(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハロアルカンスルホン酸又はその塩を含むヘムタンパク質の保存液。
【請求項２】
前記ハロアルカンスルホン酸の置換ハロゲン原子が塩素原子である請求項１に記載のヘムタンパク質の保存液。
【請求項３】
前記ハロアルカンスルホン酸が、ヒドロキシ基が置換している炭素数１乃至５のハロアルカンスルホン酸である請求項１又は２に記載のヘムタンパク質の保存液。
【請求項４】
前記ハロアルカンスルホン酸又はその塩が、クロロメタンスルホン酸、２−クロロエタンスルホン酸、３−クロロ−１−プロパンスルホン酸、２−クロロ−１−ヒドロキシエタンスルホン酸、３−クロロ−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸、又はその塩からなる群より選択される少なくとも１種である請求項１乃至３のいずれかに記載のヘムタンパク質の保存液。
【請求項５】
前記ハロアルカンスルホン酸又はその塩の濃度が０．００１ｍｏｌ／Ｌ以上０．３ｍｏｌ／Ｌ以下である請求項１乃至４のいずれかに記載のヘムタンパク質の保存液。
【請求項６】
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−エタンスルホン酸をさらに含む請求項１乃至５のいずれかに記載のヘムタンパク質の保存液。
【請求項７】
ヘムタンパク質を含む標準試料又はコントロール試料として用いられる請求項１乃至６のいずれかに記載のヘムタンパク質の保存液。
【請求項８】
免疫学的測定に用いられる請求項１乃至７のいずれかに記載のヘムタンパク質の保存液。
【請求項９】
ヘムタンパク質を含む試料中に、ハロアルカンスルホン酸又はその塩を共存させるヘムタンパク質の安定化方法。
【請求項１０】
前記ハロアルカンスルホン酸又はその塩の濃度が０．００１ｍｏｌ／Ｌ以上０．３ｍｏｌ／Ｌ以下である請求項９記載のヘムタンパク質の安定化方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘムタンパク質の保存液及びヘムタンパク質の安定化方法に関する。特に、免疫学的測定法において有用なヘムタンパク質の保存液及びヘムタンパク質の安定化方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、がんの罹患率が増加していることに伴い、大腸がん検診の一次検査や下部消化管疾患のスクリーニング法として、糞便中の血液を検出する便潜血検査が広く行われている。便潜血検査は、ヘムタンパク質であるヘモグロビンの持つペルオキシダーゼ様活性を利用した化学的な発色反応に基づく化学的測定法や、ヒトヘモグロビンに特異的な抗体を利用した免疫学的測定法によって行われており、特に、免疫学的測定法は、化学的測定法と比較して検査前の食事制限や服薬制限を必要とせず、簡便で迅速な測定が可能であるため、便潜血検査の主な検査方法として定着している。
【０００３】
しかしながら、ヘモグロビンは溶液中で非常に不安定であり、変性あるいは分解しやすいことが知られている。このヘモグロビンの変性あるいは分解によって、ヘモグロビンの立体構造が破壊され、その抗原性が低下するため、ヘモグロビンの免疫学的測定法において誤った検査結果が導かれてしまう。ヘモグロビンの変性あるいは分解の原因としては、保存温度の上昇、時間経過、細菌や酵素等様々なものが挙げられるが、例えば、保存温度について、溶液中のヘモグロビンは凍結又は冷蔵状態では比較的安定するが、室温又はそれ以上の温度では変性あるいは分解が進むことが知られている。
【０００４】
特に、便潜血検査においては、被験者自身が自宅等で糞便を採取し、便検体用希釈液を含む密閉容器に糞便を懸濁して検査に供する場合が多く、この場合、糞便中のヒトヘモグロビンは、溶液中で数日間放置され、郵便等の輸送手段を利用することによって高温下に置かれることもある。さらに、病院や検査機関では、多数の検体及び他項目の検査を実施しているため、測定結果を得るまでに多くの時間を要することもある。それゆえ、便潜血検査では、温度上昇や時間経過等の原因が重なり合い、ヘモグロビンの変性あるいは分解が生じやすい。
【０００５】
さらに、便潜血検査では、多くの検体を正確かつ迅速に測定できる自動分析装置を用いて測定が行われることが多い。自動分析装置を用いた測定では、試薬や装置の変化等が検査結果の精度に影響するため、既知濃度のヘモグロビンを含む標準試料及び既知濃度のヘモグロビンを含むコントロール試料を用いて定期的に自動分析装置のキャリブレーションや精度管理が行われている。キャリブレーションでは、複数の既知濃度の測定対象物質を含む標準試料を自動分析装置で測定して、検量線を作成し、自動分析装置の校正を行い、精度管理では、既知濃度の測定対象物質を含むコントロール試料を自動分析装置で測定し、測定値が所定範囲内に収まっているか否かにより、分析精度を判定する。しかしながら、標準試料及びコントロール試料中に含まれるヘモグロビンが変性あるいは分解していると、キャリブレーションや精度管理を正確に行うことができず、測定の誤りを招くこととなる。
【０００６】
従って、ヘモグロビンの変性あるいは分解を抑制し、正確な測定結果を得るために、これまで、ヘモグロビンを安定化するための様々な方法が提案されてきた。例えば、チメロサールやクロルヘキシジン等抗菌剤を添加する方法（例えば、特許文献１参照）、ヒト以外の動物ヘモグロビンを添加する方法（例えば、特許文献２参照）、ヒト以外の動物血清を添加する方法（例えば、特許文献３参照）、グリコシダーゼ型溶菌酵素を添加する方法（例えば、特許文献４参照）、亜硫酸や二亜硫酸等を添加する方法（例えば、特許文献５参照）、アシルアルギニンエステル及びカチオン性界面活性剤を添加する方法（例えば、特許文献６参照）、グリオキシル酸を添加する方法（例えば、特許文献７参照）等が提案されている。
【０００７】
さらに、本出願人は、水溶性遷移金属錯体を添加する方法（例えば、特許文献８参照）、フェロシアン化合物を添加する方法（例えば、特許文献９参照）、ヘモグロビンの酵素分解産物を添加する方法（例えば、特許文献１０参照）、遷移金属類を添加する方法（例えば、特許文献１１参照）、リンゴ酸等の有機酸を添加する方法（例えば、特許文献１２参照）、脱脂アルブミンを添加する方法（例えば、特許文献１３参照）、イミノカルボン酸を添加する方法（例えば、特許文献１４参照）等を既に提案している。
【０００８】
しかしながら、ヘモグロビンは非常に不安定であることから、これらのヘモグロビンの安定化方法であっても、その変性あるいは分解を十分に防ぐには至っていないという問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開昭６３−２７１１６０号公報
【特許文献２】特開平２−２９６１４９号公報
【特許文献３】特開平４−１４５３６６号公報
【特許文献４】特公平５−６９４６６号公報
【特許文献５】特開２０００−２５８４２０号公報
【特許文献６】特開２００９−２２２７１０号公報
【特許文献７】特開２０１３−２５７２１６号公報
【特許文献８】特開平７−２２９９０２号公報
【特許文献９】特開平１１−１１８８０６号公報
【特許文献１０】特開平１１−２１８５３３号公報
【特許文献１１】特開２００１−２４９１３２号公報
【特許文献１２】特開２００３−１４７６８号公報
【特許文献１３】特開２００３−１９４８２５号公報
【特許文献１４】特開２００９−０９７９５６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
このような問題を解決するため、本発明は、ヘモグロビンに代表されるヘムタンパク質の変性あるいは分解に対して有効な、新たなヘムタンパク質の保存液及びヘムタンパク質の安定化方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明のヘムタンパク質の保存液は、ハロアルカンスルホン酸又はその塩を含むことを特徴とする。また、本発明のヘムタンパク質の安定化方法は、ヘムタンパク質を含む試料中に、ハロアルカンスルホン酸又はその塩を共存させることを特徴とする。
【００１２】
すなわち、本発明は、
（１）  ハロアルカンスルホン酸又はその塩を含むヘムタンパク質の保存液。
（２）  ハロアルカンスルホン酸の置換ハロゲン原子が塩素原子である（１）に記載のヘムタンパク質の保存液。
（３）  ハロアルカンスルホン酸が、ヒドロキシ基が置換している炭素数１乃至５のハロアルカンスルホン酸である（１）又は（２）に記載のヘムタンパク質の保存液。
（４）  ハロアルカンスルホン酸又はその塩が、クロロメタンスルホン酸、２−クロロエタンスルホン酸、３−クロロ−１−プロパンスルホン酸、２−クロロ−１−ヒドロキシエタンスルホン酸、３−クロロ−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸、又はその塩からなる群より選択される少なくとも１種である（１）乃至（３）のいずれかに記載のヘムタンパク質の保存液。
（５）  ハロアルカンスルホン酸又はその塩の濃度が０．００１ｍｏｌ／Ｌ以上０．３ｍｏｌ／Ｌ以下である（１）乃至（４）のいずれかに記載のヘムタンパク質の保存液。
（６）  Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−エタンスルホン酸をさらに含む（１）乃至（５）のいずれかに記載のヘムタンパク質の保存液。
（７）  ヘムタンパク質を含む標準試料又はコントロール試料として用いられる（１）乃至（６）のいずれかに記載のヘムタンパク質の保存液。
（８）  免疫学的測定に用いられる（１）乃至（７）のいずれかに記載のヘムタンパク質の保存液。
（９）  ヘムタンパク質を含む試料中に、ハロアルカンスルホン酸又はその塩を共存させるヘムタンパク質の安定化方法。
（１０）  ハロアルカンスルホン酸又はその塩の濃度が０．００１ｍｏｌ／Ｌ以上０．３ｍｏｌ／Ｌ以下である（９）記載のヘムタンパク質の安定化方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のヘムタンパク質の保存液及びヘムタンパク質の安定化方法によれば、ヘムタンパク質の変性あるいは分解を抑制し、ヘムタンパク質を安定的に保存することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００１５】
本発明のヘムタンパク質の保存液は、ハロアルカンスルホン酸又はその塩を含む。また、本発明のヘムタンパク質の安定化方法は、ヘムタンパク質を含む試料中に、ハロアルカンスルホン酸又はその塩を共存させる。
【００１６】
本発明に用いられるハロアルカンスルホン酸又はその塩は、特に限定されるものではなく、公知のものから選択することができる。本発明に用いられるハロアルカンスルホン酸の炭素数は１乃至５、より好ましくは１乃至３である。置換したハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、及び臭素原子等が挙げられるが、特に、塩素原子であることが好ましい。置換したハロゲン原子の数は１個以上であり、より好ましくは１乃至３個、特に好ましくは１又は２個である。本発明に用いられるハロアルカンスルホン酸としては、例えば、クロロメタンスルホン酸、２−クロロエタンスルホン酸、３−クロロ−１−プロパンスルホン酸等が挙げられる。
【００１７】
さらに、本発明に用いられるハロアルカンスルホン酸又はその塩は、ヒドロキシ基が置換していてもよい。置換したヒドロキシ基の数は１個以上であり、より好ましくは１又は２個である。ヒドロキシ基が置換したハロアルカンスルホン酸又はその塩としては、例えば、２−クロロ−１−ヒドロキシエタンスルホン酸、３−クロロ−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸等が挙げられる。また、本発明に用いられるハロアルカンスルホン酸又はその塩は、少なくとも１種であり、２種以上を混合した混合物であってもよい。
【００１８】
本発明によれば、保存液又は試料中にヘムタンパク質とハロアルカンスルホン酸又はその塩とを含むことによって、ヘムタンパク質の変性あるいは分解を抑制することができる。特に、本発明によれば、ハロアルカンスルホン酸が３−クロロ−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（以下、ＣＨＰＳという）を含むことによって、ヘムタンパク質の安定性をより高めることができる。
【００１９】
本発明に用いられるハロアルカンスルホン酸の塩は、特に限定されないが、ハロアルカンスルホン酸の１価、２価、又は３価の塩である。ハロアルカンスルホン酸の塩としては、例えば、アルカリ金属塩、アンモニウム塩、アルカリ土類金属塩、鉄塩、又はアルミニウム塩等が挙げられる。アルカリ金属としては、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、ルビジウム、セシウムが挙げられる。アルカリ土類金属としては、例えばカルシウム、ストロンチウム、バリウム、ラジウムが挙げられる。
【００２０】
本発明のヘムタンパク質の保存液又はヘムタンパク質を含む試料に含まれるハロアルカンスルホン酸又はその塩の濃度の上限は、０．３ｍｏｌ／Ｌ以下、より好ましくは０．２ｍｏｌ／Ｌ以下であり、さらに好ましくは０．１５ｍｏｌ／Ｌ以下であり、下限は０．００１ｍｏｌ／Ｌ以上、より好ましくは０．００５ｍｏｌ／Ｌ以上、さらに好ましくは０．０１ｍｏｌ／Ｌ以上、最も好ましくは０．０２ｍｏｌ／Ｌ以上である。ハロアルカンスルホン酸又はその塩の濃度が０．００１ｍｏｌ／Ｌ未満であると、ヘムタンパク質の安定化効果が不十分になる。一方、ハロアルカンスルホン酸又はその塩の濃度が０．３ｍｏｌ／Ｌを超えると、免疫反応が阻害され、測定に影響を及ぼしやすくなる他、ハロアルカンスルホン酸又はその塩の溶解度が低下することにより、十分なヘムタンパク質の安定化効果が得られなくなる。
【００２１】
本発明が対象とするヘムタンパク質及び本発明の試料に含まれるヘムタンパク質は、ヘムを構成成分とするタンパク質の中から適宜選択することができる。ヘムタンパク質としては、例えば、ヘモグロビン、ミオグロビン、ペルオキシターゼ又はカタラーゼ等が挙げられる。特に、本発明が対象とするヘムタンパク質及び本発明の試料に含まれるヘムタンパク質は、好ましくは免疫学的な分析対象となるヘムタンパク質であり、より好ましくはヒトヘモグロビンである。免疫学的測定法では、検出対象の抗原性を維持することが重要であるが、本発明によればヘムタンパク質の抗原性を維持することができるため、より精確なヘムタンパク質の測定が可能となる。特に、本発明が対象とするヘムタンパク質及び本発明の試料に含まれるヘムタンパク質を生体試料中のヘモグロビンとすることで、大腸がん等の疾病の診断における測定結果の誤りを防ぐことが期待できる。さらに、特に限定されるものではなく、ヘモグロビンは、便中に含まれるヘモグロビン、赤血球より調製したヘモグロビンを含む標準試料又はコントロ−ルとして市販されているヘモグロビン、及び凍結乾燥ヘモグロビン等を含むことができる。
【００２２】
また、本発明のヘムタンパク質の保存液又はヘムタンパク質を含む試料は、ヘムタンパク質を溶解できる溶液を含むことができる。溶液としては、ヘムタンパク質を溶解できる溶液であればよく、例えば、緩衝液を挙げることができ、緩衝液の調製に使用される緩衝剤としては、緩衝能を有するものであれば特に限定されるものではなく、例えば、グッド緩衝剤、リン酸緩衝剤、トリス緩衝剤、グリシン緩衝剤、ホウ酸緩衝剤等が挙げられる。
【００２３】
さらに、グッド緩衝剤としては、例えば、２−モルホリノエタンスルホン酸（ＭＥＳ）緩衝剤、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）緩衝剤、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）緩衝剤、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）緩衝剤、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）緩衝剤、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（ＡＣＥＳ）緩衝剤、３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）緩衝剤、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）緩衝剤、３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）緩衝剤、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）緩衝剤、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）緩衝剤、３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＤＩＰＳＯ）緩衝剤、２−ヒドロキシ−３−｛［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳＯ）緩衝剤、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパン−３−スルホン酸）（ＰＯＰＳＯ）緩衝剤、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ’−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）ピペラジン（ＨＥＰＰＳＯ）緩衝剤、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ’−（３−スルホプロピル）ピペラジン（ＥＰＰＳ）緩衝剤、トリシン［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルグリシン］緩衝剤、ビシン［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン］緩衝剤、３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノプロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）緩衝剤、２−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）緩衝剤、３−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＣＡＰＳＯ）緩衝剤、３−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）プロパンスルホン酸（ＣＡＰＳ）緩衝剤等が挙げられる。特に、本発明では、グッド緩衝剤の中でもＨＥＰＥＳを用いることが好ましく、ハロアルカンスルホン酸又はその塩を共存させることで、ヘムタンパク質の安定性を著しく高めることができる。
【００２４】
緩衝剤の濃度は、測定に適した濃度であれば特に限定されないが、０．００１乃至２．０ｍｏｌ／Ｌ、好ましくは０．００５乃至１．５ｍｏｌ／Ｌ、さらに好ましくは０．０１乃至１．０ｍｏｌ／Ｌである。
【００２５】
また、本発明のヘムタンパク質の保存液又はヘムタンパク質を含む試料のｐＨは、中性域が好ましく、５乃至１０が好ましく、より好ましくは６乃至８の範囲である。ｐＨが５より低い、あるいは１０より高い場合は、ヘムタンパク質の安定性が損なわれ、ヘムタンパク質が変性あるいは分解しやすくなる。ｐＨは、公知の方法で調整でき、ＮａＯＨや適当な緩衝剤を用いて調整してもよい。
【００２６】
さらに、本発明のヘムタンパク質の保存液又はヘムタンパク質を含む試料は、水溶性遷移金属錯体、フェロシアン化合物、ヘモグロビンの酵素分解産物、遷移金属類、有機酸、イミノカルボン酸、アルブミンやゼラチンに代表される不活性タンパク質、及びアジ化ナトリウム等、公知のタンパク質保護剤を含むことができる。また、微生物の不必要な繁殖を防ぐための抗菌剤等を含んでもよい。さらに、本発明の効果を損なわない範囲において、必要に応じて、塩、凝集促進剤、その他の成分を含んでもよい。本発明によれば、従来のタンパク質保護剤や抗菌剤等の作用を阻害することなく、従来のタンパク質保護剤や抗菌剤等と共にヘムタンパク質の安定性を高めることができる。
【００２７】
また、本発明のヘムタンパク質の保存液又はヘムタンパク質を含む試料がアルブミンを含む場合には、アルブミンとして、牛、馬、豚、羊、兎、ヒト、ラット等のアルブミンを用いることができ、アルブミンを含有する血清を用いるようにしてもよい。本発明のヘムタンパク質の保存液又はヘムタンパク質を含む試料中のアルブミンの濃度は、０．０００５乃至２．０ｗ／ｖ％、より好ましくは０．０１乃至０．５ｗ／ｖ％である。
【００２８】
ヘムタンパク質の測定方法は、特に限定されるものではないが、好ましくは抗ヒトヘモグロビン抗体を用いた免疫学的測定法である。ヒトヘモグロビンの免疫学的測定法としては、例えば、寒天平板内で抗ヒトヘモグロビン抗体と被検試料中のヒトヘモグロビンの結合による免疫複合体による沈降線の発現を確認する一元放射状免疫拡散法、抗ヒトヘモグロビン抗体を感作したラテックス粒子を用いるラテックス免疫凝集法、酵素や放射性元素で標識した抗ヒトヘモグロビン抗体を用いる酵素免疫測定法や放射免疫測定法、抗ヒトヘモグロビン抗体を感作した金コロイド粒子を用いる金コロイド凝集比色法等が挙げられる。いずれの測定方法においても、ハロアルカンスルホン酸又はその塩を含む本発明のヘムタンパク質の保存液又はヘムタンパク質を含む試料によれば、ヘムタンパク質の抗原活性を保護し、測定値の誤りを抑制することができる。
【００２９】
本発明のヘムタンパク質の保存液は、ヘムタンパク質を保存するための溶液として様々な用途に用いることができ、例えば、糞便、尿、及び血液等、生体試料由来のヘムタンパク質の溶解用懸濁液、希釈液、及び抽出液等の溶液として用いることができる。特に、ヘムタンパク質の検出を行うための検査、例えば便潜血検査の便検体用希釈液として有用である。
【００３０】
また、本発明のヘムタンパク質の保存液は、上述の本発明が対象とするヘムタンパク質を含んでいてもよく、ヘムタンパク質を含む様々な溶液として使用できる。同様に、本発明のヘムタンパク質の安定化方法は、ヘムタンパク質を含む様々な試料に適用できる。例えば、本発明のヘムタンパク質の保存液及びヘムタンパク質を含む試料は、ヘムタンパク質を含む標準試料又はヘムタンパク質を含むコントロール試料等、特に自動分析装置のキャリブレーション又は精度管理に用いられるヘムタンパク質を含む標準試料又はヘムタンパク質を含むコントロール試料として使用できる。ヘムタンパク質を含む標準試料及びコントロール試料は、長期的に保存された場合においても、ヘムタンパク質の測定値が変動しないことが必要とされるが、本発明によれば、比較的高温で保存された場合においても標準試料及びコントロール試料中のヘムタンパク質の変性あるいは分解を抑制できるため、ヘムタンパク質の測定値の安定化に貢献することができる。従って、本発明のヘムタンパク質の保存液及びヘムタンパク質を含む試料は、ヘムタンパク質を含む標準試料及びコントロール試料として好適である。
【００３１】
以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれによって限定されるものではない。
【実施例】
【００３２】
実施例１
０．３ｗ／ｖ％の牛血清アルブミン、ＮａＯＨ、及び緩衝液として０．０５ｍｏｌ／Ｌのリン酸緩衝液を含み、残部を純水とするｐＨ７．０の溶液を調製した。この溶液に添加物として３−クロロ−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸（ＣＨＰＳ）を表１に示す各濃度（０．０１乃至０．２ｍｏｌ／Ｌ）となるように添加し、各濃度の溶液を調製した。この調整した各溶液１０ｍＬに溶血ヘモグロビンを６００ｎｇ／ｍＬとなるように添加し、試料とした。
【００３３】
ヘモグロビンの添加直後に、各試料のヘモグロビン濃度を測定した（添加直後濃度）。次いで、各試料を３７℃で保存した。ヘモグロビンの添加時点を保存０時間として、６時間保存後及び２４時間保存後に各試料のヘモグロビン濃度を測定した（６時間保存後濃度及び２４時間保存後濃度）。
【００３４】
ヘモグロビンの濃度測定は、ＯＣセンサーＤＩＡＮＡ分析機（栄研化学（株）製）を用いて、免疫学的測定法の一種であるラテックス凝集反応を測定原理とする専用試薬（ＯＣヘモディアオートＩＩＩ:栄研化学（株）製）を用いて行った。詳細には、試料から３５μＬを採取して試験液とし、この試験液にラテックス乳液（２０ｖｏｌ％の抗ヒトヘモグロビンウサギポリクローナル抗体感作ラテックス液）６０μＬ及び希釈液（１１．９２ｍｇ／ｍＬのＨＥＰＥＳ）３００μＬを加え、波長６６０ｎｍで吸光度を測定した。予め作成した検量線に基づき、得られた測定値から試験液中のヘモグロビン濃度を決定した。各試料について、３重測定を行い、測定結果の平均値を各試料のヘモグロビン濃度とした。
【００３５】
測定したヘモグロビン濃度から、以下の式に基づいてヘモグロビンの残存率を求めた。
【００３６】
６時間保存後又は２４時間保存後のヘモグロビンの残存率［％］  ＝  １００  ×  ヘモグロビンの６時間保存後濃度又は２４時間保存後濃度［ｎｇ／ｍＬ］  ／  対照試料の添加直後濃度［ｎｇ／ｍＬ］
【００３７】
すなわち、各試料のヘモグロビンの残存率は、対照試料におけるヘモグロビンの添加直後濃度を１００％とする相対値である。本実施例における対照試料は、添加物を含まないリン酸緩衝液であり、対照試料の添加直後濃度は５８３ｎｇ／ｍＬであった。結果を表１に示す。
【００３８】
【表１】
0006434843.tif 000002
【００３９】
表１に示す通り、ハロアルカンスルホン酸であるＣＨＰＳを含む試料は、対照試料と比較して６時間保存後及び２４時間保存後の残存率が高く、ＣＨＰＳがヘモグロビンの安定化効果を有することが分かる。さらに、ＣＨＰＳの濃度の増加に伴い、２４時間保存後の残存率は高くなり、ヘモグロビンの安定化効果を高めていることが分かる。
【００４０】
実施例２
リン酸緩衝液の代わりに、０．０５ｍｏｌ／ＬのＮ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−エタンスルホン酸（以下、ＨＥＰＥＳという）を用いた点、表２に示す各濃度（０．００５乃至０．２ｍｏｌ／Ｌ）となるようにＣＨＰＳを添加した点以外は、実施例１と同様にして試料を調製し、ヘモグロビン濃度を測定した。結果を表２に示す。なお、各試料の残存率は、対照試料（添加物を含まないＨＥＰＥＳ緩衝液）における添加直後濃度（５７６ｎｇ／ｍＬ）を１００％とする相対値で示した。
【００４１】
【表２】
0006434843.tif 000003
【００４２】
表２に示す通り、ハロアルカンスルホン酸であるＣＨＰＳを含む試料は、対照試料と比較して６時間保存後及び２４時間保存後の残存率が高く、ＣＨＰＳがヘモグロビンの安定化効果を有することが分かる。特に、ＨＥＰＥＳとＣＨＰＳとを含むことにより、ＣＨＰＳの添加濃度が５ｍＭという低濃度である試料においても６時間保存後及び２４時間保存後の残存率が高いことが分かる。さらに、ＣＨＰＳの添加濃度の増加に伴い、残存率が高くなり、ヘモグロビンの安定化効果を高めていることが分かる。
【００４３】
実施例３
リン酸緩衝液の代わりに、０．０５ｍｏｌ／Ｌのピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（以下、ＰＩＰＥＳという）、０．０５ｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳ、又は０．０５ｍｏｌ／Ｌの２−モルホリノエタンスルホン酸（以下、ＭＥＳという）を用いた点、ＣＨＰＳを表３に示す濃度となるように添加した点以外は、実施例１と同様にして試料を調製し、ヘモグロビン濃度を測定した。結果を表３に示す。なお、各試料の残存率は、対照試料（添加物を含まないリン酸緩衝液）における添加直後濃度（５８３ｎｇ／ｍＬ）を１００％とする相対値で示した。
【００４４】
【表３】
0006434843.tif 000004
【００４５】
表３に示す通り、緩衝液が異なる試料においても、ＣＨＰＳによるヘモグロビンの安定化効果がみられた。特に、ＨＥＰＥＳと、ＣＨＰＳとを含む試料は、ＨＥＰＥＳを緩衝液としてＣＨＰＳを含まない試料と比較して、２４時間保存後の残存率が著しく高く、ヘモグロビンの変性あるいは分解の抑制効果が極めて高いことが分かる。また、ＨＥＰＥＳと、ＣＨＰＳとを含む試料は、リン酸緩衝液やグッド緩衝剤であるＰＩＰＥＳ又はＭＥＳと、ＣＨＰＳとを含む試料と比較して２４時間保存後の残存率が高く、ヘモグロビンの変性あるいは分解の抑制効果をより高めていることから、相乗的なヘモグロビン安定化効果を有することが分かる。
【００４６】
実施例４
ＣＨＰＳの代わりに、添加物として、２−クロロ−１−ヒドロキシエタンスルホン酸（以下、ＣＨＥＳという）を表４に示す濃度となるように添加した点、及びリン酸緩衝液の代わりに、０．０５ｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳを用いた点以外は、実施例１と同様にして試料を調製し、ヘモグロビン濃度を測定した。結果を表４に示す。なお、各試料の残存率は、対照試料（添加物を含まないリン酸緩衝液）における添加直後濃度（５４８ｎｇ／ｍＬ）を１００％とする相対値で示した。
【００４７】
【表４】
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【００４８】
表４に示す通り、ハロアルカンスルホン酸であるＣＨＥＳはヘモグロビンの安定化効果を有することが分かる。
【００４９】
比較例１
ＣＨＰＳの代わりに、添加物として８−アニリノ−１−ナフタレンスルホン酸（以下、ＡＮＳという）又は２−メルカプトエタンスルホン酸ナトリウム（以下、ＭＥＳＳという）を０．０１ｍｏｌ／Ｌとなるように添加した点以外は、実施例１と同様にして試料を調製し、ヘモグロビン濃度を測定した。結果を表５に示す。各試料の残存率は、対照試料（添加物を含まないリン酸緩衝液）における添加直後濃度（５８３ｎｇ／ｍＬ）を１００％とする相対値で示した。
【００５０】
【表５】
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【００５１】
表５に示す通り、ハロアルカンスルホン酸ではないスルホン酸を含む試料では、ヘモグロビンの変性あるいは分解が進んでいる可能性があることが分かる。
【００５２】
従って、ＣＨＥＳ及びＣＨＰＳ等のハロアルカンスルホン酸を含む保存液及び試料は、３７℃という高温下で保存された場合においても、２４時間保存後のヘモグロビンの残存率を高く保つことが可能であった。この結果から、本発明のハロアルカンスルホン酸を含む保存液及び試料は、温度上昇及び時間経過を伴う場合においてもヘモグロビンの変性あるいは分解を抑制し、ヘモグロビンの安定化効果を有することが分かる。
【００５３】
また、実施例１乃至４及び比較例１の各試料に便検体を添加し、実施例１と同様の測定を行ったところ、実施例１乃至４及び比較例１の測定結果と同様の傾向がみられた。
【００５４】
以上より、ハロアルカンスルホン酸又はその塩を含む本発明のヘムタンパク質の保存液及びヘムタンパク質の安定化方法によれば、ヘムタンパク質の変性あるいは分解を抑制し、ヘムタンパク質を安定化できることが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明のヘムタンパク質の保存液及びヘムタンパク質の安定化方法によれば、ヘムタンパク質の変性あるいは分解を抑制し、ヘムタンパク質を安定的に保存することができ、便潜血検査の便検体用希釈液、ヘムタンパク質を含む標準試料、及びヘムタンパク質を含むコントロール試料等のヘムタンパク質を安定的に保存することができる。