(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
固相（８）から被分析物を溶出するための装置（１００）で使用するためのウェル形成機（１）であって、ウェル形成機（１）は、上面（３）と底面（４）と円周面（５）と複数のチャンバ（６）とを有する円筒本体（２）を備えており、複数のチャンバ（６）の各々が、上面（３）、底面（４）及び円周面（５）の各々に開口を画成していて、上面（３）、底面（４）及び円周面（５）の各々に複数の開口が画成されている、ウェル形成機（１）。
【請求項２】
上面の複数の開口（２３）が、円筒本体（２）の円周面（５）から互いに同一距離に位置する、請求項１記載のウェル形成機（１）。
【請求項３】
底面の複数の開口（２４）が、円筒本体（２）の円周面（５）から互いに同一距離に位置する、請求項１又は請求項２記載のウェル形成機（１）。
【請求項４】
上面の複数の開口（２３）の各々が、底面の複数の開口（２４）の対応するものの真上に整列している、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載のウェル形成機（１）。
【請求項５】
円周面の複数の開口（２５）が、円筒本体（２）の上面（３）から互いに同一距離に位置する、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載のウェル形成機（１）。
【請求項６】
複数のチャンバ（６）の各々が、上面（３）と底面（４）と円周面（５）との間に延在するＴ字形を画成する、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載のウェル形成機（１）。
【請求項７】
円周面（５）の複数の開口（２５）の上に整列して配置された圧縮リング（７）をさらに備える、請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載のウェル形成機（１）。
【請求項８】
圧縮リング（７）と円周面（５）との間に挟まれ、円周面（５）の複数の開口（２５）の上に整列して配置された固相（８）をさらに備える、請求項７記載のウェル形成機（１）。
【請求項９】
固相（８）が、電気泳動ゲル又はブロッティング膜である、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載のウェル形成機（１）。
【請求項１０】
固相（８）がストリップである、請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載のウェル形成機（１）。
【請求項１１】
ストリップが、固定化ｐＨ勾配（ＩＰＧ）ストリップである、請求項１０記載のウェル形成機（１）。
【請求項１２】
円筒本体が、上面（３）から底面（４）まで延在する中央開口（９）を備える、請求項１乃至請求項１１のいずれか１項記載のウェル形成機（１）。
【請求項１３】
固相（１０８）から被分析物を溶出するための装置（１００）であって、被分析物が、固相（１０８）の分離方向に沿って分離されており、装置（１００）が、請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載のウェル形成機（１０１）と、ウェル形成機（１０１）の複数のチャンバ（１０６）と流体連通する複数の液体分配チャネル（１１０）とを備えており、複数の液体分配チャネル（１１０）の各々が、複数のチャンバ（１０６）の１つの近傍の入口（１１１）と、通路（１１３）によって入口（１１１）と流体連通する出口（１１２）とを画成している、装置（１００）。
【請求項１４】
複数の液体分配チャネル（１１０）の各々がウェル形成機（１０１）の複数のチャンバ（１０６）の各々から外側に延在している、請求項１３記載の装置（１００）。
【請求項１５】
複数の液体分配チャネル（１１０）の各々が直線的に延在し、複数の液体分配チャネル（１１０）が互いに同一長さである、請求項１３又は請求項１４記載の装置（１００）。
【請求項１６】
複数の液体分配チャネル（１１０）が、積層フォイル（１１４）のスタックによって画成されている、請求項１３乃至請求項１５のいずれか１項記載の装置（１００）。
【請求項１７】
積層フォイル（１１４）のスタックが基部（１１５）で支持されている、請求項１６記載の装置（１００）。
【請求項１８】
複数の液体分配チャネル（１１０）の各々の出口（１１２）が、回収チャンバ（１１６）と流体連通している、請求項１３乃至請求項１７のいずれか１項記載の装置（１００）。
【請求項１９】
回収チャンバ（１１６）がマイクロタイタープレートウェルである、請求項１８記載の装置（１００）。
【請求項２０】
マイクロタイタープレートウェルが、マイクロタイタープレートウェルの屈曲可能な列（１１７）の一部分として提供されている、請求項１９記載の装置（１００）。
【請求項２１】
ウェル形成機（１０１）の円筒本体（１０２）の上面（１０３）の上に整列して配置されたロッドヘッド（１１８）をさらに備え、ロッドヘッド（１１８）は、被分析物の溶出を容易にするために、各々が、ウェル形成機（１０１）の上面の複数の開口（１２３）の１つを介して、ウェル形成機（１０１）の複数のチャンバ（１０６）の１つに適合し、複数のチャンバ（１０６）に圧力を加える複数のロッド（１１９）を備える、請求項１３乃至請求項２０のいずれか１項記載の装置（１００）。
【請求項２２】
被分析物は、固相（８）で分離方向に沿って分離される、固相（８）から被分析物を溶出するための方法であって、
（ｉ）請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載のウェル形成機（１）を供給するステップと、
（ｉｉ）ウェル形成機（１）の円筒本体（２）の円周面（５）の複数の開口（２５）の上に整列して固相（８）を配置するステップと、
（ｉｉｉ）ウェル形成機（１）の円筒本体（２）の円周面（５）と圧縮リング（７）との間に固相（８）が挟まれるように、固相（８）の上に整列して圧縮リング（７）を配置するステップと、
（ｉｖ）固相（８）から被分析物を溶出するステップと
を含む、方法。
【請求項２３】
被分析物の溶出を容易にするために、ウェル形成機（１）の円筒本体（２）における上面の複数の開口（２３）に、ロッドヘッド（１１８）を配置することによって、複数のチャンバ（６）に圧力を加えることをさらに含む、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
当該方法の溶出ステップの後に、複数の液体分配チャネル（１１０）に沿って溶出された被分析物を移動する追加のステップ（ｖ）が続く、請求項２２乃至請求項２３のいずれか１項記載の方法。
【請求項２５】
複数の液体分配チャネル（１１０）の各々は、請求項１８乃至請求項２０のいずれか１項記載の回収チャンバ（１１６）と流体連通しており、当該方法が、複数のチャンバ（６）から複数の液体分配チャネル（１１０）を通って回収チャンバ（１１６）への溶出された被分析物の移動をさらに含む、請求項２４記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体分子処理の分野に関し、詳細には、固相で分離された生体分子の溶出及び移動のための方法及びシステムに関する。本発明は、固相からマイクロタイタープレートウェルのような容器に、生体分子フラグメントを含む溶出された液体の被分析物の試薬混合物を移動するための方法及びシステムを提供する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質、ペプチド又は核酸のような生体分子の同定及び組成を決定できるようにするために、生体分子は、第１に酵素的手段又は化学的手段によってフラグメントに切断される。例としてタンパク質を取り上げると、一般的なアプローチは、特異的なアミノ酸残基でタンパク質を切断する酵素を使用することであり、典型的な例は、リジン又はアルギニン残基の後のタンパク質を加水分解するトリプシンである。トリプシン消化が極めて限定された数のタンパク質を含む試料で実行されるとき、例えば、質量分析（ＭＳ）を使用して、消化から生じるペプチドの質量から示すタンパク質の同定を決定することができる。マトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）質量分析のターゲットに利用される試料は、限定された数のペプチドを含むことのみが許容され、同様に、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）質量分析は、単位時間毎に限定された数のペプチドのみを受け入れることができる。試料は、通常、消化の後、１０万から、１００万ペプチド以上の１０００万ペプチドに容易に対応することもある、何千ものタンパク質を含む極めて複雑な混合物である。それゆえに、ペプチドの厳密な分離が、特性評価及び定量化の前に必要とされる。
【０００３】
生体分子の分離は、電気泳動及びクロマトグラフの方法を含む様々な技術によって、生体分子の同定及び定量化の前に又は生体分子の同定及び定量化と並行して達成することができる。電気泳動は、生体分子の大きさ及び／又は生体分子の電荷に基づいて、生体分子を分離するために、通常、使用される技術である。等電点電気泳動（ＩＥＦ）及びポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）のような電気泳動の技術は、一般に、クロマトグラフ代替物よりもはるかに良好な分解能及び収率を与える。高分解能等電点電気泳動（ＨｉＲＩＥＦ）は、固定化ｐＨ勾配等電点電気泳動（ＩＰＧ）ストリップを使用して、ペプチドの等電点（ｐＩ）に基づいてペプチドを分離する。第１のステップは、等電点電気泳動機器でペプチドを分離し、第２のステップでは、固定化ｐＨ勾配等電点電気泳動ストリップは、液体にペプチドを溶解し、最も多くの液体クロマトグラフィー（ＬＣ）及び質量分析機器によって支持される標準的なマイクロプレートフォーマットに液体を移動する抽出装置に移動される。等電点電気泳動及びポリアクリルアミドゲル電気泳動を組合せたものを基にした２次元電気泳動は、極めて複雑な試料の分離が行われるときに、通常、使用されるアプローチでもある。
【０００４】
しかしながら、電気泳動の技術による不利益は、電気泳動の技術が労働集約的であり、しばしば、職人技を必要とすること及び電気泳動の技術を自動化することが難しいことである。
【０００５】
電気泳動の技術と関連した不利益に対処することを目的とすることを提案してきた１つの解決策は、国際公開第２００６／１１３６２９６号及び国際公開第２００６／１１３６２９７号に記載されたペプチド抽出装置機器である。一直線のウェル形成機は、各々の固定化ｐＨ勾配等電点電気泳動ストリップに装着され、ウェル形成機からマイクロプレートにペプチドを移動する。しかしながら、この技術では、いくつかの操作がさらに必要とされる。さらに、ニードルロボットによって移動する確立された方法は、装着されたウェル形成機を有するゲルストリップからマイクロプレートへの一連の時間のかかる移動に依存する。公知の方法を使用した固定化ｐＨ勾配等電点電気泳動ストリップからマイクロプレートへのペプチドの抽出及び移動は、手動のピペットロボット又はニードルロボットの使用を含む。通常、液体を加えることによって、溶解可能にされなければならない各々７２フラクションを有する２〜８の固定化ｐＨ勾配等電点電気泳動ストリップがある。液体を加えること及び抽出することは、試料の移動を最適化するために、数回行われるべきである。試料は、液体を加えた後、液体中の試料を抽出する前に、しばらくの間、拡散することを必要とする。
【０００６】
それゆえに、試料が分離された固相からの生体分子の抽出及び移動のための、それほど労働集約的にならず、あまり時間のかからない方法に対する要求がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２００５／０４８５９７号
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）及び質量分析機器を使用するような追加の分析のために、固相での生体分子試料の抽出及びマイクロプレートのような容器への移動において有用なシステム及び方法を特徴付ける。詳細には、本発明は、試料を並行して処理することができ、それによって公知の方法と比較して、それほど労働集約的にならず、あまり時間のかからない方法を提供する、固相から被分析物を溶出するための装置を提供する。
【０００９】
１つの態様では、本発明は、固相（８）から被分析物を溶出するための装置（１００）で使用するためのウェル形成機（１）であって、ウェル形成機（１）が、上面（３）と底面（４）と円周面（５）と複数のチャンバ（６）とを有する円筒本体（２）を備えており、複数のチャンバ（６）の各々が、上面（３）、底面（４）及び円周面（５）の各々に開口を画成していて、上面（３）、底面（４）及び円周面（５）の各々に複数の開口が画成されている、ウェル形成機（１）を提供する。
【００１０】
ウェル形成機（１）の一実施形態では、上面の複数の開口（２３）は、円筒本体（２）の円周面（５）から互いに同一距離に位置する。
【００１１】
ウェル形成機（１）の一実施形態では、底面の複数の開口（２４）は、円筒本体（２）の円周面（５）から互いに同一距離に位置する。
【００１２】
ウェル形成機（１）の一実施形態では、上面の複数の開口（２３）の各々は、底面の複数の開口（２４）の対応するものの真上に整列している。
【００１３】
ウェル形成機（１）の一実施形態では、円周面の複数の開口（２５）は、円筒本体（２）の上面（３）から互いに同一距離に位置する。
【００１４】
ウェル形成機（１）の一実施形態では、複数のチャンバ（６）の各々は、上面（３）と底面（４）と円周面（５）との間に延在するＴ字形を画成する。
【００１５】
ウェル形成機（１）の一実施形態では、円周面（５）の複数の開口（２５）の上に整列して配置された圧縮リング（７）をさらに備える。
【００１６】
ウェル形成機（１）の一実施形態では、圧縮リング（７）と円周面（５）との間に挟まれ、円周面（５）の複数の開口（２５）の上に整列して配置された固相（８）をさらに備える。
【００１７】
ウェル形成機（１）の一実施形態では、固相（８）は、電気泳動ゲル又はブロッティング膜である。
【００１８】
ウェル形成機（１）の一実施形態では、固相（８）はストリップである。
【００１９】
ウェル形成機（１）の一実施形態では、ストリップは、固定化ｐＨ勾配（ＩＰＧ）ストリップである。
【００２０】
ウェル形成機（１）の一実施形態では、円筒本体は、上面（３）から底面（４）まで延在する中央開口（９）を備える。
【００２１】
別の態様では、本発明は、固相（１０８）から被分析物を溶出するための装置（１００）であって、被分析物は、固相（１０８）の分離方向に沿って分離されており、装置（１００）は、上記のウェル形成機（１０１）と、ウェル形成機（１０１）の複数のチャンバ（１０６）と流体連通する複数の液体分配チャネル（１１０）とを備えており、複数の液体分配チャネル（１１０）の各々は、複数のチャンバ（１０６）の１つの近傍の入口（１１１）と、通路（１１３）によって入口（１１１）と流体連通する出口（１１２）とを画成する、装置（１００）を提供する。
【００２２】
装置（１００）の一実施形態では、複数の液体分配チャネル（１１０）の各々は、ウェル形成機（１０１）の複数のチャンバ（１０６）の各々から外側に延在している。
【００２３】
装置（１００）の一実施形態では、複数の液体分配チャネル（１１０）の各々は、直線的に延在し、複数の液体分配チャネル（１１０）は互いに同一長さである。
【００２４】
装置（１００）の一実施形態では、複数の液体分配チャネル（１１０）は、積層フォイル（１１４）のスタックによって画成されている。
【００２５】
装置（１００）の一実施形態では、積層フォイル（１１４）のスタックは、基部（１１５）によって支持されている。
【００２６】
装置（１００）の一実施形態では、複数の液体分配チャネル（１１０）の各々の出口（１１２）は、回収チャンバ（１１６）と流体連通している。
【００２７】
装置（１００）の一実施形態では、回収チャンバ（１１６）は、マイクロタイタープレートウェルである。
【００２８】
装置（１００）の一実施形態では、マイクロタイタープレートウェルは、マイクロタイタープレートウェルの屈曲可能な列（１１７）の一部分として提供される。
【００２９】
装置（１００）の一実施形態では、ウェル形成機（１０１）の円筒本体（１０２）の上面（１０３）の上に整列して配置されたロッドヘッド（１１８）をさらに備え、ロッドヘッド（１１８）は、被分析物の溶出を容易にするために、各々が、ウェル形成機（１０１）の上面の複数の開口（１２３）の１つを介して、ウェル形成機（１０１）の複数のチャンバ（１０６）の１つに適合し、複数のチャンバ（１０６）に圧力を加える複数のロッド（１１９）をさらに備える。
【００３０】
いかなる対応する特徴に関しても、本発明の装置の別の実施形態は、本発明のウェル形成機に対して上で規定されるように存在する。
【００３１】
別の態様では、本発明は、被分析物は、固相（８）で分離方向に沿って分離される、固相（８）から被分析物を溶出するための方法であって、
（ｉ）上記のウェル形成機（１）を供給するステップと、
（ｉｉ）ウェル形成機（１）の円筒本体（２）の円周面（５）の複数の開口（２５）の上に整列して分離された被分析物を含む固相（８）を配置するステップと、
（ｉｉｉ）ウェル形成機（１）の円筒本体（２）の円周面（５）と圧縮リング（７）との間に固相（８）が挟まれるように、固相（８）の上に整列して圧縮リング（７）を配置するステップと、
（ｉｖ）固相（８）から被分析物を溶出するステップと
を含む、方法を提供する。
【００３２】
一実施形態では、本発明の方法は、被分析物の溶出を容易にするために、ウェル形成機（１）の円筒本体（２）における上面の複数の開口（２３）に、ロッドヘッド（１１８）を配置することによって、複数のチャンバ（６）に圧力を加えることをさらに含む。
【００３３】
本発明の方法の一実施形態では、方法の溶出するステップの後に、複数の液体分配チャネル（１１０）に沿って溶出された被分析物を移動する追加のステップ（ｖ）が続く。
【００３４】
本発明の方法の一実施形態では、複数の液体分配チャネル（１１０）の各々は、上記の回収チャンバ（１１６）と流体連通しており、方法は、複数のチャンバ（６）から複数の液体分配チャネル（１１０）を通って回収チャンバ（１１６）への溶出された被分析物の移動をさらに含む。
【００３５】
いかなる対応する特徴に関しても、本発明の方法の別の実施形態は、本発明のウェル形成機又は装置のいずれかに対して上で規定されるように存在する。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】円筒本体の詳細を示す、本発明のウェル形成機を示す図である。
【図２】円筒本体の特定の特徴をより詳細に示し、固相及び圧縮リングも含む、本発明のウェル形成機の断面図である。
【図３】図２の断面部分で示されたウェル形成機の分解図である。
【図４】固相が適切な位置に置かれたときの本発明のウェル形成機を示す図である。
【図５】固相及び圧縮リングの両方が適切な位置に置かれた本発明のウェル形成機を示す図である。
【図６】被分析物が固相から溶出されるチャンバと、溶出された被分析物をチャンバからマイクロプレートウェルである回収チャンバに移動するための液体分配チャネルとに圧力を加えるためのロッドヘッドを含む本発明の装置を示す図である。
【図７】本発明の装置にマイクロプレートウェルの曲げることのできるストリップをどのように配置することができるのかを示す図である。
【図８】マイクロプレートウェルの曲げることのできるストリップを、次の処理のステージに直接移動できるマイクロプレートフォームにどのように容易に組み立てることができるのかを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
図１は、上面（３）、底面（４）及び円周面（５）及び中央開口（９）を有する円筒本体（２）を示す本発明の例示のウェル形成機（１）を示す。複数のチャンバ（６）は、全体を見ることはできないが、円周面の開口（２５）の内部に存在するように示されている。面の各々の開口は、円筒本体（２）の周りの全てに一定の間隔で存在する。図では、上面の開口（２３）及び円周面の開口（２５）の２つが示されている。底面（４）の開口は、この図で見ることはできないが、上面の開口（２３）の真下に整列して配置され、それによって、各々のケースで、端部が開口した、上面（３）から底面（４）への円筒通路を画成し、円筒通路は、チャンバ（６）が実質的にＴ字形になるように、円周面（５）への別の通路をさらに含む。
【００３８】
図２は、Ｔ字形をしたチャンバ（６）の１つが断面部分に示された、本発明のウェル形成機（１）の拡大部分を示す。さらに、ウェル形成機（１）の円筒本体（２）と圧縮リング（７）との間に挟まれたストリップの形の固相（８）が、図２に含まれている。この配置では、被分析物の溶出を容易にするために、圧縮リング（７）が固相（８）を適切な位置に保持するように働くことを評価することができる。
【００３９】
固相に存在する「被分析物」は、タンパク質、ペプチド又は核酸のような生体分子である。ウェル形成機で処理する前に、被分析物は、固相（８）で分離方向に沿って分離されている。典型的には、被分析物は、分離のために固相に入れられる前に、フラグメントに開裂される。開裂は、例えばＤＮＡ分子に対して、いかなる数の周知の方法によっても実行することができ、ＤＮＡは、ＤＮＡ制限エンドヌクレアーゼ（又は制限酵素）を使用して小さなフラグメントに切断することができ、タンパク質に対して、特異的なアミノ酸残基でタンパク質を切断する酵素を使用することができ、典型的な例はトリプシンである。電気泳動ゲル又はブロッティング膜である固相での分離が実行されてもよい。一実施形態では、分離された被分析物を含む固相は、本発明のウェル形成機（１）に配置されたとき、ストリップの形で存在する。例えばストリップが固定化ｐＨ勾配（ＩＰＧ）ストリップである分離が実行されるとき、固相はストリップの形で存在するか又は固相が、分離の後、ストリップの形に変換される、すなわち、固相は、その後、ストリップに切断される平面又はスラブの形で存在することが想定される。スラブがストリップに切断されるケースでは、固相が、処理中に、例えばオペレータ、使用された機器又は環境からの他の生体分子で汚染されていないことを保証するために、注意することを必要とする。汚染を回避するための方法は、リンク（http://www.who.int/tdr/publications/documents/glp-handbook.pdf.）で見つけることができる世界保健機関「便覧：医薬品安全性試験実施基準（ＧＬＰ）：規制された非臨床的な研究及び開発のための品質保証基準」（第２版，２００９年）で開始するような当業者に周知である。
【００４０】
図３は、円筒本体（２）の上に固相（８）及び圧縮リング（７）を取り付ける前の、図２に示されたものと同一の要素を示す。ストリップを、円筒本体（２）に容易に取り付けることができるリングに変換するストリップ連結部（２８）は見ることができる。操作時、ストリップ（８）は、図２の配置にするために、圧縮リング（７）よりも前に適切な位置に置かれる。図４は、適切な位置の固相（８）のみを有する円筒本体を示す。図５は、図２のウェル形成機が全体としてどのように見えるかを示す。
【００４１】
図６は、本発明の例示の装置（１００）を示す。本発明の例示のウェル形成機（１０１）は、装置（１００）の中央位置の適切な位置に存在し、ウェル形成機（１０１）そのものが基部（１１５）によって支持された積層フォイル（１１４）のスタックの上に置かれている。積層フォイル（１１４）は、図６で３つが示された一連の液体分配チャネル（１１０）を画成する。これらの液体分配チャネル（１１０）は、一定の間隔で配置され、ウェル形成機（１０１）から放射状に広がっている。各々の液体分配チャネル（１１０）は、ウェル形成機（１０１）の複数のチャンバ（１０６）の１つの近傍の入口（１１１）と、ウェル形成機（１０１）の遠位に位置する出口（１１２）を含み、入口（１１１）と出口（１１２）は、それらの間に延在する通路（１１３）によって流体連通している。この配置によって、固相（８）から溶出された被分析物は、入口（１１１）の１つを通って、チャンバ（１０６）から液体分配チャネル（１１０）に、それによって出口（１１２）に達するように通路（１１３）に沿って通すことができ、溶出された被分析物は、適切な回収チャンバ（１１６）で回収することができる。図６では、回収チャンバ（１１６）は、マイクロタイタープレートウェルである。固相からの被分析物の溶出は、図６の装置（１００）の適切な位置に示されたロッドヘッド（１１８）によって、各々のチャンバ（１０６）に圧力を加えることによって促進される。ロッドヘッド（１１８）は、ウェル形成機（１０１）の複数のチャンバ（１０６）の中に下方に延在する複数のロッド（１１９）を含む。図６では、ロッド（１１９）がチャンバ（１０６）の中に適合して入るように、ロッド（１１９）は、チャンバ（１０６）の形に一致する円筒形である。
【００４２】
図７は、基部（１１５）の頂部の上に置かれた積層フォイル（１１４）のスタックを示し、液体分配チャネルの複数の出口（１１２）のいくつかを示す、本発明の装置（１００）の底面図を提供する。図７は、装置（１００）の縁に取り付けるために、マイクロタイタープレートウェル（１１６）を、屈曲可能な列（１１７）の形でどのように使用することができるかについての図を提供する。好都合なことに、マイクロタイタープレートウェルのこれらの屈曲可能な列（１１７）は、適切なフレームの中に置くことによって標準的なマイクロタイタープレートの形に組織化することができる一群のマイクロタイタープレートウェルを形成するために、装置（１００）から容易に取り外される。このようにして、溶出された被分析物は、マイクロタイタープレートを受け入れるように適合された様々な周知の手段によって容易に分析することができる。
【００４３】
図８は、マイクロタイタープレートウェルの屈曲可能な列（１１７）がどのように取り外され、その後、マイクロタイタープレートを形成するために、フレーム（１２０）でどのように配置されるかについてのより詳細な図を提供する。図８では、本発明の装置（１００）の半分が、様々な特徴の相対的な配置を示す断面部分で示されている。
【００４４】
一実施形態では、本発明の装置（１００）は、分離されたペプチドを含む固定化ｐＨ勾配等電点電気泳動ストリップをウェル形成機の上で受けるための円形フォーマットで存在する。ペプチドが適切な溶出液を使用して溶解されたとき、圧力は、溶解されたペプチドを、円形の移動プレートを通して、装置の縁すなわちディスク縁のマイクロタイタープレートウェルに押し込むために使用される。これらのマイクロタイタープレートウェルは、ヒンジを使用して連結され、移動プレートに取り付けられている。完全に移動させた後、マイクロタイタープレートウェルは、取り外すことができ、液体クロマトグラフ−タンデム型質量分析計機器でさらに処理できるようにする、標準的なマイクロタイタープレートと同一のマイクロタイタープレートフォーマットを与えるマイクロタイタープレートフレームに置くことができる。利点は、公知のニードルシステムと比較して移動時間を減少させる、標準的なマイクロタイタープレートフォーマットへの同時に行われるペプチドの抽出である。移動プレート及び折り畳み可能なマイクロタイタープレートは、使い捨てにすることができ、これにより洗浄時間を最小限にする。
【００４５】
本発明の方法の溶出するステップは、適したバッファーによって実行される。適した溶出バッファーは、水中で０％からｘｘ％の有機酸／無機酸又は水中で０％からｘｘ％の有機溶媒であってもよい。酸の限定されない例は、ギ酸、酢酸、リン酸等を含む。当業者は、他の適切なものに気付くだろう。有機溶媒の限定されない例は、アセトニトリル、メタノール、エタノール等を含む。当業者は、他の適切なものに気付くだろう。％酸に対して、典型的であるが非限定な濃度は、０．１％以下であるだろう。有機溶媒に対して、典型的であるが非限定な濃度は、５．０％以下であるだろう。有機溶媒に対して、５％以下であるが正確な限界ではない溶出バッファーは、被分析物が固相から溶出バッファーに溶出するように、ウェル形成機の各々のチャンバに１回以上加えられる。
【００４６】
特定の生体分子の評価において、例えば液体クロマトグラフ−タンデム型質量分析計を使用した評価を取得するために、特定の生体分子の一部にのみ、一般に関心を有する。そのため、例えば、ウェル形成機のフラクションの一部に位置するペプチドを選択し移動するために、各々のフラクションに対するペプチドの等電点（ｐＩ）範囲を知ることは重要である。関心のペプチドに対する等電点は、予測アルゴリズム又は前の実験のデータベース検索を使用することによって決定することができる。固定化ｐＨ勾配等電点電気泳動ストリップは、製造による特有の等電点勾配を有し、各々のフラクション範囲を決定するために、内部の標準的な蛍光マーカーを使用することができる。したがって、本発明は、ウェル形成機で蛍光マーカーを自動検出するための特注の検出器を含んでもよい。目的は、公知の等電点を有するマーカーが位置するフラクションを検出することである。マーカーの定量化には関心がない。検出原理は、蛍光顕微鏡とほとんど同一である。
【００４７】
検出器は、生体分子（例えば、Ｃｙ５をマーカーにしたペプチド）に存在する蛍光マーカーを励起するために、標準的なレーザを使用することができる。レーザ蛍光除去フィルタ（ｌａｓｅｒ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｃｌｅａｎ  ｕｐ  ｆｉｌｔｅｒ）は、検出が行われる蛍光発光スペクトルでレーザが邪魔をするのを防ぐために必要である。検出器の光路では、発光フィルタは、レーザスペクトルを阻止し、蛍光マーカー発光スペクトルを通過させる。（フォトダイオード、光電子増倍管などであってもよい）検出器は、放射光を測定する。試料に／試料から光を運ぶ３つの方法があり、３つの方法は、１：レーザ−ファイバ−試料−ファイバ−検出器、２：レーザ−ファイバ−試料−複数のレンズ−検出器、３：レーザ−試料−複数のレンズ−検出器である。
【００４８】
方法１に対して、検出器パッケージは、ウェル形成機のフラクション位置に移動される。光ファイバを通してウェル形成機フラクションにレーザ光を運ぶことができ、試料は、励起され、光を発光フィルタに運ぶ光ファイバによって収集された光を発光し、その後、集束レンズに運び、その後、検出器に運ぶ。１つの欠点は、結果として低下したフィルタ性能による発光フィルタへの大きな入射角である。収集する光ファイバの前の光収集レンズが必要であってもよい。
【００４９】
方法２に対して、レーザ光は、方法１におけるように試料に運ばれる。発光されたフルオロフォア光（ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｒｅ  ｌｉｇｈｔ）は、試料から焦点距離でレンズを使用して収集されることを必要とする。光は、平行光線によって、発光フィルタを通して、最終的に検出器に光を集束するレンズを通して運ばれる。放射光の角度は、ウェル形成機によって制限され、試料の真上に配置される光ファイバなしに光を収集するときに重要である。
【００５０】
方法３に対して、特異的な角度のレーザは、ウェル形成機の壁でウェル形成機フラクションの試料に光を跳ね返すために使用される。光は、方法２におけるように検出される。レーザ光を同一光路で放射光として試料に反射するビームスプリッタは、（蛍光顕微鏡の原理と同様に）使用することもできる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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