(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）少なくとも２×１０９ｐｆｕ／ｍｌのパルボウイルスＨ１（Ｈ−１ＰＶ）、又は、ＬｕＩＩＩ、マウス微小ウイルス（ＭＭＶ）、マウスパルボウイルス（ＭＰＶ）、ラット微小ウイルス（ＲＭＶ）、ラットパルボウイルス、及び、ラットウイルス（ＲＶ）からなる群から選択される関連するげっ歯類パルボウイルスと、（ｂ）４０〜５０％のイオジキサノール（ｗ／ｖ）、０．７〜０．９ｍｍｏｌのＣａＣｌ２×２Ｈ２Ｏ、５０〜６０ｍｍｏｌのＮａＣｌ、０．９〜１．２ｍｍｏｌのＫＣｌ、０．７〜０．９５ｍｇ／ｍｌのトロメタミン、及び、０．０５〜０．１５ｍｇ／ｍｌのエデト酸カルシウム二ナトリウムを含有する薬剤的に許容される担体、とを含む医薬組成物。
【請求項２】
前記薬剤的に許容される担体が、４８％のイオジキサノール（ｗ／ｖ）、０．８１ｍｍｏｌのＣａＣｌ２×２Ｈ２Ｏ、５２．８０ｍｍｏｌのＮａＣｌ、１．０６ｍｍｏｌのＫＣｌ、０．８８ｍｇ／ｍｌのトロメタミン、及び、０．０７ｍｇ／ｍｌのエデト酸カルシウム二ナトリウムを含有する請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記パルボウイルスの濃度が、２×１０９ｐｆｕ／ｍｌ〜１×１０１０ｐｆｕ／ｍｌである請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
腫瘍内注射、又は、静脈内注射による腫瘍の治療で使用するための請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記腫瘍が、脳腫瘍、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、頭頚部がん、乳がん、又は、結腸がんである請求項４に記載の使用のための請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、パルボウイルスが、４０〜５０％のイオジキサノール（ｗ／ｖ）、０．７〜０．９ｍｍｏｌのＣａＣｌ２×２Ｈ２Ｏ、５０〜６０ｍｍｏｌのＮａＣｌ、０．９〜１．２ｍｍｏｌのＫＣｌ、０．７〜０．９５ｍｇ／ｍｌのトロメタミン及び０．０５〜０．１５ｍｇ／ｍｌのエデト酸カルシウム二ナトリウムを含有する薬剤的に許容される担体中、少なくとも１×１０９ｐｆｕ／ｍｌの濃度で存在するパルボウイルス製剤に関する。前記担体は３７℃〜４０℃で３〜５ｍＰａ・ｓの粘度を有する。
【背景技術】
【０００２】
がんは世界的に死亡原因の第２位である。男性の半数そして女性の３分の１が生涯の間に何らかの形のがんと診断されると推定されている。さらに、がんは主に老化の疾患であるので、世界でがんの死亡者数は、高齢者の割合が増加するために２００７年から２０３０年までに約４５％（７９０万人から１１５０万人の死亡者）増加すると予測される（ＷＨＯ推計、２００８年）。がんはもっとも費用のかかる疾患でもある。国立がん研究所の最新の推計では、米国における２００７年のがんの全体的な経済コストは２２６８億ドルであることが示されたが、より効果的な予防的介入、早期発見及びより効率的な治療法が開発されない限り、このすでに膨大な経済的負担は次の２０年でさらに増大すると予想される。米国、及び、欧州における過去３０年にわたるがんの五年生存率の上昇によって証明されるような、多くの形態のがんの予防、検出、診断、及び、治療における大幅な進歩にもかかわらず、膵臓、肝臓、肺、脳などのいくつかの腫瘍のタイプは有効な治療がなされないままで、新しい治療選択肢の開発が望まれている。正常細胞を残しつつがん細胞を死滅させるがん特異的脆弱性を利用する腫瘍溶解性ウイルスが、がんと闘うための有望なツールとして急浮上している。１２以上の異なる腫瘍溶解性ウイルスの、単独又は他の抗がん剤と組み合わせて用いる、様々な悪性腫瘍に対する第Ｉ相〜第ＩＩＩ相臨床試験が行われている。中でも、前記腫瘍溶解性ラットパルボウイルスＨ−１ＰＶが現在、再発性多形性膠芽腫（ＧＢＭ）の患者において第Ｉ／ＩＩａ相臨床試験で安全性、及び、有効性の最初の兆候について評価されている（ＧＥＬＥＴＮＥＫＹｅｔ ａｌ, ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ, ２０１２, ｐｐ.９９（非特許文献１））。
【０００３】
Ｈ−１ＰＶは、５．１ｋｂの長さの一本鎖ＤＮＡゲノムを含む小さな（直径約２５ｎｍ）非エンベロープ二十面体粒子である。Ｈ−１ＰＶの前記ゲノム機構はＰ４早期プロモータ、及び、Ｐ３８後期プロモータの二個のプロモータの制御下の二個の転写単位からなる。Ｐ４は、非構造（ＮＳ）タンパク質（ＮＳ１及びＮＳ２）をコード化する遺伝子の発現を調節し、前記Ｐ３８はカプシド（ＶＰ）タンパク質（ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３）をコード化する遺伝子を調節する。前記ウイルスは、急速に分裂するがん細胞において優先的に増殖する。この腫瘍選択性はがん性細胞による前記ウイルスのより良好な吸収に基づくのではなく、むしろがん細胞が、ウイルスＤＮＡ複製に必要なサイクリンＡ、Ｅ２Ｆ、又は、ＣＲＥＢ／ＡＴＦなどの因子を過剰発現するという事実による。パルボウイルス及び化学療法又はＨＤＡＣ阻害剤とのその組み合わせを使用するがん治療が最近記載された（国際公開公報２００９／０８３２３２  Ａ１、国際公開公報２０１１／１１３６００  Ａ１）。
【０００４】
腫瘍溶解性ウイルスの注射又は注入による腫瘍の局所治療のありがちな１つの問題は、接種材料の標的分布及び活性物質の損失である。特に、カテーテルを使用する場合、前記分布は、組織を通る前記カテーテルの進路に沿って抵抗が減少する領域のためにカテーテルトラックに沿って起こる。この現象はバックフローとしても知られる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開公報２００９／０８３２３２  Ａ１
【特許文献２】国際公開公報２０１１／１１３６００  Ａ１
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ＧＥＬＥＴＮＥＫＹ ｅｔ ａｌ, ＢＭＣ Ｃａｎｃｅｒ, ２０１２, ｐｐ.９９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
したがって、投与時にバックフローの前記問題の悪影響を受けず、少なくとも１２ヶ月の貯蔵期間、高温条件下でも数日間、そしてＵＶ治療中に安定な医薬組成物を提供することを本発明の目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明によると、これは特許請求の範囲によって定義される主題により達成される。
【０００９】
したがって、本発明は、（ａ）少なくとも１×１０９ｐｆｕ／ｍｌの濃度のパルボウイルスＨ１（Ｈ−１ＰＶ）、又は、ＬｕＩＩＩ、マウス微小ウイルス（ＭＭＶ）、マウスパルボウイルス（ＭＰＶ）、ラット微小ウイルス（ＲＭＶ）、ラットパルボウイルス、及び、ラットウイルス（ＲＶ）からなる群から選択される関連するげっ歯類パルボウイルスと、（ｂ）４０〜５０％のイオジキサノール（ｗ／ｖ）、０．７〜０．９ｍｍｏｌのＣａＣｌ２×２Ｈ２Ｏ、５０〜６０ｍｍｏｌのＮａＣｌ、０．９〜１．２ｍｍｏｌのＫＣｌ、０．７〜０．９５ｍｇ／ｍｌのトロメタミン、及び、０．０５〜０．１５ｍｇ／ｍｌのエデト酸カルシウム二ナトリウムを含む薬剤的に許容される担体、とを含む医薬組成物を提供する。前記薬剤的に許容される担体は３７〜４０℃で３〜５ｍＰａ・ｓの粘度を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】４８％Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ／Ｒｉｎｇｅｒ液中のＨ−１ＰＶは、ランダム拡散の兆候なしにカテーテルの先端のまわりの接種材料の標的分布を示す。
【図２】Ｈ−１ＰＶは４８％Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ／Ｒｉｎｇｅｒ製剤中で２４ヶ月を越えて安定である。
【図３】４８％Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ／Ｒｉｎｇｅｒ製剤中の島状Ｈ−１ＰＶ粒子を示す電子顕微鏡写真である。ａ）Ｈ−１ＰＶチャージ１、ｂ）Ｈ−１ＰＶチャージ２
【図４】臨床試験設計を示す。
【図５】イオジキサノール／Ｒｉｎｇｅｒ液［２６．３８％Ｒｉｎｇｅｒ液と混合した７３．６２％Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（商標）３２０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）］中のウイルス濃度を示す。
【図６】高温でのイオジキサノール／Ｒｉｎｇｅｒ液中のＨ−１ＰＶの処理を示す。
【図７Ａ】二種のイオジキサノール／Ｒｉｎｇｅｒ液（Ａ、Ｂ）及びＴｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝液（Ｃ）中のＨ−１ＰＶのＵＶ処理を示す。
【図７Ｂ】二種のイオジキサノール／Ｒｉｎｇｅｒ液（Ａ、Ｂ）及びＴｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝液（Ｃ）中のＨ−１ＰＶのＵＶ処理を示す。
【図７Ｃ】二種のイオジキサノール／Ｒｉｎｇｅｒ液（Ａ、Ｂ）及びＴｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝液（Ｃ）中のＨ−１ＰＶのＵＶ処理を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
したがって、本発明は、（ａ）少なくとも１×１０９ｐｆｕ／ｍｌの濃度の、パルボウイルスＨ１（Ｈ−１ＰＶ）、又は、ＬｕＩＩＩ、マウス微小ウイルス（ＭＭＶ）、マウスパルボウイルス（ＭＰＶ）、ラット微小ウイルス（ＲＭＶ）、ラットパルボウイルス、及び、ラットウイルス（ＲＶ）からなる群から選択される関連するげっ歯類パルボウイルスと、（ｂ）３７〜４０℃で３〜５ｍＰａ・ｓの粘度を有し、４０〜５０％のイオジキサノール（ｗ／ｖ）、０．７〜０．９ｍｍｏｌのＣａＣｌ２×２Ｈ２Ｏ、５０〜６０ｍｍｏｌのＮａＣｌ、０．９〜１．２ｍｍｏｌのＫＣｌ、０．７〜０．９５ｍｇ／ｍｌのトロメタミン、及び、０．０５〜０．１５ｍｇ／ｍｌのエデト酸カルシウム二ナトリウムを含む薬剤的に許容される担体、とを含む医薬組成物を提供する。
【００１２】
「パルボウイルス」という用語は、本明細書中で使用する場合、野生型又はその改変型レプリケーションコンピテント誘導体を含む。パルボウイルスを能動的に産生するために使用でき、治療に有用な、適当な改変型パルボウイルスは、必要以上の実験を行うことなく本明細書中の開示に基づいて当該技術分野の技能範囲内で容易に決定可能である。
【００１３】
本発明によると前記組成物の前記パルボウイルスは、パルボウイルスＨ１（Ｈ１ＰＶ）、又は、関連するパルボウイルス、例えばＬｕＩＩＩ、マウス微小ウイルス（ＭＭＶ）、マウスパルボウイルス（ＭＰＶ）、ラット微小ウイルス（ＲＭＶ）、ラットパルボウイルス（ＲＰＶ）、若しくは、ラットウイルス（ＲＶ）を含む。
【００１４】
本発明によると、パルボウイルスは、１×１０９ｐｆｕ／ｍｌ以上の濃度で、４０〜５０％のイオジキサノール（ｗ／ｖ）、０．７〜０．９ｍｍｏｌのＣａＣｌ２×２Ｈ２Ｏ、５０〜６０ｍｍｏｌのＮａＣｌ、０．９〜１．２ｍｍｏｌのＫＣｌ、０．７〜０．９５ｍｇ／ｍｌのトロメタミン、及び、０．０５〜０．１５ｍｇ／ｍｌのエデト酸カルシウム二ナトリウムを含む薬剤的に許容される担体と組み合わせて有効用量で存在する。特に、前記担体は、４５〜４９％のイオジキサノール（ｗ／ｖ）、０．７５〜０．８５ｍｍｏｌのＣａＣｌ２×２Ｈ２Ｏ、５０〜５５ｍｍｏｌのＮａＣｌ、０．９５〜１．１ｍｍｏｌのＫＣｌ、０．８〜０．９ｍｇ／ｍｌのトロメタミン、及び、０．０５〜０．１０ｍｇ／ｍｌのエデト酸カルシウム二ナトリウムを含む。最も好ましい実施形態では、前記担体は４８％のイオジキサノール（ｗ／ｖ）、０．８１ｍｍｏｌのＣａＣｌ２×２Ｈ２Ｏ、５２．８０ｍｍｏｌのＮａＣｌ、１．０６ｍｍｏｌのＫＣｌ、０．８８ｍｇ／ｍｌのトロメタミン、及び、０．０７ｍｇ／ｍｌのエデト酸カルシウム二ナトリウムを含む。
【００１５】
「薬剤的に許容される」とは、活性成分の生物活性の有効性を妨げず、投与される患者に対して有毒でない任意の担体を包含することを意味する。前記定義の担体組成物に加えて、本発明に係る医薬製剤はさらなる医薬担体を含んでもよい。好適なさらなる医薬担体の例は当該技術分野で周知であり、マンニトール、ソルビトール、グルコース、又は、スクロースが挙げられる。そのような担体は従来の方法によって処方することができる。
【００１６】
「有効量」とは、疾患の経過、及び、重症度に影響を及ぼし、そのような病状の軽減、又は、緩和をもたらすために十分な活性成分の量を指す。これらの疾患又は障害を治療、及び／又は、予防するために有用な「有効量」は、当業者に公知の方法を用いて決定することができる。加えて、製剤の保存安定性を確実にするために、活性成分、すなわち前記パルボウイルスは、少なくとも１×１０９ｐｆｕ／ｍｌ、特に少なくとも５×１０９ｐｆｕ／ｍｌ、１×１０１０ｐｆｕ／ｍｌ、又は、１×１０１１ｐｆｕ／ｍｌの濃度で存在しなければならない。好ましい実施形態において、前記濃度は、１×１０９ｐｆｕ／ｍｌ〜１×１０１０ｐｆｕ／ｍｌ、特に１×、２×、３×、４×、５×、６×、７×、８×、又は、９×１０９ｐｆｕ／ｍｌである。別の好ましい実施形態では、前記濃度は、１×１０１０ｐｆｕ／ｍｌ〜１×１０１１ｐｆｕ／ｍｌ、特に１×、２×、３×、４×、５×、６×、７×、８×、又は、９×１０１０ｐｆｕ／ｍｌである。
【００１７】
本発明によると、前記担体の粘度は３７〜４０℃で３．５〜４．５ｍＰａ・ｓである。さらに好ましいのは前記担体の前記粘度が４〜５ｍＰａ・ｓである担体である。なお一層好ましいのは、約４．５ｍＰａ・ｓの粘度を有する担体である。この粘度は血液の粘度に類似している（Ｒｏｓｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ４２：８，  ｐｐ．  １１８９−１１９５  （１９９６）；ｈｔｔｐ：ｗｗｗ．ｕｃｋｅ．ｄｅ／ｃｈｒｉｓｔｉａｎ／ｐｈｙｓｉｋ／ｍｅｄｐｒａｋ／Ｖｉｓｋｏｓｉｔａｅｔ．ｐｄｆ：ｐａｇｅ  ８４，  Ｔａｂｌｅ２）。
【００１８】
本発明の好適な実施形態によると、前記担体は、７３．６２％ＶＩＳＩＰＡＱＵＥ（商標）３２０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を２６．３８％Ｒｉｎｇｅｒ液と混合することによって調製されるＲｉｎｇｅｒ液中イオジキサノールである。Ｒｉｎｇｅｒ液と混合した後の前記イオジキサノール濃度が４８％となるように、ＶＩＳＩＰＡＱＵＥ（商標）３２０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）は６５２ｍｇ／ｍｌのイオジキサノール（＝６５．２％のイオジキサノール）を含有する。「イオジキサノール」は「ＶＩＳＩＰＡＱＵＥ」（ヒト注射に使用するため）、又は、「イオジキサノラム（Ｉｏｄｉｘａｎｏｌｕｍ）」（研究等級）の同義語である。化学構造は
【化１】
0006423113.tif 000002
である。
【００１９】
ＩＵＰＡＣ名は、５−［アセチル−［３−［Ｎ−アセチル−３，５−ビス（２，３−ジヒドロキシプロピルカルバモイル）２，４，６，−トリヨードアニリノ］２−ヒドロキシプロピル］アミノ］−１−Ｎ，３，Ｎ−ビス（２，３−ジヒドロキシプロピル）−２，４，６−トリヨードベンゼン−１，３−ジカルボキサミドである。ＣＡＳ番号は９２３３９-１１−２である。それは、ＣＴイメージング用の周知の造影剤でもある。
【００２０】
投与は、様々な方法で、例えば、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、皮内、又は、腫瘍内投与によって実施することができる。投与経路は、もちろん、治療の種類、及び、前記医薬組成物中に含まれる化合物の種類に左右される。好ましい投与経路は腫瘍内、又は、静脈内投与である。投薬レジメンは、患者のデータ、観察結果、及び、例えば、前記患者の体格、体表面積、年齢、性別を含む他の臨床学的因子、投与される特定のパルボウイルス、細胞など、投与時間、及び、経路、前記腫瘍タイプ、及び、特徴、前記患者の全体的な健康、及び、前記患者が受ける他の薬物療法に基づいて担当医が当該技術分野の技能範囲内で容易に決定可能である。
【００２１】
本発明の医薬組成物は、任意の腫瘍タイプ、特に（限定されないが）脳腫瘍（例えば神経膠腫、及び、膠芽細胞腫）、膵臓がん、子宮頸がん、肺がん、頭頚部がん、乳がん、又は、結腸がんの治療に有用である。
【００２２】
本発明に係る医薬組成物によって治療可能な患者には、ヒトならびに非ヒト動物が含まれる。後者の例としては、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、イヌ、及び、ネコなどの動物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２３】
実施例１に示すような臨床データから、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ４８％の使用によって、（ｉ）ＣＴによる接種材料の明瞭な視覚化、（ｉｉ）より高い粘度の結果としての正確な局所的送達、及び、（ｉｉｉ）手動注射を使用し、延長、及び、自動化注射、例えば対流強化送達法（Ｃｏｎｖｅｃｔｉｏｎ―Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：ＣＥＤ）を使用しなかった場合でもバックフローが存在しないことが可能になると結論づけることができる。この有益な分布パターンは水溶液と比較してＶｉｓｉｐａｑｕｅ４８％の異なる物理的特性によるものである可能性が最も高い。屈折率１．４１のＲｉｎｇｅｒ液中のＶｉｓｐａｑｕｅ４８％は３７℃で４ｍＰａ・ｓの粘度を有し、３７℃の水は約０．７ｍＰａ・ｓの粘度を有する。３７℃でのヒト血液は３〜５ｍＰａ・ｓの粘度を有する。したがって、注射製剤は血液に近く、これは血液の生理値を意味する。
【００２４】
本発明者らは、ウイルス濃度が前記製剤の安定性に対して影響を及ぼすことを見出した（図５）。少なくとも１２ヶ月の保存安定性を確実にするために、前記ウイルス濃度は、７３．６２％（ｗ／ｖ）ＶＩＳＩＰＡＱＵＥ（商標）３２０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を２６．３０％（ｗ／ｖ）Ｒｉｎｇｅｒ液と混合することによって得られた４８％イオジキサノール／Ｒｉｎｇｅｒ液中、少なくとも１×１０９ｐｆｕ／ｍｌでなければならない。得られた溶液は、４８％のイオジキサノール（ｗ／ｖ）、０．８１ｍｍｏｌのＣａＣｌ２×２Ｈ２Ｏ、５２．８０ｍｍｏｌのＮａＣｌ、１．０６ｍｍｏｌのＫＣｌ、０．８８ｍｇ／ｍｌのトロメタミン、及び、０．０７ｍｇ／ｍｌのエデト酸カルシウム二ナトリウムを含む。
【００２５】
好ましい実施形態において、保存安定性は少なくとも１８ヶ月、少なくとも２４ヶ月、少なくとも３０ヶ月、少なくとも３６ヶ月、又は、さらには４８ヶ月までである。
【００２６】
図６及び７から結論づけることができるように、４８％イオジキサノール／Ｒｉｎｇｅｒ液中のウイルスは、温度上昇及び紫外線放射後でさえも数日間活性なままである。
【実施例】
【００２７】
以下の実施例は本発明をさらに詳細に説明する。
【００２８】
実施例１．Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ４８％はバックフローを回避する。
再発性悪性神経膠腫に罹っている１８人の患者に関する第Ｉ／ＩＩａ相臨床試験を開始した。この試験は、パルボウイルスＨ−１の安全性、生体内分布、最大耐量、及び、抗腫瘍活性の兆候を調査することを目的とする。前臨床データによると、パルボウイルスは腫瘍内ウイルス適用だけでなく静脈内治療も含む。
【００２９】
４８％Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ中のパルボウイルスＨ−１（ＧＭＰ等級調製物）の前記適用は、１２人（Ｉ群）及び６人の患者（ＩＩ群）の二群で実施した。投与経路は１群と２群との間で異なる（図４）。
【００３０】
各群内で、投与様式は同じであるが、用量制限事象が観察されない場合は用量を増加させる。Ｉ群では、前記パルボウイルスＨ−１（「治験薬」；ＩＭＰとも呼ばれる）を四種の用量レベルで投与し、ＩＩ群では二種の用量レベルで投与した（表１）。
【００３１】
【表１】
0006423113.tif 000003
【００３２】
１群では、１日目に腫瘍組織中への画像誘導注射によってＩＭＰを患者に投与した。この日に、患者に意図する全用量の５０％を注射する。９日間の観察期間の後、前記腫瘍を１０日目に切除した。腫瘍除去後、前記用量の残り半分を直接注射によって切除空隙の壁中に投与した。直視下手術中のこの注射で、ＩＭＰの前記投与を完了し、追加のウイルス適用は実施しなかった。
【００３３】
２群において、ＩＭＰの初回投与は静脈内経路によるものであった。１〜５日に５回の注入によって意図する用量の５０％を対象に投与し、各注入は全用量の１０％を含んでいた。５日目の最後の注入後、９日目まで観察期間があり、１０日目に腫瘍切除を１群と同様に実施した。１群と同様に、患者に腫瘍除去後に腫瘍空隙を取り囲む組織中に注射により前記用量の残り半分を投与し、前記試験の過程において各個人にさらなるウイルス注射は実施しなかった。
【００３４】
腫瘍切除後、ウイルスを前記腫瘍空隙の壁に再適用した。
【００３５】
図１で示すように、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ４８％（ＶＩＳＩＰＡＱＵＥ（商標）３２０、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｇｅｒｍａｎｙ）及びＲｉｎｇｅｒ液（ＩＤＴ  Ｂｉｏｌｏｇｉｋａ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）の担体溶液としての使用の結果、１２人の患者すべてにおいて顕著なバックフローは起こらなかった。ＣＴを注射完了後３０分以内に実施した。注射量は挿入したカテーテルあたり０．５ｍｌ〜１．２ｍｌであった（三人の患者は二本のカテーテルで処置した）。前記注射はカテーテルあたり３０分の期間にわたって手作業で実施し、前記カテーテルの端部で一つの開口部を有する嚢胞穿刺用標準的カテーテルをすべての場合で使用した。図１はさらに、ランダム拡散の兆候なしに前記カテーテルの先端の周りの接種材料の標的分布も示す。
【００３６】
この臨床データから、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ４８％の使用によって、（ｉ）ＣＴによる接種材料の明瞭な視覚化、（ｉｉ）より高い粘度の結果としての正確な局所送達、及び、（ｉｉｉ）手動注射を使用し、長期、及び、自動注射、例えば対流強化送達（ＣＥＤ）を使用しなかった場合でも、バックフローは存在しないことが可能になると結論づけることができる。この有益な分布パターンは水溶液と比べてＶｉｓｉｐａｑｕｅ４８％の異なる物理的特性によるものである可能性が最も高い。屈折率１．４１のＲｉｎｇｅｒ液中のＶｉｓｐａｑｕｅ４８％は３７℃で４ｍＰａ・ｓの粘度を有し、水は３７℃で約０．７ｍＰａ・ｓの粘度を有する。３７℃のヒト血液は約４．５ｍＰａ・ｓの粘度を有する。したがって、前記注射製剤は血液に近く、これは血液の生理値を意味する。
【００３７】
実施例２．安定性
Ｈ−１ＰＶウイルス（７３．６２％（ｗ／ｖ）ＶＩＳＩＰＡＱＵＥ（商標）３２０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を２６．３０％（ｗ／ｖ）Ｒｉｎｇｅｒ液（Ｄｅｌｔａ  Ｓｅｌｅｃｔ  ＧｍｂＨ，  Ｄｒｅｉｅｉｃｈ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）と混合することにより得られる４８％イオジキサノール／Ｒｉｎｇｅｒ液中−２０℃、又は、≦−６０℃で保存）は、プラーク形成単位（ＰＦＵ）で測定される活性において２年を越えて安定である。プラークアッセイは、本質的にＴａｔｔｅｒｓａｌｌａｎｄ Ｂｒａｔｔｏｎ（Ｊ. Ｖｉｒｏｌ. ４６ （１９８３）, ９４４−５５）によって記載されている通りに実施した。ＮＢ−３２４Ｋ細胞を、５％のＦＢＳ、１００μｇ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、及び、２ｍＭのＬ−グルタミンを含有するＭＥＭ培地中の単層培養で増殖させた。それらをＨ−１ＰＶの段階希釈で６０％コンフルーエンスにて感染させ、１時間３７℃にてインキュベートした。次いで接種材料をバクト−アガーオーバーレイ（５％ＦＢＳを含有するＭＥＭ中１．７％）と置換した。感染後４日目に、バクト−アガー（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を含有する０．０２％のトルイレンレッド染色液（Ｓｉｇｍａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を添加することによって生細胞を１８〜２４時間染色した。ディッシュを３７℃にて５％ＣＯ２下でインキュベートした。プラーク形成単位を感染後５日間ライトボックス上で計数し、それらの濃度をＰＦＵ／ｍｌで表した。
【００３８】
結果を図５に示す。１×１０８ｐｆｕ／ｍｌ未満のウイルス濃度は、４８％イオジキサノール／Ｒｉｎｇｅｒ液中では約１×１０９、又は、１×１０１０ｐｆｕ／ｍｌのより高いウイルス濃度よりも不安定であることがわかる。
【００３９】
実施例３．島状Ｈ−１ＰＶ粒子：電子顕微鏡写真は、Ｈ−１ＰＶウイルスが本発明による製剤中で凝集しないことを示す。
ウイルス製剤の定性分析のために、電子顕微鏡写真を撮影した。このために、５μｌのウイルス懸濁液をすぐに使用できる炭素コーティングされた銅格子に添加し、二分間インキュベートした。前記格子を次いで５μｌのビデスト水（ｂｉｄｅｓｔｗａｔｅｒ）で洗浄し、２％の酢酸ウラニルで３０秒間コーティングした。前記格子からＷｈａｔｍａｎ５０濾紙で液滴を吸収し、前記格子を約一分間乾燥した。Ｚｅｉｓｓ透過型電子顕微鏡を用いて２０，１００×の倍率で写真を撮影した。
【００４０】
実施例４．温度上昇の４８％Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ／Ｒｉｎｇｅｒ液中のＨ−１ＰＶに対する影響
パラメータ：
容積：１００μｌ
バイアル：５００μｌスクリューキャップ
温度：３７℃、５０℃
インキュベーション時間：１時間、４時間
さらなる保存：４℃
濃度  Ｈ−１ＰＶ：２，３×１０１０ｐｆｕ／ｍｌ：
【００４１】
【表２】
0006423113.tif 000004
【００４２】
結果を図６に示す。 
図６は、３７℃、及び、５０℃での処理の１〜４時間後にウイルスが依然として生きていることを示す。４℃で４週間後でさえＨ−１ＰＶは安定である。
【００４３】
実施例５．４８％Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ／Ｒｉｎｇｅｒ液中のＨ−１ＰＶに対する紫外線放射の影響
Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（４８％イオジキサノール）／Ｒｉｎｇｅｒ液、及び、Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（２４％イオジキサノール）／Ｒｉｎｇｅｒ液中のＨ−１ＰＶのＵＶ不活性化
【００４４】
【表３】
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【００４５】
結果を図７に示す。Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（４８％イオジキサノール）／Ｒｉｎｇｅｒ液中のＨ−１ＰＶウイルスは前記製剤によりＵＶ治療から保護される。Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ（２４％イオジキサノール）／Ｒｉｎｇｅｒ液中の前記ウイルスの安定性はＵＶ治療後に半対数減少を示す。水性製剤（Ｔｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝液＝ＶＴＥ）中で前記ウイルスを不活性化することができた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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