(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
シソ科コガネバナ属オウゴンの７０％エタノール水溶液抽出物を有効成分として用いることを特徴とする、cAMP上昇抑制方法（ヒトに対する医療行為を除く。）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は細胞内サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の産生を抑制する物質に関する。
【背景技術】
【０００２】
サイクリックＡＭＰ（以下ｃＡＭＰ）は１９５７年にホルモン機能の細胞内仲介物質であることがわかり、その後、ほとんどすべての原核生物細胞および動物細胞で細胞内シグナル分子として働くことが分かった。ｃＡＭＰはアドレナリンやグルカゴンなどの血糖上昇ホルモンがグリコーゲンホスホリラーゼの活性化に作用する際の媒介因子として働き、また種々の外界情報を標的細胞内に伝達するメッセンジャーを担う。副腎皮質刺激ホルモン、黄体形成ホルモン等各種ホルモンやプロスタグランジン等の生理活性物質がｃＡＭＰを増加させる。基本的にｃＡＭＰを上昇させる薬物は強心作用、グリコーゲンや脂肪分解作用を示すため、広く探索が行われているが、ｃＡＭＰ産生抑制による効果は十分知られていなかった。
【０００３】
そのような中、特許文献１ではｃＡＭＰはイオンチャネルに作用し、細胞内へのＣａ２＋の流入を引き起こし、細胞内Ｃａ２＋のレベルを上昇させることからｃＡＭＰの活性や産生の抑制する薬剤が皮膚バリアー機能の回復、促進につながり、皮膚バリアー機能回復剤として有用であることを見出している。また、特許文献２では特定のベンゼンスルホン酸誘導体がｃＡＭＰ上昇抑制効果を示し、骨増加作用又は骨吸収抑制作用を有することを見出している。さらに、特許文献３では特定の植物にｃＡＭＰ産生阻害効果があることが記載されている。また、この文献では同属の植物の中でもｃＡＭＰ産生阻害効果に差があることが示されており、ｃＡＭＰ産生抑制効果を示す薬剤が貴重であることが理解できる。このようにｃＡＭＰ産生抑制効果は皮膚バリアー機能の回復によるアトピー症状の改善、骨増加作用又は骨吸収抑制作用による骨粗しょう症治療薬としての可能性が期待されるが、十分な効果を持つ薬剤は知られていなかった。
【０００４】
一方、オウゴンの根は漢方薬の一種として、炎症、充血、発熱を伴う疾病、胸脇苦満、煩熱、下痢などに良いとされる。主成分はバイカリン・バイカレイン・オウゴニンなどであることが知られている。
皮膚外用剤、化粧料にも用いられ、特許文献４ではストレス性の肌荒れ予防改善効果が、特許文献５ではフィラグリン産生促進効果が知られているが、ｃＡＭＰ産生抑制効果については知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
特許文献１  特開２００４−１７５６８７号
特許文献２  特開平０７−２３８０６６号
特許文献３  特開２００２−０２９９５９号
特許文献４  特開２００５−１７０８４０号
特許文献５  特開２００６−０１６３３７号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
すなわちｃＡＭＰ産生抑制効果を持つ薬剤として広く知られたものは少なく、さらに効果は十分といえなかった。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは検討の結果、漢方薬、皮膚外用剤などとして広く用いられている安全性の高い植物であるオウゴンにｃＡＭＰ産生抑制効果を見出し、本発明を完成した。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば安全性が高く効果の高いアトピー治療薬、骨粗しょう症治療薬などを開発することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】実施例で行ったｃＡＭＰ量の測定結果である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明について詳細に説明する。オウゴンは、中国東北部、朝鮮半島などに広く生育する高さ３０〜６０ｃｍのシソ科（Ｌａｂｉａｔａｅ）の植物であり、一般名はコガネバナ、学名はScutellaria  baicalensis  Georgiである。
使用する前記オウゴンの部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、葉、茎、根、花、蕾、種子、果実、果皮、果核、地上部、全草、これらの混合物などが挙げられ、これらの中でも、根が好ましい。
【００１１】
原料の形態としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、採取後ただちに乾燥し、粉砕したものが好ましい。前記乾燥は、例えば、天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。
【００１２】
また、本発明は上記オウゴンの抽出物を用いることもできる。抽出物を用いることで本発明の効果を高めることが可能である。抽出物は一般に用いられている方法を利用することができ、市販品を使用してもよい。ここでいう抽出物には原料の抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、さらに、これらを精製した物のいずれもが含まれる。
【００１３】
なお、前記各植物の抽出原料は、脱脂などの前処理を行っても良い。抽出に用いる溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、水、親水性有機溶媒、又は、これらの混合溶媒を、室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
【００１４】
抽出溶媒として使用し得る水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。必要に応じて精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、ｐＨの調整、緩衝化などの処理を行っても良い。
【００１５】
親水性有機溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メチルアルコール、エチルアルコール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコールなどの炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトンなどの低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなどの炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、該親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。中でも中でもエチルアルコール、イソプロピルアルコールなどの低級アルコールが安全性、使用性の観点から好ましい。
【００１６】
なお、前記水と前記親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する際には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部を混合したものを使用することが好ましい。また、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部を混合したものを使用することが好ましい。
【００１７】
抽出溶媒の安全性が高ければそのまま用いることも可能だが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、常法を利用することができ、また、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリンなどのキャリアーを添加してもよい。
【００１８】
未精製のままでも実用上支障はないが、特有の匂いや味を軽減するために生理活性の低下を招かない範囲で、脱色、脱臭などの精製を行うことも可能である。なお、精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理などによって行うことができる。
【００１９】
本発明は医薬品、医薬部外品、健康食品、サプリメント、飲食物、化粧料などに応用することが可能である。形態としては目的に応じた適切なものを選択可能である。例えば経口医薬品や健康食品、サプリメントの場合には液状でもよいし、乾燥させた固体であってもよい。固体は、固形物であってもよいし、粉末状であってもよい。固体の場合は、適当な液体に溶解するかもしくは分散させ、または、適当な粉末担体と混合するかもしくはこれに吸着させ、場合によっては、さらにこれらに乳化剤、分散剤、懸濁剤、展着剤、浸透剤、湿潤剤、安定剤等を添加し、乳剤、油剤、水和剤、散剤、錠剤、カプセル剤、液剤等の製剤として使用することができる。皮膚外用剤や化粧料などの場合には液状、ゲル状、クリーム状、半固形状、固形状、スティック状、パウダー状等のいずれであってもよく、乳液、クリーム、化粧水、美容液、パック、洗顔料、メーキャップ化粧料、毛髪化粧料等に使用可能である。
【００２０】
本発明おけるオウゴンの含有量については特に制限ないが、乾燥固形分として、好ましくは０．０００１〜１０質量％あり、より好ましくは０．０１〜２質量％である。この範囲内であれば、安定に配合することができ、かつ高い効果を発揮することができる。
【００２１】
〔製造例１〕オウゴン抽出物の製造
細切りにしたオウゴンの根乾燥物１００ｇにエチルアルコール５００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣についてさらに同様の抽出処理を行い、得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、乾燥して、オウゴン抽出物９ｇを得た。
【００２２】
〔製造例２〕オウゴン抽出物の製造
細切りにしたオウゴン全草乾燥物１００ｇに５０質量％の１，３−ブチレングリコール（水と１，３−ブチレングリコールとの質量比＝１：１）５００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣についてさらに同様の抽出処理を行い、得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、乾燥して、オウゴン抽出物９ｇを得た。
【００２３】
〔製造例３〕オウゴン抽出物の製造
細切りにしたオウゴン地上部乾燥物１００ｇに精製水５００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣についてさらに同様の抽出処理を行い、得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、乾燥して、オウゴン抽出物５ｇを得た。
【００２４】
[実施例１]
正常ヒトメラノサイトを使用し、オウゴンエキス（一丸ファルコス株式会社製）を検体として、細胞内ｃＡＭＰ量抑制効果を調べた。本オウゴンエキスはオウゴンの周皮を除いた根を７０％エチルアルコール水溶液に３日間浸漬後、ろ過したろ液を用いている。
正常ヒトメラノサイトをＢＰＥ非含有のＭｅｄｉｕｍｕ２５４培地（倉敷紡績株式会社製）で二酸化炭素濃度５ｖ／ｖ％環境下において３７℃にて二日間培養した。その後オウゴンエキスを１０％エチルアルコール溶液に溶解し、その最終濃度が０μｇ／ｍＬ（対照）、１２５μｇ／ｍＬ、５００μｇ／ｍＬとなるように溶液を作製し培養液に添加した。さらに翌日培地交換を行い、培養液に前回の半量のオウゴン溶液を添加し、さらに３−ｉｓｏｂｕｔｈｙｌ−１−ｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎｅ（和光純薬工業株式会社製）のＤＭＳＯ溶液を終濃度が０．１ｍｍｏｌ／Ｌとなるように添加した後、３７℃で９０分間静置した。
次に培地を除去し、ＰＢＳを用いて全てのウェルを洗浄し、細胞内ｃＡＭＰを抽出するため氷冷した６５％エチルアルコールを添加し、細胞を破砕した後、不要な沈殿を除去し、ｃＡＭＰ溶液を得た。次に遠心エバポレーターを用いて窒素気流下、６０℃で乾固物を得た。さらにｃＡＭＰ測定キット（GEヘルスケア バイオサイエンス株式会社製）の定法に従いＯＤ４５０を測定し、ｃＡＭＰ量を測定した。結果を図１に示す。
【００２５】
［結果］
オウゴンエキスは濃度依存的にｃＡＭＰ量を抑制した。
【００２６】
実施例２：乳液（水中油型）
（成分）                                                        （質量％）
１．モノステアリン酸ポリオキシエチレン
（２０Ｅ．Ｏ．）ソルビタン                          
１．０
２．トリオレイン酸ポリオキシエチレン
（２０Ｅ．Ｏ．）ソルビタン                          
０．５
３．グリセリルモノステアレート                                      １．５
４．ステアリン酸                                                    ０．５
５．ベヘニルアルコール                                              ０．５
６．スクワラン                                                      ８．０
７．カルボキシビニルポリマー                                        ０．１
８．パラオキシ安息香酸メチル                                        ０．１
９．水酸化ナトリウム                                                ０．０５
１０．精製水                                                            残量
１１．製造例１のオウゴン抽出物                                        ０．０３
１２．エチルアルコール                                                ５．０
１３．香料                                                            ０．０５
【００２７】
（製造方法）
Ａ：成分１〜６を７０℃で均一に混合溶解する。
Ｂ：成分７〜１０を均一溶解し、７０℃に加熱する。
Ｃ：ＡにＢを加えて乳化する。
Ｄ：室温まで冷却後、成分１１〜１３を加えて均一に混合し乳液を得た。
【００２８】
実施例３：軟膏剤
（成分）                                                        （質量％）
１．ステアリン酸                                                    １８
２．セタノール                                                        ４
３．酢酸ｄｌ−α―トコフェロール                                      ０．２
４．トリエタノールアミン                                              ２．５
５．グリセリン                                                        ５．０
６．グリチルリチン酸ジカリウム                                        ０．５
７．製造例２のオウゴン抽出物                                          ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル                                          ０．１
９．精製水                                                            残量
【００２９】
（製造方法）
Ａ．成分１〜３を加熱混合し、７５℃に保つ。
Ｂ．成分４〜９を混合し、７５℃に保つ。
Ｃ．ＡにＢを徐々に加え、軟膏剤を得た。
【００３０】
実施例４：ローション剤
（成分）                                                        （質量％）
１．モノラウリン酸ポリオキシエチレン
（２０Ｅ．Ｏ．）ソルビタン                                    
１．２
２．エチルアルコール                                                  ８．０
３．パラオキシ安息香酸エチル                                          ０．１
４．グリセリン                                                        ５．０
５．１，３−ブチレングリコール                                        ６．５
６．製造例３のオウゴン抽出物                                          ０．１
７．精製水                                                            残量
【００３１】
（製造方法）
Ａ．成分１〜３を混合溶解する。
Ｂ．成分４〜７を混合溶解する。
Ｃ．ＡとＢを混合して均一にし、ローション剤を得た。
【００３２】
実施例５：リキッドファンデーション（水中油型クリーム状）
（成分）                                                          （質量％）
１．１，３―ブチレングリコール                                        ５．０
２．水素添加大豆リン脂質                                              ０．５
３．酸化チタン                                                        ５．０
４．ベンガラ                                                          ０．１
５．黄酸化鉄                                                          １．０
６．黒酸化鉄                                                          ０．０５
７．ステアリン酸                                                      ０．９
８．モノステアリン酸グリセリン                                        ０．３
９．セトステアリルアルコール                                          ０．４
１０．モノオレイン酸ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）ソルビタン        ０．２
１１．トリオレイン酸ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）ソルビタン        ０．２
１２．パラメトキシケイ皮酸２―エチルヘキシル                            ５．０
１３．アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体（注１）                  ０．５
１４．トリエタノールアミン                                              １．５
１５．グリセリン                                                        ５．０
１６．フェノキシエタノール                                              ０．３
１７．精製水                                                              残量
１８．製造例１のオウゴン抽出物                                          ０．１
１９．香料                                                              ０．０２
（注１）ペミュレンＴＲ−２（ＮＯＶＥＯＮ社製）
【００３３】
（製造方法）
Ａ：成分１〜６を分散する。
Ｂ：Ａに成分７〜１２を加え７０℃で均一に混合する。
Ｃ：成分１３〜１７を７０℃で均一に混合する。
Ｄ：ＣにＢを加え乳化し、室温まで冷却する。
Ｅ：Ｄに成分１８、１９を添加し均一に混合して水中油型クリーム状リキッドファンデーションを得た。
【００３４】
上記で調製した種々の化粧料又は皮膚外用剤は、ｃＡＭＰ阻害効果に優れ、これを皮膚に適用することにより、きめ・はりが改善すると同時に肌色を明るくし、皮膚バリアー機能の回復によるアトピー症状の改善が見られる、優れた肌荒れ改善、美肌効果を示すものであった。また、副作用がなく保存安定性に優れるものであった。
【００３５】
以下、本発明のｃＡＭＰ阻害剤を食品に配合する場合における配合例を示す。尚、本発明は以下の配合例に限定されない。
【００３６】
実施例６：錠剤
（成分）                                                          （質量％）
１．乳糖                                                            ２４．０
２．結晶セルロース                                                  ２０．０
３．コーンスターチ                                                  １５．０
４．製造例２のオウゴン抽出物                                          ５．０
５．グリセリン脂肪酸エステル                                          ５．０
６．二酸化ケイ素                                                      １．０
７．デキストリン                                                      残量
【００３７】
Ａ.成分１〜７を均一に混合し、常法に従って錠剤を得た。
【００３８】
実施例７：清涼飲料
（成分）                                                          （質量％）
１．果糖ブドウ糖液糖                                                ３０．０
２．乳化剤                                                            ０．５
３．製造例３のオウゴン抽出物                                          １．０
４．香料                                                              適量
５．精製水                                                           
残量
【００３９】
Ａ.成分１〜５を均一に混合し、常法に従って清涼飲料を得た。
【００４０】
上記で調製した錠剤および清涼飲料はｃＡＭＰ阻害作用に優れ、内服により、優れた骨粗しょう症防止などの老化防止効果を示すものであった。また、副作用がなく保存安定性に優れるものであった。
【図１】
0006267412.tif 000002