(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨髄性白血病の処置における治療有効量のＣＸＣＲ４−拮抗ペプチド及び治療有効量の化学療法剤であって、前記ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドが配列番号１で示され、前記化学療法剤がシタラビンである、治療有効量のＣＸＣＲ４−拮抗ペプチド及び化学療法剤。
【請求項２】
前記骨髄性白血病が急性骨髄性白血病である、請求項１に記載の治療有効量のＣＸＣＲ４−拮抗ペプチド及び化学療法剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野及び発明の背景】
【０００１】
本発明は、骨髄性白血病の処置方法、特に、骨髄性白血病の処置におけるＣＸＣＲ４−拮抗ペプチド及び化学療法剤の使用に関する。
【０００２】
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）は、成熟細胞への分化能低減を伴う造血幹細胞及びプロジェニター（芽球）の制御不能な増殖を特徴とする異種疾患群である（Ｅｓｔｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  ３６８：１８９４−１９０７，２００６）。化学療法剤への感受性があるにもかかわらず、ＡＭＬ患者の長期無病生存率は、低いままで、大半は、最終的に最小残存病変（ＭＲＤ；Ｍａｔｓｕｎａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ  Ｍｅｄ．  ９：１１５８−６５，２００３）によって再発する。骨髄（ＢＭ）は、ＡＭＬ細胞の骨髄構成成分への接着が薬剤から保護しうるＭＲＤの主要部位である（Ｅｓｔｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ  ３６８：１８９４−１９０７，２００６）。ケモカインレセプターＣＸＣＲ４及びそのリガンドストローマ由来因子−１（ＳＤＦ−１／ＣＸＣＬ１２）は、白血病細胞とＢＭ微小環境との間のクロストークに関与する重要な作因である（Ｊ．Ａ．Ｂｕｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ａ．Ｐｅｌｅｄ，  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２３：４３−５２，２００９）。
【０００３】
ＡＭＤ３１００と呼ばれるバイサイクラム薬剤は、元々抗ＨＩＶ化合物として発見されたもので、具体的には、拮抗的にＣＸＣＲ４と相互作用する。ＡＭＤ３１００でのＣＸＣＲ４レセプターの遮断は、造血プロジェニター細胞の動員を起こす。ＷＯ  ２００７／０２２５２３は、骨髄性又は造血性悪性腫瘍を発症している対象における化学療法の有効性を増強するためのＣＸＣＲ４作用薬、例えばＡＭＤ３１００、の使用を開示している。
【０００４】
Ｔ−１４０は、ＣＸＣＲ４への特異的結合を介したＴ細胞へのＨＩＶ−１（Ｘ４−ＨＩＶ−１）の進入を抑制する特異的ＣＸＣＲ４拮抗剤として開発された１４−残基合成ペプチドである（Ｔａｍａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｍ．  ２５３（３）：８７７−８８２，  １９９８）。その後、Ｔ−１４０のペプチド類似体が、ナノモルレベルで阻害活性を有する特異的ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドとして開発された［Ｔａｍａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｏｒｇ．  Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．  １：３６６３−３６６９，２００３），ＷＯ  ２００２／０２０５６１，ＷＯ  ２００４／０２０４６２，ＷＯ  ２００４／０８７０６８，ＷＯ  ００／０９１５２，ＵＳ  ２００２／０１５６０３４及びＷＯ  ２００４／０２４１７８］。
【０００５】
ＷＯ  ２００４／０８７０６８は、ケモカインレセプター、特にＣＸＣＲ４レセプターの拮抗剤、及び、例えば癌の処置、予防又は診断におけるそれらの使用法を開示している。’０６８公報は、例示的ＣＸＣＲ４ペプチド拮抗剤がＴ１４０及びＴ１４０誘導体を含むこと、又、病変が癌、例えば乳癌、脳腫瘍、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、腎臓癌及び非小細胞肺癌を含むことを開示している。
【０００６】
ＷＯ  ００／０９１５２は、例えば癌処置におけるＣＸＣＲ４拮抗剤の様々な治療への使用を開示している。
【０００７】
ＷＯ  ２００４／０２４１７８は、患者におけるアポトーシス−誘発処置及び／又は癌細胞の転移拡散の防止のためのＣＸＣＲ４レセプターへのリガンドとしてのケモカインレセプター拮抗剤の使用を開示している。
【０００８】
米国特許第２００２／０１５６０３４号公報は、例えば癌における造血細胞の処置のためのＣＸＣＲ４拮抗剤の使用を開示している。
【０００９】
ＷＯ  ２００２／０２０５６１は、Ｔ−１４０のペプチド類似体及び誘導体を開示している。５６１公報は、特許請求のペプチドが強力なＣＸＣＲ４阻害剤で、高い抗−ＩＨＶウイルス活性と低い細胞毒性を発現することを実証している。
【００１０】
最近、ＣＸＣＲ４拮抗剤ＴＮ１４０とＡＭＤ３１００との間の比較試験は、ＡＭＬの単剤療法として、ＴＮ１４０がＡＭＤ３１００よりも有効である、と示唆した。ＴＮ１４０と、それより劣るＡＭＤ３１００は、ヒトＣＸＣＲ４−発現ＡＭＬ細胞の退行を誘発し、ＮＯＤ／Ｓｈｉ−ｓｃｉｄ／ＩＬ−２Ｒγｎｕｌｌ（ＮＯＧ）白血病幹細胞（ＬＩＣ）を標的にした（Ｙ．Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ，  ２０１２）。
【００１１】
ＷＯ  ２００４／０２０４６２は、４Ｆ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３を含めたＴ−１４０の追加新規ペプチド類似体及び誘導体を開示している。’４６２公報は、さらに、癌、例えばＴ細胞白血病の処置のためのＴ−１４０類似体を用いた予防用及び治療用組成物及びその使用法を開示している。
【００１２】
Ｂｅｉｄｅｒら（Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．  ３９：２８２−９２，  ２０１１）は、４Ｆ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３がＡＭＬを含めた造血系起源の悪性細胞へのＣＸＣＲ４−依存性の優先的細胞毒性を発揮する、と報告した。インビボで、４Ｆ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３の皮下注射は、ヒトＡＭＬ異種移植片の増殖を有意に減少させた。
【００１３】
骨髄性白血病の処置のための安全で有効な方法を有するのは極めて有利であると思われる。
【発明の概要】
【００１４】
本発明のある側面に従って、骨髄性白血病を処置する方法が提供される。前記方法は、治療有効量のＣＸＣＲ４−拮抗ペプチド及び治療有効量の化学療法剤を、それを必要とする対象に投与する工程を含む。
【００１５】
下述の本発明の好ましい態様のさらなる特徴に従って、前記骨髄性白血病は急性骨髄性白血病である。
【００１６】
下述の本発明の好ましい態様のさらなる特徴に従って、前記骨髄性白血病は急性骨髄性白血病である。
【００１７】
前記ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドは、配列番号１で示され、前記化学療法剤はシタラビンである。
【００１８】
記述の好ましい態様のなおもさらなる特徴に従って、ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドは、配列番号１で示されるアミノ酸配列を有する。
【００１９】
記述の好ましい態様のなおもさらなる特徴に従って、前記化学療法剤はシタラビンである。
【００２０】
記述の好ましい態様のなおもさらなる特徴に従って、前記ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドは、０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の１日量で前記対象に投与される。
【００２１】
既述の好ましい態様のなおもさらなる特徴に従って、シタラビンは、１ｇ／ｍ2体表面積〜１０ｇ／ｍ2体表面積の１日量で対象に投与される。
【００２２】
記述の好ましい態様のなおもさらなる特徴に従って、前記ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドは、皮下投与される。
【００２３】
記述の好ましい態様のなおもさらなる特徴に従って、シタラビンは、静脈内投与される。
【００２４】
記述の好ましい態様のなおもさらなる特徴に従って、前記ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドは、前記化学療法剤の投与の少なくとも１日前に対象に投与される。
【００２５】
記述の好ましい態様のなおもさらなる特徴に従って、前記ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドは、前記化学療法剤の投与の少なくとも１時間前に対象に投与される。
【００２６】
本発明は、安全で有効な骨髄性白血病の新規処置方法を提供することによって現在既知の治療形態の欠点の対応に成功する。
【００２７】
別段の定めのない限り、ここで使用される全技術及び／又は科学用語は、本発明が属する当業者が共通して理解している意味と同じ意味を有する。本明細書に述べられているものと同様又は同等の方法及び材料を本発明の態様の実践又は試験に使用できるが、例示的方法及び／又は材料を以下に述べる。抵触の場合、定義を含めて、本特許明細書が統制する。さらに、材料、方法及び例は、例示のみであって、必ずしも制限を意図しない。
【００２８】
本発明の一部の態様を、添付図を参考に、例としてここに述べる。この時点で図に詳細に言及しながら、示されている事項は、例としてのものであり、本発明の実施例の例示的考察を目的とすることを強調するものである。この点で、図の説明は、どのように本発明の態様を実施してもよいかを当業者に明らかにする。
【００２９】
図中：
図１〜７は、処置後５日目に検査した血球に対する４Ｆ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３（配列番号１、ここではＢＬ−８０４０とも呼ばれる；２．４、４．８、９．６、又は、１２ｍｇ／ｋｇの濃度で）、シタラビン（ＡＲＡ−Ｃ；２００ｍｇ／ｋｇの濃度で）、又は、それらの組合せの正常Ｃ５７ＢＬ／６マウスへの処置の効果を説明する棒グラフである。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】白血球数密度（ＷＢＣ；１０3／μｌ）に対するＢＬ−８０４０単独、ＡＲＡ−Ｃ又はそれらの組合せの効果を示す。
【図２】赤血球数密度（ＷＢＣ；１０6／μｌ）に対するＢＬ−８０４０単独、ＡＲＡ−Ｃ又はそれらの組合せの効果を示す。
【図３】血中赤血球体積％（ヘマトクリット；％）に対するＢＬ−８０４０単独、ＡＲＡ−Ｃ又はそれらの組合せの効果を示す。
【図４】ヘモグロビン密度（ＨＧＢ；ｇ／ｄｌ）に対するＢＬ−８０４０単独、ＡＲＡ−Ｃ又はそれらの組合せの効果を示す。
【図５】血小板密度（１０3／μｌ）に対するＢＬ−８０４０単独、ＡＲＡ−Ｃ又はそれらの組合せの効果を示す。
【図６】リンパ球絶対数密度（ＷＢＣ；１０3／μｌ）に対するＢＬ−８０４０単独、ＡＲＡ−Ｃ又はそれらの組合せの効果を示す。
【図７】好中球絶対数密度（ＷＢＣ；１０3／μｌ）に対するＢＬ−８０４０単独、ＡＲＡ−Ｃ又はそれらの組合せの効果を示す。
【発明の特定の態様の説明】
【００３１】
本発明は、その一部の態様において、骨髄性白血病の処置における化学療法剤と併用したＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドの使用に関する。
【００３２】
本発明の原理及び実践は、図及び添付説明を参考にすると、より良く理解しうる。
【００３３】
本発明の少なくとも１つの態様を詳細に説明する前に、本発明が以下の説明において定め、例によって例証した内容に用途が必ずしも制限されないことを理解しなければならない。本発明は、他の態様が可能で、あるいは、様々な方法での実践又は実施が可能である。又、ここで用いられている一般用語及び学術用語は、説明を目的とするものであり、制限するものであると見なすべきでない、と理解しなければならない。
【００３４】
本発明者は、本発明を実施化する中で、驚くべきことに、化学療法剤シタラビン（骨髄性白血病の処置に使用）との併用によるＣＸＣＲ４−拮抗ペプチド４Ｆ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３（配列番号１）によるマウスの処置が、化学療法剤のみにより処置したマウスに比較して、実質的に高めの赤血球、ヘモグロビン、ヘマトクリットのレベルを生じることを明らかにした（例１参照）。これらの結果は、化学療法剤が原因の非標的毒性をＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドが独自に緩和でき、そのため、骨髄性白血病の化学療法処置の安全性並びに効果を改善すると指摘している。
【００３５】
よって、本発明のある側面に従って、対象の骨髄性白血病を処置する方法が提供される。前記方法は、治療有効量のＣＸＣＲ４−拮抗ペプチド及び治療有効量の化学療法剤を対象に投与し、それによって、対象の骨髄性白血病を処置することを含む。
【００３６】
ここで使用する場合、「ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチド」は、当該ペプチド拮抗剤の非存在下での同じ状況と比較して、ＣＸＣＲ−４活性化を少なくとも１０％減少させるペプチドである。具体的態様によれば、ペプチド拮抗剤は、競合阻害剤である。具体的態様によれば、ペプチド拮抗剤は、非競合阻害剤である。
【００３７】
ここで使用する場合、用語「ペプチド」は、ネイティブペプチド（分解産物、化学合成ペプチド又は組換えペプチドのいずれか）、及び、ペプチド模倣物質（化学合成ペプチドが典型的）、並びに、ペプチド類似体であるペプトイド及びセミペプトイドを包含し、これらは、例えば、前記ペプチドを、生体内で細胞内への浸透能を高めながら、安定化させる修飾を有していてもよい。
【００３８】
ある具体的態様によれば、前記ペプチドは、長さがアミノ酸１００個程度である。ある具体的態様によれば、前記ペプチドは、長さがアミノ酸５〜１００個である。ある具体的態様によれば、前記ペプチドは、長さがアミノ酸５〜５０個である。ある具体的態様によれば、前記ペプチドは、長さがアミノ酸５〜２０個である。ある具体的態様によれば、前記ペプチドは、長さがアミノ酸５〜１５個である。ある具体的態様によれば、前記ペプチドは、長さがアミノ酸１０〜２０個である。ある具体的態様によれば、前記ペプチドは、長さがアミノ酸１０〜１５個である。
【００３９】
具体的態様によれば、本発明のＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドは、例えば、４Ｆ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３（配列番号１）類似体及び誘導体であり、以下に詳述されているように、特許出願ＷＯ  ２００２／０２０５６１及びＷＯ  ２００４／０２０４６２に開示されている「Ｔ−１４０類似体」としても既知のペプチドに構造的、機能的に関連している。
【００４０】
様々な特定の態様において、Ｔ−１４０類似体又は誘導体は、次式に示すアミノ酸配列を有するか、又はその塩である：
１  ２  ３    ４      ５      ６  ７    ８  ９  １０  １１  １２  １３    １４
Ａ1−Ａ2−Ａ3−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ａ4−Ａ5−Ａ6−Ａ7−Ａ8−Ａ9−Ａ10−Ｃｙｓ−Ａ11  （Ｉ）
式中、
Ａ1はアルギニン、リシン、オルニチン、シトルリン、アラニン又はグルタミン酸残基又はこれらのアミノ酸のＮ−α−置換誘導体であるか、Ａ1は存在せず；
Ａ1が存在する場合、Ａ2はアルギニン又はグルタミン酸残基であり、もしくは、Ａ1が存在しない場合、Ａ2はアルギニン又はグルタミン酸残基又はこれらのアミノ酸のＮ−α−置換誘導体であり；
Ａ3は芳香族アミノ酸残基であり；
Ａ4、Ａ5、Ａ9は、それぞれ独立して、アルギニン、リシン、オルニチン、シトルリン、アラニン又はグルタミン酸残基であり；
Ａ6はプロリン、グリシン、オルニチン、リシン、アラニン、シトルリン、アルギニン又はグルタミン酸残基であり；
Ａ7はプロリン、グリシン、オルニチン、リシン、アラニン、シトルリン又はアルギニン残基であり；
Ａ8はチロシン、フェニルアラニン、アラニン、ナフチルアラニン、シトルリン又はグルタミン酸残基であり；
Ａ10はシトルリン、グルタミン酸、アルギニン又はリシン残基であり；
Ａ11はアルギニン、グルタミン酸、リシン又はシトルリン残基で、この場合、Ｃ−末端カルボキシルを誘導体化していてもよく；
４−位又は１３−位のシステイン残基は、ジスルフィド結合を形成でき、当該アミノ酸はＬ又はＤ型を取ることができる。
【００４１】
式（Ｉ）に従った例示的ペプチドは、以下の表１に示すように、配列番号１〜７２のいずれかに示す配列と同じアミノ酸配列を有するペプチドである。
【表１−１】
0006294459.tif 000002
【表１−２】
0006294459.tif 000003
【表１−３】
0006294459.tif 000004
【表１−４】
0006294459.tif 000005
【００４２】
ある具体的態様によれば、配列番号１〜７２のそれぞれにおいて、ジスルフィド結合により２個のシステイン残基がカップリングしている。
【００４３】
別の態様では、類似体又は誘導体は、配列番号６５（Ｈ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｉｔ−Ｌｙｓ−ＤＬｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｃｉｔ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−ＯＨ；ＴＣ１４００３）に示される通りのアミノ酸配列を有する。
【００４４】
別の態様では、本発明の組成物及び方法に使用されるペプチドは、本質的に配列番号１に示される通りのアミノ酸配列から成る。別の態様では、本発明の組成物及び方法に使用されるペプチドは、配列番号１に示される通りのアミノ酸配列を含む。別の態様では、ペプチドは、配列番号１に少なくとも６０％、少なくとも７０％又は少なくとも８０％相同である。別の態様では、ペプチドは、配列番号１に少なくとも９０％相同である。別の態様では、ペプチドは、配列番号１に少なくとも９５％相同である。各可能性は、本発明の別個の態様を表す。
【００４５】
各種の他の態様では、ペプチドは、配列番号１〜７２から選択され、その場合、各可能性は、本発明の別個の態様を表す。
【００４６】
別の態様では、ペプチドは、配列番号１〜４、１０、４６、４７、５１〜５６、６５、６６、６８、７０及び７１のいずれか１種に示されるアミノ酸配列を有する。別の態様では、ペプチドは、配列番号４、１０、４６、４７、６５、６８及び７０のいずれか１種に示されるアミノ酸配列を有する。別の態様では、ペプチドは、配列番号１、２、５１、６５及び６６のいずれか１種に示されるアミノ酸配列を有する。別の態様では、ペプチドは、配列番号５３〜５６のいずれか１種に示されるアミノ酸配列を有する。
【００４７】
ある態様では、ペプチドは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する。別の態様では、ペプチドは、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する。別の態様では、ペプチドは、配列番号５１に示されるアミノ酸配列を有する。別の態様では、ペプチドは、配列番号６６に示されるアミノ酸配列を有する。
【００４８】
他のＣＸＣＲ４ペプチド阻害剤（拮抗剤）は、ＬＹ２５１０９２４（Ｌｉｌｌｙ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙによる）、ＣＴＣＥ−９９０８（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  ２００９  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １５５：２３１〜２３６）、Ｆｃ１３１類似体及び以下の引用文献に詳述されているナノボディーを含むが、それらに制限されない。（それぞれ、本明細書に全体を参照として組み入れる）：
Ｔａｎ  ＮＣ，  Ｙｕ  Ｐ，  Ｋｗｏｎ  Ｙ−Ｕ，  Ｋｏｄａｄｅｋ  Ｔ．  Ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｃｅｌｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｐｅｐｔｏｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ（ペプトイドとペプチドとの間での相対細胞透過性のハイ−スループット評価），Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．  ２００８；１６：５８５３〜６１。
【００４９】
Ｋｗｏｎ  Ｙ−Ｕ，  Ｋｏｄａｄｅｋ  Ｔ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｃｅｌｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｐｅｐｔｏｉｄｓ  ａｎｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ（ペプトイド及びペプチドの相対細胞透過性の定量的評価）．Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．  ２００７；１２９：１５０８。
【００５０】
Ｍｉｌｌｅｒ  Ｓ，  Ｓｉｍｏｎ  Ｒ，  Ｎｇ  Ｓ，  Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ  Ｒ，  Ｋｅｒｒ  Ｊ，  Ｍｏｏｓ  Ｗ．  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  Ｌ−ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ，  Ｄ−ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ，  ａｎｄ  Ｎ−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ｇｌｙｃｉｎ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  ｐｅｐｔｏｉｄ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ（相同Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸及びＮ−置換グリシンペプチド及びペプトイドオリゴマーの蛋白分解感受性の比較）．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｒｅｓ．  １９９５；３５：２０〜３２。
【００５１】
Ｙｏｓｈｉｋａｗａ  Ｙ，  Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｋ，  Ｏｉｓｈｉ  Ｓ，  Ｆｕｊｉｉ  Ｎ，  Ｆｕｒｕｙａ  Ｔ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｃｙｃｌｉｃ  ｐｅｎｔａｐｅｐｔｉｄｅ  ＣＸＣＲ４  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ（環状ペンタペプチドＣＸＣＲ４拮抗剤）：ＣＸＣＲ４−ＦＣ１３１相互作用への新規洞察。Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．  ２０１２；２２：２１４６〜５０。
【００５２】
Ｊａａｅｈｎｉｃｈｅｎ  Ｓ，  Ｂｌａｎｃｈｅｔｏｔ  Ｃ，  Ｍａｕｓｓａｎｇ  Ｄ，  Ｇｏｎｚａｌｅｓ−Ｐａｊｕｅｌｏ  Ｍ，  Ｃｈｏｗ  ＫＹ，  Ｂｏｓｃｈ  Ｌ，  Ｄｅ  Ｖｒｉｅｚｅ  Ｓ，  Ｓｅｒｒｕｙｓ  Ｂ，  Ｕｌｒｉｃｈｔｓ  Ｈ，  Ｖａｎｄｅｖｅｌｄｅ  Ｗ．ＣＸＣＲ４  ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（ＶＨＨ−ｂａｓｅｄ  ｓｉｎｇｌｅ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ）  ｐｏｔｅｎｔｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ａｎｄ  ＨＩＶ−１  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｏｂｉｌｉｚｅ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ（ＣＸＣＲ４ナノボディー（ＶＨＨ系単一可変ドメイン）は、走化性及びＨＩＶ−１複製を強力に阻害し、幹細胞を動員する）。Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ２０１０；１０７：２０５６５〜７０。
【００５３】
理論に拘束されることなく、本発明のペプチドが、骨髄性白血病細胞の増殖停止及び／又は細胞死を誘発することが示唆される。
【００５４】
ここで使用する場合、「化学療法剤」の語句は、癌処置における治療有用性を有するいずれかの化学的作用剤を指す。ここで使用される化学療法剤は、化学的作用剤と生物学的作用剤の両方を包含する。これらの作用剤は、癌細胞が生存を続ける上で依存する細胞活性を阻害する働きをする。化学療法剤のカテゴリーは、アルキル化剤／アルカロイド剤、代謝拮抗物質、ホルモン又はホルモン類似体、及び様々な抗腫瘍薬を含む。すべてではないとしても、大半のこれらの薬剤は、癌細胞に直接毒性を発揮し、免疫刺激を必要としない。適切な化学療法剤が、例えばＳｌａｐａｋとＫｕｆｅ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（癌治療の原理），Ｃｈａｐｔｅｒ  ８６  ｉｎ  Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１４th：Ｐｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ，  Ｃｈ１７，  Ａｂｅｌｏｆｆ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２nd  ｅｄ．，  ２０００  ＣｈｒｃｈｉｌｌＬｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，  Ｉｎｃ．；Ｂａｌｔｚｅｒ  Ｌ．  ａｎｄ  Ｂｅｒｋｅｒｙ  Ｒ．（ｅｄｓ）：Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｐｏｃｋｅｔ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔ，  ２nd  ｅｄ．  Ｓｔ．  Ｌｕｏｉｓ，  ｍｏｓｂｙ−Ｙｅａｒ  Ｂｏｏｋ，  １９９５；  Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｄ．Ｓ．，  Ｋｎｏｂｆ  Ｍ  Ｆ．，  Ｄｕｒｉｖａｇｅ  Ｈ  Ｊ．，  （ｅｄ）：  Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，  ４th  ｅｄ．  Ｓｔ．Ｌｕｏｉｓ，  Ｍｏｓｂｙ−Ｙｅａｒ  Ｈａｎｄｂｏｏｋに記述されている。
【００５５】
一部の態様では、本発明の化学療法剤は、シタラビン（シトシンアラビノシド、Ａｒａ−Ｃ，  Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ）、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、ダカルバジン、イフォスファミド、ロムスチン、メクロレタミン、プロカルバジン、ペントスタチン、（２’デオキシコフォルマイシン）、エトポシド、テニポシド、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、パクリタキセル、デキサメサゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、オールトランスレチノイン酸、三酸化ヒ素、インターフェロン−アルファ、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））、ゲムツズマブ、オゾガマイシン、イマチニブメシレート、シトサル−Ｕ）、メルファラン、ブスルファン（ミレラン（登録商標））、チオテパ、ブレオマイシン、プラチナ（シスプラチン）、シクロホスファミド、シトキサン（登録商標）），ダウノルビシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、５−アザシチジン、クラドリビン、フルダラビン、ヒドロキシウレア、６−メルカプトプリン、メソトキセレート、６−チオグアニン、又は、それらのいずれかの組合せである。
【００５６】
ある態様では、化学療法剤はシタラビンである。
【００５７】
ここで使用する場合、「シタラビン」は、「シトシンアラビノシド」としても既知で、ＤＮＡ合成を阻害する化学療法剤である。
【００５８】
ブランド名は、シトスタール−Ｕ、タラビンＰＦＳ（ファイザー）、デポサイト（持続性リポゾーム配合剤）及びＡｒａ−Ｃ（アラビノフラノシルシチジン）を含むが、それらに制限されない。
【００５９】
本発明のＣＸＣＲ４−拮抗ペプチド及び化学療法剤は、骨髄性白血病の処置に使用される。ある態様では、骨髄性白血病は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。急性骨髄性白血病の診断及びモニタリング法は、例えばＣｈｅｓｏｎらのＪ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２１（２４）：４６４２〜４６４９、２００３に記述されている。
【００６０】
ここで使用される場合、「処置する」という用語は、病変（疾患、障害又は病態、即ち骨髄性白血病）の発症を抑制する、予防する、停止させる及び／又は病変の軽減、緩和又は退行を惹起することを指す。各種の方法及びアッセイを、病変発症の評価に使用してもよく、また同様に、各種の方法及びアッセイが、病変の軽減、緩和又は退行の評価に使用できる点を、当業者は理解する。
【００６１】
ここで使用される場合、「予防する」という用語は、疾患、障害又は病態を、前記疾患のリスクを有しうるが、まだ前記疾患ありと診断されていない対象に疾患、障害又は病態を発生させないことを指す。
【００６２】
ここで使用される場合、「対象」という用語は、病変、骨髄性白血病、例えば急性骨髄性白血病又は慢性骨髄性白血病に罹患している哺乳動物、好ましくは任意の年令のヒトを含む。
【００６３】
本発明のＣＸＣＲ４−拮抗ペプチド及び化学療法剤は、連続して、又は、順次投与することができる。
【００６４】
一部の態様では、ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドは、化学療法剤投与の少なくとも１時間前、少なくとも２時間前、少なくとも４時間前、少なくとも８時間前、少なくとも１２時間前、少なくとも１日前、少なくとも２日前、少なくとも３日前、少なくとも４日前、少なくとも５日前、少なくとも６日前、少なくとも１週間前、又は、少なくとも１ヶ月前に投与される。
【００６５】
一部の態様に従って、ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドは、化学療法剤投与の１時間前から２４時間前の間に投与される。一部の態様に従って、ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドは、化学療法剤投与の１時間前から８時間前の間に投与される。
【００６６】
本発明のＣＸＣＲ４−拮抗ペプチド及び化学療法剤は、有効成分自体として、又は、有効成分それぞれが適切な担体又は賦形剤と混合された医薬組成物として対象にそれぞれ投与することができる。
【００６７】
ここで使用される場合、「医薬組成物」は、ここで述べる有効成分の１種以上と化学的成分、例えば生理学的に適した担体及び賦形剤との調製品を指す。医薬組成物の目的は、生体への化合物の投与を容易にすることである。
【００６８】
本明細書において、「有効成分」という用語は、生物学的作用を司るペプチドを指す。以下に詳述するように、任意に、配合剤中に多数の有効成分、例えば化学療法剤、放射線増感剤などを含んでもよい。
【００６９】
以下に述べる「生理学的に許容可能な担体」及び「薬学的に許容可能な担体」という語句は、互換的に使用してもよく、生物への有意な刺激を引き起こさず、投与化合物の生物学的活性及び性質を無効にしない担体又は希釈剤を指す。
【００７０】
本明細書において、「賦形剤」という用語は、有効成分の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を指す。賦形剤の例は、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、各種糖、及び、各種タイプのデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、及び、ポリエチレングリコールを含むが、それらに制限されない。
【００７１】
薬剤の配合及び投与技術は、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ”，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡの最新版に見出しえ、これを、本明細書に参照としてすべて組入れる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ａ．，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  Ｐａ．，  ２０th  ｅｄ，  ２０００）。
【００７２】
本発明の医薬組成物は、技術上周知のプロセス、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、浮遊、乳化、カプセル化、封入、又は、凍結乾燥プロセスによって製造してもよい。
【００７３】
よって、本発明に従って使用される医薬組成物は、賦形剤及び補助剤を含む１種以上の生理学的に許容可能な担体を使った従来法で配合してもよく、これらが、薬学的に使用可能な製剤への有効成分の加工を容易にする。適切な配合は、選ばれる投与の経路による。
【００７４】
ある態様では、本発明のペプチド又は同ペプチドを含む医薬組成物は皮下投与される。
【００７５】
別の態様では、本発明の化学療法剤又は同化学療法剤を含む医薬組成物は静脈内投与される。
【００７６】
注射には、医薬組成物の有効成分を水溶液（例、ＷＦＩ）、好ましくは生理学的に適合する緩衝液、例えばハンク溶液、リンゲル液又は生理食塩水中で配合してもよい。
【００７７】
可能な投与に対する医薬組成物は、水溶性の形態の有効調製品の水溶液を含む。さらに、有効成分の懸濁液を適当な油性又は水性注射用懸濁液として調製してもよい。適切な親油性溶媒又はビヒクルは、脂肪油、例えばゴマ油、又は、合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチル、トリグリセリド又はリポソーム、を含む。水性注射用懸濁液は、前記懸濁液の粘性を高める物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール又はデキストラン、を含有してもよい。任意に、前記懸濁液は、高濃縮溶液の調製を可能にするために、適切な安定化剤、又は、有効成分の溶解性を高める物質も含有してもよい。
【００７８】
別に、有効成分は、使用前に、適切なビヒクル、例えば滅菌され発熱物質が除去された水性溶液と一緒にするための粉末状態であってもよい。
【００７９】
別の態様は、当技術分野で周知の通り、対象内での有効成分の持続放出又は有効成分の長時間持続を提供するデポ剤を含む。
【００８０】
本発明の状況での使用に適した医薬組成物は、有効成分が、予定の目的を達成するのに有効な量で含有される組成物を含む。治療有効量の決定は、特にここで提供される詳細な開示内容に照らして、十分に当業者の能力の範囲内である。
【００８１】
本発明の方法で使用されるいずれの調製品に対しても、治療有効量又は用量は、最初に、インビトロ及び細胞培養アッセイから推定できる。例えば、用量を動物モデルで配合し、望みの濃度又は力価を達成することができる。かかる情報を使って、ヒトにおける有用な用量を正確に決定することができる。
【００８２】
本明細書に記述される有効成分の毒性及び治療効果は、インビトロ、細胞培養又は実験動物での医薬品に関する標準手順によって決定することができる（以下の例の節及びＳｅｋｉｄｏ  ｅｔ  ａｌ  ２００２  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅｔ  Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ  １３７（１）：３３〜４２参照）。ヒトで使用するための一定の範囲の用量を配合する上で、これらのインビトロ及び細胞培養アッセイ、及び、動物試験から得られるデータを使用することができる。用量は、用いる剤形と利用される投与経路に依存して変化してもよい。正確な配合、投与経路及び用量は、個々の医師が患者の状態を考慮して選択することができる。（例えば、Ｆｉｎｇｌ，  ｅｔ  ａｌ．１９７５，「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」  Ｃｈ．１  ｐ．１を参照されたい）。
【００８３】
一部の態様では、本発明のＣＸＣＲ４−拮抗ペプチド又は同ペプチドを含む医薬組成物の１日量は、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜２ｍｇ／ｋｇ体重、０．１〜１ｍｇ／ｋｇ体重、０．３〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、０．３〜２ｍｇ／ｋｇ体重、０．３〜１ｍｇ／ｋｇ体重又は０．３〜０．９ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。
【００８４】
一部の態様では、本発明の化学療法剤又は同薬剤を含む医薬組成物の１日量は、１〜１０ｇ／ｍ2体表面積、１．５〜５ｇ／ｍ2体表面積又は２〜４ｇ／ｍ2体表面積の範囲である。
【００８５】
処置の期間及び頻度に関して、処置が治療上の利益を提供する時期を決定するために、又、用量の増減を行うべきか否か、投与頻度の増減、処置の中断、処置の再開又は他の処置計画への変更を行うべきか否かを決定するために対象をモニターするのは、熟練臨床医にとって典型的である。用量決定スケジュールは、多数の臨床因子、例えば血球数（例、赤血球又は白血球レベル、ヘモグロビンレベルなど）、前記ペプチド及び／又は化学療法剤への対象の感受性、に依存して変化させることができる。望ましい用量は、１度に投与する、又は、分割用量、例えば２〜４分割用量、に分割する、又、一定の時間間隔に亘って、例えばその日の適当な間隔又は他の適当なスケジュールで投与することができる。かかる分割用量は、単位剤形として投与することができる。
【００８６】
一部の態様では、本発明のＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドは、化学療法剤の投与前の少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、少なくとも６日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１ヶ月又は少なくとも２ヶ月の期間中投与される。
【００８７】
ここで記述する有効成分は、少なくとも２つの別々の容器を含む１つの製造品として包装することができる。一方の容器にはＣＸＣＲ４−拮抗ペプチド（例、配列番号１で示されるペプチド）が包装され、別の容器には化学療法剤（例、ａｒａ−Ｃ）が包装される。前記製造品は、骨髄性白血病（例、ＡＭＬ）の処置用ラベル及び／又は説明書を含んでもよい。
【００８８】
別に、又は、さらに、ＣＸＣＲ４阻害剤（例、配列番号１）と化学療法剤（シタラビン）を、共配合剤として上記したように、１つの医薬組成物中に配合することができる。
【００８９】
よって、組成物（ＣＸＣＲ４拮抗剤、化学療法剤又は同薬剤の組合せ）及び／又は本発明の一部の態様の製品は、希望すれば、１つのパック又はディスペンサーデバイス、例えば前記有効成分を含有する１種以上の単位剤形を含有してもよいＦＤＡ許可キット、で提示してもよい。前記パックは、例えば、金属又はプラスチックホイルを、例えばブリスターパックとして含んでもよい。前記パック又はディスペンサーデバイスは、投与指示書を添付してもよい。前記パック又はディスペンサーは、医薬品の製造、使用又は販売を監督する所管官庁が定めた書式の容器関連通知書も収容してもよく、この通知書は、組成物又はヒト又は動物への投与形態の当該官庁による許可を反映するものである。例えば、かかる通知書は、米国食品医薬品局が許可したラベル表示であるか、許可済み製品能書であってもよい。適合する医薬用担体で配合された本発明の調製品を含む組成物は、調製し、適用な容器（例、凍結乾燥バイアル）に入れ、上段で詳述しているように、適応症の処置のためにラベル表示してもよい。
【００９０】
ここで使用する場合、「約」という用語は±１０％を指す。
【００９１】
ここで使用する場合、「方法」という用語は、特定の作業を完遂するためのやり方、手段、技術及び手順を含み、化学、薬理学、生物学、生化学及び医学分野の技術の実施者に既知の、又は、当該実施者によって既知のやり方、手段、技術及び手順から容易に開発されるやり方、手段、技術及び手順を含むが、それらに制限されない。
【００９２】
本発明のいくつかの特徴は、明確にするため、別の態様の文脈に記述されているが、態様の組合せでも、単独の態様でも、提供しうると理解される。逆に、本発明の様々な特徴は、単独の態様の文脈に簡潔に記述されているが、別個に、又は、いずれかの適切な部分的組合せで、又は、いずれかの他の記述された本発明の態様において適切であるものとして提供してもよい。各種態様の文脈に記述したいくつかの特徴は、前記態様がそれらの要素がなければ作用しないというのでなければ、前記態様の不可欠な特徴とは考えられない。
【００９３】
上記で説明され、下記の特許請求の範囲で特許請求された本発明の各種の態様及び側面は、以下の例において実験的に裏付けられる。
【００９４】
［実施例］
ここで、上記の記述と合わせて、非限定的な方式で本発明を説明する以下の実施例を参考にする。
【００９５】
一般に、ここで使用する命名法、及び、本発明で用いる実験手順は、分子、生化学、微生物学組換えＤＮＡ技術を含む。かかる技術は、文献で十分に説明されている。例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」  Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）；「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」  Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ〜ＩＩＩ  Ａｕｓｕｂｅｌ，  Ｒ．Ｍ．，Ｅｄ  （１９９４）；  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，  Ｍａｒｙｌａｎｄ  （１９８８）；  Ｐｅｒｂａｌ，  「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８８）；  Ｗａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ」，  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；  Ｂｉｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ），  「Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ」，  Ｖｏｌ．  １〜４，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９９８）；米国特許番号４，６６６，８２８；４，６８３，２０２；４，８０１，５３１；５，１９２，６５９及び５，２７２，０５７に示される方法論；「Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」，  Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ〜ＩＩＩ  Ｃｅｌｌｉｓ，  Ｊ．Ｅ．，  Ｅｄ  （１９９４）；「Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ−Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」  ｂｙ  Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，  Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，  Ｎ．Ｙ．（１９９４），  Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ；  「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」，  Ｖｏｌｕｍｅ  Ｉ〜ＩＩＩ  Ｃｏｌｉｇａｎ  Ｊ．Ｅ．，  Ｅｄ（１９９４）；  Ｓｔｉｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ），  「Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」  （８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ），  Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ，  Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ（１９９４）；  Ｍｉｓｈｅｌｌ  ａｎｄ  Ｓｈｉｉｇｉ（Ｅｄｓ．），  「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」，  Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８０）；利用可能なイムノアッセイは特許及び科学文献に広範囲に記述されており、例えば米国特許Ｎｏ．３，７９１，９３２；  ３，８３９，１５３；  ３，８５０，７５２；  ３，８５０，５７８；  ３，８５３，９８７；  ３，８６７，５１７；  ３，８７９，２６２；  ３，９０１，６５４；  ３，９３５，０７４；  ３，９８４，５３３；  ３，９９６，３４５；  ４，０３４０７４；  ４，０９８，８７６；  ４，８７９，２１９；  ５，０１１，７７１及び５，２８１，５２１；  「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，  Ｇａｉｔ，  Ｍ．Ｊ．，Ｅｄ．（１９８４）��  「Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」，  Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．，Ｅｄｓ．（１９８５）；  「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ」  Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．，Ｅｄｓ．（１９８４）；  「Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ」  Ｆｒｅｓｈｎｅｙ  Ｒ．Ｉ．，Ｅｄ．（１９８６）；「Ｉｍｍｏｂｏｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ」，  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）；  「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」  Ｐｅｒｂｅｌ，Ｂ．，（１９８４）及び「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」  Ｖｏｌ．１−３１７，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；  「ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：  Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎｇｉｅｇｏ，  ＣＡ（１９９０）：  Ｍａｒｓｈａｋ  ｅｔ  ａｌ．，  「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ−  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ」，  ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）を参照されたい。これらをすべて、本明細書に参照としてそのまま組み入れる。他の一般的参考文献は、本書類全体を通して提示されている。その場合の手順は、技術上周知であると考えられており、読者の便宜のために提示されている。そこに収載されている全情報を、参照により本明細書に組入れる。
【００９６】
例１  ４Ｆ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３がマウスにおけるシタラビンに誘発される毒性を緩和する
材料及び方法
試薬
４Ｆ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３
凍結乾燥４Ｆ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３は、ＭＳＤ  Ｎ．Ｖ．によって製造された。前記化合物を、最終保存濃度２５ｍｇ／ｍＬで注射用水（ＷＦＩ）に溶解し、使用時まで−２０℃で保存した。マウスに注射する前に、４Ｆ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３を融解し、ＰＢＳで希釈し、最終濃度５ｍｇ／ｍＬとした。注射直前にＰＢＳ中５ｍｇ／ｍＬ保存溶液（塩を含む合計用量）を希釈して、実際の用量決定溶液を調製した。２００μＬの一定用量体積で４Ｆ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３を投与した。
【００９７】
シタラビン
シタラビン（シトシンアラビノシド；ＡＲＡ−Ｃ）は、Ｈａｄａｓｓａｈ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃａ  ｐｈａｒｍａｃｙ（イスラエル）から購入した。ＡＲＡ−Ｃは、１００ｍｇ／ｍＬの濃度でＨａｄａｓｓａｈ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃａ  ｐｈａｒｍａｃｙから提供された。１００ｍｇ／ｍＬ保存溶液をＰＢＳで希釈して、実際の投与液（２００ｍｇ／ｋｇ）を調製した。
【００９８】
動物
正常なＣ５７ＢＬ／６  メスのマウス  −  ９〜１０週令、体重約２０ｇ、を使用した。前記マウス最大１０匹の群を、固形の床を備え、寝床用材としてかんな屑を敷いたポリスルホンケージ（４２５ｘ２６６ｘ１８５ｍｍ）で飼育した。前記マウスには、市販のげっ歯類用飼料（Ｈａｒｌａｎｄ  Ｔｅｋｌａｎｄ（商標） Ｒａ／Ｍｏｕｓｅ  Ｄｉｅｔ）を任意に与え、少量を供給するステンレスシッパーチューブを備えたポリスルホンボトルから各ケージに供給する高圧蒸気滅菌水を自由に摂取できるようにした。ＡＲＡ−Ｃ用量決定初日から、ケージの床に吸湿の餌を置いた。１処置群当たり１０匹を無作為に割付けた。
【００９９】
毒性試験
処置群は次の通りであった（１処置群当たり１０匹）：
・Ａ群：非処置対照
・Ｂ群：１日目から７日目まで毎日、用量２．４、４．８、９．６又は１２ｍｇ／ｋｇで４ＦＢ−ＴＮ１４００３を投与されたマウス
・Ｃ群：３日目から７日目まで毎日２００ｍｇ／ｋｇの用量でＡＲＡ−Ｃを投与されたマウス
・Ｄ群：Ｂ群と同じく４ＦＢ−ＴＮ１４００３を投与され（１日目から７日目まで毎日、用量２．４、４．８、９．６又は１２ｍｇ／ｋｇ）、Ｃ群と同じくＡＲＡ−Ｃも投与された（３日目から７日目まで毎日２００ｍｇ／ｋｇの用量で）マウス。
【０１００】
４ＦＢ−ＴＮ１４００３は、一定用量体積２００μＬ／マウス（最終的に測定された体重−併記２０ｇに基づく）で、１日１回、連続７日間（１日目〜７日目）皮下注射した。対照マウスには、同一手順に従ってビヒクル（ＰＢＳ）のみを注射した。
【０１０１】
ＡＲＡ−Ｃは、ＰＢＳで希釈し、一定用量２００ｍｇ／ｋｇ及び一定体積２００μＬ／マウスを１日１回連続５日間（３日目〜７日目）皮下注射した。併用群（７〜１０群）には、４ＦＢ−ＴＮ１４００３注射４時間後にＡＲＡ−Ｃを注射した。
【０１０２】
実験１２日目に血液サンプルを収集した。各群のマウスを眼窩静脈叢からの失血死に供した。血液サンプル（約４００〜５００μＬ）を特殊血清ゲル分離管（ＢＤ  Ｍｉｃｒｏｇａｒｄ（商標））に入れ、室温、１３，０００ｒｐｍで８分間遠心分離し、上清の血清を保存した。血清サンプル（少なくとも２２０μｌ）を全血球計算（ＣＢＣ）用に２〜８℃に保った。ＣＢＣは、基本的にＮｅｒｖｉらの記述通りに（Ｂｌｏｏｄ  １１３（２４）：６２０６〜１４，２００９），Ｓｙｓｍｅｘ  ＫＸ−２１自動マルチパラメーター血球カウンター（Ｓｙｓｍｅｅｘ、米国）を使って実施した。
【０１０３】
結果
ＡＲＡ−Ｃの単独処置は、非処置対照と比較すると、予想通り、白血球（図１）、赤血球（図２）、ヘマトクリット（図３）、ヘモグロビン（図４）、血小板（図５）、リンパ球絶対数（図６）及び好中球絶対数（図７）の劇的な減少を生じた。
【０１０４】
ＡＲＡ−Ｃの単独又は４ＦＢ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３と併用した処置は、同じく血小板（図５）及び好中球絶対数（図７）のレベルの減少を生じた。
【０１０５】
４ＦＢ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３の単独処置は、非処置対照と比較すると、白血球（図１）、赤血球（図２）、ヘマトクリット（図３）、ヘモグロビン（図４）、血小板（図５）及びリンパ球絶対数（図６）の減少を引き起こさなかった。
【０１０６】
最も驚くべき点として、ＡＲＡ−Ｃと併用した４ＦＢ−ベンゾイル−ＴＮ１４００３の処置は、ＡＲＡ−Ｃ単独処置マウスと比較すると、血球、ヘマトクリット及びヘモグロビンの実質的な増加をきたした（それぞれ、図２、３及び４）。
【０１０７】
これらの結果は、ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドが、化学療法剤が引き起こす非標的毒性障害の一部を緩和できることを指摘している。
【０１０８】
本発明は、その具体的態様と関連して説明したが、多くの別法、変更及び変形が当業者の知るところとなるのは明らかである。従って、添付された特許請求の範囲の精神及び広い範囲に入るような別法、変更及び変形全部を包含することが意図されている。
【０１０９】
ここで言及されるすべての出版物、特許及び特許出願は、各個別出版物、特許又は特許出願が、参照により具体的に、個別に、本明細書に組入れると指摘されている場合と同程度にその全部が本明細書に組入れられている。さらに、本出願のいずれの参考文献も、その引用、特定は、かかる参考文献を本発明の先行技術として利用可能であると認めていると解釈してはならない。項目別見出しが使用されている場合において、必ずしも限定されるべきではない。
以下に、本願の出願当初の請求項を実施の態様として付記する。
［１］  治療有効量のＣＸＣＲ４−拮抗ペプチド及び治療有効量の化学療法剤を、それを必要とする対象に投与し、それによって、骨髄性白血病を処置することを含む、骨髄性白血病の処置方法。
［２］  前記骨髄性白血病が急性骨髄性白血病である、［１］に記載の方法。
［３］  前記ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドが配列番号１で示され、前記化学療法剤がシタラビンである、［１］又は［２］に記載の方法。
［４］  前記ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドが配列番号１で示されるアミノ酸配列を有する、［１］に記載の方法。
［５］  前記化学療法剤がシタラビンである、［１］に記載の方法。
［６］  前記ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドが０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の１日量で前記対象に投与される、［１］又は［３］に記載の方法。
［７］  シタラビンが１ｇ／ｍ2体表面積〜１０ｇ／ｍ2体表面積の１日量で前記対象に投与される、［５］又は［３］に記載の方法。
［８］  前記ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドが皮下投与される、［１］又は［３］に記載の方法。
［９］  前記シタラビンが静脈内投与される、［５］に記載の方法。
［１０］  前記ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドが前記化学療法剤投与の少なくとも１日前に前記対象に投与される、［１］又は［３］に記載の方法。
［１１］  前記ＣＸＣＲ４−拮抗ペプチドが前記化学療法剤投与の少なくとも１時間前に前記対象に投与される、［１］又は［３］に記載の方法。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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