(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１８．０９５を含む、前記結晶性形態Ａ。
【請求項２】
（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１８．０９５および１７．４９３を含む、前記結晶性形態Ａ。
【請求項３】
（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１８．０９５および１９．５１６を含む、前記結晶性形態Ａ。
【請求項４】
（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１８．０９５、１７．４９３および１９．５１６を含む、前記結晶性形態Ａ。
【請求項５】
（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１８．０９５、１７．４９３、１９．５１６および２０．０８８を含む、前記結晶性形態Ａ。
【請求項６】
（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１８．０９５、１７．４９３、１９．５１６、２０．０８８および１７．１２５を含む、前記結晶性形態Ａ。
【請求項７】
リソソーム蓄積症を有すると診断された対象を治療する方法において使用するための医薬組成物であって、当該医薬組成物は請求項１〜６のいずれか１項に記載の結晶性形態の有効量を含む、前記医薬組成物。
【請求項８】
リソソーム蓄積症が、ゴーシェ、ファブリー、ＧM1−ガングリオシド蓄積症、ＧＭ２活性化因子欠損症、Ｔａｙ−ＳａｃｈｓまたはＳａｎｄｈｏｆｆである、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
リソソーム蓄積症が、ゴーシェである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
リソソーム蓄積症が、ファブリーである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
結晶性形態を０．５ｍｇ／ｋｇ〜３００ｍｇ／ｋｇの用量で提供するように適合された、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
結晶性形態を１日２回の５０ｍｇ〜１００ｍｇの経口用量で提供するように適合された、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
方法が、さらに、対象に酵素補充療法を実施する工程を含む、請求項７〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
酵素補充療法が、グルコセレブロシダーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、セラミダーゼ、ＧM1−ガングリオシド−β−ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼＡ、ヘキソサミニダーゼＢ、β−ガラクトセレブロシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、イズロン酸スルファターゼ、ヘパラン−Ｎ−スルファターゼ、Ｎ−アセチル−α−グルコサミニダーゼ、アセチルＣｏＡ：α−グルコサミニドアセチル−トランスフェラーゼ、Ｎ−アセチル−α−グルコサミン−６−スルファターゼ、ガラクトサミン−６−スルファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、ガラクトサミン−４−スルファターゼ（アリールスルファターゼＢ）、β−グルクロニダーゼ、アリールスルファターゼＡ、アリールスルファターゼＣ、α−ノイラミニダーゼ、Ｎ−アセチル−グルコサミン−１−リン酸トランスフェラーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、α−グルコシダーゼ、α−フコシダーゼ、α−マンノシダーゼ、アスパルチルグルコサミンアミダーゼ、酸性リパーゼ、パルミトイル−タンパク質チオエステラーゼ（ＣＬＮ−１）、ＰＰＴ１、ＴＰＰ１、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、ＮＰＣ１およびＮＰＣ２から選ばれる酵素の有効量を提供する、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
リソソーム蓄積症が２型または３型ゴーシェ病であり、酵素補充療法が有効量のグルコセレブロシダーゼを提供する、請求項１４に記載の用途のための医薬組成物。
【請求項１６】
グルコセレブロシダーゼを、１Ｕ／ｋｇを１週間に３回から、１２０Ｕ／ｋｇを２週間に１回の用量レジメンで投与するためである、請求項１５に記載の用途のための医薬組成物。
【請求項１７】
リソソーム蓄積症がファブリー病であり、酵素補充療法が有効量のα−ガラクトシダーゼＡを提供する、請求項１４に記載の用途のための医薬組成物。
【請求項１８】
α−ガラクトシダーゼＡを、２日に１回から１週間または２週間に１回の頻度で、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、静脈注射の用量レジメンで投与するためである、請求項１７に記載の用途のための医薬組成物。
【請求項１９】
医薬組成物は、酵素補充療法を実施する前に、同時に、または後に投与するためである、請求項１３〜１８のいずれか１項に記載の用途のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルコシルセラミドシンターゼ（ＧＣＳ）の阻害剤として有用であり、また単独でまたは酵素補充療法と併用してリソソーム蓄積症等の代謝疾患を治療するための、および癌治療のための（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートの新規塩形態に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルコシルセラミドシンターゼ（ＧＣＳ）は、グルコシルセラミドベースのグリコスフィンゴリピド（ＧＳＬ）の生合成における初期のグリコシル化工程を触媒する、すなわちグルコースをＵＤＰ−グルコース（ＵＤＰ−Ｇｌｃ）からセラミドに移転してグルコシルセラミドを形成する重要な移送により触媒する重要な酵素である。ＧＣＳは、シス／ミディアルゴルジ内に局在する膜貫通、ＩＩＩ型細胞膜内タンパク質である。グリコスフィンゴリピド（ＧＳＬ）は、細胞の相互作用、シグナリング、および輸送を含む多くの細胞膜事象の動力学にとって必要不可欠であると考えられている。ＧＳＬ構造の合成は、胚性発生にとって、またいくつかの組織の分化にとって必須であることが明らかにされている（非特許文献１を参照）。セラミドは、スフィンゴリピド代謝において中心的な役割を演じ、またＧＣＳ活性の下方調節は、グリコスフィンゴリピドの発現量低下を伴うスフィンゴリピドパターンに顕著な効果を有することが明らかにされている。スフィンゴリピド（ＳＬ）は、心血管系の生理学的ならびに病理学的な状態において生体調節的な役割を有する。特に、スフィンゴリピドおよびその調節酵素（regulating enzyme）は、乳児期のラット心臓における慢性酸素欠乏症に対する適応性応答において役割を演ずると思われる（非特許文献２を参照）。
【０００３】
ＧＣＳ阻害剤は、様々な疾患の治療用として提案されている（例えば、特許文献１を参照）。かかる治療には、糖脂質蓄積症（glycolipid storage disease）（例えば、Ｔａｙ  Ｓａｃｈｓ病、Ｓａｎｄｈｏｆｆｓ病、ＧＭ２活性化因子欠損症、ＧＭ１ガングリオシド蓄積症、およびファブリー病）、糖脂質の蓄積と関連した疾患（例えば、ゴーシェ病；ＧＣＳ阻害剤のミグルスタット（Ｚａｖｅｓｃａ）が、１型ゴーシェ病患者の治療用として承認を経ている、非特許文献３を参照）、腎臓の肥大または過形成を引き起こす疾患、例えば糖尿病性腎障害等；高血糖または高インスリン血症（Hyperinsulemia）を引き起こす疾患；糖脂質合成が異常な癌、細胞表面の糖脂質を受容体として使用する微生物により引き起こされる感染性疾患、グルコシルセラミドの合成が必須であるまたは重要な感染性疾患、グルコシルセラミドの合成が必須であるまたは重要な疾患、過剰の糖脂質合成が生ずる疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症、多発性嚢胞腎疾患、および腎肥大）、ニューロン障害、ニューロン傷害、マクロファージの導入および活性化と関連した炎症性の疾患または障害（例えば、リウマチ性関節炎、クローン病、喘息、および敗血症）、ならびに糖尿病および肥満の治療が含まれる（特許文献２を参照）。
【０００４】
特に、ＧＣＳの過剰発現は、多剤耐性と関わり、またセラミド−誘発性アポトーシスを破綻させることが明らかにされている。例えば、Ｔｕｒｚａｎｓｋｉら（非特許文献４）は、セラミドは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の細胞内でアポトーシスを誘発すること、およびＰ−糖タンパク質（ｐ−ｇｐ）は、ＴＦ−１細胞内でセラミド−誘発性アポトーシスに対する抵抗性に顕著な関わりを有するセラミド−グルコシルセラミド経路を調節することにより、このアポトーシスに対する抵抗性を付与することを明らかにした。したがって、ＧＣＳ阻害剤は、罹患細胞におけるアポトーシスを誘発することにより、増殖性の障害を治療するのに有用であり得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００５０６８４２６号
【特許文献２】国際公開第２００６０５３０４３号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｙａｍａｓｈｉｔａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、米国、１９９９年、第９６巻（１６）、９１４２〜９１４７頁。
【非特許文献２】Ｅｌ  Ａｌｗａｎｉｔら、Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  ＆  Ｏｔｈｅｒ  Ｌｉｐｉｄ  Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ、２００５年、第７８巻（１〜４）、２４９〜２６３頁。
【非特許文献３】Ｔｒｅｉｂｅｒら、Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃａ、２００７年，第３７巻（３）、２９８〜３１４頁。
【非特許文献４】Ｔｕｒｚａｎｓｋｉら、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ、２００５年、第３３巻（１）、６２〜７２頁。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１８．０９５を含む、結晶性形態Ａに関する。
【０００８】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１８．０９５および１７．４９３を含む、結晶性形態Ａにさらに関する。
【０００９】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１８．０９５および１９．５１６を含む、結晶性形態Ａにさらに関する。
【００１０】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１８．０９５、１７．４９３、および１９．５１６を含む、結晶性形態Ａにさらに関する。
【００１１】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１８．０９５、１７．４９３、１９．５１６、および２０．０８８を含む、結晶性形態Ａにさらに関する。
【００１２】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１８．０９５、１７．４９３、１９．５１６、および２０．０８８、および１７．１２５を含む、結晶性形態Ａにさらに関する。
【００１３】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ｂであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、２４．３５５を含む、結晶性形態Ｂにさらに関する。
【００１４】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ｂであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、２４．３５５および２１．１６７を含む、結晶性形態Ｂにさらに関する。
【００１５】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ｂであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、２４．３５５、２１．１６７、および２７．３４３を含む、結晶性形態Ｂにさらに関する。
【００１６】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ｂであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、２４．３５５、２１．１６７、２７．３４３、および１６．１１１を含む、結晶性形態Ｂにさらに関する。
【００１７】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ｂであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、２４．３５５、２１．１６７、２７．３４３、１６．１１１、および１７．１８５を含む、結晶性形態Ｂにさらに関する。
【００１８】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ｂであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、２４．３５５、２１．１６７、２７，３４３、１６．１１１、１７．１８５、および２０．２４３を含む、結晶性形態Ｂにさらに関する。
【００１９】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマート（Ｓ）−２−ヒドロキシコハク酸塩の結晶性形態であって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１７．１６２を含む、結晶性形態にさらに関する。
【００２０】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマート（Ｓ）−２−ヒドロキシコハク酸塩の結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１７．１６２および１８．０２８を含む、結晶性形態Ａにさらに関する。
【００２１】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマート（Ｓ）−２−ヒドロキシコハク酸塩の結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１７．１６２、および１４．２８０を含む、結晶性形態Ａにさらに関する。
【００２２】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマート（Ｓ）−２−ヒドロキシコハク酸塩の結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１７．１６２、１８．０２８、および１４．２８０を含む、結晶性形態Ａにさらに関する。
【００２３】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマート（Ｓ）−２−ヒドロキシコハク酸塩の結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１７．１６２、１８．０２８、１４．２８０、および１８．１５３を含む、結晶性形態Ａにさらに関する。
【００２４】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマート（Ｓ）−２−ヒドロキシコハク酸塩の結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１７．１６２、１８．０２８、１４．２８０、１８．１５３、および２３．４２２を含む、結晶性形態Ａにさらに関する。
【００２５】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートＨＣｌ塩の結晶性形態であって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１８．０８７を含む、結晶性形態にさらに関する。
【００２６】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートＨＣｌ塩の結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１２．８１８を含む、結晶性形態Ａにさらに関する。
【００２７】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートＨＣｌ塩の結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、２５．７２２を含む、結晶性形態Ａにさらに関する。
【００２８】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートＨＣｌ塩の結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１２．８１８および２５．７２２を含む、結晶性形態Ａにさらに関する。
【００２９】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートＨＣｌ塩の結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１２．８１８、２５．７２２、および１３．０４０を含む、結晶性形態Ａにさらに関する。
【００３０】
本発明は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートＨＣｌ塩の結晶性形態Ａであって、そのＸ線粉末回折は、ＣｕＫα線を用いて測定された以下の２−θピーク、１２．８１８、２５．７２２、１３．０４０、および２８．９１０を含む、結晶性形態Ａにさらに
関する。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８−Ａｄｖａｎｃｅ回折計上で実施した、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａに関するディフラクトグラムである。
【図２】Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８−Ａｄｖａｎｃｅ回折計上で実施した、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ｂに関するディフラクトグラムである。
【図３】Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８−Ａｄｖａｎｃｅ回折計上で実施した、結晶性の（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル  （２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマート（Ｓ）−２−ヒドロキシコハク酸塩に関するディフラクトグラムである。
【図４】Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８−Ａｄｖａｎｃｅ回折計上で実施した、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートＨＣｌ塩の結晶性形態に関するディフラクトグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明の第１の態様は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａに関し、下記の２−θとして表されるＸ線粉末回折パターン、および相対強度＞０．５２％である相対強度により特徴付けられる（表１）。測定は以下の通り実施した：装置：Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８−Ａｄｖａｎｃｅ回折計、タイプ：Ｂｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏ；ソースＣｕＫα１、波長＝１．５４０６Å；ジェネレーター：３５ｋＶ−４０ｍＡ；ディテクター：ＰＳＤ／Ｖａｎｔｅｃ；Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒ  ＴＴＫ４５０チャンバー；Ｓｉサンプルホルダー；角度範囲：２−θ  Ｂｒａｇｇ内で２°〜４０°；可変発散スリット（Variable Divergence Slit）：４ｍｍ（Ｖ４）；ステップサイズ：０．０３３°；ステップ時間：１秒。
【００３３】
【表１】
0006438455.tif 000002
【００３４】
【表２】
0006438455.tif 000003
【００３５】
本発明の第２の態様は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ｂに関し、下記の２−θとして表されるＸ線粉末回折パターン、および相対強度＞８％である相対強度により特徴付けられる（表２）。測定は以下の通り実施した：装置：Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８−Ａｄｖａｎｃｅ回折計、タイプ：Ｂｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏ；ソースＣｕＫα１、波長＝１．５４０６Å；ジェネレーター：３５ｋＶ−４０ｍＡ；ディテクター：ＰＳＤ／Ｖａｎｔｅｃ；Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒ  ＴＴＫ４５０チャンバー；Ｓｉサンプルホルダー；角度範囲：２−θ  Ｂｒａｇｇ内で２°〜４０°；可変発散スリット：４ｍｍ（Ｖ４）；ステップサイズ：０．０３３°；ステップ時間：１秒。
【００３６】
【表３】
0006438455.tif 000004
【００３７】
本発明の第３の態様は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマート（Ｓ）−２−ヒドロキシコハク酸塩の結晶性形態に関し、下記の２−θとして表されるＸ線粉末回折パターン、および相対強度＞８％である相対強度により特徴付けられる（表３）。測定は以下の通り実施した：装置：Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８−Ａｄｖａｎｃｅ回折計、タイプ：Ｂｒａｇｇ
−Ｂｒｅｎｔａｎｏ；ソースＣｕＫα１、波長＝１．５４０６Å；ジェネレーター：３５ｋＶ−４０ｍＡ；ディテクター：ＰＳＤ／Ｖａｎｔｅｃ；Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒ  ＴＴＫ４５０チャンバー；Ｓｉサンプルホルダー；角度範囲：２−θ  Ｂｒａｇｇ内で２°〜４０°；可変発散スリット：４ｍｍ（Ｖ４）；ステップサイズ：０．０３３°；ステップ時間：１秒。
【００３８】
【表４】
0006438455.tif 000005
【００３９】
【表５】
0006438455.tif 000006
【００４０】
本発明の第４の態様は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートＨＣｌ塩の結晶性形態に関し、下記の２−θとして表されるＸ線粉末回折パターン、および相対強度＞０．９６％である相対強度により特徴付けられる（表４）。測定は以下の通り実施した：装置：Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ８−Ａｄｖａｎｃｅ回折計、タイプ：Ｂｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏ；ソースＣｕＫα１、波長＝１．５４０６Å；ジェネレーター：３５ｋＶ−４０ｍＡ；ディテクター：ＰＳＤ／Ｖａｎｔｅｃ；Ａｎｔｏｎ  Ｐａａｒ  ＴＴＫ４５０チャンバー；Ｓｉサンプルホルダー；角度範囲：２−θ  Ｂｒａｇｇ内で２°〜４０°；可変発散スリット：４ｍｍ（Ｖ４）；ステップサイズ：０．０３３°；ステップ時間：１秒。
【００４１】
【表６】
0006438455.tif 000007
【００４２】
【表７】
0006438455.tif 000008
【００４３】
ＬＳＤの治療のために、いくつかのアプローチが使用または探求されており、そのほとんどが、疾患管理において酵素補充療法を単独使用することに重点が置かれている。非常に多くの承認を経た酵素補充療法が、ＬＳＤ治療用として市販されている（例えば、ポンペ病用のミオザイム（登録商標）、ムコ多糖症Ｉ用のアルドラザイム（登録商標）、ゴーシェ病用のセレザイム（登録商標）、およびファブリー病用のファブラザイム（登録商標））。さらに、本発明者らは、ＬＳＤの管理で単独使用するためのいくつかの小分子を識別した。本明細書に記載する本発明の治療方法は、以下に詳細に記載するような様々なリソソーム蓄積症の管理に直面する医師に治療選択肢を提供する。
【００４４】
本発明の特定の態様では、本発明の化合物は、単独で、または酵素補充療法との併用療法として、リソソーム蓄積症（ＬＳＤ）等の代謝的疾患を治療するのに利用可能である。本発明のその他の態様では、本発明の化合物は、ＬＳＤ等の代謝的疾患と診断された対象において、単独でまたは酵素補充療法との併用療法として、ＧＣＳ活性を阻害するまたは低減するのに利用可能である。本発明のその他の態様では、本発明の化合物は、ＬＳＤ等の代謝的疾患と診断された対象内に蓄積した物質（例えば、リソソームの基質）の蓄積低減および／または阻害に利用可能である。上記態様の特定の実施形態では、ＬＳＤは、ゴーシェ（１型、２型、または３型）、ファブリー、ＧＭ１−ガングリオシド蓄積症、またはＧＭ２−ガングリオシド蓄積症（例えば、ＧＭ２活性化因子欠損症、Ｔａｙ−ＳａｃｈｓおよびＳａｎｄｈｏｆｆ）である。表１は、非常に多くのＬＳＤをリスト化し、また本発明の上記態様でＥＲＴとして利用可能である対応する欠損酵素を示す。
【００４５】
その他のシナリオでは、脳内の基質を低下させる必要があり、したがってＥＲＴの全身投与では治療不可能な状態を有する患者にＳＭＴを提供する必要があり得る。脳室内または髄腔内直接投与は、脳内の基質濃度を低減し得るが、ＥＲＴの全身投与は、中枢神経系（ＣＮＳ）が関与するＬＳＤの場合、ＥＲＴは血液脳関門（ＢＢＢ）を通過することができないのでこれになじまず、ＳＭＴが、ＣＮＳ内に残留酵素活性を有する患者において有益であることを証明し得る。
【００４６】
本発明に基づき、ＳＭＴが、癌および／またはリソソーム蓄積症等の代謝的疾患を治療するために患者に提供される。ＳＭＴは、１つまたはそれ以上の小分子を含み得る。ＳＭＴには、患者に本発明の化合物を投与する工程が含まれる。特定の実施形態では、化合物は、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートまたはキヌクリジン−３−イル（２−（４’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）プロパン−２−イル）カルバマート、またはこれらの組み合わせである。
【００４７】
特定の実施形態では、例えば（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートおよびキヌクリジン−３−イル（２−（４’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）プロパン−２−イル）カルバマート等の本発明の化合物は、グリコスフィンゴリピド経路の欠陥に起因する実質的に任意の蓄積症（例えば、ゴーシェ（すなわち、１型、２型、３型）、ファブリー、ＧＭ１−ガングリオシド蓄積症、ＧＭ２−ガングリオシド蓄積症（例えば、ＧＭ２活性化因子欠損症、Ｔａｙ−ＳａｃｈｓおよびＳａｎｄｈｏｆｆ））の治療で利用可能である。特に好ましい実施形態では、（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートまたはその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグが、ファブリー病の患者を対象としてＧｂ３および／またはリゾ−Ｇｂ３の蓄積を阻害するおよび／または低減するのに、単独でまたは酵素補充療法との併用療法として用いられる（実施例を参照）。好ましい実施形態では、酵素補充療法には、α−ガラクトシダーゼＡをファブリー患者に投与する工程が含まれる。確かに、下記の実施例では、本発明のＧＣＳ阻害剤は、ファブリー病のマウスモデルにおいて、Ｇｂ３およびリゾ−Ｇｂ３の蓄積を有効に低減することが実証され、したがってファブリー病の治療にとって有望なアプローチとしてのその使用を裏付ける。さらに、実施例で提示するｉｎ  ｖｉｖｏ併用療法データは、併用治療アプローチは付加的かつ相補的であり得ることを強く示唆する。
【００４８】
特定の実施形態では、例えば（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートおよびキヌクリジン−３−イル（２−（４’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）プロパン−２−イル）カルバマート等の本発明の化合物は、神経障害性のゴーシェ病と診断された対象の脳内のＧｌｕＣｅｒおよびＧｌｕＳｐｈ濃度を低減するのに、単独でまたはＥＲＴ（例えば、グルコセレブロシダーゼ投与）と併用して利用可能である。
【００４９】
本発明の併用療法で用いられる小分子療法成分に関する投与レジメンは、熟練臨床医により一般的に決定され、また治療対象とされる具体的な蓄積症および具体的な罹患者の臨床状態に応じて大幅に変化すると予想される。あらゆる蓄積症の治療を目的として、本発明の所定のＳＭＴについて、その投与レジメンを決定する一般原則は、当業者に周知されている。投与レジメンに関するガイダンスは、本トピックスについて当技術分野において周知されている多くの参考資料のいずれかより取得可能である。さらなるガイダンスは、特に、本明細書に引用する特定の参考資料のレビューから入手可能である。特定の実施形態では、かかる用量は、１日、１〜５回、腹腔内投与、経口投与、または同等の投与により、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３００ｍｇ／ｋｇの範囲、好ましくは約５ｍｇ／ｋｇ〜約６０ｍｇ／ｋｇの範囲（例えば、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５、ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、５５ｍｇ／ｋｇ、および６０ｍｇ／ｋｇ）であり得る。かかる用量は、１日、１〜５回、経口投与、腹腔内投与、または同等の投与により、約５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｇ／ｋｇの範囲、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇの範囲であり得る。１つの実施形態では、用量は、約１０ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日の範囲（例えば、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、３０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、６０ｍｇ／日、７０ｍｇ／日、８０ｍｇ／日、９０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１１０ｍｇ／日、１２０ｍｇ／日、１３０ｍｇ／日、１４０ｍｇ／日、１５０ｍｇ／日、１６０ｍｇ／日、１７０ｍｇ／日、１８０ｍｇ／日、１９０ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、２１０ｍｇ／日、２２０ｍｇ／日、２３０ｍｇ／日、２４０ｍｇ／日、２５０ｍｇ／日、２６０ｍｇ／日、２７０ｍｇ／日、２８０ｍｇ／日、２９０ｍｇ／日、３００ｍｇ／日）の範囲である。特に好ましい経口用量範囲は、約５０ｍｇ〜約１００ｍｇであり、この場合用量は１日２回投与される。本発明の化合物に関する具体的な経口用量範囲は、約５ｍｇ／ｋｇ／日〜約６００ｍｇ／ｋｇ／日である。本発明の化合物に関する具体的な経口用量範囲は、約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１２０ｍｇ／ｋｇ／日、例えば１ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日、１０ｍｇ／ｋｇ／日、１５ｍｇ／ｋｇ／日、２０ｍｇ／ｋｇ／日、２５ｍｇ／ｋｇ／日、３０ｍｇ／ｋｇ／日、３５ｍｇ／ｋｇ／日、４０ｍｇ／ｋｇ／日、４５ｍｇ／ｋｇ／日、５０ｍｇ／ｋｇ／日、５５ｍｇ／ｋｇ／日、または６０ｍｇ／ｋｇ／日、６５ｍｇ／ｋｇ／日、７０ｍｇ／ｋｇ／日、７５ｍｇ／ｋｇ／日、８０ｍｇ／ｋｇ／日、８５ｍｇ／ｋｇ／日、９０ｍｇ／ｋｇ／日、９５ｍｇ／ｋｇ／日、１００ｍｇ／ｋｇ／日、１０５ｍｇ／ｋｇ／日、１１０ｍｇ／ｋｇ／日、１１５ｍｇ／ｋｇ／日、または１２０ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００５０】
特定の実施形態では、本発明は、本発明の化合物を用いるＳＭＴと、リソソーム蓄積症の治療を目的とするＥＲＴ療法との併用療法に関する。本発明に基づき治療可能な公知のリソソーム蓄積症の非網羅的なリストを、一般的な疾患名、蓄積物質、および対応する欠損酵素を含め、表５に記載する（Ｋｏｌｏｄｎｙら、１９９８年、Ｉｄの表３８−４より転載）。
【００５１】
【表８】
0006438455.tif 000009
【００５２】
【表９】
0006438455.tif 000010
【００５３】
【表１０】
0006438455.tif 000011
【００５４】
当業者にとって公知の任意の方法が、疾患状態および本発明の併用療法の有効性を監視するのに利用可能である。疾患状態の臨床的監視項目として、臓器容積（例えば、肝臓、脾臓）、ヘモグロビン、赤血球数、ヘマトクリット、血小板減少、悪液質（消耗）、および血漿キチナーゼ濃度（例えば、キトトリオシダーゼ）が挙げられるが、ただし、これらに限定されない。キチナーゼファミリーの酵素であるキトトリオシダーゼは、リソソーム蓄積症を有する対象においてマクロファージにより高い濃度で産生されることが公知である（Ｇｕｏら、１９９５年、Ｊ．Ｉｎｈｅｒｉｔ．Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓ．、第１８巻、７１７〜７２２頁；ｄｅｎ  Ｔａｎｄｔら、１９９６年、Ｊ．Ｉｎｈｅｒｉｔ．Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓ．、第１９巻、３４４〜３５０頁；Ｄｏｄｅｌｓｏｎ  ｄｅ  Ｋｒｅｍｅｒら、１９９７年、Ｍｅｄｉｃｉｎａ（Ｂｕｅｎｏｓ  Ａｉｒｅｓ）第５７巻、６７７〜６８４頁；Ｃｚａｒｔｏｒｙｓｋａら、２０００年、Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第３３巻、１４７〜１４９頁；Ｃｚａｒｔｏｒｙｓｋａら、１９９８年、Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．第３１巻、４１７〜４２０頁；Ｍｉｓｔｒｙら、１９９７年、Ｂａｉｌｌｉｅｒｅｓ  Ｃｌｉｎ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．、第１０巻、８１７〜８３８頁；Ｙｏｕｎｇら、１９９７年、Ｊ．Ｉｎｈｅｒｉｔ．Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓ．、第２０巻、５９５〜６０２頁；Ｈｏｌｌａｋら、１９９４年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、第９３巻、１２８８〜１２９２頁を参照）。キトトリオシダーゼは、ゴーシェ患者の治療に対する反応を監視するために、アンジオテンシン変換酵素および非酒石酸抵抗性酸ホスファターゼと共に、好ましくは測定される。
【００５５】
本発明の併用療法を実施するための方法および製剤には、当技術分野において周知のあらゆる方法および製剤が含まれる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９８０年以降、第１６版以降、Ａ．Ｏｓｌｏ編、Ｅａｓｔｏｎ  Ｐａ．；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、１９８７年、改訂第２版、Ｊｏｓｅｐｈ  Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＆  Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｈ．Ｌ．Ｌｅｅ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、ＩＳＢＮ：０８２４７７５８８０；Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、１９９９年、Ｅｄｉｔｈ  Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ＩＳＢＮ：０４７１１４８２８８；米国特許第６，０６６，６２６号とそこで引用する参考資料；下記のセクションで引用する参考資料も参照）。
【００５６】
本発明によれば、下記の一般的アプローチは、リソソーム蓄積症の治療を対象に、併用療法として提供される。各一般的アプローチは、各療法単独で用いた場合と関連した欠点を最低限に抑えつつ、臨床的ベネフィットを最適化するのに適する方法で、小分子療法と酵素補充療法とを組み合わせる工程と関係する。
【００５７】
本発明の１つの実施形態では、酵素補充療法（単独または小分子療法との併用）は、治療を開始する（すなわち、対象をデバルキングする）ために実施され、そして小分子療法は、高頻度の静脈内ＥＲＴ注射を必要としない安定で、長期治療効果を実現および維持するためにデバルキング段階後に実施される。例えば、酵素補充療法は、1週間に１回、２週間に１回、または２ヶ月に１回、数週間または数ヶ月間、またはこれより長期間（例えば、関係するインジケーター臓器、例えば脾臓または肝臓等がサイズ減少を示すまで）、経静脈的に実施され得る（例えば、１〜２時間にわたり）。さらに、初期のデバルキング治療のＥＲＴ段階は、単独でまたは小分子療法と併用して実施され得る。小分子治療成分は、小分子が経口投与に適合し、したがって高頻度の静脈内介入からさらに開放されることが特に好ましい。
【００５８】
必要に応じて、ＥＲＴとＳＭＴとを入れ替え、またはＥＲＴによりＳＭＴを補足することにより、単独使用したときの各療法と関連した強みを生かし、同時にその弱点に対処する戦略がもたらされる。ＥＲＴの長所として、デバルキングで用いられるか、および／またはより長期の介護で用いられるかを問わず、医師の決定を通知するのにかなり広い臨床経験が利用可能であることが挙げられる。さらに、対象は、例えば尿中の生化学代謝物もしくはその他の身体サンプルを監視することにより、または罹患した臓器容積を測定することによりデバルキング段階において、ＥＲＴを効果的に漸増することも可能である。しかし、ＥＲＴの欠点は、必要とされる投与頻度であり、基質の定常的な再蓄積に起因して、毎週または隔週毎の静脈内注射を一般的に伴う。患者に生じる基質蓄積の量を低減するまたはその蓄積を阻害するために小分子療法を使用すれば、次にＥＲＴの投与頻度を低減することができる。例えば、隔週の酵素補充療法による投与レジメンでは、高頻度の酵素注射が療法で必要とされないように、「ＥＲＴ休日」（例えば、ＳＭＴを用いて）を設けることができる。さらに、併用療法を用いてリソソーム蓄積症を治療すると、相補的な治療アプローチを提供することができる。確かに、下記の実施例で示すように、ＳＭＴとＥＲＴとの併用療法は、いずれかの治療プラットフォームを単独で実施した場合に対してかなりの改善を提供し得る。これらのデータから、ＳＭＴとＥＲＴとを用いた併用療法は、付加的かつ相補的であり得ることが示唆される。１つの実施形態では、ＥＲＴは、デバルキング戦略（すなわち、治療を開始するための）として利用可能であり、本発明の化合物を用いたＳＭＴが後続するまたは同時に補足される。別の実施形態では、患者は、本発明の化合物を用いてＳＭＴで最初に治療され、ＥＲＴが後続するまたは同時に補足される。その他の実施形態では、ＳＭＴは、リソソーム蓄積症の患者で、基質のさらなる蓄積（またはＥＲＴによるデバルキング後に用いられる場合には、基質の再蓄積）を阻害するまたは低減するのに用いられ、そしてＥＲＴが、さらなる基質の蓄積が生じた場合、そのいずれも低減するために、必要に応じて場合により提供される。１つの実施形態では、本発明は、リソソーム蓄積症を有すると診断された対象の治療を目的とする併用療法に関する方法を提供するが、同方法は、酵素補充療法と小分子療法の間でその実施を交互に入れ替える工程を含む。別の実施形態では、本発明は、リソソーム蓄積症を有すると診断された対象の治療を目的とする併用療法に関する方法を提供するが、同方法は酵素補充療法と小分子療法を同時に実施する工程を含む。本発明の様々な併用療法では、小分子療法の実施は、酵素補充療法を実施する前に、同時に、または後に来る可能性があると理解される。同様に、酵素補充療法の実施は、小分子療法を実施する前に、同時に、または後に来る可能性がある。
【００５９】
本発明の任意の実施形態では、リソソーム蓄積症は、ゴーシェ（１、２、および３型）、ニーマン−ピック、ファーバー、ＧＭ１−ガングリオシド蓄積症、ＧＭ２−ガングリオシド蓄積症（例えば、ＧＭ２活性化因子欠損症、Ｔａｙ−Ｓａｃｈｓ、およびＳａｎｄｈｏｆｆ）、クラッベ、Ｈｕｒｌｅｒ−Ｓｃｈｅｉｅ（ＭＰＳ  Ｉ）、Ｈｕｎｔｅｒ（ＭＰＳ  ＩＩ）、Ｓａｎｆｉｌｉｐｐｏ（ＭＰＳ  ＩＩＩ）Ａ型、Ｓａｎｆｉｌｉｐｐｏ（ＭＰＳ  ＩＩＩ）Ｂ型、Ｓａｎｆｉｌｉｐｐｏ（ＭＰＳ  ＩＩＩ）Ｃ型、Ｓａｎｆｉｌｉｐｐｏ（ＭＰＳ  ＩＩＩ）Ｄ、Ｍａｒｑｕｉｏ（ＭＰＳ  ＩＶ）Ａ型、Ｍａｒｑｕｉｏ（ＭＰＳ  ＩＶ）Ｂ型、Ｍａｒｏｔｅａｕｘ−Ｌａｍｙ（ＭＰＳ  ＶＩ）、Ｓｌｙ（ＭＰＳ  ＶＩＩ）、ムコスルファチドーシス、シアリドーシス、ムコリピド蓄積症ＩＩ、ムコリピド蓄積症ＩＩＩ、ムコリピド蓄積症ＩＶ、ファブリー、シンドラー、ポンペ、シアル酸蓄積症、フコシド蓄積症、マンノシドーシス、アスパルチルグルコサミン尿症、Ｗｏｌｍａｎ、および神経セロイドリポフスチン沈着症からなる群より選択される。
【００６０】
さらに、ＥＲＴは、下記の酵素のうち少なくとも１つについて、その有効量を提供する；グルコセレブロシダーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、セラミダーゼ、ＧＭ１−ガングリオシド−β−ガラクトシダーゼ、ヘキソサミニダーゼＡ、ヘキソサミニダーゼＢ、β−ガラクトセレブロシダーゼ、α−Ｌ−イズロニダーゼ、イズロン酸スルファターゼ、ヘパラン−Ｎ−スルファターゼ、Ｎ−アセチル−α−グルコサミニダーゼ、アセチルＣｏＡ：α−グルコサミニドアセチル−トランスフェラーゼ、Ｎ−アセチル−α−グルコサミン−６−スルファターゼ、ガラクトサミン−６−スルファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、ガラクトサミン−４−スルファターゼ（アリールスルファターゼＢ）、β−グルクロニダーゼ、アリールスルファターゼＡ、アリールスルファターゼＣ、α−ノイラミニダーゼ、Ｎ−アセチル−グルコサミン−１−リン酸トランスフェラーゼ、α−ガラクトシダーゼＡ、α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、α−グルコシダーゼ、α−フコシダーゼ、α−マンノシダーゼ、アスパルチルグルコサミンアミダーゼ、酸性リパーゼ、パルミトイル−タンパク質チオエステラーゼ（ＣＬＮ−１）、ＰＰＴ１、ＴＰＰ１、ＣＬＮ３、ＣＬＮ５、ＣＬＮ６、ＣＬＮ８、ＮＰＣ１、またはＮＰＣ２。
【００６１】
本発明に基づき、ＳＭＴおよび／またはＥＲＴは、下記の蓄積物質のうち少なくとも１つにおいて減少を引き起こす；グルコセレブロシド、スフィンゴミエリン、セラミド、ＧＭ１−ガングリオシド、ＧＭ２−ガングリオシド、グロボシド、ガラクトシルセラミド、デルマタン硫酸、ヘパラン硫酸、ケラタン硫酸、スルファチド、ムコ多糖、シアリルオリゴ糖、糖タンパク質、シアリルオリゴ糖、糖脂質、グロボトリアオシルセラミド、Ｏ−連結型グリコペプチド、グリコーゲン、遊離シアル酸、フコ糖脂質、フコシルオリゴサッカライド、マンノシルオリゴサッカライド、アスパルチルグルコサミン、コレステリルエステル、トリグリセリド、粒状好濃性沈積物−サポシンＡおよびＤ、ＡＴＰシンターゼサブユニットｃ、ＮＰＣ１またはＮＰＣ２。
【００６２】
本発明の特定の実施形態では、小分子療法は、対象に有効量の（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートを投与する工程を含む（図２Ａを参照）。その他の実施形態では、小分子療法は、対象に有効量のキヌクリジン−３−イル（２−（４’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）プロパン−２−イル）カルバマートを投与する工程を含む（図２Ｂを参照）。小分子療法は、対象に１つまたはそれ以上の化合物を投与する工程を含み得る。特定の実施形態では、少なくとも１つの化合物は、本発明の化合物、例えば図２Ａおよび／または２Ｂに示す化合物等である。
【００６３】
酵素補充療法は、意図せざる免疫反応を誘発する可能性がある。したがって、免疫抑制剤が、本発明の併用療法で用いられる酵素補充療法成分と共に利用可能である。かかる薬剤は、小分子療法成分と共に利用することも可能性があるが、この場合、介入が必要とされる可能性は一般的により低い。当業者にとって公知の任意の免疫抑制剤が、本発明の併用療法と共に採用可能である。かかる免疫抑制剤として、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、およびエタネルセプト等の抗−ＴＮＦ薬が挙げられるが、ただしこれらに限定されない（例えば、Ｍｏｄｅｒ、２０００年、Ａｎｎ．Ａｌｌｅ
ｒｇｙ  Ａｓｔｈｍａ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第８４巻、２８０〜２８４頁；Ｎｅｖｉｎｓ、２０００年、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｅｄｉａｔｒ．、第１２巻、１４６〜１５０頁；Ｋｕｒｌｂｅｒｇら、２０００年、Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第５１巻、２２４〜２３０頁；Ｉｄｅｇｕｃｈｉら、２０００年、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、第９５巻、２１７〜２２６頁；Ｐｏｔｔｅｒら、１９９９年、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、第８７５巻、１５９〜１７４頁；Ｓｌａｖｉｋら、１９９９年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．、第１９巻、１〜２４頁；Ｇａｚｉｅｖら、１９９９年、Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、第２５巻、６８９〜６９６頁；Ｈｅｎｒｙ、１９９９年、Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、第１３巻、２０９〜２２０頁；Ｇｕｍｍｅｒｔら、１９９９年、Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．、第１０巻、１３６６〜１３８０頁；Ｑｉら、２０００年、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、第６９巻、１２７５〜１２８３頁を参照）。抗−ＩＬ２受容体（α−サブユニット）抗体のダクリズマブ（例えば、ゼナパックス（商標））は、移植患者で有効であることが実証されているが、これを免疫抑制剤として利用することも可能である（例えば、Ｗｉｓｅｍａｎら、１９９９年、Ｄｒｕｇｓ、第５８巻、１０２９〜１０４２頁；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら、２０００年、Ｎ．Ｅｎｇｌ  Ｊ．Ｍｅｄ．、第３４２巻、６１３〜６１９頁；Ｐｏｎｔｉｃｅｌｌｉら、１９９９年、Ｄｒｕｇｓ  Ｒ．Ｄ．、第１巻、５５〜６０頁；Ｂｅｒａｒｄら、１９９９年、Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ、第１９巻、１１２７〜１１３７頁；Ｅｃｋｈｏｆｆら、２０００年、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、第６９巻、１８６７〜１８７２頁；Ｅｋｂｅｒｇら、２０００年、Ｔｒａｎｓｐｌ．Ｉｎｔ．、第１３巻、１５１〜１５９頁を参照）。追加の免疫抑制剤として、抗−ＣＤ２（Ｂｒａｎｃｏら、１９９９年、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、第６８巻、１５８８〜１５９６頁；Ｐｒｚｅｐｉｏｒｋａら、１９９８年、Ｂｌｏｏｄ、第９２巻、４０６６〜４０７１頁）、抗−ＣＤ４（Ｍａｒｉｎｏｖａ−Ｍｕｔａｆｃｈｉｅｖａら、２０００年、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、第４３巻、６３８〜６４４頁；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、１９９９年、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第９２巻、１３８〜１５２頁）、および抗−ＣＤ４０リガンド（Ｈｏｎｇら、２０００年、Ｓｅｍｉｎ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．、第２０巻、１０８〜１２５頁；Ｃｈｉｒｍｕｌｅら、２０００年、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、第７４巻、３３４５〜３３５２頁；Ｉｔｏら、２０００年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第１６４巻、１２３０〜１２３５頁）が挙げられるが、ただしこれらに限定されない。
【００６４】
当業者にとって公知の免疫抑制剤を任意に組み合わせて、本発明の併用療法と共に利用可能である。特別な有用性を有する１つの免疫抑制剤の併用として、タクロリムス（ＦＫ５０６）＋シロリムス（ラパマイシン）＋ダクリズマブ（抗−ＩＬ２受容体α−サブユニット抗体）が挙げられる。この併用は、ステロイドおよびシクロスポリンの代替用として、特に肝臓を標的とする場合有効であることが証明されている。さらに、この併用は、膵島細胞移植を奏功可能にすることが最近明らかにされた。Ｄｅｎｉｓｅ  Ｇｒａｄｙ、Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｔｉｍｅｓ、２０００年５月２７日（土）、Ａ１およびＡ１１頁を参照。また、Ａ．Ｍ．Ｓｈａｐｉｒｏら、２０００年７月２７日、「Ｉｓｌｅｔ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｓｅｖｅｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｔｙｐｅ  １  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｌｌｉｔｕｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ａ  Ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−Ｆｒｅｅ  Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  Ｒｅｇｉｍｅｎ」、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、第３４３巻、２３０〜２３８頁；Ｒｙａｎら、２００１年、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、第５０巻、７１０〜７１９頁も参照。当技術分野において公知の任意の方法による血漿交換療法も、併用療法の様々な成分に対して発現し得る抗体を除去する、または枯渇させるのに利用可能である。
【００６５】
本発明と共に使用される免疫状態指標として、当業者にとって公知の抗体および任意のサイトカイン、例えばインターロイキン、ＣＳＦ、およびインターフェロンが挙げられるが、ただしこれらに限定されない（一般的に、Ｌｅｏｎａｒｄら、２０００年、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、第１０５巻、８７７〜８８８頁；Ｏｂｅｒｈｏｌｚｅｒら、２０００年、Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．、第２８巻（付録４号）、Ｎ３−Ｎ１２；Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎら、１９９８年、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ．、第９巻、１７５〜１８１頁を参照）。例えば、補充酵素と特に免疫反応性の抗体は、対象の免疫状態を調べるために監視の対象とされ得る。すでに知られている２ダースくらいのインターロイキンの中でも、特に好ましい免疫状態指標は、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−８、およびＩＬ−１０である。コロニー刺激因子（ＣＳＦ）の中でも、特に好ましい免疫状態指標は、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＭ−ＣＳＦである。インターフェロンの中でも、１つまたはそれ以上のα、β、またはγインターフェロンが、免疫状態指標として好ましい。
【００６６】
下記のセクションでは、８つの特別なリソソーム蓄積症（すなわち、ゴーシェ（１、２、および３型を含む）、ファブリー、ニーマン−ピックＢ、Ｈｕｎｔｅｒ、Ｍｏｒｑｕｉｏ、Ｍａｒｏｔｅａｕｘ−Ｌａｍｙ、ポンペ、およびＨｕｒｌｅｒ−Ｓｃｈｅｉｅ）で利用可能な様々な成分について記載する。後続するセクションでは、本発明の併用療法で用いられる酵素補充療法および小分子療法成分に関するさらなる有望な開示について記載する。
【００６７】
ゴーシェ
上記のように、ゴーシェ病は、グルコセレブロシダーゼ（β−Ｄ−グルコシル−Ｎ−アシルスフィンゴシングルコヒドロラーゼ、ＥＣ３．２．１．４５）酵素の欠損およびグルコセレブロシド（グルコシルセラミド）の蓄積により引き起こされる。ゴーシェ病の治療を目的とする本発明の併用療法で用いられる酵素補充療法成分の場合、治療に関係するふさわしい投与レジメンおよびその他の有用な情報について記載するいくつかの参考資料が利用可能である（Ｍｏｒａｌｅｓ、１９９６年、Ｇａｕｃｈｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ、Ｔｈｅ  Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ、第３０巻、３８１〜３８８頁；Ｒｏｓｅｎｔｈａｌら、１９９５年、Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｇａｕｃｈｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｓｋｅｌｅｔａｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｇｌｕｃｏｃｅｒｅｂｒｏｓｉｄａｓｅ、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ、第９６巻、６２９〜６３７頁；Ｂａｒｔｏｎら、１９９１年、Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ−Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｇｌｕｃｏｃｅｒｅｂｒｏｓｉｄａｓｅ  ｆｏｒ  Ｇａｕｃｈｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第３２４巻、１４６４〜１４７０頁；Ｇｒａｂｏｗｓｋｉら、１９９５年、Ｅｎｚｙｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ｔｙｐｅ  １  Ｇａｕｃｈｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  Ｍａｎｎｏｓｅ−ｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ  Ｇｌｕｃｏｃｅｒｅｂｒｏｓｉｄａｓｅ  ｆｒｏｍ  Ｎａｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｓｏｕｒｃｅｓ、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第１２２巻、３３〜３９頁；Ｐａｓｔｏｒｅｓら、１９９３年、Ｅｎｚｙｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ｇａｕｃｈｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｔｙｐｅ  １：Ｄｏｓａｇｅ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ３３  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｆｏｒ  ６  ｔｏ  ２４  Ｍｏｎｔｈｓ、Ｂｌｏｏｄ、第８２巻、４０８〜４１６頁；およびＷｅｉｎｒｅｂら、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．；第１１３巻（２）：１１２〜９頁（２００２年）を参照）。
【００６８】
１つの実施形態では、１キログラム当たり２．５単位（Ｕ／ｋｇ）を週３回から、６０Ｕ／ｋｇを２週間に１回のＥＲＴ投与レジメンが提供され、この場合、酵素は静脈内輸液により１〜２時間にわたり投与される。グルコセレブロシダーゼの単位は、合成基質のｐ−ニトロフェニル−ｐ−Ｄ−グルコピラノシド、１マイクロモルを３７℃、１分間で加水分解する反応を触媒する酵素量として定義される。別の実施形態では、１Ｕ／ｋｇを１週間に３回から、１２０Ｕ／ｋｇを２週間に１回の投与レジメンが提供される。なおも別の実施形態では、０．２５Ｕ／ｋｇを毎日または１週間に３回から、６００Ｕ／ｋｇを２〜６週間に１回の投与レジメンが提供される。
【００６９】
１９９１年以降、アルグルセラーゼ（セレダーゼ（登録商標））がＧｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能である。アルグルセラーゼは、胎盤由来の修飾された形態のグルコセレブロシダーゼである。１９９４年には、イミグルセラーゼ（セレザイム（登録商標））が、やはりＧｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能となった。イミグルセラーゼは、哺乳動物の細胞培養系（チャイニーズハムスター卵巣細胞）内で発現させた組換えＤＮＡに由来する、修飾された形態のグルコセレブロシダーゼである。イミグルセラーゼは、４つのＮ−連結型グリコシル化部位を含有する４９７個のアミノ酸からなる単量体の糖タンパク質である。イミグルセラーゼは、供給が理論的に無制限、および胎盤由来のアルグルセラーゼと比較して生物学的汚染の確率が低いという長所を有する。これらの酵素は、そのグリコシル化部位で修飾されて、マンノース残基が露出するが、これは、マンノース−６−リン酸受容体を介するリソソームのターゲティングを改善する操作である。イミグルセラーゼでは、４９５位においてアミノ酸が胎盤グルコセレブロシダーゼと１つ異なり、ヒスチジンがアルギニンに置換されている。これらの製品について、いくつかの投与レジメンが有効であることが公知である（Ｍｏｒａｌｅｓ、１９９６年、Ｉｄ．；Ｒｏｓｅｎｔｈａｌら、１９９５年、Ｉｄ．；Ｂａｒｔｏｎら、１９９１年、Ｉｄ．；Ｇｒａｂｏｗｓｋｉら、１９９５年、Ｉｄ．；Ｐａｓｔｏｒｅｓら、１９９３年、Ｉｄ．を参照）。例えば、６０Ｕ／ｋｇを２週間に１回とする投与レジメンは、中等度から重度の疾患を有する対象において臨床的ベネフィットを有する。熟練開業医は、投与レジメンおよび投与について追加の情報を得たい場合には、上記で引用した参考資料およびこれらの製品の添付文書について検討すべきである。Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ出願の米国特許第５，２３６，８３８号および同第５，５４９，８９２号も参照のこと。
【００７０】
上記のように、ゴーシェ病は、リソソーム酵素のグルコセレブロシダーゼ（ＧＣ）の欠損に起因する。ゴーシェ病の最も一般的な表現型（１型）では、病理学は細網内皮と骨格系に限定され、また神経障害性の症状は認められない。Ｂａｒｒａｎｇｅｒ、Ｇｌｕｃｏｓｙｌｃｅｒａｍｉｄｅ  ｌｉｐｉｄｏｓｉｓ：Ｇａｕｃｈｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｉｎ：Ｓｃｒｉｖｅｒ  ＣＲ  ＢＡ、Ｓｌｙ  ＷＳ、Ｖａｌｌｅ  Ｄ．編、Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、３６３５〜３６６８頁（２００１年）を参照。神経障害性のゴーシェ病（ｎＧＤ）では、２型および３型ゴーシェ病に細分化され、グルコセレブロシダーゼ（ＧＣ）の欠損は、グルコシルセラミド（ＧｌｕＣｅｒ；ＧＬ−１）およびグルコシルスフィンゴシン（ＧｌｕＳｐｈ）の脳内蓄積を引き起こし、神経学的障害をもたらす。２型ゴーシェ病は、内臓および中枢神経系における早期発現、急速な進行、広範な病理学により特徴付けられ、通常２歳までに死亡する。３型ゴーシェ病は、亜急性ｎＧＤとしても知られ、中間の表現型に該当し、発症年齢は様々であり、重症度および進行速度も異なる。Ｇｏｋｅｒ−Ａｌｐａｎら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ、第１４３巻：２７３〜２７６頁（２００３年）。最近の開発により、２型ゴーシェ病のＫ１４  ｌｎｌ／ｌｎｌマウスモデル（以後、「Ｋ１４マウス」）が生み出された；このマウスモデルは、運動失調、発作、痙縮を示すヒトの疾患を精密に再現し、またメジアン寿命も短縮し、わずか１４日である。Ｅｎｑｕｉｓｔら、ＰＮＡＳ、第１０４巻：１７４８３〜１７４８８頁（２００７年）。
【００７１】
ｎＧＤの患者と同様に、いくつかの当該疾患のマウスモデルでは、ＧＣ活性の欠損に起因して脳内のＧｌｕＣｅｒおよびＧｌｕＳｐｈ濃度が高まっている。Ｌｉｕら、ＰＮＡＳ、第９５巻：２５０３〜２５０８頁（１９９８年）、およびＮｉｌｓｓｏｎ、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、第３９巻：７０９〜７１８頁（１９８２年）。「Ｋ１４」マウスは、２型ゴーシェ病と多くの病理的な特性を共有する神経障害性の表現型、例えば特定の脳領域における神経変性、アストログリオーシス、ミクログリアの増殖、およびＧｌｕＣｅｒおよびＧｌｕＳｐｈ濃度の上昇等を示す。Ｅｎｑｕｉｓｔら（２００７年）。
【００７２】
ｎＧＤに罹患した患者の臨床管理では、２型疾患の重症度および現在の療法は血液脳関門（ＢＢＢ）を通過不能であることの両方の理由から、治療担当医師に課題が提起される。非ｎＧＤの現行の治療は、欠損酵素に置き換わるように、組換えヒトグルコセレブロシダーゼ（イミグルセラーゼ；セレザイム（商標））を静脈内送達すること、または基質（ＧＬ−１）の生成を軽減するようにグルコシルセラミドシンターゼ阻害剤を投与することに基づく。しかし、これらの薬物は血液脳関門を通過せず、したがってｎＧＤ患者に対して治療ベネフィットを提供するとは期待されない。クリニックで用いられている現行の小分子グルコシルセラミドシンターゼ阻害剤は、おそらくｎＧＤの神経障害性の表現型に対処できない。２型ゴーシェ病のＫ１４マウスモデルを対象として、本発明の化合物、キヌクリジン−３−イル（２−（４’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）プロパン−２−イル）カルバマート（以後「Ｇｚ１６１」）を評価し、脳内ＧｌｕＣｅｒおよびＧｌｕＳｐｈを確かに低減し得ることを実証した（実施例１２２〜１２５を参照）。同化合物は、脳神経病理学も低減し、またこのモデルの寿命を延長した。さらに、酵素補充法および小分子基質低減法の両方を用いた併用的アプローチは、２型ゴーシェ病に対するより優れた療法を提示する可能性がある。
【００７３】
ファブリー
これまでに指摘したように、ファブリー病は、リソソーム酵素のα−ガラクトシダーゼＡの欠損により引き起こされる。酵素欠損は、主としてグロボトリアオシルセラミド（ＧＬ３またはＧｂ３）である末端α−ガラクトシル部分を有するグリコスフィンゴリピド、ならびに少な目ではあるが、ガラビオシルセラミド、および血液型Ｂグリコスフィンゴリピドの全身性の沈着を引き起こす。
【００７４】
いくつかのアッセイ法が、疾患進行を監視し、また１つの治療方式を別の方式に切り替える時期を決定するのに利用可能である。１つの実施形態では、組織サンプル内のα−ガラクトシダーゼＡの比活性を測定するアッセイ法が利用可能である。別の実施形態では、Ｇｂ３の蓄積を測定するアッセイ法が利用可能である。別の実施形態では、医師は、体液内および血管の血管内皮細胞、周皮細胞、および平滑筋細胞のリソゾーム内のグリコスフィンゴリピド基質の沈着についてアッセイすることができる。疾患管理の有用な指標であり得るその他の臨床症状として、蛋白尿、または腎臓機能障害のその他の兆候、例えば尿中赤血球または脂質球、および赤血球沈降速度の上昇等が挙げられる。貧血、血清鉄濃度低下、高β−トロンボグロブリン濃度、および網状赤血球数上昇、または血小板凝集も監視対象であり得る。もちろん、当業者にとって公知の疾患進行を監視する任意のアプローチが利用可能である。（一般的にＤｅｓｎｉｃｋ  ＲＪら、１９９５年、α−Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ  Ａ  Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ：  Ｆａｂｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ、Ｉｎ：Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ、Ｓｃｒｉｖｅｒら編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎ．Ｙ．、７．ｓｕｐ．ｔｈ  ｅｄ．、２７４１〜２７８４頁を参照）。好ましい代用マーカーとして、ファブリー病管理を監視するための疼痛が挙げられる。その他の好ましい方法として、体液または生検試料からの酵素および／または基質の総排出量測定が挙げられる。ファブリー病を対象とする酵素補充療法に関する好ましい投与レジメンは、１〜１０ｍｇ／ｋｇ、静脈注射、２日に１回である。２日に１回から１週間または２週間に１回の頻度で、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、静脈注射の投与レジメンが利用可能である。
【００７５】
ニーマン−ピックＢ
これまでに指摘したように、ニーマン−ピック病Ｂ型は、リソソーム酵素の酸性スフィンゴミエリナーゼの活性低下、および膜脂質、主にスフィンゴミエリンの蓄積により引き起こされる。送達される補充用の酸性スフィンゴミエリナーゼの有効用量は、２日に１回から１週間に１回、２週間に１回、または２ヶ月に１回の頻度で、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇであり得る。その他の実施形態では、有効用量は、約０．０３ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ；約０．０３ｍｇ／ｋｇ〜約０．１ｍｇ／ｋｇ；および／または約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約０．６ｍｇ／ｋｇであり得る。特別な実施形態では、患者は、漸増用量レジメンにおいて下記の連続した用量で酸性スフィンゴミエリナーゼを投与する：０．１ｍｇ／ｋｇ；０．３ｍｇ／ｋｇ；０．６ｍｇ／ｋｇ；および１．０ｍｇ／ｋｇ、この場合、酸性スフィンゴミエリナーゼの各用量は少なくとも２回投与され、また各用量は２週間間隔で投与され、また患者は用量を次のレベルに増加させる前に毒性の副作用について監視される（米国特許出願公開第２０１１／００５２５５９号を参照）。
【００７６】
Ｈｕｒｌｅｒ−Ｓｃｈｅｉｅ（ＭＰＳ  Ｉ）
Ｈｕｒｌｅｒ病、Ｓｃｈｅｉｅ病、およびＨｕｒｌｅｒ−Ｓｃｈｅｉｅ病は、ＭＰＳ  Ｉとしても知られており、α−イズロニダーゼの不活性化、ならびにデルマタン硫酸およびヘパラン硫酸の蓄積により引き起こされる。いくつかのアッセイ法がＭＰＳ  Ｉの疾患進行を監視するのに利用可能である。例えば、α−イズロニダーゼ酵素活性は、組織生検試料または末梢血液から得られた培養細胞を対象として監視可能である。さらに、ＭＰＳ  Ｉおよびその他のムコ多糖症を対象とする疾患進行の好都合な指標として、グリコサミノグリカンであるデルマタン硫酸およびヘパラン硫酸の尿中排出が挙げられる（Ｎｅｕｆｅｌｄら、１９９５年、Ｉｄ．を参照）。特別な実施形態では、α−イズロニダーゼ酵素は、体重１ｋｇ当たり０．５８ｍｇの用量で、静脈内輸液として、週１回投与される。
【００７７】
Ｈｕｎｔｅｒ（ＭＰＳ  ＩＩ）
Ｈｕｎｔｅｒ病（ＭＰＳ  ＩＩとしても知られる）は、イズロン酸スルファターゼの不活性化、ならびにデルマタン硫酸およびヘパラン硫酸の蓄積により引き起こされる。Ｈｕｎｔｅｒ病は、臨床的に重度および軽度の形態を呈する。治療酵素の投与レジメンは、１．５  ｍｇ／ｋｇ、２週間に１回から５０ｍｇ／ｋｇ、１週間に１回が好ましい。
【００７８】
Ｍｏｒｑｕｉｏ（ＭＰＳ  ＩＶ）
Ｍｏｒｑｕｉｏ症候群（ＭＰＳ  ＩＶとしても知られる）は、２つの酵素のいずれかが不活性化することに起因してケラタン硫酸が蓄積した結果、引き起こされる。ＭＰＳ  ＩＶＡでは、不活性化酵素はガラクトサミン−６−スルファターゼであり、またＭＰＳ  ＩＶＢでは、不活性化酵素はβ−ガラクトシダーゼである。治療酵素の投与レジメンは、１．５ｍｇ／ｋｇ、２週間に１回から５０ｍｇ／ｋｇ、１週間に１回が好ましい。
【００７９】
Ｍａｒｏｔｅａｕｘ−Ｌａｍｙ（ＭＰＳ  ＶＩ）
Ｍａｒｏｔｅａｕｘ−Ｌａｍｙ症候群（ＭＰＳ  ＶＩとしても知られる）は、ガラクトサミン−４−スルファターゼ（アリールスルファターゼＢ）の不活性化、およびデルマタン硫酸の蓄積により引き起こされる。１．５ｍｇ／ｋｇ、２週間に１回から５０ｍｇ／ｋｇ、１週間に１回の投与レジメンが、ＥＲＴにより提供される有効な治療酵素の好ましい範囲である。最適には、採用される用量は、１週当たり１０ｍｇ／ｋｇ以下である。ＭＰＳ  ＶＩ疾患進行の好ましい代用マーカーとして、プロテオグリカン濃度が挙げられる。
【００８０】
ポンペ
ポンペ病は、酸性α−グルコシダーゼ酵素の不活性化およびグリコーゲンの蓄積により引き起こされる。酸性α−グルコシダーゼ遺伝子は、１７番ヒト染色体上に存在し、ＧＡＡと命名されている。Ｈ．Ｇ．Ｈｅｒｓがこの疾患について行った自身の試験に基づき、先天性リソソーム疾患の概念を最初に提案し、ＩＩ型グリコーゲン蓄積症（ＧＳＤ  ＩＩ）と呼んだが、今日では酸性マルターゼ欠損症（ＡＭＤ）とも呼ばれる（Ｈｅｒｓ、１９６５年、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、第４８巻、６２５頁を参照）。特別な実施形態では、ＧＡＡは、体重１ｋｇ当たり２０ｍｇの用量で、静脈内輸液として、２週間に１回投与される。
【００８１】
いくつかのアッセイ法が、ポンペ病の進行を監視するのに利用可能である。当業者に公知の任意のアッセイ法が利用可能である。例えば、特に生検から得られた心筋層、肝臓、および骨格筋線維内のグリコーゲン果粒のリソソーム内蓄積についてアッセイ可能である。α−グルコシダーゼ酵素活性は、生検試料または末梢血液から得られた培養細胞内で監視することも可能である。クレアチンキナーゼ（ＣＫ）の血清中上昇は、疾患進行の兆候として監視可能である。血清ＣＫは、幼児期発症型患者では最大１０倍上昇する場合があり、また成人発症型患者では、上昇の程度は通常低めである。Ｈｉｒｓｃｈｈｏｒｎ  Ｒ、１９９５年、Ｇｌｙｃｏｇｅｎ  Ｓｔｏｒａｇｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｔｙｐｅ  ＩＩ：Ａｃｉｄ  ａｌｐｈａ−Ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ（Ａｃｉｄ  Ｍａｌｔａｓｅ）Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ、Ｉｎ：Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ、Ｓｃｒｉｖｅｒら編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎ．Ｙ．、７．ｓｕｐ．ｔｈ  ｅｄ．、２４４３〜２４６４頁を参照。
【００８２】
酵素補充療法
下記のセクションでは、本発明の併用療法で用いられる酵素補充療法成分用として利用可能な特別な開示および代替的実施形態について記載する。一般的に、本発明の併用療法で用いられる酵素補充療法成分の投与レジメンは、熟練臨床医により一般的に決定される。グルコセレブロシダーゼによるゴーシェ病の治療を目的とする投与レジメンのいくつかの例は、上記記載の通りである。任意のＬＳＤの治療を目的として、本発明の併用療法で用いられる所与のＥＲＴ成分いずれについても、その投与レジメンを決定する一般原則は、公表文献から入手可能な情報、例えば特定のＬＳＤ毎にセクションで引用された特定の参考資料のレビュー等により当業者にとって明らかである。ＥＲＴは、静脈内輸液により患者に投与され得る。脳室内および／または髄腔内輸液（例えば、静脈内輸液に加えて）が、ＣＮＳの兆候を有するリソソーム蓄積症と診断された患者にＥＲＴを実施するのに利用可能である。
【００８３】
当技術分野において公知の任意の方法が、本発明の併用療法の酵素補充療法成分で用いられる酵素を製造するのに利用可能である。多くのかかる方法は公知であり、これには、Ｓｈｉｒｅ  ｐｌｃにより開発された遺伝子活性化技術が含まれるが、ただしこれらに限定されない（米国特許第５，９６８，５０２号および同第５，２７２，０７１号を参照）。
【００８４】
小分子療法
下記のセクションでは、本発明の併用療法で用いられる小分子療法成分で利用可能な特別な開示および代替的実施形態についても記載する。本発明の併用療法で用いられる小分子療法成分の投与レジメンは、熟練臨床医により一般的に決定され、また治療の対象とされる具体的な蓄積症および具体的な罹患者の臨床状態に応じて大幅に変化するものと予想される。任意の蓄積症の治療を目的として、本発明の任意の併用療法で用いられる所与のＳＭＴ成分について投与レジメンを決定する一般原則は、当業者に周知されている。投与レジメンに関するガイダンスは、このトピックスについて当技術分野において周知されている、任意の多くの参考資料から取得可能である。さらにガイダンスは、特に、本明細書で引用する特定の参考資料のレビューから入手可能である。
【００８５】
一般的に、例えば（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートおよびキヌクリジン−３−イル（２−（４’−フルオロ−［１，１’−ビフェニル］−３−イル）プロパン−２−イル）カルバマート等の本発明の化合物は、グリコスフィンゴリピド経路における病変に起因する、実質的に任意の蓄積症の治療を目的として、本発明の併用療法で利用可能である（例えば、ゴーシェ、ファブリー、ＧＭ１−ガングリオシド蓄積症、およびＧＭ２−ガングリオシド蓄積症（例えば、ＧＭ２活性化因子欠損症、Ｔａｙ−Ｓａｃｈｓ、およびＳａｎｄｈｏｆｆ））。同様に、アミノグリコシド（例えば、ゲンタマイシン、Ｇ４１８）が、未成熟終止コドン突然変異（すなわち、ナンセンス突然変異）を有する任意の蓄積症の個人を対象として、本発明の併用療法で利用可能である。かかる突然変異は、Ｈｕｒｌｅｒ症候群で特に広く認められる。本発明の併用療法で用いられる小分子療法成分は、治療の対象とされる蓄積症（例えば、Ｓａｎｄｈｏｆｆ、Ｔａｙ−Ｓａｃｈｓ、ニーマン−ピックＡ型、およびゴーシェ２型および３型）について中枢神経系の兆候が認められる場合、小分子はその他の療法と比較して一般的に血液脳関門を容易に通過できるので、特に好ましい。
【００８６】
本発明の併用療法で用いられる基質阻害剤の好ましい用量は、当業者により容易に決定される。特定の実施形態では、かかる用量は、腹腔内投与、経口投与、または同等の投与で、１日１回〜５回により、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約５ｍｇ／ｋｇ〜約６０ｍｇ／ｋｇ（例えば、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、５５ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ）であり得る。かかる用量は、経口投与、腹腔内投与、または同等の投与で、１日１回〜５回により、約５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｇ／ｋｇ、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇであり得る。１つの実施形態では、用量は、約１０ｍｇ／日〜約５００ｍｇ／日（例えば、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、３０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、６０ｍｇ／日、７０ｍｇ／日、８０ｍｇ／日、９０ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１１０ｍｇ／日、１２０ｍｇ／日、１３０ｍｇ／日、１４０ｍｇ／日、１５０ｍｇ／日、１６０ｍｇ／日、１７０ｍｇ／日、１８０ｍｇ／日、１９０ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、２１０ｍｇ／日、２２０ｍｇ／日、２３０ｍｇ／日、２４０ｍｇ／日、２５０ｍｇ／日、２６０ｍｇ／日、２７０ｍｇ／日、２８０ｍｇ／日、２９０ｍｇ／日、３００ｍｇ／日）の範囲である。特に好ましい経口用量範囲は、約５０ｍｇ〜約１００ｍｇであり、この場合、１日２回投与される。本発明の化合物に関する具体的な経口用量範囲は、約５ｍｇ／ｋｇ／日〜約６００ｍｇ／ｋｇ／日である。本発明の化合物に関する具体的な経口用量範囲は、約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日、例えば、１ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日、１０ｍｇ／ｋｇ／日、１５ｍｇ／ｋｇ／日、２０ｍｇ／ｋｇ／日、２５ｍｇ／ｋｇ／日、３０ｍｇ／ｋｇ／日、３５ｍｇ／ｋｇ／日、４０ｍｇ／ｋｇ／日、４５ｍｇ／ｋｇ／日、５０ｍｇ／ｋｇ／日、５５ｍｇ／ｋｇ／日、または６０ｍｇ／ｋｇ／日、６５ｍｇ／ｋｇ／日、７０ｍｇ／ｋｇ／日、７５ｍｇ／ｋｇ／日、８０ｍｇ／ｋｇ／日、８５ｍｇ／ｋｇ／日、９０ｍｇ／ｋｇ／日、９５ｍｇ／ｋｇ／日、または１００ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００８７】
治療プラットフォームの併用（すなわち、酵素補充療法と小分子療法）をローテーションするのが好ましい。しかし、対象は、熟練臨床医の決定に従い、必要に応じて両アプローチを重複して治療を受けることも可能である。治療スケジュールの例として、下記の例が挙げられるが、ただしこれらに限定されない：（１）ＳＭＴとその後のＥＲＴ；（２）ＥＲＴとその後のＳＭＴ；および（３）ＥＲＴとＳＭＴとをほぼ同時に提供。これまでに指摘したように、所与の対象における所与の蓄積症の臨床経過に基づき、必要に応じて治療プラットフォームを一時的に重複して実施することも可能である。
【００８８】
様々な併用療法の治療間隔は、幅広く変化する可能性があり、また蓄積生成物がどれほど急激に蓄積するか、その程度に応じて、蓄積症および個人が異なれば一般的に異なり得る。例えば、ポンペでは蓄積生成物が急速に蓄積するのと比較して、ファブリーでは、蓄積生成物の蓄積は低速であり得る。疾患進行および治療の奏功に関する臨床的兆候を監視することにより、当業者は特定の個人の特定の蓄積症について力価測定を実施する。
【００８９】
リソソーム蓄積症において蓄積する様々な高分子は一様に分布せず、むしろ疾患毎に好まれる所定の解剖学的部位に沈着する。しかし、外因的に供給される酵素は、細網内皮系の細胞により一般的に取り込まれ、そしてリソソームのコンパートメントに局在化し、そこで酵素は蓄積した基質を加水分解するように作用する。さらに、治療酵素の細胞への取り込みは、リソソームのターゲティングを高めるしかるべき操作により増強され得る（例えば、細胞に取り込まれ、そしてリソゾームに輸送される細胞表面マンノース受容体により認識されるオリゴ糖側鎖を再構築することにより、薬物動態が改善した組換えグルコセレブロシダーゼについて記載する、Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ出願のＦｒｉｅｄｍａｎらによる米国特許第５，５４９，８９２号を参照）。
【００９０】
治療法によっては、他法より適切にいくつかの罹患臓器を標的とする。例えば、ファブリーでは、ＥＲＴが満足の行くレベルの臨床転帰を得るのに十分なほど腎臓に到達しない場合には、ＳＭＴは、腎臓内の基質濃度を低減するのに利用可能である。実施例１１２および図６Ｂで示したように、ＳＭＴは、ファブリーマウスモデルの尿中Ｇｂ３濃度（すなわち、ファブリー患者の体内に蓄積した基質）を有効に低減し、その程度はＥＲＴよりも高かった。腎臓は、尿中Ｇｂ３の主要な発生源と考えられている。対照的に、図６Ｂは、ＥＲＴは血漿中のＧｂ３濃度を有効に低減し、その程度はＳＭＴよりも高かったことを示す。これらの結果から、ＥＲＴとＳＭＴとの併用療法は、強みを有利に生かし、また各療法を単独で採用したときのそれぞれに関連した弱みに対処する相補的な治療戦略を提供することが示唆される。ＳＭＴは、ＢＢＢを通過することができ、ＣＮＳの兆候を有するＬＳＤ、例えばＮｉｅｍａｎｎ  Ｐｉｃｋ  Ａ型および神経障害性のゴーシェ病（ｎＧＤ）等を治療するために、ＥＲＴと併用したとき、強力なアプローチを提供する。さらに、酵素補充と併用したＳＭＴにより基質濃度が低下すれば、臨床転帰を増強し得るような間隔が置かれた異なる介入ポイントで、蓄積問題に対処できる。
【００９１】
２つまたはそれ以上の療法を同時にまたは併用して実施するといっても、それは同時に実施する必要はなく、両方が対象内で同時に作用する必要があるにすぎないと理解される。
【実施例１】
【００９２】
（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマート
工程１：ヨウ化メチルによるジメチル化
【化１】
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【００９３】
手順：３Ｎ  ＲＢフラスコに、温度計、滴下ロート、および窒素流入口を取り付けた。フラスコを窒素でフラッシュし、そしてカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（ＭＷ１１２．２１、７５．４ｍｍｏｌ、８．４６ｇ、４．０当量、白色粉末）を秤量し、粉末用ロートにてフラスコに添加し、その後ＴＨＦ（６０ｍＬ）を添加した。ほとんどのカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドが溶解すると濁った溶液となった。この混合物を氷水浴中で０〜２℃（内部温度）に冷却した。別のフラスコ中で、開始エステル（ＭＷ２６５．３、１８．８５ｍｍｏｌ、５．０ｇ、１．０当量）をＴＨＦに溶解し（１８ｍＬ＋リンス用２ｍＬ）、そして滴下ロートに移した。この溶液を、冷却混合物に、２５〜３０分間にわたり滴状添加したが、添加期間中内部温度を５℃未満に保った。反応混合物を冷却して０〜２℃に戻した。別のフラスコ中で、ＴＨＦ（６ｍＬ）に溶解したヨウ化メチル溶液（ＭＷ１４１．９４、４７．１３ｍｍｏｌ、６．７ｇ、２．５当量）を調製し、滴下ロートに移した。ヨウ化メチル溶液を含有するフラスコを、次にＴＨＦ（１．５ｍＬ）でリンスし、これを次にＴＨＦに溶解した無色透明のヨウ化メチル溶液をすでに含有する滴下ロートに移した。この溶液を、暗褐色の反応混合物に、３０〜４０分間にわたり慎重に滴状添加したが、添加期間中、常時、内部温度を１０℃未満に保った。添加完了後、わずかに混濁した混合物をさらに１時間撹拌したが、その期間、内部温度を０〜５℃に下げた。０〜５℃で１時間撹拌後、５．０Ｍ  ＨＣｌ水溶液（８ｍＬ）を５〜７分間にわたりゆっくり滴状添加しながら、反応混合物をクエンチした。内部温度は、この添加期間中２０℃未満に維持すべきである。添加後、水（１４ｍＬ）を添加し、そして混合物を２〜３分間撹拌した。撹拌を中止し、そして２層に分離するまで放置した。次に、２層を２５０ｍＬの１Ｎ  ＲＢフラスコに移し、そしてＴＨＦ／生成物と水からなる二相性の層を得るためにＴＨＦを減圧中で、できる限り蒸発させた。２層に分離するまで放置した。工程１生成物のＴＨＦ溶液を次の反応に用いた。
【００９４】
工程２：ＬｉＯＨ一水和物によるエチルエステルの加水分解
【化２】
0006438455.tif 000013
【００９５】
手順：ＴＨＦに溶解した粗製のエステルを、反応フラスコに添加した。別途、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ  （ＭＷ４１．９６、７５．０ｍｍｏｌ、３．１５グラム、２．２当量）を１００ｍＬのビーカーに秤量し、これに撹拌バーを添加した。水（４０ｍＬ）を添加し、すべての固体が溶解して無色透明な溶液になるまで、混合物を撹拌した。この水溶液を、次にテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）に溶解したエステル溶液を含有する２５０ｍＬのＲＢフラスコに添加した。コンデンサーをフラスコの頸部に取り付け、そして窒素流入口をコンデンサーの最上部に連結した。混合物を還流方式で１６時間加熱した。１６時間後、加熱を中止し、そして混合物を室温まで冷却した。ＴＨＦを減圧中で蒸発させて、褐色溶液を得た。一定分量の褐色水溶液を、エチルエステルが完全に加水分解されたかどうか、ＨＰＬＣおよびＬＣ／ＭＳにより分析した。水（１５ｍＬ）を添加し、この塩基性水溶液をＴＢＭＥ（２×４０ｍＬ）で抽出してｔ−ブチルエステルを除去した。塩基性の水性層を氷水浴中で０〜１０℃まで冷却し、そして撹拌しながら、ｐＨ約１になるまで濃ＨＣｌを滴状添加して酸性化した。酸性水溶液中のこのゴム状の固体に、ＴＢＭＥ（６０ｍＬ）を添加し、混合物を振とうさせ、次に激しく撹拌してすべての酸をＴＢＭＥ層に溶解した。２層を分液ロートに移し、そしてＴＢＭＥ層を分離した。淡黄色の酸性水溶液を、ＴＢＭＥ（４０ｍＬ）で再抽出し、そしてＴＢＭＥ層を分離し、以前のＴＢＭＥ層と混合した。酸性の水性層を廃棄した。混合したＴＢＭＥ層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥、濾過し、そして減圧中で蒸発させてＴＢＭＥを除去し、高真空条件下で汚い黄色固体に凝固するオレンジ色／暗黄色の油として粗製の酸を得た。粗製の酸を秤量し、そしてヘプタン／ＴＢＭＥ（３：１、粗製の酸５ｍＬ／ｇ）中でこれを加熱することにより結晶化させて、黄色の固体として酸を得た。
【００９６】
工程３：ＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌによるヒドロキサム酸の形成
【化３】
0006438455.tif 000014
【００９７】
手順：カルボン酸（ＭＷ２６５．３、１８．８５ｍｍｏｌ、５．０ｇ、１．０当量）を秤量し、窒素下で２５ｍＬの１Ｎ  ＲＢフラスコに移した。ＴＨＦ（５．０ｍＬ）を添加すると、酸が速やかに溶解して、透明な暗黄色から褐色の溶液を得た。溶液を氷浴中で０〜２℃（浴温度）に冷却し、そしてＮ、Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ；ＭＷ１６２．１５、２０．７４ｍｍｏｌ、３．３６ｇ、１．１当量）を少量ずつ１０〜１５分間にわたりゆっくりと添加した。氷浴を除去し、溶液を室温で１時間撹拌した。１時間撹拌後、溶液を氷水浴中で０〜２℃（浴温度）まで再度冷却した。ヒドロキシルアミン塩酸塩（ＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌ；ＭＷ６９．４９、３７．７ｍｍｏｌ、２．６２ｇ、２．０当量）を添加したが、この添加は発熱性であるので、固体として少量ずつゆっくりと３〜５分間にわたり行った。添加完了後、水（１．０ｍＬ）を、２分にわたり不均質の混合物に滴状添加し、反応混合物を氷水浴中にて０〜１０℃で５分間撹拌した。冷却浴を除去し、反応混合物を窒素下、室温にて、オーバーナイトで２０〜２２時間撹拌した。すべてのＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌが溶解すると、溶液は透明となった。２０〜２２時間後、一定分量の反応混合物を、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分析した。次に、ＴＨＦを減圧下で蒸発させ、残留物を、ジクロロメタン（１２０ｍＬ）および水（６０ｍＬ）中に取り出した。混合物を分液ロートに移し、そこで混合物を振とうし、そして２層に分離するまで放置した。水層を廃棄し、ジクロロメタン層を１Ｎの塩酸（ＨＣｌ；６０ｍＬ）で洗浄した。酸の層を廃棄した。ジクロロメタン層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥、濾過し、そして溶媒を減圧下で蒸発させて、粗製のヒドロキサム酸を淡黄色の固体として得たが、これを高真空下、オーバーナイトで乾燥した。
【００９８】
工程３（続き）：ヒドロキサム酸の環状中間体（単離せず）への変換
【化４】
0006438455.tif 000015
【００９９】
手順：粗製のヒドロキサム酸（ＭＷ２８０．３２、５．１ｇ）を、窒素流入口を備えた２５０ｍＬの１Ｎ  ＲＢフラスコに移した。撹拌バーを添加し、その後にアセトニトリル（５０ｍＬ）を添加した。固体は、アセトニトリル中で不溶性であった。黄色の不均質な混合物を窒素下で２〜３分撹拌し、ＣＤＩ（ＭＷ１６２．１５、２０．７４ｍｍｏｌ、３．３６ｇ、１．１当量）を室温で一度に添加した。発熱は認められなかった。固体は速やかに溶解し、黄色の透明な溶液を、室温で２〜２．５時間撹拌した。２〜２．５時間後、一定分量をＨＰＬＣおよびＬＣ／ＭＳにより分析したが、ヒドロキサム酸が所望の環状中間体に変換したことが判明した。
【０１００】
次に、アセトニトリルを減圧下で蒸発させて、赤味を帯びた粘稠な油として粗製の環状中間体を得た。油をトルエン（６０ｍＬ）中に取り出し、そして赤味を帯びた混合物を２時間加熱還流し、その期間中、環状中間体はＣＯ２を放出してイソシアナートに再構成した（下記を参照）。
【０１０１】
【化５】
0006438455.tif 000016
【０１０２】
工程３（続き）：イソシアナートの遊離塩基への変換
【化６】
0006438455.tif 000017
【０１０３】
反応混合物を５０〜６０℃に冷却し、そして（Ｓ）−（＋）−キヌクリジノール（ＭＷ１２７．１８、２８．２８ｍｍｏｌ、３．６ｇ、１．５当量）を、混合物に固体として一度に添加した。混合物を、１８時間、再度加熱還流した。１８時間後、一定分量をＨＰＬＣおよびＬＣ／ＭＳにより分析し、イソシアナートが所望の生成物に完全変換したことが判明した。反応混合物を分液ロートに移し、トルエン（２５ｍＬ）を添加した。混合物を水で洗浄し（２×４０ｍＬ）、そして水層を分離した。混合された水層をトルエン（３０ｍＬ）で再抽出し、水層を廃棄した。混合されたトルエン層を１ＮのＨＣｌ（２×６０ｍＬ）で抽出し、トルエン層（Ｏ−アシル不純物を含有）を廃棄した。混合されたＨＣｌ層を、撹拌バーを備えた５００ｍＬのエルレンマイヤーフラスコに移した。この撹拌中の黄色／赤味を帯びたオレンジ色の透明溶液を、５０％ｗ／ｗＮａＯＨ水溶液を滴状添加することにより、ｐＨ１０〜１２まで塩基性にした。所望の遊離塩基が、汚い黄色のゴム上の固体として溶液から析出したが、これは撹拌バーをトラップするおそれがあった。この混合物に、酢酸イソプロピル（１００ｍＬ）を添加し、そしてゴム状の固体が酢酸イソプロピルに浸漬したら、混合物を５分間激しく撹拌した。撹拌を中止し、そして２層に分離するまで放置した。黄色の酢酸イソプロピル層を分離し、そして水性の塩基性層を、酢酸イソプロピル（３０ｍＬ）で再抽出した。水性の塩基性層を廃棄し、そして混合された酢酸イソプロピル層を無水のＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、事前秤量したＲＢフラスコ内に濾過し、そして溶媒を減圧下で蒸発させてベージュ色から黄褐色の固体として粗製の遊離塩基を得たが、これを高真空条件下、オーバーナイトで乾燥させた。
【０１０４】
工程３（続き）：粗製の遊離塩基の再結晶化
ベージュ色から黄褐色の粗製遊離塩基を秤量し、ヘプタン／酢酸イソプロピル（３：１、粗製の遊離塩基１ｇ当たり９．０ｍＬの溶媒）から再結晶化した。適量のヘプタン／酢酸イソプロピルを、粗製遊離塩基に撹拌バーと共に添加し、そして混合物（遊離塩基は、当初、部分的に可溶性であったが、加熱還流すると溶解して、赤味を帯びたオレンジ色の透明な溶液が得られた）を１０分間加熱還流した。熱源を除去し、混合物を撹拌しながら、室温まで冷却放置し、そのとき白色の析出物が形成された。室温で３〜４時間撹拌後、ブーフナーロートを用いてホースバキューム下で析出物を濾過し、ヘプタン（２０ｍＬ）で洗浄し、そしてブーフナーロート上、ホースバキューム下、オーバーナイトで乾燥した。析出物を結晶皿に移し、そして真空オーブン内、５５℃にて、オーバーナイトで乾燥した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．０４〜７．８３（ｍ、２Ｈ）、７．２０〜６．９９（ｍ、３Ｈ）、５．５３（ｓ、１Ｈ）、４．７３〜４．５５（ｍ、１Ｈ）、３．１８（ｄｄ、Ｊ＝１４．５、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．０５〜２．１９（ｍ、５Ｈ）、２．０〜１．７６（ｍ、１１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１６６．３８、１６５．０２、１６２．５４、１６２．８〜１５５．０（ｄ、Ｃ−Ｆ）、１３０．０６、１２８．４３、１２８．３４、１１６．０１、１１５．７９、１１２．４６、７１．１８、５５．７０、５４．１３、４７．４２、４６．５２、２７．９４、２５．４１、２４．６７、１９．５８。
【実施例２】
【０１０５】
（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートマラートの結晶性形態Ａ
（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートの遊離塩基（２０ｇ）をＩＰＡ（１４０ｍｌ）に室温で溶解し、濾過した。濾過液を、オーバーヘッドスターラーおよび窒素流入口／流出口を備えた１Ｌのｒ．ｂ．フラスコに添加した。Ｌ−リンゴ酸（６．８９ｇ）を、ＩＰＡ（１００＋３０ｍｌ）に室温で溶解し、濾過した。濾過液を、上記１リットルのフラスコに添加した。得られた溶液を室温、窒素下で４〜２４時間撹拌した（シーディング有りまたは無し）。この期間中に結晶が生じた。生成物を濾過により収集し、そして少量のＩＰＡ（３０ｍｌ）で洗浄した。固体を５５℃の真空オーブン中にて７２時間乾燥した（２３ｇ、収率：）。
Ｈ１  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３
【０１０６】
【表１１】
0006438455.tif 000018
【実施例３】
【０１０７】
（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマートＨＣｌ塩
ＩＰＡ（８ｍｌ）に溶解した（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマート（０．７８ｇ、２ｍモル）を室温で撹拌し、ＨＣｌ（２Ｍ  ＩＰＡ溶液、１ｍｌ）を添加した。溶液をシーディングし、室温で１８時間撹拌した。生成物を濾過により収集し、そして真空下で乾燥し、生成物（０．７ｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１２．（ｂｒ、ｓ、１Ｈ）、７．９〜８．０（ｍ、２Ｈ）、７．１〜７．２（ｍ、３Ｈ）、５．９（ｂｒ、ｓ、１Ｈ）、４．９〜５．０（ｍ、１Ｈ）、３．２〜３．６（ｍ、６Ｈ）、１．７〜２．４（ｍ、１１Ｈ）。
【実施例４】
【０１０８】
（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマー（Ｓ）−２−ヒドロキシコハク酸塩
コハク酸（０．１５ｇ）をＩＰＡ（５ｍｌ）に溶解し、そして５０℃で撹拌した。ＩＰＡ（８ｍｌ）に溶解した（Ｓ）−キヌクリジン−３−イル（２−（２−（４−フルオロフェニル）チアゾール−４−イル）プロパン−２−イル）カルバマート（０．５ｇ）を添加した。溶液をシーディングし、そして室温で２０時間撹拌した。生成物を濾過により収集し、そして真空下で乾燥して、生成物（０．４ｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．９（ｍ、２Ｈ）、７．１〜７．２（ｍ、３Ｈ）、５．８（ｂｒ、ｓ、１Ｈ）、４．９（ｍ、１Ｈ）、３．１〜３．５（ｍ、６Ｈ）、２．６（ｓ、４Ｈ）、１．７〜２．４（ｍ、１１Ｈ）。
【図１】
0006438455.tif 000019
【図２】
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【図３】
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【図４】
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