(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物へと投与されると該哺乳動物に投与された高置換型複合キシログルカンを該哺乳動物の体重1kgあたり0.05mg〜50mgでもたらす量の該高置換型複合キシログルカンを含むポテト多糖調製物を含む、組成物であって、
該ポテト多糖調製物が、10％アセトニトリルによるC18カートリッジからの溶出能力を有する物質を含有し、
かつ、該高置換型複合キシログルカンは、誘導体化したときにガスクロマトグラフィー／質量スペクトルを用いる評価で少なくとも以下のアシル化炭水化物を生じ、
（a）ミオ-イノシトール、ここで、内部標準として使用するためにこれを1倍とする、
（b）ミオ-イノシトールの約40倍〜約60倍量のグルコース、
（c）ミオ-イノシトールの約10倍〜約20倍量のキシロース、
（d）ミオ-イノシトールの約5倍〜約15倍量のマンノース、および、
（e）ミオ-イノシトールの約3倍〜約7倍量のガラクトース、
ここで、誘導体化手順は、該物質の乾燥残留物を形成し、次いでこれをトリフルオロ酢酸を用いて加水分解し、得られる物質は、その後、水素化ホウ素ナトリウムを用いて還元され、そしてボラートの除去後に、最終産物が無水酢酸およびピリジンを用いてアシル化される工程を含む、前記組成物。
【請求項２】
1mg〜100mgのポテト多糖調製物を含む、請求項1に記載の組成物。
【請求項３】
6mg〜20mgのポテト多糖調製物を含む、請求項1に記載の組成物。
【請求項４】
ポテト多糖調製物の高置換型複合キシログルカンを1mg〜100mg含む、請求項1に記載の組成物。
【請求項５】
ポテト多糖調製物の高置換型複合キシログルカンを6mg〜20mg含む、請求項1に記載の組成物。
【請求項６】
錠剤の形態である、請求項1に記載の組成物。
【請求項７】
αリポ酸を含む、請求項1に記載の組成物。
【請求項８】
αトコフェロールを含む、請求項1に記載の組成物。
【請求項９】
ポテト多糖調製物が、生ポテトから得られた調製物である、請求項1に記載の組成物。
【請求項１０】
ポテト多糖調製物が、哺乳動物へと投与されると該哺乳動物に投与された該ポテト多糖調製物の高置換型複合キシログルカンを該哺乳動物の体重1kgあたり0.075mg〜0.5mgでもたらす量である、請求項1に記載の組成物。
【請求項１１】
ポテト多糖調製物の少なくとも約80パーセントが高置換型複合キシログルカンである、請求項1に記載の組成物。
【請求項１２】
ポテト多糖調製物の少なくとも約90パーセントが高置換型複合キシログルカンである、請求項1に記載の組成物。
【請求項１３】
ポテト多糖調製物の少なくとも約95パーセントが高置換型複合キシログルカンである、請求項1に記載の組成物。
【請求項１４】
哺乳動物がヒトである、請求項1に記載の組成物。
【請求項１５】
ポテト多糖調製物が、哺乳動物へと投与されると該哺乳動物に投与された該ポテト多糖調製物の高置換型複合キシログルカンを該哺乳動物の体重1kgあたり0.05mg〜0.5mgでもたらす量である、請求項1に記載の組成物。
【請求項１６】
ポテト多糖調製物が、哺乳動物へと投与されると該哺乳動物に投与された該ポテト多糖調製物の高置換型複合キシログルカンを該哺乳動物の体重1kgあたり0.075mg〜0.25mgでもたらす量である、請求項1に記載の組成物。
【請求項１７】
TFAMポリペプチド、ATP5A1ポリペプチド、PDHA1ポリペプチド、PDHA2ポリペプチド、およびTHOP1ポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドの1つまたは複数の発現を細胞において増加させるための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
FOX01Aポリペプチド、NFKB1ポリペプチド、PDK2ポリペプチド、PDK4ポリペプチド、およびHMGCRポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドの1つまたは複数の発現を細胞において減少させるための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
肥満、糖尿病、および／または多嚢胞性卵巣症候群を処置するための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
1. 技術分野
本願は、栄養補助組成物に関連する。例えば、本願は、ポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物、ポテト多糖調製物を得るための方法、ポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物を製造するための方法、ならびにミトコンドリア活性または機能に関与するポリペプチドの発現を増加または減少させるための方法に関連する。
【背景技術】
【０００２】
2. 背景情報
ポテトは、ポテト植物から得られるデンプン質の食用塊茎であり、世界の多くの食物供給で欠くことのできない要素となっている。実際、ポテトは、世界で4番目に多い食用作物である。世界規模の主要ポテト種は、ジャガイモ（Solanum tuberosum）である。
【発明の概要】
【０００３】
概要
本願は、栄養補助組成物を提供する。例えば、本願は、ポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物、ポテト多糖調製物を得るための方法、ポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物を製造するための方法、ならびにミトコンドリア活性または機能に関与するポリペプチドの発現を増加または減少させるための方法を提供する。いくつかの例において、本明細書に提供される栄養補助組成物およびポテト多糖調製物は、ミトコンドリア活性または機能に関与するポリペプチドの発現を増加または減少させるために使用され得る。例えば、本明細書に提供されるポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物または本明細書に提供されるポテト多糖調製物は、転写因子A, ミトコンドリア（transcription factor A, mitochondrial）ポリペプチド（TFAMポリペプチド）、ATPシンターゼ, H+輸送, ミトコンドリアF1複合体, αサブユニット1（ATP synthase, H+ transporting, mitochondrial F1 complex, alpha subunit 1）ポリペプチド（ATP5A1ポリペプチド）、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ（リポアミド）α1（pyruvate dehydrogenase (lipoamide) alpha 1）ポリペプチド（PDHA1ポリペプチド）、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ（リポアミド）α2ポリペプチド（PDHA2ポリペプチド）、チメットオリゴペプチダーゼ1（thimet oligopeptidase 1）ポリペプチド（THOP1ポリペプチド）、またはそれらの組み合わせの発現を増加させるために使用され得る。いくつかの例において、本明細書に提供されるポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物または本明細書に提供されるポテト多糖調製物は、フォークヘッドボックスO1（forkhead box O1）ポリペプチド（FOX01Aポリペプチド）、B細胞内κ軽鎖ポリペプチド遺伝子エンハンサーの核内因子1（nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells 1）ポリペプチド（NFKB1ポリペプチド）、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ, アイソザイム2（pyruvate dehydrogenase kinase, isozyme 2）ポリペプチド（PDK2ポリペプチド）、ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ, アイソザイム4ポリペプチド（PDK4ポリペプチド）、3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-CoAレダクターゼ（3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase）ポリペプチド（HMGCRポリペプチド）、またはそれらの組み合わせの発現を減少させるために使用され得る。いくつかの例において、本明細書に提供されるポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物または本明細書に提供されるポテト多糖調製物は、1つまたは複数のポリペプチド（例えば、TFAMポリペプチド、ATP5A1ポリペプチド、PDHA1ポリペプチド、PDHA2ポリペプチド、またはTHOP1ポリペプチドのうちの1つまたは複数）を増加させるために、および1つまたは複数のポリペプチド（例えば、FOX01Aポリペプチド、NFKB1ポリペプチド、PDK2ポリペプチド、PDK4ポリペプチド、またはHMGCRポリペプチドのうちの1つまたは複数）を減少させるために使用され得る。
【０００４】
いくつかの例において、本明細書に提供される栄養補助組成物およびポテト多糖調製物は、肥満および／または糖尿病に関与するポリペプチドの発現を増加または減少させるために使用され得る。例えば、本明細書に提供されるポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物または本明細書に提供されるポテト多糖調製物は、脂肪細胞におけるリパーゼ, ホルモン感受性（lipase, hormone-sensitive）ポリペプチド（LIPEポリペプチド）の発現を増加させるため、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ2（ミトコンドリア）（phosphoenolpyruvate carboxykinase 2 (mitochondrial)）ポリペプチド（PCK2ポリペプチド）の発現を増加させるため、モノアシルグリセロール O-アシルトランスフェラーゼ1（monoacylglycerol O-acyltransferase 1）ポリペプチド（MOGAT1ポリペプチド）の発現を増加させるため、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ, コアクチベーター1α（peroxisome proliferator-activated receptor gamma, coactivator 1 alpha）ポリペプチド（PPARGC1aポリペプチド）の発現を増加させるため、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ, コアクチベーター1βポリペプチド（PPARGC1bポリペプチド）の発現を増加させるため、スーパーオキシドジスムターゼ2, ミトコンドリア（superoxide dismutase 2, mitochondrial）ポリペプチド（SOD2ポリペプチド）の発現を増加させるため、脂肪細胞における核内受容体サブファミリー4, グループA, メンバー1（nuclear receptor subfamily 4, group A, member 1）ポリペプチド（NR4A1ポリペプチド）の発現を増加させるため、アセチル-CoAアセチルトランスフェラーゼ2（acetyl-CoA acetyltransferase 2）ポリペプチド（ACAT2ポリペプチド）の発現を増加させるため、筋細胞における3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-CoAレダクターゼポリペプチド（HMGCRポリペプチド）の発現を増加させるためまたはそれらの組み合わせに使用され得る。いくつかの例において、本明細書に提供されるポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物または本明細書に提供されるポテト多糖調製物は、1-アシルグリセロール-3-リン酸 O-アシルトランスフェラーゼ1（1-acylglycerol-3-phosphate O-acyltransferase 1）ポリペプチド（AGPAT1ポリペプチド）の発現を減少させるため、酸化低密度リポタンパク質（レクチン様）受容体1（oxidized low density lipoprotein (lectin-like) receptor 1）ポリペプチド（OLR1ポリペプチド）の発現を減少させるため、分枝鎖アミノ酸トランスアミナーゼ2, ミトコンドリア（branched chain amino-acid transaminase 2, mitochondrial）ポリペプチド（BCAT2ポリペプチド）の発現を減少させるため、B細胞内κ軽鎖ポリペプチド遺伝子エンハンサーの核内因子1ポリペプチド（NFKB1ポリペプチド）の発現を減少させるため、SH2Bアダプタータンパク質1（SH2B adaptor protein 1）ポリペプチド（SH2B1ポリペプチド）の発現を減少させるため、リポタンパク質リパーゼ（lipoprotein lipase）ポリペプチド（LPLポリペプチド）の発現を減少させるため、脂肪細胞における3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリル-CoAレダクターゼポリペプチド（HMGCRポリペプチド）の発現を減少させるため、筋細胞におけるリパーゼ, ホルモン感受性ポリペプチド（LIPEポリペプチド）の発現を減少させるため、筋細胞における核内受容体サブファミリー4, グループA, メンバー1ポリペプチド（NR4A1ポリペプチド）の発現を減少させるため、ホスファターゼおよびテンシンホモログ（phosphatase and tensin homolog）ポリペプチド（PTENポリペプチド）の発現を減少させるため、カスパーゼ8, アポトーシス関連システインペプチダーゼ（caspase 8, apoptosis-related cysteine peptidase）ポリペプチド（CASP8ポリペプチド）の発現を減少させるためまたはそれらの組み合わせに使用され得る。
【０００５】
いくつかの例において、本明細書に提供されるポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物または本明細書に提供されるポテト多糖調製物は、1つまたは複数のポリペプチド（例えば、LIPEポリペプチド（脂肪細胞内）、PCK2ポリペプチド、MOGAT1ポリペプチド、PPARGC1aポリペプチド、PPARGC1bポリペプチド、SOD2ポリペプチド、NR4A1ポリペプチド（脂肪細胞内）、ACAT2ポリペプチド、またはHMGCRポリペプチド（筋細胞内）のうちの1つまたは複数）を増加させるために、および1つまたは複数のポリペプチド（例えば、AGPAT1ポリペプチド、OLR1ポリペプチド、BCAT2ポリペプチド、NFKB1ポリペプチド、SH2B1ポリペプチド、LPLポリペプチド、HMGCRポリペプチド（脂肪細胞内）、LIPEポリペプチド（筋細胞内）、NR4A1ポリペプチド（筋細胞内）、PTENポリペプチド、またはCASP8ポリペプチドのうちの1つまたは複数）を減少させるために使用され得る。
【０００６】
概して、本願の1つの局面は、哺乳動物へと投与されると該哺乳動物に投与されたポテト多糖調製物のポテト多糖成分を該哺乳動物の体重1kgあたり0.05mg〜50mgでもたらす量の該ポテト多糖調製物を含むまたは該調製物から本質的になる栄養補助組成物を特徴とする。該組成物は、1mg〜100mgのポテト多糖調製物を含み得る。該組成物は、6mg〜20mgのポテト多糖調製物を含み得る。該組成物は、ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を1mg〜100mg含み得る。該組成物は、ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を6mg〜20mg含み得る。該組成物は、錠剤の形態であり得る。該組成物は、αリポ酸を含み得る。該組成物は、αトコフェロールを含み得る。ポテト多糖調製物は、生ポテトから得られた調製物であり得る。ポテト多糖調製物は、哺乳動物へと投与されると該哺乳動物に投与された該ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を該哺乳動物の体重1kgあたり0.075mg〜0.5mgでもたらす量であり得る。ポテト多糖調製物の少なくとも約80パーセントは、ポテト多糖であり得る。ポテト多糖調製物の少なくとも約90パーセントは、ポテト多糖であり得る。ポテト多糖調製物の少なくとも約95パーセントは、ポテト多糖であり得る。哺乳動物は、ヒトであり得る。
【０００７】
別の局面において、本願は、生ポテトから得られたポテト多糖調製物を含むまたは該調製物から本質的になる栄養補助組成物を特徴とする。該組成物は、1mg〜100mgのポテト多糖調製物を含み得る。該組成物は、6mg〜20mgのポテト多糖調製物を含み得る。該組成物は、ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を1mg〜100mg含み得る。該組成物は、ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を6mg〜20mg含み得る。該組成物は、錠剤の形態であり得る。該組成物は、αリポ酸を含み得る。該組成物は、αトコフェロールを含み得る。ポテト多糖調製物は、哺乳動物へと投与されると該哺乳動物に投与された該ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を該哺乳動物の体重1kgあたり0.05mg〜0.5mgでもたらす量であり得る。ポテト多糖調製物は、哺乳動物へと投与されると該哺乳動物に投与された該ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を該哺乳動物の体重1kgあたり0.075mg〜0.25mgでもたらす量であり得る。哺乳動物は、ヒトであり得る。ポテト多糖調製物の少なくとも約80パーセントは、ポテト多糖であり得る。ポテト多糖調製物の少なくとも約90パーセントは、ポテト多糖であり得る。ポテト多糖調製物の少なくとも約95パーセントは、ポテト多糖であり得る。
【０００８】
別の局面において、本願は、細胞におけるポリペプチド発現を増加させるための方法を特徴する。該方法は、TFAMポリペプチド、ATP5A1ポリペプチド、PDHA1ポリペプチド、PDHA2ポリペプチド、およびTHOP1ポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドの1つまたは複数の発現が増加する条件下で、細胞を、生ポテトから得られたポテト多糖調製物と接触させる工程を含むまたは該工程から本質的になる。
【０００９】
別の局面において、本願は、細胞におけるポリペプチド発現を減少させるための方法を特徴とする。該方法は、FOX01Aポリペプチド、NFKB1ポリペプチド、PDK2ポリペプチド、PDK4ポリペプチド、およびHMGCRポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドの1つまたは複数の発現が減少する条件下で、細胞を、生ポテトから得られたポテト多糖調製物と接触させる工程を含むまたは該工程から本質的になる。
【００１０】
別の局面において、本願は、肥満、糖尿病、および／または多嚢胞性卵巣症候群を処置するための方法を特徴とする。該方法は、（a）肥満、糖尿病、および／または多嚢胞性卵巣症候群を有する哺乳動物を特定する工程ならびに（b）該哺乳動物に、生ポテトから得られたポテト多糖調製物を投与する工程を含むまたは該工程から本質的になる。
【００１１】
[本発明1001]
哺乳動物へと投与されると該哺乳動物に投与されたポテト多糖調製物のポテト多糖成分を該哺乳動物の体重1kgあたり0.05mg〜50mgでもたらす量の該ポテト多糖調製物を含む、栄養補助組成物。
[本発明1002]
1mg〜100mgのポテト多糖調製物を含む、本発明1001の組成物。
[本発明1003]
6mg〜20mgのポテト多糖調製物を含む、本発明1001の組成物。
[本発明1004]
ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を1mg〜100mg含む、本発明1001の組成物。
[本発明1005]
ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を6mg〜20mg含む、本発明1001の組成物。
[本発明1006]
錠剤の形態である、本発明1001の組成物。
[本発明1007]
αリポ酸を含む、本発明1001の組成物。
[本発明1008]
αトコフェロールを含む、本発明1001の組成物。
[本発明1009]
ポテト多糖調製物が、生ポテトから得られた調製物である、本発明1001の組成物。
[本発明1010]
ポテト多糖調製物が、哺乳動物へと投与されると該哺乳動物に投与された該ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を該哺乳動物の体重1kgあたり0.075mg〜0.5mgでもたらす量である、本発明1001の組成物。
[本発明1011]
ポテト多糖調製物の少なくとも約80パーセントがポテト多糖である、本発明1001の組成物。
[本発明1012]
ポテト多糖調製物の少なくとも約90パーセントがポテト多糖である、本発明1001の組成物。
[本発明1013]
ポテト多糖調製物の少なくとも約95パーセントがポテト多糖である、本発明1001の組成物。
[本発明1014]
哺乳動物がヒトである、本発明1001の組成物。
[本発明1015]
生ポテトから得られたポテト多糖調製物を含む、栄養補助組成物。
[本発明1016]
1mg〜100mgのポテト多糖調製物を含む、本発明1015の組成物。
[本発明1017]
6mg〜20mgのポテト多糖調製物を含む、本発明1015の組成物。
[本発明1018]
ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を1mg〜100mg含む、本発明1015の組成物。
[本発明1019]
ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を6mg〜20mg含む、本発明1015の組成物。
[本発明1020]
錠剤の形態である、本発明1015の組成物。
[本発明1021]
αリポ酸を含む、本発明1015の組成物。
[本発明1022]
αトコフェロールを含む、本発明1015の組成物。
[本発明1023]
ポテト多糖調製物が、哺乳動物へと投与されると該哺乳動物に投与された該ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を該哺乳動物の体重1kgあたり0.05mg〜0.5mgでもたらす量である、本発明1015の組成物。
[本発明1024]
ポテト多糖調製物が、哺乳動物へと投与されると該哺乳動物に投与された該ポテト多糖調製物のポテト多糖成分を該哺乳動物の体重1kgあたり0.075mg〜0.25mgでもたらす量である、本発明1015の組成物。
[本発明1025]
哺乳動物がヒトである、本発明1023または1024の組成物。
[本発明1026]
ポテト多糖調製物の少なくとも約80パーセントがポテト多糖である、本発明1015の組成物。
[本発明1027]
ポテト多糖調製物の少なくとも約90パーセントがポテト多糖である、本発明1015の組成物。
[本発明1028]
ポテト多糖調製物の少なくとも約95パーセントがポテト多糖である、本発明1015の組成物。
[本発明1029]
TFAMポリペプチド、ATP5A1ポリペプチド、PDHA1ポリペプチド、PDHA2ポリペプチド、およびTHOP1ポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドの1つまたは複数の発現が増加する条件下で、細胞を、生ポテトから得られたポテト多糖調製物と接触させる工程を含む、細胞におけるポリペプチド発現を増加させるための方法。
[本発明1030]
FOX01Aポリペプチド、NFKB1ポリペプチド、PDK2ポリペプチド、PDK4ポリペプチド、およびHMGCRポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチドの1つまたは複数の発現が減少する条件下で、細胞を、生ポテトから得られたポテト多糖調製物と接触させる工程を含む、細胞におけるポリペプチド発現を減少させるための方法。
[本発明1031]
（a）肥満、糖尿病、および／または多嚢胞性卵巣症候群を有する哺乳動物を特定する工程、ならびに
（b）該哺乳動物に、生ポテトから得られたポテト多糖調製物を投与する工程
を含む、肥満、糖尿病、および／または多嚢胞性卵巣症候群を処置するための方法。
そうでないことが定義されていない限り、本明細書で使用されるすべての技術および科学用語は、本発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者によって一般に理解されているのと同じ意味を有する。本発明の実施または試験には本明細書に記載されているのと類似または等価な方法および材料を使用することができるが、以下では適当な方法および材料について記載する。本明細書で言及されているすべての刊行物、特許出願、特許およびその他の参考文献は、それらの全体が参照により組み入れられる。矛盾が生じる場合、定義を含めて本明細書が優先される。加えて、材料、方法および実施例は例示にすぎず、限定を意図したものではない。
【００１２】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】生ポテト（ラセット・バーバンク（Russet Burbank））の10％ACN抽出物のHPLCクロマトグラムである。
【図２】図1に示されている生ポテトの10％ACN抽出物から収集され再精製された3.5分ピーク物質のHPLCクロマトグラムである。
【図３】TFAM発現の代表的なリアルタイムPCR増幅プロットである。
【図４】3.5分HPLCピーク物質のLC/MSトレースである。
【図５】3.5分HPLCピーク物質の全NMRスペクトルである。
【図６】3.5分HPLCピーク物質の拡大版NMRスペクトルである。
【図７】生ポテトのラセット・バーバンクから得られた3.5分HPLCピーク物質の誘導体化炭水化物フラグメントのトータルイオンクロマトグラムである。
【図８】ジアセトアミドのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図９】3-アセトキシピリジンのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図１０】3,4-フランジメタノール,ジアセタートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図１１】1,2,3-プロパントリオールジアセタートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図１２】イミダゾール,2-アセトアミノ-5-メチルのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図１３】6,7-ジヒドロ-5H-ピロロ[2,1,c][1,2,4]トリアゾール-3-カルボン酸のフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図１４】酢酸,1-(2-メチルテトラゾール-5-イル)エテニルエステルのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図１５】1,2,3,4-ブタントリオール,テトラアセタート（異性体1）のフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図１６】1,2,3,4-ブタントリオール,テトラアセタート（異性体2）のフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図１７】ペンタエリトリトールテトラアセタートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図１８】1,2,3,4,5-ペンタ-o-アセチル-D-キシリトール（異性体1）のフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図１９】1,2,3,4,5-ペンタ-o-アセチル-D-キシリトール（異性体2）のフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図２０】3,5-ジアセトキシベンジルアルコールのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図２１】β-D-ガラクトピラノース,ペンタアセタートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図２２】D-マンニトールヘキサアセタートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図２３】ガラクチコール（galacticol）,ヘキサアセタートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図２４】シクロヘキサンカルボン酸,1,2,4,5-テトラキス(アセトキシ),(1α,3α,4α,5β)-(-)のフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図２５】ムコ-イノシトール,ヘキサアセタートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図２６】D-グルシトール-ヘキサアセタートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図２７】ミオ-イノシトール,ヘキサアセタートのフラグメンテーションパターンである。ピークフラグメンテーションパターンが上パネルに、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下パネルに、そしてそれら2つを重ねて表示したものが中央パネルに示されている。
【図２８】生オーガニック・イエロー（Organic Yellow）ポテトの10％ACN抽出物のHPLCクロマトグラムである。
【図２９】生パープル（Purple）ポテトの10％ACN抽出物のHPLCクロマトグラムである。
【図３０】生アイダホ・ラセット（Idaho Russet）ポテトの10％ACN抽出物のHPLCクロマトグラムである。
【図３１】生ユーコン・ゴールド（Yukon Gold）ポテトの10％ACN抽出物のHPLCクロマトグラムである。
【図３２】生甘藷の10％ACN抽出物のHPLCクロマトグラムである。
【図３３】ゆでたパープルポテトの10％ACN抽出物のHPLCクロマトグラムである。
【図３４】アイダホ・ラセットポテト由来の2つのプールしたフラクション回収物のHPLCクロマトグラムである。
【図３５】3gのパープルポテトから回収したフラクションのHPLCクロマトグラムである。
【図３６】ポト多糖（potosaccharide）調製物に4時間曝した細胞から回収した培地のHPLCクロマトグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
詳細な説明
本願は、栄養補助組成物を提供する。例えば、本願は、ポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物、ポテト多糖調製物を得るための方法、ポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物を製造するための方法、ならびにミトコンドリア活性または機能に関与するポリペプチドの発現を増加または減少させるための方法および物質を提供する。
【００１５】
本明細書に提供される栄養補助組成物は、1つまたは複数のポテト多糖調製物を含み得る。ポテト多糖調製物は、ポテトの水抽出物から得られ、かつ10％アセトニトリルによるC18カートリッジ（例えば、Sep-Pak Plus C-18カートリッジ）からの溶出能力を有する多糖物質を含有する調製物であり得る。いくつかの例において、ポテト多糖調製物は、ポテトから得られ、かつ実施例1（図1、2および28〜34も参照のこと）に記載されるように3.5分で溶出するピークのもののHPLC特性を有する多糖物質を含有する調製物であり得る。いくつかの例において、本明細書に提供されるポテト多糖調製物の多糖は、極性、水溶性の多糖であり得る。いくつかの例において、本明細書に提供されるポテト多糖調製物の多糖は、高置換型複合キシログルカン物質であり得る。
【００１６】
いくつかの例において、ポテト多糖調製物は、ポテトから得られ、かつ誘導体化したときにGC/MSを用いる評価で少なくとも以下のアシル化炭水化物が確認される多糖物質を含有する調製物であり得る：（a）ミオ-イノシトール（内部標準として使用するためにこれを1倍とする）、（b）ミオ-イノシトールの約40倍〜約60倍量のグルコース（例えば、ミオ-イノシトールの約50倍量のグルコース）、（c）ミオ-イノシトールの約10倍〜約20倍量のキシロース（例えば、ミオ-イノシトールの約15倍量のキシロース）、（d）ミオ-イノシトールの約5倍〜約15倍量のマンノース（例えば、ミオ-イノシトールの約10倍量のマンノース）および（e）ミオ-イノシトールの約3倍〜約7倍量のガラクトース（例えば、ミオ-イノシトールの約5倍量のガラクトース）。誘導体化手順は、多糖物質の乾燥残留物を形成し、次いでこれをトリフルオロ酢酸を用いて加水分解する工程を含み得る。得られる物質は、その後、水素化ホウ素ナトリウムを用いて還元され、そしてボラートの除去後に、最終産物が無水酢酸およびピリジンを用いてアシル化される。この反応の最終産物は、その後、アシル化炭水化物を同定するためにGC/MSに直接注入される。
【００１７】
いくつかの例において、ポテト多糖調製物は、ポテトから得られ、かつ誘導体化されGC/MSを用いて評価されたときに少なくとも4つの主要成分（3,4-フランジメタノール,ジアセタート；1,2,3,4,5-ペンタ-o-アセチル-D-キシリトール（異性体1）；3,5-ジアセトキシ-ベンジルアルコール；およびD-グルシトール-ヘキサアセタート）が確認される多糖物質を含有する調製物であり得る。例えば、実施例1を参照のこと。いくつかの例において、ポテト多糖調製物は、ポテトから得られ、かつ誘導体化されGC/MSを用いて評価されたときに表3に列挙される化合物が確認されるまたは図7に示されるプロフィールが確認される多糖物質を含有する調製物であり得る。
【００１８】
いくつかの例において、本明細書に提供されるポテト多糖調製物は、実質的に純粋なポテト多糖調製物であり得る。典型的に、実質的に純粋なポテト多糖調製物は、例えばHPLCを用いて評価されたときに、単一ピークの物質（例えば、単一ピークの多糖物質）を含有する調製物である（例えば、図2および34を参照のこと）。いくつかの例において、本明細書に提供されるポテト多糖調製物の60、70、75、80、85、90、95または99パーセント超は、ポテトから得られた多糖物質であり得る。
【００１９】
任意の適当なポテト種または変種が、本明細書に提供されるポテト多糖調製物を得るために使用され得る。例えば、ジャガイモ（Solanum tuberosum）、サツマイモ（Ipomoea batatas）、S.アカウレ（S. acaule）、S.ブカソビイ（S. bukasovii）、S.レプトフィエス（S. leptophyes）、S.メギスタクロロバム（S. megistacrolobum）、S.コマーソニイ（S. commersonii）またはS.インフンジブリフォーメ（S. infundibuliforme）が、本明細書に提供されるポテト多糖調製物を得るために使用され得る。いくつかの例において、S.ツネロサム（S. tunerosum）のポテト変種、例えばオーガニック・イエロー、パープルまたはブルー変種、クリーム・オブ・ザ・クロップ（Cream of the Crop）、アディロンダック・ブルー（Adirondack Blue）、アディロンダック・レッド、アガタ（Agata）、アーモンド、アンデス・ゴールド（Andes Gold）、アンデス・サン（Andes Sun）、アプライン（Apline）、アルトゥラス（Alturas）、アマンディーヌ（Amandine）、アナベル（Annabelle）、アニヤ（Anya）、アラン・ビクトリー（Arran Victory）、アトランティック（Atlantic）、アバランチ（Avalanche）、バンベルグ（Bamberg）、バノック・ラセット（Bannock Russet）、ベル・ド・フォントネー（Belle de Fontenay）、BF-15、ビルトスター（Bildtstar）、ビンチェ（Bintje）、ブレイザー・ラセット（Blazer Russet）、ブルー・コンゴ（Blue Congo）、ボノット（Bonnotte）、ブリティッシュ・クイーンズ（British Queens）、カブリタス（Cabritas）、カモタ（Camota）、カネラ・ラセット（Canela Russet）、カーラ（Cara）、カローラ（Carola）、シェリナ（Chelina）、チロエ（Chiloe）、シエロ（Cielo）、クラベラ・ブランカ（Clavela Blanca）、デジレ（Desiree）、エスティマ（Estima）、フィアナ（Fianna）、フィンガーリング（Fingerling）、フラバ（Flava）、ジャーマン・バターボール（German Butterball）、ゴールデン・ワンダー（Golden Wonder）、ゴールドラッシュ（Goldrush）、ホーム・ガード（Home Guard）、イノベーター（Innovator）、アイリッシュ・コブラー（Irish Cobbler）、ジャージー・ロイヤル（Jersey Royal）、ケネベック（Kennebec）、ケールズ・ピンク（Kerr's Pink）、ケストレル（Kestrel）、ケウカ・ゴールド（Keuka Gold）、キング・エドワード（King Edward）、キプフラー（Kipfler）、レディ・バルフォア（Lady Balfour）、ラングレード（Langlade）、リンダ（Linda）、マーシー（Marcy）、マルフォナ（Marfona）、マリス・パイパー（Maris Piper）、マークイーズ（Marquis）、メガチップ（Megachip）、モナリザ（Monalisa）、ニコラ（Nicola）、パチャコナ（Pachacona）、パイク（Pike）、ピンク・アイ（Pink Eye）、ピンク・ファー・アップル（Pink Fir Apple）、プリムラ（Primura）、ランガー・ラセット（Ranger Russet）、ラーテ（Ratte）、レコード（Record）、レッド・ラソーダ（Red LaSoda）、レッド・ノーランド（Red Norland）、レッド・ポンティアック（Red Pontiac）、ルースター（Rooster）、ラセット・バーバンク、ラセット・ノーコター（Russet Norkotah）、セルマ（Selma）、シェポーディー（Shepody）、ジーグリンデ（Sieglinde）、シルバートン・ラセット（Silverton Russet）、シルコ（Sirco）、スノーデン（Snowden）、スプンタ（Spunta）、アップ・トゥ・デート（Up to date）、ストブラバ（Stobrawa）、スーペリア（Superior）、ビバルディ（Vivaldi）、ビテロッテ（Vitelotte）、イエロー・フィン（Yellow Finn）またはユーコン・ゴールド��、本明細書に提供されるポテト多糖調製物を得るために使用され得る。
【００２０】
任意の適当な方法が、本明細書に提供されるポテト多糖調製物を得るために使用され得る。例えば、生ポテト物質が水中でホモジナイズ（例えば、Polytronホモジナイザーを用いてホモジナイズ）され、そして室温で一定期間（例えば、約1時間）、時々振盪されつつ維持され得る。このホモジネートは、任意の大きな固形物を除去するために遠心分離（例えば、4000gで10分間遠心分離）され得る。得られた上清は、Solid Phase Extractionカートリッジ（例えば、C18カートリッジ、例えばSep-Pak Plus C-18カートリッジ）に充填され、そして10パーセントのアセトニトリルを用いて多糖物質が溶出される。溶出させた後、多糖物質は、乾燥され保管（例えば、約4℃で保管）され得る。
【００２１】
本願はまた、本明細書に提供される1つまたは複数のポテト多糖調製物を含有する栄養補助組成物を提供する。例えば、アイダホ・ラセットポテトから得られた本明細書に提供されるポテト多糖調製物が、栄養補助組成物に配合され得る。任意の適当な量の本明細書に提供されるポテト多糖調製物が、栄養補助組成物を配合するために使用され得る。例えば、本明細書に提供されるポテト多糖調製物は、栄養補助組成物がポテト多糖調製物のポテト多糖成分を約1mg〜約750mg（例えば、約1mg〜約500mg、約1mg〜約250mg、約5mg〜約40mg、約5mg〜約30mg、約5mg〜約20mg、約6mg〜約50mg、約6mg〜約20mg、約10mg〜約25mgまたは約15mg〜約20mg）含有するよう栄養補助組成物を配合するために使用され得る。いくつかの例において、栄養補助組成物は、1日あたり哺乳動物（例えば、ヒト）に対して体重1kgあたり約0.05mgのポテト多糖成分〜体重1kgあたり約0.5mgのポテト多糖成分を送達するよう配合され得る。例えば、そのような栄養補助組成物は、ヒトが1日に1度飲み込むことで体重1kgあたり約0.05mgのポテト多糖成分〜体重1kgあたり約0.5mgのポテト多糖成分を提供する単一の経口用組成物として配合され得る。
【００２２】
任意の適当な方法が、本明細書に提供される栄養補助組成物を配合するために使用され得る。例えば、一般的な配合混合および調製技術が、本明細書に記載される成分を有する栄養補助組成物を製造するために使用され得る。加えて、本明細書に提供される栄養補助組成物は、任意の形態であり得る。例えば、本明細書に提供される栄養補助組成物は、丸剤、カプセル剤、錠剤、ゲルキャップ、栄養シェイク飲料、栄養バー食品、肛門坐剤、舌下坐剤（sublingual suppository）、鼻用スプレー、吸入剤または注射用アンプルとして配合され得る。本明細書に提供される栄養補助組成物は、1つまたは複数の本明細書に提供されるポテト多糖調製物を単独で、または、非限定的に、ゼラチン、セルロース、デンプン、糖、ベントナイト、乳酸、マンニトール、αリポ酸、αトコフェロール、L-アスコルベートまたはそれらの組み合わせを含む他の成分と組み合わせて含み得る。
【００２３】
本願はまた、ミトコンドリア活性または機能に関与するポリペプチドの発現を増加または減少させるための方法を提供する。例えば、本明細書に提供されるポテト多糖調製物または本明細書に提供される栄養補助組成物が、ミトコンドリア活性または機能に関与するポリペプチドの発現を増加または減少させるために使用され得る。いくつかの例において、本明細書に提供されるポテト多糖調製物または本明細書に提供される栄養補助組成物は、TFAMポリペプチド、ATP5A1ポリペプチド、PDHA1ポリペプチド、PDHA2ポリペプチド、THOP1ポリペプチドまたはそれらの組み合わせの発現を増加させるために使用され得る。いくつかの例において、本明細書に提供されるポテト多糖調製物または本明細書に提供される栄養補助組成物は、FOX01Aポリペプチド、NFKB1ポリペプチド、PDK2ポリペプチド、PDK4ポリペプチド、HMGCRポリペプチドまたはそれらの組み合わせの発現を減少させるために使用され得る。いくつかの例において、本明細書に提供されるポテト多糖調製物または本明細書に提供される栄養補助組成物は、1つまたは複数のポリペプチド（例えば、TFAMポリペプチド、ATP5A1ポリペプチド、PDHA1ポリペプチド、PDHA2ポリペプチド、またはTHOP1ポリペプチドのうちの1つまたは複数）を増加させるために、および1つまたは複数のポリペプチド（例えば、FOX01Aポリペプチド、NFKB1ポリペプチド、PDK2ポリペプチド、PDK4ポリペプチド、またはHMGCRポリペプチドのうちの1つまたは複数）を減少させるために使用され得る。
【００２４】
ヒトにおいて、本明細書に提供されるポテト多糖調製物または本明細書に提供される栄養補助組成物は、1つもしくは複数のヒトポリペプチド（例えば、ヒトTFAMポリペプチド、ヒトATP5A1ポリペプチド、ヒトPDHA1ポリペプチド、ヒトPDHA2ポリペプチド、ヒトTHOP1ポリペプチド、ヒトLIPEポリペプチド（脂肪細胞内）、ヒトPCK2ポリペプチド、ヒトMOGAT1ポリペプチド、ヒトPPARGC1aポリペプチド、vPPARGC1bポリペプチド、ヒトSOD2ポリペプチド、ヒトNR4A1ポリペプチド（脂肪細胞内）、ヒトACAT2ポリペプチド、もしくはヒトHMGCRポリペプチド（筋細胞内）のうちの1つもしくは複数）を増加させるために、および／または1つもしくは複数のヒトポリペプチド（例えば、ヒトFOX01Aポリペプチド、ヒトNFKB1ポリペプチド、ヒトPDK2ポリペプチド、ヒトPDK4ポリペプチド、ヒトHMGCRポリペプチド（脂肪細胞内）、ヒトAGPAT1ポリペプチド、ヒトOLR1ポリペプチド、ヒトBCAT2ポリペプチド、ヒトSH2B1ポリペプチド、ヒトLPLポリペプチド、ヒトHMGCRポリペプチド（脂肪細胞内）、ヒトLIPEポリペプチド（筋細胞内）、ヒトNR4A1ポリペプチド（筋細胞内）、ヒトPTENポリペプチド、もしくはヒトCASP8ポリペプチドのうちの1つもしくは複数）を減少させるために使用され得る。
【００２５】
ヒトTFAMポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号CAG28581.1（GI番号47115243）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_003201.1（GI番号4507400）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトATP5A1ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号AAH08028.2（GI番号34782901）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_001001937.1（GI番号50345983）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトPDHA1ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号ABQ58815.1（GI番号148300624）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_001173454.1（GI番号291084741）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトPDHA2ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号AAH94760.1（GI番号66267554）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_005390.4（GI番号134031963）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトTHOP1ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号AAH00583.2（GI番号38014202）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_003249.3（GI番号34222291）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトLIPEポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号AAH70041.1（GI番号47124456）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_005357.2（GI番号21328445）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトPCK2ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号CAG33194.1（GI番号4814943）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_004563.1（GI番号66346720）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトMOGAT1ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号NP_477513.2（GI番号148746191）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_058165.1（GI番号148746190）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトPPARGC1aポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号NP_037393.1（GI番号7019499）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_013261.2（GI番号116284374）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトPPARGC1bポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号AAI44252.1（GI番号219518198）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_133263.2（GI番号289577087）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトSOD2ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号AAH16934.1（GI番号16877367）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_000636.1（GI番号67782304）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトNR4A1ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号CAG32985.1（GI番号48145525）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_173158.1（GI番号320202954）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトACAT2ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号AAH00408.1（GI番号12653279）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_005891.1（GI番号148539871）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトFOX01Aポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号NP_002006.2（GI番号9257222）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_002015.3（GI番号133930787）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトNFKB1ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号CAB94757.1（GI番号8574070）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_001165412.1（GI番号25955301）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトPDK2ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号NP_002602.2（GI番号19923736）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_00211.4（GI番号315630394）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトPDK4ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号AAH40239.1（GI番号25955471）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_002612.2（GI番号94421466）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトHMGCRポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号AAH33692.1（GI番号21707182）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_000859.2（GI番号196049378）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトAGPAT1ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号NP_116130.2（GI番号15100175）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_006411.3（GI番号301336168）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトOLR1ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号NP_002534.1（GI番号4505501）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_002543.2（GI番号119392084）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトBCAT2ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号AAH04243.2（GI番号48257075）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_001190.1（GI番号258614013）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトSH2B1ポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号AAH10704.1（GI番号14715079）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_001145797.1（GI番号224926829）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトLPLポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号CAG33335.1（GI番号4814622）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_000237.1（GI番号145275217）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトHMGCRポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号AAH33692.1（GI番号21707182）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_001130996.1（GI番号196049379）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトPTENポリペプチドは、GenBank（登録商標）アクセッション番号AAD13528.1（GI番号4240387）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_000314.2（GI番号110224474）に示される核酸配列によってコードされ得る。ヒトCASP8ポリペプチドは、GenBank（登録商標���アクセッション番号AAH68050.1（GI番号45751586）に示されるアミノ酸配列を有し得、そしてGenBank（登録商標）アクセッション番号NM_001228.4（GI番号122056470）に示される核酸配列によってコードされ得る。
【００２６】
本明細書に提供されるポテト多糖調製物または本明細書に提供される栄養補助組成物は、任意の哺乳動物（例えば、ラット、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヤギ、ブタ、ニワトリ、アヒル、ウサギ、ヒツジ、サルまたはヒト）に投与され得る。加えて、任意の投与経路（例えば、経口または非経口投与）が、本明細書に提供されるポテト多糖調製物または本明細書に提供される栄養補助組成物を哺乳動物に投与するために使用され得る。例えば、本明細書に提供されるポテト多糖調製物または本明細書に提供される栄養補助組成物は、経口投与され得る。
【００２７】
本願は、以下の実施例においてさらなる説明を提供するが、これは特許請求の範囲に記載される発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００２８】
実施例1 - ミトコンドリア活性および機能に関与するポリペプチドの発現を変化させる能力を有するポテト多糖調製物の同定
ジャガイモ種のラセットポテト変種6グラムを、50mL遠心チューブに入れた20mLの水中で、Polytronホモジナイザーを用いてホモジナイズし、そしてこれを室温で1時間維持した。このホモジネートを4000rpmで10分間遠心分離した。Sep-Pak Plus C18カートリッジを10mL 100％アセトニトリル（ACN）で活性化させ、10mL 水中0.05％トリフルオロ酢酸（TFA水）で洗浄した。10mLの上清をカートリッジに充填し、カートリッジを通過するすべてのH2Oを1.5mLエッペンドルフチューブに回収した。次に、10mLの2％ACN（0.05％TFA水中）をカラムに通し、その溶出液を1.5mLエッペンドルフチューブに回収した。次に、10mLの5％ACN（0.05％TFA水中）を使用してカラムを洗浄し、その溶出液を1.5mLエッペンドルフチューブに回収した。最後に、10mLの10％ACN（0.05％TFA水中）を、カラムを通した後に1.5mLエッペンドルフチューブに回収した。すべてのフラクションを乾燥させ、そして同じACN濃度の乾燥させたフラクションを、HPLCを通じたさらなる精製のために1本のチューブに入れて1mLの0.05％TFA水で再構成させるかまたは細胞処置に使用するために1mLのリン酸緩衝生理食塩水で再構成させた。
【００２９】
発光ダイオードアレイ検出器を備えるWaters 2695分離モジュールを用いて10％ACN抽出物を精製した。XterraRP C18カラム（4.6X 150mm）を、移動相として0.05% TFA水を用いる分離に使用した。各回のHPLCの実施は、0〜2.5％ACNの範囲の20分間の勾配とした。注入量は100μL、流速は0.5mL/分とした。10％ACN抽出物のHPLC分画により、3つの大きなUV吸収ピークが3.5、3.9および12.1分で溶出された（図1）。3.5分フラクションの回収およびHPLC再精製により、198.3nmで最大吸収を示す対称性のピークが得られた（図2）。
【００３０】
この3つのピークを、それらがミトコンドリア活性および機能に関与するポリペプチドの発現レベルを変化させる能力を有する物質を含んでいるかどうかを決定するために評価した。簡潔に説明すると、American Type Culture Collection（ATCC）から入手した5 x 105個の神経芽腫細胞を、2mLのRPMI培地を含む6ウェルプレートの各ウェルにプレーティングし、そしてHPLC精製物質の異なるアリコートの存在下または非存在下で4時間インキュベートした。インキュベート後、RNeasyミニキット（Qiagen, Valencia, CA）を用いて総RNAを単離および精製した。具体的に、ペレット状にした細胞を600μLのRLT溶解緩衝液（Qiagen）に再懸濁し、この溶解物を1mLピペットの先端を20回通過させることによってホモジナイズした。次いでこのサンプルを製造元の指示（Qiagen, Valencia, CA）にしたがい処理した。その最終工程において、RNAを、40μLのRNaseフリー水を用いて13,000gで1分間の遠心分離により溶出させた。このRNAを、総RNAナノチップを製造元のプロトコルにしたがい用いてモデル2100バイオアナライザー（Agilent, Santa Clara, CA）分析した。その後、2μgの総RNAを、Superscript IIIリバーストランスクリプターゼおよびランダムプライマーを用いて逆転写した。
【００３１】
DNAマイクロアレイ分析もまた、Agilentにより提供されたシステムを用いて実施した。アレイは、チップ（Agilent 4X44Kチップ）あたり4つのアレイを含んでいた。総RNAを、T7プライマーを用いて逆転写（400ng）し、Cyanine-3色素を用いて標識および転写した。各アレイを、65℃で18時間、少なくとも1.65μgの標識されたcRNAとハイブリダイズさせた。アレイを、Agilentアレイスキャナを用いてスキャンした。両マイクロアレイプラットフォームを用いることで、遺伝子発現の10％以上の変化を決定することができた。
【００３２】
3.5分で溶出したHPLC精製フラクションと共に培養細胞をインキュベートすることで、ミトコンドリアおよび細胞の代謝遺伝子の発現の変化が確認された（表1）。3.5分で溶出した抽出されたポテト物質は、以下に示されるようにそれが多糖であることが決定されたので、本明細書において、ポト多糖（potosaccharide）物質またはポト多糖調製物と称される。3.5分フラクション（ポト多糖調製物）は、3つのうちで唯一、リアルタイムPCRを用いてTFAM、NFKBおよびHMGCR発現について試験された場合に有意な生物学的活性を有することが決定されたフラクションであった。
【００３３】
（表１）ポト多糖調製物との4時間のインキュベート後にマイクロアレイによって決定されたHTB-11細胞における遺伝子発現の変化
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【００３４】
リアルタイムPCRを、TFAM、HMGCRおよびNFKB1の検出セットを用いて、3連で行った。βアクチンまたはGAPDHを参照遺伝子として使用した。リアルタイムPCRマスターミックスは、25μL 2xユニバーサルマスターミックス、2.5μL 20x 検出セット（プライマーおよびプローブを含む）ならびに21.5μLの水を含むものとした。PCRは、Applied Biosystems 7500配列検出システムにおいて行った。サーモサイクラーの条件は、95℃で15秒間の変性および60℃で60秒間のアニーリング／伸長を含むものとした。95℃で10分間の後に40回のPCRサイクルを行った。反応は、3連で行った。TFAMの相対量は、Applied Biosystms 7500ソフトウェアを用いて式2-ΔΔCtを用いて導き出した。リアルタイムPCRによるマイクロアレイ結果のいくつかの検証では、候補遺伝子としてTFAM、HMGCRおよびNKFB1を使用した。代表的なリアルタイムPCR増幅プロットは、TFAM mRNAが存在することおよび示差的に発現されることを実証した（図3）。ポト多糖調製物は、TFAM発現に対して強い効果を有しており、それを57％上方調節することができた（表2）。HMGCRおよびNFKB1の両方の遺伝子発現がおよそ20％減少し、これはDNAマイクロアレイデータと一致し、DNAマイクロアレイデータを追認するものである（表2）。
【００３５】
（表２）リアルタイムPCRによる遺伝子発現変化の検証
HTB-11細胞をポト多糖調製物で4時間処置した。
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【００３６】
対称性の3.5分HPLCピーク物質のさらなる化学的特徴づけを行った。プールした3.5分HPLCフラクションを乾燥させ、1mL TFA水で再構成し、そしてタンデムLC/MS/MS（図4）およびNMR化学分析（図5および6）に供した。NMR分析では、サンプルをさらに分析するために、溶媒として酸化重水素（D2O）を用いてサンプルの1H-NMRを行った。4.65PPMの水ピークを溶媒により抑制し、スペクトルを数時間得た。アセトアミドが3.2PPMで、それと共にアセトニトリルが1.9PPMで、検出された。微量のピークが、1.05PPM、1.17PPM（幅広のピーク）、1.189PPMおよび1.864PPMで検出された。プロトンNMRにおけるポリマー物質の1つの特徴は、ピークの拡大、例えば、1.17PPMのシフト、であった。NMRにおけるこれらのシフトは、4.8PPMのピークを表し、極性水溶性ポリマー、例えば多糖、を示唆するものであり得る。まとめると、これらの結果から、3.5分に溶出するHPLC精製フラクションに含まれる高分子量多糖物質の存在が確認された。
【００３７】
さらなる分析により、3.5分に溶出するHPLC精製フラクションが多糖物質（例えば、高置換型複合キシログルカン物質）を含んでいることが確認された。この多糖物質をガスクロマトグラフィー／質量スペクトル（GC/MS）によって分析可能にするため、これをその誘導体化炭水化物フラグメントに変換した。簡潔に説明すると、サンプルを濃縮して乾燥残留物にし、これをトリフルオロ酢酸を用いて加水分解した。次いでこれを、水素化ホウ素ナトリウムを用いて還元し、そしてボラートの除去後に、最終産物を無水酢酸およびピリミジンを用いてアシル化した。任意のアシル化炭水化物を同定するために、この反応の最終産物をGC/MSに直接注入した。この最終分析では、より大型の炭水化物がサンプル中に存在していた。そのトータルイオンクロマトグラム（TIC）が以下の図7に示されており、適当なピークが以下の表3に一覧表示されている。同定された主要成分が、太字で示されている（ピーク3、12、14および21）。対応する各化合物のフラグメンテーションが図8〜27に提供されている。各フラグメンテーションにおいて、ピークフラグメンテーションパターンが上段に、化合物ライブラリの対応フラグメンテーションが下段に、そしてこれら2つを重ねて表示したものが中段に示されている。最後に、一覧表示されていないピークは、カラム流出物であるかまたは化合物ライブラリとの十分な一致がみられなかったかのいずれかであった。
【００３８】
（表３）GC/MS結果のまとめ
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【００３９】
これらの結果は、より大型の炭水化物の構成単位となる糖モノマーの存在を実証している。これらの複数系統の分析から、ポト多糖調製物が高置換型複合キシログルカンであることが明らかになった。
【００４０】
実施例2 - 甘藷および複数のポテト変種がポト多糖物質の存在を示す
ジャガイモの複数の変種（オーガニック・イエロー、パープル、アイダホ・ラセットおよびユーコン・ゴールド）から6グラムのポテト物質を、および甘藷（サツマイモ）から6グラムの物質を、20mLの水に抽出した。次いでこの水10mLをsep-pakカートリッジに充填し、次いでこのカートリッジを10mLの10％ACNを用いて溶出させた。次いでACNを乾燥させ、その残留物を1mLの水に溶解させた。HPLCを用いて、この水100μLの注入量を評価した。
【００４１】
これらのHPLCクロマトグラムは、（210nmにおける3.5分の）第1ピークの量が試験した5種のポテトすべてにおいて同じであることを実証した（図28〜32）。
【００４２】
別の実験において、ゆでたパープルポテトから物質を抽出し分析した。3.5分のピークは、ゆでたポテトにおいて減少していなかった（図33）。
【００４３】
アイダホ・ラセットポテト由来の2つのプールしたフラクション回収物から3.5分ピークを回収し、乾燥させ、そして100μLの水で再構成した。次いでこの物質をHPLCに注入し、3.5分の単一ピークを得た（図34）。まとめると、これらの結果は、ジャガイモ種およびサツマイモ種のポテトがポト多糖物質を含有していることを実証している。
【００４４】
実施例3 - ポテト物質由来の高置換型複合キシログルカンは糖尿病患者から得られたヒト大網脂肪細胞（omental apidocyte）におけるポリペプチドの発現を変化させる
正常および糖尿病患者から得られたヒト大網脂肪細胞を、Zen-Bio, Inc（Research Triangle Park, NC）から購入した。これらの細胞を、処置しないか、またはパープルポテト由来の3.5分ピーク62.5μg/mLで4時間処置するかのいずれかとした。4時間のインキュベート後、細胞を収集し、そしてマイクロアレイ分析を行って遺伝子発現の変化を測定した。
【００４５】
糖尿病患者由来のヒト大網脂肪細胞を3.5分に溶出したHPLC精製フラクションと共にインキュベートすると、肥満および／または糖尿病に関与する遺伝子の発現が変化した（表4）。正常なヒト由来のヒト大網脂肪細胞のインキュベートは、表4に列挙される遺伝子の発現をわずかに変化させた（表5）。
【００４６】
（表４）糖尿病患者由来のヒト大網脂肪細胞をポト多糖調製物と共に4時間インキュベートした後にマイクロアレイによって決定された遺伝子発現の変化
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【００４７】
（表５）正常なヒト由来のヒト大網脂肪細胞をポト多糖調製物と共に4時間インキュベートした後にマイクロアレイによって決定された遺伝子発現の変化
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【００４８】
リアルタイムPCRを、AGPAT1、OLR1、BCAT2、NR4A1およびACAT2の検出セットを用いて、3連で行った。βアクチンまたはGAPDHを参照遺伝子として使用した。リアルタイムPCRマスターミックスは、25μL 2xユニバーサルマスターミックス、2.5μL 20x 検出セット（プライマーおよびプローブを含む）ならびに21.5μLの水を含むものとした。PCRは、Applied Biosystems 7500配列検出システムにおいて行った。サーモサイクラーの条件は、95℃で15秒間の変性および60℃で60秒間のアニーリング／伸長を含むものとした。95℃で10分間の後に40回のPCRサイクルを行った。反応は、3連で行った。リアルタイムPCRによるマイクロアレイ結果のいくつかの検証では、候補遺伝子としてAGPAT1、OLR1、BCAT2、NR4A1およびACAT2を使用した。リアルタイムPCR増幅プロットは、AGPAT1、OLR1、BCAT2、NR4A1およびACAT2 mRNAが存在することおよび示差的に発現されることを実証した（表6）。
【００４９】
（表６）リアルタイムPCRによる遺伝子発現変化の検証
糖尿病患者由来のヒト大網脂肪細胞をポト多糖調製物で4時間処置した。
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【００５０】
実施例4 - ポテト物質由来の高置換型複合キシログルカンはマウス筋細胞におけるポリペプチドの発現を変化させる
マウス筋芽細胞を、2mLアリコートずつ、2つの75cm2組織培養フラスコに播種した。細胞を、筋細胞に分化させるために、5％CO2、37℃で4日間置いた。
【００５１】
筋細胞を、穏やかな撹拌を用いて、フラスコの壁から剥がした。懸濁した細胞を15mLコニカルチューブに移し、500gで3分間遠心分離した。対照および糖尿病モデル細胞の両方について、2mLアリコートを75cm2組織培養フラスコに播種した。マウス細胞は、正常なマウスおよび低用量アロキサン処置したマウスから得た。糖尿病マウスは、正常マウスと比較して高い血糖を有していた。ポト多糖調製物（パープルポテト由来の3.5分ピーク62.5μg/mL）を1つの対照および1つの糖尿病フラスコに添加し、そして細胞を24時間インキュベートした。
【００５２】
24時間のインキュベート後、細胞を収集し、マイクロアレイ分析を行って遺伝子発現の変化を測定した。加えて、Optronicsデジタルカメラウェアに接続されたNikon EclipseTE300(Morell)倒立顕微鏡を用いて、処置後の細胞の画像を20xで撮影した。この画像を、細胞死亡率および線維サイズについて、ImageJソフトウェア上で分析した。細胞死亡率は、活動細胞数に対する非活動細胞数の比を用いて計算した。線維サイズは、多角形投げ輪トレーサーを用いて計算し、ピクセル面積で測定した。
【００５３】
3.5分で溶出したHPLC精製フラクションと共に糖尿病モデル由来のマウス筋細胞をインキュベートすると、肥満および／または糖尿病に関与する遺伝子の発現が変化した（表7）。正常マウス由来のマウス筋細胞のインキュベートは、表7に列挙される遺伝子の発現をわずかに変化させた（表8）。
【００５４】
（表７）糖尿病モデル由来のマウス筋細胞をポト多糖調製物と共に24時間インキュベートした後にマイクロアレイによって決定された遺伝子発現の変化
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【００５５】
（表８）正常マウス由来のマウス筋細胞をポト多糖調製物と共に24時間インキュベートした後にマイクロアレイによって決定された遺伝子発現の変化
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【００５６】
リアルタイムPCRを、PTENおよびCASP8の検出セットを用いて、3連で行った。βアクチンまたはGAPDHを参照遺伝子として使用した。リアルタイムPCRマスターミックスは、25μL 2xユニバーサルマスターミックス、2.5μL 20x 検出セット（プライマーおよびプローブを含む）ならびに21.5μLの水を含むものとした。PCRは、Applied Biosystems 7500配列検出システムにおいて行った。サーモサイクラーの条件は、95℃で15秒間の変性および60℃で60秒間のアニーリング／伸長を含むものとした。95℃で10分間の後に40回のPCRサイクルを行った。反応は、3連で行った。リアルタイムPCRによるマイクロアレイ結果のいくつかの検証では、候補遺伝子としてPTENおよびCASP8を使用した。リアルタイムPCR増幅プロットは、PTENおよびCASP8 mRNAが存在することおよび示差的に発現されることを実証した（表9）。
【００５７】
（表９）リアルタイムPCRによる遺伝子発現変化の検証
糖尿病モデル由来のマウス筋細胞をポト多糖調製物で24時間処置した。
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【００５８】
実施例5 - ポト多糖調製物の分析
ポト多糖調製物を、HPLCを用いて、3gのパープルポテトから精製した。ポト多糖のピークは、約5分で溶出した（図35）。このピークを、3.5分ピークを得るのに使用したカラムと異なるクロマトグラフィーカラム（10mm x 150mm）を用いて取得した。このカラムは大きな分取カラムであり流速は1.5mL/分であったので、ポト多糖の溶出時間は5分であった。
【００５９】
得られたピークを回収し、乾燥させ、そして60μLの水に再構成した。次いで再構成したポト多糖物質を培養フラスコ中のHTB-11細胞に4時間添加した。処置後培地を回収し、これを別フラスコのHTB-11細胞に添加した。各細胞グループを、遺伝子発現の変化について分析した。最初に処置された細胞は、ミトコンドリア遺伝子の発現に関して予想された変化を示した。処置後培地に4時間暴露された細胞では変化が検出されなかった。
【００６０】
別の実験において、処置後培地を、ポト多糖の当初の精製に使用した技術を用いて抽出した。抽出された処置後培地のクロマトグラムは、5分のピークの非存在を実証した。
【００６１】
実施例6 - 肥満の処置のためのポト調製物の使用
クラスI〜III肥満のヒトは、表10の基準に基づき特定される。
【００６２】
（表１０）BMI、腹囲、および関連疾患リスクによる、過体重および肥満の分類
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【００６３】
特定した後、クラスI〜III肥満患者を、以下のように処置する。ポト多糖を、αリポ酸もしくはαトコフェロールまたはその両方の存在下で配合する。配合されたポト多糖を90重量％の不活性バインダー物質に添加し、これを毎日2回（1日2回）、錠剤、カプセル剤または液剤の形態で経口非経口経路により投与する。1ヶ月の課程の中で最初に最大濃度のポト多糖を1日2回投与する。良好な結果の尺度は、以下のものを含む：（1）BMIの有意な減少、（2）血清LDL/HDL比の改善、（3）血清トリグリセリド濃度の低下、（4）収縮期および拡張期の血圧の低下、ならびに（5）空腹時血糖の低下。
【００６４】
実施例7 - II型糖尿病の処置のためのポト多糖調製物の使用
II型糖尿病患者を特定した後、該患者を以下のように処置する。ポト多糖を、αリポ酸もしくはαトコフェロールまたはその両方の存在下で配合する。配合されたポト多糖を90重量％の不活性バインダー物質に添加し、これを毎日2回（1日2回）、錠剤、カプセル剤または液剤の形態で経口非経口経路により投与する。1ヶ月の期間の中で最初に最大濃度のポト多糖を1日2回投与する。良好な結果の尺度は、以下のものを含む：（1）正常な空腹時血糖の回復、（2）有意な体重減少およびBMIの低下、（3）血清LDL/HDL比の改善、（4）血清トリグリセリド濃度の低下、（5）遊離脂肪酸の血清濃度の低下、（6）収縮期および拡張期の血圧の低下、（7）インスリン感受性の向上、ならびに（8）II型糖尿病患者のインスリン要求の低下。
【００６５】
実施例8 -多嚢胞性卵巣症候群の処置のためのポト多糖調節物の使用
多嚢胞性卵巣症候群（POS）患者を特定した後、該患者を以下のように処置する。ポト多糖を、αリポ酸もしくはαトコフェロールまたはその両方の存在下で配合する。配合されたポト多糖を90重量％の不活性バインダー物質に添加し、これを毎日2回（1日2回）、錠剤、カプセル剤または液剤の形態で経口非経口経路により投与する。1ヶ月の課程の中で最初に最大濃度のポト多糖を1日2回投与する。良好な結果の尺度は、以下のものを含む：（1）正常な生殖機能の回復、（2）正常な卵胞成熟化の回復、（3）正常な空腹時血糖レベルの回復、（4）有意な体重減少およびBMIの低下、（5）血清LDL/HDL比の改善、（6）血清トリグリセリド濃度の低下、（7）遊離脂肪酸の血清濃度の低下、（8）収縮期および拡張期の血圧の低下、（9）インスリン感受性の向上、ならびに（10）II型糖尿病を併発しているPOS患者のインスリン要求の低下。
【００６６】
その他の態様
本発明はその詳細な説明に関連づけて説明されているが、上記の説明は例示を意図したものであり本発明の範囲を限定することは意図されておらず、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によって定義される。他の局面、利点および改変も、添付の特許請求の範囲に包含される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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