(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一または複数の選択されるオリゴヌクレオチドを有効成分として含有することを特徴とする、対象における免疫介在性の障害を治療するための医薬組成物：
５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’（配列番号１５）、または
５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’（配列番号１６）
であって； 
免疫介在性の障害が、自己免疫疾患、又は過敏症、又は移植片拒絶、又は微生物による宿主免疫系の過剰刺激に関連する疾患、又はＮＦ−κＢの活性化によって生じるＮＦ−κΒ介在性の疾患、又はＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の活性化によって生じるＴＬＲ介在性の疾患、或いはインターフェロンまたは炎症性サイトカインの過剰産生によって生じるサイトカイン介在性の疾患である、上記医薬組成物。
【請求項２】
前記オリゴヌクレオチドのリン酸骨格が、部分的に若しくは完全にホスホロチオエート修飾されているか、又は非修飾である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記オリゴヌクレオチドが、末端に１つのヌクレオチドを付加されており、かつＴＬＲ７／８の活性化を阻害する、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記オリゴヌクレオチドが、末端の１つのヌクレオチドが削除されており、かつＴＬＲ７／８の活性化を阻害する、請求項１から３までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記オリゴヌクレオチドが、１つの塩基が変更されており、かつＴＬＲ７／８の活性化を阻害する、請求項１から４までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記オリゴヌクレオチドが他のＤＮＡ分子、プラスミド、又はウイルスベクターの一部を構成する、請求項１から５までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記オリゴヌクレオチドがさらにリン酸骨格のホスホロチオエート化以外の化学修飾を受けている、請求項１から６までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記オリゴヌクレオチドが、ペグ化を受けている、請求項１から７までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
対象がヒト又は非ヒト脊椎動物である、請求項１から８までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１から９までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
腸内投与、非経口投与、及び局所的投与、又は吸入を含む経路を介して対象に投与される、請求項１から１０までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
単独で又はさらなる活性成分と組み合わせて用いられる、請求項１から１１までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
免疫介在性の障害が、ＴＬＲの活性化によって生じるＴＬＲ介在性の疾患である、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
免疫介在性の障害が、ＮＦ−κＢの活性化によって生じるＮＦ−κΒ介在性の疾患である、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
免疫介在性の障害が、インターフェロンの過剰産生によって生じるサイトカイン介在性の疾患である、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
免疫介在性の障害が、炎症性サイトカインの過剰産生によって生じるサイトカイン介在性の疾患である、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）介在性の疾患が、敗血症、拡張型心筋症、糖尿病、自己免疫性脳脊髄炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、アテローム性動脈硬化症、喘息、慢性閉塞性肺疾患、ＥＡＥ、又は臓器不全である、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
ＮＦ−κΒ介在性の疾患が、関節リウマチ（ＲＡ）、胃炎、又は炎症性腸疾患である、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
サイトカイン介在性の疾患が、敗血症又は多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）である、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、インスリン依存性（Ｉ型）糖尿病、炎症性関節炎、関節リウマチ、多発性硬化症、自己免疫性肝炎、慢性的侵攻性肝炎、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、悪性貧血の自己免疫性萎縮性胃炎、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性精巣炎、後天性血友 病、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、ベーチェット症候群、心筋症、慢性的炎症性脱髄性多発性神経障害、瘢痕性類天疱瘡、寒冷凝集素症、多発性筋炎皮膚筋炎、円板状ループス、交感性眼炎、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛、線維筋炎、ギランバレー症候群、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ腎症、若年性関節炎、全身性硬化症、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、高免疫グロブリンＥ症候群、進行性全身性硬化症、乾癬、ライター症候群、サルコイドーシス、スティフマン症候群、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、橋本甲状腺炎、グッドパスチャー疾患、悪性貧血、アジソン病、シェーグレン症候群、重症筋無力症、グレーブス病、アレルギー性脳脊髄炎、又は糸球体腎炎である、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
過敏症がアレルギー性外因性喘息、季節性アレルギー性鼻炎、全身性アナフィラキシー、自己免疫性溶血性貧血、胎児赤芽球症、グッドパスチャー疾患、アルサス反応、血清病、全身性エリテマトーデス、糸球体腎炎、接触皮膚炎及び同種移植片拒絶である、請求項１から１２までのいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オリゴヌクレオチド、及び、オリゴヌクレオチドを用いる、免疫介在性の障害を治療するための治療薬に関するものである。免疫介在性の障害には、自己免疫疾患、移植片拒絶、過敏症、自己抗原や微生物による宿主免疫系の過剰刺激に関連する疾患、及びＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）介在性の疾患が含まれる。
【背景技術】
【０００２】
免疫系は、ヒトの身体を、細菌感染、寄生生物感染、真菌感染、ウイルス感染から、及び腫瘍細胞の成長から防御する。免疫は、自然免疫として、又は適応免疫として分類することができる。自然免疫応答は、典型的には、感染性疾患に対する早期の障壁をもたらすために、感染するとすぐに生じ、一方、適応免疫応答は、抗原特異的な長期の防御免疫の発生を伴って、後に生ずる。
【０００３】
しかし、免疫応答は、ときに望ましくないものであり得、免疫介在性の障害を生じさせ得る。障害には、自己免疫疾患、移植片拒絶、過敏症、微生物による宿主免疫系の過剰刺激に関連する疾患、及びＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）介在性の疾患が含まれる。自己免疫疾患は、内因性の及び／又は外因性の抗原に対する適応免疫応答又は自然免疫応答又はその両方の結果生じる。細菌、寄生生物、真菌、又はウイルスに由来する異物は、自己タンパク質を模倣し、免疫系を刺激して、自己細胞及び自己組織に対する応答を開始させ得、その結果、限定はしないが全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）及び関節リウマチを含む疾患を生じさせる。移植片拒絶は、移植された臓器／組織に対する移植レシピエント（宿主）における免疫応答によって生じる、臓器又は組織の移植の結果である。対象に、腎臓、膵臓、心臓、肺、骨髄、角膜、及び皮膚を含む移植片を移植すると、対象は、移植片に対する免疫応答（拒絶）を開始させ得る。過敏症は、有害な影響を有する不適切な免疫応答であり、かなりの組織ダメージ又は死亡さえももたらす。過敏症は、４つのタイプ（例えば、Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、及びＩＶ型）に分けられる。微生物による宿主免疫系の過剰刺激に関連する疾患は、インフルエンザウイルス及び他のウイルスなどの微生物の感染によって引き起こされる。インフルエンザウイルス及びグラム陰性細菌の感染のケースでは、侵入生物に対する過剰な免疫応答は、患者における致命的な要因となると思われる。この応答は、サイトカインの過剰産生によって特徴付けられる。敗血性ショック症候群の研究によって、サイトカインの過剰産生／異常産生が、サイトカイン介在性の致死的ショックに起因して、急速な死亡をもたらし得ることが実証されている（Ｓｌｉｆｋａ  ＭＫ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．２０００；７８（２）：７４〜８０）。グラム陰性菌の感染に続く敗血性ショックは、重症の患者における死亡の一番の原因である。サイトカインの過大な産生は、サイトカイン介在性の致死的ショックによって特徴付けられる敗血症の一因となることが知られている（Ｅｓｐａｔ  ＮＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ．１９９５  Ｊｕｌ；５９（１）：１５３〜８）。多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）は、重症の敗血症及びショックにおける罹患及び死亡の主要な原因である。宿主サイトカインの過剰産生の結果生じるサイトカイン介在性の致死的ショックは、ＭＯＤＳをもたらす主なメカニズムであると考えられる（Ｗａｎｇ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｅｍｅｒｇ  Ｍｅｄ．２００８  Ｊｕｌ；２６（６）：７１１〜５）。Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）介在性の疾患は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の活性化によって生じる障害である。
【０００４】
ＴＬＲは、微生物に由来する分子構造（病原体関連分子パターン、すなわちＰＡＭＰ）を認識する受容体のファミリーである。ＴＬＲを発現する免疫細胞は、ＰＡＭＰが結合すると活性化される。ＴＬＲは、様々な病原体由来生成物を認識し、活性化される。ＴＬＲ４によって認識される細菌のリポ多糖（ＬＰＳ）、ＴＬＲ２−ＴＬＲ６ダイマーによって認識されるリポテイコ酸及びジアシル化リポペプチド、ＴＬＲ２−ＴＬＲ１ダイマーによって認識されるトリアシル化リポペプチド、ＴＬＲ９によって認識されるウイルス又は細菌のいずれかから合成されるか又は由来するＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）、ＴＬＲ５によって認識される細菌フラジェリン、ＴＬＲ２−ＴＬＲ６ダイマーによって認識されるザイモサン、ＴＬＲ４によって認識される呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）由来のＦタンパク質、ＴＬＲ３によって認識されるウイルス由来の二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）及びｄｓＲＮＡの合成類似体であるポリＩ：Ｃ、ＴＬＲ９によって認識されるウイルスＤＮＡ、ＴＬＲ７及びＴＬＲ８によって認識される一本鎖ウイルスＲＮＡ（ＶＳＶ及びインフルエンザウイルス）、及びイミダゾキノロンやイミキモドなどの合成グアノシン類似体（Ｆｏｏ  Ｙ．Ｌｉｅｗ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ  ５，Ｊｕｎｅ  ２００５，４４６〜４５８）が挙げられる。
【０００５】
近年、ＴＬＲの活性化は、敗血症、拡張型心筋症、糖尿病、実験的自己免疫性脳脊髄炎、全身性エリテマトーデス、アテローム性動脈硬化症、喘息、慢性閉塞性肺疾患、及び臓器不全を含む疾患のうちのいくつかの発病に関連付けられている（Ｆｏｏ  Ｙ．Ｌｉｅｗ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ  ５，２００５，４４６〜４５８）。自己ＤＮＡによるＴＬＲ９の活性化は、乾癬（Ｇｉｌｌｉｅｔ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８，５９４〜６０６）、ＳＬＥ（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  ＳＲ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００６；２５：４１７〜２８；Ｂａｒｒａｔ  ＦＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００５；２０２：１１３１〜９；Ｗｅｌｌｍａｎｎ  Ｕ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００５；１０２：９２５８〜６３）、及び関節リウマチ（Ｌｅａｄｂｅｔｔｅｒ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ２００２；４１６：６０３〜７；Ｂｏｕｌｅ  ＭＷ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００４；１９９：１６３１〜４０）などの自己免疫疾患の発症において重要な役割を有する。
【０００６】
ＴＬＲ９アゴニストが自然免疫応答及び適応免疫応答の両方を活性化することが記載されている（Ａｒｔｈｕｒ  Ｍ．Ｋｒｉｅｇ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｖｏｌ  ５．Ｊｕｎｅ  ２００６，４７１〜４８４）。ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’を有するオリゴヌクレオチドが、ＴＬＲ９アゴニストによって誘導されるヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の増殖及びＩＦＮの産生を抑制することが記載された（ＵＳ８０３０２８９Ｂ２）。
【０００７】
本明細書において引用される参考文献は、特許請求の範囲に記載の発明に対する先行技術であるとは認められない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許公報８０３０２８９Ｂ２号
【０００９】
【非特許文献１】Ｓｌｉｆｋａ  ＭＫ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．２０００；７８（２）：７４〜８０
【非特許文献２】Ｅｓｐａｔ  ＮＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ．１９９５  Ｊｕｌ；５９（１）：１５３〜８
【非特許文献３】Ｗａｎｇ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｅｍｅｒｇ  Ｍｅｄ．２００８  Ｊｕｌ；２６（６）：７１１〜５
【非特許文献４】Ｆｏｏ  Ｙ．Ｌｉｅｗ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ  ５，Ｊｕｎｅ  ２００５，４４６〜４５８
【非特許文献５】Ｇｉｌｌｉｅｔ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８，５９４〜６０６
【非特許文献６】Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  ＳＲ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００６；２５：４１７〜２８
【非特許文献７】Ｂａｒｒａｔ  ＦＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００５；２０２：１１３１〜９
【非特許文献８】Ｗｅｌｌｍａｎｎ  Ｕ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００５；１０２：９２５８〜６３
【非特許文献９】Ｌｅａｄｂｅｔｔｅｒ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ２００２；４１６：６０３〜７
【非特許文献１０】Ｂｏｕｌｅ  ＭＷ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００４；１９９：１６３１〜４０
【非特許文献１１】Ａｒｔｈｕｒ  Ｍ．Ｋｒｉｅｇ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｖｏｌ  ５．Ｊｕｎｅ  ２００６，４７１〜４８４
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、式（ＣＣＴ）ｎＣｍを有するオリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを提供し、式中、ｎは６から１６までの整数であり、ｍは０、１、又は２であり、但しｎが８である場合、ｍは１又は２である。
【００１１】
第１の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃ−３’（配列番号１）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００１２】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃ−３’（配列番号２）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００１３】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’（配列番号３）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００１４】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃ−３’（配列番号４）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００１５】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃ−３’（配列番号５）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００１６】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’（配列番号６）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００１７】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃ−３’（配列番号７）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００１８】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃ−３’（配列番号８）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００１９】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’（配列番号９）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００２０】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃ−３’（配列番号１０）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００２１】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃ−３’（配列番号１１）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００２２】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’（配列番号１２）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００２３】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’（配列番号１３）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００２４】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’（配列番号１４）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００２５】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’（配列番号１５）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００２６】
別の実施形態において、本発明は、ヌクレオチド配列５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’（配列番号１６）を有するオリゴヌクレオチドを提供する。
【００２７】
別の実施形態において、本発明は、本発明のオリゴヌクレオチドを用いる、免疫介在性の障害を治療するための治療薬を提供する。免疫介在性の障害には、自己免疫疾患、移植片拒絶、過敏症、自己抗原や微生物による宿主免疫系の過剰刺激に関連する疾患、及びＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）介在性の疾患が含まれる。
【００２８】
別の実施形態において、本発明は、ＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス、及びＳＬＥ患者の血清などのＴＬＲアゴニストによって誘導されるＴＬＲの活性化及びＩＦＮの産生を阻害することによる、本発明のオリゴヌクレオチドを用いる免疫介在性の障害を治療するための治療薬を提供する。
【００２９】
別の実施形態において、本発明は、炎症性サイトカインの産生を阻害することによる、及びサイトカイン介在性の致死的ショックから対象を救うことによる、本発明のオリゴヌクレオチドを用いる免疫介在性の障害を治療するための治療薬を提供する。
【００３０】
別の実施形態において、本発明は、ＴＬＲの刺激によって誘導されるＮＦ−κΒの活性化を阻害することによる、本発明のオリゴヌクレオチドを用いる免疫介在性の障害を治療するための治療薬を提供する。
【００３１】
別の実施形態において、本発明は、本発明のオリゴヌクレオチドを用いる、対象におけるＳＬＥ、敗血症、及び多臓器不全症候群を治療するための治療薬を提供する。
【００３２】
別の実施形態において、本発明は、個体における免疫応答を調節するために十分な量の免疫刺激化合物を前記個体に投与することを含む、個体における免疫応答を調節する方法を提供する。本発明の方法に従った免疫調節は、免疫応答の望ましくない活性化に関連する障害に罹患した個体を含む個体で行うことができる。
【００３３】
別の実施形態において、本発明は、個体におけるＴＬＲ９依存性のサイトカインの産生を抑制するために、十分な量の免疫刺激化合物を前記個体に投与することを含む、個体におけるＴＬＲ９依存性の免疫応答を阻害する方法を提供する。
【００３４】
別の実施形態において、本発明は、個体におけるＴＬＲ７／８依存性のサイトカインの産生を抑制するために、十分な量の免疫刺激化合物を前記個体に投与することを含む、個体におけるＴＬＲ７／８依存性の免疫応答を阻害する方法を提供する。
【００３５】
別の実施形態において、本発明は、個体におけるＮＦ−κΒ依存性のサイトカインの産生を抑制するために、十分な量の免疫刺激化合物を前記個体に投与することを含む、個体におけるＮＦ−κΒ依存性の免疫応答を阻害する方法を提供する。
【００３６】
別の実施形態において、本発明は、本発明のオリゴヌクレオチドを単独で又は薬学的に許容される担体と共に、腸内投与、非経口投与、及び局所的投与、又は吸入の経路を介して対象に投与することによる、免疫介在性の障害を治療するための治療薬を提供する。
【００３７】
別の実施形態において、本発明は、免疫介在性の障害の治療のための、治療上効果的な量の本発明のオリゴヌクレオチドを含む組成物を提供する。
【００３８】
別の実施形態において、本発明は、本発明のオリゴヌクレオチドを単独で又はさらなる活性成分と組み合わせて投与することによる、免疫介在性の障害の治療のための治療薬を提供する。
【００３９】
最後の実施形態において、本発明は、送達媒体内の本発明のオリゴヌクレオチドを投与することによる、免疫介在性の障害の治療のための治療薬を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１Ａ】ヒト形質細胞様ＤＣ細胞系における阻害性ＯＤＮによるＮＦ−κΒの活性化の抑制を示す図である。ＣＡＬ−１／ＮＦκＢ−ＧＦＰ細胞系を、細胞ベースのアッセイにおいてＮＦ−κΒ転写因子の活性をモニタリングするために設計した。ＮＦ−κΒコンセンサス転写応答エレメントによって働くＧＦＰレポーター遺伝子をコードするベクターを、ヒト形質細胞様ＤＣ細胞系ＣＡＬ−１にトランスフェクトした。ＧＦＰ発現をＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ２３９５によって誘導した。
【図１Ｂ】ヒト形質細胞様ＤＣ細胞系における阻害性ＯＤＮによるＮＦ−κΒの活性化の抑制を示す図である。ＴＬＲ９の刺激によって誘導されるＧＦＰ発現を、阻害性ＯＤＮの付加によってブロックした。
【図２Ａ】ＣＡＬ−１／ＮＦκＢ−ＧＦＰ細胞系におけるＴＬＲ９の刺激によるＮＦ−κΒの活性化に対する阻害性ＯＤＮの抑制能力を示すグラフを示す図である。
【図２Ｂ】ＣＡＬ−１／ＮＦκＢ−ＧＦＰ細胞系におけるＴＬＲ９の刺激によるＮＦ−κΒの活性化に対する阻害性ＯＤＮの抑制能力を示すグラフを示す図である。
【図２Ｃ】ＣＡＬ−１／ＮＦκＢ−ＧＦＰ細胞系におけるＴＬＲ９の刺激によるＮＦ−κΒの活性化に対する阻害性ＯＤＮの抑制能力を示すグラフを示す図である。
【図２Ｄ】ＣＡＬ−１／ＮＦκＢ−ＧＦＰ細胞系におけるＴＬＲ９の刺激によるＮＦ−κΒの活性化に対する阻害性ＯＤＮの抑制能力を示すグラフを示す図である。
【図３】ＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ２３９５で刺激されたＣＡＬ−１細胞からのＩＬ−６及びＴＮＦαの産生に対する阻害性ＯＤＮの抑制能力を示すグラフを示す図である。（ｃｃｔ）８、（ｃｃｔ）８ｃ、（ｃｃｔ）８ｃｃ、（ｃｃｔ）９、（ｃｃｔ）１０、（ｃｃｔ）１１、及び（ｃｃｔ）１２の間の阻害活性の比較。
【図４】ＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ２３９５で刺激されたＣＡＬ−１細胞からのＩＬ−６及びＴＮＦαの産生に対する阻害性ＯＤＮの抑制能力を示すグラフを示す図である。（ｃｃｔ）８、（ｃｃｔ）９、（ｃｃｔ）１０、（ｃｃｔ）１１、（ｃｃｔ）１２、（ｃｃｔ）１４、及び（ｃｃｔ）１６の間の阻害活性の比較。
【図５Ａ】マウスＤＣ細胞系Ｄ２ＳＣ／１からのＩＬ−６及びＴＮＦαの産生に対する阻害性ＯＤＮの抑制能力を示すグラフを示す図である。Ｄ２ＳＣ／１細胞を、阻害性ＯＤＮの存在下で、ＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ１８２６で刺激した。（ｃｃｔ）８、（ｃｃｔ）８ｃ、（ｃｃｔ）８ｃｃ、及び（ｃｃｔ）９の間の阻害活性の比較。
【図５Ｂ】マウスＤＣ細胞系Ｄ２ＳＣ／１からのＩＬ−６及びＴＮＦαの産生に対する阻害性ＯＤＮの抑制能力を示すグラフを示す図である。Ｄ２ＳＣ／１細胞を、阻害性ＯＤＮの存在下で、ＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ１８２６で刺激した。（ｃｃｔ）８、（ｃｃｔ）９、（ｃｃｔ）１０、（ｃｃｔ）１１、（ｃｃｔ）１２、（ｃｃｔ）１４、及び（ｃｃｔ）１６の間の阻害活性の比較。
【図６】ＣｐＧ２２１６で刺激されたヒトＰＢＭＣからのＩＦＮαの産生に対する阻害性ＯＤＮの抑制活性を示すグラフを示す図である。ＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ２２１６によって誘導されるＩＦＮαの産生に対する、（ｃｃｔ）８、（ｃｃｔ）９、（ｃｃｔ）１０、（ｃｃｔ）１１、（ｃｃｔ）１２、（ｃｃｔ）１４、及び（ｃｃｔ）１６の間の阻害活性の比較。
【図７Ａ】ＣＡＬ−１／ＮＦκＢ−ＧＦＰ細胞系におけるＴＬＲ７／８の刺激によるＮＦ−κΒの活性化に対する阻害性ＯＤＮの抑制能力を示すグラフを示す図である。ＴＬＲ７／８アゴニストガーディキモドによって誘導されるＮＦκＢの活性化についての、（ｃｃｔ）６、（ｃｃｔ）７、及び（ｃｃｔ）８の間の阻害活性の比較。
【図７Ｂ】ＣＡＬ−１／ＮＦκＢ−ＧＦＰ細胞系におけるＴＬＲ７／８の刺激によるＮＦ−κΒの活性化に対する阻害性ＯＤＮの抑制能力を示すグラフを示す図である。ＴＬＲ７アゴニストＣＬ２６４によって誘導されるＮＦ−κＢの活性化についての、（ｃｃｔ）８、（ｃｃｔ）９、（ｃｃｔ）１０、（ｃｃｔ）１１、（ｃｃｔ）１２、（ｃｃｔ）１４、及び（ｃｃｔ）１６の間の阻害活性の比較。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
本発明のオリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ９の活性化を強力に阻害する。ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）は、ＴＬＲ９アゴニストとして知られている［Ｄ．Ｍ．Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．４（２００４）２４９〜２５８］。本発明のオリゴヌクレオチドは、ＣｐＧ  ＯＤＮによって刺激されるサイトカインを強力に阻害し、このことは、本発明のオリゴヌクレオチドを、ＴＬＲ９の活性化に関連する疾患の治療のための治療薬として用いることができることを示している。ＴＬＲ９の活性化は乾癬（Ｇｉｌｌｉｅｔ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８，５９４〜６０６）、ＳＬＥ（Ｂａｒｒａｔ  ＦＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００５；２０２：１１３１〜９；Ｗｅｌｌｍａｎｎ  Ｕ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００５；１０２：９２５８〜６３；Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  ＳＲ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００６；２５：４１７〜２８）、及び関節リウマチ（Ｌｅａｄｂｅｔｔｅｒ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ２００２；４１６：６０３〜７；Ｂｏｕｌｅ  ＭＷ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００４；１９９：１６３１〜４０）の発症の一因となることが報告されているため、本発明のオリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ９の活性化を阻害することによる、乾癬、ＳＬＥ、及び関節リウマチの治療のための治療薬として用いることができる。
【００４２】
本発明のオリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ９アゴニストによって誘導されるヒトＰＢＭＣからのＩＦＮの産生を強力に阻害する。ＩＦＮの増大した産生は、ＳＬＥの発症の一因となることが報告されているため（Ｂａｒｒａｔ  ＦＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００５；２０２：１１３１〜９；Ｗｅｌｌｍａｎｎ  Ｕ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００５；１０２：９２５８〜６３）、本発明のオリゴヌクレオチドは、ＩＦＮの産生を阻害することによる、ＳＬＥの治療のための治療薬として用いることができる。
【００４３】
本発明のオリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ７／８アゴニストによって誘導されるサイトカインの産生を強力に阻害する。本発明のオリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ７又はＴＬＲ８を阻害することによる、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）介在性の疾患の治療のための治療薬として用いることができる。
【００４４】
ＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ  ＯＤＮとＤ−ガラクトサミン（Ｄ−Ｇａｌ）とをマウスに注射すると過剰な免疫反応を誘導することが実証されている。モデルマウスは、１２から２４時間以内に死亡した。血漿サイトカインの分析によって、ＴＮＦαなどの炎症性サイトカインの過剰産生が明らかになった（Ｍａｒｓｈａｌｌ  ＡＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．１９９８  Ａｐｒ；６６（４）：１３２５〜３３；Ｐｅｔｅｒ  Ｍ，Ｂｏｄｅ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００８  Ｊａｎ；１２３（１）：１１８〜２８）。本発明のオリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ９の刺激によって誘導されるマウス細胞からのＴＮＦαの産生を強力に阻害する。サイトカイン介在性の致死的ショックは、敗血性ショック（Ｓｌｉｆｋａ  ＭＫ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．２０００；７８（２）：７４〜８０；Ｅｓｐａｔ  ＮＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ．１９９５  Ｊｕｌ；５９（１）：１５３〜８）及び多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）（Ｗａｎｇ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｅｍｅｒｇ  Ｍｅｄ．２００８  Ｊｕｌ；２６（６）：７１１〜５）の一因となるため、本発明のオリゴヌクレオチドは、サイトカイン介在性の致死的ショックから宿主を救うことによる、敗血症及びＭＯＧＳの治療のための治療薬として用いることができる。
【００４５】
ＮＦ−κΒは、明らかに、炎症性遺伝子発現の最も重要な調節因子の１つである。ＮＦ−κΒの活性化は、炎症性サイトカインの転写を誘導するその能力を介して、炎症において中心的な役割を有する（Ｂａｌｄｗｉｎ（Ｊｒ）ＡＳ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６，６４９〜６８３）。ＮＦ−κΒは、関節リウマチ（ＲＡ）の滑膜線維芽細胞における構成的なＩＬ−６産生において役割を有することが実証されている（Ｍｉｙａｚａｗａ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １９９８，７９３〜８０３）。ＮＦ−κΒは、ヒト単球におけるＩＬ−１又はＴＮＦαによる炎症性遺伝子の活性化に密接に関与する（Ｓｃｈｏｔｔｅｌｉｕｓ  ＡＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９９９，３１８６８〜３１８７４）。ＮＦ−κΒ陽性細胞の数は、胃炎の程度と相関する。同様に、炎症性腸疾患において、固有層マクロファージが活性化ＮＦ−κΒを提示しており、ＮＦ−κΒの活性化が示されている（Ｎｅｕｒａｔｈ  ＭＦ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １９９８，８５９：１４９〜１５９）。
【００４６】
リガンドによるＴＬＲの活性化は、ＮＦ−κΒ及びインターフェロン応答性因子（ＩＲＦ）などの転写因子の活性化を誘導する。活性化された転写因子は、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、及びインターフェロン（ＩＦＮ）などのサイトカインの産生をさらに誘導する。
【００４７】
本発明のオリゴヌクレオチドは、ＴＬＲの刺激によって誘導されるＮＦ−κΒの活性化を強力に阻害し、このことは、本発明のオリゴヌクレオチドを、ＮＦ−κΒの活性化に関連する疾患の治療のための治療薬として用いることができることを示している。ＮＦ−κΒの活性化は、関節リウマチ、胃炎、及び炎症性腸疾患の発症の一因となることが報告されているため、本発明のオリゴヌクレオチドは、ＮＦ−κΒの活性化を阻害することによる、関節リウマチ、胃炎、及び炎症性腸疾患の治療のための治療薬として用いることができる。
【００４８】
別段の記載がない限り、本発明における全ての用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。単数形の用語「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈により別段のことが示されない限り、複数形の言及を含む。同様に、語「又は」は、文脈により別段のことが示されない限り、「及び」を含むものとする。矛盾がある場合には、用語の説明を含む本明細書が優先される。さらに、材料、方法、及び例は、例示的なものにすぎず、限定することを意図したものではない。治療する、治療すること、又は治療は、文法に関係なく同じ意味を有する。同様に、予防する、予防すること、又は予防は、文法に関係なく同じ意味を有する。「オリゴヌクレオチド」：オリゴヌクレオチドは、複数のヌクレオチド（すなわち、リン酸基に、及び置換されたピリミジン（Ｐｙ）（例えば、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ））又は置換されたプリン（Ｐｕ）（例えば、アデニン（Ａ）又はグアニン（Ｇ））のいずれかである交換可能な有機塩基に連結した糖（例えばデオキシリボース）を含む分子）を意味する。本明細書において用いられる用語オリゴヌクレオチドは、オリゴデオキシリボヌクレオチド（ＯＤＮ）を指す。オリゴヌクレオチドは、既存の核酸源（例えば、ゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡ）から得ることができるが、好ましくは合成のものである。本発明のオリゴヌクレオチドは、市場において入手可能な様々な自動核酸合成装置によって合成することができる。これらのオリゴヌクレオチドは、合成オリゴヌクレオチドと呼ばれる。
【００４９】
「化学修飾」：本発明において開示されるオリゴヌクレオチドは、天然のＤＮＡと比較して、ホスホジエステルヌクレオシド間架橋、リボース単位、及び／又は天然のヌクレオシド塩基（アデニン、グアニン、シトシン、チミン）を伴う、様々な化学修飾を包含し得る。修飾は、オリゴヌクレオチドの合成の間、又は後に生じ得る。合成の間、修飾された塩基は、内部に、又はその末端に組み込まれ得る。合成の後、修飾は、活性基を用いて実施することができる（アミノ修飾因子を介して、３’若しくは５’ヒドロキシル基を介して、又はリン酸基を介して）。当業者であれば、化学修飾の例を知っている。本発明に従ったオリゴヌクレオチドは、１つ又は複数の修飾を有し得、ここで、各修飾は、天然のＤＮＡから構成される同一配列のオリゴヌクレオチドと比較して、特定のホスホジエステルヌクレオシド間架橋に、及び／又は特定のリボース単位に、及び／又は特定の天然ヌクレオシド塩基位置に位置する。化学修飾には、本発明のオリゴヌクレオチドの「骨格修飾」が含まれる。本明細書において用いられる場合、本発明のオリゴヌクレオチドの修飾された骨格には、限定はしないが、「ホスホロチオエート骨格」が含まれ、これは、架橋していないリン酸酸素が、少なくとも１つのヌクレオチド間連結で硫黄によって置き換えられている、核酸分子の、安定化された糖リン酸骨格を指す。１つの実施形態において、架橋していないリン酸酸素は、それぞれの及び全てのヌクレオチド間連結で硫黄によって置き換えられている。他の骨格修飾は、アルキルホスホナート及びアリールホスホナート（これは荷電したホスホナート酸素がアルキル基又はアリール基によって置き換えられている）、ホスホジエステル、並びに荷電した酸素部分がアルキル化されているアルキルホスホトリエステルなどの、非イオン性のＤＮＡ類似体での修飾を示す。他の例において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート／ホスホジエステルキメラであり得る。化学修飾にはまた、本発明において開示されるオリゴヌクレオチドの塩基置換も含まれる。置換されたプリン及びピリミジンは、Ｃ−５プロピンピリミジン及び７−デアザ−７−置換プリンであり得る。置換されたプリン及びピリミジンには、限定はしないが、アデニン、シトシン、グアニン、及びチミン、並びに他の天然に生じる及び非天然に生じる核酸塩基が含まれる。本発明のオリゴヌクレオチドの化学修飾には、オリゴヌクレオチドの塩基の修飾がさらに含まれる。修飾された塩基は、Ｔ、Ｃ、Ｇ、及びＡなどのＤＮＡにおいて典型的に見られる天然に生じる塩基と化学的に異なるが、これらの天然に生じる塩基と基本的な化学構造を共有する、あらゆる塩基である。
【００５０】
本発明のオリゴヌクレオチドは、シチジン誘導体を用いて修飾することができる。用語「シチジン誘導体」は、シチジン様ヌクレオチド（シチジンを除く）を指し、用語「チミジン誘導体」は、チミジン様ヌクレオチド（チミジンを除く）を指す。さらに、本発明のオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドのいずれかの又は両方の末端でテトラエチレングリコール又はヘキサエチレングリコールなどのジオールを連結することによって、化学的に修飾することができる。
【００５１】
「免疫介在性の障害」：免疫介在性の障害は、対象における望ましくない免疫応答によって生じる疾患である。この障害には、自己免疫疾患、移植片拒絶、過敏症、微生物による宿主免疫系の過剰刺激に関連する疾患、及びＴＬＲの活性化に関連する疾患が含まれる。本発明において開示されるオリゴヌクレオチドは、免疫介在性の障害を治療するための治療薬として用いることができる。
【００５２】
「免疫応答」：Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、好中球、及びマクロファージなどの免疫系の細胞の、刺激に対する応答。この応答には、自然免疫応答及び適応（特異的又は獲得）免疫応答が含まれる。適応（特異的又は獲得）免疫応答には、液性免疫応答及び細胞性免疫応答が含まれる。
【００５３】
「免疫介在性の障害を予防する又は治療する」：本明細書において用いられる場合、予防するは、対象における免疫介在性の障害の完全な発症を予防することを指し、治療するは、免疫介在性の障害の兆候若しくは症候を改善するため、進行を止めるため、又は病的状態を取り除くための、対象における治療的介入を指す。
【００５４】
「対象」：本明細書において用いられる場合、対象は、ヒト又は非ヒト脊椎動物を指す。非ヒト脊椎動物は、非ヒト霊長類、家畜動物、及びコンパニオンアニマルである。本発明のオリゴヌクレオチドは、対象における免疫介在性の障害を予防又は／及び治療するために投与することができる。
【００５５】
「自己免疫疾患」：用語「自己免疫疾患」は、適応免疫系及び自然免疫系が自己抗原に応答し、細胞及び組織のダメージを仲介するようになる、自己寛容の崩壊によって生じる疾患を指す。自己免疫疾患は、単一の臓器若しくは単一の細胞型の関与、又は複数の臓器若しくは組織系の関与によって特徴付けられることが多い。自己免疫疾患はまた、「コラーゲン」疾患又は「コラーゲン血管」疾患又は「通道組織」疾患とも呼ばれている。自己免疫障害は、過敏症反応と関連していることが多い。本発明のオリゴヌクレオチドは、様々なタイプの自己免疫疾患を治療及び／又は予防するために有用であり得る。自己免疫障害の、具体的な、非限定的な例は、全身性エリテマトーデス、インスリン依存性（Ｉ型）糖尿病、炎症性関節炎、関節リウマチ、多発性硬化症、自己免疫性肝炎、慢性的侵攻性肝炎、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、悪性貧血の自己免疫性萎縮性胃炎、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性精巣炎、後天性血友病、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、ベーチェット症候群、心筋症、慢性的炎症性脱髄性多発性神経障害、瘢痕性類天疱瘡、寒冷凝集素症、多発性筋炎皮膚筋炎、円板状ループス、交感性眼炎、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛、線維筋炎、ギランバレー症候群、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ腎症、若年性関節炎、全身性硬化症、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、高免疫グロブリンＥ、進行性全身性硬化症、乾癬、ライター症候群、サルコイドーシス、スティフマン症候群、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、橋本甲状腺炎、グッドパスチャー疾患、悪性貧血、アジソン病、皮膚筋炎、シェーグレン症候群、皮膚筋炎、重症筋無力症、グレーブス病、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎などである（Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ，Ｖｏｌ．３４５，Ｎｏ．５，Ａｕｇｕｓｔ  ２，２００１，ｐ３４０〜３５０）。ＤＮＡ含有又はＲＮＡ含有微生物から放出されたＤＮＡ又はＲＮＡは、自己ＲＮＡ又は自己ＤＮＡを含有する複合体に特異的な自己抗体の産生を刺激し得、結果的に、限定はしないがＳＬＥを含む自己免疫疾患をもたらす。
【００５６】
「過敏症」：過敏症は、組織の損傷が内因由来又は外因由来の抗原に対する液性応答又は細胞介在性応答の結果として生じる障害を言い、４つのタイプに分類されている。Ｉ型過敏症（アナフィラキシー性の、即時型の、アトピー性の、レアギン性の、ＩｇＥ介在性の過敏症反応又はアレルギーと言われることが多い）は、通常、特異的な外因性抗原と接触した後の、ＩｇＥで感作された好塩基球及びマスト細胞からの、ヒスタミン、アナフィラキシーの遅反応性物質（ＳＲＳ−Ａ）、及び好酸球遊走因子（ＥＣＦ）などの薬理学的に活性な物質の放出の結果生じる。Ｉ型過敏症には、限定はしないが、アレルギー性外因性喘息、季節性アレルギー性鼻炎、及び全身性アナフィラキシーが含まれる。ＩＩ型過敏症（細胞傷害性の、細胞溶解性相補体依存性の、又は細胞刺激性の過敏症反応とも言われる）は、抗体が、細胞若しくは組織エレメントの抗原性成分と、又は、細胞若しくは組織に密接に結合している抗原若しくはハプテンと反応すると生じる。ＩＩ型過敏症には、限定はしないが、自己免疫性溶血性貧血、胎児赤芽球症、及びグッドパスチャー疾患が含まれる。ＩＩＩ型過敏症（毒性複合体、可溶性複合体、又は免疫複合体の過敏症反応とも言われる）は、血管内又は組織内の可溶性循環抗原抗体複合体の沈着と、それに伴う免疫複合体の沈着部位での急性炎症性反応の結果生じる。ＩＩＩ型過敏症には、限定はしないが、アルサス反応、血清病、全身性エリテマトーデス、及びあるタイプの糸球体腎炎が含まれる。ＩＶ型過敏症（細胞性の、細胞介在性の、遅延型の、又はツベルクリン型の過敏症反応と呼ばれることが多い）は、特異的抗原との接触の結果生じる感作されたＴリンパ球によって生じる。ＩＶ型過敏症には、限定はしないが、接触皮膚炎及び同種移植片拒絶が含まれる（Ｒｉｃｈａｒｄ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００３，Ｗ．Ｈ．ＦＲＥＥＭＡＮ  ＡＮＤ  ＣＯＭＰＡＮＹ）。
【００５７】
「微生物による宿主免疫系の過剰刺激に関連する疾患」：微生物の侵入は、重症であれば、時々、対象において全身性炎症応答を生じさせて、微生物による宿主免疫系の過剰刺激に関連する疾患をもたらし得る。インフルエンザＡ（Ｈ５Ｎ１）又は細菌の感染のケースなどの、疾患の発症における事象には、ＴＮＦα、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）、ケモカインインターフェロン誘導性タンパク質１０、単球化学誘因物質タンパク質１、インターロイキン−８、インターロイキン−１β、及び単球化学誘因物質タンパク質１の、著しく上昇した血液レベルが含まれる。このような応答は、多くの患者において観察される敗血症、ＡＲＤＳ、及び多臓器不全の原因の一端となるサイトカイン介在性の致死的ショックをもたらし得る（Ｔｈｅ  Ｗｒｉｔｉｎｇ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（ＷＨＯ）Ｃｏｎｓｕｌｔａｔｉｏｎ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ａ／Ｈ５．Ａｖｉａｎ  Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ａ（Ｈ５Ｎ１）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎｓ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００５；３５３：１３７４〜８５）。微生物感染に続く、サイトカインの血液レベルの著しい上昇は、高サイトカイン血症（ｈｙｐｅｒｃｙｔｏｋｉｎｅｍｉａ）（ｈｙｐｅｒｃｙｔｏｋｉｎａｅｍｉａ）又はサイトカインストームと呼ばれる。リサーチによって、鳥インフルエンザ又はＳＡＲＳに感染した患者には、抗ウイルス薬に加えて免疫応答を抑制する薬剤が必要であり得ることが示唆された。
【００５８】
本発明のオリゴヌクレオチドは、対象における微生物による宿主免疫系の刺激に関連する疾患を治療及び／又は予防するために用いることができる。この疾患を生じさせる微生物には、限定はしないが、ウイルス、細菌、真菌、寄生生物、及び海綿状脳症の病原体が含まれる。
【００５９】
微生物による宿主免疫系の過剰刺激に関連する疾患を生じさせるウイルスには、ＳＡＲＳ  ＣｏＶ、インフルエンザウイルス、鳥インフルエンザウイルスＨＩＶ−１、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス、デングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、コロナウイルス、水胞性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス、エボラウイルス、パラインフルエンザウイルス、おたふく風邪ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザウイルス、ハンターンウイルス、ブンガウイルス、フレボウイルス、ナイロウイルス、出血熱ウイルス、レオウイルス、オルビウイルス及びロタウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、パルボウイルス、パピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１及びＨＳＶ−２、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス、痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、アフリカ豚コレラウイルス、海綿状脳症の病原体、デルタ肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、口蹄疫ウイルス、並びに鳥インフルエンザウイルスが含まれる。微生物による宿主免疫系の過剰刺激に関連する疾患を生じさせ得る細菌には、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉｓ）、ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、マイコバクテリウム属菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｓ）（結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム・Ｅ・イントラセルラーレ（Ｍ．Ｅ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム・カンサシ（Ｍ．ｋａｎｓａｉｉ）、マイコバクテリウム・ゴルドネ（Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ）など）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、Ａ群連鎖球菌（Ｇｒｏｕｐ  Ａ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、Ｂ群連鎖球菌（Ｇｒｏｕｐ  Ｂ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ストレプトコッカス・フェカリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・ボビス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ）、連鎖球菌（嫌気性菌）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性カンピロバクター属菌（Ｃａｒｎｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．）、エンテロコッカス属菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム属菌（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）、豚丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｒｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｙｔｅｓ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス属菌（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｐ．）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、ストレプトバチルス・モニリフォルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｉｕｍ）、トレポネーマ・ペルテニュー（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトスピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、及びイスラエル放線菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｌｉ）が含まれる。微生物による宿主免疫系の過剰刺激に関連する疾患を生じさせる真菌には、限定はしないが、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、ブラストマイセス・デルマチチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）が含まれる。微生物による宿主免疫系の過剰刺激に関連する疾患を生じさせ得る寄生生物には、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）及びトキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）が含まれる。
【００６０】
「移植片拒絶」：移植片拒絶は、臓器又は組織の移植によって生じる免疫介在性の障害であり、移植は、ドナーからレシピエントへの移植物（移植片）の移動を意味する。移植片は、ドナーからレシピエントへ移植された、生きた細胞、組織、又は臓器である。自己移植片は、ある者自身の組織の１つの位置から別の位置へ移動した移植片であり、同系移植片（同種移植片）は、一卵性双生児の間での移植片であり、同種異系移植片（ホモ移植片）は、同一種の遺伝的に類似していないメンバーの間での移植片であり、そして異種移植片（ヘテロ移植片）は、異なる種のメンバーの間での移植物である。対象が同種異系移植片又は異種移植片のレシピエントである場合、身体は、ドナー組織に対する免疫応答を生じさせ得る。この状況において、移植片の拒絶を避けるために、免疫応答を抑制することが明らかに必要である（Ｒｉｃｈａｒｄ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００３，Ｗ．Ｈ．ＦＲＥＥＭＡＮ  ＡＮＤ  ＣＯＭＰＡＮＹ）。本発明のオリゴヌクレオチドは、移植片拒絶を予防するために投与されると有用である。移植片の例は、心臓、腎臓、肝臓、骨髄、皮膚、角膜、肺、膵臓、小腸（ｉｎｔｅｓｔｉｎｕｍ  ｔｅｎｕｅ）、肢、筋肉、神経、十二指腸、小腸（ｓｍａｌｌ  ｂｏｗｅｌ）、膵島細胞などである。いくつかのケースにおいて、レシピエントは、本発明の「対象」において規定されているような動物であり得る。
【００６１】
「Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）介在性の疾患」：Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）介在性の疾患は、ＴＬＲファミリーのメンバーの活性化に関連する免疫介在性の障害を意味する。この疾患には、限定はしないが、リポ多糖（ＬＰＳ）によるＴＬＲ４の活性化に関連する敗血症、ＴＬＲ２、３、４、９の活性化に関連する拡張型心筋症、ＴＬＲ２、３、４、９の活性化に関連する糖尿病、ＴＬＲ３の活性化に関連する実験的自己免疫性脳脊髄炎、ＴＬＲ９の活性化に関連する全身性エリテマトーデス、ＴＬＲ４の活性化に関連するアテローム性動脈硬化症、ＬＰＳによるＴＬＲ４の活性化に関連する喘息、ＴＬＲ４の活性化に関連する慢性閉塞性肺疾患、ＴＬＲ４の活性化に関連するＥＡＥ、及びＴＬＲ４の活性化に関連する臓器不全が含まれる（Ｆｏｏ  Ｙ．ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ  ５，２００５，４４６〜４５８）。ＳＬＥの発症の一因となると考えられているＩＦＮα分泌によって支配されている効率的な免疫応答を誘導する、核酸含有感染性物質に由来するＣｐＧ含有ＤＮＡ（ＴＬＲ９アゴニスト）を、ＳＬＥ血清から同定することができた。本発明のオリゴヌクレオチドは、対象における、限定はしないがＳＬＥを含むＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）介在性の疾患を治療及び／又は予防するために投与することができる。
【００６２】
「ＣｐＧ  ＯＤＮ」：ＴＬＲ９アゴニストが自然免疫応答及び適応免疫応答の両方を活性化することが記載されている（Ａｒｔｈｕｒ  Ｍ．Ｋｒｉｅｇ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｖｏｌ  ５．Ｊｕｎｅ  ２００６，４７１〜４８４）。ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）は、ＴＬＲ９アゴニストである［Ｄ．Ｍ．Ｋｌｉｎｍａｎ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．４（２００４）２４９〜２５８］。機能的特徴に基づいて、ＣｐＧ  ＯＤＮは３つのタイプに分けられる（Ｔｏｍｏｋｉ  Ｉｔｏ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ，２００６，Ｖｏｌ  １０７，Ｎｕｍ  ６：２４２３〜２４３１）。Ａ型ＣｐＧ  ＯＤＮは、ヒト形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）を活性化して、大量のＩ型インターフェロン（ＩＦＮ−ａ／β）を産生し、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）を強力に活性化する。Ｂ型ＣｐＧ  ＯＤＮは、Ｂ細胞を主に活性化して、それらの増殖及び抗体の分泌を生じさせる。Ｃ型ＣｐＧ  ＯＤＮは、Ａ型及びＢ型のＣｐＧ  ＯＤＮの両方の活性を共有する。ＣｐＧ２２１６又はＣｐＧ２００６又はＣｐＧ２３９５などのＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ  ＯＤＮは、細胞区画内に取り込まれ得、そこで、それらは、ＴＬＲ９に暴露され、ＴＬＲ９を活性化する。ｐＤＣにおいて、ＴＬＲ９の活性化は、炎症誘導性サイトカイン［ＩＬ−６、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）］の分泌、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ）の分泌、及びＩＦＮ誘導性のケモカインの分泌によって特徴付けられる迅速な自然免疫応答を開始させる。ＩＦＮ依存性の及びＩＦＮ非依存性の経路の両方を介して、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、及び好中球を含む自然免疫細胞は、ｐＤＣによって二次的に活性化される。ＴＬＲ９を介して活性化されたＢ細胞は、抗原の刺激に対する感度が大きく増大しており、抗体分泌細胞に効率的に分化し、したがって、適応免疫応答、特に液性免疫応答に寄与する。ＴＬＲ９を介して活性化されたｐＤＣはＩＦＮαを分泌し、これは、リンパ節及び他の二次リンパ組織へのｐＤＣの移動及びクラスター化を引き起こし、そこでｐＤＣは、未感作Ｔ細胞及び記憶Ｔ細胞を活性化し、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）への可溶性タンパク質抗原の交差提示をアシストし、そして強力なＴＨ１に偏った細胞性ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞応答を促進する。上記の発見に基づいて、ＣｐＧ  ＯＤＮの活性と拮抗する作用物質を、自然免疫応答及び適応免疫応答の両方を阻害することによって免疫介在性の障害を治療又は予防するために用いることができることが明らかである。
【００６３】
「薬学的に許容される担体」：薬学的に許容される担体は、本発明のオリゴヌクレオチドを対象に投与するために適切な、１つ又は複数の固体又は液体の充填剤、希釈剤、又はカプセル化物質を示す。担体は、有機の、無機の、天然の、又は合成のものであり得る。担体には、あらゆる及び全ての溶液、希釈剤、溶媒、分散媒質、リポソーム、エマルジョン、被覆剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、並びに本発明のオリゴヌクレオチドを投与するために適切なあらゆる他の担体が含まれ、それらの使用は、当技術分野において周知である。薬学的に許容される担体は、オリゴヌクレオチドの特定の投与態様に応じて選択される。非経口製剤は、通常、水、生理食塩水、平衡塩溶液、水性デキストロース、グリセロールなどの薬学的に及び生理学的に許容される流体を媒体として含む、注射可能な流体を含む。固体組成物（例えば、粉末、ピル、錠剤、又はカプセルの形態）では、従来の無毒の固体担体は、例えば、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、又はステアリン酸マグネシウムを含み得る。生物学的に中性の担体に加えて、投与される医薬組成物は、湿潤剤又は乳化剤、防腐剤、及びｐＨ緩衝剤などの微量の無毒の補助物質、例えば酢酸ナトリウム又はソルビタンモノラウラートを含有し得る。
【００６４】
「治療上効果的な量」：免疫介在性の障害を治療又は予防するために、治療上効果的な量の本発明のオリゴヌクレオチドが対象に投与される。オリゴヌクレオチドの１つの「治療上効果的な量」は、対象における免疫介在性の障害の治療又は予防の所望の結果を達成するために用いられるオリゴヌクレオチドの十分な量を意味する。本発明のオリゴヌクレオチドは、純粋な形態で、又は薬学的に許容される担体内で採用され得る。或いは、オリゴヌクレオチドは、医薬組成物として投与することができる。本発明における「量」は、用量を指す。用量は、当業者に周知の標準的な技術によって決定することができ、限定はしないが、対象のサイズ若しくは／及び全体的な健康、又は疾患の重症度を含む因子に応じて変化し得る。本発明のオリゴヌクレオチドの導入は、１回の治療として、又は一連の治療にわたって実施することができる。投与のための本発明のオリゴヌクレオチドの対象用量は、投与当たり約１μｇから１００ｍｇの範囲である。しかし、免疫介在性の障害の治療のための用量は、上記の用量よりも１０から１０００倍高い範囲で用いることができる。さらに好ましい用量は、正しい医学的判断の範囲内で、当業者によって、例えば担当医によって、最適な治療効果を得るために調整することができる。
【００６５】
「投与経路」：臨床的な使用では、本発明のオリゴヌクレオチドは、所望の治療的結果を達成するために効果的な、あらゆる適切な投与経路を介して、単独で投与することができるか、又は医薬組成物中に製剤することができる。本発明のオリゴヌクレオチドを投与する「経路」は、腸内投与、非経口投与、及び局所的投与、又は吸入を意味する。本発明のオリゴヌクレオチドの投与の腸内経路には、経口経路、胃経路、腸経路、及び直腸経路が含まれる。非経口経路には、静脈内経路、腹腔内経路、筋肉内経路、髄腔内経路、皮下経路、局部注射、膣投与、局所的投与、鼻投与、粘膜投与、及び肺投与が含まれる。本発明のオリゴヌクレオチドの投与の局所的経路は、表皮に、口腔に、並びに耳、目、及び鼻の中に外的にオリゴヌクレオチドを塗布することを示す。
【００６６】
「医薬組成物」  医薬組成物は、治療上効果的な量の本発明のオリゴヌクレオチドを薬学的に許容される担体と共に又は無しで含む組成物を意味する。医薬組成物は、１つ又は複数の本発明のオリゴヌクレオチドを含み得る。組成物には、限定はしないが、水溶液又は生理食塩水、粒子、エアゾール、ペレット、顆粒、粉末、錠剤、被覆された錠剤、（マイクロ）カプセル、坐剤、シロップ、エマルジョン、懸濁液、クリーム、ドロップ、及び様々な薬剤送達系において使用するために適切な他の医薬組成物が含まれる。組成物は、非経口的に、経口的に、直腸に、膣内に、腹腔内に、局所的に（粉末剤、軟膏剤、ゲル剤、ドロップ剤、又は経皮パッチ剤の投与形態で）、口内に、又は経口若しくは経鼻スプレー剤として、投与することができる。全てのケースにおいて、組成物は、製造及び保存の条件下で無菌及び安定でなくてはならず、微生物汚染から保護されなくてはならない。非経口注射のための本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される無菌の水溶液若しくは非水溶液、分散液、懸濁液、又はエマルジョン、並びに無菌の注射可能な溶液又は分散液内に使用直前に再構成するための無菌の粉末を含む。本発明のオリゴヌクレオチドは、約３．０から約８．０のｐＨ、好ましくは約３．５から約７．４、３．５から６．０、又は３．５から約５．０のｐＨで、水性担体、例えば等張緩衝液内に懸濁することができる。緩衝液には、クエン酸ナトリウム−クエン酸緩衝液、及びリン酸ナトリウム−リン酸緩衝液、及び酢酸ナトリウム−酢酸緩衝液が含まれる。経口投与では、組成物は、粉末錠剤、ピル、ドラジェ、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などを形成するための食用担体と製剤される。固体組成物では、従来の無毒の固体担体には、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、又はステアリン酸マグネシウムが含まれ得る。口内投与では、組成物は、従来の様式の錠剤又はのど飴である。吸入剤では、組成物は、加圧されたパック若しくは噴霧器からのエアゾールスプレー、又は乾燥粉末であり、当業者によって選択され得る。いくつかのケースにおいて、本発明のオリゴヌクレオチドの効果を延ばすために、本発明のオリゴヌクレオチドはまた、持続放出系によって適切に投与される。本発明のオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの放出を遅らせるために、水溶解度が低い結晶性の又は非晶質の材料の液体懸濁液内において用いることができる。或いは、オリゴヌクレオチドの非経口投与される薬剤形態の遅延放出が、オリゴヌクレオチドを疎水性材料（許容される油性媒質）内に溶解又は懸濁することによって達成される。注射可能なデポー形態は、オリゴヌクレオチドを、リポソーム又はマイクロエマルジョン、又はポリラクチド−ポリグリコシド、ポリ（オルトエステル）、及びポリ（アンヒドライド）などの他の生分解性半透性ポリマーマトリクス内に封入することによって作製される。
【００６７】
「活性成分」。本発明のオリゴヌクレオチドは、単独で、それ自体で組み合わせて、薬学的に許容される担体内で、１つ又は複数のさらなる活性成分と組み合わせて、用いることができる。本発明のオリゴヌクレオチド及びさらなる活性成分の投与は、連続的又は同時であり得る。活性成分には、非ステロイド抗炎症剤、ステロイド、非特異的免疫抑制剤、生物学的応答修飾因子、化学的化合物、低分子、核酸分子、及びＴＬＲアンタゴニストが含まれる。活性成分はまた、ケモカインに拮抗することにより、調節性Ｔ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞）の生成を誘導することにより、補体、マトリクス金属プロテアーゼ、及び一酸化窒素合成酵素を阻害することにより、共刺激因子をブロックすることにより、並びに免疫細胞におけるシグナル伝達カスケードを阻害することにより免疫活性化を抑制する、作用物質を示す。非ステロイド抗炎症剤には、限定はしないが、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、スリンダク、トーネチン、セレコキシブ、及びロフェコキシブが含まれる。ステロイドには、限定はしないが、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、及びトリアムシノロンが含まれる。非特異的免疫抑制剤は、免疫介在性の障害の発症を抑制するために用いられる作用物質を意味する。非特異的免疫抑制剤には、限定はしないが、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、ステロイド、ＦＫ５０６、タクロリムス、ミコフェノール酸、及びシロリムスが含まれる。生物学的応答修飾因子には、組換えインターロイキン−１−受容体アンタゴニスト（キネレット又はアナキマ）、可溶性ｐ７５ＴＮＦα受容体−ＩｇＧ１融合タンパク質（エタネルセプト又はエンブレル）、又はＴＮＦαに対するモノクローナル抗体（インフリキシマブ又はレミケードＸ）が含まれる。作用物質にはまた、インターフェロンベータ−１ａ、インターロイキン−１０、及びＴＧＦβが含まれる。
【００６８】
「送達媒体」：本発明のオリゴヌクレオチドは、送達媒体内で／と、又は媒体と連結した形態で、投与することができる。媒体には、限定はしないが、ステロール（例えばコレステロール）、コクリエート（ｃｏｃｈｌｅａｔｅ）、エマルソーム、ＩＳＣＯＭ、脂質（例えば、陽イオン性脂質、陰イオン性脂質）、リポソーム、エチレングリコール（ＰＥＧ）、生細菌ベクター（例えば、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、カルメット−ゲラン桿菌（ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｒｉｎ）、赤痢菌属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、ラクトバチルス属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、生ウイルスベクター（例えば、ワクシニア（Ｖａｃｃｉｎｉａ）、アデノウイルス、単純ヘルペス（Ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ））、ビロソーム、ウイルス様粒子、ミクロスフェア、核酸ワクチン、ポリマー（例えば、カルボキシメチルセルロース、キトサン）、ポリマー環、及び特異的受容体によって標的細胞を認識する標的化剤が含まれる。
【００６９】
「ペグ化」：ペグ化は、ポリ（エチレングリコール）ポリマー鎖の、通常は薬剤又は治療的タンパク質である別の分子への、共有結合による付着のプロセスである。ペグ化は、通常は、ＰＥＧの反応性誘導体と標的作用物質とのインキュベーションによって達成される。ペグ化された作用物質は、宿主免疫系から作用物質を「マスキング」し得、作用物質の流体力学的サイズを増大させ得、これはその循環時間を延ばす。本発明のオリゴヌクレオチドは、ペグ化することができる。
【実施例】
【００７０】
本発明を、以下の実施例においてさらに詳細に記載する。しかし、本発明は、これらの実施例に限定されない。これらの実施例において、ここでは、別段の記載が無い限り、市販されているキット及び試薬を用いた実験が付属のプロトコルに従って行われた。当業者には、本発明のオリゴヌクレオチドが免疫介在性の障害を治療するために容易に適用され得ることが理解されよう。本発明を、以下の非限定的な実施例によって実証する。
【００７１】
実施例において用いられる全てのオリゴヌクレオチド（ＯＤＮ）は、北海道システム・サイエンス株式会社（札幌、日本）において合成された。ＴＬＲ９刺激性のＯＤＮは、ＣｐＧ２３９５（５’−ｔｃｇｔｃｇｔｔｔｔｃｇｇｃｇｃｇｃｇｃｃｇ−３’、配列番号１７）、ＣｐＧ１８２６（５’−ｔｃｃａｔｇａｃｇｔｔｃｃｔｇａｃｇｔｔ−３’、配列番号１８）、ＣｐＧ２２１６（５’−ｇｇｇｇｇａｃｇａｔｃｇｔｃｇｇｇｇｇｇ−３’、配列番号１９）であった。実施例において用いられる他のＯＤＮは、（ＣＣＴ）６（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’、配列番号１５）、（ＣＣＴ）７（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’、配列番号１６）、（ＣＣＴ）８（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’、配列番号２０）、（ＣＣＴ）８Ｃ（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃ−３’、配列番号１）、（ＣＣＴ）８ＣＣ（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃ−３’、配列番号２）、（ＣＣＴ）９（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’、配列番号３）、（ＣＣＴ）１０（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’、配列番号６）、（ＣＣＴ）１０Ｃ（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃ−３’、配列番号７）、（ＣＣＴ）１０ＣＣ（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃ−３’、配列番号８）、（ｃｃｔ）１１（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’、配列番号９）、（ＣＣＴ）１１Ｃ（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃ−３’、配列番号１０）、（ＣＣＴ）１１ＣＣ（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃ−３’、配列番号１１）、（ＣＣＴ）１２（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’、配列番号１２）、（ＣＣＴ）１４（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’、配列番号１３）、及び（ＣＣＴ）１６（５’−ｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔ−３’、配列番号１４）であった。以下の実施例においてオリゴヌクレオチド（ＯＤＮ）を操作するために用いられる全ての試薬は、発熱性物質を含まないものであった。
【００７２】
（例１）
ＴＬＲ９の刺激によって誘導されるＮＦ−κΒの活性化に対する阻害性ＯＤＮの影響
＜実験方法＞
ＣＡＬ−１／ＮＦκΒ−ＧＦＰ細胞系を、細胞ベースのアッセイにおいてＮＦ−κΒ転写因子の活性をモニタリングするために樹立した。ＮＦκΒコンセンサス転写応答エレメントによって働くＧＦＰレポーター遺伝子をコードするベクターを、エレクトロポレーションによって、ヒト形質細胞様ＤＣ細胞系ＣＡＬ−１にトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞を、ゼオシンでさらに選択した。（Ａ）ＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ２３９５によって誘導されたＧＦＰ発現を評価した。簡潔に述べると、ＣＡＬ−１／ＮＦκΒ−ＧＦＰ細胞（１×１０５個／ウェル）を９６ウェル平底プレート（Ｃｏｓｔａｒ）に播種し、ＣｐＧ２３９５（１μΜ）と共に又は無しで培養した。細胞を、３７℃で、５％Ｃ０２加湿インキュベーター内で、６時間インキュベートした。細胞におけるＧＦＰ発現レベルを、フローサイトメーター（ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏ．Ｌｔｄ）によって評価した。ＧＦＰ陽性細胞のパーセンテージを、図に記載した。（Ｂ）ＣＡＬ−１／ＮＦκΒ−ＧＦＰ細胞（１×１０５個／ウェル）を、（ＣＣＴ）７、（ＣＣＴ）８、及び（ＣＣＴ）９（０．１μΜ、０．３μΜ、１．０μΜ）と共に２時間、プレインキュベートした。細胞を、ＣｐＧ２３９５（１μΜ）で６時間刺激した。細胞におけるＧＦＰ発現レベルを、フローサイトメーター（ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏ．Ｌｔｄ）によって評価した。各条件におけるＧＦＰ陽性細胞のパーセンテージを、図に記載した。
【００７３】
＜実験結果＞
図１に示されるように、ＧＦＰは、ＣｐＧ２３９５の刺激によってＣＡＬ−１／ＮＦκΒ−ＧＦＰ細胞において誘導され、このことは、ＮＦ−κΒの活性化がＴＬＲ９の刺激によって誘導されたことを示している。さらに、このＧＦＰ発現は、阻害性ＯＤＮの付加によってブロックされた。阻害性ＯＤＮの濃度が高いほど、ＣＡＬ−１／ＮＦκΒ−ＧＦＰ細胞におけるＧＦＰ発現の誘導の良好な阻害が示されたため、阻害活性の用量依存性が裏付けられた（最大阻害は、１．０μΜの各阻害性ＯＤＮで観察された）。（ＣＣＴ）９は、（ＣＣＴ）８又は（ＣＣＴ）７よりも優れた有効性で、ＧＦＰ発現をブロックした。これらのデータは、本発明者らが調べた阻害性ＯＤＮが、ヒト細胞系においてＴＬＲ９アゴニストによって誘導されるＮＦ−κΒの活性化を抑制し得ることを示す。
【００７４】
（例２）
ＴＬＲ９の刺激によって誘導されるＮＦ−κΒの活性化に対する阻害性ＯＤＮの抑制活性の比較
＜実験方法＞
ＣＡＬ−１／ＮＦκΒ−ＧＦＰ細胞（１×１０５個／ウェル）を、上記の様々な阻害性ＯＤＮと共に、２時間プレインキュベートした。細胞を、ＣｐＧ２３９５（１μΜ）で６時間刺激した。各条件における細胞のＧＦＰ発現レベルを、フローサイトメーター（ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏ．Ｌｔｄ）によって評価した。ＣｐＧ２３９５単独でのＧＦＰ陽性細胞のパーセンテージを、グラフにおいて１００％と規定した。各条件におけるＧＦＰ陽性のパーセンテージを、数値から計算した。
【００７５】
＜実験結果＞
図２Ａに示されるように、ＮＦ−κΒの活性化についての阻害活性の用量依存性が、各阻害性ＯＤＮにおいて裏付けられた。（ＣＣＴ）８は、ＣｐＧ２３９５によって誘導されるＧＦＰ発現を阻害し、ヒトｐＤＣ細胞系において（ＣＣＴ）６及び（ＣＣＴ）７よりも良好な活性を示した。（ＣＣＴ）９は、（ＣＣＴ）８よりも良好な有効性で、ＧＦＰ発現を強力にブロックした。（ＣＣＴ）１０、（ＣＣＴ）１１、及び（ＣＣＴ）１２は、（ＣＣＴ）９よりもはるかに良好な阻害活性を示した。これらの結果は、長いＯＤＮの方が短いＯＤＮよりも良好な活性を有することを示唆する。しかし、（ＣＣＴ）１４及び（ＣＣＴ）１６の阻害活性は、（ＣＣＴ）１２の活性と同一であり（図２Ｂ）、このことは、（ＣＣＴ）１２並びに（ＣＣＴ）１４及び（ＣＣＴ）１６が、ＴＬＲ９の刺激によって誘導されるＮＦ−κΒ活性の阻害について最大の有効性を有し得ることを示唆している。重要なことに、１．０μΜでの（ＣＣＴ）８の阻害活性は、０．１μΜでの（ＣＣＴ）１１及び（ＣＣＴ）１２の阻害活性とほぼ同一であった。このデータは、（ＣＣＴ）１１及び（ＣＣＴ）１２が、ヒト細胞において、（ＣＣＴ）８よりも、ＮＦ−κΒの活性化の阻害について１０倍高い有効性を有することを示す。図２Ｃ及び２Ｄに示されるように、（ＣＣＴ）８Ｃ及び（ＣＣＴ）８ＣＣは、（ＣＣＴ）８よりも良好な阻害活性を示した。（ＣＣＴ）１０Ｃ及び（ＣＣＴ）１０ＣＣが（ＣＣＴ）１０よりも良好な阻害活性を示すことも実証された。
【００７６】
さらに、（ＣＣＴ）１１の阻害活性はすでにほとんど飽和していたが、（ＣＣＴ）１１Ｃ及び（ＣＣＴ）１１ＣＣは、（ＣＣＴ）１１よりも良好な阻害活性を有していた。これらの結果は、（ＣＣＴ）反復の３’末端でのＣ又はＣＣの付加がＯＤＮの阻害活性を増大させることを示した。
【００７７】
活性化されたＮＦ−κΒがインターロイキン−６（ＩＬ−６）及び腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）などの炎症性サイトカインの産生をさらに誘導することが、十分に確立されている。本発明者らが調べたオリゴヌクレオチド（ＯＤＮ）は、ＴＬＲの刺激によって誘導されるＮＦ−κΒの活性化を強力に阻害するため、ＯＤＮは、ＮＦ−κΒの活性化に関連する疾患の治療のための治療薬として用いることができる。ＮＦ−κΒの活性化は、関節リウマチ、胃炎、及び炎症性腸疾患などの自己免疫疾患の発症の一因となることが報告されているため、本発明者らが調べたＯＤＮは、ＮＦ−κΒの活性化を阻害することによる、疾患の治療のための治療薬として用いることができる。
【００７８】
（例３）
ヒト細胞での、ＴＬＲ９の刺激によって誘導される炎症性サイトカインの産生に対する阻害性ＯＤＮの抑制活性の比較
＜実験方法＞
ヒト形質細胞様ＤＣ細胞系ＣＡＬ−１細胞を培養し（１×１０５個／ウェル）、９６ウェル平底プレート（Ｃｏｓｔａｒ）に播種し、阻害性ＯＤＮの存在下で、ＣｐＧ２３９５（０．４μΜ）で、２４時間刺激した（阻害性ＯＤＮの濃度は図に記載されている）。２４時間の刺激の後、培養上清を回収し、炎症性サイトカインの産生を評価した。ＩＬ−６及びＴＮＦαの産生のレベルを、製造者のプロトコルにおいて記載されているように、ＥＬＩＳＡによって測定した（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｏ．Ｌｔｄ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＵＳＡ）。
【００７９】
＜実験結果＞
図３に示されるように、ＣＡＬ−１細胞において、ＣｐＧ２３９５によって誘導されるＩＬ−６及びＴＮＦαの産生の両方は、阻害性ＯＤＮの付加によってブロックされた。ＩＬ−６及びＴＮＦαの産生についての阻害活性の用量依存性が、各阻害性ＯＤＮにおいて裏付けられた。（ＣＣＴ）９、（ＣＣＴ）１０、（ＣＣＴ）１１、及び（ＣＣＴ）１２は、ＣｐＧ２３９５によって誘導されるＩＬ−６及びＴＮＦαの産生の両方を強力にブロックした。これらのＯＤＮの有効性は（ＣＣＴ）８の有効性よりもはるかに良好であった。重要なことに、０．４μΜでの（ＣＣＴ）８の阻害活性は、０．０４μΜでの（ＣＣＴ）１１及び（ＣＣＴ）１２の阻害活性とほぼ同一であった。このデータは、（ＣＣＴ）１１及び（ＣＣＴ）１２が、ヒト細胞において、（ＣＣＴ）８よりも１０倍高い有効性を有することを示す。（ＣＣＴ）１１及び（ＣＣＴ）１２は、０．０４ｕＭでほぼ１００％の阻害を示したため、本発明者らは、低濃度での阻害活性をさらに評価した（図４）。図に示されるように、（ＣＣＴ）９及び（ＣＣＴ）１０は、（ＣＣＴ）８よりもはるかに良好な有効性でＴＮＦαの産生をブロックした。さらに、（ＣＣＴ）１１、（ＣＣＴ）１２、（ＣＣＴ）１４、及び（ＣＣＴ）１６は、ヒト細胞において、非常に低い用量で、ＴＮＦαの産生の阻害についての強力な有効性を示した。これらの結果は、ＯＤＮを、自己免疫疾患、移植片拒絶、過敏症、自己抗原及び微生物による宿主免疫系の過剰刺激に関連する疾患などの、様々な免疫介在性の障害の治療のための治療薬として用いることができることを示唆する。ＩＬ−６及びＴＮＦαは、関節リウマチ、胃炎、及び炎症性腸疾患などの疾患の発症について鍵となる役割を有することが報告されているため、本発明者らが調べたＯＤＮは、ＩＬ−６及びＴＮＦαの阻害による疾患の治療のための治療薬として用いることができる。
【００８０】
（例４）
マウス細胞での、ＴＬＲ９の刺激によって誘導される炎症性サイトカインの産生に対する阻害性ＯＤＮの抑制活性の比較
＜実験方法＞
マウスＤＣ細胞系Ｄ２ＳＣ／１細胞を培養し、Ｄ２ＳＣ／１（１×１０５個／ウェル）を９６ウェル平底プレート（Ｃｏｓｔａｒ）に播種し、阻害性ＯＤＮの存在下で、ＣｐＧ１８２６（０．６５μΜ）で、２４時間刺激した（阻害性ＯＤＮの濃度は図に記載されている）。２４時間の刺激の後、培養上清を回収し、炎症性サイトカインの産生を評価した。ＩＬ−６及びＴＮＦαの産生のレベルを、製造者のプロトコルにおいて記載されているように、ＥＬＩＳＡによって測定した（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｏ．Ｌｔｄ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＵＳＡ）。
【００８１】
＜実験結果＞
図５に示されるように、マウスＤＣ細胞系Ｄ２ＳＣ／１細胞において、ＣｐＧ１８２６によって誘導されるＩＬ−６及びＴＮＦαの産生の両方は、阻害性ＯＤＮの付加によってブロックされた。ＩＬ−６及びＴＮＦαの産生についての阻害活性の用量依存性が、各阻害性ＯＤＮにおいて裏付けられた。（ＣＣＴ）９、（ＣＣＴ）１０、（ＣＣＴ）１１、（ＣＣＴ）１２、（ＣＣＴ）１４、及び（ＣＣＴ）１６は、ＣｐＧ１８２６によって誘導されるＩＬ−６及びＴＮＦαの産生の両方を強力にブロックした。重要なことに、これらのＯＤＮの有効性は（ＣＣＴ）８の有効性よりもはるかに良好であった。図５Ｂに示されるように、０．１μΜでの（ＣＣＴ）８は、ＣｐＧ１８２６によって誘導されるＴＮＦαの産生をほとんど阻害しなかった。しかし、同一の濃度での（ＣＣＴ）１０、（ＣＣＴ）１１、（ＣＣＴ）１２、（ＣＣＴ）１４、及び（ＣＣＴ）１６は、ＴＮＦαの産生を強力に阻害した。このデータは、（ＣＣＴ）１０、（ＣＣＴ）１１、（ＣＣＴ）１２、（ＣＣＴ）１４、及び（ＣＣＴ）１６が、マウス細胞において、ＴＬＲ９の刺激について（ＣＣＴ）８よりもはるかに良好な阻害的影響を有することを示す。
【００８２】
Ｄ−ガラクトサミンで前感作された、ＣｐＧ  ＯＤＮを有するマウスが、過剰な免疫反応の誘導が原因で、サイトカイン介在性の致死的ショックを発症することが記載された（Ｐｅｔｅｒ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００８  Ｊａｎ；１２３（１）：１１８〜２８）。血漿サイトカインの分析によって、ＴＮＦαなどの炎症性サイトカインの過剰産生が明らかになった（Ｍａｒｓｈａｌｌ  ＡＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．１９９８  Ａｐｒ；６６（４）：１３２５〜３３；Ｐｅｔｅｒ  Ｍ，Ｂｏｄｅ  Ｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００８  Ｊａｎ；１２３（１）：１１８〜２８）。本発明者らが評価したＯＤＮは、ＴＬＲ９の刺激によって誘導されるマウス細胞からのＴＮＦαの産生を強力に阻害する。サイトカイン介在性の致死的ショックは、敗血性ショック（Ｓｌｉｆｋａ  ＭＫ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．２０００；７８（２）：７４〜８０；Ｅｓｐａｔ  ＮＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ．１９９５  Ｊｕｌ；５９（１）：１５３〜８）及び多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）（Ｗａｎｇ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｅｍｅｒｇ  Ｍｅｄ．２００８  Ｊｕｌ；２６（６）：７１１〜５）の一因となるため、本発明者らが評価したＯＤＮは、サイトカイン介在性の致死的ショックから宿主を救うことによる、敗血症及びＭＯＧＳの治療のための治療薬として用いることができる。
【００８３】
（例５）
ＴＬＲ９アゴニストで刺激されたヒトＰＢＭＣからのＩＦＮαの産生に対する阻害性ＯＤＮの抑制活性。
＜実験方法＞
以下の試料において用いるヒト末梢単核球（ｈｕＰＢＭＣ）を、フィコールハイパック（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）密度勾配遠心分離によって末梢血から単離した（Ｐ．Ｍ．Ｄａｆｔａｒｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）：Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５７，１２〜２０）。細胞を、１０％ＦＣＳ（ｖ／ｖ）及び抗生物質（１ｍｌ当たり１００ＩＵのペニシリン及び１ｍｌ当たり１００ＩＵのストレプトマイシン）を補ったＲＰＭＩにおいて、３７℃で、５％Ｃ０２加湿インキュベーター内で培養した。ＴＬＲ９の刺激によって誘導されるＰＢＭＣからのＩＦＮαの産生を評価した。簡潔に述べると、ｈｕＰＢＭＣ（５×１０６個／ｍｌ）を９６ウェル平底プレートに播種し、阻害性ＯＤＮ（０．１μΜ）（ＣＣＴ）８、（ＣＣＴ）９、（ＣＣＴ）１０、（ＣＣＴ）１１、（ＣＣＴ）１２、（ＣＣＴ）１４、及び（ＣＣＴ）１６の存在下で、ＣｐＧ２２１６（１μΜ）で刺激した。ＩＦＮαの産生のレベルを測定するために、培養上清を回収した。ＩＦＮαの産生のレベルを、製造者のプロトコルにおいて記載されているように、ＥＬＩＳＡによって測定した（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｏ．Ｌｔｄ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＵＳＡ）。
【００８４】
＜実験結果＞
図６に示されるように、ヒトＰＢＭＣは、ＴＬＲ９アゴニストＣｐＧ２２１６に応答してＩＦＮαを産生した。（ＣＣＴ）８は、ＣｐＧ２２１６によって誘導されるＩＦＮαの産生をブロックした。しかし、（ＣＣＴ）８の抑制の有効性はそれほど強力ではなかった。（ＣＣＴ）９、（ＣＣＴ）１０、（ＣＣＴ）１１、（ＣＣＴ）１２、（ＣＣＴ）１４、及び（ＣＣＴ）１６は、（ＣＣＴ）８よりも、ＣｐＧ２２１６によるＩＦＮαの産生について良好な阻害活性を示した。特に、（ＣＣＴ）１１、（ＣＣＴ）１２、（ＣＣＴ）１４、及び（ＣＣＴ）１６は、ＣｐＧ２２１６によって誘導されるＩＦＮαの産生を強力に阻害した。これらの結果は、本発明者らが評価した阻害性ＯＤＮが、ヒトＰＢＭＣにおいて、ＴＬＲ９及びＩＦＮαの産生の阻害剤であり得ることを示す。ＩＦＮの増大した産生がＳＬＥの発症の一因となることが十分に確立されている（Ｂａｒｒａｔ  ＦＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００５；２０２：１１３１〜９；Ｗｅｌｌｍａｎｎ  Ｕ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００５；１０２：９２５８〜６３）。内因性ＩＦＮ誘導因子がＳＬＥ患者の血清内に存在することが報告されていることが実証されており（Ｋｗｏｋ  ＳＫ，ｅｔ  ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ．２００８；１０（２）：Ｒ２９）、ＳＬＥ患者は、ＩＦＮの産生の循環誘導因子を有し、ＳＬＥ患者の血清は、健康な血液ドナーのＰＢＭＣの培養物において、ＴＬＲ９を介してＩＦＮの産生を誘導することが多い。本発明者らが調べたＯＤＮはＩＦＮαの産生を効率的にブロックし得たため、本発明者らが評価したＯＤＮは、ＩＦＮの産生を阻害することによる、ＳＬＥ患者の治療のための治療薬として用いることができる。
【００８５】
（例６）
ＴＬＲ７／８の刺激によって誘導されるＮＦ−κΒの活性化に対する阻害性ＯＤＮの抑制活性の比較
＜実験方法＞
ＣＡＬ−１／ＮＦκΒ−ＧＦＰ細胞（１×１０５個／ウェル）を、先に記載した阻害性ＯＤＮと共に、２時間プレインキュベートした。細胞を、ＴＬＲ７／８アゴニストガーディキモド又はＣＬ２６４（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ＵＳＡ）で、４時間刺激した。各条件におけるＧＦＰ発現レベルを、フローサイトメーター（ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｏ．Ｌｔｄ）によって評価した。図７（Ａ）ＣＡＬ−１／ＮＦκΒ−ＧＦＰ細胞を、（ＣＣＴ）６、（ＣＣＴ）７、及び（ＣＣＴ）８（０．１ｕＭ、０．３ｕＭ、及び１．０ｕＭ）の存在下で、ＴＬＲ７／８アゴニストガーディキモド（２μｇ／ｍｌ）で、４時間刺激した。ガーディキモド単独でのＧＦＰ陽性細胞のパーセンテージを、グラフにおいて１００％と規定した。各条件におけるＧＦＰ陽性のパーセンテージを、数値から計算した。図７（Ｂ）ＣＡＬ−１／ＮＦκΒ−ＧＦＰ細胞を、（ＣＣＴ）８、（ＣＣＴ）９、（ＣＣＴ）１０、（ＣＣＴ）１１、（ＣＣＴ）１２、（ＣＣＴ）１４、及び（ＣＣＴ）１６（０．０１ｕＭ、０．０３ｕＭ、及び０．１ｕＭ）の存在下で、ＴＬＲ７／８アゴニストＣＬ２６４（１μｇ／ｍｌ）で、４時間刺激した。各条件におけるＧＦＰ陽性のパーセンテージを、先に記載したように計算した。
【００８６】
＜実験結果＞
図７Ａに示されるように、ＧＦＰ発現は、ガーディキモドの刺激によってＣＡＬ−１／ＮＦκΒ−ＧＦＰ細胞において誘導され、このことは、ＮＦ−κΒの活性化がＴＬＲ７の刺激によって誘導されたことを示している。さらに、このＧＦＰ発現は、阻害性ＯＤＮの付加によってブロックされた。ＴＬＲ７の刺激によるＮＦ−κΒの活性化についての阻害活性の用量依存性が、各阻害性ＯＤＮにおいて裏付けられた。（ＣＣＴ）６及び（ＣＣＴ）７は、（ＣＣＴ）８よりもガーディキモドの刺激について良好な活性を示し、一方、（ＣＣＴ）８もまた、ＧＦＰ発現をブロックした。重要なことに、１．０μΜでの（ＣＣＴ）８の阻害活性もまた、０．１μΜでの（ＣＣＴ）６及び（ＣＣＴ）７の阻害活性と同一であった。このデータは、（ＣＣＴ）６及び（ＣＣＴ）７が、（ＣＣＴ）８よりも、ＴＬＲ７の刺激によって誘導されるＮＦ−κΒの活性化の阻害について１０倍高い有効性を有することを示す。図２に示されるように、（ＣＣＴ）８は、（ＣＣＴ）６及び（ＣＣＴ）７よりも、ＴＬＲ９の刺激について良好な阻害活性を示した。したがって、このことは、（ＣＣＴ）６及び（ＣＣＴ）７がＴＬＲ７の刺激について固有の阻害活性を有するが、ＴＬＲ９の刺激については有さないことを示唆する。
【００８７】
図７Ｂに示されるように、ＧＦＰ発現は、ＣＡＬ−１／ＮＦκΒ−ＧＦＰ細胞において、ＣＬ２６４の刺激によって誘導され、このＧＦＰ発現は、阻害性ＯＤＮの付加によってブロックされた。（ＣＣＴ）９、（ＣＣＴ）１０、（ＣＣＴ）１１、及び（ＣＣＴ）１２は、ＣＬ２６４の刺激によるＧＦＰ発現を効率的にブロックし、（ＣＣＴ）８よりも良好な阻害活性を示した。これらの結果は、長いＯＤＮがＴＬＲ７の刺激について良好な阻害活性を有することを示唆するが、しかし、ＴＬＲ７の刺激についての（ＣＣＴ）１４及び（ＣＣＴ）１６の阻害活性は、（ＣＣＴ）１２の活性よりもはるかに悪かった。このことは、（ＣＣＴ）１２が、ＴＬＲ７の刺激によって誘導されるＮＦ−κΒの活性の阻害について最大の有効性を有し得ることを示す。本発明者らのデータは、本発明者らが調べたＯＤＮがヒト細胞においてＴＬＲ７の刺激をブロックし得ることを提供する。制御されていないＩＦＮの産生がＳＬＥの発症の一因となることが実証されており（Ｂａｒｒａｔ  ＦＪ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００５；２０２：１１３１〜９；Ｗｅｌｌｍａｎｎ  Ｕ，ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ２００５；１０２：９２５８〜６３）、ｈｕＰＢＭＣからのＩＦＮの産生が、ＴＬＲ７の刺激によってもたらされた。
【００８８】
実施例の結果と組み合わせて、本発明者らが調べたＯＤＮは、ＴＬＲ７又はＴＬＲ９の活性化を阻害することによる、ＳＬＥなどのＴＬＲ介在性の疾患の治療のための治療薬として用いることができる。
【００８９】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。いくつかの実施形態が示され、記載されてきたが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく様々な変更がなされ得る。
【図１Ａ】
0006307190.tif 000002
【図１Ｂ】
0006307190.tif 000003
【図２Ａ】
0006307190.tif 000004
【図２Ｂ】
0006307190.tif 000005
【図２Ｃ】
0006307190.tif 000006
【図２Ｄ】
0006307190.tif 000007
【図３】
0006307190.tif 000008
【図４】
0006307190.tif 000009
【図５Ａ】
0006307190.tif 000010
【図５Ｂ】
0006307190.tif 000011
【図６】
0006307190.tif 000012
【図７Ａ】
0006307190.tif 000013
【図７Ｂ】
0006307190.tif 000014
【配列表】
0006307190000001.app