(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（I）で示される４−アルコキシケイヒ酸と式（II)で示される１、３−アルコキシベンゼンとをフリーデル・クラフト反応（A）でカップリングして式（III)で示されるトリアルコキシイソリキリチゲニンを合成して晶出させ、反応（Ｂ）で保護基を外して式（IV）で示されるイソリキリチゲニンを得ることを特徴とするイソリキリチゲニンの製造方法。
但し、式（I）、式（II）、式（III）中Ｒはメトキシ、エトキシ又はブトキシである。
0006358877.tif 000005
【請求項２】
請求項１の反応（Ａ）の試薬として（ＣＯＣｌ）２及びＡｌＣｌ３を用い、反応（Ｂ）の試薬としてＢＢｒ３を用いる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
式（I）、（II）および（III）において、保護基ＲＯのＲがメチル基である式(Iａ) 、(IIa)及び(IIIa)の化合物を用いる請求項２に記載のイソリキリチゲニンの製造方法。
0006358877.tif 000006
【請求項４】
式（IV）で示されるイソリキリチゲニンを閉環して式（V）で示されるリキリチゲニンを得ることを特徴とする請求項３記載の方法。
0006358877.tif 000007
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は甘草素リキリチゲニンの前駆物質としてイソリキリチゲニンの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
甘草素リキリチゲニンは広く薬効が認められる優れた漢方薬であって、一般に甘草から抽出される。しかし、その抽出方法は甘草根を熱抽出した後、加水分解後の糖類部（グルコースやアビオース）を除去し、得られるリキリチゲニンの逆相クロマトグラフによる精製を必要とする。そのため、甘草素の甘草からの抽出はコスト高で、貴重であり、1ｇ1万元以上で販売されている。その上甘草の栽培が困難なことから甘草が減少傾向にあって、入手困難に伴い、ますます高騰しつつある。
【０００３】
そこで、甘草素リキリチゲニンを人工的に合成しようとする試みがある。第１の方法は図２に示すように、p−ヒドロキシベンズアルデヒドを出発原料とする方法で、４−カルボキシケイヒ酸を合成し、これを経由して１、３−ジヒドロキシベンゼンを付加してイソリキリチゲニンを得る方法である（非特許文献１）が、収率が低いという欠点がある。そこで、第２の方法として、図３に示すように、p−ヒドロキシベンズアルデヒドを出発原料とし、p位の水酸基をMOM試薬で保護する一方、１、３−ジヒドロキシベンゼンの水酸基をMOM試薬で保護し、両者を付加する方法が提案される（非特許文献２）。しかしながら、実際に検証してみると、ほぼ全段階（収率や生成物がオイル状など）でカラムクロマトによる精製工程が必要となる。しかも、我々の追試実験ではスケールアップした場合のカップリング工程の収率が42%まで低下し、その上最終工程のイソリキリチゲニンからリキリチゲニンへの閉環反応で，原料と目的物が平衡状態にあって，収率が上がらないという結果を得た。また、閉環段階での原料と目的物の分離が，困難で、最終クロマト精製条件でリキリチゲニンはテーリングし，大幅に回収率が低下した。しかもMOM保護試薬の発がん性，さらに保護，脱保護で２段階の余分な工程が必要であり、第２法は実験室レベルでは有効であるものの、量産には適しないとの知見を得た。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】薬学学報  Acta Pharmaceutica Sinica 1994,29(11):877〜880
【非特許文献２】Ｈu etc. European Journal of Medical Chemistry, 45,3453-3458
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
そこで、本発明者らはリキリチゲニンの量産方法ではクロマトグラフを使用せず、晶出させる方法を選択し、しかも発がん性のあるMOM保護試薬を使用せず、さらに人工的にイソリキリチゲニンをリキリチゲニンに変換するに平衡反応に伴って収率が向上しないことを考慮し、また、有機合成したリキリチゲニンは天然物と違って（＋）体と（−）体が共存し、新たに毒性試験を必要とするとの知見を考慮し,リキリチゲニンの量産方法として適切な方法を提供することを目的とする。
【０００６】
本発明者らは、有機合成的にイソリキリチゲニンをリキリチゲニンに変換すると天然物と違って（＋）体と（−）体が共存するが、人体に投与すると、体内組織内で（−）体のリキリチゲニンに変換される可能性に着目し、リキリチゲニンを有機合成せず、その前駆体であるイソリキリチゲニンを合成し、これを人体に投与し、体内で目的のリキリチゲニンに変換しようとするもので、イソリキリチゲニンの製造はp−アルコキシ桂皮酸を出発原料とし、これにフィーデルクラフト反応を利用してp−アルコキシベンゼンをカップリングさせ、高収率でトリアルコキシイソリキリチゲニンが形成されて晶出し、これを脱保護してイソリキリチゲニンを量産するに適する方法を提供するものである。このイソリキリチゲニンは体内変換でリキリチゲニンに変換される可能性があり、体内でリキリチゲニン（−）体の薬理効果を得ることができる。
【０００７】
本発明の反応式は図１で示すように、第１にカップリング反応（Ａ）からなり、式（i
）で示されるpーアルコキシ桂皮酸と式（ii）で示される１、３−ジアルコキシベンゼンとから式（iii）で示されるトリアルコキシイソリキリチゲニンを合成し、保護基を離脱してイソリキリチゲニンを合成する方法にある。式（i）、（ii）、（iii）はその一般式において、Rはメチル、エチルまたはブチルであるアルコキシ基であるのが望ましく、通常入手が容易なRがメチルであるメトキシ基が用いられる。反応は式（i）で示されるp−アルコキシ桂皮酸にハロゲン化剤を添加してハロゲン化し、そこに式（ii）で示されるp−アルコキシベンゼンを添加し、次いで、触媒（金属ハロゲン化物、例えば塩化アルミニウム等）存在下に所定の芳香環の水素に求電子置換し、式（iiiａ）で示されるトリアルコキシ桂皮酸が得られる。第２に反応式（B）では、この保護機を脱離すると、式（iv）で示される目的のイソリキリチゲニンが得られる。イソリキリチゲニンは閉環反応（Ｃ）により、式（iv）で示されるイソリキリチゲニンが式（v）で示されるリキリチゲニンに変換されるが、有機合成では（＋）体と（−)体が得られるため、要すればキラル分割により両者を分離する必要がある。そこで、甘草から得られるリキリチゲニンは（−）体であるため、イソリキリチゲニンのイソメラーゼ酵素を使って、リキリチゲニン（−）体を得るようにするか、またはイソリキリチゲニンを人体に投与すると酵素反応で体内組織内でキリチゲニンの（−）体を得ることもできる。p−アルコキシ桂皮酸としてはp−メトキシ桂皮酸が好ましいが、p−エトキシ桂皮酸、p−ブトキシ桂皮酸を使用しても良い。以下の実施例では、具体的には式（iａ）で示されるp−メトキシ桂皮酸と式（iiａ）で示される１、３−ジメトキシベンゼンとから式（iiiａ）で示されるトリメトキシイソリキリチゲニンを合成し、保護基を離脱してイソリキリチゲニンを合成する方法にある。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】本発明にかかるイソリキリチゲニンの製造例を示す第１反応（A）、第２反応（B）および第３反応（C）を示す反応図である。
【図２】従来の第１法のリキリチゲニンの製造例を示す反応図である。
【図３】従来の第２法のリキリチゲニンの製造例を示す反応図である。以下、本発明の好ましい具体例を実施例に基づいて説明する。（実施例１）
【０００９】
【化１】
0006358877.tif 000002
4-メトキシケイヒ酸  式(ia）10ｇをジメチルホルムアミド0.25 mLを含む無水塩化メチレン50 mLに溶解し，室温にてオキザリルクロリド9.6 mLを発泡に注意しながら10分かけて滴下した。そのまま，室温にて2時間撹拌の後，溶媒を減圧下で除去した。得られた残渣に，1，3-ジメトキシベンゼン7.4 mL（式iiａ）と無水エーテル200 mLを加え，氷浴中で，粉末にした触媒無水三塩化アルミニュウム22.4 gを15分かけてゆっくりと加えた。そのまま室温にて一晩放置した後，内容物を氷上(500 g)にあけ，６M  塩酸を10 mL加え，氷が溶解した後，酢酸エチル(300 mL)で4回抽出した。抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後，減圧下で濃縮し，残渣をエーテル-ヘキサン混液で結晶化することにより，14.2 gの目的物(式iiia)の結晶を得た。
収率85%  1H-NMR (CDCl3) δ 7.73 (1H, d, J=8.1 Hz), 7.64 (1H, d, J=15.1 Hz), 7.54 (2H, d, J=7.7 Hz), 7.38 (1H, d, J=15.1 Hz), 6.90 (2H, d, J=7.7 Hz), 6.55 (1H, brd, J=8.1 Hz), 6.49 (1H, brs), 3.89 (3H, s), 3.85 (3H, s), 3.83 (3H, s).
【００１０】
【化２】
0006358877.tif 000003
上記生成物(式iiia)3 gを塩化メチレン60 mLに溶解し0 ℃にて1 M BBr3塩化メチレン溶液を滴下した。室温まで昇温し，そのまま2日間撹拌した。セニエット塩34 gを含む氷冷水700 mLとメタノール350 mLを加え，室温で一晩撹拌した。得られた黄色溶液を酢酸エチルで2回抽出し，1 Mセニエット塩-飽和食塩水で洗浄後，無水硫酸ナトリウムで乾燥，濃縮した。残渣をエーテル-ヘキサンで結晶化し，目的物(式iv)1.95 gを得た。またその母液を濃縮後再度エーテル-ヘキサンで結晶化することにより0.59 gの目的物第２晶を得た。
合計収率98%1H-NMR (acetone-d6) δ 13.5 (1H, s), 8.10 (1H, d, J=8.3 Hz), 7.82 (1H, d, J=15.4 Hz), 7.74 (1H, d, J=15.4 Hz), 7.72 (2H, d, J=8.2 Hz), 6.90 (2H, d, J=8.2 Hz), 6.44 (1H, dd, J=8.3 and 1.7 Hz), 6.34 (1H, d, J=1.7 Hz).
（実施例２）
【００１１】
【化３】
0006358877.tif 000004
原料200 mg（式iv）に海砂3 gを加え，撹拌し，よく分散した後に，水20 mLを加えた。その懸濁液にピロリジン合計200  μLを三回に分け，1日1回加え，3日間撹拌した。海砂をろ過除去し，ろ液を１M HCｌに加え，残渣を少量のメタノールに溶かし，それらを併せて酢酸エチルで3回抽出した。抽出液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後，濃縮し，エーテルで結晶化することによりリキリチゲニンの粗結晶96 mgを得た（式v）。
収率48%.
1H-NMR (DMSO-d6) δ 9.65 (1H, brs), 7.58 (1H, m), 7.27 (2H, m), 6.74 (2H, m), 6.45 (1H, m), 6.28 (1H, m), 5.39 (1H, brd, J=11.6 Hz), 3.65 (1H, brt, J=15.0 Hz), 2.58 (1H, brd, J=15.7 Hz).
【図１】
0006358877.tif 000008
【図２】
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【図３】
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