(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬組成物であって
（ａ）約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンと
（ｂ）約１５〜約３５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約０．２〜約０．８ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｄ）保存剤とを含み、
前記組成物がＥＤＴＡを含まない、前記医薬組成物。
【請求項２】
約５ｍＭまでの濃度での塩化マグネシウムをさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記インスリンがインスリンリスプロである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記クエン酸塩の濃度が約１５〜約２５ｍＭである、請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記保存剤が、フェノール及びメタクレゾール及びそれらの混合物から成る群から選択される、請求項１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記保存剤がメタクレゾールである、請求項１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記メタクレゾールの濃度が約２．５〜約３．８ｍｇ／ｍＬである、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項８】
等張化剤をさらに含む、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記等張化剤がグリセロールである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記組成物のｐＨが約７．０〜約７．８である、請求項１〜９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１１】
医薬組成物であって、
（ａ）インスリンと
（ｂ）約１０〜約３５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約０．２〜約２ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｄ）約１〜約１５ｍＭの濃度でのマグネシウムと、
（ｅ）約１０〜約６０ｍＭの濃度での総塩化物と
（ｆ）約０．００１〜約０．２％ｗ／ｖの濃度での界面活性剤と
（ｇ）保存剤とを含み、
前記組成物がＥＤＴＡを含まない、前記医薬組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、同じインスリンを含有するが、クエン酸塩を含有しない組成物よりも少なくとも２０％迅速である血中へのインスリンの取り込みを提供する、請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、２〜８℃で少なくとも２４ヵ月の保存及び３０℃までの温度で２８日までの使用中を可能にするほど安定である、請求項１〜１２のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記組成物がどんな血管拡張剤も含まない、請求項１〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記組成物がどんなオリゴ糖も含まない、請求項１〜１４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１６】
治療法で使用するための請求項１〜１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
糖尿病の治療で使用するための請求項１〜１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
糖尿病の治療のための薬物の製造における、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１９】
請求項１〜１５に記載の医薬組成物のいずれか１つを含む製造物品。
【請求項２０】
複数回使用のバイアルである請求項１９に記載の製造物品。
【請求項２１】
再利用できるペン型注入器である請求項１９に記載の製造物品。
【請求項２２】
連続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置である請求項１９に記載の製造物品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、食後血糖変動に対抗する糖尿病の治療で使用するための及び高血糖の急性期治療のためのインスリン医薬組成物である。組成物には、場合によっては塩化ナトリウム、亜鉛及び任意で塩化マグネシウム及び／または界面活性剤の添加を含む、ヒトのインスリンまたはインスリン類似体、及び特定の濃度のクエン酸塩、塩化物が含まれる。組成物は、既存の市販インスリン組成物よりも注射部位からのインスリンの素早い取り込みを有する。組成物は、食事時のインスリン活性またはインスリンを必要とする場合の高血糖の急性期治療を提供するのに有用である。
【背景技術】
【０００２】
食後血糖のレベルを制御するにはインスリンの時間／作用プロファイルが重要である。健常な人では、膵臓は吸収された食物に応答してスパイク状のインスリンを分泌し、それは数分以内に血中インスリンレベルの上昇を生じる。１型糖尿病の人及び２型糖尿病の特定の人では、インスリンが投与されなければならない。しかしながら、投与されたインスリンはゆっくりと血液に入る。インスリンの不適切な放出及び食事の開始時での遅すぎる効果の発現は食事中または食事直後の高血糖をもたらす。作用の長すぎる持続時間及び食事間の過剰なインスリンは食後低血糖の原因となる。
【０００３】
インスリン製品の時間／作用を減らす以前の取り組みがあった。そのような製品を開発する初期の取り組みには、インスリンリスプロ（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標））、インスリンアスパルト（ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））、及びインスリングルリジン（ＡＰＩＤＲＡ（登録商標））のような新規の「即効型」インスリン類似体の開発が含まれた。インスリンリスプロ及びインスリンアスパルトは、ヒトのインスリンにおけるアミノ酸鎖の配列からのアミノ酸配列の変化を介して即効作用を達成している。インスリングルリジンもヒトのインスリンにおけるアミノ酸鎖の配列での変化を含むが、亜鉛も欠き、安定している６量体を形成しない。即効型インスリン類似体は１９９０年代及び２０００年代初頭に利用可能になった。しかしながら、いわゆる即効型インスリン類似体であっても、注射後５０〜９０分までインスリンの最大レベルには達しない。これは、正常に機能している膵臓によって放出されるインスリンよりも遅く、炭水化物の吸収プロファイルと一致するとは限らない。
【０００４】
探索されている即効作用を達成するもう１つの手段は、インスリンと併用して提供されるとインスリンの時間作用プロファイルを改善する成分または賦形剤の使用である。
【０００５】
たとえば、ＵＳ２０１３／０２３１２８１は単独で、またはポリアニオン性化合物との併用で、インスリンと特定のオリゴ糖とを含む水性組成物を開示している。ポリアニオン性化合物は、デキストランメチルカルボン酸、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ＰＡＡ（ポリアクリル酸）、アルギネート、ヒアルロン酸、グルクロン酸に基づくまたはガラクツロン酸及びその塩に基づくポリマーから成る群から選択されるアニオン性ポリマー、またはクエン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸、アジピン酸、シュウ酸、トリホスホネート、ポリホスホネート及びそれらの塩から成る群から選択されるアニオン性化合物である。一実施形態では、ポリアニオン性化合物はクエン酸ナトリウムである。ポリアニオン性化合物は、オリゴ糖単独またはポリアニオン性化合物単独が時間作用に対して効果を有さない場合でさえ、オリゴ糖含有組成物の性能を改善すると言われている。クエン酸塩を含有するが、オリゴ糖を欠く組成物についてのインスリンの時間作用の成績は開示されていない。
【０００６】
加えて、ＵＳ２０１２／０１７８６７５及びＵＳ２０１４／０１１３８５６は、たとえば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような亜鉛キレート剤と、たとえば、クエン酸またはクエン酸ナトリウムのような「溶解／安定化」剤として記載されるものとの組み合わせでインスリンを含有する組成物を開示している。ＵＳ２０１４／０１１３８５６は、そのような組成物の初期の臨床試験が注射部位での不快感を示したことを述べ、マグネシウム含有化合物の添加を介して注射部位の寛容性を高めると主張している。そのようなマグネシウム化合物には、無機塩、たとえば、水酸化マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム、臭化マグネシウム、ヨウ化マグネシウム、ピロリン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム７水和物及び酸化マグネシウム；及び有機塩、たとえば、マグネシウムＥＤＴＡ、乳酸マグネシウム、アスパラギン酸マグネシウム、酢酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、クエン酸マグネシウム、及びグルコン酸マグネシウムが挙げられる。ＵＳ２０１２／０１７８６７５及びＵＳ２０１４／０１１３８５６は、クエン酸またはクエン酸塩を含有するが、ＥＤＴＡを含有しない組成物についてのインスリンの時間作用の成績を開示しなかった。しかしながら、それら出願の指定代理人による２０１２年のポスターは、クエン酸塩を含有するが、ＥＤＴＡを含有しないインスリンリスプロ組成物の時間作用プロファイルを様々な濃度のＥＤＴＡ及びクエン酸塩を含有する組成物と比較し、そのポスターは、「製剤におけるクエン酸塩単独は［インスリンリスプロ］の吸収プロファイルを改善するには不十分であり」、「ＥＤＴＡによる亜鉛のキレート（あまり安定ではないインスリン類似体６量体の分解を加速する）とクエン酸塩（表面電荷を覆い隠し、再凝集を阻む）の双方が、吸収の皮下速度を高める閾値濃度を上回って必要とされる」と述べている。ｈｔｔｐ：／／ｆｉｌｅｓ．ｓｈａｒｅｈｏｌｄｅｒ．ｃｏｍ／ｄｏｗｎｌｏａｄｓ／ＢＩＯＤ／３３１５７０５５１６ｘ０ｘ６０２９１２／３Ｃ９５５８８６−６ＡＡ４−４Ｄ６６−ＢＤ３３−３ＦＦＢ４Ｃ９０６Ｂ２５／ＥＡＳＤ＿Ｐｏｓｔｅｒ＿Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ＿２０１２＿ＦＩＮＡＬ．ｐｄｆで入手可能であるＲｏｄｅｒｉｋｅ  Ｐｏｈｌら， “Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｕｌｔｒａ−Ｒａｐｉｄ−Ａｃｔｉｎｇ  Ｐｒａｎｄｉａｌ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ａｎａｌｏｇｓ  Ｒｅｑｕｉｒｅｓ  Ｃｈｅｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｚｉｎｃ  Ｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｃｈａｒｇｅ  Ｍａｓｋｉｎｇ  ｔｏ  Ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｔｈｅ  Ｒａｔｅ  ｏｆ  Ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ”。
【０００７】
ＵＳ２０１５／００６５４２３は、ペプチドと血管拡張剤（たとえば、ニトログリセリン）と、任意で「電荷マスキング剤」と記載されるもの、たとえば、クエン酸塩、ジケトピペラジン、ジケトピペラジン誘導体、ＥＤＴＡ、ジアルギニンピペラジン、ジアルギニンピペラジン塩、ジアルギニンピペラジン異性体、ジアルギニンピペラジンエステル及びそれらの任意の組み合わせを含む組成物を記載している。クエン酸塩を含有するが、血管拡張剤を欠いている組成物は開示されていない。
【０００８】
従来技術はまとめて、本発明に含まれる賦形剤を伴った超即効型インスリン製剤及びその特定の濃度を教示していない。
【０００９】
上述の取り組みにもかかわらず、食事時での使用が意図され、注射部位からの血中へのインスリンのさらに迅速な取り込み；既存のインスリン製品よりも早い作用の発現；及び保存の間での化学的な及び物理的な安定性を有するインスリン組成物に対するニーズが残っている。本発明は、これらのニーズを満たす組成物を提供しようとする。
【発明の概要】
【００１０】
本発明者らは驚くべきことに、特定濃度のクエン酸塩を含有する組成物が、既存の市販のインスリン組成物よりもインスリンの血中への迅速な取り込み及び／または作用の発現を有することを見いだしている。時間作用の改善を排除することなく、たとえば、亜鉛、塩化ナトリウム、及び任意で塩化マグネシウム及び／または界面活性剤のような、特定濃度の安定剤を組成物に含めることによって特定の条件下で組成物の化学的な及び物理的な安定性が維持される。
【００１１】
従って、本発明は、約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンと、約１５〜約３５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．２〜約０．８ｍＭの濃度での亜鉛と、保存剤とを含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、医薬組成物はさらに約５ｍＭまでの濃度での塩化マグネシウムをさらに含む。
【００１２】
別の実施形態では、本発明は一般に、インスリンと特定濃度のクエン酸塩と安定剤とを含む組成物を提供する。
【００１３】
特定の実施形態では、本発明は、インスリンと、約１０〜約３０ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．２〜約２ｍＭの濃度での亜鉛と、約１〜約１５ｍＭの濃度でのマグネシウムと、約１０〜約６０ｍＭの濃度での総塩化物と、約０．００１〜約０．２％ｗ／ｖの濃度での界面活性剤と、保存剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００１４】
特定の実施形態では、本発明は、インスリンと、約１０〜約３０ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．２〜約２ｍＭの濃度での亜鉛と、約１〜約１５ｍＭの濃度でのマグネシウムと、約１〜約５０ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約０．００１〜約０．２％ｗ／ｖの濃度での界面活性剤と、保存剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００１５】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１００〜約５００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約１０〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約２〜約９ｍＭの濃度でのマグネシウムと、約０．３〜約１．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約１５〜約３５ｍＭの濃度での総塩化物と、約０．０３〜約０．１２％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７．０〜７．８である。
【００１６】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１００〜約５００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約１０〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約２〜約９ｍＭの濃度でのマグネシウムと、約０．３〜約１．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約１〜約２５ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約０．０３〜約０．１２％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７．０〜７．８である。
【００１７】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約３〜約８ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約０．３〜約１．１ｍＭの濃度での亜鉛と、約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７．０〜７．８である。
【００１８】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約３〜約８ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約０．３〜約１．１ｍＭの濃度での亜鉛と、約１〜約２０ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７．０〜７．８である。
【００１９】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約３〜約８ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約０．６〜約１．１ｍＭの濃度での亜鉛と、約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７．０〜７．８である。
【００２０】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約３〜約８ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約０．６〜約１．１ｍＭの濃度での亜鉛と、約１〜約２０ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７．０〜７．８である。
【００２１】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．６〜約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７.４である。
【００２２】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．６〜約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約１〜約２０ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７.４である。
【００２３】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７.４である。
【００２４】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約１〜約２０ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７.４である。
【００２５】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約３〜約８ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約０．８〜約１．１ｍＭの濃度での亜鉛と、約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７．０〜７．８である。
【００２６】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約３〜約８ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約０．８〜約１．１ｍＭの濃度での亜鉛と、約１〜約２０ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、組成物のｐＨは約７．０〜７．８である。
【００２７】
加えて、本発明はまた、それを必要とするヒトに有効用量の本発明の医薬組成物を投与することを含む糖尿病を治療する方法も提供する。
【００２８】
加えて、本発明は、治療法で使用するための本発明の医薬組成物を提供する。さらに詳しくは、本発明は、糖尿病の治療で使用するための本発明の医薬組成物を提供する。本発明はまた、糖尿病の治療のための薬物を製造することにおける本発明の医薬組成物の使用も提供する。
【００２９】
加えて、本発明は、本発明の医薬組成物を含む製造物品を提供する。特に、本発明は、製造物品が複数回使用バイアルである本発明の医薬組成物を含む製造物品を提供する。特に、本発明は、製造物品が再利用できるペン型注入器である本発明の医薬組成物を含む製造物品を提供する。特に、本発明は、製造物品が連続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置である本発明の医薬組成物を含む製造物品を提供する。
【００３０】
実施形態では、インスリンは、ヒトインスリン、または、たとえば、インスリンリスプロ、インスリンアスパルトもしくはインスリングルリジンのようなヒトインスリンの即効型構造の変異体、突然変異体もしくは類似体から成る群から選択される。好まれる実施形態では、インスリンはインスリンリスプロである。
【００３１】
実施形態では、保存剤はフェノール及びメタクレゾールから成る群から選択される。好ましくは、保存剤はメタクレゾールである。実施形態では、メタクレゾールの濃度は約２．５ｍｇ／ｍＬ〜約３．８ｍｇ／ｍＬである。好ましくは、メタクレゾールの濃度は３．１５ｍｇ／ｍＬである。
【００３２】
実施形態では、組成物はさらに等張化剤を含む。実施形態では、等張化剤はグリセロールである。特定の実施形態では、グリセロールの濃度は約１〜約１６ｍｇ／ｍＬである。
【００３３】
実施形態では、組成物はさらに緩衝液を含む。特定の実施形態では、緩衝液はリン酸ナトリウムである。
【００３４】
特定の実施形態では、組成物はさらに追加の安定剤を含む。特定の実施形態では、組成物はさらに界面活性剤を含む。
【００３５】
特定の実施形態では、組成物は、たとえば、ＥＤＴＡのような追加のキレート剤、ニトログリセリンのような追加の血管拡張剤、及び／またはオリゴ糖を含まない。
【００３６】
実施形態では、組成物のｐＨは約７．０〜約７．８である。特定の好まれる実施形態では、組成物のｐＨは約７．３〜約７．５である。特定の好まれる実施形態では、組成物のｐＨは約７．４である。
【００３７】
特定の実施形態では、時間作用に関連する１以上の薬物動態または薬物力学のパラメータ、たとえば、インスリンの最高濃度までの時間（Ｔｍａｘ）；インスリンの最高濃度の半分に達する時間（初期１／２Ｔｍａｘ）；濃度対時間曲線の下降相の間でインスリンの最高濃度の半分に達する時間（後期１／２Ｔｍａｘ）；初期と後期の１／２Ｔｍａｘの間の時間（Ｔｍａｘスプレッド）；インスリン濃度曲線のもとでの分画面積に基づく異なる時間での吸収されたインスリン総用量の比率（たとえば、ＡＵＣ０−３０分、ＡＵＣ０−６０分、ＡＵＣ０−１２０分、ＡＵＣ０−１８０分）；総インスリン濃度の半分に達する時間（Ｔ５０）；最高グルコース注入速度に達する時間（ＧＩＲｍａｘ）、最高グルコース注入速度の半分に達する時間（初期１／２ＧＩＲｍａｘ）；濃度対時間曲線の下降相の間で最高グルコース注入速度の半分に達する時間（後期１／２ＧＩＲｍａｘ）；ＧＩＲ曲線のもとでの分画面積に基づく異なる時間での注入された総グルコースの比率（たとえば、ＧＩＲ０−３０分、ＧＩＲ０−６０分、ＧＩＲ０−１２０分、ＧＩＲ０−１８０分）によって測定されたとき、医薬組成物は、クエン酸塩を含有しない即効型のインスリン類似体の組成物よりも少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％迅速である血中へのインスリンの取り込み及び／または作用の発現を提供する。
【００３８】
特定の実施形態では、医薬組成物は、上記で記載されているもののような時間作用に関連する１以上の薬物動態または薬物力学のパラメータによって測定されたとき、クエン酸塩を含有しない即効型のインスリン類似体の組成物よりも１０％〜５０％の間迅速である血中へのインスリンの取り込み及び／または作用の発現を提供する。
【００３９】
特定の実施形態では、医薬組成物は、２〜８℃で少なくとも２４ヵ月の保存を可能にするほど安定である。特定の実施形態では、医薬組成物は、再利用できるペン型注入器におけるバイアル用またはカートリッジ用に３０℃までの温度で２８日までの使用中を可能にするほど安定である。特定の実施形態では、医薬組成物は、２〜８℃で少なくとも３６ヵ月の保存を可能にするほど安定である。特定の実施形態では、医薬組成物は、再利用できるペン型注入器におけるバイアル用またはカートリッジ用に３０℃までの温度で３２日までの使用中を可能にするほど安定である。特定の実施形態では、組成物は、７日間までの連続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置での使用を可能にするほど安定である。
【００４０】
特定の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約１５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約１５ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールと約７．６ｍｇ／ｍＬの濃度でのグリセロールとを含む。
【００４１】
別の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約１５ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールと約４．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのグリセロールとを含む。
【００４２】
別の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約３５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約２３ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含む。
【００４３】
別の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約２５ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含む。
【００４４】
別の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約１５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約１５ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールと約７．６ｍｇ／ｍＬの濃度でのグリセロールとを含み、その際、医薬組成物は、上記で記載されているもののような時間作用に関連する１以上の薬物動態または薬物力学のパラメータによって測定されたとき、クエン酸塩を含有しない即効型のインスリン類似体の組成物よりも１０％〜２０％の間、２０％〜３０％の間、３０％〜４０％の間、または４０％〜５０％の間迅速である血中へのインスリンの取り込み及び／または作用の発現を提供する。
【００４５】
別の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約１５ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールと、約４．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのグリセロールとを含み、その際、医薬組成物は、上記で記載されているもののような時間作用に関連する１以上の薬物動態または薬物力学のパラメータによって測定されたとき、クエン酸塩を含有しない即効型のインスリン類似体の組成物よりも１０％〜５０％の間迅速である血中へのインスリンの取り込み及び／または作用の発現を提供する。
【００４６】
別の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約３５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約２３ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、医薬組成物は、上記で記載されているもののような時間作用に関連する１以上の薬物動態または薬物力学のパラメータによって測定されたとき、クエン酸塩を含有しない即効型のインスリン類似体の組成物よりも１０％〜５０％の間迅速である血中へのインスリンの取り込み及び／または作用の発現を提供する。
【００４７】
別の実施形態では、医薬組成物は、約１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと、約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、約０．３ｍＭの濃度での亜鉛と、約２５ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、その際、医薬組成物は、上記で記載されているもののような時間作用に関連する１以上の薬物動態または薬物力学のパラメータによって測定されたとき、クエン酸塩を含有しない即効型のインスリン類似体の組成物よりも１０％〜５０％の間迅速である血中へのインスリンの取り込み及び／または作用の発現を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
本明細書で使用されるとき、用語「組成物」は、インスリン及び他の成分または賦形剤が単一の複合製剤で組み合わせられているインスリン及び他の成分または賦形剤の組み合わせを指す。
【００４９】
本明細書で使用されるとき、「インスリン」は、ヒトインスリンまたはヒトインスリンの機能的な活性を有するが、それよりも速い作用の発現を有するヒトインスリンの即効型構造の変異体、突然変異体または類似体を意味する。ヒトインスリンの特定の即効型類似体は、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト、及びインスリングルリジンである。市販製品のためのインスリンは組換えＤＮＡ法を用いて、または化学合成によって製造されてもよい。組換え法は周知であり、強く好まれる。ヒトインスリンの分子（ＣＡＳ番号．１１０６１−６８−０）は２本のアミノ酸鎖Ａ及びＢから成り、その配列は周知である。
【００５０】
ヒトインスリンＡ鎖はアミノ酸の以下の配列を有する：
ＧｌｙＩｌｅＶａｌＧｌｕＧｌｎＣｙｓＣｙｓＴｈｒＳｅｒＩｌｅＣｙｓＳｅｒＬｅｕＴｙｒＧｌｎＬｅｕＧｌｕＡｓｎＴｙｒＣｙｓＡｓｎ（配列番号１）
【００５１】
ヒトインスリンＢ鎖はアミノ酸の以下の配列を有する：
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＰｒｏＬｙｓＴｈｒ（配列番号２）
【００５２】
鎖は２つのジスルフィド結合：ＣｙｓＡ７−ＣｙｓＢ７及びＣｙｓＡ２０−ＣｙｓＢ１９によって連結されている。Ａ鎖はＣｙｓＡ６−ＣｙｓＡ１１にて鎖内ジスルフィド結合を有する。ヒトインスリンは実験式Ｃ２５７Ｈ３８３Ｎ６５Ｏ７７Ｓ６及び５８０８の分子量を有する。
【００５３】
ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）における薬剤物質であるインスリンリスプロは、２８位及び２９位でのＢ鎖上の天然のプロリン−リジンの逆位（２８Ｂ−Ｌ−リジン−２９Ｂ−Ｌ−プロリン  ヒトインスリン）を除いてその一次アミノ酸配列という点ではヒトインスリンと同一である。インスリンリスプロ（ＣＡＳ番号１３３１０７−６４−９）は、モル基準でヒトインスリンと等しい効力であることが示されているが、皮下注射後のその効果は注射された可溶性ヒトインスリンよりも迅速で短い持続時間である。ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）は、保存剤としてのｍ−クレゾール、及び安定剤、等張化調整剤（グリセロール）、緩衝化剤（二塩基リン酸ナトリウム）、安定剤（酸化亜鉛）及びビヒクル用のｐＨ調整剤を含有する。
【００５４】
インスリンリスプロの分子は、インスリンリスプロＢ鎖と架橋したヒトインスリンＡ鎖（配列番号１）から成り、インスリンリスプロＢ鎖のアミノ酸配列は以下の配列番号３によって与えられる：
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＬｙｓＰｒｏＴｈｒ（配列番号３）
【００５５】
インスリンリスプロの化学式はＣ２５７Ｈ３８３Ｎ６５Ｏ７７Ｓ６であり、その分子量はおよそ５８０８である。インスリンリスプロの１単位は０．０３４７ｍｇのインスリンリスプロと等価である。
【００５６】
ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標）における薬剤物質であるインスリンアスパルト（ＣＡＳ番号１１６０９４−２３−６）は、別の即効型インスリン類似体である。その構造は、ヒトインスリンのＡ鎖（配列番号１）と、以下のアミノ酸配列で反映されるようなＢ２８におけるＰｒｏがＡｓｐで置き換えられている（Ｐｒｏ−Ｂ２８−Ａｓｐ−ヒトインスリン）Ｂ鎖とから成る：
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＡｓｐＬｙｓＴｈｒ（配列番号４）
【００５７】
インスリンアスパルト（２８Ｂアスパラギン酸−ヒトインスリン）は実験式Ｃ２５６Ｈ３８１Ｎ６５Ｏ７９Ｓ６及び約５８２６の分子量を有する。インスリンアスパルトの１単位は、０．０３５ｍｇの塩を含まない無水インスリンアスパルトに相当する６ナノモルに相当する。
【００５８】
ＡＰＩＤＲＡ（登録商標）における薬剤物質であるインスリングルリジン（ＣＡＳ番号２０７７４８−２９−６）はさらに別の即効型インスリン類似体である。インスリングルリジンの分子は、ヒトインスリンＡ鎖（配列番号１）と、以下のアミノ酸配列で反映されるようなヒトインスリンと比べて修飾されたＢ鎖（Ａｓｎ−Ｂ３−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｂ２９−Ｇｌｕ）とから成る：
ＰｈｅＶａｌＬｙｓＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＰｒｏＧｌｕＴｈｒ（配列番号５）
【００５９】
インスリングルリジン（３Ｂ−リジン−２９Ｂ−グルタミン酸−ヒトインスリン）は実験式Ｃ２５８Ｈ３８４Ｎ６４Ｏ７８Ｓ６及び５８２３の分子量を有する。インスリングルリジンの１単位は０．０３４９ｍｇのインスリングルリジンに近似して相当する。
【００６０】
以下のスキームは、血糖の食事時変動を治療することにおける使用について現在認可されているヒトインスリン及び即効型インスリン類似体のアミノ酸配列及びジスルフィド結合を示す。
ヒトインスリンＡ鎖
【化１】
0006328855.tif 000002
【００６１】
特定の実施形態では、本発明の組成物は約１００〜約５００ＩＵ／ｍＬのインスリンの濃度を有する。特定の実施形態では、本発明の組成物は約１００〜約３００ＩＵ／ｍＬのインスリンの濃度を有する。特定の実施形態では、本発明の組成物は約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬのインスリンの濃度を有する。特定の組成物は約１００ＩＵ／ｍＬを含む。特定の組成物は約２００ＩＵ／ｍＬを含む。
【００６２】
本発明で実証された上記で参照されたインスリン類似体の時間作用プロファイルにおける改善は、特定の特別な濃度のクエン酸塩の使用を介して、ＵＳ２０１２／０１７８６７５及びＵＳ２０１４／０１１３８５６にて記載されたもの（たとえば、ＥＤＴＡ）のような追加のキレート剤、ＵＳ２０１５／００６５４２３にて記載されたもの（たとえば、ニトログリセリン）のような追加の血管拡張剤、またはＵＳ２０１３／０２３１２８１にて記載されたもののような他のオリゴ糖を必要とすることなく達成される。
【００６３】
クエン酸イオンは、化学名２−ヒドロキシプロパン−１,２,３−トリカルボキシレート、分子式Ｃ６Ｈ５Ｏ７−３、及び１８９の分子量を有する。クエン酸イオンは植物及び動物に広く分布し、食事の天然に存在する成分である。それは、酸化的代謝の一般的な代謝産物であり、骨の重要な成分である。多数のクエン酸塩は、以下を含めて、食物での使用について米国食品医薬品局によってＧＲＡＳ（安全であると一般に見なされる）となっている。
【表１】
0006328855.tif 000003
【００６４】
たとえば、クエン酸、クエン酸一水和物、無水クエン酸、クエン酸ナトリウム、無水クエン酸三ナトリウム、クエン酸三ナトリウム２水和物を含む種々のクエン酸含有化合物も米国食品医薬品局の不活性成分データベースに従って非経口薬剤製品における成分としても含められる。本発明の組成物で使用される特定のクエン酸化合物は酸性形態または種々の塩形態、特にそのアルカリ（たとえば、ナトリウム及びカリウム）塩及び／またはその一水和物または二水和物であってもよい。当然、クエン酸ナトリウムが好まれる。一部の実施形態では、本発明の組成物におけるクエン酸塩の濃度は約１０から約３５ｍＭまたは約１５ｍＭから約３５ｍＭに及ぶ。好まれる実施形態では、クエン酸塩の濃度は約１０から約３０ｍＭまたは約１５ｍＭから約３０ｍＭに及ぶ。特定の好まれる実施形態では、クエン酸塩の濃度は約１５から約２５ｍＭに及ぶ。特定の実施形態では、クエン酸塩の濃度は約１５から約２５ｍＭに及ぶ。特定の実施形態では、クエン酸塩の濃度は約１５から約２０ｍＭまたは約２０ｍＭから約２５ｍＭに及ぶ。特定の組成物は約１５、約２０、約２５、約３０または約３５ｍＭのクエン酸塩濃度を有する。
【００６５】
クエン酸塩の添加は時間作用における改善を生じることが見いだされているけれども、クエン酸塩の添加はまた安定性の見地からのさらに大きな不利益ももたらす。従って、長期間の保存及び使用のために十分な化学的且つ物理的な安定性を有するために、本発明の組成物はさらに、たとえば、亜鉛、マグネシウム、塩化物及び界面活性剤のような安定化剤を含み、含有する。
【００６６】
酸化亜鉛を加えて所望の化学量論の亜鉛イオンを提供してもよい。インスリン６量体は２つの特異的で高親和性の亜鉛結合部位を有する。そのような６量体に組み込まれた亜鉛イオンは「結合された」亜鉛と呼ばれることがある。現在利用できる亜鉛含有の製剤にはインスリンの６量体当たり約２〜４の間の亜鉛イオンが含まれる。一部の市販のインスリン組成物はインスリンの６つの分子（ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）ＲＵ−５００）当たり亜鉛の約２．４のイオンを有し、一部はインスリンの６つの分子（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）、ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））当たり亜鉛の約３．０のイオンを有する。インスリンリスプロ（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標））及びインスリンアスパルト（ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））の１００Ｕ／ｍＬ製剤はインスリンの６つの分子当たり亜鉛の約３．０のイオンを有し、それは約０．３ｍＭの濃度に一致する。ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）の現在利用できる２００Ｕ／ｍＬ製剤はインスリンの６つの分子当たり亜鉛の約３．５のイオンを有し、それは約０．７ｍＭの亜鉛濃度に一致する。Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ（ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）Ｒ）によって販売されているヒトインスリンの現在利用できる１００Ｕ／ｍＬ製剤はインスリンの６つの分子当たり亜鉛の約２．３のイオンを含有し、それは約０．２３ｍＭの亜鉛濃度に一致する。
【００６７】
本発明の組成物は、インスリン分子が安定している６量体を形成するのに少なくとも十分な亜鉛イオンを供給するのに十分な亜鉛濃度を有する。従って、本発明の組成物は、インスリンの６量体当たり亜鉛の少なくとも２イオンを提供するのに十分な亜鉛を含まなければならない。本発明の特定の実施形態の組成物は、約０．２ｍＭ〜約０．８ｍＭの亜鉛濃度を有する。インスリン濃度が１００ＩＵ／ｍＬである場合、本発明の特定の実施形態の亜鉛濃度は約０．３ｍＭである（約３．０のＺｎ／６つのインスリン分子）。たとえば、約１００Ｕ／ｍＬ、約２００Ｕ／ｍＬ、約３００Ｕ／ｍＬ、または約５００Ｕ／ｍＬのインスリン濃度を有する本発明の特定の実施形態では、インスリン６量体当たり亜鉛の２イオンを提供するのに必要な最少の亜鉛濃度はそれぞれ、約０．２ｍＭ、約０．４ｍＭ、約０．６ｍＭ、約１ｍＭということになる。
【００６８】
過剰な亜鉛の包含−すなわち、インスリン６量体で結合されるのよりも多い亜鉛を用いて本発明の組成物をさらに安定させてもよい。そのような亜鉛は「遊離の」または「未結合の」亜鉛と呼ばれることがある。本発明の特定の組成物では、過剰な遊離のまたは未結合の亜鉛の包含は安定化効果を有することが見いだされている。約１００Ｕ／ｍＬのインスリンリスプロと約１ｍＭまでの亜鉛濃度を有する組成物は、―約０．２ｍＭの結合亜鉛と約０．８ｍＭの未結合または遊離の亜鉛を構成することになるが―即効であり且つ安定であることが見いだされている。しかしながら、多すぎる遊離のまたは未結合の亜鉛の包含は時間作用における改善を減衰させ得る。たとえば、約１００Ｕ／ｍＬのインスリンリスプロと約５ｍＭの亜鉛濃度を有する組成物は、―約４．８ｍＭの未結合の亜鉛を構成することになるが―さらに低い亜鉛濃度の組成物で見られる時間作用における改善を有さないことが見いだされた。本発明の特定の実施形態では、亜鉛の濃度は、約０．２から約２ｍＭ、約０．４から約１ｍＭ、または約０．６から約０．９ｍＭに及ぶ。特定の実施形態では、亜鉛の濃度は、約０．６、約０．７、約０．８または約０．９ｍＭである。
【００６９】
本発明の組成物におけるマグネシウム（Ｍｇ＋２）の包含も安定化効果を有することが見いだされている。マグネシウムイオンは、種々の方法にて、たとえば、ＭｇＣｌ２の分子式及び９５．２１１の分子量を有する塩化マグネシウムの添加を介して提供されてもよい。
【００７０】
マグネシウムは特定の組成物にて安定化効果を有してもよい一方で、クエン酸塩の濃度を超える濃度はインスリンの沈殿を生じるであろう。従って、含められてもよいマグネシウムの最大量は、含まれるクエン酸塩の量によって限定される。たとえば、本発明の組成物における安定剤としてＭｇＣｌ２が使用される場合、マグネシウムのクエン酸塩に対するモル比は約１：１０から約１：２に及ぶ。好ましくは、塩化マグネシウムのクエン酸塩に対するモル比は約１：５から約１：３に及ぶ。従って、たとえば、クエン酸塩濃度が約１０〜約３０ｍＭの間である組成物にて約１：１０〜約１：２のマグネシウムのクエン酸塩に対するモル比を達成するために、マグネシウムの濃度は約１〜約１５ｍＭの間である。同様に、クエン酸塩濃度が２５ｍＭである組成物にて約１：５〜約１：３のマグネシウムのクエン酸塩に対するモル比を達成するために、マグネシウムの濃度は５から８．３ｍＭに及ぶ。特定の実施形態では、マグネシウムの濃度は約１から約１５ｍＭに及ぶ。特定の実施形態では、マグネシウムの濃度は約１から約５ｍＭ、約５から約１０ｍＭ、または約１０から約１５ｍＭに及ぶ。本発明の特定の実施形態における塩化マグネシウムの濃度は１から約５ｍＭ（約０．４８ｍｇ／ｍＬ）に及ぶ。特定の実施形態では、マグネシウムの濃度は約５ｍＭである。
【００７１】
本発明の組成物における塩化物イオン（Ｃｌ−）の特定の濃度の包含も安定化効果を有することが見いだされている。塩化物イオンは、上述のようにマグネシウムを提供するためのＭｇＣｌ２の使用を介して、または塩化ナトリウムの添加を介してを含む種々の方法で提供されてもよい。本発明の特定の実施形態の組成物は塩化ナトリウムを含む。塩化ナトリウムの分子式はＮａＣｌであり、その分子量は５８．４４である。塩化ナトリウムは、たとえば、５ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウムを含むＡＰＩＤＲＡ（登録商標）（インスリングルリジン）、０．５８ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウムを含むＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標）（インスリンアスパルト）のような即効型インスリン類似体の一部の現在利用できる製剤にて使用されている。
【００７２】
たとえば、ＭｇＣｌ２またはＮａＣｌのような塩化物含有賦形剤の組成物における包含を介した特定量の塩化物の添加は安定化効果を有することが見いだされている一方で、組成物の総塩化物含量が高すぎると、組成物におけるインスリンが低温で結晶化し得る。従って、組成物の総塩化物含量が考慮に入れられなければならない。
【００７３】
組成物の総塩化物含量を決定するために、安定剤として塩化マグネシウム及び／または塩化ナトリウムの添加を介して添加され得る塩化物イオンだけでなく、インスリンのバルク医薬品有効成分（ＡＰＩ）を伴った、ｐＨ調整に必要であってもよい少量のＨＣｌの添加を介した、及び／またはＨＣｌによる酸化亜鉛（ＺｎＯ）の可溶化により調製される溶液の形態で添加されてもよいＺｎの提供と合わせた他の成分の添加を介した塩化物イオンも考慮に入れなければならない。
【００７４】
特定の実施形態では、塩化ナトリウムを用いて目標の塩化物の濃度または濃度範囲に達するのに必要とされる追加の塩化物の量を提供する―すなわち、添加される塩化ナトリウムの量は、目標の塩化物濃度から、たとえば、インスリンＡＰＩの添加を介した、ｐＨ調整及び／または酸化亜鉛の安定化に必要であってもよい塩化マグネシウム及び／またはＨＣｌの添加を介した、他の成分の添加を介して提供される塩化物の量を差し引くことによって決定される。たとえば、製剤における目標の塩化物濃度が約２０ｍＭであり、１５ｍＭの塩化物がバルクインスリンＡＰＩ、塩化マグネシウム及びｐＨ調整に使用されるＨＣｌの組み合わせを介して提供されるならば、５ｍＭの塩化ナトリウムを添加しなければならない。当業者は、そのような製剤に添加される塩化ナトリウムの量は、（１）他の供給源を介して加えられる理論的な塩化物含量に基づいて必要とされるであろう追加の塩化物の量を予め算出すること、または（２）塩化ナトリウムを除く賦形剤すべての製剤を調製し、その製剤の塩化物含量を測定し、その量と目標とする塩化物の濃度または濃度範囲との間の差異を計算することによって決定されてもよいことを理解するであろう。水性製剤の塩化物含量は、たとえば、滴定またはイオン選択性電極法のような種々の既知の技法を用いて測定されてもよい。
【００７５】
加えて、相対的に高い塩化物濃度に関連する低温結晶化の課題はクエン酸塩濃度に敏感であることが見いだされている。従って、本明細書で提供される範囲の下端でのクエン酸塩濃度を有する本発明の組成物は、本明細書で提供される範囲の上端でのクエン酸塩濃度を有する組成物よりも相対的に高い塩化物濃度に寛容であってもよい。たとえば、２５ｍＭのクエン酸塩を含有する製剤への５０〜７５ｍＭもの高い塩化ナトリウム濃度の添加は、低温結晶化の課題をもたらすことが観察されているが、そのような課題は、５０ｍＭの塩化ナトリウムを１５ｍＭのクエン酸塩製剤に加える場合または２５ｍＭの塩化ナトリウムを２５ｍＭのクエン酸塩製剤に加える場合では、一貫して観察されるわけではない。
【００７６】
明瞭さの目的で、本明細書で使用されるとき、用語「塩化物」または「総塩化物」は、任意の成分の添加に関連して、たとえば、２５ｍＭの塩化物を含むと述べられている組成物における塩化物イオンの供給源、またはｐＨ調整もしくはＺｎＯの可溶化に必要とされるＭｇＣｌ２、ＮａＣｌ及び／またはＨＣｌの添加を介して提供される塩化物に含まれる総塩化物に関連して提供される組成物における塩化物イオンの総量を指す。一方、用語「塩化マグネシウム」、｛ＭｇＣｌ２」、「塩化ナトリウム」及び「ＮａＣｌ」は、組成物に添加されるこれら特定の塩の量を指す。従って、５ｍＭの塩化マグネシウムと１０ｍＭの塩化ナトリウムとを含むとして記載されている組成物では、たとえば、塩化物または総塩化物の濃度には、塩化マグネシウム、塩化ナトリウム及び、たとえば、ＨＣｌのような他の供給源によって提供される塩化物イオンの合わせた量が含まれる。
【００７７】
本発明の特定の実施形態では、総塩化物の濃度は約１０から約６０ｍＭに及ぶ。特定の実施形態では、総塩化物の濃度は約１５から約３５ｍＭに及ぶ。特定の実施形態では、総塩化物の濃度は約２０から約２５ｍＭに及ぶ。特定の実施形態では、総塩化物の濃度は約２０ｍＭ、約２１ｍＭ、約２２ｍＭ、約２３ｍＭ、約２４ｍＭまたは約２５ｍＭである。
【００７８】
本発明の特定の実施形態では、組成物は約１から約５０ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウム含む。特定の実施形態では、塩化ナトリウムの濃度は約１〜約２５ｍＭである。特定の実施形態では、塩化ナトリウムの濃度は約１から約２０ｍＭに及ぶ。本発明の特定の実施形態における塩化ナトリウムの濃度は約１５ｍＭ（約０．８８ｍｇ／ｍＬ）から約２５ｍＭ（約２．０ｍｇ／ｍＬ）に及ぶ。特定の実施形態では、塩化ナトリウムの濃度は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９または約２０ｍＭである。
【００７９】
必要に応じて十分な化学的且つ物理的な安定性を達成するために、組成物はさらに１以上の追加の安定剤を含んでもよい。例となる安定剤には界面活性剤が挙げられる。驚くべきことに、安定剤としての界面活性剤とマグネシウムの組み合わせは本発明の組成物において相加または相乗を上回る安定化効果を有し得ることが発見されている。
【００８０】
非経口用医薬組成物での使用のために開示される界面活性剤の例には、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）のようなポリソルベート、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３０００、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ−１００のようなポリエチレングリコール、ポリエチレン（２３）ラウリルエーテル（ＣＡＳ番号：９００２−９２−０、商品名ＢＲＩＪ（登録商標）のもとで販売）のようなポリエチレングリコール、たとえば、ＭＹＲＪ（商標）のようなアルコキシル化脂肪酸、ポリプロピレングリコール、ブロックコポリマー、たとえば、ポロキサマー１８８（ＣＡＳ番号９００３−１１−６、商品名ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ−６８のもとで販売）及びポロキサマー４０７（ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ１２７）、ソルビタンアルキルエステル（たとえば、ＳＰＡＮ（登録商標））、ポリエトキシ化ヒマシ油（たとえば、ＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））ならびにトレハロース及びその誘導体、たとえば、ラウリン酸トレハロースエステルが挙げられる。特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリオキシエチレン（２３）ラウリルエーテル、ポロキサマー１８８及びラウリン酸トレハロースエステルから成る群から選択される。好まれる界面活性剤はポロキサマー１８８である。特定の実施形態では、たとえば、ポロキサマー１８８のような界面活性剤の濃度は、約０．００１から約２％ｗ／ｖ、約０．００１から約０．２％ｗ／ｖ、約０．０３から約０．１２％ｗ／ｖ、または約０．０６から約０．０９％ｗ／ｖに及ぶ。特定の実施形態では、ポロキサマー１８８の濃度は約０．０６、約０．０７、約０．０８または約０．０９％ｗ／ｖである。
【００８１】
加えて、本発明の組成物は１以上の保存剤を含み、それは抗菌特性を提供するが、さらに安定性の利益を提供してもよい。組成物は最初に製造されたとき無菌であるが、複数回使用のバイアルまたはカートリッジで組成物が提供される場合、製剤の他の成分と相溶性である抗菌保存剤化合物または化合物の混合物が通常、規制上及び薬局方上の抗菌保存剤の要件を満たすのに十分な強さで加えられる。Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ．Ｉｎｓｕｌｉｎ  ｌｉｓｐｒｏ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．ＵＳＰ２９−ＮＦ２４；Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ  ２００８  Ｖｏｌｕｍｅ  ＩＩＩ：Ｉｎｓｕｌｉｎ  ａｓｐａｒｔ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ．Ｉｎｓｕｌｉｎ  ａｓｓａｙｓ；及びＵ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｃｈａｐｔｅｒｓ．ＵＳＰ２９−ＮＦ２４．Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ：Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ；２００５．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｔｅｓｔｉｎｇ；ｐｐ．２４９９-２５００を参照のこと。好まれる保存剤はアリール酸及びフェノール化合物、またはそのような化合物の混合物である。
【００８２】
従って、本発明の組成物は１以上の保存剤を含む。上記で参照された方法を用いて有効な濃度を容易に突き止めることができる。インスリン製品で一般に使用される保存剤には、フェノール（ＣＡＳ番号１０８−９５−２、分子式Ｃ６Ｈ５ＯＨ、分子量９４．１１，）、及びｍ−クレゾール（ＣＡＳ番号１０８−３９−４、分子式Ｃ７Ｈ８Ｏ、分子量１０８．１４）が挙げられる。現在の市販の組成物は、たとえば、３．１５ｍｇ／ｍＬのｍ−クレゾール（ＨＵＭＡＬＯＧ（登録商標）及びＡＰＩＤＲＡ（登録商標））、１．７２ｍｇ／ｍＬのｍ−クレゾール及び１．５０ｍｇ／ｍＬのフェノール（ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標））、ならびに２．５ｍｇ／ｍＬのｍ−クレゾール（ＨＵＭＵＬＩＮ（登録商標）ＲＵ−５００）を含有する。本発明の組成物は１以上の保存剤を含む。実施形態では、保存剤はフェノール及びメタクレゾール及びそれらの混合物から成る群から選択される。好ましくは、保存剤はメタクレゾールである。特定の実施形態では、メタクレゾールの濃度は約２．５ｍｇ／ｍＬ〜約３．８ｍｇ／ｍＬである。好ましくは、メタクレゾールの濃度は約３．１５ｍｇ／ｍＬである。
【００８３】
体液とほぼ等張ではない溶液は投与された際、痛く刺すような感覚を生じ得るので、組成物を投与する際、注射部位での体液の等張性（すなわち、浸透圧）に出来るだけ近くほぼ一致することが望ましい。従って、組成物は注射の部位での体液とほぼ等張であることが望ましい。等張化剤の非存在下で組成物の浸透圧が組織の浸透圧（血液については３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ；浸透圧についての欧州薬局方の要件は＞２４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである）よりも十分に低ければ、そのときは、等張化剤を一般に加えて組成物の等張性を約３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇまで上げるべきである。典型的な等張化剤はグリセロール（グリセリン）及び塩化ナトリウムである。等張化剤の添加が必要とされるのであれば、グリセロールが好まれる。添加される等張化剤の量は標準の技法を用いて容易に決定される。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｄａｖｉｄ  Ｂ．Ｔｒｏｙ  ａｎｄ  Ｐａｕｌ  Ｂｅｒｉｎｇｅｒ，ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００６，ｐｐ．２５７−２５９；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｌｉｎｄａ  Ｅｄ  Ｆｅｌｔｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，２０１３，ｐｐ．２７７−３００。特定の実施形態では、グリセロールの濃度は約１〜約１６ｍｇ／ｍＬである。
【００８４】
特定の実施形態では、医薬組成物は保存及び使用の条件下では安定である。本明細書で使用されるとき、用語「安定な」は、たとえば、５％未満のインスリン効能の喪失、１．５％以下のＡ−２１デスアミドの形成、４％以下のインスリン及びＡ−２１デスアミド以外の物質（まとめて他の関連物質（ＯＲＳ）と呼ばれる）の発生、１．５％未満の高分子量（ＨＭＷ）形成、及び沈殿のない透明で無色の溶液の維持によって示されるような化学的及び物理的双方の安定性を指す。そのような特性は、たとえば、以下で記載される試験にて要約されるものを含む既知の技法によって測定されてもよい。特定の実施形態では、医薬組成物は２〜８℃で少なくとも２４ヵ月の保存を可能にするほど安定である。特定の実施形態では、医薬組成物は、再利用できるペン型注入器におけるバイアル用またはカートリッジ用に３０℃までの温度で２８日までの使用中を可能にするほど安定である。特定の実施形態では、医薬組成物は、２〜８℃で少なくとも３６ヵ月の保存を可能にするほど安定である。特定の実施形態では、医薬組成物は、再利用できるペン型注入器におけるバイアル用またはカートリッジ用に３０℃までの温度で３２日までの使用中を可能にするほど安定である。特定の実施形態では、組成物は、７日間まで連続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置での使用を可能にするほど安定である。
【００８５】
上記で言及されたように、時間作用における改善に寄与するために添加されるクエン酸塩は、特定のｐＨレベルで緩衝特性を有することも知られているが、所望であれば、追加の緩衝化合物を含めてもよい。そのような緩衝化合物の例は、たとえば、二塩基リン酸ナトリウムのようなリン酸緩衝液、または酢酸ナトリウム及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）である。リン酸塩またはＴＲＩＳの緩衝液が好まれる。市販のインスリン組成物のｐＨは普通７．２〜７．６の範囲であり、一般的な目標ｐＨとしては７．４±０．１である。本発明の組成物のｐＨは通常７．０〜７．８であり、それは、生理的に適当な酸及び塩基、通常、塩酸１０％及び水酸化ナトリウム１０％を用いて調整される。好ましくは、ｐＨは約７．４である。
【００８６】
本発明の組成物の投与の経路は、静脈内、皮内または腹腔内の経路も使用されてもよいけれども、通常、たとえば、注射器またはペン型用具による自己投与される皮下注射による、または、インスリンポンプ装置による連続皮下インスリン注入療法によるであろう。好ましくは、投与の経路は自己投与される皮下注射による。注射される活性剤の用量は患者の主治医と相談して患者によって決定されるであろう。
【００８７】
本発明の追加の実施形態には以下で記載されるものが含まれる。
インスリン、クエン酸塩、亜鉛、マグネシウム、塩化物、界面活性剤及び保存剤を含む医薬組成物。
【００８８】
インスリンがヒトインスリン、インスリンリスプロ、インスリンアスパルトまたはインスリングルリジンから成る群から選択される、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【００８９】
インスリンがインスリンリスプロである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【００９０】
インスリン濃度が約１００〜５００Ｕ／ｍＬである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【００９１】
インスリン濃度が約１００〜３００Ｕ／ｍＬである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【００９２】
インスリン濃度が約１００〜２００Ｕ／ｍＬである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【００９３】
インスリン濃度が約１００Ｕ／ｍＬである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。インスリン濃度が約１００Ｕ／ｍＬである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【００９４】
クエン酸塩の濃度が約１０〜約３５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【００９５】
クエン酸塩の濃度が約１０〜約３０ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【００９６】
クエン酸塩の濃度が約１５〜約３５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【００９７】
クエン酸塩の濃度が約１５〜約３０ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【００９８】
クエン酸塩の濃度が約１５〜約２５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【００９９】
クエン酸塩の濃度が約１５〜約２０ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１００】
クエン酸塩の濃度が約２０〜約２５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１０１】
亜鉛の濃度が約０．２〜約２ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１０２】
亜鉛の濃度が約０．３〜約１ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１０３】
亜鉛の濃度が約０．４〜約１ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１０４】
亜鉛の濃度が約０．６〜約０．９ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１０５】
マグネシウムのクエン酸塩に対するモル比が約１：１０〜約１：２である、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１０６】
マグネシウムのクエン酸塩に対するモル比が約１：５〜約１：３である、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１０７】
マグネシウムの濃度が約１〜約１５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１０８】
マグネシウムの濃度が約１〜約５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１０９】
マグネシウムの濃度が約５〜約１０ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１１０】
マグネシウムの濃度が約１０〜約１５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１１１】
マグネシウムの濃度が約３〜約８ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１１２】
マグネシウムの濃度が塩化マグネシウムの包含を介して提供される、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１１３】
総塩化物の濃度が約１０〜約６０ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１１４】
総塩化物の濃度が約１５〜約３５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１１５】
総塩化物の濃度が約１５〜約３０ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１１６】
総塩化物の濃度が約２０〜約２５ｍＭである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１１７】
組成物が約１から約５０ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１１８】
組成物が約１から約２５ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１１９】
組成物が約１から約２０ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１２０】
界面活性剤の濃度が約０．００１〜約０．２％ｗ／ｖである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１２１】
界面活性剤がポロキサマー１８８である、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１２２】
ポロキサマー１８８の濃度が約０．００３〜約０．２％ｗ／ｖである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１２３】
ポロキサマー１８８の濃度が約０．０３〜約０．１２％ｗ／ｖである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１２４】
ポロキサマー１８８の濃度が約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１２５】
保存剤がフェノール及びメタクレゾールから成る群から選択される、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１２６】
保存剤がメタクレゾールである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１２７】
メタクレゾールの濃度が約２．５〜約３．８ｍｇ／ｍＬである、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１２８】
さらに等張化剤を含む、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１２９】
等張化剤としてグリセロールを含む、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１３０】
約１〜約１６ｍｇ／ｍＬの濃度で等張化剤としてグリセロールを含む、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１３１】
さらに追加の緩衝液を含む、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１３２】
組成物のｐＨが約７．０〜約７．８である、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１３３】
組成物が、同じインスリンを含有するが、クエン酸塩を含有しない組成物よりも少なくとも２０％迅速である血中へのインスリンの取り込みを提供する、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１３４】
組成物が、同じインスリンを含有するが、クエン酸塩を含有しない組成物よりも少なくとも２０％迅速である作用の発現を提供する、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１３５】
組成物が、同じインスリンを含有するが、クエン酸塩を含有しない組成物よりも少なくとも３０％迅速である血中へのインスリンの取り込みを提供する、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１３６】
組成物が、同じインスリンを含有するが、クエン酸塩を含有しない組成物よりも少なくとも３０％迅速である作用の発現を提供する、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１３７】
組成物が２〜８℃で少なくとも２４ヵ月の保存を可能にするほど安定である、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１３８】
組成物が再利用できるペン型注入器におけるバイアル用またはカートリッジ用に３０℃までの温度で２８日までの使用中を可能にするほど安定である、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１３９】
組成物が２〜８℃で少なくとも３６ヵ月の保存を可能にするほど安定である、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１４０】
組成物が再利用できるペン型注入器におけるバイアル用またはカートリッジ用に３０℃までの温度で３２日までの使用中を可能にするほど安定である、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１４１】
組成物が７日間までの連続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置での使用を可能にするほど安定である、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１４２】
組成物が追加のキレート剤を含まない、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１４３】
組成物がＥＤＴＡを含まない、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１４４】
組成物が、ＥＤＴＡ、エチレングリコール四酢酸（ＥＧＴＡ）、アルギン酸、アルファリポ酸、ジメルカプトコハク酸（ＤＭＳＡ）、または１，２−ジアミノシクロヘキサン四酢酸（ＣＤＴＡ）を含まない、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１４５】
組成物がどんな血管拡張剤も含まない、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１４６】
組成物がどんなニトログリセリンも含まない、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１４７】
組成物が、アデノシン、内皮由来過分極因子、ホスホジエステラーゼ５型（ＰＤＥＳ）阻害剤、カリウムチャンネル開口薬、プロスタサイクリン、フォルスコリン、ニトログリセリン、酸化窒素形成剤、亜硝酸アミル、またはニトロプルシドを含まない、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１４８】
組成物がどんなオリゴ糖も含まない、上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１４９】
それを必要とするヒトに有効用量の上述の実施形態のいずれかの医薬組成物を投与することを含む、糖尿病を治療する方法。
【０１５０】
治療法で使用するための上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１５１】
糖尿病の治療で使用するための上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１５２】
糖尿病の治療のための薬物の製造において使用するための上述の実施形態のいずれかの医薬組成物。
【０１５３】
上述の実施形態のいずれかの医薬組成物のいずれか１つを含む複数回使用バイアル。
【０１５４】
上述の実施形態のいずれかの医薬組成物のいずれか１つを含む再使用できるペン型注入器。
【０１５５】
上述の実施形態のいずれかの医薬組成物のいずれか１つを含む連続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置。
【０１５６】
本発明は以下の実施例によってさらに説明されるが、それらは限定として解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１５７】
薬物動態試験及び薬物力学試験
３５ｍＭのクエン酸塩と０．３ｍＭの亜鉛と５ｍＭのＭｇＣｌ２と２３ｍＭのＮａＣｌと共に製剤化されたインスリンリスプロ
以前固定した血管アクセスポートを持つ糖尿病（アロキサンで誘導された）の去勢オスのユカタンミニブタをスタッフ及び獣医の監督のもとで使用した。糖尿病の動物は個別に飼育し、新鮮な水を自由摂取させる。１日２回の標準餌の食餌を与え、１日２回の適当な維持基準及び食餌時のインスリンを与えて糖尿病状態を管理する。
【０１５８】
試験物品（以下の表における組成物Ａ）を製剤化し、試験場所に送ったが、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）インスリン対照は試験場所でのその場の市販のバイアルだった。
表１
【表２】
0006328855.tif 000004
【０１５９】
試験の前日、動物には１日の分配量の半分の餌を与え、朝の維持投与で０．２Ｕ／ｋｇのＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）Ｍｉｘ７５／２５インスリンを投与した。試験動物すべてを一晩絶食させ、試験日での薬剤投与に先立って夕方のインスリンまたは餌を与えなかった。
【０１６０】
試験の朝、拘束するために動物すべてをスリングに入れ、血管アクセスポート（採血のために設けた）にアクセスし、開存性をチェックした。動物を無作為に処理群に入れた。これはｎ＝１３での完全なクロスオーバー計画だった。１匹の動物が組成物Ａ処理群に参加しなかったので、その処理群ではｎ＝１２だった。
【０１６１】
２回のベースライン血液試料（−３０分と−２０分）を採取した後、動物を檻に戻し、約３００ｇを食べさせた。完全な餌の消費の提示の２０分後、Ｔｅｒｕｍｏインスリン注射器（１／２”の針で０．３または０．５ｍＬ）によって試験物品を動物の脇腹の皮下に注射した（０分）。残りの採血期間全体を通して試験動物はすべて清潔で新鮮な水にアクセスさせた。
【０１６２】
以下の時点：−３０、−２０（次いで直ちに餌を与えた）、０（投与直前）、皮下投与後５、１０、１５、３０、４５、６０、７５、９０、１０５、１２０、１５０、１８０、２４０及び３６０分にて各動物から連続血液試料（各２．０ｍＬ）を採取した。
【０１６３】
血液試料（抗凝固剤：なし［血清］）を少なくとも３０分間、しかし、２時間を超えずに常温で維持して凝固させた。次いで遠心分離によって血清を分離し、２つのアリコートに分け、ほぼ−７０℃で凍結保存した。
【０１６４】
血清グルコース濃度は、自動ＡＵ４８０臨床検査分析器（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｂｒｅａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を用いて測定した。ＰＫ用のアリコートは翌日配送サービスによってドライアイス上でＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｓｔ．Ｃｈａｒｌｅｓ，ＭＯに送り、詳細な試料伝票を含めた。
【０１６５】
血清グルコースのデータは指定されない限り、平均値（ｍｇ／ｄＬ）±ＳＥＭとして以下の表２に示す。
表２
【表３】
0006328855.tif 000005
【０１６６】
異なる時点で異なる製剤のもとで血清グルコースの変化を統計的に比較するために、微分解析を利用した。各時点での血中グルコースの変化は現時点での一次微分係数（瞬間方向変化）を特徴とする。次数１０までの多項式を各個動物の時間経過データに当て嵌める。Ｂａｙｅｓｉａｎ情報基準（ＢＩＣ）を用いて多項式の最適な次数を選択する。各時点での変化の比率をその時点での適合させた多項式曲線の微分係数として算出する。いったん微分係数が得られると、ＡＮＯＶＡモデルを当て嵌めて各時間での異なる製剤を比較する。動物ごとの変動はＡＮＯＶＡモデルで説明される。対比を構築して異なる製剤を比較し、Ｒパッケージ「ｍｕｌｔｃｏｍｐ」を用いてｐ値を調整する。時間０の後に動物に投与するので、時間０は解析に含まれない。１５０分を超える時点については、微分係数を堅実に推定するのに十分な時点はないので、これらの時点は統計的解析から除外される。
【０１６７】
組成物ＡはＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）に比べて、投与後５、１０及び１５分で有意に（ｐ≦０．０１）速い血清グルコースの低下を生じた。
【０１６８】
総インスリンＲＩＡを用いて、組成物Ａ処理群及びＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）処理群について血清ＰＫ試料のインスリンレベルを測定した。アッセイについての定量の下限及び上限はそれぞれ２０ｐＭ及び５０００ｐＭである。定量の下限を下回る値は２０ｐＭであると見なされる。Ｐｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ｖ６．３を用いて非コンパートメント薬物動態解析を行う。
表３
【表４】
0006328855.tif 000006
略記：Ｔｍａｘ＝最大濃度までの時間、Ｃｍａｘ＝最大濃度、ＡＵＣＩＮＦ＝０から無限までの曲線下面積、ＣＬ／Ｆ＝クリアランス／生体利用効率
Ｔｍａｘの平均値及び中央値はＨｕｍａｌｏｇよりも組成物Ａにおいてそれぞれ５５％及び７２％速い。
【０１６９】
２５〜３５ｍＭのクエン酸塩と０．２８５ｍＭの亜鉛と５ｍＭのＭｇＣｌ２と１５〜２３ｍＭのＮａＣｌと共に製剤化されたインスリンリスプロ
【０１７０】
一般に上述の手順に従って糖尿病（アロキサンで誘導された）の去勢オスのユカタンミニブタにて、種々の濃度のクエン酸塩及び亜鉛、塩化マグネシウム及び塩化ナトリウムを含む組成物の試験を行う。
【０１７１】
試験物品（以下の表における組成物Ａ’及びＢ）を製剤化し、試験場所に送り、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）インスリン対照は試験場所でのその場の市販のバイアルである。
表４
【表５】
0006328855.tif 000007
【０１７２】
試験は、ブタすべてを処理すべてにおいて検討する２１匹のブタの完全クロスオーバー計画として設計する（ｎ＝２１）。１匹の動物が＜２００ｍｇ／ｄｌのベースライン血糖のためにＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）処理群から除外され、１匹の動物が非特許ポートのためにＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）処理群から除外されるので、その処理群ではｎ＝１９である。１匹の動物が注射時の用量の報告ミスのために組成物Ａ’処理群から除外されるので、その処理群ではｎ＝２０である。１匹の動物が＜２００ｍｇ／ｄｌのベースライン血糖のために組成物Ｂ処理群から除外されるので、その処理群ではｎ＝２０である。
【０１７３】
血清グルコースのデータは平均値（ｍｇ／ｄＬ）±ＳＥＭとして以下の表５にて提示される。
表５
【表６】
0006328855.tif 000008
【０１７４】
異なる時点で異なる製剤のもとで血清グルコースの変化を統計的に比較するために、一般に上述の手順に従って、微分解析を利用した。組成物Ａ’及びＢはそれぞれ、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）に比べて投与後５、１０及び１５分で血清グルコースにて有意に（ｐ≦０．０１）速い低下を生じた。
【０１７５】
血清インスリン濃度及びＰＫパラメータを生成し、上述のように一般に解析し、ＰＫの結果を以下の表６にて提供する。
表６
【表７】
0006328855.tif 000009
中央値Ｔｍａｘは、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）よりも組成物Ａ’及びＢにおいて３３％及び６７％速く、平均値ＴｍａｘはＨｕｍａｌｏｇよりも組成物Ｂにて４８％速い。
【０１７６】
１５ｍＭのクエン酸塩と０．２８５ｍＭの亜鉛と５ｍＭのＭｇＣｌ２と１５ｍＭのＮａＣｌと共に製剤化されたインスリンリスプロ
【０１７７】
一般に上述の手順に従って糖尿病（アロキサンで誘導された）の去勢オスのユカタンミニブタにて、クエン酸塩、亜鉛、塩化マグネシウム及び塩化ナトリウムを含む組成物で試験を行う。組成物Ｃを製剤化し、試験場所に送り、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照は市販のバイアルである。
表７
【表８】
0006328855.tif 000010
【０１７８】
試験は、ブタすべてを処理すべてにおいて検討する１３匹のブタの完全クロスオーバー計画として設計する（ｎ＝１３）。１匹の動物が＜２００ｍｇ／ｄｌのベースライン血糖のために組成物Ｃ処理群から除外され、１匹の動物が注射時の用量の報告ミスのために組成物Ｃ処理群から除外されるので、結果的にその処理群ではｎ＝１１である。
【０１７９】
血清グルコースのデータは平均値（ｍｇ／ｄＬ）±ＳＥＭとして以下の表８にて提示する。
表８
【表９】
0006328855.tif 000011
【０１８０】
組成物ＣはＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照のプロファイルに比べてグルコースのプロファイルでシフトを生じた。
【０１８１】
血清インスリン濃度及びＰＫパラメータを生成し、上述のように一般に解析し、ＰＫの結果を以下の表９にて提供する。
表９
【表１０】
0006328855.tif 000012
Ｔｍａｘの平均値及び中央値はそれぞれ、Ｈｕｍａｌｏｇよりも組成物Ｃにて２８％及び２５％速い。
【０１８２】
２５ｍＭのクエン酸塩と０．２８５ｍＭの亜鉛と２５ｍＭのＮａＣｌと共に製剤化されたインスリンリスプロ
【０１８３】
一般に上述の手順に従って糖尿病（アロキサンで誘導された）の去勢オスのユカタンミニブタにて、２５ｍＭのクエン酸塩、亜鉛、及び塩化ナトリウムを含む組成物で試験を行う。
【０１８４】
試験物品（以下の表における組成物Ｄ）を製剤化し、試験場所に送り、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）インスリン対照は試験場所でのその場の市販のバイアルだった。
表１０
【表１１】
0006328855.tif 000013
【０１８５】
この試験は、同じ用量でのＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）と比較される３つの用量（０．１、０．２及び０．４単位／ｋｇ）の組成物Ｄから成る。試験は、ブタすべてを処理すべてにおいて検討する２１匹のブタの完全クロスオーバー計画として設計する（ｎ＝２１）。０．４単位／ｋｇの用量については、２匹の動物を組成物Ｄ処理群から除外した（１匹は病気のために及び１匹はポート非特許性のために）ので、その処理群ではｎ＝１９だった。１匹の動物がＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）０．４単位／ｋｇ処理群から除外された（ポート非特許性のために）ので、その処理群ではｎ＝２０だった。他の用量すべては各群でｎ＝２１だった。
【０１８６】
血清グルコースのデータは平均値（ｍｇ／ｄＬ）±ＳＥＭとして表１１にて提示する。
表１１
【表１２】
0006328855.tif 000014
【０１８７】
異なる時点で異なる製剤のもとで血清グルコースの変化を統計的に比較するために、一般に上述の手順に従って、微分解析を利用した。それぞれ同じ用量でのＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）に対して比較すると、組成物Ｄの３つの用量（０．１、０．２及び０．４Ｕ／ｋｇ）はすべて５、１０及び１５分の時点での血糖レベルで有意に（ｐ≦０．０１）速い低下を生じる。
【０１８８】
薬物動態解析については、オンラインの無作為化ツールを用いて１１匹のブタを無作為に選択した。これらのブタについての血清ＰＫ試料のためのインスリンレベルを、総インスリンＲＩＡを用いて測定する。アッセイについての定量の下限及び上限はそれぞれ２０ｐＭ及び５０００ｐＭである。定量の下限を下回る値は２０ｐＭであると見なされる。Ｐｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ｖ６．３を用いて非コンパートメント薬物動態解析を行う。
表１２
【表１３】
0006328855.tif 000015
中央値Ｔｍａｘの値は、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）による同じ用量に比べて０．１Ｕ／ｋｇ、０．２Ｕ／ｋｇ及び０．４Ｕ／ｋｇの組成物Ｄ群にて６７％、５０％及び４０％速い。平均値Ｔｍａｘの値は、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）による同じ用量に比べて０．１Ｕ／ｋｇ及び０．４Ｕ／ｋｇの組成物Ｄ群にて２０％及び３５％速かった。総曝露及びＣｍａｘは、０．２Ｕ／ｋｇ及び０．４Ｕ／ｋｇの用量にてＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）よりも組成物Ｄで大きいと思われる。
【０１８９】
２５ｍＭのクエン酸塩と５ｍＭのＭｇＣｌ２と共に製剤化されたヒトインスリン、インスリンアスパルト及びインスリングルリジン
【０１９０】
一般に上述の手順に従って糖尿病（アロキサンで誘導された）の去勢オスのユカタンミニブタにて、３種の異なるインスリン、２５ｍＭのクエン酸塩及び塩化マグネシウムを含む組成物で試験を行う。
【０１９１】
ＨＵＭＵＬＩＮ−Ｒ（登録商標）、ＮＯＶＯＬＯＧ（登録商標）及びＡＰＩＤＲＡ（登録商標）の市販のバイアルに十分なクエン酸塩と塩化マグネシウムとを加え、２５ｍＭのクエン酸塩と５ｍＭの塩化マグネシウムの濃度に達することによって試験物品（以下の表における組成物Ｅ、Ｆ及びＧ）を製剤化する。
表１３
【表１４】
0006328855.tif 000016
【０１９２】
試験は、ブタすべてを処理すべてにおいて検討する完全クロスオーバー計画として設計する（ｎ＝２０）。１匹の動物が＜２００ｍｇ／ｄｌのベースライン血糖のために組成物Ｆ処理群から除外されるので、結果的にその群ではｎ＝１９である。血清グルコースのデータは平均値（ｍｇ／ｄＬ）±ＳＥＭとして表１４にて提示する。
【０１９３】
表１４
【表１５】
0006328855.tif 000017
【０１９４】
インスリンアスパルト及びヒトインスリンのクエン酸塩含有製剤はそれぞれ、Ｎｏｖｏｌｏｇ（登録商標）及びＨｕｍｕｌｉｎ−Ｒ（登録商標）の対照に比べてグルコースのプロファイルにてシフトを生じる。インスリングルリジンのクエン酸塩含有製剤は、Ａｐｉｄｒａ（登録商標）対照に比べて投与の後、最初のおよそ９０分間であまり顕著ではないシフトを生じる。
【０１９５】
種々の濃度のクエン酸塩とＭｇＣｌ２と亜鉛と界面活性剤とＮａＣｌと共に製剤化されたインスリンリスプロ
【０１９６】
一般に上述の手順に従って糖尿病（アロキサンで誘導された）の去勢オスのユカタンミニブタにて、種々の濃度のクエン酸塩、塩化マグネシウム、亜鉛、界面活性剤及び／または塩化ナトリウムを含む組成物で試験を行う。
【０１９７】
以下の表における試験組成物Ｈ及びＪはバルクインスリンリスプロの医薬品有効成分（ＡＰＩ）から調製され、以下の表における試験物品Ｉ及びＫはＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）製剤のバイアルにクエン酸塩と示した安定剤とを加えることによって調製され、それらを試験場所に送付し、Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）インスリン対照は試験場所でのその場の市販のバイアルである。
表１５
【表１６】
0006328855.tif 000018
【０１９８】
試験は、ブタすべてを処理すべてにおいて検討する完全クロスオーバー計画として設計する（ｎ＝１９）。１匹の動物が、ポート障害または動物の状態のために組成物Ｉ、Ｊ及びＫの処理群のそれぞれから除外されるので、結果的にそれらの処理群ではｎ＝１８である。血清グルコースのデータは平均値（ｍｇ／ｄＬ）±ＳＥＭとして表１６にて提示する。
【０１９９】
表１６
【表１７】
0006328855.tif 000019
【０２００】
クエン酸塩含有の製剤はＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照に比べてグルコースのプロファイルにてシフトを生じる。
【０２０１】
Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）及び組成物Ｈ、Ｊ及びＫについての血清インスリン濃度及びＰＫパラメータを生成し、上述のように一般に解析し、ＰＫの結果を以下の表１７にて提供する。
表１７
【表１８】
0006328855.tif 000020
【０２０２】
結果は、組成物Ｈ、Ｊ及びＫがＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）よりも速いＰＫの作用発現を有することを示している。
【０２０３】
安定性試験
種々の濃度のクエン酸塩と塩化ナトリウムと塩化マグネシウムと共に製剤化されたインスリンリスプロ
【０２０４】
加速保存可能期間安定性試験を行って、種々の濃度のクエン酸塩、塩化ナトリウム、及び任意で塩化マグネシウムと同時製剤化された場合のインスリンリスプロの安定性を評価する。以下の表で述べられる組成を有する安定性試料は、以下の表で示される他の賦形剤と共にインスリンリスプロの医薬品有効成分を製剤化することによって（組成物Ｌ、Ｍ及びＮ）、またはＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）製剤のバイアルにクエン酸塩と塩化ナトリウムとを加えることによって（組成物Ｏ）調製される。
表１８
【表１９】
0006328855.tif 000021
【０２０５】
０．２２ミクロンのＰＶＤＦ膜（Ｃａｔ番号ＳＬＧＶ０１３ＳＬ，Ｍｉｌｌｅｘ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて溶液を濾過し、上にネジ蓋の付いた（Ｃａｔ番号Ｃ４０１５−６７Ａ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ）ガラス製のバイアル（Ｃａｔ番号ＮＣ４０１５−１，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．）に分配し、それぞれ２〜８℃及び３０℃でインキュベートする。３０℃のインキュベート温度から分析のために開始時、８、１６、２７、３６、４４、５４及び６６日の時点で試料を取り出した。５℃のインキュベート温度から分析のために開始時、２７、３６、４４、５４及び６６日の時点で試料を取り出す。
【０２０６】
サイズ排除高速液体クロマトグラフィ（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）解析を行って、タンパク質の有効性を評価し、２７６ｎｍでＵＶ検出器を用いて安定性の時点での各組成物における高分子量種を定量する。２５分の流れ時間にわたって定組成溶出の移動相（０．１％ＴＦＡ、５０％ＡＣＮ）にて１．０ｍＬ／分の流速でＳｅｐａｘ  Ｚｅｎｉｘ−Ｃ  ＳＥＣ−８０、７．８×３００ｍｍの３μｍ粒子のカラム（ｃａｔａｌｏｇ番号２３３０８０−７８３０）を用いて室温にて各試料（１０μＬ）を分離する。インスリン濃度は、インスリンリスプロの基準面積とインスリンのピーク面積を比較し、逆相ＨＰＬＣにより決定された純度について調整することによって算出される。ＩＵ／ｍＬで報告された結果を以下で示す。
表１９
【表２０】
0006328855.tif 000022
表２０
【表２１】
0006328855.tif 000023
【０２０７】
クエン酸塩含有の試料及びＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照試料のインスリンの損失は４℃及び３０℃で６６日目まで試料すべてについて５％未満である。
【０２０８】
高分子量の比率（％ＨＭＷ）は主ピークに先立って溶出するピークすべての総面積％を積分することによって算出される。結果（％ＨＭＷ）を以下の表で示す。
表２１
【表２２】
0006328855.tif 000024
表２２
【表２３】
0006328855.tif 000025
【０２０９】
ＨＭＷの形成は、クエン酸塩含有の試料及びＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照試料のすべてについて４℃及び３０℃で６６日目まで１％未満である。
【０２１０】
逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）解析を行って、２１４ｎｍでのＵＶ検出器を用いて安定性の時点で各組成物におけるタンパク質の純度を評価する。移動相Ａ（５０ｍＭの硫酸塩、ｐＨ２．３＋２０％アセトニトリル（ｖ／ｖ））及び移動相Ｂ（５０ｍＭの硫酸塩、ｐＨ２．３＋５０％アセトニトリル（ｖ／ｖ））による０．６ｍＬ／分の流速でのＷａｔｅｒｓ  ＢｉｏＳｕｉｔｅ  Ｃ１８  ＰＡ−Ｂ、３．５μｍ、２．１×１５０ｍｍのＨＰＬＣカラム（Ｐａｒｔ番号１８６００２４３５）、または匹敵するカラムを用いることによって各試料（５μＬ）を４０℃にて分離する。０、３、１５、２１、２６、２７、２７．５及び３５．０分での移動相Ｂの勾配はそれぞれ、２１、２５、２５、３０、８０、８０、２１及び２１％である。主ピークとＡ−２１デスアミドの外側にある試料の比率は、１００パーセントから主ピークの比率とＡ−２１デスアミドの比率を差し引くことによって決定される。まとめて、これらのピークは他の関連物質（ＯＲＳ）と見なされる。結果（主ピークとＡ−２１デスアミドの外側の％）を以下で示す。
表２３
【表２４】
0006328855.tif 000026
表２４
【表２５】
0006328855.tif 000027
【０２１１】
クエン酸塩含有の試料及びＨｕｍａｌｏｇ（登録商標）対照試料のすべてについてのＯＲＳは４℃にて６６日間で１．５％未満であり、３０℃にて６６日間で３．０％未満である。
２５ｍＭのクエン酸塩と０．３ｍＭの亜鉛と５ｍＭのＭｇＣｌ２と０．０９％のポロキサマーと種々の濃度の塩化物と共に製剤化されたインスリンリスプロの物理的安定性
【０２１２】
バルク無菌操作用の水にて２００Ｕ／ｍＬのインスリンリスプロ／ｍＬと３２ｍｇのグリセリン／ｍＬと６．３０ｍｇのメタクレゾール／ｍＬと０．６ｍＭの亜鉛を含むリスプロの濃縮ストック製剤を調製する。製剤は塩酸でｐＨ調整を行い、インスリンリスプロを溶解し、次いで水酸化ナトリウムで７．４５のｐＨに合わせる。
【０２１３】
次いで、インスリンリスプロ濃縮液をクエン酸ナトリウム緩衝液、塩化マグネシウム６水和物粉末、ポロキサマー１８８溶液、及び顆粒状塩化ナトリウムで希釈し、バルク無菌操作用の適量の水で、２３．２ｍＭ（組成物Ｐ）または１７．７ｍＭ（組成物Ｑ）の総塩化物を伴った２５ｍＭのクエン酸塩、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０９％のポロキサマー１８８、１００単位／ｍＬのリスプロ、１６ｍｇ／ｍＬのグリセリン、３．１５ｍｇ／ｍＬメタクレゾール、及び０．３ｍＭの亜鉛の組成物にすることによって試験製剤を調製する。
【０２１４】
製剤を無菌濾過し、次いで容積測定して１０ｍＬのガラス製バイアルに移し、７ｍＬ満たし、栓をしてクリンプシールする。
【０２１５】
１３日間で、加速安定性試験（３０℃、１分当たり７５回のストロークで振盪（ｓｐｍ））のバイアルは２、４、８及び１３日目での目視検査を受ける。沈殿のない透明で無色の溶液を含有するバイアルを「合格」としてスコア化されたと見なす一方で、粒子状物質を含有するまたは透明ではない及び／または変色している溶液含有するバイアルを「不合格」として記録する。データは表２５にて以下で提供する。
表２５
【表２６】
0006328855.tif 000028
【０２１６】
マグネシウムを伴って及び伴わずに２５ｍＭのクエン酸塩と０．３ｍＭの亜鉛と０．０９％のポロキサマーと２３ｍＭの総塩化物と共に製剤化されたインスリンリスプロの物理的な安定性
【０２１７】
バルク無菌操作用の水にて２００Ｕ／ｍＬのインスリンリスプロ／ｍＬと３２ｍｇのグリセリン／ｍＬと６．３０ｍｇのメタクレゾール／ｍＬと０．６ｍＭの亜鉛を含むリスプロの濃縮ストック製剤を調製する。製剤は塩酸でｐＨ調整を行い、インスリンリスプロを溶解し、次いで水酸化ナトリウムで７．４５のｐＨに合わせる。
【０２１８】
次いで、インスリンリスプロ濃縮液をクエン酸ナトリウム緩衝液、ポロキサマー１８８溶液、顆粒状塩化ナトリウム、任意で塩化マグネシウム６水和物粉末で希釈し、バルク無菌操作用の適量の水で、２５ｍＭのクエン酸塩、０．０９％のポロキサマー１８８、１００単位／ｍＬのリスプロ、１６ｍｇ／ｍＬのグリセリン、３．１５ｍｇ／ｍＬメタクレゾール、０．３ｍＭの亜鉛、２３ｍＭの総塩化物及び０ｍＭ（組成物Ｒ）または５ｍＭ（組成物Ｓ）のＭｇＣｌ２の組成物にすることによって試験製剤を調製する。
【０２１９】
製剤を無菌濾過し、次いで容積測定して１０ｍＬのガラス製バイアルに移し、７ｍＬ満たし、栓をしてクリンプシールする。
【０２２０】
一般に上述の方法に続いて定期的な目視検査を伴う１３日間の加速安定性試験にバイアルを供する。データは表２６にて以下で提供する。
表２６
【表２７】
0006328855.tif 000029
【０２２１】
結果は、マグネシウムが組成物Ｒに比べて組成物Ｓの安定性を改善したことを支持している。
２５ｍＭのクエン酸塩と５ｍＭのＭｇＣｌ２と２０ｍＭの塩化物と０．６ｍＭの亜鉛と０．０９％のポロキサマーと共に製剤化されたインスリンリスプロの物理的な安定性
【０２２２】
１００Ｕ／ｍＬのインスリンリスプロ、５ｍＭのＭｇＣｌ２、２０ｍＭの塩化物、０．６ｍＭの亜鉛、０．０９％ｗ／ｖのポロキサマー１８８、５ｍｇ／ｍＬのグリセリン、及び３．１５ｍｇ／ｍＬメタクレゾール含む製剤（組成物Ｔ）で６９日間の加速保存可能期間試験を行う。
【０２２３】
ＨＣｌの添加によりｐＨを下げることによってグリセリン、メタクレゾール、リスプロ及び酸化亜鉛をバルク無菌操作用の水に溶解することによりバルク濃縮製剤を調製する。ＮａＯＨでｐＨを７．４〜７．５に合わせた後、組成物Ｔの最終的な目標賦形剤濃度を達成するための適当な濃度のクエン酸塩と追加の安定剤の溶液を加える。この溶液は、バルク無菌操作用の水におけるクエン酸ナトリウム緩衝液と塩化亜鉛と塩化マグネシウム６水和物とポロキサマー１８８とで構成される。必要に応じてｐＨを７．４〜７．５に合わせた後、塩化ナトリウム溶液を加えて目標の総塩化物濃度を達成する。次いでバルク無菌操作用の水によって製剤を適量の容積に合わせる。
【０２２４】
製剤を無菌濾過し、次いで容積測定して１０ｍＬのガラス製バイアルに移し、１０．３ｍＬ満たし、栓をしてクリンプシールする。バイアルを静止且つ直立にて３０℃で保存し、３６日目と６９日目に一般に上述の方法に従って目視検査する。各時点で検査したバイアルはすべて合格する（３６日目でｎ＝３、６９日目でｎ＝５）。これらの結果は、組成物Ｔが加速保存可能期間試験にて沈殿がなく透明で且つ無色のままであることを支持している。
【０２２５】
種々の濃度のクエン酸塩とマグネシウムと塩化物と亜鉛と界面活性剤とグリセリンとＴＲＩＳと共に製剤化されたインスリンリスプロ
【０２２６】
以下の７種の製剤の物理的な安定性を使用試験における３２日間の模擬患者で調べる。
表２７
【表２８】
0006328855.tif 000030
【０２２７】
ＨＣｌの添加によりｐＨを下げることによってバルク無菌操作用の水に適当量のグリセリン、メタクレゾール、リスプロ、酸化亜鉛及び任意でＴＲＩＳを溶解することにより濃縮リスプロストック溶液を調製する。２つの濃縮溶液の組成は以下とおりである：（１）２００Ｕ／ｍＬのリスプロ、１２ｍＭの総塩化物、１０ｍｇ／ｍＬのグリセリン、６．３ｍｇ／ｍＬのメタクレゾール、０．６ｍＭの総亜鉛、及び（２）２００Ｕ／ｍＬのリスプロ、５１ｍＭの総塩化物、２．６ｍｇ／ｍＬのグリセリン、６．３ｍｇ／ｍＬのメタクレゾール、０．６ｍＭの総亜鉛、８０ｍＭのＴＲＩＳ。次いでＮａＯＨまたはＨＣｌによって溶液を７．４〜７．５のｐＨに合わせ、バルク無菌操作用の水によって容積を合わせる。
【０２２８】
クエン酸ナトリウム緩衝液、亜鉛のＨＣｌ溶液、ｐＨを合わせるための水酸化ナトリウム、塩化マグネシウム６水和物溶液、ポロキサマー１８８溶液、及び塩化ナトリウム溶液を順次加えることによりリスプロストック溶液を希釈することによって試験組成物を調製する。組成物を無菌濾過し、次いで容積測定してバルク無菌操作用の水で適量に容積を合わせる。組成物を容積測定して１０ｍＬのガラス製バイアルに移し、１０．３ｍＬ満たし、栓をしてクリンプシールする。
【０２２９】
組成物を３０℃で保存し、以下のステップで記載されているような疑似使用中投薬状態に１日３回供する：インスリン注射器を入手し、８単位の空気を引き入れる；バイアルを直立の位置におきながら針をバイアルに挿入する；針の先端がインスリン溶液に確実に触れないようにする；バイアルに空気を注入する；針をバイアルの中で保持しながら、バイアルと注射器をひっくり返す；８単位の組成物を引き抜く；注射器に気泡があれば、プランジャーをゆっくり動かして気泡をバイアルに戻す；最終投与量が８単位であるように注射器のプランジャーを調整する；注射器を取り出し、バイアルを３０℃のインキュベータに戻す。
【０２３０】
一般に上述の方法に従って１５、２０、２５、２８及び３２日目に目視検査を行う。データは表２８にて提供される。
表２８
【表２９】
0006328855.tif 000031
【０２３１】
まとめると、上述の試験は、特定の特別な濃度のクエン酸と、たとえば、亜鉛、マグネシウム、塩化物及び界面活性剤のような他の賦形剤とを伴ったインスリンの組成物は作用のさらに速い発現を有すると共にさらに速いグルコース低下効果を有し、特定の実施形態では、化学的に且つ物理的に安定であることを実証している。
【０２３２】
配列
ヒトのインスリンＡ鎖
ＧｌｙＩｌｅＶａｌＧｌｕＧｌｎＣｙｓＣｙｓＴｈｒＳｅｒＩｌｅＣｙｓＳｅｒＬｅｕＴｙｒＧｌｎＬｅｕＧｌｕＡｓｎＴｙｒＣｙｓＡｓｎ（配列番号１）
ヒトのインスリンＢ鎖
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＰｒｏＬｙｓＴｈｒ（配列番号２）．
インスリンリスプロＢ鎖
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＬｙｓＰｒｏＴｈｒ（配列番号３）
インスリンアスパルトＢ鎖
ＰｈｅＶａｌＡｓｎＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＡｓｐＬｙｓＴｈｒ（配列番号４）
インスリングルリジンＢ鎖
ＰｈｅＶａｌＬｙｓＧｌｎＨｉｓＬｅｕＣｙｓＧｌｙＳｅｒＨｉｓＬｅｕＶａｌＧｌｕＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕＶａｌＣｙｓＧｌｙＧｌｕＡｒｇＧｌｙＰｈｅＰｈｅＴｙｒＴｈｒＰｒｏＧｌｕＴｈｒ（配列番号５）
本発明は、以下の態様を含む。
［１］
医薬組成物であって、
（ａ）インスリンと
（ｂ）約１０〜約３０ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約０．２〜約２ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｄ）約１〜約１５ｍＭの濃度でのマグネシウムと、
（ｅ）約１０〜約６０ｍＭの濃度での総塩化物と
（ｆ）約０．００１〜約０．２％ｗ／ｖの濃度での界面活性剤と
（ｇ）保存剤とを含む、前記医薬組成物。
［２］
前記インスリンがインスリンリスプロである［１］に記載の医薬組成物。
［３］
前記インスリンリスプロの濃度が約１００〜約５００Ｕ／ｍＬである［１］または［２］のいずれかに記載の医薬組成物。
［４］
前記クエン酸塩の濃度が約１５〜約２５ｍＭである［１］〜［３］のいずれかに記載の医薬組成物。
［５］
前記亜鉛の濃度が約０．３〜約１．１ｍＭである［１］〜［４］のいずれかに記載の医薬組成物。
［６］
前記マグネシウムの濃度が塩化マグネシウムの包含を介して提供される［１］〜［５］のいずれかに記載の医薬組成物。
［７］
前記マグネシウムの濃度が約３〜約８ｍＭである［１］〜［６］のいずれかに記載の医薬組成物。
［８］
前記塩化物の濃度が約１５〜約３５ｍＭである［１］〜［７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［９］
前記塩化物の濃度が約２０〜約２５ｍＭである［１］〜［８］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１０］
約１から約５０ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む［１］〜［９］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１１］
約１から約２５ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む［１］〜［１０］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１２］
約１から約２０ｍＭに及ぶ濃度で塩化ナトリウムを含む［１］〜［１１］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１３］
前記界面活性剤がポロキサマー１８８である［１］〜［１２］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１４］
前記ポロキサマー１８８の濃度が約０．００３〜約０．２％ｗ／ｖである［１３］に記載の医薬組成物。
［１５］
前記ポロキサマー１８８の濃度が約０．０３〜約０．１２％ｗ／ｖである［１４］に記載の医薬組成物。
［１６］
前記ポロキサマー１８８の濃度が約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖである［１５］に記載の医薬組成物。
［１７］
前記保存剤が、フェノール及びメタクレゾール及びそれらの混合物から成る群から選択される［１］〜［１６］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１８］
前記保存剤がメタクレゾールである［１］〜［１７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［１９］
前記メタクレゾールの濃度が約２．５〜約３．８ｍｇ／ｍＬである［１８］に記載の医薬組成物。
［２０］
さらに等張化剤を含む［１］〜［１９］のいずれかに記載の医薬組成物。
［２１］
前記等張化剤がグリセロールである［２０］に記載の医薬組成物。
［２２］
さらに追加の緩衝液を含む［１］〜［２１］のいずれかに記載の医薬組成物。
［２３］
前記組成物のｐＨが約７．０〜約７．８である［１］〜［２２］のいずれかに記載の医薬組成物。
［２４］
医薬組成物であって
（ａ）約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと
（ｂ）約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約３〜約８ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、
（ｄ）約０．６〜約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｅ）約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、
（ｆ）約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、
（ｇ）約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、
前記組成物のｐＨが約７．０〜７．８である、前記医薬組成物。
［２５］
医薬組成物であって
（ａ）１００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと
（ｂ）約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｄ）約５ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、
（ｅ）約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、
（ｆ）約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、
（ｇ）約３．１５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、
前記組成物のｐＨが約７．４である、前記医薬組成物。
［２６］
医薬組成物であって
（ａ）２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンリスプロと
（ｂ）約１５〜約２５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約３〜約８ｍＭの濃度での塩化マグネシウムと、
（ｄ）約０．６〜約０．９ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｅ）約２０〜約２５ｍＭの濃度での総塩化物と、
（ｆ）約０．０６〜約０．０９％ｗ／ｖの濃度でのポロキサマー１８８と、
（ｇ）約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、
（ｈ）前記組成物のｐＨが約７．０〜７．８である、前記医薬組成物。
［２７］
医薬組成物であって
（ａ）約１００〜約２００ＩＵ／ｍＬの濃度でのインスリンと
（ｂ）約１５〜約３５ｍＭの濃度でのクエン酸塩と、
（ｃ）約５ｍＭまでの濃度での塩化マグネシウムと、
（ｄ）約０．２〜約０．８ｍＭの濃度での亜鉛と、
（ｅ）約１５〜約２５ｍＭの濃度での塩化ナトリウムと、
（ｆ）界面活性剤と、
（ｇ）約２．８〜約３．５ｍｇ／ｍＬの濃度でのメタクレゾールとを含み、
（ｈ）前記組成物のｐＨが約７．０〜７．８である、前記医薬組成物。
［２８］
前記組成物が、同じインスリンを含有するが、クエン酸塩を含有しない組成物よりも少なくとも２０％迅速である血中へのインスリンの取り込みを提供する［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［２９］
前記組成物が、２〜８℃で少なくとも２４ヵ月の保存及び３０℃までの温度で２８日までの使用中を可能にするほど安定である［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３０］
前記組成物がＥＤＴＡを含まない［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３１］
前記組成物がどんな血管拡張剤も含まない［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３２］
前記組成物がどんなオリゴ糖も含まない［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３３］
それを必要とするヒトに有効用量の［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物を投与することを含む、糖尿病の治療方法。
［３４］
治療法で使用するための［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３５］
糖尿病の治療で使用するための［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物。
［３６］
糖尿病の治療のための薬物の製造における［１］〜［２７］のいずれかに記載の医薬組成物の使用。
［３７］
［１］〜［２７］に記載の医薬組成物のいずれか１つを含む製造物品。
［３８］
複数回使用のバイアルである［３７］に記載の製造物品。
［３９］
再利用できるペン型注入器である［３７］に記載の製造物品。
［４０］
連続皮下インスリン注入療法のためのポンプ装置である［３７］に記載の製造物品。
【配列表】
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