(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
メチロバクテリウム・コマガテ（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅ）、メチロバクテリウム・アクアチカム（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ）、及びメチロバクテリウム・プラタニ（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉ）からなる群より選択される１つ又は２つ以上の微生物又はその培養液を含むことを特徴とする臭気防止用組成物。
【請求項２】
空調装置で発生する臭気を防止するためのものであることを特徴とする請求項１に記載の臭気防止用組成物。
【請求項３】
前記微生物は、メチロバクテリウム・コマガテＨＫＭＣ−１１（ＫＣＣＭ１１３３５Ｐ）、メチロバクテリウム・アクアチカムＨＫＭＣ−１（ＫＣＣＭ１１３２５Ｐ）、及びメチロバクテリウム・プラタニＨＫＭＣ−３（ＫＣＣＭ１１３２７Ｐ）からなる群より選択される１つ又は２つ以上であることを特徴とする請求項１に記載の臭気防止用組成物。
【請求項４】
前記微生物は、メチロバクテリウム・アクアチカム及びメチロバクテリウム・プラタニの微生物２種の組み合わせ、又はメチロバクテリウム・アクアチカム、メチロバクテリウム・プラタニ、スフィンゴモナス・アクアティリス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ）及びブレビバチルス・インボカタス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｉｎｖｏｃａｔｕｓ）の微生物４種の組み合わせ、又はメチロバクテリウム・アクアチカム、メチロバクテリウム・プラタニ、レイフソニア・ソリ（Ｌｅｉｆｓｏｎｉａ  ｓｏｌｉ）及びメチロバクテリウム・コマガテの微生物４種の組み合わせ、又はメチロバクテリウム・アクアチカム、メチロバクテリウム・プラタニ、アシネトバクター・ジョンソニー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、スフィンゴモナス・アクアティリス及びメチロバクテリウム・コマガテの微生物５種の組み合わせ、又はメチロバクテリウム・アクアチカム、メチロバクテリウム・プラタニ、アシネトバクター・ジョンソニー及びシュードモナス・ニトロレデュッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓ）の微生物４種の組み合わせ、又はメチロバクテリウム・アクアチカム、メチロバクテリウム・プラタニ、アシネトバクター・ジョンソニー及びシュードモナス・ニトロレデュッセンスの微生物４種の組み合わせ、又はメチロバクテリウム・アクアチカム、メチロバクテリウム・プラタニ、レイフソニア・ソリ及びシュードモナス・ニトロレデュッセンスの微生物４種の組み合わせ、又はメチロバクテリウム・アクアチカム、メチロバクテリウム・プラタニ、ブレビバチルス・インボカタス、スフィンゴモナス・アクアティリス及びシュードモナス・ニトロレデュッセンスの微生物５種の組み合わせ、又はメチロバクテリウム・アクアチカム、メチロバクテリウム・プラタニ、アシネトバクター・ジョンソニー、スフィンゴモナス・アクアティリス及びシュードモナス・ニトロレデュッセンスの微生物５種の組み合わせであることを特徴とする請求項１に記載の臭気防止用組成物。
【請求項５】
前記微生物の組み合わせに用いられるメチロバクテリウム・コマガテ、メチロバクテリウム・アクアチカム及びメチロバクテリウム・プラタニ以外の微生物は、アシネトバクター・ジョンソニーＨＫＭＣ−４（ＫＣＣＭ１１３２８Ｐ）、ブレビバチルス・インボカタスＨＫＭＣ−６（ＫＣＣＭ１１３３０Ｐ）、レイフソニア・ソリＨＫＭＣ−８（ＫＣＣＭ１１３３２Ｐ）、シュードモナス・ニトロレデュッセンスＨＫＭＣ−９（ＫＣＣＭ１１３３３Ｐ）、及びスフィンゴモナス・アクアティリスＨＫＭＣ−１０（ＫＣＣＭ１１３３４Ｐ）からなる群より選択されることを特徴とする請求項４に記載の臭気防止用組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の臭気防止用組成物がコーティングされていることを特徴とするエバポレータコア（ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ  ｃｏｒｅ）。
【請求項７】
前記エバポレータコアには、請求項１から５のうち何れか１項に記載の臭気防止用組成物に含まれる微生物が１０４ｃｆｕ／ｇ乃至１０８ｃｆｕ／ｇの濃度で付着されていることを特徴とする請求項６に記載のエバポレータコア。
【請求項８】
前記微生物の付着は、Ｏ．Ｄ．（ｏｐｔｉｃａｌ  ｄｅｎｓｉｔｙ）値が０．３乃至０．９の微生物培養液を用いて付着されることを特徴とする請求項７に記載のエバポレータコア。
【請求項９】
前記微生物は、エバポレータコアの表面にバイオフィルムを形成することを特徴とする請求項６に記載のエバポレータコア。
【請求項１０】
請求項１から５のうち何れか一項に記載の臭気防止用組成物をエバポレータコアにコーティングする段階を含む、空調装置内の臭気を誘発しないことを特徴とする無臭エバポレータコアの製造方法。
【請求項１１】
前記コーティングする段階は、前記臭気防止用組成物に含まれた微生物を１０４ｃｆｕ／ｇ乃至１０８ｃｆｕ／ｇの濃度でエバポレータコアに付着する過程を含むことを特徴とする請求項１０に記載の無臭エバポレータコアの製造方法。
【請求項１２】
コーティングされた臭気防止用組成物内の微生物を繁殖させてバイオフィルムを形成する段階を更に含むことを特徴とする請求項１０に記載の無臭エバポレータコアの製造方法。
【請求項１３】
請求項１から５のうち何れか一項に記載の臭気防止用組成物をエバポレータコアにコーティングする段階を含むことを特徴とする空調装置の臭気防止方法。
【請求項１４】
前記コーティングする段階は、前記臭気防止用組成物に含まれた微生物を１０４ｃｆｕ／ｇ乃至１０８ｃｆｕ／ｇの濃度でエバポレータコアに付着する過程を含むことを特徴とする請求項１３に記載の空調装置の臭気防止方法。
【請求項１５】
前記臭気防止用組成物内に含まれた微生物を繁殖させてバイオフィルムを形成する段階を更に含むことを特徴とする請求項１３に記載の空調装置の臭気防止方法。
【請求項１６】
請求項１から５のうち何れか一項に記載の臭気防止用組成物をエバポレータコアにコーティングする段階を含むことを特徴とする空調装置の臭気確認方法。
【請求項１７】
前記コーティングされた臭気防止用組成物内に含まれた微生物の栄養分となる石油類又は空気汚染物質を投入して臭気が発生するか否かを確認する段階を含むことを特徴とする請求項１６に記載の空調装置の臭気確認方法。
【請求項１８】
請求項１３に記載の空調装置の臭気防止方法のためのエバポレータコアのコーティング用途のメチロバクテリウム・コマガテＨＫＭＣ−１１（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅ  ＨＫＭＣ−１１）（ＫＣＣＭ１１３３５Ｐ）。
【請求項１９】
請求項１３に記載の空調装置の臭気防止方法のためのエバポレータコアのコーティング用途のメチロバクテリウム・アクアチカムＨＫＭＣ−１（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ  ＨＫＭＣ−１）（ＫＣＣＭ１１３２５Ｐ）。
【請求項２０】
請求項１３に記載の空調装置の臭気防止方法のためのエバポレータコアのコーティング用途のメチロバクテリウム・プラタニＨＫＭＣ−３（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉ  ＨＫＭＣ−３）（ＫＣＣＭ１１３２７Ｐ）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、無臭微生物又はその培養液を含む臭気防止用組成物、及びそれを用いた臭気防止方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
清潔な空気は人間の健康と快適な暮らしの基本となり、不快な臭いや、汚染された空気は快適な環境を害する主な要因として作用する。例えば、密閉空間で不快に感じられる室内空気は次の２つの重要な要因によってもたらされる。１つの要因は、密閉環境を構成する構成物質そのもの（建物、車両など）から直接発生する室内空気の汚染物質であり、他の要因は、人間活動による物質、又は外部から流入された物質が原因となって発生した臭いである。
【０００３】
空調システムは、建物、車両、鉄道、船舶、航空機などにおいて、空気の温度、湿度、気流及び清浄度を調和させるという空気調和に目的がある、室内温度を低減して室内環境を最適化させるシステムである。このような空調システムは、生活水準の向上によって普及率がますます増加してきている。空調システムの普及率の増加によって、空調システムの基本的な機能は非常に発展してきたが、室内空気の質のための環境的部分ではまだ解決しなければならない問題がたくさん残っている。
【０００４】
空調システムにおいて、特に、エアコンの臭いの原因は、かびと細菌の代謝物質によると知られているが、該かびと細菌の種類及び微生物が、具体的にいかなる代謝物質をどれくらい分泌するかという点に対する具体的な資料はまだ明らかになっていない。
【０００５】
空調装置の構造上、ブロワーを通過した全体空気は、エバポレータコアを通過するが、冷たい冷媒と空気との熱交換時、エバポレータコアの表面には、温度差による凝縮水の凝結現象があり、この凝縮水が凝結し続けると、エバポレータコアの表面にかび及び細菌が生息、繁殖しやすい環境が整う。外部空気に露出されたエバポレータコアにかび及び細菌が増殖すると、エバポレータコアの表面に増殖した細菌の代謝物質により、微生物の揮発性有機化合物（ｍＶＯＣｓ）が発生し、エバポレータコアを通過した空気が室内に送風されると、微生物から発生した揮発性有機化合物によって、長期間使用する場合、室内はかび及び細菌による悪臭が生じることになる。
【０００６】
悪臭が発生するエバポレータコアの表面は長期間使用するものであるため、バイオフィルムで覆われており、バクテリア、細胞集合（ｃｅｌｌ  ｃｌｕｓｔｅｒ）、ＥＰＳからなるが、ＥＰＳは蛋白質（Ｐｒｏｔｅｉｎ）、ポリサッカライド、ポリウロン酸（Ｐｏｌｙｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、核酸（Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）、脂質（Ｌｉｐｉｄ）などの様々な成分を含んでいる。そのため、エバポレータコアの表面では様々な細菌、かびがバイオフィルムを養分として増殖し、代謝物質により微生物から有機化合物（ｍＶＯＣｓ）を排出するが、これがエアコンの悪臭の一要因となる腐敗臭である。
【０００７】
この悪臭を除去するために多様な種類の芳香剤が市販されているが、これらはエバポレータコアに生息するかび及び細菌を根本的に除去するものではなく、単に一時的に不快な臭いを薄める役割に過ぎない。現在、市販中の抗菌剤でも、エバポレータコアに生息する特定のかび又は細菌に特別に作用するように開発されたものはなく、単に通常の病原菌に対する抗菌力を有するという理由で販売されている。
【０００８】
したがって、本発明者は、エバポレータコアの表面に悪臭の原因を提供する細菌、かびの蒸着及び繁殖を防止するように、エバポレータコアの表面に無臭あるいは香り立つ特定の微生物からなるバイオフィルムをコーティングしたエバポレータコアの製造方法を特許文献１に開示した。
【０００９】
しかし、従来発明では、いかなる細菌が無臭微生物であるかを提示しておらず、また、これをコーティングすると、エバポレータコアで生存できるか否か、及び悪臭などの臭いを誘発する微生物の生息や悪臭を防止できるか、を十分に立証できなかった。
上述した背景技術は、ただ本発明の背景に対する理解を助けるためのものであって、この技術分野で通常の知識を有する者にとって、既に知られた従来技術に該当するだけにとどまるものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】韓国公開特許第２０１２−２０３０９号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明者らは、無臭微生物を用いて悪臭を誘発する微生物を効果的に制御する方法を求めて努力した。その結果、空調装置内で悪臭を誘発しない微生物１３種を分離することに成功し、これら又はこれらの組合せを用いてバイオフィルムを形成した場合、悪臭を誘発する微生物の生育を阻止し、結果的に悪臭を防止する可能性があることを確認して本発明を完成した。
【００１２】
したがって、本発明の目的は、無臭微生物又はその培養液を含む臭気防止用組成物を提供することにある。
本発明の他の目的は、前記臭気防止用組成物がコーティングされたエバポレータコアを提供することにある。
【００１３】
本発明の又他の目的は、前記臭気防止用組成物をエバポレータコアにコーティングする段階を含む、空調装置内の臭気を誘発しない無臭のエバポレータコアの製造方法を提供することにある。
本発明の又他の目的は、前記臭気防止用組成物をエバポレータコアにコーティングする段階を含む空調装置の臭気防止方法を提供することにある。
【００１４】
本発明の又他の目的は、前記臭気防止用組成物をエバポレータコアにコーティングする段階を含む空調装置の臭気確認方法を提供することにある。
本発明の又他の目的は、前記空調装置の臭気防止のためのエバポレータコアのコーティング用途の無臭微生物を提供することにある。
【００１５】
本発明の他の目的及び利点は、下記発明の詳細な説明、特許請求の範囲及び図面によって明確になる。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明の一様態によれば、無臭微生物又はその培養液を含む臭気防止用組成物を提供する。
本発明者らは、無臭微生物を用いて悪臭を誘発する微生物を効果的に制御する方法を求めて努力し、特に、空調装置で誘発される悪臭の原因を根本的に遮断しようと努力した。その結果、空調装置内で悪臭を誘発しない微生物１３種を分離することに成功し、これら又はこれらの組合せを用いてバイオフィルムを形成した場合、悪臭を誘発する微生物の生育を阻止し、結果的に悪臭を防止する可能性を確認した。
【００１７】
本明細書で、用語「空調装置」とは、外部環境から一部又は全部が分離された空間であって、温度、湿度、空気の清浄度、流れなどを快適に維持するシステムを総称する意味である。前記分離された空間の好ましい例は、建物内部又は車両、鉄道、船舶、航空機などの内部のように外部から部分的又は全体的に分離された内部空間をいう。前記空調装置の好ましい例としてエアコンが挙げられる。
【００１８】
空調装置は、その構造上、ブロワーを通過した全体空気がエバポレータコアを通過し、前記エバポレータコアの表面には温度差による凝縮水の凝結現象が持続して、微生物が生育しやすい環境になり、長期間使用した場合、バイオフィルム（Ｂｉｏｆｉｌｍ）が形成される。この際、微生物は、空気中に存在する室内及び室外の多様な物質を栄養分として代謝し、その結果として発生した揮発性有機化合物（ｍＶＯＣｓ）によって悪臭が発生する。
【００１９】
バイオフィルムは、微生物が群落して生きていく群落形態で、１つの膜に囲まれた層構造を有するが、前記膜は、微生物を外部環境から保護して栄養分を供給する役割をする。膜を構成する成分にＥＰＳ（Ｅｘｏｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）があり、これは蛋白質、ポリサッカライド、ポリウロン酸、核酸、脂質などの多様な成分を含む。エバポレータコアの表面では、多様な微生物がこれを養分として増殖し、代謝して悪臭を排出する。
【００２０】
本発明者らは、前記エバポレータコアから悪臭を誘発しない微生物を分離し、これらを培養して、コロニーを形成する微生物から優占菌株を分離培養した。優占菌株を分離及び培養する方法は、当業界における多様な公知方法を利用してもよいが、例えば、希釈比率、コロニーの色、大きさ、形状などの形態学的（ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）なアプローチによって優占微生物を選択することができる。
【００２１】
前記優占微生物は、メチロバクテリウム、アシネトバクター、バチルス、ブレビバチルス、デイノコッカス、シュードモナス、スフィンゴモナス又はフラボバクテリウム微生物を含み、好ましくはメチロバクテリウム・アクアチカム（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ）、メチロバクテリウム・ブラチアタム（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒａｃｈｉａｔｕｍ）、メチロバクテリウム・プラタニ（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉ）、アシネトバクター・ジョンソニー（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、バチルス・ビエトナメンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ）、ブレビバチルス・インボカタス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｉｎｖｏｃａｔｕｓ）、デイノコッカス・フィクス（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｉｃｕｓ）、レイフソニア・ソリ（Ｌｅｉｆｓｏｎｉａ  ｓｏｌｉ）、シュードモナス・ニトロレデュッセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓ）、スフィンゴモナス・アクアティリス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ）、メチロバクテリウム・コマガテ（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅ）、デイノコッカス・アパケンシス（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ａｐａｃｈｅｎｓｉｓ）又はフラボバクテリウム・オケアノセディメントン（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｏｃｅａｎｏｓｅｄｉｍｅｎｔｕｍ）を含む。
【００２２】
前記微生物は、韓国微生物保存センターに２０１２年１１月１４日又は２０１３年１２月１０日付で寄託され、次の寄託番号を受けた：メチロバクテリウム・アクアチカムＨＫＭＣ−１（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２５Ｐ）、メチロバクテリウム・ブラチアタムＨＫＭＣ−２（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２６Ｐ）、メチロバクテリウム・プラタニＨＫＭＣ−３（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２７Ｐ）、アシネトバクター・ジョンソニーＨＫＭＣ−４（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２８Ｐ）、バチルス・ビエトナメンシスＨＫＭＣ−５（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２９Ｐ）、ブレビバチルス・インボカタスＨＫＭＣ−６（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３０Ｐ）、デイノコッカス・フィクスＨＫＭＣ−７（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３１Ｐ）、レイフソニア・ソリＨＫＭＣ−８（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３２Ｐ）、シュードモナス・ニトロレデュッセンスＨＫＭＣ−９（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３３Ｐ）、スフィンゴモナス・アクアティリスＨＫＭＣ−１０（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３４Ｐ）、メチロバクテリウム・コマガテＨＫＭＣ−１１（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３５Ｐ）、デイノコッカス・アパケンシスＨＫＭＣ−１２（寄託番号：ＫＣＣＭ１１４９９Ｐ）及びフラボバクテリウム・オケアノセディメントンＨＫＭＣ−１３（寄託番号：ＫＣＣＭ１１５００Ｐ）。
前記微生物は、単独又は相異なる微生物間の組合せで、前記臭気防止用組成物に含まれることができる。
【００２３】
本発明の臭気防止用組成物は、悪臭誘発微生物の生息及び／又はこれらによって悪臭を遮断するために使用される。具体的には、本発明の組成物は、悪臭が発生する装置（例えば、空調装置、廃水処理処置など）、水（例えば、ごみ箱、便器など）、動物（例えば、汚染された家畜など）、人体（例えば、口腔内、糖尿足など）の全体又は特定の部分にコーティング又は噴射することで、悪臭を発生する原因微生物の生息を阻止するために使用される。
【００２４】
本発明の臭気防止用組成物は、前記コーティングする対象の違いによるバイオフィルムの形成能を向上させるために、当業界に公知の多様な培地成分を更に含むことができる。前記培地は、例えば、寒天、ゼラチン、アルギン酸、カラギナン又はペクチン培地を選ぶことができ、空調装置内のエバポレータコアへの適用時は、好ましくはＰＴＹＧ培地、Ｒ２Ａ培地又はＬＢ培地であり得る。
【００２５】
また、本発明の臭気防止用組成物は、悪臭の遮断や、悪臭原因菌の予防又は除去のために、前記無臭微生物の他にも芳香剤、殺菌剤、抗菌剤などを更に含むことができる。
本発明の好ましい実施例によれば、本発明の組成物は空調装置で発生する臭気を防止するためのものである。
【００２６】
本発明の組成物が適用可能な空調装置は、建物、車両、鉄道、船舶、航空機などに設置できるもので、空気の温度、湿度、気流又は清浄度を調和させるために使用されるものを含む。
【００２７】
本発明のバイオフィルムをコーティングする対象は空調装置であり、空調装置は、圧縮機、ブロワー、エバポレータコアなどを含むが、特に、本発明のバイオフィルムをコーティングする好ましい対象はエバポレータコア（ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ  ｃｏｒｅ）である。
【００２８】
具体的に前記空調装置内のエバポレータコア（ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ  ｃｏｒｅ）の表面は、空気の熱交換による凝縮水の凝結現象によって細菌が生息、繁殖しやすい環境になり、付着した細菌は所定時間が経つとバイオフィルムを形成し、除去しにくい安定した群落として生存するようになる。すなわち、悪臭微生物の繁殖を抑制するように、予め無臭微生物を繁殖させることである。
【００２９】
前記特性を用いて、本発明は、前記空調装置又はエバポレータコアに優占種又は生存力に優れた無臭微生物を予めコーティングすると、これらだけの群落により、エバポレータコア内にバイオフィルムを形成でき、悪臭及び悪臭を誘発する他の微生物の付着及び繁殖を有意に抑制できるということを見出した（実施例９から１４）。
【００３０】
本発明の他の様態によれば、本発明は、前記臭気防止用組成物がコーティングされたエバポレータコア（ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ  ｃｏｒｅ）及びその製造方法を提供する。
【００３１】
エバポレータコアのフィン（ｆｉｎ）は、アルミニウム又はアルミニウム合金であることを特徴とし、エバポレータコアに抗菌処理をしたアルミニウム又は抗菌処理をしなかった合金材質を用いてエバポレータコアを製造する。しかし、エバポレータコアの材質はアルミニウム又はアルミニウム合金に限定されることはなく、一般的にエバポレータコアはアルミニウム以外にも銅などの熱伝導率が良く、耐腐食性に優れた金属は何れも材質として利用可能であり、合金で製造したものも利用可能である。電気自動車などにはペルチェ（ＰＥＬＴＩＥＲ）素子に熱交換機を連結して使用でき、このように熱交換を容易にする同一又はほぼ類似の構造であれば、何れも材質として利用することができる。
【００３２】
前記無臭微生物又はその培養液を含む臭気防止用組成物を用いてエバポレータコアをコーティングする方法は、当業界に公知の様々な方法（例えば、噴射、塗布、浸漬）を利用できるが、好ましくは全エバポレータコアに均一にコーティングするようにエバポレータコアを無臭微生物の培養液に浸漬してエバポレータコア内のフィンを均一にコーティングすることが好ましい。前記コーティングは１回〜数回かけて行われる。
【００３３】
前記無臭微生物の培養液は、Ｏ．Ｄ．（ｏｐｔｉｃａｌ  ｄｅｎｓｉｔｙ）値が０．３〜０．９の微生物培養液を利用することが好ましく、より好ましくは０．４〜０．８の値が良い。
【００３４】
Ｏ．Ｄ．値が０．３〜０．９の微生物培養液を利用する場合、付着する微生物の濃度は１０４ｃｆｕ／ｇ〜１０８ｃｆｕ／ｇであり、Ｏ．Ｄ．値が０．４〜０．８の微生物培養液を利用する場合、付着する微生物の濃度は１０５ｃｆｕ／ｇ〜１０７ｃｆｕ／ｇである。実際に中古車が備えているエバポレータコアに存在する微生物の濃度が約１０６ｃｆｕ／ｇ程度であることを考慮すると、Ｏ．Ｄ．値が０．４〜０．８の微生物培養液を用いて１０５ｃｆｕ／ｇ〜１０７ｃｆｕ／ｇの濃度で微生物を付着させることが実車に適用する場合の側面で最も好ましい。
【００３５】
前記方式でコーティングされた無臭微生物は、エバポレータコアの表面に均一に分布及び生息して長期間（３０日以上、６０日以上又は９０日以上）安定したバイオフィルムを形成することができる（実施例１１から１３）。
【００３６】
本発明の又他の様態によれば、本発明は、前記臭気防止用組成物をエバポレータコアにコーティングする段階を含む空調装置の臭気防止方法を提供する。
本発明の一実施例によれば、本発明の組成物をコーティングしたエバポレータコアが外部空気の条件で無臭微生物の群落を維持するか否か、及びその他悪臭誘発微生物の付着と生息を阻止できるか否かを、あたかも実際の車両に設置したように、自動車のルーフにジグを設置し、ここに前記エバポレータコアを装着して実験した。実験結果、６０日経過した時点まで、初めに塗布された無臭微生物の群落を維持し、悪臭誘発の可能性のある外部微生物は検出されなかった（実施例１４）。
【００３７】
したがって、本発明の無臭微生物又はこれらの組合せを含む臭気防止用組成物でコーティングしてバイオフィルムを形成する場合、悪臭誘発可能性のある外部微生物の流入及び生息を有意的に阻止することで、空調装置の臭気を効果的に防止することができる。
本発明の又他の様態によれば、本発明は、前記臭気防止用組成物をエバポレータコアにコーティングする段階を含む空調装置の臭気確認方法を提供する。
【００３８】
前記臭気防止用組成物に含まれた微生物が実際に臭気を発生するかは、これら微生物の代謝エネルギーとなる餌の栄養供給源の成分によって変わるため、前記微生物が適用される産業において、その栄養供給源を投与しても臭気が発生しないことが重要である。
【００３９】
空調装置では、微生物は空気中に存在する室内及び室外の多様な物質を栄養分として代謝し、室内及び室外の空気汚染物質や排気ガス成分（ガソリン、軽油、ＬＰＧなどの石油類）がこれら微生物の栄養供給源になるため、これら栄養供給源を、前記微生物がコーティングされたエバポレータコアに投入して該当産業に適用すると、空調装置に臭気が発生するか否かを予め確認することができる。
【００４０】
本発明の又他の様態によれば、本発明は、空調装置の臭気防止のためのエバポレータコアのコーティング用途の微生物のメチロバクテリウム・アクアチカムＨＫＭＣ−１（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２５Ｐ）、メチロバクテリウム・ブラチアタムＨＫＭＣ−２（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２６Ｐ）、メチロバクテリウム・プラタニＨＫＭＣ−３（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２７Ｐ）、アシネトバクター・ジョンソニーＨＫＭＣ−４（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２８Ｐ）、バチルス・ビエトナメンシスＨＫＭＣ−５（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２９Ｐ）、ブレビバチルス・インボカタスＨＫＭＣ−６（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３０Ｐ）、デイノコッカス・フィクスＨＫＭＣ−７（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３１Ｐ）、レイフソニア・ソリＨＫＭＣ−８（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３２Ｐ）、シュードモナス・ニトロレデュッセンスＨＫＭＣ−９（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３３Ｐ）、スフィンゴモナス・アクアティリスＨＫＭＣ−１０（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３４Ｐ）、メチロバクテリウム・コマガテＨＫＭＣ−１１（寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３５Ｐ）、デイノコッカス・アパケンシスＨＫＭＣ−１２（寄託番号：ＫＣＣＭ１１４９９Ｐ）又はフラボバクテリウム・オケアノセディメントン−１３（寄託番号：ＫＣＣＭ１１５００Ｐ）を提供する。
【００４１】
前記微生物は、単独又は組み合わせて空調装置の臭気を防止するためのエバポレータコアのコーティング用途として使用することができる。
【発明の効果】
【００４２】
本発明の特徴及び利点を要約すると次の通りである。
（ｉ）本発明は、無臭微生物又はその培養液を含む臭気防止用組成物を提供する。
（ｉｉ）また、本発明は、前記臭気防止用組成物がコーティングされたエバポレータコア及びその製造方法を提供する。
（ｉｉｉ）更に、本発明は、前記臭気防止用組成物をエバポレータコアにコーティングする段階を含む臭気防止方法を提供する。
（ｉｖ）本発明の臭気防止用組成物を用いて悪臭誘発微生物が生息可能な対象をコーティングしてバイオフィルムを形成する場合、悪臭誘発可能性のある外部微生物の流入及び生息を有意に阻止して臭気を効果的に防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】アルミニウムフィンを滅菌し、栄養培地に浸漬（Ｄｉｐｐｉｎｇ）した後、無臭微生物を接種させるためのペトリ皿を示す。
【図２】３０日生存評価１番組合せのコロニーの色別個体数を示す。
【図３】３０日生存評価１番組合せのコロニーの色別比率を示す。
【図４】３０日生存評価１番組合せのＲＥＰ−ＰＣＲによる菌株比率を示す。
【図５】３０日生存評価２番組合せのＲＥＰ−ＰＣＲによる菌株比率を示す。
【図６】３０日生存評価３番組合せのＲＥＰ−ＰＣＲによる菌株比率を示す。
【図７】３０日生存評価３番組合せのＲＥＰ−ＰＣＲによるＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．菌株比率を示す。
【図８】３０日生存評価４番組合せのＲＥＰ−ＰＣＲによる菌株比率を示す。
【図９】３０日生存評価５番組合せのＲＥＰ−ＰＣＲによる菌株比率を示す。
【図１０】３０日生存評価Ａ組合せのＲＥＰ−ＰＣＲによる菌株比率を示す。
【図１１】３０日生存評価Ｂ組合せのＲＥＰ−ＰＣＲによる菌株比率を示す。
【図１２】３０日生存評価Ｃ組合せのＲＥＰ−ＰＣＲによる菌株比率を示す。
【図１３】３０日生存評価Ｄ組合せのＲＥＰ−ＰＣＲによる菌株比率を示す。
【図１４】３０日生存評価Ｅ組合せのＲＥＰ−ＰＣＲによる菌株比率を示す。
【図１５】３０日生存評価Ｆ組合せのＲＥＰ−ＰＣＲによる菌株比率を示す。
【図１６】９０日生存評価でＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍとＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅとの組合せの個体数を示す。
【図１７】９０日生存評価でＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍとＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅとの組合せのＲＥＰ−ＰＣＲによる菌株比率を示す。
【図１８】ジグでＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍとＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅとの組合せの個体数を示す。
【図１９】ジグでＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍとＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅとの組合せのＲＥＰ−ＰＣＲ分析による個体数変化を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
以下に、実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。これら実施例は、本発明をより具体的に説明するためのもので、本発明の要旨のため、本発明の範囲がこれら実施例により制限されることはないことは当業界で通常の知識を持つ者にとって明らかである。
【実施例】
【００４５】
［実施例１：悪臭のする中古車の確保］
【表１】
0006410730.tif 000002
本発明者は、悪臭のする中古車５種を確保し、それぞれ車種Ａから車種Ｅに装着されているエバポレータコアを取り外してエバポレータコア試片をサンプリングした。
【００４６】
［実施例２：エバポレータコア試片のサンプリング］
前記悪臭のする中古車Ａ〜Ｅから確保したエバポレータコアからえたエバポレータコアのサンプルは、使用するまで４℃で冷蔵保管されるが、ポリエチレン袋（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｂａｇ）で密封して保管した。微生物を分離培養するために、それぞれのエバポレータコアの前面部及び後面部を含む任意の部位で、フィン試料を、滅菌されたラジオペンチ（ｌｏｎｇ  ｎｏｓｅ  ｐｌｉｅｒ）を用いて各５ｇずつ採取し、混合して使用した。
【００４７】
［実施例３：エバポレータコアからの微生物の脱離過程］
下記過程によってエバポレータコアからの微生物の脱離手続き及び方法について記載する。
１）エバポレータコアから抽出した試料を混ぜて混合器に入れる。
２）滅菌された１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ；Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ）２００ｍｌを混合器に入れる。
３）混合した試料とＰＢＳとを３０秒間混合する。
４）混合器を氷に１分間置く。
５）３）〜４）ステップを２回更に繰り返す。
６）懸濁液を４℃で３分間１３０００ｒｐｍで遠心分離（ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ）する。
７）上澄液だけ採って、新しいチューブに移し入れる。
８）滅菌綿棒を上澄液に浸し、サンプルを採取したエバポレータコアの表面を複数回ふき取る。
９）ふき取った綿棒は、上澄液にその頭部（ｈｅａｄ）だけを入れてボルテックス（ｖｏｒｔｅｘｉｎｇ）する。
１０）６）で獲得した沈殿物と９）の混合物を混ぜて接種原液として使用する。
前記１）〜１０）の過程を車種Ａから車種Ｅに装着されているエバポレータコアに対してそれぞれ物理的脱離を行って微生物を分離した。
【００４８】
［実施例４：微生物の分離培養］
エアコンの細菌の分離は、通常、一般細菌という好気性従属栄養細菌を、従属栄養平板培養を用いて分離する。一般細菌の分離に使用する複合栄養培地は、ＰＴＹＧ寒天培地（ＰＴＹＧ  ａｇａｒ  ｍｅｄｉｕｍ）、Ｒ２Ａ寒天培地（Ｒ２Ａ  ａｇａｒ  ｍｅｄｉｕｍ）の２種類を使用する。ＰＴＹＧ寒天培地は、ペプトン０．２５ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、トリプトン０．２５ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、酵母エキス０．５ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、グルコース０．５ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ（Ｓｉｇｍａ）、ＣａＣｌ２３ｍｇ（Ｓｉｇｍａ）、バクト寒天（Ｂａｃｔｏ  ａｇａｒ）１５ｇ（Ｄｉｆｃｏ）を蒸溜水９８０ｍｌに入れてｐＨ７．０で１２１℃、１５分間高圧滅菌した。Ｒ２Ａ寒天培地は、酵母エキス０．５ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、プロテオースペプトンＮｏ．３  ０．５ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、カザミノ酸０．５ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、デキストロース０．５ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、可溶性でんぷん０．５ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、ピルビン酸ナトリウム０．３ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、硫酸二カリウム０．３ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、硫酸マグネシウム０．０５ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、バクト寒天１５ｇ（Ｄｉｆｃｏ）を蒸溜水９８０ｍｌに入れてｐＨ７．２で１２１℃、１５分間高圧滅菌した。非優占の一般細菌を分離するために、３種類の抗生剤を使用するが（表２）、各抗生剤は１００ｐｐｍの濃度でフィルタ滅菌した後、培地温度が約５０℃程度になると、接種して抗生剤培地を製作した。
【００４９】
【表２】
0006410730.tif 000003
【００５０】
［実施例５：真菌（かび）の分離培養］
エアコン真菌（かび）の分離培養は、栄養培地で好気性平板培養を行って分離する。真菌（かび）の分離培養に使用する培地は、ポテトデキストロース寒天培地及び麦芽エキス寒天培地の２種類を使用した。ポテトデキストロース寒天培地は、ジャガイモでんぷん４ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、デキストロース２０ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、バクト寒天１５ｇ（Ｄｉｆｃｏ）を蒸溜水９８０ｍｌに入れてｐＨ５．１で１２１℃、１５分間高圧滅菌した。麦芽エキス寒天培地は、麦芽エキス２０ｇ（Ｄｉｆｃｏ）、バクト寒天１５ｇ（Ｄｉｆｃｏ）を蒸溜水９８０ｍｌに入れてｐＨ５．０で１２１℃、１５分間高圧滅菌した。
真菌の分離培養のために９０ｍｍ×１５ｍｍのペトリ皿を使用し、培養された真菌をそれぞれ分離培養するためには６０ｍｍ×１５ｍｍのペトリ皿が使用した。
【００５１】
［実施例６：エバポレータコアの微生物が培養された全体培地で優占菌株の分離培養］
優占菌株を分離培養するためには、まず希釈比率とコロニーの色、大きさ、形状など形態学的なアプローチによって多様な優占菌株を選別しなければならないため、下記手続きにより優占菌株を分離培養する。
１）離培養された培地でかびとバクテリアとを分けて分離する。
２）形態学的に異なる複数の細菌を、ループを用いて複合培地に接種して純粋分離する。
３）接種された培地のうち、最も生育の良い培地を選択して継代培養する。
４）かびは菌糸の終端部を外科用メス（ｓｃａｌｐｅｌ）を用いて分離した後、複合培地に接種する。
５）かび菌株も、接種された培地のうち、最も生育の良い培地を選択して継代培養する。
【００５２】
［実施例７：エバポレータコアの優占バクテリアの遺伝的特性の分析］
ＲＥＰ−ＰＣＲパターン分析によるフィンガープリント（Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ）調査
ＲＥＰ−ＰＣＲは、細菌染色体の構造を分析する分子生物学的方法であって、各細菌菌株と他の細菌を分けて識別できるフィンガープリント方法である。ＲＥＰ−ＰＣＲを行うために下記の各手続きによって遺伝的特性を分析した。
【００５３】
（１）細胞溶解（Ｃｅｌｌ  ｌｙｓｉｓ）手続き
１）Ｌｙｓｅ−Ｎ−Ｇｏ  ＰＣＲ試薬（Ｒｅａｇｅｎｔ）（Ｔｈｅｒｍｏ）２．５μＬをＰＣＲチューブに入れる。
２）クリーンベンチでコロニーをピペットで採って該チューブに入れてピペット操作する。この際、採った量は溶液がぼやけるようにならないように注意する。
３）製造業者の提供する指示書に従ってＰＣＲ装置で培養する。
４）下記の表３に記載されている溶解（Ｌｙｓｉｓ）プログラムによるサイクルを繰り返し、９サイクルで８０℃になると、オフせずにそのまま置く。
【００５４】
【表３】
0006410730.tif 000004
【００５５】
（２）ＰＣＲ反応（ｒｅａｃｔｉｏｎ）
下記表４に記載されているＰＣＲ反応に必要な成分を所定の量に合わせて混合することで反応混合物を製造し、これを用いて表５に記載されたように予備変性段階（ｐｒｅ−ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ）９４℃で７分、変性段階（ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ）９２℃で１分、冷却段階（ａｎｎｅａｌｉｎｇ）５１．５℃で１分、延長段階（ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）６５℃で８分の変性、冷却、延長過程を３３回繰り返してＰＣＲ増幅過程を行った。
【００５６】
【表４】
0006410730.tif 000005
【００５７】
【表５】
0006410730.tif 000006
【００５８】
（３）ゲル電気泳動（  Ｇｅｌ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）
それぞれのＰＣＲによって増幅されたＤＮＡ断片を採って、ＥｔＢｒを添加した１．２−１．５％のアガロース・ゲル（ａｇａｒｏｓｅ  ｇｅｌ）を使用し、６ｘ色素（ｄｙｅ）とサンプルを１：５の比率で混合して、できるだけ多量をローディングした。大部分のＰＣＲ製品は１００〜１０００ｂｐであるため、１００ｂｐのラダー（ｌａｄｄｅｒ）を共にローディングしてできるだけゆっくり（５０Ｖ）ブロモフェノール・ブルー（ｂｒｏｍｏｐｈｅｎｏｌ  ｂｌｕｅ）とキシレンシアノール色素（ｘｙｌｅｎｅ  ｃｙａｎｏｌ  ｄｙｅ）の中間が全体ゲルの中間となるように電気泳動する。ゲル上のＤＮＡパターンが同一の菌株は同じ菌株であると看做す。
【００５９】
（４）エアコン優占バクテリアの１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子分析による同定
１６Ｓ  ｒＲＮＡ（ｒｉｂｏｓｏｍａｌ  Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）遺伝子は、バクテリアの遺伝学的分類同定のために用いられ、ＲＥＰ−ＰＣＲにより分類されたバクテリアの属（ｇｅｎｕｓ）及び種（ｓｐｅｃｉｅｓ）の水準での同定が可能である。１６Ｓ  ｒＲＮＡは、多様な蛋白質と相互作用してリボソーム（Ｒｉｂｏｓｏｍｅ）を構成するＲＮＡであって、その完全な序列やオリゴヌクレオチド（Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）の目録に対する塩基配列が２０００種以上の細菌から明らかになったため、１６Ｓ  ｒＲＮＡの遺伝子の類似性に基づいて細菌をいくつかの主要群に分けることができる。前記１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列の変化率が大部分のゲノムにある他の遺伝子の塩基配列よりも非常に少ないため、１６Ｓ  ｒＲＮＡ塩基配列の類似度の程度が生物間の系統学的距離を反映すると認められている。前記１６Ｓ  ｒＲＮＡ遺伝子の切片の塩基配列を分析し、その類似度によって微生物を同定する方法は、上述した脂肪酸分析及び炭水化物同化能分析法と共に微生物、特に産業的に効果的な微生物を同定する場合の代表的な同定方法として用いられてきた。
【００６０】
＜１６Ｓ  ｒＲＮＡ  ＰＣＲ＞
ＰＣＲ条件（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）（総５０μＬ）：ＤＮＡとＴａｑを除いた残り溶液を下記表６のように必要量だけ混合して該溶解（ｌｙｓｉｓ）溶液に４４．５μＬを加えた。次に、表７のように予備変性段階（ｐｒｅ−ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ）９４℃で５分、変性段階（ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ）９４℃で１分、冷却段階（ａｎｎｅａｌｉｎｇ）５５℃で１分、延長段階（ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ）７２℃で１分３０秒を行い、変性、冷却及び延長段階を２９回更に施してＰＣＲ増幅過程を行った。
【００６１】
【表６】
0006410730.tif 000007
【００６２】
【表７】
0006410730.tif 000008
【００６３】
（５）ＰＣＲ精製（ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）
１６Ｓ−ｒＲＮＡ  ＰＣＲを用いて増幅した産物をＱｉａｑｕｉｃｋ  ＰＣＲ  ｐｕｒｉｆｃａｔｉｏｎ  ｋｉｔを用いて下記の方法きにより精製した。
１）ＰＣＲ製品の５倍のＰＢバッファー（ｂｕｆｆｅｒ）を入れる。
２）混合した液をＱＩＡｑｕｉｃｋカラム（ｃｏｌｕｍｎ）に分注する。
３）ＤＮＡを結合（ｂｉｎｄｉｎｇ）させるために１分間遠心分離し、通過した混合液を除去する。
４）洗浄のために７５０μＬのＰＥバッファーをＱＩＡｑｕｉｃｋカラムに入れて１分間遠心分離し、通過した混合液を除去する。
５）１分間再び遠心分離する。
６）ＱＩＡｑｕｉｃｋカラムを新たなチューブに移す。
７）ＤＮＡを抽出するために３０μＬのＥＢバッファーを入れて１分間置く。
８）１分間遠心分離してＥＢに溶けたＤＮＡをチューブに集める。
【００６４】
（６）分離した各微生物の名称及び微生物の特性
＜微生物１＞
１．微生物の名称：ＨＫＭＣ−１
属名：Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
種名：ａｑｕａｔｉｃｕｍ
寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２５Ｐ（２０１２年１１月１４日）
２．復元条件
イ．復元剤
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
ロ．温度（℃）２８℃で７日間培養
３．培地
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
４．培養条件
イ．好気性、嫌気性：好気性
ロ．温度（℃）２８℃
ハ．振盪、静置（液体、固体）を問わず使用可能
５．保存条件
温度（℃）−７０℃
【００６５】
＜微生物２＞
１．微生物の名称：ＨＫＭＣ−２
属名：Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
種名：ｂｒａｃｈｉａｔｕｍ
寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２６Ｐ（２０１２年１１月１４日）
２．復元条件
イ．復元剤
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
ロ．温度（℃）２８℃で７日間培養
３．培地
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
（３）殺菌条件：１２１℃で２０分
４．培養条件
イ．好気性、嫌気性：好気性
ロ．温度（℃）２８℃
ハ．振盪、静置（液体、固体）を問わず使用可能
５．保存条件
温度（℃）−７０℃
【００６６】
＜微生物３＞
１．微生物の名称：ＨＫＭＣ−３
属名：Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
種名：ｐｌａｔａｎｉ
寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２７Ｐ（２０１２年１１月１４日）
２．復元条件
イ．復元剤
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
ロ．温度（℃）２８℃で７日間培養
３．培地
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
４．培養条件
イ．好気性、嫌気性：好気性
ロ．温度（℃）２８℃
ハ．振盪、静置（液体、固体）を問わず使用可能
５．保存条件
温度（℃）−７０℃
【００６７】
＜微生物４＞
１．微生物の名称：ＨＫＭＣ−４
属名：Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ
種名：ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ
寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２８Ｐ（２０１２年１１月１４日）
２．復元条件
イ．復元剤
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
ロ．温度（℃）２８℃で７日間培養
３．培地
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
４．培養条件
イ．好気性、嫌気性：好気性
ロ．温度（℃）２８℃
ハ．振盪、静置（液体、固体）を問わず使用可能
５．保存条件
温度（℃）−７０℃
【００６８】
＜微生物５＞
１．微生物の名称：ＨＫＭＣ−５
属名：Ｂａｃｉｌｌｕｓ
種名：ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ
寄託番号：ＫＣＣＭ１１３２９Ｐ（２０１２年１１月１４日）
２．復元条件
イ．復元剤
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
ロ．温度（℃）２８℃で７日間培養
３．培地
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
４．培養条件
イ．好気性、嫌気性：好気性
ロ．温度（℃）２８℃
ハ．振盪、静置（液体、固体）を問わず使用可能
５．保存条件
温度（℃）−７０℃
【００６９】
＜微生物６＞
１．微生物の名称：ＨＫＭＣ−６
属名：Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ
種名：ｉｎｖｏｃａｔｕｓ
寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３０Ｐ（２０１２年１１月１４日）
２．復元条件
イ．復元剤
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
ロ．温度（℃）２８℃で７日間培養
３．培地
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
４．培養条件
イ．好気性、嫌気性：好気性
ロ．温度（℃）２８℃
ハ．振盪、静置（液体、固体）を問わず使用可能
５．保存条件
温度（℃）−７０℃
【００７０】
＜微生物７＞
１．微生物の名称：ＨＫＭＣ−７
属名：Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ
種名：ｆｉｃｕｓ
寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３１Ｐ（２０１２年１１月１４日）
２．復元条件
イ．復元剤
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
ロ．温度（℃）２８℃で７日間培養
３．培地
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
４．培養条件
イ．好気性、嫌気性：好気性
ロ．温度（℃）２８℃
ハ．振盪、静置（液体、固体）を問わず使用可能
５．保存条件
温度（℃）−７０℃
【００７１】
＜微生物８＞
１．微生物の名称：ＨＫＭＣ−８
属名：Ｌｅｉｆｓｏｎｉａ
種名：ｓｏｌｉ
寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３２Ｐ（２０１２年１１月１４日）
２．復元条件
イ．復元剤
（１）組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
（２）ｐＨ：７．０
（３）殺菌条件：１２１℃で２０分
ロ．温度（℃）２８℃で７日間培養
３．培地
（１）組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
（２）ｐＨ：７．０
（３）殺菌条件：１２１℃で２０分
４．培養条件
イ．好気性、嫌気性：好気性
ロ．温度（℃）２８℃
ハ．振盪、静置（液体、固体）を問わず使用可能
５．保存条件
温度（℃）−７０℃
【００７２】
＜微生物９＞
１．微生物の名称：ＨＫＭＣ−９
属名：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
種名：ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓ
寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３３Ｐ（２０１２年１１月１４日）
２．復元条件
イ．復元剤
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
ロ．温度（℃）２８℃で７日間培養
３．培地
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
４．培養条件
イ．好気性、嫌気性：好気性
ロ．温度（℃）２８℃
ハ．振盪、静置（液体、固体）を問わず使用可能
５．保存条件
温度（℃）−７０℃
【００７３】
＜微生物１０＞
１．微生物の名称：ＨＫＭＣ−１０
属名：Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ
種名：ａｑｕａｔｉｌｉｓ
寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３４Ｐ（２０１２年１１月１４日）
２．復元条件
イ．復元剤
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
ロ．温度（℃）２８℃で７日間培養
３．培地
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
４．培養条件
イ．好気性、嫌気性：好気性
ロ．温度（℃）２８℃
ハ．振盪、静置（液体、固体）を問わず使用可能
５．保存条件
温度（℃）−７０℃
【００７４】
＜微生物１１＞
１．微生物の名称：ＨＫＭＣ−１１
属名：Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
種名：ｋｏｍａｇａｔａｅ
寄託番号：ＫＣＣＭ１１３３５Ｐ（２０１２年１１月１４日）
２．復元条件
イ．復元剤
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
ロ．温度（℃）２８℃で７日間培養
３．培地
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
４．培養条件
イ．好気性、嫌気性：好気性
ロ．温度（℃）２８℃
ハ．振盪、静置（液体、固体）を問わず使用可能
５．保存条件
温度（℃）−７０℃
【００７５】
＜微生物１２＞
１．微生物の名称：ＨＫＭＣ−１２
属名：Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ
種名：ａｐａｃｈｅｎｓｉｓ
寄託番号：ＫＣＣＭ１１４９９Ｐ（２０１３年１２月１０日）
２．復元条件
イ．復元剤
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
ロ．温度（℃）２８℃で７日間培養
３．培地
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
４．培養条件
イ．好気性、嫌気性：好気性
ロ．温度（℃）２８℃
ハ．振盪、静置（液体、固体）を問わず使用可能
５．保存条件
温度（℃）−７０℃
【００７６】
＜微生物１３＞
１．微生物の名称：ＨＫＭＣ−１３
属名：Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
種名：ｏｃｅａｎｏｓｅｄｉｍｅｎｔｕｍ
寄託番号：ＫＣＣＭ１１５００Ｐ（２０１３年１２月１０日）
２．復元条件
イ．復元剤
〈１〉組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
〈２〉ｐＨ：７．０
〈３〉殺菌条件：１２１℃で２０分
ロ．温度（℃）２８℃で７日間培養
３．培地
（１）組成：ＰＴＹＧ培地（１Ｌ当たりペプトン０．２５ｇ、トリプトン０．２５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、ＭｇＳＯ４３０ｍｇ、ＣａＣｌ２３ｍｇ）又はＲ２Ａ培地。
（２）ｐＨ：７．０
（３）殺菌条件：１２１℃で２０分
４．培養条件
イ．好気性、嫌気性：好気性
ロ．温度（℃）２８℃
ハ．振盪、静置（液体、固体）を問わず使用可能
５．保存条件
温度（℃）−７０℃
【００７７】
［実施例８：分離した微生物のアルミニウムフィンでの官能評価］
（１）栄養培地での培養
前記実施例７で同定した微生物のうちの１１種の官能的特性を分析するために、微生物を分離した栄養培地で７日間２８℃で培養して評価を実施した。下記に、バクテリアを栄養培地で培養する過程を記述する。
１）純粋分離培養された微生物を液体栄養培地に接種する。
２）接種された培地を２８℃で５〜７日間培養する。
３）固体栄養培地に、液体培地で培養された菌体を１００μＬ採って接種する。
４）接種した菌体をスプレッダー（ｓｐｒｅａｄｅｒ）を用いて均一に広げる。
５）ペトリ皿を密封して２８℃で１０日間培養する。
（２）アルミニウムフィン培地での官能評価
矩形のアルミニウムフィンを滅菌処理し、これをホコリ及び栄養培地に浸漬した。次に、バクテリアを接種して前記栄養培地での段階(2)−(4)に記載された条件と同様にして培養して評価し、これを下記表８に官能評価の結果を記載した。
１）抗菌剤が処理されたアルミニウムフィン：エバポレータコアの主な材料となるアルミニウム上に抗菌コーティングしたもので、市販品として購買可能なエバポレータコア製品のコーティングである。
２）抗菌剤が処理されていない、親水コーティング処理のみをしているアルミニウムフィン：エバポレータコアのコーティング工程のうち、親水工程のみ行ったアルミニウムフィンである。通常、親水工程と抗菌工程が同時に行われる。抗菌性コティングフィンと抗菌性のないコティングフィンを比較するために特別に製作したものである。エバポレータコアは、軽量化のためにアルミニウムフィンで製作されるが、銅材質、鋼鉄材質など多様な金属にしても製造可能である。
【００７８】
【表８】
0006410730.tif 000009
アルミニウム抗菌剤フィン及び無抗菌剤フィンの両方共に前記１１種の微生物を接種して培養した結果、全て無臭という結果が得られた。
【００７９】
［実施例９：無臭微生物の最適の付着条件の評価］
（１）無臭微生物のフィン付着の最適濃度分析
前記１１種の無臭微生物のエバポレータコアのコーティングのために、２０１２年の研究結果（優先出願）のように１０６ｃｆｕ／ｇ水準で接種するための付着滴定濃度を確認した。濃度確認試験は、共通菌株の１つのＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍを使用し、２８℃で後期対数期（ｌａｔｅ  ｌｏｇ  ｐｈａｓｅ）まで培養した後、滅菌された０．８５％の生理食塩水（ｓａｌｉｎｅ）で洗浄し、４℃で１８時間培養した。４℃で培養した後、Ｏ．Ｄ．（ｏｐｔｉｃａｌ  ｄｅｎｓｉｔｙ）を０．７４９、０．５８８、０．５５、０．５、０．４５に滴定した後、２ｇのＵ字状のフィンを漬けて１時間室温で一定のｒｐｍで振盪（ｓｈａｋｉｎｇ）しながら付着した。このようにそれぞれの濃度の微生物が付着されたフィンは混合器により脱離され、Ｒ２Ａ寒天プレート（Ｒ２Ａ  ａｇａｒ  ｐｌａｔｅ）に連続希釈法（ｓｅｒｉａｌ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ）により平板塗抹した。
このような平板塗抹の結果、Ｏ．Ｄ．数値によってフィンに付着される微生物の濃度が変化することを確認することができた。Ｏ．Ｄ．０．７４９の場合は１．５３×１０８±  １．５２×１０７ｃｆｕ／ｇのフィンの付着程度を示し、Ｏ．Ｄ．０．５８８と０．５５はそれぞれ４．００×１０７±１．００×１０７ｃｆｕ／ｇのフィン、１．０３×１０７±  ８．５０×１０５ｃｆｕ／ｇのフィンの付着程度を示した。更に、Ｏ．Ｄ．０．５とＯ．Ｄ．０．４５の場合は６．００×１０６±７．００×１０５ｃｆｕ／ｇのフィン、２．５３×１０６±３．５１×１０５ｃｆｕ／ｇのフィンの付着程度を示すため、Ｏ．Ｄ．による付着程度は比例関係を示すことを確認することができた。これら付着濃度のうち、微生物が分離されたエバポレータコアが有する１０６ｃｆｕ／ｇ水準の微生物をコーティングするＯ．Ｄ．値の０．５を用いて他の１０種の無臭微生物をコーティングした。
【００８０】
（２）無臭微生物のエバポレータコア及びフィンの付着性の確認
前記フィンの付着実験の結果、属（ｇｅｎｕｓ）にかかわらず、１１種の無臭微生物は同一のＯ．Ｄ．で同じ付着程度を示すことを確認した。したがって、菌株の１つのＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍを用いてフィンと同一のＯ．Ｄ．の培養液を使用してエバポレータコアに付着される微生物の量を確認した。
Ｏ．Ｄ．０．５で滴定されたＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍは、エバポレータコアで８．９５×１０６±５．５１×１０５ｃｆｕ／ｇのフィンの付着程度を示した。このように同じ培養液を用いて付着したエバポレータコアは、２．５５×１０６±３．５１×１０５ｃｆｕ／ｇのフィンの付着程度を示した。このような結果から、同一のＯ．Ｄ．の培養液を使用すると、同じ水準の微生物が付着されることを確認することができた。
【００８１】
［実施例１０：分離された微生物のエバポレータコアへの付着時の官能評価］
（１）１１種の単一無臭微生物のエバポレータコアへの付着及び官能評価
前記実施例８で同定した微生物の官能的特性を分析するために、１１種の無臭微生物をそれぞれエバポレータコアに付着して官能評価を実施した。
このような条件で各微生物に対する臭気評価実験により、各微生物の悪臭発生程度を分析した。微生物が付着したエバポレータコアは、１５人以上の官能評価要員によって評価された。その結果、１１種の微生物から１．７８±  ０．４１の平均官能結果が得られた（５点評点法）（０：臭気なし；１：とても弱い臭気（感知しにくい臭気）；２：弱い臭気（種類を区分しにくい臭気）；３：臭い（種類を区分できる臭気）；４：強い臭気及び５：非常に強い臭気）。これらの中、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．は１．６２５±  ０．２９の数値を示して平均よりも低い官能評価結果であり、共通菌株３種（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒａｃｈｉａｔｕｍ及びＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉ）の場合は１．６±  ０．３５の数値を示した。官能評価の結果、最も高い点数を受けた単一菌株はＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｉｃｕｓで２．８点を示し、その次はＢａｃｉｌｌｕｓ  ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓが２．１点で高い官能評価結果を示した（表８）。
これら官能評価結果に基づき、臭気の発生程度が比較的高い３種の微生物を組合せ菌株から排除した。排除された菌株はＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒａｃｈｉａｔｕｍ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｖｉｅｔｎａｍｅｎｓｉｓ、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｆｉｃｕｓであった。
【００８２】
【表９】
0006410730.tif 000010
【００８３】
再現条件＊：ステップ１：ガソリン（微生物の餌）の投入後、２時間の再現期を稼動（温度：２５℃、湿度：５０％〜９０％、風速：１７０ＣＭＨ、餌の注入：ガソリン１０ｐｐｍ）
ステップ２：２時間の再現期を止めた後（温度：２５℃、湿度：３０％〜５０％、風速：０ＣＭＨ、再現期の入口を少し開いて臭気を評価）
【００８４】
（２）無臭微生物組合せの官能評価
前記単一微生物の官能評価から選別された８種の無臭微生物を２種の共通菌株（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ及びＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉ）と組み合わせて最適の無臭組合せとして１４組合せを確保した。選別された無臭組合せの、実際的な官能評価のために組合せ微生物を、同じ密度水準で混合した後、エバポレータコアに付着させて官能評価を行った。
臭気評価の結果、１４組合せの平均官能評価の数値は１．８９±  ０．５２（５点満点）であり、共通菌株と共にＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉとＳｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ、及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓを含む１４番目の組合せが１．２５で最も低い官能評価点数を示し、共通菌株を含んだＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ組合せが３．１４で最も高い官能点数を示した（表１０）。このような数値的評価と共に臭気の質に対する評価を考慮して、共通菌株と共にＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｉｎｖｏｃａｔｕｓが単独で含まれた２種類の３菌株組合せとＢｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｉｎｖｏｃａｔｕｓ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅの３菌株が組み合わされた７番組合せとＬｅｉｆｓｏｎｉａ  ｓｏｌｉ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓが含まれた１３番組合せを除いた１０個の組合せが最終生存競争実験のために選ばれた。
【００８５】
【表１０】
0006410730.tif 000011
【００８６】
［実施例１１：１０個組合せの３０日生存評価］
前記実施例９−（２）の官能評価の結果、１０個の微生物組合せが無臭組合せとして選別され、該当微生物を対象として３０日間の生存評価を行った。コーティング組合せとして用いられた微生物の組合せ番号及び微生物リストは次の通りである（表１１）。
【００８７】
【表１１】
0006410730.tif 000012
【００８８】
培養とエバポレータコアのコーティングの順序によって１番から１０番までの順で行われ、それぞれのコーティングは１０６ｃｆｕ／ｇのフィンの水準で行われた。
１番組合せは、エバポレータコアで１．０９×１０７±８．６５×１０５ｃｆｕ／ｇのフィンのコーティング水準を示し、表現型を見た時、赤色コロニーが８．７０×１０６±２．３５×１０６ｃｆｕ／ｇのフィン、白色コロニーが２．５０×１０５±７．０７×１０４ｃｆｕ／ｇのフィン、黄色コロニーが１．９０×１０６±１．７３×１０５ｃｆｕ／ｇのフィンの水準として検出された。３０日経過後は４．６３×１０６±５．０９×１０４ｃｆｕ／ｇのフィンの水準の総細菌数を示し、赤色コロニーだけが４．６３×１０６±１．５３×１０５ｃｆｕ／ｇのフィンの水準で確認された（図２）。これは比率を確認した時、赤色コロニーが８０％以上を占め、３０日経過後は１００％を占めるということを確認することができる（図３）。前記表現型を見たとき、赤色コロニーはピンク色素沈着（ｐｉｎｋ  ｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）を有するＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍを含むと疑われる。ＲＥＰ−ＰＣＲによる組合せ微生物の比率を確認してみた結果、Ｔｉｍｅ  ０でＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓを除いたＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉ及びＢｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｉｎｖｏｃａｔｕｓを確認できず、特に共通微生物として用いたＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉが検出されなかった。１番組合せのｔｉｍｅ  ０では、総８６個のＲＥＰ−ＰＣＲサンプルのうち、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍが７０個で最も多く検出され、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｑｕａｔｉｌｉｓが１２個、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓが４個でそれぞれ検出された。Ｔｉｍｅ  ３０日には総３２個のサンプルのうち、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍが３２個サンプル全体に存在し、既存の微生物が死滅などの理由によって全く検出されないことを確認した（図４）。
【００８９】
２番組合せに用いられた菌株は、共通菌株のＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍとＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉを含み、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓが使用された。Ｔｉｍｅ  ０でエバポレータコアには１．５２×１０７±５．４２×１０５ｃｆｕ／ｇのフィン水準の総細菌が付着されていることが確認され、３０日経過後はエバポレータコア上で３．２３×１０６±８．３９×１０４ｃｆｕ／ｇのフィン水準の総細菌が生存することが確認された。ＲＥＰ−ＰＣＲパターンの分析結果、ｔｉｍｅ  ０のエバポレータコアで生存した微生物はＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓであると確認され、１０５個のＲＥＰ−ＰＣＲサンプルのうち、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍが９４個、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｑｕａｔｉｌｉｓが７個、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓが４個確認された。３０日経過後に確認したＲＥＰ−ＰＣＲサンプルでは３０個のサンプル全体がＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍであると確認された（図５）。
【００９０】
３番微生物組合せはｔｉｍｅ  ０で総細菌数が１．８３×１０７±３．８９×１０５ｃｆｕ／ｇのフィン水準で付着されていることを確認され、その後３０日経過後は５．２３×１０６±１．５０×１０５ｃｆｕ／ｇのフィン水準で存在することを確認した。ＲＥＰ−ＰＣＲ分析による微生物の個体数を確認した結果、組合せに使用された５個の微生物のうち、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉを除いた４種の微生物のＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅがｔｉｍｅ  ０で生存していることを確認し、３０日経過後にも共通微生物の１つのＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ以外に、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅが生存することを確認した。Ｔｉｍｅ  ０の微生物の生存比率は１０１個のサンプルのうち、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍが４９個、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉが１個、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｑｕａｔｉｌｉｓが１１個、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅが４０個の比率で確認され、３０日経過後はＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍが１９個、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅが１５個で、３４個のサンプルが検出された（図６）。これら比率において、生存したＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ２種の比率を時間変化によって察し見ると、３０日経過に構わず、約１：１の均質な比率を維持することを確認することができる（図７）。
【００９１】
４番組合せに使用された５種の菌株は、付着する時に２．０４×１０７±４．９１×１０５ｃｆｕ／ｇのフィン水準の総細菌が存在すると確認され、ＲＥＰ−ＰＣＲによるそれぞれの微生物の個体数を確認してみると、８６個の代表サンプルのうち、８０個のサンプルがＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍで、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉが１個、Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｉｎｖｏｃａｔｕｓが３個、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓが２個検出された（図８）。
【００９２】
５番組合せはＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓの４つの菌株からなり、初期エバポレータコアに付着する時に２．８６×１０７±１．１９×１０６ｃｆｕ／ｇのフィン水準の総細菌が付着されたと確認され、ＲＥＰ−ＰＣＲを用いて生存微生物を同定した結果、２８個の代表サンプルのうちＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍが２４個、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓがそれぞれ２個ずつ検出された（図９）。
【００９３】
今まで行った微生物組合せの３０日生存評価で、共通細菌として使用したＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉが微生物組合せによりエバポレータコアのコティングに使用すると生存力が低いことを確認し、その代わりに、３０日まで共通菌株のＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍとほぼ類似の生存性を見せたＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅを用いて微生物組合せを更に製作して３０日の生存性評価を行うことにした。
【００９４】
［実施例１２：追加６個組合せの３０日生存評価］
３０日生存評価で確認されたＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉの弱い生存力を代える微生物としてＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅを選定し、これを共通菌株のＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍと混合して使用する微生物組合せを６個更に選定した（表１２）。更に選定された微生物は、官能的に無臭ではないとしても生存性に優れた微生物を少数含んでおり、これによって、更に堅固な微生物組合せを製作検出しようとした。
【００９５】
【表１２】
0006410730.tif 000013
【００９６】
Ａ組合せは、エバポレータコアにコーティングする時に４．３０×１０６±１．２５×１０６ｃｆｕ／ｇのフィン水準の生菌が付着されていることを確認し、３０日経過後にも４．３０×１０６±１．２５×１０６ｃｆｕ／ｇのフィン水準が生存することを確認した。ＲＥＰ−ＰＣＲパターン分析により、付着された微生物の群落構造を確認した結果、ｔｉｍｅ  ０では標本の４５個のサンプルのうち８個のサンプルがＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍであると確認され、３７個のサンプルがＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅであると確認された。３０日経過後には２０個のサンプルのうち５個のサンプルがＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ、１５個のサンプルがＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅであると確認され、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍの比率が多少増加したが、有意義な差ではない（図１０）。
【００９７】
Ｂ組合せは、２．０７×１０７±１．１１×１０６ｃｆｕ／ｇのフィン水準の総細菌がｔｉｍｅ  ０で確認され、３０日経過後には１．７４×１０７±１．３０×１０６ｃｆｕ／ｇのフィン水準が検出された。ＲＥＰ−ＰＣＲによる個体数の確認結果、ｔｉｍｅ  ０のＢ組合せは３４個の代表サンプルのうち１つがＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍであると確認され、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅは１１個のサンプルが確認された。また、残り２２個のサンプルは全てＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ａｐａｃｈｅｎｓｉｓであると確認され、付着されている微生物の４０％以上がＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ａｐａｃｈｅｎｓｉｓであることを確認した（図１１）。３０日経過後、ＲＥＰ−ＰＣＲパターンの分析結果、微生物はＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍが１１．１％、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅは２２．２％、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ａｐａｃｈｅｎｓｉｓは６６．６％の比率で生存することを確認し、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍの比率がｔｉｍｅ  ０に比べて少量増加したが、３種の微生物が全て生存した。
【００９８】
Ｃ組合せでは、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅ、Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｌｉｎｇｕａｌｅ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｄｏｋｄｏｎｅｎｓｉｓ及びＬｅｉｆｓｏｎｉａ  ｓｏｌｉが使用され、５個の菌株を混合してエバポレータコアに付着すると、７．５３×１０６±３．７４×１０５ｃｆｕ／ｇのフィン水準の総細菌が確認され、これら微生物は３０日経過後、総細菌数が３．７０×１０６±１．３７×１０５ｃｆｕ／ｇのフィン水準で確認された。
【００９９】
このように、生存した微生物を同定するために、ＲＥＰ−ＰＣＲによるパターン分析を行った結果、ｔｉｍｅ  ０の５１個の代表サンプルのうち４個がＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ、３０個がＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅ、３個がＳｐｉｒｏｓｏｍａ  ｌｉｎｇｕａｌｅ、１４個がＳｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｄｏｋｄｏｎｅｎｓｉｓであった。３０日経過後にはＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ２９．６％、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅが５９．２％で、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍの比率が小幅上昇したことが確認され、Ｓｐｉｒｏｓｏｍａ  ｌｉｎｇｕａｌｅは検出できず、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｄｏｋｄｏｎｅｎｓｉｓが１１．１％で、ｔｉｍｅ  ０に比べてその比率が減少した（図１２）。
【０１００】
Ｄ組合せのＴｉｍｅ  ０では総細菌数は１．７５×１０７±１．２４×１０６ｃｆｕ／ｇのフィンで付着されていることが確認され、３０日経過後には総細菌が６．０３×１０６±１．０１×１０６ｃｆｕ／ｇのフィンで培養された。ＲＥＰ−ＰＣＲによる各菌の比率を確認した結果、ｔｉｍｅ  ０ではＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍが１６．３％、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅは４７．３％、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓは３６．４％であった。
【０１０１】
３０日経過後にはＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍが３４．３％に増加し、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅも５７．１％に少量増加した。しかし、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓは８．６％で、他の微生物に比べてその数が減少した（図１３）。
【０１０２】
Ｅ組合せは、８．５３×１０６±３．２１×１０５ｃｆｕ／ｇのフィンの総細菌が培養学的方法により検出され、３０日経過後に培養された総細菌数は１．２０×１０６±３．８４×１０４ｃｆｕ／ｇのフィンであった。ＲＥＰ−ＰＣＲによるそれぞれの個体数の確認結果、ｔｉｍｅ  ０のサンプルの７５個代表値のうち８個がＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ、２１個がＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅ、３２個がＦｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｏｃｅａｎｏｓｅｄｉｍｅｎｔｕｍ、１４個がＢｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ  ｋｗａｎｇｃｈｕｎｅｎｓｉｓに該当した。３０日経過後には総８９個の代表サンプルのうちＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍが１６個、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅが３２個、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｏｃｅａｎｏｓｅｄｉｍｅｎｔｕｍが３９個、Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ  ｋｗａｎｇｃｈｕｎｅｎｓｉｓが２個であった（図１４）。
これによって、ｔｉｍｅ  ０ではＳｐｉｒｏｓｏｍａ  ｐａｎａｃｉｔｅｒｒａｅは検出しにくい非常に少ない数が付着されて生存するか、ほとんど付着されていないことを確認し、Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ  ｋｗａｎｇｃｈｕｎｅｎｓｉｓは初期に比べて生存する微生物の比率が大きく減少することを確認することができた。
【０１０３】
Ｆ組合せは、２個のＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．共通菌株を含んで総６個の菌株が組み合わされ、Ｔｉｍｅ  ０の付着状況で１．６０×１０７±１．１５×１０６ｃｆｕ／ｇのフィン水準のバクテリアが培養学的方法により検出され、３０日経過後に確認した総細菌の数は９．０３×１０６±２．４２×１０５ｃｆｕ／ｇのフィンの数値であった。ＲＥＰ−ＰＣＲパターン分析による菌株の群落構造の分析結果、ｔｉｍｅ  ０の７１個の代表サンプルのうち５４個がＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ、１７個がＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅで、３０日後のサンプルでは７３個のうち５０個がＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ、２３個がＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅであった（図１５）。
【０１０４】
［実施例１３：共通菌株組合せの９０日生存評価］
無臭微生物組合せの９０日間の長期影響評価のために多様な組合せを構成したが、まず全組合せにおいて共通的に用いられるＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍとＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅで構成される群落に対して９０日間の長期評価を行った。
【０１０５】
２つのＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．菌株をエバポレータコアにコーティングしたｔｉｍｅ  ０のサンプルで培養した総細菌の数を培養学的な方法により分析した結果、１．９２×１０７±８．０２×１０５ｃｆｕ／ｇのフィン水準で存在することを確認した。その後、３０日ごとに５ｇのフィンを採って総細菌数を測定したが、３０日経過後には８．７０×１０６±６．５６×１０５ｃｆｕ／ｇのフィン水準のバクテリアが、６０日及び９０日経過後には４．１０×１０６±３．００×１０５ｃｆｕ／ｇのフィン、３．１３×１０６±５．５１×１０５ｃｆｕ／ｇのフィン水準のバクテリアが生存することを確認した（図１６）。それぞれのサンプリング位置ごとに７１、６６、４１、４４個の代表サンプルを選別し、該当コロニーのＲＥＰ−ＰＣＲパターンを分析した結果、ｔｉｍｅ  ０ではＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍとＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅがそれぞれ３７個、３４個検出され、３０日には３５個、３１個、６０日には２７個、１４個、最後の９０日には２５個、１９個が確認された（図１７）。この数値は、％比率にすると、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍが５２．１〜６５．８％水準で検出され、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅは３４．１〜４７．９％の範囲で存在する。このような均質な比率の２つの菌株の共存は、長期的な生存に２つの菌株の群落が適合することを示す。
【０１０６】
［実施例１４：共通菌株組合せの自動車ジグ上での生存評価］
共通菌株Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ及びＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅの組合せが外部条件でどれだけ成長するかを調べるために、２つの菌株を使用してエバポレータコアをコーティングした後、自動車のルーフに設置するジグにエバポレータコアを装着、運行して外部空気に露出されたコーティング菌株の変化を確認した。
【０１０７】
２つの菌株を用いてコーティングしたエバポレータコアでは３．２０×１０７±６．５６×１０６ｃｆｕ／ｇのフィン水準の総細菌が確認され、３０日経過後には６．２３×１０６±１．９９×１０５ｃｆｕ／ｇのフィン、６０日経過後には１．０８×１０６±４．３６×１０４ｃｆｕ／ｇのフィン水準でエバポレータコア上に微生物が存在することが確認された（図１８）。しかし、外部環境に露出されたにもかかわらず、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．のコロニー以外の外部微生物は、６０日経過後に培養学的な方法で検出されなかった。検出された微生物に対してＲＥＰ−ＰＣＲによる菌株同定の結果、ｔｉｍｅ  ０では１：１の菌株構成比率を示し、３０日経過後にＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍが４．２％水準に減少し、６０日以後には確認される全ての細菌がＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅであった（図１９）。
【０１０８】
［結論］
エバポレータコアで分離培養された無臭微生物１１種を形態学的特性により４種類に分け、分子生物学的同定方法の１６Ｓ  ｒＤＮＡ塩基配列決定法（ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）により再分類した結果、微生物１１株がそれぞれ異なる種であることを再確認した。
１６Ｓ  ｒＤＮＡで分類、同定した微生物は、ＲＥＰ−ＰＣＲ方法で菌株の重複性を調べた結果、１１種類の相異なるＲＥＰ−ＰＣＲ群が確認され、これら菌株はＲＥＰ−ＰＣＲ群方法で区分できる相異なる菌株であることが最終確認された。
【０１０９】
単一菌株を対象として微生物付着エバポレータコアを官能評価した結果、比較的悪臭発生程度の低いＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｉｎｖｏｃａｔｕｓ、Ｌｅｉｆｓｏｎｉａ  ｓｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ａｑｕａｔｉｌｉｓ及びＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅの８種の微生物を最終的に選別した。
【０１１０】
選別された８種の微生物により決定された１４種類の組合せに対して付着及び官能評価を実施した結果、共通菌株２種を含んだ５個の菌株が含まれた４個組合せ、４個の菌株が含まれた４個組合せ、３個菌株が含まれた１個組合せ、そして２個菌株が含まれた１個組合せなど、１０個の組合が最終生存競争実験対象組合せとして選ばれた。しかし、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｌａｔａｎｉ組合せの不適合性によって、６個の組合せを更に製作し、これを用いた３０日間の生存性評価によりＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅを基本菌株とする組合せを確認した。この中、基本菌株のＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｑｕａｔｉｃｕｍ及びＭｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｏｍａｇａｔａｅだけ含む組合せを対象として９０日間の生存試験を進行し、９０日間の実験室条件での生存結果、付着初期と比較してほぼ類似の微生物群落の維持性を示し、持続力を有する競争力のある組合せであることを確認した。更に、これら組合せがコーティングされたエバポレータコアを、自動車のルーフのジグに設置して外部空気に接触させた後、生存性を評価した結果、総細菌の個体数は１０６ｃｆｕ／ｇのフィン水準を維持することが確認され、外部微生物の培養は確認されていない。
【０１１１】
以上、本発明の特定部分を詳細に記述したが、当業界の通常の知識を有する者にとって、このような具体的な記述は単に好ましい一実施例であるだけで、これによって本発明の範囲が制限されることはない。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付した請求項とその等価物によって定義される。
【０１１２】
0006410730.tif 000014
0006410730.tif 000015
0006410730.tif 000016
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0006410730.tif 000026
【図１】
0006410730.tif 000027
【図２】
0006410730.tif 000028
【図３】
0006410730.tif 000029
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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