(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（a）微生物用の栄養培地を含有するベースと、
（b）上記栄養培地上に重なる多孔質膜であって、該栄養培地は、ベースの上方に隆起した平らな増殖領域と、平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域とを有し、該栄養培地は増殖領域で微生物の増殖を維持することが可能である、多孔質膜と、
（c）上記膜及び栄養培地を覆うように上記ベースに嵌合する蓋と
を備える細胞培養デバイス。
【請求項２】
（i）前記増殖領域が、サンプル収集前に100から450ミクロンの平坦度、又はサンプル収集後に300から600ミクロン以下の平坦度を有するか；
（ii）前記膜が周辺領域において多孔質ではないか；
（iii）前記膜が、前記ベースにシールされるフィルムによって、ベースに取着されているか；
（iv）前記ベース及び周辺領域に付着されたフィルムであって、前記膜をベースに接着させるフィルムをさらに含むか；又は
（v）前記ベースが、前記膜がその全体にわたりシールされる周辺溝を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
（a）微生物用の栄養培地を含有するベースであって、該栄養培地はベースの上方に隆起した平らな増殖領域を有し、該栄養培地は増殖領域内で微生物の増殖を維持することが可能である、ベースと、
（b）上記栄養培地上に重なるフィルムであって、該フィルム及び栄養培地は平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域を有し、該フィルムは平らな増殖領域の一部分を露出させる開口を有する、フィルムと、
（c）上記栄養培地を覆うように上記ベースに嵌合する蓋と
を備える細胞培養デバイス。
【請求項４】
露出した増殖領域に接触する多孔質膜をさらに含む、請求項３に記載のデバイス。
【請求項５】
（a）（i）微生物用の栄養培地を含有するベースであって、該栄養培地はベースの上方に隆起した平らな増殖領域を有し、該栄養培地は増殖領域内で微生物の増殖を維持することが可能である、ベースと、
（ii）上記栄養培地上に重なるフィルムであって、該フィルム及び栄養培地は平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域を有し、該フィルムは平らな増殖領域の一部分を露出させる開口を有する、フィルムと
を備える細胞培養デバイス、
（b）上記平らな増殖領域の露出部分に配置するために構成された多孔質膜、
（c）上記膜及び栄養培地を覆うように上記ベースに嵌合する蓋
を含む、細胞培養のためのキット。
【請求項６】
（i）前記増殖領域が100から450ミクロンの平坦度を有するか；
（ii）前記フィルムが多孔質ではないか；又は
（iii）前記フィルムが、増殖領域上に膜を配置するための基準マークを有する、請求項３に記載のデバイス又は請求項５に記載のキット。
【請求項７】
前記膜が、蛍光栄養培地、プラスチック、又は印刷された材料を露出させるスルーホールを有する、請求項４に記載のデバイス又は請求項５に記載のキット。
【請求項８】
前記膜が、（i）混合セルロースエステル膜を含むか；
（ii）実質的に非放射性であり、かつ実質的に非反射性であるか；又は
（iii）黒色である、請求項１若しくは４に記載のデバイス又は請求項５に記載のキット。
【請求項９】
基準マークをさらに含む、請求項１若しくは３に記載のデバイス又は請求項５に記載のキット。
【請求項１０】
前記基準マークが前記増殖領域の外側にある、請求項９に記載のデバイス又はキット。
【請求項１１】
前記基準マークが、放射性プラスチック、印刷された蛍光材料、又はエンボス加工された蛍光材料を含む、請求項１０に記載のデバイス又はキット。
【請求項１２】
（i）前記蓋が、増殖領域を撮像できるように配置された光学的に透明な材料を含むか；
（ii）前記蓋が、ベースに取着される場合、微生物の進入による汚染を防止し、前記蓋が空気間隙によって膜から隔てられているか；
（iii）前記ベースに固有のID標識をさらに含むか；
（iv）前記ベースが、蓋に対するベースの50μmよりも大きい回転を防止するように、蓋に嵌合するか；
（v）前記ベースがポリスチレンを含むか；又は
（vi）前記ベースが、底面と、底面の外周の周りに且つ底面から上向きに延びる側壁とを有し、前記栄養培地がベースの側壁内にあり、前記蓋が、上面と、上面の外周の周りに且つ上面から下向きに延びる側壁とを有し、前記蓋がベースに可逆的に固定される、請求項１若しくは３に記載のデバイス又は請求項５に記載のキット。
【請求項１３】
前記ベースが、底面と、底面の外周の周りに且つ底面から上向きに延びる側壁とを有し、前記栄養培地がベースの側壁内にあり、前記蓋が、上面と、上面の外周の周りに且つ上面から下向きに延びる側壁とを有し、前記蓋がベースに可逆的に固定され、また
（i）前記蓋が軸方向圧縮によりベースに固定されるか；
（ii）前記蓋がベースに対する蓋の回転によってベースに固定されるか；又は
（iii）前記ベースの側壁から又は前記蓋の側壁から横方向に延びる周辺リムと、前記ベースの側壁から又は前記蓋の側壁から横方向に延びる第1の移動止めをさらに含み、該周辺リムは、蓋の上部又はベースの底部から見て外方を向く近位側面と、蓋の上部又はベースの底部に面する遠位側面と、該近位側面と遠位側面を接続する側方縁部とを有し、
前記蓋が周辺リムを有し、かつ前記ベースが少なくとも1つの第1の移動止めを有するか、又は前記蓋が少なくとも1つの第1の移動止めを有し、かつ前記ベースが周辺リムを有するものであり、前記蓋は、周辺リムと少なくとも1つの第1の移動止めとの間の相互係合によってベースに固定される、請求項１２に記載のデバイス又はキット。
【請求項１４】
（i）前記周辺リムが、ベースの側壁又は蓋の側壁の周りで連続しているか；
（ii）横方向に延びる少なくとも1つの第1の移動止めが、第1の移動止めと、ベースの底面又は蓋の上面との間の隙間を画定し、該隙間は周辺リムを受容するようにサイズが決められ、第1の移動止めは周辺リムの遠位側面に係合するか；
（iii）少なくとも1つの第1の移動止めが周辺リムの側面に係合するか；
（iv）前記側壁から横方向に延びる少なくとも1つの第2の移動止めをさらに含み、前記周辺リムは切り溝を含み、第2の移動止めが切り溝に係合するか；又は
（v）前記周辺リムが、ベースの側壁又は蓋の側壁の周囲に沿って不連続である、請求項１３に記載のデバイス又はキット。
【請求項１５】
前記周辺リムが、ベースの側壁又は蓋の側壁の周囲に沿って不連続であり、前記リムの遠位側面が傾斜しており、少なくとも1つの第1の移動止めが、ベースに対する蓋の相対回転によってリムの遠位側面に係合する、請求項１４に記載のデバイス又はキット。
【請求項１６】
（i）複数の周辺リム及び第1の移動止めをさらに含み、前記蓋は、90度以下の相対回転によってベースに固定されるか；又は
（ii）前記蓋又はベースに、指定量の回転後に周辺リムの回転を阻止する止め具をさらに含む、請求項１５に記載のデバイス又はキット。
【請求項１７】
（a）請求項１、２及び８〜１６のいずれか１項に記載のデバイスを用意するステップ、（b）前記デバイスの増殖領域に、ある体積の空気又は表面を接触させるステップ、
（c）前記デバイスをインキュベートして微生物を増殖させるステップ、
（d）微生物の増殖の程度を測定するステップ
を含む、環境中の微生物の存在をモニターする方法。
【請求項１８】
（i）前記表面が、工業用又は実験室用の表面又は衣服であるか；
（ii）ステップ（b）が、周辺領域及び増殖領域が表面に接触するようにデバイスを転がすこと、又はある体積の空気を増殖領域上を通過させることを含むか；又は
（iii）ステップ（d）が増殖領域を光学的に撮像することを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ステップ（d）が増殖領域を光学的に撮像することを含み、また
（i）微生物の数を定量するために画像を分析するステップをさらに含むか；又は
（ii）ステップ（c）及び（d）を繰り返して、増殖する微生物のコロニーを測定するステップをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
（a）請求項４〜１６のいずれか１項に記載のデバイス又はキットを用意するステップ、
（b）サンプルを膜に通して濾過するステップ、
（c）上記膜を増殖領域上に配置するステップ、
（d）上記デバイスをインキュベートして微生物を増殖させるステップ、
（e）微生物の増殖の程度を測定するステップ
を含む、サンプル中の微生物の存在をモニターする方法。
【請求項２１】
ステップ（e）が増殖領域を光学的に撮像することを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
（i）微生物の数を定量するために画像を分析するステップをさらに含むか；又は
（ii）ステップ（d）及び（e）を繰り返して、増殖する微生物のコロニーを測定するステップをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
（a）（i）微生物用の栄養培地を含有するベースと、
（ii）上記栄養培地上に重なる多孔質膜であって、該栄養培地はベースの上方に隆起した平らな増殖領域と平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域とを有し、該栄養培地は増殖領域で微生物を維持することが可能である、多孔質膜と
を備える細胞培養デバイス、
（b）上記ベースに取着され、微生物の進入による汚染を防止する保護蓋であって、空気間隙によって上記膜から隔てられている保護蓋、
（c）上記保護蓋が取り外された場合にベースに取着可能であり、ベースに取着された場合に増殖領域を撮像できるように配置された光学的に透明な材料を含む光学蓋
を含むキット。
【請求項２４】
（a）（i）微生物用の栄養培地を含有するベースであって、該栄養培地はベースの上方に隆起した平らな増殖領域を有し、該栄養培地は増殖領域で微生物の増殖を維持することが可能である、ベースと、
（ii）上記栄養培地上に重なるフィルムであって、該フィルム及び栄養培地は平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域を有し、該フィルムは平らな増殖領域の一部分を露出させる開口を有する、フィルムと
を備える細胞培養デバイス、
（b）平らな増殖領域の露出部分に配置されるよう構成された多孔質膜、
（c）上記ベースに取着され、微生物の進入による汚染を防止する保護蓋であって、空気間隙により増殖領域から隔てられている保護蓋、
（d）上記保護蓋が取り外された場合にベースに取着可能であり、ベースに取着された場合に増殖領域を撮像できるように配置された光学的に透明な材料を含む光学蓋
を含む、細胞培養のためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2012年4月16日に出願された米国特許仮出願第61/624,643号の利益を主張し、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、細胞培養及び検出の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
多くの産業、特に食品、飲料、ヘルスケア、電子、及び医薬品産業では、細菌、酵母、又はカビなどの微生物による汚染の程度に関してサンプルを迅速に分析することが必要不可欠である。
【０００４】
微生物計数又はコロニー係数法と呼ばれる1つの微生物培養技法は、サンプル中の微生物細胞の数を定量する。in situ微生物複製に基づく微生物計数法は、一般に、サンプル中の各微生物細胞ごとに、1つの視覚的に検出可能な「コロニー」をもたらす。したがって、目に見えるコロニーをカウントすることにより、微生物学者はサンプル中の微生物細胞の数を正確に測定することが可能になる。微生物計数を行うために、細菌細胞をペトリ皿内の栄養寒天（「寒天プレート」）の表面に撒布し、in situ細菌複製を可能にする条件下でインキュベートすることができる。微生物計数は、簡単であり、超高感度であり、安価であり、且つ定量的であるが、遅くもある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
迅速な微生物計数のための、さらなる培養デバイス及び方法が求められる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、例えば環境サンプル中に存在する微生物を捕獲し培養するための、デバイス及びキットを提供する。一態様では、本発明は、微生物用の栄養培地を含有するベースと；栄養培地上に重なる多孔質膜と；この膜及び栄養培地を覆うようにベースに嵌合する蓋とを備える細胞培養デバイスを提供する。栄養培地は、ベースの上方に隆起した平らな増殖領域と、平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域とを有し、栄養培地は増殖領域で微生物の増殖を維持することが可能である。ある実施形態では、ベースはポリスチレンを含む。ベースは、膜がその全体にわたりシールされる周辺溝を含んでいてもよい。膜は、例えば混合セルロースエステル膜を含む。膜は、実質的に非放射性であり、実質的に非反射性及び/又は黒色であってもよい。
【０００７】
他の実施形態では、増殖領域は、サンプル収集前に100から450μmの平坦度、又はサンプル収集後に300から500μmの平坦度を有する。栄養培地は、周辺領域において微生物の増殖を維持してもよいし維持しなくてもよい。膜は、ベースにシールされるフィルムによって、ベースに取着されてもよい。或いはデバイスは、ベース及び周辺領域に付着されたフィルムであって、そこで膜をベースに接着させるフィルムをさらに含んでいてもよい。
【０００８】
別の態様では、本発明は、微生物用の栄養培地を含有するベースであって、栄養培地はベースの上方に隆起した平らな増殖領域（例えば、平坦度約100から450ミクロン）を有し、栄養培地は増殖領域内で微生物の増殖を維持することが可能である、ベースと、上記栄養培地上に重なるフィルムであって、フィルム及び栄養培地は平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域を有し、フィルムは平らな増殖領域の一部分を露出させる開口を有する、フィルムと、上記栄養培地を覆うようにベースに嵌合する蓋とを備える細胞培養デバイスを提供する。別の実施形態では、デバイスは、露出した増殖領域に接触する多孔質膜も含む。
【０００９】
別の態様では、本発明は、微生物用の栄養培地を含有するベースであって、栄養培地はベースの上方に隆起した平らな増殖領域（例えば、平坦度約100から450ミクロン）を有し、栄養培地は増殖領域内で微生物の増殖を維持することが可能である、ベースと、上記栄養培地上に重なるフィルム（例えば、非多孔質フィルム）であって、フィルム及び栄養培地は平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域を有し、フィルムは平らな増殖領域の一部分を露出させる開口を有する、フィルムとを備える細胞培養デバイス；上記平らな増殖領域の露出部分上に配置するために構成された多孔質膜；上記膜及び栄養培地を覆うように上記ベースに嵌合する蓋を含む、細胞培養のためのキットを提供する。別の実施形態では、フィルムは、増殖領域上に膜を配置するための基準マークを有する。一実施形態では、キットは、WO 2007/038478（参照により本明細書に組み込まれる）のデバイスなどの濾過デバイスも含む。
【００１０】
本発明のデバイス又はキットのいずれかの一実施形態において、蓋は、増殖領域を撮像できるように配置された光学的に透明な材料を含んでいてもよい。蓋は、ベースに取着される場合、微生物の進入による汚染も防止することができ、この場合蓋は、空気間隙によって膜から隔てられている。デバイスは、ベース上に固有のID標識を含んでいてもよい。ID標識は、バーコード又は2Dバーコードであってもよい。ID標識は、デバイスの同一性、自動検出機器及びプロトコルに対するデバイスの適合性、デバイスの有効期限、滅菌履歴、並びにその他の対象の情報を追跡するために使用することができる。デバイスは、例えば蓋及び/又はデバイスに、使用者又は機器類による位置合わせ及び把持を可能にする窪み又は突起を含んでいてもよい。ある実施形態では、デバイスは、例えば増殖領域の平坦度を維持するために、横方向に圧縮性ではない。そのような実施形態では、1つ以上の機械的支持要素を、横方向に剛性を与えるためにデバイスに組み込んでもよい。他の実施形態では、デバイスは、例えば増殖領域の外側に位置付けられた、例えば放射性プラスチック、印刷された蛍光材料、エンボス加工された蛍光材料の基準マーク、又は蛍光培地、材料、若しくはプラスチックを露出させるスルーホールを含む。分離可能な膜を備えるデバイスでは、基準マークは、サンプルが濾過されて通過する領域の外側に位置付けられた、膜のスルーホールであってもよい。そのようなスルーホールは、蛍光栄養培地、プラスチック、又は印刷された材料を露出させてもよい。基準マークは、膜と増殖領域とを位置合わせするのに、且つ/又はデバイスから得られた複数の画像の自動アライメントで用いてもよい。
【００１１】
別の実施形態では、ベースは、蓋に対するベースの約50μmよりも大きい回転を防止するように、蓋に嵌合する。
【００１２】
別の実施形態では、本発明は、ベースが、底面と、底面の外周の周りに且つ底面から上向きに延びる側壁とを有し、栄養培地がベースの側壁内にあり、蓋が、上面と、上面の外周の周りに且つ上面から下向きに延びる側壁とを有し；蓋がベースに可逆的に固定される（例えば、蓋は軸方向圧縮によりベースに固定され、又は蓋は、ベースに対する蓋の回転によってベースに固定される）、デバイス又はキットを提供する。
【００１３】
別の実施形態では、蓋又はベースは、ベースの側壁から又は蓋の側壁から横方向に延びる周辺リム（例えば、連続又は不連続）と、ベースの側壁から又は蓋の側壁から横方向に延びる第1の移動止めも含み、周辺リムは、蓋の上部又はベースの底部から離れた方向を向く近位側面と、蓋の上部又はベースの底部に面する遠位側面と、近位側面と遠位側面を接続する側方縁部とを有し、蓋が周辺リムを有し、かつベースが少なくとも1つの第1の移動止めを有するか、又は蓋が少なくとも1つの第1の移動止めを有し、かつベースが周辺リムを有するものものであり、蓋は、周辺リムと少なくとも1つの第1の移動止めとの間の相互係合によってベースに固定される。別の実施形態では、横方向に延びる少なくとも1つの第1の移動止めは、第1の移動止めと、ベースの底面又は蓋の上面との間の隙間を画定し、隙間は周辺リムを受容するようにサイズが決められ、第1の移動止めは周辺リムの遠位側面に係合する。或いは第1の移動止めは、周辺リムの側面に係合してもよい。デバイスは、側壁から横方向に延びる少なくとも1つの第2の移動止めを含んでいてもよく、周辺リムは切り溝を含み、第2の移動止めが切り溝に係合する。本発明の別の実施形態は、リムの遠位側面が傾斜しており、少なくとも1つの第1の移動止めが、ベースに対する蓋の相対回転によってリムの遠位側面に係合する、デバイスを含んでいてもよい。デバイスは、複数の周辺リム及び第1の移動止めを含んでいてもよく、蓋は、90度以下、例えば45度以下の相対回転によってベースに固定される。デバイスは、蓋又はベースに、指定量の回転後に周辺リムの回転を阻止する止め具を含んでいてもよい。
【００１４】
別の態様では、本発明は、微生物用の栄養培地を含有するベースと、栄養培地上に重なる多孔質膜であって、栄養培地はベースの上方に隆起した平らな増殖領域と平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域とを有し、栄養培地は増殖領域で微生物を維持することが可能である、多孔質膜とを備える細胞培養デバイス；ベースに取着され、微生物の進入による汚染を防止する保護蓋であって、空気間隙によって膜から隔てられている保護蓋；保護蓋が取り外された場合にベースに取着可能であり、ベースに取着された場合に増殖領域の撮像ができるように配置された光学的に透明な材料を含む光学蓋を含むキットを提供する。
【００１５】
他の態様では、本発明は、微生物用の栄養培地を含有するベースであって、栄養培地はベースの上方に隆起した平らな増殖領域を有し、栄養培地は増殖領域で微生物の増殖を維持することが可能である、ベースと、栄養培地上に重なるフィルムであって、フィルム及び栄養培地は平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域を有し、フィルムは平らな増殖領域の一部分を露出させる開口を有する、フィルムとを備える細胞培養デバイス；平らな増殖領域の露出部分上に配置されるよう構成された多孔質膜；ベースに取着され、微生物の進入による汚染を防止する保護蓋であって、空気間隙により増殖領域から隔てられている保護蓋；保護蓋が取り外された場合にベースに取着可能であり、ベースに取着された場合に増殖領域を撮像できるように配置された光学的に透明な材料を含む光学蓋を含むキットを提供する。キットは、本明細書に記述される濾過デバイスを含んでいてもよい。
【００１６】
本発明は、本発明のデバイス又はキットを用意するステップと；デバイスの増殖領域に、ある体積の空気又は表面を接触させるステップと；デバイスをインキュベートして微生物を増殖させるステップと；微生物の増殖の程度を測定するステップとによって、微生物の存在をモニターする方法に関する。表面の例には、工業用及び実験室用の表面及び衣服が含まれる。ある実施形態では、サンプルは、周辺領域及び増殖領域が表面に接触するようにデバイスを転がすことによって、又はある体積の空気を増殖領域上を通過させることによって、収集する。増殖の程度は、増殖領域を光学的に撮像することによって測定してもよい。画像は、微生物の数を定量するために分析してもよい。インキュベーション及び測定ステップは、経時的に増殖する微生物のコロニーを測定するために繰り返してもよい。
【００１７】
別の態様では、本発明は、本発明のデバイス又はキットを用意するステップと、サンプルを膜に通して濾過するステップと、膜を増殖領域上に配置するステップと、デバイスをインキュベートして微生物を増殖させるステップと；微生物の増殖の程度を測定するステップとによって、サンプル中の微生物の存在をモニターする方法を提供する。増殖の程度は、増殖領域を光学的に撮像することによって測定してもよい。画像は、微生物の数を定量するために分析してもよい。インキュベーション及び測定ステップは、経時的に増殖する微生物のコロニーを測定するために繰り返してもよい。
【００１８】
「実質的に非放射性」の物体とは、例えば蛍光、リン光、又はルミネセンスによって、光を発しない物体を意味する。
【００１９】
「実質的に非反射性」の物体とは、物体の撮像に使用される光の25％未満、10％未満、5％未満、1％未満、又は0.1％未満を反射する物体を意味する。
【００２０】
「固定部材」とは、2つの実体を接合し又は添着する、機械的メカニズムの態様の構成要素又は機構を意味する。固定部材の例は、ねじ、受金具、移動止め、リム、ラッチ、フック、留め金、スナップ、差込み式マウント、J形フック、L形フック、窪み、突起、リブ、ばね舌片、タブ、溝、止め具、ノッチ、ホール、切り溝、圧縮嵌め、締まり嵌め、押し嵌め、カム、及びカム式止め具である。「固定する」とは、2つの実体を嵌合し、接合し、又はそれらの間に連結（union）を形成し、それによって2つの実体の互いに対する回転が制限されることを意味する。
【００２１】
「周辺」とは、外周の周りを意味する。周辺は、本発明においては円形に限定されない。
【００２２】
他の特徴及び利点は、以下の説明、図面、及び特許請求の範囲から明らかにされよう。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図1Aは、本発明のデバイスの分解立体図である。図1Bは、カバーを取り外した状態のデバイスの写真である。
【図２】図2A〜2Bは、本発明のデバイスの断面図である。図2Aは、デバイスの使用前に保護蓋が取り付けられた状態の、デバイスの断面図である。図2Bは、光学蓋が取り付けられた状態の、デバイスの断面図である。
【図３】図3A〜3Bは、ベースに対する膜の取着の詳細を示す、断面図である。図3Aは、伸展トラフを示す、デバイスの一部分の断面図である。図3Bは、フィルム又は縁部コーティング及び伸展トラフの場所を示す、デバイスの一部分の概略図である。
【図４】バーコードを付着するための区域、機械的支持要素（リブ）、二重周辺側壁、位置合わせし把持するための窪み（V機構）、及び光学的位置合わせのための機構を含む、本発明のデバイスのベースの図である。
【図５Ａ】図5Aは、保護蓋と、基準マーク（ダッシュ）が付いた周辺フィルムと、栄養培地及び増殖領域を有するベースと、バーコードラベルとを備える、本発明のデバイスの分解立体図である。
【図５Ｂ】図5Bは、基準マーク（ダッシュ）が付いた周辺フィルムと、栄養培地及び増殖領域を有するベースと、増殖領域上に重なり且つ周辺フィルム上に部分的に重なる周辺基準スルーホールが付いた膜とを備える、本発明のデバイスの写真である。
【図６】周辺リムを有する光学蓋と、3つの第1の移動止め（スナップ式移動止め、図6の詳細図A）及び3つの第2の移動止め（心出し移動止め、図6の詳細図B）を有するベースとを備える、本発明のデバイスの概略図である。
【図７】切り溝の付いた周辺リム（図7の詳細図A）を有する蓋と、3つの第1の移動止め（ボール式移動止め、図7の詳細図B）、及び3つの第3の移動止め（心出し移動止め、図7の詳細図C）、並びに切り溝内を塞ぐように構成された9つの第2の移動止め（図7の詳細図A）を有するベースとを備える、本発明のデバイスの概略図である。
【図８】不連続周辺リム（図8の詳細図A参照）を有する蓋と、蓋の不連続リムに相補的な2タイプの移動止めを有するベースとを備える、本発明のデバイスの概略図である。ベースの移動止めは、周辺に対して約40度離れている。第1の移動止め（図8の詳細図C参照）及び第2の移動止め（図8の詳細図B参照）は、不連続リムに係合する。蓋は、視覚的インジケーター（リム機構）も有する。
【図９】2つの不連続な傾斜の付いた周辺リムを有する蓋と、3つの第1の移動止め及び2つの止め具（カム式止め具、図9の詳細図A）を有するベースとを備える、本発明のデバイスの概略図である。
【図１０】ベースと、栄養培地上に重なる膜と、ベースまで傾斜する周辺領域とを備える、本発明のデバイスの写真である。さらに、基準マーク（ドット）を周辺領域に見ることができる。
【図１１】デバイス上に増殖し且つヒトの眼で可視できる、微生物コロニーの写真である。
【図１２】図12A〜12Cは、種々のタイプの環境サンプル：空気（図12A）、作業領域などの表面（図12B）、及び手袋や袖などの衣服（図12C）のモニターにおけるデバイスの使用を示す一組の画像である。
【図１３Ａ】図13Aは、漏斗、基準マークが付いた膜、メッシュ支持パッド、及び濾過ベースを備える、濾過デバイスの分解立体図である。
【図１３Ｂ】図13Bは、組み立てられた濾過デバイスの写真である。
【図１４Ａ】図14A〜14Dは、濾過デバイス及び本発明のデバイスを使用した、液体サンプルのモニタリングを示す、一組の画像である。図14Aは、組み立てられた濾過デバイス、保護蓋、及び本発明のデバイスの写真である。
【図１４Ｂ】図14Bは、濾過デバイス内の膜を通したサンプルの濾過の写真である。
【図１４Ｃ】図14Cは、漏斗、濾過ベース上の膜、保護蓋、及び本発明のデバイスを示す、分解した濾過デバイスの写真である。
【図１４Ｄ】図14Dは、本発明のデバイスへの膜の移動を示す写真であり、膜は、周辺リム上に、基準マークと共に置かれており、膜における基準マーク（周辺スルーホール）によって、撮影された膜の複数の画像の位置合わせが可能になる。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は、微生物（例えば、細菌、真菌（fungi）、又は原生生物（protists））を捕獲し培養するためのデバイス及びキットと、環境サンプル中の微生物を検出するために該デバイス及びキットを使用する方法に関する。デバイスは、迅速な環境モニタリングに有用であり、例えばデバイスを表面上で転がすことによって微生物を収集するのに使用することができる。次いでデバイスは、収集された任意の微生物がコロニー内で増殖できるようにインキュベートされるが、このコロニーは微生物の汚染を示すものである。
デバイス
本発明の細胞培養デバイスは、サンプル収集、サンプル増殖、及びサンプル内での微生物の検出を容易にする。本発明のデバイスは、広く様々な適用例を目的として、効率的な、費用効果のある、堅牢な微生物モニタリングを可能にする。
【００２５】
例えば（図1A〜1B）に示されるデバイスは、多孔質膜が重ねられた栄養培地を含有するベースを備える。膜は、栄養培地に等角接触する。膜及び栄養培地は、傾斜の付いた周辺領域によって取り囲まれた平らな増殖領域を形成する。好ましい実施形態では、膜は、栄養分を通過させ、増殖領域内での微生物増殖を維持するが、周辺領域では維持しない。本発明の一態様では、デバイスは、例えば米国公開第2003/0082516号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、例えば迅速なコロニー計数のためのGrowth Direct(商標)システムを使用した、微生物の自動検出に有用である。デバイスは、任意の適切なサイズであってよく、例えばRODAC(商標)プレートのサイズであってもよい。
【００２６】
ベースは、実質的に非放射性及び非反射性とすることができ、任意の適切な材料、例えばポリスチレン又は他のプラスチックで作製することができる。ベースは、膜の取着に使用することができる周辺溝（伸展トラフとも呼ばれる）を有していてもよい（例えば、図2及び3に示されるように）。ベースは、当技術分野で公知の方法、例えば射出成型によって生成することができる。
【００２７】
デバイス、例えばベース及び/又は蓋は、デバイスの把持又はデバイスとの位置合わせ用に、窪み（例えば、図4に示されるように）又は突起を含んでいてもよい。ある実施形態では、デバイスは、横方向に圧縮されない。例えばデバイスは、取扱い中に増殖領域の平坦度が維持されるよう、1つ以上の機械的支持要素（図4）を含んでいてもよい。
【００２８】
デバイスは、多孔質膜、例えば自己蛍光微生物微小コロニーの検出に相応しい蛍光特性を有するものを備える。例えば膜は、自己蛍光微生物微小コロニーの検出のために実質的に非放射性及び非反射性である。膜は、セルロース、セルロースアセテート、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート（PET）、ポリオレフィン、エチレンビニルアセテート、ポリプロピレン、ポリスルホン、ポリテトラフルオロエチレン、ナイロン、及びシリコーンコポリマーなどの材料から製造することができる。膜の選択は、部分的には、培養される細胞のタイプ（例えば、表面に付着して増殖する微生物（足場依存性）、懸濁状態で増殖する微生物（足場非依存性）、又は表面に付着して若しくは懸濁状態で増殖する微生物）、透過度、並びに流体及び気体の移動速度に依存する。膜の例は、黒色混合セルロースエステル膜（Sartorius AG）である。
【００２９】
膜は栄養培地上に配置され、この膜と培地とが等角接触するように配置される。膜及び栄養培地は、ベースの上方に隆起した平らな増殖領域であって縁部の周りに周辺傾斜領域を備えたものを形成する。そのような設計により、デバイスは、例えばデバイスを表面上で転がすことによる接触試験に適したものになる。膜及び栄養培地は、例えば10、15、20、25、30、35、又は50cm2、好ましくは少なくとも25cm2の面積全体が平らな増殖領域を形成する。栄養培地上の膜は、製作されたときの状態で約100から600μm、例えば200から350μm、例えば約300μm、又はサンプルの収集後に300から500μm、例えば約450μmの平坦度を有する。膜は、好ましくは工場で据え付けられ、製品の寿命の間は湿った状態に置かれる。膜は、膜上に堆積した微生物が、下にある栄養培地から栄養分を得ることができるように、細孔を有する。膜の孔径の例は、0.45μm及び0.22μmである。
【００３０】
固体又は半固体の栄養増殖培地を、本発明のデバイスで用いることができる。その例には、サブローデキストロース寒天（SDA）、R2A寒天、トリプチックソイ寒天（TSA）レセーン、及びプレートカウント寒天（PCA）が含まれる。培地を、溶融液体状態でベース上に注ぎ、次いでベースの上方に隆起した平らな増殖領域及びこの平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域に凝固させてもよい。増殖領域の平坦度は、表面張力によって及び重力に直角に充填することによって、制御することができる。増殖領域の平坦度は、いくつかの代替方法を使用して実現してもよい。例えば、平らな増殖領域を実現する1つの方法としては、溶融栄養培地を、事前に取着された湿った膜の下側に注ぐことがある。この代替方法では、膜は、底部に開口を有するベースに事前に取着される。開口は、溶融栄養培地、例えば寒天を充填するのに使用される。次いでこの開口は、カバー又はフィルムによって、充填後にシールされる。膜は、漏出が防止されるように、周辺がシールされる。膜は、充填プロセス中は伸展し又は膨らみ、適切な形状の入れ子又は空洞内で捕捉することによって成形されてもよい。平坦度を実現する別の方法は、ベース中間セクションを、例えば真空を使用して、約150から200μm下向きに事前に撓ませることである。栄養培地を注ぎ、この培地が凹面状に凝固したら、撓み力を解放し、増殖領域は平らな状態に跳ね返る。或いは栄養培地は、平らな増殖領域及び傾斜する周辺領域を有するように成形された多孔質マトリックスに保持された、液体培地であってもよい。
【００３１】
膜は、好ましくは使用中に剥がれないように固定される。膜は、ベースへのヒートシールによって、例えば周辺溝に橋掛けることによって据え付けることができる。溝（図3A）は、皺が寄ることなく膜を伸展させる。溝は、取着中に形成されたあらゆる水分も捕捉する。或いは膜は、増殖領域の縁部を画定するのに使用されてもよい、例えばPET、co-PET、アセテート、又はポリイミドの周辺フィルムを使用して、デバイスに取着されてもよい。フィルムは、黒色としてもよい。フィルムは、実質的に非放射性及び/又は比反射性であってもよい。フィルムは、いくつかの層を含有してもよい（図3B）。そのような層は、膜、低蛍光、及び/又は低反射率を損なうことなく、膜への熱融合を可能にする。フィルムは、平らな増殖領域の外側での微生物の増殖を防止するために、周辺領域を覆ってもよい。この配置構成は、例えば撮像又は目視検査のため、デバイスのある領域に増殖を閉じ込めるのに有益である。
【００３２】
代替の設計では、デバイスは、一体的な膜を備えない。このデバイスは、ベースの上方に隆起した栄養培地、平らな増殖領域、栄養培地の周辺領域上に重なるフィルム（図5A及び5B）、及び平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域も備える。デバイスは、周辺領域上に重なる（全体として又は部分的に）フィルムを備え、フィルムは、平らな増殖領域の一部分を露出させる開口を有する。フィルムにおける開口及び栄養培地は、例えば10、15、20、25、30、35、又は50cm2、好ましくは少なくとも25cm2の面積全体が平らな増殖領域を形成する。適切なフィルムとしては、任意の非多孔質又は疎水性のプラスチック又は材料、例えばPET、co-PET、アセテート、又はポリイミドが挙げられる。フィルムは黒色としてもよい。フィルムは、実質的に非放射性及び/又は非反射性であってもよい。増殖領域は、例えばサンプルに暴露される多孔質膜を上に重ねてもよい表面を提供する。栄養培地は、上に重なる膜の上面での生物の増殖の維持を提供し、それによって、細胞培養及び汚染検出のためのデバイスが提供される。
【００３３】
デバイスは、蓋も備える。蓋は、例えば、膜に接触せず且つ使用前のデバイスの汚染を防止する、保護蓋（図2A）である。蓋は、例えば可視光又はUV光で増殖領域を撮像するための光学的に透明な窓を有する光学蓋（図2B）であってもよい。蓋の材料の例は、Zeonor(登録商標)1060R（ポリシクロオレフィン樹脂； Zeon Chemicals LP）である。ガラスを用いてもよい。光学蓋は、使用前に保護蓋として使用してもよい。蓋はベースに嵌合して、膜及び栄養培地を外側の汚染からシールする。蓋は、当技術分野で公知の方法、例えば射出成型によって生成することができる。蓋の全て又は一部分は、非放射性及び/又は非反射性であってもよい。
【００３４】
蓋は、蓋とベースの両方に存在する固定部材を使用して、ベースに固定される。蓋及びベースは可逆的に固定又は係合されてもよく、この場合の蓋及びベースは複数回分離し且つ取着し直すことができる。蓋をベースに固定することによって、蓋をベースに対して軸方向（z軸）に添着し、それによってデバイスがシールされる。固定部材は、ベースに対する蓋の位置合わせを行って、横方向（x軸及びy軸）に固定することができる。好ましくは蓋は、ベースを保護し、蓋がベースに対して例えば50μm未満回転するのも防止する。
【００３５】
蓋は、軸方向の圧縮によりベースに固定されてもよい。例えば蓋の周辺リム（図6）及びベースの移動止め（スナップ式移動止め、図6、詳細図A）は、軸方向の力が蓋に加えられたときにベースに蓋を固定するのに使用することができる。移動止めは、周辺リムが移動止めを通過するときに歪む。周辺リムは、スナップ式移動止めとベースの底面との隙間にある（rest in）。スナップ式移動止め（図6の詳細図A）は、スナップ式移動止めの接触表面積を低減させる尖った突起を有していてもよく、したがって周辺リムに加えられる面積当たりの力が増加する。スナップ式移動止めに加え、周辺リムの横縁部に圧力を加える心出し移動止めを使用することができ（図6の詳細図B）、したがって蓋の位置が固定される。ベースに対する光学蓋の位置の再現性は、自動サンプル撮像の一貫性を改善するのに重要である。光学蓋を固定し且つその動きを防止することによって、自動画像分析の再現性が改善する。
【００３６】
代替の実施形態では、ベースは、複数のボール式移動止め（図7の詳細図B）、複数の第2の移動止め（図7の詳細図A）、及び複数の心出し移動止め（図7の詳細図C）を、ベースの外周の周りに備えてもよい。蓋は、周辺リムによってベースの第1の移動止めに固定される（図7）。第2の移動止めは、蓋をベースに対して位置合わせするのを助ける。切り溝が付いた周辺リム（図7の詳細図D）は、第2の移動止め（図7の詳細図A）がリムの切り溝を塞ぐので、ベースに対する蓋の回転を防止する。
【００３７】
蓋は、90度以下の回転運動によってベースに固定されてもよい。例えば蓋は、一連の不連続周辺リムを有していてもよい（図8、詳細図A）。不連続周辺リムは、それぞれ約40度離れて外周の周りに均等に分布してもよいし分布しなくてもよい（図8）。一連の移動止めは、ベース上に位置付けられてもよい（図8）。移動止めの2つの変形例が示されているが（図8の詳細図C及び詳細図B）、単一タイプを用いてもよい。第1の移動止めは、不連続周辺リムの垂直部分とは反対の部分において周辺リムの上縁（蓋の上面に隣接する遠位縁）に係合する。第2の移動止めは、周辺リムの上縁（蓋の上面に隣接する遠位縁）に係合する。
【００３８】
蓋は、90度以下の回転運動でベースに固定されてもよい。例えばベースは、不連続の傾斜した周辺リム（図9）に可逆的に固定されるようにサイズが決められ形が決められた、複数の移動止め（図9の詳細図A）を備える。第1の移動止めは、上面に、蓋が誤った場所に据え付けられるのを防止する水平距離を有する。第1の移動止めは、蓋がベースに対して捻られるにつれて高さが変化する（傾斜した）不連続周辺に徐々に相互作用する、上方境界を設けることによって、押し嵌めを容易にする。止め具（カム式止め具、図9の詳細図A）は、不連続周辺リムに回転境界を提供する。徐々に高くなる周辺リムは、リムが約90度向きを変えるにつれて第1の移動止めに係合し、それによって押し嵌めが誘発される。カム式止め具は過剰回転を防止し、周辺リムの前縁に停止を提供する。
【００３９】
蓋をベースに固定するための固定部材及び機構の追加の非限定的な例には、ねじ、クランプ、ガスケット、磁石、王冠、及び摩擦嵌めが含まれる。例えば本発明のデバイスの蓋は、一連のねじを有するように構成されてもよい。本発明のベースは、蓋をベースに固定するために、相補的な一連のねじを有するように構成されてもよい。
【００４０】
保護蓋及び光学蓋は、同じ又は異なる機構を使用して同じベースに取着してもよい。固定部材は蓋又はベースにあってもよい。例えば周辺リムが蓋にあってもよく、移動止めがベースにあってもよい。或いは、移動止めが蓋にあってもよく、周辺リムがベースにあってもよい。周辺リムは、蓋又はベースの側壁の外側又は内側にある外周にあってもよい。
【００４１】
デバイスは、蓋がベースに首尾良く固定されることを示す機構を含んでいてもよい。例えば、蓋のリム機構（図8）は、ベースの上方にあってもよく、蓋がベースに固定される前は目に見えてもよい。蓋がベースに固定されると、リム機構はベースの上方に見えなくなり、それによって蓋とベースとが首尾良く連結したことが示される。デバイスは、自動化に適合する固定部材を備えてもよい。例えば固定部材は、ロボット移送アームが固定部材に係合できるようにサイズが決められ形が決められてもよく、それによってデバイスの自動使用が容易になる。
【００４２】
デバイスは、基準マーク、例えば印刷された蛍光材料、エンボス加工された蛍光材料、放射性プラスチック、又は蛍光培地、材料、若しくはプラスチックを露出させるスルーホールを備えてもよい。他の基準マークが当技術分野で公知である。基準マークは、増殖領域の外側にあってもよい（図5B及び図10）。基準マークは、膜とデバイスとの位置合わせを助けてもよい（図5B）。基準マークは、同じデバイスから獲得された、例えば異なる時点に撮影された、複数の画像を位置合わせするのに使用されてもよく、又は基準マークは、撮像素子内でデバイスを位置合わせするのに使用されてもよい。基準マークは、撮像するのに適切な、デバイス上の任意の位置、例えばベース、周辺領域、増殖領域、又は蓋にあってよい。
【００４３】
デバイスは、例えばGrowth Direct(商標)システムによって、自動処理又はサンプル追跡を支援するために、このデバイス上にインプリントされた又は添着された固有のID標識を有していてもよい。ID標識は、バーコード又は2Dバーコードであってもよい。ID標識は、デバイスの同一性、機器及びプロトコルに対するデバイス適合性、デバイス耐用年数、滅菌履歴、並びにその他の対象の情報を追跡するために使用することができる。
使用方法
デバイスは、例えば環境中の微生物の存在をモニターするために使用することができる。環境サンプルには、限定するものではないが、空気、表面、及び衣服が挙げられる。本発明のデバイス及びキットは、微生物汚染を迅速に検出する必要がある任意の状況、例えば実験室、病院、製造領域、ナノテクノロジー製造及び適用例のための「クリーンルーム」で使用されてもよい。表面サンプルの例には、ステンレス鋼の表面、ガラス又は花崗岩の加工表面、壁面、床、及び設備表面が含まれる。表面には、指及び額などの解剖学的構造が含まれてもよい。衣服サンプルの例には、ジャケットの袖、手袋、チェストプレート、及び着用可能な衣服の任意の他の部分が含まれる。方法は、デバイスの増殖領域とある体積の空気又は表面とを接触させるステップ；デバイスをインキュベートして微生物を増殖させるステップ（インキュベーションは、室温で、室温よりも高く、又は室温よりも低い温度で行い得る）；及び微生物の増殖の程度を、例えばコロニー（図11に示されるような）の手作業での計数によって又は自動計数によって、測定するステップを含むことができる。細菌、シアノバクテリア（cyanobacteria）、原虫（protozoa）、及び真菌などの任意の培養可能な微生物を、本明細書に記載されるデバイスと併せて用いることができる。デバイスは、好気性及び嫌気性試験のために使用することができる。
【００４４】
サンプルは、周辺領域及び増殖領域が表面に接触するように、デバイスを転がすことによって収集してもよい。表面は、例えば、実験室の表面若しくは工業的表面（図12B）、衣服（図12C）、又は手袋（図12C）などの作業表面（work surface）とすることができる。本発明の別の態様では、空気サンプルは、ある体積の空気を、例えば空気モニター（図12A）内で増殖領域上を通過させることによって、又はデバイスをある期間にわたりカバーしない状態にすることによって、試験することができる。
【００４５】
サンプル収集後、デバイスは、典型的には光学カバーを使用して覆われ、微生物を増殖させるために例えばインキュベーター内で室温よりも高い又は低い温度でインキュベートされる。一実施形態では、サンプル収集後、デバイスをGrowth Direct(商標)システム内に配置してインキュベーション及び撮像を行う。デバイスは所定の時間間隔で撮像されてもよく、微生物は、当技術分野で公知の適切な方法、例えば蛍光（自己蛍光若しくは染色を介して）、反射率、又は吸光度によって検出することができる。或いは生体染色を栄養培地に導入し、増殖中に微生物に吸収させてもよい。検出は、増殖するコロニーと増殖していない微生物又は組織片とを見分けるために、繰り返してもよい。微生物の画像は、デジタル式又はフィルムのいずれかで記録してもよい。デバイスの光学蓋を、手作業で又は自動的に取り外し、保管中に保護蓋と置き換えてもよい。保護蓋は、1つ以上の固定部材を使用して、ベースに可逆的に固定してもよい。光学蓋は、1つ以上の固定部材を使用して、ベースに可逆的に固定してもよい。
【００４６】
或いはサンプルは、サンプルを膜に通して濾過し、次いで膜を本発明のデバイスに適用することによって、収集してもよい。例えば膜及び濾過デバイス（図13A及び13Bと、図14A）は、液体サンプルを濾過するのに使用してもよく、したがって膜上の任意の汚染微生物が収集される。図13A〜13Bに示されるように、濾過デバイスの例は、膜を濾過ベースに捕捉させる漏斗を備える。膜は、濾過中に平坦度が維持されるように、メッシュ支持パッドにより支持される。他の濾過デバイスは、例えばWO 2007/038478に記載されているように当技術分野で公知である。対象のサンプルは、微生物が収集されるように膜を通過する（図14B）。膜は、濾過デバイスから取り外され、膜を受容するように構成されたデバイスの栄養培地上に重ねられる（図14C〜14D）。膜は、フィルム上の基準マーク（ダッシュ）に対して位置合わせされてもよい。膜は、濾過された領域の外側の領域に、基準マーク、例えばスルーホールを備えていてもよい。そのようなスルーホールは、通常なら膜によって覆われる蛍光培地、プラスチック、又は印刷された材料を、露出させるのに使用することができる。膜は、露出した増殖領域より大きい直径であってもよく、周辺フィルムに重ねられてもよい。膜は、栄養分で濡らすことによって、増殖領域に接着させてもよい。次いで膜及びデバイスを、上述のように覆い、インキュベートし、撮像する。
【００４７】
デバイスと共に使用することができる、手作業の又は自動化されたコロニー計数のための他の方法及び機器が、当技術分野で公知である。
環境モニタリング及び濾過のためのキット
本発明はまた、デバイス、保護蓋及び光学蓋を含むキットに関する。本キットは、保護蓋をデバイスに据え付けた状態で輸送し得る。保護蓋及び光学蓋を備えるデバイスは、無菌包装で別々に又は一緒にパッケージングすることができる。使用する際に、保護蓋を取り外し、サンプリングを行い、続いて光学蓋を据え付ける。
【００４８】
あるいは、本発明はまた、デバイス、保護蓋、膜及び光学蓋を含むキットに関する。本キットは、保護蓋をデバイスに据え付けた状態で輸送し得る。保護蓋、膜及び光学蓋を備えるデバイスは、無菌包装で別々に又は一緒にパッケージングすることができる。使用する際に、保護蓋を取り外し、サンプリングを行い、続いて光学蓋を据え付ける。かかるキットはまた、本明細書に記載する濾過デバイスを含んでもよい。
他の態様
上記の明細書において言及されたすべての刊行物、特許、及び特許出願は、参照により本明細書に組み入れられる。本発明の説明された方法及びシステムの種々の改変及び変形は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく、当業者に明らかであろう。本発明を具体的な実施形態と関連して説明したが、特許請求の範囲に記載された本発明は、そのような具体的な実施形態に不当に限定されるべきではないことが理解されるべきである。実際に、当業者に明白である、本発明を実施するために説明された形態の種々の改変は、本発明の範囲内であることが意図される。
本発明の実施形態として、例えば以下を挙げることができる。
(1)  （a）微生物用の栄養培地を含有するベースと、
（b）上記栄養培地上に重なる多孔質膜であって、該栄養培地は、ベースの上方に隆起した平らな増殖領域と、平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域とを有し、該栄養培地は増殖領域で微生物の増殖を維持することが可能である、多孔質膜と、
（c）上記膜及び栄養培地を覆うように上記ベースに嵌合する蓋と
を備える細胞培養デバイス。
(2)  前記増殖領域が、サンプル収集前に約100から450ミクロンの平坦度、又はサンプル収集後に約300から600ミクロン以下の平坦度を有する、(1)に記載のデバイス。
(3)  前記膜が周辺領域において多孔質ではない、(1)に記載のデバイス。
(4)  前記膜が、前記ベースにシールされるフィルムによって、ベースに取着されている、(1)に記載のデバイス。
(5)  前記ベース及び周辺領域に付着されたフィルムであって、前記膜をベースに接着させるフィルムをさらに含む、(1)に記載のデバイス。
(6)  前記ベースが、前記膜がその全体にわたりシールされる周辺溝を含む、(1)に記載のデバイス。
(7)  （a）微生物用の栄養培地を含有するベースであって、該栄養培地はベースの上方に隆起した平らな増殖領域を有し、該栄養培地は増殖領域内で微生物の増殖を維持することが可能である、ベースと、
（b）上記栄養培地上に重なるフィルムであって、該フィルム及び栄養培地は平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域を有し、該フィルムは平らな増殖領域の一部分を露出させる開口を有する、フィルムと、
（c）上記栄養培地を覆うように上記ベースに嵌合する蓋と
を備える細胞培養デバイス。
(8)  露出した増殖領域に接触する多孔質膜をさらに含む、(7)に記載のデバイス。
(9)  （a）（i）微生物用の栄養培地を含有するベースであって、該栄養培地はベースの上方に隆起した平らな増殖領域を有し、該栄養培地は増殖領域内で微生物の増殖を維持することが可能である、ベースと、
（ii）上記栄養培地上に重なるフィルムであって、該フィルム及び栄養培地は平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域を有し、該フィルムは平らな増殖領域の一部分を露出させる開口を有する、フィルムと
を備える細胞培養デバイス、
（b）上記平らな増殖領域の露出部分に配置するために構成された多孔質膜、
（c）上記膜及び栄養培地を覆うように上記ベースに嵌合する蓋
を含む、細胞培養のためのキット。
(10)  前記増殖領域が約100から450ミクロンの平坦度を有する、(7)に記載のデバイス又は(9)に記載のキット。
(11)  前記フィルムが多孔質ではない、(7)に記載のデバイス又は(9)に記載のキット。
(12)  前記フィルムが、増殖領域上に膜を配置するための基準マークを有する、(7)に記載のデバイス又は(9)に記載のキット。
(13)  前記膜が、蛍光栄養培地、プラスチック、又は印刷された材料を露出させるスルーホールを有する、(8)に記載のデバイス又は(9)に記載のキット。
(14)  前記膜が混合セルロースエステル膜を含む、(1)若しくは(8)に記載のデバイス又は(9)に記載のキット。
(15)  前記膜が、実質的に非放射性であり、かつ実質的に非反射性である、(1)若しくは(8)に記載のデバイス又は(9)に記載のキット。
(16)  前記膜が黒色である、(1)若しくは(8)に記載のデバイス又は(9)に記載のキット。
(17)  前記ベースがポリスチレンを含む、(1)若しくは(7)に記載のデバイス又は(9)に記載のキット。
(18)  基準マークをさらに含む、(1)若しくは(7)に記載のデバイス又は(9)に記載のキット。
(19)  前記基準マークが前記増殖領域の外側にある、(18)に記載のデバイス又はキット。
(20)  前記基準マークが、放射性プラスチック、印刷された蛍光材料、又はエンボス加工された蛍光材料を含む、(19)に記載のデバイス又はキット。
(21)  前記蓋が、増殖領域を撮像できるように配置された光学的に透明な材料を含む、(1)若しくは(7)に記載のデバイス又は(9)に記載のキット。
(22)  前記蓋が、ベースに取着される場合、微生物の進入による汚染を防止し、前記蓋が空気間隙によって膜から隔てられている、(1)若しくは(7)に記載のデバイス又は(9)に記載のキット。
(23)  前記ベースに固有のID標識をさらに含む、(1)若しくは(7)に記載のデバイス又は(9)に記載のキット。
(24)  前記ベースが、蓋に対するベースの約50μmよりも大きい回転を防止するように、蓋に嵌合する、(1)若しくは(7)に記載のデバイス又は(9)に記載のキット。
(25)  前記ベースが、底面と、底面の外周の周りに且つ底面から上向きに延びる側壁とを有し、前記栄養培地がベースの側壁内にあり、前記蓋が、上面と、上面の外周の周りに且つ上面から下向きに延びる側壁とを有し、前記蓋がベースに可逆的に固定される、(1)若しくは(7)に記載のデバイス又は(9)に記載のキット。
(26)  前記蓋が軸方向圧縮によりベースに固定される、(25)に記載のデバイス又はキット。
(27)  前記蓋がベースに対する蓋の回転によってベースに固定される、(25)に記載のデバイス又はキット。
(28)  前記ベースの側壁から又は前記蓋の側壁から横方向に延びる周辺リムと、前記ベースの側壁から又は前記蓋の側壁から横方向に延びる第1の移動止めをさらに含み、該周辺リムは、蓋の上部又はベースの底部から見て外方を向く近位側面と、蓋の上部又はベースの底部に面する遠位側面と、該近位側面と遠位側面を接続する側方縁部とを有し、
前記蓋が周辺リムを有し、かつ前記ベースが少なくとも1つの第1の移動止めを有するか、又は前記蓋が少なくとも1つの第1の移動止めを有し、かつ前記ベースが周辺リムを有するものであり、前記蓋は、周辺リムと少なくとも1つの第1の移動止めとの間の相互係合によってベースに固定される、(25)に記載のデバイス又はキット。
(29)  前記周辺リムが、ベースの側壁又は蓋の側壁の周りで連続している、(28)に記載のデバイス又はキット。
(30)  横方向に延びる少なくとも1つの第1の移動止めが、第1の移動止めと、ベースの底面又は蓋の上面との間の隙間を画定し、該隙間は周辺リムを受容するようにサイズが決められ、第1の移動止めは周辺リムの遠位側面に係合する、(28)に記載のデバイス又はキット。
(31)  少なくとも1つの第1の移動止めが周辺リムの側面に係合する、(28)に記載のデバイス又はキット。
(32)  前記側壁から横方向に延びる少なくとも1つの第2の移動止めをさらに含み、前記周辺リムは切り溝を含み、第2の移動止めが切り溝に係合する、(28)に記載のデバイス又はキット。
(33)  前記周辺リムが、ベースの側壁又は蓋の側壁の周囲に沿って不連続である、(28)に記載のデバイス又はキット。
(34)  前記リムの遠位側面が傾斜しており、少なくとも1つの第1の移動止めが、ベースに対する蓋の相対回転によってリムの遠位側面に係合する、(33)に記載のデバイス又はキット。
(35)  複数の周辺リム及び第1の移動止めをさらに含み、前記蓋は、90度以下の相対回転によってベースに固定される、(34)に記載のデバイス又はキット。
(36)  前記蓋又はベースに、指定量の回転後に周辺リムの回転を阻止する止め具をさらに含む、(34)に記載のデバイス又はキット。
(37)  (a）(1)〜(6)及び(14)〜(36)のいずれかに記載のデバイスを用意するステップ、
（b）前記デバイスの増殖領域に、ある体積の空気又は表面を接触させるステップ、
（c）前記デバイスをインキュベートして微生物を増殖させるステップ、
（d）微生物の増殖の程度を測定するステップ
を含む、環境中の微生物の存在をモニターする方法。
(38)  前記表面が、工業用又は実験室用の表面又は衣服である、(37)に記載の方法。
(39)  ステップ（b）が、周辺領域及び増殖領域が表面に接触するようにデバイスを転がすこと、又はある体積の空気を増殖領域上を通過させることを含む、(37)に記載の方法。
(40)  ステップ（d）が増殖領域を光学的に撮像することを含む、(37)に記載の方法。
(41)  微生物の数を定量するために画像を分析するステップをさらに含む、(40)に記載の方法。
(42)  ステップ（c）及び（d）を繰り返して、増殖する微生物のコロニーを測定するステップをさらに含む、(40)に記載の方法。
(43)  （a）(8)〜(36)のいずれかに記載のデバイス又はキットを用意するステップ、（b）サンプルを膜に通して濾過するステップ、
（c）上記膜を増殖領域上に配置するステップ、
（d）上記デバイスをインキュベートして微生物を増殖させるステップ、
（e）微生物の増殖の程度を測定するステップ
を含む、サンプル中の微生物の存在をモニターする方法。
(44)  ステップ（e）が増殖領域を光学的に撮像することを含む、(43)に記載の方法。
(45)  微生物の数を定量するために画像を分析するステップをさらに含む、(44)に記載の方法。
(46)  ステップ（d）及び（e）を繰り返して、増殖する微生物のコロニーを測定するステップをさらに含む、(44)に記載の方法。
(47)  （a）（i）微生物用の栄養培地を含有するベースと、
（ii）上記栄養培地上に重なる多孔質膜であって、該栄養培地はベースの上方に隆起した平らな増殖領域と平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域とを有し、該栄養培地は増殖領域で微生物を維持することが可能である、多孔質膜と
を備える細胞培養デバイス、
（b）上記ベースに取着され、微生物の進入による汚染を防止する保護蓋であって、空気間隙によって上記膜から隔てられている保護蓋、
（c）上記保護蓋が取り外された場合にベースに取着可能であり、ベースに取着された場合に増殖領域を撮像できるように配置された光学的に透明な材料を含む光学蓋
を含むキット。
(48)  （a）（i）微生物用の栄養培地を含有するベースであって、該栄養培地はベースの上方に隆起した平らな増殖領域を有し、該栄養培地は増殖領域で微生物の増殖を維持することが可能である、ベースと、
（ii）上記栄養培地上に重なるフィルムであって、該フィルム及び栄養培地は平らな増殖領域の縁部からベースまで傾斜する周辺領域を有し、該フィルムは平らな増殖領域の一部分を露出させる開口を有する、フィルムと
を備える細胞培養デバイス、
（b）平らな増殖領域の露出部分に配置されるよう構成された多孔質膜、
（c）上記ベースに取着され、微生物の進入による汚染を防止する保護蓋であって、空気間隙により増殖領域から隔てられている保護蓋、
（d）上記保護蓋が取り外された場合にベースに取着可能であり、ベースに取着された場合に増殖領域を撮像できるように配置された光学的に透明な材料を含む光学蓋
を含む、細胞培養のためのキット。
【００４９】
他の態様は特許請求の範囲に含まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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