(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【化３８】
0006280117.tif 000042
［式中、
Ｒ1が、水素原子を表し、
Ｒ2が、水素原子を表し、
Ｘ基が、直鎖状のＣ1-6アルキレン基である。］
【請求項２】
Ｘ基が、１〜４の炭素原子からなる直鎖状のアルキレン基である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
以下のうちのいずれかから選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物。
【化３９】
0006280117.tif 000043
【化４０】
0006280117.tif 000044
【請求項４】
下記の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物。
【化４１】
0006280117.tif 000045
【請求項５】
下記の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物。
【化４２】
0006280117.tif 000046
【請求項６】
下記の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物。
【化４３】
0006280117.tif 000047
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、組成物。
【請求項８】
少なくとも１つの薬学的に許容されるか、または美容的に許容される担体または賦形剤をさらに含む請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
式Ｉの化合物が、Ｘ基が、１〜４の炭素原子からなる直鎖状のアルキレン基である化合物である請求項７または８に記載の組成物。
【請求項１０】
式Ｉの化合物が、以下の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項７または８に記載の組成物。
【化４４】
0006280117.tif 000048
【請求項１１】
式Ｉの化合物が、以下の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項７または８に記載の組成物。
【化４５】
0006280117.tif 000049
【請求項１２】
式Ｉの化合物が、以下の化合物、またはその薬学的に許容される塩である、請求項７または８に記載の組成物。
【化４６】
0006280117.tif 000050
【請求項１３】
光線力学的治療または診断の方法において使用するための、請求項７〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記方法が、癌；癌に関連した感染；ウイルス、細菌、もしくは真菌感染；または非癌性状態の治療または診断のためである、請求項１３に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
前記非癌性状態が、炎症である請求項１４に記載の使用のための組成物。
【請求項１６】
前記方法が、癌の治療または診断のためである請求項１３に記載の使用のための組成物。
【請求項１７】
前記方法が、膀胱癌、結腸癌、もしくは胃癌；ヒトパピローマウイルス、Ｂ型肝炎、もしくはエプスタインバーウイルス；ヘリコバクターピロリ感染もしくは座瘡；または炎症性座瘡、大腸炎、もしくは感染性皮膚炎の治療または診断のためである、請求項１３に記載の使用のための組成物。
【請求項１８】
光線力学的治療または診断の方法において使用するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
前記方法が、癌；癌に関連した感染；ウイルス、細菌、もしくは真菌感染；または非癌性状態の治療または診断のためである、請求項１８に記載の使用のための化合物。
【請求項２０】
前記非癌性状態が、炎症である請求項１９に記載の使用のための化合物。
【請求項２１】
前記方法が、癌の治療または診断のためである請求項１８に記載の使用のための化合物。
【請求項２２】
前記方法が、膀胱癌、結腸癌、もしくは胃癌；ヒトパピローマウイルス、Ｂ型肝炎、もしくはエプスタインバーウイルス；ヘリコバクターピロリ感染もしくは座瘡；または炎症性座瘡、大腸炎、もしくは感染性皮膚炎の治療または診断のためである、請求項１８に記載の使用のための化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、５−アミノレブリン酸（５−ＡＬＡ）の新規の誘導体、および光感作剤としてのそれらの使用に関する。具体的には、一般式Ｉの化合物およびそれらの薬学的に許容される塩、そのような化合物を調製するための方法、ならびに例えば、光線力学的療法および診断の方法におけるそれらの医学的および美容的用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
光線力学的治療（ＰＤＴ）は、前癌性病変、癌、および非癌性疾患を治療するための技法である。ＰＤＴは、光増感剤またはその前駆体（すなわち、「光感作剤」）の目的とする領域への投与を伴う。光増感剤またはその前駆体は、細胞内に取り込まれ、光増感剤の前駆体はそこで光増感剤に変換される。目的とする領域を光に曝露することにより、通常基底一重項状態から励起一重項状態に光増感剤が励起される。その後、長寿命励起三重項状態への項間交差を受ける。基底三重項状態の組織に存在するいくつかの化学種のうちの１つは、分子酸素である。光増感剤および酸素分子が近接する場合、光増感剤がその基底一重項状態に緩和させるエネルギーの移動が起こり、励起一重項状態の酸素分子を作り出すことができる。一重項酸素は、非常に攻撃的な化学種であり、あらゆる近傍生体分子と非常に急速に反応する。最終的に、これらの破壊的な反応は、アポトーシスまたは壊死により細胞を死滅させ、それによって、例えば、癌細胞を選択的に死滅させる。このメカニズムは、まだ完全には理解されていないが、研究は、臨床的結果（すなわち、癌性細胞に対する選択性）が癌性細胞による選択的取り込みによるものではないことを示唆する。むしろ、全ての細胞型において取り込みのレベルは類似するが、変換および排除のプロセスは、悪性細胞および一般的に代謝的に活性な細胞（例えば炎症もしくは感染細胞）において異なり、癌性組織と正常な組織との間に濃度勾配をもたらす。
【０００３】
両方ともに光増感剤の前駆体である５−アミノレブリン酸（５−ＡＬＡ）およびそのある特定の誘導体、例えば、５−ＡＬＡエステルを含むいくつかの光感作剤は、既知であり、文献に記載されている。これらは、細胞内で、光増感剤であるプロトポルフィリンＩＸ（ＰｐＩＸ）等のプロトポルフィリンに変換される。現在、５−ＡＬＡまたはそのエステルを含むいくつかの医薬製品が、ＰＤＴおよび光線力学的診断（ＰＤＤ）において臨床使用中である。それらのうちの１つは、Ｍｅｔｖｉｘ（登録商標）であり、これは、日光角化症および基底細胞癌の光線力学的治療用の５−ＡＬＡメチルエステルを含むクリーム形態の真皮用製品である（Ｐｈｏｔｏｃｕｒｅ  ＡＳＡ，Ｎｏｒｗａｙによって開発され、現在、Ｇａｌｄｅｒｍａ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄによって販売されている）。もう１つは、Ｌｅｖｕｌａｎ  Ｋｅｒａｓｔｉｃｋ（登録商標）（ＤＵＳＡ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｃａｎａｄａ）であり、これは、５−ＡＬＡを含有する日光角化症の光線力学的治療用の製品である。Ｈｅｘｖｉｘ（登録商標）（Ｐｈｏｔｏｃｕｒｅ  ＡＳＡによって開発された）は、膀胱癌の診断のために膀胱の中に滴下するための５−ＡＬＡヘキシルエステルを含む水溶液である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、代替の光増感剤またはその前駆体の必要性が依然として存在する。本発明は、以下の一般式に従う光増感剤の前駆体を提供することにより、この必要性に対処する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
よって、第１の態様から見られるように、本発明は、一般式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供し、
【０００６】
【化１】
0006280117.tif 000002
【０００７】
式中、
Ｒ１は、水素原子または任意に置換されたアルキルもしくはシクロアルキル基を表し、
Ｒ２は、それぞれ同一または異なっていてもよく、水素原子または任意に置換されたアルキル基を表し、
Ｘは、連結基である。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】カルボキシメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩のクリーム製剤の適用後のミニブタの皮膚からの蛍光を示す。
【図２】光線力学的作用による、カルボキシメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩および２−カルボキシエチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩と共にインキュベートしたＳ．アウレウス細菌の成長の遅延を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
式Ｉの化合物において、−Ｘ−ＣＯ２Ｒ１部分は、本質的に親水性であることが好ましい。用語「親水性」は、分子の−Ｘ−ＣＯ２Ｒ１部分が水もしくは他の極性溶媒および／または物質と相互作用するか、あるいはそれによって溶解される傾向があることを意味する。分子のこの部分の親水性の性質は、Ｘ基の性質および／または−ＣＯ２Ｒ１基の性質に起因し得る。したがって、Ｘが親水性であるか、または−ＣＯ２Ｒ１基が親水性であるか、あるいはＸおよび−ＣＯ２Ｒ１基の両方が親水性であるかのいずれかであってもよい。
【００１０】
第１の実施形態では、一般式Ｉの化合物の−Ｘ−ＣＯ２Ｒ１部分の連結基Ｘのみが、親水性である。
【００１１】
親水性基Ｘの典型的な例は、基に親水性を付与する１つ以上の置換基（すなわちペンダント基）を坦持するもの、すなわち、親水性置換基である。用語「親水性置換基」は、水素結合が可能な置換基を表す。典型的かつ好ましい親水性置換基は、ヒドロキシル、チオール、カルボキシル、カルバモイル、エステル、およびアミン、より好ましくは、ヒドロキシル、アミン、およびチオールである。あるいは、親水性基Ｘは、基に親水性を付与する１つ以上のヘテロ原子、すなわち、水素結合が可能なヘテロ原子を含有し得る。好ましいヘテロ原子は、酸素または硫黄である。
【００１２】
親水性基Ｘの特定の例としては、１つ以上のヘテロ原子、好ましくは、１つ以上の酸素原子によって中断されるアルキレン基が挙げられる。そのような基は、ポリエチレングリコール基、好ましくは、１〜４のエチレンオキシド単位を含有するポリエチレングリコール基を含む。親水性基Ｘの他の例は、１つ以上のヒドロキシル、チオール、またはアミン置換基を含む、アルキレン基、好ましくは、Ｃ１−４アルキレン基である。
【００１３】
Ｘのみが親水性である場合、Ｒ１基は、任意に置換されたアルキル基、すなわち、直鎖状もしくは分枝状アルキル基またはシクロアルキル基であってもよい。Ｒ１が置換される場合、これは、１つ以上の非親水性置換基によって置換される。用語「非親水性置換基」は、本質的に水素結合が不可能である置換基を意味する。非親水性置換基は、ヒドロキシル、チオール、カルボキシル、カルバモイル、エステル、およびアミン等、親水性基の例として本明細書に記載される基のいずれかを含まない。好ましい非親水性置換基は、ハロ、好ましくは、ＦまたはＣｌ、ニトロ、およびアリールである。非親水性置換基がアリール基である場合、前記アリール基は、１つ以上のハロ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ（例えば、Ｃ１−３アルコキシ）、またはニトロ基によって置換され得る。
【００１４】
一実施形態では、Ｒ１は、非置換の直鎖状もしくは分枝状アルキル基、または非置換のシクロアルキル基、好ましくは、４〜２０個の炭素原子（好ましくは、４〜１０個の炭素、例えば、４〜８個の炭素）を含有する非置換の直鎖状アルキル基、４〜２０個の炭素原子（好ましくは、４〜１０個の炭素、例えば、４〜８個の炭素）を含有する非置換の分枝状アルキル基、または３〜７個の炭素原子（好ましくは、３〜６個の炭素原子）を含有する非置換のシクロアルキル基である。
【００１５】
Ｒ１が非置換のアルキル基である場合、直鎖状アルキル基であるＲ１基が好ましい。Ｃ４−１０直鎖状アルキル基がより好ましく、Ｃ４−８直鎖状アルキル基が最も好ましい。そのような基の代表的な例は、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル（ｎｏｎｌｙ）、およびｎ−デシルである。ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、およびｎ−オクチルが特に好ましい。
【００１６】
Ｒ１が非置換の分枝状アルキル基である場合、そのような分枝状アルキル基は、好ましくは、４〜２０個の炭素原子、より好ましくは、４〜１０個の炭素原子、最も好ましくは、４〜８個の炭素原子を含有する。そのような分枝状アルキル基の代表的な例としては、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、２−メチルブチル、３，３−ジメチル−１−ブチル、および１−エチルブチルが挙げられる。好ましい基は、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルを含む。
【００１７】
Ｒ１が、非置換のシクロアルキル基である場合、そのようなシクロアルキル基は、好ましくは、３〜６個の炭素原子、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシルからなる。
【００１８】
Ｒ１が置換されたアルキル基である場合、これは、１つ以上の非親水性置換基、好ましくは、１つまたは２つの非親水性置換基を坦持する直鎖状もしくは分枝状アルキルまたはシクロアルキル基であってもよい。２つ以上の非親水性置換基が存在する場合、これらは、同一であるか、または異なってもよい。好ましい非親水性置換基は、ハロ、好ましくは、ＦまたはＣｌ、ニトロ、およびアリールである。非親水性置換基がアリール基である場合、前述のアリール基は、１つ以上のハロ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ（例えば、Ｃ１−３アルコキシ）、またはニトロ基によって置換され得る。好ましいそのようなＲ１基は、１つ以上のアリール基、好ましくは、１つまたは２つのアリール基によって置換されるＣ１−２アルキルであり、アリール基自体は、アルキル（例えば、Ｃ１−４アルキル）、ハロ、ニトロ、ハロアルキル、またはアルコキシ（例えば、Ｃ１−３アルコキシ）によって任意に置換される。そのようなＲ１基の例としては、ベンジル、４−イソプロピルベンジル、４−メチルベンジル、２−メチルベンジル、３−メチルベンジル、４−［ｔ−ブチル］ベンジル、４−［トリフルオロメチル］ベンジル、４−メトキシベンジル、３，４−［ジ−クロロ］ベンジル、４−クロロベンジル、４−フルオロベンジル、２−フルオロベンジル、３−フルオロベンジル、２，３，４，５，６−ペンタフルオロベンジル、３−ニトロベンジル、４−ニトロベンジル、２−フェニルエチル、４−フェニルブチル、および４−ジフェニル−メチルが挙げられる。より好ましいそのようなＲ１基は、ベンジル、４−イソプロピルベンジル、４−メチルベンジル、４−ニトロベンジル、および４−クロロベンジルである。最も好ましくは、ベンジルである。
【００１９】
第２の実施形態では、一般式Ｉの化合物の−Ｘ−ＣＯ２Ｒ１部分に存在する−ＣＯ２Ｒ１基のみが、親水基である。そのような基の典型的かつ好ましい例は、−ＣＯ２Ｈである、すなわち、Ｒ１が水素原子を表す場合である。代替の好ましい例は、−ＣＯ２Ｒ１基であり、式中、Ｒ１は、短い直鎖状または分枝状アルキル基、好ましくは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、およびイソプロピル等の１〜３個の炭素原子を含有するアルキル基である。
【００２０】
本明細書に記載される第２の実施形態では、連結基Ｘは、好ましくは、１つ以上の非親水性置換基によって任意に置換される直鎖状もしくは分枝状アルキレン基、シクロアルキレン基、アリーレン基、またはアラルキレン基である。
【００２１】
Ｘが直鎖状アルキレン基である場合、これは、好ましくは、１〜１６個の炭素原子、すなわち、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレン、デシレン、ウンデシレン、ドデシレン、トリデシレン、テトラデシレン、ペンタデシレン、またはヘキサデシレン、より好ましくは、１〜６個の炭素原子、すなわち、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、またはヘキシレン、さらにより好ましくは、１〜４個の炭素原子、すなわち、メチレン、エチレン、プロピレン、またはブチレンからなる。
【００２２】
Ｘが分枝状アルキレン基である場合、これは、好ましくは、２〜１０個の炭素原子、より好ましくは、２〜６個の炭素原子からなる。好ましい例は、メチル−メチレン、ジメチル−メチレン、１−メチル−エチレン、２−メチル−エチレン、１，２−ジメチルエチレン、エチル−メチレン、イソプロピル−メチレン、１−エチル−エチレン、および２−エチル−エチレンである。最も好ましい例は、メチル−メチレン、エチル−メチレン、およびイソプロピル−メチレンである。
【００２３】
Ｘがシクロアルキレン基である場合、これは、好ましくは、３〜８個の炭素原子、より好ましくは、５または６個の炭素原子からなる。好ましい例は、シクロペンチレンおよびシクロヘキシレンである。
【００２４】
Ｘがアリーレン基である場合、これは、好ましくは、６〜１２個の炭素原子からなる。好ましい基は、フェニレン、すなわち、好ましくは、炭素原子１および４に遊離原子価を有する−Ｃ６Ｈ４−である。
【００２５】
Ｘがアラルキレン基である場合、これは、好ましくは、７〜１５個の炭素原子からなる。好ましい基は、ベンジレン、すなわち、好ましくは、芳香環の炭素原子４に遊離原子価を有する−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４−である。
【００２６】
上述のＸ基、すなわち、直鎖状もしくは分枝状アルキレン基、シクロアルキレン基、アリーレン基、またはアラルキレン基のいずれかは、１つ以上の非親水性置換基、例えば、本明細書に記載されるそのような基のいずれかによって任意に置換され得る。
【００２７】
本発明の第３の実施形態では、一般式Ｉの化合物のＸおよび−Ｘ−ＣＯ２Ｒ１部分の−ＣＯ２Ｒ１基の両方が親水性である。そのような親水性基Ｘおよび−ＣＯ２Ｒ１の典型的かつ好ましい例は、上記の前の段落に提供される。
【００２８】
Ｒ２は、水素原子または任意に置換されたアルキル基（好ましくは、Ｃ１−６アルキル、例えば、Ｃ１−３アルキル基）を表し、これらの各々が同一であるか、または異なってもよい。Ｒ２が任意に置換されたアルキル基である場合、置換基は、本明細書に定義されるように、親水性置換基または非親水性置換基であってもよい。
【００２９】
本発明に従う好ましい化合物は、少なくとも１つのＲ２が水素原子を表すものである。好ましい実施形態では、各Ｒ２は、水素原子を表す。
【００３０】
好ましい実施形態では、本発明は、一般式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ｒ１は、水素原子、または短い直鎖状もしくは分枝状アルキル基、好ましくは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、またはイソプロピル等の１〜３個の炭素原子を含有する直鎖状もしくは分枝状アルキル基を表す。
Ｒ２は、水素原子または任意に置換されたアルキル基、好ましくは、水素を表し、これらの各々は同一であるか、または異なってもよく、
連結基Ｘは、
（ａ）任意に置換されたＣ１−６アルキレン基、または
（ｂ）任意に置換されたシクロアルキレン、アリーレン、もしくはアラルキレン基である。
【００３１】
より好ましい実施形態では、本発明は、一般式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ｒ１およびＲ２は各々、水素原子を表し、
連結基Ｘは、
（ａ）任意に置換されたＣ１−６アルキレン基、または
（ｂ）任意に置換されたシクロアルキレン、アリーレン、もしくはアラルキレン基である。
【００３２】
より好ましい実施形態では、本発明は、一般式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ｒ１は、水素原子、または短い直鎖状もしくは分枝状アルキル基、好ましくは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、またはイソプロピル等の１〜３個の炭素原子を含有する直鎖状もしくは分枝状アルキル基を表す。
Ｒ２は、水素原子または任意に置換されたアルキル基、好ましくは、水素を表し、これらの各々は同一であるか、または異なってもよく、
連結基Ｘは、
（ａ）任意に置換された直鎖状Ｃ１−４アルキレン基、もしくは任意に置換された分枝状Ｃ２−６アルキレン基、または
（ｂ）任意に置換されたＣ５−６シクロアルキレン基、任意に置換されたＣ６−１２アリーレン基、もしくは任意に置換されたＣ７−１５アラルキレン基である。
【００３３】
より好ましい実施形態では、本発明は、一般式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
Ｒ１およびＲ２は各々、水素原子を表し、
連結基Ｘは、
（ａ）任意に置換された直鎖状Ｃ１−４アルキレン基、もしくは任意に置換された分枝状Ｃ２−６アルキレン基、または
（ｂ）任意に置換されたＣ５−６シクロアルキレン基、任意に置換されたＣ６−１２アリーレン基、もしくは任意に置換されたＣ７−１５アラルキレン基である。
【００３４】
一実施形態では、そのようなＸ基は、非置換されてもよい。あるいは、そのような基は、前述の１つ以上の非親水性置換基によって置換され得る。連結基Ｘが置換される場合、１つ以上の非親水性置換基で置換され得る。２つ以上の置換基が存在する場合、それらは、同一であるか、または異なってもよく、アルキレン鎖、シクロアルキレン環、アリーレン環、またはアラルキレン基の鎖もしくは環の同一のまたは異なる炭素原子に結合され得る。
【００３５】
一実施形態では、連結基Ｘは、非置換の直鎖状Ｃ１−６アルキレン基である。そのような基の例は、非置換の直鎖状Ｃ１アルキレン基、すなわち、メチレン基、非置換の直鎖状Ｃ２アルキレン基、すなわち、エチレン基、非置換の直鎖状Ｃ３アルキレン基、すなわち、プロピレン基、非置換の直鎖状Ｃ４アルキレン基、すなわち、ブチレン基、非置換の直鎖状Ｃ５アルキレン基、すなわち、ペンチレン基、および非置換の直鎖状Ｃ６アルキレン基、すなわち、ヘキシレン基である。好ましい連結基Ｘは、非置換の直鎖状Ｃ１−４アルキレン基、すなわち、メチレン、エチレン、プロピレン、およびブチレンである。
【００３６】
別の実施形態では、連結基Ｘは、置換された直鎖状Ｃ１−６アルキレン基、好ましくは、置換された直鎖状Ｃ１−４アルキレン基、より好ましくは、置換されたＣ１−２アルキレン基である。好ましい置換基は、ハロ、好ましくは、ＦおよびＣｌならびにアリールである。任意の置換基がアリール基である場合、アリールは、１つ以上のハロ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ（例えば、Ｃ１−３アルコキシ）、もしくはニトロ基によって非置換または置換され得る。好ましい実施形態では、前述のアリール基は非置換される。そのような置換基のうちの１つ以上（例えば１つまたは２つ）は、アルキレン鎖に結合され得る。２つ以上のそのような置換基が存在する場合、それらは、連結基Ｘに存在する同一の炭素原子、または異なる炭素原子に連結され得る。一実施形態では、２つのハロ置換基が同一の炭素原子に連結され得る。モノ−またはジ−フッ素化される直鎖状Ｃ１−６アルキレン基、より好ましくは、直鎖状Ｃ１−４アルキレン基、さらにより好ましくは、直鎖状Ｃ１−２アルキレン基が、本発明の好ましい態様を形成する。アリール置換基、好ましくは、フェニルによって置換される直鎖状Ｃ１−６アルキレン基、より好ましくは、直鎖状Ｃ１−４アルキレン基、さらにより好ましくは、直鎖状Ｃ１−２アルキレン基が、本発明の別の好ましい態様を形成する。
【００３７】
さらに別の実施形態では、連結基Ｘは、非置換の分枝状Ｃ２−６アルキレン基である。そのようなＸ基の好ましい例は、メチル−メチレン、すなわち、−ＣＨ（ＣＨ３）−、エチル−メチレン、すなわち、−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）−、およびイソプロピル−メチレン、すなわち、ＣＨ（ＣＨ−（ＣＨ３）２）−である。
【００３８】
さらに別の実施形態では、連結基Ｘは、置換された分枝状Ｃ２−６アルキレン基である。好ましい置換基は、ハロ、好ましくは、ＦおよびＣｌならびにアリールである。任意の置換基がいずれのアリール基である場合、前述のアリールは、１つ以上のハロ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ（例えば、Ｃ１−３アルコキシ）、もしくはニトロ基によって非置換または置換され得る。好ましい実施形態では、前述のアリールは非置換される。ハロは、好ましい置換基であり、そのような置換基のうちの１つ以上は、分枝状アルキレン鎖に結合され得る。２つ以上のそのような置換基が存在する場合、それらは、分枝状アルキレン鎖に存在する同一の炭素原子または異なる炭素原子に連結され得る。そのようなＸ基の好ましい例は、トリフルオロメチル−メチレンである。
【００３９】
さらに別の実施形態では、連結基Ｘは、シクロプロピレン、シクロブチレン、シクロペンチレン、シクロヘキシレン、シクロヘプチレン、またはシクロオクチレン等の非置換のシクロアルキレン基である。好ましくは、連結基Ｘは、５または６個の炭素原子からなる非置換のシクロアルキレン基、すなわち、シクロペンチレンまたはシクロヘキシレンである。
【００４０】
さらに別の実施形態では、連結基Ｘは、６または１２個の炭素原子からなる非置換のアリーレン基である。この実施形態の好ましい連結基Ｘは、フェニレン、すなわち、好ましくは、炭素原子１および４に遊離原子価を有する−Ｃ６Ｈ４−である。
【００４１】
さらに別の実施形態では、連結基Ｘは、置換されたアリーレン基であり、この場合、アリーレン基は、６または１２個の炭素原子、好ましくは、６個の炭素原子からなる。好ましい環置換基は、アルキル、ハロ、およびニトロである。そのような置換基のうちの１つ以上（例えば１つまたは２つ）は、アリーレン環に結合され得る。
【００４２】
さらに別の実施形態では、連結基Ｘは、７〜１１個の炭素原子からなる非置換のアラルキレン基である。この実施形態の好ましい連結基Ｘは、ベンジレン、すなわち、好ましくは、芳香環の炭素原子４に遊離原子価を有する−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４−である。
【００４３】
Ｘ基の好ましい例は、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＦ２−、シクロヘキシレン、−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４−、−フェニレン−、および−ＣＨ（Ｐｈ）−（式中、Ｐｈ＝フェニル）を含む。
【００４４】
本発明の好ましい化合物は、Ｘが上述の基を表し、Ｒ１が水素原子、またはメチル、エチル、ｎ−プロピル、およびイソプロピル等の１〜３個の炭素原子を含有する短い直鎖状もしくは分枝状アルキル基、好ましくは、アルキル基を表し、各Ｒ２が同一であり、水素を表すものを含む。
【００４５】
本発明に従う好ましい化合物を表す以下のものについて特に言及することができる：
カルボキシメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００４６】
【化２】
0006280117.tif 000003
【００４７】
２−カルボキシエチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００４８】
【化３】
0006280117.tif 000004
【００４９】
３−カルボキシプロピル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００５０】
【化４】
0006280117.tif 000005
【００５１】
カルボキシジフルオロメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００５２】
【化５】
0006280117.tif 000006
【００５３】
１−カルボキシエチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００５４】
【化６】
0006280117.tif 000007
【００５５】
１−（イソプロピルカルボキシ）エチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００５６】
【化７】
0006280117.tif 000008
【００５７】
（４−カルボキシフェニル）メチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００５８】
【化８】
0006280117.tif 000009
【００５９】
カルボキシフェニルメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００６０】
【化９】
0006280117.tif 000010
【００６１】
４−カルボキシブチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００６２】
【化１０】
0006280117.tif 000011
【００６３】
５−カルボキシペンチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００６４】
【化１１】
0006280117.tif 000012
【００６５】
７−カルボキシヘプチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００６６】
【化１２】
0006280117.tif 000013
【００６７】
８−カルボキシオクチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００６８】
【化１３】
0006280117.tif 000014
【００６９】
９−カルボキシノニル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００７０】
【化１４】
0006280117.tif 000015
【００７１】
１０−カルボキシデシル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００７２】
【化１５】
0006280117.tif 000016
【００７３】
１１−カルボキシウンデシル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００７４】
【化１６】
0006280117.tif 000017
【００７５】
および
１５−カルボキシペンタデシル５−アミノ−４−オキソペンタノエート
【００７６】
【化１７】
0006280117.tif 000018
【００７７】
ならびにそれらの薬学的に許容される塩。
【００７８】
本明細書で使用される、用語「アルキル」は、特に記載しない限り、飽和炭化水素基を指し、いずれの長鎖または短鎖、直鎖状および分枝状アルキル基を包含するよう意図される。
【００７９】
本明細書で使用される、用語「アルキレン」は、遊離原子価が分子の残部と一重結合を形成するアルカンに由来する二価ラジカルを指す。本用語は、直鎖状および分枝状アルキレン基を含む。
【００８０】
本明細書で使用される、用語「シクロアルキレン」は、遊離原子価が分子の残部と一重結合を形成するシクロアルカンに由来する二価ラジカルを指す。
【００８１】
本明細書に記載される、用語「アリール」は、芳香環系を包含するよう意図される。そのような環系は、単環式または多環式（例えば、二環式）であってよく、少なくとも１つの不飽和芳香環を含有する。それらが多環式環を含有する場合、それらは縮合され得る。
【００８２】
本明細書で使用される、用語「アリーレン」は、遊離原子価が分子の残部と一重結合を形成する芳香族炭化水素に由来する二価ラジカルを指す。
【００８３】
本明細書で使用される、「アラルキレン」は、遊離原子価が分子の残部と一重結合を形成する分子のアリールおよびアルキル部分の両方において単一の遊離原子価でアリール置換されたアルキルまたはアルキル置換されたアリールに由来する二価ラジカルを指す。
【００８４】
特に記載されない限り、用語「ハロ」または「ハロゲン原子」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードを含む。
【００８５】
本発明の化合物は、遊離アミンの形態で、例えば、−ＮＨ２、−ＮＨＲ２、もしくは−ＮＲ２Ｒ２、または好ましくは、薬学的に許容される塩の形態で提供され得る。そのような塩は、好ましくは、薬学的に許容される有機酸または無機酸を有する酸添加塩である。
【００８６】
好適な酸は、例えば、塩酸、硝酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、スルホン酸、およびスルホン酸誘導体、酢酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、アスコルビン酸、オレイン酸、ならびにステアリン酸を含む。よって、適切な塩は、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、リン酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、メシル酸塩、トシル酸塩、ナプシル酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、アスコルビン酸塩、オレイン酸塩、およびステアリン酸塩を含む。好ましい酸は、塩酸（ＨＣｌ）および臭化水素酸（ＨＢｒ）である。さらに好ましい酸は、全内容が参照により本明細書に組み込まれるＰｈｏｔｏｃｕｒｅ  ＡＳＡの国際公開第ＷＯ２００５／０９２８３８号に記載される硝酸、スルホン酸、およびスルホン酸誘導体（例えば、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、またはトルエンスルホン酸）である。
【００８７】
用語「薬学的に許容される塩」は、医薬製品における使用に適しており、例えば、安全性、生物学的利用能性、および忍容性に関する必要条件を満たす塩を意味する（例えば、Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ  Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，Ｚｕｒｉｃｈ，２００２を参照）。
【００８８】
本発明の化合物は、多官能化合物の誘導体化、例えば、カルボン酸の誘導体化の分野において周知の標準的なプロセスおよび手順を用いて調製され得る。当該技術分野において既知であるように、そのような反応は、必要とされる基のみが活性を維持し、選択された反応条件下で反応に加わるように、適切な基の保護および脱保護を伴い得る。よって、例えば、本発明に従う化合物を調製するために使用される反応物のいずれか上に存在する置換基は、保護され得る。同様に、−ＮＲ２２基は、反応中保護され、その後脱保護され得る。そのような保護／脱保護手順は、当該技術分野において周知であり、例えば、ＭｃＯｍｉｅ  ｉｎ  "Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ"，Ｐｌｅｎｕｍ，１９７３  ａｎｄ  Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ｉｎ  "Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ"，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９８１．を参照されたい。
【００８９】
さらなる態様では、本発明は、よって、５−アミノレブリン酸またはその保護された誘導体のカルボン酸基を誘導体化するステップを含む本発明の化合物を調製するためのプロセスを提供する。
【００９０】
よって、本発明は、本発明の化合物を調製するためのプロセスを提供すると見なすことができ、前述のプロセスは、以下のステップ：
（ａ）式ＩＩ：
【００９１】
【化１８】
0006280117.tif 000019
【００９２】
の化合物（式中、同一であるか、または異なってもよい各Ｒ２'は、本明細書に定義されるＲ２基、またはその保護された誘導体である）を、
式ＩＩＩ：
【００９３】
【化１９】
0006280117.tif 000020
【００９４】
の化合物（式中、Ｘは、本明細書に定義される通りであり、
Ｌは、脱離基、例えば、ハロゲン原子を表し、
Ｒ１'は、本明細書に定義されるＲ１基、またはその保護された誘導体である）と反応させるステップ、
（ｂ）式Ｉの化合物の保護された誘導体を脱保護するステップ、および
（ｃ）式Ｉの化合物を、その薬学的に許容される塩に変換するステップのうちの少なくとも１つを含む。
【００９５】
ステップ（ａ）の反応は、好都合に、水、アセトン、酢酸エチル、ジエチルエーテル、メチルホルムアミド、テトラヒドロフラン等の溶媒または溶媒の混合物中で、混合物の沸点までの温度、好ましくは、周囲温度で行うことができる。反応の厳密な条件は、使用される反応物に依存し、条件は、最終生成物の最大収率が得られるように選択され得る。
【００９６】
ステップ（ａ）の反応は、好都合に、触媒、例えば、無機酸、もしくは有機酸、または塩基等の酸結合剤の存在下で行うことができる。
【００９７】
出発材料として使用される化合物は、文献から既知であり、多くの場合、市販されているか、またはそれ自体が既知の方法を用いて得ることができる。例えば、５−ＡＬＡは、Ｓｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈまたはＢｉｏｓｙｎｔｈ  ＡＧ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから入手可能である。
【００９８】
本発明の化合物は、好ましくは、薬学的に許容され、かつ／または皮膚適合性の塩の形態を取る。そのような塩は、好ましくは、前述される生理学的に許容される有機酸または無機酸を含む酸添加塩である。
【００９９】
本発明の化合物は、光増感剤の前駆体である、すなわち、それらは、細胞に取り込まれ、光増感剤であるプロトポルフィリンに変換される。よって、本発明の化合物は、有益な薬理学的特性、つまり、光線力学的治療および光線力学的診断の方法、ならびに光線力学的な美容的な方法において有用であるそれらを付与する光増感剤の前駆体としての特性を有する。
【０１００】
したがって、本発明のさらなる態様は、少なくとも１つの薬学的に許容されるか、もしくは美容的に許容される担体または賦形剤と共に、本明細書に記載される式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む組成物を提供する。
【０１０１】
好ましい実施形態では、本発明は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体または賦形剤と共に、本明細書に記載される式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む薬学的組成物を提供する。
【０１０２】
別の好ましい実施形態では、本発明は、少なくとも１つの美容的に許容される担体または賦形剤と共に、本明細書に記載される式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される美容組成物を提供する。
【０１０３】
さらなる態様では、本発明は、例えば、光線力学的治療または光線力学的診断の方法において薬剤として使用するための、具体的には、光線力学的治療もしくは診断に応答する身体の外部または内部表面の障害もしくは異常の治療または診断のための、本明細書に記載される化合物または薬学的組成物を提供する。
【０１０４】
またさらなる態様では、本発明は、光線力学的治療の方法において使用するための薬学的組成物の調製に使用するための、または光線力学的診断の方法において使用するための、具体的には、光線力学的治療もしくは診断に応答する身体の外部または内部表面の障害もしくは異常の治療または診断のための薬学的組成物の調製に使用するための、本明細書に記載される式Ｉの化合物、または薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【０１０５】
癌、ウイルス感染（例えば、ヒトパピローマウイルス、Ｂ型肝炎、またはエプスタインバーウイルス）、もしくは細菌感染（例えば、ヘリコバクターピロリ感染）等の癌に関連した感染の光線力学的治療、または診断、あるいは非癌性状態の治療または診断において、本明細書に記載される化合物および薬学的組成物の使用は、本発明の好ましい態様を形成する。
【０１０６】
本明細書で使用される、用語「癌」および「癌性」は、悪性細胞が存在する状態に関連して使用される。よって、前悪性状態は、これらの用語に包含されない。
【０１０７】
用語「非癌性」は、良性および前悪性状態を含む。
【０１０８】
本明細書で使用される、用語「治療」または「療法」は、治癒的ならびに予防的治療または療法を包含する。
【０１０９】
本発明により治療または診断され得る異常および障害は、光線力学的治療または診断に応答するいずれの悪性、前悪性、および良性異常を含む。
【０１１０】
一般的に、代謝的に活性である細胞は、本発明の化合物を用いた光線力学的治療または診断に応答する。代謝的に活性な細胞の例は、異常な成長パターンを受ける細胞である。そのような異常な成長パターンは、細胞数の増加／細胞増殖の増加（過形成）、細胞の異常な成熟および分化（形成異常）、ならびに細胞の異常増殖（新形成）を含む。過形成成長の細胞は、依然として正常な調節制御機構を受けている。新形成成長の細胞は、正常な刺激に応答しない非生理学的様式で増殖する遺伝的に異常な細胞である。代謝的に活性な細胞の他の例は、炎症性細胞である。
【０１１１】
本発明に従う化合物および薬学的組成物は、内部身体表面および外部身体表面（例えば皮膚）上の新生物ならびに腫瘍（良性、前悪性、および悪性）の光線力学的治療および診断に使用するのに特に適している。外部身体表面上のそのような新生物ならびに腫瘍の例は、日光角化症およびボーエン病である。内部身体表面上の新生物および腫瘍の例は、膀胱癌および結腸癌である。
【０１１２】
さらに、本発明に従う化合物および薬学的組成物は、座瘡（プロピオニバクテリウムアクネス細菌に関連する）、腟または頚上皮内新形成（ヒトパピローマウイルスに関連する）、胃癌（ヘリコバクターピロリ細菌に関連する）、および偽膜性腸炎（クロストリジウム−ディフィシレ細菌）等のウイルス、細菌、および真菌感染に関連する疾患および障害の光線力学的治療ならびに診断に使用するのに特に適している。
【０１１３】
さらに、本発明に従う化合物および薬学的組成物は、グラム陽性菌を有する皮膚または創傷の感染の光線力学的治療に使用するのに特に適している。そのような感染は、スタヒロコッカス・アウレウス（Ｓ．アウレウス）によって引き起こされることが多く、一般的に、抗生物質、例えば、ペニシリンで治療される。多くのスタヒロコッカス・アウレウス株が抗生物質耐性を発達させたため、代替の治療を探すという医学的必要性が満たされていない。細菌創傷感染に関与する他のグラム陽性菌は、例えば、表皮ブドウ球菌、バチルスズブチルス、エンテロコッカスフィカリス、およびミクロコッカス・ルテウスである。
【０１１４】
加えて、本発明に従う化合物および薬学的組成物は、炎症性細胞の光線力学的治療および診断に使用するのに特に適している。細胞の炎症は、通常、有害刺激を取り除き、治癒プロセスを開始する生物による保護の試みであり、よって、感染に関連することが多い。例としては、炎症性座瘡、大腸炎（例えば、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、およびクローン病）、および感染性皮膚炎、すなわち、細菌、ウイルス、または真菌感染によって引き起こされる皮膚の炎症である。
【０１１５】
本発明により治療され得る内部および外部身体表面は、例えば、粘膜、臓器の内層、例えば、呼吸、胃腸、および泌尿生殖器、ならびにそのような表面上に移す導管を伴う腺（例えば、肝臓、皮脂腺を伴う毛嚢、乳腺、唾液腺、および精嚢）を含む皮膚ならびに全ての他の上皮および漿膜表面を含む。皮膚に加えて、そのような表面は、例えば、膣の内層、子宮内膜、および尿路上皮を含む。そのような表面は、病変または癌性組織の切除後に身体に形成された空洞、例えば、神経膠腫等の腫瘍の切除後の脳空洞も含み得る。
【０１１６】
よって、例示的な表面は、（ｉ）皮膚および結膜、（ｉｉ）口腔、咽頭、食道、胃、腸、および腸付属器、直腸、ならびに肛門管の内層、（ｉｉｉ）鼻孔、鼻洞、上咽頭、気管、気管支、および細気管支の内層、（ｉｖ）尿管、膀胱、および尿道の内層、（ｖ）陰門、膣、子宮頸部、および子宮の内層、（ｖｉ）壁側および臓側胸膜、（ｖｉｉ）腹膜および骨盤腔の内層、ならびにこれらの腔内に含まれる臓器の表面、ならびに（ｖｉｉｉ）硬膜および髄膜を含む。
【０１１７】
本発明に従う薬学的組成物を得るために、  式Ｉによる化合物は、当該技術分野において周知の技法に従い、１つ以上の生理学的に許容される担体または賦形剤を用いて、いずれの従来の様式で製剤化され得る。適切である場合、本発明に従う化合物または組成物は、減菌製剤を提供するために、存在する場合、担体または賦形剤の添加前または添加後に、例えば、γ照射、オートクレーブ、または熱減菌により減菌される。
【０１１８】
薬学的組成物は、全身的（例えば、経口的もしくは非経口的）または罹患部位に、もしくはその付近に局所的（例えば、注射もしくは局所的）に施され得る。局所薬学的組成物が好ましく、ゲル、クリーム、軟膏、スプレー、ローション、膏薬、スティック、粉末、腟坐薬、坐剤、エアロゾル、滴剤、溶液、および当該技術分野における他の従来の医薬形態のいずれかを含む。アクセスできない部位への局所投与は、当該技術分野において既知の技法により、例えば、カテーテルまたは他の適切な薬物送達系を用いることにより達成され得る。
【０１１９】
軟膏、ゲル、およびクリームは、例えば、好適な増粘剤および／またはゲル化剤を添加することにより、水性または油性基剤を用いて製剤化され得る。使用されるいずれの増粘剤またはゲル化剤は、非毒性、非刺激性、および浸出不純物に欠けているべきである。それらは、活性成分に対して不活性であるべきである、すなわち、その分解を促進するべきではない。創傷治療、例えば、細菌感染創傷の治療用の製剤は、ゲル製剤、例えばヒドロゲルに基づき得る。本発明の化合物は、そのようなヒドロゲル製剤に組み込むことができる。あるいは、化合物は、ヒドロゲルに組み込まれるリポソームに組み込むことができる（例えば、Ｊ．Ｈｕｒｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１０１，Ｎｏ．１０，２０１２，３９０６−３９１５を参照）。ローションは、水性または油性基剤を用いて製剤化され、一般的に、１つ以上の乳化剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、または着色剤も含有する。粉末は、いずれの好適な粉末基剤を用いて形成され得る。滴剤、スプレー、および溶液は、１つ以上の分散剤、可溶化剤、または懸濁化剤も含む水性または非水性基剤を用いて製剤化され得る。エアロゾルスプレーは、好適な推進剤を使用することにより、好都合に加圧パックから送達される。
【０１２０】
あるいは、薬学的組成物は、例えば、皮内、皮下、腹腔内、または静脈内注射による、経口または非経口投与に適している形態で提供され得る。よって、代替の医薬形態は、担体または賦形剤として、コーンスターチ、ラクトース、スクロース、微結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、クエン酸、酒石酸、水、水／エタノール、水／グリセロール、水／ソルビトール、水／ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ステアリルアルコール、カルボキシメチルセルロース、または硬い脂肪等の脂肪性物質、あるいはこれらの好適な混合物を含有するコーティングしていない、またはコーティングされた錠剤、カプセル、懸濁液、および溶液を含む。本発明に従う薬学的組成物が、１つ以上の薬学的に許容される溶剤を任意に含む場合、そのような溶剤は、遊離脂肪酸、遊離脂肪族アルコール、水溶液、例えば、緩衝液、または水であってもよい。
【０１２１】
薬学的組成物は、潤滑剤、増粘剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、防腐剤、充填剤、結合剤、保存剤、吸着増強剤、例えば、以下に記載する表面浸透剤等の通常の薬学的賦形剤を追加で含み得る。可溶化剤および／または安定化剤、例えば、シクロデキストリン（ＣＤ）α、β、γ、およびＨＰ−βシクロデキストリンも、使用され得る。当業者は、それらの目的に基づき、好適な賦形剤を選択することができるだろう。本明細書に記載される医薬製品に使用され得る通常の賦形剤は、  様々な手引書（例えば、Ｄ．Ｅ．Ｂｕｇａｙ  ａｎｄ  Ｗ．Ｐ．Ｆｉｎｄｌａｙ（Ｅｄｓ）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９），Ｅ−Ｍ  Ｈｏｅｐｆｎｅｒ，Ａ．Ｒｅｎｇ  ａｎｄ  Ｐ．Ｃ．Ｓｃｈｍｉｄｔ  （Ｅｄｓ）  Ｆｉｅｄｌｅｒ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ａｒｅａｓ  （Ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｃａｎｔｏｒ，Ｍｕｎｉｃｈ，２００２）、およびＨ．Ｐ．Ｆｉｅｌｄｅｒ（Ｅｄ）Ｌｅｘｉｋｏｎ  ｄｅｒ  Ｈｉｌｆｓｓｔｏｆｆｅ  ｆuｒ  Ｐｈａｒｍａｚｉｅ，Ｋｏｓｍｅｔｉｋ  ｕｎｄ  ａｎｇｒｅｎｚｅｎｄｅ  Ｇｅｂｉｅｔｅ（Ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｃａｎｔｏｒ  Ａｕｌｅｎｄｏｒｆ，１９８９））に列挙されている。
【０１２２】
上述の薬学的に許容される賦形剤は全て、当該技術分野において周知であり、様々な製造業者から市販されている。
【０１２３】
本発明の薬学的組成物は、当該技術分野において周知の手順を採用することにより、患者に投与した後、活性成分の急速放出、持続放出、または遅延放出を提供するように製剤化され得る。
【０１２４】
薬学的組成物中の本明細書に記載される化合物の濃度は、化合物の性質、組成、投与様式、治療もしくは診断される状態、およびそれが投与される対象に依存し、選択により変動または調節され得る。しかしながら、一般的に、０．０５〜２０重量％、または１〜１０重量％、例えば１〜５重量％等、０．０１〜５０重量％の濃度範囲が好適である。ＰＤＴは、診断方法に使用されるより高濃度の本発明の化合物を必要とし得ることを理解する。
【０１２５】
別の実施形態では、薬学的組成物は、１つ以上の生体接着剤、例えば、Ｐｈｏｔｏｃｕｒｅ  ＡＳＡの国際公開第ＷＯ０２／０９６９０号（その全内容は参照により本明細書に組み込まれる）に記載される粘膜付着剤をさらに含み得る。
【０１２６】
本発明の化合物は、光線力学的作用を強化するように機能する他の活性成分、例えば、表面浸透補助剤（または浸透増強剤）および／またはキレート剤と共に製剤化および／または投与され得る。好適な表面浸透補助剤およびキレート剤ならびにそのような薬剤の好適な濃度は、Ｐｈｏｔｏｃｕｒｅ  ＡＳＡの国際公開第ＷＯ２００９／０７４８１１号（その全内容は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。組成物の性質により、化合物は、そのような他の任意の薬剤と共に、例えば単一の組成物において同時投与されるか、あるいはそれらは、別個に（例えば、連続して）投与され得る。いくつかの場合では、活性成分を投与する前に、別個のステップにおいて、治療される身体の外部または内部表面を、表面浸透補助剤で前処置することが有益であり得る。表面浸透補助剤が前処置のステップにおいて使用される場合、これは、より高濃度、例えば最大１００重量％で使用され得る。そのような前処置ステップが使用される場合、本発明に従う薬学的組成物は、前処置の数時間後まで、例えば、前処置後５〜６０分の間隔で、後続投与することができる。
【０１２７】
身体の外部もしくは内部表面の異常を光線力学的治療または診断する方法における同時、別個、または連続使用のための混合調製として、本明細書に記載される薬学的組成物、ならびに任意に表面浸透補助剤および／またはキレート剤を含む製品およびキットは、本発明のさらなる態様を形成する。
【０１２８】
代替えとして見ると、本発明のこの態様は、身体の外部もしくは内部表面の疾患、障害、または異常を光線力学的治療あるいは診断する方法において使用するためのキットを提供し、前述のキットは、
（ａ）本明細書に記載される化合物、もしくはその薬学的に許容される塩、または本明細書に記載される薬学的組成物を含有する第１の容器と、
（ｂ） 少なくとも１つの表面浸透補助剤を含有する第２の容器と、任意に、
（ｃ） 前述の第１の容器または任意の第３の容器のいずれかの中に含有される１つ以上のキレート剤とを含む。
【０１２９】
本発明のさらなる態様は、身体の外部もしくは内部表面の疾患、障害、または異常を光線力学的治療あるいは診断する方法を提供し、前述の方法は、本明細書に記載される薬学的組成物を罹患した表面に施すことと、前述の表面を光に曝露することとを含む。
【０１３０】
薬学的組成物を、身体の外部もしくは内部表面に投与した後、治療または検査（診断の場合）する所望の領域は、所望の光活性化を達成するために、光に曝露（照射）される。投与と光への曝露との間の時間期間の長さ、すなわち、インキュベーション時間は、化合物の性質、組成物の性質、治療または診断される状態、および投与様式に依存する。一般的に、薬学的組成物中の本発明の化合物は、光活性化の前に、治療または診断される組織の細胞によって取り込まれるように十分に放出され、光増感剤に変換され、意図される治療／診断部位で有効な組織濃度を達成することが必要である。典型的には、インキュベーション時間は、最大１０時間、例えば、約１０分〜１０時間、例えば、３０分〜７時間、または１時間〜５時間である。直接局所投与により、インキュベーション時間がより短くなる、例えば、インキュベーション時間が全くない（すなわち、投与後、光への中間曝露）、約１分〜３時間、例えば、５分〜約２時間、もしくは１５分〜１．５時間、または３０分〜１時間となり得る。経口投与後に全身取り込みが必要とされる場合、インキュベーション時間は、より長い、例えば、約３０分〜６時間、例えば、２〜５時間、または３〜４時間であってもよい。標的部位で光増感剤の濃度を最大にする最適なインキュベーション時間は、例えば、経時的な蛍光測定により、容易に決定することができる。
【０１３１】
照射は、一般的に、高光強度で、すなわち、高フルエンス率で短い時間の間、または低光強度で、すなわち、低フルエンス率で適用される。後者は、特に患者が麻酔されない場合、ＰＤＴ手順において好ましくてもよい。低光強度のＰＤＴ手順により、治療の有効性を少しも低減することなく、患者への不快さが低減される。しかしながら、ＰＤＴまたはＰＤＤ手順が、患者を麻酔および／もしくは固定することが要求される場合、ならびに／または手術室で行われる必要がある場合、高光強度で、すなわち、高フルエンス率で短時間の間適用される照射が好ましくてもよい。フルエンス率は、照射の手段、すなわち、使用される特定のランプまたはレーザに依存する。フルエンス率は、ランプ／レーザの使用者によって選択することができない内在的パラメータであり得る。しかしながら、フルエンス率が選択できる場合、発光ダイオードを含むランプに関しては、一般的に、０．５〜１００ｍＷ／ｃｍ２のフルエンス率が選択され得る。低フルエンス率手順に関しては、５０ｍＷ／ｃｍ２を下回るフルエンス率が好ましい。１〜３０ｍＷ／ｃｍ２の範囲のフルエンス率がより好ましく、２〜１０ｍＷ／ｃｍ２の範囲が最も好ましい。高フルエンス率手順に関しては、５０ｍＷ／ｃｍ２を超えるフルエンス率が好ましく、より好ましくは、５０〜７０ｍＷ／ｃｍ２の範囲である。
【０１３２】
照射に使用される光波長は、所望の光線力学的作用を達成するように選択され得る。３００〜８００ｎｍ、例えば、４００〜７００ｎｍおよび５００〜７００ｎｍの範囲の光波長での照射は、特に有効であることが分かった。ＰＤＴに関して、６３０および６９０ｎｍの波長を含むことが特に重要であり得る。赤色光（６００〜６７０ｎｍ）は、この波長の光が組織に良好に貫通することが知られているため、特に好ましい。ＰＤＤに関しては、目的とする領域は、白色光を用いて最初に検査され得る。実際の光線力学的診断に関しては、典型的には、３６０〜４５０ｎｍの範囲の波長を有する青色光が一般的に使用され、好適な分光計によって視覚的に検出または測定され得る赤色領域（例えば、５５０〜７５０ｎｍ）に蛍光を生じさせる。
【０１３３】
ＰＤＴの照射は、一般的に、１０〜２００Ｊ／ｃｍ２、好ましくは、２０〜１００Ｊ／ｃｍ２、最も好ましくは、２５〜６０Ｊ／ｃｍ２の光線量で適用される。ＰＤＤに関して、照射は、好ましくは、全診断手順の間、またはその一部分の間、例えば、白色光検出と組み合わされる場合、実施される。ＰＤＴおよびＰＤＤの両方に関して、単一照射が使用されるか、あるいは光線量がいくつかの画分、例えば、照射の間に数分〜数時間はさんで送達される光分割線量が使用され得る。複数の照射も適用され得る。
【０１３４】
ＰＤＴの照射持続時間（すなわち、照射時間）は、照射デバイスおよび所望の光線量のフルエンス率に依存する。本質的に、光線量は、照射時間およびフルエンス率の産物である。
【０１３５】
様々な照射手段、例えば、レーザおよびランプが当該技術分野において既知である。後者は、電球、例えば、短アークキセノン球または蛍光灯を備えるランプであってもよい。あるいは、ランプは、発光ダイオードまたは有機発光ダイオード（ＬＥＤおよびＯＬＥＤ）を備えることができる。身体の内部表面、例えば、膀胱または結腸の内層の照射に関して、内視鏡が使用され得る。通常、内視鏡は、光を外部光源から目的とする領域に伝達するための導波管として機能する光ファイバに連結される外部光源（例えば、レーザまたはランプ）を備える。
【０１３６】
さらなる態様では、よって、本発明は、身体の内部または外部表面の標的部位のインビボ撮像の方法を提供し、前述の方法は、以下のステップ：
（ａ）対象、例えば、ヒトまたはヒト以外の動物に、本明細書に記載される化合物、その薬学的に許容される塩、または前述の化合物もしくは前述の塩を含む薬学的組成物を投与するステップと、
（ｂ）必要であれば、化合物またはその薬学的に許容される塩が前述の標的部位の細胞に取り込まれ、光増感剤に変換され、標的部位で有効濃度を達成するのに必要な時間期間待つステップと、
（ｃ）標的部位を光に曝露し、それによって、光増感剤を光活性化するステップと、
（ｄ）標的部位の異常を示す蛍光を検出するステップと、
（ｅ）任意に、検出した蛍光を目的とする領域の画像に変換するステップとを含む。
【０１３７】
本発明のこの態様の好ましい実施形態では、撮像方法は、前述の化合物、その薬学的に許容される塩、または前述の化合物もしくは前述の塩を含む薬学的組成物で前投与された対象に実施することができる。
【０１３８】
本明細書に記載されるＰＤＤ手順は、本発明の化合物または前述の化合物を含む薬学的組成物が患者に投与され、その後、手術が青色光下で実施される手術中にも実施することができる。異常が青色光下で蛍光を発するという事実は、外科医が「手術境界線」を画定するのに役立ち、それによって、所望の領域（例えば、腫瘍）のより選択的な切除が可能になる。手術方法における本明細書に記載される化合物および薬学的組成物の使用は、本発明のさらなる態様を形成する。
【０１３９】
本明細書に記載される治療および診断方法は、併用治療の形態でも使用され得る。例えば、本明細書に記載される化合物または組成物を使用して、身体の内部もしくは外部表面の異常、障害、または疾患に関して実施される一連のＰＤＴの後にＰＤＤ法が続いてもよい（例えば、ＰＤＴが有効であった程度を決定するため、および／または状態のいずれの再発を検出するため）。
【０１４０】
さらなる態様では、本発明は、よって、（ｉ）患者の身体の内部もしくは外部表面の異常、障害、または疾患の光線力学的治療を行うステップと、（ｉｉ）前述の患者に光線力学的診断を行うステップとを含む方法において使用するための、本明細書に記載される化合物または組成物を提供する。ステップ（ｉ）および（ｉｉ）のうちの少なくとも１つは、前述の患者に、本発明に従う化合物または薬学的組成物を投与した後に実施される。好ましくは、ステップ（ｉ）および（ｉｉ）の両方が、そのような化合物または組成物の投与後に行われる。
【０１４１】
本明細書に記載される方法のいずれかを使用して、身体の内部もしくは外部表面の異常、障害、または疾患を特定した後、これは、次いで、別の治療法により、例えば、手術または化学治療により治療され得る。現在の治療の例としては、外科治療、内視鏡切除療法、化学的切除、熱切除、または機械的切除が挙げられる。本発明の一実施形態では、ＰＤＴをもたらすために、目的とする部位への化合物または薬学的組成物のさらなる適用が行われ得る。
【０１４２】
本発明の化合物は、インビトロ診断法、例えば、体液に含有される細胞の検査にも使用され得る。代謝的に活性な細胞に関係する高蛍光は、好都合に、異常または障害を表し得る。この方法は、感度が高く、それぞれ、尿または痰試料における上皮細胞の検査により、異常または障害、例えば、膀胱癌または肺癌の早期検出に使用することができる。尿および痰に加えて診断に使用することができる他の有用な体液は、血液、精液、涙、脊髄液等を含む。組織試料または調製物、例えば、生検組織または骨髄試料も、評価することができる。よって、本発明は、光線力学的診断、ならびに前述の診断を実施するための製品およびキットのための本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用に及ぶ。
【０１４３】
本発明のさらなる態様は、患者の身体の内部もしくは外部表面の異常、障害、または疾患を、前述の患者の体液または組織の試料をアッセイすることによりインビトロで診断する方法に関し、前述の方法は、少なくとも以下のステップ：
ｉ）体液または組織の前述の試料を、前述の化合物、その薬学的に許容される塩、または前述の化合物もしくは前述の塩を含む薬学的組成物と混合するステップと、
ｉｉ）前述の混合物を光に曝露するステップと、
ｉｉｉ）蛍光レベルを確認するステップと、
ｉｖ）任意に、蛍光レベルを対照レベルと比較するステップとを含む。
【０１４４】
本発明に従う化合物は、病原菌、または条件付き病原菌、すなわち、普通のヒトの細菌叢の一部であるが、ある特定の条件下で病原性であり得る細菌を含む細菌によって引き起こされる、ないしは別の方法で関連する身体の内部もしくは外部表面の異常、障害、または疾患の光線力学的治療にも使用され得る。
【０１４５】
多剤耐性は、感染疾患の分野において問題が増加している。従来の抗生物質に耐性となった病原菌の多くの種の中では、皮膚感染の原因ならびに創傷および火傷の感染に関与するスタヒロコッカス・アウレウス（Ｓ．アウレウス）がそうである。毒性株のＳ．アウレウスは、そのような感染の結果として血流に入り得、これは、同時に、重度の合併症およびさらには毒血症（毒素性ショック症候群）、心内膜炎、および肺炎等の生命に関わる状態につながる場合がある。Ｓ．アウレウスの耐性株は、メチシリン耐性Ｓ．アウレウス（ＭＲＳＡ）を含む。
【０１４６】
本明細書に記載される化合物は、ＰＤＴにおいて使用される場合、細菌細胞、特に、グラム陽性菌、具体的には、スタヒロコッカス・アウレウスを死滅させる、または少なくともその増殖の可能性を減少させるのに有効であることが分かった。
【０１４７】
さらなる態様から見ると、よって、本発明は、細菌感染の治療および／または予防の方法に使用するための、例えば、薬剤耐性細菌によって引き起こされる、もしくはそれに関連する状態の治療または予防の方法に使用するための、本明細書に記載される化合物、または薬学的組成物を提供する。有効量の化合物または組成物がそれを必要とする患者に投与されるそのような状態の医療上の治療方法は、本発明のさらなる態様を形成する。
【０１４８】
乳児において、Ｓ．アウレウス感染は、重度の疾患であるブドウ球菌熱傷様皮膚症候群（ＳＳＳＳ）を引き起こす可能性がある。疾患は、薄肉で容易に破裂する、液体で満たされた水泡の広範な形成を示す。さらに、Ｓ．アウレウスは、他の人々より耐性が低いアトピー性皮膚炎の患者に大流行する。合併症を引き起こすことが多く、この疾患は、大半が、腋窩、毛髪、および頭皮を含む繁殖可能な活発な場所で見られる。
【０１４９】
前述のように、本発明に従う化合物は、特に光線力学的な美容的な方法にも役立つ。したがって、さらなる態様では、本発明は、少なくとも１つの皮膚適合性担体または賦形剤と共に、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を含む美容組成物を提供する。
【０１５０】
いずれの組成物、製品、キット、方法、または使用に関して、本明細書で使用される、用語「美容」は、美容目的、すなわち、それを投与された個人の全身の皮膚の外観を向上、改善、または維持するために使用されるか、またはそのための使用を意図する製品または治療方法を定義するよう意図される。
【０１５１】
用語「皮膚適合性」は、美容用皮膚組成物、例えば、哺乳類、具体的には、ヒトの皮膚に使用するための組成物に使用するのに適した物質を指す。「皮膚適合性」担体または賦形剤は、通常、非刺激性であり、忍容性に優れている。
【０１５２】
本発明に従う美容組成物を得るために、  式Ｉの化合物は、当該技術分野において周知の技法に従い、１つ以上の皮膚適合性担体または賦形剤を用いて、いずれの従来の様式で製剤化され得る。適切な場合、組成物の化合物は、薬学的組成物に関して前述される方法を用いて減菌され得る。
【０１５３】
美容組成物は、典型的には、皮膚に施される。好適な美容組成物は、ゲル、クリーム、軟膏、スプレー、ローション、膏薬、スティック、粉末、溶液、および当該技術分野の他の従来の美容製剤のうちのいずれかを含む。
【０１５４】
美容軟膏、ゲル、ローション、膏薬、およびクリームは、例えば、好適な増粘剤および／またはゲル化剤に加えて、水性または油性基剤（軟膏および膏薬に好ましい）を用いて製剤化され得る。使用されるいずれの増粘剤またはゲル化剤は、非毒性、非刺激性、および浸出不純物に欠けているべきである。これらは、本発明の化合物に対して不活性なはずである、すなわち、それらの分解を促進しないはずである。ローションおよびクリームは、水性または油性基剤を用いて製剤化され、一般的に、１つ以上の乳化剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、または着色剤も含有する。粉末は、いずれの好適な粉末基剤を用いて形成され得る。スプレーおよび溶液は、１つ以上の分散剤、可溶化剤、または懸濁化剤も含む水性または非水性基剤を用いて製剤化され得る。
【０１５５】
美容組成物は、加えて、潤滑剤、増粘剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、防腐剤、香料、充填剤、結合剤、および保存剤等の通常の美容賦形剤を含み得る。それらは、以下に記載される表面浸透剤等をさらに含み得る。当業者は、それらの目的に基づき、好適な賦形剤を選択することができるだろう。本明細書に記載される美容製品に使用され得る通常の賦形剤は、  様々な手引書（例えば、Ｅ−Ｍ  Ｈｏｅｐｆｎｅｒ，Ａ．Ｒｅｎｇ  ａｎｄ  Ｐ．Ｃ．  Ｓｃｈｍｉｄｔ  （Ｅｄｓ）  Ｆｉｅｄｌｅｒ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ａｒｅａｓ（Ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｃａｎｔｏｒ，Ｍｕｎｉｃｈ，２００２）、およびＨ．Ｐ．Ｆｉｅｌｄｅｒ（Ｅｄ）Ｌｅｘｉｋｏｎ  ｄｅｒ  Ｈｉｌｆｓｓｔｏｆｆｅ  ｆuｒ  Ｐｈａｒｍａｚｉｅ，Ｋｏｓｍｅｔｉｋ  ｕｎｄ  ａｎｇｒｅｎｚｅｎｄｅ  Ｇｅｂｉｅｔｅ（Ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｃａｎｔｏｒ  Ａｕｌｅｎｄｏｒｆ，１９８９））に列挙されている。さらに、本発明に従う美容組成物に使用するための皮膚適合性賦形剤および担体ならびにその好適な量は、Ｐｈｏｔｏｃｕｒｅ  ＡＳＡの国際公開第ＷＯ２０１１／１０７４７８号に開示されており、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５６】
上述の美容賦形剤は全て、当該技術分野において周知であり、様々な製造業者から市販されている。
【０１５７】
美容組成物における本発明の化合物の所望量は、製剤の特定の性質、光源が美容治療に使用されるか否か、使用される場合、光源の種類、および選択される波長、美容治療の持続時間、ならびに全体的治療の数を含むいくつかの因子に依存する。これらの様々な因子を考慮すれば、量は、当業者によって容易に決定され得る。本発明に従う美容組成物は、一般的に、５重量％以下の本発明の化合物、好ましくは、０．０２〜３重量％、より好ましくは、０．０５〜１．５重量％、例えば、０．５〜１．２５重量％、最も好ましくは、０．１〜１．０重量％を含み、０．２５〜０．７５重量％の範囲が最も好ましい。これらの範囲内の所望量の決定において、当業者の知識および専門技術内の以下の基準も考慮され得る：
・  例えば、組成物の性質、選択された本発明の化合物の性質による、またはより深部への浸透を促進する薬剤、例えば、皮膚浸透増進剤の存在によって皮膚のより深部に透過することができる美容組成物は、典型的には、主に皮膚の表面に留まる傾向がある組成物より低濃度の本発明の化合物を含有する、
・  長い皮膚治療持続時間を対象とした美容組成物（すなわち、皮膚へのより長い組成物のインキュベーションおよび／またはより長い照明）は、通常、短い治療持続時間を対象とした組成物より少ない本発明の化合物を含有する、
・  ２回以上の皮膚治療、例えば、一定期間にわたって数回の治療または反復治療等の数回または複数回の治療を対象とした美容組成物は、通常、１回の使用を対象とした、または各治療間の間隔が空くことが多い限られた回数の使用を対象とした組成物より少ない本発明の化合物を含有する、
・  わずかな（光による）老化の兆候しか有しない皮膚の治療を対象とした美容組成物は、重度の（光による）老化皮膚の治療を対象とした組成物より少ない本発明の化合物を含有し得る。
【０１５８】
本発明に従う美容組成物は、美容治療の方法において使用することができる。そのような美容治療は、哺乳類対象、好ましくは、ヒト対象の皮膚の外観を向上および／または改善するために行われ得る。特に、（光による）老化の兆候は、改善され得、例えば、目尻のしわ、クマ、小じわ、しわの外観を減少させ、孔径を減少させ、皮膚の張りおよび弾性を改善し得る。
【０１５９】
そのような美容治療の好適な光源ならびに好適なフルエンス率、照射時間、光線量、および波長は、Ｐｈｏｔｏｃｕｒｅ  ＡＳＡの国際公開第ＷＯ２０１１／１０７４７８号に詳細に開示されており、その全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１６０】
本発明は、以下の非限定的な例により、および添付の図面を参照して図示される。
【０１６１】
［図１］カルボキシメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩のクリーム製剤の適用後のミニブタの皮膚からの蛍光を示す。
［図２］光線力学的作用による、カルボキシメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩および２−カルボキシエチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩と共にインキュベートしたＳ．アウレウス細菌の成長の遅延を示す。
【０１６２】
以下の略語は、実施例において使用される。
Ｂｏｃ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
Ｃｂｚ−カルボキシベンジル
ｄｅｃ−分解
実施例１−カルボキシメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエートヒドロハライド（塩酸塩および臭化水素酸塩）の調製
１ａ−ｔ−ブトキシカルボニルメチル５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタノエートの調製
【０１６３】
【化２０】
0006280117.tif 000021
【０１６４】
周囲温度のアルゴン下で、トリエチルアミン（２．２２ｇ；２２．０ｍｍｏｌ）を、５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタン酸（４．６２ｇ；２０．０ｍｍｏｌ）および酢酸エチル（６０ｍＬ）中のｔ−ブチルブロモ酢酸（４．３０ｇ；２２．０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に滴下して添加した。混合物（スラリー）を１７時間還流させ、次いで、周囲温度に冷却し、０．５ＭのＨＣｌ（１００ｍＬ）に注ぎ、十分に振盪した。水性部分を、酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機溶液を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１×２０ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ溶液（１×２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。蒸発により、琥珀色の油状物を得て、これは、酢酸エチル−ヘキサン（１：１）（６００ｍＬ）で溶出した４０×５５−ｍｍシリカゲル６０カラムフラッシュクロマトグラフィーにより精製され、５×１００ｍＬの画分が収集された。画分１および２の蒸発により、６．１５ｇ（８９％）の生成物を得た（黄色の油状物）。
【０１６５】
１Ｈ  ＮＭＲ：（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．４４（９Ｈ、ｓ）、１．４７（９Ｈ、ｓ）、２．７７（４Ｈ、ｓ）、４．０６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ）、４．４９（２Ｈ、ｓ）、５．２５（１Ｈ、ｂｒ  ｓ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２７．５、２８．０、２８．３、３４．２、５０．３、６１．３、７９．８、８２．５、１５５．５、１６６．５、１７１．７、２０３．９。
【０１６６】
１ｂ−カルボキシメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
【０１６７】
【化２１】
0006280117.tif 000022
【０１６８】
ジオキサン中の塩化水素の４Ｍ溶液（３５ｍＬ；０．１４ｍｏｌ）を、１ａの生成物（３．３ｇ；９．５ｍｍｏｌ）に添加し、ガスを発生させながら、油状物が溶解されるまで攪拌した。１時間放置した後、溶媒を蒸発させ、ジエチルエーテル（４×２０ｍＬ）で残渣を粉砕し、油状物を黄褐色の粉末に固化した。残渣を濾過し、５０℃および１３ｍｍ  Ｈｇの乾燥ピストル中で一晩乾燥させた。２．０５ｇ（９６％）の生成物を得た（黄褐色の粉末）。
【０１６９】
１Ｈ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２．６５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、２．８２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．９Ｈｚ）、３．９６（２Ｈ、ｂｒ  ｓ）、４．５７（２Ｈ、ｓ）、８．４０（３Ｈ、ｂｒ  ｓ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（７５ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２６．７、３４．１、４６．５、６０．７、１６８．８、１７１．５、２０２．３。
【０１７０】
１ｃ−カルボキシメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩の調製
【０１７１】
【化２２】
0006280117.tif 000023
【０１７２】
酢酸中の臭化水素の３０％溶液（１２ｍＬ）を、氷浴により冷却した１ａの生成物（３．３ｇ；９．５ｍｍｏｌ）に添加し、ガスを発生させながら、油状物が溶解するまで攪拌した。１５分間攪拌した後、混合物をヘキサン（４×２０ｍＬ）およびジエチルエーテル（４×２０ｍＬ）で粉砕し、油状物を黄褐色の粉末に固化した。残渣を濾過し、約５０℃および１２ｍｍ  Ｈｇの乾燥ピストル中で一晩乾燥させた。４．４４ｇ（９２％）の生成物を得た（黄褐色の粉末、ｍｐ１１０〜１１４℃（ｄｅｃ．））。
【０１７３】
１Ｈ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２．６６（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）、２．８５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）、４．０２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ）、４．５７（２Ｈ、ｓ）、８．１４（３Ｈ、ｂｒ  ｓ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（７５ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２６．７、３４．１、４６．６、６０．６、１６８．８、１７１．５、２０２．３。
【０１７４】
実施例２−１−（イソプロピルカルボキシ）エチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
【０１７５】
【化２３】
0006280117.tif 000024
【０１７６】
２ａ−ベンジル２−ブロモプロパノエートの調製
２−ブロモプロパン酸（１５．３ｇ；１００ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（１３．０ｇ；１２０ｍｍｏｌ）、およびシクロヘキサン（２００ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（５０ｍｇ）の混合物を、１９時間、Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ装置において還流させた。反応混合物を周囲温度に冷却し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１×３０ｍＬ）、水（１×３０ｍＬ）、および飽和ＮａＣｌ溶液（１×３０ｍＬ）で洗浄した。乾燥させ、（ＭｇＳＯ４）、濾過し、蒸発させた後、残渣を減圧蒸留した。２５．４ｇ（８７％）生成物を得た（無色の液体、ｂｐ  １１１〜１１３℃／１．１ｍｍ  Ｈｇ）。
【０１７７】
１Ｈ  ＮＭＲ：（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．８３（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）、４．４０（１Ｈ、ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）、５．２０（２Ｈ、ｓ）、７．３６（５Ｈ、ｓ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２１．６、３９．９、６７．５、１２８．０、１２８．４、１２８．５、１３５．０、１６９．９。
【０１７８】
２ｂ−１−（ベンジルオキシカルボニル）エチル５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタノエートの調製
トリエチルアミンを、５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタン酸（４．００ｇ；１５．０ｍｍｏｌ）および酢酸エチル（５０ｍＬ）中の２ａの生成物（３．６５ｇ；１５．０ｍｍｏｌ）の攪拌した溶液に滴下して添加した。攪拌混合物を２日間アルゴン下で還流させた。周囲温度に冷却した後、０．５ＭのＨＣｌ溶液（５０ｍＬ）を添加し、混合物を十分に振盪した。水層を、酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた酢酸エチルを、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２×１５ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ溶液（１×１５ｍＬ）で洗浄し、次いで、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。濾過し、蒸発させた後、酢酸エチル−ヘキサン（１：１）（１０００ｍＬ）で溶出した６０×５５ｍｍシリカゲル６０カラムフラッシュクロマトグラフィーにより精製され、８×１００ｍＬの画分が収集された琥珀色の油状物を得た。画分３〜５の蒸発により、４．９２ｇ（７７％）の生成物を得た（油状物）。
【０１７９】
１Ｈ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．４１（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）、２．５６（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．３Ｈｚ）、２．６８（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．３Ｈｚ）、４．０３（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．１Ｈｚ）、５．０４（２Ｈ、ｓ）、５．０６（１Ｈ、ｑ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、５．１６（２Ｈ、ｓ）、７．３６（１０Ｈ、ｍ）、７．５４（１Ｈ、ｂｒ  ｓ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（７５ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １６．６、２６．９、３３．５、４９．６、６５．４、６６．１、６８．４、１２７．６、１２７．８、１２８．３、１２８．４、１３５．６、１３７．０、１５６．３、１７０．１、１７１．６、２０５．２。
【０１８０】
２ｃ−１−（イソプロピルカルボキシ）エチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
２ｂの生成物（４．９２ｇ；１１．５ｍｍｏｌ）、１０％のパラジウム坦持活性炭（１００ｍｇ）、水素ガス、および２−プロパノール（１５ｍＬ）およびジオキサン（１５ｍＬ）中のジエチルエーテル（１０ｍＬ；２０ｍｍｏｌ）中２．０Ｍの塩化水素の攪拌した混合物を、周囲温度で２日間、約６バールで水素添加した。混合物を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）５４５パッドを通して濾過し、２−プロパノール（２×５ｍＬ）で残渣を洗浄した。合わせた濾液を蒸発させ、得られた油状物をジエチルエーテル（４×１０ｍＬ）で粉砕し、次いで、冷凍庫で保管した。油状物は固化しなかった。一晩、減圧乾燥（０．００５ｍｍ  Ｈｇで）させた後、１．９７ｇ（７１％）の生成物を得た（黄褐色、粘稠な油状物）。
【０１８１】
１Ｈ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．１７（６Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝５．７Ｈｚ）、１．３７（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）、２．６０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、２．８０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、３．９３（２Ｈ、ｂｒ  ｓ）、４．８８（２Ｈ、ｍ）、８．３８（３Ｈ、ｂｒ  ｓ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（７５ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １６．６、２１．３、２６．８、３４．１、４６．５、６８．５、６８．７、１６９．７、１７１．５、２０２．３。
【０１８２】
実施例３−カルボキシジフルオロメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
【０１８３】
【化２４】
0006280117.tif 000025
【０１８４】
３ａ−ベンジル  ブロモジフルオロ酢酸塩の調製
この化合物は、実施例２ａに従い、ブロモジフルオロ酢酸（９．８２ｇ；６８．７ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（７．０ｇ；６５ｍｍｏｌ）、およびシクロヘキサン（１２０ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（５０ｍｇ）から調製された。蒸発させた後に得た粗生成物は、３ｂでさらに処理することなくそのまま使用された。
【０１８５】
１Ｈ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ５．３５（２Ｈ、ｓ）、７．３９（５Ｈ、ｓ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（７５ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ６９．８、１０８．８（ｔ、ＪＣ−Ｆ＝３１２Ｈｚ）、１２８．６、１２８．９、１２９．２、１４０．８、１５９．５（ｔ、ＪＣ−Ｆ＝３１Ｈｚ）。
【０１８６】
３ｂ−（ベンジルオキシカルボニル）ジフルオロメチル５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタノエートの調製
シリンジを用いて、トリエチルアミン（３．５ｍＬ；２．５ｇ；２５ｍｍｏｌ）を、３ａの粗生成物（８．６ｇ；２０ｍｍｏｌ）および乾燥アセトニトリル（１００ｍＬ）中の５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタン酸（６．６３ｇ；２５ｍｍｏｌ）の攪拌した混合物に添加した。混合物を、１８時間還流させ、次いで、溶媒を蒸発させ、暗赤色の残渣を、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）および０．５ＭのＨＣｌ（１００ｍＬ）に溶解した。十分に混合した後、エーテル層を、水（２×１５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２×１５ｍＬ）、および飽和ＮａＣｌ溶液（１×１５ｍＬ）で洗浄し、次いで、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。濾過し、蒸発させた後、残渣をジクロロメタン−ジエチルエーテル（９：１）（１０００ｍＬ）で溶出した６０×５５ｍｍシリカゲル６０カラムフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１０×７５ｍＬの画分を収集した。画分２〜５の蒸発および減圧乾燥（０．０２ｍｍ  Ｈｇ）後、６．７ｇ（７４％）の生成物を得た（赤オレンジ色の固体ｍｐ４８〜５０℃）。
【０１８７】
１Ｈ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２．５６（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、２．７３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、３．９０（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ）、５．０５（２Ｈ、ｓ）、５．０８（２Ｈ、ｓ）、７．３６（１０Ｈ、ｓ）、７．５４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．７Ｈｚ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（７５ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２７．２、３３．７、４９．６、６５．４２、６５．４４、１０１．１、１２７．６、１２７．７、１２７．８、１２７．９、１２８．２７、１２８．３３、１３６．１、１３７．０、１５６．３、１７２．０、１７４．８、２０５．５。
【０１８８】
３ｃ−カルボキシジフルオロメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
この化合物は、実施例２ｃに記載されるように、３ｂの生成物（４．０ｇ；８．９ｍｍｏｌ）、１０％のパラジウム坦持炭素（０．２０ｇ）、水素ガス、および２−プロパノール（７５ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（２５ｍＬ）中のジエチルエーテル（１０ｍＬ；２０ｍｍｏｌ）中２ＭのＨＣｌから生成された。Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を通して濾過した後、ひだ付き濾紙を通して溶液を再濾過した。蒸発後、淡琥珀色の油状物を得て、これは、ジエチルエーテル（４×１０ｍＬ）で粉砕され、１．６ｇ（８０％）の生成物が得られた（淡黄褐色のゴム状固体）。得られた生成物は、主にカルボキシジフルオロメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩、多少のイソプロピル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩、ならびに多少の１−（イソプロピルカルボキシ）ジフルオロメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩を含有した混合物であった。カルボキシジフルオロメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩は、標準的な方法、例えば、分取ＨＰＬＣにより、混合物から単離され得る。
【０１８９】
１Ｈ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２．６３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．３Ｈｚ）、２．８３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ）、３．９６（２Ｈ、ｂｒ  ｓ）、８．３７（３Ｈ、ｂｒ、ｓ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（７５ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２７．３、３４．２、４６．５、１７１．４、１７１．８、２０２．５。
【０１９０】
実施例４−２−カルボキシエチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩の調製
【０１９１】
【化２５】
0006280117.tif 000026
【０１９２】
４ａ−２−（ｔ−ブトキシカルボニル）エチル５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタノエートの調製
シリンジを用いて、アルゴン下で、周囲温度のＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，３．３４ｇ；１６．２ｍｍｏｌ）の溶液を、ジクロロメタン（４０ｍＬ）中の５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタン酸（３．７０ｇ；１６．０ｍｍｏｌ）、ｔ−ブチル３−ヒドロキシプロパノエート（２．３１ｇ；１５．８ｍｍｏｌ）、および乾燥ジクロロメタン（２０ｍＬ）中の４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ，５０ｍｇ）の攪拌した混合物に添加した。適度の発熱反応は、氷水浴で抑えられた。周囲温度で２日間攪拌した後、混合物をガラス−焼結フィルタで吸引濾過した。残渣をジクロロメタン（３×２０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を蒸発させ、残渣を、酢酸エチル−ヘキサン（１：１）（５００ｍＬ）で溶出した４５×５５ｍｍシリカゲル６０カラムフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、７×５０ｍｌの画分を収集した。画分２〜４を蒸発させた後、５．４５ｇ（９６％）の生成物を得た（淡黄色の油状物）。
【０１９３】
１Ｈ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．３８（９Ｈ、ｓ）、１．４１（９Ｈ、ｓ）、２．４９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）、２．５３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、２．６６（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、３．７６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．９Ｈｚ）、４．１６（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、７．０６（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．８Ｈｚ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（７５ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２７．１、２７．６、２８．１、３３．５、３４．３、４９．４、５９．９、７８．０、８０．１、１５５．７、１６９．６、１７１．９、２０５．８。
【０１９４】
４ｂ−２−カルボキシエチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩の調製
この化合物は、４ａの生成物（５．４３ｇ；１５．１ｍｍｏｌ）および実施例１ｃによる酢酸（１５ｍＬ）中３０％のＨＢｒから調製された。３．３８ｇ（７９％）の生成物を得た（固化しなかった琥珀色のゴム）。
【０１９５】
１Ｈ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２．５５（４Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、２．８０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．３Ｈｚ）、４．００（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝３．５Ｈｚ）、４．１９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．３Ｈｚ）、８．１０（３Ｈ、ｂｒ  ｓ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（７５ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２６．９、３３．２、３４．１、４６．６、６０．１、１７１．８（２Ｃ）、２０２．６。
【０１９６】
実施例５−３−カルボキシプロピル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
【０１９７】
【化２６】
0006280117.tif 000027
【０１９８】
５ａ−３−（ベンジルオキシカルボニル）プロピル５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタノエートの調製
この化合物は、実施例１ａに記載される、ベンジル４−ブロモブタノエート（７．２ｇ；２８．０ｍｍｏｌ）、５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタノエート（６．７ｇ；２９．０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２．９５ｍｍｏｌ）、および酢酸エチル（１００ｍＬ）から調製された。粗生成物を、酢酸エチル−ヘキサン（１：２）（７５０ｍＬ）で溶出した６０×５５ｍｍシリカゲル６０カラムフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、６×１００ｍＬの画分を収集した。画分３および４を蒸発させた後、５．４３ｇ（４６％）の生成物を得た（黄色の油状物）。
【０１９９】
１Ｈ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．３８（９Ｈ、ｓ）、１．８５（２Ｈ、ｍ）、２．４１−２．５０（４Ｈ、ｍ）、２．６７（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ）、３．７７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ）、４．０２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、５．１０（２Ｈ、ｓ）、７．０７（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．７Ｈｚ）、７．３７（５Ｈ、ｓ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（７５ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２３．６、２７．２、２８．１、３０．０、３３．６、４９．４、６３．０、６５．４、７８．０、１２７．８７、１２７．９３、１２８．４、１３６．１、１５５．７、１７２．１、１７２．２、２０６．０。
【０２００】
５ｂ−３−カルボキシプロピル５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタノエートの調製
この化合物は、５ａからの生成物（５．４０ｇ；１３．２ｍｍｏｌ）、実施例２ｃに記載される、１０％のパラジウム坦持活性炭（２５０ｍｇ）、水素ガス、および９６％のエタノール（１００ｍＬ）から調製された。４．３０ｇの生成物を得（帯黄色の油状物）、これは、さらに処理することなく５ｃで使用された。
【０２０１】
５ｃ−３−カルボキシプロピル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
この化合物は、５ｂの生成物（４．２０ｇ；１３．２ｍｍｏｌ）、実施例１ｂに記載される、ジエチルエーテル（７．５ｍＬ；１５ｍｍｏｌ）中２ＭのＨＣｌ、およびジエチルエーテル（５０ｍＬ）から調製された。溶媒を蒸発させた後、油状の残渣を、ジエチルエーテル（４×１０ｍＬ）で粉砕し、淡黄褐色の固体に固化するまで冷凍庫で一晩維持した。１２ｍｍ  Ｈｇおよび周囲温度で乾燥させた後、１．９０ｇ（５７％）の生成物を得た。
【０２０２】
１Ｈ  ＮＭＲ：（３００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．８０（２Ｈ、ｍ）、２．３０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．５５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ）、２．８２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、３．９５（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ）、４．０３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ）、８．４２（３Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１２．１（１Ｈ、ｂｒ  ｓ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（７５ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２３．６、２７．０、３０．１、３４．２、４６．４、６３．３、１７１．９、１７３．８、２０２．６。
【０２０３】
実施例６−カルボキシフェニルメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩の調製
【０２０４】
【化２７】
0006280117.tif 000028
【０２０５】
６ａ−ｔ−ブチルα−ブロモフェニルアセテートの調製
濃縮した硫酸（０．５５ｍＬ；１０ｍｍｏｌ）を、周囲温度の乾燥ジクロロメタン（４０ｍＬ）中の無水ＭｇＳＯ４（４．８ｇ；４０ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁液に添加した。１５分間攪拌した後、α−ブロモフェニル酢酸（２．１５ｇ；１０．０ｍｍｏｌ）、続いてｔ−ブチルアルコール（４．８ｍＬ；５０ｍｍｏｌ）を添加した。栓で反応フラスコを閉じ、混合物を周囲温度で７日間攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液（７５ｍＬ）および水（７５ｍＬ）を反応混合物に添加した。分離した後、水層をジクロロメタン（２×１５ｍＬ）で抽出した。混合有機層を水で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。濾過および蒸発後、２．３９ｇ（８８％）の生成物を得た（無色の油状物）。
【０２０６】
１Ｈ  ＮＭＲ：（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．４６（９Ｈ、ｓ）、５．２５（１Ｈ、ｓ）、７．３０−７．３８（３Ｈ、ｍ）、７．４８−７．５６（２Ｈ、ｍ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２７．７、４８．３、８３．０、１２８．５、１２８．６、１２８．９、１３６．２、１６７．０。
【０２０７】
６ｂ−ｔ−ブチルα−［５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタノイルオキシ］−フェニルアセテートの調製
この化合物は、５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタン酸（１．９７ｇ；８．５ｍｍｏｌ）、６ａの生成物（２．３５ｇ；８．７ｍｍｏｌ）、および実施例１ａに記載される、酢酸エチル（３０ｍＬ）中のトリエチルアミン（０．８８ｇ；８．７ｍｍｏｌ）から調製された。粗生成物を、酢酸エチル−ヘキサン（１：２）（１１００ｍＬ）で溶出した６５×５５ｍｍシリカゲル６０カラムフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１８×５０ｍＬの画分を収集した。画分３〜８を蒸発させた後、２．７９ｇ（７８％）の生成物を得た（琥珀色の油状物）。
【０２０８】
１Ｈ  ＮＭＲ：（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．３９（９Ｈ、ｓ）、１．４４（９Ｈ、ｓ）、２．７５−２．８５（４Ｈ、ｍ）、４．０５（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ）、５．２２（１Ｈ、ｂｒ  ｓ）、５．７７（１Ｈ、ｓ）、７．３５−７．４６（５Ｈ、ｍ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２７．７、２７．８、２８．３、３４．２、５０．３、７５．２、７９．８、８２．５、１２７．４、１２８．８、１２８．９、１３４．０、１５５．７、１６７．５、１７１．６、２０３．７。
【０２０９】
６ｃ−カルボキシフェニルメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩の調製
この化合物は、６ｂの生成物（２．７５ｇ；６．５ｍｍｏｌ）および実施例１ｃに記載される酢酸（５ｍＬ）中３３％のＨＢｒから調製された。粗生成物を、アセトニトリル中１０％のメタノール（４００ｍＬ）で溶出した４０×５５ｍｍシリカゲル６０カラムフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、２０×１０ｍｌの画分を収集した。画分４〜１５を、４０℃および０．０１ｍｍ  Ｈｇで４８時間蒸発させ、減圧乾燥した後、１．６０ｇ（７１％）の生成物を得た（オレンジ色の発泡体，ｍｐ７７〜８０℃）。
【０２１０】
１Ｈ  ＮＭＲ：（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２．７３（２Ｈ、ｍ）、２．８５（２Ｈ、ｍ）、４．０２（２Ｈ、ｓ）、５．８２（１Ｈ、ｓ）、７．３−７．５（５Ｈ、ｍ）、８．１３（３Ｈ、ｂｒ  ｓ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２６．８、３４．１、４６．５、７４．１、１２７．４、１２７．９、１２８．５、１３４．０、１６９．４、１７１．２、２０２．１。
【０２１１】
実施例７−（４−カルボキシフェニル）メチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩の調製
【０２１２】
【化２８】
0006280117.tif 000029
【０２１３】
７ａ−ｔ−ブチル４−（ブロモメチル）安息香酸塩の調製
この化合物は、４−（ブロモメチル）安息香酸（２．１５ｇ；１０．０ｍｍｏｌ）、ｔ−ブチルアルコール（４．８ｍＬ；５０ｍｍｏｌ）、無水ＭｇＳＯ４（４．８ｇ；４０ｍｍｏｌ）、および実施例６ａに記載されるジクロロメタン中の濃縮した硫酸（４０ｍＬ）から調製された。１４日後、実施例６ａに記載されるように混合物を処理した。１．０７ｇ（３９％）の生成物を得た（白色固体）。さらに精製することなく生成物を７ｂに使用した。
【０２１４】
１Ｈ  ＮＭＲ：（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．５９（９Ｈ、ｓ）、４．４９（２Ｈ、ｓ）、７．４２（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．９６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２８．１、３２．３、８１．２、１２８．７、１２９．８、１３０．６、１４１．９、１６５．０。
【０２１５】
７ｂ−ｔ−ブチル［４−［５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタノイルオキシ］メチル］−安息香酸塩の調製
この化合物は、５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタン酸（０．８１ｇ；３．５０ｍｍｏｌ）、７ａの粗生成物（１．００ｇ；３．７ｍｍｏｌ）、および実施例１ａに記載される酢酸エチル（１５ｍＬ）中のトリエチルアミン（０．４０ｇ；４．０ｍｍｏｌ）から調製された。粗生成物を、酢酸エチル−ヘキサン（１：２）（１２００ｍＬ）で溶出した６５×５５ｍｍシリカゲル６０カラムフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１６×５０ｍＬの画分を収集した。画分６〜１０を蒸発させた後、０．５９ｇ（４０％）の生成物を得た（無色の油状物）。
【０２１６】
１Ｈ  ＮＭＲ：（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．４４（９Ｈ、ｓ）、１．５９（９Ｈ、ｓ）、２．７３（４Ｈ、ｓ）、４．０５（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．０Ｈｚ）、４．１（１Ｈ、ｂｒ  ｓ）、５．１５（２Ｈ、ｓ）、７．３７（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．９８（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２７．７、２８．２、２８．３、３４．３、５０．３、８１．１（２Ｃ）、１２７．４（２Ｃ）、１２９．６（２Ｃ）、１３１．８、１４０．０、１６５．２、１７２．０、２０３．９。
【０２１７】
７ｃ−（４−カルボキシフェニル）メチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩の調製
この化合物は、７ｂの生成物（０．５０ｇ；１．２ｍｍｏｌ）および実施例１ｃに記載される酢酸（２ｍＬ）中３３％のＨＢｒから調製された。ＨＢｒの添加は、白色固体の即時沈降をもたらした。沈降物を、実施例１ｃに記載されるヘキサンおよびジエチルエーテルで粉砕した。残渣を４０℃および０．０１ｍｍ  Ｈｇで４８時間減圧乾燥させた。０．３７ｇ（８８％）の生成物を得た（白色の粉末，ｍｐ１９８〜２００°Ｃ（ｄｅｃ．））。
【０２１８】
１Ｈ  ＮＭＲ：（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２．６８（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、２．８８（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、４．０３（２Ｈ、ｓ）、５．１９（２Ｈ、ｓ）、７．４９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．９６（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．１３（３Ｈ、ｂｒ  ｓ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ：（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２７．０、３４．２、４６．６、６４．８、１２７．３、１２９．２、１３０．１、１４０．８、１６６．８、１７１．６、２０２．４。
【０２１９】
実施例８〜１５−直鎖状カルボキシアルキル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
実施例８〜１５に記載される直鎖状カルボキシアルキル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の一般構造：
【０２２０】
【化２９】
0006280117.tif 000030
【０２２１】
ｎ＝４、５、７、８、９、１０、１１、１５
実施例８〜１５の化合物の調製に使用された一般手順：
手順Ａ  カルボジイミドを用いたベンジルエステルの調製
シリンジを介して、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）または乾燥ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミドの溶液を、アルゴン下で、カルボン酸、ベンジルアルコール、または２，２，２−トリクロロエタノール、および乾燥ジクロロメタン（４０ｍＬ）中の４−ピロリジニルピリジンの攪拌溶液に滴下して添加した。周囲温度で１日または２日間攪拌した後、混合物を減圧濾過し、残渣を少量のジクロロメタンで洗浄した。溶媒を蒸発させ、クーゲルロール装置を用いて残渣を５０℃（浴温）および０．０１４ｍｍ  Ｈｇで減圧乾燥させ、過剰なベンジルアルコールを除去した。
【０２２２】
手順Ｂ  共沸蒸留を用いたベンジルエステルの調製
カルボン酸、ベンジルアルコール、およびトルエン中のｐ−トルエンスルホン酸の混合物を、ディーンスタークトラップを通して一晩還流させた。周囲温度に冷却した後、混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１×１５ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（１×１５ｍＬ）で洗浄した。乾燥（ＭｇＳＯ４）、濾過、および蒸発させた後、クーゲルロール装置を用いて、残渣を５０℃（浴温）および０．０１４ｍｍ  Ｈｇで減圧乾燥させた。
【０２２３】
手順Ｃ  エステルのＮ−保護５−ＡＬＡ誘導体へのカップリング：  ω−ブロモアルカノエートおよびセシウム５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタノエート
ベンジルω−ブロモアルカノエート、セシウム５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタノエート、および乾燥ＤＭＳＯ（２５ｍＬ）中のＮａＩ（１０ｍｇ）を、アルゴン下で一晩、１００℃（浴温）に加熱した。混合物を周囲温度に冷却し、水（１５０ｍＬ）で希釈し、ジエチルエーテル（５×２５ｍＬ）で抽出した。合わせたエーテル溶液を水（２×１０ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ溶液（１×１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ４）。濾過し、蒸発させた後、残渣を、酢酸エチル−ヘキサン（１：１）で溶出したシリカゲル６０カラムフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物を含有する画分を蒸発させて、保護５−ＡＬＡエステルを単離した。
【０２２４】
手順Ｄ  エステルのＮ−保護５−ＡＬＡ誘導体へのカップリング：ω−ヒドロキシアルカノエートおよび５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタン酸
アルゴン下で、乾燥ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）の溶液を、ω−ヒドロキシアルカノエート、５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタン酸、および乾燥ジクロロメタン（２５ｍＬ）中の４−ピロリジニルピリジン（５０ｍｇ）の攪拌溶液に添加した。混合物を周囲温度で１〜３日間攪拌した後、減圧濾過した。濾液を蒸発させ、残渣を、酢酸エチル−ヘキサン（１：１）で溶出したシリカゲル６０カラムフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物を含有する画分を蒸発させて、保護５−ＡＬＡエステルを単離した。
【０２２５】
手順Ｅ  エステルのＮ−保護５−ＡＬＡ誘導体へのカップリング：トリクロロエチルω−ヒドロキシアルカノエートおよび５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタン酸
アルゴン下で、乾燥ジクロロメタン（１５ｍＬ）中のＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，２．４１ｇ；１４．１ｍｍｏｌ）の溶液を、２，２，２−トリクロロエチルω−ヒドロキシアルカノエート、５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタン酸、および０℃（浴温）に冷却した乾燥ジクロロメタン中のピリジンの攪拌溶液に滴下して添加した。０℃で１時間攪拌した後、混合物を周囲温度で一晩攪拌した。反応混合物を減圧濾過し、酢酸（３ｍＬ）を濾液に添加した。３０分間放置した後、混合物を再濾過し、濾液をジエチルエーテル（１５０ｍＬ）で希釈した。溶液を、１ＭのＨＣｌ（３×２５ｍＬ）、水（３×２５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２×２５ｍＬ）、および飽和ＮａＣｌ溶液（１×２５ｍＬ）で洗浄した。乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、蒸発させた後、残渣を、酢酸エチル−ヘキサンで溶出するシリカゲル６０カラムフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。生成物を含有する画分を蒸発させて、生成物を得た。
【０２２６】
実施例８−４−カルボキシブチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
【０２２７】
【化３０】
0006280117.tif 000031
【０２２８】
８ａ−ベンジル５−ブロモペンタノエートの調製
この化合物は、手順Ｂを用いて、５−ブロモペンタン酸（１．８１ｇ；１０．０ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（１．６２ｇ；１５．０ｍｍｏｌ）、およびトルエン（１００ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホン酸（５０ｍｇ）から調製した。２．６０ｇ（９６％）の生成物を得た（透明の油状物）。さらに精製することなく生成物を８ｃに使用した。
【０２２９】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．８−１．９（４Ｈ、ｍ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．３９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）；３．３９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）；５．１２（２Ｈ、ｓ）、７．３５（５Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２３．５、３１．９、３２．９、３３．２、６６．２、１２８．１、１２８．２、１２８．４、１３５．８、１７２．７  ｐｐｍ。
【０２３０】
８ｂ−セシウム５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタノアートの調製
５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタン酸（２．６６ｇ；１０．０ｍｍｏｌ）を、脱イオン水（４０ｍＬ）中の炭酸セシウム（１．６４ｇ；５．０ｍｍｏｌ）の核酸溶液に添加した。ＣＯ２の発生が停止した後、混合物を液体窒素で凍結し、一晩凍結乾燥させた。４．２ｇ（約１００％）の生成物を得た（淡黄褐色の固体）。さらに精製することなく生成物を８ｃに使用した。
【０２３１】
８ｃ−４−（ベンジルオキシカルボニル）ブチル５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタノエートの調製
この化合物は、手順Ｃにより、８ａの生成物（０．７３ｇ；２．７ｍｍｏｌ）および８ｂの生成物（１．０ｇ；２．５ｍｍｏｌ）から調製された。粗生成物を、酢酸エチル−ヘキサン（１：１）（１０００ｍＬ）で溶出した７５×４５ｍｍシリカゲル６０カラムにより精製し、１３×５０ｍＬの画分を収集した。生成物（５〜８）を含有する画分を収集し、蒸発させた後、０．８２ｇ（７２％）の生成物を得た（帯黄色の固体，ｍｐ５３〜５６℃）。
【０２３２】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．５８（４Ｈ、ｂｒ  ｓ）、２．３−２．５（４Ｈ、重複したｔ）、２．６９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ）、３．８９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ）、３．９９（２Ｈ、ｂｒ  ｓ）；５．０４（２Ｈ、ｓ）、５．０９（２Ｈ、ｓ）、７．３６（１０Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２０．９、２３．６、２７．２、３２．８、３３．６、４９．６、６３．４、６５．２、６５．３、１２７．５、１２７．６、１２７．７、１２７．８、１２８．１、１２８．２、１３６．０、１３６．８、１５６．２、１７１．９、１７２．３、２０５．３  ｐｐｍ。
【０２３３】
８ｄ−４−カルボキシブチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
８ｃの生成物（０．７０ｇ；１．５４ｍｍｏｌ）、１２ＭのＨＣｌ（０．１３ｍＬ；１．５４ｍｍｏｌ）、１０％のＰｄ／Ｃ（Ｄｅｇｕｓｓａタイプ１０１  ＮＥ／Ｗ）（１００ｍｇ）、および２−プロパノール（２５ｍＬ）の攪拌混合物を、周囲温度および４バールの圧力で一晩水素添加した。混合物を、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）５４５パッドを通して濾過した。濾液を蒸発させ、残渣を乾燥ジエチルエーテル（３×５ｍＬ）で粉砕した。周囲温度および０．０１ｍｍ  Ｈｇで残渣を乾燥させた後、０．３８ｇ（９７％）の生成物を得た（白色の固体）。
【０２３４】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．４−１．７（４Ｈ、ｍ）、２．２５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、２．５５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、２．８２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、３．９−４．１（４Ｈ、ｍ）、８．４３（３Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２０．９、２３．５、２７．０、３０．０、３４．２、４６．４、６３．６、１７１．８、１７３．６、２０２．３  ｐｐｍ。
【０２３５】
実施例９−５−カルボキシペンチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
【０２３６】
【化３１】
0006280117.tif 000032
【０２３７】
９ａ−ベンジル６−ブロモヘキサノエートの調製
この化合物は、手順Ｂを用いて、６−ブロモヘキサン酸（１．９５ｇ；１０．０ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（１．６２ｇ；１５．０ｍｍｏｌ）、およびトルエン（１００ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホン酸（５０ｍｇ）から調製された。２．８０ｇ（９８％）の生成物を得た（透明な油状物）。さらに精製することなく生成物を９ｂに使用した。
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．４−１．５（２Ｈ、ｍ、Ｊ＝６．８Ｈｚ）、１．６−１．７（２Ｈ、ｍ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、１．８−１．９（２Ｈ、ｍ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．３７（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）；３．３８（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）；５．１２（２Ｈ、ｓ）、７．３５（５Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２４．０、２７．７、３２．３、３３．４、３４．０、６６．１、１２８．１、１２８．４、１３５．９、１７３．０  ｐｐｍ。
【０２３８】
９ｂ−５−（ベンジルオキシカルボニル）ペンチル  ５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタノエートの調製
この化合物は、手順Ｃにより、９ａの生成物（０．７７ｇ；２．７ｍｍｏｌ）および８ｂの生成物（１．０ｇ；２．５ｍｍｏｌ）から調製された。反応時間は２日であった。粗生成物を、酢酸エチル−ヘキサン（１：１）（１０００ｍＬ）で溶出した７５×４５ｍｍシリカゲル６０カラムにより精製し、１４×５０ｍＬの画分を収集した。生成物（５〜７）を含有する画分を収集し、蒸発させた後、０．５２ｇ（４４％）の生成物を得た（冷凍庫に放置することによりワックス状固体に固化した琥珀色の油状物）。
【０２３９】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．２５−１．３８（２Ｈ、ｍ）、１．４５−１．６（４Ｈ、ｍ）、２．３６（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．４７（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、２．６９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、３．８５−４．１（４Ｈ、重複したｄおよびｔ、Ｊ＝６  ａｎｄ  ６．４Ｈｚ）、５．０４（２Ｈ、ｓ）、５．０９（２Ｈ、ｓ）、７．３６（１０Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２４．０、２４．７、２７．２、２７．６、３３．２、３３．６、４９．６、６３．６、６５．２、６５．３、１２７．５、１２７．６、１２７．７、１２７．８、１２８．１、１２８．２、１３６．１、１３６．８、１５６．２、１７１．９、１７２．４、２０５．３  ｐｐｍ。
【０２４０】
９ｃ−５−カルボキシペンチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
この化合物は、実施例８ｄの手順を用いて、９ｂの生成物（０．４５ｇ；０．９６ｍｍｏｌ）、１２ＭのＨＣｌ（０．０８ｍＬ；０．９６ｍｍｏｌ）、１０％のＰｄ／Ｃ（１００ｍｇ）、水素ガス、および２−プロパノール（２５ｍＬ）から調製された。０．２０ｇ（７７％）の生成物を得た（白色固体）。
【０２４１】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．２−１．４（２Ｈ、ｍ）、１．４−１．７（４Ｈ、ｍ）、２．２２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．５５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、２．８２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、３．９−４．１（４Ｈ、ｍ）、８．４１（３Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２４．０、２４．８、２７．０、２７．７、３３．４、３４．２、４６．４、６３．８、１７１．８、１７４．１、２０２．３  ｐｐｍ。
【０２４２】
実施例１０−７−カルボキシヘプチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
【０２４３】
【化３２】
0006280117.tif 000033
【０２４４】
１０ａ−ベンジル８−ブロモオクタノエートの調製
この化合物は、手順Ａを用いて、８−ブロモオクタン酸（２．２３ｇ；１０．０ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（１．１９ｇ；１１．０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，２．２７ｇ；１１．０ｍｍｏｌ）、および乾燥ジクロロメタン（５０ｍＬ）中の４−ピロリジニルピリジン（５０ｍｇ）から調製された。３．１４ｇ（１００％）の生成物を得た（放置により最終的に固化した透明の油状物）。
【０２４５】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．３３（６Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．６−１．７（２Ｈ、ｍ）、１．７５−１．９（２Ｈ、ｍ）、２．３５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）；３．３８（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ）；５．１１（ｓ、２Ｈ）、７．３５（ｓ、５Ｈ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２４．８、２７．９、２８．３、２８．９、３２．６、３３．８、３４．２、６６．０、１２８．１、１２８．４、１３６．０、１７３．３  ｐｐｍ。
【０２４６】
１０ｂ−７−（ベンジルオキシカルボニル）ヘプチル５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタノエートの調製
この化合物は、手順Ｃにより、１０ａの生成物（０．７９ｇ；２．５ｍｍｏｌ）および８ｂの生成物（１．０ｇ；２．５ｍｍｏｌ）から調製された。反応時間は２日であった。粗生成物を、酢酸エチル−ヘキサン（１：１）（１０００ｍＬ）で溶出した８０×４５ｍｍシリカゲル６０カラムにより精製し、１３×５０ｍＬの画分を収集した。生成物（３〜６）を含有する画分を収集し、蒸発させた後、０．８３ｇ（６７％）生成物を得た（冷凍庫に放置することによりワックス状固体に固化した琥珀色の油状物，ｍｐ５２〜５４℃）。
【０２４７】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．２６（６Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．５３（４Ｈ、ｂｒ  ｓ）、２．３４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．４８（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．８Ｈｚ）、２．６９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、３．３８（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）、３．８９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ）、３．９８（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）、５．０４（２Ｈ、ｓ）、５．０８（２Ｈ、ｓ）、７．３５（１０Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２４．３、２５．１、２６．３、２７．２、２７．９、３３．４、３３．７、４９．６、６３．８、６５．１、６５．３、１２７．４、１２７．７、１２８．２、１３６．１、１３６．８、１５６．１、１７１．８、１７２．５、２０５．２  ｐｐｍ。
【０２４８】
１０ｃ−７−カルボキシヘプチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
この化合物は、実施例８ｄの手順を用いて、１０ｂの生成物（０．７０ｇ；１．４ｍｍｏｌ）、１２ＭのＨＣｌ（０．１２ｍＬ；１．４ｍｍｏｌ）、１０％のＰｄ／Ｃ（１００ｍｇ）、水素ガス、および２−プロパノール（２５ｍＬ）から調製された。０．３０ｇ（７０％）の生成物を得た（白色固体）。
【０２４９】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．２８（６Ｈ、ｓ）、１．４−１．７（４Ｈ、ｍ）、２．２０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７Ｈｚ）、２．５５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、２．８１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、３．９−４．１（４Ｈ、ｍ）、８．４２（３Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２４．３、２５．１、２７．０、２７．９、２８．２、２８．３、３３．６、３４．２、４６．４、６３．９、１７１．８、１７４．２、２０２．３  ｐｐｍ。
【０２５０】
実施例１１−８−カルボキシオクチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
【０２５１】
【化３３】
0006280117.tif 000034
【０２５２】
１１ａ−ベンジル水素ノナンジオエートの調製
二酸ノナン（１８．８ｇ；０．１０ｍｏｌ）、ベンジルアルコール（１０．８ｇ；０．１０ｍｏｌ）、およびトルエン（２００ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホン酸（０．２ｇ）の攪拌混合物を、ディーンスタークトラップを通して一晩還流させた。混合物を周囲温度に冷却し、１０％の水性Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン（４×２５ｍＬ）で抽出した。最後の抽出物は、乳白色のエマルジョンであった。最初の３つの抽出物を合わせ、１ＭのＨＣｌ（５０ｍＬ）で酸性化し、濾過し、回収したノナン二酸（３．８ｇ）を得た。エマルジョンを１ＭのＨＣｌで酸性化し、一晩分離させた。有機層を蒸発させ、残渣をヘキサン（２００ｍＬ）およびジエチルエーテル（５０ｍＬ）に溶解した。溶液を１０％のＮ−メチル−Ｄ−グルカミン（２×５０ｍＬ）で抽出した（少量のエタノールを添加することにより破壊されたエマルジョン）。有機溶液を水（１×２５ｍＬ）で洗浄し、混合水溶液を１ＭのＨＣｌ（１５０ｍＬ）で酸性化した。ジクロロメタン−テトラヒドロフラン（４：１）（５×１０ｍＬ）で抽出した後、混合抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。１３．０ｇ（４７％）の生成物を得た（放置により固化した油状物）。
【０２５３】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．３１（６Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．５−１．８（４Ｈ、ｍ）、２．２５−２．４（４Ｈ、ｍ）；５．１１（ｓ、２Ｈ）、７．３４（５Ｈ、ｓ）、１０．４（１Ｈ、ｂｒ  ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２４．６、２８．８、３４．０、３４．２、６６．１、１２８．１、１２８．４、１３６．０、１７３．５、１７９．９  ｐｐｍ。
【０２５４】
１１ｂ−ベンジル９−ヒドロキシノナノエートの調製
１１ａの生成物（１２．９ｇ；４６．３ｍｍｏｌ）を、乾燥テトラヒドロフラン（２５ｍＬ）中のホウ化水素ナトリウム（１．７０ｇ；４５．０ｍｍｏｌ）の攪拌混合物に少しずつ添加した。水素の発生が治まった後、乾燥テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）中の三フッ化ホウ素ジメチルエーテル化合物（４．６ｍＬ；５．７ｇ；５０ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して添加した。発熱反応は、冷水浴で抑えられた。周囲温度で４時間攪拌した後、反応混合物を冷水（２０ｍＬ）で加水分解した。混合物を分離し、有機相を蒸発させた。残渣を水（２０ｍＬ）およびジクロロメタン（７０ｍＬ）と混合し、一晩放置することにより分離したエマルジョンを得た。洗浄がｐＨ紙に対して中性になるまで、有機相を水（４×１５ｍＬ）で洗浄した。乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた後、１１．９５ｇ（９８％）の生成物を得た（油状物）。
【０２５５】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．３０（８Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．４−１．７５（４Ｈ、ｍ）、２．３４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．６）；３．６２（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）、５．１０（２Ｈ、ｓ）、７．３４（５Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２４．９、２５．６、２９．０、２９．１、３２．６、３４．３、６３．０、６６．０、１２８．０、１２８．４、１３６．０、１７３．６  ｐｐｍ。
【０２５６】
１１ｃ−８−（ベンジルオキシカルボニル）オクチル５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタノエートの調製
この化合物は、手順Ｄにより、１１ｂの生成物（１．１ｇ；４．２ｍｍｏｌ）、５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタン酸（１．０ｇ；３．８ｍｍｏｌ）、４−ピロリジニルピリジン（６０ｍｇ）、およびジクロロメタン（３５ｍＬ）中のＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，０．８７ｇ；４．２ｍｍｏｌ）から調製した。反応時間は３日であった。粗生成物を、酢酸エチル−ヘキサン（１：１）（１０００ｍＬ）で溶出した８５×４５ｍｍシリカゲル６０カラムにより精製し、１４×５０ｍＬの画分を収集した。生成物（４〜７）を含有する画分を蒸発させ、１．５ｇ（７７％）の生成物を得た。
【０２５７】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．２４（８Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．５４（４Ｈ、重複したｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、２．３４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．４８（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、２．６９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、３．８９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ）、３．９７（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）、５．０４（２Ｈ、ｓ）、５．０８（２Ｈ、ｓ）、７．３５（１０Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２３．６、２４．３、２５．０、２７．２、２７．９、３３．３、３３．６、４９．６、６３．８、６５．１、６５．３、１２７．５、１２７．６、１２７．７、１２８．１、１２８．２、１３６．１、１３６．８、１５６．２、１７１．９、１７２．５、２０５．３  ｐｐｍ。
【０２５８】
１１ｄ−８−カルボキシオクチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
この化合物は、実施例８ｄの手順を用いて、１１ｃの生成物（１．４ｇ；２．７ｍｍｏｌ）、１２ＭのＨＣｌ（０．２５ｍＬ；３．０ｍｍｏｌ）、１０％のＰｄ／Ｃ（１００ｍｇ）、水素ガス、および２−プロパノール（２５ｍＬ）から調製された。０．５４ｇ（６２％）の生成物を得た（白色固体）。
【０２５９】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．１−１．７（１２Ｈ、ｍ）、２．２０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．５４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、２．８１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、３．９−４．１（４Ｈ、ｍ）、８．４０（３Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２４．４、２５．１、２７．０、２８．０、２８．４、２８．５、３３．５、３４．２、４６．４、６３．９、１７１．８、１７４．２、２０２．３  ｐｐｍ。
【０２６０】
実施例１２−９−カルボキシノニル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
【０２６１】
【化３４】
0006280117.tif 000035
【０２６２】
１２ａ−２，２，２−トリクロロエチル１０−ヒドロキシデカノエートの調製
アルゴン下で、乾燥ジクロロメタン（１５ｍＬ）中のＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，２．４１ｇ；１４．１ｍｍｏｌ）の溶液を、１０−ヒドロキシデカン酸（１．８８ｇ；１０．０ｍｍｏｌ）、２，２，２−トリクロロエタノール（６．１３ｇ；４１．０ｍｍｏｌ）および０℃（浴温）に冷却された乾燥ジクロロメタン（３５ｍＬ）中のピリジン（４．１ｍＬ）の溶液に滴下して添加した。０℃で１時間攪拌した後、混合物を周囲温度で一晩攪拌した。反応混合物を減圧濾過し、酢酸（３ｍＬ）を濾液に添加した。３０分間放置した後、混合物を再濾過し、濾液をジエチルエーテル（１５０ｍＬ）で希釈した。溶液を、１ＭのＨＣｌ（３×２５ｍＬ）、水（３×２５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２×２５ｍＬ）、および飽和ＮａＣｌ溶液（１×２５ｍＬ）で洗浄した。乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、蒸発させた後、残渣を、酢酸エチル−ヘキサン（１：１）で溶出した１７０×２５ｍｍシリカゲル６０カラムフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、１２×２５ｍＬの画分を収集した。画分３〜５を蒸発させ、過剰な２，２，２−トリクロロエタノールを除去するために、クーゲルロール装置で、残渣を、５０℃および０．０５ｍｍ  Ｈｇで減圧乾燥させた。２．１ｇ（６６％）の生成物を得た（無色の油状物）。
【０２６３】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．３２（１０Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．４−１．８（５Ｈ、ｍ）、２．４７（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）；３．６３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、４．７４（２Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２４．７、２５．６、２９．０、２９．１、２９．２８、２９．３２、３２．６、３３．９、６３．０、７３．８、９５．０、１７２．１  ｐｐｍ。
【０２６４】
１２ｂ−２，２，２−トリクロロエチル１０−［５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタノイルオキシ］デカノエートの調製
この化合物は、手順Ｅを用いて、５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタン酸（１．００ｇ；４．３ｍｍｏｌ）、１２ａからの生成物（１．３７ｇ；４．３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，１．０３ｇ；５．０ｍｍｏｌ）、およびジクロロメタン（４０ｍＬ）中のピリジン（２．０ｍＬ）から調製した。粗生成物を、酢酸エチル−ヘキサン（１：２）で溶出した１００×５０ｍｍシリカゲル６０カラムで精製し、１６×５０ｍＬの画分を収集した。画分４〜９の蒸発により、１．６ｇ（７１％）の生成物を得た（帯黄色の油状物）。
【０２６５】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．３１（１０Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．４４（９Ｈ、ｓ）、１．５−１．８（４Ｈ、ｍ）、２．４６（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．６−２．８（４Ｈ、ｍ）、４．０−４．１（４Ｈ、ｍ）、４．７４（２Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２４．７、２５．７、２５．８、２７．８、２８．３、２８．５、２８．９、２９．２、２９．３、３２．７、３３．９、５０．３、６４．９、７３．８、９５．０、１７１．９、１７２．３、２０４  ｐｐｍ。
【０２６６】
１２ｃ−９−カルボキシノニル  ５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタノエートの調製
１モルのリン酸二水素カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）溶液（４．０ｍＬ；４．０ｍｍｏｌ）、続いて、亜鉛粉末（２．０ｇ；３０ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（２５ｍＬ）中の１２ｂからの生成物（１．５０ｇ；２．８ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。周囲温度で１８時間攪拌した後、新しく少量の１ＭのＫＨ２ＰＯ４溶液（５ｍＬ）および亜鉛（２．０ｇ；３０ｍｍｏｌ）を添加した。５時間後にさらに１ＭのＫＨ２ＰＯ４溶液（２５ｍＬ）を添加し、混合物を周囲温度で一晩攪拌した。混合物を減圧濾過し、残渣を酢酸エチルで洗浄した。濾液中の酢酸エチルを蒸発させ、水溶液をジクロロメタン（４×５ｍＬ）で抽出した。混合抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させた。１．０４ｇ（９３％）の生成物を得た（淡い黄色のワックス状固体）。
【０２６７】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．３０（１０Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．４４（９Ｈ、ｓ）、１．５−１．７（４Ｈ、ｍ）、２．３４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．６−２．８（４Ｈ、ｍ）、４．０−４．１（４Ｈ、ｍ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２４．７、２５．７、２５．８、２７．８、２８．３、２８．５、２９．０、２９．１、２９．２、２９．３、３２．６、３４．０、５０．３、６５．０；１７２．４、１７９．１  ｐｐｍ。
【０２６８】
１２ｄ−９−カルボキシノニル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
アルゴン下で、周囲温度のジエチルエーテル中のＨＣｌの１．０Ｍ溶液（７．０ｍＬ；７．０ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル（１０ｍＬ）中の１２ｃからの生成物（１．０ｇ；２．５ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。７時間後、過剰の溶媒を蒸発させ、残渣をジエチルエーテル（４×５ｍＬ）で粉砕した。残渣を、４０℃および１５ｍｍ  Ｈｇで一晩乾燥させ、０．１１ｇの白色固体を得た。合わせたエーテル抽出物を蒸発させ、９６％のエタノール（２５ｍＬ）およびジエチルエーテル（５ｍＬ）中の１ＭのＨＣｌに溶解した。周囲温度で１０日間攪拌した後、混合物を濾過し、前と同じように残渣をジエチルエーテルで粉砕し、０．２２ｇの第２の収穫物を得た。ＬＣ−ＭＳ分析は、生成物が約３０％の５−アミノ−４−オキソペンタン酸を含有したことを示し、混合収穫物は、アセトニトリル（１００ｍＬ）、アセトニトリル（５００ｍＬ）中２．５％のメタノール、アセトニトリル（５００ｍＬ）中５％のメタノール、次いで、アセトニトリル（１０００ｍＬ）中７％のメタノールで連続的に溶出される１６５×２５ｍｍシリカゲル６０カラムフラッシュクロマトグラフィーにより精製され、４７×５０ｍＬの画分を得た。生成物を含有する画分を蒸発させ、残渣を水（１０ｍＬ）に溶解した。溶液を一晩凍結乾燥させ、０．１７ｇ（２０％）の生成物を得た（白色固体，ｍｐ９８〜１０２℃，軟化，鋭いｍｐなし）。
【０２６９】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．２６（１０Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．４−１．６（４Ｈ、ｍ）、２．１９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．５４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４）、２．８１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）、３．９−４．１（４Ｈ、ｍ）、８．５（３Ｈ、ｂｒ  ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２４．４、２５．２、２７．０、２８．０、２８．４、２８．４８、２８．５４、２８．６、３３．６、３４．２、４６．４、６３．９、１７１．８、１７４．１、２０２．３  ｐｐｍ。
【０２７０】
実施例１３−１０−カルボキシデシル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
【０２７１】
【化３５】
0006280117.tif 000036
【０２７２】
１３ａ−ベンジル１１−ブロモウンデカノエートの調製
この化合物は、手順Ｂを用いて、１１−ブロモウンデカン酸（２．６５ｇ；１０．０ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（１．６２ｇ；１５．０ｍｍｏｌ）、およびトルエン（１００ｍＬ）中ｐ−トルエンスルホン酸（５０ｍｇ）から調製された。３．６２ｇの生成物を得て、これは、さらに精製することなく、１３ｂに使用された。
【０２７３】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．２７（１２Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．６−１．７（２Ｈ、ｍ）、１．８−１．９（２Ｈ、ｍ）、２．３５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）；３．３９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ）；５．１１（２Ｈ、ｓ）、７．３４（５Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２４．９、２８．１、２８．７、２８．８、２９．０、２９．１、２９．３、３２．８、３３．９、３４．３、６６．０、１２８．０、１２８．４、１３６．０、１７３．４  ｐｐｍ。
【０２７４】
１３ｂ−１０−（ベンジルオキシカルボニル）デシル５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタノエートの調製
この化合物は、手順Ｃにより、３ａの生成物（０．９６ｇ；２．７ｍｍｏｌ）および８ｂの生成物（１．０ｇ；２．５ｍｍｏｌ）から調製された。粗生成物を、酢酸エチル−ヘキサン（１：１）（１０００ｍＬ）で溶出した７０×４５ｍｍシリカゲル６０カラムにより精製し、１３×５０ｍＬの画分を収集した。生成物（３）を含有する画分を蒸発させ、０．６９ｇ（４７％）の生成物を得た（帯ピンク色固体，ｍｐ７０〜７２℃）。
【０２７５】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．２３（１２Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．５４（４Ｈ、ｂｒ  ｓ）、２．３４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、２．４８（２Ｈ、ｍ）、２．６９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、３．８９（２Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）、３．９８（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、５．０４（２Ｈ、ｓ）、５．０８（２Ｈ、ｓ）、７．３５（１０Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２３．６、２４．３、２５．２、２７．２、２８．０、２８．３、２８．５、２８．７、３３．４、３３．６、４９．６、６３．８、６５．１、６５．３、１２７．５、１２７．６、１２７．７、１２８．１、１２８．２、１３６．１、１３６．８、１５６．２、１７１．９、１７２．５、２０５．３  ｐｐｍ。
【０２７６】
１３ｃ−１０−カルボキシデシル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
この化合物は、実施例８ｄの手順を用いて、１３ｂの生成物（０．６０ｇ；１．１ｍｍｏｌ）、１２Ｍ  ＨＣｌ（０．０９ｍＬ；１．１ｍｍｏｌ）、１０％のＰｄ／Ｃ（１００ｍｇ）、水素ガス、および２−プロパノール（２５ｍＬ）から調製された。０．２０ｇ（５１％）の生成物を得た（白色固体）。
【０２７７】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．１−１．７（１６Ｈ、ｍ）、２．１９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．５４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、２．８１（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、３．９−４．１（４Ｈ、ｍ）、８．４１（３Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２４．４、２５．２、２７．０、２８．０、２８．４、２８．５５、２８．６２、２８．７４、３３．６、３４．２、４６．４、６４．０、１７０．６、１７１．８、２０２．３  ｐｐｍ。
【０２７８】
実施例１４−１１−カルボキシウンデシル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
【０２７９】
【化３６】
0006280117.tif 000037
【０２８０】
１４ａ−２，２，２−トリクロロエチル１２−ヒドロキシドデカノエートの調製
この化合物は、実施例１２ａの手順を用いて、１２−ヒドロキシドデカン酸（２．０ｇ；９．２ｍｍｏｌ）、２，２，２−トリクロロエタノール（６．０ｇ；４０ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，４．１ｇ；２０ｍｍｏｌ）、および乾燥ジクロロメタン（５０ｍＬ）中のピリジン（５．０ｍＬ）から調製された。３．６３ｇ（６６％）の生成物を得た（無色の油状物）。
【０２８１】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．２８（１４Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．５−１．７５（４Ｈ、ｍ）、２．４６（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）；３．６３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、４．７４（２Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２４．７、２５．７、２８．６、２９．０、２９．１、２９．２、２９．４、３２．７、３３．９、６２．９、７３．８、９５．０、１７２．０  ｐｐｍ。
【０２８２】
１４ｂ−２，２，２−トリクロロエチル１２−［５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタノイルオキシ］ドデカノエートの調製
この化合物は、手順Ｅを用いて、５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタン酸（２．０ｇ；８．６ｍｍｏｌ）、１４ａの生成物（３．０ｇ；８．６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，２．１ｇ；１０．０ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（７５ｍＬ）中のピリジン（４．０ｍＬ）から調製された。粗生成物を、酢酸エチル−ヘキサン（１：３）で溶出した９０×５０ｍｍシリカゲルカラムで精製し、１３×５０ｍＬの画分を収集した。画分６〜１１を蒸発させた後、１．４４ｇ（３０％）の生成物を得た（帯黄色の油状物）。
【０２８３】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．２８（１４Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．４５（９Ｈ、ｓ）、１．５−１．８（４Ｈ、ｍ）、２．４６（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．６−２．８（４Ｈ、ｍ）、４．０−４．１（４Ｈ、ｍ）、４．７４（２Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２４．７、２５．８、２８．３、２８．５、２９．１、２９．２、２９．３、２９．４、２９．５、３３．９、３４．３、５０．３、６４．９、７３．８、７４．１、９５．０、１７２．０、１７２．３、２０４．１  ｐｐｍ。
【０２８４】
１４ｃ−１１−カルボキシウンデシル５−（Ｂｏｃ−アミノ）−４−オキソペンタノエートの調製
この化合物は、実施例１２ｃの手順に従い、同量の１Ｍ  ＫＨ２ＰＯ４溶液および亜鉛粉末を用いて、テトラヒドロフラン（２５ｍＬ）中の１４ｂの生成物（１．３８ｇ；２．５ｍｍｏｌ）から調製された。処理後、１．０ｇ（９３％）の生成物を得た（淡黄色の油状物）。
【０２８５】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．２８（１４Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．４４（９Ｈ、ｓ）、１．５−１．７（４Ｈ、ｍ）、２．３３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．６−２．８（４Ｈ、ｍ）、４．０−４．１（４Ｈ、ｍ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２４．７、２５．８、２８．３、２８．５、２９．０、２９．２、２９．３、２９．４、３２．６、３４．０、５０．３、６５．０、１７２．４、１７８．９、２０４．３  ｐｐｍ。
【０２８６】
１４ｄ−１１−カルボキシウンデシル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
アルゴン下で、周囲温度のジエチルエーテル中のＨＣｌの１．０Ｍ溶液（５．０ｍＬ；５．０ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル（１０ｍＬ）中の１４ｃからの生成物（０．９５ｇ；２．２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。５日後、混合物を濾過し、残渣をジエチルエーテル（２×５ｍＬ）で粉砕した。残渣を、４０℃および１５ｍｍ  Ｈｇで一晩乾燥させ、０．１１ｇの白色固体を得た。合わせたエーテル抽出物を蒸発させた。ＬＣ−ＭＳ分析は、生成物が約２５％の５−アミノ−４−オキソペンタン酸を含有したことを示し、混合収穫物は、アセトニトリル（１０００ｍＬ）中３％のメタノール、アセトニトリル（１０００ｍＬ）中６％のメタノール、次いで、アセトニトリル（２０００ｍＬ）中９％のメタノールで連続的に溶出させる１５０×２５ｍｍシリカゲル６０カラムフラッシュクロマトグラフィーにより精製され、５６×５０ｍＬの画分を収集した。生成物を含有する画分を蒸発させ、残渣を水（１０ｍＬ）に溶解した。溶液を一晩凍結乾燥させ、０．０６ｇ（７．５％）の生成物を得た（白色固体，ｍｐ１１０〜１１５℃（軟化、鋭いｍｐなし））。
【０２８７】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．２５（１４Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．４−１．６（４Ｈ、ｍ）、２．１９（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．５５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、２．８０（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、３．９−４．１（４Ｈ、ｍ）、９．１（３Ｈ、ｂｒ  ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２４．４、２５．２、２７．０、２８．０、２８．４、２８．５、２８．６、２８．８、３３．６、３４．１、４６．４、６４．０、１７１．８、１７４．２、２０２．４  ｐｐｍ。
【０２８８】
実施例１５−１５−カルボキシペンタデシル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
【０２８９】
【化３７】
0006280117.tif 000038
【０２９０】
１５ａ−ベンジル１６−ヒドロキシヘキサデカノエートの調製
この化合物は、手順Ｂを用いて、１６−ヒドロキシヘキサデカン酸（２．４５ｇ；９．０ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（４．９ｇ；４５ｍｍｏｌ）、およびトルエン（１００ｍＬ）中のｐ−トルエンスルホン酸（１００ｍｇ）から調製された。２．８２ｇの粗生成物を得て、これは、予測された生成物と１６−ヒドロキシヘキサデカン酸の２つの分子間のエステルの１：１の混合物であった。ベンジルアルコール（１０ｇ）中のＮａＨ（約１００ｍｇ）の溶液（前に乾燥ヘキサンで３回洗浄された）を、粗生成物に添加し、アルゴン下で３時間、混合物を１００℃（浴温）で攪拌した。周囲温度に冷却した後、混合物をジクロロメタン（７５ｍＬ）で希釈し、１０％の水性クエン酸溶液（１×１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（Ｎａ２ＳＯ４）。濾過し、蒸発させた後、クーゲルロール装置を用いて、残渣を５０℃（浴温）および０．０１４ｍｍ  Ｈｇで減圧乾燥させた。２．５６ｇ（７６％）の生成物を得た（白色固体）。プロトンＮＭＲは、約１０％の二量体エステルが残存していたことを示した。
【０２９１】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  １．２５（２２Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．５５−１．６５（４Ｈ、ｍ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、１．９（１Ｈ、ｂｒ  ｓ）、２．３５（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）；３．６３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）；５．１１（２Ｈ、ｓ）、７．３４（５Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ  ２４．９、２５．７、２８．９、２９．１、２９．２、２９．４、２９．６、３２．８、３４．３、６３．０、６６．０、１２８．０、１２８．２、１２８．４、１３６．０、１７３．６  ｐｐｍ。
【０２９２】
１５ｂ−１５−（ベンジルオキシカルボニル）ペンタデシル５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタノエートの調製
この化合物は、手順Ｄにより、１５ａの生成物（１．２ｇ；３．２ｍｍｏｌ）、５−（Ｃｂｚ−アミノ）−４−オキソペンタン酸（０．８４ｇ；３．２ｍｍｏｌ）、４−ピロリジニルピリジン（５０ｍｇ）、およびジクロロメタン（３５ｍＬ）中のＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（０．５０ｇ；４．０ｍｍｏｌ）から調製された。反応時間は３日であった。粗生成物を、酢酸エチル−ヘキサン（１：１）（１０００ｍＬ）で溶出した８５×５５ｍｍシリカゲル６０カラムにより精製し、１３×５０ｍＬの画分を収集した。生成物（３〜６）を含有する画分を蒸発させ、０．５７ｇ（２９％）の生成物を得た（白色固体，ｍｐ７８〜８１℃）。
【０２９３】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．２４（２２Ｈ、ｂｒ  ｓ）、１．５４（４Ｈ、ｂｒ  ｓ）、２．３３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．４８（２Ｈ、ｂｒ  ｓ）、２．６８（２Ｈ、ｂｒ  ｓ）、３．８８（２Ｈ、ｂｒ  ｓ）、３．９８（２Ｈ、ｂｒ  ｓ）、５．０４（２Ｈ、ｓ）、５．０８（２Ｈ、ｓ）、７．３４（１０Ｈ、ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２４．４、２５．３、２７．４、２８．１、２８．３、２８．６、２８．９、３３．５、３３．８、４９．８、６３．９、６５．２、６５．５、１２７．４、１２７．６、１２７．７、１２８．１、１２８．２、１３６．９、１７１．８、２０５．２  ｐｐｍ。
【０２９４】
１５ｃ−１５−カルボキシペンタデシル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩の調製
この化合物は、実施例８ｄの手順を用いて、１５ｂの生成物（０．４５ｇ；０．７４ｍｍｏｌ）、１２ＭのＨＣｌ（０．０６２ｍＬ；０．７４ｍｍｏｌ）、１０％のＰｄ／Ｃ（１００ｍｇ）、水素ガス、および２−プロパノール（２５ｍＬ）から調製された。０．０６ｇ（１９％）の生成物を得た（白色固体）。
【０２９５】
１Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  １．１−１．７（２８Ｈ、ｍ）、２．２５（２Ｈ、ｍ）、２．５２（２Ｈ、ｍ）、２．８２（２Ｈ、ｍ）、３．９−４．１（４Ｈ、ｍ）、８．４３（３Ｈ、ｓ）、１２．１（１Ｈ、ｂｒ  ｓ）  ｐｐｍ。
１３Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ２４．４、２５．３、２７．０、２７．２、２７．６、２８．０、２８．４、２８．６、２８．９、３３．６、３４．２、４６．４、６３．９、１７１．８、１７４．１、２０２．３  ｐｐｍ。
【０２９６】
実施例１６−健康なヌードマウスにおけるインビボ皮膚蛍光研究
皮膚用途のために光増感剤の前駆体としての本発明の化合物の可能性を評価するために、研究が行われた。そのため、本発明の化合物は、皮膚に浸透し、皮膚の細胞によって取り込まれ、光増感剤に変換される必要がある。このプロセスの結果は、光増感剤分子を励起する光に皮膚を曝露し、励起された光増感剤分子がエネルギー的により低い状態に緩和されるときに蛍光の形態で放出されるエネルギーの量を決定することによって可視化される。
【０２９７】
本発明の以下の化合物は、健康なヌードマウスの皮膚で試験された。
化合物２：１−（イソプロピルカルボキシ）エチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩（実施例２に従い調製）
化合物４：２−カルボキシエチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩（実施例４に従い調製）
化合物７：（４−カルボキシフェニル）メチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩（実施例７に従い調製）
上記の化合物２、４、および７は、Ｕｎｇｕｅｎｔｕｍ  Ｍｅｒｃｋにおいてクリームとして製剤化された。化合物は、等モル量で試験された。
１６％（１６０ｍｇ／ｇ）の化合物２
１６％（１６０ｍｇ／ｇ）の化合物４、および
１９％（１９０ｍｇ／ｇ）の化合物７。
【０２９８】
３つのマウス群（５匹のマウス／群、１群の各マウスは、同じクリーム製剤を施された）が実験に含まれた。約１００μｌのクリーム製剤が１匹のマウスの背部に適用された。光退色を避けるために、皮膚蛍光測定の前にマウスを６時間暗所に保持した。皮膚蛍光を評価するために、蛍光カメラ（Ｍｅｄｅｉｋｏｎｏｓ  ＰＤＤ／ＰＤＴ，Ｍｅｄｅｉｋｏｎｏｓ  ＡＢ，Ｇｏｔｈｅｎｂｕｒｇ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用し、各マウスの背部の画像を撮影した。３６５および４０５ｎｍの波長および２秒の照明時間で、励起を行った。各画像は、蛍光標準（Ｕｒａｎｙｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ，Ｊ＆Ｍ，Ａｎａｌｙｔｉｓｃｈｅ  Ｍｅｓｓ−ｕｎｄ  Ｒｅｇｅｌｔｅｃｈｎｉｋ  ＧｍｂＨ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に較正され、背景蛍光に調節された。各画像の皮膚蛍光の平均量は、画像分析器−ソフトウェア（ＭａｔＬａｂ７．２．０．２３２，Ｍａｔｈ−Ｗｏｒｋｓ，Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ，ＵＳＡ）の手段によって計算され、各マウス群（５匹／化合物）の皮膚蛍光の平均量が計算された。
【０２９９】
【表１】
0006280117.tif 000039
【０３００】
試験した３つ全ての化合物は、化合物２の１−（イソプロピルカルボキシ）エチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩が最も高い蛍光レベルを示す皮膚蛍光をもたらした。
【０３０１】
実施例１７−ミニブタにおけるインビボ皮膚蛍光研究
化合物１ｃ（カルボキシメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩、実施例１ｃに従い調製）は、Ｕｎｇｕｅｎｔｕｍ  Ｍｅｒｃｋにおいてクリームとして製剤化された（１５％，１５０ｍｇ／ｇ；０．５６ｍｍｏｌ）。
【０３０２】
クリームは、ミニブタの背部の皮膚に施された。クリームを適用する前に、周囲の皮膚は、必要な場合、滅菌水およびガーゼで洗浄された。均質なクリーム層をもたらすように０．５ｇのクリームを各試験部位（直径５０ｍｍ）に適用し、その後、ドレッシング（Ｔｅｇａｄｅｒｍ（登録商標））で覆った。ドレッシングを定位置に保持するためにガーゼＶｅｔ−Ｆｌｅｘ（登録商標）を使用した。
【０３０３】
６３０ｎｍでの皮膚蛍光は、クリームを施す前、ならびに製造者の指示に従い、ＦｌｕｏＤｅｒｍ機器（ＤｉａＭｅｄｉｃｏ  ＡｐＳ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を用いて、クリームを施した１．５、５および１２時間後に評価された。ＦｌｕｏＤｅｒｍ機器は、直径４０ｍｍの円形視野にわたって平均蛍光の客観的リアルタイムインビボ測定を行うための手持ち式のデバイスである。測定は、実際の周辺光に対して電子的に補正された。結果を図１に示す。
【０３０４】
結果：
図１に見られるように、皮膚蛍光は時間と共に増加した。
【０３０５】
皮膚の生検：
クリームは上述のように施された。ｔ＝０（すなわち、クリームを施す前）、１．５、５、および１２時間で、１０ｍｍの生検パンチ（ＡｃｕＰｕｎｃｈ  １０ｍｍ，Ａｃｕｄｅｒｍ，ＵＳＡ）を用いて生検試料を採取した。試料を採取し、最小限に照明された部屋で取り扱った。各試料はいかなる皮下脂肪組織も含まないように縁取りされ、その後半分に切断された。次いで、各試料を、アルミニウム箔の袋または類似物の中で、液体窒素で急速凍結し、−８０℃の冷凍庫に移した。
【０３０６】
生検試料を、１０μｍに分け、同様に、周辺光を最小限にするための注意が払われた。脂腺および表皮が特定できる場合、一連の３つの連続した部分を各試料から準備した。通常の光学顕微鏡および蛍光顕微鏡の両方用に装備されたＬｅｉｃａ  ＤＭＲＸＥ顕微鏡において、その部分を１５分以内に検査した。従来の光学顕微鏡を用いて表皮および脂腺が局在化された。これは、５秒以内に行われ、次いで、光源は、フィルタセット；励起フィルタ３９０〜４４７ｎｍ、ビームスプリッタ４５５ｎｍおよび発光フィルタ＞６００ｎｍを備える水銀ランプ／蛍光に交換された。この部分は直ちに撮影された。検体を移動することなく、光源を、従来の光学顕微鏡に交換し戻し、この部分を、蛍光顕微鏡と全く同じ位置で撮影した。表皮および脂腺と同様に、真皮を分析し、蛍光が見つかった場合、同じく撮影した。分析した全ての構造の局在化をさらに検証するために、この部分をヘマトキシリン／エオシンで染色した。
【０３０７】
画像分析は、ＩｍａｇｅＪ（バージョンＦｉｊｉ−ｗｉｎ３２．ｅｘｅ）のソフトウェアプログラムを用いて実施された。このプログラムを用いて、保存した画像からピクセル当たりの平均蛍光強度を測定した。
【０３０８】
結果：
１．５時間後、蛍光は脂腺において既に見ることができ、５時間後、蛍光は表皮においても見られた。化合物１ｃは、よって、脂腺に対して選択性を示し、したがって、座瘡、毛孔性角化症、皮脂過形成、脂腺癌、または脂腺腫等の脂腺に影響を及ぼす疾患の光線力学的治療に有用であり得る。
【０３０９】
実施例１８−健康なヌードマウスおよびＵＶ損傷皮膚を有するヌードマウスにおけるインビボ  皮膚蛍光研究
ＵＶ損傷皮膚において選択的蓄積を示す化合物６の可能性を評価するために実験を行った。評価のために、化合物の適用後に皮膚蛍光が健康なマウスの皮膚およびＵＶ損傷マウスの皮膚においてインビボで測定された。ＵＶ損傷皮膚（日射損傷）を有するヌードマウスモデルは、Ｋ．Ｔｏｇｓｖｅｒｄ−Ｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１２，２１，２６０−２６４に記載される通りに確立された。
【０３１０】
等モル量の化合物２（実施例２に従い調製された１−（イソプロピルカルボキシ）エチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩）および化合物５（実施例５に従い調製された３−カルボキシプロピル５アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩）は、Ｕｎｇｕｅｎｔｕｍ  Ｍｅｒｃｋにおいてクリームとして製剤化された：それぞれ、化合物２：１６％，１６０ｍｇ／ｇおよび化合物５：１４％，１４０ｍｇ／ｇ。
【０３１１】
健康なヌードマウスの１群（１０匹のマウス、対照群）およびＵＶ損傷皮膚を有するヌードマウスの１群（１０匹）が実験に含まれた。約１２５μｌのクリーム製剤が各マウスの背部に適用された。クリームの適用前に、各マウスの背の皮膚は、化合物の浸透を向上させるために５回テープストリップされた。接着フィルム（スコッチテープ，３Ｍ）を適用領域の皮膚に押圧し、テープストリップを１回素早く動かし、新しいテープストリップが使用された。光退色を避けるために、皮膚蛍光測定の前にマウスを３時間暗所に保持された。実施例１７に記載されるように皮膚蛍光を評価し、各マウス群の皮膚蛍光の平均量が計算された。
【０３１２】
結果：
ＵＶ損傷マウスの皮膚の皮膚蛍光［ａ．ｕ］に対する健康なマウスの皮膚における皮膚蛍光［ａ．ｕ．］の比率が決定された。
【０３１３】
化合物２の比率は１．１４であるが、化合物５の比率は２．７２であった。よって、化合物２は、ＵＶ損傷皮膚にある程度の選択性を示すが、化合物は、ＵＶ損傷皮膚に顕著な選択性を示す。
【０３１４】
実施例１９−細菌におけるＰＤＴ有効性
光線力学的反応を介して細菌を死滅させるための、本発明に従う様々な化合物の有効性は、グラム陽性菌スタヒロコッカス・アウレウスにおいて検証された。
【０３１５】
本発明の以下の化合物が試験された。
化合物１ｃ：カルボキシメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩（実施例１ｃに従い調製）
化合物４：２−カルボキシエチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩（実施例４に従い調製）
細菌株：Ｓ．アウレウス株ＤＳＭ  ２０２３１（ＡＴＣＣ  １２６００）。実験を行う前に細菌株を、３５〜３７℃で、心臓浸出液寒天（Ｄｉｆｃｏ）上で２４時間成長させ、ＭｃＦａｒｌａｎｄ  ０．５標準液に対応する濃度（約１−５×１０８ＣＦＵ／ｍＬ）の２０ｍＭのＰＩＰＥＳ，ｐＨ７．２〜７．４に再懸濁した。生存細胞培養を確実にし、接種サイズおよび純度をチェックするために、細菌のストックは、実験の直前に作製され、ＣＦＵ／ｍＬは、標準コロニーアッセイにおいて決定された。
【０３１６】
暗所毒性：「暗所毒性」、すなわち、  光の不在下での化合物の毒性作用（したがって、ＰＤＴ作用とは無関係）は、細菌細胞死を含み得、したがって、同様に細菌細胞死をもたらすＰＤＴ作用の正確な測定を妨げる可能性がある。暗所毒性は、同じ実験条件下であるが、光の不在下で各化合物の毒性を決定し、それによって、いずれのＰＤＴ作用を回避することにより測定され得る。低暗所毒性を生じさせる条件下で本発明の化合物を使用することは、暗所毒性作用が非標的細胞を害するまたは死滅させ、ＰＤＴ治療自体に干渉することも含み得るため、有利である。これらの留意事項を考慮して、ＰＤＴ媒介細菌細胞死滅に使用するための最適な薬剤は、低い暗所毒性と、標的細菌細胞を死滅させるために光線力学的作用を誘発する高い効力の両方を示すべきである。
暗所毒性は、プレートが照明されなかったことを除き、以下の「ＰＤＴ治療」の段落に記載されるように決定される。続いて、マイクロプレートアッセイが以下に記載されるように行われた。
【０３１７】
化合物１ｃおよび４の暗所毒性は、０．００１、０．１、１、および１０ｍＭの濃度で試験された。暗所毒性はこれらの濃度のうちのいずれにおいても観察されなかった。
【０３１８】
ＰＤＴ治療：化合物１ｃおよび４のストック液は、１００ｍＭのＤＭＳＯにおいて作製された。実験前に、０．０１ｍＭ、０．１ｍＭ、および１ｍＭの濃度を得るために、０．０２ｍＬのＤＭＳＯ（対照）または化合物２および３のストック液を、ＶｉｓｉＰｌａｔｅｓ−２４のウェルにピペットで入れた。各ウェルに２ｍＬの細菌ストック培養液を添加し、自動ピペットを用いて混合した。全てのウェルは、最終濃度が１％のＤＭＳＯを含有した。４時間のインキュベーション後、プレートを３２分間赤色光（Ａｋｔｉｌｉｔｅ（登録商標）ＣＬ１２８ランプ）で照明した（光線量１４８Ｊ／ｃｍ２）。全ウェルへの均一な照明を実現するために、プレートは、ランプが適用される領域内で小さな円運動をさせながら下から（平坦な底のウェル）照明された。
【０３１９】
マイクロプレートアッセイ：照明後、ウェルの内容物全てをエッペンドルフチューブに移し、０．１ｍＬの内容物をマイクロプレートのウェルに再導入した。成長曲線を生成するために、再導入した接種材料に１．５ｍＬの心臓浸出液ブロス（Ｄｉｆｃｏ）を添加した。全ての移行は、ピペティングにより内容物を十分に混合しながら進められた。
【０３２０】
Ｖｉｃｔｏｒ  １４２０  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｔｕｒｋｕ，Ｆｉｎｌａｎｄ）の温度機能を適用することにより、プレートを３７±１℃でインキュベートした。成長曲線は、細菌細胞が対数成長期に入るまで規則的な間隔で、５９５ｎｍで吸光度を測定することにより生成された。測定は、Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｃｏｕｎｔｅｒによって自動的に行われた。
【０３２１】
生データは、細菌細胞が対数成長期に入る接種後の時間（すなわち、遅延期の長さ）を決定するために、半対数軸上（時間に対するｌｏｇ１０吸光度（１単位＝１５分））にプロットされた。遅延期の長さは、生存細胞の数に依存し、光線力学的治療の有効性に比例して増加する。
【０３２２】
結果：
結果は図２に示され、両化合物が、Ｓ．アウレウス菌を死滅させるのに有効であり、細菌細胞の再成長を効果的に遅延させることができることがこの図から見られる。
【０３２３】
実施例２０−エームズ試験
エームズ試験（Ｂ．Ｎ．Ａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｓ  ａｎｄ  ｍｕｔａｇｅｎｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ／ｍａｍｍａｌｉａｎ−ｍｉｃｒｏｓｏｍｅ  ｍｕｔａｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｔｅｓｔ．Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３１，３４７−３６４，１９７５を参照）は、試験化学化合物がある特定の細菌株において変異を誘発する能力を検出するための、規制機関によって承認された標準的な試験法である。試験化学化合物がそのような変異を誘発する場合、ヒトにおいて使用するための医薬化合物に使用することができない。
【０３２４】
この研究の目的は、ラット肝臓代謝系（Ｓ−９）の不在下および存在下において、また可視光の不在下および存在下において、サルモネラ・ティフィムリウムＴＡ９８およびＴＡ１００の２つのヒスチジン要求性株を回復させるその能力を検査することにより、化合物１ｃのカルボキシメチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩（実施例１ｃに従い調製）の変異原性の可能性および光変異原性（ｐｈｏｔｏｍｕｔａｇｅｎｉｃ）の可能性を評価するためであった。後者は、化合物１ｃが細菌細胞によって取り込まれ、前述の細胞の照明により変異原性生成物を誘発する可能性がある光増感剤に変換されたため、評価された。
【０３２５】
結果は、この研究に採用された条件下で試験されたときに、サルモネラ・ティフィムリウムのこれらの２つの株において、化合物１ｃが変異または光変異（ｐｈｏｔｏｍｕｔａｔｉｏｎ）を誘発しなかったことを示す。
【０３２６】
実施例２１−癌細胞におけるインビトロＰｐＩＸ蛍光研究
光増感剤の前駆体としての本発明の化合物の可能性を評価するために、研究が行われた。そのため、本発明の化合物は、細胞によって取り込まれる必要があり、光増感剤、すなわち、ＰｐＩＸに変換される必要がある。このプロセスの結果は、ＰｐＩＸ分子を励起する光に細胞を曝露し、励起されたＰｐＩＸ分子がエネルギー的により低い状態に緩和されるときに蛍光の形態で放出されるエネルギーの量を決定することによって可視化される。
【０３２７】
本発明の以下の化合物が試験された。
化合物５（実施例５に従い調製された３−カルボキシプロピル５アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩）
化合物９（実施例９に従い調製された５−カルボキシペンチル５−アミノ４−オキソペンタノエート塩酸塩）
化合物１０（実施例１０に従い調製された７−カルボキシヘプチル５−アミノ４−オキソペンタノエート塩酸塩）
化合物１２（実施例１２に従い調製された９−カルボキシノニル５−アミノ４−オキソペンタノエート塩酸塩）
化合物１４（実施例１４に従い調製された１１−カルボキシウンデシル５−アミノ４−オキソペンタノエート塩酸塩）
化合物１５（実施例１５に従い調製された１５−カルボキシペンタデシル５−アミノ４−オキソペンタノエート塩酸塩）
以下の化合物は、参照化合物として使用された。
５−ＡＬＡ塩酸塩（ＡＬＡ）
５−ＡＬＡヘキシルエステル塩酸塩（ＨＡＬ）
上記の化合物のストック液は、１００ｍＭの濃度にそれらをＤＭＳＯに溶解することにより調製された。実験に使用された濃度は、ストック液をＰＢＳまたは細胞培養培地で希釈することにより得られた。
【０３２８】
細胞培養ならびに細胞の化合物および参照物による治療
直腸Ｓ状結腸の原発性腺癌に由来するＷｉＤｒ細胞を、１０％のウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、および１％のグルタミンを含有するＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）中で継代培養した。１週間に２回、細胞を１：１００に分け、湿潤環境において、３７℃および５％のＣＯ２で維持した。実験を行うために、上述の２ｍｌの培地中の５×１０５ＷｉＤｒ細胞を、６−ウェルプラスチック製組織培養プレート（Ｎｕｎｃ）の各ウェルに添加し、基質に適切に付着させるために、湿潤環境において、３７℃および５％のＣＯ２で４８時間放置した。次いで、細胞を、血清を含まないＲＰＭＩ  １６４０培地で２回洗浄し、続いて、２つ組で、２ｍｌの新しい培養培地中の上記の化合物および参照物を０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、および１ｍＭの最終濃度に適切に希釈したウェルに添加した。２つのウェルには、２ｍｌの新しい培養培地のみが添加された。これらの未処理の細胞は、対照として機能する。細胞を、３７℃で４時間、暗所でインキュベートした。
【０３２９】
暗所毒性：
暗所毒性、すなわち、光の不在下での細胞毒性は、様々な濃度の化合物および参照物を用いた上記の４時間のインキュベーション直後に、ＭＴＳアッセイにより測定された。ＡＬＡ塩酸塩および化合物５、９、１０、１２、および１４に関して、細胞毒性は、試験をした濃度のいずれにおいても観察されなかった。ヘキシルエステル塩酸塩に関して、弱い細胞毒性が８５％の最小細胞生存率で０．３〜１ｍＭの範囲で観察された。化合物１５は、０．１ｍＭを超える濃度で毒性であった。
【０３３０】
ＰｐＩＸ形成：
上述の本発明の化合物および参照化合物で処理した後、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、Ｃｏｓｔａｒ細胞スクレーパで基質を５０％のメタノール中の１Ｍ  ＨＣｌＯ４の溶液中にこすり落とした。細胞残屑を遠心分離により除去した。ＰｐＩＸは、この手順で細胞から定量的に抽出された。各試料中のＰｐＩＸ含量は、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＬＳ５０Ｂ分光蛍光計を用いて蛍光定量的に決定された。ＰｐＩＸは４０７ｎｍで励起され、放出された蛍光は、ロングパスカットオフフィルタ（５３０ｎｍ）を用いて、放出側で、６０６ｎｍで測定された。合計蛍光を５０〜１００％増加させる濃度で、既知の標準ＰｐＩＸ濃度が試料に添加された。各試料中のＰｐＩＸ濃度は、ビシンコニン酸タンパク質アッセイにより測定される、対照細胞中のタンパク質含量に対して計算された。
【０３３１】
【表２】
0006280117.tif 000040
【０３３２】
結果は、試験した全ての化合物が癌細胞において有用な光感作剤である、すなわち、癌の光線力学的治療に使用される可能性を有し、試験した全ての化合物が癌細胞においてＰｐＩＸに変換され、最大のＰｐＩＸが形成された濃度が細胞に毒性ではない、すなわち、そのような濃度で暗所毒性が観察されなかったことを示した。傾向としては、最大ＰｐＩＸ濃度が長鎖化合物の低濃度で生じる傾向がある。
【０３３３】
実施例２２−ラット膀胱細胞におけるインビトロＰｐＩＸ蛍光研究
５−ＡＬＡヘキシルエステル塩酸塩（ＨＡＬ）は、Ｈｅｘｖｉｘ（登録商標）の活性成分であり、膀胱における癌の光線力学的検出のための市販の薬物である。調査研究は、膀胱癌の光線力学的治療のためのＨｅｘｖｉｘ（登録商標）の使用も示す。ＨＡＬは、膀胱癌細胞においてＰｐＩＸに変換され、その特有の蛍光によって検出され得る。Ｈｅｘｖｉｘ（登録商標）の開発における初期研究は、ヒト膀胱細胞および組織のモデルとして、ラットの膀胱細胞および組織において行われた。この研究は、膀胱において使用することができる光増感剤の前駆体としての本発明の化合物の可能性を評価する第１のステップとして行われた。そのような第１のステップでは、化合物の適切な濃度は、化合物のＰｐＩＸ蛍光をＨＡＬのものと比較することにより、インビトロで確立された。その結果に基づき、さらなるインビボ研究の濃度が確立される。
【０３３４】
以下の化合物が試験された。
化合物４：２−カルボキシエチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート臭化水素酸塩（実施例４に従い調製）
化合物５：（実施例５に従い調製された３−カルボキシプロピル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩）
化合物８：実施例８に従い調製された２−カルボキシブチル５−アミノ−４−オキソペンタノエート塩酸塩）
５−ＡＬＡヘキシルエステル塩酸塩（ＨＡＬ）は、参照化合物として使用された。
【０３３５】
膀胱細胞におけるＰｐＩＸ測定：
ラットの膀胱細胞（ＡＹ−２７）を、培養培地（９％のウシ胎児血清、１％のＬ−グルタミン（２００ｍＭ）、および１％のペニシリン（１０  ０００ＵＩ）、ストレプトマイシン（１００００μｇ．ｍＬ−１）で補足されたＲＰＭＩ  １６４０）中で成長させた。指数関数的に成長する細胞（ＡＹ−２７）を、新しく調製した０．８ｍＭのＨＡＬ溶液（ヒト患者において膀胱癌の検出に使用される濃度の１０分の１）および３〜１５ｍＭの濃度で（下の表を参照）新しく調製した化合物４、５、および８の溶液と共に２時間インキュベートした。対照細胞は、いずれの試験または参照化合物を含まない無血清培地を受けた。インキュベーション後、溶液または培地を廃棄し、細胞を氷冷ＰＢＳで２回すすいだ。エタノール／ＤＭＳＯ／酢酸（８０／２０／１，ｖ／ｖ／ｖ）からなる氷冷溶解抽出混合物を使用して、ＰｐＩＸを細胞から抽出した。細胞可溶化物を遠心分離し（４００ｇ、１０分、２℃）、ペレットを粉砕し、遠心分離する前に懸濁液を１５分間音波処理した。ＰｐＩＸの蛍光シグナルは、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＬＳ  ５５分光計（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｂｅａｃｏｎｓｆｉｅｌｄ，ＵＫ）で測定され、タンパク質含量の画分として表された。各試料における６３５ｎｍでの蛍光強度は、上述の抽出混合物中に希釈されたＰｐＩＸ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｆｒａｎｃｅ）を用いて確立された較正曲線について報告された。ＰｐＩＸ濃度は、タンパク質含量に対して表された。簡潔に、溶解緩衝混合物（１ｍＭのＥＤＴＡ、１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、および１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ；ｐＨ７．４）を、ＤＭＳＯ中５００ｍＭのＰＭＳＦ（抗プロテアーゼ）溶液と共に凍結細胞皿に添加された。可溶化物を氷上に３０分間維持し、４℃で２０分間、１５０００ｇで遠心分離した。次いで、Ｌｏｗｒｙによって開発された方法に基づくＢｉｏｒａｄ  ＤＣタンパク質アッセイキットＢｉｏ−Ｒａｄ，Ｆｒａｎｃｅ）により、ＢＳＡ較正曲線に対してタンパク質含量を測定した。
【０３３６】
全ての実験は、抑えた光下で、４〜５つの複写物で実施された。≧１ｍＭの化合物の濃度に関して、細胞毒性は、ＭＴＴ試験により評価された。指数関数的に成長する細胞を、９６ウェルプレート中で、２時間、上述の新しく調製した溶液または培地と共にインキュベートした。インキュベーション後、溶液または培地を廃棄し、細胞をＰＢＳで２回洗浄した。次いで、５０μｌのＭＴＴ（２．５ｍｇ．ｍｌ−１）を、ウェル当たり１５０μｌのＲＰＭＩ無血清培地に添加し、３時間インキュベートした。吸光度は、ホルマザン結晶を５０μｌのＤＭＳＯに溶解することにより測定された。吸光度は、対照細胞の吸光度に正規化された。
【０３３７】
【表３】
0006280117.tif 000041
【０３３８】
参照として使用されたＨＡＬは、約３０４ｐｍｏｌｅのＰｐＩＸ／ｍｇタンパク質を生成し、１５％の許容される細胞毒性レベルであったことが表から見られる。
【０３３９】
化合物４は、ほぼ同じ濃度（１ｍＭ）のＨＡＬと比較して、大幅に低いＰｐＩＸ濃度を誘導した。約６倍の濃度（すなわち、５ｍＭ）で、ＨＡＬのほぼ半分のＰｐＩＸ濃度が得られた。高濃度で、細胞毒性が誘発された。
【０３４０】
化合物５および８は、比較可能な濃度（すなわち、１ｍＭ）および５ｍＭでＨＡＬと類似するＰｐＩＸ濃度を誘導した。細胞毒性のレベルも、１ｍＭで比較可能であり、許容された。よって、化合物５および８は、膀胱においてＰＤＤおよびＰＤＴの光増感剤の前駆体として使用するための有望な候補である。
【０３４１】
ｐＨ実験：
膀胱は低ｐＨに感受性であり、一方、本発明の化合物（および一般的にＡＬＡ−エステル）は、高ｐＨでピラジンを形成する。よって、本発明の化合物の溶液は、膀胱が容認できないｐＨとなってはならない。培地のｐＨに対する試験化合物の作用は、１、５、および２５ｍＭの濃度で化合物をＲＰＭＩ  １６４０培地に添加し、続いてｐＨを測定することにより試験された。１ｍＭの化合物は、培地のｐＨを変えないが、５および２５ｍＭの化合物は、ｐＨを、それぞれ、７．５から７．１および５．５に変えたことが分かった。データをプロットすることにより、１５ｍＭの化合物が補間によりｐＨ６．０となるであろうことが分かった。ｐＨ６未満で、膀胱における有害作用（収縮など）が生じる可能性がある。１５ｍＭは、インビボ研究の１０ｍＭの予測された濃度より十分に高い（ＨＡＬでの実験、およびインビトロ濃度の１０倍がインビボで使用されるという過程に基づく）。
【図１】
0006280117.tif 000051
【図２】
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