(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
0006446461.tif 000031
式中、
Ｒ１は、Ｈまたはメチルを表し、
Ｒ２は、ＡまたはＨｅｔを表し、
Ａは、１〜８個のＣ原子を有する非分枝または分枝状アルキルを表し、ここで、１個または２個の隣接していないＣＨおよび／またはＣＨ２基はＮまたはＯ原子で置換されてもよく、および／または、ここで１〜７個のＨ原子はＦまたはＣｌで置換されてもよく、
Ｈｅｔは、ピリミジル、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、フラニル、チオフェニル、ピロリル、オキサゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、またはチアジアゾリルを表し、その各々は、非置換またはＨａｌ、Ａ、ＣＮ、ＯＨおよび／またはＯＡによって一または二置換され、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを表し、
Ｒ１がＨの場合、Ｒ２は４−ＯＭｅではない、
で表される化合物、またはそれらの薬学的に許容し得る塩、互変異性体もしくは立体異性体、または全ての比率におけるそれらの混合物。
【請求項２】
Ａは、１〜８個のＣ原子を有する非分枝または分枝状アルキルを表し、ここで、１個または２個の隣接していないＣＨ２基はＯ原子で置換されてもよく、および／または、ここで、１〜３個のＨ原子はＦで置換されてもよい、請求項１に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容し得る溶媒和物、塩、互変異性体もしくは立体異性体、または全ての比率におけるそれらの混合物。
【請求項３】
Ｈｅｔは、ピリミジル、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、フラニル、チオフェニル、ピロリル、オキサゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、またはチアジアゾリルを表し、その各々は、非置換またはＡによって一置換される、請求項１または２に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容し得る溶媒和物、塩、互変異性体もしくは立体異性体、または全ての比率におけるそれらの混合物。
【請求項４】
Ｒ１は、Ｈまたはメチルを表し、
Ｒ２は、ＡまたはＨｅｔを表し、
Ａは、１〜８個のＣ原子を有する非分枝状または分枝状アルキルを表し、ここで、１個または２個の隣接していないＣＨ２基はＯ原子で置換されてもよく、および／または１〜３個のＨ原子はＦで置換されてもよく、
Ｈｅｔは、ピリミジル、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、フラニル、チオフェニル、ピロリル、オキサゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、またはチアジアゾリルを表し、その各々は、非置換またはＡによって一置換される、請求項１に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容し得る塩、互変異性体もしくは立体異性体、または全ての比率におけるそれらの混合物。
【請求項５】
以下の群
【表１】
0006446461.tif 000032
から選択される、請求項１に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容し得る溶媒和物、塩、互変異性体もしくは立体異性体、または全ての比率におけるそれらの混合物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の式Ｉで表される化合物、およびそれらの薬学的に許容し得る塩、溶媒和物、互変異性体および立体異性体の調製のためのプロセスであって、式ＩＩ
【化２】
0006446461.tif 000033
式中、Ｒ１およびＲ２は、請求項１に示された意味を有する、
で表される化合物が脱ベンジル化され、
および／または
式Ｉの塩基または酸がその塩の１つに変換される、
ことを特徴とする、前記プロセス。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の式Ｉで表される少なくとも１種の化合物および／またはそれらの薬学的に許容し得る塩、溶媒和物、互変異性体もしくは立体異性体、または全ての比率におけるそれらの混合物、および任意に薬学的に許容し得る担体、賦形剤またはビヒクルを含む医薬。
【請求項８】
がん、多発性硬化症、心血管疾患、中枢神経系の損傷および炎症の処置および／または予防のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の式Ｉで表される化合物、またはそれらの薬学的に許容し得る塩、溶媒和物、互変異性体もしくは立体異性体、または全ての比率におけるそれらの混合物を含む医薬。
【請求項９】
頭部、頸部、目、口、喉、食道、気管支、喉頭、咽頭、胸部(chest)、骨、肺、結腸、直腸、胃、前立腺、膀胱、子宮、子宮頸部、胸部(breast)、卵巣、精巣または他の生殖器、皮膚、甲状腺、血液、リンパ節、腎臓、肝臓、膵臓、脳、中枢神経系のがん、固形腫瘍および血液由来の腫瘍の群から選択される疾患の処置および／または予防のための、請求項８に記載の医薬。
【請求項１０】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の式Ｉで表される少なくとも１種の化合物および／またはそれらの薬学的に許容し得る塩、溶媒和物もしくは立体異性体、または全ての比率におけるそれらの混合物、ならびに少なくとも１種のさらなる医薬活性成分を含む、医薬。
【請求項１１】
（ａ）有効量の、請求項１〜５のいずれか一項に記載の式Ｉで表される化合物および／またはそれらの薬学的に許容し得る塩、溶媒和物、塩もしくは立体異性体、または全ての比率におけるそれらの混合物
ならびに
（ｂ）有効量の、さらなる医薬活性成分
の別個のパックからなるセット（キット）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、価値のある特性を有する新規化合物、特に医薬品の調製に用いられ得るそれらを見出す目的を有していた。
【０００２】
本発明は、タンキラーゼ（ＴＡＮＫ）およびポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼＰＡＲＰ−１の活性を阻害するイミダゾピラジノン誘導体に関する。本発明の化合物は、したがって、がん、多発性硬化症、心血管疾患、中枢神経系の損傷および異なる形態の炎症などの疾患の処置に有用である。本発明はまた、これらの化合物、これらの化合物を含む医薬組成物の調製方法、およびこれらの化合物を含む医薬組成物を利用する疾患の処置方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
核酵素ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ−１（ＰＡＲＰ−１）は、ＰＡＲＰ酵素ファミリーの一員である。この成長する酵素のファミリーは、例えばＰＡＲＰ−１、ＰＡＲＰ−２、ＰＡＲＰ−３およびボールトＰＡＲＰなどのＰＡＲＰ；例えばＴＡＮＫ−１およびＴＡＮＫ−２などのタンキラーゼ（ＴＡＮＫ）からなる。ＰＡＲＰはまた、ポリ（アデノシン５’−ジホスホ−リボース）ポリメラーゼまたはＰＡＲＳ（ポリ（ＡＤＰ−リボース）シンテターゼ）として参照される。
【０００４】
ＴＡＮＫ−１は、有糸分裂紡錘体会合ポリ（ＡＤＰ−リボース）の重合に必要とされると思われる。ＴＡＮＫ−１のポリ（ＡＤＰ−リボシル）化活性は、スピンドル双極性の正確な形成と維持のために重要であるかもしれない。さらに、ＴＡＮＫ−１のＰＡＲＰ活性は、分裂後期前の正常なテロメア分離に必要であることが示されて来た。タンキラーゼＰＡＲＰ活性の妨害は、おそらくスピンドルチェックポイントの活性化及びその後の細胞死に起因する、一過性の細胞周期停止を発生させる、異常な有糸分裂をもたらす。タンキラーゼの阻害は、したがって腫瘍細胞の増殖に対して細胞毒性効果を及ぼすことが期待される（WO2008/107478号）。
ＰＡＲＰ阻害剤は、M. Rouleau et al. によりNature Reviews, Volume 10, 293-301の臨床がん研究（表２、２９８頁）に記載されている。
【０００５】
HorvathおよびSzaboによるレビュー(Drug News Perspect 20(3), April 2007, 171-181)によれば、もっとも最近の研究は、ＰＡＲＰ阻害剤が、主として種々のレベルにおいてＤＮＡ修復を妨害することから、がん細胞死を増強することを実証した。より最近の研究は、ＰＡＲＰ阻害剤が、成長因子発現を阻害することによるか、または成長因子誘発細胞増殖的反応を阻害することによる血管新生を阻害することをまた、実証した。これらの知見はまた、ＰＡＲＰ阻害剤のin vivoでの抗がん効果のモードに影響を与えるかも知れない。
【０００６】
また、Tentori et al. (Eur. J. Cancer, 2007, 43 (14) 2124-2133)による研究は、ＰＡＲＰ阻害剤が、VEGFまたは胎盤成長因子誘発移行を阻害し、in vivoでの細胞ベースの系における細管状ネットワークの形成を防止し、および血管新生を妨げることを示す。同研究は、また、ＰＡＲＰ−１欠損（knock-out）マウスにおいて、成長因子誘発血管新生が欠乏することを実証している。本研究の結果は、抗血管新生のためのＰＡＲＰに標的を定めるための証拠を提供し、がん治療におけるＰＡＲＰ阻害剤の使用に新規の治療的意味合いを付加する。
【０００７】
保存されたシグナル伝達経路における欠陥は、基本的にすべてのがんの起源および挙動において重要な役割を果たすことがよく知られている（E.A.Fearon, Cancer Cell, Vol. 16, Issue 5, 2009, 366-368）。Ｗｎｔ経路は、抗がん処置の標的である。Ｗｎｔ経路の重要な特徴は、β−カテニン破壊複合体によるβ−カテニンの調節タンパク質分解（劣化）である。ＷＴＸ、ＡＰＣまたはアキシンなどのタンパク質が、劣化プロセスに関与している。β−カテニンの適切な劣化は、多くのがんにおいて観察されたＷｎｔ経路の不適切な活性化を回避するために重要である。タンキラーゼはアキシンの活性を阻害し、したがってβ−カテニンの劣化を阻害する。
【０００８】
その結果として、タンキラーゼ阻害剤は、β−カテニンの劣化を増大させる。Ｎａｔｕｒｅ誌での論文は、タンパク質調節Ｗｎｔ信号送信に重要な新しい洞察を提供するだけでなく、さらに、小分子を介する、β−カテニンのレベルおよび局在化を無効にするためのアプローチを支持する（Huang et al., 2009; Nature, Vol 461, 614-620）。化合物ＸＡＶ９３９は、ＤＬＤ−１がん細胞の成長を阻害する。彼らはＸＡＶ９３９３がＡＸＩＮ１およびＡＸＩＮ２タンパク質のレベルを増加させることにより、β−カテニンのＷｎｔ−刺激の蓄積をブロックすることを見出した。著者らによるその後の仕事は、ＸＡＶ９３９が、両者がポリ（ＡＤＰリボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）タンパク質ファミリーのメンバーである、タンキラーゼ１および２（ＴＮＫＳ１およびＴＮＫＳ２）の阻害を介してＡＸＩＮレベルを調節することを証明した（S.J. Hsiao et al., Biochimie 90, 2008, 83-92）。
【０００９】
本発明による化合物およびそれらの塩は、良好な認容性を示しつつも極めて価値のある病理学的特性を有することを見出した。
【００１０】
本発明は、具体的にタンキラーゼ１および２を阻害する式Ｉで表される化合物に、これらの化合物を含む組成物に、ならびに、ＴＡＮＫ誘発疾患および愁訴の処置のためのそれらの使用プロセスに関する。
【００１１】
式Ｉで表される化合物は、さらにＴＡＮＫの単離および活性または発現の調査に使用され得る。加えて、それらは、調節されていないか、または妨げられたＴＡＮＫ活性に関連する疾患の診断方法で使用するのが特に好適である。
【００１２】
宿主または患者は、任意の哺乳動物種、例えば、霊長類種、特にヒト；マウス、ラットおよびハムスターを含む齧歯類；ウサギ；ウマ、ウシ、イヌ、ネコなどに属し得る。動物モデルは、実験的調査の対象とされ、ヒトの疾患の処置のためのモデルを提供する。
【００１３】
本発明による化合物での処置に対する特定の細胞の感受性は、in vitro試験で決定することができる。典型的には、細胞の培養物を、抗ＩｇＭなどの活性剤が、表面マーカーの発現などの細胞内応答を誘発できるようにするに十分な期間、通常約１時間〜１週間、様々な濃度の本発明による化合物と組み合わせる。in vitroでの試験は、血液または生検試料からの培養細胞を使用して実行することができる。発現した表面マーカーの量は、該マーカーを認識する特異抗体を使用したフロー・サイトメトリーにより評価される。
【００１４】
用量は、使用する特定の化合物、特定の疾患、患者状態などに依存して変動する。治療用量は、典型的には、標的組織における望ましくない細胞集団をかなり低減しつつも、患者の生存性を維持するのに十分なものである。処置は、一般に、かなりの低減、例えば負荷細胞における少なくとも約５０％の低減が生じるまで継続され、本質的に所望でない細胞が体内で検出されなくなるまで継続してもよい。
【００１５】
従来技術
E. Wahlberg et al., Nature Biotechnology (2012), 30(3), 283
H. Bregman et al., Journal of Medicinal Chemistry (2013), 56(3), 1341
その他のタンキラーゼ阻害剤は、WO 2013/012723, WO 2013/010092, WO 2012/076898およびWO 2013/008217に記載されている。
【００１６】
WO2011/089400 (CNIO, Centro Nacional de Investigaciones Oncologicas ) は
【化１】
0006446461.tif 000002
などの中間体として記載された置換イミダゾピラジノンを開示し、日本公開特許公報(2005), 特開2005089352A；言語：日本語：は
【００１７】
イミダゾール［１，５−ａ］ピラジン誘導体、それらを含む医薬組成物、ならびにタンパク質チロシンキナーゼ関連疾患の予防または処置のためのそれらの使用を記載する。 (Mukoyama, Harunobu; Nishimura, Toshihiro; Nakayama, Akiko; Kikuchi, Shinji; Komatsu, Yoshimitsu; Onoda, Hideki
【化２】
0006446461.tif 000003
R = H, 4-Br, 2-OMe, 3-OMe, 4-OMe, 4-CN, 4-F
【化３】
0006446461.tif 000004
などの置換イミダゾピラジノン。
【発明の概要】
【００１８】
本発明は、式Ｉ
【化４】
0006446461.tif 000005
式中
Ｒ１は、Ｈまたはメチルを表し、
Ｒ２は、ＡまたはＨｅｔを表し、
Ａは、１〜８個のＣ原子を有する非分枝状または分枝状アルキルを表し、ここで、１個または２個の隣接していないＣＨおよび／またはＣＨ２基はＮまたはＯ原子で置換されてもよく、および／または、ここで１〜７個のＨ原子はＦまたはＣｌで置換されてもよく、
Ｈｅｔは、ピリミジル、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、フラニル、チオフェニル、ピロリル、オキサゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、またはチアジアゾリルを表し、その各々は、非置換またはＨａｌ、Ａ、ＣＮ、ＯＨおよび／またはＯＡによって一または二置換され、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを表し、
但し、Ｒ１がＨの場合、Ｒ２は４−ＯＭｅではない、
で表される化合物、およびそれらの薬学的に許容し得る塩、互変異性体もしくは立体異性体、および全ての比率におけるそれらの混合物に関する。
【００１９】
本発明は、また光学活性体（立体異性体）、エナンチオマー、ラセミ体、ジアステレオマーおよびこれらの化合物の水和物および溶媒和物に関する。
さらに、本発明は、薬学的に許容し得る、式Ｉで表される化合物の誘導体に関する。
用語、溶媒和物は、それらの相互引力により形成された、化合物上への不活性溶媒分子の付加物(adduction)を意味するものとする。溶媒は、例えば、一水和物もしくは二水和物またはアルコキシドである。
本発明はまた塩の溶媒和物にも関する、ということが理解される。
用語、薬学的に許容し得る誘導体は、例えば、本発明による化合物の塩、ならびにまたプロドラッグ化合物を意味するものとする。
【００２０】
本明細書中において用いられ、および別段の指示がない限り、用語「プロドラッグ」は、生物学的条件（in vitroまたはin vivo）下で加水分解、酸化または別の反応がなされ、活性化合物、特に式Ｉで表される化合物を提供する、式Ｉで表される化合物の誘導体を意味する。プロドラッグの例は、これらに限定されないが、生体加水分解性（biohydrolyzable）部分、例えば生体加水分解性アミド、生体加水分解性エステル、生体加水分解性カルバミン酸塩、生体加水分解性炭酸塩、生体加水分解性ウレイドおよび生体加水分解性リン酸塩類似体などを含む式Ｉで表される化合物の誘導体および代謝産物を含む。ある態様において、カルボキシル官能基を有するプロドラッグ化合物は、カルボン酸の低級アルキルエステルである。カルボン酸エステルは、分子上に存在するカルボン酸部分のいずれかをエステル化することによって、簡便に形成される。プロドラッグは、典型的には、周知の方法、例えばBurger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6th ed. (Donald J. Abraham ed., 2001, Wiley) およびDesign and Application of Prodrugs (H.Bundgaard ed., 1985, Harwood Academic Publishers Gmfh)に記載されるものなどを使用して製造することができる。
【００２１】
表現「有効量」は、組織、系、動物またはヒトにおいて、例えば研究者もしくは医師に、探索されているか、または所望されている生物学的または医学的応答を引き起こさせる医薬のまたは薬学的に活性な成分の量を示す。
【００２２】
加えて、表現「治療有効量」は、この量を施与されていない対応する対象と比較して、以下の転帰を有する量を表す：
疾患、症候群、状態、愁訴、障害もしくは副作用の、改善された処置、治癒、予防または排除、あるいはまた、疾患、愁訴または障害の進行の低減。
表現「治療有効量」はまた、正常な生理学的機能を増加させるのに有効である量も包含する。
【００２３】
本発明はまた、式Ｉで表される化合物の混合物、例えば２種のジアステレオマーの、例えば１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：１０、１：１００または１：１０００の比率での混合物の使用に関する。
これらは、特に好ましくは立体異性化合物の混合物である。
【００２４】
「互変異性体」は、互いに平衡状態にある化合物の異性体をいう。異性体の濃度は、化合物が見出される環境に依存し、例えば、化合物が固体であるか、または有機溶液もしくは水性溶液中にあるかによって異なり得る。
【００２５】
本発明は、式Ｉで表される化合物およびその塩、ならびに式Ｉで表される化合物およびそれらの薬学的に許容し得る塩、溶媒和物、互変異性体ならびに立体異性体を調製するプロセスであって、
式ＩＩ
【化５】
0006446461.tif 000006
式中、Ｒ１およびＲ２は、請求項１に示された意味を有する、
で表される化合物が脱ベンジル化され、
および／または
式Ｉで表される塩基または酸がその塩の１つに変換される、
ことを特徴とする、前記プロセスに関する。
【００２６】
上記および下記において、ラジカルＲ１およびＲ２は、他に明確に述べない限り式Ｉに対して示した意味を有する。
【００２７】
Ａは、アルキルを表し、これは非分枝状（直鎖状）または分枝状であり、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個のＣ原子を有する。Ａは、好ましくはエチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルまたはｔｅｒｔ−ブチル、さらにはまたペンチル、１−、２−もしくは３−メチルブチル、１，１−、１，２−もしくは２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、ヘキシル、１−、２−、３−もしくは４−メチルペンチル、１，１−、１，２−、１，３−、２，２−、２，３−もしくは３，３−ジメチルブチル、１−もしくは２−エチルブチル、１−エチル−１−メチルプロピル、１−エチル−２−メチルプロピル、１，１，２−もしくは１，２，２−トリメチルプロピル、さらに好ましくは、例えばトリフルオロメチルを表す。
【００２８】
Ａは、特に好ましくは、２個、３個、４個、５個、または６個のＣ原子を有するアルキルを、好ましくはエチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルまたはｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチルまたは１，１，１−トリフルオロエチルを表す。
さらに、Ａは、好ましくはＣＨ２ＯＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３を表す。
Ａは、好ましくはまた、１〜８個のＣ原子を有する、非分枝状または分枝状アルキルを表し、ここで、１または２個の隣接していないＣＨ２基は、Ｏ原子によって置換されてもよく、および／またはここで、１〜３個のＨ原子はＦによって置換されてもよい。
【００２９】
Ｈｅｔは、好ましくは、ピリミジル、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、フラニル、チオフェニル、ピロリル、オキサアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、またはチアジアゾリルを表わし、その各々は、非置換またはＡによって一置換される。
【００３０】
本発明をとおして、１回以上現れる全てのラジカルは、同一であっても異なっていてもよい、すなわち、互いに独立している。
式Ｉで表される化合物は、１個または２個以上のキラル中心を有してもよく、よって、様々な立体異性体の形態で存在し得る。式Ｉはこれら全ての形態を包含する。
【００３１】
したがって、本発明は特に、式Ｉで表される化合物であって、式中前記ラジカルの少なくとも１つが上に示した好ましい意味の１つを有する、該化合物に関する。化合物のいくつかの好ましい群は、以下の従属式Ｉａ〜Ｉｄによって表され得、それは式Ｉに適合し、ここでより詳細に指定しないラジカルは、式Ｉについて示した意味を有するが、ここで、
Ｉａにおいて、Ａは、１〜８個のＣ原子を有する非分枝状または分枝状を表し、ここで、１個または２個の隣接していないＣＨおよび／またはＣＨ２基はＯ原子で置換されてもよく、および／または、ここで１〜３個のＨ原子はＦで置換されてもよく；
Ｉｂにおいて、Ｈｅｔは、ピリミジル、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、フラニル、チオフェニル、ピロリル、オキサゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、またはチアジアゾリルを表し、その各々は、非置換またはＡによって一置換され；
【００３２】
Ｉｃにおいて、Ｒ１は、Ｈまたはメチルを表し、
Ｒ２は、ＡまたはＨｅｔを表し、
Ａは、１〜８個のＣ原子を有する非分枝状または分枝状を表し、ここで、１個または２個の隣接していないＣＨ２基はＯ原子で置換されてもよく、および／または、ここで１〜３個のＨ原子はＦで置換されてもよく；
Ｈｅｔは、ピリミジル、ピリジル、ピリダジニル、ピラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、ピラゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、フラニル、チオフェニル、ピロリル、オキサゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、またはチアジアゾリルを表し、その各々は、非置換またはＡによって一置換され；
およびそれらの薬学的に許容し得る塩、互変異性体もしくは立体異性体、ならびに全ての比率におけるそれらの混合物である。
【００３３】
式Ｉで表される化合物および、それらの製造のための出発物質もまた、さらには、文献（例えば標準的学術書、例えばHouben-Weyl, Methoden der organischen Chemie［有機化学の方法］, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart）に記載されているように、それ自体知られている方法によって、正確には、前記反応において公知かつ好適な反応条件の下で製造する。本明細書では、より詳細に述べられていない、それ自体知られている変法もまた、ここで使用することができる。
【００３４】
式ＩＩで表される出発化合物は、一般に知られている。しかしそれらが新規である場合、それらは、自体公知の方法によって製造することができる。
【００３５】
式Ｉで表される化合物は、好ましくは式ＩＩで表される化合物を脱ベンジル化することによって得ることができる。
反応は、一般的にイミダゾール存在化で行われる。
使用する条件に依存して、反応時間は数分〜１４日間であり、反応温度は約６０°〜２５０°、通常８０°〜２００°、特に約１００°〜約１８０°である。
好ましくは、反応は無溶媒で行われる。
【００３６】
薬学的な塩および他の形態
本発明による当該化合物は、それらの最終非塩形態で使用され得る。一方で、本発明はまた、当該技術分野において知られている手順によりさまざまな有機および無機の酸ならびに塩基から誘導され得る、それらの薬学的に許容し得る塩の形態でのこれらの化合物の使用も包含する。式Ｉで表される化合物の薬学的に許容し得る塩形態は、大部分が、慣用の方法により製造される。式Ｉで表される化合物がカルボキシル基を含む場合、その好適な塩の１つは、その化合物を好適な塩基と反応させて、対応する塩基付加塩を得ることにより、形成され得る。
【００３７】
かかる塩基は、アルカリ金属水酸化物、例えば水酸化カリウム、水酸化ナトリウムおよび水酸化リチウムなど；アルカリ土類金属水酸化物、例えば水酸化バリウムおよび水酸化カルシウムなど；アルカリ金属アルコキシド、例えばカリウム・エトキシドおよびナトリウム・プロポキシドなど；ならびに、さまざまな有機塩基類、例えばピペリジン、ジエタノールアミンおよびＮ−メチル−グルタミンなどである。式Ｉで表される化合物のアルミニウム塩もまた同様に含まれる。式Ｉで表されるある化合物の場合、酸付加塩は、これらの化合物を、薬学的に許容し得る有機酸および無機酸、例えばハロゲン化水素、例えば、塩化水素、臭化水素またはヨウ化水素のなど、他の鉱酸およびその対応する塩、硫酸塩、硝酸塩またはリン酸塩など、ならびにアルキルスルホン酸塩、例えばエタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩およびベンゼンスルホン酸塩およびモノアリールスルホン酸塩、ならびに他の有機酸およびその対応する塩、例えば酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、アスコルビン酸塩など、と処置することによって形成され得る。
【００３８】
したがって、式Ｉで表される化合物の薬学的に許容し得る酸付加塩は、以下のものを含む：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アルギナート(arginate)、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩（ベシル酸塩）、重硫酸塩、重亜硫酸塩、臭化物、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、カプリル酸塩、塩化物、クロロ安息香酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、リン酸二水素化物、ジニトロ安息香酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、ギ酸塩、ガラクテル酸塩（粘液酸からのもの）、ガラクツロン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミコハク酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、馬尿酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ヨウ化物、イセチオン酸塩、イソ酪酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メタリン酸塩、メタンスルホン酸塩、メチル安息香酸塩、リン酸一水素化物、２−ナフタレンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、オレイン酸塩、パルモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニル酢酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ホスホン酸塩、フタル酸塩、しかしこれは限定を表さない。
【００３９】
さらに、本発明による化合物の塩基性塩は、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、リチウム、マグネシウム、マンガン（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛の塩を含むが、これが限定を表すことは意図されない。前述した塩のうち、好ましいのは、アンモニウム；アルカリ金属塩類ナトリウムおよびカリウム、ならびにアルカリ土類金属類カルシウムおよびマグネシウムである。薬学的に許容し得る有機無毒性塩基に由来する式Ｉで表される化合物の塩は、第一級、第二級および第三級アミン、置換アミン、ならびに天然由来の置換アミン、環状アミン、および塩基性イオン交換樹脂、例えば、アルギニン、ベタイン、カフェイン、クロロプロカイン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン（ベンザチン）、ジシクロヘキシルアミン、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リドカイン、リシン、メグルミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン類、テオブロミン、トリエタノールアミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミンおよびトリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン（トロメタミン）などを含むが、これが限定を表すことは意図されない。
【００４０】
塩基性窒素含有基を含む本発明の化合物は、薬剤、例えばハロゲン化（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、例えば、塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、イソプロピルおよびｔｅｒｔ−ブチル；ジ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル硫酸塩、例えば、硫酸ジメチル、ジエチルおよびジアミル；ハロゲン化（Ｃ１０〜Ｃ１８）アルキル、例えば塩化、臭化およびヨウ化デシル、ドデシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリル；ならびにハロゲン化アリール（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、例えば、塩化ベンジルおよび臭化フェネチルなどを使用して四級化され得る。本発明による水溶性化合物と油溶性化合物の両方が、かかる塩を使用して製造され得る。
【００４１】
好ましい前述の薬学的な塩は、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ベシル酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、ヘミコハク酸塩、馬尿酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、イセチオン酸塩、マンデル酸塩、メグルミン、硝酸塩、オレイン酸塩、ホスホン酸塩、ピバル酸塩、リン酸ナトリウム、ステアリン酸塩、硫酸塩、スルホサリチル酸塩、酒石酸塩、チオリンゴ酸塩、トシル酸塩およびトロメタミンを含むが、これが限定を表すことは意図されない。
特に好ましいのは、塩酸塩、二塩酸塩、臭化水素酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩、リン酸塩、硫酸塩およびコハク酸塩である。
【００４２】
式Ｉで表される塩基性化合物の酸付加塩は、遊離塩基形態を十分量の所望の酸と接触させ、慣用の様式で塩を形成させることにより製造される。遊離塩基は、塩形態を塩基と接触させ、慣用の様式で遊離塩基を分離することにより、再生させることができる。遊離塩基形態は、特定の物性例えば極性溶媒中での溶解性などに関し、その対応する塩形態と、ある点において異なる；しかしながら、本発明の目的に対し、塩は、他の点においては、そのそれぞれの遊離塩基形態に対応する。
【００４３】
前述のように、式Ｉで表される化合物の薬学的に許容し得る塩基付加塩は、金属類またはアミン類、例えばアルカリ金属およびアルカリ土類金属または有機アミンなどと形成される。好ましい金属類は、ナトリウム、カリウム、マグネシウムおよびカルシウムである。好ましい有機アミン類は、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンおよびプロカインである。
【００４４】
本発明による酸性化合物の塩基付加塩は、遊離酸形態を十分量の所望の塩基と接触させ、慣用の様式で塩を形成させることにより製造される。遊離酸は、塩形態を酸と接触させ、慣用の様式で遊離酸を分離することにより、再生され得る。遊離酸形態は、特定の物性、例えば極性溶媒中での溶解性などに関し、その対応する塩形態と、ある点において異なる；しかしながら、本発明の目的に対し、塩は、他の点においては、そのそれぞれの遊離の酸形態に対応する。
【００４５】
本発明による化合物が、このタイプの薬学的に許容し得る塩を形成させることができる１個より多い基を含む場合、本発明はまた、多重塩をも包含する。典型的な多重塩形態は、例えば、重酒石酸塩、二酢酸塩、二フマル酸塩、二メグルミン塩、二リン酸塩、二ナトリウム塩および三塩酸塩を含むが、これが制限を表すことは意図されない。
【００４６】
上で述べたことに関し、本関連における表現「薬学的に許容し得る塩」は、特にこの塩形態が、以前に使用されていた活性成分の遊離体または活性成分のその他の塩形態と比較して、活性成分に薬物動態学的特性を付与する場合に、式Ｉで表される化合物をその塩の１つの形態で含む活性材料を意味するものと解することができる。活性材料の薬学的に許容し得る塩形態はまた、従前有していなかった所望の薬物動態学的特性を有するこの活性成分を初めて提供することもでき、また体内での治療効果に関し、この活性材料の薬力学に対して正の影響すら有することができる。
【００４７】
同位体
さらに、式Ｉで表される化合物がその同位体標識された形態を含むことが意図される。式Ｉで表される化合物の同位体標識された形態は、化合物の１個または２個以上の原子が通常天然に存在する原子の原子質量または質量数と異なる原子質量または質量数を有する原子（単数）または原子（複数）によって置き換えられているという事実以外は、この化合物と同一である。
【００４８】
容易に商業的に入手でき、周知の方法によって式Ｉで表される化合物に包含させることができる同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素および塩素の同位体、例えば、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆおよび３６Ｃｌを含む。上述の同位体および／または他の原子の他の同位体の１種または２種以上を含む式Ｉで表される化合物、そのプロドラッグまたは薬学的に許容し得る塩が、本発明の一部であることが意図される。
【００４９】
式Ｉで表される同位体標識化合物を、多数の有益なやり方で使用することができる。例えば、放射性同位体、例えば３Ｈまたは１４Ｃなどが包含された式Ｉで表される同位体標識化合物は、医薬および／または基質組織分布アッセイに適している。これらの放射性同位体、つまりトリチウム（３Ｈ）および炭素１４（１４Ｃ）は、単純な調製および優れた検出能のために特に好ましい。より重い同位体、例えば重水素（２Ｈ）の式Ｉで表される化合物中への組み込みは、この同位体標識化合物のより高い代謝安定性のために治療的利点を有する。
【００５０】
より高い代謝安定性は、増加したin vivoでの半減期またはより低い投与量へと直接的に転換され、これは、ほとんどの状況下での本発明の好ましい態様を表す。式Ｉで表される同位体標識化合物は、本文中の合成スキームおよび関連する記載に、例の部に、ならびに製造の部に開示した手順を、容易に利用可能な同位体標識反応体により非同位体標識反応体を置き換えて実行することによって、製造することができる。
【００５１】
重水素（２Ｈ）をまた、化合物の酸化的代謝を一次的な速度論的同位体効果によって操作するための目的で、式Ｉで表される化合物に組み込むことができる。一次的な速度論的同位体効果は、同位体核の交換に起因する化学反応についての速度の変化であり、それは次に、この同位体交換の後に共有結合形成に必要な基底状態エネルギーの変化によって引き起こされる。より重い同位体の交換の結果、通常は化学結合のための基底状態エネルギーの低下がもたらされ、したがって速度制限的な結合切断の速度の低下が生じる。
【００５２】
多重生成物反応の座標沿いの鞍点領域においてまたはその近辺で結合切断が生じる場合には、生成物分布比を、実質的に変化させることができる。説明のために：重水素が炭素原子に交換可能でない位置において結合する場合には、ｋＭ／ｋＤ＝２〜７の速度差が典型的である。もしこの速度差が、酸化を受けやすい式Ｉで表される化合物に成功裏に適用されれば、in vivoでこの化合物のプロフィールを大幅に修正し、改善された薬物動態学的特性をもたらすことができる。
【００５３】
治療薬を発見し、開発する場合、当業者は、薬物動態学的パラメーターを最適化し、同時に所望のin vitro特性を保持することを試みる。乏しい薬物動態学的プロフィールを有する多くの化合物が酸化的代謝を受けやすいことを推測するのは合理的である。
【００５４】
現在利用可能なin vitroでの肝臓ミクロソームアッセイは、このタイプの酸化的代謝の経過に関する有用な情報を提供し、それによって次に、かかる酸化的代謝に対する耐性によって改善された安定性を有する式Ｉで表される重水素化された化合物の合理的な設計が可能になる。
【００５５】
式Ｉで表される化合物の薬物動態学的プロフィールにおける著しい改良がそれによって得られ、in vivo半減期（ｔ／２）、最大の治療効果の濃度（Ｃｍａｘ）、用量反応曲線下の面積（ＡＵＣ）およびＦの増加の点において；ならびに低下したクリアランス、用量および物質コストの点において定量的に表すことができる。
【００５６】
以下は、上記のものを例示することを意図する：酸化的代謝のための攻撃の複数の潜在的な部位、例えばベンジル水素原子および窒素原子に結合した水素原子を有する式Ｉで表される化合物を、水素原子の様々な組み合わせが重水素原子によって置き換えられ、したがってこれらの水素原子のいくつか、ほとんどまたはすべてが重水素原子によって置き換えられている一連の類似体として製造する。半減期決定によって、酸化的代謝に対する耐性の改善が改善される程度の、好ましく、かつ正確な決定が可能になる。このようにして、基本化合物の半減期を、このタイプの重水素−水素交換の結果１００％にまで延長することができることが決定される。
【００５７】
式Ｉで表される化合物における重水素−水素交換を使用して、所望されない有毒な代謝産物を減少させるかまたは消失させるための出発化合物の代謝産物範囲の好ましい修正もまた達成することができる。例えば、有毒な代謝産物が酸化的炭素−水素（Ｃ−Ｈ）結合切断によって生じる場合には、重水素化された類似体が、特に当該酸化が律速ステップでない場合であっても、所望されない代謝産物の産生を大幅に減少させるかまたは消失させるであろうことを合理的に推測することができる。重水素−水素交換に関しての最先端技術に関するさらなる情報は、例えばHanzlik et al., J. Org. Chem. 55, 3992-3997, 1990、Reider et al., J. Org. Chem. 52, 3326-3334, 1987、Foster, Adv. Drug Res. 14, 1-40, 1985、Gillette et al, Biochemistry 33(10) 2927-2937, 1994およびJarman et al. Carcinogenesis 16(4), 683-688, 1993に見出され得る。
【００５８】
さらに、本発明は、式Ｉで表される化合物および／またはその薬学的に許容され得る塩、互変異性体および立体異性体、全ての比率でのそれらの混合物の少なくとも１種、ならびに任意に、賦形剤および／またはアジュバントを含む医薬に関する。
【００５９】
医薬処方物は、予め決定した量の投薬単位毎に活性成分を含む投与単位の形態で投与され得る。かかる単位は、例えば、０．５ｍｇ〜１ｇ、好ましくは１ｍｇ〜７００ｍｇ、特に好ましくは５ｍｇ〜１００ｍｇの本発明による化合物を含み得、処置される状態、投与方法および年齢、体重および患者の状態に応じてか、または、医薬処方物は、予め決定した量の投薬単位毎に活性成分を含む投薬単位の形態で投与され得る。好ましい投薬単位処方物は、先に示されるように、活性成分の１日用量または部分用量、あるいはその対応する画分を含むものである。さらに、このタイプの医薬処方物は、薬学の分野において一般的に知られているプロセスを使用して製造され得る。
【００６０】
医薬処方物は、任意の所望する好適な方法を介する投与に適合され得、例えば、経口（口腔または舌下を含む）、経直腸、経鼻、局所（頬、舌下または経皮を含む）、経膣または非経口（皮下、筋肉内、静脈内または皮内を含む）の方法による。かかる製剤は、薬学の分野で知られているあらゆるプロセスを使用して、例えば、活性成分に賦形剤（単数または複数）またはアジュバント（単数または複数）を組み合わせることにより調製され得る。
【００６１】
経口投与に適合させた医薬処方物を、例えば、カプセルまたは錠剤；粉末または顆粒；水性または非水性液体中の溶液または懸濁液；食用泡(edible foam)または泡食品(foam food)；あるいは、水中油滴型液体エマルションまたは油中水滴型液体エマルション、などの別個の単位で投与することができる。
【００６２】
よって、例えば、錠剤またはカプセルの形態での経口投与の場合には、活性成分の成分を、例えば、エタノール、グリセリン、水などの経口用の、無毒性である、薬学的に許容し得る不活性賦形剤と組み合わせることができる。化合物を好適な微細サイズの粉末状にし、それを類似の様式で粉末状にした、例えばデンプンまたはマンニトールなどの、例えば食用炭水化物などの薬学的賦形剤と混合することにより、粉末を調製する。フレーバー剤、保存料、分散剤および色素が、同様に存在してもよい。
【００６３】
カプセルは、前記のように粉末混合物を調製し、これで、形状化したゼラチン殻を充填させることにより製造される。例えば固体形態の、高分散ケイ酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムまたはポリエチレングリコールなどの流動促進剤および潤滑剤を、充填操作の前に粉末混合物に加えてもよい。例えば寒天、炭酸カルシウムまたは炭酸ナトリウムなどの崩壊剤または可溶化剤もまた、カプセルが摂取されたあとの医薬の利用率を高めるために、同様に加えてもよい。
【００６４】
加えて、所望の場合または必要な場合、好適な結合剤、潤滑剤および崩壊剤ならびに色素も、同様に混合物中に組み入れてもよい。好適な結合剤は、デンプン、ゼラチン、天然糖、例えばグルコースまたはベータ−ラクトースなど、トウモロコシから作られる甘味料、天然および合成ゴム、例えばアカシア、トラガカントまたはアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなどを含む。これらの剤形に使用される潤滑剤は、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどを含む。崩壊剤は、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどを含むが、これらに限定されない。
【００６５】
錠剤は、例えば、粉末混合物を調製し、混合物を顆粒化するか、または乾式プレスし、潤滑剤および崩壊剤を添加し、混合物全体を圧縮して錠剤が得ることにより処方される。粉末混合物は、前記のように、好適な様式で粉末化された化合物を、希釈剤または基剤と、および任意に結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチンまたはポリビニルピロリドンなど、溶解遅延剤、例えばパラフィンなど、吸収促進剤、例えば第四級アンモニウム塩などおよび／または吸収剤、例えばベントナイト、カオリンまたはリン酸二カルシウムなどと混合することにより調製される。粉末混合物は、それを結合剤、例えばシロップ、デンプンペースト、アカシア粘液またはセルロースまたはポリマー材料の溶液などにより湿潤させ、ふるいを通してそれを圧縮することにより顆粒化することができる。顆粒化の代替として、粉末混合物は、打錠機に通され、砕かれて顆粒を形成する不均一な形状の塊が得られ得る。
【００６６】
顆粒は、錠剤の型に付着することを防ぐために、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルクまたは鉱油の添加により潤滑化され得る。潤滑化された混合物は、次いで圧縮され、錠剤が得られる。本発明による化合物はまた、自由流動性不活性賦形剤と組み合わされて、次いで直接圧縮され、顆粒化または乾式プレスを行わずに錠剤が得られ得る。シェラックシーリング層、糖またはポリマー材料の層およびワックスの光沢層からなる、透明なまたは不透明な保護層が存在してもよい。色素は、異なる投薬単位を差別化することを可能にするために、これらの被膜に添加され得る。
【００６７】
例えば、溶液、シロップおよびエリキシルなどの経口液体は、所定の量が予め特定された量の化合物を含むような、投与単位の形態で調製され得る。シロップは、水溶液中で好適なフレーバー剤とともに化合物を溶解させることにより調製することができ、一方、エリキシルは、無毒性アルコールビヒクルを使用して調製される。懸濁液は、無毒性ビヒクル中の化合物の分散により処方され得る。例えばエトキシ化されたイソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトールエーテルなどの可溶化剤および乳化剤、保存料、例えばペパーミント油または天然甘味料またはサッカリンなどのフレーバー添加剤あるいは他の人工甘味料なども、同様に添加され得る。
【００６８】
経口投与のための用量単位製剤を、所望の場合には、マイクロカプセルにカプセル化することができる。製剤をまた、放出が延長または遅延されるように、例えば、ポリマー、ワックスなどの中に粒子状材料を被覆することまたは包埋することなどにより調製することができる。
【００６９】
式Ｉで表される化合物、および、それらの薬学的に許容し得る塩、互変異性体および立体異性体はまた、例えば小型単層ベシクル、大型単層ベシクルおよび多層ベシクルなどのリポソーム送達系の形態でも投与され得る。リポソームは、例えばコレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンなどのさまざまなリン脂質から形成され得る。
【００７０】
式Ｉで表される化合物、および、それらの薬学的に許容し得る塩、互変異性体および生理学的官能性誘導体はまた、化合物分子が結合している個々の担体としてのモノクローナル抗体を使用しても送達され得る。化合物はまた、標的医薬担体として可溶性ポリマーに結合され得る。かかるポリマーは、パルミトイルラジカルで置換された、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルトアミドフェノールまたはポリエチレンオキシドポリリジンを包含してもよい。化合物は、さらに、医薬の制御放出を達成するのに好適な生分解性ポリマーのクラス、例えばポリ乳酸、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロキシピラン、ポリシアノアクリレートおよび架橋または両親媒性の、ヒドロゲルのブロックコポリマーなどと結合されていてもよい。
【００７１】
経皮投与に適合された医薬処方物を、独立した膏薬として、レシピエントの表皮との広範かつ密接な接触のために、投与することができる。よって、例えば、活性成分を、一般論としてPharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986)に記載されるように、膏薬からイオン泳動により、送達することができる。
局所投与に適合された薬学的化合物を、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、粉末、溶液、ペースト、ジェル、スプレー、エアロゾルまたはオイルとして処方することができる。
【００７２】
眼または他の外部組織、例えば口および皮膚の処置のために、製剤を、好ましくは、局所的軟膏またはクリームとして適用する。軟膏を得るための製剤の場合において、活性成分を、パラフィン性または水混和性のクリーム基剤のいずれかとともに用いることができる。代替的に、活性成分を処方し、水中油滴型クリーム基剤または油中水滴型基剤を有するクリームとして得ることができる。
【００７３】
眼への局所適用に適合された医薬処方物には、活性成分が、好適な担体に、特に水性溶媒に溶解されるか、または懸濁された点眼剤が含まれる。
口腔中の局所適用に適合された医薬処方物には、薬用キャンディー、トローチおよびマウスウォッシュが包含される。
直腸投与に適合された医薬処方物を、坐薬または浣腸の形態で投与することができる。
【００７４】
担体物質が固体である、経鼻投与に適合された医薬処方物には、例えば２０〜５００ミクロンの範囲の粒径を有し、鼻から吸い込んで摂取される様式で、すなわち鼻の近傍に保持され、粉末を含有する容器から鼻腔を経由した急速な吸入により投与される粗粉末を含む。担体物質として液体を伴う鼻腔用スプレーまたは点鼻剤に好適な処方物には、水または油中の活性成分溶液が包含される。
【００７５】
吸入による投与に適合された医薬処方物には、エアロゾル、噴霧器または吸入器を備えた種々の加圧ディスペンサーにより発生させることができる、微粒子ダストまたはミストが包含される。
膣内投与に適合された医薬処方物を、ペッサリー、タンポン、クリーム、ジェル、ペースト、泡またはスプレー処方物として投与することができる。
【００７６】
非経口投与に適合された医薬処方物は、抗酸化剤、緩衝液、静菌物質(bacteriostatics)および溶質を含み、それにより処方物は処置されるべきレシピエントの血液と等張とされる水性および非水性の滅菌注射溶液；ならびに、懸濁媒体および増粘剤を含んでもよい水性および非水性の滅菌懸濁液を含む。処方物は、例えば密封アンプルおよびバイアルなどの単回用量または複数回投与容器で投与されることができ、フリーズドライ（凍結乾燥）状態で貯蔵されることができ、使用直前の、例えば注射用の水などの滅菌担体溶液の添加のみが必要とされるようにできる。レシピに従って調製された注射溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製され得る。
【００７７】
特に前述した構成成分に加え、特定のタイプの製剤に関し、該製剤にはまた、当該技術分野において通常の他の剤も含まれていてもよいことは言うまでもなく；よって、例えば、経口投与に好適な製剤には、フレーバー剤が含まれていてもよい。
【００７８】
式Ｉで表される化合物の治療有効量は、複数の因子に応じて、例えば、動物の年齢および体重、処置が求められる正確な状態、その重症度、処方物の性質および投与の方法が含まれ、最終的には処置する医師または獣医により決定される。しかしながら、本発明による化合物の有効量は、一般的に、１日当たりレシピエント（哺乳動物）の体重の０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲であり、特に典型的には、１日当たり体重の１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。よって、７０ｋｇの体重である成体の哺乳動物について、１日当たりの実際の量は、通常７０〜７００ｍｇであり、ここで、この量を、１日当たり単回用量でまたは通常１日あたり一連の部分用量（例えば２、３、４、５または６など）で投与することができ、これにより１日の全体用量が同一となる。それらの塩もしくは溶媒和物、または、それらの生理学的に機能的な誘導体の有効量は、本発明による化合物自体の有効量の割合として決定され得る。類似の用量も前述の他の状態の処置に好適であると想定され得る。
【００７９】
このタイプの併用処置は、処置の個々の成分の同時の、連続の、または別個の施与により、達成され得る。このタイプの併用製品は、本発明による化合物を用いる。
本発明は、さらに、式Ｉで表される少なくとも１種の化合物、ならびに／または、それらの薬学的に許容し得る塩、互変異性体および立体異性体、ならびに、全ての比率でのそれらの混合物と、少なくとも１種のさらなる医薬活性材料とを含む医薬に関する。
【００８０】
本発明はまた、
（ａ）有効量の式Ｉで表される化合物、ならびに／または、それらの薬学的に許容し得る塩、互変異性体および立体異性体、ならびに、全ての比率でのそれらの混合物、
ならびに、
（ｂ）有効量のさらなる医薬活性材料
の個別のパックからなるセット（キット）にも関する。
【００８１】
セットは、好適な容器、例えば箱、個別の瓶、袋またはアンプルなどを含む。セットは、例えば、それぞれが、有効量の式Ｉで表される化合物、ならびに／または、それらの薬学的に許容し得る塩、溶媒和物および立体異性体、ならびに全ての比率でのそれらの混合物、ならびに、溶解されたか、または凍結乾燥された形態での有効量のさらなる医薬活性材料を含む、小分けされたアンプルを含む。
【００８２】
本明細書で使用される「処置する」は、障害もしくは疾患に関連する症状の全体でまたは一部の緩和、あるいは、それらの症状のさらなる進行もしくは悪化の遅延または停止、あるいは、疾患もしくは障害を発症するリスクがある対象における該疾患もしくは該障害の阻止(prevention)または予防(prophylaxis)を意味する。
【００８３】
式（Ｉ）で表される化合物に関係する用語「有効量」は、障害もしくは疾患に関連する症状の全部または一部を緩和すること、あるいは、それらの症状のさらなる進行もしくは悪化を遅らせることまたは止めること、あるいは、本明細書に開示される疾患、例えば炎症状態、免疫学的状態、がんまたはメタボリック状態、を有するかまたはそれを発症するリスクがある対象において、疾患または障害を阻止するかまたは予防を提供することを可能にする量を意味し得る。
【００８４】
一態様において、式Ｉで表される化合物の有効量は、例えばin vitroまたはin vivoで、細胞中のタンキラーゼを阻害する量である。いくつかの態様において、有効量の式（Ｉ）で表される化合物は、細胞中のタンキラーゼを、未処置の細胞中のタンキラーゼの活性と比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９９％阻害する。例えば医薬組成物中の、式（Ｉ）で表される化合物の有効量は、所望の効果を発揮するであろうレベルであってもよい；例えば、経口投与および非経口投与の両方のための単位投薬において、約０．００５ｍｇ／対象の体重のｋｇ〜約１０ｍｇ／対象の体重のｋｇ。
【００８５】
使用
本化合物は、がん、多発性硬化症、心血管疾患、中枢神経系の損傷および異なる形態の炎症の処置において、哺乳動物、特にヒトのための薬学的に有効な成分として適している。
【００８６】
本発明は、がん、多発性硬化症、心血管疾患、中枢神経系の損傷ならびに異なる形態の炎症の処置または予防のための医薬の製造のための式Ｉで表される化合物、および／またはそれらの薬学的に許容され得る塩、互変異性体および立体異性体の使用を包含する。
【００８７】
炎症性疾患の例としては、慢性関節リウマチ、乾癬、接触性皮膚炎、遅延型過敏反応などを含む。
【００８８】
式Ｉで表される化合物ならびに／またはそれらの薬学的に許容し得る塩、互変異性体および立体異性体の、哺乳動物におけるタンキラーゼ誘発疾患またはタンキラーゼ誘発状態の処置または防止のための医薬の製造のための使用もまた包含され、ここでこの方法に対して、治療的に有効な量の本発明の化合物を、かかる処置を必要としている罹患した哺乳動物に投与する。治療的量は特定の疾患によって変化し、過度の努力を伴わずに当業者によって決定することができる。
【００８９】
表現「タンキラーゼ誘発疾患または状態」は、タンキラーゼの活性に依存する病的な状態を指す。タンキラーゼ活性と関連する疾患は、がん、多発性硬化症、心血管疾患、中枢神経系の損傷および異なる形態の炎症を含む。
【００９０】
本発明は特に、タンキラーゼの阻害、制御および／または調節阻害が役割を果たす疾患の処置のための使用のための、式Ｉで表される化合物およびそれらの薬学的に許容し得る塩、互変異性体および立体異性体、ならびに全ての比率でのそれらの混合物に関する。
【００９１】
本発明は特に、タンキラーゼの阻害のための使用のための、式Ｉで表される化合物ならびにそれらの薬学的に許容し得る塩、互変異性体および立体異性体、ならびに全ての比率でのそれらの混合物に関する。
本発明は特に、がん、多発性硬化症、心血管疾患、中枢神経系の損傷および異なる形態の炎症の処置のための使用のための、式Ｉで表される化合物およびそれらの薬学的に許容し得る塩、互変異性体および立体異性体、ならびに全ての比率でのそれらの混合物に関する。
【００９２】
本発明は特定的に、がん、多発性硬化症、心血管疾患、中枢神経系の損傷および異なる形態の炎症を処置するかまたは防止する方法であって、その必要のある対象に、有効量の式Ｉで表される化合物またはそれらの薬学的に許容し得る塩、互変異性体、立体異性体もしくは溶媒和物を投与することを含む、前記方法に関する。
【００９３】
式Ｉで表される化合物が処置するかまたは防止するのに有用である代表的ながんは、頭部、頸部、目、口、喉、食道、気管支、喉頭(larynx)、咽頭(pharynx)、胸部(chest)、骨、肺、結腸、直腸、胃、前立腺、膀胱、子宮、子宮頸部、胸部(breast)、卵巣、精巣または他の生殖器、皮膚、甲状腺、血液、リンパ節、腎臓、肝臓、膵臓、脳、中枢神経系のがん、固形腫瘍および血液由来の腫瘍を含むが、それらには限定されない。
【００９４】
式Ｉで表される化合物が処置または防止するのに有用である代表的な心血管疾患は、再狭窄、アテローム性動脈硬化症およびその結果、例えば脳卒中、心筋梗塞、心臓、肺、腸、腎臓、肝臓、膵臓、脾臓または脳に対する虚血性障害を含むが、それらには限定されない。
【００９５】
本発明は、増殖的、自己免疫の、抗炎症性または感染性疾患障害を処置する方法であって、その必要のある対象に、治療的に有効な量の式Ｉで表される化合物を投与することを含む、前記方法に関する。
【００９６】
好ましくは、本発明は、疾患ががんである方法に関する。
特に好ましくは、本発明は、疾患ががんである方法に関し、ここで、投与が、同時、連続的または少なくとも１種の他の活性薬剤の投与との交互である。
【００９７】
式Ｉで表される開示した化合物を、抗がん剤を含む他の既知の治療薬と組み合わせて投与することができる。本明細書中で使用する用語「抗がん剤」は、がんを処置する目的のためにがんを有する患者に投与される全ての薬剤に関する。
【００９８】
上に定義した抗がん処置を、単独療法として適用してもよいか、または式Ｉで表される本明細書中に開示した化合物に加えて、慣用の手術もしくは放射線療法もしくは医薬療法を含んでもよい。かかる医薬療法、例えば化学療法または標的療法は、以下の抗腫瘍剤の１種または２種以上、しかし好ましくは１種を含んでもよい：
【００９９】
アルキル化剤
例えばアルトレタミン、ベンダムスチン、ブスルファン、カルムスチン、クロラムブシル、クロルメチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、イホスファミド、インプロスルファン、トシレート、ロムスチン、メルファラン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ニムスチン、ラニムスチン、テモゾロミド、チオテパ、トレオスルファン、メクロレタミン、カルボコン；
アパジコン、ホテムスチン、グルホスファミド(glufosfamide)、パリホスファミド(palifosfamide)、ピポブロマン、トロホスファミド、ウラムスチン(uramustine)、ＴＨ−３０２４、ＶＡＬ−０８３４；
【０１００】
白金化合物
例えばカルボプラチン、シスプラチン、エプタプラチン(eptaplatin)、ミリプラチン水和物、オキサリプラチン、ロバプラチン(lobaplatin)、ネダプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン；
ロバプラチン、ネダプラチン、ピコプラチン、サトラプラチン；
【０１０１】
ＤＮＡ変化剤
例えばアムルビシン、ビサントレン(bisantrene)、デシタビン、ミトキサントロン、プロカルバジン、トラベクテジン、クロファラビン；
アムサクリン、ブロスタリシン(brostallicin)、ピクサントロン、ラロムスチン(laromustine)１、３；
【０１０２】
トポイソメラーゼ阻害剤
例えばエトポシド、イリノテカン、ラゾキサン、ソブゾキサン、テニポシド、トポテカン；
アモナフィド(amonafide)、ベロテカン(belotecan)、エリプチニウムアセテート(elliptinium acetate)、ボレロキシン；
【０１０３】
微小管変性剤
例えばカバジタキセル、ドセタキセル、エリブリン、イクサベピロン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ビンフルニン；
フォスブレタブリン、テセタキセル(tesetaxel)；
【０１０４】
代謝拮抗薬
例えばアスパラギナーゼ3、アザシチジン、レボホリナートカルシウム、カペシタビン、クラドリビン、シタラビン、エノシタビン、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、メルカプトプリン、メトトレキサート、ネララビン、ペメトレキセド、プララトレキサート、アザチオプリン、チオグアニン、カルモフール；
ドキシフルリジン、エラシタラビン(elacytarabine)、ラルチトレキセド、サプラシタビン(sapacitabine)、テガフール２、３、トリメトレキサート；
【０１０５】
抗がん抗生物質
例えばブレオマイシン、ダクチノマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、レバミソール、ミルテホシン、マイトマイシンＣ、ロミデプシン、ストレプトゾシン、バルルビシン、ジノスタチン、ゾルビシン、ダウノルビシン、プリカマイシン；
アクラルビシン、ペプロマイシン、ピラルビシン；
【０１０６】
ホルモン／アンタゴニスト
例えばアバレリックス、アビラテロン、ビカルタミド、ブセレリン、カルステロン、クロロトリアニセン、デガレリクス、デキサメタゾン、エストラジオール、フルオコルトロン、フルオキシメステロン、フルタミド、フルベストラント、ゴセレリン、ヒストレリン、リュープロレリン、メゲストロール、ミトタン、ナファレリン、ナンドロロン、ニルタミド、オクトレオチド、プレドニゾロン、ラロキシフェン、タモキシフェン、サイロトロピンアルファ、トレミフェン、トリロスタン、トリプトレリン、ジエチルスチルベストロール；
アコルビフェン(acolbifene)、ダナゾール、デスロレリン(deslorelin)、エピチオスタノール、オルテロネル(orteronel)、エンザルタミド１，３；
【０１０７】
アロマターゼ阻害剤
例えばアミノグルテチミド、アナストロゾール、エキセメスタン、ファドロゾール、レトロゾール、テストラクトン；
ホルメスタン；
【０１０８】
小分子キナーゼ阻害剤
例えばクリゾチニブ、ダサチニブ、エルロチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、バンデタニブ、ベムラフェニブ、ボスチニブ、ゲフィチニブ、アキシチニブ；
アファチニブ、アリサーチブ(alisertib)、ダブラフェニブ、ダコミチニブ(dacomitinib)、ジナシクリブ(dinaciclib)、ドビチニブ(dovitinib)、エンザスタウリン、ニンテダニブ、レンバチニブ、リニファニブ、リンシチニブ(linsitinib)、マシチニブ(masitinib)、ミドスタウリン(midostaurin)、モテサニブ、ネラチニブ、オランチニブ(orantinib)、ペリフォシン、ポナチニブ、ラドチニブ(radotinib)、リゴセルチブ(rigosertib)、ティピファニブ、チバンチニブ、チボザニブ、トラメチニブ、ピマセルチブ(pimasertib)、ブリバニブアラニネート、セジラニブ、アパチニブ(apatinib)４、カボザンチニブＳ−マレート１，３、イブルチニブ１，３、イコチニブ(icotinib)４、ブパルリシブ(buparlisib)２、シパチニブ(cipatinib)４、コビメチニブ１，３、イデラリシブ１，３、フェドラチニブ(fedratinib)1、ＸＬ−６４７４；
【０１０９】
光線感作物質
例えばメトキサレン３；
ポルフィマーナトリウム、タラポルフィン、テモポルフィン；
【０１１０】
抗体
例えばアレムツズマブ、ベシレソマブ、ブレンツキシマブベドチン、セツキシマブ、デノスマブ、イピリムマブ、オファツムマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、ベバシズマブ、ペルツズマブ２，３；
カツマキソマブ、エロツズマブ、エプラツズマブ、ファーレツズマブ、モガムリズマブ、ネシツムマブ、ニモツズマブ(nimotuzumab)、オビヌツズマブ、オカラツズマブ(ocaratuzumab)、オレゴボマブ、ラムシルマブ、リロツムマブ、シルツキシマブ、トシリズマブ、ザルツムマブ、ザノリムマブ、マツズマブ、ダロツズマブ(dalotuzumab)１，２，３、オナルツズマブ(onartuzumab)１，３、ラコツモマブ(racotumomab)１、タバルマブ(tabalumab)１，３、ＥＭＤ−５２５７９７４、ニボルマブ１，３；
【０１１１】
サイトカイン
例えばアルデスロイキン、インターフェロンアルファ２、インターフェロンアルファ２ａ３、インターフェロンアルファ２ｂ２、３；
セルモロイキン、タソネルミン、テセロイキン、オプレルベキン１，３、組換えインターフェロンベータ−１ａ４；
【０１１２】
薬物複合体
例えばデニロイキンジフチトクス、イブリツモマブチウキセタン、イオベングアン(iobenguane)Ｉ１２３、プレドニムスチン、トラスツズマブエムタンシン、エストラムスチン、ゲムツズマブ、オゾガマイシン、アフリベルセプト；
シトレデキンベスドトックス(cintredekin besudotox)、エドトレオチド(edotreotide)、イノツズマブオゾガマイシン、ナプツモマブ・エスタフェナトクス、オポルツズマブモナトックス(oportuzumab monatox)、テクネチウム（９９ｍＴｃ）アルシツモマブ１，３、ビンタフォリド１，３；
【０１１３】
ワクチン
例えばシプロイセル３；
ビテスペン３、エメペピムト(emepepimut)−Ｓ３、oncoVAX４、リンドペピムト(rindopepimut)３、troVax４、ＭＧＮ−１６０１４、ＭＧＮ−１７０３４；
【０１１４】
その他
アリトレチノイン、ベキサロテン、ボルテゾミブ、エベロリムス、イバンドロン酸、イミキモド、レナリドミド、レンチナン、メチロシン、ミファムルチド、パミドロン酸、ペグアスパルガーゼ、ペントスタチン、シプロイセル３、シゾフィラン、タミバロテン、テムシロリムス、サリドマイド、トレチノイン、ビスモデギブ、ゾレドロン酸、ボリノスタット；
セレコキシブ、シレンジチド(cilengitide)、エンチノスタット(entinostat)、エタニダゾール、ガネテスピブ(ganetespib)、イドロノキシル(idronoxil)、イニパリブ(iniparib)、イキサゾミブ(ixazomib)、ロニダミン、ニモラゾール、パノビノスタット、ペレチノイン、プリチデプシン(plitidepsin)、ポマリドミド、プロコダゾール(procodazol)、リダフォロリムス、タスキニモド(tasquinimod)、テロトリスタット(telotristat)、チマルファシン(thymalfasin)、チラパザミン、トレドスタット(tosedostat)、トラベデルセン、ウベニメクス、バルスポダル(valspodar)、ゲンジシン(gendicine)４、ピシバニール４、レオリシン(reolysin)４、レタスピマイシン塩酸塩１、３、トレバナニブ(trebananib)２，３、ビルリジン(virulizin)４、カーフィルゾミブ１，３、エンドスタチン４、イムコテル(immucothel)４、ベリノスタット(belinostat)３、ＭＧＮ−１７０３４；
１Prop. INN（提唱された国際一般的名称（Proposed International Nonproprietary Name））
２Rec. INN（推奨された国際一般的名称（Recommended International Nonproprietary names））
３USAN（米国一般名（United States Adopted Name））
４INNなし。
【０１１５】
以下の略語は、それぞれ下記の定義を参照する：
ａｑ（水性）、ｈ（時間）、ｇ（グラム）、Ｌ（リットル）、ｍｇ（ミリグラム）、ＭＨｚ（メガヘルツ）、ｍｉｎ．（分）、ｍｍ（ミリメートル）、ｍｍｏｌ（ミリモル）、ｍＭ（ミリモーラー）、ｍ．ｐ．（融点）、ｅｑ（定量的）、ｍｌ（ミリリットル）、μｌ（マイクロリットル）、ＡＣＮ（アセトニトリル）、ＡｃＯＨ（酢酸）、ＣＤＣｌ３（重水素化クロロホルム）、ＣＤ３ＯＤ（重水素化メタノール）、ＣＨ３ＣＮ（アセトニトリル）、ｃ−ｈｅｘ（シクロヘキサン）、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＤＣＭ（ジクロロメタン）、ＤＩＣ（ジイソプロピルカルボジイミド）、ＤＩＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシ）、ＤＭＳＯ−ｄ６（重水素化ジメチルスルホキシド）、ＥＤＣ（１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド）、ＥＳＩ（エレクトロスプレイイオン化）、ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）、ＥｔＯＨ（エタノール）、ＨＡＴＵ（ジメチルアミノ（［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イルオキシ）−メチレン］−ジメチル−アンモニウムヘキサフルオロホスファート）、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィ）、ｉ−ＰｒＯＨ（２−プロパノール）、Ｋ２ＣＯ３（炭酸カリウム）、ＬＣ（液体クロマトグラフィ）、ＭｅＯＨ（メタノール）、ＭｇＳＯ４（硫酸マグネシウム）、ＭＳ（質量分析）、ＭＴＢＥ（メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル）、ＮａＨＣＯ３（重炭酸ナトリウム）、ＮａＢＨ４（水素化ホウ素ナトリウム）、ＮＭＭ（Ｎ−メチルモルホリン）、ＮＭＲ（核磁気共鳴）、ＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート）、ＲＴ（室温）、Ｒｔ（保持時間）、ＳＰＥ（固相抽出）、ＴＢＴＵ（２−（１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート）、ＴＥＡ（トリエチルアミン）、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィ）、ＵＶ（紫外線）。
【０１１６】
in vitroアッセイの説明
略語：
ＧＳＴ  ＝  グルタチオン−Ｓ−転移酵素
ＦＲＥＴ  ＝  蛍光共鳴エネルギー移動
ＨＴＲＦ（登録商標）  ＝  （均一時間分解蛍光）
ＨＥＰＥＳ  ＝  ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸緩衝液
ＤＴＴ  ＝  ジチオトレイトール
ＢＳＡ  ＝  ウシ血清アルブミン
ＣＨＡＰＳ  ＝  デタージェント；
ＣＨＡＰＳ  ＝  ３−［（３−クロロアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート
【０１１７】
Streptavidin-XLent（登録商標）は、いくつかのアッセイ、特に高感度を要求するもののために増強された性能を伴ってコンジュゲート(conjugate)を産生するために、結合条件が最適化された、高級グレードのStreptavidin-XL665コンジュゲートである。
タンキラーゼ１および２の生化学的活性試験：自動パーシレーション・アッセイ(Autoparsylation assay)
【０１１８】
自動パーシレーション・アッセイは、２段階で進行する：ＧＳＴタグ付けされた各々タンキラーゼ−１、タンキラーゼ−２が、補基質としてのビオチン化ＮＡＤからそれ自身へビオチン化ＡＤＰリボースを転送させる酵素反応、および当該酵素のＧＳＴタグに取付けられたクリプテート標識された抗ＧＳＴおよびビオチンパーシレーション残渣に取付らけれた、Xlent（登録商標）標識されたストレプトアビジンの間の時間分解ＦＲＥＴが分析される、検出反応である。自動パーシレーション活性は、ＨＴＲＦ信号における増加を介して直接検出された。
【０１１９】
自動パーシレーション・アッセイは、グライナー低容積ｎｂ３８４−ウェルマイクロタイタ・プレートにおける３８４−ウェルＨＴＲＦ（登録商標）（Cisbio社、コドレ、フランス）アッセイ形式として実行され、高処理能力(throughput)のスクリーン用に使用される。補基質としての各々250 nM GSTタグ付けされたタンキラーゼ−１ (1023-1327 aa), 約250 nM GSTタグ付けされたタンキラー−２(873-1166 aa) および5 μM バイオNAD (Biolog, Life science Inst社, ブレーメン、ドイツ) が、試験化合物（１０希釈濃度）の存在または不存在下、３０℃で、９０分間、総体積５μｌ (50 mM HEPES, 4 mM 塩化マグネシウム、0.05 % Pluronic F-68, 1.4 mM DTT, 0.5 % DMSO, pH 7.7) 中に培養される。反応は、１μｌの５０ｍＭ  ＥＤＴＡ溶液の添加によって停止される。５０ｍＭＨＥＰＥＳ、８００ｍＭＫＦ、０．１％ＢＳＡ、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１％ＣＨＡＰＳ、ｐＨ７．０中、検出溶液（１．６μＭ ＳＡ−Xlent（登録商標） (Cisbio社, コドレ、フランス）２μ、７．４ｎＭの 抗ＧＳＴ−Ｋ（登録商標） (Ｅｕ標識抗ＧＳＴ, Cisbio,コドレ、フランス）が添加される。
【０１２０】
室温で１時間培養した後で、ＨＴＲＦがエンビジョン・マルチモード・リーダー（パーキンエルマーＬＡＳドイツＧｍｂＨ社）で励起波長３４０ｎｍ（レーザーモード）および放射波長６１５ｎｍおよび６６５ｎｍにおいて測定される。放射信号の比率が決定される。用いられる全値は阻害剤のない反応である。用いられる薬理学的０値は、５μＭの最終濃度において、ＸＡＶ−９３９（Ｔｏｃｒｉｓ）である。阻害値（ＩＣ５０）は、GeneData社のプログラムSymyx Assay Explorer（登録商標）またはCondosseo（登録商標）の何れかを用いて測定される。
【０１２１】
タンキラーゼの細胞阻害の測定
タンキラーゼはＡｘｉｎ２の細胞レベルをモジュレートすると記載されている（Huang et al., 2009；Nature）ので、Ａｘｉｎ２レベルの増加は、Luminexベース・アッセイにおけるタンキラーゼの細胞阻害の測定ための読出しとして用いられる。
【０１２２】
大腸がん細胞株ＤＬＤ１の細胞は、１穴当たり１．５×１０４細胞数で９６穴プレートに固定される。翌日、０．３％の最終ＤＭＳＯ濃度で複製するように、細胞は、７つのステップで試験化合物の連続希釈で処理される。２４時間後、細胞は溶解緩衝液（２０ｍＭのトリス／ＨＣｌ  ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％ＮＰ４０、１０％グリセロール）中で溶解され、溶解物を９６穴フィルタープレート（０．６５μｍ）を通して遠心分離によってクリアされる。 Ａｘｉｎ２タンパク質は、蛍光カルボキシビーズに結合されているモノクローナル抗Ａｘｉｎ２抗体（Ｒ＆Ｄシステムズ＃ＭＡＢ６０７８）と共に培養することにより細胞溶解物から単離される。
【０１２３】
その後、結合されたＡｘｉｎ２は、具体的には、ポリクローナル抗Ａｘｉｎ２抗体（細胞シグナリング＃２１５１）、および適切なＰＥ蛍光二次抗体を用いて検出される。単離されたＡｘｉｎ２タンパク質の量は、１穴当たり１００のイベントをカウントすることにより、製造業者の指示に従ってＬｕｍｉｎｅｘ２００機械（ルミネックス社）で測定される。試験化合物によるタンキラーゼの阻害は、直接的に検出可能な蛍光の増加と相関する、Ａｘｉｎ２のより高いレベルになる。コントロール細胞は溶媒のみ（ニュートラル制御）で、およびＡｘｉｎ２の最大増加のためのコントロールとして参照する、タンキラーゼの参照阻害剤ＩＷＲ−２  Ａｘｉｎ２（３Ｅ−０６Ｍ）で処理される。分析のために、得られたデータは、未処理の溶媒コントロールに対して正規化され、Assay Explorerソフトウェア（Accelrys社）を用いてＥＣ５０値の測定のために適合される。
【０１２４】
ＰＡＲＰ１アッセイの記載
ＰＡＲＰ−１の生化学的活性：自動パーシレーション・アッセイ
自動パーシレーション・アッセイは、２段階で進行する：Ｈｉｓタグ付けされたＰａｒｐ−１が、補基質としてのビオチン化ＮＡＤ／ＮＡＤからそれ自身へビオチン化ＡＤＰ−リボース／ＡＤＰ−リボースを転送する酵素反応、および酵素のＨｉｓタグに取り付けられたクリプテート標識された抗Ｈｉｓ抗体およびビオチン・パーシレーション残渣に取り付けられたXlent（登録商標）標識ストレプトアビジン間の時間分解ＦＲＥＴが分析される検出反応である。自動パーシレーション活性は、ＨＴＲＦ信号の増加を介して直接的に検出可能である。
【０１２５】
自動パーシレーション・アッセイは、グライナー低容量ｎｂ３８４穴マイクロタイタプレートにおいて３８４穴ＨＴＲＦ（登録商標）（Ｃｉｓｂｉｏ社、コドレ、フランス）アッセイ形式として実施される。 ３５ｎＭのＨｉｓタグ付けＰａｒｐ−１（ヒト、組換え、エンゾライフサイエンス社、レラッハ、ドイツ）および１２５ｎＭのバイオＮＡＤ（Ｂｉｏｌｏｇ社、ライフサイエンス研、ブレーメン、ドイツ）の混合物、および補基質としての８００ｎＭのＮＡＤが、６μｌの総容量（１００ｍＭトリス／塩酸、４ｍＭの塩化マグネシウム、０．０１％ＩＧＥＰＡＬ（登録商標）ＣＡ６３０、１ｍＭのＤＴＴ、０．５％ＤＭＳＯ、ｐＨ８、１３ｎｇ／μｌの活性化されたＤＮＡ（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社、サンディエゴ、米国））で、２３℃において１５０分間、試験化合物（１０希釈濃度）の存在下または不存在下で培養される。停止／検出溶液（７０ｎＭ  SA-Xlent（登録商標）（Cisbio社、コドレ、フランス）、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ中２．５ｎＭの抗His-K（登録商標）（Ｅｕ標識抗Ｈｉｓ、Cisbio社、コドレ、フランス）、４００ｍＭのＫＦ、０．１％ＢＳＡ、２０ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．０）の４μｌを添加することによって反応は停止される。室温で１時間培養後、ＨＴＲＦが、励起波長３４０ｎｍ（レーザーモード）、および放射波長６１５ｎｍおよび６６５ｎｍにおいて、Ｅｎｖｉｓｉｏｎのマルチモードリーダー（パーキンエルマーＬＡＳドイツ社）で測定される。放射信号の比が測定される。使用される完全な値は、阻害剤を含まない反応である。使用されている薬理学的ゼロ値は、１μＭの最終濃度におけるオラパリブ（Olaparib）（LClabs社、ウォバーン、米国）である。阻害値（ＩＣ５０）はGeneDataのSymyx Assay Explorer（登録商標）またはCondosseo（登録商標）のいずれかのプログラムを使用して測定される。
【０１２６】
ＴＮＫＳ１および ＴＮＫＳ２  ＥＬＩＳＡアッセイの記載
ＴＮＫＳ１および２：活性ＥＬＩＳＡの生化学的活性試験（自動パーシレーション・アッセイ）
ＴＮＫＳ１および２の自動パーシレーション活性の分析のために、活性ＥＬＩＳＡが行われる：最初のステップにおいて、ＧＳＴタグ付けされたＴＮＫＳは、グルタチオンコートプレート上に捕捉される。次いで、ビオチン化ＮＡＤで活性アッセイが、化合物の非存在／存在下で行われる。酵素反応の間に、ＧＳＴタグ付けＴＮＫＳが、補基質としてビオチン化ＮＡＤからそれ自身にビオチン化ＡＤＰリボースを転送する。検出のためにストレプトアビジンＨＲＰコンジュゲートは、ビオチン化ＴＮＫＳに結合し、それによってプレートに捕捉されるように添加される。ビオチン化および自動パーシレーション化されたＴＮＫＳの各々の量は、ＨＲＰ用の発光基質で検出される。発光信号のレベルは、直接自動パーシレーション化ＴＮＫＳの量と、したがって、ＴＮＫＳの活性と相関がある。
【０１２７】
活性ＥＬＩＳＡは、３８４穴グルタチオン被覆したマイクロタイタプレート（高速捕捉グルタチオン被覆プレート、Biocat社、ハイデルベルク、ドイツ）において行われる。プレートをＰＢＳで予め平衡化される。その後、アッセイ緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、４ｍＭのＭｇ塩化物、０．０５％プルロニックＦ−６８、２ｍＭのＤＴＴ、ｐＨ７．７）中プレートを５０μｌの２０ｎｇ／穴ＧＳＴタグ付けＴｎｋｓ−１（１０２３〜１３２７ａａ、自社で調製）、ＧＳＴタグ付けＴｎｋｓ−２（８７３〜１１６６ａａ、自社で調製）でそれぞれ、４℃において一晩培養する。プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ−２０で３回洗浄する。穴を、５０μｌのブロッキング緩衝液（ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０、０．５％ＢＳＡ）で、室温において２０分間培養することによりブロックされる。その後、プレートをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ−２０で３回洗浄する。酵素反応は、５０μｌの反応液 （５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、４ｍＭの塩化マグネシウム、０．０５％プルロニックＦ−６８、１．４ｍＭのＤＴＴ、０．５％ＤＭＳＯ、ｐＨ７．７）中において、１０μＭのバイオＮＡＤ（Biolog社、ライフサイエンス研、ブレーメン、ドイツ）で、３０℃において1時間、試験化合物（１０倍希釈濃度）の非存在下または存在下における補基質として行われる。反応は、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ−２０で３回洗浄することによって停止される。検出のために５０μｌの２０ｎｇ／μｌのストレプトアビジン、ＰＢＳ／０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０／０．０１％ＢＳＡ中ＨＲＰコンジュゲート（MoBiTec社、ゲッティンゲン、ドイツ）を添加し、プレートを室温で３０分間培養する。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ−２０で３回洗浄した後、５０μｌの超信号ＥＬＩＳＡフェムト最大感度基質溶液（サーモフィッシャー・サイエンティフィック（ピアース）、ボン、ドイツ）が添加される。室温において１分間の培養に続いて、発光信号が、Ｅｎｖｉｓｉｏｎのマルチモードリーダー（パーキンエルマーＬＡＳドイツ社）を用いて７００ｎｍにおいて測定される。使用される全数値は、阻害剤を含まない反応である。使用されている薬理学的ゼロ値は、５μＭの最終濃度でＸＡＶ−９３９（Tocris）である。阻害値（ＩＣ５０）はGeneDataSymyx Assay Explorer（登録商標）またはCondosseo（登録商標）のいずれかのプログラムを使用して測定される。
【０１２８】
上記および以下の、全ての温度は℃で示されている。以下の例において、「慣用のワークアップ」は；必要であれば水を加え、ｐＨは必要に応じて、２〜１０の間の値に調整され、最終生成物の構成に応じて、混合物は酢酸エチルまたはジクロロメタンで抽出され、相は分離され、有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発させ、残渣はシリカゲル上クロマトグラフィによって、および／または結晶化により精製される。
【０１２９】
１Ｈ  ＮＭＲを、重水素化溶媒の残留シグナルを内部基準として使用して、Bruker 400または500MHz分光計上に記録した。化学シフト（δ）を、残留溶媒シグナル（ＤＭＳＯ−ｄ６における１Ｈ  ＮＭＲについてδ＝２．４９ｐｐｍ）に相対させて、ｐｐｍで報告する。１Ｈ  ＮＭＲデータを、以下のように報告する：化学シフト（水素の多重度、結合定数および数）。多重度を、以下のように略す：ｓ（一重線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｑ（四重線）、ｍ（多重線）、ｂｒ（ブロード）。
【０１３０】
HPLC/MS条件 (A)
カラム：Chromolith SpeedROD RP-18e, 50 x 4.6mm2
勾配：3.4分でA:B=96:4 から 0:100
流速：2.40ml／分
溶離液Ａ：水＋０．０５％ギ酸
溶離液Ｂ：アセトニトリル＋０．０４％ギ酸
波長：２２０ｎｍ
質量スペクトル：ポジティブモード
【０１３１】
例１
６−ｐ−トリル−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン（「Ａ１」）の合成
【化６】
0006446461.tif 000007
１．１  （Ｚ）−３−ジメチルアミノ−２−イソシアノ−アクリル酸エチルエステル
【化７】
0006446461.tif 000008
イソシアノ酢酸エチル（３．２２ｍｌ、２９．４４ｍｍｏｌ）にｔｅｒｔ−ブトキシ−ビス（ジメチルアミノ）メタン（１２．１６ｍｌ、５８．８８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温でアルゴン下１４時間撹拌した。反応混合物は、蒸発乾固し、残渣（５．６ｇ（９８％）、茶色油）をさらなる精製なしで次のステップにて使用された；HPLC-MS： Rt ＝ 1.64；[M+H]169
【０１３２】
１．２  １−ベンジル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルエステル
【化８】
0006446461.tif 000009
（Ｚ）−３−ジメチルアミノ−２−イソシアノ−アクリル酸エチルエステル（５．６ｇ、２８．９７ｍｍｏｌ）にベンジルアミン（３．４８ｍｌ、３１．８６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物は７０℃で１４時間撹拌した。反応混合物は濃縮し、残渣はフラッシュクロマトグラフィーによって精製した（溶離液：ＤＣＭ−メタノール）。所望の留分は合され、蒸発乾固して茶色油を得た（３．９３ｇ（５７％））；HPLC-MS：Rt＝1.72；[M+H]231
【０１３３】
１．３  １−ベンジル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸アミド
【化９】
0006446461.tif 000010
１−ベンジル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルエステル（３．９３ｇ、１７．０７ｍｍｏｌ）および塩化アンモニウム（０．２７ｇ、５．１２ｍｍｏｌ）が水酸化アンモニウム溶液（３２％、４５ｍＬ）で処理され、オートクレーブ中で１０５℃において１４時間撹拌した。反応混合物は室温に冷却し、沈殿物を濾過し、水洗して真空中５０℃において乾燥した；収量：２．１３ｇ（６１％）； HPLC-MS： Rt＝1.30； [M+H] 202
【０１３４】
１．４  ２−ベンジル−８−オキソ−６−ｐ−トリル−７，８−ジヒドロ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−２−イウムブロミド
【化１０】
0006446461.tif 000011
１−ベンジル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸アミド（５００ｍｇ、２．４９ｍｍｏｌ）および２−ブロモ−１−ｐ−トリル−エタノン（６３５．３ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ／ＣＨ３ＣＮ-３／７（１０ｍＬ）中で溶解し、９０℃において１４時間撹拌した。反応混合物は室温に冷却し、沈殿物を濾別し、ジエチルエーテルで洗浄し乾燥した；収量４５２ｍｇ（４６％）； HPLC-MS：Rt ＝1.43；[M]316。
【０１３５】
１．５  ６−ｐ−トリル−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン（「Ａ１」）
【化１１】
0006446461.tif 000012
２−ベンジル−８−オキソ−６−ｐ−トリル−７，８−ジヒドロ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−２−イウムブロミド（４５１．０ｍｇ、１．１３８ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（３．８７ｇ，５６．９０ｍｍｏｌ）の混合物を窒素雰囲気下１７５℃に加熱し、５時間撹拌した。反応混合物を冷却し、氷に注いだ。沈殿物を吸引濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥した；収量：１４１ｍｇ（５５％）； HPLC-MS：Rt =1.50；[M+H] 226；
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ = 10.93 (s, 1H), 8.25 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.59 - 7.54 (m, 2H), 7.31 - 7.26 (m, 2H), 2.36 (s, 3H)。
【０１３６】
以下の例は、同様に調製される：
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン（「Ａ２」）
【化１２】
0006446461.tif 000013
収量：１３．５ｍｇ（１１％）；HPLC-MS： Rt ＝1.97；[M+H] 268；
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.92 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 2H), 7.53 - 7.47 (m, 2H), 1.31 (s, 9H)。
【０１３７】
６−（４−トリフロロメチル−フェニル）−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン（「Ａ３」）
【化１３】
0006446461.tif 000014
収量：３９．５ｍｇ（２０％）；HPLC-MS：Rt = 1.75；[M+H] 280；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 11.15 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.96 - 7.80 (m, 6H)。
【０１３８】
例４
６−［４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン（「Ａ４」）の合成
４．１  ６−（４−ブロモ−フェニル）−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン
【化１４】
0006446461.tif 000015
収量：１．６ｇ（９８％）； HPLC-MS：Rt =1.65；[M+H] 291。
【０１３９】
４．２  ６−［４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−フェニル］−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン
【化１５】
0006446461.tif 000016
６−（４−ブロモ−フェニル）−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン（例４、１５０．０ｍｇ、０．５１７ｍｍｏｌ）、１−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ピラゾール（１１８．３ｍｇ、０．５６９ｍｍｏｌ）および炭酸水素ナトリウム（５２．１ｍｇ、０．６２０ｍｍｏｌ）がＤＭＦ／水−２：１（１．５ｍｌ）中で懸濁し、窒素でフラッシュし、４０℃に加熱した。ビス（トリフェニルホスフィン）−塩化パラジウム（ＩＩ）（１０．５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物は８０℃で１４時間加熱した。温度を９０℃まで昇温し、反応混合物を追加して５時間撹拌した。反応混合物を水で希釈した。もたらされた沈殿物を吸引濾過し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製した；収量：１７ｍｇ（１１％）；HPLC-MS：Rt = 1.40；[M+H] 292;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.82 (brs, 1H), 8.21(s, 2H), 7.93 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.73 - 7.61 (m, 5H), 3.87 (s, 3H)。
【０１４０】
例５
６−（４−ヒドロキシメチル−フェニル）−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン（「Ａ５」）の合成
【化１６】
0006446461.tif 000017
５．１  ４−（８−オキソ−７，８−ジヒドロ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸メチルエステル
【化１７】
0006446461.tif 000018
オートクレーブ中、６−（４−ブロモ−フェニル）−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン（５００ｍｇ、１．７２３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２６０ｍｇ、２．５６９ｍｍｏｌ）のメタノール／トルエン−１／１溶液（１６ｍｌ）を窒素でフラッシュした。（１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン）二塩化パラジウム（ＩＩ）、二塩化メタン（４３ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）および、１−ビス−（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン（３９ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）を添加した。その後、オートクレーブを一酸化炭素で充填し、１００℃に加熱した。オートクレーブは、この温度で６時間、２〜４バールの一酸化炭素圧に保たれる。オートクレーブを大気圧に戻す。沈殿物固体が吸引濾過され、メタノールで洗浄し、真空下で乾燥した；収量：３１４ｍｇ（６８％）、HPLC-MS：Rt =1.47；[M+H]270。
【０１４１】
５．２  ６−（４−ヒドロキシメチル−フェニル）−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン
【化１８】
0006446461.tif 000019
４−（８−オキソ−７，８−ジヒドロ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）安息香酸メチルエステル（１００ｍｇ、０．３７１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍｌ）中に懸濁し、水酸化リチウムアルミニウム（ＴＨＦ中２．０ｍｏｌ、０．３７１ｍｌ、０．７４３ｍｍｏｌ）にて処理し、室温で１４時間撹拌した。反応混合物を少量のメタノールで急冷し、１Ｎ塩酸１ｍｌで酸化し、濾過した。濾過物をジクロロメタンで３回洗浄し、合わせた有機層を水および食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、蒸発乾固した。水層を蒸発乾固した。合わせた残渣をクロマトグラフィで精製した；収量：５５ｍｇ（６１％）； HPLC-MS：Rt =1.05；[M+H] 242；
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.96 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.79 - 7.74 (m, 2H), 7.66 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 2H), 5.25 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.55 (d, J = 5.7 Hz, 2H)。
【０１４２】
例６
６−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−フェニル］−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン（「Ａ６」）の合成
【化１９】
0006446461.tif 000020
４−（８−オキソ−７，８−ジヒドロ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−安息香酸メチルエステル（７０ｍｇ、０．２５２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４ｍｌ）中で懸濁し、塩化セリウム（６８．４ｍｇ，０．２７７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１時間撹拌した。塩化メチルマグネシウム（ＴＨＦ中３Ｍ、０．３９ｍｌ；１，０５９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を５％クエン酸で冷却した。生成した沈殿を濾過し、濾液を濃縮した。生成した沈殿を吸引濾過し、乾燥した；収量：５０ｍｇ（７４％）； HPLC-MS: Rt = 1.30; [M+H] 270; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.92 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.64 - 7.51 (m, 4H), 5.14 (s, 1H), 1.44 (s, 6H)。
【化２０】
0006446461.tif 000021
【０１４３】
例７
６−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−３−メチル−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン（「Ａ７」）の合成
７．１  ２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルエステル
【化２１】
0006446461.tif 000022
２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸（１．４３ｇ；１１．２９９ｍｍｏｌ）をエタノール（９０．ｏｍｌ）に溶解した。ジオキサン中ＨＣｌ（４Ｍ、７．５０ｍＬ）を添加し、混合物を９０℃において１８時間加熱した。 溶液を濃縮した。残渣を酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液間で分割した。水層は酢酸エチルで２回抽出した。合された有機層は食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濾過し、蒸発乾固した；収量：１．４３ｇ（８２％）。
【０１４４】
７．２  １−ベンジル−２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルエステル
【化２２】
0006446461.tif 000023
アセトニトリル（８０ｍｌ）の２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１．４３ｇ；９．２７６ｍｍｏｌ）溶液に炭酸セシウム（６．０４ｇ；１８．５５１ｍｍｏｌ）を添加した。臭化ベンジル（１．５９ｇ；９．２７６ｍｍｏｌ）を滴下添加し、反応混合物を室温で１４時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、水で希釈し、酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し蒸発乾固した。油状の残渣を精製しないで次の工程に用いた；収量：９４０ｍｇ（２９％）。
【０１４５】
７．３  １−ベンジル−２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸アミド
【化２３】
0006446461.tif 000024
１−ベンジル−２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルエステル（３００．０ｍｇ、１．２２８ｍｍｏｌ）および塩化アンモニウム（２０．０ｍｇ、０．３６８ｍｍｏｌ）をオートクレーブ中にて水酸化アンモニウム溶液（３２％、２０ｍＬ）中で１０５℃、４時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、蒸発乾固した。残渣は、次の工程にさらに精製することなく用いられた；収量：１３２ｍｇ（５０％）。
【０１４６】
７．４  ６−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−３−メチル−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン
【化２４】
0006446461.tif 000025
１−ベンジル−２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸アミド（６９．０ｍｇ；０．３２１ｍｍｏｌ）および１−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−２−クロロ−エテノン（８１．０ｍｇ；０．３８５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）およびアセトニトリル（３ｍＬ）中に溶解し、 マイクロ波装置（ＣＥＭ）中にて１６０℃で６時間加熱した。反応混合物を濃縮し、水で希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層は水および食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固した。油状残渣はクロマトグラフィによって精製した；収量：１１．０ｍｇ（１２％）； HPLC-MS: Rt = 1.85; [M+H] 282;
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) = 10.82 (s, 1H), 7.69 - 7.63 (m, 3H), 7.53 - 7.46 (m, 3H), 2.57 (s, 3H), 1.32 (s, 9H).
【０１４７】
例８
６−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−フェニル］−３−メチル−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−オン（「Ａ８」）の合成
８．１  ６−（４−ブロモ−フェニル）−３−メチル−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−８−オン
【化２５】
0006446461.tif 000026
例７に記載のように調製（工程７．４）；収量：８３．０ｍｇ（３３％）；
HPLC-MS: Rt = 1.57; [M+H] 304-307。
【０１４８】
８．２  ４−（３−メチル−８−オキソ−７，８−ジヒドロ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−安息香酸メチルエステル
【化２６】
0006446461.tif 000027
例５に記載のように調製（工程５．１）；収量：３７．０ｍｇ（４９％）；
HPLC-MS: Rt = 1.40; [M+H] 284.
【０１４９】
８．３  ６−［４−（１−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−フェニル］−３−メチル−７Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−オン（「Ａ８」）
【化２７】
0006446461.tif 000028
例６に記載のように調製；収量：１５．０ｍｇ（４０％）； HPLC-MS: Rt = 1.24; [M+H] 284; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.82 (s, 1H), 7.72 - 7.62 (m, 3H), 7.60 - 7.46 (m, 3H), 5.07 (s, 1H), 2.57 (s, 3H), 1.45 (s, 6H)。
【０１５０】
薬理学的データ
【表１】
0006446461.tif 000029
【０１５１】
【表２】
0006446461.tif 000030
【０１５２】
以下の例は、薬品に関する：
例Ａ：注射バイアル
式Ｉの活性剤１００ｇおよびリン酸水素二ナトリウム５ｇの再蒸留水３Ｌ溶液を２Ｎ塩酸を用いてｐＨ６．５に調整し、滅菌濾過し、注射バイアルへ移し、滅菌状態で凍結乾燥し、滅菌状態で封印した。各注射バイアルは活性成分５ｍｇを含む。
【０１５３】
例Ｂ：座薬
大豆レシチン１００ｇ、式Ｉの活性成分２０ｇならびに１４００ｇカカオバターの混合物を溶融し、金型に注ぎ、放冷した。各座薬は２０ｍｇの活性成分を含む。
【０１５４】
例Ｃ：溶液
式Ｉの活性成分１ｇ、ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ９．３８ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ２８．４８ｇならびに再蒸留水９４０ｍＬ中の塩化ベンズアルコニウム０．１ｇから溶液が調製された。本溶液は、点眼薬の形態で使用し得る。
【０１５５】
例Ｄ：  軟膏
式Ｉの活性成分５００ｍｇを９９．５ｇのワセリンと無菌状態で混合した。
【０１５６】
例Ｅ：  錠剤
式Ｉの活性成分１ｋｇ、ラクトース４ｋｇ、１．２ｋｇのじゃがいも澱粉、０．２ｋｇのタルクならびに０．１ｋｇのステアリン酸マグネシウムの混合物を従来の様式によって加圧し、各錠剤が１０ｍｇの活性成分を含むように錠剤を得る
【０１５７】
例Ｆ：  糖衣錠
錠剤を例Ｅと同様に加圧し、続いてサックロース、じゃがいも澱粉、タルク、トラガントおよび色素で従来の様式によってコーティングする。
【０１５８】
例Ｇ：カプセル
式Ｉの活性成分２ｋｇを各カプセルが２０ｍｇの活性成分を含むように従来の様式によって硬質ゼラチンカプセルに導入する。
【０１５９】
例Ｈ：アンプル
６０Ｌの再蒸留水中式Ｉの活性成分１ｋｇの溶液を滅菌濾過し、アンプルへ移し、滅菌状態で凍結乾燥し、滅菌状態で封かんする。各アンプルは１０ｍｇの活性成分を含む。