(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩ）の化合物の治療有効量を含む、胃癌または咽喉癌の治療または予防に用いるための組成物：
0006444984.tif 000049
式中、
Ｒａは、Ｃ２−６アルケニル、アリールＣ１−６アルキル、またはアリールＣ２−６アルケニルであり；
ｍは１または２であり；かつ
Ｒ１０およびＲ２０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、またはＣ１−６アルコキシルであり；
ただし、Ｒ１０およびＲ２０が共にヒドロキシルである場合は、Ｒａは、アリールＣ１−６アルキルまたはアリールＣ２−６アルケニルではない。
【請求項２】
ヒト対象において胃癌または咽喉癌の治療または予防に用いるための、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
式（ＩＩ）の化合物が、式（ＩＩＡ）：
0006444984.tif 000050
の化合物である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
Ｒ１０およびＲ２０がそれぞれ水素であるか、Ｒ１０およびＲ２０がそれぞれヒドロキシルであるか、Ｒ１０がヒドロキシルであり、かつＲ２０がＣ１−６アルコキシルであるか、またはＲ１０がＣ１−６アルコキシルであり、かつＲ２０がヒドロキシルである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記Ｃ１−６アルコキシルがＯＭｅである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
ＲａがＣ２−６アルケニル、またはアリールＣ１−６アルキルである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記Ｃ２−６アルケニルがプレニルまたはイソプレニルである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記アリールＣ１−６アルキルがベンジルである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記アリールＣ２−６アルケニルがシンナミルである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
ｍが２である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
Ｒ１０およびＲ２０がそれぞれ水素である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
ｍが１である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
ＲａがＣ２−６アルケニルであり；並びに、Ｒ１０およびＲ２０がそれぞれヒドロキシルであるか、Ｒ１０がヒドロキシルであり、かつＲ２０がＣ１−６アルコキシルであるか、もしくはＲ１０がＣ１−６アルコキシルであり、かつＲ２０がヒドロキシルであるか、または
ＲａがアリールＣ１−６アルキルであり；並びに、Ｒ１０がヒドロキシルであり、かつＲ２０がＣ１−６アルコキシルであるか、もしくはＲ１０がＣ１−６アルコキシルであり、かつＲ２０がヒドロキシルである、
請求項１〜８、１０、および１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
ＲａがＣ２−６アルケニルであり；かつＲ１０およびＲ２０がそれぞれヒドロキシルである、請求項１〜４、６、７、１０、１２、および１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
ＲａがアリールＣ１−６アルキルであり；Ｒ１０がヒドロキシルであり、かつＲ２０がＣ１−６アルコキシルであるか、またはＲ１０がＣ１−６アルコキシルであり、かつＲ２０がヒドロキシルである、請求項１〜６、８、１０、１２、および１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
ａ）１，１−ジメチルアリルカフェ酸、
ｂ）３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、
ｃ）フェルラ酸ベンジル、および
ｄ）イソフェルラ酸ベンジル、
のうちの任意の１つもしくは複数から選択される少なくとも１種類の化合物の治療有効量を、任意に少なくとも１つの追加の治療剤と共に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
経口投与用または粘膜表面への局所投与用に製剤化されている、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、胃腸癌の治療および予防のための組成物に関する。特に、本発明は、これらの化合物の１種類もしくは複数種類が濃縮された１つまたは複数のプロポリス抽出物を含む抗胃腸癌組成物を含む、プロポリスから誘導される化合物を含有する抗胃腸癌組成物に関する。特に、結腸直腸、喉および胃の癌の治療または予防におけるそのような組成物の使用が企図される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
結腸直腸癌は、先進国からの報告によると、女性および男性において、それぞれ２番目、３番目に多い癌である。結腸直腸癌は先進国でより多く見られ、米国、オーストラリア、ヨーロッパ、およびニュージーランドで割合が最も高く、発生率は発展途上国よりも１０倍も高い。手術は有効であり得るが、早期発見が有益な手術結果に非常に重要である。原発腫瘍、またはリンパ節外の転移を治療する際の現在の化学療法および放射線療法の有効性が議論されているので、他の治療法は、寿命延長および緩和ケアに主に向けられている。
【０００３】
食道癌、咽頭癌、または喉頭癌とも呼ばれる咽喉癌は、咽頭、鼻咽頭、中咽頭、下咽頭、喉頭（ボイスボックス）または扁桃の組織で発症する腫瘍を包含する。咽喉癌の治療法には、手術、放射線療法または化学療法が含まれる。咽喉癌の治療は喉を損傷させ得、患者が食べ、呼吸し、眠る方法を変更させる可能性がある。
【０００４】
胃癌（Ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）は、世界の癌関連死で２番目に多い原因である。症状が病気の初期段階で発生していない可能性があるため、診断が遅れる場合が多い。胃を除去するための手術（胃切除）が、胃癌を治すことができる唯一の治療である。手術後の化学療法および放射線療法は、治癒の可能性を改善し得る。
【０００５】
したがって、結腸直腸癌、胃癌もしくは咽喉癌の治療または予防に使用するのに適するもの、および抗胃腸癌活性の維持を支援するか、または結腸直腸癌、胃癌もしくは咽喉癌に対する抗胃腸癌活性を増強することができるものを含む抗胃腸癌組成物に対するニーズがある。
【０００６】
結腸直腸癌、胃癌および咽喉癌を含む胃腸癌の治療または予防における使用のための、安定した抗胃腸癌組成物を含む抗胃腸癌組成物を提供すること、または少なくとも有用な選択を公共に提供することが本発明の目的である。
【発明の概要】
【０００７】
第１の態様では、本発明は、式（Ｉ）
0006444984.tif 000002
（式中、
ＺはＯまたはヒドロキシルであり；
Ｘは、水素、Ｃ１−６アルキルＣ（Ｏ）Ｏ、またはＣ１−６アルキルであり；
------は、ＺがＯである場合は単結合であり、Ｚがヒドロキシルである場合は存在せず、
0006444984.tif 000003
は、単結合または二重結合であり；
Ｒ1およびＲ２は、それぞれ独立して、ヒドロキシルまたはＣ１−６アルコキシルであり；
ただし、Ｒ1およびＲ２の少なくとも一方はヒドロキシルであり；
ただし、Ｒ1およびＲ２は、ＸがＨであり、かつ
0006444984.tif 000004
が二重結合である場合は、共にヒドロキシルではない）
または式（ＩＩ）
0006444984.tif 000005
（式中、
Ｒａは、水素、Ｃ２−６アルケニル、アリールＣ１−６アルキル、またはアリールＣ２−６アルケニルであり；
ｍは１または２であり；
Ｒ１０およびＲ２０は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシルまたはＣ１−６アルコキシであり；
ただし、Ｒ１０およびＲ２０が共にヒドロキシルである場合は、Ｒａは、アリールＣ１−６アルキルまたはアリールＣ２−６アルケニルではない）
の治療有効量の化合物を含む医薬組成物に関する。
【０００８】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＡ）
0006444984.tif 000006
の化合物である。
【０００９】
一実施形態では、Ｘは、水素、Ｃ１−６アルキルＣ（Ｏ）Ｏ、またはＣ２−５アルキルである。
【００１０】
一実施形態では、Ｘは、水素またはＣ１−６アルキルＣ（Ｏ）Ｏである。
【００１１】
一実施形態では、Ｃ１−６アルキルＣ（Ｏ）ＯはＭｅＣ（Ｏ）Ｏである。
【００１２】
一実施形態では、Ｒ1およびＲ２は、それぞれ独立して、ヒドロキシルまたはＣ１−６アルコキシである。
【００１３】
一実施形態では、Ｒ1がヒドロキシルであり、かつＲ２がＣ１−６アルコキシであるか、Ｒ1がＣ１−６アルコキシであり、かつＲ２がヒドロキシルであるか、またはＲ1およびＲ２は、それぞれヒドロキシルである。
【００１４】
一実施形態では、Ｃ１−６アルコキシはＯＭｅである。
【００１５】
一実施形態では、ＺはＯであり、------は単結合であり、
0006444984.tif 000007
は単結合であり、
ＸはＣ１−６アルキルＣ（Ｏ）Ｏであり、かつＲ1およびＲ２は、それぞれヒドロキシルである。
【００１６】
一実施形態では、ＺがＯであり、かつ------が単結合であるか、またはＺがヒドロキシルであり、かつ------は存在せず；
0006444984.tif 000008
は二重結合であり；Ｘは水素であり；Ｒ１がヒドロキシルであり、かつＲ２がＣ１−６アルコキシであるか、またはＲ1がＣ１−６アルコキシであり、かつＲ２がヒドロキシルである。
【００１７】
一実施形態では、Ｒ１がＣ１−６アルコキシであり、かつＲ２がヒドロキシルである。
【００１８】
一実施形態では、ＺはＯであり；------が単結合である。
【００１９】
一実施形態では、Ｚはヒドロキシルであり；------は存在しない。
【００２０】
一実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＡ）
0006444984.tif 000009
の化合物である。
【００２１】
一実施形態では、Ｒ1０およびＲ２０はそれぞれ水素であるか、Ｒ1０およびＲ２０はそれぞれヒドロキシルであるか、Ｒ1０がヒドロキシルであり、かつＲ２０がＣ１−６アルコキシであるか、またはＲ１０がＣ１−６アルコキシであり、かつＲ２０がヒドロキシルである。
【００２２】
一実施形態では、Ｃ１−６アルコキシはＯＭｅである。
【００２３】
一実施形態では、Ｒａは水素、Ｃ２−６アルケニル、アリールＣ１−６アルキルである。
【００２４】
一実施形態では、Ｃ２−６アルケニルはプレニルまたはイソプレニルである。
【００２５】
一実施形態では、アリールＣ１−６アルキルはベンジルである。
【００２６】
一実施形態では、アリールＣ１−６アルケニルはシンナミルである。
【００２７】
一実施形態では、ｍは２である。
【００２８】
一実施形態では、Ｒａは水素であり、Ｒ1０およびＲ２０はそれぞれ水素である。
【００２９】
一実施形態では、ｍは１である。
【００３０】
一実施形態では、ＲａはＣ２−６アルケニルまたはアリールＣ１−６アルキルであり；Ｒ1０およびＲ２０はそれぞれヒドロキシルであるか、Ｒ1０がヒドロキシルであり、かつＲ２０がＣ１−６アルコキシであるか、またはＲ1０がＣ１−６アルコキシであり、かつＲ２０がヒドロキシルである。
【００３１】
一実施形態では、ＲａはＣ２−６アルケニルであり；Ｒ1０およびＲ２０はそれぞれヒドロキシルである。
【００３２】
一実施形態では、ＲａはアリールＣ１−６アルキルであり；Ｒ1０がヒドロキシルであり、かつＲ２０がＣ１−６アルコキシであるか、またはＲ1０がＣ１−６アルコキシであり、かつＲ２０がヒドロキシルである。
【００３３】
したがって、第２の態様では、本発明は、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、または
ａ）５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、
ｂ）３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、
ｃ）１，１−ジメチルアリルカフェ酸、
ｄ）ピノバンクシン−３−アセテート、
ｅ）テクトクリシン、
ｆ）ピノストロビンカルコン、
ｇ）フェルラ酸ベンジル、および
ｈ）イソフェルラ酸ベンジル
のうちの任意の１つもしくは複数から選択される化合物を含む、本明細書で定義される少なくとも１種類の化合物を含む抗胃腸癌組成物に関する。
【００３４】
誤解を避けるために、５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸は以下に示す式（Ａ）を有し、３−メチル−３−ブテニルカフェ酸は以下に示す式（Ｂ）を有し、１，１−ジメチルアリルカフェ酸は以下に示す式（Ｃ）を有し、ピノバンクシン−３−アセテートは以下に示す式（Ｄ）を有し、テクトクリシンは以下に示す式（Ｅ）を有し、ピノストロビンカルコンは式（Ｆ）を有し、フェルラ酸ベンジルは以下に示す式（Ｇ）を有し、イソフェルラ酸ベンジルは以下に示す式（Ｈ）を有する。
0006444984.tif 000010
【００３５】
一実施形態では、抗胃腸癌組成物は抗結腸直腸癌組成物である。別の実施形態では、抗胃腸癌組成物は抗胃癌組成物である。さらなる実施形態では、抗胃腸癌組成物は抗咽喉癌組成物である。
【００３６】
別の態様では、本発明は、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、または
ａ）５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、
ｂ）３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、
ｃ）１，１−ジメチルアリルカフェ酸、
ｄ）ピノバンクシン−３−アセテート、
ｅ）テクトクリシン、
ｆ）ピノストロビンカルコン、
ｇ）フェルラ酸ベンジル、および
ｈ）イソフェルラ酸ベンジル
のうちの任意の１つもしくは複数から選択される化合物を含む、本明細書で定義される少なくとも１種類の化合物を含むか、本質的にそれらからなるか、またはそれらからなる医薬組成物に関する。
【００３７】
一実施形態では、本組成物は、腸の健康状態を維持または改善するためのものである。したがって、一実施形態では、本発明は、腸の健康状態を改善するための組成物であって、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、または
ａ）５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、
ｂ）３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、
ｃ）１，１−ジメチルアリルカフェ酸、
ｄ）ピノバンクシン−３−アセテート、
ｅ）テクトクリシン、
ｆ）ピノストロビンカルコン、
ｇ）フェルラ酸ベンジル、および
ｈ）イソフェルラ酸ベンジル
のうちの任意の１つもしくは複数から選択される化合物を含む、本明細書で定義される少なくとも１種類の化合物を含むか、本質的にそれらからなるか、またはそれらからなる組成物に関する。
【００３８】
別の態様では、本発明は、対象における胃腸癌を治療または予防する方法であって、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、または
ａ）５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、
ｂ）３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、
ｃ）１，１−ジメチルアリルカフェ酸、
ｄ）ピノバンクシン−３−アセテート、
ｅ）テクトクリシン、
ｆ）ピノストロビンカルコン、
ｇ）フェルラ酸ベンジル、および
ｈ）イソフェルラ酸ベンジル
のうちの任意の１つもしくは複数から選択される化合物を含む、本明細書で定義される少なくとも１種類の化合物を含むか、本質的にそれらからなるか、またはそれらからなる有効量の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法に関する。
【００３９】
一実施形態では、胃腸癌は結腸直腸癌である。別の実施形態では、胃腸癌は胃癌である。さらなる実施形態では、胃腸癌は咽喉癌である。
【００４０】
別の態様では、本発明は、対象における胃腸の腫瘍形成を阻害するか、胃腸の腫瘍増殖を阻害するか、胃腸の腫瘍転移を阻害するか、または胃腸癌を治療または予防する方法であって、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、または
ａ）５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、
ｂ）３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、
ｃ）１，１−ジメチルアリルカフェ酸、
ｄ）ピノバンクシン−３−アセテート、
ｅ）テクトクリシン、
ｆ）ピノストロビンカルコン、
ｇ）フェルラ酸ベンジル、および
ｈ）イソフェルラ酸ベンジル
のうちの任意の１つもしくは複数から選択される化合物を含む、本明細書で定義される少なくとも１種類の化合物を含むか、本質的にそれらからなるか、またはそれらからなる有効量の組成物を、それを必要とする対象に別々に、同時に、または連続して投与することを含む方法に関する。
【００４１】
一実施形態では、胃腸の腫瘍は結腸直腸腫瘍である。別の実施形態では、胃腸の腫瘍は胃の腫瘍である。さらなる実施形態では、胃腸の腫瘍は咽喉腫瘍である。
【００４２】
本発明の別の態様は、対象における１つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、または
ａ）５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、
ｂ）３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、
ｃ）１，１−ジメチルアリルカフェ酸、
ｄ）ピノバンクシン−３−アセテート、
ｅ）テクトクリシン、
ｆ）ピノストロビンカルコン、
ｇ）フェルラ酸ベンジル、および
ｈ）イソフェルラ酸ベンジル
のうちの任意の１つもしくは複数から選択される化合物を含む、本明細書で定義される少なくとも１種類の化合物を含むか、本質的にそれらからなるか、またはそれらからなる有効量の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法に関する。
【００４３】
一実施形態では、アポトーシスは結腸直腸腫瘍細胞のアポトーシスである。別の実施形態では、アポトーシスは胃の腫瘍細胞のアポトーシスである。さらなる実施形態では、アポトーシスは咽喉腫瘍細胞のアポトーシスである。
【００４４】
本発明の別の態様は、対象において１つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞の増殖を調節する方法であって、それを必要とする対象に有効量の本発明の組成物を投与することを含む方法に関する。
【００４５】
例えば、一実施形態では、調節は低減である。したがって、本発明は、対象において１つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞の増殖を低減する方法であって、５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、１，１−ジメチルアリルカフェ酸、ピノバンクシン−３−アセテート、テクトクリシン、ピノストロビンカルコン、フェルラ酸ベンジル、およびイソフェルラ酸ベンジルを含むか、本質的にそれらからなるか、またはそれらからなる有効量の組成物を投与することを含む方法に関する。
【００４６】
一実施形態では、増殖は結腸直腸腫瘍細胞の増殖である。別の実施形態では、増殖は胃の腫瘍細胞の増殖である。さらなる実施形態では、増殖は咽喉腫瘍細胞の増殖である。
【００４７】
本発明の別の態様は、本明細書に記載の本発明の組成物を対象に投与することを含む、胃腸癌療法に対する対象の応答性を増加させる方法に関する。
【００４８】
一実施形態では、胃腸癌療法は結腸直腸癌療法である。別の実施形態では、胃腸癌療法は胃癌療法である。さらなる実施形態では、胃腸癌療法は咽喉癌療法である。
【００４９】
本発明の別の態様は、本明細書に記載の本発明の組成物を対象に投与することを含む、癌療法に対する対象の胃腸腫瘍の感受性を増加させる方法に関する。
【００５０】
一実施形態では、胃腸腫瘍は結腸直腸腫瘍である。別の実施形態では、胃腸の腫瘍は胃の腫瘍である。さらなる実施形態では、胃腸腫瘍は咽喉腫瘍である。
【００５１】
さらなる態様では、本発明は、治療に耐性を示す１つまたは複数の胃腸癌細胞を再感作させる方法であって、１つまたは複数の胃腸癌細胞に有効量の本明細書に記載の本発明の組成物を投与することを含む方法に関する。
【００５２】
一実施形態では、胃腸癌細胞は、対象に存在する腫瘍を含む。
【００５３】
本発明はまた、胃腸癌に罹患している対象における腫瘍細胞の癌療法に対する耐性を少なくとも部分的に逆転させる方法であって、本明細書に記載の本発明の組成物を対象に投与することを含む方法にも関する。
【００５４】
さらに、本発明は、胃腸癌療法に対する胃腸癌患者の耐性を全体的にまたは部分的に逆転させる方法であって、本明細書に記載の本発明の組成物を前記患者に投与するステップを含む方法に関する。
【００５５】
別の態様では、本発明は、胃腸癌療法による治療に耐性を示すか、または耐性を示すこともしくは耐性になることが予想される胃腸癌患者の１つまたは複数の腫瘍を、胃腸癌療法による治療に対して再感作させる方法であって、本明細書に記載の本発明の組成物を前記患者に投与するステップを含む方法を提供する。
【００５６】
一実施形態では、腫瘍は化学療法による治療に耐性を示す。
【００５７】
一実施形態では、胃腸癌は結腸直腸癌である。別の実施形態では、胃腸癌は胃癌である。さらなる実施形態では、胃腸癌は咽喉癌である。
【００５８】
さらなる態様では、本発明は、腸の健康状態を改善する方法であって、本明細書に記載の本発明の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法に関する。
【００５９】
一実施形態では、本組成物は相乗的治療用組成物である。一実施形態では、本組成物は、相乗的治療効果を提供する。
【００６０】
一実施形態では、本組成物は、本明細書に記載の化合物と、いずれかの一方の単独の効果よりも大きいか、またはいずれかの一方の単独の相加効果よりも大きい相乗的治療効果を提供する少なくとも１種類の追加の治療剤と、を含む。例えば、アポトーシスの誘導に対して、胃腸癌細胞の生存もしくは増殖に対して、療法に対する再感作に対して、胃腸癌の治療もしくは予防に対して、または治療法に対する対象もしくは腫瘍の応答に対してより大きな効果がある。一実施形態では、本化合物および少なくとも１種類の追加の治療剤は、必要に応じて、同時投与または連続投与される胃腸癌療法の投与の投与量を減少させるかもしくは増加させること、または投与の期間を減少させるかもしくは増加させることを可能にする。
【００６１】
一実施形態では、相乗的治療用組成物は、プロポリスに由来する少なくとも１種類の追加の化合物または抽出物を含む。例えば、本組成物は、ピノセンブリン、ＣＡＰＥ、クリシン、ガランギン、カフェ酸ベンジルまたはカフェ酸を含む群から選択される少なくとも１種類の化合物をさらに含む。
【００６２】
本発明の別の態様は、本明細書に記載の目的のための組成物の製造における、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、または
ａ）５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、
ｂ）３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、
ｃ）１，１−ジメチルアリルカフェ酸、
ｄ）ピノバンクシン−３−アセテート、
ｅ）テクトクリシン、
ｆ）ピノストロビンカルコン、
ｇ）フェルラ酸ベンジル、および
ｈ）イソフェルラ酸ベンジル
のうちの任意の１つもしくは複数から選択される化合物を含む、本明細書で定義される少なくとも１種類の化合物の使用に関する。
【００６３】
一実施形態では、使用は、本明細書に記載の目的のための組成物の製造における、少なくとも１種類の追加の治療薬との併用である。
【００６４】
本発明の別の態様は、本明細書に記載の目的のための組成物の製造において、少なくとも１種類の追加の治療剤と共に、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の化合物、または
ａ）５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、
ｂ）３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、
ｃ）１，１−ジメチルアリルカフェ酸、
ｄ）ピノバンクシン−３−アセテート、
ｅ）テクトクリシン、
ｆ）ピノストロビンカルコン、
ｇ）フェルラ酸ベンジル、および
ｈ）イソフェルラ酸ベンジル
のうちの任意の１つもしくは複数から選択される化合物を含む、本明細書で定義される少なくとも１種類の化合物を含む組成物を使用することに関し、本組成物は、少なくとも１種類の化合物および少なくとも１種類の追加の治療剤の別々の投与、同時投与または連続投与を提供するように製剤化される。
【００６５】
一実施形態では、複合体はシクロデキストリンを含む。別の実施形態では、本化合物は、溶媒、例えば、エタノールまたはプロピレングリコールに溶解されて提供される。
【００６６】
本発明の別の態様は、
ａ）５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、
ｂ）３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、
ｃ）１，１−ジメチルアリルカフェ酸、
ｄ）ピノバンクシン−３−アセテート、
ｅ）テクトクリシン、
ｆ）ピノストロビンカルコン、
ｇ）フェルラ酸ベンジル、および
ｈ）イソフェルラ酸ベンジル
のうちの任意の１つもしくは複数から選択される少なくとも１種類の化合物を含むか、本質的にそれらからなるか、またはそれらからなる組成物に関する。
【００６７】
一実施形態では、本化合物は、単離、精製または実質的に精製されている。
【００６８】
一実施形態では、本組成物は、
ａ）５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、
ｂ）３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、
ｃ）１，１−ジメチルアリルカフェ酸、
ｄ）ピノバンクシン−３−アセテート、
ｅ）テクトクリシン、
ｆ）ピノストロビンカルコン、
ｇ）フェルラ酸ベンジル、および
ｈ）イソフェルラ酸ベンジル
のうちの任意の１つもしくは複数から選択される少なくとも１種類の化合物を添加されたものである。
【００６９】
一実施形態では、本組成物は、
ａ）５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、
ｂ）３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、
ｃ）１，１−ジメチルアリルカフェ酸、
ｄ）ピノバンクシン−３−アセテート、
ｅ）テクトクリシン、
ｆ）ピノストロビンカルコン、
ｇ）フェルラ酸ベンジル、および
ｈ）イソフェルラ酸ベンジル
のうちの任意の１つもしくは複数から選択される少なくとも１種類の単離、精製または実質的に精製された化合物を添加されたものである。
【００７０】
本発明の別の態様は、ヒト対象における胃腸の腫瘍形成を阻害すること、胃腸の腫瘍増殖を阻害すること、胃腸の腫瘍転移を阻害すること、または胃腸癌を治療もしくは予防すること、ヒト対象における１つもしくは複数の腫瘍性胃腸細胞のアポトーシスを誘導すること、胃腸癌治療に対するヒト対象の応答性を高めること、胃腸癌治療に対するヒト対象における胃腸腫瘍の感受性を増加させること、治療に耐性のあるヒト対象における１つもしくは複数の胃腸癌細胞を再感作させること、胃腸癌に罹患しているヒト対象における腫瘍細胞の胃腸癌療法に対する耐性を少なくとも部分的に逆転させること、胃腸癌療法に対する胃腸癌ヒト患者の耐性を完全にまたは部分的に逆転させること、または胃腸癌療法による治療に耐性を示すか、耐性を示すこともしくは耐性を示すようになることが予想される胃腸癌ヒト患者の１つもしくは複数の腫瘍を、胃腸癌療法による治療に対して再感作させることに使用するための本発明の組成物に関する。
【００７１】
一実施形態では、本発明は、胃腸癌の治療または予防に使用するための本発明の組成物に関する。
【００７２】
以下の実施形態は、上記の態様のいずれかに関連し得る。
【００７３】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回る５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００７４】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回る３−メチル−３−ブテニルカフェ酸濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００７５】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回る１，１−ジメチルアリルカフェ酸濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００７６】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るピノバンクシン−３−アセテート濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００７７】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るテクトクリシン濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００７８】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るピノストロビンカルコン濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００７９】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回る濃度のフェルラ酸ベンジルを有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００８０】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るイソフェルラ酸ベンジル濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００８１】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るＣＡＰＥ濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００８２】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るピノセンブリン濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００８３】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るガランギン濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００８４】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るクリシン濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００８５】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るピノバンクシン濃濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００８６】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るカフェ酸濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００８７】
一実施形態では、本組成物は、約１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るカフェ酸ベンジル濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００８８】
一実施形態では、１種類または複数種類の化合物は、５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、１，１−ジメチルアリルカフェ酸、ピノバンクシン−３−アセテート、テクトクリシン、ピノストロビンカルコン、フェルラ酸ベンジルおよびイソフェルラ酸ベンジルから選択される１種類または複数種類の化合物が濃縮されたプロポリス抽出物またはプロポリス画分の形態の抗胃腸癌組成物中に存在する。一実施形態では、濃縮は、粗プロポリスに存在するレベルに対する濃縮である。この実施形態では、濃縮は、脱脂されたプロポリス中に存在する非脂質成分に対する濃縮である。したがって、一実施形態では、企図される濃縮は、粗プロポリスまたは未処理のプロポリス中に存在するものなどのワックスを除去するための粗プロポリスの脱脂もしくは他の処理後のプロポリス抽出物またはプロポリス画分中に存在する成分に対する濃縮である。別の実施形態では、濃縮は、本明細書の表１中の同定された化合物の１つまたは複数に対する濃縮である。
【００８９】
さらなる実施形態では、１種類または複数種類の化合物は、５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、１，１−ジメチルアリルカフェ酸、ピノバンクシン−３−アセテート、テクトクリシン、ピノストロビンカルコン、フェルラ酸ベンジル、およびイソフェルラ酸ベンジルから選択される１種類もしくは複数種類の化合物が濃縮されたプロポリス抽出物またはプロポリス画分の形態の抗胃腸癌組成物中に存在し、濃縮は精製されたプロポリスに存在するレベルに対する濃縮である。したがって、企図される濃縮は、ワックスを除去するための粗プロポリスの脱脂もしくは他の処理、次いで、実施例１に記載され、当技術分野で公知のものなどのさらなる分画工程（複数可）、例えば、ＨＰＬＣ、カラムクロマトグラフィー、ＨＰ−２０もしくはセファデックスなどのポリマー樹脂への吸着および脱着、溶媒分配を用いた画分への分離の後のプロポリス抽出物またはプロポリス画分中に存在する成分に対する濃縮である。
【００９０】
一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸が濃縮されている。一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、３−メチル−３−ブテニルカフェ酸が濃縮されている。一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、１，１−ジメチルアリルカフェ酸が濃縮されている。一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、ピノバンクシン−３−アセテートが濃縮されている。一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、テクトクリシンが濃縮されている。一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、ピノストロビンカルコンが濃縮されている。一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、フェルラ酸ベンジルが濃縮されている。一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、イソフェルラ酸ベンジルが濃縮されている。
【００９１】
様々な実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、１，１−ジメチルアリルカフェ酸、ピノバンクシン−３−アセテート、テクトクリシン、ピノストロビンカルコン、フェルラ酸ベンジル、およびイソフェルラ酸ベンジルのうちの２種類以上の任意の組み合わせが濃縮されている。
【００９２】
一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、約０．１、０．５、０．７５、１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回る５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約０．１〜約１、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００９３】
一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、約０．１、０．５、０．７５、１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回る３−メチル−３−ブテニルカフェ酸濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約０．１〜約１、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００９４】
一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、約０．１、０．５、０．７５、１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回る１，１−ジメチルアリルカフェ酸濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約０．１〜約１、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００９５】
一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、約０．１、０．５、０．７５、１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るピノバンクシン−３−アセテート濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約０．１〜約１、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００９６】
一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、約０．１、０．５、０．７５、１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るテクトクリシン濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約０．１〜約１、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００９７】
一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、約０．１、０．５、０．７５、１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るピノストロビンカルコン濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約０．１〜約１、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００９８】
一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、約０．１、０．５、０．７５、１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るフェルラ酸ベンジル濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約０．１〜約１、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【００９９】
一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、約０．１、０．５、０．７５、１、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、９００または９９９ｍｇ／ｇを上回るイソフェルラ酸ベンジル濃度を有し、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約０．１〜約１、約１〜約５、約１〜約１０、約２〜約２０、約５〜約２０、約５〜約２５、約１０〜約２５、約１０〜約４０、約１５〜約１００、または約２０〜約９９９ｍｇ／ｇ）から選択され得る。
【０１００】
一実施形態では、プロポリス抽出物またはプロポリス画分は、カフェ酸フェニルエーテルエステル（ＣＡＰＥ）、ピノセンブリン、カフェ酸、クリシン、ガランギン、またはカフェ酸ベンジルを含む群から選択される化合物のうちの少なくとも1種類が濃縮されている。
【０１０１】
一実施形態では、プロポリスまたはプロポリス画分は、約１ｍｇ／ｇ、約１．５ｍｇ／ｇ、約２ｍｇ／ｇ、約２．５ｍｇ／ｇ、約３ｍｇ／ｇ、約３．５ｍｇ／ｇ、約４ｍｇ／ｇ、約４．５ｍｇ／ｇ、約５ｍｇ／ｇ、約５．５ｍｇ／ｇ、約６ｍｇ／ｇ、約７．５ｍｇ／ｇ、約１０ｍｇ／ｇ、約１５ｍｇ／ｇ、約２０ｍｇ／ｇ、約２５ｍｇ／ｇ、約３０ｍｇ／ｇ、約４０ｍｇ／ｇ、約５０ｍｇ／ｇ、約７５ｍｇ／ｇ、約１００ｍｇ／ｇ、約１２５ｍｇ／ｇ、約１５０ｍｇ／ｇ、約１７５ｍｇ／ｇ、約２００ｍｇ／ｇ、２５０ｍｇ／ｇ、約３００ｍｇ／ｇ、約３５０ｍｇ／ｇ、約４００ｍｇ／ｇ、約４５０ｍｇ／ｇ、約５００ｍｇ／ｇ、約５５０ｍｇ／ｇ、約６００ｍｇ／ｇ、約６５０ｍｇ／ｇ、約７００ｍｇ／ｇ、約７５０ｍｇ／ｇ、約８００ｍｇ／ｇ、約８５０ｍｇ／ｇ、約９００ｍｇ／ｇ、約９５０ｍｇ／ｇを上回り、約９９９ｍｇ／ｇまでのＣＡＰＥ濃度を有する。
【０１０２】
一実施形態では、プロポリスまたはプロポリス画分は、約１ｍｇ／ｇ、約１．５ｍｇ／ｇ、約２ｍｇ／ｇ、約２．５ｍｇ／ｇ、約３ｍｇ／ｇ、約３．５ｍｇ／ｇ、約４ｍｇ／ｇ、約４．５ｍｇ／ｇ、約５ｍｇ／ｇ、約５．５ｍｇ／ｇ、約６ｍｇ／ｇ、約７．５ｍｇ／ｇ、約１０ｍｇ／ｇ、約１５ｍｇ／ｇ、約２０ｍｇ／ｇ、約２５ｍｇ／ｇ、約３０ｍｇ／ｇ、約４０ｍｇ／ｇ、約５０ｍｇ／ｇ、約７５ｍｇ／ｇ、約１００ｍｇ／ｇ、約１２５ｍｇ／ｇ、約１５０ｍｇ／ｇ、約１７５ｍｇ／ｇ、約２００ｍｇ／ｇ、２５０ｍｇ／ｇ、約３００ｍｇ／ｇ、約３５０ｍｇ／ｇ、約４００ｍｇ／ｇ、約４５０ｍｇ／ｇ、約５００ｍｇ／ｇ、約５５０ｍｇ／ｇ、約６００ｍｇ／ｇ、約６５０ｍｇ／ｇ、約７００ｍｇ／ｇ、約７５０ｍｇ／ｇ、約８００ｍｇ／ｇ、約８５０ｍｇ／ｇ、約９００ｍｇ／ｇ、約９５０ｍｇ／ｇを上回り、約９９９ｍｇ／ｇまでのピノセンブリン濃度を有する。
【０１０３】
一実施形態では、プロポリスまたはプロポリス画分は、約１ｍｇ／ｇ、約１．５ｍｇ／ｇ、約２ｍｇ／ｇ、約２．５ｍｇ／ｇ、約３ｍｇ／ｇ、約３．５ｍｇ／ｇ、約４ｍｇ／ｇ、約４．５ｍｇ／ｇ、約５ｍｇ／ｇ、約５．５ｍｇ／ｇ、約６ｍｇ／ｇ、約７．５ｍｇ／ｇ、約１０ｍｇ／ｇ、約１５ｍｇ／ｇ、約２０ｍｇ／ｇ、約２５ｍｇ／ｇ、約３０ｍｇ／ｇ、約４０ｍｇ／ｇ、約５０ｍｇ／ｇ、約７５ｍｇ／ｇ、約１００ｍｇ／ｇ、約１２５ｍｇ／ｇ、約１５０ｍｇ／ｇ、約１７５ｍｇ／ｇ、約２００ｍｇ／ｇ、２５０ｍｇ／ｇ、約３００ｍｇ／ｇ、約３５０ｍｇ／ｇ、約４００ｍｇ／ｇ、約４５０ｍｇ／ｇ、約５００ｍｇ／ｇ、約５５０ｍｇ／ｇ、約６００ｍｇ／ｇ、約６５０ｍｇ／ｇ、約７００ｍｇ／ｇ、約７５０ｍｇ／ｇ、約８００ｍｇ／ｇ、約８５０ｍｇ／ｇ、約９００ｍｇ／ｇ、約９５０ｍｇ／ｇを上回り、約９９９ｍｇ／ｇまでのガランギン濃度を有する。
【０１０４】
一実施形態では、プロポリスまたはプロポリス画分は、約１ｍｇ／ｇ、約１．５ｍｇ／ｇ、約２ｍｇ／ｇ、約２．５ｍｇ／ｇ、約３ｍｇ／ｇ、約３．５ｍｇ／ｇ、約４ｍｇ／ｇ、約４．５ｍｇ／ｇ、約５ｍｇ／ｇ、約５．５ｍｇ／ｇ、約６ｍｇ／ｇ、約７．５ｍｇ／ｇ、約１０ｍｇ／ｇ、約１５ｍｇ／ｇ、約２０ｍｇ／ｇ、約２５ｍｇ／ｇ、約３０ｍｇ／ｇ、約４０ｍｇ／ｇ、約５０ｍｇ／ｇ、約７５ｍｇ／ｇ、約１００ｍｇ／ｇ、約１２５ｍｇ／ｇ、約１５０ｍｇ／ｇ、約１７５ｍｇ／ｇ、約２００ｍｇ／ｇ、２５０ｍｇ／ｇ、約３００ｍｇ／ｇ、約３５０ｍｇ／ｇ、約４００ｍｇ／ｇ、約４５０ｍｇ／ｇ、約５００ｍｇ／ｇ、約５５０ｍｇ／ｇ、約６００ｍｇ／ｇ、約６５０ｍｇ／ｇ、約７００ｍｇ／ｇ、約７５０ｍｇ／ｇ、約８００ｍｇ／ｇ、約８５０ｍｇ／ｇ、約９００ｍｇ／ｇ、約９５０ｍｇ／ｇを上回り、約９９９ｍｇ／ｇまでのクリシン濃度を有する。
【０１０５】
一実施形態では、プロポリスまたはプロポリス画分は、約１ｍｇ／ｇ、約１．５ｍｇ／ｇ、約２ｍｇ／ｇ、約２．５ｍｇ／ｇ、約３ｍｇ／ｇ、約３．５ｍｇ／ｇ、約４ｍｇ／ｇ、約４．５ｍｇ／ｇ、約５ｍｇ／ｇ、約５．５ｍｇ／ｇ、約６ｍｇ／ｇ、約７．５ｍｇ／ｇ、約１０ｍｇ／ｇ、約１５ｍｇ／ｇ、約２０ｍｇ／ｇ、約２５ｍｇ／ｇ、約３０ｍｇ／ｇ、約４０ｍｇ／ｇ、約５０ｍｇ／ｇ、約７５ｍｇ／ｇ、約１００ｍｇ／ｇ、約１２５ｍｇ／ｇ、約１５０ｍｇ／ｇ、約１７５ｍｇ／ｇ、約２００ｍｇ／ｇ、２５０ｍｇ／ｇ、約３００ｍｇ／ｇ、約３５０ｍｇ／ｇ、約４００ｍｇ／ｇ、約４５０ｍｇ／ｇ、約５００ｍｇ／ｇ、約５５０ｍｇ／ｇ、約６００ｍｇ／ｇ、約６５０ｍｇ／ｇ、約７００ｍｇ／ｇ、約７５０ｍｇ／ｇ、約８００ｍｇ／ｇ、約８５０ｍｇ／ｇ、約９００ｍｇ／ｇ、約９５０ｍｇ／ｇを上回り、約９９９ｍｇ／ｇまでのカフェ酸ベンジル濃度を有する。
【０１０６】
一実施形態では、プロポリスまたはプロポリス画分は、約１ｍｇ／ｇ、約１．５ｍｇ／ｇ、約２ｍｇ／ｇ、約２．５ｍｇ／ｇ、約３ｍｇ／ｇ、約３．５ｍｇ／ｇ、約４ｍｇ／ｇ、約４．５ｍｇ／ｇ、約５ｍｇ／ｇ、約５．５ｍｇ／ｇ、約６ｍｇ／ｇ、約７．５ｍｇ／ｇ、約１０ｍｇ／ｇ、約１５ｍｇ／ｇ、約２０ｍｇ／ｇ、約２５ｍｇ／ｇ、約３０ｍｇ／ｇ、約４０ｍｇ／ｇ、約５０ｍｇ／ｇ、約７５ｍｇ／ｇ、約１００ｍｇ／ｇ、約１２５ｍｇ／ｇ、約１５０ｍｇ／ｇ、約１７５ｍｇ／ｇ、約２００ｍｇ／ｇ、２５０ｍｇ／ｇ、約３００ｍｇ／ｇ、約３５０ｍｇ／ｇ、約４００ｍｇ／ｇ、約４５０ｍｇ／ｇ、約５００ｍｇ／ｇ、約５５０ｍｇ／ｇ、約６００ｍｇ／ｇ、約６５０ｍｇ／ｇ、約７００ｍｇ／ｇ、約７５０ｍｇ／ｇ、約８００ｍｇ／ｇ、約８５０ｍｇ／ｇ、約９００ｍｇ／ｇ、約９５０ｍｇ／ｇを上回り、約９９９ｍｇ／ｇまでのカフェ酸濃度を有する。
【０１０７】
様々な実施形態では、本組成物は、少なくとも１種類の追加の治療剤を含むか、少なくとも１種類の追加の治療剤と別々にまたは同時にまたは連続的に投与され、好ましくは、少なくとも１種類の追加の治療剤は抗腫瘍剤であり、好ましくは、抗腫瘍剤は、抗腫瘍食品因子、化学療法剤、または免疫療法剤から選択される。
【０１０８】
様々な実施形態では、胃腸癌療法、治療剤、または抗腫瘍剤は、アポトーシスの誘導、例えば、１つもしくは複数の胃腸癌細胞または１つもしくは複数の腫瘍細胞におけるアポトーシスの誘導に有効である。
【０１０９】
一実施形態では、胃腸癌療法、治療剤、または抗腫瘍剤は、ブチラートまたはブチラート源である。
【０１１０】
一実施形態では、本組成物は消費財である。
【０１１１】
一実施形態では、本組成物は、食品、飲料、食品添加物、飲料用添加剤、栄養補助食品、栄養製品、医療食品、栄養補助食品、医薬品または医薬である。
【０１１２】
様々な実施形態では、本組成物は、経口、局所、または非経口投与用に製剤化され得る。
【０１１３】
一実施形態では、本組成物は、１つまたは複数の追加の抗胃腸癌剤を含む。
【０１１４】
一実施形態では、本組成物は医薬組成物である。別の実施形態では、本組成物は、栄養補助食品組成物である。
【０１１５】
様々な実施形態では、化学療法剤は、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ビンフルニン、ポドフィロトキシンを含むビンカアルカロイド類、ドセタキセル、ラロタキセル、オルタタキセル、パクリタキセル、およびテセタキセルを含むタキサン類、およびイクサベピロンなどのエポチロン類などの有糸分裂阻害剤；トポテカン、イリノテカン、カンプトテシン、ルビテカン、およびベロテカンなどのトポイソメラーゼＩ阻害剤、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、およびテニポシドを含むトポイソメラーゼＩＩ型阻害剤、アクラルビシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、アムルビシン、ピラルビシン、バルルビシン、およびゾルビシンなどのアントラサイクリン類、ならびにミトキサントロンおよびピクサントロンなどのアントラセンジオン類；アミノプテリン、メトトレキサート、ペメトレキセドなどのジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤、ラルチトレキセドおよびペメトレキセドなどのチミジル酸合成酵素阻害剤、ペントスタチンを含むアデノシンデアミナーゼ阻害剤、クラドリビン、クロファラビン、およびフルダラビンなどのハロゲン化またはリボヌクレオチド還元酵素阻害剤、チオグアニンおよびメルカプトプリンを含むチオプリン類、フルオロウラシル、カペシタビン、テガフール、カルモフール、およびフロクスウリジンを含むチミジル酸合成酵素阻害剤、シタラビンなどのＤＮＡポリメラーゼ阻害剤、ゲムシタビンなどのリボヌクレオチド還元酵素阻害剤、アザシチジンおよびデシタビンを含む低メチル化剤、ヒドロキシウレアなどのリボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤を含む代謝拮抗薬；メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、トロホスファミド、クロラムブシル、メルファラン、プレドニムスチン、ベンダムスチン、ウラムスチン、エストラムスチンを含むナイトロジェンマスタードなどのアルキル化剤、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、フォテムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、およびストレプトゾシンを含むニトロソ尿素類、ブスルファン、マンノスルファン、およびトレオスルファンを含むスルホン酸アルキル類、カルボコン、チオテパ、トリアジコン、およびトリエチレンメラミンを含むアジリジン類、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、四硝酸トリプラチン、サトラプラチンなどの白金剤を含むアルキル化様剤、プロカルバジンなどのヒドラジン類、ダカルバジン、テモゾロミド、アルトレタミン、およびミトブロニトールなどのトリアゼン類、アクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノマイシン、マイトマイシン、およびプリカマイシンなどのストレプトマイシン類を含む細胞周期非特異的な抗悪性腫瘍薬；アミノレブリン酸、アミノレブリン酸メチル、エファプロキシラル、ならびにポルフィマーナトリウム、タラポルフィン、テモポルフィン、およびベルテポルフィンなどのポルフィリン誘導体類を含む光増感剤；チピファルニブなどのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、アルボシジブおよびセリシクリブなどのサイクリン依存性キナーゼ阻害剤、ボルテゾミブなどのプロテアソーム阻害剤、アナグレリドなどのホスホジエステラーゼ阻害剤、チアゾフリンなどのＩＭＰデヒドロゲナーゼ阻害剤、マソプロコールなどのリポキシゲナーゼ阻害剤、ならびにオラパリブなどのＰＡＲＰ阻害剤を含む酵素阻害剤；アトラセンタンを含むエンドセリン受容体アンタゴニスト、ベキサロテンなどのレチノイドＸ受容体アンタゴニスト、およびテストラクトンなどの受容体アンタゴニスト類；アムサクリン、トラベクテジン、アリトレチノインおよびトレチノイン、三酸化ヒ素などのレチノイド類、アスパラギナーゼまたはペガスパルガーゼなどのアスパラギンデプレター（ａｓｐａｒａｇｉｎｅ ｄｅｐｌｅｔｅｒ）類、セレコキシブ、デメコルチン、エレスクロモール、エルサミトルシン、エトグルシド、およびロニダミンを含む他の化学療法剤を含む群から選択される。
【０１１６】
本明細書に開示される数値の範囲（例えば、１〜１０）への言及はまた、その範囲内の全ての有理数（例えば、１、１．１、２、３、３．９、４、５、６、６．５、７、８、９および１０）ならびにその範囲内の有理数の任意の範囲（例えば、２〜８、１．５〜５．５、３．１〜４．７）への言及を包含し、したがって、本明細書に明示的に開示される全ての範囲の全てのサブ範囲は、本明細書に明示的に開示されることが意図される。これらは、具体的に意図されるものの単なる例であり、列挙される最低値と最高値の間の全ての可能な数値の組み合わせが、同様に、本出願に明示的に記載されると考えられるべきである。
【０１１７】
特許明細書、他の外部文書、または他の情報源に対して言及している本明細書では、これは、一般的に、本発明の特徴を議論するための状況を提供する目的のものである。特に具体的に記載しない限り、そのような外部文書への言及は、そのような文書、またはそのような情報源が、任意の管轄区域で先行技術である、または当技術分野における共通の一般知識の一部を形成しているという承認として解釈されるべきではない。
【０１１８】
本発明はまた、本出願の明細書で言及または示される部分、要素および特徴の中、前記部分、要素もしくは特徴のうちの２以上の任意のまたは全ての組み合わせの中に個々にまたは集合的に存在すると広く言うことができ、本明細書で言及される特定の整数が本発明に関連する技術分野で公知の均等物を有する場合、このような公知の等価物は、個別に記載されるように本明細書に組み込まれるとみなされる。
[本発明1001]
式（Ｉ）
0006444984.tif 000011
式中、
ＺはＯまたはヒドロキシルであり；
Ｘは、水素、Ｃ1−6アルキルＣ（Ｏ）Ｏ、またはＣ1−6アルキルであり；
------は、ＺがＯである場合は単結合であり、またはＺがヒドロキシルである場合は存在せず、
0006444984.tif 000012
は、単結合または二重結合であり；かつ
Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立して、ヒドロキシルまたはＣ1−6アルコキシルであり；
ただし、Ｒ1およびＲ2の少なくとも一方はヒドロキシルであり；
ただし、Ｒ1およびＲ2は、ＸがＨであり、かつ
0006444984.tif 000013
が二重結合である場合は、共にヒドロキシルではない；
または式（ＩＩ）
0006444984.tif 000014
式中、
Ｒａは、水素、Ｃ2−6アルケニル、アリールＣ1−6アルキル、またはアリールＣ2−6アルケニルであり；
ｍは1または2であり；かつ
Ｒ10およびＲ20は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、またはＣ1−6アルコキシであり；
ただし、Ｒ10およびＲ20が共にヒドロキシルである場合は、Ｒａは、アリールＣ1−6アルキルまたはアリールＣ2−6アルケニルではない、
上記式（I）または（II）の化合物の治療有効量を含む医薬組成物。
[本発明1002]
前記式（Ｉ）の化合物が式（ＩＡ）
0006444984.tif 000015
の化合物である、本発明1001の組成物。
[本発明1003]
Ｘが水素、Ｃ1−6アルキルＣ（Ｏ）Ｏ、またはＣ2−5アルキルである、本発明1001または1002の組成物。
[本発明1004]
Ｘが水素またはＣ1−6アルキルＣ（Ｏ）Ｏである、本発明1001〜1003のいずれかの組成物。
[本発明1005]
前記Ｃ1−6アルキルＣ（Ｏ）ＯがＭｅＣ（Ｏ）Ｏである、本発明1001〜1004のいずれかの組成物。
[本発明1006]
Ｒ1およびＲ2がそれぞれ独立してヒドロキシルまたはＣ1−6アルコキシである、本発明1001〜1005のいずれかの組成物。
[本発明1007]
Ｒ1がヒドロキシルであり、かつＲ2がＣ1−6アルコキシであるか、Ｒ1がＣ1−6アルコキシであり、かつＲ2がヒドロキシルであるか、またはＲ1およびＲ2がそれぞれヒドロキシルである、本発明1001〜1006のいずれかの組成物。
[本発明1008]
前記Ｃ1−6アルコキシがＯＭｅである、本発明1001〜1007のいずれかの組成物。
[本発明1009]
ＺがＯであり、------が単結合であり、
0006444984.tif 000016
が単結合であり、ＸがＣ1−6アルキルＣ（Ｏ）Ｏであり、Ｒ1およびＲ2がそれぞれヒドロキシルである、本発明1001〜1008のいずれかの組成物。
[本発明1010]
ＺがＯであり、かつ------が単結合であるか、またはＺがヒドロキシルであり、かつ------が存在せず；
0006444984.tif 000017
が二重結合であり；Ｘが水素であり；Ｒ1がヒドロキシルであり、かつＲ2がＣ1−6アルコキシであるか、またはＲ1がＣ1−6アルコキシであり、かつＲ2がヒドロキシルである、本発明1001〜1008のいずれかの組成物。
[本発明1011]
Ｒ1がＣ1−6アルコキシであり、かつＲ2がヒドロキシルである、本発明1010の組成物。
[本発明1012]
ＺがＯであり、かつ------が単結合である、本発明1010または本発明1011の組成物。
[本発明1013]
Ｚがヒドロキシルであり、かつ------が存在しない、本発明1010または本発明1011の組成物。
[本発明1014]
前記式（ＩＩ）の化合物が、式（ＩＩＡ）
0006444984.tif 000018
の化合物である、本発明1001の組成物。
[本発明1015]
Ｒ10およびＲ20がそれぞれ水素であるか、Ｒ10およびＲ20がそれぞれヒドロキシルであるか、Ｒ10がヒドロキシルであり、かつＲ20がＣ1−6アルコキシであるか、またはＲ10がＣ1−6アルコキシであり、かつＲ20がヒドロキシルである、本発明1001または1014の組成物。
[本発明1016]
前記Ｃ1−6アルコキシがＯＭｅである、本発明1001、1014、および1015のいずれかの組成物。
[本発明1017]
Ｒａが水素、Ｃ2−6アルケニル、またはアリールＣ1−6アルキルである、本発明1001および本発明1014〜1016のいずれかの組成物。
[本発明1018]
前記Ｃ2−6アルケニルがプレニルまたはイソプレニルである、本発明1001および本発明1014〜1017のいずれかの組成物。
[本発明1019]
前記アリールＣ1−6アルキルがベンジルである、本発明1001および本発明1014〜1017のいずれかの組成物。
[本発明1020]
前記アリールＣ1−6アルケニルがシンナミルである、本発明1001および本発明1014〜1016のいずれかの組成物。
[本発明1021]
ｍが2である、本発明1001および本発明1014〜1020のいずれかの組成物。
[本発明1022]
Ｒａが水素であり、Ｒ10およびＲ20がそれぞれ水素である、本発明1021の組成物。
[本発明1023]
ｍが1である、本発明1001および本発明1014〜1020のいずれかの組成物。
[本発明1024]
ＲａがＣ2−6アルケニルまたはアリールＣ1−6アルキルであり；Ｒ10およびＲ20がそれぞれヒドロキシルであるか、Ｒ10がヒドロキシルであり、かつＲ20がＣ1−6アルコキシであるか、またはＲ10がＣ1−6アルコキシであり、かつＲ20がヒドロキシルである、本発明1001および本発明1014〜1019、および本発明1023のいずれかの組成物。
[本発明1025]
ＲａがＣ2−6アルケニルであり；Ｒ10およびＲ20がそれぞれヒドロキシルである、本発明1001および本発明1014〜1018、本発明1023および1024のいずれかの組成物。
[本発明1026]
ＲａがアリールＣ1−6アルキルであり；Ｒ10がヒドロキシルであり、かつＲ20がＣ1−6アルコキシであるか、またはＲ10がＣ1−6アルコキシであり、かつＲ20がヒドロキシルである、本発明1001および本発明1014〜1017、本発明1019、1023、および1024のいずれかの組成物。
[本発明1027]
ａ）1，1−ジメチルアリルカフェ酸、
ｂ）3−メチル−3−ブテニルカフェ酸、
ｃ）フェルラ酸ベンジル、
ｄ）イソフェルラ酸ベンジル、
ｅ）ピノバンクシン−3−アセテート、
ｆ）テクトクリシン、
ｇ）5−フェニルペンタ−2，4−ジエン酸、
ｈ）ピノストロビンカルコン
のうちの任意の1つもしくは複数から選択される少なくとも1種類の化合物の治療有効量を含む、本発明1001の医薬組成物。
[本発明1028]
対象における胃腸癌を治療または予防する方法であって、本発明1001〜1027のいずれかの組成物の有効量を、それを必要としている対象に投与することを含む、方法。
[本発明1029]
対象における胃腸の腫瘍形成を阻害するか、胃腸の腫瘍増殖を阻害するか、胃腸の腫瘍転移を阻害するか、または胃腸癌を治療または予防する方法であって、本発明1001〜1027のいずれかの組成物の有効量を、それを必要としている対象に別々に、同時にまたは連続して投与することを含む、方法。
[本発明1030]
対象における1つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞のアポトーシスを誘導する方法であって、本発明1001〜1027のいずれかの組成物の有効量を、それを必要としている対象に投与することを含む、方法。
[本発明1031]
胃腸癌療法に対する対象の応答性を増加させる方法であって、本発明1001〜1027のいずれかの組成物を対象に投与することを含む、方法。
[本発明1032]
胃腸癌療法に対する対象の胃腸腫瘍の感受性を増加させる方法であって、本発明1001の組成物を対象に投与することを含む、方法。
[本発明1033]
治療に耐性を示す1つまたは複数の胃腸癌細胞を再感作させる方法であって、1つまたは複数の胃腸癌細胞に、本発明1001〜1027のいずれかの組成物の有効量を投与することを含む、方法。
[本発明1034]
胃腸癌に罹患している対象における腫瘍細胞の胃腸癌療法に対する耐性を少なくとも部分的に逆転させる方法であって、本発明1001〜1027のいずれかの組成物を対象に投与することを含む、方法。
[本発明1035]
胃腸癌療法に対する胃腸癌患者の耐性を全体的にまたは部分的に逆転させる方法であって、本発明1001〜1027のいずれかの組成物を前記患者に投与するステップを含む、方法。
[本発明1036]
胃腸癌療法による治療に耐性を示すか、または耐性を示すかもしくは耐性になることが予想される、胃腸癌患者の1つまたは複数の腫瘍を、胃腸癌療法による治療に対して再感作させる方法であって、本発明1001〜1027のいずれかの組成物を前記患者に投与するステップを含む、方法。
[本発明1037]
前記対象がヒトである、本発明1028〜1036のいずれかの方法。
[本発明1038]
対象における胃腸の腫瘍形成を阻害するか、胃腸の腫瘍増殖を阻害するか、胃腸の腫瘍転移を阻害するか、または胃腸癌を治療もしくは予防すること；対象における1つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞のアポトーシスを誘導すること；胃腸癌療法に対する対象の応答性を増加させること；胃腸癌療法に対する対象における胃腸腫瘍の感受性を増加させること；治療に耐性を示す対象における1つまたは複数の胃腸癌細胞を再感作させること；胃腸癌に罹患している対象における腫瘍細胞の胃腸癌療法に対する耐性を少なくとも部分的に逆転させること；胃腸癌療法に対する胃腸癌患者の耐性を全体的にまたは部分的に逆転させること；あるいは、胃腸癌療法による治療に耐性を示すか、または耐性を示すかもしくは耐性になることが予想される胃腸癌患者の1つまたは複数の腫瘍を、胃腸癌療法による治療に対して再感作させること、に使用するための組成物の製造における、下記式（I）または（II）の化合物の使用：
式（Ｉ）
0006444984.tif 000019
式中、
ＺはＯまたはヒドロキシルであり；
Ｘは、水素、Ｃ1−6アルキルＣ（Ｏ）Ｏ、またはＣ1−6アルキルであり；
------は、ＺがＯである場合は単結合であり、Ｚがヒドロキシルである場合は存在せず；
0006444984.tif 000020
は、単結合または二重結合であり；かつ
Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立して、ヒドロキシルまたはＣ1−6アルコキシルであり；
ただし、Ｒ1およびＲ2の少なくとも一方はヒドロキシルであり；
ただし、Ｒ1およびＲ2は、ＸがＨであり、かつ
0006444984.tif 000021
が二重結合である場合は、共にヒドロキシルではない；
あるいは式（ＩＩ）
0006444984.tif 000022
式中、
Ｒａは、水素、Ｃ2−6アルケニル、アリールＣ1−6アルキル、またはアリールＣ2−6アルケニルであり；
ｍは1または2であり；かつ、
Ｒ10およびＲ20は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、またはＣ1−6アルコキシであり；
ただし、Ｒ10およびＲ20が共にヒドロキシルである場合は、Ｒａは、アリールＣ1−6アルキルまたはアリールＣ2−6アルケニルではない。
[本発明1039]
ヒト対象における胃腸の腫瘍形成を阻害するか、胃腸の腫瘍増殖を阻害するか、胃腸の腫瘍転移を阻害するか、または胃腸癌を治療もしくは予防すること；ヒト対象における1つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞のアポトーシスを誘導すること；胃腸癌療法に対するヒト対象の応答性を増加させること；胃腸癌療法に対するヒト対象の胃腸腫瘍の感受性を増加させること；治療に耐性を示すヒト対象における1つまたは複数の胃腸癌細胞を再感作させること；胃腸癌に罹患しているヒト対象における腫瘍細胞の胃腸癌療法に対する耐性を少なくとも部分的に逆転させること；胃腸癌療法に対する胃腸癌ヒト患者の耐性を全体的にまたは部分的に逆転させること；あるいは、胃腸癌療法による治療に耐性を示すか、または耐性を示すかもしくは耐性になることが予想される胃腸癌ヒト患者の1つまたは複数の腫瘍を、胃腸癌療法による治療に対して再感作させること、に使用するための組成物の製造における、下記式（I）または（II）の化合物の使用：
式（Ｉ）
0006444984.tif 000023
式中、
ＺはＯまたはヒドロキシルであり；
Ｘは、水素、Ｃ1−6アルキルＣ（Ｏ）Ｏ、またはＣ1−6アルキルであり；
------は、ＺがＯである場合は単結合であり、Ｚがヒドロキシルである場合は存在せず；
0006444984.tif 000024
は、単結合または二重結合であり；かつ、
Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立して、ヒドロキシルまたはＣ1−6アルコキシルであり；
ただし、Ｒ1およびＲ2の少なくとも一方はヒドロキシルであり；
ただし、Ｒ1およびＲ2は、ＸがＨであり、かつ
0006444984.tif 000025
が二重結合である場合は、共にヒドロキシルではない；
あるいは式（ＩＩ）
0006444984.tif 000026
式中、
Ｒａは、水素、Ｃ2−6アルケニル、アリールＣ1−6アルキル、またはアリールＣ2−6アルケニルであり；
ｍは1または2であり；かつ、
Ｒ10およびＲ20は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、またはＣ1−6アルコキシである。
[本発明1040]
前記化合物が、本発明1002〜1027のいずれかに定義されるとおりの化合物である、本発明1038または本発明1039の使用。
[本発明1041]
対象における胃腸の腫瘍形成を阻害するか、胃腸の腫瘍増殖を阻害するか、胃腸の腫瘍転移を阻害するか、または胃腸癌を治療もしくは予防すること；対象における1つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞のアポトーシスを誘導すること；胃腸癌療法に対する対象の応答性を増加させること；胃腸癌療法に対する対象の胃腸腫瘍の感受性を増加させること；治療に耐性を示す対象における1つまたは複数の胃腸癌細胞を再感作させること；胃腸癌に罹患している対象における腫瘍細胞の胃腸癌療法に対する耐性を少なくとも部分的に逆転させること；胃腸癌療法に対する胃腸癌患者の耐性を全体的にまたは部分的に逆転させること；あるいは、胃腸癌療法による治療に耐性を示すか、または耐性を示すかもしくは耐性になることが予想される胃腸癌患者の1つまたは複数の腫瘍を、胃腸癌療法による治療に対して再感作させること、に使用するための組成物の製造における、必要に応じて少なくとも1つの追加の治療剤との、
ａ）1，1−ジメチルアリルカフェ酸、
ｂ）3−メチル−3−ブテニルカフェ酸、
ｃ）フェルラ酸ベンジル、
ｄ）イソフェルラ酸ベンジル、
ｅ）ピノバンクシン−3−アセテート、
ｆ）テクトクリシン、
ｇ）5−フェニルペンタ−2，4−ジエン酸、および
ｈ）ピノストロビンカルコン
からなる群から選択される任意の1つまたは複数から選択される少なくとも1種類の化合物の使用。
[本発明1042]
ヒト対象における胃腸の腫瘍形成を阻害するか、胃腸の腫瘍増殖を阻害するか、胃腸の腫瘍転移を阻害するか、または胃腸癌を治療もしくは予防すること；ヒト対象における1つまたは複数の腫瘍性胃腸細胞のアポトーシスを誘導すること；胃腸癌療法に対するヒト対象の応答性を増加させること；胃腸癌療法に対するヒト対象の胃腸腫瘍の感受性を増加させること；治療に耐性を示すヒト対象における1つまたは複数の胃腸癌細胞を再感作させること；胃腸癌に罹患しているヒト対象における腫瘍細胞の胃腸癌療法に対する耐性を少なくとも部分的に逆転させること；胃腸癌療法に対する胃腸癌ヒト患者の耐性を全体的にまたは部分的に逆転させること；あるいは、胃腸癌療法による治療に耐性を示すか、または耐性を示すかもしくは耐性になることが予想される胃腸癌ヒト患者の1つまたは複数の腫瘍を、胃腸癌療法による治療に対して再感作させること、に使用するための、本発明1001〜1027のいずれかの組成物。
[本発明1043]
胃腸癌の治療または予防において使用するための、本発明1042の組成物。
【発明を実施するための形態】
【０１１９】
詳細な説明
本発明は、５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、１，１−ジメチルアリルカフェ酸、ピノバンクシン−３−アセテート、テクトクリシン、ピノストロビンカルコン、フェルラ酸ベンジル、およびイソフェルラ酸ベンジルのうちの任意の１つまたは複数から選択される化合物を含む組成物の発見に基づく。本発明の薬学的組成物、例えば、本発明の抗癌組成物は、プロポリスまたはプロポリスが含まれる物質の活性および物理化学的特性を向上させる。
【０１２０】
したがって、抗胃腸癌組成物が哺乳類対象への投与に適するように製剤化される、例えば、それらが人体に安全な物質からなるという条件で、抗胃腸癌組成物は、抗胃腸癌医薬組成物および医薬品だけでなく、飲料、および食品などの栄養補助食品組成物、消費財を製造するために使用できる。
【０１２１】
さらに、本発明の組成物の実施形態の抗胃腸癌活性が持続期間維持されるので、組成物の投与の投薬量もしくは投与頻度を低減できるか、またはより高い活性が提供されるか、またはその両方が可能になる。
【０１２２】
本発明の（本明細書において互換的に使用される）語句「抗胃腸癌組成物」または「抗胃腸癌活性を有する組成物」は、対象への投与に適する任意の種類の組成物を企図する。例としては、プロポリスから誘導される化合物を含有する抗結腸直腸癌組成物、抗胃癌組成物または抗咽喉癌組成物が挙げられる。
【０１２３】
用語「および／または」は、「および」または「または」を意味し得る。
【０１２４】
用語「癌」および「癌性」は、典型的には、異常なまたは無秩序な細胞増殖、細胞生存、細胞運動、腫瘍性、および／または発癌性を特徴とする、哺乳類における生理学的状態を指す。癌および癌の病理は、例えば、転移、隣接細胞の正常な機能の妨害、異常なレベルでのサイトカインまたは他の分泌産物の放出、炎症もしくは免疫応答の抑制または悪化、新生物、前悪性、悪性腫瘍、リンパ節などの周囲もしくは離れた組織または臓器の浸潤などと関連し得る。具体的には、上皮性腫瘍、非上皮性腫瘍、癌腫、例えば、上皮内癌、ならびに侵襲性結腸直腸癌を含み得る結腸直腸癌および前癌状態が含まれる。また、上皮腫瘍、腺癌、胃リンパ腫、カルチノイド腫瘍、間質腫瘍を含み得る胃癌および前癌状態も含まれる。また、上皮腫瘍、扁平上皮癌、腺癌を含み得る咽喉癌および前癌の症状も含まれる。癌は、例えば、上皮内癌、および浸潤癌であり得る。
【０１２５】
本明細書で使用する用語「含む」は、「から少なくとも部分的になる」を意味する。その用語を含む本明細書中の文を解釈するとき、それぞれの文の中でその用語によって前置きされる特徴は全て存在する必要があるが、他の特徴も存在し得る。「含む」および「含まれる」などの関連用語も同様に解釈されるべきである。
【０１２６】
「有効量」は、治療効果を与えるのに必要な量である。（体表面の平方メートル当たりのミリグラムに基づく）動物およびヒトに対する投与量の相互関係は、Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈら（１９６６）に記載されている。体表面積は、対象の身長および体重からほぼ決定できる。例えば、科学テーブル、ガイギー医薬品（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｔａｂｌｅｓ，Ｇｅｉｇｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ニューヨーク州アーズリー、１９７０年、５３７を参照されたい。有効な用量はまた、当業者よって認識されるように、投与経路、および賦形剤の使用などに依存して変化する。
【０１２７】
本明細書で使用する、本発明での使用に適するプロポリスの「抽出物」または「画分」は、それらが抗胃腸癌活性を示すように、本明細書に記載の化合物のうちの１つまたは複数が濃縮されている。そのような機能性抽出または機能性画分は、天然プロポリスを上回るまたは下回る活性を有し得る。一例では、機能性抽出物または機能性画分が有する天然プロポリスの生物学的活性のうちの１つまたは複数は、天然プロポリスに見られるレベルを上回るまたは下回るレベルで機能性抽出物または機能性画分中に存在し得る。別の例では、機能性抽出物または機能性画分が有する天然プロポリスの生物学的活性のそれぞれは、天然プロポリスに見られるレベルを上回るまたは下回るレベルで機能性抽出物または機能性画分中に存在する。さらに別の例では、天然プロポリスの生物学的活性のうちの１つまたは複数は、天然プロポリスに見られるレベルを上回るレベルで維持されるかまたは存在するが、天然プロポリスの１つもしくは複数の他の生物学的活性は存在しないか、または天然プロポリスに見られるレベルを下回るレベルで存在する機能性抽出物または機能性画分を提供することが望ましい場合がある。そのような機能性抽出物の例としては、本明細書の実施例に記載の抗胃腸癌チンキ剤が挙げられる。
【０１２８】
本明細書に記載の化合物によって誘発される１つまたは複数の生物学的効果を決定するための方法およびアッセイは、当該分野で周知であり、例が本明細書に記載されており、このような方法およびアッセイを用いて、プロポリスの１つもしくは複数の機能性抽出物または１つもしくは複数の機能性画分を同定または検証できる。例えば、本明細書の実施例に記載のものなどの、細胞内の１つまたは複数の発癌性形質を増大させるプロポリスの能力の測定は、プロポリスの１つもしくは複数の機能性抽出物または１つもしくは複数の機能性画分を同定するのに適する。
【０１２９】
本明細書で使用する「プロポリス」は、本明細書で説明する化合物の１つまたは複数を提供することが可能な任意の植物源からハチにより産生されるプロポリスを企図する。一実施形態では、プロポリスは、「ヨーロッパ」プロポリスである。「ヨーロッパ」プロポリスは、「ポプラ」プロポリスなどの別の名前でも知られている。例えば、プロポリスは、ポプラ、白樺、カラマツもしくは柳の１種または複数種の芽および葉の滲出物から得られる。プロポリスは、植物源に基づいて、７つの主要クラスに分類されている（Ｓｆｏｒｃｉｎ ａｎｄ Ｂａｎｋｏｖａ，２０１１．Ｐｒｏｐｏｌｉｓ：ｉｓ ｔｈｅｒｅ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｎｅｗ ｄｒｕｇｓ？ Ｊ． Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１３３：２５３−２６０）。これらのクラスは、ヨーロッパ、北米、南米南部、ニュージーランド由来の「ポプラ」、アルテピリンＣを含む「ブラジルグリーン」、ロシア由来の「バーチ」、キューバ、ブラジル、メキシコ由来の「赤プロポリス」、ギリシャ、シチリア島、クレタ島、マルタ由来、および針葉樹から供給される「地中海」、キューバおよびベネズエラ由来の「クルシア」、ならびに「プロポリン」を含む、沖縄、台湾、インドネシア由来の「太平洋」である。
【０１３０】
様々な国から報告されたプロポリス中の化合物の代表的な化合物および濃度を以下の表１に示す。これらの化合物は、例えば、プロポリスの供給源の特定、または本発明での使用に適するプロポリスの特徴付けおよび識別に有用である。
【０１３１】
（表１）様々な地域からのエタノール可溶性プロポリス抽出物の組成データ（Ｋｕｍａｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４．  Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｐｒｏｐｏｌｉｓ  ｏｆ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ  ｒｅｇｉｏｎｓ，  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ８４：３２９−３３９より）
0006444984.tif 000027
全ての値はｍｇ／ｇプロポリス樹脂である。
１シンナミリデン酢酸（またはフェニルペンタジエン酸）。Ａｒｇ＝アルゼンチン、Ａｕｓ＝オーストラリア、Ｂｒａ＝ブラジルグリーン？プロポリス、Ｂｕｌ＝ブルガリア、Ｃｈｉｌ＝チリ、Ｃｈｉ＝中国（ａ＝河北省、ｂ＝湖北省、ｃ＝浙江省）、Ｈｕｎ＝ハンガリー、ＮＺ＝ニュージーランド、ＳＡ＝南アフリカ、Ｕｋｒ＝ウクライナ、Ｕｒｕ＝ウルグアイ、Ｕｚｂ＝ウズベキスタン、ＭＨＮＺ  １＝ニュージーランドプロポリス（マヌカヘルス・ニュージーランド社）、ＭＨＮＺ  ２＝ニュージーランドプロポリス（マヌカヘルス・ニュージーランド社）
【０１３２】
本発明の組成物または本発明の組成物の成分などの抗胃腸癌活性を有する薬剤に関して使用される場合、語句「抗胃腸癌活性を保持する」ならびにその文法的等価物およびその派生体は、薬剤が依然として有用な抗胃腸癌活性を有することを意味すると意図される。好ましくは、保持される活性は、元の活性の少なくとも約３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９または１００％であり、有用な範囲は、これらの値のいずれかの間（例えば、約３５〜約１００％、約５０〜約１００％、約６０〜約１００％、約７０〜約１００％、約８０〜約１００％、および約９０〜約１００％）から選択され得る。本発明の典型的な組成物は、理想的には、本明細書で企図される方法において利用されるまで、これらが含む抗胃腸癌剤（複数可）の有用な抗胃腸癌活性の維持を支援することができ、抗胃腸癌活性を保持すると言うことができる。
【０１３３】
本発明の組成物または本発明の組成物の成分に関して使用される場合、語句「抗胃腸癌活性を増強する」ならびにその文法的等価物およびその派生体は、組成物中に存在する場合に、抗胃腸癌剤の等しい量または濃度が、（単離された薬剤などの）本組成物を含まない薬剤と比べて抗胃腸癌活性を増加させたことを意味すると意図される。好ましくは、増強された活性は、元の活性の少なくとも約１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００％、またはそれ以上であり、有用な範囲はこれらの値のいずれかの間（例えば、約１０５〜約１５０％、約１２０〜約１８０％、約１４０〜約２００％、約１６０〜約２００％、約１８０〜約２００％、および約１９０〜約２００％）から選択され得る。特定の実施形態では、本発明の組成物は、増強された抗胃腸癌活性を示す、すなわち、プロポリス単独の抗胃腸癌活性の少なくとも約１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００％、またはそれ以上を示し得る。同様に、本発明の好ましい組成物は、増強された抗胃腸癌活性の維持を支援することが可能であり、理想的には本明細書で企図される方法を用いて利用されるまで、増強された抗胃腸癌活性を保持すると言うことができる。（増強された活性の維持を含む）増強された活性は、いかなる理論に束縛されることなく、本発明の組成物の様々な成分間の相乗作用に起因すると考えられている。
【０１３４】
本発明の組成物に関連して使用される場合、本明細書で使用する用語「安定」は、好ましくは２時間を超える、３時間を超える、６時間を超える、９時間を超える、１２時間を超える、１５時間を超える、１８時間を超える、２０時間を超える、１日を超える、好ましくは約２日、約３日、約４日、好ましくは約５日、より好ましくは約６日、好ましく１週、２週、３週、一ヶ月、またはそれ以上の間、抗胃腸癌活性を支持することができる組成物を意味する。
【０１３５】
用語「経口投与」には、経口、口腔内、腸内および胃内投与が含まれる。
【０１３６】
用語「非経口投与」には、（任意の真皮、表皮または粘膜表面への投与を含む）局所、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内および（腫瘍への任意の直接投与を含む）腫瘍内投与が含まれるが、これらに限定されない。
【０１３７】
用語「薬学的に許容される担体」は、本発明の組成物の成分として、対象に投与することができる賦形剤、希釈剤または補助剤を含むがこれらに限定されない担体を指すと意図される。好ましい担体は組成物の活性を低下させず、有効量の５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、１，１−ジメチルアリルカフェ酸、ピノバンクシン−３−アセテート、テクトクリシン、ピノストロビンカルコン、フェルラ酸ベンジル、およびイソフェルラ酸ベンジルのうちの任意の１つまたは複数を送達するのに十分な用量で投与した場合に毒性がないか、または投与される場合、別の抗胃腸癌剤の活性を低下させない。
【０１３８】
名詞の後にある用語「（複数可）」は、単数形もしくは複数形、またはその両方を企図する。
【０１３９】
用語「対象」は、動物、好ましくは哺乳類、より好ましくは哺乳類のコンパニオン動物またはヒトを指すと意図される。好ましいコンパニオン動物には、猫、犬および馬が含まれる。他の哺乳類対象には、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、シカ、もしくはニワトリを含む農業用動物、またはサル、ラット、もしくはマウスを含む実験動物が含まれる。
【０１４０】
用語「治療」およびその派生体は、それらの最も広い可能な状況で解釈されるべきである。この用語は、対象が完全に回復するまで治療されることを意味すると解釈されるべきではない。したがって、「治療」には、実質的に静的なレベルでの対象の疾患の進行もしくは症状の維持、対象の回復率の増加、特定の病状の徴候もしくは重症度の改善、および／または発症の予防、あるいは、患者の生活の質の延長が広く含まれる。用語「治療」には、敏感な個体のための健康状態の維持および病気予防のスタミナの構築も広く含まれる。
【０１４１】
本発明の例示的な用途
本発明の方法および組成物は、結腸直腸癌、結腸直腸癌細胞と関連する腫瘍性疾患、および結腸直腸癌の症状の治療または予防、結腸直腸癌の治療、ならびに関連する障害に使用できる。
【０１４２】
結腸直腸癌は、大腸、特に、結腸および直腸に影響を与える新生物の病状であり、したがって、一般的に、結腸癌または大腸癌とも呼ばれる。危険因子には、年齢、食事、特に、脂肪、アルコールまたは赤身の肉の大量摂取、男性であること、肥満、喫煙および運動不足が含まれる。
【０１４３】
結腸直腸癌は、胃腸管の結腸または直腸の上皮細胞に由来し、Ｗｎｔ−ＡＰＣ−β−カテニンシグナル伝達経路の欠陥と最も一般的に関連している。可能な場合には、好ましい治療は、根治的な完全な外科的切除である。転移が発生し、癌がリンパ節に入った場合に、化学療法剤のフルオロウラシルまたはカペシタビンは、平均余命を増加させることが報告されている。使用に考慮される他の化学療法薬には、フルオロウラシル、カペシタビン、ＵＦＴ、ロイコボリン、イリノテカン、またはオキサリプラチン、およびこれらの薬剤の組合せが含まれる。しかし、癌がより蔓延している場合、または手術ができない場合には、治療は、一般的に緩和ケアおよび平均余命の延長に焦点が当てられる。放射線療法と化学療法の組み合わせが直腸癌に対して考慮され得るが、腸は放射線感受性であるため、一般的に大腸癌に放射線療法は使用しない。
【０１４４】
本発明の方法および組成物は、胃癌、胃癌細胞と関連する腫瘍性疾患、および胃癌の症状の治療または予防、胃癌治療、ならびに関連する障害に使用できる。
【０１４５】
胃癌は、胃の全ての部分から生じる新生物の病状である。ほとんどの患者が進行した疾患を呈するため、予後は不良である。危険因子には、年齢、食事、特に、薫製食品、塩魚、保存肉および漬物の大量摂取、喫煙、男性であること、自己免疫性萎縮性胃炎または腸上皮化生の病歴が含まれる。
【０１４６】
癌の約９０％が胃粘膜の腺上皮に由来する腺癌である。他の種類には、リンパ腫（マルトーマ（ＭＡＬＴｏｍａｓ）またはＭＡＬＴリンパ腫）、およびカルチノイドならびに間質腫瘍が含まれる。可能な場合、好ましい治療は、胃の全部または一部および周囲リンパ節の完全な外科的切除である。胃癌は化学療法剤に特に敏感ではないが、フルオロウラシル、カペシタビン、ＢＣＮＵ（カルムスチン）、メチルＣＣＮＵ（セムスチン）、およびドキソルビシン（アドリアマイシン）、マイトマイシンＣ、シスプラチンおよびタキソテールを含む化学療法剤が緩和ケア計画に使用されている。放射線療法および化学療法の組み合わせは、時々、胃癌の治療に使用される。
【０１４７】
本発明の方法および組成物は、咽喉癌、咽喉癌細胞と関連する腫瘍性疾患、および咽喉癌の症状の治療または予防、咽喉癌治療、ならびに関連する障害に使用できる。
【０１４８】
食道癌、咽頭癌、または喉頭癌とも呼ばれる咽喉癌は、咽頭、鼻咽頭、中咽頭、下咽頭、喉頭（ボイスボックス）または扁桃の組織で発症する腫瘍を包含する。咽喉癌の約９０％は、これらの領域の粘膜内層（上皮）から生じる扁平上皮癌である。危険因子には、食事、特に、アルコールの大量摂取、喫煙、無煙たばこの使用、ビンロウ実咀嚼、ニッケル製錬、織物繊維および木工の職業被ばくを含む環境発癌物質への暴露が含まれる。
【０１４９】
最も一般的な治療法は、腫瘍および放射線治療の外科的切除である。化学療法剤は、手術および／または放射線の組み合わせで使用できる。薬剤には、パクリタキセル、カルボプラチン、セツキシマブ、タキソテールおよびドセタキセルが含まれる。
【０１５０】
堅牢な消化管の健康状態は、腸の快適さ、感染症に対する耐性および慢性胃腸疾患の予防と関連している。
【０１５１】
これには、不良な腸の健康状態、低免疫および消化管の炎症に関連する病状の治療または予防が含まれる。例えば、本発明の方法および組成物は、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、周囲の腸疾患、感染性下痢の治療または予防、ならびに内臓痛の除去または軽減に有用である。
【０１５２】
本発明の組成物
本発明の例示的な抗胃腸癌組成物には、医薬組成物が含まれる。腸の健康状態の維持に使用するための本発明の例示的な組成物には、消費者製品などと共に、医薬組成物および栄養補助食品組成物が含まれる。
【０１５３】
一般に知られている他の抗胃腸癌物質は、組成物が置かれるべき用途に応じて、本発明の抗胃腸癌組成物と組み合わせることができる。
【０１５４】
対象への投与に適する組成物は、食品、飲料、食品添加物、飲料添加物、栄養補助食品、栄養製品、医療用食品、栄養補助食品、医療補給品、医療機器、薬物または医薬品として製剤化され得る。適切な製剤は、当技術分野の当業者が本明細書の教示により調製できる。
【０１５５】
一実施形態では、本発明は、食品、飲料、食品添加物、飲料添加物、栄養補助食品、栄養製品、医療用食品、栄養補助食品、医療補給品、医療機器、薬物または医薬品の製造における、必要に応じて、少なくとも１種類の抗胃腸癌剤と共に、本明細書に記載の化合物のうちの１種類もしくは複数種類の使用、または本明細書に記載の化合物のうちの１種類もしくは複数種類が濃縮された１つもしくは複数のプロポリス画分または１つもしくは複数のプロポリス抽出物の使用に関する。一実施形態では、本組成物は経口投与用に製剤化される。別の実施形態では、本組成物は、局所投与を含む非経口投与用に製剤化される。特定の実施形態では、本組成物は、アポトーシスを誘導するため、胃腸癌の治療もしくは予防、または上記のような１つもしくは複数の他の用途のためのものである。
【０１５６】
一実施形態では、本組成物は、粉末、錠剤、カプレット、丸剤、硬カプセル剤もしくは軟カプセル剤またはトローチ剤の形態である。
【０１５７】
一実施形態では、本組成物は、小袋、分注可能な粉末、顆粒、懸濁液、エリキシル剤、液体、飲料の形態、または例えば、水または果汁を含む食品または飲料に添加することができる任意の他の形態である。一実施形態では、本組成物は、経腸製品、固形経腸製品または液状経腸製品である。
【０１５８】
一実施形態では、本組成物は、貯蔵中または投与後の組成物の劣化を予防または低減させる（抗酸化剤などの）１つまたは複数の成分をさらに含む。
【０１５９】
一実施形態では、本明細書で有用な組成物は、１つまたは複数のシクロデキストリンを運ぶことができる任意の食用消費者製品を含む。本組成物がタンパク質性因子のような少なくとも１種類の追加の抗胃腸癌剤を含む場合、食用消費者製品は、タンパク質を運搬することができるものである。
【０１６０】
様々な実施形態では、本組成物はシクロデキストリンを含む。一実施形態では、シクロデキストリンはγ−シクロデキストリンであるか、またはシクロデキストリンは、γ−シクロデキストリンを含むシクロデキストリンの組み合わせとして存在する。
【０１６１】
一実施形態では、シクロデキストリンは、化学的に修飾されたシクロデキストリンである。
【０１６２】
適切な食用消費者製品の例としては、焼き菓子、粉末、液体、菓子製品、再構成されたフルーツの製品、スナックバー、食品バードミューズリーバー、スプレッド、ソース、ディップ、アイスクリーム、ヨーグルトおよびチーズを含む酪農製品、酪農ベースおよび非酪農ベースの飲料を含む（ミルクセーキ、およびヨーグルトドリンクを含む乳飲料などの）飲料、ミルクパウダー、酪農ベースおよび非酪農ベースのスポーツ用補助食品もしくは栄養補助食品を含むスポーツ用補助食品または栄養補助食品、タンパク質スプリンクルなどの食品添加物および日常のサプリメント錠剤を含む栄養補助製品が挙げられる。この実施形態の範囲内で、本明細書で有用な組成物はまた、粉末または液体の形態の特殊調製粉乳であってもよい。本明細書で有用な好適な栄養補助食品組成物は、同様の形態で提供され得る。特に、乳製品または１種類もしくは複数種類の乳製品または乳タンパク質などの乳成分、乳漿タンパク質、初乳、乳脂肪、または乳製品または１種類もしくは複数種類の乳製品の画分または乳脂肪画分、乳タンパク質画分、乳漿タンパク質画分、もしくは初乳画分などの乳成分を追加的に含む組成物が企図される。
【０１６３】
本明細書で有用な組成物は、カルシウム、亜鉛、マグネシウム、セレン、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ２、複合糖質、ヤシ、オリーブ、大豆、キャノーラ、トウモロコシ、ヒマワリ、ベニバナ、ピーナッツ、グレープシード、ゴマ、ナッツ、アーモンド、カシューナッツ、ヘーゼルナッツ、マカダミア、ペカン、ピスタチオ、およびクルミを含む食用または調理用油、ならびにアサイ、アマランス、アプリコット、アルガン、アーティチョーク、アボカド、ババス、ベン、ブラックカラントシード、ボリジシード、ボルネオタローナッツ、ヒョウタン、水牛ひょうたん、イナゴマメポッド（アルガロバ）、コフネヤシ、コリアンダーシード、月見草、偽亜麻、麻、カポックシード、ラレマンチア、メドウフォームシード、マスタード、オクラシード（ハイビスカスシード）、シソシード、ペキー、松の実、ポピーシード、プルーンカーネル、パンプキンシード、キノア、ラムティル、米ぬか、茶（ツバキ）、アザミ、ウォーターメロンシード、または小麦胚芽油を含む他の食料品、またはそれらの組み合わせなどの他の因子をさらに含み得る。
【０１６４】
本明細書で有用な組成物は、経口投与または（局所、皮下、筋肉内および静脈内を含む）非経口投与を含むが、これらに限定されない任意の選択された経路によって対象への投与を可能にするように製剤化できる。例えば、本発明の医薬組成物が腸の健康状態を維持するために投与されている場合は、対象への投与経路は、典型的には組成物が投与されている目的について考慮され、投与経路は、典型的には、この障害の性質を考慮して選択されると当業者なら理解するであろう。
【０１６５】
一般に、経口投与については、規定食（例えば、食品、食品添加物または食品サプリメント）、栄養補助食品または本明細書で有用な医薬組成物は、周知の製剤技術に従って、当業者が製剤化できる。
【０１６６】
したがって、本発明に係る有用な医薬組成物は、意図された投与経路および標準的な薬務に関連して選択される（賦形剤、希釈剤、補助剤、およびそれらの組み合わせを含む）適切な薬学的に許容される担体と共に製剤化され得る。例えば、レミントンの製薬科学、第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ（編）、マック・パブリッシング社、１９８０を参照されたい。
【０１６７】
好ましい投与経路は経口であるが、任意の投与様式は、本発明の任意の組成物に適切であり、異なる薬剤のための異なる経路を含む複数の経路による投与を含み得ることが理解されるべきである。したがって、本発明の任意の組成物の吸入（鼻または口腔吸入）、ならびに膣投与および直腸投与も企図される。本発明の任意の組成物の髄内、硬膜外、関節内、および胸膜内投与も企図される。第２の投与経路による１種類もしくは複数種類の他の抗胃腸癌剤を含む１種類または複数種類の他の薬剤の別々の投与、同時投与または連続投与を伴って、必要に応じて少なくとも１種類の追加の抗胃腸癌因子とともに、本発明の組成物を第１の投与経路により投与することも企図される。例えば、本発明の組成物の経口投与は、少なくとも１種類の追加の抗胃腸癌剤の局所投与を伴う。
【０１６８】
本発明の組成物はまた、剤形として製剤化できる。本明細書で有用な剤形は、粉末、液体、錠剤またはカプセル剤として経口投与できる。適切な剤形は、必要に応じて、乳化剤、抗酸化剤、香味剤または着色剤を含む追加の薬剤を含むか、または腸溶性コーティングを有し得る。適切な腸溶性コーティングが知られている。有効成分を囲む腸溶性コーティングは、胃の中の有効成分の放出を防止するが、剤形が胃を出た後の放出を可能にする。本明細書で有用な剤形は、有効成分の即時放出、遅延放出、改変放出、持続放出、パルス放出または制御放出に適合させることができる。必要に応じて、適切な製剤は、乳化剤、酸化防止剤、香味剤または着色剤を含む追加の薬剤を含み得る。
【０１６９】
カプセルは、ゼラチンまたはセルロースなどの任意の標準的な薬学的に許容される材料を含有できる。錠剤は、固体担体および潤滑剤と有効成分の混合物を圧縮することにより、従来の手順にしたがって製剤化できる。固体担体の例としては、デンプンおよび糖ベントナイトが挙げられる。有効成分はまた、ハードシェル錠剤または結合剤、例えば、ラクトースまたはマンニトールを含有するカプセル、従来の充填剤、および錠剤の形態で投与できる。医薬組成物はまた、非経口経路を介して投与できる。代表的な非経口剤形は、活性剤の水溶液、等張食塩水もしくは５％グルコース、または他の周知の薬学的に許容される賦形剤を含む。当業者に周知の可溶化剤は、抗胃腸癌剤の送達のための薬学的賦形剤として利用できる。
【０１７０】
注射用剤形は、液体溶液または懸濁液として製剤化できる。注射前に液体中の溶液または懸濁液にするのに適する固体形態もまた調製され得る。剤形はまた乳化され得る。プロポリスに由来する１種類または複数種類の化合物、および存在する場合、少なくとも１種類の追加の抗胃腸癌因子は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、またはエタノールなどの担体、およびそれらの組み合わせと混合され得る。
【０１７１】
徐放性製剤は、企図される化合物の１種類または複数種類を組み込んで調製され得る。徐放性調製物の適切な例は、化合物の１種類または複数種類と、存在する場合、少なくとも１種類の追加の抗胃腸癌剤を含む固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスを含む。マトリックスは、成形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態であり得る。徐放性マトリックスの非限定的な例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号参照）、Ｌ−グルタミン酸とエチル−Ｌ−グルタミン酸塩の共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドで構成される注射可能なミクロスフェア）などの分解性乳酸−グリコール酸共重合体が挙げられる。
【０１７２】
本発明はまた、必要に応じて、少なくとも１種類の追加の治療剤と共に、本明細書に具体的に記載される化合物の１種類または複数種類を含む非経口単位剤形にも関する。
【０１７３】
様々な実施形態では、少なくとも１種類の追加の治療薬は、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、またはパロモマイシンなどのアミノグリコシド系；ゲルダナマイシンまたはハービマイシンなどのアンサマイシン系；ロラカルベフなどのカルバセフェム系；エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、またはメロペネムなどのカルバペネム系；セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン（Ｃｅｆａｌｏｔｉｎ）もしくはセファロチン（Ｃｅｆａｌｏｔｈｉｎ）、またはセファレキシンなどのセファロスポリン系（第一世代）；セファクロル、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、またはセフロキシムなどのセファロスポリン系（第二世代）；セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、またはセフトリアキソンなどのセファロスポリン系（第三世代）；セフェピムなどのセファロスポリン系（第四世代）；セフトビプロールなどのセファロスポリン系（第五世代）；テイコプラニン、またはバンコマイシンなどのグリコペプチド系；アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、テリスロマイシン、またはスペクチノマイシンなどのマクロライド系；アズトレオナムなどのモノバクタム系；アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリン、ピペラシリン、またはチカルシリンなどのペニシリン系；バシトラシン、コリスチン、またはポリミキシンｂなどのポリペプチド系；シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ノルフロキサシン、またはオフロキサシンなどのキノロン系；マフェニド、スルホンアミドクリソイジン（ａｒｃｈａｉｃ）、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファメチゾール、スルファニルアミド（ａｒｃｈａｉｃ）、スルファサラジン、スルフィソキサゾール、トリメトプリム、またはトリメトプリム−スルファメトキサゾール（コトリモキサゾール）（ｔｍｐ−ｓｍｘ）などのスルホンアミド系；デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリンなどのテトラサイクリン系；アルスフェナミン、クロラムフェニコール、クリンダマイシン、リンコマイシン、エタンブトール、ホスホマイシン、フシジン酸、フラゾリドン、イソニアジド、リネゾリド、メトロニダゾール、ムピロシン、ニトロフラントイン、プラテンシマイシン、ピラジナミド、キヌプリスチン／ダルホプリスチン、リファンピシン（米国ではリファンピン）、チアンフェニコール、チニダゾール、ダプソン、クロファジミンなどの他のもの；または、ダプトマイシンなどの環状リポペプチド系、チゲサイクリンなどのグリシルサイクリン、またはリネゾリドなどのオキサゾリジノン系などの抗生物質である。
【０１７４】
他の実施形態では、少なくとも１種類の追加の治療薬は、ナタマイシン、リモシジン、フィリピン、ナイスタチン、アンホテリシンＢ、カンジシジンなどのポリエン抗真菌剤；ミコナゾール、ケトコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、ビホナゾール、ブトコナゾール、フェンチコナゾール、イソコナゾール、オキシコナゾール、セルタコナゾール、スルコナゾール、もしくはチオコナゾールなどのイミダゾール系；フルコナゾール、イトラコナゾール、イサブコナゾール、ラブコナゾール、ポサコナゾール、ボリコナゾール、またはテルコナゾールなどのトリアゾール系；アバフンギンなどのチアゾール系；テルビナフィン、アモロルフィン、ナフチフィン、またはブテナフィンなどのアリルアミン系；アニデュラファンギン、カスポファンギン、またはミカファンギンなどのエキノカンジン系；安息香酸、シクロピロックス、トルナフテート、ウンデシレン酸、フルシトシンまたは５−フルオロシトシン、グリセオフルビン、ハロプロジン、および重炭酸ナトリウムなどの他のもの；またはアリシン、ティーツリー油、シトロネラ油、ヨウ素、レモングラス、オリーブの葉、オレンジ油、パルマローザ油、パチョリ、レモンマートル、ニーム種子油、ヤシ油、亜鉛、セレンなどの代替物などの抗真菌剤である。
【０１７５】
あるいは、薬剤は、本明細書に記載のもののいずれかから選択される。
【０１７６】
本発明に係る有用な組成物の有効性は、インビトロおよびインビボの両方で評価できる。簡単に説明すると、一実施形態では、本組成物は、例えば、インビトロでの腫瘍細胞増殖を阻害するその能力について試験され得る。インビボ研究では、本組成物を動物（例えば、マウス）に摂食させるかまたは注入でき、次いで、癌細胞の生存、増殖、転移、または胃腸癌の１つもしくは複数の症状、または関連する疾患もしくは障害に対する影響が評価される。その結果に基づいて、適切な投与量範囲、頻度、および投与経路を決定できる。
【０１７７】
本明細書で有用な組成物は、単独で、または１種類もしくは複数種類の他の抗胃腸癌剤、または１種類もしくは複数種類の追加の治療剤と組み合わせて使用できる。抗胃腸癌剤または追加の治療剤は、食品、飲料、食品添加物、飲料添加物、食品成分、飲料成分、栄養補助食品、栄養製品、医療食品、栄養補助食品、医療機器、医薬用供給品、薬剤または医薬品であるか、またはそれらを含み得る。抗胃腸癌剤または追加の治療剤は、好ましくは、１つもしくは複数の腫瘍性の疾患または障害、または１つもしくは複数の腫瘍性の疾患または障害の症状のうちの１つまたは複数を減衰するのに有効であるか、またはそうでなければ投与される対象に利益を与える。好ましい治療剤は、治療用食品因子、免疫剤または免疫刺激剤、および創傷治癒剤などが含まれる。
【０１７８】
上記の追加の抗胃腸癌剤または治療剤（食品ベースの薬剤および医薬品の両方）はまた、それらが本明細書で有用な組成物と別々に、同時にまたは連続して投与される本発明に係る方法においても使用され得ることを理解されたい。
【０１７９】
認識されるように、投与される組成物の用量、投与期間、および一般的な投与計画は、対象の症状の重症度、治療されるべき障害の種類、選択される投与様式、対象の年齢、性別および／または一般的な健康状態などの変数に依存して対象間で異なり得る。しかし、一般的な例として、１日あたりまたは１投与あたり、体重１ｋｇあたり本明細書で有用な組成物の約１ｍｇ〜約５０００ｍｇが投与され、体重１ｋｇあたり本明細書で有用な組成物の約１ｍｇ〜約４０００ｍｇが投与され、体重１ｋｇあたり本明細書で有用な組成物の約１ｍｇ〜約３０００ｍｇが投与され、体重１ｋｇあたり本明細書で有用な組成物の約１ｍｇ〜約２０００ｍｇが投与され、体重１ｋｇあたり本明細書で有用な組成物の約１ｍｇ〜約１０００ｍｇが投与され、好ましくは１日あたり、好ましくは１ｋｇあたり約５０〜約１０００ｍｇである。一実施形態では、本明細書で有用な組成物の投与は、体重１ｋｇあたり約０．０５ｍｇ〜約２５０ｍｇである。
【０１８０】
様々な実施形態では、１投与あたりまたは１日あたり本明細書に記載の少なくとも１種類の化合物を体重１ｋｇあたり約０．００１ｍｇ〜約５０ｍｇ、体重１ｋｇあたりプロポリスを約０．００１ｍｇ〜約４０ｍｇ、体重１ｋｇあたりプロポリスを約０．００１ｍｇ〜約３０ｍｇ、体重１ｋｇあたりプロポリスを約０．００１ｍｇ〜約２０ｍｇ、体重１ｋｇあたりプロポリスを約０．００１ｍｇ〜約１０ｍｇ、体重１ｋｇあたりプロポリスを約０．００１ｍｇ〜約５ｍｇ、体重１ｋｇあたりプロポリスを約０．００１ｍｇ〜約１ｍｇ、体重１ｋｇあたりプロポリスを約０．００１ｍｇ〜約０．５ｍｇ、体重１ｋｇあたりプロポリスを約０．００１ｍｇ〜約０．１ｍｇ、体重１ｋｇあたりプロポリスを約０．００１ｍｇ〜約０．０５ｍｇを送達するのに十分な組成物が投与される。
【０１８１】
投与は、１日１回の投与などの単回用量または適切であり得るような個別の分割された用量のいくつかの投与を含み得ることを理解されたい。当業者は、過度の実験をすることなく、その技術および本開示を考慮して、所与の病状のための（用量および投与のタイミングを含む）有効な投与計画を決定することができることを理解されたい。
【０１８２】
別の抗胃腸癌剤または治療薬と組み合わせて使用される場合、本明細書で有用な組成物および他の抗胃腸癌剤または治療薬の投与は、同時または連続的であってもよい。同時投与は、全ての成分を含む単一剤形の投与すること、または実質的に同時に別々の剤形の投与することを含む。好ましくは、本明細書で有用な組成物および他の治療薬が提供される間の期間に重複が存在するように、連続投与は異なるスケジュールに従う投与を含む。
【０１８３】
さらに、本発明による組成物は、特定の場合において、対象に有益であり得る追加の有効成分と共に製剤化され得ることが企図される。例えば、疾患過程の同じまたは異なるファセットを標的とする治療薬が使用されてもよい。
【０１８４】
したがって、本発明の「抗胃腸癌組成物を含む食品および飲料」を、一般的な食品および健康食品に使用できる。本発明の抗胃腸癌組成物は、本明細書に記載の化合物、すなわちプロポリスの味をマスクするので、そのままの状態または粉末形態で食べることができる。本発明の抗胃腸癌組成物は、液滴またはチューインガムを含む、ケーキ、ビスケット、クッキー、チョコレート、菓子および他の菓子用の成分または原料として使用できる。本発明の組成物は、飲料として水に添加されてもよく、ミルク、紅茶、コーヒー、ホットチョコレートなどの飲料用の甘味料、および果汁飲料、スポーツドリンクなどの成分または原料として使用できる。
【０１８５】
本発明の典型的な組成物、およびそのような組成物を調製するための方法を、これから以下の実施例を参照して説明する。
【実施例】
【０１８６】
実施例１
この実施例では、分取クロマトグラフィーによって生成されるプロポリス画分の抗胃腸癌活性の評価について説明する。この研究は、結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１の増殖アッセイを用いて行った。
【０１８７】
材料および方法
以下の表２に示す試験試料を、ＭＴＴアッセイによって評価されるように、ヒト結腸直腸腺癌細胞（ＤＬＤ−１）の生存率および増殖を調節する能力について評価した。非補充細胞対照（陰性対照）に加えて、陽性対照の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）をこの試験に含めた。試験試料をプロポリスチンキの分画によって得た。
【０１８８】
カラムクロマトグラフィーによるプロポリスチンキ画分の生成
メタノール（ＭｅＯＨ、２００ｍＬ）で洗浄し、２０％ＥｔＯＨ水溶液（５００ｍＬ）で平衡化したメルクリクロプレップ（Ｍｅｒｃｋ  Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ）ＣＩ８を充填したガラスカラムの逆相固定相（１６×４ｃｍ）を用いて分画を行った。エタノール（ＥｔＯＨ、５ｍＬ）に溶解したプロポリス（５．４４６ｇ）を、ピストンポンプを用いてカラムの頂部に装填した。溶出を、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％ＥｔＯＨ水溶液からなる階段状勾配（２５０ｍＬ）、その後、１００％ＥｔＯＨステップを２回、次いで、２−プロパノール（ＩＰＡ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、アセトン、およびクロロホルム（ＣＨＣｌ３）で行った。様々な画分の溶媒をロータリーエバポレーターで真空除去し、その後、一晩凍結乾燥した。２つの１００％ＥｔＯＨ画分をプールし、比較的低い質量による残りの４つの非極性画分（ＩＰＡ、ＥｔＯＡｃ、アセトン、およびＣＨＣｌ３）も生物学的アッセイ作業のためにプールした。
【０１８９】
カラムからの溶出工程で使用されるエタノールの割合、例えば、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％ＥｔＯＨ水溶液、および１００％ＥｔＯＨに応じて、画分を表２に示す。
【０１９０】
ＤＬＤ−１結腸癌抗増殖アッセイのための材料および方法
以下の表２に示す試験試料を、ＭＴＴアッセイによって評価されるように、ヒト結腸直腸腺癌細胞（ＤＬＤ−１）の生存率および増殖を調節する能力について評価した。非補充細胞対照（陰性対照）に加えて、陽性対照の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）をこの試験に含めた。
【０１９１】
（表２）試験試料
0006444984.tif 000028
【０１９２】
試験材料および試験方法の説明
ヒト結腸直腸腺癌上皮細胞株を凍結保存から元に戻し、試験試料および参照試料の存在下で培養した。細胞の培養条件は、細胞の供給業者（ＡＴＣＣ）によって記載されたものであった。その後、ＭＴＴアッセイを培養物で行い、細胞増殖に対する試料の効果を決定した。
【０１９３】
方法は、以下の報告された手順に基づいた。
0006444984.tif 000029
【０１９４】
試料調製
作業溶液を、１５％エタノール（ＥＴＯＨ）／ＨＢＳＳに試験画分を２ｍｇ／ｍＬの固形分濃度まで溶解することによって調製した。
【０１９５】
実験手順
試験システムの特徴づけ
１．ヒト結腸直腸腺癌細胞（ＡＴＣＣ ＣＣｌ−２２１、ＤＬＤ−１）
２．ペニシリン−ストレプトマイシン溶液：０．９％のＮａＣｌ（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｐ−０７８１）中１００００ユニット／ｍＬのペニシリン、１０ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシン。−２０℃で保存した。
３．ＤＭＥＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログ番号１２１００−０４６）。−２０℃で保存した。
４．トリプシン−ＥＤＴＡ溶液：０．２５％トリプシン／ＥＤＴＡ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログ番号１５４０００５４（ストックでは１０倍）
５．リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ＴＢＬにより調製）
６．ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）（ＧＩＢＣＯ社、カタログ番号１４１８５−０５２）。４℃で保存した。
７．ウシ胎児血清（ＧＩＢＣＯ社、カタログ番号１００９１−１４８）。−２０℃で保存した。
８．ＭＴＴ試薬：１００ｍｇ／バイアル（ＳＩＧＭＡ社、カタログ番号Ｍ−２１２８）を１０ｍｇ／ｍＬでＰＢＳに溶解し、−２０℃で保存した。５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ溶液をＰＢＳで調製し、作業溶液として４℃で保存した。
９．ＭＴＴ溶解緩衝液：１０％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）／４５％ジメチルホルムアミド（ＳＤＳ２０ｇを２回蒸留した水（ＤＤＷ）１００ｍＬに溶解し、ジメチルホルムアミド９０ｍＬをＳＤＳ溶液に添加した）。ｐＨを氷酢酸により４．７に調整し、ＤＤＷを２００ｍＬの最終容量まで添加した。
１０．５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ｆ−６６２７）。１５０ｎｇ／ｍＬおよび７５ｎｇ／ｍＬの２つの作業溶液を調製し、１５％エタノール／ＨＢＳＳに溶解した。最終濃度は、７．５０ｎｇ／ｍＬおよび３．７５ｎｇ／ｍＬであった。
【０１９６】
培地の調製
結腸直腸腺癌（ＤＬＤ−１）細胞の増殖のための培地は、ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（１リットルあたり１０ｍＬ）を補充したＤＭＥＭであった。使用直前にＦＢＳを添加し、１０％ｗ／ｖにした。
【０１９７】
細胞の培養
１．米国のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションから入手したヒト結腸直腸腺癌細胞（ＤＬＤ−１）を、凍結保存から元に戻した。
２．前述の培地（培地の調製参照）を使用して初期増殖させた後、培養物を以下のようにトリプシン−ＥＤＴＡを用いて継代培養した。培地を除去し、５ｍＬのトリプシン−ＥＤＴＡ溶液を添加し、５分間、３７℃でまたは全ての細胞が剥離するまでインキュベートした。等量のＤＭＥＭ培地を添加することによりトリプシンを中和し、培地を３００ｇ（１２００ｒｐｍ）で、５分間、４℃で遠心分離した。
３．上清をデカントし、細胞ペレットをＤＭＥＭ培地、ＦＢＳ（１０％）、ペニシリン（１００ユニット／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）中に再懸濁した。細胞を、５％ＣＯ２／９５％空気中３７℃で培養した。
４．コンフルエンスに達した後、細胞をトリプシン−ＥＤＴＡを用いて剥離し、上記２に記載したように遠心分離した。
５．上清を捨て、上記３に記載したように、１ｍＬあたり１．０×１０４細胞でＤＭＥＭおよび補助剤中に細胞を再懸濁した。
６．３枚の９６ウェルプレートの各ウェルに、１８０μｌの細胞（１，８００細胞／ウェル）または培地を添加した。これらのプレートを、細胞を付着させるのに十分な４８時間、５％ＣＯ２／９５％空気中３７℃でインキュベートした。
７．各ウェルに、試験試料または陽性対照それぞれを２０μｌ加えた。「培地」または「細胞のみ」の対照については、２０μｌの１５％ＥＴＯＨ／ＨＢＳＳを各ウェルに加えた。各試料を６回の反復で評価し、３枚のプレートのそれぞれの対照は、９回の反復で（三つ組の組み合わせで）評価した。各ウェル中の試料の最終濃度は２００μｇ／ｍＬであった。
８．各ウェルの総容積は２００μｌであった。
９．これらのプレートを、５％ＣＯ２／９５％空気中３７℃で１９時間インキュベートした。
【０１９８】
細胞増殖アッセイ
１．インキュベーション完了時に、２０μｌのＭＴＴ作業溶液（５ｍｇ／ｍＬ）を全てのウェルに加え、５％ＣＯ２／９５％空気中３７℃で３〜４時間インキュベートした。
２．このインキュベーション期間中、細胞＋試料のウェルと試料＋培地ブランクウェルの両方の中の、いくつかの試料のいくつかのウェルに予期せぬ強い色が現れたことに留意されたい。この期間の終わりに、上清を各ウェルから除去し、各ウェルを穏やかにＨＢＳＳで２回洗浄し、紫の色を除去した後に、以下のステップ３に記載のＭＴＴ溶解緩衝液を添加した。
３．次いで、１００μｌのＭＴＴ溶解緩衝液を添加し、プレートを５％ＣＯ２／９５％空気中３７℃で一晩インキュベートした。これらのプレートを１０分間、１２００ｒｐｍで遠心分離し、残りの不溶性物質をペレット化した。各ウェルから２００μｌのアリコートを新鮮な９６ウェルプレートに移した。これらのプレートを５７０ｎｍでＶｅｒｓａＭａｘマイクロプレートリーダーによって読み取った。
４．細胞のみの対照と比較した、試料の存在下で培養した細胞の増殖の割合として結果を表した。ブランクの読み取りを、バックグラウンドの読み取りとして全てのウェルから差し引いた。
【０１９９】
結果
細胞の増殖に対する対照および試験試料の影響の概要を以下の表３に示す。
・２００μｇ／ｍＬで、結腸癌細胞の増殖の最高の阻害は、プロポリス画分１（６８．１％）、プロポリス画分２（７２．８％）、プロポリス画分５（４１．０％）およびプロポリス画分８（７２．０％）であった。
・２００μｇ／ｍＬで、プロポリスチンキが結腸癌細胞の増殖を３２．６％阻害した。
【０２００】
（表３）ＤＬＤ−１細胞の増殖に対する試験試料の影響
0006444984.tif 000030
【０２０１】
さらなる研究を行い、最も活性のある画分に存在する化合物を決定した。これらの研究を実施例２に記載する。
【０２０２】
実施例２
この実施例では、純粋な化合物の標準物質と比較した本発明の組成物の抗胃腸癌活性の評価について説明する。実施例１に記載したように、この研究を、結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１の増殖アッセイを用いて行った。
【０２０３】
分取ＨＰＬＣ
実施例１のために生成した２０％、３０％、６０％、および９０％ＥｔＯＨ水溶液の溶出画分を、分取ＨＰＬＣによってさらに分画した。乾燥させた２０％および３０％ＥｔＯＨ画分をＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ（１：１）に溶解し、６０％および９０％ＥｔＯＨ画分を薄めていないＥｔＯＨに溶解した。各溶液を、Ｇｉｌｓｏｎ ３２１分取ポンプおよびＡｇｉｌｅｎｔ社製１１００シリーズダイオードアレイ検出器を使用して、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｉ  ４μｍ−ＲＰ Ｍａｘ ８０Ａ ２５０×３０ｍｍ Ｃ−１２カラム上で分取ＨＰＬＣによりクロマトグラフィーを行った。０．５〜１．５ｍＬの注入体積を用いた。２０ｍＬ／分の流量を用いた。２０％、３０％、および６０％エタノール画分については、（０．１％トリフルオロ酢酸［ＴＦＡ］体積／体積を含む）７０％の水および（０．１％ＴＦＡ体積／体積を含む）３０％のＭｅＯＨの初期溶媒組成を用いた。溶媒組成を初期条件で１０分間一定に保持し、その後、８分かけてＭｅＯＨ濃度を４０％まで直線的に増加させ、この組成で５分間保持し、その後、３２分かけて８０％まで増加させ、次いで、５分かけて１００％まで増加させた。
【０２０４】
クロマトグラフィーを約１８℃の室温で行った。画分を手動で収集し、オンライン検出を（フラボノイドについては）２６８ｎｍおよび（カフェ酸誘導体については）３２７ｎｍで行った。分析ＨＰＬＣを回収した全画分にて行い、単一の化合物または高度に精製された化合物を示すものを、ロータリーエバポレーターにより真空下で溶媒除去し、秤量し、生物学的アッセイのために調製した。さらなるアッセイのために提示されていない２０％および３０％シリーズの画分を混合して生物学的アッセイのための「非ピーク」２０％および３０％画分を形成し、主要な活性が、選択した波長で観察されない任意の材料よりもむしろ観察されたピークに起因することを確認した。６０％のＥｔＯＨのＦ８および６０％ＥｔＯＨのＦ９の６０％画分の２つが、さらなるクロマトグラフィーに必要であった（以下のセファデックスＬＨ２０クロマトグラフィーを参照されたい）。９０％エタノール画分をクロマトグラフィーにも供した。しかし、使用する溶媒および勾配プロファイルを、この画分のクロマトグラフィーのために改変した。ここで使用した溶媒は、（０．１％ＴＦＡを含む）８０％ＭｅＯＨ水溶液およびＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（４：１体積／体積）であった。最初の溶離液組成物は８０％メタノール水溶液からなっていた。溶媒組成物を５分間初期条件で保持し、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ溶媒濃度を３５分かけて１００％まで直線的に増加させた。分析ＨＰＬＣによる９０％ＥｔＯＨ画分の分析により、この画分の主要な成分が非常に非極性であり、クロマトグラムの後期に溶出することが示され、他のプロポリス画分での分析のために使用した波長、すなわち、２６８および３２７ｎｍで最小のＵＶ吸収が示された。しかし、蒸発光散乱検出（ＥＬＳＤ）は、成分の複雑な混合物を明らかにした。ＥＬＳＤの破壊的な性質により、分取ＨＰＬＣ画分を手動で収集し、オンライン検出を２１０ｎｍで行った。クロマトグラフィーは明確に分離したピークではなく、ベースラインの幅広い増減をもたらしたので、ラン中に４画分を収集し、全てを生物学的アッセイのために調製した。
【０２０５】
セファデックスＬＨ２０クロマトグラフィー
上記の分取ＨＰＬＣ作業由来の６０％ＥｔＯＨ  Ｆ８およびＦ９画分のＨＰＬＣ分析により、これらの画分が近くで溶出するいくつかの化合物を含有することが示された。これらの画分を、以下のようにさらなるクロマトグラフィーに供した。
【０２０６】
これらの画分の各々を、予め（０．１％ＴＦＡ体積／体積を含む）７０％ＭｅＯＨ水溶液で平衡化したセファデックスＬＨ２０固定相（３×４２ｃｍ）を含むガラスカラムの上部にアプライした。画分を、約７ｍＬの個々の画分の容量で、フラクションコレクターを使用して時間ベースで収集した。画分を分析ＨＰＬＣによって調べ、単一の化合物または高度に精製された化合物を含有するものを合わせて、生物学的アッセイのために調製した。各シリーズからの残りの画分を合わせ、「非ピーク」画分として生物学的アッセイのために調製した。
【０２０７】
ＤＬＤ−１結腸癌抗増殖アッセイのための材料および方法
以下の表４に示す試験試料を、ＭＴＴアッセイによって評価されるように、ヒト結腸直腸腺癌細胞（ＤＬＤ−１）の生存率および増殖を調節する能力について評価した。非補充細胞対照（陰性対照）に加えて、陽性対照の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）をこの試験に含めた。ＤＬＤ−１抗増殖アッセイを実施例１に記載したように行った。
【０２０８】
（表４）試験試料
0006444984.tif 000031
【０２０９】
試料は、１５％ＥｔＯＨ／ＨＢＳＳ中１ｍｇ／ｍＬであった試料＃１を除いて、１５％ＥｔＯＨのＨＢＳＳ溶液中２ｍｇ／ｍＬで作業溶液として溶解させた。このアッセイでは、最終エタノール濃度が１．５％で、１００μｇ／ｍＬであった試料＃１を除いて、試料の最終濃度は２００μｇ／ｍＬで、最終エタノール濃度が１．５％であった。
【０２１０】
結果および考察
概要
・試験した試料の大部分は、ＤＬＤ−１結腸癌細胞増殖の阻害剤であった。
・試料のいずれも、刺激効果を有していなかった。
・プロポリス画分のうち、最も強力な阻害剤（括弧内に抑制性レベルを示す）は、以下のとおりであった。
＃３・・・２０％ Ｆ８（９５．２％）
＃８・・・３０％ Ｆ８（９６．１％）
＃１４・・・６０％ Ｆ８（２７−３０） （９５．０％）
＃１７・・・６０％ Ｆ８（４４−５０） （９０．４％）
＃１８・・・６０％ Ｆ８（５２−５３） （９０．４％）
・いくつかの試料は、結腸癌の増殖に対して全くまたはほとんど影響を及ぼさなかった。これらには以下のものが含まれていた。
＃１・・・２０％ Ｆ１（０．４％阻害）
＃９・・・３０％ Ｆ１０（３．２％刺激）
＃１０・・・３０％ Ｆ１１（７．５％阻害）
＃３８・・・ピノセンブリン７−メチルエーテル（２．７％阻害）
【０２１１】
２４時間のインキュベーション後の細胞増殖に対する陽性対照および試験試料の影響の概要を以下の表５に示す。
【０２１２】
（表５）ＤＬＤ−１細胞の増殖に対する試験試料の影響
0006444984.tif 000032
0006444984.tif 000033
【０２１３】
化合物の同定
結腸癌細胞増殖の最も強力な阻害剤である画分をさらに分析して、これらの画分中に存在する化合物を同定した。活性画分で同定された化合物を表６に示す。各化合物を同定するために使用した方法を以下に詳述する。
【０２１４】
５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸
ＨＰＬＣオンラインＵＶ−可視吸収スペクトルおよび低解像度ＬＣＭＳ ｍ／ｚデータは、ニュージーランド起源のプロポリスに存在すると以前に報告された５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸の構造（Ｍａｒｋｈａｍ ｅｔ ａｌ，１９９６．ＨＰＬＣ ａｎｄ ＧＣ−ＭＳ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｏｒｇａｎｉｃ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｉｎ Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ ｐｒｏｐｏｌｉｓ．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４２（１）：２０５−２１１）と一致した。構造を、真の標準物質を用いたＨＰＬＣでの共クロマトグラフィーにより確認した。
【０２１５】
３−メチル−３−ブテニルカフェ酸
ＨＰＬＣオンラインＵＶ−可視吸収スペクトルおよび低解像度のＬＣＭＳ ｍ／ｚデータは、ニュージーランド起源のプロポリスに存在すると以前に報告された３−メチル−３−ブテニルカフェ酸の構造（Ｍａｒｋｈａｍら、１９９６）と一致した。さらに、ＨＲＭＳ、１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲデータは、３−メチル−３−ブテニルカフェ酸について公表されたデータと一致する。
【０２１６】
１，１−ジメチルアリルカフェ酸
ＨＰＬＣオンラインＵＶ−可視吸収スペクトルおよび低解像度のＬＣＭＳ ｍ／ｚデータは、ニュージーランド起源のプロポリスに存在すると以前に報告された１，１−ジメチルアリルカフェ酸の構造（Ｍａｒｋｈａｍら、１９９６）と一致した。構造は、真の標準物質を用いたＨＰＬＣでの共クロマトグラフィーにより確認した。さらに、ＨＲＭＳ、１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲデータは、１，１−ジメチルアリルカフェ酸について公表されたデータと一致する。
【０２１７】
ピノバンクシン−３−アセテート
ＨＰＬＣオンラインＵＶ−可視吸収スペクトルおよび低解像度のＬＣＭＳ ｍ／ｚデータは、ニュージーランド起源のプロポリスに存在すると以前に報告されたピノバンクシン−３−アセテートの構造（Ｍａｒｋｈａｍら、１９９６）と一致した。実験室での参照試料もまた比較のために利用可能であった。
【０２１８】
ピノストロビンカルコン
ピノストロビンカルコンを粗プロポリスから単離した。単離は、いくつかのクロマトグラフィー工程を含んでおり、シリカゲル上で２回行い、最終的なクリーンアップ工程にはセファデックスＬＨ−２０を使用した。この最終ステップからの主な黄色の化合物を収集し、ＮＭＲおよびＵＶ可視分光データと文献値（Ｍａｌｅｋ，Ｓ．Ｎ．Ａ．；Ｐｈａｎｇ，Ｃ．Ｗ．；Ｉｂｒａｈｉｍ，Ｈ．；Ａｂｄｕｌ Ｗａｈａｂ，Ｎ．；Ｓｉｍ，Ｋ．Ｓ．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ａｌｐｉｎｉａ ｍｕｔｉｃａ Ｒｈｉｚｏｍｅｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０１１，１６，５８３−５８９．）の比較によって、純粋なピノストロビンカルコンであることが示された。
【０２１９】
テクトクリシン
ＨＰＬＣオンラインＵＶ−可視吸収スペクトルおよび低解像度のＬＣＭＳ ｍ／ｚデータは、ニュージーランド起源のプロポリスに存在すると以前に報告されたテクトクリシンの構造（Ｍａｒｋｈａｍら、１９９６）と一致した。
【０２２０】
フェルラ酸ベンジルとイソフェルラ酸ベンジル
Ｓ＃２３の６０％Ｆ９画分に存在するエステルを、フェルラ酸ベンジルとイソフェルラ酸ベンジルの混合物として同定した。ベンジルアルコールおよびフェルラ酸とイソフェルラ酸の混合物が得られた画分の小規模な加水分解に基づいて同定した。加水分解生成物を、参照化合物からのデータとＨＰＬＣデータ（保持時間およびオンラインＵＶ−ＶＩＳスペクトル）との比較から同定した。
【０２２１】
（表６）活性画分中で同定された化合物
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【０２２２】
考察
これらのデータは、結腸直腸細胞増殖の増殖阻害における本発明の組成物の有効性を支持する。
【０２２３】
この実施例から最も生物活性のある化合物を選択し、精製し、合成し、または以下の実施例で純粋な標準物質として使用した。ピノセンブリンおよびｐ−クマル酸をまた、それぞれそれらの強力な活性および弱い活性に基づいて追加的な陽性対照ならびに陰性対照として試験した。
【０２２４】
実施例３
この実施例では、画分Ｓ＃１４ ６０％のＦ７（表６、実施例２）としてＮＺ起源ヨーロッパ型プロポリスから単離した化合物の５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸の抗胃腸癌活性の評価について説明する。この研究は、ヒト結腸腺癌細胞株のＤＬＤ−１、ヒト結腸癌細胞株のＨＣＴ−１１６、ヒト胃癌細胞株のＮＣＩ−Ｎ８７、およびヒト食道扁平上皮癌細胞株のＫＹＳＥ−３０の増殖アッセイを用いて行った。
【０２２５】
実施例３〜１３に用いた一般的な方法を以下に示す。
【０２２６】
胃腸癌抗増殖アッセイのための材料および方法
５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸を、ＭＴＴアッセイによって評価されるように、ヒト結腸直腸腺癌細胞（ＤＬＤ−１）、ヒト結腸癌細胞株（ＨＣＴ−１１６）、ヒト胃癌細胞株（ＮＣＩ−Ｎ８７）、およびヒト食道扁平上皮癌細胞株（ＫＹＳＥ−３０）の生存率および増殖を調節するその能力について評価した。本研究の陰性対照として非補充細胞対照に加えて、陽性対照の５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を３種類の濃度で含めた。５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸は、ＮＭＲおよびＭＳにより確認した化学構造を有する純粋な標準物質であった。
【０２２７】
試験材料および試験方法
４種類のヒト胃腸癌細胞株を凍結保存から元に戻し、試験試料および参照試料の存在下で培養した。次いで、ＭＴＴアッセイを培養物にて行い、細胞の生存率および増殖に対する試料の影響を決定した。
【０２２８】
方法は、以下の参考文献に報告されている手順に基づく。
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【０２２９】
細胞の培養条件は、細胞の供給者（ＡＴＣＣおよびＥＣＡＣＣ）によって提供されたものである。
【０２３０】
試料調製
試験試料５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸、および実施例４〜１２の他の全ての試験試料（テクトクリシンを除く）を、最初に、約１３.３５ｍｇ／ｍｌの濃度まで純エタノールに溶解した。テクトクリシンを、最初に、同じ濃度までトリエチレングリコールモノメチルエーテルに溶解した。次いで、作業溶液を２ｍｇ／ｍＬの固形分濃度まで１５％のエタノール／ハンクス平衡塩溶液（ＥｔＯＨ）／ＨＢＳＳに希釈することによってストック溶液から調製した。このアッセイでは、試料の最終濃度は２００μｇ／ｍｌであり、最終ＥｔＯＨ濃度は１.５％であった。上記のように調製した試験化合物およびプロポリスの最終濃度は、実施例３に記載したとおりである。
【０２３１】
実験手順
試験システムの特徴付け
１．ヒト結腸直腸腺癌細胞（ＡＴＣＣ ＣＣｌ−２２１、ＤＬＤ−１）（ＡＴＣＣ、米国メリーランド州ベセスダ）
２．ヒト胃癌細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−５８２２、ＮＣＩ−Ｎ８７）（ＡＴＣＣ、米国メリーランド州ベセスダ）
３．ヒト食道扁平上皮癌（ＥＣＡＣＣ、ＫＹＳＥ−３０）（Ｓｉｇｍａ社 Ａｌｄｒｉｃｈ社、オークランド、ニュージーランド）
４．ヒト結腸癌細胞（ＥＣＡＣＣ ＨＣＴ−１１６）（Ｓｉｇｍａ社 Ａｌｄｒｉｃｈ社、オークランド、ニュージーランド）
５．ペニシリン−ストレプトマイシン溶液：０.９％ＮａＣｌ中１００００ユニット／ｍｌのペニシリン、１０ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ社カタログ番号Ｐ−０７８１）。−２０℃で保存した。
６．ＤＬＤ−１細胞については、ＤＭＥＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社カタログ番号１２１００−０４６）。４℃で保存した。
７．ＮＣＩ−Ｎ８７細胞については、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、４５００ｍｇ／Ｌのグルコース、および１５００ｍｇ／Ｌの重炭酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ社  Ｒ６５０４）を含むように改変したＲＰＭＩ−１６４０培地。４℃で保存した。
８．ＫＹＳＥ−４１０細胞については、２ｍＭのＬ−グルタミンを含むように改変したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｓｉｇｍａ社  Ｒ６５０４）。４℃で保存した。
９．ＨＣＴ−１１６細胞については、２ｍＭのＬ−グルタミンを含むように改変したマッコイ５Ａ培地（Ｓｉｇｍａ社  Ｍ４８７９２）。４℃で保存した。
１０．トリプシン−ＥＤＴＡ溶液：０.２５％トリプシン／ＥＤＴＡ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社カタログ番号１５４０００５４（ストックでは１０倍）
１１．リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ＴＢＬにより調製）
１２．ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）。（ＧＩＢＣＯ社カタログ番号１４１８５−０５２）。４℃で保存した。
１３．ウシ胎児血清（ＧＩＢＣＯ社カタログ番号１００９１−１４８）。−２０℃で保存。
１４．ＭＴＴ試薬：１００ｍｇ／バイアル（ＳＩＧＭＡ社カタログ番号Ｍ−２１２８）を１０ｍｇ／ｍｌでＰＢＳに溶解し、−２０℃で保存した。５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ溶液をＰＢＳで調製し、作業溶液として４℃で保存した。
１５．ＭＴＴ溶解緩衝液：１０％ナトリウムドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）／４５％ジメチルホルムアミド（ＳＤＳ２０ｇを２回蒸留した水（ＤＤＷ）１００ｍｌに溶解し、ジメチルホルムアミド９０ｍｌをＳＤＳ溶液に添加する）。ｐＨを氷酢酸により４.７に調整し、ＤＤＷを２００ｍＬの最終体積まで添加した。
１６．５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、（Ｓｉｇｍａ社カタログ番号Ｆ−６６２７）。３種類の作業溶液を、１５％エタノール／ＨＢＳＳに溶解した１９.５μｇ／ｍｌ、６.５μｇ／ｍｌおよび１.９５μｇ／ｍｌで調製する。最終濃度は、１.９５μｇ／ｍｌ（１５μΜ）、０.６５μｇ／ｍｌ（５μΜ）および０.１９５μｇ／ｍｌ（１.５μΜ）である。
【０２３２】
培地調製
細胞株のそれぞれの増殖のための培地は上記の通りである。各培地を、ＡＴＣＣ／ＥＣＡＣＣの指示に従って調製し、ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（１リットル当たり１０ｍｌ）を補充した。ＦＢＳ（１０％）を使用直前に添加した。
【０２３３】
細胞の培養
１．米国のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションまたは細胞培養物欧州コレクション（ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ）のいずれかから入手した細胞株のそれぞれを凍結保存から元に戻した。
２．上記の培地（試験システムの特徴づけおよび培地調製を参照されたい）を使用した初期増殖後、培養物をトリプシン−ＥＤＴＡを用いて継代培養した。培地を除去し、トリプシン−ＥＤＴＡ溶液５ｍｌを添加し、３７℃で５分間かまたは全ての細胞が剥離するまでインキュベートした。等量の関連培地を添加することによってトリプシンを中和し、４℃で５分間、３００ｇ（１２００ｒｐｍ）で懸濁液を遠心分離した。
３．上清をデカントし、細胞ペレットをＦＢＳ（１０％）、ペニシリン（１００ユニット／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を含む関連培地に再懸濁した。
４．コンフルエンスに達した後、上記２に記載したようにトリプシン−ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離し、遠心分離した。
５．上清を廃棄し、上記３に記載したように関連培地および補充剤中に１ｍｌ当たり１.０×１０４細胞で再懸濁した。各細胞懸濁液は総容量で約５４ｍｌ必要であった。
６．６枚の９６ウェルプレートの各ウェルに、細胞（１,８００細胞／ウェル）または培地１８０μｌを予め決定したプレートのレイアウトに従って添加した。プレートを５％ＣＯ２／９５％空気中３７℃で約４８時間インキュベートし、細胞を接着させた。
７．各ウェルに、試験化合物または５−ＦＵのそれぞれ２０μｌをプレートレイアウトに示すように添加した。「培地」または「細胞のみ」と表示した陰性対照ウェルについては、１５％ＥＴＯＨ／ＨＢＳＳ２０μｌを添加した。それぞれの試料または対照を３回または６回の反復で評価した。
８．各ウェルの総容積は２００μｌであった。
９．これらのプレートを２４時間、５％ＣＯ２／９５％空気中３７℃でインキュベートした。
【０２３４】
細胞増殖アッセイ
１．インキュベーションの完了時に、ＭＴＴ作業溶液２０μｌ（５ｍｇ／ｍｌ）を全てのウェルに加え、５％ＣＯ２／９５％空気中３７℃で３〜４時間インキュベートした。これらのプレートを、３０〜６０分毎に監視し、いくつかの細胞が結晶の存在を示した場合、溶解緩衝液を、以下のステップ２のように添加した。
２．次いで、ＭＴＴ溶解緩衝液１００μｌを添加し、プレートを５％ＣＯ２／９５％空気中３７℃で一晩インキュベートした。これらのプレートを１０分間、１２００ｒｐｍで遠心分離して、残りの不溶性物質をペレット化した。各ウェルから２００μｌを新鮮な９６ウェルプレートに移した。次いで、これらのプレートを５５０ｎｍでＶｅｒｓａＭａｘマイクロプレートリーダーにて読み取った。
３．ブランクの読み取りを、バックグラウンドの読み取りとして全てのウェルから差し引いた。結果を、細胞のみの対照に対する、試料の存在下で培養した細胞の増殖の割合として表した。
４．ＶｅｒｓａＭａｘ９６ウェルプレートリーダーを用いて、（５５０ｎｍで）細胞の増殖を比色測定で評価した。
５．平均の標準誤差の割合を評価し、ＳＥＭ％が１５を超える場合、極端な異常値を除去する。予備的な統計的有意性を、（異常値の有無に関わらず）α≦０.０５で独立したスチューデントｔ−検定を用いて評価する。
【０２３５】
試験方法に関する観察
様々な試験調製物および５−ＦＵの存在下でいくつかの癌細胞の培養を、２４時間後のＤＬＤ−１およびＮＣＩ−Ｎ８７の陰性対照の細胞密度の目視のように４８時間行うと、増殖が予想されるほど急速ではなかったことが示唆された。一貫性のために、他の培養時間を同じように設定した。
【０２３６】
平均の標準誤差（ＳＥＭ）の割合が１５％を上回る場合、研究計画は、反復間の異常値を計算から削除する必要があった。試料が強いアンタゴニストである場合には、吸光度の値は小さい。その結果、これらの間の小さな変化は、阻害が低い試料と比較した場合、パーセンテージとして表した平均からの分散が比較的大きいことを意味する。これは、実質的に完全な阻害が発生し、分析から除外されるいくつかの異常値をもたらした。
【０２３７】
結果
５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸ための細胞増殖アッセイの結果を、３つの濃度の陽性対照５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）および陰性対照（試験化合物または陽性対照を含まず、培地のみを有する細胞）の結果と共に表７に示す。表において、ＯＤは５７０ｎｍで測定した光学密度である。ＳＥＭは、測定された平均光学密度値に関する標準誤差である。ｐは、測定がスチューデントｔ検定を用いて統計的に有意である確率値であり、本明細書では＜０.０５とする。刺激（％）は、陰性対照（不活性な試験化合物）と比較した増殖刺激の割合である。阻害（％）は、陰性対照と比較した増殖の低下の割合であり、大きな数は、試験化合物が抗癌増殖能を有することを示す。
【０２３８】
（表７）４種類の胃腸細胞株に対する５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸の抗増殖活性
0006444984.tif 000036
【０２３９】
考察
５−フェニルペンタ−２，４−ジエン酸は４種類全ての癌細胞株に対して活性があり、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１の増殖を４３.５％阻害し、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６の増殖を３６.４％阻害し、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７の増殖を４２．５６％阻害し、ヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖を３７．６％阻害した。阻害の程度は、既知の抗癌剤５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を使用して達成されるのと類似しており、実際、ＮＣＩ−Ｎ８７細胞については上回った。
【０２４０】
実施例４
この実施例では、画分Ｓ＃１４ ６０％ Ｆ８（２７−３０）中のＮＺ起源ヨーロッパ型プロポリスから単離した化合物である１,１−ジメチルアリルカフェ酸の抗胃腸癌活性の評価について説明する（表６、実施例２）。この研究は、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、およびヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３についての増殖アッセイを用いて行った。
【０２４１】
２００μｇ／ｍｌの濃度でアッセイに使用した１,１−ジメチルアリルカフェ酸は、純粋な標準物質であった。実施例３に詳細に示されるのと同じ試験手順を実施例４にも使用した。
【０２４２】
結果
１,１−ジメチルアリルカフェ酸についての細胞増殖アッセイの結果を表８に示す。細胞のみ（陰性対照）の結果および５−ＦＵ陽性対照の結果は実施例３と同じであるので、表８には含めない。
【０２４３】
（表８）４種類の胃腸細胞株に対する１，１−ジメチルアリルカフェ酸の抗増殖活性
0006444984.tif 000037
【０２４４】
考察
１,１−ジメチルアリルカフェ酸は４種類全ての癌細胞株に対して非常に活性があり、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１の増殖を９３.２％阻害し、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６の増殖を８６.７％阻害し、ヒト胃癌細胞ＮＣＩ−Ｎ８７の増殖を８６.７％阻害し、ヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖を９７.８％阻害した。
【０２４５】
阻害の程度は、既知の抗癌剤の５−フルオロウラシルを使用して達成した程度より実質的に優れており、外れ値の結果も含めた場合、ＮＣＩ−Ｎ８７を除く全ての細胞株はほぼ完全に死滅した。結果はまた、主として１,１−ジメチルアリルカフェ酸を含む画分Ｓ＃１４の６０％  Ｆ８（２７−３０）がＤＬＤ−１の増殖を実質的に阻害することが示された実施例２の結果を再確認する。
【０２４６】
実施例５
この実施例では、画分Ｓ＃１５  ６０％  Ｆ８（３５−４０）中のＮＺ起源ヨーロッパ型プロポリスから単離した化合物である３−メチル−３−ブテニルカフェ酸の抗胃腸癌活性の評価について説明する（表６、実施例２）。この研究は、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、およびヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０についての増殖アッセイを用いて行った。
【０２４７】
２００μｇ／ｍｌの濃度でアッセイに使用した３−メチル−３−ブテニルカフェ酸は、化学的に合成し、同一性をＮＭＲおよびＭＳにより確認した。実施例３に詳細に示したのと同じ試験手順を実施例５にも使用した。
【０２４８】
結果
３−メチル−３−ブテニルカフェ酸についての細胞増殖アッセイの結果を表９に示す。細胞のみ（陰性対照）の結果および５−ＦＵ陽性対照の結果は実施例３と同じであるので、表９には含めない。
【０２４９】
（表９）４種類の胃腸細胞株に対する３−メチル−３−ブテニルカフェ酸の抗増殖活性
0006444984.tif 000038
【０２５０】
考察
３−メチル−３−ブテニルカフェ酸は４種類全ての癌細胞株に対して非常に活性があり、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１の増殖を９１.６％阻害し、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６の増殖を９６.０％阻害し、ヒト胃癌細胞ＮＣＩ−Ｎ８７の増殖を８４.５％阻害し、ヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖を９６.３％阻害した。
【０２５１】
阻害の程度は、既知の抗癌剤５−フルオロウラシルを使用して達成された程度よりも実質的に優れており、ＨＣＴ−１１６およびＫＹＳＥ−３０細胞をほぼ完全に死滅したことが観察された。結果はまた、画分Ｓ＃１５の６０％Ｆ８（３５−４０）中の不純な３−メチル−３−ブテニルカフェ酸がＤＬＤ−１の増殖を実質的に阻害することが示された実施例２の結果を再確認する。
【０２５２】
実施例６
この実施例では、画分Ｓ＃２４ ６０％  Ｆ９（５４−５７）中のＮＺ起源ヨーロッパ型プロポリスから単離した化合物であるピノストロビンカルコンの抗胃腸癌活性の評価について説明する（表６、実施例２）。この研究は、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、およびヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０についての増殖アッセイを用いて行った。
【０２５３】
２００μｇ／ｍｌの濃度でアッセイに使用したピノストロビンカルコンは、粗プロポリスから単離し、大規模に精製した。その同一性をＮＭＲおよびＭＳにより確認した。実施例３に詳細に示したのと同じ試験手順を実施例６にも使用した。
【０２５４】
結果
ピノストロビンカルコンについての抗増殖アッセイの結果を表１０に示す。細胞のみの結果（陰性対照）、および５−ＦＵ陽性対照の結果は実施例３と同じであるので、表１０には含めない。
【０２５５】
（表１０）４種類の胃腸細胞株に対するピノストロビンカルコンの抗増殖活性
0006444984.tif 000039
【０２５６】
考察
ピノストロビンカルコンは４種類の癌細胞株のうちの３種類に対して高度から中程度の活性があり、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１の増殖を８３.３％阻害し、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６の増殖を５１.２％阻害し、およびヒト食道扁平上皮細胞癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖を４５.０％阻害した。
【０２５７】
しかし、ピノストロビンカルコンは、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７に対して活性はなかった。驚くべきことに、ピノストロビンカルコンはこの細胞株の増殖についてわずかであるが、統計的に有意ではない刺激性があった。他の３種類の細胞株に対する阻害の程度は、既知の抗癌剤の５−フルオロウラシルを使用して達成した程度と同じであるか、またはそれよりも実質的に優れていた。結果はまた、画分Ｓ＃２４ ６０％  Ｆ９（５４−５７）中の不純なピノストロビンカルコンがＤＬＤ−１の増殖を実質的に阻害することが示された実施例２の結果を再確認する。
【０２５８】
実施例７
この実施例では、画分Ｓ＃１６  ６０％のＦ８（４１−４３）中のＮＺ起源ヨーロッパ型プロポリスから単離した化合物であるピノバンクシン３−Ｏ−アセテートの抗胃腸癌活性の評価について説明する（表６、実施例２）。この研究は、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、およびヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０についての増殖アッセイを用いて行った。
【０２５９】
２００μｇ／ｍｌの濃度でアッセイに使用したピノバンクシン３−Ｏ−アセテートは純粋な実験室の標準物質であり、同一性をＮＭＲおよびＭＳにより確認した。実施例３に詳細に示したのと同じ試験手順を実施例７にも使用した。
【０２６０】
結果
ピノバンクシン３−Ｏ−アセテートについての抗増殖アッセイの結果を表１１に示す。細胞のみ（陰性対照）の結果および５−ＦＵ陽性対照の結果は実施例３と同じであるので、表１１には含めない。
【０２６１】
（表１１）４種類の胃腸細胞株に対するピノバンクシン３−Ｏ−アセテートの抗増殖活性
0006444984.tif 000040
【０２６２】
考察
ピノバンクシン３−Ｏ−アセテートは４種類全ての癌細胞株に対して高度から中程度の活性があり、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１の増殖を７５.４％阻害し、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６の増殖を９０.６％阻害し、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７の増殖を４８.２％阻害し、ヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖を６８.０％阻害した。
【０２６３】
阻害の程度は、既知の抗癌剤の５−フルオロウラシルを使用して達成された程度よりも実質的に優れていた。結果はまた、画分Ｓ＃１６の６０％  Ｆ８（４１−４３）中の不純な３ピノバンクシン３−Ｏ−アセテートは、ＤＬＤ−１の増殖を実質的に阻害することが示された実施例２の結果を再確認する。
【０２６４】
実施例８
この実施例では、画分Ｓ＃１８  ６０％  Ｆ８（５２−５３）中のＮＺ起源ヨーロッパ型プロポリスから単離した化合物であるピノセンブリンの抗胃腸癌活性の評価について説明し、標準物質としてＳ＃３７を使用した（表６、実施例２）。この研究は、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、およびヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０についての増殖アッセイを用いて行った。
【０２６５】
２００μｇ／ｍｌの濃度でアッセイに使用したピノセンブリンは、純粋な標準物質であった。実施例３に詳細に示されるのと同じ試験手順を実施例８にも使用した。
【０２６６】
結果
ピノセンブリンについての抗増殖アッセイの結果を表１２に示す。細胞のみ（陰性対照）の結果および５−ＦＵ陽性対照の結果は実施例３と同じであるので、表１２には含めない。
【０２６７】
（表１２）４種類の胃腸細胞株に対するピノセンブリンの抗増殖活性
0006444984.tif 000041
【０２６８】
考察
ピノセンブリンは４種類全ての癌細胞株に対して非常に活性があり、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１の増殖を９１.７％阻害し、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６の増殖を９９.１％阻害し、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７の増殖を７２.５％阻害し、ヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖を９６.３％阻害した。
【０２６９】
阻害の程度は、既知の抗癌剤５−フルオロウラシルを使用して達成された程度よりも実質的に優れており、ＫＹＳＥ−３０およびＨＣＴ−１１６については、ほとんど全ての細胞が死滅した。結果はまた、画分Ｓ＃１８  ６０％  Ｆ８（５２−５３）中の不純なピノセンブリンおよびピノセンブリン標準物質Ｓ＃３７の両方がＤＬＤ−１の増殖をほぼ完全に阻害することが示された実施例２の結果を再確認する。
【０２７０】
実施例９
この実施例では、画分Ｓ＃２３  ６０％  Ｆ９（４９−５１）中のＮＺ起源ヨーロッパ型プロポリスから単離した化合物であるフェルラ酸ベンジルの抗胃腸癌活性の評価について説明する（表６、実施例２）。この研究は、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７およびヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０についての増殖アッセイを用いて行った。
【０２７１】
２００μｇ／ｍｌの濃度でアッセイに使用したフェルラ酸ベンジルは、化学的に合成し、その同一性をＮＭＲ、ＭＳにより確認し、次いで、ＮＺプロポリスから単離したエステルを親酸およびアルコールに加水分解することにより、それらを真の標準化合物と比較して同定した。実施例３に詳細に示されるのと同じ試験手順を実施例９にも使用した。
【０２７２】
結果
フェルラ酸ベンジル用抗増殖アッセイの結果を表１３に示す。細胞のみ（陰性対照）の結果および５−ＦＵ陽性対照の結果は実施例３と同じであるので、表１３には含めない。
【０２７３】
（表１３）４種類の胃腸細胞株に対するフェルラ酸ベンジルの抗増殖活性
0006444984.tif 000042
【０２７４】
考察
フェルラ酸ベンジルは４種類全ての癌細胞株に対して非常に活性があり、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１の増殖を８６.０％阻害し、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６の増殖を９５.９％阻害し、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７の増殖を８７.０％阻害し、ヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖を９８.６％阻害した。
【０２７５】
阻害の程度は、既知の抗癌剤５−フルオロウラシルを使用して達成された程度よりも実質的に優れており、ＫＹＳＥ−３０およびＨＣＴ−１１６については、ほとんど全ての細胞が死滅した。結果はまた、画分Ｓ＃２３ ６０％  Ｆ９（４９−５１）中のフェルラ酸ベンジルおよびイソフェルラ酸ベンジルの不純な混合物がＤＬＤ−１の増殖を実質的に阻害することが示された実施例２の結果を再確認する。
【０２７６】
実施例１０
この実施例では、画分Ｓ＃２３ ６０％  Ｆ９（４９−５１）中のＮＺ起源ヨーロッパ型プロポリスから単離した化合物であるイソフェルラ酸ベンジルの抗胃腸癌活性の評価について説明する（表６、実施例２）。この研究は、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、およびヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖アッセイを用いて行った。
【０２７７】
２００μｇ／ｍｌの濃度でアッセイに使用したイソフェルラ酸ベンジルは、化学的に合成し、その同一性をＮＭＲ、ＭＳにより確認し、次いで、ＮＺプロポリスから単離したエステルを親の酸およびアルコールに加水分解することにより、それらを真の標準化合物と比較して同定した。実施例３に詳細に示されるのと同じ試験手順を実施例１０にも使用した。
【０２７８】
結果
イソフェルラ酸ベンジルについての抗増殖アッセイの結果を表１４に示す。細胞のみ（陰性対照）および５−ＦＵ陽性対照の結果は、実施例３と同じであるので、表１４には含めない。
【０２７９】
（表１４）４種類の胃腸細胞株に対するイソフェルラ酸ベンジルの抗増殖活性
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【０２８０】
考察
イソフェルラ酸ベンジルは４種類全ての癌細胞株に対して非常に活性があり、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１の増殖を９０.８％阻害し、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６の増殖を９４.８％阻害し、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７の増殖を８０.０％阻害し、ヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖を９５.８％阻害した。
【０２８１】
阻害の程度は、既知の抗癌剤５−フルオロウラシルを使用して達成された程度よりも実質的に優れており、構造異性体フェルラ酸ベンジルで達成された阻害の程度とほぼ同じであり、ＫＹＳＥ−３０およびＨＣＴ−１１６については、ほとんど全ての細胞が死滅した。結果はまた、画分Ｓ＃２３ ６０％  Ｆ９（４９−５１）中のフェルラ酸ベンジルおよびイソフェルラ酸ベンジルの不純な混合物がＤＬＤ−１の増殖を実質的に阻害することが示された実施例２の結果を再確認する。
【０２８２】
実施例１１
この実施例では、画分Ｓ＃２７ ６０％  Ｆ１０中のＮＺ起源ヨーロッパ型プロポリスから単離した化合物であるクリシン−７−メチルエーテルとしても知られているテクトクリシンの抗胃腸癌活性の評価について説明し、比較標準物質としてＳ＃３５を使用した（表６、実施例２）。この研究は、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、およびヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖アッセイを用いて行った。
【０２８３】
２００μｇ／ｍｌの濃度でアッセイに使用したテクトクリシンは真の標準物質であった。実施例２の試料Ｓ＃３５のように適切に溶解していなかったので、テクトクリシンをトリエチレングリコールモノメチルエーテルに溶解したことを除いて、実施例３に詳細に示したのと同じ試験手順を実施例１１にも使用した。
【０２８４】
結果
テクトクリシンについての抗増殖アッセイの結果を表１５に示す。細胞のみ（陰性対照）の結果および５−ＦＵ陽性対照の結果は実施例３と同じであるので、表１５には含めない。
【０２８５】
（表１５）４種類の胃腸細胞株に対するピノバンクシン３−Ｏ−アセテートの抗増殖活性
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【０２８６】
考察
テクトクリシンは４種類全ての癌細胞株に対して、高度から中程度の活性があり、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１の増殖を９２.８％阻害し、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６の増殖を９０.１％阻害し、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７の増殖を５４.０％阻害し、ヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖を８７.６％阻害した。
【０２８７】
阻害の程度は、既知の抗癌剤５−フルオロウラシルを使用して達成された程度よりも実質的に優れていた。結果はまた、不純なテクトクリシンがＤＬＤ−１の増殖を実質的に阻害することが示されたＳ＃２７ ６０％  Ｆ１０についての実施例２の結果を再確認するが、今回は試料が試験媒体中に完全に溶解したので、実施例２のＳ＃３５と異なる。
【０２８８】
実施例１２
この実施例では、ヨーロッパ型プロポリスと広く関連し、ＮＺプロポリスから単離された場合にはＤＬＤ−１に対して不活性であることが示されている化合物で、ｐ−クマル酸としても知られているパラ−クマル酸の抗胃腸癌活性の評価について説明する（実施例２にはデータ示さず）。この研究は、ヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６、ヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７、およびヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０の増殖アッセイを用いて行った。
【０２８９】
２００μｇ／ｍｌの濃度でアッセイに使用したｐ−クマル酸は、真の標準物質であった。
【０２９０】
結果
ｐ−クマル酸抗増殖アッセイの結果を表１６に示す。細胞のみ（陰性対照）の結果および５−ＦＵ陽性対照の結果は、実施例３と同じであるので、表１６には含めない。
【０２９１】
（表１６）４種類の胃腸細胞株に対するｐ−クマル酸の抗増殖活性
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【０２９２】
考察
ｐ−クマル酸は、ヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０に対して中程度の活性を示し、４６.１％阻害する。しかし、増殖を１４.３％阻害するヒト結腸腺癌細胞株ＤＬＤ−１、および増殖を１７.３％阻害するヒト胃癌細胞株ＮＣＩ−Ｎ８７に対しては、統計的に有意ではないがあまり活性はなかった。ｐ−クマル酸は、ヒト結腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６に対して不活性であるが、統計的に有意ではないが、増殖をわずか２.６％刺激した。
【０２９３】
したがって、この化合物は、扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０に対して活性があるとみなすことができる。ピノセンブリンおよびｐ−クマル酸を、それぞれ、それらの強力な活性および弱い活性に基づいて正および負の対照として選択した。
【０２９４】
実施例１３
この実施例では、２００μｇ／ｍｌの濃度で実施例４、５、８および９で試験し、示されたＮＺ型およびポーランドポプラ型のプロポリスならびにプロポリスから単離された最も生物活性がある化合物の抗食道癌活性の詳細な評価を提供する。この研究は、実施例３に概説した一般的な方法を用いるヒト食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０についての増殖アッセイを用いて行った。試験化合物は、１００μｇ／ｍｌのピノセンブリン、１００μｇ／ｍｌのジメチルアリルカフェ酸、１０μｇ／ｍｌの３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、５０μｇ／ｍｌのフェルラ酸ベンジルであった。２種類のプロポリス試料は、ピノセンブリンおよびピノバンクシン３−Ｏ−アセテートが濃縮されたＮＺプロポリスチンキ、ｐ−クマル酸が濃縮されたポーランドプロポリスチンキであった。両方の試料を蒸発乾固させた後、試験溶液に溶解し、最終濃度を５０μｇ／ｍｌにした。蒸発乾固させた後の２種類のプロポリスチンキ試料の組成を、乾燥固体１グラムあたりの化合物（ｍｇ）で表１７および１８に示す。
【０２９５】
（表１７）蒸発乾固させたプロポリスチンキのフラボノイド組成（ｍｇ／ｇ乾燥固体）
0006444984.tif 000046
Ｐ−３−Ｏ−Ａ＝ピノバンクシン３−Ｏ−アセテート；ピノ−７−ｍｅ＝ピノセンブリン−７−メチルエーテル
【０２９６】
（表１８）蒸発乾固させたプロポリスチンキのフェノール酸およびエステル組成（ｍｇ／ｇ乾燥固体）
0006444984.tif 000047
ＣＡＰＥ＝カフェ酸フェネチルエステル、ベンジルｆ＆ｉｓｏ−ｆ＝フェルラ酸ベンジルおよびイソフェルラ酸ベンジル、３Ｍ３Ｂカフェ酸＝３−メチル−３−ブテニルカフェ酸、ＤＭＡカフェ酸＝ジメチルアリルカフェ酸
【０２９７】
ＮＺプロポリスは、ポーランドプロポリスよりも実質的に高いレベルのフラボノイドのピノセンブリンおよびピノバンクシン３−Ｏ−アセテートを有する。ジメチルアリルカフェ酸および３−メチル−３−ブテニルカフェ酸の含有量はまた実質的に高く、一緒に定量したフェルラ酸ベンジルおよびイソフェルラ酸ベンジルの合計レベルも実質的に高かった。ポーランドプロポリスは、実質的に高いレベルのｐ−クマル酸、および中程度に高いレベルのＣＡＰＥを有する。
【０２９８】
試験した化合物およびプロポリスチンキ試料についてのＫＹＳＥ−３０細胞増殖アッセイの結果を、３種類の濃度での陽性対照５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）および陰性対照（試験化合物または陽性対照を含まず、培地のみを有する細胞）の結果と共に表１９に示す。この表において、ｎは反復回数であり（ｎ＜６は、増殖の１００％阻害を与えたいくつかの反復を示す）、ＯＤは５７０ｎｍで測定した光学密度であり、ＳＥＭは測定された平均光学密度値に付随する標準誤差であり、ｐは、測定がスチューデントｔ検定を用いて統計的に有意である確率の値であり、本明細書では＜０.０５とされ（ＮＳ＝有意ではない）、％阻害は、陰性対照と比較した増殖の低下の割合であり、大きい数字は試験化合物が抗癌増殖能を有することを示す。
【０２９９】
（表１９）食道扁平上皮癌細胞株ＫＹＳＥ−３０に対する試験化合物の抗増殖活性
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【０３００】
考察
この実施例は、プロポリスから単離した化合物がプロポリスよりＫＹＳＥ−３０の増殖阻害においてより効果的であり、医薬製剤に適する候補分子であることを示す。この実施例はまた、ピノセンブリン、ジメチルアリルカフェ酸、フェルラ酸ベンジル、３−メチル−３−ブテニルカフェ酸のための用量反応の指標も提供する。ジメチルアリルカフェ酸およびフェルラ酸ベンジルの両方は、それぞれ実施例４および９で使用した濃度の半分ならびに１／４であっても非常に高い活性があることが示されている。ジメチルアリルカフェ酸についての６回の反復のうち３回の反復のみが１００％未満の増殖阻害を与えた。フェルラ酸ベンジルについての６回の反復のうち５回の反復のみが１００％未満のＫＹＳＥ−３０の増殖阻害を与えた。３−メチル−３−ブテニルカフェ酸もまた、実施例５で使用した濃度のわずか５％である１０μｇ／ｍｌでまだ中程度の活性（３９.３％阻害）を示したので、増殖の非常に強力な阻害剤である。ピノセンブリンは、１００μｇ／ｍｌでまだ高い活性（５０.３％阻害）を示した。増殖を５０.３％阻害するＮＺプロポリスは、２９.６％阻害するポーランドプロポリスよりも効果的であり、高レベルで高活性のジヒドロフラボノイドのピノセンブリンおよびピノバンクシン−３−Ｏ−アセテートならびに低レベルで中程度の活性を示すｐ−クマル酸を有する利点を反映する。
【０３０１】
産業上の利用可能性
プロポリスから誘導される化合物またはその画分を含む本発明の抗胃腸癌組成物は、食品および飲料、医療機器、医薬品、機能性食品および医薬品を含む消費財に使用できる。例えば、胃腸癌およびその症状の治療におけるそのような組成物を使用する方法は、医療分野に適用される。