(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)に示すポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体、
【化２】
0006415725.tif 000020
ここで、R=CH3(CH2)nCO，n=1〜5である。
【請求項２】
請求項１に記載の式(I)に示すポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体の調製方法であって、下記の工程を含むことを特徴とする方法、
１）20(R)-ジンセノサイドRg3を有機溶媒に溶解し、20(R)-ジンセノサイドRg3溶液を作る、
２）エステル化のためアシル化剤を加え、エステル化の反応温度を80〜100℃とし、
３）水を加えて反応をクエンチ（quench）し、混合液のpHをアルカリで7に調整し、及び
４）濾過して再結晶し最終産物を得る。
【請求項３】
請求項２に記載の方法であって、工程１）における有機溶媒が、トリエチルアミン又は無水ピリジンからなる群れより選ばれることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項２に記載の方法であって、工程１）における有機溶媒が無水ピリジンであることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項２に記載の方法であって、工程２）におけるアシル化剤が塩化アシル又は酸無水物からなる群れより選ばれることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、塩化アシルが、塩化プロピオニル（propionyl chloride）、塩化ブチリル（butyryl chloride）、塩化バレリル（valeryl chloride）又は塩化ヘキサノイル（hexanoyl chloride）からなる群れより選ばれ、酸無水物が、無水プロピオン酸（propionic anhydride）、無水酪酸（butyric anhydride）、無水吉草酸（valeric anhydride）又は無水ヘキサン酸（caproic anhydride）からなる群れより選ばれることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項２に記載の方法であって、工程３）におけるアルカリが無機アルカリであることを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、無機アルカリが、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム又は炭酸水素カリウムからなる群れより選ばれることを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項１のポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体の抗腫瘍剤及び抗癌剤の調製における応用。
【請求項１０】
動物の様々な固形腫瘍及びヒトの肺がん、乳がん、胃がん、腸がん及び肝がんに対する薬剤の調製のための請求項１のポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体の応用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は薬化学分野に関し、特に、本発明はポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体、その調製方法、及びその誘導体の抗腫瘍性薬理効果に関する。
【背景技術】
【０００２】
20(R)-ジンセノサイドRg3(20(R)-Ginsenoside)は、紅参(紅参は朝鮮人蔘（Panax ginseng C. A. Mey）の調理品) から抽出した四環系トリペノイドジンセノサイドサポニン（tetracyclic triterpenoid ginsenoside saponin) の単量体である。それは、朝鮮人参から日本の学者である北川勲によって1980年に単離され、その分子式はC42H72O13であり、その相対的分子量は784.3である。20(R)-ジンセノサイドRg3は、相乗的な解毒作用、気虚症状の改善、ヒトの免疫力を増強するなどの効果を有する。加えて、これらの研究は、ジンセノサイドRg3が腫瘍細胞の増殖、浸潤及び転移の抑制に役割があること、肝がん細胞、前立腺がん細胞、白血病細胞、子宮がん細胞のアポトーシスを誘導できることを示している。
【０００３】
【化１】
0006415725.tif 000002
【０００４】
その巨大な分子構造のため、20(R)-ジンセノサイドRg3は、水や他の高極性溶媒に溶解せず、石油エーテル、クロロホルム及び他の低極性又は非極性溶媒にも溶解しない。20(R)-ジンセノサイドRg3は、ピリジン、エタノール溶液(50%〜70%)、強酸水溶液(pH<2)及び強アルカリ水溶液(pH>10)に容易に溶解する。それは、Biopharmaceutics Classification System (BCS)のClass IV薬物に属し、溶解性と膜透過性が低く、生体利用効率が低いため、20(R)-ジンセノサイドRg3の薬理作用は限定されている。
【０００５】
近年、多くの学者が、天然産物のポリアシル化について深い研究を実施している、例えば、中国科学アカデミー  昆明植物研究所(Kunming Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences)の劉吉開（Liu Jikai）らは、特許出願CN200510010970.0号に示すように、固体酸触媒を利用して五酢酸ベルゲニン（bergenin pentaacetylate）を合成した。原料のベルゲニンと比較して、動物実験は、五酢酸ベルゲニンが明確な相乗的薬理効果を有することを示し、鎮咳・抗喘息効果に乏しく、経口吸収され難いなどのベルゲニンの欠点を効率よく克服できることを示した。
【０００６】
広西医科大学の▲トウ▼家剛（Deng Jia Gang）の研究グループは、硫酸を触媒として使用して、五酢酸マンギフェリン（mangiferin）、七プロピオン酸マンギフェリン及び六酪酸マンギフェリン化合物合成し、これら3つの誘導体の薬理実験によって、これらの3つのマンギフェリン誘導体はマンギフェリンの1/4モル量であっても、マンギフェリンと同等の薬理作用を提供でき、それらアシル化誘導体の抗炎症作用はマンギフェリンよりも優れていることを示した(Chinese Journal of Experiment Traditional Medical Formulae Vol18, No24, page185-189)。
【０００７】
香港理工大学のTak Hang Chanの研究グループは、没食子酸エピガロカテキン（epigallocatechin gallate）を多重アシル化（multi-acylated）修飾して、八酢酸没食子酸エピガロカテキン（epigallocatechin gallate octaacetate）を合成し、誘導体の安定性が増加して抗がん効果が増強していることを示した(Bioorg & Medicinal Chemistry 12 (2004) 5587-5593)。
【０００８】
要約すると、エステル化修飾することによって、薬物のエステル化誘導体は脂溶性が向上して、油／水分配係数の増加とそれに伴う膜透過性が増加し、それらは薬物の膜透過吸収性及び生体利用効率を向上させ、最終的には薬効を増強する。しかし、このような研究は20(R)-ジンセノサイドRg3ではなされておらず、そのため、私たちはアルカリ触媒によるポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体を設計・合成し、薬理実験を実施した。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明によって解決される技術的問題は、ポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体を化学合成によって調製することである。本発明は、出発化合物として20(R)-ジンセノサイドRg3を使用し、これをアシル化して得られる合成ポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体を提供する。
【００１０】
20(R)-ジンセノサイドRg3の水酸基は、親油性を向上させ、油水分離係数を変え、腸内吸収を強化するために封鎖され、それとともに有効性も向上される。さらに、本発明は、ポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体の調製方法も提供し、この方法は反応条件が穏やかで工業的な大量生産に適している。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
まず、本発明は、式（I）のポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体(すなわち、20(R)-ジンセノサイドRg3の多重アシル化誘導体)を提供する、
【００１２】
【化２】
0006415725.tif 000003
【００１３】
ここで、R=CH3(CH2)nCO，n=1〜5である。
好ましくは、R=CH3(CH2)nCO，n=2〜4である。
【００１４】
また、本発明は、本発明のポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体及び薬理学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１５】
ここで、薬理学的に許容される賦形剤としては、非毒性の固体状、半固体状又は液状の充填剤、希釈剤、担体、pH調節剤、イオン強度調節剤、徐放又は制御放出剤、封入物質及び他の薬理学的賦形剤が挙げられる。賦形剤は、投与方法に適合するものであればよく、当技術分野で公知の賦形剤によって、注射液、注射液用凍結乾燥粉末、スプレー、経口液剤、経口懸濁剤、錠剤、カプセル剤、腸溶剤、丸剤、粉剤、顆粒剤、徐放性又は遅延放出性の形態等に調製できる。
【００１６】
本発明の第一の形態であるポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体は、注射又は消化管を経由して投与される、したがって、本発明の医薬組成物は、好ましくは注射剤又は消化管を経由して投与される剤形、すなわち、注射剤又は消化管を経由して投与される剤形のための賦形剤がより好まれる。
【００１７】
ここで、「消化管を経由して投与」との用語は、経口投与、強制経口投与及び注腸投与等を含む、患者の消化管を経由する薬剤の投与形態を意味し、好ましくは経口投与、例えば、当技術分野で公知の補助材料を使用する経口液剤、経口懸濁剤、錠剤、カプセル剤、腸溶剤、丸剤、粉剤、顆粒剤、徐放性又は遅延放出性製剤等の形態で提供され、一方、注射製剤は主に注射及び粉体注射を含む。
【００１８】
また、本発明は、以下の工程を含むポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体の調製方法を提供する、
１）20(R)-ジンセノサイドRg3を有機溶媒に溶解し、20(R)-ジンセノサイドRg3溶液を作る、
２）エステル化のためアシル化剤を加え、エステル化の反応温度を80〜100℃とし、
３）水を加えて反応をクエンチ（quench）し、混合液のpHをアルカリで7に調整し、及び
４）濾過して再結晶し最終産物を得る。
【００１９】
ここで、工程１）における有機溶媒は、トリエチルアミン又は無水ピリジンから選ばれ、無水ピリジンが好ましく、工程２）におけるアシル化剤は塩化アシル又は酸無水物である。
【００２０】
特に、塩化アシルは、塩化アセチル（acetyl chloride）、塩化プロピオニル（propionyl chloride）、塩化ブチリル（butyryl chloride）、塩化バレリル（valeryl chloride）又は塩化ヘキサノイル（hexanoyl chloride）から選ばれ、酸無水物は無水酢酸（acetic anhydride）、無水プロピオン酸（propionic anhydride）、無水酪酸（butyric anhydride）、無水吉草酸（valeric anhydride）又は無水ヘキサン酸（caproic anhydride）から選ばれる。
【００２１】
特に、エステル化の反応時間は2-5時間である。
【００２２】
特に、アシル化剤は、20(R)-ジンセノサイドRg3溶液に室温で加えられる。
具体的には、室温は15〜35℃である。
【００２３】
ここで、工程３）におけるアルカリは無機アルカリから選ばれる。
特に、無機アルカリは、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸ナトリウム又は炭酸水素カリウムから選ばれ、重炭酸ナトリウムが好ましい。
【００２４】
特に、工程３）で加えられる水は、エステル化反応をクエンチするため、氷水、すなわち、温度が0℃の水である。
【００２５】
ここで、工程４）におけるポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体の再結晶は、水／メタノール系を使用して行われる。
【００２６】
さらに、本発明の他の形態は、ポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体の抗腫瘍剤及び抗がん剤の調製のための応用を提供する。
【００２７】
加えて、本発明は、様々な動物の固形腫瘍、抗ヒト肺がん、抗乳がん、抗胃がん、抗結腸がん及び抗肝細胞がんを制御するための薬剤の製造におけるポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体の応用を提供する。
【発明の効果】
【００２８】
本発明は次のような利点を有する。すなわち、本発明のポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体の調製方法は、容易に制御され、生成物の全収率が容易に向上でき、工業的な大量生産に適している。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明は、以下の実施例によりさらに説明され、以下の実施例は単に本発明の例示のためのものであり、これらは本発明の範囲への如何なる限定としても解釈されない。加えて、実施例において使用される試薬及び材料は商業的に入手でき、もし不十分な場合は、有機合成ガイド、薬物監督行政上のガイドライン、及び機器及び試薬について対応する製造業者の指示等を参照して欲しい。
【実施例１】
【００３０】
１）20(R)-ジンセノサイドRg3(4g,5.09mmol)が乾燥無水ピリジン180mlに加えられて溶解のため撹拌され、20(R)-ジンセノサイドRg3溶液が作られた。
２）室温(15〜35℃)で、塩化アセチル(0.71ml,約10mmol)が、20(R)-ジンセノサイドRg3溶液に加えられた。
３）得られた混合液は撹拌下で加温され、エステル化のために80℃に維持された。
４）80℃で5時間反応が維持されたのち、反応液は氷水に滴下されて、飽和重炭酸ナトリウム水溶液が加えられてpH7に調整され、白色固体の大量の沈殿物が得られた。
５）濾過によって白色固体が得られ、これが大量の水で洗浄され、水/メタノールによって再結晶され、白色粉末が得られた。
【００３１】
八酢酸20(R)-ジンセノサイドRg3（20(R)-GinsenosideRg3 octo-acetate,3g)は白色固体で水及びエタノールに溶解する。TLC板が展開されたのち(クロマトグラフ溶液は、クロロホルム/メタノールの50:1溶液、Rf値は0.4であった。) 、10% H2SO4-エタノール試薬がスプレーされ、それによって紫色を呈色した。ESI-MSスペクトルによると、m/z[M+Na]は1143.6であり、分子量は1121である。
【００３２】
八酢酸20(R)-ジンセノサイドRg3の1H-NMR及び13C-NMRは以下のとおりである。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm)：5.301-5.255(t,1H,J=9.2Hz),5.192-5.146(t,1H,J=9.2Hz),5.062(s,1H),4.891-4.721(m,4H),4.629(s,2H),4.182-4.067(m,3H),3.973-3.911(m,3H),3.630-3.592(t,1H,J=1.2Hz),3.512(s,1H),3.054-3.053(d,1H,J=7.6Hz),2.088(s,2H),1.984-1.902(m,22H),1.738(s,3H),1.626-1.210(m,18H),0.992-0.889(m,12H),0.794(s,3H),0.721(s,5H)；
【００３３】
13C-NMR(100MHz,Pyridin-d5)δ(ppm)：171.88、171.81、171.72、171.61、171.51、171.31、171.19、171.15(C=O),132.05(C-25),127.30(C-24),104.92(C-1"),102.35(C-1'),91.57(C-3),79.27(C-2'),76.78(C-5"),74.96(C-5'),74.71(C-2"),74.71(C-20),73.56(C-3"),73.25(C-3'),72.98(C-12),70.79(C-4"),70.39(C-4'),63.95(C-6"&6'),57.54(C-5),53.76(C-14),51.56(C-17),51.47(C-9),47.40(C-13),44.35(C-22),41.17(C-4),40.85(C-8),40.04(C-1),38.18(C-10),36.06(C-7),32.75(C-11),30.09(C-15),27.22(C-28),25.64(C-16),24.96(C-2),24.83(C-26),22.39(C-21),21.93(C-23),21.71-21.79(CH3CO),18.29(C-6),17.65(C-30),17.26(C-27),16.17(C-29),16.13(C-19),16.90(C-18)
【００３４】
ESI-MS、1H-NMR及び13C-NMRの実験データに基づけば、八酢酸20(R)-ジンセノサイドRg3の構造式は以下のように決定できる。
【００３５】
【化３】
0006415725.tif 000004
【実施例２】
【００３６】
１）20(R)-ジンセノサイドRg3(4g,5.09mmol)が乾燥無水ピリジン180mlに加えられて溶解のため撹拌され、20(R)-ジンセノサイドRg3溶液が作られた。
２）室温で(20〜25℃)、N-無水酪酸(3.07ml,約10mmol)が、20(R)-ジンセノサイドRg3溶液に加えられた。
３）得られた混合液は撹拌下で加温され、エステル化のために100℃に維持された。
４）100℃で5時間反応が維持されたのち、反応液は氷水に滴下されて、飽和重炭酸ナトリウム水溶液が加えられてpH7に調整され、白色固体の大量の沈殿物が得られた。
５）濾過によって白色固体が得られ、これが大量の水で洗浄され、水/メタノールによって再結晶され、白色粉末が得られた。
【００３７】
八n-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3（20(R)-GinsenosideRg3 octo-n-butyrate,3g)は白色固体で水及びエタノールに溶解する。TLC板が展開されたのち(クロマトグラフ溶液は、石油エーテル/酢酸エチルの3:1溶液、Rf値は0.5だった。)、10% H2SO4-エタノール試薬がスプレーされ、それによって紫色を呈色した。ESI-MSスペクトルによると、m/z[M+Na]は1368.27であり、分子量は1345である。
【００３８】
八n-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3の1H-NMR及び13C-NMRは以下のとおりである。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm)：5.301-5.255(t,1H,J=9.2Hz),5.192-5.146(t,1H,J=9.2Hz),5.062(s,1H),4.891-4.721(m,4H),4.629(s,2H),4.182-4.067(m,3H),3.973-3.911(m,3H),3.630-3.592(t,1H,J=1.2Hz),3.512(s,1H),3.054-3.053(d,1H,J=7.6Hz),2.35(m,12H),2.32(s,2H),1.984-1.902(m,22H),1.801-1.793(m,16H),1.738(s,3H),0.992-0.889(m,16H),0.794(s,3H),0.721(s,5H).
【００３９】
13C-NMR(100MHz,Pyridin-d5)δ(ppm):172.96、172.89、172.62、172.51、172.47、172.28、172.26、172.06(C=O),130.55(C-25),125.81(C-24),103.44(C-1"),100.82(C-1'),90.01(C-3),77.41(C-2'),77.11(C-5"),76.68(C-5'),75.47(C-2"),72.04(C-20),74.43(C-3"),73.91(C-3'),71.64(C-12),69.14(C-4"),68.74(C-4'),63.30(C-6'),63.35(C-6"),56.34(C-5),51.39(C-14),50.16(C-17),49.99(C-9),48.73(C-13),42.59(C-22),40.25(C-4),40.04(C-8),39.25(C-1),36.85(C-10),35.59-35.90(CH3CH2CH2CO),35.01(C-7),31.59(C-11),31.16(C-15),27.22(C-28),25.64(C-16),24.96(C-2),24.83(C-26),22.39(C-21),21.93(C-23),18.42(C-6),18.17-18.34(CH3CH2CH2CO),17.65(C-30),17.26(C-27),16.12(C-29),16.02(C-19),15.40(C-18),13.64(CH3CH2CH2CO).
【００４０】
ESI-MS、1H-NMR及び13C-NMRの実験データに基づけば、八n-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3の構造式は以下のように決定できる。
【００４１】
【化４】
0006415725.tif 000005
【実施例３】
【００４２】
１）20(R)-ジンセノサイドRg3(4g,5.09mmol)が乾燥無水ピリジン180mlに加えられて溶解のため撹拌され、20(R)-ジンセノサイドRg3溶液が作られた。
２）室温(15〜25℃)で、N-プロピオン酸無水物(3.07ml,約10mmol)が、20(R)-ジンセノサイドRg3溶液に加えられた。
３）得られた混合液は撹拌下で加温され、エステル化のために80℃に維持された。
４）80℃で5時間反応が維持されたのち、反応液は氷水に滴下されて、飽和重炭酸ナトリウム水溶液が加えられてpH7に調整され、白色固体の大量の沈殿物が得られた。
５）濾過によって白色固体が得られ、これが大量の水で洗浄され、水/メタノールによって再結晶され、白色粉末が得られた。
【００４３】
八n-プロピオン酸20(R)-ジンセノサイドRg3（20(R)-GinsenosideRg3 octo-n-propionate,3g)は白色固体で水及びエタノールに溶解する。TLC板が展開されたのち(クロマトグラフ溶液は、石油エーテル/酢酸エチルの3:1溶液、Rf値は0.4だった。)、10% H2SO4-エタノール試薬がスプレーされ、それによって紫色を呈色した。ESI-MSスペクトルによると、m/z[M+Na]は1255.71であり、分子量は1233である。
【００４４】
八n-プロピオン酸20(R)-ジンセノサイドRg3の1H-NMR及び13C-NMRは以下のとおりである。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):5.301-5.255(t,1H,J=9.2Hz),5.192-5.146(t,1H,J=9.2Hz),5.062(s,1H),4.891-4.721(m,4H),4.629(s,2H),4.182-4.067(m,3H),3.973-3.911(m,3H),3.630-3.592(t,1H,J=1.2Hz),3.512(s,1H),3.054-3.053(d,1H,J=7.6Hz),2.29-2.27(m,16H),2.088(s,2H),1.14-1.12(m,24H),1.738(s,3H),),0.992-0.889(m,16H),0.794(s,3H),0.721(s,5H)；
【００４５】
13C-NMR(100MHz,Pyridin-d5)δ(ppm):175.27、175.20、175.04、174.97、174.87、174.70、174.68、174.52(C=O),132.06(C-25),127.31(C-24),104.96(C-1"),102.38(C-1'),91.53(C-3),79.14(C-2'),77.11(C-5"),76.68(C-5'),75.47(C-2"),72.46(C-20),74.43(C-3"),73.91(C-3'),70.18(C-12),70.86(C-4"),70.36(C-4'),63.81(C-6"&6'),57.57(C-5),53.86(C-14),51.53(C-17),51.49(C-9),7.40(C-13),44.29(C-22),41.20(C-4),40.87(C-8),40.07(C-1),38.20(C-10),36.09(C-7),32.87(C-11),30.13(C-15),29.54-29.98(CH3CH2CO),29.10(CH3CH2CO),28.82-28.98(CH3CH2CO),27.08(C-28),24.24(C-16),24.96(C-2),24.83(C-26),22.39(C-21),21.93(C-23),19.65(C-6),18.97(C-30),18.96(C-27),17.53(C-29),17.50(C-19),16.90(C-18),10.45-10.58(CH3CH2CO).
【００４６】
ESI-MS、1H-NMR及び13C-NMRの実験データに基づけば、八n-プロピオン酸20(R)-ジンセノサイドRg3の構造式は以下のように決定できる。
【００４７】
【化５】
0006415725.tif 000006
【実施例４】
【００４８】
１）20(R)-ジンセノサイドRg3(4g,5.09mmol)が乾燥無水ピリジン180mlに加えられて溶解のため撹拌され、20(R)-ジンセノサイドRg3溶液が作られた。
２）室温で、ヘキサノイルクロリド(1.387ml,約10mmol)が、20(R)-ジンセノサイドRg3溶液に加えられた。
３）得られた混合液は撹拌下で加温され、エステル化のために80℃に維持された。
４）80℃で5時間反応が維持されたのち、反応液は氷水に滴下されて、飽和重炭酸ナトリウム水溶液が加えられてpH7に調整され、白色固体の大量の沈殿物が得られた。
５）濾過によって白色固体が得られ、これが大量の水で洗浄され、水/メタノールによって再結晶され、白色粉末が得られた。
【００４９】
八ヘキサン酸20(R)-ジンセノサイドRg3（20(R)-GinsenosideRg3 octo-n-hexanoat,3g)は白色固体で水及びエタノールに溶解する。TLC板が展開されたのち(クロマトグラフ溶液は、クロロホルム/メタノールの5:1溶液、Rf値は0.4だった。)、10% H2SO4-エタノール試薬がスプレーされ、それによって紫色を呈色した。ESI-MSスペクトルによると、m/z[M+Na]は1602.2、分子量は1570である。
【００５０】
八ヘキサン酸20(R)-ジンセノサイドRg3の1H-NMR及び13C-NMRは以下のとおりである。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):5.301-5.255(t,1H,J=9.2Hz),5.192-5.146,(t,1H,J=9.2Hz),5.062(s,1H),4.891-4.721(m,4H),4.629(s,2H),4.182-4.067(m,3H),3.973-3.911(m,3H),3.630-3.592(t,1H,J=1.2Hz),3.512(s,1H),3.054-3.053(d,1H,J=7.6Hz),2.29-2.27(m,16H),2.088(s,2H),1.14-1.12(m,24H),1.738(s,3H),),0.992-0.889(m,16H),0.794(s,3H),0.721(s,5H) 
【００５１】
13C-NMR(100MHz,Pyridin-d5)δ(ppm):173.27、173.20、173.04、172.98、172.82、172.70、172.67、172.52(C=O),132.06(C-25),127.31(C-24),104.96(C-1"),102.38(C-1'),91.53(C-3),79.14(C-2'),77.11(C-5"),76.68(C-5'),75.47(C-2"),72.46(C-20),74.43(C-3"),73.91(C-3'),70.18(C-12),70.86(C-4"),70.36(C-4'),63.81(C-6"&6'),57.57(C-5),53.86(C-14),51.53(C-17),51.49(C-9),7.40(C-13),44.29(C-22),41.20(C-4),40.87(C-8),40.07(C-1),38.20(C-10),36.09(C-7),33.14-34.28(CH3CH2CH2CH2CH2CO),32.87(C-11),28.82-28.98(CH3CH2CH2CH2CH2CO),30.13(C-15),27.08(C-28),24.24(C-16),24.96(C-2),24.83(C-26),22.39(C-21),22.48-22.10(CH3CH2CH2CH2CH2CO),21.93(C-23),19.65(C-6),18.97(C-30),18.96(C-27),17.53(C-29),17.50(C-19),16.90(C-18),14.41-14.67(CH3CH2CH2CH2CH2CO).
【００５２】
ESI-MS、1H-NMR及び13C-NMRの実験データに基づけば、八ヘキサン酸20(R)-ジンセノサイドRg3の構造式は以下のように決定できる。
【００５３】
【化６】
0006415725.tif 000007
【実験例】
【００５４】
腫瘍成長の抑制におけるポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体の効果
１．被試験薬
ポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体:
八酢酸20(R)-ジンセノサイドRg3、八n-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3及び八n-プロピオン酸20(R)-ジンセノサイドRg3は、大連富生天然薬物開発有限公司（Dalian Fusheng Natural Medicine Development Co.,Ltd.）により製造され、高速液体クロマトグラフィー検出器、すなわち、紫外線検出器及び蒸発光散乱検出器(ELSD)を使用する面積正規化法によって、純度がそれぞれ99.6%、99.2%及び99.1%であると検出された。
【００５５】
調製方法
ポリアシル化20(R)-ジンセノサイドRg3誘導体の量を正確に測定し、5% CMC-Naを加えて目的濃度の懸濁液を作る。投薬容量は0.5 ml/マウスである。
【００５６】
２．実験材料
陽性薬物:
注射用のシクロホスファミド(CTX)は、上海華連製薬集団（Shanghai Hualian Pharmaceuticals group）によって生産され、連続して７日間一日一回投与された。
5-Fu注射液は、上海旭東海普薬業有限公司（Shanghai Xudonghaipu Pharmaceuticals Co.,ltd）によって生産された。
注射用のマイトマイシン(MMC)は、協和発酵工業株式会社によって生産された。
【００５７】
腫瘍源:
ヒト乳がんBcap-37モデル、ヒト肺がんA549モデル、ヒト腸がんLOVOモデル、ヒト胃がんMGCモデル及びヒト肝がんQGYモデルの各腫瘍細胞株は全て第二又はそれ以上の世代である。マウスB16黒色腫細胞株、マウスルイス肺がんモデル、マウス肉腫s180モデルは、上海医薬工業研究院（Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry）薬理室において全て継代・維持された。
【００５８】
３．実験動物
由来：
ヌードマウスは、上海市中国科学アカデミー実験動物センター（Laboratory Animal Center of Chinese Academy of Sciences）によって提供され、承認番号はSCXK 2003-0003である。
C57BL/6マウス及び昆明マウスは、上海医薬工業研究院薬理室の実験動物班によって提供され、実験動物使用許可番号はSYXK(上海)2004-0015である。
体重：ヌードマウスは6週令であり、昆明マウス及びC57BL/6マウスは18〜22gである。
性別：雄又は雌、各実験では同一の性別を使用した。
動物数：実験では陽性対照群及び試験群として10匹のヌードマウス及び10匹のマウスを使用し、陰性対照群として20匹のマウスを使用した。
【００５９】
４．実験計画
用量設定:
八酢酸20(R)-ジンセノサイドRg3、八n-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3及び八n-プロピオン酸20(R)-ジンセノサイドRg3の用量は、高用量群(0.3mg/kg/d)、中用量群(0.06mg/kg/d)及び低用量群(0.012mg/kg/d)に設定された。
投与計画：経口投与、1日2回。
ヒト腫瘍モデル及び細胞移植マウスモデル：po×14bid。
マウス腫瘍移植モデル：po×10bid。
【００６０】
対照試験：
陰性対照群：試験群と同じ容量の5% CMC-Naが、試験群と同じ投与計画に従って投与された。
陽性対照群：シクロホスファミド(CTX) 30mg/kg、MMC 2mg/kg及び5-Fu 30mg/kgは、腹腔内投与又は静脈投与により、1日1回、連続７日間投与された。
【００６１】
５．実験方法及び重要な段階
５．１抗腫瘍試験
５．１．１皮下移植モデル
様々な成長段階の腫瘍細胞が滅菌状態に置かれ、ホモジナイゼーションによって約1-2×107/mlの細胞懸濁液にされ、懸濁液が0.2ml/マウスの量で宿主マウスに皮下移植され、実験計画に従って翌日も繰り返され、各群の動物が約3週間後に解体され、腫瘍が集められて重量を量られ、腫瘍抑制率が次の式によって計算された。
【００６２】
【数１】
0006415725.tif 000008
【００６３】
同じ操作が、餌、パッキング、ケージ及び接触器具の全てが使用前に高圧滅菌されるとともに、ヌードマウスが層流ラックで飼育されたことを除いて、ヒト腫瘍異種移植モデルで繰り返された。腫瘍及び担がん動物の増量は動的に測定された（腫瘍の大きさはカリパスを使用して測定した。長径／a、短径／b、及び腫瘍体積=a×b2/2）。
【００６４】
５．１．２胃原位置移植モデル
様々な成長段階のMGC胃がんを生体内で2代継代したものが滅菌状態に置かれ、ホモジナイゼーションによって約2×107/mlの細胞懸濁液にされ、細胞懸濁液(0.05 ml)がヌードマウスの胃の大彎に外科的に注入され、実験計画に従って翌日も繰り返され、担がん宿主の延命率が次の式によって計算された。
【００６５】
【数２】
0006415725.tif 000009
【００６６】
５．２抗腫瘍転移試験
５．２．１尾静脈移植モデル
対数増殖期のマウス黒色腫細胞B16が滅菌状態に置かれ、約2.5×105/mlの細胞懸濁液にされ、細胞懸濁液が0.2ml/マウスとなるようC57BL/6マウスに尾静脈注射され、実験計画に従って翌日も繰り返され、マウスが3週間後に解体され、各群のマウスの肺腫瘍が集められ、マウスごとに肺にある転移がんのコロニー及び各群における腫瘍細胞のコロニーの平均が計算され、腫瘍抑制率が次の式によって計算された。
【００６７】
【数３】
0006415725.tif 000010
【００６８】
５．２．２脾臓移植肝臓転移モデル
対数増殖期のLOVO腸がん細胞（試験管内で培養された)滅菌状態に置かれて、希釈液にRPMI1640培養液を使用して、約1.8×107/mlの細胞懸濁液に調製された。ヌードマウスは全身麻酔されて腹部皮膚が所定の方法で消毒されたのち腹部が切断され、脾臓が取り出されてLOVO腸がん細胞懸濁液（0.05ml/マウス）を移植されたのち元の場所に戻され、開口部が縫合され、マウスがケージに入れられたのち層流ラックに置かれた。マウスは実験結果に従って翌日処理され、各群のマウスの死亡率が観察及び記録され、延命率が計算されて陰性対照群と比較された。
【００６９】
５．２．３肝臓原位置移植モデル
滅菌条件下で、様々な成長段階のQGY腫瘍源を生体内で2代継代したものがホモジナイゼーション(1:6)によって約1-2×107/mlの細胞懸濁液に調製され、ホモジネートは100メッシュのステンレススチールの篩を使用して濾過され、使用できるよう準備された。ヌードマウスは所定の方法で消毒されて麻酔されたのち、腹腔の中央にある剣状突起の部分で切断されて肝臓が露出させられ、細胞懸濁液(0.05ml)が輸入された28ga 1/2mlシリンジを使用して肝実質に注射され、腹腔が閉じられて層ごとに縫合された。ヌードマウスは層流ラックで飼育され、使用するすべての餌、パッキング、ケージ及び接触器具は使用前に高圧滅菌された。マウスは実験計画に従って翌日処理され、群ごとに45日間に渡って生存時間が観察・記録され、生存時間は陰性対照群と比較され、延命率が計算された。
【００７０】
６．結果
６．１腫瘍モデルにおけるポリアシル化Rg3誘導体の抗腫瘍試験の結果
マウス及びヒト腫瘍モデルにおける八n-プロピオン酸20(R)-ジンセノサイドRg3、八n-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3及び八酢酸20(R)-ジンセノサイドRg3の抗腫瘍試験の結果は、表１及び表２に示された。
【００７１】
【表１】
0006415725.tif 000011
【００７２】
【表２】
0006415725.tif 000012
【００７３】
表１及び表２から分かるように、八n-プロピオン酸20(R)-ジンセノサイドRg3、八n-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3及び八酢酸20(R)-ジンセノサイドRg3は、マウス及びヒト固体腫瘍モデルにおいて腫瘍成長抑制効果を備え、処理群の最善の腫瘍抑制率は70%を超え、陰性対照群との比較では顕著な差異を示した(p<0.01)。
【００７４】
６．２腫瘍転移モデルにおけるポリアシル化Rg3誘導体(すなわち、多重アシル化Rg3誘導体)の抗腫瘍転移試験の結果
マウス黒色腫B16、S180、ルイス肺がん転移モデル及びヒト肺がん転移モデルにおける八n-プロピオン酸20(R)-ジンセノサイドRg3、八n-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3及び八酢酸20(R)-ジンセノサイドRg3の抗腫瘍転移試験の結果は、表３〜６に示された。
【００７５】
【表３】
0006415725.tif 000013
【００７６】
【表４】
0006415725.tif 000014
【００７７】
【表５】
0006415725.tif 000015
【００７８】
【表６】
0006415725.tif 000016
【００７９】
表３〜６から分かるように、マウス黒色腫B16、S180、ルイス肺がん転移モデル及びヒト肺がん転移モデルにおける八n-プロピオン酸20(R)-ジンセノサイドRg3、八n-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3及び八酢酸20(R)-ジンセノサイドRg3のがん転移抑制率は、70%〜80%に達した。
【００８０】
６．３腫瘍転移モデルにおけるポリアシル化Rg3誘導体の抗腫瘍試験による延命率の結果
ヒト胃がん転移、ヒト腸がん転移、ヒト肝がん転移モデルにおける八n-プロピオン酸ジンセノサイドRg3、八n-酪酸ジンセノサイドRg3及び八酢酸ジンセノサイドRg3の抗腫瘍試験による延命率の結果は、表７〜９に示された。
【００８１】
【表７】
0006415725.tif 000017
【００８２】
【表８】
0006415725.tif 000018
【００８３】
【表９】
0006415725.tif 000019
【００８４】
表７〜９から分かるように、八n-プロピオン酸20(R)-ジンセノサイドRg3、八n-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3及び八酢酸20(R)-ジンセノサイドRg3は、ヒト胃がん、ヒト腸がん及びヒト肝がんモデルにおいて、生存時間を顕著に増加させることができ、明確な延命効果を示した。各群の中でも、八n-プロピオン酸20(R)-ジンセノサイドRg3、八n-酪酸20(R)-ジンセノサイドRg3及び八酢酸20(R)-ジンセノサイドRg3の高用量群は、ヒト胃がん、ヒト腸がん及びヒト肝がんにおいて明確な延命効果を示し、これら全てが陽性対照群よりも優れていた。また、低用量群は陽性対照群と同程度の延命効果を示した。