(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体を含む注射用持効性製剤。
【請求項２】
前記粒子（１）において、光学活性のトルバプタンが本質的にＲ体トルバプタンからなるトルバプタン又は本質的にＳ体トルバプタンからなるトルバプタンである請求項１に記載の注射用持効性製剤。
【請求項３】
前記粒子（１）中の光学活性のトルバプタンの含有量が５０〜１００重量％である請求項１又は２に記載の注射用持効性製剤。
【請求項４】
前記粒子（１）が、光学活性のトルバプタンから本質的になる粒子である請求項１〜３のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【請求項５】
前記粒子（１）の平均粒子径が約０．２〜１００μｍである請求項１〜４のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【請求項６】
前記薬学的に許容される注射用担体（２）が、
（ａ）懸濁化剤、及び／又は、湿潤剤、
（ｂ）必要に応じて等張化剤、及び／又は、バルキング剤、
（ｃ）必要に応じて緩衝剤、
（ｄ）必要に応じてｐＨ調整剤、
（ｅ）必要に応じて粘度増強剤、並びに
（ｆ）必要に応じて保存剤
を含む請求項１〜５のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【請求項７】
前記懸濁化剤がカルボキシメチルセルロースナトリウム及びポリビニルピロリドンである請求項６に記載の注射用持効性製剤。
【請求項８】
前記湿潤剤がポリソルベート８０及び／又はポロキサマーである請求項６又は７に記載の注射用持効性製剤。
【請求項９】
前記粒子（１）が、水溶性ポリマー及び／又は生分解性ポリマーを含む請求項１〜８のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【請求項１０】
前記水溶性ポリマーが、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドロン及びヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートからなる群より選択される１種類以上であり、前記生分解性ポリマーが、ポリ乳酸及びポリ乳酸−ポリグリコール酸共重合体からなる群より選択される１種類以上である請求項９に記載の注射用持効性製剤。
【請求項１１】
前記光学活性のトルバプタンが非晶質である請求項１〜１０のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【請求項１２】
前記光学活性のトルバプタンが結晶である請求項１〜１０のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【請求項１３】
さらに、（３）注射用水を含む水性懸濁液の形態である請求項１〜１２のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【請求項１４】
前記水性懸濁液中の前記粒子（１）に含まれる光学活性のトルバプタンの濃度が１００ｍｇ／ｍｌ〜５００ｍｇ／ｍｌである請求項１３に記載の注射用持効性製剤。
【請求項１５】
多発性嚢胞腎の予防又は治療に用いられる請求項１〜１４のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【請求項１６】
筋肉内又は皮下に投与される請求項１〜１５のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【請求項１７】
２週間以上毎に１回投与される請求項１〜１６のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【請求項１８】
注射用持効性製剤の製造方法であって、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体を混合することを特徴とする製造方法。
【請求項１９】
水性懸濁液の形態である注射用持効性製剤の製造方法であって、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、（２）薬学的に許容される注射用担体、及び（３）注射用水を混合することを特徴とする製造方法。
【請求項２０】
（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体を含む容器、並びに（３）注射用水を含む容器を含有する多発性嚢胞腎の予防又は治療用キット。
【請求項２１】
（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子を含む容器、並びに（２）薬学的に許容される注射用担体、及び（３）注射用水を含む容器を含有する多発性嚢胞腎の予防又は治療用キット。
【請求項２２】
多発性嚢胞腎を予防又は治療するために用いる、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体を含む注射用持効性製剤。
【請求項２３】
多発性嚢胞腎を予防又は治療するための医薬として使用するための、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体を含む注射用持効性製剤。
【請求項２４】
多発性嚢胞腎を予防又は治療する注射用持効性製剤を製造するための、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体の組合せの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、筋肉内投与又は皮下投与して用いる持効性注射剤として好適な、光学活性のトルバプタンを含む粒子を含有する注射用持効性製剤及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
特許文献１には、水利尿作用を有するバソプレッシン拮抗剤として有用な式（Ｉ）で表されるトルバプタン（即ち、７−クロロ−５−ヒドロキシ−１−［２−メチル−４−（２−メチルベンゾイルアミノ）ベンゾイル］−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾアゼピン）が開示されている。
【０００３】
【化１】
0006265999.tif 000002
【０００４】
トルバプタンは、式（Ｉ）で示されるように、水酸基が結合する炭素（５位炭素）が不斉炭素となるため、当該不斉炭素にも基づく一対の光学異性体（鏡像異性体）を有している。特許文献１に記載されるトルバプタンは、光学異性体（鏡像異性体）であるＲ−（＋）−７−クロロ−５−ヒドロキシ−１−［２−メチル−４−（２−メチルベンゾイルアミノ）ベンゾイル］−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾアゼピン（以下、Ｒ体とも表記する）と、Ｓ−（−）−７−クロロ−５−ヒドロキシ−１−［２−メチル−４−（２−メチルベンゾイルアミノ）ベンゾイル］−２，３，４，５−テトラヒドロ-１Ｈ-ベンゾアゼピン（以下、Ｓ体とも表記する）の等量混合物（ラセミ体）であり、その旋光度[α]20D=０°である。このラセミのトルバプタンは、低ナトリウム血症や心不全における体液貯留に対する治療薬として販売されている。
【０００５】
トルバプタンの光学異性体（Ｒ体及びＳ体）の製造方法は、非特許文献１〜３に記載されている。
【０００６】
特許文献２には、トルバプタン及びヒドロキシプロピルセルロースを含む溶液を噴霧乾燥して得られる粉末の非晶質な固形製剤組成物が、溶解性が向上し、消化管からのトルバプタンの吸収性が向上することが報告されている。
【０００７】
ところで、多発性嚢胞腎は、腎臓に多発性の嚢胞が生じて慢性腎臓病（CKD）を生じる遺伝性疾患であり、症状の進行により腎臓は肥大し、透析又は移植を必要とする末期腎不全に至る。多発性嚢胞腎の患者の腎臓ではバソプレッシンは腎機能を阻害する嚢胞の成長を促進すると考えられている。この多発性嚢胞腎に対する治療薬として、バソプレッシン拮抗薬であるトルバプタンは有用な治療薬として注目されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開平４−１５４７６５号公報
【特許文献２】特許第４２１０３５５号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Heterocycles, 54(1),2001, pp.131-138
【非特許文献２】Heterocycles, 56, 2002, pp.123-128
【非特許文献３】Tetrahedron: Asymmetry 21, (2010) 2390-2393
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
上記のように、バソプレッシン拮抗薬であるトルバプタンは多発性嚢胞腎に対する有用な治療薬として注目されている。トルバプタンは経口投与すると消失が比較的早いため、バソプレッシンの作用を定常的に抑制するには、高ドーズのトルバプタンの１日２回の経口投与が必要とされている。また、経口投与では、トルバプタンの高い血中濃度による過剰な利尿作用、血中からの早い消失によるバソプレッシン拮抗作用の低下等を示す場合がある。高い血中濃度の結果、頻尿、特に夜間頻尿を生じることがあり、患者の生活の質（QOL）の面でさらなる改善の余地があった。また、多発性嚢胞腎の治療は一生涯に渡って薬剤を服用する必要があるため、患者のQOLとアドヒアランスの観点から、トルバプタンの投与頻度を減らすことが求められる。
【００１１】
そのため、多発性嚢胞腎の患者のQOLとアドヒアランスを改善させ、かつ確実な治療効果を得るために、トルバプタンの治療学的有効血中濃度を長期間維持可能な持効性製剤が望まれている。特に、例えば、少なくとも２週間毎、好ましくは１ヶ月毎から３ヶ月毎の筋肉内又は皮下投与でバソプレッシン拮抗作用を維持可能な持効性注射剤は、患者のQOLとアドヒアランスの向上と確実な治療効果のために非常に有用な製剤になり得る。
【００１２】
本発明は、多発性嚢胞腎の予防又は治療に用いられる製剤であり、トルバプタンの治療学的有効血中濃度を長期間維持可能なトルバプタンの注射用持効性製剤、及びその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記の課題を解決するため、注射用持効性製剤、特に筋肉内投与又は皮下投与して用いるトルバプタンの持効性注射剤について鋭意研究を行った。
【００１４】
その結果、ラセミのトルバプタン結晶の水性懸濁液を調製し投与したところ、低レベルの血清中濃度しか維持できないことが明らかとなった。投与後４週間後の投与部位を観察したところ、ラセミのトルバプタン結晶の大部分が吸収されずに残存していることが判明した。ラセミのトルバプタン結晶の水性懸濁液では、ラセミのトルバプタンの吸収量が低くなり血清中濃度が低く維持されるため、薬効の発現が期待できない（試験例４の（１）、図６の比較例８）。
【００１５】
しかし、光学活性のトルバプタン（特にＲ体又はＳ体）を含む粒子、及び薬学的に許容される注射用担体、を含む注射用持効性製剤が予想外に上記の課題を解決できることを見出した。具体的には、以下の知見を得た。
（１）光学活性のトルバプタンはラセミのトルバプタンに比べて哺乳動物において代謝安定性が高いことを見出した。ラットではＲ体が、ヒトではＳ体がラセミ体に比べてin vitroにおいて代謝安定性が高い（試験例１、図１の（１）及び（２））。
（２）光学活性のトルバプタンの水性懸濁液を筋肉内投与すると、ラセミのトルバプタンのそれよりも高いトルバプタンの血清中濃度が長期間にわたって得られることを見出した。ラットではＲ体がラセミ体に比べて高い血清中濃度が得られる（試験例４の（１）及び（２）、図６及び図７）。
（３）光学活性のトルバプタンの水性懸濁液を筋肉内投与すると、ラセミのトルバプタンのそれよりも投与後４週間後の投与部位におけるトルバプタンの残存量が低いことを見出した。残存量は投与部位における吸収されていないトルバプタンの量を表しており、上記結果より、筋肉内投与において光学活性体はラセミ体よりも吸収速度が速いことが確認された（試験例４の（１）及び（２）、表３及び表４）。
【００１６】
かかる知見に基づき、さらに研究を行うことにより本発明を完成するに至った。
【００１７】
本発明は以下に示す光学活性のトルバプタンを含む注射用持効性製剤及びそれらの製造方法を提供する。
【００１８】
項１  （１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体を含む注射用持効性製剤。
【００１９】
項２  前記粒子（１）において、光学活性のトルバプタンが本質的にＲ体トルバプタンからなるトルバプタン（好ましくは、Ｒ体トルバプタン）又は本質的にＳ体トルバプタンからなるトルバプタン（好ましくは、Ｓ体トルバプタン）である項１に記載の注射用持効性製剤。
【００２０】
項３  前記粒子（１）中の光学活性のトルバプタンの含有量が５０〜１００重量％（好ましくは６５〜１００重量％、より好ましくは８０〜１００重量％、さらにより好ましくは９０〜１００重量％、特に好ましくは１００重量％）である項１又は２に記載の注射用持効性製剤。
【００２１】
項４  前記粒子（１）が、光学活性のトルバプタンから本質的になる粒子である項１〜３のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【００２２】
項５  前記粒子（１）の平均粒子径が約０．２〜１００μｍ（好ましくは０．５〜６０μｍ、より好ましくは１〜５０μｍ）である項１〜４のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【００２３】
項６  前記薬学的に許容される注射用担体（２）が、
（ａ）懸濁化剤、及び／又は、湿潤剤、
（ｂ）必要に応じて等張化剤、及び／又は、バルキング剤、
（ｃ）必要に応じて緩衝剤、
（ｄ）必要に応じてｐＨ調整剤、
（ｅ）必要に応じて粘度増強剤、並びに
（ｆ）必要に応じて保存剤
を含む項１〜５のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【００２４】
項７  前記懸濁化剤がカルボキシメチルセルロースナトリウム及びポリビニルピロリドンである項６に記載の注射用持効性製剤。
【００２５】
項８  前記湿潤剤がポリソルベート８０及び／又はポロキサマーである項６又は７に記載の注射用持効性製剤。
【００２６】
項９  前記粒子（１）が、水溶性ポリマー及び／又は生分解性ポリマーを含む項１〜８のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【００２７】
項１０  前記水溶性ポリマーが、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドロン及びヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートからなる群より選択される１種類以上であり、前記生分解性ポリマーが、ポリ乳酸及びポリ乳酸−ポリグリコール酸共重合体からなる群より選択される１種類以上である項９に記載の注射用持効性製剤。
【００２８】
項１１  前記光学活性のトルバプタンが非晶質である項１〜１０のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【００２９】
項１２  前記光学活性のトルバプタンが結晶である項１〜１０のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【００３０】
項１３  さらに、（３）注射用水を含む水性懸濁液の形態である項１〜１２のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【００３１】
項１４  前記水性懸濁液中の前記粒子（１）に含まれる光学活性のトルバプタンの濃度が１００ｍｇ／ｍｌ〜５００ｍｇ／ｍｌである項１３に記載の注射用持効性製剤。
【００３２】
項１５  多発性嚢胞腎の予防又は治療に用いられる項１〜１４のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【００３３】
項１６  筋肉内又は皮下に投与される項１〜１５のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【００３４】
項１７  ２週間以上毎に１回投与される項１〜１６のいずれかに記載の注射用持効性製剤。
【００３５】
項１８  注射用持効性製剤の製造方法であって、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体を混合することを特徴とする製造方法。
【００３６】
項１９  水性懸濁液の形態である注射用持効性製剤の製造方法であって、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、（２）薬学的に許容される注射用担体、及び（３）注射用水を混合することを特徴とする製造方法。
【００３７】
項２０  （１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体を含む容器、並びに（３）注射用水を含む容器を含有する多発性嚢胞腎の予防又は治療用キット。
【００３８】
項２１  （１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子を含む容器、並びに（２）薬学的に許容される注射用担体、及び（３）注射用水を含む容器を含有する多発性嚢胞腎の予防又は治療用キット。
【００３９】
項２２  多発性嚢胞腎を予防又は治療するために用いる、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体を含む注射用持効性製剤。
【００４０】
項２３  多発性嚢胞腎を予防又は治療するための医薬として使用するための、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体を含む注射用持効性製剤。
【００４１】
項２４  多発性嚢胞腎を予防又は治療する注射用持効性製剤を製造するための、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体の組合せの使用。
【００４２】
項２５  多発性嚢胞腎を予防又は治療する方法であって、多発性嚢胞腎の予防又は治療が必要な患者に、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体を含む注射用持効性製剤を投与することを特徴とする方法。
【００４３】
なお、本願明細書において、用語「注射用持効性製剤」は、注射用水を含まない固形の形態（粉末、ケーキ、顆粒等）の製剤、及び注射用水を含む水性懸濁液の形態のいずれをも含む意味に用いられる。
【発明の効果】
【００４４】
本発明の注射用持効性製剤は、光学活性のトルバプタンの持効性製剤として好適な溶出特性を有し、これを筋肉内投与又は皮下投与することによりトルバプタンの治療学的有効血中濃度を長期間維持することができる。
【００４５】
そのため、難病である多発性嚢胞腎の形成を持続的に抑制することができる。具体的には、本発明の注射用持効性製剤を、多発性嚢胞腎の患者に対し、少なくとも２週間以上毎、好ましくは２週間〜１２週間毎、特に好ましくは２週間〜４週間毎に筋肉内又は皮下投与を行うことで、トルバプタンの治療学的有効血中濃度を維持又は持続することが可能となる。
【００４６】
本発明の注射用持効性製剤は、多発性嚢胞腎の症状に対する確実な治療及び予防効果に加え、少なくとも２週間毎に投与できるという簡便な投与形態が可能であり、また過剰な利尿作用を抑制することができる。そのため、多発性嚢胞腎の患者のQOLの改善に資するものであり、医療上及び産業上において極めて有用である。
【００４７】
本発明の光学活性のトルバプタン（特にＲ体又はＳ体）を含む粒子を有する製剤は、ラセミのトルバプタンを含む粒子を有する製剤に比べて、次の点で顕著な作用効果を奏する。
（１）光学活性のトルバプタンはラセミのトルバプタンに比べて哺乳動物において代謝安定性が高い。ラットではＲ体が、ヒトではＳ体がラセミ体に比べてin vitroにおいて代謝安定性が高い（試験例１、図１の（１）及び（２））。
（２）光学活性のトルバプタンの水性懸濁液を筋肉内投与又は皮下投与すると、ラセミのトルバプタンのそれよりも高いトルバプタン血中濃度が得られる。ラットではＲ体が高い血清中濃度が得られる（試験例４の（１）及び（２）、図６及び図７）。これは、光学活性体のトルバプタンの投与量をラセミのトルバプタンのそれより低減しても、ラセミ体と同じ治療学的有効血中濃度を維持できることを意味する。長期間持続製剤に適用する場合には一般に薬剤を高用量で投与することが必要になるが、光学活性のトルバプタンではより少ない投与量で所望の血中濃度を維持でき、大変有用である。
（３）光学活性のトルバプタンの水性懸濁液を筋肉内投与すると、ラセミのトルバプタンのそれよりも投与後４週間後の投与部位におけるトルバプタンの残存量が低い。残存量は投与部位における吸収されていないトルバプタンの量を表しており、上記結果より筋肉内投与において光学活性体はラセミ体よりも吸収速度が速いことを意味する（試験例４の（１）及び（２）、表３及び表４）。
【００４８】
本発明の非晶質の光学活性のトルバプタン（特にＲ体又はＳ体）を含む粒子を有する製剤は、非晶質のラセミのトルバプタンを含む粒子を有する製剤に比べて、次の点で有利である。
（ａ）代謝安定性の高い非晶質の光学活性のトルバプタンの水性懸濁液を筋肉内投与すると、非晶質のラセミのトルバプタンのそれよりも高いトルバプタン血清中濃度が得られる（試験例４の（２）、図７）。これは、光学活性のトルバプタンの投与量をラセミのトルバプタンのそれよりも低減しても、ラセミ体と同じ治療学的有効血中濃度を維持できることを意味する。
（ｂ）非晶質の光学活性のトルバプタンは、非晶質のラセミのトルバプタンよりも極めて高い溶出特性を長期間安定して維持できる（試験例２、図２〜４）。これは、非晶質の光学活性のトルバプタンは、非晶質のラセミのトルバプタンと比較して結晶化しにくく、非晶質を維持することができるためである。
【００４９】
これより、非晶質の光学活性のトルバプタンは、長時間の湿式状態を経る製造法を採用しても非晶質を維持できることから、製造面でも有用である。また、筋肉内や皮下に投与後、投与部位で結晶化しにくいため、高い血中濃度の維持が可能になる。さらに、臨床現場において、患者に投薬するために水性懸濁液を調製した際に非晶質を長時間維持できるため、調製直後に投薬する必要がない。
（ｃ）非晶質の光学活性のトルバプタンは、非晶質のラセミのトルバプタンよりも投与４週間後の投与部位のトルバプタンの残存量が低い（試験例４の（２）、表４）。
【００５０】
本発明の結晶の光学活性のトルバプタン（特にＲ体又はＳ体）を含む粒子を有する製剤は、結晶のラセミのトルバプタンを含む粒子を有する製剤に比べて、次の点で有利である。
（ｉ）代謝安定性の高い結晶の光学活性のトルバプタンの水性懸濁液を筋肉内投与又は皮下投与すると、結晶のラセミのトルバプタンのそれよりも高いトルバプタン血中濃度が得られる（例えば、試験例４の（１）、図６）。
（ii）結晶の光学活性のトルバプタンは、結晶のラセミのトルバプタンよりも高い溶出特性を長期間安定して維持できる。結晶のラセミ体の溶出速度は低下するが、結晶の光学活性体の溶出速度は安定して維持される（試験例３、図５）。
【００５１】
これより、結晶の光学活性のトルバプタンは、長時間の湿式状態を経る製造法を採用しても結晶形を維持できることから、製造面でも有用である。また、結晶のラセミのトルバプタンに比べて、結晶の光学活性のトルバプタンは溶出速度の低下がない。さらに、臨床現場において、患者に投薬するために水性懸濁液を調製した際に溶出速度の低下の心配がないため、調製直後に投薬する必要がない。
（iii）結晶の光学活性のトルバプタンは、結晶のラセミのトルバプタンよりも投与４週間後の投与部位のトルバプタンの残存量が低い（試験例４の（１）、表３）。残存量は投与部位における吸収されていないトルバプタンの量を表しており、上記結果より筋肉内投与において結晶の光学活性体は結晶のラセミ体よりも吸収速度が速いことを意味する。加えて、結晶の光学活性体は結晶のラセミ体よりも高い血中濃度の維持が可能になる。
【００５２】
本発明の結晶の光学活性のトルバプタン（特にＲ体又はＳ体）を含む粒子を有する製剤は、非晶質の光学活性のトルバプタンを含む粒子を有する製剤に比べて、次の点で有利である。
（ア）結晶の光学活性のトルバプタンは、非晶質の光学活性のトルバプタンのような投与直後の高血清中濃度（初期バースト等）が認められず、かつ治療学的有効血清中濃度を長期間一定に維持することができる。血清中濃度の変動が少ないため、高血清中濃度に伴う過剰利尿を抑制することができる（試験例４の（３）、図８）。
（イ）結晶の光学活性のトルバプタンは、非晶質の光学活性のトルバプタンに比べて、投与後１４日目以降の血中濃度が高く、少なくとも４週間毎の持効性注射剤として好ましい（試験例４の（３）、図８）。
【００５３】
本発明の結晶の光学活性のトルバプタン（特にＲ体又はＳ体）を含む粒子を有する製剤は、多発性嚢胞腎のモデル動物に対し、腎重量又は腎容積の増加を抑制することができ、かつ長期間にわたりトルバプタンの有効血漿中濃度を一定に維持できることが確認された（試験例５及び６、表７及び８、図９及び１０）。これより、当該製剤は、ヒトを含む哺乳動物における多発性嚢胞腎の予防又は治療のために有用である。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】試験例１における、ヒト及びラットの肝ホモジネート（Ｓ９画分）を用いた、ラセミのトルバプタン及び光学活性体のトルバプタン（Ｒ体及びＳ体）の代謝安定性試験の結果を示す。Ｒ体（●）、Ｓ体（□）及びラセミ体（△）。
【図２】試験例２における、比較例１〜３の非晶質のラセミのトルバプタンを含む噴霧乾燥粉末、比較例７の結晶のラセミのトルバプタンのジェットミル粉砕粉末の溶出試験の結果を示す図である。
【図３】試験例２における、比較例４〜６の非晶質のラセミのトルバプタンを含む噴霧乾燥粉末、比較例７の結晶のラセミのトルバプタンのジェットミル粉砕粉末の溶出試験の結果を示す図である。
【図４】試験例２における、実施例１及び２の非晶質の光学活性のトルバプタン（Ｒ体又はＳ体）を含む噴霧乾燥粉末、比較例７の結晶のラセミのトルバプタンのジェットミル粉砕粉末の溶出試験の結果を示す図である。
【図５】試験例３における結晶のR-トルバプタン粉末、結晶のS-トルバプタン粉末および比較例７の結晶のラセミのトルバプタン粉末の溶出試験の結果を示す図である。
【図６】試験例４の（１）における、結晶のR-トルバプタン粒子を含む水性懸濁液（実施例３）、及び結晶のラセミのトルバプタン粒子を含む水性懸濁液（比較例８）を、雌性ラットに100mg/kgで筋肉内投与した時のトルバプタンの血清中濃度の推移を示す図である。
【図７】試験例４の（２）における、非晶質のR-トルバプタン粉末を含む水性懸濁液（実施例１）、及び非晶質のラセミのトルバプタン粉末を含む水性懸濁液（比較例５）を、雌性ラットに100mg/kgで筋肉内投与した時のトルバプタンの血清中濃度の推移を示す図である。
【図８】試験例４の（３）における、結晶のR-トルバプタン粒子を含む水性懸濁液（実施例３）、及び非晶質のR-トルバプタン粉末を含む水性懸濁液（実施例１）を、雌性ラットに100mg/kgで筋肉内投与した時のトルバプタンの血清中濃度の推移を示す図である。
【図９】試験例５における、結晶のS-トルバプタン粒子の水性懸濁液（実施例５）を、pcyマウス（雄性）に1000mg/kgで皮下投与した時のトルバプタンの血漿中濃度の推移を示す図である。
【図１０】試験例６における、結晶のR-トルバプタン粒子の水性懸濁液（実施例６）を、PCKラット（雄性）に400mg/kgで筋肉内投与した時のトルバプタンの血漿中濃度の推移を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
１．注射用持効性製剤
本発明の注射用持効性製剤は、（１）有効成分として、光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体を含有する。また、本発明の注射用持効性製剤は、注射用水を含まない固形（粉末、ケーキ、顆粒等）の形態の製剤及び注射用水を含む水性懸濁液の形態のいずれをも包含する。
【００５６】
以下、本発明の製剤の各成分について説明する。
（１）有効成分を含む粒子
光学活性のトルバプタン
本発明の有効成分を含む粒子において、有効成分はトルバプタンであり、該トルバプタンは光学活性体である。
【００５７】
光学活性のトルバプタンとは、本質的にＲ−（＋）−７−クロロ−５−ヒドロキシ−１−［２−メチル−４−（２−メチルベンゾイルアミノ）ベンゾイル］−２，３，４，５−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾアゼピン（Ｒ体）からなるトルバプタン、又は本質的にＳ−（−）−７−クロロ−５−ヒドロキシ−１−［２−メチル−４−（２−メチルベンゾイルアミノ）ベンゾイル］−２，３，４，５−テトラヒドロ-１Ｈ-ベンゾアゼピン（Ｓ体）からなるトルバプタンを意味する。
【００５８】
光学活性のトルバプタンは、例えば、非特許文献１〜３等の記載に基づいて製造することができる。
【００５９】
本質的にＲ体からなるトルバプタンとは、本発明の効果を奏する限りにおいて、その鏡像異性体であるＳ体を含んでいてもよいトルバプタンを意味する。具体的には、本質的にＲ体からなるトルバプタンとは、Ｒ体トルバプタンの光学純度（鏡像体過剰率；ｅｅ）が、通常８０％ｅｅ以上、好ましくは９０％ｅｅ以上、より好ましくは９５％ｅｅ以上、さらに好ましくは９９％ｅｅ以上、特に好ましくは１００％ｅｅであるトルバプタンを意味する。即ち、エナンチオピュアなR-トルバプタンが好ましい。
【００６０】
また、本質的にＳ体からなるトルバプタンとは、本発明の効果を奏する限りにおいて、その鏡像異性体であるＲ体を含んでいてもよいトルバプタンを意味する。具体的には、本質的にＳ体からなるトルバプタンとは、Ｓ体トルバプタンの光学純度（鏡像体過剰率；ｅｅ）が、通常８０％ｅｅ以上、好ましくは９０％ｅｅ以上、より好ましくは９５％ｅｅ以上、さらに好ましくは９９％ｅｅ以上、特に好ましくは１００％ｅｅであるトルバプタンを意味する。即ち、エナンチオピュアなS-トルバプタンが好ましい。
【００６１】
高い吸収性及びヒトでの高い代謝安定性の観点から、本質的にＳ体からなるトルバプタンが好ましく、Ｓ-トルバプタンがより好ましい。
【００６２】
光学活性のトルバプタンには、当該トルバプタンの無水物、溶媒和物（例えば、水和物、アルコール和物等）、共結晶等も包含し得る。さらに、トルバプタン分子中の１つ又は複数の原子を１つ又は複数の同位体原子で置換したものも包含し得る。同位体原子の例としては重水素（２Ｈ）、三重水素（３Ｈ）、１３Ｃ、１４Ｎ、１８Ｏ等が挙げられる。
【００６３】
光学活性のトルバプタンは結晶又は非晶質のいずれの形態をも取り得る。
【００６４】
非晶質の光学活性のトルバプタンの非晶質とは、粒子中に含まれる全トルバプタンのうちの結晶トルバプタンの含有量が１０重量％未満、好ましくは５重量％未満、より好ましくは３重量％未満であること、特に好ましくは結晶トルバプタンが検出されないことを示す。
【００６５】
結晶の光学活性のトルバプタンの結晶とは、粒子中に含まれる全トルバプタンのうちの結晶トルバプタンの含有量が９０重量％以上、好ましくは９５重量％以上、より好ましくは９７重量％以上であること、特に好ましくは非晶質トルバプタンが検出されないことを示す。
【００６６】
粒子中の全トルバプタンのうちの結晶トルバプタンの含有量は、当該粒子を、Ｘ線回折装置、示差走査熱量計(DSC)、近赤外（NIR）分光計、マイクロカロリメータ、ラマン分光計、テラヘルツ分光計等の分析装置を用いて測定し決定することができる。
【００６７】
粒子
上記の有効成分である光学活性のトルバプタンを含む粒子には、光学活性のトルバプタンと他の成分を含む粒子、及び光学活性のトルバプタンから本質的になる粒子（光学活性のトルバプタンのみからなる粒子を含む）のいずれも含む概念である。
【００６８】
他の成分としては、粒子からの光学活性のトルバプタンの放出速度をコントロールするために添加される成分等が挙げられ、例えば、水溶性ポリマー及び／又は生分解性ポリマーが例示される。
【００６９】
水溶性ポリマーとしては、例えば、ポリビニルピロリドロン（PVP)、ヒドロキシプロピルセルロース(HPC)、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート(HPMCP)、ヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPMC)、メタアクリル酸コポリマーＬ、メチルセルロース（MC)等が挙げられる。好ましい水溶性ポリマーは、ヒドロキシプロピルセルロース(HPC)、ポリビニルピロリドロン（PVP)、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート(HPMCP)である。
【００７０】
生分解性ポリマーとしては、例えば、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリカプロラクトン、ポリカーボネート、ポリエステルアミド、ポリ酸無水物、ポリ（アミノ酸）、ポリオルトエステル、ポリシアノアクリレート、ポリ（ｐ−ジオキサノン）、ポリ（アルキレンオキサレート）、生分解性ポリウレタン、その混合物、及びそれらのコポリマーが挙げられる。上記のポリマー中に不斉炭素を有する場合には、そのポリマーを構成するモノマーはＤ体、Ｌ体又はＤＬ体のいずれであってもよく、好ましくはＬ体である。好ましい生分解性ポリマーは、ポリ（乳酸）、ポリ乳酸−ポリグリコール酸のコポリマーである。
【００７１】
粒子中における光学活性のトルバプタンと水溶性ポリマー及び／又は生分解性ポリマーとの重量比は、通常、１：０〜１：４であり、さらに４：１〜１：４であり、よりさらに４：１〜１：２であり、特に２：１〜１：１である。重量比は、とりわけ１：０が好適である。
【００７２】
光学活性のトルバプタンを含む粒子において、当該粒子中における光学活性のトルバプタンの含有量は、通常、５０〜１００重量％であり、好ましくは６５〜１００重量％であり、より好ましくは８０〜１００重量％であり、さらに好ましくは９０〜１００重量％であり、特に好ましくは１００重量％である。
【００７３】
光学活性のトルバプタンから本質的になる粒子において、当該粒子中における光学活性のトルバプタンの含有量は、通常、８０〜１００重量％であり、好ましくは９０〜１００重量％であり、より好ましくは９５〜１００重量％であり、さらに好ましくは９８〜１００重量％であり、特に好ましくは１００重量％である。
【００７４】
光学活性のトルバプタンを含む粒子の平均粒子径は、通常、０．２〜１００μｍ、好ましくは０．５〜６０μｍ、より好ましくは１〜５０μｍに設定することができる。粒子の平均粒子径は、体積平均径であり、レーザー回折粒度分布計を用いて測定することができる。
【００７５】
特に、非晶質の光学活性のトルバプタンを含む粒子は、通常、光学活性のトルバプタン、並びに必要に応じて水溶性ポリマー及び／又は生分解性ポリマーを有機溶媒に溶解させた後、噴霧乾燥することにより製造される。そのため当該粒子は一般に球状を有している。当該粒子の平均粒子径は、この噴霧乾燥法の条件を適宜変更して所望の範囲（０．２〜１００μｍ、好ましくは２〜６０μｍ、より好ましくは４〜５０μｍ）に設定することができる。
【００７６】
結晶の光学活性のトルバプタンを含む粒子は、例えば、非特許文献１〜３等に基づいて合成された光学活性のトルバプタンを再結晶して調製される。これを所望の平均粒子径になるように公知の粉砕方法、好ましくは湿式粉砕を用いて製造される。当該粒子の平均粒子径は、この粉砕条件を適宜変更して所望の範囲（０．２〜１００μｍ、好ましくは０．５〜３０μｍ、より好ましくは１〜１０μｍ）に設定することができる。
【００７７】
非晶質の光学活性のトルバプタンを含む粒子を用いた場合（実施例１及び２）、結晶のラセミのトルバプタンを含む粒子（比較例７）に比べて、高い溶出特性を長期間維持することができ（試験例２、図４）、筋肉内投与又は皮下投与において高い血中濃度が長期間維持される（例えば、試験例４の（１）及び（２）、図６、７、実施例１及び比較例８）。これにより、多発性嚢胞腎において嚢胞腎形成を効果的に抑制することができる。
【００７８】
特に、非晶質の光学活性のトルバプタンが、非晶質のラセミのトルバプタンに比べて極めて高い溶出特性を長期間維持できる点は特筆すべきである。具体的には、図２〜４の溶出試験結果より、実施例１（Ｒ体）及び実施例２（Ｓ体）の製剤では溶出開始後から長時間（１４０時間、約６日間）高い溶出量が維持されているのに対し、比較例１〜６（ラセミ体）の製剤では比較的短時間で溶出量が大きく低下している。これは、実施例１及び２の非晶質の光学活性のトルバプタンでは、非晶質のラセミのトルバプタンよりも、遙かに結晶化が起こりにくいため高い溶出量が維持されていると考えられる。従って、非晶質の光学活性のトルバプタンの粒子中における非晶質の光学活性のトルバプタンは、比較的長時間の湿式状態の工程（例えば、湿式粉砕工程等）を伴う場合も非晶質を維持できることから、製剤の製造面でも有用である。また、筋肉内又は皮下投与においても投与後結晶化しにくいため、高い血中濃度の維持が可能になる。また、臨床現場において、患者に投薬される際に、水性懸濁液の状態を構成した際にも、非晶質を長時間維持できるため、臨床上も有用である。
【００７９】
結晶の光学活性のトルバプタン（Ｒ体又はＳ体）が、結晶のラセミのトルバプタン（比較例７）に比べて安定した溶出特性を有する点は特筆すべきである（図５）。また、筋肉内投与又は皮下投与において、優れた吸収特性を有し代謝安定性に優れる結晶の光学活性のトルバプタンを用いる場合、結晶のラセミのトルバプタンに比べて、高い血中濃度が長期間維持される点も特筆すべきである(例えば、図６、実施例３及び比較例８）。これにより、多発性嚢胞腎において嚢胞腎形成を効果的に抑制することができる。加えて、結晶の光学活性のトルバプタンは、非晶質のラセミのトルバプタン及び非晶質の光学活性のトルバプタンと異なり、投与直後の高血中濃度（初期バースト）が認められず、かつ治療学的有効血中濃度を長期間維持することができる（例えば、試験例４の図７及び８）。これにより、過剰な利尿作用が抑制されるため、患者のQOL及びアドヒアランスにとって有用である。
【００８０】
また、結晶の光学活性のトルバプタンは、元々結晶のままで優れた血中濃度を長期間維持できるため、水性懸濁液中での非晶質から結晶化する問題は考慮する必要がない。そのため臨床上極めて取扱性に優れるという利点がある。さらに、光学活性のトルバプタン結晶の場合、ラセミのトルバプタン結晶に比べ、溶出速度の低下がない。従って、結晶形を長時間維持することが出来るため、血中濃度の変動も少なく、治療学的有効血中濃度を長期間維持することができる。
【００８１】
（２）薬学的に許容される注射用担体
薬学的に許容される注射用担体は、有効成分である光学活性のトルバプタンを含む粒子を水性懸濁液の形態に調製するために用いられる。当該注射用担体には、通常、（ａ）懸濁化剤及び／又は湿潤剤、（ｂ）必要に応じて等張化剤及び／又はバルキング剤、（ｃ）必要に応じて緩衝剤、（ｄ）必要に応じてｐＨ調整剤、（ｅ）必要に応じて粘度増強剤、並びに（ｆ）必要に応じて保存剤が含まれる。
【００８２】
上記（ａ）懸濁化剤及び／又は湿潤剤は、上記光学活性のトルバプタンを水中に懸濁させるために必須である。
【００８３】
好適な懸濁化剤の例としては、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルエチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、マクロゴール、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。これらのうち１種又は２種以上を用いることができる。特に、カルボキシメチルセルロースナトリウムとポリビニルピロリドンの組み合わせが好ましい。
【００８４】
懸濁化剤の配合量は、注射用製剤（注射用水を含む水性懸濁液）の総容量に基づいて、通常、約０．１〜約１０ｗ／ｖ％、好ましくは約０．２〜約５ｗ／ｖ％の範囲内である。
【００８５】
好適な湿潤剤の例としては、種々の界面活性剤（非イオン性およびイオン性界面活性剤を含む）、例えば、ゼラチン、レシチン（ホスファチド）、ソルビタンエステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体（polyoxyethylene castor oil derivatives）、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、市販のＴｗｅｅｎｓ（登録商標）、例えば、Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標）およびＴｗｅｅｎ８０（登録商標、ポリソルベート８０）（ＩＣＩ Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ））、ポロキサマー（poloxamers）（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ Ｆ６８（登録商標）およびＦ１０８（登録商標）、これらは、エチレンオキサイドおよびプロピレンオキサイドのブロックコポリマーである）；ポロキサミン（例えば、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ ９０８（登録商標）、Ｐｏｌｏｘａｍｉｎｅ ９０８（登録商標）としても公知、これは、エチレンジアミンへのプロピレンオキサイドおよびエチレンオキサイドの連続付加から誘導される四官能性ブロックコポリマーである（ＢＡＳＦ Ｗｙａｎｄｏｔｔｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．））などが挙げられる。これらのうち１種又は２種以上を用いることができる。特に、ポリソルベート８０とポロキサマーが好ましい。
【００８６】
湿潤剤の配合量は、注射用製剤の総容量に基づいて、通常、約０．０１〜約５ｗ／ｖ％、好ましくは約０．１〜約２ｗ／ｖ％の範囲内である。
【００８７】
注射用担体は、（ｂ）等張化剤及び／又はバルキング剤を必要に応じて加えることが出来る。等張化剤として、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトール、スクロース、ラクトース、マルトース、キシリトール、グルコース、ソルビトール等が挙げられる。これらのうち１種又は２種以上を用いることができる。
【００８８】
等張化剤及び／又はバルキング剤を含む場合その配合量は、注射用製剤の総容量に基づいて、通常、約０．２〜約１２ｗ／ｖ％、好ましくは約０．５〜約１０ｗ／ｖ％の範囲内である。
【００８９】
注射用担体は、（ｃ）緩衝剤を必要に応じて加えることが出来る。本明における好適な緩衝剤の例としては、クエン酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、又はＴＲＩＳ緩衝剤等が挙げられる。これらのうちの１種又は２種以上を用いることができる。特に、リン酸ナトリウム（特にリン酸二水素ナトリウム）が好ましい。
【００９０】
緩衝剤を含む場合その配合量は、用時調製後の水性懸濁液のｐＨを、通常、約６〜約８、好ましくは約７に調整できる量である。このようなｐＨを達成するために、通常、緩衝剤は、タイプに依存して、注射用製剤の総重量に基づいて、約０．０２〜約２重量％、好ましくは約０．０３〜約１重量％の範囲内、そしてより好ましくは約０．１重量％の量で使用される。
【００９１】
注射用担体は、（ｄ）ｐＨ調整剤を必要に応じて加えることが出来る。これは、用時調製後の水性懸濁液のｐＨを、約６〜約８の範囲、好ましくは約７に調整する量で使用される。そして、所望の約７の中性ｐＨに調整するために、トルバプタンの水性懸濁液のｐＨを上昇させる必要があるのか或いは低下させる必要があるのかに依存して、塩基又は酸のいずれかを用い得る。従って、ｐＨを低下させる必要がある場合、酸性ｐＨ調整剤（例えば、塩酸、リン酸、酢酸等が挙げられ、好ましくは塩酸）が使用され得る。ｐＨを上昇させる必要がある場合、塩基性ｐＨ調整剤（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カルシウム、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウム等が挙げられ、好ましくは水酸化ナトリウム）が使用される。
【００９２】
注射用担体は、（ｅ）粘度増強剤を必要に応じて加えることが出来る。粘度増強剤としは、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム等が挙げられる。
【００９３】
注射用担体は、（ｆ）保存剤を必要に応じて加えることが出来る。保存剤として、例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム等の第四アンモニウム塩；グルコン酸クロルヘキシジン等の陽イオン化合物；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール等のアルコール化合物；デヒドロ酢酸ナトリウム；チメロサール等が挙げられる。
【００９４】
本発明は、多発性嚢胞腎の予防又は治療するために用いる、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体（さらに必要に応じ、（３）注射用水）を含む注射用持効性製剤を提供する。
【００９５】
本発明は、多発性嚢胞腎を予防又は治療する注射用持効性製剤を製造するための、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体（さらに必要に応じ、（３）注射用水）の組合せの使用を提供する。
【００９６】
本発明は、また、多発性嚢胞腎を予防又は治療する方法であって、多発性嚢胞腎の予防又は治療が必要な患者に、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体（さらに必要に応じ、（３）注射用水）を含む注射用持効性製剤を投与することを特徴とする方法を提供する。
【００９７】
２．本発明製剤の調製
本発明の注射用持効性製剤は、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体を混合することにより調製することができる。
【００９８】
本発明の水性懸濁液の形態である注射用持効性製剤は、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子、（２）薬学的に許容される注射用担体、及び（３）注射用水を混合することにより調製することができる。
【００９９】
上記工程において粒子（１）中に配合される光学活性のトルバプタンの配合量は、いずれも治療学的有効量であればよく、目的に応じて適宜に調節される。
【０１００】
非晶質の光学活性のトルバプタンを含む粒子は、例えば、光学活性のトルバプタン、並びに、必要に応じて水溶性ポリマー及び／又は生分解性ポリマーを有機溶媒に溶解させた後、前記有機溶媒を留去し粉末化して調製することができる。有機溶媒としては、各成分を溶解可能なものでありかつ留去し易いものが選択される。例えば、塩化メチレン、塩化メチレンとアルコール（メタノール又はエタノール）の混合溶媒が挙げられる。得られた溶解液を噴霧乾燥法（スプレードライ）して所望の粒度分布の粒子を製造することができる。上記粒子の製造工程は、例えば、特許文献２（特許第４２１０３５５号公報）に準じて実施することができる。
【０１０１】
また、結晶の光学活性のトルバプタンを含む粒子（特に、結晶の光学活性のトルバプタンから本質的になる粒子）は、例えば、光学活性のトルバプタンを再結晶により結晶化し、これを粉砕して粉末化して調製することができる。上記粒子の製造工程は、例えば、一般的に使用される乾式粉砕機（ジェットミル、ハンマーミル等）を用いることで、実施することができる。その他の方法としては、制御された晶析法（controlled crystallization）等が挙げられる。例えば、トルバプタンを有機溶媒(良溶媒)に溶解し、水等の (貧溶媒) で析出させることにより、粒子を調製することができる。また、結晶の光学活性のトルバプタンと他の成分（例えば、前記水溶性ポリマー及び／又は生分解性ポリマー）からなる粒子は、例えば、結晶の光学活性のトルバプタンの粒子がほとんど溶解しない溶媒に他成分を溶解させ、結晶の光学活性のトルバプタンの粒子をその溶液に懸濁させて湿式粉砕にて粒子を調製することができる。湿式粉砕手法としては、湿式ボールミリング（wet ball milling）や高圧ホモジナイザー粉砕（high pressure homogenization）、高剪断ホモジナイゼーション（high shear homogenization）等が好ましい。前記粉砕手法に加えて、他の低及び高エネルギーミル（例えば、ローラーミル）も使用することができる。この懸濁液を、噴霧乾燥して得ることができる。
【０１０２】
本発明の固形の形態の注射用持効性製剤は、粒子（１）と薬学的に許容される注射用担体（２）を所定の割合で混合することにより調製することができる。
【０１０３】
本発明の注射用持効性製剤が水性懸濁液の形態である場合、通常、上記粒子（１）と上記薬学的に許容される注射用担体（２）、及び注射用水（３）を所定の割合で混合することにより調製される。
【０１０４】
前記水性懸濁液は、例えば、上記粒子（１）と、上記薬学的に許容される注射用担体（２）及び注射用水（３）を含む水溶液とを混合することにより調製することもできる。
【０１０５】
具体的には、例えば、バイアル等の容器に封入された無菌の光学活性のトルバプタンを含む粒子（１）に、薬学的に許容される注射用担体（２）及び注射用水（３）を含む水溶液を混和した後、得られた混合物を強く振とうする方法、ボルテックスミキサーで懸濁液をかき混ぜる方法、超音波照射する方法等を用いて、均質な水性懸濁液を調製することができる。また、２つの無菌シリンジを準備し、一方に無菌の光学活性のトルバプタンを含む粒子（１）を封入し、もう一方に薬学的に許容される注射用担体（２）及び注射用水（３）を含む水溶液を充填し、２つのシリンジをコネクターで結合し、ポンピングを繰り返すことにより、均質な水性懸濁液を調製することもできる。上記工程を用いて、用時に水性懸濁液を調製することができる。
【０１０６】
上記の調製方法を採用する場合、本発明の製剤は、例えば、（１）有効成分として光学活性のトルバプタンを含む粒子を含む容器、並びに（２）薬学的に許容される注射用担体、及び（３）注射用水を含む容器を含有する多発性嚢胞腎の予防又は治療用キットの形態にすることができる。
【０１０７】
他の例としては、前記水性懸濁液は、注射用水（３）を含まない固形の形態の製剤（即ち、上記粒子（１）と上記薬学的に許容される注射用担体（２）を含む固形製剤）に、用時、注射用水（３）を加えて調製することもできる。
【０１０８】
上記の調製方法を採用する場合、本発明の製剤は、例えば、（１）有効成分として光学活性体トルバプタンを含む粒子、及び（２）薬学的に許容される注射用担体を含む容器、並びに（３）注射用水を含む容器を含有する多発性嚢胞腎の予防又は治療用キットの形態にすることができる。
【０１０９】
上記の各成分及びその配合量は、上記「１．注射用持効性製剤」の項で記載した成分及び配合量（所定の割合等を含む）を採用することができる。
【０１１０】
３．投与法（用法及び用量）
本発明の注射用持効性製剤は、多発性嚢胞腎の予防又は治療に用いることができる。当該製剤は、無菌条件下で、（１）光学活性のトルバプタンを含む粒子、（２）薬学的に許容される注射用担体、及び（３）注射用水を混和して、均質な水性懸濁液とすることで製造することができ、その後、多発性嚢胞腎の予防又は治療を必要とする患者に筋肉内又は皮下に注射して投薬することができる。なお、上記水性懸濁液は、用時に調製することもできる。
【０１１１】
粒子（１）が非晶質の光学活性のトルバプタンを含む場合は、上記非晶質のラセミのトルバプタンを含む粒子と異なり、水性懸濁液中で結晶化が起こり難いため（試験例２、図２〜４）、高い溶出量が長期間維持される。そのため、非晶質の光学活性のトルバプタンを含む粒子を含有する製剤は、例えば、病院の薬剤部においてトルバプタン水性懸濁液を調製後、患者に投薬するまでの間安定性を十分確保できるため、臨床上極めて有用である。また、非晶質の光学活性のトルバプタンは、投与部位における結晶化が生じにくいため、非晶質のラセミのトルバプタンと比較して、高い血中濃度を長期間持続できる。
【０１１２】
粒子（１）が結晶の光学活性のトルバプタンを含む場合は、元々結晶のままであるため、水性懸濁液中でのトルバプタンの非晶質から結晶への転移の問題は考慮する必要がない。そのため臨床上極めて取扱性に優れるという利点がある。さらに、光学活性のトルバプタン結晶は、ラセミ体結晶に比べ溶出速度の低下がないため臨床上極めて取扱性に優れる（試験例３、図５）。また、結晶の光学活性のトルバプタンは、投与後も、結晶形を長時間維持することができることから、非晶質光学活性のトルバプタンと比較して血清中濃度の変動も少なく（試験例４の（３）、図８）、ラセミ体結晶と比較して、高い血清中濃度を長期間持続できるため最も好適である（試験例４の（１）、図６）。
【０１１３】
本発明の注射用持効性製剤が水性懸濁液である場合、当該水性懸濁液に含まれるトルバプタンの配合量（濃度）は、治療学的有効量であれば特に限定はない。治療学的有効量とは、臨床上症状の改善をもたらす量を意味する。水性懸濁液中の光学活性体トルバプタンの配合量（濃度）は、好ましくは100mg/mL〜500mg/mL、より好ましくは200mg/mL〜400mg/mLの範囲に調製される。患者に筋肉内投与又は皮下内投与される１回当たりの水性懸濁液の容量としては、通常、0.5mL〜6mL、好ましくは1mL〜3mLである。
【０１１４】
なお、上記の光学活性体トルバプタンの配合量は、上記固形製剤を注射用水等で構成して得られた後の水性懸濁液中のトルバプタンの配合量をも意味する。
【０１１５】
実際の投薬量は各患者により異なるが、例えば、２週間毎に投与する場合は、トルバプタンとして100mg〜1000mgを1回で、又は、２分割して投薬することが好ましく、４週間毎に投与する場合は、トルバプタンとして200mg〜2000mgを1回、又は、２〜４分割して投薬することが好ましい。８週間毎に投与する場合は、トルバプタンとして400mg〜4000mgを1回で、又は、２〜４分割して投薬することが好ましく、１２週間毎に投与する場合は、トルバプタンとして600mg〜6000mgを1回、又は、２〜４分割して投薬することが好ましい。より長期間の投与間隔で投与する場合は、粒子（１）が結晶の光学活性のトルバプタンを含む粒子であることが、長期間に渡り血中濃度を維持できる点で好ましい。
【０１１６】
光学活性のトルバプタンには、Ｒ体又はＳ体の２種が存在する。例えば、ラット又はウサギに投薬する場合はR-トルバプタンを含む粒子を、イヌ又はヒトに投薬する場合はS-トルバプタンを含む粒子を使用すると、ラセミ体を含む粒子と比較して、高い血中濃度を維持できるため投与量を下げることができる。一般に、投与部位の局所刺激性は、投与量が影響することが知られているため、投与量を下げることにより、投与部位の局所刺激性を軽減できる。また、ヒトでは結晶のＳ体のトルバプタンは、代謝安定性が高いため、有効血中濃度を一定に維持するために好ましい。
【実施例】
【０１１７】
次に、実施例を用いて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【０１１８】
実施例１（33%HPC-SLを含むR-トルバプタンスプレードライ(SD)粉末の調製）
R-トルバプタン結晶（大塚製薬(株)製） 100.6 g及びヒドロキシプロピルセルロース（HPC-SL 、日本曹達(株)製）50.3 g をジクロロメタン1055 mL、エタノール455 ｍLに溶解した。スプレードライヤー（Pulvis GB21型、ヤマト科学（株）製）を用いて、スプレー圧1.6-1.7 kg/cm2、ヒーター60℃、送液速度10-15 g/minで溶液をスプレードライした。調製したスプレードライ粉末は減圧下で乾燥した。調製された粉末の粉末Ｘ線回折を行ったところ、ハローピークしか認められなかったことから、非晶質であることを確認した。
【０１１９】
R-トルバプタンSD粉末を300mgシリンジに充填し、もう一方のシリンジに下記媒体溶液（表１）を0.76g充填し、２つのシリンジをコネクターで結合し、ポンピングを繰り返すことにより、均質な200mg/mLの非晶質 R-トルバプタン水性懸濁液を調製した。レーザー回折式粒度分布計（SALD-3000J、（株）島津製作所製）で湿式法にて測定したR-トルバプタンSD粉末の平均粒子径は5.8μｍであった。
【０１２０】
【表１】
0006265999.tif 000003
【０１２１】
実施例２（33%HPC-SLを含むS-トルバプタンSD粉末の調製）
S-トルバプタン結晶（大塚製薬(株)製）100.3 g及びヒドロキシプロピルセルロース（HPC-SL、日本曹達（株）製）50.3 g をジクロロメタン1050 mL、エタノール450 ｍLに溶解した。スプレードライヤー（Pulvis GB21型、ヤマト科学（株）製）を用いて、スプレー圧1.7 kg/cm2、ヒーター60℃、送液速度10-15 g/minで溶液をスプレードライした。調製したスプレードライ粉末は減圧下で乾燥した。調製された粉末の粉末Ｘ線回折を行ったところ、ハローピークしか認められなかったことから、非晶質であることを確認した。
【０１２２】
S-トルバプタンSD粉末を300mgシリンジに充填し、もう一方のシリンジに実施例１（表１）の媒体溶液を0.76g充填し、２つのシリンジをコネクターで結合し、ポンピングを繰り返すことにより、均質な200mg/mLの非晶質S-トルバプタン水性懸濁液を調製した。
【０１２３】
レーザー回折式粒度分布計（SALD-3000J、（株）島津製作所製）で湿式法にて測定したS-トルバプタンSD粉末の平均粒子径は6.2μｍであった。
【０１２４】
実施例３（R-トルバプタンの結晶粒子の製剤）
R-トルバプタン結晶 （大塚製薬(株)製）2.0 gを実施例１（表１）の媒体溶液8.3 gに懸濁した(10 mL相当)。懸濁液中にφ1.5 mmジルコニアビーズ10 gを加え、容器内に攪拌子を入れ、スターラーで攪拌することでビーズミル（湿式粉砕）を行い、均質な200mg/mL R-トルバプタン結晶水性懸濁液を調製した。レーザー回折式粒度分布計（SALD-3000J、（株）島津製作所製）で湿式法にて超音波照射時に測定したR-トルバプタンの結晶粒子の平均粒子径は2.5 μmであった。
【０１２５】
実施例４（S-トルバプタンの結晶粒子の製剤）
S-トルバプタン結晶（大塚製薬(株)製）2.0 gを実施例１（表１）の媒体溶液8.3 gに懸濁した(10 mL相当)。懸濁液中にφ1.5 mmジルコニアビーズ10 gを加え、容器内に攪拌子を入れ、スターラーで攪拌することでビーズミル（湿式粉砕）を行い、均質な200mg/mL S-トルバプタン結晶水性懸濁液を調製した。レーザー回折式粒度分布計（SALD-3000J、（株）島津製作所製）で湿式法にて超音波照射時に測定したS-トルバプタンの結晶粒子の平均粒子径は2.5 μmであった。
【０１２６】
比較例１（ラセミのトルバプタンのスプレードライ（SD）粉末の調製）
トルバプタン（ラセミ体）結晶（大塚製薬（株）製）20gをジクロロメタン 150mLとエタノール 30ｍLに溶解した。スプレードライヤー（Pulvis GB22型、ヤマト科学（株）製）を用いて、噴霧空気圧0.1 MPa、乾燥温度80℃、風量0.45 m3/min、送液速度 40 mL/minで上記溶液をスプレードライした。調製したスプレードライ粉末は減圧下で乾燥した。調製された粉末の粉末Ｘ線回折を行ったところ、ハローピークしか認められなかったことから、非晶質であることを確認した。
【０１２７】
レーザー回折式粒度分布計（SALD-3000J、（株）島津製作所製）で湿式法にて測定したラセミのトルバプタンSD粉末の平均粒子径は5.1μmであった。
【０１２８】
比較例２（33%PLGAを含むラセミのトルバプタンSD粉末の調製）
トルバプタン（ラセミ体）結晶（大塚製薬（株）製）10g及びDL乳酸／グリコール酸のコポリマー（PLGA-5005、和光純薬（株）製）5g をジクロロメタン100ｍLとエタノール 20ｍLに溶解した。スプレードライヤー（Pulvis GB22型、ヤマト科学（株）製）を用いて、噴霧空気圧0.1 MPa、乾燥温度80℃、風量0.44 m3/min、送液速度 40 mL/minで溶液をスプレードライした。調製したスプレードライ粉末は減圧下で乾燥した。調製された粉末の粉末Ｘ線回折を行ったところ、ハローピークしか認められなかったことから、非晶質であることを確認した。
【０１２９】
レーザー回折式粒度分布計（SALD-3000J、（株）島津製作所製）で湿式法にて測定した33%PLGAを含むラセミのトルバプタンSD粉末の平均粒子径は5.1μmであった。
【０１３０】
比較例３（33%PVP-17PFを含むラセミのトルバプタンSD粉末の調製）
トルバプタン（ラセミ体）結晶（大塚製薬（株）製）10g及びポリビニルピロリドン（PVP-17PF、BASF製) 5g をジクロロメタン100mL、エタノール20ｍLに溶解した。スプレードライヤー（Pulvis GB22型、ヤマト科学（株）製）を用いて、噴霧空気圧0.1 MPa、乾燥温度80℃、風量0.41 m3/min、送液速度 7 mL/minで溶液をスプレードライした。調製したスプレードライ粉末は減圧下で乾燥した。調製された粉末の粉末Ｘ線回折を行ったところ、ハローピークしか認められなかったことから、非晶質であることを確認した。
【０１３１】
レーザー回折式粒度分布計（SALD-3000J、（株）島津製作所製）で湿式法にて測定した33%PVP-17PFを含むラセミのトルバプタンSD粉末の平均粒子径は7.2μｍであった。
【０１３２】
比較例４（33%HP-55を含むラセミのトルバプタンSD粉末の調製）
トルバプタン （ラセミ体）結晶（大塚製薬（株）製）10g及びヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（HP-55、信越化学（株）製）5g をジクロロメタン150mL、エタノール30ｍLに溶解した。スプレードライヤー（Pulvis GB22型、ヤマト科学（株）製）を用いて、噴霧空気圧0.1 MPa、乾燥温度80℃、風量0.41 m3/min、送液速度 40 mL/minで溶液をスプレードライした。調製したスプレードライ粉末は減圧下で乾燥した。調製された粉末の粉末Ｘ線回折を行ったところ、ハローピークしか認められなかったことから、非晶質であることを確認した。
【０１３３】
レーザー回折式粒度分布計（SALD-3000J、（株）島津製作所製）で湿式法にて測定した33%HP-55を含むラセミのトルバプタンSD粉末の平均粒子径は5.5μｍであった。
【０１３４】
比較例５（33%HPC-SLを含むラセミのトルバプタンSD粉末の調製）
トルバプタン（ラセミ体）結晶（大塚製薬（株）製）10g及びヒドロキシプロピルセルロース（HPC-SL、日本曹達（株）製）5g をジクロロメタン100mL、エタノール30ｍLに溶解した。スプレードライヤー（Pulvis GB22型、ヤマト科学（株）製）を用いて、噴霧空気圧0.1 MPa、乾燥温度80℃、風量0.39 m3/min、送液速度 7 mL/minで溶液をスプレードライした。調製したスプレードライ粉末は減圧下で乾燥した。調製された粉末の粉末Ｘ線回折を行ったところ、ハローピークしか認められなかったことから、非晶質であることを確認した。
【０１３５】
33%HPC-SLを含むラセミのトルバプタンSD粉末を300mgシリンジに充填し、もう一方のシリンジに実施例１（表１）の媒体溶液を0.76g充填し、２つのシリンジをコネクターで結合し、ポンピングを繰り返すことにより、均質な200mg/mLの非晶質ラセミのトルバプタン水性懸濁液を調製した。
【０１３６】
レーザー回折式粒度分布計（SALD-3000J、（株）島津製作所製）で湿式法にて測定した33%HPC-SLを含むラセミのトルバプタンSD粉末の平均粒子径は6.6μｍであった。
【０１３７】
比較例６（ラセミのトルバプタンSD粉末の調製）
トルバプタン（ラセミ体）結晶（大塚製薬（株）製）10g をジクロロメタン100mL、エタノール20ｍLに溶解した。スプレードライヤー（SPRAY DRYER ODT-8型、大河原化工機（株）製）を用いて、アトマイザーは回転ディスク式、回転数13000rpm、パージエアー圧0/1kg/cm2、熱風入り口温度90℃、送液速度180g/minで溶液をスプレードライした。調製したスプレードライ粉末は減圧下で乾燥した。調製された粉末の粉末Ｘ線回折を行ったところ、ハローピークしか認められなかったことから、非晶質であることを確認した。
【０１３８】
レーザー回折式粒度分布計（SALD-3000J、（株）島津製作所製）で湿式法にて測定したラセミのトルバプタンSD粉末の平均粒子径は32.5μｍであった。
【０１３９】
比較例７（ラセミのトルバプタン結晶のジェットミル粉砕粉末の調製）
トルバプタン（ラセミ体）結晶（大塚製薬（株）製）をジェットミル粉砕機（PJM-100SP、日本ニューマチィック工業(株)製）を用いて、エアー圧5 kgf/cm2、送り速度20rpmでジェットミル粉砕を行った。調製された粉末の粉末Ｘ線回折を行ったところ、トルバプタン結晶が維持されていることを確認した。
【０１４０】
レーザー回折式粒度分布計（SALD-3000J、（株）島津製作所製）で湿式法にて測定したラセミのトルバプタンSD粉末の平均粒子径は2.4μｍであった。
【０１４１】
比較例８（ラセミのトルバプタンの結晶粒子の製剤）
トルバプタン（ラセミ体）結晶2.0 gを実施例1（表1）の媒体溶液8.3 gに懸濁した(10 mL相当)。懸濁液中にφ1.5 mmジルコニアビーズ10 gを加え、容器内に攪拌子を入れ、スターラーで攪拌することでビーズミル（湿式粉砕）を行い、均質な200mg/mLのラセミのトルバプタン結晶水性懸濁液を調製した。
【０１４２】
レーザー回折式粒度分布計（SALD-3000J、（株）島津製作所製）で湿式法にて超音波照射時に測定したラセミのトルバプタンの結晶粒子の平均粒子径は2.4 μmであった。
【０１４３】
試験例１
ヒト及びラットの肝ホモジネート(S9 画分) を用いて、トルバプタン (ラセミ体) 、R-トルバプタン及び S-トルバプタンのin vitro 代謝安定性試験を実施した。評価化合物濃度は100 nM とし、反応液中の化合物濃度を添加後5、10、30、60分に経時的にサンプリングを行ない、LC-MS/MS により測定した（図１の（１）及び（２））。
【０１４４】
その結果、ヒトにおいて S-トルバプタンの消失は、トルバプタン(ラセミ体) やR-トルバプタンと比較して遅く、代謝安定性が高かった（図１の（１））。ラットにおいてR-トルバプタンの消失は、トルバプタン (ラセミ体) や S-トルバプタンと比較して遅く、代謝安定性が高かった（図１の（２））。
【０１４５】
試験例２
実施例１，２のR-又はS-トルバプタンSD粉末、並びに比較例１〜６のトルバプタン（ラセミ体）SD粉末、及び比較例７のトルバプタン（ラセミ体）結晶粉末の溶出試験を行った（図２〜４）。溶出試験方法は、R-及びS-トルバプタンSD粉末、トルバプタン（ラセミ体）SD粉末、及びトルバプタン（ラセミ体）結晶粉末をそれぞれ0.1 g秤取し、下記表２の溶出試験溶液 500 mL中に添加した。上記秤取量のトルバプタンは溶出試験溶液に溶解せず、十分に懸濁させた。添加後0.083、0.167、0.5、1、2、4、6、8、12、24、48、144時間に経時的にサンプリングを行った。
【０１４６】
【表２】
0006265999.tif 000004
【０１４７】
その結果、比較例７のトルバプタン（ラセミ体）結晶は初期から溶出濃度は顕著に低かった。比較例１〜６の非晶質トルバプタン（ラセミ体）は溶出試験開始後から数時間高い濃度を示した後、10時間以内にその溶出濃度は急激に低下し、その後トルバプタン（ラセミ体）結晶の溶出濃度と同レベルに低下した。実施例１及び２のR-トルバプタンSD粉末とS-トルバプタンSD粉末は、少なくとも溶出試験開始後144時間では溶出濃度の顕著な低下は認められなかった。
【０１４８】
試験例３
R-又はS-トルバプタン結晶粉末の溶出試験を行った（図５）。対照として、上記試験例２の比較例７の結果をプロットとした。溶出試験方法はR-トルバプタン結晶粉末（平均粒子径：34.0μｍ）又はS-トルバプタン結晶粉末トルバプタン結晶粉末（平均粒子径：35.8μｍ）をそれぞれ0.1 g秤取し、上記表２の溶出試験溶液 500 mL中に添加した。上記秤取量のトルバプタンは溶出試験溶液に溶解せず、十分に懸濁させた。添加後0.083、0.167、0.5、1、2、4、6、8、12、24、48時間に経時的にサンプリングを行った。
【０１４９】
その結果、比較例７のトルバプタン（ラセミ体）結晶は試験開始直後の溶出濃度はやや高かったが、すぐに溶出速度が低下した。R-トルバプタン結晶とS-トルバプタン結晶は、2時間目以降には比較例７のトルバプタン（ラセミ体）結晶よりも溶出濃度がやや高く、ほぼ一定になり、少なくとも溶出試験開始後48時間では、比較例７のような溶出濃度の低下は認められなかった。
【０１５０】
試験例４
SD系雌性ラットに軽度ジエチルエーテル麻酔下、シリンジを用いて24Gの針で、実施例１，２，３，４の光学活性トルバプタン水性懸濁液、及び比較例５，８のラセミのトルバプタン水性懸濁液を100 mg/kgの用量で大腿部に筋肉内投与を行った（ｎ＝４）。各被験製剤（水性懸濁液）を投与後、1時間、6時間、1日、3日、7日、14日、21日 28日後に軽度ジエチルエーテル麻酔下頚静脈より各々約0.5mL採血した。採取した血液は各々セパラピットチューブにとり、室温下で約30分間放置後1800×gで10分間遠心分離し血清を得た。得られた血清は測定まで-20℃以下で保存した。LC-MS/MS法により得られた血清中トルバプタン濃度の測定を行った（ｎ＝４）。
【０１５１】
（１）結晶の光学活性体と結晶のラセミ体の対比
実施例３のR-トルバプタン結晶の水性懸濁液、実施例４のS-トルバプタン結晶の水性懸濁液及び比較例８のトルバプタン（ラセミ体）結晶の水性懸濁液を雌性SDラットに投与した。
【０１５２】
投与28日後に投与部位である大腿部を切開し、残存しているトルバプタンを確認後、シストごとトルバプタンを摘出した。シスト内のトルバプタンをアセトニトリルで抽出後、アセトニトリルとメタノールで希釈し、孔径0.2 μmのフィルターでろ過後、HPLCにてトルバプタンの残存率を測定した（ｎ＝３）。
【０１５３】
その結果、比較例８のトルバプタン（ラセミ体）結晶の残存率が約70%であり、４週間毎製剤としては吸収速度が遅すぎることが判明した。実施例３（R-トルバプタン結晶）、及び実施例４(S-トルバプタン結晶)は残存率が約50%であり、実施例は全て、4週毎投与製剤として好適なトルバプタンの量が4週間で吸収されていることが判明した（表３）。
【０１５４】
【表３】
0006265999.tif 000005
【０１５５】
さらに、実施例３のR-トルバプタン結晶の水性懸濁液と比較例８のトルバプタン（ラセミ体）結晶の水性懸濁液の筋肉内投与後28日間の血清中トルバプタン濃度推移の結果を図６に示す（ｎ＝４）。実施例３のR-トルバプタン結晶は、比較例８のトルバプタン（ラセミ体）結晶と比較して、投与後４週間に渡り顕著に高い血清中濃度推移を示した。
【０１５６】
（２）非晶質の光学活性体と非晶質のラセミ体の対比
実施例１の非晶質R-トルバプタンの水性懸濁液、実施例２の非晶質S-トルバプタンの水性懸濁液、及び比較例５の非晶質トルバプタン（ラセミ体）の水性懸濁液を雌性SDラットに投与し、上記（１）と同様に、投与部位のトルバプタンの投与２８日後の残存率測定を測定した（ｎ＝３）。
【０１５７】
その結果、比較例５の非晶質トルバプタン（ラセミ体）の残存率は約20%であり、実施例２の非晶質S-トルバプタンは残存しておらず、実施例１の非晶質R-トルバプタンの残存率は約4%であった。実施例１の非晶質R-トルバプタン、実施例２の非晶質S-トルバプタンの吸収速度は、非晶質トルバプタン（ラセミ体）よりも速いことが判明した（表４）。
【０１５８】
【表４】
0006265999.tif 000006
【０１５９】
さらに、筋肉内投与後28日間の血清中トルバプタン濃度推移の結果を図７に示す（ｎ＝４）。実施例１の非晶質R-トルバプタンは、比較例５の非晶質トルバプタン（ラセミ体）と比較して、投与後４週間に渡り顕著に高い血清中濃度推移を示した。
【０１６０】
（３）結晶の光学活性体と非晶質の光学活性体の対比
実施例３のR-トルバプタン結晶の水性懸濁液、及び実施例１の非晶質R-トルバプタンの水性懸濁液を雌性SDラットに投与し、筋肉内投与後28日間の血清中濃度推移の結果を図８に示す。実施例３のR-トルバプタン結晶は、実施例１の非晶質R-トルバプタンと異なり、投与直後の高血清中濃度（初期バースト等）が認められず、投与後４週間に渡り治療学的有効量の血清中濃度を維持することができる。特に、実施例３のR-トルバプタン結晶は、血清中濃度の変動が少なく、また実施例１の非晶質R-トルバプタンと比べて１４日目以降の血清中濃度が高いため、４週間毎の持効性注射剤として好ましいことが分かった。
【０１６１】
上記表３，４のように、実施例３のR-トルバプタン結晶の残存率が約50%であり、実施例１の非晶質R-トルバプタンの残存率は約4％であった。
【０１６２】
実施例５（S-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液）
S-トルバプタン結晶（大塚製薬(株)製）15.0 gを、表５の媒体溶液38.0gに懸濁した (製剤50 mL相当)。懸濁液中にφ1.5 mmジルコニアビーズ50 gを加え、容器内を攪拌することでビーズミル（湿式粉砕）を行い、S-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液を調製した。
【０１６３】
レーザー回折式粒度分布計（SALD-3000J、（株）島津製作所製）で湿式法にて超音波照射時に測定したS-トルバプタンの結晶粒子の平均粒子径は3.0 μmであった。
【０１６４】
【表５】
0006265999.tif 000007
【０１６５】
実施例６（R-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液）
R-トルバプタン結晶（大塚製薬(株)製）30.0 gを、実施例５（表５）の媒体溶液76.0gに懸濁した(製剤100 mL相当)。懸濁液中にφ1.5 mmジルコニアビーズ150 gを加え、容器内を攪拌することでビーズミル（湿式粉砕）を行い、R-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液を調製した。
【０１６６】
レーザー回折式粒度分布計（SALD-3000J、（株）島津製作所製）で湿式法にて超音波照射時に測定したR-トルバプタンの結晶粒子の平均粒子径は1.9μmであった。
【０１６７】
実施例５及び６で調製された製剤の組成を表６に示す。
【０１６８】
【表６】
0006265999.tif 000008
【０１６９】
試験例５
多発性嚢胞腎のモデル動物であるpcyマウス（雄性）を用いて、多発性嚢胞腎に対する実施例５のS-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液の作用を検討した。
【０１７０】
pcyマウスを4週齢時の体重ならびにMRIで測定した腎臓の容積で、(1) コントロール群、(2) S-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液投与群に、群分けを行なった。正常マウスコントロールとしてDBA/2JJclを用いた。
【０１７１】
S-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液投与群は、6および10週齢時に200 mg/mLに希釈調製したS-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液を1000 mg/kgになるように皮下投与した。薬物処置は6週齢より開始し、16週齢で剖検を実施した。剖検時には左右の腎臓を採取し、腎重量は体重で補正して評価した。
【０１７２】
表７に16週齢時（試験開始10週間後）に評価した腎重量の結果を示す。16週齢時のpcyコントロールマウスは正常DBAマウスに比較して腎重量の増大が認められた。S-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液投与群はpcyコントロール群に比較して、有意に腎重量の増大を抑制した。
【０１７３】
図９に7, 9, 13及び16週齢に測定した血漿中トルバプタン濃度を示す。6および10週齢時の S-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液の投与により、pcyマウスの血漿中トルバプタン濃度は試験終了（16週齢）まで、安定して推移した。
【０１７４】
【表７】
0006265999.tif 000009
【０１７５】
試験例６
多発性嚢胞腎のモデル動物であるPCKラット（雄性）を用いて、多発性嚢胞腎に対する実施例６のR-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液の作用を検討した。
【０１７６】
PCKラットを12週齢時の血漿アルブミン値ならびにMRIで測定した腎臓の容積で、(1) コントロール群、(2)R-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液投与群に、群分けを行なった。正常ラットコントロールとしてCrl:CD(SD)を用いた。
【０１７７】
R-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液投与群には、14，15，20週齢時に、R-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液（300 mg/mL)をラット左右腓腹筋に400 mg/kgとなるように筋肉内投与した。薬物処置は14週齢より開始した。24週齢で再度MRIによる右腎容積の測定を行い、嚢胞腎の指標として薬物投与前後の腎容積の変化を評価した。
【０１７８】
表８に12週齢（群分け時）および24週齢時にMRIで測定した右腎容積から算出した右腎容積の変化量（Δmm3）を示した。PCKコントロールラットの12週齢時の右腎容積は3595±162 mm3であり、24週齢までに嚢胞の増大により右腎容積は約1.4倍増加した。R-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液投与群では、有意に腎容積の増大を抑制した（P<0.05）。
【０１７９】
図１０に16, 20, 21及び25週齢に測定した血漿中トルバプタン濃度を示す。14，15，20週齢時のR-トルバプタン結晶粒子の水性懸濁液の投与により、PCKラットの血漿中トルバプタン濃度は試験終了（25週齢）まで、安定して推移した。
【０１８０】
【表８】
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【０１８１】
以上の結果より、多発性嚢胞腎モデル動物であるpcyマウスおよびPCKラットにおいて、結晶の光学活性のトルバプタンを含む水性懸濁液は血漿中トルバプタン濃度を持続的に維持することができ、多発性嚢胞腎の進行を抑制することが示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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