(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つ以上の環状プリンジヌクレオチドを含む、免疫応答の抑制における使用のための組成物。
【請求項２】
前記組成物中に存在する環状プリンジヌクレオチドが、以下の構造：
【化１】
0006400082.tif 000005
が、
【化２】
0006400082.tif 000006
と共有結合された構造であって、式中、
Ｒ３は、(ｂ)の５’炭素との共有結合であり、
Ｒ４は、（ｂ）の２’または３’の炭素との共有結合であり、
Ｒ１は、そのＮ９窒素を介して（ａ）のリボース環と連結されているプリンであり、
Ｒ５は、そのＮ９窒素を介して（ｂ）のリボース環と連結されているプリンであり、
Ｘ１およびＸ２は、各々独立して、ＯまたはＳであり、
Ｒ２は、Ｈであるか、または１〜１８個の炭素および０〜３個の異種原子を有する置換されていてもよい直鎖アルキル、２〜９個の炭素を有する置換されていてもよいアルケニル、２〜９個の炭素を有する置換されていてもよいアルキニル、または置換されていてもよいアリールであり、ここで、置換（単数または複数）は、存在する場合、独立して、Ｃ１−６アルキル直鎖またはＣ１−６アルキル分枝鎖、ベンジル、ハロゲン、トリハロメチル、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＯＲ’（ここで、Ｒ’はＨまたは低級アルキルである）、−ＣＨ２ＯＨおよび−ＣＯＮＨ２からなる群から選択されてよく、
（ａ）との共有結合にない（ｂ）の２’または３’の炭素は−Ｏ−Ｒ６であり、ここで、Ｒ６はＨであるか、または１〜１８個の炭素および０〜３個の異種原子を有する置換されていてもよい直鎖アルキル、２〜９個の炭素を有する置換されていてもよいアルケニル、２〜９個の炭素を有する置換されていてもよいアルキニル、または置換されていてもよいアリールであり、ここで、置換（単数または複数）は、存在する場合、独立して、Ｃ１−６アルキル直鎖またはＣ１−６アルキル分枝鎖、ベンジル、ハロゲン、トリハロメチル、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＯＲ’（ここで、Ｒ’はＨまたは低級アルキルである）、−ＣＨ２ＯＨおよび−ＣＯＮＨ２からなる群から選択されてよく、
Ｒ２およびＲ６が両方ともＨであることはない、
構造；
を有する環状プリンジヌクレオチド、またはその製薬上許容可能な塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物中に存在する環状プリンジヌクレオチドが、以下の構造：
【化３】
0006400082.tif 000007
が
【化４】
0006400082.tif 000008
と共有結合された構造であって、式中、
Ｒ３は、（ｂ）の５’炭素との共有結合であり、
Ｒ４は、（ｂ）の３’炭素との共有結合であり、
Ｒ１は、そのＮ９窒素を介して（ａ）のリボース環と連結されているプリンであり、
Ｒ５は、そのＮ９窒素を介して（ｂ）のリボース環と連結されているプリンであり、
Ｘ１およびＸ２は、各々独立して、ＯまたはＳであり、
Ｒ２は、Ｈであるか、または１〜１８個の炭素および０〜３個の異種原子を有する置換されていてもよい直鎖アルキル、２〜９個の炭素を有する置換されていてもよいアルケニル、２〜９個の炭素を有する置換されていてもよいアルキニル、または置換されていてもよいアリールであり、ここで、置換（単数または複数）は、存在する場合、独立して、Ｃ１−６アルキル直鎖またはＣ１−６アルキル分枝鎖、ベンジル、ハロゲン、トリハロメチル、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＯＲ’（ここで、Ｒ’はＨまたは低級アルキルである）、−ＣＨ２ＯＨおよび−ＣＯＮＨ２からなる群から選択されてよく、
（ｂ）の２’炭素は−Ｏ−Ｒ６であり、ここで、Ｒ６はＨであるか、または１〜１８個の炭素および０〜３個の異種原子を有する置換されていてもよい直鎖アルキル、２〜９個の炭素を有する置換されていてもよいアルケニル、２〜９個の炭素を有する置換されていてもよいアルキニル、または置換されていてもよいアリールであり、ここで、置換（単数または複数）は、存在する場合、独立して、Ｃ１−６アルキル直鎖またはＣ１−６アルキル分枝鎖、ベンジル、ハロゲン、トリハロメチル、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＯＲ’（ここで、Ｒ’はＨまたは低級アルキルである）、−ＣＨ２ＯＨおよび−ＣＯＮＨ２からなる群から選択されてよく、
Ｒ２およびＲ６が両方ともＨであることはない、
構造；
を有する環状プリンジヌクレオチド、またはその製薬上許容可能な塩である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
Ｒ２およびＲ６の一方または両方が、独立して、１〜１８個の炭素を有する非置換直鎖アルキル、２〜９個の炭素を有する非置換アルケニル、２〜９個の炭素を有する非置換アルキニル、または非置換アリールである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
（ａ）Ｒ２およびＲ６の一方または両方がアリルであるか、または
（ｂ）Ｒ２およびＲ６の一方または両方がプロパルギルを含むか、または
（ｃ）Ｒ２およびＲ６の一方または両方がメチルであるか、または
（ｄ）Ｒ２およびＲ６の一方または両方がエチルであるか、または
（ｅ）Ｒ２およびＲ６の一方または両方がプロピルであるか、または
（ｆ）Ｒ２およびＲ６の一方または両方がベンジルであるか、または
（ｇ）Ｒ２またはＲ６の一方が、アリル、プロパルギル、ホモアリル、ホモプロパルギル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、シクロプロピルメチルおよびベンジルからなる群から選択され、Ｒ２またはＲ６の他方が、プロドラッグ脱離基を含み、前記プロドラッグ脱離基がＣ６〜Ｃ１８脂肪酸エステルである、
請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
Ｘ１およびＸ２がともにＳである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
Ｒ１およびＲ５が、独立して、アデニン、グアニン、イノシンおよびキサンチンからなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
（ａ）Ｒ１およびＲ５の一方または両方がアデニンであるか、または
（ｂ）Ｒ１およびＲ５の一方または両方がグアニンであるか、または
（ｃ）Ｒ１がアデニンであり、且つＲ５がグアニンである、
請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
環状プリンジヌクレオチドの細胞取り込みおよび／または安定性を増強する送達ビヒクルと共に環状プリンジヌクレオチドが製剤化される、
請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
個体においてＳＴＩＮＧ依存性Ｉ型インターフェロン産生を抑制する方法における使用のための請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物であって、前記方法は、ＳＴＩＮＧ依存性Ｉ型インターフェロン産生を抑制するのに十分な量で前記組成物を前記個体に投与することを含む、組成物。
【請求項１１】
前記投与が非経口的である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物中に存在する環状プリンジヌクレオチドのＸ１およびＸ２がともにＳである、請求項１０〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物中に存在する環状プリンジヌクレオチドが、１つ以上の純粋なＳｐ，Ｓｐ、Ｒｐ，Ｒｐ、Ｓｐ，ＲｐまたはＲｐ，Ｓｐの立体異性体を含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
医薬における使用のための請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国特許仮出願６１／８２５，００９（２０１３年５月１８日出願）および米国特許仮出願６１／９０２，１２５（２０１３年１１月８日出願）(これらの記載内容は各々、参照により本明細書中で援用される)に対する優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景についての以下の考察は、読者の本発明の理解を手助けするために提供されるだけであって、本発明に対して従来技術を記載または構成することが許容されるわけではない。
【０００３】
ヒト免疫系は、一般的に、「自然免疫」および「獲得免疫」として言及される２つの部門に分けられ得る。自然部門の免疫系は、主に、多数の可溶性因子、例えば補体系およびケモカイン／サイトカイン系、ならびに多数の特殊化細胞型、例えば肥満細胞、マクロファージ、樹状細胞(ＤＣ)およびナチュラルキラー細胞を介した初期炎症性応答に関与する。これに比して、獲得免疫系部門は、遅延および長期持続性抗体応答を、抗原に対する免疫学的記憶に重要な役割を果たすＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞応答と一緒に包含する。免疫系の第三の部門は、ＮＫＴ細胞とＭＡＩＴ細胞のようなγδＴ細胞、および限定Ｔ細胞受容体レパートリーを有するＴ細胞を包含するとして同定され得る。
【０００４】
抗原に対する有益な免疫応答のために、抗原提示細胞(ＡＰＣ)は、Ｔ細胞に対して適正なＭＨＣ状況で抗原を処理し、表示しなければならず、これが次に、細胞傷害性およびヘルパーＴ細胞のＴ細胞刺激を生じる。抗原提示後、ＡＰＣおよびＴ細胞の両方における同時刺激分子の上首尾の相互作用が中断される。ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−１２は、多数の主要モデルにおける有効な前炎症性分子として役立つ。例えば、ＧＭ−ＣＳＦは、骨髄系前駆細胞を誘導して、増殖し、樹状細胞(ＤＣ)に分化するが、しかし、Ｔ細胞の活性化に必要な有効抗原提示細胞へのそれらの成熟を活性化するためには付加的シグナルが必要である。有効な免疫療法に対する障壁としては、適切な大きさおよび機能を有する細胞傷害性ＣＤ８Ｔ細胞の誘導を制限し得る標的化抗原に対する耐性、悪性細胞の部位への生成Ｔ細胞の移動不足、ならびに誘導Ｔ細胞応答の持続性不足が挙げられる。
【０００５】
腫瘍細胞破砕屑を貪食するＤＣは、主要組織適合性複合体(ＭＨＣ)提示のための材料を処理し、共刺激因子の発現を上方調節し、所属リンパ節に移動して、腫瘍特異的リンパ球を刺激する。この経路は、腫瘍関連抗原と反応するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖および活性化をもたらす。実際、このような細胞は、患者の血液、リンパ組織および悪性病変でしばしば検出され得る。
【０００６】
免疫回避の基礎をなすメカニズムへの新規の識見は、免疫チェックポイント阻害薬またはその他の治療薬と組み合わせることにより、治療的ワクチン接種(直接的または間接的)の効能を高める併用処置レジメンと一緒に、有効な抗腫瘍免疫を誘導するワクチンの開発のための基礎として役立っている。ＣＤＮ環状ジＡＭＰ(リステリア・モノサイトゲネスにより産生される)およびその類似体環状ジＧＭＰ(レジオネラ・ニューモフィラにより産生される)は、ＰＡＭＰ(病原体関連分子パターン)として宿主細胞により認識され、これは、ＳＴＩＮＧとして既知のＰＲＲ(病原体認識受容体)と結合する。ＳＴＩＮＧは、ＴＡＮＫ結合キナーゼ(ＴＢＫ１)−ＩＲＦ３シグナル伝達軸を活性化して、自然免疫を強力に活性化するＩＦＮ−βおよびその他のＩＲＦ−３依存性遺伝子産物の誘導をもたらす宿主哺乳動物細胞の細胞質中のアダプタータンパク質である。ＳＴＩＮＧは、細胞内病原体による感染を感知し、応答してＩＦＮ−βの産生を誘導して、抗原特異的ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞ならびに病原体特異的抗体の両方からなる適応型防御性病原体特異的免疫応答の発現を生じる宿主サイトゾル調査経路の構成成分である、と目下理解されている。環状プリンジヌクレオチドの例は、例えば米国特許第７，７０９，４５８号および第７，５９２，３２６号、ＷＯ２００７／０５４２７９、ならびにＹａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．１８：５６３１（２００８）(これらの記載内容は各々、参照により本明細書中で援用される)で多少詳細に記載されている。
【０００７】
伝統的治療アプローチに難治性であり得る癌のような疾患を処置するための免疫学的戦略に関する改良された組成物および方法が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、免疫応答の抑制または調整のための、ＳＴＩＮＧ(インターフェロン遺伝子の刺激因子)として知られている近年発見された細胞質受容体でのシグナル伝達を抑制する新規の環状ジヌクレオチド(ＣＤＮ)化合物の使用を提供することであり、特に、ＳＴＩＮＧ依存性ＴＢＫ１活性化およびその結果生じるＩ型インターフェロンの産生を抑制する１つ以上の環状プリンジヌクレオチドを含む組成物の形態で上記のＣＤＮを提供することである。
【０００９】
第一の態様において、本発明は、以下の：インターフェロン遺伝子の刺激因子(「ＳＴＩＮＧ」)依存性Ｉ型インターフェロン産生を抑制する１つ以上の環状プリンジヌクレオチド（「ＣＤＮ」）を含む組成物を提供する。本明細書中で後述するように、多数のＣＤＮが本発明において用途を見出す。好ましい環状プリンジヌクレオチドとしては、限定されないが、ｃ−ジ−ＡＭＰ、ｃ−ジ−ＧＭＰ、ｃ−ジ−ＩＭＰ、ｃ−ＡＭＰ−ＧＭＰ、ｃ−ＡＭＰ−ＩＭＰ、ｃ−ＧＭＰ−ＩＭＰおよびその類似体のうちの１つ以上が挙げられる。この一覧は、限定されるものではない。
【００１０】
本発明による環状プリンジヌクレオチドの一般構造は、以下の：
【化１】
0006400082.tif 000002
であり、式中、Ｒ１およびＲ２はプリンであり、ならびに構造：
【化２】
0006400082.tif 000003
は、リン酸結合が、２’または３’位置に存在し得るし、環状結合に参加しない２’または３’位置の他方が−ＯＨである、ということを反映するよう意図される。したがって、本発明は、２’，５’，２’，５’ＣＤＮ、２’，５’，３’，５’ＣＤＮ、および３’，５’，３’，５’ＣＤＮを意図する。例として、３’−５’結合を有するｃ−ジ−ＧＭＰは上記の分子を指し、この場合、Ｒ１およびＲ２は各々グアニンであり、各リン酸結合は３’−５’である。
【００１１】
本発明の目的のために、この一般構造は、ＳＴＩＮＧ依存性シグナル伝達を抑制する能力を付与し、それによりＳＴＩＮＧ依存性Ｉ型インターフェロン産生を抑制する置換基を導入するよう、さらに修飾される。例として、本発明は、以下の化合物：
【化３】
0006400082.tif 000004
を含む組成物を提供するが、式中、Ｘは、独立して、ＯまたはＳであり、Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、Ｈ、または１〜１８個の炭素および０〜３個の異種原子を有する任意置換直鎖アルキル、１〜９個の炭素を有する任意置換アルケニル、１〜９個の炭素を有する任意置換アルキニル、または任意置換アリールであって、この場合、置換（単数または複数）は、存在する場合、独立して、Ｃ１−６アルキル直鎖または分枝鎖、ベンジル、ハロゲン、トリハロメチル、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＯ２、−ＮＨ２、−ＯＨ、＝Ｏ、−ＣＯＯＲ’（ここで、Ｒ’はＨまたは低級アルキルである）、−ＣＨ２ＯＨおよび−ＣＯＮＨ２からなる群から選択され、Ｒ３およびＲ４はともにＨでない。
【００１２】
好ましい実施形態では、Ｒ３およびＲ４の一方または両方が、独立して、１〜１８個の炭素を有する非置換直鎖アルキル、１〜９個の炭素を有する非置換アルケニル、１〜９個の炭素を有する非置換アルキニル、または非置換アリールである。ある実施形態では、Ｒ３およびＲ４の一方または両方が、置換されるかまたは置換されないアリール、プロパルギル、ホモアリル、ホモプロパルギル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、シクロプロピルメチルまたはベンジルである。ある実施形態では、Ｒ３およびＲ４の一方はプロドラッグ脱離基、例えば細胞エステラーゼにより除去される脂肪族エステルであるが、ともにプロドラッグ脱離基であるというわけではない。
【００１３】
ある実施形態では、各ＸはＳである。好ましい実施形態では、各ＸがＳである場合、組成物は１つ以上の実質的に純粋なＳｐ，Ｓｐ、Ｒｐ，Ｒｐ、Ｓｐ，ＲｐまたはＲｐ，Ｓｐ立体異性体を含む。
【００１４】
ある実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、アデニン、グアニン、イノシンおよびキサンチンまたはその類似体からなる群から選択される。好ましくは、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、アデニンまたはグアニンである。
【００１５】
本明細書中で後述されるように、本発明による環状プリンジヌクレオチド組成物は、３’−５’結合を有するｃ−ジ−ＧＭＰと比較して、ＳＴＩＮＧ依存性Ｉ型インターフェロン産生を少なくとも２倍、さらに好ましくは５倍または１０倍抑制し得る。
【００１６】
本発明の組成物は、製薬上許容可能な担体、アジュバントおよびビヒクルを含有する処方物中で、種々の腸管外および非腸管外経路により、それを必要とする個体に投与され得る。好ましい経路は腸管外であり、例えば、限定されないが、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、皮内、くも膜下腔内および硬膜外投与のうちの１つ以上が挙げられる。特に好ましいのは、皮下投与による投与である。好ましい薬学的組成物は、水性、リポソーム性または水中油型エマルジョンとして処方される。例示的組成物は、本明細書中で後述される。
【００１７】
関連態様では、本発明は、個体における免疫応答の抑制または調整方法であって、それを必要とする個体に本発明による組成物を投与することを包含する方法に関する。他の関連態様では、本発明は、個体におけるＩ型インターフェロン産生の抑制または調整方法であって、それを必要とする個体に本発明による組成物を投与することを包含する方法に関する。本発明の組成物を用いて処置され得る自己免疫疾患の例としては、限定されないが、円形脱毛症、自己免疫溶血性貧血、自己免疫肝炎、皮膚筋炎、糖尿病（１型）、自己免疫若年性特発性関節炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、特発性血小板減少性紫斑病、狼瘡、重症筋無力症、いくつかの型の心筋炎、多発性硬化症、天疱瘡／類天疱瘡、悪性貧血、結節性多発性動脈炎、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、関節リウマチ、強皮症／全身性硬化症、シェーグレン症候群、全身性紅斑性狼瘡、いくつかの型の甲状腺炎、いくつかの型のブドウ膜炎、白斑、および多発性血管炎を伴う肉芽腫症（ウェーゲナー肉芽腫症）が挙げられる。
【００１８】
他の実施形態では、本明細書中に記載される方法は、Ｔｈ１からＴｈ２免疫へのシフトが臨床的利益を付与する障害の処置のための有効量の本発明の実質的に純粋なＣＤＮを哺乳動物に投与することを包含し得る。細胞媒介性免疫(ＣＭＩ)は、サイト間ＩＬ−２、インターフェロン(ＩＦＮ)−γおよび腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)−αを産生するＴＨ１  ＣＤ４＋Ｔリンパ球と関連する。これに対比して、体液性免疫は、ＩＬ−４、ＩＬ−６およびＩＬ−１０を産生するＴＨ２  ＣＤ４＋Ｔリンパ球と関連する。ＴＨ１応答に向かう免疫偏向は、典型的には、細胞傷害性Ｔ細胞リンパ球(ＣＴＬ)、ナチュラルキラー(ＮＫ)細胞、マクロファージおよび単球の活性化を生じる。一般的には、Ｔｈ１応答は、細胞内病原体(宿主細胞内部に存在するウィルスおよび細菌)および腫瘍に対してより有効であるが、一方、Ｔｈ２応答は、細胞外細菌、寄生生物、例えば蠕虫、および毒素に対してより有効である。Ｉ型インターフェロン(ＩＦＮ−Ｉ)は、内毒素血症および敗血症の致死作用を媒介すると考えられ、したがって、本発明の方法および組成物は敗血症の処置に用途を見出し得る。さらに、自然免疫の活性化は、Ｔヘルパー１および２型(Ｔｈ１／Ｔｈ２)免疫系平衡を正常化し、免疫グロブリン(Ｉｇ)Ｅ依存性アレルギーおよびアレルギー性喘息を引き起こすＴｈ２型応答の過剰反応を抑圧すると予測される。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】環状プリンジヌクレオチド（「ＣＤＮ」）媒介性シグナル伝達を示す。ＣＤＮ（例えば、ｃ−ジ−ＡＭＰまたはｃ−ジ−ＧＭＰ）は、サイトゾルアダプタータンパク質ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激因子）と結合することによりＩＦＮ−βの産生を誘導し、ＴＢＫ−１／ＩＲＦ−３経路によるシグナル伝達を誘導して、ＩＦＮ受容体との結合とその後のシグナル伝達を介してＤＣの自己分泌および傍分泌活性化の両方をもたらす。
【図２】２’−Ｏ−プロパルギル−環状Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ（２’−Ｏ−プロパルギル−ＭＬ−ＣＤＡ）の合成の合成模式図を示す。
【図３Ａ】２’−Ｏ−プロパルギル−ＭＬ−ＣＤＡ（化合物８）に関する１Ｈ  ＮＭＲ分析結果を示す。
【図３Ｂ】２’−Ｏ−プロパルギル−ＭＬ−ＣＤＡ（化合物８）に関する３１Ｐ  ＮＭＲ分析結果を示す。
【図３Ｃ】２’−Ｏ−プロパルギル−ＭＬ−ＣＤＡ（化合物８）に関するＣＯＳＹ（２．５〜６．５ｐｐｍ−１Ｈ軸）分析結果を示す。
【図３Ｄ】２’−Ｏ−プロパルギル−ＭＬ−ＣＤＡ（化合物８）に関するＨＭＢＣ（３．５〜６．５ｐｐｍ−１Ｈ軸）分析結果を示す。
【図３Ｅ】２’−Ｏ−プロパルギル−ＭＬ−ＣＤＡ（化合物８）に関するＨＰＬＣ（２〜２０％ＡＣＮ／１０ｍＭ  ＴＥＡＡ緩衝液−２０分）分析結果を示す。
【図４】ｃ−［Ｇ（２’，５’）ｐＧ（３’，５’）ｐ］およびジチオリボースＯ−置換誘導体を示す。
【図５】ｃ−［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］およびジチオリボースＯ−置換誘導体を示す。
【図６】ｃ−［Ｇ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］およびジチオリボースＯ−置換誘導体を示す。
【図７】Ｉ型インターフェロンのＳＴＩＮＧ依存性活性化の２’−Ｏ−プロパルギル−環状［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（２’−Ｏ−プロパルギル−ＭＬ−ＣＤＡ）抑制を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明の詳細な説明
本発明は、ＳＴＩＮＧ(インターフェロン遺伝子の刺激因子)として既知の近年発見された細胞質受容体でのシグナル伝達を抑制する新規の環状ジヌクレオチド(ＣＤＮ)化合物の使用に関する。特に、本発明のＣＤＮは、ＳＴＩＮＧ依存性ＴＢＫ１活性化を、およびその結果生じるＩ型インターフェロンの産生を抑制する１つ以上の環状プリンジヌクレオチドを含む組成物の形態で提供される。
【００２１】
ＣＤＮ環状−ジ−ＡＭＰ（リステリア・モノサイトゲネスにより産生される)およびその類似体環状ジＧＭＰ(レジオネラ・ニューモフィラにより産生される)は、ＰＡＭＰ(病原体関連分子パターン)として宿主細胞により認識され、これは、ＳＴＩＮＧとして既知のＰＲＲ(病原体認識受容体)と結合する。ＳＴＩＮＧは、ＴＡＮＫ結合キナーゼ(ＴＢＫ１)−ＩＲＦ３シグナル伝達軸を活性化して、自然免疫を強力に活性化するＩＦＮ−γおよびその他のＩＲＦ−３依存性遺伝子産物の誘導をもたらす宿主哺乳動物細胞の細胞質中のアダプタータンパク質である。ＳＴＩＮＧは、細胞内病原体による感染を感知し、応答してＩＦＮの産生を誘導して、抗原特異的ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞ならびに病原体特異的抗体の両方からなる適応型防御性病原体特異的免疫応答の発現を生じる宿主サイトゾル調査経路の構成成分である、と目下理解されている。
【００２２】
自己免疫疾患の症例では、この経路の阻害薬は、従来利用されたことがない新規の治療手段を提供し得る。
【００２３】
定義
「投与」は、ヒト、哺乳動物、哺乳動物被験体、動物、獣医学的被験体、プラセボ被験体、研究用被験体、実験用被験体、細胞組織、器官または生物学的流体に関して本明細書中で用いる場合、限定されないが、外因性リガンド、試薬、プラセボ、小分子、薬物学的作用物質、治療薬、診断薬または組成物の、被験体、細胞、組織、器官または生物学的流体等への接触を指す。「投与」は、例えば薬力学的、診断的、研究的、プラセボおよび実験的方法を指し得る。細胞の処置は、細胞への試薬の接触、ならびに流体への試薬の接触を包含し、この場合、流体は細胞と接触している。「投与」は、試薬、診断、結合組成物による、あるいは別の細胞による、例えば細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｅｘ ｖｉｖｏ処置も包含する。「一緒に投与される」とは、２つ以上の作用物質が単一組成物として投与されるという意味が含まれるよう意図されない。単一組成物としての投与が本発明により意図されるが、しかしこのような作用物質は別個の投与として単一被験体に送達され、これは、同時に、または異なる時点であり得るし、同一投与経路または異なる投与経路であり得る。
【００２４】
「アゴニスト」は、それがリガンドおよび受容体に関する場合、受容体を刺激する分子、分子の組合せ、複合体または試薬の組合せを含む。例えば、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子(ＧＭ−ＣＳＦ)のアゴニストは、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦの突然変異タンパク質または誘導体、ＧＭ−ＣＳＦのペプチド藻放物、ＧＭ−ＣＳＦの生物学的機能を模倣する小分子、あるいはＧＭ−ＣＳＦ受容体を刺激する抗体を包含する。
【００２５】
「アンタゴニスト」は、それがリガンドおよび受容体に関する場合、受容体を抑制し、反対に作用し、下方調節し、および／または脱感作する分子、分子の組合せ、または複合体を含む。「アンタゴニスト」は、受容体の構成的活性を抑制する任意の試薬を包含する。構成的活性は、リガンド／受容体相互作用の非存在下で明白であるものである。「アンタゴニスト」は、受容体の刺激化(または調節化)活性を抑制するかまたは防止する任意の試薬も包含する。例として、ＧＭ−ＣＳＦ受容体のアンタゴニストとしては、如何なる限定も意味することなく、リガンド(ＧＭ−ＣＳＦ)と結合し、それが受容体と結合しないようにする抗体、あるいは受容体と結合し、リガンドが受容体と結合しないようにするか、もしくは抗体が不活性立体配座で受容体を欠く場合の抗体が挙げられる。
【００２６】
本発明のＣＤＮに関して「実質的に純粋な」とは、特定種が、組成物中に存在するＣＤＮ活性の少なくとも５０重量％、さらにしばしば少なくとも６０重量％、典型的には少なくとも７０重量％、さらに典型的には７５重量％、最も典型的には少なくとも８０重量％、普通は少なくとも８５重量％、さらに普通は少なくとも９０重量％、最も普通には少なくとも９５重量％、慣用的には少なくとも９８重量％またはそれ以上を占める、と意図される。水、緩衝剤、塩、洗剤、還元剤、プロテアーゼ阻害剤、安定化剤(付加タンパク質、例えばアルブミンを含む)、および賦形剤の重量は、一般的に、純度の確定に用いられない。
【００２７】
「特異的に」または「選択的に」結合するは、リガンド／受容体、核酸／相補的拡散、抗体／抗原、またはその他の結合対(例えば、サイトカイン対サイトカイン受容体)(各々、一般的に、「標的生体分子」または「標的」として本明細書中で言及される)に言及する場合、タンパク質またはその他の生物学的製剤の異種集団中の標的の存在に関連する結合反応を示す。特異的結合は、例えば、意図される方法の、抗体の抗原結合部位に由来する結合化合物、核酸リガンド、抗体または結合組成物が、非標的分子との親和性のしばしば少なくとも２５％より大きい、さらにしばしば少なくとも５０％より大きい、さらにしばしば少なくとも１００％(２倍)より大きい、通常少なくとも１０倍より大きい、さらに通常少なくとも１０倍より大きい、さらに通常少なくとも２０倍より大きい、最も通常では少なくとも１００倍より大きい親和性でその標的と結合する、ということを意味し得る。
【００２８】
「リガンド」は、標的生体分子と結合する小分子、核酸、ペプチド、ポリペプチド、糖類、多糖、グリカン、糖タンパク質、糖脂質またはその組合せを指す。このようなリガンドは受容体のアゴニストまたはアンタゴニストであり得るが、リガンドは、アゴニストまたはアンタゴニストでない、そしてアゴニストまたはアンタゴニスト特性を有さない結合作用物質も包含する。その同族の標的に関するリガンドの特異的結合は、しばしば、「親和性」の点からみて表される。好ましい実施形態では、本発明のリガンドは、約１０４Ｍ−１〜約１０８Ｍ−１の親和性で結合する。親和性は、Ｋｄ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ（ｋｏｆｆは解離速度定数であり、Ｋｏｎは会合速度定数であり、Ｋｄは平衡定数である）として算定される。
【００２９】
親和性は、種々の濃度(ｃ)で標識化リガンドの結合割合(ｒ)を測定することにより、平衡で確定され得る。データは、スキャッチャード方程式：ｒ／ｃ＝Ｋ（ｎ−ｒ）（式中、ｒ＝平衡での結合リガンドのモル数／受容体のモル数；ｃ＝平衡での遊離リガンド濃度；Ｋ＝平衡会合定数；およびｎ＝受容体分子当たりのリガンド結合部位の数)を用いてグラフ化される。グラフ分析により、ｒ／ｃをＸ軸上のｒに対してＹ軸上にプロットし、したがって、スキャッチャードプロットを生じる。スキャッチャード分析による親和性測定は、当該技術分野で周知である。例えば、ｖａｎ  Ｅｒｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  １２：４２５−４３，１９９１；Ｎｅｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｇｒｉｓｗｏｌｄ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｐｒｏｇｒａｍｓ  Ｂｉｏｍｅｄ．２７：６５−８，１９８８を参照。代替的には、親和性は、等温滴定型熱量測定(ＩＴＣ)により測定し得る。典型的ＩＴＣ実験では、リガンドの溶液は、その同族標的の溶液中で滴定される。それらの相互作用時に放出される熱（ΔＨ）は、経時的にモニタリングされる。リガンドの連続量がＩＴＣ細胞中で滴定される場合、吸収または放出される熱の量は、結合の量と直接的に比例する。系が飽和に達すると、希釈液の熱だけが観察されるまで、熱シグナルは減少する。次に、細胞中のリガンドおよび結合相手の比に対する各注入からの熱のプロットから、結合曲線が得られる。結合曲線は、適切な結合モデルで分析されて、ＫＢ、ｎおよびΔＨを確定する。ＫＢ＝１／Ｋｄであることに留意されたい。
【００３０】
「被験体」という用語は、本明細書中で用いる場合、ヒトまたは非ヒト生物体を指す。したがって、本明細書中に記載される方法および組成物は、ヒトおよび獣医学的疾患の両方に適用可能である。ある実施形態では、被験体は「患者」、すなわち疾患または症状のために医学的ケアを受けている生きたヒトである。これは、病態の徴候に関して検査されているものである明白な疾病を有さない人々を含む。好ましいのは、本発明の組成物および方法により標的化されるものである特定の癌の既存の診断を有する被験体である。本明細書中に記載される組成物での処置のために好ましい癌としては、限定されないが、前立腺癌、腎臓癌、黒色腫、膵臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、結腸癌、頭部および頚部癌、肺癌および乳癌が挙げられる。
【００３１】
「治療的有効量」は、患者の利益を示すために、すなわち、処置されている症状の症候の減少、防止または改善を生じるために十分である試薬または薬学的組成物の量と定義される。作用物質または薬学的組成物が診断薬を含む場合、「診断的有効量」は、シグナル、画像またはその他の診断パラメーターを生成するのに十分である量と定義される。薬学的製剤の有効量は、個体の感受性の程度、個体の年齢、性別および体重、ならびに個体の特異体質応答といったような因子によって変わる。「有効量」は、限定されないが、医学的状態または障害またはその原因過程の症候または徴候を改善し、逆転し、緩和し、防止し、または診断し得る量を包含する。他の方法で、明白に、または状況により示されない限り、「有効量」は、症状を改善するのに十分な最小量に限定されない。
【００３２】
「処置」または「処置すること」(症状または疾患に関して)は、有益なまたは所望の結果、例えば、好ましくは臨床結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、疾患に関する有益なまたは所望の結果としては、限定されないが、以下のうちの１つ以上が挙げられる：疾患を防止すること、疾患に関連した症状を改善すること、疾患を治癒すること、疾患の重症度を低減すること、疾患の進行を遅延すること、疾患に関連した１つ以上の症候を軽減すること、疾患に罹患している者の生活の質を増大すること、および／または生存を延長すること。例えば、本明細書中に記載される組成物が癌の処置のために用いられる実施形態では、有益なまたは所望の結果としては、限定されないが、以下のうちの１つ以上が挙げられる：新生物または癌性細胞の増殖を低減すること(または破壊すること)、癌に見出される新生物細胞の転移を低減すること、腫瘍のサイズを縮小すること、癌に起因する症候を減少すること、癌に罹患している者の生活の質を増大すること、疾患を処置するために必要とされる他の医薬品の用量を減少すること、癌の進行を遅延すること、および／または癌を有する患者の生存を延長すること。状況によって、被験体の「処置」は、被験体が処置を必要としている、例えば試薬の投与により改善されると予期される障害を被験体が包含する状況である、ということを意味する。
【００３３】
「抗体」という用語は、本明細書中で用いる場合、抗原またはエピトープを特異的に結合し得る単数の免疫グロブリン遺伝子または複数の免疫グロブリン遺伝子に由来するか、その後にモデル化されるか、またはそれにより実質的にコードされるペプチドまたはポリペプチド、あるいはその断片を指す。例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ，ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９３）；Ｗｉｌｓｏｎ（１９９４；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １７５：２６７−２７３；Ｙａｒｍｕｓｈ（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２５：８５−９７参照。抗体という用語は、抗原結合部分、すなわち抗原を結合する能力を保持する「抗原結合部位」(例えば、断片、亜配列、相補性決定領域(ＣＤＲ))、例えば(ｉ)Ｆａｂ断片：ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨｌドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片：ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結される２つのＦａｂ断片からなる二価断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片：ＶＨおよびＣＨｌドメインからなる；（ｉｖ）Ｆｖ断片：抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなる；（ｖ）ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）:これはＶＨドメインからなる；ならびに（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。一本鎖抗体も、参照により「抗体」という用語に含まれる。
を含む。
【００３４】
環状プリンジヌクレオチド
原核生物ならびに真核生物細胞は、細胞シグナル伝達、ならびに細胞内および細胞間連絡のために種々の小分子を用いる。環状ヌクレオチド、例えばｃＧＭＰ、ｃＡＭＰ等は、原核生物および真核生物細胞における調節および開始活性を有することが知られている。真核生物細胞とは違って、原核生物細胞は、調節分子として環状プリンジヌクレオチドも用いる。原核生物では、２つのＧＴＰ分子の縮合は、細菌における重要な調節因子を表すｃ−ジＧＭＰを生じるための酵素ジグアニレートシクラーゼ(ＤＧＣ)による触媒作用である。
【００３５】
環状ジＧＭＰまたはその類似体はさらにまた、患者における免疫または炎症性応答を刺激または増強し得るし、あるいは哺乳動物においてアジュバントとして役立つことによりワクチンに対する免疫応答を増強し得る、ということを近年の研究は示唆している。病原体由来ＤＮＡのサイトゾル検出は、ＴＡＮＫ結合キナーゼ１(ＴＢＫ１)およびその下流転写因子であるＩＦＮ調節因子３(ＩＲＦ３)を介したシグナル伝達を要する。ＳＴＩＮＧ(ＩＦＮ遺伝子の刺激因子;ＭＩＴＡ、ＥＲＩＳ、ＭＰＹＳおよびＴＭＥＭ１７３としても既知)と呼ばれる膜貫通タンパク質は、これらの環状プリンジヌクレオチドのためのシグナル伝達受容体として機能して、ＴＢＫ１−ＩＲＦ３シグナル伝達軸およびＳＴＩＮＥ依存性Ｉ型インターフェロン応答の刺激を引き起こす（例えば図１参照）。Ｂｕｒｄｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４７８：５１５−１８，２０１１は、ＳＴＩＮＧが環状ジグアニレートモノホスフェートと直接結合するが、しかし他の非関連ヌクレオチドまたは核酸とは結合しない、ということを実証した。
【００３６】
本発明のＣＤＮを得るために前駆体として用いるための環状プリンジヌクレオチドは、例えばＧａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ（２０１３）１５３：ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２０１３．０４．０４６；米国特許第７，７０９４５８号および第７，５９２，３２６号；ＷＯ２００７／０５４２７９；ならびにＹａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．１８：５６３１（２００８）(これらの記載内容は各々、参照により本明細書中で援用される)で多少詳細に記載されている。これらのＣＤＮは、本発明のＣＤＮを生成するために、標準有機化学技法を用いて修飾され得る。
【００３７】
好ましいプリンとしては、限定されないが、アデニン、グアニン、イノシン、ヒポキサンチン、キサンチン、イソグアニン等が挙げられる。本発明のＣＤＮは、好ましくはホスホロチオエート類似体、最も好ましくは実質的に純粋なそのＳｐ，Ｓｐ、Ｒｐ，Ｒｐ、ＳｐＲｐまたはＲｐ，Ｓｐ立体異性体である。
【００３８】
構造で示されるように、各リボースは、置換され得る２’または３’ヒドロキシルを含む。本明細書中で後述されるように、本発明のＣＤＮは、プロドラッグ脱離基として除去されないブロッキング部分を提供するこれらの２’または３’ヒドロキシル（これは環状連結の一部ではない）の一方または両方で置換を含み得る。このような置換としては、限定されないが、Ｏ−メチル、Ｏ−エチル、Ｏ−プロピル、Ｏ−イソプロピル、Ｏ−ベンジル、Ｏ−メトキシエチル、Ｏ−アミノエチル、Ｏ−プロパルギル、Ｏ−アリル等が挙げられる。この一覧は、限定されるものではない。「プロドラッグ」という用語は、本明細書中で用いる場合、意図される化合物の修飾を指し、この場合、修飾化合物は、低薬理学的活性を示し(修飾化合物と比較した場合)、修飾化合物は身体内で(例えば標的細胞または標的器官で)、酵素または非酵素反応により非修飾形態に転化し戻される。ある実施形態では、１つのリボース上のヒドロキシルは、プロドラッグ脱離基を含む。プロドラッグは、薬剤の物理化学的、生物薬学的および薬物動態的特性を修飾し得る。伝統的プロドラッグは、ｉｎ  ｖｉｖｏで転換を受けて活性薬剤を生成することにより活性化される薬剤として分類される。プロドラッグ開発の理由は、典型的には、貧水性可溶性、化学的不安定性、低経口的生物学的利用能、血液脳関門透過の欠如、および親薬剤に関連した高初回通過代謝である。適切なプロドラッグ部分は、例えば“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”Ｊ．Ｒａｕｔｉｃｏ，Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，２０１１に記載されている。
【００３９】
好ましい環状プリンジヌクレオチドは、本明細書中で「チオホスフェート」として言及されるホスホロチオエート類似体である。ホスホロチオエートは、非架橋酸素の１つがイオウに取って代わられる標準ヌクレオチドの変異体である。ヌクレオチド間結合の硫化は、エンド−およびエキソヌクレアーゼ、例えば５’→３’および３’→５’ＤＮＡ  ＰＯＬ１エキソヌクレアーゼ、ヌクレアーゼＳ１およびＰ１、ＲＮアーゼ、血清ヌクレアーゼおよびヘビ毒ホスホジエステラーゼの作用を劇的に低減する。さらに、脂質二重膜を横断する能力を増大する。
【００４０】
固有キラルでのホスホロチオエート結合。この構造におけるホスフェートは、ＲまたはＳ型で各々存在し得る、と当業者は理解する。したがって、Ｒｐ，Ｒｐ、Ｓｐ，Ｓｐ、Ｓｐ，ＲｐおよびＲｐ，Ｓｐ型が考えられる。
【００４１】
上記のように、本発明の環状プリンジヌクレオチドは、ＣＤＮの２’−Ｏ−および３’−Ｏ−置換基型、特にＣＤＮチオホスフェートを含む。付加的安定性および生物学的利用能は、リボース部分の２’−ＯＨの置換により提供され得る。本明細書中で扱い易い置換基としては、限定されないが、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アシル（−Ｃ（Ｏ）Ｒａａ）、カルボキシル（−Ｃ（Ｏ）０−Ｒａａ）、脂肪族基、脂環式基、アルコキシ、置換オキシ（−０−Ｒａａ）、アリール、アラルキル、複素環式ラジカル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、アミノ（−Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ））、イミノ（＝ＮＲｂｂ）、アミド（−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）（ＲｃＣ）または−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒａａ）、アジド（−Ｎ３）、ニトロ（−Ｎ０２）、シアノ（−ＣＮ）、カルバミド（−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ）または−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）ＯＲａａ）、ウレイド（−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ））、チオウレイド（−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ））、グアニジニル（−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）（Ｒｃｃ））、アミジニル（−Ｃ（＝ＮＲｂｂ）Ｎ（Ｒｂｂ）（ＲｃＣ）または−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｃ（＝ＮＲｂｂ）（Ｒａａ））、チオール（−ＳＲｂｂ）、スルフィニル（−Ｓ（Ｏ）Ｒｂｂ）、スルホニル（−Ｓ（Ｏ）２Ｒｂ）およびスルホンアミジル（−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒｂｂ）（ＲｃＣ）または−Ｎ（Ｒｂｂ）Ｓ（Ｏ）２Ｒｂｂ）が挙げられる。この場合、Ｒａａ、ＲｂｂおよびＲｃｃは、各々独立して、Ｈ、任意連結化学官能基またはさらなる置換基であり、好ましい一覧としては、限定されないが、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、脂肪族、アルコキシ、アシル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、脂環式、複素環式およびヘテロアリールアルキルが挙げられる。本明細書中に記載される化合物内の選定置換基は、帰納的程度に存在する。
【００４２】
「アルキル」という用語は、本明細書中で用いる場合、２４個までの炭素原子を含有する飽和直鎖または分枝鎖炭化水素ラジカルを指す。アルキル基の例としては、限定されないが、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、ｎ−ヘキシル、オクチル、デシル、ドデシル等が挙げられる。アルキル基は、典型的には１〜約２４個の炭素原子、さらに典型的には１〜約１２個の炭素原子を含み、１〜約６個の炭素原子がより好ましい。「低級アルキル」という用語は、本明細書中で用いる場合、１〜約６個の炭素原子を含む。アルキル基は、本明細書中で用いる場合、任意に、１つ以上のさらなる置換基を含み得る。
【００４３】
「アルケニル」という用語は、本明細書中で用いる場合、２４個までの炭素原子を含有し、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分枝鎖炭化水素鎖ラジカルを指す。アルケニル基の例としては、限定されないが、エテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イル、ジエン、例えば１，３−ブタジエン等が挙げられる。アルケニル基は、典型的には２〜約２４個の炭素原子、さらに典型的には２〜約１２個の炭素原子を含み、２〜約６個の炭素原子がより好ましい。アルケニル基は、本明細書中で用いる場合、任意に、１つ以上のさらなる置換基を含み得る。
【００４４】
「アルキニル」という用語は、本明細書中で用いる場合、２４個までの炭素原子を含有し、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖または分枝鎖炭化水素ラジカルを指す。アルキニル基の例としては、限定されないが、エチニル、１−プロピニル、１−ブチニル等が挙げられる。アルキニル基は、典型的には２〜約２４個の炭素原子、さらに典型的には２〜約１２個の炭素原子を含み、２〜約６個の炭素原子がより好ましい。アルキニル基は、本明細書中で用いる場合、任意に、１つ以上のさらなる置換基を含み得る。
【００４５】
「アシル」という用語は、本明細書中で用いる場合、有機酸からのヒドロキシル基の除去により生成されるラジカルを指し、一般式−Ｃ(Ｏ)−Ｘ(式中、Ｘは典型的には脂肪族、脂環式または芳香族である)を有する。例としては、脂肪族カルボニル、芳香族カルボニル、脂肪族スルホニル、芳香族スルフィニル、脂肪族スルフィニル、芳香族ホスフェート、脂肪族ホスフェート等が挙げられる。アシル基は、本明細書中で用いる場合、任意にさらなる置換基を含み得る。
【００４６】
「脂環式」という用語は、環が脂肪族である環式環系を指す。環系は、少なくとも１つの環が脂肪族である１つ以上の環を含み得る。好ましい脂環式としては、環中に約５〜約９個の炭素原子を有する環が挙げられる。脂環式は、本明細書中で用いる場合、任意にさらなる置換基を含み得る。
【００４７】
「脂肪族」という用語は、本明細書中で用いる場合、任意の２つの炭素原子間の飽和が一重、二重または三重結合である２４個までの炭素原子を含有する直鎖または分枝鎖炭化水素ラジカルを指す。脂肪族基は、好ましくは１〜約２４個の炭素原子、さらに典型的には１〜約１２個の炭素原子を含有し、１〜約６個の炭素原子がより好ましい。脂肪族基の直鎖または分枝鎖は、窒素、酸素、イオウおよびリンを含む１つ以上の異種原子により中断され得る。異種原子により中断されるこのような脂肪族基としては、限定されないが、ポリアルコキシ、例えばポリアルキレングリコール、ポリアミンおよびポリイミンが挙げられる。脂肪族基は、本明細書中で用いる場合、任意にさらなる置換基を含み得る。
【００４８】
「アルコキシ」という用語は、本明細書中で用いる場合、アルキル基と酸素原子との間で生成されるラジカルを指し、この場合、酸素原子は、アルコキシ基を親分子に結合するために用いられる。アルコキシ基の例としては、限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ネオペントキシ、ｎ−ヘキソキシ等が挙げられる。アルコキシ基は、本明細書中で用いる場合、任意にさらなる置換基を含み得る。
【００４９】
「アミノアルキル」という用語は、本明細書中で用いる場合、アミノ置換Ｃ＼−Ｃｎアルキルラジカルを指す。ラジカルのアルキル部分は、親分子と共有結合を形成する。アミノ基は任意の位置に置かれ得るし、アミノアルキル基はアルキルおよび／またはアミノ位置でさらなる置換基で置換され得る。
【００５０】
「アラルキル」および「アリールアルキル」という用語は、本明細書中で用いる場合、Ｃ＼−Ｃｎアルキルラジカルと共有結合される芳香族基を指す。その結果生じるアラルキル(またはアリールアルキル)基のアルキルラジカル部分は、親分子と共有結合を形成する。例としては、限定されないが、ベンジル、フェネチル等が挙げられる。アラルキル木は、本明細書中で用いる場合、任意に、ラジカル基を形成するアルキル、アリールまたは両方の基と結合されるさらなる置換基を含み得る。
【００５１】
「アリール」および「芳香族」という用語は、本明細書中で用いる場合、１つ以上の芳香族環を有する一または多環式炭素環式環系ラジカルを指す。アリール基の例としては、限定されないが、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、イデニル等が挙げられる。好ましいアリール環系は、１つ以上の環において約５〜約２０個の炭素原子を有する。アリール基は、本明細書中で用いる場合、任意にさらなる置換基を含み得る。
【００５２】
「ハロ」および「ハロゲン」という用語は、本明細書中で用いる場合、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から選択される原子を指す。
【００５３】
「ヘテロアリール」および「ヘテロ芳香族」という用語は、本明細書中で用いる場合、一または多環式芳香族環、関係または縮合環系を含むラジカルを指し、この場合、環のうちの少なくとも１つは芳香族であり、１つ以上の異種原子を含む。ヘテロアリールは、さらにまた、縮合環系、例えば縮合環のうちの１つ以上が異種原子を含有しない系を含むよう意図される。ヘテロアリール基は、典型的には、イオウ、窒素または酸素から選択される１つの環原子を含む。ヘテロアリール基の例としては、限定されないが、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニル等が挙げられる。ヘテロアリールラジカルは、直接的に、あるいは脂肪族基または異種原子のような連結部分を介して、親分子と結合され得る。ヘテロアリール基は、本明細書中で用いる場合、任意にさらなる置換基を含み得る。
【００５４】
「ヘテロアリールアルキル」という用語は、本明細書中で用いる場合、共有結合化Ｃ１〜Ｃ１２アルキルラジカルをさらに含む前記のようなヘテロアリール基を指す。その結果生じるヘテロアリールアルキル基のアルキルラジカル部分は、親分子と共有結合を形成し得る。例としては、限定されないが、ピリジニルメチル、ピリミジニルエチル、ナフチリジニルプロピル等が挙げられる。ヘテロアリールアルキル基は、本明細書中で用いる場合、任意に、ヘテロアリールまたはアルキル部分の一方または両方の上にさらなる置換基を含み得る。
【００５５】
以下の用語は、以下のように定義される：
アリール−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、
プロパルギル−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、
ホモアリル−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、および
ホモプロパルギル−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ。
【００５６】
上記のように、好ましい環状プリンジヌクレオチドは、さらにまた、プロドラッグ型のＣＤＮ、特にＣＤＮチオホスフェートを含む。プロドラッグは、薬剤の物理化学的、生物薬学的および薬物動態特性を修飾し得る。伝統的プロドラッグは、ｉｎ  ｖｉｖｏで転換を受けて活性薬剤を生成することにより活性化される薬剤として分類される。プロドラッグ開発の理由は、典型的には、貧水性可溶性、化学的不安定性、低経口的生物学的利用能、血液脳関門透過の欠如、および親薬剤に関連した高初回通過代謝である。適切なプロドラッグ部分は、例えば“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”Ｊ．Ｒａｕｔｉｃｏ，Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，２０１１に記載されている。
【００５７】
「実質的に純粋な」という用語は、環状プリンジヌクレオチドに関して本明細書中で用いる場合、上記の図に示されるキラル中心で他の考え得る立体化学に比して少なくとも７５％純粋であるＲｐ，ＲｐまたはＲｐ，Ｓｐ型を指す。例として、「実質的に純粋なＲｐ，Ｒｐ  ｃ−ジ−ＧＭＰチオホスフェート」は、ｃ−ジ−ＧＭＰチオホスフェートのＲｐ，ＳｐおよびＳｐ，Ｓｐ型に関して、少なくとも７５％純粋である。好ましい実施形態では、実質的に純粋な環状プリンジヌクレオチドは、少なくとも８５％純粋、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９７％純粋および少なくとも９９％純粋である。本発明の実質的に純粋な環状プリンジヌクレオチド調製物は「立体化学低に純粋」であるが、これは、これらのキラル中心に特定の立体化学を有する調製物内のすべてのＣＤＮが、別の状況では同一である、ということを示すよう意図されない。例えば、実質的に純粋な環状プリンジヌクレオチド調製物は、Ｒｐ，Ｒｐ  ｃ−ジ−ＧＭＰチオホスフェートおよびＲｐ，Ｒｐ  ｃ−ジ−ＡＭＰチオホスフェートの組合せを含有し、依然として実質的に純粋な環状プリンジヌクレオチド調製物であり得る。このような調製物は、患者処置のために有益である本明細書中で後述されるような他の構成成分も含み得るが、但し、調製物内のＣＤＮはすべて、これらのキラル中心に特定の立体化学を有する。
【００５８】
本明細書中に記載されるＣＤＮ組成物は、単独で、または製薬上許容可能な賦形剤と組み合わせて、適切な免疫応答を修飾するのに十分な量で、投与され得る。免疫応答は、限定されないが、特異的免疫応答、非特異的免疫応答、特異的および非特異的応答の両方、自然応答、一次免疫応答、適応免疫、二次免疫応答、記憶免疫応答、免疫細胞活性化、免疫細胞増殖、免疫細胞分化およびサイトカイン発現を含み得る。ある実施形態では、ＣＤＮ組成物は、１つ以上の付加的組成物と一緒に投与される。ＣＤＮ組成物は、付加的な治療用または予防用組成物の前に、後に、および／または一緒に投与され得る。付加的治療薬との同時投与のための方法は、当該技術分野で周知である（Ｈａｒｄｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ  ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｐｏｏｌｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ；Ｃｈａｂｎｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｏ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ）。ある実施形態では、１つ以上の治療薬が、抗−ＴＮＦ薬（例えば、エタネルセプト、インフリキシマブ）、ステロイド、アザチオプリン、シクロスポリン、メトトレキセート、アバタセプト、ＰＤＥ４阻害薬（例えば、ロフルミラスト）等から選択される。
【００５９】
送達剤
リポソームは、リン脂質の１つ（「単一ラメラ」）またはそれより多い（「多重ラメラ」）層から形成される小胞である。リン脂質の基礎的要素の両親媒性のため、リポソームは、典型的には、親水性外面を提示し、親水性コアを取り囲む親水性層を含む。親水性／疎水性構成成分の組み入れにおけるリポソームの多能性、それらの非毒性、生分解能、生体適合性、アジュバント性、細胞免疫の誘導、徐放性の特性、ならびにマクロファージによる即時取り込みは、それらを抗原送達のための魅力的候補にする。
【００６０】
ＷＯ２０１０／１０４８３３（この記載内容は参照により本明細書中で援用される）は、以下のものを含むリポソーム調製物を記載する：
ａ）水性ビヒクル；
ｂ）以下のものを含むリポソーム：
（ｉ）ジミリストイルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）、
（ｉｉ）ジミリストイルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）、ジミリストイルトリメチルアンモニウムプロパン（「ＤＭＴＡＰ」）、またはＤＭＰＧおよびＤＭＴＡＰの両方、および
（ｉｉｉ）少なくとも１つのステロール誘導体；ならびに
ｃ）前記少なくとも１つのステロール誘導体の１％〜１００％と共有結合される１つ以上の免疫原性ポリペプチド（単数または複数）または炭水化物（単数または複数）。
【００６１】
上記で言及した「免疫原性ポリペプチド（単数または複数）または炭水化物（単数または複数）」を伴うか、または伴わない、ＶｅｓｉＶａｘ（登録商標）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）と呼ばれるこのようなリポソーム製剤は、１つ以上の付加的構成成分、例えばペプチドグリカン、リポペプチド、リポ多糖、モノホスホリル脂質Ａ、リポテイコ酸、レシキモド、イミキモド、フラゲリン、非メチル化ＣｐＧモチーフを含有するオリゴヌクレオチド、ベータガラクトシルセラミド、ムラミルジペプチド、全トランスレチノイン酸、二本鎖ウィルスＲＮＡ、熱ショックタンパク質、ジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミド、陽イオン性界面活性剤、ｔｏｌｌ様受容体アゴニスト、ジミリストイルトリメチルアンモニウムプロパンおよびｎｏｄ様受容体アゴニストを含有し得る。有益であるのは、これらのリポソーム製剤が、本発明に従って１つ以上の環状プリンジヌクレオチドを送達するために用いられ得ることである。
【００６２】
さらに、上記で考察されたリポソーム製剤は、リポソームに免疫原性ポリペプチドまたは炭水化物を結合するためのアンカーとして「ステロイド誘導体」を用いるが、ステロイドは、単に、非共役ステロイド、例えばコレステロールとして提供され得る。
【００６３】
脂質混合物からリポソームを調製するための適切な方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｂａｓｕ  ＆  Ｂａｓｕ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，２００２；Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｉｎｆｏｒｍａ  ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ，２００６を参照。好ましい方法としては、そこに記載された押出、均質化および音波処理法が挙げられる。本発明に用いるためのリポソーム調製のための例示的方法で、脂質混合物を乾燥すること、その後、水性ビヒクル中で水和し、音波処理してリポソームを生成することを包含する方法は、ＷＯ２０１０／１０４８３３に記載されている。
【００６４】
ある実施形態では、リポソームは、特定の平均サイズ範囲内で提供される。リポソームサイズは、例えば、予備選定孔サイズを有する膜を通してリポソームを含む水性ビヒクルを押し出し、膜を通して流れる物質を収集することにより、選択され得る。好ましい実施形態では、リポソームは、実質的に直径５０〜５００ｎｍ、さらに好ましくは実質的に直径５０〜２００ｎｍ、最も好ましくは実質的に直径５０〜１５０ｎｍであるよう選択される。「実質的に」という用語は、この状況で本明細書中で用いる場合、リポソームの少なくとも７５％、さらに好ましくは８０％、最も好ましくは少なくとも９０％が意図される範囲内である、ということを意味する。
【００６５】
本発明において用途を見出し得るその他の脂質および脂質様アジュバントとしては、水中油型（ｏ／ｗ）エマルジョン（例えば、Ｍｕｄｅｒｈｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｓｃｉ．８８：１３３２−９，１９９９）参照）、ＶｅｓｉＶａｘ（登録商標）ＴＬＲ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、ジギトニン（例えば、米国特許第５，６９８，４３２号参照）およびグルコピラノシル脂質（例えば、米国特許出願２０１００３１０６０２参照）が挙げられる。
【００６６】
ナノ粒子も、ほとんどの投与経路に適した薬剤送達系を表す。長年に亘って、種々の天然および合成ポリマーがナノ粒子の調製のために調査されてきたが、このうちのポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）およびそれらのコポリマー（ＰＬＧＡ）が、それらの生体適合性および生分解性のために、広範に研究されてきた。ナノ粒子およびその他のナノ担体は、いくつかのクラスの薬剤、例えば抗癌薬、抗高血圧薬、免疫調節薬およびホルモン；ならびに高分子物質、例えば核酸、タンパク質、ペプチドおよび抗体のための潜在的担体として作用する。例えば、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．２１：３８７−４２２，２００４；Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ：Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １：２２−３０，２００５を参照。
【００６７】
薬学的組成物
「薬学的」という用語は、本明細書中で用いる場合、疾患の治癒、処置または防止に用いるために意図される化学物質を指し、これは、処方薬または一般用医薬品として米国食品医薬品局（またはその非Ｕ．Ｓ．等価機関）による承認プロセスを受ける。このような組成物の処方および投与のための技法に関する詳細は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）およびＮｉｅｌｌｏｕｄ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉ−Ｍｅｓｔｒｅｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ：２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に記載されている。
【００６８】
本発明の木庭のために、薬学的組成物は、種々の手段により、例えば経口的に、非経口的に、吸入噴霧により、局所的に、または直腸的に、製薬上許容可能な担体、アジュバントおよびビヒクルを含有する製剤中で投与され得る。非経口的という用語は、本明細書中で用いる場合、限定されないが、種々の注入技法を伴う皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、皮内、くも膜下腔内および硬膜外注射を包含する。動脈内および静脈内注射は、本明細書中で用いる場合、カテーテルを通した投与を含む。冠動脈内ステントおよび冠動脈内レザバーを介した投与も、意図される。経口という用語は、本明細書中で用いる場合、限定されないが、経口摂取、あるいは舌下または頬経路による送達を包含する。経口投与は、流体ドリンク、エネルギーバー、ならびにピル製剤を包含する。
【００６９】
薬学的組成物は、意図される投与方法に適した任意の形態であり得る。例えば経口的使用のために用いられる場合、錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、乳濁液、硬質または軟質カプセル、シロップまたはエリキシルが調製され得る。経口使用のために意図される組成物は、薬学的組成物の製造に関して当該技術分野で既知の方法に従って調製され得るし、このような組成物は、口に合う調製物を提供するために、１つ以上の作用物質、例えば甘味剤、風味剤、着色剤および防腐剤を含有し得る。錠剤の製造に適している非毒性の製薬上許容可能な賦形剤と混合して薬剤化合物を含有する錠剤は、許容可能である。これらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤、例えば炭酸カルシウムまたはナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはナトリウム；造粒および崩壊剤、例えばトウモロコシデンプンまたはアルギン酸；結合剤、例えばデンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム；および滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであり得る。錠剤は、被覆されないこともあり、あるいは既知の技法、例えば腸溶性コーティング、結腸溶解性コーティングまたはマイクロカプセル化により被覆されて、消化管における崩壊および吸着を遅延し、および／または長期間に亘る持続性作用を提供することもある。例えば、時間遅延物質、例えばグリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートは、単独で、または蝋とともに用いられ得る。
【００７０】
経口使用のための製剤は、硬質ゼラチンカプセルとしても提示され、この場合、薬剤化合物は、不活性固体希釈剤、例えばリン酸カルシウムまたはカオリンと混合され、あるいは軟質カプセルとして提示され、この場合、活性成分は水または油性媒質、例えば落花生油、液体パラフィンまたはオリーブ油と混合される。
【００７１】
薬学的組成物は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合して、水性懸濁液として処方され得る。このような賦形剤としては、沈澱防止剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアラビアゴム、ならびに分散または湿潤剤、例えば天然ホスファチド（例えば、レシチン）、アルキレンオキシドと脂肪酸の縮合物（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、エチレンオキシドと脂肪酸および無水ヘキシトール由来の部分エステル誘導体との縮合物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）が挙げられる。水性懸濁液は、１つ以上の防腐剤、例えばエチルまたはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシ−ベンゾエート、１つ以上の着色剤、１つ以上の風味剤、および１つ以上の甘味剤、例えばスクロースまたはサッカリンも含有し得る。
【００７２】
油性懸濁液は、植物油、例えば落花生油、オリーブ油、ゴマ油またはヤシ油、あるいは鉱油、例えば液体パラフィン中に活性成分を懸濁することにより処方され得る。経口懸濁液は、増粘剤、例えば蜜蝋、硬質パラフィンまたはセチルアルコールを含有し得る。口当たりの良い経口調製物を提供するために、甘味剤、例えば上記のもの、および風味剤が添加され得る。これらの組成物は、酸化防止剤、例えばアスコルビン酸の添加により保存され得る。
【００７３】
水の添加による水性懸濁液の調製に適した本発明の分散性粉末および顆粒は、分散または湿潤剤、沈澱防止剤、ならびに１つ以上の防腐剤と混合して活性成分を提供する。適切な分散または湿潤剤および沈澱防止剤は、上記で開示されたものにより例示される。付加的賦形剤、例えば甘味剤、風味剤および着色剤も存在し得る。
【００７４】
本発明の薬学的組成物は、水中油型エマルジョンの形態でもあり得る。油性相は、植物油、例えばオリーブ油または落花生油、鉱油、例えば液体パラフィン、あるいはこれらの混合物であり得る。適切な乳化剤としては、天然ゴム、例えばアラビアゴムおよびトラガカントゴム、天然ホスファチド、例えばダイズレシチン、脂肪酸由来のエステルまたは部分エステル、ならびに無水ヘキシトール、例えばソルビタンモノステアレート、およびこれらの部分エステルとエチレンオキシドとの縮合物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートが挙げられる。エマルジョンは、湿潤剤および風味剤も含有し得る。
【００７５】
シロップおよびエリキシルは、甘味剤、例えばグリセロール、ソルビトールまたはスクロースを伴って処方され得る。このような製剤は、粘滑剤、防腐剤、風味剤または着色剤も含有する。
【００７６】
本発明の薬学的組成物は、滅菌注射用調製物、例えば滅菌注射用水性または油性懸濁液の形態であり得る。この懸濁液は、上記された適切な分散または湿潤剤および沈澱防止剤を用いて、当該技術分野で既知の方法により処方され得る。滅菌注射用調製物は、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液でもあり得るし、あるいは凍結乾燥粉末としても調製され得る。用いられ得る許容可能なビヒクルおよび溶媒のうちの１つが、水、リンガー溶液および等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、滅菌不揮発性油は、溶媒または懸濁媒質として慣用的に用いられ得る。この目的のために、任意の刺激の少ない不揮発性油、例えば合成モノまたはジグリセリドが用いられ得る。さらに、脂肪酸、例えばオレイン酸は、同様に注射剤の調製に用いられ得る。
【００７７】
単一剤形を生成するために担体物質と組み合わされ得る活性成分の量は、処置される宿主および特定投与方式によって変わる。例えば、ヒトへの経口投与のために意図される持効性製剤は、総組成物の約５％から約９５％まで変化し得る適切な且つ便利な量の担体物質とともに調合される約２０〜５００ｍｇの活性物質を含有し得る。投与のために容易に測定可能な量を提供する薬学的組成物が調製されるのが好ましい。典型的には、全身投与されるべき有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇであり、多数の因子、例えば被験体（例えば哺乳動物、例えばヒト）の年齢および体重、処置を必要とする正確な症状およびその重症度、投与経路によって決まり、結局は担当医または獣医の判断である。しかしながら、任意の特定患者のための具体的用量は、当業者に十分に理解されるような種々の因子、例えば用いられる具体的化合物の活性、処置されている個体の年齢、体重、全身健康状態、性別および食餌；投与時間および経路；排出速度；以前に投与された他の薬剤；ならびに治療を受けている特定症状の重症度によって決まると、理解される。
【００７８】
上記のように、経口投与に適した本発明の製剤は、各々が予定量の活性成分を含有する分離単位、例えばカプセル、カシェー剤または錠剤として、粉末または顆粒として、水性または非水性液体中の溶液または懸濁液として、あるいは水中油型液体エマルジョンまたは油中水型液体エマルジョンとして提示され得る。薬学的組成物は、ボーラス剤、舐剤またはペーストとしても投与され得る。
【００７９】
錠剤は、任意に１つ以上の補助成分とともに、圧縮または成形により製造され得る。圧縮錠剤は、粉末または顆粒のような流動性形態で活性成分を適切な機械で圧縮することにより調製され、任意に、結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルエチルセルロース）、滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤または分散剤と混合され得る。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿潤される粉末化化合物の混合物を用いて、適切な機械で製造され得る。錠剤は、任意に、被覆されるかまたは刻み目を入れられ得るし、所望の放出プロフィルを提供するために、例えば種々の割合でヒドロキシプロピルメチルセルロースを用いて、その中の活性成分の遅延または制御放出を提供するよう処方され得る。錠剤は、任意に、腸溶性または結腸溶解性コーティングを伴って提供されて、胃以外の腸の部分における放出を提供する。これは、このような化合物が酸加水分解に感受性である場合、式１の化合物で特に有益である。
【００８０】
口における局所投与に適した製剤としては、風味基剤、通常はスクロースおよびアラビアゴムまたはトラガカントゴム中に活性成分を含むロゼンジ；不活性基剤、例えばゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアラビアゴム中に活性成分を含む香錠；ならびに適切な液体担体中に活性成分を含むマウスウォッシュが挙げられる。
【００８１】
直腸投与のための製剤は、例えばココアバターまたはサリチレートを含む適切な基剤を有する座薬として提示され得る。
【００８２】
膣投与に適した製剤は、活性成分のほかに、適切であることが当該技術分野で既知出るような担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、発泡体または噴霧製剤として提示され得る。
【００８３】
非経口投与に適した製剤としては、酸化防止剤、緩衝剤、静細菌剤、および製剤を意図されるレシピエントの血液と等張にさせる溶質を含有し得る水性および非水性等張滅菌注射溶液；ならびに沈澱防止剤および増粘剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁液が挙げられる。製剤は、単位用量または多用量密封容器、例えばアンプルおよびバイアル中で提示され得るし、使用直前に注射のために滅菌液体担体、例えば水の添加のみを必要とする冷凍−乾燥（凍結乾燥）条件で保存され得る。注射用溶液および懸濁液は、前記の種類の滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製され得る。
【００８４】
本明細書中で用いる場合、製薬上許容可能な塩としては、限定されないが、酢酸塩、ピリジン、アンモニウム、ピペラジン、ジエチルアミン、ニコチンアミド、蟻酸、尿素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、リチウム、桂皮酸、メチルアミノ、メタンスルホン酸、ピクリン酸、酒石酸、トリエチルアミノ、ジメチルアミノおよびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンが挙げられる。付加的な製薬上許容可能な塩は、当業者に既知である。
【００８５】
特定患者に関する有効量は、処置されている症状、患者の全体的健康、投与経路および用量、ならびに副作用の重症度といったような因子によって変わり得る。処置および診断の方法に関する指針が、利用可能である（例えば、Ｍａｙｎａｒｄ，  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ａ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ＳＯＰｓ  ｆｏｒ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ；Ｄｅｎｔ（２００１）Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｕｒｃｈ  Ｐｕｂｌ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ参照）。
【００８６】
有効量は１回用量で与えられ得るが、しかし１回用量に限定されない。したがって、投与は、薬学的組成物の、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０回またはそれ以上の投与であり得る。本発明の方法において薬学的組成物の１回より多い投与が存在する場合、投与は、１分、２分、３、４、５、６、７、８、９、１０分またはそれ以上の時間の間隔を約１時間、２時間、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、時間等の間隔を置かれ得る。時間に関連して、「約」という用語は、±３０分以内の任意の時間間隔を意味する。投与は、さらにまた、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日およびその組合せの時間間隔を置かれ得る。本発明は、等時間間隔を置かれる用量投与間隔に限定されないが、しかし非等間隔での用量投与を包含する。
【００８７】
例えば、１回／週、２回／週、３回／週、４回／週、５回／週、６回／週、７回／週、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、５週間毎に１回等の用量投与スケジュールが、本発明に関して利用可能である。用量投与スケジュールは、例えば１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月および１２ヶ月の総時間期間の用量投与を包含する。
【００８８】
上記の用量投与スケジュールのサイクルが提供される。サイクルは、例えば約７日毎、１４日毎、２１日毎、２８日毎、３５日毎、４２日毎、４９日毎、５６日毎、６３日毎、７０日毎等に反復され得る。非用量投与の間隔はサイクル間に生じ得るが、この場合、間隔は、例えば約７日、１４日、２１日、２８日、３５日、４２日、４９日、５６日、６３日、７０日等であり得る。この状況において、「約」という用語は、±１日、±２日、±３日、±４日、±５日、±６日または±７日を意味する。
【００８９】
付加的治療薬との同時投与のための方法は、当該技術分野で周知である（Ｈａｒｄｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ  ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｐｏｏｌｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ；Ｃｈａｂｎｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｏ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ）。
【００９０】
特に言及したように、本発明の組成物は、好ましくは、非経口または経腸送達のための薬学的組成物として処方される。動物への投与のための典型的薬物学的組成物は、製薬上許容可能なビヒクル、例えば水性溶液、非毒性賦形剤、例えば塩、防腐剤、緩衝剤等を含む。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｅａｓｔｏｎ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，ｐｐ  １４０５−１４１２  ａｎｄ  １４６１−１４８７（１９７５）；Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  ＸＩＶ，１４ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ（１９７５）を参照。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、および注射可能有機エステル、例えばエチルオレエートである。水性担体としては、水、アルコール／水溶液、生理食塩水溶液、非経口ビヒクル、例えば塩化ナトリウム、リンガーのデキストロース等が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、流体および栄養物補充物が挙げられる。防腐剤としては、抗菌剤、酸化防止剤、キレート剤および不活性ガスが挙げられる。薬学的組成物の種々の構成成分のｐＨおよび正確な濃度は、当業者により調整される。
【実施例】
【００９１】
以下の実施例は、本発明を例証するために役立つ。これらの実施例は、いかなる点でも、本発明の範囲を限定するよう意図されない。
【００９２】
実施例１．  一般的方法
溶液相オリゴヌクレオチド合成に適した無水溶媒および試薬を購入し、無水技法を用いて乾燥アルゴンまたは窒素下で取り扱った。アミダイトカップリング反応および環化を、乾燥アルゴンまたは窒素下で、無水アセトニトリルまたはピリジン中で実行した。乾燥ピリジン中での全ての反応のための出発物質を、ピリジンからの濃縮（３回）により乾燥した。分取シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを、ジクロロメタン中のメタノールの勾配を用いて、Ｆｌｕｋａ  ６０Ａ高純度等級またはＭｅｒｃｋ等級９３８５シリカを用いて実行した。Ｖａｒｉａｎ  Ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ  １０ミクロンＣ１８  ２５０×４．６ｍｍまたはＶａｒｉａｎ  ３ミクロンＣ１８  １００×４．６ｍｍカラム、ならびに１０ｍＭ  ＴＥＡＡおよびアセトニトリルの勾配を用いて、２５４ｎｍでモニタリングするＰｒｏＳｔａｒ  ３３０フォトダイオードアレイ検出器を有するＶａｒｉａｎ  ＰｒｏＳｔａｒ  ２１０  ＨＰＬＣ系上で、分析的ＨＰＬＣを実行した。５０ｍｌ／分の流量で、１０ｍＭＴＥＡＡおよびアセトニトリルの勾配を用いて、Ｖａｒｉａｎ  Ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ  ６０−８  Ｃ−１８  ４１．６×２５０ｍｍカラム上で、２５４ｎｍでモニタリングするＳＰＤ−２０Ａ  ＵＶ／Ｖｉｓ検出器を装備したＳｈｉｍａｄｚｕ分取ＬＣ２０−ＡＰ  ＨＰＬＣ系上で、分取ＨＰＬＣを実行した。Ｃ−１８  Ｓｅｐ−Ｐａｋ（Ｗａｔｅｒｓ）を用いる固相抽出を、３％（ｗｔ／ｗｔ）の負荷で実行した。Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ２０Ｄ分析的ＨＰＬＣを用いて、ＰＤＡ、ＭＳおよびＥＬＳＤ検出を有する単一四重極型Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ２０１０ＥＶ機器で、ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ／ＡＰＣＩ）を得た。Ｈｉｇｈ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ＦＴ−ＩＣＲ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃ  ｗａｓ  ｏｂｔａｉｎｅｄ  ｆｒｏｍ  ｂｏｔｈ  エール大学のＷＭ  Ｋｅｃｋ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｎｅｗ  Ｈａｖｅｎ，ＣＴ）およびＱＢ３／Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔ  Ｌａｂ（ＵＣ  Ｂｅｒｋｅｌｅｙ）の両方から、高分解能ＦＴ−ＩＣＲ質量分析を得た。
【００９３】
１Ｈ、３１Ｐ、１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹ（２Ｄ  ＮＭＲ相関分光法）、１Ｈ−３１Ｐ  ＨＭＢＣ（異核多結合相関分光法）スペクトルを、１Ｈに関して５００ＭＨｚおよび３１Ｐに関して２０２ＭＨｚで操作するＶａｒｉａｎ  ＩＮＯＶＡ−５００  ＮＭＲ分光計で、４５℃で、１０ｕＬ  Ｄ２Ｏを有するｄ６−ＤＭＳＯ（Ｄ２Ｏ添加後１６時間遅延）で獲得した。その結果生じたＦＩＤをＰＣに移し、ＮＵＴＳ  ＮＭＲプロセシングソフトウェア（Ａｃｏｒｎ  ＮＭＲ  Ｉｎｃ）を用いて処理した。化学シフトを、１Ｈに関して２．５０ｐｐｍのＤＭＳＯ溶媒に対して参照した。ＮＭＲスペクトル１の参照に関するＩＵＰＡＣ推奨に従って、３１Ｐ化学シフトを、「統一スケール」を用いて、０ｐｐｍの絶対１Ｈ頻度に対して参照した。１Ｈおよび３１Ｐスペクトルのいくつかは、１Ｈに関しては４００ＭＨｚおよび３１Ｐに関しては１６２ＭＨｚで操作するＪＥＯＬ  ＥＣＸ−４００  ＮＭＲ分光計で獲得した。勾配ＣＯＳＹスペクトルは、１Ｈに関しては５００ＭＨｚおよび３１Ｐに関しては２０２ＭＨｚで操作するＶａｒｉａｎ  ＩＮＯＶＡ−５００  ＮＭＲ分光計で４５℃で獲得した。その結果生じたＦＩＤをＰＣに移し、ＮＵＴＳ  ＮＭＲプロセシングソフトウェア（Ａｃｏｒｎ  ＮＭＲ  Ｉｎｃ）を用いて処理した。化学シフトは、１Ｈに関しては２．５０ｐｐｍのＤＭＳＯ溶媒に対して参照した。ＮＭＲスペクトル１の参照に関するＩＵＰＡＣ推奨に従って、３１Ｐ化学シフトを、「統一スケール」を用いて、０ｐｐｍの絶対１Ｈ頻度に対して参照した。直接寸法での２０４８データ点および間接寸法での２５６時点を用いて、絶対値モードで勾配ＣＯＳＹスペクトルを獲得した。サインベル二乗関数を用いて、両寸法をアポダイズした。間接寸法にゼロを入れて、２０４８×２０４８ポイントの最終マトリクスサイズおよび３．９１Ｈｚ／両データ点の分解能を得た。
【００９４】
ホスホジエステル結合での位置化学の割り当て：１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹを１Ｈ−３１Ｐ  ＨＭＢＣと組み合わせる実験を用いて、ホスホジエステル結合の位置化学が２’，５’−３’，５’であるという直接的証拠を提供した（例えば図３Ｃおよび３Ｄ参照）。
【００９５】
略語および頭字語。  グアニン＝Ｇ。イソブチリルグアニン＝Ｇｉｂ。４，４−ジメトキシトリチル＝ＤＭＴ。ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３＝ＣＥＯ。ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル＝ＴＢＳ。アデニン＝Ａ。ベンゾイルアデニン＝ＡＢｚ。２’−Ｏ−ミリストイル−環状−［Ｇ（２’，５’）ｐＧ（３’，５’）ｐ］＝Ｃ１４−ＭＬ−ＣＤＧ＝１０（ＴＥＡ塩）。２５４ｎｍでのＵＶ検出を用いてＣ１８逆相ＨＰＬＣ分析により示されるように、ＣＤＮ生成物はすべて、純度＞９５％であった（構造８の純度に関しては、図２Ｅ参照）。
【００９６】
実施例２．    ２’−Ｏ−プロパルギル−環状−Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ（２’−Ｏ−プロパルギル−ＭＬ−ＣＤＡ，構造８）、図２）の合成
１）３．の調製
７．５ｍｌのアセトニトリル中の１．７ｇ（１．７２ｍｍｏｌ）のＮ６−ベンゾイル−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−２’−Ｏ−［（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノフィニル］アデノシン（１）の溶液に、０．０５４ｍｌ（３ｍｍｏｌｅ）の水および０．３５ｇ（１．８ｍｍｏｌｅ）のピリジニウムトリフルオロアセテートを添加した。室温で５分間撹拌後、７．５ｍｌのｔｅｒｔ−ブチルアミンを添加し、反応を室温で１５分間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、２を発泡体として得て、これを次にアセトニトリル（３×１５ｍｌ）と共蒸発させて、次いで、１８ｍｌのジクロロメタン中に溶解した。この溶液に、水（０．２７ｍｌ、１５ｍｍｏｌｅ）およびジクロロメタン中の６％（ｖ／ｖ）ジクロロ酢酸（１３．２ｍｍｏｌｅ）１８ｍｌを添加した。室温で１０分後、ピリジン（２．１ｍｌ、２６ｍｍｏｌｅ）の添加により反応をクエンチし、油に濃縮し、これを１２ｍｌの無水アセトニトリルで３回共蒸発により乾燥して、最後に〜４ｍｌの容積で３を残す。
【００９７】
２）４のドライ溶液の調製
Ｎ６−ベンゾイル−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−Ｏ−プロパルギル−３’−Ｏ−［（２−シアノエチル）−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノフィニル］アデノシン（４、２ｇ、２．２ｍｍｏｌｅ）を、２５ｍｌの無水アセトニトリル中に溶解し、２５ｍｌの無水アセトニトリルで３回共蒸発により乾燥して、最後に〜６ｍｌを残した。１０個の３Å分子篩を添加し、ドライ溶液を使用するまでアルゴン下で保存した。
【００９８】
３）２’，５’−線状二量体５の調製
６ｍｌのアセトニトリル中の共沸乾燥４（２ｇ、２．２ｍｍｏｌｅ）を、注射器で、〜４ｍｌの無水アセトニトリル中の３（１．７２ｍｍｏｌｅ）の溶液に添加した。室温で５分間撹拌後、デカン中の０．８２ｍｌ（４．５ｍｍｏｌｅ）の５．５Ｍ  ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシドを添加し、反応物を室温で３０分間撹拌した。反応を氷浴中で冷却し、０．７５ｍｌの水中の０．３８ｇのＮａＨＳＯ３を添加し、室温で５分間撹拌した。反応物を濃縮し、残留油を２４ｍｌのジクロロメタン中に溶解した。水（０．２７ｍｌ、１５ｍｍｏｌｅ）およびジクロロメタン中の２４ｍｌの６％（ｖ／ｖ）ジクロロ酢酸（１７．４  ｍｍｏｌｅ）を添加し、反応物を室温で１０分間撹拌した。１５ｍｌのピリジンを添加してジクロロ酢酸をクエンチし、これを次に、濃縮して〜４ｍｌとした。
【００９９】
４）完全保護化プロパルギル環状ジヌクレオチド６を得るための５の環化および酸化
５を４５ｍｌのドライピリジン中に溶解し、これを濃縮して容積を約３０ｍｌとした。２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３，２−ジオキサホスホリナン−２−オキシド（ＤＭＯＣＰ、１ｇ、５．２ｍｍｏｌｅ）を次に添加し、反応物を室温で１０分間撹拌した。１ｍｌの水を添加し、その直後に、Ｉ２（０．５ｇ、２ｍｍｏｌｅ）を添加して、反応物を室温で５分間撹拌した。次いで、反応混合物を、０．３ｇのＮａＨＳＯ３を含有する水２１０ｍｌ中に注ぎ入れ、室温で５分間撹拌した。６ｇのＮａＨＣＯ３を徐々に添加し、室温で５分間撹拌して、次に、分離漏斗に注ぎ入れ、２５０ｍｌの１：１  酢酸エチル：ジエチルエーテルで抽出した。水性層を再び６０ｍｌの１：１  酢酸エチル：ジエチルエーテルで抽出した。有機層を併合し、減圧下で濃縮して、完全保護化プロパルギル環状ジヌクレオチド６を含有する油約５．６ｇを得た。
【０１００】
６）粗製７への完全保護化プロパルギル環状ジヌクレオチド６の脱保護
５．６ｇの粗製６を、厚壁ガラス圧力管に移した。３０ｍｌのメタノールおよび３０ｍｌの濃縮水性アンモニアを添加し、５５℃で４時間、油浴中で撹拌しながら管を加熱し、この時点で分析的ＨＰＬＣは、脱保護が完了したことを示した。反応混合物をほぼ周囲温度に冷却し、アルゴンガスを３０分間散布して、次に大型丸底フラスコに移した。揮発性物質のほとんどを減圧下で除去して、４．７ｇの残渣を得て、これを２０ｍｌの１：１（ｖ／ｖ）ジクロロメタン：ヘキサンに対して粉砕した。あらゆる残留溶媒を減圧下で除去して、７を含有する固体４．５ｇを得た。
【０１０１】
７）純７を得るための粗製７の分取ＨＰＬＣ精製
７を含有する粗製固体を２５ｍｌのＣＨ３ＣＮ／水（１：１）中に溶解した。０．４５ミクロンＰＴＦＥ濾過後、４〜５ｍｌ試料部分をＣ−１８  Ｄｙｎａｍａｘカラム（４０×２５０ｍｍ）に適用した。アセトニトリルおよび１０ｍＭ水性トリエチルアンモニウムアセテートの勾配を用いて溶離を実施した（５０ｍｌ／分流量で２０分に亘って２０％〜５０％ＣＨ３ＣＮ）。純７を含有する分取ＨＰＬＣ実行からの分画をプールし、蒸発させて、ＣＨ３ＣＮおよび水の大半を除去し、ＣＨ３ＣＮと数回共蒸発させて、５５ｍｇの純７を得た。
【０１０２】
８）ビス−トリエチルアンモニウム塩として純８を得るためのトリエチルアミントリヒドロフルオリドによる７のＴＢＳ基の脱保護、 ＴＥＡＢでの中性化、Ｃ−ｌ８  Ｓｅｐ−Ｐａｋによる固相抽出および凍結乾燥
５５ｍｇの７に、１．０ｍｌの正味トリエチルアミントリヒドロフルオリドを添加した。混合物を、室温で約３時間、撹拌した。次に混合物を、５０℃でさらに２時間、油浴に移し、この時点で、分析的ＨＰＬＣは反応の完了を確証した。５ｍｌの冷却撹拌１Ｍトリエチルアンモニウムビカルボネート中に滴下することにより、試料を中和した。中性／わずかに塩基性（〜ｐＨ８）状態が達成されたことをｐＨ紙が示すまで、約１〜２ｍｌのＴＥＡを撹拌冷却溶液に滴下した。中和溶液を、Ｗａｔｅｒｓ  Ｃ−１８  Ｓｅｐ−Ｐａｋ上で脱塩し、生成物をＣＨ３ＣＮ／１０ｍＭ水性トリエチルアンモニウムアセテート（１５：８５）で溶離した。ＣＨ３ＣＮを減圧下で蒸発させて、溶液を凍結させ、凍結乾燥した。さらにもう１回、水から凍結乾燥して、９ｍｇ（１３μｍｏｌｅ）の２’−Ｏ−プロパルギル−ＭＬ−ＣＤＡ（８）をビス−トリエチルアンモニウム塩として得た。１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，４５℃，ＤＭＳＯ−Ｄ６＋１５μＬのＤ２Ｏ）δ８．６８（ｓ，１Ｈ），８．３１（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），６．１０（ｄ，Ｊ＝８．０，１Ｈ），５．９９（ｄ，Ｊ＝６．０，１Ｈ），５．０６−５．０４（ｍ，１Ｈ），４．９８−４．９４（ｍ，１Ｈ），４．５３（ｑｔ，Ｊ＝１６．０，２．５，２Ｈ），４．３９（ｄ，Ｊ＝４．０，１Ｈ），４．２７−４．２６（ｍ，１Ｈ），４．１４−４．１３（ｍ，１Ｈ），４．０５−３．９０（ｍ，３Ｈ），３．７４（ｄ，Ｊ＝１２．０，１Ｈ），３．２１（ｔ，Ｊ＝２．５，１Ｈ），３．０３（ｑ，Ｊ＝７．０，１２Ｈ），１．１４（ｔ，Ｊ＝７．５，１９Ｈ）；３１ＰＮＭＲ（２００ＭＨｚ，４５℃，ＤＭＳＯ−Ｄ６＋１５μＬのＤ２Ｏ）δ  −１．４８，−１．８２（図３Ａ−３Ｄ）；ＨＲＭＳ（ＦＴ−ＩＣＲ）ｍ／ｚ：［Ｍ−Ｈ］−  Ｃ２３Ｈ２５Ｎ１０Ｏ１２Ｐ２：計算値６９５．１１３４；実測値６９５．１１１８．
【０１０３】
図４〜６は、本明細書中に記載されるモノと類似の方法により製造され得る代替的か合を示す。
【０１０４】
実施例３．  ＳＴＩＮＧ依存性応答の抑制
アンタゴニスト２’−Ｏ−プロパルギル−環状−［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ−プロパルギル−ＣＤＡ）がヒト細胞におけるＲｐ，Ｒｐジチオ環状［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ  ＲＲ−ＣＤＡ）によるＩ型インターフェロン誘導のＳＴＩＮＧ−依存性誘導を抑制し得るか否かを評価するために、４×１０５個のＴＨＰ１−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＳＧ細胞（５つのＩＦＮ刺激化応答素子からなるプロモーターの制御下でアルカリホスファターゼを発現するＩＲＦ誘導性受容体遺伝子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でトランスフェクトされたヒト単球細胞株）を、１０μＭの２’−Ｏ−プロパルギル−環状−［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ−プロパルギル−ＣＤＡ）を用いた３０分の予備インキュベーション後に、５０μＭのＲｐ，Ｒｐジチオ環状［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ  ＲＲ−ＣＤＡ）、１０μＭまたは５０μＭのアンタゴニスト２’−Ｏ−プロパルギル−環状−［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ−プロパルギル−ＣＤＡ）、ともに５０μＭのＲｐ，Ｒｐジチオ環状［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ  ＲＲ−ＣＤＡ）および１０μＭまたは５０μＭの２’−Ｏ−プロパルギル−環状−［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ−プロパルギル−ＣＤＡ）、または５０μＭのＲｐ，Ｒｐジチオ環状［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ  ＲＲ−ＣＤＡ）とともにインキュベートした。３０分後、細胞を洗浄し、１０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ培地中で９６−ウェル皿中でプレート化して、５％ＣＯ２を用いて３７℃でインキュベートした。各試料からの細胞培養上清を１６時間インキュベーション後に収集し、２０μＬの細胞培養上清を１８０μＬのＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ試薬（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）に添加し、５分間インキュベートして、Ｉ型インターフェロンタンパク質レベルを評価した。吸光度６５５ｎｍでの読取りを、Ｖｅｒｓａ  Ｍａｘ動力学的分光分析器（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）で測定した。
【０１０５】
図７Ａに示すように、１０μＭまたは５０μＭのアンタゴニスト２’−Ｏ−プロパルギル−環状−［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ−プロパルギル−ＣＤＡ）の、５０μＭのＲｐ，Ｒｐジチオ環状［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ  ＲＲ−ＣＤＡ）を伴う添加は、用量依存的方法で、Ｒｐ，Ｒｐジチオ環状［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ  ＲＲ−ＣＤＡ）によりＩ型ＩＦＮの誘導を有意に抑制した。図７Ｂは、１０μＭの２’−Ｏ−プロパルギル−環状−［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ−プロパルギル−ＣＤＡ）を伴う予備インキュベーションが、５０μＭのＲｐ，Ｒｐジチオ環状［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ  ＲＲ−ＣＤＡ）のその後の添加によりＩ型インターフェロンの誘導を抑制する、ということを示している。環状ジ−ヌクレオチド、例えばＲｐ，Ｒｐジチオ環状［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ  ＲＲ−ＣＤＡ）がＳＴＩＮＧを介してＩ型ＩＦＮシグナル伝達を誘導することは既知である。したがって、２’−Ｏ−プロパルギル−環状−［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ−プロパルギル−ＣＤＡ）によるＲｐ，Ｒｐジチオ環状［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ  ＲＲ−ＣＤＡ）−誘導性Ｉ型ＩＦＮ産生の低減は、２’−Ｏ−プロパルギル−環状−［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ−プロパルギル−ＣＤＡ）がヒトＳＴＩＮＧのアンタゴニストである、ということを実証する。
【０１０６】
アポおよび環状ジヌクレオチド結合型のＳＴＩＮＧの構造的研究は、ＳＴＩＮＧが、二量体界面により形成されるポケットで結合される環状ジヌクレオチドとの遊離および結合状態で対称的Ｖ形状二量体を形成する、ということを示した（Ｇａｏ  Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）．Ｃｅｌｌ  １５４，７４８−７６２、およびＢｕｒｄｅｔｔｅ  ａｎｄ  Ｖａｎｃｅ，（２０１３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４，１９−２６で再検討）。ＳＴＩＮＧは、リガンド結合時に、アポ型におけるより大きな「開放」立体配座から、リガンド結合の間中生じる四本鎖逆平行βシートを有する「閉鎖」立体配座への大きな立体配座スイッチを受ける。
【０１０７】
ここで示される結果は、２’−Ｏ−プロパルギル−環状−［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ−プロパルギル−ＣＤＡ）が、２つのＳＴＩＮＧ二量体の界面により形成される同一結合ポケットで結合し得る、ということを実証する。ポケット内での２’−Ｏ−プロパルギル−環状−［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ−プロパルギル−ＣＤＡ）の結合は、活性化している環状ジヌクレオチドの結合を防止する。ＳＴＩＮＧ結合ポケット中に存在するアンタゴニスト分子から伸びている２’−Ｏ−プロパルギル−環状−［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ−プロパルギル−ＣＤＡ）上のプロパルギル基は、リガンド結合ポケット上の逆平行βシート蓋の形成を立体的に遮断し、それにより、ＳＴＩＮＧがシグナル伝達コンピテント立体配座に変異しないようにする。ひとまとめにして、これらの結果は、２’−Ｏ−プロパルギル−環状−［Ａ（２’，５’）ｐＡ（３’，５’）ｐ］（ＭＬ−プロパルギル−ＣＤＡ）がヒトＳＴＩＮＧの活性を抑制することができる、ということを示している。
【０１０８】
本発明の目的を実行し、記述される目標および利点ならびにそこに固有のものを獲得するために本発明が良好に適合される、と当業者は容易に理解する。本明細書中で提供される実施例は、好ましい実施形態を代表するものであり、例示であって、本発明の範囲を限定するものではない。
【０１０９】
本発明は、その適用において、構築物の詳細に、ならびに以下の説明に記述され、図面に示される構成成分の配置に限定されない、と理解されるべきである。本発明は、記載されるもののほかに実施形態を有し得るし、種々の方法で実施され、実行され得る。さらにまた、本明細書中で用いられる表現法および用語、ならびに要約は、説明という目的のためであり、限定的であるとみなされるべきでない、と理解されるべきである。
【０１１０】
このようなものとして、本開示が基礎にしている概念は、本発明のいくつかの目的を実行するための他の構造、方法およびシステムの設計のための基礎として容易に利用され得る、と当業者は理解する。したがって、本発明の精神および範囲を逸脱しない限り、特許請求の範囲はこのような等価の構築物を含むとみなされる、ということは重要である。
【０１１１】
本発明を記載し、当業者がそれを製造し、使用するのに十分詳細に例示してきたが、本発明の精神および範囲を逸脱しない限り、種々の変更、修正および改良がなされ得ることは明らかである。本明細書中で提供される実施例は好ましい実施形態を代表するものであって、本発明の範囲を限定するものではない。そこにおける修正およびその他の使用が、当業者に生じるであろう。これらの修正は本発明の精神の内に包含され、特許請求の範囲に定義されている。
【０１１２】
本発明の範囲および精神を逸脱しない限り、本明細書中に開示される本発明に対して種々の置換および修正がなされ得ることは、当業者に容易に明らかになる。
【０１１３】
本明細書中に記述される特許および出版物はすべて、本発明が関する当該技術分野の当業者のレベルを示している。すべての特許および出版物は、各々個々の出版物が具体的に独立して参照により援用されることを示された場合と同程度に、その記載内容が参照により本明細書中で援用される。
【０１１４】
本明細書中に例証的に記載される本発明は、本明細書中に具体的に開示されない任意の単数または複数の素子、単数または複数の制限の非存在下で、適切に実行され得る。したがって、例えば本明細書中の各場合に、「〜を含む」、「本質的に〜から成る」および「〜から成る」という用語のいずれかは、他の２つの用語のいずれかと取り替えられ得る。用いられてきた用語および表現は、説明の用語として用いられ、限定するものではなく、示され、このような用語および表現の使用に際して、記載される特徴またはその部分の任意の等価物を除外するということは意図されないが、しかし種々の修正が本発明の特許請求の範囲内で可能であると認識される。したがって、好ましい実施形態および任意の特徴により本発明を具体的に開示してきたが、開示された本明細書中の概念の修正および変更は、当業者により用いられ得るし、このような修正および変更は、添付の特許請求の範囲により定義されるような本発明の範囲内であるとみなされる、と理解されるべきである。
【０１１５】
その他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内で記述される。
【図１】
0006400082.tif 000009
【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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