(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｉ）急性炎症期に有効な少なくとも１つの急速に送達される化合物と、
ｉｉ）再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物を含む徐放性製剤と
を有するゲルの相を備え、
前記再狭窄の初期段階の急性炎症期に有効な少なくとも１つの急速に送達される化合物は、
アスピリン、ニトロアスピリン、キマーゼ阻害剤、スラミン、メチルアミノクロマン、スーパーオキシドジスムターゼ、Ｌアルギニン、スペルミン／ＮＯ、マリマスタット、ドキシサイクリン、カルシウムチャンネルブロッカー、ペリリルアルコール、ＢＳＦ３０２１４６（ＥＴＡ）、Ｌ−１５８，８０９（アンジオテンシンＩＩ）、アトルバスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、
またはこれらの２または複数から成る組み合わせから成る群の中から選択され、
前記再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物は、
３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、分裂阻害剤、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択される、
再狭窄の治療および／または予防を必要とする被験者での、
それら治療および／または予防に用いられる医薬製剤。
【請求項２】
前記徐放性製剤は、ミクロ球体またはナノ球体の形態である、
請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項３】
前記徐放性製剤は、生体適合性生分解性高分子である、
請求項１または２に記載の医薬製剤。
【請求項４】
前記生体適合性生分解性高分子は、
ポリラクチド、ポリラクチドの共重合体、ポリグリコリド、ポリグリコリドの共重合体、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）共重合体、ポリ乳酸、ポリ乳酸の共重合体、ポリグリコール酸、ポリグリコール酸の共重合体、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）共重合体、ポリカプロラクトン、ポリカプロラクトンの共重合体、ポリカーボネート、ポリカーボネートの共重合体、ポリエステルアミド、ポリエステルアミドの共重合体、ポリ酸無水物、ポリ酸無水物の共重合体、ポリアミノ酸、ポリアミノ酸の共重合体、ポリオルトエステル、ポリオルトエステルの共重合体、ポリシアノアクリレート、ポリシアノアクリレートの共重合体、ポリ（ｐ−ジオキサノン）、ポリ（ｐ−ジオキサノン）の共重合体、ポリアルキレンオキサラート、ポリアルキレンオキサラートの共重合体、
またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択される、
請求項３に記載の医薬製剤。
【請求項５】
前記ゲルは、ヒドロゲルである、
請求項１から４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項６】
前記ヒドロゲルは、ヒアルロン酸またはその複数の塩の１つから成る、
請求項５に記載の医薬製剤。
【請求項７】
前記ヒアルロン酸またはその複数の塩の１つは、
架橋されている、
または実質的に架橋されている、
請求項６に記載の医薬製剤。
【請求項８】
前記３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡ還元酵素阻害剤は、
アトルバスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、
またはこれらの１または複数から成る組み合わせを含む群から選択されるスタチンである、
請求項１から７のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項９】
再狭窄の発生の後期に有効な前記少なくとも１つの化合物は、
パクリタキセル、シロリムス、ｃ−ｍｙｃアンチセンスｃ−ｆｏｓ＋ｃ−ｊｕｎアンチセンス、ＰＣＮＡアンチセンス、ＮＦカッパＢデコイ、Ｅ２Ｆデコイ、
またはこれらの１または複数から成る組み合わせを含む群から選択される
分裂阻害剤である、
請求項１から７のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
前記再狭窄は、
切開による外科的な血管新生に続く、
請求項１から９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
ｉ）急性炎症期に有効な少なくとも１つの急速に送達される化合物と、
ｉｉ）再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物を含む徐放性製剤と
を含むゲルの相を有し、
前記再狭窄の初期段階の急性炎症期に有効な少なくとも１つの急速に送達される化合物は、
アスピリン、ニトロアスピリン、キマーゼ阻害剤、スラミン、メチルアミノクロマン、スーパーオキシドジスムターゼ、Ｌアルギニン、スペルミン／ＮＯ、マリマスタット、ドキシサイクリン、カルシウムチャンネルブロッカー、ペリリルアルコール、ＢＳＦ３０２１４６（ＥＴＡ）、Ｌ−１５８，８０９（アンジオテンシンＩＩ）、アトルバスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、シンバスタチン、
またはこれらの２または複数から成る組み合わせから成る群の中から選択され、
再狭窄の発生の後期に有効な前記少なくとも１つの化合物は、
３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、分裂阻害剤、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択される、
再狭窄の治療および／または予防を必要とする被験者での、
それら治療および／または予防に用いられる医薬製剤を備える、
再狭窄の治療および／または予防のためのキット。
【請求項１２】
前記徐放性製剤は、生体適合性生分解性高分子であり、
前記生体適合性生分解性高分子は、
ポリラクチド、ポリラクチドの共重合体、ポリグリコリド、ポリグリコリドの共重合体、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）共重合体、ポリ乳酸、ポリ乳酸の共重合体、ポリグリコール酸、ポリグリコール酸の共重合体、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）共重合体、ポリカプロラクトン、ポリカプロラクトンの共重合体、ポリカーボネート、ポリカーボネートの共重合体、ポリエステルアミド、ポリエステルアミドの共重合体、ポリ酸無水物、ポリ酸無水物の共重合体、ポリアミノ酸、ポリアミノ酸の共重合体、ポリオルトエステル、ポリオルトエステルの共重合体、ポリシアノアクリレート、ポリシアノアクリレートの共重合体、ポリ（ｐ−ジオキサノン）、ポリ（ｐ−ジオキサノン）の共重合体、ポリアルキレンオキサラート、ポリアルキレンオキサラートの共重合体、
またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択される、
請求項１１に記載の再狭窄の治療および／または予防のためのキット。
【請求項１３】
前記ゲルは、ヒドロゲルであり、
前記ヒドロゲルは、ヒアルロン酸またはその複数の塩の１つから成る、
請求項１１または１２に記載の再狭窄の治療および／または予防のためのキット。
【請求項１４】
前記３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡ還元酵素阻害剤は、
アトルバスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、ロバスタチンシンバスタチン、
またはこれらの１または複数から成る組み合わせを含む群から選択されるスタチンである、
請求項１１から１３のいずれか１項に記載の再狭窄の治療および／または予防のためのキット。
【請求項１５】
再狭窄の発生の後期に有効な前記少なくとも１つの化合物は、
パクリタキセル、シロリムス、ｃ−ｍｙｃアンチセンスｃ−ｆｏｓ＋ｃ−ｊｕｎアンチセンス、ＰＣＮＡアンチセンス、ＮＦカッパＢデコイ、Ｅ２Ｆデコイ、
またはこれらの１または複数から成る組み合わせを含む群から選択される
分裂阻害剤である、
請求項１１から１３のいずれか１項に記載の再狭窄の治療および／または予防のためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願発明は概して、再狭窄の治療および／または予防を必要とする被験者での、それら治療および／または予防に用いられる医薬製剤に関する。治療および／または予防の方法も提供される。
【背景技術】
【０００２】
グラフトを用いた身体部位または臓器への血液供給の改善として定義される切開による外科的な血管再生は、毎年世界中で３千万人を超える患者に対して実施されている。残念なことに、吻合部位における閉塞に繋がる狭窄症に主に起因して、５年以内に２０〜５０％の症例において移植不全が発生している［１］。
【０００３】
血管内への介入の場合、結果が期待出来るステントまたはプレーンバルーンなど管内の血管狭窄症を防ぐ医療機器が特定されてきている。しかし、切開による血管再生が必須であるとき、局所的な薬物送達のために利用可能な設計はない。現在の切開による血管再生後の治療は、副作用のリスクを伴う活性化合物の繰り返しの経口服用を含む。
【０００４】
狭窄症の発生を避けることにより再潅流の可能性を高めるために、手術部位に適用される局所的な予防治療は、全身投与より安全であろうし、より効率的であろう。効率的であるために、局所的な治療は、投与部位に留まり、病理学の発達により明らかにされる最適なタイムスケジュールに従って薬物を送達する必要がある。この製剤は、薬物送達機器を取り除くための２回目の手術を避けるよう加水分解または酵素分解のいずれかを介して排除されるべく、生体適合性かつ生分解性である必要もある。さらに、それは少ない量、ヒトでは約５ｍｌで送達されるべきであり、グラフトまたは周囲組織に損傷を与えるべきではない。
【０００５】
投与の血管周囲の経路は動物のモデルで試験されているが、このアプローチの成功は限定的である。現在まで、臨床応用は市場でまだ利用可能ではない。成功がこのように限定的である理由は、実現可能性面での制約にある。切開による外科的な血管再生の後の再狭窄の予防治療のために生体適合性かつ生分解性の重合体を用いる、病理学の発達に適応した最適な薬物放出プロファイルを併せ持つ、長期の、患部における局所的な持久性を実現した製剤はこれまでない。
【０００６】
これらのゴールは、本願発明に係る、再狭窄の治療および／または予防を必要とする被験者での、それら治療および／または予防に用いられる医薬製剤を提供することにより本願発明において達成される。
【発明の概要】
【０００７】
本願発明は、
ｉ）急性炎症期に有効な少なくとも１つの急速に送達される化合物、または少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物と、
ｉｉ）再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物、または少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物を有する徐放性製剤と
を有するゲル相を備える、再狭窄の治療および／または予防を必要とする被験者での、それら治療および／または予防に用いられる医薬製剤を提供する。
【０００８】
ｉ）急性炎症期に有効な少なくとも１つの急速に送達される化合物、または少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物と、
ｉｉ）再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物を有する徐放性製剤と
を含むゲル相を有する医薬製剤を投与する段階を備える、再狭窄の治療および／または予防を必要とする被験者での、それら治療および／または予防の方法も開示される。
【０００９】
本願発明は、
ｉ）急性炎症期に有効な少なくとも１つの急速に送達される化合物、または少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物と、
ｉｉ）再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物、または少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物を含む徐放性製剤と
を含むゲル相を有する、再狭窄の治療および／または予防を必要とする被験者での、それら治療および／または予防に用いられる医薬製剤を備える、再狭窄の治療および／または予防のためのキットをさらに提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ＩＨの進行に従った、最適な放出動態プロファイルを有する本願発明の略図。急性炎症期に有効な、本願発明の急速に送達される化合物、またはその任意の活性代謝物は、ヒドロゲルに充填され、再狭窄の発生の初期の間に放出される。ヒドロゲルはその固有の粘性に起因して、必要とされる時間の間、薬物送達システムの局所化を確実にする。再狭窄の後期において活性であるミクロ球体に充填される本願発明の第２の化合物、またはその任意の活性代謝物は、持続するやり方で、この図においては例えば４週間までの間、放出される。
【図２】ＡＴＶを取り込んだヒドロゲルからの放出動態。異なる量（２．５μＭ、５μＭ、１０μＭ）のアトルバスタチン（ＡＴＶ）がヒドロゲルに取り込まれた。全てのサンプルに関して、ＡＴＶはヒドロゲルから１２時間以内に放出された。ヒドロゲルの保持効果は無視出来る程度であった。放出プロファイル間の有意差（ｔ検定、ｐ＞０．０５）は、３つの異なる濃度間で観察されなかった。
【図３】ヒドロゲルから放出されるＡＴＶは、ヒト血管平滑筋細胞（ｈＶＳＭＣ）の生存能力を低下させた。ＭＴＴ検定により評価されるｈＶＳＭＣの生存能力は、薬物が培地（培地）に直接加えられた場合も、ヒドロゲル（ゲル）により放出された場合も５〜１０μＭのＡＴＶにより実質的に低下させられた。この変化は、５μＭ（７２ｈ）よりも１０μＭのＡＴＶの存在下でより速かった（２４ｈ）。ＡＴＶの不在状態で培養されたそれぞれの細胞（対照）に対して＊Ｐ＜０．０５。
【図４】ＡＴＶを取り込んでいるヒドロゲルはｈＶＳＭＣの移動を低減させた。上側のパネル：初代ｈＶＳＭＣの移動度合いを、細胞を含まない間隙〜５００μｍ（線）を画定するシリコンカルチャーインサートを用いて評価した。対照条件（対照培地）で成長させられたｈＶＳＭＣはこの間隙に移動して約４８ｈでそれを満たした。この移動は、薬物が培地に直接加えられた場合も（ＡＴＶ培地）、ヒドロゲルにより放出された場合も（ＡＴＶゲル）、５および１０μＭのＡＴＶにより減少した。棒は８０μｍを表す。下側のパネル：細胞移動の阻害が５μＭのＡＴＶの存在下で３６ｈにおいて、培地に直接加えられた１０μＭのＡＴＶの存在下で既に２４ｈにおいて観察された（左側のパネル）。ｈＶＳＭＣの移動の同様の阻害は、ＡＴＶ充填ヒドロゲルを用いた場合に観察された（右側のパネル）。ＡＴＶの不在状態で培養された対照細胞に対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。
【図５】ＡＴＶを取り込んでいるヒドロゲルは遊出を低減させる。上側のパネル：ＡＴＶの存在下または不在状態でのｈＶＳＭＣの遊出を、変更が加えられたＢｏｙｄｅｎチャンバー法を用いて評価した。下側のパネル：遊出した細胞の定量的評価は、ｈＶＳＭＣの、培地内の、またはヒドロゲルから放出されたＡＴＶの存在下で遊出する能力の実質的な低下を示す。ＡＴＶの不在状態で培養された対照細胞に対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１。棒は、２０μｍを表す。
【図６】ｈＶＳＭＣの転写（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ）およびタンパク質の解析培地に直接加えられたＡＴＶの存在下でのｈＶＳＭＣの様々なｍＲＮＡレベルの測定を実施した。ＰＡＩ−１およびＭＭＰ２およびＣｘ４３  ｍＲＮＡレベルは低下し、他方、ｔＰＡおよびＨＭＯＸ転写は２４時間の培養の後に増加した。２４ｈ後にＡＴＶがヒドロゲルから放出されたとき実質的な変化は観察されなかった。対照的に、試験された遺伝子の同様の制御が、４８時間後にヒドロゲルから放出されたＡＴＶの存在下で観察された。ＡＴＶなしで培養された細胞（対照）に対して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、および＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図７】アトルバスタチン充填ＰＬＧＡミクロ球体およびそれらの断面の走査電子顕微鏡写真。ミクロ球体は球状であり、１０μｍの平均サイズを有していて平滑であり（左側のパネル）、中実の内部構造を有している（右側のパネル）。
【図８】累積的な（上側のパネル）、および非累積的な（下側のパネル）、ミクロ球体に充填されたＡＴＶ、および／またはゲルに取り込まれた自由なＡＴＶからのＡＴＶ放出。製剤内のＡＴＶの合計量は粒子およびゲルの充填を調節することにより１ｍｇ／ｍｌに一定に保たれた。専門用語：Ｇ−Ｍ＋：ヒドロゲルに取り込まれたＡＴＶ充填ミクロ球体。Ｇ＋Ｍ−：ヒドロゲルに取り込まれた自由なＡＴＶおよび薬物非含有ミクロ球体。Ｇ＋Ｍ＋：ヒドロゲルに取り込まれた自由なＡＴＶおよびＡＴＶ充填ミクロ球体。アトルバスタチンをカプセル化しているミクロ球体の存在により、製剤からの放出が実質的に遅められる。
【図９】内膜過形成（ＩＨ）の発生は、ヒドロゲルに取り込まれたＡＴＶ充填粒子および／または自由なＡＴＶの存在下で低減する。上側のパネル：ＣＡＬモデルに供されたＷＴマウスの頸動脈の代表的な断面の顕微鏡写真（Ｖｅｒｈｏｅｆｆ−ｖａｎ  Ｇｉｅｓｏｎエラスチン染色。拡大率×１０）。治療を受けていないマウスを対照として用いた。治療を受けた全てのマウスが、ヒドロゲル（Ｇ）および／またはミクロ球体（Ｍ）のいずれかに充填された状態（＋）、またはされていない状態（−）のＡＴＶを１ｍＭの一定の合計濃度で投与された。例えば、Ｇ＋Ｍ＋条件においてＧ＋＝５００μＭおよびＭ＋＝５００μＭ。他方、条件Ｇ−Ｍ＋において、Ｇ−：０ｍＭおよびＭ＋１ｍＭ。真ん中のパネル：予備結果は、ＷＴ対照マウスと比較して、術後Ｄａｙ１４およびＤａｙ２８において、ＡＴＶ充填ミクロ球体の治療を受けた動物において内膜の厚さが著しく減少したことを示している。下側のパネル：１４日（左側のパネル）および２８日（右側のパネル）における結紮部位からの異なる距離に関して示された内膜／中膜比（Ｉ／Ｍ）の定量的評価は、ＡＴＶ充填ミクロ球体１ｍＭの存在下で結紮後１４日および２８日において、対照と比較して、結紮された頸動脈の内膜／中膜比が結紮から０．５、１、１．５、および２ｍｍの部位において減少したことを示した。
【図１０】ＡＴＶ充填ミクロ球体からのＡＴＶのより長期的な放出動態このバッチのミクロ球体は、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−グリコリド）共重合体（Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０３）を用いて調製した。放出は５２日までの間、持続した。
【図１１】ヒドロゲルに取り込まれたＡＴＶ充填ミクロ球体および自由なアスピリン（ＡＳＡ）からのＡＴＶおよびＡＳＡの放出動態ゲルは、ヒドロゲル１ｍｌ当たり４００μｇのＡＳＡ、およびヒドロゲル１ｍｌ当たり、ミクロ球体内にカプセル化された１ｍｇのＡＴＶを含有していた。専門用語：Ｇａｓ：ヒドロゲルに取り込まれた自由なＡＳＡ。ＧＭａｔ：ヒドロゲルに取り込まれたＡＴＶ充填ミクロ球体。ＧａｓＭａｔＡＳＡ：ヒドロゲルに取り込まれた自由なＡＳＡおよびＡＴＶ充填ミクロ球体。ＡＳＡに関する結果。ＧａｓＭａｔＡＴＶ：ヒドロゲルに取り込まれた自由なＡＳＡおよびＡＴＶ充填ミクロ球体。ＡＴＶに関する結果。ＡＳＡは２日以内に急速に放出されたが、ＡＴＶは４週間後でもまだ放出されていた。
【図１２】２９μｍの平均サイズを有する、パクリタキセル（ＰＴＸ）充填ＲＧ５０３ミクロ球体の光透過顕微鏡写真。
【図１３】ヒドロゲルに取り込まれたＰＴＸ充填ミクロ球体および自由なアスピリン（ＡＳＡ）からのＰＴＸおよびＡＳＡの放出動態。ゲルは、ヒドロゲル１ｍｌ当たり４００μｇのＡＳＡ、およびヒドロゲル１ｍｌ当たりミクロ球体内にカプセル化されたＰＴＸ４ｍｇを含有していた。専門用語：Ｇａｓ：ヒドロゲルに取り込まれた自由なＡＳＡ。ＧＭｐａ：ヒドロゲルに取り込まれたＰＴＸ充填ミクロ球体。ＧａｓＭｐａＡＳＡ：ヒドロゲルに取り込まれた自由なＡＳＡおよびＰＴＸ充填ミクロ球体。ＡＳＡに関する結果。ＧａｓＭｐａＰＴＸ：ヒドロゲルに取り込まれた自由なＡＳＡおよびＰＴＸ充填ミクロ球体。ＰＴＸに関する結果。これらの加速放出条件の下、ＡＳＡは４日以内に完全に放出され、ＰＴＸ放出は１０日間、持続した。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
超急性期は、既存の本物の内膜の内層が損傷することによって開始する。ｈＶＳＭＣ（ヒト血管平滑筋細胞）の増殖は、損傷を受けた内皮細胞およびｈＶＳＭＣの増殖の２つのメカニズムを通して始まる。急性期は、血栓組織化、内皮細胞の内殖、および成長因子の放出により特徴づけられる。損傷後の数時間から数週間のこの期において、細胞外基質（ＥＣＭ）の完全性が影響を受け、中膜から内膜へのｈＶＳＭＣの移動が促進される［２］。内膜過形成（ＩＨ）の第３および最終の慢性期において、新たなＥＣＭが合成され、これは初期障害の後、数か月続き得るプロセスである［３］。
【００１２】
最初の２４ｈにおいて、静脈グラフトは局所貧血の期間を経て、再潅流がその後続き、過酸化物、および他の、内皮およびｈＶＳＭＣの細胞毒性を引き起こす反応性酸素種が生成されることとなる［４］。一旦内膜に入ると、ｈＶＳＭＣは増幅された速度で増殖し、新たに合成されたＥＣＭに定着し、これにより、さらに内膜肥厚に寄与することになる［５］。手術のために伏在静脈を外科的に準備することは、内皮を大きく取り除くことを伴う［６］。内皮露出により、グラフトの移植の直後の血小板および白血球付着を引き起こし、これは内膜肥厚の誘発因子として作用とするのに加えて血栓症を促進する［７〜９］。活性化されたｈＶＳＭＣはより合成しやすく、より速い増殖および移動速度を有する［１０］。結果として、ｈＶＳＭＣは中膜から内膜へと移動し、そこでそれらは増殖し、ＥＣＭを分泌し、このことが内膜層の肥厚に繋がる。さらに、凝固因子および繊維素溶解の生成物は、ｈＶＳＭＣの活性化および内膜肥厚に活発に寄与する［１１］。移植後の静脈グラフト内での増加した接着分子発現に起因して、促進された白血球結合が可能とされる［１２］。粘着白血球、特に好中球は、ロイコトリエン、インターロイキン、ヒスタミン、腫瘍壊死因子、血小板活性化因子、およびタンパク分解酵素を含む多数の炎症誘発性物質を放出し、これらは全てｈＶＳＭＣの増殖および移動を促進する［１３］。静脈のグラフトの移植の後、初期に単核細胞の付着も発生し、内膜肥厚を促進する。単核細胞は内膜に侵入し、脂質を取り込んだ後に在住マクロファージ、およびその後、泡沫細胞へと分化し、これらはアテローム形成の主要な寄与因子である。また、内皮露出の結果として、血管保護システム、血栓症および炎症を阻害するヘパリン様の物質に加えて主に一酸化窒素（ＮＯ）およびプロスタサイクリン、が失われることになる［１４］。
【００１３】
血管壁は、細胞およびＥＣＭの高度に組織化された構造である［１５］。ｈＶＳＭＣの移動および増殖を可能とするよう、ＥＣＭとカドへリンとの接触はＭＭＰを含むタンパク分解酵素によって消化されなければならない。さらに、静脈グラフトＩＨにおけるＭＭＰの関与を示す直接的な証拠が、内因性のＭＭＰ阻害剤、ＭＭＰの組織阻害剤（ＴＩＭＰ）の過剰発現が内膜肥厚を実質的に阻止したことの観察により提供されている［１６］。
【００１４】
したがって、本願発明は、
ｉ）急性炎症期に有効な少なくとも１つの急速に送達される化合物、または少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物と、
ｉｉ）再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物、または少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物を有する徐放性製剤と
を有するゲル相を備える、再狭窄の治療および／または予防を必要とする被験者での、それら治療および／または予防に用いられる医薬製剤に関する。
【００１５】
本明細書で用いられているように、「再狭窄」または「狭窄症」とは、概して動脈または静脈における、介入後の狭窄の再発を指す。狭窄の程度は一貫していないが、血管腔の直径の７０％を超える部分が閉塞したときに著しい。再狭窄は、バルーン血管形成術の後に２０〜５０％の患者において、およびステントを移植した患者の１０〜３０％において発生する。
【００１６】
「再狭窄の発生の初期の急性炎症期」。この期の後には、壁の厚さの増加、およびそれに続く血管腔の減少に繋がる内膜下層におけるＥＣＭの堆積により特徴づけられる後期が続く。
【００１７】
本明細書で用いられているように、「再狭窄の発生の初期の急性炎症期」は、マクロファージの血管壁における蓄積により象徴される初期を指す。追加で、サイトカインを含む単核細胞は、細胞外基質を通るｈＶＳＭＣの移動を引き起こす。
【００１８】
この初期の後には、本明細書に用いられている意味での「再狭窄の後期」が続く。この「再狭窄の後期」は、壁の厚さの増加、およびそれに続く血管腔の減少に繋がる内膜下層の細胞外基質の堆積により特徴づけられる。
【００１９】
本明細書で用いられているように、「ゲル相」とは、当技術分野において説明されてきた様々なタイプのゲルを指す。多数の研究が血管周囲への投与のためのヒドロゲルの使用に関するものではあるが、これまで臨床研究まで至ったプロジェクトはない。失敗は、速い放出動態プロファイルに繋がるヒドロゲルの急速な分解または洗浄に起因している。代替的に、または追加で、本願発明のゲルは熱感受性であり得、このことが意味するのは、それらが体温未満の温度において液体であり、３０℃を超えると硬化するということである。
【００２０】
したがって、本願発明の医薬製剤のゲル相は、ヒアルロン酸、アルギン酸塩、キトサンなどの生体高分子に基づくヒドロゲル、またはポロキサマーまたは熱感受性トリブロックＰＬＧＡ−ＰＥＧ重合体などの合成高分子を含む非限定的な群から選択される。好ましくは、同ヒドロゲルは、ヒアルロン酸に存し、またはその複数の塩の１つから成る。
【００２１】
代替的に、同ヒアルロン酸またはその複数の塩の１つは架橋されている、または実質的に架橋されている。
【００２２】
ヒアルロン酸は、交互するβ−１，４およびβ−１，３グリコシド結合を介して結合された二糖類、Ｄ−グルクロン酸及びＤ−Ｎ−アセチルグルコサミン、の天然高分子である。それは、結合組織、皮膜組織、および神経組織に亘り広く分布させられている。したがって、重合体はその自然的な特性により、薬物送達システムの有効性にも寄与し得る。
【００２３】
任意の市販のヒアルロン酸、または同ヒアルロン酸の塩が、医薬製剤のゲル相に関して選択され得る。市販のヒアルロン酸の典型的な例は、Ｆｏｒｔｅｌｉｓ  ｅｘｔｒａ（登録商標）（Ａｎｔｅｉｓ）である。
【００２４】
好ましくは、少なくとも１つの急速に送達される化合物は、溶液内でゲルに取り込まれ得る、再狭窄の超急性期に有効な薬物である。ゲルはその後、凍結乾燥させられ、凍結乾燥させられたヒドロゲルは、使用の前に水により再水和される。当技術分野において公知の任意の他の技術も適用され得る。
【００２５】
異なる潜在的に複数の共同作用効果を有する２つまたはそれより多くの薬物が組み合わせられ得る場合、再狭窄の治療としての組み合わせによる薬物治療が魅力的である。強力な、再狭窄に対する組み合わせられた効果を得るために、特定の薬物は、初期の炎症のイベントを阻害すべきであり、他方、他の薬物はＩＨを阻害すべきである。外膜への制御された局所的な薬物送達、または血管細胞のタイプを識別する薬物は、血管壁の幾何学の選択的な変更において重要であり得る。
【００２６】
通常、少なくとも１つの急速に送達される化合物は再狭窄の発生の初期の急性炎症期に有効であり、非ステロイド系抗炎症薬物（アスピリンまたはニトロアスピリンなど）、非変換型酵素阻害剤、キマーゼ阻害剤、スラミン、メチルアミノクロマン、スーパーオキシドジスムターゼ、Ｌアルギニン、スペルミン／ＮＯ、マリマスタット、ドキシサイクリン、カルシウムチャンネルブロッカー、ペリリルアルコール、ＢＳＦ３０２１４６（ＥＴＡ）、およびＬ−１５８，８０９（アンジオテンシンＩＩ）、またはこれらの化合物の２つまたはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択される。最も好ましくは、少なくとも１つの急速に送達される化合物はアスピリンである。
【００２７】
代替的に、少なくとも１つの急速に送達される化合物は、再狭窄の超急性期に有効な薬物であり、アトルバスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、およびシンバスタチン、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせなどスタチンの非限定的な群から選択され得る。
【００２８】
通常、徐放性製剤はミクロ球体の形態である。好ましくは、同徐放性製剤は、生体適合性生分解性高分子から成るミクロ球体の形態である。生体適合性生分解性高分子は、ポリラクチド、ポリラクチドの共重合体、ポリグリコリド、ポリグリコリドの共重合体、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）共重合体、ポリ乳酸、ポリ乳酸の共重合体、ポリグリコール酸、ポリグリコール酸の共重合体、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）共重合体、ポリカプロラクトン、ポリカプロラクトンの共重合体、ポリカーボネート、ポリカーボネートの共重合体、ポリエステルアミド、ポリエステルアミドの共重合体、ポリ無水物、ポリ無水物の共重合体、ポリアミノ酸、ポリアミノ酸の共重合体、ポリオルトエステル、ポリオルトエステルの共重合体、ポリシアノアクリレート、ポリシアノアクリレートの共重合体、ポリ（ｐ−ジオキサノン）、ポリ（ｐ−ジオキサノン）の共重合体、ポリアルキレンオキサラート、ポリアルキレンオキサラートの共重合体、ポリウレタン、ポリウレタンの共重合体、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む非限定的な群から選択される。
【００２９】
ミクロ球体技術を用いるいくつかの製剤は既に市販されており、例えば、Ｌｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ（登録商標）、Ｄｅｃａｐｅｐｔｙｌ（登録商標）、Ｓｏｍａｔｕｌｉｎ（登録商標）ＬＡ、およびＲｉｓｐｅｒｉｄａｌ（登録商標）ＣｏｎｓｔａＴＭがある。ミクロ球体は、異なる重合体および調製方法により開発され得る。したがって、充填された薬物の放出速度は、重合体の性質および分子量、粒子のサイズ、特定の賦形剤の存在を含むいくつかのパラメータによって制御され得る。マイクロカプセル化のために用いられる重合体のうち、ポリ乳酸（ＰＬＡ）およびポリ乳酸−グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）が最も好ましいままである。これらの重合体は忍容性が良好であり、クレブス回路を介して排除される乳酸およびグリコール酸の放出によって生体分解性である。さらに、そのような重合体を含有している薬物製剤は、アメリカ食品医薬品局（ＵＳ−ＦＤＡ）によりヒトでの使用が承認されている。
【００３０】
通常、徐放性製剤は、変質させられたｈＶＳＭＣの表現型を戻すのに十分な時間の間、再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物の制御され安定した放出を維持する。
【００３１】
血管周囲への投与のために薬物の送達に適した任意の他の微小粒子が想定される。例えば、Ｅｄｅｌｍａｎらは、動脈に隣接して直接的に載置されたアルギン酸カルシウムのマイクロカプセル内にカプセル化される前にタンパク質がヘパリンセファロースビーズに吸着された塩基性線維芽細胞成長因子のための送達システムを開発した［１７］。
【００３２】
好ましくは、微小粒子、例えばミクロ球体またはナノ球体の平均サイズは、０．１μｍから３００μｍの間であり、より好ましくは、５μｍから４０μｍの間であり、さらにより好ましくは、１４μｍから２０μｍの間である。
【００３３】
また好ましくは、再狭窄の後期に有効な少なくとも１つの化合物は、例えば、乳化−蒸発プロセスに従って調製されたミクロ球体に充填される。Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２および再狭窄の後期に有効な少なくとも１つの化合物の溶液を塩化メチレン内で調製し、ポリビニルアルコールの水溶液と激しく混合した。乳剤をその後、大量の水に加え、室温で一晩、蒸発するよう溶媒を静置した。粒子を洗浄し、凍結乾燥の前に、遠心分離／再懸濁の連続的な段階により濃縮させた。代替的に、粒子は、サイズ、形態学に関して特徴づけられ得、再狭窄の後期に有効な少なくとも１つの化合物の充填効率はＨＰＬＣ法により決定され得る。それらはその後、均質な懸濁液が得られるまで穏やかに混合することによりゲルに取り込まれる。再狭窄の後期に有効な少なくとも１つの化合物が充填されたミクロ球体または粒子を調製するための任意の他の方法が用いられ得る。
【００３４】
また通常、狭窄症の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物は、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、分裂阻害剤、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択される。
【００３５】
好ましくは、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡ還元酵素阻害剤は、スタチン、その医薬的に許容される塩もしくはエステルである。スタチンは、肝臓におけるコレステロールの生成において中心的な役割を担う酵素ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素を競合的に阻害することによりコレステロールレベルを低下させるのに用いられる薬物の種類である。
【００３６】
再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物がスタチン、その医薬的に許容される塩もしくはエステルである場合、それは、アトルバスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、およびシンバスタチン、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択される。最も好ましくは、スタチンは、アトルバスタチン（ＡＴＶ）、その医薬的に許容される塩もしくはエステルである。
【００３７】
また好ましくは、粒子またはミクロ球体１ｍｇ当たりで充填される薬物の量は、薬物そのものに依るであろう。例えば、スタチンがアトルバスタチン（ＡＴＶ）である場合、この量は、粒子またはミクロ球体１ｍｇ当たり５μｇから２００μｇの間であり得る。薬物がパクリタキセルである場合、この量は、粒子またはミクロ球体１ｍｇ当たり２０μｇから１０００μｇの間である可能性が最も高いであろう。
【００３８】
アトルバスタチン（ＡＴＶ）は、マクロファージの浸潤を制限し、組織のタンパク分解性の活動を低減させることにより、動脈化させられた静脈グラフトにおいて拡大性の再造形およびＩＨを阻害する［１８］。血管周囲領域にＡＴＶを適用することにより、ｈＶＳＭＣの移動、および外膜に存在する筋線維芽細胞を阻害し得る。従来スタチンは、伏在静脈グラフトの開存性に対するそれらの有益な効果を脂質の低下により発揮するものと考えられていたが、追加のメカニズムが関与していることを示唆する臨床データがある。冠動脈バイパス手術後試験集団の解析は、集中的対中程度スタチン治療の、ＬＤＬの低下とは独立した伏在静脈グラフトの再狭窄の発生に関する実質的な保護効果を明らかにした［１９］。メバロン酸可逆メカニズムを通じた、分離されたヒトの静脈ｈＶＳＭＣの増殖の治療［２０］、および静脈グラフトＩＨの形成の抑制［２１］。スタチンは、それらの効果を、酵素の活性部位への基質結合をブロックすることによる３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）還元酵素の阻害を通じて発揮する。
【００３９】
好ましい実施形態において、再狭窄の発生の初期の急性炎症期に有効な少なくとも１つの急速に送達される化合物はアスピリンであり、再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物はアトルバスタチンであろう。
【００４０】
「医薬的に許容される塩」という用語は、例えば、本願発明のスタチンの塩を指す。そのような塩の例は、アルカリ金属（ナトリウム、カリウム、またはリチウム）、アルカリ土類金属（例えば、カルシウムまたはマグネシウム）からなる群より選択されるものなどの金属陽イオンの水酸化物、炭酸塩、または重炭酸塩などの有機または無機塩基との、または有機第一、第二、または第三アルキルアミンとの反応により得られる塩基付加塩を含むがこれらに限定されない。メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、モルホリン、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−グルカミン、Ｎ，Ｎ'−ビス（フェニルメチル）−ｌ，２−エタンジアミン、トロメタミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルモルホリン、プロカイン、ピペリジン、ピペラジン、および同様のもの由来のアミン塩が、本願発明の範囲に含まれるものとして想定される。
【００４１】
再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物が分裂阻害剤である場合、それは、パクリタキセル、シロリムス、ｃ−ｍｙｃアンチセンスｃ−ｆｏｓ＋ｃ−ｊｕｎアンチセンス、ＰＣＮＡアンチセンス、ＮＦカッパＢデコイ、およびＥ２Ｆデコイ、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む非限定的な群から選択されるであろう。好ましくは、再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物は、パクリタキセル、または、その、例えば、ＤＨＡ−パクリタキセルまたはＰＧパクリタキセルなどの誘導体である。
【００４２】
再狭窄の発生の後期に有効な化合物および再狭窄の発生の初期の急性炎症期に有効な化合物は両方、治療的に有効な量で、本願発明の医薬組成物に存在する。本明細書で用いられているように、「治療的に有効な量」は、再狭窄の発生を低減し、および／または防ぐのに有効であり、また安全な量である。
【００４３】
本明細書全体を通じて用いられているように、「それらを必要とする被験者」とは、再狭窄を患っている、再狭窄の再発を患うリスクがある、再狭窄が発生するリスクがある、哺乳動物である患者、最も好ましくはヒトである患者を指す。
【００４４】
典型的には、再狭窄のリスクがある被験者は、切開による外科的な血管再生を受けている、またはそうすることが予想される被験者を含む。
【００４５】
本願発明の医薬製剤は、ミョウバン、安定剤、抗菌物質、緩衝剤、着色剤、補助剤、および同様のものなどの１または複数の追加の医薬的に許容される成分をさらに備え得る。従来用いられている補助剤、担体、希釈剤、または賦形剤と共に本願発明の化合物は、本明細書に説明されているようにゲル相の状態とされ得る。
【００４６】
本願発明は、
ｉ）急性炎症期に有効な少なくとも１つの急速に送達される化合物、または少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物と、
ｉｉ）再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物を有する徐放性製剤と
を含むゲル相を有する医薬製剤を投与する段階を備える、再狭窄の治療および／または予防を必要とする被験者での、それら治療および／または予防の方法にも関する。
【００４７】
好ましくは、徐放性製剤は、再狭窄の発生を防ぐのに十分な時間の間、再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物の制御された安定した放出を維持する。通常、この時間は、２から８週間まで、好ましくは３から６週間までであり、および最も好ましくはこの時間は４週間までである。
【００４８】
本明細書において用いられているように、「急速に送達される」とは、１ｈから７日間まで、最も好ましくは３日間まで、または最も好ましくは４日間まで続く時間枠を指す。
【００４９】
本願発明に当てはまるように「投与」とは、通常治療的に有効量の形態である医薬製剤の、それらを必要としている被験者、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトとの接触を指す。
【００５０】
また本願発明において想定されているのは、
ｉ）急性炎症期に有効な少なくとも１つの急速に送達される化合物、または少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物と、
ｉｉ）再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物、または少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物を含む徐放性製剤と
を含むゲル相を有する、再狭窄の治療および／または予防を必要とする被験者での、それら治療および／または予防に用いられる医薬製剤を備える、再狭窄の治療および／または予防のためのキットである。
【００５１】
当業者は、本明細書に説明されている本願発明には、具体的に説明されているものの他に変形および修正を加えられることを理解されよう。本願発明は、その思想および本質的な特性から逸脱することなくそのような全ての変形および修正を含むことが理解されよう。また本願発明は、本明細書において言及された、または示された段階、特徴、組成物、および化合物の全てを個別に、または集合的に、および、同段階または特徴のうち２つまたはそれより多くの任意の、および全ての組み合わせ含む。したがって、本開示は、示されている全ての態様にあるように、および限定的ではないものと見なされ、添付の請求項に示されている本願発明の範囲、および、等価物の意味および範囲に含まれる全ての変更が包含されることが意図されている。
【００５２】
様々な参考文献が本明細書の全体に亘って引用されており、それぞれが全体的に参照により本明細書において組み込まれる。
【００５３】
上記の説明は、以下の実施例を参照することにより、より完全に理解されよう。しかし、そのような実施例は、本願発明を実施する方法を例示するものであり、本願発明の範囲を限定することは意図されていない。
【００５４】
実施例
【００５５】
実施例１
【００５６】
アトルバスタチン（ＡＴＶ）充填ヒドロゲル
【００５７】
ヒドロゲルに取り込まれたＡＴＶの調製
【００５８】
ヒアルロン酸ゲル（Ｆｏｒｔｅｌｉｓ  ｅｘｔｒａ（登録商標），Ａｎｔｅｉｓ，ＣＨ）は、リン酸塩緩衝液に懸濁されたバイオ発酵から得られる２５．５ｍｇ／ｍｌの架橋ヒアルロン酸から成る。Ｃｈｅｍｏｓ  ＧｍｂＨ（Ｒｅｇｅｎｓｔａｕｆ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から得たカルシウムＡＴＶを、３３％エタノール水溶液に溶解し、所望される濃度でヒドロゲルに取り込んだ。ヒドロゲルをその後、凍結乾燥させた。滅菌水をその後、加えてそれらの初期の体積とし、２４ｈの間、再水和させるよう静置した。
【００５９】
ヒドロゲルに取り込まれたＡＴＶの生体外放出動態
【００６０】
ヒドロゲルに取り込まれたＡＴＶからの放出動態プロファイルを調べるため、ゲルを２４ウェル細胞培養プレートのウェルの底部に載置して、透析膜により培地から分離した（分画分子量：１４ｋＤａ）。ＨＰＬＣによりＡＴＶの量を評価するために培地を定期的にサンプリングした。
【００６１】
ヒドロゲルに充填したとき、ＡＴＶは急速に放出され、１２ｈ後に１００％の放出が完了し、放出動態は、濃度とは独立して同様のパターンを示した（図２）。
【００６２】
細胞培養上での、一旦ヒドロゲルに取り込まれたアトルバスタチンの活性度の生体外評価
【００６３】
ヒドロゲルに取り込まれたＡＴＶを、細胞生存性、および、それにしたがって、ＡＴＶがその活性型でヒドロゲルから放出されるかを試験するために、初代ヒト血管平滑筋細胞（ｈＶＳＭＣ）に関して分析した。この目的のために、ｈＶＳＭＣの移動および遊出に対する薬物の影響、および細胞浸潤性に関与するタンパク質の異なるｍＲＮＡの発現に関する実験を実施した。
【００６４】
図３〜６に示されているように、ヒドロゲルに取り込まれたアトルバスタチンは、ＨＳＶＣに対する機能効果を有する。効果の程度は投与量に依存し、溶液内の本来の薬物の効果に関連する。
【００６５】
全体的に、継代２〜５の初代ｈＳＶＭＣ培養を用いると、ＡＴＶが、ヒトＳＭＣの、遊出に加えて生存能力および増殖を低減させ、ＩＨの発生に関与する遺伝子の発現を異なるように規制することを示すことが出来た。アトルバスタチンの存在下でのヒトの静脈からの平滑筋細胞ｍＲＮＡレベルの定量的評価は、ＰＡＩ−１およびＭＭＰ２が減少することを示し、ｔＰＡおよびヘムオキシゲナーゼ（ＨＭＯＸ）が増加した。
【００６６】
要約すると、生体外細胞分析は、ＡＴＶがヒドロゲルから活性型で放出されることを示した。投与量依存である有効性が示され、溶液内のＡＴＶとゲル内のＡＴＶとを比較するといくつかの有意差が記録され、ゲルの存在下で活性が高められたことさえ示された。
【００６７】
実施例２
【００６８】
ヒドロゲルに取り込まれたミクロ球体に充填されたＡＴＶ
【００６９】
ＡＴＶ充填ミクロ球体の調製
【００７０】
ＡＴＶ充填ミクロ球体を、乳化−蒸発プロセスに従って調製した。用いた重合体は、ポリ乳酸−グリコール酸共重合体（ＭＷ：２０ ｋＤａ，Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）である。Ｒｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０２およびＡＴＶの溶液を塩化メチレン内で調製し、ポリビニルアルコールの水溶液と共に激しく混合した。乳剤をその後、大量の水に加え、室温で一晩、蒸発するよう溶媒を静置した。粒子を洗浄し、凍結乾燥の前に、遠心分離／再懸濁の連続的な段階により濃縮させた。粒子は、サイズ、形態学に関して特徴づけられ得、ＡＴＶの充填効率はＨＰＬＣ法により決定された（図７）。
【００７１】
このプロセスにより、５０μｇのＡＴＶ／粒子１ｍｇが充填された、平均サイズが１０μｍの粒子を調製した。
【００７２】
ミクロ球体に充填された、および／またはヒドロゲルに取り込まれたＡＴＶ
【００７３】
製剤の調製を、ヒアルロン酸（Ｆｏｒｔｅｌｉｓ  ｅｘｔｒａ，Ａｎｔｅｉｓ，ＣＨ）から成る市販のヒドロゲルを用いて行った。ゲル１ｍｌ当たり１ｍｇのＡＴＶが充填されたゲルを得た。生体外および生体内の分析のためにゲルおよびミクロ球体を提供するよう滅菌手順を用意した。対照として、薬物非含有ゲルおよび粒子も調製した。
【００７４】
前に言及したように、ＡＴＶをハイドロアルコール溶液としてのゲルに取り込んだ。粒子を懸濁液に入れ、穏やかに混合することによりヒドロゲルに取り込んだ。ゲルを凍結乾燥させ、続いて、使用の前に水を用いて再水和させた。
【００７５】
生体外および生体内の試験のために３つの異なる製剤を調製した：ｉ）自由なＡＴＶおよび薬物非含有ミクロ球体を含有しているヒドロゲル（Ｇ＋Ｍ−）；ｉｉ）ミクロ球体内にカプセル化されたＡＴＶを含有するヒドロゲル（Ｇ−Ｍ＋）；ｉｉｉ）自由なＡＴＶ、およびミクロ球体内にカプセル化されたＡＴＶの両方を含有するヒドロゲル（Ｇ＋Ｍ＋）。
【００７６】
ヒドロゲルに取り込まれたＡＴＶ充填ミクロ球体および／または自由なＡＴＶの生体外放出プロファイル
【００７７】
粒子充填ゲルからの放出動態を、変更が加えられたフランツ細胞設計を用いて調べた。手短に言えば、ゲルが載置されたドナーチャンバーを、ＡＴＶの浸透は可能であるが粒子およびゲルの浸透は可能としない０．２２μｍの孔を有する合成膜によりレセプターチャンバーから分離した。レセプターコンパートメントをＰＢＳ／ＳＤ  ０．１％で満たし、任意の時間毎にサンプリングして、ＨＰＬＣによりＡＴＶ濃度を決定した。
【００７８】
粒子をゲルに加えたとき、８日よりも長い期間の間ＡＴＶ放出が持続した。製剤によっては、ピークの濃度は２４から３２時間の間に見られた。放出は、充填粒子（Ｇ−Ｍ＋）のみがヒドロゲルに取り込まれているときに長く持続した。粒子製剤で通常観察されるバーストに対する平滑作用は、自由なＡＴＶの存在に起因して、Ｇ＋Ｍ＋において示された。薬物の放出において実際のラグタイムは観察されず、予想よりも早く製剤は空になった（図８）。
【００７９】
生体内マウス頸動脈結紮モデル
【００８０】
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（月齢２から３ヶ月）に麻酔をかけ、左総頸動脈を小さな子宮頚管切開により解剖し、頸動脈分岐近くで結紮した（マウスのケア、手術、および安楽死の手順は、当施設およびＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｏｆｆｉｃｅ  Ｌａｕｓａｎｎｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから承認を受け、実験動物のケアおよび使用に関するガイドに準拠している。Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｌａｕｓａｎｎｅ，Ａ５５５２−０．Ａｎｉｍａｌ  ａｕｔｈｏｒｉｚａｔｉｏｎ  ２５２３）。ＷＴに対して実施した予備実験は、全ての動物が回復したことを示し、発作の兆候を示さなかった。ＣＡＬ後、１４日および２８日において、それぞれの正常血圧のＷＴ動物と比較して、高血圧の動物において内膜の厚さが増大した。ＡＴＶ充填製剤の有効性を試験するためにこのモデルを用いた（Ｇ−Ｍ＋：充填されたミクロ球体を含む薬物非含有ゲル、Ｇ＋Ｍ−：薬物非含有ミクロ球体を含む充填ゲル、Ｇ＋Ｍ＋：充填ミクロ球体を含む充填ゲル）。各調剤薬を５０マイクロリットル、結紮の後の頸動脈周りに適用した。治療を受けた動物において異常な振る舞い、体重の減少は観察されなかった。動物は、手術の後、Ｄ１４およびＤ２８において安楽死させた。適用の２８日後にゲルの存在を観察した。動脈を回収し、組織学的検討のために処理した。血管の異なる解剖学的な構成要素の厚さを評価するために組織形態測定も実施した（図９）。
【００８１】
最も効率的な製剤は、１４日および２８日後の両方に関してＩＨを実際的に示さなかったＧ−Ｍ＋であることが示された。
【００８２】
実施例３
【００８３】
ＡＴＶ−ミクロ球体製剤の向上
【００８４】
ＩＨの発生に続くより長い時間枠内でＡＴＶを放出するミクロ球体について検討した。それらはまた、上記にて説明したような乳剤−蒸発技術によっても調製されるが、ここでは、ポリ乳酸−グリコール酸共重合体としてＲｅｓｏｍｅｒ  ＲＧ５０３（ＭＷ：４２ ｋＤ，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）を用いた。生成されたミクロ球体は２０μｍの平均直径を有し、粒子１ｍｇ当たり１４ｇのＡＴＶを含有していた。
【００８５】
５０ｍｇのミクロ球体を、５０ｍｌのＰＢＳ（ｐＨ７．４）／ＳＤ０．１％内で穏やかに撹拌しながら３７℃で培養した。放出プロファイルは、最初の２４時間内にわずかなバーストを示し、５２日までの間の薬物の持続された放出を確認することが出来た（図１０）。
【００８６】
実施例４
【００８７】
ヒドロゲルに取り込まれたＡＴＶ充填ミクロ球体および自由なＡＳＡ
【００８８】
ヒドロゲルに取り込まれたＡＴＶ充填ミクロ球体および自由なＡＳＡの調製
【００８９】
製剤の調製を、市販のヒアルロン酸ヒドロゲル（Ｆｏｒｔｅｌｉｓ  ｅｘｔｒａ（登録商標），Ａｎｔｅｉｓ，Ｐｌａｎ−ｌｅｓ−Ｏｕａｔｅｓ，ＣＨ）を用いて行った。ＡＴＶ充填ミクロ球体の調製は実施例３に説明されている。アスピリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ，ＤＥ）水溶液を調製し、穏やかに撹拌することにより所望される濃度でＡＴＶミクロ粒子の懸濁液と共にヒドロゲル内に取り込んだ。ヒドロゲルをその後、凍結乾燥させた。続いて滅菌水をその後、加えてその初期の体積とし、２４ｈの間、再水和させるよう静置した。
【００９０】
調製された製剤は、ヒドロゲル１ｍｌ当たり４００μｇのＡＳＡ、およびヒドロゲル１ｍｌ当たりミクロ球体内にカプセル化された１ｍｇのＡＴＶを含有していた。
【００９１】
ヒドロゲルに取り込まれたＡＴＶ充填ミクロ球体および自由なＡＳＡの生体外放出動態
【００９２】
製剤の放出動態を、実施例２に説明したように変更が加えられたフランツセルを用いて調べた。レセプターコンパートメントを任意の時間毎にサンプリングして、ＵＨＰＬＣによりＡＴＶおよびＡＳＡ濃度を同時に決定した。
【００９３】
アスピリンの放出は４日後に完了した。ミクロ粒子から放出されたＡＴＶは、最初の３週間の間、ゼロ次の放出動態を示した。その後、小さいが無視出来る程度ではない量の薬物が、４週間後になっても放出された（図１１）。
【００９４】
実施例５
【００９５】
両方ともヒドロゲルに取り込まれた、ミクロ球体に充填されたパクリタキセル（ＰＴＸ）および自由なアスピリン（ＡＳＡ）
【００９６】
（ＰＴＸ）充填ミクロ球体の調製
【００９７】
ＰＴＸをカプセル化しているミクロ球体（Ｃｆｍ  Ｏｓｋａｒ  Ｔｒｏｐｉｔｚｓｃｈ  ＧｍｂＨ，ＤＥ）を、上記にて説明した乳剤蒸発技術により、ポリ乳酸−グリコール酸共重合体としてＲＧ５０３（ＭＷ：４２ｋＤａ，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，ＤＥ）を用いて調製した。生成されたミクロ球体は球状であり、２９μｇの平均サイズを有していた（図１２）。それらは、粒子１ｍｇ当たりＰＴＸ７７μｇを含有していた。
【００９８】
ヒドロゲルに取り込まれたＰＴＸ充填ミクロ球体および自由なＡＳＡの調製
【００９９】
製剤の調製を、市販のヒアルロン酸ヒドロゲル（Ｆｏｒｔｅｌｉｓ  ｅｘｔｒａ（登録商標），Ａｎｔｅｉｓ，Ｐｌａｎ−ｌｅｓ−Ｏｕａｔｅｓ，ＣＨ）を用いて行った。アスピリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ，ＤＥ）水溶液を調製し、穏やかに撹拌することにより所望される濃度でＰＴＸミクロ粒子の懸濁液と共にヒドロゲル内に取り込んだ。ヒドロゲルをその後、凍結乾燥させた。続いて滅菌水をその後、加えてその初期の体積とし、２４ｈの間、再水和させるよう静置した。
【０１００】
調製された製剤は、ヒドロゲル１ｍｌ当たり４００μｇのＡＳＡ、およびヒドロゲル１ｍｌ当たりミクロ球体内にカプセル化されたＰＴＸ４ｍｇを含有していた。
【０１０１】
ヒドロゲルに取り込まれたＰＴＸ充填ミクロ球体および自由なＡＳＡの生体外放出動態
【０１０２】
製剤の放出動態を、いくつかの変更を加えたうえで、実施例２に説明したように変更が加えられたフランツセルを用いて調べた。レセプター培地内でのＰＴＸの溶解性を確保するため、ＰＢＳ／ＳＤを、２Ｍの濃度のＰＢＳ（０．２Ｍ）内でＤＥＮＡと置き換えた。この培地は、加速させられた放出動態データを提供し、長期に亘って放出する製剤の急速な調査を可能とする。レセプターコンパートメントを任意の時間毎にサンプリングして、ＵＨＰＬＣによりＰＴＸおよびＡＳＡ濃度を同時に決定した。
【０１０３】
アスピリンは４日後に放出され、他方、ＰＴＸ放出は、１０日後にようやく完了する。これらの加速放出条件の下、生理的条件においてより長い期間に亘り放出が維持され得ることを結果が示している。
【０１０４】
参考文献
【０１０５】
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４．Ｗｅｓｔ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｖｅｎｏｕｓ  ｂｙｐａｓｓ  ｇｒａｆｔ  ｉｎｔｉｍａｌ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ：ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ  ｏｘｉｄａｓｅ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ，２００１．２１（２）：ｐ．１８９−９４．
５．Ｎｅｗｂｙ，Ａ．Ｃ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｎａｔｉｖｅ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｎｄ  ｖｅｉｎ−ｇｒａｆｔ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｌａｑｕｅ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｖｅｓｓｅｌ−ｗａｌｌ  ｒｅｍｏｄｅｌｌｉｎｇ  ｂｙ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ−ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ｃｏｒｏｎ  Ａｒｔｅｒｙ  Ｄｉｓ，１９９７．８（３−４）：ｐ．２１３−２４．
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１０．Ｏｗｅｎｓ，Ｇ．Ｋ．，Ｍ．Ｓ．Ｋｕｍａｒ，ａｎｄ  Ｂ．Ｒ．Ｗａｍｈｏｆｆ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ，２００４．８４（３）：ｐ．７６７−８０１．
１１．Ｊｅｒｅｍｙ，Ｊ．Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎ  ｔｈｅ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｓａｐｈｅｎｏｕｓ  ｖｅｉｎ  ｇｒａｆｔｓ  ｆｉｔｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｓｈｅａｔｈｓ  ａｎｄ  ｓｔｅｎｔｓ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２００７．２８（６）：ｐ．８９５−９０８．
１２．Ｇａｎｇａｄｈａｒａｎ，Ｓ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｔｏ  ｂａｌｌｏｏｎ−ｉｎｊｕｒｅｄ  ａｒｔｅｒｉｅｓ：ｔｈｅ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｓｅｅｄｉｎｇ．Ｊ  Ｖａｓｃ  Ｓｕｒｇ，２００１．３３（６）：ｐ．１２４７−５４．
１３．Ｓｅｇｅｌ，Ｇ．Ｂ．，Ｍ．Ｗ．Ｈａｌｔｅｒｍａｎ，ａｎｄ  Ｍ．Ａ．Ｌｉｃｈｔｍａｎ，Ｔｈｅ  ｐａｒａｄｏｘ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ'ｓ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｔｉｓｓｕｅ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ，２０１１．８９（３）：ｐ．３５９−７２．
１４．Ｃｈａｎｎｏｎ，Ｋ．Ｍ．ａｎｄ  Ｔ．Ｊ．Ｇｕｚｉｋ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｌｏｏｄ  ｖｅｓｓｅｌｓ：ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｔｏ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒｓ．Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００２．５３（４  Ｐｔ  １）：ｐ．５１５−２４．
１５．Ｃｈｅｒｅｐａｎｏｖａ，Ｏ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｘｉｄｉｚｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｓ  ｉｎｄｕｃｅ  ｔｙｐｅ  ＶＩＩＩ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ．Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ，２００９．１０４（５）：ｐ．６０９−１８．
１６．Ｇｅｏｒｇｅ，Ｓ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｖｅｉｎ  ｇｒａｆｔ  ｎｅｏｉｎｔｉｍａ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｅｘ  ｖｉｖｏ  ＴＩＭＰ−３  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２０１１．１２４（１１  Ｓｕｐｐｌ）：ｐ．Ｓ１３５−４２．
１７．Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｅ．Ｒ．，Ｍ．Ａ．Ｎｕｇｅｎｔ，ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｋａｒｎｏｖｓｋｙ，Ｐｅｒｉｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂａｓｉｃ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：ｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｓｏｌｉｄ  ｏｒｇａｎ  ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，１９９３．９０（４）：ｐ．１５１３−７．
１８．Ｑｉａｎｇ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔａｔｉｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｅｘｐａｎｓｉｖｅ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｉｎ  ｖｅｎｏｕｓ  ｂｙｐａｓｓ  ｇｒａｆｔｓ．Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２０１２．２２３（１）：ｐ．１０６−１３．
１９．Ｄｏｍａｎｓｋｉ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｉｃ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ，ｗｉｔｈ  ａｎｄ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｃｈｏｌｅｓｔｙｒａｍｉｎｅ，ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｏｓｔ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｂｙｐａｓｓ  ｇｒａｆｔ（Ｐｏｓｔ  ＣＡＢＧ）ｔｒｉａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ，２００８．１０２（８）：ｐ．１０２３−７．
２０．Ｙａｎｇ，Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．，ＨＭＧ−ＣｏＡ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓａｐｈｅｎｏｕｓ  ｖｅｉｎｓ．Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ，２０００．３６（５）：ｐ．１６９１−７．
２１．Ｙａｍａｎｏｕｃｈｉ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ  ｓｔａｔｉｎ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｖｅｉｎ  ｇｒａｆｔ  ｉｎｔｉｍａｌ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ  ｖｉａ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ−ｔｒｏｐｉｃ  Ｒｈｏ−ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．Ｊ  Ｖａｓｃ  Ｓｕｒｇ，２００５．４２（４）：ｐ．７５７−６４．
（項目１）
ｉ）急性炎症期に有効な少なくとも１つの急速に送達される化合物、または前記少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物と、
ｉｉ）再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物、または前記少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物を有する徐放性製剤と
を有するゲル相を備える、再狭窄の治療および／または予防を必要とする被験者での、それら治療および／または予防に用いられる医薬製剤。
（項目２）
前記少なくとも１つの急速に送達される化合物は、再狭窄の発生の初期の急性炎症期に有効である、項目１に記載の医薬製剤。
（項目３）
前記徐放性製剤は、ミクロ球体の形態である、項目１または２に記載の医薬製剤。
（項目４）
前記徐放性製剤は、生体適合性生分解性高分子である、項目３に記載の医薬製剤。
（項目５）
前記生体適合性生分解性高分子は、ポリラクチド、ポリラクチドの共重合体、ポリグリコリド、ポリグリコリドの共重合体、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）共重合体、ポリ乳酸、ポリ乳酸の共重合体、ポリグリコール酸、ポリグリコール酸の共重合体、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）共重合体、ポリカプロラクトン、ポリカプロラクトンの共重合体、ポリカーボネート、ポリカーボネートの共重合体、ポリエステルアミド、ポリエステルアミドの共重合体、ポリ無水物、ポリ無水物の共重合体、ポリアミノ酸、ポリアミノ酸の共重合体、ポリオルトエステル、ポリオルトエステルの共重合体、ポリシアノアクリレート、ポリシアノアクリレートの共重合体、ポリ（ｐ−ジオキサノン）、ポリ（ｐ−ジオキサノン）の共重合体、ポリアルキレンオキサラート、ポリアルキレンオキサラートの共重合体、ポリウレタン、ポリウレタンの共重合体、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択される、項目４に記載の医薬製剤。
（項目６）
再狭窄の初期の急性炎症期に有効な前記少なくとも１つの急速に送達される化合物は、アスピリン、ニトロアスピリン、非変換型酵素阻害剤（ａｎｔｉｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、キマーゼ阻害剤、スラミン、メチルアミノクロマン、スーパーオキシドジスムターゼ、Ｌアルギニン、スペルミン／ＮＯ、マリマスタット、ドキシサイクリン、カルシウムチャンネルブロッカー、ペリリルアルコール、ＢＳＦ３０２１４６（ＥＴＡ）、およびＬ−１５８，８０９（アンジオテンシンＩＩ）、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択される、前述の項目のいずれか一項に記載の医薬製剤。
（項目７）
前記ゲルは、ヒドロゲルを含む群から選択される、前述の項目のいずれか一項に記載の医薬製剤。
（項目８）
前記ヒドロゲルは、ヒアルロン酸に存する、またはその複数の塩の１つから成る、項目７に記載の医薬製剤。
（項目９）
前記ヒアルロン酸またはその複数の塩の１つは、架橋されている、または実質的に架橋されている、項目８に記載の医薬製剤。
（項目１０）
再狭窄の発生の後期に有効な前記少なくとも１つの化合物は、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、分裂阻害剤、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択される、前述の項目のいずれか一項に記載の医薬製剤。
（項目１１）
前記３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡ還元酵素阻害剤はスタチンである、項目１０に記載の医薬製剤。
（項目１２）
前記スタチンは、アトルバスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、ロバスタチンおよびシンバスタチン、またはこれらの１または複数から成る組み合わせを含む群から選択される、項目１１に記載の医薬製剤。
（項目１３）
再狭窄の発生の後期に有効な前記少なくとも１つの化合物は、パクリタキセル、シロリムス、ｃ−ｍｙｃアンチセンスｃ−ｆｏｓ＋ｃ−ｊｕｎアンチセンス、ＰＣＮＡアンチセンス、ＮＦカッパＢデコイ、およびＥ２Ｆデコイ、またはこれらの１または複数から成る組み合わせを含む群から選択される分裂阻害剤である、項目１０に記載の医薬製剤。
（項目１４）
前記再狭窄は、切開による外科的な血管新生に続く、前述の項目のいずれか一項に記載の医薬製剤。
（項目１５）
ｉ）急性炎症期に有効な少なくとも１つの急速に送達される化合物、または前記少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物と、
ｉｉ）再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物を有する徐放性製剤と
を含むゲル相を有する医薬製剤を投与する段階を備える、再狭窄の治療および／または予防を必要とする被験者での、それら治療および／または予防の方法。
（項目１６）
前記少なくとも１つの急速に送達される化合物は、再狭窄の発生の初期の急性炎症期に有効である、再狭窄の治療および／または予防の方法。
（項目１７）
前記徐放性製剤は、ミクロ球体またはナノ球体の形態である、項目１５または１６に記載の再狭窄の治療および／または予防の方法。
（項目１８）
前記徐放性製剤は、生体適合性生分解性高分子である、項目１７に記載の再狭窄の治療および／または予防の方法。
（項目１９）
前記生体適合性生分解性高分子は、ポリラクチド、ポリラクチドの共重合体、ポリグリコリド、ポリグリコリドの共重合体、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）共重合体、ポリ乳酸、ポリ乳酸の共重合体、ポリグリコール酸、ポリグリコール酸の共重合体、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）共重合体、ポリカプロラクトン、ポリカプロラクトンの共重合体、ポリカーボネート、ポリカーボネートの共重合体、ポリエステルアミド、ポリエステルアミドの共重合体、ポリ無水物、ポリ無水物の共重合体、ポリアミノ酸、ポリアミノ酸の共重合体、ポリオルトエステル、ポリオルトエステルの共重合体、ポリシアノアクリレート、ポリシアノアクリレートの共重合体、ポリ（ｐ−ジオキサノン）、ポリ（ｐ−ジオキサノン）の共重合体、ポリアルキレンオキサラート、ポリアルキレンオキサラートの共重合体、ポリウレタン、ポリウレタンの共重合体、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択される、項目１８に記載の再狭窄の治療および／または予防の方法。
（項目２０）
再狭窄の発生の初期の急性炎症期に有効な前記少なくとも１つの急速に送達される化合物は、アスピリン、ニトロアスピリン、非変換型酵素阻害剤、キマーゼ阻害剤、スラミン、メチルアミノクロマン、スーパーオキシドジスムターゼ、Ｌアルギニン、スペルミン／ＮＯ、マリマスタット、ドキシサイクリン、カルシウムチャンネルブロッカー、ペリリルアルコール、ＢＳＦ３０２１４６（ＥＴＡ）、およびＬ−１５８，８０９（アンジオテンシンＩＩ）、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択される、項目１５から１９のいずれか一項に記載の再狭窄の治療および／または予防の方法。
（項目２１）
前記ゲルは、ヒドロゲルおよびポロキサマーを含む群から選択される、項目１５から２０のいずれか一項に記載の再狭窄の治療および／または予防の方法。
（項目２２）
前記ヒドロゲルは、ヒアルロン酸に存する、またはその複数の塩の１つから成る、項目１９に記載の再狭窄の治療および／または予防の方法。
（項目２１）
前記ヒアルロン酸またはその複数の塩の１つは、架橋されている、または実質的に架橋されている、項目２０に記載の再狭窄の治療および／または予防の方法。
（項目２２）
再狭窄の発生の後期に有効な前記少なくとも１つの化合物は、スタチン、分裂阻害剤、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択される、項目１３から２１に記載の再狭窄の治療および／または予防の方法。
（項目２３）
再狭窄の発生の後期に有効な前記少なくとも１つの化合物は、アトルバスタチン、フルバスタチン、プラバスタチン、ピタバスタチン、ロバスタチンおよびシンバスタチン、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択されるスタチンである、項目２２に記載の再狭窄の治療および／または予防の方法。
（項目２４）
再狭窄の発生の後期に有効な前記少なくとも１つの化合物は、パクリタキセル、シロリムス、ｃ−ｍｙｃアンチセンスｃ−ｆｏｓ＋ｃ−ｊｕｎアンチセンス、ＰＣＮＡアンチセンス、ＮＦカッパＢデコイ、およびＥ２Ｆデコイ、またはこれらの２つ若しくはそれより多くから成る組み合わせを含む群から選択される分裂阻害剤である、項目２２に記載の再狭窄の治療および／または予防の方法。
（項目２５）
前記再狭窄は、切開による外科的な血管新生に続く、項目１３から２４のいずれか一項に記載の再狭窄の治療および／または予防の方法。
（項目２６）
ｉ）急性炎症期に有効な少なくとも１つの急速に送達される化合物、または前記少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物と、
ｉｉ）再狭窄の発生の後期に有効な少なくとも１つの化合物、または前記少なくとも１つの化合物の任意の活性代謝物を含む徐放性製剤と
を含むゲル相を有する、再狭窄の治療および／または予防を必要とする被験者での、それら治療および／または予防に用いられる医薬製剤を備える、再狭窄の治療および／または予防のためのキット。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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