(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体サンプル添加区画と、
試薬材料を含む、前記サンプル添加区画の下流にあり、これと流体連通する試薬区画と、
捕捉要素が結合された、前記試薬区画と流体連通する検出区画と、
前記検出区画から流れる液体サンプルを受ける能力を有する、前記検出区画と流体連通する吸上区画とを含み、
前記サンプル添加区画、前記試薬区画、前記検出区画及び前記吸上区画が流体流路を画定し、
前記サンプル添加区画の下流、かつ前記検出区画の上流の、前記流体流路に沿い、これと流体連通する試薬添加区画を更に含み、
前記サンプル添加区画は、サンプルを受け取り、前記サンプルが前記流体流路を通じて移動するのを可能にするように構成されており、
前記試薬添加区画は、試薬流体が前記試薬添加区画に添加され得るように構成されており、前記試薬流体が、前記流体流路を通じて前記サンプルが流れるのを中断し、それによって前記流体流路内のサンプル量を制御するようになっている、アッセイ装置。
【請求項２】
前記流体流路の少なくとも一部が、基材表面、及び前記基材表面から実質的に垂直に延びる突起部を有し、前記突起部は高さと、断面と、前記基材表面と平行な毛管流を生じることができる前記突起部間の空間を画定する、互いの間の距離とを有する、請求項１に記載のアッセイ装置。
【請求項３】
前記試薬添加区画が、前記試薬区画の下流にある、請求項１に記載のアッセイ装置。
【請求項４】
前記試薬添加区画がリザーバを含む、請求項１に記載のアッセイ装置。
【請求項５】
前記試薬材料が標識された試薬材料を含む、請求項１に記載のアッセイ装置。
【請求項６】
前記検出区画が、これに結合する捕捉要素を含む、請求項１に記載のアッセイ装置。
【請求項７】
前記サンプル添加区画が上部に堆積された界面活性剤を含む、請求項１に記載のアッセイ装置。
【請求項８】
前記サンプル添加区画上にフィルターを更に含み、サンプルが前記流体流路に入る前に前記フィルターを通過する、請求項１に記載のアッセイ装置。
【請求項９】
前記検出区画を少なくとも部分的に被覆する親水性テープを更に含む、請求項１に記載のアッセイ装置。
【請求項１０】
アッセイ装置のサンプル量を制御する方法であって、
液体サンプル添加区画を提供することと、
試薬材料を含む、前記サンプル添加区画の下流にあり、これと流体連通する試薬区画を提供することと、
前記試薬区画と流体連通する検出区画を提供することと、
前記検出区画から流れる液体サンプルを受ける能力を有する、前記検出区画と流体連通する吸上区画であって、前記サンプル添加区画、前記試薬区画、前記検出区画及び前記吸上区画が流体流路を画定する、吸上区画を提供することと、
前記サンプル添加区画の下流、かつ前記検出区画の上流の、前記流体流路に沿い、これと流体連通する試薬添加区画を更に提供することと、
前記サンプル添加区画にサンプルを添加することであって、前記サンプルが前記流体流路を通じて移動する、ことと、
試薬流体を前記試薬添加区画に添加することであって、前記試薬流体が前記流体流路を通じた前記サンプルの流れを中断し、それによって前記流体流路内のサンプル量を制御する、こととを含む、方法。
【請求項１１】
前記サンプルが前記吸上区画に移動した際に、前記試薬流体が前記試薬添加区画に添加される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記サンプルが、前記吸上区画の５０％まで移動している、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記試薬添加区画に添加された前記試薬流体が洗浄試薬である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記サンプル添加区画上に界面活性剤を堆積させることを更に含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記サンプルが前記サンプル添加区画に添加される前に、前記サンプル添加区画上に前記界面活性剤が堆積される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記サンプル添加区画上にフィルターを提供することを更に含み、サンプルは前記流体流路に入る前に前記フィルターを通過する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
前記検出区画を少なくとも部分的に被覆する親水性テープを提供することを更に含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
１つ又は２つ以上の関心の検体の検出のために、液体サンプルのアッセイを実行する方法であって、
液体サンプル添加区画を提供することと、
試薬材料を含む、前記サンプル添加区画の下流にあり、これと流体連通する試薬区画を提供することと、
前記試薬区画と流体連通する検出区画を提供することと、
前記検出区画から流れる液体サンプルを受ける能力を有する、前記検出区画と流体連通する吸上区画であって、前記サンプル添加区画、前記試薬区画、前記検出区画及び前記吸上区画が流体流路を画定する、吸上区画を提供することと、
前記サンプル添加区画の下流、かつ前記検出区画の上流の、前記流体流路に沿い、これと流体連通する試薬添加区画を更に提供することと、
前記関心の検体を含む液体サンプルを前記サンプル添加区画に添加することと、
毛管現象により、前記サンプルを前記試薬区画に移動させることであって、前記サンプルが前記試薬材料を溶解する、ことと、
前記試薬材料が溶解した前記試薬区画から前記検出区画へと、毛管現象により前記サンプルを流すことであって、生成される信号を読取ることによって前記検出区画で、前記関心の検体が検出される、ことと、
前記サンプル及びいずれかの非結合物質を前記吸上区画へと流すこととを含み、
前記方法は、試薬流体を前記試薬添加区画に添加することであって、前記試薬流体が前記流体流路を通じた前記サンプルの流れを中断し、それによって前記流体流路内のサンプル量を制御する、ことを更に含む、方法。
【請求項１９】
前記サンプルが前記吸上区画に移動した際に、前記試薬流体が前記試薬添加区画に添加される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記サンプルが、前記吸上区画の５０％まで移動している、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記試薬添加区画に添加された前記試薬流体が洗浄試薬である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記サンプルは、前記検出区画から前記吸上区画へと移動し、前記信号は、前記サンプルが前記検出区画を通じて移動した直後又は少し後に読まれ得る、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
いずれかの非結合検出要素を前記検出区画から流すために、１つ又は２つ以上の洗浄液が、前記サンプルの後に流され得る、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
前記試薬材料が、検出要素で標識されている、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
前記検出区画が、前記検出要素を捕捉するための捕捉要素を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
前記信号が、前記検出要素により生成される、請求項２５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本特許出願は、２０１２年１月２０日に出願された米国特許仮出願番号第６１／５８８，８９９号への優先権を主張し、これは本明細書において参照によってその全体が組み込まれる。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、診断アッセイの分野、及びより具体的には、検出されるべき検体が生体又は非生体サンプル中に存在する、側方流動アッセイに関連する。
【背景技術】
【０００３】
診断アッセイは幅広く普及しており、多くの疾患の診断、治療及び管理のための中心になっている。様々なタイプの診断アッセイが、血液、血清、血漿、尿、唾液、組織生検、便、痰、皮膚若しくは喉スワブ及び組織サンプル、又は処理した組織サンプルの検出を容易にするために、多くの年月にわたって開発されてきた。これらのアッセイは多くの場合において、迅速で確実な結果を生じる一方で、使用方法が容易であり、製造が安価であることを期待される。当然、これら全ての要件を同一のアッセイで満たすことは困難である。実際には、多くのアッセイはその速度が制限されている。別の重要なパラメータは感度である。アッセイ技術における最近の開発は、より高感度の試験へと繋がり、これは微量の検体を検出すること、及びサンプル内の疾患の兆候をできるだけ早い段階で検出することを可能にする。
【０００４】
一般的な種類の使い捨てアッセイ装置は、液体サンプルを受ける区画又は領域、試薬区画として既知のコンジュゲート区画、及び検出区画としても既知の反応区画を含む。これらのアッセイ装置は一般に、側方流動試験ストリップとして既知である。これらは、毛管流を支持し得る、流体流の経路を画定する多孔質材料、例えば、ニトロセルロースを利用する。実施例には、米国特許第５，５５９，０４１号、同第５，７１４，３８９号、同第５，１２０，６４３号、及び同第６，２２８，６６０号に示されるものが挙げられ、これらは本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。
【０００５】
サンプル添加区画は多くの場合において、サンプルを吸収することができ、血球の分離が所望される際には、また赤血球を効果的に捕捉する、より多孔質の材料からなる。このような材料の例は、紙、フリース、ゲル若しくは組織（例えば、セルロース、ウール、ガラス繊維、アスベスト、合成繊維、ポリマー又はこれらの混合物を含む）などの、繊維性材料である。
【０００６】
アッセイ装置の別の種類は、毛管流を含むべく突起部を有する非多孔質アッセイ装置である。このようなアッセイ装置の例としては、ＰＣＴ国際公開第２００３／１０３８３５号、同第２００５／０８９０８２号、同第２００５／１１８１３９号、及び同第２００６／１３７７８５号に開示される、開いた側方流動装置が挙げられ、これらは全て、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。
【０００７】
既知の非多孔質装置が図１に図示される。アッセイ装置１は、少なくとも１つのサンプル添加区画２、試薬区画３、少なくとも１つの検出区画４、及び少なくとも１つの吸上区画５を有する。区画は、サンプル添加区画から吸上区画までサンプルが流れる流路を形成する。任意により装置に堆積される（例えば、コーティングにより）検体に結合することができる、検出区画４内の抗体などの捕捉要素、及び試薬区画内で装置に堆積される検体の濃度の判定を可能にする試薬に関与することができる標識されたコンジュゲート物質をも含み、標識されたコンジュゲート物質は検出区画における検出のための標識を有する。サンプルが試薬区画を通じて流れる際に、コンジュゲート物質は溶解し、検出区画へと下流に流れる溶解した標識コンジュゲート物質及びサンプルのコンジュゲートプルームを形成する。コンジュゲートプルームが検出区画へと流れると、コンジュゲート物質が、例えばコンジュゲート物質と検体の複合体を介して（「サンドイッチ」アッセイにおいて）、又は直接的に（「競合」アッセイにおいて）捕捉要素により捕捉される。拘束されない溶解したコンジュゲート物質は、検出区画を通過して少なくとも１つの吸上区画５へと流される。また図１に突起物又は微細柱状物７が図示される。
【０００８】
米国特許出願公開第２００６０２８９７８７（Ａ１）号、及び同第２００７０２３１８８３（Ａ１）号、並びに米国特許第７，４１６，７００号、及び同第６，１３９，８００号（これらは全て、本明細書において参照によりその全体が組み込まれる）は、検出区画内において結合したコンジュゲート物質を検出することができる。一般的な標識としては、蛍光染料を励起し、蛍光染料を感知することができる検出器を組み込む器具によって検出され得る、蛍光染料が挙げられる。
【０００９】
図１に示される、このような典型的なアッセイ装置のサンプル量は、一般的に約２００μＬである。このようなサンプル量は、瀉血医などの医療専門家が静脈血を採取することを必要とする。いわゆる「指先穿刺」採血により採取可能な血液の量（約２５μＬ以下）に適合する、遥かに小さなサンプル量で機能し得る、側方流動装置に対する必要性が高まっている。このような少量のサンプルとは、ランセットで指先を穿刺した後の、一滴の血液における血液量である。家庭用血糖計は典型的には、血液内の血糖値を測定するために、このような方法で得られた血液の液滴を使用する。このような、より少ないサンプルの量は、血液を採取するために医療専門家を必要とせず、分析用のサンプルを提供する患者に、より高い快適性をもたらす。
【００１０】
必要なサンプル量を低減させるために、より少量のサンプルに適合するように、側方流動アッセイ装置の寸法が低減される。しかしながら、サンプル量及び装置の寸法を減少させることにより、検出区画における不十分なコンジュゲート、及びそれによって、器具によって読み取られる信号の低下（いくつかの場合において最大５倍弱い信号）、並びにより低い検出性をもたらすことが見出された。検出区画における不十分なコンジュゲートは、他の条件の中でもとりわけ、より少ないサンプル量、及び装置内のサンプルの非効率な使用によるものと考えられる。寸法の低減の別の欠点は、検出区画の幅もまた減少することであり、やはり器具によって読み取ることができる、利用可能な信号が少なくなることである。また、小さな装置は流れ時間及びコンジュゲート物質接触時間を低減し、それによってサンプル内の検体とコンジュゲート物質との間のより弱い結合を生じることが見出された。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
より小さいサンプル量に適合することができ、様々なサンプルに適合することができ（例えば、全血）、かつ必要な感度及び特異性を有する結果をもたらし得る、より小さなサンプル量のアッセイ装置に対する必要性が引き続き存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、このようなアッセイ装置を対象とする。本発明によるより小さいサンプル装置の利益は、「中断洗浄液」を使用してサンプル量を制御する能力である。最も広義において、洗浄液は任意の流体でもあり得る。流体は、試薬流体（試薬を含む流体）を含み、好ましい中断流体は洗浄流体である。チップ装置に対する所定の充填量で中断洗浄流体が添加され、これがサンプル量を制御し、また、検出チャネルを洗浄し、かつ残りのチップ体積を充填するのに役立つ。
【００１３】
したがって、本発明の一態様は、液体サンプル添加区画と、試薬材料を含む、サンプル添加区画の下流にあり、これと流体連通する試薬区画と、捕捉要素が結合された、試薬区画と流体連通する検出区画と、検出区画から流れる液体サンプルを受ける能力を有する、検出区画と流体連通する吸上区画とを含む、アッセイ装置を対象とする。装置内において、サンプル添加区画、試薬区画、検出区画及び吸上区画が流体流路を画定する。装置は、サンプル添加区画の下流、かつ検出区画の上流の、流体流路に沿い、これと流体連通する試薬添加区画を更に含む。「中断洗浄液」が、本発明の方法によるこの試薬添加区画（最も広義における流体添加区画）で添加される。
【００１４】
本発明の別の態様はしたがって、アッセイ装置のサンプル量を制御する方法を対象とする。したがって、本方法は、液体サンプル添加区画を提供することと、試薬材料を含む、サンプル添加区画の下流にあり、これと流体連通する試薬区画を提供することと、試薬区画と流体連通する検出区画を提供することと、検出区画から流れる液体サンプルを受ける能力を有する、検出区画と流体連通する吸上区画を提供することとを含む。サンプル添加区画、試薬区画、検出区画及び吸上区画が流体流路を画定する。本方法は、サンプル添加区画の下流、かつ検出区画の上流の、流体流路に沿い、これと流体連通する試薬区画を提供することを含む。本方法は、サンプル添加区画にサンプルを添加することであって、サンプルが流体流路を通じて移動する、ことと、試薬を試薬添加区画に添加することであって、試薬が流体流路を通じたサンプルの流れを中断し、それによって流体流路内のサンプル量を制御する、こととを更に含む。好ましくは添加される試薬は洗浄流体である。
【００１５】
本発明の更に別の態様は、１つ又は２つ以上の関心の検体の検出のために、液体サンプルのアッセイを実行する方法を対象とする。本方法は、液体サンプル添加区画を提供することと、試薬材料を含む、サンプル添加区画の下流にあり、これと流体連通する試薬区画を提供することと、試薬区画と流体連通する検出区画を提供することと、検出区画から流れる液体サンプルを受ける能力を有する、検出区画と流体連通する吸上区画であって、サンプル添加区画、試薬区画、検出区画及び吸上区画が流体経路を画定する、吸上区画を提供することと、サンプル添加区画の下流、かつ検出区画の上流の、流体流路に沿い、これと流体連通する試薬添加区画を提供することとを更に含む。本方法は、関心の検体を含む液体サンプルをサンプル添加区画に添加することと、毛管現象により試薬区画にサンプルを移動させることであって、サンプルが試薬材料を溶解する、ことと、試薬材料が溶解した試薬区画から、毛管現象によりサンプルを検出区画へと流すことであって、生成される信号を読取ることによって検出区画内で、関心の検体が検出される、ことと、サンプル及びいずれかの非結合物質を吸上区画へと流すこととを更に含む。本方法は、試薬を試薬添加区画に添加することであって、試薬が流体流路を通じたサンプルの流れを中断し、それによって流体流路内のサンプル量を制御する、こととを更に含む。好ましくは添加される試薬は洗浄流体である。
【００１６】
本発明の更なる目的、特徴及び利点が、以下の好ましい実施形態の詳細な考察から、当業者に明白となるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】既知のアッセイ装置。
【図２】本発明の一実施形態によるアッセイ装置の概略図。
【図３】本発明の別の実施形態によるアッセイ装置の概略図。
【図４】本発明によるアッセイ装置パッケージの層状構成の分解図。
【図５】サンプル添加区画に様々な界面活性剤が堆積された、本発明の一実施形態によるアッセイ装置における、全血のための平均流れ時間。
【図６】中断洗浄液プロトコルを有する全血を使用したカルバマゼピンの用量反応と、血漿から得られる結果との比較。
【図７】中断洗浄液プロトコルを有する全血を使用したフェノバルビタールの用量反応曲線血漿から得られる結果との比較。
【図８】様々なＮＴｐｒｏＢＮＰ濃度での、本発明の一実施形態によるアッセイ装置における、直後に洗浄液を流す、全血の平均流れ時間。
【図９】各試験サンプルにおける、蛍光反応対ＮＴｐｒｏＢＮＰ濃度の平均ピーク面積と、同様のＮＴｐｒｏＢＮＰ濃度の血清サンプルと比較した全血サンプルに関して得られる用量反応曲線（本発明の一実施形態によるアッセイ装置において、直後に洗浄液を流す）。
【図１０】検体としてＮＴｐｒｏＢＮＰを有する異なるアッセイ装置設計の感度。
【図１１】検体としてＮＴｐｒｏＢＮＰを有する異なるアッセイ装置設計の感度。
【図１２】全血サンプル及び洗浄を使用した、プロカルシトニン濃度対平均ピーク面積のプロット。
【図１３】全血サンプルを使用した、プロカルシトニン濃度対平均ピーク面積のプロット。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本明細書及び添付の「特許請求の範囲」において使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、その文脈において別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を包含する。
【００１９】
説明及び請求項を通じて多くの値に関連して使用される用語「約」は、当業者にとって周知であり、許容され得る不正確性を示す。不正確性は好ましくは±１０％である。
【００２０】
本明細書における用語「サンプル」とは成分の存在又は不在、成分の濃度など、そのいずれかの特性を定性的又は定量的に判定されるべく意図された、液体、溶液又は懸濁液の容量を意味する。本発明の文脈における典型的なサンプルは、人間又は動物の体液、例えば血液、血漿、血清、リンパ、尿、唾液、精液、羊水、胃液、喀痰、痰、粘液、涙、便などである。他の種類のサンプルは、ヒト又は動物の組織サンプルに由来し、この組織サンプルは、検査のために特定の組織成分を明らかにするために、液体、溶液又は懸濁液へと加工されている。本発明の実施形態は、あらゆる身体的サンプルに適用可能であるが、好ましくは全血、尿又は痰のサンプルに適用される。
【００２１】
他の例において、サンプルは食物試験、環境試験、生物学的脅威又は生物汚染試験などに関連し得る。これは、本発明において使用され得るサンプルの僅かな例にすぎない。
【００２２】
本発明において、サンプルの側方流動、及びサンプル中に存在する成分と、装置内に存在するか、又は手順の間に装置に追加される試薬との相互作用、並びに定性的又は定量的なこのような相互作用の検出に基づく判定は、診断目的など、いずれかの目的のためであり得る。このような試験は多くの場合において、側方流動アッセイと称される。
【００２３】
診断判定の例としては、例えば、慢性的な代謝異常など、異なる疾患に特異的な検体（マーカーとも称される）、例えば、血糖、血中ケトン、尿中ブドウ糖（血糖）、血中コレストロール（アテローム性動脈硬化症、肥満等）；他の特定の疾患（例えば、急性疾患）のマーカー、例えば、冠状動脈感染マーカー（例えば、トロポニン−Ｔ、ＮＴ−ＰｒｏＢＮＰ）、甲状腺機能のマーカー（例えば、甲状腺刺激ホルモンの判定（ＴＳＨ））、ウイルス感染のマーカー（特定のウイルス抗体の検出のための側方流動イムノアッセイの使用）などの判定が挙げられるがこれらに限定されない。
【００２４】
更に別の重要な分野は、コンパニオン診断の分野であり、薬剤などの治療薬が、そのような薬剤を必要とする個人に投与される。薬剤がその所望の効果を有するかどうかを判定するための適切なマーカーの濃度を決定するために、その後、適切なアッセイが実行される。あるいは、薬がこれを必要とする個人を助けるかどうかを決定するために、治療薬の投与の前に、本発明のアッセイ装置が使用され得る。
【００２５】
更に別の重要な分野は、薬剤乱用を示す薬剤及び薬物代謝産物の容易かつ迅速な検出、例えば、尿サンプル内の特定の薬物及び薬物代謝産物（例えばＴＨＣ）の決定の分野である。
【００２６】
用語「検体」は、用語「マーカー」の同義語として使用され、定性的又は定量的に測定されるいずれかの化学又は生物学的物質を包含し、かつ小さな分子、タンパク質、抗体、ＤＮＡ、ＲＮＡ、核酸、ウイルス成分若しくは完全なウイルス、細菌成分又は完全な細菌、細胞成分又は完全な細胞、並びにこれらの複合体及び誘導体を含み得る。
【００２７】
用語「区画」、「領域」及び「部位」は、本記載、実施例及び請求項の文脈において、先行技術の装置又は本発明の実施形態による装置のいずれかにおける基材上の流体流路の部分を定義するために使用される。
【００２８】
用語「反応」は、基材上又は基材内のサンプル成分と少なくとも１つの試薬との間で、又はサンプル内に存在する２つ又は３つ以上の成分の間で生じるいずれかの反応を定義するために使用される。用語「反応」は特に、検体の定性的又は定量的な決定の一部として検体と試薬との間で生じる、反応を定義するために使用される。
【００２９】
用語「基材」とは、サンプルが添加され、その中で判定が行われるか、又は検体と試薬との間の反応が生じる、キャリア又はマトリックスを意味する。
【００３０】
本発明は、少なくとも１つの検体の存在又は量を判定するための側方流動アッセイ装置を対象とする。図２及び図３は、本発明による、このような装置の好ましい実施形態の概略図を図示する。アッセイ装置１０は、少なくとも１つのサンプル添加区画２０、試薬区画３０、少なくとも１つの検出区画４０、及び少なくとも１つの吸上区画５０を有する。区画は、サンプル添加区画から吸上区画までサンプルが流れる流路を形成する。アッセイ装置はまた、好ましくは試薬区画と検出区画との間に位置する、少なくとも１つの試薬添加区画３５を含む。
【００３１】
アッセイ装置の構成要素（すなわち、装置の他の部分からの別個の部品であってもなくても、装置の物理的構造）は、コポリマー、ブレンド、ラミネート、金属ホイル、金属フィルム又は金属から調製され得る。あるいは、装置構成要素は、コポリマー、ブレンド、ラミネート、金属ホイル、金属フィルム金属から、以下の物質の１つを堆積させて調整される：ポリオレフィン、ポリエステル、スチレン含有ポリマー、ポリカーボネート、アクリルポリマー、塩素含有ポリマー、アセタールホモポリマー及びコポリマー、セルロース類及びこれらのエステル、硝酸セルロース、フッ素含有ポリマー、ポリアミド、ポリイミド、ポリメチルメタクリレート、硫酸含有ポリマー、ポリウレタン、シリコン含有ポリマー、ガラス並びにセラミック材料。あるいは、装置の構成要素は、プラスチック、エラストマー、ラテックス、シリコンチップ又は金属で作られる。エラストマーは、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリアクリレート、シリコンエラストマー又はラテックスを含み得る。あるいは、装置の構成要素は、ラテックス、ポリスチレンラテックス又は疎水性ポリマーから調製され、疎水性ポリマーは、ポリプロピレン、ポリエチレン又はポリエステルを含み得る。あるいは、装置の構成要素はＴＥＦＬＯＮ（登録商標）、ポリスチレン、ポリアクリレート、又はポリカーボネートを含み得る。あるいは、装置構成要素は、エンボス加工、ミリング又は射出成形され得るプラスチックから、又は銅、銀及び金のフィルムの表面から作製され、この上に様々な長鎖アルカンチオールが吸収され得る。ミリング又は射出成形され得る、プラスチックの構造は、ポリスチレン、ポリカーボネート、又はポリアクリレートを含み得る。特に好ましい実施形態において、アッセイ装置は、例えば、商標名Ｚｅｏｎｏｒ（登録商標）で販売されるシクロオレフィンポリマーから射出成形される。好ましい射出成形技術は、米国特許第６，３７２，５４２号、同第６，７３３，６８２号、同第６，８１１，７３６号、同第６，８８４，３７０号、及び同第６，７３３，６８２号に記載され、これらは全て、本明細書において参照により全体が組み込まれる。
【００３２】
流路は、開いた又は閉じた経路、溝及び毛管を含み得る。好ましくは流路は、毛管流が流路を通じて維持されるような寸法、形状及び相互の間隔を有するように、突起部に隣接する側方流動経路を含む。一実施形態において、流路は、底面及び側壁を有する基材内のチャネル内にある。この実施形態において、突起部は、チャネルの底面から突出する。側壁は、液体の毛管機能に寄与してもしなくてもよい。側壁が液体の毛管現象に寄与しない場合、液体が突起部により画定される流路に収容された状態に維持するために、最外突起部と側壁との間に間隙が提供され得る。図１は、突起部７を図示する。
【００３３】
一実施形態において、流路は少なくとも部分的に開いている。別の実施形態において、流路は完全に開いている。開いているとは、毛管距離において蓋又はカバーが存在しないことを意味する。流路に対する物理的保護として存在する場合、蓋は、流路内の毛管流に寄与しない。開いた側方流動は、以下の出願公開に記載され、これらは本明細書において参照としてその全体を組み込まれる：ＰＣＴ国際公開第２００３／１０３８３５号、同第２００５／０８９０８２号、同第２００５／１１８１３９号、同第２００６／１３７７８５号、及び同第２００７／１４９０４２号。突起部は高さ（Ｈ）、直径（Ｄ）及び突起部の間の距離（ｔ１、ｔ２）を有し、それによってこの区画における、血漿、好ましくはヒトの血漿の側方毛管流が達成される。これらの寸法は、米国特許出願公開第２００６／０２８５９９６号に図示され、これは本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。上記の高さ、直径及び突起部間の距離を最適化することに加え、突起部は突起部の表面を変性させることによって所望の化学的、生物学的又は物理的機能を付与され得る。一実施形態において、突起部は、約１５〜約１５０μｍ、好ましくは約３０〜約１００μｍの範囲の高さ、約１０〜約１６０μｍ、好ましくは約４０〜約１００μｍの直径、及び互いから約３〜約２００μｍ、好ましくは約５〜約５０μｍ又は約１０〜約５０μｍの突起部間の間隔を有する。流路は、約５〜約５００ｍｍ、好ましくは約１０〜約１００ｍｍの長さ、約０．３〜約１０ｍｍ、好ましくは約０．３〜約３ｍｍ、好ましくは約０．５〜約１．５、及び好ましくは約０．５〜約１．２ｍｍの幅を有し得る。
【００３４】
殆どの検出は、流体流路の検出区画部分において生じるが、装置の他の部分において検出が行われ得ることも可能である。例えば、非侵襲性、非反応性サンプルの一体性測定は、サンプル区画と試薬区画、又は試薬添加区画との間で、好ましくはフィルター要素（存在する場合）の後方で生じ得る。他の測定は、ブランク値、ＨｂＡ１ｃなどの判定のためのヘモグロビン及び糖化ヘモグロビンの両方を測定するための、二部分反応シーケンスの一方などを含み得る。
【００３５】
液体サンプル区画（液体サンプル添加区画とも称される）は、ピペットなどのサンプル分配器からサンプルを受け取る。サンプルは典型的には、区画の上へと堆積される。サンプル添加区画は、サンプルが反応区画に堆積される点から、任意のフィルター及び試薬添加区画を通じて、好ましくは毛管流を通じて、液体サンプルを移送することができる。毛管流を生じる構造は、ニトロセルロースなどの多孔質材料を含み、又は好ましくは、図１に図示されるように、微細柱状物による。指先穿刺量の血液を使用し得る装置において、サンプルは指に触れて直接採取されるか、本明細書において参照としてその全体を組み込まれる、同時係属出願、表題「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  Ｆｌｕｉｄ  Ｆｌｏｗ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ａｎ  Ａｓｓａｙ  Ｄｅｖｉｃｅ」（２０１２年１月２０日出願、米国仮特許出願第６１／５８８，７７２号号、代理人整理番号第ＣＤＳ５１１２ＵＳＰＳＰ号、第１発明者Ｊａｍｅｓ  Ｋａｎａｌｅｙ）に記載されるように、毛管ピペットによって採取され得る。
【００３６】
サンプルから粒子を濾過し、又は血液から血球を濾過し、装置を通じて血漿がより遠くまで移動できるようにサンプル添加区画内にフィルター材料（図４）が配置されてもよい。
【００３７】
サンプル添加区画と検出区画との間に、試薬区画が位置する。試薬区画は、分析要素と結合する試薬であり、一般的に反応において有用な試薬であり（免疫アッセイのための抗体又は抗原などの結合パートナー、酵素アッセイのための基材、分子診断アッセイのためのプローブ）、結合した試薬を安定化させる材料などの補助剤、反応への干渉を抑制する材料などを含み得る。一般的に反応において有用な試薬の１つが、以下に記載されるような、検出可能な信号を有する。いくつかの場合において、例えば、着色した又は蛍光分子などの、分光法を使用して検出可能な分子が挙げられるがこれらに限定されない、検出可能な信号を形成するために、試薬が検体と直接反応するか、又はカスケード反応を通じて反応する。試薬区画の試薬の量は、同じ試薬の幅を維持しながら、装置に堆積される試薬の長さによって調節することができる。試薬の量は、長さを維持しながら幅を変えることによって調節され得る。試薬の量は、幅及び長さを同時に変えることによって更に調節され得る。１つの好ましい実施形態において、試薬区画は、コンジュゲート物質を含む。用語「コンジュゲート」とは、検出要素及び結合パートナーの両方を有するいずれかの部分を意味する。
【００３８】
検出要素は、その物理的分布及び／又はこれが生じる信号（発光分子（例えば、蛍光剤、リン発光性剤、化学発光性剤、生物発光剤など）、着色分子、反応の際に色を生成する分子、酵素、放射性同位体、特定の結合を呈するリガンドなどが挙げられるがこれに限定されない）の強度に関連して検出される薬剤である標識とも称される検出要素は、好ましくは、発色団、蛍光色素分子、放射能標識及び酵素から選択される。好適な標識が、抗体、タンパク質及び核酸の標識のための広範な染料を提供する供給元から市販される。例えば、実際に全可視及び赤外スペクトルに及ぶ蛍光色素分子が存在する。好適な蛍光剤又はリン光性標識は、例えば、フルオレセインＣｙ３、Ｃｙ５などが挙げられるがこれらに限定されない。好適な化学発光性標識は、例えば、ルミノール、サイリュームなどであるがこれらに限定されない。
【００３９】
同様に、放射能標識は、市販されているか、又は検出要素がこれらが放射能標識を組み込むようにして合成され得る。好適な放射能標識は、例えば、放射性ヨード及びリン、例えば、１２５Ｉ及び３２Ｐである。
【００４０】
好適な酵素標識は、例えば、わさび大根ペルオキシターゼ、βガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼなどが挙げられるがこれらに限定されない。
【００４１】
２つの標識は、これらが、互いに阻害、干渉又は抑制することなく、個別に検出され、かつ好ましくは同時に数量化され得るときに、「区別可能」である。多数の検体又はマーカーが検出される際、２つ又は３つ以上の標識が使用され得る。
【００４２】
結合パートナーは、検体の存在又は量を判定するために使用され得る複合体を形成し得る材料である。例えば、「サンドイッチ」アッセイにおいては、コンジュゲートの結合パートナーは、検体及びコンジュゲートを含む複合体を形成し、この複合体は、検出区画に組み込まれる、捕捉要素とも称される別の結合パートナーへと更に結合し得る。競合イムノアッセイにおいて、検体はコンジュゲートの内の結合パートナーの、検出区画に組み込まれた捕捉要素とも称される別の結合パートナーへの結合と干渉する。コンジュゲートに含まれる例の結合パートナーは、抗体、抗原、検体又は検体擬似体などを含む。
【００４３】
試薬区画の前又は後、かつ検出区画の前の流体流路には、試薬添加区画がある。試薬添加区画３５が図３に図示される。広義において、試薬添加区画は、流体添加区画である。このような流体は試薬流体であり得、好ましくは洗浄流体である。試薬添加区画は、装置の外部から試薬を添加することを可能にする。より具体的に、試薬添加区画は、サンプル及び吸上区画への流体経路に存在する他の結合されていない成分を洗い流すために使用され得る阻害試薬を追加するために使用される。好ましい実施形態において、試薬添加区画３５は、試薬区画３０の後に位置する（図３を参照）。
【００４４】
試薬区画からの試薬プルームは、試薬区画の幅をできるだけ広く被覆するために、可能な限り広くされるべきである。試薬プルームの幅を増加させるための１つの方法は、同時係属出願、表題「Ａｓｓａｙ  Ｄｅｖｉｃｅ  Ｈａｖｉｎｇ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｃｅｌｌｓ」（米国仮特許出願第６１／５８８，７３８号、２０１２年１月２０日出願、代理人整理番号第ＣＤＳ５１０４ＵＳＰＳＰ号、第１発明者Ｚｈｏｎｇ  Ｄｉｎｇ）に記載され、これは本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。要するに、試薬区画内に試薬材料（今後「試薬セル」と称される）を有する多数の領域と、多数の試薬セルから生じる多数の流れを１つの流れに再統合する要素とが、より望ましく混合された、より広い試薬プルームを、これが試薬区画を超えて検出区画に入る際に生じる。
【００４５】
液体サンプル区画、及び試薬区画の下流には、検出区画があり、これは、サンプル添加区画と流体連通している。検出区画は、上記のもののような突起部を含み得る。また上記のように、これらの突起部は好ましくは、射出成形又はエンボス加工など、Ｚｅｏｎｏｒなどの光学プラスチック材料から基材へと一体的に成形される。検出区画の流路の幅は典型的に、従来的な大きさの装置においておよそ２ｍｍであるが、いくつかのより少ない体積の装置、例えば、上記、及び２０１２年１月２０日に出願された、係属出願、表題「Ｌｏｗｅｒ  Ｖｏｌｕｍｅ  Ａｓｓａｙ  Ｄｅｖｉｃｅ  Ｈａｖｉｎｇ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ」（米国仮特許出願第６１／５８８，７５８号、代理人整理番号第ＣＤＳ５１１１ＵＳＰＳＰ、第１発明者明Ｐｈｉｌ  Ｈｏｓｉｍｅｒ）（本明細書において参照としてその全体を組み込まれる）に記載のものなどは、はるかに狭い（例えば、１．５ｍｍ以下）。
【００４６】
検出区画は、いずれかの検出可能な信号が読み取られる場所である。検出区画内の突起部に取り付けられた好ましい実施形態は、捕捉要素である。捕捉要素は、コンジュゲート、又はコンジュゲートを含む複合体のための結合パートナーを含み得る。例えば、検体が特定のタンパク質である場合、コンジュゲートは蛍光プローブなどの検出要素に連結された、このタンパク質と特異的に結合する抗体であり得る。捕捉要素は、ひいてはこのタンパク質にやはり特異的に結合する別の抗体であり得る。別の実施例において、マーカー又は検体がＤＮＡである場合、捕捉分子は合成オリゴヌクレオチド、その類似物又は特定の抗体であり得るが、これらに限定されない。他の好適な捕捉要素としては、検出される抗体に特異的な、抗体、抗体断片、アプタマー、及び核酸配列が挙げられる。好適な捕捉要素の非限定的な例は、ビオチン官能基を含有するコンジュゲートに結合するアビジン官能基を有する粒子である。
【００４７】
検出区画は、多数の検出区画を含み得る。多数の検出区画は、１つ又は２つ以上のマーカーを含むアッセイのために使用され得る。多数の検出区画の場合において、捕捉要素は、第１及び第２捕捉要素などの多数の捕捉要素を含み得る。
【００４８】
コンジュゲートは例えば、試薬区画内のコーティングによりアッセイ装置に予め堆積されてもよい。同様に、捕捉要素は、検出区画のアッセイ装置上に予め堆積されてもよい。好ましくは、検出要素及び捕捉要素の両方が、それぞれ、アッセイ装置上で、試薬区画及び検出区画上に予め堆積される。
【００４９】
サンプルがサンプル区画に供給された後、試薬区画に達する。サンプルが試薬区画を通じて流れ、これと相互作用、かつ試薬添加区画においてこれと光学的に相互作用した後、サンプル及び試薬プルームは、流体流内に含まれる。試薬プルームは、試薬区画に溶解した試薬材料、又は試薬添加区画を通じて添加された試薬材料のいずれかを含み得る。試薬プルームは、検出要素及び結合パートナーの両方を有するコンジュゲートを含むことがあり、この場合これは、コンジュゲートプルームと称されることが多い。
【００５０】
検出区画の下流に吸上区画があり、検出区画と流体連通している。吸上区画は、液体サンプル及び流路内の他のいずれかの物質（例えば、非結合試薬、洗浄流体など）を受ける容量を有する、アッセイ装置の領域である。吸上区画は、検出区画を通じて、その外へと液体サンプルを移動させ続ける毛管力を提供する。吸上区画は、ニトロセルロースなどの多孔質材料を含んでもよく、又は本明細書において記載される突起物などの非多孔質構造であってもよい。吸上区画は、例えば、蒸発性加熱又はポンプを使用する、非毛管流体駆動手段を含み得る。本発明によるアッセイ装置において使用される吸上区画の更なる詳細は、米国特許出願公開第２００５／００４２７６６号、同第２００６／０２３９８５９号に見出され、そのいずれもが本明細書において参照により全体が組み込まれる。吸上区画はまた、本明細書においてその全体を組み込まれる、表題「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  Ｆｌｕｉｄ  Ｆｌｏｗ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ａｎ  Ａｓｓａｙ  Ｄｅｖｉｃｅ」（米国仮特許出願第（２０１２年１月２０日出願）、米国仮特許出願第６１／５８８，７７２号号、代理人整理番号第ＣＤＳ５１１２ＵＳＰＳＰ号、第１発明者Ｊａｍｅｓ  Ｋａｎａｌｅｙ）に記載されるように、毛管ピペットによって採取され得る。
【００５１】
好ましくは、サンプル添加区画、検出区画、及び吸上区画を含む流路全体は、基材との関係において実質的に垂直であり、流路内にサンプルの側方流動を生じることができる、高さ、直径及び相互の間隔を有する突起部を含む。
【００５２】
上記の実施形態のいずれかにおいて、装置は好ましくは使い捨てアッセイ装置である。アッセイ装置は、取り扱い及び保護の容易性のためにハウジング内に収容され得る。アッセイ装置がこのようなハウジング内に収容される場合、ハウジングは好ましくはサンプルをアッセイ装置に添加するためのポートを含む。
【００５３】
本発明のアッセイ装置は、本発明のアッセイ装置において実行された、アッセイ装置の結果を読むための装置（読み取り機）と共に使用され得る。読み取り機は、光検出器などの検出要素から発信されるか、又は反射される信号を読取るための手段、及び一体型の読み取り機又は別個のコンピュータ内に含まれ得るマイクロプロセッサなどの、信号を処理し結果を表示するための手段を含む。好適な読み取り機は、米国特許出願公開第２００７／０２３１８８３号、及び米国特許第７，４１６，７００号の実施例に記載され、これらは両方とも本明細書において参照によりその全体が組み込まれる。
【００５４】
別の実施形態は、アッセイ装置で実行されるアッセイの結果を読み取るための装置であり、この装置は、アッセイ装置の既定される位置に存在する少なくとも１つの検出要素から発信又は反射される信号を読取ることができる検出器を含む。上記の実施形態のいずれかにおいて、読み取りは好ましくは、色、蛍光、放射能又は酵素活性の検出及び／又は数量化から選択される。
【００５５】
本発明の別の態様は、１つ又は２つ以上の関心の検体の検出のために、液体サンプルのアッセイを実行する方法を対象とする。関心の検体を含む液体サンプルは、例えば、装置のハウジングのポートを通じて、又は指先穿刺採血の場合においてサンプル添加区画に直接指を触れることによって、アッセイ装置のサンプル添加区画に堆積される。サンプルは、毛管現象により任意のフィルターを通じ、試薬区画へと移動し、ここで試薬材料を溶解させる。好ましい実施形態において、サンプルは、サンドイッチタイプアッセイにおいて、直接的又は間接的に（例えば、抗体を通じて）検出要素と反応する。サンプルは、溶解した試薬のプルームを有する試薬区画から離れるように流れ、検出区画へと流れる。
【００５６】
次に、サンプルは、毛管現象によって、検出区画へと移動する。この検出区画において、検体又は対照を表す信号が生成される。好ましい実施形態において、検出要素を有するサンプル又は１つ又は２つ以上の試薬が、検出区画の表面上の抗体などによって捕捉され、検体又は対照の存在又は濃度を表す信号が生成される。上記の読み取り機又は検出器は、その後検体又は対照の存在又は濃度を判定するために、検出区画において生成される信号を読取るために使用される。サンプルは、検出区画から吸上区画へと移動する。読み取り機は、検出区画を通じてサンプルが移動した直後又は少し後に信号を読取ることができる。また、検出区画から離れた、検出要素などのいずれかの非結合試薬を洗浄するために、サンプルの後に装置を通じて１つ又は２つ以上の洗浄液が添加され得る。
【００５７】
本発明の実施形態による、方法、アッセイ装置及び読み取り機は、多くの利点を有する。「中断洗浄」の概念は、以下の係属出願に記載される様々なアッセイ装置において使用され得る：「Ｌｏｗ  Ｖｏｌｕｍｅ  Ａｓｓａｙ  Ｄｅｖｉｃｅ  Ｈａｖｉｎｇ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ」（米国特許出願第６１／５８８，７５８号、代理人整理番号第ＣＤＳ５１１１ＵＳＰＳＰ号、第１発明者Ｐｈｉｌ  Ｈｏｓｉｍｅｒ）、「Ａｓｓａｙ  Ｄｅｖｉｃｅ  Ｈａｖｉｎｇ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｃｅｌｌｓ」（米国仮特許出願第６１／５８８，７３８、代理人整理番号第ＣＤＳ５１０４ＵＳＰＳＰ号、第１発明者Ｚｈｏｎｇ  Ｄｉｎｇ）、「Ａｓｓａｙ  Ｄｅｖｉｃｅ  Ｈａｖｉｎｇ  Ｕｎｉｆｏｒｍ  Ｆｌｏｗ  Ａｒｏｕｎｄ  Ｃｏｒｎｅｒｓ」（米国借り特許出願第６１／５８８，７４５号、代理人整理番号第ＣＤＳ５１１０ＵＳＰＳＰ号、第１発明者Ｊａｍｅｓ  Ｋａｎａｌｅｙ）「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  Ｆｌｕｉｄ  Ｆｌｏｗ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ａｎ  Ａｓｓａｙ  Ｄｅｖｉｃｅ」（米国仮特許出願第６１／５８８，７７２号、代理人整理番号第ＣＤＳ５１１２ＵＳＰＳＰ号、第１発明者Ｊａｍｅｓ  Ｋａｎａｌｅｙ）、及び「Ａｓｓａｙ  Ｄｅｖｉｃｅ  Ｈａｖｉｎｇ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｉｎｇ」（米国仮特許出願第６１／５８８，７７９号、代理人整理番号第ＣＤＳ５１１３ＵＳＰＳＰ号、第１発明者Ｓｕｅ  Ｄａｎｉｅｌｓｏｎ）、全て、２０１２年１月２０日に出願され、全て本明細においてその全体が組み込まれる。
【００５８】
本発明によるアッセイ装置は、図４に示されるようにパッケージ化され得る。パッケージ１００は、上部カバー１２０、フィルター１３０、親水性テープ１４０、アッセイ装置（チップ）１５０、及び基部カバー１６０など、アッセイ機能のために必要な機能的要素の全てを含む。
【００５９】
本発明は本明細書において示される特定の実施形態に限定されないことが理解される。以下の実施例は例示目的のために提供され、本発明の領域を限定することを意図されず、本発明は、添付の請求項及びその等価物によってのみ限定される。
【実施例】
【００６０】
（実施例１）
シッフ塩基連結による、タンパク質の共有結合不動化のために、表面上に酸化デキストランを有する、Ｚｅｏｎｏｒ（Ｚｅｏｎ，Ｊａｐａｎ）で作製されたプラスチック基材チップが使用された。ＮＴｐｒｏＢＮＰチップに関し、蛍光で標識されたＡｎｔｉ−ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰモノクローナル抗体は、試薬区画を生成するために堆積させ、かつ乾燥させた。Ａｎｔｉ−ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰモノクローナル抗体は、試薬区画を生成するために堆積させ、かつ乾燥させた。より良好な毛管流のためにサンプルの湿潤性を増加させるために、装置に少量のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−４５が堆積された。装置のサンプル区画にサンプルが添加され、微細柱状物の毛管現象が、流路を通じて吸上区画にサンプルを分配した。典型的なアッセイ時間は約１０分間であった。検出区画における、蛍光標識された複合物からの信号強度は、プロトタイプ線形照明蛍光スキャナーにおいて記録された。カルバマゼピンチップに関し、カルバマゼピン検出試薬は、カルバマゼピンハプテン及び蛍光標識を、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）に共有結合させることによって調整され得る。フェノバルビタール検出試薬は、フェノバルビタールハプテン及び蛍光標識をＢＳＡに共有結合させることによって調整された。モノクローナル及びフェノバルビタール抗体を堆積させ、かつ乾燥させ、検出区画を生成した。異なる濃度のＮＴｐｒｏＢＮＰ、カルバマゼピン及びフェノバルビタールを、ヒト血清に混ぜて、データを生成した。より小さい体積のチップ設計（例えば、図２に図示される）及びより小さい設置面積のチップ設計（例えば、図３に図示される）を使用して実験した。
【００６１】
本発明の第１実施形態において、血漿から赤血球を分離するために、指先穿刺サンプルからの全血が試験装置のフィルターに直接適用された。血漿はフィルターから微細柱状物サンプル区画内の毛管空間に入り、流体流路の端部まで、毛管流によって進行する。フィルター膜のサンプル区画の微細柱状物表面への接触は、血漿が膜から流れるために重要である。接触が生じる場所において、微細柱状物構造内の毛管力が、膜から血漿を吸い上げ、血漿の流れを生じる。
【００６２】
従来技術の設計において、アッセイには約３５μＬの血漿しか必要とされなかったにもかかわらず、２００μＬの全血がフィルターに適用された。全サンプル使用の効率性は、１７．５％にすぎなかった。
【００６３】
本発明は、より小さい体積のチップ設計、及びより少ない体積、より小さい設置面積のチップ設計において、２５μＬの全血のみで使用されることが意図される。アッセイに必要な９μＬの血漿を得るために、４５％のヘマトクリット値で、２５μＬの全血に対して少なくとも３６％の濾過効率性を必要とする。
【００６４】
この装置の別の実施形態において、赤血球から血漿を分離するために、フィルター膜を使用せずに、全血が微細柱状物表面に直接適用され得る。全血の濃度は血清又は血漿よりも遥かに高いため、微細柱状物空間内の流動抵抗もまた遥かに高く、これにより非常に遅い流れ、又は流れの停止が生じる。また、全血の濃度は、患者間のヘマトクリット値の大きな差異により、多様に変化し得る。微細柱状物空間内の全血の一定の流れを達成するため、流動抵抗を減少させる、又は毛管力を増加させる方法が必要とされた。
【００６５】
この実施形態において、微細柱状物空間内の全血の流れは、より小さい体積のチップ設計、及びより小さい体積、より小さい設置面積のチップ設計の、サンプル添加区画内又はその付近において、非溶血性、非イオン性、良好な湿潤性の界面活性剤を含む溶液を小さな体積（１μＬ以下）で添加することによって促進された。この予備湿潤溶液を添加した直後、１０〜１５μＬの全血がサンプル添加区画に直接添加される。界面活性剤含有溶液は、表面張力を低減させ、流体前部における赤血球の蓄積を防止するように機能する。微細柱状物構造内の毛管力は、試薬（コンジュゲート）区画を通じ、検出（反応）チャネルを通じて、吸上区画内へと全血の流れを前進させる。
【００６６】
検出（反応）チャネルを覆う疎水性テープの追加は、微細柱状物空間内における毛管力を増加させ、チップを通じた全血の流れを更に改善させるべく機能する。検出コンジュゲートの反応及び捕捉免疫物質と、標的検体との間の反応は、全血の存在下において生じる。しかしながら、赤血球が、検出コンジュゲートの光学的測定と干渉するため、これらは読み取りが行われる前に取り除かれなくてはならない。これは、最終的な読み取りの前に洗浄ことを追加することによって達成される。
【００６７】
本発明による方法は、サンプル量を制御し、かつ検出区画（チャネル）から血球及び他の干渉物質を除去するために、中断洗浄を使用する。血液サンプルが吸上区画を所定の水準まで充填した時点において、洗浄流体を添加することにより、サンプル量が制御される。微細柱状物は、均一な様式で列ごとに充填する設計になっているため、流れは、サンプルがチップを目標体積まで充填する時点を判定するため、手動又は器具により判定され得る。目標サンプル量が達成されると、本発明により、より小さい体積のチップ設計においては図２に、より小さい体積、より小さい設置面積のチップ設計に関しては図３に示されるように、検出チャネルの上流の位置において、微細柱状物チャネルに洗浄流体が追加される。
【００６８】
下流検出（反応）チャネルからサンプルを効率的に除去するために両方向に流れ、上流の柱状物空間内のサンプルが検出（反応）チャネルに進入するのを防ぐ、ドーム状の液滴を形成するように、１０〜１５μＬの洗浄流体液滴が適用される。
【００６９】
洗浄流体は典型的には、０．１Ｍのリン酸ナトリウム、１％のウシ血清アルブミン、及び０．１％の界面活性剤から構成される。界面活性剤は、毛管力による流体の流れを可能にするために、表面張力を低減させるために、微細柱状物空間内全体にわたって必要とされる。従来技術のチップ設計において、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−４５が好ましい界面活性剤であり、これは、微細柱状物チップのサンプル区画内において堆積され、乾燥させた。チップ内で全血を一定して流すためには、サンプル区画内におけるＴＸ−４５の堆積は最適ではない。微細柱状物チップ内の全血の流量を改善するために、いくつかの異なる非イオン性界面活性剤が示された。図５は、サンプル添加区画に様々な界面活性剤が堆積された、より小さい体積のチップ設計における、吸上区画の開始位置に全血が到達するまでの平均流れ時間と、吸上区画の終了位置に到達するまでの時間を示す。結果は、ＴＸ−４５と比較して、試験された全ての活性剤において、全血がより早く流れることを示している。
【００７０】
これらの結果は、単一の全血サンプルで得られた。全血は個人により大きく異なるため、流量の大きなばらつきが予測される。より高いヘマトクリット値のサンプルではより低い流量が観察され、より高いヘマトクリット値においてサンプルの停止が観察された。全血の連続的な流れは、サンプル添加区画における好ましい界面活性剤の使用により、及びサンプル添加の前の同じ界面活性剤を含む予備湿潤溶液の添加によって得られた。
【００７１】
好ましい予備湿潤及び洗浄溶液は、界面活性剤Ｓｕｒｆｙｎｏｌ（登録商標）４８５、又はＳｕｒｆｙｎｏｌ（登録商標）４６５を含む。他の好ましい界面活性剤には、Ｓｉｌｗｅｔ（登録商標）Ｌ７６００、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｌ６４、Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  １０Ｇ、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−３０５、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−４５、及びＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００が挙げられる。０．０５％〜１％の界面活性剤濃度が好ましい。
【００７２】
中断洗浄液を有する全血の試験結果：静脈採血によりＥＤＴＡ全血が得られ、表１に示される濃度まで、カルバマゼピン及びフェノバルビタールを混ぜた。吸上区画及び検出区画の２／３（図２参照）をテープで被覆した、より少ない堆積チップが、中断洗浄プロトコルを評価するために使用された。各多重チップは、カルバマゼピンのための不動化捕捉抗体からなる検出（反応）区画、及びフェノバルビタール抗体で不動化された第２検出（反応）区画を含む。ＢＳＡのコンジュゲート、及び各薬剤の蛍光物質が、試薬（コンジュゲート）区画に堆積された。
【００７３】
リン酸緩衝生理食塩水内における、１％  ＢＳＡ、０．１％のＴＸ−１００を含む１マイクロリットルの洗浄流体が、サンプル区画内に滴下され、微細柱状物空間に自由に完全に進入させ、その直後に１５マイクロリットルの全血サンプルを分配した。流体が吸上区画の５０％を充填するまで、流体前部が目視検査によって監視された。同じ洗浄流体１５マイクロリットルがその後、チャネル（試薬添加区画）にわたって適用され、吸上区画が完全に充填されるまで流体前部が監視された。チップがカートリッジへと組み立てられ、蛍光読み取り機で読み取られた。
【表１】
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【００７４】
血漿を全血から分離するため、各全血サンプルのアリコートは遠心分離された。各アリコートからの血漿は、同じチップ設計により回収及び評価された。１５マイクロリットルの血漿が、サンプル区画に直接添加された。チップは目視検査により監視され、吸上区画が完全に充填されたものと判断された直後に蛍光読み取り機で読み取られた。
【００７５】
図６及び図７における、生じた用量反応の曲線は、記載される中断洗浄液プロトコルを使用して、全血が少量で微細柱状物チップに直接適用され、血漿において得られるものと同様の結果を生じ得ることを示している。上記のカルバマゼピン及びフェノバルビタール競合アッセイの両方とも、全血の存在下で行われ、予測されたアッセイの結果を生じた。
【００７６】
フィルター及び中断洗浄液を伴う全血：本発明の別の実施形態において、少量の全血は、上記の濾過及び中断洗浄液概念を組み合わせることにより、微細柱状物装置において使用され得る。フィルターは、２５マイクロリットル以下の全血の血漿から赤血球を分離するために使用された。微細柱状構造に移送される血漿量は、中断洗浄液プロトコルと組み合わせ使用される際に遥かに少ないことがある。この実施形態において、必要とされる血漿量は、アッセイの適切な検出信号を生じるために十分であるが、チップの全体積を充填するために必要なほど大きな量ではない。洗浄液と組み合わせた際、２〜６マイクロリットルほどの少量の血漿量が使用され得る。
【００７７】
本実施形態において、全血がフィルターに適用される。血漿ろ液が、サンプル添加区画内の微細柱状物空間に移送され、試薬及び検出区画を通じて流れ続ける。流れ前部は、目視検査によって、又は器具によって、これが吸上区画の画定された距離に到達するまで監視された。洗浄流体が上流チャネルに適用され、これは追加的なサンプルがチャネルに入るのを防ぎ、よってサンプル量を制御する。洗浄流体流は、両方向に流れ、これにより追加的な血漿がチャネルに入るのを防ぎ、血漿及び残ったコンジュゲートを検出（反応）チャネルから出す。洗浄流体はまた、残ったチップ体積を充填するように機能する。流体前部は、吸上区画が完全に充填される際に、監視され、読み取られる。中断洗浄液は、一定のサンプル量がチップ内に入った後に適用され得る。理想的には、この体積は、試薬区画内のいずれかの試薬材料（例えば、コンジュゲート物質）の完全な溶解を可能にするが、適切な洗浄のために、吸上区画内に十分な空間を残す。
【００７８】
直後の洗浄を伴う全血：別の実施形態において、直後に洗浄を伴い、全血を使用して、蛍光読み取り機において用量反応曲線が示された。使用されたチップは、図２に図示されるより小さい体積のチップ設計であり、ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ試薬を堆積され（検出／試薬区画における検出検体ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ、及び試薬／コンジュゲート区画における捕捉抗体ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ）テープで吸上区画及び検出区画チャネルを被覆する。ＥＤＴＡ全血からなるサンプルにおよそ３５０００ｐｇ／ｍＬのＮＴｐｒｏＢＮＰを含有する血清サンプルが、同等の体積の血漿を排除した後に添加され、７５、２２２０、４５５０及び８９４２ｐｇ／ｍＬのＮＴｐｒｏＢＮＰ濃度が得られた。リン酸緩衝生理食塩水中において、１％のウシ血清アルブミン、０．１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．３ｍｇ／ｍＬのマウスＩｇＧ、０．３ｍｇ／ｍＬウシγグロブリンを含む溶液が、予備湿潤及び洗浄流体として使用された。
【００７９】
４μＬの全血サンプルをサンプル添加区画に追加した後に、流路を事前湿潤させるために、サンプル添加区画に１μＬの洗浄流体を添加することにより、アッセイプロトコルが構成される。サンプルが、流路の微細柱状物空間内に流され、その後２μＬの洗浄流体がサンプル添加区画の後ろに添加される。洗浄流体は、柱状物空間内に完全に流され、その後、洗浄ステップが更に２回繰り返された。吸上区画が完全に充填されるまで流体流は監視され、その後読み取り機においてチップが読み取られる。
【００８０】
図８は、様々なＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ濃度において、全血サンプルに関して得られた３回の反復データの平均流れ時間を示す。これらの結果は、全血サンプルに関する流路全体にわたる流量が、大きく変化しないことを示す。図９は、各試験サンプルにおける、蛍光読み取り機において得られる蛍光反応の平均ピーク面積対ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ濃度をプロットする。図９は、全血サンプルに関して得られた用量反応曲線を、同様のＮＴ−ｐｒｏＢＮＰ濃度の血清サンプルと比較して示す。これらの結果はしたがって、図２に示される、より小さい体積のチップの流路に全血を適用し、流れを促進するために全血を添加する前に洗浄流体を適用し、流路を洗浄するために全血を添加した後に追加的な洗浄流体を適用することにより、蛍光読み取り機により、用量反応曲線が得られることを示している。
【００８１】
（実施例２）
シッフ塩基連結による、タンパク質の共有結合不動化のために、表面上に酸化デキストランを有する、Ｚｅｏｎｏｒ（Ｚｅｏｎ，Ｊａｐａｎ）で作製されたアッセイ装置が使用された。蛍光で標識されたＡｎｔｉ−ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰモノクローナル抗体は、試薬区画を生成するために堆積させ、かつ乾燥させた。Ａｎｔｉ−ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰモノクローナル抗体は、試薬区画を生成するために堆積させ、かつ乾燥させた。より良好な毛管流のためにサンプルの湿潤性を増加させるために、装置に少量のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−４５が堆積された。ＮＴ−ｐｒｏＢＮＰを混ぜた血清が装置のサンプル区画に添加され、微細柱状物の毛管現象が、流路を通じて吸上区画にサンプルを分配した。１５マイクロメートルのサンプル量が低体積装置設計Ｒ２．０２、Ｒ２．０４、Ｒ２．０９及びＲ３．１６で利用された。Ｒ１．０２装置設計は、図１に示されるような、２００ｍＬの全血で使用することを意図される、対照装置であった。Ｒ１．０２装置は、この実施例において、４５ｍＬの血清で試験された。典型的なアッセイ時間は約１０分間であった。検出区画における、蛍光標識された複合物からの信号強度は、プロトタイプ線形照明蛍光スキャナーにおいて記録された。
【００８２】
図１０及び図１１に図示されるように、棒線及び曲線Ａ（Ｒ２．０２）は、単一の試薬セル、及び０．５ｍｍの幅を備える検出区画を備えるそのまま縮小された検出区画を有する小型装置であり、一方で棒線及び曲線Ｂ（Ｒ２．０９）は、２つの試薬セル及び１ｍｍのより広い検出区画を有する小型装置である。２つの追加的な装置のデータがまた、比較のために含まれる。曲線及び棒線Ｃ（Ｒ１．０２）は、２００μＬの全血サンプル量を有する従来的な大きさの装置であり、曲線及び棒線Ｄ（Ｒ２．０４）は１ｍｍの検出区画幅を有する単一の試薬セル装置である。曲線Ｅ（Ｒ３．１６）は、二重試薬セル及び１ｍｍ幅の検出区画を含む。
【００８３】
（実施例３）
シッフ塩基連結による、タンパク質の共有結合不動化のために表面に酸化デキストランを有する、Ｚｅｏｎｏｒ（Ｚｅｏｎ，Ｊａｐａｎ）で作製された二重試薬セルを有する小型アッセイ装置が使用された。蛍光で標識された抗プロカルシトニンモノクローナル抗体は、試薬区画を生成するために堆積させ、かつ乾燥させた。抗プロカルシトニンモノクローナル抗体は、試薬区画を生成するために堆積させ、かつ乾燥させた。より良好な毛管流のためにサンプルの湿潤性を増加させるために、装置に少量のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−４５が堆積された。この実施例において、プロカルシトニンを含有する２５マイクロリットルの全血が、アッセイ装置のサンプル添加区画と接触するフィルターに適用された。フィルターからサンプル添加区画へと血漿が移送され、その後、毛管力によって流路を通じて吸上区画へと移動する。流体流は、目視検査によって監視され、流体流の全部が吸上区画の２０％を満たしたときに、０．０１Ｍリン酸緩衝液、０．００２７Ｍ塩化カリウム、０．１３７Ｍ塩化ナトリウム、１％ウシ血清アルブミン、及び０．１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含む１０ｍＬの洗浄流体が試薬添加区画に追加された。吸上区画が完全に充填されたものと判定された直後に、アッセイ装置は蛍光読み取り機に挿入された。検出区画内の蛍光信号が測定され、反応曲線のピーク面積が、各サンプルに関して判定された。全血サンプルが、ヘパリンリチウム管に通常のドナーから新しく採取された。１０μｇ／ｍＬのプロカルシトニンを含む濃縮血清サンプルが、全血のアリコートに添加されて、０、０．４、５、２０及び３５ｎｇ／ｍＬプロカルシトニンを含むサンプルを生成した。図１２は、各サンプル対プロカルシトニン濃度の、５つの反復した結果の平均ピーク面積をプロットする。図１２が示すように、小さなサンプル量の使用（すなわち、２５μＬ全血／１０μＬ洗浄液）の使用は、広範な検体濃度にわたり、良好な結果をもたらす。
【００８４】
（実施例４）
シッフ塩基連結による、タンパク質の共有結合不動化のために表面に酸化デキストランを有する、Ｚｅｏｎｏｒ（Ｚｅｏｎ，Ｊａｐａｎ）で作製された二重試薬セルを有する小型アッセイ装置が使用された。蛍光で標識された抗プロカルシトニンモノクローナル抗体は、試薬区画を生成するために堆積させ、かつ乾燥させた。抗プロカルシトニンモノクローナル抗体は、試薬区画を生成するために堆積させ、かつ乾燥させた。より良好な毛管流のためにサンプルの湿潤性を増加させるために、装置に少量のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−４５が堆積された。この実施例において、プロカルシトニンを含有する３５μＬの全血が、アッセイ装置のサンプル添加区画と接触するフィルターに適用された。フィルターからサンプル添加区画へと血漿が移送され、その後、毛管力によって流路を通じて吸上区画へと移動する。流量は目視検査により監視され、吸上区画が完全に充填されたものと判断された直後に蛍光読み取り機に挿入された。検出区画内の蛍光信号が測定され、反応曲線のピーク面積が、各サンプルに関して判定された。全血サンプルが、ＥＤＴＡ管に通常のドナーから新しく採取された。１０μｇ／ｍＬのプロカルシトニンの濃縮血清サンプルが、全血のアリコートに添加されて、０、０．４、５、及び２０ｎｇ／ｍＬプロカルシトニンを含むサンプルを生成した。図１３は、各サンプル対プロカルシトニン濃度の、３つの反復した結果の平均ピーク面積をプロットする。図１３が示すように、小さなサンプル量の使用（すなわち、３５μＬ全血）の使用は、広範な検体濃度にわたり、良好な結果をもたらす。
【００８５】
当業者は、本発明及び本明細書において記載されるその実施形態は、具体的に記載されたもの以外の変化形態及び修正を含むことを理解する。本発明は全ての変化形態及び修正を含むものとして理解されべきである。本発明はまた、本明細書において参照される全てのこと及び特徴を個別に、又は包括的に、かつ工程又は特徴のいずれかの２つ又は３つ以上のうちのいずれか及び全ての組み合わせを含む。
【００８６】
同時係属出願、表題「Ｌｏｗ  Ｖｏｌｕｍｅ  Ａｓｓａｙ  Ｄｅｖｉｃｅ  Ｈａｖｉｎｇ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ」（米国仮特許出願第６１／５８８，７５８号、代理人整理番号第ＣＤＳ５１１１ＵＳＰＳＰ号、第１発明者Ｐｈｉｌ  Ｈｏｓｉｍｅｒ）、「Ａｓｓａｙ  Ｄｅｖｉｃｅ  Ｈａｖｉｎｇ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｃｅｌｌｓ」（米国仮特許出願第６１／５８８，７３８、代理人整理番号第ＣＤＳ５１０４ＵＳＰＳＰ号、第１発明者Ｚｈｏｎｇ  Ｄｉｎｇ）、「Ａｓｓａｙ  Ｄｅｖｉｃｅ  Ｈａｖｉｎｇ  Ｕｎｉｆｏｒｍ  Ｆｌｏｗ  Ａｒｏｕｎｄ  Ｃｏｒｎｅｒｓ」（米国仮特許出願第６１／５８８，７４５号、代理人整理番号第ＣＤＳ５１１０ＵＳＰＳＰ号、第１発明者Ｊａｍｅｓ  Ｋａｎａｌｅｙ）「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  Ｆｌｕｉｄ  Ｆｌｏｗ  Ｔｈｒｏｕｇｈ  Ａｎ  Ａｓｓａｙ  Ｄｅｖｉｃｅ」（米国仮特許出願第６１／５８８，７７２号、代理人整理番号第ＣＤＳ５１１２ＵＳＰＳＰ号、第１発明者Ｊａｍｅｓ  Ｋａｎａｌｅｙ）、及び「Ａｓｓａｙ  Ｄｅｖｉｃｅ  Ｈａｖｉｎｇ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｉｎｇ」（米国仮特許出願第６１／５８８，７７９号、代理人整理番号第ＣＤＳ５１１３ＵＳＰＳＰ号、第１発明者：Ｓｕｅ  Ｄａｎｉｅｌｓｏｎ）は全て本発明と同日付で出願され、全て本明細書において参照によりそれらの全体が組み込まれる。
【００８７】
〔実施の態様〕
（１）  液体サンプル添加区画と、
試薬材料を含む、前記サンプル添加区画の下流にあり、これと流体連通する試薬区画と、
捕捉要素が結合された、前記試薬区画と流体連通する検出区画と、
前記検出区画から流れる液体サンプルを受ける能力を有する、前記検出区画と流体連通する吸上区画とを含み、
前記サンプル添加区画、前記試薬区画、前記検出区画及び前記吸上区画が流体流路を画定し、
前記サンプル添加区画の下流、かつ前記検出区画の上流の、前記流体流路に沿い、これと流体連通する試薬添加区画を更に含む、アッセイ装置。
（２）  前記流体流路の少なくとも一部が、基材表面、及び前記基材表面から実質的に垂直に延びる突起部を有し、前記突起部は高さと、断面と、前記基材表面と平行な毛管流を生じることができる前記突起部間の空間を画定する、互いの間の距離とを有する、実施態様１に記載のアッセイ装置。
（３）  前記試薬添加区画が、前記試薬区画の下流にある、実施態様１に記載のアッセイ装置。
（４）  前記試薬添加区画がリザーバを含む、実施態様１に記載のアッセイ装置。
（５）  前記試薬材料が標識された試薬材料を含む、実施態様１に記載のアッセイ装置。
（６）  前記検出区画が、これに結合する捕捉要素を含む、実施態様１に記載のアッセイ装置。
（７）  前記サンプル添加区画が上部に堆積された界面活性剤を含む、実施態様１に記載のアッセイ装置。
（８）  前記サンプル添加区画上にフィルターを更に含み、サンプルが前記流体流路に入る前に前記フィルターを通過する、実施態様１に記載のアッセイ装置。
（９）  前記検出区画を少なくとも部分的に被覆する親水性テープを更に含む、実施態様１に記載のアッセイ装置。
（１０）  アッセイ装置のサンプル量を制御する方法であって、
液体サンプル添加区画を提供することと、
試薬材料を含む、前記サンプル添加区画の下流にあり、これと流体連通する試薬区画を提供することと、
前記試薬区画と流体連通する検出区画を提供することと、
前記検出区画から流れる液体サンプルを受ける能力を有する、前記検出区画と流体連通する吸上区画であって、前記サンプル添加区画、前記試薬区画、前記検出区画及び前記吸上区画が流体流路を画定する、吸上区画を提供することと、
前記サンプル添加区画の下流、かつ前記検出区画の上流の、前記流体流路に沿い、これと流体連通する試薬添加区画を更に提供することと、
前記サンプル添加区画にサンプルを添加することであって、前記サンプルが前記流体流路を通じて移動する、ことと、
試薬を前記試薬添加区画に添加することであって、前記試薬が前記流体流路を通じた前記サンプルの流れを中断し、それによって前記流体流路内のサンプル量を制御する、こととを含む、方法。
【００８８】
（１１）  前記サンプルが前記吸上区画に移動した際に、前記試薬が前記試薬添加区画に添加される、実施態様１０に記載の方法。
（１２）  前記サンプルが、前記吸上区画の５０％まで移動している、実施態様１１に記載の方法。
（１３）  前記試薬添加区画に添加された前記試薬が洗浄試薬である、実施態様１０に記載の方法。
（１４）  前記サンプル添加区画上に界面活性剤を堆積させることを更に含む、実施態様１０に記載の方法。
（１５）  前記サンプルが前記サンプル添加区画に添加される前に、前記サンプル添加区画上に前記界面活性剤が堆積される、実施態様１４に記載の方法。
（１６）  前記サンプル添加区画上にフィルターを提供することを更に含み、前記サンプルは前記流体流路に入る前に前記フィルターを通過する、実施態様１０に記載の方法。
（１７）  前記検出区画を少なくとも部分的に被覆する親水性テープを提供することを更に含む、実施態様１０に記載の方法。
（１８）  １つ又は２つ以上の関心の検体の検出のために、液体サンプルのアッセイを実行する方法であって、
液体サンプル添加区画を提供することと、
試薬材料を含む、前記サンプル添加区画の下流にあり、これと流体連通する試薬区画を提供することと、
前記試薬区画と流体連通する検出区画を提供することと、
前記検出区画から流れる液体サンプルを受ける能力を有する、前記検出区画と流体連通する吸上区画であって、前記サンプル添加区画、前記試薬区画、前記検出区画及び前記吸上区画が流体流路を画定する、吸上区画を提供することと、
前記サンプル添加区画の下流、かつ前記検出区画の上流の、前記流体流路に沿い、これと流体連通する試薬添加区画を更に提供することと、
前記関心の検体を含む液体サンプルを前記サンプル添加区画に添加することと、
毛管現象により、前記サンプルを前記試薬区画に移動させることであって、前記サンプルが前記試薬材料を溶解する、ことと、
前記試薬材料が溶解した前記試薬区画から前記検出区画へと、毛管現象により前記サンプルを流すことであって、生成される信号を読取ることによって前記検出区画で、前記関心の検体が検出される、ことと、
前記サンプル及びいずれかの非結合物質を前記吸上区画へと流すこととを含み、
前記方法は、試薬を前記試薬添加区画に添加することであって、前記試薬が前記流体流路を通じた前記サンプルの流れを中断し、それによって前記流体流路内のサンプル量を制御する、ことを更に含む、方法。
（１９）  前記サンプルが前記吸上区画に移動した際に、前記試薬が前記試薬添加区画に添加される、実施態様１８に記載の方法。
（２０）  前記サンプルが、前記吸上区画の５０％まで移動している、実施態様１９に記載の方法。
【００８９】
（２１）  前記試薬添加区画に添加された前記試薬が洗浄試薬である、実施態様１８に記載の方法。
（２２）  前記サンプルは、前記検出区画から前記吸上区画へと移動し、前記信号は、前記サンプルが前記検出区画を通じて移動した直後又は少し後に読まれ得る、実施態様１８に記載の方法。
（２３）  いずれかの非結合検出要素を前記検出区画から流すために、１つ又は２つ以上の洗浄液が、前記サンプルの後に前記アッセイ装置を通じて流され得る、実施態様１８に記載の方法。
（２４）  前記試薬材料が、検出要素で標識されている、実施態様１８に記載の方法。
（２５）  前記検出区画が、前記検出要素を捕捉するための捕捉要素を含む、実施態様１８に記載の方法。
（２６）  前記信号が、前記検出要素により生成される、実施態様２５に記載の方法。
【図１】
0006395998.tif 000003
【図２】
0006395998.tif 000004
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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