(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
流動性乾燥凝集栄養培地を作製する方法であって、
粉末栄養素を含む栄養成分及び凝集液を、フロースルー型凝集チャンバを備える凝集装置に導入する工程（ここで、前記栄養成分は微生物の増殖を促進するものであり、前記凝集液は噴霧スプレーとして導入される）と、
所定の期間にわたって前記凝集チャンバ内で前記栄養成分を前記凝集液と湿式塊状化して、凝集栄養培地粒子を形成する工程と、
ある期間にわたって前記凝集栄養培地粒子を乾燥条件に曝露して、前記乾燥凝集栄養培地を形成する工程と、を含み、
前記栄養成分を前記凝集チャンバに導入する工程が、５０ｋｇ／時〜１０００ｋｇ／時の供給速度で前記栄養成分を導入することを含み、
前記凝集液を前記凝集チャンバに導入する工程が、１５ｋｇ／時〜３００ｋｇ／時の噴霧速度で前記凝集液を導入することを含み
前記凝集装置が混合ブレードを更に備え、前記混合ブレードが５００ｒｐｍ〜４０００ｒｐｍのブレード回転速度で回転し、
前記凝集栄養培地を乾燥条件に曝露する工程が、前記凝集栄養培地を６０℃〜８５℃の所定の温度に曝露することを含み、
前記供給速度、前記噴霧速度、前記ブレード回転速度、及び前記所定の温度は、１０５ミクロン〜２０００ミクロンの第１の粒径分布範囲の粒子を有する乾燥凝集栄養培地を生成するように選択され、且つ
前記粒子の亜集団を選択する工程を更に含み、前記亜集団が、前記第１の粒径分布範囲よりも狭い第２の粒径分布範囲を有し、前記第２の粒径分布範囲が１４９ミクロン〜１０００ミクロンである、方法。
【請求項２】
前記凝集液が水からなる、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、参照によりそのすべてが本明細書に組み込まれる、２０１２年７月２５日出願の米国仮特許出願第６１／６７５，６２４号の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
動物、植物、及び微生物細胞を含む数多くの細胞種類を培養するために、栄養培地処方が使用されてきた。培養培地中で培養された細胞は、利用可能な栄養素を異化し、モノクローナル抗体、ホルモン、増殖因子、ウイルス等の有用な生物学的物質を生成する。そのような生成物は治療に応用され、組み換えＤＮＡ技術の出現で、大量のこれらの生成物を生成するように、細胞が遺伝子操作され得る。したがって、インビトロで細胞を培養する能力は、細胞生理学の研究に重要なだけではなく、そうでなければ費用効率が高い手段によって得られない可能性がある有用な物質の生成にも必要である。
【０００３】
微生物培養培地の典型的な構成成分としては、タンパク質加水分解物、無機塩、ビタミン、微量金属、及び炭水化物が挙げられてもよく、それらの種類及び量は、所与の種の微生物の特定の要件に応じて異なり得る。これらの構成成分は脱水形態でより安定する傾向があるため、それらは乾燥粉末剤形として頻繁に提供される。粉末剤形は使用前に水に添加され、任意に滅菌される。
【０００４】
培養培地は典型的には、液体形態又は粉末形態で生成される。これらの形態のそれぞれは、特定の利点及び不利点を有する。
【０００５】
例えば、液体培養培地は、すぐに使える状態で提供され（栄養素又は他の構成成分の補充が必要ではない限り）、かつ剤形が特定の細胞種類に対して最適化されているという利点を有する。しかしながら、液体培地は、特定の微生物の培養における最適な性能のために、補充物（例えば、ビタミン又は補助因子、及び抗生物質）の添加を必要とする場合があるという不利点を有する。更に、ほとんどの液体培地は、何らかの種類の滅菌（例えば、オートクレーブ、濾過）を必要とし、それらは時間のかかる及び／又は高価なプロセスである可能性がある。
【０００６】
不利点のいくつかを克服するために、液体培養培地は濃縮形態で作ることができ、濃縮物は使用前に作用濃度に希釈されてもよい。このアプローチは、標準培養培地よりも大きく可変のバッチサイズを作る可能性を提供し、濃縮培地処方又はその構成成分は、多くの場合、より長い貯蔵寿命を有する。米国特許第５，４７４，９３１号は、培養培地濃縮技術に関し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。しかしながら、これらの利点にもかかわらず、濃縮液体培地はなお、それらが補充物の添加を必要とするという不利点を有し、経済的に滅菌することが困難であり得る。
【０００７】
液体培地の代替手段として、粉末培養培地がしばしば使用される。このアプローチは、より大きいバッチサイズが生成されてもよく、粉末培地が典型的には液体培地よりも長い貯蔵寿命を有し、培地が処方後に照射（例えば、ガンマ若しくは紫外線照射）又はエチレンオキシド浸透によって滅菌され得るという利点を有する。しかしながら、粉末培地はいくつかの異なる不利点を有する。例えば、粉末培地の構成成分のいくつかは、再可溶化が困難又は不可能になるように、凍結乾燥によって不溶性になるか又は凝集する。更に、粉末培地は典型的には、細塵粒子を含み、それらは、粉末培地をなんらかの材料の損失なく移動及び／又は再構成することを特に困難にする場合があり、更に粉末培地をＧＭＰ／ＧＬＰ、ＵＳＰ、又はＩＳＯ  ９０００設定下で動作する多くのバイオテクノロジー生産設備で使用するのに非実用的にし得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
再水和性培地の進歩にもかかわらず、栄養的に複雑な安定乾燥粉末栄養培地、培地補充物、培地部分群、及び緩衝液を迅速に溶解する必要性がまだあり、それらは、可変のバルク量で調製することができ、滅菌に適している。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本開示は概して、微生物（例えば、細菌、酵母、かび）の増殖を促進するために使用される栄養培地に関する。具体的に、本開示は、乾燥凝集栄養培地を生成するために、１つ以上の粉末栄養成分を凝集する方法を提供する。方法は、選択された化学組成物、サイズ、密度、含水量、又は前記の特性のいずれか２つ以上の組み合わせを有する凝集粒子を提供するプロセス条件を含む。別の態様では、本開示は更に、本明細書に開示される任意の方法に従って作製される乾燥凝集栄養培地を含む組成物を提供する。別の態様では、本開示は、本明細書に開示される任意の乾燥凝集栄養組成物を含む物品及びキットを提供する。
【００１０】
有利に、本開示の組成物は、水性溶媒による粒子の表面の湿潤を促進する化学組成物を有する。更に有利に、本開示の組成物は、水性溶媒中の粒子の浸漬を促進するように選択された密度（例えば、重力によって充填された平均粒子密度）を有する。なお更に有利に、本開示の乾燥凝集栄養培地は、水性溶媒中の粒子の迅速な溶解を促進するように選択された粒径分布を有する。
【００１１】
一態様では、本開示は、流動性乾燥凝集栄養培地を作製する方法を提供する。方法は、粉末栄養素を含む栄養成分及び凝集液を、フロースルー型凝集チャンバを備える凝集装置に導入する工程と、所定の期間にわたって凝集チャンバ内で栄養成分を凝集液と湿式塊状して、凝集栄養培地粒子を形成する工程と、ある期間にわたって凝集栄養培地粒子を乾燥条件に曝露して、乾燥凝集栄養培地を形成する工程とを含むことができる。栄養成分は、微生物の増殖を促進する。凝集液は、噴霧スプレーとして導入される。方法のいずれかの実施形態において、凝集液は、水からなり得る。方法のいずれかの実施形態において、凝集液は、微生物の増殖を促進する溶解栄養素を有する溶媒を含むことができる。方法の上記の実施形態のいずれかにおいて、栄養成分を導入する工程は、２つ以上の粉末栄養素の実質的に均一な混合物を導入することを含むことができる。
【００１２】
方法の上記の実施形態のいずれかにおいて、凝集装置は更に混合ブレードを備えることができ、ここで、栄養成分を凝集チャンバに導入する工程は、約５０ｋｇ／時〜約１０００ｋｇ／時の供給速度で栄養成分を導入することを含み、凝集液を凝集チャンバに導入する工程は、約１５ｋｇ／時〜約３００ｋｇ／時の噴霧速度で凝集液を導入することを含み、混合ブレードは約５００ｒｐｍ〜約４０００ｒｐｍのブレード回転速度で回転し、凝集栄養培地を乾燥条件に曝露する工程は、凝集栄養培地を約６０℃〜約８５℃の所定の温度に曝露することを含み、供給速度、噴霧速度、ブレード回転速度、及び所定の温度は、５重量％未満の事前選択された平均含水量を有する乾燥凝集栄養培地を生成するように選択される。方法の上記の実施形態のいずれかにおいて、凝集装置は更に混合ブレードを備えることができ、ここで、栄養成分を凝集チャンバに導入する工程は、約５０ｋｇ／時〜約１０００ｋｇ／時の供給速度で栄養成分を導入することを含み、凝集液を凝集チャンバに導入する工程は、約１５ｋｇ／時〜約３００ｋｇ／時の噴霧速度で凝集液を導入することを含み、混合ブレードは約５００ｒｐｍ〜約４０００ｒｐｍのブレード回転速度で回転し、凝集栄養培地を乾燥条件に曝露する工程は、凝集栄養培地を約６０℃〜約８５℃の所定の温度に曝露することを含み、供給速度、噴霧速度、ブレード回転速度、及び所定の温度は、０．２〜０．５グラム／立方センチメートルの重力によって充填された密度を有する乾燥凝集栄養培地を生成するように選択される。方法の上記の実施形態のいずれかにおいて、凝集装置は更に混合ブレードを備えることができ、ここで、栄養成分を凝集チャンバに導入する工程は、約５０ｋｇ／時〜約１０００ｋｇ／時の供給速度で栄養成分を導入することを含み、凝集液を凝集チャンバに導入する工程は、約１５ｋｇ／時〜約３００ｋｇ／時の噴霧速度で凝集液を導入することを含み、混合ブレードは約５００ｒｐｍ〜約４０００ｒｐｍのブレード回転速度で回転し、凝集栄養培地を乾燥条件に曝露する工程は、凝集栄養培地を約６０℃〜約８５℃の所定の温度に曝露することを含み、供給速度、噴霧速度、ブレード回転速度、及び所定の温度は、約１０５ミクロン〜約２０００ミクロンの第１の粒径分布範囲の粒子を有する乾燥凝集栄養培地を生成するように選択される。上記の実施形態のいずれかにおいて、方法は更に、粒子の亜集団を選択する工程を含むことができ、亜集団は、第１の粒径分布範囲よりも狭い第２の粒径分布範囲を有し、第２の粒径分布範囲は、約１４９ミクロン〜約１０００ミクロンである。
【００１３】
方法の上記の実施形態のいずれかにおいて、１つ以上の粉末栄養素は、タンパク質、炭水化物、塩、及び前記の粉末栄養素のうちのいずれか２つ以上の混合物からなる群から選択され得る。上記の実施形態のいずれかにおいて、方法は更に、乾燥凝集栄養培地を、乾燥凝集栄養培地中の生存微生物の数を減らすプロセスに供する工程を含むことができる。
【００１４】
別の態様では、本開示は、上記の請求項のいずれか一項に記載の方法によって生成される流動性乾燥凝集栄養培地を含む、組成物を提供する。組成物のいずれかの実施形態において、特定の質量（ｓｐｅｃｉｆｉｅｄ  ｍａｓｓ）の乾燥凝集栄養培地は、凝集栄養培地が作られる等しい質量の栄養成分よりも迅速に溶解することができる。
【００１５】
更に別の態様では、本開示は、組成物の上記の実施形態のいずれかを含むキットを提供する。キットのいずれかの実施形態において、組成物は、所定の質量の乾燥凝集栄養培地を含むパッケージ中に配置され得、所定の質量は、微生物の増殖を促進することが可能な再構成培地を生成するために、９０ｍＬ〜９９ｍＬの水性希釈剤と混合され得る。上記の実施形態のいずれかにおいて、キットは更に、バッグ、ボトル、及び試料捕捉デバイスからなる群から選択される物品を含むことができる。上記の実施形態のいずれかにおいて、キットは更に、選択剤及び／又は指示薬を含むことができる。
【００１６】
更に別の態様では、本開示は、薄膜培養デバイスを提供する。培養デバイスは、第１の主表面及び第２の主表面を有する自己支持型防水基材と、第１の主表面の少なくとも一部上に配置された接着剤層と、接着剤層の少なくとも一部に配置された、上記の実施形態のいずれかの組成物を含むコーティングと、栄養培地との流体接触のために位置付けられた乾燥冷水溶性ゲル化剤とを含むことができる。上記の実施形態のいずれかにおいて、薄膜培養デバイスは更に、基材の少なくとも一部に連結されたカバーシートを備えることができ、カバーシートは、第１の主表面に対向する第１の側面を有する。
【００１７】
用語「好ましい」及び「好ましくは」とは、特定の状況下で、特定の利益をもたらすことができる、本発明の実施形態を指す。しかしながら、同一又は他の環境下で、他の実施形態も好ましい可能性がある。更に、１つ以上の好ましい実施形態の記載は、他の実施形態が有用でないことを示唆するものではなく、また、本発明の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものでもない。
【００１８】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及びこの変形は、これらの用語が現れる明細書及び請求項を制限する意図を持たない。
【００１９】
本明細書で使用するとき、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、「少なくとも１つの」、及び「１つ以上の」は、互換可能に使用される。したがって、例えば、不変化詞「１つの（ａ）」粒子は、「１つ以上の（ｏｎｅ  ｏｒ  ｍｏｒｅ）」粒子を意味するように解釈され得る。
【００２０】
用語「及び／又は」は、列挙された要素の１つ若しくはすべてを、又は列挙された要素の任意の２つ以上の組み合わせを意味する。
【００２１】
また本明細書では、端点による数値範囲の記載は、その範囲内に含まれるすべての数を含む（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５などを含む）。
【００２２】
上記の本発明の「課題を解決するための手段」は、本発明の開示されるそれぞれの実施形態又は本発明のすべての実施を説明することを目的としたものではない。以下の説明は、例示的な実施形態をより具体的に例示するものである。本出願の全体を通じて幾つかの箇所で、実施例のリストによって指針が与えられるが、これらの実施例は異なる組み合わせで使用することができる。いずれの場合も、記載される列挙は、あくまで代表的な群としてのみの役割を果たすものであって、排他的な列挙として解釈するべきではない。
【００２３】
これらの実施形態及び他の実施形態の更なる詳細を、添付の図面及び以下の説明文に記載する。他の特徴、目的、及び利点は、説明文及び図面、並びに「特許請求の範囲」から明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】本開示による薄膜培養デバイスの一実施形態の、一部切り開いた、上面斜視図である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本開示のいずれかの実施形態を詳細に説明する前に、本発明はその用途で、以下の説明に記載されるか又は以下の図面に示される構成の詳細及び構成要素の配置に限定されないことを理解すべきである。本発明には他の実施形態が可能であり、本発明は様々な方法で実施又は実行することが可能である。また、本明細書で使用する語法及び専門用語は、説明を目的としたものであり、発明を限定するものとして見なされるべきでない点は理解されるべきである。本明細書での、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、又は「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、及びこれらの変化形の使用は、その後に列記される項目及びそれらの均等物、並びに更なる項目を包むものである。本開示の範囲から逸脱することなく、他の実施形態が利用されてもよく、構造的又は論理的な変更がなされてもよいことを理解すべきである。
【００２６】
概して本開示は、水溶性粉末から作製される流動性乾燥凝集粒子、及び上記の凝集体を作製する方法に関する。いくつかの実施形態では、方法は、微生物の増殖を促進するための栄養培地を作製するために使用され得る。凝集粒子が作製される粉末のうちの少なくとも１つとは対照的に、かつ他の凝集粒子組成物とは対照的に、本発明の凝集粒子の集団は有利に、２つの非常に望ましい特性を有する：１）水性液体の表面上に注がれたとき、凝集粒子が迅速（すなわち、すぐに又はほぼすぐに）かつ実質的に定量的に、水性液体の表面化に沈む、及び２）凝集粒子が迅速に水性液体中に溶解する。理論によって束縛されないが、これらの非常に望ましい特性は、平均粒径、表面積、表面組成物、密度、及び／又は本開示に従って生成される凝集粒子の集団に見られる前記の物理的特性のうちの２つ以上の独特な組み合わせに起因すると考えられている。したがって、一態様では、本開示は、手動又は機械的撹拌をほとんど又は全く用いず、水性液体中に迅速に分散及び溶解する、栄養培地を提供する。
【００２７】
したがって、本開示は、凝集栄養培地の調製のための方法を提供し、凝集培地は、微生物の回収及び／又は増殖を促進するのに好適であり、方法は、ｉ）粉末栄養素を含む栄養成分及び凝集液を、フロースルー型凝集チャンバ（すなわち、「Ｓｃｈｕｇｉタイプ」凝集チャンバ）に導入する工程と、ｉｉ）凝集栄養培地を形成するために、最大で３０秒の期間にわたって、凝集チャンバ内で栄養成分を凝集液と湿式塊状化する工程と、ｉｉｉ）ある期間にわたって、凝集栄養培地を乾燥条件に曝露する工程と、を含む。本開示の方法に従って、栄養成分（例えば、少なくとも１つの粉末栄養素）は、微生物の増殖を促進する。更に、本開示の方法に従って、凝集液は噴霧スプレーとして導入される。
【００２８】
凝集液の適用、及び栄養素を含む組成物の湿式塊状化の非常に短くかつ集中的な工程は、流動性乾燥栄養培地の調製に好適である凝集粒子の集団をもたらすことがわかっている。
【００２９】
凝集液の適用及び湿式塊状化の工程のためのプロセス時間は、採用される装置に応じて異なり得る。特定の実施形態では、工程ｉｉ）の湿式塊状化は、最大で約２０秒、例えば、最大で約１５秒、最大で約１０秒、又は最大で約５秒等の期間で実施される。
【００３０】
本方法での使用に特に好適な装置は、ＢＥＰＥＸ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＬＬＣによって製造される垂直経路、フロースルー型凝集チャンバである。モデルＦＸ−１００  Ｓｃｈｕｇｉ  ＦＬＥＸ−Ｏ−ＭＩＸミキサ／凝集装置が本開示の方法に好ましいが、本発明は、この特定のモデル又はメーカーの使用に限定されず、上記のような湿式塊状化の非常に速い工程をもたらす同様の構成を有する他のモデル又は装置もまた本開示の範囲内である。例えば、Ｓｃｈｕｇｉ  ＦＬＥＸＯＭＩＸでは、工程ｉｉ）の湿式塊状化は、最大で約１秒、好ましくは最大で約０．５秒、最大で約０．４秒、最大で約０．３秒、又は最大で約０．２秒の期間で実施される。
【００３１】
当業者は、採用される装置のサイズに応じて、栄養素粉末組成物での凝集チャンバの供給速度並びに凝集液の流速が異なり得ることを認識するであろう。
【００３２】
通常、本開示に従って使用されるようなフロースルー型凝集装置において、凝集チャンバに、約５０〜約１０００ｋｇ／時、例えば、５０〜約８５０ｋｇ／時、約５０〜約７５０ｋｇ／時、５０〜約５００ｋｇ／時、約５０〜約２５０ｋｇ／時、約５０〜約２００ｋｇ／時、約１００ｋｇ／時又は約２００ｋｇ／時等の約１００〜約２００ｋｇ／時等の供給速度を用いて、栄養成分（例えば、粉末栄養素）を供給する。
【００３３】
非常に速い生成用のフロースルー型凝集装置では、凝集チャンバは、約１０００〜約１５００ｋｇ／時、例えば、約１１００〜約１３００ｋｇ／時等の供給速度で供給される。
【００３４】
凝集液の液体流量もまた、凝集液の適用及び組成物の湿式塊状化の迅速かつ効率的な工程を得るために、フロースルー型凝集チャンバにおいて重要なパラメータである。通常、凝集液は、約１５〜約１００ｋｇ／時の範囲の噴霧速度で組成物上に噴霧される。この場合もやはり、流速は、装置のサイズ（例えば、チャンバ体積）によって決まり、より大きい装置は、より小さい装置よりも高い流速を可能にする。上記の例示的な装置（モデルＦＸ−１００  Ｓｃｈｕｇｉ  ＦＬＥＸ−Ｏ−ＭＩＸミキサ／凝集装置）では、凝集液は、約１５〜約８０ｋｇ／時（境界値を含む）、例えば、約２０〜約６０ｋｇ／時（境界値を含む）、約２０〜約５０ｋｇ／時（境界値を含む）、約２０〜約４０ｋｇ／時（境界値を含む）、又は約２５〜約３５ｋｇ／時（境界値を含む）の範囲の噴霧速度で組成物上に噴霧され得る。当業者は、採用される装置に応じて液体流量を調節する方法を理解するであろう。実施例で採用されるより大きい装置のためのガイダンスとして、凝集液は、約５０〜約３００ｋｇ／時（境界値を含む）、例えば、約６０〜約２００ｋｇ／時（境界値を含む）、約６５〜約１５０ｋｇ／時（境界値を含む）、約７０〜約１２５ｋｇ／時（境界値を含む）、又は約７５〜約１０５ｋｇ／時（境界値を含む）の噴霧速度で組成物上に噴霧されてもよい。
【００３５】
いずれの実施形態においても、栄養成分及び凝集液は、同時及び／又は連続的に凝集チャンバに供給され得る。粉末組成物並びに凝集液の連続供給は、プロセスが連続的になることを可能にし、すなわち、プロセスは、１日以上、例えば、２日以上、３日以上、４日以上、５日以上、又は７日以上等の期間にわたって連続的であってもよい。原理上、期間は、生成される乾燥凝集培地の量に基づき決定されるが、すすがれる必要がある装置の部品の詰まりによって最終的に中断される場合がある。
【００３６】
Ｓｃｈｕｇｉ  ＦＬＥＸＯＭＩＸ装置（又は同様の装置）を使用した特定の実施形態では、粉末栄養素（例えば、緩衝ペプトン水を作製するための粉末成分）を含む栄養成分は、凝集チャンバの頂部を通って供給され、重力によってチャンバを通過する。チャンバは、栄養成分の集中的な湿式塊状化を可能にする多くのブレードを含有する。高せん断混合プロセスと比較して、本方法に従った凝集液の適用工程及び湿式塊状化工程ははるかに迅速である。
【００３７】
栄養成分
本開示の方法は、栄養成分を凝集液と湿式塊状化する工程を含む。栄養成分は、微生物の増殖（例えば、細菌、酵母、かび）を促進する少なくとも１つの栄養素を含む。いずれの実施形態においても、栄養成分は、微生物の増殖を促進する２つ以上の栄養素の混合物を含んでもよい。好適な栄養素の非限定的な例としては、炭水化物（例えば、単糖類、二糖類、三糖類、オリゴ糖、又は多糖類）、タンパク質、タンパク質加水分解物、細胞抽出物（例えば、酵母抽出物）、塩、緩衝構成成分、選択剤（例えば、抗生物質）、及び前記の栄養素のいずれか２つ以上の組み合わせが挙げられる。
【００３８】
いずれの実施形態においても、栄養成分は実質的に乾燥剤形（例えば、実質的に乾燥粉末）であってもよい。粉末培地は典型的には、混合プロセス、例えばボールミリングを介して培養培地の乾燥構成成分を混合することによって、又は予め作られた液体培養培地を凍結乾燥することによって生成される。本開示の方法で使用される例示的な栄養培地は、緩衝ペプトン水であり、それは、例えばＯｘｏｉｄ  Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ，ＵＫ）及びＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含む、種々の供給源から粉末として市販されている。
【００３９】
本開示に従って凝集され得る他の粉末栄養培地処方は、緩衝ペプトン水、トリプチケースソイブロス、ラクトースブロス、ＵＶＭ変法リステリアエンリッチメントブロス、緩衝リステリアエンリッチメントブロス（（「ＢＬＥＢ」）、Ｄｅｍｉ−Ｆｒａｓｅｒブロスを生成するために再水和される処方、並びに当該技術分野において既知であり、かつ例えばＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｄｉａ（Ｒ．Ａｔｌａｓ，ｅｄ．，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１０，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，ＭＩ（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））に見られ得る微生物用の他の培養培地を含む。
【００４０】
凝集液
凝集液は、栄養成分のより小さい個々の粒子（例えば、粉末粒子）のより大きい凝集粒子への凝集を促進するために、凝集チャンバに噴霧される。いずれの実施形態においても、凝集液は、水（例えば、蒸留及び／又は脱イオン水）を含むことができる。いずれの実施形態においても、凝集液は、本質的に水（例えば、蒸留及び／又は脱イオン水）からなることができる。いずれの実施形態においても、凝集液は、水（例えば、蒸留及び／又は脱イオン水）からなることができる。いずれの実施形態においても、凝集液は、有機溶媒（例えば、エタノール、イソプロパノール）を含んでもよい。
【００４１】
任意に、いずれの実施形態においても、結合剤、特に水溶性結合剤は、栄養成分の凝集を促進するために有用であり得る。結合剤は、栄養成分に添加されてもよく（例えば、実質的に乾燥した粒子の形態で、例えば粉末等）、又は凝集液中に溶解若しくは懸濁されてもよい。
【００４２】
好適な結合剤の非限定的な例としては、生体適合性ポリマー（例えば、タンパク質、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリサッカライド、デキストラン、デキストリン、マルトデキストリン、微結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、澱粉、及び前記のポリマーのいずれかの生体適合性誘導体）、並びに糖類（例えば、デキストロース、フルクトース、グルコース、イノシトール、エリスリトール、イソマルト、ラクチトール、ラクトース、マルチトール、マルトース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、タガトース、トレハロース、及びキシリトール）が挙げられる。いずれの実施形態においても、結合剤は、微生物の増殖を促進する物質であってもよい（例えば、少なくとも１つの栄養素を含有する完全培地又は希釈剤）。一例として、凝集緩衝ペプトン水培地のための好適な凝集液は、１〜５０重量％の緩衝ペプトン水の溶液であってもよく、凝集トリプチケースソイブロス培地のための好適な凝集液は、１〜５０重量％のトリプチケースソイ培地の水性溶液であってもよい。
【００４３】
栄養素を含む組成物中の結合剤の濃度は、採用される特定の結合剤に応じて広範囲に異なり得るが、概して約０．１％〜約４０％  ｗ／ｗ、例えば約０．２〜約３５％  ｗ／ｗ、約０．３〜約３０％  ｗ／ｗ、又は約０．４〜約２５％  ｗ／ｗ、又は約０．４〜約２４．２％  ｗ／ｗである。ソルビトールの場合、濃度は通常、約２０〜３０％  ｗ／ｗであり、ソルビトール以外の糖アルコールの場合、濃度は通常、約３０〜約４０％  ｗ／ｗ等のより高い範囲である。
【００４４】
好ましくは、凝集液は、水性培地である。結合剤が凝集液中に含まれる場合、凝集液は、水中に結合剤を溶解することによって調製される。あるいは、結合剤は、乾燥形態で粉末になるように混合され得る。
【００４５】
凝集栄養培地は、好適な乾燥チャンバ内での乾燥に供される。それは、凝集装置に動作可能に連結された乾燥チャンバであってもよい。乾燥チャンバは、バッチ式で又は連続的に動作されてもよく、任意に、２つ以上の独立して制御された乾燥ゾーン中に分離されてもよく、ゾーンは異なる温度で動作される。
【００４６】
いずれの実施形態においても、凝集液は、微生物の増殖を促進する栄養培地を含んでもよい。例えば、一実施形態では、凝集液は、緩衝ペプトン水ブロス（水、１０．０ｇ／Ｌのペプトン、５．０ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、９．０ｇ／Ｌのオルトリン酸水素二ナトリウム１２Ｈ２Ｏ、及び１．５ｇ／Ｌのオルトリン酸二水素カリウム）を含んでもよい。
【００４７】
本開示に従った方法は、凝集栄養培地（例えば、乾燥、湿潤凝集栄養培地）を作製するために使用される。凝集栄養培地は、微生物（例えば、細菌、酵母、かび）の増殖を促進する凝集微生物栄養培地であってもよい。本開示の方法は、粉末栄養素を含む栄養成分及び凝集液を凝集チャンバに導入する工程を含む。凝集チャンバは、凝集粒子を生成するために、Ｓｃｈｕｇｉ混合方法（例えば、「Ｔｈｅ  Ａｒｔ  ｏｆ  Ａｇｇｌｏｍｅｒａｔｉｏｎ」，１９９９，Ｐｏｗｄｅｒ  Ｈａｎｄｌｉｎｇ  ＆  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，ｖｏｌｕｍｅ  １１，ｐａｇｅ  ３６８を参照されたく、それは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を使用するシステムの構成要素であってもよい。例示的なシステムは、Ｂｅｐｅｘ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，ＬＬＣ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）から入手可能な垂直経路Ｓｃｈｕｇｉ  ＦＬＥＸＯＭＩＸ  ＦＸＤ−１００ミキサ／凝集装置である。凝集チャンバは、第１の端部、第１の端部と反対側の第２の端部、及びそれらの間に配設された混合ブレード（例えば、ナイフブレード）を有することができる。チャンバは、チャンバの第１の端部からチャンバの第２の端部への材料の通過のための実質的に垂直な経路を有して構成されてもよい。
【００４８】
いくつかの実施形態では、混合ブレードは、それが取り付けられるシャフトと角度をなす。ブレード角度は、シャフトに対して７５°〜１０５°で調節され得る。当業者は、ブレード角度が、凝集栄養培地粒子の粒径及び粒径分布の最適な制御を得るように調節され得ることを認識するであろう。
【００４９】
いずれの実施形態においても、栄養成分及び凝集流体は、チャンバの第１の端部に近接して、凝集チャンバに導入され得る。いずれの実施形態においても、栄養成分は、粉末ディスペンサーを介して凝集チャンバに供給され得る（例えば、重力流によって）。いずれの実施形態においても、凝集流体は、噴霧スプレー（例えば、圧縮空気駆動式噴霧スプレー）を形成する１つ以上のノズルを介して、チャンバに導入されてもよい。栄養成分は、本明細書に記載される任意の好適な栄養成分であってもよい。いずれの実施形態においても、栄養成分は、２つ以上の粉末栄養素の実質的に均一な混合物を含むことができる。
【００５０】
いずれの実施形態においても、本開示の方法は更に、凝集栄養培地を形成するために、所定の期間（例えば、最大で約３０秒、最大で約２０秒、最大で約１０秒、最大で約５秒、最大で約１秒、好ましくは最大で約０．５秒；最大で約０．４秒、最大で約０．３秒、又は最大で約０．２秒）にわたって、凝集チャンバ内で栄養成分を凝集液と湿式塊状化する工程を含む。いずれの実施形態においても、所定の期間は、特定の含水量又は特定の含水量範囲を有する凝集粒子をもたらすように選択され得る。いずれの実施形態においても、混合ブレード（例えば、回転ナイフブレード）は、栄養成分と凝集装置流体との間の接触を促進するために、及び／又は凝集栄養培地粒子のサイズを限定するために使用され得る。
【００５１】
いずれの実施形態においても、方法は更に、ある期間にわたって凝集栄養培地粒子を乾燥条件に曝露する工程を含む。いずれの実施形態においても、凝集栄養培地粒子は、粒子の乾燥を引き起こすために、好ましくは周囲温度又はそれ以上で、ガス（例えば、空気）に曝露され得る。いずれの実施形態においても、乾燥条件（例えば、温度、時間、及びガス又は空気流）は、事前選択された平均含水量及び／又は事前選択された含水量範囲を有する凝集栄養培地粒子を生成するように選択され得る。いずれの実施形態においても、乾燥温度は、約６０℃〜約８５℃（境界値を含む）であってもよい。いずれの実施形態においても、乾燥温度は、約６０℃〜約６５℃（境界値を含む）であってもよい。いずれの実施形態においても、乾燥温度は、約６５℃〜約７０℃（境界値を含む）であってもよい。いずれの実施形態においても、乾燥温度は、約７０℃〜約７５℃（境界値を含む）であってもよい。いずれの実施形態においても、乾燥温度は、約７５℃〜約８０℃（境界値を含む）であってもよい。いずれの実施形態においても、乾燥温度は、約８０℃〜約８５℃（境界値を含む）であってもよい。
【００５２】
いくつかの実施形態では、混合チャンバは、凝集栄養培地粒子が混合チャンバの第１の端部から第２の端部へ通過した後に（例えば、重力流によって）、粒子が乾燥ゾーン（例えば、流動床乾燥装置）中に移動するように、乾燥装置（例えば、流動床乾燥装置）に動作可能に連結されてもよい。これらの実施形態では、乾燥ゾーン中の温度、ガス（例えば、空気）流、及び滞留時間は、事前選択された含水量を有する粒子を得るように事前選択され得る。いずれの実施形態においても、乾燥装置は、複数の分離した乾燥ゾーンを含んでもよく、各ゾーンは、粒子を処理するための特定の温度及び滞留時間パラメータを有する。いずれの実施形態においても、乾燥装置は、冷却ゾーンを含んでもよい。
【００５３】
方法のいずれかの実施形態において、凝集液は、微生物の増殖を促進する少なくとも１つの溶解栄養素を含んでもよい。一実施形態では、凝集液は、緩衝ペプトン水を含む。
【００５４】
本開示に従った方法は、栄養成分を凝集チャンバに導入する工程を含む。いずれの実施形態においても、栄養成分を凝集チャンバに導入する工程は、ある供給速度で栄養成分を導入することを含む。当業者は、栄養成分及び凝集液を導入する速度が、凝集粒子の物理的パラメータ（例えば、サイズ、質量、密度、及び形状）に影響を及ぼし得ることを認識するであろう。更に、供給速度は典型的には、凝集チャンバの体積及び形状に応じて異なる。したがって、凝集プロセスがＨｏｓｏｋａｗａ  Ｍｉｃｒｏｎ（Ｓｕｍｍｉｔ，ＮＪ）から入手可能なＳｃｈｕｇｉ  ＦＬＥＸＯＭＩＸ  ＦＸ−１００凝集装置で実施される方法の一実施形態では、栄養成分の供給速度は、約２００〜約１０００ｋｇ／時（例えば、３００〜約８５０ｋｇ／時、約３００〜約７５０ｋｇ／時、３００〜約７００ｋｇ／時、約３５０〜約６５０ｋｇ／時、約４００〜約６００ｋｇ／時、約４５０〜約５５０ｋｇ／時、例えば約５００ｋｇ／時）であってもよい。
【００５５】
本開示に従った方法は、凝集液を凝集チャンバに導入する工程を含む。いずれの実施形態においても、凝集液を凝集チャンバに導入する工程は、ある噴霧速度で凝集液を導入することを含む。当業者は、栄養成分及び凝集液を導入する速度が、凝集粒子の物理的パラメータ（例えば、サイズ、質量、密度、及び形状）に影響を及ぼし得ることを認識するであろう。更に、噴霧速度は典型的には、凝集チャンバの体積及び形状、並びに粉末の供給速度及び組成物に応じて異なる。したがって、凝集プロセスがＨｏｓｏｋａｗａ  Ｍｉｃｒｏｎ（Ｓｕｍｍｉｔ，ＮＪ）から入手可能なＳｃｈｕｇｉ  ＦＬＥＸＯＭＩＸ  ＦＸ−１００凝集装置で実施される方法の一実施形態では、凝集液の噴霧速度は、約１５〜約８０ｋｇ／時（境界値を含む）、例えば、約２０〜約６０ｋｇ／時（境界値を含む）、約２０〜約５０ｋｇ／時（境界値を含む）、約２０〜約４０ｋｇ／時（境界値を含む）、又は約２５〜約３５ｋｇ／時（境界値を含む）等の範囲であってもよい。当業者は、採用される装置に応じて液体流量を調節する方法を理解するであろう。Ｓｃｈｕｇｉ  ＦＬＥＸＯＭＩＸ  ＦＸ−１００凝集装置よりも大きい装置のためのガイダンスとして、凝集液は、約５０〜約３００ｋｇ／時（境界値を含む）（例えば、約６０〜約２００ｋｇ／時（境界値を含む）、約６５〜約１５０ｋｇ／時（境界値を含む）、約７０〜約１２５ｋｇ／時（境界値を含む）、又は約７５〜約１０５ｋｇ／時（境界値を含む））の範囲の噴霧速度で、凝集チャンバに噴霧されてもよい。
【００５６】
いずれの実施形態においても、本開示の方法で使用される凝集装置は、混合ブレードを備えることができる。混合ブレードは、シャフトに連結されてもよい。混合ブレードは、ｉ）栄養成分と凝集液との接触を促進すること、ｉｉ）凝集粒子の粒径を制御すること、及び／又はｉｉｉ）凝集チャンバを通る粒子の移動を促進することを含むがこれらに限定されない、１つ以上の機能を達成するために、凝集プロセス中に回転する。いずれの実施形態においても、混合ブレードは、約５００ｒｐｍ〜約５０００ｒｐｍ（境界値を含む）で回転し得る。いくつかの実施形態では、混合ブレードは、３０００ｒｐｍで回転し得る。いくつかの実施形態では、混合ブレードは、４０００ｒｐｍで回転し得る。当業者は、混合ブレードの回転速度及び／又は形状が、上記のように、粒子形状、有効粒径（例えば、平均粒径及び／又は粒径範囲）、密度、及び／又は凝集栄養培地粒子の充填密度を制御するために使用されてもよいことを認識するであろう。
【００５７】
したがって、プロセス条件（例えば、栄養素供給速度、凝集液噴霧速度、ブレード回転速度、及び／又は所定の乾燥温度）のうちの少なくともいくつかは、本開示の方法によって生成される乾燥凝集栄養培地粒子の物理化学的特性のうちの１つ以上に影響を及ぼし得る。これらの特性としては、平均有効粒径、平均粒径、粒子形状、平均粒子量、平均粒子湿分含量、有効粒径範囲、粒子量範囲、及び／又は粒子湿分含量範囲が挙げられるがこれらに限定されない。物理化学的特性のうちの１つ又はそのいずれか２つ以上の組み合わせは、乾燥凝集栄養培地粒子の流体力学的特性（例えば、水性液体中の粒子沈降速度、水性液体中の粒子溶解時間）に影響を及ぼし得る。
【００５８】
いずれの実施形態においても、本開示に従った方法は、平均有効粒径及び第１の粒径分布範囲を有する乾燥凝集栄養培地粒子の集団を得る。いずれの実施形態においても、第１の粒径分布範囲は、約１０５ミクロン〜約２０００ミクロンの有効粒径を有する凝集粒子を含むことができる。いずれの実施形態においても、第１の粒径分布範囲は、約１０５ミクロン〜約１０００ミクロンの有効粒径を有する凝集粒子を含むことができる。
【００５９】
いずれの実施形態においても、方法は更に、乾燥凝集栄養培地粒子の亜集団を単離する工程を含むことができ、亜集団は、事前選択された平均有効粒径を有する、及び／又は第２の粒径分布範囲の範囲内の有効粒径を有する。亜集団は、当該技術分野において既知の粒径選択方法を使用して（例えば、所定の有効粒径を有する粒子の保持又は通過を可能にする篩を使用して）、単離され得る。いずれの実施形態においても、亜集団は、約１４９ミクロン〜約１０００ミクロン（境界値を含む）の有効粒径を有する凝集粒子を含んでもよい。いずれの実施形態においても、亜集団は、約１４９ミクロン〜約８５０ミクロン（境界値を含む）の有効粒径を有する凝集粒子を含んでもよい。いずれの実施形態においても、亜集団は、約１４９ミクロン〜約４００ミクロン（境界値を含む）の有効粒径を有する凝集粒子を含んでもよい。いずれの実施形態においても、亜集団は、約２５０ミクロン〜約４００ミクロン（境界値を含む）の有効粒径を有する凝集粒子を含んでもよい。
【００６０】
方法のいずれかの実施形態において、乾燥凝集栄養培地粒子は、事前選択された平均含水量を有することができる。当業者は、例えば、噴霧速度、乾燥温度、及び／又は乾燥時間等のある特定のプロセスパラメータを調節することによって、所望の平均含水量が達成され得ることを認識するであろう。平均含水量は、例えばカール・フィッシャー滴定法を使用して、測定することができる。いずれの実施形態においても、平均重量％の水は、約５重量％未満の水になるように事前選択され得る。いずれの実施形態においても、平均重量％の水は、約３重量％以下の水になるように事前選択され得る。
【００６１】
方法のいずれかの実施形態において、乾燥凝集栄養培地粒子は、重力によって充填された密度を有することができる。乾燥凝集栄養培地粒子の重力によって充填された密度は、例えば、既定の体積（例えば、１００ｍＬ）の粒子をメスシリンダーに注入し、平均密度を計算するために、粒子の質量を測定することによって測定することができる。重力によって充填された密度は、約０．２グラム／立方センチメートル〜約０．５グラム／立方センチメートルであってもよい。
【００６２】
上記の実施形態のいずれかにおいて、本開示の方法は更に、乾燥凝集栄養培地を、乾燥凝集栄養培地中の生存微生物の数を減らすプロセスに供する工程を含むことができる。いずれの実施形態においても、乾燥凝集栄養培地は、当該技術分野において既知である方法に従って生存微生物の数を減らすために、エチレンオキシド蒸気で処理され得る。エチレンオキシド蒸気による処理後、栄養培地は、エチレンオキシド処理された凝集培地中の残留エチレンオキシドを低減又は除去するために、使用前に曝気され得る。いずれの実施形態においても、乾燥凝集栄養培地は、当該技術分野において既知である方法に従って生存微生物の数を減らすために、電離放射線（例えば、ガンマ線）又は紫外線源で処理され得る。乾燥凝集培地は、米国特許第６，３８３，８１０号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるガンマ線源に曝露され得る。
【００６３】
流動性乾燥凝集栄養培地を作成する方法に加えて、本開示は更に、本明細書に開示される方法の実施形態のいずれかに従って調製される流動性乾燥凝集栄養培地の組成物を提供する。組成物は、試料中（例えば、臨床試料、環境試料、食品試料、飲料試料、水試料）の微生物の回収及び／又は増殖を促進するための栄養培地を調製するために使用され得る。更に、組成物は、微生物を培養するための物品中で使用され得る。
【００６４】
有利に、本開示の組成物は、流動性であり（例えば、一方の容器から他方に注入され得る）、塵（例えば、凝集培地が作られる栄養素のより小さい粒子）を実質的に含まず、凝集培地が、少なくとも１つの水溶性粉末を含む実質的に乾燥した出発物質から作られるとき、凝集培地は、出発物質よりも実質的に迅速に水中に溶解し得る。溶解時間が、２．５５ｇ〜４．４４グラムの乾燥凝集栄養培地（例えば、緩衝ペプトン水、トリプチケースソイブロス、又は変法リステリア回収培地を作製するために使用される乾燥凝集栄養培地）を、１００ｍＬの脱イオン水を含有する容器に注入し、容器を撹拌せずに室温で保持することによって測定されるとき、乾燥凝集培地は、５分未満で溶解し得る。いくつかの実施形態では、乾燥凝集培地は、４分未満で溶解することができる。いくつかの実施形態では、乾燥凝集培地は、３分未満で溶解することができる。いくつかの実施形態では、乾燥凝集培地は、２分未満で溶解することができる。いくつかの実施形態では、乾燥凝集培地は、１分未満で溶解することができる。
【００６５】
したがって、更に別の態様では、本開示は、微生物を培養するための物品を提供する。本開示に従った物品の非限定的な例は、米国特許第４，５６５，７８３号及び同第５，０８９，４１３号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載される粉末コーティングデバイスと同様の薄膜培養デバイスである。本開示の乾燥凝集栄養培地は、薄膜培養デバイス中で粉末栄養素の代わりに使用され得る。
【００６６】
図１は、本開示に従った薄膜培養デバイスの一実施形態を示す。培養デバイス１０は、上面及び下面を有する自己支持型防水基材１２を備える本体部材を含む。基材１２は好ましくは、水を吸着しないか又は他の方法で水による影響を受けないポリエステル、ポリプロピレン、又はポリスチレン等の材料の比較的剛性のフィルムである。厚さ約０．００４〜０．００７インチ（０．１〜０．１８ｍｍ）のポリエステルフィルム、厚さ約０．００４〜０．００８インチ（０．１〜０．２ｍｍ）のポリプロピレンフィルム、及び厚さ約０．０１５インチ（０．３８ｍｍ）のポリスチレンフィルムは、良好に機能することがわかっている。他の好適な基材には、ポリエチレン又は他の耐水性コーティングを有する紙が挙げられる。好適なポリエチレンコーティング紙基材の一例は、「Ｓｃｈｏｅｌｌｅｒ  Ｔｙｐｅ  ＭＩＬ」写真印画紙（Ｓｃｈｏｅｌｌｅｒ  Ｐｕｌａｓｋｉ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋから市販）である。基材１２は、使用者が細菌コロニーを基材を介して視察することを望むか否かによって、透明又は不透明のどちらかであり得る。細菌コロニーの集計を容易にするために、基材１２は好ましくは、例えば米国特許第４，５６５，７８３号に記載されるような、その上に印刷された正方格子パターンを有する。
【００６７】
基材１２は、その上面が接着剤１４の層によってコーティングされ、その層は、容易な水和のために、均一の単層中で乾燥ゲル化剤及び／又栄養素を保持するのに役立つ。接着剤１４は、非水溶性であり、微生物の増殖を阻害しないものでなければならない。好ましくは、接着剤は、接着剤でコーティングされたフィルムを通して細菌コロニーを見ることができるように、濡れたときに十分に透明である。接着剤１４は、感圧性であることが好ましい。しかしながら、より融点の低い物質がより融点の高い物質上にコーティングされている熱活性化接着剤を用いてもよい。ゴム糊等の水活性化接着剤も有用である場合がある。
【００６８】
接着剤１４は、好ましくは粉末化されたゲル化剤及び／又は栄養素の粒子の直径未満の厚さで基材１２上にコーティングされるべきである。目的は、粒子を基材に接着させるために十分な接着剤を塗布することであるが、あまり接着剤が多いと粒子が完全に接着剤に埋め込まれてしまう。粉末１６の均一な単層は、水和のために露出される十分な表面積を有することが所望される。概して、０．０００２〜０．０００５インチ（０．００５１〜０．０１２７ミリメートル）の範囲の厚さの接着層が好適である。本開示の乾燥凝集栄養培地を含む粉末は、例えば米国特許第４，５６５，７８３号に記載されるような接着剤層にコーティングされ得る。
【００６９】
本体部材のスペーサ１８の一縁部に接着されるのは、任意のカバーシート２２である。カバーシート２２は好ましくは、細菌コロニーの集計を容易にするために透明であり、細菌及び水蒸気に対して実質的に不透過性である。本明細書及び特許請求の範囲で使用するとき、「細菌及び水蒸気に対して実質的に不透過性」は、デバイスの保管及び使用中に脱水培地の所望されない汚染を防止する、並びにインキュベーション期間の間に微生物の増殖を助ける環境を提供する、カバーシートを指す。概して、カバーシートは、基材１２と同一の特性を有するが、同じくらい剛性である必要はない。
【００７０】
図１の例示された実施形態は、デバイスに取り付けられたカバーシート２２を含むが、保存及びインキュベーションの間、粉末を含有する実施形態が被覆されず、単純に無菌環境に配置され得ることも本発明の範囲内で想到される。任意に、カバーシート２２は更に、接着剤（図示せず）及び粉末（図示せず）の層を含んでもよい。カバーシートに接着される接着剤及び粉末は、上記の接着剤１４及び粉末１６と同様の（又は同一の）特性及び／又は組成物を有することができ、基材１２に適用される接着剤１４及び粉末１６と同一の方法でカバーシートに適用され得る。
【００７１】
別の一態様において、本開示はキットを提供する。キットは、本明細書に記載される乾燥凝集栄養培地を含む任意の組成物を含むことができる。いずれの実施形態においても、キットは、乾燥凝集栄養培地を使用するための説明書を含んでもよい。いずれの実施形態においても、キットは更に、試料を得るための、試料を処理するための、及び／又は微生物を培養するための物品を含んでもよい。物品は、バッグ、ボトル、試料捕捉デバイス（例えば、ピペット、綿棒、スポンジ）、及び前記の物品のいずれか２つ以上の組み合わせからなる群から選択され得る。上記の実施形態のいずれかにおいて、キットは更に、選択剤（例えば、抗生物質）を含んでもよい。いずれの実施形態においても、選択剤は、溶液中で、又は実質的に乾燥形態で提供され得る。いずれの実施形態においても、選択剤は、所定の体積の試料に添加され得る単位用量形態（例えば、錠剤、チューブ、又はアンプル）で提供され得る。いずれの実施形態においても、キットは更に、試料中の微生物の存在又は非存在を検出するために使用される指示薬を含んでもよい。
【００７２】
上記の実施形態のいずれかにおいて、キットは、所定の質量の乾燥凝集栄養培地を含むパッケージを含んでもよい。いずれの実施形態においても、所定の質量は、微生物の増殖を促進することが可能な再構成培地を生成するために、所定の体積（例えば、９．９ｍＬ、１０ｍＬ、９０ｍＬ、９９ｍＬ、１００ｍＬ、２２５ｍＬ、１．０Ｌ、又は３．３７５Ｌ）の水性希釈剤と混合されるのに十分な量であり得る。
【００７３】
本開示の方法、組成物、物品、及びキットのある特定の実施形態は、実施形態の以下のリストに記載される。
【００７４】
実施形態
実施形態Ａは、流動性乾燥凝集栄養培地を作製する方法であって、
粉末栄養素を含む栄養成分及び凝集液を、フロースルー型凝集チャンバを備える凝集装置に導入する工程であって、
栄養成分が微生物の増殖を促進し、
凝集液が噴霧スプレーとして導入される、工程と、
所定の期間にわたって凝集チャンバ内で栄養成分を凝集液と湿式塊状化して、凝集栄養培地粒子を形成する工程と、
ある期間にわたって凝集栄養培地粒子を乾燥条件に曝露して、乾燥凝集栄養培地を形成する工程と、を含む、方法である。
【００７５】
実施形態Ｂは、凝集液が水からなる、実施形態Ａの方法である。
【００７６】
実施形態Ｃは、凝集液が、微生物の増殖を促進する溶解栄養素を有する溶媒を含む、実施形態Ａの方法である。
【００７７】
実施形態Ｄは、溶媒が水を含み、栄養素が、ペプトン、塩化ナトリウム、及びリン酸ナトリウム又はリン酸カリウムを含む、実施形態Ｃの方法である。
【００７８】
実施形態Ｅは、栄養成分を導入する工程が、２つ以上の粉末栄養素の実質的に均一な混合物を導入することを含む、実施形態Ａ〜Ｄのいずれか１つの方法である。
【００７９】
実施形態Ｆは、
栄養成分を凝集チャンバに導入する工程が、約５０ｋｇ／時〜約１０００ｋｇ／時の供給速度で栄養成分を導入することを含み、
凝集液を凝集チャンバに導入する工程が、約１５ｋｇ／時〜約３００ｋｇ／時の噴霧速度で凝集液を導入することを含み、
凝集装置が混合ブレードを更に備え、混合ブレードが約５００ｒｐｍ〜約４０００ｒｐｍのブレード回転速度で回転し、
凝集栄養培地を乾燥条件に曝露する工程が、凝集栄養培地を約６０℃〜約８５℃の所定の温度に曝露することを含み、
供給速度、噴霧速度、ブレード回転速度、及び所定の温度が、５重量％未満の事前選択された平均含水量を有する乾燥凝集栄養培地を生成するように選択される、実施形態Ａ〜Ｅのいずれか１つの方法である。
【００８０】
実施形態Ｇは、
栄養成分を凝集チャンバに導入する工程が、約５０ｋｇ／時〜約１０００ｋｇ／時の供給速度で栄養成分を導入することを含み、
凝集液を凝集チャンバに導入する工程が、約１５ｋｇ／時〜約３００ｋｇ／時の噴霧速度で凝集液を導入することを含み、
凝集装置が混合ブレードを更に備え、混合ブレードが約５００ｒｐｍ〜約４０００ｒｐｍのブレード回転速度で回転し、
凝集栄養培地を乾燥条件に曝露する工程が、凝集栄養培地を約６０℃〜約８５℃の所定の温度に曝露することを含み、
供給速度、噴霧速度、ブレード回転速度、及び所定の温度が、０．２〜０．５グラム／立方センチメートルの重力によって充填された密度を有する乾燥凝集栄養培地を生成するように選択される、実施形態Ａ〜Ｆのいずれか１つの方法である。
【００８１】
実施形態Ｈは、
栄養成分を凝集チャンバに導入する工程が、約５０ｋｇ／時〜約１０００ｋｇ／時の供給速度で栄養成分を導入することを含み、
凝集液を凝集チャンバに導入する工程が、約１５ｋｇ／時〜約３００ｋｇ／時の噴霧速度で凝集液を導入することを含み、
凝集装置が混合ブレードを更に備え、混合ブレードが約５００ｒｐｍ〜約４０００ｒｐｍのブレード回転速度で回転し、
凝集栄養培地を乾燥条件に曝露する工程が、凝集栄養培地を約６０℃〜約８５℃の所定の温度に曝露することを含み、
供給速度、噴霧速度、ブレード回転速度、及び所定の温度が、約１０５ミクロン〜約２０００ミクロンの第１の粒径分布範囲の粒子を有する乾燥凝集栄養培地を生成するように選択される、実施形態Ａ〜Ｇのいずれか１つの方法である。
【００８２】
実施形態Ｉは、粒子の亜集団を選択する工程を更に含み、亜集団が、第１の粒径分布範囲よりも狭い第２の粒径分布範囲を有し、第２の粒径分布範囲が約１４９ミクロン〜約１０００ミクロンである、実施形態Ａ〜Ｈのいずれか１つの方法である。
【００８３】
実施形態Ｊは、１つ以上の粉末栄養素が、タンパク質、炭水化物、塩、及び前記の粉末栄養素のうちのいずれか２つ以上の混合物からなる群から選択される、実施形態Ａ〜Ｉのいずれか１つの方法である。
【００８４】
実施形態Ｋは、乾燥凝集栄養培地を、乾燥凝集栄養培地中の生存微生物の数を減らすプロセスに供する工程を更に含む、実施形態Ａ〜Ｊのいずれか１つの方法である。
【００８５】
実施形態Ｌは、乾燥凝集栄養培地を生存微生物の数を減らすプロセスに供する工程が、乾燥凝集栄養培地を電離放射線又はエチレンオキシド蒸気に曝露することを含む、実施形態Ｋの方法である。
【００８６】
実施形態Ｍは、実施形態Ａ〜Ｌのいずれか１つの方法によって生成される流動性乾燥凝集栄養培地を含む、組成物である。
【００８７】
実施形態Ｎは、特定の質量の乾燥凝集栄養培地が、凝集栄養培地が作られる等しい質量の栄養成分よりも迅速に溶解する、実施形態Ｍの組成物である。
【００８８】
実施形態Ｏは、実施形態Ｍ又は実施形態Ｎの組成物を含むキットである。
【００８９】
実施形態Ｐは、組成物が所定の質量の乾燥凝集栄養培地を含むパッケージ中に配置され、所定の質量が、微生物の増殖を促進することが可能な再構成培地を生成するために、９．９ｍＬ、１０ｍＬ、９０ｍＬ、９９ｍＬ、１００ｍＬ、２２５ｍＬ、１．０Ｌ、又は３．３７５Ｌの水性希釈剤と混合されるように選択される、実施形態Ｏのキットである。
【００９０】
実施形態Ｑは、バッグ、ボトル、及び試料捕捉デバイスからなる群から選択される物品を更に含む、実施形態Ｏ又は実施形態Ｐのキットである。
【００９１】
実施形態Ｒは、選択剤及び／又は指示薬を更に含む、実施形態Ｏ〜Ｑのいずれか１つのキットである。
【００９２】
実施形態Ｓは、
第１の主表面及び第２の主表面を有する自己支持型防水基材と、
第１の主表面の少なくとも一部上に配置された接着剤層と、
接着剤層の少なくとも一部上に配置された、実施形態Ｍ又は実施形態Ｎの組成物を含むコーティングと、
栄養培地との流体接触のために位置付けられた乾燥冷水溶性ゲル化剤と、を含む、薄膜培養デバイスである。
【００９３】
実施形態Ｔは、基材の少なくとも一部に連結されたカバーシートを更に備え、カバーシートが、第１の主表面に対向する第１の側面を有する、実施形態Ｓの薄膜培養デバイスである。
【００９４】
実施形態Ｕは、ゲル化剤が、カバーシートの第１の側面に接着されている、実施形態Ｔの薄膜培養デバイスである。
【００９５】
本発明の目的及び利点は、以下の実施例によって更に例示されるが、これらの実施例において列挙された特定の材料及びその量は、他の諸条件及び詳細と同様に本発明を過度に制限するものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【００９６】
実施例１．Ｓｃｈｕｇｉ凝集プロセスを使用した凝集栄養培地粒子の生成。
垂直Ｓｃｈｕｇｉ  ＦＬＥＸＯＭＩＸ  ＦＸＤ−１００ミキサ／凝集装置（Ｂｅｐｅｘ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＬＬＣ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を湿潤凝集のために使用する。３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ  ＭＮ）から得られる、２５キログラムの脱水緩衝ペプトン水（「ＢＰＷ」、ＩＳＯ処方、カタログ番号ＢＰＷ０１０）を、３００ｋｇ／時の供給速度で粉末ディスペンサーを介して連続的に供給する。また、ミキサ／凝集装置に、１５Ｌ／時の供給速度で脱イオン水を連続的に供給する（４つの霧化ノズルの配列を介して）。回転ナイフブレードを、４０００ｒｐｍの速度に設定する。ミキサ−造粒機の出口の湿潤顆粒は、３つの区画と適合した流動床乾燥装置に重力下で連続的に入る。第１のゾーンのみを、６０〜６５℃まで加熱された空気を用いて、湿潤凝集生成物を乾燥させるために使用する。生成物を、排気が約４５℃に達するまで乾燥状態で保持する。乾燥凝集生成物を、４０〜６０メッシュ（すなわち、約２５０ミクロン〜約４００ミクロン）の有効直径を有する主要部分（例えば、４０％超）を有する２０〜１４０メッシュで、粉末を回収するように篩過する。このプロセスを用いて得た自由流凝集ＢＰＷ粒子は、約０．３〜０．５ｇ／ｃｍ３の重力によって充填された密度、及び脱イオン水中で５分未満の溶解時間を含む、特有の性質を有する。凝集ＢＰＷ粒子の湿分含量は、５％未満である。
【００９７】
実施例２〜４  Ｓｃｈｕｇｉ凝集プロセスを使用した凝集栄養培地粒子の生成。
実施例２〜４に対して、動作条件及び器具設定（すなわち、粉末供給速度、液体供給速度、ブレード回転速度、乾燥温度）が表１に示される値に調節されることを除いて、実施例１に記載されるものと同一の手順を踏む。
【００９８】
【表１】
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【００９９】
実施例５〜７  Ｓｃｈｕｇｉ凝集プロセスを使用した凝集栄養培地粒子の生成。
Ｎ１３ノズルコンボを有する垂直Ｓｃｈｕｇｉ  ＦＬＥＸＯＭＩＸ  ＦＸ−１００／流動床ＦＢ−５（Ｂｅｐｅｘ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＬＬＣ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を湿潤凝集のために使用する。３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ  ＭＮ）から得られる、２５キログラムの脱水緩衝ペプトン水（「ＢＰＷ」、ＩＳＯ処方、カタログ番号ＢＰＷ０１０）を、１３６ｋｇ／時の供給速度で粉末ディスペンサーを介して連続的に供給する。また、ＦＸ１００／ＦＢ５に、１１．３Ｌ／時（実施例５）、１２．９Ｌ／時（実施例６）、及び８．３Ｌ／時の１０％（ｗ／ｗ）のＢＰＷ溶液（実施例７）の供給速度で、脱イオン水を連続的に供給する（４つの霧化ノズルの配列を介して）。回転ナイフブレードを、４０００ｒｐｍの速度に設定する。ミキサ−造粒機の出口の湿潤顆粒は、３つの区画と適合した流動床乾燥装置に重力下で連続的に入る。第１のゾーンのみを、８０℃未満まで加熱された空気を用いて、湿潤凝集生成物を乾燥させるために使用する。生成物を、排気が約４５℃に達するまで乾燥状態で保持する。表２は、各実施例の稼働条件を示し、表３は、プロセスから得られた粒子分析を示す。
【０１００】
【表２】
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【０１０１】
【表３】
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【０１０２】
本明細書に引用するすべての特許、特許出願及び公開公報、並びに電子的に入手可能な資料の開示内容の全体を援用する。本出願の開示内容と本明細書に援用されるいずれかの文書の開示内容との間になんらかの矛盾が存在する場合には、本出願の開示内容が優先するものとする。前記の詳細な説明及び実施例は、あくまで理解を助ける明確さのために示したものである。これらによって不要な限定をするものと理解されるべきではない。本発明は、示され記載された厳密な詳細事項に限定されるべきではないが、それは当業者に対して明らかな変形が特許請求の範囲において規定された本発明の範囲に包含されるからである。
【０１０３】
すべての見出しは、読者の利便性のためであり、指定のない限り、その見出しに続く本文の意味を限定するために使用するべきではない。
【０１０４】
本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく様々な改変を行うことが可能である。これら及び他の実施形態は以下の特許請求の範囲に含まれる。
【図１】
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