(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は配列番号１に示されるアミノ酸配列の１つのアミノ酸残基が置換され若しくは欠失したアミノ酸配列若しくは配列番号１に示されるアミノ酸配列に１つのアミノ酸残基が付加されたアミノ酸配列からなり、かつ抗炎症活性を有するポリペプチド。
【請求項２】
請求項１に記載のポリペプチドの少なくとも一つを有効成分とする抗炎症剤。
【請求項３】
請求項１に記載のポリペプチドの少なくとも一つを含有する、抗炎症用組成物。
【請求項４】
組成物がフィコエリスリンを含む藻類のサーモリシン分解物である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
藻類が紅藻類である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
紅藻類がダルスである、請求項５に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗炎症性ポリペプチド及び当該ポリペプチドを含む抗炎症性組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然資源の少ない日本において、未利用天然資源の有効利用が課題であることは謳われて久しい。特に海洋に囲まれた国土を有する我が国では、有用な海洋資源の探索及びその利用は重要な意義を持つ。
【０００３】
海洋資源のうち、生育が早くかつ近海で回収が容易な海藻類は、バイオエタノールの原料として、又はフコキサンチンその他の様々な生理活性成分の原料として、多方面において有効利用が図られている。
【０００４】
日本の沿岸及び近海に生息する海藻類の例として、紅藻類（ｒｅｄ  ａｌｇａｅ）が挙げられる。紅藻類は、光合成色素としてクロロフィル、フィコシアニン又はフィコエリスリンなどの光合成に関与する色素を含む、全体として紫色から赤色を呈する海藻類であり、およそ五、六千種存在すると報告されている。
【０００５】
紅藻類は、古くから食素材として利用されている。例えば、トコロテンや寒天の原料としてテングサ目（マクサなど）、オゴノリ目（オゴノリなど）又はイギス目（エゴノリなど）に属する紅藻類が、カラギーナンの原料としてスギノリ目（ツノマタなど）に属する紅藻類がそれぞれ利用されている。
【０００６】
紅藻類はまた、様々な生理活性物質として又はその供給源としても利用されている。特に、紅藻類ダルス目ダルス科の藻類の一種であるダルス（英語名Ｄｕｌｓｅ、学名Ｐａｌｍａｒｉａ  ｐａｌｍａｔａ）の水抽出物については、免疫抑制作用（特許文献１）、抗腫瘍作用（特許文献２）、抗ラジカル作用（特許文献３）、細胞賦活作用（特許文献４）、メラニン生成抑制作用（特許文献５）などの生理活性を示すことが知られている。
【０００７】
本発明者らは、ダルス由来のフィコビリタンパク質をペプシンとトリプシンで連続的に消化して得られる加水分解物が、カラゲニン誘発浮腫を有意に抑制するなどの抗炎症作用を有することを見いだしている（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】李大英ら、第６７回日本栄養・食糧学会講演要旨集、講演番号３Ｌ−０３ａ、公益社団法人日本栄養・食糧学会、平成２５年４月３０日、第２１７ページ
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開平６−２９８６６１号公報
【特許文献２】特開平１−６６１２６号公報
【特許文献３】特表平５−５０４５８３号公報
【特許文献４】特開平８−２５９４４３号公報
【特許文献５】特開平１０−３３０２１９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、海洋資源である紅藻類に含まれるフィコビリタンパク質に由来する、新たな抗炎症性ポリペプチドとこれを含む抗炎症性組成物を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、フィコビリタンパク質に由来する加水分解物の抗炎症作用を研究する過程において、特定のアミノ酸配列からなるオリゴペプチドが抗炎症作用を有していることを見出し、下記の各発明を完成させた。
【００１２】
（１）配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は配列番号１に示されるアミノ酸配列の１〜３つのアミノ酸残基が置換され若しくは欠失したアミノ酸配列若しくは配列番号１に示されるアミノ酸配列に１〜３つのアミノ酸残基が付加されたアミノ酸配列からなり、かつ抗炎症活性を有するポリペプチド。
（２）（１）に記載のポリペプチドの少なくとも一つを有効成分とする抗炎症剤。
（３）（１）に記載のポリペプチドの少なくとも一つを含有する、抗炎症性組成物。
（４）組成物がフィコエリスリンを含む藻類のサーモリシン分解物である、（３）に記載の組成物。
（５）藻類が紅藻類である、（４）に記載の組成物。
（６）紅藻類がダルスである、（５）に記載の組成物。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のポリペプチド及び該ポリペプチドを含む抗炎症性組成物は、天然の海洋資源である藻類、特に食経験のある紅藻類であるダルスに由来するポリペプチド又はサーモリシンによる分解物であり、安全性に優れたポリペプチド又は抗炎症性組成物として利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ダルス由来のフィコビリタンパク質のサーモリシン分解物のマウスカラゲニン浮腫抑制作用を示すグラフである。図中の破線はコントロール群、実線はサーモリシン分解物投与群、点線はインドメタシン投与群をそれぞれ表す。
【図２】ダルス由来のフィコビリタンパク質のサーモリシン分解物にトリフルオロ酢酸を加えて得られる沈殿物の、マウスマクロファージ様細胞（Ｒａｗ２６４．７細胞、細菌由来リポ多糖（ＬＰＳ）で刺激）からのＴＮＦ−α（パネル上）及びＩＬ−６（パネル下）の産生抑制作用を示すグラフである。＊＊＊はｐ＜０．００１で、いずれもＳｔｕｄｅｎｔ−Ｔテストによる無添加区（Ｃｏｎｔｒｏｌ）との検定結果を示す。
【図３】ダルス由来のフィコビリタンパク質のサーモリシン分解物にトリフルオロ酢酸を加えて得られる沈殿物をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＡＳＳで解析したときのスペクトルである。
【図４】化学合成されたポリペプチド（ＤＤＰ８３−９２）のＴＮＦ−α（パネル上）及びＩＬ−６（パネル下）の産生抑制作用を示すグラフである。＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．０１で、いずれもＳｔｕｄｅｎｔ−Ｔテストによる無添加区（０）との検定結果を示す。
【図５】ダルスのフィコビリタンパク質を各種のタンパク質分解酵素で消化した分解物の、Ｒａｗ２６４．７細胞（ＬＰＳで刺激）からのＴＮＦ−α（パネル上）及びＩＬ−６（パネル下）の産生抑制作用を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本出願で開示される発明の一態様である抗炎症性ポリペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は配列番号１に示されるアミノ酸配列の１〜３つのアミノ酸残基が置換され若しくは欠失したアミノ酸配列若しくは配列番号１に示されるアミノ酸配列に１〜３つのアミノ酸残基が付加されたアミノ酸配列からなり、かつ抗炎症活性を有するポリペプチドである。
【００１６】
配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドは、フィコビリタンパク質を構成するサブユニットであるフィコエリスリンβ鎖の８３番目〜９２番目までの部分アミノ酸配列からなるポリペプチドである。以下、このポリペプチドをＤＤＰ８３−９２と表す。
【００１７】
ＤＤＰ８３−９２は、ダルスの水抽出画分に含まれるフィコビリタンパク質をタンパク質分解酵素であるサーモリシン（ｔｈｅｒｍｏｌｙｓｉｎ、ＥＣ３．４．２４．２７）で消化した分解物から見いだされた、全１０残基の比較的短鎖のポリペプチドである。
【００１８】
ＤＤＰ８３−９２は、後の実施例にその一部が示されるように、マクロファージからの一酸化窒素（ＮＯ）若しくはＴＮＦ−αの産生抑制、又はカラギーナン誘導浮腫の抑制などの抗炎症作用を示す。このように、ＤＤＰ８３−９２は抗炎症剤として利用可能である。本発明における抗炎症作用とは、マクロファージからの一酸化窒素（ＮＯ）、ＴＮＦ−α若しくはインターロイキン６（ＩＬ−６）の産生、又はカラギーナン誘導浮腫の少なくともいずれか一つを抑制することができる作用として定義される。
【００１９】
また本出願は、ＤＤＰ８３−９２の改変体、例えば配列番号１に示されるアミノ酸配列の１〜３つのアミノ酸残基が置換され若しくは欠失したアミノ酸配列若しくは配列番号１に示されるアミノ酸配列に１〜３つのアミノ酸残基が付加されたアミノ酸配列からなり、かつ抗炎症活性を有するポリペプチドも提供する。以下、かかるポリペプチドをＤＤＰ８３−９２改変ポリペプチドと表す。
【００２０】
ＤＤＰ８３−９２改変ポリペプチドの好ましい例は、配列番号１に示されるアミノ酸残基の１〜３つがいわゆる保存的に置換されたポリペプチドである。その様なポリペプチドの例としては、配列番号１に示されるアミノ酸配列におけるグルタミン酸がアスパラギン酸に、アスパラギン酸がグルタミン酸若しくはアスパラギンに、アルギニンがリジンに、グリシンがアラニンに、ロイシンがイソロイシン若しくはバリンに、及び／又はイソロイシンがロイシン若しくはバリンにそれぞれ置換された改変ポリペプチドを挙げることができる。また、ＤＤＰ８３−９２のＮ末端及び／又はＣ末端の各１残基程度が欠失された改変ポリペプチド、ＤＤＰ８３−９２のＮ末端及び／又はＣ末端に１〜数個の任意のアミノ酸残基が付加されたポリペプチド、ヒスチジンタグなどの機能的アミノ酸配列又は任意のタンパク質との融合タンパク質を構成し得るアミノ酸配列が付加されたポリペプチドなども、ＤＤＰ８３−９２改変ポリペプチドの例として挙げることができる。
【００２１】
本出願は、フィコエリスリンを含む藻類、特にフィコエリスリンを含む紅藻類のサーモリシン分解物を、抗炎症性組成物として提供する。
【００２２】
後の実施例で示すように、ダルスのサーモリシン分解物自体、ＤＤＰ８３−９２と同様に抗炎症作用を示す。ＤＤＰ８３−９２は、ダルスの水抽出画分に含まれるフィコビリタンパク質をサーモリシンで消化した分解物から見いだされた、フィコビリタンパク質を構成するサブユニットであるフィコエリスリンβ鎖の８３番目〜９２番目までの部分アミノ酸配列からなるポリペプチドである。
【００２３】
藍藻及び紅藻類は、光合成を行うためにフィコビリソームと称されるコアとロッドからなるタンパク質超複合体を有することが知られている。フィコビリソームは、フィコビリンと特定のアポタンパク質が共有結合したフィコビリタンパク質と呼ばれる色素タンパク質と、これを連結するリンカータンパク質を含んでいる。フィコビリソームでは、光合成における光エネルギーの伝達が、光化学的性質が異なる複数のフィコビリタンパク質であるアロフィコシアニン、フィコシアニン、フィコエリスリンなどを介して行われている。フィコエリスリンは、フィコエリスリンβ鎖を構成要素とする赤色蛍光のマルチサブユニットタンパク質であり、フィコビリソームを構成し、紅藻類の赤色の元となっている。
【００２４】
したがって、ダルスに限らず、フィコエリスリンを含む藻類、特にフィコエリスリンを含む紅藻類のサーモリシン分解物も、抗炎症性組成物として利用可能であることが期待される。
【００２５】
本発明において利用可能な藻類はフィコビリタンパク質であるフィコエリスリンを含む藻類であり、含有量が高い紅藻類であることが好ましい。そのような紅藻類の例としては、アクロカエティウム目、チノリモ目、ウシケノリ目、ウミゾウメン目、エリスロペルティス目、オオイシソウ目、カクレイト目、サンゴモ目、ダルス目、テングサ目、ロドゴルゴン目、ベニマダラ目、カギノリ目、カギケノリ目、カワモズク目、スギノリ目、オゴノリ目、マサゴシバリ目、イタニグサ目、およびイギス目に属する紅藻類を挙げることができる。好ましい紅藻類はダルス目に属する紅藻類であり、特に好ましい紅藻類はダルスである。
【００２６】
藻類のサーモリシン消化は、生の藻類を微細化したものに対して、又は乾燥させ微粉末化した藻類を適量の水に浸すことで得られる水抽出画分に対して行えばよく、特殊な有機溶媒や補助剤は、使用しても差し支えないが必須ではない。またサーモリシン消化は、試薬として又はバルク製品として市販されているサーモリシンを用い、推奨された反応条件の下で行えばよく、特別な処理条件は必要とはされない。サーモリシンの使用量は、藻類タンパク質の乾燥重量（グラム）に対して０．１〜１％重量の範囲で適宜使用すればよい。処理時間は概ね３０分〜６時間、好ましくは１〜３時間とすればよい。
【００２７】
ＤＤＰ８３−９２は、サーモリシンにとって好適な温度範囲とされる６５〜８５℃、さらには１００℃に置かれても、その抗炎症作用を失わない。ＤＤＰ８３−９２のこのような高温耐性は、藻類のサーモリシン消化を高温で行うことを可能にし、雑菌汚染を防止することができるという利点をもたらし得る。
【００２８】
ＤＤＰ８３−９２は、上記紅藻類、特にダルスの水抽出画分に含まれるフィコビリタンパク質をサーモリシンで消化した分解物から、塩析、クロマトグラフィーその他の当業者が通常に行うことができる一般的な方法を用いて、部分的に若しくは高純度に精製し又は単離することができる。
【００２９】
ＤＤＰ８３−９２はまた、ｔ−Ｂｏｃ法に代表される種々の化学的方法によって製造することができる。さらに、ＤＤＰ８３−９２のアミノ酸配列をコードする核酸を用いた遺伝子工学的方法によって製造することもできる。同様に、ＤＤＰ８３−９２改変ポリペプチドも化学的方法及び／又は遺伝子工学的方法によって製造することができる。このようなポリペプチドの化学的方法又は遺伝子工学的方法による製造は、それぞれ当業者に公知又は周知な一般的な方法を用いて行えばよい。
【００３０】
本出願により提供されるポリペプチド又は抗炎症性組成物の好ましい態様において、前記抗炎症性組成物がサーモリシン分解物である場合、その有効量は、投与される個体の体重１ｋｇあたり０．１ｍｇ〜５００ｍｇ、好ましくは１ｍｇ〜３００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇ〜１００ｍｇであり、これを１回または複数回に分けて投与することができる。また、サーモリシン分解物以外の前記抗炎症性組成物の有効量、及びポリペプチドの有効量は、サーモリシン分解物に含まれるポリペプチド量を参照することにより、当業者によって適宜決定される。
【００３１】
本出願により提供されるポリペプチド又は抗炎症性組成物は、精製水その他の溶媒や希釈剤などで適宜希釈した液体状又は固体状の形態へと加工してもよい。更に、本出願により提供されるポリペプチド又は抗炎症性組成物は、当業者に公知の任意の薬学的に許容される賦形剤、担体その他の成分と共に医薬組成物を形成し、又は製剤化することができる。このような医薬組成物及び製剤も、本発明である抗炎症性組成物に包含される。
【００３２】
本出願により提供されるポリペプチド又は抗炎症性組成物と、適当な溶媒、賦形剤、担体及び／又は補助剤等とを含む医薬組成物又は製剤においては、抗炎症作用が発揮されるに十分な量の前記ポリペプチド又は抗炎症性組成物を含有させることが好ましい。かかる量は、投与方法、患者の症状、年齢等に応じて当業者が適宜決めることができる。例えば、該組成物重量当たり、０．１〜５０重量％、好ましくは、１〜１０重量％程度の前記サーモリシン分解物を含有させることが好ましい。
【００３３】
薬学的に許容される賦形剤、担体その他の成分は当業者において公知又は周知であり、当業者が通常の実施能力の範囲内で、例えば第十六改正日本薬局方その他の規格書に記載された成分から製剤の形態に応じて適宜選択して使用することができる。
【００３４】
賦形剤、担体又は補助剤の例としては、例えば、乳糖、ブドウ糖、マンニット、デキストリン、シクロデキストリン、でん粉、ショ糖、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、イオン交換樹脂、メチルセルロース、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軟質無水ケイ酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク、トラガント、ベントナイト、ビーガム、酸化チタン、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラチン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ろう、流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非イオン性界面活性剤、プロピレングルコール、水等を挙げることができる。
【００３５】
本出願により提供されるポリペプチド又は抗炎症性組成物を含む医薬組成物又は製剤は、任意の剤型をとることができる。剤形の例としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒、内服液、散剤及びシロップ剤等の内服剤、坐剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼付剤、スプレー剤及びローション剤等の外用剤、液体製剤、懸濁剤、注射剤等を挙げることができる。これらの製剤は、当業者が常法に従って調製することができる。
【００３６】
本出願により提供されるポリペプチド又は抗炎症性組成物を含む医薬組成物又は製剤は、当業者に公知の任意の投与経路、例えば、経口投与、皮膚外用剤等の非経口投与、及び直腸内投与等で投与することができる。このような医薬組成物又は製剤の製造は、それぞれ当業者に公知又は周知な一般的な方法を用いて行えばよい。
【００３７】
以下、実施例を示して本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明の理解を助けるためのものであって、本発明の技術的範囲はこれらにより限定されるものではない。
【実施例】
【００３８】
＜実施例１＞
１）ダルスのサーモリシン分解物の調製
ダルス葉体を流水で洗浄後、凍結乾燥し、さらに微粉末化した。１０ｇ（グラム）の微粉末に１００ｍＬ（リットル）の蒸留水を加え、５℃で３０分間攪拌しながら水抽出を行った。遠心分離によって上澄みを回収し、７０％硫安分画を３回行って沈殿を回収し、透析によって塩を取り除いて、粗フィコビリタンパク質画分を得た。
【００３９】
５０ｍＬの粗フィコビリタンパク質画分（１０ｍｇタンパク質／ｍＬ、ｐＨを８．０に調節）に対して、サーモリシン（和光純薬工業製、９２００ＰＵ／ｍｇ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃｕｓ  Ｒｏｋｋｏ由来）を１％（ｗ／ｗ）となるように加え、７０℃で１８０分間インキュベーションした後、９５−９８℃で１５分間加熱してサーモリシンを失活させた。これを２０,０００×ｇで３０分間遠心分離して上清を回収し、サーモリシン分解物を得た。
【００４０】
２）抗炎症作用の確認
６週齢の雄ＩＣＲマウス（ｎ＝７）の右後ろ肢足蹠の容積と厚さをプレシスモメータ（ＭＫ−１０１Ｐ、室町機械製）で測定して、０時間の測定値とした。上記で調製したサーモリシン分解物を経口投与（３００ｍｇタンパク質／ｋｇ体重）した１時間後に、右後ろ肢足蹠皮下へ生理食塩水で溶解した１％カラゲニンを４０μＬ注射投与し、１時間毎に５時間まで、右後ろ肢足蹠の容積と厚さを測定した。また、サーモリシン分解物に代えてインドメタシンを１０ｍｇ／ｋｇ投与したＩＣＲマウスをポジコンとして用意した。
【００４１】
サーモリシン分解物と等容積の蒸留水のみを経口投与したコントロールを用意し、その平均値を１００％としたときのサーモリシン分解物又はインドメタシンによるカラゲニン浮腫率を図１に示す。
【００４２】
上記の試験の結果、サーモリシン分解物はコントロールに対してカラゲニン浮腫の増悪（浮腫率の上昇）を約４割程度抑制できることが確認された。
【００４３】
＜実施例２＞
実施例１の１）で調製したサーモリシン分解物（図２でＴｏｔａｌと称する）１０ｍｇを、０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）溶液に１０ｍｇ／ｍＬとなるように加え、室温で１０分間攪拌した後、２０，０００×ｇで１０分間遠心分離し、上清と沈殿を回収した。上清はそのまま凍結乾燥して上清画分とした。沈殿は、０．１％ＴＦＡを含む蒸留水１ｍＬを加えて室温で超音波処理によって確実に溶解・静置した後、２０，０００×ｇで１０分間遠心分離するまでの操作を２回繰り返し、最終的に得られた沈殿画分（図２で沈殿と称する）と上清画分（図２で上清と称する）を凍結乾燥した。
【００４４】
１０％ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地で培養したＲＡＷ２６４．７細胞を２．０×１０５個／ウェルで９６ウェルプレートに播種した後、２時間インキュベートした。培地を交換した後、直ちに測定試料とＬＰＳ（終濃度２．５ｎｇ／ｍＬ）を添加して２４時間培養（３７℃、５％ＣＯ２）した。その後、培養液中のＴＮＦ−αおよびＩＬ−６量をＥＬＩＳＡ法で測定した。ＴＮＦ−αの測定では、一次抗体と二次抗体にそれぞれ抗マウスＴＮＦ−αモノクローナル抗体とビオチン標識ＴＮＦ−α抗体を用いた。また、ＩＬ−６の測定では、一次抗体と二次抗体にそれぞれ抗マウスＩＬ−６モノクローナル抗体とビオチン標識ＩＬ−６抗体を用いた。両者の定量は、ＨＲＰ標識抗ビオチン抗体とＴＭＢ溶液を用いた吸光法でおこなった。この結果を図２に示す。図中の数字は各試料の添加量（μｇ／ｍＬ）である。
【００４５】
図２に示されるように、上清画分と比較して沈殿画分においてより強い抗炎症作用が確認された。
【００４６】
＜実施例３＞ＤＤＰ８３−９２の特定及び活性評価
１）ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＡＳＳ解析
実施例２で調製した沈殿画分に含まれる物質を、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社製、ＡＢ４７００、マトリックスはα−ＣＨＣＡ）を用いて解析した。得られたスペクトルを図３に示す。
【００４７】
スペクトル上の主要なピークとしてＭｗ＝１２４７．７を選択し、その構造をさらにＣｏｌｌｉｓｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＣＩＤ）−Ｈｉｇｈ  ｅｎｅｒｇｙ  ｃｏｌｌｉｓｉｏｎ法によって詳細に解析したところ、配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドであることが確認された。このアミノ酸配列をクエリーとしてＤＮＡ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ  ｏｆ  Ｊａｐａｎに対して検索したところ、フィコエリスリンβ鎖の８３番目〜９２番目までの部分アミノ酸配列と一致することが確認された。
【００４８】
２）ポリペプチドの合成
ペプチドシンセサイザー（モデルＭｕｌｔｉＳｙｎＴｅｃｈ社、ＳｙｒｏＩＩ）を用いて、フィコエリスリンβ鎖の８３番目〜９２番目までの部分アミノ酸配列からなる純度９５％以上のポリペプチド（ＤＤＰ８３−９２）を化学合成した。化学合成されたＤＤＰ８３−９２のＴＮＦ−α産生抑制能及びＩＬ−６産生抑制能を、実施例２に記載された方法により測定した。その結果を図４に示す。
【００４９】
図４に示されるように、合成されたＤＤＰ８３−９２は、ＴＮＦ−α及びＩＬ−６の産生をいずれも抑制し、抗炎症作用を有することが確認された。
【００５０】
＜試験例＞
実施例１の１）のサーモリシンに代えて下記表１に示された酵素（いずれも市販品）を用い、各酵素の至適温度及び至適ｐＨにおいてダルスの粗フィコビリタンパク質を消化して、各酵素による分解物を調製した。酵素量は粗フィコビリタンパク質の１％に統一した。それぞれの分解物の抗炎症作用を、ＴＮＦ−α産生抑制能及びＩＬ−６産生抑制能を測定することによって確認した。その結果を図５に示す。なお、ペプシン・トリプシンはペプシンとトリプシンの連続消化による分解物を表す。
【００５１】
【表１】
0006444133.tif 000002
【００５２】
図５に示されるように、サーモリシン分解物は他の酵素による分解物と比較して、最も強い抗炎症作用を示すことが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００５３】
本発明のポリペプチド及び該ポリペプチドを含む抗炎症性組成物は、天然の海洋資源である藻類、特に食経験のある紅藻類であるダルスに由来するポリペプチド又はサーモリシンによる分解物であり、安全性に優れたポリペプチド又は抗炎症性組成物として利用可能である。
【図１】
0006444133.tif 000003
【図２】
0006444133.tif 000004
【図３】
0006444133.tif 000005
【図４】
0006444133.tif 000006
【図５】
0006444133.tif 000007
【配列表】
0006444133000001.app