(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
手順１：エネルギービームにより冬虫夏草の宿主であるコウモリガ幼虫の体表に傷を作り、当該エネルギービームがレーザーであり、当該レーザーが照射するエネルギー強度を０．５−２．５Ｗとし、当該レーザーが照射する投与時間を１秒とし、当該レーザーを同一部位に照射する投与回数を３−４回とし、
手順２：中華被毛胞の菌液により当該コウモリガ幼虫の虫体に接触する、
という手順を含み、
前記コウモリガ幼虫は３−４齢のコウモリガ幼虫である、
冬虫夏草の宿主への感染率と子実体の生成率を高める方法。
【請求項２】
当該傷の位置が当該コウモリガ幼虫の尾部又は頸部である、請求項１に記載の冬虫夏草の宿主への感染率と子実体の生成率を高める方法。
【請求項３】
当該傷の個数が２−３箇所で、当該傷の大きさが０．１ｍｍ−５ｍｍである、請求項１に記載の冬虫夏草の宿主への感染率と子実体の生成率を高める方法。
【請求項４】
当該中華被毛胞の菌液による当該コウモリガ幼虫の虫体への接触方法が噴霧、塗布又は浸透のいずれかである、請求項１に記載の冬虫夏草の宿主への感染率と子実体の生成率を高める方法。
【請求項５】
手順１と手順２前後の当該コウモリガ幼虫の飼育基質に、中華被毛胞の菌液を更に加える、請求項１に記載の冬虫夏草の宿主への感染率と子実体の生成率を高める方法。
【請求項６】
当該飼育基質への中華被毛胞の菌液の添加率が２０−４０％（v/v）である、請求項５に記載の冬虫夏草の宿主への感染率と子実体の生成率を高める方法。
【請求項７】
当該飼育基質の構成が腐植土１５−２５％、川砂２０−３０％、木屑５０−６５％である、請求項５に記載の冬虫夏草の宿主への感染率と子実体の生成率を高める方法。
【請求項８】
手順１と手順２前後のコウモリガ幼虫の飼料に中華被毛胞の菌液を更に加える、請求項１に記載の冬虫夏草の宿主への感染率と子実体の生成率を高める方法。
【請求項９】
当該飼料への中華被毛胞の菌液の添加率が５−２０％（v/v）である、請求項８に記載の冬虫夏草の宿主への感染率と子実体の生成率を高める方法。
【請求項１０】
腐植土１５−２５％、川砂２０−３０％、木屑５０−６５％で構成され、中華被毛胞の菌液を更に加えた、
冬虫夏草の宿主への感染率と子実体の生成率を高める飼育基質。
【請求項１１】
当該中華被毛胞の菌液の添加率が２０−４０％（v/v）である、請求項１０に記載の冬虫夏草の宿主への感染率と子実体の生成率を高める飼育基質。
【請求項１２】
当該飼育基質を冬虫夏草の宿主であるコウモリガの幼虫の、
手順１：エネルギービームにより冬虫夏草の宿主であるコウモリガ幼虫の体表に傷を作り、当該エネルギービームがレーザーであり、当該レーザーが照射するエネルギー強度を０．５−２．５Ｗとし、当該レーザーが照射する投与時間を１秒とし、当該レーザーを同一部位に照射する投与回数を３−４回とし、
手順２：中華被毛胞の菌液により当該コウモリガ幼虫の虫体に接触する、
手順１と手順２前後の飼育に使う、請求項１０に記載の冬虫夏草の宿主への感染率と子実体の生成率を高める飼育基質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一種の真菌の宿主への感染の方法に関し、具体的には、中華被毛胞（ヒルステラシネンシス菌糸・Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）菌種の冬虫夏草の宿主である幼虫への感染の技術、特に冬虫夏草の子実体の人工培養が加速できる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｂｅｒｋ．）Ｓａｃｃ．）は青蔵高原にある海抜３，５００メートル以上の一部地域で生み出される希少で高価な漢方薬剤であり、その味は甘酸っぱく、平性、香りがあり、肺・腎の２経脈に入ると言われる。肺気（肺機能）の保持、実理、補虚（養分補充、体質強化）、解毒、止血、去痰の効能がある。      
【０００３】
冬虫夏草は昆虫病原糸状菌又は昆虫病原性糸状菌に属し、中華被毛胞菌（Ｈｉｒｓｕｔｅｌｌａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）とコウモリガ科（Ｈｅｐｉａｌｉｄａｅ）の幼虫により形成される複合体である。宿主は中華被毛胞菌がチョウ目コウモリガに寄生する幼虫体であり、宿主の組織球養分が消耗されるまでその養分を吸収してから、菌糸体とコウモリガ虫体が硬くてふっくらとした内生菌核（ｅｎｄｏｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ）を形成する。菌核形成後には、適切な環境のもとで冬虫夏草の子実体が生えてくる。
【０００４】
自然環境のもとでは、中華被毛胞菌の宿主であるコウモリガ幼虫への感染経路は、中華被毛胞菌の子嚢胞子が成熟してから地面に噴霧する時に、子嚢胞子が発芽して生成される分生子柄が虫の体表面に接触し、虫体の体表から虫体体内に入る。子嚢胞子がはじき出されてからは、その胞子の発芽・成長が栄養、温度、湿度、酸素など４つの環境要素の影響を受けるため、子嚢胞子の発芽率は１０−２０％に留まっている。そのため自然環境のもとでは中華被毛胞菌がコウモリガ幼虫を感染させる確率は非常に低い。
【０００５】
現在、幼虫を人工的に感染させる方法は中華被毛胞胞子液を宿主の体表に塗布すること、宿主の体内に注射すること又は飼料を混合して与え宿主の食道から宿主の体内に入れることを含む。
例えば中国特許出願番号：２０１０１０６０４４６０．７、付与公告番号：ＣＮ１０２１０６２３５Ｂ、発明名称：一種の冬虫夏草の全工程人工培養方法の特許文献では、一種の針状器具による中華被毛胞胞子液のコウモリガ幼虫体内への注射による感染方法を開示した。当該感染方法の欠点は操作速度が遅く、作業を行うのに労力を大量に投入しなければならず、なおかつ操作での不注意により虫の体表面の傷が簡単に広がりすぎるため、幼虫の体液が過量に流失して死んでしまうことである。
【０００６】
中国特許出願番号：２０１２０３３８５８３．Ｘ、付与公告番号：ＣＮ  １０２７９２８５５  Ｂ、発明名称：一種の冬虫夏草の宿主への感染に使う菌種材料と宿主への感染方法の特許文献では、一種の冬虫夏草の宿主への感染に使う菌種材料と宿主への感染方法を開示した。当該宿主への感染方法は冬虫夏草の宿主が感染する菌種材料の懸濁液体を冬虫夏草の宿主である幼虫の口内に注ぐ、又は冬虫夏草の宿主の飼料内に混ぜ合わせ、冬虫夏草の宿主を飼育するものである。当該感染方法の欠点は感染してから６−１２か月後にならなければ感染のピーク時期（感染率１００％）に達さず、感染硬化までの期間が１年にも及び、１年後には幼虫の生存率が低くなり、相対的に冬虫夏草の子実体の生産量も低くなることである。
【０００７】
前述の研究を総括すれば、現在すでに冬虫夏草の宿主への人工的な感染は実現できるものの、既存技術では未だに不十分な箇所がある。当該不十分な箇所は、感染後に宿主の死亡率が高く、感染率が低く、感染硬化期間が長いなどの問題点を克服しなければならず、既存技術では低死亡率、高感染率及び感染硬化期間の短縮を同時には達成できないことを含む。そのため、一種の高感染率・低死亡率を保つ冬虫夏草の宿主への人工感染方法をどのように開発するかが、本発明がここで解決を望む重要課題となっている。    
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
前述の問題と不備を考慮に入れ、発明者は長年の経験を積み重ね、長期にわたる構想と研究を経てきた。本発明は、冬虫夏草の宿主への感染率を高める方法を提供するものであり、レーザーエネルギービームにより冬虫夏草の宿主に人工的に感染させる確率を高め、感染後の宿主の死亡率を減らし、幼虫硬化期間を縮めることを目的としている。      
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、冬虫夏草の宿主への感染率を高める感染方法を提供することを目的とし、以下の手順を含む。手順１：エネルギービームにより冬虫夏草の宿主であるコウモリガ幼虫の体表に傷を作る、手順２：中華被毛胞の菌液により当該コウモリガ幼虫の虫体に接触する。            
【００１０】
前述した発明の目的を達成するために、当該傷の位置は冬虫夏草の宿主であるコウモリガ幼虫の体表のいかなる部位であってもよく、そのうち当該傷の最適な位置は尾部と頸部である。
【００１１】
前述した発明の目的を達成するために、当該傷の個数は２−３箇所とし、当該傷の大きさは０．１ｍｍ−５ｍｍとする。
【００１２】
前述した発明の目的を達成するために、当該レーザーが照射するエネルギー強度は０．５Ｗ−２．５Ｗとする。また、当該エネルギービームはレーザーであり、当該レーザーが照射する投与時間は１秒とし、当該レーザーが照射する同一部位での投与回数は３−４回とする。
【００１３】
前述した発明の目的を達成するために、中華被毛胞の菌液による当該コウモリガ幼虫の虫体への接触方法は噴霧、塗布又は浸透であってもよい。
【００１４】
前述した発明の目的を達成するために、感染前後の当該コウモリガ幼虫の飼育基質には、中華被毛胞の菌液を更に加えてもよい。
【００１５】
前述した発明の目的を達成するために、当該中華被毛胞の菌液の添加率は２０−４０％を最適とする。
【００１６】
前述した発明の目的を達成するために、当該飼育基質の構成は腐植土１５−２５％、川砂２０−３０％、木屑５０−６５％を含む。
【００１７】
前述した発明の目的を達成するために、感染前後の当該コウモリガ幼虫の飼料には、中華被毛胞の菌液を更に加えてもよい。
【００１８】
前述した発明の目的を達成するために、当該中華被毛胞の菌液の添加率は５−２０％を最適とする。
【００１９】
本発明は更に、冬虫夏草の宿主への感染率を高める飼育基質を提供し、当該飼育基質の構成は腐植土１５−２５％、川砂２０−３０％、木屑５０−６５％を含む。
【００２０】
前述した発明の目的を達成するために、当該飼育基質に中華被毛胞の菌液を更に加えてもよい。
【００２１】
前述した発明の目的を達成するために、当該飼育基質に中華被毛胞の菌液を更に加えてもよく、当該中華被毛胞の菌液の添加率は２０−４０％を最適とする。
【００２２】
前述した発明の目的を達成するために、当該飼育基質は冬虫夏草の宿主であるコウモリガ幼虫感染前後の飼育に使ってもよい。
【００２３】
上記の内容を総括すれば、この発明の技術面での有益な効果は次のものを含む。
１．本発明が提供するレーザーにより冬虫夏草の宿主に感染させる方法は、操作が簡単でなおかつ迅速であり、大量に操作できる。
２．レーザーによりコウモリガの体表に傷を作り、傷は小さく、ほとんど体液が染み出ない。感染後にはコウモリガ幼虫の生存率が高い。
３．レーザーによりコウモリガの体表に傷を作ることで、コウモリガ幼虫の感染率が高くなり、なおかつ幼虫硬化の期間が縮まる。
４．感染前後に中華被毛胞の菌液を含んだ飼育基質と飼料に入れると、コウモリガの感染率と生存率が更に高まる。
５．この方法は冬虫夏草の人工養殖による量産に応用でき、冬虫夏草の人工的育成の普及・発展に重要な役割を担う。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】冬虫夏草の宿主への感染率を高める人工培養方法１の説明図。
【図２】冬虫夏草の宿主への感染率を高める人工培養方法２の説明図。
【図３】冬虫夏草の宿主への感染率を高める人工培養方法３の説明図。
【図４】人工培養による及び野生の冬虫夏草の子実体にあるコルジセピン成分をＨＰＬＣにより分析したもの。
【図５】人工培養による及び野生の冬虫夏草の子実体にあるアデノシン成分をＨＰＬＣにより分析したもの。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明を以下の実施例により例示し解説する。ただし本発明は下記の実施例によっては限定されない。
【００２６】
例えばレーザーのようなエネルギービームにより、冬虫夏草の宿主であるコウモリガ幼虫の体表に傷を作る。その後、コウモリガ幼虫の体表に中華被毛胞の菌液を噴霧することで、感染の効果が得られる。感染前後のコウモリガ幼虫を中華被毛胞の菌液を含む飼育基質又は飼料に入れることで、感染率が更に高まる。
【００２７】
実施例１
【００２８】
中華被毛胞の菌液調合方法
【００２９】
無菌メスを取ってアルコールランプの炎のもとで高温消毒した後で７５度のアルコールに浸して温度を下げてから、無菌メスにより冬虫夏草の子実体にある組織塊を切り取り、当該組織塊を人工培地に接種する。
当該人工培地の構成は２−１０％のペプトン、２−１０％の酵母エキス、２−１０％のグルコース、２−１０％の特号砂糖及び１−５％の粉寒天などを含み、上記の成分を高温高圧で滅菌する。当該圧力は約１．２ａｔｍ（ｋｇ／ｃｍ２）で、当該消毒温度は１２０−１３０℃とし、滅菌時間は滅菌開始から終了までを約５０分間とする。高温高圧滅菌の人工培地は紫外線ランプのもとに置いて１２時間照射消毒してから使用に供することができる。冬虫夏草の子実体にある組織塊は人工的方法で温度を１４−２０℃にして培養し、培養期間は約２５−３０日とする。
【００３０】
培養終了後に人工培地にある菌糸塊を選んで顕微鏡で菌体、胞子及び菌糸タイプを観察する。菌塊のｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡを取ってユニバーサル  ＩＴＳ  １／ＩＴＳ４プライマー対を応用してＰＣＲ反応を行い、内部転写領域（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ  ｓｐａｃｅｒ、ＩＴＳ）を増幅してから、核酸配列の比較照合を経て中華被毛胞菌株であると確認する。
【００３１】
中華被毛胞菌株の菌塊を取り、破砕機を稼動させてから、それを三角フラスコに接種し、振とう培養を行う。培養器の回転速度を１００−２００ｒｐｍとし、培養温度を１４−２０℃とし、培養期間を約１４−２０日とする。菌液を取って無菌メンブレンフィルターにより固液分離を行ってから、菌糸体を取って破砕機を稼動させてから、再度固液分離を行う。すると上澄み液が冬虫夏草の宿主への感染用となる中華被毛胞の菌液となる。
【００３２】
実施例２
【００３３】
中華被毛胞の菌液のコウモリガ幼虫への感染方法１  
【００３４】
３−４齢のコウモリガ幼虫を２，１００匹採集し、全てを７群に分け、各群を３００匹とした（図１）。任意にコウモリガ幼虫１群３００匹を取って、マイクロニードルにより実施例１で調合した中華被毛胞の菌液を幼虫体内に注射し、対照群とした。残りの幼虫１，８００匹は、レーザーをコウモリガ幼虫の体表に照射し、虫体の照射部位（頸部、尾部）とレーザー出力条件（０．５Ｗ、１．５Ｗ及び２．５Ｗ）の違いに応じて６群に分け、群ごとに虫を３００匹とした。虫の体表面は無菌棉棒によりヨードチンキをつけて数回往復させて拭き取り、上記の６群の条件に従ってレーザーガンにより虫の体表面を照射した。照射時間は各群とも１秒とし、同一部位に３−４回照射した。実施例１に記載の中華被毛胞の菌液を無菌噴霧器に装填し、レーザーで感染させたコウモリガ幼虫の虫体に均一に噴霧した。菌液を幼虫の虫体に２０−４０秒留めてから、基質と飼料を入れて養生した。その幼虫の養生温度は８−２０℃とし、相対湿度を約４０−９０％とした。２か月間飼育させてから幼虫の成長状況を観察し、群ごとの感染後の幼虫の生存個数を記録し、ランダムなサンプル採取方法で、群ごとに幼虫を２０匹抽出しそれらの体液を抜き取って、顕微鏡で観察し感染状況を記録した。その結果は表１に示す通りである。
表１の結果からは、レーザー技術による方法を冬虫夏草の宿主への感染に応用することで、感染率と生存率をはっきりと高めることができ、そのうち照射位置が幼虫尾部で照射出力が１．５Ｗの群が、感染の２か月後にその幼虫の生存率が８２％に、感染率は７７％に達したことが分かる。
【００３５】
表１．  レーザー技術による幼虫への感染の結果
0006404772.tif 000002
【００３６】
実施例３
【００３７】
中華被毛胞の菌液を混合した飼育基質の調合
【００３８】
飼育基質の構成設計では高山草原の土質成分を参考にし、腐植土、川砂及び木屑を含み、その最適な比率は腐植土１５−２５％、川砂２０−３０％、木屑５０−６５％である。上記の飼育基質成分を混合してから、高温高圧滅菌を経て、圧力を約１．２ａｔｍ（ｋｇ／ｃｍ２）とし、温度を１２０−１３０℃とし、滅菌時間を滅菌開始から終了までで約１２０−１８０分間とし、滅菌済みの飼料基質を無菌検査により分析し、雑菌数が１０２ＣＦＵ／ｇ未満とすること。
【００３９】
上記の混合基質に実施例１で調合した中華被毛胞の菌液を注入し、添加率を約２０−４０％とし、均一に混合してから無毒のＰＶＣ製又は無菌のプラスチック製の箱内に敷いて、コウモリガ幼虫の飼育を行う。
【００４０】
実施例４
【００４１】
中華被毛胞の菌液によるコウモリガ幼虫への感染方法２          
【００４２】
３−４齢のコウモリガ幼虫を１，２００匹採集し、全てを４群に分け、各群を３００匹とし、各群を実施例２に記載の中華被毛胞の菌液によるコウモリガ幼虫への感染方法により感染させた（図２）。レーザー照射部位は幼虫尾部とし、照射出力は１．５Ｗとし、照射時間は全て１秒とした。任意に１群３００匹のコウモリガ幼虫を取って対照群とし、対照群の感染前後の飼育については、その飼育基質には全て中華被毛胞の菌液を加えなかった。任意にコウモリガ幼虫を１群３００匹取り、感染前後の飼育については、その飼育基質は全て実施例３に記載の中華被毛胞の菌液を混合した飼育基質を導入し、これを実験群Ｉとした。任意にコウモリガ幼虫を１群３００匹取り、感染前の飼育については、その飼育基質は実施例３に記載の中華被毛胞の菌液を混合した飼育基質を導入し、これを実験群IIとした。残りのコウモリガ幼虫３００匹は、感染後の飼育については、その飼育基質は実施例３に記載の中華被毛胞の菌液を混合した飼育基質を導入し、これを実験群IIIとした。幼虫飼育の温度を８−２０℃、相対湿度を４０−９０％とした。飼育開始２か月後に幼虫の成長状況を観察し、各群での感染後の幼虫の生存個数を記録し、ランダムなサンプル採取方法で、群ごとに２０匹幼虫を抽出しそれらの体液を抜き取って、顕微鏡で観察し感染状況を記録した。その結果は表２に示す通りである。
表２の結果から、レーザーにより感染させたコウモリガ幼虫の、感染前又は感染後の飼育については、その飼育基質が実施例３に記載の中華被毛胞の菌液を混合した飼育基質を導入したら、感染２か月後に実験群Ｉ〜IIIの感染率がはっきりと高まり、そのうち実験群Ｉが最適で、幼虫の生存率は８０％に、感染率は８７％に達したことが分かる。
【００４３】
表２．中華被毛胞の菌液によるコウモリガ幼虫への感染方法２の結果
0006404772.tif 000003
【００４４】
実施例５
【００４５】
中華被毛胞の菌液を混合した飼育飼料の調合
【００４６】
ニンジン、サツマイモ、ジャガイモを飼料として選び、上記の飼料の表面をきれいに洗浄する。その後、これらを６−２０ｐｐｍ食用レベルの消毒液に３０−５０分間浸して、無菌刃物で３ｘ５ｃｍ２の大きさに切り、実施例１の記載により調合した中華被毛胞の菌液を注入し、添加率を約５−２０％とし、均一に混合してから飼育基質の上方に置く。幼虫は飼育過程で病虫害が起こっていないかを定時に観察すること。病虫害が起こった場合には、直ちに隔離して飼育し、なおかつその環境に対し消毒液を噴霧して消毒しなければならない。
【００４７】
実施例６
【００４８】
中華被毛胞の菌液によるコウモリガ幼虫のへの感染方法３
【００４９】
３−４齢のコウモリガ幼虫を１，２００匹採集し、全てを４群に分け、各群を３００匹とし、各群を実施例２に記載の中華被毛胞の菌液によるコウモリガ幼虫への感染方法により感染させた（図３）。レーザー照射部位は幼虫尾部とし、照射出力は１．５Ｗとし、照射時間は全て１秒とした。任意にコウモリガ幼虫を１群３００匹取って対照群とした。対照群の感染前後の飼育については、その飼育飼料には全て中華被毛胞の菌液を加えなかった。任意にコウモリガ幼虫を１群３００匹取り、感染前後の飼育については、その飼育飼料は全て実施例５に記載の中華被毛胞の菌液を混合した飼育飼料を導入し、これを実験群IVとした。任意にコウモリガ幼虫を１群３００匹取り、感染前の飼育については、その飼育飼料は実施例３に記載の中華被毛胞の菌液を混合した飼育飼料を導入し、これを実験群Ｖとした。残りのコウモリガ幼虫３００匹は、感染後の飼育については、その飼育飼料は実施例３に記載の中華被毛胞の菌液を混合した飼育飼料を導入し、これを実験群VIとした。幼虫飼育の温度を８−２０℃、相対湿度を４０−９０％とした。飼育開始２か月後に幼虫の成長状況を観察し、各群での感染後の幼虫の生存個数を記録し、ランダムなサンプル採取方法で、群ごとに幼虫を２０匹抽出してそれらの体液を抜き取って、顕微鏡で観察し感染状況を記録した。その結果は表３に示す通りである。
表３の結果からは、レーザーにより感染させたコウモリガ幼虫の、感染前又は感染後の飼育については、その飼育飼料として実施例５に記載の中華被毛胞の菌液を混合した飼育飼料を導入し、感染２か月後に実験群IV〜VIの感染率がはっきりと高まり、そのうち実験群VIが最適で、幼虫の生存率は９０％に、感染率は９２％に達したことが分かる。
【００５０】
表３．中華被毛胞の菌液によるコウモリガ幼虫への感染方法３の結果
0006404772.tif 000004
【００５１】
実施例７
【００５２】
人工的に育成した冬虫夏草の子実体と天然冬虫夏草の子実体の活性成分の比較
【００５３】
実施例１、４、６に記載の中華被毛胞の菌液をレーザーに感染させたコウモリガ幼虫を使って、菌糸体と虫体が硬くふっくらとした内生菌核を形成するまで持続的に飼育するのに、約２−３か月が必要である。続いて、適切な環境のもとで子実体を生やす。本発明の冬虫夏草の子実体は、子座構造が幼虫の頭部から生成され、発育・成熟後の子実体の頂部表面に子嚢殼が観察できるようになり、数日経つと成熟した子嚢胞子を噴出するなど、天然冬虫夏草の子実体のタイプと特徴が一致する。本発明の冬虫夏草の子実体と天然冬虫夏草の子実体の指標成分の比較結果は次の通りである。
１．多糖含有量
冬虫夏草の子実体をすり潰してから、硫酸で加水分解し、５％のフェノールを加えて色を出すと、ＯＤ４９０の吸光度を読み取る。その結果から、人工養殖・培養した冬虫夏草の子実体は多糖含有量が５．１％であり、野生の冬虫夏草にある子実体の多糖含有量である５．０％に近いことが分かる。
２．コルジセピン含有量
高速液体クロマトグラフィー（Ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＨＰＬＣ）での分析結果は図４に示す通りである。人工養殖による冬虫夏草の子実体、野生の冬虫夏草の子実体及びコルジセピン標準品では、コルジセピンは保持時間（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ）が１３．０分の時点で現れる。人工養殖による冬虫夏草はコルジセピン含有量が１２ｍｇ／ｇであり、野生の冬虫夏草の子実体のコルジセピン含有量である１３ｍｇ／ｇに近い。
３．アデノシン含有量
ＨＰＬＣでの分析結果は図５に示す通りである。人工養殖による冬虫夏草の子実体、野生の冬虫夏草の子実体及びアデノシン標準品では、コルジセピンは保持時間（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ）が１０．６分の時点で現れる。人工養殖培養による冬虫夏草はアデノシン含有量が０．０６％であり、野生の冬虫夏草にある子実体のアデノシン含有量である０．０２％を上回っている。
【００５４】
本発明はレーザーによる冬虫夏草の宿主への感染方法を提供し、操作が簡単でなおかつ迅速であり、大量に操作できる。レーザーによりコウモリガの体表に傷を作り、傷は小さく、ほとんど体液が染み出ない。感染後にはコウモリガ幼虫の生存率が高く（８０％に達する）、感染率が高く（８７％に達する）、なおかつ幼虫硬化の期間が縮まっている（必要期間は２−３か月のみ）。感染前後に菌液を含む飼育基質と飼料に入れることで、コウモリガの感染率（９２％に達する）と生存率（９０％に達する）が更に高まる。本発明事例はコウモリガ感染での高生存率、高感染率、短期間の幼虫硬化及び大量操作への適合性を同時に兼ね備え、先行技術で低死亡率、高感染率及び感染硬化期間短縮などが同時に達成できなかったと言う問題を解決した。
上記の詳細な説明は本発明の実行可能な実施例の具体的説明である。ただし当該実施例は本発明の特許範囲を限定するためのものではなく、本発明を逸脱しない修飾加工によって行われる同等の効果を有する実施又は変更は全て、本案件の特許範囲内に含まれなければならない。
【００５５】
上記の複数項に示す効果は、真に充分に新規性と進歩性の法定発明特許要件に適合する。そこで法に基づいて出願を行いますので、本特許出願により特許を付与し、発明を奨励する力としていだだきたい。
【図１】
0006404772.tif 000005
【図２】
0006404772.tif 000006
【図３】
0006404772.tif 000007
【図４】
0006404772.tif 000008
【図５】
0006404772.tif 000009