(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
サルソリノールの、糖尿病創傷を局所的に治療するための医薬を製造するための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１６年２月５日に出願された米国仮特許出願番号６２／２９１，９２３号の利益を主張し、その全内容は本明細書において参照により組み込まれる。
【０００２】
本発明は、糖尿病創傷を治療するための方法を提供する。特に、本発明は、糖尿病創傷治療用イソキノリン誘導体の新規使用を提供する。
【背景技術】
【０００３】
イソキノリン誘導体は、天然の植物および動物に存在する窒素含有有機化合物のグループである。これらの大部分は、それらの窒素原子が環に組み込まれている複合環構造を有する。サルソリノールおよびレチクリンを含む、このようなイソキノリン誘導体は顕著な生物活性を有する。サルソリノールは主に血圧を調節するために使用されることが知られており、一方、レチクリンは主にマラリアを治療するための有効成分として、およびまた、鎮痛剤における成分として使用されている。
【０００４】
特許文献１において、サルソリノールおよびレチクリンを含むイソキノリン誘導体は、ＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ（ＡＭＰＫ）を活性化することができ、ＡＭＰＫ依存性疾患の治療において使用することができることが開示されている。しかしながら、従来技術の参考文献は、糖尿病創傷治療の処置におけるイソキノリン誘導体の効果を報告していない。
【０００５】
糖尿病は、制御される場合、実質的に無害になり得るが、この病態に関連する異常に高い血糖値の状態は、いくつかの重篤な合併症を引き起こす可能性がある。長時間制御されていない場合、または糖尿病患者がその疾患を管理するために彼らの生活様式を適応させることができない場合、合併症の発症を防ぐことが、より困難になる。糖尿病患者が遭遇し得る重篤な合併症は糖尿病創傷である。
【０００６】
糖尿病創傷に関する主な懸念は、不十分または遅延した治癒である。治癒の問題は、糖尿病で発症し得る末梢動脈疾患および末梢神経障害によって引き起こされ、身体、特に手足（手および足）の異なる部分における微小血管がより狭くなり、それらの領域への血液循環を減少させる。手足における循環の不足は、身体組織および神経への酸素および栄養素の減少した供給を生じることがあり、このことは治療を必要とする。時間が経つと、これらの領域における神経は傷つき、痛み、温度および接触の感覚を減少させ、損傷に対して患者を脆弱にする場合がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許出願第１４／４９２，５４７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
当該分野において糖尿病創傷を治療するための方法についての必要性が長年にわたって存在している。本発明はこの必要性を満たす。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
サルソリノールなどの特定のイソキノリン誘導体が、糖尿病創傷治療において有効であることが本発明において予想外に見出された。
【００１０】
一態様において、本発明は、薬学的に許容可能な担体と、治療有効量の一般式Ｉ：
【化１】
0006434650.tif 000002
（式中、Ｒ、Ｒ１およびＲ２は各々独立して、Ｈ、アルキルまたはアシル（ＲａＣＯ）基であり、Ｒ３は、Ｈ、アルキルまたは置換ベンジル基であり、ここでＲａはＨまたはアルキル基である）
を有する化合物とを含む医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、糖尿病創傷を治療する方法を提供する。
【００１１】
本発明の一実施形態において、前記置換ベンジル基は以下の式ＩＩ：
【化２】
0006434650.tif 000003
（式中、ＸおよびＹは各々独立して、Ｈ、ＯＨ、メトキシ（ＯＭｅ）またはアシルオキシ（ＲｂＣＯ−Ｏ−）基であり、ここでＲｂはＨまたはアルキル基である）
を有する。
【００１２】
本発明の一例において、式Ｉを有する前記化合物はサルソリノールである。
【００１３】
別の態様において、本発明は、糖尿病創傷を治療するための医薬の製造における本発明の一般式Ｉを有する化合物の使用を提供する。
【００１４】
本発明のこれらおよび他の態様は、好ましい実施形態の以下の説明および図面によってさらに明確にされ得る。本発明において変更または修飾がなされてもよいが、それらは、本発明に開示される新規概念の趣旨および範囲に含まれる。
【００１５】
本発明の好ましい実施形態を示す図面は本発明を例示することを目的とする。本発明は示される好ましい実施形態に限定されないことは理解されるべきである。図面および実施例におけるデータは、対応のあるｔ検定（ｐａｉｒｅｄ  ｔ−ｔｅｓｔ）によって決定された平均±標準偏差（ＳＤ）として示す。有意差は以下のように示す：＊：Ｐ＜０．０５；＊＊：Ｐ＜０．０１。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】１５日間、処置をしていない正常なラット（ＮＣ）、および処置をしていないＳＴＺ誘発性糖尿病ラット（ＤＣ）の創傷の回復率を示す。
【図２】１５日間、異なる濃度（０．０１ｍｇ／ｇ、０．０３ｍｇ／ｇ、０．１ｍｇ／ｇおよび０．３ｍｇ／ｇ）にてサルソリノールで処置したＳＴＺ誘発性糖尿病ラットの創傷の回復率を示す。
【図３】１４日間、処置をしていないＳＴＺ誘発性糖尿病ラット（ＤＣ）、ビヒクル（ＤＶ）、Ｓｗｉｖａｚｉｎ（登録商標）（ＤＰ、陽性対照）、およびサルソリノール（Ｄ＋サルソリノール、本発明の化合物）で処置したＳＴＺ誘発性糖尿病ラットの創傷の回復率を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
他に定義しない限り、本明細書に使用される全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解されているものと同じ意味を有する。
【００１８】
本明細書に明確に特定されない限り、冠詞「１つの（ａ、ａｎ）」および「前記」の意味は、「１つより多い」複数形を全て含む。したがって、例えば、「成分」という用語が使用される場合、それは複数の前記成分および前記分野における一般的な知識を有する当業者に公知の複数の等価物を含む。
【００１９】
本明細書に使用される場合、「置換された」または「置換」という用語は、化合物における官能基が別の基によって置き換えられていることを指す。
【００２０】
本明細書に使用される場合、「対象」という用語は、患者、ペット（例えば、イヌ、ネコおよび同種のもの）、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマおよび同種のもの）または実験動物（例えば、ラット、マウス、ウサギおよび同種のもの）などのヒトまたは哺乳動物を指す。
【００２１】
本明細書に使用される場合、「アルキル基」という用語は、１〜２０個の炭素原子を含有する直鎖または分枝一価炭化水素、例えば、１〜１０個の炭素を有するアルキル基、好ましくは１〜６個の炭素を有するアルキル基、より好ましくは１〜３個の炭素を有するアルキル基を指す。アルキル基の例としては、限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、およびｔ−ブチルが挙げられる。
【００２２】
したがって、本発明は、一態様において、糖尿病創傷を治療する方法を提供する。その方法は、薬学的に許容可能な担体と、治療有効量の一般式Ｉ：
【化３】
0006434650.tif 000004
（式中、Ｒ、Ｒ１およびＲ２は各々独立して、Ｈ、アルキルまたはアシル（ＲａＣＯ）基であり、Ｒ３は、Ｈ、アルキルまたは置換ベンジル基であり、ＲａはＨまたはアルキル基である）
を有する化合物とを含む医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。
【００２３】
本発明の特定の例において、前記置換ベンジル基は、以下の式ＩＩ：
【化４】
0006434650.tif 000005
（式中、ＸおよびＹは各々独立して、Ｈ、ＯＨ、メトキシ（ＯＭｅ）またはアシルオキシ（ＲｂＣＯ−Ｏ−）基であり、ＲｂはＨまたはアルキル基である）
を有する。
【００２４】
本発明の活性化合物の実施形態は、一般式Ｉ（式中、Ｒ＝Ｒ１＝Ｒ２＝Ｈであり、Ｒ３＝Ｍｅ（メチル）である）を有する化合物であり、その化合物は以下の式を有するサルソリノールである：
【化５】
0006434650.tif 000006
【００２５】
本発明の実施例に示されるように、サルソリノールなどの本発明の式Ｉを有する化合物は、糖尿病創傷を治療する効果を有する。
【００２６】
本発明によれば、式Ｉを有する前記化合物は、製剤分野において周知であるかまたは一般に使用される医薬の任意の形態に製剤化され得、製剤分野において周知の任意の技術に従って、一般に使用される担体または薬学的に許容可能な担体と組み合わせて治療有効量の前記化合物を含む組成物に調製され得る。
【００２７】
本明細書に使用される「担体」または「薬学的に許容可能な担体」という用語は、限定されないが、製剤分野における当業者に周知のものを含む、薬学的に許容可能な賦形剤、充填剤、希釈剤などを含む。
【００２８】
本発明は、本発明の上記の詳細な説明および以下の実施例において説明されているが、それらは本発明の範囲を制限するために使用されるべきではない。
【実施例】
【００２９】
１．本発明の式Ｉを有する化合物の調製
ドーパミン（１．６ｇ）、１０ｍＬのメタノール、１ｍＬの１Ｎ塩酸、および２ｍＬの９９％アセトアルデヒドを５０ｍＬの丸底フラスコに連続して加え、室温下で６時間撹拌した。減圧濃縮によって得られた濃縮物をＬｏｂａｒ  ＲＰ−１８カラム（サイズＢ、Ｍｅｒｃｋ）に充填し、０．０５％のギ酸水溶液によって溶出して、１Ｈ  ＮＭＲにより本質的に純粋なサルソリノール（１．０ｇ）を得た。
【００３０】
ＥＳＩ−ＴＯＦ質量分析およびＮＭＲ分光分析を使用して、サルソリノールの特徴的データは以下の通りである：
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ６．６３（１Ｈ，ｓ），６．５７（１Ｈ，ｓ），４．３０（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−１），３．４０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１２．６，５．６Ｈｚ，Ｈａ−３），３．２０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．６，８．２，５．６Ｈｚ，Ｈｂ−３），２．９２（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１６．８，８．２，５．８Ｈｚ，Ｈａ−４），２．８０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１６．８，５．６Ｈｚ，Ｈｂ−４），１．５５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｍｅ−１）；ＥＳＩＭＳ：ｍ／ｚ１８０（［Ｍ＋Ｈ］＋）。
【００３１】
２．糖尿病創傷の治療におけるサルソリノールの効果の評価
０．０１ｍｇ／ｇ、０．０３ｍｇ／ｇ、０．１ｍｇ／ｇ、および０．３ｍｇ／ｇにおけるサルソリノール軟膏を、それぞれ、０．５ｍｇ、１．５ｍｇ、５ｍｇ、および１５ｍｇのサルソリノールを、２．５ｍＬのグリセロール（Ｓｉｇｍａ  Ｉｎｃ．、ＭＯ、ＵＳＡ）プラス１．０ｍＬのＣｒｅａｇｅｌ乳化剤（Ｆｉｒｓｔ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、ＴＰＥ、台湾）および４５．５ｍＬの蒸留水に溶解することによって調製した。ビヒクルは、グリセロール（２．５ｍＬ）、Ｃｒｅａｇｅｌ乳化剤（１．０ｍＬ）および蒸留水（４５．５ｍＬ）から構成された。
【００３２】
Ｓｗｉｖａｚｉｎ（登録商標）−ＨＮクリームを、ＳＴＺ誘発性糖尿病ラットの創傷を治療するための陽性対照として使用し、それはツボクサ（Ｃｅｎｔｅｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａ）から単離したアシアチコシド（ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ）（４ｍｇ／ｇ）を含有した。Ｓｈｕｋｌａらによって、アシアチコシドは、不十分な糖尿病創傷治癒を改善するのに効果があることが報告されている。［Ｓｈｕｋｌａら  Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｗｏｕｎｄ  ｈｅａｌｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｃｅｎｔｅｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａ．  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ６５  （１９９９）：１−１１］。
【００３３】
ＢｉｏＬＡＳＣＯ（台湾）から購入した４週齢の成体のオスのＷｉｓｔａｒラットを使用し、１２−１２時間の明（７：００Ａ．Ｍ．から７：００Ｐ．Ｍ．）−暗（７：００Ｐ．Ｍ．から７：００Ａ．Ｍ．）サイクル、２３±１℃の温度、および６５±５％の湿度で部屋に慣れさせた。
【００３４】
水および標準的な齧歯動物の軟らかい食餌の両方を各ラットに自由に取らせた。ＳＴＺを６５ｍｇ／Ｋｇ体重の用量で腹腔内に注射した。１週間後、２５０ｍｇ／ｄＬより高い血糖値を有するラットを、ＳＴＺ誘発性糖尿病ラットとみなし、実験に使用した。
【００３５】
全ての実験手順は、実験動物委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ））のガイドラインによって承認され、それに準拠するように実施した。全ての手術は、動物が４％のイソフルランによる持続麻酔下の間に行った。
【００３６】
背面皮膚を剃り、次いで１０％のポビドンヨードで消毒し、その後、切除全層四角形状皮膚創傷（１．５×１．５ｃｍ）を、無菌創傷マーカーを使用して誘導した。次いで動物をそのケージ内に単独で収容して、あらゆるさらなる創傷損傷を回避した。
【００３７】
ラットを以下のように８つの群（ｎ＝６、各群）に無作為に分けた：０．０１ｍｇ／ｇ、０．０３ｍｇ／ｇ、０．１ｍｇ／ｇおよび０．３ｍｇ／ｇのそれぞれの異なる濃度での比較のための正常ラット（ＮＣ）、処置をしていないＳＴＺ誘発性糖尿病ラット（ＤＣ）、ビヒクルのみで処置したＳＴＺ誘発性糖尿病ラット（ＤＶ）、陽性対照としてＳｗｉｖａｚｉｎ（登録商標）−ＨＮクリームで処置したＳＴＺ誘発性ラット（ＤＰ、ツボクサ由来の４ｍｇ／ｇのアシアチコシドを含有するＳｗｉｖａｚｉｎ（登録商標）−ＨＮクリーム）、およびサルソリノールで処置したＳＴＺ誘発性糖尿病ラット（Ｄ＋サルソリノール）。群は毎日１回同じ量で投与され、創傷を１日、３日、５日、７日、１０日および１５日目に写真で取り、Ｖｉｓｕａｌ  Ｂａｓｉｃ  ６．０を使用して創傷の大きさを分析した。実験の時点における創傷閉鎖を、「回復率」と呼ばれる、初期創傷領域のパーセントとして算出した。
【００３８】
この実施例において、ラットの腹腔内にＳＴＺを注射して、血糖値が増加した（＞２５０ｍｇ／ｄＬ）ＳＴＺ誘発性糖尿病ラットを得た。処置なしの正常ラット（ＮＣ）および処置なしの糖尿病ラット（ＤＣ）の創傷を比較した。図１に示すように、ＮＣの創傷は初期に急速に回復し、１５日目に回復率は９８％を超えたが、ＤＣの創傷治癒は正常なラット（ＮＣ）と比較して低い回復率の観点から遅いことが示され、ＤＣの創傷は１〜３日目にさらに悪化することが見出された。ＳＴＺ誘発性糖尿病ラットの創傷治癒は不十分であり、遅延することが示された。
【００３９】
ＳＴＺ誘発性糖尿病ラットを４つの群に分け、０．０１ｍｇ／ｇ、０．０３ｍｇ／ｇ、０．１ｍｇ／ｇおよび０．３ｍｇ／ｇのそれぞれの濃度にてサルソリノールで処置した。図２に示されるように、全ての濃度においてサルソリノールで処置した群に関して、サルソリノールは、創傷閉鎖および治癒を向上させることができる。特に、０．０１ｍｇ／ｇの濃度にてサルソリノールで処置した群は、７〜１５日目に比較的改善された回復率（１５日目に９７％超）を示した。
【００４０】
サルソリノールで処置したＳＴＺ誘発性糖尿病ラット（Ｄ＋サルソリノール）の群を、処置なし（ＤＣ）の群またはビヒクル（ＤＶ）およびＳｗｉｖａｚｉｎ（登録商標）（ＤＰ、陽性対照）で処置した群と比較した。図３に示されるように、ＤＰおよびＤ＋サルソリノール群の創傷は初期に急速に回復し、１５日目に９７％を超える回復率を有した。サルソリノール（Ｄ＋サルソリノール）で処置した群は顕著に増加した回復率を示し、サルソリノール（Ｄ＋サルソリノール）およびＳｗｉｖａｚｉｎ（登録商標）（ＤＰ）で処置した群の間で明らかな差異はなかった。
【００４１】
まとめると、本発明の一例であるサルソリノールは、糖尿病創傷治療において顕著に改善された効果を提供し、糖尿病創傷治療用の医薬を開発する可能性を有する。
【図１】
0006434650.tif 000007
【図２】
0006434650.tif 000008
【図３】
0006434650.tif 000009