(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
0006307096.tif 000057
［式中：
Ｒ１は、メチルまたはエチルであり；そして
Ｒ２は、ヒドロキシにより置換されている（Ｃ２−３）アルキルである］；
または薬学的に許容しうるその塩。
【請求項２】
Ｒ２が基（ｉ）〜（ｘｉ）
【化２】
0006307096.tif 000058
から選択される、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
【請求項３】
Ｒ２が請求項２で定義した基（ｉ）〜（ｖｉ）から選択される、請求項１または請求項２に記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
【請求項４】
Ｒ２が請求項２で定義した基（ｉ）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
【請求項５】
Ｒ１がメチルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
【請求項６】
Ｒ１がエチルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
【請求項７】
以下の化合物：
１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−プロパン−１−オン；
１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−エチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−プロパン−１−オン；
（３Ｒ）−１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−ブタン−１−オン；
（３Ｓ）−１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−ブタン−１−オン；
（２Ｒ）−１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−２−メチル−プロパン−１−オン；
１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロパン−１−オン
から選択される請求項１に記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
【請求項８】
結晶形態にある、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
【請求項９】
医薬品として用いるための、請求項１〜８のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩、および薬学的に許容しうる希釈剤またはキャリヤーを含む、医薬組成物。
【請求項１１】
ヒトなどの温血動物における癌の予防または処置に用いるための、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
他の抗腫瘍剤の投与と組み合わせて癌の処置に用いるための、請求項１０または１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
選択された患者の処置において使用するための請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、該選択が、腫瘍由来ＤＮＡまたは腫瘍細胞を含有する患者からの試料を提供し；患者の腫瘍由来ＤＮＡまたは腫瘍細胞中のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子が野生型であるか変異体であるかを決定し；そして、処置するための患者を選択することを含む、前記医薬組成物。
【請求項１４】
癌を患っている患者の処置方法に用いるための請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の医薬組成物であって、該方法が、患者からの腫瘍細胞含有試料を提供し；患者の腫瘍細胞中のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子が野生型であるか変異体であるかを決定し；そして、腫瘍細胞が変異体ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を持つ場合、該患者に、該医薬組成物を投与することを含む、前記医薬組成物。
【請求項１５】
変異体ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を持つと確認されている腫瘍細胞を有する癌を処置するための、請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗癌活性を持ち、したがって人体または動物体の処置方法に有用である、特定の新規アミノピラジン誘導体または薬学的に許容しうるその塩に関する。本発明はまた、前記アミノピラジン誘導体の製造プロセス、それらを含有する医薬組成物、および治療法におけるそれらの使用、例えば、癌の予防または処置における使用を含め、ヒトなどの温血動物における癌の予防または処置に用いるための医薬品の製造におけるそれらの使用に関する。
【０００２】
本発明はまた、ＰＩ３キナーゼファミリーの酵素（あるいは、ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼファミリーまたはＰＩ３Ｋファミリーとして知られる）、とりわけＰＩ３Ｋ−αおよびＰＩ３Ｋ−δアイソフォームの選択的阻害剤であり、例えば抗腫瘍治療に有用である、アミノピラジン誘導体に関する。
【背景技術】
【０００３】
近年、癌の分野において、細胞は、そのＤＮＡの一部が、活性化により悪性腫瘍細胞の形成を引き起こす遺伝子である腫瘍遺伝子に形質転換することにより、癌になる可能性があることが発見された（Ｂｒａｄｓｈａｗ，Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，１９８６，１，９１）。そのような腫瘍遺伝子のいくつかは、キナーゼ、すなわち、タンパク質基質または脂質基質をリン酸化することができる酵素のクラスである、ペプチドの産生をもたらす。キナーゼにはいくつかのクラスがある。
【０００４】
第一にチロシンキナーゼであり、これは、受容体チロシンキナーゼまたは非受容体チロシンキナーゼであることができる。さまざまなクラスの受容体チロシンキナーゼが、異なる受容体チロシンキナーゼの細胞外表面に結合することができる成長因子ファミリーに基づき公知である（Ｗｉｌｋｓ，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９３，６０，４３−７３）；一例として、分類は、ＥＧＦファミリーの受容体チロシンキナーゼを含むクラスＩ受容体チロシンキナーゼを包含する。非受容体チロシンキナーゼは細胞内に位置する；Ｓｒｃ、Ｌｙｎ、ＦｙｎおよびＹｅｓチロシンキナーゼなどのＳｒｃファミリーを含む、さまざまなクラスの非受容体チロシンキナーゼが公知である。
【０００５】
つぎに、特定のキナーゼは、同様に細胞内に位置するセリン／スレオニンキナーゼのクラスに属する。セリン／スレオニンキナーゼシグナル伝達経路は、Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫカスケード、ならびにＰＤＫ−１、ＡＫＴおよびｍＴＯＲなどＰＩ３キナーゼの下流のものを包含する（Ｂｌｕｍｅ−ＪｅｎｓｅｎおよびＨｕｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，２００１，４１１，３５５）。
【０００６】
特定の他のキナーゼは脂質キナーゼのクラスに属することも知られている。これらは、細胞内に位置し、上記キナーゼと同様に、生化学的シグナル、例えば、腫瘍細胞の成長および侵襲性に影響を及ぼすシグナルの伝達に関与する。上記ＰＩ３キナーゼファミリーを含むさまざまなクラスの脂質キナーゼが公知である。
【０００７】
現在、腫瘍遺伝子および腫瘍抑制遺伝子の脱調節(deregulation)は、例えば増大した細胞増殖または増大した細胞生存により、悪性腫瘍の形成に寄与することが、十分に理解されている。現在、ＰＩ３キナーゼファミリーにより媒介されるシグナル伝達経路は、増殖および生存を含むいくつかの細胞プロセスにおいて中心的役割を有し、これらの経路の脱調節は、広範なヒトの癌および他の疾患の原因要素であることも、公知である（Ｋａｔｓｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．，２００１，１７：６１５−６１７およびＦｏｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，１１６：３０３７−３０４０）。
【０００８】
脂質キナーゼのＰＩ３キナーゼファミリーは、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）のイノシトール環の３位をリン酸化する酵素の群である。ＰＩ３キナーゼ酵素の主要な３群が公知であり、これらは、その生理学的特異性に従って分類されている（Ｖａｎｈａｅｓｅｂｒｏｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．，１９９７，２２，２６７；Ｅｎｇｌｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００６，７，６０７）。クラスＩＩＩのＰＩ３キナーゼ酵素は、ＰＩだけをリン酸化する。対照的に、クラスＩＩのＰＩ３キナーゼ酵素は、ＰＩおよびＰＩ４−リン酸［以下、ＰＩ（４）Ｐと略す］の両方をリン酸化する。クラスＩのＰＩ３キナーゼ酵素は、ＰＩ、ＰＩ（４）ＰおよびＰＩ４，５−ビスリン酸［以下、ＰＩ（４，５）Ｐ２と略す］をリン酸化するが、生理学的細胞基質と考えられるのはＰＩ（４，５）Ｐ２だけである。ＰＩ（４，５）Ｐ２のリン酸化は、脂質のセカンドメッセンジャーのＰＩ３，４，５−三リン酸［以下、ＰＩ（３，４，５）Ｐ３と略す］をもたらす。このスーパーファミリーのより関連が遠いメンバーは、クラスＩＶのキナーゼ、例えば、タンパク質基質内のセリン／スレオニン残基をリン酸化するｍＴＯＲおよびＤＮＡ依存性タンパク質キナーゼである。これら脂質キナーゼのうちもっとも研究され理解されているのは、クラスＩのＰＩ３キナーゼ酵素である。
【０００９】
クラスＩのＰＩ３キナーゼは、ｐ１１０触媒サブユニットおよび調節サブユニットからなるヘテロ二量体であり、そのファミリーは、調節パートナーおよび調節機序に基づき、さらにクラスＩａおよびクラスＩｂの酵素に分けられる（Ｅｎｇｌｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００６，７，６０７）。クラスＩａの酵素は、５つの別個の調節サブユニット（ｐ８５α、ｐ５５α、ｐ５０α、ｐ８５βおよびｐ５５γ）と二量化する３つの別個の触媒サブユニット（ｐ１１０α、ｐ１１０βおよびｐ１１０δ、命名法により、ＰＩ３キナーゼのアイソフォームをそれぞれα、β、δと定義する）からなり、すべての触媒サブユニットはすべての調節サブユニットと相互作用して、さまざまなヘテロ二量体を形成することができる。クラスＩａのＰＩ３キナーゼ酵素は、一般に、受容体チロシンキナーゼの成長因子刺激に応答して、調節サブユニットＳＨ２ドメインと、活性化受容体またはＩＲＳ−１などのアダプタータンパク質の特定のホスホチロシン残基との相互作用を介して、活性化される。ｐ１１０αおよびｐ１１０βは両方とも、複数の細胞タイプおよび組織に幅広く発現するが、ｐ１１０δの発現は、白血球集団およびいくつかの上皮細胞に、より限定されている。対照的に、単一のクラスＩｂ酵素は、ｐ１０１調節サブユニットと相互作用するｐ１１０γ触媒サブユニットからなる。さらに、クラスＩｂ酵素は、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）系に応答して、および上記機序により、活性化される。
【００１０】
現在、クラスＩａのＰＩ３キナーゼ酵素が、多種多様なヒト癌における腫瘍形成に直接的または間接的に寄与することを示す、多くの証拠がある（ＶｉｖａｎｏおよびＳａｗｙｅｒｓ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，２００２，２，４８９−５０１）。とりわけ、ＰＩ３キナーゼのｐ１１０α触媒サブユニットをコードするＰＩＫ３ＣＡ遺伝子は腫瘍形成に広く関与する。ｐ１１０αのヘリカルドメインまたは触媒ドメインにもっともよく見いだされる活性化点変異は、ホロ酵素のＰＩ３キナーゼ活性を向上させ、細胞を形質転換することができる。それらは、とりわけ、体細胞において広範な腫瘍タイプにかなりの頻度で生じる変異として報告されている（Ｓａｍｕｅｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００４，３０４，５５４；Ｓａｍｕｅｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ，２００５，７，５６１；Ｅｎｇｌｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００６，７，６０７；Ｚｈａｏ  ＬおよびＶｏｇｔ  ＰＫ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００８，２７  ５４８６）。ｐ８５αにおける腫瘍関連変異も、卵巣癌および結腸癌などの癌で確認されている（Ｐｈｉｌｉｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００１，６１，７４２６−７４２９）。さらに、ｐ１１０αサブユニットは、卵巣腫瘍（Ｓｈａｙｅｓｔｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９９，２１，９９−１０２）および子宮頸部腫瘍（Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０００，１９，２７３９−２７４４）などいくつかの腫瘍において増幅される。
【００１１】
直接的作用に加え、クラスＩａのＰＩ−３キナーゼの活性化は、例えば、受容体チロシンキナーゼ、ＧＰＣＲ系またはインテグリンのリガンド依存型またはリガンド非依存型の活性化により、シグナル伝達経路の上流で起こる腫瘍形成事象に寄与すると考えられる（Ｖａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００４，３０，１９３−２０４）。そのような上流のシグナル伝達経路の例としては、さまざまな腫瘍においてＰＩ３キナーゼ媒介経路の活性化をもたらす受容体チロシンキナーゼＥｒｂ２の過剰発現（Ｈａｒａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０００，１９，６１０２−６１１４）と、腫瘍遺伝子Ｒａｓの過剰発現（Ｋａｕｆｆｍａｎｎ−Ｚｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９７，３８５，５４４−５４８）が挙げられる。これに加えて、クラスＩａのＰＩ３キナーゼは、さまざまな下流のシグナル伝達事象により引き起こされる腫瘍形成に寄与する可能性がある。例えば、ＰＩ（３，４，５）Ｐ３からもとのＰＩ（４，５）Ｐ２への変換を触媒するＰＴＥＮ腫瘍抑制ホスファターゼの作用の喪失は、ＰＩ３キナーゼが媒介するＰＩ（３，４，５）Ｐ３の産生の脱調節を介して、非常に広範囲の腫瘍と関連づけられている（ＳｉｍｐｓｏｎおよびＰａｒｓｏｎｓ，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．，２００１，２６４，２９−４１）。さらに、ＰＩ３キナーゼが媒介する他のシグナル伝達事象の作用の増大は、例えばＡｋｔの活性化により、さまざまな癌に寄与すると考えられる（ＮｉｃｈｏｌｓｏｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ，２００２，１４，３８１−３９５）。
【００１２】
したがって、ＰＩ３キナーゼの一般的な脱調節は、上流および下流のシグナル伝達経路の脱調節とともに、集合的にヒト癌においてもっとも一般的な脱調節された経路の一つになる（Ｈｅｎｎｅｓｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，２００５，４，９８８）。
【００１３】
腫瘍細胞において増殖および生存のシグナル伝達を媒介する役割に加えて、クラスＩａのＰＩ３キナーゼ酵素が、腫瘍関連間質細胞における機能を介して腫瘍形成にも寄与するという証拠も十分にある。例えば、ＰＩ３キナーゼのシグナル伝達は、ＶＥＧＦなどの血管新生促進因子(pro-angiogenic factor)に応答して内皮細胞において血管新生事象を媒介することにおいて、重要な役割を果たすことが知られている（Ａｂｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．，２００４，２４，２９４−３００）。クラスＩのＰＩ３キナーゼ酵素は運動および移動にも関与するので（Ｓａｗｙｅｒ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ，２００４，１３，１−１９）、ＰＩ３キナーゼ阻害剤は、腫瘍細胞の侵襲および転移の阻害を介して治療上の利益をもたらすはずである。
【００１４】
これに加えて、クラスＩのＰＩ３キナーゼ酵素は、炎症細胞の腫瘍形成促進作用(pro-tumourigenic effect)に寄与するＰＩ３キナーゼ活性を有する免疫細胞の調節において、重要な役割を果たす（ＣｏｕｓｓｅｎｓおよびＷｅｒｂ，Ｎａｔｕｒｅ，２００２，４２０，８６０−８６７）。実際、クラスＩａのＰＩ３キナーゼ酵素であるＰＩ３キナーゼδは、血液学的悪性腫瘍、例えば、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、およびマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）における腫瘍形成に、特に関与している。ＰＩ３Ｋ（おもにｐ１１０δ）のシグナル伝達の増加が、広範な悪性リンパ球様細胞に報告されている（Ｈｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１０，１１６．２０７８；Ｉｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２０１０，１１６，１４６０；Ｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００６，１０８，４１７８；Ｒｕｄｅｌｉｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  ２００６，１０８，１６６８；Ｇａｒｃｉａ−Ｍａｒｔｉｎｅｚ．，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，２０１１，１０４，１１１６；Ｒｅｎｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２００７，２，７８０）。これにより、ＰＩ３キナーゼδを標的とし、血液学的悪性腫瘍における初期臨床結果が有望な作用物質が開発された（Ｃａｓｔｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ，２０１２，２１，１５）。
【００１５】
これらの所見は、クラスＩのＰＩ３キナーゼ酵素の薬理学的阻害剤が、癌腫および肉腫などの固形腫瘍ならびに白血病およびリンパ性悪性疾患を含むさまざまな形態の癌疾患の処置に、治療的有用性を有する可能性があることを示唆している。
【００１６】
ＰＩ３キナーゼ酵素の生理学的および病理学的役割を探求する初期の研究では、前臨床および臨床研究の両方で、より広範なキナーゼファミリー、ＰＩ３キナーゼファミリー、またはＰＩ３キナーゼのクラス１ファミリーに、限定されたキナーゼ阻害選択性を有する作用物質が広く用いられていた。したがって、臨床に入っている初期の作用物質を超える改善された治療限界をもたらす可能性がある有用な治療薬を提供するために、より選択的な薬学的ＰＩ３キナーゼのクラス１の阻害剤が必要とされている。
【００１７】
一般に、本発明の化合物は、クラスＩのＰＩ３キナーゼ酵素のサブセットに対し強力な阻害活性を持つ。とりわけクラスＩａのＰＩ３キナーゼ−αおよび−δアイソフォームに対し強力な阻害活性を持ち、−γおよびとりわけ−βアイソフォームに対する阻害活性は比較的低い。該化合物は、より広範なＰＩ３キナーゼファミリーおよびより広範なキノームに対しても選択性を示す。そのような化合物は、クラスＩのＰＩ３キナーゼ酵素に対し十分な効力を持ち、クラスＩのＰＩ３キナーゼのアイソフォームのサブセットを阻害するのに十分な量、とりわけ、クラスＩａのＰＩ３キナーゼ酵素−αおよび−δを阻害するのに十分な量で用いることができる一方、他のキナーゼに対してはほとんど活性を示さない。
【００１８】
ヒトの癌および他の疾患におけるＰＩ３キナーゼシグナル伝達の脱調節を理解することにより、個別化ヘルスケア（ＰＨＣ）または個別化医療として知られるプロセスを通じて本特許に記載する作用物質の処置により恩恵を受ける可能性がもっとも高い患者のサブセットを、標的にする見通しが得られる。これらの作用物質では、増加または変更されたＰＩ３Ｋ−αシグナル伝達および／またはＰＩ３Ｋ−δシグナル伝達に依存する疾患を有する患者が、とりわけ処置から恩恵を受けることができる。応答−予測バイオマーカーの読み取りを提供するために診断を用いることができることは周知である。そのような診断により、経路の脱調節の１以上の読み取り、例えば、限定されるものではないが、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＴＥＮもしくはｐ８５（ＰＩＫ３Ｒ）遺伝子における変異、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の増幅もしくは複製数増加、ＰＩ３Ｋ−αおよび／もしくは−δアイソフォームの過剰発現もしくは活性上昇、または、ホスホ−ＲＴＫもしくはホスホ−ＡＫＴなどの経路内でのホスホバイオマーカーの読み取りの使用を、評価することが可能である。これに加えて、異常または脱調節されたＰＩＫ３ＣＡもしくはＰＩ３Ｋ−αを有する腫瘍における耐性の潜在的マーカーであるＫｒａｓなどの追加的遺伝子の変異状態または活性化状態の測定は（Ｅｎｇｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００８  １４，ｐ１３５１−１３５５；Ｉｈｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００９，６９，ｐ１４３−１６０；Ｊａｎｋｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２０１１，１０，ｐ５５８−５６４）、個別化医療アプローチの予測性の向上に役立つ可能性がある。あるいは、標的化しているがあまり特異的ではない他のアプローチにおいて、処置は、関連ＰＩ３Ｋアイソフォームの脱調節がもっとも多く見られることが公知の疾患サブセットに集中している可能性がある。
【００１９】
記載する化合物は、単独または他の薬学的作用物質（１以上）との組み合わせで、疾患を標的にするために用いることができる。ＰＩ３キナーゼ阻害剤を他の治療と組み合わせると、先天性またはＰＩ３キナーゼ作用物質に応答して誘発される耐性機序を克服することにより、効力を改善することができる。そのようなアプローチを裏付けるのに十分な前臨床データがある（Ｃｏｕｒｔｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ，２０１０，２８，１０７５；Ｅｎｇｌｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００６，７，６０７）。アプローチの１つは、ＰＩ３キナーゼシグナル伝達経路において他の軸を変調させる作用物質（例えば、ｍＴＯＲ、ＡＫＴ、ＲＴＫ、他のＰＩ３−キナゼ作用物質）との‘経路内部’の組み合わせである。第２のアプローチは、１より多くのシグナル伝達経路の阻害が単一経路の阻害より有益であり得る‘経路間’の組み合わせである（例えば、ＭＥＫ阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、Ｂｃｌファミリーモジュレーター、ＲＴＫ阻害剤、またはＰＡＲＰ阻害剤などＤＮＡ損傷シグナル伝達モジュレーターとの組み合わせ）。他のアプローチとしては、ＰＩ３キナーゼ阻害剤を、臨床業務においてすでに確立されている作用物質もしくは治療方式、いわゆる標準治療（ＳｏＣ）アプローチと組み合わせるか、腫瘍間質細胞などの非腫瘍細胞機序を標的にする作用物質と組み合わせるか、または免疫系を介することが挙げられる。
【００２０】
腫瘍形成に加え、クラスＩのＰＩ３キナーゼ酵素が他の疾患の一因となる証拠がある（Ｗｙｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，２４，３６６−３７６）。クラスＩａのＰＩ３キナーゼ酵素の両方、とりわけＰＩ３Ｋ−δ、および単一のクラスＩｂ酵素（ＰＩ３Ｋ−γ）は、免疫系の細胞において重要な役割を有し（Ｋｏｙａｓｕ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００３，４，３１３−３１９）、したがって、炎症性およびアレルギー性の適応症の治療標的である。ＰＩ３キナーゼの阻害はまた、先に記載したように、抗炎症作用を介するか、心筋細胞に影響を及ぼすことにより直接的に、心臓血管疾患を処置するのに有用である（Ｐｒａｓａｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００３，１３，２０６−２１２）。このように、クラスＩのＰＩ３キナーゼ酵素の阻害剤は、癌に加え多種多様な疾患の予防および処置に有用であることができる。
【００２１】
本発明の化合物、すなわちアミノピラジン誘導体は、強力な抗腫瘍活性を持つことが見いだされており、悪性疾患に起因する制御されていない細胞増殖の阻害に有用である。本発明に開示する化合物が薬理学的活性を持つことを単一の生物学的プロセスに対する作用に基づいてのみ示唆しようとするものではないが、該化合物は、クラスＩのＰＩ３キナーゼ酵素の阻害により、とりわけクラスＩａのＰＩ３キナーゼ酵素のサブセットの阻害により、さらに特にＰＩ３Ｋ−αおよび−δアイソフォームの阻害により、抗腫瘍作用をもたらすと考えられる。
【００２２】
本発明の化合物はまた、炎症性疾患（例えば、リウマチ様関節炎および炎症性腸疾患）、線維症（例えば、肝硬変および肺線維症）、腎炎、多発性硬化症、乾癬、良性前立腺肥大症（ＢＰＨ）、皮膚の超過敏反応、血管疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症および再狭窄）、アレルギー性喘息、インスリン依存性糖尿病、糖尿病性網膜症および糖尿病性腎障害などさまざまな非悪性疾患に起因する、制御されていない細胞増殖の阻害に有用であることができる。
【００２３】
プロリンアミドは、国際特許出願ＷＯ２００９／０８０７０５号、ＷＯ２０１０／０２９０８２号およびＷＯ２０１１／０００９０５号においてＮｏｖａｒｔｉｓによりＰＩ３Ｋ−α選択性作用物質として開示されている。アミノピラジン含有ＡＴＲキナーゼ阻害剤は、ＷＯ２０１１／１４３４２６号およびＷＯ２０１０／０７１８３７号（Ｖｅｒｔｅｘ）に開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２４】
【特許文献１】ＷＯ２００９／０８０７０５号
【特許文献２】ＷＯ２０１０／０２９０８２号
【特許文献３】ＷＯ２０１１／０００９０５号
【特許文献４】ＷＯ２０１１／１４３４２６号
【特許文献５】ＷＯ２０１０／０７１８３７号
【非特許文献】
【００２５】
【非特許文献１】Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，１９８６，１，９１
【非特許文献２】Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９３，６０，４３−７３
【非特許文献３】Ｎａｔｕｒｅ，２００１，４１１，３５５
【非特許文献４】Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．，２００１，１７：６１５−６１７
【非特許文献５】Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，１１６：３０３７−３０４０
【非特許文献６】Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．，１９９７，２２，２６７
【非特許文献７】Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００６，７，６０７
【非特許文献８】Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，２００２，２，４８９−５０１
【非特許文献９】Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００４，３０４，５５４
【非特許文献１０】Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ，２００５，７，５６１
【非特許文献１１】Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００８，２７  ５４８６
【非特許文献１２】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００１，６１，７４２６−７４２９
【非特許文献１３】Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９９９，２１，９９−１０２
【非特許文献１４】Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０００，１９，２７３９−２７４４
【非特許文献１５】Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００４，３０，１９３−２０４
【非特許文献１６】Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２０００，１９，６１０２−６１１４
【非特許文献１７】Ｎａｔｕｒｅ，１９９７，３８５，５４４−５４８
【非特許文献１８】Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．，２００１，２６４，２９−４１
【非特許文献１９】Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ，２００２，１４，３８１−３９５
【非特許文献２０】Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，２００５，４，９８８
【非特許文献２１】Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．，２００４，２４，２９４−３００
【非特許文献２２】Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ，２００４，１３，１−１９
【非特許文献２３】Ｎａｔｕｒｅ，２００２，４２０，８６０−８６７
【非特許文献２４】Ｂｌｏｏｄ，２０１０，１１６．２０７８
【非特許文献２５】Ｂｌｏｏｄ，２０１０，１１６，１４６０
【非特許文献２６】Ｂｌｏｏｄ，２００６，１０８，４１７８
【非特許文献２７】Ｂｌｏｏｄ  ２００６，１０８，１６６８
【非特許文献２８】Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，２０１１，１０４，１１１６
【非特許文献２９】Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２００７，２，７８０
【非特許文献３０】Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ，２０１２，２１，１５
【非特許文献３１】Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００８  １４，ｐ１３５１−１３５５
【非特許文献３２】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００９，６９，ｐ１４３−１６０
【非特許文献３３】Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２０１１，１０，ｐ５５８−５６４
【非特許文献３４】Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ，２０１０，２８，１０７５
【非特許文献３５】Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，２４，３６６−３７６
【非特許文献３６】Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００３，４，３１３−３１９
【非特許文献３７】Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００３，１３，２０６−２１２
【発明の概要】
【００２６】
本発明の一観点に従って、式（Ｉ）の化合物
【００２７】
【化１】
0006307096.tif 000002
【００２８】
［式中：
Ｒ１は、メチルまたはエチルであり；そして
Ｒ２は、ヒドロキシルにより置換されている（Ｃ２−３）アルキルである］；
または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
すなわち本明細書は以下の発明の開示を包含する。
［１］式（Ｉ）の化合物
【化１−１】
0006307096.tif 000003
［式中：
Ｒ１は、メチルまたはエチルであり；そして
Ｒ２は、ヒドロキシにより置換されている（Ｃ２−３）アルキルである］；
または薬学的に許容しうるその塩。
［２］Ｒ２が基（ｉ）〜（ｘｉ）
【化１−２】
0006307096.tif 000004
から選択される、［１］に記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
［３］Ｒ２が［２］で定義した基（ｉ）〜（ｖｉ）から選択される、［１］または［２］に記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
［４］Ｒ２が［２］で定義した基（ｉ）である、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
［５］Ｒ１がメチルである、［１］〜［４］のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
［６］Ｒ１がエチルである、［１］〜［４］のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
［７］以下の化合物：
１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−プロパン−１−オン；
１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−エチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−プロパン−１−オン；
（３Ｒ）−１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−ブタン−１−オン；
（３Ｓ）−１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−ブタン−１−オン；
（２Ｒ）−１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−２−メチル−プロパン−１−オン；
１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロパン−１−オン
から選択される［１］に記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
［８］結晶形態にある、［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
［９］医薬品として用いるための、［１］〜［８］のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
［１０］ヒトなどの温血動物における癌の予防または処置に用いるための、［１］〜［９］のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容しうるその塩。
［１１］癌の処置に用いるのに適した組み合わせであって、［１］に記載の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩と、他の抗腫瘍剤を含む組み合わせ。
［１２］［１］に記載の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩と、薬学的に許容しうる希釈剤またはキャリヤーとを含む、医薬組成物。
［１３］式（Ｉ）の化合物で処置するための患者の選択方法であって、該方法が、腫瘍由来ＤＮＡまたは腫瘍細胞を含有する患者からの試料を提供し；患者の腫瘍細胞または腫瘍由来ＤＮＡ中のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子が野生型であるか変異体であるかを決定し；そして、それに基づき式（Ｉ）の化合物で処置するための患者を選択することを含む、前記方法。
［１４］癌を患っている患者の処置方法であって、患者からの腫瘍細胞含有試料を提供し；患者の腫瘍細胞中のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子が野生型であるか変異体であるかを決定し；そして、腫瘍細胞が変異体ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を持つ場合、該患者に、有効量の［１］に記載の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、前記方法。
［１５］変異体ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を持つと確認されている腫瘍細胞を有する癌を処置するための、［１］に記載の式（Ｉ）の化合物。
【００２９】
本発明の他の観点において、先に定義した式（Ｉ）の化合物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】実施例１フォームＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図２】実施例１フォームＡのＤＳＣサーモグラムを示す。
【図３】実施例３フォームＡのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図４】実施例３フォームＡのＤＳＣサーモグラムを示す。
【図５】実施例３フォームＢのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図６】実施例３フォームＢのＤＳＣサーモグラムを示す。
【図７】実施例３フォームＣのＸ線粉末回折パターンを示す。
【図８】実施例３フォームＣのＤＳＣサーモグラムを示す。
【図９】逐次投与でＡＫＴ阻害剤（ＡＺＤ５３６３）と組み合わせた実施例３による腫瘍成長阻害を示す。
【図１０】同時投与でＡＫＴ阻害剤（ＡＺＤ５３６３）と組み合わせた実施例３による腫瘍成長阻害を示す。
【図１１】ＢＴ４７４異種移植モデルにおけるＰＡＲＰ阻害剤（オラパリブ）と組み合わせた実施例３による腫瘍成長阻害を示す。
【図１２】ＭＣＦ７異種移植モデルにおけるＰＡＲＰ阻害剤（オラパリブ）と組み合わせた実施例３による腫瘍成長阻害を示す。
【図１３】（ＡＺＤ８１８６）と組み合わせた実施例３による腫瘍成長阻害を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
“ヒドロキシルにより置換されている（Ｃ２−３）アルキル”という用語が、直鎖および分枝アルキル基の両方、例えば基（ｉ）〜（ｘｉ）として以下に例示するものを包含することは、理解されるであろう：
【００３２】
【化２】
0006307096.tif 000005
【００３３】
先に定義した式（Ｉ）の化合物のいくつかが、１以上の不斉炭素原子に基づき光学活性形態またはラセミ形態で存在することができる場合、本発明は、ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ阻害活性を持つあらゆる光学活性形態またはラセミ形態をその定義に包含することは、理解されるであろう。光学活性形態の合成は、当分野で周知の有機化学の標準的技術により、例えば、光学活性出発材料からの合成によるかラセミ形態の分割により、実施することができる。同様に、上記活性は、標準的な実験技術を用いて評価することができる。
【００３４】
本明細書中に記載する化合物の特定のエナンチオマーは、同化合物の他のエナンチオマーより活性であることができる。
【００３５】
本発明の他の観点に従って、≧９５、≧９８％または≧９９％のエナンチオマー過剰率（％ｅｅ）にある単一エナンチオマーである式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。単一エナンチオマーは、≧９９％のエナンチオマー過剰率（％ｅｅ）で存在すると好都合である。
【００３６】
本発明の他の観点に従って、≧９５、≧９８％または≧９９％のエナンチオマー過剰率（％ｅｅ）にある単一エナンチオマーである式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を、薬学的に許容しうる希釈剤またはキャリヤーと共同して含む、医薬組成物を提供する。単一エナンチオマーは、≧９９％のエナンチオマー過剰率（％ｅｅ）で存在すると好都合である。
【００３７】
いくつかの式（Ｉ）の化合物は結晶質であることができ、１より多くの結晶形を有することができる。本発明は任意の結晶質もしくは非晶質形態またはその混合物を包含し、該形態はＰＩ３Ｋ−αおよび−δ活性の阻害に有用な性質を持ち、ＰＩ３Ｋ−αおよび／または−δ活性の阻害に関する結晶質または非晶質形態の効力を以下に記載する標準試験により決定する方法は当分野で周知であることを、理解すべきである。
【００３８】
結晶質材料は、Ｘ線粉末回折（以下、ＸＲＰＤ）分析、示差走査熱量測定（以下、ＤＳＣ）、熱重量分析（以下、ＴＧＡ）、拡散反射フーリエ変換赤外（ＤＲＩＦＴ）分光法、近赤外（ＮＩＲ）分光法、溶液および／または固体状態核磁気共鳴分光法などの従来技術を用いて分析することができることが、一般に知られている。そのような結晶質材料の含水量は、カールフィッシャー分析により決定することができる。
【００３９】
一例として、実施例１の化合物は結晶度を示し、１つの結晶形が同定された。
【００４０】
したがって、本発明の他の観点は、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンのフォームＡである。
【００４１】
本発明の他の観点に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、約２シータ＝５．１°に少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００４２】
本発明の他の観点に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、約２シータ＝１８．０°に少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００４３】
本発明の他の観点に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、約２シータ＝５．１および１８．０°に少なくとも２つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。  
【００４４】
本発明の他の観点に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、約２シータ＝５．１、１８．０、１０．２、１１．７、１９．４、１８．５、１４．８、２６．７、２６．６、１７．８°に特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００４５】
本発明に従って、図１に示すＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する結晶形、フォームＡを提供する。
【００４６】
本発明の他の観点に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、約２シータ＝５．１°プラスまたはマイナス０．２°の２シータに少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００４７】
本発明の他の観点に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、約２シータ＝１８．０°プラスまたはマイナス０．２°の２シータに少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００４８】
本発明の他の観点に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、約２シータ＝５．１および１８．０°プラスまたはマイナス０．２°の２シータに少なくとも２つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００４９】
本発明の他の観点に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、約２シータ＝５．１、１８．０、１０．２、１１．７、１９．４、１８．５、１４．８、２６．７、２６．６、１７．８°プラスまたはマイナス０．２°の２シータに特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００５０】
実施例３も結晶質であり、３つのフォーム（Ａ、ＢおよびＣ）を本明細書中に記載する。
【００５１】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、約２シータ＝４．８°に少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００５２】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、約２シータ＝１０．０°に少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００５３】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、約２シータ＝４．８°および１０．０°に少なくとも２つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００５４】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、約２シータ＝４．８、１０．０、１４．６、５．２、１９．９、１０．４、２５．４、２３．６、２４．４、１６．２°に特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００５５】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、図３に示すＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００５６】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、２シータ＝４．８°プラスまたはマイナス０．２°の２シータに少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００５７】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、２シータ＝１０．０°プラスまたはマイナス０．２°の２シータに少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００５８】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、２シータ＝４．８°および１０．０°に少なくとも２つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、前記値がプラスまたはマイナス０．２°の２シータである可能性があるものを提供する。  
【００５９】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＡであって、２シータ＝４．８、１０．０、１４．６、５．２、１９．９、１０．４、２５．４、２３．６、２４．４、１６．２°に特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、前記値がプラスまたはマイナス０．２°の２シータである可能性があるものを提供する。
【００６０】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＢであって、約２シータ＝５．８°に少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００６１】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＢであって、約２シータ＝１０．９°に少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００６２】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＢであって、約２シータ＝５．８°および１０．９°に少なくとも２つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００６３】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＢであって、約２シータ＝５．８、１０．９、１１．５、２５．９、１７．３、２４．０、１９．１、１２．９、２４．７、２７．２°に特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００６４】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＢであって、図５に示すＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００６５】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＢであって、２シータ＝５．８°プラスまたはマイナス０．２°の２シータに少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００６６】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＢであって、２シータ＝１０．９°プラスまたはマイナス０．２°の２シータに少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００６７】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＢであって、２シータ＝５．８°および１０．９°に少なくとも２つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、前記値がプラスまたはマイナス０．２°の２シータである可能性があるものを提供する。
【００６８】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＢであって、２シータ＝５．８、１０．９、１１．５、２５．９、１７．３、２４．０、１９．１、１２．９、２４．７、２７．２°に特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、前記値がプラスまたはマイナス０．２°の２シータである可能性があるものを提供する。
【００６９】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＣであって、約２シータ＝６．９°に少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００７０】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＣであって、約２シータ＝１２．３°に少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００７１】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＣであって、約２シータ＝６．９°および１２．３°に少なくとも２つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。  
【００７２】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＣであって、約２シータ＝６．９、１２．３、１０．５、２１．０、２４．６、１３．６、１６．４、１９．６、２０．２、２２．５°に特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００７３】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＣであって、図７に示すＸ線粉末回折パターンと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００７４】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＣであって、２シータ＝６．９°プラスまたはマイナス０．２°の２シータに少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００７５】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＣであって、２シータ＝１２．３°プラスまたはマイナス０．２°の２シータに少なくとも１つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有するものを提供する。
【００７６】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＣであって、２シータ＝６．９°および１２．３°に少なくとも２つの特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、前記値がプラスまたはマイナス０．２°の２シータである可能性があるものを提供する。
【００７７】
本発明に従って、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンの結晶形、フォームＣであって、２シータ＝６．９、１２．３、１０．５、２１．０、２４．６、１３．６、１６．４、１９．６、２０．２、２２．５°に特異的ピークを有するＸ線粉末回折パターンを有し、前記値がプラスまたはマイナス０．２°の２シータである可能性があるものを提供する。
【００７８】
本発明が実施例１または実施例３のような本発明の化合物の結晶形に関連すると記載している場合、結晶化度は、好都合には約６０％を超え、より好都合には約８０％を超え、好ましくは約９０％を超え、より好ましくは約９５％を超える。もっとも好ましくは、結晶化度は約９８％を超える。
【００７９】
本発明が実施例１または実施例３のような本発明の化合物の結晶形に関連すると記載している場合、該結晶形は、同化合物の他の結晶形または非晶質形態を実質的に含まないことが好ましい。この文脈において、“実質的に含まない”は、純粋な単一結晶形が、好都合には約６０％を超え、より好都合には約８０％を超え、好ましくは約９０％を超え、より好ましくは約９５％を超え、さらにより好ましくは約９８％を超え、さらにより好ましくは約９９％を超えることを意味する。例えば、実施例３はフォームＡの形態にあり、フォームＢおよびＣを実質的に含まないことができ；あるいは、実施例３はフォームＢの形態にあり、フォームＡおよびＣを実質的に含まないことができ；あるいは、実施例３はフォームＣの形態にあり、フォームＡおよびＢを実質的に含まないことができる。同様に、実施例３はフォームＢの形態にあり、他の結晶質または非晶質形態を実質的に含まないことができる。
【００８０】
Ｘ線粉末回折パターンの２シータ値は、機械または試料によってわずかに変動する可能性があるので、引用する値を絶対的なものと解釈すべきではない。
【００８１】
Ｘ線粉末回折パターンは、測定条件（用いる機器または機械など）に応じて１以上の測定誤差を有するものが得られる可能性があることが公知である。とりわけ、Ｘ線粉末回折パターンの強度が測定条件により変動する可能性があることは、一般に公知である。したがって、上記本発明の結晶形は、特記しない限り、図１、３、５に示すＸ線粉末回折パターンと同一のＸ線粉末回折パターンを提供する結晶に限定されず、これらの図に示すものと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを提供する結晶は、本発明の範囲内にあることを、理解すべきである。Ｘ線粉末回折の分野の技術者なら、Ｘ線粉末回折パターンの実質的同一性を判断することができる。
【００８２】
Ｘ線粉末回折の分野の技術者なら、ピークの相対強度が、例えば、３０ミクロンより大きいサイズの粒子や試料の分析に影響を及ぼしうる非ユニタリーな (non-unitary) アスペクト比により影響を受ける可能性があることも、理解するであろう。当業者は、反射位置が、回折計の中で試料が置かれる位置の正確な高さと回折計のゼロ較正により影響を受ける可能性があることも、理解するであろう。試料表面の平面性もわずかな影響を有する可能性がある。したがって、提示する回折パターンデータは、絶対的な値とみなすべきではない（Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｒ  ＆  Ｓｎｙｄｅｒ，Ｒ．Ｌ．‘Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｘ−Ｒａｙ  Ｐｏｗｄｅｒ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｒｙ’Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  １９９６；Ｂｕｎｎ，Ｃ．Ｗ．（１９４８）、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，Ｃｌａｒｅｎｄｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ロンドン；Ｋｌｕｇ，Ｈ．Ｐ．  ＆  Ａｌｅｘａｎｄｅｒ，Ｌ．Ｅ．（１９７４），Ｘ−Ｒａｙ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ参照）。
【００８３】
一般に、Ｘ線粉末ディフトグラムにおける回折角の測定誤差は、２シータのおよそプラスまたはマイナス０．２°であり、そのような程度の測定誤差を、Ｘ線粉末回折データを検討する際は考慮すべきである。さらに、強度は、実験条件および試料調製（選択配向(preferred orientation)）に応じて変動しうることを理解すべきである。
【００８４】
本発明の特定の化合物は各実施例であり、各実施例はさらに、本発明の独立した観点を提供する。本発明の他の特定の化合物は、各実施例の薬学的に許容しうる塩（１以上）であり、各実施例はさらに、本発明の独立した観点を提供する。
【００８５】
本発明の他の観点に従って、本明細書中に開示する実施例のいずれかに従って得ることができる式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００８６】
他の特徴は、実施例１、３、４など具体的実施例を個別に放棄するという条件で、本明細書中で定義する範囲のいずれかである。
【００８７】
当業者なら、式（Ｉ）の特定の化合物は非対象に置換された炭素原子を含有し、したがって、光学活性形態およびラセミ形態で存在することができ、そのような形態で単離することができることを、理解するであろう。式（Ｉ）のいくつかの化合物は、多形性を示す可能性がある。本発明は任意のラセミ形態、光学活性形態、多形形態もしくは立体異性形態、またはそれらの混合物を包含し、該形態がＰＩ３Ｋ−αおよび−δ活性の阻害に有用な性質を持ち、光学活性形態の調製法（例えば、再結晶化技術によるラセミ形態の分割によるか、光学活性出発材料からの合成によるか、キラル合成によるか、酵素的分割によるか、生体内変換によるか、キラル固定相を用いるクロマトグラフ分離による）および以下に記載する標準試験によりＰＩ３Ｋ−αおよび−δ活性の阻害に関する効力を決定する方法が当分野で周知であることを、理解すべきである。
【００８８】
先に定義した式（Ｉ）の特定の化合物は互変異性現象を示す可能性があることを、理解すべきである。本発明は、その定義にＰＩ３Ｋ阻害活性を持つそのような互変異性形態またはその混合物を包含し、化学式の図内で利用されているか実施例で名前を挙げられている任意の１つの互変異性形態のみに限定されるものではないことを、理解すべきである。一般に、任意のそのような互変異性形態の１つだけを、以下に続く実施例で名前を挙げてあり、または、以下に続く任意の関連する化学式の図に提示している。
【００８９】
本発明は、本化合物で生じる原子のすべての同位体を包含するものとする。同位体が、同じ原子番号を有するが異なる質量数を有する原子を包含することは、理解されるであろう。例えば、水素の同位体として、トリチウムおよびジュウテリウムが挙げられる。炭素の同位体としてはＣ１３およびＣ１４が挙げられる。
【００９０】
式（Ｉ）の化合物の適した薬学的に許容しうる塩は、例えば、式（Ｉ）の化合物の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸またはトリフルオロ酢酸などの強い無機酸または有機酸との酸付加塩である。式（Ｉ）の化合物の他の適した薬学的に許容しうる塩は、例えば、式（Ｉ）の化合物の投与後にヒトまたは動物の体内で形成される塩である。
【００９１】
さらに、式（Ｉ）の化合物の適した薬学的に許容しうる溶媒和物も本発明の観点を構成することを、理解すべきである。適した薬学的に許容しうる溶媒和物は、例えば、半水和物、一水和物、二水和物もしくは三水和物または他の量の水和物などの水和物である。
【００９２】
さらに、式（Ｉ）の化合物の適した薬学的に許容しうるプロドラッグも本発明の観点を構成することを、理解すべきである。したがって、本発明の化合物は、ヒトまたは動物の体内で分解して本発明の化合物を放出する化合物であるプロドラッグの形態で投与することができる。プロドラッグは、本発明の化合物の物理的特性および／または薬物動態学的特性を変更するために用いることができる。本発明の化合物が、改質基が付着することができる適した基または置換基を含有する場合、プロドラッグを形成することができる。プロドラッグの例としては、式（Ｉ）の化合物中のヒドロキシ基において形成することができるｉｎ−ｖｉｖｏ開裂性エステル誘導体、および式（Ｉ）の化合物中のアミノ基において形成することができるｉｎ−ｖｉｖｏ開裂性アミド誘導体が挙げられる。
【００９３】
したがって、本発明は、有機合成により利用可能になる場合、およびプロドラッグの開列によりヒトまたは動物の体内で利用可能になる場合の、先に定義した式（Ｉ）の化合物を包含する。したがって、本発明は、有機合成手段により生じる式（Ｉ）の化合物のほか、前駆体化合物の代謝によりヒトまたは動物の体内で生じる化合物を包含する、すなわち、式（Ｉ）の化合物は、合成的に生成される化合物または代謝的に生成される化合物であることができる。
【００９４】
式（Ｉ）の化合物の適した薬学的に許容しうるプロドラッグは、望ましくない薬理学的活性および不適切な毒性がなく、ヒトまたは動物の体に投与するのに適しているという、合理的な医学的判断に基づいたものである。
【００９５】
さまざまな形態のプロドラッグが、例えば以下の文書に記載されている：−
ａ）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４２，ｐ３０９−３９６、Ｋ．Ｗｉｄｄｅｒ，ｅｔ  ａｌ．編集（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８５）；
ｂ）  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編集（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５）；
ｃ）  Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−ＬａｒｓｅｎおよびＨ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編集、Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄによる第５章“Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ”、ｐ１１３−１９１（１９９１）；
ｄ）  Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，８，１−３８（１９９２）；
ｅ）  Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，７７，２８５（１９８８）；
ｆ）  Ｎ．Ｋａｋｅｙａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３２，６９２（１９８４）；
ｇ）  Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．Ｓｔｅｌｌａ，“Ｐｒｏ−Ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ”，Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ，Ｖｏｌｕｍｅ  １４；および
ｈ）  Ｅ．Ｒｏｃｈｅ（編者）、“Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ”、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７。
【００９６】
ヒドロキシ基を持つ式（Ｉ）の化合物の適した薬学的に許容しうるプロドラッグは、例えば、そのｉｎ  ｖｉｖｏ開裂性エステルまたはエーテルである。ヒドロキシ基を含有する式（Ｉ）の化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ開裂性エステルまたはエーテルは、例えば、ヒトまたは動物の体内で開裂して親ヒドロキシ化合物を生じる薬学的に許容しうるエステルまたはエーテルである。ヒドロキシ基に適した薬学的に許容しうるエステル形成基は、リン酸エステル（ホスホルアミド環状エステルを含む）などの無機エステルを包含する。ヒドロキシ基に適した他の薬学的に許容しうるエステル形成基としては、アセチル基、ベンゾイル基、フェニルアセチル基、置換ベンゾイル基および置換フェニルアセチル基などの（１−１０Ｃ）アルカノイル基、ならびに、エトキシカルボニル基、Ｎ，Ｎ−［ジ−（１−４Ｃ）アルキル］カルバモイル基、２−ジアルキルアミノアセチル基および２−カルボキシアセチル基などの（１−１０Ｃ）アルコキシカルボニル基が挙げられる。フェニルアセチル基およびベンゾイル基上の環置換基の例としては、アミノメチル、Ｎ−アルキルアミノメチル、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノメチル、モルホリノメチル、ピペラジン−１−イルメチルおよび４−（１−４Ｃ）アルキルピペラジン−１−イルメチルが挙げられる。ヒドロキシ基に適した薬学的に許容しうるエーテル形成基としては、アセトキシメチル基およびピバロイルオキシメチル基などのα−アシルオキシアルキル基が挙げられる。
【００９７】
アミノ基を持つ式（Ｉ）の化合物の適した薬学的に許容しうるプロドラッグは、例えば、そのｉｎ  ｖｉｖｏ開裂性アミド誘導体である。アミノ基からの適した薬学的に許容しうるアミドとしては、例えば、アセチル基、ベンゾイル基、フェニルアセチル基、置換ベンゾイル基および置換フェニルアセチル基などの（１−１０Ｃ）アルカノイル基と形成されるアミドが挙げられる。フェニルアセチル基およびベンゾイル基上の環置換基の例としては、アミノメチル、Ｎ−アルキルアミノメチル、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノメチル、モルホリノメチル、ピペラジン−１−イルメチルおよび４−（１−４Ｃ）アルキルピペラジン−１−イルメチルが挙げられる。
【００９８】
式（Ｉ）の化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ作用は、式（Ｉ）の化合物の投与後にヒトまたは動物の体内で形成される１以上の代謝産物により部分的に影響を受ける可能性がある。先に記載したように、式（Ｉ）の化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ作用は、前駆体化合物（プロドラッグ）の代謝によって影響を受ける可能性もある。
【００９９】
式（Ｉ）の化合物は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２［式中、Ｒ２は、ヒドロキシルにより置換されている（Ｃ２−３）アルキルである］により置換されているピペリジンサブユニットを含有する。これらの化合物の考えうる代謝経路の１つは、この基のヒドロキシル置換基の酸化による。一般に、これらの酸化化合物は、多少のＰＩ３Ｋ−αおよび−δ阻害活性を保持している。
【０１００】
したがって、本発明の他の観点に従って、式（Ａ）の化合物：
【０１０１】
【化３】
0006307096.tif 000006
【０１０２】
［式中：
Ｒ１Ａは、メチルまたはエチルであり；そして
Ｒ２Ａは、カルボキシにより置換されている（Ｃ１−２）アルキルである］；
または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０１０３】
式（Ａ）の化合物の例としては、実施例１の同定されている代謝産物である実施例８
【０１０４】
【化４】
0006307096.tif 000007
【０１０５】
および実施例３の同定されている代謝産物である実施例９：
【０１０６】
【化５】
0006307096.tif 000008
【０１０７】
が挙げられる。
【０１０８】
実施例３の他の考えうる代謝産物は、以下に示し、実施例１０および１１でさらに記載する、別の２つの酸化生成物である：
【０１０９】
【化６】
0006307096.tif 000009
【０１１０】
【化７】
0006307096.tif 000010
【０１１１】
式（Ａ）の化合物の適した薬学的に許容しうる塩としては、例えば、カルシウムもしくはマグネシウム塩などのアルカリもしくはアルカリ土類金属塩、またはアンモニウム塩、またはメチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、モルホリンもしくはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミンなどの有機塩基との塩が挙げられる。
【０１１２】
誤解を避けるために、本明細書中で、基が‘先に定義した’または‘上記で定義した’により修飾されている場合、前記基は、その基に関し最初に現れたもっとも広範囲の定義およびそれぞれすべての詳細な定義を包含することを、理解すべきである。
【０１１３】
本発明の特定の新規化合物としては、例えば、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩であって、特記しない限り、Ｒ１およびＲ２のそれぞれが、先に定義した意味または以下に記載する意味のいずれかを有するものが挙げられる：
Ｒ１はメチルである。
【０１１４】
Ｒ１はエチルである。
【０１１５】
Ｒ２は、先に定義した基（ｉ）〜（ｘｉ）のいずれかである。
【０１１６】
Ｒ２は、先に定義した基（ｉ）〜（ｖｉ）である。
【０１１７】
Ｒ２は基（ｉ）である。
【０１１８】
本発明の化合物の特定の群は、上記式（Ｉ）の化合物
［式中：−
Ｒ１は、メチルまたはエチルであり；
Ｒ２は、基（ｉ）：
【０１１９】
【化８】
0006307096.tif 000011
【０１２０】
である］
または薬学的に許容しうるその塩である。
【０１２１】
本発明の特定の化合物は、例えば、以下に提示する実施例中に開示する式（Ｉ）の化合物である。
【０１２２】
例えば、本発明の特定の化合物は、以下のいずれか１つから選択される式（Ｉ）の化合物である：−
１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−プロパン−１−オン（実施例１および２）；
１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−エチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−プロパン−１−オン（実施例３）；
（３Ｒ）−１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−ブタン−１−オン（実施例４）；
（３Ｓ）−１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−ブタン−１−オン（実施例５）；
（２Ｒ）−１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−２−メチル−プロパン−１−オン（実施例６）；
１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロパン−１−オン（実施例７）。
【０１２３】
本発明の他の観点は、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩の調製プロセスを提供する。適したプロセスを、以下の代表的変形プロセスにより例示する。該プロセスにおいて、特記しない限り、Ｒ１、Ｒ２は、先に定義した意味のいずれかを有する。必要な出発材料は、有機化学の標準的手順により得ることができる。そのような出発材料の調製法は、以下の代表的変形プロセスと併せて、添付の実施例に記載する。あるいは、必要な出発材料は、有機化学者の一般的技術の範囲内にあり、例示する手順と類似の手順により、得ることができる。
【０１２４】
適した変形プロセスとしては、例えば、以下が挙げられる：
（ａ）好都合には適した活性化試薬の存在下で、式ＩＩの化合物
【０１２５】
【化９】
0006307096.tif 000012
【０１２６】
［式中、Ｒ１は、先に定義した意味のいずれかを有する］を、必要に応じて任意の官能基が保護されている点を除きカルボン酸Ｒ２−ＣＯＯＨと、適した塩基の存在下で反応させた後、存在する任意の保護基を除去する。この反応に適したカップリング剤としては、例えば、２−ヒドロキシ−ピリジンＮ−オキシド存在下での１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、またはＴＢＴＵ（２−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムテトラフルオロボレート）が挙げられる。
【０１２７】
反応は、適した塩基の存在下で行うと好都合である。適した塩基は、例えば有機アミン塩基、例えば、ピリジン、２，６−ルチジン、コリジン、４−ジメチルアミノピリジン、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン、ジイソプロピルエチルアミンなど、あるいは、例えばアルカリまたはアルカリ土類金属の炭酸塩または水酸化物、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムであり；好ましくはＮ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミンである。
【０１２８】
この反応は、適した不活性溶媒、例えば、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、メタノール、エタノール、または、ジクロロメタン、クロロホルムもしくは四塩化炭素などのハロゲン化溶媒などの存在下、例えば−５０℃〜１００℃の範囲、好ましくは０℃〜３０℃の範囲の温度で行うと好都合である。
【０１２９】
あるいは、カルボン酸Ｒ２−ＣＯＯＨを活性化種に変換することができ、その後、これを、当分野で周知の条件下で式ＩＩの化合物と反応させることができる。
【０１３０】
ヒドロキシル基に適した保護基は、実施例２および３に記載するようなテトラヒドロピラン保護基である。この基を除去するのに適した条件としては、溶媒としてのアルコール、例えばメタノールまたはエタノールの存在下、２０〜７０℃の温度における弱酸性条件が挙げられる。用いられる典型的な弱酸は、ｐ−トルエンスルホン酸ピリジンである。
【０１３１】
式ＩＩの化合物は、適した塩基の存在下で、式ＩＩＩの化合物：
【０１３２】
【化１０】
0006307096.tif 000013
【０１３３】
［式中、Ｐはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルなどの保護基である］を、式Ｒ１−Ｌの化合物［式中、Ｌは、適した脱離基、例えば、ブロモ、ヨード基などのハロゲノ基（ヨードが好都合である）などである］と反応させた後、存在する任意の保護基を除去することにより、得ることができる。
【０１３４】
適した塩基は、例えば、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エンなどの有機アミン塩基である。
【０１３５】
反応は、例えば２−メチルテトラヒドロフラン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレンなど適した不活性溶媒の存在下、例えば−５０℃〜６０℃の範囲、好ましくは−１０℃〜０℃の範囲の温度で実行すると、好都合である。
【０１３６】
ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルの脱保護に適した条件としては、ほぼ室温（２０〜２５℃）におけるジクロロメタンなどの不活性溶媒中のトリフルオロ酢酸といった酸性条件が挙げられる。
【０１３７】
化合物ＩＩＩは、適した活性化試薬の存在下で、式ＩＶの化合物
【０１３８】
【化１１】
0006307096.tif 000014
【０１３９】
を、式Ｖの化合物
【０１４０】
【化１２】
0006307096.tif 000015
【０１４１】
と、好ましくは適した塩基の存在下でカップリング反応させた後、弱酸の存在下で環化反応させることにより、得ることができる。
【０１４２】
カップリング反応は、例えば、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートまたはＴＢＴＵ（２−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムテトラフルオロボレート）などの適したカップリング剤の存在下で行うことができる。
【０１４３】
カップリング反応は、適した塩基の存在下で行うと好都合である。適した塩基は、例えば有機アミン塩基、例えば、ピリジン、２，６−ルチジン、コリジン、４−ジメチルアミノピリジン、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン、ジイソプロピルエチルアミンなど、あるいは、例えばアルカリまたはアルカリ土類金属の炭酸塩または水酸化物、例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムであり；好ましくはＮ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミンである。
【０１４４】
カップリング反応は、適した不活性溶媒、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、メタノール、エタノール、または、ジクロロメタン、クロロホルムもしくは四塩化炭素などのハロゲン化溶媒などの存在下、例えば−５０℃〜１００℃の範囲、好ましくは０℃〜３０℃の範囲の温度で行うと好都合である。
【０１４５】
環化条件は、弱酸、典型的には酢酸の存在下で実施する。反応は、適した不活性溶媒、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの存在下、例えば５０℃〜１５０℃の範囲、好ましくは８０℃〜１００℃の範囲の温度で行うと好都合である。
【０１４６】
化合物ＩＶは、式ＶＩの化合物とヒドラジンの反応から得ることができる。
【０１４７】
【化１３】
0006307096.tif 000016
【０１４８】
この反応は、適した不活性溶媒、例えば、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、またはエタノールもしくはイソプロパノールなどのアルコールの存在下、例えば２０℃〜７０℃の範囲、好ましくは約５０℃の温度で行うと好都合である。
【０１４９】
化合物ＶＩは、式ＶＩＩの化合物と二シアン化亜鉛（ＩＩ）などのシアン化物源との金属触媒反応から得ることができる。
【０１５０】
【化１４】
0006307096.tif 000017
【０１５１】
該反応に適した触媒としては、例えば、パラジウム（０）などの金属触媒、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）；またはパラジウム（ＩＩ）塩からｉｎ−ｓｉｔｕで形成される触媒、例えば、酢酸パラジウム（ＩＩ）、塩化パラジウム（ＩＩ）、臭化パラジウム（ＩＩ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）、もしくはトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム、およびホスフィンリガンド、例えばジシクロヘキシル（２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル−２−イル）ホスフィンが挙げられる。該反応は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエンまたはキシレンなど適した溶媒中、例えば２０℃〜１５０℃の範囲、好ましくは６０℃〜１２０℃の範囲の温度で行うと好都合である。該反応は、亜鉛など追加的な金属の存在下で行うことも好都合である。
【０１５２】
このタイプの適した反応は、‘Ｍｅｔａｌ−Ｃａｔａｌｙｚｅｄ  Ｃｒｏｓｓ−Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ’、第２版、Ａｒｍｉｎ  Ｍｅｉｊｅｒｅ、Ｆｒａｎｃｏｉｓ  Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈ編集、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００４に記載されている。
【０１５３】
化合物ＶＩＩの合成は、実施例１および２に記載している。
【０１５４】
あるいは、式ＩＩの化合物は、化合物ＶＩＩＩ［式中、Ｒは小さなアルキルである］と化合物ＩＸ［式中、Ｐは、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルなどの保護基である］との金属触媒反応により得ることができる。
【０１５５】
【化１５】
0006307096.tif 000018
【０１５６】
【化１６】
0006307096.tif 000019
【０１５７】
該反応に適した触媒としては、例えば、パラジウム（０）などの金属触媒、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）；またはパラジウム（ＩＩ）塩からｉｎ−ｓｉｔｕで形成される触媒、例えば、酢酸パラジウム（ＩＩ）、塩化パラジウム（ＩＩ）、臭化パラジウム（ＩＩ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）、もしくはトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム、およびホスフィンリガンド、例えばジシクロヘキシル（２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル−２−イル）ホスフィンが挙げられる。
【０１５８】
該反応は、適した溶媒、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエンもしくはキシレン、または４−メチル−２−ペンタノールなどのアルコール中、例えば５０℃〜１８０℃の範囲、好ましくは１２０℃〜１５０℃の範囲の温度で行うと好都合である。
【０１５９】
該反応は、塩化リチウムなど追加的な塩の存在下で行うことも好都合である。
【０１６０】
このタイプの適した反応は、‘Ｍｅｔａｌ−Ｃａｔａｌｙｚｅｄ  Ｃｒｏｓｓ−Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ’、第２版、Ａｒｍｉｎ  Ｍｅｉｊｅｒｅ、Ｆｒａｎｃｏｉｓ  Ｄｉｅｄｅｒｉｃｈ編集、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００４に記載されている。
【０１６１】
式ＶＩＩＩの化合物は、化合物ＶＩＩと適したヘキサアルキルジスタンナンとの金属触媒反応から得ることができる。該反応に適した触媒としては、例えば、パラジウム（０）などの金属触媒、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）；またはパラジウム（ＩＩ）塩からｉｎ−ｓｉｔｕで形成される触媒、例えば、酢酸パラジウム（ＩＩ）、塩化パラジウム（ＩＩ）、臭化パラジウム（ＩＩ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）、もしくはトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム、およびホスフィンリガンド、例えばジシクロヘキシル（２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル−２−イル）ホスフィンが挙げられる。該反応は、適した溶媒、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、１，２−ジメトキシエタン、ベンゼン、トルエン、キシレン、または４−メチル−２−ペンタノールなどのアルコール中、例えば５０℃〜１００℃の範囲、好ましくは７０℃〜８０℃の範囲の温度で行うと好都合である。
【０１６２】
式ＩＸの化合物は、実施例１（Ｒ１＝ＭｅおよびＰ＝ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである）に例示するように、市販の材料から数段階で得ることができる。
【０１６３】
上記変形プロセスにおけるプロセス段階の他の並べ換えも可能であることを、理解すべきである。
【０１６４】
先に記載したプロセスのいずれかにより得られる任意の式（Ｉ）の化合物は、必要に応じて他の式（Ｉ）の化合物に転化することができることを、理解すべきである。
【０１６５】
式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容しうる塩、例えば酸付加塩が必要な場合、それは、例えば、前記化合物と適した酸との反応により得ることができる。
【０１６６】
式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容しうるプロドラッグが必要な場合、それは、従来の手順を用いて得ることができる。例えば、式（Ｉ）の化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ開裂性エステルは、例えば、ヒドロキシ基を含有する式（Ｉ）の化合物と、薬学的に許容しうるカルボン酸との反応により得ることができる。プロドラッグに関するさらなる情報は、先に提示してある。
【０１６７】
上記反応のいくつかでは、化合物中の任意の感受性の高い基を保護することが必要または望ましい可能性があることも、理解されるであろう。保護が必要または望ましい場合および保護に適した方法は、当業者に公知である。従来の保護基を、標準的技法に従って用いることができる（例示のために、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９１参照）。したがって、反応体がアミノ、カルボキシまたはヒドロキシなどの基を包含する場合、上記反応のいくつかでは該基を保護することが望ましい可能性がある。
【０１６８】
アミノまたはアルキルアミノ基に適した保護基は、例えば、アシル基、例えばアセチルなどのアルカノイル基、アルコキシカルボニル基、例えば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニルもしくはｔ−ブトキシカルボニル基、アリールメトキシカルボニル基、例えばベンジルオキシカルボニル、またはアロイル基、例えばベンゾイルである。上記保護基の脱保護条件は、保護基の選択に伴い必然的に変動する。したがって、例えば、アルカノイルもしくはアルコキシカルボニル基などのアシル基またはアロイル基は、例えば、アルカリ金属の水酸化物、例えば水酸化リチウムもしくは水酸化ナトリウムなど適した塩基との加水分解により除去することができる。あるいは、ｔ−ブトキシカルボニル基などのアシル基は、例えば、塩酸、硫酸もしくはリン酸またはトリフルオロ酢酸などの適した酸との処理により除去することができ、ベンジルオキシカルボニル基などのアリールメトキシカルボニル基は、例えば、例えば、パラジウム担持カーボンなどの触媒上での水素化によるか、ルイス酸、例えばトリス（トリフルオロ酢酸）ホウ素での処理により、除去することができる。第一級アミノ基に適した他の保護基は、例えばフタロイル基であり、これは、アルキルアミン、例えばジメチルアミノプロピルアミンでの処理によるか、またはヒドラジンでの処理により、除去することができる。
【０１６９】
ヒドロキシ基に適した保護基は、例えば、アシル基、例えばアセチルなどのアルカノイル基、アロイル基、例えばベンゾイル、またはアリールメチル基、例えばベンジルである。上記保護基の脱保護条件は、保護基の選択に伴い必然的に変動する。したがって、例えば、アルカノイルなどのアシル基またはアロイル基は、例えば、アルカリ金属の水酸化物、例えば水酸化リチウムもしくは水酸化ナトリウムなど適した塩基との加水分解により除去することができる。あるいは、ベンジル基などのアリールメチル基は、例えば、パラジウム担持カーボンなどの触媒上での水素化により、除去することができる。
【０１７０】
カルボキシ基に適した保護基は、例えば、エステル化基、例えば、例えば水酸化ナトリウムなどの塩基での加水分解により除去することができるメチルもしくはエチル基、または、例えば、例えばトリフルオロ酢酸のような有機酸などの酸での処理により除去することができるｔ−ブチル基、または、例えば、例えばパラジウム担持カーボンなどの触媒上での水素化により除去することができるベンジル基である。
【０１７１】
保護基は、化学分野で周知の従来技術を用いて、合成中の任意の好都合な段階で除去することができる。
【０１７２】
本明細書中に定義する特定の中間体（例えば、式ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩの化合物）は新規であり、これらを、本発明のさらなる特徴として提供する。
生物学的アッセイ−
以下のアッセイを用いて、ａ）生物学的アッセイにおけるＰＩ３キナーゼ酵素の阻害剤として、ｂ）生物学的アッセイにおける他のキナーゼの阻害剤として、ｃ）ＢＴ４７４細胞におけるホスホＡＫＴ（Ｔｈｒ３０８）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害剤として、ｄ）ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞におけるホスホＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害剤として、ｅ）ＪＥＫＯ細胞におけるホスホＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害剤として、ｆ）ＨＴ２９細胞におけるホスホＣｈｋ１（Ｓｅｒ３４５）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害剤として、ｇ）腫瘍細胞株パネル全体にわたる細胞増殖の阻害剤として、ｈおよびｉ）ヒト乳腺癌細胞株ＭＣＦ７を移植したＳＣＩＤマウスにおけるそれぞれホスホＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）のｉｎ  ｖｉｖｏ阻害剤または腫瘍成長のｉｎ  ｖｉｖｏ阻害剤としての、本発明の化合物の効果を測定した。
アッセイプロトコルに用いられる略語：
ＰＩＰ２：  ＰＩ（４，５）Ｐ２、ホスファチジルイノシトール４，５−ビスホスフェート
ｓ．ｃ．：  皮下に
ＡＴＰ：  アデノシン三リン酸
ＤＭＳＯ：  ジメチルスルホキシド
ＴＲＩＳ：  トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
ＣＨＡＰＳ：  ３−［（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート
ＤＴＴ：  ジチオトレイトール
ＦＢＳ：  ウシ胎仔血清
ＤＭＥＭ：  ダルベッコ変法イーグル培地
ＥＤＴＡ：  エチレンジアミン四酢酸
ＥＧＴＡ：  エチレングリコール四酢酸
ＢＳＡ：  ウシ血清アルブミン
ＰＢＳ：  リン酸緩衝食塩液
ＨＲＰ：  ホースラディッシュペルオキシダーゼ
ＲＰＭＩ：  ロズウェルパーク記念研究所培地１６４０
４ＮＱＯ：  ４−ニトロキノリンＮ−オキシド
ＥＭＥＭ：  イーグル最小必須培地
ＣＯ２：  二酸化炭素
ＰＢＳＴ：  リン酸緩衝食塩液／Ｔｗｅｅｎ
Ａｂ：  抗体
ＭＴＳ試薬：  ［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、内塩；ＭＴＳ］および電子結合試薬（フェナジンメトスルフェート）ＰＭＳ。
（ａ）  ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ酵素阻害アッセイ
ＰＩ３Ｋ−β、ＰＩ３Ｋ−α、ＰＩ３Ｋ−γおよびＰＩ３Ｋ−δの阻害を、ヒト組み換え酵素を用いて、Ｋｉｎａｓｅ  Ｇｌｏに基づく酵素活性アッセイで評価した。アッセイプラットフォームは、酵素、ＰＩＰ２基質、ＡＴＰおよび化合物とのインキュベーション後のＡＴＰの減少を間接的に測定するものであった。
【０１７３】
酵素反応の終了後、残存するＡＴＰを、発光下でルシフェラーゼがホタルルシフェリンをオキシルシフェリンに変換する二次酵素反応で用いた。測定したルミネセンスと、完了したキナーゼ反応の残存ＡＴＰとの間には、直接的な関係があった。したがって、ルミネセンスは、キナーゼ活性に逆相関していた。典型的には、１２種の異なる化合物濃度について試験し、ＰＩ３Ｋ−β、ＰＩ３Ｋ−α、ＰＩ３Ｋ−γまたはＰＩ３Ｋ−δの阻害からの生データを、阻害剤濃度に対してプロットした。
方法の詳細：
１００％ＤＭＳＯ中の化合物を、音響分配(acoustic dispensing)によりアッセイプレートに加えた。ＰＩ３Ｋ酵素をトリス緩衝液（５０ｍＭトリス  ｐＨ７．４、０．０５％  ＣＨＡＰＳ、２．１ｍＭ  ＤＴＴ、および１０ｍＭ塩化マグネシウム）に加え、そのまま化合物と２０分間プレインキュベートした後、ＰＩＰ２およびＡＴＰを含有する基質溶液を加えた。８０分後に、ルシフェリンおよびルシフェラーゼを含有するＫｉｎａｓｅ  Ｇｌｏ検出溶液（Ｋｉｎａｓｅ  Ｇｌｏ（Ｒ）  Ｐｌｕｓ  Ｌｕｍｉｎｅｃｅｎｔ  Ｋｉｎａｓｅ  Ａｓｓａｙキット（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｖ３７７２）から）の添加により、酵素反応を停止させた。プレートを室温で３０分間放置した後、標準的なルミネセンスフィルターブロックを備えるＰｈｅｒａｓｔａｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔで読み取った。該アッセイにおけるＤＭＳＯ、ＡＴＰおよびＰＩＰ２の最終濃度は、それぞれ１％、８μＭ、および８０μＭであった。
データ解析
非線形回帰適合に適合している対数曲線を用いて、ＩＣ５０値を計算した。ＩＣ５０値は、酵素活性の５０％を阻害する試験化合物の濃度であった。
（ｂ）ＰＩ３キナーゼ  クラス１酵素以外のキナーゼ選択性の評価
キナーゼアッセイの大規模パネルは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎおよびＰｒｏＱｉｎａｓｅなどさまざまな商業的製造供給元により提供されている。そのようなパネルにより、所定の化合物の全体的キナーゼ選択率の評価が可能になる。正確な方法／技術は、製造供給元によりさまざまである。
【０１７４】
本明細書中に記載する化合物のいくつかに関する選択率データは、英国、ダンディーのＭＲＣ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ＵｎｉｔのＭＲＣ−Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｙ（ＤＳＴＴ）で実施される酵素アッセイを用いて得た。タンパク質キナーゼアッセイは、放射化学的フォーマットを用いて行った。アッセイは、室温において、マルチドロップ３８４ウェルプレート中、全アッセイ体積２５．５μＬで実施した。化合物を酵素およびペプチド／タンパク質基質存在下で５分間プレインキュベートした後、１０μＬのＡＴＰ（最終濃度は、各キナーゼについて５、２０または５０μＭで選択した）の添加により反応を開始させた。アッセイを室温で実施した後、５μＬのオルトリン酸を加えることにより停止させた。その後、アッセイプレート内容物をＰａｃｋａｒｄ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ（洗浄緩衝液は５０ｍＭのオルトリン酸であった）によりＷｈａｔｍａｎ−Ｐ８１−Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒ  Ｐｌａｔｅ上に採取し、風乾した。その後、乾燥ＵｎｉｆｉｌｔｅｒプレートをＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ  Ｏの添加によって密封し、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｔｏｐｃｏｕｎｔ  ＮＸＴシンチレーションカウンターで計数した。このプロトコルは、パネルのキナーゼの大部分に適した一般的フォーマットを占めるが、当業者ならよくわかるように、該プロトコルの修正が少数のキナーゼには必要であった。
【０１７５】
約１８の脂質キナーゼに関する脂質キナーゼアッセイもＤＳＴＴで実施した。脂質キナーゼアッセイはすべて、室温において、３８４ウェルプレート中、全アッセイ体積４０μＬで行った。該アッセイは、ＡＤＰ−ＧＬＯアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、＃Ｖ９１０１）に提供されているプロトコルに従って実施した。このプロトコルは、パネルのキナーゼの大部分に適した一般的フォーマットを占めるが、当業者ならよくわかるように、該プロトコルの修正が少数のキナーゼには必要であった。
【０１７６】
キナーゼ選択率も、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸを介して入手可能なＫＩＮＯＭＥｓｃａｎＴＭスクリーニングプラットフォームを用いて評価した。これは、試験化合物と、４５０を超えるヒトキナーゼおよび疾患に関連する変異体バリアント(mutant variant)との相互作用を定量的に測定するために、活性部位を対象とする競合結合アッセイを採用している。ＫＩＮＯＭＥｓｃａｎＴＭアッセイではＡＴＰが必要なく、これにより、ＡＴＰ濃度に依存する可能性があるＩＣ５０値とは対照的に、真の熱力学的相互作用の親和力が報告される。該手法は、キナーゼ活性部位と結合し、固定化リガンドに結合するキナーゼを直接的（立体的）または間接的（アロステリック）に妨げ、これにより、固体支持体上に捕獲されるキナーゼの量を減少させる化合物に基づく。反対に、キナーゼと結合しない試験分子は、固体支持体上に捕獲されるキナーゼの量に対し影響を有さない。スクリーニングの“ヒット”は、関連するＤＮＡ標識を検出する定量的ｑＰＣＲ法を用いて、試験で捕獲されるキナーゼの量を対照試料と対比して測定することにより確認する。同様に、試験化合物−キナーゼ相互作用の解離定数（Ｋｄｓ）は、固体支持体上に捕獲されるキナーゼの量を試験化合物濃度の関数として測定することにより計算する。
（ｃ）ＢＴ４７４細胞におけるリン酸化ＡＫＴ（Ｔｙｒ３０８）を測定するアッセイのプロトコル
このアッセイを用いて、細胞におけるＰＩ３Ｋ−α阻害を測定した。ＢＴ４７４細胞（ヒト乳管癌、ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−２０）を、１０％ＦＢＳおよび１％グルタミンを含有するＤＭＥＭ中に５６００細胞／ウェルの密度で黒色３８４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、＃３７１２）中に播種し、一晩放置して付着させた。
【０１７７】
翌朝、１００％ＤＭＳＯ中の化合物を、音響分配によりアッセイプレートに加えた。３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートした後、培地を吸引し、細胞を、２５ｍＭトリス、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、３ｍＭ  ＥＧＴＡ、５０ｍＭフッ化ナトリウム、２ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム、０．２７Ｍ  スクロース、１０ｍＭ  β−グリセロホスフェート、５ｍＭポリリン酸ナトリウム、０．５％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００およびコンプリートプロテアーゼインヒビターカクテル錠剤（Ｒｏｃｈｅ  ＃０４６９３１１６００１、溶解緩衝液５０ｍＬあたり１錠使用）を含有する緩衝液で溶解させた。
【０１７８】
２０分後、細胞溶解物を、ＰＢＳ緩衝液中の抗全ＡＫＴ抗体で予めコーティングしてあるＥＬＩＳＡプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  ＃７８１０７７）に移し、非特異的結合を、０．０５％のＴｗｅｅｎ  ２０を含有するＰＢＳ中の１％  ＢＳＡでブロックした。プレートを４℃で一晩インキュベートした。翌日、該プレートを、０．０５％のＴｗｅｅｎ  ２０を含有するＰＢＳ緩衝液で洗浄し、マウスモノクローナル抗ホスホＡＫＴ  Ｔ３０８を用いてさらに２時間インキュベートした。プレートを再び上記のように洗浄した後、ウマ抗マウスＨＲＰ接合二次抗体を加えた。室温で２時間インキュベートした後、プレートを洗浄し、ＱｕａｎｔａＢｌｕ基質希釈標準溶液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＃１５１６９、供給元の指示に従って調製）を各ウェルに加えた。６０分後、ウェルに停止液を加えることにより、発生した蛍光生成物を停止させた。３２５ｎｍの励起波長および４２０ｎｍの発光波長をそれぞれ用い、Ｔｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅプレートリーダーを用いて、プレートを読み取った。特記しない限り、Ｃｅｌｌ  ＳｉｇｎａｌｌｉｎｇからのＰａｔｈ  Ｓｃａｎ  Ｐｈｏｓｐｈｏ  ＡＫＴ（Ｔｈｒ３０８）  ｓａｎｄｗｉｃｈ  ＥＬＩＳＡキット（＃７１４４）に入っていた試薬を、このＥＬＩＳＡアッセイで用いた。
（ｄ）ＰＩ３キナーゼ−ベータ阻害の尺度としてのＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞におけるホスホＡＫＴ（Ｓｅｒ４７３）の検出プロトコル
このアッセイを用いて細胞におけるＰＩ３Ｋ−β阻害を測定し、このアッセイを上記アッセイ（ｃ）と併せて用いて、細胞におけるアルファ対ベータ選択率を決定した。ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞（ヒト乳腺癌＃ＡＴＣＣ  ＨＴＢ  １３２）を、Ｇｒｅｉｎｅｒ  ３８４ウェル黒色平底プレート中に、１０％ＦＢＳおよび１％グルタミンを含有する４０μＬのＤＭＥＭ中に１５００細胞／ウェルで播種した。細胞プレートを３７℃のインキュベーターで１８時間インキュベートした後、音響分配を用いて、１００％ＤＭＳＯ中の化合物を投与した。
【０１７９】
無作為化したプレートマップ中に、化合物を１２点の濃度範囲で投与した。１００％  ＤＭＳＯを投与するか（最大シグナル）、ｐＡＫＴシグナルを完全に排除する参照化合物（ＰＩ３Ｋ−β阻害剤）を添加する（最小対照）ことにより、対照ウェルを得た。プレートを３７℃で２時間インキュベートした後、１０μＬの３．７％ホルムアルデヒド溶液を添加することにより細胞を固定した。３０分後、Ｔｅｃａｎ  ＰＷ３８４プレート洗浄機を用いてプレートをＰＢＳで洗浄した。ウェルをブロックし、０．５％  Ｔｗｅｅｎ２０および１％  ＭａｒｖｅｌＴＭ（乾燥粉乳）を含有する４０μＬのＰＢＳを添加して細胞を透過処理し、室温で６０分間インキュベートした。該プレートを０．５％（ｖ／ｖ）のＴｗｅｅｎ  ２０を含有するＰＢＳで洗浄し、同ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ＋１％  ＭａｒｖｅｌＴＭ中の２０μＬのウサギ抗ホスホＡＫＴ  Ｓｅｒ４７３（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、＃３７８７）を加え、４℃で一晩インキュベートした。
【０１８０】
Ｔｅｃａｎ  ＰＷ３８４を用いて、プレートをＰＢＳ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０で３回洗浄した。１％  ＭａｒｖｅｌＴＭを含有するＰＢＳ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０中に希釈した二次抗体Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８抗ウサギ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、＃Ａ１１００８）を各ウェルに２０μＬ加え、室温で１時間インキュベートした。プレートを上記のように３回洗浄した後、各ウェルに２０μＬのＰＢＳを加え、プレートを黒色プレートシーラーで密封した。
【０１８１】
プレートをできるだけ早くＡｃｕｍｅｎプレートリーダーで読み取り、４８８ｎｍのレーザーで励起後の緑色蛍光を測定した。このシステムを用いてＩＣ５０値を得て、プレートの質を対照ウェルにより決定した。参照化合物を毎回操作して、アッセイ性能をモニタリングした。
（ｅ）Ｊｅｋｏ細胞におけるホスホＡＫＴ（ｓｅｒ４７３）の検出プロトコル
このアッセイを用いて、細胞におけるＰＩ３Ｋ−δ阻害を測定した。１０μＬの１％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯ中の×１０の最終濃度の化合物を、Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｖ底９６ウェルプレート（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｍ９６８６）のウェルに加えた。１μＭまたは１０μＭの最大用量から１０点の濃度範囲で化合物を投与し、８つの化合物を１つのプレート上に投与した。抗ＩｇＭ（ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ  Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトＩｇＭ（Ｓｔｒａｔｅｃｈ、＃１０９−００６−１２９）およびビヒクルを投与した最大シグナル対照がプレート１枚につき８ウェル、抗ＩｇＭおよび参照ＰＩ３Ｋ−δ阻害剤を投与した最小シグナル対照が８ウェルであった。最終ビヒクル濃度は０．１％  ＤＭＳＯであった。各試験にＰＩ３Ｋ−δ選択性化合物の全用量反応曲線は包含されていた。Ｊｅｋｏ  Ｂ細胞（ヒトマントル細胞リンパ腫、ＡＴＣＣ  ＃ＣＲＬ−３００６）を、化合物を含有するＧｒｅｉｎｅｒ９６ウェルＶ底プレート中に播種した。細胞は、１％グルタミンを含有する７０μＬのＲＰＭＩ中に１０００００細胞／ウェルで播種した。
【０１８２】
細胞プレートを化合物と一緒に３７℃のインキュベーターで１時間インキュベートした。この化合物のプレインキュベーション時間の後、上記抗ＩｇＭを２０μＬのアッセイ緩衝液（１％グルタミンを含有するＲＰＭＩ）中×５の最終濃度でプレートに加えた。最終抗ＩｇＭ濃度は、０．０６μｇ／ｍＬまたはＥＣ９０用量と同等であった。プレートを３７℃で１０分間インキュベートした後、プレートをすぐに氷上に置き、１２０００ｒｐｍで４分間遠心分離した。氷上で、手動ピペットを用いて上澄みを慎重に除去し、４０μＬの溶解緩衝液を加えた。プレートを氷上で５分間インキュベートし、製造業者の指示に従ってリン光体（Ｓｅｒ４７３）／全Ａｋｔ全細胞溶解液キット（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、＃Ｋ１１１００Ｄ−３）でアッセイするまで−８０℃で保管した。
（ｆ）ＨＴ２９細胞におけるホスホＣｈｋ１（Ｓｅｒ３４５）の検出プロトコル
ＡＴＲ（Ａｔａｘｉａ  Ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｓｉａ＋Ｒａｄ３関連キナーゼ）は、ＤＮＡの損傷または複製のブロックに応答してセリンまたはスレオニン残基上の複数基質をリン酸化するＰＩ３キナーゼ関連キナーゼである。Ｃｈｋ１は、ＡＴＲの下流タンパク質キナーゼであり、ＤＮＡ損傷のチェックポイント制御において重要な役割を果たす。Ｃｈｋ１の活性化はＳｅｒ３１７およびＳｅｒ３４５のリン酸化を伴う（後者は、ＡＴＲによるリン酸化／活性化の選択的標的とみなされている）。
【０１８３】
これは、化合物および紫外線模倣４ＮＱＯ（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｎ８１４１）で処理した後のＨＴ２９細胞におけるＣｈｋ１（Ｓｅｒ３４５）のリン酸化の減少を測定することにより、ＡＴＲキナーゼの阻害を測定するための、細胞に基づくアッセイであった。ＨＴ２９細胞（ＥＣＡＣＣ  ＃８５０６１１０９）を、１％Ｌグルタミンおよび１０％ＦＢＳを含有する４０μＬのＥＭＥＭ培地中に６０００細胞／ウェルの密度で３８４ウェルアッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ＃３７１２）中に播種し、一晩放置して付着させた。翌朝、１００％  ＤＭＳＯ中の化合物を音響分配によりアッセイプレートに加えた。３７℃および５％  ＣＯ２で１時間インキュベートした後、無応答対照(null response control)を作り出すために４ＮＱＯで処理しないままにした最小対照ウェルを除き、すべてのウェルに１００％  ＤＭＳＯ中の３ｍＭ  ４ＮＱＯを音響分配により４０ｎＬ加えた。プレートをさらに１時間インキュベーターに戻した。その後、ＰＢＳ溶液中の３．７％ホルムアルデヒドを２０μＬ加え、室温で２０分間インキュベートすることにより、細胞を固定した。その後、ＰＢＳ中の０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００を２０μＬ加え、室温で１０分間インキュベートして、細胞を透過処理した。その後、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５プレート洗浄機を用いて、プレートを５０μＬ／ウェルのＰＢＳで１回洗浄した。
【０１８４】
ホスホ−Ｃｈｋ１  Ｓｅｒ  ３４５抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＃２３４８）を、０．０５％ポリソルベート／Ｔｗｅｅｎを含有するＰＢＳ中に１５０倍希釈し、１５μＬを各ウェルに加えて室温で一晩インキュベートした。翌朝、プレートを、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５プレート洗浄機を用いて５０μＬ／ウェルのＰＢＳで３回洗浄した後、ＰＢＳＴ中に５００倍希釈のＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、＃Ａ−１１００８）および０．００２ｍｇ／ｍＬ  Ｈｏｅｓｃｈｓｔ染料（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  ＃Ｈ−３５７０）を含有する二次Ａｂ溶液を２０μＬ加えた。室温で２時間インキュベートした後、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０５プレート洗浄機を用いてプレートを５０μＬ／ウェルのＰＢＳで３回洗浄した後、読み取るまで黒色プレートシールでプレートを密封した。１０×の対物レンズとともにＸＦ５３フィルターを用い、Ａｒｒａｙ  Ｓｃａｎ  ＶＴＩ機器を用いて、プレートを読み取った。Ｈｏｅｓｃｈｓｔ（４０５ｎＭ）での核染色およびｐＣｈｋ１（４８８ｎＭ）の二次抗体染色を分析するために、２つのレーザー装備を用いた。
（ｇ）腫瘍細胞株における細胞増殖アッセイ（個別化医療の前提を実証するために用いる）
化合物の作用に対するヒト癌細胞株パネルの感受性を、標準的な増殖アッセイで決定した。細胞株はＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  Ｃｅｌｌ  Ｂａｎｋから得た。細胞株の大部分は、当業者に公知の細胞バンク保管所、例えば、ＡＴＣＣ、ＥＣＡＣＣ、ＤＭＳＺ、ＲＩＫＥＮ、ＫＣＬＢ、ＪＣＲＢ（ＨＳＲＲＢ）、ＬＢＮＬ、ＣＬＳおよびＩＣＬＣからも入手可能である。
【０１８５】
細胞を、９６ウェルプレートに、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ培地中に１ウェルあたり１０００〜６０００細胞の密度で入れた。３７℃で１６時間インキュベートした後、さまざまな濃度の化合物をアッセイプレートに加えた。追加的に７２時間インキュベートした後、２時間にわたりＭＴＳ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  ＃３５８２）を各ウェルに添加することにより生存細胞を決定した。ＭＴＳは、電子カップリング試薬の存在下で代謝的に活性な細胞によりホルマザンに生物還元されるテトラゾリウム塩である。その後、生細胞の相対数の指標として、ホルマザン生成物を４９０ｎｍにおける吸光度により定量した。ＧＩ５０（細胞成長が５０％阻害された濃度）を決定するために、薬物添加時に存在する細胞の相対数を、薬物添加前のＭＴＳの読み取りと比較することにより決定し、この値を、アッセイ中の細胞成長の基準として、未処理細胞の７２時間の値から差し引いた。
【０１８６】
以下の‘個別化ヘルスケア／個別化医療の例’に記載するこのデータの解析は、ＰＩ３Ｋα阻害剤が、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子変異を有する細胞株の選択的成長阻害を示すことを明らかにするための、このデータの解析方法を例示している。応答予測バイオマーカーの読み取りを用いて、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子に変異を含有する腫瘍を有し、本明細書中に記載する化合物に応答する可能性が高い患者を識別することができる場合、これは、個別化ヘルスケア（ＰＨＣ）または個別化医療の適切な条件を例示している。
【０１８７】
本明細書中に記載する化合物に応答する他の考えうるマーカーとしては、限定されるものではないが、複製数の増加、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の増幅または転座、およびＰＩ３３キナーゼ経路の活性化または依存性の基準を提供する他の遺伝子的、ゲノム的もしくはプロテオミクス的変化；例えば、限定されるものではないが、１以上の受容体チロシンキナーゼの活性化、またはＰＩ３キナーゼの調節サブユニット（ｐ８５）をコードするＰＩＫ３Ｒ遺伝子の変異もしくは転座、またはｐＡＫＴ、ｐＳ６もしくはＦＯＸＯ状態などの下流シグナル伝達マーカーのリン酸化が挙げられる。これに加えて、他の遺伝子および／またはそれらのタンパク質生成物、例えばＫｒａｓのシグナル伝達の解析は、個別化医療アプローチの予測性の改善に役立つ可能性がある。
（ｈ）雄ＳＣＩＤマウスにおいて成長したＭＣＦ−７腫瘍からのホスホＡＫＴ（ｓｅｒ４７３）の検出プロトコル
これは、動物モデルにおけるＰＩ３Ｋ−α阻害の基準を提供する薬力学的アッセイであった。雄ＳＣＩＤマウス（英国ＡＺ、英国Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒからも入手可能）の皮下（ｓ．ｃ．）にヒト乳腺癌細胞株ＭＣＦ７（ＩＣＲＦ  Ｌｏｎｄｏｎ、ＡＴＣＣ  ＃ＨＴＢ−２２からも入手可能）を移植して、ＰＩ３キナーゼ阻害剤でのＡＫＴのリン酸化の阻害を決定した。細胞を埋め込む２４時間前に、０．５ｍｇの２１日徐放エストロゲンペレット剤（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ、＃Ｅ１２１）をマウスに埋め込んだ。５０％マトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）中の５×１０６細胞を、動物の左側腹部に皮下注射した。腫瘍が４００ｍｍ３の体積に達したら動物を無作為に８匹の対照群と４匹の処置群に分け、翌日投与を開始した。選択した時間点に腫瘍を取り出し、このときにＰＫ測定のために血液試料も取り出した。
【０１８８】
マウスから切除した腫瘍をＦａｓｔ  Ｐｒｅｐ管（溶解マトリックスＡを含有する２ｍＬ畝付き管(ridged tube)、ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ  ＃６９１０−５００）に入れ、即座に凍結した。１ｍＬの溶解緩衝液（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、３ｍＭ  ＥＧＴＡ、５０ｍＭフッ化ナトリウム、２ｍＭオルトバナジン酸塩、０．２７Ｍスクロース、１０ｍＭベータ−グリセロホスフェート、５ｍＭピロリン酸塩、０．５％  Ｔｒｉｔｏｎ  ｘ−１００）およびホスファターゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｐ２８５０およびＳｉｇｍａ  ＃５７２６、１：１００希釈物）およびプロテアーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｐ８３４０、１：２００希釈物）を、各管に加えた。腫瘍をＦａｓｔＰｒｅｐ−ＴＭ機（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ  ＃１１６００４５００）で１分間ホモジナイズした後、氷上に５分間放置し、続いて、さらに２つの均質化段階を行い、各段階の後に氷上で５分間インキュベートした。試料を冷却遠心分離器において１３００ｒｐｍで１０分間スピンさせた。その後、澄んだ溶解物を未使用の管に取り、１０μＬをタンパク質決定アッセイに用いた。
【０１８９】
全ＡＫＴおよびリン酸化ＡＫＴ（ｓｅｒ４７３）の検出は、ＭＳＤマルチスポットアッセイキット（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＃Ｋ１５１０ＯＤ−３  ）を用いて行った。プレートの各ウェルは４つのスポットを含有していた；これらのうち２つは、キットに付いているマウスモノクローナル抗体でコーティングされており；１つは、全ＡＫＴ用の捕捉抗体でコーティングされており、１つはリン酸化ＡＫＴ（ｓｅｒ４７３）用の抗体でコーティングされていた。プレートを、低温室において、１ウェルあたり１５０μＬのブロッキング溶液を用いてシェーカー上で一晩ブロックした。該ブロッキング溶液は、２０ｍＬの洗浄溶液の１×溶液およびキットに付いていた６００ｍｇのＢｌｏｃｋｅｒ  Ａを用いて作製した。１ウェルあたり０．３ｍＬの洗浄溶液でプレートを３回洗浄した。溶解物のアリコートを各腫瘍から取り出し、溶解緩衝液で２ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈した後、２５μＬの希釈溶解物を各ウェルに加え、１ウェルあたりの全量を５０μｇにした。プレートを室温において１時間シェーカー上に置いた後、プレートを３回洗浄した。検出抗体溶液は、ブロッキングおよび洗浄溶液の混合物、ならびに５０×ＳＵＬＦＯ−ＴＡＧ−ＴＭ抗全ＡＫＴ抗体の１対５０希釈物を用いて調製した。プレートを室温において１時間シェーカー上に置いた後、プレートを３回洗浄した。キットに付いていた読み取り緩衝液１５０μＬを脱イオン水で１：４に希釈して各ウェルに加えた後、プレートをＭＳＤプレート分析器で読み取った。読み取り緩衝液は電気化学ルミネセンスに適した化学的環境をもたらすので、プレートリーダーでプレートに電圧を加えると、プレート底面上の電極により、検出抗体に結合している標識は発光する。発光した光の強度は、存在する全ＡＫＴまたはリン酸化ＡＫＴの定量的尺度である。リン酸化ＡＫＴと全ＡＫＴの比を計算するために、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅにより提案されている計算を施用した：リン酸化シグナルを２倍したものを全シグナル＋リン酸化シグナルで割った後、１００をかけてリンタンパク質の％を得る。値をＬｏｇ１０に変換した後、これらの値を用いて、各群のＧｅｏｍｅａｎおよび標準誤差を計算した。その後、両側検定の式(2 tailed formula)および不等分散を用いてスチューデントのｔ検定を施用して、有意性を確認した。試験により、８匹の動物の対照群と１処置群につき４匹が、試験を推進するのに十分であることが示された。
（ｉ）ＳＣＩＤマウスに移植したヒト乳腺癌細胞株ＭＣＦ７における腫瘍成長の検出プロトコル
この方法は、ＰＩ３Ｋ−α依存性モデルにおけるＰＩ３キナーゼ阻害剤のｉｎ  ｖｉｖｏでの抗腫瘍効力の評価を提供する。上記ＰＤ試験では、雄ＳＣＩＤマウスにヒト乳腺癌細胞株ＭＣＦ７を皮下移植した。細胞を埋め込む２４時間前に、０．５ｍｇの２１日徐放エストロゲンペレット剤をマウスに埋め込んだ。５０％マトリゲル中の５×１０６細胞を、動物の左側腹部に皮下注射した。腫瘍が約２００〜３００ｍｍ３の体積に達したら動物を無作為に１０〜１５匹の対照群に分け、処置を開始した。動物に、経口経路、静脈内経路または腹腔内経路により、保護要件(welfare requirements)（経口投与用懸濁液はｐＨ範囲４〜７、腹腔内／静脈内投与用溶液はｐＨ範囲５．５〜７．０）に適応し、所要経路を介した投与に適したビヒクル中の化合物を、定義した投与量で２〜４週間にわたり投与した。通常、腫瘍はカリパスにより週に２回測定し、腫瘍体積は楕円の公式（パイ／６×幅×幅×長さ）を用いて計算した。
【０１９０】
予想どおり、式（Ｉ）の化合物の薬理学的特性は構造変化に伴い変動するが、一般に、式（Ｉ）の化合物が持つ活性は、上記試験（ａ）および（ｃ）の１以上において以下の濃度または用量で実証することができる：−
試験（ａ）：−  例えば１ｎＭ〜１００ｎＭの範囲における、ＩＣ５０対ＰＩ３Ｋ−α；
試験（ｃ）：−  例えば１０ｎＭ〜１μＭの範囲における、ＩＣ５０対ＢＴ４７４細胞中の細胞ホスホＡＫＴ（Ｔｙｒ３０８）；
本発明の特定の化合物は、上記試験（ａ）および（ｃ）の１以上において以下の濃度または用量で活性を持つと好都合である：−
試験（ａ）：−  例えば１ｎＭ〜１００ｎＭの範囲における、ＩＣ５０対ＰＩ３Ｋ−α；
試験（ｃ）：−  例えば１０ｎＭ〜１μＭの範囲における、ＩＣ５０対ＢＴ４７４細胞中の細胞ホスホＡＫＴ（Ｔｙｒ３０８）；
本発明の特定の化合物は、上記試験（ａ）、（ｃ）、（ｈ）および（ｉ）の１以上において以下の濃度または用量で活性を持つと好都合である：−
試験（ａ）：−  例えば１ｎＭ〜１００ｎＭの範囲における、ＩＣ５０対ＰＩ３Ｋ−α；
試験（ｃ）：−  例えば１０ｎＭ〜１μＭの範囲における、ＩＣ５０対ＢＴ４７４細胞中の細胞ホスホＡＫＴ（Ｔｙｒ３０８）；
試験（ｈ）：−  例えば１〜２００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲における、ｉｎ  ｖｉｖｏでのホスホＡＫＴ（ｓｅｒ４７３）の＞５０％阻害；
試験（ｉ）：−  例えば１〜２００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲における異種移植片活性。
【０１９１】
実施例に関し以下のデータを作成した：
【０１９２】
【表１】
0006307096.tif 000020
【０１９３】
組み合わせ試験
材料および方法
ＭＣＦ７は、ＰＩＫＣ３ＣＡ遺伝子（Ｅ５４５Ｋ）に変異を有するエストロゲン受容体陽性の乳房腫瘍細胞株である。雄ＳＣＩＤマウス（英国ＡＺ）の皮下（ｓ．ｃ．）にヒト乳腺癌細胞株ＭＣＦ７（ＩＣＲＦ  Ｌｏｎｄｏｎ）を移植して、ＰＩ３キナーゼ阻害剤の抗腫瘍活性を決定した。細胞を埋め込む２４時間前に、０．５ｍｇの２１日徐放エストロゲンペレット剤（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ）をマウスに埋め込んだ。５０％マトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）中の５×１０６細胞を、動物の左側腹部に皮下注射した。
【０１９４】
ＢＴ４７４は、増加したＨｅｒ２発現を有し、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子（Ｋ１１１Ｎ）に変異を有する、エストロゲン受容体陽性の乳房腫瘍細胞株である。マウスで継代培養したヒト上皮乳管癌細胞株ＢＴ４７４ｃ（ＢＴ４７４−ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−２０からＡＺで誘導）腫瘍を、雌スイス無胸腺ヌードマウス（スイスｎｕ／ｎｕ−英国ＡＺ）に皮下移植した。細胞を埋め込む２４時間前に、０．３６ｍｇの６０日徐放エストロゲンペレット剤（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ）をマウスに埋め込んだ。５０％マトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）中の５×１０６細胞を、動物の左側腹部に皮下注射した。
【０１９５】
ＨＣＣ７０は、ＰＴＥＮ遺伝子発現に欠ける乳房腫瘍細胞株である。乳管上皮腫瘍細胞株ＨＣＣ７０（ＡＴＣＣ−ＣＲＬ２３１５）細胞を、雌スイス無胸腺ヌードマウス（スイスｎｕ／ｎｕ−英国ＡＺ）に皮下移植した。５０％マトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）中の１×１０６細胞を、動物の左側腹部に皮下注射した。
【０１９６】
腫瘍が約２００〜３００ｍｍ３の体積に達したら動物を無作為に１０〜１５匹の群に分け、処置を開始した。適したビヒクル中の化合物を、定義した用量およびスケジュールで経口経路により動物に３〜４週間投与した。腫瘍をカリパスにより週に２〜３回測定し、楕円の公式（パイ／６×幅×幅×長さ）を用いて腫瘍体積を計算した。
【０１９７】
ＡＺＤ５３６３は、単独で投与する場合、１０％  ＤＭＳＯ、２５％  Ｋｌｅｐｔｏｓｅ溶液中に配合した。（ＫｌｅｐｔｏｓｅはＲｏｑｕｅｔｔｅ−Ｐｈａｒｍａ（商標）から供給されるヒドロキシプロピル  ベータシクロデキストリンである−ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用および配合に適している）。
【０１９８】
ＡＺＤ５３６３は、実施例３と同時投与する場合、ＨＰＭＣ／Ｔｗｅｅｎ（０．５％  Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（ヒドロキシプロピルメトセルロース）／０．１％  Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ８０）中に配合した。該懸濁液を一晩ボールミル粉砕した。
【０１９９】
実施例３は、ＨＰＭＣ／Ｔｗｅｅｎ（０．５％  Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（ヒドロキシプロピルメトセルロース）／０．１％  Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ８０）中に配合した。
【０２００】
ＡＺＤ８１８６は、ＨＰＭＣ／Ｔｗｅｅｎ（０．５％  Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（ヒドロキシプロピルメトセルロース）／０．１％  Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ８０）中に配合した。
【０２０１】
ＡＺＤ８１８６は、実施例３と同時投与する場合、ＨＰＭＣ／Ｔｗｅｅｎ（０．５％  Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（ヒドロキシプロピルメトセルロース）／０．１％  Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ８０）中に配合した。該懸濁液を一晩ボールミル粉砕した。
【０２０２】
オラパリブは、１０％  ＤＭＳＯ／３０％  Ｋｌｅｐｔｏｓｅ溶液中に配合した。
ＡＫＴ阻害剤（ＡＺＤ５３６３）と組み合わせた実施例３による腫瘍成長阻害−逐次投与
試験は、ＢＴ４７４異種移植モデルで実施した。実施例３およびＡＺＤ５３６３を、６〜８時間あけて１日２回（ＢＩＤ）、週に２日投与／５日非投与のサイクルで、ＡＺＤ５３６３を週の１日目および２日目のサイクルで投与し、実施例３を週の３日目および４日目のサイクルで投与するような順序で投与した。それぞれＨＰＭＣ／Ｔｗｅｅｎ中およびＤＭＳＯ／Ｋｌｏｐｔｏｓｅ中、実施例３は５０ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤで投与し、ＡＺＤ５３６３は１７０ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤで投与した。
【０２０３】
腫瘍成長曲線（図９に示す）は、実施例３またはＡＺＤ５３６３の間欠投与が、ビヒクルのみの対照（ＨＰＭＣ／Ｔｗｅｅｎ）と比べ、腫瘍成長を部分的に阻害したことを示している。実施例３＋ＡＺＤ５３６３の組み合わせは、腫瘍退縮をもたらした。
ＡＫＴ阻害剤（ＡＺＤ５３６３）と組み合わせた実施例３による腫瘍成長阻害−同時投与
試験は、ＢＴ４７４異種移植モデルで実施した。実施例３およびＡＺＤ５３６３を、６〜８時間あけて１日２回（ＢＩＤ）、週に２日投与／５日非投与のサイクルで、随伴して投与した。ともにＨＰＭＣ／Ｔｗｅｅｎ中、実施例３は２５ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤで投与し、ＡＺＤ５３６３は１００ｍｇ／ｋｇ  ＢＩＤで投与した。
【０２０４】
腫瘍成長曲線（図１０に示す）は、実施例３またはＡＺＤ５３６３の間欠投与が、ビヒクルのみの対照（ＨＰＭＣ／Ｔｗｅｅｎ）と比べ、腫瘍成長を部分的に阻害したことを示している。実施例３＋ＡＺＤ５３６３の組み合わせは、投与期間中は腫瘍退縮をもたらしたが、続く非投与期間中に腫瘍は再成長した。
ＰＡＲＰ阻害剤（オラパリブ）と組み合わせた実施例３による腫瘍成長阻害
試験は、ＢＴ４７４異種移植モデルで実施した。実施例３およびオラパリブを、試験期間を通して毎日、実施例３は６〜８時間あけて１日２回（ＢＩＤ）、各回２５ｍｇ／ｋｇの用量で、オラパリブは１日１回（ＱＤ）、実施例３の最初の１日用量の１時間後に１００ｍｇ／ｋｇで投与した。どちらの作用物質もＨＰＭＣ／Ｔｗｅｅｎ中のものを投与した。
【０２０５】
腫瘍成長曲線（図１１）は、オラパリブ単独は腫瘍成長に著しい効果を有さず、実施例３単独は部分的に成長を阻害したが、実施例３＋オラパリブの組み合わせは腫瘍退縮をもたらしたことを示している。
ＰＡＲＰ阻害剤（オラパリブ）と組み合わせた実施例３による腫瘍成長阻害
試験は、ＭＣＦ７異種移植モデルで実施した。実施例３およびオラパリブを、試験期間を通して毎日、実施例３は６〜８時間あけて１日２回、各回２５ｍｇ／ｋｇの用量で、オラパリブは１日１回（ＱＤ）、実施例３の最初の１日用量の１時間後に１００ｍｇ／ｋｇで投与した。どちらの作用物質もＨＰＭＣ／Ｔｗｅｅｎ中のものを投与した。
【０２０６】
腫瘍成長曲線（図１２）は、オラパリブ単独は腫瘍成長に対し最小限の効果しか有さず、実施例３単独は多少の腫瘍退縮をもたらすが、実施例３＋オラパリブの組み合わせは、より強い腫瘍退縮をもたらしたことを示している。
ＰＩ３Ｋベータ／デルタ阻害剤（ＡＺＤ８１８６）と組み合わせた実施例３による腫瘍成長阻害
試験は、ＨＣＣ７０異種移植モデルで実施した。実施例３およびＡＺＤ８１８６を、試験期間を通して毎日、１日２回（ＢＩＤ）、実施例３は各回２５ｍｇ／ｋｇの用量で、ＡＺＤ８１８６は各回５０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。どちらの作用物質もＨＰＭＣ／Ｔｗｅｅｎ中のものを投与した。
【０２０７】
腫瘍成長曲線（図１３）は、ＡＺＤ８１８６は腫瘍成長を部分的に阻害し、実施例３単独はより強く成長を阻害したが、実施例３＋ＡＺＤ８１８６の組み合わせは腫瘍退縮をもたらしたことを示している。
【０２０８】
本発明の他の観点に従って、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を、薬学的に許容しうる希釈剤またはキャリヤーと共同して含む、医薬組成物を提供する。
【０２０９】
錠剤製剤に適した薬学的に許容しうる賦形剤としては、例えば、不活性希釈剤、顆粒化および崩壊剤、結合剤、潤滑剤、防腐剤ならびに酸化防止剤が挙げられる。錠剤製剤は、コーティングされていなくてもよく、あるいは、製剤の崩壊と、それに続く胃腸管内での活性構成成分の吸収を改変するために、または製剤の安定性および／もしくは外観を改善するために、どちらの場合も当分野で周知の従来のコーティング剤および手順を用いて、コーティングされていることができる。
【０２１０】
経口使用のための組成物は、選択的に、活性構成成分が不活性固体希釈剤と混合されている硬ゼラチンカプセルの形態にあるか、活性構成成分が水またはオイルと混合されている軟ゼラチンカプセルの形態にあることができる。
【０２１１】
水性懸濁液は一般に、微粉化形態にある活性構成成分を、１以上の懸濁化剤、分散剤または湿潤剤と一緒に含有する。水性懸濁液は、１以上の防腐剤、酸化防止剤、着色剤、香味剤、および／または甘味剤も含有することができる。
【０２１２】
油性懸濁液は、活性構成成分を植物油または鉱油に懸濁させることにより配合することができる。油性懸濁液は増粘剤を含有することもできる。口当たりの良い経口調製物を提供するために、上記のような甘味剤、および香味剤を加えてもよい。これらの組成物は、酸化防止剤を加えることにより保存することができる。
【０２１３】
水の添加により水性懸濁液を調製するのに適した分散性粉末および顆粒は、一般に、活性構成成分を、分散剤もしくは湿潤剤、懸濁化剤、および１以上の防腐剤と一緒に含有する。甘味剤、香味剤および着色剤などの追加的な賦形剤も、存在することができる。
【０２１４】
本発明の医薬組成物は、水中油型エマルションの形態で存在することもできる。油相は植物油もしくは鉱油またはこれらのいずれかの混合物であることができる。エマルションは、甘味剤、香味剤、および防腐剤も含有することができる。
【０２１５】
シロップおよびエリキシルは、甘味剤と一緒に配合することができ、粘滑剤、防腐剤、香味剤および／または着色剤を含有することもできる。
【０２１６】
該医薬組成物は、無菌の注射可能な水性または油性懸濁液の形態にあることもでき、これは、上記の適した分散剤または湿潤剤および懸濁化剤の１以上を用い、公知の手順に従って配合することができる。無菌の注射可能な調製物は、非毒性で非経口的に許容しうる希釈剤または溶媒中の無菌の注射可能な溶液または懸濁液であることもできる。
【０２１７】
吸入投与用の組成物は、微細な固体または液滴を含有するエーロゾルのいずれかとして活性構成成分が分配されるようになっている、従来の加圧エーロゾルの形態にあることができる。揮発性フッ素化炭化水素または炭化水素などの従来のエーロゾル噴射剤を用いることができ、エアゾール機器は、計量した分量の活性構成成分を分配するようになっている。
【０２１８】
製剤に関するさらなる情報については、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙの第５巻、２５．２章（Ｃｏｒｗｉｎ  Ｈａｎｓｃｈ；編集委員委員長）、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ  １９９０を参照のこと。
【０２１９】
単一剤形をもたらすために１以上の賦形剤と組み合わせる活性構成成分の量は、処置される宿主および特定の投与経路に応じて必然的に変動する。例えば、ヒトへの経口投与では、一般に、例えば、１ｍｇ〜２ｇの投与しようとする活性作用物質（より適切には１００ｍｇ〜２ｇ、例えば、２５０ｍｇ〜１．８ｇ、例えば５００ｍｇ〜１．８ｇ、とりわけ５００ｍｇ〜１．５ｇ、好都合には５００ｍｇ〜１ｇ）を、全組成物の約３〜約９８重量パーセントであることができる適切で好都合な量の賦形剤と配合することが必要になる。大用量が必要な場合、活性構成成分の用量を好都合に分けて、多数の剤形、例えば、２以上の錠剤またはカプセルが必要となる可能性があることは、理解されるであろう。好都合には、単一剤形は、１〜３００ｍｇの活性構成成分を含有することができる。
【０２２０】
治療的または予防的目的での式（Ｉ）の化合物の用量サイズは、周知の医療の原理に準じて、疾患状態の性質および重症度、動物または患者の年齢および性別、ならびに投与経路に従って必然的に変動する。
【０２２１】
治療的または予防的目的での式（Ｉ）の化合物の使用において、それは、一般に、必要に応じて分割用量で、例えば１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある１日用量が受領されるように投与する。一般に、非経口経路を採用する場合は、より低い用量を投与する。したがって、例えば静脈内投与の場合、例えば１ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量を一般に用いる。同様に、吸入投与の場合、例えば１ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量を用いる。しかしながら、とりわけ錠剤形態での経口投与が好ましい。典型的には、単位剤形は、約１０ｍｇ〜０．５ｇの本発明の化合物を含有する。
【０２２２】
本発明の化合物は、毎日、または１日１回より多く、投与することができる。本発明の化合物は、適した投与スケジュールで投与することもでき、例えば、本発明の化合物を特定日数にわたり１日１回以上（例えば、１日１回、２回または３回）投与した後、一定期間投与しないことができる。その後、この投与サイクル（投与日および非投与日からなる）を繰り返すことができる。好都合には、投与サイクルは、５〜１４日間、例えば、５、７、１０または１４日間であり、より好都合には７日間である。一観点において、ある投与サイクルでは、式（Ｉ）の化合物を１日または連続した２もしくは３日間投与した後、３、４、５または６日間投与しない。
【０２２３】
一観点では、式（Ｉ）の化合物を１日投与した後、２、３または４日間投与しない。
【０２２４】
他の一観点では、式（Ｉ）の化合物を２日間投与した後、４、５または６日間投与しない。
【０２２５】
さらに他の一観点では、式（Ｉ）の化合物を３日間投与した後、３、４または５日間投与しない。
【０２２６】
他の一観点では、式（Ｉ）の化合物を４日間投与した後、２、３または４日間投与しない。
【０２２７】
他の一観点では、式（Ｉ）の化合物を５日間投与した後、１、２または３日間投与しない。
【０２２８】
他の一観点では、式（Ｉ）の化合物を１日おきに投与する。
【０２２９】
上記投与スケジュールは、本発明の化合物を単剤療法として用いるときに施用すると好都合である。併用療法として本発明の化合物を投与するための考えうる投与スケジュールの他の例は、以下に記載する。
【０２３０】
上記のように、ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ酵素は、癌および他の細胞の増殖を媒介する作用、血管新生事象を媒介する作用、ならびに癌細胞の運動、移動および侵襲を媒介する作用の１以上により、腫瘍形成に寄与することが知られている。われわれは、本発明の化合物が強い抗腫瘍活性を持ち、これが、腫瘍細胞の増殖および生存ならびに転移性腫瘍細胞の侵襲および移動能をもたらすシグナル伝達段階に関わるＰＩ３Ｋ−αおよび−δ酵素の阻害により得られると考えられることを、見いだした。
【０２３１】
したがって、本発明の化合物は、抗腫瘍剤として、とりわけ、腫瘍の成長および生存の阻害ならびに転移性腫瘍の成長の阻害をもたらす哺乳類癌細胞の増殖、生存、運動、内転移および侵襲の選択的阻害剤として、有用である。とりわけ、本発明の化合物は、固形腫瘍疾患の封じ込めおよび／または処置における抗増殖剤および抗侵襲剤として有用である。とりわけ、本発明の化合物は、腫瘍細胞の増殖および生存ならびに転移性腫瘍細胞の移動能および侵襲をもたらすシグナル伝達段階に関わるＰＩ３Ｋ−αおよび／または−δ酵素の阻害に対し感受性を示す腫瘍の予防または処置に有用であると予想される。さらに、本発明の化合物は、ＰＩ３Ｋ−αおよび／もしくは−δ酵素の阻害により単独でまたは部分的に媒介される腫瘍の予防または処置に有用であると予想される、すなわち、該化合物は、ＰＩ３Ｋ−αおよび／または−δ酵素阻害作用を、そのような処置を必要とする温血動物にもたらすために、用いることができる。
【０２３２】
本発明の他の観点に従って、ヒトなどの温血動物において医薬品として用いるための、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２３３】
本発明の他の観点に従って、ヒトなどの温血動物における抗増殖作用の生成に用いるための、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２３４】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、ヒトなどの温血動物において固形腫瘍疾患の封じ込めおよび／または処置における抗侵襲剤として用いるための、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２３５】
本発明の他の観点に従って、ヒトなどの温血動物における抗増殖作用の生成のための、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩の使用を提供する。
【０２３６】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、ヒトなどの温血動物における抗増殖作用の生成に用いるための医薬品の製造における、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩の使用を提供する。
【０２３７】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、ヒトなどの温血動物において固形腫瘍疾患の封じ込めおよび／または処置における抗侵襲剤として用いるための医薬品の製造における、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２３８】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、抗増殖作用を、そのような処置を必要とするヒトなどの温血動物において生成するための方法であって、前記動物に、有効量の先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０２３９】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、固形腫瘍疾患の封じ込めおよび／または処置による抗侵襲作用を、そのような処置を必要とするヒトなどの温血動物において生成するための方法であって、前記動物に、有効量の先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０２４０】
本発明の他の観点に従って、ヒトなどの温血動物における癌の予防または処置に用いるための、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２４１】
本発明の他の観点に従って、ヒトなどの温血動物における癌の予防または処置に用いるための医薬品の製造における、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩の使用を提供する。
【０２４２】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、癌の予防または処置を、そのような処置を必要とするヒトなどの温血動物において行うための方法であって、前記動物に、有効量の先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０２４３】
本発明の他の観点に従って、ヒトなどの温血動物における固形腫瘍疾患の予防または処置に用いるための、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２４４】
本発明の他の観点に従って、ヒトなどの温血動物における固形腫瘍疾患の予防または処置に用いるための医薬品の製造における、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩の使用を提供する。
【０２４５】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、固形腫瘍疾患の予防または処置を、そのような処置を必要とするヒトなどの温血動物において行うための方法であって、前記動物に、有効量の先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０２４６】
本発明の他の観点に従って、腫瘍細胞の増殖、生存、侵襲および移動能をもたらすシグナル伝達段階に関わるＰＩ３Ｋ−αおよび／または−δ酵素の阻害に対し感受性を示す腫瘍の予防または処置に用いるための、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２４７】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、腫瘍細胞の増殖、生存、侵襲および移動能をもたらすシグナル伝達段階に関わるＰＩ３Ｋ−αおよび／または−δ酵素の阻害に対し感受性を示す腫瘍の予防または処置に用いるための医薬品の製造における、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩の使用を提供する。
【０２４８】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、腫瘍細胞の増殖、生存、侵襲および移動能をもたらすシグナル伝達段階に関わるＰＩ３Ｋ−αおよび／または−δ酵素の阻害に対し感受性を示す腫瘍の予防または処置に用いるための方法であって、前記動物に、有効量の先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０２４９】
本発明の他の観点に従って、ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ酵素阻害作用をもたらすのに用いるための、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２５０】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ酵素阻害作用をもたらすのに用いるための医薬品の製造における、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩の使用を提供する。
【０２５１】
本発明の他の観点に従って、ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ酵素阻害作用をもたらすための方法であって、有効量の先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を投与することを含む、前記方法も提供する。
【０２５２】
上記のように、本発明の特定の化合物は、ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ酵素に対し、他のＰＩ３キナーゼ酵素または他のキナーゼに対してより、実質的に良好な効能を持つ。そのような化合物は、ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ酵素に対し十分な効能を持ち、ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ酵素を阻害するのに十分な量で用いることができるが、ＰＩ３Ｋ−β酵素および他のほとんどのキナーゼ酵素に対しては活性をほとんど示さない。そのような化合物は、ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ酵素の選択的阻害に有用である可能性が高く、例えばＰＩ３Ｋ−αおよび／または−δ酵素により促進される腫瘍の有効な処置に有用である可能性が高い。
【０２５３】
本発明のこの観点に従って、選択的ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ酵素阻害作用をもたらすのに使用するための、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２５４】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、選択的ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ酵素阻害作用をもたらすのに用いるための医薬品の製造における、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩の使用を提供する。
【０２５５】
本発明の他の観点に従って、選択的ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ酵素阻害作用をもたらすための方法であって、有効量の先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を投与することを含む、前記方法も提供する。
【０２５６】
“選択的ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ酵素阻害作用”は、式（Ｉ）の化合物が、ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ酵素に対し、他のクラス１  ＰＩ３キナーゼに対してより効能が高く、一般に、より広いＰＩ３キナーゼファミリーの他のメンバー、ならびにチロシンおよびｓｅｒ／ｔｈｒキナーゼを含むより広範なクラスのキナーゼ酵素にわたる他のメンバーと比較して、良好な選択性を示すことを意味する。
【０２５７】
本発明の他の特徴に従って、乳癌、胃(stomach)（胃(gastric)）および食道癌、扁平上皮癌（ＳＣＣ）および腺癌を含む非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）、頭頚部（Ｈ＆Ｎ）のＳＣＣ、婦人科癌（子宮内膜癌、卵巣癌および子宮頚癌を含む）、ならびに、多発性骨髄腫、リンパ腫および白血病（慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）およびマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）を含む）などの血液癌の処置に用いるための、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２５８】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、膀胱、脳／ＣＮＳ、結腸直腸、肺（すべての他の形態）、胆嚢および胆管、ならびに皮膚の癌の処置に用いるための、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２５９】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、前立腺、骨、腎臓、肝臓、黒色腫、胃腸組織、膵臓、睾丸、甲状腺、陰茎、外陰部の癌、および、変異、増幅または他の異常を通じてＰＩ３キナーゼ依存性を示す他の腫瘍タイプの処置に用いるための、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２６０】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、乳癌、胃(stomach)（胃(gastric)）および食道癌、ＳＣＣおよび腺癌を含むＮＳＣＬＣ、Ｈ＆ＮのＳＣＣ、婦人科癌（子宮内膜癌、卵巣癌および子宮頚癌を含む）、ならびに、多発性骨髄腫、リンパ腫および白血病（ＣＬＬ、ＡＬＬおよびＭＣＬを含む）などの血液癌の処置を、そのような処置を必要とするヒトなどの温血動物において行うための方法であって、有効量の先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０２６１】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、膀胱、脳／ＣＮＳ、結腸直腸、肺（すべての他の形態）、胆嚢および胆管、ならびに皮膚の癌の処置を、そのような処置を必要とするヒトなどの温血動物において行うための方法であって、有効量の先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０２６２】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、前立腺、骨、腎臓、肝臓、黒色腫、胃腸組織、膵臓、睾丸、甲状腺、陰茎、外陰部の癌、および、変異、増幅または他の異常を通じてＰＩ３キナーゼ依存性を示す他の腫瘍タイプの処置を、そのような処置を必要とするヒトなどの温血動物において行うための方法であって、有効量の先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０２６３】
本発明の他の特徴に従って、乳癌、胃(stomach)（胃(gastric)）および食道癌、ＳＣＣおよび腺癌を含むＮＳＣＬＣ、Ｈ＆ＮのＳＣＣ、婦人科癌（子宮内膜癌、卵巣癌および子宮頚癌を含む）、ならびに、多発性骨髄腫、リンパ腫および白血病（ＣＬＬ、ＡＬＬおよびＭＣＬを含む）などの血液癌の処置に用いるための医薬品の製造における、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩の使用を提供する。
【０２６４】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、膀胱、脳／ＣＮＳ、結腸直腸、肺（すべての他の形態）、胆嚢および胆管、ならびに皮膚の癌の処置に用いるための医薬品の製造における、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩の使用を提供する。
【０２６５】
本発明のこの観点の他の特徴に従って、前立腺、骨、腎臓、肝臓、黒色腫、胃腸組織、膵臓、睾丸、甲状腺、陰茎、外陰部の癌、および、変異、増幅または他の異常を通じてＰＩ３キナーゼ依存性を示す他の腫瘍タイプの処置に用いるための医薬品の製造における、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩の使用を提供する。
【０２６６】
本発明の１つの特徴において、処置しようとする癌は乳癌である。この特徴の他の観点において、乳癌はエストロゲン受容体陽性である。この観点の一態様では、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を、本明細書中で定義する抗ホルモン剤と組み合わせて投与する。この観点の他の態様では、実施例３を、本明細書中で定義する抗ホルモン剤と組み合わせて投与する。この観点の他の態様では、実施例３を、オラパリブまたは薬学的に許容しうるその塩と組み合わせ、所望によりさらに本明細書中で定義する抗ホルモン剤と組み合わせて投与する。この観点の他の態様では、実施例３を、ＡＺＤ５３６３または薬学的に許容しうるその塩と組み合わせ、所望によりさらに本明細書中で定義する抗ホルモン剤と組み合わせて投与する。
【０２６７】
癌の処置が示されている一観点において、これは、転移すなわち癌の拡散の予防および転移の処置をさすことができることを、理解すべきである。したがって、本発明の化合物は、転移を有さない患者を処置するのに用いると、転移の発生を阻止するか転移が発生するまでの期間を長くすることができ、既に転移を有する患者に用いると、転移それ自体を処置することができる。さらに、癌の処置は、確立された原発腫瘍（１以上）および進行性の原発腫瘍（１以上）の処置をさすことができる。したがって、一観点において、癌の処置は転移の予防に関する。本発明の他の観点において、癌の処置は転移の処置に関する。本発明の他の観点において、癌の処置は、確立された原発腫瘍（１以上）または進行性の原発腫瘍（１以上）の処置に関する。
【０２６８】
上記のように、式（Ｉ）の化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ作用は、式（Ｉ）の化合物の投与後にヒトまたは動物の体内で形成される１以上の代謝産物（先に定義した式Ａの化合物など）により部分的にもたらされる。
【０２６９】
本発明の特定の化合物は、ＰＩ３キナーゼ−αおよび−δに対し、他のクラスＩのＰＩ３キナーゼアイソフォーム、例えば−βおよび−γに対してより、良好な効能を持つ。一観点において、本発明の化合物は、ＰＩ３Ｋ−βおよび−γに比べＰＩ３Ｋ−αおよび−δに対し選択性が高い。
【０２７０】
したがって、本発明はまた、患者においてＰＩ３キナーゼ−αを阻害するための方法であって、患者においてホスホイノシチド３キナーゼ−αを阻害するのに有効な量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を、患者に投与することを含む、前記方法を企図する。
【０２７１】
したがって、本発明はまた、患者においてＰＩ３キナーゼ−αおよび−δを阻害するための方法であって、患者においてＰＩ３キナーゼ−αおよび−δを阻害するのに有効な量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を、患者に投与することを含む、前記方法を企図する。
【０２７２】
ＰＩ３キナーゼの阻害剤である式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩は、さまざまな他の疾患状態における潜在的な治療上の用途も有する。例えば、ＰＩ３キナーゼは、血管樹、すなわち、血管平滑筋細胞（Ｔｈｙｂｅｒｇ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９８，７６（１），３３−４２）および肺（気道平滑筋細胞）（Ｋｒｙｍｓｋａｙａ，Ｖ．Ｐ．，ＢｉｏＤｒｕｇｓ，２００７，２１（２），８５−９５）における平滑筋増殖を促進するのに重要な役割を果たす。血管平滑筋細胞の過剰増殖は、アテローム斑の形成および侵襲的な血管処置後の新生内膜過形成の発現において、重要な役割を果たす（Ｓｃｗａｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ，１９８４，２６，３５５−３７２；Ｃｌｏｗｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ，１９７８，３９，１４１−１５０）。さらに、気道平滑筋細胞の過剰増殖は、喘息および慢性気管支炎の状況においてＣＯＰＤの発現を引き起こす。したがって、ＰＩ３キナーゼ活性の阻害剤は、血管再狭窄、アテローム性動脈硬化症およびＣＯＰＤの予防に用いることができる。
【０２７３】
ＰＩ３キナーゼはまた、白血球機能（Ｆｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９９，１６２（１１），６３３７−６３４０；Ｅｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，２７３（４３），２８０２５−３１）およびリンパ球機能（Ｖｉｃｅｎｔｅ−Ｍａｎｚａｎａｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９９，１６３（７），４００１−４０１２）において重要な役割を果たす。例えば、炎症を起こした内皮への白血球付着には、ＰＩ３キナーゼ依存性シグナル伝達プロセスによる内因性白血球インテグリンの活性化が関与する。さらに、好中球における酸化的バースト（Ｎｉｓｈｉｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９８，４４１（１），６３−６６およびＣｏｎｄｌｉｆｆｅ，Ａ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００５，１０６（４），１４３２−４０）および細胞骨格の再構築（Ｋｉｒｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＵＳＡ，１９９９，９６（１１），６２１１−６２１６）に、ＰＩ３キナーゼシグナル伝達が関与すると思われる。好中球の遊走および方向性運動も、ＰＩ３キナーゼ活性に依存する（Ｃａｍｐｓ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ，２００５，１１（９），９３６−４３およびＳａｄｈｕ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３，１７０（５），２６４７−５４）。したがって、ＰＩ３キナーゼの阻害剤は、炎症部位での白血球の付着および活性化を減少させるのに有用である可能性があり、したがって、急性および／または慢性の炎症性障害の処置に用いることができる。ＰＩ３キナーゼは、リンパ球の増殖および活性化においても重要な役割を果たす。Ｆｒｕｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９，２８３（５４００），３９３−３９７。とりわけ、ＰＩ３Ｋ−δはＢ細胞の発生および機能、例えば、ＩｇＭに特異的な抗体により誘発されるＢ細胞増殖（Ｏｋｋｅｎｈａｕｇ  Ｋ  ｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，２９７（５５８３），１０３１−１０３４）、Ｂ細胞受容体により誘発されるＤＮＡの合成および増殖、ならびにＩＬ−４により誘発される生存（Ｂｉｌａｎｃｉｏ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００６，１０７，６４２−６５０）に必須である。これらの観察結果は、ＰＩ３Ｋ−δが、Ｂ細胞の機能において、他のクラスＩのＰＩ３Ｋにより補われない極めて重要で重複しない役割を有することを示している。自己免疫疾患におけるリンパ球の重要な役割を考えると、ＰＩ３キナーゼ活性の阻害剤を、そのような疾患の処置に用いることができる（Ｒｏｍｍｅｌ  Ｃ，Ｃａｍｐｓ  ＭおよびＪｉ  Ｈ，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００７，１０３８，１９１−２０１）。
【０２７４】
先に定義した抗癌処置は、単独療法として施用することができ、または、本発明の化合物に加えて、従来の外科手術もしくは放射線療法もしくは化学療法を包含することができる。そのような化学療法としては、以下のカテゴリーの抗腫瘍剤の１以上を挙げることができる：−
（ｉ）医学的腫瘍学で用いられるような抗増殖薬／抗新生物薬およびそれらの組み合わせ、例えば、アルキル化剤（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、テモゾロミド(temozolamide)およびニトロソウレア）；代謝拮抗剤（例えば、ゲムシダビンおよび抗葉酸剤、例えば、５−フルオロウラシルおよびテガフールのようなフルオロピリミジン、ラルチトレキセド、メトトレキサート、シトシンアラビノシド、およびヒドロキシウレア）；抗腫瘍性抗生物質（例えば、アドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシンＣ、ダクチノマイシンおよびミトラマイシンのようなアントラサイクリン）；抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビンのようなビンカアルカロイド、ならびにタキソールおよびタキソテールのようなタキソイド、ならびにポロキナーゼ阻害剤）；ならびにトポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エトポシドおよびテニポシドのようなエピポドフィロトキシン、アムサクリン、トポテカン、ならびにカンプトセシン）；
（ｉｉ）抗ホルモン剤、例えば、抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン、フルベストラント、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、およびヨードキシフェン）、抗アンドロゲン剤（例えば、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、および酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨアンタゴニストまたはＬＨＲＨアゴニスト（例えば、ゴセレリン、リュープロレリン、およびブセレリン）、プロゲストゲン（例えば、酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトロゾール、ボロゾール(vorazole)、およびエキセメスタン）、ならびに５α−レダクターゼの阻害剤、例えばフィナステリド；
（ｉｉｉ）成長因子の機能およびそれらの下流のシグナル伝達経路の阻害剤：これには、Ｓｔｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ／Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ，２００５，５４，１１〜２９頁により検討されている任意の成長因子または成長因子受容体標的のＡｂモジュレーターが包含される；そのような標的の小分子阻害剤、例えば、キナーゼ阻害剤も包含される−例としては、抗ｅｒｂＢ２抗体トラスツズマブ［ＨｅｒｃｅｐｔｉｎＴＭ］、抗ＥＧＦＲ抗体パニツムマブ、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブ［Ｅｒｂｉｔｕｘ、Ｃ２２５］のほか、ｅｒｂＢ受容体ファミリーの阻害剤を含むチロシンキナーゼ阻害剤、例えば、ゲフィチニブまたはエルロチニブなどの上皮成長因子ファミリー受容体（ＥＧＦＲ／ｅｒｂＢ１）チロシンキナーゼ阻害剤、ラパチニブなどのｅｒｂＢ２チロシンキナーゼ阻害剤、およびアファチニブ(afatanib)などの混合ｅｒｂ１／２阻害剤が挙げられる；同様の戦略が、他のクラスの成長因子およびそれらの受容体、例えば、肝細胞成長因子ファミリーまたはｃ−ｍｅｔおよびｒｏｎを含むそれらの受容体の阻害剤；インスリンおよびインスリン成長因子ファミリーまたはそれらの受容体（ＩＧＦＲ、ＩＲ）の阻害剤、血小板由来成長因子ファミリーまたはそれらの受容体（ＰＤＧＦＲ）の阻害剤、ならびに、ｃ−ｋｉｔ、ＡｎＬＫおよびＣＳＦ−１Ｒなど他の受容体チロシンキナーゼにより媒介されるシグナル伝達の阻害剤に、利用可能である；
より広範なＰＩ３キナーゼシグナル伝達経路でシグナル伝達タンパク質を標的にするモジュレーター、例えば、ＰＩ３Ｋ−βなど他のＰＩ３キナーゼアイソフォームの阻害剤、およびＡＫＴ、ｍＴＯＲ、ＰＤＫ、ＳＧＫ、ＰＩ４ＫまたはＰＩＰ５Ｋなどのｓｅｒ／ｔｈｒキナーゼの阻害剤も包含される；
先に挙げていないセリン／スレオニンキナーゼの阻害剤、例えば、ベムラフェニブなどのｒａｆ阻害剤、セルメチニブ（ＡＺＤ６２４４）などのＭＥＫ阻害剤、イマチニブまたはニロチニブなどのＡｂｌ阻害剤、イブルチニブなどのＢｋｔ阻害剤、フォスタマニチブなどのＳｙｋ阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤（例えばＡＺＤ１１５２）、ＪＡＫ、ＳＴＡＴおよびＩＲＡＫ４など他のｓｅｒ／ｔｈｒキナーゼの阻害剤、ならびにサイクリン依存性キナーゼ阻害剤も包含される；
（ｉｖ）ＤＮＡ損傷シグナル伝達経路のモジュレーター、例えば、ＰＡＲＰ阻害剤（例えばオラパリブ）、ＡＴＲ阻害剤またはＡＴＭ阻害剤；
（ｖ）Ｂｃｌファミリーモジュレーター（例えばＡＢＴ−２６３／ナビトクラックス、ＡＢＴ−１９９）などのアポトーシスおよび細胞死経路のモジュレーター；
（ｖｉ）血管内皮成長因子の作用を阻害するような抗血管新生剤［例えば抗血管内皮細胞成長因子抗体ベバシズマブ（ＡｖａｓｔｉｎＴＭ）、ならびに、例えば、ソラフェニブ、アキシチニブ、パゾパニブ、スニチニブおよびバンデタニブなどのＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤（ならびに、他の機序により働く他の化合物（例えば、リノミド、インテグリンαｖβ３機能の阻害剤、およびアンギオスタチン）］；
（ｖｉｉ）コンブレタスタチンＡ４などの血管損傷剤；
（ｖｉｉｉ）抗侵襲剤、例えば、ダサチニブ（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００４，４７，６６５８−６６６１）およびボスチニブ（ＳＫＩ−６０６）のようなｃ−Ｓｒｃキナーゼファミリー阻害剤、ならびに、マリマスタットのようなメタロプロテイナーゼ阻害剤、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体機能の阻害剤、またはヘパラナーゼに対する抗体］；
（ｉｘ）免疫療法アプローチ、例えば、インターロイキン２、インターロイキン４または顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子のようなサイトカインでのトランスフェクションなど、患者の腫瘍細胞の免疫原性を向上させるｅｘ−ｖｉｖｏおよびｉｎ−ｖｉｖｏアプローチ、Ｔ細胞アネルギーを低下させるアプローチ、サイトカイントランスフェクト樹状細胞などのトランスフェクト免疫細胞を用いるアプローチ、サイトカイントランスフェクト腫瘍細胞株を用いるアプローチ、ならびに抗イディオタイプ抗体を用いるアプローチなど。具体例としては、ＰＤ−１を標的にするモノクローナル抗体（例えばＢＭＳ−９３６５５８）またはＣＴＬＡ４を標的にするモノクローナル抗体（例えば、イピリムマブおよびトレメリムマブ）が挙げられる；
（ｘ）アンチセンスまたはＲＮＡｉに基づく治療、例えば、上記標的を対象とするもの。
（ｘｉ）遺伝子療法アプローチ、例えば、異常ｐ５３または異常ＢＲＣＡ１もしくはＢＲＣＡ２のような異常遺伝子を置換するアプローチ、シトシンジアミナーゼ、チミジンキナーゼまたは細菌性ニトロレダクターゼ酵素を用いるようなＧＤＥＰＴ（遺伝子を対象とする酵素プロドラッグ療法）アプローチ、ならびに多剤耐性遺伝子療法など化学療法または放射線療法に対する患者の耐容性を向上させるアプローチなど。
【０２７５】
本発明のこの観点に従って、癌の処置に用いるのに適した組み合わせであって、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩と、他の抗腫瘍剤、とりわけ、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げた抗腫瘍剤のいずれか１つとを含む組み合わせを提供する。とりわけ、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げた抗腫瘍剤は、処置しようとする特定の癌の標準治療である；当業者なら、“標準治療”の意味を理解するであろう。
【０２７６】
したがって、本発明の他の観点において、他の抗腫瘍剤、とりわけ、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２７７】
本発明の他の観点において、他の抗腫瘍剤、とりわけ、上記（ｉ）に挙げたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２７８】
本発明の他の観点において、癌の処置に用いるのに適した組み合わせであって、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩と、上記（ｉ）に挙げた抗腫瘍剤のいずれか１つとを含む、前記組み合わせを提供する。
【０２７９】
本発明の他の観点において、癌の処置に用いるのに適した組み合わせであって、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩と、例えばタキソールまたはタキソテールなどのタキソイド、好都合にはタキソテールとを含む、前記組み合わせを提供する。
【０２８０】
本発明の他の観点において、他の抗腫瘍剤、とりわけ、上記（ｉｉ）に挙げたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２８１】
本発明の他の観点において、癌の処置に用いるのに適した組み合わせであって、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩と、上記（ｉｉ）に挙げた抗ホルモン剤、例えば、上記（ｉｉ）に挙げた抗エストロゲン剤のいずれか１つとを含む、前記組み合わせを提供する。
【０２８２】
本発明の他の観点において、国際公開ＷＯ２００８／０２３１６１号に開示されているようなｍＴＯＲ阻害剤、例えば、
【０２８３】
【化１７】
0006307096.tif 000021
【０２８４】
と組み合わせた、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２８５】
本発明の他の観点において、癌の処置に用いるのに適した組み合わせであって、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩と、国際公開ＷＯ２００８／０２３１６１号に開示されているようなｍＴＯＲ阻害剤、例えば、
【０２８６】
【化１８】
0006307096.tif 000022
【０２８７】
とを含む、前記組み合わせを提供する。
【０２８８】
とりわけ、ｍＴＯＲ阻害剤はＡＺＤ２０１４であり、これは以下の構造を有する：
【０２８９】
【化１９】
0006307096.tif 000023
【０２９０】
一観点において、式（Ｉ）の化合物とＡＺＤ２０１４の上記組み合わせは、所望により標準治療のホルモン療法と組み合わせて、エストロゲン受容体陽性の乳癌の処置に用いるのに適してる。
【０２９１】
本発明の他の観点において、ＰＩ３Ｋ−βの阻害剤と組み合わせた、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２９２】
式（Ｉ）の化合物とＰＩ３Ｋ−βの阻害剤の組み合わせは、ＰＴＥＮ喪失に起因する腫瘍、例えば、前立腺癌、乳癌（例えばトリプルネガティブ乳癌）、扁平上皮ＮＳＣＬＣおよび腎癌の処置に、とりわけ有用であることができる。
【０２９３】
本発明の他の観点において、癌の処置に用いるのに適した組み合わせであって、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩とＰＩ３Ｋ−βの阻害剤とを含む組み合わせを提供する。
【０２９４】
一観点において、上記ＰＩ３Ｋ−βの阻害剤は、ＰＩ３Ｋ−δ阻害活性もいくらか有する。
【０２９５】
本発明の他の観点において、ＰＩ３Ｋ−βの阻害剤、例えば、国際特許出願ＷＯ２０１１／０５１７０４号の実施例のいずれか１つと組み合わせた、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０２９６】
本発明の他の観点において、癌の処置に用いるのに適した組み合わせであって、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩と、ＰＩ３Ｋ−βの阻害剤、例えば、国際特許出願ＷＯ２０１１／０５１７０４号の実施例のいずれか１つとを含む、前記組み合わせを提供する。
【０２９７】
本発明の他の観点において、ＰＩ３Ｋ−βおよびＰＩ３Ｋ−δの阻害剤、例えば、８−（（１Ｒ）−１−（３，５−ジフルオロフェニルアミノ）エチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−モルホリノ−４−オキソ−４Ｈ−クロメン−６−カルボキサミド（国際特許出願ＷＯ２０１１／０５１７０４号の実施例３．０６ｂ、ＡＺＤ８１８６としても知られる）または薬学的に許容しうるその塩：
【０２９８】
【化２０】
0006307096.tif 000024
【０２９９】
と組み合わせた、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０３００】
本発明の他の観点において、癌の処置に用いるのに適した組み合わせであって、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩と、ＰＩ３Ｋ−βおよびＰＩ３Ｋ−δの阻害剤、例えば、８−（（１Ｒ）−１−（３，５−ジフルオロフェニルアミノ）エチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−モルホリノ−４−オキソ−４Ｈ−クロメン−６−カルボキサミド（国際特許出願ＷＯ２０１１／０５１７０４号の実施例３．０６ｂ、ＡＺＤ８１８６としても知られる）または薬学的に許容しうるその塩：
【０３０１】
【化２１】
0006307096.tif 000025
【０３０２】
とを含む、前記組み合わせを提供する。
【０３０３】
本発明の他の観点において、ＡＫＴキナーゼの阻害剤、例えば、（Ｓ）−４−アミノ−Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロピル）−１−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド（ＡＺＤ５３６３）または薬学的に許容しうるその塩（例えば国際公開ＷＯ２００９／０４７５６３号参照）と組み合わせた、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０３０４】
式（Ｉ）の化合物とＡＫＴ阻害剤の組み合わせは、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の変異がより高率で出現している腫瘍、例えば、エストロゲン受容体陽性の乳癌、子宮内膜癌、卵巣癌、扁平上皮ＮＳＣＬＣ、胃癌、膀胱癌、および胆道癌の処置に、とりわけ有用であることができる。
【０３０５】
本発明の他の観点において、癌の処置に用いるのに適した組み合わせであって、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩と、ＡＫＴキナーゼの阻害剤、例えば、（Ｓ）−４−アミノ−Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロピル）−１−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミド（ＡＺＤ５３６３）または薬学的に許容しうるその塩（例えば国際公開ＷＯ２００９／０４７５６３号参照）とを含む、前記組み合わせを提供する。
【０３０６】
本発明の他の観点において、オラパリブ（４−［３−（４−シクロプロパンカルボニル−ピペラジン−１−カルボニル）−４−フルオロ−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン）または薬学的に許容しうるその塩と組み合わせた、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を提供する。
【０３０７】
式（Ｉ）の化合物とオラパリブの組み合わせは、ＢＲＣＡ野生型または欠損のいずれかのトリプルネガティブ乳癌と、エストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋ｖｅ）乳癌の両方、とりわけ、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子に変異を有するものに、とりわけ有用であることができる。
【０３０８】
本発明の他の観点において、癌の処置に用いるのに適した組み合わせであって、先に定義した式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩と、オラパリブ（４−［３−（４−シクロプロパンカルボニル−ピペラジン−１−カルボニル）−４−フルオロ−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン）または薬学的に許容しうるその塩とを含む、前記組み合わせを提供する。
【０３０９】
本発明の特定の組み合わせは、本明細書中の実施例の化合物（または薬学的に許容しうるその塩）のいずれか１つと、上記のようなｍＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＡＫＴキナーゼの阻害剤またはオラパリブとを含む。本発明の他の特定の組み合わせは、実施例３（または薬学的に許容しうるその塩）と、上記のようなｍＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＡＫＴキナーゼの阻害剤またはオラパリブとを含む。本発明の他の特定の組み合わせは、実施例３（または薬学的に許容しうるその塩）と、上記のようなＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＡＫＴキナーゼの阻害剤またはオラパリブ（または、これら３つのうちいずれか１つの薬学的に許容しうる塩）とを含む。本発明のさらに他の特定の組み合わせの例は、実施例３（または薬学的に許容しうるその塩）と、ＡＺＤ８１８６、ＡＺＤ５３６３およびオラパリブ（または、これら３つのうちいずれか１つの薬学的に許容しうる塩）とを含む。本発明の組み合わせの他の例は、実施例３とＡＺＤ２０１４を含む。
【０３１０】
上記組み合わせのすべてにおいて、該組み合わせは、当業者なら理解するように、上記（ｉ）〜（ｘｉ）からの他の処置などの標準治療の処置と一緒に投与することもできることは、理解されるであろう。例えば、エストロゲン受容体陽性乳癌の処置に上記組み合わせのいずれかを用いようとする場合、標準治療のホルモン療法（上記（ｉｉ）に挙げた作用物質など）を、本発明の組み合わせと併せて用いることができる。他の観点において、標準治療は、上記（ｉ）から適切に選択することができる。
【０３１１】
したがって、本発明の他の観点において、癌の処置に用いるのに適した三重の組み合わせ
ａ）式（Ｉ）の化合物（実施例３など）または薬学的に許容しうるその塩；
ｂ）ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋβ阻害剤、ＡＫＴキナーゼの阻害剤またはオラパリブまたは薬学的に許容しうるそれらの塩；
ｃ）処置しようとする癌に関する標準治療の療法
を提供する。
【０３１２】
標準治療の療法は、当業者なら理解するように、その通常の投与計画に従って適切に投与することができる。
【０３１３】
本発明の他の観点に従って、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を、薬学的に許容しうる希釈剤またはキャリヤーと共同して含む、医薬組成物を提供する。
【０３１４】
本発明の他の観点に従って、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた実施例３または薬学的に許容しうるその塩を、薬学的に許容しうる希釈剤またはキャリヤーと共同して含む、医薬組成物を提供する。
【０３１５】
本発明の他の観点に従って、ＡＺＤ５３６３、ＡＺＤ８１８６またはオラパリブ（または、これら３つのうちいずれか１つの薬学的に許容しうる塩）と組み合わせた実施例３または薬学的に許容しうるその塩を、薬学的に許容しうる希釈剤またはキャリヤーと共同して含む、医薬組成物を提供する。
【０３１６】
本発明の他の観点に従って、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を、薬学的に許容しうる希釈剤またはキャリヤーと共同して含む、癌の処置に用いるための医薬組成物を提供する。
【０３１７】
本発明の他の観点に従って、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた実施例３または薬学的に許容しうるその塩を、薬学的に許容しうる希釈剤またはキャリヤーと共同して含む、癌の処置に用いるための医薬組成物を提供する。
【０３１８】
本発明の他の観点に従って、ＡＺＤ５３６３、ＡＺＤ８１８６またはオラパリブ（または、これら３つのうちいずれか１つの薬学的に許容しうる塩）と組み合わせた実施例３または薬学的に許容しうるその塩を、薬学的に許容しうる希釈剤またはキャリヤーと共同して含む、癌の処置に用いるための医薬組成物を提供する。
【０３１９】
本発明の他の特徴に従って、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩の、ヒトなどの温血動物における癌に用いるための医薬品の製造における使用を提供する。
【０３２０】
本発明の他の特徴に従って、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた実施例３または薬学的に許容しうるその塩の、ヒトなどの温血動物における癌に用いるための医薬品の製造における使用を提供する。
【０３２１】
本発明の他の特徴に従って、ＡＺＤ５３６３、ＡＺＤ８１８６またはオラパリブ（または、これら３つのうちいずれか１つの薬学的に許容しうる塩）と組み合わせた実施例３または薬学的に許容しうるその塩の、ヒトなどの温血動物における癌に用いるための医薬品の製造における使用を提供する。
【０３２２】
したがって、本発明の追加的特徴において、癌の処置を必要とするヒトなどの温血動物における癌の処置方法であって、前記動物に、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた有効量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０３２３】
したがって、本発明の追加的特徴において、癌の処置を必要とするヒトなどの温血動物における癌の処置方法であって、前記動物に、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた有効量の実施例３または薬学的に許容しうるその塩を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０３２４】
したがって、本発明の追加的特徴において、癌の処置を必要とするヒトなどの温血動物における癌の処置方法であって、前記動物に、ＡＺＤ５３６３、ＡＺＤ８１８６またはオラパリブ（または、これら３つのうちいずれか１つの薬学的に許容しうる塩）と組み合わせた有効量の実施例３または薬学的に許容しうるその塩を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０３２５】
本発明の他の観点に従って、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げたものから選択される抗腫瘍剤と組み合わせた式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩を含む、キットを提供する。
【０３２６】
本発明の他の観点に従って、以下を含むキットを提供する：
ａ）第１の単位剤形にある式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩；
ｂ）第２の単位剤形にある上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げたものから選択される抗腫瘍剤；ならびに
ｃ） 前記第１および第２の剤形を含有するための容器手段。
【０３２７】
本発明の他の観点に従って、以下を含むキットを提供する：
ａ）第１の単位剤形にある式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩；
ｂ）第２の単位剤形にある上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げたものから選択される抗腫瘍剤；
ｃ） 前記第１および第２の剤形を含有するための容器手段；ならびに、所望により
ｄ）使用説明書。
【０３２８】
本発明の他の観点に従って、以下を含むキットを提供する：
ａ）第１の単位剤形にある式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩；
ｂ）第２の単位剤形にあるｍＴＯＲ阻害剤、例えば国際公開ＷＯ２００８／０２３１６１号に開示されているもの、例えば
【０３２９】
【化２２】
0006307096.tif 000026
【０３３０】
；ならびに
ｃ） 前記第１および第２の剤形を含有するための容器手段。
【０３３１】
本発明の他の観点に従って、以下を含むキットを提供する：
ａ）第１の単位剤形にある式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩；
ｂ）第２の単位剤形にあるＰＩ３Ｋ−βの阻害剤、例えば、国際特許出願ＷＯ２０１１／０５１７０４号の実施例のいずれか１つ、または薬学的に許容しうるその塩；ならびに
ｃ） 前記第１および第２の剤形を含有するための容器手段。
【０３３２】
本発明の他の観点に従って、以下を含むキットを提供する：
ａ）第１の単位剤形にある式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩；
ｂ）第２の単位剤形にあるＰＩ３Ｋ−βの阻害剤、例えば、国際特許出願ＷＯ２０１１／０５１７０４号の実施例のいずれか１つ、または薬学的に許容しうるその塩；
ｃ） 前記第１および第２の剤形を含有するための容器手段；ならびに、所望により
ｄ）使用説明書。
【０３３３】
本発明の他の観点に従って、以下を含むキットを提供する：
ａ）第１の単位剤形にある式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩；
ｂ）第２の単位剤形にある、８−（（１Ｒ）−１−（３，５−ジフルオロフェニルアミノ）エチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−モルホリノ−４−オキソ−４Ｈ−クロメン−６−カルボキサミド（国際特許出願ＷＯ２０１１／０５１７０４号の実施例３．０６ｂ、ＡＺＤ８１８６としても知られる）または薬学的に許容しうるその塩であるＰＩ３Ｋ−βおよびＰＩ３Ｋ−δの阻害剤；ならびに
ｃ） 前記第１および第２の剤形を含有するための容器手段。
【０３３４】
本発明の他の観点に従って、以下を含むキットを提供する：
ａ）第１の単位剤形にある式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩；
ｂ）第２の単位剤形にある、８−（（１Ｒ）−１−（３，５−ジフルオロフェニルアミノ）エチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−モルホリノ−４−オキソ−４Ｈ−クロメン−６−カルボキサミド（国際特許出願ＷＯ２０１１／０５１７０４号の実施例３．０６ｂ、ＡＺＤ８１８６としても知られる）または薬学的に許容しうるその塩であるＰＩ３Ｋ−βおよびＰＩ３Ｋ−δの阻害剤；
ｃ） 前記第１および第２の剤形を含有するための容器手段；ならびに、所望により
ｄ）使用説明書。
【０３３５】
本発明の他の観点に従って、以下を含むキットを提供する：
ａ）第１の単位剤形にある式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩；
ｂ）第２の単位剤形にある、ＡＫＴキナーゼの阻害剤、例えば、（Ｓ）−４−アミノ−Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロピル）−１−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミドまたは薬学的に許容しうるその塩（ＡＺＤ５３６３、例えば国際公開ＷＯ２００９／０４７５６３号参照）；
ｃ） 前記第１および第２の剤形を含有するための容器手段；ならびに、所望により
ｄ）使用説明書。
【０３３６】
本発明の他の観点に従って、以下を含むキットを提供する：
ａ）第１の単位剤形にある式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩；
ｂ）第２の単位剤形にある、ＡＫＴキナーゼの阻害剤、例えば、（Ｓ）−４−アミノ−Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロピル）−１−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミドまたは薬学的に許容しうるその塩（ＡＺＤ５３６３、例えば国際公開ＷＯ２００９／０４７５６３号参照）；ならびに
ｃ） 前記第１および第２の剤形を含有するための容器手段。
【０３３７】
本発明の他の観点に従って、以下を含むキットを提供する：
ａ）第１の単位剤形にある式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩；
ｂ）第２の単位剤形にある、ＡＫＴキナーゼの阻害剤、例えば、（Ｓ）−４−アミノ−Ｎ−（１−（４−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロピル）−１−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）ピペリジン−４−カルボキサミドまたは薬学的に許容しうるその塩（ＡＺＤ５３６３、例えば国際公開ＷＯ２００９／０４７５６３号参照）；
ｃ） 前記第１および第２の剤形を含有するための容器手段；ならびに、所望により
ｄ）使用説明書。
【０３３８】
本発明の他の観点に従って、以下を含むキットを提供する：
ａ）第１の単位剤形にある式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩；
ｂ）第２の単位剤形にある、オラパリブ（４−［３−（４−シクロプロパンカルボニル−ピペラジン−１−カルボニル）−４−フルオロ−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン）または薬学的に許容しうるその塩；ならびに
ｃ） 前記第１および第２の剤形を含有するための容器手段。
【０３３９】
本発明の他の観点に従って、以下を含むキットを提供する：
ａ）第１の単位剤形にある式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容しうるその塩；
ｂ）第２の単位剤形にある、オラパリブ（４−［３−（４−シクロプロパンカルボニル−ピペラジン−１−カルボニル）−４−フルオロ−ベンジル］−２Ｈ−フタラジン−１−オン）または薬学的に許容しうるその塩；
ｃ） 前記第１および第２の剤形を含有するための容器手段；ならびに、所望により
ｄ）使用説明書。
【０３４０】
上記組み合わせ、使用、処置方法およびキットのすべてにおいて、ＡＺＤ５３６３、ＡＺＤ８１８６およびオラパリブは、遊離塩基の形態または薬学的に許容しうる塩の形態にあることができる。したがって、一態様においてＡＺＤ５３６３は遊離塩基の形態にあり；別の態様においてＡＺＤ５３６３は薬学的に許容しうる塩の形態にある。他の態様においてＡＺＤ８１８６は遊離塩基の形態にあり；別の態様においてＡＺＤ８１８６は薬学的に許容しうる塩の形態にある。他の態様においてオラパリブは遊離塩基の形態にあり；別の態様においてオラパリブは薬学的に許容しうる塩の形態にある。
【０３４１】
式（Ｉ）の化合物は主に温血動物（ヒトを含む）において用いるための治療薬として有用であるが、それらはまた、ＰＩ３キナーゼ−αおよび−δの作用を阻害することが必要な場合はつねに有用である。したがって、それらは、新規生物学的試験の開発および新規薬理学的作用物質の探索に用いるための薬理学的標準物質として有用である。
【０３４２】
本明細書中、“組み合わせ”という用語を用いる場合、これは同時、個別または逐次投与をさすことを理解すべきである。本発明の一観点において、“組み合わせ”は同時投与をさす。本発明の他の観点において、“組み合わせ”は個別投与をさす。本発明の別の観点において、“組み合わせ”は逐次投与をさす。投与が逐次投与または個別投与である場合、第２の成分の投与における遅延は、有益な効果が失われないようなものであるべきである。
【０３４３】
一態様において、逐次処置は、組み合わせの各成分を１１日の期間以内に投与することを包含する。他の態様において、この期間は１０日である。他の態様において、この期間は９日である。他の態様において、この期間は８日である。他の態様において、この期間は７日である。他の態様において、この期間は６日以内である。他の態様において、この期間は５日以内である。他の態様において、この期間は４日以内である。他の態様において、この期間は３日以内である。他の態様において、この期間は２日以内である。他の態様において、この期間は２４時間以内である。他の態様において、この期間は１２時間以内である。
【０３４４】
本明細書では、逐次投与および同時投与の両方を、ＢＴ４７４モデルにおける実施例３およびＡＺＤ５３６３の組み合わせ実験で実証する。この実施例において、逐次投与は、ＡＺＤ５３６３を２日間、続いて実施例３を２日間投与した後、どちらの作用物質も３日間投与せず、その後、該パターンを繰り返す（“投与サイクル”）ことにより例示する。同時投与は、ＡＺＤ５３６３および実施例３の両方を２日間投与した後、どちらの作用物質も５日間投与しない投与計画で例示する。これら２つの実施例において、逐次投与は、腫瘍退縮をもたらすのにより有効であると思われ、計画の最適化の潜在的重要性を例示している。他の考えうる同時投与計画としては、以下が挙げられる：
１）ＡＺＤ５３６３と実施例３を両方とも２日間投与した後、どちらの作用物質も３日間投与しない投与サイクル；
２）ＡＺＤ５３６３と実施例３を両方とも３日間投与した後、どちらの作用物質も４日間投与しない投与サイクル；
３）ＡＺＤ５３６３と実施例３を両方とも４日間投与した後、どちらの作用物質も３日間投与しない投与サイクル；
４）ＡＺＤ５３６３と実施例３を両方とも５日間投与した後、どちらの作用物質も２日間投与しない投与サイクル；
５）ＡＺＤ５３６３と実施例３を１日おきに投与する投与サイクル；
６）ＡＺＤ５３６３と実施例３を３日ごとに投与する投与サイクル；
７）ＡＺＤ５３６３と実施例３を、投与間隔が３日および４日の週間スケジュール（例えば、月曜日／木曜日）で投与する投与サイクル；
８）ＡＺＤ５３６３と実施例３を、投与間隔が２日および３日の週間スケジュール（例えば、月曜日／水曜日／金曜日）で投与する投与サイクル。
【０３４５】
式（Ｉ）の化合物、とりわけ実施例３と、ｍＴＯＲ阻害剤、例えばＡＺＤ２０１４またはＰＩ３Ｋ−β阻害剤（β／δ阻害剤ＡＺＤ８１８６など）の組み合わせは、実施例３とＡＺＤ５３６３の組み合わせに関し上記したものと同様の計画で、適切に投与することができる。
【０３４６】
式（Ｉ）の化合物とオラパリブの組み合わせは、オラパリブは毎日投与することができ、式（Ｉ）の化合物は間欠投与スケジュール（例えば、２日間投与した後、３〜５日間投与しないなど）に従って投与する。
【０３４７】
これらの各例示的投与計画は、本発明の他の観点を構成する。これらの各例示的投与計画は、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げた他の抗腫瘍剤との組み合わせに施用することもできる。
【０３４８】
所定の投与サイクル内に、組み合わせの特定の一成分を他に先立ち投与する−すなわち、逐次投与が有利である可能性がある。
【０３４９】
したがって、一態様において、逐次投与は、投与サイクル内に、式（Ｉ）の化合物（とりわけ実施例３）の後、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げた他の抗腫瘍剤、とりわけ、ＡＺＤ５３６３、ＡＺＤ８１８６およびオラパリブから選択される抗腫瘍剤を投与する、逐次投与を含む。
【０３５０】
他の態様において、逐次投与は、投与サイクル内に、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げた抗腫瘍剤、とりわけ、ＡＺＤ５３６３、ＡＺＤ８１８６およびオラパリブから選択される抗腫瘍剤の後、式（Ｉ）の化合物（とりわけ実施例３）を投与する、逐次投与を含む。
【０３５１】
一態様では、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げた抗腫瘍剤および式（Ｉ）の化合物を、最大２日間あけて投与する。他の態様では、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げた抗腫瘍剤および式（Ｉ）の化合物を、最大１日あけて投与する。他の態様では、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げた抗腫瘍剤および式（Ｉ）の化合物を、最大１８時間あけて投与する。他の態様では、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げた抗腫瘍剤および式（Ｉ）の化合物を、最大１２時間あけて投与する。他の態様では、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げた抗腫瘍剤および式（Ｉ）の化合物を、最大６時間あけて投与する。他の態様では、上記（ｉ）〜（ｘｉ）に挙げた抗腫瘍剤および式（Ｉ）の化合物を、最大３時間あけて投与する。
【０３５２】
他の態様において、投与サイクルは長さが５〜１０日間であることができる。
【０３５３】
他の態様において、投与サイクルは長さが６〜１０日間であることができる。
【０３５４】
他の態様において、投与サイクルは長さが７〜９日間であることができる。
【０３５５】
他の態様において、投与サイクルは長さが６〜８日間であることができる。
【０３５６】
他の態様において、投与サイクルは長さが１０日間であることができる。
【０３５７】
他の態様において、投与サイクルは長さが９日間であることができる。
【０３５８】
他の態様において、投与サイクルは長さが８日間であることができる。
【０３５９】
他の態様において、投与サイクルは長さが７日間であることができる。
【０３６０】
他の態様において、投与サイクルは長さが６日間であることができる。
【０３６１】
他の態様において、投与サイクルは長さが５日間であることができる。
【０３６２】
他の態様において、投与サイクルは、式（Ｉ）の化合物（とりわけ実施例３）を連続２〜４日間投与し、長さが６〜９日間の投与サイクル内の残りの日は投与しないことを包含することができる。
【０３６３】
他の態様において、投与サイクルは、式（Ｉ）の化合物（とりわけ実施例３）を連続３〜４日間投与し、長さが６〜９日間（例えば長さ７日間）の投与サイクル内の残りの日は投与しないことを包含することができる。
【０３６４】
他の態様において、投与サイクルは、式（Ｉ）の化合物（とりわけ実施例３）を連続３〜５日間投与し、長さが７〜１０日間の投与サイクル内の残りの日は投与しないことを包含することができる。
【０３６５】
他の態様において、投与サイクルは、式（Ｉ）の化合物（とりわけ実施例３）を連続５日間投与し、長さが６〜９日間の投与サイクル内の残りの日は投与しないことを包含することができる。
【０３６６】
他の態様において、投与サイクルは、式（Ｉ）の化合物（とりわけ実施例３）を連続４日間投与し、長さが６〜９日間（例えば長さ７日間）の投与サイクル内の残りの日は投与しないことを包含することができる。
【０３６７】
他の態様において、投与サイクルは、式（Ｉ）の化合物（とりわけ実施例３）を連続３日間投与し、長さが６〜９日間の投与サイクル内の残りの日は投与しないことを包含することができる。
【０３６８】
投与サイクルは、活性な組み合わせの成分を投与しない数日間により分離されていてもよい。
【０３６９】
上記併用療法は、典型的には通常の処方投薬スケジュールに従って実行される標準治療療法に加えることができる。
個別化ヘルスケア
本発明の他の観点は、ホスホイノシチド−３−キナーゼ触媒アルファポリペプチド（ＰＩＫ３ＣＡ）をコードする遺伝子の状態と、式（Ｉ）の化合物での処置に対する感受性との関連の確認に基づく。したがって、これは、式（Ｉ）の化合物で処置するための患者、とりわけ癌患者を選択するため、ならびに／または、該処置に治療的に応答する可能性が高くない患者の処置を回避し、これにより、不必要な処置、およびそのような非効果的な処置に付随しうるあらゆる副作用を回避するための、条件、方法およびツールを提供する。
【０３７０】
本発明は、患者の選択ツールおよび選択方法（個別化医療を含む）に関する。選択は、処置しようとする腫瘍細胞が野生型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を持つか変異体ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を持つか基づく。したがって、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子状態は、ＰＩ３Ｋ−αおよび−δ阻害剤での処置に対する感受性のバイオマーカーとして用いることができる。
【０３７１】
腫瘍がＰＩ３Ｋ−αおよび−β阻害剤、例えば式（Ｉ）の化合物での処置に応答する患者をエンリッチ化(enrich)または選択するバイオマーカーが、明らかに必要とされている。作用物質に応答する可能性がもっとも高い患者を識別する患者選択バイオマーカーは、癌の処置に理想的である。これは、応答しない腫瘍を有する患者における、そのような作用物質の潜在的副作用に対する不必要な処置が減少するためである。
【０３７２】
バイオマーカーは、“正常な生物学的プロセス、発病プロセス、または治療的介入に対する薬理学的応答の指標として客観的に測定および評価される特性”として説明することができる。バイオマーカーは、特定の状態または疾患に関連する識別および測定可能な任意の指標であり、バイオマーカーの存在またはレベルと、状態または疾患のいくつかの観点（状態または疾患の存在、レベルもしくは変化レベル、タイプ、段階、状態または疾患に対する感受性、あるいは状態または疾患を処置するのに用いられる薬剤に対する応答性を含む）との間には相互関係がある。該相互関係は、定性的、定量的、または定性的および定量的の両方であることができる。典型的には、バイオマーカーは、化合物、化合物フラグメント、または化合物群である。そのような化合物は、生体中に見いだされるか生体により産生される任意の化合物、例えば、タンパク質（およびペプチド）、核酸および他の化合物であることができる。
【０３７３】
バイオマーカーは予測力を有することができ、したがって、特定の状態または疾患の存在、レベル、タイプまたは段階（特定の微生物または毒素の存在またはレベルを含む）、特定の状態または疾患に対する感受性（遺伝的感受性を含む）、あるいは特定の処置（薬物処置を含む）に対する応答を、予測または検出するのに用いることができる。バイオマーカーは、研究開発プログラムの効率を改善することにより、薬物の発見および開発において今後ますます重要な役割を果たすようになると考えられる。バイオマーカーは、診断薬、疾患進行のモニター、処置のモニター、および臨床転帰の予測因子として用いることができる。例えば、さまざまなバイオマーカー研究プロジェクトで、特定の癌ならびに特定の心臓血管疾患および免疫学的疾患のマーカーの識別が試みられている。新規の有効なバイオマーカーの開発により、ヘルスケアおよび薬剤開発のコストの著しい低下、ならびに多種多様な疾患および状態の処置の著しい改善の両方がもたらされると考えられる。
【０３７４】
臨床試験を最適に設計し、これらの試験からもっとも多くの情報を得るために、バイオマーカーが必要になる可能性がある。マーカーは、代用組織および腫瘍組織において測定可能であることができる。理想的には、これらのマーカーは効力にも相関し、したがって、最終的に患者の選択に用いることができる。
【０３７５】
したがって、本発明のこの観点の根底にある技術的問題は、式（Ｉ）の化合物で処置するための患者の階層化手段の識別である。該技術的問題は、本明細書中の特許請求の範囲および／または説明で特徴付けられる態様を提供することにより解決される。
【０３７６】
本明細書中の実施例で詳述するように、ＰＩＫ３ＣＡに変異を持つ細胞は、一般に式（Ｉ）の化合物による成長阻害の影響をより受けやすいことが見いだされた。
【０３７７】
本発明は、式（Ｉ）の化合物に対する細胞の感受性を決定する方法を提供する。該方法は、前記細胞中のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の状態を決定することを含む。細胞は、該細胞が変異ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を持つ場合、式Ｉの化合物に対し感受性を示す可能性が高いと識別される。したがって、変異ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有する患者は、式（Ｉ）の化合物での処置の影響をとりわけ受けやすいと予測される。細胞は、細胞成長アッセイにおいて細胞数の増加が式（Ｉ）の化合物により阻害される場合（細胞増殖の阻害により、および／または細胞死の増加により）、式（Ｉ）の化合物に対し感受性を示すと定義される。本発明の方法は、成長阻害により式（Ｉ）の化合物に応答する可能性が高い細胞を予測するのに有用である。
【０３７８】
本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物を投与するか否かの決定を含め、式（Ｉ）の化合物に対する患者の応答性を決定するのに用いることができる方法に、部分的に基づく。具体的には、本発明の方法は、ＰＩＫ３ＣＡの遺伝子状態の決定を包含する。変異ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の存在は、式（Ｉ）の化合物と接触したときに腫瘍細胞が成長阻害により応答する可能性が高いことを示す。したがって、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子状態は、式（Ｉ）の化合物で処置するための患者の選択に用いることができる。
【０３７９】
さらに、式（Ｉ）の化合物に対し感受性を示す可能性がある患者を識別するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法を開示する。ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の変異状態を検出することができるオリゴ−またはポリヌクレオチドプライマーまたはプローブの使用も開示する。ＰＩＫ３ＣＡ変異の検出用キット、例えば、限定されるものではないが、ＱｉａｇｅｎおよびＲｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓなどの診断会社により市販されているＰＩＫ３ＣＡ変異検出キットの使用も開示する。他の態様において、本発明は、癌を患っている患者が式（Ｉ）の化合物での薬学的処置に対する応答者である可能性があるか否かを決定するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ法に関連する。前記方法は、以下の段階を含む：（ｉ）前記患者から予め収集した腫瘍の代表的試料を得る段階；および（ｉｉ）ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子が前記試料中に変異を含有するか否かを決定する段階。ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子における変異は、式（Ｉ）の化合物での処置に応答する可能性の増大を示す。単一遺伝子バイオマーカー試験として、ＰＩＫ３ＣＡ変異を含有する腫瘍の識別は、式（Ｉ）の化合物への応答をエンリッチ化する。ＰＩＫ３ＣＡ変異を含有する個々の腫瘍は、式（Ｉ）の化合物に応答する可能性がもっとも高い。
【０３８０】
“腫瘍の代表的”試料は、単離した実際の腫瘍試料であることができ、または、さらに処理してある試料、例えば、腫瘍試料からのＰＣＲ増幅核酸の試料であることができる。
定義：
この個別化ヘルスケアの節において：
“アレル”は、特定のヌクレオチドまたはアミノ酸配列により他の形態と区別される、遺伝子座の特定の形態をさす。
【０３８１】
“増幅反応”は、非標的核酸に対し標的核酸の特異的増幅をもたらす核酸反応である。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）は、周知の増幅反応である。
【０３８２】
“癌”は、本明細書中では、新生物表現型への細胞形質転換により生じる新生物成長をさす。
【０３８３】
“遺伝子”は、プロモーター、エクソン、イントロン、および５’または３’隣接領域内（遺伝子の転写部分内ではなく）に位置することができ発現を制御する他の配列因子を含む、ＲＮＡ産物の調節された生合成のためのすべての情報を含有するＤＮＡ断片である。
【０３８４】
“遺伝子状態”は、遺伝子が野生型であるか否か（すなわち変異体）をさす。
【０３８５】
“標識”は、アッセイ試料中の標的ポリヌクレオチドの存在を示す検出可能なシグナルを生成することができる組成物をさす。適した標識としては、放射性同位体、ヌクレオチド発色団、酵素、基質、蛍光性分子、化学発光部分、磁性粒子、生物発光部分などが挙げられる。したがって、標識は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電気的、光学的または化学的手段により検出することができる任意の組成物である。
【０３８６】
“非同義バリエーション(variation)”は、別個の（変更された）ポリペプチド配列の生成をもたらす、遺伝子のコード配列における、またはこれと部分的に一致するバリエーション（バリアンス(variance)）をさす。これらのバリエーションは、タンパク質機能に影響を及ぼす可能性があってもなくてもよく、ミスセンスバリアント（アミノ酸１つが他のものにより置換される）、ナンセンスバリアント（未成熟終止コドンの発生により短縮型(truncated)ポリペプチドがもたらされる）および挿入／欠損バリアントを包含する。
【０３８７】
“同義バリエーション”は、コードされたポリペプチドの配列に影響を及ぼさない、遺伝子のコード配列におけるバリエーション（バリアンス）をさす。これらのバリエーションは、間接的に（例えば、遺伝子発現の変更により）タンパク質機能に影響を及ぼす可能性があるが、不利な証拠がない場合、一般に無害であると推定される。
【０３８８】
“核酸”は、自然界で見いだされる天然核酸、および／または修飾された主鎖もしくは塩基を有する当分野で公知の人工の修飾核酸を含む、一本鎖または二本鎖のＤＮＡおよびＲＮＡ分子をさす。
【０３８９】
“プライマー”は、複製しようとする核酸鎖に相補的なプライマー伸長生成物の合成に関し開始点として働くことができる一本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチド配列をさす。プライマーの長さおよび配列は、伸長生成物の合成を始動させることができるようなものでなければならない。典型的なプライマーは、標的配列に実質的に相補的で長さが少なくとも約７ヌクレオチドの配列を含有するが、いくぶん長いプライマーが好ましい。通常、プライマーは約１５〜２６ヌクレオチドを含有するが、これより長いまたは短いプライマーを採用することもできる。
【０３９０】
“多型部位”は、ある集団において少なくとも２つの代替的配列が見いだされる、座位内の位置である。
【０３９１】
“多型”は、個体の多型部位で観察される配列バリエーションをさす。多型は、ヌクレオチドの置換、挿入、欠失およびマイクロサテライトを包含し、遺伝子発現またはタンパク質機能に、必ずではないが、検出可能な差をもたらす可能性がある。発現またはタンパク質機能に対する作用の証拠がない場合、非同義バリアントを含む一般的な多型は、一般に、野生型の遺伝子配列の定義に包含されると考えられる。ヒト多型のカタログおよび関連注釈、例えば、バリデーション、観測頻度および疾病関連性は、ＮＣＢＩ（ｄｂＳＮＰ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｊｅｃｔｓ／ＳＮＰ／）により維持されている。遺伝子配列の文脈で用いられる場合の“多型”という用語をは、固体状態の形の化合物の文脈で用いられる場合の“多形”、すなわち化合物の結晶質または非晶質の性質と混同すべきでないことに、留意されたい。当業者なら、文脈により意図する意味を理解するであろう。
【０３９２】
“プローブ”は、検出しようとするアレルの標的配列に対し正確に相補的な配列を有する、一本鎖配列に特異的なオリゴヌクレオチドをさす。
【０３９３】
“応答”は、患者を２つの主要群、すなわち、部分的応答または安定な疾患を示す群と、進行性疾患の徴候を示す群とに分類することを包含する、固形がんの治療効果判定のためのガイドライン（ＲＥＣＩＳＴ）に従って決定される測定値により定義される。
【０３９４】
“ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件”は、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（７５０ｍＭ  ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％硫酸デキストラン、および２０ｐｇ／ｍＩの変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中、４２℃で一晩インキュベートした後、約６５℃において０．１×ＳＳＣ中でフィルターを洗浄することをさす。
【０３９５】
“生存”は、患者の全生存および無進行生存を包含する。
【０３９６】
“全生存”（ＯＳ）は、投薬開始から何らかの原因による死亡までの時間と定義される。“無進行生存”（ＰＦＳ）は、投薬開始から、進行性疾患の最初の出現または何らかの原因による死亡までの時間と定義される。
【０３９７】
本発明の一観点に従って、式（Ｉ）の化合物で処置するための患者の選択方法であって、該方法が、患者からの腫瘍細胞含有試料を提供し；患者の腫瘍細胞含有試料中のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子が野生型であるか変異体であるかを決定し；そして、それに基づき式（Ｉ）の化合物で処置するための患者を選択することを含む、前記選択方法を提供する。
【０３９８】
該方法は、実際の患者の試料の単離段階を包含することができ、または排除することができる。したがって、本発明の一観点に従って、式（Ｉ）の化合物で処置するための患者の選択方法であって、該方法が、患者から予め単離した腫瘍細胞含有試料中のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子が野生型であるか変異体であるかを決定し；そして、それに基づき式（Ｉ）の化合物で処置するための患者を選択することを含む、前記選択方法を提供する。
【０３９９】
一態様において、腫瘍細胞のＤＮＡが変異体ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を有する場合、患者を、式（Ｉ）の化合物での処置に選択する。他の態様において、腫瘍細胞のＤＮＡが野生型ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を持つ患者は、式（Ｉ）の化合物での処置に選択しない。
【０４００】
本発明の他の観点に従って、式（Ｉ）の化合物に対する患者の応答性を予測するための方法であって、該方法が、患者の腫瘍細胞中のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子が野生型であるか変異体であるかを決定し、それに基づき、式（Ｉ）の化合物での処置に対する患者の応答性を予測することを含む、前記方法を提供する。
【０４０１】
本発明の他の観点に従って、癌に罹患しているヒト患者において式Ｉの化合物での処置の有効性の可能性を決定するための方法であって、患者の腫瘍細胞中のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子（１以上）が野生型であるか変異体であるかを決定し、それに基づき、式（Ｉ）の化合物での処置に対する患者の応答性を予測することを含む、前記方法を提供する。
【０４０２】
本発明の目的に関し、野生型の遺伝子状態は、遺伝子が正常または適切に発現し、コードされたタンパク質の機能が正常であることを示すものとする。対照的に、変異体状態は、遺伝子発現が異常もしくは不適切であるか、または、癌における変異体ＰＩＫ３ＣＡの公知の役割（上記のような）と一致する、変更された機能を有するタンパク質が発現していることを示すものとする。いくつもの遺伝子的または非遺伝子的な変更、例えば、限定されるものではないが、変異、増幅、欠失、ゲノム再編成、またはメチル化プロフィールにおける変化が、変異体状態をもたらす可能性がある。しかしながら、そのような変更が、それでもなお正常なタンパク質の適切な発現または機能的に同等の変異体をもたらす場合、その遺伝子状態は野生型とみなす。機能的変異体遺伝子状態を典型的にはもたらさない変異体の例としては、同義コード変異体および一般的多型（同義または非同義）が挙げられる。以下で検討するように、遺伝子状態は、機能性アッセイにより評価することができ、または、検出された参照配列からの逸脱の性質から推察することができる。
【０４０３】
特定の態様において、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の野生型または変異体の状態は、遺伝子中に非同義核酸バリエーションが存在するか存在しないかにより決定される。観察される非同義バリエーションは、注釈付きの機能効果のない公知の一般的な多型に対応する場合、変異体の遺伝子状態に寄与しない。
【０４０４】
変異状態を示すＰＩＫ３ＣＡ遺伝子における他のバリエーションは、ｐｒｅ−ｍＲＮＡからｍＲＮＡへの処理中のイントロン／エクソン接合部の認識を低下させる、スプライス部位のバリエーションを包含する。これは、エクソンのスキッピング、またはスプライシングされたｍＲＮＡにおける正常なイントロン配列の包含（イントロン保持または隠蔽された(cryptic)スプライス接合部の利用）をもたらす可能性がある。同様に、これは、正常なタンパク質と比べ挿入および／または欠失を有する異常なタンパク質の生成をもたらす可能性がある。したがって、他の態様において、遺伝子は、イントロン／エクソン接合部におけるスプライス部位認識配列を変更するバリアントが存在する場合、変異体状態を有する。
【０４０５】
これに加えて、異常または脱調節されたＰＩＫ３ＣＡまたはＰＩ３Ｋ−αを有する腫瘍における耐性の潜在的マーカーであるＫｒａｓなどの追加的遺伝子の変異状態または活性化状態の測定は、個別化医療アプローチの予測性の向上に役立つ可能性がある。
【０４０６】
われわれがＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａで行った乳癌に関する調査（ＣＯＳＭＩＣ  データベース（Ｗｅｌｃｏｍｅ  Ｔｒｕｓｔ  Ｓａｎｇｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、２０１１年９月）に基づく）では、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子における＞５５の異なる変異が、＞５Ｋのヒト腫瘍を対象とするデータセットから識別された。変異の大部分は＜１％の頻度で発生し、３つは１〜３％の頻度で発生したが、４つの変異はＰＩＫ３ＣＡの全変異の約８８％を占めた。これらは、Ｃ末端キナーゼドメイン、すなわちＨ１０４７Ｒ（５５％）およびＨ１０４７Ｌ（５％）、ならびにヘリカルドメイン残留物、すなわちＥ５４５Ｋ（１８％）およびＥ５４２Ｋ（１１％）における、キナーゼドメインのミスセンス変異であった。他の一般的な乳癌変異のより長いリストは、網羅的なわけではないが、Ｒ３８Ｈ、Ｒ３８Ｃ、Ｒ８８Ｑ、Ｎ３４５Ｋ、Ｃ４２０Ｒ、Ｅ４５３Ｑ、Ｐ５３９Ｒ、Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ｋ、Ｅ５４５Ａ、Ｑ５４６Ｋ、Ｑ５４６Ｐ、Ｍ１０４３Ｉ、Ｍ１０４３Ｖ、Ｈ１０４７Ｒ、Ｈ１０４７Ｌ、Ｈ１０４７Ｙを包含する。したがって、もっとも一般的な変異の検出に焦点を合わせ、これにより大部分のＰＩＫ３ＣＡ変異の識別を可能にする診断アッセイを、構築することができる。例えば、Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ＳｙｓｔｅｍｓからのＣｏｂａｓ（ＴＭ）ＰＩＫ３ＣＡ変異試験は、ホルマリンで固定しパラフィンで包埋した腫瘍試料から単離したＤＮＡ中のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子のエクソン１、４、７、９および２０における１７の変異（Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ａ、Ｅ５４５Ｇ、Ｅ５４５Ｋ、Ｅ５４５Ｄ、Ｅ５４６Ｋ、Ｑ５４６Ｒ、Ｑ５４６Ｅ、Ｑ５４６Ｌ、Ｎ３４５Ｋ、Ｃ４２０Ｒ、Ｒ８８Ｑ、Ｈ１０４７Ｌ、Ｈ１０４７Ｒ、Ｈ１０４７Ｙ、Ｇ１０４９ＲおよびＭ１０４３Ｉ）を検出するように設計されている。このキットは、エストロゲン受容体陽性乳癌における変異の最高約９５％を捕捉することができる。変異の分布は他の腫瘍タイプでは異なり、それに応じて診断上の戦略を適応させることができる。例えば、子宮内膜癌では、乳癌と比べ、より均一な変異の分布がＰＩＫ３ＣＡ遺伝子コード配列の全体に広がり、より多数の変異がタンパク質のＮ末端領域にみられる（Ｄｏｕｇｌａｓ  Ａ．Ｌｅｖｉｎｅ，Ｍ．Ｄによる情報、ＴＣＧＡ  ２ｎｄ  Ａｎｎｕａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，２０１２年１２月２８日）。
【０４０７】
ＰＩＫ３ＣＡの場合、参照配列は、遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＧ＿０１２１１３）、ｍＲＮＡ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＭ＿００６２１８）、およびタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号：ＮＰ＿００６２０９またはＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔアクセッション：Ｐ４２３３６）で使用可能である。参照遺伝子（ゲノム領域）配列は、上流配列の５０００塩基および下流配列の２０００塩基を包含する。ＰＩＫ３ＣＡ内での変異は周知であり（ＣＯＳＭＩＣデータベース−Ｗｅｌｃｏｍｅ  Ｔｒｕｓｔ  Ｓａｎｇｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、当業者なら、ＰＩＫ３ＣＡの遺伝子状態、すなわち、特定のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子が野生型であるか変異体であるかを、野生型のＤＮＡまたはタンパク質配列との比較に基づき決定することができる。
【０４０８】
ＰＩＫ３ＣＡについて開示されている遺伝子およびｍＲＮＡ配列ならびにＰＩ３キナーゼアルファタンパク質配列のｐ１１０α触媒サブユニットは、それぞれ代表的な配列であることは明らかであろう。正常な個体では、各遺伝子の２つの複製、すなわち母方および父方の複製が存在し、これらが配列の差異をいくらか有すると思われ、さらに個体群内では、遺伝子配列のアレルバリアントが非常に多く存在する。野生型とみなされる他の配列としては、核酸配列に１以上の同義変化をもつもの（この変化は、コードされたタンパク質配列を変更しない）、タンパク質配列を変更するがタンパク質機能には影響を及ぼさない一般的な非同義多型（例えば、生殖細胞株多型）、およびイントロン非スプライス部位の配列変化が挙げられる。
【０４０９】
本発明の他の観点に従って、癌に罹患しているヒト患者において式（Ｉ）の化合物での処置の有効性の可能性を決定するための方法であって、前記患者のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子中に野生型と比べて少なくとも１つの非同義核酸バリアンスが存在するか存在しないかを検出することを含む方法を提供する。これに関し、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子における少なくとも１つの体細胞非同義核酸バリアンスの存在は、式（Ｉ）の化合物での処置が有効である可能性があることを示す。
【０４１０】
本発明の他の観点に従って、式（Ｉ）の化合物での処置に対する個体の感受性を評価するための方法を提供する。これに関し、該方法は、
（ｉ）個体からの腫瘍細胞ＤＮＡ中のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の非同義変異状態を決定し；そして、
（ｉｉ）腫瘍細胞中のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の非同義変異状態を参照することにより、式（Ｉ）の化合物での処置に対する個体の推定感受性を決定する、
ことを含む。
【０４１１】
ＰＩＫ３ＣＡの遺伝子状態を決定するために当業者が利用することができる技術は数多くある。遺伝子状態は、核酸配列の決定により決定することができる。これは、全長遺伝子の直接的配列決定または遺伝子内の特定部位、例えば、一般に変異部位の分析により行うことができる。
【０４１２】
ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子が野生型または変異体であるか否かを決定するための他の手段は、転写遺伝子の機能の評価である。このＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の機能的変異は、脂質キナーゼ活性が向上したタンパク質をもたらして、細胞における経路の下流でのシグナル伝達の増大、例えば、限定されるものではないが、ＡｋｔおよびＳ６キナーゼの活性化をもたらす。細胞中に発現した場合にＰＩＫ３ＣＡバリアントの機能状態を評価するためのアッセイ
としては、限定されるものではないが、以下が挙げられる：
（ｉ）ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子、ホスファチジルイノシトール−三リン酸（ＰＩ（３，４，５）Ｐ３）のキナーゼ活性の生成物の生成の増大；
（ｉｉ）リン酸化ＡｋｔまたはＳ６キナーゼのレベルの増大；
（ｉｉｉ）ＰＩＫ３ＣＡのバリアントをトランスフェクトしたＮＩＨ−３Ｔ３細胞のフォーカスおよびコロニー形性の増大；（Ｉｋｅｎｏｕｅ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２００５  ６５，４５６２−４５６７）。
試料
遺伝子状態を試験する患者の試料は、個体から得た、または得ることができる、任意の腫瘍組織または腫瘍細胞含有試料であることができる。試験試料は、個体から得た血液、口腔スワブ、生検材料、または他の体液もしくは体組織の試料であると好都合である。特定の実施例は以下を包含する：循環腫瘍細胞、血漿もしくは血清中の循環ＤＮＡ、卵巣癌患者の腹水から単離した細胞、肺内に腫瘍を有する患者の肺喀痰、乳癌患者からの細針吸引物、尿、末梢血、細胞剥離物、毛嚢、皮膚穿刺物または頬試料。
【０４１３】
試験試料は、同等に、試験試料中の配列に対応する核酸配列であることができる、すなわち、核酸試料中の領域のすべてまたは一部を、最初に任意の従来技術、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて増幅してから分析することができることは、理解されるであろう。核酸は、ゲノムＤＮＡまたは断片化もしくは全細胞ＲＮＡであることができる。特定の態様において、ＲＮＡは全細胞ＲＮＡであり、ランダムプライマーまたはポリＡプライマーを用いて第１鎖ｃＤＮＡを標識するための鋳型として直接用いられる。試験試料中の核酸またはタンパク質は、標準的手順に従って試料から抽出することができる（Ｇｒｅｅｎ  ＆  Ｓａｍｂｒｏｏｋ編集，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（２０１２，第４版，１〜３巻，ＩＳＢＮ  ９７８１９３６１１３４２２）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．参照）。
【０４１４】
本発明の診断方法は、個体または患者から予め採取しておいた試料を用いて開始することができる。そのような試料は、凍結させるか、ホルマリン−パラフィンもしくは他の媒体に固定し包埋することにより、保存することができる。あるいは、新しい腫瘍細胞含有試料を入手して用いてもよい。
【０４１５】
本発明の方法は、任意の腫瘍からの細胞を用いて施用することができる。式（Ｉ）の化合物での処置に適した腫瘍については、本明細書中で先に記載している。
【０４１６】
ＰＩＫ３ＣＡの変異は臨床腫瘍において広く見いだされるが、各遺伝子の変異出現率は、腫瘍組織のタイプにより著しく変動する。例えば、ＰＩＫ３ＣＡ変異は乳癌では比較的一般的であるが、腎腫瘍では比較的まれである。
【０４１７】
【表２】
0006307096.tif 000027
【０４１８】
【表３】
0006307096.tif 000028
【０４１９】
当業者には明らかになるように、この頻度データは、ＴＣＧＡ（Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍａ  Ａｔｌａｓ）およびＩＣＧＣ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ）などのヒト癌ゲノムプロファイリングコンソーシアムから新規およびより包括的なデータが出ると、継続的に改善および更新される。したがって、ＰＩＫ３ＣＡ依存性の追加的な腫瘍タイプを識別し、本明細書中に記載する化合物での処置に望ましいとすることができる。
核酸の検出方法
本発明の状況では、変異体ＰＩＫ３ＣＡ核酸の検出を採用して薬物処置に対する応答を予測することができる。これらの遺伝子の変異はＤＮＡレベルで起こるので、本発明の方法は、ゲノムＤＮＡにおける変異またはバリアンス、ならびに転写産物およびタンパク質自体の検出に基づくことができる。検出した変異が実際に被検体に発現していることを保証するために、転写産物および／またはポリペプチドの分析によりゲノムＤＮＡの変異を確認することが望ましい可能性がある。
【０４２０】
遺伝子の１以上の位置にバリアントヌクレオチドが存在するか存在しないかを検出するために用いることができる分析手順は非常に多くあることが、当業者には明らかであろう。一般に、アレルバリエーションの検出は、変異判別技術、所望により増幅反応（ポリメラーゼ連鎖反応に基づくものなど）および所望によりシグナル発生システムを必要とする。当分野で利用可能な変異検出技術は数多くあり、これらは、当分野で利用可能なものが多数あるシグナル発生システムと組み合わせて用いることができる。アレルバリエーションを検出するための多くの方法が、Ｎｏｌｌａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，４３，１１１４−１１２０；Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＳＭ．Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｄｉａｇｎ．，２０１１，１１，６３５−６４２；Ｍｅｙｅｒｓｏｎ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｇｅｎｅｔ．，２０１０，１１，６８５−６９６により；ならびに、標準的教科書、例えば“Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ”，Ｕ．Ｌａｎｄｅｇｒｅｎ編集，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６および“ＰＣＲ”，Ｎｅｗｔｏｎ  ＆  Ｇｒａｈａｍによる第二版，ＢＩＯＳ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ，１９９７に、概説されている。
【０４２１】
上記のように、癌を有する患者のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子に特定のバリアンスまたは複数のバリアンスが存在するか存在しないかの決定は、さまざまな方法で実施することができる。そのような試験は、一般に、生物学的試料、例えば、組織生検材料、尿、便、喀痰、血液、細胞、組織剥離物、胸部吸引物または他の細胞材料から収集したＤＮＡまたはＲＮＡを用いて実施し、さまざまな方法、例えば、限定されるものではないが、ＰＣＲ、アレル特異性プローブを用いるハイブリダイゼーション、酵素変異検出、ミスマッチの化学開裂、質量分析法、またはミニ配列決定を含むＤＮＡ塩基配列決定法により、実施することができる。
【０４２２】
適した変異検出技術としては、増幅不応性変異システム(amplification refractory mutation system)（ＡＲＭＳＴＭ）、増幅不応性変異システム線形延長（ＡＬＥＸＴＭ）、競合的オリゴヌクレオチドプライミングシステム（ＣＯＰＳ）、Ｔａｑｍａｎ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｅａｃｏｎ、制限断片長多型（ＲＦＬＰ）、ならびに制限部位に基づくＰＣＲおよび蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）技術が挙げられる。
【０４２３】
特定の態様において、バイオマーカー遺伝子内のヌクレオチド（１以上）を決定するために採用される方法は、以下から選択される：アレル特異性増幅（アレル特異性ＰＣＲ）−例えば、増幅不応性変異システム（ＡＲＭＳ）、配列決定、アレル判別アッセイ、ハイブリダイゼーション、制限断片長多型（ＲＦＬＰ）またはオリゴヌクレオチド連結反応アッセイ（ＯＬＡ）。
【０４２４】
特定の態様において、アレル特異性プローブを用いるハイブリダイゼーションは、以下により行うことができる：（１）例えば多くのＤＮＡチップでの施用のように、溶液中の標識試料と一緒に固相（例えば、ガラス、シリコン、ナイロン膜）に結合しているアレル特異性オリゴヌクレオチド；または（２）結合試料（クローン化ＤＮＡまたはＰＣＲ増幅ＤＮＡであることが多い）および溶液中の標識オリゴヌクレオチド（アレル特異性であるか、ハイブリダイゼーションによる配列決定が可能になるように短い）。診断試験は、固体支持体上にあることが多いバリアンスのパネルを包含することができ、該パネルにより、１より多くのバリアンスを同時に決定することが可能になる。そのようなハイブリダイゼーションプローブは、当分野で周知であり（例えば、Ｇｒｅｅｎ  ＆  Ｓａｍｂｒｏｏｋ編集，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（２０１２年，第４版，Ｖｏｌ．１−３，ＩＳＢＮ  ９７８１９３６１１３４２２）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）、２以上のバリアンス部位に及ぶことができる。
【０４２５】
したがって、一態様において、少なくとも１つの変異が存在するか存在しないかの検出は、推定変異部位を含有するＰＩＫ３ＣＡ核酸を、少なくとも１つの核酸プローブと接触させることを提供する。バリアンス部位を包含し、該バリアンス部位に相補的ヌクレオチド塩基を含有する核酸配列と、プローブは、選択的ハイブリダイゼーション条件下で優先的にハイブリダイズする。ハイブリダイゼーションは、当業者に公知の標識を用いて、検出可能な標識で検出することができる。そのような標識としては、限定されるものではないが、放射性標識、蛍光標識、染料標識および酵素標識が挙げられる。
【０４２６】
他の態様において、少なくとも１つの変異が存在するか存在しないかの検出は、推定変異部位を含有するＰＩＫ３ＣＡ核酸を、少なくとも１つの核酸プライマーと接触させることを提供する。バリアンス部位を包含し、該バリアンス部位に相補的ヌクレオチド塩基を含有する核酸配列と、プライマーは、選択的ハイブリダイゼーション条件下で優先的にハイブリダイズする。
【０４２７】
特異的増幅のためのプライマーとして用いられるオリゴヌクレオチドは、分子の中心において（これにより、増幅は示差的ハイブリダイゼーションに依存する；例えば、Ｇｉｂｂｓ，ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１７，２４３７−２４８参照）、または、適切な条件下でミスマッチがポリメラーゼ伸長を抑えるか減少させることができる、１つのプライマーの３’最末端(extreme 3'-terminus)において（例えば、Ｐｒｏｓｓｎｅｒ，１９９３，Ｔｉｂｔｅｃｈ，１１  ２３８参照）、相補的ヌクレオチド塩基を対象となる変異に進めることができる。
【０４２８】
さらに他の態様において、少なくとも１つの変異が存在するか存在しないかの検出は、少なくとも１つの核酸配列を配列決定し、得られた配列を公知の野生型核酸配列と比較することを含む。
【０４２９】
あるいは、少なくとも１つの変異が存在するか存在しないかは、少なくとも１つの核酸配列の質量分光測定を含む。
【０４３０】
一態様において、少なくとも１つの核酸バリアンスが存在するか存在しないかの検出は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）の実施を含む。仮定的バリアンスを含有する標的核酸配列を増幅し、増幅核酸のヌクレオチド配列を決定する。増幅核酸のヌクレオチド配列の決定は、少なくとも１つの核酸セグメントの配列決定を含む。あるいは、増幅産物をサイズに従って分離することができる任意の方法、例えば、自動および手動でのゲル電気泳動法などを用いて、増幅産物を分析することができる。
【０４３１】
ゲノム核酸における変位は、増幅核酸断片の移動度シフトに基づく技術により有利に検出される。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９９６，２３９，６１−９には、競合的移動度シフトアッセイによる単一塩基変異の検出が記載されている。さらに、Ｍａｒｃｅｌｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １９９９，２６，１１３４−１１４８の技術に基づくアッセイは、商業的に利用可能である。
【０４３２】
特定の例では、キャピラリーヘテロ二本鎖分析を用いて、ミスマッチの存在の結果として、キャピラリー系における二本鎖核酸の移動度シフトに基づき、変異の存在を検出することができる。
【０４３３】
試料からの分析用核酸の生成には、一般に核酸増幅が必要である。多くの増幅方法は、酵素連鎖反応（ポリメラーゼ連鎖反応、リカーゼ連鎖反応、または自立配列複製など）に依存するか、それがクローニングされているベクターのすべてまたは一部の複製に由来する。好ましくは、本発明に従った増幅は、例えばポリメラーゼ連鎖反応により示されるような、指数関数的増幅である。
【０４３４】
多くの標的およびシグナル増幅方法が文献に記載されており、例えば、Ｌａｎｄｅｇｒｅｎ，Ｕ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８８  ２４２，２２９−２３７およびＬｅｗｉｓ，Ｒ．，Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｎｅｗｓ  １９９０，１０，５４−５５には、これらの方法の一般的概説が記載されている。これらの増幅方法は、われわれの発明の方法に用いることができ、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ｉｎ  ｓｉｔｕ  ＰＣＲ、リガーゼ増幅反応（ＬＡＲ）、リガーゼハイブリダイゼーション、Ｑβバクテリオファージレプリカーゼ、転写に基づく増幅システム（ＴＡＳ）、転写産物配列決定を伴うゲノム増幅（ＧＡＷＴＳ）、核酸配列に基づく増幅（ＮＡＳＢＡ）、およびｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションを包含する。さまざまな増幅技術に用いるのに適したプライマーは、当分野で公知の方法に従って調製することができる。
【０４３５】
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）ＰＣＲは、とりわけ米国特許公報第４６８３１９５号および第４６８３２０２号に記載されている核酸増幅方法である。ＰＣＲは、ＤＮＡポリメラーゼが引き起こすプライマー伸長反応の繰り返しサイクルからなる。標的ＤＮＡを熱変性し、増幅しようとするＤＮＡの逆鎖の標的配列を挟む２つのオリゴヌクレオチドをハイブリダイズする。これらのオリゴヌクレオチドが、ＤＮＡポリメラーゼと一緒に用いるためのプライマーになる。プライマー伸長によりＤＮＡが複製されて、両方の鎖の第２の複製が作られる。熱変性、プライマーのハイブリダイゼーション、および伸長のサイクルを繰り返すことにより、標的ＤＮＡを約２〜４時間で１００万倍以上に増幅することができる。ＰＣＲは、増幅結果を決定するための検出技術と併せて用いなければならない分子生物学的ツールである。ＰＣＲの利点は、それが、約４時間で標的ＤＮＡの量を１００万から１０億倍に増幅することにより感度を向上させる点である。ＰＣＲは、診断の状況であらゆる公知の核酸を増幅するのに用いることができる（Ｍｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｙｎａｅｃｏｌｏｇｉｃ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１９９４，５２：２４７−２５２）。
【０４３６】
増幅不応性変異システム（ＡＲＭＳＴＭ）などのアレル特異性増幅技術（Ｎｅｗｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，１９８９，１７，２５０３−２５１６）も、単一塩基変異の検出に用いることができる。適したＰＣＲ増幅条件下において、プライマーの３’末端に位置する単一塩基ミスマッチは、完全にマッチしたアレルの優先的増幅に十分であり（Ｎｅｗｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，ｓｕｐｒａ）、近縁種の判別が可能になる。上記プライマーを用いる増幅システムの基礎は、３’残基がミスマッチしているオリゴヌクレオチドが、適切な条件下でのＰＣＲにおいてプライマーとして機能しないということである。この増幅システムにより、アガロースゲル電気泳動後の反応混合物の検査のみによる遺伝子型決定が可能になる。
【０４３７】
増幅産物の分析は、増幅産物をサイズに従って分離することができる任意の方法、例えば、自動および手動でのゲル電気泳動法、質量分析法などを用いて、実施することができる。
【０４３８】
核酸の単離、増幅および分析の方法は当業者にとって日常的なものであり、プロトコルの例は、例えば、Ｇｒｅｅｎ  ＆  Ｓａｍｂｒｏｏｋ編集，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（２０１２，第４版，Ｖｏｌ．１−３，ＩＳＢＮ  ９７８１９３６１１３４２２），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｏｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）に見いだすことができる。ＰＣＲ増幅に用いられる方法にとりわけ有用なプロトコル源は、Ｍ．Ｊ．ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｓ．Ｇ．Ｍａｉｌｅｒ，Ｐ．Ｂｅｙｎｏｎ，Ｃ．ＨｏｗｅによるＰＣＲ（Ｂａｓｉｃｓ：Ｆｒｏｍ  Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ  ｔｏ  Ｂｅｎｃｈ），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ；第１版（２０００年１０月１５日），ＩＳＢＮ：０３８７９１６００８である。
【０４３９】
本発明はまた、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子中の標的核酸を増幅するための縮重プライマーと、増幅プロトコルおよび結果の分析を含む使用説明書とを含む、予測的および診断的なキットを提供する。あるいは、該キットは、増幅産物の増幅および分析を実施するための緩衝液、酵素、および容器も含むことができる。該キットは、スクリーニングの構成要素、またはＤＮＡマイクロアレイなどの他のツールもしくは他の支持体を含む診断キットであることもできる。好ましくは、該キットは、１以上の対照鋳型、例えば、正常な組織試料および／または参照遺伝子にさまざまなバリアンスを示す一連の試料から単離した核酸も提供する。
【０４４０】
一態様において、該キットは、２以上のプライマー対を提供する。これに関し、各対は参照（ＰＩＫ３ＣＡ）遺伝子の異なる領域を増幅することができ（各領域は潜在的バリアンスの部位である）、これにより、１つの反応またはいくつかの並列反応での生物学的試料におけるいくつかの遺伝子バリアンスの発現を分析するためのキットがもたらされる。
【０４４１】
キット中のプライマーは、増幅産物の検出および核酸バリアンスの必然的な分析を促進するために、標識、例えば蛍光標識されていてもよい。また、該キットにより、１より多くのバリアンスを１つの分析で検出することが可能になる。したがって、組み合わせキットは、参照遺伝子の異なるセグメントを増幅することができるプライマーを含む。プライマーは、バリアンスが差別化されるように、例えば異なる蛍光標識を用いて、異なった形で標識することができる。
【０４４２】
ＰＩＫ３ＣＡ変異の検出用キット、例えば、限定されるものではないが、ＱｉａｇｅｎおよびＲｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓなどの診断会社により市販されているＰＩＫ３ＣＡ変異検出キットの使用も開示する。
【０４４３】
他の観点において、本発明は、以下を含む、癌を患っている患者の処置方法を提供する：患者の腫瘍細胞中のＰＩＫ３ＣＡ遺伝子が変異体状態であるか野生型状態であるかを決定し、ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子が変異体である場合、患者に有効量の式（Ｉ）の化合物を投与する。
【０４４４】
本明細書中で用いる場合、“有効な”および“有効性”という用語は、薬理学的有効性と生理学的安全性の両方を包含する。薬理学的有効性は、処置が、患者に望ましい生物学的効果をもたらす能力をさす。生理学的安全性は、処置の投与に起因する毒性のレベル、または細胞、臓器および／もしくは生命体レベルでの他の有害な生理学的作用（しばしば副作用とよばれる）をさす。“より低い有効性”は、処置が、治療的に著しくより低いレベルの薬理学的有効性および／または治療的により高いレベルの有害な生理学的作用をもたらすことを意味する。
【０４４５】
本発明の他の観点に従って、腫瘍細胞が変異体ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を持つと確認されている癌患者を処置するための、式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【０４４６】
本発明の他の観点に従って、変異体ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を持つと確認されている腫瘍細胞を有する癌を処置するための式（Ｉ）の化合物を提供する。
【０４４７】
さらに他の態様において、本発明は、変異体ＰＩＫ３ＣＡ遺伝子を持つと確認されている腫瘍細胞を有する癌の予防および処置に用いるための、式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物に関する。
【０４４８】
上記観点のすべてに関し、決定／確認されたＰＩＫ３ＣＡの変異体形態は、遺伝子全体のすべての位置に存在する。
【０４４９】
上記観点のすべてに関し、一例として乳癌などの腫瘍を用いる場合、決定／確認されたＰＩＫ３ＣＡの特定の変異体形態は、Ｒ３８、Ｒ８８、Ｎ３４５、Ｃ４２０、Ｅ４５３、Ｐ５３９、Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ｋ、Ｑ５４６、Ｍ１０４３、Ｍ１０４３およびＨ１０４７Ｒの位置にあるものである。
【０４５０】
上記観点のすべてに関し、一例として乳癌などの腫瘍を用いる場合、決定／確認されたＰＩＫ３ＣＡの特定の変異体形態は、Ｅ５４２、Ｅ５４５およびＨ１０４７の位置にあるものである。
個別化ヘルスケア／個別化医療の例
腫瘍細胞株における細胞増殖アッセイ
化合物の作用に対するヒト癌細胞株パネルの感受性を、標準的な増殖アッセイで決定した。アッセイプロトコルの詳細は、上記生物学的アッセイ（ｇ）に記録している。
変異の相関分析
方法
実施例３での処置に応答した細胞成長阻害を測定する薬理学データを、さまざまな組織および多数の供給源からの２０９個の癌細胞株のコレクション(collection)について得た。各細胞株を、感受性（ＧＩ５０＜＝１．０μＭ）または耐性（ＧＩ５０＞１．０μＭ）として分類した。
【０４５１】
各細胞株の遺伝子の変異状態は、内部（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）および公共の情報源からの結果を統合することにより得た。公共のデータは、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｏｊｅｃｔリリース３（Ｇａｒｎｅｔｔ  ＭＪ，ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ，２０１２，Ｍａｒ  ４８３，５７０−５）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａプロジェクト（Ｂａｒｒｅｔｉｎａ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ２０１２，４８３，６０３−７）およびＣａｔａｌｏｇｕｅ  ｏｆ  Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｄｅｒ（ＣＯＳＭＩＣ）データベース（リリースｖ６１；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／ｇｅｎｅｔｉｃｓ／ＣＧＰ／ｃｏｓｍｉｃ／；Ｆｏｒｂｅｓ  ＳＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ，２０１１，３９（データベース発行）：Ｄ９４５−５０；Ｆｏｒｂｅｓ  ＳＡ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ．２００８；１０章：単元１０．１１．）、および選択した学術論文からの全細胞株データを包含していた。サイレントコーディング領域変異（同義バリアント）および非同義多型は除外し、この分析の目的に関し、変異の接合性は無視した。細胞株と遺伝子の各組み合わせについて、状態を、変異体（ＭＵＴ）、野生型（ＷＴ）、または不一致（ＩＮＣＯＮ）としてまとめた。最初に不一致であったいくつかの例（同じ細胞株の同じ遺伝子に関する独立したＷＴおよびＭＵＴの観察）は、内部観察結果およびＣＯＳＭＩＣのＣａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔ（ＣＣＬＰ）サブセットの観察結果に加重するか、マニュアルレビュー(manual review)後に状態を選択することにより解決した。不一致の観察結果を解決することができなかった場合、ＩＮＣＯＮ標識を保持し、分析中の遺伝子状態は未知とみなした。
【０４５２】
変異状態と応答との関連を、各遺伝子について分割表を構築し、対応するオッズ比およびフィッシャーの正確確率検定の両側検定ｐ値を決定することにより確認した。応答に不十分と分類された細胞株は初期分析から除外して、対象となるバイオマーカーを識別した。変異状態に関し、ＭＵＴまたはＷＴ所見を計数し、４未満のＷＴまたは４未満のＭＵＴを有する遺伝子の細胞株も排除した。
結果および考察
変異状態と応答との関連を、方法に記載したように確認した。実施例３に対する細胞株の応答と、これに対応するＰＩＫ３ＣＡ遺伝子の遺伝子状態を表３に示す。
【０４５３】
【表４】
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【０４５４】
【表５】
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【０４５５】
【表６】
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【０４５６】
【表７】
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【０４５７】
【表８】
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【０４５８】
【表９】
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【０４５９】
【表１０】
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【０４６０】
【表１１】
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【０４６１】
変異が実施例３に対する感受性ともっとも強く相関していた遺伝子は、ＰＩＫ３ＣＡであった。ＰＩＫ３ＣＡ  ＷＴ細胞株は１７７個のうち１２個（７．７％）だけが実施例３に対し感受性を示したが、ＰＩＫ３ＣＡの変異体である細胞株は３２個のうち１５個（４６．９％）が感受性を示した。これは、１２．１のオッズ比および１．２×１０−７のｐ値に対応する（表４参照）。
【０４６２】
【表１２】
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【０４６３】
本明細書中に示すように、異常または脱調節されたＰＩＫ３ＣＡまたはＰＩ３Ｋ−αを有する腫瘍における耐性の潜在的マーカーであるＫＲＡＳなどの追加的遺伝子の変異状態または活性化状態の測定は、個別化医療アプローチの予測性の向上に役立つ可能性があることが、報告されている。
【０４６４】
われわれは、これを、ＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞中のＫＲＡＳ変異のエンリッチメント(enrichment)を、阻害に対する細胞株の応答と比較することにより、上記データセットに関し実証した。分析は、２つの遺伝子の‘ホットスポット’変異を含有する細胞株に限定した（ＰＩＫ３ＣＡについてはコドンＥ５４２、Ｅ５４５およびＨ１０４７、ＫＲＡＳについてはコドンＫ１２、１３およびＱ６１）。これにより、ＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞株では、ＫＲＡＳにおける変異が、実施例３による阻害に対する耐性を与えることが示された。
−２８個の細胞株はＰＩＫ３ＣＡに活性化変異を含有していた。
−活性化ＰＩＫ３ＣＡ変異および野生型ＫＲＡＳ遺伝子を含有する１９個の細胞株のうち６個（３１．６％）は、実施例３に対し耐性を示した。
−９個のＰＩＫ３ＣＡ変異体細胞株のうち７個（７７．８％）が、共存するＫＲＡＳ変異を含有し、実施例３に対し耐性を示した。
これは、７．５のオッズ比および０．０４２のｐ値に変換される（表５参照）。
【０４６５】
【表１３】
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【実施例】
【０４６６】
実施例
ここで、本発明を以下の実施例で例示する。これに関し、一般に：
（ｉ）操作は、特記しない限り、周囲温度、すなわち１７〜２５℃において、窒素などの不活性ガスの雰囲気下で行った；
（ｉｉ）蒸発は、回転蒸発によるか真空下でＧｅｎｅｖａｃ装置を利用して行い、後処理手順は、濾過により残留固体を除去した後に行った；
（ｉｉｉ）フラッシュクロマトグラフィー精製は、自動Ａｒｍｅｎ  Ｇｌｉｄｅｒ  Ｆｌａｓｈで実施した：ドイツ、ＤａｒｍｓｔａｄのＭｅｒｃｋから得た予め充填されているＭｅｒｃｋ順相Ｓｉ６０シリカカートリッジ（粒度分布：１５〜４０または４０〜６３μｍ）を用いるＳｐｏｔ  ＩＩ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ（Ａｒｍｅｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ，Ｓａｉｎｔ−Ａｖｅ，フランス）；
（ｉｖ）分取クロマトグラフィーは、ＺＭＤまたはＺＱ  ＥＳＣｉ質量分析計およびＷａｔｅｒｓ  Ｘ−ＴｅｒｒａまたはＷａｔｅｒｓ  Ｘ−ＢｒｉｄｇｅまたはＷａｔｅｒｓ  ＳｕｎＦｉｒｅ逆相カラム（Ｃ−１８、５ミクロンシリカ、直径１９ｍｍ、長さ１００ｍｍ、流速４０ｍＬ／分）を取り付けたＷａｔｅｒｓ機器（６００／２７００または２５２５）で、極性が低下する水（０．２％炭酸アンモニウムを含有する）とアセトニトリルの混合物を溶離液として用いて実施した；
（ｖ）収量は、存在する場合、必ずしも到達可能な最大値ではない；
（ｖｉ）一般に、式Ｉの最終生成物の構造は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法により確認した；ＮＭＲ化学シフト値はデルタスケールで測定した［プロトン磁気共鳴スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ５００（５００ＭＨｚ）機器を用いて決定した］；特記しない限り、測定は周囲温度で行った；以下の略語を用いた：ｓ、シングレット；ｄ、ダブレット；ｔ、トリプレット；ｑ、カルテット；ｍ、マルチプレット；ｄｄ、ダブレットのダブレット；ｄｄｄ、ダブレットのダブレットのダブレット；ｄｔ、トリプレットのダブレット；ｂｓ、ブロードシグナル；
（ｖｉｉ）一般に、式Ｉの最終生成物は、液体クロマトグラフィーに続く質量分析（ＬＣＭＳ）による特性決定も行った；ＬＣＭＳは、Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱ  ＥＳＣｉまたはＺＭＤ  ＥＳＣｉ質量分析計およびＸ  Ｂｒｉｄｇｅ  ５μｍ  Ｃ−１８カラム（２．１×５０ｍｍ）を取り付けたＷａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ＨＴ（２７９０  ＆  ２７９５）を用い、９５％Ａ＋５％Ｃ〜９５％ Ｂ＋５％Ｃの溶媒系を２．４ｍＬ／分の流速で４分間にわたって用いて行った。これに関し、Ａ＝水、Ｂ＝メタノール、Ｃ＝１：１  メタノール：水（０．２％炭酸アンモニウムを含有する）である；
（ｖｉｉｉ）中間体は、一般に完全には特性を決定せず、薄層クロマトグラフィー、質量スペクトル、ＨＰＬＣおよび／またはＮＭＲ分析により純度を評価した；
（ｉｘ）Ｘ線粉末回折スペクトルは、結晶質材料の試料をＢｒｕｋｅｒシリコン単結晶（ＳＳＣ）ウエハマウント上に載せ、顕微鏡スライドを用いて該試料を薄層へ広げることにより決定した（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ４分析機器を用いる）。試料を１分あたり３０回転でスピンさせ（計数統計を向上させるために）、４０ｋＶおよび４０ｍＡで操作した銅ロングファインフォーカス管(long-fine focus tube)により発生させた波長１．５４１８オングストロームのＸ線を照射した。コリメートしたＸ線源を、Ｖ２０に設定した自動可変発散スッリトに通し、反射した放射線を５．８９ｍｍの散乱防止スリット(antiscatter slit)および９．５５ｍｍの検出器スリットに通して方向付けた。試料を、シータ−シータモードで２度〜４０度の２シータ範囲にわたり、０．００５７０°の２シータ増分につき０．０３秒間暴露した（連続走査モード）。実行時間は３分３６秒であった。該機器に、位置感応検出器（Ｌｙｎｘｅｙｅ）を備え付けた。対照およびデータの捕捉には、Ｄｅｌｌ  Ｏｐｔｉｐｌｅｘ  ６８６  ＮＴ４．０  ＷｏｒｋｓｔａｔｉｏｎをＤｉｆｆｒａｃ＋ソフトウェアで操作して用いた。Ｘ線粉末回折分野の技術者なら、ピークの相対強度が、例えば、３０ミクロンより大きいサイズの粒子や試料の分析に影響を及ぼしうる非ユニタリーなアスペクト比により影響を受ける可能性があることを、理解するであろう。当業者は、反射の位置が、回折計の中で試料が置かれる位置の正確な高さと回折計のゼロ較正により影響を受ける可能性があることも、理解するであろう。試料表面の平面性もわずかな影響を有する可能性がある。したがって、提示する回折パターンデータは、絶対的な値とみなすべきではない；
（ｘ）示差走査熱量測定は、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｑ１０００  ＤＳＣ機器を用いて実施した。典型的には、蓋付きの標準的なアルミニウム製パンに入れた５ｍｇ未満の材料を、１分あたり１０℃の一定の加熱速度で２５℃〜３００℃の温度範囲にわたり加熱した。窒素を用いるパージガスを、１分あたり５０ｍＬの流速で用いた；そして
（ｘｉ）以下の略語を用いた：−
ａｑ．          水性
ＣＤＣｌ３       ジュウテロクロロホルム
ＣＨＣｌ３      クロロホルム
ＤＢＵ          １，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン
ＤＣＭ          ジクロロメタン
ＤＥＡ          ジエチルアミン
ＤＩＰＥＡ      Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン
ＤＭＡ          Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド
ＤＭＦ          Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ        ジメチルスルホキシド
ＤＳＣ          示差走査熱量測定
ＤＴＡＤ        （Ｅ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジアゼン−１，２−ジカルボキシレート
ＥＤＣＩ        １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩
Ｅｔｈｅｒ      ジエチルエーテル
ＥｔＯＨ        エタノール
ＥｔＯＡｃ      酢酸エチル
％ｅｅ          エナンチオマー過剰率％
ＨＯＰＯ        ２−ヒドロキシ−ピリジンＮ−オキシド
ＨＰＬＣ        高速液体クロマトグラフィー
ＩＰＡ          イソプロピルアルコール
ＭｅＣＮ        アセトニトリル
ＭｅＯＨ        メタノール
ＭＩＢＫ        メチルイソブチルケトン
ＭＴＢＥ        メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ＮＭＰ          １−メチル−２−ピロリドン
ｒｔ            室温
ｓａｔ．        飽和
ｓｏｌ．        溶液
ＴＨＦ          テトラヒドロフラン
ＴＥＡ          トリエチルアミン
ＴＢＴＵ        ２−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムテトラフルオロボレート
ｖ／ｖ          体積／体積
ＴＦＡ          トリフルオロ酢酸
実施例１
１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン
【０４６７】
【化２３】
0006307096.tif 000039
【０４６８】
３−ヒドロキシプロパン酸（水中の３０％ｖ／ｖ溶液）（２００μＬ、４７．０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を蒸発乾固した後、トルエンと共沸させた。該酸をＮＭＰ（１ｍＬ）に溶解し、モレキュラーシーブ（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（０．１３６ｍＬ、０．７８ｍｍｏｌ）を加えた後、２−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムテトラフルオロボレート（２０９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間撹拌した後、３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−メチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２時間攪拌した。反応混合物を、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ逆相カラム（Ｃ−１８、５ミクロンシリカ、直径１９ｍｍ、長さ１００ｍｍ、流速４０ｍＬ／分）および極性が低下する水（０．２％炭酸アンモニウムを含有する）とアセトニトリルの混合物を溶離液として用いて、分取ＨＰＬＣにより精製した。
【０４６９】
望ましい化合物を含有する画分を蒸発乾固して、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン（４５．０ｍｇ、３７．９％）を透明な黄色固体として得た：1H NMRスペクトル (CDCl3) 1.52 (9H, s), 1.79 - 1.94 (2H, m), 2.07 - 2.15  (2H, m), 2.58 (2H, t), 2.84 - 2.94 (1H, m,), 3.00 - 3.10  (1H, m), 3.17 - 3.26 (1H, m), 3.53 (1H, t), 3.86 - 3.94  (3H, m), 4.30 (3H, s), 4.56 -4.62  (1H,  m), 9.02 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+= 456. 
３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−メチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（実施例１．１）は、以下のように調製した：
２０℃において、ジクロロメタン（５００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−カルバモイルピペリジン−１−カルボキシレート（４７ｇ、２０５．８８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（５００ｍＬ）中のトリエチルオキソニウムヘキサフルオロホスフェート（Ｖ）（５６．２ｇ、２２６．４７ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、窒素下で４５分間にわたり滴下して加えた。得られた溶液を２０℃で一晩攪拌した。その後、Ｎａ２ＣＯ３の飽和水溶液を、ｐＨ８が得られるまで加えた。相をデカントし、水相を再び２００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で抽出した後、有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（エトキシ（イミノ）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート（５１．０ｇ、９７％）を無色液体として得た：
【０４７０】
【数１】
0006307096.tif 000040
【０４７１】
ジオキサン（５００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（エトキシ（イミノ）メチル）ピペリジン−１−カルボキシレート（５１ｇ、１９８．９５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ホルモヒドラジド（１７．９２ｇ、２９８．４３ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液をＮ２下、４０℃でそのまま一晩攪拌すると、白色固体（ヒドラジド中間体）の沈殿が生じた。その後、反応混合物を６時間にわたり８０℃に加熱し、室温に冷却し、濃縮した。残渣を５００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、３００ｍＬの水を加えた。相をデカントし、有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（４６．０ｇ、９２％）を白色固体として得た：
【０４７２】
【数２】
0006307096.tif 000041
【０４７３】
ジクロロメタン（２５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２２ｇ、８７．１９ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、水酸化ナトリウム２Ｎ（１３１ｍＬ、２６１．５８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を機械的攪拌で激しく攪拌した後、温度を約１５℃に維持しつつ、ジクロロメタン（２５０ｍＬ）中のベンジルトリメチルアンモニウムトリブロミド（３７．４ｇ、９５．９１ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加えた。反応混合物をそのまま室温で１時間攪拌し、２Ｎ  ＨＣｌを加えてｐＨ５を得た（温度は約１５℃に維持した）。相をデカントし、有機相をＨ２Ｏ（２×１Ｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−ブロモ−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２５．００ｇ、８７％）を灰色がかった白色の固体として得た：
【０４７４】
【数３】
0006307096.tif 000042
【０４７５】
トルエン（２００ｍＬ）およびメタノール（５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（５−ブロモ−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２６ｇ、７８．５０ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に、温度を約２０℃に維持しつつ、Ｎ２下でヘキサン（４３．２ｍＬ、８６．３５ｍｍｏｌ）中の（ジアゾメチル）トリメチルシラン２Ｍ溶液を滴下して加えた：ガスの発生およびわずかな発熱が観察された。得られた黄色溶液を室温で１時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、得られたオイルをシリカ上で精製し、石油エーテル中の４０％ＥｔＯＡｃで溶離して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（１５．００ｇ、５５．３％）をオイルとして得た：
【０４７６】
【数４】
0006307096.tif 000043
【０４７７】
ヒドラジン一水和物（３４ｍＬ、１０９４．９５ｍｍｏｌ）を、エタノール（６５ｍＬ）中のメチル３−アミノピラジン−２−カルボキシレート（２１．３ｇ、１３９．０９ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に室温で少しずつ加えた。得られたスラリーを６０℃で２時間攪拌し、室温に冷却し、濾過した。固体を冷エタノール（２×２５ｍＬ）で洗浄し、恒量まで乾燥して、３−アミノピラジン−２−カルボヒドラジド（２０．７５ｇ、９７％）をベージュ色の固体として得た：1H NMRスペクトル；(DMSO-d6) 4.49 (2H, d), 7.46 (2H, br s,), 7.78 (1H, d), 8.17 (1H, d), 9.79 (1H, t)；質量スペクトル [M+H]+= 154。
【０４７８】
２−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムテトラフルオロボレート（４７．７ｇ、１４８．６９ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（３５０ｍＬ）中のＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（７０．６ｍＬ、４０５．５１ｍｍｏｌ）、ピバル酸（１７．０８ｍＬ、１４８．６９ｍｍｏｌ）および３−アミノピラジン−２−カルボヒドラジド（２０．７ｇ、１３５．１７ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に１５分かけて少しずつ加え、反応混合物を８０℃で２０分間攪拌した（溶液を得た）。反応混合物を０℃に冷却し、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（７０．６ｍＬ、４０５．５１ｍｍｏｌ）、続いて４−メチルベンゼン−１−スルホニルクロリド（７７ｇ、４０５．５１ｍｍｏｌ）を１５分間にわたり加えた。反応混合物（黄色懸濁液）を還流（可溶化）した後、そのまま室温で１４時間攪拌して、暗い橙色の溶液を得た。該溶液を濃縮した。残渣をジクロロメタンで希釈し、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濃縮した。粗生成物を、ジクロロメタン中の０〜４０％酢酸エチルで溶離してシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を蒸発乾固した。得られた混合物をエーテル（１００ｍＬ）で粉砕し、濾過し、最低限のエーテルで洗浄し、乾燥して、３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−アミン（２０．８ｇ、７０．２％）を淡黄色固体として得た：1H NMRスペクトル；(CDCl3) 1.53 (9H, s), 1.58 - 1.68 (2H, m), 6.67 (2H, s), 8.13 (2H, dt)；質量スペクトル [M+H]+= 220。
【０４７９】
１−ブロモピロリジン−２，５−ジオン（１８．５７ｇ、１０４．３６ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（３２０ｍＬ）中の３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−アミン（２０．８ｇ、９４．８７ｍｍｏｌ）に少しずつ加え、溶液を室温で１６時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、残渣をジクロロメタン（３００ｍＬ）に溶解し、水（２×１５０ｍＬ）、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濃縮した。溶媒を蒸発させ、粗生成物を、ジクロロメタン中の０〜１０％酢酸エチルで溶離してシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を蒸発乾固して、５−ブロモ−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−アミン（２５．５ｇ、９０％）をベージュ色の固体として得た：1H NMRスペクトル；(CDCl3) 1.52 (9H, s), 8.23 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 300。
【０４８０】
トルエン（４５０ｍＬ）中の５−ブロモ−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−アミン（４５ｇ、１５０．９４ｍｍｏｌ）の懸濁液に、１，１，１，２，２，２−ヘキサメチルジスタンナン（３７．６ｍＬ、１８１．１２ｍｍｏｌ）およびビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（５．３０ｇ、７．５５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をアルゴンで脱ガスし、８０℃で２時間加熱した。（加熱により可溶化した後、橙色溶液が再沈殿して黒色になる。これは、反応が終了したことを示している。）反応混合物を冷却し、濃縮し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、Ｄｅｃａｌｉｔｅ上で濾過して、不溶性不純物を除去した。濾液を濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２中の０〜１０％ＥｔＯＡｃで溶離してシリカ上で精製した。溶媒を濃縮して、３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（トリメチルスタンニル）ピラジン−２−アミン（２２．６３ｇ、３９．２％）を橙色固体として得た：1H NMRスペクトル；(CDCl3) 0.38 (9H, s), 1.53 (9H, s), 6.49 (2H, br s), 8.13 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 384。
【０４８１】
４−メチル−２−ペンタノール（２８ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（５−ブロモ−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２７００ｍｇ、７．８２ｍｍｏｌ）および３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（トリメチルスタンニル）ピラジン−２−アミン（２９８８ｍｇ、７．８２ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に、塩化リチウム（９９５ｍｇ、２３．４６ｍｍｏｌ）およびビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（２２０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を加えた。該混合物をアルゴンで脱ガスし、１４０℃で２時間加熱した。反応物を冷却し、得られた沈殿物を濾過により収集し、イソプロパノール（２５ｍＬ）、水（２５ｍＬ）で洗浄し、吸引乾燥した。イソプロパノール有機画分を濃縮し、形成した沈殿物を収集し、主な沈殿物と組み合わせて、ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（３．０ｇ、７９％）を得た：1H NMRスペクトル： (DMSO-d6) 1.41 (9H, s), 1.45 (9H, s), 1.50 - 1.68 (2H, m), 1.95 (3H, dd), 2.78 - 3.05 (1H, m), 3.96 (3H, d), 4.21 (3H, s), 8.86 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 484。
【０４８２】
ＴＦＡ（１５ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（３ｇ、６．２０ｍｍｏｌ）の溶液を２５℃で１時間攪拌した。該混合物をトルエンと共沸させ、メタノールおよびジクロロメタン中のアンモニアの７Ｎ溶液を加え、混合物をシリカゲル上に吸着させた。粗生成物を、ジクロロメタン中の０〜８％メタノール、続いてジクロロメタン中の０〜１０％メタノール性アンモニアで溶離してシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。溶媒を蒸発乾固して、３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−メチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（２．０４０ｇ、８６％）を黄色結晶質固体として得た：1H NMRスペクトル：(DMSO-d6) 1.45 (9H, s), 1.55 - 1.66  (2H, m), 1.86 (2H, dd), 2.52 - 2.61 (2H, m), 2.69 - 2.78 (1H, m), 2.95 - 3.02 (2H, m), 4.20 (3H, s), 8.86 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+= 384。
実施例１の単結晶形の単離
上記で単離した材料のＸ線粉末回折スペクトルは、材料が、結晶質であるが、多形形態の混合物であることを示した。この材料は２２６．４℃の融点（開始）を有していた。
【０４８３】
フォームＡの材料は、２５℃において原材料をアセトニトリル中でスラリー化することにより生成した。約２０ｍｇの原材料をマグネティックスターラーバーと一緒にバイアルに入れ、約２ｍＬのアセトニトリルを加えた後、バイアルを蓋でしっかり密封し、マグネティックスターラープレート上でそのまま攪拌した。約５日後、試料をプレートから除去し、蓋を外し、スラリーを、周囲条件下で放置して乾燥した後、ＸＲＰＤおよびＤＳＣにより分析した。この形態（フォームＡ）は、ＸＲＰＤにより結晶質であると決定された。この材料は２２７．２℃の融点（開始）を有していた。
【０４８４】
同じ結晶形を、室温において粗材料をアセトニトリル中で一晩スラリー化した後、得られた固体を濾過し、冷アセトニトリルで洗浄し、乾燥することにより、作製することができる。
【０４８５】
本発明の一観点において、化合物試料をアセトニトリル中でスラリー化することにより実施例１の結晶形（フォームＡ）を形成するためのプロセスを提供する。Ｘ線粉末回折の１０個のピークを以下の表に示す：
【０４８６】
【表１４】
0006307096.tif 000044
【０４８７】
実施例１フォームＡのＸ線粉末回折スペクトルを図１に示す。
【０４８８】
実施例１フォームＡのＤＳＣ分析は、２２７．２℃で開始し２２８．６℃にピークを有する融解吸熱を示している（図２）。
【０４８９】
したがって、ＤＳＣ分析は、実施例１フォームＡが、約２２７．２℃で融解を開始し２２８．６℃にピークを有する高融点固体であることを示している。
【０４９０】
実施例１フォームＡのＤＳＣを図２に示す。
Ｘ線粉末回折
分析機器：Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ４。
【０４９１】
Ｘ線粉末ディフラクトグラムは、結晶質材料の試料をＢｒｕｋｅｒシリコン単結晶（ＳＳＣ）ウエハマウント上に載せ、顕微鏡スライドを用いて該試料を薄層へ広げることにより決定した。試料を１分あたり３０回転でスピンさせ（計数統計を向上させるために）、４０ｋＶおよび４０ｍＡで操作した銅ロングファインフォーカス管により発生させた波長１．５４１８オングストロームのＸ線を照射した。コリメートしたＸ線源を、Ｖ２０に設定した自動可変発散スッリトに通し、反射した放射線を５．８９ｍｍの散乱防止スリットおよび９．５５ｍｍの検出器スリットに通して方向付けた。試料を、シータ−シータモードで２度〜４０度の２シータ範囲にわたり、０．００５７０°の２シータ増分につき０．０３秒間暴露した（連続走査モード）。実行時間は３分３６秒であった。該機器に、位置感応検出器（Ｌｙｎｘｅｙｅ）を備え付けた。対照およびデータの捕捉には、Ｄｅｌｌ  Ｏｐｔｉｐｌｅｘ  ６８６  ＮＴ４．０  ＷｏｒｋｓｔａｔｉｏｎをＤｉｆｆｒａｃ＋ソフトウェアで操作して用いた。Ｘ線粉末回折分野の技術者なら、ピークの相対強度が、例えば、３０ミクロンより大きいサイズの粒子や試料の分析に影響を及ぼしうる非ユニタリーなアスペクト比により影響を受ける可能性があることを、理解するであろう。当業者は、反射の位置が、回折計の中で試料が置かれる位置の正確な高さと回折計のゼロ較正により影響を受ける可能性があることも、理解するであろう。試料表面の平面性もわずかな影響を有する可能性がある。したがって、提示する回折パターンデータは、絶対的な値とみなすべきではない。
示差走査熱量測定
分析機器：ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｑ１０００  ＤＳＣ。
【０４９２】
典型的には、蓋付きの標準的なアルミニウム製パンに入れた５ｍｇ未満の材料を、１分あたり１０℃の一定の加熱速度で２５℃〜３００℃の温度範囲にわたり加熱した。窒素を用いるパージガスを、１分あたり５０ｍＬの流速で用いた。
【０４９３】
実施例１の化合物の他の合成法を、実施例２として以下に提供する。
実施例２：１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン
【０４９４】
【化２４】
0006307096.tif 000045
【０４９５】
ピリジン４−メチルベンゼンスルホネート（３．５８ｇ、１４．２５ｍｍｏｌ）を、窒素下でメタノール（２７５ｍＬ）中の１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン−１−オン（３７ｇ、６８．５７ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。混合物を６０℃で１．５時間攪拌した。該混合物は５分後に溶解性を示した。該混合物を５０℃で一晩保持すると、その間に沈殿物が形成した。反応混合物をジクロロメタン（４００ｍＬ）に溶解し、水（３００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。水性抽出物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で逆洗し、有機相を組み合わせたものをＭｇＳＯ４上で乾燥し、濃縮した。粗生成物を、１００％酢酸エチル〜１０：５０：４０メタノール／酢酸エチル／ＤＣＭで溶離してシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。複数の画分を含有する生成物を蒸発乾固して、ベージュ色の固体（２４．５ｇ）を得た。固体をアセトニトリル（５００ｍＬ）中で一晩スラリー化し、濾過し、高真空下で乾燥して、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン（実施例２）（２４ｇ、７８％）をクリーム色の固体として得た：1H NMRスペクトル：(DMSO-d6) 1.51 (9H, s), 1.55 - 1.68 (1H, m), 1.68 - 1.84 (1H, m), 1.96 - 2.13 (2H, m), 2.78 - 2.93 (1H, m), 2.98 - 3.1 (1H, m), 3.19 - 3.3 (1H, m), 3.71 (2H, q), 3.93 - 4.04 (1H, m), 4.27 (3H, s), 4.35 - 4.48 (1H, m), 4.54 (1H, t), 7.96 (2H, s), 8.92 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 456
（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン−１−オン（実施例２．１）は、以下のように調製した：
ヒドラジン水和物（２３．５９ｍＬ、４８０．７５ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（２Ｌ）中のメチル３−アミノ−６−ブロモピラジン−２−カルボキシレート（１００ｇ、４１８．０４ｍｍｏｌ）の攪拌混合物に滴下して加えた。混合物を、窒素下、５０℃で加熱した。得られた濃厚懸濁液を５０℃で１６時間攪拌した。さらにヒドラジン（２．５ｍＬ）を１回で加え、懸濁液を５０℃でさらに２４時間攪拌した。エタノール（５００ｍＬ）を濃厚反応混合物に入れ、該混合物をそのまま室温まで冷却した。得られた懸濁液を濾過し、固体をエタノール（１Ｌ）で洗浄し、真空乾燥して、３−アミノ−６−ブロモピラジン−２−カルボヒドラジド（９８ｇ、定量的）をクリーム色の固体として得た：1H NMRスペクトル；(DMSO-d6) 4.52 (2H, s),  7.59 (2H, s), 8.30 (1H, s), 9.74 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+= 232。
【０４９６】
無水ピバル酸（１６５ｍＬ、８１５．３８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１．８Ｌ）中の３−アミノ−６−ブロモピラジン−２−カルボヒドラジド（１７２ｇ、７４１．２６ｍｍｏｌ）の攪拌混合物に加え、混合物を８０℃で１時間加熱した。反応物を放置して１６時間攪拌した。必要な黄色固体材料を濾過により単離した。濾液をＥｔＯＡｃ（２Ｌ）と水性重炭酸ナトリウム（２Ｌ）に分配した。有機相を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥した。溶液を濾過して濃縮すると橙色の粘性固体を得られ、これをＭＴＢＥ（２５０ｍＬ）で粉砕した。不溶性黄色固体を濾過により単離した。この材料は最初の固体と同一であることが示された。固体を組み合わせたものを５０℃の真空オーブンで３日間乾燥して、３−アミノ−６−ブロモ−Ｎ’−ピバロイルピラジン−２−カルボヒドラジド（２２４ｇ、９６％）を黄色固体として得た：1H NMRスペクトル：(DMSO-d6) 1.17 (9H, s), 7.62 (2H, s), 8.37 (1H, s), 9.42 - 9.56 (1H, m), 10.09 - 10.23 (1H, m)；質量スペクトル[M+H]+ = 318。
【０４９７】
ｐ−トルエンスルホニルクロリド（１６４ｇ、８６１．６０ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（２２００ｍＬ）中の３−アミノ−６−ブロモ−Ｎ’−ピバロイルピラジン−２−カルボヒドラジド（２２７ｇ、７１８．００ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２９７ｍＬ、１７９５．０１ｍｍｏｌ）の懸濁液に少しずつ加えた。混合物を７０℃で２時間攪拌した。反応物を一晩放置して室温まで冷却した。反応混合物を酢酸エチル（２Ｌ）と重炭酸ナトリウム溶液（２Ｌ）に分配した。有機層を飽和ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧濃縮した。得られた褐色／ベージュ色の固体を高温のＭＴＢＥ（１０００ｍＬ）で粉砕し、濾過により単離し、乾燥して、５−ブロモ−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−アミンを黄色固体（１８７ｇ、８７％）として得た。母液を蒸発乾固した。粗製固体をＭＴＢＥ（５００ｍＬ）で粉砕し、濾過し、１００ｍＬのＭＴＢＥで洗浄した。得られた固体を一晩風乾して、５−ブロモ−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−アミンの第２の収穫物(crop)（３６ｇ、１７％）を得た：1H NMRスペクトル：(DMSO-d6)  1.43 (9H, s), 7.70 (2H, s), 8.39 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+= 298。
【０４９８】
他の調製法では、５０℃において、ＭｅＣＮ（１０．８Ｌ）中の３−アミノ−６−ブロモ−Ｎ’−ピバロイルピラジン−２−カルボヒドラジド（２３０１ｇ、７．２８ｍｏｌ）に、ＤＩＰＥＡ（３．０４４Ｌ、１７．４８ｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホニルクロリド（１６６５ｇ、８．７３ｍｏｌ）を３０分間かけて少しずつ（約２８０ｇ×６）加えた。反応温度は、添加速度を制御することにより６５〜７０℃に維持した。添加終了後、反応混合物を７０℃で１時間攪拌した。混合物を室温に冷却し、５％ＮａＨＣＯ３（水性、２４．２Ｌ）で急冷した。得られた懸濁液を３０分間撹拌した後、濾過した。生成物を水（１４．８Ｌ）で洗浄し、吸引乾燥し、５０℃で１６時間乾燥した。生成物をＤＣＭ（１２Ｌ）に溶解し、相を分離した。有機相をシリカパッド（６ｋｇ）上に載せ、生成物を２０％ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ（８×１０Ｌ）で溶離した。複数の画分を含有する生成物を濃縮して、１９８７ｇ（収率９２％）をＨＰＬＣによる純度９９．８％で得た。
【０４９９】
窒素ガス流を、ＤＭＡ（１．２Ｌ）中の５−ブロモ−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−アミン（８９．３５ｇ、２３９．７５ｍｍｏｌ）の溶液に２０分間通した。ジシクロヘキシル（２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル−２−イル）ホスフィン（１１．４３ｇ、２３．９８ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（５．４９ｇ、５．９９ｍｍｏｌ）、亜鉛（１．５６８ｇ、２３．９８ｍｍｏｌ）およびジシアノ亜鉛（１６．８９ｇ、１４３．８５ｍｍｏｌ）を、攪拌混合物に逐次的に加えた。該混合物を１００℃に加熱し、１時間攪拌した。混合物を冷却し、ＤＣＭ（３Ｌ）と水（１Ｌ）に分配した。黒色混合物をセライトに通して濾過し、有機層を分離した。溶液を、水、次にブラインで洗浄した。該溶液を硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣をＭＴＢＥで粉砕し、濾過により単離し、ＭＴＢＥで洗浄した。濾過ケークを真空乾燥して、５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−カルボニトリル（５５．７ｇ、９５％）を淡橙色固体として得た：1H NMRスペクトル：(DMSO-d6) 1.46 (9H, s), 6.02 (1H, s), 8.38 (2H, s)；質量スペクトル[M-H]-=  242。
【０５００】
ＭＴＢＥでの粉砕の代わりに、生成物をヘプタン中でスラリー化した後、濾過し、乾燥してもよい。
【０５０１】
ヒドラジン水和物（８２ｍＬ、１．６９ｍｏｌ）をＩＰＡ（２００ｍＬ）中の５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−カルボニトリル（５５ｇ、２２５．１８ｍｍｏｌ）に加え、混合物を窒素下、５０℃で１６時間加熱した。混合物を氷浴で冷却した。得られた沈殿物を濾過により収集し、ＩＰＡおよびジエチルエーテルで洗浄し、恒量まで乾燥して、（Ｚ）−５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−カルボヒドラゾンアミド（４９．２ｇ、７９％）を黄色固体として得た：1H NMRスペクトル： (DMSO-d6) 1.45 (9H, s), 5.26 (2H, s), 5.58 (2H, s), 7.56 (2H, s), 8.75 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 277。
【０５０２】
Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（７４．３ｇ、１９５．４４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＡ（８００ｍＬ）中のＮ−Ｂｏｃ−イソニペコチン酸（４１．１ｇ、１７９．１５ｍｍｏｌ）および４−メチルモルホリン（３５．９ｍＬ、３２５．７４ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。混合物を１０分間攪拌した後、該溶液に（Ｚ）−５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−カルボヒドラゾンアミド（４５ｇ、１６２．８７ｍｍｏｌ）を１回で加えた（２２℃〜２７℃に発熱が観察された）。数分後、生成物が反応混合物から晶出した。反応混合物を容器から取り出し、シンターに通して濾過した。追加的なＤＭＡを容器の側面から洗浄生成物に加え（１５０ｍＬ）、これを濾過ケーク上に注ぎ入れた。イソプロパノール（６００ｍＬ）を容器に加え、容器中の生成物の残りを、激しい攪拌を用いてこの溶媒に懸濁させた。該イソプロパノール懸濁液を、ＤＭＡを吸引除去した後すぐに濾過ケークを洗浄するために用いた。濾過ケークを吸引乾燥した後、ＭＴＢＥで洗浄し、もう一度吸引乾燥した。濾過ケークを真空乾燥して、（Ｚ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（アミノ（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）メチレン）ヒドラジンカルボニル）ピペリジン−１−カルボキシレート（７６ｇ、９５％）を黄色固体として得た：1H NMRスペクトル：(DMSO-d6) 1.40 (9H, s), 1.46 (9H, s), 1.63 - 1.9 (2H, m), 2.33 - 2.6 (2H, m, DMSOシグナルにより不明瞭になった), 2.63 - 3.03 (2H, m), 3.18 - 3.48 (4H, m, 水シグナルにより不明瞭になった), 3.88 - 4.11 (2H, m), 6.43 (2H, s), 7.76 (2H, br), 8.84 (0.5H, s), 8.87 (0.5H, s), 9.85 (1H, s)；質量スペクトル[M+H]+ = 488
他の調製法では、Ｎ−Ｂｏｃ−イソニペコチン酸をｉｎ  ｓｉｔｕで以下のように作製することができる：イソニペコチン酸（８５８ｇ、３．７４ｍｏｌ）をＤＭＡ（２５．３Ｌ）に溶解し、４−メチルモルホリン（３９３ｍＬ、３．７４ｍｏｌ）を加えた。５分間撹拌し、クロロギ酸イソブチル（４８９ｍＬ、３．７４ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２５℃で２時間攪拌し、１５℃に冷却してから、（Ｚ）−５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−カルボヒドラゾンアミド（９４０ｇ、３．４ｍｏｌ）を１０分かけて少しずつ加えた。反応混合物を１５℃で１〜２時間攪拌した。水（２０．５Ｌ）を１時間かけて少しずつ加え、さらに１時間攪拌した後、濾過した。その後、濾過ケークを水（４×４Ｌ）で洗浄し、フィルター上で吸引乾燥した後、乾燥するまで５０℃の真空オーブンで乾燥して、望ましい生成物を得た。
【０５０３】
３Ｌの固定二重ジャケット付き容器中のジオキサン（５００ｍＬ）に酢酸（２００ｍＬ）を加え、溶液を窒素下で７０℃に加熱した。（Ｚ）−ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（アミノ（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）メチレン）ヒドラジンカルボニル）−ピペリジン−１−カルボキシレート（７４．５ｇ、１５２．８０ｍｍｏｌ）を、加温した混合物に少しずつ加えた。１０分後、温度を１００℃に上昇させた（わずかに還流した）。反応混合物を１００℃で１．５時間攪拌した後（懸濁液）、８０℃で一晩保持した（一晩保持した後、溶液が形成した）。得られた溶液を減圧濃縮した後、トルエンで希釈し、蒸発乾固し、トルエンで溶解し、再び濃縮した。残留オイルを多少の酢酸エチルと混合し、乾燥するまで濃縮した。固体が溶液から晶出し、これをＭＴＢＥ（２００ｍＬ）で粉砕し、濾過により単離した。濾過ケークを水およびＭＴＢＥで洗浄して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（５０ｇ、７０％）を灰色固体として得た。濾液を減圧濃縮して黄色固体を得た。この材料をＭＴＢＥで粉砕し、濾過した。濾過ケークを、酢酸エチル、次にＭＴＢＥで洗浄して、淡黄色固体として第２の収穫物を得た（４．９３ｇ、７％）。この材料は、第１の収穫物と同一であった：
【０５０４】
【数５】
0006307096.tif 000046
【０５０５】
１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン（１９．８７ｍＬ、１３２．９０ｍｍｏｌ）を、２−メチルＴＨＦ（３００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（４８ｇ、１０２．２３ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。５分後に暗色溶液が得られた。これを木炭で処理し、セライトパッドに通して濾過し、木炭と木炭を追加的な２−メチルＴＨＦ（１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を、３Ｌのジャケット付き固定容器内で、窒素雰囲気下、−５℃において、エアースターラーを用いて攪拌した。黄色懸濁液の攪拌を促すために２−メチルＴＨＦ（１００ｍＬ）を加えた。ヨードメタン（７．９６ｍＬ、１２７．７８ｍｍｏｌ）を１５分かけて滴下して加えた。該混合物を２時間攪拌し、反応混合物を室温まで温めた。１６時間後、追加的なヨードメタン（６ｍＬ）およびＤＢＵ（２０ｍＬ）を加え、１６時間にわたり攪拌を継続した。該混合物を水中に注ぎ入れ、５分間撹拌した。不溶性材料をベージュ色の固体として単離し、真空乾燥して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（２４．７７ｇ、５０．１％）を得た。母液を減圧濃縮し、残渣を、ＭＴＢＥを溶離液として用いてシリカ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。このようにして、望ましい生成物の第２の収穫物（１３．０４ｇ、２６％）を黄色固体として得た：1H NMRスペクトル：(DMSO-d6) 1.47 (9H, s), 1.51 (9H, s), 1.57 - 1.76 (2H, m), 1.94 - 2.1 (2H, m), 2.87 - 3.09 (3H, m), 3.9 - 4.08 (2H, m), 4.26 (3H, s), 7.97 (2H, br, s), 8.92 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 484。
【０５０６】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（３６．８１ｇ、７６．１２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の２，２，２−トリフルオロ酢酸（１００ｍＬ、１３０５．８７ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。混合物を室温で３時間攪拌した。該混合物を減圧濃縮した。残渣をＤＣＭ（１．５Ｌ）に溶解し、水（４００ｍＬ）中で激しく攪拌している濃アンモニア（１５０ｍＬ）に加えた。水性物をＤＣＭ（４００ｍＬ）で洗浄し、有機溶液を組み合わせたものを硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、乾燥するまで濃縮して、３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−メチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（３０．０ｇ、１０３％）を黄色固体として得た：
1H NMRスペクトル：(DMSO-d6) 1.44 (9H, s), 1.54 - 1.69 (2H, m), 1.8 - 1.92 (2H, m), 2.53 - 2.63 (2H, m), 2.68 - 2.83 (1H, m), 2.93 - 3.05 (2H, m), 4.19 (3H, s), 7.89 (2H, br), 8.85 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+= 384。
【０５０７】
Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（３０．４ｇ、８０．０４ｍｍｏｌ）を、２５℃において、アセトニトリル（２００ｍＬ）に溶解した３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン酸（１２．６７ｇ、７２．７６ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（２５．３ｍＬ、１４５．５２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に少しずつ加えた。得られた溶液を２５℃で２０分間攪拌した後、３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−メチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（３０ｇ、７２．７６ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、最後のポーションをアセトニトリル（１００ｍＬ）中のスラリーとして混合物中に洗い流した。１時間攪拌した後、沈殿物を濾過により収集し、アセトニトリルで洗浄し、真空乾燥して、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン−１−オン（３５．０ｇ、８９％）をベージュ色の固体として得た。濾液をＤＣＭ（６００ｍＬ）で希釈し、水洗し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濃縮した。残渣を、ジクロロメタンを用いて２〜２．５％のメタノール中の７Ｎアンモニアの勾配で溶離するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物の第２の収穫物（３．３１ｇ、６．１３ｍｍｏｌ、８．４３％）も、クリーム色固体として得られた。両方の試料を組み合わせてベージュ色の固体を得た：1H NMRスペクトル：(DMSO-d6) 1.44 (9H, s), 1.52 - 1.79 (4H, m), 1.88 - 2. 04 (2H, m), 2.53 - 2.73 (2H, m), 2.73 - 2.87 (1H, m), 2.91 - 3.05 (1H, m), 3.13 - 3.24 (1H, m), 3.37 - 3.47 (1H, m), 3.53 - 3.65 (1H, m), 3.7 - 3.8 (1H, m), 3.81 - 3.89 (1H, m), 3.89 - 3.99 (1H, m), 4.20 (3H, s), 4.29 - 4.4 (1H, m), 4.54 - 4.61 (1H, m), 7.60 - 8.20 (2H, br), 8.85 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ =  540。
実施例３
１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン
【０５０８】
【化２５】
0006307096.tif 000047
【０５０９】
ピリジン４−メチルベンゼンスルホネート（１１．６２ｇ、４６．２４ｍｍｏｌ）を、窒素下でメタノール（１Ｌ）中の１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン−１−オン（１２８ｇ、２３１．１９ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。混合物を６０℃で１．５時間攪拌した。該混合物は５分後に溶解性を示した。該混合物を５０℃で一晩保持すると、その間に沈殿物が形成した。固体材料を濾過により単離し、水およびアセトニトリルで洗浄した。この材料はまだ前段階からの少量の不純物を含有しており、さらに精製する必要があった。該材料をジクロロメタンに溶解し、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（０％メタノール／ＤＣＭ〜１０％メタノール／ＤＣＭ）により精製した。このようにして、望ましい生成物である１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン（実施例３）（９２ｇ、８５％）をクリーム色固体として単離した（フォームＡ）：1H NMRスペクトル：(DMSO-d6) 1.4 - 1.51 (12H, m), 1.51 - 1.78 (2H, m), 1.89 - 2.05 (2H, m), 2.72 - 2.86 (1H, m), 2.91 - 3.05 (1H, m), 3.12 - 3.24 (1H, m), 3.64 (2H, q), 3.83 - 4.01 (1H, m), 4.29 - 4.41 (1H, m), 4.47 (1H, t), 4.58 (2H, q), 8.26 (2H, s), 8.85 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 470。
【０５１０】
１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン−１−オン（実施例３．１）は、以下のように調製した：
１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン（７６ｍＬ、５１１．１４ｍｍｏｌ）を、２−メチルＴＨＦ（１．２Ｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（１５０ｇ、３１９．４６ｍｍｏｌ）の懸濁液に加えた。ヨードエタン（４６ｍＬ、５７５．０３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を３５℃で１６時間攪拌した。さらにヨードエタン（４６ｍＬ、５７５．０３ｍｍｏｌ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン（７６ｍＬ、５１１．１４ｍｍｏｌ）を加え、攪拌を３５℃で２４時間継続した。混合物を水中に注ぎ入れ、不溶性材料を濾過により単離し、水およびＭＴＢＥで洗浄し、真空乾燥して、ｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（１１６ｇ、７３．０％）を黄色固体として得た。濾液をＤＣＭで抽出し、有機溶液を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧濃縮した。残渣を、勾配溶離（３０％  ＭＴＢＥ／ヘプタン〜１００％  ＭＴＢＥ）を用いてシリカ上でのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。このようにして、望ましい生成物の第２の収穫物（１２ｇ、２４．１２ｍｍｏｌ、７．５５％）を黄色固体として単離し、これを後で第１の収穫物と組み合わせた：1H NMRスペクトル：(DMSO-d6) 1.41 (9H, s), 1.44 (9H, s), 1.48 (3H, t), 1.52 - 1.69 (2H, m), 1.87 - 2.04 (2H, m), 2.79 - 3.03 (3H, m), 3.86 - 4.03 (2H, m), 4.59 (2H, q), 7.89 (2H, s), 8.85 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+= 498。
【０５１１】
ＴＨＦも上記反応に適した溶媒である可能性がある。
【０５１２】
ＴＦＡ（４００ｍＬ）を、ＤＣＭ（４００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（１２６ｇ、２５３．２２ｍｍｏｌ）の溶液に少しずつ加えた。混合物を室温で１６時間攪拌した。該混合物を減圧濃縮し、ＤＣＭ（１Ｌ）に溶解し、０℃において、水中の濃水性アンモニア（５００ｍＬ）の激しく攪拌している溶液に徐々に加えた。有機溶液を水性物から分離し、減圧濃縮＊して、３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−エチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（１０１ｇ、１００％）を黄色固体として得た：1H NMRスペクトル：(DMSO-d6) 1.4 - 1.52 (12H, m), 1.57 - 1.73 (2H, m), 1.83 - 1.93 (2H, m), 2.57 - 2.7 (2H, m), 2.71 - 2.84 (1H, m), 2.96 - 3.09 (2H, m), 4.58 (2H, q), 8.06 (2H, s), 8.84 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 398。
＊同様の規模（約１７０ｇの出発材料）での他の実験では、以下の単離手順を用いた：層を分離し、上層（固体を含むエマルション）を濾過した。固体をＤＣＭ（０．５Ｌ）で洗浄し、濾液を分液漏斗に移した。層を分離し、水層をＤＣＭ（０．５Ｌ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮した。生成物を５０℃で一晩乾燥した（８１．７５ｇ）。抽出物からの固体を室温において水（２００ｍＬ）中で３０分間スラリー化し、濾過により取り出した。生成物を５０℃で真空乾燥した（６１．８ｇ）。
【０５１３】
他の変法は以下のとおりである；
ＤＣＭ（９Ｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（３００９．５ｇ、６．０５ｍｏｌ）の懸濁液を、Ｎ２下で５〜１０℃に冷却した。温度を＜３０℃に維持しつつ、ＴＦＡ（９Ｌ）を懸濁液に少しずつ加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌した。混合物を濃縮し、得られた残渣を水（３０Ｌ）に溶解し、０〜５℃で３５％アンモニア水溶液（１２Ｌ）に徐々に加えた。懸濁液を３０分間撹拌した後、生成物を濾過により取り出し、水（２×６Ｌ）で洗浄した。生成物を５０℃で２日間にわたり真空乾燥した（２４９６ｇ）。
【０５１４】
Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、１０６ｇ、２７９．５１ｍｍｏｌ）を、２５℃において、アセトニトリル（６００ｍＬ）に溶解した３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン酸（４４．３ｇ、２５４．１０ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（８９ｍＬ、５０８．２１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に少しずつ加えた。得られた溶液を２５℃で２０分間攪拌した後、３−（５-ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−エチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（１０１ｇ、２５４．１０ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、最後のポーションをアセトニトリル（３００ｍＬ）中のスラリーとして混合物中に洗い流した。１時間攪拌した後、沈殿物を濾過により収集し、アセトニトリルで洗浄し、真空乾燥して、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン−１−オン（１２８ｇ、９１％）をベージュ色の固体として得た。濾液をＤＣＭ（６００ｍＬ）で希釈し、水洗し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濃縮した。残渣を、ジクロロメタンを用いて２〜２．５％のメタノール中の７Ｎアンモニアの勾配で溶離するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。望ましい生成物の第２の収穫物（４０ｇ、７２．２ｍｍｏｌ、２８．４％）をクリーム色固体として得た。これを第１の収穫物と組み合わせた：1H NMRスペクトル：(DMSO-d6) 1.29 - 1.48 (16H, m), 1.48 - 1.75 (4H, m), 1.83 - 1.99 (2H, m), 2.48 - 2.68 (2H, m), 2.68 - 2.79 (1H, m), 2.87 - 2.99 (1H, m), 3.07 - 3.19 (1H, m), 3.32 - 3.42 (1H, m), 3.47 - 3.6 (1H, m), 3.64 - 3.75 (1H, m), 3.75 - 3.84 (1H, m), 3.84 - 3.95 (1H, m), 4.24 - 4.39 (1H, m), 4.47 - 4.6 (3H, m), 7.84 (2H, s), 8.79 (1H, s)：質量スペクトル [M+Na]+ = 577。
他の調製法：
ＴＨＦ（５５２ｍＬ）中の３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン酸（４８．８０ｇ、０．２７７４ｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（８６．９６ｍＬ、０．４９９３ｍｏｌ）の溶液に、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１１５．７３ｇ、０．３０５１ｍｏｌ）を、窒素下、室温において少しずつ加えた。得られた混合物を２０分間攪拌した後、３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−エチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（１２２．５ｇ（１１０．２５ｇ活性）、０．２７７４ｍｏｌ）を１時間かけて少しずつ加えた。３．５時間後、混合物を濃縮し、残渣を室温で１５分間にわたりＭｅＣＮ（２７５ｍＬ）中でスラリー化した。生成物を濾過により取り出し、ＭｅＣＮ（３×１１０ｍＬ）で洗浄し、５０℃で一晩真空乾燥した。これにより、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン−１−オン（１３１．９ｇ、９６％）を得た。さらに他の調製法では、ＴＨＦ中のＨＢＴＵ（Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）を、ＨＡＴＵの代わりにカップリング剤として用いてもよい。
実施例３の他の調製法
メタノール（１０４５ｍＬ）中の１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン−１−オン（１３１．９ｇ、０．２３８２ｍｏｌ）の懸濁液に、Ｎ２下でｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（１１．９７ｇ、４７．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、６０℃で５．５時間、その後５０℃で一晩攪拌した。反応混合物を０℃に冷却し、固体を濾過により取り出した。生成物を室温において水（２５０ｍＬ）中で２０分間スラリー化し、濾過により取り出し、水（３×４０ｍＬ）で洗浄し、５０℃で真空乾燥した。これにより、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン（２１．４ｇ）をフォームＡとして得た（以下参照）。
【０５１５】
メタノール液を濃縮し、得られた固体を室温において水（０．６Ｌ）中で２０分間スラリー化した。固体を濾過により単離し、水（３×１００ｍＬ）で洗浄した。濾過ケークの２回目のスラリー化を、水（０．５Ｌ）中でさらに２０分間行った。生成物を濾過により単離し、水（１００ｍＬ）で洗浄し、５０℃で真空乾燥した。これにより、８１．９ｇの１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン（８１．９ｇ）をフォームＡとして得た。
【０５１６】
両方の収穫物を組み合わせ（１０３．３ｇ）、フォームＢ（１６．６８ｇ）を種入れ(seed)し、室温においてＭｅＣＮ（８２６ｍＬ）中で一晩スラリー化した。これにより、１１７．４ｇの１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンを淡黄色固体（１１７．４ｇ）、フォームＢ（以下参照）として得た。この材料を、ヘプタン（７．５相対体積）中で１時間スラリー化することにより、さらに精製した。混合物を濾過し、フィルター上で吸引乾燥し、５０℃の真空オーブンで一晩乾燥して、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン（１０２．５ｇ）をフォームＢとして得た。
【０５１７】
フォームＢは、種入れすることなく、ＭｅＣＮ中でフォームＡをスラリー化することにより作製することもできる。
【０５１８】
フォームＡまたはＢは、以下のようにフォームＣに転化することもできる：
ＩＰＡ（１２体積）中の１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オン（例えば、先に概説したプロセスにより作製したフォームＢ）の懸濁液を、固体が溶解するまで加熱還流した。溶液を熱濾過した後、室温に冷却した。これにより、フォームＣとして、１−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシプロパン−１−オンを淡黄色固体（９９．３ｇ、９７％）として得た。
【０５１９】
フォームＣは、以下のようにフォームＢに転化することもできる。
【０５２０】
１０Ｌのフランジフラスコ中で、ＭＩＢＫ（７９００ｍＬ）中のフォームＣ（３７７．８ｇ  ポーション１）を１１０〜１１５℃に加熱して溶液を得た。該溶液をそのまま９７〜１０３℃に冷却し、−１５℃で攪拌しているアセトニトリル（８２２０ｍＬ）中のフォームＢの種（０．８ｇ）を含有する５０Ｌ容器中に速やかに研磨濾過(polish filter)した。添加中、５０Ｌ容器中の温度は、ジャケット冷却により−１５〜２５℃に維持した。ＭＩＢＫに溶解した化合物の他の３つのポーションを、同様の方法により加えた。得られたスラリーにフォームＢの種（０．８ｇ）を加えた後、混合物を１０〜２０℃で一晩攪拌した。プロセス中、分析により望ましい形態（フォームＢ）が確認され、フォームＣまたは可視的非晶質は確認されなかった。混合物を濾過し、アセトニトリル（３３４０ｍＬ）で洗浄した。固体を、恒量が得られるまで２日間オーブン乾燥した（乾燥中に、固体は、粉末およびサイズが約１ｍｍ〜約３〜４ｍｍの小さな塊の混合物に崩壊した）。収量＝１５３２．８ｇ（９３．５％）
３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン酸は、以下のように調製した：
窒素下、０℃において、メタノール（２．４Ｌ）および濃硫酸（４４．４ｍＬ、８３２．６１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ベータ−プロピオラクトン（１７５ｍＬ、２．７８ｍｏｌ）を滴下して加えた。この溶液をそのまま室温で２日間攪拌した。反応混合物を１０℃に冷却した後、重炭酸ナトリウム（１４５ｇ、１．７２ｍｏｌ）を少しずつ加え、得られた懸濁液を放置して室温で７５分間攪拌した。この溶液を濾過し、濾過ケークをメタノール（８００ｍＬ）で洗浄した。濾液を蒸発させてオイルを得、これをジクロロメタン（１．２Ｌ）に再溶解し、６０分間攪拌した後、再び濾過した。この溶液を濾過した後、蒸発させて、３−ヒドロキシプロパン酸メチル（２１９ｇ、７６％）をオイルとして得た。1H NMRスペクトル： (CDCl3) 2.50 (2H, t), 3.63 (3H, s), 3.78 (2H, t)。
【０５２１】
ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（７．６５ｇ、３０．４５ｍｍｏｌ）を、窒素下の室温においてジクロロメタン（６５０ｍＬ）中の３−ヒドロキシプロパン酸メチル（６３．４ｇ、６０９．００ｍｍｏｌ）および３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（７８ｍＬ、８５２．６０ｍｍｏｌ）の透明溶液に加えて、濁った溶液を得た。これを、そのまま室温で一晩攪拌した。反応混合物を水（２５０ｍＬ）およびブライン（２５０ｍＬ）で洗浄した後、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、オイルを得た。この粗生成物を、ヘプタン中の１５〜３０％  ＥｔＯＡｃの溶離勾配でフラッシュシリカクロマトグラフィーにより精製した。純粋な画分を蒸発乾固して、メチル３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパノエート（６７．７ｇ、５９．０％）を無色オイルとして得た：1H NMRスペクトル：(CDCl3) 1.47 (4H, dddd), 1.55 - 1.84 (2H, m), 2.55 (2H, t), 3.33 - 3.53 (1H, m), 3.53 - 3.7 (4H, m), 3.78 (1H, ddd), 3.93 (1H, dt), 4.42 - 4.72 (1H, m)；質量スペクトル [MH]+= 189。
【０５２２】
水酸化ナトリウム（２Ｍ、３４９ｍＬ、６９７．５８ｍｍｏｌ）を、室温において、ＴＨＦ（６８０ｍＬ）中のメチル３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパノエート（６７．６８ｇ、３５９．５８ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を室温で３時間攪拌した。ＴＨＦを真空除去し、つぎに水層を酢酸エチル（２６０ｍＬ）で洗浄した後、０℃に冷却し、塩酸（２Ｍ）の添加によりｐＨ５に慎重に酸性化した。生成物を酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した後、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン酸（５７．０ｇ、９１％）を透明オイルとして得た。この材料を酢酸エチル（７５０ｍＬ）に溶解した後、水（３×２５０ｍＬ）およびブライン（２５０ｍＬ）で洗浄して、残存する酢酸を除去した。有機溶液を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパン酸（４５．６７ｇ、７２．９％）を無色オイルとして得た：1H NMRスペクトル：1H NMR (CDCl3) 1.43 - 1.67 (4H, m), 1.65 - 1.95 (2H, m), 2.68 (2H, t), 3.48 - 3.58 (1H, m), 3.73 (1H, dt), 3.88 (1H, ddd), 4.02 (1H, dt), 4.59 - 4.7 (1H, m)；質量スペクトル [M-H]- = 173。上記で単離した実施例３は、本明細書中ではフォームＡ、ＢおよびＣと記載する、３つの異なる結晶形にある結晶質固体であった。
【０５２３】
実施例３のフォームＡの結晶構造は、ＸＲＰＤおよびＤＳＣにより特性決定することができる。
【０５２４】
これらの技術を実施するための方法は、実施例１について記載したとおりである。
【０５２５】
【表１５】
0006307096.tif 000048
【０５２６】
実施例３フォームＡのＸＲＰＤを図３に示す。
【０５２７】
実施例３フォームＡのＤＳＣ分析は、２７．０℃で開始し６３．０℃にピークを有する初期吸熱を示している。以下の温度に、開始およびピークを有する他の吸熱シフトが見られる；１６６．５℃および１６８．７℃、１７２．２℃および１７３．２℃、ならびに１７４．８℃の最終融解および１７５．７℃のピーク（図４）。
【０５２８】
したがって、ＤＳＣ分析は、実施例３フォームＡが、約２７．０℃で脱溶媒和を開始し約６３．０℃にピークを有する溶媒和材料であることを示している。
【０５２９】
実施例３（フォームＡ）のＸ線粉末回折スペクトルは、該材料が結晶質であることを示した。この材料は２８．０℃の脱溶媒和点（開始）を有していた。
【０５３０】
実施例３は、本明細書中でフォームＢとよぶ他の多形形態で存在することもできる。フォームＢの調製法は先に記載した。
【０５３１】
この材料は１７２．５℃の融点（開始）を有していた。
【０５３２】
本発明の他の観点では、実施例３の試料をアセトニトリル中でスラリー化することにより、実施例３のフォームＢを作製するためのプロセスを提供する。本発明の他の観点では、実施例３のフォームＢを、ＭＩＢＫ中の実施例３フォームＣの溶液から作製するためのプロセスを提供する。
【０５３３】
【表１６】
0006307096.tif 000049
【０５３４】
実施例３フォームＢのＸＲＰＤを図５に示す。
【０５３５】
実施例３フォームＢのＤＳＣ分析は、１７２．５℃で開始し１７４．２℃にピークを有する融解吸熱を示している（図６）。
【０５３６】
したがって、ＤＳＣ分析は、実施例３Ｂが、約１７２．５℃で融解を開始し約１７４．２℃にピークを有する高融点固体であることを示している。
【０５３７】
実施例３は、本明細書中ではフォームＣとよぶ第３の結晶形で存在することもできる。例えばフォームＢ材料からフォームＣ材料をイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）からの晶出により作製するためのプロセスを、先に記載している。
【０５３８】
したがって、本発明の他の観点において、実施例３をＩＰＡから晶出させることにより実施例３フォームＣを作製するためのプロセスを提供する。
【０５３９】
実施例３フォームＣは、ＣｕＫａ線を用いて測定して以下の２θ値の少なくとも１つを提供することを特徴とする：６．９および１２．３。実施例３フォームＣは、実質的に図７に示すようなＸ線粉末回折パターンを提供することを特徴とする。１０個のＸ線粉末回折ピークを以下に示す：
【０５４０】
【表１７】
0006307096.tif 000050
【０５４１】
実施例３フォームＣのＤＳＣ分析は、１８３．０℃で開始し１８５．６℃にピークを有する融解吸熱を示している（図８）。
【０５４２】
したがって、ＤＳＣ分析は、実施例３フォームＣが、約１８３．０℃で融解を開始し約１８５．６℃にピークを有する高融点固体であることを示している。
フォームＣの分析に用いた技術の詳細
Ｘ線粉末回折
分析機器：Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｕｂｉｘ。
【０５４３】
Ｘ線粉末ディフラクトグラムは、結晶質材料の試料をＰａｎａｌｙｔｉｃａｌシリコン単結晶（ＳＳＣ）ウエハマウント上に載せ、顕微鏡スライドを用いて該試料を薄層へ広げることにより決定した。試料を１分あたり３０回転でスピンさせ（計数統計を向上させるために）、４５ｋＶおよび４０ｍＡで操作した銅ロングファインフォーカス管により発生させた波長１．５４１８オングストロームのＸ線を照射した。Ｘ線ビームを、０．０４ｒａｄのソーラスリット、次に２０ｍｍに設定した自動可変発散スッリト、最後に２０ｍｍのビームマスクに通した。反射した放射線を２０ｍｍの散乱防止スリットと０．０４ｒａｄのソーラスリットに通して方向付けた。試料を、シータ−シータモードで２度〜４０度の２シータ範囲にわたり、０．００２５０６７°の２シータ増分につき１．９０５秒間暴露した（連続走査モード）。該機器にＸ−Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ検出器を備え付けた。対照およびデータの捕捉には、Ｄｅｌｌ  Ｐｅｎｔｉｕｍ  ４ＨＴ  ＷｏｒｋｓｔａｔｉｏｎをＸ’Ｐｅｒｔ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙソフトウェアで操作して用いた。Ｘ線粉末回折分野の技術者なら、ピークの相対強度が、例えば、３０ミクロンより大きいサイズの粒子や試料の分析に影響を及ぼしうる非ユニタリーなアスペクト比により影響を受ける可能性があることを、理解するであろう。当業者は、反射の位置が、回折計の中で試料が置かれる位置の正確な高さと回折計のゼロ較正により影響を受ける可能性があることも、理解するであろう。試料表面の平面性もわずかな影響を有する可能性がある。したがって、提示する回折パターンデータは、絶対的な値とみなすべきではない。
示差走査熱量測定
分析機器：ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｑ１０００  ＤＳＣ。
【０５４４】
典型的には、蓋付きの標準的なアルミニウム製パンに入れた５ｍｇ未満の材料を、１分あたり１０℃の一定の加熱速度で２５℃〜３００℃の温度範囲にわたり加熱した。窒素を用いるパージガスを、１分あたり５０ｍＬの流速で用いた。
実施例４
（３Ｒ）−１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−ブタン−１−オン
【０５４５】
【化２６】
0006307096.tif 000051
【０５４６】
２−（１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルイソウロニウムテトラフルオロボレート（２０１ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中の３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−メチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（２００ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ、実施例１に記載）、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（０．２７３ｍＬ、１．５６ｍｍｏｌ）および（Ｒ）−３−ヒドロキシブタン酸（６５．２ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に加えた。得られた懸濁液を室温で２時間攪拌した。得られた混合物を、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ逆相カラム（Ｃ−１８、５ミクロンシリカ、直径３０ｍｍ、長さ１５０ｍｍ、流速６０ｍＬ／分）を用い、水（炭酸アンモニウムを含有する（２ｇ／Ｌ））中の３１％アセトニトリルの無勾配混合物を用いて、分取ＨＰＬＣにより精製した。望ましい化合物を含有する画分を蒸発乾固して、淡黄色固体を得た。この固体を室温においてアセトニトリル（３ｍＬ）中で攪拌した。得られた固体を濾過し、冷アセトニトリルで洗浄し、乾燥して、表題化合物（１２５ｍｇ、５１．０％）を淡黄色固体として得た。
1H NMRスペクトル：(CDCl3) 1.24 (3H, d), 1.52 (9H, s), 1.85 (2H, m), 2.10 (2H, m), 2.35 (1H, dd), 2.55 (1H, d), 2.90 (1H, m), 3.05 (1H, m), 3.20 (1H, m), 3.90 (1H, m), 4.25 (1H, m), 4.31 (3H, s), 4.6 (1H, m), 9.03 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 470。
実施例５
（３Ｓ）−１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−ブタン−１−オン
【０５４７】
【化２７】
0006307096.tif 000052
【０５４８】
実施例４と同様の手順を用いて、３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−メチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミンを（Ｓ）−３−ヒドロキシブタン酸と反応させて、表題化合物（１６７ｍｇ、６８．２％）を淡黄色固体として得た。
1H NMRスペクトル：(CDCl3) 1.24 (3H, d), 1.52 (9H, s), 1.85 (2H, m), 2.10 (2H, m), 2.35 (1H, dd), 2.55 (1H, d), 2.90 (1H, m), 3.05 (1H, m), 3.20 (1H, m), 3.90 (1H, m), 4.25 (1H, m), 4.31 (3H, s), 4.6 (1H, m), 9.03 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 470。
実施例６
（２Ｒ）−１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−ヒドロキシ−２−メチル−プロパン−１−オン
【０５４９】
【化２８】
0006307096.tif 000053
【０５５０】
実施例４と同様の手順を用いて、３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−メチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミンを（Ｒ）−３−ヒドロキシ−２−メチルプロパン酸と反応させて、表題化合物（８７ｍｇ、４７．４％）を淡黄色固体として得た。
1H NMRスペクトル：(CDCl3) 1.55 (9H, s), 1.61 (3H, s br), 1.8-2.0 (2H, m), 2.10-2.25 (2H, m), 2.90 (2H, m), 3.10 (1H, m), 3.3 (2H, m), 3.77 (2H, m), 4.33 (3H, s), 4.6 (1H, m), 9.05 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 470。
実施例７
１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−２−ヒドロキシ−２−メチル−プロパン−１−オン
【０５５１】
【化２９】
0006307096.tif 000054
【０５５２】
１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（１００ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で、ＮＭＰ（１．２ｍＬ）に溶解した２−ヒドロキシ−２−メチルプロパン酸（３８．０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−メチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）および２−ヒドロキシ−ピリジンＮ−オキシド（５７．９ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）に１回で加えた。得られた溶液を２５℃で３時間攪拌した。ピリジン（１００μＬ、１．２４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１８時間攪拌した。追加的な２−ヒドロキシピリジン１−オキシド（５７．９ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（１００ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を加えた。その後、混合物を４８時間かけて最高７０℃に加熱し、さらに２−ヒドロキシ−２−メチルプロパン酸（１５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（５０．０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）および２−ヒドロキシピリジン１−オキシド（２５．０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を加えた後、混合物を７０℃に８時間維持した。該溶液を、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ逆相カラム（Ｃ−１８、５ミクロンシリカ、直径１９ｍｍ、長さ１００ｍｍ、流速４０ｍＬ／分）および極性が低下する水（０．２％炭酸アンモニウムを含有する）とアセトニトリルの混合物を溶離液として用いて分取ＨＰＬＣにより精製して、表題化合物（７１ｍｇ、５８％）を淡黄色固体として得た。
1H NMRスペクトル：(CDCl3) 1.55 (15H, s br), 1.90 (2H, m), 2.15 (2H, m), 3.05-3.3 (4H, m), 4.32 (3H, s), 4.6 (1H, m), 9.03 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 470。
実施例８
３−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−オキソ−プロパン酸
【０５５３】
【化３０】
0006307096.tif 000055
【０５５４】
エチル３−クロロ−３−オキソプロパノエート（０．０３７ｍＬ、０．２９ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（１．５ｍＬ）に溶解した３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−メチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．０４７ｍＬ、０．３４ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、窒素下、０℃において２分間かけて滴下して加えた。混合物を０℃で１０分間攪拌した後、そのまま室温まで温め、１時間攪拌した。該混合物を蒸発させ、ＤＭＦに溶解した；白色固体を濾過により取り出し、濾液を、水（０．２％炭酸アンモニウムを含有する）とアセトニトリルの混合物で溶離するＷａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｔｅｒｒａ逆相カラムを用いて分取ＨＰＬＣにより精製して、エチル３−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−オキソプロパノエート（８０ｍｇ、６１．７％）を黄色固体として得た。この材料をＴＨＦ（２ｍＬ）に懸濁させた。２Ｎ水酸化ナトリウム（０．２３５ｍＬ、０．４７ｍｍｏｌ）および水（０．５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で一晩攪拌した。２Ｎ塩酸（２３０μＬ）を混合物に加えた。溶媒を蒸発させた。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）および水（５ｍＬ）で希釈した。有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥した。溶媒を蒸発させた。得られたフォームをエーテル中で粉砕した。得られた黄色固体を濾過し、乾燥し、アセトニトリル（３ｍＬ）中で粉砕した。黄色固体を濾過により収集し、４０℃で乾燥して、表題化合物（５０ｍｇ、６８％）を黄色固体として得た。
1H NMRスペクトル：(DMSO-d6) 1.46 (9H, s), 1.58 (1H, m), 1.74 (1H, m), 1.98 (2H, m), 2.84 (1H, m), 3.0 (1H, m), 3.21 (1H, m), 3.46 (2H, m), 3.83 (1H, m), 4.22 (3H, s), 4.34 (1H, m), 7.8-8.2 (1H, m), 8.87 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 470。
実施例９：３−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−エチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−３−オキソ−プロパン酸
【０５５５】
【化３１】
0006307096.tif 000056
【０５５６】
Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（４７４ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解した３−エトキシ−３−オキソプロパン酸（１５０ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（０．３９４ｍＬ、２．２６ｍｍｏｌ）および３−（５−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−エチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（４５０ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、５０℃において３０秒かけて少しずつ加えた。得られた溶液を１分後（反応終了）サンプリングし、そのまま速やかに周囲温度まで冷却した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、水（２０ｍＬ）および飽和ブライン（２０ｍＬ）で順次洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過し、蒸発させて、粗製エチル３−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−オキソプロパノエート（８５０ｍｇ）を得た。
該材料の一部（７８０ｍｇ）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶解した。この溶液に、２Ｎ水性水酸化ナトリウム（２．３ｍＬ、４．５７ｍｍｏｌ）および水（５ｍＬ）、続いてメタノール（５ｍＬ）を加えて、透明溶液を得た。混合物を室温で３時間攪拌した。ＴＨＦを蒸発させた。水層を２Ｎ水性塩酸（２．５ｍＬ）でｐＨ３に酸性化した。ジクロロメタン（５０ｍＬ）を加え、有機相を抽出した。該有機相をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥した。溶媒を蒸発させた。得られたガムを、極性が低下する水（１％アンモニアを含有する）とアセトニトリルの混合物を溶離液として用い、分取ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤカラム、５μシリカ、直径５０ｍｍ、長さ１００ｍｍ）により精製した。望ましい化合物を含有する画分を蒸発乾固して、純粋なアンモニウム塩を得た。これを水中で可溶化し、２Ｎ塩酸（約０．３ｍＬ）でｐＨ３に酸性化した。ジクロロメタン（５０ｍＬ）を加え、有機相を分離し、ブライン（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥した。濾過後、得られた溶液を蒸発乾固し、残渣をジエチルエーテル（５ｍＬ）で粉砕し、濾過して、３−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）−３−オキソプロパン酸（１９５ｍｇ、２６．５％）をクリーム色固体として得た。1H NMRスペクトル：(DMSO-d6) 1.45 (9H, s), 1.48 (3H, m), 1.55 - 1.62 (1H, m), 1.70 - 1.80 (1H, m), 1.95 - 2.05 (2H, m), 2.80 - 2.90 (1H, m), 2.95 - 3.05 (1H, m), 3.15 - 3.25 (1H, m), 3.45 (2H, s), 3.78 - 3.85 (1H, m), 4.30 - 4.40 (1H, m), 4.55 - 4.65 (2H, m), 7.80 - 8.00 (2H, br s), 8.88 (1H, s), 12.60 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+= 484
実施例１０：（２Ｓ）−１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−エチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−２，３−ジヒドロキシ−プロパン−１−オン
ＤＣＭ（５ｍＬ）中の３−（５−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−エチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミン（２５７ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ、ＴＦＡ塩）、カリウム（Ｓ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボキシレート（１０１ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（１０５ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）の混合物に、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物（８５ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１９４ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間攪拌した。水を混合物に加え、該混合物をＤＣＭで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、濃縮して、（Ｓ）−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メタノン（３２０ｍｇ）を得た。質量スペクトル [M+H]+ = 526。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の（Ｓ）−（４−（５−（５−アミノ−６−（５−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル）−１−エチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピペリジン−１−イル）（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−イル）メタノン（３２０ｍｇ）の混合物に、室温でＴＦＡ（１．６ｍＬ、２０．７７ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。混合物を室温で１６時間攪拌し、濃縮し、極性が低下する水（０．１％  ＮＨ３を含有する）とＭｅＣＮの混合物を溶離液として用いて分取ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤカラム、５μシリカ、直径１９ｍｍ、長さ１００ｍｍ）により精製した。望ましい化合物を含有する画分を蒸発乾固して、表題化合物（１４２ｍｇ、４８％）を白色固体として得た：1H NMRスペクトル (400 Hz, DMSO-d6, 30oC): 1.45 (12H, m), 1.56 (1H, m), 1.70 (1H, m), 1.98 (2H, m), 2.85 (1H, m),  3.00 (1H, m), 3.20 (1H, m), 3.45 (1H, s), 3.55 (1H, s), 4.05 (1H, m), 4.35 (2H, m), 4.60 (2H, m), 4.70 (1H, m), 4.85 (1H, m), 7.90 (2H, m), 8.85 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 486。
実施例１１：（２Ｒ）−１−［４−［５−［５−アミノ−６−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）ピラジン−２−イル］−１−エチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−１−ピペリジル］−２，３−ジヒドロキシ−プロパン−１−オン
３−（５−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）−５−（１−エチル−３−（ピペリジン−４−イル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）ピラジン−２−アミンを、実施例１０に記載した手順と同様の手順を用いてカリウム（Ｒ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−カルボキシレートと反応させて、表題化合物（０．１４５ｇ、４０％）を固体として得た：1H NMRスペクトル (400 Hz, DMSO-d6, 30oC): 1.45 (12H, m), 1.60 (2H, m), 1.98 (2H, m), 2.85 (1H, m),  3.00 (1H, m), 3.17 (1H, m), 3.45 (1H, s), 3.55 (1H, s), 4.05 (1H, m), 4.35 (2H, m), 4.60 (2H, m), 4.70 (1H, m), 4.85 (1H, m), 7.90 (2H, m), 8.85 (1H, s)；質量スペクトル [M+H]+ = 486。
【図１】
0006307096.tif 000059
【図２】
0006307096.tif 000060
【図３】
0006307096.tif 000061
【図４】
0006307096.tif 000062
【図５】
0006307096.tif 000063
【図６】
0006307096.tif 000064
【図７】
0006307096.tif 000065
【図８】
0006307096.tif 000066
【図９】
0006307096.tif 000067
【図１０】
0006307096.tif 000068
【図１１】
0006307096.tif 000069
【図１２】
0006307096.tif 000070
【図１３】
0006307096.tif 000071