(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式（Ｉ）：
【化１】
0006410351.tif 000014
（式中、Ｘ１は放射性核種を表す。）
又は次式（II）：
【化２】
0006410351.tif 000015
（式中、Ｘ２は放射性核種を表し、Ｙ−は陰イオンを表す。）
で示される化合物を含有する代謝機能を測定するための検査薬であって、胆汁排泄された前記化合物の放射性代謝物の量を測定することによって薬物代謝機能を測定するための検査薬。
【請求項２】
次式（Ｉ）：
【化３】
0006410351.tif 000016
（式中、Ｘ１は放射性核種を表す。）
又は次式（II）：
【化４】
0006410351.tif 000017
（式中、Ｘ２は放射性核種を表し、Ｙ−は陰イオンを表す。）
で示される化合物を含有する代謝機能を測定するための検査薬。
【請求項３】
前記式（Ｉ）又は（II）において、Ｘ１又はＸ２で表される放射性核種が１２３−ヨード（１２３Ｉ）、１２４−ヨード（１２４Ｉ）、１２５−ヨード（１２５Ｉ）、１３１−ヨード（１３１Ｉ）、１１−炭素（１１Ｃ）、１３−窒素（１３Ｎ）、１５−酸素（１５Ｏ）、１８−フッ素（１８Ｆ）又は７６−臭素（７６Ｂｒ）である請求項１又は２記載の検査薬。
【請求項４】
次式（Ｉ）：
【化５】
0006410351.tif 000018
（式中、Ｘ１は放射性核種を表す。）
又は次式（II）：
【化６】
0006410351.tif 000019
（式中、Ｘ２は放射性核種を表し、Ｙ−は陰イオンを表す。）
で示される化合物。
【請求項５】
前記式（Ｉ）又は（II）において、Ｘ１又はＸ２で表される放射性核種が１２３−ヨード（１２３Ｉ）、１２４−ヨード（１２４Ｉ）、１２５−ヨード（１２５Ｉ）、１３１−ヨード（１３１Ｉ）、１１−炭素（１１Ｃ）、１３−窒素（１３Ｎ）、１５−酸素（１５Ｏ）、１８−フッ素（１８Ｆ）又は７６−臭素（７６Ｂｒ）である請求項４記載の化合物。
【請求項６】
次式（III）：
【化７】
0006410351.tif 000020
（式中、Ｘ２は放射性核種を表し、Ｙは陰イオンとして脱離しうる基を表す。）
で示される化合物をメタキジンと反応させることを含む、
次式（II）：
【化８】
0006410351.tif 000021
（式中、Ｘ２は前記と同義であり、Ｙ−は陰イオンを表す。）
で示される化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬物代謝機能を測定するための検査薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
薬物は体内に摂取された後、大部分が薬物代謝酵素によって別の化合物に代謝される。この薬物代謝酵素の活性には個人差があることが知られており、活性の高低によって代謝物の量が変化する。そのため、薬剤の投与量が同じであっても、薬効や副作用の発現には個体差が生じる。この薬物代謝酵素活性の個人差を測定することで、必要な薬効を得るとともに副作用を最小限に抑える個人に合わせた薬剤の投与量を決定することができると考えられる。また薬物代謝酵素活性の測定を基にして投与量を決定することは、昨今重要視されている根拠に基づく個別化医療(evidence-based personalized medicine)の観点からも、非常に有効であると思われる。
【０００３】
特許文献１には、生体内に存在する酵素の作用により組織から排出されやすい放射性代謝物、蛍光性代謝物、常磁性代謝物又は磁気共鳴性代謝物に変化する化合物を含有する、分子イメージングにより代謝機能を測定するための検査薬が開示されており、シトクロムＰ４５０（ＣＹＰ）の各分子種とその基質となりうる化合物との具体例として、多数の具体例とともに、ＣＹＰ１Ａ２とアセトアミノフェンの組み合わせが挙げられているが、アセトアミノフェンの具体的な標識化合物は示されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１３−１８０９５９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、薬物代謝酵素活性をダイナミック撮像により判定できる放射性薬剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、（ｉ）肝臓で代謝される、（ii）代謝物のみが胆汁排泄される、（iii）代謝物が放射性であるという条件を満たす検査薬があれば薬物代謝酵素の機能をイメージングで捉えることができると考え、各種化合物を放射性核種で標識し、体内分布の検討と放射性代謝物の分析を行った結果、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明の要旨は以下のとおりである。
（１）次式（Ｉ）：
【化１】
0006410351.tif 000002
（式中、Ｘ１は放射性核種又は放射性核種標識用キレート部位を表す。）
又は次式（II）：
【化２】
0006410351.tif 000003
（式中、Ｘ２は放射性核種又は放射性核種標識用キレート部位を表し、Ｙ−は陰イオンを表す。）
で示される化合物を含有する代謝機能を測定するための検査薬であって、胆汁排泄された前記化合物の放射性代謝物の量を測定することによって薬物代謝機能を測定するための検査薬。
【０００８】
（２）次式（Ｉ）：
【化３】
0006410351.tif 000004
（式中、Ｘ１は放射性核種又は放射性核種標識用キレート部位を表す。）
又は次式（II）：
【化４】
0006410351.tif 000005
（式中、Ｘ２は放射性核種又は放射性核種標識用キレート部位を表し、Ｙ−は陰イオンを表す。）
で示される化合物を含有する代謝機能を測定するための検査薬。
（３）前記式（Ｉ）又は（II）において、Ｘ１又はＸ２で表される放射性核種が１２３−ヨード（１２３Ｉ）、１２４−ヨード（１２４Ｉ）、１２５−ヨード（１２５Ｉ）、１３１−ヨード（１３１Ｉ）、１１−炭素（１１Ｃ）、１３−窒素（１３Ｎ）、１５−酸素（１５Ｏ）、１８−フッ素（１８Ｆ）又は７６−臭素（７６Ｂｒ）である前記（１）又は（２）に記載の検査薬。
（４）次式（Ｉ）：
【化５】
0006410351.tif 000006
（式中、Ｘ１は放射性核種又は放射性核種標識用キレート部位を表す。）
又は次式（II）：
【化６】
0006410351.tif 000007
（式中、Ｘ２は放射性核種又は放射性核種標識用キレート部位を表し、Ｙ−は陰イオンを表す。）
で示される化合物。
（５）前記式（Ｉ）又は（II）において、Ｘ１又はＸ２で表される放射性核種が１２３−ヨード（１２３Ｉ）、１２４−ヨード（１２４Ｉ）、１２５−ヨード（１２５Ｉ）、１３１−ヨード（１３１Ｉ）、１１−炭素（１１Ｃ）、１３−窒素（１３Ｎ）、１５−酸素（１５Ｏ）、１８−フッ素（１８Ｆ）又は７６−臭素（７６Ｂｒ）である前記（４）に記載の化合物。
（６）次式（III）：
【化７】
0006410351.tif 000008
（式中、Ｘ２は放射性核種又は放射性核種標識用キレート部位を表し、Ｙは陰イオンとして脱離しうる基を表す。）
で示される化合物をメタキジンと反応させることを含む、
次式（II）：
【化８】
0006410351.tif 000009
（式中、Ｘ２は前記と同義であり、Ｙ−は陰イオンを表す。）
で示される化合物の製造方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、薬物代謝酵素活性をダイナミック撮像により判定できる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は１２５Ｉ−２−ヨードアセトアミノフェン投与マウスの各組織の重量集積率の経時変化を示す図である。
【図２】図２は胆汁中放射能のＴＬＣ分析の結果を示す図である。
【図３】図３は１２５Ｉ−２−ヨードアセトアミノフェン（１２５Ｉ−ＩＡＰ）のＴＬＣ分析の結果を示す図である。
【図４】図４は１２５Ｉ−２−ヨードアセトアミノフェン（１２５Ｉ−ＩＡＰ）と１２５Ｉ−３−ヨード−Ｌ−チロシン（１２５Ｉ−Ｌ−ＭＩＴ）における胃の重量集積率の経時変化を示す図である。
【図５】図５はメキタジンの１２５Ｉ標識体（１２５Ｉ−ＢＯＡ６）投与マウスの各組織の重量集積率の経時変化を示す図である。
【図６】図６はマウス肝臓中放射能(in vitro)のＴＬＣ分析の結果を示す図である。
【図７】図７はマウス肝臓中放射能(in vitro)の時間経過ＴＬＣ分析の結果を示す図である。
【図８】図８はメキタジンの１２５Ｉ標識体（１２５Ｉ−ＢＯＡ６）を投与したマウスの胆汁と、生理食塩水を投与したマウスの胆汁に１２５Ｉ−ＮａＩ、メキタジンの１２５Ｉ標識体（１２５Ｉ−ＢＯＡ６）を加えたもののＴＬＣ分析の結果を示す図である（（Ａ）胆汁＋１２５Ｉ−ＮａＩ＋１２５Ｉ−ＢＯＡ６、（Ｂ）１２５Ｉ−ＢＯＡ６を投与した胆汁）。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明に用いる前記式（Ｉ）で示される化合物は、薬物代謝酵素による代謝経路が報告されている解熱鎮痛剤アセトアミノフェン（４−（アセチルアミノ）フェノール）（Lee SS, Joroen JT, Thierry P, et al: Role of CYP2E1 in the hepatotoxicity of acetaminophen. J. Biol. Chem. 271: 12063-12067, 1996）の２位を放射性核種で標識したものである。
【００１２】
本発明に用いる前記式（II）で示される化合物は、ＣＹＰ２Ｄ６が代謝酵素となるヒスタミンＨ１拮抗薬メキタジンのアザビシクロ［２．２．２］オクタン環の窒素原子に放射性核種を導入したものである。
【００１３】
前記式（Ｉ）又は（II）で示される化合物は、いずれも（ｉ）肝臓で代謝される、（ii）代謝物のみが胆汁排泄される、（iii）代謝物が放射性であるという条件を満たすものである。
したがって、代謝機能をイメージングで捉えることができる。
【００１４】
前記式（Ｉ）、（II）又は（III）において、Ｘ１又はＸ２で表される放射性核種としては、例えばトリチウム（３Ｈ）、１１−炭素（１１Ｃ）、１４−炭素（１４Ｃ）、１３−窒素（１３Ｎ）、１５−酸素（１５Ｏ）、１８−フッ素（１８Ｆ）、３２−リン（３２Ｐ）、５９−鉄（５９Ｆｅ）、６２−銅（６２Ｃｕ）、６４−銅（６４Ｃｕ）、６７−銅（６７Ｃｕ）、６７−ガリウム（６７Ｇａ）、７６−臭素（７６Ｂｒ）、８１ｍ−クリプトン（８１ｍＫｒ）、８１−ルビジウム（８１Ｒｂ）、８９−ストロンチム（８９Ｓｒ）、９０−イットリウム（９０Ｙ）、９９ｍ−テクネチウム（９９ｍＴｃ）、１１１−インジウム（１１１Ｉｎ）、１２３−ヨード（１２３Ｉ）、１２４−ヨード（１２４Ｉ）、１２５−ヨード（１２５Ｉ）、１３１−ヨード（１３１Ｉ）、１３３−キセノン（１３３Ｘｅ）、１１７ｍ−スズ（１１７ｍＳｎ）、１５３−サマリウム（１５３Ｓｍ）、１８６−レニウム（１８６Ｒｅ）、１８８−レニウム（１８８Ｒｅ）、２０１−タリウム（２０１Ｔｌ）、２１２−ビスマス（２１２Ｂｉ）、２１３−ビスマス（２１３Ｂｉ）及び２１１−アスタチン（２１１Ａｔ）、好ましくは１８−フッ素（１８Ｆ）、７６−臭素（７６Ｂｒ）、１２３−ヨード（１２３Ｉ）、１２４−ヨード（１２４Ｉ）、１２５−ヨード（１２５Ｉ）及び１３１−ヨード（１３１Ｉ）が挙げられる。
【００１５】
前記式（II）において、Ｙ−で表される陰イオンとしては、例えば臭化物イオン、塩化物イオン、ヨウ化物イオン、フッ化物イオン、メタンスルホナートイオン、パラトルエンスルホナートイオン、トリフルオロメタンスルホナートイオン、四フッ化ホウ酸イオン、好ましくは臭化物イオンが挙げられる。
【００１６】
前記式（III）において、Ｙで表される陰イオンとして脱離しうる基は、前記Ｙ−で表される陰イオンに対応する基であり、例えば臭素原子、塩素原子、ヨウ素原子、フッ素原子、メシル基、トシル基、好ましくは臭素原子が挙げられる。
【００１７】
本発明に用いる前記式（Ｉ）で示される化合物は、アセトアミノフェンに放射性核種を導入することにより製造することができる。
【００１８】
アセトアミノフェンへの放射性核種の導入法としては一般的な方法を用いることができ、例えば、放射性核種が１２３−ヨード（１２３Ｉ）、１２４−ヨード（１２４Ｉ）、１２５−ヨード（１２５Ｉ）又は１３１−ヨード（１３１Ｉ）である場合は、クロラミンＴ法を用いることができる。
【００１９】
一方、本発明に用いる前記式（II）で示される化合物の場合、酸化条件下でのトリアルキルスズ化合物への直接的１２５−ヨード（１２５Ｉ）等の導入により目的物を得ることができるが、それとともにメキタジンが酸化し変性した化合物が得られる。そのため、例えば、下記式に示すように、ベンジルブロミドの４位に放射性核種を導入した化合物を製造し、当該化合物とメキタジンを反応させて前記式（II）で示される化合物を製造することが好ましい。
【００２０】
ベンジルブロミドの代わりに、ベンジルクロリド、ベンジルヨージド、ベンジルトシラート、ベンジルメシラートなどの４位に放射性核種を導入した化合物を用いることもできる。また、ベンジルブロミドを用いて１２５Ｉ−ＢＯＡ６を合成した後、イオン交換等によって臭化物イオンを塩化物イオン、ヨウ化物イオンなどの他の対アニオンに変換することができる。
【００２１】
【化９】
0006410351.tif 000010
（式中、Ｘ２は放射性核種又は放射性核種標識用キレート部位を表す。）
【００２２】
本発明の検査薬によれば、ヒトの体深部の組織における代謝機能を測定する場合に、非侵襲的なイメージングも可能である。また、特定の代謝酵素による代謝以降に複数の代謝物が存在しても、代謝酵素活性をイメージングすることができる。
【００２３】
本発明においては、目的に応じて、前記化合物を単独で、又は２種以上組み合わせて用いる。
【００２４】
本発明の検査薬の投与経路としては、静脈内、皮内、皮下、経口、経粘膜、及び直腸投与などが挙げられる。
【００２５】
本発明の検査薬の投与形態としては、投与経路に適した剤形であれば、注射剤、液剤、錠剤等から適宜選択すればよく、本発明の作用及び効果を損なわない限り、薬学的に許容される担体、又は剤形によって当該技術分野において一般的に使用される添加剤を更に含んでもよい。添加剤として、例えば、着色剤、保存剤、風味剤、香り改善剤、呈味改善剤、甘味剤、又は安定剤、その他薬学的に許容される添加剤を含有することができる。
【００２６】
本発明の検査薬の投与量は、投与方法、投与する化合物ならびに患者の年齢、性別及び体重によって、適宜決定すればよい。
【実施例】
【００２７】
以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２８】
（実施例１）１２５Ｉ−２−ヨードアセトアミノフェンの調製及びその代謝分析
Ｉ．アセトアミノフェンの１２５Ｉ標識
クロラミンＴ法でアセトアミノフェンの１２５Ｉ標識を行った。１２５Ｉ−ＮａＩ（１．５ＭＢｑ）をリン酸緩衝化食塩水（ｐＨ７．４）で１０μＬに希釈し、１０ｍＭアセトアミノフェンのエタノール溶液１００μＬ及び４ｍＭクロラミンＴ水溶液（塩酸でｐＨ５．６に調整したｍｉｌｌｉＱに溶解）２５μＬを加えて十分に撹拌し、２５℃で３０分間反応させた後、ピロ亜硫酸ナトリウムの１／１０飽和溶液２５μＬを加え、反応を停止した。反応液を窒素気流下で濃縮し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて分離精製した。検出機器には、ＵＶ−ＶＩＳ検出器（ＳＰＤ−１０Ａ，Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、ＲＩ検出器；ラジオアナライザー（ＲＬＣ−７０１，Ａｌｏｋａ）を使用し、下記の分析条件で行った。条件を最適化した結果、標識率は７５〜８５％、放射化学的純度は９８％以上で１２５Ｉ−２−ヨードアセトアミノフェン（１２５Ｉ−ＩＡＰ）が得られた。
【００２９】
（ＨＰＬＣ分析条件）
カラム  5C18-MS-II(Nacalai tesque)
移動相  20％メタノール：80％50mM KH2PO4(pH4.7), 0-10分
50％メタノール：50％50mM KH2PO4(pH4.7), 10-18分
流速  1.0mL/分
UV  225nm
RI  27keV±5%
【００３０】
II．１２５Ｉ−ＩＡＰの正常マウス体内分布
Ａ）実験材料と方法
予め２４時間絶食しておいたマウス（ｄｄＹ，雄，６週齢）に生理食塩水に溶解した１２５Ｉ−ＩＡＰを１匹あたり１８．５ｋＢｑ／１００μＬずつ尾静脈より投与した。一定時間（２、５、１０、１５、２０、６０、１２０、３６０分）経過後、エーテル麻酔下にて心臓採血を行い、脳、肺、心、膵、脾、肝、胆嚢、胃、腎、小腸、大腸、骨、筋を摘出し、重量を測定した。オートウェルγカウンタ（ＡｃｃｕＦＬＥＸγ７０００，Ａｌｏｋａ）で血液及び各組織の放射能を計測し、重量集積率を次式にて算出した。
【００３１】
重量集積率[% ID／g]＝(組織放射能[cpm]×100)／(投与放射能[cpm]×組織重量[g])
【００３２】
Ｂ）結果と考察
摘出組織のうち、血液、肝、胆嚢、胃の重量集積率を図１に示す。その他組織は２、５分の腎でおよそ２０％ＩＤ／ｇの集積がある以外は１０％ＩＤ／ｇ以上の集積が認められず、時間の経過に伴い集積は減少し１２０分時には小腸で４．６２％ＩＤ／ｇ、その他組織は２％ＩＤ／ｇ以下となった。胆嚢は他の組織と異なり、早期に集積が上昇し１２０分にピークが見られた。このことから、投与された１２５Ｉ−ＩＡＰの大部分は最終的に胆汁排泄されると推測された。また、胆嚢に比べ肝の集積が低いことから、１２５Ｉ−ＩＡＰは肝には留まらず、速やかに胆汁中に排泄されていると推測された。
【００３３】
III．１２５Ｉ−ＩＡＰ投与マウスの胆汁中放射性代謝物の分析
体内分布において多くの放射性物質が胆汁排泄されていることが確認された。この胆汁排泄物が１２５Ｉ−ＩＡＰであるのかを検討するため、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析を行い、オートウェルγカウンタを用いて確認した。
【００３４】
Ａ）実験材料と方法
予め２４時間絶食しておいたマウス（ｄｄＹ，雄，６週齢）に、生理食塩水に溶解した１２５Ｉ−ＩＡＰを１匹あたり４０．０ｋＢｑ／１００μＬずつ尾静脈より投与した。正常マウス体内分布実験において、胆嚢の重量集積率のピークが見られた１２０分後に胆嚢を摘出した。ヘキサン：酢酸エチル：ジエチルエーテル＝１：４：１の展開溶媒で胆汁をシリカゲル薄層板（Ａｒｔ．５５５４，Ｍｅｒｃｋ）に展開し、１２５Ｉ−ＩＡＰの展開結果と比較した。
【００３５】
Ｂ）結果と考察
胆汁と１２５Ｉ−ＩＡＰのＴＬＣ分析の結果をそれぞれ図２及び３に示す。１２５Ｉ−ＩＡＰのＲｆ値は０．２５〜０．３０であるのに対し、胆汁中の放射能のＲｆ値は原点から移動しておらず、遊離のＩ−のＲｆ値と一致した。よって、胆汁内の放射性物質は１２５Ｉ−ＩＡＰではない別の物質であり、１２５Ｉ−ＩＡＰの代謝物であると考えられる。
【００３６】
IV．１２５Ｉ−３−ヨード−Ｌ−チロシン（１２５Ｉ−Ｌ−ＭＩＴ）と１２５Ｉ−ＩＡＰの体内分布比較
III．において胆汁中に見られた放射性代謝物が、脱ヨウ素化酵素によって生じた遊離の１２５Ｉ−であるのかを検討するために、脱ヨウ素化酵素の基質である１２５Ｉ−３−ヨード−Ｌ−チロシン（１２５Ｉ−Ｌ−ＭＩＴ）との体内分布の比較を行った。遊離１２５Ｉ−が生じると集積の上昇が見られる胃の早期の重量集積率（２〜１５分）と、胆嚢を撮像するために重要となる胆嚢・肝間の重量集積率の比の二点を比較した。
【００３７】
Ａ）実験材料と方法
予め２４時間絶食しておいたマウス（ｄｄＹ，雄，６週齢）に生理食塩水に溶解した１２５Ｉ−Ｌ−ＭＩＴを１匹あたり４０．０ｋＢｑ／１００μＬを尾静脈より投与した。５分後に胆嚢を摘出して、重量測定しオートウェルγカウンタで放射能を測定した。その他データは文献より引用した（Kawai K, Fujibayashi Y, Saji H, et al: Monoiodo-D-tyrosine, an artificial amino acid radiopharmaceutical for selective measurement of membrane amino acid transport in the pancreas. Nucl. Med. Biol. 17: 369-376, 1990）。
【００３８】
Ｂ）結果と考察
１２５Ｉ−ＩＡＰと１２５Ｉ−Ｌ−ＭＩＴにおける胃の重量集積率の経時変化を図４に、投与５分後における肝、胆嚢の重量集積率及び胆／肝比を表１に示す。
【００３９】
【表１】
0006410351.tif 000011
【００４０】
１２５Ｉ−Ｌ−ＭＩＴの集積は時間経過に伴って著しく上昇しているのに対して、１２５Ｉ−ＩＡＰではその傾向は見られない。また、胆／肝比は１２５Ｉ−Ｌ−ＭＩＴでは０．０１と極めて低いのに対して、１２５Ｉ−ＩＡＰでは３．５２と高く胆嚢の撮像に十分な値であった。この値は時間経過に伴い上昇し１２０分では１１１．８２と極めて高い値を示した。脱ヨウ素化酵素の基質である１２５Ｉ−Ｌ−ＭＩＴを投与したマウスにおいて、胆嚢の集積は見られなかった。そのため、脱ヨウ素化酵素によって生じた遊離の１２５Ｉ−は胆汁排泄されないと考えられた。また、１２５Ｉ−ＩＡＰ投与マウスは胆嚢に集積が見られ、投与後早期に胃の重量集積率が上昇しなかった。これらの傾向は１２５Ｉ−Ｌ−ＭＩＴとは明らかに異なっているため、１２５Ｉ−ＩＡＰへの脱ヨウ素化酵素の影響は極めて小さいと考えられた。したがって、１２５Ｉ−ＩＡＰ投与マウスの胆汁内の放射性代謝物は遊離の１２５Ｉ−ではなく、他の薬物代謝酵素による代謝物であると推測された。
【００４１】
Ｖ．結語
１２５Ｉ−ＩＡＰの投与マウスにおいて、胆汁中に１２５Ｉ−ＩＡＰの代謝物が排泄されていると推測された。またこの排泄量が肝の集積に対して多いため、１２５Ｉ−ＩＡＰは速やかに肝で代謝され、その後胆汁に排泄されたと考えられた。また、体内分布において胆／肝比が投与後早期より極めて高く、胆汁中の代謝物の撮像が可能であることが確認できた。これらの結果より、胆汁排泄のダイナミック撮像による肝での薬物代謝酵素活性測定の可能性が示された。
【００４２】
（実施例２）メキタジンの１２５Ｉ標識体（１２５Ｉ−ＢＯＡ６）の調製及びその代謝分析
Ｉ．メキタジンの１２５Ｉ標識
従来用いるクロラミンＴ法では、メキタジンが酸化し変性してしまうおそれがあるため、本実施例では２段階の標識、すなわち、下記の合成ルートにしたがって、メキタジンの１２５Ｉ標識体（１２５Ｉ−ＢＯＡ６）を調製した。
【００４３】
【化１０】
0006410351.tif 000012
【００４４】
4-(tributylstannyl)benzyl bromide（ＢＯＡ５）のジクロロメタン（５０μＬ）溶液に、酢酸（２０μＬ）と１２５Ｉ−ＮａＩ（３．７ＭＢｑ）、酸化剤としてｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド（ｔ−ＢｕＯＯＨ）水溶液（７０％、３３μＬ、０．２４ｍｍｏｌ）を加え３０℃の温浴中で５分間撹拌した。
【００４５】
飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液７２０μＬを加え、クロロホルム（５ｍＬ×３）で抽出後、飽和食塩水で有機層を洗浄した。硫酸ナトリウムを加えて乾燥後、ろ過して減圧下で溶媒を除いた。
【００４６】
１２５Ｉ−４−ヨードベンジルブロミド（１２５Ｉ−ＢＯＡ５）のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）に、メキタジン（３２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加えて３０℃の温浴中で５分間撹拌した。窒素気流下で濃縮後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて分離精製した。検出機器にはＵＶ−ＶＩＳ（ＳＰＤ−１０Ａ，Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、ＲＩ検出器；ラジオアナライザー（ＲＬＣ−７０１，Ａｌｏｋａ）を使用し、表２の分析条件で行った。条件を最適化した結果、標識率は８８−９１％、放射化学的純度は９９％以上で目的物（１２５Ｉ−ＢＯＡ６）が得られた。
【００４７】
以下に、１２５Ｉで標識されていないＢＯＡ６のＮＭＲデータを示す。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3/TMS) δ: 7.66 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.17-7.15 (m, 4H), 6.95 (t, J = 7.8 Hz, 4H), 5.00 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.96 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.13 (dd, J = 14.2, 9.6 Hz, 1H), 3.98 (dd, J = 14.2, 6.0 Hz, 1H), 3.77-3.72 (m, 4H), 3.57-3.46 (m, 2H), 2.66 (br s, 1H), 2.28-2.27 (m, 1H), 1.96-1.81 (m, 4H). 13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 144.56, 138.31, 134.87, 127.79, 127.71, 126.34, 126.11, 123.26, 116.10, 97.49, 65.96, 57.27, 54.13, 53.92, 48.29, 31.98, 24.86, 21.87, 19.54.
【００４８】
【表２】
0006410351.tif 000013
【００４９】
II．メキタジンの１２５Ｉ標識体（１２５Ｉ−ＢＯＡ６）の正常マウス体内分布
Ａ）実験材料と方法
予め６時間絶食しておいたマウス（ｄｄＹ，雄，６週齢）に生理食塩水に溶解した１２５Ｉ−ＢＯＡ６を１匹あたり１８．５ｋＢｑ／１００μＬずつ尾静脈より投与した。一定時間（２、１０、３０分）経過後、エーテル麻酔下にて心臓採血を行い、脳、甲状腺、肺、心、膵、脾、肝、胆嚢、胃、腎、腸、骨、筋を摘出し、重量を測定した。オートウェルγカウンタ（ＡｃｃｕＦＬＥＸγ７０００，Ａｌｏｋａ）で血液及び各組織の放射能を計測し、重量集積率を次式にて算出した。
【００５０】
重量集積率[% ID／g]＝(組織放射能[cpm]×100)／(投与放射能[cpm]×組織重量[g])
【００５１】
Ｂ）結果と考察
摘出組織のうち、甲状腺、肝、胆嚢、胃、腎、腸の重量集積率を図５に示す。その他組織は２０％ＩＤ／ｇ以上の集積が認められず、時間の経過に伴い集積は減少した。甲状腺や胃への集積が低いことから、投与された１２５Ｉ−ＢＯＡ６の大部分は代謝を受け１２５Ｉが外れることなく排泄されると推測された。また、胆嚢に比べ肝の集積が低いことから、１２５Ｉ−ＢＯＡ６は肝には留まらず、速やかに胆汁中に排泄されていると推測された。
【００５２】
III．１２５Ｉ−ＢＯＡ６投与マウスの肝臓中放射性代謝物の分析
体内分布において放射性物質が肝臓へ集積し胆汁排泄されていることが確認された。そこで、肝臓において１２５Ｉ−ＢＯＡ６が代謝されているのかを検討するため、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析を行い、オートウェルγカウンタを用いて確認した。
【００５３】
Ａ）実験材料と方法
マウス肝ホモジネート２０μＬにリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）７５μＬ、ＮＡＤＰＨ生成系（０．５ｍＭ  β−ＮＡＤＰ＋、５ｍＭグルコース−６−リン酸、１Ｕ／ｍＬグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２）５０μＬ、３７０ｋＢｑの１２５Ｉ−ＩＭＰ２５μＬを混合し、反応溶液が２５０μＬになるように精製水を加え、調整した。１２５Ｉ−ＩＭＰ添加後、３７℃で２、５、１０、１５、３０分間インキュベーションした。その後、反応を停止させるために過塩素酸５０μＬ、タンパク質への放射性物質の吸着を防ぐためにエタノールを２００μＬ添加し、２０℃、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。遠心分離後、メタノール：酢酸＝１００：１の展開溶媒で上清をシリカゲル薄層板（Ａｒｔ．５５５４，Ｍｅｒｃｋ）に展開した。
【００５４】
Ｂ）結果と考察
例示としてインキュベーション時間３０分のＴＬＣ分析の結果を図６に、各時間経過での１２５Ｉ−ＢＯＡ６と他の放射性物質の増減を図７に示した。時間経過に従って、Ｒｆ値０．１５〜０．２０のピーク割合に増加傾向が見られた。この分析系では、それぞれのＲｆ値が１２５Ｉ−ＮａＩでは０．４５〜０．５０、１２５Ｉ−ＢＯＡ６は０．６０〜０．６５であることから、肝臓中の放射性物質は１２５Ｉ−ＮａＩや１２５Ｉ−ＢＯＡ６ではない別の物質であり、１２５Ｉ−ＢＯＡ６の代謝物であると考えられる。
【００５５】
IV．１２５Ｉ−ＢＯＡ６投与マウスの胆汁中放射性代謝物の分析
体内分布において放射性物質が胆汁排泄されていることが確認された。この胆汁排泄物が１２５Ｉ−ＢＯＡ６であるのかを検討するため、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析を行い、オートウェルγカウンタを用いて確認した。
【００５６】
Ａ）実験材料と方法
予め６時間絶食しておいたマウス（ｄｄＹ，雄，６週齢）に、生理食塩水に溶解した１２５Ｉ−ＢＯＡ６を１匹あたり２．０ＭＢｑ／１００μＬずつ尾静脈より投与した。正常マウス体内分布実験において、胆嚢の重量集積率が最も高くなった３０分後に胆嚢を摘出した。クロロホルム：メタノール：酢酸＝６０：４０：１の展開溶媒で胆汁をシリカゲル薄層板（Ａｒｔ．５５５４，Ｍｅｒｃｋ）に展開し、１２５Ｉ−ＮａＩ、１２５Ｉ−ＢＯＡ６の展開結果と比較した。
【００５７】
Ｂ）結果と考察
１２５Ｉ−ＢＯＡ６を投与したマウスの胆汁と、生理食塩水を投与したマウスの胆汁に１２５Ｉ−ＮａＩ、１２５Ｉ−ＢＯＡ６を加えたもののＴＬＣ分析の結果をそれぞれ図８（Ａ）、（Ｂ）に示した。それぞれのＲｆ値が１２５Ｉ−ＮａＩは０．４５〜０．５０、１２５Ｉ−ＢＯＡ６は０．６５〜０．７５であるのに対し、胆汁中の放射能のＲｆ値は０．００〜０．３５であった。よって、胆汁内の放射性物質は１２５Ｉ−ＮａＩや１２５Ｉ−ＢＯＡ６ではない別の物質であり、１２５Ｉ−ＢＯＡ６の代謝物であると考えられる。
【００５８】
Ｖ．結語
１２５Ｉ−ＢＯＡ６において、肝臓中で代謝が行われ、胆汁中に１２５Ｉ−ＢＯＡ６の代謝物が排泄されていると推測された。またこの排泄量が肝の集積に対して多いため、１２５Ｉ−ＢＯＡ６は速やかに肝で代謝され、その後胆汁に排泄されたと考えられた。これらの結果より、胆汁排泄のダイナミック撮像による肝での薬物代謝酵素活性測定の可能性が示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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