(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
固形培地の表面が露出した第１の領域、および評価対象となる抗カビ部材の表面から形成され前記固形培地に少なくとも一部が隣接する第２の領域を形成する構築ステップと、
前記第１の領域において前記第２の領域から所定の距離にてカビを植菌し、当該カビを培養する培養ステップと、
培養されたカビが前記第２の領域に侵入した程度を測定する測定ステップと、を含み、
前記構築ステップは、前記抗カビ部材を固形培地の表面の一部に静置することによって、前記抗カビ部材が表面に配置された領域を前記第２の領域、残る領域を前記第１の領域とするものであり、
前記抗カビ部材は、略正多角形状の平板であって、当該平板の前記固形培地に接する面とは反対側の表面に防カビ剤を含む塗膜が形成されており、
前記培養ステップは、前記抗カビ部材の各辺のうち２つ以上の辺について、所定の距離にてそれぞれ微生物を植菌することを含み、
前記測定ステップは、前記２つ以上の辺について、前記第２の領域に侵入した割合または距離の平均に基づいて評価するものであることを特徴とする抗カビ部材の抗カビ性の評価方法。
【請求項２】
前記測定ステップは、前記第１の領域と前記第２の領域との間に形成された境界線を基準として、前記カビが前記第２の領域に侵入した割合または距離を測定するものであることを特徴とする請求項１に記載の抗カビ部材の抗カビ性の評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法に関する。特に、抗藻菌部材について、防カビ性能や防藻性能を評価する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
住宅など建築物の外壁部に使用される外壁材の表面には、塗装が施されている。この塗装によって、外壁材は、風雨、光、熱などから住人を保護している。しかし、経年変化によって、外壁材の表面に変退色、チョーキング、汚れ、生物汚染などの劣化現象や不具合現象が生じることは避けられない。近年では、塗料の耐候性能力が大幅に向上してきている。そのため、変退色やチョーキングの不具合よりも、むしろカビや微細藻類などの微生物の増殖が問題となっている。これらの増殖によって、美観を損ねるだけでなく、外壁材の表面の塗膜が劣化してしまうからである。
【０００３】
また、外壁材の表面において病原性のカビが増殖した場合には、アレルギーや肺炎などの疾患の原因となる。一方、防カビ効果や防藻効果をもたらす薬剤を配合した防カビ塗料や防藻塗料は、カビや藻類だけでなく人体へも悪影響を及ぼしてしまう。そのため、外壁材の性能維持だけを考えて、防カビ塗料や防藻塗料の塗布量を増やすことには限界があった。加えて、塗膜中に含まれる薬剤の効果は、時間とともに低下してしまうという問題もあった。
【０００４】
これに対し、たとえば外壁材の表面に塗装された塗膜の防カビ性能を評価する方法としては、「かび抵抗性試験方法」（ＪＩＳ  Ｚ  ２９１１−２０００）およびそれに類似する方法（特許文献１）が知られていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００８−２２９４９８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、いずれの方法においても、塗膜表面にカビ胞子の懸濁液を噴霧して所定時間培養し、塗膜表面に形成されるカビマットの占有面積を３段階で評価していた。そのため、塗膜の撥水性による植菌量の均一性や、面積算出の精度において、さらに改善の余地があった。
【０００７】
本発明はこうした状況に鑑みてなされており、その目的とするところは、簡便かつ正確に抗藻菌部材の抗藻菌性を定量的に評価することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するために、本発明におけるある態様の抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法は、固形培地の表面が露出した第１の領域、および評価対象となる抗藻菌部材の表面から形成され固形培地に少なくとも一部が隣接する第２の領域を形成する構築ステップと、第１の領域において第２の領域から所定の距離にて微生物を植菌し、当該微生物を培養する培養ステップと、培養された微生物が第２の領域に侵入した程度を測定する測定ステップと、を含む。
【０００９】
この態様によると、定性性と定量性を伴って、正確に抗藻菌部材の抗藻菌性を評価することができる。加えて、簡便かつ省スペースにて抗藻菌性を評価することができる。
【００１０】
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法において、測定ステップは、第１の領域と第２の領域との間に形成された境界線を基準として、微生物が第２の領域に侵入した割合または距離を測定するものであってもよい。この態様によると、簡便性をさらに高めることができるとともに、客観性および再現性のある評価を行うことができる。
【００１１】
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法において、構築ステップは、抗藻菌部材を固形培地の表面の一部に静置することによって、抗藻菌部材が表面に配置された領域を第２の領域、残る領域を第１の領域とするものであってもよい。この態様によると、より小型化およびより簡便化した装置を用いて評価を行うことができる。
【００１２】
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法において、抗藻菌部材は、略正多角形状の平板であってもよい。培養ステップは、抗藻菌部材の各辺のうち２つ以上の辺について、所定の距離にてそれぞれ微生物を植菌することを含む。また、測定ステップは、２つ以上の辺について、第２の領域に侵入した割合または距離の平均に基づいて評価するものであってもよい。この態様によると、１つの装置で複数回の実験を同時に短時間で行うことができる。加えて、評価の定量性、定性性、再現性を高めることができる。
【００１３】
なお、上述した各要素を適宜組み合わせたものも、本件特許出願によって特許による保護を求める発明の範囲に含まれうる。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、簡便かつ正確に抗藻菌部材の抗藻菌性を評価することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】第１の実施の形態に係る抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法を模式的に示す図である。図１（Ａ）は、（１）構築ステップを示す平面図である。図１（Ｂ）は、（１）構築ステップを示す側面方向の断面図である。図１（Ｃ）は、（２）培養ステップを示す平面図である。図１（Ｄ）は、（２）培養ステップを示す側面方向の断面図である。図１（Ｅ）は、（３）測定ステップを示す平面図である。図１（Ｆ）は、（３）測定ステップを示す側面方向の断面図である。
【図２】第２の実施の形態に係る抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法を模式的に示す図である。図２（Ａ）は、（１）構築ステップを示す平面図である。図２（Ｂ）は、（１）構築ステップを示す側面方向の断面図である。図２（Ｃ）は、（２）培養ステップを示す平面図である。図２（Ｄ）は、（２）培養ステップを示す側面方向の断面図である。図２（Ｅ）は、（３）測定ステップを示す平面図である。図２（Ｆ）は、（３）測定ステップを示す側面方向の断面図である。
【図３】距離ｙを算出する場合の変形例を示す概略図である。
【図４】実施例１におけるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ＮＢＲＣ１０５６５０についての評価試験の結果を示す図である。図４（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図４（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図５】実施例２におけるＣ．ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅ  ＮＢＲＣ６３４８についての評価試験の結果を示す図である。図５（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図５（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図６】実施例３におけるＣ．ｇｌｏｂｏｓｕｍ  ＮＢＲＣ６３４７についての評価試験の結果を示す図である。図６（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図６（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図７】実施例４におけるＰ．ｃｉｔｒｉｎｕｍ  ＮＢＲＣ６３５２についての評価試験の結果を示す図である。図７（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図７（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図８】実施例５におけるＰ．ｐｉｎｏｐｈｉｌｕｍ  ＮＢＲＣ６３４５についての評価試験の結果を示す図である。図８（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図８（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図９】実施例６におけるＲ．ｏｒｙｚａｅ  ＮＢＲＣ３１００５についての評価試験の結果を示す図である。図９（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図９（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図１０】実施例７におけるＡ．ｂｌａｋｅｓｌｅｅａｎａ  ＡＴＣＣ１０１４８ｂについての評価試験の結果を示す図である。図１０（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１０（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図１１】実施例８におけるＡ．ｏｃｈｒａｃｅｕｓ  ＡＴＣＣ１８５００についての評価試験の結果を示す図である。図１１（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１１（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図１２】実施例９におけるＢ．ｆｉｌｖａ  ＮＢＲＣ３１８７７についての評価試験の結果を示す図である。図１２（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１２（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図１３】実施例１０におけるＣ．ｇｌｏｂｏｓｕｍ  ＡＴＣＣ６２０５についての評価試験の結果を示す図である。図１３（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１３（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図１４】実施例１１におけるＣ．ｃｏｍａｔｕｓ  ＮＢＲＣ３０４８０についての評価試験の結果を示す図である。図１４（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１４（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図１５】実施例１２におけるＭ．ｎｏｒｄｉｎｉｉ  ＮＢＲＣ３０５４８についての評価試験の結果を示す図である。図１５（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１５（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図１６】実施例１３におけるＮ．ｃｒａｓｓａ  ＡＴＣＣ１４６９２についての評価試験の結果を示す図である。図１６（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１６（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図１７】実施例１４におけるＰ．ａｕｒｉｖｅｌｌａ  ＮＢＲＣ３０２６６についての評価試験の結果を示す図である。図１７（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１７（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図１８】実施例１５におけるＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ  ＩＡＭ７００２についての評価試験の結果を示す図である。図１８（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１８（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図１９】実施例１６におけるＰ．ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ  ＩＡＭ７１５３についての評価試験の結果を示す図である。図１９（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１９（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図２０】実施例１７におけるＰ．ｂｒｕｍａｌｉｓ  ＮＢＲＣ３０７４１についての評価試験の結果を示す図である。図２０（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図２０（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【図２１】実施例１８におけるＳ．ｒｏｓａｒｉｅｎｓｉｓ  ＤＳＭ８１０８についての評価試験の結果を示す図である。図２１（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図２１（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
（第１の実施の形態）
本実施の形態に係る抗藻菌部材２０の抗藻菌性の評価方法は、（１）固形培地１０の表面１４が露出した第１の領域１２、および評価対象となる抗藻菌部材２０の表面２４から形成され固形培地１０に少なくとも一部が隣接する第２の領域２２を形成する構築ステップと、（２）第１の領域１２において第２の領域２２から所定の距離ｘにて微生物Ｐを植菌し、微生物Ｐを培養する培養ステップと、（３）培養された微生物Ｐが第２の領域２２に侵入した程度を測定する測定ステップと、を含む。
【００１７】
図１は、第１の実施の形態に係る抗藻菌部材２０の抗藻菌性の評価方法を模式的に示す図である。以下、本実施の形態に係る抗藻菌部材２０の抗藻菌性の評価方法に含まれる３つのステップを、図１を用いて順に説明する。
【００１８】
（１）構築ステップ
図１（Ａ）は、（１）構築ステップを示す平面図である。図１（Ｂ）は、（１）構築ステップを示す側面方向の断面図である。
【００１９】
固形培地１０は、微生物Ｐに栄養を供給するための培地である。固形培地１０として、修正サブロー培地を好適に使用することができる。修正サブロー培地の組成は、１Ｌあたり、グルコースを４０ｇ，ペプトンを１０ｇ，ＦｅＳＯ４・Ｈ２Ｏを５ｍｇ，ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏを１０ｍｇ，ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏを２０ｍｇ含む。
【００２０】
容器１６は、固形培地１０を収容する。容器１６は、たとえば微生物を培養するための直方体状のシャーレである。本実施の形態では、容器１６の一方の側面は開放端となっている。これにより、固形培地１０と抗藻菌部材２０とが接することができる。
【００２１】
抗藻菌部材２０は、抗藻菌性が付与された抗藻菌性の評価対象となる部材である。本実施の形態では、抗藻菌部材２０は板状のポリスチレン板、スレート板等の無機材、ステンレス板等の金属板などである。本実施の形態では、抗藻菌部材２０の抗藻菌性は、防カビ剤または防藻剤が約１〜約３％の濃度にて表面に塗布されて塗膜が形成されることによる。しかし、抗藻菌部材２０の抗藻菌性の付与は、塗料の塗布には限られない。たとえば抗藻菌部材２０は、銀などの抗藻菌性を有する成分が含有されたプラスチックまたは繊維材料により形成されてもよい。なお、抗藻菌部材は予めホルマリンや酸化エチレンなどの殺菌性ガスへの接触とそれに続くガス除去により、表面に付着している雑菌を全て除去した後に試験に用いることが好ましい。
【００２２】
本ステップでは、固形培地１０の表面が露出した第１の領域１２、および評価対象となる抗藻菌部材２０の表面２４から形成され固形培地１０に少なくとも一部が隣接する第２の領域２２を形成させる。本実施の形態では、固形培地１０と抗藻菌部材２０とが互いの長辺にて接触するように配置されている。抗藻菌部材２０の長辺は固形培地１０の長辺よりも長い。図１（Ａ）に示すように、第１の領域１２と第２の領域２２の境界には、境界線ｚが形成されている。また、図１（Ｂ）に示すように、第１の領域１２と第２の領域２２は略同一平面上に存在する。
【００２３】
（２）培養ステップ
図１（Ｃ）は、（２）培養ステップを示す平面図である。図１（Ｄ）は、（２）培養ステップを示す側面方向の断面図である。
【００２４】
本ステップでは、第１の領域１２において第２の領域２２から所定の距離ｘにて微生物Ｐを植菌し、当該微生物Ｐを培養する。培養条件は、たとえば２８℃で１週間である。
【００２５】
微生物Ｐは、抗藻菌部材２０の抗藻菌性を評価するために適した生物である。微生物Ｐとして、たとえばＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ＮＢＲＣ１０５６５０，  Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍｃ  ｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅ  ＮＢＲＣ６３４８，  Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ  ｇｌｏｂｏｓｕｍ  ＮＢＲＣ６３４７，  Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃｉｔｒｉｎｕｍ  ＮＢＲＣ６３５２，  Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｐｉｎｏｐｈｉｌｕｍ  ＮＢＲＣ６３４５，Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ  ＮＢＲＣ３１００５，  Ａｂｓｉｄｉａ  ｂｌａｋｅｓｌｅｅａｎａ  ＡＴＣＣ１０１４８ｂ，  Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｃｈｒａｃｅｕｓ  ＡＴＣＣ１８５００，  Ｂｙｓｓｏｃｈｌａｍｙｓ  ｆｉｌｖａ  ＮＢＲＣ３１８７７，  Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ  ｇｌｏｂｏｓｕｍ  ＡＴＣＣ６２０５，  Ｃｏｐｒｉｎｕｓ  ｃｏｍａｔｕｓ  ＮＢＲＣ３０４８０，  Ｍｏｎｏｃｉｌｌｉｕｍ  ｎｏｒｄｉｎｉｉ  ＮＢＲＣ３０５４８，  Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ  ＡＴＣＣ１４６９２，  Ｐｈｏｌｉｏｔａ  ａｕｒｉｖｅｌｌａ  ＮＢＲＣ３０２６６，  Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｌｉｌａｃｉｎｕｓ  ＩＡＭ７００２，  Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ  ＩＡＭ７１５３，  Ｐｏｌｙｐｏｒｅｌｌｕｓ  ｂｒｕｍａｌｉｓ  ＮＢＲＣ３０７４１，  Ｓｅｓｑｕｉｃｉｌｌｏｐｓｉｓ  ｒｏｓａｒｉｅｎｓｉｓ  ＤＳＭ８１０８の１つ以上を使用することができる。これらの微生物Ｐは、単体で用いてもよいし２つ以上を混合して用いてもよい。本実施の形態では、微生物Ｐは、直径約１ｍｍの円形に植菌される。これはたとえば滅菌された爪楊枝を用いて行われる。
【００２６】
距離ｘは、微生物Ｐが植菌される位置から、境界線ｚに下ろした垂線の長さによって定義される。
【００２７】
（３）測定ステップ
図１（Ｅ）は、（３）測定ステップを示す平面図である。図１（Ｆ）は、（３）測定ステップを示す側面方向の断面図である。微生物Ｐは、培養されることによってコロニーＱを形成する。
【００２８】
本ステップでは、培養された微生物Ｐが第２の領域２２に侵入した程度が測定される。本ステップは、第１の領域１２と第２の領域２２との間に形成された境界線ｚを基準として、微生物Ｐが第２の領域２２に侵入した割合または距離ｙを測定するものであることが好ましい。
【００２９】
具体的には、微生物Ｐが第２の領域２２に侵入した割合を、同様の評価方法を複数回反復することによって算出する（定性的評価）。たとえば、本実施の形態の評価方法を５回反復した場合に、微生物Ｐが第２の領域２２に侵入した割合が４回であれば、侵入率は８０％である。
【００３０】
または、微生物Ｐが第２の領域２２に侵入した距離ｙを算出してもよい（定量的評価）。本実施の形態では、距離ｙは、微生物Ｐが第２の領域２２に最も深く侵入した位置から、境界線ｚに下ろした垂線の長さによって定義される。この場合にも、同様の評価方法を複数回反復することによって距離ｙを算出することが好ましい。たとえば本実施の形態の評価方法を３回反復した場合に微生物Ｐが第２の領域２２に侵入した距離がそれぞれ５ｍｍ，４ｍｍ，３ｍｍであれば、平均侵入距離は４ｍｍである。このように複数回の試験を行うことによって、標準偏差あるいは標準誤差による測定値のバラツキの算出や、ｔ検定などの統計学的有意差検定を行うこともできる。または、微生物Ｐが第２の領域２２に侵入した面積に基づいて評価を行ってもよい。
【００３１】
以上、本実施の形態によると、定性性と定量性を伴って、正確に抗藻菌部材２０の抗藻菌性を評価することができる。加えて、簡便かつ省スペースにて抗藻菌性を評価することができる。
【００３２】
なお、（１）構築ステップと（２）培養ステップとの順序は、逆であってもよいし、両方がほぼ同時に行われてもよい。
【００３３】
また、境界線ｚの長さがコロニーＱの直径よりも十分に長いと予想される場合には、互いのコロニーが重ならないような距離をおいて、１つの境界線ｚに対して複数の箇所に微生物Ｐが植菌されてもよい。これにより、省スペースにて複数回の評価方法を同時に行うことが可能となる。
【００３４】
（第２の実施の形態）
図２は、第２の実施の形態に係る抗藻菌部材２０の抗藻菌性の評価方法を模式的に示す図である。本実施の形態の評価方法を、第１の実施の形態とは異なる点を中心に説明する。
【００３５】
（１）構築ステップ
図２（Ａ）は、（１）構築ステップを示す平面図である。図２（Ｂ）は、（１）構築ステップを示す側面方向の断面図である。
【００３６】
本実施の形態では、容器１６は丸型のシャーレである。抗藻菌部材２０は、表面２４に塗膜が形成された平板である。また、抗藻菌部材２０は、角に切り込み部２６が形成された略正方形状に形成されている。
【００３７】
抗藻菌部材２０を容器１６に形成された固形培地１０の表面１４の一部に静置する。この場合に、抗藻菌部材２０が表面１４に配置された領域を第２の領域２２、残る領域を第１の領域１２とする。つまり、本実施の形態では、抗藻菌部材２０の下側には、固形培地１０の表面１４の一部が存在する点が第１の実施の形態とは異なる。
【００３８】
（２）培養ステップ
図２（Ｃ）は、（２）培養ステップを示す平面図である。図２（Ｄ）は、（２）培養ステップを示す側面方向の断面図である。本実施の形態では、抗藻菌部材２０の厚みによって、第１の領域１２と第２の領域２２との間には段差が形成されている。
【００３９】
本ステップでは、塗板の各辺のうち２つ以上の辺について、所定の距離にてそれぞれ微生物Ｐを植菌する。本実施の形態では、抗藻菌部材２０の４つの辺のそれぞれに対して、距離ｘをおいて微生物Ｐ（Ｐ１，Ｐ２，Ｐ３，Ｐ４）を植菌する。
【００４０】
（３）測定ステップ
図２（Ｅ）は、（３）測定ステップを示す平面図である。図２（Ｆ）は、（３）測定ステップを示す側面方向の断面図である。Ｑ１，Ｑ２，Ｑ３，Ｑ４は、それぞれ微生物Ｐ１，Ｐ２，Ｐ３，Ｐ４により形成されたコロニーを示す。
【００４１】
測定ステップでは、２つ以上の辺について、微生物Ｐが第２の領域に侵入した割合または距離の平均に基づいて評価する。
【００４２】
具体的には、微生物Ｐが第２の領域２２に侵入した割合を、抗藻菌部材２０の各辺について算出する（定性的評価）。たとえば本実施の形態では４つの辺に対して微生物Ｐが第２の領域２２に侵入した割合は４／４であるため、侵入率は１００％である。
【００４３】
または、微生物Ｐが第２の領域２２に侵入した距離ｙを算出してもよい（定量的評価）。本実施の形態では、４つの辺に対して微生物Ｐ１，Ｐ２，Ｐ３，Ｐ４がコロニーＱ１，Ｑ２，Ｑ３，Ｑ４を形成している。この場合、第２の領域２２に侵入した距離はそれぞれｙ１，ｙ２，ｙ３，ｙ４である。そのため、平均侵入距離は（ｙ１＋ｙ２＋ｙ３＋ｙ４）／４である。
【００４４】
以上、本実施の形態によっても、簡便かつ正確に抗藻菌部材の抗藻菌性を評価することができる。加えて、１つの装置で複数回の実験を同時に短時間で行うことができる。加えて、評価の定量性、定性性、再現性を高めることができる。
【００４５】
なお、抗藻菌部材２０は、正方形以外の略正多角形状に形成されてもよい。抗藻菌部材２０が略正ｎ角形に形成されて各辺の近傍に微生物Ｐが植菌された場合には、平均侵入距離は（ｙ１＋ｙ２＋・・・＋ｙｎ）／ｎにより算出される。
【００４６】
（変形例）
次に、距離ｙを算出する場合の変形例を説明する。図３は、距離ｙを算出する場合の変形例を示す概略図である。ここでは、コロニーＱがいびつな形状となった場合における距離ｙの算出方法について説明する。なお、第１の領域１２と第２の領域２２は境界線ｚの近傍のみが示されている。
【００４７】
本変形例では、コロニーＱは境界線ｚと垂直とならない線を長軸とする略楕円形に形成されている。この場合、距離ｙの算出方法には以下の３つの方法が主に考えられる。
【００４８】
１つめは、微生物Ｐが植菌された位置から境界線ｚに下ろした垂線と、コロニーＱの外延との交点から距離ｙ５を算出する方法である。２つめは、上述した実施の形態と同様に、境界線ｚを基準とした場合に、コロニーの侵入が最も深く侵入した位置について、境界線ｚに下ろした垂線に基づいて距離ｙ６を算出する方法である。３つめは、第２の領域２２に侵入した位置の中で、微生物Ｐが植菌された位置から最も遠い位置を基準として、距離ｙ７を算出する方法である。
【００４９】
これら３つの算出方法のいずれを用いて距離ｙを算出してもよい。上述した実施の形態では、Ｐを通る垂線について略線対称な形状にコロニーＱが形成されている。そのため、１つめの算出方法と２つめの算出方法ではほぼ同じ値が得られる（ｙ５≒ｙ６）。
【００５０】
なお、実体顕微鏡あるいは走査型電子顕微鏡によるカビの塗板への菌糸の侵入の観察を合わせて行うことによって、抗藻菌部材２０における微生物Ｐの侵入の形態を詳細に解析することも有用である。
【００５１】
（有用性）
本出願に係る評価方法の特長は、カビや藻類を防汚対象物質としている点、および抗カビ塗料の性能評価法として、現在行われているＪＩＳ規格に基づいた抗耐性試験をしのぐ、迅速かつ定量性のある新規なアッセイ系である点である。本出願に係る評価方法では、従来技術が有していた塗板の撥水性や定量性における改善点を克服している。
【実施例】
【００５２】
第２の実施の形態（図２）に示した抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法を、それぞれの菌株に対して適用した。培地には修正サブロー培地を使用した。修正サブロー培地の組成は、１Ｌあたり、グルコースを４０ｇ，ペプトンを１０ｇ，ＦｅＳＯ４・Ｈ２Ｏを５ｍｇ，ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏを１０ｍｇ，ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏを２０ｍｇ含む。Ａｇａｒの濃度は１．５％、ｐＨは６．０であった。抗藻菌部材としては、防カビ剤濃度がそれぞれ０％，１％，２％，３％である４種類の塗料を膜厚０．５ｍｍで塗装したポリスチレン板（２５×２５ｍｍ）を使用した。丸型のシャーレ内に収まるように、ポリスチレン板の角は切り落とし、ホルマリンで１２時間ガス滅菌した後、３日間ガス除去を行うことで付着している雑菌をガス滅菌した。
【００５３】
試験板をシャーレに分注した修正サブロー寒天培地の上に置いた。カビの菌株は、シャーレの内壁際に植菌した。これによって、塗板を置いた方向へのコロニーの増殖を制限した。培養は２５oＣでカビが塗板に侵入するために十分な時間行った。培養後、写真撮影を行い塗板への侵入距離を計測した。この際には、サンプルからカメラまでの距離を２５ｃｍに固定して撮影した。撮影した画像より、菌糸の侵入距離の平均値と標準偏差を求め、ｔ検定により有意差を求めた。
【００５４】
（実施例１）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ＮＢＲＣ１０５６５０に適用した。図４は、実施例１におけるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ＮＢＲＣ１０５６５０についての評価試験の結果を示す図である。図４（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図４（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００５５】
培養後のＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ＮＢＲＣ１０５６５０は、気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。また、防かび剤の濃度変化による増殖抑制効果も確認された。しかし、１％、２％、３％で有意差は見られなかった。
【００５６】
（実施例２）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＣ．ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅ  ＮＢＲＣ６３４８に適用した。図５は、実施例２におけるＣ．ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅ  ＮＢＲＣ６３４８についての評価試験の結果を示す図である。図５（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図５（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００５７】
培養後のＣ．ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅ  ＮＢＲＣ６３４８は、菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。しかし、気中菌糸が短いためか侵入距離は短かった。防かび剤の濃度変化による増殖抑制効果は、１％でも十分であった。
【００５８】
（実施例３）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＣ．ｇｌｏｂｏｓｕｍ  ＮＢＲＣ６３４７に適用した。図６は、実施例３におけるＣ．ｇｌｏｂｏｓｕｍ  ＮＢＲＣ６３４７についての評価試験の結果を示す図である。図６（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図６（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００５９】
培養後のＣ．ｇｌｏｂｏｓｕｍ  ＮＢＲＣ６３４７は、防カビ剤入りの塗板でも菌糸が塗板表面に侵入しているように見えるが、塗板表面に触れず空中に増殖しているものも確認された。また、防カビ剤の濃度変化による増殖抑制効果も確認された。
【００６０】
（実施例４）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＰ．ｃｉｔｒｉｎｕｍ  ＮＢＲＣ６３５２に適用した。図７は、実施例４におけるＰ．ｃｉｔｒｉｎｕｍ  ＮＢＲＣ６３５２についての評価試験の結果を示す図である。図７（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図７（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００６１】
培養後のＰ．ｃｉｔｒｉｎｕｍ  ＮＢＲＣ６３５２は、気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。加えて、気中菌糸が短いため培地と塗板の段差（図２（Ｆ））を越えられないことも確認された。また、防カビ剤の濃度変化による増殖抑制効果も確認された。
【００６２】
（実施例５）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＰ．ｐｉｎｏｐｈｉｌｕｍ  ＮＢＲＣ６３４５に適用した。図８は、実施例５におけるＰ．ｐｉｎｏｐｈｉｌｕｍ  ＮＢＲＣ６３４５についての評価試験の結果を示す図である。図８（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図８（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００６３】
培養後のＰ．ｐｉｎｏｐｈｉｌｕｍ  ＮＢＲＣ６３４５は、気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。また、防カビ剤の濃度変化による増殖抑制効果も確認された。
【００６４】
（実施例６）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＲ．ｏｒｙｚａｅ  ＮＢＲＣ３１００５に適用した。図９は、実施例６におけるＲ．ｏｒｙｚａｅ  ＮＢＲＣ３１００５についての評価試験の結果を示す図である。図９（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図９（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００６５】
培養後のＲ．ｏｒｙｚａｅ  ＮＢＲＣ３１００５は、気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。また防カビ剤の濃度変化による増殖阻害は確認されなかった。Ｒ．ｏｒｙｚａｅ  ＮＢＲＣ３１００５は気中菌糸が長いため空中に増殖したものではないかと考えられる。
【００６６】
（実施例７）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＡ．ｂｌａｋｅｓｌｅｅａｎａ  ＡＴＣＣ１０１４８ｂに適用した。図１０は、実施例７におけるＡ．ｂｌａｋｅｓｌｅｅａｎａ  ＡＴＣＣ１０１４８ｂについての評価試験の結果を示す図である。図１０（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１０（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００６７】
培養後のＡ．ｂｌａｋｅｓｌｅｅａｎａ  ＡＴＣＣ１０１４８ｂは、気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。また、防カビ剤の濃度変化による増殖阻害は確認されなかった。Ａ．ｂｌａｋｅｓｌｅｅａｎａ  ＡＴＣＣ１０１４８ｂは気中菌糸が長いため塗板表面ではなく空中に増殖したものではないかと考えられる。
【００６８】
（実施例８）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＡ．ｏｃｈｒａｃｅｕｓ  ＡＴＣＣ１８５００に適用した。このカビは、気中菌糸が短いが、胞子が飛びやすいという性質を有する。図１１は、実施例８におけるＡ．ｏｃｈｒａｃｅｕｓ  ＡＴＣＣ１８５００についての評価試験の結果を示す図である。図１１（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１１（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００６９】
培養後のＡ．ｏｃｈｒａｃｅｕｓ  ＡＴＣＣ１８５００は、気中菌糸が塗板表面への侵入と胞子の付着が確認された。また、防カビ剤濃度の変化による増殖阻害も確認された。
【００７０】
（実施例９）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＢ．ｆｉｌｖａ  ＮＢＲＣ３１８７７に適用した。図１２は、実施例９におけるＢ．ｆｉｌｖａ  ＮＢＲＣ３１８７７についての評価試験の結果を示す図である。図１２（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１２（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００７１】
培養後のＢ．ｆｉｌｖａ  ＮＢＲＣ３１８７７は、気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。防カビ剤が含まれた塗板でも増殖は確認されたが、塗板表面ではなく空中に菌糸を伸ばしていた。また、防カビ剤の濃度変化による増殖阻害は確認されなかった。これは、カビの増殖が寒天内部に増殖したためであると考えられる。
【００７２】
（実施例１０）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＣ．ｇｌｏｂｏｓｕｍ  ＡＴＣＣ６２０５に適用した。図１３は、実施例１０におけるＣ．ｇｌｏｂｏｓｕｍ  ＡＴＣＣ６２０５についての評価試験の結果を示す図である。図１３（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１３（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００７３】
培養後のＣ．ｇｌｏｂｏｓｕｍ  ＡＴＣＣ６２０５は、気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。また、防カビ剤の濃度変化による増殖阻害は確認されなかった。
【００７４】
（実施例１１）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＣ．ｃｏｍａｔｕｓ  ＮＢＲＣ３０４８０に適用した。図１４は、実施例１１におけるＣ．ｃｏｍａｔｕｓ  ＮＢＲＣ３０４８０についての評価試験の結果を示す図である。図１４（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１４（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００７５】
培養後のＣ．ｃｏｍａｔｕｓ  ＮＢＲＣ３０４８０は、気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。また、防カビ剤濃度の変化による増殖阻害も確認された。
【００７６】
（実施例１２）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＭ．ｎｏｒｄｉｎｉｉ  ＮＢＲＣ３０５４８に適用した。図１５は、実施例１２におけるＭ．ｎｏｒｄｉｎｉｉ  ＮＢＲＣ３０５４８についての評価試験の結果を示す図である。図１５（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１５（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００７７】
培養後のＭ．ｎｏｒｄｉｎｉｉ  ＮＢＲＣ３０５４８は、気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。また、防カビ剤濃度の変化による増殖阻害も確認された。このカビは、気中菌糸が短いが、胞子が飛びやすいため塗板の中心部にも胞子が付着していることが確認された。
【００７８】
（実施例１３）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＮ．ｃｒａｓｓａ  ＡＴＣＣ１４６９２に適用した。図１６は、実施例１３におけるＮ．ｃｒａｓｓａ  ＡＴＣＣ１４６９２についての評価試験の結果を示す図である。図１６（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１６（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００７９】
培養後のＮ．ｃｒａｓｓａ  ＡＴＣＣ１４６９２は、気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。また、防カビ剤濃度の変化による増殖阻害も確認された。Ｎ．ｃｒａｓｓａ  ＡＴＣＣ１４６９２は、気中菌糸が短いが、胞子が飛びやすいため塗板の中心部にも胞子が付着していることが確認された。
【００８０】
（実施例１４）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＰ．ａｕｒｉｖｅｌｌａ  ＮＢＲＣ３０２６６に適用した。図１７は、実施例１４におけるＰ．ａｕｒｉｖｅｌｌａ  ＮＢＲＣ３０２６６についての評価試験の結果を示す図である。図１７（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１７（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００８１】
培養後のＰ．ａｕｒｉｖｅｌｌａ  ＮＢＲＣ３０２６６は気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。また、防カビ剤濃度の変化による増殖阻害は確認されなかった。Ｐ．ａｕｒｉｖｅｌｌａ  ＮＢＲＣ３０２６６には今回使用した塗板に含まれる防カビ剤の効果がないものと考えられる。
【００８２】
（実施例１５）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ  ＩＡＭ７００２に適用した。図１８は、実施例１５におけるＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ  ＩＡＭ７００２についての評価試験の結果を示す図である。図１８（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１８（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００８３】
培養後のＰ．ｌｉｌａｃｉｎｕｓ  ＩＡＭ７００２は、気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。また、防カビ剤濃度の変化による増殖阻害も確認された。防カビ剤入りの塗板では、塗板に付着することのできなかった気中菌糸が空中に増殖していることが確認された。
【００８４】
（実施例１６）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＰ．ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ  ＩＡＭ７１５３に適用した。図１９は、実施例１６におけるＰ．ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ  ＩＡＭ７１５３についての評価試験の結果を示す図である。図１９（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図１９（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００８５】
培養後のＰ．ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ  ＩＡＭ７１５３は、気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。また、防カビ剤濃度の変化による増殖阻害も確認された。Ｐ．ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ  ＩＡＭ７１５３は、気中菌糸が短いが、塗板表面の中心部に付着していたことが確認された。これは胞子が飛んだことによるものではないかと考えられる。
【００８６】
（実施例１７）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＰ．ｂｒｕｍａｌｉｓ  ＮＢＲＣ３０７４１に適用した。図２０は、実施例１７におけるＰ．ｂｒｕｍａｌｉｓ  ＮＢＲＣ３０７４１についての評価試験の結果を示す図である。図２０（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図２０（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００８７】
培養後のＰ．ｂｒｕｍａｌｉｓ  ＮＢＲＣ３０７４１は、気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。また、防カビ剤濃度の変化による増殖阻害も確認された。
【００８８】
（実施例１８）
抗藻菌部材の抗藻菌性の評価方法をＳ．ｒｏｓａｒｉｅｎｓｉｓ  ＤＳＭ８１０８に適用した。図２１は、実施例１８におけるＳ．ｒｏｓａｒｉｅｎｓｉｓ  ＤＳＭ８１０８についての評価試験の結果を示す図である。図２１（Ａ）は、培養後のシャーレを上側から撮影した写真である。図２１（Ｂ）は、防かび剤の濃度（％）と侵入距離（ｍｍ）との関係を示すグラフである。
【００８９】
培養後のＳ．ｒｏｓａｒｉｅｎｓｉｓ  ＤＳＭ８１０８では、気中菌糸が塗板表面に侵入していることが確認された。防カビ剤入りの塗板では、塗板に付着することのできなかった気中菌糸が空中に増殖していることが確認された。
【００９０】
（実施例１〜１８のまとめ）
上述した実施例１〜１８の多くでは、防カビ剤濃度に依存して塗板への侵入距離の抑制効果が認められた。具体的には、使用菌株においてｔ検定を行い、有意差を求めたところ１８株中１３株で５％未満の有意差を確認することができた。なお、第２の実施の形態に示したように、寒天培地の上に抗藻菌部材を設置したため、菌糸が短い株は抗藻菌部材の厚みにより形成された段差を越えることができない場合があった（図２（Ｆ））。
【００９１】
実施例１〜１８の結果に基づいて、防カビ剤濃度と侵入距離との相関関係を求めた。表１は、防カビ剤濃度と侵入距離との相関関係を示す表である。
【００９２】
【表１】
0006411803.tif 000002
【００９３】
表１に示す相関係数（Ｒ２）より、０．６以上を相関関係ありとすると、一部を除き０．６以上の結果が見られ、０．９を超えるものも確認された。防カビ剤を含まない塗板では菌の増殖が大きく、また侵入距離も長くなっていた。防カビ剤３％の塗板で菌の増殖や侵入距離は防カビ剤を含まない塗板と比較すると増殖抑制も認められ、侵入距離も短くなっていた。これらのことから防カビ剤の有効性が認められた。
【００９４】
抗カビ塗料の性能評価方法として現在はＪＩＳ規格をもとに抗耐性試験が行われているが、これは塗板の撥水性や定量性に改善点があるため十分に有効な手段とまでは言えなかった。しかし、本実験で行った方法を用いることにより塗板の持つ撥水性の問題を解決でき、また、定量化も可能になった。このことよりＪＩＳ規格に基づいた抗耐性試験をしのぐ新規なアッセイ系として有効であると考えられる。
【００９５】
（実施例１９）
走査型電子顕微鏡によるカビの塗板への菌糸の侵入の観察により、塗板表面への気中菌糸の付着を確認することができた。モルタル板では、表面の凹凸にＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ＮＢＲＣ１０５６５０の侵入を確認することができたため、カビの付着は建造物の外観を損ねると言える。またＡｃｒｙｌｉｃ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎ塗膜ではピンホールへの菌糸の侵入が観察された。ピンホールへの菌糸の侵入は内部から塗膜を破壊する可能性が高く、外壁の劣化や強度の低下をもたらすと考えられる。走査型電子顕微鏡による観察は、塗板へのカビの付着や侵入を確認する手段として有効であると言える。
【００９６】
以上、本発明を上述の実施の形態を参照して説明したが、本発明は上述の実施の形態に限定されるものではなく、実施の形態の構成を適宜組み合わせたものや置換したものについても本発明に含まれるものである。また、当業者の知識に基づいて実施の形態における組合せや工程の順番を適宜組み替えることや各種の設計変更等の変形を実施の形態に対して加えることも可能であり、そのような変形が加えられた実施の形態も本発明の範囲に含まれうる。
【符号の説明】
【００９７】
１０  固形培地、  １２  第１の領域、  １４  表面、  ２０  抗藻菌部材、  ２２  第２の領域、  ２４  表面、  Ｐ  微生物
【図１】
0006411803.tif 000003
【図２】
0006411803.tif 000004
【図３】
0006411803.tif 000005
【図４】
0006411803.tif 000006
【図５】
0006411803.tif 000007
【図６】
0006411803.tif 000008
【図７】
0006411803.tif 000009
【図８】
0006411803.tif 000010
【図９】
0006411803.tif 000011
【図１０】
0006411803.tif 000012
【図１１】
0006411803.tif 000013
【図１２】
0006411803.tif 000014
【図１３】
0006411803.tif 000015
【図１４】
0006411803.tif 000016
【図１５】
0006411803.tif 000017
【図１６】
0006411803.tif 000018
【図１７】
0006411803.tif 000019
【図１８】
0006411803.tif 000020
【図１９】
0006411803.tif 000021
【図２０】
0006411803.tif 000022
【図２１】
0006411803.tif 000023