(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＤＯＴＡＰからなるカチオン性脂質と、ＧＭ−ＣＳＦである治療因子とを含み、患者の中で免疫抑制細胞集団を減らすのに十分な用量である、ワクチン組成物。
【請求項２】
前記カチオン性脂質は、エナンチオマーである、請求項１に記載のワクチン組成物。
【請求項３】
前記エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＡＰである、請求項２に記載のワクチン組成物。
【請求項４】
前記組成物は、１種類以上の抗原をさらに含む、請求項１に記載のワクチン組成物。
【請求項５】
少なくとも１種類の抗原は、ＨＰＶタンパク質またはペプチドである、請求項４に記載のワクチン組成物。
【請求項６】
前記抗原は、ｇｐ１００配列（ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ［配列番号８］）およびＴＲＰ２配列（ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ［配列番号９］）のうち１つ以上を含む、請求項５に記載のワクチン組成物。
【請求項７】
前記免疫抑制細胞集団は、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の集団である、請求項１に記載のワクチン組成物。
【請求項８】
哺乳動物における免疫抑制細胞集団を減少させるためのワクチン組成物の製造におけるアジュバントと治療因子の使用方法であって、前記アジュバントはＲ−ＤＯＴＡＰであり、前記治療因子はＧＭ−ＣＳＦである、使用方法。
【請求項９】
前記免疫抑制細胞は、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である、請求項８に記載の使用方法。
【請求項１０】
前記組成物は、１種類以上の抗原をさらに含む、請求項８に記載の使用方法。
【請求項１１】
少なくとも１種類の抗原は、ＨＰＶタンパク質またはペプチドである、請求項１０に記載の使用方法。
【請求項１２】
前記抗原は、ｇｐ１００配列（ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ［配列番号８］）およびＴＲＰ２配列（ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ［配列番号９］）のうち１つ以上を含む、請求項１０に記載の使用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ヒトで使用するための安全かつ効果的な免疫療法および治療用ワクチンの開発は、世界中の患者にとって、医療上の重要な必要性があるままである。一般に、ワクチン組成物は、標的となる免疫応答を刺激するための抗原を含む。しかしながら、開発途上のワクチンの中には、大きな哺乳動物集団では、弱い免疫応答刺激物質であることから、効果がないものがある。たとえば、ワクチン組成物における抗原は、哺乳動物で免疫原性が乏しい場合がある。また、ワクチンによっては、哺乳動物の免疫系の抗原提示細胞（「ＡＰＣ」）まで効率的に抗原を送達できないこともある。
【０００２】
骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介される応答など、患者における適応免疫応答を抑制する能力を持つ初期骨髄系前駆細胞の不均一集団である。ＭＤＳＣは、免疫抑制性サイトカインを分泌し、制御性Ｔ細胞の発生を誘導することが知られている。さらに、ＭＤＳＣは、炎症誘発性サイトカインによって誘導され、感染性病態および炎症性病態において数が増加して認められる。
【０００３】
ＭＤＳＣは、担腫瘍マウスの血液、骨髄、二次リンパ臓器に蓄積し、腫瘍微小環境にＭＤＳＣが存在することが、腫瘍関連免疫抑制の促進に何らかの原因的な役割を果たしているのではないかと示唆されてきた。重要なことに、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞寛容は、腫瘍エスケープの重要な要素であると報告されてきた。さらに、ＭＤＳＣは、ほとんどのがん患者に存在することが見いだされている。現在、Ｔ細胞応答を向上させて感染細胞を攻撃して殺す手段として、ＭＤＳＣおよび制御性Ｔ細胞などの免疫抑制細胞を阻害する手段を特定すべく、業界内で重要な研究が行われている。業界での現在の実務は、ブロッキング抗体を使用して関連の免疫抑制因子をブロックおよび阻止する方法の模索に的を絞っている。メラノーマを治療するための治療用ワクチンとして免疫応答の調節に役割を果たすことが知られている、ヒト抗体であるIpilimumabなどのワクチンを使用して、細胞障害性Ｔリンパ球関連抗原−４（ＣＴＬＡ−４）をブロックしてもよい。
【背景技術】
【０００４】
また、ワクチン組成物中での抗原の効力を高めようと、ワクチンは一般にアジュバントも含む。たとえば、油中水滴型エマルション、ミョウバン（たとえば、アルミニウム塩）、他の化学物質などのアジュバントは一般に、哺乳動物における抗原応答を高めるのに用いられている。従来のアジュバントに加えて、固有の免疫作用を有する他のアジュバント（たとえば、インフルエンザビロソームおよびChiron社のＭＦ５９）を使用してもよい。しかしながら、これらのアジュバントも、望ましくない。なぜなら、モデル動物で得られたエビデンス（ＨＳＶおよびインフルエンザワクチンでの臨床試験報告による）は、これらのアジュバントが動物におけるＴ細胞応答を増すのではなく、単に中和抗体の産生を増やすだけであることを示唆しているためである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
このため、哺乳動物における免疫応答を刺激するために、また、免疫抑制細胞を阻害して哺乳動物における免疫応答を向上するために、抗原を効果的に送達する、あるいは抗原提示細胞による抗原取り込みを促進するような、新たなワクチン組成物に対する需要が存在する。さらに、可能であれば安全で効果的な免疫修飾因子（「免疫調節物質」）を治療因子とともにワクチン組成物に含ませることによって、哺乳動物における細胞免疫応答を刺激する効果的で新たな方法も、極めて望ましい。したがって、本開示は、望ましい特性を呈し、哺乳動物における免疫抑制細胞集団の低減と免疫応答の増大を向上するための関連する利点をもたらすような、ワクチン組成物および当該組成物の使用方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本開示は、少なくとも１種類のアジュバントと少なくとも１種類の治療因子とを含むワクチン組成物を提供する。また、本開示は、このワクチン組成物を利用して、哺乳動物における免疫抑制細胞集団を減少させる方法、哺乳動物における免疫応答を増大させる方法、および哺乳動物における疾患を治療する方法も提供する。
【０００７】
本開示によるワクチン組成物および方法は、従来技術における他の組成物および方法と比較して、いくつかの利点を提供する。第１に、このワクチン組成物は、哺乳動物における適当な免疫応答を亢進、指令、または促進する免疫調節物質であるアジュバントを含む。免疫調節物質は、ワクチン組成物に含まれていると、抗原に対する哺乳動物の免疫応答を効果的にブーストする可能性を持つ。たとえば、免疫調節物質は、（１）抗原の送達および／またはＡＰＣにおける処理を向上、（２）抗原に対する免疫応答の発達を好む免疫調節性サイトカインの産生を誘導し、細胞障害性Ｔリンパ球（「ＣＴＬ」）を含む細胞免疫を促進、（３）効果的なワクチンに必要な免疫化回数または抗原の量を低減、（４）ワクチン抗原の生物学的または免疫学的半減期の増加、（５）免疫抑制因子の阻害による抗原に対する免疫寛容の克服、のうち１つ以上を有利に達成してもよい。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質に基づくアジュバントを強力な免疫修飾アジュバントとして利用して、ワクチン組成物におけるより良いＴ細胞および抗体免疫応答を引き出すことができる。
【０００８】
第２に、本開示のワクチン組成物は、組み合わせとして、哺乳動物における免疫抑制細胞集団を低減できるサイトカインなどの治療因子を含み、これは、疾患に応答する哺乳動物の免疫応答を向上できる。ＭＤＳＣおよび制御性Ｔ細胞などの免疫抑制細胞を阻害する手段を特定するための現在の研究では、複雑なブロッキング抗体を使用している。結果として、患者へ投与し、特に腫瘍における免疫応答を向上するのに、サイトカインなどの治療因子を含む強力なワクチン組成物の投与は、より容易に行い得る。
【０００９】
第３に、治療因子を含む本開示におけるワクチン組成物は、抗原特異的Ｔ細胞の自然な活性化を容易にすると同時に免疫抑制細胞集団を低減することで、疾患特異的抗原がある場合とない場合の両方でＭＤＳＣの低減を引き起こすため、がんなどの疾患を治療する独特で強力な手法につながり得る。治療因子を含むワクチン組成物は、より良い疾患特異的免疫応答の発生につながるが、これはアジュバントまたは治療因子のいずれかだけを抗原と配合しても観察されないものである。
【００１０】
最後に、治療因子は、カチオン性脂質アジュバントと組み合わせてワクチン組成物を形成すると、哺乳動物における免疫応答の独特な相乗的向上につながる。治療因子（たとえば、ＧＭ−ＣＳＦ）と他のアジュバント（たとえば、フロイント不完全（ＩＦＡ）または抗−ＣＤ４０＋ＩＦＡ）との組み合わせでは、免疫応答の同様の相乗的向上にはつながらない。このように、カチオン性脂質アジュバントと治療因子との組み合わせが、特異的かつ有意に、一般に用いられている他のアジュバントを使用しても再現できない免疫応答の相乗的向上につながるのである。
【００１１】
以下の番号を付した実施形態が企図されるが、これらに限定されるものではない。
１．  アジュバントおよび治療因子を含む、ワクチン組成物。
２．  アジュバントは、免疫調節物質である、項１に記載のワクチン組成物。
３．  アジュバントは、カチオン性脂質である、項１または項２に記載のワクチン組成物。
４．  カチオン性脂質は、精製されている、項３に記載のワクチン組成物。
５．  カチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＥＰＣ、それらの組み合わせからなる群から選択される、項３または項４に記載のワクチン組成物。
６．  カチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰである、項３から項５のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
７．  カチオン性脂質は、ＤＯＴＭＡである、項３から項５のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
８．  カチオン性脂質は、ＤＯＥＰＣである、項３から項５のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
９．  アジュバントは、カチオン性脂質のエナンチオマーである、項１または項２に記載のワクチン組成物。
１０．  エナンチオマーは、精製されている、項９に記載のワクチン組成物。
１１．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＡＰまたはＳ−ＤＯＴＡＰである、項９または項１０に記載のワクチン組成物。
１２．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＡＰである、項９または項１０に記載のワクチン組成物。
１３．  エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＴＡＰである、項９または項１０に記載のワクチン組成物。
１４．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＭＡまたはＳ−ＤＯＴＭＡである、項９または項１０に記載のワクチン組成物。
１５．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＭＡである、項９または項１０に記載のワクチン組成物。
１６．  エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＴＭＡである、項９または項１０に記載のワクチン組成物。
１７．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＥＰＣまたはＳ−ＤＯＥＰＣである、項９または項１０に記載のワクチン組成物。
１８．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＥＰＣである、項９または項１０に記載のワクチン組成物。
１９．  エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＥＰＣである、項９または項１０に記載のワクチン組成物。
２０．  治療因子は、インターロイキン１〜１８、幹細胞因子、塩基性ＦＧＦ、ＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＬＫ−２リガンド、ＨＩＬＤＡ、ＭＩＰ−１α、ＴＧＦ−β、ＴＧＦ−α、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、可溶性ＣＤ２３、ＬＩＦ、それらの組み合わせからなる群から選択される、項１から項１９のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
２１．  治療因子は、サイトカインである、項１から項１９のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
２２．  サイトカインは、ＧＭ−ＣＳＦである、項２０に記載のワクチン組成物。
２３．  治療因子は、免役細胞増殖因子である、項１から項１９のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
２４．  組成物は、１種類以上の抗原をさらに含む、項１から項２３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
２５．  １種類以上の抗原は、タンパク質に基づく抗原である、項２４に記載のワクチン組成物。
２６．  １種類以上の抗原は、ペプチドに基づく抗原である、項２４に記載のワクチン組成物。
２７．  １種類以上の抗原は、がん抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、病原体抗原からなる群から選択される、項２４から項２６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
２８．  １種類以上の抗原は、がん抗原である、項２４から項２６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
２９．  １種類以上の抗原は、ウイルス抗原である、項２４から項２６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
３０．  １種類以上の抗原は、細菌抗原である、項２４から項２６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
３１．  １種類以上の抗原は、病原体抗原である、項２４から項２６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
３２．  病原体抗原は、合成抗原または組換え抗原である、項３１に記載のワクチン組成物。
３３．  少なくとも１種類の抗原は、ＨＰＶタンパク質またはペプチドである、項２４から項３２のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
３４．  少なくとも１種類の抗原は、ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号１）、ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号２）、ＫＳＳＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号３）、ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号４）、ＫＳＳＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号５）、ＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号６）、ＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号７）、ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号８）、ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ（配列番号９）、ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ（配列番号１０）、ＫＳＳＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号１１）、ＫＳＳＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号１２）、ＫＳＳＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号１３）からなる群から選択される配列を含む、項２４から項３３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
３５．  少なくとも１種類の抗原は、ｇｐ１００（ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ［配列番号８］）、ＴＲＰ２（ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ［配列番号９］）、ｐ５３（ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ［配列番号１０］）、それらの組み合わせを含む群から選択される配列を含む、項２４から項３３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
３６．抗原は、ｇｐ１００配列（ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ［配列番号８］）およびＴＲＰ２配列（ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ［配列番号９］）のうち１つ以上を含む、項２４から項３３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
３７．  抗原は、配列ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号１）を含む、項２４から項３３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
３８．  抗原は、配列ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号２）を含む、項２４から項３３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
３９．  抗原は、配列ＫＳＳＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号３）を含む、項２４から項３３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
４０．  抗原は、配列ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号４）を含む、項２４から項３３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
４１．  抗原は、配列ＫＳＳＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号５）を含む、項２４から項３３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
４２．  抗原は、配列ＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号６）を含む、項２４から項３３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
４３．  抗原は、配列ＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号７）を含む、項２４から項３３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
４４．  抗原は、配列ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号８）を含む、項２４から項３３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
４５．  抗原は、配列ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ（配列番号９）を含む、項２４から項３３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
４６．  抗原は、配列ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ（配列番号１０）を含む、項２４から項３３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
４７．  抗原は、配列ＫＳＳＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号１１）を含む、項２４から項３３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
４８．  少なくとも１種類の抗原は、リポタンパク質、リポペプチド、および、疎水性が高められたアミノ酸配列、または疎水性が低減されたアミノ酸配列で修飾されたタンパク質またはペプチドからなる群から選択される、項２４から項４７のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
４９．  １種類以上の抗原は、脂質修飾抗原、またはそれ自体の疎水性を高めるよう修飾された抗原である、項２４から項４８のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
５０．  少なくとも１種類の抗原は、修飾されたタンパク質またはペプチドである、項２４から項４９のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
５１．  修飾されたタンパク質またはペプチドは、疎水性基に結合される、項５０に記載のワクチン組成物。
５２．  修飾されたタンパク質または疎水性基に結合されたペプチドは、抗原と疎水性基との間のリンカー配列をさらに含む、項５１に記載のワクチン組成物。
５３．  疎水性基は、パルミトイル基である、項５１または項５２に記載のワクチン組成物。
５４．  少なくとも１種類の抗原は、未修飾のタンパク質またはペプチドである、項２４から項５３のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
５５．  ワクチン組成物は、マイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼシグナル伝達経路を活性化することによって、哺乳動物における免疫応答を誘導する、項１から項５４のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
５６．  ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路は、細胞外シグナル制御キナーゼ（「ＥＲＫ」）−１、ＥＲＫ−２、ｐ３８のうちの少なくとも１つを刺激することによって活性化される、項５５に記載のワクチン組成物。
５７．  ワクチン組成物は、哺乳動物における機能的な抗原特異的ＣＤ８＋Ｔリンパ球応答を亢進する、項１から項５６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
５８．  哺乳動物は、ヒトである、項５７に記載のワクチン組成物。
【００１２】
５９．  有効量のワクチン組成物を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物における免疫抑制細胞集団を減少させる方法であって、ワクチン組成物は、アジュバントおよび治療因子を含む、方法。
６０．  免疫抑制細胞は、ＭＤＳＣである、項５９に記載の方法。
６１．  免疫抑制細胞は、制御性Ｔ細胞である、項５９に記載の方法。
６２．  減少させることが、哺乳動物におけるＴ細胞応答の増加につながる、項５９から項６１のいずれか１項に記載の方法。
６３．  Ｔ細胞は、腫瘍浸潤Ｔ細胞である、項６２に記載の方法。
６４．  Ｔ細胞応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答である、項６２または項６３に記載の方法。
６５．  ＣＤ４＋Ｔ細胞は、腫瘍浸潤ＣＤ４＋Ｔ細胞である、項６４に記載の方法。
６６．  Ｔ細胞応答は、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答である、項６２または項６３に記載の方法。
６７．  ＣＤ８＋Ｔ細胞は、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞である、項６６に記載の方法。
６８．  哺乳動物は、ヒトである、項５９から項６７のいずれか１項に記載の方法。
６９．  アジュバントは、免疫調節物質である、項５９から項６８のいずれか１項に記載の方法。
７０．  アジュバントは、カチオン性脂質である、項５９から項６９のいずれか１項に記載の方法。
７１．  カチオン性脂質は、精製されている、項７０に記載の方法。
７２．  カチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＥＰＣ、それらの組み合わせからなる群から選択される、項７０または項７１に記載の方法。
７３．  カチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰである、項７０から項７２のいずれか１項に記載の方法。
７４．  カチオン性脂質は、ＤＯＴＭＡである、項７０から項７２のいずれか１項に記載の方法。
７５．  カチオン性脂質は、ＤＯＥＰＣである、項７０から項７２のいずれか１項に記載の方法。
７６．  アジュバントは、カチオン性脂質のエナンチオマーである、項５９から項６９のいずれか１項に記載の方法。
７７．  エナンチオマーは、精製されている、項７６に記載の方法。
７８．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＡＰまたはＳ−ＤＯＴＡＰである、項７６または項７７に記載の方法。
７９．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＡＰである、項７６または項７７に記載の方法。
８０．  エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＴＡＰである、項７６または項７７に記載の方法。
８１．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＭＡまたはＳ−ＤＯＴＭＡである、項７６または項７７に記載の方法。
８２．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＭＡである、項７６または項７７に記載の方法。
８３．  エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＴＭＡである、項７６または項７７に記載の方法。
８４．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＥＰＣまたはＳ−ＤＯＥＰＣである、項７６または項７７に記載の方法。
８５．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＥＰＣである、項７６または項７７に記載の方法。
８６．  エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＥＰＣである、項７６または項７７に記載の方法。
８７．  治療因子は、インターロイキン１〜１８、幹細胞因子、塩基性ＦＧＦ、ＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＬＫ−２リガンド、ＨＩＬＤＡ、ＭＩＰ−１α、ＴＧＦ−β、ＴＧＦ−α、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、可溶性ＣＤ２３、ＬＩＦ、それらの組み合わせからなる群から選択される、項５９から項８６のいずれか１項に記載の方法。
８８．  治療因子は、サイトカインである、項５９から項８６のいずれか１項に記載の方法。
８９．  サイトカインは、ＧＭ−ＣＳＦである、項８８に記載の方法。
９０．  治療因子は、免役細胞増殖因子である、項５９から項８６のいずれか１項に記載の方法。
９１．  組成物は、１種類以上の抗原をさらに含む、項５９から項９０のいずれか１項に記載の方法。
９２．  １種類以上の抗原は、タンパク質に基づく抗原である、項９１に記載の方法。
９３．  １種類以上の抗原は、ペプチドに基づく抗原である、項９１に記載の方法。
９４．  １種類以上の抗原は、がん抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、病原体抗原からなる群から選択される、項９１から項９３のいずれか１項に記載の方法。
９５．  １種類以上の抗原は、がん抗原である、項９１から項９３のいずれか１項に記載の方法。
９６．  １種類以上の抗原は、ウイルス抗原である、項９１から項９３のいずれか１項に記載の方法。
９７．  １種類以上の抗原は、細菌抗原である、項９１から項９３のいずれか１項に記載の方法。
９８．  １種類以上の抗原は、病原体抗原である、項９１から項９３のいずれか１項に記載の方法。
９９．  病原体抗原は、合成抗原または組換え抗原である、項９８に記載の方法。
１００．  少なくとも１種類の抗原は、ＨＰＶタンパク質またはペプチドである、項９１から項９９のいずれか１項に記載の方法。
１０１．  少なくとも１種類の抗原は、ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号１）、ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号２）、ＫＳＳＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号３）、ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号４）、ＫＳＳＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号５）、ＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号６）、ＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号７）、ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号８）、ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ（配列番号９）、ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ（配列番号１０）、ＫＳＳＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号１１）、ＫＳＳＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号１２）、ＫＳＳＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号１３）からなる群から選択される配列を含む、項９１から項１００のいずれか１項に記載の方法。
１０２．  少なくとも１種類の抗原は、ｇｐ１００（ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ［配列番号８］）、ＴＲＰ２（ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ［配列番号９］）、ｐ５３（ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ［配列番号１０］）、それらの組み合わせを含む群から選択される配列を含む、項９１から項１００のいずれか１項に記載の方法。
１０３．  抗原は、ｇｐ１００配列（ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ［配列番号８］）およびＴＲＰ２配列（ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ［配列番号９］）のうちの１つ以上を含む、項９１から項１００のいずれか１項に記載の方法。
１０４．  抗原は、配列ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号１）を含む、項９１から項１００のいずれか１項に記載の方法。
１０５．  抗原は、配列ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号２）を含む、項９１から項１００のいずれか１項に記載の方法。
１０６．  抗原は、配列ＫＳＳＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号３）を含む、項９１から項１００のいずれか１項に記載の方法。
１０７．  抗原は、配列ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号４）を含む、項９１から項１００のいずれか１項に記載の方法。
１０８．  抗原は、配列ＫＳＳＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号５）を含む、項９１から項１００のいずれか１項に記載の方法。
１０９．  抗原は、配列ＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号６）を含む、項９１から項１００のいずれか１項に記載の方法。
１１０．  抗原は、配列ＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号７）を含む、項９１から項１００のいずれか１項に記載の方法。
１１１．  抗原は、配列ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号８）を含む、項９１から項１００のいずれか１項に記載の方法。
１１２．  抗原は、配列ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ（配列番号９）を含む、項９１から項１００のいずれか１項に記載の方法。
１１３．  抗原は、配列ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ（配列番号１０）を含む、項９１から項１００のいずれか１項に記載の方法。
１１４．  抗原は、配列ＫＳＳＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号１１）を含む、項９１から項１００のいずれか１項に記載の方法。
１１５．  少なくとも１種類の抗原は、リポタンパク質、リポペプチド、および、疎水性が高められたアミノ酸配列または疎水性が低減されたアミノ酸配列で修飾されたタンパク質またはペプチドからなる群から選択される．項９１から項１１４のいずれか１項に記載の方法。
１１６．  １種類以上の抗原は、脂質修飾抗原、またはそれ自体の疎水性を高めるよう修飾された抗原である、項９１から項１１５のいずれか１項に記載の方法。
１１７．  少なくとも１種類の抗原は、修飾されたタンパク質またはペプチドである、項９１から項１１６のいずれか１項に記載の方法。
１１８．  修飾されたタンパク質またはペプチドは、疎水性基に結合される、項１１７に記載の方法。
１１９．  修飾されたタンパク質または疎水性基に結合されたペプチドは、抗原と疎水性基との間のリンカー配列をさらに含む、項１１８に記載の方法。
１２０．  疎水性基は、パルミトイル基である、項１１８または項１１９に記載の方法。
１２１．  少なくとも１種類の抗原は、未修飾のタンパク質またはペプチドである、項９１から項１２０のいずれか１項に記載の方法。
１２２．  投与は、哺乳動物の免疫系の細胞のＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路によって免疫応答を活性化する、項５９から項１２１のいずれか１項に記載の方法。
１２３．  ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路は、ＥＲＫ−１、ＥＲＫ−２、ｐ３８のうちの少なくとも１つを刺激することによって活性化される、項１２２に記載の方法。
１２４．  免疫応答は、哺乳動物における細胞障害性Ｔリンパ球を活性化する、項１２２または項１２３に記載の方法。
１２５．  細胞障害性Ｔリンパ球は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、項１２４に記載の方法。
１２６．  免疫応答は、哺乳動物における抗体応答を活性化する、項１２２から項１２５のいずれか１項に記載の方法。
１２７．  免疫応答は、哺乳動物におけるインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）を活性化する、項１２２から項１２６のいずれか１項に記載の方法。
１２８．  投与は、機能的な抗原特異的ＣＤ８＋Ｔリンパ球応答を亢進する、項５９から項１２７のいずれか１項に記載の方法。
【００１３】
１２９．  有効量のワクチン組成物を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物における免疫応答を増大させる方法であって、ワクチン組成物は、アジュバントおよび治療因子を含む、方法。
１３０．  減少させることが、哺乳動物におけるＴ細胞応答の増加につながる、項１２９に記載の方法。
１３１．  Ｔ細胞は、腫瘍浸潤Ｔ細胞である、項１３０に記載の方法。
１３２．  Ｔ細胞応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答である、項１３０または項１３１に記載の方法。
１３３．  ＣＤ４＋Ｔ細胞は、腫瘍浸潤ＣＤ４＋Ｔ細胞である、項１３２に記載の方法。
１３４．  Ｔ細胞応答は、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答である、項１２９から項１３３のいずれか１項に記載の方法。
１３５．  ＣＤ８＋Ｔ細胞は、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞である、項１３４に記載の方法。
１３６．  哺乳動物は、ヒトである、項１２９から項１３５のいずれか１項に記載の方法。
１３７．  アジュバントは、免疫調節物質である、項１２９から項１３６のいずれか１項に記載の方法。
１３８．  アジュバントは、カチオン性脂質である、項１２９から項１３７のいずれか１項に記載の方法。
１３９．  カチオン性脂質は、精製されている、項１３８に記載の方法。
１４０．  カチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＥＰＣ、それらの組み合わせからなる群から選択される、項１３８または項１３９に記載の方法。
１４１．  カチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰである、項１３８から項１４０のいずれか１項に記載の方法。
１４２．  カチオン性脂質は、ＤＯＴＭＡである、項１３８から項１４０のいずれか１項に記載の方法。
１４３．  カチオン性脂質は、ＤＯＥＰＣである、項１３８から項１４０のいずれか１項に記載の方法。
１４４．  アジュバントは、カチオン性脂質のエナンチオマーである、項１２９から項１３７のいずれか１項に記載の方法。
１４５．  エナンチオマーは、精製されている、項１４４に記載の方法。
１４６．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＡＰまたはＳ−ＤＯＴＡＰである、項１４４または項１４５に記載の方法。
１４７．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＡＰである、項１４４または項１４５に記載の方法。
１４８．  エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＴＡＰである、項１４４または項１４５に記載の方法。
１４９．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＭＡまたはＳ−ＤＯＴＭＡである、項１４４または項１４５に記載の方法。
１５０．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＭＡである、項１４４または項１４５に記載の方法。
１５１．  エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＴＭＡである、項１４４または項１４５に記載の方法。
１５２．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＥＰＣまたはＳ−ＤＯＥＰＣである、項１４４または項１４５に記載の方法。
１５３．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＥＰＣである、項１４４または項１４５に記載の方法。
１５４．  エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＥＰＣである、項１４４または項１４５に記載の方法。
１５５．  治療因子は、インターロイキン１〜１８、幹細胞因子、塩基性ＦＧＦ、ＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＬＫ−２リガンド、ＨＩＬＤＡ、ＭＩＰ−１α、ＴＧＦ−β、ＴＧＦ−α、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、可溶性ＣＤ２３、ＬＩＦ、それらの組み合わせからなる群から選択される、項１２９から項１５４のいずれか１項に記載の方法。
１５６．  治療因子は、サイトカインである、項１２９から項１５４のいずれか１項に記載の方法。
１５７．  サイトカインは、ＧＭ−ＣＳＦである、項１５６に記載の方法。
１５８．  治療因子は、免役細胞増殖因子である、項１２９から項１５４のいずれか１項に記載の方法。
１５９．  組成物は、１種類以上の抗原をさらに含む、項１２９から項１５８のいずれか１項に記載の方法。
１６０．  １種類以上の抗原は、タンパク質に基づく抗原である、項１５９に記載の方法。
１６１．  １種類以上の抗原は、ペプチドに基づく抗原である、項１５９に記載の方法。
１６２．  １種類以上の抗原は、がん抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、病原体抗原からなる群から選択される、項１５９から項１６１のいずれか１項に記載の方法。
１６３．  １種類以上の抗原は、がん抗原である、項１５９から項１６１のいずれか１項に記載の方法。
１６４．  １種類以上の抗原は、ウイルス抗原である、項１５９から項１６１のいずれか１項に記載の方法。
１６５．  １種類以上の抗原は、細菌抗原である、項１５９から項１６１のいずれか１項に記載の方法。
１６６．  １種類以上の抗原は、病原体抗原である、項１５９から項１６１のいずれか１項に記載の方法。
１６７．  病原体抗原は、合成抗原または組換え抗原である、項１６６に記載の方法。
１６８．  少なくとも１種類の抗原は、ＨＰＶタンパク質またはペプチドである、項１５９から項１６７のいずれか１項に記載の方法。
１６９．  少なくとも１種類の抗原は、ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号１）、ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号２）、ＫＳＳＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号３）、ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号４）、ＫＳＳＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号５）、ＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号６）、ＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号７）、ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号８）、ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ（配列番号９）、ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ（配列番号１０）、ＫＳＳＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号１１）、ＫＳＳＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号１２）、ＫＳＳＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号１３）からなる群から選択される配列を含む、項１５９から項１６８のいずれか１項に記載の方法。
１７０．  少なくとも１種類の抗原は、ｇｐ１００（ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ［配列番号８］）、ＴＲＰ２（ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ［配列番号９］）、ｐ５３（ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ［配列番号１０］）、それらの組み合わせを含む群から選択される配列を含む、項１５９から項１６８のいずれか１項に記載の方法。
１７１．  抗原は、ｇｐ１００配列（ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ［配列番号８］）およびＴＲＰ２配列（ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ［配列番号９］）のうちの１つ以上を含む、項１５９から項１６８のいずれか１項に記載の方法。
１７２．  抗原は、配列ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号１）を含む、項１５９から項１６８のいずれか１項に記載の方法。
１７３．  抗原は、配列ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号２）を含む、項１５９から項１６８のいずれか１項に記載の方法。
１７４．  抗原は、配列ＫＳＳＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号３）を含む、項１５９から項１６８のいずれか１項に記載の方法。
１７５．  抗原は、配列ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号４）を含む、項１５９から項１６８のいずれか１項に記載の方法。
１７６．  抗原は、配列ＫＳＳＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号５）を含む、項１５９から項１６８のいずれか１項に記載の方法。
１７７．  抗原は、配列ＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号６）を含む、項１５９から項１６８のいずれか１項に記載の方法。
１７８．  抗原は、配列ＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号７）を含む、項１５９から項１６８のいずれか１項に記載の方法。
１７９．  抗原は、配列ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号８）を含む、項１５９から項１６８のいずれか１項に記載の方法。
１８０．  抗原は、配列ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ（配列番号９）を含む、項１５９から項１６８のいずれか１項に記載の方法。
１８１．  抗原は、配列ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ（配列番号１０）を含む、項１５９から項１６８のいずれか１項に記載の方法。
１８２．  抗原は、配列ＫＳＳＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号１１）を含む、項１５９から項１６８のいずれか１項に記載の方法。
１８３．  少なくとも１種類の抗原は、リポタンパク質、リポペプチド、および、疎水性が高められたアミノ酸配列または疎水性が低減されたアミノ酸配列で修飾されたタンパク質またはペプチドからなる群から選択される、項１５９から項１８２のいずれか１項に記載の方法。
１８４．  １種類以上の抗原は、脂質修飾抗原、またはそれ自体の疎水性を高めるよう修飾された抗原である、項１５９から項１８３のいずれか１項に記載の方法。
１８５．  少なくとも１種類の抗原は、修飾されたタンパク質またはペプチドである、項１５９から項１８４のいずれか１項に記載の方法。
１８６．  修飾されたタンパク質またはペプチドは、疎水性基に結合される、項１８５に記載の方法。
１８７．  修飾されたタンパク質または疎水性基に結合されたペプチドは、抗原と疎水性基との間のリンカー配列をさらに含む、項１８５に記載の方法。
１８８．  疎水性基は、パルミトイル基である、項１８６または項１８７に記載の方法。
１８９．  少なくとも１種類の抗原は、未修飾のタンパク質またはペプチドである、項１５９から項１８８のいずれか１項に記載の方法。
１９０．  投与は、哺乳動物の免疫系の細胞のＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路によって免疫応答を活性化する、項１２９から項１８９のいずれか１項に記載の方法。
１９１．  ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路は、ＥＲＫ−１、ＥＲＫ−２、ｐ３８のうちの少なくとも１つを刺激することによって活性化される、項１９０に記載の方法。
１９２．  免疫応答は、哺乳動物における細胞障害性Ｔリンパ球を活性化する、項１９０または項１９１に記載の方法。
１９３．  細胞障害性Ｔリンパ球は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、項１９２に記載の方法。
１９４．  免疫応答は、哺乳動物における抗体応答を活性化する、項１９０から項１９３のいずれか１項に記載の方法。
１９５．  免疫応答は、哺乳動物におけるインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）を活性化する、項１９０から項１９４のいずれか１項に記載の方法。
１９６．  投与は、機能的な抗原特異的ＣＤ８＋Ｔリンパ球応答を亢進する、項１２９から項１９５のいずれか１項に記載の方法。
【００１４】
１９７．  有効量のワクチン組成物を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物における疾患を治療する方法であって、ワクチン組成物は、アジュバントおよび治療因子を含む、方法。
１９８．  方法は、予防的治療である、項１９７に記載の方法。
１９９．  疾患は、がんである、項１９７または項１９８に記載の方法。
２００．  アジュバントは、免疫調節物質である、項１９７から項１９９のいずれか１項に記載の方法。
２０１．  アジュバントは、カチオン性脂質である、項１９７から項２００のいずれか１項に記載の方法。
２０２．  カチオン性脂質は、精製されている、項２０１に記載の方法。
２０３．  カチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＥＰＣ、それらの組み合わせからなる群から選択される、項２０１または項２０２に記載の方法。
２０４．  カチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰである、項２０１から項２０３のいずれか１項に記載の方法。
２０５．  カチオン性脂質は、ＤＯＴＭＡである、項２０１から項２０３のいずれか１項に記載の方法。
２０６．  カチオン性脂質は、ＤＯＥＰＣである、項２０１から項２０３のいずれか１項に記載の方法。
２０７．  アジュバントは、カチオン性脂質のエナンチオマーである、項１９７から項２００のいずれか１項に記載の方法。
２０８．  エナンチオマーは、精製されている、項２０７に記載の方法。
２０９．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＡＰまたはＳ−ＤＯＴＡＰである、項２０７または項２０８に記載の方法。
２１０．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＡＰである、項２０７または項２０８に記載の方法。
２１１．  エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＴＡＰである、項２０７または項２０８に記載の方法。
２１２．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＭＡまたはＳ−ＤＯＴＭＡである、項２０７または項２０８に記載の方法。
２１３．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＭＡである、項２０７または項２０８に記載の方法。
２１４．  エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＴＭＡである、項２０７または項２０８に記載の方法。
２１５．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＥＰＣまたはＳ−ＤＯＥＰＣである、項２０７または項２０８に記載の方法。
２１６．  エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＥＰＣである、項２０７または項２０８に記載の方法。
２１７．  エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＥＰＣである、項２０７または項２０８に記載の方法。
２１８．  治療因子は、インターロイキン１〜１８、幹細胞因子、塩基性ＦＧＦ、ＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＬＫ−２リガンド、ＨＩＬＤＡ、ＭＩＰ−１α、ＴＧＦ−β、ＴＧＦ−α、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、可溶性ＣＤ２３、ＬＩＦ、それらの組み合わせからなる群から選択される、項１９７から項２１７のいずれか１項に記載の方法。
２１９．  治療因子は、サイトカインである、項１９７から項２１７のいずれか１項に記載の方法。
２２０．  サイトカインは、ＧＭ−ＣＳＦである、項１５６に記載の方法。
２２１．  治療因子は、免役細胞増殖因子である、項１９７から項２１７のいずれか１項に記載の方法。
２２２．  組成物は、１種類以上の抗原をさらに含む、項１９７から項２２１のいずれか１項に記載の方法。
２２３．  １種類以上の抗原は、タンパク質に基づく抗原である、項２２２に記載の方法。
２２４．  １種類以上の抗原は、ペプチドに基づく抗原である、項２２２に記載の方法。
２２５．  １種類以上の抗原は、がん抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、病原体抗原からなる群から選択される、項２２２から項２２４のいずれか１項に記載の方法。
２２６．  １種類以上の抗原は、がん抗原である、項２２２から項２２４のいずれか１項に記載の方法。
２２７．  １種類以上の抗原は、ウイルス抗原である、項２２２から項２２４のいずれか１項に記載の方法。
２２８．  １種類以上の抗原は、細菌抗原である、項２２２から項２２４のいずれか１項に記載の方法。
２２９．  １種類以上の抗原は、病原体抗原である、項２２２から項２２４のいずれか１項に記載の方法。
２３０．  病原体抗原は、合成抗原または組換え抗原である、項１６６に記載の方法。
２３１．  少なくとも１種類の抗原は、ＨＰＶタンパク質またはペプチドである、項２２２から項２３０のいずれか１項に記載の方法。
２３２．  少なくとも１種類の抗原は、ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号１）、ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号２）、ＫＳＳＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号３）、ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号４）、ＫＳＳＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号５）、ＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号６）、ＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号７）、ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号８）、ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ（配列番号９）、ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ（配列番号１０）、ＫＳＳＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号１１）、ＫＳＳＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号１２）、ＫＳＳＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号１３）からなる群から選択される配列を含む、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２３３．  少なくとも１種類の抗原は、ｇｐ１００（ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ［配列番号８］）、ＴＲＰ２（ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ［配列番号９］）、ｐ５３（ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ［配列番号１０］）、それらの組み合わせを含む群から選択される配列を含む、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２３４．  抗原は、ｇｐ１００配列（ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ［配列番号８］）およびＴＲＰ２配列（ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ［配列番号９］）のうちの１つ以上を含む、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２３５．  抗原は、配列ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号１）を含む、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２３６．  抗原は、配列ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号２）を含む、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２３７．  抗原は、配列ＫＳＳＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号３）を含む、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２３８．  抗原は、配列ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号４）を含む、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２３９．  抗原は、配列ＫＳＳＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号５）を含む、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２４０．  抗原は、配列ＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号６）を含む、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２４１．  抗原は、配列ＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号７）を含む、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２４２．  抗原は、配列ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号８）を含む、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２４３．  抗原は、配列ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ（配列番号９）を含む、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２４４．  抗原は、配列ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ（配列番号１０）を含む、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２４５．  抗原は、配列ＫＳＳＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号１１）を含む、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２４６．  少なくとも１種類の抗原は、リポタンパク質、リポペプチド、および、疎水性が高められたアミノ酸配列または疎水性が低減されたアミノ酸配列で修飾されたタンパク質またはペプチドからなる群から選択される、項２２２から項２３１のいずれか１項に記載の方法。
２４７．  １種類以上の抗原は、脂質修飾抗原、またはそれ自体の疎水性を高めるよう修飾された抗原である、項２２２から項２４６のいずれか１項に記載の方法。
２４８．  少なくとも１種類の抗原は、修飾されたタンパク質またはペプチドである、項２２２から項２４７のいずれか１項に記載の方法。
２４９．  修飾されたタンパク質またはペプチドは、疎水性基に結合される、項２４８に記載の方法。
２５０．  修飾されたタンパク質または疎水性基に結合されたペプチドは、抗原と疎水性基との間のリンカー配列をさらに含む、項２４８に記載の方法。
２５１．  疎水性基は、パルミトイル基である、項２４９または項２５０に記載の方法。
２５２．  少なくとも１種類の抗原は、未修飾のタンパク質またはペプチドである、項２２２から項２５１のいずれか１項に記載の方法。
２５３．  投与は、哺乳動物の免疫系の細胞のＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路によって免疫応答を活性化する、項１９７から項２５２のいずれか１項に記載の方法。
２５４．  ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路は、ＥＲＫ−１、ＥＲＫ−２、ｐ３８のうちの少なくとも１つを刺激することによって活性化される、項２５３に記載の方法。
２５５．  免疫応答は、哺乳動物における細胞障害性Ｔリンパ球を活性化する、項２５３または項２５４に記載の方法。
２５６．  細胞障害性Ｔリンパ球は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、項２５５に記載の方法。
２５７．  免疫応答は、哺乳動物における抗体応答を活性化する、項２５３から項２５６のいずれか１項に記載の方法。
２５８．  免疫応答は、哺乳動物におけるインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）を活性化する、項２５３から項２５７のいずれか１項に記載の方法。
２５９．  投与は、機能的な抗原特異的ＣＤ８＋Ｔリンパ球応答を亢進する、項１９７から項２５８のいずれか１項に記載の方法。
【００１５】
２６０．  抗原は、配列ＫＳＳＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号１２）を含む、項２４から項３４または項４８から項５８のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
２６１．  抗原は、配列ＫＳＳＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号１３）を含む、項２４から項３４または項４８から項５８のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
２６２．  抗原は、配列ＫＳＳＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号１２）を含む、項９１から項１００または項１１５から項１２８のいずれか１項に記載の方法。
２６３．  抗原は、配列ＫＳＳＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号１３）を含む、項９１から項１００または項１１５から項１２８のいずれか１項に記載の方法。
２６４．  抗原は、配列ＫＳＳＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号１２）を含む、項１５９から項１６８または項１８３から項１９６のいずれか１項に記載の方法。
２６５．  抗原は、配列ＫＳＳＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号１３）を含む、項１５９から項１６８または項１８３から項１９６のいずれか１項に記載の方法。
２６６．  抗原は、配列ＫＳＳＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号１２）を含む、項２２２から項２３１または項２４６から項２５９のいずれか１項に記載の方法。
２６７．  抗原は、配列ＫＳＳＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号１３）を含む、項２２２から項２３１または項２４６から項２５９のいずれか１項に記載の方法。
【００１６】
＜関連出願へのクロスリファレンス＞
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）により、２０１２年６月１５日にファイルされた米国仮特許出願第６１／６６０，１７２号の利益を主張するものであり、その開示内容全体を本明細書に援用する。
【００１７】
＜政府の権利＞
本発明に至った研究の一部は、国立衛生研究所のＣＲＡＤＡ第２６４４号として提供された米国政府の支援により行われた。よって、米国政府は、本発明に一定の権利を保有する。
【００１８】
＜電子的に提出された資料の援用＞
全体が援用されるのは、本明細書と同時に提出され、以下のように識別される、コンピューター読取り可能な配列表である：２０１３年６月１２日に作成されたファイル名「225611_ST25.txt」の３，２２８バイトのＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル１つ。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】さまざまなワクチン組成物が、担腫瘍マウスの抗原特異的免疫応答に対しておよぼす影響を示す。マウス由来の脾細胞１０６個あたりのＩＦＮ−γスポット数を、脾細胞１００万個あたりのＥ７４９−５７を用いて再刺激した培養−対照抗原を用いて再刺激した培養で得られるスポット数±ＳＤとして提示する。図中のＥ７ペプチドは、ＧＭ−ＣＳＦ−Ｅ７＋Ｃｄ４０＋ＩＦＡを示す。（＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
【図２】フローサイトメトリーアッセイを使用して、さまざまなワクチン組成物が、腫瘍浸潤ＭＤＳＣ数（ＣＤ４４＋細胞集団内のＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ−１＋細胞として定義）に対しておよぼす影響を示す。腫瘍浸潤細胞数を、全腫瘍細胞１×１０６個あたりの数正規化して、平均値±ＳＤとして表されている。（＊Ｐ＜０．０５、未処理群およびＧＭ−ＣＳＦのみの群との比較）。
【図３】マウスへの投与後、さまざまなワクチン組成物が、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞数に対しておよぼす影響を示す。腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞数は、フローサイトメトリーアッセイを使用して、ＣＤ４４＋細胞の集団内で分析した。腫瘍浸潤細胞数を、全腫瘍細胞１×１０６個あたりの数で正規化して、平均値±ＳＤとして表されている。（＊Ｐ＜０．０５）。
【図４】さまざまなワクチン組成物が、抗原特異的免疫応答に対しておよぼす影響を示す。メラノーマ抗原ＴＲＰ−２および、ｇｐ−１００ペプチド、またはペプチド対照（各１０μｇ／ｍｌ）の存在下におけるＩＦＮγ活性を、ＥＬＩＳＰＯＴによってアッセイした。値は、脾細胞１０６個あたりのＴＲＰ−２およびｇｐ１００を用いて再刺激した培養−対照抗原を用いて再刺激した培養で得られるスポット数として表されている。（＊Ｐ＜０．０１）。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明のさまざまな実施形態を、以下のように本明細書で説明する。本明細書に記載の一実施形態では、ワクチン組成物が提供される。ワクチン組成物は、アジュバントおよび治療因子を含む。
【００２１】
もうひとつの実施形態では、哺乳動物における免疫抑制細胞集団を減少させる方法が提供される。この方法は、有効量のワクチン組成物を哺乳動物に投与する工程を含み、、ワクチン組成物は、アジュバントおよび治療因子を含む。
【００２２】
さらにもうひとつの実施形態では、哺乳動物における免疫応答を増大させる方法が提供される。この方法は、有効量のワクチン組成物を哺乳動物に投与する工程を含み、ワクチン組成物は、アジュバントおよび治療因子を含む。
【００２３】
さらにもうひとつの実施形態では、哺乳動物における疾患を治療する方法が提供される。この方法は、有効量のワクチン組成物を哺乳動物に投与する工程を含み、ワクチン組成物は、アジュバントおよび治療因子を含む。
【００２４】
さまざまな実施形態において、ワクチン組成物は、アジュバントおよび治療因子を含む。本明細書で使用する場合、「アジュバント」という用語は、抗原に対する哺乳動物の免疫応答を亢進、増大および／または増強させる物質をいう。本明細書で使用する場合、「治療因子」という用語は、免疫応答を誘導、亢進または抑制することによって、疾患の治療に関わるあらゆる作用剤をいう。本明細書で使用する場合、治療因子は、免疫系刺激物質、細胞殺傷物質、腫瘍浸透促進物質、化学療法剤、または細胞障害性免疫細胞を含むが、これらに限定されるものではない。ワクチン組成物は、アジュバントおよび治療因子が一緒に投与される調製物、ならびにアジュバントおよび治療因子が別々に投与される調製物が企図される。アジュバントおよび治療因子の用量は、当業者に知られている。
【００２５】
本明細書に記載のいくつかの実施形態では、アジュバントは、免疫調節物質である。本明細書で使用する場合、「免疫調節物質」という用語は、哺乳動物における免疫応答を亢進、指令、および／または促進する免疫修飾因子をいう。
【００２６】
本明細書に記載のいくつかの実施形態では、アジュバントは、ナノ粒子である。本明細書で使用する場合、「ナノ粒子」という用語は、サイズがナノメートル台で測定される粒子をいう。本明細書で使用する場合、「ナノ粒子」とは、サイズが約１，０００ナノメートル未満の構造を有する粒子をいう。いくつかの実施形態では、ナノ粒子は、リポソームである。
【００２７】
本明細書に記載のいくつかの実施形態では、アジュバントは、カチオン性脂質である。本明細書で使用する場合、「カチオン性脂質」という用語は、生理的ｐＨにおいて正味の正電荷を帯びるか、プロトン化可能な基を有し、ｐＫａ未満のｐＨで正に荷電するような、多数の脂質種のうちいずれかをいう。
【００２８】
本開示による好適なカチオン性脂質は、以下のものを含むが、これらに限定されるものではない：３−β［４Ｎ−（１Ｎ，８−ジグアニジノスペルミジン）−カルバモイル］コレステロール（ＢＧＳＣ）；３−β［Ｎ，Ｎ−ジグアニジノエチル−アミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＢＧＴＣ）；Ｎ，Ｎ１Ｎ２Ｎ３テトラ−メチルテトラパルミチルスペルミン（cellfectin）；Ｎ−ｔ−ブチル−Ｎ’−テトラデシル−３−テトラデシル−アミノプロピオン−アミジン（CLONfectin）；ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）；１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）；２，３−ジオレオイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート）（ＤＯＳＰＡ）；１，３−ジオレオイルオキシ−２−（６−カルボキシスペルミル）−プロピルアミド（ＤＯＳＰＥＲ）；４−（２，３−ビス−パルミトイルオキシ−プロピル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール（ＤＰＩＭ）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２，３−ジオレオイルオキシ−１，４−ブタン−ジアンモニウムヨージド）（Ｔｆｘ−５０）；Ｎ−１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）または他のＮ−（Ｎ，Ｎ−１−ジアルコキシ）−アルキル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−三置換アンモニウム界面活性剤；１，２ジオレオイル−３−（４’−トリメチルアンモニオ）ブタノール−ｓｎ−グリセロール（ＤＯＢＴ）またはコレステリル（４’トリメチルアンモニア）ブタノエート（ＣｈＯＴＢ）（ここで、トリメチルアンモニウム基は、ブタノールスペーサーアームを介して、二重鎖（ＤＯＴＢの場合）またはコレステリル基（ＣｈＯＴＢの場合）に連結される）；ＤＯＲＩ（ＤＬ−１，２−ジオレオイル−３−ジメチルアミノプロピル−β−ヒドロキシエチルアンモニウム）またはＤＯＲＩＥ（ＤＬ−１，２−Ｏ−ジオレオイル−３−ジメチルアミノプロピル−β−ヒドロキシエチルアンモニウム）（ＤＯＲＩＥ）またはその類縁体（たとえば、ＷＯ９３／０３７０９に開示されているものなど）；１，２−ジオレオイル−３−スクシニル−ｓｎ−グリセロールコリンエステル（ＤＯＳＣ）；コレステリルヘミコハク酸エステル（ＣｈＯＳＣ）；リポポリアミン、たとえば、ジオクタデシルアミドリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）およびジパルミトイルホスファチジルエタノールアミルスペルミン（ＤＰＰＥＳ）、コレステリル−３β−カルボキシル−アミド−エチレントリメチルアンモニウムヨージド、１−ジメチルアミノ−３−トリメチルアンモニオ−ＤＬ−２−プロピル−コレステリルカルボキシレートヨージド、コレステリル−３−Ｏ−カルボキシアミドエチレンアミン、コレステリル−３−β−オキシスクシンアミド−エチレントリメチルアンモニウムヨージド、１−ジメチルアミノ−３−トリメチルアンモニオ−ＤＬ−２−プロピル−コレステリル−３−β−オキシスクシネートヨージド、２−（２−トリメチルアンモニオ）−エチルメチルアミノエチル−コレステリル−３−β−オキシスクシネートヨージド、３−β−Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイルコレステロール（ＤＣ−ｃｈｏｌ）、３−β−Ｎ−（ポリエチレンイミン）−カルバモイルコレステロール；Ｏ，Ｏ’−ジミリスチル−Ｎ−リジルアスパルテート（ＤＭＫＥ）；Ｏ，Ｏ’−ジミリスチル−Ｎ−リジル−グルタメート（ＤＭＫＤ）；１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチル−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）；１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＬＥＰＣ）；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＭＥＰＣ）；１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＯＥＰＣ）；１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＰＥＰＣ）；１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＳＥＰＣ）；１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）；ジオレオイルジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＡＰ）；１，２−パルミトイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＰＴＡＰ）；１，２−ジステアロイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＳＴＡＰ）、１，２−ミリストイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）。さらに、表記のカチオン性脂質いずれかの構造的な変異体および誘導体も企図される。
【００２９】
いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰ、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＥＰＣ、それらの組み合わせからなる群から選択される。他の実施形態では、カチオン性脂質は、ＤＯＴＡＰである。さらに他の実施形態では、カチオン性脂質は、ＤＯＴＭＡである。他の実施形態では、カチオン性脂質は、ＤＯＥＰＣである。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、精製されている。
【００３０】
いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、カチオン性脂質のエナンチオマーである。「エナンチオマー」という用語は、カチオン性脂質の立体異性体であって、対になる立体異性体を重ねることのできない鏡像となっている立体異性体のことであり、たとえば、ＲエナンチオマーおよびＳエナンチオマーをいう。さまざまな例では、エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＡＰまたはＳ−ＤＯＴＡＰである。一例において、エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＡＰである。もうひとつの例では、エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＴＡＰである。いくつかの実施形態では、エナンチオマーは、精製されている。さまざまな例では、エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＭＡまたはＳ−ＤＯＴＭＡである。一例において、エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＴＭＡである。もうひとつの例では、エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＴＭＡである。いくつかの実施形態では、エナンチオマーは、精製されている。さまざまな例では、エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＰＥＣまたはＳ−ＤＯＰＥＣである。一例において、エナンチオマーは、Ｒ−ＤＯＰＥＣである。もうひとつの例では、エナンチオマーは、Ｓ−ＤＯＰＥＣである。いくつかの実施形態では、エナンチオマーは、精製されている。
【００３１】
本明細書に記載のさまざまな実施形態では、治療因子は、インターロイキン１〜１８、幹細胞因子、塩基性ＦＧＦ、ＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＬＫ−２リガンド、ＨＩＬＤＡ、ＭＩＰ−１α、ＴＧＦ−β、ＴＧＦ−α、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、可溶性ＣＤ２３、ＬＩＦ、それらの組み合わせからなる群から選択される。他の治療因子も当業者に知られており、本開示のワクチン組成物に用いられてもよい。
【００３２】
本明細書に記載のさまざまな実施形態では、治療因子は、サイトカインである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＧＭ−ＣＳＦである。本明細書に記載の他の実施形態では、治療因子は、免役細胞増殖因子である。
【００３３】
本明細書に記載のさまざまな実施形態では、組成物は、１種類以上の抗原をさらに含む。本明細書で使用する場合、「抗原」という用語は、免疫系を有する哺乳動物に（直接あるいは、たとえばＤＮＡワクチンなどでの発現時に）導入されると、この哺乳動物の免疫系によって認識され、免疫応答を誘発できるあらゆる作用剤（たとえば、タンパク質、ペプチド、多糖、糖タンパク質、糖脂質、核酸またはそれらの組み合わせ）をいう。本明細書で定義する場合、抗原誘発免疫応答は、液性であっても細胞性であってもよいし、両方であってもよい。作用剤は、免疫グロブリン（抗体）またはＴ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）などの免疫系の抗原認識分子と特異的に相互作用できるときに、「抗原性」であるとされる。
【００３４】
いくつかの実施形態では、１種類以上の抗原は、タンパク質に基づく抗原である。他の実施形態では、１種類以上の抗原は、ペプチドに基づく抗原である。さまざまな実施形態において、１種類以上の抗原は、がん抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、病原体抗原からなる群から選択される。「微生物抗原」とは、本明細書で使用する場合、微生物の抗原であり、感染性ウイルス、感染性細菌、感染性寄生虫、感染性真菌を含むが、これらに限定されるものではない。微生物抗原は、インタクトな微生物ならびにその天然単離物、断片または誘導体のほか、天然に生じる微生物抗原と同一または類似であり、好ましくは、（天然に生じる微生物抗原が由来する）対応の微生物に特異的な免疫応答を誘導する合成化合物であってもよい。一実施形態では、抗原は、がん抗原である。一実施形態では、抗原は、ウイルス抗原である。もうひとつの実施形態では、抗原は、細菌抗原である。さまざまな実施形態において、抗原は、病原体抗原である。いくつかの実施形態では、病原体抗原は、合成抗原または組換え抗原である。
【００３５】
いくつかの実施形態では、抗原は、がん抗原である。「がん抗原」とは、本明細書で使用する場合、腫瘍またはがん細胞に関連し、ＭＨＣ分子の文脈では抗原提示細胞の表面で発現されると免疫応答（液性および／または細胞性）を誘発できる分子または化合物（たとえば、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、リポタンパク質、リポペプチド、糖タンパク質、糖ペプチド、脂質、糖脂質、炭水化物、ＲＮＡおよび／またはＤＮＡ）である。たとえば、がん抗原は、腫瘍関連抗原であってもよい。腫瘍関連抗原は、自己抗原のみならず、がんとは特異的に関連していないかもしれないが、それにもかかわらず、哺乳動物に投与されると腫瘍またはがん細胞に対する免疫応答を亢進する、および／または腫瘍またはがん細胞の増殖を低減するような、他の抗原を含む。一実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、ＨＰＶタンパク質またはペプチドである。
【００３６】
本開示のいくつかの実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号１）、ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号２）、ＫＳＳＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号３）、ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号４）、ＫＳＳＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号５）、ＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号６）、ＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号７）、ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号８）、ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ（配列番号９）、ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ（配列番号１０）、ＫＳＳＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号１１）、ＫＳＳＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号１２）、ＫＳＳＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号１３）からなる群から選択される配列を含む。一実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、配列ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号１）を含む。もうひとつの実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、配列ＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号２）を含む。さらにもうひとつの実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、配列ＫＳＳＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号３）を含む。いくつかの実施形態では、ＫＳＳＧＱＡＥＰＤＲＡＨＹＮＩＶＴＦ（配列番号３）は、疎水性基をさらに含むよう修飾される。一実施形態では、疎水性基は、パルミトイル基である。
【００３７】
他の実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、配列ＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号４）を含む。もうひとつの実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、配列ＫＳＳＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号５）を含む。さらにもうひとつの実施形態では、ＫＳＳＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号５）は、疎水性基をさらに含むよう修飾される。一実施形態では、疎水性基は、パルミトイル基である。
【００３８】
他の実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、配列ＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号６）を含む。もうひとつの実施形態では、ＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号６）は、疎水性基をさらに含むよう修飾される。一実施形態では、疎水性基は、パルミトイル基である。
【００３９】
他の実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、配列ＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号７）を含む。いくつかの実施形態では、ＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号７）は、疎水性基をさらに含むよう修飾される。一実施形態では、疎水性基は、パルミトイル基である。
【００４０】
いくつかの実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、配列ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号８）を含む。他の実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、配列ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ（配列番号９）を含む。さらに他の実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、配列ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ（配列番号１０）を含む。もうひとつの実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、配列ＫＳＳＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号１１）を含む。いくつかの実施形態では、ＫＳＳＫＶＰＲＮＱＤＷＬ（配列番号１１）は、疎水性基をさらに含むよう修飾される。一実施形態では、疎水性基は、パルミトイル基である。
【００４１】
他の実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、配列ＫＳＳＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号１２）を含む。もうひとつの実施形態では、ＫＳＳＭＨＧＤＴＰＴＬＨＥＹＭＬＤＬＱＰＥＴＴ（配列番号１２）は、疎水性基をさらに含むよう修飾される。一実施形態では、疎水性基は、パルミトイル基である。
【００４２】
他の実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、配列ＫＳＳＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号１３）を含む。いくつかの実施形態では、ＫＳＳＬＬＭＧＴＬＧＩＶＣＰＩＣＳＱＫＰ（配列番号１３）は、疎水性基をさらに含むよう修飾される。一実施形態では、疎水性基は、パルミトイル基である。
【００４３】
一実施形態では、抗原は、ｇｐ１００（ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ［配列番号８］）、ＴＲＰ２（ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ［配列番号９］）、ｐ５３（ＫＹＩＣＮＳＳＣＭ［配列番号１０］）、それらの組み合わせを含む群から選択される配列を含む。
【００４４】
一実施形態では、抗原は、ｇｐ１００配列（ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ［配列番号８］）およびＴＲＰ２配列（ＳＹＶＤＦＦＶＷＬ［配列番号９］）のうちの１つ以上を含む。
【００４５】
さまざまな実施形態において、少なくとも１種類の抗原は、リポタンパク質、リポペプチド、および、疎水性が高められたアミノ酸配列または疎水性が低減されたアミノ酸配列で修飾されたタンパク質またはペプチドからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、１種類以上の抗原は、それ自体の疎水性を高めるよう修飾された抗原である。一実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、修飾されたタンパク質またはペプチドである。いくつかの実施形態では、修飾されたタンパク質またはペプチドは、疎水性基に結合される。他の実施形態では、修飾されたタンパク質または疎水性基に結合されたペプチドは、抗原と疎水性基との間のリンカー配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、疎水性基は、パルミトイル基である。さらに他の実施形態では、少なくとも１種類の抗原は、未修飾のタンパク質またはペプチドである。
【００４６】
本明細書に記載のさまざまな実施形態では、ワクチン組成物は、マイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼシグナル伝達経路を活性化することによって、哺乳動物における免疫応答を誘導する。カチオン性脂質などのアジュバントによる免疫応答の誘導は、たとえば、ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５７６７８（ＷＯ／２００８／１１６０７８；「Stimulation of an Immune Response by Cationic Lipids（カチオン性脂質による免疫応答の刺激）」）およびＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４０５００（ＷＯ／２００９／１２９２２７；「Stimulation of an Immune Response by Enantiomers of Cationic Lipids（カチオン性脂質のエナンチオマーによる免疫応答の刺激）」）に記載されており、その両方の開示内容全体を本明細書に援用する。いくつかの実施形態では、ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路は、細胞外シグナル制御キナーゼ（「ＥＲＫ」）−１、ＥＲＫ−２、ｐ３８のうちの少なくとも１つを刺激することによって活性化される。他の実施形態では、組成物は、機能的な抗原特異的ＣＤ８＋Ｔリンパ球応答を亢進する。「哺乳動物」という用語は、当業者に良く知られている。一実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【００４７】
本明細書に記載の一実施形態では、哺乳動物における免疫抑制細胞集団を減少させる方法が提供される。この方法は、有効量のワクチン組成物を哺乳動物に投与する工程を含み、ワクチン組成物は、アジュバントおよび治療因子を含む。ワクチン組成物についての上述した実施形態は、本明細書に記載の哺乳動物における免疫抑制細胞集団を減少させる方法にも適用可能である。
【００４８】
いくつかの実施形態では、免疫抑制細胞は、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である。他の実施形態では、免疫抑制細胞は、制御性Ｔ細胞である。
【００４９】
さまざまな実施形態において、減少させることが、哺乳動物におけるＴ細胞応答の増加につながる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、腫瘍浸潤Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答である。特定の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、腫瘍浸潤ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞応答は、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答である。特定の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【００５０】
さまざまな実施形態において、哺乳動物は、ヒトである。いくつかの実施形態では、投与は、哺乳動物の免疫系の細胞のＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路によって免疫応答を活性化する。さまざまな実施形態において、ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路は、ＥＲＫ−１、ＥＲＫ−２、ｐ３８のうちの少なくとも１つを刺激することによって活性化される。
【００５１】
他の実施形態では、免疫応答は、哺乳動物における細胞障害性Ｔリンパ球を活性化する。一実施形態では、細胞障害性Ｔリンパ球は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。もうひとつの実施形態では、投与は、機能的な抗原特異的ＣＤ８＋Ｔリンパ球応答を亢進する。さらにもうひとつの実施形態では、免疫応答は、哺乳動物における抗体応答を活性化する。他の実施形態では、免疫応答は、哺乳動物におけるインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）を活性化する。
【００５２】
本明細書に記載の一実施形態では、哺乳動物における免疫応答を増大させる方法が提供される。この方法は、有効量のワクチン組成物を哺乳動物に投与する工程を含み、ワクチン組成物は、アジュバントおよび治療因子を含む。ワクチン組成物および哺乳動物における免疫抑制細胞集団を減少させる方法についての上述した実施形態は、本明細書に記載の哺乳動物における免疫応答を増大させる方法にも適用可能である。
【００５３】
本明細書に記載の一実施形態では、哺乳動物における疾患を治療する方法が提供される。この方法は、有効量のワクチン組成物を哺乳動物に投与する工程を含み、ワクチン組成物は、アジュバントおよび治療因子を含む。ワクチン組成物および哺乳動物における免疫抑制細胞集団を減少させる方法についての上述した実施形態は、本明細書に記載の哺乳動物における疾患を治療する方法にも適用可能である。
【００５４】
いくつかの実施形態では、感染性の病原体に関して本明細書で使用する場合、「治療」、「治療する」、「治療している」は、病原体に対する被検体の耐性を高めるあるいは、被検体が病原体に感染する尤度を低下させるような、予防的治療のことを指す、および／または、感染を低減するかなくす、あるいは感染が悪化するのを防ぐなど、感染と闘うために行うような、被検体が感染したあとの治療のことを指す。一実施形態では、この方法は、予防的治療である。いくつかの実施形態では、疾患は、がんである。
【実施例】
【００５５】
〔実施例１〕
アジュバントおよび抗原を取り込んだアジュバントの調製
アジュバントは、カチオン性脂質だけを使って調製されてもよい。あるいは、アジュバントは、カチオン性脂質と他の免疫調節物質との混合物を用いて調製されてもよい。ワクチン組成物は、抗原を取り込んだカチオン性脂質に基づく組成物を用いて調製されてもよい。本例では、例示的なカチオン性脂質としてＤＯＴＡＰを使用し、例示的な抗原としてＨＰＶタンパク質Ｅ７ペプチド抗原を使用した。
【００５６】
カチオン性脂質をリポソームに調製するすべての手順で、注射用滅菌水（ＷＦＩ）または緩衝液を使用した。この例では、脂質膜を用いてリポソームを調製した。リポソームへの取り込み用のＥ７抗原としては、ＨＰＶ  １６  Ｅ７タンパク質由来のＨ−２Ｄｂ拘束性のＣＴＬエピトープ（アミノ酸４９〜５７、ＲＡＨＹＮＩＶＴＦ［配列番号１］）を使用した。（１）脂質をクロロホルムなどの有機溶媒に溶解させ、（２）クロロホルム溶液を乾燥窒素ガスの安定した流れのもとで蒸発させること、によって、ガラスバイアル中にて脂質膜を形成した。膜を真空下にて一晩維持して、微量の有機溶媒を除去した。その後、所望の量のＷＦＩまたは緩衝液を加えることによって脂質膜を水和させ、最終濃度を４〜１０ｍｇ／ｍＬとした。この懸濁液を２００ｎｍの大きさまで押し出し、４℃で保管した。
【００５７】
抗原を取り込んだカチオン性脂質を調製するために、Ｅ７ペプチドの水溶液によって、ＤＯＴＡＰ脂質膜を再水和させた。当業者間で良く知られているような、リポソームの調製で一般的に用いられる他の方法を使用してもよい。
【００５８】
〔実施例２〕
ワクチン組成物が担腫瘍マウスにおける抗原特異的免疫応答に対しておよぼす影響
本開示に従ってさまざまなワクチン組成物を比較し、それらが担腫瘍マウスにおける抗原特異的免疫応答に対しておよぼす影響を評価してもよい。この例では、例示的なカチオン性脂質としてＲ−ＤＯＴＡＰを使用し、例示的な抗原としてＥ７ペプチドを使用し、例示的な治療因子としてサイトカインＧＭ−ＣＳＦを使用した。さらに、抗−ＣＤ４０  Ａｂおよびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）を比較用アジュバントとして使用した。
【００５９】
この例では、本開示に従ってワクチン組成物を調製し、以下の群を評価した。
群１：Ｒ−ＤＯＴＡＰ−Ｅ７ペプチド（２０μｇ／匹）およびＧＭ−ＣＳＦ（５μｇ／匹）
群２：Ｒ−ＤＯＴＡＰ−Ｅ７ペプチド（２０μｇ／匹）
群３：ＧＭ−ＣＳＦ（５μｇ／匹）、Ｅ７ペプチド（１００ｕｇ／匹）、抗−ＣＤ４０  Ａｂ（２０μｇ／匹）、ＩＦＡ（５０μｇ／匹）
群４：Ｒ−ＤＯＴＡＰのみ
群５：ＧＭ−ＣＳＦのみ
群６：Ｒ−ＤＯＴＡＰおよびＧＭ−ＣＳＦ
群７：未処理の対照
【００６０】
０日目、６〜８週齢のメスのＣ５７ＢＬ６マウス（１群あたり５匹）の右側腹部に、ＴＣ−１細胞５０，０００個／匹を皮下移植した。８日目、すべてのマウスに直径約３〜４ｍｍの腫瘍が生じたら、各群の被検体を、適切な群のワクチン組成物で処理する。
【００６１】
１５日目に、治療を繰り返した。６日後（すなわち、腫瘍の移植後２１日目）に、マウスを屠殺した。マウスの脾臓を回収し、全リンパ球を得られるよう処理した。Ｅ７４９−５７ペプチド、または無関係のペプチド対照（各１０μｇ／ｍｌ）の存在下におけるＩＦＮγ活性を、ＥＬＩＳＰＯＴによってアッセイした。脾細胞１００万個あたりのＥ７４９−５７を用いて再刺激した培養−無関係の抗原を用いて再刺激した培養で得られるスポット数を評価した。
【００６２】
図１に示されるように、群１（すなわち、Ｒ−ＤＯＴＡＰ−Ｅ７ペプチドおよびＧＭ−ＣＳＦ）では、他の群と比較して、担腫瘍マウスにおける抗原特異的免疫応答に統計的に有意な増加が認められた。Ｒ−ＤＯＴＡＰ−Ｅ７ペプチドとＧＭ−ＣＳＦとを組み合わせると、個々の成分の場合と比較して、抗原特異的免疫応答に相乗効果が認められた。群３（すなわち、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｅ７ペプチド、抗−ＣＤ４０  Ａｂ、ＩＦＡ）では、成長因子および非カチオン性脂質アジュバントを投与したが、群１で観察されたような免疫応答に対する相乗効果は認められなかった。
【００６３】
〔実施例３〕
ワクチン組成物が担腫瘍マウスの腫瘍微小環境におけるＭＤＳＣに対しておよぼす影響
本開示に従ってさまざまなワクチン組成物を比較し、それらが担腫瘍マウスの腫瘍微小環境におけるＭＤＳＣ数に対しておよぼす影響を評価してもよい。この例では、例示的なカチオン性脂質としてＲ−ＤＯＴＡＰを使用し、例示的な抗原としてＥ７ペプチドを使用し、例示的な治療因子としてサイトカインＧＭ−ＣＳＦを使用した。
【００６４】
この例では、本開示に従ってワクチン組成物を調製し、以下の群を評価した。
群１：Ｒ−ＤＯＴＡＰ−Ｅ７ペプチド（２０μｇ／匹）およびＧＭ−ＣＳＦ（５μｇ／匹）
群２：Ｒ−ＤＯＴＡＰ−Ｅ７ペプチド（２０μｇ／匹）
群３：Ｒ−ＤＯＴＡＰのみ
群４：ＧＭ−ＣＳＦのみ
群５：Ｒ−ＤＯＴＡＰおよびＧＭ−ＣＳＦ
群６：未処理の対照
【００６５】
０日目、６〜８週齢のメスのＣ５７ＢＬ６マウス（１群あたり５匹）の右側腹部に、ＴＣ−１細胞５０，０００個／匹を皮下移植した。８日目、すべてのマウスに直径約３〜４ｍｍの腫瘍が生じた時点で、各群の被検体を、適切な群のワクチン組成物で処理した。
【００６６】
１５日目に、治療を繰り返した。６日後（すなわち、腫瘍の移植後２１日目）、腫瘍組織をマウスから回収した。製造業者に提案されたようにして、GentleMACS Dissociator（Miltenyi Biotec, Auburn, CA）および固体腫瘍均質化プロトコールを用いて、腫瘍のサンプルを処理した。
【００６７】
フローサイトメトリーアッセイを使用して、ＣＤ４４＋細胞（造血細胞のマーカー）の集団内での腫瘍浸潤ＭＤＳＣ（ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ−１＋細胞として定義）の数を分析した。腫瘍浸潤細胞の数を全腫瘍細胞１×１０６あたりの数で正規化して、平均値として表した。
【００６８】
図２に示されるように、群１（すなわち、Ｒ−ＤＯＴＡＰ−Ｅ７ペプチドおよびＧＭ−ＣＳＦ）および群５（すなわち、Ｒ−ＤＯＴＡＰ−Ｅ７およびＧＭ−ＣＳＦ）ではどちらも、未処理のマウスおよびＧＭ−ＣＳＦのみで処理したマウスと比較して、担腫瘍マウスにおけるＭＤＳＣ数に統計的に有意な減少が認められた。Ｒ−ＤＯＴＡＰ−Ｅ７ペプチドとＧＭ−ＣＳＦとの組み合わせでは、個々の成分の場合と比較して、ＭＤＳＣ数を減らす相乗効果が認められた。また、Ｒ−ＤＯＴＡＰとＧＭ−ＣＳＦとの組み合わせ（すなわち、抗原の投与なし）でも、個々の成分の場合と比較して、ＭＤＳＣ数を減らす同様の相乗効果が認められた。
【００６９】
〔実施例４〕
ワクチン組成物が担腫瘍マウスにおける腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞に対しておよぼす影響
本開示に従ってさまざまなワクチン組成物を比較し、それらが担腫瘍マウスの腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞数に対しておよぼす影響を評価してもよい。この例では、例示的なカチオン性脂質としてＲ−ＤＯＴＡＰを使用し、例示的な抗原としてＥ７ペプチドを使用し、および例示的な治療因子としてサイトカインＧＭ−ＣＳＦを使用した。
【００７０】
この例では、本開示に従ってワクチン組成物を調製し、以下の群を評価した。
群１：Ｒ−ＤＯＴＡＰ−Ｅ７ペプチド（２０μｇ／匹）およびＧＭ−ＣＳＦ（５μｇ／匹）
群２：Ｒ−ＤＯＴＡＰ−Ｅ７ペプチド（２０μｇ／匹）
群３：Ｒ−ＤＯＴＡＰのみ
群４：ＧＭ−ＣＳＦのみ
群５：Ｒ−ＤＯＴＡＰおよびＧＭ−ＣＳＦ
群６：未処理の対照
【００７１】
０日目、６〜８週齢のメスのＣ５７ＢＬ６マウス（１群あたり５匹）の右側腹部に、ＴＣ−１細胞５０，０００個／匹を皮下移植した。８日目、すべてのマウスに直径約３〜４ｍｍの腫瘍が生じた時点で、各群の被検体を適切な群のワクチン組成物で処理した。
【００７２】
１５日目に、治療を繰り返した。６日後（すなわち、腫瘍の移植後２１日目）、腫瘍組織をマウスから回収した。製造業者に提案されたようにして、GentleMACS Dissociator（Miltenyi Biotec, Auburn, CA）および固体腫瘍均質化プロトコールを用いて、腫瘍のサンプルを処理した。
【００７３】
フローサイトメトリーアッセイを使用して、ＣＤ４４＋細胞（造血細胞のマーカー）の集団内での腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞の数を分析した。腫瘍浸潤細胞数を全腫瘍細胞１×１０６あたりの数で正規化し、平均値として表した。
【００７４】
図３に示されるように、群１（すなわち、Ｒ−ＤＯＴＡＰ−Ｅ７ペプチドおよびＧＭ−ＣＳＦ）および群２（すなわち、Ｒ−ＤＯＴＡＰ−Ｅ７）ではどちらも、他の群と比較して、担腫瘍マウスにおける腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞数に統計的に有意な増加が認められた。Ｒ−ＤＯＴＡＰ−Ｅ７ペプチドとＧＭ−ＣＳＦとの組み合わせでは、個々の成分の場合と比較して、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞数を増やす相乗効果が認められた。
【００７５】
〔実施例５〕
ワクチン組成物がマウスにおける抗原特異的免疫応答に対しておよぼす影響
本開示に従ってさまざまなワクチン組成物を比較し、それらがマウスにおける抗原特異的免疫応答に対しておよぼす影響を評価してもよい。この例では、例示的なカチオン性脂質としてＲ−ＤＯＴＡＰを使用し、例示的な抗原としてＴＲＰ−２およびｇｐ１００ペプチドを使用し、例示的な治療因子としてサイトカインＧＭ−ＣＳＦを使用した。
【００７６】
この例では、本開示に従ってワクチン組成物を調製し、以下の群を評価した。
群１：Ｒ−ＤＯＴＡＰ／ＴＲＰ−２／ｇｐ１００ペプチド（１９０ｕｇ／１６０ｕｇ）
群２：Ｒ−ＤＯＴＡＰ／ＴＲＰ−２／ｇｐ１００ペプチド／ＧＭ−ＣＳＦ（１９０ｕｇ／１６０ｕｇ／０．５ｕｇ）
【００７７】
この研究には、６〜８週齢のメスのＣ５７ＢＬ６マウス（１群あたり４匹）を使用した。０日目と８日目、各群の被検体を適切な群のワクチン組成物で処理した。
【００７８】
７日後（すなわち、最初の投与後１４日目）に、マウスを屠殺し、その脾臓を回収し、全リンパ球を得られるよう処理した。ＴＲＰ−２および、ｇｐ−１００ペプチド、または無関係のペプチド対照（各１０μｇ／ｍｌ）の存在下におけるＩＦＮγ活性を、ＥＬＩＳＰＯＴによってアッセイした。値については、脾細胞１００万個あたりとして、ＴＲＰ−２およびｇｐ１００を用いて再刺激した培養から得られるスポット数から無関係の抗原を用いて再刺激した培養で得られるスポット数の引き算として表した。
【００７９】
図４に示されるように、群２（すなわち、Ｒ−ＤＯＴＡＰ／ＴＲＰ−２／ｇｐ１００ペプチド／ＧＭ−ＣＳＦ）では、ＧＭ−ＣＳＦを含まなかった群１と比較して、抗原特異的免疫応答に統計的に有意な増加が認められた。
【００８０】
上記の説明において本発明を図示し、詳細に説明してきたが、このような図示と説明は、特徴において例示であって限定的なものではないと解釈され、例示的な実施形態を説明したにすぎず、本発明の範囲内に包含されるあらゆる変更および改変が保護されることが望まれるのは、理解できよう。当業者であれば、本明細書に記載され、よって本開示の範囲内に包含される特徴を１つ以上取り入れた自らの実施の形態を容易に考案できるであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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