(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣ５ａに結合することができるＬ−核酸分子であって、前記Ｌ−核酸分子が、配列番号４、配列番号８〜４９、配列番号５５〜６０、配列番号９０〜９２、配列番号１〜３、配列番号５および配列番号６からなる群から選択されるヌクレオチド配列からなるＬ−核酸分子。
【請求項２】
ヒトＣ５ａおよびマウスＣ５ａに結合することができるＬ−核酸分子であって、前記Ｌ−核酸分子が、配列番号４、配列番号８〜４９、配列番号５５〜６０、配列番号９０〜９２、配列番号１〜３、配列番号５および配列番号６からなる群から選択されるヌクレオチド配列からなるＬ−核酸分子に対する少なくとも９０％の同一性を有するＬ−核酸分子。
【請求項３】
前記Ｌ−核酸分子がヒトＣ５ａおよびマウスＣ５ａに結合することができる、請求項１に記載のＬ−核酸分子。
【請求項４】
前記核酸が、ヒトおよび／またはマウスのＣ５ａにより媒介される活性のアンタゴニストである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子においてさらに修飾基を含むＬ−核酸分子であって、前記修飾基は、生分解性修飾および非生分解性修飾を含む群から選択される、Ｌ−核酸分子。
【請求項６】
前記修飾基は、ポリエチレングリコール、直鎖ポリエチレングリコール、分岐ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、ペプチド、タンパク質、多糖、ステロール、ポリオキシプロピレン、ポリオキシアミデートおよびポリ（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−グルタミンを含む群から選択される、請求項５に記載のＬ−核酸分子。
【請求項７】
疾患を治療および／または予防するための方法において使用するための、請求項１〜６のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子。
【請求項８】
前記疾患は、補体活性化およびＣ５ａ媒介性発症機構に関連があり、かつ／または、自己免疫性疾患、炎症性疾患、全身性炎症反応症候群、眼疾患、虚血／再灌流傷害、臓器移植後臓器機能障害、移植片拒絶、心血管疾患、呼吸器疾患、急性反応、感染性疾患、神経性疾患、神経変性疾患、線維性疾患、血液疾患、代謝性疾患、腫瘍、および生体材料による補体活性化に関連する臨床的合併症を含む群から選択される、請求項７に記載の使用のためのＬ−核酸分子。
【請求項９】
前記全身性炎症反応症候群は、敗血症および外傷または重度の熱傷の二次的損傷を含む群から選択される、請求項８に記載の使用のためのＬ−核酸分子。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項で定義されたＬ−核酸分子および場合によりさらなる構成要素を含む医薬組成物であって、さらなる構成要素は、薬学的に許容できる賦形剤、薬学的に許容できる担体および薬学的に活性な薬剤を含む群から選択される医薬組成物。
【請求項１１】
医薬品を製造するための、請求項１〜９のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子の使用。
【請求項１２】
診断手段を製造するための、請求項１〜９のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子の使用。
【請求項１３】
前記医薬品が、自己免疫性疾患、炎症性疾患、全身性炎症反応症候群、眼疾患、虚血／再灌流傷害、臓器移植後臓器機能障害、移植片拒絶、心血管疾患、呼吸器疾患、急性反応、感染性疾患、神経性疾患、神経変性疾患、線維性疾患、血液疾患、代謝性疾患、腫瘍、および生体材料による補体活性化に関連する臨床的合併症の治療および／または予防のためのものである、請求項１１に記載の使用。
【請求項１４】
前記全身性炎症反応症候群は、敗血症および外傷または重度の熱傷の二次的損傷を含む群から選択される、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子ならびにＣ５ａを含む複合体。
【請求項１６】
Ｃ５ａを検出するための、請求項１〜９のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子のｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける使用。
【請求項１７】
Ｃ５ａにより媒介される活性のアンタゴニストをスクリーニングするための方法であって、
Ｃ５ａにより媒介される活性の候補アンタゴニストを提供するステップと、
請求項１〜９のいずれか１項で定義されたＬ−核酸分子を提供するステップと、
Ｃ５ａにより媒介される活性のアンタゴニストの存在下でシグナルを発生する試験系を提供するステップと
Ｃ５ａにより媒介される活性の候補アンタゴニストが、Ｃ５ａにより媒介される活性のアンタゴニストであるかどうかを決定するステップと
を含む方法。
【請求項１８】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のＬ−核酸分子と、少なくとも指示書または反応槽とを含む、Ｃ５ａの検出のためのキット。
【請求項１９】
試料中の、請求項１〜９のいずれか１項で定義された核酸を検出するための方法であって、
ａ）捕捉プローブおよび検出プローブを準備するステップであって、前記捕捉プローブは、請求項１〜９のいずれか１項で定義されたＬ−核酸分子の第１の部分に対して少なくとも部分的に相補性を示し、前記検出プローブは、請求項１〜９のいずれか１項で定義されたＬ−核酸分子の第２の部分に対して少なくとも部分的に相補性を示すか、あるいは、前記捕捉プローブは、請求項１〜９のいずれか１項で定義されたＬ−核酸分子の第２の部分に対して少なくとも部分的に相補性を示し、前記検出プローブは、請求項１〜９のいずれか１項で定義されたＬ−核酸分子の第１の部分に対して少なくとも部分的に相補性を示すステップと、
ｂ）前記捕捉プローブおよび前記検出プローブを別々にまたは組み合わせて、請求項１〜９のいずれか１項で定義された前記Ｌ−核酸分子を含有する試料または請求項１〜９のいずれか１項で定義された前記Ｌ−核酸分子を含有すると推定される試料に添加するステップと、
ｃ）前記捕捉プローブおよび前記検出プローブを、請求項１〜９のいずれか１項で定義された前記Ｌ−核酸分子またはその部分と同時にまたは任意の順番で順次に反応させるステップと、
ｄ）請求項１〜９のいずれか１項で定義された前記Ｌ−核酸分子ならびに前記捕捉プローブおよび前記検出プローブからなる、ステップｃ）で形成された複合体を検出するステップと
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｃ５ａおよび／Ｃ５に結合することができる核酸分子、医薬品、診断薬および検出薬をそれぞれ製造するためのその使用、前記核酸分子を含む組成物、前記核酸分子を含む複合体、前記核酸分子を使用して、Ｃ５ａおよび／Ｃ５により媒介される活性のアンタゴニストをスクリーニングするための方法、ならびに前記核酸分子を検出するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトアナフィラトキシンＣ５ａ（補体因子５ａ；ＳｗｉｓｓＰｒｏｔエントリー：Ｐ０１０３１）の一次構造が、１９７８年に決定された（ＦｅｒｎａｎｄｅｚおよびＨｕｇｌｉ、１９７８）。これは、８，２００Ｄａの分子量に相当する７４個のアミノ酸からなり、一方、炭水化物部分は、およそ３，０００Ｄａに相当する。Ｃ５ａの炭水化物部分は、６４位においてアスパラギンにつながる単一の複雑なオリゴ糖単位として存在する。３つのジスルフィド結合が、分子に安定で硬直な構造をもたらす。
【０００３】
異なる哺乳動物種からのＣ５ａの形態の三次元構造は一般に維持されているが、アミノ酸配列は、進化の間にそれほど十分には保存されてきたとはいえない。配列アライメントの結果から、ヒトＣ５ａおよびマウスＣ５ａとは、６４％の全体的な配列同一性が実証されている。ヒトＣ５ａは、Ｃ５ａとは、以下に示すパーセントで同一のアミノ酸を共有している。
・  Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ（アカゲザル）              ８５％
・  Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ（カニクイザル）  ８５％
・  Ｂｏｓ  ｔａｕｒｕｓ（ウシ）                            ６９％
・  Ｓｕｓ  ｓｃｒｏｆａ（ブタ）                            ６８％
・  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ（マウス）                      ６４％
・  Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ（ラット）            ６１％
【０００４】
配列相同性が限られている以外に、グリコシル化も異種である。ヒトＣ５ａはアスパラギン６４でグリコシル化されるが、マウス相同体は全くグリコシル化されない。より遠縁のヒトタンパク質であるＣ３ａおよびＣ４ａは、Ｃ５ａとわずか３５および４０％の同一性をそれぞれ共有するに過ぎない。
【０００５】
前世紀の始めに、補体系が、細胞および細菌の抗血清媒介性溶解を「補完する」熱感受性血清画分として発見された。補体系は、生来の非特異的（自然）免疫応答の液性構成成分であり、感染病原体に対する宿主防御、および炎症過程において不可欠な役割を果たす。補体は、３つの明確に異なる経路、すなわち、（ｉ）抗体自体が細胞表面もしくは細菌につながって生じる経路（古典経路と呼ばれる）、（ｉｉ）細菌もしくはウイルスの糖脂質による直接的な経路（代替経路と呼ばれる）、または（ｉｉｉ）細菌上の炭水化物による経路（レクチン経路と呼ばれる）を介して活性化され得る。全てのこれらの活性化経路は、補体構成成分Ｃ３およびＣ５の活性化点に収束し、ここから共通の終末経路が始まり、最後には膜侵襲複合体（略語：ＭＡＣ）の集合に至る。補体系は、タンパク質分解性酵素または結合性タンパク質のいずれかとして機能する２０個超の可溶性タンパク質からなり、脊椎動物血清中の全グロブリンの約１０％を構成する。さらに、補体系は、補体タンパク質のタンパク質分解性断片に対して特異性を示し、炎症細胞および適応免疫応答を調節する細胞によって発現される複数の明確に異なる細胞−表面受容体も含む。補体の活性化を阻害し、したがって、宿主細胞を偶発的な補体攻撃から保護するいくつかの調節タンパク質がある。補体系は、独立にかまたは適応免疫応答と一緒に活性化され得る。
【０００６】
補体の機能には、オプソニン化過程（すなわち、細菌を食作用に対してより感受性にする過程）、細菌および外来細胞の、それらの膜に細孔を挿入することによる溶解（膜侵襲複合体と呼ばれる）、走化性の点で活性を示す物質の生成、血管透過性の増加、平滑筋収縮の誘起、ならびに肥満細胞の脱顆粒化の促進が含まれる。凝固カスケードと同様に、補体活性化の過程も、酵素カスケードとしても知られている順次的な酵素によるステップとして編成される（ＳｉｍおよびＬａｉｃｈ、２０００）。これらの相互作用の詳細な順番を、以下に概説する。
【０００７】
古典経路。この抗体依存性の活性化経路は、特異的な抗体応答を補完する。古典経路は、代替経路と同様に精巧に制御されるが、自発的な開始能力、すなわち、抗体非依存性の認識機能、およびフィードバック増幅機構を欠く。古典経路の活性化物質には、抗原−抗体複合体、β−アミロイド、ＤＮＡ、ポリイノシン酸、ヘパリン／プロタミンのようなポリアニオン−ポリカチオン複合体、いくつかの外被を有するウイルス、尿酸ナトリウム結晶、細菌の細胞壁のリピドＡ、プリカト酸、アリ毒液の多糖、細胞内膜（ミトコンドリア等）、ならびに細胞および血漿に由来する酵素、すなわち、プラスミン、カリクレイン、活性化されたハーゲマン因子、エラスターゼまたはカテプシン等がある。抗体誘発性の古典経路はＣ１によって始まり、Ｃ１は、細胞表面の抗原に連結する抗体（ＩｇＭ＞ＩｇＧ３＞ＩｇＧ１＞＞ＩｇＧ２）のＦｃ断片にライゲーションする。Ｃ１は、２２個のポリペプチド鎖でできている認識複合体であり、３つのサブユニットすなわちＣ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓからなる。Ｃ１ｑが、実際の認識部分であり、チューリップの花束の様に見えるコラーゲン様ドメイン（ヒドロキシプロリン残基およびヒドロキシリジン残基を提示する）を含有する糖タンパク質である。Ｃ１ｑを介しての結合時には、Ｃ１ｒが活性化されてプロテアーゼになり、これがＣ１ｓを切断し、Ｃ１ｓは、Ｃ２およびＣ４の両方を（切断により）Ｃ２ａ／ｂおよびＣ４ａ／ｂに活性化する形態に変化する。Ｃ２ａとＣ４ｂとが組み合わさって、Ｃ４ｂ２ａすなわちＣ３コンバターゼ（Ｃ３活性化酵素）を生じる。Ｃ４ａは、弱いアナフィラトキシン活性しか示さないが、走化性ではない。Ｃ３が、全ての３つの活性化経路の中心となる。古典経路では、Ｃ４ｂ２ａコンバターゼが、Ｃ３をＣ３ａ／ｂに切断する。Ｃ３ａはアナフィラトキシンである。Ｃ３ｂは、Ｃ４ｂ２ａと組み合わさって、Ｃ４ｂ２ａ３ｂ複合体（Ｃ５コンバターゼ）を形成する。Ｃ３ｂはまた、細胞に直接結合して、それらの細胞を食作用に対して感受性にすること（オプソニン化）もできる。
【０００８】
代替経路。この経路は、活性化のために抗体を必要とせず、細菌感染およびウイルス感染に対する宿主防御において主として重要である。これは、この経路は、古典経路とは異なり、侵入微生物の表面構造すなわち細菌／ウイルスの糖脂質等、または内毒素によって直接活性化されるからである。その他の活性化物質には、イヌリン、ウサギ赤血球、脱シアル化ヒト赤血球、コブラ毒液因子またはホスホロチオエートオリゴヌクレオチドがある。６つのタンパク質、すなわち、Ｃ３、Ｂ因子、Ｄ因子、Ｈ因子、Ｉ因子およびプロパージンが一緒になって、この経路の開始、認識および活性化の機能を果たし、その結果、活性化物質が結合したＣ３／Ｃ５コンバターゼの形成に至る。カスケードがＣ３によって始まる。少量のＣ３ｂが、Ｃ３の自発的な切断（「Ｃ３−ｔｉｃｋｏｖｅｒ」）の結果として循環中に常に見い出されるが、それに続く分解によって、この濃度は一般に非常に低く保たれる。しかし、Ｃ３ｂが、細胞表面上の糖に結合すると、これは、代替経路の活性化のための核として働くことができる。次いで、Ｂ因子がＣ３ｂに結合する。Ｄ因子の存在下で、結合したＢ因子は、ＢａおよびＢｂに切断され、Ｂｂは、Ｃ３コンバターゼの活性部位を含有する。次に、プロパージンがＣ３ｂＢｂに結合して、細胞表面上のＣ３ｂＢｂコンバターゼを安定化させ、これは、さらなるＣ３分子の切断に至る。最後に、代替のＣ５コンバターゼＣ３ｂＢｂ３ｂが形成され、これが、Ｃ５をＣ５ａ／ｂに切断する。Ｃ５ｂの出現により、上記の膜侵襲複合体の集合が開始される。一般に、グラム陰性細胞のみが、抗体と補体とによって直接溶解され得、グラム陽性細胞は、ほとんどの場合抵抗性である。しかし、食作用が、Ｃ３ｂによるオプソニン化によって大幅に増強され（食細胞は、表面上にＣ３ｂ受容体を有する）、抗体は必ずしも必要であるとは限らない。さらに、補体は、ウイルス粒子を、直接的な溶解またはウイルスの宿主細胞への貫入の阻止のいずれかによって中和することもできる。
【０００９】
レクチン経路。最も最近になって発見されたレクチン経路またはマンナン結合レクチン（略語：ＭＢＬ）経路は、外来物質（すなわち、細菌表面）の生得的な認識に依存する。この経路は、古典経路に対して構造的および機能的な類似性を示す。レクチン経路の活性化は、急性期タンパク質ＭＢＬによって開始され、これは、細菌上のマンノース、ＩｇＡや、おそらく損傷を受けた内皮が暴露する構造も認識する。ＭＢＬは、Ｃ１ｑに対して相同性を示し、ＭＢＬ関連セリンプロテアーゼ（略語：ＭＡＳＰ）を引き起こし、これらのうち、３つの形態であるＭＡＳＰ１、ＭＡＳＰ２およびＭＡＳＰ３が記載されている。その後のレクチン経路の活性化は、古典経路の活性化と事実上同一であり、同じＣ３コンバターゼおよびＣ５コンバターゼを形成する。さらに、ＭＡＳＰは、いくつかの条件下ではＣ３を直接活性化することができるといういくつかの証拠もある。
【００１０】
終末経路。全ての３つの活性化経路は、Ｃ５コンバターゼの形成に収束し（古典経路およびレクチン経路ではＣ４ｂ２ａ３ｂ、代替経路ではＣ３ｂＢｂ３ｂ）、これは、Ｃ５をＣ５ａ／ｂに切断する。Ｃ５ａは、強力なアナフィラトキシン活性を示し、走化性である。他方のＣ５断片であるＣ５ｂは、その疎水性結合部位によって標的細胞表面上でアンカーとして機能し、そうした細胞に対して、溶解性の膜侵襲複合体（ＭＡＣ、または終末補体複合体、略語：ＴＣＣ）を形成する。ＭＡＣは、５つの前駆体タンパク質、すなわち、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８およびＣ９の集合体である。最後の事象が、Ｃ９オリゴマーの形成であり、これは、それ自体を膜貫通チャネルとして細胞膜中に挿入して、細胞の浸透圧溶解を起こす。ＭＡＣ集合体は、可溶性血漿因子であるＳタンパク質（ビトロネクチンとしても知られている）およびＳＰ−４０，４０（クラスタリン（ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ）としても知られている）、ならびに宿主細胞膜上のＣＤ５９およびＨＲＦ（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）によって制御される。多くの種類の細胞、すなわち、赤血球、血小板、細菌、リポタンパク質外被をもつウイルス、およびリンパ球が、補体媒介性溶解に対して感受性である。
【００１１】
補体系は、炎症を開始し、増幅するための強力な機構である。これは、補体構成成分の断片を通して媒介される。アナフィラトキシン、すなわち、Ｃ３ａ、Ｃ４ａおよびＣ５ａは、補体系のセリンプロテアーゼの最も十分に定義されている断片でもあり、タンパク質分解性断片でもある。アナフィラトキシンは、補体の活性化の過程においてのみならず、また、Ｃ３、Ｃ４およびＣ５を直接切断することができるその他の酵素系の活性化からも生じる。そのような酵素には、トロンビン、プラスミン、カリクレイン、組織および白血球のリソソーム酵素、ならびに細菌のプロテアーゼがある。アナフィラトキシンは、血管壁に対して力強い効果を示し、平滑筋（例えば、回腸、気管支、子宮および血管の筋肉）の収縮を引き起こし、血管透過性を増加させる。これらの効果は、特異的なタキフィラキシーを示し（すなわち、反復刺激が、応答の減少を誘発し）、抗ヒスタミン剤によって遮断することができる。これらはおそらく、肥満細胞および好塩基球からのヒスタミンの放出を介して直接媒介されるであう。Ｃ５ａは、Ｃ５血漿タンパク質α鎖の、７４個のアミノ酸からなるＮ末端切断産物である。Ｃ５ａには、多くの異なる細胞型上、すなわち、最も注目すべきは、好中球、マクロファージ、平滑筋細胞および内皮細胞の上に存在する分子である受容体Ｃ５ａＲ（Ｃ５Ｒ１またはＣＤ８８としても知られている）が高い親和性で結合する。Ｃ５ａは、圧倒的に最も力強いアナフィラトキシンであり、Ｃ３ａよりはおよそ１００倍超有効であり、Ｃ４ａよりは１０００倍超有効である。この活性は、Ｃ５ａ＞ヒスタミン＞アセチルコリン＞Ｃ３ａ＞＞Ｃ４ａの順で減少する。
【００１２】
Ｃ５ａは、好中球の走化性、接着性、呼吸性バーストの発生および脱顆粒を刺激する点で極めて強力である。Ｃ５ａはまた、好中球および内皮細胞を刺激して、より多くの接着分子も提示させる。例えば、動物実験では、Ｃ５ａを静脈内注射すると、好中球の血管壁への接着が引き起こされることによって好中球減少が急速に生じる。好中球Ｃ５ａ受容体のライゲーションに続いて、プロスタグランジンに代謝される膜アラキドン酸、ならびに好中球および単核球のもう１つの強力な化学誘引物質であるＬＴＢ４を含めた、ロイコトリエンが動員される。単核球Ｃ５ａ受容体のライゲーションに続いて、ＩＬ−１が放出される。こうして、Ｃ５ａの炎症部位における局所性放出の結果、力強い炎症促進性刺激が生じる。実際に、Ｃ５ａの放出は、多くの急性または慢性の状態、すなわち、免疫複合体関連疾患全般（Ｈｅｌｌｅｒら、１９９９）；喘息（Ｋｏｈｌ、２００１）；敗血症性ショック（Ｈｕｂｅｒ−Ｌａｎｇら、２００１）；全身性炎症反応症候群（略語：ＳＩＲＳ）；多臓器不全（略語：ＭＯＦ）；急性呼吸促迫症候群（略語：ＡＲＤＳ）；炎症性腸症候群（略語：ＩＢＤ）（Ｗｏｏｄｒｕｆｆら、２００３）；感染；重度の熱傷（Ｐｉｃｃｏｌｏら、１９９９）；心臓（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｐａｌｓら、２０１０）、脾臓、膀胱、膵臓、胃、肺、肝臓、腎臓、肢、脳、骨格筋または腸等の臓器の再灌流傷害（Ｒｉｌｅｙら、２０００）；乾癬（Ｂｅｒｇｈら、１９９３）；心筋炎；多発性硬化症（Ｍｕｌｌｅｒ−Ｌａｄｎｅｒら、１９９６）；および関節リウマチ（略語：ＲＡ）（Ｗｏｏｄｒｕｆｆら、２００２）等に直接的または間接的に関係する。
【００１３】
補体系と疾患との間の関係について、多数の概要が公開されている（Ｋｉｒｓｃｈｆｉｎｋ、１９９７；Ｋｏｈｌ、２００１；Ｍａｋｒｉｄｅｓ、１９９８；Ｗａｌｐｏｒｔ、２００１ａ；Ｗａｌｐｏｒｔ、２００１ｂ）。
【００１４】
補体による細胞傷害が、細胞表面上において、古典経路または代替経路のいずれかの活性化の結果として生じる。ＭＡＣは、およそ２０個のタンパク質分子でできており、およそ１．７×１０６Ｄａの分子量に相当する超分子組織を構成する。完全に集合したＭＡＣは、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７およびＣ８を各１分子、ならびにＣ９数分子を含有する。全てのこれらのＭＡＣ構成成分は、糖タンパク質である。Ｃ５が、Ｃ５コンバターゼによって切断され、Ｃ５ｂが生じると、ＭＡＣの自己集合が始まる。Ｃ５ｂとＣ６とが、安定で可溶性の二分子複合体を形成し、これはＣ７に結合し、Ｃ７を誘発して準安定部位を発現させ、新生三分子複合体（Ｃ５ｂ−７）が標的脂質二重層上にかまたはそれにごく接近して生じた場合には、その準安定部位を通して、この三分子複合体はそれ自体を膜中に挿入することができる。挿入は、Ｃ７のＣ５ｂ−６への結合後に出現する、Ｃ５ｂ−７複合体上の疎水性領域によって媒介される。膜に結合したＣ５ｂ−７は、ＭＡＣ集合体を膜部位に収容し、Ｃ８のための受容体を形成する。Ｃ８、１分子が各Ｃ５ｂ−７複合体に結合すると、１ｎｍ未満の機能性直径の小さな膜貫通型チャネルが生じ、このチャネルは、標的の細菌および赤血球の膜を撹乱させることができる。膜に結合した各Ｃ５ｂ−８複合体は、複数のＣ９分子のための受容体として作用し、Ｃ９の、細胞膜の炭化水素コア中への挿入を促進するようである。Ｃ９、１分子の結合によって、膜の侵襲部位におけるＣ９オリゴマー形成の過程が開始される。少なくとも１２個の分子が、複合体中に組み込まれると、個別のチャネル構造が形成される。したがって、最終産物は、四分子Ｃ５ｂ−８複合体（およそ５５０ｋＤａの分子量を有する）および管状のポリ−Ｃ９（およそ１，１００ｋＤａの分子量を有する）からなる。この形態のＭＡＣは、細胞膜中に挿入されると、完全な膜貫通型チャネルを生み出し、細胞の浸透圧溶解を起こす。形成された膜貫通型チャネルは、チャネル構造中に組み込まれたＣ９分子の数に依存して、サイズが異なる。ポリ−Ｃ９の存在が、赤血球細胞や有核細胞の溶解のためには必ずしも絶対不可欠であるとは限らないが、細菌を死滅させるためには必要である場合がある。
【００１５】
補体系は、侵入微生物に対する身体の防御において主として有益である。補体カスケードの早期の構成成分は、感染病原体のオプソニン化に重要であり、オプソニン化に続いて、感染病原体は身体から排除される。さらに、それらの構成成分は、免疫複合体の形成およびクリアランスの制御またはデブリ、死滅組織および外来物質の浄化のような免疫系のいくつかの正常機能も果たす。（健常な身体中では）広範な種類の非自己構造を定義する異なる分子パターンを認識する、全てのこれらの活性化経路は、侵入物の制御に役立つ。最後にはＭＡＣ集合体に至る終末補体経路は、細菌および外来細胞を溶解することによる、さらなる防衛線を意味する。
【００１６】
補体欠損の効果を考察すると、機能性の補体系の重要性が明らかになる。例えば、代替経路のタンパク質または後期の構成成分（Ｃ３〜Ｃ９）のうちの１つがない個体は、化膿性の生物体、特にナイセリア種によって重度の感染を起こす傾向がある。また、古典経路の構成成分（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ４等）の欠損にも、あまり大きくは上昇しないが、感染のリスクの増加が伴う。また、Ｃ１およびＭＢＬのような補体構成成分は、ウイルスの宿主細胞膜との相互作用を妨害し、したがって、ウイルスが細胞中へ入るのを阻止することによる、ウイルスを中和する能力も有する。
【００１７】
注目すべきことには、Ｃ５の切断から、Ｃ５ａおよびＭＡＣが生じるが、Ｃ５欠損の臨床上の特徴は、その他の終末構成成分（例えば、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９）の欠損の臨床上の特徴と目覚しく異なることはなく、このことから、Ｃ５ａの不在が、Ｃ５欠損患者の臨床像に顕著に寄与するわけではないことが示唆されている。したがって、Ｃ５ａの選択的な拮抗が、補体の正常な上流および下流の疾患予防機能が変化しない状態を保つような、最適な手助けとなることが期待される。したがって、炎症促進性のアナフィラトキシンの有害な過剰産生のみが遮断される。
【００１８】
Ｃ５ａＲ欠損マウスは、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染に対してより感受性であるが、それ以外は正常に見えるという事実から、Ｃ５ａ機能の遮断には有害な作用はないことが示唆されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
Ｃ５ａもしくはＣ５または各受容体を標的とするいくつかの化合物が知られており、ｉｎ  ｖｉｖｏモデルでの試験に成功した。それらの内の一部は、臨床試験でさらに試験されている。Ｃ５特異的ヒト化抗体であるエクリズマブは、発作性夜間ヘモグロビン尿症に承認されており、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、急性抗体媒介性腎同種移植片拒絶および寒冷凝集素症の治療で効能を示している。エクリズマブはＣ５の切断を予防し、Ｃ５ａおよびＣ５ｂの両方の作用を阻害する。同じような研究段階のＣ５抗体および抗体フラグメント以外に、Ｃ５ａ：Ｃ５ａＲ（ＣＤ８８）相互作用を選択的に妨害し、Ｃ５切断およびＣ５ｂ依存性のＭＡＣ形成の影響を受けないようにする抗体に特別な関心がある。例として、炎症性疾患および組織傷害の潜在的静脈内治療のための第１相臨床開発中であるヒト抗Ｃ５ａ  ｍＡｂ  ＭＥＤＩ−７８１４とＣ５ａ抗体ＴＮＸ−５５８とが挙げられるが、これらの開発は、２００７年から報告されていない。関節リウマチおよび脳卒中のために、Ｃ５ａ受容体に対する抗体であるニュートラツマブ（ｎｅｕｔｒａｚｕｍａｂ）が開発中である（ＲｉｃｋｌｉｎおよびＬａｍｂｒｉｓ、２００７；ＷａｇｎｅｒおよびＦｒａｎｋ、２０１０）。
【００２０】
ＰＥＧ化された抗Ｃ５アプタマー（ＡＲＣ−１９０５）がＡＭＤのために前臨床開発中である。ＣＣＸ１６８は、抗好中球細胞質の自己抗体に関連する血管炎のために現在は第２相臨床開発中である小分子Ｃ５ａＲ阻害剤である（ＣｈｅｍｏＣｅｎｔｒｙｘ  Ｐｒｅｓｓ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｏｃｔ  １７、２０１１）。臨床開発中の別のＣ５ａＲアンタゴニストは、関節リウマチの治療用のＭＰ−４３５である。
【００２１】
小分子／ペプチド模倣のＣ５ａ受容体アンタゴニストＪＰＥ−１３７５、ＪＳＭ−７７１７に関する開発は、最近では報告されていない（ＲｉｃｋｌｉｎおよびＬａｍｂｒｉｓ、２００７）。Ｃ５ａ受容体ＣＤ８８の別の阻害剤である環状ヘキサペプチドＰＭＸ５３は、炎症性動物モデルでは有効であるが、関節リウマチを患う患者におけるプラセボ対照二重盲検臨床研究ではエンドポイントを満たしていない。ＡＭＤのための臨床開発も中止されている（ＷａｇｎｅｒおよびＦｒａｎｋ、２０１０）。ＰＭＸ５３の研究段階の変異体であるＰＭＸ２０５は、アルツハイマー認知症のマウスモデルでは有効であることが公開されている（Ｆｏｎｓｅｃａら、２００９）。さらなる臨床段階の化合物は、Ｃ５ａ受容体（Ｃ５ａＲ）アンタゴニストであるＣＣＸ−１６８である。２０１０年１月に、炎症性疾患および自己免疫疾患のための第１相臨床試験が開始されている。
【００２２】
上記に記載したＣ５ａの効果以外に、新しいデータから、腫瘍微小環境でのＣ５ａの生成により、抗腫瘍ＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性反応の抑制によって腫瘍増殖が増進されると推測され、前記抑制は、骨髄由来サプレッサー細胞の腫瘍中への誘引（ｒｅｃｒｕｉｔｅｍｅｎｔ）およびそのＴ細胞指向性の抑制能力の増大と関連があると思われる。Ｍａｒｋｉｅｗｓｋｉらは、ペプチドＣ５ａ受容体アンタゴニストによるＣ５ａ受容体の遮断によって、マウスモデルでは腫瘍増殖の遅延がもたらされることを示した（Ｍａｒｋｉｅｗｓｋｉら、２００８）。
【００２３】
ペプチド化合物の大部分はペプチダーゼによる分解および修飾を起こしやすく、さらに、身体、好ましくはヒトの身体からの急速なクリアランス速度を示す。したがって、これらのペプチド化合物を、一般に市販される薬物の開発の必要条件である薬物様化合物として考えることはできない。
【００２４】
ヒトＣ５ａに特異的に結合するがその他の種のＣ５ａには特異的に結合しない、いくつかのスピーゲルマーが過去に開発されている（ＷＯ２００９／０４０１１３およびＷＯ２０１０／１０８６５７を参照されたい）。
【００２５】
前臨床開発および臨床開発のために動物モデルが不可欠であることから、本発明の根本的な課題は、マウスＣ５ａと相互作用する化合物を提供することである。より具体的には、本発明の根本的な問題は、マウスＣ５ａとヒトＣ５ａとの両方に相互作用する化合物を提供することである。
【００２６】
さらなる本発明の根本的な課題は、ヒトおよび／または非ヒトの疾患を治療するための医薬品を製造するための化合物を提供することであり、Ｃ５ａがそのような疾患の発症機構に直接的にかまたは間接的にのいずれかで関与することによって、疾患を特徴付ける。
【００２７】
その上さらなる本発明の根本的な課題は、疾患を治療するための診断薬を製造するための化合物を提供することであり、Ｃ５ａがそのような疾患の発症機構に直接的にかまたは間接的にのいずれかで関与することによって、疾患を特徴付ける。
【００２８】
本発明の根本的な、これらおよびその他の課題は、付属の独立請求項の主題によって解決される。好ましい実施形態は、従属請求項から引き出すことができる。
【課題を解決するための手段】
【００２９】
第１の態様はまた、第１の態様の第１の実施形態でもあり、本発明の根本的な課題は、第１の態様において、ヒトＣ５ａに結合することができる核酸分子によって解決され、核酸分子は中心ストレッチのヌクレオチドを含み、中心ストレッチのヌクレオチドは
５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＫＵｎ２ｎ３ＲＧＧＧＨＵＧＵＫＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６１］のヌクレオチド配列を含み、
ｎ１は、ＵまたはｄＵであり、ｎ２は、ＧまたはｄＧであり、ｎ３は、ＡまたはｄＡであり、ｎ４は、ＵまたはｄＵであり、ｎ５は、ＵまたはｄＵであり、かつ
Ｇ、Ａ、Ｕ、Ｃ、Ｈ、ＫおよびＲは、リボヌクレオチドであり、かつ
ｄＵ、ｄＧおよびｄＡは、２’−デオキシリボヌクレオチドである。
【００３０】
第１の態様の第２の実施形態はまた、第１の態様の第１の実施形態のある実施形態でもあり、ここでは、中心ストレッチのヌクレオチドが、
ａ）５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＵＵｎ２ｎ３ＡＧＧＧＵＵＧＵＧＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６２］、
ｂ）５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＵＵｎ２ｎ３ＧＧＧＧＵＵＧＵＧＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６３］、
ｃ）５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＵＵｎ２ｎ３ＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６４］、
ｄ）５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＧＵｎ２ｎ３ＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６５］、
ｅ）５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＧＵｎ２ｎ３ＧＧＧＧＵＵＧＵＧＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６６］、
ｆ）５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＧＵｎ２ｎ３ＧＧＧＧＡＵＧＵＧＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６７］、および
ｇ）５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＵＵｎ２ｎ３ＧＧＧＧＣＵＧＵＧＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６８］
の群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
ｎ１は、ＵまたはｄＵであり、ｎ２は、ＧまたはｄＧであり、ｎ３は、ＡまたはｄＡであり、ｎ４は、ＵまたはｄＵであり、ｎ５は、ＵまたはｄＵであり、かつ
Ｇ、Ａ、ＵおよびＣは、リボヌクレオチドであり、かつ
ｄＵ、ｄＧおよびｄＡは、２’−デオキシリボヌクレオチドである。
【００３１】
第１の態様の第３の実施形態はまた、第１の態様の第２の実施形態のある実施形態でもあり、ここでは、前記中心ストレッチのヌクレオチドが、
５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＧＵｎ２ｎ３ＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６５］のヌクレオチド配列を含み、
ｎ１は、ＵまたはｄＵであり、ｎ２は、ＧまたはｄＧであり、ｎ３は、ＡまたはｄＡであり、ｎ４は、ＵまたはｄＵであり、ｎ５は、ＵまたはｄＵであり、かつ
Ｇ、Ａ、ＵおよびＣは、リボヌクレオチドであり、かつ
ｄＵ、ｄＧおよびｄＡは、２’−デオキシリボヌクレオチドである。
【００３２】
第１の態様の第４の実施形態はまた、第１の態様の第３の実施形態のある実施形態でもあり、前記中心ストレッチのヌクレオチドが、
ａ）５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７３］、
ｂ）５’ＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵｄＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７４］、
ｃ）５’ＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵＧｄＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７５］、
ｄ）５’ＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７６］、
ｅ）５’ＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７７］、
ｆ）５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７８］、
ｇ）５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７９］、
ｈ）５’ＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号８０］、
ｉ）５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号８１］、
ｊ）５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵｄＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号８２］、
ｋ）５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵＧｄＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号８３］、
ｌ）５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵｄＧｄＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号８４］
の群から選択されるヌクレオチド配列を含み、
好ましくは、前記中心ストレッチのヌクレオチドが、
５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７８］または
５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵｄＧｄＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号８４］
である。
【００３３】
第１の態様の第５の実施形態はまた、第１の態様の第２の実施形態のある実施形態でもあり、前記中心ストレッチのヌクレオチドが、
５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＧＵｎ２ｎ３ＧＧＧＧＵＵＧＵＧＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６６］のヌクレオチド配列を含み、
ｎ１は、ＵまたはｄＵであり、ｎ２は、ＧまたはｄＧであり、ｎ３は、ＡまたはｄＡであり、ｎ４は、ＵまたはｄＵであり、ｎ５は、ＵまたはｄＵであり、かつ
Ｇ、Ａ、ＵおよびＣは、リボヌクレオチドであり、かつ
ｄＵ、ｄＧおよびｄＡは、２’−デオキシリボヌクレオチドである。
【００３４】
第１の態様の第６の実施形態はまた、第１の態様の第２の実施形態のある実施形態でもあり、前記中心ストレッチのヌクレオチドが、
５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＧＵｎ２ｎ３ＧＧＧＧＡＵＧＵＧＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６７］のヌクレオチド配列を含み、
ｎ１は、ＵまたはｄＵであり、ｎ２は、ＧまたはｄＧであり、ｎ３は、ＡまたはｄＡであり、ｎ４は、ＵまたはｄＵであり、ｎ５は、ＵまたはｄＵであり、かつ
Ｇ、Ａ、ＵおよびＣは、リボヌクレオチドであり、かつ
ｄＵ、ｄＧおよびｄＡは、２’−デオキシリボヌクレオチドである。
【００３５】
第１の態様の第７の実施形態はまた、第１の態様の第２の実施形態のある実施形態でもあり、前記中心ストレッチのヌクレオチドが、
５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＵＵｎ２ｎ３ＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６４］のヌクレオチド配列を含み、
ｎ１は、ＵまたはｄＵであり、ｎ２は、ＧまたはｄＧであり、ｎ３は、ＡまたはｄＡであり、ｎ４は、ＵまたはｄＵであり、ｎ５は、ＵまたはｄＵであり、かつ
Ｇ、Ａ、ＵおよびＣは、リボヌクレオチドであり、かつ
ｄＵ、ｄＧおよびｄＡは、２’−デオキシリボヌクレオチドである。
【００３６】
第１の態様の第８の実施形態はまた、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、および第７の実施形態のある実施形態でもあり、前記中心ストレッチのヌクレオチドが、リボヌクレオチドおよび２’−デオキシリボヌクレオチドからなる。
【００３７】
第１の態様の第９の実施形態はまた、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第５の、第６の、および第７の実施形態のある実施形態でもあり、前記中心ストレッチのヌクレオチドがリボヌクレオチドからなる。
【００３８】
第１の態様の第１０の実施形態はまた、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、および第９の実施形態のある実施形態でもあり、前記核酸分子が、５’−＞３’方向に、第１の末端ストレッチのヌクレオチド、前記中心ストレッチのヌクレオチドおよび第２の末端ストレッチのヌクレオチドを含み、
前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドは、１〜５個のヌクレオチドを含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドは、１〜５個のヌクレオチドを含み、
好ましくは、
前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドは、３〜５個のヌクレオチドを含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドは、３〜５個のヌクレオチドを含み、
より好ましくは、
前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドは、３個のヌクレオチドを含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドは、３個のヌクレオチドを含む。
【００３９】
第１の態様の第１１の実施形態はまた、第１の態様の第１０の実施形態のある実施形態でもあり、前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’Ｚ５Ｚ６Ｚ７Ｚ８Ｚ９３’のヌクレオチド配列を含み、
Ｚ１は、Ｇまたは不在であり、Ｚ２は、Ｓまたは不在であり、Ｚ３は、Ｓまたは不在であり、Ｚ４は、Ｂまたは不在であり、Ｚ５は、ＣまたはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖまたは不在であり、Ｚ７は、Ｓまたは不在であり、Ｚ８は、Ｓまたは不在であり、Ｚ９は、Ｃまたは不在であり、かつ
Ｇ、Ｓ、Ｂ、Ｃ、Ｖは、リボヌクレオチドであり、かつ
ｄＣは、２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
好ましくは、
ａ）Ｚ１は、Ｇであり、Ｚ２は、Ｓであり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、Ｃであるか、または
ｂ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、Ｓであり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｃ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｄ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、不在であり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、不在であり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｅ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、Ｓであり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、Ｃであるか、または
ｆ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、Ｃであるか、または
ｇ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、不在であり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、Ｃであるか、または
ｈ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、不在であり、Ｚ４は、不在であり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、Ｃであるか、または
ｉ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｊ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、不在であり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｋ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、不在であり、Ｚ４は、不在であり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｌ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、Ｓであり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｍ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、Ｓであり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、不在であり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｎ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、不在であり、Ｚ４は、不在であり、Ｚ５は、Ｃであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｏ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、不在であり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｐ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、不在であり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｑ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、不在であり、Ｚ７は、不在であり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在である。
【００４０】
第１の態様の第１２の実施形態はまた、第１の態様の第１０の、および第１１の実施形態のある実施形態でもあり、前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＣＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＣＡＧＧＣ３’または５’ｄＣＡＧＧＣ３’のヌクレオチド配列を含み、
Ｃ、Ａ、ＧおよびＵは、リボヌクレオチドであり、かつ
ｄＣは、２’−デオキシリボヌクレオチドである。
【００４１】
第１の態様の第１３の実施形態はまた、第１の態様の第１２の実施形態のある実施形態でもあり、前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＡＧＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００４２】
第１の態様の第１４の実施形態はまた、第１の態様の第１２の実施形態のある実施形態でもあり、前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＣＡＧＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００４３】
第１の態様の第１５の実施形態はまた、第１の態様の第１０の、および第１１の実施形態のある実施形態でもあり、
前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＣＣＵＧ３’または５’ＣＵＧ３’または５’ＵＧ３’または５’Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＡＧＧＣ３’のヌクレオチド配列を含み、
Ｃ、Ａ、ＧおよびＵは、リボヌクレオチドであり、かつ
ｄＣは、２’−デオキシリボヌクレオチドである。
【００４４】
第１の態様の第１６の実施形態はまた、第１の態様の第１５の実施形態のある実施形態でもあり、前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＣＣＵＧ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００４５】
第１の態様の第１７の実施形態はまた、第１の態様の第１５の実施形態のある実施形態でもあり、前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＣＵＧ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００４６】
第１の態様の第１８の実施形態はまた、第１の態様の第１０の、および第１１の実施形態のある実施形態でもあり、
ａ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＡＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＧＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｃ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＧＣＣ３’のヌクレオチド配列を含み、
Ｃ、Ａ、ＧおよびＵは、リボヌクレオチドであり、かつ
ｄＣは、２’−デオキシリボヌクレオチドである。
【００４７】
第１の態様の第１９の実施形態はまた、第１の態様の第１８の実施形態のある実施形態でもあり、
第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＧＣＣ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００４８】
第１の態様の第２０の実施形態はまた、第１の態様の第１０の、および第１１の実施形態のある実施形態でもあり、
前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＣＵＧ３’または５’ＵＧ３’または５’ＣＧ３’または５’Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＡＧＣ３’のヌクレオチド配列を含み、
Ｃ、Ａ、ＧおよびＵが、リボヌクレオチドであり、かつ
ｄＣが、２’−デオキシリボヌクレオチドである。
【００４９】
第１の態様の第２１の実施形態はまた、第１の態様の第１０の、および第１１の実施形態のある実施形態でもあり、
前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＡＣ３’または５’ｄＣＣ３’または５’ｄＣＡ３’のヌクレオチド配列を含み、
Ｃ、Ａ、ＧおよびＵが、リボヌクレオチドであり、かつ
ｄＣが、２’−デオキシリボヌクレオチドである。
【００５０】
第１の態様の第２２の実施形態はまた、第１の態様の第１０の、および第１１の実施形態のある実施形態でもあり、
ａ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＡＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＡ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｃ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｄ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｅ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｆ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｇ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｈ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｉ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含み、
Ｃ、Ａ、ＧおよびＵは、リボヌクレオチドであり、かつ
ｄＣは、２’−デオキシリボヌクレオチドである。
【００５１】
第１の態様の第２３の実施形態はまた、第１の態様の第２２の実施形態のある実施形態でもあり、
前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む。
【００５２】
第１の態様の第２４の実施形態はまた、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第５の、第６の、第７の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、および第１４の実施形態のある実施形態でもあり、前記核酸分子が、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６および配列番号９０の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６および配列番号９０の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子に対する少なくとも８５％の同一性を有する核酸分子を含むか、または配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６および配列番号９０の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と相同である核酸分子を含み、相同性は少なくとも８５％である。
【００５３】
第１の態様の第２５の実施形態はまた、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第８の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、および第２３の実施形態のある実施形態でもあり、前記核酸分子が、配列番号１４、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号３７、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６０、配列番号９１および配列番号９２の群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、または１４、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号３７、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６０、配列番号９１および配列番号９２の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子に対する少なくとも８５％の同一性を有する核酸分子を含むか、または１４、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号３７、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６０、配列番号９１および配列番号９２の群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子と相同である核酸分子を含み、相同性は少なくとも８５％である。
【００５４】
第１の態様の第２６の実施形態はまた、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、および第２５の実施形態のある実施形態でもあり、前記核酸分子がヒトＣ５ａおよびマウスＣ５ａに結合することができる。
【００５５】
第１の態様の第２７の実施形態はまた、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、および第２６の実施形態のある実施形態でもあり、前記核酸分子が、ヒトＣ５ａおよびマウスＣ５ａに結合することができる少なくとも１つの結合部分を含み、そのような結合部分は、Ｌ−ヌクレオチドからなる。
【００５６】
第１の態様の第２８の実施形態はまた、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、および第２７の実施形態のある実施形態でもあり、前記核酸分子のヌクレオチドまたは前記核酸分子を形成するヌクレオチドが、Ｌ−ヌクレオチドである。
【００５７】
第１の態様の第２９の実施形態はまた、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、および第２８の実施形態のある実施形態でもあり、前記核酸分子がＬ−核酸分子である。
【００５８】
第１の態様の第３０の実施形態はまた、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、および第２９の実施形態のある実施形態でもあり、前記核酸が、ヒトおよび／またはマウスのＣ５ａにより媒介される活性のアンタゴニストである。
【００５９】
第１の態様の第３１の実施形態はまた、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、および第３０の実施形態のある実施形態でもあり、前記核酸分子は修飾基を含み、前記修飾基を含む前記核酸分子の生物からの排出速度は、前記修飾基を含まない核酸と比較して低下する。
【００６０】
第１の態様の第３２の実施形態はまた、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、および第３０の実施形態のある実施形態でもあり、前記核酸分子は修飾基を含み、前記修飾基を含む前記核酸分子の生物における保持時間は、前記修飾基を含まない核酸分子と比較して増大する。
【００６１】
第１の態様の第３３の実施形態はまた、第１の態様の第３１の、および第３２の実施形態のある実施形態でもあり、前記修飾基は、生分解性修飾および非生分解性修飾を含む群から選択され、好ましくは、前記修飾基は、ポリエチレングリコール、直鎖ポリエチレングリコール、分岐ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、ペプチド、タンパク質、多糖、ステロール、ポリオキシプロピレン、ポリオキシアミデートおよびポリ（２−ヒドロキシエチル）−Ｌ−グルタミンを含む群から選択される。
【００６２】
第１の態様の第３４の実施形態はまた、第１の態様の第３３の実施形態のある実施形態でもあり、前記修飾基はポリエチレングリコールであり、好ましくは直鎖ポリエチレングリコールまたは分岐ポリエチレングリコールからなり、前記ポリエチレングリコールの分子量は好ましくは約２０，０００〜約１２０，０００Ｄａであり、より好ましくは約３０，０００〜約８０，０００Ｄａであり、最も好ましくは約４０，０００Ｄａである。
【００６３】
第１の態様の第３５の実施形態はまた、第１の態様の第３３の実施形態のある実施形態でもあり、前記修飾基はヒドロキシエチルデンプンであり、好ましくは前記ヒドロキシエチルデンプンの分子量は約５０〜約１０００ｋＤａであり、より好ましくは約１００〜約７００ｋＤａであり、最も好ましくは２００〜５００ｋＤａである。
【００６４】
第１の態様の第３６の実施形態はまた、第１の態様の第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、および第３５の実施形態のある実施形態でもあり、前記修飾基は、前記核酸分子にリンカーを介して結合し、好ましくは、前記リンカーは生分解性リンカーである。
【００６５】
第１の態様の第３７の実施形態はまた、第１の態様の第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、および第３６の実施形態のある実施形態でもあり、前記修飾基は、前記核酸分子の５’末端のヌクレオチドおよび／もしくは３’末端のヌクレオチドに、ならびに／または前記核酸分子の５’末端のヌクレオチドと前記核酸分子の３’末端のヌクレオチドとの間の前記核酸分子のヌクレオチドに結合する。
【００６６】
第１の態様の第３８の実施形態はまた、第１の態様の第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、および第３７の実施形態のある実施形態でもあり、前記生物は、動物またはヒトの身体であり、好ましくはヒトの身体である。
【００６７】
第２の態様はまた、第２の態様の第１の実施形態でもあり、本発明の根本的な課題は、第２の態様において、疾患を治療および／もしくは予防するための方法において使用するための、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による核酸分子によって解決される。
【００６８】
第２の態様の第２の実施形態はまた、第２の態様の第１の実施形態のある実施形態でもあり、疾患は、補体活性化およびＣ５ａ媒介性発症機構に関連があり、かつ／または、自己免疫性疾患、炎症性疾患、全身性炎症反応症候群、眼疾患、虚血／再灌流傷害、臓器移植後臓器機能障害、移植片拒絶、心血管疾患、呼吸器疾患、急性反応、感染性疾患、神経性疾患、神経変性疾患、線維性疾患、血液疾患、代謝性疾患、腫瘍、および生体材料による補体活性化に関連する臨床的合併症を含む群から選択され、好ましくは、前記全身性炎症反応症候群は、敗血症および外傷または重度の熱傷の二次的損傷を含む群から選択される。
【００６９】
第３の態様はまた、第３の態様の第１の実施形態でもあり、本発明の根本的な課題は、第３の態様において、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態によるならびに第２の態様の第１の実施形態による核酸分子ならびに場合によりさらなる構成要素を含む医薬組成物によって解決され、さらなる構成要素は、薬学的に許容できる賦形剤、薬学的に許容できる担体および薬学的に活性な薬剤を含む群から選択される。
【００７０】
第３の態様の第２の実施形態はまた、第３の態様の第１の実施形態のある実施形態でもあり、ここでは、医薬組成物が、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態によるおよび第２の態様の第１の実施形態による核酸分子ならびに薬学的に許容できる担体を含む。
【００７１】
第４の態様はまた、第４の態様の第１の実施形態でもあり、本発明の根本的な課題は、第４態様において、医薬品を製造するための、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態によるおよび第２の態様の第１の実施形態による核酸分子の使用によって解決される。
【００７２】
第４の態様の第２の実施形態はまた、第４の態様の第１の実施形態のある実施形態でもあり、ここでは、医薬品は、ヒト用医薬における使用のためのものまたは獣医用医薬における使用のためのものである。
【００７３】
第４の態様の第３の実施形態はまた、第４の態様の第１の、および第２の実施形態のある実施形態でもあり、前記医薬品が、自己免疫性疾患、炎症性疾患、全身性炎症反応症候群、眼疾患、虚血／再灌流傷害、臓器移植後臓器機能障害、移植片拒絶、心血管疾患、呼吸器疾患、急性反応、感染性疾患、神経性疾患、神経変性疾患、線維性疾患、血液疾患、代謝性疾患、腫瘍、および生体材料による補体活性化に関連する臨床的合併症の治療および／または予防のためのものであり、好ましくは、前記全身性炎症反応症候群は、敗血症および外傷または重度の熱傷の二次的損傷を含む群から選択される。
【００７４】
第５の態様はまた、第５の態様の第１の実施形態でもあり、本発明の根本的な課題は、第５態様において、診断手段を製造するための、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態によるおよび第２の態様の第１の実施形態による核酸分子の使用によって解決される。
【００７５】
第６の態様はまた、第６の態様の第１の実施形態でもあり、本発明の根本的な課題は、第６の態様において、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による、ならびに第２の態様の第１の実施形態による核酸分子とＣ５ａとを含む複合体によって解決され、好ましくは、複合体は結晶性の複合体である。
【００７６】
第７の態様はまた、第７の態様の第１の実施形態でもあり、本発明の根本的な課題は、第７の態様において、Ｃ５ａを検出するための、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による、ならびに第２の態様の第１の実施形態による核酸分子の使用によって解決される。
【００７７】
第８の態様はまた、第８の態様の第１の実施形態でもあり、本発明の根本的な課題は、第８の態様において、Ｃ５ａにより媒介される活性のアンタゴニストをスクリーニングするための方法によって解決され、この方法は、
−  Ｃ５ａにより媒介される活性の候補アンタゴニストを準備するステップと、
−  第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による、ならびに第２の態様の第１の実施形態による核酸分子を準備するステップと、
−  Ｃ５ａにより媒介される活性のアンタゴニストの存在下でシグナルを発生する試験系を準備するステップと、
−  Ｃ５ａにより媒介される活性の候補アンタゴニストが、Ｃ５ａにより媒介される活性のアンタゴニストであるかどうかを決定するステップと
を含む。
【００７８】
第９の態様はまた、第９の態様の第１の実施形態でもあり、本発明の根本的な課題は、第９の態様において、Ｃ５ａを検出するためのキットによって解決され、このキットは、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による、ならびに第２の態様の第１の実施形態による核酸分子と、少なくとも指示書または反応槽とを含む。
【００７９】
第１０の態様はまた、第１０の態様の第１の実施形態でもり、本発明の根本的な課題は、第１０の態様において、試料中の、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による、ならびに第２の態様の第１の実施形態による核酸を検出するための方法によって解決され、この方法は、
ａ）捕捉プローブおよび検出プローブを準備するステップであって、前記捕捉プローブは、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による、ならびに第２の態様の第１の実施形態による核酸分子の第１の部分に対して少なくとも部分的に相補性を示し、前記検出プローブは、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による、ならびに第２の態様の第１の実施形態による核酸分子の第２の部分に対して少なくとも部分的に相補性を示すか、あるいは、前記捕捉プローブは、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による、ならびに第２の態様の第１の実施形態による核酸分子の第２の部分に対して少なくとも部分的に相補性を示し、前記検出プローブは、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による、ならびに第２の態様の第１の実施形態による核酸分子の第１の部分に対して少なくとも部分的に相補性を示すステップと、
ｂ）前記捕捉プローブおよび前記検出プローブを別々にまたは組み合わせて、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による、ならびに第２の態様の第１の実施形態による前記核酸分子を含有する試料または第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による、ならびに第２の態様の第１の実施形態による前記核酸分子を含有すると推定される試料に添加するステップと、
ｃ）前記捕捉プローブおよび前記検出プローブを、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による、ならびに第２の態様の第１の実施形態による前記核酸分子またはその部分と同時にまたは任意の順番で順次に反応させるステップと、
ｄ）任意選択的に、前記捕捉プローブがステップａ）で準備された第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による、ならびに第２の態様の第１の実施形態による前記核酸分子とハイブリダイズするか否かを検出するステップと、
ｅ）第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８の、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６の、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態による、ならびに第２の態様の第１の実施形態による前記核酸分子ならびに前記捕捉プローブおよび前記検出プローブからなる、ステップｃ）で形成された複合体を検出するステップと
を含む。
【００８０】
第１０の態様の第２の実施形態はまた、第１０の態様の第１の実施形態のある実施形態でもあり、ここでは、検出プローブは、検出手段を含み、かつ／または捕捉プローブは、支持体、好ましくは、固体の支持体に固定化する。
【００８１】
第１０の態様の第３の実施形態はまた、第１０の態様の第１および第２の実施形態のある実施形態でもあり、ここでは、ステップｃ）で形成された複合体の一部ではない検出プローブはいずれも、反応から除去され、したがって、ステップｅ）において、複合体の一部である検出プローブのみが検出される。
【００８２】
第１０の態様の第４の実施形態はまた、第１０の態様の第１、第２および第３の実施形態のある実施形態でもあり、ここでは、ステップｅ）が、第１の態様の第１の、第２の、第３の、第４の、第５の、第６の、第７の、第８、第９の、第１０の、第１１の、第１２の、第１３の、第１４の、第１５の、第１６、第１７の、第１８の、第１９の、第２０の、第２１の、第２２の、第２３の、第２４の、第２５の、第２６の、第２７の、第２８の、第２９の、第３０の、第３１の、第３２の、第３３の、第３４の、第３５の、第３６の、第３７の、および第３８の実施形態によるおよび第２の態様の第１の実施形態による核酸分子またはその一部が存在する場合と、前記核酸またはその一部が存在しない場合とで、捕捉プローブおよび検出プローブがハイブリダイズしたときに検出手段が発生させるシグナルを比較するステップを含む。
【００８３】
いずれの説にも縛られる意図はないが、本発明者らは、驚くことに、マウスＣ５ａおよびヒトＣ５ａの配列相同性は、相同領域および３個の追加のＮ末端アミノ酸を有するマウスＣ５ａにおいてわずか６４％であるが、本発明による核酸分子がマウスＣ５ａおよびヒトＣ５ａの両方に特異的におよび高親和性で結合し、それによりＣ５ａ受容体へのＣ５ａの結合が阻害されることを発見した。さらに、ヒトＣ５ａとは対照的に、マウスＣ５ａはグリコシル化されていない。ヒトＣ５ａにおけるグリコシル化部位であるアスパラギン６４は、マウスではグルタミン酸塩に変異されている。特に、ピコモル範囲におけるいくつかの個々のＣ５ａ結合性核酸の示された親和性を予測することができなかった。
【００８４】
さらに、本発明者らは、驚くことに、本発明による核酸分子がＣ５ａとＣ５ａ受容体との相互作用の遮断に適していることを発見した。この限りでは、本発明による核酸分子をＣ５ａ受容体のアンタゴニストとしてみなすこともでき、それぞれ、Ｃ５ａの効果、特にＣ５ａのその受容体に関する効果のアンタゴニストとしてみなすこともできる。Ｃ５ａに対するアンタゴニストは、本発明による核酸分子等のＣ５ａに結合する分子であり、好ましくは、実施例に記載されているｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイまたはｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいてＣ５ａの機能を阻害する。
【００８５】
本発明による核酸が核酸分子であることは本発明の範囲に含まれる。この限りでは、核酸および核酸分子という用語は、別段の記載がない限り、本明細書では同義として使用される。また、そのような（１つまたは複数の）核酸は、好ましくは、本明細書では、本発明による（１つまたは複数の）核酸分子、本発明による（１つまたは複数の）核酸、本発明の（１つまたは複数の）核酸、または本発明の（１つまたは複数の）核酸分子とも呼ぶ。
【００８６】
本明細書に記載する本発明による核酸の特徴は、核酸が、単独でかまたは何らかの組合せのいずれかで使用される、本発明の任意の態様において理解することができる。
【００８７】
本発明による核酸分子および組成物、好ましくは本発明による核酸分子を含む医薬組成物を使用することにより治療または予防することができる様々な疾患、状態および障害に関して、そのような疾患、状態および障害は、特に本出願の導入部に記載されているおよび該導入部で説明されているものを含む、本明細書に記載されているものであることを認める必要がある。この限りでは、本明細書の各節および本明細書の導入部は、前記疾患、状態および障害のそれぞれの予防および治療への本発明の核酸分子の適合性を教示する本開示の不可欠な部分を形成する。さらに、Ｃ５ａ−Ｃ５ａ受容体軸の生理学的効果がＣ５ａのより高い血漿中レベルに関連する場合には、本発明による核分子が好ましい。
【００８８】
本明細書で使用する場合、Ｃ５ａという用語は、哺乳動物Ｃ５ａを含む任意のＣ５ａに関するが、これには限定されない。好ましくは、哺乳動物Ｃ５ａは、ヒトＣ５ａ、ラットＣ５ａ、マウスＣ５ａ、サルＣ５ａを含む群から選択される（図１１でのＣ５ａ種アラインメントを参照されたい）。より好ましくは、Ｃ５ａはヒトＣ５ａである。ヒトＣ５ａは、配列番号５０に記載のアミノ酸配列を有する塩基性タンパク質である。マウスＣ５ａは、配列番号５２に記載のアミノ酸配列を有する塩基性タンパク質である。
【００８９】
特許請求の範囲および実施例１においてより詳細に概説するが、より驚くべきことには、本発明者らは、ヒトＣ５ａおよびマウスＣ５ａの両方に結合することができる、いくつかの異なる結合性核酸分子を同定することができた。
【００９０】
本明細書においてより詳細に概説するが、本発明者らは、ヒトＣ５ａおよびマウスＣ５ａの両方に結合することができる、いくつかの異なるＣ５ａ結合性核酸分子を同定し、核酸分子は、本明細書では開示されているようにも呼ばれているストレッチのヌクレオチドの観点から特徴付けられ得る（実施例１を参照されたい）。実施例８および９に実験的に示すように、本発明者らは、驚くべきことに、いくつかの系において、本発明による核酸分子が敗血症の治療に適していることを実証することができた。
【００９１】
Ｃ５ａに結合する異なるタイプの本発明のＣ５ａ結合性核酸分子はそれぞれ、３つの異なるストレッチのヌクレオチド、すなわち第１の末端ストレッチのヌクレオチド、中心ストレッチのヌクレオチドおよび第２の末端ストレッチのヌクレオチドを含む。一般に、本発明のＣ５ａ結合性核酸分子は、その５’末端および３’末端において、末端ストレッチのヌクレオチド、すなわち第１の末端ストレッチのヌクレオチドまたは第２の末端ストレッチのヌクレオチド（また、５’末端ストレッチのヌクレオチドおよび３’末端ストレッチのヌクレオチドとも呼ばれる）をそれぞれ含む。第１の末端ストレッチのヌクレオチドおよび第２の末端ストレッチのヌクレオチドは、原則としてはそれらの塩基相補性に起因して相互にハイブリダイズすることができ、ハイブリダイゼーション時に二本鎖構造が形成される。しかしながら、そのようなハイブリダイゼーションは、生理学的条件および／または非生理学的条件下において分子内で必ずしも実現されるものではない。Ｃ５ａ結合性核酸分子の３つのストレッチのヌクレオチドである第１の末端ストレッチのヌクレオチド、中心ストレッチのヌクレオチドおよび第２の末端ストレッチのヌクレオチドは、５’→３’方向で、すなわち第１の末端ストレッチのヌクレオチド−中心ストレッチのヌクレオチド−第２の末端ストレッチのヌクレオチドで相互に配列されている。あるいは、第２の末端ストレッチのヌクレオチド、中心ストレッチのヌクレオチドおよび末端の第１のストレッチのヌクレオチドが５’→３’方向で相互に配列されている。
【００９２】
本発明による核酸の中心ストレッチのヌクレオチドの長さは、好ましくは３４である。
【００９３】
本発明による核酸の第１の末端ストレッチのヌクレオチドの長さは、１から５の間のヌクレオチドであり、好ましくは３から５の間のヌクレオチドであり、より好ましくは３ヌクレオチドである。
【００９４】
本発明による核の第２の末端ストレッチのヌクレオチドの長さは、１から５の間のヌクレオチドであり、好ましくは３から５の間のヌクレオチドであり、より好ましくは３ヌクレオチドである。
【００９５】
「ストレッチ」および「ストレッチのヌクレオチド」という用語は、別段の記載がない限り、同義として本明細書で使用される。
【００９６】
様々なＣ５ａ結合性核酸分子の間での定義されたストレッチの配列における差異は、Ｃ５ａに対する結合親和性に影響を及ぼすことができる。本発明の様々なＣ５ａ結合性核酸分子の結合解析に基づいて、中心ストレッチおよびそれを形成するヌクレオチドは、個々に、より好ましくはそれらの全体でＣ５ａへのＣ５ａ結合性核酸分子の結合に不可欠である。
【００９７】
好ましい実施形態では、本発明による核酸は単一核酸分子である。さらなる実施形態では、単一核酸分子は、多数の単一核酸分子として、または多数の単一核酸分子種として存在する。
【００９８】
本発明に従った核酸分子は、好ましくはホスホジエステル連結または結合を介して、相互に共有結合的に連結されているヌクレオチドから好ましくはなることが当業者により認められるであろう。
【００９９】
本発明による核酸分子が、原則として、相互にハイブリダイズすることができる２つ以上のそのストレッチまたは（１つもしくは複数の）部分を含むことは本発明の範囲に含まれる。そのようにハイブリダイズすると、二本鎖構造が形成される。当業者であれば、そのようなハイブリダイゼーションが、特に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏの条件下では、起こる場合もあれば、起こらない場合もあることを認識するであろう。また、ハイブリダイゼーションの場合、原則としては少なくとも塩基対合則に基づいてそのようなハイブリダイゼーションしたがって二本鎖構造の形成が起こることができる２つのストレッチの全長にわたっては、そのようなハイブリダイゼーションが必ずしも起こるとは限らない。本明細書で使用する場合、好ましくは、二本鎖構造は、核酸分子または２つ以上の別個の鎖もしくは核酸分子の一本鎖の２つの空間的に別個のストレッチによって形成された構造の一部であり、好ましくはワトソン−クリック塩基対合則に従って塩基対を形成する少なくとも１つ、好ましくは２つ以上の塩基対が存在する。また、当業者であれば、フーグスティーン塩基対等のその他の塩基対合も、そのような二本鎖構造中に存在するかまたはそれを形成する場合があることを認識するであろう。２つのストレッチがハイブリダイズするという特徴が、好ましくは、そのようなハイブリダイゼーションがｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで実際に起こるかどうかに関わらず、そのようなハイブリダイゼーションが２つのストレッチの塩基相補性に起因して起こると推測されることを示すことも認められるはずである。本発明に関連して、そのようなストレッチは、上記で定義したように、ある実施形態においてハイブリダイズすることができる第１の末端ストレッチのヌクレオチドおよび第２の末端ストレッチのヌクレオチドである。
【０１００】
好ましい実施形態では、本明細書で使用する場合、配置という用語は、本明細書に開示する（１つまたは複数の）核酸分子に関連して本明細書に記載する構造的または機能的な特徴または要素の順または順番を意味する。
【０１０１】
当業者であれば、本発明による核酸は、Ｃ５ａおよびＣ５の両方に結合することができることを認識するであろう。この結合の特徴は、核酸の同定のために、Ｃ５ａおよびＣ５の両方の中に存在するＣ５ａの部分が使用されたという事実から派生する。したがって、本発明による核酸は、Ｃ５ａもしくはＣ５のいずれかまたは両方の検出に適している。また、当業者であれば、本発明による核酸分子は、Ｃ５およびＣ５ａの両方に対するアンタゴニストでもあることを認識するであろう。このことから、本発明による核酸は、Ｃ５ａもしくはＣ５のいずれかまたは両方に関連があるか、あるいはそれらによって引き起こされた、いずれかの疾患の治療および予防それぞれに適している。科学的な理論的根拠は、Ｃ５ａおよびＣ５がそれぞれ、多様な疾患および状態それぞれに関与するかまたは関連があることを確立している先行技術から得ることができる。そうした先行技術は、参照により本明細書に組み込まれている。
【０１０２】
本明細書に開示されている本発明のＣ５ａ結合性核酸分子は、Ｃ５との関連においてＣ５ａを認識することが分かっている（実施例１を参照されたい）。したがって、膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の一部である、アナフィラトキシンＣ５ａおよびＣ５ｂへのＣ５の切断がＣ５ａ結合性核酸により阻害されるかどうかを調べた。ＭＡＣは補体カスケードの最終生成物、すなわちＣ５ｂ−９からなる細孔である。ＭＡＣは病原体の細胞膜中に挿入され、細胞質漏出の誘発により病原体を死滅させると考えられる。Ｃ５切断に関するアッセイを、補体依存性のヒツジ赤血球溶血試験を使用することによって達成した。本発明のＣ５ａ結合性分子は溶血を阻害しなかった（実施例６を参照されたい）。本発明のＣ５ａ結合性核酸分子はＣ５切断およびＭＡＣ形成を妨げず、したがって、Ｃ５ａのみの選択的アンタゴニストである。医薬品として使用される場合、本発明のＣ５ａ結合性核酸分子の存在下において、病原体防御に有益であるＭＡＣの形成が損なわれないことから、本発明のＣ５ａ結合性核酸分子は多くの疾患において有利であることができる。
【０１０３】
また、本発明による核酸分子は、本明細書に開示する特定の配列に対して本質的に相同性を示す核酸も含むものとする。実質的に相同性を示すという用語は、相同性が、少なくとも７５％、好ましくは８５％、より好ましくは９０％、最も好ましくは９５％超、９６％超、９７％超、９８％超または９９％超であると理解されたい。
【０１０４】
本発明による核酸中に存在する相同性を示すヌクレオチドの実際のパーセントは、核酸中に存在するヌクレオチドの全数に依存する。パーセントの改変は、核酸中に存在するヌクレオチドの全数に基づくことができる。
【０１０５】
当業者に知られているように、２つの核酸分子間の相同性を決定することができる。この場合、より具体的には、配列比較アルゴリズムは、指定したプログラムのパラメータに基づいて、参照配列と比べた（１つまたは複数の）試験配列についてのパーセント配列相同性を計算するために使用することができる。試験配列は、好ましくは、別の核酸分子に対して相同性を示すはずであるかまたは相同性を示すかどうかを試験すべきであるといわれている核酸分子の配列、および相同性を示す場合には、その程度を試験すべきであるといわれている核酸分子の配列であり、そのような別の核酸分子は、参照配列とも呼ばれている。ある実施形態では、参照配列は、本明細書に記載する核酸分子、好ましくは、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号９０、配列番号１４、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号３７、配列番号５７、配列番号５９、配列番号６０、配列番号９１および配列番号９２のうちのいずれか１つに記載の配列を有する核酸分子である。比較のために配列アラインメントの最適化を、例えば、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎの局地的相同性アルゴリズム（ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、１９８１）、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈの相同性アラインメントアルゴリズム（ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、１９７０）、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎの類似を検索する方法（ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、１９８８）、これらのアルゴリズムのコンピュータによる実行（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．製）、または目視検査によって行うことができる。
【０１０６】
パーセント配列同一性を決定するために適しているアルゴリズムの１つの例が、基本的な局地的アラインメント検索ツール（以下「ＢＬＡＳＴ」）において使用されているアルゴリズムである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０およびＡｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７）を参照されたい。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウエアが、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（以下「ＮＣＢＩ」）から公的に入手可能である。ＮＣＢＩから入手可能なソフトウエア、例えば、ＢＬＡＳＴＮ（ヌクレオチド配列の場合）およびＢＬＡＳＴＰ（アミノ酸配列の場合）を使用して配列同一性を決定する場合に使用するデフォルトパラメータが、ＭｃＧｉｎｎｉｓら（ＭｃＧｉｎｎｉｓら、２００４）に記載されている。
【０１０７】
本発明による核酸は、本明細書で開示されている核酸に対する同一性を特定の程度で有し、およびそのヌクレオチド配列によって定義される核酸も含むものとする。より好ましくは、本発明は、本明細書に開示され、およびそのヌクレオチド配列またはその一部によって定義される核酸に対して少なくとも７５％、好ましくは８５％、より好ましくは９０％、最も好ましくは９５％、９６％、９７％、９８％または９９％を超える同一性を有する核酸分子も含む。
【０１０８】
また、本発明の核酸または本発明による核酸という用語は、好ましくは、核酸または前記一部が、ヒトＣ５ａへの結合に関与する範囲内で、本明細書に開示する核酸配列またはその一部を含む核酸も含む。そのような核酸は、ある実施形態では、本明細書に記載する核酸分子のうちの１つ、またはその誘導体および／もしくは代謝産物であり、そのような誘導体および／または代謝産物は、好ましくは、本明細書に記載する核酸分子と比較して切り詰められた核酸である。切り詰めは、本明細書に開示する核酸のいずれかまたは両方の末端に関してでよい。また、切り詰めは、核酸のヌクレオチドの内部配列に関してでもよく、すなわち、それぞれの５’末端のヌクレオチドと３’末端のヌクレオチドとの間の（１個または複数の）ヌクレオチドに関してでよい。さらに、切り詰めは、本明細書に開示する核酸配列からのわずか１個のヌクレオチドの欠失も含むものとする。また、切り詰めは、（１個または複数の）本発明の核酸の２つ以上のストレッチに関してでもよく、ストレッチは、わずか１ヌクレオチド長であってもよい。本発明による核酸の結合は、当業者であれば、日常的な実験を使用してか、または本明細書に記載する、好ましくは、本明細書の実施例の部分に記載する方法を使用もしくは採用することによって決定することができる。
【０１０９】
本発明による核酸分子は、Ｄ−核酸分子またはＬ−核酸分子のいずれかであってよい。好ましくは、本発明による核酸分子はＬ−核酸分子である。より好ましくは、本発明の核酸分子はスピーゲルマーである。
【０１１０】
また、ある実施形態では、本明細書に記載する核酸分子全体のそれぞれおよびいずれかが、それらの（１つまたは複数の）核酸配列に関して、特定の示された（１つまたは複数の）ヌクレオチド配列に限定されることも本発明の範囲に含まれる。すなわち、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」という用語は、そのような実施形態では、含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）またはからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）を意味すると解釈するものとする。
【０１１１】
また、本発明による核酸は、より長い核酸の一部であり、このより長い核酸は、いくつかの部分を含み、少なくとも１つのそのような部分は、本発明による核酸またはその一部であることも本発明の範囲に含まれる。これらのより長い核酸のその他の（１つまたは複数の）部分は、１つもしくはいくつかのＤ−核酸、または１つもしくはいくつかのＬ−核酸のいずれかであってよい。本発明に関連して、いずれの組合せも使用することができる。より長い核酸のその他の（１つまたは複数の）部分は、単独でかまたは一緒になってのいずれかで、全体または特定の組合せのいずれかとして、結合、好ましくは、Ｃ５ａへの結合とは異なる機能を示すことができる。１つの可能な機能は、例えば、固定化、架橋結合、検出または増幅のため等、その他の分子との相互作用を可能にすることであり、そのようなその他の分子は、好ましくは、Ｃ５ａとは異なる。本発明のさらなる実施形態では、本発明による核酸は、個々の部分または組み合わせた部分として、本発明の核酸のうちのいくつかを含む。また、本発明の核酸のうちのいくつかを含むそのような核酸も、より長い核酸という用語によって包含される。
【０１１２】
本明細書で使用する場合、Ｌ−核酸は、Ｌ−ヌクレオチドからなる、好ましくは、Ｌ−ヌクレオチドから完全になる核酸または核酸分子である。
【０１１３】
本明細書で使用する場合、Ｄ−核酸は、Ｄ−ヌクレオチドからなる、好ましくは、Ｄ−ヌクレオチドから完全になる核酸または核酸分子である。
【０１１４】
核酸および核酸分子という用語を、明確に別段の記載がない限り、互換的に使用する。
【０１１５】
また、別段の記載がない限り、いずれのヌクレオチド配列も、本明細書では、５’→３’方向に記載する。
【０１１６】
好ましくは、本明細書で使用する場合、ヌクレオチドの位置はいずれも、配列、そのようなヌクレオチドを含有するストレッチまたはサブストレッチの５’末端に対して決定または言及する。したがって、第２のヌクレオチドとは、配列、ストレッチおよびサブストレッチそれぞれの５’末端から数えて２番目のヌクレオチドである。また、それに従って、最後から２番目のヌクレオチドとは、配列、ストレッチおよびサブストレッチそれぞれの３’末端から数えて２番目のヌクレオチドである。
【０１１７】
本発明の核酸分子が、Ｄ−ヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、または例えば、ランダムな組合せもしくは少なくとも１個のＬ−ヌクレオチドおよび少なくとも１つのＤ−核酸からなる、定義された配列のストレッチである、両方の組合せからなるかどうかに関わらず、核酸は、（１個もしくは複数の）デオキシリボヌクレオチド、（１個もしくは複数の）リボヌクレオチド、またはそれらの組合せからなることができる。
【０１１８】
核酸分子がリボヌクレオチドおよび２’デオキシリボヌクレオチドの両方からなることも本発明の範囲に含まれる。２’デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを図２２および２３に示す。本発明による核酸分子の配列においてリボヌクレオチドおよび２’デオキシリボヌクレオチドを区別するために、本明細書において以下の参照コードを使用する。
【０１１９】
本発明による核酸分子は２’デオキシリボヌクレオチドからなり、
ｄＧは、２’デオキシ−グアノシン−５’−モノホスフェートであり、
ｄＣは、２’デオキシ−シチジン−５’−モノホスフェートであり、
ｄＡは、２’デオキシ−アデノシン−５’−モノホスフェートであり、
ｄＵは、２’デオキシ−ウリジン５’−モノホスフェートである。
【０１２０】
本発明による核酸分子はリボヌクレオチドからなり、
Ｇは、グアノシン−５’−モノホスフェートであり、
Ｃは、シチジン５’−モノホスフェートであり、
Ａは、アデノシン−５’−モノホスフェートであり、
Ｕは、ウリジン−５’−モノホスフェートである。
【０１２１】
リボヌクレオチド配列モチーフの定義のために、曖昧なヌクレオチドに関してＩＵＰＡＣ略称を以下のように使用する。
Ｓ  強          ＧまたはＣ、
Ｗ  弱          ＡまたはＵ、
Ｒ  プリン      ＧまたはＡ、
Ｙ  ピリミジン  ＣまたはＵ、
Ｋ  ケト        ＧまたはＵ、
Ｍ  イミノ      ＡまたはＣ、
Ｂ  Ａでない    ＣまたはＵまたはＧ、
Ｄ  Ｃでない    ＡまたはＧまたはＵ、
Ｈ  Ｇでない    ＡまたはＣまたはＵ、
Ｖ  Ｕでない    ＡまたはＣまたはＧ、
Ｎ  全て        ＡまたはＧまたはＣまたはＵ。
【０１２２】
本発明の核酸分子をＬ−核酸分子として設計することは、いくつかの理由で好都合である。Ｌ−核酸分子は、天然に存在する核酸の鏡像異性体である。しかし、Ｄ−核酸分子は、水溶液中、ならびに特に、ヌクレアーゼの広範な存在により生物学的系中および生物学的試料中ではあまり安定ではない。天然に存在するヌクレアーゼ、特に動物細胞由来のヌクレアーゼには、Ｌ−核酸を分解する能力はない。このことから、Ｌ−核酸分子の生物学的半減期は、動物およびヒトの身体を含めた、そのような系においては顕著に延長する。Ｌ−核酸分子の分解性がないことにより、ヌクレアーゼによる分解産物が生成されることはなく、したがって、そこから発生する副作用は、動物およびヒトの身体を含めたそのような系の中で観察されない。この側面は、Ｃ５の存在が関与する疾患および／または障害の療法において使用される事実上全てのその他の化合物からＬ−核酸分子を区別する。ワトソンクリック塩基対合とは異なる機構を通して標的分子に特異的に結合するＬ−核酸分子、またはＬ−ヌクレオチドから部分的もしくは完全になるアプタマー、特にアプタマーの標的分子への結合に関与しているアプタマーの部分は、スピーゲルマーとも呼ばれる。アプタマーおよびスピーゲルマーそれ自体は当業者に知られており、とりわけ「Ｔｈｅ  Ａｐｔａｍｅｒ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」（Ｋｌｕｓｓｍａｎｎ編、２００６）に記載されている。
【０１２３】
本発明の核酸分子が、それがＤ−核酸、Ｌ−核酸もしくはＤ，Ｌ−核酸として存在するかどうか、またはそれがＤＮＡもしくはＲＮＡであるかどうかに関わらず、一本鎖または二本鎖の核酸分子として存在し得ることも本発明の範囲に含まれる。典型的には、核酸分子は、その一次配列によって定義された二次構造を示す一本鎖核酸分子であり、したがって、三次構造も形成することができる。しかし、核酸分子はまた、相互に相補性または部分的な相補性である２つの鎖が相互にハイブリダイズしているという意味での二本鎖であってもよい。
【０１２４】
本発明の核酸分子は、修飾することができる。そのような修飾は、核酸分子の単一のヌクレオチドに関連することができ、当技術分野ではよく知られている。そのような修飾の例が、とりわけ、Ｖｅｎｋａｔｅｓａｎら（Ｖｅｎｋａｔｅｓａｎら、２００３）およびＫｕｓｓｅｒ（Ｋｕｓｓｅｒ、２０００）に記載されている。そのような修飾は、核酸分子を構成する個々のヌクレオチドの内の１つ、いくつか、または全ての２’位におけるＨ原子、Ｆ原子またはＯ−ＣＨ３基またはＮＨ２基であってもよい。また、本発明による核酸分子は、少なくとも１個のＬＮＡヌクレオチドを含むことができる。ある実施形態では、本発明による核酸分子は、ＬＮＡヌクレオチドからなる。
【０１２５】
ある実施形態では、本発明による核酸分子は多分割核酸分子であってもよい。本明細書で使用する場合、多分割核酸分子は、少なくとも２つの別々の核酸の鎖からなる核酸分子である。これらの少なくとも２つの核酸の鎖は、機能性の単位を形成し、機能性の単位は、標的分子に対するリガンドであり、好ましくは、Ｃ５ａの本場合では標的分子に対するアンタゴニストである。少なくとも２つの核酸の鎖は、本発明の核酸分子を切断して少なくとも２つの鎖を生成するか、または本発明の完全長の核酸分子の第１の部分に対応する１つの核酸分子および本発明の完全長の核酸分子の別の部分に対応する別の核酸分子を合成することにより、本発明の核酸分子のいずれかから得ることができる。完全長の核酸分子を形成する部分の数に応じて、必要なヌクレオチド配列を有する同数の部分を合成することができる。切断アプローチと合成アプローチとを両方適用して、上記で例示した２つの鎖より多い鎖をもつ多分割核酸分子を生成することができることを認識されたい。換言すれば、少なくとも２つの別々の核酸の鎖は、典型的には、相互に相補的でありハイブリダイズする２つの鎖と異なるが、前記少なくとも２つの別々の核酸の鎖の間にある程度の相補性が存在することがあり、そのような相補性の結果、前記別々の鎖のハイブリダイゼーションが生じることがある。
【０１２６】
最後にまた、本発明による核酸分子の完全に閉鎖した、すなわち、環状の構造も実現されており、すなわち、本発明による核酸分子が、ある実施形態において、好ましくは共有結合により閉鎖され、より好ましくはそのような共有結合が本明細書に開示する本発明の核酸分子またはその任意の誘導体の核酸配列の５’末端と３’末端との間で作製されることもの本発明の範囲に含まれる。
【０１２７】
本発明による核酸分子の結合定数を決定できる可能性は、実施例３および４に記載する方法の使用であり、これにより、本発明による核酸が有望なＫＤ値の範囲を示すという上記の知見が確認される。個々の核酸分子と、本発明ではＣ５ａである標的との間の結合強度を表すための適切な尺度が、いわゆるＫＤ値であり、これは、その決定方法と共に、当業者であれば知っている。
【０１２８】
好ましくは、本発明による核酸が示すＫＤ値は、１μＭ未満である。約１μＭのＫＤ値は、核酸の標的に対する非特異的な結合の特徴であるといわれている。当業者であれば認識するであろうが、本発明による核酸等の化合物群のＫＤ値は、特定の範囲に収まる。約１μＭの上記で言及したＫＤは、ＫＤ値の好ましい上限である。標的に結合する核酸のＫＤの下限は、わずか約１０ピコモルまたはそれ以上であってよい。個々の核酸のＣ５ａに対する結合のＫＤ値が、好ましくは、この範囲に収まることは本発明の範囲に含まれる。好ましい範囲は、この範囲内の任意の第１の数およびこの範囲内の任意の第２の数を選ぶことによって定義することができる。好ましい上のＫＤ値は、２５０ｎＭおよび１００ｎＭであり、好ましい下のＫＤ値は、５０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭおよび１０ｐＭである。より好ましい上のＫＤ値は１０ｎＭであり、より好ましい下のＫＤ値は１００ｐＭである。
【０１２９】
本発明による核酸分子の結合特性に加えて、本発明による核酸分子は、この場合Ｃ５ａである各標的分子の機能を阻害する。Ｃ５ａの機能の阻害（例えば既に記載した各受容体の刺激）は、本発明による核酸分子のＣ５ａへの結合により、および本発明による核酸分子とＣ５ａとの複合体の形成により達成される。核酸分子とＣ５ａとのそのような複合体は、通常はＣ５ａによって、すなわち本発明の核酸分子との複合体中に存在しないＣ５ａによって刺激される受容体を刺激することができない。したがって、本発明の核酸分子による受容体機能の阻害は、Ｃ５ａによって刺激され得る各受容体から独立しているが、本発明の核酸分子による、Ｃ５ａによる受容体の刺激の予防から生じる。
【０１３０】
本発明による核酸分子の阻害定数を決定できる可能性は、実施例５に記載する方法の使用であり、これにより、本発明による核酸が、治療的処置スキームにおける前記核酸の使用を可能にする有望な阻害定数を示すという上記の知見が確認される。この場合Ｃ５ａである標的と各受容体との相互作用に関する個々の核酸分子の阻害効果の強度を表すのに適した尺度は、いわゆる５０％阻害濃度（略語：ＩＣ５０）であり、それ自体、同様にその決定方法も当業者に知られている。
【０１３１】
好ましくは、本発明による核酸分子によって示されるＩＣ５０値は１μＭ未満である。約１μＭのＩＣ５０値は、核酸分子による標的機能の非特異的な阻害に特徴的であるといわれている。当業者によって認められるように、本発明による核酸分子等の一群の化合物のＩＣ５０値は特定の範囲内にある。上記で述べた約１μＭのＩＣ５０は、ＩＣ５０値についての好ましい上限である。標的結合性核酸分子のＩＣ５０についての下限はわずか約１０ピコモルでもよく、またはより高くてもよい。Ｃ５ａと結合する個々の核酸のＩＣ５０値が好ましくはこの範囲内であることは、本発明の範囲に含まれる。好ましい範囲は、この範囲内の任意の第１の数およびこの範囲内の任意の第２の数を選ぶことによって定義することができる。好ましい上のＩＣ５０値は２５０ｎＭおよび１００ｎＭであり、好ましい下のＩＣ５０値は５０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、１００ｐＭおよび１０ｐＭである。より好ましい上のＩＣ５０値は５ｎＭであり、より好ましい下のＩＣ５０値は１００ｐＭである。
【０１３２】
本発明による核酸分子は、標的分子に依然として結合できるならば、いずれの長さであってもよい。当技術分野では、本発明による核酸の好ましい長さがあることが認識されるであろう。典型的には、その長さは、１５〜１２０ヌクレオチド長である。当業者であれば、本発明による核酸については、１５と１２０との間の任意の整数の長さが可能であることを認識するであろう。本発明による核酸の長さのより好ましい範囲は、約２０〜１００ヌクレオチド長、約２０〜８０ヌクレオチド長、約２０〜６０ヌクレオチド長、約３８〜４４ヌクレオチド長、および約４０ヌクレオチド長である。
【０１３３】
本明細書の核酸分子が、好ましくは、高分子量部分であり、かつ／または好ましくは、とりわけ、動物の身体、好ましくはヒトの身体内における滞留時間に関する核酸分子の特徴を改変することを可能にする部分を含むことは本発明の範囲に含まれる。そのような改変の特に好ましい実施形態が、本発明による核酸のＰＥＧ化およびＨＥＳ化である。本明細書で使用する場合、ＰＥＧはポリ（エチレングリコール）を、ＨＥＳはヒドロキシエチルデンプンを表す。好ましくは、本明細書で使用する場合、ＰＥＧ化は、本発明による核酸分子の改変であり、そのような改変は、本発明による核酸分子につながっているＰＥＧ部分からなる。好ましくは、本明細書で使用する場合、ＨＥＳ化は、本発明による核酸分子の改変であり、そのような改変は、本発明による核酸分子につながっているＨＥＳ部分からなる。これらの改変、およびそのような改変を使用する核酸分子の改変プロセスが、欧州特許出願第ＥＰ１  ３０６  ３８２号に記載されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれている。
【０１３４】
ＰＥＧがそのような高分子量部分である場合には、分子量は、好ましくは、約２０，０００〜約１２０，０００Ｄａ、より好ましくは、約３０，０００〜約８０，０００Ｄａであり、最も好ましくは、約４０，０００Ｄａである。ＨＥＳがそのような高分子量部分である場合、分子量は、好ましくは約５０ｋＤａ〜約１０００ｋＤａであり、より好ましくは約１００ｋＤａ〜約７００ｋＤａであり、最も好ましくは２００ｋＤａ〜５００ｋＤａである。ＨＥＳは、０．１〜１．５の、より好ましくは１〜１．５のモル置換を示し、およびおよそ０．１〜１５の、好ましくはおよそ３〜１０のＣ２／Ｃ６比として表される置換グレードを示す。ＨＥＳの改変プロセスは、例えば、ドイツ特許出願第ＤＥ１  ２００４  ００６  ２４９．８号に記載されており、その開示全体が、参照により本明細書に組み込まれている。
【０１３５】
改変は、原則として、本発明の核酸分子に対して、その任意の位置において作製することができる。好ましくは、そのような改変は、核酸分子の５’末端ヌクレオチド、３’末端ヌクレオチドおよび／または５’ヌクレオチドと３’ヌクレオチドとの間の任意のヌクレオチドのいずれかに対して作製される。
【０１３６】
改変、ならびに好ましくはＰＥＧ部分および／またはＨＥＳ部分は、本発明の核酸分子に、直接にかまたは間接にのいずれかで、好ましくは間接にリンカーを通してつなげることができる。また、本発明による核酸分子が、１つまたは複数の改変、好ましくは、１つまたは複数のＰＥＧ部分および／またはＨＥＳ部分を含むことも本発明の範囲に含まれる。ある実施形態では、個々のリンカー分子が、２つ以上のＰＥＧ部分またはＨＥＳ部分を、本発明による核酸分子につなげる。本発明に関連して使用するリンカーはそれ自体が、直鎖状または分枝状のいずれかであってよい。この種のリンカーは、当業者には知られており、国際特許出願第ＷＯ２００５／０７４９９３号およびＷＯ２００３／０３５６６５号にさらに記載されている。
【０１３７】
好ましい実施形態では、リンカーは、生分解性リンカーである。生分解性リンカーによって、とりわけ、動物の身体、好ましくはヒトの身体内における滞留時間に関する本発明による核酸分子の特徴を、本発明による核酸分子からの放出の改変により改変することが可能になる。生分解性リンカーの使用によって、本発明による核酸分子の滞留時間をより良好に制御することが可能となる場合がある。そのような生分解性リンカーの好ましい実施形態が、これらに限定されないが、国際特許出願第ＷＯ２００６／０５２７９０号、第ＷＯ２００８／０３４１２２号、第ＷＯ２００４／０９２１９１号および第ＷＯ２００５／０９９７６８号に記載されている生分解性リンカーである。
【０１３８】
改変または改変基が、生分解性の改変であり、生分解性の改変は、本発明の核酸分子に、直接にかまたは間接にのいずれかで、好ましくはリンカーを通してつなげることができることは本発明の範囲に含まれる。生分解性の改変によって、とりわけ、動物の身体、好ましくはヒトの身体内における滞留時間に関する本発明による核酸分子の特徴を、本発明による核酸分子からの放出または分解の改変により改変することが可能になる。生分解性リンカーの使用によって、本発明による核酸分子の滞留時間をより良好に制御することが可能となる場合がある。そのような生分解性リンカーの好ましい実施形態が、これらに限定されないが、国際特許出願第ＷＯ２００２／０６５９６３号、第ＷＯ２００３／０７０８２３号、第ＷＯ２００４／１１３３９４号および第ＷＯ２０００／４１６４７に、好ましくは、第ＷＯ２０００／４１６４７号では、１８頁、４〜２４行に記載されている。
【０１３９】
上記に記載した修飾以外にも、他の修飾を使用して、本発明による核酸分子の特徴を修飾することができ、このような他の修飾は、タンパク質、コレステロール等の脂質、アミラーゼ、デキストラン等の糖鎖の群から選択され得る。
【０１４０】
いずれの説にも縛られる意図はないが、好ましくは生理的に許容されるポリマー、より詳細には本明細書に開示するポリマーの１つまたはいくつか等の高分子量部分で本発明による核酸分子を修飾することにより、そのような修飾された本発明の核酸分子の、本発明の修飾核酸分子が投与される動物またはヒトの身体からの排出動態が変化する。より詳細には、そのような修飾をされた本発明の核酸分子の分子量が増加し、特にＬ型の時に、すなわちＬ−核酸分子であるときに本発明の核酸分子が代謝にさらされないため、動物の身体、好ましくは哺乳動物の身体、より好ましくはヒトの身体からの排出が減少する。典型的には排出が腎臓を介して行われるので、本発明者らは、こうして修飾された核酸分子の糸球体ろ過率がこの種の高分子量修飾を有さない核酸分子と比較して著しく低下、その結果、動物の身体における修飾核酸分子の滞留時間が増加すると推測している。それに関連して、そのような高分子量修飾にも関わらず、本発明による核酸分子の特異性が、有害な方法で影響を受けないことは特に注目に値する。この限りでは、本発明による核酸分子は、とりわけ、持続性放出をもたらす医薬製剤が本発明による核酸分子の持続性放出をもたらすことが必ずしも必要でないような、薬学的活性化合物から通常は予想できない驚くべき特徴を有する。むしろ、高分子量部分を含む修飾された形態の本発明による核酸分子は、その修飾のため、すでに持続性放出製剤から放出されたかのように働くので、それ自体すでに持続性放出製剤として使用することができる。この限りでは、本明細書に開示する本発明による核酸分子の（１つまたは複数の）修飾およびこうして修飾された本発明による核酸分子ならびにそれらを含む任意の組成物は、独特の、好ましくはその調節された薬物動態および生体内分布をもたらすことができる。これには、動物およびヒトの身体の循環ならびにそのような動物およびヒトの組織への分布における滞留時間も含まれる。そのような修飾は、特許出願ＷＯ２００３／０３５６６５にさらに記載されている。
【０１４１】
しかしまた、本発明による核酸分子が、いずれの修飾、特にＰＥＧまたはＨＥＳ等の高分子量修飾も含まないことも本発明の範囲に含まれる。そのような実施形態は、本発明による核酸分子が身体内のいずれかの標的の臓器もしくは組織に対して優先的な分布を示す場合または投与後に身体からの本発明による核酸分子の急速なクリアランスが望まれる場合には特に好ましい。身体内のいずれかの標的の臓器または組織に対して優先的な分布プロファイルを示す、本明細書に開示する本発明による核酸分子によって、核酸分子の全身濃度は低く保ちながら、標的組織において有効な局所濃度を確立することが可能となるであろう。これによって、低い用量を使用することが可能になり、これは、経済的な観点から有益であるのみならず、また、その他の組織の核酸分子に対する不必要な曝露も減少し、したがって、副作用の潜在的なリスクが低下するであろう。本発明による核酸またはそれを含む医薬品を使用するｉｎ  ｖｉｖｏ画像診断または特異的な治療投与が必要な場合には、とりわけ、投与後の身体からの本発明による核酸分子の急速なクリアランスが望まれるだろう。
【０１４２】
本明細書では本発明による核酸とも呼ぶ本発明の核酸、および／または本発明によるアンタゴニストを、医薬品を生成または製造するために使用することができる。そのような医薬品、または本発明による医薬組成物は、本発明の核酸のうちの少なくとも１つを、場合によりさらなる薬学的に活性な化合物と共に含有し、本発明の核酸はそれ自体が、好ましくは、薬学的に活性な化合物として作用する。そのような医薬品は、好ましい実施形態では、少なくとも薬学的に許容できる担体を含む。そのような担体は、例えば、水、緩衝剤、ＰＢＳ、グルコース溶液、好ましくは、５％グルコース塩平衡化溶液、デンプン、糖、ゼラチンまたは任意のその他の許容できる担体物質であってよい。そのような担体は一般に当業者に知られている。また、当業者であれば、本発明の医薬品のまたはそれに関するいずれの実施形態、使用および態様も、本発明の医薬組成物に適用可能であり、逆もまた同じであることを認識するであろう。
【０１４３】
治療および／または予防のために、本発明によるかまたは本発明に従って調製した核酸、医薬組成物および医薬品を使用することができる適応症、疾患および障害は、それぞれの発症機構においてＣ５ａが直接的にかまたは間接的にのいずれかで関与した結果生じる。
【０１４４】
Ｃ５ａの炎症部位における局所放出の結果、力強い炎症促進性の刺激が生じる。したがって、Ｃ５ａの中和が、多くの急性または慢性の状態、例えば免疫複合体関連疾患全般（Ｈｅｌｌｅｒら、１９９９）；例えば、アルツハイマー病における神経変性および炎症（ＢｏｎｉｆａｔｉおよびＫｉｓｈｏｒｅ、２００７）において有益な場合があり、補体Ｃ５ａ受容体アンタゴニストであるＰＭＸ２０５は、行動学的パラメータならびに線維状沈着物および活性化グリア等の病理学的マーカーの低下を改善した（Ｆｏｎｓｅｃａら、２００９）。Ｃ５ａが関与する、その他の炎症性疾患は、全身性エリテマトーデス（Ｊａｃｏｂら、２０１０ａ；Ｊａｃｏｂら、２０１０ｂ）、喘息（Ｋｏｈｌ、２００１）；外傷の二次的損傷（Ｙａｏら、１９９８）；敗血症性ショック（Ｈｕｂｅｒ−Ｌａｎｇら、２００１）；全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）；多臓器不全（ＭＯＦ）；急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）；炎症性腸症候群（ＩＢＤ）（Ｗｏｏｄｒｕｆｆら、２００３）；免疫複合体媒介性腎臓疾患（Ｗａｎｇ、２００６）、例えば、全身性エリテマトーデスの合併症として（Ｍａｎｄｅｒｓｏｎら、２００４）；感染およびその結果（例えば血管漏出または歯周炎の二次的な骨喪失などの骨喪失（Ｂｒｅｉｖｉｋら、２０１１））；重度の熱傷（Ｐｉｃｃｏｌｏら、１９９９）；とりわけ臓器移植後臓器機能障害（Ｌｅｗｉｓら、２００８）もしくは線維症および／または、例えば二次的損傷をもたらす心臓、脳または肺の梗塞後の臓器の再構築をもたらす恐れのある、心臓、脾臓、膀胱、膵臓、胃、肺、肝臓、腎臓、肢、脳、骨格筋または腸等の臓器の再灌流傷害（Ｒｉｌｅｙら、２０００）（Ｇｕｅｌｅｒら、２００８；Ｋｈａｎら、２０１１；ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｐａｌｓら、２０１０；Ｚｈｅｎｇら、２００８）；乾癬（Ｂｅｒｇｈら、１９９３）；心筋炎；多発性硬化症（Ｍｕｌｌｅｒ−Ｌａｄｎｅｒら、１９９６）；発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、溶血、血栓塞栓症（Ｈｉｌｌｍｅｒｎら、２００７）、ならびに関節リウマチ（ＲＡ）（Ｗｏｏｄｒｕｆｆら、２００２）腎細胞癌の切除、および例えば骨関節炎または遅延治癒をもたらす骨破壊を促進する破骨細胞の活性化である。また、補体Ｃ５ａは、加齢黄斑変性においてはドルーゼンの量の増加として見出されており、ＶＥＧＦ発現の増加をもたらし、視覚障害および失明をもたらす恐れがある脈絡膜血管新生を促進することが示されている（Ｎｏｚａｋｉら、２００６）。
【０１４５】
補体系の活性化により、マウスモデルにおける脳性マラリアの発症に対する感受性を高めることも示されている。Ｃ５ａまたはＣ５ａ受容体に対する免疫を有するマウス由来の血清を使用する、Ｃ５ａまたはＣ５ａ受容体の遮断により、脳性マラリアに対する耐性が付与された。したがって、Ｃ５Ｃ５ａ軸の遮断は、マラリア、とりわけヒトにおける脳性マラリアの発症の予防に有益であることができる（Ｐａｔｅｌら、２００８）。
【０１４６】
補体が関与する自己免疫炎症性疾患が最近になって総説されている（Ｃｈｅｎら、２０１０）。可能なおよびすでに追求されている補体標的療法について、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙに専門家が総説している（ＲｉｃｋｌｉｎおよびＬａｍｂｒｉｓ、２００７）。２０１１年に、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅに最新情報が公開された（Ｅｈｒｎｔｈａｌｌｅｒら、２０１１）。
【０１４７】
もちろん、本発明によるＣ５ａ結合性核酸は、ヒトＣ５ａと相互作用するかまたはそれに結合するので、当業者であれば一般に、本発明によるＣ５ａ結合性核酸を、本明細書に記載するヒトおよび動物のいずれかの疾患の治療、予防および／または診断のために容易に使用することができることを理解するであろう。それに関連して、本発明による核酸分子を、本明細書に記載する疾患、障害または状態のうちのいずれかの治療および予防のために、そのような疾患、障害および状態の根拠をなす作用様式に関わらず使用することができることを認識されたい。
【０１４８】
以下に、いずれの説にも縛られる意図はないが、本発明による核酸分子を、種々の疾患、障害および状態に関して使用することについての理論的根拠を提供し、したがって、請求している本発明による核酸分子の治療、予防および診断への適用を妥当なものとする。いずれの不必要な反復も回避するために、それに関連して概説するように、Ｃ５ａ−Ｃ５ａ受容体の軸が関与することから、前記軸は、本発明による核酸分子によって対処することができ、したがって、請求している治療、予防および診断の効果が達成されることを認識されたい。患者の疾患、障害および状態の詳細な事項、ならびにそれに関連して記載する治療計画の詳細のいずれもが、本出願の好ましい実施形態の対象となることができることもさらに認識されたい。
【０１４９】
骨髄由来サプレッサー（略語：ＭＤＳ）細胞は、３０年を超える昔に癌患者で最初に観測され、その抗腫瘍免疫の妨害者としての役割が今になって評価されている。分化の中間段階で捕捉された正常な骨髄細胞の異種集団であるＭＤＳ細胞は、実質的には全ての癌患者において血液、リンパ腺中におよび腫瘍部位に蓄積する。健康な個体では、これらの細胞はマクロファージ、樹状細胞および好中球に分化するが、腫瘍は、免疫前駆細胞の分化を妨害するいくつかの因子を分泌する（Ｏｓｔｒａｎｄ−Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ、２００８）。健康なマウスの末梢血および脾臓から単離したＭＳＤ細胞について示すように、ＭＤＳ細胞はその表面上に、その成熟対応物である顆粒球および単球のＣ５ａ受容体と同程度（大量発現）までＣ５ａ受容体を発現する。さらに担癌マウスでは、ＭＤＳ細胞はＣ５ａ受容体を発現するが、腫瘍に関連するＭＳＤ細胞の表面上での発現レベルは、末梢血および脾臓におけるＭＳＤ細胞上に比べて低い。Ｍａｒｋｉｅｗｓｋｉらにより示されるように、腫瘍に関連する細胞にＣ５ａ受容体が内部移行されることから、Ｃ５ａ受容体アンタゴニストはＭＳＤ細胞の表面上のＣ５ａ受容体の機能を遮断することができ、腫瘍増殖の減少をもたらした（Ｍａｒｋｉｅｗｓｋｉら、２００８）。Ｃ５ａはまた、特定の免疫疾患を患う患者における腫瘍監視およびＮＫ機能障害への補体の悪影響についての説明を提供するナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）機能のサプレッサーとしても作用する（Ｌｉら、２０１２；Ｍｉｎら、２０１２）。
【０１５０】
したがって、治療および／または予防のために、本発明による医薬品を使用することができる疾患および／または障害および／または疾患状態として、これらに限定されないが、腫瘍が関連した疾患および／または障害および／または疾患状態が挙げられる。
【０１５１】
好ましい実施形態では、腫瘍（ｔｕｍｏｒ）または腫瘍（ｔｕｍｏｕｒ）は、細胞の異常な増殖（腫瘍性と命名される）により形成される膨化または病変に関する名称である。腫瘍は良性、前悪性または悪性の腫瘍であることできる。さらに、腫瘍は固体腫瘍であることができ、好ましくは癌腫（ｃａｒｃｉｎｉｎｏｍａ）、肉腫（ｓａｒｃｏｍａａ）、アオテオーマ（ａｏｔｅｏｍａ）、線維肉腫および骨軟骨腫（ｃｈｏｎｄｒｏｓｏｍａ）であることができる。
【０１５２】
特に本発明による医薬品または核酸分子により治療され得る腫瘍は、好ましくは、内分泌系、眼、消化管、生殖系、造血系（混合腫瘍および胚芽腫を含む）、乳腺、神経系、呼吸器系、骨格、皮膚、軟組織、排尿系の腫瘍を含む群から選択される腫瘍である。
【０１５３】
好ましくは、これらの腫瘍は、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、骨肉腫、膠芽腫、黒色腫、小細胞肺癌および結腸直腸癌を含む群から選択される。
【０１５４】
本発明者らによる核酸をそれぞれ含有する医薬品および医薬組成物を、そのように治療のために使用することができることは本発明の範囲に含まれる。
【０１５５】
さらなる実施形態では、医薬品は、腫瘍の治療のために薬学的に活性な薬剤をさらに含む。そのようなさらなる薬学的に活性な化合物は、これらに限定されないが、とりわけ、抗腫瘍性の活性物質として知られているもの、アルキル化剤、代謝拮抗剤、血管新生阻害剤、有糸分裂阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、細胞シグナル伝達の阻害剤、ホルモン、抗体、免疫抱合体および融合タンパク質である。
【０１５６】
その他の薬学的に活性な化合物は、これらに限定されないが、とりわけ、ブレオマイシン、ラルチトレキセドおよびペメトレキセド等のチミジル酸合成酵素（ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｓｙｎｔｈａｓｅ）の阻害剤、Ｌ−アスパラギナーゼ、ミルテホシン（Ｍｉｌｔｅｆｏｓｉｎ）およびアナグレイド等の酵素、ボルテゾミブ等のプロテアソームの阻害剤として知られているものである。
【０１５７】
さらに、本発明による医薬品を、慢性閉塞性（ｏｂｔｒｕｃｔｉｖｅ）の肺疾患の治療および／または予防に使用することができる。
【０１５８】
慢性閉塞性肺疾患（略語：ＣＯＰＤ）は、肺からの気流の持続的な閉塞によって特徴付けられる肺の病気である。ＣＯＰＤは、正常な呼吸を妨げ、完全に可逆性でない、診断が不十分で生命を脅かす肺病である。ＣＯＰＤは少数の肺疾患を含み、最も共通なのは、慢性気管支炎および肺気腫である。ＣＯＰＤを患う多くの人々は、これらの疾患の両方を有する。肺気腫は、気道の先端の肺胞に対する損傷であり、これは身体が必要とする酸素を取り込むことを困難にする。慢性気管支炎中に、気道は炎症を起こし、赤くなり、粘着性の粘液を過剰に作る。気道の壁は腫大し、空気が通過するのを部分的に遮断する。
【０１５９】
好中球はＣ５ａ勾配へ引き付けられ、病原体を死滅させるためにスーパーオキシドラジカルを放出し、炎症部位で複合グルクロニド抱合体を加水分解するためにベータ−グルクロニダーゼを放出する。しかし、好中球が無菌の炎症部位、例えば感染、発作もしくは臓器移植後の再灌流部位に、または自己免疫疾患、アルツハイマー病および以下に列挙されている他のものの場合に動員される場合、好中球の貴重な防御機構は身体に損傷を与える可能性がある。
【０１６０】
その結果、非常に高いＣ５ａ濃度により、とりわけ、敗血症中に現れるように、局所的にのみ上昇しない場合に、（臓器障害をもたらす）好中球の全身的活性化、それに続く、好中球の細胞表面上でのＣ５ａ受容体発現の低下による消耗および失活がもたらされる。このことにより、患者は、患者の身体中に存続する病原体に対してさらに脆弱になる（Ｈｕｂｅｒ−Ｌａｎｇら、２００２）。
【０１６１】
（分化したＢＡＦ−３細胞を使用する走化性アッセイによって明らかになるように）その受容体（ＣＤ８８）に対するＣ５ａ媒介性効果についても抑制性があるＣ５ａ結合性核酸は、したがって、Ｃ５ａシグナル伝達の上記結果を遮断する可能性があり、異常なＣ５ａシグナル伝達が関与する多くの疾患および状態において医薬品の一部としての有益性を証明することができた。これらの状態の内の１つは複数菌による敗血症である。敗血症におけるＣ５ａシグナル伝達の有害な役割についての証拠を収集している豊富な本文の文献がある（Ｗａｒｄ、２０１０ｂ）。盲腸結紮穿孔（ＣＬＰ）の研究において、本発明による核酸は、マウスの生存期間および臓器機能パラメータを改善することが発見された。ＣＬＰは、複数菌による敗血症を対象とする十分に確立された齧歯動物モデルである。最近では、盲腸結紮穿孔により誘発される敗血症における補体Ｃ５ａの役割が、野生型およびＣ５欠損マウスにおいて調べられた（Ｆｌｉｅｒｌら、２００８）。Ｃ５−／−マウスは野生型マウスと比較して生存期間の優位性を有していなかったが、野生型マウスと比較した場合、血液感染性細菌が４００倍に増加することが示された。これらの効果は、Ｃ５（−／−）マウスに終末膜侵襲複合体（ＭＡＣ）を構築する能力がないことと関連した。著者らは、敗血症中において、Ｃ５ａまたは（Ｃ５よりもむしろ）その受容体の選択的な遮断がより期待できる戦略であると思われると結論付ける。なぜならば、Ｃ５ａ遮断により、ＭＡＣは依然として形成されるがＣ５ａの有害効果が予防されるからである。一致するように、Ｃ５ａ受容体であるＣＤ８８およびＣ５Ｌ２の遺伝的欠損、ＣＤ８８の薬理学的遮断、またはＣ５ａの薬理学的中和は、盲腸結紮穿孔（ＣＬＰ）により誘発される敗血症において保護的であることが明らかとなっている（Ｃｚｅｒｍａｋら、１９９９；Ｒｉｔｔｉｒｓｃｈら、２００８）。ヒト全血液を使用する髄膜炎菌性敗血症のトランスレーショナルｉｎ  ｖｉｖｏモデルは、選択的Ｃ５ａ阻害は（Ｃ５切断の遮断とは対照的に）、細菌排除を含むことなく、潜在的に有害な白血球活性化を予防することを確認する（Ｓｐｒｏｎｇら、２００３）。Ｃ５ａの阻害により、全身性炎症、凝固およびその他の発症機構を制限することによって実験敗血症における多臓器不全が予防される（Ｈｕｂｅｒ−Ｌａｎｇら、２００１；Ｈｕｂｅｒ−Ｌａｎｇら、２００２；Ｌａｕｄｅｓら、２００２；Ｒｉｔｔｉｒｓｃｈら、２００８；Ｗａｒｄ、２０１０ａ）。本発明による核酸はＣ５に結合するが、ＭＡＣ形成に必要であるＣ５ａおよびＣ５ｂへのＣ５切断を遮断しない。むしろ、本発明の核酸はタンパク質Ｃ５を占有し、核酸はまた、終末血漿中半減期を増加させ、および例えばＣ５転換酵素によりＣ５ａが一旦遊離されるとＣ５ａの作用を選択的に遮断する。敗血症モデルでは、本発明による核酸は炎症を限定し、多臓器不全および浮腫形成を予防し、ならびに生存期間を改善することが明らかとなっている。
【０１６２】
敗血症患者は、急性肺損傷（ＡＬＩ）および急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）により機械的人工呼吸を必要とすることが多い。ＡＬＩ／ＡＲＤＳは、肺炎における地域感染または院内感染による肺の直接感染からも発症し得る。ＡＬＩ／ＡＲＤＳにおけるＣ５ａの病原的役割に関する十分な証拠がある。Ｃ５ａにより誘発される組織因子発現は、ＡＬＩ／ＡＲＤＳ患者の肺胞内での線維素沈着の一因となる（Ｋａｍｂａｓら、２００８）。Ｃ５−／−マウスでは実験ＡＬＩが軽減され、肺におけるＣ５ａ中和またはＣ５ａＲのサイレンシングにより炎症反応が抑制され、および血管漏出が予防される（ＢｏｓｍａｎｎおよびＷａｒｄ、２０１２）。
【０１６３】
さらに、治療および／または予防のために、本発明による医薬品を使用することができる他の疾患および／または障害および／または疾患状態として、これらに限定されないが、自己免疫性疾患、例として、関節リウマチ（略語：ＲＡ）、強直性脊椎炎（略語：ＡＳ）、全身性エリテマトーデス（略語：ＳＬＥ）、多発性硬化症（略語：ＭＳ）、乾癬、円形脱毛症、温式および冷式の自己免疫性溶血性貧血（略語：ＡＩＨＡ）、非典型溶血性尿毒症、悪性貧血、急性炎症性疾患、自己免疫性副腎炎、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー（略語：ＣＩＤＰ）、チャーグ−ストラウス症候群、コーガン症候群、クレスト症候群、尋常性天疱瘡および落葉状天疱瘡、水疱性類天疱瘡、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、膵炎、腹膜炎、乾癬性関節炎、リウマチ熱、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、強皮症、セリアック病、全身硬直症候群、高安動脈炎、一過性グルテン不耐性、自己免疫性ブドウ膜炎、白斑、多発性軟骨炎、疱疹状皮膚炎（略語：ＤＨ）またはジューリング病、線維筋痛症、グッドパスチャー症候群、ギラン−バレー症候群、橋本甲状腺炎、自己免疫性肝炎、炎症性腸疾患（略語：ＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、重症筋無力症、免疫複合体障害、糸球体腎炎、結節性多発動脈炎、抗リン脂質症候群、多腺性自己免疫性症候群、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑（略語：ＩＴＰ）、蕁麻疹、自己免疫性不妊、若年性関節リウマチ、サルコイドーシス、自己免疫性心筋症、ランバート−イートン症候群、硬化性苔癬、ライム病、グレーブス病、ベーチェット病、メニエル病、反応性の関節炎（ライター症候群）；ＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＣＭＶ等のウイルス、またはリーシュマニア、リケッチア、クラミジア、コクシエラ、マラリア原虫、ブルセラ、マイコバクテリア、リステリア、トキソプラズマおよびトリパノソーマ等の細胞内寄生生物による感染；外傷の二次的損傷；局所性炎症、ショック、アナフィラキシー性ショック、熱傷、敗血症性ショック、出血性ショック、全身性炎症反応症候群（略語：ＳＩＲＳ）、多臓器不全（略語：ＭＯＦ）、喘息およびアレルギー；側頭動脈炎、血管炎、血管漏出等の血管炎、およびアテローム動脈硬化；急性中枢神経系傷害、心筋炎、皮膚筋炎、歯肉炎、急性呼吸不全、慢性閉塞性肺疾患、脳卒中、心筋梗塞、再灌流傷害、認知神経科学的機能不全、熱傷；ブドウ膜炎、加齢黄斑変性（略語：ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症（略語：ＤＲ）、糖尿病性黄斑浮腫（略語：ＤＭＥ）、眼類天疱瘡、角結膜炎、スティーブン−ジョンソン症候群およびグレーブス眼症等の炎症性眼疾患；全身性疾患の局所的所見、血管構造の炎症性疾患、急性中枢神経系傷害、１型および２型の糖尿病、糖尿病所見、ＳＬＥ、ならびに眼、脳、血管構造、心臓、肺、腎臓、肝臓、消化管、脾臓、皮膚、骨、リンパ系、血液もしくはその他の臓器系におけるリウマチ性疾患、冠状動脈バイパスグラフト（略語：ＣＡＢＧ）、オフポンプ冠状動脈バイパスグラフト（略語：ＯＰＣＡＢＧ）、最小限侵襲直接冠状動脈バイパスグラフト（略語：ＭＩＤＣＡＢ）、経皮経管的冠状動脈血管形成術（略語：ＰＴＣＡ）、血栓溶解、臓器移植および血管クランプ手術の予防および／または支援および／または術後治療のため；肝臓、腎臓、腸、肺、心臓、皮膚、肢、角膜、ランゲルハンス島、骨髄、血管および膵臓等の移植された臓器もしくは移植しようとする臓器の臓器損傷の予防のため、または移植された臓器についての移植片拒絶の治療における使用のため；胎児拒絶が挙げられる。
【０１６４】
治療および／または予防のために、核酸を使用することができる種々の疾患および障害を、以下のようにグループ化することができる。
【０１６５】
１．  自己免疫性／炎症性の疾患
１．１．  アレルギー、敗血症性ショック、外傷の二次的損傷、温式および冷式の自己免疫性溶血性貧血（略語：ＡＩＨＡ）、全身性炎症反応症候群（略語：ＳＩＲＳ）、出血性ショック、糖尿病１型、糖尿病２型、糖尿病所見、びまん性強皮症、歯周炎およびそれに関連する骨喪失、多発性軟骨炎、多腺性自己免疫性症候群、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（略語：ＳＬＥ）およびその所見、反応性の関節炎（ライター症候群としても知られている）が含まれる、全身性の自己免疫性および／または炎症性の疾患
【０１６６】
１．２．  クローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、一過性グルテン不耐性、炎症性腸疾患（略語：ＩＢＤ）、膵炎、消化管のアレルギー性過敏症、壊死性腸炎が含まれる、消化管の自己免疫性および／または炎症性の疾患。
【０１６７】
１．３．  乾癬、蕁麻疹、皮膚筋炎、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、水疱性類天疱瘡、モルフェア／線状強皮症、白斑、疱疹状皮膚炎（略語：ＤＨ）またはジューリング病、硬化性苔癬が含まれる、皮膚の自己免疫性および／または炎症性の疾患。
【０１６８】
１．４．  血管炎（好ましくは、側頭動脈炎）、血管炎、ヘノッホシェーンライン紫斑病、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連血管炎、血管漏出、リウマチ性多発筋痛症、アテローム動脈硬化、チャーグ−ストラウス症候群、高安動脈炎、グッドパスチャー症候群（＝抗糸球体基底膜疾患；多くの場合、腎臓糸球体および肺に影響を及ぼす）、糸球体腎炎、結節性多発動脈炎、ベーチェット病が含まれる、血管構造の自己免疫性および／または炎症性の疾患。
【０１６９】
１．５．  多発性硬化症（略語：ＭＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー（略語：ＣＩＤＰ）、認知神経科学的機能不全、全身硬直症候群、ギラン−バレー症候群、重症筋無力症、ランバート−イートン症候群、視神経脊髄炎（デビック症候群）が含まれる、神経系の自己免疫性および／または炎症性の疾患。
【０１７０】
１．６．  関節リウマチ、眼、脳、肺、腎臓、心臓、肝臓、消化管、脾臓、皮膚、骨、リンパ系、血液またはその他の臓器におけるリウマチ性疾患、強直性脊椎炎（略語：ＡＳ）、サルコイドーシス、歯周炎および関連する骨喪失、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、乾癬性関節炎、リウマチ熱、多発性軟骨炎、線維筋痛症、若年性関節リウマチ、ライム病、反応性の関節炎（ライター症候群としても知られている）が含まれる、筋肉、骨格の自己免疫性および／または炎症性の疾患。
【０１７１】
１．７．  コーガン症候群、自己免疫性副腎炎、免疫複合体障害、メニエル病、局所性炎症、円形脱毛症、急性炎症性疾患、原発性胆汁性肝硬変、シェーグレン症候群、強皮症、びまん性強皮症、クレスト症候群、モルフェア／線状強皮症、自己免疫性ブドウ膜炎、橋本甲状腺炎（自己免疫性の甲状腺破壊）、グレーブス病、自己免疫性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、糸球体腎炎、腹膜炎、抗リン脂質症候群、特発性肺線維症、腎線維症、肝線維症、自己免疫性不妊、胎児拒絶または流産、および移植片対宿主病が含まれる、その他の自己免疫性および／または炎症性の疾患。
【０１７２】
２．  ブドウ膜炎、結膜炎、加齢黄斑変性（略語：ＡＭＤ）、糖尿病性網膜症（略語：ＤＲ）、糖尿病性黄斑浮腫（略語：ＤＭＥ）、網膜血管閉塞、緑内障、白内障、自己免疫性の網膜および眼内の炎症性疾患、眼類天疱瘡、角結膜炎、スティーブン−ジョンソン症候群ならびにグレーブス眼症が含まれる眼疾患。
【０１７３】
３．  脳卒中、心筋梗塞、肝臓（Ａｒｕｍｕｇａｍら、２００４）、腎臓（Ａｒｕｍｕｇａｍら、２００３）、腸、肺、心臓、皮膚、肢、角膜、ランゲルハンス島（Ｔｏｋｏｄａｉら、２０１０）、骨髄、血管および膵臓等の移植された臓器に対する再灌流傷害、移植後の血栓性微小血管症または臓器損傷、臓器または骨髄の移植後の腎臓損傷が含まれる、再灌流傷害および移植片拒絶。
【０１７４】
４．  肝臓、腎臓、腸、肺、心臓、皮膚、肢、角膜、ランゲルハンス島、骨髄、血管および膵臓等の移植された臓器の移植片拒絶が含まれる、移植片拒絶の予防。
【０１７５】
５．  アテローム動脈硬化、心筋炎、心筋梗塞、脳卒中、肺動脈高血圧症（ＰＡＨ）、腹部大動脈瘤、血管構造の炎症性疾患、血管炎、好ましくは、側頭動脈炎、血管炎、血管漏出、糖尿病所見、子癇前症、自己免疫性心筋症、静脈宿主病、催不整脈性右心室異形成／心筋症、冠状動脈バイパスグラフト（略語：ＣＡＢＧ）の予防および／または支援および／または術後治療のためが含まれる心血管疾患。
【０１７６】
６．  インスリン耐性、耐糖能障害、脂肪炎症および食事性肥満における心血管機能障害が含まれる代謝機能不全。
【０１７７】
７．  喘息、急性呼吸不全、急性肺損傷、輸血関連肺損傷、成人呼吸促迫症候群、慢性閉塞性肺疾患、人工呼吸器により誘発される肺損傷、肺炎およびそれらの合併症が含まれる呼吸器疾患。
【０１７８】
８．  炎症性眼疾患、自己免疫性ブドウ膜炎（Ｃｏｐｌａｎｄら、２０１０）、結膜炎、春季カタル、全身性疾患の局所的所見が含まれる炎症性疾患。
【０１７９】
９．  外傷および骨折の二次的損傷、ショック、熱傷、アナフィラキシー性ショック、出血性ショック、多臓器不全（略語：ＭＯＦ）、急性中枢神経系傷害、急性中枢神経系傷害、臓器または膵島の移植後等の活性化した凝固系による過剰なＣ５ａ産生に起因する急性損傷が含まれる急性反応。
【０１８０】
１０．  疼痛、急性疼痛、慢性疼痛、神経因性疼痛、モルヒネ耐性および退薬により誘発される痛覚過敏。
【０１８１】
１１．  神経障害、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病およびパーキンソン病（Ｆａｒｋａｓら、１９９８）が含まれる、神経性および神経変性の疾患。
【０１８２】
１２．  以下が含まれる感染性疾患、
１２．１  細菌感染、好ましくは、髄膜炎、ライム病、反応性の関節炎（ライター症候群としても知られている）、尿路および腎臓の感染、敗血症、および臓器不全、心機能不全、全身性低灌流、アシドーシス、成人呼吸促迫症候群等のその合併症、細胞内病原体による感染（Ｋｌｏｓら、２００９）、
１２．２  ウイルス感染、好ましくは、ＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＣＭＶ、ウイルス性髄膜炎、
１２．３  細胞内寄生生物、好ましくは、リーシュマニア、リケッチア、クラミジア、コクシエラ、マラリア原虫、とりわけ脳性マラリア、ブルセラ、マイコバクテリア、リステリア、トキソプラズマおよびトリパノソーマ。
【０１８３】
１３．  凝固および線溶系の活性化に関連する疾患、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）および／または血栓症、悪性貧血、温式および冷式の自己免疫性溶血性貧血（略語：ＡＩＨＡ）、抗リン脂質症候群およびそれに関連する合併症、動脈および静脈の血栓症、反復流産および胎児の死亡等の妊娠合併症、子癇前症、胎盤機能不全、胎児発育不全、子宮頸管のリモデリングおよび早産、特発性血小板減少性紫斑（略語：ＩＴＰ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）およびアレルギー性の輸血反応が含まれる血液学的疾患。
【０１８４】
１４．  補体の生体材料による活性化に関連する臨床的合併症、および血液透析、アフェレーシス、関節炎の関節の粘性補給、心肺バイパス、人工血管移植片、心血管デバイスの使用が含まれる手順で生じる凝固カスケード。
【０１８５】
また、本発明による核酸は、患者の免疫系への有害な作用を回避するために、手術中に使用することもでき、より好ましくは、冠状動脈バイパスグラフト（略語：ＣＡＢＧ）の予防および／または支援および／または術後治療のため、オフポンプ冠状動脈バイパスグラフト（略語：ＯＰＣＡＢＧ）、最小限侵襲直接冠状動脈バイパスグラフト（略語：ＭＩＤＣＡＢ）、経皮経管的冠状動脈血管形成術（略語：ＰＴＣＡ）、血栓溶解、臓器移植、
脳および脊髄の手術、再建手術ならびに血管クランプ手術；血管漏出および／または肺気腫等の人工呼吸器により誘発される肺損傷または二次的損傷を避けるための、人工呼吸または人工呼吸補助による任意の治療の間移植された臓器もしくは移植しようとする臓器の臓器損傷の予防のため、または肝臓、腎臓、腸、肺、心臓、皮膚、肢、角膜、ランゲルハンス島、骨髄、血管および膵臓等の移植された臓器についての移植片拒絶および再灌流傷害の治療における使用のためが含まれる。
【０１８６】
本発明者らによる核酸を含有する医薬品および医薬組成物をそれぞれ、そのような場合における治療のために使用することができることは本発明に含まれる。
【０１８７】
さらなる実施形態では、医薬品は、薬学的に活性な薬剤をさらに含む。そのようなさらなる薬学的に活性な化合物は、これらに限定されないが、とりわけ、免疫系を抑制することが知られているもの、例として、カルシニューリン阻害剤、シクロスポリンＡ、メトトレキセート、アザチオプリン、タクロリムス、ラパマイシン、クロラムブシル、レフルノミド、ミコフェノール酸モフェチル、ブレキナル、ミゾリビン、サリドマイドまたはデオキシスパガリンである。また、さらなる薬学的に活性な化合物は、さらなる実施形態では、ヒスタミン産生を低下させる化合物、例として、メクロジン、クレマスチン、ジメチンデン、バミピン、ケトチフェン、セチリジン、ロベセチリジン（ｌｏｖｅｃｅｔｉｒｉｚｉｎ）、セスロラタジン（ｃｅｓｌｏｒａｔａｄｉｎ）、アゼラスチン、ミゾラスチン、レボカバスチン、テルフェナジン、フェキソフェナジンまたはエバスチンのうちの１つであってもよい。また、そのような化合物は、これらに限定されないが、ステロイドであってもよく、好ましくは、プレドニゾン、メチルプレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、トリアムシノロン、ベタメタゾン、エファーヴェセント（ｅｆｆｅｒｖｅｓｃｅｎｔ）またはブデソニドのような副腎皮質ステロイドを含む群から選択される。さらに、そのような化合物は、１つまたはいくつかの抗生物質、例として、これらに限定されないが、アミノグリコシド、β−ラクタム抗生物質、ジャイレース阻害剤、糖ペプチド抗生物質、リンコサミド、マクロライド抗生物質、ニトロイミダゾール誘導体、ポリペプチド抗生物質、スルホンアミド、トリメトプリムおよびテトラサイクリンであってもよい。さらに、より特異的な抗炎症性または抗血管新生の生物学的製剤、例として、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ＩＬ−１０、エルリズマブ（ｅｒｌｉｚｕｍａｂ）、トレルマブ（ｔｏｌｅｒｍａｂ）、リツキシマブ、ゴミリキシマブ（ｇｏｍｉｌｉｘｉｍａｂ）、バシリキシマブ、ダクリズマブ、ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ、ビジリズマブ、ＨｕＭａｘＣＤ４、クレノリキシマブ、ＭＡＸ１６Ｈ５、ＴＮＸ１００、トラリズマブ（ｔｏｒａｌｉｚｕｍａｂ）、アレムツズマブ、ＣＹ１７８８、ガリキシマブ、パキセリズマブ、エクリズマブ、ＰＭＸ−５３、ＥＴＩ１０４、ＦＧ３０１９、ベルチリムマブ（ｂｅｒｔｉｌｉｍｕｍａｂ）、２４９４１７（抗第ＩＸ因子）アブシキシマブ、ＹＭ３３７、オマリズマブ、タリズマブ、フォントリズマブ（ｆｏｎｔｏｌｉｚｕｍａｂ）、Ｊ６９５（抗ＩＬ１２）、ＨｕＭａｘＩＬ−１５、メポリズマブ、エルシリモマブ（ｅｌｓｉｌｉｍｏｍａｂ）、ＨｕＤＲＥＧ、アナキンラ、Ｘｏｍａ−０５２、アダリムマブ、インフリキシマブ、セルトリズマブ、アフェリモマブ、ＣｙｔｏＦａｂ、ＡＭＥ５２７、ヴァパリキシマブ（Ｖａｐａｌｉｘｉｍａｂ）、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ヴィタキシン（ｖｉｔａｘｉｎ）、ベリムマブ（ｂｅｌｉｍｕｍａｂ）、ＭＬＮ１２０２、ボロシキシマブ（ｖｏｌｏｃｉｘｉｍａｂ）、Ｆ２００（抗α５β１）、エファリズマブ、ｍ６０．１１（抗ＣＤ１１ｂ）、エタネルセプト、オナセプト（ｏｎｅｒｃｅｐｔ）、リロナセプト、アバタセプト、ナタリズマブまたはシプリズマブ（ｓｉｐｌｉｚｕｍａｂ）、トシリズマブ、ウステキヌマブ、ＡＢＴ−８７４を組み合わせて使用することもできる。最後に、さらなる薬学的に活性な薬剤は、いずれかのその他のケモカインの活性調節物質であってもよく、それらは、ケモカインのアゴニストもしくはアンタゴニスト、またはケモカイン受容体のアゴニストもしくはアンタゴニストであってよく、ケモカインは走化性脂質であってもよい。例として、Ｓ１Ｐ受容体調節物質であるフィンゴリモドが挙げられる。それに代わってまたは追加して、そのようなさらなる薬学的に活性な薬剤は、本発明によるさらなる核酸である。あるいは、医薬品は、Ｃ５ａとは異なる標的分子に結合するかまたは本発明による核酸のうちの１つとは異なる機能を示す、少なくとも１つのさらなる核酸を含む。
【０１８８】
一般に、Ｃ５ａアンタゴニストは、その他の炎症促進性の分子またはそれらの受容体の阻害剤と組み合わせることができる。その作用を、Ｃ５ａアンタゴニストと組み合わせて減弱させることができる炎症促進性の分子についての例には、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ、α４β７、α５β１、ＢｌｙＳ、カドヘリン、ＣＣＲ２、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１２５、ＣＤ１３０、ＣＤ１６、ＣＤ１８、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３０、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５Ｒ、ＣＤ５４、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ６８、ＣＤ８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９５、ＣＥＰ、ガストリン−Ｒ、Ｃ１、Ｃ１−エステラーゼ、Ｃ５、Ｄ因子、ＭＢＬ、補体受容体１、ＣＲＴＨ２−受容体、ＣＴＧＦ、Ｅ−およびＰ−セレクチン、エオタキシン、第ＩＸ因子、ＦＧＦ−２０、Ｆｇｌ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＰ  ＩＩｂ／ＩＩＩａ受容体、ＨＭＧ１、ＩＣＡＭ−１、ＩｇＥ、胸腺細胞、ＩＦＮγ、ＩＦＮｒ、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１、Ｍ−ＣＳＦ受容体、ＭＩＦ、ＭＭＰ９、ＰＤＧＦ−Ｄ、ＳＤＦ−１、ＴＧＦβ１、組織因子、チロシンキナーゼ受容体、ＶＡＰ−１、ＶＣＡＭ−１、ＶＥＧＦ、ＶＬＡ１、フォン−ヴィルブランド因子、スフィンゴシン１ホスフェート、セラミド−１ホスフェート、ならびにマイトジェンの阻害剤、例えばリゾホスファチジン酸の阻害剤がある。
【０１８９】
最後に、さらなる薬学的に活性な薬剤は、いずれかのその他のケモカインの活性調節物質であってもよく、それらは、ケモカインのアゴニストもしくはアンタゴニスト、またはケモカイン受容体のアゴニストもしくはアンタゴニストであってよい。それに代わってまたは追加して、そのようなさらなる薬学的に活性な薬剤は、本発明によるさらなる核酸である。あるいは、医薬品は、Ｃ５ａとは異なる標的分子に結合するかまたは本発明による核酸のうちの１つとは異なる機能を示す、少なくとも１つのさらなる核酸を含む。
【０１９０】
原則として、それに代わってまたは追加して医薬品を使用して、疾患を治療するための医薬品の使用に関連して開示する前記疾患のうちのいずれかを予防することは本発明の範囲に含まれる。したがって、それぞれのマーカー、すなわち、それぞれの疾患についてのマーカーが当業者には知られている。好ましくは、それぞれのマーカーはＣ５ａである。
【０１９１】
本発明の医薬品の１つの実施形態では、そのような医薬品は、本明細書に開示する疾患、特に本発明の医薬品を使用すべき疾患のうちのいずれかのために、その他の治療と組み合わせて使用するためのものである。
【０１９２】
「併用療法（「ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ」または「ｃｏ−ｔｈｅｒａｐｙ」）」は、本発明の医薬品と、特異的な治療計画の一部としての少なくとも第２の薬剤との投与を含んで、これらの治療剤、すなわち、本発明の医薬品と前記第２の薬剤との共同作用からの有益な効果をもたらす。組合せの有益な効果として、これらに限定されないが、治療剤の組合せの結果として生じる薬物動態学的または薬力学的な共同作用が挙げられる。これらの治療剤を組み合わせた投与は典型的には、（通常、選択された組合せに依存して、分、時間、日または週の）定義された期間にわたり実施される。
【０１９３】
「併用療法」は、一般にはそうではないが、偶発的かつ任意に本発明の組合せに至る別個の単独療法の投与計画の一部としての、これらの治療剤のうちの２つ以上の投与を包含することを意図することができる。「併用療法」は、これらの治療剤を順次に投与すること、すなわち、各治療剤を異なる時期に投与すること、およびこれらの治療剤または治療剤のうちの少なくとも２つを実質的に同時に投与することを包括することを意図する。実質的な同時投与は、例えば、対象に、各治療剤の一定比を有する単一のカプセル剤を投与するか、または各治療剤についての単一のカプセル剤を複数投与することによって達成することができる。
【０１９４】
各治療剤の順次投与または実質的な同時投与は、これらに限定されないが、外用経路、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路および粘膜組織を通しての直接的な吸収を含めた、いずれかの適切な経路によってもたらすことができる。治療剤は、同じ経路によって投与しても、または異なる経路によって投与してもよい。例えば、選択された組合せのうちの第１の治療剤を注射により投与することができ、一方、組合せの他方の治療剤を外用として投与することができる。
【０１９５】
あるいは、例えば、全ての治療剤を外用として投与してもよく、または全ての治療剤を注射によって投与してもよい。治療剤を投与する順番には、別段の記載がない限り、あまり重大な意味はない。また、「併用療法」は、上記に記載した治療剤をその他の生物学的に活性な成分とさらに組み合わせた投与も包括することができる。併用療法が非薬物治療をさらに含む場合、治療剤と非薬物治療の組合せの同時作用から有益な効果が達成される限り、非薬物治療をいずれかの適切な時期において実施することができる。例えば、適切な場合には、非薬物治療が治療剤の投与から一時的に、おそらく数日または数週もの間外された場合でも有益な効果が依然として達成される。
【０１９６】
上記で大まかに概説したように、本発明による医薬品は原則として、当業者に知られているいずれかの形態で投与することができる。好ましい投与経路は、全身投与であり、より好ましくは非経口投与、好ましくは注射によるものである。あるいは、医薬品は、局所投与することもできる。その他の投与経路には、筋肉内、腹腔内および皮下、経口（ｐｅｒ  ｏｒｕｍ）、鼻腔内、気管内または肺からの経路があり、効率を保証する一方で侵襲性が最も低い投与経路が選好される。
【０１９７】
非経口投与は一般に、皮下、筋肉内または静脈内への注射および注入のために使用される。さらに、非経口投与のための１つのアプローチは、徐放性または持続放出性のシステムの埋込みを利用し、このシステムによって、一定レベルの投与量の維持が保証され、これは、当業者にはよく知られている。
【０１９８】
さらに、本発明の好ましい医薬品は、適切な鼻腔内ビヒクルを外用として使用することを介する鼻腔内への形態で、すなわち、吸入剤としてか、または経皮経路を介して当業者にはよく知られている経皮皮膚パッチの形態を使用して投与することができる。経皮送達システムの形態として投与するためには、もちろん、投与量は、投与計画全体を通して間欠的ではなくむしろ連続的に投与される。その他の好ましい外用調製物には、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、エアロゾルスプレー剤およびジェル剤があり、活性成分の濃度は典型的には、０．０１％〜１５％、ｗ／ｗまたはｗ／ｖの範囲である。
【０１９９】
本発明の医薬品は一般に、これらに限定されないが、薬学的に許容できる媒体中に溶解または分散する本発明の核酸分子を含めて、療法の（１つまたは複数の）活性な構成成分の有効量を含む。薬学的に許容できる媒体または担体には、ありとあらゆる溶媒、分散媒体、被覆、抗細菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延剤等が含まれる。薬学的に活性な物質のためのそのような媒体および薬剤は、当技術分野ではよく知られている。また、補助的な活性成分も、本発明の医薬品中に組み込むことができる。
【０２００】
さらなる態様では、本発明は、医薬組成物に関する。そのような医薬組成物は、本発明による核酸のうちの少なくとも１つ、および好ましくは薬学的に許容できるビヒクルを含む。そのようなビヒクルは、当技術分野で使用されているおよび／または知られている任意のビヒクルまたは任意の結合剤であってよい。より具体的には、そのような結合剤またはビヒクルは、本明細書に開示する医薬品の製造に関連して論じる任意の結合剤またはビヒクルであってよい。さらなる実施形態では、医薬組成物は、さらなる薬学的に活性な薬剤を含む。
【０２０１】
医薬品および医薬組成物の調製は、当業者には本開示に照らせば分かる。典型的には、そのような組成物を、液剤もしくは懸濁剤のいずれかとしての注射用として；注射前に液体となす液剤もしくは懸濁剤の中において適した固体の形態；経口投与のための錠剤もしくはその他の固体；時間放出性のカプセル剤；または点眼剤、クリーム剤、ローション剤、軟膏剤、吸入剤等を含めた、現在使用されている任意のその他の形態として調製することができる。また、手術分野においては、外科医、内科医または医療従事者による、食塩水に基づいた洗浄液等の無菌製剤の特定の領域を治療するための使用が特に有用な場合もある。また、組成物を、微小デバイス、微小粒子またはスポンジを介して送達することもできる。
【０２０２】
製剤化したら、医薬品を、投与製剤に適合した様式で、薬理学的に有効である量で投与する。製剤は、例として、上記の注射用液剤の型等の多様な投与剤型に容易に投与されるが、また、薬物放出カプセル剤等も利用することができる。
【０２０３】
こうした状況では、投与すべき活性成分の分量および組成物の体積は、治療しようとする個体または対象に依存する。投与に必要な活性化合物の特異的な量は、開業医の判断によって決まり、各個体に特有である。
【０２０４】
活性化合物を分散させるために必要な医薬品の最少体積を、典型的には活用する。また、適切な投与計画は可変であるが、典型的には、最初に化合物を投与し、結果をモニターし、次いで、さらに間を置いて制御した用量をさらに与える。
【０２０５】
例えば、錠剤またはカプセル剤（例えば、ゼラチンカプセル剤）の形態で経口投与する場合、活性な薬物構成成分、すなわち、本発明の核酸分子および／あるいは本明細書では（１つもしくは複数の）治療剤または（１つもしくは複数の）活性化合物とも呼ぶ任意のさらなる薬学的に活性な薬剤を、経口で無毒性の薬学的に許容できる不活性な担体、例として、エタノール、グリセロール、水等と組み合わせることができる。またさらに、所望するかまたは必要とする場合には、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤および着色剤も混合物中に組み込むことができる。適切な結合剤には、デンプン、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン、グルコースまたはベータ−ラクトース等の天然の糖、トウモロコシ甘味剤、アカシア、トラガントまたはアルギン酸ナトリウム等の天然および合成のガム、ポリエチレングリコール、ろう等がある。これらの投与剤型中で使用される滑沢剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、シリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウムもしくはカルシウムの塩および／またはポリエチレングリコール等がある。崩壊剤には、これらに限定されないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムデンプン、寒天、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩、または発泡性混合物等がある。希釈剤には、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシンがある。
【０２０６】
また、本発明の医薬品は、時限的な放出および持続性放出の錠剤、またはカプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁剤、シロップ剤および乳剤等の経口投与剤型で投与することもできる。坐剤は、脂肪酸の乳剤または懸濁剤から好都合に調製される。
【０２０７】
医薬組成物または医薬品は、滅菌することができ、かつ／あるいは保存剤、安定化剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩および／または緩衝剤等のアジュバントを含有することができる。またさらに、それらは、その他の治療上価値のある物質も含有することができる。組成物は、従来の混合、顆粒化または被覆の方法に従って調製され、典型的には、活性成分を約０．１％〜７５％、好ましくは約１％〜５０％含有する。
【０２０８】
液体、特に注射用組成物は、例えば、溶解させる、分散させる等によって調製することができる。活性化合物を、薬学的に純粋な溶媒、例えば、水、食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノール等中に溶解させるかまたはそれらと混合して、それによって、注射用の液剤または懸濁剤を形成する。さらに、注射前に液体中に溶解させるために適した固体の形態としても製剤化することができる。
【０２０９】
固体の組成物のための賦形剤には、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム等がある。また、上記で定義した活性化合物は、坐剤として、例えば、担体としてポリアルキレングリコール、例えば、プロピレングリコールを使用して製剤化することもできる。いくつかの実施形態では、坐剤は、脂肪酸の乳剤または懸濁剤から好都合に調製される。
【０２１０】
また、本発明の医薬品および核酸分子はそれぞれ、リポソーム送達システムの形態、例として、小型の単層状ベシクル、大型の単層状ベシクルおよび多層状ベシクルで投与することもできる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンを含有する多様なリン脂質から形成することができる。いくつかの実施形態では、脂質の構成成分のフィルムを薬物の水溶液を用いて水和させて、薬物を被包する脂質層を形成する。これは、当業者にはよく知られている。例えば、本明細書に記載する核酸分子を、当技術分野で知られている方法を使用して構築した、親油性化合物または非免疫原性の高分子量化合物との複合体として提供することができる。さらに、リポソームは、表面上には、そのような核酸分子を担って標的化を行い、内部には、細胞の死滅を媒介するための細胞傷害性を示す薬剤を担持することもできる。核酸関連複合体の例が、米国特許第６，０１１，０２０号に提供されている。
【０２１１】
また、本発明の医薬品および核酸分子はそれぞれ、標的化を行うことができる薬物担体としての可溶性ポリマーと結合させることもできる。そのようなポリマーとして、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピル−メチルアクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパナミドフェノール（ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌａｓｐａｎａｍｉｄｅｐｈｅｎｏｌ）、またはパルミトイル残基で置換されているポリエチレンオキシドポリリジンを挙げることができる。さらに、本発明の医薬品および核酸分子はそれぞれ、薬物の制御放出を達成する場合に有用なクラスの生分解性ポリマー、例えば、ポリ乳酸、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋結合性または両親媒性のブロックコポリマーに結合させることもできる。
【０２１２】
また所望により、投与すべき医薬組成物および医薬品はそれぞれ、微量の無毒性の補足的な物質、例として湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、ならびにその他の物質、例えば、酢酸ナトリウムおよびオレイン酸トリエタノールアミン等を含有することもできる。
【０２１３】
本発明の核酸分子および医薬品それぞれを活用する投与計画は、患者の型、種、年齢、体重、性別および医学的状態；治療しようとする状態の重症度；投与経路；患者の腎臓および肝臓の機能；ならびに利用する特定のアプタマーまたはその塩を含めた、多様な要因に従って選択される。通常の技術を有する内科医または獣医であれば、状態の進行を予防する、無効にするまたは静止させるために必要な薬物の有効量を容易に決定し、処方することができる。
【０２１４】
本発明による核酸の有効な血漿レベルは、好ましくは、本明細書に開示する疾患のうちのいずれかの治療の場合には、５００ｆＭ〜５００μＭの範囲である。
【０２１５】
本発明の核酸分子および医薬品はそれぞれ、好ましくは、１日１回の用量で、２日もしくは３日に１回、毎週、２週に１回、月１回の用量で、または３ヵ月に１回投与することができる。
【０２１６】
本明細書に記載する医薬品が本明細書に開示する医薬組成物を構成することは本発明の範囲に含まれる。
【０２１７】
さらなる態様では、本発明は、そのような治療を必要とする対象を治療するための方法に関し、この方法は、本発明による核酸のうちの少なくとも１つを薬学的に活性な量で投与するステップを含む。ある実施形態では、対象は、ある疾患に罹患しているかまたはそのような疾患を発症するリスクを有し、疾患は、本明細書に開示する疾患のいずれかであり、特に、医薬品を製造するための本発明による核酸のうちのいずれかの使用に関連して開示する疾患のうちのいずれかである。
【０２１８】
本発明による核酸およびアンタゴニストは、医薬品として、もしくは医薬品を製造するためのみならず、また、美容上の目的でも、特に皮膚病変の炎症領域におけるＣ５ａの関与に関して使用することができることを理解されたい。したがって、治療または予防のために本発明による核酸、医薬品および／または医薬組成物を使用することができる、さらなる状態または疾患は、皮膚病変の炎症領域である。
【０２１９】
好ましくは、本明細書で使用する場合、診断器具または診断薬または診断手段は、Ｃ５ａ、好ましくは本明細書に記載するＣ５ａ、およびより好ましくは本明細書に記載する種々の障害および疾患に関連して本明細書に記載するＣ５ａを直接的にかまたは間接的にのいずれかで検出するために適している。診断器具は、本明細書に記載する障害および疾患それぞれのうちのいずれかを検出および／または追跡するために適している。そのような検出は、本発明による核酸のＣ５ａへの結合を通して可能である。そのような結合は、直接的にかまたは間接的にのいずれかで検出することができる。それぞれの方法および手段が当業者には知られている。とりわけ、本発明による核酸は、本発明による核酸、好ましくはＣ５ａに結合した核酸の検出を可能にする標識を含むことができる。そのような標識は、好ましくは、放射性標識、酵素標識および蛍光標識を含む群から選択される。原則として、本発明による核酸について、抗体について開発されている全ての既知のアッセイを採用することができ、標的結合性抗体が、標的結合性核酸に置換される。未標識の標的結合性抗体を使用する抗体アッセイの場合、検出は、好ましくは、放射性標識、酵素標識および蛍光標識を用いて改変され、標的結合性抗体にそのＦｃ断片において結合する第２の抗体によって行われる。核酸、好ましくは本発明による核酸の場合、核酸をそのような標識を用いて改変し、好ましくは、そのような標識は、ビオチン、Ｃｙ−３およびＣｙ−５を含む群から選択され、そのような標識は、そのような標識に対して作られた抗体、例えば、抗ビオチン抗体、抗Ｃｙ−３抗体もしくは抗Ｃｙ−５抗体によって検出されるか、または標識がビオチンである場合には、標識は、ビオチンに自然に結合するストレプトアビジンもしくはアビジンによって検出される。この場合、そのような抗体、ストレプトアビジンまたはアビジンは、好ましくは、（第２の抗体と同様に）それぞれの標識、例えば、放射性標識、酵素標識または蛍光標識を用いて改変されている。
【０２２０】
さらなる実施形態では、本発明による核酸分子を、第２の検出手段によって検出または解析し、前記検出手段は、分子ビーコンである。分子ビーコンの方法は、当業者には知られている。手短にいうと、分子ビーコンとも呼ばれている核酸プローブが、検出しようとする核酸試料に対する逆向き相補体であり、このために、検出しようとする核酸試料の一部にハイブリダイズする。核酸試料に結合すると、分子ビーコンのフルオロフォア基が分離し、その結果、蛍光シグナルの変化、好ましくは強度の変化が生じる。この変化は、存在する核酸試料の量と相関する。
【０２２１】
本発明による核酸を使用するＣ５ａの検出によって、特に、本明細書で定義するＣ５ａの検出が可能となることを認識するであろう。
【０２２２】
Ｃ５ａの検出に関連して、好ましい方法は、
（ａ）Ｃ５ａの存在について試験しようとする試料を提供するステップと、
（ｂ）本発明による核酸を提供するステップと、
（ｃ）試料を核酸と、好ましくは反応槽中で反応させるステップと
を含み、
ステップ（ａ）をステップ（ｂ）の前に実施してもよく、または（ｂ）をステップ（ａ）の前に実施してもよい。
【０２２３】
好ましい実施形態では、試料の核酸との反応を検出することからなる、さらなるステップｄ）を提供する。好ましくは、ステップｂ）の核酸は、表面に固定化されている。表面は、反応チューブ、プレートのウエル等の反応槽の表面であっても、またはそのような反応槽中に含有されている装置、例えば、ビーズ等の表面であってもよい。核酸を表面に、これらに限定されないが、非共有結合性または共有結合性の連結を含めた、当業者に既知の任意の手段によって固定化することができる。好ましくは、連結は、表面と核酸との間の共有結合性の化学結合を介して確立される。しかしまた、核酸が表面に間接的に固定化され、そのような間接的な固定化には、さらなる構成成分または一対の相互作用のパートナーの使用が関与することも本発明の範囲に含まれる。そのようなさらなる構成成分は、好ましくは、固定化しようとする核酸と特異的に相互作用し、したがって、核酸が表面へつながることを媒介する、相互作用のパートナーとも呼ばれる化合物である。相互作用のパートナーは、好ましくは、核酸、ポリペプチド、タンパク質および抗体を含む群から選択される。好ましくは、相互作用のパートナーは、抗体、より好ましくはモノクローナル抗体である。あるいは、相互作用のパートナーは、核酸、好ましくは機能性の核酸である。より好ましくは、そのような機能性の核酸は、アプタマー、スピーゲルマー、および当該核酸に対して少なくとも部分的に相補性を示す核酸を含む群から選択される。さらなる代替の実施形態では、核酸の表面への結合は、多分割の相互作用のパートナーによって媒介される。そのような多分割の相互作用のパートナーは、好ましくは、一対の相互作用のパートナー、または第１のメンバーと第２のメンバーとからなる相互作用のパートナーであり、第１のメンバーは、核酸によって構成されているかまたは核酸につながっており、第２のメンバーは、表面につながっているかまたは表面によって構成されている。多分割の相互作用のパートナーは、好ましくは、ビオチンとアビジン、ビオチンとストレプトアビジン、およびビオチンとニュートラアビジンを含む相互作用のパートナーの対の群から選択される。好ましくは、相互作用のパートナーの対の第１のメンバーは、ビオチンである。
【０２２４】
そのような方法の好ましい結果が、Ｃ５ａと核酸との固定化された複合体の形成であり、より好ましくは、前記複合体が検出される。複合体から、Ｃ５ａが検出されることは、ある実施形態の範囲に含まれる。
【０２２５】
この要件に従うそれぞれの検出手段は、例えば、Ｃ５ａの（１つまたは複数の）部分に対して特異的である検出手段のいずれかである。特に好ましい検出手段は、核酸、ポリペプチド、タンパク質および抗体を含む群から選択される検出手段であり、これらの生成は当業者であれば知っている。
【０２２６】
また、Ｃ５ａを検出する方法は、好ましくはステップｃ）を実施するために使用された反応槽から、試料を取り出すステップも含む。
【０２２７】
また、さらなる実施形態では、この方法は、Ｃ５ａの相互作用のパートナーを表面、好ましくは上記で定義した表面上に固定化するステップも含み、相互作用のパートナーは、本明細書に従って定義され、好ましくは、それぞれの方法に関連して上記に従い、より好ましくは、種々の実施形態における核酸、ポリペプチド、タンパク質および抗体を含む。この実施形態では、特に好ましい検出手段は、本発明による核酸であり、そのような核酸は、好ましくは、標識してもまたは標識しなくてもよい。そのような核酸が標識されている場合、核酸は直接的または間接的に検出することができる。また、そのような検出には、第２の検出手段の使用が関与してよく、第２の検出手段もまた、好ましくは、本明細書に記載する種々の実施形態における核酸、ポリペプチド、タンパク質および実施形態を含む群から選択される。そのような検出手段は、好ましくは、本発明による核酸に対して特異的である。より好ましい実施形態では、第２の検出手段は、分子ビーコンである。好ましい実施形態では、核酸もしくは第２の検出手段のいずれか、または両方が、検出標識を含むことができる。検出標識は、好ましくは、ビオチン、ブロモ−デオキシウリジン標識、ジゴキシゲニン標識、蛍光標識、ＵＶ標識、放射標識およびキレート分子を含む群から選択される。あるいは、第２の検出手段が、好ましくは、核酸によって含有されている、核酸によって構成されている、または核酸につながっている検出標識と相互作用する。特に好ましいのは、以下の組合せである。
検出標識がビオチンであり、第２の検出手段がビオチンに対して作られた抗体であるか、または
検出標識がビオチンであり、第２の検出手段がアビジンもしくはアビジン担持分子であるか、または
検出標識がビオチンであり、第２の検出手段がストレプトアビジンもしくはストレプトアビジン担持分子であるか、または
検出標識がビオチンであり、第２の検出手段がニュートラアビジンもしくはニュートラアビジン担持分子であるか、または
検出標識がブロモ−デオキシウリジンであり、第２の検出手段がブロモ−デオキシウリジンに対して作られた抗体であるか、または
検出標識がジゴキシゲニンであり、第２の検出手段がジゴキシゲニンに対して作られた抗体であるか、または
検出標識がキレート剤であり、第２の検出手段が放射性核種であり、前記検出標識が核酸につながっていることが好ましい。また、この種類の組合せは、核酸が表面につながっている実施形態にも適用可能であることを認識されたい。そのような実施形態では、検出標識が相互作用のパートナーにつながっていることが好ましい。
【０２２８】
最後にまた、第２の検出手段が第３の検出手段を使用して検出され、好ましくは、第３の検出手段は、酵素であり、より好ましくは、第２の検出手段の検出時には酵素反応を示すか、または第３の検出手段は、放射線、より好ましくは、放射性核種から放射された放射線を検出するための手段であることも本発明の範囲に含まれる。好ましくは、第３の検出手段は、第２の検出手段を特異的に検出する、かつ／または第２の検出手段と相互作用する。
【０２２９】
また、Ｃ５ａの相互作用のパートナーが表面上に固定化されている実施形態においては、本発明による核酸を、好ましくは、相互作用のパートナーとＣ５ａとの間に形成された複合体に添加し、試料を、反応から、より好ましくは、ステップｃ）および／またはｄ）が実施される反応槽から取り出すことができる。
【０２３０】
ある実施形態では、本発明による核酸は、蛍光部分を含み、蛍光部分の蛍光が、核酸とＣ５ａとの間での複合体形成時には、遊離のＣ５ａとは異なる。
【０２３１】
さらなる実施形態では、核酸が本発明による核酸の誘導体であり、核酸の誘導体は、アデノシンに置き換わっている少なくとも１つのアデノシン蛍光誘導体を含む。好ましい実施形態では、アデノシン蛍光誘導体は、エテノアデノシンである。
【０２３２】
さらなる実施形態では、本発明による核酸の誘導体およびＣ５ａからなる複合体を、蛍光を使用して検出する。
【０２３３】
方法のある実施形態では、シグナルが、ステップ（ｃ）またはステップ（ｄ）において生み出され、好ましくは、シグナルは、試料中のＣ５ａ濃度と相関する。
【０２３４】
好ましい態様では、アッセイを、９６ウエルプレート中で実施することができ、構成成分が、上記に記載するように、反応槽中に固定化されており、ウエルが反応槽として働く。
【０２３５】
本発明の核酸は、薬物設計のための出発材料としてもさらに使用することができる。基本的には、２つの可能なアプローチがある。１つのアプローチは、化合物ライブラリーのスクリーニングであり、そのような化合物ライブラリーは、好ましくは低分子量化合物ライブラリーである。ある実施形態では、スクリーニングは、高スループットスクリーニングである。好ましくは、高スループットスクリーニングは、標的に基づいたアッセイにおいての、化合物の迅速、効率的な試行錯誤評価である。最良の場合には、解析を比色分析測定によって実施する。それに関連して使用するライブラリーが当業者には知られている。
【０２３６】
あるいは、本発明による核酸は、理論的薬物設計ために使用することができる。好ましくは、理論的薬物設計は、薬学的なリード構造の設計である。典型的にはＸ線結晶解析または核磁気共鳴分光法等の方法によって同定される標的の三次元構造から出発して、コンピュータプログラムを使用して、多くの異なる化合物の構造を含有するデータベースをくまなく検索する。選択はコンピュータによって行われ、それに続いて、同定された化合物を実験室で試験することができる。
【０２３７】
理論的薬物設計は、本発明による核酸のうちのいずれかから出発することができ、本発明の核酸の構造に類似するか、または本発明の核酸の構造の結合媒介部分に同一である構造、好ましくは、三次元構造に関する。いずれの場合も、そのような構造は、本発明の核酸と同じかまたはそれに類似する結合の特徴を依然として示す。理論的薬物設計において、さらなるステップにおいてかまたは代替のステップとしてのいずれかでは、好ましくは、神経伝達物質に結合する核酸の部分の三次元構造が、ヌクレオチドとも核酸とも異なる化学基によって模倣される。この模倣によって、核酸とは異なる化合物を設計することができる。そのような化合物は、好ましくは、小型分子またはペプチドである。
【０２３８】
化合物ライブラリーをスクリーニングする場合、当業者に知られている競合アッセイを使用すること等によって、適切なＣ５ａ類似体、Ｃ５ａアゴニストまたはＣ５ａアンタゴニストを見出すことができる。そのような競合アッセイは、以下のように組み立てることができる。本発明の核酸、好ましくは、標的結合性Ｌ−核酸であるスピーゲルマーを、固相に結合させる。Ｃ５ａ類似体を同定するために、標識したＣ５ａをアッセイに添加することができる。見込みのある類似体であれば、スピーゲルマーに結合するＣ５ａ分子と競合し、これには、それぞれの標識によって得られるシグナルの減少が伴う。アゴニストまたはアンタゴニストについてのスクリーニングには、当業者には知られている細胞培養アッセイの使用が関与することができる。
【０２３９】
本発明によるキットは、本発明の核酸のうちの少なくとも１つまたはいくつかを含むことができる。さらに、キットは、少なくとも１つまたはいくつかの陽性または陰性の対照を含むこともできる。陽性対照は、例えば、Ｃ５ａ、特に、それに対して本発明の核酸が選択されるか、またはそれに本発明の核酸が結合する、好ましくは、液体の形態をとるＣ５ａであってよい。陰性対照は、例えば、生物物理学的特性の観点からＣ５ａに類似すると定義されるが、本発明の核酸としては認められないペプチドであってよい。さらに、前記キットは、１つまたはいくつかの緩衝剤も含むことができる。キット中には、種々の成分を、乾燥もしくは凍結乾燥させた形態でか、または液体中に溶解させて含有することができる。キットは、１つまたはいくつかの容器を含むことができ、これは、この場合、キットの１つまたはいくつかの成分を含有することができる。さらなる実施形態では、キットは、キットの使用方法およびその種々の成分についての情報を使用者に提供する指示または指示書を含む。
【０２４０】
本発明による核酸の薬学的決定および生物分析決定は、基本的に、ヒトおよび非ヒトの身体のいくつかの体液、組織および臓器において、その薬物動態および生物力学のプロファイルを判定するためである。そのような目的では、本明細書に開示するかまたは当業者に知られている検出方法のうちのいずれかを使用することができる。本発明のさらなる態様では、本発明による核酸を検出するために、サンドイッチハイブリダイゼーションアッセイを提供する。検出アッセイ内部では、捕捉プローブおよび検出プローブを使用する。捕捉プローブは、本発明による核酸の第１の部分に対して相補性を示し、検出プローブは、第２の部分に対して相補性を示す。捕捉プローブおよび検出プローブの両方を、ＤＮＡヌクレオチド、改変したＤＮＡヌクレオチド、改変したＲＮＡヌクレオチド、ＲＮＡヌクレオチド、ＬＮＡヌクレオチドおよび／またはＰＮＡヌクレオチドによって形成することができる。
【０２４１】
したがって、捕捉プローブは、本発明による核酸の５’末端に対して相補性を示す配列ストレッチを含み、検出プローブは、本発明による核酸の３’末端に対して相補性を示す配列ストレッチを含む。この場合、捕捉プローブは、表面またはマトリックスに５’末端を介して固定化されており、捕捉プローブは、その５’末端において直接的にか、またはその５’末端と表面もしくはマトリックスとの間のリンカーを介して固定化することができる。しかし原則として、リンカーは、捕捉プローブの各ヌクレオチドに連結することができる。リンカーは、当業者の親水性リンカーによってか、またはＤ−ＤＮＡヌクレオチド、改変したＤ−ＤＮＡヌクレオチド、Ｄ−ＲＮＡヌクレオチド、改変したＤ−ＲＮＡヌクレオチド、Ｄ−ＬＮＡヌクレオチド、ＰＮＡヌクレオチド、Ｌ−ＲＮＡヌクレオチド、Ｌ−ＤＮＡヌクレオチド、改変したＬ−ＲＮＡヌクレオチド、改変したＬ−ＤＮＡヌクレオチドおよび／もしくはＬ−ＬＮＡヌクレオチドによって形成することができる。
【０２４２】
あるいは、捕捉プローブは、本発明による核酸の３’末端に対して相補性を示す配列ストレッチを含み、検出プローブは、本発明による核酸の５’末端に対して相補性を示す配列ストレッチを含む。この場合、捕捉プローブは、表面またはマトリックスに３’末端を介して固定化されており、捕捉プローブは、その３’末端において直接的にか、またはその３’末端と表面もしくはマトリックスとの間のリンカーを介して固定化することができる。しかし原則として、リンカーは、本発明による核酸に対して相補性を示す配列ストレッチの各ヌクレオチドに連結することができる。リンカーは、当業者の親水性リンカーによってか、またはＤ−ＤＮＡヌクレオチド、改変したＤ−ＤＮＡヌクレオチド、Ｄ−ＲＮＡヌクレオチド、改変したＤ−ＲＮＡヌクレオチド、Ｄ−ＬＮＡヌクレオチド、ＰＮＡヌクレオチド、Ｌ−ＲＮＡヌクレオチド、Ｌ−ＤＮＡヌクレオチド、改変したＬ−ＲＮＡヌクレオチド、改変したＬ−ＤＮＡヌクレオチドおよび／もしくはＬ−ＬＮＡヌクレオチドによって形成することができる。
【０２４３】
本発明による核酸にハイブリダイズすることができる捕捉プローブおよび検出プローブのヌクレオチドの数は可変であり、捕捉プローブおよび／もしくは検出プローブのヌクレオチドの数、ならびに／または本発明による核酸自体に依存してよい。本発明による核酸にハイブリダイズすることができる捕捉プローブと検出プローブとのヌクレオチドの総数は、最高でも本発明による核酸によって構成されるヌクレオチドの数でなければならない。検出プローブおよび捕捉プローブのヌクレオチドの最低数（２〜１０個のヌクレオチド）によっても、本発明による核酸の５’末端または３’末端それぞれにハイブリダイゼーションが可能とならなければならない。本発明による核酸と解析する試料中に存在するその他の核酸との間で、高い特異性および選択性を実現するためには、捕捉プローブと検出プローブとのヌクレオチドの総数は、本発明による核酸によって構成されるヌクレオチドの数、または最高数でなければならない。
【０２４４】
さらに、検出プローブは、好ましくは、先の本明細書の記載に従って検出することができるマーカー分子または標識を担持する。標識またはマーカー分子は原則として、検出プローブの各ヌクレオチドに連結することができる。好ましくは、標識またはマーカーは、検出プローブの５’末端または３’末端に位置し、本発明による核酸に対して相補性を示す検出プローブ内のヌクレオチドと標識との間には、リンカーを挿入することができる。リンカーは、当業者の親水性リンカーによってか、またはＤ−ＤＮＡヌクレオチド、改変したＤ−ＤＮＡヌクレオチド、Ｄ−ＲＮＡヌクレオチド、改変したＤ−ＲＮＡヌクレオチド、Ｄ−ＬＮＡヌクレオチド、ＰＮＡヌクレオチド、Ｌ−ＲＮＡヌクレオチド、Ｌ−ＤＮＡヌクレオチド、改変したＬ−ＲＮＡヌクレオチド、改変したＬ−ＤＮＡヌクレオチドおよび／もしくはＬ−ＬＮＡヌクレオチドによって形成することができる。
【０２４５】
本発明による核酸の検出を、以下に従って実施することができる。本発明による核酸を、その一方の末端で捕捉プローブに、他方の末端で検出プローブにハイブリダイズさせる。その後、未結合の検出プローブを、例えば、１または複数回の洗浄ステップによって除去する。それに続いて、好ましくは標識またはマーカー分子を担持する結合された検出プローブの量を、例えば、参照より本明細書に組み込まれているＷＯ／２００８／０５２７７４のより詳細な概説に従って測定することができる。
【０２４６】
好ましくは、本明細書で使用する場合、治療という用語は、好ましい実施形態では、追加または代替の予防および／または追跡を含む。
【０２４７】
好ましくは、本明細書で使用する場合、疾患および障害という用語は、別段の記載がない限り、互換的に使用するものとする。
【０２４８】
本明細書で使用する場合、含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）という用語は、好ましくは、そのような用語に続くかまたはそれが説明する主題を制限しないものとする。しかし、代替の実施形態では、この用語は、含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）を意味し、したがって、そのような用語に続くかまたはそれが説明する主題を制限するものと理解されたい。
【０２４９】
本発明による核酸分子および本明細書で使用する標的分子であるＣ５ａの種々の配列番号、化学的性質、それらの実際の配列、および内部参照番号を、以下の表に要約する。
【表１Ａ】
0006415327.tif 000002
【表１Ｂ】
0006415327.tif 000003
【表１Ｃ】
0006415327.tif 000004
【表１Ｄ】
0006415327.tif 000005
【表１Ｅ】
0006415327.tif 000006
【表１Ｆ】
0006415327.tif 000007
【表１Ｇ】
0006415327.tif 000008
【表１Ｈ】
0006415327.tif 000009
【表１Ｉ】
0006415327.tif 000010
【０２５０】
さらなる特徴、実施形態および利点を示すことができる図、実施例および配列表によって、本発明をさらに例示する。
【図面の簡単な説明】
【０２５１】
【図１】表面プラズモン共鳴測定により決定したヒトおよびマウスのＣ５ａに対するＫＤ値および相対結合活性を含む、ヒトおよびマウスのＣ５ａに結合することができる核酸分子の配列のアラインメントを示す図である。
【図２】表面プラズモン共鳴測定により決定したヒトＣ５ａに対するＫＤ値および相対結合活性を含む、単一のリボヌクレオチドが２’−デオキシリボヌクレオチドに置換されている核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の誘導体を示す図である。
【図３】表面プラズモン共鳴測定により決定したヒトＣ５ａに対するＫＤ値および相対結合活性を含む、２個、３個、４個、５個または６個のリボヌクレオチドが２’−デオキシリボヌクレオチドに置換されている核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の誘導体を示す図である。
【図４Ａ−４Ｂ】表面プラズモン共鳴測定により決定したヒトＣ５ａに対するＫＤ値および相対結合活性を含む、核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘＤＮＡの切り詰めを示す図である。
【図５】表面プラズモン共鳴測定により決定したヒトＣ５ａに対するＫＤ値および相対結合活性を含む、０、１個、２個、３個または４個のリボヌクレオチドが２’−デオキシリボヌクレオチドに置換されている核酸分子ＮＯＸ−Ｄ２０００１の誘導体を示す図である。
【図６】核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９およびＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−１６−１７−３０−３２−４０（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘＤＮＡとも呼ばれる）のＢｉａｃｏｒｅ測定によるヒトＣ５ａに対する動態評価を示す図であり、５００ｎＭのスピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ１９００１、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９（略語：Ｄ０９）およびＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−１６−１７−３０−３２−４０（略語：Ｄ０９−１６−１７−３０−３２−４０）に関するデータを示す。
【図７】走化性アッセイにおける５’末端４０ｋＤａ  ＰＥＧ化Ｃ５ａ結合性スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ１９００１−５’ＰＥＧ（ＮＯＸ−Ｄ１９とも呼ばれる）ＮＯＸ−Ｄ２０（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘＤＮＡ−０２０−５’４０ｋＤａ  ＰＥＧとも呼ばれる）の効能を示す図であり、様々な量のスピーゲルマーと共に３７°Ｃでプレインキュベートした０．１ｎＭのｈｕＣ５ａに向けて、細胞を遊走させた。
【図８】核酸分子ＮＯＸ−Ｄ２０（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘＤＮＡ−０２０−５’４０ｋＤａ  ＰＥＧとも呼ばれる）のＢｉａｃｏｒｅ測定によるヒトＣ５ａ、ラットＣ５ａ、マウスＣ５ａ、サルＣ５ａに対する動態評価を示す図であり、１０００、５００、２５０、１２５、６２．５、３１．３、１５．６、７．８、３．９および１．９５〜０ｎＭのスピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ２０に関するデータを示す。
【図９】核酸分子ＮＯＸ−Ｄ２０（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘＤＮＡ−０２０−５’４０ｋＤａ  ＰＥＧとも呼ばれる）のＢｉａｃｏｒｅ測定によるヒトＣ５およびヒトｄｅｓＡｒｇ−Ｃ５ａに対する動態評価を示す図であり、１０００、５００、２５０、１２５、６２．５、３１．３、１５．６、７．８、３．９および１．９５〜０ｎＭのスピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ２０に関するデータを示す。
【図１０】核酸分子ＮＯＸ−Ｄ２１（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−２ｄＵ−１ｄＣ−０２０−５’４０ｋＤａ  ＰＥＧとも呼ばれる）のＢｉａｃｏｒｅ測定によるヒトＣ５ａ、ヒトＣ５、ヒトｄｅｓＡｒｇ−Ｃ５ａ、マウスＣ５ａおよびマウスｄｅｓＡｒｇ−Ｃ５ａに対する動態評価を示す図であり、ヒトＣ５ａおよびヒトＣ５に結合する、１０００、５００、２５０、１２５、６２．５、３１．３、１５．６、７．８、３．９および１．９５〜０ｎＭのスピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ２１に関するデータを示す。
【図１１】ヒト、アカゲザル、マウスおよびラット由来のＣ５ａのポリペプチド配列アラインメントを示す図である。
【図１２Ａ】ヒトＣ５ａおよびマウスＣ５ａによる走化性アッセイにおけるＣ５ａ結合性スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ２０の効能を示す図であり、様々な量のスピーゲルマーと共に３７°Ｃでプレインキュベートした０．１ｎＭのｈｕＣ５ａまたは０．３ｎＭのｍＣ５ａに向けて細胞を遊走させ、ａ）細胞数を各データセットの最大値に正規化し、スピーゲルマー濃度に対する百分率数として示し、ｂ）Ｐｒｉｓｍ５ソフトウエアによる非線形回帰（４パラメーターフィット）を使用して、走化性が５０％阻害されるスピーゲルマー濃度（ＩＣ５０）を算出した。
【図１２Ｂ】ヒトＣ５ａによる走化性アッセイにおけるＣ５ａ結合性スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ２１の効能を示す図であり、様々な量のスピーゲルマーと共に３７°Ｃでプレインキュベートした０．１ｎＭのｈｕＣ５ａに向けて細胞を遊走させ、ａ）細胞数を各データセットの最大値に正規化し、スピーゲルマー濃度に対する百分率数として示し、ｂ）Ｐｒｉｓｍ５ソフトウエアによる非線形回帰（４パラメーターフィット）を使用して、走化性が５０％阻害されるスピーゲルマー濃度（ＩＣ５０）を算出した。
【図１３】ヒトＣ５ａによる初代ヒトＰＭＮの（Ａ）走化性アッセイおよび（Ｂ）エラスターゼ放出アッセイにおけるＣ５ａ結合性スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ１９およびＮＯＸ−Ｄ２０の効能を示す図であり、１ｎＭのｈｕＣ５ａに向けて細胞を遊走させ、様々な量のスピーゲルマーと共に３７°Ｃでプレインキュベートした３０ｎＭのｈｕＣ５ａによりエラスターゼ放出を刺激した。
【図１４】スピーゲルマー（Ａ）ＮＯＸ−１９およびＮＯＸ−Ｄ２０ならびに（Ｂ）ＮＯＸ−Ｄ２１によるヒツジ赤血球溶血アッセイを使用するＣ５切断阻害の評価を示す図である。陽性（Ｃ５Ｃ６）および陰性の対照（逆ＮＯＸ−Ｄ１９および逆ＮＯＸ−Ｄ２１）を示す。
【図１５】複数菌による敗血症の盲腸結紮穿孔（ＣＬＰ）マウスモデルにおける生存期間を示す図であり、ＣＬＰ手術の直後から、示した用量でＮＯＸ−Ｄ１９またはビヒクルを腹腔内に毎日注射した。偽動物にＣＬＰを伴わない手術をし、続いてビヒクルを注射した。
【図１６】示した用量でＮＯＸ−Ｄ１９により処理したマウス、ビヒクル処理マウスおよび偽動物における手術前（−４日）およびＣＬＰ手術後１日の（Ａ）血清クレアチニンレベルおよび（Ｂ）血液尿素窒素（ＢＵＮ）レベルを示す図である。血清クレアチニンおよびＢＵＮは腎機能に関するバイオマーカーである。
【図１７】示した用量でＮＯＸ−Ｄ１９により処理したマウス、ビヒクル処理マウスおよび偽動物における手術前（−４日）およびＣＬＰ手術後１日の（Ａ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の血清レベルおよび（Ｂ）アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の血清レベルを示す図である。血清ＡＬＴは、肝細胞障害に関するバイオマーカーである。血清ＡＳＴは多臓器不全に関するバイオマーカーである。
【図１８】複数菌による敗血症の盲腸結紮穿孔（ＣＬＰ）マウスモデルにおける生存期間を示す図であり、ＣＬＰ手術の直後から、示した用量でＮＯＸ−Ｄ２０またはビヒクルを腹腔内に毎日注射した。１つの群に、ＣＬＰ手術の直後に１ｍｇ／ｋｇのＮＯＸ−Ｄ２０の単回投与をし、続いてビヒクルを毎日注射した。偽動物にＣＬＰを伴わない手術をし、続いてビヒクルを注射した。
【図１９】示した用量でＮＯＸ−Ｄ２０により処理したマウス、ビヒクル処理マウス、および偽動物におけるＣＬＰ手術後１日目の（Ａ）血清クレアチニンレベル、（Ｂ）血液尿素窒素（ＢＵＮ）および（Ｃ）アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の血清レベルを示す図である。血清クレアチニンおよびＢＵＮは腎機能に関するバイオマーカーである。血清ＡＬＴは肝細胞障害に関するバイオマーカーである。
【図２０】ＣＬＰ手術後１日目の、組織傷害に関するバイオマーカーである（Ａ）血清乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、（Ｂ）血管漏出および（Ｃ）腹膜中へのＰＭＮ浸潤に関する、示した用量でのＮＯＸ−Ｄ２０の効果を示す図である。ビヒクル処理したマウスおよび偽動物を対照として示す。
【図２１】虚血／再灌流損傷により誘発された急性腎傷害のモデルにおける生存期間を示す図であり、示した用量でのＮＯＸ−Ｄ２１またはビヒクルを、手術１時間前に静脈内に、続いて３日にわたって２４時間毎に腹腔内に注射した。
【図２２】本発明による核酸分子を構成する２’デオキシリボヌクレオチドを示す図である。
【図２３】本発明による核酸分子を構成するリボヌクレオチドを示す図である。
【実施例１】
【０２５２】
ヒトおよびマウスのＣ５ａに結合することができる核酸分子
いくつかのＣ５ａ結合性核酸分子およびそれらの誘導体を同定し、それらのヌクレオチド配列を図１〜図５に示す。Ｃ５ａ結合性核酸分子を、
ａ）直接的なプルダウンアッセイ（実施例３）および／または比較競合的なプルダウンアッセイ（ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ  ｐｕｌｌ−ｄｏｗｎ  ａｓｓａｙ）を使用して、アプタマー、すなわちＤ−核酸分子として、
ｂ）表面プラズモン共鳴測定により（実施例４）、およびヒトＣ５ａ受容体を発現する細胞によるｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにより（実施例５）、スピーゲルマー、すなわちＬ−核酸分子として特徴付けた。さらに、スピーゲルマーを、Ｃ５ａにより誘発される初代ヒト好中球の活性化の阻害に関して（実施例６）およびｉｎ  ｖｉｖｏで（実施例８、９および１０）で試験した。スピーゲルマーおよびアプタマーを実施例２に記載するように合成した。
【０２５３】
こうして生成した核酸分子はわずかに異なる配列を示し、配列を配列ファミリーとして要約するまたは分類することができる。
【０２５４】
リボヌクレオチド配列モチーフを定義するために、曖昧なヌクレオチドについてのＩＵＰＡＣの略語を使用する。
Ｓ      強い            ＧまたはＣ；
Ｗ      弱い            ＡまたはＵ；
Ｒ      プリン          ＧまたはＡ；
Ｙ      ピリミジン      ＣまたはＵ；
Ｋ      ケト            ＧまたはＵ；
Ｍ      イミノ          ＡまたはＣ；
Ｂ      Ａでない        ＣまたはＵまたはＧ；
Ｄ      Ｃでない        ＡまたはＧまたはＵ；
Ｈ      Ｇでない        ＡまたはＣまたはＵ；
Ｖ      Ｕでない        ＡまたはＣまたはＧ；
Ｎ      全て            ＡまたはＧまたはＣまたはＵ
【０２５５】
別段の記載がない限り、核酸配列またはストレッチの配列それぞれをいずれも５’→３’方向に示す。
【０２５６】
２’−デオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチドとを区別するために、以下の略語を使用する。
２’−デオキシリボヌクレオチドに関して：ｄＧ、ｄＣ、ｄＴｄＡおよびｄＵ（図２２を参照されたい）。
リボヌクレオチドに関して：Ｇ、Ｃ、Ｔ、Ｕ（図２３を参照されたい）。
【０２５７】
図１〜図５に示すように、Ｃ５ａ結合性核酸分子は、潜在的なＣ５ａ結合モチーフを定義する、１つの中心ストレッチのヌクレオチドを含み、図１は配列ファミリーの様々な配列を示し、図２〜図５は、ＮＯＸ−Ｄ２０００１（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘ−ＤＮＡ−０２０とも呼ばれる、図４Ａ）およびＮＯＸ−Ｄ２１００１（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−２ｄＵ−１ｄＣ−０２０とも呼ばれる、図５）を含む核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の誘導体を示す。
【０２５８】
一般に、Ｃ５ａ結合性核酸分子は、５’末端および３’末端に末端ストレッチのヌクレオチド、すなわち第１の末端ストレッチのヌクレオチドおよび第２の末端ストレッチのヌクレオチドを含む。第１の末端ストレッチのヌクレオチドと第２の末端ストレッチのヌクレオチドとは相互にハイブリダイズすることができ、ハイブリダイゼーション時に、二本鎖構造が形成される。しかし、そのようなハイブリダイゼーションは、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏで分子内に必ずしも与えられるわけではない。
【０２５９】
Ｃ５ａ結合性核酸分子の３つのストレッチのヌクレオチドである第１の末端ストレッチのヌクレオチド、中心ストレッチのヌクレオチドおよび第２の末端ストレッチのヌクレオチドは、５’→３’方向に相互に、すなわち第１の末端ストレッチのヌクレオチド−中心ストレッチのヌクレオチド−第２の末端ストレッチのヌクレオチドで相互に配列されている。しかし、あるいは、第１の末端ストレッチのヌクレオチド、中心ストレッチのヌクレオチドおよび第２の末端ストレッチのヌクレオチドは、５’→３’方向に相互に、すなわち第２の末端ストレッチのヌクレオチド、中心ストレッチのヌクレオチド−第１の末端ストレッチのヌクレオチドで相互に配列されている。
【０２６０】
定義したストレッチの配列が、Ｃ５ａ結合性核酸分子の間で異なる場合があり、このことは、Ｃ５ａに対する結合親和性に影響を与える。異なるＣ５ａ結合性核酸分子の結合解析に基づくと、以下に記載する中心ストレッチのヌクレオチドおよびそのヌクレオチド配列が個々に、より好ましくはそれらの全体が、ヒトＣ５ａへの結合のために不可欠である。
【０２６１】
図１に示す本発明によるＣ５ａ結合性核酸分子はリボヌクレオチドからなり、図１〜図５に示す。Ｃ５ａ結合性核酸分子２７４−Ｈ６−００２を、Ｃ５ａ結合性核酸分子２７４−Ｄ５−００２に対する比較競合的なプルダウンアッセイ（プロトコルに関して実施例３を参照されたい）でアプタマーとして試験した。Ｃ５ａ結合性核酸分子２７４−Ｈ６−００２は、Ｃ５ａ結合性核酸分子２７４−Ｄ５−００２と比較して弱い結合親和性を示した。プラズモン共鳴測定により、Ｃ５ａ結合性核酸分子２７４−Ｂ５−００２、２７４−Ｄ５−００２、２７４−Ｃ８−００２、２７４−Ｃ８−００２−Ｇ１４（＝ＮＯＸ−Ｄ１９００１）、２７４−Ｃ５−００２および２７４−Ｇ６−００２を、それらのヒトおよびマウスのＣ５ａへの結合能力に関してスピーゲルマーとして試験した（実施例４、図１を参照されたい）。
【０２６２】
Ｃ５ａ結合性核酸分子２７４−Ｃ８−００２−Ｇ１４（＝ＮＯＸ−Ｄ１９００１）は、マウスＣ５ａに関してはＫＤが０．３ｎＭであり、ヒトＣ５ａに関してはＫＤが１．３８ｎＭである最大の結合親和性を示す（図１）。
【０２６３】
Ｃ５ａ結合性核酸分子２７４−Ｂ５−００２、２７４−Ｄ５−００２、２７４−Ｃ８−００２、２７４−Ｃ８−００２−Ｇ１４（＝ＮＯＸ−Ｄ１９００１）、２７４−Ｃ５−００２、２７４−Ｇ６−００２および２７４−Ｈ６−００２は、配列
５’ＡＵＧＵＧＧＵＧＫＵＧＡＲＧＧＧＨＵＧＵＫＧＧＧＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６９］を共有し、
Ｇ、Ａ、Ｕ、Ｃ、Ｈ、ＫおよびＲは、リボヌクレオチドである。
【０２６４】
Ｃ５ａ結合性核酸分子２７４−Ｃ８−００２、２７４−Ｃ８−００２−Ｇ１４（＝ＮＯＸ−Ｄ１９００１）および２７４−Ｃ５−００２はＣ５ａに対する最大の結合親和性を示し、中心ストレッチに関して以下の配列
ａ）２７４−Ｃ８−００２：５’ＡＵＧＵＧＧＵＧＵＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７０］、
ｂ）２７４−Ｃ８−００２−Ｇ１４：５’ＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７１］、
ｃ）２７４−Ｃ５−００２：５’ＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＧＧＧＧＵＵＧＵＧＧＧＧＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７２］を含み、
ｄＧ、Ａ、ＵおよびＣは、リボヌクレオチドである。
【０２６５】
発明者らは、驚くべきことに、中心ストレッチのヌクレオチドおよび第２の末端ストレッチのヌクレオチドの配列内において２’−デオキシリボヌクレオチドでリボヌクレオチドを置換することにより、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の結合親和性が向上することを発見した。特に、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１中において２’−デオキシリボヌクレオチドで６個以下のリボヌクレオチドを置換することにより、ヒトＣ５ａに対する結合親和性が３．５倍向上した。より詳細には、本発明者らは、驚くべきことに以下のことを発見した。
ａ）Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の中心ストレッチのヌクレオチド中の４、１１、１２、２５または２７位において１個の２’−デオキシリボヌクレオチドで１個のリボヌクレオチドを置換することにより、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の結合親和性と比較してヒトＣ５ａに対する結合親和性の向上がもたらされた（図２を参照されたい；スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ１６、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ１７、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３２）；
ｂ）Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の第２の末端ストレッチのヌクレオチド中の１位において１個の２’−デオキシリボヌクレオチドで１個のリボヌクレオチドを置換することにより、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の結合親和性と比較してヒトＣ５ａに対する結合親和性の向上がもたらされた（図２を参照されたい；スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ４０）；
ｃ）Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の中心ストレッチのヌクレオチド中の４／２５、４／２７または２５／２７位において２個の２’−デオキシリボヌクレオチドで２個のリボヌクレオチドを置換することにより、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の結合親和性と比較してビオチン化Ｃ５ａに対する結合親和性の向上がもたらされた（図３を参照されたい；スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３２、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３０−３２）；
ｄ）２個のリボヌクレオチドを置換することであって、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の第２の末端ストレッチのヌクレオチド中の１位において１個の２’−デオキシリボヌクレオチドで１個のリボヌクレオチドを置換することにより、およびＣ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の中心ストレッチのヌクレオチドの４、２５または２７位において１個の２’−デオキシリボヌクレオチドで１個のリボヌクレオチドを置換することにより、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の結合親和性と比較してヒトＣ５ａに対する結合親和性の向上がもたされた（図３を参照されたい；スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−４０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３０−４０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３２−４０）；
ｅ）３個のリボヌクレオチドを置換することであって、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の第２の末端ストレッチのヌクレオチド中の１位において１個の２’−デオキシリボヌクレオチドで１個のリボヌクレオチドを置換することにより、およびＣ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の中心ストレッチのヌクレオチドの４／２５、４／２７、２５／２７位において２個の２’−デオキシリボヌクレオチドで２個のリボヌクレオチドを置換することにより、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の結合親和性と比較してヒトＣ５ａに対する結合親和性の向上がもたされた（図３を参照されたい；スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３０−４０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３２−４０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３０−３２−４０）；
ｆ）Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の中心ストレッチのヌクレオチド中の０４／２５／２７位において３個の２’−デオキシリボヌクレオチドで３個のリボヌクレオチドを置換することにより、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の結合親和性と比較してビオチン化Ｃ５ａに対する結合親和性の向上がもたらされた（図３を参照されたい；スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３０−３２）；
ｇ）４個のリボヌクレオチドを置換することであって、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の第２の末端ストレッチのヌクレオチド中の１位において１個の２’−デオキシリボヌクレオチドで１個のリボヌクレオチドを置換することにより、およびＣ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の中心ストレッチのヌクレオチドの０４／２５／２７位において３個の２’−デオキシリボヌクレオチドで３個のリボヌクレオチドを置換することにより、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の結合親和性と比較してヒトＣ５ａに対する結合親和性の向上がもたされた（図３を参照されたい；スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３０−３２−４０）；
ｈ）５個のリボヌクレオチドを置換することであって、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の第２の末端ストレッチのヌクレオチド中の１位において１個の２’−デオキシリボヌクレオチドで１個のリボヌクレオチドを置換することにより、およびＣ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の中心ストレッチのヌクレオチドの０４／１１／２５／２７または０４／１２／２５／２７位において４個の２’−デオキシリボヌクレオチドで４個のリボヌクレオチドを置換することにより、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の結合親和性と比較してヒトＣ５ａに対する結合親和性の向上がもたされた（図３を参照されたい；スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−１６−３０−３２−４０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−１７−３０−３２−４０）；
ｉ）６個のリボヌクレオチドを置換することであって、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の第２の末端ストレッチのヌクレオチド中の１位において１個の２’−デオキシリボヌクレオチドで１個のリボヌクレオチドを置換することにより、およびＣ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の中心ストレッチのヌクレオチドの０４／１１／１２／２５／２７位において５個の２’−デオキシリボヌクレオチドで５個のリボヌクレオチドを置換することにより、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の結合親和性と比較してヒトＣ５ａに対する結合親和性の向上がもたされた（図３を参照されたい；スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−１６−１７−３０−３２−４０＝ＮＯＸ−Ｄ１９−００１−６ｘＤＮＡ）。
【０２６６】
Ｃ５ａ結合性核酸分子の中心ストレッチのヌクレオチドのいくつかの位置における２’−デオキシリボヌクレオチドによるリボヌクレオチドの置換によってＣ５ａに対する結合の向上がもたらされることを示すデータに基づいて、試験した全てのＣ５ａ結合性核酸分子の中心ストレッチを以下の一般式
５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＫＵｎ２ｎ３ＲＧＧＧＨＵＧＵＫＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６１］に要約することができ、
ｎ１は、ＵまたはｄＵであり、ｎ２は、ＧまたはｄＧであり、ｎ３は、ＡまたはｄＡであり、ｎ４は、ＵまたはｄＵであり、ｎ５は、ＵまたはｄＵであり、かつ
Ｇ、Ａ、Ｕ、Ｃ、Ｈ、Ｋ
およびＲは、リボヌクレオチドであり、かつｄＵ、ｄＧおよびｄＡは、２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
ａ）好ましい実施形態では、中心ストレッチのヌクレオチドは、
５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＵＵｎ２ｎ３ＡＧＧＧＵＵＧＵＧＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号６２］（２７４−Ｂ５−００２を参照されたい）；
の配列を含み、または
ｂ）好ましい実施形態では、中心ストレッチのヌクレオチドは、
５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＵＵｎ２ｎ３ＧＧＧＧＵＵＧＵＧＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ３’［配列番号６３］（２７４−Ｄ５−００２を参照されたい）
の配列を含み、または
ｃ）好ましい実施形態では、中心ストレッチのヌクレオチドは、
５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＵＵｎ２ｎ３ＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ３’［配列番号６４］（２７４−Ｃ８−００２を参照されたい）
の配列を含み、または
ｄ）好ましい実施形態では、中心ストレッチのヌクレオチドは、
５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＧＵｎ２ｎ３ＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ３’［配列番号６５］（ＮＯＸ−Ｄ１９００１を参照されたい）
の配列を含み、または
ｅ）好ましい実施形態では、中心ストレッチのヌクレオチドは、
５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＧＵｎ２ｎ３ＧＧＧＧＵＵＧＵＧＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ３’［配列番号６６］（２７４−Ｃ５−００２を参照されたい）
の配列を含み、または
ｆ）好ましい実施形態では、中心ストレッチのヌクレオチドは、
５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＧＵｎ２ｎ３ＧＧＧＧＡＵＧＵＧＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ３’［配列番号６７］（２７４−Ｇ６−００２を参照されたい）
の配列を含み、または
ｇ）好ましい実施形態では、中心ストレッチのヌクレオチドは、
５’ＡＵＧｎ１ＧＧＵＧＵＵｎ２ｎ３ＧＧＧＧＣＵＧＵＧＧＧＧｎ４Ｇｎ５ＣＧＡＣＧＣＡ３’［配列番号６８］（２７４−Ｈ６−００２を参照されたい）
の配列を含む。
【０２６７】
Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ１６、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ１７、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３２、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３２、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−４０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３０−３２、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３０−４０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３２−４０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３０−３２、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３０−４０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３２−４０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３０−３２−４０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３０−３２−４０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−１６−３０−３２−４０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−１７−３０−３２−４０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−１６−１７−３０−３２−４０（図２および図３を参照されたい）はＣ５ａに対する最大の結合親和性を示し、中心ストレッチのヌクレオチドに関して以下の配列を含み、
ａ）５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７３］（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−４０を参照されたい）；または
ｂ）５’ＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵｄＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７４］（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ１６参照）；または
ｃ）５’ＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵＧｄＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７５］（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ１７参照）；または
ｄ）５’ＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７６］（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３０−４０を参照されたい）；または
ｅ）５’ＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７７］（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３２、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３２−４０を参照されたい）；または
ｆ）５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７８］（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３０−４０を参照されたい）；または
ｇ）５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号７９］（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３２、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３２−４０を参照されたい）；
ｈ）５’ＡＵＧＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号８０］（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３０−３２、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ３０−３２−４０を参照されたい）；または
ｉ）５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号８１］（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３０−３２、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−３０−３２−４０）；または
ｊ）５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵｄＧＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号８２］（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−１６−３０−３２−４０を参照されたい）；または
ｋ）ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵＧｄＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号８３］（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−１７−３０−３２−４０を参照されたい）；または
ｌ）５’ＡＵＧｄＵＧＧＵＧＧＵｄＧｄＡＡＧＧＧＵＵＧＵＵＧＧＧｄＵＧｄＵＣＧＡＣＧＣＡ  ３’［配列番号８４］（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−１６−１７−３０−３２−４０＝ＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘＤＮＡを参照されたい）、
Ｇ、Ａ、ＵおよびＣは、リボヌクレオチドであり、かつｄＧ、ｄＡおよびｄＵは、２’−デオキシリボヌクレオチドである。
【０２６８】
表面プラズモン共鳴測定により決定し、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９およびＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−１６−１７−３０−３２−４０（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘＤＮＡとも呼ばれる）に関して例示するように、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１の結合親和性は、２’−デオキシリボヌクレオチドで１〜６個のリボヌクレオチドを置換することにより著しく改善された（図６）：
ＮＯＸ−Ｄ１９００１：１．３８ｎＭのＫＤ、
ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９：７０９ｐＭのＫＤ、
ＮＯＸ−Ｄ１９００１−Ｄ０９−１６−１７−３０−３２−４０：３６１ｐＭのＫＤ。
【０２６９】
ＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘＤＮＡは、リボヌクレオチドの代わりに５個の２’−デオキシリボヌクレオチドを有する中心ストレッチのヌクレオチド、５個のリボヌクレオチドを有する第１の末端ストレッチのヌクレオチド、および４個のリボヌクレオチドと１個の２’−デオキシリボヌクレオチドとを有する第２の末端ストレッチのヌクレオチドを含む。驚くべきことに、発明者らは、４個または３個のヌクレオチドに対する親和性を低下させることなく、第１のおよび第２の末端ストレッチのヌクレオチドを切り詰めることができることを明らかにすることができた。本明細書に示すように、親和性を保持しつつ、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘＤＮＡの第１のおよび第２の末端ストレッチのヌクレオチドを５個のヌクレオチドから３個のヌクレオチドに切り詰めることができた（ＮＯＸ−Ｄ２０００１とも呼ばれるＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘＤＮＡ−０２０を参照されたい）（図４Ａ）。
【０２７０】
図４は、リボヌクレオチドの２’−デオキシリボヌクレオチドへの置換および切り詰めの成功した組み合わせを実証し、それぞれリボヌクレオチドならびに５個のヌクレオチドを有する第１のおよび第２の末端ストレッチのヌクレオチドからなるＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘＤＮＡおよびＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘＤＮＡ−０２０（ＮＯＸ−Ｄ２０００１とも呼ばれる）の母分子であるＮＯＸ−Ｄ１９００１は、１．３８ｎＭの結合親和性（ＫＤ）を有する。６個のリボヌクレオチドの（ＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘＤＮＡをもたらす）２’−デオキシリボヌクレオチドへの置換、ならびに（ＮＯＸ−Ｄ２０００１とも呼ばれるＮＯＸ−Ｄ１９００１−６ｘＤＮＡ−０２０をもたらす）３個のヌクレオチドを有する第１のおよび第２の末端ストレッチのヌクレオチドへの切り詰め後に、ヒトＣ５ａに対する結合親和性は４を超える倍数で向上した（ＮＯＸ−Ｄ２０００１、０．３ｎＭのＫＤ）。ヌクレオチドの第１のまたは第２のストレッチのヌクレオチドの１個のヌクレオチドへの切り詰めにより活性の低下がもたらされるが、そのような分子は、１０ｎＭ未満のＫＤでＣ５ａに依然として結合する（図４Ａ、図４Ｂを参照されたい）。
【０２７１】
２’−デオキシリボヌクレオチドによるリボヌクレオチドの成功した置換に関する別の例を図５に示す。分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１−０２０は、ＮＯＸ−Ｄ１９００１の切り詰められた誘導体であり、ＮＯＸ−Ｄ１９００１に関して決定した１．３８ｎＭ（図１および図２を参照されたい）の代わりに１１．３ｎＭ（図５を参照されたい）のＫＤを有する。両方の分子が同一の中心ストレッチのヌクレオチドを含むが、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−０２０は、５個のリボヌクレオチドの代わりに３個のみの第１の末端ストレッチと、５個のリボヌクレオチドの代わりに３個のみの第２の末端ストレッチとを含む。中心ストレッチのヌクレオチドにおける２’−デオキシリボヌクレオチドによる２個または３個のリボヌクレオチドの置換、および任意選択的に、第２の末端ストレッチのヌクレオチドにおける２’−デオキシリボヌクレオチドによる１個のリボヌクレオチドの置換により、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−０２０の結合親和性を、１０を超える倍数で改善することができる（図５、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−２ｘＤＮＡ−０２０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−３ｘＤＮＡ−０２０、ＮＯＸ−Ｄ２１００１とも呼ばれるＮＯＸ−Ｄ１９００１−２ｄＵ−１ｄＣ−０２０、ＮＯＸ−Ｄ１９００１−３ｄＵ−１ｄＣ−０２０を参照されたい）。
【０２７２】
これらをまとめると、Ｃ５ａ結合性核酸分子の第１のおよび第２の末端ストレッチは、１個、２個、３個、４個または５個のヌクレオチドを含み（図１〜図５）、ストレッチは任意選択的に、相互にハイブリダイズし、ハイブリダイゼーション時に二本鎖構造が形成される。この二本鎖構造は、１〜５個の塩基対からなることができる。しかし、そのようなハイブリダイゼーションは、必ずしも分子内で生じるとは限らない。
【０２７３】
試験した全てのＣ５ａ結合性核酸分子の第１の末端ストレッチのヌクレオチドおよび第２の末端ストレッチのヌクレオチドの解析により、第１の末端ストレッチのヌクレオチドの一般式は５’Ｚ１Ｚ２Ｚ３Ｚ４Ｇ３’であり、第２の末端ストレッチのヌクレオチドの一般式は５’Ｚ５Ｚ６Ｚ７Ｚ８Ｚ９３’であり、
Ｚ１は、Ｇまたは不在であり、Ｚ２は、Ｓまたは不在であり、Ｚ３は、Ｓまたは不在であり、Ｚ４は、Ｂまたは不在であり、Ｚ５は、ＣまたはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖまたは不在であり、Ｚ７は、Ｓまたは不在であり、Ｚ８は、Ｓまたは不在であり、Ｚ９は、Ｃまたは不在であり、かつ
Ｇ、Ｓ、Ｂ、Ｃ、Ｖは、リボヌクレオチドであり、かつｄＣは２’−デオキシリボヌクレオチドであり、
第１の好ましい実施形態では、
ａ）Ｚ１は、Ｇであり、Ｚ２は、Ｓであり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、Ｃであるか、または
ｂ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、Ｓであり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｃ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｄ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、不在であり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、不在であり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｅ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、Ｓであり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、Ｃであるか、または
ｆ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、Ｃであるか、または
ｇ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、不在であり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、Ｃであるか、または
ｈ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、不在であり、Ｚ４は、不在であり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、Ｃであるか、または
ｉ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｊ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、不在であり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｋ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、不在であり、Ｚ４は、不在であり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、Ｓであり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｌ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、Ｓであり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｍ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、Ｓであり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、不在であり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｎ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、不在であり、Ｚ４は、不在であり、Ｚ５は、Ｃであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｏ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、不在であり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、Ｓであり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｐ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、Ｖであり、Ｚ７は、不在であり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であるか、または
ｑ）Ｚ１は、不在であり、Ｚ２は、不在であり、Ｚ３は、Ｓであり、Ｚ４は、Ｂであり、Ｚ５は、ＣもしくはｄＣであり、Ｚ６は、不在であり、Ｚ７は、不在であり、Ｚ８は、不在であり、Ｚ９は、不在であり、
第２の好ましい実施形態では、
ａ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＣＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＣＡＧＧＣ’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｂ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＣＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＡＧＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｃ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＣＣＵＧ３’もしくは５’ＣＵＧ３’もしくは５’ＵＧ３’もしくは５’Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＡＧＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｄ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＡＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｅ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＧＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｆ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＧＣＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｇ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＣＵＧ３’もしくは５’ＵＧ３’もしくは５’ＣＧ３’もしくは５’Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＡＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｈ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＡＣ３’もしくは５’ｄＣＣ３’もしくは５’ｄＣＡ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｉ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＡＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｊ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＵＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＡ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｋ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｌ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｍ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’Ｇ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｎ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｏ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｐ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ｄＣＣ３’のヌクレオチド配列を含むか、または
ｑ）前記第１の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＧＣＧ３’のヌクレオチド配列を含み、かつ
前記第２の末端ストレッチのヌクレオチドが、５’ＣＧＣ３’のヌクレオチド配列を含む。
【０２７４】
これらの機能性を証明するために、Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９００１、ＮＯＸ−Ｄ２０００１およびＮＯＸ−Ｄ２１００１を、その５’末端にアミノ基を含むスピーゲルマーとして合成した。前記アミノ修飾スピーゲルマーに対して４０ｋＤａのＰＥＧ部分を結合させ、Ｃ５ａ結合性スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ１９、ＮＯＸ−Ｄ２０およびＮＯＸ−Ｄ２１をもたらした。スピーゲルマーの合成およびＰＥＧ化を実施例２に記載する。
【０２７５】
Ｃ５ａ結合性核酸分子の機能性に関して、結合親和性の向上の効果を明らかにすることができた。走化性アッセイにより決定したように（実施例５）、リボヌクレオチドのみからなるＣ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−Ｄ１９（ＩＣ５０＝１．９ｎＭ）は、ＮＯＸ−２０、６個のリボヌクレオチドが２’−デオキシリボヌクレオチドに置換されているＮＯＸ−Ｄ１９の誘導Ｃ５ａ結合性核酸分子（ＩＣ５０＝０．２８ｎＭ）よりもヒトＣ５ａの機能を阻害する作用が弱かった（図７）。
【０２７６】
ＮＯＸ−Ｄ２０は、１９ｐＭの解離定数ＫＤでマウスＣ５ａに対する非常に高い結合親和性を示したが、ヒトＣ５ａに関しては２９９ｐＭのＫＤを決定した（実施例４、図８）。ＮＯＸ−Ｄ２０は、走化性アッセイにより決定した２７５ｐＭの阻害定数ＩＣ５０でヒトＣ５ａの機能を阻害する（実施例５、図７および図１２Ａ）。化学量論的理由のために、マウスＣ５ａに関する走化性アッセイの感度は、３００ｐＭであるマウスＣ５ａの刺激濃度に起因して１５０ｐＭに制限される。したがって、マウスＣ５ａに関しては、ＮＯＸ−Ｄ２０に関して１４０ｐＭのＩＣ５０に決定した（実施例５、図１２Ａ）。
【０２７７】
ＮＯＸ−Ｄ２０はラットまたはアカゲザル由来のＣ５ａへの結合を示さず、非常に高い標的特異性を示した（図８）。ヒト、マウス、ラットおよびアカゲザルのＣ５ａのポリペプチド配列アラインメントおよび決定した特異性から、ヒトＣ５ａの残基セリン１６およびバリン２８がＣ５ａ上の不可欠の結合残基である可能性が最も高い（図１１）。これらはヒトおよびマウスのＣ５ａで保存されているが、アカゲザルおよびラットのＣ５ａでは異なる。
【０２７８】
ＮＯＸ−Ｄ２１はＮＯＸ−Ｄ２０の主要な親和性向上部位を含有し、Ｂｉａｃｏｒｅ測定により明らかなように、ヒトおよびマウスのＣ５ａに対する高い親和性を示した（ＫＤ（マウスＣ５ａ）＝２９ｐＭ、ＫＤ（ヒトＣ５ａ）＝８１５ｐＭ、ＫＤ（ヒトＣ５）＝４１３ｐＭ、図１１を参照されたい）。ＮＯＸ−Ｄ２１は、走化性アッセイにより決定したように４７６ｐＭの阻害定数ＩＣ５０でヒトＣ５ａの機能を阻害する（実施例５、図１２Ｂ）。
【０２７９】
Ｃ末端のアルギニン残基の酵素的切断により、ｄｅｓ−Ａｒｇ−Ｃ５ａ（Ｃ５ａｄｅｓＡｒｇとも呼ばれる）として知られているＣ５ａの切り詰められたバージョンをｉｎ  ｖｉｖｏで生成した。ｄｅｓ−Ａｒｇ−Ｃ５ａの生物学的機能は完全に理解されていないが、ｄｅｓ−Ａｒｇ−Ｃ５ａが白血球活性化機能を保持する証拠がある。したがって、ＮＯＸ−Ｄ２０もｄｅｓ−Ａｒｇ−Ｃ５ａに結合するかどうかを調べた。ＮＯＸ−Ｄ２０は、固定化した組み換えヒトｄｅｓ−Ａｒｇ−Ｃ５ａに用量依存的に結合することを示した（図９）。
【０２８０】
記載した詳細な動態評価は、ヒトｄｅｓ−Ａｒｇ−Ｃ５ａが、同等の親和性を有するＮＯＸ−２０により完全長のヒトＣ５ａに結合し、それぞれの解離定数が３１６ｐＭおよび２９９ｐＭであることを示した。ＮＯＸ−Ｄ２１は、マウスおよびヒトのｄｅｓ−Ａｒｇ−Ｃ５ａに、それぞれ２８ｐＭおよび８５４ｐＭの解離定数で結合した（図１０）。したがって、Ｃ５ａのｄｅｓ−Ａｒｇ−Ｃ５ａへの切断後であっても、ＮＯＸ−２０およびＮＯＸ−Ｄ２１等のＣ５ａ結合性核酸分子は、依然としてその標的に結合する。
【０２８１】
驚くべきことに、ＮＯＸ−Ｄ２０およびＮＯＸ−Ｄ２１も、ヒト血漿から精製したＣ５に、それぞれ１６４ｐＭおよび４１３ｐＭの親和性で結合することを示した（図９および図１０）。この現象を予測することができなかった。しかし、Ｃ５ａはＣ５の一部であることから、補体系が活性化される場合にＣ５転換酵素により、または活性化された凝固系のトロンビンまたはその他のメンバーによりＣ５が切断される可能性がある。さらに、ヒト血漿から精製したＣ５は、アスパラギン６４上に天然グリコシル化構造を担持する。グリコシル化は、ＮＯＸ−Ｄ１９、ＮＯＸ−Ｄ２０、ＮＯＸ−Ｄ２１および本発明によるその他の核酸分子の同定に使用したマウスの鏡像Ｃ５ａポリペプチド上には存在しなかった。
【０２８２】
大型のＣ５タンパク質の予想される低クリアランスおよび３５０〜３９０ｎＭの公開された血漿濃度により、Ｃ５への結合が薬物動態に影響を及ぼす場合がある。Ｃ５への結合は薬力学にも影響を及ぼす場合がある。Ｃ５は、ＮＯＸ−２０およびＮＯＸ−Ｄ２１等のＣ５ａ結合性核酸分子により結合されるが、Ｃ５ａは、Ｃ５ａが遊離されて受容体のシグナル伝達をもたらす可能性がある前に、スピーゲルマーによりすでに遮断されている。
【実施例２】
【０２８３】
アプタマーおよびスピーゲルマーの合成および誘導体化
小規模な合成
アプタマー（Ｄ−ＲＮＡ核酸）およびスピーゲルマー（Ｌ−ＲＮＡ核酸）を、ＡＢＩ３９４合成機（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ、米国）を用いて、２’ＴＢＤＭＳ  ＲＮＡホスホラミダイト化学（ＤａｍｈａおよびＯｇｉｌｖｉｅ、１９９３）を使用する固相合成によって生成した。Ｄ−およびＬ−立体配置のｒＡ（Ｎ−Ｂｚ）−、ｒＣ（Ａｃ）−、ｒＧ（Ｎ−ｉｂｕ）−およびｒＵ−ホスホラミダイトをＣｈｅｍＧｅｎｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡから購入した。アプタマーおよびスピーゲルマーを、ゲル電気泳動によって精製した。
【０２８４】
大規模な合成および改変
スピーゲルマーを、ＡｋｔａＰｉｌｏｔ１００合成機（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ）を用いて、２’ＴＢＤＭＳ  ＲＮＡホスホラミダイト化学（ＤａｍｈａおよびＯｇｉｌｖｉｅ、１９９３）を使用する固相合成によって生成した。Ｌ−ｒＡ（Ｎ−Ｂｚ）−、Ｌ−ｒＣ（Ａｃ）−、Ｌ−ｒＧ（Ｎ−ｉｂｕ）−およびＬ−ｒＵ−ホスホラミダイトを、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡから購入した。５’−アミノ改変体を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．（Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、ＭＡ、米国）から購入した。未改変または５’−アミノ改変のスピーゲルマーの合成を、Ｌ−ｒｉｂｏＧ、Ｌ−ｒｉｂｏＣ、Ｌ−ｒｉｂｏＡまたはＬ−ｒｉｂｏＵ改変ＣＰＧポアサイズ１０００Å（Ｌｉｎｋ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｇｌａｓｇｏｗ、英国）上で開始した。カップリング（１サイクル当たり１５分）のために、アセトニトリル中の０．３Ｍベンジルチオテトラゾール（ＣＭＳ−Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ａｂｉｎｇｄｏｎ、英国）、およびアセトニトリル中の３．５当量のそれぞれの０．１Ｍホスホラミダイト溶液を使用した。酸化−キャッピングのサイクルを使用した。オリゴヌクレオチド合成のためのさらなる標準的な溶媒および試薬は、Ｂｉｏｓｏｌｖｅ（Ｖａｌｋｅｎｓｗａａｒｄ、オランダ）から購入した。スピーゲルマーをＤＭＴ−ＯＮで合成した。脱保護の後、スピーゲルマーを調製用ＲＰ−ＨＰＬＣ（Ｗｉｎｃｏｔｔら、１９９５）によって、Ｓｏｕｒｃｅ１５ＲＰＣ媒体（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を使用して精製した。５’ＤＭＴ基を、８０％酢酸を用いて除去した（室温にて３０分）。それに続いて、２Ｍ  ＮａＯＡｃ水溶液を添加し、スピーゲルマーを、接線フローろ過によって、５Ｋ再生セルロースメンブラン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）を使用して脱塩した。
【０２８５】
スピーゲルマーのＰＥＧ化
ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるスピーゲルマーの血漿滞留時間を延長させるために、スピーゲルマーを、５’末端において４０ｋＤａのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分に共有結合によって結合させた。
ＰＥＧ化するために（ＰＥＧ化のための方法の技術的な詳細については、欧州特許出願第ＥＰ１  ３０６  ３８２号を参照されたい）、精製した５’−アミノ改変スピーゲルマーを、Ｈ２Ｏ（２．５ｍｌ）、ＤＭＦ（５ｍｌ）および緩衝液Ａ（５ｍｌ；クエン酸Ｈ２Ｏ［７ｇ］、ホウ酸［３．５４ｇ］、リン酸［２．２６ｍｌ］および１Ｍ  ＮａＯＨ［３４３ｍｌ］を混合し、水を添加して１ｌの最終容積となすことによって調製し；１Ｍ  ＨＣｌを用いてｐＨ＝８．４に加減した）の混合液中に溶解させた。
【０２８６】
スピーゲルマー溶液のｐＨを、１Ｍ  ＮａＯＨを用いて８．４とし、次いで、４０ｋＤａのＰＥＧ−ＮＨＳエステル（Ｊｅｎｋｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ａｌｌｅｎ、ＴＸ、米国）を、３７°Ｃにおいて各０．２５当量を６回に分けて３０分毎に添加して、７５〜８５％の収率を達成した。反応混合物のｐＨは、ＰＥＧ−ＮＨＳエステルを添加する間、１Ｍ  ＮａＯＨを用いて８〜８．５に保った。
【０２８７】
反応混合物を、４ｍｌの尿素溶液（８Ｍ）および４ｍｌの緩衝液Ｂ（Ｈ２Ｏ中の０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム）と混ぜ、１５分かけて９５°Ｃまで加熱した。次いで、ＰＥＧ化スピーゲルマーを、ＲＰ−ＨＰＬＣにより、Ｓｏｕｒｃｅ１５ＲＰＣ媒体（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いて、アセトニトリル勾配（緩衝液Ｂ；緩衝液Ｃ：アセトニトリル中の０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム）を使用して精製した。過剰なＰＥＧは５％緩衝液Ｃにおいて、ＰＥＧ化スピーゲルマーは１０〜１５％緩衝液Ｃにおいて溶出した。＞９５％の純度（ＨＰＬＣによって判定）を有する生成物の画分を組み合わせ、４０ｍｌの３Ｍ  ＮａＯＡＣと混合した。ＰＥＧ化スピーゲルマーは、接線フローろ過（５Ｋ再生セルロースメンブラン、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）によって脱塩した。
【実施例３】
【０２８８】
アプタマーのためのＣ５ａへの結合定数の決定（プルダウンアッセイ）
直接的なプルダウンアッセイ
Ｃ５ａ結合性核酸の親和性を、ビオチン化マウスＤ−Ｃ５ａ（配列番号８９）に対するアプタマー（Ｄ−ＲＮＡ核酸）の結合として、プルダウンアッセイのフォーマットにおいて３７°Ｃで測定した。アプタマーは、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって、［γ−３２Ｐ］−標識ＡＴＰ（Ｈａｒｔｍａｎｎ  Ａｎａｌｙｔｉｃ、Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、ドイツ）を使用して５’−リン酸標識した。標識されたアプタマーの特異的な放射活性は、２００，０００〜８００，０００ｃｐｍ／ピコモルであった。アッセイを、選択緩衝液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ  ７．４；１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；５ｍＭ  ＫＣｌ；１ｍＭ  ＭｇＣｌ２；１ｍＭ  ＣａＣｌ２；４Ｕ／ｍｌ  ＲＮａｓｅ阻害剤（ＲＮａｓｅＯＵＴ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）；結合パートナーが、使用するプラスチック製品または固定化マトリックスの表面に吸着するのを予防するために、５０μｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）および１０μｇ／ｍｌの非特異的スピーゲルマーを補充した０．１％［ｗ／ｖｏｌ］ツイーン２０）中で実施した。低い濃度において平衡に達するために、アプタマーを、変性および再生の後に、０．２〜１ｎＭの濃度で、選択緩衝液中、ビオチン化マウスＤ−Ｃ５ａの変化させた量と一緒に３７°Ｃで３〜４時間インキュベートした。ビオチン化マウスＤ−Ｃ５ａの濃度範囲は、６４０ｐＭ〜１０μＭに設定し；全反応容積は８０〜２００μｌであった。選択緩衝液を用いてあらかじめ平衡化してある５μｌのＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎ  Ａｇａｒｏｓｅ  Ｐｌｕｓ粒子（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）上に、ビオチン化マウスＤ−Ｃ５ａ、およびアプタマーとビオチン化マウスＤ−Ｃ５ａとの複合体を固定化した。粒子を、サーモミキサー中で、懸濁液中に３７°Ｃで３０分間保った。上清を取り除き適切に洗浄した後、固定化した放射活性をシンチレーションカウンター中で定量化した。結合のパーセントを、ビオチン化マウスＤ−Ｃ５ａの濃度に対してプロットし、解離定数を、１：１の化学量論を推測し、ソフトウエアアルゴリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）を使用することによって得た。
【０２８９】
競合的なプルダウンアッセイ
異なるＤ−Ｃ５ａ結合性核酸を比較するために、競合的なランク付けアッセイを実施した。この目的では、利用可能な最もアフィンなアプタマーを放射標識し（上記を参照されたい）、参照として用いた。それを、変性および再生の後、選択緩衝液中で、ビオチン化マウスＤ−Ｃ５ａと共に３７°Ｃで、競合がない場合には４μｌのＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎ  Ａｇａｒｏｓｅ  Ｐｌｕｓ粒子（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）上への固定化および洗浄の後に約５〜１０％のビオチン化マウスＤ−Ｃ５ａへの結合をもたらす条件下でインキュベートした。過剰量の変性および再生した非標識Ｄ−ＲＮＡアプタマー変異体を、９ｐＭ〜４００ｎＭの範囲の濃度で、標識参照アプタマーと共に平行結合反応に添加し；全反応容積は１６０〜４００μｌであった。３〜４時間のインキュベーション後にビオチン化マウスＤ−Ｃ５ａ、およびアプタマーとビオチン化との複合体を固定化し、アッセイを上記に記載したように解析した。試験しようとするアプタマーは、参照アプタマーと競合して標的に結合し、したがって、それらの結合の特徴に依存して、結合のシグナルが減少した。次いで、このアッセイにおいて最も活性であることが見出されたアプタマーを、さらなるアプタマー変異体の競合解析のための新しい参照として用いることができた。
【実施例４】
【０２９０】
Ｃ５ａおよび関連ペプチドに結合するスピーゲルマーのＢｉａｃｏｒｅ測定
装置を３７°Ｃの不変温度に設定した。ＤＥＳＯＲＢ法を使用してＢｉａｃｏｒｅ２０００装置を洗浄した後、新しいチップについて各実験／固定化を開始した。メンテナンスチップのドッキング後、装置に脱着溶液１（０．５％のドデシル硫酸ナトリウム、ＳＤＳ）、脱着溶液２（５０ｍＭのグリシン、ｐＨ９．５）およびＨＢＳ−ＥＰ緩衝液を連続してプライミングした。最後に、系にＨＢＳ−ＥＰ緩衝液をプライミングした。
【０２９１】
Ｂｉａｃｏｒｅ実験用にＣ５ａ結合性スピーゲルマーを滅菌水で調製し、濃度を１００μＭとした。
【０２９２】
ＣＭ５チップをＨＢＳ−ＥＰ緩衝液でプライミングし、安定したベースラインが観察されるまで平衡化した。フローセルを、フローセル４から始めてフローセル１まで固定化した。０．４ＭのＥＤＣおよび０．１ＭのＮＨＳの１：１混合物１００μｌを、ＱＵＩＣＫＩＮＪＥＣＴコマンドを使用して１０μｌ／分の流量で注入した。ＮＨＳ／ＥＤＣ注入後のＲＵの増加（典型的には、ＣＭ５チップで１５０〜５００ＲＵ）により、フローセルの活性化をモニタリングした。Ｃ５ａに関しては１０ｍＭのＮａＡｃ  ｐＨ５．５中の、またはヒトＣ５に関しては１０ｍＭのＮａＡｃ  ｐＨ５．５中の、０．１〜１μｇ／ｍｌの溶液をバイアルに移し、ＭＡＮＵＡＬＩＮＪＥＣＴコマンドを使用して１０μｌ／分の流量で注入した。１０００〜３０００ＲＵをチップに固定化した。次いで、７０μｌの１Ｍエタノールアミン塩酸塩、ｐＨ８を１０μｌ／分の流量で注入することにより、全てのフローセルを遮断した。３０μｌの再生溶液（１ＭのＮａＣｌ）を３０μｌ／分の流量で注入し、非特異的に結合しているタンパク質をチップ表面から除去した。
【０２９３】
最低濃度で開始して、実行緩衝液で希釈した２，０００−１，０００−５００−２００−１２５−６２．５−３１．３−１５．６（２ｘ）−７．８−３．９−１．９５−０．９８−０．４８−０．２４−０．１２−０ｎＭの濃度での一連のスピーゲルマー注入により、動態パラメータおよび解離定数を評価した。全ての実験において、３０μｌ／分の流量で、２４０の会合時間および２４０秒の解離時間を定義するＫｉｎｊｅｃｔコマンドを使用して、３７°Ｃで解析を実施した。アッセイを二重参照し、ＦＣ１は（遮断）表面対照として用い（各スピーゲルマー濃度のバルク寄与）、被検体を含まない一連の緩衝液注入は、緩衝液それ自体のバルク寄与を決定した。少なくとも１つのスピーゲルマー濃度を２回注入し、実験中の再生効率およびチップの完全性をモニタリングした。３０μｌ／分の流量で６０μｌの１Ｍ  ＮａＣｌを注入することにより再生を実施した。各再生サイクル後のベースラインの安定化時間を３０μｌ／分で１分に設定した。
【０２９４】
データ解析および解離定数（ＫＤ）の算出を、定数ＲＩおよび１×１０７［ＲＵ／Ｍ＊ｓ］の質量輸送係数による質量輸送評価によって改変されたＬａｎｇｍｕｉｒ１：１化学量論適合アルゴリズムを使用するＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ３．１．１ソフトウエア（ＢＩＡＣＯＲＥ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）により行なった。
【実施例５】
【０２９５】
走化性アッセイにおける阻害濃度の決定
Ｃ５ａのためのヒト受容体を発現する細胞株の生成
ヒトＣ５ａ受容体をコードするプラスミド（ＮＣＢＩ寄託ＮＭ＿００１７３６、ｐｃＤＮＡ３．１＋）でＢＡ／Ｆ３マウスプロＢ細胞をトランスフェクトすることにより、Ｃ５ａのためのヒト受容体を発現する安定的なトランスフェクト細胞株を生成した。Ｃ５ａＲを発現する細胞をゲネチシン処理により選択し、ＲＴ−ＰＣＲにより発現に関して試験し、走化性アッセイにより機能性に関して試験した。
【０２９６】
走化性アッセイ
実験前日、細胞を０．３×１０６個／ｍｌで新しいフラスコ中に播種する。実験のために、細胞を遠心分離し、ＨＢＨ（ＨＢＳＳ、１ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミンおよび２０ｍＭのＨＥＰＥＳを含有する）中で１回洗浄し、１．３３×１０６個の細胞／ｍｌで再懸濁させた。この懸濁液７５μｌを、５μｍの細孔を有する９６ウエルのＣｏｒｎｉｎｇ  Ｔｒａｎｓｗｅｌｌプレート（Ｃｏｓｔａｒ  Ｃｏｒｎｉｎｇ、＃３３８８；ＮＹ，ＵＳＡ）の上側のコンパートメントに添加した。下側のコンパートメントでは、組み換えヒトＣ５ａ（配列番号５０）またはマウスＣ５ａ（配列番号５４）を、細胞の添加前に、２０〜３０分間にわたって３７°Ｃにおいて、２３５μｌのＨＢＨ中において様々な濃度でスピーゲルマーと一緒にプレインキュベートした。細胞を３７°Ｃで３時間遊走させた。その後、挿入プレート（上側のコンパートメント）を除去し、リン酸塩緩衝食塩水中の４４０μＭのレサズリン（Ｓｉｇｍａ、Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ、ドイツ）３０μｌを下側のコンパートメントに添加した。２．５時間にわたる３７°Ｃでのインキュベーション後、蛍光を、５４４ｎｍの励起波長および５９０ｎｍの発光波長で測定した。
【０２９７】
蛍光値を、バックグラウンドの蛍光（ウエル中にＣ５ａなし）について補正し、スピーゲルマー濃度に対してプロットした。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用する非線形回帰（４パラメータフィット）で、ＩＣ５０値を決定した。あるいは、スピーゲルマーを含まない試料（Ｃ５ａのみ）に関する値を１００％に設定し、スピーゲルマーを含む試料に関する値をこのパーセントとして算出する。パーセント値をスピーゲルマー濃度に対してプロットし、ＩＣ５０値を上記に記載したように決定する。
【０２９８】
ヒトおよびマウスのＣ５ａについての最大半量有効濃度（ＥＣ５０）の決定
様々なヒトＣ５ａまたはマウスＣ５ａ濃度の方向へのＢＡ／Ｆ３／Ｃ５ａＲ細胞の３時間の遊走後、ヒトおよびマウスのＣ５ａについての用量応答曲線を得たが、これは、ｈｕＣ５ａについては０．１ｎＭの半量有効濃度（ＥＣ５０）を示し、ｍＣ５ａについては０．３ｎＭの半量有効濃度（ＥＣ５０）を示した。スピーゲルマーによる走化性の阻害に関する実験のために、０．１ｎＭのヒトＣ５ａおよび０．３ｎＭのマウスＣ５ａを使用した。
【実施例６】
【０２９９】
Ｃ５ａにより誘発される初代ヒト好中球の活性化の阻害
ヒトＰＭＮの単離
室温での不連続勾配遠心分離により、多形核白血球（ＰＭＮ）を全血液から単離した。クエン酸デキストロース含有採血管（Ｓａｒｓｔｅｄｔ）中に血液を収集した。デキストラン５００（Ａｃｃｕｒａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）を２重量／体積％の最終濃度まで添加し、血液／デキストランをＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ（１．０７７ｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ）上に積層した。遠心分離後、勾配界面上の全ての液体および細胞を破棄した。ペレットおよび上記の残存する液体の約８０％超を回収し、ボルベン８０体積／体積％（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｋａｂｉ）、ＰＢＳ１６体積／体積％（Ｓｉｇｍａ）およびＡＣＤ４体積／体積％（Ｓｉｇｍａ）の混合物で１：１に希釈した。混合物を４００ｒｐｍで１５分にわたり遠心分離した。上清を収集し、１，０００ｒｐｍで７分にわたり遠心分離した。ペレットを徐々に再懸濁させ、残存する赤血球を溶解により除去した。
【０３００】
Ｃ５ａにより誘発されるヒトＰＭＮの走化性の阻害
走化性プレートの下方チャンバー中において、ＨＢＳＳ＋０．０１％ＢＳＡ＋２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ中の示した濃度のＮＯＸ−Ｄ１９またはＮＯＸ−Ｄ２０と共にヒトＣ５ａ（１ｎＭ）をプレインキュベートした。走化性プレートの上方チャンバーにヒト好中球を添加し、３７°Ｃおよび５％ＣＯ２で２５分を超えて走化性を実施した。インキュベーション後に、Ａｃｃｕｔａｓｅを含有する白色発光プレートに上方チャンバーを取り付け、走化性メッシュの裏面に結合した細胞を回収した。Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加し、１０分にわたり平衡化した。Ｂｉｏｔｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ  ２プレートリーダーを使用して発光を測定した。
【０３０１】
Ｃ５ａにより誘発されるエラスターゼ放出のヒトＰＭＮによる阻害
３７°Ｃ、５％ＣＯ２で３０分にわたり、ＴＮＦα（１０ｎｇ／ｍｌ）およびサイトカラシンＢ（５μｇ／ｍｌ）によりヒト好中球を予備刺激した。示した濃度でＮＯＸ−Ｄ１９またはＮＯＸ−Ｄ２０と共にプレインキュベートしたヒトＣ５ａ（３０ｎＭ）により、細胞を４５分にわたり刺激した。次いで、遠心分離により細胞を分離し、２５μｌの上清を、Ｔｒｉｓ−Ｈｃｌ０．１Ｍ  ｐＨ７．４中のエラスターゼ基質（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）と共に３７°Ｃで１時間にわたりインキュベートし、５分毎に４０５ｎｍの吸光度で読み取りを行なった。動態データを解析し、各試料についてのｖｍａｘを決定した。各試料について、対照に対するエラスターゼ活性の平均パーセントを算出した（バックグラウンドを減じていない）。
【０３０２】
結果
ＮＯＸ−Ｄ１９およびＮＯＸ−Ｄ２０は、新鮮単離したヒト末梢血ＰＭＮのＣ５ａによる活性化を効果的に阻害する。１０ｎＭのＮＯＸ−Ｄ１９またはＮＯＸ−Ｄ２０は、ｈｕＣ５ａにより誘発されるヒトＰＭＮの走化性の８５％超を遮断するのに十分であった（図１３Ａ）。ｈｕＣ５ａにより誘発される抗菌性エラスターゼの放出は、ＮＯＸ−Ｄ１９およびＮＯＸ−Ｄ２０により効果的に阻害された（図１３Ｂ）。３０ｎＭのＮＯＸ−Ｄ１９またはＮＯＸ−Ｄ２０は、Ｃ５ａにより誘発されるエラスターゼ放出の約５０％を抑制した。注目すべきことに、化学量論的理由のために、このアッセイの感度は、エラスターゼ放出が３０ｎＭのｈｕＣ５ａにより誘発されるＩＣ５０＝１５ｎＭに制限される。
【実施例７】
【０３０３】
Ｃ５ａ結合性核酸は補体依存性溶血を妨げない。
補体カスケードの最終生成物は、膜侵襲複合体（ＭＡＣ）であるＣ５ｂ−９からなる細孔である。ＭＡＣは病原体の細胞膜中に挿入され、細胞質漏出の誘発により病原体を死滅させると考えられる。
【０３０４】
本明細書に示すＣ５ａ結合性核酸（スピーゲルマー）は、Ｃ５との関連においてＣ５ａを認識することが分かっている（実施例１、図９および図１０を参照されたい）。したがって、ＭＡＣの一部である、アナフィラトキシンＣ５ａおよびＣ５ｂへのＣ５の切断が、これらのスピーゲルマーにより阻害されるかどうかを調べた。このことを、補体依存性のヒツジ赤血球溶血試験を使用することによって達成した。
【０３０５】
方法
元に戻したヒト凍結乾燥血清（「ヒト補体血清」（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、ドイツ）を、９６ウエルプレート（Ｎｕｎｃ−Ｉｍｍｕｎｏ（商標）プレート、ＭａｘｉＳｏｒｐ  Ｓｕｒｆａｃｅ（商標））中において１０ｎＭ〜１０，０００ｎＭの範囲のＰＥＧ化スピーゲルマーＮＯＸ−Ｄ１９、ＮＯＸ−Ｄ２０およびＮＯＸ−Ｄ２１と共にプレインキュベートした。陽性対照として、Ｃ５切断を阻害する、最大の２’ＯＭｅプリンおよび２’フルオロピリミジン置換を有するＣ５結合性アプタマーＣ５Ｃ６（Ｂｉｅｓｅｃｋｅｒら、１９９９）（インハウスで合成した）を同じ濃度範囲で使用した。アッセイでの潜在的に非特異的なスピーゲルマー効果についての対照として、ＮＯＸ−Ｄ１９およびＮＯＸ−Ｄ２１の逆配列である逆ＮＯＸ−Ｄ１９および逆ＮＯＸ−Ｄ２１を有するＰＥＧ化スピーゲルマーを含めた。逆ＮＯＸ−Ｄ１９および逆ＮＯＸ−Ｄ２１は、Ｂｉａｃｏｒｅおよび細胞に基づくアッセイにおいてＣ５ａを阻害しないことがすでに明らかであった。３７°Ｃでの１時間のインキュベーション後、溶血系（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｖｉｒｉｏｎ／Ｓｅｒｉｏｎ  ＧｍｂＨ、ドイツ）として知られている、ウサギ抗ヒツジ赤血球抗体でオプソニン化したヒツジ赤血球を、プレインキュベートした血清補体阻害剤混合物に添加する。Ｃ５のＣ５ａおよびＣ５ｂへの切断をもたらす古典経路を介して補体を活性化した。次いで、Ｃ５ｂはＣ６−Ｃ９と会合して溶解性の膜侵襲複合体（ＭＡＣ）を形成する。無傷細胞の沈降から３０分後に、比色測定により、ＭＡＣ形成に起因するヒツジ赤血球溶血を測定した。溶血の程度が高くなるほど、（Ｆｌｕｏ  Ｓｔａｒプレートリーダー中で測定した）４０５ｎｍでの吸収が高くなる。
【０３０６】
結果
アプタマーＣ５Ｃ６は、およそ１μＭのＩＣ５０でヒツジ赤血球の補体依存性溶血を阻害した（図１４Ａ、図１４Ｂ）。試験したスピーゲルマー、すなわちＣ５およびＣ５ａ結合性核酸ＮＯＸ−Ｄ１９およびＮＯＸ−Ｄ２０（図１４Ａ）およびＮＯＸ−Ｄ２１（図１４Ｂ）ならびにＣ５またはＣ５ａ非結合性スピーゲルマーである逆ＮＯＸ−Ｄ１９（図１４Ａ）および逆ＮＯＸ−Ｄ２１（図１４Ｂ）は溶血を阻害しなかった。
【０３０７】
考察
試験したＣ５ａ結合性スピーゲルマーはＭＡＣ形成を阻害しないことが明らかとなり、したがって、試験したＣ５ａ結合性スピーゲルマーはＣ５ａのみの選択的アンタゴニストである。医薬品として使用される場合、このことは有利であることができ、なぜならば、ＭＡＣ形成の阻害は、侵入する病原体、主にグラム陰性細菌に対する身体の防御機構を損なう可能性があるからである。
【実施例８】
【０３０８】
Ｃ５ａ結合性核酸分子ＮＯＸ−１９は、複数菌による敗血症に関するマウスの盲腸結紮穿刺モデルにおいて効能を示す。
複数菌による敗血症の経過におけるＮＯＸ−Ｄ１９の腹腔内注射の効果を、齧歯動物の盲腸結紮穿刺（ＣＬＰ）モデルで試験した。
【０３０９】
方法
動物モデル
１０〜１２週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ドイツ）を本研究に使用した。軽いイソフルラン（ｉｓｏｆｌｕｒａｎ）麻酔下で、腹膜炎を外科的に誘発させた。腹膜腔の左上腹部（盲腸の正常な位置）を切開した。盲腸を露出させ、盲腸の周囲に結紮糸をきつく巻き、小腸の挿入より遠位で縫合した（７５％を結紮した）。２４ゲージ針によって盲腸に１つの穿刺創を形成し、少量の盲腸内容物を穿刺創から押し出した。盲腸を腹膜腔中に戻し、開腹部位を塞いだ。５００μｌの生理食塩水を補液として皮下注射した。盲腸の結紮および穿刺を除いて、偽動物に同じ手順を施した。最後に、動物を、食料および水に自由にアクセスできるケージに戻した。
【０３１０】
研究群
以下の４つの群（偽手術に関してｎ＝６のマウスおよびＣＬＰ手術に関して群当たりｎ＝１０のマウス）を試験した：（１）ビヒクル（生理食塩水）処理を伴う偽手術、（２）ビヒクル処理を伴うＣＬＰ手術、（３）低用量のＮＯＸ−Ｄ１９（１ｍｇ／ｋｇ）処理を伴うＣＬＰ手術、および（４）高用量のＮＯＸ  Ｄ１９（１０ｍｇ／ｋｇ）処理を伴うＣＬＰ手術。研究者らは処理戦略を把握しておらず、どの化合物がビヒクルまたは本物（ｖｅｒｕｍ）を含有するか分からなかった。投与ルートは、ＣＬＰ手術時から始まり６日にわたって毎日、腹腔内であった。
【０３１１】
生存期間
経過観察は各群において７日であった。マウスを毎日モニタリングし、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ４ソフトウエアを使用してカプランマイヤー生存曲線を生成した。
【０３１２】
採血
手術前（ベースライン、−４日）および手術後１日目に、毛細管により海綿静脈洞から軽いエーテル麻酔下で血液試料を得て、急性腎傷害（血清クレアチニンおよび血液尿素窒素、ＢＵＮ）および急性肝不全（血清アラニンアミノトランスフェラーゼ、血清ＡＬＴ）の通常の血清マーカーを測定した。多臓器不全のマーカーとして、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（血清ＡＳＴ）の血清中のレベルを測定した。臨床化学パラメータの測定をＯｌｙｍｐｕｓ分析器（ＡＵ４００）上で実施した。
【０３１３】
統計
スチューデントのＴ検定により統計的有意性を算出した。生存期間に関して、カプランマイヤー曲線を生成し、有意性に関するログランク検定を実施した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ４ソフトウエアを使用した。
【０３１４】
結果
生存期間
予想したように、ＣＬＰを伴わない偽手術を施した動物は死亡しなかった（図１５）。ＣＬＰ手術したマウスおよびビヒクルのみで処理したマウスでは、生存期間中央値は１．５日であり、ＣＬＰ手術後のＮＯＸ−Ｄ１９処理により生存期間中央値が改善された（図１５）。低用量のＮＯＸ−Ｄ１９（１ｍｇ／ｋｇ）で処理したマウスは、最長の生存期間中央値を示した（５日、ビヒクルに対してｐ＜０．０００１）。高用量のＮＯＸ−Ｄ１９（１０ｍｇ／ｋｇ）で処理したマウスは、ビヒクル処理マウス（ｐ＝０．０４０１）に比べて有意に長いが低用量のＮＯＸ−Ｄ１９処理（ｐ＝０．４８７５）と有意差がない３日の生存期間中央値を有した。１００％のビヒクルマウスがＣＬＰ手術後４日以内に死亡した。低用量のＮＯＸ−Ｄ１９および高用量のＮＯＸ−Ｄ１９それぞれで処理したマウスでは、７日までに死亡率は１００％および９０％になっていなかった（図１５）。
【０３１５】
臨床化学
腎機能
血清クレアチニンおよび血液尿素窒素（ＢＵＮ）濃度は腎機能に関するパラメータである。研究の開始前（−４日）およびＣＬＰ手術後１日目に腎機能を評価した。１日までに、ＣＬＰは、ビヒクル処理マウスにおける血清クレアチニンレベルの有意な増加を誘発した。低用量のＮＯＸ−Ｄ１９処理（１ｍｇ／ｋｇ）により、この増加が予防された（図１６Ａ）。高用量のＮＯＸ−Ｄ１９（１０ｍｇ／ｋｇ）で処理されたマウスでは、血清クレアチニンレベルの中程度ではあるが統計的に有意ではない増加を観察した（ビヒクルに対してｐ＝０．１８７３）（図１６Ａ）。
【０３１６】
クレアチニンに比べて敏感な腎機能のパラメータであるＢＵＮ（図１６Ｂ）は、ビヒクル処理マウスにおいて、ＣＬＰ手術後１日目に有意に増加した。低用量のＮＯＸ−Ｄ１９および高用量のＮＯＸ−Ｄ１９で処理したマウスでは、ＣＬＰによるＢＵＮの増加が有意に抑制された（図１６Ｂ）。
【０３１７】
肝機能
肝臓細胞の損傷または壊死の最も確実なマーカーは、血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（血清ＡＬＴ）である。全ての群が、ＣＬＰ手術後１日目に血清ＡＬＴの増加を示した。しかし、ＮＯＸ−Ｄ１９処理した敗血症マウスの両方の群は、ビヒクル処理したマウスと比べて肝機能の改善を実証した（図１７Ａ）。
【０３１８】
多臓器不全
アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの血清レベル（血清ＡＳＴ）（図１７Ｂ）を多臓器不全のマーカーとして測定した。なぜならば、ＡＳＴは、心筋梗塞、急性膵炎、急性溶血性貧血、重度の熱傷、急性腎臓疾患、筋骨格系疾患および外傷等の、肝臓以外の臓器に影響を及ぼす疾患で上昇することが明らかになっているからである。ＡＬＴと同様に、全ての群は、ＣＬＰ手術後１日目にＡＳＴレベルの上昇を示した（偽に対してｐ＜０．００１）。しかし、肝機能と同様に、ＮＯＸ−Ｄ１９処理した敗血症マウスの両方の群は、ビヒクル処理したマウスと比べてあまりはっきりとしないＡＳＴレベルを実証した（図１７Ｂ）。
【実施例９】
【０３１９】
改善されたＣ５ａ結合性核酸ＮＯＸ−Ｄ２０は、複数菌による敗血症に関するマウスの盲腸結紮穿刺モデルにおいて効能を示す。
複数菌による敗血症の経過におけるＮＯＸ−Ｄ２０の腹腔内注射の効果を、齧歯動物の盲腸結紮穿刺（ＣＬＰ）モデルで試験した。
【０３２０】
方法
動物モデル
実施例８に記載したように、複数菌による敗血症を、盲腸の６０〜７５％が結紮されている１０〜１２週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ドイツ）に誘発させた。
【０３２１】
生存期間
経過観察は各群において７日であった。マウスを毎日モニタリングし、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ４ソフトウエアを使用してカプランマイヤー生存曲線を生成した。
【０３２２】
研究群
以下の５つの群（偽手術に関してｎ＝６のマウスおよびＣＬＰ手術に関して群当たりｎ＝１０のマウス）を試験した：（１）ビヒクル（生理食塩水）処理を伴う偽手術、（２）ビヒクル処理を伴うＣＬＰ手術、（３）毎日の低用量のＮＯＸ−Ｄ２０（１ｍｇ／ｋｇ）処理を伴うＣＬＰ手術、（４）毎日の高用量のＮＯＸ−Ｄ２０（３ｍｇ／ｋｇ）処理を伴うＣＬＰ手術、および（５）手術後に単回の低用量のＮＯＸ−Ｄ２０（１ｍｇ／ｋｇ）、続いて毎日のビヒクル処理を伴うＣＬＰ手術。研究者らは処理戦略を把握しておらず、どの化合物がビヒクルまたは本物を含有するか分からなかった。投与ルートは腹腔内であった。
【０３２３】
臨床化学および炎症パラメータ
手術後１日目に、毛細管により海綿静脈洞から軽いエーテル麻酔下で実施例８に記載したように血液試料を得た。急性腎傷害（血清クレアチニンおよび血液尿素窒素、ＢＵＮ）、急性肝不全（血清ＡＬＴ）および内皮損傷（血清乳酸脱水素酵素、血清ＬＤＨ）の通常の血清マーカーを測定した。３ｍｌのＰＢＳを使用して腹腔洗浄（ＰＬ）を実施した。各試料においてＰＬの収集量を測定し、血球計（Ｎｅｕｂａｕｅｒ  Ｚａｅｈｌｋａｍｍｅｒ、Ｇｅｈｒｄｅｎ、ドイツ）を使用して全細胞数を評価した。腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）およびＣＣＬ２（＝マクロファージ走化タンパク質−１、ＭＣＰ−１）の血清レベルおよびＰＬレベルをビーズベースのフローサイトメトリーアッセイ（ＣＢＡキット、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、ドイツ）により定量化した。ＣＸＣＬ１（＝ケラチノサイト化学誘因物質、ＫＣ）およびＣＸＣＬ２（＝マクロファージ炎症性タンパク質２、ＭＩＰ−２）の血清濃度およびＰＬ濃度を、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ、ドイツ）により測定した。ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色サイトスピン（サイトスピン４、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上で、ＰＬにおける差分細胞計数を実施した。
【０３２４】
毛細血管漏出
ＣＬＰ手術直後に、０．２５重量／体積％のエバンスブルー（２００μｌ）を静脈注射した。１８時間後にマウスを屠殺し、上記に記載したようにＰＬを実施した。血清流体およびＰＬ流体におけるエバンスブルー染料の濃度を６２０ｎｍで分光光学的に測定した。ヘム色素の混入のために、以下の式を使用して光学濃度を補正した：Ｅ６２０（補正）＝（Ｅ６２０（未加工）−（Ｅ４０５（未加工）×０．０１４）。ＰＬ流体中における消光と血漿中における消光との比率として血漿滲出を定量化した。
【０３２５】
統計
一元ＡＮＯＶＡおよびＤｕｎｎｅｔｔｓ検定により統計的有意性を算出した。生存期間に関して、有意性に関するログランク検定を実施した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ４ソフトウエアを使用した。
【０３２６】
結果
生存期間
予想したように、偽手術したマウスは手術後７日以内に死亡しなかった（図１８）。ビヒクル処理したＣＬＰマウスでは、生存期間中央値は３日であった。１ｍｇ／ｋｇのＮＯＸ−Ｄ２０で毎日処理したマウスでは、生存期間中央値が７日に有意に延びた（ビヒクルに対してｐ＝０．００４３）。ＮＯＸ−Ｄ２０の投与量を３ｍｇ／ｋｇに増加させても、さらなる保護効果はなく、生存期間中央値は同様に６．５日であった（ビヒクルに対して０．００９２）。特に、ＣＬＰ手術後の１ｍｇ／ｋｇのＮＯＸ−Ｄ２０の単回注射は毎日の処理と同じように効果的であり、生存期間中央値が６．５日に有意に延びた（図１８）。ビヒクル処理したマウスの１００％が５日以内に死亡するが、ＮＯＸ−Ｄ２０で処理したマウスの３０〜４０％は７日目において実験の終了時に依然として生存した（図１８）。
【０３２７】
臓器機能
全身性炎症は多臓器不全を起こすことが多い。クレアチニンおよびＢＵＮの血清レベルの増加は、糸球体ろ過率の低下および腎不全に関するパラメータである。両方のパラメータは、偽マウスと比べて、ＣＬＰ手術後１日に、ビヒクル処理したマウスにおいて有意に増加した。ＮＯＸ−Ｄ２０処理により両方のマーカーの増加が効果的に防止され、このことは腎機能に関するＮＯＸ−Ｄ２０の保護効果を示唆した（図１９Ａ、図１９Ｂ）。アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）は肝臓細胞の損傷および壊死の一般的なマーカーであり、ＣＬＰにより誘発された敗血症は、ＡＬＴの血清レベルの増加と関連した。ＮＯＸ−Ｄ２０処理したマウスは、ビヒクル処理したマウスと比べて血清ＡＬＴの有意な低下を実証し、このことは肝機能の改善を示唆した（図１９Ｃ）。乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の血清レベルの上昇は組織傷害後に起こり、したがって臓器不全の一般的なマーカーである。ＣＬＰによって引き起こされるＬＤＨレベルの上昇は、ＮＯＸ−Ｄ２０により効果的に遮断された（図２０Ａ）。内皮バリアの崩壊および浮腫形成は、敗血症で通常の致命的事象である。偽手術したマウスと比べて、ビヒクル処理において、敗血症の誘発により、関連する血漿タンパク質の腹膜腔中への溢出が２倍に増加した。ＮＯＸ−Ｄ２０処理により毛細血管漏出が有意に阻害された（図２０Ｂ）。本明細書で試験した全てのパラメータに関して、１ｍｇ／ｋｇのＮＯＸ−Ｄ２０は、臓器機能を有意に改善するのに十分であり、このことは、ＮＯＸ−Ｄ２０処理したマウスの生存期間の改善に反映される。
【０３２８】
炎症
ＣＬＰにより、炎症促進性のサイトカインおよびケモカインの強局在のおよび全身の上方制御がもたらされた。ＮＯＸ−Ｄ２０によるＣ５ａの遮断より、ＣＬＰ後１日目において、腹膜および血清中のＴＮＦα、ＩＬ−６、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１およびＣＸＣＬ２の濃度が効果的に低下した。これらのケモカインの上方制御は、多形核白血球（ＰＭＮ）の腹膜への動員と関係する。したがって、ＮＯＸ−Ｄ２０によるＣ５ａ−阻害によって、腹膜腔中でのＰＭＮの蓄積が阻害された（図２０Ｃ）。同様に、ＮＯＸ−Ｄ２０によって単球の浸潤が遮断された。
【実施例１０】
【０３２９】
虚血再灌流により誘発される急性腎傷害のモデルにおけるＮＯＸ−Ｄ２１の効能
腎虚血／再灌流損傷（ＩＲＩ）の齧歯動物モデルにおいて、急性腎傷害（ＡＫＩ）についてのＮＯＸ−Ｄ２１の効果を試験した。
【０３３０】
方法
動物モデル
鼻マスクによってインフルランを使用し、１２〜１５週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ドイツ）に麻酔をかけ、暖房テーブル上に仰向けに寝かせて体温を約３２°Ｃに維持した。正中線切開を実施し、３０分にわたりマイクロ動脈瘤クリップで右および左の腎茎を挟んだ。クリップの除去および皮膚の縫合後にマウスをケージに戻し、完全に目が覚めるまでモニタリングした。
【０３３１】
研究群
以下の３つの群（群当たりｎ＝１０のマウス）を試験した：（１）ビヒクル処理を伴うＩＲＩ手術、（２）低用量のＮＯＸ−Ｄ２１（１ｍｇ／ｋｇ）処理を伴うＩＲＩ手術、（３）高用量のＮＯＸ−Ｄ２１（１０ｍｇ／ｋｇ）処理を伴うＩＲＩ手術。研究者らは処理戦略を把握しておらず、どの化合物がビヒクルまたは本物を含有するか分からなかった。ＮＯＸ−Ｄ２１を０日目において手術前に１時間点滴し、次の３日の間（１日目〜３日目）、ＮＯＸ−Ｄ２１を１日に１回、腹腔内に投与した。
【０３３２】
生存期間
１４日にわたり毎日マウスをモニタリングした。カプランマイヤー生存曲線を生成し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ４ソフトウエアを使用してログランク検定により有意性を決定した。
【０３３３】
結果
高ＮＯＸ−Ｄ２１での処理によって、生存期間が有意に改善された（図２１）。低用量のＮＯＸ−Ｄ２１処理では、生存期間はまだ統計的に有意に改善されないことは明らかだった。ビヒクルのみで処理した対照群では、１匹のマウスが１４日まで生存した。ＮＯＸ−Ｄ２１処理により、生存しているマウスの割合が４５〜５５％に増加した（図２１）。
【０３３４】
参照文献
本明細書に列挙した文献の完全な書誌データを以下に示す。これらの開示は、別段の記載がない限り、参照により組み込まれている。
【表２Ａ】
0006415327.tif 000011
【表２Ｂ】
0006415327.tif 000012
【表２Ｃ】
0006415327.tif 000013
【表２Ｄ】
0006415327.tif 000014
【表２Ｅ】
0006415327.tif 000015
【表２Ｆ】
0006415327.tif 000016
【０３３５】
本明細書に開示した本発明の特徴、特許請求の範囲、配列表および／または図面は、別個にも、それらを任意に組み合わせても、本発明をその種々の形態として実現するための材料となり得る。
【図１】
0006415327.tif 000017
【図２】
0006415327.tif 000018
【図３−１】
0006415327.tif 000019
【図３−２】
0006415327.tif 000020
【図４Ａ】
0006415327.tif 000021
【図４Ｂ】
0006415327.tif 000022
【図５】
0006415327.tif 000023
【図６】
0006415327.tif 000024
【図７】
0006415327.tif 000025
【図８−１】
0006415327.tif 000026
【図８−２】
0006415327.tif 000027
【図９】
0006415327.tif 000028
【図１０】
0006415327.tif 000029
【図１１】
0006415327.tif 000030
【図１２Ａ．１２Ｂ】
0006415327.tif 000031
【図１３】
0006415327.tif 000032
【図１４】
0006415327.tif 000033
【図１５】
0006415327.tif 000034
【図１６】
0006415327.tif 000035
【図１７】
0006415327.tif 000036
【図１８】
0006415327.tif 000037
【図１９】
0006415327.tif 000038
【図２０】
0006415327.tif 000039
【図２１】
0006415327.tif 000040
【図２２】
0006415327.tif 000041
【図２３】
0006415327.tif 000042