(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において、食欲低減用、食物摂取量低減用、カロリー摂取量低減用、インスリン感受性の改善用、および、体重増加の低減または予防用、から選ばれる１以上の用途で使用される、プロピオネートイヌリンエステルを含む治療剤。
【請求項２】
肥満または糖尿病の治療または予防用である、プロピオネートイヌリンエステルを含む治療剤。
【請求項３】
プロピオネートイヌリンエステルの置換度が０．２から１の間である、請求項１または請求項２に記載の治療剤。
【請求項４】
プロピオネートイヌリンエステルの置換度が０．５５から１の間である、請求項１または請求項２に記載の治療剤。
【請求項５】
体重１キログラム（ｋｇ）当たりプロピオネートイヌリンエステル０．１ｍｇから体重１ｋｇ当たり５００ｍｇを与える量で投与される、請求項１から４のいずれか一項に記載の治療剤。
【請求項６】
経口投与される、請求項１から５のいずれか一項に記載の治療剤。
【請求項７】
食物に添加される、および／または食品添加物として使用される、請求項１から６のいずれか一項に記載の治療剤。
【請求項８】
対象が過体重、例えば肥満である、請求項１から７のいずれか一項に記載の治療剤。
【請求項９】
対象が糖尿病である、請求項１から８のいずれか一項に記載の治療剤。
【請求項１０】
対象に５ｇから２０ｇの間の１日用量で投与される、請求項１から９のいずれか一項に記載の治療剤。
【請求項１１】
食欲低減用、食物摂取量低減用、カロリー摂取量低減用、インスリン感受性の改善用、および、体重増加の低減または予防用、から選ばれる１以上の用途で使用される、プロピオネートイヌリンエステルを含有する機能性食品又は食事サプリメント。
【請求項１２】
正常ＢＭＩを有する対象における食欲低減用、食物摂取量低減用、および、カロリー摂取量低減用、から選ばれる１以上の用途で使用される、請求項１に記載の治療剤。
【請求項１３】
治療有効量の別の薬剤とともに投与される、請求項１から４のいずれか一項に記載の治療剤。
【請求項１４】
前記別の薬剤は、追加の食欲抑制薬、追加の食物摂取量低減剤、血漿グルコース低下剤または血漿脂質改変剤からなる群から選ばれる請求項１３に記載の治療剤。
【請求項１５】
対象において、食欲低減用、食物摂取量低減用、カロリー摂取量低減用、インスリン感受性の改善用、および、体重増加の低減または予防用、から選ばれる１以上の用途で使用される医薬を製造するための、プロピオネートイヌリンエステルの使用。
【請求項１６】
肥満または糖尿病を治療または予防する医薬を製造するための、プロピオネートイヌリンエステルの使用。
【請求項１７】
−治療有効量のプロピオネートイヌリンエステル、および
−１種または複数の薬学的に許容される賦形剤
を含む医薬組成物。
【請求項１８】
−治療有効量のプロピオネートイヌリンエステル、および
−追加の食欲抑制薬
を含むキットであって、
２種又はそれよりも多くの構成成分を同時、別々または順次に共投与するキット。
【請求項１９】
−治療有効量のプロピオネートイヌリンエステル、および
−追加の食欲抑制薬
を含む組成物。
【請求項２０】
肥満または糖尿病を治療または予防する医薬として使用するための、請求項１７または１９に記載の組成物。
【請求項２１】
対象において、食欲低減用、食物摂取量低減用、カロリー摂取量低減用、インスリン感受性の改善用、および、体重増加の低減または予防用、から選ばれる１以上の用途の医薬として使用される、請求項１７または１９に記載の組成物。
【請求項２２】
水中にイヌリンを溶解させて、１リットル当たりフルクトース当量の１モルから２モルの間の濃度とすること、前記イヌリンの溶液の温度を１０℃から２０℃の間に低下させた後、イヌリンの溶液の温度を１０℃から２０℃の間に、溶液のｐＨをｐＨ８からｐＨ８．５の間に維持しながら、イヌリン溶液にプロピオン酸無水物および２０％ｗ／ｖから１００％ｗ／ｖの間の濃度の水性アルカリ金属塩基を添加することを備えたプロピオネートイヌリンエステルの製造方法であって、イヌリンに添加されるプロピオン酸無水物のモル数を、前記イヌリン溶液中のフルクトース単位当量のモル数×目標置換度×１．２５として算出することで所望の置換度とする、プロピオネートイヌリンエステルの製造方法。
【請求項２３】
前記水中にイヌリンを溶解させる工程が、７０℃から８０℃の間で実行される、請求項２２に記載のプロピオネートイヌリンエステルの製造方法。
【請求項２４】
水中にプロピオネートイヌリンエステルを溶解し、溶液のｐＨを濃強酸でｐＨ２に調整し、０．２Ｍ強酸で洗浄およびコンディショニングした活性炭カラムの中に溶液を通過させ、カラムから溶液を回収し、濃強酸でｐＨ２に調整し、０．２Ｍ強酸で洗浄およびコンディショニングした第２の活性炭カラムの中に溶液を通過させ、溶液をカラムから回収し、濃強酸でｐＨ２に調整し、およびスプレー乾燥することを含む、プロピオネートイヌリンエステルを精製する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、特に肥満および糖尿病の分野における、食欲、食物摂取量および／もしくはカロリー摂取量を制御するため、ならびに／またはインスリン感受性を改善するためのプロピオネートイヌリンエステルの使用に関する。
【発明の背景】
【０００２】
肥満およびその関連疾患は、２型糖尿病、冠動脈性心疾患および特定種の癌を含めて、２１世紀の主要な公衆衛生の課題である。世界保健機関（ＷＨＯ）は、世界的な小児肥満および成人肥満のレベルが流行の割合に達し、先進国および発展途上国の両方における発生率が警戒すべき速度で増加していることを宣言した（ＷＨＯ、Ｏｂｅｓｉｔｙ：Ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ  ａｎｄ  ｍａｎａｇｉｎｇ  ｔｈｅ  ｇｌｏｂａｌ  ｅｐｉｄｅｍｉｃ、Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｎ  ａ  ＷＨＯ  Ｃｏｎｓｕｌｔａｔｉｏｎ、２０００）。世界の成人集団の最大５８％が２０３０年までに過体重または肥満になることが予測される（Ｋｅｌｌｙ，Ｔ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｂｅｓ．３２：１４３１〜７、２００８）。
【０００３】
糖尿病は、膵臓が十分なインスリンを産生しない場合に生じる慢性疾患（１型糖尿病）、または身体が産生するインスリンを有効に使用できない場合の慢性疾患（２型糖尿病）である。過体重、肥満および肉体的不活発であることに関係する２型糖尿病は、糖尿病の全症例の約９０％を占め、症例数は地球規模で増加している。ＷＨＯは、糖尿病の死亡数が２００５年から２０３０年の間で２倍になるため（ＷＨＯ概況報告書第３１２号、２０１１年）、２０３０までに糖尿病が世界的に第７の主要な死因になると予測している。
【０００４】
２型糖尿病疾患リスクまたは心血管疾患リスクなど、肥満に関係する疾患リスクは、他とは無関係にボディマス指数（ＢＭＩ）の増加と共に増加する。このリスクは、２４．９より大きいＢＭＩの１ポイント毎に、女性では心臓病のリスクが５％増加し、男性では心臓病のリスクが７％増加すると定量化された（Ｋｅｎｃｈａｉａｈ，Ｍ．Ｄ．ら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４７：３０５、２００２；Ｍａｓｓｉｅ，Ｂ．Ｍ．、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４７：３５８、２００２を参照）。加えて、肥満者の減量が重要な疾患リスク因子を低減するという実質的証拠がある。過体重および肥満の成人の双方において、初期体重の１０％などの小さい減量さえ、高血圧、高脂質血症および高血糖症などのリスク因子の減少に関連していた。近年、相当な減量が２型糖尿病を有効に治癒できることが示された（Ｌｉｍ，Ｅ．Ｌ．ら、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ  ５４：２５０６〜１４、２０１１）。
【０００５】
肥満の原因は、複合的および多因子性である。増加する証拠は、肥満が自己制御の単純な問題ではなく、食欲調節およびエネルギー代謝を伴う複合的障害であることを示唆している。肥満の病因は最終的に確立されていないが、遺伝的、代謝的、生化学的、文化的および心理社会的な要因が寄与すると思われる。
【０００６】
食事療法および運動は、体重増加を減少する単純なプロセスを提供するが、過体重者および肥満者は、しばしば、有効に減量させるような要因を十分に制御することができない。薬物療法が利用可能であり、包括的な減量プログラムの一部として使用できるいくつかの減量薬が、食品医薬品局によって承認されてきた。しかしながら、これらの薬物の多くは、重篤な有害副作用を有することが証明され、取り下げなければならなかった。許容される薬物療法は、長期間にわたる使用に対して許容されなければならず、そのため副作用のリスクは低くなければならない。侵襲の少ない方法が失敗に終わり、患者が肥満関連の罹患または死亡の高いリスクがある場合、減量外科手術は、臨床的に重度の肥満を有する、慎重に選択された患者における選択肢である。しかしながら、これらの治療は、高リスクであり、限定数の患者だけにおける使用に適当である。
【０００７】
減量を希望することがあるのは、肥満対象だけでない。例えば、推奨される範囲の上部に体重を有する人々は、理想的重量に近づけるために減量を希望することがある、または、健康体重を有する人々は、体重の増加を予防することにより体重を維持する際の補助を得たいと欲することがある。したがって、過体重および肥満対象ならびに正常体重の対象の減量を起こすために使用できる薬剤の必要性が存続している。
【０００８】
Ｆｏｒｅｓｉｇｈｔ報告書は、肥満の食事療法における主要な目標として食欲調節を強調した（Ｂｕｔｌａｎｄ，Ｂ．Ｊ．、ら、Ｆｏｒｅｓｉｇｈｔ  Ｔａｃｋｌｉｎｇ  Ｏｂｅｓｉｔｉｅｓ：Ｆｕｔｕｒｅ  Ｃｈｏｉｃｅｓ−Ｐｒｏｊｅｃｔ  Ｒｅｐｏｒｔ、Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｏｆｆｉｃｅ  ｆｏｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２００７）。特に興味対象なのは、満腹感を増加させる機能性食品または新規生成物の概念である。目標は、膨満の知覚を増加させるとともに個体がより早く食べることを止めるのを促し、したがって総エネルギー摂取量を低減する食物または食事レジメンを設計することである（Ｈｉｌｌ，Ｊ．Ｏ．、Ｐｅｔｅｒｓ，Ｊ．Ｃ．、Ｂｒ．Ｊ．Ｎｕｔｒ．８８（補足２）：Ｓ２１３−８、２００２）。
【０００９】
肥満の薬物療法または食事療法の成功の１つの目標は、それが公衆衛生レベルで適用可能であり得ることである。これは、全生涯にわたって食欲調節を改善するとともに体重増加を予防するための、集団レベルで安全に適用することができる費用効果の高い治療を意味する。魅力的戦略は、食欲、食物摂取量および／またはカロリー摂取量を低減する構成成分を用いる食物の強化である。嗜好性に対して注目すべき影響がなく、パンなどの主食品に添加することができる組成物は、より多くの人々にとって簡便にアクセス可能であり、そのため公衆衛生レベルで適用可能である。
【００１０】
食欲、食物摂取量および／またはカロリー摂取量を首尾よく調節する肥満のさらなる薬物療法および食事療法、ならびに不快な副作用を有しないこうした治療に対する必要性が現在も残っている。健康または過体重の対象における体重増加を予防することができる薬物療法および食事療法に対する必要性も残っている。本発明者らの狙いは、食欲、食物摂取量および／もしくはカロリー摂取量を低減し、ならびに／または対象におけるインスリン感受性を改善することができ、公衆衛生レベルで適用可能な治療を同定することである。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、食欲、食物摂取量および／もしくはカロリー摂取量の低減のため、ならびに／または対象におけるインスリン感受性を改善するためのプロピオネートイヌリンエステル(propionate inulin ester)（「ＰＥ」）を提供する。
【００１２】
本発明は、肥満または糖尿病の治療または予防のためのプロピオネートイヌリンエステルも提供する。
【００１３】
本発明は、経口投与されたプロピオネートイヌリンエステルが、食欲、食物摂取量およびカロリー摂取量を低減し、満腹感を増加させ、ヒトにおけるイヌリン感受性を改善するという本発明者らによる所見に基づいている。
【００１４】
本発明は、さらに、特定の新規なプロピオネートイヌリンエステルを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】非置換イヌリンと比較した、異なるエステル化度（ｄｅ）のプロピオネートイヌリンエステルを経口摂取した後の糞便培養のバッチにおける短鎖脂肪酸のモル比を示すグラフである。
【図２】図２（ａ）〜（ｃ）は血糖レベルに対する、異なるｄｅを有するプロピオネートイヌリンエステルの効果を示すグラフである。
【図３】図３（ａ）〜（ｃ）血中インスリンレベルに対する、異なるｄｅを有するプロピオネートイヌリンエステルの効果を示すグラフである。
【図４】図４（ａ）は７時間にわたって取った食事の総食物摂取量に対する、異なるｄｅを有するプロピオネートイヌリンエステルの効果を示すグラフである；図４（ｂ）はプロピオネートイヌリンエステルの経口摂取から７時間後に取った無制限の食事の食物摂取量に対する、異なるｄｅを有するプロピオネートイヌリンエステルの効果を示すグラフである。
【図５】７時間にわたってイヌリンプロピオネートエステルの増加する用量（ｄｅ＝０．７４）を用いた、食べたいという欲求および膨満の主観的な食欲格付けを示すグラフである。
【図６】１３Ｃ標識プロピオネートイヌリンエステルの摂取後の、呼気における１３Ｃの濃縮（回収率）および呼気水素のレベル（ｐｐｍ）を示すグラフである。
【図７】図７（ａ）はイヌリンと比較した、プロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４、１０ｇ）の摂取から７時間後の食物摂取量を示すグラフである；図７（ｂ）はプロピオネートイヌリンエステルサプリメント（ｄｅ＝０．７４、１０ｇ）の摂取から７時間後の、２０人の対象における食物摂取量の個々の分析を示すグラフである。
【図８】図８（ａ）〜（ｅ）は摂取時および摂取から最大７時間後の、プロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４、１０ｇ）の摂取からの空腹、不調、快感、予想食物摂取量および膨満の感覚についての視覚的アナログスケールの結果を示すグラフである。
【図９】図９（ａ）および図９（ｄ）はプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４、１０ｇ）の摂取時および摂取から最大７時間後の腸管ペプチドＧＬＰ−１およびＰＹＹ（ｐｍｏｌ／Ｌ）のレベルを示すグラフである；図９（ｂ）および図９（ｅ）は０分から２４０分の間のこれらの実験に関する血漿ＡＵＣを示すグラフである；図９（ｃ）および図９（ｆ）は２４０分から４２０分の間のこれらの実験に関する血漿ＡＵＣを示すグラフである。
【図１０】図１０（ａ）および図１０（ｂ）はプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４、１０ｇ）の摂取時および摂取から最大７時間後のグルコース（ｍｍｏｌ／Ｌ）およびインスリン（ｍＵ／Ｌ）のレベルを示すグラフである。
【図１１】図１１（ａ）および図１１（ｂ）はプロピオネートを用いるインキュベーション後の初代ヒト結腸細胞(primary human colonic cells)から放出されたＰＹＹおよびＧＬＰ−１のレベルを示すグラフである。
【図１２】ヒト対象の長期食物補充調査における対象の募集および保持のためのプロセスを示す図である。
【図１３】対象のベースライン特性、ならびにプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）およびイヌリン対照の２４週間補充後の心血管および糖尿病のリスク因子における変化を示す表である。
【図１４】図１４（ａ）は体重に対するプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）およびイヌリン対照の２４週間補充の効果を示すグラフである；図１４（ｂ）はプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）およびイヌリン対照の２４週間補充の終了時に、ベースライン体重の３％以上および５％以上が増加した対象割合を示すグラフである；図１４（ｃ）および図１４（ｄ）はベースライン時（０週目）ならびにプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）およびイヌリン対照の２４週間補充後（２４週目）の腸管ペプチドＧＬＰ−１およびＰＹＹ（ｐｍｏｌ／Ｌ）のレベルを示すグラフである。
【図１５】ベースライン時（０週目）ならびにプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）およびイヌリン対照の２４週間補充後（２４週目）の平均体脂肪蓄積を示す表である。
【図１６】プロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）（Ａ）、イヌリン対照（Ｂ）および基質なしの対照（Ｃ）を用いる嫌気性のｐＨ制御糞便バッチ培養発酵後の０時間、１０時間、２４時間、３４時間および４８時間における培養液中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の種（Ｂｉｆ１６４）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ／Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ（Ｂａｃ３０３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ／Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（Ｅｒｅｃ４８２）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ（Ｃｈｉｓ１５０）、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ  ｃｌｕｓｔｅｒ（Ａｔｏ２９１）、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｒｅｃｔａｌｅ／Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃｏｃｃｏｉｄｅｓ（Ｅｒｅｃ４８２）および全細菌（ＥＵＢ３３８  Ｉ  ＩＩ  ＩＩＩ）の細菌濃度（Ｌｏｇ１０細胞／ｍｌ）を示す表である。
【図１７】ベースライン時（０週）の標準的朝食の摂取後の呼気水素（ｐｐｍ）、ならびにプロピオネートイヌリンエステルおよびイヌリン対照の２４週間補充後（２４週目）の、１０ｇのプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）（ＰＥ群）または１０ｇのイヌリン（対照群）を含んだ標準的朝食の摂取後の呼気水素（ｐｐｍ）の平均レベルを示すグラフである。
【図１８】図１８（ａ）はベースライン時（０週目）での、ならびにプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）およびイヌリン対照を用いる２４週間補充後の、２４週目での食後グルコース応答（ｍｍｏｌ／Ｌ）を示すグラフである；図１８（ｂ）はベースライン時（０週目）での、ならびにプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）およびイヌリン対照を用いる２４週間補充後の、２４週目でのグルコース血漿グルコースＡＵＣを示すグラフである；図１８（ｃ）はプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）およびイヌリン対照を用いる２４週間補充後の、２４週目におけるグルコース血漿ＡＵＣのベースライン（０週目）からの変化を示すグラフである。
【図１９】図１９（ａ）はベースライン時（０週目）での、ならびにプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）およびイヌリン対照を用いる２４週間補充後の、２４週目での食後インスリン応答（ｍＵ／Ｌ）を示すグラフである；図１９（ｂ）はベースライン時（０週目）での、ならびにプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）およびイヌリン対照を用いる２４週間補充後の、２４週目での血漿インスリンＡＵＣを示すグラフである；図１９（ｃ）はプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）およびイヌリン対照を用いる２４週間補充後の、２４週目におけるインスリン血漿ＡＵＣのベースライン（０週目）からの変化を示すグラフである。
【定義】
【００１６】
この開示の各種実施形態の概説を容易にするために、具体的用語の以下の説明を提供する。
【００１７】
動物：生きている多細胞脊椎動物生物体、例えば哺乳動物および鳥類が含まれるカテゴリー。哺乳動物という用語には、ヒトおよび非ヒトの哺乳動物両方が含まれる。同様に、「対象」という用語には、ヒトおよび獣医学的対象の両方が含まれる。
【００１８】
食欲：食物に対する自然の欲求または熱望。一実施形態において、食欲は、食物に対する欲求を評価するための調査によって測定される。食欲の増加は、一般に、摂食行動の増加に至る。
【００１９】
食欲は、当業者に知られている任意の手段によって測定することができる。例えば、食欲の減少は、認識された空腹(perceived hunger)、満腹および／または膨満に関係した心理学的評価によって評価することができる。空腹は、当業者に知られている任意の手段によって評価することができる。例えば、空腹は、心理学的アッセイを使用して、例えば、これに限定されないが視覚的アナログスコア（ＶＡＳ）アンケートなどのアンケートを使用する空腹感および知覚認識の評価によって評価される。１つの具体的な非限定的例において、空腹は、食欲、飲料、予想の食物摂取(prospective food consumption)、吐き気、および、匂いまたは味に関する認識に関する質問に答えることによって評価される。
【００２０】
食欲抑制薬：食物に対する欲求を減少させる化合物。市販されている食欲抑制薬としては、これらに限定されないが、アンフェプラモン（ジエチルプロピオン）、フェンテルミン、マジンドールおよびフェニルプロパノールアミンフェンフルラミン、デクスフェンフルラミン、ならびにフルオキセチンが挙げられる。
【００２１】
ボディマス指数（ＢＭＩ）：時々ケトレー指数とも呼ばれる、ボディマスを測定するための数式。ＢＭＩは、体重（ｋｇ）を高さ２（メートル２）で割ることによって算出される。「正常」として認容されている男性および女性の両方について現在の標準は、２０〜２４．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩである。一実施形態において、２５ｋｇ／ｍ２より大きいＢＭＩは、対象を肥満として同定するために使用することができる。肥満グレードＩ（時々、肥満よりむしろ「過体重」と称される）は、２５〜２９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩに対応する。肥満グレードＩＩは、３０〜４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩに対応し；肥満グレードＩＩＩは、４０ｋｇ／ｍ２より大きいＢＭＩに対応する（Ｊｅｑｕｉｅｒ，Ｅ．、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．４５：１０３５〜４７、１９８７）。理想的な体重は、高さ、体格、骨構造および性別に基づく種および個体の間で変動する。
【００２２】
糖尿病：インスリンの内因性不足および／またはインスリン感受性の欠損のいずれかにより、細胞が、内因性グルコースをその膜を通して輸送できないこと。糖尿病は、インスリンの不十分な分泌または標的組織のインスリン抵抗性による、炭水化物、タンパク質および脂肪の代謝障害の慢性症候群である。それは、主要な２形態：インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ、Ｉ型）およびインスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ、ＩＩ型）において起こり、これらは、病因、病態、遺伝、発症年齢、および治療が異なる。
【００２３】
糖尿病の主要な２形態は、両方とも、グルコース恒常性の制御のために必要とされる量および正確なタイミングでインスリンを送達することができないことを特徴とする。１型糖尿病またはインスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）は、内因性インスリンの不十分なレベルをもたらすβ細胞の破壊によって引き起こされる。２型糖尿病またはインスリン非依存性糖尿病は、インスリンに対する身体の感受性の欠損およびインスリン産生の相対的不足の両方に起因する。２型糖尿病は、過体重、肥満および運動不足であることに関係する。
【００２４】
置換度：炭水化物、例えばイヌリンの置換度（ｄｅ）は、糖単位当たりに結合する置換基の平均数である。イヌリンプロピオネートエステルのｄｅは、イヌリン分子のフルクトースまたはグルコースの単位当たりに結合するプロピオネート基の平均数である。イヌリンプロピオネートエステルの最大ｄｅは、３個の遊離ＯＨ基だけを有する各フルクトース単位に依り３である。
【００２５】
食物摂取量：個体によって摂取された食物の量。食物摂取量は、体積もしくは重量によってまたはカロリーによって測定することができる。例えば、食物摂取量は、個体によって摂取された食物の総量であり得る。あるいは、食物摂取量は、タンパク質、脂肪、炭水化物、コレステロール、ビタミン、鉱物、または個体の任意の他の食物構成成分の量であり得る。「タンパク質摂取量」は、個体によって摂取されたタンパク質の量を指す。同様に、「脂肪摂取量」、「炭水化物摂取量」、「コレステロール摂取量」、「ビタミン摂取量」および「ミネラル摂取量」は、個体によって摂取されたタンパク質、脂肪、炭水化物、コレステロール、ビタミンまたはミネラルの量を指す。
【００２６】
グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ１）：ＧＬＰ１は、グルカゴン遺伝子の転写産物から誘導される。ＧＬＰ１の生物活性形態は、ＧＬＰ１（７〜３７）およびＧＬＰ１（７〜３６）−ＮＨ２として知られている切断型である。ヒトＧＬＰ１のシークエンスは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／？ｔｅｒｍ＝ＧＬＰ１から利用可能である。
【００２７】
ＧＰＲ４３：遊離脂肪酸受容体２（ＦＦＡＲ２）としても知られているＧＰＲ４３は、オーファンＧタンパク質共役型受容体の同族ファミリーのメンバーであり、ホルモンＧＬＰ−１およびＰＹＹを放出する腸内分泌Ｌ細胞上に発現される。短鎖脂肪酸は、ＧＰＲ４３のリガンドであり、プロピオネート(propionate)、続いてアセテート(acetate)が、該受容体に対して最も強い親和性を有する。（ＬｅＰｏｕｌ，Ｅ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００３）、２７８巻、２５４８１〜２５４８９ページ）。ヒトＧＬＰ１のシークエンスは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／？ｔｅｒｍ＝ＦＦＡＲ２から利用可能である。
【００２８】
イヌリン：イヌリンは、しばしば末端グルコース単位を有する、全てのβ（２→１）グリコシド結合線状フルクタンを網羅する総称である。末端グルコースを有するイヌリンは、ＧｐｙＦｎと省略されるアルファ−Ｄ−グルコピラノシル−［ベータ−Ｄ−フルクトフラノシル］（ｎ−１）−Ｄ−フルクトフラノシドとして知られている。
【００２９】
グルコースを有しないイヌリンは、ＦｐｙＦｎと省略されるベータ−Ｄ−フルクトピラノシル−［Ｄ−フルクトフラノシル］（ｎ−１）−Ｄ−フルクトフラノシドである。一般に、植物から誘導されるイヌリンは、２０個から数千個の間のフルクトース単位を含有する。より小さい化合物は、フルクト−オリゴ糖類と呼ばれ、最も単純なのは、２個のフルクトース単位および１個のグルコース単位を有する１−ケストースである。
【００３０】
消化不可能な炭水化物（ＮＤＣ）：ＮＤＣは、胃および小腸中では非消化性であるが、ＳＣＦＡへの細菌の発酵プロセス、細菌バイオマスおよび他の副生物によって結腸中で分解される炭水化物である。ＮＤＣとしては、イヌリン、ペクチン、フルクト−オリゴ糖、β−グルカン、Ｌ−ラムノース、アラビノガラクタンおよびガラクト−オリゴ糖が挙げられる。
【００３１】
正常な日常食事療法：所定の種の個体のための平均的食物摂取量。正常な日常食事療法は、カロリー摂取量、タンパク質摂取量、炭水化物摂取量および／または脂肪摂取量の点から表すことができる。ヒトにおける正常な日常食事療法は、一般に、約２，８００カロリーを含む。加えて、ヒトにおける正常な日常食事療法には、一般に、約１２ｇから約４５ｇのタンパク質、約１２０ｇから約６１０ｇの炭水化物、および約１１ｇから約９０ｇの脂肪が含まれる。低カロリー食事療法は、ヒト個体の正常なカロリー摂取量のわずか約８５％、好ましくはわずか約７０％である。
【００３２】
動物において、カロリーおよび栄養の所要量は、動物の種およびサイズに依存して変動する。例えば、ネコにおいて、１ポンド当たりの合計カロリー摂取量、ならびにタンパク質、炭水化物および脂肪のパーセント分布は、ネコの年齢および生殖状態とともに変動する。ネコについての一般ガイドラインは、しかしながら、４０ｃａｌ／ｌｂ／日（１８．２ｃａｌ／ｋｇ／日）である。約３０％から約４０％はタンパク質であるべきであり、約７％から約１０％は炭水化物由来であるべきであり、約５０％から約６２．５％は脂肪摂取量から誘導されるべきである。当業者は、任意の種の個体の正常な日常食事療法を容易に同定することができる。
【００３３】
肥満：過剰の体脂肪が人を健康リスクにさらす恐れがある状態（Ｂａｒｌｏｗ，Ｓ．Ｅ．、およびＤｉｅｔｚ，Ｗ．Ｈ．、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １０２：Ｅ２９、１９９８；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ，ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＨＬＢＩ），Ｏｂｅｓ．Ｒｅｓ．６（補足２）：５１Ｓ−２０９Ｓ、１９９８を参照）。過剰の体脂肪は、エネルギー摂取量およびエネルギー支出の不均衡の結果である。例えば、ボディマス指数（ＢＭＩ）を使用することで、肥満を評価することができる。１つの共通使用慣習において、２５．０ｋｇ／ｍ２から２９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩは過体重であり、一方、３０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩは肥満である。
【００３４】
別の慣習において、ウエスト周囲を使用することで、肥満を評価する。この慣習において、男性では、１０２ｃｍ以上のウエスト周囲が肥満と考えられ、一方女性では、８９ｃｍ以上のウエスト周囲が肥満と考えられる。強い証拠が、肥満は個体の罹患率および死亡率の両方に影響することを示す。例えば、肥満個体は、とりわけ、心疾患、非インスリン依存性（２型）糖尿病、高血圧、脳卒中、癌（例えば、子宮内膜癌、乳癌、前立腺癌、および結腸癌）、脂質異常症、胆嚢疾患、睡眠時無呼吸、受精能の低減および変形性関節症に対するリスクが増加する（Ｌｙｚｎｉｃｋｉ，Ｊ．Ｍ．ら、Ａｍ．Ｆａｍ．Ｐｈｙｓ．６３：２１８５、２００１を参照）。
【００３５】
過体重：個体の理想的体重を超える体重である個体。過体重個体は肥満であり得るが、必ずしも肥満というわけでない。例えば、過体重個体は、個体の重量を減少させることを望む任意の個体である。１つの慣習において、過体重個体は、２５．０ｋｇ／ｍ２から２９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する個体である
【００３６】
ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）：ＰＹＹという用語は、本明細書で使用される場合、下方小腸（回腸）および結腸を裏打ちする細胞によって血中に分泌されるホルモンであるペプチドＹＹポリペプチドを指す。ヒトＧＬＰ１のシークエンスは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／？ｔｅｒｍ＝ｐｙｙから利用可能である
【００３７】
末梢投与：中枢神経系の外側への投与。末梢投与には、脳への直接投与が含まれない。末梢投与としては、これらに限定されないが、血管内、静脈内、筋肉内、皮下、吸入、経口、腹腔内、直腸、経皮、舌下または鼻腔内の投与が挙げられる。
【００３８】
短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡs）：短鎖脂肪酸は、６個以下の炭素の脂肪族尾部(aliphatic tails)を有する脂肪酸である。ＳＣＦＡsとしては、６個の炭素以下のカルボン酸が挙げられ、これらとしては、アセテート(acetate)、プロピオネート(propionate)およびブチレート(butyrate)、ならびにイソブチレート（２−メチルプロピオネート）(isobutyrate (2-methylpropionate))およびイソバレレート（３−メチルブチレート）などの分岐酸が挙げられる。ＳＣＦＡsであるアセテート(acetate)、プロピオネート(propionate)およびブチレート(butyrate)は、ＮＤＣの結腸発酵の重要な最終産物である。
【００３９】
治療有効量：障害の進行を予防もしくは障害の後退を引き起こすのに充分な用量、または障害の徴候もしくは症状を解放できる用量、または所望の結果を達成できる用量。いくつかの実施形態において、本発明の文脈における治療有効量は、体重増加を阻害もしくは停止するのに充分な量、または食欲を減少させるのに充分な量、またはカロリー摂取量もしくは食物摂取量を低減させるもしくはエネルギー支出を増加させるのに充分な量である。
【詳細な説明】
【００４０】
上記の通り、本発明は、対象における、
−食欲、
−食物摂取量、
−カロリー摂取量
の１つもしくは複数の低減のため、および／またはインスリン感受性を改善するための、プロピオネートイヌリンエステルの使用を提供する。
【００４１】
特に、対象は、食欲、食物摂取量もしくはカロリー摂取量の１つもしくは複数の低減、および／またはインスリン感受性の改善を必要としている人である。特に、対象は、食欲、食物摂取量またはカロリー摂取量の１つまたは複数の低減を必要としているヒトである。
【００４２】
したがって、本発明は、肥満または糖尿病の治療または予防のための、プロピオネートイヌリンエステルの使用を提供する。本発明は、正常体重を有する対象における体重の制御および維持のための、プロピオネートイヌリンエステルの使用も提供する。
【００４３】
ヒトに対するプロピオネートイヌリンエステルの経口投与は、食物摂取量を低減することが、本発明者らによって見い出された。例えば、対象が、１０ｇのイヌリンプロピオネートエステル（ｄｅ＝０．７４）を与えられた場合、その後の食事で、イヌリンを与えられた対照群より平均で１６２カロリー少なく食べた。プロピオネートイヌリンエステルは、主観的な食欲応答を抑制しなかったが、食事量を有意に低減した。
【００４４】
本発明者らは、イヌリンプロピオネートエステルで食事療法を補充することは満腹感の増加に至ることを見い出した。これは、プロピオネートエステルを肥満用の実行可能な食事療法（予防的防止を含めて）にする。多くの場合、本発明のプロピオネートイヌリンエステルは、肥満のための代替の薬物療法および食事療法よりも改善された効力および／または長い作用時間および／または少ない副作用および／または良好なコンプライアンスを示す。
【００４５】
本発明者らは、イヌリンプロピオネートエステルで食事療法を補充することは、脂肪組織から排出される脂肪酸の減少につながり、インスリン感受性の改善につながることも見い出した。これは、プロピオネートエステルを糖尿病用の実行可能な食事療法にする。多くの場合、本発明のプロピオネートイヌリンエステルは、糖尿病のための代替の薬物療法および食事療法よりも改善された効力および／または長い作用時間および／または少ない副作用および／または良好なコンプライアンスを呈する。
【００４６】
一定の置換度を有するプロピオネートイヌリンエステルの用量を増加させることは、主観的な食欲応答における食欲の減少および膨満レベルの増加につながることも見い出された。例えば、対象が１０ｇのイヌリンプロピオネートエステル（ｄｅ＝０．７４）を与えられた時、その後の食事で、彼らは対照（ｐ＜０．０５）より１３％少ないエネルギーを摂取した。
【００４７】
ヒトに対するプロピオネートイヌリンエステルの経口投与は、非置換イヌリンの対照と比較して、プロピオネートの用量（即ち、プロピオネートイヌリンエステルの置換度）に関して用量依存性方式(dose dependent manner)における食物摂取量を低減することが、本発明者らによって見い出された。例えば、対象がエステル化度０．２３を有する１０ｇのイヌリンプロピオネートエステルを与えられた時、その後の食事で、彼らは１１００Ｋｃａｌを摂取したが、他方、彼らが、エステル化度０．７４を有する１０ｇのイヌリンプロピオネートエステルを与えられた時、彼らは９５０Ｋｃａｌを摂取した（図４（ｂ）を参照）。
【００４８】
毎日の経口投与によるヒトへのプロピオネートイヌリンエステルの長期送達は、１６週後に食物摂取量を低減し、体重増加を予防し、減量を増加させることが、本発明者らによって見い出された。例えば、２４週のランダム化比較試験(randomised controlled trial)において、プロピオネートイヌリンエステル群における体重増加は、対照群より低く（プロピオネートイヌリンエステル群は平均体重で１．０２±０．５７ｋｇ（ｐ＝０．０６２）減少し、対照群は０．３８±０．６９ｋｇ増加した（ｐ＝０．５５８））、＞３％または＞５％の体重増加を示したボランティアは有意に少なかった。減量率における有意な増加は、１６〜２４週目の間でプロピオネートイヌリンエステル群において生じた（０．８１±０．２６ｋｇ；ｐ＝０．００２）。エネルギー摂取の減少は、研究の２４週間を通して４％のプロピオネートイヌリンエステル群において観察された。
【００４９】
同じ２４週の研究において、本発明者らは、プロピオネートイヌリンエステルの長期投与が、腹部脂肪組織の減少、および肝臓脂質の細胞内含有量の群内低減、および有意に低い食後インスリン感受性につながることを見い出した。食後グルコース応答の有意な低下が対照群において生じ、これは、プロピオネートイヌリンエステル群においては観察されなかった。血漿ＰＹＹおよびＧＬＰ−１の増加は、２４週の研究中に観察されなかった。そのため、プロピオネートイヌリンエステルは、体重増加に関連するグルコース恒常性(glucose homeostasis)の低下を防ぐことができる。
【００５０】
本発明者らは、プロピオネートイヌリンエステルおよびイヌリンが、心血管疾患および糖尿病に関するいくつかのリスク因子を低減することも見い出した。例えば、上記の２４週のランダム化比較試験において、総コレステロール、ＬＤＬ、ＨＤＬ、アラニントランスアミナーゼ、アルカリホスファターゼおよびアスパラギン酸トランスアミナーゼの有意な改善が、プロピオネートイヌリンエステル群において観察され、コレステロール、ＨＤＬ、アラニントランスアミナーゼおよびアルカリホスファターゼの有意な改善が、対照群において観察された。
【００５１】
幾つかのイヌリンエステルが知られている。例えば、特定のイヌリンプロピオネートエステルの合成が、ＵＳ５，８７７，１４４で報告されている。本発明における使用のための好ましいプロピオネートイヌリンエステルは、０．１から１．２の間、好ましくは０．２から１の間、好ましくは０．５５から１の間、より好ましくは０．６から１の間、最も好ましくは０．７から０．９の間の置換度を有する。
【００５２】
本発明者らは、観察された効果の背後にある考え得る生理学的機序を調査した。
【００５３】
同位体標識されたイヌリンプロピオネートエステルを使用して、本発明者らは、イヌリンプロピオネートが大腸へのプロピオネートの送達を容易にすることを観察した。イヌリンは消化不可能な炭水化物である。イヌリンは、胃または上部ＧＩ管において開裂されないエステル結合によってプロピオネートに結合している。それは、結腸における細菌発酵によってのみ開裂可能である。結腸において、プロピオネートはイヌリンから放出される。安定同位体の実験の結果は、プロピオネートエステルのプロピオネート担持量＞８０％が結腸において放出されることを示した。一部の炭水化物は短鎖脂肪酸の担体として使用できることが、以前に報告された（例えばＵＳ５，８４０，８６０を参照）。プロピオネートを担持するためのイヌリンの特異的使用は以前に報告されていない。
【００５４】
本発明者らは、プロピオン酸ナトリウムが、単離された結腸細胞においてＰＹＹ放出の刺激を誘発することも見い出した。ヒトにおいて、血漿中のＰＹＹのレベルは、プロピオネートイヌリンエステルのプロピオネートの置換度の増加とともに増加することが示された。結腸へのプロピオネートの送達後のＰＹＹの放出は、観察した食物摂取量低減に関与し得ると仮定される。
【００５５】
放出されたプロピオネートは、食物摂取量低減に関与すると思われる。ヒトにおけるプロピオネートの効果に関する現在の知識を前提とすると、それは驚くべき所見であろう。例えば、プロピオネートが食物摂取量に対する効果を有し得るという一部の報告を考察したＤａｒｚｉらによる概説［Ｄａｒｚｉ，Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎｕｔｒ．Ｓｏｃ．（２０１１）７０巻、１１９〜１２８ページ］は、食欲調節においてプロピオネートの役割は無い可能性があると結論づけた。代わりに、彼らは、食物摂取量低減が示唆されている一部の早期研究の結果は、プロピオネートおよびプロピオネートを添加した食料品の嗜好性の欠如に依るものであったことを示唆している。同じ概説において報告されたそれら自体の研究において、Ｄａｒｚｉらは、要因として嗜好性を除去し、経口投与されたプロピオネートが食欲または食物摂取量の効果を有していないことを示した。Ａｌ−Ｌａｈｈａｍらによる別の概説［Ａｌ−Ｌａｈｈａｍ，Ｓ．Ｈ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．（２０１０）、１８０１巻、１１７５〜１１８３ページ．］は、ヒトにおけるプロピオン酸の生物学的影響を概説した。該概説は、プロピオン酸が、食物摂取量を低減することおよび満腹感を改善するにおいて有益となり得るが、この効果が食物嫌悪または吐き気および不快感に依ることが可能であると示唆している。
【００５６】
したがって、経口投与された遊離プロピオネートは、一部の研究において、食物摂取量または食欲における一部の低減を引き起こしたと見られた一方で、該効果は大部分が、遊離プロピオネートを摂る場合の不快感および吐き気の副作用との組合せで、プロピオネートを含有する食物（それは非常に酸性である）の嗜好性の低減のためとされている。経口プロピオン酸は、近位小腸において吸収される。
【００５７】
本発明者らによる本発明は、プロピオネートが大腸に送達されるのを可能にし、それは、その食欲低減効果をそこで発揮すると思われる。この仮定機序に確信を加えるために、さらなる研究が必要とされる。
【００５８】
化合物
イヌリンは、下記一般式を有する：
【００５９】
【化１】
0006313300.tif 000002
【００６０】
本発明における使用のためのイヌリンは、好ましくは、β（２→１）連結によって接続されているフルクトース単位で構成され、一般に、グルコース単位によって終結している。イヌリンは、チコリー（Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ  ｉｎｔｙｂｕｓ）、キクイモ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｓ）、またはイヌリンの他の供給源、例えばオオグルマ（Ｉｎｕｌａ  ｈｅｌｅｎｉｕｍ）、コーンフラワー（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ属の種）、タンポポ（Ｔａｒａｘａｃｕｍ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）、ワイルドヤム（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ属の種）、葛芋（Ｐａｃｈｙｒｈｉｚｕｓ  ｅｒｏｓｕｓ）、ゴボウ（Ａｒｃｔｉｕｍ  ｌａｐｐａ）、コスツス（Ｓａｕｓｓｕｒｅａ  ｌａｐｐａ）、ヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、タマネギ（Ａｌｌｉｕｍ  ｃｅｐａ）、ガーリック（Ａｌｌｉｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ）、リュウゼツラン（Ａｇａｖｅ属の種）、セイヨウウサギギク（Ａｒｎｉｃａ  ｍｏｎｔａｎａ）、ヤーコン（Ｓｍａｌｌａｎｔｈｕｓ  ｓｏｎｃｈｉｆｏｌｉｕｓ属の種）、カマス（Ｃａｍａｓｓｉａ属の種）またはバナナから抽出することができる。合成イヌリンも使用することができる。
【００６１】
好ましくは、本発明における使用のための適当なイヌリンは、チコリーまたはキクイモ、および最も好ましくはチコリーから抽出される。チコリーからのイヌリンの市販されている供給源の例は、Ｂｅｎｅｏ−Ｏｒａｆｔｉ  Ｆｏｏｄ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ、Ｔｉｅｎｅｎ、ＢｅｌｇｉｕｍからのＯｒａｆｔｉ（登録商標）ＨＰである。
【００６２】
イヌリンの重合度（結合し合った単糖単位の数）は、２から数千の間である。好ましくは、重合度は２から６０の間、より好ましくは３から６０の間である。本発明のイヌリンの平均重合度は、好ましくは２０から３０の間、より好ましくは２３から２７の間、最も好ましくは２５である。
【００６３】
イヌリンは、非消化性の炭水化物である。ヒトにおいて、それは酵素の影響下にて胃または小腸中で消化できずに、大腸／結腸で細菌の存在を必要とする。本発明は、胃または小腸中で消化できない任意のイヌリンまたはフラクトオリゴ糖に適用可能である。
【００６４】
プロピオネートは、式ＣＨ３ＣＨ２ＣＯ２−を有する。対応するカルボン酸のプロピオン酸は、式ＣＨ３ＣＨ２ＣＯ２Ｈを有する。
【００６５】
有機化学の当業者は、多くの有機化合物が、それらが反応される溶媒またはそれらが沈殿もしくは結晶化される溶媒を用いて複合体を形成することができることを理解されよう。こうした複合体は、「溶媒和物」として知られている。例えば、水との複合体は「水和物」として知られている。活性成分の遊離酸または塩は、溶媒和物として与えることができる。
【００６６】
プロピオネートイヌリンエステルを調製する方法
本発明における使用のためのイヌリンプロピオネートエステル(Inulin propionate esters)は、以下の通り、水性条件で調製することができる。イヌリンは、例えば２０℃から８０℃で水中に溶解される。生成する溶液の濃度は、好ましくは１リットル当たりフルクトース当量の０．２モルから４モルの間、より好ましくは１リットル当たりフルクトース当量の１モルから２モルの間、最も好ましくは１リットル当たりフルクトース当量の１．２モルから１．６モルの間である。生成する溶液の温度は、好ましくは、１０℃から２０℃の間に低下させる。プロピオン酸無水物および金属塩基、好ましくは水性アルカリ金属塩基、より好ましくは金属水酸化物、例えば水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムがイヌリン溶液に添加され、好ましくは温度を１０℃から２０℃の間に、溶液のｐＨをｐＨ８からｐＨ８．５の間に維持する。塩基は、好ましくは、１０％ｗ／ｖから１００％ｗ／ｖの間、好ましくは２０％ｗ／ｖから１００％ｗ／ｖの間、より好ましくは２０％ｗ／ｖから４０％ｗ／ｖの間、最も好ましくは２５％ｗ／ｖの水溶液であり、イヌリン溶液に滴下により添加される。プロピオン酸無水物対イヌリンの比を変化させることで、異なる置換度が得られる。イヌリンに添加されるプロピオン酸無水物のモル数は、フルクトース単位当量のモル×目標置換度×１．２５と算出される。表１は、使用される例比を示している。
【００６７】
【表１】
0006313300.tif 000003
【００６８】
この合成は、０．０５から３．０の間の置換度を有するイヌリンプロピオネートエステルの合成に適当である。好ましくは、この合成は、０．１から２．０の間、より好ましくは０．１から１．５の間の置換度を有するイヌリンプロピオネートエステルの合成、最も好ましくは０．１から１の間の置換度を有するイヌリンプロピオネートエステルの合成のために使用される。
【００６９】
本発明は、２０℃から８０℃の間で水中にイヌリンを溶解させて１リットル当たりフルクトース当量の１モルから２モルの間の濃度を与えること、溶液の温度を１０℃から２０℃の間に低下させること、溶液の温度を１０℃から２０℃の間に、溶液のｐＨをｐＨ８からｐＨ８．５の間に維持しながら、溶液に２０％ｗ／ｖから１００％ｗ／ｖの間の濃度でプロピオン酸無水物および水性金属塩基を添加して、所望の置換度とすることにより調製可能であるプロピオネートイヌリンエステルを提供し、イヌリンに添加されるプロピオン酸無水物のモル数は、溶液中のフルクトース単位当量のモル数×目標置換度×１．２５として算出される。
【００７０】
本発明における使用のためのイヌリンプロピオネートエステルは、水が溶媒の代わりとなる水性反応と同様な反応手順を使用して、極性非プロトン性溶媒などの有機溶媒中、例えば、これらに限定されないが、Ｎ、Ｎ’−ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド中で合成することができる。
【００７１】
好ましくは、本発明のイヌリンプロピオネートは、水性条件で合成される。
【００７２】
上記の水性方法に従って合成されるイヌリンプロピオネートエステルは、精製して遊離プロピオネートを除去することができ、それによって嗜好性を改善し、遊離プロピオネートを経口摂取することで、可能性のある副作用を低減する。好ましくは、精製は、酸性条件下で活性炭カラムを使用して実施され、その後スプレー乾燥が続く。例えば、上記通りの合成終了後、または、１リットル当たりフルクトース当量の０．２モルから４モルの間、より好ましくは１リットル当たりフルクトース当量の１モルから２モルの間、最も好ましくは１リットル当たりフルクトース当量の１．２モルから１．６モルの間の濃度を有する溶液を得るため、水中に溶解したプロピオネートイヌリンエステルに対して、反応混合物または溶液は、濃強酸、例えば強無機酸、例えばＨＣｌで、ｐＨ１．５からｐＨ３．５の間に、より好ましくはｐＨ２からｐＨ３の間に、最も好ましくはｐＨ２に調整される。酸の添加後直ちに、反応混合物は、０．０５Ｍから０．５Ｍの間の強酸、好ましくは０．１Ｍから０．３Ｍの間の強酸、最も好ましくは０．２Ｍの強酸、例えば無機強酸、例えばＨＣｌで徹底的に洗浄およびコンディショニングした活性炭カラムの中を流す。プロピオネートイヌリンエステルは、およそ１Ｌ／ｈｒでカラムの中を流す。活性炭カラムのサイズは、該溶液中のフルクトース当量のモル数に依存して選択され、例えば、およそ２．８モルのフルクトース単位を含有する２Ｌの溶液には、約１ｋｇの活性炭を含有するカラムが適当である。活性炭は、そのアニオン型のプロピオネートと比較して、プロピオン酸に対するより高い親和性および滞留の能力を有する。カラムから回収された反応混合物は、濃強酸、例えば強無機酸、例えばＨＣｌでｐＨ２に調整され、第１のカラムと同一または同様の様式において調製された第２の活性炭カラムに通過させる。反応混合物は収集され、ｐＨ２に調整された後、不活性なＮ２ガス流中でスプレー乾燥（Ｂｕｃｈｉ、Ｏｌｄｈａｍ  ＵＫ）される。液体流、ガスおよびネブライザー温度は、約１００℃の流出口温度が維持されるように制御される。
【００７３】
好ましくは、本発明における使用のためのプロピオネートイヌリンエステルは、プロピオネートイヌリンエステル中の遊離プロピオネートが１％未満のレベルまで精製されるが、好ましくは非結合プロピオネートが完全にない。
【００７４】
本発明は、水中にプロピオネートイヌリンエステルを溶解すること、溶液のｐＨを濃強酸で約ｐＨ２に調整すること、０．２Ｍ強酸で洗浄およびコンディショニングした活性炭カラムに溶液を通過させること、溶液をカラムから回収すること、濃強酸で約ｐＨ２に調整すること、０．２Ｍの強酸で洗浄およびコンディショニングした第２の活性炭カラムに溶液を通過させること、溶液をカラムから回収すること、濃強酸で約ｐＨ２に調整すること、およびスプレー乾燥することを含む、プロピオネートイヌリンエステルを精製する方法を提供する。
【００７５】
プロピオネートイヌリンエステルの精製は、透析を使用して達成することもできる。透析管における透析による精製は特に有効である。好ましくは、透析は、１日から５日の間、最も好ましくは３日の期間である。透析は、任意の塩不純物を除去するため、および完全脱エステル化の後に利用可能な総プロピオネートの＜１％のレベルに遊離プロピオネートを除去するために使用することができる。適当な透析管の例は、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｅｕｒｏｐｅ  Ｂ．Ｖ．、Ｂｒｅｄａ、ＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓからのＳｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ  ６、１０００  ＭＷＣＯである。例えば、透析管における３日の透析後、これは、水中に溶解した場合にほとんど味がないとともに、果汁中に溶解した場合に検出不可能であるプロピオネートイヌリンエステルをもたらす。
【００７６】
プロピオネートの味は、嗜好性の低減につながる。透析による精製後、遊離プロピオネートの味は非常に低く、他の香味で簡便にマスキングすることができる。これは嗜好性の増加をもたらし、このことが、より高いレベルの患者コンプライアンスにつながり得る。それは、特に大用量のプロピオネートイヌリンエステルが経口摂取される場合、残存遊離プロピオネートの経口摂取に起因する副作用の可能性も低減する。
【００７７】
本発明は、さらに、０．５５から１の置換度を有する新規なイヌリンプロピオネートエステルを提供する。ＵＳ５，８７７，１４４は、置換度＝０．５のプロピオネートイヌリンエステルの合成を記載している。
【００７８】
本発明は、０．５５から１．０の間のｄｅを有するプロピオネートイヌリンエステルを提供する。こうしたプロピオネートイヌリンエステルは、例えば７０℃から８０℃の間で水中にイヌリンを溶解させて１リットル当たりフルクトース当量の１モルから２モルの間の濃度を与えること、溶液の温度を１０℃から２０℃の間に低下させること、溶液の温度を１０℃から２０℃の間に、溶液のｐＨをｐＨ８からｐＨ８．５の間で維持しながら、溶液に２０％ｗ／ｖから１００％ｗ／ｖの間の濃度でプロピオン酸無水物および水性アルカリ金属塩基を添加することにより調製可能であり、所望の置換度とするためにイヌリンに添加されるプロピオン酸無水物のモル数は、溶液中におけるフルクトース単位当量のモル数×目標置換度×１．２５、最小目標置換度＝０．５５および最大目標置換度＝１として算出される。温度およびｐＨは、それらが反応物の混合に影響を及ぼすので、上述の限度内に制御されることが重要であり、エステル化度を制御するために必要である。
【００７９】
組成物
活性成分は単独で投与されることが可能であるが、それを医薬製剤または組成物中に存在させること、または食物への直接添加物として経口投与することが好ましい。
【００８０】
本発明は、プロピオネートイヌリンエステル、および１種または複数の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本発明は、食欲、食物摂取量および／もしくはカロリー摂取量の低減における使用のためならびに／またはインスリン感受性を改善するため、あるいは肥満または糖尿病の治療または予防における使用のための、プロピオネートイヌリンエステル、および１種または複数の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物も提供する。本発明は、さらに、食欲、食物摂取量および／もしくはカロリー摂取量の低減における使用のため、ならびに／または肥満の治療もしくは予防における使用のための、プロピオネートイヌリンエステル、および１種または複数の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００８１】
本発明における使用のために適当な医薬製剤としては、経口投与に適当なものが挙げられる。最も適当な経路は、例えばレシピエントの状態および障害に依存し得る。
【００８２】
該製剤は、好都合には、単位剤形で存在することができ、薬学の分野においてよく知られている方法のいずれによっても調製することができる。全ての方法には、１種または複数の副成分を構成する担体と活性成分とを会合させるステップが含まれる。一般に、該製剤は、液体担体または微粉化固体担体または両方と活性成分とを均一および密接に会合させること、および次いで、必要ならば、生成物を所望の製剤に成形することによって調製される。
【００８３】
経口投与に適当な製剤は、各々が活性成分の所定量を含有するカプセル、カシェもしくは錠剤などの別個の単位として；粉末もしくは顆粒として；水性液体もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液として；または水中油液体エマルジョンもしくは油中水型液体エマルジョンとして存在することができる。活性成分は、ボーラス、舐剤またはペーストとして存在することもできる。様々な薬学的に許容される担体およびそれらの製剤は、標準的製剤の論文、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｂｙ  Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに記載されている。Ｗａｎｇ，Ｙ．Ｊ．およびＨａｎｓｏｎ，Ｍ．Ａ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  １０号（補足４２）：２Ｓ、１９８８も参照されたい。
【００８４】
錠剤は、任意選択により１種または複数の副成分とともに、圧縮または成形することによって作製することができる。圧縮錠剤は、適当な機械において、活性成分を粉末または顆粒などの自由流動性形態に圧縮すること、任意選択により、結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、平滑剤、表面活性薬剤または分散剤と混合することによって調製することができる。１つの適当な賦形剤の例はイヌリンである。成形された錠剤は、適当な機械において、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化化合物の混合物を成形することによって作製することができる。錠剤は、任意選択により、コーティングするまたは割線入りとすることができ、その中の活性成分の緩徐放出または制御放出をするように製剤化することができる。本化合物は、例えば、即時放出または持続放出に適当な形態で投与することができる。即時放出または持続放出は、本化合物を含む適当な医薬組成物の使用によって達成することができる。本化合物は、リポソームとして投与することもできる。
【００８５】
経口投与のための例示的な組成物としては、例えば、バルクを付与するための微結晶性セルロース、懸濁剤としてアルギン酸またはアルギン酸ナトリウム、粘度増強剤としてメチルセルロース、および甘味料または香味剤、例えば当技術分野において知られているものを含有することができる懸濁液；ならびに例えば、微結晶性セルロース、第二リン酸カルシウム、デンプン、ステアリン酸マグネシウムおよび／もしくはラクトースならびに／または他の賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、希釈剤および滑沢剤、例えば当技術分野において知られているものを含有することができる即時放出錠剤が挙げられる。該化合物は、舌下投与および／またはバッカル投与によって口腔を介して送達することもできる。成形錠剤、圧縮錠剤または凍結乾燥錠剤は、使用することができる例示的な形態である。例示的な組成物としては、マンニトール、ラクトース、スクロースおよび／またはシクロデキストリンなどの高速溶解性希釈剤を用いて本化合物（単数または複数）を製剤するものが挙げられる。セルロース（アビセル）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの高分子量賦形剤も、こうした製剤に含み得る。こうした製剤には、粘膜付着を助ける賦形剤、例えばヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ナトリウムカルボキシメチルセルロース（ＳＣＭＣ）、マレイン酸無水物コポリマー（例えば、Ｇａｎｔｒｅｚ）、および放出を制御するための薬剤、例えばポリアクリル酸コポリマー（例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９３４）も含まれ得る。滑沢剤、流動促進剤、香味、着色剤および安定剤も、作製および使用の簡便さのために添加することができる。
【００８６】
プロピオネートイヌリンは、乾燥組成物、例えば粉末または顆粒の形態として提供することができる。それは、投与用の溶液または懸濁液の調製のために使用することができる。濃縮物またはスラリーの形態における組成物も、投与用の溶液の調製のために使用することができる。溶液を調製するのに適当な組成物、例えば粉末もしくは顆粒の形態、または濃縮物もしくはスラリーには、香味剤が含まれ得る。組成物は、治療有効量の単位用量の調製のための定量、例えば５０ｍｌから１Ｌの間の用量、例えば５００ｍｌの用量で提供することができる。本発明は、水との混合物のための組成物を提供する。本発明は、さらに、食料品との混合物のための乾燥組成物、例えば粉末または顆粒の形態を提供する。
【００８７】
溶液または懸濁液は、水性液体または非水性液体でもよい。該溶液は、香味剤および／または保存剤を含み得る。
【００８８】
本発明の組成物における使用のための香味料は、適用可能ならば、任意の塩味および／または酸味をマスキングするとともに組成物中で安定であるべきである。香味料は溶液をより美味にし、したがって、患者コンプライアンスを助ける。好ましい香味料としては、オレンジ、レモン、イチゴ、グレープフルーツ、クロフサスグリ、バニラ、ならびにレモンおよびライムが挙げられる。
【００８９】
用量当たり複数単位を服用する場合、各単位は、同じまたは異なる物理的形態でもよい。１日当たり複数用量を服用する場合、各用量は、同じまたは異なる物理的形態でもよい。２種以上の組成物の各々内の構成成分は、同じまたは異なる物理的形態でもよい。好ましい単位投与量製剤は、下記に列挙した、活性成分の有効量またはその適切な部分量を含有するものである。
【００９０】
該活性成分は、適当には、徐放系において投与することができる。徐放系の適当な例としては、適当なポリマー材料、例えば、成形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態をとる半透過性のポリマーマトリクス；例えば許容される油中のエマルジョンとして適当な疎水性材料；またはイオン交換樹脂；および該化合物のやや溶けにくい誘導体、例えばやや溶けにくい塩が挙げられる。徐放系は、経口的にまたは経口スプレーとして投与することができる。
【００９１】
本発明との使用には通常必要ではないが、投与のための調製物は、化合物の制御放出を与えるために適当に製剤化することができる。例えば、該医薬組成物は、生分解性ポリマー、多糖類ゼリー状および／または生体接着性のポリマー、両親媒性ポリマー、プロピオネートイヌリンエステルの粒子の界面特性を修飾できる薬剤の１つまたは複数を含む粒子の形態でもよい。これらの組成物は、活性物質の制御放出を可能にする特定の生体適合性の特徴を呈する。米国特許第５，７００，４８６号を参照されたい。
【００９２】
経口的にプロピオネートイヌリンエステルを送達するための代替の手法は、他の点では通常である食物にそれを組み込むことである。例えば、それは、対象が主な食事中に食べ得る食物、例えば朝食の穀類もしくはパン、または対象が日中にスナックとして食べ得る食物、例えばビスケットもしくはチョコレートに組み込むことができる。食事の一部としてプロピオネートイヌリンエステルを送達することによって、次の食事もしくはその日のうちの後の別の食事、または翌日にとられる食事で、所望の食欲低下を誘発することが可能である。例えば、食物に組み込まれたプロピオネートイヌリンエステルを有する食物は、有益には、後の食事の約３時間から１０時間前に、好ましくは後の食事の４時間から８時間前の間に食べられる。これは、後の食事のより少ない分量で対象を満足させるか、または通常の分量のより少ない量を対象に食べさせることになる。
【００９３】
プロピオネートイヌリンエステルは、対象が当該の食物の全体（または通常の分量）を摂取する場合、食欲を低減する用量を対象に提供するレベルで組み込まれる。食欲を低減する用量のプロピオネートイヌリンエステルを組み込む食料品は、機能性食品と名付けることができる。プロピオネートイヌリンエステルが添加され得る食物の例としては、これらに限定されないが、焼き物（例えばパン）、菓子、牛乳、ヨーグルトおよびフレッシュチーズ、チョコレート、アイスクリーム、ソース、果実調製物またはフルクトースシロップの調製用果実が挙げられる。プロピオネートイヌリンエステルは、イヌリンを組み込むまたは正常に組み込む食料品においてイヌリンの代替物として使用することができる。プロピオネートイヌリンエステルは、イヌリンに添加することもでき、イヌリンおよびプロピオネートイヌリンエステルの混合物は、イヌリンを組み込むまたは正常に組み込む食料品においてイヌリンを単独で使用するための代替物として使用することができる。
【００９４】
組合せ
一実施形態において、活性成分は、別の薬剤、例えば追加の食欲抑制薬、追加の食物摂取量低減剤、血漿グルコース低下剤または血漿脂質改変剤の治療有効量とともに投与される。追加の食欲抑制薬の具体的な非限定的例としては、アンフェプラモン（ジエチルプロピオン）、フェンテルミン、マジンドールおよびフェニルプロパノールアミン、フェンフルラミン、デクスフェンフルラミン、およびフルオキセチンが挙げられる。本発明の使用における活性成分は、追加の食欲抑制薬と同時に投与することができるか、またはそれは順次に投与し得る。
【００９５】
したがって、本発明は、実施形態において、
−プロピオネートイヌリンエステル、および
−追加の食欲抑制薬
を含む組成物を提供する。
【００９６】
こうした組成物は、医薬としての使用のため、例えば肥満または糖尿病、例えば肥満の治療または予防のための医薬としての使用のために提供される。
【００９７】
本発明は、
−プロピオネートイヌリンエステル、および
−追加の食欲抑制薬、
を含むキットも提供し、２種（以上）の構成成分は、同時、別々または順次の共投与のためである。
【００９８】
投与量
化合物の投与すべき治療有効量は、利用されるプロピオネートイヌリンエステル（特定のイヌリン、プロピオネートの置換度を含めて）、治療される対象、苦痛の重症度および型、ならびに投与の方式および経路に依存する。
【００９９】
送達されるプロピオネートイヌリンエステルの量を考慮して、治療有効量は、体重１キログラム（ｋｇ）当たり約０．１ｍｇから体重１ｋｇ当たり約５００ｍｇ、例えば体重１ｋｇ当たり約１ｍｇから約２５０ｍｇ、例えば体重１ｋｇ当たり約１０ｍｇから約１８０ｍｇ、例えば体重１ｋｇ当たり約２０ｍｇから約１５０ｍｇ、例えば体重１ｋｇ当たり約６０ｍｇから約１２５ｍｇでもよい。例えば、治療有効量は、約１０ｍｇから約４０ｇ、例えば約８０ｍｇから約２０ｇ、例えば約１００ｍｇから約１５ｇ、例えば約１ｇから約１２ｇ、例えば約５ｇから約１０ｇでもよい。
【０１００】
経口投与のため、治療有効量は、約１０ｍｇから約２０ｇ、例えば約５０ｍｇから約２０ｇ、例えば約１００ｍｇから約２０ｇ、例えば約１００ｍｇから約１０ｇ、例えば約５００ｍｇから約１０ｇ、例えば５００ｍｇから５ｇ、例えば５００ｍｇから２ｇ、例えば１ｇから１５ｇ、例えば１ｇから１０ｇ、例えば１ｇから８ｇ、例えば１ｇから２ｇ、例えば１ｇから４ｇ、例えば２ｇから４ｇ、例えば２ｇから６ｇ、例えば４ｇから８ｇ、例えば４ｇから６ｇ、例えば５ｇから１０ｇ、例えば６ｇから１０ｇ、例えば６ｇから８ｇ、例えば８ｇから１２ｇ、例えば８ｇから１０ｇ、例えば１０ｇから１４ｇ、例えば１０ｇから１２ｇ、例えば１０ｇから２０ｇでもよい。一部の好ましい実施形態において、治療有効量は、約１０ｍｇから約５０ｇ、例えば１０ｍｇから約３０ｇ、例えば約５０ｍｇから約３０ｇ、例えば約１００ｍｇから約３０ｇ、例えば約１００ｍｇから約１５ｇ、または例えば約５００ｍｇから約１５ｇでもよい。別の好ましい実施形態において、治療有効量は、約１ｇから５０ｇ、例えば５ｇから５０ｇ、例えば１０ｇから４０ｇ、例えば１ｇから３０ｇ、例えば５ｇから３０ｇ、例えば３ｇから２５ｇ、例えば１ｇから２０ｇ、例えば５ｇから２０ｇ、例えば１ｇから１０ｇ、例えば２０ｇから３０ｇ、例えば３０ｇから４０ｇ、または例えば５ｇから１５ｇでもよい。記述され得る具体的な投与量は、０．５ｇ、１．０ｇ、１．５ｇ、２．０ｇ、２．５ｇ、３．０ｇ、３．５ｇ、４．０ｇ、４．５ｇ、５．０ｇ、５．５ｇ、６．０ｇ、６．５ｇ、７．０ｇ、７．５ｇ、８．０ｇ、８．５ｇ、９．０ｇ、９．５ｇ、１０．０ｇ、１０．５ｇ、１１．０ｇ、１１．５ｇ、１２．０ｇ、１２．５ｇ、１３．０ｇ、１３．５ｇ、１４．０ｇ、１４．５および１５．０ｇ、殊に５．０ｇ、５．５ｇ、６．０ｇ、６．５ｇ、７．０ｇ、７．５ｇ、８．０ｇ、８．５ｇ、９．０ｇ、９．５ｇ、１０．０ｇ、１０．５ｇ、１１．０ｇ、１１．５ｇおよび１２．０ｇである。
【０１０１】
治療有効量の各用量は、いくつかの単位用量でもよい。単一の固体単位用量は、例えば、約５０ｍｇから約３ｇ、例えば約１００ｍｇから約２ｇ、例えば約２５０ｍｇから約２ｇ、例えば約５００ｍｇから約２ｇ、例えば約２５０ｍｇから約１ｇ、例えば約５００ｍｇから約１ｇ、例えば１００ｍｇから５００ｍｇ、例えば１００ｍｇから１ｇ、例えば１００ｍｇから２ｇ、例えば２５０ｍｇから２ｇ、例えば２５０ｍｇから１ｇ、例えば５００ｍｇから２ｇ、例えば５００ｍｇから１ｇ、例えば１ｇから３ｇ、例えば１ｇから２ｇを含有することができる。記述され得る具体的な単位用量は、０．１ｇ、０．２５ｇ、０．５ｇ、０．６ｇ、０．７５ｇ、０．８ｇ、１．０ｇ、１．２５ｇ、１．５ｇ、１．７５ｇ、２．０ｇ、２．２５ｇ、２．５ｇ、２．７５ｇおよび３．０ｇである。
【０１０２】
液体への溶解もしくは添加または食料品への溶解もしくは添加に適当な単一の乾燥単位用量、または溶液中の用量、または濃縮用量、またはスラリー用量は、例えば、約１００ｍｇから約１５ｇ、例えば約２５０ｍｇから約１５ｇ、例えば約５００ｍｇから約１５ｇ、例えば約５００ｍｇから約１０ｇ、例えば約５００ｍｇから約５ｇ、例えば約５００ｍｇから約３ｇ、例えば１００ｍｇから１ｇ、例えば１００ｍｇから３ｇ、例えば１ｇから１５ｇ、例えば１ｇから１０ｇ、例えば１ｇから５ｇ、例えば１ｇから３ｇ、例えば１ｇから２ｇ、例えば２ｇから１０ｇ、例えば２ｇから５ｇ、例えば５ｇから１５ｇ、例えば５ｇから１０ｇ、例えば２５０ｍｇから１．５ｇ、例えば２ｇから４ｇ、例えば２ｇから６ｇ、例えば４ｇから６ｇ、例えば４ｇから８ｇ、例えば６ｇから８ｇ、例えば６ｇから１０ｇ、例えば８ｇから１０ｇ、例えば８ｇから１２ｇ、例えば１０ｇから１２ｇ、例えば１０ｇから１４ｇ、例えば１５ｇから２０ｇを含有することができる。記述され得る具体的な単位用量は、０．２５、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、１１．０、１１．５、１２．０、１２．５、１３．０、１３．５、１４．０、１４．５、１５．０、１５．５、１６．０、１６．５および１７．０である。
【０１０３】
上記で考察されている投与量は、例えば、１日１回、２回、３回もしくは４回、または週１回もしくは２回与えることができる。例えば、経口投与のため、３０ｍｇから約１２０ｇ、例えば約２４０ｍｇから約６０ｇ、例えば約３００ｍｇから約４５ｇ、例えば約３ｇから約３６ｇ、または例えば約１５ｇから約３０ｇの総１日用量が与えられ得る。好ましい一実施形態において、経口投与のための総１日用量は、例えば約１ｇから約５０ｇ、例えば約１ｇから約３０ｇ、例えば約５ｇから約３０ｇ、例えば約５ｇから約２５ｇ、例えば約５ｇから約１５ｇ、または例えば約１０ｇである。別の好ましい実施形態において、経口投与のための総１日用量は、例えば約３ｇから約５０ｇ、例えば約５ｇから約４０ｇ、例えば約８ｇから約３０ｇ、例えば約１０ｇから約２５ｇ、例えば約１０ｇから約２０ｇ、例えば約１２ｇから約１８ｇ、または例えば約１５ｇである。
【０１０４】
特定の実施形態によると、用量は、取ろうとする各食事の４時間前から１０時間前の間に１回投与することができる。用量は、効果（例えば、食欲抑制、食物摂取量の減少および／またはカロリー摂取量の減少および／またはインスリン感受性の改善）が望まれる４時間前から１０時間前の間、例えば、これらに限定されないが、効果が望まれる時間の４時間前から１０時間前の間、５時間前から９時間前の間、６時間前から８時間前の間、約４時間前、約５時間前、約６時間前、約７時間前、約８時間前、約９時間前、または約１０時間前に、例えば食事前のそれらの時間に投与することができる。プロピオネートイヌリンエステルが「機能性食品」として投与される場合、該用量は、食事の一部として、またはとられるスナックとして、効果を望む時に取ろうとするその後の食事の約３時間から１０時間、好ましくは約４時間前から１０時間前、より好ましくは約４時間前から８時間前に投与することができる。
【０１０５】
実施形態において、用量は、１日当たり３回、例えば食事の約４時間前から１０時間前に３回、またはその日の後の別の食事もしくは翌日にとられる別の食事で効果を有するために食事の一部として各食事中に投与される。その実施形態において、総１日用量は、体重１キログラム（ｋｇ）当たり約０．３ｍｇから体重１ｋｇ当たり約１．５、例えば体重１ｋｇ当たり約３ｍｇから約７５０ｍｇ、例えば体重１ｋｇ当たり約３０ｍｇから約５４０ｍｇ、例えば体重１ｋｇ当たり約６０ｍｇから約４５０ｍｇ、例えば体重１ｋｇ当たり約１８０ｍｇから約３７５ｍｇでもよい。例えば、治療有効量は、約３０ｍｇから約１２０ｇ、例えば約２４０ｍｇから約６０ｇ、例えば約３００ｍｇから約４５ｇ、例えば約３ｇから約３６ｇ、例えば約１５ｇから約３０ｇでもよい。
【０１０６】
実施形態において、用量は、食事またはスナックの一部として投与される。食事またはスナックの一部分の例は、２切れのパンでもよい。その実施形態において、２切れのパンは、約１００ｍｇから約１５ｇ、例えば約１ｇから約１２ｇ、例えば約５ｇから約１０ｇのプロピオネートイヌリンエステルを含有することができる。スナックの例はビスケットでもよい。その実施形態において、ビスケットは、約１００ｍｇから約１５ｇ、例えば約１ｇから約１２ｇ、例えば約５ｇから約１０ｇのプロピオネートイヌリンエステルを含有することができる。別の例において、成分として小麦粉を含む食事またはスナックにおいて、その食事またはスナック中、約１００ｍｇから約１５ｇ、例えば約１ｇから約１２ｇ、例えば約５ｇから約１０ｇの小麦粉が、同じ重量のプロピオネートイヌリンエステルと置き換えられる。別の例において、ソースを含有する食事もしくはスナック、または液体もしくはゲルの部分、例えばパスタソースもしくはヨーグルトを含む食事もしくはスナックにおいて、約１００ｍｇから約１５ｇ、例えば約１ｇから約１５ｇ、例えば約１ｇから約１２ｇ、例えば約５ｇから約１０ｇのプロピオネートイヌリンエステルが、ソースまたは液体もしくはゲルの部分と混合される。
【０１０７】
実施形態において、１回の用量は、食事またはスナックまたは液体の一部として投与され、ここで対象は、食事、スナックまたは液体（例えば、水または果汁）と混合または組み合わせるための乾燥用量を提供される。
【０１０８】
本発明のプロピオネートイヌリンエステルは、低カロリー食事療法と併せた特別な使用を見い出す。多くの対象は、低カロリー食事療法を順守するのは難しいと感じる。本発明は、低カロリー食事療法の順守を促進する。
【０１０９】
条件：
本発明は、対象において、
−食欲、
−食物摂取量、
−カロリー摂取量
の１つもしくは複数の低減における使用のため、および／またはインスリン感受性を改善するためのプロピオネートイヌリンエステルを提供する。
【０１１０】
したがって、本発明は、肥満または糖尿病の治療または予防における使用のためのプロピオネートイヌリンエステルを提供する。例えば、本発明は、肥満の治療または予防における使用のためのプロピオネートイヌリンエステルを提供する。
【０１１１】
典型的に、対象は過体重であるか、または過体重になるリスクがある。本発明は、対象における食欲の低減のため、対象における食物摂取量の低減における使用のため、または対象におけるカロリー摂取量の低減のためのプロピオネートイヌリンエステルを提供する。本発明は、さらに、インスリン感受性を改善する際の使用のためのプロピオネートイヌリンエステルを提供する。
【０１１２】
対象は、過体重、例えば肥満であり得る。特定の実施形態において、プロピオネートイヌリンエステルは、過体重、例えば肥満である対象における、食欲、食物摂取量および／もしくはカロリー摂取量の低減における使用のため、ならびに／またはインスリン感受性を改善するためである。
【０１１３】
代替として、または加えて、対象は、例えばインスリン抵抗性もしくはグルコース不耐性、または両方を有する糖尿病でもよい。対象は真性糖尿病を有することがあり、例えば、対象は２型糖尿病を有することがある。対象は、過体重、例えば肥満であってよく、真性糖尿病、例えば２型糖尿病を有することがある。特定の実施形態において、プロピオネートイヌリンエステルは、インスリン抵抗性および／またはグルコース不耐性を有する糖尿病である対象における、食欲、食物摂取量および／もしくはカロリー摂取量の低減における使用のため、ならびに／またはインスリン感受性を改善するためのものである。
【０１１４】
本発明は、体重の管理および治療、例えば体重増加を予防および低減すること、減量を誘発および促進すること、ならびにボディマス指数によって測定した場合の肥満を低減することのために使用することができる。本発明は、食欲、食物摂取量および／またはカロリー摂取量の任意の１つまたは複数の制御、特に以下の任意の１つまたは複数において使用することができる：食欲を低減、抑制および阻害すること；食物摂取量を低減、抑制および阻害すること；カロリー摂取量を低減、抑制および阻害すること。本発明の化合物は、所望の体重、所望のボディマス指数、所望の外観および良好な健康の任意の１つまたは複数を維持することに使用することができる。
【０１１５】
対象は、減量を望む対象、例えば女性または男性の対象であって、彼女または彼の外観における変化を望む対象でもよい。対象は、空腹感の減少を望むことがあり、例えば対象は、高いレベルの集中を必要とする長期にわたる職務に関与する人、例えば従軍中の兵士、航空管制官、または長距離路線のトラック運転手でもよい。
【０１１６】
特定の実施形態において、本発明は、健康な対象（例えば、正常のＢＭＩを有する）における食欲、食物摂取量および／またはカロリー摂取量の低減のための、プロピオネートイヌリンエステルの使用を提供する。
【０１１７】
加えて、または代替として、対象は、肥満または過体重であることがリスク因子である障害を有するまたは有するリスクがある恐れがある。こうした障害としては、これらに限定されないが、心血管疾患、例えば高血圧、アテローム性動脈硬化症、うっ血性心不全、および脂質異常症；脳卒中；胆嚢疾患；変形性関節症；睡眠時無呼吸；生殖性な障害、例えば、多嚢胞性卵巣症候群；癌、例えば乳癌、前立腺癌、結腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、および食道癌；静脈瘤；黒色表皮腫；湿疹；運動不耐性；インスリン抵抗性；高血圧高コレステロール血症；胆石症；変形性関節症；整形外科的損傷；インスリン抵抗性、例えば２型糖尿病およびシンドロームＸ；ならびに血栓塞栓性疾患が挙げられる（Ｋｏｐｅｌｍａｎ，Ｐ，Ｇ．、Ｎａｔｕｒｅ  ４０４：６３５〜４３、２０００；Ｒｉｓｓａｎｅｎ，Ａ．ら、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｍｅｄ．Ｊ．３０１：８３５、１９９０を参照）。
【０１１８】
肥満に関連する他の障害としては、うつ病、不安、パニック発作、片頭痛、ＰＭＳ、慢性疼痛状態、線維筋痛症、不眠症、衝動性、強迫性障害、およびミオクローヌスが挙げられる。さらに、肥満は、一般麻酔の合併症の発生率の増加についてのリスク因子と認められている。（例えば、Ｋｏｐｅｌｍａｎ、Ｎａｔｕｒｅ  ４０４：６３５〜４３、２０００を参照）。一般に、肥満は寿命を低減し、上記にリストされているものなどの共罹患率の重大なリスクを持つ。
【０１１９】
肥満に関連する他の疾患または障害は、出生時欠損、神経管欠損の発生率増加に関連する母性肥満、手根管症候群（ＣＴＳ）；慢性静脈不全（ＣＶＩ）；日中の眠気；深部静脈血栓症（ＤＶＴ）；末期腎疾患（ＥＳＲＤ）；痛風；熱障害；免疫応答の障害；呼吸機能の障害；不妊症；肝臓疾患；腰痛；産婦人科合併症；膵炎；ならびに腹部ヘルニア；黒色表皮腫；内分泌異常；慢性の低酸素症および高炭酸ガス血症；皮膚科学的効果；象皮症；胃食道逆流；踵骨骨棘；下肢浮腫；ブラジャーストラップによる疼痛、皮膚傷害、子宮頸部疼痛、乳房下の皮膚ひだにおける慢性の臭気および感染などかなりの問題を引き起こす乳房肥大症；大きな前腹壁腫瘤、例えば頻繁な皮下脂肪組織炎を伴う腹部皮下脂肪組織炎、歩行障害、頻繁な感染の発生、臭気、着衣困難、腰背痛；筋骨格疾患；偽性脳腫瘍（または良性の頭蓋内高血圧）、および食道裂孔ヘルニアである。
【０１２０】
特定の実施形態によると、対象は、肥満または過体重でないにもかかわらず望まない体重を有することがある。こうした使用は、前には過体重または肥満であった対象および非健康的体重に戻ることを予防したいと思う対象に関することがある。それは、インスリン非感受性または前糖尿病などの前糖尿病の状態を有する対象にも関する。対象が正常体重である一部の場合において、本発明の態様は、治療的処置よりむしろ美容的処置に関係することがある。
【０１２１】
本発明は、相対的に高い栄養素利用能によって引き起こされるか、複雑化されるかまたは悪化される状態または障害を治療、予防、寛解または軽減することに使用することもできる。「カロリー（または栄養素）利用能を低減することによって軽減することができる状態または障害」という用語は、本明細書において、相対的に高い栄養素利用能によって引き起こされるか、複雑化されるかもしくは悪化されるかのいずれかの対象、または栄養素利用能を低減することによって、例えば食物摂取量を減少することによって軽減することができる対象における任意の状態または障害を表すために使用される。インスリン抵抗性、グルコース不耐性であるかまたは真性糖尿病、例えば１型糖尿病、２型糖尿病もしくは妊娠糖尿病の任意の形態を有する対象も、本発明による方法から利益を得ることができる。
【０１２２】
カロリー摂取量の増加に関連する状態または障害としては、これらに限定されないが、インスリン抵抗性、グルコース不耐性、肥満、２型糖尿病を含めて糖尿病、摂食障害、インスリン抵抗性症候群、およびアルツハイマー病が挙げられる。
【０１２３】
対象は、好ましくはヒトである。しかしながら、対象はまた、別の脊椎動物、例えば他の霊長類；家畜動物、例えばブタ、ウシおよび家禽；スポーツ用動物、例えばウマ；またはコンパニオンアニマル、例えばイヌおよびネコであってもよい。
【実施例】
【０１２４】
本発明を以下の非限定的例によって例示する。
【０１２５】
［実施例１ａ］
プロピオネートイヌリンエステルの合成および特性決定
材料および方法
合成方法
４５０ｇイヌリン（１１０．５ミリモルまたは２．８モルのフルクトース当量、Ｂｅｎｅｏ−Ｏｒａｆｔｉ  Ｆｏｏｄ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ、Ｔｉｅｎｅｎ、ＢｅｌｇｉｕｍからのＯｒａｆｔｉ（登録商標）ＨＰ：平均重合度＝２５；平均ＭＷ＝４０７１  Ｄａ；重合の最小レベル＝３）を、２Ｌの脱イオン水中に溶解させ、オーバーヘッド撹拌および連続的ｐＨモニタリングしながら３Ｌの水冷式ジャケット付反応器に移し、約２５℃に冷却させた。３６０ｇのプロピオン酸無水物（２．８モル）および５５０ｍｌの２５％ｗ／ｖのＮａＯＨを、反応器上方のドロッパー漏斗中に設置した。反応混合物における温度が＜２０℃である時に開始されたＮａＯＨの滴下による添加およびプロピオン酸無水物の添加によって、ｐＨを８．２５に調整した。試薬の添加速度は、ｐＨが８〜８．５の間のままであり、温度が＜２０℃のままであるようにした。プロピオン酸無水物対イヌリンの比を変動することで、以下の通り、異なるｄｅの生成物を生成した：
【０１２６】
【表２】
0006313300.tif 000004
【０１２７】
添加が完了すると、反応混合物をｐＨ安定化させ、その後、濃ＨＣｌでｐＨ２に調整した。直ちに、反応混合物を、０．２ＭのＨＣｌで徹底的に洗浄およびコンディショニングした活性炭カラムに流動させた。カラムは約１ｋｇの活性炭を含有しており、約１Ｌ／ｈｒで流動することを可能にした。活性炭は、そのアニオン型のプロピオネート(anionic form - propionate)と比較して、プロピオン酸(propionic acid)に対して、より高い親和性および滞留容量を有する。カラムから回収された反応混合物を濃ＨＣｌでｐＨ２に調整し、第１のカラムと同一の様式で調製された第２のカラムに通過させた。最終の収集混合物を収集し、ｐＨ２に再び調整した後、不活性なＮ２ガス流においてスプレー乾燥（Ｂｕｃｈｉ、Ｏｌｄｈａｍ  ＵＫ）した。液体の流れ、ガスおよびネブライザーの温度は、１００℃の流出口温度が維持されるようにした。
【０１２８】
プロピオネートイヌリンエステル特性決定
化学的特性決定
赤外分光法
ＫＢｒディスクを使用して、赤外（ＦＴ−ＩＲ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ  ＵＫ）スペクトルを記録した。
【０１２９】
ＧＣ−ＦＩＤによるプロピオネート含有量の分析
プロピオネートイヌリンエステル生成物１００ｍｇを、内部標準（ＩＳ）として１ｍＭ酪酸を含有する２ｍｌの水中に溶解させた。遊離プロピオネートを定量化するため、該溶液の２００μｌを濃オルトリン酸１００μｌで処理し、その後直ちにエーテル抽出（１ｍｌ）を続けた。総プロピオネート（遊離＋結合）を定量化するため、該溶液の別の２００μｌを濃オルトリン酸１００μｌで処理し、８０℃で１時間の間加熱した後、１ｍｌのエーテルで抽出した。エーテル抽出物を、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）分析の準備ができている清浄バイアルにデカントした。ＺＢ−ＷＡＸカラム（３０ｍ×０．３２ｍｍ×０．２５ｕｍ；Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｃｈｅｓｈｉｒｅ  ＵＫ）、およびスプリット注入（約５０：１のスプリット比）における担体ガス（１．８ｍｌ／ｍｉｎ）としてＨｅを使用するＧＣ分析（ＨＰ５７９０、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＵＳＡ）によって、プロピオネートおよびブチレートを定量化した。温度プログラムは４０℃で開始し、１分間保持した後、１０℃／ｍｉｎで２００℃まで傾斜させた。検出を炎イオン化検出（ＦＩＤ）によって実施した。外部標準を毎日実行することでＦＩＤ応答係数を算出し、データプロセッシングのためのＥｘｃｅｌスプレッドシートにピーク面積比を抽出した。ＩＳに対するプロピオネート濃度を算出し、異なる処理の１ｇエステル当たりの遊離および総プロピオネートの収率を算出した。
【０１３０】
ＩＳに対するプロピオネート収率を算出し、比（遊離／総）×１００（％）によって遊離プロピオネートの量を算出した。エステル化度（ｄｅ）も、エステル１グラム当たりの結合プロピオネート（総−遊離）の収率を使用することによりこの分析を使用して算出することで、プロピオネートエステル１モル当たりに得られたプロピオネートのモルを見積もった。
【０１３１】
純度特性決定
塩含有量
約１年の期間をかけて生成されたプロピオネートイヌリンエステルの１２個の無作為バッチの塩含有量を、公認の食品実験室（Ａｌｃｏｎｔｒｏｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｒｏｔｈｅｒｈａｍ、ＵＫ）によって外部で試験した。結果をｇ／ｇ×１００（％）含有量として表した。
【０１３２】
重金属スクリーニング
誘導結合プラズマ発光分光法（ＩＣＰ−ＯＥＳ；Ｏｐｔｉｍａ  ７３００  ＤＶ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ  ＵＫ）によって、外部校正用標準に対して毒性重金属（Ａｓ、Ｃｒ、Ｃｄ＆Ｐｂ）含有量を測定した。イヌリンおよびプロピオネートイヌリンエステルの試料をＡｎａｌａｒ濃硝酸中に溶解し、１：１００に希釈した後、外部校正物を参照して分析した。機器によって決定された通りに結果（μｇ／ｇ）を表した。
【０１３３】
微生物学的スクリーニング
約１年の期間をかけて生成された１２個の無作為のプロピオネートイヌリンエステルバッチの微生物学的品質を、公認の食品試験実験室（Ａｌｃｏｎｔｒｏｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｅｌｌｓｈｉｌｌ、ＵＫ）によって外部で試験した。好気性コロニーカウント（ｃｆｕ／ｇ）、腸内細菌科（ｃｆｕ／ｇ）、大腸菌（ｃｆｕ／ｇ）およびリステリア（２５ｇ中）について、試料を試験した。
【０１３４】
結果
合成
イヌリンからのプロピオネートイヌリンエステルの収率は約７０％であった。
【０１３５】
化学的特性決定
赤外分光法
エステル基の固有振動が１７３６．８ｃｍ−１で観察され、これは出発イヌリン生成物に存在しなかった。
【０１３６】
ＧＣ−ＦＩＤ
ＧＣ分析（ｎ＝１２）で、完全な脱エステル化で分子から得られた総プロピオネートの２．５７±０．２６％遊離プロピオネートを得た。分子からのプロピオネートの総収率（および遊離プロピオネートを占める）の分析は、達成された実際のエステル化度（ｄｅ）は０．７４±０．０２であることを示した。
【０１３７】
純度
塩含有量の分析は、最終重量の２５．９±０．５％（ｎ＝１２）がＮａＣｌに帰属し得ることを示した。
【０１３８】
重金属スクリーニングは、全てのＩＰＥ試料が、商業的供給源の親化合物の重金属含有量より低い重金属含有量を有し、全ての種について＜１μｇ／ｇであったことを示した。
【０１３９】
微生物学的試験の結果は、試験された全ての試料において＜２０ｃｆｕ／ｇの好気性コロニー、＜１０ｃｆｕ／ｇの腸内細菌科、＜１０ｃｆｕ／ｇの大腸菌、およびリステリア（２５ｇ中）については「検出されず」を表示し、食べる準備ができている食料品（２２）についての認容閾値より非常に下であった。
【０１４０】
［実施例１ｂ］
１３Ｃ標識プロピオネートイヌリンエステルの合成および特性決定
材料および方法
出発材料として１３Ｃ−プロピオン酸無水物を使用して、プロピオネートイヌリンエステルについて上記と同一の様式で、プロピオネートイヌリンエステルの１３Ｃ安定同位体標識変異体を合成することで、（１−１３Ｃ１）−プロピオネートがイヌリンに結合された１３Ｃ−プロピオネートエステルを生成した。
【０１４１】
結果
約０．７４の予測ｄｅを用いる標識プロピオネートイヌリンエステルを合成した。この予測は、同じ合成方法論および同じ比のプロピオネート対エステル（１：１）が使用されているので標識プロピオネートイヌリンエステルのｄｅは非標識プロピオネートイヌリンエステルと同じであるという仮定に基づいている。
【０１４２】
［実施例２］
プロピオネートイヌリンエステルの消化性および発酵性のインビトロ試験
材料および方法
バッチ糞便培養を使用して、ｄｅ＝０．２３を有するイヌリンプロピオネートエステルおよびｄｅ＝０．９２を有するイヌリンプロピオネートエステルの発酵プロファイルを試験した。１人の健康な女性から糞便試料を収集し、各処理について同じインキュベーション３回で調製した。試料をホモジナイズするための標準的キッチンブレンダーを使用して、ＰＢＳ（ｐＨ７、１００ｍＭ）中１％（湿重量／ｖｏｌ）の濃度で、バッチ糞便培養を調製した。このスラリー５０ｍｌを気密なクリンプトップ１００ｍｌ血清バイアルに移し、試験するＮＤＣエステル約１００ｍｇを添加した。バイアルを直ちに酸素フリー窒素でフラッシュ洗浄し、３７℃で保持されている振盪水浴に入れた。水体積８００μｌを各バイアルから０時間、２時間、４時間および６時間の間隔毎に除去した。ＩＳ（２−エチル酪酸、７３．８ｍＭ）１００μｌおよび濃オルトリン酸１００μｌを添加し、試料を徹底的に混合し、直ちに３×３ｍｌのエーテルで抽出した。そのエーテル分量をプールし、サブ試料を分析用の清浄バイアルに移した。すでに記載されている通りのＧＣ−ＦＩＤによって試料を分析し、アセテート、プロピオネートおよびブチレートの濃度を、ＩＳに対する面積比、および重量測定で調製された外部標準によって決定されたＩＳに対する各ＳＣＦＡの較正した応答係数を使用して各時点で報告した。
【０１４３】
結果
図１は、糞便発酵におけるプロピオネートイヌリンエステルから生成したプロピオネートの割合が、イヌリンと比較して有意により高く、生成された総ＳＣＦＡの約９０％を占めることを示している。
【０１４４】
［実施例３］
ヒト対象における食欲および空腹の格付けの主観的尺度、食物摂取量、ならびに代謝応答に対する、異なるｄｅを有するプロピオネートイヌリンエステルの効果
材料および方法
研究プロトコール
９人の健康な対象（８人の男性および１人の女性）を動員して、プロピオネートイヌリンエステルにおける増加するｄｅの効果を調査した。平均（±ＳＥＭ）年齢、ボディマス指数（ＢＭＩ）は、それぞれ２６±２歳、および２３．９±２．１ｋｇ／ｍ２であった。
【０１４５】
除外の基準は、喫煙、物質乱用、妊娠、薬物療法（経口避妊薬を除く）の使用、事前３ヵ月における体重＞５ｋｇの変化、医学的または精神的疾病、および理学的検査、心電図検査またはスクリーニング血液試験（完全血球数、電解質、絶食グルコース、甲状腺機能および肝機能の測定）で検出された任意の異常であった。全ての対象は、Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｑｕｅｅｎ  Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ’ｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（０８／Ｈ０７０７／９９）によって承認された臨床試験（登録番号：ＮＣＴ００７５０４３８）の前に、書面によるインフォームドコンセントを提供した。該研究はヘルシンキ宣言に従って実施した。
【０１４６】
該研究は、対照（１０ｇイヌリン）で出発し、その後１週ごとにプロピオネートの用量を増加する（後続の週においてＩＰＥ  ｄｅ＝０．２３、ｄｅ＝０．４６、ｄｅ＝０．７４、それぞれ１０ｗｔ％、２０ｗｔ％および３０ｗｔ％のプロピオネート摂取量に近づく）４週の期間をかけて行った。プロトコールは、週ごとに２日の用量順化、３日目の研究日、続いて洗い流しの４日であった。対象は、各研究日前の２４時間の間アルコールおよび激しい運動を控え、前夜の１９：００から２０：００の間に同一の食事を摂取した。対象は次いで終夜絶食し、各研究日の０８：３０にＨａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ  Ｈｏｓｐｉｔａｌに到着した。カニューレを前腕静脈に挿入し、ベースライン血液試料を−１０分および０分に収集した。０分試料に続いて、いずれかの試験ベクター(test vector)を含有する標準化朝食（３９８ｋｃａｌ；７１．２ｇのＣＨＯ、７．９ｇの脂肪、１０．３ｇのタンパク質）を対象に出した。１８０分に、標準化昼食（３５６ｋｃａｌ；３４．２ｇのＣＨＯ、１１．９ｇの脂肪、２８．１ｇのタンパク質）を提供し、４２０分に、食欲を全て満足させるために食物が過剰に出されたビュッフェ式ディナーを対象に提供した。出された食物を食前に、および食べられなかった食物を食後に秤量することによって、食物摂取量を算出した。食後の血液試料を１５分、３０分、６０分、９０分、１２０分、１８０分、２４０分、３００分、３６０分および４２０分に取り、アプロチニン（Ｂａｙｅｒ）０．２ｍｌを含有するヘパリンコーティングチューブ中に収集した。血漿を直ちに遠心分離（１０分間３０００ｒｐｍ）によって４℃で分離し、次いで、それを分析するまで−７０℃で貯蔵した。主観的な空腹、満腹および吐き気を、１００ｍｍのＶＡＳの使用でモニタリングした。各血液試料の前にＶＡＳを完了することを対象に依頼した。呼気Ｈ２を、０分、６０分、１２０分、１８０分、２４０分、３００分、３６０分および４２０分に測定した（Ｂｅｄｆｏｎｔ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｋｅｎｔ  ＵＫ）。超感受性ヒトインスリンラジオイムノアッセイ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＵＳＡ）を使用して、インスリン様免疫反応性を測定した。Ａｂｂｏｔｔ  Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ  ｃｉ８２００分析器（Ａｂｂｏｔｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ＵＳＡ）を使用して、血漿グルコースを測定した。
【０１４７】
データ分析
結果は平均±ＳＥＭとして表される。ＡＶＯＶＡによって事後分析を用いて、結果を比較した。統計分析をＳＰＳＳ  １８（Ｃｈｉｃａｇｏ、ＵＳＡ）上で行った。
【０１４８】
結果：
インビボにおいて、最大プロピオネートフラックスが生じる期間中、グルコース濃度の低減について有意な線形傾向（ｐ＜０．０２）があったが（図２（ｃ）、ＡＵＣ１８０−３６０）、全体的グルコースＡＵＣ０−４２０は有意な減弱を示さなかった（図２（ｂ））。有意な線形傾向（ｐ＜０．０１）は、研究プロトコールにわたってインスリン応答についても観察されたが（図３（ｂ）、ＡＵＣ０−４２０）、最大プロピオネートフラックス中では観察されなかった（図３（ｃ）ＡＵＣ１８０−３６０、ｐ＝０．１６７）。有意な線形傾向（ｐ＝０．０３）は、ベースラインから、ｄｅ＝０．４６を有するプロピオネートイヌリンエステルまで観察され、これは、より高いｄｅでプラトーまで現れた。処置をグルコースまたはインスリンについて１群ごとに分析した場合、有意な効果は観察されなかった。
【０１４９】
処置の全体にわたって、プロピオネートイヌリンエステルの経口摂取から７時間後に取られた無制限の食事における食物摂取量（図４（ｂ））および全体の実験にわたる食物摂取量（図４（ａ））は、増加するプロピオネートイヌリンエステルｄｅを有する食物摂取量の低減における有意な線形傾向を呈したが（全体の実験にわたる食物摂取量についてｐ＝０．０２）、群比較は有意な効果を示さなかった。
【０１５０】
［実施例４］
食欲および空腹の格付けの主観的尺度ならびに食物摂取量に対する、プロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）の異なる用量（０ｇ、５ｇ、１０ｇおよび１５ｇ）の効果。
研究プロトコール
９人の健康な対象（８人の男性および１人の女性）を動員して、プロピオネートイヌリンエステルの固定ｄｅでの増加する用量の効果を調査した。平均（±ＳＥＭ）年齢およびボディマス指数（ＢＭＩ）は、それぞれ２７±２歳、および２５．０±１．３ｋｇ／ｍ２であった。
【０１５１】
除外の基準は、喫煙、物質乱用、妊娠、薬物療法の使用（経口避妊薬を除く）、事前３ヵ月における体重＞５ｋｇの変化、医学的または精神的疾病、および理学的検査、心電図検査またはスクリーニング血液試験（完全血球数、電解質、絶食グルコース、甲状腺機能および肝機能の測定）で検出された任意の異常であった。全ての対象は、Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｑｕｅｅｎ  Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ’ｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（０８／Ｈ０７０７／９９）によって承認されている臨床試験（登録番号：ＮＣＴ００７５０４３８）の前に、書面によるインフォームドコンセントを提供した。該研究はヘルシンキ宣言に従って実施した。
【０１５２】
１週離れた４回で対象を研究した。各週、対象は０８：３０にＨａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ  Ｈｏｓｐｉｔａｌに到着し、０、５ｇ、１０ｇ、１５ｇのＩＰＥ（ｄｅ＝０．７４）の上昇する用量を含有する標準化朝食（５３３ｋｃａｌ；７８．１ｇのＣＨＯ、１６．９ｇの脂肪、１７．５ｇのタンパク質）が出された。これは、所定の用量での６日の実行期間、続いて、次の用量レベルに移動する前に研究日を含む。各回において、彼らに１００ｍｇの１３Ｃ標識プロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝約０．７４、結合（１−１３Ｃ１）−プロピオン酸約３０ｍｇを含有する）の同一用量を与えた。呼気Ｈ２を収集し、携帯Ｈ２モニター（Ｂｅｄｆｏｎｔ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｔｄ、Ｋｅｎｔ  ＵＫ）を使用して実時間で測定した。ストローを通してＥｘｅｔａｉｎｅｒに肺胞呼気を吐くことによって、呼気ＣＯ２を２４時間（睡眠期間を除く）にわたり連続して収集した。１３ＣＯ２濃縮を同位体比質量分光分析法によって決定した。呼気Ｈ２はｐｐｍとして表し、１３ＣＯ２は、同位体経口摂取の前に収集されたベースライン試料を上回るｐｐｍ１３Ｃ濃縮として定義されたｐｐｍ  ｘｓとして表した。累積１３ＣＯ２排出も算出した。
【０１５３】
研究の初めに、試験用量＋１００ｍｇの１３Ｃ−ＩＰＥを含有する標準化朝食（３９８ｋｃａｌ；７１．２ｇのＣＨＯ、７．９ｇの脂肪、１０．３ｇのタンパク質）を対象に出した。１８０分に、標準化昼食（３５６ｋｃａｌ；３４．２ｇのＣＨＯ、１１．９ｇの脂肪、２８．１ｇのタンパク質）を提供し、４２０分に、食欲を全て満足させるために過剰に出された食物を有するビュッフェ式ディナーを対象に提供した。食前に食物を秤量するによって食物摂取量を定量化し、食べられなかった食物を食後に秤量した。主観的な空腹、満腹および吐き気を１００ｍｍのＶＡＳの使用でモニタリングした。１５分、３０分、６０分、９０分、１２０分、１８０分、２４０分、３００分、３６０および４２０分にＶＡＳを完了することを、対象に依頼した。
【０１５４】
データ分析
結果を平均±ＳＥＭとして表す。事後分析を用いてＡＶＯＶＡによって、結果を比較した。統計分析をＳＰＳＳ  １８（Ｃｈｉｃａｇｏ、ＵＳＡ）上で行った。
【０１５５】
結果：
プロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）の摂取量増加に関係する食物摂取量は、線形傾向（ｐ＝０．１２）または群分析（ｐ＝０．９）のいずれにおいても有意な減少を示さなかった。図５（ａ）は、ＶＡＳによって評価された食べたいという感覚が、１０ｇおよび１５ｇの用量のＩＰＥ（ｐ＜０．０５）で欲求の有意な減少を示したことを示している。食べたいことの減少に向かう有意な線形傾向は、ベースラインから１０ｇ（ｐ＝０．０４）までだけに観察され、ベースラインから１５ｇ（ｐ＝０．１１）までのプロピオネートイヌリンエステル摂取量には観察されなかった。ＩＰＥの増加する用量を用いる膨満感の増加に向かう有意な線形傾向（ｐ＝０．０４６）が観察されたが（図５（ｂ））、有意な効果は群比較において見られなかった。
【０１５６】
［実施例５］
安定同位体調査
研究対象
安定同位体調査のために、９人の健康な対象（８人の男性および１人の女性）を動員した。平均（±ＳＥＭ）年齢、体重およびボディマス指数（ＢＭＩ）は、それぞれ３２±４歳、７５．０±４．０ｋｇ、および２５．０±１．３ｋｇ／ｍ２であった。
【０１５７】
調査のための包含基準は、２０ｋｇ／ｍ２から３５ｋｇ／ｍ２のＢＭＩ、および２１歳から６５歳の年齢であった。除外基準は、喫煙、物質乱用、妊娠、薬物療法の使用（経口避妊薬を除く）、事前３ヵ月における体重＞５ｋｇの変化、医学的または精神的疾病、食制限（オランダ食挙動アンケート：男性スコア＞２．２５；女性スコア＞２．８０）、および理学的検査、心電図検査またはスクリーニング血液試験（完全血球数、電解質、絶食グルコース、甲状腺機能および肝機能の測定）で検出された任意の異常であった。
【０１５８】
１週離れた４回で対象を研究した。各週、対象は０８：３０にＨａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ  Ｈｏｓｐｉｔａｌに到着し、上昇する用量のイヌリンプロピオネート（０ｇ、５ｇ、１０ｇ、１５ｇ）を含有する標準化朝食（５３３ｋｃａｌ；７８．１ｇのＣＨＯ、１６．９ｇの脂肪、１７．５ｇのタンパク質）が出された。各回において、彼らに（１−１３Ｃ１）−プロピオン酸約３０ｍｇ（ｄｅ＝約０．７４、結合（１−１３Ｃ１）−プロピオン酸約３０ｍｇを含有する）を含有する１３Ｃ標識イヌリンプロピオネートの同一用量を与えた。呼気Ｈ２を収集し、携帯Ｈ２モニター（Ｂｅｄｆｏｎｔ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｔｄ、Ｋｅｎｔ  ＵＫ）を使用して実時間で測定した。Ｅｘｅｔａｉｎｅｒに吹き込むことによって呼気ＣＯ２を収集した。１３ＣＯ２濃縮を同位体比質量分光分析法（ＩＲＭＳ）によって決定した。呼気Ｈ２はｐｐｍとして表し、１３ＣＯ２は、同位体経口摂取前に収集されたベースライン試料を上回るｐｐｍ１３Ｃとして定義されたｐｐｍ  ｘｓとして表した。累積１３ＣＯ２排出も算出した。研究の全体にわたって連続して血液を収集した。
【０１５９】
ＧＣ−燃焼−ＩＲＭＳ（ＧＣ−Ｃ−ＩＲＭＳ）による１３Ｃプロピオネート濃縮の分析のため、−１５分、０分、１５分、３０分、６０分、９０分、１２０分、１８０分、２４０分、３００分、３６０分に血漿を収集した。アセテート１３Ｃ濃縮も対照として同じ分析において、ＳＣＦＡ１３Ｃ濃縮に対する食事の影響およびプロピオネートとアセテートとの相互変換の証拠について測定した。データは、国際的に認容されている標準炭素Ｖｉｅｎｎａ  Ｐｅｅ  Ｄｅｅ  Ｂｅｌｅｍｎｉｔｅ（ＶＰＤＢ）からの測定比における変化を１０００分の１で表すδ１３Ｃ（１ｍｉｌまたは１‰当たり）として表した。尿を１３ＣプロピオネートについてＧＣ−Ｃ−ＩＲＭＳによって分析した。尿を収集し、プロピオネートエステルの摂取直前から２４時間の間プールした。２つの２５ｍｌ分量を収集し、分析まで−２０℃で貯蔵した。同位体濃縮をδ１３Ｃ（‰）として表した。内部標準（３−メチル吉草酸）に対してＳＣＦＡ濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）を測定した。
【０１６０】
結果：
１３Ｃプロピオネートイヌリンエステル、２４時間かけて呼気中で回収されたプロピオネート８２．９±２．３％は、呼気Ｈ２における第１の持続的上昇として定義された呼気Ｈ２の開始時および開始後に一致して現れ、結腸への大部分のトレーサーの送達を示唆している。
【０１６１】
突然死の犠牲者からのデータは、近位大腸における平均プロピオネートプールサイズが４．５ｍｍｏｌであることを示している。我々は、全てのプロピオネートが結腸中に放出されるとしたら、３６．２ｍｍｏｌのプロピオネートを放出する１０ｇのプロピオネートイヌリンエステルの摂取が結腸のプロピオネートレベルを平均で約８００％増加させると算出した。
【０１６２】
プロピオネートおよび呼気水素は１８０分で増加し始め、プロピオネートイヌリンエステルが発酵されていることを示唆した（図６）。標識プロピオネートの回収は、それがプラトーに達した４２０分まで増加し続けた。循環する血漿プロピオネートが検出可能である場合、プロピオネート１３Ｃ濃縮（δ１３Ｃ＝−１８．４±１．６対−２．５±３．３‰、ｐ≦０．０３、ｎ＝４）および濃度（１３．４±１．４対２３．７±２．２μｍｏｌ／Ｌ、ｐ≦０．０５、ｎ＝４）における有意な増加を、ベースラインと比較して、末梢血液中３６０分で測定した。血漿アセテートの濃縮または濃度において、有意差は観察されなかった。尿において、１３Ｃプロピオネート濃縮は、対照イヌリン（δ１３Ｃ＝−２３．３±１．８対−１３．６±３．４‰；ｐ＝０．０２；ｎ＝５）と比較して、１０ｇのプロピオネートイヌリンエステルを用いると有意により高いが、尿プロピオネート濃度において有意差は見られなかった。同位体データは、プロピオネートが血流に入り、全身的に利用可能になることを実証している。
【０１６３】
［実施例６］
ヒト対象における食物摂取量調査
材料および方法：
プロピオネートイヌリンエステル
エステル化度ｄｅ＝０．７４±０．０２（ｎ＝１２）、および当該分子から利用可能な総プロピオネートの２．５７±０．２６％（ｎ＝１２）の遊離プロピオネートのレベルで、プロピオネートイヌリンエステルを生成した。回収されたプロピオネートの９７％は、イヌリンポリマーに化学的に結合していた。
【０１６４】
研究対象
食物摂取量調査のために、２０人の健康な対象（１５人の男性および５人の女性）を動員した。平均（±ＳＥＭ）年齢、重量およびボディマス指数（ＢＭＩ）は、それぞれ３１±２歳、７５．０±３．０ｋｇ、および２５．４±０．８ｋｇ／ｍ２であった。
【０１６５】
調査のための包含基準は、２０ｋｇ／ｍ２から３５ｋｇ／ｍ２のＢＭＩ、および２１歳から６５歳の年齢であった。除外基準は、喫煙、物質乱用、妊娠、薬物療法の使用（経口避妊薬を除く）、事前３ヵ月における体重＞５ｋｇの変化、医学的または精神的疾病、食制限（オランダ食挙動アンケート：男性スコア＞２．２５；女性スコア＞２．８０）、および理学的検査、心電図検査またはスクリーニング血液試験（完全血球数、電解質、絶食グルコース、甲状腺機能および肝機能の測定）で検出された任意の異常であった。
【０１６６】
食物摂取量調査
該研究は、無作為化二重盲検クロスオーバー方式で行い、＞４日離れた２回で各対象を研究した。対象は、各研究日前の２４時間の間アルコールおよび激しい運動を控え、前夜の１９：００から２０：００の間に同一の食事を摂取した。対象は次いで終夜絶食し、各研究日の０８：３０にＨａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ  Ｈｏｓｐｉｔａｌに到着した。カニューレを前腕静脈に挿入し、ベースライン血液試料を−１０および０分に収集した。０分の試料に続いて、イヌリンプロピオネートエステル１０ｇ（ｄｅ＝０．７４）または１０ｇのイヌリンのいずれかを含有する標準化朝食（３９８ｋｃａｌ；７１．２ｇのＣＨＯ、７．９ｇの脂肪、１０．３ｇのタンパク質）を対象に出した。１８０分に、標準化昼食（３５６ｋｃａｌ；３４．２ｇのＣＨＯ、１１．９ｇの脂肪、２８．１ｇのタンパク質）を提供し、４２０分に、食欲を全て満足させるため過剰に出された食物を有するビュッフェ式ディナーを対象に提供した。食物の量を食前および食後に定量化し、エネルギー摂取量を算出した。食後の血液試料を１５分、３０分、６０分、９０分、１２０分、１８０分、２４０分、３００分、３６０分および４２０分に採り、アプロチニン（Ｂａｙｅｒ）０．２ｍｌを含有するヘパリンコーティングチューブ中に収集した。血漿を直ちに遠心分離によって４℃で分離し、次いで、それを分析するまで−７０℃で貯蔵した。主観的な空腹、満腹および吐き気を、１００ｍｍ視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）の使用でモニタリングした。各血液試料の前にＶＡＳを完了することを、対象に依頼した。加えて、標準化朝食の嗜好性を評価するためにも、ＶＡＳを完了させた。呼気Ｈ２を、０分、６０分、１２０分、１８０分、２４０分、３００分、３６０および４２０分に測定した（Ｂｅｄｆｏｎｔ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｋｅｎｔ  ＵＫ）。
【０１６７】
腸ホルモン分析
特異性および感受性の自家ラジオイムノアッセイを使用して、ＧＬＰ−１様およびＰＹＹ様免疫反応性を測定した。超感受性ヒトインスリンラジオイムノアッセイ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、インスリン様免疫反応性を測定し、Ａｂｂｏｔｔ  Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ  ｃｉ８２００分析器（Ａｂｂｏｔｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ＵＳＡ）を使用して、血漿グルコースを測定した。
【０１６８】
統計分析
Ｐａｉｒｅｄ  Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ検定を使用して、治験間の血漿ホルモンレベルおよびＶＡＳについて、エネルギー摂取量および増加的曲線下面積（ｉＡＵＣ）における差異を評価した。二元配置（治験×回）反復測定ＡＮＯＶＡを行うことで、血漿ホルモンレベル、ＶＡＳおよび呼気水素における差異を決定した。有意な効果を事後比較（Ｄｕｎｎｅｔｔ）によって追跡調査した。Ｐ値＜０．０５は統計的に有意であると思われた。データを平均±ＳＥＭとして表示する。
【０１６９】
結果
経口プロピオネートイヌリンエステルの摂取から７時間後のヒトボランティアにおける食物摂取量に対するプロピオネートイヌリンエステルの効果。
プロピオネートエステルまたはイヌリンサプリメントのいずれかの摂取から７時間後の標準化無制限ビュッフェ食事中の食物摂取量を測定することによって、食欲における変化を評価した。食物摂取量は、１１７５±１０４ｋｃａｌから１０１３±９４ｋｃａｌ（ｐ＝０．００９）に有意に低減されたが、これは１３．８％の平均低減に対応する（図７（ａ）を参照）。データの個々の分析は、２０人のうち１６人の対象が、プロピオネートイヌリンエステルサプリメント下で食物摂取量における低減を経験したことを明らかにした（図７（ｂ）を参照）。
【０１７０】
ヒトボランティアにおける有効化視覚的アナログスケールを使用する、食欲の主観的な評価に対するプロピオネートイヌリンエステルの効果
空腹、不調、快感、予想食物摂取量および膨満の感覚について、有効化視覚的アナログスケールを使用する全食事研究の全体にわたって、食欲を評価した。全データを図８（ａ）〜８（ｅ）に例示する。膨満における有意な増加がプロピオネートエステルサプリメント後に観察されて（８（ｅ））、心的飽和（Ｐ＜０．０３）に対する効果を示唆した；しかしながら、空腹、不調、快感および予想食物摂取量の格付けにおいて有意な変化はなかった。
【０１７１】
１０ｇのプロピオネートイヌリンエステルまたは１０ｇのイヌリンの投与後の、２０人の対象の膨満格付けの分析
図８（ａ）は、経口投与後０〜４２０分における膨満を示している。平均ｉＡＵＣは、プロピオネートイヌリンエステルの３５．０±５．２対イヌリンの２６．６±２．９、ｐ＝０．０９であった。
【０１７２】
１０ｇのプロピオネートイヌリンエステルまたは１０ｇのイヌリンの投与後の、２０人の対象の空腹格付けの分析
図８（ｂ）は、経口投与後０〜４２０分における膨満を示している。平均ｉＡＵＣは、プロピオネートイヌリンエステルの−２５．８±４．５対イヌリンの−２４．３±４．７、ｐ＝０．８２であった。
【０１７３】
１０ｇのプロピオネートイヌリンエステルまたは１０ｇのイヌリンの投与後の、２０人の対象の不調格付けの分析
図８（ｃ）は、経口投与後の０〜４２０分における膨満を示している。平均ｉＡＵＣは、プロピオネートイヌリンエステルの−１．５±２．３対イヌリンの−１．６±１．４、ｐ＝０．９５であった。
【０１７４】
１０ｇのプロピオネートイヌリンエステルまたは１０ｇのイヌリンの投与後の、２０人の対象の快感格付けの分析
図８（ｄ）は、経口投与後０〜４２０分における膨満を示している。平均ｉＡＵＣは、プロピオネートイヌリンエステルの−２５．８±３．９対イヌリンの−２６．６±４．６、ｐ＝０．８７であった
【０１７５】
１０ｇのプロピオネートイヌリンエステルまたは１０ｇのイヌリンの投与後の、２０人の対象の予想食物摂取量の格付け分析
図８（ｅ）は、経口投与後０〜４２０分における膨満を示している。平均ｉＡＵＣは、プロピオネートイヌリンエステルの−２０．９±２．７対イヌリンの−１９．９±３．６、ｐ＝０．７８であった
【０１７６】
腸におけるＰＹＹおよびＧＬＰ−１の放出に対するプロピオネートイヌリンエステルの効果
対照と比較して、プロピオネートイヌリンエステルは、血漿ＰＹＹ（ΔＡＵＣ２４０〜４２０分  ４２９ｐｍｏｌ／Ｌ［９５％ＣＩ、−５４３から１４００］の対照対３３４９ｐｍｏｌ／Ｌ［８４１から５８５７］のプロピオネートイヌリンエステル；ｐ＜０．０５）（図９（ａ）および９（ｃ）、ここで、矢は標準化食事を指し示している）、ならびに経口摂取後２４０〜４２０分の間のＧＬＰ−１レベルおよびＧＬＰ−１（ΔＡＵＣ２４０〜４２０分  ３４９５ｐｍｏｌ／Ｌ［９５％ＣＩ、−１５６７から８５５８］の対照対１０８０１ｐｍｏｌ／Ｌ［５８９７から１５７０４］のプロピオネートイヌリンエステル；ｐ＜０．０５）を有意に増加させた（図９（ｄ）および９（ｆ））。２４０分（分子が結腸に入るのを概算した時間）より前に、対照とプロピオネートイヌリンエステルとの間のＰＹＹおよびＧＬＰ−１の濃度において有意差はなかった（図９（ｂ）および９（ｅ））。
【０１７７】
グルコース恒常性に対するプロピオネートイヌリンエステルの効果
グルコースおよびインスリンのレベルを食事試験全体中で測定した。グルコースレベル（平均ｉＡＵＣ  ０．３２±０．１６対０．２８±０．１２、ｐ＝０．８、図１０（ａ））もインスリンレベル（平均ｉＡＵＣ  ２８．４±２．９対３２．５±４．７、ｐ＝０．２７、図１０（ｂ））も、プロピオネートイヌリンエステルとイヌリンサプリメントとの間で有意に異なっていなかった。
【０１７８】
［実施例７］
インビトロにおけるヒトＬ−細胞からのＰＹＹおよびＧＬＰ−１の放出に対する遊離プロピオネートの効果
材料および方法
ヒト結腸細胞の単離
結腸生検は、Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ  Ｈｏｓｐｉｔａｌで診断的結腸内視鏡検査を受ける患者から得た。全ての対象は、Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｑｕｅｅｎ  Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ’ｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって認可が授与されている研究の前に、書面によるインフォームドコンセントを提供した。
【０１７９】
結腸組織を、微修正とともに前に記載されている通り（Ｒｅｉｍａｎｎら、２００８）に消化した。簡潔には、０．４ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼＸＩ（Ｓｉｇｍａ、ＵＫ）を用いてダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中にて３７℃で組織を消化した。結果として得られた細胞懸濁液を５分間５００ｇで遠心分離し、ペレットをＤＭＥＭ（１０％ＦＣＳおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充した）中に再懸濁した。消化プロセスを３〜４回反復し、合わせた細胞懸濁液を２４ウェルの１％マトリゲルコーティングプレート上で平板培養し、３７℃にて５％ＣＯ２の雰囲気でインキュベートした。
【０１８０】
インビトロ腸ホルモン分泌実験
結腸細胞のプレーティングの１８〜２４時間後に、分泌実験を実施した。０．１％ＢＳＡを含有する分泌緩衝剤（４．５ｍＭのＫＣｌ、１３８ｍＭのＮａＣｌ、４．２ｍＭのＮａＨＣＯ３、１．２ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、２．６ｍＭのＣａＣｌ２、１．２ｍＭのＭｇＣｌ２および１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４にＮａＯＨで調整した）で２回、細胞を洗浄した。プロピオン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ、ＵＫ）を用いて４時間の間３７℃にて５％ＣＯ２の雰囲気中で、細胞をインキュベートした。インキュベーションに続いて、細胞上澄みを遠心分離することで細胞デブリを除去し、プレートを溶解緩衝液で処理し、凍結−解凍した。腸ホルモン分泌を百分率のホルモン放出として表し、各ウェルについて算出し、基礎分泌に正常化した。ＣｙｔｏＳｃａｎ（商標）乳酸脱水素酵素アッセイ（Ｇ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、細胞健康を確認した。
【０１８１】
結果：
プロピオネートは、２００ｍｍｏｌ／Ｌおよび４００ｍｍｏｌ／Ｌの濃度でヒト結腸細胞からのＰＹＹ分泌を有意に刺激して、それぞれ基礎分泌の１．８倍および３．０倍の上昇を誘発した（Ｐ＜０．０５およびＰ＜０．００１）。プロピオネートはまた、２００ｍｍｏｌ／Ｌおよび４００ｍｍｏｌ／ＬでＧＬＰ−１分泌を増加させて、それぞれＧＬＰ−１放出における１．６倍および２．４倍（Ｐ＜０．００１）の増加を誘発した（図１１を参照）。
【０１８２】
［実施例８ａ］
さらなる精製方法
方法および材料
透析管（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ  ６、１０００  ＭＷＣＯ、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｅｕｒｏｐｅ  Ｂ．Ｖ．、Ｂｒｅｄａ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）における３日の透析を、実施例１で調製した通りのプロピオネートイヌリンエステル（ｄｅ＝０．７４）に実施した。
【０１８３】
結果
透析は、塩の完全な除去をもたらした。エステル収率の損失（約５０％）の結果となったが、エステル品質を損なうことはなかった。加えて、遊離プロピオネートの量は、透析によって、完全脱エステル化の後に利用可能な総プロピオネートの＜１％に低減された。
【０１８４】
［実施例８ｂ］
嗜好性研究
材料および方法
実施例１で調製された通りのプロピオネートイヌリンエステル１０ｇ（ｄｅ＝０．７４）、ならびに実施例１で調製され、実施例８ａの通りに精製された通りのプロピオネートイヌリンエステル１０ｇ（ｄｅ＝０．７４）を、水中および果汁中に溶解させた。有効化視覚的アナログスケールを使用して、空腹、不調、快感、予想食物摂取量および膨満の感覚について、嗜好性研究を実施した。
【０１８５】
結果
塩がなくプロピオネートが少ない、透析によって精製されたエステル、単独の活性炭カラムによって精製された該エステルは、ヒトの摂取のために、より美味であった。透析による精製は、水中に溶解されるとほとんど味がないとともに果汁中に溶解されると検出不可能である生成物をもたらした。単独の活性炭カラムによって精製されたエステルは、水中に溶解されると苦味を有し、果汁中に溶解されるとわずかに苦味を有する。
【０１８６】
［実施例９］
ヒト対象における長期食物補充調査
材料および方法：
プロピオネートイヌリンエステル
エステル化度、ｄｅ＝０．７４±０．０２（ｎ＝１２）、および分子から利用可能な総プロピオネートの２．５７±０．２６％（ｎ＝１２）の遊離プロピオネートレベルで、プロピオネートイヌリンエステルを生成した。回収されたプロピオネートの９７％は、イヌリンポリマーに化学的に結合されていた。
【０１８７】
研究対象
２５〜４０ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する年齢４０〜６５歳の健康な男性および女性を、一般人から動員した。潜在的対象が、食欲および／または体重に影響することが知られている薬物療法を受ける臨床的に重大な疾病（１型または２型糖尿病を含めて）、先行する２ヵ月中における３ｋｇ以上の減量、喫煙、物質乱用、精神的疾病、食制限（オランダ食挙動アンケート：男性スコア＞２．２５；女性スコア＞２．８０）、および理学的検査、心電図検査またはスクリーニング血液試験（完全血球数、電解質、絶食グルコース、甲状腺機能および肝機能の測定）で検出された任意の異常を有している場合、彼らを除いた。女性が妊娠中または母乳哺育中であった場合、彼らは不適格であった。要請状に応答した初期１６７人の人々から、スクリーニング後の最終試料は６０人の人々を含んでいた。スクリーニングプロセスを図１２に示す。全ての対象は、Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｑｕｅｅｎ  Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ’ｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（０８／Ｈ０７０７／９９）によって承認された臨床試験（登録番号：ＮＣＴ００７５０４３８）の前に書面によるインフォームドコンセントを提供した。該研究はヘルシンキ宣言に従って実施した。
【０１８８】
（ａ）食物補充調査
該研究は、無作為化二重盲検プラセボ対照並列設計において行った。ベースライン時（０週目）および食事補充の２４週後に、２日の研究訪問を必要とした。各研究訪問の前日に、対象に、標準的夕食を摂取すること、２２：００から終夜絶食すること、ならびに激しい身体活動性およびアルコールを回避することを依頼した。全ての研究訪問は０８：００から０９：００の間で始まった。全てのベースライン測定を行った後、対象を、１０ｇ／日のプロピオネートイヌリンエステル群または１０ｇ／日のイヌリン対照群のいずれかに無作為に割り当てた。食事サプリメントを使用準備済サッシェ中で対象に供給し、２４週の治療期間中に１日１回彼らの正常食事療法に該含有物を混合するように、彼らに指示した。該介入期間中、彼らの通常の食事および活動の習慣を維持するように、全ての対象に指示した。対象と研究調査者との間の定期的コミュニケーションで、良好なコンプライアンスを確実にした。介入期間の８週後および１６週後に、体重を記録するとともにコンプライアンスおよび胃腸系副作用をモニタリングするための追跡調査訪問に参加するように、対象に要請した。２４週後、ベースライン時に行われた測定を反復した。対象が、全ての彼らの使用済みおよび未使用のサッシェを返すことで、コンプライアンスを判断した。研究期間にわたって症状日誌も収集した。
【０１８９】
（ｂ）食物摂取量およびグルコース恒常性
研究訪問時に、カニューレを肘前静脈中に挿入し、およびベースライン血液試料を−１０分および０分に収集して、グルコース、インスリン、ＰＹＹおよびＧＬＰ−１の血漿濃度を評価した。０分の試料に続いて、対象に標準化朝食（３９８ｋｃａｌ；７１．２ｇのＣＨＯ、７．９ｇの脂肪、１０．３ｇのタンパク質）を出した。２４週目に、朝食は、治療群に依存してプロピオネートイヌリンエステル１０ｇまたは１０ｇのイヌリン対照も含有していた。食後の血液試料を１５分、３０分、６０分、９０分、１２０分、１８０分、２４０分および３００分に採り、アプロチニン（Ｂａｙｅｒ、ＵＫ）０．２ｍｌを含有するヘパリンコーティングチューブ中に収集した。特異性および感受性の自家ラジオイムノアッセイを使用して、ＧＬＰ−１様およびＰＹＹ様の免疫反応性を測定した。超感受性ヒトインスリンラジオイムノアッセイ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してインスリン様免疫反応性を測定し、Ａｂｂｏｔｔ  Ａｒｃｈｉｔｅｃｔ  ｃｉ８２００分析器（Ａｂｂｏｔｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ＵＳＡ）を使用して血漿グルコースを測定した。３００分に、過剰に出された食物を有するビュッフェ式昼食を対象に提供し、対象に、彼らが心地よく膨満するまで食べることを依頼した。食物の量を定量化し、エネルギー摂取量を算出した。１００ｍｍ視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）の使用で、主観的な空腹、満腹および吐き気をモニタリングした。各血液試料の前にＶＡＳを完了することを、対象に依頼した。加えて、各群のサブセット（プロピオネートエステル群で９人、イヌリン対照群で８人）において、呼気Ｈ２を、０分、６０分、１２０分、１８０分、２４０分および３００分に測定した（Ｂｅｄｆｏｎｔ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｋｅｎｔ  ＵＫ）。
【０１９０】
（ｃ）身体組成
磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）および分光法（ＭＲＳ）を使用して、身体組成を評価した。金属移植片（ｎ＝８）、閉所恐怖症（ｎ＝９）およびスキャナーの技術問題（ｎ＝２）により、１９人の対象においてＭＲＩおよびＭＲＳのデータは収集できなかった。体重は、全ての対象において０．１ｋｇの位まで測定し（ＴＢＦ−３００、Ｔａｎｉｔａ）、対象が薄着をしている間に行った。
【０１９１】
（ｄ）心血管疾患および糖尿病に関するリスク因子
絶食血液試料を収集し、トリグリセリドのレベル、総コレステロール、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロール、グリコシル化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）、および肝機能試験（アラニントランスアミナーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ）について分析した。対象が少なくとも１５分間仰臥位であった後に、血圧および脈拍も測定した。
【０１９２】
（ｅ）プロピオネートイヌリンエステルおよびイヌリン対照に対する腸微生物の変化を評価するための蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション
糞便試料を３人の健康なヒトボランティア（１人の女性および２人の男性；年齢３０〜５０歳；ＢＭＩ  ２５〜３１）から得た。ボランティアが任意の胃腸障害（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群、消化性潰瘍および癌）を患っているおよび／または試料供与に先行する６ヵ月以内に抗生物質を服用していたならば、彼らを除いた。試料を嫌気条件下（１０％のＨ２、１０％のＣＯ２および８０％のＮ２）で保持し、収集に続いて最大３０分内に使用した。試料を嫌気性ＰＢＳ（０．１ｍｏｌ／ｌのリン酸緩衝溶液、ｐＨ７．４）中に１／１０  ｗ／ｗで希釈し、Ｓｔｏｍａｃｈｅｒ（Ｓｔｏｍａｃｈｅｒ  ４００、Ｓｅｗａｒｄ、Ｗｅｓｔ  Ｓｕｓｓｅｘ、ＵＫ）において２分間正常速度でホモジナイズした。
【０１９３】
滅菌バッチ培養発酵器（１５０ｍｌの作業体積）を並行して設置し、１３５ｍｌの事前低減された滅菌基礎培養培地（ペプトン水２ｇ／ｌ（Ｏｘｏｉｄ）、酵母抽出物２ｇ／ｌ（Ｏｘｏｉｄ、Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、ＵＫ）、ＮａＣｌ  ０．１ｇ／ｌ、Ｋ２ＨＰＯ４  ０．０４ｇ／ｌ、ＫＨ２ＰＯ４  ０．０４ｇ／ｌ、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ  ０．０１ｇ／ｌ、ＣａＣｌ２．６Ｈ２Ｏ  ０．０１、ＮａＨＣＯ３  ２ｇ／ｌ、Ｔｗｅｅｎ  ８０２ｍｌ（ＢＤＨ、Ｐｏｏｌｅ、ＵＫ）、ヘミン０．０５ｇ／ｌ、ビタミンＫ１１０μｌ、システイン．ＨＣｌ  ０．５ｇ／ｌ、胆汁塩０．５ｇ／ｌ）を無菌的に充填した。発酵器に終夜Ｏ２フリーＮ２ガスを入れた。プロピオネートイヌリンエステルおよびイヌリン対照の基質（１／１０  ｗ／ｖ）を、糞便スラリーの添加の直前にそれらのそれぞれの発酵器に添加した。陰性対照として各ボランティアに基質フリー槽を設置した。培養物を連続撹拌し、循環する水浴の手段によって３７℃で保持した。自動ｐＨ制御器（Ｆｅｒｍａｃ  ２６０、Ｅｌｅｃｔｒｏｌａｂ、Ｔｅｗｋｅｓｂｕｒｙ、ＵＫ）を使用して、培養ｐＨを９．７から６．９の間に保持した。各槽に１５ｍｌの新鮮な糞便スラリー（１／１０  ｗ／ｗ）を接種した。バッチ発酵を４８時間の間実行し、蛍光ｉｎ−ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）分析のため、０時間、１０時間、２４時間、３４時間および４８時間に各槽から６ｍｌの試料を得た。３つのリプリケート発酵を設置し、各々に、３つの異なるヒト糞便試料のうちの１つを接種した。
【０１９４】
Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の種（Ｂｉｆ１６４）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ／Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ（Ｂａｃ３０３）、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ／Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（Ｅｒｅｃ４８２）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ（Ｃｈｉｓ１５０）、Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ  ｃｌｕｓｔｅｒ（Ａｔｏ２９１）およびＥｕｂａｔｅｒｉｕｍ  ｒｅｃｔａｌｅ／Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃｏｃｃｏｉｄｅｓ（Ｅｒｅｃ４８２）を標的とする蛍光ｉｎ−ｓｉｔｕハイブリダイゼーションを、Ｓａｒｂｉｎｉら（２０１１）によって記載されている通りに使用した。Ｆｌｕｏｒ  １００レンズを使用する蛍光顕微鏡法（Ｅｃｌｉｐｓｅ  ４００、Ｎｉｋｏｎ、Ｓｕｒｒｅｙ、ＵＫ）を使用して、細胞を視覚化した。各試料について、１５個の異なる視野を列挙した。単変量分散分析（ＡＮＯＶＡ）およびチューキー事後検定を使用することで、細菌群集団で使用された基質の有意差を決定した。
【０１９５】
統計分析
急性食物摂取量研究のための試料サイズは、２０％の標準偏差でエネルギー摂取における１５％の減少を想定する電力算出に基づいており（α＝０．０５、出力＝０．８５）、１群当たり２０の概算所要試料サイズをもたらした。急性補充研究からのデータを使用することで、長期調査のための所要試料サイズを概算した。２４週目でエネルギー摂取における差異のＳＤが２５０ｋｃａｌであると想定して、試料サイズを算出した。プロピオネートイヌリンエステルおよびイヌリン対照治療群の間の食物摂取量における２００ｋｃａｌの差異を検出するために、５２人の個体（各群において２６人）が８０％信頼（α＝０．０５）を提供する。２４週の介入を完了した４９人の対象からデータを分析した（プロトコール当たりの分析；図１３）。１１人の対象（１８％）は２４週の介入を完了せず、図１２に示されている通り、２つの群の間の削減における有意な差はなかった。ベースラインおよび介入後の身体組成データを、プロピオネートイヌリンエステル群における１７人の対象および対照群における１５人の対象から収集した。連続変数の比較のため、２４週でのベースラインからの変化を各対象において算出し、対応のあるｔ検定を使用して群内の平均を比較し対応のないｔ検定を使用して群間の平均変化を比較した。カイ二乗試験を行うことで、対象の初期体重の≧３％および≧５％を増加した各群における対象の百分率を比較した。一元配置ＡＮＯＶＡを行うことで、インビトロ分泌腸ホルモンレベルにおける差異を決定した。治験間の血漿ホルモンレベルについてエネルギー摂取および曲線下面積（ＡＵＣ）における差異を、Ｐａｉｒｅｄ  Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ検定を使用して評価した。二元配置（治験×時間）反復測定ＡＮＯＶＡを行うことで、血漿ホルモンレベル、ＶＡＳおよび呼気水素における差異を決定した。有意な効果を事後比較によって追跡調査した。Ｐ値＜０．０５は統計的に有意であると考えた。データを平均±ＳＥＭまたは±９５％信頼区間［ＣＩ］として表す。
【０１９６】
結果
減量および身体組成
食事補充の２４週後、プロピオネートイヌリンエステル群は、１．０２±０．５７ｋｇ（ｐ＝０．０６２）の平均体重を損失していたが、他方対照群は０．３８±０．６９ｋｇ（ｐ＝０．５５８）増加していた。群間の減量における差異は、２４週の期間（図１４（ａ）；ｐ＝０．０９７）にわたり有意に異なっていなかった。１６週目から２４週目のプロピオネートイヌリンエステル群内の減量は有意であった（０．８１±０．２６ｋｇ；ｐ＝０．００２）。我々は、対照群における２４人の対象のうちの６人（２５％）と比較した場合、正常体重維持（≧３％ベースライン体重）の過剰な体重増加が、プロピオネートイヌリンエステル治療に続いて２５人の対象のうちの１人（４％）において生じたことを見い出した（図１４（ｂ）；Ｐ＝０．０３６）。さらに、対照治療後の２４人のうちの４人（１７％）と比較して、プロピオネートイヌリンエステル群における対象のいずれも実質的体重増加（≧５％ベースライン体重）を有していなかった（図１４（ｂ）；Ｐ＝０．０３３）。
【０１９７】
介入期間に続いて、群間の合計脂肪組織含量における有意な変化はなかったが、しかしながら、治療に続いて、腹部領域における内部脂肪の分布における変化（総脂肪組織含量の百分率として表される）は、対照補充と比較して、プロピオネートイヌリンエステル群において有意により低かった（図１５；ｐ＝０．０４０）。さらに、内部脂肪組織は対照群内で有意に増加され（ｐ＝０．０４９）、内部脂肪組織：皮下脂肪組織の比は有意に増加された（ｐ＝０．００２）。肝細胞内脂質（ＩＨＣＬ）は、プロピオネートイヌリンエステル治療群内で有意に低減されたが（ｐ＝０．０３８）、ＩＨＣＬ、ヒラメ筋細胞内脂質および脛骨筋細胞内脂質（ＩＭＣＬ）における変化は、介入群間で有意に異なってはいなかった。インビトロ分析は、体重増加および脂肪分布に対するプロピオネートイヌリンエステルの保護効果が、対照と比較して、腸細菌集団における変化によるものではないことを示唆している（下記の「プロピオネートイヌリンエステルおよび対照に対する腸微生物変化」結果、および図１６を参照）。
【０１９８】
対象コンプライアンスおよび有害事象
プロピオネートイヌリンエステル群およびイヌリン群についてのコンプライアンスは、合計２４週の期間にわたって同様であった。２４週の研究の最後における未開封サッシェの数に基づく平均コンプライアンスは、プロピオネートイヌリンエステル群について９５±７％およびイヌリン群について９４±７％であった。
【０１９９】
プロピオネートイヌリンエステル群について０週目から８週目、９週目から１６週目、および１７週目から２４週目にわたるコンプライアンスは、以下の通りであった：０週目から８週目：９６±９％；９週目から１６週目：９６±６％；および１７週目から２４週目：９３±９％。イヌリン群について０週目から８週目、９週目から１６週目、および１７週目から２４週目にわたるコンプライアンスは、以下の通りであった：０週目から８週目：９７±３％；９週目から１６週目：９４±１０％；および１７週目から２４週目：９２±１３％。
【０２００】
イヌリンまたはプロピオネートイヌリンエステルの摂取を示唆する両群について、絶食および呼気水素に関する曲線下面積において、ベースライン（対照９±３  ｖ  １９．１±７  ｐ＜０．０５  プロピオネートイヌリンエステル１０±４  ｖ  １４±４  ｐ＜０．０１）から２４週までに有意な増加（対照２３５５±８００  ｖ  ５０００±１４８０  ｐ＜０．０５  プロピオネートイヌリンエステル  ３１４６±１１３７  ｖ  ４６６０±１２６８  ｐ＜０．０５）があった（図１７を参照）。
【０２０１】
副作用プロファイルは、２４週目での鼓脹および膨満における有意な増加を有するイヌリン対照群のほうが大きく、これはプロピオネートイヌリンエステル群において見られなかった。
【０２０２】
食物摂取量および腸ホルモン放出
プロピオネートイヌリンエステル治療は、食物摂取量を８３６±５６ｋｃａｌから７６３±５４ｋｃａｌ（ｐ＝０．１００）まで８．７％低減した。対照補充は、食物摂取量を６７８±６９ｋｃａｌから６５１±６４ｋｃａｌ（ｐ＝０．１９７）を低減し、４．０％の平均低減であった。食物摂取量における変化は、群間において統計的に有意でなかった（ｐ＝０．４１６）。長期のプロピオネートイヌリンエステル補充後の食後期間中で、血漿ＰＹＹ放出（ΔＡＵＣ０〜３００分  １１４８±７１２ｐｍｏｌ／Ｌから９０７±５５６ｐｍｏｌ／Ｌ；ｐ＝０．７５６）またはＧＬＰ−１放出（ΔＡＵＣ０〜３００分  ４２３２±１０７０ｐｍｏｌ／Ｌから３２１６±８４７ｐｍｏｌ／Ｌ；ｐ＝０．４４７）において差異はなかった。血漿ＰＹＹ（ΔＡＵＣ０〜３００分  ９６２±８６９ｐｍｏｌ／Ｌから６５６±８８０ｐｍｏｌ／Ｌ；ｐ＝０．８１７）およびＧＬＰ−１（ΔＡＵＣ０〜３００分  ３４４１±８４３ｐｍｏｌ／Ｌから２２７８±１０００ｐｍｏｌ／Ｌ；ｐ＝０．３３４）も、対照治療によって影響されなかった。ＰＹＹ（図１４（ｃ）；ｐ＝０．９６５）およびＧＬＰ−１（図１４（ｄ）を参照；ｐ＝０．９９３）の放出における変化は、治療群間で有意に異なっていなかった。
【０２０３】
グルコース恒常性
２４週目での標準化朝食に対する食後グルコース応答における変化は、群間で有意に異なった（図１８；ｐ＝０．０３７）。血糖応答は対照補充に続いて有意により大きく（ＡＵＣ０〜３００分  １６００±５１ｐｍｏｌ／Ｌから１６９１±５４ｐｍｏｌ／Ｌ；ｐ＝０．０１０）、プロピオネートイヌリンエステル治療に続いて未変化であり（ＡＵＣ０〜３００分  １６３０±５０ｐｍｏｌ／Ｌから１６３０±４２ｐｍｏｌ／Ｌ；ｐ＝０．９９３）、群内で経験された体重増加および体脂肪分布における差異と一致した。インスリン応答は、プロピオネートイヌリンエステル（ＡＵＣ０〜３００分  ７６８４±８８１μＵ／ｍＬから７９６９±９７１μＵ／ｍＬ；ｐ＝０．６１２）または対照治療（ＡＵＣ  ０〜３００分  ９２８５±８８２μＵ／ｍＬから８７８１±７３１μＵ／ｍＬ；ｐ＝０．４６４）に続いて有意に異なっておらず、インスリン応答における変化は群間で有意に異なっていなかった（図１９；ｐ＝０．３７２）。
【０２０４】
心血管疾患および糖尿病に関するリスク因子
プロピオネートイヌリンエステル補充は、総コレステロール（ｐ＜０．００１）、ＬＤＬ（ｐ＜０．００１）、ＨＤＬ（ｐ＝０．００４）、アラニントランスアミナーゼ（ｐ＝０．０１５）、アルカリホスファターゼ（ｐ＜０．００１）およびアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ｐ＝０．００７）を有意に低減した。総コレステロール（ｐ＝０．０１４）、ＨＤＬ（ｐ＜０．００１）、アラニントランスアミナーゼ（ｐ＜０．００１）およびアルカリホスファターゼ（ｐ＜０．００１）は、対照群においてベースライン値から有意に低減された。プロピオネートイヌリンエステルおよび対照治療は、絶食グルコース、インスリン、ＨｂＡ１ｃおよびトリグリセリド濃度に対して有意な効果を有していなかった（図１４）。
【０２０５】
プロピオネートイヌリンエステルおよび対照に対する腸微生物変化
イヌリン対照は、ベースラインと比較して、全ての時点でＢｉｆ１６４標識細胞を有意に増加させた。対照を有するＢｉｆ１６４レベルは、発酵の全体にわたってプロピオネートイヌリンエステル培養における濃度と比較して、有意により高かった。プロピオネートイヌリンエステルおよびイヌリン対照の両方が、ベースラインレベルと比較して、全てのサンプリング時点でＢａｃ３０３標識細胞における有意な増加を媒介した。Ａｔｏ２９１標識細胞は、ベースライン濃度と比較して、１０時間から３４時間のバッチ培養発酵の間の両方の試験基質で有意に増加した。標的とされた群のいずれにおいても、または全細菌レベルにおいても、他の有意な変化は見られなかった。プロピオネートイヌリンエステルはＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓおよびＡｔｏｐｏｂｉｕｍによって発酵可能であるが、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属の種によって代謝されないと思われる。図１６はこれらの結果を示している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図８−３】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図９−３】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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