(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカの含水アルコール（７０％エタノール）薬草エキスと水と十分なエタノールとを組み合わせて、７０％エタノール濃度を有するアルコール混合物を形成することと、
ここで、前記含水アルコール薬草エキスを組み合わせるときに、前記含水アルコール薬草エキスのサンブクス・ニグラ：エキナセア・プルプレア：センテラ・アジアティカの乾燥させた状態での重量比は、７：１：２であることを特徴とし、
不溶性材料及びアルコールを前記アルコール混合物から分離して、水性組成物を生成することと、
前記水性組成物を更に乾燥させて、組み合わされた乾燥薬草エキスを形成することと、
を含む、組み合わされた薬草エキスを調製する方法。
【請求項２】
不溶性材料を前記アルコール混合物から遠心分離、濾過又は沈降を用いて分離する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
アルコールを前記アルコール混合物から真空を用いてまたは蒸留により分離する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記水性組成物を噴霧乾燥又はフリーズドライにより乾燥させる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記組み合わされた乾燥薬草エキスと、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤とを、組み合わせることを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記賦形剤は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセリン及び精油からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカの含水アルコール薬草エキスは、サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカの植物物質を、７０％アルコールを含む溶剤中で８時間混合することによって調製される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
植物物質対溶剤の比は１：８である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
植物物質及び溶剤の前記混合物から溶剤を除去して、含水アルコール薬草エキスを形成することを更に含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカのそれぞれの含水アルコール（７０％エタノール）薬草エキスを含む、組み合わされた薬草エキスであって、
乾燥させた状態での前記組み合わされた薬草エキスの０．０５５％以上は、ナリンゲニンから構成され、乾燥させた状態での前記組み合わされた薬草エキスは、５重量％の濃度でプロピレングリコールに完全に溶解する、組み合わされた薬草エキス。
【請求項１１】
２０重量％の濃度のプロピレングリコール溶液中で溶解性を有する、請求項１０に記載の組み合わされた薬草エキス。
【請求項１２】
サンブクス・ニグラ：エキナセア・プルプレア：センテラ・アジアティカの含水アルコール薬草エキスの乾燥させた状態での重量比が７：１：２である、請求項１０に記載の組み合わされた薬草エキス。
【請求項１３】
請求項１０に記載の組み合わされた薬草エキスを含む、医薬組成物。
【請求項１４】
薬学的に許容可能な担体を更に含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記担体がプロピレングリコールを含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
口内洗浄液、パッチ、軟膏、ペースト、ローション、クリーム、トローチ、キャンディ、チューインガム、溶液、ゲル、フォームまたはスプレーの形態の、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカのそれぞれの含水アルコール（７０％エタノール）薬草エキスを含む、請求項１に記載の方法によって調製された組み合わされた薬草エキスであって、
乾燥させた状態での前記組み合わされた薬草エキスの０．０５５％以上は、ナリンゲニンから構成され、乾燥させた状態での前記組み合わされた薬草エキスは、５重量％の濃度でプロピレングリコールに完全に溶解する、組み合わされた薬草エキス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、米国特許法１１９（ｅ）条により２０１２年３月１４日出願米国仮出願第６１／６１０４８０号の利益を主張するものであり、その開示は参照することにより本明細書に組込まれる。
【０００２】
本発明の実施形態は、薬草エキスの新規組成物、それらの調製方法、及び疾患を治療するためのそれらエキスの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
植物種サンブクス・ニグラ（Ｓａｍｂｕｃｕｓ  ｎｉｇｒａ：セイヨウニワトコ）、エキナセア・プルプレア（Ｅｃｈｉｎａｃｅａ  ｐｕｒｐｕｒｅａ：ムラサキバレンギク）及びセンテラ・アジアティカ（Ｃｅｎｔｅｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａ：ツボクサ）の薬草エキスを含む治療組成物は、米国特許第７５６３４６６号明細書に記載されている。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の実施形態の一態様は、植物種サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカの薬草エキスを含む新規の治療組成物を提供することに関する。これらの組成物は、種々の炎症性疾患、特に、粘膜又は皮膚の炎症性疾患の治療に関して、既に同定された組成物と比較して高められた治療活性を示す。更に、これらの組成物は、既に同定された組成物と比較して高められた溶解性を示す。
【０００５】
本発明の一実施形態は、０．０５５％以上のナリンゲニン濃度を有する組成物である、植物種サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカのエキスを含む組成物を提供する。本発明の一実施形態において、この治療組成物はプロピレングリコール中に２０％の濃度で可溶性である。本発明の一実施形態において、サンブクス・ニグラ：エキナセア・プルプレア：センテラ・アジアティカの比は７：１：２である。
【０００６】
本発明の一実施形態は、少なくとも２回の抽出を用いて、上記の植物種のエキスを含む水性治療組成物を調製する方法を提供する。
【０００７】
本発明の一実施形態は、植物種のエキスを含む組成物を投与することよりなる、疾患、特に粘膜又は皮膚の疾患、炎症性疾患、又は組織修復により改善されるべき疾患、状態又は外傷を治療するための方法を提供する。
【０００８】
本明細書中、他に言及がない限り、本発明の一実施形態の１つ又は複数の特徴の状態又は関連特性を変更する「実質的に」及び「約」のような形容詞は、その状態又は特性が、意図される出願のための実施形態の操作に関して、受け入れることができる許容内に定義されることを意味するものと理解される。他に指示がない限り、明細書又は請求の範囲中の「又は」という語は、排他的な又はよりむしろ包括的な「又は」であるとみなされ、かつこれが結び付ける項目の少なくとも１つ又は任意の組合せを示唆する。
【０００９】
この概要は、簡略化された形での概念の選択を紹介するために提供されるのであって、詳細な説明で更に後述される。この概要は、主張される要旨の重要特徴又は本質的特徴を同定することを意図しておらず、また主張される要旨の範囲を限定するために用いられることも意図していない。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１ａ】本発明の実施形態による、植物種サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカからのエキスを含む組成物を製造するための合成計画を図示する流れ図である。
【図１ｂ】本発明の実施形態による、植物種サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカからのエキスを含む組成物を製造するための合成計画を図示する流れ図である。
【図２ａ】炎症の指標であるインターロイキン−１β−変換酵素（ＩＣＥ）活性の阻害に対する従来のエキスの効果と本発明の実施形態による薬草エキスの効果とを、種々の濃度で比較するグラフである。
【図２ｂ】創傷治癒の指標である細胞からのコラーゲン放出に対する本発明の実施形態による薬草エキスの効果と従来のエキスの効果とを種々の濃度で比較するグラフである。
【図２ｃ】炎症の指標であるＮＦκＢ（エヌエフ−カッパーＢ）の阻害に対する本発明の実施形態による薬草エキスの効果と従来のエキスの効果とを種々の濃度で比較するグラフである。
【図２ｄ】炎症の指標である細胞中の酸化窒素（ＮＯ）活性の阻害に対する本発明の実施形態による薬草エキスの効果と従来のエキスの効果とを、種々の濃度で比較するグラフである。
【図３】ハムスターを対象にした放射線誘発口腔粘膜炎モデルにおける粘膜炎スコアの減少に対する本発明の実施形態によるエキスの調合物の薬効を図示するグラフである。
【図４】６人のヒト患者の口腔粘膜炎に対する本発明の実施形態による組成物の効果を図示するグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、詳細な説明において、薬草エキスを含む組成物の新規製造方法を記載する。更に、新規薬草組成物の向上した品質を示す化学的性質及び生物学的性質を記載する。本発明の実施形態による組成物の高められた抗炎症効果を示す動物モデルを記載する。ヒトの治療における本発明の実施形態による組成物の効果を示す臨床試験を記載する。新規薬草組成物を用いる治療方法を提供する。
【００１２】
実施例１ａ：本発明の実施形態による組成物の合成。
【００１３】
図１ａは、植物種サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカからのエキスを含む種々の組成物を合成するための合成計画１００を図示する流れ図を示す。合成計画１００は、サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカそれぞれと、含水アルコール溶液（水とアルコールとを含む溶液）とを混合することよりなるブロック１０、２０及び３０を含む。ブロック１２、２２及び３２は、不溶性植物物質及び溶剤を除去して、それぞれ、サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカの乾燥エキスを形成することよりなる。ブロック４０は、ブロック１２、２２及び３２の乾燥薬草エキスを組み合わせることよりなる。
【００１４】
本発明の一実施形態において、ブロック１０、２０及び／又は３０の含水アルコール溶液は２５〜７５％の間のアルコールを含む。一実施形態において、ブロック１０、２０及び／又は３０の含水アルコール溶液は７０％アルコールを含む。一実施形態において、含水アルコール溶液中のアルコールはエタノールを含む。一実施形態において、ブロック１０、２０及び／又は３０における溶剤対植物の比は、溶剤約６重量部〜約１０重量部の間に対して植物材料１重量部である。一実施形態において、ブロック１０、２０及び／又は３０における溶剤対植物の比は、重量が約８：１の間である。一実施形態において、含水アルコール溶液を約８時間混合する。一実施形態において、抽出工程は多段階式である。一実施形態において、含水アルコール溶液を約３０〜４０℃（摂氏）の温度で混合する。一実施形態において、溶剤及び植物物質を除去する前に含水アルコール溶液へ賦形剤を加える。一実施形態において、賦形剤は担体、例えばマルトデキストリンである。一実施形態において、賦形剤はコロイド無水シリカである。一実施形態において、薬草エキス対賦形剤の比は約７：３である。
【００１５】
本発明の一実施形態において、溶剤を、ブロック１２、２２及び／又は３２において、噴霧乾燥により除去する。
【００１６】
本発明の一実施形態において、ブロック４０において、サンブクス・ニグラ：エキナセア・プルプレア：センテラ・アジアティカの薬草エキスは、２〜１５：０．５〜３：０．５〜３の重量比でそれぞれ組み合わされる。他の実施形態において、サンブクス・ニグラ：エキナセア・プルプレア：センテラ・アジアティカの薬草エキスは、７０：１０：２０の重量比でそれぞれ組み合わされる。
【００１７】
合成計画１００は、水と、ブロック４０の組み合わされた薬草エキスとを組み合せることよりなるブロック４２を更に含む。一実施形態において、水は、薬草エキス１キログラム（ｋｇ）当たり水３〜１４リットル（Ｌ）の比で組み合わされる。一実施形態において、水は、薬草エキス１ｋｇ当たり水９Ｌの比で組み合わされる。一実施形態において、水と薬草エキスとの混合物を約６〜約２４時間混合する。一実施形態において、水と薬草エキスとの混合物を約１２時間混合する。
【００１８】
合成計画１００は、アルコールと、ブロック４２で形成された混合物とを組み合せることよりなるブロック４４を更に含む。本発明の一実施形態において、アルコールはエタノールを含む。一実施形態において、９６％又は１００％エタノールを使用して、約５０％〜約９０％エタノール濃度を有するアルコール混合物を形成する。一実施形態において、７０％エタノール濃度に達するまでエタノールを加える。
【００１９】
本発明の一実施形態において、ブロック４４のアルコール混合物を約６〜約２４時間、好ましくは約１２時間撹拌する。
【００２０】
合成計画１００は、ブロック４４で形成されたアルコール混合物から不溶性材料を除去することよりなるブロック４６を更に含む。本発明の一実施形態において、不溶性材料は、アルコール混合物から、遠心分離、濾過、沈降又はこれらの方法のいくつかの組合せを用いて除去される。
【００２１】
合成計画１００は、アルコールを除去して、薬草水溶液を形成することよりなるブロック４８を更に含む。本発明の一実施形態において、アルコールは、蒸留又は回転蒸発器を用いる蒸発によって除去されうる。本発明の一実施形態において、アルコールはエタノールであり、かつ回転蒸発器を用いて３０℃より低い温度で除去される。
【００２２】
合成計画１００は、ブロック４８の水溶液から水を除去して、乾燥薬草粉末を形成することよりなるブロック５０を更に含む。水の除去は、本発明の一実施形態によれば、凍結乾燥（フリーズドライ）又は噴霧乾燥を用いて成し遂げられてよい。
【００２３】
図１ｂは、植物種サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカからのエキスを含む種々の組成物を合成するための合成計画２００を図示する流れ図を示す。合成計画２００は、上記合成計画１００のブロック１２、２２及び３２の乾燥薬草エキスを組み合わせることよりなるブロック４０を含む。
【００２４】
本発明の一実施形態において、ブロック４０において、サンブクス・ニグラ：エキナセア・プルプレア：センテラ・アジアティカの薬草エキスは、２〜１５：０．５〜３：０．５〜３の重量比でそれぞれ組み合わされる。他の実施形態において、サンブクス・ニグラ：エキナセア・プルプレア：センテラ・アジアティカの薬草エキスは、７０：１０：２０の重量比でそれぞれ組み合わされる。
【００２５】
合成計画２００は、アルコールと、ブロック４０の組み合わされた薬草エキスとを組み合せることよりなるブロック６２を更に含む。一実施形態において、アルコールは、薬草エキス１ｋｇ当たりアルコール約３〜約１４Ｌ、好ましくはアルコール約９Ｌの比での比で使用される。一実施形態において、アルコールと薬草エキスとの混合物を約１２時間混合する。本発明の一実施形態において、アルコールはエタノールを含む。一実施形態において、エタノールは、９６％〜１００％エタノールである。
【００２６】
合成計画２００は、水と、ブロック６２で形成された混合物とを組み合せることよりなるブロック６４を更に含む。一実施形態において、水を使用して、約５０％〜約９０％エタノール濃度を有するアルコール混合物を形成する。一実施形態において、７０％エタノール濃度に達するまで水を使用する。
【００２７】
本発明の一実施形態において、ブロック６４のアルコール混合物を撹拌する。一実施形態において、この混合物を約６〜約２４時間、好ましくは約１２時間撹拌する。
【００２８】
合成計画２００は、ブロック６４で形成されたアルコール混合物から不溶性材料を除去することよりなるブロック６６を更に含む。本発明の一実施形態において、不溶性材料は、アルコール混合物から、遠心分離、濾過、沈降又はこれらの方法のいくつかの組合せを用いて除去される。
【００２９】
合成計画２００は、アルコールを除去して、薬草水溶液を形成することよりなるブロック６８を更に含む。本発明の一実施形態において、アルコールは蒸留又は例えば回転蒸発器を用いる蒸発によって除去されうる。本発明の一実施形態において、アルコールはエタノールであり、かつ回転蒸発器を用いて３０℃より低い温度で除去される。
【００３０】
合成計画２００は、ブロック６８の水溶液から水を除去して、乾燥薬草粉末を形成することよりなるブロック７０を更に含む。水の除去は、本発明の一実施形態によれば、凍結乾燥（フリーズドライ）又は噴霧乾燥を用いて成し遂げられてよい。
【００３１】
実施例１ｂ：エキスＮの合成。
【００３２】
実施例１ａで記載された合成計画１００を、本発明の一実施形態に従って、以降詳細に述べる。
【００３３】
ブロック１０により、サンブクス・ニグラ（開花時の先端部分）と、７０％エタノールとを（溶剤対植物比８：１）混合した。ブロック１２による、不溶性植物物質の除去及び溶剤の乾燥の際に、乾燥サンブクス・ニグラエキス３．２９ｋｇが形成された。
【００３４】
ブロック２０により、エキナセア・プルプレア（根茎及び根）と、７０％エタノールとを（溶剤対植物比８：１）混合した。ブロック２２による、不溶性植物物質の除去及び溶剤の乾燥の際に、乾燥エキナセア・プルプレアエキス４７０ｇ（グラム）が形成された。
【００３５】
ブロック３０により、センテラ・アジアティカ（地上部）を、７０％エタノールと（溶剤対植物比８：１）接触させた。ブロック３２による、不溶性植物物質の除去及び溶剤の乾燥の際に、乾燥センテラ・アジアティカエキス９４０ｇ（グラム）が形成された。
【００３６】
ブロック４０に従って、３つの薬草からの３つの乾燥エキス（重量比７０：１０：２０）を組み合わせた。ブロック４２に従って、水４７Ｌを加え、この混合物を１２時間撹拌した。ブロック４４により、この混合物に９６％エタノール１１３．９Ｌを加えて、７０％エタノールアルコール混合物１６０．９Ｌを形成した。ブロック４６に従ってこの混合物を濾過し、不溶性材料を除去した。ブロック４８に従ってエタノールを蒸発させ、ブロック５０により溶液を噴霧乾燥させて、乾燥薬草粉末３．２ｋｇが形成され、この乾燥薬草粉末をエキスＮと呼んだ。この方法の収率（ブロック４０により加えられた乾燥エキスに対する重量百分率）は６８．７％であった。
【００３７】
実施例１ｃ：エキスＰの合成
【００３８】
合成計画１００のブロック４０に従って、３つの薬草からの３つの乾燥エキス（重量比７０：１０：２０）を組み合わせた。次いで、エキスＰを製造するために、合成計画２００を続けた。ブロック６２に従って、エタノール（１００％）を、乾燥エキス１ｇ当たりエタノール９ｇの比で加えた。この混合物を１２時間撹拌した。次いで、ブロック６４により、７０％エタノールの最終濃度に達するまで、水をゆっくりと加えた。ブロック６６に従ってこの混合物を遠心分離し、不溶性材料を除去した。ブロック６８に従って、真空下で回転蒸発器を用いてエタノールを蒸発させ、ブロック７０により溶液を凍結乾燥させて、乾燥薬草粉末が形成され、この乾燥薬草粉末をエキスＰと呼んだ。エキスＰの収率（ブロック４０により加えられた乾燥エキスに対する重量百分率）は７５％であった。
【００３９】
実施例１ｄ：エキスＤの合成。
【００４０】
合成計画１００のブロック４０に従って、３つの薬草からの３つの乾燥エキス（重量比７０：１０：２０）を組み合わせた。実施例１ｂに記載したようにブロック４２により、水性混合物を形成し、この混合物を約１７〜２０時間混合した。水溶液の遠心分離及び０．２ミクロンフィルタを用いる濾過により、溶液から不溶性材料を除去した。一晩凍結乾燥することにより、濾液から水を除去した。この乾燥薬草混合物をエキスＤと呼んだ。
【００４１】
実施例１ｅ：エキスＢの合成。
【００４２】
薬草エキスを、ブロック４０まで、実施例１ａにより調製した。この組み合わせた薬草エキスをエキスＢと呼んだ。
【００４３】
実施例１ｆ：エキスＭの合成：
【００４４】
薬草エキスを、実施例１ａにより（ブロック４０まで）調製した。１００％エタノールを、組み合わせた薬草エキスに加え、１２時間撹拌した。エタノールの濃度が３０％になるまで、エタノール混合物に水を加えた。次いでエタノールを、回転蒸発器を用いて除去し、次いで水を凍結乾燥により除去した。得られるエキスをエキスＭと呼んだ。
【００４５】
実施例２：本発明の実施形態による組成物の化学分析
【００４６】
本発明の実施形態によるエキスは、抗炎症性を含む複数の生理学的に活性な化合物を含む。ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）定量分析を、エキスＤとエキスＮとの化学的相違を同定するために実施した。
【００４７】
ＨＰＬＣ分析を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ４μｍ  Ｈｙｄｒｏ−ＲＰ８０Ａカラムを用いて、移動相溶剤として水及びアセトニトリル中の０．０１Ｍリン酸を用いて実施した。検出を、ダイオードアレー検出器を用いて実施した。
【００４８】
薬草サンブクス・ニグラ由来の本発明の実施形態によるエキス中で同定された抗炎症性化合物の１つは、ナリンゲニンである。薬草エキスのサンプル中のナリンゲニンの量を定量化するために、ナリンゲニン（Ｓｉｇｍａから入手）を用いてマーカーを調製した。
【００４９】
ＨＰＬＣ分析を種々のバッチからのエキスＤ及びＮで実施した。分析を実施する前に、エキスＤ及びＮを希釈して、５０％アセトニトリル／５０％水の溶剤中の１％溶液とした。結果を次の表１にまとめたが、この際、ナリンゲニン含有率はエキスの百分率を単位として示されている。
【００５０】
【表１】
0006410355.tif 000002
【００５１】
エキスＰを分析したところ、エキスＮと同様のナリンゲニン含有率を有することが分かった。
【００５２】
表１から明らかなように、ナリンゲニン濃度は、エキスＤ中よりもエキスＮ中で一貫して高く、このことは、エキスＤと比較して、エキスＮが改善された抗炎症性特性を有することを示唆している。
【００５３】
実施例３：本発明の実施形態による組成物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験
【００５４】
エキスＤ及びエキスＮの生物学的特性を種々のｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルで比較した。
【００５５】
実施例３ａ：ＩＣＥアッセイ
【００５６】
ＩＣＥ（インターロイキン−１β−変換酵素又はＩＣＥ−カスパーゼ−１）は、炎症における重要な役割を果たすシステインアスパラギン酸−特異性プロテアーゼのファミリーに属する。エキスＤ及びＮによるＩＣＥの阻害を、次の方法を用いて２．５、１．２５及び０．６２５ｍｇ／ｍｌ（ミリリットル当たりのミリグラム）のエキス濃度に関して測定した。
【００５７】
Ａｃ−ＹＶＡＤ−ＡＭＣ構造を有するペプチド基質はＩＣＥのための蛍光原基質であり、この蛍光原基質は蛍光色素７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ）を含む。ＡＭＣは、ＩＣＥによる切断の際に、この基質から放出される。切断の際にもたらされる蛍光シグナルの強さは、サンプル中のＩＣＥ活性の存在に比例する。公知のＩＣＥの選択的阻害剤、Ａｃ−ＹＶＡＤ−ＣＨＯを、潜在的な阻害のための標準試料として使用した。ブラック９６−ウェルプレートを、サンプルの蛍光を検出するための蛍光プレートリーダーと共に使用した。
【００５８】
ＩＣＥアッセイの結果を図２ａに示した。試験した全ての濃度において、エキスＮを用いるＩＣＥ阻害は、エキスＤよりも優れていた。この結果は、エキスＤと比較して、エキスＮが高められた抗炎症性活性を有することを示している。
【００５９】
実施例３ｂ：コラーゲン放出アッセイ
【００６０】
コラーゲンは、結合組織内に豊富にあり、創傷治癒において重要な役割を有するタンパク質である。皮膚線維芽細胞（結合細胞の製造を補助する細胞）中へのコラーゲン放出を生じる薬剤は創傷治癒剤として有効であろう。皮膚線維芽細胞中へのコラーゲンの放出に対するエキスＤ及びＮの効果を、次の手順を用いて試験した。
【００６１】
ヒト包皮線維芽細胞を、ヒトタイプ１コラーゲンを認識する１対の抗体を基礎とするサンドウィッチＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）で使用した。使用した抗体は、ヤギ抗タイプ１コラーゲン：補足抗体−ラベルなし（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、  ＵＳＡから購入、Ｃａｔ．＃１３１０−０１）及び検出抗体−ビオチン複合体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、ＵＳＡから購入、Ｃａｔ．＃１３１０−０８）であった。
【００６２】
コラーゲン放出に対するエキスＤ及びＮの効果を、１．５、０．７５、０．３８及び０．１９ｍｇ／ｍｌの濃度を用いて試験した。コラーゲン放出アッセイの結果を図２ｂに示す。試験した全ての濃度で、エキスＮが、エキスＤよりも、コラーゲン生成の誘導においてより効果的であり、このことは、エキスＮが、エキスＤよりも、より優れた創傷治癒能力を有することを示唆している。
【００６３】
実施例３ｃ：ＮＦκＢレポーターアッセイ
【００６４】
ＮＦκＢタンパク質は、炎症、免疫応答、細胞増殖及びアポトーシス抑制において重要な役割を担う。
【００６５】
ネズミマクロファージ細胞株ＲＡＷ２６４．７（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手）をＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーター構造を用いて形質導入し、これを、ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子構造を含む細胞中へのＮＦ−κＢタンパク質の誘導に対するエキスＤ及びＮの阻害効果を測定するためにこのアッセイで使用した。ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーターを誘導するためにリポ多糖（ＬＰＳ）を使用し、阻害活性に関してエキスを試験した。正規化に関するＲＡＷ２６４．７細胞数を測定するための蛍光染料として、カルセインＡＭ（カルセインのアセトメトキシ誘導体）を使用した。モデル中の発光は、ＮＦ−κＢタンパク質の発現に関連付けられるので、発現の阻害は、発光の阻害と関連付けることにより測定されうる。
【００６６】
モデルにおいて高い阻害率を有する組成物は、哺乳類でのＮＦ−κＢタンパク質の阻害による炎症の減少のための、その潜在的な使用を示唆する。１、０．２５及び０．１２ｍｇ／ｍｌの濃度でのＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーターに対するエキスＤ及びＮの効果を試験し、図２ｃに示した。２種類の低濃度で、エキスＮは、エキスＤよりも、ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーター誘導の阻害に関して効果的であり、このことは、エキスＮがエキスＤと比較して向上した抗炎症性特性を有し、より低い用量で効果的であることを示唆している。
【００６７】
実施例３ｄ：酸化窒素放出アッセイ
【００６８】
酸化窒素（ＮＯ）は、炎症に関与する重要な生理学的メッセンジャー及びエフェクター分子である。細胞中でのＮＯ生成の阻害は、組成物の抗炎症性特質の指標となりうる。エキスＤ及びＮを、次のアッセイによりＮＯ阻害特質に関して試験した。
【００６９】
このアッセイのために、ＲＡＷ２６４．７細胞を使用した。ＮＯの存在は、ＮＯの２つの一次安定性及び不揮発性の分解生成物のうちの一つである亜硝酸塩を測定する、グリース試薬システムを用いて測定した。亜硝酸塩は、スルファニルアミド及びＮ−１−ナフチルエチレンジアミンジヒドロクロライド（ＮＥＤ）と、酸性（リン酸）条件下で反応して蛍光アゾ化合物を生成し、これをプレートリーダーにより検出する。ＲＡＷ２６４．７細胞中で炎症を誘発するためにＬＰＳを使用し、炎症の阻害を１．０、０．５、０．２５及び０．１３ｍｇ／ｍｌのエキスＤ及びＮを用いて試験した。
【００７０】
モデルにおいて高い阻害率を有する組成物は、哺乳類でのＮＯ生成の阻害による炎症の減少のための、その潜在的な使用を示唆する。ＮＯ生成に対する、エキスＤ及びＮの効果を図２ｄに示した。全ての濃度で、エキスＮは、エキスＤよりも、ＮＯ生成の阻害に関してより効果的であり、このことは、エキスＮがエキスＤと比較して向上した抗炎症性特性を有することを示唆している。
【００７１】
実施例３ｅ：ＩＬ−１１（インターロイキン−１１）ＥＬＩＳＡアッセイ
【００７２】
粘膜保護効果の指標となる、線維芽細胞中へのＩＬ−１１の放出を誘導したサイトカインに対する薬草エキスの効果を試験するために、アッセイを行なった。このアッセイを、ヒト歯肉線維芽細胞で実施した。
【００７３】
歯肉線維芽細胞の細胞株を、１０４細胞／ウェルの開始接種密度で、９６ウェル組織培養プレートの増殖培地１５０μｌ（マイクロリットル）中に接種し、２４時間培養した。増殖培地を除去し、次いで歯肉線維芽細胞の細胞を、ＢＳＡ培地（ウシ血清アルブミン）１５０μｌ中に加えられたＴＧＦ−β（トランスフォーミング成長因子ベータ）２．０ｎｇ／ｍｌ（ミリリットル当たりナノグラム）の最終濃度で活性化した。０．５ｍｇ／ｍｌの濃度で薬草エキスも加え、その培地を更に２４時間インキュベートした。薬草エキスと成長因子との相乗作用の程度を測定するために、ＴＧＦ−βも単独で試験を行った。
【００７４】
ＩＬ−１１濃度の測定のためにならし培地のサンプル（１００μｌ）を抽出し、結果を正規化するために残る５０μｌと共に歯肉線維芽細胞の細胞を発光細胞生死判別アッセイで試験した。サイトカインを添加しないネガティブコントロールが含まれた。ＩＬ−１１の生成に対するサンプル材料の効果を、市販で得られるキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｃａｔ．＃  ＤＹ  ２１８，  ＭＮ，  ＵＳＡ）を用いて製造元の指示書によりＥＬＩＳＡアッセイによって測定した。
【００７５】
ＴＧＦ−βの存在及び不存在下の両方でのそれぞれのエキスについてのｐｇ／ｍｌ（ピコグラム／ミリグラム）を単位とするＩＬ−１１生成の結果を測定した。次いで、これらの結果を、（ＴＧＦ−β及びエキスの存在下でのＩＬ−１１濃度）／（ＴＧＦ−Ｐ単独の存在下でのＩＬ−１１濃度）＋（エキス単独の存在下でのＩＬ−１１濃度）を表す相乗作用ユニットを測定するために計算した。上の式で１の値は、細胞に一緒に加えられたＴＧＦ−β＋エキスに関して得られた値が、歯肉線維芽細胞の細胞に別々に加えられたこれらのそれぞれに関して得られた値の合計と同じであることを示唆している。これは、相加効果である。１より大きな値は、薬草エキスの相乗的効果を示唆している。
【００７６】
【表２】
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【００７７】
表２において見られるように、エキスＮ及びＰは相乗的活性を示すが、エキスＭは相乗的活性を示さない。
【００７８】
実施例４：ハムスターの口腔粘膜炎（ＯＭ）のモデルを用いる、本発明の実施形態による組成物のｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
【００７９】
、
体重約９５ｇの雄シリアンゴールデンハムスター（「ハムスター」）を無作為に、２つの溶媒対照群（各群ハムスター８匹）と、４つの試験品群（各群ハムスター６匹）とに割り当てた。研究０日目に、それぞれのハムスターに左頬側頬袋に向けて４０Ｇｙ（グレイ）の急性放射線線量を与えた。試験品を、−１日（放射線線量の前日）から２０日に１日３回局所投与した。−１日から２５日まで、ハムスターの状態を毎日評価し、体重を１日１回測定した。粘膜炎を７、１０、１３、１６、１９、２２及び２５日に評定した。粘膜炎の経過への試験品の影響力を測定するために、粘膜炎の持続時間及び重症度を、治療群と未治療対照群とで比較した。
【００８０】
ハムスターにおける粘膜炎を表３によりスコア化した
【表３】
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【００８１】
２つの溶媒対照群は、生理食塩水か又はプロピレングリコール（ＰＧ）のいずれか一方を投与した。４つの治療群に次のような治療を施した：
【００８２】
群１：ＰＧ１００％中のエキスＢ１％
【００８３】
群２：ＰＧ１００％中のエキスＭ１％
【００８４】
群３：ＰＧ１００％中のエキスＮ１％
【００８５】
群４：１分間渦動することにより生理食塩水中に溶解したエキスＮ１％。
【００８６】
試験される組成物０．２ｍｌを、それぞれのハムスターに１日３回投与した。ハムスターにおいて、いずれの群も上昇したスコアが３を超える合計日数を足して、各群を評価した合計日数の百分率として表した。その結果を図３に示す。
【００８７】
生理食塩水中のエキスＮは、生理食塩水対照群と比較して、粘膜炎スコアの低下に対して、有意な効果（ｐ＝０．０２４）を有した。同様に、ＰＧ中のエキスＮは、ＰＧ対照群と比較して、粘膜炎スコアの低下に対して有意な効果（ｐ＝０．００３）を有した。エキスＢ及びＭは、ＰＧ対照群と比較して、ハムスターにおいて３より低いスコアの低下を示さなかった。
【００８８】
この試みの結果は、エキスＮがヒトのＯＭの治療において効果的であろうことを示唆する。この効果は、水（生理食塩水）か又はＰＧかを基礎とするエキスＮの調合物で顕著であった。
【００８９】
実施例５：本発明の実施形態による組成物の向上した溶解性
【００９０】
エキスＢとエキスＮとを区別するために溶解性試験を実施した。
【００９１】
水中濃度１％（リットル当たりのグラム）のエキスＢ及びＮを用いて、エキス溶液を調製した。撹拌の間、双方の溶液は濁っていた。エキスＢは、目で認識されうる粒子を有し、この粒子は撹拌する間にかなり澄明な溶液中で周りに浮いた。エキスＮは、溶液は濁っているが、認識可能な粒子を有さずに、より均質な分散液を生じた。混濁度を、ＨＦ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃにより製造されたＭｉｃｒｏ１００混濁計を用いて測定し、比濁混濁度ユニット（ＮＴＵ）を単位として表した。表中に見て取ることができるように、２つの調合物の混濁度には有意な相違があり、Ｂ中のより大きな粒子は、Ｎ中の粒子より早く沈降した。
【００９２】
【表４】
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【００９３】
１００％ＰＧ中の溶液を、濃度５％（リットル当たりのグラム）で調製した。エキスＮは完全に溶解したように見えたが、エキスＢは濁っていた。撹拌後に混濁度を測り、エキスＢが３８５ＮＴＵ及びエキスＮが１４．７ＮＴＵであることが測定された。一晩放置後に、沈殿物の多くの量はエキスＢの懸濁液から沈降したが、澄明なエキスＮ混合物中に沈殿物は見られなかった。
【００９４】
これらの試験は、エキスＮが、水中のエキスＢよりも、高い溶解性を有し、より安定性の懸濁液を形成することを示唆している。更に、ＰＧ溶液は、エキスＮと５〜２０％濃度（重量）で配合されうる一方、エキスＢはこれらの濃度では安定溶液を提供しない。エキスＮは、付加的溶解剤を必要とせずに、ＰＧ中に実行可能に配合されうる。
【００９５】
実施例６ａ：本発明の実施形態によるエキスを含む医薬組成物
【００９６】
エキスＮ２．６０１ｋｇをＰＧ１０．３７９ｋｇ及びスクラロース２６．０１ｇと１２時間撹拌して、濃縮溶液を形成した。濃縮溶液２．５ｇを生理食塩水４７．５ｍｌと混合して、口内洗浄剤を調製した。
【００９７】
実施例６ｂ：本発明の付加的実施形態によるエキスを含む医薬組成物
【００９８】
本発明の付加的実施形態において、本発明の組成物は、植物種セイヨウオトギリソウ及びミルラノキ、キャッツクロー、タチジャコウソウ、ジャーマンカモミール、セイヨウシロヤナギ、キンセンカ、サルオガゼ、リグスティクム・ポルテリイ−オシャ（Ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ  ｐｏｒｔｅｒｉｉ−ｏｓｈａ）、チェッカーベリー、チャノキ、セイヨウスノキ、レモンバーム、ニンニク、チャノキ、アキザキマンサク又はラタニアのエキスを更に含む。
【００９９】
更に、本発明の付加的実施形態において、医薬組成物は、パッチ、軟膏、ペースト、ローション、クリーム、トローチ、キャンディ、チューインガム、溶液、ゲル、フォーム及びスプレーの形態で調製されてよい。医薬組成物は、本発明の実施形態により、組成物を即時放出又は遅延放出する形に調製されていてよい。
【０１００】
実施例７ａ：本発明の実施態様による組成物を用いる治療方法
【０１０１】
ＯＭは、最もしばしば報告され、癌化学療法及び放射線治療に付随する潜在的に最も衰弱している状態であり、発現率の範囲は、化学療法又は放射線治療を受けている患者の１０〜７５％、骨髄移植被移植者の７０〜９０％及び頭部及び頸部癌（ＨＮＣ）のために放射線及び化学療法の組み合わせを受けている患者の９５％超である。ＯＭは、鎮痛剤及び抗生剤の使用の増加、発熱日数、胃チューブ又は非経口栄養の必要性、入院期間の長さ、計画していない緊急救命室の滞在及び全治療費と関係があり、これらはすべて健康及び経済的結果に悪影響を及ぼす。アメリが合衆国において毎年約５０万人の患者がＯＭを発症し、その多くは避けられないものであると考えられる。
【０１０２】
ＨＮＣのためにＣＲＴ（化学−放射線治療）を受けている患者を対象に、固定用量を用いて実施例６ａによるＯＭにおける口内洗浄液の効果を試験する、プラセボ対照二盲検無作為化比較試験を実施する。患者は、無作為化計画により、活性口内洗浄液又はプラセボのいずれかを受けるよう無作為に１：１に割り付ける。洗浄液用量は、実施例６に記載したように１％口腔洗浄剤１５ｍｌとし、１日３回の頻度である。プラセボを、生理食塩水で希釈したＰＧ、スクラロース及び食用着色料を用いて調製する。
【０１０３】
約１０４人の被検者が、約７〜９週間ＣＲＴと同時に治療を受け、重症粘膜炎が消炎するまで続けられた。被検者は、増幅変調放射線治療又は３次元計画のいずれかによって誘導される外部ビーム連続照射を受けるように、スケジュールされる。累積処方線量は５０〜７０Ｇｙの間である。口腔の２５％以上が５０Ｇｙ以上の線量を受ける。放射線治療は、２１日ごとに１回投与される６０〜１００ｍｇ／ｍ２（平方メートル当たりミリグラム）か、又は、毎週１回投与される３０〜４０ｍｇ／ｍ２の線量で、シスプラチン化学療法と同時に施される。
【０１０４】
安全性は、生命徴候及び理学的検査を基礎とする一般毒性により評価する。有効性を、５０Ｇｙの累積放射線量でのＯＭのためのＷＨＯ（世界保健機関）経口毒性尺度により、スコアが３から４の積極的治療群対プラセボ群での患者の割合により評価する。
【０１０５】
ＯＭに関するＷＨＯ経口毒性尺度は次のようである：グレード０：粘膜炎又は粘膜病変なし。グレード１：紅斑、粘膜感受性及び疼痛。グレード２：潰瘍、固形食を食べることができる。グレード３：潰瘍、液体に制限された口からの摂取。グレード４：潰瘍、経口栄養は不可能。
【０１０６】
非盲検部分試験において、７人の患者を実施例６ａで記載された医薬組成物で治療した。累積放射線量に対するＯＭスコアを示すグラフを図４に示す。患者５及び６は、治療期間中、重複するスコアを有し、１本線によって表す。
【０１０７】
過去のデータに基づいて、試験対象の患者集団では、口腔に対して相当量の放射線累積線量を受ける患者の約７５％がグレード３〜４のＯＭを発症すると予想される。組成物の成分の１つに対して明らかにアレルギー反応を示したため、患者の一名を、治療の非常に短い期間後に試験対象外とした。残る６名の患者のうち４名は、これらの患者のスコアが治療期間全体を通して１を超えなかったので、治療に有利に反応したと認められた。１名の追加患者は、放射線の累積線量が４０Ｇｙを超えた後ＯＭを発症したため、一部反応を示したとみなされた。
【０１０８】
非盲検部分試験の結果は、本発明の実施形態により調製された組成物が、口腔に放射線療法を受けた患者を含むＯＭ発症の危険にある患者を治療する際に効果的であることを示す。同様の結果が、完全試験からも予想される。
【０１０９】
実施例７ｂ：ＯＭを患う患者での本発明の実施形態による組成物の使用
【０１１０】
約８０歳の膵臓がん患者を化学療法と放射線により３年間断続的に治療した。患者はＯＭを患っていると診断され、組成物Ｑ（下記に示す調製）で約２〜３週間治療した。ＯＭの有意な改善は認識されなかった。
【０１１１】
組成物Ｑを、次の方法を用いて調製した。薬草サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカのエタノール抽出物を調製し、次いで８５：５：１０の比で組み合わせた。次いで、この配合物を、組み合わせた薬草エキス１ｋｇ当たり水９Ｌの比で、水で抽出した。不溶性材料を除去し、可溶性相を濾過した。次いで、可溶性相を水、二ナトリウムＥＤＴＡ、安息香酸ナトリウム、塩化セチルピリジニウム一水和物、ＰＥＧ−４０硬化ヒマシ油９０％、Ｓ−乳酸、ソルビトール、ＰＧ、香味料及びエリオグラウシンと組み合わせることにより、組成物Ｑへと配合した。組成物Ｑ中の可溶性相中の固体含有率の濃度は１％であった。
【０１１２】
２〜３週間後に、組成物Ｑの投与を止め、次いで患者に実施例６による組成物を投与した。患者は、２５時間内に疼痛の可測的軽減及び腫瘍領域寸法の減少を経験した。
【０１１３】
ＯＭを治療することに加えて、粘膜の炎症に関連する他の疾患が、本発明の実施形態によるエキスを用いて治療されうる。本発明の実施形態によるエキスを用いて治療される粘膜としては、頬、食道、胃、腸管、鼻、嗅神経、口、気管支、子宮、子宮内膜、膣又は陰茎の粘膜を挙げることができる。本発明の実施形態による炎症性疾患としては、炎症性腸疾患、放射線誘発直腸炎及び萎縮性膣炎が挙げられる。
【０１１４】
本発明の実施形態によるエキスを含む組成物は、種々の疾患及び適応症の治療又は予防のために使用されうる。本発明の一実施形態において、組成物は、口腔粘膜疾患の治療における使用が意図されている。本発明の一実施形態において、治療組成物は、歯周病、歯肉炎、アフタ性潰瘍、機械的外傷、熱的外傷、扁平苔癬、水疱性類天疱瘡、尋常性天疱瘡、疱疹状皮膚炎、口角びらん症及び再発性ヘルペスからなる群から選択される口腔粘膜疾患の治療における使用が意図されている。
【０１１５】
本発明の一実施形態において、治療組成物は、皮膚病変の治療における使用が意図されている。本発明の一実施形態において、治療組成物は、皮膚外傷の治療における使用が意図されている。他の好ましい実施形態において、治療組成物は、虫刺され及び他の局所的表在的刺激の治療における使用が意図されている。
【０１１６】
本発明の一実施形態において、治療組成物は、肛門病変の治療における使用が意図されている。本発明の一実施形態において、治療組成物は、肛門裂傷、痔及び非特異性刺激からなる群から選択される状態に付随する肛門病変の治療における使用が意図されている。
【０１１７】
本発明の一実施形態において、治療組成物は、膣病変の治療における使用が意図されている。本発明の一実施形態において、治療組成物は、萎縮性膣炎に付随する膣病変の治療における使用が意図されている。
【０１１８】
本発明による実施形態は、薬草エキスを１日につき１ｍｇ〜１．５ｇの間で投与することを含む治療方法を提供する。本発明の実施形態において、一日の用量は６２５ｍｇ／日である。実施形態において、一日の投与量は４５０ｍｇ／日である。別の実施形態では、９００ｍｇ／日である。
【０１１９】
更に、本発明の一実施形態に従って、サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカの含水アルコール薬草エキスと水とを組み合わせて、水性混合物を形成すること；水性混合物とアルコールとを組み合わせて、約５０％より高いアルコール濃度を有するアルコール混合物を形成すること；不溶性材料及びアルコールをアルコール混合物から分離して、水性治療組成物を生成すること：を含む、水性治療組成物を調製する方法が提供される。任意選択的に、アルコール混合物は約７０％アルコールを含む。任意選択的に、水性治療組成物を更に乾燥させて、乾燥治療組成物を形成する。任意選択的に、アルコールはエタノールである。任意選択的に、不溶性材料をアルコール混合物から遠心分離、濾過又は沈降を用いて分離する。任意選択的に、アルコールをアルコール混合物から真空を用いて分離する。任意選択的に、水性治療組成物を噴霧乾燥又はフリーズドライにより乾燥する。任意選択的に、この方法は、乾燥治療組成物と少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤とを組み合わせることを更に含む。任意選択的に、賦形剤は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセリン及び精油からなる群から選択される。任意選択的に、サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカの水アルコール薬草エキスは、約７０％アルコールを含む溶剤中に植物物質を混合することにより調製される。任意選択的に、植物物質を約８時間混合する。任意選択的に、植物物質対溶剤の比は約１：８である。任意選択的に、この方法は、植物物質及び溶剤の混合物から溶剤を除去して、含水アルコール薬草エキスを形成することを更に含む。
【０１２０】
更に、本発明の一実施形態に従って、０．０５５％以上のナリンゲニン濃度を有するエキスである、サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカのそれぞれの含水アルコール薬草エキスを含む薬草エキスが提供される。任意選択的に、この薬草エキスは、プロピレングリコール中の２０％溶液中で溶解性を有する。任意選択的に、サンブクス・ニグラ：エキナセア・プルプレア：センテラ・アジアティカの比は約７：１：２である。
【０１２１】
更に、本発明の一実施形態に従って、０．０５５％以上のナリンゲニン濃度を有するエキスである、サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカのそれぞれの含水アルコール薬草エキスを含む、薬草エキスを含む医薬組成物が提供される。任意選択的に、この医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体を更に含む。任意選択的に、担体は、プロピレングリコールを含む。任意選択的に、医薬組成物は、それに応じて、口内洗浄液、パッチ、軟膏、ペースト、ローション、クリーム、トローチ、キャンディ、チューインガム、溶液、ゲル、フォームまたはスプレーの形態である。
【０１２２】
更に、本発明の一実施形態に従って、０．０５５％以上のナリンゲニン濃度を有するエキスである、サンブクス・ニグラ、エキナセア・プルプレア及びセンテラ・アジアティカのそれぞれの水アルコール薬草エキスを含む、薬草エキスを含む薬学的に許容可能な量の医薬組成物を投与することよりなる、疾患を治療する方法が提供される。任意選択的に、疾患は、粘膜又は皮膚の疾患である。任意選択的に、疾患は炎症性疾患である。任意選択的に、疾患は組織修復により改善される。任意選択的に、疾患は、口腔粘膜炎、炎症性腸疾患、放射線誘発直腸炎、萎縮性膣炎、歯周病、歯肉炎、アフタ性潰瘍、機械的外傷、  熱的外傷、扁平苔癬、水疱性類天疱瘡、尋常性天疱瘡、疱疹状皮膚炎、口角びらん症及び再発性ヘルペスからなる群から選択される。任意選択的に、薬草エキス投与量は、１日当たり１ｍｇ〜１．５ｇの間である。
【０１２３】
本明細書の説明及び請求の範囲において、「よりなる」「含む」及び「有する」という動詞それぞれ及びその複合は、動詞の１つまたは複数の目的語が、動詞の主語の成分、要素又は部分の必ずしも完全な列挙ではないということを示唆するために用いられる。
【０１２４】
本明細書中の本発明の実施形態の説明は、例示として提供されるものであり、本発明の範囲を限定することを意図していない。記載された実施形態は異なる特徴を含み、この特徴の全てが本発明の全ての実施形態において必要とされるわけではない。いくつかの実施形態は、これらの特徴のいくつかのみを又はこれらの特徴の可能な組み合わせを利用する。記載される本発明の種々の実施形態及び記載された実施形態において言及された特徴の異なる組み合わせを含む本発明の実施形態は、当業者に推測されるであろう。本発明の範囲は、請求の範囲によってのみ限定される。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図２ｃ】
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【図２ｄ】
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【図３】
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【図４】
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