(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゼラチン溶液を、ゲル化温度以上３２℃以下の温度でノズル部から液滴状態で吐出させ、吐出された液滴状態のゼラチン溶液を、水接触角が９０°以下の基板上に滴下させる工程を含む、ゼラチン成形体の製造方法。
【請求項２】
前記ゼラチン溶液が、架橋剤不含のゼラチン溶液である、請求項１に記載のゼラチン成形体の製造方法。
【請求項３】
前記ゼラチンが、リコンビナントゼラチンである、請求項１又は２に記載のゼラチン成形体の製造方法。
【請求項４】
前記ゼラチン成形体の形状が、網目状である、請求項１〜３の何れか一項に記載のゼラチン成形体の製造方法。
【請求項５】
前記水接触角が５０°以上である、請求項１〜４の何れか一項に記載のゼラチン成形体の製造方法。
【請求項６】
前記基板が、ポリメタクリル酸メチル樹脂により形成されている、請求項１〜５の何れか一項に記載のゼラチン成形体の製造方法。
【請求項７】
ゼラチン成形体を基板から剥離する剥離工程を含む、請求項５又は６に記載のゼラチン成形体の製造方法。
【請求項８】
ゼラチン成形体のゼラチンを架橋する工程を含む、請求項１〜７の何れか一項に記載のゼラチン成形体の製造方法。
【請求項９】
ゼラチン成形体を加湿する工程、加湿されたゼラチン成形体を冷凍する工程、冷凍されたゼラチン成形体を減圧乾燥する工程、及び減圧乾燥したゼラチン成形体を加熱する工程を含む、請求項１〜８の何れか一項に記載のゼラチン成形体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ゼラチン溶液を液滴状態で吐出させ、基板上に滴下させることによって、ゼラチン成形体を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
機能障害又は機能不全に陥った生体組織又は臓器の再生を計る再生医療の実用化が進められている。再生医療は、生体が持っている自然治癒能力だけでは回復できなくなった生体組織において、細胞、足場及び成長因子の一種以上を使って元の組織と同じような形態及び機能を再生する医療技術である。再生医療においては、生体適合性材料からなる成形体を使用する場合がある。
【０００３】
特許文献１には、基板表面を疎水化処理した後に親水化処理し、次いでこの基板表面に天然高分子からなるゾルを流し出し、この天然高分子ゾルを冷却してゲル状とした後、基板から剥離することを特徴とする高分子ゲルの製造方法が記載されている。特許文献１に記載の方法は、ゼラチンなどの天然高分子からなるゲルを任意の寸法及び形状に成形するための方法である。
【０００４】
特許文献２には、温度に対して特性の異なる複数の塗布液を特性に応じた異なる送液温度で同一の塗布ヘッドに送液し、複数の塗布液を塗布ヘッドから吐出して走行するウエブに多層同時塗布する方法が記載されている。特許文献２においては、送液温度が最も高い塗布液をａ、その送液温度をＴａin、吐出温度をＴａout とし、送液温度が最も低い塗布液をｂ、その送液温度をＴｂin、吐出温度をＴｂout としたときに、０℃＜Ｔａin−Ｔａout ＜１０℃で且つ０℃＜Ｔｂout−Ｔｂin＜１０℃を満足させる条件下で複数の塗布液を多層同時塗布することを特徴とする多層同時塗布方法が記載されている。
【０００５】
また、特許文献３には、凹部を有するモールドにポリマー溶解液を注型する注型工程と、ポリマー溶解液を乾燥固化する乾燥固化工程と、機能性シートをモールドから剥離する剥離工程とを含む機能性シートの製造方法であって、乾燥固化工程では、恒率乾燥期間において、ポリマー溶解液の温度ＴＰが、ポリマー溶解液のゲル化温度Ｔgelより高い温度に調節される方法が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００４−２６３０８１号公報
【特許文献２】特開２００２−３３１２６３号公報
【特許文献３】特開２００９−２４１３５７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
特許文献１の方法は、疎水化処理した後に親水化処理した基板表面に天然高分子からなるゾルを流し出すことを含む方法であるが、ゼラチン溶液を用いてゼラチン成形体を製造する方法ではない。特許文献２の方法は、温度に対して特性の異なる複数の塗布液を多層同時塗布する方法に関するものである。特許文献３の方法は、凹部を有するモールドを使用して成形を行う方法に関するものである。上記の通り、ゼラチン溶液を用いてメッシュ状のゼラチン成形体を製造することについてはこれまでに報告がない。
【０００８】
本発明は、ゼラチン溶液を用いてゼラチン成形体を製造する方法を提供することを解決すべき課題とした。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、ゼラチン溶液を、ゲル化温度以上３２℃以下の温度でノズル部から液滴状態で吐出させ、吐出された液滴状態のゼラチン溶液を、水接触角が９０°以下の基板上に滴下させることによって、ゼラチン成形体を製造できることを見出した。本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。
【００１０】
即ち、本発明によれば、以下の発明が提供される。
［１］  ゼラチン溶液を、ゲル化温度以上３２℃以下の温度でノズル部から液滴状態で吐出させ、吐出された液滴状態のゼラチン溶液を、水接触角が９０°以下の基板上に滴下させる工程を含む、ゼラチン成形体の製造方法。
［２］  上記ゼラチン溶液が、架橋剤不含のゼラチン溶液である、［１］に記載のゼラチン成形体の製造方法。
［３］  上記ゼラチンが、リコンビナントゼラチンである、［１］又は［２］に記載のゼラチン成形体の製造方法。
［４］  上記ゼラチン成形体の形状が、網目状である、［１］〜［３］の何れか一に記載のゼラチン成形体の製造方法。
［５］  上記水接触角が５０°以上である、［１］〜［４］の何れか一に記載のゼラチン成形体の製造方法。
［６］  上記基板が、ポリメタクリル酸メチル樹脂により形成されている、［１］〜［５］の何れか一に記載のゼラチン成形体の製造方法。
［７］  ゼラチン成形体を基板から剥離する剥離工程を含む、［５］又は［６］に記載のゼラチン成形体の製造方法。
［８］  ゼラチン成形体のゼラチンを架橋する工程を含む、［１］〜［７］の何れか一に記載のゼラチン成形体の製造方法。
［９］  ゼラチン成形体を加湿する工程、加湿されたゼラチン成形体を冷凍する工程、冷凍されたゼラチン成形体を減圧乾燥する工程、及び減圧乾燥したゼラチン成形体を加熱する工程を含む、［１］〜［８］の何れか一に記載のゼラチン成形体の製造方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によるゼラチン成形体の製造方法によれば、ゼラチン溶液を用いてゼラチン成形体を製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、格子状のゼラチン成形体（メッシュ）の様子を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。
（１）ゼラチン成形体の製造方法
本発明によるゼラチン成形体の製造方法においては、ゼラチン溶液を、ゲル化温度以上３２℃以下の温度でノズル部から液滴状態で吐出させ、吐出された液滴状態のゼラチン溶液を、水接触角が９０°以下の基板上に滴下させる。
ポリ乳酸などの生体適合性を有する熱可塑性樹脂を繊維化してメッシュ状の成形体を製造することは可能であったが、ゼラチン溶液を用いてメッシュ状のゼラチン成形体を製造することについてはこれまでに報告がなかった。ゼラチン溶液を用いてゼラチン成形体を製造する際には、ゼラチン溶液を基板上に滴下した際に、ゼラチン溶液の液滴が変形してしまい（液滴が広がってしまう）、ゼラチンを所望の形状に成形することが困難であった。本発明においては、ゼラチン溶液を、ゲル化温度以上３２℃以下の温度でノズル部から液滴状態で吐出させ、吐出された液滴状態のゼラチン溶液を、水接触角が９０°以下の基板上に滴下させることによって、ゼラチン溶液の液滴の変形を抑制し、ゼラチンを所望の形状に成形することが可能となった。上記した本発明の構成により、ゼラチンを所望の形状に成形できることは、本発明により初めて見いだされた予想外な知見である。
【００１４】
本発明においては、ゼラチン溶液を液滴状態で吐出させる。液滴状態とは、ノズル部から吐出したゼラチン溶液が、ノズル部と基板のいずれにも接触せずに、空間中を移動する状態である。ゼラチン溶液の吐出について、液滴状態での吐出以外の態様としては連続吐出もあるが、ゼラチン溶液を連続吐出した場合には、ゼラチン溶液が基板上に広がってしまい。メッシュ状の成形体を製造することはできなくなる。
【００１５】
本発明においては、ゼラチン溶液を、ゲル化温度以上３２℃以下の温度でノズル部から液滴状態で吐出させる。ゼラチン溶液の温度がゲル化温度以上とすることによりゼラチン溶液のゲル化を抑制し、ノズル部からの液滴状態での吐出が可能になる。ゼラチン溶液の温度が３２℃以下とすることにより、ゼラチン溶液の液滴を基板上に滴下した際に、液滴の変形が抑制され、所望の形状に成形することが可能になる。
ゼラチン溶液をノズル部から液滴状態で吐出させる際の温度は、好ましくは２５℃以上３２℃以下であり、より好ましくは２８℃以上３２℃以下である。
【００１６】
ゼラチン溶液をノズル部から液滴状態で吐出させることは、ディスペンサーを用いて行うことができる。ディスペンサーとは、基板上にポリマー溶液などの塗布液を塗布するための装置であり、定量の塗布液を吐出することができる装置である。シリンジポンプなどの吐出装置を用いて塗布液をノズル部から吐出しながら、ノズル部（吐出口）を基板上において一定速度で動作させることによって、塗布液を基板上の任意の場所に均一に塗布することが可能である。基板とノズル部（吐出口）の間隔を一定に保つことにより、塗布量を均一にすることが可能である。なお、ディスペンサーとは、所定量の塗布液を安定して供給するコントローラ及びその周辺機器（ロボットなど）を含むシステムを意味する場合もある。
【００１７】
ディスペンサーとしては、空圧（シリンジ）方式のディスペンサーを使用することができる。エア源とシリンジとは空圧配管により連結している。シリンジ内部には、好ましくはプランジャ（ピストン）が設けられている。エア源から空気がシリンジに送られると、プランジャ（ピストン）を押し下げ、シリンジ内部の塗布液がノズル部（吐出口）から吐出される。
【００１８】
ディスペンサーの具体例としては、ジェットディスペンサー（武蔵エンジニアリング株式会社製のＡｅｒｏＪｅｔ  ＭＪＥＴ−Ａ。ノズル部は、武蔵エンジニアリング株式会社製のＳＮＪ２１-３４Ｇ−ＳＨＮ。ロボットは、武蔵エンジニアリング株式会社製のＳｈｏｔ  ｍｉｎｉ２００ΩＸ）を挙げることができるが、特に限定されない。
【００１９】
本発明において、ディスペンサーに設けられたノズルのノズル幅は、好ましくは、１０μｍ〜１００μｍであり、より好ましくは、５０μｍ〜８０μｍである。
なお、塗布液の吐出量は、空圧×吐出時間、により制御されるが、塗布液の粘度、ノズル部の長さ（高さ）及びノズル幅にも依存する。
【００２０】
本発明においては、吐出された液滴状態のゼラチン溶液を、水接触角が９０°以下の基板上に滴下させる。
基板の水接触角を９０°以下とすることにより、ゼラチン溶液の液滴を基板上に滴下した際に、液滴の変形が抑制され、ゼラチンを所望の形状に成形することが可能になる。
【００２１】
基板の水接触角の下限は特に限定されないが、一般的には１０°以上であり、好ましくは３０°以上であり、より好ましくは５０°以上である。基板の水接触角を５０°以上とすることにより、ゼラチン成形体を基板から剥離することが容易になる。
基板の水接触角の特に好ましい範囲は、７０°以上９０°以下であり、最も好ましい範囲は７５°以上８５°以下である。なお、３６０°は、２πラジアン（rad）である。
【００２２】
水接触角とは、ＪＩＳ−Ｒ３２５７に基づいて、接触角計を用いて、表面被覆層の表面に水を滴下して測定した水に対する静的な接触角をいう。例えば、協和界面科学株式会社製のＤＭ−５００又は株式会社ニック製のＬＳＥ-ＭＥ１（ソフトウェア２ｗｉｎ ｍｉｎｉ）を用いて測定を行うことができる。より具体的には、純水を用いて室温２０℃で、水平を保った基板上に液滴２μＬを滴下し、滴下後２０秒時点での水接触角を測定することができる。
【００２３】
基板の材質、形状、及び大きさは、上記した水接触角の条件を満たす限り特に限定されず、目的に応じて適切な基板を使用することができる。
基板としては、所定の面積の平面を有する基板が好ましい。基板の表面積は特に限定されないが、好ましくは５〜２００ｃｍ2であり、より好ましくは２０〜１００ｃｍ2である。
【００２４】
基板の材質としては、アクリル、メタクリル（ポリメタクリル酸メチル樹脂など）、ポリスチレン、及びポリプロピレン等のプラスチック素材、ガラス等の無機素材、並びに銅、アルミ及びステンレス鋼などの金属素材等が挙げられる。基板の材質は、好ましくは、メタクリルであり、特に好ましくはポリメタクリル酸メチル樹脂である。
【００２５】
液滴状態のゼラチン溶液を基板上に滴下させる際、ゼラチンの線幅は好ましくは２００μｍ〜３００μｍであり、格子状のゼラチンの隙間の間隔は２００μｍ〜４００μｍである。液滴状態のゼラチン溶液を上記のように基板上に滴下させることにより、形状が網目状（メッシュとも言う）であるゼラチン成形体を製造することができる。網目状（メッシュ）とは、複数の微細孔を備えた形状を意味する。
【００２６】
ゼラチン成形体の大きさは特に限定されないが、ゼラチン成形体を直方体に近似した場合で、直方体の縦、横及び高さはそれぞれ、好ましくは２００ｍｍ〜１ｍｍであり、より好ましくは２００ｍｍ〜０．１ｍｍである。
【００２７】
本発明においては、液滴状態のゼラチン溶液を基板上に滴下させてゼラチン成形体を製造した後に、ゼラチン成形体を基板から剥離することができる。即ち、本発明の方法は、ゼラチン成形体を基板から剥離する剥離工程を含んでいてもよい。本発明によれば、ゼラチン成形体を基板から剥離することができ、特に、水接触角が５０°以上である基板を使用することにより、ゼラチン成形体を基板からの剥離は容易になる。
【００２８】
本発明において、後記するゼラチンを架橋する工程を行う場合には、基板からのゼラチン成形体の剥離は、ゼラチンを架橋する工程の前、ゼラチンを架橋する工程の間、又はゼラチンを架橋する工程の後のどの段階で行ってもよい。
【００２９】
（２）ゼラチン溶液
（２−１）ゼラチン
ゼラチンは、天然ゼラチン（動物ゼラチン等）、リコンビナントゼラチン又は化学合成ゼラチンの何れでもよい。
天然ゼラチンとは天然由来のコラーゲンより作られたゼラチンを意味する。ゼラチンが由来する生物は特に限定されず、例えば、動物（哺乳類、魚類など）由来のゼラチンを使用することができる。
【００３０】
化学合成ゼラチンとは、人工的に合成したゼラチンを意味する。ゼラチン等のペプチドの合成は、固相合成でも液相合成でもよいが、好ましくは固相合成である。ペプチドの固相合成は当業者に公知であり、例えば、アミノ基の保護としてＦｍｏｃ基（Fluorenyl-Methoxy-Carbonyl基）を使用するＦｍｏｃ基合成法、並びにアミノ基の保護としてＢｏｃ基（tert-Butyl Oxy Carbonyl基）を使用するＢｏｃ基合成法などが挙げられる。
【００３１】
天然ゼラチン及び化学合成ゼラチンの好ましい態様は、本明細書中後記するリコンビナントゼラチンに記載した内容を当てはめることができる。
【００３２】
（２−２）リコンビナントゼラチン
本発明で用いるゼラチンとしては、リコンビナントゼラチンが好ましい。
リコンビナントゼラチンとは、遺伝子組み換え技術により作られたゼラチン類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドもしくは蛋白様物質を意味する。本発明で用いることができるリコンビナントゼラチンは、コラーゲンに特徴的なＧｌｙ−Ｘ−Ｙで示される配列（Ｘ及びＹはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示す）の繰り返しを有するものが好ましい。ここで、複数個のＧｌｙ−Ｘ−Ｙはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。好ましくは、細胞接着シグナルが一分子中に２配列以上含まれている。本発明で用いるリコンビナントゼラチンとしては、コラーゲンの部分アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列を有するリコンビナントゼラチンを用いることができる。例えばＥＰ１０１４１７６、米国特許６９９２１７２号、国際公開ＷＯ２００４／８５４７３、国際公開ＷＯ２００８／１０３０４１等に記載のものを用いることができるが、これらに限定されるものではない。本発明で用いるリコンビナントゼラチンとして好ましいものは、以下の態様のリコンビナントゼラチンである。
【００３３】
リコンビナントゼラチンは、天然のゼラチン本来の性能から、生体親和性に優れ、且つ天然由来ではないことで牛海綿状脳症（ＢＳＥ）などの懸念がなく、非感染性に優れている。また、リコンビナントゼラチンは天然ゼラチンと比べて均一であり、配列が決定されているので、強度及び分解性においても架橋等によってブレを少なく精密に設計することが可能である。
【００３４】
リコンビナントゼラチンの分子量は、特に限定されないが、好ましくは２０００以上１０００００以下（２ｋＤａ（キロダルトン）以上１００ｋＤａ以下）であり、より好ましくは２５００以上９５０００以下（２．５ｋＤａ以上９５ｋＤａ以下）であり、さらに好ましくは５０００以上９００００以下（５ｋＤａ以上９０ｋＤａ以下）であり、最も好ましくは１００００以上９００００以下（１０ｋＤａ以上９０ｋＤａ以下）である。
【００３５】
リコンビナントゼラチンは、コラーゲンに特徴的なＧｌｙ−Ｘ−Ｙで示される配列の繰り返しを有することが好ましい。ここで、複数個のＧｌｙ−Ｘ−Ｙはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙ において、Ｇｌｙはグリシンを表し、Ｘ及びＹは、任意のアミノ酸（好ましくは、グリシン以外の任意のアミノ酸）を表す。コラーゲンに特徴的なＧｌｙ−Ｘ−Ｙで示される配列とは、ゼラチン及びコラーゲンのアミノ酸組成及び配列における、他のタンパク質と比較して非常に特異的な部分構造である。この部分においてはグリシンが全体の約３分の１を占め、アミノ酸配列では３個に１個の繰り返しとなっている。グリシンは最も簡単なアミノ酸であり、分子鎖の配置への束縛も少なく、ゲル化に際してのヘリックス構造の再生に大きく寄与している。Ｘ及びＹで表されるアミノ酸はイミノ酸（プロリン、オキシプロリン）が多く含まれ、全体の１０％〜４５％を占めることが好ましい。好ましくは、リコンビナントゼラチンの配列の８０％以上、更に好ましくは９５％以上、最も好ましくは９９％以上のアミノ酸が、Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙの繰り返し構造である。
【００３６】
一般的なゼラチンは、極性アミノ酸のうち電荷を持つものと無電荷のものが１：１で存在する。ここで、極性アミノ酸とは具体的にシステイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン及びアルギニンを指し、このうち極性無電荷アミノ酸とはシステイン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン及びチロシンを指す。本発明で用いるリコンビナントゼラチンにおいては、構成する全アミノ酸のうち、極性アミノ酸の割合が１０〜４０％であり、好ましくは２０〜３０％である。上記極性アミノ酸中の無電荷アミノ酸の割合が好ましくは５％以上２０％未満であり、より好ましくは５％以上１０％未満である。さらに、セリン、スレオニン、アスパラギン、チロシン及びシステインのうちいずれか１アミノ酸を配列上に含まないことが好ましく、セリン、スレオニン、アスパラギン、チロシン及びシステインのうち２以上のアミノ酸を配列上に含まないことがより好ましい。
【００３７】
一般にポリペプチドにおいて、細胞接着シグナルとして働く最小アミノ酸配列が知られている（例えば、株式会社永井出版発行「病態生理」Ｖｏｌ．９、Ｎｏ．７（１９９０年）５２７頁）。本発明で用いるリコンビナントゼラチンは、これらの細胞接着シグナルを一分子中に２以上有することが好ましい。具体的な配列としては、接着する細胞の種類が多いという点で、アミノ酸一文字表記で現わされる、ＲＧＤ配列、ＬＤＶ配列、ＲＥＤＶ配列、ＹＩＧＳＲ配列、ＰＤＳＧＲ配列、ＲＹＶＶＬＰＲ配列、ＬＧＴＩＰＧ配列、ＲＮＩＡＥＩＩＫＤＩ配列、ＩＫＶＡＶ配列、ＬＲＥ配列、ＤＧＥＡ配列、及びＨＡＶ配列の配列が好ましい。さらに好ましくはＲＧＤ配列、ＹＩＧＳＲ配列、ＰＤＳＧＲ配列、ＬＧＴＩＰＧ配列、ＩＫＶＡＶ配列及びＨＡＶ配列、特に好ましくはＲＧＤ配列である。ＲＧＤ配列のうち、好ましくはＥＲＧＤ配列である。細胞接着シグナルを有するリコンビナントゼラチンを用いることにより、細胞の基質産生量を向上させることができる。
【００３８】
本発明で用いるリコンビナントゼラチンにおけるＲＧＤ配列の配置としては、ＲＧＤ間のアミノ酸数が０〜１００の間で均一でないことが好ましく、ＲＧＤ間のアミノ酸数が２５〜６０の間で均一でないことがより好ましい。
この最小アミノ酸配列の含有量は、細胞接着及び増殖性の観点から、タンパク質１分子中３〜５０個が好ましく、さらに好ましくは４〜３０個、特に好ましくは５〜２０個である。最も好ましくは１２個である。
【００３９】
本発明で用いるリコンビナントゼラチンにおいて、アミノ酸総数に対するＲＧＤモチーフの割合は少なくとも０．４％であることが好ましい。リコンビナントゼラチンが３５０以上のアミノ酸を含む場合、３５０のアミノ酸の各ストレッチが少なくとも１つのＲＧＤモチーフを含むことが好ましい。アミノ酸総数に対するＲＧＤモチーフの割合は、より好ましくは少なくとも０．６％であり、更に好ましくは少なくとも０．８％であり、更に一層好ましくは少なくとも１．０％であり、特に好ましくは少なくとも１．２％であり、最も好ましくは少なくとも１．５％である。リコンビナントペプチド内のＲＧＤモチーフの数は、２５０のアミノ酸あたり、好ましくは少なくとも４、より好ましくは６、更に好ましくは８、特に好ましくは１２以上１６以下である。ＲＧＤモチーフの０．４％という割合は、２５０のアミノ酸あたり、少なくとも１つのＲＧＤ配列に対応する。ＲＧＤモチーフの数は整数であるので、０．４％の特徴を満たすには、２５１のアミノ酸からなるゼラチンは、少なくとも２つのＲＧＤ配列を含まなければならない。好ましくは、本発明のリコンビナントゼラチンは、２５０のアミノ酸あたり、少なくとも２つのＲＧＤ配列を含み、より好ましくは２５０のアミノ酸あたり、少なくとも３つのＲＧＤ配列を含み、さらに好ましくは２５０のアミノ酸あたり、少なくとも４つのＲＧＤ配列を含む。本発明のリコンビナントゼラチンのさらなる態様としては、少なくとも４つのＲＧＤモチーフ、好ましくは６つ、より好ましくは８つ、さらに好ましくは１２以上１６以下のＲＧＤモチーフを含む。
【００４０】
リコンビナントゼラチンは部分的に加水分解されていてもよい。
【００４１】
好ましくは、本発明で用いるリコンビナントゼラチンは、Ａ−［（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙ）n］m−Ｂで示されるものである。ｎ個のＸはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、ｎ個のＹはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示す。ｍは好ましくは２〜１０の整数を示し、より好ましくは３〜５の整数を示す。ｎは３〜１００の整数が好ましく、１５〜７０の整数がさらに好ましく、５０〜６５の整数が最も好ましい。Ａは任意のアミノ酸又はアミノ酸配列を示し、Ｂは任意のアミノ酸又はアミノ酸配列を示す。なお、ｎ個のＧｌｙ−Ｘ−Ｙはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。
【００４２】
より好ましくは、本発明で用いるリコンビナントゼラチンは、  Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−［（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙ）63］3−Ｇｌｙ（式中、６３個のＸはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、６３個のＹはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示す。なお、６３個のＧｌｙ−Ｘ−Ｙはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。）で示されるものである。
【００４３】
繰り返し単位には天然に存在するコラーゲンの配列単位を複数結合することが好ましい。ここで言う天然に存在するコラーゲンとは天然に存在するものであればいずれでも構わないが、好ましくはＩ型、II型、III型、IV型、又はV型コラーゲンである。より好ましくは、I型、II型、又はIII型コラーゲンである。別の形態によると、上記コラーゲンの由来は好ましくは、ヒト、ウシ、ブタ、マウス又はラットであり、より好ましくはヒトである。
【００４４】
本発明で用いるリコンビナントゼラチンの等電点は、好ましくは５〜１０であり、より好ましくは６〜１０であり、さらに好ましくは７〜９．５である。リコンビナントゼラチンの等電点の測定は、等電点電気泳動法（Ｍａｘｅｙ，Ｃ．Ｒ．（１９７６；Ｐｈｉｔｏｇｒ．Ｇｅｌａｔｉｎ ２，Ｅｄｉｔｏｒ Ｃｏｘ，Ｐ．Ｊ．Ａｃａｄｅｍｉｃ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌ．参照）に記載されたように、１質量％ゼラチン溶液をカチオン及びアニオン交換樹脂の混晶カラムに通したあとのｐＨを測定することで実施することができる。
【００４５】
好ましくは、リコンビナントゼラチンは脱アミン化されていない。
好ましくは、リコンビナントゼラチンはテロペプタイドを有さない。
好ましくは、リコンビナントゼラチンは、アミノ酸配列をコードする核酸により調製された実質的に純粋なポリペプチドである。
【００４６】
本発明で用いるリコンビナントゼラチンとして特に好ましくは、
（１）配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド；
（２）配列番号１に記載のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ生体親和性を有するペプチド；又は
（３）配列番号１に記載のアミノ酸配列と８０％以上（さらに好ましくは９０％以上、特に好ましくは９５％以上、最も好ましくは９８％以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ生体親和性を有するペプチド；
の何れかである。
【００４７】
本発明における配列同一性は、以下の式で計算される値を指す。
％配列同一性＝［（同一残基数）／（アラインメント長）］×１００
２つのアミノ酸配列における配列同一性は当業者に公知の任意の方法で決定することができ、ＢＬＡＳＴ（(Basic Local Alignment Search Tool)）プログラム（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０，１９９０）等を使用して決定することができる。
【００４８】
「１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列」における「１若しくは数個」とは、好ましくは１〜２０個、より好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜５個、特に好ましくは１〜３個を意味する。
【００４９】
本発明で用いるゼラチンの親水性値である「１／ＩＯＢ」値は、０から１．０が好ましい。より好ましくは、０から０．６であり、さらに好ましくは０から０．４である。ＩＯＢとは、藤田穆により提案された有機化合物の極性/非極性を表す有機概念図に基づく、親疎水性の指標であり、その詳細は、例えば、"Pharmaceutical Bulletin", vol.2, 2, pp.163-173（1954）、「化学の領域」vol.11, 10, pp.719-725（1957）、「フレグランスジャーナル」, vol.50, pp.79-82（1981）等で説明されている。簡潔に言えば、全ての有機化合物の根源をメタン（ＣＨ4）とし、他の化合物はすべてメタンの誘導体とみなして、その炭素数、置換基、変態部、環等にそれぞれ一定の数値を設定し、そのスコアを加算して有機性値（ＯＶ）、無機性値（ＩＶ）を求め、この値を、有機性値をＸ軸、無機性値をＹ軸にとった図上にプロットしていくものである。有機概念図におけるＩＯＢとは、有機概念図における有機性値（ＯＶ）に対する無機性値（ＩＶ）の比、すなわち「無機性値（ＩＶ）／有機性値（ＯＶ）」をいう。有機概念図の詳細については、「新版有機概念図−基礎と応用−」（甲田善生等著、三共出版、２００８）を参照されたい。本明細書中では、ＩＯＢの逆数をとった「１／ＩＯＢ」値で親疎水性を表している。「１／ＩＯＢ」値が小さい（０に近づく）程、親水性であることを表す表記である。
【００５０】
本発明で用いるゼラチンの「１／ＩＯＢ」値を上記範囲とすることにより、親水性が高く、かつ、吸水性が高くなる。
【００５１】
本発明で用いるゼラチンは、Grand average of hydropathicity（GRAVY）値で表される親疎水性指標が、０．３以下、マイナス９．０以上であることが好ましく、０．０以下、マイナス７．０以上であることがさらに好ましい。Grand average of hydropathicity（GRAVY）値は、『Gasteiger E., Hoogland C., Gattiker A., Duvaud S., Wilkins M.R., Appel R.D., Bairoch A.;Protein Identification and Analysis Tools on the ExPASy Server;(In) John M. Walker (ed): The Proteomics Protocols Handbook, Humana Press (2005). pp. 571-607』及び『Gasteiger E., Gattiker A., Hoogland C., Ivanyi I., Appel R.D., Bairoch A.; ExPASy: the proteomics server for in-depth protein knowledge and analysis.; Nucleic Acids Res. 31:3784-3788(2003).』の方法により得ることができる。
本発明で用いるゼラチンのＧＲＡＶＹ値を上記範囲とすることにより、親水性が高く、かつ、吸水性が高くなる。
【００５２】
本発明で用いるリコンビナントゼラチンは、当業者に公知の遺伝子組み換え技術によって製造することができ、例えばＥＰ１０１４１７６Ａ２号公報、米国特許第６９９２１７２号公報、国際公開ＷＯ２００４／８５４７３号、国際公開ＷＯ２００８／１０３０４１号等に記載の方法に準じて製造することができる。具体的には、所定のリコンビナントゼラチンのアミノ酸配列をコードする遺伝子を取得し、これを発現ベクターに組み込んで、組み換え発現ベクターを作製し、これを適当な宿主に導入して形質転換体を作製する。得られた形質転換体を適当な培地で培養することにより、リコンビナントゼラチンが産生されるので、培養物から産生されたリコンビナントゼラチンを回収することにより、本発明で用いるリコンビナントゼラチンを調製することができる。
【００５３】
（２−３）ゼラチン溶液
本発明では、ゼラチン溶液を使用する。ゼラチン溶液に使用する溶媒は、ゼラチンを溶解できる溶媒であれば、特に限定されないが、一般的には、水、有機溶媒、又は水と有機溶媒の混合物であり、好ましくは水、又は水と有機溶媒の混合物などの水性媒体である。有機溶媒としては、例えば、  アセトン、エタノール等があげられ、「極少量」を水に加えることにより表面張力、液粘度を調整することが可能である。ゼラチン溶液として好ましくは、ゼラチン水溶液を使用することができる。
【００５４】
ゼラチン溶液におけるゼラチン濃度は特に限定されないが、一般的には１質量％〜５０質量％であり、好ましくは２〜４０質量％であり、より好ましくは３〜３０質量％であり、さらに好ましくは５〜２０質量％であり、特に好ましくは１０〜２０質量％である。なお、所望の形状のゼラチン成形体を製造するためには、ノズル幅は狭い方が有利であるが、ノズル幅が狭い場合には、ゼラチン溶液の粘度が高すぎる場合には、吐出が困難になる場合がある。
【００５５】
ゼラチン成形体の用途が、医療用途（皮膚欠損部の再生等）の場合には、架橋剤を使用することなくゼラチン成形体を製造することが望ましい。従って、本発明においては、ゼラチン溶液は、架橋剤不含のゼラチン溶液であることが好ましい。上記の架橋剤としては、アルデヒド類（例えば、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドなど）及び縮合剤（カルボジイミド、シアナミドなど）などを挙げることができる。
【００５６】
（３）ゼラチン成形体のゼラチンを架橋する工程
本発明においては、ゼラチン成形体を製造した後に、ゼラチン成形体のゼラチンを架橋する工程（以下、ゼラチン架橋工程とも言う）を行ってもよい。但し、ゼラチン架橋工程は必須ではなく、本発明の方法は、ゼラチン架橋工程を行わない場合も包含するものとする。
【００５７】
ゼラチン架橋工程は、好ましくは、ゼラチン成形体を加熱して架橋する工程を含む。ゼラチン架橋工程は、より好ましくは、ゼラチン成形体を加湿する工程、加湿されたゼラチン成形体を冷凍する工程、冷凍されたゼラチン成形体を減圧乾燥する工程、及び減圧乾燥したゼラチン成形体を加熱する工程を含む。ゼラチン架橋工程を行うことにより、強度が高いゼラチン成形体を製造することができる。
【００５８】
ゼラチン溶液を、ゲル化温度以上３２℃以下の温度でノズル部から液滴状態で吐出させ、吐出された液滴状態のゼラチン溶液を、水接触角が９０°以下の基板上に滴下させることにより製造されるゼラチン成形体は、ゲルとゾルとの混合物と推定される。このゼラチン成形体を加湿することにより、ゼラチン成形体は溶媒（水）を得ることになり、分子が流動化し、安定なゲル化構造を形成するようになることが想定される。加湿工程を行うことにより、後記する加熱工程において架橋されるゼラチンの強度をより向上させることができる。加湿工程の条件は、上記の通り、ゼラチン成形体に水を付与することができる条件であれば特に限定されないが、一般的には、相対湿度４０％〜６０％、温度２０℃〜２５℃（例えば、室温）の条件下で、１時間〜３時間程度行うことができる。
【００５９】
加湿されたゼラチン成形体を冷凍する工程を行うことにより、後記する加熱工程において架橋されるゼラチンの強度をより向上させることができる。冷凍条件は特に限定されないが、一般的には冷凍温度は−１０℃〜−２５℃の範囲内であり、冷凍時間は、１時間〜３時間程度である。
【００６０】
冷凍されたゼラチン成形体を減圧乾燥する工程においては、ゼラチン成形体の内部の水分を除去し、ゲル化状態の構造を維持させながら、乾燥を行う。減圧の条件としては、一般的には、−０．０１ＭＰａ〜−１．０ＭＰａであり、好ましくは−０．０１ＭＰａ〜−０．５ＭＰａである。減圧乾燥は、一般的には、温度２０℃〜２５℃（例えば、室温）１時間〜３時間程度行うことができる。
【００６１】
ゼラチン成形体を加熱する工程により、ゼラチンを架橋することができる。加熱温度は、架橋ができる限り特に限定されないが、好ましくは、０℃〜３００℃であり、より好ましくは５０℃〜３００℃であり、更に好ましくは１００℃〜２５０℃であり、特に好ましくは１２０℃〜２００℃である。但し、Ｔ〔ケルビン：Ｋ〕＝ｔ〔セルシウス度：℃〕＋２７３．１５である。
【００６２】
架橋時間は、特に限定されないが、一般的には１時間から１２０時間であり、好ましくは２時間から７２時間であり、より好ましくは４時間から６０時間であり、さらに好ましくは８時間から４８時間である。
【００６３】
（４）ゼラチン成形体の用途
本発明の方法で製造されるゼラチン成形体の用途は特に限定されないが、好ましくは、再生医療用足場材、再生医療等製品（体外で組織培養するもの）又は組織修復材として使用することができる。
【００６４】
本発明における組織修復材とは、生体内に埋植されることにより、この埋植された部位における組織の形成に寄与する材料のことであり、細胞を含んでいても含んでいなくてもよい。また、増殖因子や薬剤のような生体の反応を促す成分を含んでいても含んでいなくてもよい。さらに、ハイドロキシアパタイト等の無機材料と混合、ないしコンポジットを作製して適用してもよい。本発明における組織修復材とは、埋植部位に通常存在する正常組織の形成に寄与するものだけではなく、瘢痕組織等を含む非正常組織の形成を促進する材料も包含するものである。
【００６５】
組織修復材の具体例としては、特に限定されないが、軟骨、半月板、皮膚又は骨の修復材を挙げることができる。即ち、本発明における組織修復材は、軟骨、半月板、皮膚又は骨の再生のための治療剤として使用することができる。上記した再生が必要である限り、疾患は限定されるものではないが、一例として、軟骨欠損を伴う疾患としては、変形性関節症、骨軟骨欠損、離断性骨軟骨炎、外傷性軟骨損傷、骨関節炎、再発性多発軟骨炎、軟骨無形成症、椎間板損傷、椎間板ヘルニア等を挙げることができる。
【００６６】
また、組織修復材は、移植細胞や骨誘導薬剤と併用することによっても骨再生治療剤として用いることもできる。骨誘導薬剤としては、例えばＢＭＰ（骨形成因子）やｂＦＧＦ（塩基性線維芽細胞増殖因子）が挙げられるが、特に限定はされない。
【００６７】
本発明のゼラチン成形体は、組織修復材として使用できることから、組織の修復方法や、組織の損傷を伴う疾患等の治療方法も本発明に包含される。本発明における組織の修復方法は、対象組織が欠損又は損傷した部位に、ゼラチン成形体である組織修復材を適用することを含み、必要に応じて他の工程を含んでいてもよい。他の工程としては、例えば、移植細胞及び／又は骨誘導剤を組織修復材の適用の前後、又は同時に組織修復材を適用する部位へ適用することが挙げられる。
対象組織が欠損又は損傷した部位に、ゼラチン成形体を適用する方法としては、切開、注射、関節鏡、内視鏡などが使用可能である。
【００６８】
以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
【実施例】
【００６９】
［リコンビナントゼラチン］
リコンビナントゼラチンとして以下のＣＢＥ３を用意した（国際公開ＷＯ２００８／１０３０４１号公報に記載）。
ＣＢＥ３：
分子量：５１．６ｋＤ
構造：  ＧＡＰ［（ＧＸＹ）63］3Ｇ
アミノ酸数：５７１個
ＲＧＤ配列：１２個
イミノ酸含量：３３％
ほぼ１００％のアミノ酸がＧＸＹの繰り返し構造である。ＣＢＥ３のアミノ酸配列には、セリン、スレオニン、アスパラギン、チロシン及びシステインは含まれていない。ＣＢＥ３はＥＲＧＤ配列を有している。
等電点：９．３４
ＧＲＡＶＹ値：−０．６８２
１／ＩＯＢ値：０．３２３
アミノ酸配列（配列表の配列番号１）（国際公開ＷＯ２００８／１０３０４１号公報の配列番号３と同じ。但し末尾のＸは「Ｐ」に修正）
GAP(GAPGLQGAPGLQGMPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADGAPGAPGLQGMPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADGAPGKDGVRGLAGPIGPPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADGAPGKDGVRGLAGPIGPPGPAGAPGAPGLQGMPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADGAPGKDGVRGLAGPP)3G
【００７０】
［ディスペンサー］
以下の実施例及び比較例において、ドット状の液滴の吐出は、ジェットディスペンサー（武蔵エンジニアリング株式会社製、ＡｅｒｏＪｅｔ  ＭＪＥＴ−Ａを用いて行った。ノズル部は、武蔵エンジニアリング株式会社製、ＳＮＪ２１-３４Ｇ−ＳＨＮを用いた。ノズル部の直径は０．０７ｍｍである。ロボットは、武蔵エンジニアリング株式会社製、Ｓｈｏｔ  ｍｉｎｉ２００ΩＸ）を用いた。
【００７１】
［実施例１］
粉状のリコンビナントゼラチン（ＣＢＥ３）を蒸留水に溶解し、２０質量％のゼラチン水溶液を調製した。１０ｃｍ×１０ｃｍのアクリル基板（水接触角は７０〜９０°）（ポリメタクリル酸メチル樹脂からなる基板：以下の実施例及び比較例では同じものを使用した）の上に、上記ゼラチン水溶液の液滴をドット状に吐出し、それらのドットを重ねて線にすることによって、３０ｍｍ×３０ｍｍの格子状のゼラチン成形体（メッシュ）を作製した。ゼラチン水溶液の吐出時の温度は、３０℃とした。格子状のゼラチン成形体（メッシュ）の様子を図１に示す。ゼラチンの線幅は、２００μｍ〜３００μｍであり、格子状のゼラチンの隙間の間隔は約３００μｍであった。
【００７２】
上記の条件において、ゼラチン水溶液の液滴を安定に吐出することができた。また、ゼラチン成形体の作製時の変形性は抑制され、成形性は良好であった。さらに、ゼラチン成形体はアクリル基板から容易に剥離することができた。
【００７３】
［実施例２］
粉状のリコンビナントゼラチン（ＣＢＥ３）を蒸留水に溶解し、２０質量％のゼラチン水溶液を調製した。１０ｃｍ×１０ｃｍのアクリル基板（水接触角は７０〜９０°）の上に、上記ゼラチン水溶液の液滴をドット状に吐出し、それらのドットを重ねて線にすることによって、３０ｍｍ×３０ｍｍの格子状のゼラチン成形体（メッシュ）を作製した。ゼラチン水溶液の吐出時の温度は、３２℃とした。
【００７４】
上記の条件において、ゼラチン水溶液の液滴を安定に吐出することができた。また、ゼラチン成形体の作製時の変形性は抑制され、成形性は良好であった。さらに、ゼラチン成形体はアクリル基板から容易に剥離することができた。
【００７５】
［実施例３］
粉状の動物（魚）ゼラチン（新田ゼラチン「イクオス」シリーズ：ＦＧＬ１００ＳＰ：平均分子量は約５万）を蒸留水に溶解し、２０質量％のゼラチン水溶液を調製した。１０ｃｍ×１０ｃｍのアクリル基板（水接触角は７０〜９０°）の上に、上記ゼラチン水溶液の液滴をドット状に吐出し、それらのドットを重ねて線にすることによって、３０ｍｍ×３０ｍｍの格子状のゼラチン成形体（メッシュ）を作製した。ゼラチン水溶液の吐出時の温度は、３０℃とした。
【００７６】
上記の条件において、ゼラチン水溶液の液滴を安定に吐出することができた。また、ゼラチン成形体の作製時の変形性は抑制され、成形性は良好であった。さらに、ゼラチン成形体はアクリル基板から容易に剥離することができた。
【００７７】
［実施例４］
粉状のリコンビナントゼラチン（ＣＢＥ３）を蒸留水に溶解し、２０質量％のゼラチン水溶液を調製した。１０ｃｍ×１０ｃｍのガラス基板（水接触角は３０°以下）の上に、上記ゼラチン水溶液の液滴をドット状に吐出し、それらのドットを重ねて線にすることによって、３０ｍｍ×３０ｍｍの格子状のゼラチン成形体（メッシュ）を作製した。ゼラチン水溶液の吐出時の温度は、３０℃とした。
【００７８】
上記の条件において、ゼラチン水溶液の液滴を安定に吐出することができた。また、ゼラチン成形体の作製時の変形性は抑制され、成形性は良好であった。ゼラチン成形体はガラス基板に密着しており、剥離は容易ではなかったが、剥離することは可能であった。
【００７９】
［比較例１］
粉状のリコンビナントゼラチン（ＣＢＥ３）を蒸留水に溶解し、２０質量％のゼラチン水溶液を調製した。１０ｃｍ×１０ｃｍのアクリル基板（水接触角は７０〜９０°）の上に、上記ゼラチン水溶液の液滴をドット状に吐出し、それらのドットを重ねて線にすることによって、３０ｍｍ×３０ｍｍの格子状のゼラチン成形体（メッシュ）を作製した。ゼラチン水溶液の吐出時の温度は、２５℃とした。
【００８０】
上記の条件において、ゼラチン水溶液の液滴の吐出は、最初は可能であったが、ゼラチン水溶液は次第にゲル状になり、粘度の上昇により、安定に吐出することができなくなった。上記の通り、比較例１では、安定な吐出ができなかったので、ゼラチン成形体の成形性及びアクリル基板からの剥離性は評価できなかった。
【００８１】
［比較例２］
粉状のリコンビナントゼラチン（ＣＢＥ３）を蒸留水に溶解し、２０質量％のゼラチン水溶液を調製した。１０ｃｍ×１０ｃｍのアクリル基板（水接触角は７０〜９０°）の上に、上記ゼラチン水溶液の液滴をドット状に吐出し、それらのドットを重ねて線にすることによって、３０ｍｍ×３０ｍｍの格子状のゼラチン成形体（メッシュ）を作製した。ゼラチン水溶液の吐出時の温度は、３６℃とした。
【００８２】
上記の条件において、ゼラチン水溶液の液滴は固まらず、周囲に拡散し、ゼラチン成形体（メッシュ）の格子の空隙が、ゼラチン水溶液の液滴で埋まる状態となった。比較例２では、ゼラチン成形体の成形性及びアクリル基板からの剥離性は評価できなかった。
【００８３】
［比較例３］
粉状のリコンビナントゼラチン（ＣＢＥ３）を蒸留水に溶解し、２０質量％のゼラチン水溶液を調製した。１０ｃｍ×１０ｃｍのテフロン（登録商標）基板（水接触角は１００°以上）の上に、上記ゼラチン水溶液の液滴をドット状に吐出し、それらのドットを重ねて線にすることによって、３０ｍｍ×３０ｍｍの格子状のゼラチン成形体（メッシュ）を作製した。ゼラチン水溶液の吐出時の温度は、３０℃とした。
【００８４】
上記の条件において、ゼラチン水溶液の液滴を安定に吐出することができた。しかし、基板上に滴下した液滴が弾かれ、基板上での液滴の位置が定まらず、液滴同士がつながりにくく、線にもなりにくく、ゼラチン成形体を作製することは困難であった。なお、比較例３では、ゼラチン成形体のテフロン（登録商標）基板からの剥離性は評価できなかった。
【００８５】
［実施例１１］
相対湿度９５％以上及び温度２０℃の容器内において、実施例１で製造したゼラチン成形体を有するアクリル基板を、３時間放置した。これによりゼラチン成形体を加湿した。
アクリル基板とゼラチン成形体を容器から取り出した後、直ちに冷凍庫(−２０℃）に入れ、３時間放置した。これにより、加湿されたゼラチン成形体を冷凍した。ここでは、真空引きはせず常圧でよいため、凍結乾燥機は必要ない。
【００８６】
アクリル基板と冷凍されたゼラチン成形体を、減圧が可能なデシケーターに入れ、冷凍されたゼラチン成形体を１時間ほど室温で減圧乾燥した。減圧度は−０．１ＭＰａとした。
アクリル基板と減圧乾燥したゼラチン成形体をデシケーターから取り出した後、ピンセットを用いてゼラチン成形体をアクリル基板から静かに剥がした。この際、ゼラチン成形体をアクリル基板から容易に剥離することができた。
【００８７】
アクリル基板から剥離させたゼラチン成形体を、オーブンにおいて１４０℃で２４時間加熱した。加熱の際、酸素を追い出すため、Ｎ2ガスを導入し、減圧可能なオーブンＶＡＣ−２０１Ｐ（エスペック株式会社製）を用いた。また、加熱の開始前に、Ｎ２パージを行った。
上記によりゼラチンが架橋されたゼラチン成形体を得た。
【００８８】
上記で製造したゼラチンが架橋されたゼラチン成形体は、水に浸けると膨潤した。水に浸ける前のゼラチン成形体の一辺の長さに対する、膨潤した後のゼラチン成形体の一辺の長さの比を、膨潤率として求めた。その結果、膨潤率は１．２であった。
【００８９】
［実施例１２］
実施例１で製造したゼラチン成形体を有するアクリル基板から剥離し、オーブンにおいて１４０℃で２４時間加熱した。加熱の際、酸素を追い出すため、Ｎ2ガスを導入し、減圧可能なオーブンＶＡＣ−２０１Ｐ（エスペック株式会社製）を用いた。また、加熱の開始前に、Ｎ２パージを行った。上記によりゼラチンが架橋されたゼラチン成形体を得た。
【００９０】
上記で製造したゼラチンが架橋されたゼラチン成形体は、水に浸けると膨潤した。膨潤率を実施例１１と同様に求めた結果、膨潤率は１．５であった。
【００９１】
［実施例１３］
相対湿度９５％以上及び温度２０℃の容器内において、実施例１で製造したゼラチン成形体を有するアクリル基板を、３時間放置した。これによりゼラチン成形体を加湿した。
【００９２】
加湿されたゼラチン成形体を、減圧が可能なデシケーターに入れ、加湿されたゼラチン成形体を１時間ほど室温で減圧乾燥した。減圧度は−０．１ＭＰａとした。
アクリル基板と減圧乾燥したゼラチン成形体をデシケーターから取り出した後、ピンセットを用いてゼラチン成形体をアクリル基板から静かに剥がした。この際、ゼラチン成形体をアクリル基板から容易に剥離することができた。
【００９３】
アクリル基板から剥離させたゼラチン成形体を、オーブンにおいて１４０℃で２４時間加熱した。加熱の際、酸素を追い出すため、Ｎ2ガスを導入し、減圧可能なオーブンＶＡＣ−２０１Ｐ（エスペック株式会社製）を用いた。また、加熱の開始前に、Ｎ２パージを行った。
上記によりゼラチンが架橋されたゼラチン成形体を得た。
【００９４】
上記で製造したゼラチンが架橋されたゼラチン成形体は、水に浸けると膨潤した。膨潤率を実施例１１と同様に求めた結果、膨潤率は１．４であった。
【００９５】
上記した実施例及び比較例の結果を以下の表１及び表２にまとめる。
吐出の適性の評価基準は以下の通りである。
Ａ：安定的で良好な吐出が可能である場合。
Ｂ：粘度の上昇により安定に吐出することができない場合、又はゼラチン水溶液の液滴が固まらずに周囲に拡散する場合。
【００９６】
成形体作製時の変形抑制（成形性）の評価基準は以下の通りである。
Ａ：ゼラチン成形体の作製時の変形性が抑制され、成形性は良好である場合。
Ｂ：基板上に滴下した液滴が弾かれ、基板上での液滴の位置が定まらず、液滴同士がつながりにくく、線にもなりにくい場合。
【００９７】
剥離性の評価基準は以下の通りである。
Ａ：ゼラチン成形体が基板から容易に剥離できる場合。
Ｂ：ゼラチン成形体が基板に密着しているが、剥離できる場合。
【００９８】
【表１】
0006434438.tif 000002
【００９９】
【表２】
0006434438.tif 000003
【０１００】
本発明の構成を有する実施例１から４の方法によれば、ゼラチン溶液を用いてゼラチン成形体を製造できることが示された。また、ゼラチン成形体のゼラチンを架橋する工程を行うことによって、水に浸けた場合の膨潤率が低下した強固なゼラチン成形体を製造することができる。
【図１】
0006434438.tif 000004
【配列表】
0006434438000001.app