(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
0006294490.tif 000152
［式中、
Ｒ１は、１つ以上のＲ１’で場合により置換されている、低級アルキル、フェニル、シクロアルキル又はピリジニルであり；
各Ｒ１’は、独立して、低級アルキル、ハロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２又はシアノであり；
Ｒ２は、存在しないか、又は、ハロ、低級アルコキシ、ヒドロキシ若しくは低級アルキルであり；
Ｒ３は、存在しないか、又は、ハロ、低級アルコキシ、ヒドロキシ若しくは低級アルキルであり；
Ｒ４は、存在しないか、又は、ヘテロシクロアルキル低級アルキルであり；
Ｘは、ＣＨ又はＮであり；そして
Ｙは、ＣＨ又はＮである］
で示される化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２】
ＹがＣＨである、請求項１に記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３】
ＸがＮである、請求項１又は２に記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項４】
ＸがＣＨである、請求項１又は２に記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項５】
Ｒ４がモルホリニルメチルである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項６】
Ｒ４が存在しない、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項７】
Ｒ２が存在しない、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項８】
Ｒ２がハロである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項９】
Ｒ２が低級アルキルである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１０】
Ｒ２が低級アルコキシである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１１】
Ｒ２がヒドロキシである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１２】
Ｒ３が、ハロ、低級アルコキシ又はヒドロキシである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１３】
Ｒ１が、１つ以上のＲ１’で場合により置換されているフェニルである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１４】
Ｒ１が、１つ以上のＲ１’で場合により置換されている、低級アルキル、シクロアルキル又はピリジニルである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１５】
以下：
［５−アミノ−１−（３−フルオロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（６−フェノキシ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−２−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−３−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（３−クロロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
｛５−アミノ−１−［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（３−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（２−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（４−イソプロポキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（４−シクロペンチルオキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
｛５−アミノ−１−［４−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
｛５−アミノ−１−［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
２−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−メチル−フェノキシ｝−ベンゾニトリル；
３−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−クロロ−フェノキシ｝−ベンゾニトリル；
３−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−メチル−フェノキシ｝−ベンズアミド；
｛５−アミノ−１−［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；及び
３−｛４−［５−アミノ−４−（６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−クロロ−フェノキシ｝−ベンゾニトリル
からなる群より選択される請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物、又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項１６】
炎症性の又は自己免疫性の病態を処置するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を含む医薬組成物。
【請求項１７】
炎症性の病態を処置するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を含む医薬組成物。
【請求項１８】
関節リウマチを処置するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を含む医薬組成物。
【請求項１９】
喘息を処置するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を含む医薬組成物。
【請求項２０】
癌を処置するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩を含む医薬組成物。
【請求項２１】
少なくとも１種の薬学的に許容し得る担体、賦形剤又は希釈剤と、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩とを含む、医薬組成物。
【請求項２２】
治療活性物質として使用するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２３】
炎症性の又は自己免疫性の病態を処置するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２４】
炎症性の又は自己免疫性の病態を処置するための医薬を製造するための、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容し得る塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｂｔｋを阻害し、かつ、異常なＢ細胞活性化によって引き起こされる腫瘍性、自己免疫及び炎症性疾患の処置に有用である、新規化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロテインキナーゼは、ヒトの酵素の最も大きなファミリーの１つを構成し、そして、リン酸基をタンパク質に付加することによって、多くの異なるシグナル伝達プロセスを調節する（T. Hunter, Cell 1987 50:823-829）。具体的には、チロシンキナーゼは、チロシン残基のフェノール部分でタンパク質をリン酸化する。チロシンキナーゼファミリーは、細胞の成長、移動及び分化を制御するメンバーを含む。異常なキナーゼ活性は、癌、自己免疫及び炎症性疾患を含む、様々なヒトの疾患に関与している。プロテインキナーゼは、細胞のシグナル伝達の重要な調節因子の１つであるので、これらは、小分子キナーゼ阻害剤で細胞機能をモジュレートするためのターゲットを提供し、そのために良好な薬物設計ターゲットとなる。キナーゼ媒介疾患過程の処置に加えて、選択的かつ効果的なキナーゼ活性阻害剤もまた、細胞のシグナル伝達プロセスの調査及び治療上関心の高いその他の細胞ターゲットの同定に有用である。
【０００３】
Ｂ細胞が、自己免疫及び／又は炎症性疾患の病因において重要な役割を果たしているという確かな証拠がある。リツキサン（Rituxan）などのＢ細胞を枯渇させるタンパク質ベースの治療法は、関節リウマチなどの自己抗体によって生じる炎症性疾患に対して効果的である（Rastetter et al. Annu Rev Med 2004 55:477）。従って、Ｂ細胞活性化においてある役割を果たすプロテインキナーゼの阻害剤は、自己抗体産生などのＢ細胞媒介疾患病理に対する有用な治療法であるはずである。
【０００４】
Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）を介するシグナル伝達は、成熟した抗体産生細胞への増殖及び分化を含む、広範なＢ細胞応答を制御する。ＢＣＲは、Ｂ細胞活性に対する重要な調節点であり、そして、異常なシグナル伝達は、無秩序なＢ細胞の増殖及び病原性自己抗体の形成を引き起こし、多数の自己免疫及び／又は炎症性疾患を招く恐れがある。ブルトンチロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）は、膜近位のＢＣＲのすぐ下流にある、非ＢＣＲ関連キナーゼである。Ｂｔｋの欠如は、ＢＣＲシグナル伝達を遮断することが知られており、従って、Ｂｔｋの阻害は、Ｂ細胞媒介疾患過程を遮断する有用な治療アプローチであり得る。
【０００５】
Ｂｔｋは、チロシンキナーゼのＴｅｃファミリーのメンバーであり、初期Ｂ細胞発生ならびに成熟Ｂ細胞活性化及び生存の重要な調節因子であることが知られている（Khan et al. Immunity 1995 3:283; Ellmeier et al. J. Exp. Med. 2000 192:1611）。ヒトのＢｔｋの突然変異は、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症（ＸＬＡ）状態を引き起こす（Rosen et al. New Eng. J. Med. 1995 333:431及びLindvall et al. Immunol. Rev. 2005 203:200に概説されている）。これらの患者は免疫不全状態であり、そして、Ｂ細胞の成熟障害、免疫グロブリン及び末梢Ｂ細胞レベルの減少、Ｔ細胞非依存性免疫応答の低下ならびにＢＣＲ刺激後のカルシウム動員の減衰を示す。
【０００６】
自己免疫及び炎症性疾患にＢｔｋがある役割を果たしているという証拠が、Ｂｔｋ欠損マウスモデルによって提供された。全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の前臨床マウスモデルにおいて、Ｂｔｋ欠損マウスは、疾患進行の著しい改善を示す。さらに、Ｂｔｋ欠損マウスは、コラーゲン誘発関節炎に耐性を示す（Jansson and Holmdahl Clin. Exp. Immunol. 1993 94:459）。選択的Ｂｔｋ阻害剤は、マウスの関節炎モデルにおいて、用量依存的効果を示すことが実証された（Z. Pan et al., Chem. Med Chem. 2007 2:58-61）。
【０００７】
Ｂｔｋはまた、疾患過程に関与し得るＢ細胞以外の細胞によっても発現される。例えば、Ｂｔｋは、肥満細胞によって発現され、そして、Ｂｔｋ欠損骨髄由来の肥満細胞は、抗原誘発脱顆粒障害を示す（Iwaki et al. J. Biol. Chem. 2005 280:40261）。これは、Ｂｔｋがアレルギー及び喘息などの病的な肥満細胞応答を処置するために有用であり得ることを示す。また、Ｂｔｋ活性が欠如したＸＬＡ患者由来の単球は、刺激後にＴＮＦα産生の低下を示す（Horwood et al. J. Exp. Med. 2003 197:1603）。従って、ＴＮＦα媒介炎症は、小分子Ｂｔｋ阻害剤によってモジュレートされ得る。また、Ｂｔｋは、アポトーシスにおいてある役割を果たすことが報告されており（Islam and Smith Immunol. Rev. 2000 178:49）、従って、Ｂｔｋ阻害剤は、ある種のＢ細胞リンパ腫及び白血病の処置に有用であり得る（Feldhahn et al. J. Exp. Med. 2005 201:1837）。
【０００８】
発明の概要
本出願は、本明細書において後述するような式ＩのＢｔｋ阻害化合物、その使用方法を提供する：
【０００９】
本出願は、式Ｉ：
【化１】
0006294490.tif 000002
［式中、
Ｒ１は、１つ以上のＲ１’で場合により置換されている、低級アルキル、フェニル、シクロアルキル又はピリジルであり；
各Ｒ１’は、独立して、低級アルキル、ハロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２又はシアノであり；
Ｒ２は、存在しないか、ハロ、低級アルコキシ、ヒドロキシ又は低級アルキルであり；
Ｒ３は、存在しないか、ハロ、低級アルコキシ、ヒドロキシ又は低級アルキルであり；
Ｒ４は、存在しないか、又はヘテロシクロアルキル低級アルキレニルであり；
Ｘは、ＣＨ又はＮであり；そして
Ｙは、ＣＨ又はＮである］
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。
【００１０】
本出願は、炎症性及び／又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００１１】
本出願は、式Ｉの化合物を少なくとも１つの薬学的に許容し得る担体、賦形剤又は希釈剤との混合物で含む、医薬組成物を提供する。
【００１２】
発明の詳細な説明
定義
本明細書において使用されるように、表現「一つ（「a」又は「an」）の実体」は、一つ以上のその実体を指す；例えば、化合物（a compound）は、一つ以上の化合物又は少なくとも一つの化合物を指す。そのため、用語「a」（又は「an」）、「一つ以上」、及び「少なくとも一つ」は、本明細書では、互換的に使用され得る。
【００１３】
表現「本明細書上記に定義されるような」は、発明の概要又は最も広い特許請求の範囲に与えられるような各基についての最も広い定義を指す。下記に与えられる全てのその他の実施態様において、各実施態様に存在することができ、かつ明確に定義されていない置換基は、発明の概要に与えられる最も広い定義を保持する。
【００１４】
本明細書において使用されるように、請求項における移行句であるか本文であるかを問わず、用語「含む（comprise(s)）」及び「含む（comprising）」は、オープンエンド（制限のない）の意味を有すると解釈されるべきである。すなわち、これらの用語は、語句「少なくとも〜を有する（having at least）」又は「少なくとも〜を含む（including at least）」と同意的に解釈されるべきである。プロセスに関連して使用する場合、用語「含む（comprising）」は、プロセスが少なくとも記載された工程を含むが、さらなる工程を含み得ることを意味する。化合物又は組成物に関連して使用する場合、用語「含む（comprising）」は、化合物又は組成物が、少なくとも記載された特徴又は成分を含むが、さらなる特徴又は成分も含み得ることを意味する。
【００１５】
本明細書において使用されるように、別段具体的に示さない限り、用語「又は」は、「及び／又は」の「包含的」意味で使用され、「いずれか／又は」の「排他的」意味では使用されない。
【００１６】
用語「独立して」は、本明細書において、同一の化合物内で、同じ又は異なる定義を有する変数の存在又は不在に関わらず、変数が、任意の一つの場合に適用されることを示すことに使用される。したがって、Ｒ”が２回出現し、それが「独立して炭素又は窒素」と定義される化合物においては、両方のＲ”が炭素であることも、両方のＲ”が窒素であることも、又は一方のＲ”が炭素であり、他方が窒素であることもあり得る。
【００１７】
任意の変数が本発明中で使用され又はクレームされている化合物を表し、そして記載している任意の部分又は式中に１回より多く出現する場合、出現ごとのその定義は、すべての他の出現でのその定義とは独立している。同じく、置換基及び／又は変数の組合せは、そのような化合物が安定した化合物に至る場合に限り許容される。
【００１８】
結合の終端部の記号「＊」又は結合を貫いて延伸する「------」は、各々、官能基又は他の化学部分が、その一部である分子の残りに結合する点を指す。したがって、例えば：
【化２】
0006294490.tif 000003
【００１９】
環系中に引かれる結合（明確な頂点で連結されたものと対照をなす）は、結合が適切な環原子のいずれかに結合され得ることを示す。
【００２０】
本明細書において使用されるように、用語「場合による」又は「場合により」は、続いて記載される事象又は状況が起こってもよいが起こる必要もなく、その記載は、その事象又は状況が起こる場合と起こらない場合とを含むことを意味する。例えば「場合により置換されている」は、場合により置換されている部分が、水素原子又は置換基を組み込み得ることを意味する。
【００２１】
「場合により結合」という語句は、結合が存在してもよいし又はしなくてもよく、そしてその記載は単結合、二重結合又は三重結合を含むことを意味する。置換基が「結合」又は「存在しない」ことが示される場合、置換基に結合される原子は、その後直接結合される。
【００２２】
用語「約」は本明細書において、およそ、ほぼ、おおまかに、あたりを意味することに使用される。用語「約」が数値範囲との組み合わせで使用される場合、それは記載される数値の上及び下に境界を拡張することによってその範囲を修飾する。概して、用語「約」は本明細書において、数値を、記載された数値の上及び下に２０％の変動で修飾することに使用される。
【００２３】
式Ｉの特定の化合物は、互変異性を示し得る。互変異性化合物は、２種以上の相互転換可能な種として存在できる。プロトン性（prototropic）互変異性体は、二つの原子間における共有結合した水素原子の移動から生じる。互変異性体は、一般的に、平衡状態で存在し、個々の互変異性体を単離しようとすると、通例、化合物の混合物と変わらない化学的及び物理的性質を有する混合物を生成する。平衡の位置は、分子内の化学的特徴部分に依存する。例えば、アセトアルデヒド等の多くの脂肪族アルデヒド及びケトンでは、ケト型が優位を占める一方、フェノールでは、エノール型が優位を占める。一般的なプロトン性互変異性体は、ケト／エノール（−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ−⇔−Ｃ（−ＯＨ）＝ＣＨ−）、アミド／イミド酸（−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−⇔−Ｃ（−ＯＨ）＝Ｎ−）及びアミジン（−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＨ−⇔−Ｃ（−ＮＨＲ）＝Ｎ−）互変異性体を含む。後者二つはヘテロアリール及び複素環において特に一般的であり、本発明は本化合物のすべての互変異性型を含む。
【００２４】
本明細書において用いられる技術及び科学用語は、特に定義されない場合、本発明が関連する技術における当業者によって、一般に理解される意味を有する。当業者に知られた様々な方法論及び材料を、本明細書において引用する。Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th Ed., McGraw Hill Companies Inc., New York (2001) を含む標準引例は、薬理学の一般的原理を説明するのに役立つ。当業者に知られた任意の適切な材料及び／又は方法を、本発明を実施する際に用いることができる。しかしながら、好ましい材料及び方法が記載されている。以下の説明及び実施例で引用する材料、試薬等は、特に指示のない場合、商業的供給源より入手可能である。
【００２５】
本明細書に記載される定義は、例えば、「ヘテロアルキルアリール」、「ハロアルキルヘテロアリール」、「アリールアルキルヘテロシクリル」、「アルキルカルボニル」、「アルコキシアルキル」等の化学的に関連する組み合わせを形成するために加えられ得る。用語「アルキル」が、「フェニルアルキル」又は「ヒドロキシアルキル」のように別の用語の後に接尾辞として使用される場合、これは、他の具体的に名前を挙げた基から選択される１個〜２個の置換基により置換されている、上記で定義されたようなアルキル基を指すことが意図される。したがって、例えば、「フェニルアルキル」は、１〜２個のフェニル置換基を有するアルキル基を指し、したがって、ベンジル、フェニルエチル、及びビフェニルを含む。「アルキルアミノアルキル」は、１〜２個のアルキルアミノ置換基を有するアルキル基である。「ヒドロキシアルキル」は、２−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシプロピル、１−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピル、２−ヒドロキシブチル、２，３−ジヒドロキシブチル、２−（ヒドロキシメチル）、３−ヒドロキシプロピル等を含む。したがって、本明細書において使用されるように、用語「ヒドロキシアルキル」は、以下に定義されるヘテロアルキル基のサブセットを定義するために用いられる。用語−（ar）アルキルは、非置換アルキル又はアラルキル基のいずれかを指す。用語（ヘテロ）アリール又は（het）アリールは、アリール又はヘテロアリール基のいずれかを指す。
【００２６】
本明細書において使用されるように、用語「スピロシクロアルキル」は、例えば、スピロ［３．３］ヘプタンのようにスピロ環式シクロアルキル基を意味する。本明細書において使用されるように、用語スピロヘテロシクロアルキルは、例えば、２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタンのようにスピロ環式ヘテロシクロアルキルを意味する。
【００２７】
本明細書において使用されるように、用語「アシル」は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒの基を示し、式中、Ｒは、水素又は本明細書で定義された低級アルキルである。本明細書において使用されるように、用語「アルキルカルボニル」は、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒの基を示し、式中、Ｒは、本明細書において定義されたアルキルである。用語Ｃ１−６アシルは、６個の炭素原子を含む基−Ｃ（＝Ｏ）Ｒである。本明細書において使用されるように、用語「アリールカルボニル」は、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、アリール基である）を意味し；本明細書において使用されるように、用語「ベンゾイル」は、「アリールカルボニル」基（ここでＲは、フェニルである）を意味する。
【００２８】
本明細書において使用されるように、用語「エステル」は、式‐Ｃ（＝Ｏ）Ｒの基を示し、式中、Ｒは、本明細書において定義された低級アルキルである。
【００２９】
本明細書において使用されるように、用語「アルキル」は、１〜１０個の炭素原子を含む、非分岐又は分岐鎖の飽和一価の炭化水素残基を表す。用語「低級アルキル」は、１〜６個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐鎖の炭化水素残基を表す。本明細書で使用される「Ｃ１−１０アルキル」は、１〜１０個の炭素からなるアルキルを指す。アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル又はペンチル（を含む低級アルキル基）、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル及びオクチルを非限定的に含む。
【００３０】
用語「アルキル」が、「フェニルアルキル」又は「ヒドロキシアルキル」のように別の用語の後に接尾辞として使用される場合、これは、他の具体的に名前を挙げた基から選択される１個〜２個の置換基により置換されている、上記で定義されたようなアルキル基を指すことが意図される。したがって、例えば、「フェニルアルキル」は、基Ｒ’Ｒ”−（ここで、Ｒ’は、本明細書で定義されたとおりの、フェニル基であり、Ｒ”は、アルキレン基である）を表し、フェニルアルキル部分の結合点はアルキレン基上であると理解される。アリールアルキル基の例は、ベンジル、フェニルエチル、３−フェニルプロピルを非限定的に含む。用語「アリールアルキル」又は「アラルキル」は、Ｒ’がアリール基である以外、同様に解釈される。用語「（het）アリールアルキル」又は「（het）アラルキル」は、Ｒ’が、場合によりアリール又はヘテロアリール基である以外、同様に解釈される。
【００３１】
用語「ハロアルキル」又は「ハロ低級アルキル」又は「低級ハロアルキル」は、１〜６つの炭素原子を含む直鎖又は分枝鎖炭化水素残基を指し、１個以上の炭素原子が１個以上のハロゲン原子で置換される。
【００３２】
本明細書中において使用されるように、用語「アルキレン」又は「アルキレニル」は、特に断りない限り、１〜１０個の炭素原子の二価の飽和直鎖炭化水素基（例えば、（ＣＨ２）ｎ）、又は２〜１０個の炭素原子の分岐飽和二価炭化水素基（例えば、−ＣＨＭｅ−又は−ＣＨ２ＣＨ（ｉ−Ｐｒ）ＣＨ２−）を示す。メチレンの場合を除いて、アルキレン基の開いた原子価は、同じ原子には結合しない。アルキレン基の例は、メチレン、エチレン、プロピレン、２−メチル−プロピレン、１，１−ジメチル−エチレン、ブチレン、２−エチルブチレンを非限定的に含む。
【００３３】
本明細書において使用されるように、用語「アルコキシ」は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ（これらの異性体を含む）のような、−Ｏ−アルキル基（ここで、アルキルは、上記で定義されたとおりである）を意味する。本明細書において使用されるように「低級アルコキシ」は、先に定義されたような「低級アルキル」基を有するアルコキシ基を示す。本明細書において使用されるように、「Ｃ１−１０アルコキシ」は、アルキルがＣ１−１０である、−Ｏ−アルキルを指す。
【００３４】
用語「ＰＣｙ３」は、３つの環状部で三置換基されたホスフィンを指す。
【００３５】
用語「ハロアルコキシ」又は「ハロ低級アルコキシ」又は「低級ハロアルコキシ」は、低級アルコキシ基を指し、１個以上の炭素原子は、１個以上のハロゲン原子で置換される。
【００３６】
本明細書において使用されるように、用語「ヒドロキシアルキル」は、異なる炭素原子上の１〜３個の水素原子が水酸基により置き換えられている、本明細書において定義されたようなアルキル基を表す。
【００３７】
用語「アルキルスルホニル」及び「アリールスルホニル」は、本明細書で使用するとき、式−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、それぞれ、アルキル又はアリールであり、そして、アルキル及びアリールは、本明細書に定義するとおりである）で表される基を指す。用語「ヘテロアルキルスルホニル」は、本明細書で使用するとき、式−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、本明細書に定義するとおりの「ヘテロアルキル」である）で表される基を指す。
【００３８】
用語「アルキルスルホニルアミノ」及び「アリールスルホニルアミノ」は、本明細書で使用するとき、式−ＮＲ’Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、それぞれ、アルキル又はアリールであり、Ｒ’は、水素又はＣ１−３アルキルであり、そして、アルキル及びアリールは、本明細書に定義するとおりである）で表される基を指す。
【００３９】
用語「シクロアルキル」は、本明細書で使用するとき、３〜８個の炭素原子を含有する飽和炭素環、すなわち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、又はシクロオクチルを指す。「Ｃ３−７シクロアルキル」は、本明細書で使用するとき、炭素環が３〜７個の炭素原子からなるシクロアルキルを指す。
【００４０】
用語「カルボキシ−アルキル」は、本明細書で使用するとき、ヘテロアルキル基の結合点が炭素原子を貫くという理解の下で、１つの水素原子がカルボキシルで置換されているアルキル部分を指す。用語「カルボキシ」又は「カルボキシル」は、−ＣＯ２Ｈ部分を指す。
【００４１】
用語「ヘテロアリール」又は「複素環式芳香族」は、本明細書で使用するとき、ヘテロアリール基の結合点が芳香環又は部分不飽和環上に存在するという理解の下で、環１つ当たり４〜８個の原子を含有し、１つ以上のＮ、Ｏ、又はＳヘテロ原子が組み込まれ、残りの環原子が炭素である少なくとも１つの芳香環又は部分不飽和環を有する、５〜１２個の環原子の単環式又は二環式の基を意味する。当業者に周知であるとおり、ヘテロアリール環は、全てが炭素である対応物よりも低い芳香族特性を有する。したがって、本発明の目的のために、ヘテロアリール基は、ある程度の芳香族特性しか必要としていない。ヘテロアリール部分の例は、５〜６個の環原子及び１〜３個のヘテロ原子を有する単環式芳香族複素環が挙げられ、ヒドロキシ、シアノ、アルキル、アルコキシ、チオ、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロ、低級ハロアルキル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、及びジアルキルアミノアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル、及びカルバモイル、アルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アルキルカルボニルアミノ及びアリールカルボニルアミノから選択される１つ以上、好ましくは１又は２つの置換基で場合により置換されていてもよい、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、オキサジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、４，５−ジヒドロ−オキサゾリル、５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサゾリル、イソキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、トリアゾリン、チアジアゾール及びオキサジアキソリンが挙げられるが、これらに限定されない。二環式部分の例は、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾフリル、ベンゾチオフェニル、ベンズオキサゾール、ベンズイソキサゾール、ベンゾチアゾール、ナフチリジニル、５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，６］ナフチリジニル、及びベンズイソチアゾールが挙げられるが、これらに限定されない。二環式部分は、いずれかの環において場合により置換されていてもよいが、結合点は、ヘテロ原子を含有する環上に存在する。
【００４２】
用語「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクロアルキル」、又は「複素環」は、本明細書で使用するとき、環１つ当たり３〜８個の原子を有し、１つ以上の環ヘテロ原子（Ｎ、Ｏ、又はＳ（Ｏ）０−２から選択される）が組み込まれている１つ以上の環、好ましくは１〜２個の環（スピロ環系を含む）からなり、そして、特に指定しない限り、場合により、独立して、ヒドロキシ、オキソ、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロ、低級ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルアミノスルホニル、アリールアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、及びこれらのイオン形態から選択される１つ以上、好ましくは１〜２つの置換基で置換されていてもよい、一価飽和環状基を示す。複素環式基の例は、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ヘキサヒドロアゼピニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、キヌクリジニル、及びイミダゾリニル、並びにこれらのイオン形態が挙げられるが、これらに限定されない。また、例は、例えば、３，８−ジアザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン、２，５−ジアザ−ビシクロ［２．２．２］オクタン、又はオクタヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジン等の二環式であってもよい。
【００４３】
Ｂｔｋの阻害剤
本出願は、式Ｉ：
【化３】
0006294490.tif 000004
［式中、
Ｒ１は、１つ以上のＲ１’で場合により置換されている、低級アルキル、フェニル、シクロアルキル又はピリジルであり；
各Ｒ１’は、独立して、低級アルキル、ハロ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２又はシアノであり；
Ｒ２は、存在しないか、ハロ、低級アルコキシ、ヒドロキシ又は低級アルキルであり；
Ｒ３は、存在しないか、ハロ、低級アルコキシ、ヒドロキシ又は低級アルキルであり；
Ｒ４は、存在しないか、又はヘテロシクロアルキル低級アルキレニルであり；
Ｘは、ＣＨ又はＮであり；そして
Ｙは、ＣＨ又はＮである］
で表される化合物又はその薬学的に許容し得る塩を提供する。
【００４４】
本出願は、ＹがＣＨである、式Ｉの化合物を提供する。
【００４５】
本出願は、ＸがＮである、上記式Ｉの化合物のいずれかを提供する。
【００４６】
本出願は、代替的に、ＸがＣＨである、上記式Ｉの化合物のいずれかを提供する。
【００４７】
本出願は、Ｒ４がモルホリニルメチレンである、上記式Ｉの化合物のいずれかを提供する。
【００４８】
本出願は、代替的に、Ｒ４が存在しない、上記式Ｉの化合物のいずれかを提供する。
【００４９】
本出願は、Ｒ２が存在しない、上記式Ｉの化合物のいずれかを提供する。
【００５０】
本出願は、代替的に、Ｒ２がハロである、上記式Ｉの化合物のいずれかを提供する。
【００５１】
本出願は、代替的に、Ｒ２が低級アルキルである、上記式Ｉの化合物のいずれかを提供する。
【００５２】
本出願は、代替的に、Ｒ２が低級アルコキシである、上記式Ｉの化合物のいずれかを提供する。
【００５３】
本出願は、代替的に、Ｒ２がヒドロキシである、上記式Ｉの化合物のいずれかを提供する。
【００５４】
本出願は、Ｒ３が、ハロ、低級アルコキシ又はヒドロキシである、上記式Ｉの化合物のいずれかを提供する。
【００５５】
本出願は、Ｒ１が、１つ以上のＲ１’で場合により置換されているフェニルである、上記式Ｉの化合物のいずれかを提供する。
【００５６】
本出願は、代替的に、Ｒ１が、１つ以上のＲ１’で場合により置換されている、低級アルキル、シクロアルキル又はヘテロアリールである、上記式Ｉの化合物のいずれかを提供する。
【００５７】
本出願は、下記からなる群より選択される、式Ｉの化合物を提供する：
［５−アミノ−１−（３−フルオロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（６−フェノキシ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−２−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−３−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
５−アミノ−１−（３−クロロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
｛５−アミノ−１−［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（３−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（２−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（４−イソプロポキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（４−シクロペンチルオキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
｛５−アミノ−１−［４−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
｛５−アミノ−１−［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；
２−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−メチル−フェノキシ｝−ベンゾニトリル；
３−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−クロロ−フェノキシ｝−ベンゾニトリル；
３−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−メチル−フェノキシ｝−ベンズアミド；
｛５−アミノ−１−［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−メタノン；
［５−アミノ−１−（４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン；及び
３−｛４−［５−アミノ−４−（６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−クロロ−フェノキシ｝−ベンゾニトリル。
【００５８】
本出願は、炎症性及び／又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００５９】
本出願は、関節リウマチを処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００６０】
本出願は、喘息を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００６１】
本出願は、癌を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【００６２】
本出願は、式Ｉの化合物を含む、医薬組成物を提供する。
【００６３】
本出願は、式Ｉの化合物を少なくとも１つの薬学的に許容し得る担体、賦形剤又は希釈剤との混合物で含む、医薬組成物を提供する。
【００６４】
本出願は、炎症性疾患を処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００６５】
本出願は、自己免疫疾患を処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００６６】
本出願は、関節リウマチを処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００６７】
本出願は、喘息を処置するための医薬の製造における、式Ｉで表される化合物の使用を提供する。
【００６８】
本出願は、炎症及び／又は自己免疫状態を処置するための上記のような化合物の使用を提供する。
【００６９】
本出願は、関節リウマチを処置するための上記のような化合物の使用を提供する。
【００７０】
本出願は、喘息を処置するための上記のような化合物の使用を提供する。
【００７１】
本出願は、炎症及び／又は自己免疫状態の処置において使用するために上記のような化合物を提供する。
【００７２】
本出願は、関節リウマチの処置において使用するために上記のような化合物を提供する。
【００７３】
本出願は、喘息の処置において使用するために上記のような化合物を提供する。
【００７４】
本出願は、本明細書に記載されるような化合物、方法又は組成物を提供する。
【００７５】
本出願は、本明細書に記載される発明を提供する。
【００７６】
化合物及び調製
本発明に包含され、本発明の範囲内である代表的な化合物の例を、以下の表で提供する。これらの下記の実施例及び調製例は、当業者が本発明をより明確に理解し、実施することを可能とするために提供される。これらは、本発明の範囲を制限するものではなく、本発明の例示及び代表例としてのみ考えられるべきである。
【００７７】
一般に、本出願に使用される命名法は、IUPAC系統的命名法の作成のためのBeilstein InstituteコンピュータシステムであるAUTONOMTM v. 4.0に基づく。図示された構造とその構造を示す名称との間に相違がある場合、図示された構造がより重視される。加えて、構造又は構造の一部の立体化学が、例えば太字又は点線によって示されていない場合、その構造又は構造の一部は、その立体異性体の全てを包含すると解釈すべきである。
【００７８】
表Ｉは、一般式Ｉに係る化合物の例を示す。
【表１】
0006294490.tif 000005
0006294490.tif 000006
0006294490.tif 000007
0006294490.tif 000008
【００７９】
一般的な合成スキーム
本発明の化合物は、任意の従来の手段によって調製することができる。これら化合物を合成するのに好適なプロセスは、実施例に提供される。一般的に、本発明の化合物は、以下のスキームに従って調製することができる。
【００８０】
【化４】
0006294490.tif 000009
【００８１】
式１４の化合物（式中、Ｒ１及びＲ２は、式Ｉの属（genus）において上述したとおりである）は、スキーム１に概説される経路を使用して調製され得る。この手順に従って、市販されている式１の化合物（４−ブロモメチル−安息香酸メチルエステル）は、ベンジルアミンへと変換され、式２の化合物を与え得る。エステルの還元は、ベンジルアルコール誘導体４を与え、これはアルデヒド誘導体５へと酸化されることができる。アジド−酢酸エチルエステルとの反応は、アクリル酸メチルエステル誘導体７を与え、これは対応するインドール誘導体８へと環化されることができる。トシル（Ｔｓ）又は２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭ）などの標準的な保護基でのインドール環の保護は、式９の化合物を与える。次いで、エステル９は、アセトニトリルから誘導されるアニオンと反応して、式１０のシアノアセチル誘導体を与え得る。ジメチルホルムアミドジメチルアセタールとの反応はアクリロニトリル誘導体１１を提供し、そして、これは式１２のフェニルヒドラジン誘導体と反応して式１３のアミノピラゾールを与える。次いで、保護基の除去は、式１４の本発明の化合物を提供する。
【００８２】
４−ブロモメチル−安息香酸メチルエステル（式１の化合物）は、テトラヒドロフランなどの不活性溶媒中、０℃前後の温度で、モルホリンの存在下、ジ−イソプロピルエチルアミンなどの塩基で簡便に処理され得る。混合物を室温で１時間〜数時間の間の反応時間にわたって撹拌することができる。そのような反応のための条件は、文献、例えば、Moore, Jason L. et al. Arkivoc, 2005, 6, 287-292 に見出され得る。
【００８３】
式３の化合物は、テトラヒドロフランとメタノールなどの溶媒の混合物中、水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤で処理することによって、式４のベンジルアルコール誘導体へと簡便に変換され得る。混合物を還流下で２時間〜数時間の間の反応時間にわたって撹拌することができる。
【００８４】
式４の化合物は、ジクロロメタンなどの溶媒中、二酸化マンガンなどの酸化剤で処理することによって、式５のアルデヒド誘導体へと簡便に変換され得る。混合物を室温で数時間撹拌することができる。
【００８５】
アルデヒド５とアジド−酢酸エチルエステル６との縮合反応は、メタノールなどの溶媒を使用して、ナトリウムメトキシドの存在下、０℃前後の温度で起こることができる。混合物を３０分間又は数時間の間の反応時間にわたって撹拌することができる。
【００８６】
インドール８の形成は、アクリル酸メチルエステル誘導体７から開始するヘメツバーガー・クニッテル（Hemetsberger-Knittel）合成を使用して達成されることができる。キシレン又はトルエンなどの溶媒を使用して、反応混合物を高温（９０℃以上）で数時間加熱する。その環化を実施するために他の方法が文献において利用可能である。触媒としてペルフルオロ酪酸ロジウム（II）を使用した温和な手順を記載したStokes et al., J. Am. Chem. Soc. 2007, 129, 7500-7501 を参照されたい。また、Tetrahedron Letters 2009, 50, 1708-1709 を参照されたい。代替的に、異なる合成方法を使用してインドール環を合成することもできる。概説については、Chem. Rev. 2006, 106, 2875-2911 を参照されたい。
【００８７】
式８の化合物は、テトラヒドロフランなどの不活性溶媒中、０℃前後の温度で、水素化ナトリウムなどの塩基で簡便に処理され、対応するアニオンが生成され得る。これはトシルクロリド又は２−（トリメチルシリル）エトキシメチルクロリドなどの保護基で処理され得、そして、混合物を室温で約１時間撹拌して、式９の誘導体を与えることができる。
【００８８】
式９の化合物は、テトラヒドロフランなどの溶媒中、低温（約−７８℃など）で、アセトニトリルと強塩基（リチウムジイソプロピルアミド又はリチウムヘキサメチルジシラジドなど）の混合物で処理することによって、式１０のシアノアセチル誘導体へと簡便に変換され得る。そのような反応のための条件は、特許文献、例えば、Taka, N. et al. US 20120208811 Page 163 に見出され得る。
【００８９】
式１０の化合物は、芳香族炭化水素（例えば、トルエン）又はテトラヒドロフランなどの不活性溶媒中、おおよそ室温で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタールでの処理によって、式１１のアクリロニトリル誘導体へと変換され得る。そのような反応のための条件は、特許文献、例えば、Taka, N. et al. US 20120208811 page 132 に見出され得る。
【００９０】
式１１のアクリロニトリル誘導体は、メタノール又はエタノール又はイソプロパノールなどのアルコール溶媒中、おおよそ溶媒の還流温度で、式１２の中間体（式中、Ｒ１及びＲ２は、式Ｉの属において上述したとおりである）での処理によって、式１３のアミノピラゾール誘導体へと変換され得る。そのような反応のための条件は、特許文献、例えば、Taka, N. et al. US 20120208811 Page 94 に見出され得る。
【００９１】
式１３の化合物の式１４の本発明の化合物への変換は、任意の従来手順を使用して実行され得る。例えば、トシル保護基の場合、反応は、式１３の化合物を、炭酸セシウムなどの塩基とメタノールなどの低級アルコールの混合物で、テトラヒドロフランなどの溶媒中、おおよそ室温〜その混合物のおおよそ還流温度の間の温度で処理することによって行われ得る。そのような反応に使用され得る条件の例は、文献、例えば、Zhang, B and Wee. A. G. H. Org. Biomol. Chem. 2012, 10, 4597-4608 Supplementary Information; Alam, M. et al. US 20110071150 page 54; 及び Taka, N. et al. US 20120208811 Page 55 に見出すことができる。例えば、ＳＥＭ保護基の場合、反応は、式１３の化合物を、フッ化テトラブチルアンモニウムとエチレンジアミンの混合物で、テトラヒドロフラン又はジメチルホルムアミドなどの溶媒中、約５０℃〜その混合物のおおよそ還流温度の間の温度で処理することによって行われ得る。そのような反応に使用され得る条件の例は、文献、例えば、Barrett, T. D. et al. WO 2004007463 Page 182; Kerns, J. K. et al. WO 2007062318 Page 47; 及び Degnan, A. P. et al. US 20090018132 Page 119 に見出すことができる。代替的に、式１４の化合物は、アルコール溶媒（メタノール、エタノール又はイソプロパノールなど）中又はテトラヒドロフラン中、還流温度にて、濃塩酸で処理され、式１４の本発明の化合物を与え得る。そのような反応に使用され得る条件の例は、文献、例えば、Muneau, Y. et al. US 20080262020 Page 24 に見出すことができる。
【００９２】
【化５】
0006294490.tif 000010
【００９３】
式１２の中間体（式中、Ｒ１及びＲ２は、式Ｉの属において上述したとおりである）は、スキーム２に従って調製され得る。式１５の化合物は、式１６のフェノール誘導体との求核芳香族置換反応を受けて、式１７の化合物を与える。式１８の化合物中のニトロ基の還元、続く、ジアゾ化及び還元は、式１２のアリール−ヒドラジン誘導体を与える。
【００９４】
化合物１５などの４−クロロ−１−ニトロ−ベンゼン誘導体は、炭酸カリウム又は炭酸セシウムなどの塩基の存在下、ジメチルホルムアミドなどの不活性溶媒中、約１００℃〜約１５０℃の間の温度にて、場合によりマイクロ波照射下で、式１６のフェノールで処理され、式１７のニトロ化合物を与え得る。そのような反応に使用され得る特定の条件の例は、文献、例えば、Chee, G.-L et al. US 20040266738 Page 5; 及びCui, S.-L. et al. Synlett 2004, 1829-1831 に見出され得る。
【００９５】
式１７の化合物中のニトロ基の還元は、有機合成の分野において平均的な技能を有する者に周知の種々の手順を使用して実行されることができる。これらの手順の多くは、Larock, R. C. Comprehensive Organic Transformations John Wiley & Sons Inc. NY 1999, pp. 823（以下参照）に概説されている。１つの簡便なアプローチは、パラジウム炭素などの貴金属触媒の存在下、アルコール（例えば、メタノール又はエタノール）などの溶媒中、約１気圧の水素〜約３気圧の水素の間の圧力で、おおよそ室温にて、式１７の化合物を水素ガスで処理することである。そのような反応に使用され得る特定の条件の例は、文献、例えば、Chee, G.-L et al. US 20040266738 Page 5; 及びSchoenafinger, K. et al. US 20030236288 Page 18 に見出され得る。
【００９６】
式１７の化合物中のアニリン基のジアゾ化及び還元は、任意の従来手順を使用して行われ得る。例えば、反応は、水溶液中、塩酸などの無機酸の存在下、約５℃未満、好ましくは約０℃未満の温度で、式１８の化合物を亜硝酸ナトリウムで処理し、続いて、ほぼ同じ温度で、塩化スズ（ＩＩ）又は亜ジチオン酸ナトリウムなどの還元剤を添加することによって簡便に行われる。そのような反応に使用され得る特定の条件の例は、文献、例えば、Wipf, P. and Qiming, J. WO 2012078859 page 47; Rewolinski, M. V. et al. WO 2009055721 page 82; 及び Schoenafinger, K. et al. US 20030236288 page 18 に見出され得る。
【００９７】
【化６】
0006294490.tif 000011
【００９８】
式７の化合物（式中、Ｒ１及びＲ２は、式Ｉの属において上述したとおりである）は、スキーム１に概説される経路を使用して調製され得る。この手順に従って、式１の化合物（市販されている）は、トシル（Ｔｓ）又は２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭ）などの保護基を使用して保護され、式２の化合物を与え得る。次いで、エステル２は、アセトニトリルから誘導されるアニオンと反応して、式３のシアノアセチル誘導体を与え得る。ジメチルホルムアミドジメチルアセタールとの反応はアクリロニトリル誘導体４を提供し、そして、これは式５のフェニルヒドラジン誘導体と反応して、式６のアミノピラゾールを与える。次いで、保護基の除去は、式７の本発明の化合物を提供する。
【００９９】
１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチル及び１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−カルボン酸エチル（式１の化合物）は、テトラヒドロフランなどの不活性溶媒中、０℃前後の温度で、水素化ナトリウムなどの塩基で簡便に処理され、対応するアニオンが生成され得る。これはトシルクロリド又は２−（トリメチルシリル）エトキシメチルクロリドで処理され得、そして、混合物を室温で約１時間撹拌して、式２の誘導体を与えることができる。
【０１００】
式２の化合物は、テトラヒドロフランなどの溶媒中、低温（約−７８℃など）で、アセトニトリルと強塩基（リチウムジイソプロピルアミド又はリチウムヘキサメチルジシラジドなど）の混合物で処理することによって、式３のシアノアセチル誘導体へと簡便に変換され得る。そのような反応のための条件は、特許文献、例えば、Taka, N. et al. US 20120208811 Page 163 に見出され得る。
【０１０１】
式３の化合物は、芳香族炭化水素（例えば、トルエン）又はテトラヒドロフランなどの不活性溶媒中、おおよそ室温で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタールでの処理によって、式４のアクリロニトリル誘導体へと変換され得る。そのような反応のための条件は、特許文献、例えば、Taka, N. et al. US 20120208811 page 132 に見出され得る。
【０１０２】
式４のアクリロニトリル誘導体は、メタノール又はエタノール又はイソプロパノールなどのアルコール溶媒中、おおよそ溶媒の還流温度で、式５の中間体（式中、Ｒ１及びＲ２は、式Ｉの属において上述したとおりである）での処理によって、式６のアミノピラゾール誘導体へと変換され得る。そのような反応のための条件は、特許文献、例えば、Taka, N. et al. US 20120208811 Page 94 に見出され得る。
【０１０３】
式６の化合物の式７の本発明の化合物への変換は、任意の従来手順を使用して実行され得る。例えば、トシル保護基の場合、反応は、式６の化合物を、炭酸セシウムなどの塩基とメタノールなどの低級アルコールの混合物で、テトラヒドロフランなどの溶媒中、おおよそ室温〜その混合物のおおよそ還流温度の間の温度で処理することによって行われ得る。そのような反応に使用され得る条件の例は、文献、例えば、Zhang, B and Wee. A. G. H. Org. Biomol. Chem. 2012, 10, 4597-4608 Supplementary Information; Alam, M. et al. US 20110071150 page 54; 及び Taka, N. et al. US 20120208811 Page 55 に見出すことができる。例えば、ＳＥＭ保護基の場合、反応は、式６の化合物を、フッ化テトラブチルアンモニウムとエチレンジアミンの混合物で、テトラヒドロフラン又はジメチルホルムアミドなどの溶媒中、約５０℃〜その混合物のおおよそ還流温度の間の温度で処理することによって行われ得る。そのような反応に使用され得る条件の例は、文献、例えば、Barrett, T. D. et al. WO 2004007463 Page 182; Kerns, J. K. et al. WO 2007062318 Page 47; 及び Degnan, A. P. et al. US 20090018132 Page 119 に見出すことができる。代替的に、式７の化合物は、アルコール溶媒（メタノール、エタノール又はイソプロパノールなど）中又はテトラヒドロフラン中、還流温度にて、濃塩酸で処理され、式７の本発明の化合物を与え得る。そのような反応に使用され得る条件の例は、文献、例えば、Muneau, Y. et al. US 20080262020 Page 24 に見出すことができる。
【０１０４】
【化７】
0006294490.tif 000012
【０１０５】
式５の中間体（式中、Ｒ１及びＲ２は、式Ｉの属において上述したとおりである）は、スキーム２に従って調製され得る。式８の化合物は、式９のアルコール誘導体との求核芳香族置換反応を受けて、式１０の化合物を与える。式１１の化合物中のニトロ基の還元、続く、ジアゾ化及び還元は、式５のアリール−ヒドラジン誘導体を与える。
【０１０６】
化合物８などの４−クロロ−１−ニトロ−ベンゼン誘導体は、炭酸カリウム又は炭酸セシウムなどの塩基の存在下、ジメチルホルムアミドなどの不活性溶媒中、約１００℃〜約１５０℃の間の温度にて、場合によりマイクロ波照射下で、式９のアルコール（フェノール又はアルキルアルコール）で処理され、式１０のニトロ化合物を与え得る。そのような反応に使用され得る特定の条件の例は、文献、例えば、Chee, G.-L et al. US 20040266738 Page 5; 及びCui, S.-L. et al. Synlett 2004, 1829-1831 に見出され得る。
【０１０７】
式１０の化合物中のニトロ基の還元は、有機合成の分野において平均的な技能を有する者に周知の種々の手順を使用して実行されることができる。これらの手順の多くは、Larock, R. C. Comprehensive Organic Transformations John Wiley & Sons Inc. NY 1999, pp. 823（以下参照）に概説されている。１つの簡便なアプローチは、パラジウム炭素などの貴金属触媒の存在下、アルコール（例えば、メタノール又はエタノール）などの溶媒中、約１気圧の水素〜約３気圧の水素の間の圧力で、おおよそ室温にて、式１０の化合物を水素ガスで処理することである。そのような反応に使用され得る特定の条件の例は、文献、例えば、Chee, G.-L et al. US 20040266738 Page 5; 及びSchoenafinger, K. et al. US 20030236288 Page 18 に見出され得る。
【０１０８】
式１１の化合物中のアニリン基のジアゾ化及び還元は、任意の従来手順を使用して行われ得る。例えば、反応は、水溶液中、塩酸などの無機酸の存在下、約５℃未満、好ましくは約０℃未満の温度で、式１１の化合物を亜硝酸ナトリウムで処理し、続いて、ほぼ同じ温度で、塩化スズ（II）又は亜ジチオン酸ナトリウムなどの還元剤を添加することによって簡便に行われる。そのような反応に使用され得る特定の条件の例は、文献、例えば、Wipf, P. and Qiming, J. WO 2012078859 page 47; Rewolinski, M. V. et al. WO 2009055721 page 82; 及び Schoenafinger, K. et al. US 20030236288 page 18 に見出され得る。
【０１０９】
医薬組成物及び投与
本発明の化合物は、多種多様な経口投与用の剤形及び担体で処方してよい。経口投与は、錠剤、コート錠、糖衣錠、硬及び軟ゼラチンカプセル剤、液剤、乳剤、シロップ剤又は懸濁剤の形態であり得る。本発明の化合物は、その他の投与経路の中でも、連続的（点滴）局所非経口、筋肉内、静脈内、皮下、経皮（浸透促進剤を含み得る）、口腔内、鼻腔内、吸入及び坐剤投与を含む他の投与経路によって投与されたときに効果的である。好ましい投与方法は、一般的に、苦痛の程度及び有効成分に対する患者の反応に従って調整され得る慣用の一日用量レジメンを使用する経口である。
【０１１０】
本発明の化合物（１つ又は複数）ならびにそれらの薬学的に使用可能な塩は、１つ又は複数の従来の賦形剤、担体又は希釈剤と一緒に、医薬組成物及び単位用量の形態にしてよい。医薬組成物及び単位投薬形態は、慣用の成分を慣用の割合で、追加の活性化合物もしくは成分と共に又は無しで含むことができ、単位投薬形態は、使用される１日用量の意図される範囲に釣り合う有効成分のあらゆる適切な有効量を含むことができる。医薬組成物は、錠剤もしくは充填カプセル剤、半固形剤、粉末剤、持続性放出製剤のような固形剤として、又は液剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤もしくは経口用の充填カプセル剤のような液剤として；又は直腸内もしくは膣内投与用の坐剤の形態；又は非経口的使用の注射用滅菌液剤の形態で使用することができる。典型的な調製剤は、約５％〜約９５％の活性化合物（１つ又は複数）（w/w）を含有する。用語「調製剤」又は「剤形」は、活性化合物の固体製剤と液体製剤の両方を含むことを意図し、当業者であれば、ターゲット臓器又は組織及び所望の用量及び薬物動態パラメーターに応じて、有効成分が異なる調製剤として存在し得ることが理解されよう。
【０１１１】
本明細書において使用される用語「賦形剤」は、一般的に安全で無毒であり、生物学的にもその他の面でも望ましくないことはない、医薬組成物の調製において有用である化合物を指し、そして、獣医学的使用ならびにヒトへの薬学的使用に許容し得る賦形剤を含む。本発明の化合物は、単独で投与することができるが、一般的に、意図される投与経路及び標準的な薬務に照らして選択される１つ又は複数の適切な薬学的賦形剤、希釈剤又は担体との混合物で投与される。
【０１１２】
「医薬的に許容し得る」は、それが、一般的に安全であり、非毒性であり、生物学的にも、その他の面でも望ましくないことはない医薬組成物を調製する際に有用であることを意味し、獣医学的使用、ならびにヒトの医薬的使用に許容可能であるものを含む。
【０１１３】
有効成分の「薬学的に許容し得る塩」形態は、また、最初に、非塩形態において存在しなかった望ましい薬物動態特性を有効成分に付与することができ、そして、有効成分の薬力学に対して体内でのその治療活性に関して正の影響をさらに与え得る。化合物の「薬学的に許容し得る塩」という表現は、薬学的に許容し得るものであって、親化合物の所望の薬理学的活性を有する塩を意味する。そのような塩は、（１）無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など）と形成される酸付加塩；あるいは、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［2.2.2］−オクタ−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第三級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸、などのような有機酸とで形成される酸付加塩；あるいは（２）親化合物に存在する酸性プロトンが、金属イオン、例えばアルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、もしくはアルミニウムイオンにより置き換えられる；又は、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミン、などのような有機塩基と配位している場合に形成される塩を含む。
【０１１４】
固体製剤は、粉末剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、及び分散性顆粒剤を含む。固体担体は、希釈剤、風味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁剤、結合剤、防腐剤、錠剤崩解剤又はカプセル化材料としても作用することができる１種以上の物質であってよい。粉末剤では、担体は、一般に、微粉化した有効成分との混合物である微粉化固体である。錠剤では、有効成分は、一般的に、必要な結合能力を有する担体と適切な割合で混合され、所望の形状及び大きさに成形される。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、乳糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ロウ、ココアバター等を非限定的に含む。固体形態の製剤は、有効成分に加えて、着色料、香味料、安定剤、緩衝剤、人工及び天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤等を含有してもよい。
【０１１５】
液体製剤は、また、経口投与に適しており、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、水性液剤、水性懸濁剤を含む液体製剤を含む。これらは、使用直前に液体形態の調製剤に変換することを意図する固体形態の調製剤を含む。乳剤は、溶液中、例えば、プロピレングリコール水溶液中に調製してもよく、又はレシチン、ソルビタンモノオレート若しくはアラビアゴムなどの乳化剤を含有してもよい。水性液剤は、有効成分を水に溶解し、適切な着色剤、風味剤、安定剤及び増粘剤を加えることにより調製できる。水性懸濁剤は、微粉化した有効成分を、天然又は合成ガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び他の周知の懸濁剤のような粘性材料と共に水に分散することにより調製できる。
【０１１６】
本発明の化合物は、非経口投与（例えば、注射、例としてはボーラス注射（bolus injection）又は持続注入による）のために製剤化することができ、アンプル剤、充填済注射器（pre-filled syringes）、防腐剤を添加した小型注入容器又は多用量容器に単位用量形態で存在できる。組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁剤、液剤又は乳剤、例えばポリエチレングリコール水溶液中の液剤のような形態をとることができる。油性又は非水性の担体、希釈剤、溶媒又はビヒクルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（例えば、オリーブ油）及び注射用有機エステル類（例えば、オレイン酸エチル）を含み、防腐剤、湿潤剤、乳化剤又は懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤のような配合剤を含有してよい。あるいはまた、有効成分は、滅菌固体の無菌分離によるか、又は適切なビヒクル、例えば滅菌した発熱物質を含まない水を用いて、使用前の構成用溶液から凍結乾燥することにより得られる粉末形態であってよい。
【０１１７】
本発明の化合物を、軟膏剤、クリーム剤若しくはローション剤として又は経皮パッチ剤として表皮に局所投与するために製剤化することができる。例えば、軟膏剤及びクリーム剤を、適切な増粘剤及び／又はゲル化剤を加え、水性又は油性基剤を用いて製剤化することができる。ローション剤は、水性又は油性基剤を用いて製剤化することができ、また一般的に、１種以上の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁剤、増粘剤又は着色剤も含有する。口腔内の局所投与に適切な製剤は、風味付けした基剤、通常、スクロース及びアカシア又はトラガカント中に活性剤を含むトローチ剤；ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアのような不活性基剤中に有効成分を含むパステル剤；ならびに適切な液体担体中に有効成分を含む洗口剤を含む。
【０１１８】
本発明の化合物は坐剤として投与するために製剤化することができる。脂肪酸グリセリド又はココアバターの混合物のような低融点ロウを、最初に溶融して、有効成分を例えば撹拌により均質に分散する。次に均質溶融混合物を、都合のよい大きさの成形型に注ぎ、冷却させ、凝固させる。
【０１１９】
本発明の化合物は膣内投与用に製剤化することができる。有効成分に加えて、当該技術で適切であることが既知である担体を含有するペッサリー剤、タンポン剤、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤又はスプレー剤。
【０１２０】
本発明の化合物は鼻腔内投与用に製剤化することができる。液剤又は懸濁剤を、慣用の方法、例えば、滴瓶、ピペット又はスプレーを用いて直接鼻腔に適用する。製剤は、単回投与又は多回投与形態で提供することができる。滴瓶又はピペットの後者の場合、液剤又は懸濁剤の適切で所定の容量を患者が投与することで、それを達成することができる。スプレーの場合、例えば計量噴霧スプレーポンプを用いてこれを達成することができる。本発明の化合物は、特に、鼻内投与を含む、気道へのエアゾール投与用に製剤化することができる。化合物は、一般的に、例えばほぼ５ミクロン以下程度の小さい粒径を有する。そのような粒径は、当該技術で既知の方法、例えば微粉砕により得ることができる。有効成分は、クロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン若しくはジクロロテトラフルオロエタン、又は二酸化炭素、或いは他の適切なガスのような、適切な噴射剤を用いた加圧パックで提供される。エアロゾルはまた、レシチンのような界面活性剤を都合よく含有することができる。薬剤の用量は、計量弁により制御され得る。あるいはまた、有効成分は、乾燥粉末の形態で、例えば、乳糖、デンプン、デンプン誘導体、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース及びポリビニルピロリジン（ＰＶＰ）のような適切な粉末基剤中の化合物の粉末混合物で提供され得る。粉末担体は、鼻腔内でゲルを形成する。粉末組成物は、例えばゼラチンのカプセル又はカートリッジ、又はブリスターパックのような単位用量形態で存在してよく、これから粉末剤が吸入器により投与され得る。
【０１２１】
所望であれば、製剤は、有効成分の持続的又は制御的放出投与に適合する腸溶性コーティングを用いて調製できる。例えば、本発明の化合物は、経皮又は皮下薬剤送達装置に配合できる。これらの送達系は、化合物の持続放出が必要であり、患者の処置レジメンに対するコンプライアンスが重要である場合に有利である。経皮送達系における化合物は、多くの場合、皮膚付着固体支持体に結合されている。目的の化合物は、また、浸透向上剤、例えばアゾン（１−ドデシルアザ−シクロヘプタン−２−オン）と組み合わせることができる。続的放出送達系は、手術又は注入により皮下層に皮下的に挿入される。皮下インプラントは、脂溶性膜、例えばシリコーンゴム又は生物分解性ポリマー、例えばポリ乳酸で化合物を包み込む。
【０１２２】
適切な製剤は、薬学的担体、希釈剤及び賦形剤と共に、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvaniaに記載されている。熟練の製剤科学者であれば、本発明の組成物を不安定にすることなく又はそれらの治療活性を損なうことなく、特定の投与経路のための多くの製剤を提供するために、本明細書の教示の範囲内で製剤を改変することができる。
【０１２３】
水又はその他のビヒクルにより可溶性にするための本化合物の改変は、例えば、小さな改変（塩形成、エステル化など）によって容易に達成することができ、これらは十分に当該分野における通常の技能の範囲内である。また、患者に最大の有益な効果を与えるように本化合物の薬物動態を管理するために、特定の化合物の投与経路及び用量レジメンを改変することも十分に当該分野における通常の技能の範囲内である。
【０１２４】
本明細書において使用される用語「治療有効量」は、個体の疾患の症状を軽減するのに必要な量を意味する。用量は、各特定の症例において、個々の要件に対して調整される。その用量は、多くの要因、例えば、処置される疾患の重症度、患者の年齢及び総体的な健康状態、患者の処置に用いられているその他の医薬、投与経路及び形態、ならびに担当医の選好及び経験などに応じて、広い範囲内で変更することができる。経口投与の場合、単剤療法及び／又は併用療法では、一日あたり約０．０１〜約１０００mg/kg体重の一日用量が適切であろう。好ましい一日用量は、一日当たり約０．１〜約５００mg/kg体重、より好ましくは、０．１〜約１００mg/kg体重、最も好ましくは、１．０〜約１０mg/kg体重である。従って、７０kgの人への投与では、用量範囲は、一日当たり約７mg〜０．７ｇであろう。一日用量は、単回用量又は分割用量（典型的には、１〜５回の用量／日）で投与することができる。一般的に、処置は、化合物の最適用量より少ない用量から開始する。その後、個々の患者に最適な効果が得られるまで、用量を少量ずつ増やしていく。本明細書に記載される疾患を処置する当業者であれば、必要以上の実験を実施することなく、個人の知識、経験及び本出願の開示を頼りに所与の疾患及び患者について本発明の化合物の治療有効量を確定することができるであろう。
【０１２５】
医薬製剤は、好ましくは単位用量形態である。そのような形態では、製剤は、活性成分の適切な量を含有する単位用量に細分化されている。単位用量形態は、パッケージ製剤であることができ、そのパッケージは、パケット錠剤、カプセル剤及びバイアル又はアンプル中の粉末剤のような製剤の別個の分量を含有する。また、単位投薬形態は、それ自体カプセル剤、錠剤、カシェ剤又はトローチ剤であることができるか、又はパッケージ形態におけるこれらのうちのいずれかの適切な数であることができる。
【０１２６】
適応及び処置の方法
一般式Ｉで表される化合物は、ブルトンチロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）を阻害する。上流のキナーゼによるＢｔｋの活性化により、ホスホリパーゼ−Ｃγが活性化され、続いて、前炎症性メディエーターの放出が刺激される。式Ｉで表される化合物は、関節炎、並びに他の抗炎症及び自己免疫疾患の処置において有用である。したがって、式Ｉに係る化合物は、関節炎の処置に有用である。式Ｉで表される化合物は、細胞内のＢｔｋを阻害するため及びＢ細胞の発生を調節するために有用である。本発明は、さらに、薬学的に許容し得る担体、賦形剤、又は希釈剤と混合された、式Ｉで表される化合物を含有する医薬組成物を含む。
【０１２７】
本明細書に記載される化合物は、キナーゼ阻害剤、特に、Ｂｔｋ阻害剤である。これらの阻害剤は、哺乳動物において、キナーゼ阻害に応答する１つ又は複数の疾患（Ｂｔｋ阻害及び／又はＢ細胞増殖の阻害に応答する疾患を含む）を処置するために有用であり得る。いかなる特定の理論に束縛されるものではないが、本発明の化合物とＢｔｋの相互作用がＢｔｋ活性の阻害をもたらすために、これらの化合物が薬学的有用性を有すると考えられる。従って、本発明は、Ｂｔｋ活性の阻害及び／又はＢ細胞増殖の阻害に応答する疾患を有する哺乳動物（例えば、ヒト）を処置する方法であって、そのような疾患を有する哺乳動物に、有効量の本明細書に与えられる少なくとも１つの化学物質を投与することを含む方法を含む。有効濃度は、実験的に、例えば、化合物の血中濃度をアッセイすることによって、又は理論的にバイオアベイラビリティを計算することによって確認することができる。Ｂｔｋの他に影響を受け得るその他のキナーゼは、特に限定されないが、その他のチロシンキナーゼ及びセリン／トレオニンキナーゼを含む。
【０１２８】
キナーゼは、増殖、分化及び死（アポトーシス）などの基本的な細胞プロセスを制御するシグナル伝達経路において特筆すべき役割を果たす。異常なキナーゼ活性は、多発性癌、自己免疫及び／又は炎症性疾患ならびに急性炎症反応を含む、広範な疾患に関与している。重要な細胞のシグナル伝達経路におけるキナーゼのこの多面的な役割は、キナーゼ及びシグナル伝達経路をターゲットとする新規薬物を同定する重要な機会を提供する。
【０１２９】
１つの実施態様は、Ｂｔｋ活性及び／又はＢ細胞の増殖の阻害に応答する、自己免疫及び／もしくは炎症性疾患又は急性炎症反応を有する患者を処置する方法を含む。
【０１３０】
本発明に係る化合物及び組成物を使用して影響を及ぼし得る自己免疫及び／又は炎症性疾患は、特に限定されないが、乾癬、アレルギー、クローン病、過敏性腸症候群、シェーグレン病、組織移植片拒絶反応及び移植臓器の超急性拒絶反応、喘息、全身性エリテマトーデス（及び関連する糸球体腎炎）、皮膚筋炎、多発性硬化症、強皮症、血管炎（ＡＮＣＡ関連及びその他の血管炎）、自己免疫性の溶血及び血小板減少状態、グッドパスチャー症候群（ならびに関連する糸球体腎炎及び肺出血）、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、慢性特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、アジソン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、糖尿病、敗血性ショックならびに重症筋無力症を含む。
【０１３１】
本明細書に提供される少なくとも１つの化学物質が抗炎症剤と組み合わせて投与される処置法が本明細書に含まれる。抗炎症剤は、特に限定されないが、ＮＳＡＩＤ、非特異的及びＣＯＸ−２特異的シクロオキシゲナーゼ酵素阻害剤、金化合物、コルチコステロイド、メトトレキサート、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ）受容体拮抗剤、免疫抑制剤及びメトトレキサートを含む。
【０１３２】
ＮＳＡＩＤの例は、特に限定されないが、イブプロフェン、フルルビプロフェン、ナプロキセン及びナプロキセンナトリウム、ジクロフェナク、ジクロフェナクナトリウムとミソプロストールの組み合わせ、スリンダク、オキサプロジン、ジフルニサル、ピロキシカム、インドメタシン、エトドラク、フェノプロフェンカルシウム、ケトプロフェン、ナトリウムナブメトン、スルファサラジン、トルメチンナトリウムならびにヒドロキシクロロキンを含む。ＮＳＡＩＤの例は、また、セレコキシブ、バルデコキシブ、ルミラコキシブ及び／又はエトリコキシブなどのＣＯＸ−２特異的阻害剤を含む。
【０１３３】
いくつかの実施態様において、抗炎症剤は、サリチル酸塩である。サリチル酸塩は、アセチルサリチル酸（すなわち、アスピリン）、サリチル酸ナトリウムならびにサリチル酸コリン及びマグネシウムを含むが、これらに限定されない。
【０１３４】
抗炎症剤は、また、コルチコステロイドであり得る。例えば、コルチコステロイドは、コルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム又はプレドニゾンであり得る。
【０１３５】
追加の実施態様において、抗炎症剤は、金チオリンゴ酸ナトリウム又はオウラノフィンなどの金化合物である。
【０１３６】
本発明は、また、抗炎症剤が、代謝阻害剤、例えば、ジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤（メトトレキサートなど）、又はジヒドロオロット酸デヒドロゲナーゼ阻害剤（レフルノミドなど）である実施態様を含む。
【０１３７】
本発明の他の実施態様は、少なくとも１つの抗炎症性化合物が、抗Ｃ５モノクローナル抗体（エクリズマブ又はパキセリズマブなど）、ＴＮＦ拮抗剤（エンタネルセプト（entanercept）など）又は抗ＴＮＦαモノクローナル抗体であるインフリキシマブである組み合わせに関する。
【０１３８】
本発明のさらに他の実施態様は、少なくとも１つの活性剤が、メトトレキサート、レフルノミド、シクロスポリン、タクロリムス、アザチオプリン及びミコフェノール酸モフェチルから選択される免疫抑制化合物などの免疫抑制化合物である組み合わせに関する。
【０１３９】
ＢＴＫを発現するＢ細胞及びＢ細胞前駆体は、Ｂ細胞リンパ腫、リンパ腫（ホジキン及び非ホジキンリンパ腫を含む）、ヘアリー細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、慢性及び急性骨髄性白血病ならびに慢性及び急性リンパ性白血病を非限定的に含む、Ｂ細胞の悪性腫瘍の病理に関与している。
【０１４０】
ＢＴＫは、Ｂリンパ球系細胞のＦａｓ／ＡＰＯ−１（ＣＤ−９５）死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）の阻害剤であることが知られている。白血病／リンパ腫細胞の運命は、ＤＩＳＣにより活性化されるカスパーゼの反対のアポトーシス促進効果とＢＴＫ及び／又はその基質が関わる上流の抗アポトーシス調節メカニズムとの間のバランスに依存し得る（Vassilev et al., J. Biol. Chem. 1998, 274, 1646-1656）。
【０１４１】
また、ＢＴＫ阻害剤が、化学療法増感剤として有用であり、従って、その他の化学療法薬、特に、アポトーシスを誘導する薬物との組み合わせで有用であることが発見された。化学療法増感性のＢＴＫ阻害剤と組み合わせて使用することができるその他の化学療法薬の例は、トポイソメラーゼＩ阻害剤（カンプトテシン又はトポテカン）、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、ダウノマイシン及びエトポシド）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、メルファラン及びＢＣＮＵ）、チューブリン作用剤（例えば、タキソール及びビンブラスチン）ならびに生物学的作用物質（例えば、抗ＣＤ２０抗体などの抗体、ＩＤＥＣ８、免疫毒素及びサイトカイン）を含む。
【０１４２】
Ｂｔｋ活性は、また、第９及び第２２染色体の一部の転座から生じるｂｃｒ−ａｂｌ融合遺伝子を発現するいくつかの白血病と関連している。この異常は、通常、慢性骨髄性白血病に認められる。Ｂｔｋは、ｂｃｒ−ａｂｌキナーゼによって構成的にリン酸化され、これが下流の生存シグナルを開始して、ｂｃｒ−ａｂｌ細胞におけるアポトーシスを回避する（N. Feldhahn et al. J. Exp. Med. 2005 201(11):1837-1852）。
【０１４３】
処置の方法
本出願は、炎症性及び／又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１４４】
本出願は、炎症状態を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１４５】
本出願は、関節リウマチを処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式Ｉの化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１４６】
本出願は、喘息を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、式Ｉの治療有効量を投与することを含む方法を提供する。
【０１４７】
本出願は、炎症性及び／又は自己免疫状態を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式ＩのＢｔｋ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１４８】
本出願は、関節炎を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式ＩのＢｔｋ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１４９】
本出願は、癌を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式ＩのＢｔｋ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１５０】
本出願は、喘息を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の式ＩのＢｔｋ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１５１】
本出願は、Ｂ細胞増殖を阻害する方法であって、それを必要とする患者に治療有効量の式ＩのＢｔｋ阻害化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１５２】
本出願は、Ｂｔｋ活性を阻害するための方法であって、式Ｉのいずれか１つのＢｔｋ阻害化合物を投与することを含む方法を提供し、ここで、Ｂｔｋ阻害化合物は、Ｂｔｋ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて５０マイクロモル以下のＩＣ５０を示す。
【０１５３】
上記方法の１つのバリエーションにおいて、Ｂｔｋ阻害化合物は、Ｂｔｋ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて１００ナノモル以下のＩＣ５０を示す。
【０１５４】
上記方法の別のバリエーションにおいて、本化合物は、Ｂｔｋ活性のインビトロ生化学アッセイにおいて１０ナノモル以下のＩＣ５０を示す。
【０１５５】
本出願は、炎症性病態を処置するための方法であって、それを必要とする患者に治療有効量の抗炎症化合物を式ＩのＢｔｋ阻害化合物と組み合わせて同時投与することを含む方法を提供する。
【０１５６】
本出願は、関節炎を処置するための方法であって、それを必要とする患者に治療有効量の抗炎症化合物を式ＩのＢｔｋ阻害化合物と組み合わせて同時投与することを含む方法を提供する。
【０１５７】
本出願は、リンパ腫又はＢＣＲ−ＡＢＬ１＋白血病細胞を処置するための方法であって、それを必要とする患者に治療有効量の式ＩのＢｔｋ阻害化合物を投与することによる方法を提供する。
【０１５８】
実施例
一般的な略語
一般的に使用される略語は、以下を含む：アセチル（Ａｃ）、アゾ−ビス−イソブチリルニトリル（ＡＩＢＮ）、気圧（Ａｔｍ）、９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナン（９−ＢＢＮ又はＢＢＮ）、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）、tert−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジ−tert−ブチルピロカルボナート又はｂｏｃ無水物（ＢＯＣ２Ｏ）、ベンジル（Ｂｎ）、ブチル（Ｂｕ）、ケミカルアブストラクト登録番号（Chemical Abstracts Registration Number）（ＣＡＳＲＮ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ又はＺ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、三フッ化ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）、ジベンジリデンアセトン（ｄｂａ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン（ＤＢＮ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１，２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、ジエチルアゾジカルボキシラート（ＤＥＡＤ）、ジ−イソ−プロピルアゾジカルボキシラート（ＤＩＡＤ）、水素化ジ−イソ−ブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ又はＤＩＢＡＬ−Ｈ）、ジ−イソ−プロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、１，１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）エタン（ｄｐｐｅ）、１，１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（ｄｐｐｆ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、エチル（Ｅｔ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、２−エトキシ−２Ｈ−キノリン−１−カルボン酸エチルエステル（ＥＥＤＱ）、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）、エチルイソプロピルエーテル（ＥｔＯｉＰｒ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート酢酸（ＨＡＴＵ）、酢酸（ＨＯＡｃ）、１−Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イソプロパノール（ＩＰＡ）、塩化イソプロピルマグネシウム（ｉＰｒ ｍｇＣｌ）、ヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）、リチウムヘキサメチルジシラザン（ＬｉＨＭＤＳ）、メタ−クロロペルオキシ安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、融点（ｍｐ）、ＭｅＳＯ２−（メシル又はＭｓ）、メチル（Ｍｅ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、ｍ−クロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）、質量スペクトル（ｍｓ）、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、メチルテトラヒドロフラン（ＭｅＴＨＦ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、ｎ−ブチルリチウム（ｎＢｕＬｉ）、Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）、Ｎ−クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）���Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、クロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）、ジクロロ−（（ビス−ジフェニルホスフィノ）フェロセニル）パラジウム（II）（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２）、酢酸パラジウム（II）（Ｐｄ（ＯＡｃ）２）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）、ジクロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ）、フェニル（Ｐｈ）、プロピル（Ｐｒ）、イソ−プロピル（ｉ−Ｐｒ）、ポンド／平方インチ（ｐｓｉ）、ピリジン（ｐｙｒ）、１，２，３，４，５−ペンタフェニル−１’−（ジ−tert−ブチルホスフィノ）フェロセン（Ｑ−Ｐｈｏｓ）、室温（周囲温度、ｒｔ又はＲＴ）、sec−ブチルリチウム（ｓＢｕＬｉ）、tert−ブチルジメチルシリル又はｔ−ＢｕＭｅ２Ｓｉ（ＴＢＤＭＳ）、フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ又はＥｔ３Ｎ）、２，２，６，６−テトラメチルピペリジン１−オキシル（ＴＥＭＰＯ）、トリメチルシリルエトキシメチル（ＳＥＭ）、トリフラート又はＣＦ３ＳＯ２−（Ｔｆ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、１，１’−ビス−２，２，６，６−テトラメチルヘプタン−２，６−ジオン（ＴＭＨＤ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トリメチルシリル又はＭｅ３Ｓｉ（ＴＭＳ）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（ＴｓＯＨ又はｐＴｓＯＨ）、４−Ｍｅ−Ｃ６Ｈ４ＳＯ２−又はトシル（Ｔｓ）、及びＮ−ウレタン−Ｎ−カルボキシ無水物（ＵＮＣＡ）。接頭語ノルマル（ｎ）、イソ（ｉ−）、第二級（sec−）、第三級（tert−）及びネオを含む従来の命名法は、アルキル部分と共に使用される場合それらの慣用の意味を有する（J. Rigaudy and D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979Pergamon Press, Oxford.）。
【０１５９】
一般条件
本発明の化合物は、市販の出発物質から開始して、当業者に公知の一般的な合成技術及び手順を利用することによって調製されることができる。以下の概説は、そのような化合物を調製するための好適な反応スキームである。さらなる例示については、特定の実施例に見出すことができる。
【０１６０】
特定の略語
ＣＤＣｌ３  重水素化クロロホルム
ＣＨ２Ｃｌ２  ジクロロメタン
ＣＨ３ＣＮ  アセトニトリル
ＣＯ２  二酸化炭素
Ｃｏｎｃ  濃縮
Ｃｓ２ＣＯ３  炭酸セシウム
ＤＩＰＥＡ  ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
ＥｔＯＨ  エタノール
ＨＣｌ  塩酸
Ｋ２ＣＯ３  炭酸カリウム
ＬＤＡ  リチウムジイソプロピルアミド
ＬｉＡｌＨ４  水素化アルミニウムリチウム
ＭｅＯＨ  メタノール
ＮａＢＨ４  水素化ホウ素ナトリウム
ＮａＯＨ  水酸化ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４  硫酸ナトリウム
ＮａＨ  水素化ナトリウム
ＮａＮＯ２  亜硝酸ナトリウム
Ｐｄ（ＯＡｃ）２  酢酸パラジウム（ＩＩ）
Ｐｄ（ＰＰｈ３）４  テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
ＳＯＣｌ２  塩化チオニル
ＳＥＭ  ２−（トリメチルシリル）エトキシメチル
ＳＥＭ−Ｃｌ  ２−トリメチルシリル）エトキシメチルクロリド
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
【０１６１】
一般的な実験詳細
試薬は、Aldrich、Oakwood、Matrix又は他の商業的供給源から購入し、さらに精製することなく使用した。加熱にマイクロ波照射を使用する反応は、Personal Chemistry Emrys Optimizer System又はCEM Discovery Systemのいずれかを使用して実施した。数ミリグラム〜数グラムスケールの精製は、シリカゲルフラッシュカラムの溶離などの当業者に公知の方法によって実施し；また、場合によっては、数グラムのシリカゲルが充填されたディスポーザブルカラム（RediSep）を使用してCombiFlash systemで溶離させることによる、分取フラッシュカラム精製も実行した。また、Biotage（商標）及びISCO（商標）は、中間体の精製のために本発明において使用され得るフラッシュカラム装置である。
【０１６２】
化合物の同定及び純度の確認のために、ＬＣ／ＭＳ（液体クロマトグラフィー／質量分析）スペクトルを以下のシステムを使用して記録した。質量スペクトルの測定のために、当該システムは、Micromass Platform II 分光計：ＥＳイオン化（ポジティブモード）（質量範囲：１５０〜１２００）から構成される。同時クロマトグラフィー分離は、以下のＨＰＬＣシステムで達成した：ES Industries Chromegabond WR C-18 3u 120Å（３．２×３０mm）カラムカートリッジ；移動相Ａ：水（０．０２％ＴＦＡ）及び相Ｂ：アセトニトリル（０．０２％ＴＦＡ）；勾配１０％Ｂ〜９０％Ｂで３分間；１分間の平衡時間；流速２mL／分。
【０１６３】
また、多くの式１の化合物を、当業者に周知の方法を使用した逆相ＨＰＬＣによって精製した。場合によっては、Shimadzu分取ＨＰＬＣシステム及びLeap自動注入装置に取り付けられたGilson 215コレクターを制御するPE Sciex 150 EX Mass Specを使用して、分取ＨＰＬＣ精製を実施した。ＬＣ／ＭＳ検出を使用して陽イオン検出で流れてくる溶離液から化合物を回収した：Ｃ−１８カラム（２．０×１０cm、２０mL／分で溶離）からの化合物の溶離は、適切な線形勾配モードを使用して、溶媒（Ａ）０．０５％ ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ及び溶媒（Ｂ）０．０３５％ ＴＦＡ／アセトニトリルで１０分間かけて実行した。ＨＰＬＣシステムへの注入のために、粗試料をメタノール、アセトニトリル及びＤＭＳＯの混合物に溶解した。
【０１６４】
Bruker又はVarian 300又は400 MHz NMR分光計を使用して１Ｈ−ＮＭＲ特性決定を実施した。
【０１６５】
本発明の化合物は、公知の技術に従って合成され得る。以下の実施例及び参考文献は、本発明の理解を助けるために提供される。しかしながら、実施例は、本発明を限定することを意図するものではなく、その真の範囲は、添付の特許請求の範囲において明記される。実施例中の最終生成物の名称は、Isis AutoNom 2000を使用して生成した。
【０１６６】
中間体１
（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル
【化８】
0006294490.tif 000013
工程１）
１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル
【化９】
0006294490.tif 000014
０℃で、脱水ＴＨＦ中の１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル（１ｇ、５．２９mmol）の撹拌した溶液に、６０％油分散液の水素化ナトリウム（０．４２３ｇ、１０．５８mmol）を加え、３０分間撹拌した。この混合物に、ｐ−トルエン  スルホニルクロリド（２ｇ、１０．５８mmol）を加え、１２時間撹拌した。それを飽和塩化アンモニウムでクエンチし、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させ、そして粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステルを白色の固体として与えた（１．１ｇ、６１％）。ＭＳ  Ｃ１８Ｈ１７ＮＯ４Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値３４４、実測値３４４．１。
【０１６７】
工程２）
３−オキソ−３−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−プロピオニトリル
【化１０】
0006294490.tif 000015
−７８℃で、脱水ＴＨＦ（４０mL）中の１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル（８ｇ、２３．３mmol）及びアセトニトリル（３．８mL、９３．３mmol）の撹拌した溶液に、ＬＤＡ（４７．３ml、４６．６４mmol）を滴下した［−７８℃で、脱水ＴＨＦ（１５mL）中のジ−イソプロピルアミン（６．７mL、４６．６mmol）の溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（２５．６mL、４６．６４mmol）の添加から調製し、アルゴン下で３０分間撹拌した］。それを２０分間撹拌し、塩化アンモニウム（１０mL）でクエンチし、濃縮し、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させ、そしてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、３０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、３−オキソ−３−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−プロピオニトリルを粘性の褐色の液体として与えた（５．７ｇ、７２％）。ＭＳ  Ｃ１８Ｈ１４Ｎ２Ｏ３Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値３３９、実測値３３９．０。
【０１６８】
工程３）
（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル
【化１１】
0006294490.tif 000016
ＤＭＦ−ＤＭＡ（０．７２ｇ、７．０９mmol）を、トルエン（３０mL）中の３−オキソ−３−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−プロピオニトリル（２ｇ、５．９１mmol）の撹拌した溶液に室温で加え、１５時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、そして粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、３０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリルを黄色の固体として与えた（１．２ｇ、５２％）。ＭＳ  Ｃ２１Ｈ１９Ｎ３Ｏ３Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値３９４、実測値３９４．３。
【０１６９】
中間体２
（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル
【化１２】
0006294490.tif 000017
工程１）
１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル
【化１３】
0006294490.tif 000018
２５０mLの丸底フラスコ中で、エチル １Ｈ−インドール−２−カルボキシラート（５ｇ、２６．４mmol）、ＳＥＭ−Ｃｌ（５．２９ｇ、５．６２mL、３１．７mmol）及び６０％油分散液のＮａＨ（１．２７ｇ、３１．７mmol）を、ＴＨＦ（４０mL）及びＤＭＦ（２０mL）を用いて４℃で合わせた。反応混合物を撹拌し、室温に５時間温めた。反応混合物をＭｅＯＨでクエンチし、水及びＥｔＯＡｃで希釈した。溶液をブラインで洗浄し、合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜４０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル（６．８ｇ、８１％）を橙色の油状物として与えた。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7.69 (t, J = 7.63 Hz, 2H), 7.31 - 7.41 (m, 2H), 7.17 (t, J= 7.50 Hz, 1H), 5.96 (s, 2H), 4.32 (q, J= 7.16 Hz, 2H), 3.43 (t, J = 7.82 Hz, 2H), 1.33 (t, J = 7.06 Hz, 3H), 0.76 (t, J = 7.82 Hz, 2H), -0.14 (s, 9H)。
【０１７０】
工程２）
３−オキソ−３−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−プロピオニトリル
【化１４】
0006294490.tif 000019
５００mLの丸底フラスコ中で、エチル  １−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシラート（５ｇ、１５．７mmol）、アセトニトリル（３．９３ｇ、５mL、９５．７mmol）を、窒素雰囲気下、−７８℃でＴＨＦ（７５mL）と合わせて、橙色の溶液を与えた。ＴＨＦ中の２Ｍ ＬＤＡ（１０mL、２０．０mmol）を、−７８℃で加え、反応混合物を撹拌し、そして室温に温めた。反応は、２時間３０分後に完了した。反応混合物を水及びＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜４０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、３−オキソ−３−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−プロピオニトリル（３．９ｇ、７９％）を油状物として与えた。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7.77 (d, J = 7.91 Hz, 1H), 7.65 - 7.72 (m, 2H), 7.44 (t, J= 7.63 Hz, 1H), 7.21 (t, J = 7.44 Hz, 1H), 5.93 (s, 2H), 4.75 (s, 2H), 1.17 (t, J = 7.16 Hz, 2H), 0.78 (t, J = 7.91 Hz, 2H), -0.12 (s, 9H)。
【０１７１】
工程３）
（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル
【化１５】
0006294490.tif 000020
２５０mLの丸底フラスコ中で、３−オキソ−３−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−インドール−２−イル）プロパンニトリル（３．８ｇ、１２．１mmol）及びＤＭＦ−ＤＭＡ（７mL、５２．３mmol）を、トルエン（３０mL）と合わせて、明黄色の溶液を与えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（３．５ｇ、７８％）を橙色の泡状物として与えた。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.03 (s, 1H), 7.69 (d, J= 7.91 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.29 Hz, 1H), 7.32 (t, J = 7.25 Hz, 1H), 7.12 - 7.19 (m, 2H), 5.78 (s, 2H), 3.40 (s, 3H), 3.31 - 3.35 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 0.75 (t, J = 8.01 Hz, 2H), -0.13 (s, 9H)。
【０１７２】
中間体３
（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボニル］−アクリロニトリル
【化１６】
0006294490.tif 000021
工程１）
１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボン酸エチルエステル
【化１７】
0006294490.tif 000022
２５０mLの丸底フラスコ中で、エチル  １Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−カルボキシラート（３ｇ、１５．８mmol）、ＳＥＭ−Ｃｌ（３．３６mL、１８．９mmol）及び６０％油分散液のＮａＨ（７６０mg、３１．７mmol）を、ＴＨＦ（２５mL）及びＤＭＦ（１０mL）と合わせて、白色の懸濁液を与えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応物を水でクエンチした。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜４０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボン酸エチルエステル（２．７ｇ、５３％）を油状物として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ１６Ｈ２４Ｎ２Ｏ３Ｓｉ（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：３２１．４  実測値：３２１．０
【０１７３】
工程２）
３−オキソ−３−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］−プロピオニトリル
【化１８】
0006294490.tif 000023
１００mLの丸底フラスコ中で、エチル １−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−カルボキシラート（２ｇ、６．２４mmol）及びアセトニトリル（２．５６ｇ、３．２６ml、６２．４mmol）を、窒素雰囲気下、−７８℃でＴＨＦ（４０mL）と合わせて、明褐色の溶液を与えた。ＴＨＦ中の２Ｍ ＬＤＡ（５mL、１０．０mmol）を、−７８℃で加え、反応混合物を撹拌し、そして室温に温めた。反応混合物をこの温度で４時間撹拌し、次に反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液に注ぎ、そしてＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜４０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、３−オキソ−３−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］−プロピオニトリル（０．６ｇ、３１％）を油状物として与えた。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 7.88 (d, J = 8.10 Hz, 1H), 7.78 - 7.84 (m, 1H), 7.49 - 7.57 (m, 1H), 7.38 - 7.47 (m, 1H), 5.87 - 6.09 (m, 2H), 4.86 (s, 2H), 3.41 - 3.71 (m, 2H), 0.68 - 0.94 (m, 2H), -0.1 (s, 9H)
【０１７４】
工程３）
（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボニル］−アクリロニトリル
【化１９】
0006294490.tif 000024
２０mLのシンチレーションバイアル中で、３−オキソ−３−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）プロパンニトリル（５００mg、１．５９mmol）及びＤＭＦ−ＤＭＡ（０．８５mL、６．３４mmol）を、トルエン（５mL）と合わせて、黄色の溶液を与えた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（０．２６ｇ、４４％）を橙色の泡状物として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ１９Ｈ２６Ｎ４Ｏ２Ｓｉ（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：３７１．５  実測値：３７１．０
【０１７５】
一般手順Ａ：  芳香族求核置換
【化２０】
0006294490.tif 000025
Ｃｓ２ＣＯ３（１．５当量）を、脱水ＤＭＦ中のニトロ化合物（１当量）及びフェノール又はアルキルアルコール誘導体（１．２当量）の撹拌した溶液に加えた。混合物を、密閉管中で１５０℃で２４時間加熱した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で蒸発させた。残留物を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、生成物を与えた。
【０１７６】
一般手順Ｂ：  ニトロ基の還元
【化２１】
0006294490.tif 000026
１０％パラジウム担持炭（１０％重量）を、エタノール中のニトロ化合物の撹拌した溶液に窒素雰囲気下で加えた。反応混合物を水素雰囲気下で１２時間撹拌し、焼結漏斗に通して濾過し、減圧下で蒸発させて、対応するアミンを得た。
【０１７７】
一般手順Ｃ−１：  アリールヒドラジン類の調製
【化２２】
0006294490.tif 000027
水中の亜硝酸ナトリウム（１．５当量）の溶液を、−５℃で塩酸中のアミノ芳香族化合物（１当量）の撹拌した溶液に加え、混合物を−５℃で４５分間撹拌した。塩酸中の塩化スズ（II）（５当量）の溶液を加え、混合物を３０分間撹拌した。混合物を、ＮａＯＨ水溶液の添加によりアルカリを作成し、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させて、生成物を与え、これを次の工程においてそのまま使用した。
【０１７８】
一般手順Ｃ−２：  アリールヒドラジン類の調製
【化２３】
0006294490.tif 000028
水中の亜硝酸ナトリウム（１．５当量）の溶液を、−５℃で、塩酸中のアミノ芳香族化合物（１当量）の撹拌した溶液に加え、混合物を−５℃で４５分間撹拌した。塩酸中の塩化スズ（II）（５当量）の溶液を加え、混合物を３０分間撹拌した。混合物を濾過し、大気下で乾燥させて、生成物を与え、これを次の工程においてそのまま使用した。
【０１７９】
一般手順Ｄ：  ピラゾール環形成
【化２４】
0006294490.tif 000029
ＥｔＯＨ中の式Ａｒ−ＮＨ−ＮＨ２のアリールヒドラジン（２当量）と（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（中間体１、工程３に記載したように調製することができる；１当量）の混合物を、還流下で１６時間加熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、生成物を与えた。
【０１８０】
一般手順Ｅ：  Ｔｓ保護基の脱保護
【化２５】
0006294490.tif 000030
ＴＨＦ：ＭｅＯＨ（７：３）中のＴｓ保護インドール（１当量）の撹拌した溶液に、炭酸セシウム（２当量）を加えた。混合物を室温で１８時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、生成物を与えた。
【０１８１】
実施例１
［５−アミノ−１−（３−フルオロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化２６】
0006294490.tif 000031
工程１）
２−フルオロ−４−ニトロ−１−フェノキシ−ベンゼン
【化２７】
0006294490.tif 000032
１−ブロモ−２−フルオロ−４−ニトロベンゼンを、一般手順Ａで概説した条件を用いて、フェノールと反応させて、２−フルオロ−４−ニトロ−１−フェノキシ−ベンゼンを与えた。
【０１８２】
工程２）
３−フルオロ−４−フェノキシ−フェニルアミン
【化２８】
0006294490.tif 000033
２−フルオロ−４−ニトロ−１−フェノキシ−ベンゼンを、一般手順Ｂで概説した条件を用いて還元して、３−フルオロ−４−フェノキシ−フェニルアミンを与えた。ＭＳ  Ｃ１２Ｈ１１ＦＮＯ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２０４、実測値２０４．２。
【０１８３】
工程３）
（３−フルオロ−４−フェノキシ−フェニル）−ヒドラジン
【化２９】
0006294490.tif 000034
３−フルオロ−４−フェノキシ−フェニルアミンを、一般手順Ｃ−１で概説した条件を用いて、ジアゾ化し、還元して、（３−フルオロ−４−フェノキシ−フェニル）−ヒドラジンを与えた。
【０１８４】
工程４）
［５−アミノ−１−（３−フルオロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン
【化３０】
0006294490.tif 000035
（３−フルオロ−４−フェノキシ−フェニル）−ヒドラジンを、一般手順Ｄで概説した条件を用いて、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（中間体１、工程３に記載したように調製することができる）と反応させて、［５−アミノ−１−（３−フルオロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ３１Ｈ２３ＦＮ４Ｏ４Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値５６７、実測値５６７．１。
【０１８５】
工程５）
［５−アミノ−１−（３−フルオロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化３１】
0006294490.tif 000036
［５−アミノ−１−（３−フルオロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを、一般手順Ｅで概説した条件を用いて、炭酸セシウムと反応させて、［５−アミノ−１−（３−フルオロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ２４Ｈ１７ＦＮ４Ｏ２［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値４１３、実測値４１３．１。
【０１８６】
実施例２
［５−アミノ−１−（６−フェノキシ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化３２】
0006294490.tif 000037
工程１）
５−ニトロ−２−フェノキシ−ピリジン
【化３３】
0006294490.tif 000038
２−クロロ−５−ニトロ−ピリジンを、一般手順Ａで概説した条件を用いて、フェノールと反応させて、５−ニトロ−２−フェノキシ−ピリジンを与えた。
【０１８７】
工程２）
６−フェノキシ−ピリジン−３−イルアミン
【化３４】
0006294490.tif 000039
５−ニトロ−２−フェノキシ−ピリジンを、一般手順Ｂで概説した条件を用いて、還元して、６−フェノキシ−ピリジン−３−イルアミンを与えた。ＭＳ  Ｃ１１Ｈ１０Ｎ２Ｏ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値１８７、実測値１８７．１。
【０１８８】
工程３）
（６−フェノキシ−ピリジン−３−イル）−ヒドラジン
【化３５】
0006294490.tif 000040
６−フェノキシ−ピリジン−３−イルアミンを、一般手順Ｃ−１で概説した条件を用いて、ジアゾ化し、還元して、（６−フェノキシ−ピリジン−３−イル）−ヒドラジンを与えた。
【０１８９】
工程４）
［５−アミノ−１−（６−フェノキシ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン
【化３６】
0006294490.tif 000041
（６−フェノキシ−ピリジン−３−イル）−ヒドラジンを、一般手順Ｄで概説した条件を用いて、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（中間体１、工程３に記載したように調製することができる）と反応させて、［５−アミノ−１−（６−フェノキシ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ３０Ｈ２３Ｎ５Ｏ４Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値５５０、実測値５５０．２。
【０１９０】
工程５）
［５−アミノ−１−（６−フェノキシ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化３７】
0006294490.tif 000042
［５−アミノ−１−（６−フェノキシ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを、一般手順Ｅで概説した条件を用いて、炭酸セシウムと反応させて、［５−アミノ−１−（６−フェノキシ−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ２３Ｈ１７Ｎ５Ｏ２Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値３９６、実測値３９６．１。
【０１９１】
実施例３
｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−２−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化３８】
0006294490.tif 000043
工程１）
２−（４−ニトロ−フェノキシ）−ピリジン
【化３９】
0006294490.tif 000044
１−クロロ−４−ニトロ−ベンゼンを、一般手順Ａで概説した条件を用いて、ピリジン−２−オールと反応させて、２−（４−ニトロ−フェノキシ）−ピリジンを与えた。ＭＳ  Ｃ１１Ｈ８Ｎ２Ｏ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２１７、実測値２１７．１。
【０１９２】
工程２）
４−（ピリジン−２−イルオキシ）−フェニルアミン
【化４０】
0006294490.tif 000045
２−（４−ニトロ−フェノキシ）−ピリジンを、一般手順Ｂで概説した条件を用いて還元して、４−（ピリジン−２−イルオキシ）−フェニルアミンを与えた。ＭＳ  Ｃ１１Ｈ１０Ｎ２Ｏ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値１８７、実測値１８７．３。
【０１９３】
工程３）
［４−（ピリジン−２−イルオキシ）−フェニル］−ヒドラジン
【化４１】
0006294490.tif 000046
４−（ピリジン−２−イルオキシ）−フェニルアミンを、一般手順Ｃ−１で概説した条件を用いて、アジゾ化し、還元して、［４−（ピリジン−２−イルオキシ）−フェニル］−ヒドラジンを与えた。
【０１９４】
工程４）
｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−２−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン
【化４２】
0006294490.tif 000047
［４−（ピリジン−２−イルオキシ）−フェニル］−ヒドラジンを、一般手順Ｄで概説した条件を用いて、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（中間体１、工程３に記載したように調製することができる）と反応させて、｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−２−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ３０Ｈ２３Ｎ５Ｏ４Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値５５０、実測値５５０．０。
【０１９５】
工程５）
｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−２−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化４３】
0006294490.tif 000048
｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−２−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを、一般手順Ｅで概説した条件を用いて、炭酸セシウムと反応させて、｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−２−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ２３Ｈ１７Ｎ５Ｏ２Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値３９６、実測値３９５．９。
【０１９６】
実施例４
｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−３−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化４４】
0006294490.tif 000049
工程１）
３−（４−ニトロ−フェノキシ）−ピリジン
【化４５】
0006294490.tif 000050
１−クロロ−４−ニトロ−ベンゼンを、一般手順Ａで概説した条件を用いて、ピリジン−３−オールと反応させて、３−（４−ニトロ−フェノキシ）−ピリジンを与えた。ＭＳ  Ｃ１１Ｈ８Ｎ２Ｏ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２１７、実測値２１７．２。
【０１９７】
工程２）
４−（ピリジン−３−イルオキシ）−フェニルアミン
【化４６】
0006294490.tif 000051
３−（４−ニトロ−フェノキシ）−ピリジンを、一般手順Ｂで概説した条件を用いて還元して、４−（ピリジン−３−イルオキシ）−フェニルアミンを与えた。ＭＳ  Ｃ１１Ｈ１０Ｎ２Ｏ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値１８７、実測値１８７．４。
【０１９８】
工程３）
［４−（ピリジン−３−イルオキシ）−フェニル］−ヒドラジン
【化４７】
0006294490.tif 000052
４−（ピリジン−３−イルオキシ）−フェニルアミンを、一般手順Ｃ−１で概説した条件を用いて、ジアゾ化し、還元して、［４−（ピリジン−３−イルオキシ）−フェニル］−ヒドラジンを与えた。
【０１９９】
工程４）
｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−３−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン
【化４８】
0006294490.tif 000053
［４−（ピリジン−３−イルオキシ）−フェニル］−ヒドラジンを、一般手順Ｄで概説した条件を用いて、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（中間体１、工程３に記載したように調製することができる）と反応させて、｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−３−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ３０Ｈ２３Ｎ５Ｏ４Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値５５０、実測値５５０．３。
【０２００】
工程５）
｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−３−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化４９】
0006294490.tif 000054
｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−３−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを、一般手順Ｅで概説した条件を用いて、炭酸セシウムと反応させて、｛５−アミノ−１−［４−（ピリジン−３−イルオキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ２３Ｈ１７Ｎ５Ｏ２Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値３９６、実測値３９６．４。
【０２０１】
実施例５
５−アミノ−１−（３−クロロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化５０】
0006294490.tif 000055
工程１）
２−クロロ−４−ニトロ−１−フェノキシ−ベンゼン
【化５１】
0006294490.tif 000056
１，２−ジクロロ−４−ニトロ−ベンゼンを、一般手順Ａで概説した条件を用いて、フェノールと反応させて、２−クロロ−４−ニトロ−１−フェノキシ−ベンゼンを与えた。ＭＳ  Ｃ１２Ｈ８ＣｌＮＯ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２５０、実測値２４９．９。
【０２０２】
工程２）
３−クロロ−４−フェノキシ−フェニルアミン
【化５２】
0006294490.tif 000057
２−クロロ−４−ニトロ−１−フェノキシ−ベンゼンを、一般手順Ｂで概説した条件を用いて還元して、３−クロロ−４−フェノキシ−フェニルアミンを与えた。
【０２０３】
工程３）
（３−クロロ−４−フェノキシ−フェニル）−ヒドラジン
【化５３】
0006294490.tif 000058
３−クロロ−４−フェノキシ−フェニルアミンを、一般手順Ｃ−１で概説した条件を用いて、ジアゾ化し、還元して、（３−クロロ−４−フェノキシ−フェニル）−ヒドラジンを与えた。
【０２０４】
工程４）
［５−アミノ−１−（３−クロロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン
【化５４】
0006294490.tif 000059
（３−クロロ−４−フェノキシ−フェニル）−ヒドラジンを、一般手順Ｄで概説した条件を用いて、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（中間体１、工程３に記載したように調製することができる）と反応させて、［５−アミノ−１−（３−クロロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ３１Ｈ２３ＣｌＮ４Ｏ４Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値５８４、実測値５８５．２。
【０２０５】
工程５）
［５−アミノ−１−（３−クロロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化５５】
0006294490.tif 000060
［５−アミノ−１−（３−クロロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを、一般手順Ｅで概説した条件を用いて、炭酸セシウムと反応させて、［５−アミノ−１−（３−クロロ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ２４Ｈ１７ＣｌＮ４Ｏ２［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値４２９、実測値４２９．４。
【０２０６】
実施例６
｛５−アミノ−１−［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化５６】
0006294490.tif 000061
工程１）
３，４−ジフルオロ−３−（４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゼン
【化５７】
0006294490.tif 000062
１−クロロ−４−ニトロ−ベンゼンを、一般手順Ａで概説した条件を用いて、３，４−ジフルオロ−フェノールと反応させて、３，４−ジフルオロ−３−（４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゼンを与えた。ＭＳ  Ｃ１２Ｈ７Ｆ２ＮＯ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２５２、実測値２５２．０。
【０２０７】
工程２）
４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニルアミン
【化５８】
0006294490.tif 000063
１，２−ジフルオロ−３−（４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゼンを、一般手順Ｂで概説した条件を用いて還元して、４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニルアミンを与えた。
【０２０８】
工程３）
［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−ヒドラジン
【化５９】
0006294490.tif 000064
４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニルアミンをジアゾ化し、そして一般手順Ｃ−１で概説した条件を用いて還元して、［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−ヒドラジンを与えた。
【０２０９】
工程４）
｛５−アミノ−１−［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン
【化６０】
0006294490.tif 000065
［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−ヒドラジンを、一般手順Ｄで概説した条件を用いて、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（中間体１、工程３に記載したように調製することができる）と反応させて、｛５−アミノ−１−［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを与えた。
【０２１０】
工程５）
｛５−アミノ−１−［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化６１】
0006294490.tif 000066
｛５−アミノ−１−［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを、一般手順Ｅで概説した条件を用いて、炭酸セシウムと反応させて、｛５−アミノ−１−［４−（３，４−ジフルオロ−フェノキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ２４Ｈ１６Ｆ２Ｎ４Ｏ２［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値４３１、実測値４３１．３。
【０２１１】
実施例７
［５−アミノ−１−（３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化６２】
0006294490.tif 000067
工程１）
２−メトキシ−４−ニトロ−１−フェノキシ−ベンゼン
【化６３】
0006294490.tif 000068
１−クロロ−２−メトキシ−４−ニトロ−ベンゼンを、一般手順Ａで概説した条件を用いて、フェノールと反応させて、２−メトキシ−４−ニトロ−１−フェノキシ−ベンゼンを与えた。ＭＳ  Ｃ１３Ｈ１１ＮＯ４［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２４６、実測値２４６．０。
【０２１２】
工程２）
３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニルアミン
【化６４】
0006294490.tif 000069
２−メトキシ−４−ニトロ−１−フェノキシ−ベンゼンを、一般手順Ｂで概説した条件を用いて還元して、３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニルアミンを与えた。
【０２１３】
工程３）
（３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−ヒドラジン
【化６５】
0006294490.tif 000070
３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニルアミンを、一般手順Ｃ−１で概説した条件を用いて、ジアゾ化し、還元して、（３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−ヒドラジンを与えた。
【０２１４】
工程４）
［５−アミノ−１−（３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン
【化６６】
0006294490.tif 000071
（３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−ヒドラジンを、一般手順Ｄで概説した条件を用いて、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（中間体１、工程３に記載したように調製することができる）と反応させて、［５−アミノ−１−（３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ３２Ｈ２６Ｎ４Ｏ５Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値５７９、実測値５７９．１。
【０２１５】
工程５）
［５−アミノ−１−（３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化６７】
0006294490.tif 000072
［５−アミノ−１−（３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを、一般手順Ｅで概説した条件を用いて、炭酸セシウムと反応させて、［５−アミノ−１−（３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ２５Ｈ２０Ｎ４Ｏ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値４２５、実測値４２５．３。
【０２１６】
実施例８
［５−アミノ−１−（３−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化６８】
0006294490.tif 000073
工程１）
［５−アミノ−１−（３−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン
【化６９】
0006294490.tif 000074
ＤＣＭ（８mL）中の［５−アミノ−１−（３−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン（１５０mg、０．２９６mmol）の溶液に、ＢＢｒ３（０．１０３mL、１．０４mmol）を０℃で加え、３０分間撹拌した。ＴＬＣが、出発物質の消費の完了を示し、次に混合物をＮａＯＨ水溶液でクエンチし、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして濃縮した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２５％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、［５−アミノ−１−（３−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン（１００mg、６８％）を黄色を帯びた固体として与えた。ＭＳ  Ｃ３１Ｈ２４Ｎ４Ｏ５Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値５６５、実測値５６５．３。
【０２１７】
工程２）
［５−アミノ−１−（３−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化７０】
0006294490.tif 000075
［５−アミノ−１−（３−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを、一般手順Ｅで概説した条件を用いて、炭酸セシウムと反応させて、［５−アミノ−１−（３−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ２４Ｈ１８Ｎ４Ｏ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値４１１、実測値４１１．２。
【０２１８】
実施例９
［５−アミノ−１−（２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化７１】
0006294490.tif 000076
工程１）
２−メトキシ−１−ニトロ−４−フェノキシ−ベンゼン
【化７２】
0006294490.tif 000077
１−クロロ−３−メトキシ−４−ニトロ−ベンゼンを、一般手順Ａで概説した条件を用いて、フェノールと反応させて、２−メトキシ−１−ニトロ−４−フェノキシ−ベンゼンを与えた。ＭＳ  Ｃ１３Ｈ１１ＮＯ４［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２４６、実測値２４６．０。
【０２１９】
工程２）
２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニルアミン
【化７３】
0006294490.tif 000078
２−メトキシ−１−ニトロ−４−フェノキシ−ベンゼンを、一般手順Ｂで概説した条件を用いて還元して、２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニルアミンを与えた。
【０２２０】
工程３）
（２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−ヒドラジン
【化７４】
0006294490.tif 000079
２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニルアミンを、一般手順Ｃ−１で概説した条件を用いて、ジアゾ化し、還元して、（２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−ヒドラジンを与えた。
【０２２１】
工程４）
［５−アミノ−１−（２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン
【化７５】
0006294490.tif 000080
（２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−ヒドラジンを、一般手順Ｄで概説した条件を用いて、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（中間体１、工程３に記載したように調製することができる）と反応させて、［５−アミノ−１−（２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ３２Ｈ２６Ｎ４Ｏ５Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値５７９、実測値５７９．１。
【０２２２】
工程５）
［５−アミノ−１−（２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化７６】
0006294490.tif 000081
［５−アミノ−１−（２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを、一般手順Ｅで概説した条件を用いて、炭酸セシウムと反応させて、［５−アミノ−１−（２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ２５Ｈ２０Ｎ４Ｏ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値４２５、実測値４２５．３。
【０２２３】
実施例１０
［５−アミノ−１−（２−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化７７】
0006294490.tif 000082
工程１）
［５−アミノ−１−（２−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン
【化７８】
0006294490.tif 000083
ＤＣＭ（８mL）中の［５−アミノ−１−（２−メトキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン（１５０mg、０．２９６mmol）の溶液に、ＢＢｒ３（０．１０３mL、１．０４mmol）を０℃で加え、３０分間撹拌した。ＴＬＣが、出発物質の消費の完了を示し、次に混合物をＮａＯＨ水溶液でクエンチし、そしてＤＣＭで抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして濃縮した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２５％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、［５−アミノ−１−（２−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン（１００mg、６８％）を黄色を帯びた固体として与えた。ＭＳ  Ｃ３１Ｈ２４Ｎ４Ｏ５Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値５６５、実測値５６５．３。
【０２２４】
工程２）
［５−アミノ−１−（２−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化７９】
0006294490.tif 000084
［５−アミノ−１−（２−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを、一般手順Ｅで概説した条件を用いて、炭酸セシウムと反応させて、［５−アミノ−１−（２−ヒドロキシ−４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ２４Ｈ１８Ｎ４Ｏ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値４１１、実測値４１１．３。
【０２２５】
実施例１１
［５−アミノ−１−（４−イソプロポキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化８０】
0006294490.tif 000085
工程１）
１−イソプロポキシ−４−ニトロ−ベンゼン
【化８１】
0006294490.tif 000086
１−クロロ−４−ニトロ−ベンゼンを、一般手順Ａで概説した条件を用いて、イソプロパノールと反応させて、１−イソプロポキシ−４−ニトロ−ベンゼンを与えた。ＭＳ  Ｃ９Ｈ１１ＮＯ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値１８２、実測値１８２．２。
【０２２６】
工程２）
４−イソプロポキシ−フェニルアミン
【化８２】
0006294490.tif 000087
１−イソプロポキシ−４−ニトロ−ベンゼンを、一般手順Ｂで概説した条件を用いて還元して、４−イソプロポキシ−フェニルアミンを与えた。
【０２２７】
工程３）
（４−イソプロポキシ−フェニル）−ヒドラジン
【化８３】
0006294490.tif 000088
４−イソプロポキシ−フェニルアミンを、一般手順Ｃ−１で概説した条件を用いて、ジアゾ化し、還元して、（４−イソプロポキシ−フェニル）−ヒドラジンを与えた。
【０２２８】
工程４）
［５−アミノ−１−（４−イソプロポキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン
【化８４】
0006294490.tif 000089
（４−イソプロポキシ−フェニル）−ヒドラジンを、一般手順Ｄで概説した条件を用いて、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（中間体１、工程３に記載したように調製することができる）と反応させて、［５−アミノ−１−（４−イソプロポキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ２８Ｈ２６Ｎ４Ｏ４Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値５１５、実測値５１５．２。
【０２２９】
工程５）
［５−アミノ−１−（４−イソプロポキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化８５】
0006294490.tif 000090
［５−アミノ−１−（４−イソプロポキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを、一般手順Ｅで概説した条件を用いて、炭酸セシウムと反応させて、［５−アミノ−１−（４−イソプロポキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ２１Ｈ２０Ｎ４Ｏ２［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値３６１、実測値３６１．２。
【０２３０】
実施例１２
［５−アミノ−１−（４−シクロペンチルオキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化８６】
0006294490.tif 000091
工程１）
１−シクロペンチルオキシ−４−ニトロ−ベンゼン
【化８７】
0006294490.tif 000092
１−クロロ−４−ニトロ−ベンゼンを、一般手順Ａで概説した条件を用いて、シクロペンタノールと反応させて、１−シクロペンチルオキシ−４−ニトロ−ベンゼンを与えた。
【０２３１】
工程２）
４−シクロペンチルオキシ−フェニルアミン
【化８８】
0006294490.tif 000093
１−シクロペンチルオキシ−４−ニトロ−ベンゼンを、一般手順Ｂで概説した条件を用いて還元して、４−シクロペンチルオキシ−フェニルアミンを与えた。
【０２３２】
工程３）
（４−シクロペンチルオキシ−フェニル）−ヒドラジン
【化８９】
0006294490.tif 000094
４−シクロペンチルオキシ−フェニルアミンを、一般手順Ｃ−１で概説した条件を用いて、ジアゾ化し、還元して、（４−シクロペンチルオキシ−フェニル）−ヒドラジンを与えた。
【０２３３】
工程４）
［５−アミノ−１−（４−シクロペンチルオキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン
【化９０】
0006294490.tif 000095
（４−シクロペンチルオキシ−フェニル）−ヒドラジンを、一般手順Ｄで概説した条件を用いて、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（中間体１、工程３に記載したように調製することができる）と反応させて、［５−アミノ−１−（４−シクロペンチルオキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ３０Ｈ２８Ｎ４Ｏ４Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値５４１、実測値５４１．３。
【０２３４】
工程５）
［５−アミノ−１−（４−シクロペンチルオキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化９１】
0006294490.tif 000096
［５−アミノ−１−（４−シクロペンチルオキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを、一般手順Ｅで概説した条件を用いて、炭酸セシウムと反応させて、［５−アミノ−１−（４−シクロペンチルオキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ２３Ｈ２２Ｎ４Ｏ２［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値３８７、実測値３８７．４。
【０２３５】
実施例１３
｛５−アミノ−１−［４−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化９２】
0006294490.tif 000097
工程１）
１−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−４−ニトロ−ベンゼン
【化９３】
0006294490.tif 000098
１−クロロ−４−ニトロ−ベンゼンを、一般手順Ａで概説した条件を用いて、２，２−ジメチル−プロパン−１−オールと反応させて、１−シクロペンチルオキシ−４−ニトロ−ベンゼンを与えた。ＭＳ  Ｃ１１Ｈ１５ＮＯ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２１０、実測値２１０．２。
【０２３６】
工程２）
４−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−フェニルアミン
【化９４】
0006294490.tif 000099
１−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−４−ニトロ−ベンゼンを、一般手順Ｂで概説した条件を用いて還元して、４−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−フェニルアミンを与えた。
【０２３７】
工程３）
［４−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−フェニル］−ヒドラジン
【化９５】
0006294490.tif 000100
４−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−フェニルアミンを、一般手順Ｃ−１で概説した条件を用いて、ジアゾ化し、還元して、［４−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−フェニル］−ヒドラジンを与えた。
【０２３８】
工程４）
｛５−アミノ−１−［４−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン
【化９６】
0006294490.tif 000101
［４−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−フェニル］−ヒドラジンを、一般手順Ｄで概説した条件を用いて、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（中間体１  工程３に記載したように調製することができる）と反応させて、｛５−アミノ−１−［４−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ３０Ｈ３０Ｎ４Ｏ４Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値５４３、実測値５４３．２。
【０２３９】
工程５）
｛５−アミノ−１−［４−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化９７】
0006294490.tif 000102
｛５−アミノ−１−［４−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−［１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノンを、一般手順Ｅで概説した条件を用いて、炭酸セシウムと反応させて、｛５−アミノ−１−［４−（２，２−ジメチル−プロポキシ）−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノンを与えた。ＭＳ  Ｃ２３Ｈ２４Ｎ４Ｏ２［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値３８９、実測値３８９．２。
【０２４０】
実施例１４
｛５−アミノ−１−［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化９８】
0006294490.tif 000103
工程１：  ２−メチル−１−ニトロ−４−（２，３−ジフルオロ）−フェノキシ−ベンゼン
【化９９】
0006294490.tif 000104
４−クロロ−２−メチル−ニトロベンゼンを、一般手順Ａで概説した条件を用いて、２，３−ジフルオロ−フェノールと反応させて、２−メチル−１−ニトロ−４−（２，３−ジフルオロ）−フェノキシ−ベンゼンを与えた。ＭＳ  Ｃ１３Ｈ１０Ｆ２ＮＯ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２６６、実測値２６６．２
【０２４１】
工程２：  ４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニルアミン
【化１００】
0006294490.tif 000105
２−メチル−１−ニトロ−４−（２，３−ジフルオロ）−フェノキシ−ベンゼンを、一般手順Ｂで概説した条件を用いて還元して、４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニルアミンを与えた。ＭＳ  Ｃ１３Ｈ１２Ｆ２ＮＯ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２３６、実測値２３５．８。
【０２４２】
工程３：  ［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−ヒドラジン、塩酸塩
【化１０１】
0006294490.tif 000106
４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニルアミンを、一般手順Ｃ−２で概説した条件を用いて、ジアゾ化し、還元して、［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−ヒドラジン塩酸塩を与えた。
【０２４３】
工程４）
｛５−アミノ−１−［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１エトキシメチル−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化１０２】
0006294490.tif 000107
２０mLのシンチレーションバイアル中で、（Ｅ）−３−（ジメチルアミノ）−２−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）アクリロニトリル（中間体２、工程３）（２００mg、０．５４１mmol）、（４−（２，３−ジフルオロフェノキシ）−２−メチルフェニル）ヒドラジン（２７１mg、１．０８mmol）及び炭酸カリウム（２２４mg、１．６２mmol）を、ＥｔＯＨ（４mL）と合わせて、黄色の懸濁液を与えた。反応混合物を８０℃で一晩加熱した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン  ０〜１００％）により精製して、｛５−アミノ−１−［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１エトキシメチル−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン（１６５mg、７９％）を油状物として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ２８Ｈ２４Ｆ２Ｎ４Ｏ３（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：５０３．５  実測値：５０３．１
【０２４４】
工程５）
｛５−アミノ−１−［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化１０３】
0006294490.tif 000108
２０mLのシンチレーションバイアル中で、（５−アミノ−１−（４−（２，３−ジフルオロフェノキシ）−２−メチルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）（１−（エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−イル）メタノン（１００mg、０．１９９mmol）を、ＥｔＯＨ（４mL）及び１０％ ＨＣｌ水溶液（２mL）と合わせた。反応混合物を８０℃で２時間加熱した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜７０％ ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して、｛５−アミノ−１−［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン（３６mg、４１％）を油状物として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ２５Ｈ１８Ｆ２Ｎ４Ｏ２（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：４４５．４  実測値：４４４．９
【０２４５】
実施例１５
２−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−メチル−フェノキシ｝−ベンゾニトリル
【化１０４】
0006294490.tif 000109
工程１）
２−（３−メチル−４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル
【化１０５】
0006294490.tif 000110
アセトン（１００mL）中の４−フルオロ−２−メチル−１−ニトロ−ベンゼン（１３．１ｇ、８４mmol）、２−ヒドロキシベンゾニトリル（１０ｇ、８４mmol）及びＫ２ＣＯ３（２３．５ｇ、１６８mmol）の混合物を、７０℃で一晩加熱した。水を加え、混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして蒸発させた。ＭｅＯＨを加え、混合物を週末にかけて室温で放置した。固体を濾過して、２つの産生物の２−（３−メチル−４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル（７．５ｇ、３５％）を黄色の固体として与えた。1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ ppm 8.10 (d, J=8.9 Hz, 1 H), 7.75 (dd, J=7.7, 1.5 Hz, 1 H), 7.56 - 7.68 (m, 1 H), 7.33 (td, J=7.6, 0.9 Hz, 1 H), 7.09 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 6.88 - 7.00 (m, 2 H), 2.64 (s, 3 H)。ＭＳ  Ｃ１４Ｈ１１Ｎ２Ｏ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２５５、実測値２５５．０。
【０２４６】
工程２）
２−（４−アミノ−３−メチル−フェノキシ）−ベンゾニトリル
【化１０６】
0006294490.tif 000111
塩化スズ（II）（１８．６ｇ、９８．３mmol）、２−（３−メチル−４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル（５ｇ、１９．７mmol）、ＭｅＯＨ（６０mL）、ＴＨＦ（１００mL）及び水（３０mL）の混合物を、７０℃で４時間加熱した。混合物を蒸発させ、そして残留物を１０Ｎ ＮａＯＨの添加により塩基性化した。得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させた。残留物を、クロマトグラフィー（シリカゲル、０〜３０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、２−（４−アミノ−３−メチル−フェノキシ）−ベンゾニトリル（３．５ｇ、７９％）を固体として与えた。ＭＳ  Ｃ１４Ｈ１３Ｎ２Ｏ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２２５、実測値２２４．９。
【０２４７】
工程３）
２−（４−ヒドラジノ−３−メチル−フェノキシ）−ベンゾニトリル塩酸塩
【化１０７】
0006294490.tif 000112
水（１０mL）中のＮａＮＯ２（１．２３ｇ、１７．８mmol）の溶液を、２−（４−アミノ−３−メチル−フェノキシ）−ベンゾニトリル（２ｇ、８．９２mmol）、ＨＣｌ（１０mL）、水（２０mL）及びＭｅＯＨ（１５mL）の混合物に４℃で加えた。混合物を４℃で４５分間撹拌した。濃ＨＣｌ（１０mL）中の塩化スズ（II）（１０ｇ、４４．６mmol）の溶液を加え、そして混合物を４時間撹拌した。混合物を濾過して、粗２−（４−ヒドラジノ−３−メチル−フェノキシ）−ベンゾニトリル塩酸塩（６００mg、２８％）を黄色の塩として与えた。この物質を、更に精製することなく次の工程において使用した。
【０２４８】
工程４）
２−（４−｛５−アミノ−４−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピラゾール−１−イル｝−３−メチル−フェノキシ）−ベンゾニトリル
【化１０８】
0006294490.tif 000113
２０mLのシンチレーションバイアル中で、（Ｅ）−３−（ジメチルアミノ）−２−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）アクリロニトリル（中間体２、工程３）（２００mg、０．５４１mmol）、２−（３−ヒドラジニル−２−メチルフェノキシ）ベンゾニトリル塩酸塩（２００mg、０．８３６mmol）及び炭酸カリウム（３００mg、２．１７mmol）を、ＥｔＯＨ（４mL）と合わせて、暗赤色の懸濁液を与えた。反応混合物を８０℃で一晩加熱した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜７０％ ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して、２−（４−｛５−アミノ−４−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピラゾール−１−イル｝−３−メチル−フェノキシ）−ベンゾニトリル（１６０mg、５２％）を油状物として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ３２Ｈ３３Ｎ５Ｏ３Ｓｉ（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：５６４．７  実測値：５６４．２
【０２４９】
工程５）
２−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−メチル−フェノキシ｝−ベンゾニトリル
【化１０９】
0006294490.tif 000114
２０mLのシンチレーションバイアル中で、２−（４−（５−アミノ−４−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−メチルフェノキシ）ベンズアミド（１６０mg、０．２７５mmol、当量：１．００）、ＴＨＦ中の１Ｍ ＴＢＡＦ（５．５mL、５．５mmol、当量：２０）及びエタン−１，２−ジアミン（１６５mg、２．７５mmol、当量：１０）を合わせた。反応混合物を７０℃で一晩加熱した。１８時間後、反応は未完了であった。さらにＴＨＦ中の１Ｍ ＴＢＡＦ（４mL）を加え、そして７０℃でさらに２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。粗物質をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、２−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−メチル−フェノキシ｝−ベンゾニトリル（５０mg、４２％）を固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ２６Ｈ１９Ｎ５Ｏ２（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：４３４．４  実測値：４３４．０
【０２５０】
実施例１６
３−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−クロロ−フェノキシ｝−ベンゾニトリル
【化１１０】
0006294490.tif 000115
工程１）
３−（３−クロロ−４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル
【化１１１】
0006294490.tif 000116
ＤＭＦ（１００mL）中の２−クロロ−４−フルオロ−１−ニトロ−ベンゼン（１５ｇ、８５mmol）、３−ヒドロキシベンゾニトリル（１０．１ｇ、８５mmol）及びＣｓ２ＣＯ３（３０．４ｇ、９３．５mmol）の混合物を、１２０℃で１時間加熱した。ＥｔＯＡｃを加え、混合物を水及びブラインで洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させて、３−（３−クロロ−４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル（２３ｇ、９９％）を黄色の固体として与えた。
【０２５１】
工程２）
３−（４−アミノ−３−クロロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル
【化１１２】
0006294490.tif 000117
ＨＣｌ（５０mL）中の塩化スズ（II）二水和物（７５．４ｇ、３３５mmol）の溶液を、ＭｅＯＨ（５００mL）中の３−（３−クロロ−４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル（２３ｇ、８３．９mmol）の溶液に加え、そして混合物を室温で６時間撹拌した。混合物を２Ｎ ＮａＯＨの添加により塩基性にし、得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させた。残留物を、クロマトグラフィー（シリカゲル、０〜３０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、３−（４−アミノ−３−クロロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル（１３．８ｇ、６７％）を黄色の油状物として与えた。
【０２５２】
工程３）
３−（３−クロロ−４−ヒドラジノ−フェノキシ）−ベンゾニトリル塩酸塩
【化１１３】
0006294490.tif 000118
ＭｅＯＨ（３０mL）中の３−（４−アミノ−３−クロロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル（５ｇ、２０．４mmol）と濃ＨＣｌ（３０mL）の混合物を、−５℃に冷却した。水（２mL）中のＮａＮＯ２（１．７２ｇ、２４．５mmol）の溶液を加え、混合物を−５℃で４０分間撹拌した。ＨＣｌ（２０mL）中の塩化スズ（II）二水和物（２３．１ｇ、１０２mmol）の溶液を加え、混合物を１時間撹拌した。混合物を蒸発させ、固体を濾別し、減圧下で乾燥させて、３−（３−クロロ−４−ヒドラジノ−フェノキシ）−ベンゾニトリル塩酸塩（５．８ｇ、９６％）を与えた。この物質を、更に精製することなく次の工程において使用した。
【０２５３】
工程４）
３−｛４−［５−アミノ−４−（１−エトキシメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−クロロ−フェノキシ｝−ベンゾニトリル
【化１１４】
0006294490.tif 000119
２０mLのシンチレーションバイアル中で、（Ｅ）−３−（ジメチルアミノ）−２−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）アクリロニトリル（中間体２、工程３）（１００mg、０．２７１mmol）、炭酸カリウム（１１２mg、０．８１２mmol）及び３−（３−クロロ−４−ヒドラジニルフェノキシ）ベンゾニトリル（２１７mg、０．８３６mmol）を、ＥｔＯＨ（４mL）と合わせて、黄色の懸濁液を与えた。反応混合物を８０℃で一晩加熱した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、３−｛４−［５−アミノ−４−（１−エトキシメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−クロロ−フェノキシ｝−ベンゾニトリル（９５mg、６９％）を油状物として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ２８Ｈ２２ＣｌＮ５Ｏ３（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：５１２．９  実測値：５１１．９
【０２５４】
工程５）
３−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−クロロ−フェノキシ｝−ベンゾニトリル
【化１１５】
0006294490.tif 000120
２０mLのシンチレーションバイアル中で、３−（４−（５−アミノ−４−（１−（エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−クロロフェノキシ）ベンゾニトリル（６０mg、０．１１７mmol）を、ＥｔＯＨ（４mL）及び１０％ ＨＣｌ（２mL）水溶液と合わせた。反応混合物を８０℃で３時間加熱した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜７０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、３−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−クロロ−フェノキシ｝−ベンゾニトリル（１８mg、３４％）を明褐色の固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ２５Ｈ１６ＣｌＮ５Ｏ２（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：４５４．８  実測値：４５４．０
【０２５５】
実施例１７
３−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−メチル−フェノキシ｝−ベンズアミド
【化１１６】
0006294490.tif 000121
工程１）
３−（３−メチル−４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル
【化１１７】
0006294490.tif 000122
ＤＭＦ（１００mL）中の４−フルオロ−２−メチル−１−ニトロ−ベンゼン（１３．１ｇ、８４mmol）、３−ヒドロキシベンゾニトリル（１０ｇ、８４mmol）及びＣｓ２ＣＯ３（３０．１ｇ、９２mmol）の混合物を、１２０℃で３時間加熱した。Ｅｔ２Ｏを加え、混合物を水及びブラインで洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させて、３−（３−メチル−４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル（１９．２ｇ、９０％）を与えた。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.09 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 7.71 - 7.77 (m, 2 H), 7.62 - 7.70 (m, 1 H), 7.48 - 7.55 (m, 1 H), 7.16 (d, J=2.8 Hz, 1 H), 7.04 (dd, J=8.9, 2.9 Hz, 1 H)。ＭＳ  Ｃ１４Ｈ１１Ｎ２Ｏ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２５５、実測値２５４．９。
【０２５６】
工程２）
３−（４−アミノ−３−メチル−フェノキシ）−ベンゾニトリル
【化１１８】
0006294490.tif 000123
濃ＨＣｌ（３５mL）中の塩化スズ（II）二水和物（３４．９ｇ、１５５mmol）の溶液を、ＭｅＯＨ（３００mL）中の３−（３−メチル−４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル（９．８５ｇ、３８．７mmol）の溶液に加え、混合物を一晩撹拌した。混合物を蒸発させ、残留物を２Ｎ ＮａＯＨの添加により塩基性化した。得られた混合物をＥｔＯＡｃで４回抽出した。有機層を水及びブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させた。残留物を、クロマトグラフィー（シリカゲル、０〜３０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、３−（４−アミノ−３−メチル−フェノキシ）−ベンゾニトリル（４．６ｇ、５３％）を黒色の液体として与えた。ＭＳ  Ｃ１４Ｈ１３Ｎ２Ｏ（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：２２５、実測値２２５．０。
【０２５７】
工程３）
３−（４−ヒドラジノ−３−メチル−フェノキシ）−ベンゾニトリル
【化１１９】
0006294490.tif 000124
水（１mL）中のＮａＮＯ２（３４０mg、４．９mmol）の溶液を、３−（４−アミノ−３−メチル−フェノキシ）−ベンゾニトリル（１ｇ、４．４６mmol）、濃ＨＣｌ（２mL）、水（４mL）及びＭｅＯＨ（２mL）の混合物に４℃で加えた。混合物を３０分間撹拌した。濃ＨＣｌ（１０mL）中の塩化スズ（II）（４．２３ｇ、２２mmol）の溶液をゆっくりと加え、そして混合物を３時間撹拌した。ＭｅＯＨ（１０mL）を加え、続いて１０Ｍ  ＮａＯＨ（注意：発熱）を加えた。混合物を冷却し、ＥｔＯＡｃ及び１０Ｍ  ＮａＯＨを加えた。有機相をブラインで洗浄し、蒸発させて、粗３−（４−ヒドラジノ−３−メチル−フェノキシ）−ベンゾニトリル（６００mg、５６％）を赤−褐色の油状物として与えた。この物質を、更に精製することなく次の工程において使用した。ＭＳ  Ｃ１４Ｈ１４Ｎ３Ｏ（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：２４０、実測値２２２．９。
【０２５８】
工程４）
３−（４−｛５−アミノ−４−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボニル］−ピラゾール−１−イル｝−３−メチル−フェノキシ）−ベンゾニトリル
【化１２０】
0006294490.tif 000125
２０mLのシンチレーションバイアル中で、（Ｅ）−３−（ジメチルアミノ）−２−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−カルボニル）アクリロニトリル（中間体３、工程  ３）（２００mg、０．５４０mmol）、３−（４−ヒドラジニル−３−メチルフェノキシ）ベンゾニトリル（２００mg、０．８３６mmol）及び炭酸カリウム（３００mg、２．１７mmol）を、ＥｔＯＨ（４mL）と合わせて、橙色の懸濁液を与えた。反応混合物を８０℃で一晩加熱した。反応は、未完了であった。３−（４−ヒドラジニル−３−メチルフェノキシ）ベンゾニトリル（２００mg、０．８３６mmol、当量：１．５５）を加え、反応混合物を８０℃でさらなる時間加熱した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜７０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、３−（４−｛５−アミノ−４−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボニル］−ピラゾール−１−イル｝−３−メチル−フェノキシ）−ベンゾニトリル（３０mg、１０％）を油状物として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ３１Ｈ３２Ｎ６Ｏ３Ｓｉ（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：５６５．７  実測値：５６５．１
【０２５９】
工程５）
３−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−メチル−フェノキシ｝−ベンズアミド
【化１２１】
0006294490.tif 000126
２０mLのシンチレーションバイアル中で、３−（４−（５−アミノ−４−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−カルボニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−メチルフェノキシ）ベンゾニトリル（３０mg、０．０５３mmol）、ＴＨＦ中の含水１Ｍ ＴＢＡＦ（１３．９mg、０．０５３mmol）及びエタン−１，２−ジアミン（３２mg、０．５３mmol）を、ＴＨＦ（１mL）と合わせた。反応混合物を７０℃で２４時間加熱した。溶媒を減圧下で除去した。粗物質をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、３−｛４−［５−アミノ−４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−メチル−フェノキシ｝−ベンズアミド（１３mg、収率５４％）を固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ２５Ｈ２０Ｎ６Ｏ３（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：４５３．４  実測値：４５２．９
【０２６０】
実施例１８
｛５−アミノ−１−［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−メタノン
【化１２２】
0006294490.tif 000127
工程１）
｛５−アミノ−１−［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］−メタノン
【化１２３】
0006294490.tif 000128
２０mLのシンチレーションバイアル中で、（Ｅ）−３−（ジメチルアミノ）−２−（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−カルボニル）アクリロニトリル（中間体３、工程  ３）（２００mg、０．５４０mmol）、（４−（２，３−ジフルオロフェノキシ）−２−メチルフェニル）ヒドラジン（実施例１４、工程３）（２６１mg、１．０４mmol）及び炭酸カリウム（２２４mg、１．６２mmol）を、ＥｔＯＨ（５mL）と合わせて、黄色の懸濁液を与えた。反応混合物を８０℃で一晩加熱した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインで洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜７０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、｛５−アミノ−１−［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−［１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル］−メタノン（４０mg、収率１３％）を油状物として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ３０Ｈ３１Ｆ２Ｎ５Ｏ３Ｓｉ（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：５７６．７  実測値：５７６．１
【０２６１】
工程２）
｛５−アミノ−１−［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−メタノン
【化１２４】
0006294490.tif 000129
２０mLのシンチレーションバイアル中で、（５−アミノ−１−（４−（２，３−ジフルオロフェノキシ）−２−メチルフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）（１−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−２−イル）メタノン（４０mg、０．０７０mmol）、エタン−１，２−ジアミン（４２mg、０．  ６９５mmol）及びＴＨＦ中の１Ｍ ＴＢＡＦ（０．９mL、１．８mmol）を、ＴＨＦ（１mL）と合わせて、明赤色の溶液を与えた。反応混合物を７０℃で２４時間加熱した。溶媒を減圧下で除去した。粗物質をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、｛５−アミノ−１−［４−（２，３−ジフルオロ−フェノキシ）−２−メチル−フェニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル｝−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）−メタノン（２０mg、収率６５％）を固体として与えた。ＬＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ２４Ｈ１７Ｆ２Ｎ５Ｏ２（［Ｍ＋Ｈ］＋）の計算値：４４６．４  実測値：４４５．９
【０２６２】
実施例１９
［５−アミノ−１−（４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化１２５】
0006294490.tif 000130
工程１）  ４−モルホリン−４−イルメチル−安息香酸メチルエステル
【化１２６】
0006294490.tif 000131
ジ−イソプロピルエチルアミン（１５．２mL、８７．３mmol）を、０℃で、脱水ＴＨＦ（５０mL）中のモルホリン（４．２mL、４８mmol）の撹拌した溶液に加えた。脱水ＴＨＦ（７０mL）中の４−ブロモメチル−安息香酸メチルエステル（１０ｇ、８７．３mmol）を加え、そして１２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、水で希釈した。得られた溶液を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、３０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、４−モルホリン−４−イルメチル−安息香酸メチルエステル（１０．５ｇ、９３％）をオフホワイトの固体として与えた。ＭＳ  Ｃ１３Ｈ１７ＮＯ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２３６、実測値２３６．１。
【０２６３】
工程２）  （４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−メタノール
【化１２７】
0006294490.tif 000132
水素化ホウ素ナトリウム（２．５７ｇ、６８mmol）を、窒素雰囲気下、０℃で、ＴＨＦ：ＭｅＯＨ（８：１）（５６mL）の混合物中の４−モルホリン−４−イルメチル−安息香酸メチルエステル（２ｇ、８．５mmol）の撹拌した溶液に加えた。反応混合物を２時間加熱還流した。それを飽和塩化アンモニウム溶液を用いて０℃でクエンチし、そして３０分間撹拌した。それを酢酸エチル（２０mL×２）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させ、そしてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して、（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−メタノール（１．３ｇ、７４％）を白色の固体として与えた。ＭＳ  Ｃ１２Ｈ１７ＮＯ２［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２０８、実測値２０８．１。
【０２６４】
工程３）  ４−モルホリン−４−イルメチル−ベンズアルデヒド
【化１２８】
0006294490.tif 000133
二酸化マンガン（３．２８ｇ、３７．６７mmol）を、室温で、メチレンジクロリド（１２０mL）中の（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−メタノール（１．３ｇ、６．２８mmol）の撹拌した溶液に加え、そして７２時間撹拌した。反応混合物を、セライトを使用する焼結漏斗に通して濾過し、メチレンジクロリド（５０mL）で洗浄した。溶媒を減圧下で蒸発させ、そしてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、４−モルホリン−４−イルメチル−ベンズアルデヒド（１．２ｇ、９３％）を白色の固体として与えた。ＭＳ  Ｃ１２Ｈ１５ＮＯ２［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２０６、実測値２０６．３。
【０２６５】
工程４）  Ｅ）−２−アジド−３−（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−アクリル酸メチルエステル
【化１２９】
0006294490.tif 000134
メタノール（１８mL）中の４−モルホリン−４−イルメチル−ベンズアルデヒド（６．８ｇ、３３．１７mmol）とアジド−酢酸エチルエステル（７．１１ｇ、１３２．６８mmol）の混合物を、０℃で、メタノール（３０mL）中のナトリウムメトキシド（５．３７ｇ、９９．５１mmol）の撹拌した溶液に加え、そして３０分間撹拌した。反応混合物を焼結漏斗に通して濾過し、水で洗浄して、Ｅ）−２−アジド−３−（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−アクリル酸メチルエステル（７ｇ、７０％）を白色の固体として与えた。ＭＳ  Ｃ１５Ｈ１８Ｎ４Ｏ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値３０２、実測値３０３．３。
【０２６６】
工程５）  ６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル
【化１３０】
0006294490.tif 000135
キシレン（９０mL）中のＥ）−２−アジド−３−（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−アクリル酸メチルエステル（３．８ｇ、１２．５８mmol）を、９０℃に２時間加熱し、室温に冷やし、そして室温で１２時間撹拌した。キシレンを減圧下で蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して、６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル（１．９ｇ、５５％）を白色の固体として与えた。ＭＳ  Ｃ１５Ｈ１８Ｎ２Ｏ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２７５、実測値２７５．２。
【０２６７】
工程６）  ６−モルホリン−４−イルメチル−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル
【化１３１】
0006294490.tif 000136
脱水ＴＨＦ（１０mL）中の６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル（３．６ｇ、１３．１３mmol）を、０℃で、脱水ＴＨＦ（２０mL）中の６０％油分散液の水素化ナトリウム（１．３ｇ、３２．８４mmol）の撹拌した溶液に加え、そして３０分間撹拌した。脱水ＴＨＦ（１０mL）中のパラ−トルエンスルホニルクロリド（５ｇ、２６．２７mmol）を加えた。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。それを飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチし、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して、６−モルホリン−４−イルメチル−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル（３．５ｇ、９３％）を白色の固体として与えた。ＭＳ  Ｃ２２Ｈ２４Ｎ２Ｏ５Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値４２９、実測値４２８．９。
【０２６８】
工程７）  ３−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−３−オキソ−プロピオニトリル
【化１３２】
0006294490.tif 000137
ブチルリチウム（１５ml、１３．５５mmol）を、−７８℃で、脱水ＴＨＦ（２０mL）中のジイソプロピルアミン（１．９５ml、１３．５５mmol）の撹拌した溶液に加え、そして３０分間撹拌した。それを、−７８℃で、脱水ＴＨＦ（２０mL）中の６−モルホリン−４−イルメチル−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル（２．９ｇ、６．７７mmol）及びアセトニトリル（１．４mL、２７mmol）の撹拌した溶液に加え、そして３０分間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチし、酢酸エチル（２０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させ、そしてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して、３−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−３−オキソ−プロピオニトリル（１．８ｇ、９０％）を黄色の固体として与えた。ＭＳ  Ｃ２３Ｈ２３Ｎ３Ｏ４Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値４３８、実測値４３８．１。
【０２６９】
工程８）  （Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル
【化１３３】
0006294490.tif 000138
ＤＭＦ−ＤＭＡ（３．９ml、２９．３mmol）を、室温で、脱水トルエン（５０mL）中の３−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−３−オキソ−プロピオニトリル（３．２ｇ、７．３２mmol）の撹拌した溶液に加え、１２時間撹拌した。トルエンを減圧下で蒸発させ、そしてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（２．５ｇ、９７％）を黄色の固体として与えた。ＭＳ  Ｃ２６Ｈ２８Ｎ４Ｏ４Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値４９３、実測値４９３．３。
【０２７０】
工程９）［５−アミノ−１−（４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン
【化１３４】
0006294490.tif 000139
（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（０．１５ｇ、０．３０５mmol））を、エタノール中の（４−フェノキシ−フェニル）−ヒドラジン（０．０９１ｇ、０．４５７mmol）の撹拌した溶液に加え、そして１６時間加熱還流した。エタノールを減圧下で蒸発させ、そして粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して、［５−アミノ−１−（４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン（０．１４ｇ、７１％）を黄色の固体として与えた。ＭＳ  Ｃ３６Ｈ３３Ｎ５Ｏ５Ｓ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値６４８、実測値６４８．２。
【０２７１】
工程１０）［５−アミノ−１−（４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−（６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−イル）−メタノン
【化１３５】
0006294490.tif 000140
炭酸セシウム（０．２１ｇ、０．６５mmol）を、室温で、ＴＨＦ：ＭｅＯＨ（７：３）（６mL）の混合物中の［５−アミノ−１−（４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（トルエン−４−スルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン（０．１４ｇ、０．２１６mmol）の撹拌した溶液に加え、１８時間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、そして粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して、［５−アミノ−１−（４−フェノキシ−フェニル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−［６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノン（０．０５５ｇ、５２％）を黄色の固体として与えた。ＭＳ  Ｃ２９Ｈ２７Ｎ５Ｏ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値４９４、実測値４９４．４。
【０２７２】
実施例２０
３−｛４−［５−アミノ−４−（６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−クロロ−フェノキシ｝−ベンゾニトリル
【化１３６】
0006294490.tif 000141
工程１）  ３−（３−クロロ−４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル
【化１３７】
0006294490.tif 000142
ＤＭＦ（１００mL）中の２−クロロ−４−フルオロ−１−ニトロ−ベンゼン（１５ｇ、８５mmol）、３−ヒドロキシベンゾニトリル（１０．１ｇ、８５mmol）及びＣｓ２ＣＯ３（３０．４ｇ、９３．５mmol）の混合物を、１２０℃で１時間加熱した。ＥｔＯＡｃを加え、混合物を水及びブラインで洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させて、３−（３−クロロ−４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル（２３ｇ、９９％）を黄色の固体として与えた。
【０２７３】
工程２）  ３−（４−アミノ−３−クロロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル
【化１３８】
0006294490.tif 000143
ＨＣｌ（５０mL）中の塩化スズ（II）二水和物（７５．４ｇ、３３５mmol）の溶液を、ＭｅＯＨ（５００mL）中の３−（３−クロロ−４−ニトロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル（２３ｇ、８３．９mmol）の溶液に加え、そして混合物を室温で６時間撹拌した。混合物を２Ｎ ＮａＯＨの添加により塩基性化し、得られた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして蒸発させた。残留物を、クロマトグラフィー（シリカゲル、０〜３０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、３−（４−アミノ−３−クロロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル（１３．８ｇ、６７％）を黄色の油状物として与えた。
【０２７４】
工程３）  ３−（３−クロロ−４−ヒドラジノ−フェノキシ）−ベンゾニトリル塩酸塩
【化１３９】
0006294490.tif 000144
ＭｅＯＨ（３０mL）中の３−（４−アミノ−３−クロロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル（５ｇ、２０．４mmol）と濃ＨＣｌ（３０mL）の混合物を、−５℃に冷却した。水（２mL）中のＮａＮＯ２（１．７２ｇ、２４．５mmol）の溶液を加え、そして混合物を−５℃で４０分間撹拌した。ＨＣｌ（２０mL）中の塩化スズ（II）二水和物（２３．１ｇ、１０２mmol）の溶液を加え、混合物を１時間撹拌した。混合物を蒸発させ、そして固体を濾別し、真空下で乾燥させて、３−（３−クロロ−４−ヒドラジノ−フェノキシ）−ベンゾニトリル塩酸塩を与えた（５．８ｇ、９６％）。この物質を、更に精製することなく次の工程において使用した。
【０２７５】
工程４）  ６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル
【化１４０】
0006294490.tif 000145
（Ｅ）−２−アジド−３−（４−モルホリン−４−イルメチル−フェニル）−アクリル酸メチルエステル（３０３．３４mg、１．００mmol）、Ｒｈ２（ｐｆｂ）４（ジロジウム（II）テトラキス（ペルフルオロブチラート））（５２．８mg、０．０５mmol）を、トルエン（７５８μｌ）に溶解し、次に６０℃に２日間加熱し、そして次に９０℃に２時間加熱した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、そして水、ブラインで洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、そして粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製して、６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル（０．４１ｇ、５０％）を白色の固体として与えた。ＭＳ  Ｃ１５Ｈ１８Ｎ２Ｏ３［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値２７５、実測値２７５．２。
【０２７６】
工程５）  ６−モルホリン−４−イルメチル−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル
【化１４１】
0006294490.tif 000146
６０％油分散液のＮａＨ（２４４mg、６．１mmol）を、０℃で、脱水ＴＨＦ（６mL）及びＤＭＦ（２．５mL）中のエチル ６−（モルホリノメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボキシラート（１．６ｇ、５．５mmol）の撹拌した溶液に少量ずつ加えた。反応混合物を０℃で３０分間撹拌した。（２−（クロロメトキシ）エチル）トリメチルシラン（９２５mg、５．５５mmol）を０℃で加え、次に室温で１時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水及びブラインで洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、そして粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜５０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、６−モルホリン−４−イルメチル−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステルを黄色の油状物として与えた。ＭＳ  Ｃ２１Ｈ３２Ｎ２Ｏ４Ｓｉ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値４０５、実測値４０５．２。
【０２７７】
工程６）  ３−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−３−オキソ−プロピオニトリル
【化１４２】
0006294490.tif 000147
１００mLの丸底フラスコ中で、６−モルホリン−４−イルメチル−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸メチルエステル（１．６ｇ、３．８２mmol）及びＭｅＣＮ（９４１mg、１．２mL、２２．９mmol）を、ＴＨＦ（２０mL）と合わせて、暗褐色の溶液を与えた。−７８℃で冷却した後、ＬＤＡ（２Ｍ／ＴＨＦ）（３．８２mL、７．６４mmol）を、５分間かけてゆっくり加えた。反応混合物を−７８℃で３０分間撹拌した。反応物を飽和ＮＨ４Ｃｌ（１０mL）でクエンチした。反応物を水（１５０mL）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１００mL）で抽出し、そしてブラインで洗浄した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜４０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、３−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−３−オキソ−プロピオニトリル（０．１５ｇ、１０％）を黄色の油状物として与えた。ＭＳ  Ｃ２２Ｈ３１Ｎ３Ｏ３Ｓｉ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値４１４、実測値４１４．３。
【０２７８】
工程７）  （Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル
【化１４３】
0006294490.tif 000148
２５mLの丸底フラスコ中で、３−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−３−オキソ−プロピオニトリル（１４５mg、３５１μmol）を、トルエン（１．４６mL）と合わせて、明黄色の溶液を与えた。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（６０．５μｌ、４５６μmol）を加え、そして室温で３０分間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜５０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（０．１２ｇ、７３％）を黄色の油状物として与えた。ＭＳ  Ｃ２５Ｈ３６Ｎ４Ｏ３Ｓｉ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値４６９、実測値４６９．２。
【０２７９】
工程８）  ３−（４−｛５−アミノ−４−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピラゾール−１−イル｝−３−クロロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル
【化１４４】
0006294490.tif 000149
ＥｔＯＨ（２mL）中の（Ｅ）−３−ジメチルアミノ−２−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−アクリロニトリル（１１５mg、２４５μmol）、３−（３−クロロ−４−ヒドラジノ−フェノキシ）−ベンゾニトリル塩酸塩（２１８mg、７３６μmol）及びＫ２ＣＯ３（１７０mg、１．２３mmol）を、８０℃で２時間加熱した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水、ブラインで洗浄し、そして無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下で除去し、そして粗物質をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、０〜５０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して、３−（４−｛５−アミノ−４−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピラゾール−１−イル｝−３−クロロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル（０．１０３ｇ、６１％）を黄色の油状物として与えた。ＭＳ  Ｃ３６Ｈ３９ＣｌＮ６Ｏ４Ｓｉ［（Ｍ＋Ｈ）＋］の計算値６８３、実測値６８３．２。
【０２８０】
工程１０）  ３−｛４−［５−アミノ−４−（６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−クロロ−フェノキシ｝−ベンゾニトリル
【化１４５】
0006294490.tif 000150
３−（４−｛５−アミノ−４−［６−モルホリン−４−イルメチル−１−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル］−ピラゾール−１−イル｝−３−クロロ−フェノキシ）−ベンゾニトリル（８０mg、１１７μmol）を、ＥｔＯＨ（４mL）に溶解し、１０％ ＨＣｌ（２mL、２０．０mmol）を加え、そして８０℃に１０分間加熱した。溶媒を減圧下で除去した。粗物質を、エーテルでトリチュレートして、３−｛４−［５−アミノ−４−（６−モルホリン−４−イルメチル−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−ピラゾール−１−イル］−３−クロロ−フェノキシ｝−ベンゾニトリルを与えた（８０mg、収率９４％）。1H NMR (DMSO-d6) δ: 12.13 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.89 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.72 - 7.86 (m, 6H), 7.58 - 7.70 (m, 3H), 7.42 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.36 (dd, J = 8.7, 2.6 Hz, 1H), 7.25 (br. s., 1H), 4.57 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 3.77 - 4.14 (m, 4H), 3.16 - 3.45 (m, 4H)。
【０２８１】
生物学的実施例
ブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）阻害アッセイ
本アッセイは、濾過による放射性３３Ｐリン酸化産物の捕獲である。Ｂｔｋ、ビオチン化ＳＨ２ペプチド基質（Ｓｒｃ相同）及びＡＴＰの相互作用は、ペプチド基質のリン酸を導く。ビオチン化産物は、結合したストレプトアビジンセファロースビーズである。全ての結合した放射性標識産物をシンチレーションカウンターによって検出する。
【０２８２】
アッセイするプレートは、９６ウェルのポリプロピレン（Greiner）及び９６ウェルの１．２μm親水性ＰＶＤＦフィルタープレート（Millipore）である。ここに報告する濃度は、最終アッセイ濃度である：ＤＭＳＯ中１０〜１００μMの化合物（Burdick and Jackson）、５〜１０nM Ｂｔｋ酵素（Ｈｉｓタグ化、完全長）、３０μMペプチド基質（ビオチン−Ａｃａ−ＡＡＡＥＥＩＹＧＥＩ−ＮＨ２）、１００μM ＡＴＰ（Sigma）、８mM イミダゾール（Sigma、ｐＨ７．２）、８mM グリセロール−２−ホスファート（Sigma）、２００μM ＥＧＴＡ（Roche Diagnostics）、１mM ＭｎＣｌ２（Sigma）、２０mM ＭｇＣｌ２（Sigma）、０．１mg/ml ＢＳＡ（Sigma）、２mM ＤＴＴ（Sigma）、１μCi ３３Ｐ ＡＴＰ（Amersham）、２０％ストレプトアビジンセファロースビーズ（Amersham）、５０mM ＥＤＴＡ（Gibco）、２M ＮａＣｌ（Gibco）、２M ＮａＣｌ w／１％リン酸（Gibco）、microscint-20（Perkin Elmer）。
【０２８３】
ＩＣ５０の決定は、標準的な９６ウェルプレートアッセイテンプレートから得られるデータを利用して、化合物当たり１０個のデータ点から算出する。１種の対照化合物及び７種の未知阻害剤を各プレートで試験し、各プレートで２回実行した。典型的には、化合物を１００μMから開始して３nMで終了する半対数（half-log）系列で希釈した。対照化合物は、スタウロスポリンとした。バックグラウンドをペプチド基質の非存在下でカウントした。総活性をペプチド基質の存在下で決定した。以下のプロトコルを使用してＢｔｋ阻害を決定した。
【０２８４】
試料調製：試験化合物を、アッセイ緩衝液（イミダゾール、グリセロール−２−ホスファート、ＥＧＴＡ、ＭｎＣｌ２、ＭｇＣｌ２、ＢＳＡ）中、半対数増分で希釈した。
【０２８５】
ビーズ調製
１）５００ｇで遠心分離することによってビーズをすすぐ。
２）ＰＢＳ及びＥＤＴＡを用いてビーズを再構成して、２０％ビーズスラリーを作製する。
３）基質を含有しない反応混合物（アッセイ緩衝液、ＤＴＴ、ＡＴＰ、３３Ｐ ＡＴＰ）及び基質を含有する混合物（アッセイ緩衝液、ＤＴＴ、ＡＴＰ、３３Ｐ ＡＴＰ、ペプチド基質）を３０℃で１５分間プレインキュベートする。
４）アッセイを開始するために、酵素緩衝液（イミダゾール、グリセロール−２−ホスファート、ＢＳＡ）中のＢｔｋ１０μL及び試験化合物１０μLをＲＴで１０分間プレインキュベートする。
５）基質を含有しない又は含有する反応混合物３０μLをＢｔｋ及び化合物に加える。
６）全アッセイ混合物５０μLを３０℃で３０分間インキュベートする。
７）アッセイ液４０μLをフィルタープレート中のビーズスラリー１５０μLに移して、反応を停止する。
８）３０分後、以下の工程でフィルタープレートを洗浄する：
ＮａＣｌ  ３×２５０μL
ＮａＣｌ（１％リン酸を含有する）  ３×２５０μL
Ｈ２Ｏ  １×２５０μL
９）プレートを６５℃で１時間又はＲＴで一晩乾燥させる。
１０）microscint-20 ５０μLを加えて、シンチレーションカウンターで３３Ｐ（cpm）をカウントする。
【０２８６】
生データから活性率を算出する（cpm）：
活性率＝（試料−ｂｋｇ）／（総活性−ｂｋｇ）×１００
ワンサイト用量反応シグモイドモデルを使用して、活性率からＩＣ５０を算出する：
ｙ＝Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（ｘ／Ｃ）Ｄ））））
ｘ＝化合物濃度、ｙ＝活性％、Ａ＝最小、Ｂ＝最大、Ｃ＝ＩＣ５０、Ｄ＝１（ヒルの傾き）。
【０２８７】
ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害のＴＲ−ＦＲＥＴ（時間分解ＦＲＥＴ）アッセイ
このＢＴＫ競合アッセイは、ＦＲＥＴ（Forster／蛍光共鳴エネルギー移動）技術を使用して、不活性状態のブルトン型チロシンキナーゼに対する化合物の効力（ＩＣ５０）を測定する。ＢＴＫ−Ｅｕ錯体を氷上で１時間インキュベートした後、５０nM ＢＴＫ−Bioease（商標）：１０nM Ｅｕ−ストレプトアビジン（Perkin-Elmer Catalog# AD0062）の開始濃度で使用した。アッセイ緩衝液は、２０mM ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．１５）、０．１mM ＤＴＴ、１０mM ＭｇＣｌ２、０．５mg/ml ＢＳＡと３％ Kinase Stabilizer（Fremont Biosolutions, Catalog # STB-K02）から構成した。１時間後、上記反応混合物をアッセイ緩衝液中で１０倍希釈して、５nM ＢＴＫ：１nM Ｅｕ−ストレプトアビジン錯体（ドナーフルオロフォア）を作製した。次いで、０．１１nM ＢＴＫ−Ｅｕと０．１１nM Kinase Tracer 178（Invitrogen, Catalog # PV5593）の混合物１８μlを、非陰性対照としてのＢＴＫ−Ｅｕ単独と共に、３８４ウェル平底プレート（Greiner, 784076）に分注した。１０点曲線を生成するために、アッセイで試験する化合物を１０×濃度として調製し、半対数増分の系列希釈をＤＭＳＯ中で実施した。ＦＲＥＴ反応を開始するために、ＤＭＳＯ中に１０×ストックとして調製した化合物をプレートに加え、プレートを１４℃で１８〜２４時間インキュベートした。
【０２８８】
インキュベーション後、プレートをBMG Pherastar Fluorescentプレートリーダー（又は等価物）で読み取り、これを使用してユーロピアムドナーフルオロフォア（６２０nm発光）及びＦＲＥＴ（６６５nm発光）からの発光エネルギーを測定した。陰性対照ウェルの値を平均化して、平均最小値を得た。陽性「阻害剤なし」対照ウェルを平均化して、平均最大値を得た。最大ＦＲＥＴのパーセントを以下の式を使用して計算した：
最大ＦＲＥＴ％＝１００×［（ＦＳＲ化合物−ＦＳＲ平均最小値）／（ＦＳＲ平均最大値−ＦＳＲ平均最小値）］
式中、ＦＳＲ＝ＦＲＥＴシグナル比。最大ＦＲＥＴ％の曲線をActivity Base（Excel）でプロットし、ＩＣ５０（％）、ヒルの傾き、ｚ’及びＣＶ％を決定した。平均ＩＣ５０及び標準偏差は、Microsoft Excelを使用して、２連曲線（２つの独立した希釈物からの単一阻害曲線）から誘導されるだろう。
【０２８９】
このアッセイについての代表化合物のデータを以下の表ＩＩに列挙する。
【０２９０】
【表２】
0006294490.tif 000151
【０２９１】
ＣＤ６９発現によって測定される全血中のＢ細胞活性化の阻害
ヒト血液中のＢ細胞のＢ細胞受容体媒介活性化を抑制するＢＴＫ阻害剤の能力を試験する手順は、以下のとおりである：
【０２９２】
ヒト全血（ＨＷＢ）を健康なボランティアから以下の制限で得る：２４時間薬物不使用の非喫煙者。血液を静脈穿刺によってヘパリンナトリウムで抗凝固処理したバキュテイナー（Vacutainer）管に採取する。試験化合物を、ＰＢＳ（２０×）で所望の開始薬物濃度の１０倍に希釈し、続いて、ＰＢＳ中１０％ ＤＭＳＯで３倍系列希釈して、９点用量反応曲線を作成する。各化合物希釈物５．５μlを、２mlの９６ウェルＶ底プレート（Analytical Sales and Services, #59623-23）に２連で加え；ＰＢＳ中１０％ ＤＭＳＯ ５．５μlを対照ウェル及び非刺激ウェルに加える。ＨＷＢ（１００μl）を各ウェルに加え、混合した後、プレートを３７℃、５％ ＣＯ２、湿度１００％で３０分間インキュベートする。ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Southern Biotech, #2022-14）（５００μg/ml溶液１０μl、最終濃度５０μg/ml）を各ウェル（非刺激ウェルを除く）に混合しながら加え、プレートをさらに２０時間インキュベートする。
【０２９３】
２０時間のインキュベートの最後に、試料を、蛍光プローブ標識抗体（ＰＥマウス抗ヒトＣＤ２０ １５μl、BD Pharmingen, #555623、及び／又はＡＰＣマウス抗ヒトＣＤ６９ ２０ul、BD Pharmingen #555533）と、３７℃、５％ ＣＯ２、湿度１００％で３０分間インキュベートする。誘導対照、補正調整用の未染色ステイン及び単一ステイン、並びに初期電圧設定を含める。次いで、試料を1×Pharmingen Lyse Buffer（BD Pharmingen # 555899）１mlで溶解し、プレートを１８００rpmで５分間遠心分離する。上清を吸引により除去し、残ったペレットをさらなる１×Pharmingen Lyse Buffer（１ml）で再度溶解して、プレートを前回と同様にスピンダウンする。上清を吸引し、残ったペレットをＦＡＣｓ緩衝液（ＰＢＳ＋１％ ＦＢＳ）中で洗浄する。最終スピンの後、上清を除去し、ペレットをＦＡＣｓ緩衝液１８０μl中に再懸濁する。BD LSR IIフローサイトメーターのＨＴＳ９６ウェルシステムで実行するのに適した９６ウェルプレートに試料を移す。
【０２９４】
使用するフルオロフォアに適切な励起波長及び発光波長を使用して、データを取得し、Cell Quest Softwareを使用して陽性細胞のパーセント値を得る。最初にＦＡＣＳ解析ソフトウェア（Flow Jo）によって結果を解析する。試験化合物のＩＣ５０は、ＣＤ６９陽性細胞（抗ＩｇＭによる刺激後にＣＤ２０陽性でもある）のパーセントを５０％減少させる濃度（非刺激バックグラウンドについて８個のウェルの平均を減算した後の８個の対照ウェルの平均）として定義される。ＩＣ５０値は、XLfitソフトウェアバージョン３、式２０１を使用して算出する。
【０２９５】
Ｂ細胞活性化の阻害−Ramos細胞におけるＢ細胞ＦＬＩＰＲアッセイ
本発明の化合物によるＢ細胞活性化の阻害は、抗ＩｇＭで刺激したＢ細胞応答に及ぼす試験化合物の効果を決定することによって実証される。
【０２９６】
Ｂ細胞ＦＬＩＰＲアッセイは、抗ＩｇＭ抗体による刺激からの細胞内カルシウム上昇に対する潜在的阻害剤の効果を決定する細胞ベースの機能的方法である。Ramos細胞（ヒトバーキットリンパ腫細胞株、ATCC-No. CRL-1596）を増殖培地（後述する）中で培養した。アッセイの前日に、Ramos細胞を新しい増殖培地（上記と同じ）中に再懸濁し、濃度を組織培養フラスコ中０．５×１０６細胞／mLに設定した。アッセイ当日、細胞をカウントし、濃度を、組織培養フラスコ中、１μM ＦＬＵＯ−３ＡＭ（TefLabs Cat-No. 0116、無水ＤＭＳＯ及び１０％プルロニック酸（Pluronic acid）中に調製）を補充した増殖培地中１×１０６細胞／mLに設定し、３７℃（４％ ＣＯ２）で１時間インキュベートする。細胞外色素を除去するために、細胞を遠心分離（５分間、１０００rpm）によって回収して、ＦＬＩＰＲ緩衝液（後述する）中に１×１０６細胞／mLで再懸濁し、次いで、９６ウェルのポリ−Ｄ−リシン被覆黒色／透明プレート（BD Cat-No. 356692）に１×１０５細胞／ウェルで分注した。試験化合物を、１００μM〜０．０３μM（７種の濃度、詳細は以下）の範囲の様々な濃度で加え、細胞をＲＴで３０分間インキュベートした。１０μg/mLの抗ＩｇＭ（Southern Biotech, Cat-No. 2020-01）を加えることによって、Ramos細胞のＣａ２＋シグナル伝達を刺激して、ＦＬＩＰＲ（molecular Devices、アルゴンレーザーを備えたＣＣＤカメラを使用して、４８０nM励起における９６ウェルプレートの画像を取得する）で測定した。
【０２９７】
培地／緩衝液：
増殖培地：Ｌ−グルタミン（Invitrogen, Cat-No. 61870-010）、１０％ウシ胎仔血清（FBS, Summit Biotechnology Cat-No. FP-100-05）；１mM ピルビン酸ナトリウム（Invitrogen Cat. No. 11360-070）を補充したＲＰＭＩ １６４０培地。
【０２９８】
ＦＬＩＰＲ緩衝液：ＨＢＳＳ（Invitrogen, Cat-No. 141175-079）、２mM ＣａＣｌ２（Sigma Cat-No. C-4901）、ＨＥＰＥＳ（Invitrogen, Cat-No. 15630-080）、２．５mM プロベネシド（Sigma, Cat-No. P-8761）、０．１％ ＢＳＡ（Sigma, Cat-No.A-7906）、１１mM グルコース（Sigma, Cat-No.G-7528）。
【０２９９】
化合物希釈の詳細：
１００μMの最も高い最終アッセイ濃度を達成するために、１０mMの化合物ストック溶液（ＤＭＳＯ中に作製）２４μLをＦＬＩＰＲ緩衝液５７６μLに直接加える。試験化合物をＦＬＩＰＲ緩衝液中で希釈し（Biomek 2000ロボットピペッターを使用して）、以下の希釈スキームを得る：ビヒクル、１．００×１０−４Ｍ、１．００×１０−５、３．１６×１０−６、１．００×１０−６、３．１６×１０−７、１．００×１０−７、３．１６×１０−８。
【０３００】
アッセイ及び解析：
カルシウムの細胞内上昇は、最大−最小統計値（Molecular DevicesのＦＬＩＰＲ対照及び統計値エクスポートソフトウェアを使用し、刺激抗体を加えることによって生じるピークから休止ベースラインを減算する）を使用して報告した。非線形曲線適合（GraphPad Prism software）を使用してＩＣ５０を決定した。
【０３０１】
マウスのコラーゲン誘発関節炎（ｍＣＩＡ）
０日目に、マウスの尾の付け根又は背中の数か所に、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中のII型コラーゲンのエマルションを皮内（i.d.）注射する。コラーゲン免疫後、動物は、２１〜３５日目頃に関節炎を発症する。関節炎の発症は、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ；i.d.）中のコラーゲンの全身投与によって２１日目に同期（追加免疫）する。追加免疫に対するシグナルである軽度関節炎（採点１又は２；下記の採点の説明を参照のこと）の発症について、２０日目以降毎日動物を調べる。追加免疫後、マウスを採点し、所定の期間（典型的には、２〜３週間）にわたって毎日（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ）の投薬頻度で候補治療薬剤を投薬する。
【０３０２】
ラットのコラーゲン誘発関節炎（ｒＣＩＡ）
０日目に、ラットの背中の数か所に、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中のウシＩＩ型コラーゲンのエマルションを皮内注射（i.d.）によって注射する。コラーゲンエマルションの追加免疫注射（i.d.）を、７日目頃に、尾の付け根又は背中の別の部位に行う。関節炎は、一般に、最初のコラーゲン注射の１２〜１４日後に観察される。１４日目以降、後述（関節炎の評価）のように関節炎の発症について動物を評価することができる。２回目の抗原刺激の時点から開始し、所定の期間（典型的には、２〜３週間）にわたって毎日（ＱＤ）又は１日２回（ＢＩＤ）の投薬頻度で、候補治療薬剤を動物に予防的に投薬する。
【０３０３】
関節炎の評価：
両方のモデルにおいて、採点システム（後述する基準に従って４本の脚を評価することを含む）を使用して、脚及び肢関節の炎症の発症を定量する：
採点：
１＝脚又は１本の指の腫脹及び／又は発赤
２＝２つ以上の関節の腫脹
３＝３つ以上の関節が関係する脚の全体的な腫脹
４＝脚及び指全体の重度の関節炎。
【０３０４】
評価は、ベースライン測定については０日目に行い、最初の兆候又は腫脹で再び評価を開始し、１週間に最大３回、実験の最後まで行う。個々の脚の４個の採点を足すことによって、各マウスの関節炎指標を得る（動物当たり最大１６個の採点を与える）。
【０３０５】
ラットのインビボ喘息モデル
雄のBrown-Norwayラットに、ミョウバン０．２ml中のＯＡ（オボアルブミン）１００μgを週に１回３週間にわたって（０、７及び１４日目）腹腔内投与することによって感作する。２１日目（最後の感作の１週間後）に、ラットにビヒクル又は化合物製剤のいずれかを皮下的に投与（q.d.）して、０．５時間後、ＯＡエアロゾル抗原刺激（１％ ＯＡで４５分間）を行い、抗原刺激の４時間後又は２４時間後に終了する。屠殺時に、血清検査及びＰＫ用に全ての動物からそれぞれ血清及び血漿を採取する。気管カニューレを挿入し、肺をＰＢＳで３回洗浄する。ＢＡＬ液の総白血球数及び白血球分画を解析する。細胞アリコート（２０〜１００μl）中の総白血球数を、コールターカウンター（Coulter Counter）によって決定する。白血球分画については、試料５０〜２００μlをサイトスピン（Cytospin）内で遠心分離し、スライドをDiff-Quikで染色する。光学顕微鏡下で標準的な形態学的基準を使用して、単球、好酸球、好中球及びリンパ球の比率をカウントし、これをパーセントで表す。代表的なＢｔｋ阻害剤は、対照レベルと比較して、ＯＡ感作及び抗原刺激したラットのＢＡＬ中の総白血球数の低下を示す。
【０３０６】
前述の発明は、明確化及び理解を目的として、説明及び例によっていくらか詳しく記載されている。当業者にとって、添付の特許請求の範囲内で変更及び変形を実施できることは明らかであろう。従って、上の記載は、例示的であって、限定的ではないことを意図したものであることを理解されたい。従って、本発明の範囲は、上の記載に関して決定されるべきではなく、以下に添付される特許請求の範囲に関して、そのような特許請求の範囲が権利を有する均等物の全範囲と合わせて決定されるべきである。
【０３０７】
本出願に引用される特許、特許出願及び刊行物は全て、個々の特許、特許出願又は刊行物が各々個別に示されたかのように同程度に、全ての目的についてその全体が参照により本明細書に組み込まれる。