(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
５．５〜６．５のｐＨを有し、
（ｉ）１８ｍｇ／ｍＬ〜１６５ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、低フコシル化または非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として８０ｍＭ〜３００ｍＭのショ糖、トレハロースまたはマンニトールと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として５ｍＭ〜５０ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩またはコハク酸塩と、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０１％〜０．１％のポリソルベート２０と、場合によって
（ｖ）２ｍＭ〜８０ｍＭのアルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌと
を含む、水性組成物。
【請求項２】
５．５〜６．５のｐＨを有し、
（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、低フコシル化または非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として１１０ｍＭ〜２５０ｍＭのショ糖またはトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として１５ｍＭ〜２５ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩またはコハク酸塩と、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０２％〜０．０６％までのポリソルベート２０と、場合によって
（ｖ）２ｍＭ〜８０ｍＭのアルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌと
を含む、請求項１に記載の水性組成物。
【請求項３】
５．５〜６．５のｐＨを有し、
（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、低フコシル化または非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として１２０ｍＭ〜２２０ｍＭのショ糖またはトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として１８ｍＭ〜２２ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩またはコハク酸塩と、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０２％〜０．０６％までのポリソルベート２０と、場合によって
（ｖ）２ｍＭ〜８０ｍＭのアルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌと
を含む、請求項１に記載の水性組成物。
【請求項４】
６．０のｐＨを有し、
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、低フコシル化または非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として２２０ｍＭのショ糖と、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と
を含む、請求項１に記載の水性組成物。
【請求項５】
６．０のｐＨを有し、
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、低フコシル化または非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として２２０ｍＭのトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と
を含む、請求項１に記載の水性組成物。
【請求項６】
６．０のｐＨを有し、
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、低フコシル化または非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として１２０ｍＭのショ糖と、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と、
（ｖ）５０ｍＭのアルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌと
を含む、請求項１に記載の水性組成物。
【請求項７】
６．０のｐＨを有し、
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、低フコシル化または非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として１２０ｍＭのトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と、
（ｖ）５０ｍＭのアルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌと
を含む、請求項１に記載の水性組成物。
【請求項８】
６．０のｐＨを有し、
（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、低フコシル化または非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として２２０ｍＭのショ糖と、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と
を含む、請求項１に記載の水性組成物。
【請求項９】
６．０のｐＨを有し、
（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む、低フコシル化または非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として２２０ｍＭのトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と
を含む、請求項１に記載の水性組成物。
【請求項１０】
低フコシル化または非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体が、配列番号１のアミノ酸を有するＶＨドメインと配列番号２のアミノ酸を有するＶＬドメインとを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の水性組成物。
【請求項１１】
低フコシル化または非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体が、配列番号９の重鎖領域と配列番号１０の軽鎖領域とを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の水性組成物。
【請求項１２】
請求項１から１１のいずれか一項に記載の水性組成物を含む送達デバイス。
【請求項１３】
請求項１から１１のいずれか一項に記載の水性組成物を含む充填済み注射器。
【請求項１４】
哺乳動物への低フコシル化または非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体の送達に使用するための、請求項１から１１のいずれか一項に記載の水性組成物であって、哺乳動物に水性組成物を投与するステップを含む、前記水性組成物。
【請求項１５】
ＢＡＦＦ受容体により媒介されるかまたはＢ細胞を死滅もしくは枯渇させることにより処置できる疾患または障害の処置において使用するための、請求項１から１１のいずれか一項に記載の水性組成物、または請求項１２に記載の送達デバイス、または請求項１３に記載の充填済み注射器。
【請求項１６】
自己免疫疾患の処置において使用するための、請求項１から１１のいずれか一項に記載の水性組成物、または請求項１２に記載の送達デバイス、または請求項１３に記載の充填済み注射器。
【請求項１７】
リンパ腫、白血病または骨髄腫のようなＢ細胞新生物の処置において使用するための、請求項１から１１のいずれか一項に記載の水性組成物、または請求項１２に記載の送達デバイス、または請求項１３に記載の充填済み注射器。
【請求項１８】
関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、シェーグレン症候群または尋常性天疱瘡の処置において使用するための、請求項１から１１のいずれか一項に記載の水性組成物、または請求項１２に記載の送達デバイス、または請求項１３に記載の充填済み注射器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＢＡＦＦＲ（ＢＡＦＦ受容体）に対する抗体の医薬製剤、それを調製するための方法および製剤の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＢＡＦＦＲ：ＢＡＦＦ対は、成熟Ｂ細胞の生存および活性化ならびにＴ細胞依存性抗原に応答するアイソタイプクラススイッチのための、移行性Ｂ細胞の成熟に大きく関与する。ＢＡＦＦおよびその受容体であるＢＡＦＦＲは、悪性Ｂ細胞の生存および成長のためにも重要である。さらに、ＢＡＦＦＲは、プレＢ細胞上に通常は発現されないが、ヒトＡＬＬ（Ｂ細胞系急性リンパ性白血病）細胞上で発現されることが最近示された（Parameswaran、2010、Cancer Res. 70(11) 4346〜4356頁）。自己反応性Ｂ細胞の除去および自己免疫障害またはがんに罹患する患者における過剰なＢＡＦＦレベルにより媒介される不適当な生存／活性化の遮断は、十分に立証された治療の目標である。よって、抗ＢＡＦＦＲ抗体、特に抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）およびＢＡＦＦＲへのリガンドの結合の遮断が可能な抗体は、自己免疫疾患およびＢ細胞新生物での有効な治療剤を提供できる。
【０００３】
ＢＡＦＦＲに対する抗体は、例えばＷＯ２０１０／００７０８２から知られており、配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含むことを特徴とする抗体を含む。抗体ＭＯＲ６６５４は、あるそのような抗体である（ＩｇＧ１カッパ）。この抗体は、配列番号９の重鎖アミノ酸配列と配列番号１０の軽鎖アミノ酸配列とを有する。この抗体は、配列番号１４および１５から、好ましくはフコシルトランスフェラーゼを欠く宿主細胞、例えば不活性ＦＵＴ８（−／−）遺伝子を有する哺乳動物株化細胞において発現されて、ＡＤＣＣが増強された機能的非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体をもたらす。この抗体は、以下、ＭＯＲ６６５４Ｂという。非フコシル化抗体を生成するための代替法は、当該技術において知られている。
【０００４】
治療用抗体は、即時に非経口投与できる水性の形態、または投与前に適切な希釈剤を用いて再構成するための凍結乾燥物のいずれかとして典型的に製剤化される。
【０００５】
国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１１／０７２２４８は、再構成すると、患者への送達のために抗体活性成分が高濃度であり抗体凝集物が低レベルである溶液が得られる凍結乾燥物を開示する。高濃度の抗体は、患者に送達しなければならない投与量を低減させるので有用である。投与量の低減は、一定の用量を患者に送達するためにかかる時間を最小限にする。
【０００６】
しかし、高濃度の抗体を含有するように製剤化された医薬組成物は、有効期限が短く、製剤化された抗体は、貯蔵中の化学的および物理的な不安定さを原因として生物活性を失うことがある。中でも、凝集、脱アミドおよび酸化が、抗体分解の最も一般的な原因であることが知られている。さらに、凝集は、患者における免疫応答の増加を導く可能性があり、安全性の懸念を導く。よって、医薬組成物における抗体凝集は、最小限にするかまたは妨げなければならない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
よって、本発明の目的は、抗体凝集がないかまたは実質的になく高濃度の抗ＢＡＦＦＲ抗体を可能にするように製剤化された、抗ＢＡＦＦＲ抗体を含むさらなる改善された医薬組成物を提供することである。
【０００８】
本発明の別の目的は、皮下投与に適した抗ＢＡＦＦＲ抗体製剤を提供することである。皮下注射の利点は、医療従事者が患者への比較的短い介入で行うことができることである。さらに、患者は、患者自身で皮下注射を行うように訓練できる。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
この目的は、本発明の水性医薬組成物により充足される。
【００１０】
本発明の水性組成物は、高濃度の抗ＢＡＦＦＲ抗体を含むが、凝集抗体を含まないかまたは本質的に含まず、よって、皮下投与に特に適している。
【００１１】
一実施形態では、本発明は、５．０〜７．０のｐＨを有し、
（ｉ）１８〜１６５ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤と、
（ｉｉｉ）緩衝剤と
（ｉｖ）界面活性剤と、場合によって
（ｖ）アミノ酸と
を含む水性組成物に関する。
【００１２】
特に、本発明は、５．５〜６．５のｐＨを有し、
（ｉ）１８〜１６５ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤としてショ糖、トレハロースまたはマンニトールと、
（ｉｉｉ）緩衝剤としてヒスチジン、クエン酸塩またはコハク酸塩と、
（ｉｖ）界面活性剤としてポリソルベート２０、ポロキサマー１８８またはヒドロキシプロイル（hydroxyproyl）−ｂ−シクロデキストリンと、場合によって
（ｖ）アミノ酸としてアルギニンと
を含む水性組成物を提供する。
【００１３】
一実施形態では、様々な実施形態で本明細書に記載する本発明の水性組成物は、抗ＢＡＦＦＲ抗体を、２０ｍｇ／ｍＬから１５０ｍｇ／ｍＬの間、特に８０ｍｇ／ｍＬから１５０ｍｇ／ｍＬの間、特に１００ｍｇ／ｍＬから１５０ｍｇ／ｍＬの間の濃度で含む。
【００１４】
一実施形態では、様々な実施形態で本明細書に記載する本発明の水性組成物は、安定化剤として糖、特にショ糖、マンニトールまたはトレハロースを、８０ｍＭから３００ｍＭの間、特に１２０ｍＭから２７０ｍＭの間、特に１２０ｍＭから２２０ｍＭの間の濃度で含む。
【００１５】
一実施形態では、様々な実施形態で本明細書に記載する本発明の水性組成物は、界面活性剤、特にポリソルベート２０またはポロキサマー１８８を、０．０１％から０．１％の間、特に０．０２％から０．０６％の間の濃度で含む。
【００１６】
一実施形態では、様々な実施形態で本明細書に記載する本発明の水性組成物は、緩衝剤、特にヒスチジン、クエン酸塩またはコハク酸塩を、５ｍＭから５０ｍＭの間の濃度、特に１５ｍＭから２５ｍＭの間、特に１８ｍＭから２２ｍＭの間、特に２０ｍＭの濃度で含む。
【００１７】
一実施形態では、様々な実施形態で本明細書に記載する本発明の水性組成物は、加えて、アミノ酸、特にアルギニンまたはアルギニン−ＨＣｌを、２ｍＭから８０ｍＭの間の濃度で含む。
【００１８】
一実施形態では、様々な実施形態で本明細書に記載する本発明の水性組成物は、ショ糖またはトレハロースを１１０ｍＭから２５０ｍＭの間の濃度で含む。
【００１９】
特定の実施形態では、本発明は、５．５〜６．５のｐＨを有し、
（ｉ）１８ｍｇ／ｍＬ〜１６５ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として８０ｍＭ〜３００ｍＭのショ糖、トレハロースまたはマンニトールと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として５ｍＭ〜５０ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩またはコハク酸塩と、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０１％〜０．１％のポリソルベート２０もしくはポロキサマー１８８または１ｍＭ〜３ｍＭのヒドロキシプロイル（hydroxyproyl）−ｂ−シクロデキストリンと、場合によって
（ｖ）２ｍＭ〜８０ｍＭのアルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌと
を含む水性組成物を提供する。
【００２０】
別の特定の実施形態では、本発明は、５．５〜６．５のｐＨを有し、
（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として１１０ｍＭ〜２５０ｍＭのショ糖またはトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として１５ｍＭ〜２５ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩またはコハク酸塩と、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０２％〜０．０６％までのポリソルベート２０もしくはポロキサマー１８８または２ｍＭ〜３ｍＭのヒドロキシプロイル（hydroxyproyl）−ｂ−シクロデキストリンと、場合によって
（ｖ）２ｍＭ〜８０ｍＭのアルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌと
を含む水性組成物を提供する。
【００２１】
さらに別の特定の実施形態では、本発明は、５．５〜６．５のｐＨを有し、
（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として１２０ｍＭ〜２２０ｍＭのショ糖またはトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として１８ｍＭ〜２２ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩またはコハク酸塩と、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０２％〜０．０６％までのポリソルベート２０もしくはポロキサマー１８８または２．５ｍＭのヒドロキシプロイル（hydroxyproyl）−ｂ−シクロデキストリンと、場合によって
（ｖ）２ｍＭ〜８０ｍＭのアルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌと
を含む水性組成物を提供する。
【００２２】
別の特定の実施形態では、本発明は、６．０のｐＨを有し、
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として２２０ｍＭのショ糖と、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と
を含む水性組成物を提供する。
【００２３】
別の特定の実施形態では、本発明は、６．０のｐＨを有し、
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として２２０ｍＭのトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と
を含む水性組成物を提供する。
【００２４】
別の特定の実施形態では、本発明は、６．０のｐＨを有し、
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として１２０ｍＭのショ糖またはトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と、
（ｖ）５０ｍＭのアルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌと
を含む水性組成物を提供する。
【００２５】
別の特定の実施形態では、本発明は、６．０のｐＨを有し、
（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として２２０ｍＭのショ糖またはトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と
を含む水性組成物を提供する。
【００２６】
一実施形態では、本発明は、様々な実施形態で本明細書に記載する本発明の水性組成物であって、抗ＢＡＦＦＲ抗体が、配列番号１のアミノ酸を有するＶＨドメインと配列番号２のアミノ酸を有するＶＬドメインとを含む組成物に関する。
【００２７】
本発明の別の実施形態では、抗ＢＡＦＦＲ抗体が、配列番号９の重鎖領域と配列番号１０の軽鎖領域とを含む、様々な実施形態で本明細書に記載する本発明の水性組成物。
【００２８】
一実施形態では、抗ＢＡＦＦＲ抗体は、非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体である。
【００２９】
本発明は、様々な実施形態で本明細書に記載する本発明の水性組成物を含む送達デバイスをさらに提供する。
【００３０】
この送達デバイスは、様々な実施形態で本明細書に記載する本発明の水性組成物を含む充填済み注射器の形態で提供されることがある。
【００３１】
一実施形態では、本発明は、哺乳動物に抗ＢＡＦＦＲ抗体を送達するための方法であって、前記哺乳動物に、充填済み注射器のような特に送達デバイスの形態での様々な実施形態で本明細書に記載する本発明の水性組成物を投与するステップを含む方法に関する。
【００３２】
本発明は、ＢＡＦＦ受容体により媒介されるかまたはＢ細胞を死滅もしくは枯渇させることにより処置できる疾患または障害の処置において使用するための、様々な実施形態で本明細書に記載する本発明の組成物または送達デバイスまたは充填済み注射器をさらに提供する。
【００３３】
特に、様々な実施形態で本明細書に記載する本発明の医薬組成物または送達デバイスまたは充填済み注射器は、自己免疫疾患、リンパ腫、白血病もしくは骨髄腫のようなＢ細胞新生物、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群または尋常性天疱瘡の処置において使用することができる。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本発明は、液体（水性）組成物として高濃度で製剤化された場合に著しい安定性と生物活性特性とを保持するＭＯＲ６６５４およびＭＯＲ６６５４Ｂのような製剤化抗体の特性に少なくとも部分的に基づく。
【００３５】
本明細書で用いる場合、「水性」医薬組成物は、医薬としての使用に適した組成物であって、水性担体が蒸留水である組成物である。医薬としての使用に適した組成物は、滅菌、均質および／または等張であってよい。水性医薬組成物は、水性の形で直接、例えば即時使用可能な充填済み注射器として調製してもよく（「液体製剤」）、または使用直前に再構成される凍結乾燥物として調製してもよい。
【００３６】
本明細書で用いる場合、用語「水性医薬組成物」は、液体製剤または再構成された凍結乾燥製剤のことをいう。ある種の実施形態では、本発明の水性医薬組成物は、ヒト対象への非経口投与に適している。特定の実施形態では、本発明の水性医薬組成物は、皮下投与に適している。
【００３７】
本明細書で用いる場合、「非経口投与」との句は、通常、注射による、経腸および局部投与以外の投与の形態を意味し、限定されないが、静脈内、筋内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内（intrastemal）注射および注入を含む。
【００３８】
薬の活性成分としての抗体の使用は、現在、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）（トラスツズマブ）、ＲＩＴＵＸＡＮ（商標）（リツキシマブ）、ＳＹＮＡＧＩＳ（商標）（パリビズマブ）などの製品を含んで広範にわたっている。医薬グレードまで治療用抗体を精製するための技術は、当該技術において公知である。
【００３９】
組成物は、通常、発熱性物質を含まず、例えば用量あたり１ＥＵ（内毒素単位、標準的な尺度）未満、好ましくは用量あたり０．１ＥＵ未満で含有する。組成物は、好ましくは、グルテンを含まない。
【００４０】
特定の実施形態では、本発明の水性医薬組成物は、低レベルから検出不能レベルの抗体凝集または分解を示し、製造、調製、輸送および長期貯蔵中に生物活性の喪失がほとんどないかまたはない（抗ＢＡＦＦＲ抗体の濃度は、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬまたは３００ｍｇ／ｍＬである）。
【００４１】
一態様では、本発明は、高濃度の抗ＢＡＦＦＲ抗体を含む水性医薬組成物に関する。
【００４２】
当該技術において、このような高濃度の水性医薬組成物は、例えば、より低い抗体濃度が特定の治療的介入のためまたは小児を含む体重がより軽い患者を処置する場合に要求されるならば、注射前に希釈できることが知られている。適切な濃度は、２５ｍｇ／ｍＬまたは１０ｍｇ／ｍＬであり得る。代わりに、元の製剤を、このようなより低い濃度で製造してもよい。
【００４３】
「抗体」との用語は、本明細書で言及する場合、抗体全体およびその任意の抗原結合断片（すなわち「抗原結合部分」）または単鎖を含む。自然に存在する「抗体」は、ジスルフィド結合で互いに接続された少なくとも２つの重鎖（Ｈ）と２つの軽鎖（Ｌ）とを含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと省略する）と重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、アイソタイプに依存して３または４つのドメインＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと省略する）と軽鎖定常領域とで構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬで構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）とよばれるより保存された領域が散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）とよばれる超可変性の領域にさらに細分化できる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置される３つのＣＤＲと４つのＦＲとで構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）および伝統的な補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介できる。
【００４４】
抗体の「抗原結合部分」（または単純に「抗原部分」）との用語は、本明細書で用いる場合、抗原（例えばＢＡＦＦＲの一部分）と特異的に結合する能力を保持する抗体の全長または１もしくは複数の断片のことをいう。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片により発揮できることが示されている。抗体の「抗原結合部分」との用語に包含される結合断片としては、例えばＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる１価断片であるＦａｂ断片；ヒンジ領域にてジスルフィドブリッジにより連結された２つのＦａｂ断片を含む２価断片であるＦ（ａｂ）２断片；ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体の１本腕のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Wardら、1989 Nature 341:544〜546頁）；ならびに単離相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。
【００４５】
さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によりコードされるが、これらを、組換え法を用いて、ＶＬおよびＶＨ領域の対が１価分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えばBirdら、1988 Science 242:423〜426頁；およびHustonら、1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879〜5883頁を参照されたい）を形成するように単一タンパク質鎖になるような合成リンカーによりつなぐことができる。このような単鎖抗体も、抗体の「抗原結合領域」との用語内に包含することを意図する。これらの抗体断片は、当該技術において知られる従来の技術を用いて得られ、断片を、インタクトな抗体と同様に同様の様式で用いるためにスクリーニングする。
【００４６】
「単離抗体」は、本明細書で用いる場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体のことをいい、例えばヒトＢＡＦＦＲと特異的に結合する単離抗体は、ＢＡＦＦＲ以外の抗原と特異的に結合する抗体を実質的に含まない。ＢＡＦＦＲと特異的に結合する単離抗体は、しかし、他の種からのＢＡＦＦＲ分子のような他の抗原と交差反応性を有してもよい。さらに、単離抗体は、他の細胞性物質および／または化学物質を実質的に含まないことがある。
【００４７】
「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」との用語は、本明細書で用いる場合、単分子組成物の抗体分子の調製物のことをいう。モノクローナル抗体組成物は、単一結合特異性および特定のエピトープに対する親和性を示す。
【００４８】
「ヒト抗体」との用語は、本明細書で用いる場合、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト起源の配列に由来する可変領域を有する抗体を含む。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、該定常領域もこのようなヒト配列、例えばヒト生殖系列配列もしくは変異バージョンのヒト生殖系列配列または例えばKnappikら（2000. J Mol Biol 296、57〜86頁）に記載されるようなヒトフレームワーク配列分析に由来するコンセンサスフレームワーク配列を含有する抗体に由来する。
【００４９】
免疫グロブリン可変ドメイン、例えばＣＤＲの構造および場所は、公知の番号付けスキーム、例えばＫａｂａｔ番号付けスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａ（ＡｂＭ）との組合せなどを用いて定義してもよい（例えばSequences of Proteins of Immunological Interest、U.S. Department of Health and Human Services (1991)、Kabatら編；Al Lazikaniら(1997) J. Mol. Bio. 273:927〜948頁を参照されたい）。本明細書を通して、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの両方の定義の組合せによりこのＣＤＲについて定義されるアミノ酸のひと続きであるＣＤＲＨ１以外は、Ｋａｂａｔ定義に従って定義する。
【００５０】
本発明のヒト抗体は、ヒト配列によりコードされないアミノ酸残基を含んでもよい（例えば無作為突然変異誘発もしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏ部位特異的突然変異誘発またはｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞突然変異による）。しかし、「ヒト抗体」との用語は、本明細書で用いる場合、マウスのような別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列とつなぎ合わされた抗体を含むことを意図しない。
【００５１】
「ヒトモノクローナル抗体」との用語は、フレームワークおよびＣＤＲ領域がともにヒト配列に由来する可変領域を有する、単一結合特異性を示す抗体のことをいう。
【００５２】
用語「組換えヒト抗体」は、本明細書で用いる場合、組換え手段により調製、発現、創出または単離された全てのヒト抗体、例えばヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックまたは染色体導入型である動物（例えばマウス）またはそれから調製されたハイブリドーマから単離された抗体、ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマ（transfectoma）から単離された抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、およびヒト免疫グロブリン遺伝子、配列の全体または一部分の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段により調製、発現、創出または単離された抗体を含む。このような組換えヒト抗体は、フレームワークおよびＣＤＲ領域がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。ある種の実施形態では、しかし、このような組換えヒト抗体をｉｎ  ｖｉｔｒｏ突然変異誘発（またはヒトＩｇ配列についてトランスジェニックな動物を用いる場合、ｉｎ  ｖｉｖｏ体細胞突然変異誘発）に供することができ、よって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来しかつそれに関連するが、ｉｎ  ｖｉｖｏにてヒト抗体生殖系列レパートリー内に自然に存在しないことがある配列である。
【００５３】
本明細書で用いる場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によりもたらされる抗体クラス（例えばＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよびＩｇＧ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のことをいう。
【００５４】
「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」との句は、本明細書において、「抗原と特異的に結合する抗体」との用語と交換可能に用いられる。
【００５５】
本明細書で用いる場合、「ＢＡＦＦＲポリペプチドと特異的に結合する」抗体または「抗ＢＡＦＦＲ抗体」は、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下のＫＤで配列番号１３のヒトＢＡＦＦＲポリペプチドと結合する抗体のことをいう。「ＢＡＦＦＲ以外の抗原と交差反応する」抗体は、０．５×１０−８Ｍ以下、５×１０−９Ｍ以下または２×１０−９Ｍ以下のＫＤで該抗原と結合する抗体のことをいう。「特定の抗原と交差反応しない」抗体は、１．５×１０−８Ｍ以上のＫＤまたは５〜１０×１０−８Ｍもしくは１×１０−７Ｍ以上のＫＤで該抗原と結合する抗体のことをいうことを意図する。ある種の実施形態では、抗原と交差反応しないこのような抗体は、標準的な結合アッセイにおいてこれらのタンパク質と本質的に検出不能な結合を示す。
【００５６】
一実施形態では、本発明の水性医薬組成物中の高濃度の抗ＢＡＦＦＲ抗体は、少なくとも５０ｍｇ／ｍＬである。一実施形態では、高濃度は、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬである。一実施形態では、高濃度は、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬである。一実施形態では、高濃度は、少なくとも２００ｍｇ／ｍＬである。一実施形態では、高濃度は、少なくとも２５０ｍｇ／ｍＬである。一実施形態では、高濃度は、少なくとも２７０ｍｇ／ｍＬである。一実施形態では、高濃度は、少なくとも３００ｍｇ／ｍＬである。
【００５７】
一実施形態では、本発明の水性医薬組成物は、５０ｍｇ／ｍＬから３００ｍｇ／ｍＬの間の抗ＢＡＦＦＲ抗体、例えばＭＯＲ６６５４、特にＭＯＲ６６５４Ｂを含む。
【００５８】
一実施形態では、本発明の水性医薬組成物は、７５ｍｇ／ｍＬから２７０ｍｇ／ｍＬの間の抗ＢＡＦＦＲ抗体、例えばＭＯＲ６６５４、特にＭＯＲ６６５４Ｂを含む。
【００５９】
一実施形態では、本発明の水性医薬組成物は、１００ｍｇ／ｍＬから２５０ｍｇ／ｍＬの間の抗ＢＡＦＦＲ抗体、例えばＭＯＲ６６５４、特にＭＯＲ６６５４Ｂを含む。
【００６０】
一実施形態では、本発明の水性医薬組成物は、１００ｍｇ／ｍＬから２００ｍｇ／ｍＬの間の抗ＢＡＦＦＲ抗体、例えばＭＯＲ６６５４、特にＭＯＲ６６５４Ｂを含む。
【００６１】
一実施形態では、本発明の水性医薬組成物は、１５０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＡＦＦＲ抗体、例えばＭＯＲ６６５４、特にＭＯＲ６６５４Ｂを含む。
【００６２】
一実施形態では、本発明の水性医薬組成物は、２０ｍｇ／ｍＬの抗ＢＡＦＦＲ抗体、例えばＭＯＲ６６５４、特にＭＯＲ６６５４Ｂを含む。
【００６３】
一実施形態では、本発明の水性医薬組成物は、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２１０ｍｇ／ｍＬ、約２２０ｍｇ／ｍＬ、約２３０ｍｇ／ｍＬ、約２４０ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２７０ｍｇ／ｍＬまたは約３００ｍｇ／ｍＬの抗ＢＡＦＦＲ抗体、例えばＭＯＲ６６５４、特にＭＯＲ６６５４Ｂを含む。
【００６４】
さらに、様々な実施形態で本明細書に記載する本発明による水性医薬組成物は、２〜８℃にて４週間の貯蔵後であっても、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより測定して全抗ＢＡＦＦＲ抗体の５％、４％、３％、２％、１％、０．０５％または０．０１％未満が凝集するほど安定である。
【００６５】
様々な実施形態で本明細書に記載する本発明による水性医薬組成物は、２〜８℃にて２ヶ月の貯蔵後であっても、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより測定して全抗ＢＡＦＦＲ抗体の５％、４％、３％、２％、１％、０．０５％または０．０１％未満が凝集するほど安定である。
【００６６】
水性医薬組成物は、抗ＢＡＦＦＲ抗体の他に、以下の１または複数のようなさらなる成分を含んでもよい：（ｉ）安定化剤；（ｉｉ）緩衝剤；（ｉｉｉ）界面活性剤；および（ｉｖ）遊離アミノ酸。このような付加的成分のそれぞれを含むことにより、抗ＢＡＦＦＲ抗体の凝集が少ない組成物を得ることができる。
【００６７】
本発明における使用に適した安定化剤は、例えば、粘度増進剤、増量剤、可溶化剤などとして作用できる。安定化剤は、イオン性または非イオン性（例えば糖）であり得る。糖としては、それらに限定されないが、単糖、例えば果糖、麦芽糖、ガラクトース、ブドウ糖、Ｄ−マンノース、ソルボースなど；二糖、例えば乳糖、ショ糖、トレハロース、セロビオースなど；多糖、例えばラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプンなど；およびアルジトール、例えばマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）などが挙げられる。例えば、糖は、ショ糖、トレハロース、ラフィノース、麦芽糖、ソルビトールまたはマンニトールであってもよい。糖は、糖アルコールまたはアミノ糖であってもよい。ショ糖は、特に有用である。イオン安定化剤として、これらは、ＮａＣｌのような塩またはアルギニン−ＨＣｌのようなアミノ酸成分を含む。
【００６８】
本発明における使用に適した緩衝剤は、それらに限定されないが、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸もしくはフタル酸のような有機酸の塩；Ｔｒｉｓ、トメタミン（thomethamine）塩酸塩またはリン酸塩緩衝剤を含む。さらに、アミノ酸成分は、緩衝剤として用いることもできる。このようなアミノ酸成分は、限定することなく、グリシンおよびヒスチジンを含む。ヒスチジン緩衝剤は、特に有用である。
【００６９】
水性医薬組成物は、このような緩衝剤またはｐＨ調整剤を含有して、ｐＨ制御が改善されている。一実施形態では、本発明の水性医薬組成物は、５．０から８．０の間、５．０から７．０の間、５．５から７．０の間または５．５から６．５の間のｐＨを有する。特定の実施形態では、本発明の水性医薬組成物は、約６．０のｐＨを有する。
【００７０】
本明細書で用いる場合、「界面活性剤」との用語は、両親媒性の構造を有する有機物質のことをいう。すなわち、該有機物質は、逆の溶解性傾向を有する基、典型的には脂溶性炭化水素鎖と水溶性イオン性基とで構成される。界面活性剤は、界面活性部分の電荷に依存して、様々な医薬組成物および生物学的物質の調製物用のアニオン、カチオンおよび分散剤に分類できる。
【００７１】
本発明における使用に適した界面活性剤は、それらに限定されないが、非イオン界面活性剤、イオン界面活性剤および双性イオン界面活性剤を含む。本発明で用いるために典型的な界面活性剤は、それらに限定されないが、ソルビタン脂肪酸エステル（例えばモノカプリル酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン）、トリオレイン酸ソルビタン、グリセリン脂肪酸エステル（例えばモノカプリル酸グリセリン、モノミリスチン酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリン）、ポリグリセリン脂肪酸エステル（例えばモノステアリン酸デカグリセリン、ジステアリン酸デカグリセリン、モノリノール酸デカグリセリン）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えばモノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノパルミチン酸ポリオキシエチレンソルビタン、トリオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、トリステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン）、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル（例えばテトラステアリン酸ポリオキシエチレンソルビトール、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール）、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル（例えばモノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン）、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えばジステアリン酸ポリエチレングリコール）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えばポリオキシエチレンラウリルエーテル）、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル（例えばポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンプロピルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンセチルエーテル）、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル（例えばポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（例えばポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油）、ポリオキシエチレンミツロウ誘導体（例えばポリオキシエチレンソルビトールミツロウ）、ポリオキシエチレンラノリン誘導体（例えばポリオキシエチレンラノリン）およびポリオキシエチレン脂肪酸アミド（例えばポリオキシエチレンステアリン酸アミド）；Ｃ１０〜Ｃ１８アルキル硫酸塩（例えばセチル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、オレイル硫酸ナトリウム）、平均２〜４モルのエチレンオキシド単位が付加されたポリオキシエチレンＣ１０〜Ｃ１８アルキルエーテル硫酸塩（例えばポリオキシエチレンラウリル硫酸ナトリウム）、およびＣ１〜Ｃ１８アルキルスルホコハク酸塩エステル塩（例えばラウリルスルホハク酸塩エステルナトリウム）；ならびに天然界面活性剤、例えばレシチン、グリセロリン脂質、スフィンゴリン脂質（例えばスフィンゴミエリン）およびＣ１２〜Ｃ１８脂肪酸のショ糖エステルを含む。組成物は、これらの界面活性剤の１または複数を含んでもよい。好ましい界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、例えばポリソルベート２０、４０、６０または８０である。ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）は、特に有用である。
【００７２】
本発明における使用に適した遊離アミノ酸は、それらに限定されないが、アルギニン、リジン、ヒスチジン、オルニチン、イソロイシン、ロイシン、アラニン、グリシン、グルタミン酸またはアスパラギン酸を含む。塩基性アミノ酸、すなわちアルギニン、リジンおよび／またはヒスチジンを含むことが好ましい。組成物がヒスチジンを含むならば、これは緩衝剤および遊離アミノ酸の両方として作用できるが、ヒスチジン緩衝剤を用いる場合、ヒスチジンでない遊離アミノ酸を含め、例えばヒスチジン緩衝剤とリジンとを含めることが典型的である。アミノ酸は、そのＤ型および／またはＬ型で存在してもよいが、Ｌ型が典型的である。アミノ酸は、任意の適切な塩、例えば塩酸塩、例えばアルギニン−ＨＣｌとして存在してもよい。
【００７３】
本発明の水性医薬組成物において利用できるその他の企図される補形剤は、例えば香味剤、抗微生物剤、甘味剤、抗酸化剤、帯電防止剤、リン脂質もしくは脂肪酸のような脂質、コレステロールのようなステロイド、血清アルブミン（ヒト血清アルブミン）、組換えヒトアルブミン、ゼラチン、カゼインのようなタンパク質補形剤、ナトリウムのような塩形成性対イオンなどを含む。本発明の製剤における使用に適したこれらのおよび付加的な既知の薬学的補形剤および／または添加剤は、例えば「The Handbook of Pharmaceutical Excipients、第4版、Roweら編、American Pharmaceuticals Association (2003);およびRemington: the Science and Practice of Pharmacy、第21版、Gennaro編、Lippincott Williams & Wilkins (2005)に列挙されるように当該技術において既知である。
【００７４】
本発明の水性医薬組成物は、抗ＢＡＦＦＲ抗体の他にさらなる活性成分を含んでもよい。さらなる薬理学的物質は、例えば化学療法用化合物を含むことがある。
【００７５】
標的疾患および障害
抗ＢＡＦＦＲ抗体を含む本発明の水性医薬組成物は、様々な疾患または障害を処置、改善または防止するために用いることができる。抗ＢＡＦＦＲ抗体を含む医薬組成物は、自己免疫障害、例えば全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群、尋常性天疱瘡、関節リウマチ、多発性硬化症ならびに急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）およびＢ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）のようなＢ細胞新生物のようなＢＡＦＦＲ関連障害を処置するために特に有用である。
【００７６】
本明細書で用いる場合、「ＢＡＦＦＲ関連障害」は、異常なＢＬｙＳレベルに関連するかもしくはそのようなレベルを特徴とする状態、ならびに／またはＢ細胞を枯渇もしくは死滅させることにより処置できる疾患もしくは状態を含む。これらは、限定することなく、炎症性状態、自己免疫疾患、重度の感染および臓器または組織移植拒絶を含む。これらは、Ｂ細胞新生物をさらに含む。
【００７７】
例えば、抗ＢＡＦＦＲ抗体を含む本発明の水性医薬組成物は、同種移植片拒絶または異種移植片拒絶を含む心臓、肺、心肺同時、肝臓、腎臓、膵臓、皮膚または角膜の移植片のレシピエントの処置、改善または防止のため、ならびに骨髄移植の後のような移植片対宿主疾患および臓器移植関連動脈硬化症の防止のために用いてもよい。さらに、本発明の水性医薬組成物は、実質臓器移植ならびに抗体が媒介する急性および慢性移植片拒絶において有用である。
【００７８】
抗ＢＡＦＦＲ抗体を含む本発明の水性医薬組成物は、自己免疫疾患および炎症性状態、特に自己免疫成分を含む病因を有する炎症性状態、例えば関節炎（例えば関節リウマチ、慢性進行性関節炎（arthritis chronica progrediente）および変形性関節炎）およびリウマチ性疾患（骨量減少、炎症性疼痛、脊椎関節症（強直性脊椎炎、ライター症候群、反応性関節炎、乾癬性関節炎および腸炎性関節炎）に関与する炎症性状態およびリウマチ性疾患を含む）ならびに過敏症（気道過敏症および皮膚過敏症をともに含む）およびアレルギーの処置、防止または改善のために有用である。本発明の抗体を採用できる具体的な自己免疫疾患は、自己免疫血液学的障害（例えば溶血性貧血、再生不良性貧血、真性赤血球性貧血および特発性血小板減少症を含む）、後天性血友病Ａ、寒冷凝集素症、クリオグロブリン血症、血栓性血小板減少性紫斑病、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、炎症性筋疾患、多発性軟骨炎、強皮症、クリオグロブリン血症のような血管炎、巨細胞動脈炎のような大型血管炎、リウマチ性多発性筋痛、抗好中球細胞質抗体関連血管炎、高安動脈炎、結節性多発動脈炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病およびチャーグ・ストラウス症候群を含む壊死性血管炎、ＩｇＭ媒介ニューロパチー、血清反応陰性脊椎関節炎（spondarthritis）、眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群、ウェジナー肉芽腫症、皮膚筋炎、抗好中球細胞質自己抗体（ＡＮＣＡ）血管炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、乾癬、スティーブン−ジョンソン症候群、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、特発性スプルー、自己免疫炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病および過敏性腸症候群を含む）、内分泌性眼疾患、グレーブス病、サルコイドーシス、多発性硬化症、視神経脊髄炎、原発性胆汁性肝硬変、若年性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、ぶどう膜炎（前部、中間部および後部ならびに汎ぶどう膜炎）、乾性角結膜炎および春季カタル、間質性肺線維症、乾癬性関節炎および糸球体腎炎（腎炎症候群ありおよびなし、例えば特発性腎炎症候群または微小変化型ネフローゼを含む）、急性腎炎性ループス、腫瘍、皮膚および角膜の炎症性疾患、筋炎、骨インプラントの緩み、アテローム動脈硬化症、糖尿病および脂質異常症のような代謝障害を含む。
【００７９】
本発明の水性医薬組成物は、Ｂ細胞新生物の防止、改善または処置においても有用であることがある。このような疾患および状態としては、例えば、それらに限定されないが、小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、びまん性大細胞型リンパ腫およびバーキットリンパ腫のようなＢ細胞非ホジキンリンパ腫；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、前駆Ｂ−リンパ芽球性白血病；Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）ならびに多発性骨髄腫が挙げられる。その他のＢ細胞新生物は、本発明の範囲内に包含される。
【００８０】
患者への投与
本発明の医薬組成物は、患者に投与できる。投与は、注入によりまたは注射器を用いて典型的に行われる。よって、本発明は、本発明の医薬組成物を含む送達デバイス（例えば注射器）を提供する（例えば充填済み注射器）。患者は、主活性成分として有効量の抗ＢＡＦＦＲ抗体、すなわち問題の疾患または障害を処置、改善または防止するために十分な量を受ける。治療効果は、身体的症状の低減も含むことがある。いずれの特定の対象についての最適有効量および抗体の濃度も、患者の年齢、サイズ、健康および／または性別、状態の性質および程度、特定の抗体の活性、体からのクリアランス速度ならびに抗体と併用投与される任意の可能性のあるさらなる治療剤を含む様々な因子に依存する。所定の状況について送達される有効量は、臨床家の判断において決定できる。本発明の目的のために、有効量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇまで、または約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇまでであってもよい。既知の抗体に基づく薬は、この点に関して手引きとなり、例えばＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）は、４ｍｇ／ｋｇ体重の初期負荷用量および２ｍｇ／ｋｇ体重の毎週維持用量で投与される。ＲＩＴＵＸＡＮ（商標）は、週当たり３７５ｍｇ／ｍ２で投与される。ＳＹＮＡＧＩＳ（商標）は、１５ｍｇ／ｋｇ体重で筋内投与されるなどである。
【００８１】
本発明は、哺乳動物にモノクローナル抗体を送達するための方法であって、患者に本発明の医薬組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【００８２】
本発明は、医薬品用の、例えば哺乳動物に抗体を送達する際に使用するための、または上記の疾患および障害の１もしくは複数を処置、防止もしくは改善する際に使用するための、様々な実施形態で本明細書に記載する本発明の製剤も提供する。
【００８３】
哺乳動物は、好ましくはヒトであるが、例えばウマまたはウシまたはイヌまたはネコであってもよい。抗体は、標的とする種とマッチするように選択されるのが理想的であり、例えばヒト投与のためにヒト抗体、ウマのためにウマ抗体、イヌのためにイヌ抗体などである。天然の宿主抗体が利用可能でないならば、例えばヒト化でのように、ドナー抗体からのＣＤＲ残基（および典型的に、さらに１または複数のフレームワーク残基）を宿主種からのレシピエントフレームワークに移すことにより、ある種から別の種へと抗体特異性を移すことができる。ウマ化、ウシ化、イヌ化およびネコ化抗体は、当該技術において既知である。抗体は、標的とする種からのＢＡＦＦＲと結合するが、他の種からのＢＡＦＦＲと交差反応することもある。
【００８４】
投与は、単回投与計画または多回投与計画によるものであり得る。
【００８５】
本発明の組成物を形成するための成分は、密閉型容器中で供給してもよい。
【００８６】
抗ＢＡＦＦＲ抗体
本発明は、抗ＢＡＦＦＲ抗体、より具体的にＭＯＲ６６５４およびＭＯＲ６６５４Ｂの製剤に関する。
【００８７】
本発明の医薬組成物に含まれ得るある適切な抗体は、以下にさらに記載するような構造的特徴を有するヒト組換え抗体ＭＯＲ６６５４である。このような単離抗ＢＡＦＦＲ抗体のＶＨアミノ酸配列を配列番号１に示す。このような単離抗ＢＡＦＦＲ抗体のＶＬアミノ酸配列を配列番号２に示す。このような単離抗ＢＡＦＦＲ抗体の全長重鎖アミノ酸配列の例を配列番号９に示す。このような単離抗ＢＡＦＦＲ抗体の全長軽鎖アミノ酸配列の例を配列番号１０に示す。このような単離抗ＢＡＦＦＲ抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列の別の例は、それぞれ配列番号１１および配列番号１２のヌクレオチド配列によりコードされるものである。抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列の別の例は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ  ＡＧ、Ｆｏｒｕｍ１、ＣＨ−４００２  Ｂａｓｅｌ、ＳｗｉｔｚｅｒｌａｎｄによりＤＳＭＺ、Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒａｓｓｅ  ７Ｂ、３８１２４  Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、Ｇｅｒｍａｎｙに２００９年４月２９日に受託番号ＤＳＭ２２５４２で寄託されたプラスミドｐＢＷ５１０に含まれる対応するＤＮＡ配列によりコードされるものである。
【００８８】
本発明の医薬組成物を調製するために用いることができる他の抗ＢＡＦＦＲ抗体は、アミノ酸欠失、挿入または置換により変異された（しかし、上記の重鎖または軽鎖領域のいずれかにおいて１、２、３、４または５アミノ酸以下の欠失、挿入または置換を有する）アミノ酸を有する抗ＢＡＦＦＲ抗体を含む。特定の実施形態では、このようなアミノ酸変化は、フレームワークおよび／または定常領域内にのみ出現し、ＣＤＲ領域は、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３領域、ならびに配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３領域と１００％同一である。もう１つの具体的な実施形態では、作製される変化は、ＣＤＲ領域の外側の保存アミノ酸置換だけである。
【００８９】
保存アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖（例えばトレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。よって、抗ＢＡＦＦＲ抗体のＣＤＲ領域の外側の１または複数のアミノ酸残基を、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置き換えることができ、変更された抗体を、保持された機能、特にＢＡＦＦＲとの同じ結合特性について試験できる。
【００９０】
抗体は、典型的にグリコシル化できる。例えば重鎖のＣＨ２ドメインに付着するＮ結合型グリカンは、Ｃ１ｑおよびＦｃＲ結合に影響でき、脱グリコシル化抗体は、これらの受容体についてより低いかまたは異なる親和性を有することがある。グリカン構造は、活性にも影響でき、例えば補体媒介性細胞死における違いが、グリカンの二分岐鎖の末端でのガラクトース糖の数（０、１または２）に依存してみられることがある。抗体のグリカンは、好ましくは、投与後にヒト免疫原性応答を導かない。
【００９１】
さらにまたは代わりに、フコシル残基の量が低減されているかもしくはフコシル残基を有さない低フコシル化もしくは非フコシル化抗体、または二分ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体のような糖鎖修飾のタイプが変更された抗体を作製できる。このような糖鎖修飾パターンの変更は、抗体の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）能力を増加させることが証明されている。このような炭水化物修飾は、例えば糖鎖修飾機構が変更された宿主細胞において抗体を発現させることにより達成できる。糖鎖修飾機構が変更された細胞は、当該技術において記載されており、本発明の組換え抗体を発現させて糖鎖修飾が変更された抗体を生成するための宿主細胞として用いることができる。例えばＨａｎｇらによるＥＰ１，１７６，１９５は、このような株化細胞において発現される抗体が、低フコシル化を示すかまたはフコシル残基を有さないような、機能が破壊されたＦＵＴ８遺伝子（これはフコシルトランスフェラーゼをコードする）を有する株化細胞について記載している。よって、一実施形態では、本発明の医薬組成物に含まれる抗ＢＡＦＦＲ抗体は、低フコシル化または非フコシル化パターンを示す株化細胞、例えばフコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子の発現が欠損した哺乳動物株化細胞における組換え発現により生成される。
【００９２】
本明細書で用いる場合、用語「ＭＯＲ６６５４」は、任意のタイプの糖鎖修飾パターンを包含する。特定の実施形態では、医薬組成物は、非フコシル化パターンを示す（フコシル残基を含まない）ＭＯＲ６６５４Ｂのような低フコシル化または非フコシル化パターンを示す株化細胞において生成されるＭＯＲ６６５４からなる抗ＢＡＦＦＲ抗体を含む。ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴパンフレットＷＯ０３／０３５８３５は、Ａｓｎ（２９７）結合型炭水化物にフコースを付着させる能力が低減されたバリアントＣＨＯ株化細胞であるＬｅｃｌ３細胞について記載し、これも、宿主細胞で発現される抗体の低フコシル化をもたらす（Shields, R.L.ら、2002 J. Biol. Chem. 277:26733〜26740頁も参照されたい）。ＵｍａｎａらによるＰＣＴパンフレットＷＯ９９／５４３４２は、工学的に改変された株化細胞において発現される抗体が二分ＧｌｃＮａｃ構造の増加（これは抗体のＡＤＣＣ活性の増加をもたらす）を示すように、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えばベータ（１，４）−ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように工学的に改変された株化細胞について記載している（Umanaら、1999 Nat. Biotech. 17:176〜180頁も参照されたい）。Ｅｕｒｅｋａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓは、フコシル残基を有さない、哺乳動物糖鎖修飾パターンが変更された抗体を生成できる遺伝子工学改変ＣＨＯ哺乳動物細胞についてさらに記載している（http://www.eurekainc.com/about_us/ companyoverview.html）。代わりに、抗ＢＡＦＦＲ抗体は、哺乳動物様糖鎖修飾パターンについて工学的に改変され、糖鎖修飾パターンとしてフコースを欠く抗体を生成できる酵母または糸状菌において生成できる（例えばＥＰ１２９７１７２Ｂ１を参照されたい）。
【００９３】
本発明により企図される本明細書における抗ＢＡＦＦＲ抗体の別の修飾は、ｐｅｇ化である。抗体は、ｐｅｇ化して、例えば抗体の生物学的（例えば血清）半減期を増加できる。抗体をｐｅｇ化するために、抗体またはその断片を、典型的に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の反応性エステルまたはアルデヒド誘導体のようなＰＥＧと、１または複数のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に付着する条件下で、反応させることができる。ｐｅｇ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）を用いるアシル化反応またはアルキル化反応により行うことができる。
【００９４】
本明細書で用いる場合、「ポリエチレングリコール」との用語は、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−もしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール−マレイミドのような、他のタンパク質を誘導体化するために用いられている任意の形のＰＥＧを包含することを意図する。ある種の実施形態では、ｐｅｇ化される抗体は、脱グリコシル化抗体である。タンパク質をｐｅｇ化するための方法は、当該技術において既知であり、本発明の抗体に対して用いることができる。例えばＮｉｓｈｉｍｕｒａらによるＥＰ０１５４３１６およびＩｓｈｉｋａｗａらによるＥＰ０４０１３８４を参照されたい。
【００９５】
抗ＢＡＦＦＲ抗体（例えばＭＯＲ６６５４）の任意のその他の天然または非天然翻訳後修飾は、本発明の医薬組成物を調製するために用いることができる抗ＢＡＦＦＲ抗体の具体的な実施形態としてさらに企図される。
【００９６】
抗体は、抗体が天然に会合していると考えられる生成物を含まない形で調製できる。抗体の天然の環境での混入成分は、酵素、ホルモンまたはその他の宿主細胞タンパク質のような物質を含む。
【実施例】
【００９７】
抗ＢＡＦＦＲ抗体の調製
抗体ＭＯＲ６６５４はＢＡＦＦＲと特異的に結合し、ＷＯ２０１０／００７０８２として公開された国際出願にも記載されている。これは、ファージディスプレイにより得られたヒトＩｇＧ１カッパ抗体である。この重鎖および軽鎖は、配列番号９および１０からなる。以下の表１および２は、ＭＯＲ６６５４の配列の特徴についてまとめている。
【００９８】
【表１】
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【００９９】
【表２】
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【０１００】
製剤の実施例
ＭＯＲ６６５４Ｂの高濃度液体製剤が所望されていたので、製剤研究を行った。糖、緩衝剤および界面活性剤を含む液体製剤は安定であり、高い抗体濃度を維持できた。
【０１０１】
抗体は、適切な発現プロモーターの下に重鎖および軽鎖コード配列を保有する発現ベクターをトランスフェクトしたＣＨＯ株化細胞のような哺乳動物宿主細胞において生成できる。
【０１０２】
抗体は、好ましくは、例えばフコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子の発現欠損を導くＰｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（商標）技術（ＢｉｏＷａ，Ｉｎｃ．）を用いることにより改変された哺乳動物株化細胞、例えばＣＨＯ株化細胞において生成する。得られる抗体は、フコシル化されておらず、本明細書においてＭＯＲ６６５４Ｂと称する。
【０１０３】
バイアルまたは充填済み注射器中の液体ＭＯＲ６６５４Ｂ製剤の開発は、２つの研究からなった。第１のスクリーニングは、製剤中の補形剤を規定するために行った。第２のスクリーニングでは、選択した製剤を最終一次包装中で確認した。
【０１０４】
安定性および分析計画
以下の分析方法を行った：ＵＶアッセイ、サイズ排除クロマトグラフィーＨＰＬＣ、動的光散乱法、カチオン交換クロマトグラフィーＨＰＬＣ、逆相クロマトグラフィーＨＰＬＣ、ＡＬＰ分析装置、濁度、ｐＨ値、浸透圧、ＭＦＩ（マイクロフローイメージング）、粘度、色、目視検査。
【０１０５】
安定性の決定
安定性は、撹拌、凍結−融解サイクルおよび長期間の光への曝露（４０℃にて１ヶ月）を含むある種のストレス状態に製剤を供した後にさらに決定した。
【０１０６】
濁度検定法
濁度は、濁度検定法により測定した。
【０１０７】
試料の濁度検定測定は、以下の操作マニュアルに従って行った（モデル２１００ＡＮ装置マニュアル、第４７９０１−８８号、２００６年１１月、第２版）。分析の開始時に、水を含む５つの校正試料を分析することにより、装置についての校正曲線を確認した。装置により測定される値が標準値の５％以内であったならば、校正曲線は合格と判断した。標準物質のいずれかが５％の許容基準を満たさなかったならば、操作マニュアルに従って装置を再校正した。装置が校正に合格した後に、試料を１１ｍｍ平底テストチューブに入れ、分析した。
【０１０８】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）法
液体製剤を分析するために用いたＳＥＣ法において、以下の方法パラメータを用いた：
カラム：ＴＳＫｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷＸＬ
分析緩衝液：１５０ｍＭリン酸Ｋ、ｐＨ６．５±０．１
流速：０．４ｍＬ／分
カラム温度：３０℃
検出：２１０ｎｍ
注入容積：１０ｕｌ
試料温度：およそ５℃
運転時間：４０分
データサンプリング速度：１．０点／秒（Ｃｈｒｏｍｅｌｅｏｎステップ＝１．０）
【０１０９】
カチオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）ＨＰＬＣ法
ＣＥＸ  ＨＰＬＣ法を用いる試料分析についての第１ステップは、水を用いて全ての製剤を１０ｍｇ／ｍＬに希釈することであった。第２ステップでは、１０ｍｇ／ｍＬ希釈試料を取り、移動相Ａを用いて３ｍｇ／ｍＬに再び希釈することであった。試料を、次いで、ＨＰＬＣに装填し、分析した。
移動相Ａ：２５ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．５
移動相Ｂ：２５ｍＭリン酸ナトリウム、２５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．５
流速：１．０ｍＬ／分
カラム温度：３０℃±２℃
試料温度：５℃±２℃
注入容積：４０ｕｌ
運転時間（分）：６０
検出：２１５ｎｍ
勾配：
【０１１０】
【表３】
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【０１１１】
ＲＰ  ＨＰＬＣ法
ＬＢ−１２０試料を分析するために用いたＲＰ  ＨＰＬＣ法は、以下のＲＰ法パラメータに従って行った。試験プロトコール中の勾配により、タンパク質はカラム空隙容積中に溶出した。
方法パラメータ
カラム情報：ＰｏｒｏＳｈｅｌｌ  ３００ＳＢ−Ｃ８
移動相Ａ：９０％（ｖ／ｖ）Ｈ２Ｏ／１０％（ｖ／ｖ）ＡＣＮ／０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ
移動相Ｂ：１０％（ｖ／ｖ）Ｈ２Ｏ／９０％（ｖ／ｖ）ＡＣＮ／０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ
流速：２ｍＬ／分
カラム温度：８０℃
検出：２１０ｎｍ
注入容積：５μＬ
試料温度：およそ５℃
運転温度：６分
勾配：
【０１１２】
【表４】
0006265978.tif 000006
【０１１３】
ＭＦＩ法
全ての安定性試料は、標準１００μｍフローセル（１．６ｍｍ、シランコーティングされたＳＰ３、ｃａｔ＃４００２−００２−００１）と５×対物レンズを用いるＰｒｏｔｅｉｎ  Ｓｉｍｐｌｅマイクロフローイメージング（ＭＦＩ）装置モデルＤＰＡ４２００を用いて試験した。ＭＦＩビューシステムソフトウェアについてのソフトウェアバージョンは、２−Ｒ２．６．２．２１．２１７１であった。
【０１１４】
装置の設定および選択した特徴は、以下を含む：
端部粒子排除−選択
粒子充填−選択（Ｔ０以外）
試料容積：０．５ｍＬ
パージ容積：０．１５ｍＬ
およその試料容積：０．３０ｍＬ（自動計算）
【０１１５】
試験当日に、各条件について３つ（単一試験）または４つ（２重試験）の注射器を、個別の１５ｍＬＮｕｎｃチューブ（カタログ＃３３９６５１）にプールした。全ての作業は、層流フード中で行い、ＭＦＩ試料は希釈せずに試験した。
【０１１６】
各試料および標準物質の前に水ブランクを流すことからなる一連の運転を行って、粒子のバックグラウンドレベルに確実に理由があるようにした（典型的に、６００粒子／ｍＬ未満または１％未満の試料粒子／ｍＬ）。異なる試料間および試料と標準物質との間に３０ｍＬ以上の水を流し、その後、バックグラウンド粒子レベルを測定した（ブランク）。ブランクが許容できない場合、さらに水を流し、別のブランクを運転した。反復試料間および反復標準物質間に１０ｍＬの水を流して、システムから気泡を適当に除き、粒子を低減させた。Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｄｉｒｅｃｔ−Ｑタイプ１水を、ブランクおよび洗浄のために用いた（０．２２μｍろ過、１８．２ＭΩレベルの質）。Ｎｅｐｔｕｎｅ  Ｂａｒｒｉｅｒ  １０００μｌチップを用いて、試料注入口に試料を送達した。
【０１１７】
それぞれの一連の試料は、運転中の再現性を決定するために、３μｍ以上のサイズで３０００粒子／ｍＬを含有するＮＩＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）認定５．０μｍ粒子標準（Ｃａｔ＃ＣＣ０５、ロット３９５８８、２０１２年７月使用期限）をいくつか含有した。標準物質の性能を、表３に列挙する。
【０１１８】
【表５】
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【０１１９】
円相当径（ＥＣＤ）として知られる個別の粒子サイズは、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｉｍｐｌｅｓ測定技術を用いて決定した。物体のＥＣＤは、ミクロンで示し、粒子と同じ２次元表面積を占める球の直径を表す。ＭＦＩ製品プラットフォームは、物体の面積を、専有の変換技術を用いてＥＣＤ値に変換して、視野の次元に基づく直接計算に固有の誤差を回避する。変換技術は、ＮＩＳＴ追跡可能ポリスチレンビーズを用いる装置サイズ範囲全体のマッピングに基づく。変換はポリスチレンビーズに基づくが、販売者は、ＭＦＩ製品プラットフォームの独特の操作により、装置を用いて得られる結果は、粒子材料特性に左右されないことを保証すると主張している。よって、装置は、正しい操作のために、特定のタイプの試料に対して校正を必要としない。
【０１２０】
比色測定
試料の色は、標準試験手順を用いて分析した。各試料についての色の値は、欧州薬局方（ＥＰ）の色の定義（表４）で記録した。例えば、Ｂ１からＢ９は、欧州薬局方において定義される茶色尺度である。
【０１２１】
【表６】
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【０１２２】
光安定性試験
表１６に記載する４つの製剤Ｆ１〜Ｆ４のそれぞれを含有する注射器を、光安定性試験に供した。全体的に、１２の注射器（製剤あたり３つ）を、光源の３．５インチ下の白色印刷用紙で覆われた箱の表面に置いた。注射器を約１インチ離して以下のような数的順序で置いた（１  ２  ３  ４  １  ２  ３  ４  １  ２  ３  ４）。端の注射器（１および４）は、ランプの端からそれぞれ５インチであった。
【０１２３】
光源は、２つの白色蛍光ランプ（ＧＥ  Ｅｃｏｌｕｘ  Ｆ２０Ｔ１２−ＣＷ−ＥＣＯ、各２０Ｗ）および２つの近ＵＶ蛍光ランプ（３２０から４００ｎｍまでの分光分布、各２０Ｗ）であった。周囲温度での曝露時間は、白色蛍光ランプについて１４日、近ＵＶランプについて８８時間であった。
【０１２４】
撹拌研究
試験する異なる製剤のそれぞれについて３つの注射器を冷蔵条件から取り出し、１５ｍＬＮｕｎｃ円錐形チューブにプールし、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＭａｘＱ  ２０００オービタルシェーカーのプラットフォームに個別に固定し、周囲光および温度条件下で１５０ｒｐｍにて２４時間撹拌した。
【０１２５】
凍結−融解（Ｆ／Ｔ）サイクル研究
試験する異なる製剤のそれぞれについての注射器を冷蔵条件から取り出し、１５ｍＬＮｕｎｃ円錐形チューブにプールした。プールした試料を、次いで、５回のサイクルの凍結（−２０℃）および融解（周囲温度の水を用いる）に供した。
【０１２６】
研究Ｉ：第１の液体製剤スクリーニング
ＭＯＲ６６５４Ｂの液体製剤についての初期製剤スクリーニングを、例えば異なる緩衝剤、安定化剤、補形剤およびｐＨの値を試験するように設定した。いくつかの製剤は、一次包装選択についての経験を得るため、および異なるタイプのＰＦＳ（充填済み注射器）におけるＭＯＲ６６５４Ｂ液体製剤の安定性についての経験を得るためにさらに研究した。
【０１２７】
試料の調製
製剤は、水中に１６０ｇ／Ｌまで濃度を上昇させた脱フコシル化モノクローナル抗体を発現するＣＨＯ株化細胞から得た薬物（ＭＯＲ６６５４Ｂ）を用いて生成した。ＭＯＲ６６５４Ｂ薬物を適当な量の補形剤希釈溶液と混合し、滅菌ろ過し、滅菌１ｍＬ  ＰＦＳ（０．７ｍＬの充填容積）または６ｍＬガラスバイアル（３．６ｍＬの充填容積）に無菌的に充填し、Ｄａｉｋｙｏ  Ｄ２１−７Ｓ  Ｖ１０−Ｆ７−３ＷＲＳ  ＲＢ２−ＴＲ  ｌｙｏストッパーを用いて閉じた。試験した全ての製剤は、１００ｇ／ＬのＭＯＲ６６５４Ｂであった。
【０１２８】
【表７】
0006265978.tif 000009
【０１２９】
結果
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）についての結果の表
【０１３０】
【表８】
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【０１３１】
【表９】
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【０１３２】
【表１０】
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【０１３３】
【表１１】
0006265978.tif 000013
【０１３４】
【表１２】
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【０１３５】
【表１３】
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【０１３６】
【表１４】
0006265978.tif 000016
【０１３７】
【表１５】
0006265978.tif 000017
【０１３８】
【表１６】
0006265978.tif 000018
【０１３９】
【表１７】
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【０１４０】
結果のまとめ、第１の液体製剤スクリーニング
モノクローナル抗体ＭＯＲ６６５４Ｂの１６の製剤を、５℃および２５℃にて６ヶ月まで安定性について評価した。さらに、同じ製剤を、撹拌ストレス、反復Ｆ／Ｔサイクルおよび熱ストレス（４０℃にて１ヶ月）に供した。広範囲の生物物理学的および生化学的分析方法を用いて、安定性の点について製剤間に差があるかを決定した。ＳＥＣデータは、試験した製剤間で安定性の差を指摘した。振とうストレス試料では、製剤５（ｐＨ７、界面活性剤なし）において凝集生成物の増加がより高く、ポリソルベートの有利な効果を示した。凝集生成物のより激しい増加が、マンニトールおよび塩化ナトリウム製剤において凍結融解ストレスの際に記録された。
【０１４１】
この第１の研究の結果は、以下のようにまとめることができる：好ましいｐＨは６．０である。試験した非イオン安定化剤であるトレハロースは、製剤安定性にとって有利である。ポリソルベート２０は、凝集物の形成を妨げて製剤の安定性にとって有利である。
【０１４２】
研究ＩＩ：第２の液体製剤スクリーニング
抗ＢＡＦＦＲ抗体の製剤
高い抗体濃度１５０ｍｇ／ｍＬを有するＭＯＲ６６５４Ｂの３つの製剤（Ｆ１、Ｆ２およびＦ３）およびより低い抗体濃度２０ｍｇ／ｍＬを有する１つの製剤（Ｆ４）を、安定性について評価した。４つの製剤Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３およびＦ４を１．０ｍＬシリコン処理ガラス注射器に充填し、表１６に示すように緩衝剤、糖、界面活性剤および遊離アミノ酸を含めた。
【０１４３】
【表１８】
0006265978.tif 000020
【０１４４】
各製剤の試料を調製し、３つの異なる温度にて安定性について試験した。４つの液体製剤を実験的貯蔵条件下におき、
０（ｔ０）および２ヶ月（ｔ２）の時点にて２℃〜８℃
０（ｔ０）および２ヶ月（ｔ２）の時点にて２５℃
０（ｔ０）、１（ｔ１）および２ヶ月（ｔ２）の時点にて４０℃
の貯蔵の後に安定性について試験した。
【０１４５】
様々な温度での貯蔵に加えて、製剤を、長期間の光への曝露、撹拌および複数回の凍結−融解（Ｆ／Ｔ）サイクルのようないくつかのストレス条件に供した。各試料を、様々な方法を用いて分析した。
【０１４６】
結果および考察、第２の製剤スクリーニング
４つ全ての製剤を、ストレス条件に応じて同時に試験した。ゼロ時点（ｔ０）にて測定を１点について２つの検体を用いて行い、２ヶ月後（ｔ２）の測定も同様に行った。その他の試料は全て単一反復のみを分析した。より適切な結果を以下に報告する。
【０１４７】
ネフェロメトリー
ネフェロメトリーは、可溶性凝集物の存在を検出するためまたは乳白光を示すために用いられる比濁法である。結果を、ネフェロメトリー濁度単位（ＮＴＵ）の点で列挙する。
【０１４８】
【表１９】
0006265978.tif 000021
【０１４９】
ネフェロメトリーの結果は、タンパク質が物理的にかなり安定であり、４０℃にて２ヶ月経過した後でも明らかな変化がないことを示す。
【０１５０】
予想通り、より低い温度での貯蔵は、いずれの製剤についてもＮＴＵレベルの認識できる変化をもたらさなかった（表１８）。製剤３がより高いＮＴＵをなぜ示すかは明らかでない。
【０１５１】
【表２０】
0006265978.tif 000022
【０１５２】
【表２１】
0006265978.tif 000023
【０１５３】
最後に、撹拌、複数回のＦ／Ｔサイクルおよび長期間の光への曝露のようなストレス条件に供した試料のネフェロメトリーにより、いずれのストレス条件についてのいずれの製剤についても小さい変化だけが明らかになった。例えば、製剤１は、撹拌により約１．５ＮＴＵの増加を示し、Ｆ／Ｔストレスによりおよそ１ＮＴＵの増加を示した。比較すると、製剤２での増加はいずれのストレス条件についても１ＮＴＵ未満であった。同様に、より低い濃度の製剤４（これはショ糖も含有する）は、撹拌により約１ＮＴＵのわずかな上昇を示す。
【０１５４】
高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）測定
サイズ排除クロマトグラフ（ＳＥＣ）
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を筆頭に、これらの試料について３種類のＨＰＬＣ分析を行った。４０℃にて１または２ヶ月貯蔵した試料について、ＳＥＣにより測定して単量体が明らかに喪失する（表２０）。
【０１５５】
【表２２】
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【０１５６】
４０℃にて１または２ヶ月貯蔵した試料について、ＳＥＣにより測定して約７％〜８％の単量体が喪失する。
【０１５７】
【表２３】
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【０１５８】
より低い温度で貯蔵した試料について、４℃にて単量体は喪失せず、２５℃にておよそ１％の小さい喪失だけがある。ストレス条件の影響を考慮した場合、撹拌およびＦ／Ｔサイクルにより全ての製剤においてわずかな減少があるが、製剤間で本質的な差はない。光分解によっても、単量体含量が少し減少する。ここでもまた、製剤間の差は直ちに明らかでない。
【０１５９】
【表２４】
0006265978.tif 000026
【０１６０】
全体的な単量体含量についての検査は役に立つが、全体的な安定性プロファイルを考慮することがより有用であり得る。以下の表は、それぞれの場所で観察されるそれぞれのピークのパーセントについてまとめている。簡便のために、ピークはそれらの相対的保持時間（ＲＲＴ）の順に並べて、運転時間のわずかな変動を除く。
【０１６１】
【表２５】
0006265978.tif 000027
【０１６２】
ｔ０にて高分子量凝集物ピークは検出されず（表２３）、ＲＲＴ  ０．８８でのピーク（これは、ある種のオリゴマーであると考えられる）を含む３つの不純物だけが見出された。４０℃にて１ヶ月または２ヶ月の貯蔵により、単量体含量が実質的に減少し、分解生成物の大部分は主要ピークよりも後に溶出される（表２３）。このことは、これらの製剤について凝集よりも断片化がより問題であることを示す。
【０１６３】
２５℃にて２ヶ月加熱した試料について、単量体はほとんど喪失しない（＜１％）（表２４）。このことは、一次分解経路のための見かけの活性化エネルギーがかなり大きい（これは、加水分解と一致すると考えられる）ことを示唆する。同じ２つの断片化ピークがＲＲＴ  １．０７および１．２２にて見られ、１．０７でのピークは全ての試料においてかなり大きい。実際に、ＲＲＴ  １．２２は、製剤１および２において、運転に組み込まれないほど小さい。それ以外は、ＳＥＣによりアッセイした場合に、２５℃にて貯蔵した製剤間には最小の差だけがあった。
【０１６４】
【表２６】
0006265978.tif 000028
【０１６５】
４℃にて２ヶ月貯蔵した試料について、いずれの場所でもＳＥＣにより単量体の本質的な喪失はない（表２３）。オリゴマーの量は、全ての製剤についてほぼ同一である。
【０１６６】
異なるストレス条件を調べた場合（撹拌、Ｆ／Ｔおよび光安定性試験）、ＳＥＣによりほとんど分解は見られない。撹拌は、反復Ｆ／Ｔサイクルと同様に認識できる化学分解を引き起こさず、オリゴマーレベルのわずかな増加を引き起こすことがわかる。全ての製剤は、ほぼ同じように挙動する。光への曝露により、ＳＥＣ分析は、製剤３についてより高いレベルの断片化を示す（表２６）。
【０１６７】
【表２７】
0006265978.tif 000029
【０１６８】
【表２８】
0006265978.tif 000030
【０１６９】
ＲＰ  ＨＰＬＣ
ＲＰ  ＨＰＬＣは、タンパク質中で生じる可能性がある化学分解についての情報を与える。
【０１７０】
化学分解がＭＯＲ６６５４Ｂ中で生じると考えられるので、ＲＰ  ＨＰＬＣ分析は、かなりの情報を与えることができる。
【０１７１】
ｔ０にて、４つ全ての製剤は、ＲＰ  ＨＰＬＣにより９９．９％付近の純度を有する。
【０１７２】
４０℃にて１ヶ月の貯蔵の後に、純度はおよそ９６％まで減少するが、純度は製剤４について著しく高い。これらの値の格差は、この値が正しいかについて疑問を呈する（表２７）。
【０１７３】
２ヶ月にて、４つ全ての製剤は約９４％まで減少し、製剤間にあったとしてもわずかな差しかない。
【０１７４】
【表２９】
0006265978.tif 000031
【０１７５】
【表３０】
0006265978.tif 000032
【０１７６】
２５℃にて２ヶ月の貯蔵は、およそ９６．５％までのＲＰ  ＨＰＬＣによる純度の減少を生じる（表２８）。４℃にて貯蔵した試料の純度はそれほど異ならず、純度は９７％付近であった。ここでもまた、４つ全ての製剤が同様に挙動した。
【０１７７】
ストレス条件に供することにより、純度も減少する。撹拌およびＦ／Ｔ研究について、純度は、全ての製剤について約９７〜９８％である。しかし、光への曝露により、分解の程度がより大きくなる。１５０ｍｇ／ｍＬ製剤は約９４％まで減少するが、２０ｍｇ／ｍＬ製剤は＜９０％までずっと減少する。
【０１７８】
【表３１】
0006265978.tif 000033
【０１７９】
ＳＥＣを用いる場合と同様に、分解生成物の見かけを調べるとともに、主要ピークの喪失を考慮することが役に立つ。４０℃にて貯蔵した試料について、分解プロファイルを表３０にまとめる。１つの不純物だけがｔ０にて見られるが、より高い温度での貯蔵により複数の種が観察される。製剤４についてｔ１にて見られる比較的高い純度は、単にＲＲＴ  １．１９でのピークが見られなかったことによると考えられる（表３０）。全体的に、ＲＰ  ＨＰＬＣにより測定して明らかになる全体的な安定性に関して、４つの製剤のいずれの間にもほとんど差がない。
【０１８０】
【表３２】
0006265978.tif 000034
【０１８１】
２５℃にて貯蔵した試料について、２つの一次分解生成物が主要ピークの後に溶出される（表３１）。４つ全ての製剤についての安定性プロファイルは、ＲＰ  ＨＰＬＣを用いてアッセイした場合に、２５℃にて本質的に同じである。同様に、４℃にて貯蔵した試料について分解プロファイルは同様である（表３２）。
【０１８２】
【表３３】
0006265978.tif 000035
【０１８３】
【表３４】
0006265978.tif 000036
【０１８４】
試料を撹拌に供した場合、１つの分解生成物だけが出現し、レベルは全ての試料において同様である（表３３）。製剤４は、おそらくタンパク質濃度がより低いために、他の３つよりも安定性がわずかに低いことがわかる。反復Ｆ／Ｔサイクルも、ＲＰ  ＨＰＬＣにより観察されるようにいくらかのわずかな損傷を引き起こし、プロファイルは、撹拌について観察されるものと同様である。このことは研究を通して繰り返して観察され、このタンパク質の界面感受性が、どちらの試験をするかによってわかることを示す。界面応力に対する全体的な感受性を査定するために両方を行う必要性はないと考えられる。最後に、光への曝露は、断片である可能性が高い、早く溶出されるいくらかの種を創出する。４つの製剤のうち、これらの種のレベルは、製剤３についてより高い（表３３）。
【０１８５】
【表３５】
0006265978.tif 000037
【０１８６】
カチオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ  ＨＰＬＣ）
４つのＭＯＲ６６５４Ｂ製剤の安定性を評価するために用いた３番目のＨＰＬＣ法は、カチオン交換（ＣＥＸ）クロマトグラフィーである。この方法は、親化合物とは電荷が異なる分解生成物を同定することを意図する。初期は、４つ全ての製剤は、全ピーク面積の約９８％を占める広い主要ピークを示す（表３４）。４０℃にて１ヶ月の貯蔵により、主要ピークは約９６％に減少し、製剤４は、わずかに高い純度を有する（表３４）。４０℃にて２ヶ月の後に、これは約９５％までさらに減少し、製剤１は最高の純度を示す。
【０１８７】
【表３６】
0006265978.tif 000038
【０１８８】
【表３７】
0006265978.tif 000039
【０１８９】
２５℃にて２ヶ月貯蔵したＭＯＲ６６５４Ｂ製剤について、純度は、＞９８％からおよそ９７％まで減少し、製剤４はわずかだけであるがより安定である（表３５）。４℃にて同じ期間貯蔵した場合、ＲＰ  ＨＰＬＣデータで見られたのと同様に純度がいくらか喪失する。ここでもまた、２５℃でとほぼ同じ程度の分解が４℃でもあるのかが明らかでないが、分解の程度は小さく、全てのＭＯＲ６６５４Ｂ製剤はほぼ同じように挙動する。
【０１９０】
【表３８】
0006265978.tif 000040
【０１９１】
反復Ｆ／Ｔサイクルの撹拌により、ＣＥＸ  ＨＰＬＣに基づいていくらかの喪失があり、４つ全ての製剤は等しく挙動する（表３６）。長期間の光への曝露は、ＣＥＸ  ＨＰＬＣによりほとんど損傷を生じず、ＳＥＣおよびＲＰ  ＨＰＬＣで観察されたこととは対照的であった（それぞれ表２６および２９）。このことは、光により生じる分解生成物は、親化合物と電荷の点で異ならないことを示唆する。
【０１９２】
還元キャピラリー電気泳動（ｒＣＥ−ＳＤＳ）
キャピラリー電気泳動法は、ここでは、独立して抗体の軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）に対する損傷の程度を見ることを可能にする。さらに、非ＬＣ／ＨＣ含量により示されるように、どの程度のタンパク質がインタクトなＬＣおよびＨＣでないかを見積もることを可能にする。ｔ０にて、サイズの差により補正せずにピーク面積によりおよそ２５％のＬＣと７０％のＨＣが存在し（表３７）、残り（およそ５％）は、非ＬＣ／ＨＣ種（表３８）とみなす。
【０１９３】
【表３９】
0006265978.tif 000041
【０１９４】
４０℃にて１ヶ月貯蔵後に、ＬＣおよびＨＣの相対量は変化し、ＬＣが今ではおよそ２７％、ＨＣが６２から６８％の間を占める（表３７）。このことは、ＨＣが喪失されたことを示す。このことは、非ＬＣ／ＨＣ種の量の著しい増加に反映され（表３８）、非ＬＣ／ＨＣ種の量は、貯蔵前レベルの２倍付近である。
【０１９５】
【表４０】
0006265978.tif 000042
【０１９６】
２ヶ月が終わるまでに、約１０％（以上）の非ＬＣ／ＨＣ種が存在する。これらのデータは、製剤４が最も堅固であり、非ＬＣ／ＨＣレベルのパーセント増加が最小であることを示唆する。
【０１９７】
【表４１】
0006265978.tif 000043
【０１９８】
試料を４℃にて貯蔵した場合、ｒＣＥ−ＳＤＳによりまだいくらかの分解が観察され、ＬＣレベルはおよそ２５％からおよそ２７％まで上昇する（表３９）。この場合、製剤２が最も安定であり、非ＬＣ／ＨＣ種の量がほとんど増加しない。
【０１９９】
【表４２】
0006265978.tif 000044
【０２００】
２５℃にて２ヶ月貯蔵した場合、同程度のＬＣの増加およびＨＣ含量の減少がある（表４０）。非ＬＣ／ＨＣ種のレベルは上昇するが、４０℃試料のものとほぼ同程度である。これらのうち、製剤３は、安定性が最も乏しいことがわかるが、差は小さい。
【０２０１】
【表４３】
0006265978.tif 000045
【０２０２】
ｒＣＥ−ＳＤＳにより分析される試料の最後の一組は、３つの異なるストレス条件に供したものである（表４１）。試料を撹拌するかまたはＦ／Ｔサイクルに曝露した場合、４つのＭＯＲ６６５４Ｂ製剤のいずれについても非ＬＣ／ＨＣ種の増加は認められない。このことは、これらの製剤中のＭＯＲ６６５４Ｂが界面応力に対してあまり感受性でないという他の知見と一貫する。このことは、これらの２つの試験が界面安定性の同程度の査定を与えるという考えも補強する。長期間の光への曝露は、ＨＣのいくらかの喪失と非ＬＣ／ＨＣレベルの上昇とをもたらす（表４１）。これらの製剤のうち、製剤４は、最大の変化を示した。
【０２０３】
マイクロフローイメージング（ＭＦＩ）
過去数年にわたって、注射用タンパク質製品中の肉眼では見えない粒子のレベルに対する注目が増加している。その結果、いくつかの異なる分析法が開発された。最も広く知られているものの１つが、マイクロフローイメージング（ＭＦＩ）である。この技術は、異なるサイズ範囲内の肉眼では見えない粒子含量（１ｍＬあたりの粒子数に換算）を測定するために用いられた。データは、サイズの点で１００ｕｍまで収集したが、２５ｕｍまでのデータだけを示す。ＭＦＩデータの再現性は、非常によい。２重測定についての平均相対的標準偏差は、約５％である。
【０２０４】
【表４４】
0006265978.tif 000046
【０２０５】
しばしば、ＭＦＩについてまとめたデータは、全粒子数（１ｍＬあたりの粒子数）だけを報告するが、１〜２ｕｍサイズ範囲で計数された粒子の数が優勢を占めるので、このデータは誤解を招き得る。このサイズ範囲では、シリコーンオイルおよび気泡が顕著であり、タンパク質に基づく粒子の形態から離れて計数を歪める。これらの数を示しながら、サイズが２ｕｍより大きい、可能であれば５ｕｍより大きい粒子を見ることが最適である。また、平均および標準偏差を報告する試料について、これらは、１点につき２つの検体を測定する運転の結果である。
【０２０６】
４０℃にて貯蔵した場合、肉眼では見えない粒子数は、製剤全てについて上昇する（表４２）。特に注目されるのは製剤４であり、ここでは、全粒子数がｔ０にて１ｍＬあたり５０００粒子であり、他の高濃度製剤よりもかなり低い。１ヶ月後に、全ての製剤は、今では１ｍＬあたり２００００粒子を超えるが、製剤３についての増加はかなり小さい（表４２）。２ヶ月にて、製剤２だけが１ｍＬあたり３００００粒子未満である。２〜５ｕｍ（ここでは、この製剤は１ｍＬあたり５０００未満の粒子を含有する）および５〜１０ｕｍの粒子について差がより著しく、ここではレベルが１ｍＬあたり１０００粒子未満であり、存在する肉眼では見えない粒子の全量の点で製剤１だけが近い。
【０２０７】
【表４５】
0006265978.tif 000047
【０２０８】
ＭＯＲ６６５４Ｂ試料を２５℃にて２ヶ月貯蔵した場合、全ての製剤において肉眼では見えない粒子が増加するが、製剤１における増加は非常に小さい（表４３）。製剤１について、５から１０ｕｍまでのサイズの粒子だけが穏やかに増加する。それ以外は、本質的に変化がない。一方、他の製剤の全てでは、特に２から２５ｕｍのサイズ範囲においてかなり大きい増加がある。特に、製剤３および４は、ほとんどのサイズ範囲ビンにおいて著しい増加を示す。
【０２０９】
４℃にて２ヶ月貯蔵したＭＯＲ６６５４Ｂ製剤について、肉眼では見えない粒子のレベルにほとんど変化はない。製剤１は、５〜１０ｍｍの粒子の小さい増加だけを示し、他のサイズ範囲の全てにおいてわずかな減少を示す。製剤２は、異なるサイズ範囲にわたって小さい増加だけを示すが、製剤３は、全体的な粒子レベルの小さい減少を示す。比較すると、非常に低い肉眼では見えない粒子の負荷（純水のものをかろうじて上回る）で出発した製剤４は、全てのサイズ範囲において１ｍＬあたりの粒子数の著しい増加を示す。
【０２１０】
ＭＯＲ６６５４Ｂ製剤を撹拌、Ｆ／Ｔサイクルおよび光曝露のストレス条件に供した場合、光安定性試料についてのみ大きい増加がある（表４４）。撹拌およびＦ／Ｔサイクルはともに、特に２ｕｍ未満の粒子を無視すれば、粒子レベルにおいて小さい増加から穏やかな増加だけを引き起こす。他方、長期間の光への曝露は、肉眼では見えない粒子の形成を、かなり大きい増加まで引き起こす（表４４）。このことは、特に製剤３および４について当てはまる。比較すると、製剤１は、肉眼では見えない粒子の全体的な負荷の変化をほとんど示さない。
【０２１１】
【表４６】
0006265978.tif 000048
【０２１２】
比色法
この安定性研究において用いた最後の分析法は、比色法であった。ｔ０にて、４つの製剤は全て茶色を示し（表４５）、より希釈された製剤（製剤４）について色の強度がわずかに異なる。４０℃にて１または２ヶ月のインキュベーションにより、色の変化はほとんど導かれないが、製剤４は、いくらかの色の変化を示す（表４５）。より低い温度で貯蔵した場合、あったとしてもわずかな色の変化しかない（表４６）。いずれかのストレス条件に供した場合も、色は同じままである（表４７）。
【０２１３】
【表４７】
0006265978.tif 000049
【０２１４】
【表４８】
0006265978.tif 000050
【０２１５】
【表４９】
0006265978.tif 000051
【０２１６】
まとめ
広範囲の生物物理学的および生化学的分析法を用いて、安定性の点で製剤間に差があるかを決定した。第２のスクリーニングのために選択した製剤のうち、分析技術の多くを用いてほとんど差が観察されなかった。４０℃での貯蔵および長期間の光への曝露だけが、いくらかの著しい量の分解を引き起こした。４つ全ての製剤は安定性プロファイルの点で非常に類似していたが、製剤１（１５０ｍｇ／ｍＬ  ＭＯＲ６６５４Ｂ、２２０ｍＭショ糖、２０ｍＭヒスチジン、０．０４％ポリソルベート２０、ｐＨ６．０）は、この一連の分析法により決定して、全体的な分解の傾向が最も小さかった。製剤１は、熱および光ストレス条件においてより安定であり、分解しにくく、肉眼では見えない範囲の粒子形成の点でもより安定であった。
本発明は以下を提供する。
［１］
５．０〜７．０のｐＨを有し、
（ｉ）１８〜１６５ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤と、
（ｉｉｉ）緩衝剤と
（ｉｖ）界面活性剤と、場合によって
（ｖ）アミノ酸と
を含む水性組成物。
［２］
５．５〜６．５のｐＨを有し、
（ｉ）１８〜１６５ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤としてショ糖、トレハロースまたはマンニトールと、
（ｉｉｉ）緩衝剤としてヒスチジン、クエン酸塩またはコハク酸塩と、
（ｉｖ）界面活性剤としてポリソルベート２０、ポロキサマー１８８またはヒドロキシプロイル（hydroxyproyl）−ｂ−シクロデキストリンと、場合によって
（ｖ）アミノ酸としてアルギニンと
を含む、上記［１］に記載の水性組成物。
［３］
抗ＢＡＦＦＲ抗体を２０ｍｇ／ｍＬから１５０ｍｇ／ｍＬの間の濃度で含む、上記［１］または［２］に記載の水性組成物。
［４］
ショ糖、マンニトールまたはトレハロースを８０ｍＭから３００ｍＭの間の濃度で含む、上記［１］から［３］のいずれか一項に記載の水性組成物。
［５］
ポリソルベート２０またはポロキサマー１８８を０．０１％から０．１％の間の濃度で含む、上記［１］から［４］のいずれか一項に記載の水性組成物。
［６］
ヒスチジン、クエン酸塩またはコハク酸塩を５ｍＭから５０ｍＭの間の濃度で含む、上記［１］から［５］のいずれか一項に記載の水性組成物。
［７］
アルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌを２ｍＭから８０ｍＭの間の濃度で含む、上記［１］から［６］のいずれか一項に記載の水性組成物。
［８］
ショ糖またはトレハロースを１１０ｍＭから２５０ｍＭの間の濃度で含む、上記［１］から［７］のいずれか一項に記載の水性組成物。
［９］
ショ糖またはトレハロースを１２０ｍＭから２２０ｍＭの間の濃度で含む、上記［１］から［８］のいずれか一項に記載の水性組成物。
［１０］
ポリソルベート２０を０．０２％から０．０６％の間の濃度で含む、上記［１］から［９］のいずれか一項に記載の水性組成物。
［１１］
ヒスチジンを１５ｍＭから２５ｍＭの間の濃度で含む、上記［１］から［１０］のいずれか一項に記載の水性組成物。
［１２］
アルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌを１８ｍＭから２２ｍＭの間の濃度で含む、上記［１］から［１１］のいずれか一項に記載の水性組成物。
［１３］
５．５〜６．５のｐＨを有し、
（ｉ）１８〜１６５ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として８０ｍＭ〜３００ｍＭのショ糖、トレハロースまたはマンニトールと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として５ｍＭ〜５０ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩またはコハク酸塩と、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０１％〜０．１％のポリソルベート２０もしくはポロキサマー１８８または１ｍＭ〜３ｍＭのヒドロキシプロイル（hydroxyproyl）−ｂ−シクロデキストリンと、場合によって
（ｖ）２ｍＭ〜８０ｍＭのアルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌと
を含む、上記［１］に記載の水性組成物。
［１４］
５．５〜６．５のｐＨを有し、
（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として１１０ｍＭ〜２５０ｍＭのショ糖またはトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として１５ｍＭ〜２５ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩またはコハク酸塩と、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０２％〜０．０６％までのポリソルベート２０もしくはポロキサマー１８８または２ｍＭ〜３ｍＭのヒドロキシプロイル（hydroxyproyl）−ｂ−シクロデキストリンと、場合によって
（ｖ）２ｍＭ〜８０ｍＭのアルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌと
を含む、上記［１］に記載の水性組成物。
［１５］
５．５〜６．５のｐＨを有し、
（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として１２０ｍＭ〜２２０ｍＭのショ糖またはトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として１８ｍＭ〜２２ｍＭのヒスチジン、クエン酸塩またはコハク酸塩と、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０２％〜０．０６％までのポリソルベート２０もしくはポロキサマー１８８または２．５ｍＭのヒドロキシプロイル（hydroxyproyl）−ｂ−シクロデキストリンと、場合によって
（ｖ）２ｍＭ〜８０ｍＭのアルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌと
を含む、上記［１］に記載の水性組成物。
［１６］
６．０のｐＨを有し、
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として２２０ｍＭのショ糖と、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０とを含む、上記［１］に記載の水性組成物。
［１７］
６．０のｐＨを有し、
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として２２０ｍＭのトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と
を含む、上記［１］に記載の水性組成物。
［１８］
６．０のｐＨを有し、
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として１２０ｍＭのショ糖と、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と、
（ｖ）５０ｍＭのアルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌと
を含む、上記［１］に記載の水性組成物。
［１９］
６．０のｐＨを有し、
（ｉ）１５０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として１２０ｍＭのトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と、
（ｖ）５０ｍＭのアルギニン、特にアルギニン−ＨＣｌと
を含む、上記［１］に記載の水性組成物。
［２０］
６．０のｐＨを有し、
（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として２２０ｍＭのショ糖と、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と
を含む、上記［１］に記載の水性組成物。
［２１］
６．０のｐＨを有し、
（ｉ）２０ｍｇ／ｍＬの濃度を有し、それぞれ配列番号３、４および５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と配列番号６、７および８の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３とを含む抗ＢＡＦＦＲ抗体と、
（ｉｉ）安定化剤として２２０ｍＭのトレハロースと、
（ｉｉｉ）緩衝剤として２０ｍＭのヒスチジンと、
（ｉｖ）界面活性剤として０．０４％のポリソルベート２０と
を含む、上記［１］に記載の水性組成物。
［２２］
抗ＢＡＦＦＲ抗体が、配列番号１のアミノ酸を有するＶＨドメインと配列番号２のアミノ酸を有するＶＬドメインとを含む、上記［１］から［２１］のいずれか一項に記載の水性組成物。
［２３］
抗ＢＡＦＦＲ抗体が、配列番号９の重鎖領域と配列番号１０の軽鎖領域とを含む、上記［１］から［２２］のいずれか一項に記載の水性組成物。
［２４］
抗ＢＡＦＦＲ抗体が、フコシル化されていない、上記［１］から［２３］のいずれか一項に記載の水性組成物。
［２５］
上記［１］から［２４］のいずれか一項に記載の水性組成物を含む送達デバイス。
［２６］
上記［１］から［２４］のいずれか一項に記載の水性組成物を含む充填済み注射器。
［２７］
哺乳動物に抗ＢＡＦＦＲ抗体を送達するための方法であって、前記哺乳動物に、上記［１］から［２４］のいずれか一項に記載の水性組成物を投与するステップを含む方法。
［２８］
ＢＡＦＦ受容体により媒介されるかまたはＢ細胞を死滅もしくは枯渇させることにより処置できる疾患または障害の処置において使用するための、上記［１］から［２４］のいずれか一項に記載の水性組成物、または上記［25］に記載の送達デバイス、または上記［２６］に記載の充填済み注射器。
［２９］
自己免疫疾患の処置において使用するための、上記［１］から［２４］のいずれか一項に記載の水性組成物、または上記［２５］に記載の送達デバイス、または上記［２６］に記載の充填済み注射器。
［３０］
リンパ腫、白血病または骨髄腫のようなＢ細胞新生物の処置において使用するための、上記［１］から［２４］のいずれか一項に記載の水性組成物、または上記［２５］に記載の送達デバイス、または上記［２６］に記載の充填済み注射器。
［３１］
関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シェーグレン症候群または尋常性天疱瘡の処置において使用するための、上記［１］から［２４］のいずれか一項に記載の水性組成物、または上記［２５］に記載の送達デバイス、または上記［２６］に記載の充填済み注射器。
【配列表】
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