(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
処置を必要とする対象における癌の処置のための非経腸投与用組成物であって、薬学的に許容される担体中にあり、
ａ. 治療有効量の、α−１,２−結合ラムノースおよびα−１,４−結合ガラクツロン酸(ＧａｌＡ)残基の交互オリゴマーの分枝ヘテロポリマーに結合した１,４−結合ＧａｌＡおよびガラクツロン酸メチル(ＭｅＧａｌＡ)残基骨格を含み、該ラムノース残基が１,４−β−Ｄ−ガラクトース残基、１,５−α−Ｌ−アラビノース残基またはその組み合わせのオリゴマーの主な分枝を有するものであるガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネート
を含み、
ｂ. 治療有効量の、ＯＸ４０、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２に結合できるモノクローナル抗体またはそれらの組み合わせである免疫調節剤
をさらに含むか、または該免疫調節剤と組み合わせて投与される、組成物。
【請求項２】
免疫調節剤が、ＯＸ４０、ＣＴＬＡ−４もしくはＰＤ−１に結合できるモノクローナル抗体またはそれらの組み合わせである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
(i) α−１,２−結合ラムノースおよびα−１,４−結合ガラクツロン酸(ＧａｌＡ)残基の交互オリゴマーの分枝ヘテロポリマーに結合した１,４−結合ＧａｌＡおよびガラクツロン酸メチル(ＭｅＧａｌＡ)残基骨格を含み、該ラムノース残基が１,４−β−Ｄ−ガラクトース残基、１,５−α−Ｌ−アラビノース残基またはその組み合わせのオリゴマーの主な分枝を有するものであるガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネート(ＧＡ−ＲＧ)
を許容される医薬担体中に含む、癌の処置のための非経腸または経腸投与用組成物であって、
(ii) 治療有効量の、ＯＸ４０、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１もしくはＰＤ−Ｌ２に結合できるモノクローナル抗体またはそれらの組み合わせである免疫調節剤
をさらに含むか、または該免疫調節剤と組み合わせて投与され、
その投与により、
ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞またはＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＣＤ４＋ Ｔ細胞の活性化において少なくとも１０％増大；
腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞の少なくとも１０％増大；
腫瘍サイズの少なくとも１０％減少；
転移サイズの少なくとも１０％減少；
転移数の少なくとも１０％減少；
治療有効量の免疫調節剤単独で処置したコントロール対象と比較したとき全腫瘍量の減少
のうち少なくとも一つが得られる、組成物。
【請求項４】
さらに、治療有効量の、ＣＤ２７もしくは４−１ＢＢに結合できるモノクローナル抗体またはそれらの組み合わせを含むか、またはそれと組み合わせて投与される、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
さらに、治療有効量の、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ７０もしくは４−１ＢＢＬに結合できるモノクローナル抗体またはそれらの組み合わせを含むか、またはそれと組み合わせて投与される、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネートが、２０kDa〜７０kDaの範囲の平均分子量を有する、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネートが、さらに、キシロース、グルコース、フコース残基またはそれらの組み合わせを含む、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、米国仮特許出願第61/701,914号(2012年9月17日出願)、米国仮特許出願第61/756,818号(2013年1月25日出願)、および、米国仮特許出願第61/759,532号(2013年2月1日出願)の優先権の利益を主張しており、各々は、その全体が、引用によって本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明の分野
本発明の方法および組成物は、癌の処置における特異的免疫療法の向上に関する。
【背景技術】
【０００３】
本発明の背景
免疫系は、外来性抗原を認識し、外来性抗原または外来性抗原を発現する病原体もしくは細胞の除去をもたらす多数の細胞型を含む協調的応答を組織化する。免疫系は、細菌、ウイルスおよび寄生虫を含むがこれらに限定されない侵入微生物からの保護、異常なまたは変異した細胞(癌)の監視および除去に極めて重要である。免疫系はまた、身体への医学的デバイスの挿入または異種臓器もしくは細胞の移植に対する反応によって、治療介入の障害をもたらす。
【０００４】
宿主動物を保護するという免疫系の基本的機能に加えて、疾患の処置のために免疫系を調節することはかなり有望である。これに関して、患者自身の免疫系を患者の癌を攻撃し処置するのに利用することは、多くの異なるタイプの癌に対する非常に有望な治療的方法であり得る。
【０００５】
癌の処置における免疫療法の近年の成功にもかかわらず、ヒト腫瘍の応答は、個体間でおよびそれが作用する場所において変わりやすく、しばしば部分的にしか成功しない。
そのため、免疫療法の癌を処置する能力を向上できる方法についての必要性がある。
【発明の概要】
【０００６】
本発明の概要
本発明の局面は、複合糖質医薬化合物を単独でまたは癌の免疫療法の有効性を増大させ得る他の標的化免疫療法と組み合わせて使用して免疫機能をブーストする新規方法に関する。
本発明の局面は、免疫機能をブーストできる組成物、組成物を使用する方法および製造する方法に関する。
【０００７】
本発明の他の局面は、処置を必要とする対象を処置する方法に関する。幾つかの態様において、本方法は、許容される医薬担体中に化合物を含む、静脈内、皮下、非経腸の他の経路または経口投与用組成物を得て、該組成物を処置を必要とする対象に投与する過程を含む。
【０００８】
或る態様において、本化合物は、ガラクト−ラムノガラクツロネート(ＧＲＧ)、ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネート(ＧＡ−ＲＧ)、ガラクトマンナン(ＧＭ)、修飾合成二糖類(ＭＳＤ)、ペプチド／タンパク質阻害剤(ＰＩＡ)、ペプチド模倣薬(ＰＭＡ)、ガレクチン特異的抗体(ＧＳＡ)または有機小分子(ＳＯＭ)、または前述の何れかの組み合わせのうちの１個であり得る。
【０００９】
或る態様において、特異的なＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、ガレクチン１〜１５を含むガレクチンタンパク質のクラスの様々なドメインと相互作用する能力を有し、それによって、それらの機能を阻害し、増強し、または調節し得る。
【００１０】
或る態様において、特異的なＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、ガレクチン−３タンパク質の炭水化物のＳ面およびＦ面認識ドメインおよびＮ末端ドメインを含むがこれらに限定されない様々なドメインと相互作用する能力を有し、それによって、ガレクチン−３機能を阻害する天然リガンドとの相互作用を阻害し得る。
【００１１】
或る態様において、特異的なＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、ガレクチン−１タンパク質の炭水化物認識ドメインおよび二量化ドメインを含むがこれらに限定されない様々なドメインと相互作用する能力を有し、それによってガレクチン−１機能を阻害する天然リガンドとの相互作用を阻害し得る。
【００１２】
或る態様において、本化合物は、その骨格が主に１,４−結合ガラクツロン酸(ＧａｌＡ)部分からなり、交互の１,４−結合ＧａｌＡおよび１,２−結合ラムノース(Ｒｈａ)である少量の骨格組成を伴い、これが次に主に１,４−ｂ−Ｄ−ガラクトース(Ｇａｌ)と少量の１,５−ａ−Ｌ−アラビノース(Ａｒａ)残基を含む任意の数の側鎖に結合している選択的脱重合分枝ヘテロポリマーである、ガラクト−ラムノガラクツロネート(ＧＲＧ)と化学的に定義される多糖類であり得る。他の側鎖副構成要素は、キシロース(Ｘｙｌ)、グルコース(Ｇｌｕ)およびフコース(Ｆｕｃ)またはその組み合わせを含み得る。
【００１３】
或る態様において、ＧＲＧ化合物は、米国特許出願公開第2008/0107622号、現米国特許第8,236,780号(全ての目的について引用によって明示的に組み込まれる)に記載された通りに製造できる。
【００１４】
或る態様において、ＧＲＧ化合物は、米国特許第8,128,966号、第8,187,624号、米国特許出願公開第2012/0315309号および第2012/0309711号(全ての目的について引用によって明示的に組み込まれる)に記載された通りに製造できる。
【００１５】
或る態様において、本化合物は、その骨格が主に１,４−結合ガラクツロン酸(ＧａｌＡ)およびガラクツロン酸メチル(ＭｅＧａｌＡ)残基からなり、交互の１,４−結合ＧａｌＡおよび１,２−結合ラムノース(Ｒｈａ)である少量の骨格組成を伴い、これが次に主に１,４−ｂ−Ｄ−ガラクトース(Ｇａｌ)および１,５−ａ−Ｌ−アラビノース(Ａｒａ)残基を含む任意の数の側鎖に結合している選択的脱重合分枝ヘテロポリマーである、ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネート(ＧＡ−ＲＧ)と化学的に定義される多糖類であり得る。他の側鎖副構成要素は、キシロース(Ｘｙｌ)、グルコース(Ｇｌｕ)およびフコース(Ｆｕｃ)またはその組み合わせを含み得る。
【００１６】
本発明の局面は、(ａ)α−１,２−結合ラムノースおよびα−１,４−結合ＧａｌＡ残基の交互オリゴマーの分枝ヘテロポリマーに結合した１,４−結合ガラクツロン酸(ＧａｌＡ)およびガラクツロン酸メチル(ＭｅＧａｌＡ)残基骨格を含み、ラムノース残基が１,４−β−Ｄ−ガラクトース残基、１,５−α−Ｌ−アラビノース残基またはそれらの組み合わせのオリゴマーの一次分枝を有するものであるガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネートおよび治療有効量の免疫調節剤を含む非経腸または経腸投与用組成物を得ること；および(ｂ)処置を必要とする対象に、有効量の組成物を投与し、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞またはＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＣＤ４＋ Ｔ細胞の活性化について少なくとも１０％増大、腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞の少なくとも１０％増加；腫瘍サイズの少なくとも１０％減少、転移サイズの少なくとも１０％減少、転移数の少なくとも１０％減少、治療有効量の免疫調節剤単独で処置したコントロール対象と比較したとき、全腫瘍量の減少のうち一つ以上の結果を得ることを含む方法に関する。或る態様において、処置を必要とする対象は、癌を有する対象である。或る態様において、投与過程は、対象の全腫瘍量の少なくとも５０％減少をもたらし、癌を処置する。
【００１７】
或る態様において、ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネートを得る工程において、ガスクロマトグラフィー／質量分析によって特性決定されたとき、１,４−結合ガラクツロン酸およびガラクツロン酸メチル残基骨格は５５〜８５モル％の炭水化物総モル含量を表し得て、交互のα−１,２−結合ラムノースおよびα−１,４−結合ＧａｌＡ残基の分枝ヘテロポリマーは１〜６モル％の炭水化物総モル含量を表し得て、一次分枝のオリゴマー１,４−β−Ｄ−ガラクトースは６〜１５モル％の炭水化物総モル含量を表し得て、一次分枝のオリゴマー１,５−α−Ｌ−アラビノースは２〜８モル％の炭水化物総モル含量を表し得る。
【００１８】
或る態様において、ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネートは、２０kDa〜７０kDaの範囲の平均分子量を有し得る。或る態様において、ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネートは、さらに、キシロース、グルコース、フコース残基またはそれらの組み合わせを含む。
【００１９】
或る態様において、本化合物は、ガレクチンに結合し、ガレクチン機能を阻害し得るペプチド／タンパク質阻害剤(ＰＩＡ)であり得る。或る態様において、ペプチド／タンパク質阻害剤は、anginexを含み、これに限定されない。Anginexは、或る態様において、米国特許第6,770,622号(全ての目的について引用によって明示的に組み込まれる)に記載された通りに製造できる。
【００２０】
或る態様において、本化合物は、ガレクチンに結合でき、ガレクチン機能を阻害できるペプチド模倣薬(ＰＭＡ)であり得る。或る態様において、ＰＭＡは、OTX-008 (PTX-008としても知られる)であり得るが、これに限定されない。或る態様において、ペプチド模倣薬は、米国特許第8,207,228号(全ての目的について引用によって明示的に組み込まれる)に記載された通りに製造されるＰＭＡを含み得るが、これに限定されない。
【００２１】
或る態様において、本化合物は、ガレクチン−３またはガレクチンファミリーのタンパク質の他のメンバーに結合し、阻害するモノクローナル抗体を含むがこれらに限定されないガレクチン特異的抗体(ＧＳＡ)であり得る。
【００２２】
或る態様において、本化合物は、ガレクチン分子の炭水化物結合ドメインおよびタンパク質二量化ドメインを含むがこれらに限定されない様々なドメインと相互作用し得る有機小分子(ＳＯＭ)であり得る。
【００２３】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、リンパ球同時刺激リガンドまたは受容体に結合し、同時刺激のアンタゴニストまたはアゴニストの何れかとして作用する、治療有効量のモノクローナル抗体、ペプチドまたは他の薬物と組み合わせて使用できる。同時刺激受容体は、ＣＤ２８およびＩＣＯＳを含み得るが、これらに限定されない。同時刺激リガンドは、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳリガンドを含み得るが、これらに限定されない。
【００２４】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、リンパ球阻害リガンドまたは受容体に結合し、リンパ球阻害のアンタゴニストまたはアゴニストの何れかとして作用する、治療有効量のモノクローナル抗体、ペプチドまたは他の薬物と組み合わせて使用できる。阻害受容体は、ＣＴＬＡ−４およびＬＡＧ−３(リンパ球活性化遺伝子３；ＣＤ２２３とも示される)を含むが、これらに限定されない。阻害リガンドは、ＣＤ８０およびＣＤ８６を含むが、これらに限定されない。
【００２５】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量のＣＴＬＡ−４に結合するモノクローナル抗体(抗ＣＴＬＡ４)と組み合わせて使用できる。
【００２６】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、リンパ球に発現する腫瘍壊死因子受容体(ＴＮＦＲ)スーパーファミリーの受容体またはそれらのリガンドに結合し、リンパ球同時刺激のアンタゴニストまたはアゴニストの何れかとして作用する、治療有効量のモノクローナル抗体、ペプチドまたは他の薬物と組み合わせて使用できる。ＴＮＦＲスーパーファミリーの受容体のメンバーは、ＣＤ１３４(ＯＸ４０としても知られる)、ＣＤ２７および４−１ＢＢを含み得るがこれらに限定されず、ＴＮＦＲ受容体リガンドは、ＯＸ４０ＬおよびＣＤ７０および４−１ＢＢＬ(ＣＤ１３７Ｌ)を含むがこれらに限定されない。
【００２７】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量のＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体(抗ＯＸ４０)と組み合わせて使用できる。或る態様において、本明細書に記載されたＧＡ−ＲＧまたはＧＭ化合物は、治療有効量の組換えＯＸ４０Ｌまたは他のＯＸ４０のアゴニストと組み合わせて使用できる。
【００２８】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量のＰＤ−リガンドに結合するモノクローナル抗体(抗ＰＤ−Ｌ１および抗ＰＤ−Ｌ２)と組み合わせて使用できる。
【００２９】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量のＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体(抗ＰＤ−１)と組み合わせて使用できる。
【００３０】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、樹状細胞の活性化または機能を修飾し、それによって抗原プロセシングまたは応答を変化させる、治療有効量のモノクローナル抗体、ペプチドまたは他の薬物と組み合わせて使用できる。
【００３１】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量の癌ワクチンと組み合わせて使用できる。或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量の腫瘍抗原指向性ワクチンと組み合わせて使用できる。
【００３２】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量の感染性疾患を処置または予防する目的で使用されるワクチンと組み合わせて使用できる。
【００３３】
本発明の或る局面において、癌を処置する方法は、(ａ)許容される医薬担体中にガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネートを含む非経腸または経腸投与用組成物を得ることであって、ここで、ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネートは、α−１,２−結合ラムノースおよびα−１,４−結合ＧａｌＡ残基の交互オリゴマーの分枝ヘテロポリマーに結合した１,４−結合ガラクツロン酸(ＧａｌＡ)およびガラクツロン酸メチル(ＭｅＧａｌＡ)残基骨格を含み、ラムノース残基は１,４−β−Ｄ−ガラクトース残基、１,５−α−Ｌ−アラビノース残基またはそれらの組み合わせのオリゴマーの一次分枝を有し；(ｂ)処置を必要とする対象に、有効量の組成物を投与し、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞またはＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＣＤ４＋ Ｔ細胞の活性化において少なくとも１０％増大、腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞の少なくとも１０％増大；腫瘍サイズの少なくとも１０％減少、転移サイズの少なくとも１０％減少、転移数の少なくとも１０％減少、治療有効量の癌の処置のための承認された治療で処置したコントロール対象と比較したとき、全腫瘍量の減少のうち一つ以上の結果を得ることを含む。或る態様において、投与過程は、対象における全腫瘍量の少なくとも５０％減少をもたらして癌を処置し得る。
【００３４】
或る態様において、ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネートを得る工程において、ガスクロマトグラフィー／質量分析によって特性決定されたとき、１,４−結合ガラクツロン酸およびガラクツロン酸メチル残基骨格は５５〜８５モル％の炭水化物総モル含量を表し得て、α−１,２−結合ラムノースおよびα−１,４−結合ＧａｌＡ残基の交互分枝ヘテロポリマーは１〜６モル％の炭水化物総モル含量を表し得て、一次分枝のオリゴマー１,４−β−Ｄ−ガラクトースは６〜１５モル％の炭水化物総モル含量を表し得て、一次分枝のオリゴマー１,５−α−Ｌ−アラビノースは２〜８モル％の炭水化物総モル含量を表し得る。
【００３５】
或る態様において、ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネートは、２０kDa〜７０kDaの範囲の平均分子量を有し得る。或る態様において、ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネートは、さらに、キシロース、グルコース、フコース残基またはそれらの組み合わせを含み得る。
【００３６】
本発明の或る局面において、本方法は、(i)ガラクト−ラムノガラクツロネート(ＧＲＧ)、ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネート(ＧＡ−ＲＧ)、ガラクトマンナン(ＧＭ)、修飾合成二糖類(ＭＳＤ)、ペプチド／タンパク質阻害剤(ＰＩＡ)、ペプチド模倣薬(ＰＭＡ)、ガレクチン特異的抗体(ＧＳＡ)または有機小分子(ＳＯＭ)または前述の何れかの組み合わせのうちの１個、および、(ii)治療有効量の、リンパ球同時刺激リガンドまたは受容体、リンパ球阻害リガンドまたは受容体、腫瘍壊死因子受容体(ＴＮＦＲ)スーパーファミリーの受容体、ＰＤリガンド、または前述の何れかの組み合わせの１種以上に結合できるモノクローナル抗体、ペプチド、または薬物を含む免疫調節剤を含む非経腸または経腸投与用組成物であって、許容される医薬担体中である組成物を得ることを含む。本方法は、さらに、処置を必要とする対象に、ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞またはＣＤ８＋ Ｔ細胞およびＣＤ４＋ Ｔ細胞の活性化において少なくとも１０％増大、腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞の少なくとも１０％増大；腫瘍サイズの少なくとも１０％減少、転移サイズの少なくとも１０％減少、転移数の少なくとも１０％減少、治療有効量の免疫調節剤のみで処置されたコントロール対象と比較したとき全腫瘍量の減少のうち少なくとも一つの結果を得ることができる組成物を有効量投与することを含む。或る態様において、投与過程は、対象における全腫瘍量の少なくとも５０％減少をもたらし、癌を処置し得る。
【００３７】
或る態様において、免疫調節剤は、抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ２、４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬに対する抗体、ＬＡＧ−３に対する抗体またはそれらの組み合わせであり得る。
【００３８】
本発明の他の局面は、許容される医薬担体中である組成物であって、(ａ)治療有効量のα−１,２−結合ラムノースおよびα−１,４−結合ＧａｌＡ残基の交互オリゴマーの分枝ヘテロポリマーに結合した１,４−結合ガラクツロン酸(ＧａｌＡ)およびガラクツロン酸メチル(ＭｅＧａｌＡ)残基骨格を含み、ラムノース残基が１,４−β−Ｄ−ガラクトース残基、１,５−α−Ｌ−アラビノース残基またはそれらの組み合わせのオリゴマーの一次分枝を有するものであるガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネート、および、(ｂ)治療有効量の免疫調節剤を含む非経腸投与用組成物に関する。或る態様において、本組成物は癌の処置に使用できる。
【００３９】
或る態様において、免疫調節剤は、リンパ球同時刺激リガンドまたは受容体、リンパ球阻害リガンドまたは受容体、腫瘍壊死因子受容体(ＴＮＦＲ)スーパーファミリーの受容体、ＰＤ−リガンド、または前述の何れかの組み合わせの１種以上に結合できるモノクローナル抗体、ペプチド、または薬物を含み得る。或る態様において、免疫調節剤は、抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ２、４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬに対する抗体、ＬＡＧ−３に対する抗体またはそれらの組み合わせであり得る。
【００４０】
図面の簡単な説明
本発明は、さらに、添付の図面の記載で説明される。ここで、似た構造は、幾つかの図を通して似た数字によって記載される。示された図面は必ずしも縮尺通りではなく、むしろ本発明の原理を説明する上で一般に強調されている。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】図１は、グランザイムＢを発現するＣＤ８＋細胞のパーセントについて分析した、様々な実験群の末梢血リンパ球のパーセンテージを表す。
【図２】図２は、Ｋｉ−６７を発現するＣＤ８＋細胞のパーセントについて分析した、様々な実験群の末梢血リンパ球のパーセンテージを表す。
【図３】図３は、Ｋｉ−６７を発現するＣＤ４＋細胞のパーセントについて分析した、様々な実験群の末梢血リンパ球のパーセンテージを表す。
【図４】図４は、様々な実験群の１３日目のマウスのＴＲＡＭＰ−Ｃ１前立腺腫瘍のサイズを表す。
【図５】図５は、様々な実験群の１９日目、２５日目、２９日目および３３日目のマウスのＴＲＡＭＰ−Ｃ１前立腺腫瘍のサイズを表す。
【図６】図６は、ＴＲＡＭＰ−Ｃ１前立腺癌を有する様々な実験群についての生存曲線を表す。
【図７】図７は、様々な実験群の１１日目、１４日目、２０日目および２５日目のマウスの乳癌のサイズを表す。
【図８】図８Ａは、抗ＯＸ４０単独またはＧＡ−ＲＧ(ＭＤ０２とラベルした)との組み合わせで治療したマウスにおいて、４Ｔ１乳癌を使用した実験での生存率を記載している。図８Ｂは、抗ＯＸ４０単独またはＧＡ−ＲＧ(ＭＤ０２とラベルした)との組み合わせで治療したマウスにおいて、４Ｔ１乳癌を使用した実験での肺転移数を記載している。
【図９】図９Ａは、抗ＯＸ４０単独またはＧＡ−ＲＧ(ＭＤ０２とラベルした)との組み合わせで処置した４Ｔ１乳癌を有するマウスの循環におけるＧＲ−１陰性／ＣＤ１１ｂ陽性細胞のパーセンテージを表す。図９Ｂは、抗ＯＸ４０単独またはＧＡ−ＲＧ(これらの図中でＭＤ０２とラベルした)との組み合わせで処置した４Ｔ１乳癌を有するマウスの循環におけるＧＲ−１中間／ＣＤ１１ｂ陽性細胞のパーセンテージを表す。＊  ｐ＜０.０５；＊＊  ｐ＜０.０１；＊＊＊  ｐ＜０.００１。
【図１０】図１０Ａは、抗ＯＸ４０単独またはＧＡ−ＲＧ(これらの図中でＭＤ０２とラベルした)との組み合わせによる処置に対するＭＣＡ−２０５肉腫を有するマウスの応答を示す。図１０Ｂは、同じ動物群における生存曲線を示す。
【図１１】図１１Ａは、様々な腫瘍細胞株において、培地に分泌されたガレクチン−３タンパク質の発現を表す。図１１Ｂは、様々な腫瘍細胞株における全細胞ライセート中のガレクチン−３タンパク質の発現を表す。
【図１２】図１２Ａは、様々なマーカーのフローサイトメトリー分析によるガレクチン−３欠損ＣＤ８ ナイーブＴ細胞 対 野生型ＣＤ８ Ｔ細胞の表現型の比較を表す。図１２Ｂは、実験で使用されたモデルのスキームである。
【図１３】図１３Ａ〜Ｃは、ガレクチン−３欠損ＣＤ８ Ｔ細胞がインビボでの抗原刺激後、低いエフェクター機能を示すことを示す。図１３Ａは、野生型およびｇａｌ−３欠損動物におけるＯＴ−ｌ陽性／総ＣＤ８ 細胞のパーセントを示す。図１３Ｂは、野生型およびｇａｌ−３欠損ＣＤ８リンパ球におけるマーカー発現の相違を示す。図１３Ｃは、野生型およびｇａｌ−３欠損ＣＤ８リンパ球におけるサイトカイン分泌の相違を示す。
【図１４】図１４は、選択された遺伝子が、ガレクチン−３欠損ＣＤ８ Ｔ細胞において下方制御されることを表す。図１４Ａは、Ｇａｌ３−／−ＯＴ−Ｉ細胞において野生型細胞より下方制御されることが分かった幾つかの遺伝子のグラフ表示である。図１４Ｂは選択された遺伝子について相対単位および倍率変化を示す。
【図１５】図１５は、フローサイトメトリーによるＣＤ２５ (ＩＬ２−Ｒａ)またはＯＸ４０の発現を示す。図１５は、ガレクチン−３欠損ＣＤ８Ｔ細胞が抗原刺激後、低いＣＤ２５およびＯＸ４０の発現量を有することを表す。
【図１６】図１６Ａは、不処置マウス(黒色バー)またはＧａｌ−３阻害剤ＧＲ−ＭＤ−０２を投与されたマウスの７日目の末梢血または脾臓におけるドナー細胞の表現型を示す。図１６Ｂは、不処置マウス(黒色バー)またはＧａｌ−３阻害剤ＧＲ−ＭＤ−０２を投与したマウスの２９日目の末梢血または脾臓におけるドナー細胞の表現型を示す。図１６Ａ〜Ｂは、ＧＡ−ＲＧ(この図ではＧＲ−ＭＤ−０２とラベルされる)を使用したガレクチン−３阻害が、ＣＤ８ Ｔ細胞増殖およびエフェクター機能を亢進することを示す。
【図１７】図１７は、抗ＣＴＬＡ４治療と組み合わせたガレクチン−３阻害が、抗ＣＴＬＡ４単独に対して、脾臓中の抗原特異的ＣＤ８メモリーＴ細胞の形成を増大させることを示す。ＧＡ−ＲＧは図中でＭＤ０２と記される。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本発明の詳細な説明
本発明の詳細な態様は、本明細書に開示される。しかし、開示された態様は、様々な形態で具体化され得る本発明の例にすぎない。さらに、本発明の様々な態様に関連して示される例はそれぞれ、例示であって、制限的でないことを意図される。さらに、図は必ずしも縮尺通りではなく、幾つかの特徴が特定の成分の詳細を示すために誇張され得る。さらに、図中に示された測定値、仕様などは何れも例示であって制限的でないことが意図される。そのため、本明細書に開示された具体的な構造上および機能上の詳細は、限定と解釈されるべきでなく、単に本発明を様々に使用する当業者への教示のための代表例と解釈される。
【００４３】
特記しない限り、本明細書で表された全てのパーセンテージは重量／重量である。
【００４４】
用語“対象”は、霊長類(例えばヒト)を含むがこれらに限定されない動物をいう。用語“対象”および“患者”は、本明細書で相互交換可能に使用され、例えば、哺乳動物の対象、例えばヒトの対象をいう。
【００４５】
癌免疫療法で進められている一つの方法は、腫瘍特異的抗原または過剰発現抗原での免疫化を含む用語“腫瘍ワクチン”によって包含される領域である。この方法では、腫瘍細胞に特異的なまたは腫瘍細胞で過剰発現される１種または複数種の抗原を、単独で、アジュバントと共に、抗原を送達する微生物(例えばリステリア・モノサイトゲネス)の一部として、または細胞および／または体液の免疫応答を誘発するために免疫細胞(樹状細胞を含むがこれに限定されない)と共にエクスビボでインキュベートした後に、注入される。
【００４６】
癌免疫療法で進められている他の方法は、特異的免疫細胞受容体またはそのリガンドの機能を調節を介する。これは、免疫細胞受容体および／またはリガンドを認識し、結合するモノクローナル抗体を使用して達成されている。モノクローナル抗体の標的受容体またはリガンドへの結合は、受容体またはリガンドの機能を阻害または増強することが示されている。
【００４７】
腫瘍に対する免疫応答を増強することが判明しているモノクローナル抗体は、ＣＴＬＡ−４(細胞毒性Ｔ−リンパ球関係抗原−４)、ＰＤ−１受容体(プログラム死−１)およびＯＸ４０(ＣＤ１３４としても知られる)に結合する抗体を含む。細胞実験および腫瘍を有する動物でのその活性に加えて、抗ＣＴＬＡ−４および抗ＰＤ−１モノクローナル抗体は、ヒトにおいて、重要な抗腫瘍活性を有することが示されている。
【００４８】
本発明の局面は、本明細書に記載された複合糖質医薬製品または他の薬物を、単独で、または、免疫系の活性化を利用する癌および他の疾患の免疫療法の有効性を増大させ得る他の標的化免疫療法と組み合わせて使用して、免疫機能をブーストする新規方法に関する。用語“標的化免疫療法”および“免疫調節剤”は、相互交換可能に使用される。
【００４９】
本発明の或る態様は、処置を必要とする対象を処置する方法に関する。或る態様において、本方法は、許容される医薬担体中に化合物を含む、静脈内、皮下、非経腸の他の経路または経口投与用組成物を得て、該組成物を処置を必要とする対象に投与する過程を含む。或る態様において、本組成物は、許容される医薬担体中に化合物および免疫調節剤を含む。
【００５０】
本発明の他の局面は、許容される医薬担体中に治療有効量の化合物および治療有効量の免疫調節剤を含む非経腸投与用製剤に関する。
【００５１】
或る態様において、本化合物は、ガラクト−ラムノガラクツロネート(ＧＲＧ)、ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネート(ＧＡ−ＲＧ)、ガラクトマンナン(ＧＭ)、修飾合成二糖類(ＭＳＤ)、ペプチド／タンパク質阻害剤(ＰＩＡ)、ペプチド模倣薬(ＰＭＡ)、ガレクチン特異的抗体(ＧＳＡ)または有機小分子(ＳＯＭ)、または前述の何れかの組み合わせの１個であり得る。
【００５２】
或る態様において、特異的なＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、ガレクチン１〜１５を含むガレクチンタンパク質のクラスの様々なドメインと相互作用する能力を有し、それによって、それらの機能を阻害し、増強し、または調節し得る。
【００５３】
或る態様において、特異的なＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、ガレクチン−３タンパク質の炭水化物認識ドメインのＳ−面およびＦ−面およびＮ−末端ドメインを含むがこれらに限定されない様々なドメインと相互作用する能力を有し、それによって、ガレクチン−３機能を阻害する天然のリガンドとの相互作用を阻害し得る。
【００５４】
或る態様において、特異的なＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、ガレクチン−１タンパク質の炭水化物認識ドメインおよび二量化ドメインを含むがこれらに限定されない様々なドメインと相互作用する能力を有し、それによって、ガレクチン−１機能を阻害する天然のリガンドとの相互作用を阻害し得る。
【００５５】
用語“有効量”は、動物またはヒトに非経腸投与として投与されたとき、免疫応答のマーカーの少なくとも１０％、少なくとも２０％または少なくとも２５％の向上を伴って免疫応答を調節する１種以上の抗体、タンパク質または他の薬物との組み合わせにおける、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物の量を意味する。免疫応答のマーカーは、ＣＤ８受容体を有するＴリンパ球(本明細書でＣＤ８リンパ球という)の増殖(Ｋｉ−６７の染色を含むがこれに限定されない様々な方法によって示される)、ＣＤ８細胞の活性化した機能のマーカー(グランザイムＢの染色を含むがこれに限定されない様々な方法によって示される)、または他の細胞制御性細胞またはエフェクター細胞の変化を含むが、これらに限定されない。他の免疫マーカーは、ＧＲ−１＋およびＣＤ１１ｂ＋単核細胞の相対発現および／または頻度を含むが、これらに限定されない。
【００５６】
免疫調節剤は、ＯＸ４０に対する抗体(抗ＯＸ４０)、ＣＴＬＡ−４に対する抗体(抗ＣＴＬＡ−４)、ＰＤ−１に対する抗体(抗ＰＤ−１)、ＰＤ−１Ｌ／２Ｌに対する抗体(抗ＰＤ−Ｌ１または抗ＰＤ−Ｌ２)、４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬに対する抗体、ＬＡＧ−３に対する抗体または前述の抗体の２以上の組み合わせを含み得るがこれらに限定されない。
【００５７】
免疫調節剤は、免疫応答のプロセス、例えば抗原依存性認識、抗原プロセシング、リンパ球同時刺激およびリンパ球阻害に影響を及ぼす抗体、タンパク質、ペプチドまたは有機小分子もまた含み得る。
【００５８】
用語“有効性”は、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物単独またはその免疫調節剤または２以上の免疫調節剤の組み合わせとの組み合わせによる処置を使用して、免疫調節剤単独または２以上の免疫調節剤の組み合わせによる処置と比較して、少なくとも１０％腫瘍の増殖、進行または転移を減少させることを証明することを意味する。
【００５９】
本発明の局面は、免疫機能をブーストできる組成物および当該組成物を使用する方法に関する。
【００６０】
本発明の局面は、処置を必要とする対象を処置する方法に関する。或る態様において、対象は癌に罹患している。或る態様において、本方法は、許容される医薬担体中に化合物を含む静脈内または皮下または経口投与用組成物を得る工程を含む。或る態様において、本方法は、非経腸投与用組成物を得る工程を含む。“非経腸投与”は、ボラス注射または注入による投与、ならびに静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内の注射および注入による投与を含む。
【００６１】
或る態様において、本化合物は、その骨格が主に１,４−結合ガラクツロン酸(ＧａｌＡ)部分およびガラクツロン酸メチル(ＭｅＧａｌＡ)残基からなり、交互の１,４−結合ＧａｌＡおよび１,２−結合ラムノース(Ｒｈａ)である少量の骨格組成を伴い、これが次に主に１,４−ｂ−Ｄ−ガラクトース (Ｇａｌ)および１,５−ａ−Ｌ−アラビノース(Ａｒａ)残基を含む任意の数の側鎖に結合している選択的脱重合分枝ヘテロポリマーである、ガラクト−ラムノガラクツロネート(ＧＲＧ)と化学的に定義される多糖類である。他の側鎖副構成要素は、キシロース(Ｘｙｌ)、グルコース(Ｇｌｕ)およびフコース(Ｆｕｃ)またはそれらの組み合わせを含み得る。
【００６２】
或る態様において、ＧＲＧ化合物は、米国特許出願第2008/0107622号、現米国特許第8,236,780号(全ての目的について引用によって明示的に組み込まれる)に記載された通りに製造される。
【００６３】
或る態様において、ＧＲＧ化合物は、米国特許第8,128,966号、第8,187,624号、米国特許出願第2012/0315309号および第2012/0309711号(全ての目的について引用によって明示的に組み込まれる)に記載された通りに製造できる。
【００６４】
或る態様において、本化合物は、その骨格が主に１,４−結合ガラクツロン酸 (ＧａｌＡ)部分からなり、交互の１,４−結合ＧａｌＡおよび１,２−結合ラムノース(Ｒｈａ)である少量の骨格組成を伴い、これが次に主に１,４−ｂ−Ｄ−ガラクトース(Ｇａｌ)および１,５−ａ−Ｌ−アラビノース(Ａｒａ)残基を含むを含む任意の数の側鎖に結合している選択的脱重合分枝ヘテロポリマーである、ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネート(ＧＡ−ＲＧ)と化学的に定義された多糖類である。或る態様において、ガスクロマトグラフィー／質量分析によって特性決定されたとき、１,４−結合ガラクツロン酸およびガラクツロン酸メチル残基骨格は５５〜８５モル％の炭水化物総モル含量を表し、交互のα−１,２−結合ラムノースおよびα−１,４−結合ＧａｌＡ残基の分枝ヘテロポリマーは１〜６モル％の炭水化物総モル含量を表し、一次分枝のオリゴマー１,４−β−Ｄ−ガラクトースは６〜１５モル％の炭水化物総モル含量を表し、一次分枝のオリゴマー１,５−α−Ｌ−アラビノースは２〜８モル％の炭水化物総モル含量を表す。
【００６５】
他のより少ない側鎖構成要素は、キシロース(Ｘｙｌ)、グルコース(Ｇｌｕ)およびフコース(Ｆｕｃ)またはそれらの組み合わせを含み得る。
【００６６】
或る態様において、本発明のＧＡ−ＲＧ化合物中の１,４−ｂ−Ｄ−Ｇａｌ残基および１,５−ａ−Ｌ−Ａｒａ残基のモル％は２１.５％であり、１,４−ｂ−Ｄ−Ｇａｌ：１,５−ａ−Ｌ−Ａｒａのモル比３：１である。
【００６７】
或る態様において、本化合物は、ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネート(ＧＡ−ＲＧ)と化学的に定義される多糖類であり、ＳＥＣ−ＲＩ法によって測定された分子量範囲２０,０００〜７０,０００ダルトンである。或る態様において、ガラクトアラビノ−ラムノガラクツロネートは、２０kDa〜７０kDaの範囲の平均分子量を有する。
【００６８】
或る態様において、ＧＡ−ＲＧ化合物は、国際特許出願PCT/US12/55311(全ての目的について引用によって明示的に組み込まれる)に記載された通りに製造できる。
【００６９】
或る態様において、本化合物は、米国特許出願第20110077217号(その全体が全ての目的について引用によって明示的に組み込まれる)に記載された通りに製造されたガラクトマンナン(ＧＭ)多糖類組成物である。
【００７０】
或る態様において、ＧＭ化合物の平均分子量は、ＳＥＣ−ＭＡＬＬＳ法によって測定されたとき、約４,０００kDおよび６０,０００kDである。
【００７１】
或る態様において、本化合物は、米国特許第6,444,655号、第7,230,096号、第7,638,623号、第7,700,763号および第8,092,825号(全ての目的について引用によって明示的に組み込まれる)に記載された通りに製造された修飾合成二糖類(ＭＳＤ)である。
【００７２】
或る態様において、本化合物は、ガレクチンに結合し、ガレクチンの機能を阻害し得るペプチド／タンパク質阻害剤(ＰＩＡ)であり、米国特許第6,770,622号(全ての目的について引用によって明示的に組み込まれる)に記載された通りに製造されたＰＩＡを含み、これに限定されない。
【００７３】
或る態様において、本化合物は、ガレクチンに結合し、ガレクチンの機能を阻害し得るペプチド模倣薬(ＰＭＡ)であり、米国特許第8,207,228号(全ての目的について引用によって明示的に組み込まれる)に記載された通りに製造されるanginexおよびOTX-008(PTX-008としても知られる)を含み得るが、これらに限定されない。
【００７４】
或る態様において、本化合物はガレクチン特異的モノクローナル抗体(ＧＳＡ)である。
【００７５】
或る態様において、本化合物は、ガレクチン分子の炭水化物結合ドメインおよびタンパク質二量化ドメインを含むがこれらに限定されない様々なドメインと相互作用する有機小分子(ＳＯＭ)である。
【００７６】
或る態様において、ＧＲＧおよびＧＡ−ＲＧは、ｂ−サンドイッチ結合ドメインのＳ−面上の標準的炭水化物認識ドメイン中の複数のアミノ酸残基およびタンパク質の反対側のＦ−面上のアミノ酸でガレクチン−３分子に結合する。
【００７７】
或る態様において、ＧＲＧおよびＧＡ−ＲＧのガレクチン−３分子中のアミノ酸残基への結合は、ガレクチン−３分子の機能の妨害の原因である。
【００７８】
或る態様において、修飾合成二糖類(ＭＳＤ)は、ガレクチン−３炭水化物ドメインのＧＡ−ＲＧと類似の部位に結合し、ガレクチン−３分子の機能を阻害する点で類似の機能を有し得る。
【００７９】
或る態様において、ペプチド／タンパク質阻害剤(ＰＩＡ)は、ガレクチン−３炭水化物ドメインのＧＡ−ＲＧと類似の部位に結合し、ガレクチン−３分子の機能を阻害する点で類似の機能を有し得る。
【００８０】
或る態様において、ペプチド模倣薬(ＰＭＡ)は、ガレクチン−３炭水化物ドメインのＧＡ−ＲＧと類似の部位に結合し、ガレクチン−３分子の機能を阻害する点で類似の機能を有し得る。
【００８１】
或る態様において、ガレクチン特異的抗体(ＧＳＡ)は、ガレクチン−３炭水化物ドメインのＧＡ−ＲＧと類似の部位に結合し、ガレクチン−３分子の機能を阻害する点で類似の機能を有し得る。
【００８２】
或る態様において、有機小分子(ＳＯＭ)は、ガレクチン−３炭水化物ドメインのＧＡ−ＲＧと類似の部位に結合し、ガレクチン−３分子の機能を阻害する点で類似の機能を有し得る。
【００８３】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量のＣＴＬＡ−４に結合するモノクローナル抗体(抗ＣＴＬＡ−４)と組み合わせて使用される。ＣＤ１５２(分化クラスター１５２)としても知られるＣＴＬＡ−４(細胞毒性Ｔリンパ球抗原４)は、免疫系を下方制御し、抗原に対する細胞免疫攻撃をもたらすＴ細胞の表面で発見され得るタンパク質受容体である。
【００８４】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量のＯＸ４０に結合するモノクローナルアゴニスト抗体(抗ＯＸ４０)またはアゴニストとして作用する組換えＯＸ４０Ｌと組み合わせて使用される。ＯＸ４０は、腫瘍壊死因子／神経増殖因子受容体(ＴＮＦＲ／ＮＧＦＲ)のファミリーのメンバーである。ＯＸ４０は、Ｔ細胞活性化ならびに正常および悪性リンパ細胞の分化、増殖またはアポトーシスの制御に役割を果たし得る。
【００８５】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量のＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体(抗ＰＤ−１)と組み合わせて使用される。ＰＤ−１は、Ｔ細胞制御因子のＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４ファミリーのメンバーであるプログラム細胞死タンパク質１をいう。
【００８６】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、リンパ球同時刺激リガンドまたは受容体に結合し、同時刺激のアンタゴニストまたはアゴニストの何れかとして作用する、治療有効量のモノクローナル抗体、ペプチドまたは他の薬物と組み合わせて使用できる。同時刺激受容体は、ＣＤ２８およびＩＣＯＳを含むがこれらに限定されず、リガンドは、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＯＳリガンドを含むがこれらに限定されない。
【００８７】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、リンパ球阻害リガンドまたは受容体に結合し、リンパ球阻害のアンタゴニストまたはアゴニストの何れかとして作用する、治療有効量のモノクローナル抗体、ペプチドまたは他の薬物と組み合わせて使用できる。阻害受容体は、ＣＴＬＡ−４を含むがこれに限定されず、リガンドは、ＣＤ８０およびＣＤ８６を含むがこれらに限定されない。
【００８８】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量のＣＴＬＡ−４に結合するモノクローナル抗体(抗ＣＴＬＡ−４)と組み合わせて使用できる。
【００８９】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、リンパ球で発現され、リンパ球同時刺激のアンタゴニストまたはアゴニストの何れかとして作用する腫瘍壊死因子受容体(ＴＮＦＲ)スーパーファミリーの受容体またはそれらのリガンドに結合する、治療有効量のモノクローナル抗体、ペプチドまたは他の薬物と組み合わせて使用できる。ＴＮＦＲスーパーファミリーの受容体のメンバーは、ＣＤ１３４(ＯＸ４０としても知られる)、４−１ＢＢ (ＣＤ１３７)およびＣＤ２７を含むがこれらに限定されず、ＴＮＦＲ受容体リガンドは、ＯＸ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ(ＣＤ１３７Ｌ)およびＣＤ７０を含むがこれらに限定されない。
【００９０】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量のＯＸ４０に結合するモノクローナル抗体(抗ＯＸ４０)と組み合わせて使用でき、本明細書に記載されたＧＡ−ＲＧまたはＧＭ化合物は、治療有効量の組換えＯＸ４０ＬまたはＯＸ４０の他のアゴニストと組み合わせて使用できる。
【００９１】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量のＰＤ−リガンドに結合するモノクローナル抗体(抗ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２)と組み合わせて使用できる。
【００９２】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量のＰＤ−１に結合するモノクローナル抗体(抗ＰＤ−１)と組み合わせて使用できる。
【００９３】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、樹状細胞の活性化または機能を修飾し、それによって抗原プロセシングまたは応答を変化させる、治療有効量のモノクローナル抗体、ペプチドまたは他の薬物と組み合わせて使用できる。
【００９４】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量の腫瘍抗原指向性ワクチンまたは癌ワクチンと組み合わせて使用できる。或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、アジュバントと組み合わせて使用できる。アジュバントは、或る態様において、ＴＬＲリガンド、例えばポリＩ：Ｃ、ＣｐＧなどを含み得る。
【００９５】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、単独で、または、治療有効量の腫瘍抗原指向性ワクチンまたは癌ワクチンと組み合わせて使用できる。
【００９６】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、治療有効量の感染性疾患を処置または予防する目的で使用されるワクチンと組み合わせて使用できる。
【００９７】
或る態様において、本明細書に記載されたＧＲＧ、ＧＡ−ＲＧ、ＧＭ、ＭＳＤ、ＰＩＡ、ＰＭＡ、ＧＳＡまたはＳＯＭ化合物は、単独で、または治療有効量の前述の薬物または前述の薬物の何れかの組み合わせと組み合わせて使用できる。
【００９８】
治療有効量の抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ−１または他の免疫調節剤、または前述の何れかの組み合わせと組み合わせて使用される、実験動物(例えばマウス)への腹腔内または静脈内有効投与量のＧＲＧまたはＧＡ−ＲＧ多糖は、１０〜１２０mg/mgの間であって、週１回、週２回または週３回与えられ得る。
【００９９】
治療有効量の抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１または他の免疫調節剤または前述の何れかの組み合わせと組み合わせて使用される、ヒト対象への静脈内有効投与量のＧＲＧまたはＧＡ−ＲＧは、動物投与量から等量を計算したとき、０.５〜１５mg/kgの間であって、週１回、週２回または週３回与えられ得る。
【０１００】
治療有効量の抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１または他の免疫調節剤または前述の何れかの組み合わせと組み合わせて使用される、ヒト対象への有効投与量のＧＲＧまたはＧＡ−ＲＧは、皮下、他の非経腸経路または経口で、静脈内投与量の１〜１００倍の量で投与できる。
【０１０１】
治療有効量の抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１または他の免疫調節剤または前述の何れかの組み合わせと組み合わせて使用される、実験動物(例えばマウス)への腹腔内または静脈内有効投与量の本明細書に記載されたＧＭ化合物は、１０〜１８０mg/mgの間であって、週１回、週２回または週３回与えられ得る。
【０１０２】
治療有効量の抗ＯＸ４０、抗ＰＤ−１または他の免疫調節剤または前述の何れかの組み合わせと組み合わせて使用される、ヒト対象への静脈内有効投与量のＧＭは、動物投与量から等量を計算したとき、０.５〜２０mg/kgであって、週１回、週２回または週３回与えられ得る。
【０１０３】
治療有効量の抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４、抗ＰＤ−１または他の免疫調節剤または前述の何れかの組み合わせと組み合わせて使用される、ヒト対象への有効投与量のＧＭ化合物は、皮下、他の非経腸経路または経口で、静脈内投与量の１〜１００倍で投与できる。
【０１０４】
或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖の少なくとも１０％増加によって決定される。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖の少なくとも１５％増加によって決定される。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖の少なくとも２０％増加によって決定される。
【０１０５】
或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、Ｋｉ−６７発現によって測定されるＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖の少なくとも１０％増加によって決定される。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、Ｋｉ−６７発現によって測定されるＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖の少なくとも１５％増加によって決定される。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、Ｋｉ−６７発現によって測定されるＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞増殖の少なくとも２０％増加によって決定される。
【０１０６】
或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞の通常の増殖に関係しない。
【０１０７】
或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞またはＣＤ４＋ Ｔ細胞活性化の少なくとも１０％〜２５％以下の増加によって決定される。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞またはＣＤ４＋ Ｔ細胞活性化の少なくとも１５％〜２５％以下の増加によって決定される。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞またはＣＤ４＋ Ｔ細胞活性化の少なくとも２０％増加によって決定される。
【０１０８】
或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、グランザイム Ｂの発現によって測定されるＣＤ８＋ Ｔ細胞またはＣＤ４＋ Ｔ細胞活性化の少なくとも１０％増加によって決定される。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、グランザイム Ｂの発現によって測定されるＣＤ８＋ Ｔ細胞またはＣＤ４＋ Ｔ細胞活性化の少なくとも１５％増加によって決定される。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、グランザイム Ｂの発現によって測定されるＣＤ８＋ Ｔ細胞またはＣＤ４＋ Ｔ細胞活性化の少なくとも２０％増加によって決定される。
【０１０９】
或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞におけるグランザイム Ｂ発現の通常の増加に関係しない。
【０１１０】
或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞の少なくとも１０％までの増加と関係する。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞の少なくとも１５％までの増加と関係する。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞の少なくとも２０％までの増加と関係する。
【０１１１】
或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、ＧＲ−１陰性／ＣＤ１１ｂ陽性細胞の少なくとも１０％までの増加と関係する。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、ＧＲ−１陰性／ＣＤ１１ｂ陽性細胞の少なくとも１５％までの増加と関係する。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、ＧＲ−１陰性／ＣＤ１１ｂ陽性細胞の少なくとも２０％までの増加と関係する。
【０１１２】
或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、ＧＲ−１中間または陽性／ＣＤ１１ｂ陽性細胞の少なくとも１０％までの減少と関係する。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、ＧＲ−１中間または陽性／ＣＤ１１ｂ陽性細胞の少なくとも１５％までの減少と関係する。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、ＧＲ−１中間または陽性／ＣＤ１１ｂ陽性細胞の少なくとも２０％までの減少と関係する。
【０１１３】
或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、腫瘍サイズの少なくとも１０％までの減少(処置開始時のサイズと比較したとき)と関係する。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、腫瘍サイズの少なくとも１５％までの減少と関係する。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、腫瘍サイズの少なくとも２０％までの減少と関係する。
【０１１４】
或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、原発性腫瘍からの遠隔転移のサイズまたは数の少なくとも１０％までの減少と関係する。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、原発性腫瘍からの遠隔転移のサイズまたは数の少なくとも１５％までの減少と関係する。或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、原発性腫瘍からの遠隔転移のサイズまたは数の少なくとも２０％までの減少と関係する。
【０１１５】
或る態様において、全ての病変が占める体積の総計を、単数の用語で“全腫瘍量”(Total Tumor Burden)(ＴＴＢ)と表し得る。そのようなものとして、腫瘍が選択された処置計画に応答したとき、ＴＴＢは変化する。或る態様において、ＴＴＢは、本明細書に記載された化合物(例えば炭水化物化合物)の免疫調節剤との組み合わせを含む併用治療で処置した後の対象で測定し、免疫調節剤単独で処置した対象のＴＴＢと比較できる。また、他の態様において、ＴＴＢは、本明細書に記載された化合物(例えば炭水化物化合物)で処置した後の対象で測定し、標準治療(例えば癌処置用承認薬)で処置した対象のＴＴＢと比較できる。
【０１１６】
或る態様において、炭水化物化合物(例えばＧＡ−ＲＧ)単独または他の免疫治療(例えば免疫調節剤)との組み合わせで処置した腫瘍は、固形腫瘍の免疫関連応答基準を使用して評価され得る。或る態様において、使用される免疫関連応答基準は、Hoos et al. (J Natl Cancer Inst. 102:1388-1397 および Clinical Cancer research 15:74, 2009)(引用によりその全体が本明細書に組み込まれる)によって記載された基準であり得る。腫瘍の測定可能性は、ヘリカルコンピュータ断層撮影スキャンで５×５mm以上と定義され得る。ベースラインでの指標病変の長径とそれに直交する径の総和(ＳＰＤ)は、下記の式に従って全腫瘍量(ＴＴＢ)を計算するために、新規病変のＳＰＤに加算され得る：
全腫瘍量＝指標病変のＳＰＤ＋測定可能な新規病変のＳＰＤ。
【０１１７】
或る態様において、腫瘍量の変化は、ベースライン腫瘍量、すなわちベースラインでの全指標病変のＳＰＤに対して評価できる。ベースラインでの腫瘍量に対して指標および新規の測定可能な腫瘍量が１００％減少するならば、全応答はｉｒＣＲ(免疫関連応答完全応答)である。ベースラインでの腫瘍量に対して指標および新規の測定可能な腫瘍量が５０％以上減少するならば、全応答はｉｒＰＲ(免疫関連応答部分応答)である。ベースラインでの腫瘍量に対して指標および新規の測定可能な腫瘍量の減少が５０％未満ないしは増加が２５％未満であるならば、全応答はｉｒＳＤ(免疫関連応答安定疾患)である。ベースライン腫瘍量に対して指標および新規の測定可能な腫瘍量が２５％以上増加するならば、応答および進行を少なくとも４週隔てて第２評価によって確認すると仮定して、全応答はｉｒＰＤ(免疫関連応答進行性疾患)である。
【０１１８】
或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、腫瘍において増大したガレクチン−３発現に関係した増大した有効性で、腫瘍におけるガレクチン−３の発現レベルに直接関係する。
【０１１９】
或る態様において、癌治療における非経腸投与用組成物の有効性は、腫瘍細胞中のガレクチン−３の発現レベルに直接関係し、増大したガレクチン−３レベルで腫瘍微小環境に分泌されたガレクチン−３は、良好な有効性に関する。
【０１２０】
或る態様において、非経腸投与用組成物の有効性は、消化器の癌(食道、胃、小腸、大腸および肛門)、膵臓癌(内分泌性および腺癌)、胆管癌、様々なタイプの肝臓癌、肉腫、筋肉腫、乳癌、肺癌、頭頸部癌、口腔癌、皮膚癌、黒色腫、腎臓癌、泌尿器および膀胱の癌、前立腺癌、精巣癌、卵巣癌、子宮内膜癌、神経の癌(脳および神経)、内分泌腺の癌(甲状腺癌、腺癌、副甲状腺、下垂体)、骨の癌(骨肉腫)、血液の癌(リンパ腫、白血病)、多発性骨髄腫および骨髄線維症を含むがこれらに限定されない多くの癌の治療に使用され得る。
【０１２１】
或る態様において、処置方法は、さらに、有効量の非経腸投与用組成物またはその免疫調節抗体との組み合わせを対象に投与する過程を含むか、または、
Ｋｉ−６７および／またはグランザイム Ｂ発現を含むがこれらに限定されない様々な方法によって示されるとき、循環ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞の活性化の証拠の少なくとも１０％増加
腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋またはＣＤ４＋ Ｔ細胞の少なくとも１０％増加
腫瘍サイズまたは進行の少なくとも１０％応答速度 
無増悪生存期間(癌が進行しない患者の生存期間)または患者の全生存期間の延長
原発性腫瘍から遠隔転移のサイズまたは数の少なくとも１０％減少
標準治療のみ、治療せず、または免疫調節剤のみを含む治療と比較したとき、免疫関連応答基準によって評価した全腫瘍量について、統計学的に有意な差異
の少なくとも一つをもたらし得る。
【実施例】
【０１２２】
実施例１：抗ＣＴＬＡ−４、抗ＯＸ４０または抗ＰＤ−１のＧＡ−ＲＧおよびＧＭとの組み合わせによる共処置後の免疫増強および前立腺腫瘍応答
本実施例では、マウスの癌の同系モデルで実験を行った。使用した腫瘍細胞は、マウスの前立腺癌に由来するＴＲＡＭＰ−Ｃ１細胞株であった。これらの細胞を導き出すために、ＳＶ４０大Ｔ抗原をトランスジェニックマウスにおいて前立腺特異的遺伝子プロモーターで発現させ、それによって前立腺組織中で特異的にＳＶ４０大Ｔ細胞を発現させた。ＴＲＡＭＰ−Ｃ１細胞株は、得られた前立腺腫瘍に由来した。重要なことに、当該細胞株はＳＶ４０大Ｔ抗原を発現しない。腫瘍モデルにおいて、ＴＲＡＭＰ−Ｃ１細胞(１×１０６細胞)を、皮下注射によって、正常なＣ５７ＢＬ／６マウスに接種した。
【０１２３】
ＴＲＡＭＰ−Ｃ１細胞を接種した後、マウスの群を、ＩｇＧ(コントロールとして, 接種後４日目、６日目および８日目)、または抗ＣＴＬＡ−４ (２００μｇ, 接種後４日目、６日目および８日目)、または抗ＰＤ−１ (２００μｇ, 接種後４日目、６日目および８日目)、または抗ＯＸ４０ (２５０μｇ, 接種後４日目および８日目)の何れかを腹腔内注射により処置した。
【０１２４】
他の動物の群を、上記と同じ化合物＋ＧＡ−ＲＧまたはＧＭの何れかで下記の通り処置した：４日目、６日目および８日目にＧＡ−ＲＧ  ２.４mg/投与、または４日目、６日目および８日目にＧＭ  ２.４mg/投与、続いて２８日目、３０日目および３２日目にＧＡ−ＲＧ。
【０１２５】
図１は、実験動物の異なる群(群当たり５匹のマウス)についての実験結果を示す。ｙ軸に表された測定値は、グランザイム Ｂについても陽性である単離されたＣＤ８＋細胞のパーセントである。タンパク質グランザイム Ｂは、ＣＤ８陽性リンパ球のエフェクター機能についてのマーカーである。グランザイムは、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞のような標的細胞でアポトーシスを誘発できるＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞内で細胞質顆粒によって放出されるセリンプロテアーゼである。ラットＩｇＧのみ(コントロール)と、抗ＯＸ４０(aOX40)、抗ＣＴＬＡ−４(aCTLA-4)または抗ＰＤ−１(aPD-1)で処置した動物との比較は、抗体コントロール処置が、グランザイム Ｂ発現ＣＤ８＋細胞のパーセントについて統計学的に有意でない増大を起こすことを示す。
【０１２６】
また、図１は、抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４または抗ＰＤ−１による処置にＧＭ処置を追加した結果を示す。ＧＭをＩｇＧのみによる治療に追加したときＣＤ８＋細胞の幾分かの活性化が見られるが、これらの変化は有意でなく、ＧＭを抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４または抗ＰＤ−１による処置に追加したときグランザイム Ｂ陽性細胞のさらなる増大はない。
【０１２７】
対照的に、ＧＡ−ＲＧ処置の抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４または抗ＰＤ−１による処置への追加は、ＣＤ８＋細胞活性化の著しい増大を示した。ＧＡ−ＲＧの抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４または抗ＰＤ−１による処置への追加は、グランザイム Ｂ陽性ＣＤ８＋細胞のパーセントを、それぞれ２倍、５倍および４倍まで増大させた。これは、ＧＡ−ＲＧを処置に追加したとき、ＣＤ８＋細胞活性化の非常に有意で、著しい増大を表す。
【０１２８】
図２は、異なる群の実験動物についてのＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖マーカーの結果を示す。増殖マーカーは、細胞増殖と関係した核タンパク質であるＫｉ−６７である。抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４または抗ＰＤ−１単独またはＧＭとの組み合わせによる処置の後、ＣＤ８＋細胞増殖はほとんど変化しない。しかし、Ｋｉ−６７は、ＧＡ−ＲＧと共投与した抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４または抗ＰＤ−１で、図１で見られるグランザイム Ｂ発現のパーセントと非常に類似した程度まで著しく上昇した。
【０１２９】
図３は、異なる群の実験動物についてのＣＤ４＋ Ｔ細胞における増殖マーカーＫｉ−６７の結果を示す。抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４または抗ＰＤ−１単独またはＧＭとの組み合わせによる処置の後、ＣＤ４＋細胞増殖はほとんど変化しない。しかし、Ｋｉ−６７は、ＧＡ−ＲＧと共投与した抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４または抗ＰＤ−１によって、ＣＤ８＋細胞で見られるのと非常に類似した程度まで著しく増加した(図２)。
【０１３０】
図４は、様々な実験群における腫瘍増殖の結果を示す。ＧＡ−ＲＧ処置を抗ＣＴＬＡ４または抗ＰＤ−１の処置に追加したとき、抗体単独での治療と比較して、腫瘍増殖が著しく減少した。
【０１３１】
これらの実験結果は、抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ−４または抗ＰＤ−１のＧＡ−ＲＧとの組み合わせでマウスを処置するとき、ＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞の増殖および活性化が著しく増強され、ＣＤ４＋ 制御性Ｔ細胞の増殖が増大し、腫瘍サイズが減少することを証明している。
【０１３２】
実施例２：抗ＣＴＬＡ４または抗ＯＸ４０のＧＡ−ＲＧとの組み合わせによる共投与後の免疫増強および前立腺腫瘍応答
本実施例では、マウスの癌の同系モデルで実験を行った。使用した腫瘍細胞は、実施例１に記載したマウスの前立腺癌に由来するＴＲＡＭＰ−Ｃ１細胞株であった。
【０１３３】
本実施例は、腫瘍を接種したマウスの次の３群中各２群ずつの６処置群を含む：接種後４日目、８日目、１１日目および１５日目に、ＧＡ−ＲＧ(１.２mg/投与)と共におよび無しで、ＩｇＧ処置コントロールマウス；接種後４日目、８日目、１１日目および１５日目に、ＧＡ−ＲＧ(１.２mg/投与)と共におよび無しで、抗ＯＸ４０(２５０μｇ)で処置したマウス；および、接種後４日目、８日目、１１日目および１５日目にＧＡ−ＲＧ(１.２mg/投与)でおよびＧＡ−ＲＧ無しで、４日目、６日目、８日目、１１日目、１３日目および１５日目に、抗ＣＴＬＡ４(２００μｇ)で処置したマウス。
【０１３４】
図５は、接種後の様々な時間点での腫瘍サイズに対するこれらの処置の結果を示す。抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ４およびＧＡ−ＲＧ単独による処置は腫瘍サイズに僅かな効果しかなかったが、抗ＯＸ４０および抗ＣＴＬＡ４のＧＡ−ＲＧとの組み合わせは、腫瘍接種後３３日目までの各時間点で腫瘍サイズの減少に大きな効果を有した。
図６は、６処置群のマウスの生存曲線を示す。抗ＯＸ４０および抗ＣＴＬＡ４のＧＡ−ＲＧとの組み合わせにより処置された群は、生存率が二倍であった。
【０１３５】
これらの実験結果は、抗ＯＸ４０または抗ＣＴＬＡ−４のＧＡ−ＲＧとの組み合わせでマウスを処置したとき、薬物単独より前立腺腫瘍の退縮が著しく大きく、生存率が増大したことを証明している。抗ＯＸ４０または抗ＣＴＬＡ４の組み合わせで処置したマウスの２０％が１００日を越えて生存し、一方、何れかの薬物単独で処置したマウスは全て５８日目までに死んだ。
【０１３６】
実施例３：抗ＣＴＬＡ４または抗ＯＸ４０のＧＡ−ＲＧとの組み合わせで共処置した後の免疫増強および乳癌応答
本実施例では、マウスの乳癌の同系モデルで実験を行った。使用した腫瘍細胞は、自然発生的ＢＡＬＢ／ｃ乳癌に由来する同系乳癌細胞株である４Ｔ１であった。同所に導入されたとき、４Ｔ１株は、原発部位で急速に増殖し、３〜６週に亘って肺、肝臓、骨および脳に転移を形成する。尾静脈または動脈を介して導入されたとき、転移は同じ臓器で１〜２週後に見られる。ヒト乳癌で影響を受ける臓器への急速かつ効率的な転移は、４Ｔ１モデルをヒトの乳癌の転移性進行を調べるための優れたマウスモデルとする。モデルがＢＡＬＢ／ｃマウスで同系であるため、それは腫瘍成長および転移における免疫系の役割を調べるために使用できる。これらの実験の腫瘍モデルのために、４Ｔ１細胞(５×１０４細胞)を、正常なＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下注射によって接種した。
【０１３７】
本実施例は、腫瘍を接種したマウスの次の３群中各２群ずつの６処置群を含む：接種後４日目、８日目、１１日目および１５日目に、ＧＡ−ＲＧ(１.２mg/投与)と共におよび無しで、ＩｇＧ処置コントロールマウス；接種後４日目、８日目、１１日目および１５日目に、ＧＡ−ＲＧ(１.２mg/投与)と共におよび無しで、抗ＯＸ４０(２５０μｇ)で処置されたマウス；および接種後４日目、８日目、１１日目および１５日目にＧＡ−ＲＧ(１.２mg/投与)と共におよび無しで、接種後４日目、６日目、８日目、１１日目、１３日目および１５日目に、抗ＣＴＬＡ４(２００μｇ)で処置されたマウス。
【０１３８】
図７は、接種後の様々な時間での腫瘍サイズに対するこれらの処置の結果を示す。抗ＯＸ４０、抗ＣＴＬＡ４およびＧＡ−ＲＧ単独による処置は腫瘍サイズに幾らか効果を有したが、抗ＯＸ４０および抗ＣＴＬＡ４のＧＡ−ＲＧとの組み合わせは、腫瘍接種後２５日目までの各時間点で腫瘍サイズの減少に非常に大きな効果を有した。
【０１３９】
これらの実験の結果は、抗ＯＸ４０または抗ＣＴＬＡ−４のＧＡ−ＲＧとの組み合わせでマウスを処置したとき、薬物単独よりも乳癌の退縮が著しく大きく、生存率が増大することを証明している。
【０１４０】
実施例４：抗ＯＸ４０のＧＡ−ＲＧとの組み合わせで共処置後の生存率向上および肺転移数の減少
本実施例では、４Ｔ１細胞を使用したマウスの乳癌の同系モデルで実験を行った。
本実施例は、腫瘍を接種したマウスの次の２群中各２群ずつの４処置群を含む：接種後４日目、８日目、１１日目および１５日目に、ＧＡ−ＲＧ(２.４mg/投与)と共におよび無しで、ＩｇＧ処置コントロールマウス；および、接種後４日目、８日目、１１日目および１５日目に、ＧＡ−ＲＧ(２.４mg/投与)と共におよび無しで、抗ＯＸ４０(２５０μｇ)で処置されたマウス。
【０１４１】
図８Ａに示された通り、抗ＯＸ４０およびＧＡ−ＲＧの組み合わせで処置されたマウスは、抗ＯＸ−４０単独で処置されたマウスよりも高い生存率を有した。
肺転移数を、動物において、均一化した肺から増殖した独立細胞クローン数を評価するクローン原性アッセイを使用して評価した。図８Ｂに示した通り、抗ＯＸ４０およびＧＡ−ＲＧの組み合わせで処置したマウスの肺転移数は、抗ＯＸ−４０単独で処置したマウスの１０倍減少した。
【０１４２】
これらの結果は、抗ＯＸ４０およびＧＡ−ＲＧの組み合わせで処置したマウスが、抗ＯＸ−４０単独で処置したマウスより大きい生存率を有することを示し、この作用は、転移性疾患の軽減に一部関係し得る。
【０１４３】
実施例５：単球集団の変化
本実施例では、４Ｔ−１細胞を使用したマウスの乳癌の同系モデルで実験を行った。
本実施例は、腫瘍を接種したマウスの次の２群中各２群ずつの４処置群を含む：接種後４日目、８日目、１１日目および１５日目に、ＧＡ−ＲＧ(２.４mg/投与)と共におよび無しで、ＩｇＧ処置コントロールマウス；および、接種後４日目、８日目、１１日目および１５日目に、ＧＡ−ＲＧ(２.４mg/投与)と共におよび無しで、抗ＯＸ４０ (２５０μｇ)で処置されたマウス。
【０１４４】
図９Ａに示した通り、抗ＯＸ−４０およびＧＡ−ＲＧ(このグラフでＭＤ０２とラベルした)の組み合わせで処置した動物の循環において、ＧＲ−１陰性／ＣＤ１１ｂ陽性細胞のパーセンテージが増大した。
対照的に、ＧＲ−１中間／ＣＤ１１ｂ陽性細胞の数は、抗ＯＸ４０およびＧＡ−ＲＧ(このグラフでＭＤ０２とラベルした)で処置した動物で、相反的に減少した。
【０１４５】
ＧＲ−１陰性／ＣＤ１１ｂ陽性細胞の増加は、腫瘍に対する治療効果に関係し得る免疫細胞抑制減少に関係する非抑制因子型単球細胞の増加を示す。
また、これらの結果は、単核細胞／マクロファージの表現型が、併用治療した腫瘍を有するマウスの循環および腫瘍微小環境で変化し得ることを示唆する。
【０１４６】
実施例６：抗ＯＸ４０のＧＡ−ＲＧとの組み合わせで共処置後の、ＭＣＡ２０５腫瘍、肉腫腫瘍細胞株への有効性の向上
本実施例ではＭＣＡ２０５細胞を使用したマウス肉腫癌の同系モデルで実験を行った。
本実施例は、腫瘍を接種した次の２群中各２群ずつの４処置群を含む：接種後４日目、６日目、８日目、１１日目、１３日目および１５日目に、ＧＡ−ＲＧ(２.４mg/投与)と共におよび無しでＩｇＧ処置コントロールマウス(２５０μｇ；４日目、８日目)；および、接種後４日目、６日目、８日目、１１日目、１３日目および１５日目に、ＧＡ−ＲＧ(２.４mg/投与)と共におよび無しで、抗ＯＸ４０(２５０μｇ；４日目、８日目)で処置されたマウス。
【０１４７】
図１０Ａは、抗ＯＸ４０をＧＡ−ＲＧ(この図においてＧＲ−ＭＤ−０２とラベルした)と組み合わせて投与したとき、時間と共に腫瘍サイズが著しく減少し、組み合わせで処置された動物において腫瘍がほとんど増殖しないことを示す。
【０１４８】
図１０Ｂは動物の生存曲線を示す。抗ＯＸ４０のＧＡ−ＲＧ(この図においてＧＲ−ＭＤ−０２とラベルした)との組み合わせを与えた動物において、生存率の統計学的に有意な改善があった。
【０１４９】
これは、前立腺癌細胞および乳癌細胞と同様に、肉腫腫瘍細胞でも同様の効果が見られること、幾つかの局面において、その効果はこれらの腫瘍モデルより強いことを証明している。
【０１５０】
実施例７：腫瘍細胞株におけるガレクチン−３の発現
ガレクチン−３の発現を、これらの実験に使用した腫瘍細胞株、ならびに他の腫瘍細胞株で評価した。
【０１５１】
図１１Ａは、複数の細胞株によって顕著な量のガレクチン−３タンパク質が培養培地に分泌され、ＮＯＰ−１７およびＳＣＮ細胞株ではほとんどまたは全く分泌されないことを示す。重要なことに、前述の実施例で使用した２つの細胞株、すなわち４Ｔ１およびＴＲＡＭＰ−Ｃ１は、多量のガレクチン−３を分泌した。これらのデータは、薬物有効性に関係し得る細胞株における異なるガレクチン−３の発現レベルを示す。
【０１５２】
図１１Ｂは、複数の細胞株の全細胞ライセートで、顕著な量のガレクチン−３タンパク質があることを示し、ＮＯＰ−１７およびＳＣＮ細胞株で少量であることを示す。重要なことに、先の実施例で使用した３種の細胞株、すなわち４Ｔ１、ＴＲＡＭＰ−Ｃ１およびＭＣＡ−２０５は、多量のガレクチン−３を発現した。
【０１５３】
注目すべきことは、多量のガレクチン−３を発現する細胞株ＭＣＡ−２０５(図１１Ｂ)は、抗ＯＸ４０およびＧＡ−ＲＧによる組み合わせ治療に最も反応した(実施例６)。
これらの結果は、さらに、ＧＡ−ＲＧとの組み合わせ治療への腫瘍の応答がガレクチン−３の発現レベルと相関していることを示唆している。
【０１５４】
実施例８：Ｔ細胞活性化におけるガレクチン−３の二重の役割
腫瘍浸潤性リンパ球の免疫抑制および細胞溶解機能は、患者において有効な治療を作る際の主要な障害である。ガレクチン−３は、レクチンファミリーのメンバーであり、乳癌および前立腺癌を含む多くの癌で発現される。さらに、それは、前立腺上皮、マクロファージおよび活性化リンパ球によって広範に発現される。
【０１５５】
内因性ガレクチン−３は、代替マクロファージ活性化を促進し、抗腫瘍免疫を制限するＴＣＲ介在ＣＤ４ Ｔ細胞活性化を制限する。
ガレクチン−３の炎症制御作用およびＣＤ８ Ｔ細胞機能が分からないため、この点を調べるために実験を行った。
【０１５６】
腫瘍微小環境内でガレクチン−３はＣＤ８ Ｔ細胞の機能を負に制御することによって腫瘍進行を促進すると仮定する。これを試験するために、ＣＤ８ Ｔ細胞中の内因性ガレクチン−３欠損の効果を調べた。
【０１５７】
インビボで、抗原特異的Ｇａｌ３−／− ＣＤ８ Ｔ細胞は、野生型(ＷＴ)コントロールと比較してエフェクター機能の減少(増殖、グランザイム Ｂ、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２の減少)を示した。
【０１５８】
抗原特異的Ｇａｌ３−／−またはＧａｌ３＋／＋ ＣＤ８ Ｔ細胞における差次的遺伝子発現分析により、グランザイム Ｂ、ＣＤ２５、ＫＬＲＧ−１およびＢｌｉｍｐ−１遺伝子発現は、コントロールと比較して、Ｇａｌ３−／− ＣＤ８ Ｔ細胞で減少することが分かった。
【０１５９】
インビトロ試験は、抗原特異的Ｇａｌ３−／− ＣＤ８ Ｔ細胞が、ＣＤ２５およびＯＸ４０発現を著しく減少させることを証明した。これらのデータは、新規の驚くべき発見であり、すなわち、ガレクチン−３が、ＣＤ４機能を阻害する役割と対照的に、ＣＤ８ Ｔ細胞機能の促進に重要な役割を有することを示唆している。
【０１６０】
腫瘍微小環境におけるガレクチン−３の役割を評価するために、前立腺癌のＴＲＡＭＰモデルを使用して、腫瘍内のガレクチン−３発現を調べた。ガレクチン−３はマクロファージおよび腫瘍内の癌細胞で発現された。
【０１６１】
インビボでのＧＡ−ＲＧ(ＧＲ−ＭＤ−０２)によるガレクチン−３阻害は、ＣＤ８ Ｔ細胞増殖およびＣＤ６２Ｌ発現を亢進し、このことは、ＣＤ８ Ｔ細胞機能におけるＧａｌ３の二重の役割を示唆している。
【０１６２】
図１２は、フローサイトメトリーによるガレクチン−３欠損ＣＤ８ ナイーブＴ細胞と野生型(ＷＴ)のＣＤ８ Ｔ細胞の間の表現型の比較を示す。図１２Ａは、野生型、Ｇａｌ３−／−、野生型ＯＴ−１またはＧａｌ３−／− ＯＴ−１マウスにおけるＣＤ８およびＣＤ４ナイーブ上の表現型マーカーのベースライン発現を、不処置脾細胞で評価した。ＣＤ８およびＣＤ４において、記載した％発現は、ＣＤ８またはＣＤ４の何れかを発現する生存細胞のパーセントである。図１２Ｂは、野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、３×１０６個のナイーブＷＴまたはＧａｌ３−／− ＯＴ−Ｉ ＣＤ８ Ｔ細胞(iv)を−１日目に与えるモデルを示す。ドナーＯＴ−Ｉ Ｔ細胞を、５００μｇの可溶性ＯＶＡ(ｓｑ；ｄ０)で刺激した。
【０１６３】
図１３は、ガレクチン−３欠損ＣＤ８ Ｔ細胞が、インビボで抗原刺激後にエフェクター機能を低下させることを示す。図１３Ａ〜Ｃは、刺激後７日目にフローサイトメトリーによって測定した脾臓におけるドナーＯＴ−Ｉ Ｔ細胞の表現型を示す。グラフは、３個の独立した実験の１個から、個々のマウス(ｎ＝４／群)の平均値を表す(＊Ｐ＜０.０５；＊＊Ｐ＜０.０１)。
【０１６４】
図１４は、選択された遺伝子がガレクチン欠損ＣＤ８ Ｔ細胞で下方制御することを示す。野生型またはＧａｌ３−／− ＯＴ−１ Ｔ細胞を、野生型宿主細胞に養子性に導入し、ＯＶＡで刺激した。４日後、リンパ節を回収し、ドナーＣＤ８ Ｔ細胞を細胞ソーティングによって精製した。ＲＮＡをこれらの細胞から抽出し、Affymetrix ＤＮＡマイクロアレイを使用して遺伝子発現の変化を評価した。図１４Ａは、野生型に対してＧａｌ３−／− ＯＴ−１で下方制御されることが分かった幾つかの遺伝子のグラフ表示を示す。図１４Ｂは、選択された遺伝子の相対単位および倍率変化を示す。
【０１６５】
図１５は、ガレクチン欠損ＣＤ８ Ｔ細胞が抗原刺激後のＣＤ２５およびＯＸ４０発現を減少させることを示す。インビトロで、精製野生型ナイーブまたはＧａｌ３−／− ＯＴ−１ ＣＤ８を、ペプチドパルス(５μｇ/mlまたは０.０００５μｇ/ml)  ＤＣ２.４樹状細胞で、ＩＬ−２(１００ng/ml)と共にまたは無しで刺激した。細胞を４８時間後または７２時間後に回収し、ＣＤ２５(ＩＬ−２Ｒａ)またはＯＸ４０の発現をフローサイトメトリーによって調べた。
【０１６６】
図１６は、ガレクチン−３阻害がＣＤ８ Ｔ細胞エフェクター機能を亢進することを示す。野生型Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、−１日目に、３×１０６個の野生型ＯＴ−Ｉ ＣＤ８ ナイーブＴ細胞(iv)、ドナーＯＴ−Ｉ Ｔ細胞、Ｇａｌ−３阻害剤、ＧＲ−ＭＤ−０２(特にＧＡ−ＲＧ)(白色の棒グラフ)(ｓｑ；ｄ０, １)を与えた。７日後(図１６Ａ)または２９日後(図１６Ｂ)、末梢血または脾臓中のドナー細胞の表現型をそれぞれフローサイトメトリーによって測定した。Ｋｉ−６７、グランザイム ＢまたはＫＬＲＧ−１の発現について群の間で差はなかった。
【０１６７】
図１７は、上に記載した通りに、２９日目に摘出した脾細胞において、抗ＣＴＬＡ−４と組み合わせて使用したとき、ＧＡ−ＲＧ(ＧＲ−ＭＤ−０２)によるガレクチン−３の阻害がＣＤ８ Ｔ細胞増殖を亢進することを示す。
【０１６８】
これらの試験は、内因性ガレクチン−３欠損が、抗原に応答したＣＤ８ Ｔ細胞増殖および活性化を減少させ、サイトカイン産生を減少させることを示す。
【０１６９】
ガレクチン−３欠損ＣＤ８ Ｔ細胞は、ＫＬＲＧ、ＣＤ２５、ＩＦＮｇ、グランザイム ＢおよびＦａｓＬを減少させ、これらは全てエフェクターＣＤ８を増加させる。
【０１７０】
ガレクチン−３欠損ＣＤ８ Ｔ細胞はインビトロでＣＤ２５およびＯＸ４０発現を減少させる。ＣＤ２５発現はＩＬ−２の追加によってレスキューできるが、ＯＸ４０発現はＩＬ−２の追加によってレスキューできない。
【０１７１】
インビボでのＧＡ−ＲＧ(ＧＲ−ＭＤ−０２とも呼ぶ)を使用したガレクチン−３阻害は、抗原に応答したＣＤ８ Ｔ細胞増殖および活性化を増強する。
【０１７２】
従って、実質的にまたは全く細胞外コンパートメントのみで作用する阻害剤でのガレクチン−３の阻害は、Ｔ細胞において内因的に生じるガレクチン−３の完全な欠落とは異なる作用を有するようである。
【０１７３】
本発明は、好ましい態様の記載について特に示され記載されているが、当業者は、本発明の範囲から逸脱せずに、形態および詳細における様々な変更を行い得ることを理解するだろう。本明細書に記載された全ての文献、特許および配列データベースエントリーは、各文献または特許がそれぞれ引用により具体的かつ個別に示され組み込まれるかのように、その全体が引用によって本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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