再生の際の不必要又は不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止するために、除去されるか又は他のアミノ酸と置き換えられ得る。他の状況において、生物学的に等価な抗体は、抗体のグリコシル化特徴を改変するアミノ酸変化、例えばグリコシル化を排除または除去する変異を含む抗ＡＳＩＣ１抗体変異体を含み得る。
【００６９】
種選択性及び種交差反応性
本発明の特定の実施態様によれば、抗ＡＳＩＣ１抗体はヒトＡＳＩＣ１に結合するが、他の種由来のＳＩＣ１には結合しない。本発明はまた、ヒトＡＳＩＣ１、及び１つ又はそれ以上の非ヒト種由来のＡＳＩＣ１に結合する抗ＡＳＩＣ１抗体を含む。例えば、本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体はヒトＡＳＩＣ１に結合し得、そして場合によっては、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、アレチネズミ、ブタ、ネコ、イヌ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウマ、ラクダ、カニクイザル、マーモセット、アカゲザル又はチンパンジーＡＳＩＣ１の１つ又はそれ以上に結合し得るか結合しないかもしれない。本発明はまた、ヒトＡＳＩＣ１チャネルを通る（しかし非ヒトＡＳＩＣ１チャンルは通らない）酸誘導イオン電流を選択的に遮断する抗ＡＳＩＣ１抗体を含む。あるいは、特定の実施態様によれば、非ヒト（例えば、マウス、ラットなど）ＡＳＩＣ１チャネルに加えて非ヒトＡＳＩＣ１を通る酸誘導イオン電流を遮断する抗ＡＳＩＣ１抗体が提供される（例えば、本明細書の実施例５を参照のこと）。
【００７０】
免疫複合体
本発明は、治療部分、例えば、細胞毒、化学療法薬、免疫抑制剤又は放射性同位体と複合体化した抗ＡＳＩＣ１モノクローナル抗体（「免疫複合体」）を包含する。細胞傷害性薬物は細胞に対して有害な薬剤を含む。免疫複合体を形成するために適した細胞傷害性薬物及び化学療法薬の例は当該分野で公知である（例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照のこと）。
【００７１】
多重特異性抗体
本発明の抗体は、単一特異性でも、二重特異性でも、多重毒異性でもよい。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であり得、又は１つより多くの標的ポリペプチドに対して特異的な抗原結合ドメインを含んでいてもよい。例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．、１９９１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９；Ｋｕｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、２００４、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８−２４４を参照のこと。本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体は、別の機能的分子、例えば別のペプチド又はタンパク質に連結されるか又はそれと同時発現されてもよい。例えば、抗体又はそのフラグメントは、１つ又はそれ以上の他の分子実体、例えば別の抗体又は抗体フラグメントに機能的に連結されて（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合又は他の方法により）、第二の結合特異性を有する二重特異性又は多重特異性抗体を生じ得る。例えば、本発明は、免疫グロブリンの１つのアームがヒトＡＳＩＣ１又はそのフラグメントに特異的であり、かつ免疫グロブリンの他方のアームが他の治療剤に特異的であるか治療的部分に結合されている二重特異性抗体を含む。
【００７２】
本発明の状況において使用され得る例となる二重特異性抗体形式は、第一の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣH３ドメイン及び第二のＩｇＣH３ドメインの使用を含み、ここで第一及び第二のＩｇＣH３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸だけ互いに異なり、そしてここで少なくとも１つのアミノ酸の差異は、アミノ酸の差異の無い二重特異性抗体と比較して、二重特異性抗体のプロテインＡへの結合を減少させる。一実施態様において、第一のＩｇ  ＣH３ドメインはプロテインＡに結合し、そして第二のＩｇ  ＣH３ドメインは、Ｈ９５Ｒ改変（ＩＭＧＴエクソン番号付けによる；ＥＵ番号付けではＨ４３５Ｒ）のようなプロテインＡ結合を減少させるかまたは消滅させる変異を含む。第二のＣH３はＹ９６Ｆ改変をさらに含み得る（ＩＭＧＴによる；ＥＵではＹ４３６Ｆ）。第二のＣH３内に見出され得るさらなる改変としては以下が挙げられる：ＩｇＧ１抗体の場合、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵではＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、及びＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；ＥＵではＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、及びＶ４２２Ｉ）；並びにＩｇＧ４抗体の場合、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵではＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、及びＶ４２２Ｉ）。上記の二重特異性抗体形式の変形は本発明の範囲内に意図される。
【００７３】
治療用製剤及び投与
本発明は、本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体又はその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、適切な担体、添加剤、及び改善された輸送、送達、忍容性などをもたらす他の薬剤を用いて製剤化される。多数の適切な処方が、全ての製薬化学者に公知の処方集に見出され得る：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ。これらの製剤としては、例えば、散剤、ペースト剤、軟膏、ゼリー、ワックス、オイル、脂質、脂質（カチオン性又はアニオン性）含有ベシクル小胞（例えばＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮTM、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油及び油中水乳剤、エマルションｃａｒｂｏｗａｘ（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固形ゲル、及びｃａｒｂｏｗａｘを含有する半固形混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ  （１９９８）  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  ５２：２３８−３１１も参照のこと。
【００７４】
患者に投与される抗体の用量は、患者の年齢及びサイズ、標的疾患、状態、投与経路などに依存して変わり得る。好ましい用量は、典型的には体重又は体表面に従って計算される。本発明の抗体が成人患者におけるＡＳＩＣ１活性に関連する状態又は疾患を処置するために使用される場合、通常は約０．０１〜約２０ｍｇ／体重ｋｇ、より好ましくは約０．０２〜約７、約０．０３〜約５、又は約０．０５〜約３ｍｇ／体重ｋｇの単回用量で、本発明の抗体を静脈内投与することが有利であるかもしれない。状態の重症度に依存して、処置の頻度及び期間は調整され得る。抗ＡＳＩＣ１抗体の投与についての有効投薬量及びスケジュールは経験的に決定され得；例えば、患者の進行は定期的評価によりモニタリングされ得、そして用量がそれに従って調整され得る。さらに、投薬量の種間スケーリングは、当該分野で周知の方法を使用して行われ得る（例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉ  ｅｔ  ａｌ．、１９９１、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．８：１３５１）。
【００７５】
様々な送達系が公知であり、本発明の医薬組成物を投与するために使用され得る（例えば、リポソーム中の封入、マイクロパーティクル、マイクロカプセル、変異ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照のこと））。導入方法としては、限定されないが、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路が挙げられる。組成物は、いずれかの都合のよい経路により、例えば注入又はボーラス注射により、上皮又は皮膚粘膜裏層（ｌｉｎｉｎｇｓ）（例えば、口腔粘膜、直腸及び腸粘膜など）を通した吸収により投与され得、そして他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与され得る。投与は全身でも局所でもよい。
【００７６】
本発明の医薬組成物は、標準的な針及びシリンジを用いて皮下又は静脈内に送達され得る。さらに、皮下送達に関して、ペン型送達デバイスは、本発明の医薬組成物の送達の際に容易に有用性を有する。このようなペン型デバイスは再使用可能であるか又は使い捨てであり得る。再使用可能なペン型デバイスは一般的に、医薬組成物を含む交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内の全ての医薬組成物が投与されてカートリッジが空になると、この空のカートリッジは容易に廃棄され得、そして医薬組成物を含む新しいカートリッジと交換され得る。次いで、ペン型送達デバイスは再使用され得る。使い捨てペン型送達デバイスでは、交換可能なカートリッジはない。むしろ、使い捨てペン型送達デバイスは、デバイス内のリザーバー中に保持された医薬組成物を充てん済みにされる。リザーバーから医薬組成物が空になると、デバイス全体が廃棄される。
【００７７】
多数の再使用可能なペン型及び自動注入送達デバイスが本発明の医薬組成物の皮下送達において有用性を有する。例としては、限定されないが少数を挙げると、ＡＵＴＯＰＥＮTM（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ、Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣTMペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ  ７５／２５TMペン、ＨＵＭＡＬＯＧTMペン、ＨＵＭＡＬＩＮ  ７０／３０TMペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮTM  Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲTM（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤTMペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮTM、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯTM、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴTM、並びにＯＰＴＩＣＬＩＫTM（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）が挙げられる。本発明の医薬組成物の皮下送達において有用性を有する使い捨てペン型送達デバイスとしては、限定されないが少数を挙げると、ＳＯＬＯＳＴＡＲTMペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮTM（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）、及びＫＷＩＫＰＥＮTM（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫTM自動注入装置（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴTM（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）、並びにＨＵＭＩＲＡTMペン（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ  ＩＬ）が挙げられる。
【００７８】
特定の状況において、医薬組成物は徐放系で送達され得る。一実施態様において、ポンプが使用され得る（Ｌａｎｇｅｒ、ｓｕｐｒａ；Ｓｅｆｔｏｎ、１９８７、ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１を参照のこと）。別の実施態様において、ポリマー材料が使用され得る；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ  （ｅｄｓ．）、１９７４、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａを参照のこと。さらに別の実施態様において、徐放系はその組成物の標的に近接して配置され得、従って全身用量のわずかしか必要としない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、１９８４、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、ｓｕｐｒａ、ｖｏｌ．２、ｐｐ．１１５−１３８を参照のこと）。他の徐放系は、Ｌａｎｇｅｒ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３による概説において考察される。
【００７９】
注射可能製剤としては、静脈内、皮下、皮内及び筋内注射、点滴などのための投薬形態が挙げられ得る。これらの注射可能製剤は、公知の方法により製造され得る。例えば、注射可能製剤は、例えば上記の抗体又はその塩を、注射用に従来使用される滅菌水性媒体又は油性媒体中に溶解、懸濁又は乳化させることにより製造され得る。注射用水性媒体として、例えば、生理食塩水、グルコース及び他の補助剤を含有する等張溶液などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加体）］などのような適切な可溶化剤と組み合わせて使用され得る。油性媒体として、例えばゴマ油、大豆油などが使用され、これらは安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどのような可溶化剤と組み合わせて使用され得る。このようにして製造された注射は好ましくは適切なアンプル中に充填される。
【００８０】
有利には、上記の経口又は非経口用途のための医薬組成物は、活性成分の用量に合うように適合された単位用量での投薬形態へと製造される。単位用量でのこのような投薬形態としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射（アンプル）、坐剤などが挙げられる。含有される上述の抗体の量は、一般的には単位用量での投薬形態あたり約５〜約５００ｍｇであり；特に注射の形態では、上述の抗体が約５〜約１００ｍｇで含有され、そして他の投薬形態では約１０〜約２５０ｍｇで含有されることが好ましい。
【００８１】
抗体の治療上の使用
本発明の抗体は、とりわけ、ＡＳＩＣ１活性と関連するか若しくはＡＳＩＣ１活性により媒介されるか、又は個体の神経細胞において酸誘導ＡＳＩＣ１媒介イオン電流を遮断若しくは減弱することにより処置可能である、いずれかの疾患又は障害の処置、予防及び／又は寛解のために有用である。本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体で処置され得る例となる疾患及び障害としては、疼痛状態、例えば侵害受容性疼痛及び内臓痛（例えば、炎症性腸疾患／過敏性腸症候群、間質性膀胱炎、膵炎、子宮内膜症、慢性骨盤痛症候群などに由来する疼痛）、さらには、炎症に関連する疼痛（例えば、炎症性筋肉痛）、多発性筋炎、術後創（例えば、手術後の痛み）、神経障害（例えば、糖尿病性神経障害）、坐骨神経痛、帯状疱疹後神経痛、筋筋膜性疼痛症候群（例えば、慢性筋筋膜痛）、関節炎、鎌状赤血球、腸神経虚血、跛行痛、骨折、熱傷、骨粗鬆症性骨折、痛風、片頭痛、線維筋痛症、複合性局所疼痛症候群、急性疱疹性疼痛などが挙げられる。本発明の抗体はまた、例えば、神経変性疾患（例えば、脱髄性執権、例えば多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症など）、脳損傷（例えば、脳卒中、外傷性脳損傷、脳アシドーシス）、神経障害（例えば、けいれん、発作性疾患）、及び精神疾患（例えば、抑うつ、不安障害、外傷後ストレス障害、パニック障害など）のような状態を予防及び／又は寛解するために使用され得る。
【００８２】
本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体はまた、癌関連痛の処置又は予防に有用である。「癌関連痛」としては、例えば骨に転移した癌に由来する疼痛を含む骨癌痛（例えば、乳癌、前立腺癌、肺癌、肉腫、腎臓癌、多発性骨髄腫など）が挙げられる。「癌関連痛」はまた、例えば、腎細胞癌、膵癌、乳癌、頭頸部癌、前立腺癌、悪性神経膠腫、骨肉腫、結腸直腸癌、胃癌、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、小細胞肺癌、非小細胞肺がん、滑膜肉腫、甲状腺癌、又は黒色腫のような癌性状態により一般的に関連する疼痛を含む。本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体はまた、がん治療又は抗癌治療により引き起こされるかそれらと関連する疼痛、例えば化学療法誘発神経障害性疼痛、例えばパクリタキセル（ＴａｘｏｌTM）、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ(R)）；ニトロソウレア、シクロホスファミド、ドキソルビシン、エピルビシン、５−フルオロウラシル、トポテカン、イリノテカン、カルムスチン、エストラムスチン、及び白金ベースの化学療法化合物、例えばシスプラチン、カルボプラチン、及びイプロプラチン（ｉｐｒｏｐｌａｔｉｎ）を用いた処置により引き起こされるか又はそれらと関連する疼痛を処置又は予防するために有用である。
【００８３】
組み合わせ治療
本発明は、本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体を、少なくとも１つのさらなる治療活性成分と組み合わせて投与することを含む治療投与計画を含む。このようなさらなる治療活性成分の非限定的な例としては、他のＡＳＩＣ阻害剤、例えば第二の抗ＡＳＩＣ１抗体、異なるＡＳＩＣ成分に特異的な抗体（例えば、抗ＡＳＩＣ２抗体、抗ＡＳＩＣ３抗体、抗ＡＳＩＣ４抗体など）、ペプチドＡＳＩＣ阻害剤（例えば、プサルモトキシン（ｐｓａｌｍｏｔｏｘｉｎ）−１  ［ＰｃＴｘ１］、ＡＰＥＴｘ２など）、及び／又は小分子ＡＳＩＣ阻害剤（例えば、アミロライド、Ａ−３１７５６７など）が挙げられる。
【００８４】
本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体と組み合わせて都合よく投与され得る他の薬剤としては、サイトカイン阻害剤（ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８のようなサイトカインに結合するか、又はそれらのそれぞれの受容体に結合する小分子サイトカイン阻害剤及び抗体を含む）、抗ウイルス剤、抗生物質、鎮痛薬、コルチコステロイド及び／又はＮＳＡＩＤが挙げられる。
【００８５】
さらなる治療活性成分は、本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体の投与の前、同時又は後に投与され得る；（本開示の目的のために、このような投与計画は、さらなる治療活性成分「と組み合わせた」抗ＡＳＩＣ１抗体の投与とみなされる）。
【００８６】
抗体の診断上の使用
本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体はまた、例えば診断目的のために、サンプル中のＡＳＩＣ１、又はＡＳＩＣ１発現細胞を検出及び／又は測定するために使用され得る。例えば、抗ＡＳＩＣ１抗体、又はそのフラグメントは、ＡＳＩＣ１の異常な発現（例えば、過剰発現、過小発現、無発現など）により特徴付けられる状態又は疾患を診断するために使用され得る。ＡＳＩＣ１についての例となる診断アッセイは、例えば、患者から得られたサンプルを本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体と接触させることを含み得、ここで抗ＡＳＩＣ１抗体は、検出可能な標識又はレポーター分子で標識されている。あるいは、非標識抗ＡＳＩＣ１抗体を、それ自体検出可能に標識されている二次抗体と組み合わせた診断適用において使用することができる。検出可能な標識又はレポーター分子は、放射性同位体、例えば3Ｈ、14Ｃ、32Ｐ、35Ｓ、若しくは125Ｉ；蛍光性部分若しくは化学発光部分、例えばフルオレセインイソチオシアネート、若しくはローダミン；又は酵素、例えばアルカリホスファターゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、若しくはルシフェラーゼであり得る。サンプル中のＡＳＩＣ１を検出又は測定するために使用され得る具体例となるアッセイとしては、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、及び蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）が挙げられる。
【００８７】
本発明のＡＳＩＣ１診断アッセイにおいて使用され得るサンプルは、正常又は病理的状態下で、検出可能な量のＡＳＩＣ１タンパク質又はそのフラグメントを含有する、患者から得ることができるいずれかの組織又は流体サンプルを含む。一般に、健常患者（例えば、異常ＡＳＩＣ１レベル又は活性に関連する疾患又は状態に罹患していない患者）から得られた特定のサンプル中のＡＳＩＣ１のレベルは、最初にベースラインを確立するため、又は標準的なＡＳＩＣ１のレベルを確立するために測定されるだろう。次いでＡＳＩＣ１のこのベースラインレベルを、ＡＳＩＣ１関連疾患又は状態を有すると疑われる個体から得られたサンプル中で測定されたＡＳＩＣ１のレベルに対して比較することができる。
【実施例】
【００８８】
以下の実施例は、本発明の方法及び組成物を製造し、使用する方法の完全な開示及び記載を当業者に提供するように示されるものであり、発明者らが彼らの発明とみなすものの範囲を制限することは意図されない。使用される数（例えば、量、温度など）に関して正確さを確実にするよう努力がなされたが、実験誤差及び偏差がいくらかを占めるはずである。そうではないと示されていなければ、部数は質量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、そして圧力は大気圧付近である。
【００８９】
実施例１．ヒトＡＳＩＣ１に対するヒト抗体の生成
抗ヒトＡＳＩＣ１抗体を生成するためにＤＮＡ免疫化手順を使用し、ここでは全長ヒトＡＳＩＣ１をコードするＤＮＡプラスミドを、アジュバントをコードする別のプラスミドと一緒に、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ(R)マウス（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｉｎｃ．、Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ、ＮＹ）に皮内注射した。次いで注射部位を電気穿孔してプラスミドの宿主細胞トランスフェクションを誘導した。免疫化に使用したＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ(R)マウスは、ヒト免疫グロブリン重鎖及びカッパ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含み、そして内在性マウスａｓｉｃ１ａ遺伝子を欠いている。抗体免疫応答を、ヒトＡＳＩＣ１を発現するように操作された細胞を使用する細胞結合アッセイによりモニタリングした。所望の免疫応答が達成された場合、脾細胞を採取し、そしてマウス骨髄腫細胞に融合してそれらの生存能を保存し、そしてハイブリドーマ細胞株を形成した。ハイブリドーマ細胞株をスクリーニングして選択し、ＡＳＩＣ１特異的抗体を産生する細胞株を同定した。この技術を使用して、いくつかの抗ＡＳＩＣ１キメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメイン及びマウス定常ドメインを有する抗体）を得た；この方法で生成された例となる抗体を以下のように指定した：Ｈ１Ｍ６７１２Ｎ、Ｈ１Ｍ６７１６Ｎ、Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ、Ｈ１Ｍ７１０１Ｎ、Ｈ２Ｍ７１０３Ｎ、Ｈ３Ｍ６７１３Ｎ、Ｈ３Ｍ６７１５Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２０Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２１Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２１Ｎ２、Ｈ３Ｍ６７２６Ｎ、Ｈ３Ｍ６７６０Ｎ、Ｈ３Ｍ７１０２Ｎ、及びＨ３Ｍ７１１８Ｎ。
【００９０】
また抗ＡＳＩＣ１抗体を、ＵＳ２００７／０２８０９４５Ａ１に記載されるように、骨髄腫細胞に融合することなく抗原陽性Ｂ細胞からも直接単離した。この方法を使用して、いくつかの完全ヒト抗ＡＳＩＣ１抗体（すなわち、ヒト可変ドメイン及びヒト定常ドメインを有する抗体）を得た；この方法で生成された例となる抗体を以下のように指定した：Ｈ４Ｈ６３６２Ｐ、Ｈ４Ｈ６３６３Ｐ、Ｈ４Ｈ６３６４Ｐ、Ｈ４Ｈ６３６６Ｐ、Ｈ４Ｈ６３７２Ｐ、Ｈ４Ｈ６３７４Ｐ、Ｈ４Ｈ６３７５Ｐ、Ｈ４Ｈ６３７９Ｐ、Ｈ４Ｈ６３８０Ｐ、Ｈ４Ｈ６３８１Ｐ、及びＨ４Ｈ６３８３Ｐ。
【００９１】
本実施例の方法に従って生成された例となる抗ＡＳＩＣ１抗体の特定の生物学的特性を以下に記載される実施例において詳細に記載する。
【００９２】
実施例２．重鎖及び軽鎖可変領域アミノ酸配列
表１は、選択された抗ＡＳＩＣ１抗体の重鎖及び軽鎖可変領域アミノ酸配列対及びそれらの対応する抗体識別子（ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒｓ）を示す。
【００９３】
【表１】
0006302844.tif 000002
【００９４】
抗体は、典型的には以下の命名法に従って本明細書中で言及される：Ｆｃ接頭語（例えば「Ｈ４Ｈ」、「Ｈ１Ｍ」、「Ｈ２Ｍ」）、続いて数字識別子（例えば表１に示されるような「６７１２」又は「６３６２」）、続いて「Ｐ」又は「Ｎ」の接尾語。従って、この命名法によれば、抗体は本明細書において、例えば「Ｈ１Ｍ６７１２Ｎ」又は「Ｈ４Ｈ６３６２Ｐ」のように呼ばれる。本明細書で使用される抗体の表示でのＨ４Ｈ、Ｈ１Ｍ、及びＨ３Ｍの接頭語は、抗体の特定のＦｃ領域を示す。例えば、「Ｈ１Ｍ」抗体はマウスＩｇＧ１  Ｆｃを有し、一方で「Ｈ４Ｈ」抗体はヒトＩｇＧ４  Ｆｃを有する。当業者には当然のことながら。Ｈ１Ｍ又はＨ３Ｍ抗体はＨ４Ｈ抗体に変換され得、そして逆もまた同様であるが、いずれの事象においても、可変ドメイン（ＣＤＲを含む）  −  これは表１に示される数字識別子により示される  −  は同じままである。
【００９５】
実施例３．全長ヒト又はマウスＡＳＩＣ１を発現する細胞への抗体の結合
抗ＡＳＩＣ１抗体をさらに特徴づけるために、（ａ）全長ヒトＡＳＩＣ１（３Ｔ３／ｈＡＳＩＣ１；ＮＣＢＩ受入番号ＮＰ＿００１０８６．２［配列番号４０１］のアミノ酸１〜５２８）を過剰発現するように安定にトランスフェクトされたマウス線維芽細胞３Ｔ３細胞株、（ｂ）全長マウスＡＳＩＣ１ａ（３Ｔ３／ｍＡＳＩＣ１ａ；ＮＣＢＩ受入番号ＮＰ＿０３３７２７のアミノ酸１〜５２６）を過剰発現するように安定にトランスフェクトされた３Ｔ３細胞株、又は（ｃ）ラットＡＳＩＣ１を内因的に発現する、マウス神経芽細胞腫及びラット後根神経節の融合細胞株であるＮＤ７細胞株（ＥＣＡＣＣ、＃９２０９０９０３）のいずれかに結合するそれらの能力を、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）を使用して決定した。ＮＤ７細胞を、１ｍＭジブチリル−ｃＡＭＰ（カタログ番号ｓｃ−２０１５６７Ａ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ）を含有する低血清培地（０．５％ＦＢＳ）で培地を置き換えることにより分化させた。ＦＡＣＳ結合を、いくつかの抗体について未分化ＮＤ７細胞及び分化したＮＤ７細胞の両方に対して試験した。
【００９６】
ＦＡＣＳ結合実験を行うために、接着細胞を、ＰＢＳ中１ｍＭ  ＥＤＴＡを使用して集め、次いで洗浄し、そして５％ＦＢＳを含有する冷ＰＢＳ中に再懸濁させた。各結合実験のために、各抗ＡＳＩＣ１抗体を（３Ｔ３／ｈＡＳＩＣ１細胞への結合について精製された抗体１０ｎＭ又は抗体上清３．３ｎＭ及び３Ｔ３／ｍＡＳＩＣ１ａ又はＮＤ７細胞への結合について５ｎＭの最終濃度で）、５％ＦＢＳを含むＰＢＳ５００μＬ中の２５０，０００個の細胞に加えた。２０分間室温でインキュベートした後、次いでヒトＦｃ（カタログ番号１０９−１３６−０９８、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）又はマウスＦｃ（カタログ番号５５０８２６、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を認識し、そしてアロフィコシアニンに結合体化された二次抗体を、最終濃度１３．３ｎＭで細胞混合物に加えた。氷上で２０分間インキュベートした後、細胞を洗浄し、そして５％ＦＢＳを含有するＰＢＳ中に再懸濁させ、次いでフローサイトメーター（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）で分類及び分析して、候補抗体による試験された細胞株への相対的結合を決定した。抗ＡＳＩＣ１抗体で染色した細胞のヒストグラムを、二次抗体のみで染色した細胞のヒストグラムと比較した。ＡＳＩＣ１シグナルの二次抗体のみに対するパーセンテージをＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ、Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ）を使用して計算した。１０％より高くゲーティングされた（ｇａｔｅｄ）場合に、抗ＡＳＩＣ１抗体で染色されたサンプルをＦＡＣＳポジティブと記録した。１％より低くゲーティングされた場合に、抗ＡＳＩＣ１抗体で染色されたサンプルをＦＡＣＳネガティブと記録した。１％〜１０％の間でゲーティングされた場合に、抗ＡＳＩＣ１抗体で染色されたサンプルを弱いと記録した。抗ＡＳＩＣ１抗体の３Ｔ３／ｈＡＳＩＣ１細胞、３Ｔ３／ｍＡＳＩＣ１ａ細胞及びＮＤ７細胞に対する結合特異性を表２にまとめる（ＮＤ＝未決定）。
【００９７】
【表２】
0006302844.tif 000003
【００９８】
選択された抗体の３Ｔ３／ｈＡＳＩＣ１細胞に対する結合親和性を、多数の抗体濃度（６７ｎＭ、６．７ｎＭ、０．６７ｎＭ、６７ｐＭ、及び６．７ｐＭ）を使用してＦＡＣＳによりさらに調べ、これからおよそのＥＣ50値を計算した。抗ＡＳＩＣ１抗体について観察された平均蛍光強度（ＭＦＩ）シグナルからバックグラウンドシグナル（二次抗体のみ）を差し引いて、抗体濃度の関数としてプロットし、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用してＥＣ50値を決定した（表３）。
【００９９】
【表３】
0006302844.tif 000004
【０１００】
表２に示されるように、試験された２５の抗体のうち１７は、３Ｔ３／ｈＡＳＩＣ１細胞株に対して特異的結合を示し；試験された１０の抗体のうち８つは、３Ｔ３／ｍＡＳＩＣ１ａ細胞に対してポジティブな結合を示し；試験された１０の抗体のうち６つは未分化ＮＤ７細胞株に対してポジティブな結合を示し；そして試験された７つの抗体のうち５つは分化ＮＤ７細胞株に対してポジティブな結合を示した。とりわけ、１つの抗体（Ｈ３Ｍ７１１８Ｎ）は、３Ｔ３／ｍＡＳＩＣ１ａ細胞株及び未分化ＮＤ７細胞株の両方に弱い結合を示したが、３Ｔ３／ｈＡＳＩＣ１細胞に対してはポジティブな結合を示した。表３に示されるように、多数の抗体濃度で試験された抗ＡＳＩＣ１抗体は、３Ｔ３／ｈＡＳＩＣ１細胞への結合について２３ｐＭほどの低いおよそのＥＣ50値で高親和性ＦＡＣＳ結合を示した。
【０１０１】
実施例４．抗ＡＳＩＣ１抗体は細胞カルシウム流アッセイにおいて酸媒介細胞シグナル伝達を遮断する
抗ＡＳＩＣ１抗体による酸媒介細胞シグナル伝達の機能的遮断を特徴付けるために、細胞カルシウム流を測定するアッセイを、ヒトＡＳＩＣ１（ＮＣＢＩ受入番号ＮＰ＿００１０８６２．２［配列番号４０１］のアミノ酸１〜５２８）を発現するように一過性トランスフェクトされた細胞株、ＨＥＫ２９３  ＣＬ：１Ｆ１０  （１Ｆ１０）を使用して実施した。この細胞株は、ヒトＰａｒ２を発現するように安定にトランスフェクトされた親株ＨＥＫ２９３／Ｄ９から作製された。トランスフェクトされた細胞を３７℃、５％ＣＯ2で２日間インキュベートした後、９６ウェル黒色透明底アッセイプレートに１ウェルあたり１００，０００細胞の濃度で再プレーティング（ｒｅｐｌａｔｉｎｇ）した。細胞を室温で２０分間プレートに接着させ、次いで終夜３７℃、５％ＣＯ2でインキュベートした。
【０１０２】
Ｆｌｕｏ−４  ＮＷカルシウムアッセイキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃  Ｆ３６２０６）を使用して、低ｐＨ緩衝液により活性化された細胞内での細胞内カルシウム流のレベルを決定した。アッセイ緩衝液を製造者の仕様書に従って調製した。プロベネシド５０μＬ（７７μｇ／ｕＬ）を緩衝液Ｃ（２ｘＨＢＳＳ）  ５ｍＬに加え、次いでこれを成分Ａ（Ｆｌｕｏ−４色素）に加えた。抗ＡＳＩＣ１抗体を、一点ブロッキング（ｓｉｎｇｌｅ  ｐｏｉｎｔ  ｂｌｏｃｋｉｎｇ）アッセイのためにＦｌｕｏ−４色素中で２５０ｎＭの濃度に希釈した。低ｐＨ緩衝液により刺激されたカルシウム流を遮断した抗体を、多数の抗体濃度を使用してこのアッセイでさらに特徴づけした。抗ＡＳＩＣ１抗体を、色素中で２５０ｎＭの濃度に希釈し、そして８点１：３希釈系列（２５０〜０．１ｎＭの範囲）を使用して、各抗体の遮断ＩＣ50を決定した。細胞培地を、細胞を含有するアッセイプレートから除去し、次いで抗ＡＳＩＣ１抗体を含有するＦｌｕｏ−４色素５０μＬを加えた。プレートを３７℃、５％ＣＯ2で１時間インキュベートした後、ＦＬＩＰＲ  Ｔｅｔｒａ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）により読み取った。
【０１０３】
緩衝液ＣのｐＨをｐＨ５．０又はｐＨ５．５に調整し、そして細胞に加える前にリザーバープレートに加えた。次いでＦＬＩＰＲ  Ｔｅｔｒａにリザーバープレートから低ｐＨ緩衝液５０μＬをアッセイプレート中の細胞に毎秒５０μｌの速度で加えた。緩衝液を加える前１０秒間（先行読み取り（ｐｒｅ−ｒｅａｄ））及び緩衝液を加えた後１００秒間の各ウェルにより生じたカルシウムシグナルを、４７０〜４９０ｎｍの励起波長設定及び５１５〜５７５ｎｍの発光波長設定を使用してＦＬＩＰＲ  Ｔｅｔｒａにより測定した。緩衝液を加えた後に得られた最大観測値と、先行読み取り及び緩衝液を加えた後の両方を含めてアッセイ全体の間の最小値との間の差異を計算し、そしてＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用してグラフ化した。結果を表４及び５に示す。
【０１０４】
【表４】
0006302844.tif 000005
【０１０５】
【表５】
0006302844.tif 000006
【０１０６】
表４に示されるように、２４の抗体のうち２つ（Ｈ３Ｍ６７２１Ｎ及びＨ１Ｍ６７１８Ｎ）は、２５０ｎＭの単一の濃度でＨ５．５及びｐＨ５．０の両方でカルシウム流の３０％より高い遮断（ポジティブ）を示し、そして１つの抗体（Ｈ３Ｍ６７６０Ｎ）は、ｐＨ５．５でしか３０％より高い遮断を示さなかった。２５０ｎＭの単一の濃度で試験された、ｐＨ５．５で２４の抗体のうち１２、及びｐＨ５．０で２４抗体のうち１７が、測定可能な遮断を示さなかった（ネガティブ）。２５０ｎＭの単一の濃度で試験された、ｐＨ５．５で２４の抗体のうち９つ、及びｐＨ５．０で２４抗体のうち５つが、１０〜３０％の間のカルシウム流の減少を示した（弱い）。
【０１０７】
表５に示されるように、ｐＨ５．５での用量依存性遮断について試験された１０の抗体のうち８つが、２７％〜７８％の範囲に及ぶカルシウム流の遮断％及び０．１ｎＭ〜６ｎＭの範囲に及ぶＩＣ50値を示した。ｐＨ５．５での用量依存性カルシウム流遮断について試験された抗体のうち２つ（Ｈ４Ｈ６３８０Ｐ及びＨ４Ｈ６３８１Ｐ）は測定可能な遮断を示さなかった。ｐＨ５．０での用量依存性遮断について試験された１０の抗体のうち２つ（Ｈ３Ｍ６７２１Ｎ及びＨ１Ｍ６７１８Ｎ）は、それぞれカルシウム流の２５％及び４８％遮断を示したが、ＩＣ50値は用量依存性を示したにもかかわらず測定できなかった（ＩＣ＊）。ｐＨ５．０での用量依存性遮断について試験された１０の抗体のうちの１つ（Ｈ３Ｍ６７６０Ｎ）は、カルシウム流の５６％遮断及び１ｎＭのＩＣ50を示した。ｐＨ５．０での用量依存性カルシウム流遮断について試験された１０の抗体のうち５つは、用量依存性遮断は示さなかったが、試験された抗体濃度の各々におけるカルシウム流の１０％と２５％との間の遮断を示した。ｐＨ５．０での用量依存性遮断について試験された１０の抗体のうち２つ（Ｈ４Ｈ６３８０Ｐ及びＨ４Ｈ６３８１Ｐ）は測定可能な遮断を示さなかった。
【０１０８】
実施例５．抗ＡＳＩＣ１抗体は、自動化電位固定パッチクランプアッセイ［Ｑ−Ｐａｔｃｈ］において酸誘導ＡＳＩＣ１イオン電流を遮断する
マイクロチップベースの自動化パッチクランプシステムＱ−Ｐａｔｃｈ（Ｓｏｐｈｉｏｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｉｎｃ．、Ｂａｌｌｅｒｕｐ、Ｄｅｎｍａｒｋ）を使用して、全長ヒトＡＳＩＣ１チャネルを発現する安定にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞株（ＨＥＫ／ｈＡＳＩＣ１；ＮＣＢＩ受入番号ＮＰ＿００１０８６．２のアミノ酸１〜５２８）におけるヒトＡＳＩＣ１電流、又は全長マウスＡＳＩＣ１ａチャネルを発現する安定にトランスフェクトされた３Ｔ３細胞株（３Ｔ３／ｍＡＳＩＣ１ａ；ＮＣＢＩ受入番号ＮＰ＿０３３７２７のアミノ酸１〜５２６）におけるマウスＡＳＩＣ１ａ電流のいずれかを阻害する、抗ＡＳＩＣ１抗体の能力を決定した。
【０１０９】
ＨＥＫ／ｈＡＳＩＣ１細胞を、ＤＭＥＭ高グルコース培地、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１％非必須アミノ酸及び５００μｇ／ｍＬ  Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ(R)（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃  １０１３１）中で培養した。３Ｔ３／ｍＡＳＩＣ１ａ細胞を、ＤＭＥＭ高グルコース培地、１０％  ＦＢＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃１０３７８−０１６）、及び４００ｕｇ／ｍＬ  Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ(R)中で培養した。記録の日に、細胞をＤｅｔａｃｈｉｎ細胞剥離液（Ｇｅｎｌａｎｔｉｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、＃Ｔ１００１００）を用いて採取し、遠心分離し、そして１．４ｍＬ無血清溶液［ＣＨＯ−ＳＦＭ−ＩＩ  ｍｅｄｉａ  （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃３１０３３）、ＨＥＰＥＳ  ２５ｍＭ及びペニシリン／ストレプトマイシン１００単位／ｍＬ］中に再懸濁した。次いでこの細胞懸濁液を振盪機で４０分間室温（ＲＴ）にてインキュベートした。２又は３つの抗ＡＳＩＣ１抗体及びコントロール抗体に１つの実験を並行して行った。従って、インキュベーションの終わりに、細胞懸濁液を４本のチューブに分けて（チューブあたり３００μＬ中に約５ｘ１０5細胞）、抗体を、一点実験のために直接チューブ中で１００ｎＭの最終濃度に、又は用量応答実験のために様々な濃度で希釈し、次いで振盪機で２０分間ＲＴにてインキュベートした。インキュベーションの終わりに、細胞をＱ−Ｐａｔｃｈにロードした。
【０１１０】
細胞を、最初に０．２％（質量／体積）ウシ血清アルブミンを含有する緩衝液（ＮａＣｌ  １４０ｍＭ、ＫＣｌ  ４ｍＭ、ＭｇＣｌ2  １ｍＭ、ＣａＣｌ2  ２ｍＭ、グルコース５ｍＭ及びＨＥＰＥＳ  １０ｍＭ）（細胞外緩衝液）でｐＨ７．４にて灌流し、そして目的の抗体を、一点実験のために１００ｎＭの最終濃度で、又は用量応答実験のために様々な濃度で加え、そして約３分間インキュベートして放置した。次いで、細胞を保持電位−８０ｍＶに維持しながらｐＨ  ６．０に調整した細胞外緩衝液を加えることによりヒトＡＳＩＣ１電流を１秒間誘発させた。Ｑ−Ｐａｔｃｈでのそれぞれの記録後にアミロライド３０μＭを加えて、細胞がアッセイ期間の間応答性であったことを実証した。細胞内記録液の組成は、ＣｓＣｌ  １４０ｍＭ、ＭｇＣｌ2  ４ｍＭ、ＥＧＴＡ  １０ｍＭ及びＨＥＰＥＳ  １０ｍＭであり；ＣｓＯＨを用いてｐＨ７．３に調整された。
【０１１１】
全ての抗ＡＳＩＣ１抗体を四連でコントロール無関連抗体と並行して試験した。チャネル遮断を、コントロール無関連抗体の存在下での電流と比較した、抗ＡＳＩＣ１抗体の存在下での電流の阻害パーセントとして測定し、複数の遮断実験にわたって平均した。結果を表６にまとめる。
【０１１２】
【表６】
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【０１１３】
表６に示されるように、Ｑ−Ｐａｔｃｈで１００ｎＭにて試験された２３の抗体のうち１７が、ヒトＡＳＩＣ１電流の機能的阻害を示し、１７の抗体のうち９つは７０％より高い遮断を示した。１１の抗体（Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２０Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２１Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２６Ｎ、Ｈ４Ｈ６３６６Ｐ、Ｈ１Ｍ７１０１Ｎ、Ｈ３Ｍ７１０２Ｎ、Ｈ２ｂＭ７１０３Ｎ、Ｈ３Ｍ７１１８Ｎ、Ｈ４Ｈ６７１８Ｎ、及びＨ４Ｈ６７２１Ｎ２）を、Ｑ−Ｐａｔｃｈで様々な濃度にてヒトＡＳＩＣ１電流を阻害するそれらの能力についてさらに試験し、そして９つの抗体（Ｈ４Ｈ６７１８Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２０Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２１Ｎ、Ｈ１Ｍ７１０１Ｎ、Ｈ３Ｍ７１０２Ｎ、Ｈ２ｂＭ７１０３Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２６Ｎ、Ｈ４Ｈ６３６６Ｐ、及びＨ３Ｍ７１１８Ｎ）はマウスＡＳＩＣ１電流を阻害するそれらの能力について試験した。これらの抗体について観察された遮断パーセンテージを表７（ヒトＡＳＩＣ１）及び表８（マウスＡＳＩＣ１）にまとめる。
【０１１４】
【表７】
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【０１１５】
【表８】
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【０１１６】
【表９】
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【０１１７】
【表１０】
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【０１１８】
表７に示されるように、１つの抗体Ｈ３Ｍ６７２６Ｎは、１０ｎＭより高い見掛けのＩＣ50でヒトＡＳＩＣ１電流を遮断したが、６つの抗体（Ｈ３Ｍ６７２０Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２１Ｎ、Ｈ４Ｈ６３６６Ｐ、Ｈ３Ｍ７１０２Ｎ、Ｈ２ｂＭ７１０３Ｎ及びＨ３Ｍ７１１８Ｎ）は、１０ｎＭ又はそれ以下の見掛けのＩＣ50でヒトＡＳＩＣ１電流を遮断した。これらの抗体のうち４つ（Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ、Ｈ１Ｍ７１０１Ｎ、Ｈ４Ｈ６７１８Ｎ、及びＨ４Ｈ６７２１Ｎ２）は、１ｎＭ未満の見掛けのＩＣ50でヒトＡＳＩＣ１電流を遮断した。
【０１１９】
表８に示されるように、マウスＡＳＩＣ１を発現する細胞で試験された１０の抗ＡＳＩＣ１抗体のうち６つ（Ｈ４Ｈ６７１８Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２１Ｎ、Ｈ４Ｈ６７２１Ｎ２、Ｈ１Ｍ７１０１Ｎ、Ｈ３Ｍ７１０２Ｎ及びＨ３Ｍ７１１８Ｎ）は、試験された最も高い抗体濃度でマウスＡＳＩＣ１電流を９０〜１００％阻害したが、４つの抗体（Ｈ３Ｍ６７２０Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２６Ｎ、Ｈ４Ｈ６３６６Ｐ、及びＨ２ｂＭ７１０３Ｎ）は、約８０％又はそれ以下しか電流を阻害しなかった。Ｈ３Ｍ７１１８Ｎ、Ｈ２ｂＭ７１０３Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２０Ｎ及びＨ３Ｍ６７２１Ｎは、２５ｎＭ未満の見掛けのＩＣ50でマウスＡＳＩＣ１電流を阻害した。Ｈ４Ｈ６７１８Ｎは、１ｎＭ未満の見掛けのＩＣ50でヒトＡＳＩＣ１電流を阻害した。
【０１２０】
またＱ−Ｐａｔｃｈを使用して、内因的にラットＡＳＩＣ１を発現するマウス神経芽細胞腫及びラット後根神経節の融合細胞株であるＮＤ７／２３細胞株（ＥＣＡＣＣ、＃９２０９０９０３）においてＡＳＩＣ１電流を阻害する抗ＡＳＩＣ１抗体  Ｈ４Ｈ６７１８Ｎの能力を決定した。
【０１２１】
ＮＤ７／２３細胞を、１０％ＦＢＳ、２ｍＭグルタミン、１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃１０３７８−０１６）を含有するＤＭＥＭ高グルコース培地で培養した。播種後の日、１ｍＭジブチリル−ｃＡＭＰ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、＃ｓｃ−２０１５６７Ａ）を含有する低血清培地（０．５％ＦＢＳ）と培地を置き換えることによりＮＤ７／２３細胞を分化させた。記録の日に、ＳｔｅｍＰｒｏ  Ａｃｃｕｔａｓｅ細胞解離試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃Ａ１１１０５−０１）を使用して細胞を採取し、遠心分離し、そして細胞外緩衝液１ｍＬ中に再懸濁した。次いでこの細胞懸濁液をＱ−Ｐａｔｃｈにロードした。
【０１２２】
細胞を最初に０．２％（質量／体積）ウシ血清アルブミンを含有する細胞外緩衝液（ＮａＣｌ  １４０ｍＭ、ＫＣｌ  ４ｍＭ、ＭｇＣｌ2  １ｍＭ、ＣａＣｌ2  ２ｍＭ、グルコース５ｍＭ及びＨＥＰＥＳ  １０ｍＭ、ＮａＯＨでｐＨ７．４に調整）でｐＨ７．４にて６分間灌流してパッチを安定化した。次いで細胞を−８０ｍＶの保持電位に維持しながら、ラットＡＳＩＣ１電流を、ｐＨ６．０に調整された細胞外緩衝液を加えることにより１秒間誘発した。ラットＡＳＩＣ１電流を、細胞外緩衝液でｐＨ６で２回誘発し、次いで１０ｎＭのアイソタイプコントロール抗体又は１０ｎＭの抗ＡＳＩＣ１抗体（Ｈ４Ｈ６７１８Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２０Ｎ、Ｈ２ｂＭ７１０３Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２６Ｎ、Ｈ４Ｈ６３６６Ｐ及びＨ３Ｍ７１１８Ｎ）のいずれかを含有する同じ細胞外緩衝液でさらに２回誘発した。抗ＡＳＩＣ１抗体の記録の後に、１０ｎＭの選択的ＡＳＩＣ１アンタゴニストＰｃＴｘ１（Ａｌｏｍｏｎｅ  Ｌａｂｓ、＃ＳＴＰ−２００）を細胞に加えて、ｐＨ６で細胞外緩衝液により誘発された電流に対するＡＳＩＣ１特異的電流の寄与を評価した。細胞内記録溶液の組成は、ＣｓＦ  １２０ｍＭ、ＮａＣｌ  １５ｍＭ、ＥＧＴＡ  １０ｍＭ及びＨＥＰＥＳ  １０ｍＭであり；ＣｓＯＨでｐＨ７．３に調整された。
【０１２３】
チャネル遮断を、抗体の適用前に測定された電流と比較した、抗ＡＳＩＣ１抗体の存在下での電流の阻害パーセントとして測定し、そして最大ＡＳＩＣ１特異的電流遮断を規定するために使用されたＰｃＴｘ１の存在下での電流の阻害パーセントと比較した。結果を表９に示す。
【０１２４】
【表１１】
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【０１２５】
表９に示されるように、Ｈ４Ｈ６７１８Ｎは、分化ＮＤ７／２３細胞において１０ｎＭの濃度でラットＡＳＩＣ１電流の１００％阻害を示したが（ｎ＝９）、Ｈ３Ｍ６７２０Ｎ及びＨ３Ｍ７１１８Ｎはそれぞれ約４３％及び６５％だけ電流を阻害した。３つの抗体（Ｈ２ｂＭ７１０３Ｎ、Ｈ３Ｍ６７２６Ｎ及びＨ４Ｈ６３６６Ｐ）は、これらの実験において１０ｎＭでラットＡＳＩＣ１電流の有意な阻害を示さなかった。
【０１２６】
実施例６．抗ＡＳＩＣ１抗体は、自動化電位固定パッチクランプアッセイ［Ｐｏｒｔ−Ａ−Ｐａｔｃｈ］において酸誘導ＡＳＩＣ１イオン電流を遮断する
マイクロチップベースの自動化パッチクランプシステムであるＰｏｒｔ−ａ−Ｐａｔｃｈ（Ｎａｎｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｎｏｒｔｈ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）を使用して、全長ヒトＡＳＩＣ１チャネル（ＨＥＫ／ｈＡＳＩＣ１；ＮＣＢＩ受入番号ＮＰ＿００１０８６．２のアミノ酸１〜５２８）を発現する安定にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞株においてヒトＡＳＩＣ１電流を阻害するために必要な抗ＡＳＩＣ１抗体  Ｈ１Ｍ６７１８Ｎの最大半量の阻害濃度（ＩＣ50）を決定した。
【０１２７】
ＨＥＫ／ｈＡＳＩＣ１細胞を、ＤＭＥＭ高グルコース培地、１０％ウシ胎児血清、１％非必須アミノ酸及び５００μｇ／ｍＬ  Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ(R)（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃１０１３１）中で培養した。記録の日に、Ｄｅｔａｃｈｉｎ細胞剥離液（Ｇｅｎｌａｎｔｉｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、＃Ｔ１００１００）を用いて細胞を採取し、遠心分離し、そして細胞外緩衝液（ＮａＣｌ  １４０ｍＭ、ＫＣｌ  ４ｍＭ、ＭｇＣｌ2  １ｍＭ、ＣａＣｌ2  ２ｍＭ、グルコース５ｍＭ及びＨＥＰＥＳ  １０ｍＭ、ＮａＯＨを用いてｐＨ７．４）５００ｕＬに再懸濁した。次いでこの細胞懸濁液をＰｏｒｔ−ａ−Ｐａｔｃｈにロードした。
【０１２８】
０．１％（質量／体積）ウシ血清アルブミンを含有する細胞外緩衝液でｐＨ７．４にて最初に細胞を約５分間灌流してパッチを安定化した。次いで、−８０ｍＶの保持電位に細胞を維持しながら、ｐＨ６．０に調整した細胞外緩衝液を加えることによりヒトＡＳＩＣ１電流を３秒間誘発させた。ヒトＡＳＩＣ１電流をｐＨ６．０細胞外緩衝液で３回（２分空けて）誘発し、そして１００ｎＭのアイソタイプコントロール抗体又は１０、３、１、０．８若しくは０．６ｎＭの抗ＡＳＩＣ１抗体  Ｈ１Ｍ６７１８Ｎのいずれかを含有するｐＨ６．０細胞外緩衝液で３回誘発した。ｐＨ６細胞外緩衝液中の３０μＭのアミロライドを、ｐＨ刺激測定を完了した後に加えて、細胞がアッセイの期間の間応答性であったことを実証した。細胞内記録溶液の組成は、ＣｓＦ  １２０ｍＭ、ＮａＣｌ2  １５ｍＭ、ＥＧＴＡ  １０ｍＭ及びＨＥＰＥＳ  １０ｍＭであり；ＣｓＯＨでｐＨ７．３に調整された。
【０１２９】
チャネル遮断を、抗体の適用前の電流と比較した、抗ＡＳＩＣ１抗体の存在下での電流の阻害パーセントとして測定した。これを複数の遮断実験にわたって平均した。
【０１３０】
１０、３、１、０．８及び０．６ｎＭのＨ１Ｍ６７１８ＮによるヒトＡＳＩＣ１電流の遮断パーセンテージを表１０にまとめる。
【０１３１】
【表１２】
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【０１３２】
Ｈ１Ｍ６７１８Ｎは、８６０ｐＭの計算されたＩＣ50でヒトＡＳＩＣ１電流の用量依存性阻害を示したが、アイソタイプコントロール抗体は１００ｎＭの濃度で電流の阻害を示さなかった。
【０１３３】
実施例７．抗ＡＳＩＣ１抗体はマウスモデルにおいて内蔵痛を減少させる
本実施例において、酢酸誘導腹部収縮のモデルにおいて内臓痛を減弱させる抗ＡＳＩＣ１抗体  Ｈ１Ｍ６７１８Ｎの能力を評価した。Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）からの野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスをこの実験において使用した。別々のコホートのマウス（ｎ＝１０）に、１０ｍｇ／ｋｇ（皮下（ｓ．ｃ．））のアイソタイプコントロールｍＡｂ又は１若しくは１０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）のＨ１Ｍ６７１８Ｎを投与した。抗体投与の２４時間後に、全てのコホートに０．６％酢酸の腹腔内注射を投与し、これは型通りの腹部伸縮行動（例えば収縮）を生じ、これを盲検観察者が注射３０分後まで計数した。腹部収縮の総数の変化パーセントで表されたこの実験の結果を表１１に示す（全てのデータは平均±ＳＥＭで表される）。
【０１３４】
【表１３】
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【０１３５】
この実施例は、酸誘導ＡＳＩＣ１イオン電流を強く遮断することが示された（実施例４〜６を参照のこと）抗ＡＳＩＣ１抗体（Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ）が、マウスモデルにおいて酸誘導内臓痛反応を軽減する際に有効であったことを実証する。
【０１３６】
実施例８．抗ＡＳＩＣ１抗体はマウスモデルにおいて侵害性機械的刺激に対する鎮痛を生じる
この実施例において、侵害性の挟み（ｐｉｎｃｈ）／押圧刺激に対する応答における鎮痛を生じる抗ＡＳＩＣ１抗体（Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ）の能力を評価した。
【０１３７】
Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）からの野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスをこの実験で使用した。マウスの別々のコホートに、１、１０、若しくは４０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）のＨ１Ｍ６７１８Ｎ、又は１０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ）のアイソタイプコントロール抗体を投与した。抗体投与の２４時間後、別々のコホート（ｎ＝１０）を、それらの機械的侵害受容閾値について試験し、これらは腓腹筋又は尾の挟みに対する引き込み閾値により測定された（Ｍｏｄｅｌ  ＃２４５５、ＩＩＴＣ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｏｏｄｌａｎｄ  Ｈｉｌｌｓ、ＣＡ）。尾部における機械的侵害受容を、アイソタイプコントロールで処置されたマウスに加えて、１ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇのＨ１Ｍ６７１８Ｎで処置されたマウスにおいて測定した。腓腹筋における機械的侵害受容を、アイソタイプコントロールで処置されたマウスに加えて、１０ｍｇ／ｋｇ及び４０ｍｇ／ｋｇのＨ１Ｍ６７１８Ｎで処置されたマウスにおいて測定した。挟みに対する引き込み閾値としてグラムで表される（マウスの各コホートについての平均±ＳＥＭ）これらの実験の結果を、図１、パネルＡ及びＢに示す。
【０１３８】
両方の実験について、Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ処置は、ＡＮＯＶＡ（尾部についてｐ＝０．００１５及び腓腹筋について０．０２２８）、及びＢｏｎｆｅｒｏｎｎｉ事後検定（＊＝ｐ＜０．０５）により決定して、試験した最も高い抗体用量（尾部の実験において１０ｍｇ／ｋｇ［図１、パネルＡ］及び腓腹筋実験において４０ｍｇ／ｋｇ［図１、パネルＢ］）で、アイソタイプコントロールと比較して、引き込み閾値の有意な増加を生じた。
【０１３９】
実施例９．抗ＡＳＩＣ１抗体はマウスモデルにおける筋痛を減弱する
この実施例において、酸性食塩水（ｐＨ５．５）又は３％カラゲナンのいずれかの注射により生じた筋痛を減弱する抗ＡＳＩＣ１抗体Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ及びＨ４Ｈ６７２１Ｎ２の能力を評価した。Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）からの野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスをこれらの実験において使用した。
【０１４０】
第一の実験において、マウスの別々のコホートに、１０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ）のアイソタイプコントロール抗体又は１０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）のＨ１Ｍ６７１８Ｎを投与した。抗体投薬の２４時間後に、全てのマウスに酸性食塩水（ｐＨ  ５．５）の腓腹筋への筋内注射を投与し、これは、筋肉の挟みに対する引き込み閾値により測定して（Ｍｏｄｅｌ  ＃２４５５、ＩＩＴＣ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｏｏｄｌａｎｄ  Ｈｉｌｌｓ、ＣＡ）、数日間の強く一次的な（ｒｏｂｕｓｔ  ｐｒｉｍａｒｙ）機械的痛覚過敏を生じた。結果を図２に示す。
【０１４１】
第二の事件において、マウスの別々のコホートに、１０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）のアイソタイプコントロールｍＡｂ；１０、若しくは４０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）のＨ１Ｍ６７１８Ｎ；又は１０若しくは３０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）のＨ４Ｈ６７２１Ｎ２を投与した。抗体投薬の２４時間後に、全てのマウスに、腓腹筋への３％カラゲナン（質量／体積）筋内注射を投与し、これは、筋肉の挟みに対する引き込み閾値により測定して（Ｍｏｄｅｌ  ＃２４５５、ＩＩＴＣ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｏｏｄｌａｎｄ  Ｈｉｌｌｓ、ＣＡ）、数日間の強く一次的な（ｒｏｂｕｓｔ  ｐｒｉｍａｒｙ）機械的痛覚過敏を生じた。結果を図３Ａ（１０及び４０ｍｇ／ｋｇ  Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ）及び３Ｂ（１０及び３０ｍｇ／ｋｇ  Ｈ４Ｈ６７２１Ｎ２）に示す。
【０１４２】
これらの実験の結果は、図２及び３に示されるように、ベースラインからの引き込み閾値の変化パーセントで表される（全てのデータは平均±ＳＥＭで表される）。両方の実験について、Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ処置の有意な主作用が、反復測定ＡＮＯＶＡ（により観察された（酸性食塩水についてｐ＝０．０３６３及びカラゲナンについて０．０１９３）。第二の実験については、Ｈ１Ｍ６７２１Ｎ２処置の有意な主作用が反復測定ＡＮＯＶＡにより観察された（ｐ＝０．００１８）。所定の時点についてのＢｏｎｆｅｒｏｎｎｉ事後検定により＊＝ｐ＜０．０５及び＊＊＝ｐ＜０．０１。従って、両方の抗体が本明細書において使用された実験系における筋痛の軽減において実質的な有効性を示した。
【０１４３】
実施例１０．化学療法誘導神経障害様疼痛のモデルにおける抗ＡＳＩＣ１抗体の有効性
この実施例において、化学療法剤タキソールの全身曝露から生じた神経障害様疼痛を減弱させる抗ＡＳＩＣ１抗体Ｈ４Ｍ６７１８Ｎの能力を評価した。Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  （Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）からの野生型Ｃ５７ＢＬ／６雄性マウスをこれらの実験で使用した。ベースライン行動試験の後、全てのマウスは、治療的投薬を開始する前に、タキソールの投与計画（４  ｍｇ／ｋｇ、合計４回投薬の間１日おき）を受けた。マウスの別々のコホートに、３０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）のアイソタイプコントロールｍＡｂ、３０ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）のＨ１Ｍ６７１８Ｎ、又は１００ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）のガバペンチンを投与した。抗体は毎週の行動試験の各々の２４時間前に投与され、そしてガバペンチンは、毎週の行動試験の各々の２時間前に投与された。機械的アロディニアを全てのコホートにおいて、Ｄｉｘｏｎの上下（ｕｐ−ｄｏｗｎ）方法（Ｃｈａｐｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．５３（１）：５５−６３）に従ってフォン・フライの刺激毛（＃５８０１１、Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｗｏｏｄ  Ｄａｌｅ、ＩＬ）を使用して測定した。この実験の結果を図４に示す（全てのデータは平均±ＳＥＭで表される）。
【０１４４】
図４に示されるように、Ｈ１Ｍ６７１８Ｎ処置及びガバペンチン処置の両方の有意な主作用が、アイソタイプコントロールコホートと比較して、反復測定ＡＮＯＶＡにより観察された（Ｈ４Ｈ６７１８Ｎについてｐ＝０．０００３、ガバペンチンについてｐ＜０．００００１）。従って、この実施例は、本発明の抗ＡＳＩＣ１抗体が化学療法誘導疼痛反応の減弱において高度に有効であるということを示唆する。
【０１４５】
集合的に、前述の実施例の結果は、様々な疼痛状態の処置のための抗ＡＳＩＣ１遮断抗体の使用を支持する。
【０１４６】
本発明は、本明細書に記載刺される特定の実施態様により範囲を限定されるべきではない。実際に、本明細書に記載されるものに加えて、本発明の様々な改変は、前述の記載及び添付の図面から当業者に明らかとなるだろう。このような改変は添付の特許請求の範囲内に包含されることを意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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