(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I
0006404215.tif 000100
［上式中：
Ｒ１は、Ｈであり；
Ｒ２は、ｔ−ブチルであり；
Ｒ３は、Ｈ又はＣ１−６アルキルであり；
Ａは、一又は複数のＡ’で置換されていてもよい、フェニルであり；且つ各Ａ’は、独立して、Ｃ１−６アルキル、ハロ、Ｃ１−６アルキルスルホニル、アミド、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アミノＣ１−６アルキル、又は重水素である］の化合物；
又はその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ３がＣ１−６アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ３がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
各Ａ’が、独立して、Ｃ１−６アルキル、ハロ、Ｃ１−６アルキルスルホニル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アミノＣ１−６アルキル又は重水素である、請求項１から３の何れか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ａ’がＣ１−６アルキルである、請求項１から４の何れか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ａ’がＣ１−６アルキルスルホニルである、請求項１から５の何れか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ａ’がＣ１−６アルキル又はＣ１−６アルキルスルホニルである、請求項１から６の何れか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(２-フルオロ-４-メチルフェニルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(ｐ-トリルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(３-(メチルスルホニル)フェニルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(２-(ジメチルアミノカルボニル)フェニルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(２,４-ジメチルフェニルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(４-(メチルスルホニル)フェニルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(３-(１-ヒドロキシエチル)フェニルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
２-(３-(１-アミノエチル)フェニルアミノ)-Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
２-(３-メタンスルホニル-フェニルアミノ)-３-メチル-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボン酸 ｔｅｒｔ-ブチルアミド；及び
２-フェニルアミノ(Ｄ５)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボン酸 ｔｅｒｔ-ブチルアミド
からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
少なくとも一種の薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤と混合された、請求項１から８の何れか一項に記載の化合物を含む薬学的組成物。
【請求項１０】
化学療法若しくは抗増殖剤、抗炎症剤、免疫調節剤若しくは免疫抑制剤、神経栄養因子、心臓血管病を治療するための薬剤、糖尿病を治療するための薬剤及び免疫不全疾患を治療するための薬剤から選択される追加の治療剤を更に含む、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
Ｓｙｋに関連する疾患の治療に有用な医薬の製造のための、請求項１から８の何れか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１２】
Ｓｙｋに関連する疾患の治療において使用するための、請求項１から８の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
狼瘡、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病、臓器移植による合併症、異種移植、糖尿病、がん、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫甲状腺疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、アルツハイマー病及び白血病を含む免疫疾患の治療において使用するための、請求項１から８の何れか一項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
プロテインキナーゼは、最大のヒト酵素ファミリーの一つを構成し、リン酸基をタンパク質に付加することによって多くの異なるシグナル伝達過程を調節し；特にチロシンキナーゼは、タンパク質をチロシン残基のアルコール部分でリン酸化する。チロシンキナーゼファミリーは、細胞の増殖、移動及び分化を制御するメンバーを含む。異常なキナーゼ活性は、がん、自己免疫及び炎症性疾病を含む様々なヒト疾病に関連づけられている。プロテインキナーゼは、細胞シグナル伝達の鍵となる制御因子に含まれるため、キナーゼ活性の小分子阻害剤で細胞機能を調節するための手段を提供し、したがって、良い医薬品設計の標的になる。キナーゼ媒介性疾病過程の治療に加えて、キナーゼ活性の選択的且つ有効な阻害剤は、細胞シグナル伝達過程の調査及び治療上興味深い他の細胞標的の同定にも有用である。
【背景技術】
【０００２】
ＳＹＫ（脾臓チロシンキナーゼ）は、ＢＣＲシグナル伝達を介したＢ細胞活性化に必須である非受容体チロシンキナーゼである。ＳＹＫは、リン酸化されたＢＣＲに結合した際に活性化され、したがってＢＣＲ活性化に続く早期シグナル伝達事象を開始する。ＳＹＫが欠損したマウスは、Ｂ細胞発生の早期遮断を示す。したがって、細胞のＳＹＫ酵素活性の阻害が、自己抗体産生に対するその効果による、自己免疫疾病の治療として提案されている。
【０００３】
ＳＹＫは、ＢＣＲシグナル伝達及びＢ細胞活性化における役割に加えて、ＦｃεＲＩ媒介性肥満細胞脱顆粒及び好酸球活性化にも重要な役割を果たす。したがって、ＳＹＫは、喘息を含むアレルギー疾患に関連づけられる。ＳＹＫは、ＦｃγＲＩのリン酸化されたガンマ鎖に、そのＳＨ２ドメインを介して結合し、下流のシグナル伝達に必須である。ＳＹＫ欠損肥満細胞は、欠陥のある脱顆粒、アラキドン酸及びサイトカイン分泌を示す。これはまた、肥満細胞のＳＹＫ活性を阻害する、薬理作用のある物質であることが示されている。ＳＹＫアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、喘息の動物モデルにおいて好酸球及び好中球の抗原誘発性浸潤を阻害する。ＳＹＫ欠損好酸球は、ＦｃεＲ刺激に対する応答で、活性化障害も示す。したがって、ＳＹＫの小分子阻害剤は、喘息を含むアレルギー誘発性炎症性疾病の治療に有用である。
【０００４】
ＳＹＫ経路の調節に関与する治療によって利益を得ることが企図される多くの状態を考慮すると、ＳＹＫ経路を調節する新規化合物及びこれらの化合物を使用する方法が、多種多様な患者にかなりの治療利益を提供するはずであることは直ぐに分かる。本明細書において提供するのは、ＳＹＫ経路の標的化又はＳＹＫキナーゼの阻害による自己免疫疾病及び炎症性疾病の治療的処置に使用するための新規な化合物である。
【発明の概要】
【０００５】
本願は式I、II又はIII
0006404215.tif 000002
［各式中：
Ｒ１は、Ｈ、ハロ、又は低級アルキルであり；
Ｒ２は、低級アルキル又は低級ヒドロキシアルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ又は低級アルキルであり；
Ａは、一又は複数のＡ’で置換されていてもよい、単環式又は二環式ヘテロアリール（好ましくは、ピリジニル、ピリミジル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、チアゾリル若しくはピラジニル）又はフェニルであり；且つ各Ａ’は、独立して、低級アルキル、ハロ、低級アルキルスルホニル、低級アルキルアミド、アミド、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ、アミノ低級アルキル、又は重水素である］の化合物；又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００６】
本願は、炎症状態又は自己免疫状態を治療するための方法であって、それを必要としている患者に、式Iの化合物の治療的有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【０００７】
本願は、少なくとも一の薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤と混合された、式Iの化合物を含む薬学的組成物を提供する。
【０００８】
定義
ここで使用される「ａ」又は「ａｎ」実体なる語句は、その実体の一又は複数を指す；例えば、化合物（ａ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）は、一若しくは複数の化合物又は少なくとも一の化合物を指す。同様に、「ａ」（又は「ａｎ」）、「一又は複数」、及び「少なくとも一」なる用語は、本明細書では互換的に使用され得る。
【０００９】
本明細書において使用される場合、請求項の移行句においてであれ本文においてであれ、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」なる用語は、オープンエンドの意味を有していると解釈されるべきである。すなわち、該用語は、「少なくとも有する」又は「少なくとも含む」なる語句と同義的に解釈されるべきである。方法の文脈で使用される場合、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」なる用語は、その方法が記載された工程を少なくとも含むが、追加の工程を含んでもよいことを意味する。化合物又は組成物の文脈で使用される場合、「含む」なる用語は、その化合物又は組成物が、記載された特徴又は成分を少なくとも含むが、追加の特徴又は成分も含んでもよいことを意味する。
【００１０】
ここで使用される場合、別段の記載がない限り、単語「又は」は、「及び／又は」の「包括的な」意味で使用され、「何れか／又は」の「排他的な」意味で使用されるものではない。
【００１１】
「独立して」なる用語は、本明細書では、ある変数が、何れか一つの場合に、同じ化合物内に同じ又は異なる定義を有する変数があるなしにかかわらず適用されることを示すために使用される。したがって、Ｒ”が２回現れ、「独立して炭素又は窒素」として定義されている化合物においては、両方のＲ”が炭素である可能性があり、両方のＲ”が窒素である可能性があり、又は、一方のＲ”が炭素で他方が窒素である可能性がある。
【００１２】
任意の変数が、本発明において用いられる又は請求される化合物を示し記述する任意の部分又は式に複数回出現する場合、各出現におけるその定義は、他の各出現におけるその定義とは無関係である。また、置換基及び／又は変数の組合せは、そのような化合物が安定な化合物を生じる場合のみ許容される。
【００１３】
結合の端部の記号「＊」又は結合を貫いて引かれた「------」は、各々、官能基又は他の化学部分が、それが一部分である分子の残りに結合する点を指す。したがって、例えば、
0006404215.tif 000003
である。
【００１４】
（明確な頂点に連結されているのと異なり）環系に引かれている結合は、結合がその適切な環原子の何れかに結合され得ることを示している。
【００１５】
ここで使用される「任意選択的な（ｏｐｔｉｏｎａｌ）」又は「〜してもよい（ｏｐｔｉｏｎａｌｌｙ）」なる用語は、続いて記載される事象又は状況が、起こってもよいが起こる必要はないことを意味し、その記載は、事象又は状況が起こる場合とそれが起こらない場合とを含んでいることを意味する。例えば、「置換されていてもよい」は、置換されていてもよい部分に、水素原子又は置換基を含め得ることを意味する。
【００１６】
「任意選択的な結合」なる語句は、その結合が、存在していても、していなくてもよいこと、及びその記載が、単結合、二重結合又は三重結合を含むことを意味する。置換基が、「結合」であるか又は「存在しない」と標記される場合、置換基に連結した原子が、直接連結される。
【００１７】
「約」なる用語は、本明細書では、およそ、〜の辺り、大体、又は、〜前後を意味するために使用される。「約」なる用語が、ある数値範囲と共に使用される場合、記載された数値の上下にその境界を拡張することにより、その範囲を修正する。一般に、「約」なる用語は、本明細書では、２０％の分散で、表示された値の上下に数値を修正するために使用される。
【００１８】
ある化合物は、互変異性体を示し得る。互変異性化合物は、二以上の相互転換可能な種として存在し得る。プロトン移動（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｉｃ）互変異性体は、二つの原子の間の共有結合水素原子の移動により生じる。互変異性体は、一般に平衡状態で存在し、個々の互変異性体を単離する試みは、通常、その化学的及び物理的特性が、化合物の混合物と一致している混合物をもたらす。平衡の位置は、その分子内の化学的特徴に依拠する。例えば、アセトアルデヒド等の、多くの脂肪族アルデヒド及びケトンにおいて、ケト型が優勢であるが、一方でフェノールにおいては、エノール型が優勢である。一般的なプロトン移動互変異性体には、ケト／エノール（−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ−⇔−Ｃ（−ＯＨ）＝ＣＨ−）、アミド／イミド酸（−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−⇔−Ｃ（−ＯＨ）＝Ｎ−）及びアミジン（−Ｃ（＝ＮＲ）−ＮＨ−⇔−Ｃ（−ＮＨＲ）＝Ｎ−）互変異性体が含まれる。後者の二つは、ヘテロアリール及びヘテロ環式環で特に一般的であり、本発明は、該化合物の全ての互変異性型を包含する。
【００１９】
特に別の定義がされていない限り、ここで使用される技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって通常理解される意味を持つ。本明細書では、当業者に知られた様々な方法論及び材料が参照される。薬理学の一般原理を示す標準的な参考文献には、Goodman andgilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10th Ed., McGraw Hill Companies Inc., New York (2001)が含まれる。当業者に知られたいかなる適切な物質及び／又は方法も、本発明の実施に利用され得る。しかしながら、好ましい材料及び方法が記載される。以下の説明及び実施例で参照される物質、試薬などは、特に断りのない限り、商業的供給元から得ることができる。
【００２０】
本明細書で記載される定義は、化学的に関連した組合せ、例えば、「ヘテロアルキルアリール」、「ハロアルキルヘテロアリール」、「アリールアルキルヘテロシクリル」、「アルキルカルボニル」、「アルコキシアルキル」等を形成するように付け加えられてもよい。「アルキル」なる用語が、「フェニルアルキル」又は「ヒドロキシアルキル」におけるように、別の用語に続く接尾辞として使用される場合、これは、他の具体的に名を挙げられた基から選択される一又は二の置換基で置換されている、上で定義された通りのアルキル基を指すことが意図される。したがって、例えば、「フェニルアルキル」は、一から二のフェニル置換基を有するアルキル基を指し、したがって、ベンジル、フェニルエチル及びビフェニルを含む。「アルキルアミノアルキル」は、一から二のアルキルアミノ置換基を有するアルキル基である。「ヒドロキシアルキル」は、２−ヒドロキシエチル、２−ヒドロキシプロピル、１−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロピル、２−ヒドロキシブチル、２,３−ジヒドロキシブチル、２−（ヒドロキシメチル）、３−ヒドロキシプロピル等を含む。したがって、本明細書で使用される場合、「ヒドロキシアルキル」なる用語は、以下に定義されるヘテロアルキル基のサブセットを定義するために使用される。
【００２１】
−アルキル（アラルキル）なる用語は、非置換アルキル又はアラルキル基の何れかを指す。（ヘテロ）アリール又は（ヘタ）アリールなる用語は、アリール又はヘテロアリール基の何れかを指す。
【００２２】
「スピロシクロアルキル」なる用語は、本明細書で使用される場合、スピロ環式シクロアルキル基、例えば、スピロ［３,３］ヘプタン等を意味する。スピロヘテロシクロアルキルなる用語は、本明細書で使用される場合、スピロ環式ヘテロシクロアルキル、例えば、２,６−ジアザスピロ［３,３］ヘプタン等を意味する。
【００２３】
本明細書で使用される場合の「アシル」なる用語は、式−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、水素又は本明細書で定義される通りの低級アルキルである）の基を表す。本明細書で使用される場合の「アルキルカルボニル」なる用語は、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、本明細書で定義される通りのアルキルである）の基を表す。Ｃ１−６アシルなる用語は、６個の炭素原子を含む基−Ｃ（＝Ｏ）Ｒを指す。本明細書で使用される場合の「アリールカルボニル」なる用語は、式Ｃ（＝Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、アリール基である）の基を意味し；本明細書で使用される場合の「ベンゾイル」なる用語は、Ｒがフェニルである「アリールカルボニル」基を意味する。
【００２４】
本明細書で使用される場合の「エステル」なる用語は、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ（式中、Ｒは、本明細書で定義される通りの低級アルキルである）の基を表す。
【００２５】
本明細書で使用される場合の「アルキル」なる用語は、１から１０個の炭素原子を含む、非分枝又は分枝鎖の飽和一価炭化水素残基を表す。「低級アルキル」なる用語は、１から６個の炭素原子を含む直鎖又は分枝鎖の炭化水素残基を表す。本明細書で使用される場合の「Ｃ１−１０アルキル」は、１から１０個の炭素から構成されるアルキルを指す。アルキル基の例には、低級アルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル又はペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル及びオクチルが含まれる。
【００２６】
「アルキル」なる用語が、「フェニルアルキル」又は「ヒドロキシアルキル」におけるように、別の用語に続く接尾辞として使用される場合、これは、他の具体的に名を挙げられた基から選択される一又は二の置換基で置換されている、上で定義された通りのアルキル基を指すことが意図される。したがって、例えば、「フェニルアルキル」とは、Ｒ’Ｒ”基−（ここで、Ｒ’は、フェニル基であり、Ｒ”は、本明細書で定義される通りのアルキレン基である）を表し、フェニルアルキル部分の結合点は、アルキレン基上にあると理解される。アリールアルキル基の例は、ベンジル、フェニルエチル、３−フェニルプロピルを含むが、これらに限定されない。「アリールアルキル」又は「アラルキル」なる用語は、Ｒ’がアリール基であることを除いて、同様に解釈される。「（ヘタ）アリールアルキル」又は「（ヘタ）アラルキル」なる用語は、Ｒ’が場合によってアリール又はヘテロアリール基であることを除いて、同様に解釈される。
【００２７】
「ハロアルキル」又は「ハロ−低級アルキル」又は「低級ハロアルキル」なる用語は、１から６個の炭素原子（ここで、一又は複数の炭素原子は、一又は複数のハロゲン原子で置換されている）を含む直鎖又は分枝鎖炭化水素残基を指す。
【００２８】
本明細書で使用される場合の「アルキレン」又は「アルキレニル」なる用語は、別段の記載がない限り、１から１０個の炭素原子の線状の飽和二価炭化水素基（例えば、（ＣＨ２）ｎ）又は２から１０個の炭素原子の分枝状の飽和二価炭化水素基（例えば、−ＣＨＭｅ−又は−ＣＨ２ＣＨ（ｉ−Ｐｒ）ＣＨ２−）を表す。メチレンの場合を除いて、アルキレン基の空の原子価は、同じ原子に結合していない。アルキレン基の例は、メチレン、エチレン、プロピレン、２−メチル−プロピレン、１,１−ジメチル−エチレン、ブチレン、２−エチルブチレンを含むが、これらに限定されない。
【００２９】
本明細書で使用される場合の「アルコキシ」なる用語は、−Ｏ−アルキル基（ここで、アルキルは上で定義された通りである）、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ（それらの異性体を含む）を意味する。本明細書で使用される場合の「低級アルコキシ」とは、前に定義された通り「低級アルキル」基と一緒のアルコキシ基を表す。本明細書で使用される場合の「Ｃ１−１０アルコキシ」は、アルキルがＣ１−１０である、−Ｏ−アルキルを指す。
【００３０】
「ハロアルコキシ」又は「ハロ−低級アルコキシ」又は「低級ハロアルコキシ」なる用語は、一又は複数の炭素原子が、一又は複数のハロゲン原子で置換されている、低級アルコキシ基を指す。
【００３１】
本明細書で使用される場合の「ヒドロキシアルキル」なる用語は、異なる炭素原子上の一から三の水素原子が、ヒドロキシル基で置き換えられている、本明細書で定義される通りのアルキル基を表す。
【００３２】
本明細書で使用される場合の「アルキルスルホニル」及び「アリールスルホニル」なる用語は、式−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、それぞれアルキル又はアリールであり、アルキル及びアリールは本明細書で定義される通りである）の基を指す。本明細書で使用される場合の「ヘテロアルキルスルホニル」なる用語は、式−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、本明細書で定義される通りの「ヘテロアルキル」である）の基を表す。
【００３３】
本明細書で使用される場合の「低級アルキルアミド」なる用語は、式ＣＯＮＲａＲｂ（式中、Ｒａ及びＲｂは、独立して本明細書で定義される通りのＨ及び低級アルキルである）の基を指す。
【００３４】
本明細書で使用される場合の「アルキルスルホニルアミノ」及び「アリールスルホニルアミノ」なる用語は、式−ＮＲ’Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ（式中、Ｒは、それぞれアルキル又はアリールであり、Ｒ’は、水素又はＣ１−３アルキルであり、アルキル及びアリールは、本明細書で定義される通りである）の基を指す。
【００３５】
本明細書で使用される場合の「シクロアルキル」なる用語は、３〜８個の炭素原子を含む飽和炭素環、すなわち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル又はシクロオクチルを指す。本明細書で使用される場合の「Ｃ３−７シクロアルキル」とは、炭素環中３〜７個の炭素から構成されるシクロアルキルを指す。
【００３６】
本明細書で使用される場合の「カルボキシ−アルキル」なる用語は、一個の水素原子がカルボキシルで置き換えられているアルキル部分を指し、ヘテロアルキル基の結合点は、炭素原子を介することが理解される。「カルボキシ」又は「カルボキシル」なる用語は、-ＣＯ２Ｈ部分を指す。
【００３７】
本明細書で使用される場合の「ヘテロアリール」又は「ヘテロ芳香族」なる用語は、一つの環当たり四から八個の原子を含み、一又は複数のＮ、Ｏ又はＳヘテロ原子を組み込んでおり、残りの環原子が炭素である芳香環又は部分不飽和環を少なくとも一つ有する、５から１２個の環原子の単環式又は二環式基を意味し、ヘテロアリール基の結合点は、芳香環又は部分不飽和環上にあると理解される。当業者によく知られているとおり、ヘテロアリール環は、それらの全て炭素の対応物よりも少ない芳香族特性を有する。したがって、本発明の目的上、ヘテロアリール基は、ある程度の芳香族特性を有することのみを必要とする。５から６個の環原子及び１から３個のヘテロ原子を有する単環式芳香族複素環を含む、ヘテロアリール部分の例は、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、オキサジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、４,５−ジヒドロ−オキサゾリル、５,６−ジヒドロ−４Ｈ−［１,３］オキサゾリル、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、トリアゾリン、チアジアゾール及びオキサジアキソリンを含むが、これらに限定されず、これらはヒドロキシ、シアノ、アルキル、アルコキシ、チオ、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロ、低級ハロアルキル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、及びジアルキルアミノアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル及びカルバモイル、アルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アルキルカルボニルアミノ及びアリールカルボニルアミノから選択される、一又は複数、好ましくは一個又は二個の置換基で置換されていてもよい。二環式部分の例は、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾフリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾール、ベンズイソオキサゾール、ベンゾチアゾール、ナフチリジニル、５,６,７,８−テトラヒドロ−［１,６］ナフチリジニル及びベンズイソチアゾールを含むが、これらに限定されない。二環式部分は、何れか一方の環上で場合によって置換されていてもよいが、その結合点はヘテロ原子を含む環上にある。
【００３８】
本明細書で使用される場合の「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクロアルキル」又は「ヘテロ環」なる用語は、一又は複数の環ヘテロ原子（Ｎ、Ｏ又はＳ（Ｏ）０−２から選択される）を組み込んでいる、スピロ環式環系を含めて、一つの環当たり三から八個の原子の、一又は複数の環、好ましくは一から二つの環からなり、これは、別段の記載がない限り、ヒドロキシ、オキソ、シアノ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ、ハロ、低級ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、ニトロ、アルコキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルアミノスルホニル、アリールアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、及びそれらのイオン形態から選択される一又は複数、好ましくは一個又は二個の置換基で独立して置換されていてもよい、一価の飽和環式基を表す。ヘテロ環式基の例は、モルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ヘキサヒドロアゼピニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、キヌクリジニル及びイミダゾリニル並びにそれらのイオン形態を含むが、これらに限定されない。
例はまた、例えば、３,８−ジアザ−ビシクロ［３.２.１］オクタン、２,５−ジアザ−ビシクロ［２.２.２］オクタン又はオクタヒドロ−ピラジノ［２,１−ｃ］［１,４］オキサジンなどの二環式であってもよい。
【００３９】
ＳＹＫ阻害剤
本願は、式I、II又はIII
0006404215.tif 000004
［各式中：
Ｒ１は、Ｈ、ハロ、又は低級アルキルであり；
Ｒ２は、低級アルキル又は低級ヒドロキシアルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ又は低級アルキルであり；
Ａは、一又は複数のＡ’で置換されていてもよい、単環式又は二環式ヘテロアリール（好ましくは、ピリジニル、ピリミジル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、チアゾリル若しくはピラジニル）又はフェニルであり；且つ各Ａ’は、独立して、低級アルキル、ハロ、低級アルキルスルホニル、低級アルキルアミド、アミド、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ、アミノ低級アルキル、又は重水素である］の化合物；又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【００４０】
特に、本願は、式I
0006404215.tif 000005
［上式中：
Ｒ１は、Ｈ、ハロ、又は低級アルキルであり；
Ｒ２は、低級アルキル又は低級ヒドロキシアルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ又は低級アルキルであり；
Ａは、一又は複数のＡ’で置換されていてもよい、単環式又は二環式ヘテロアリール（好ましくは、ピリジニル、ピリミジル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、チアゾリル若しくはピラジニル）又はフェニルであり；且つ各Ａ’は、独立して、低級アルキル、ハロ、低級アルキルスルホニル、アミド、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ、アミノ低級アルキル、又は重水素である］の化合物；又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【００４１】
本願は、Ｒ３が低級アルキルである、式I、II又はIIIの化合物を提供する。
【００４２】
本願は、Ｒ３がＨである、式I、II又はIIIの化合物を提供する。
【００４３】
本願は、Ｒ２が低級アルキルである、式I、II又はIIIの化合物を提供する。
【００４４】
本願は、Ｒ３がＨであり、Ｒ２が低級アルキルである、式I、II又はIIIの化合物を提供する。
【００４５】
本願は、Ｒ１がＨである、式I、II又はIIIの化合物を提供する。
【００４６】
本願は、Ｒ１がＨであり、Ｒ３がＨである、式I、II又はIIIの化合物を提供する。
【００４７】
本願は、Ｒ１がＨであり、Ｒ２が低級アルキルである、式I、II又はIIIの化合物を提供する。
【００４８】
Ｒ１がＨであり、Ｒ３がＨであり、且つＲ２が低級アルキルである、式I、II又はIIIの化合物を提供する。
【００４９】
本願は、Ａが、一又は複数のＡ’で置換されていてもよい単環式ヘテロアリールである、式Iの化合物を提供する。
【００５０】
本願は、Ａが、一又は複数のＡ’で置換されていてもよい単環式ヘテロアリールであり、Ｒ１がＨであり、Ｒ３がＨであり、且つＲ２が低級アルキルである、式Iの化合物を提供する。
【００５１】
本願は、Ａ’が低級アルキルである、式Iの化合物を提供する。
【００５２】
本願は、Ａ’が重水素である、式Iの化合物を提供する。
【００５３】
本願は、Ａが、一又は複数のＡ’で置換されていてもよい単環式ヘテロアリールであり、Ｒ１がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ２が低級アルキルであり、且つＡ’が低級アルキルである、式Iの化合物を提供する。
【００５４】
本願は、Ａ’が低級アルキルスルホニルである、式Iの化合物を提供する。
【００５５】
本願は、Ａが、一又は複数のＡ’で置換されていてもよい単環式ヘテロアリールであり、Ｒ１がＨであり、Ｒ３がＨであり、Ｒ２が低級アルキルであり、且つＡ’が低級アルキルスルホニルである、式Iの化合物を提供する。
【００５６】
本願は、Ａが、一又は複数のＡ’で置換されていてもよいフェニルである、式Iの化合物を提供する。
【００５７】
本願は、Ａが、一又は複数のＡ’で置換されていてもよいフェニルであり、Ｒ１がＨであり、Ｒ３がＨであり、且つＲ２が低級アルキルである、式Iの化合物を提供する。
【００５８】
本願は、Ａ’が低級アルキル又は低級アルキルスルホニルである、式Iの化合物を提供する。
【００５９】
本願は、Ａ’が低級アルキル又は低級アルキルスルホニルであり、Ａが、一又は複数のＡ’で置換されていてもよいフェニルであり、Ｒ１がＨであり、Ｒ３がＨであり、且つＲ２が低級アルキルである、式Iの化合物を提供する。
【００６０】
本願は、Ａが、一又は複数のＡ’で置換されていてもよい二環式ヘテロアリールである、式Iの化合物を提供する。
【００６１】
本願は、Ａが、一又は複数のＡ’で置換されていてもよい二環式ヘテロアリールであり、Ｒ１がＨであり、Ｒ３がＨであり、且つＲ２が低級アルキルである、式Iの化合物を提供する。
【００６２】
好ましい実施態様において、本願は、Ｒ１がＨであり；Ｒ２が低級アルキル又は低級ヒドロキシアルキルであり；Ｒ３がＨであり；Ａが、一又は複数のＡ’で置換されていてもよい、ピリジニル、ピリミジル、ピラゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、チアゾリル、ピラジニル又はフェニルであり；且つ各Ａ’が、独立して、低級アルキル、ハロ、低級アルキルスルホニル、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ、アミノ低級アルキル、又は重水素である式Iの化合物；又はその薬学的に許容される塩を提供する。
【００６３】
本願は、
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(５-メチルピリジン-２-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-(１-ヒドロキシ-２-メチルプロパン-２-イル)-２-(５-メチルピリジン-２-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(１-メチル-１Ｈ-ピラゾール-３-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-イソプロピル-２-(５-メチルピリジン-２-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(１-メチル-１Ｈ-ピラゾール-４-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(６-メチルピリジン-３-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(２-メチルピリミジン-５-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(５-メチルピラジン-２-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(３-メチル-１Ｈ-ピラゾール-５-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(ピリジン-３-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(２-フルオロ-４-メチルフェニルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(ｐ-トリルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(３-(メチルスルホニル)フェニルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(１-エチル-１Ｈ-ピラゾール-４-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(２-(ジメチルカルバモイル)フェニルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(１,５-ジメチル-１Ｈ-ピラゾール-４-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-(１-ヒドロキシ-２-メチルプロパン-２-イル)-２-(１-メチル-１Ｈ-ピラゾール-４-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(３-メチルイソチアゾール-５-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(２,４-ジメチルフェニルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(４-(メチルスルホニル)フェニルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(メチル(ピリジン-３-イル)アミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(３-メチルイソオキサゾール-５-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(６-(メチルスルホニル)ピリジン-３-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(３-(１-ヒドロキシエチル)フェニルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(２-メトキシピリミジン-５-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-(１-ヒドロキシ-２-メチルプロパン-２-イル)-２-(ピリジン-３-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
２-(３-(１-アミノエチル)フェニルアミノ)-Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(２-(メチルスルホニル)ピリジン-４-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(５-(メチルスルホニル)ピリジン-３-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(１,３-ジメチル-１Ｈ-ピラゾール-４-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(３-メチル-１,２,４-チアジアゾール-５-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(２-メチル-６,７-ジヒドロ-２Ｈ-ピラゾロ[４,３-ｂ]ピリジン-４(５Ｈ)-イル)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-２-(１-メチル-６,７-ジヒドロ-１Ｈ-ピラゾロ[４,  ３-ｂ]ピリジン-４(５Ｈ)-イル)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミド；
３-メチル-２-(１-メチル-１Ｈ-ピラゾール-４-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボン酸 ｔｅｒｔ-ブチルアミド；
２-(３-メタンスルホニル-フェニルアミノ)-３-メチル-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボン酸 ｔｅｒｔ-ブチルアミド；
３-メチル-２-(３-メチル-イソチアゾール-５-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボン酸 ｔｅｒｔ-ブチルアミド；
２-フェニルアミノ(Ｄ５)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボン酸 ｔｅｒｔ-ブチルアミド；及び
Ｎ-ｔｅｒｔ-ブチル-３-クロロ-２-(３-メチルイソチアゾール-５-イルアミノ)-５Ｈ-ピロロ[２,３-ｂ]ピラジン-７-カルボキサミドからなる群より選択される化合物を提供する。
【００６４】
本願は、炎症状態又は自己免疫状態を治療するための方法であって、それを必要としている患者に、式Iの化合物の治療的有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【００６５】
本願は、化学療法若しくは抗増殖剤、抗炎症剤、免疫調節若しくは免疫抑制剤、神経栄養因子、心臓血管病を治療するための薬剤、糖尿病を治療するための薬剤又は免疫不全疾患を治療するための薬剤から選択される追加の治療剤を投与することを更に含む、上記の方法を提供する。
【００６６】
本願は、炎症状態を治療するための方法であって、それを必要としている患者に、式Iの化合物の治療的有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【００６７】
本願は、関節リウマチを治療するための方法であって、それを必要としている患者に、式Iの化合物の治療的有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【００６８】
本願は、喘息を治療するための方法であって、それを必要としている患者に、式Iの化合物の治療的有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【００６９】
本願は、狼瘡、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病、臓器移植による合併症、異種移植、糖尿病、がん、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫甲状腺疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、アルツハイマー病及び白血病を含む免疫疾患を治療するための方法であって、それを必要としている患者に、式Iの化合物の治療的有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【００７０】
本願は、炎症状態を治療するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的有効量の抗炎症化合物を式Iの化合物と組み合わせて共投与することを含む、方法を提供する。
【００７１】
本願は、免疫疾患を治療するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的有効量の免疫抑制化合物を式Iの化合物と組み合わせて共投与することを含む、方法を提供する。
【００７２】
本願は、少なくとも一の薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤と混合された、式Iの化合物を含む薬学的組成物を提供する。
【００７３】
本願は、化学療法若しくは抗増殖剤、抗炎症剤、免疫調節若しくは免疫抑制剤、神経栄養因子、心臓血管病を治療するための薬剤、糖尿病を治療するための薬剤又は免疫不全疾患を治療するための薬剤から選択される追加の治療剤を更に含む、上記の薬学的組成物を提供する。
【００７４】
本願は、Ｓｙｋに関連する疾患の治療に有用な医薬の製造のための、式Iの化合物の使用を提供する。
【００７５】
本願は、関節リウマチの治療に有用な医薬の製造のための、式Iの化合物の使用を提供する。
【００７６】
本発明により包含され、且つ本発明の範囲内の代表的な化合物の例は、以下の表に提供される。これらの例及びその後に続く調製法は、本発明を当業者がより明確に理解し、実施可能にするために提供されている。これらは、単にその例示及び代表であって、本発明の範囲を限定するものと考えられるべきではない。
【００７７】
一般に、本願で使用される命名法は、ＩＵＰＡＣ体系名を作成するためのＢｅｉｌｓｔｅｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅコンピューター化システムであるＡＵＴＯＮＯＭＴＭ ｖ.４.０又はＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ（登録商標）アプリケーションであるＳｔｒｕｃｔ＝Ｎａｍｅに基づいている。図示された構造と構造に与えられた名前に矛盾がある場合、図示された構造により重きを与えられるべきである。さらに、構造又は構造の一部分の立体化学が、例えば、太線又は点線で示されていない場合は、その構造又はその構造の一部分は、その立体異性体の全てを包含すると解釈される。
【００７８】
表Ｉは、一般的な式Iによる化合物の例を示す。
【００７９】
0006404215.tif 000006
0006404215.tif 000007
0006404215.tif 000008
0006404215.tif 000009
0006404215.tif 000010
0006404215.tif 000011
0006404215.tif 000012
0006404215.tif 000013
0006404215.tif 000014
0006404215.tif 000015
【００８０】
合成
一般スキーム
以下の一般スキームにおいて、Ｒ２は、低級アルキル又は低級ヒドロキシアルキルであり得；Ａは、一又は複数のＡ’で置換されていてもよい、単環式又は二環式ヘテロアリール又はフェニルであり得；各Ａ’は、独立して、低級アルキル、ハロ、低級アルキルスルホニル、アミド、低級ヒドロキシアルキル、低級アルコキシ、アミノ低級アルキル、又は重水素であり得る。
【００８１】
0006404215.tif 000016
【００８２】
0006404215.tif 000017
【００８３】
薬学的組成物及び投与
本発明の化合物は、多種多様な経口投与投薬形態及び担体で製剤化され得る。経口投与は、錠剤、コーティング錠剤、糖衣錠剤、硬質及び軟質ゼラチンカプセル、溶液、乳液、シロップ又は懸濁液の形態であり得る。本発明の化合物は、投与経路のうちでも、連続（点滴）局所非経口、筋肉内、静脈内、皮下、経皮（これは浸透増強剤を含み得る）、頬側、鼻腔、吸入及び坐剤投与を含む、他の投与経路によって投与される場合、効果的である。好ましい投与方法は、一般には、苦痛の程度及び活性成分に対する患者の反応に応じて調整され得る簡便な１日投与レジメンを使用する経口投与である。
【００８４】
本発明の化合物（一又は複数）及びそれらの薬学的に使用可能な塩は、一又は複数の従来の賦形剤、担体又は希釈剤と共に、薬学的組成物及び単位投薬の形態にしてもよい。薬学的組成物及び単位投薬の形態は、追加の活性化合物又は成分の有無にかかわらず、従来の比率で従来の成分から構成されてもよく、単位投薬形態は、意図された用いられるべき１日の投薬量の範囲と見合った任意の適切な有効量の活性成分を含んでもよい。薬学的組成物は、経口使用のための固形剤（錠剤又は充填カプセル剤等）、半固形剤、散剤、持続放出製剤若しくは液剤（溶液、懸濁液、乳液、エリキシル剤又は充填カプセル剤等）として；又は直腸若しくはは膣投与のための坐剤の形態で；又は非経口使用のための滅菌注射溶液の形態で用いてもよい。典型的な調合剤は、約５％から約９５％の活性化合物（一又は複数）（ｗ／ｗ）を含む。「調合剤」又は「投薬形態」なる用語は、活性化合物の固体と液体の両方の製剤を含むことが意図され、当業者は、活性成分が標的臓器又は組織並びに所望の容量及び薬物動態学的パラメータに応じて異なる調合剤で存在し得ることを理解する。
【００８５】
本明細書で使用される場合の「賦形剤」なる用語は、一般に安全で非毒性であり、生物学的にもその他の点でも望ましくないことがない薬学的組成物の調製に有用である化合物を指し、それは、ヒトの薬学的使用並びに獣医学的使用にも許容される賦形剤を含む。本発明の化合物は、単独でも投与され得るが、一般には、意図された投与経路及び標準的な薬務に関して選択される一又は複数の適切な薬学的賦形剤、希釈剤又は担体と混合して投与される。
【００８６】
「薬学的に許容される」とは、それが、一般に安全で非毒性であり、生物学的にもその他の点でも望ましくないことがない薬学的組成物の調製に有用であるものを意味し、それは、ヒトの薬学的使用並びに獣医学的使用にも許容されるものを含む。
【００８７】
活性成分の「薬学的に許容される塩」形態は、初めに非塩形態において欠けていた望ましい薬物動態学的特性を活性成分に与えることができ、更には身体におけるその治療活性に関して活性成分の薬力学に正の影響を与え得る。化合物の「薬学的に許容される塩」なる語句は、薬学的に許容され、且つ親化合物の所望の薬理学的活性を保有する塩を意味する。このような塩は、（１）無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などと形成されるか；又は有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１,２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ［２.２.２］−オクタ−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプタン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第三級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などと形成される、酸付加塩；あるいは（２）親化合物に存在する酸性プロトンが金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン若しくはアルミニウムイオンで置き換えられているか；又は有機塩基、例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエテノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンなどと配位する場合に形成される塩を含む。
【００８８】
固体形態調合剤には、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤（ｃａｃｈｅｔｓ）、坐剤、及び分散性顆粒剤が含まれる。固体担体は、賦形剤、香味料、可溶化剤、滑沢剤、懸濁化剤、結合剤、保存料、錠剤崩壊剤又はカプセル化剤としても作用し得る一又は複数の物質であってもよい。散剤において、担体は一般に、微粉化された活性成分との混合物である微粉化された固体である。錠剤において、活性成分は一般に、適切な比率で必要な結合能を有する担体と混合され、所望の形状及び大きさに圧縮される。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ろう、カカオ脂などを含むが、これらに限定されない。固体形態調合剤は、活性成分に加えて、着色料、香味料、安定剤、緩衝剤、人工及び天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含み得る。
【００８９】
経口投与にも適している液体製剤は、乳液、シロップ、エリキシル、水溶液、水性懸濁液を含む液体製剤を含む。これは、使用直前に液体形態調合剤に変換されることが意図される固体形態調合剤を含む。乳液は、溶液中、例えば、プロピレングリコール水溶液中で調製され得、又はレシチン、モノオレイン酸ソルビタン若しくはアカシアなどの乳化剤を含み得る。水溶液は、活性成分を水中に溶解し、適切な着色料、香味料、安定剤及び増粘剤を添加することによって調製され得る。水性懸濁液は、微粉化活性成分を、粘着性物質、例えば、天然又は合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び他のよく知られた懸濁化剤と共に水中に分散させることによって調製し得る。
【００９０】
本発明の化合物は、非経口投与（例えば、注射、例えば、ボーラス注射又は持続注入による）のために製剤化され得、添加された保存料と共にアンプル、プレフィルシリンジ、小量注入又は多剤容器中に単位用量形態で提示されてもよい。組成物は、油性又は水性媒体中懸濁液、溶液又は乳液、例えば、水性ポリエチレングリコール中溶液のような形態を取ってもよい。油性又は非水性の担体、賦形剤、溶媒又は媒体の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（例えば、オリーブ油）及び注射可能有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）を含んでおり、製剤化剤、例えば、保存料、湿潤剤、乳化剤若しくは懸濁化剤、安定剤及び／又は分散剤を含んでもよい。あるいは、活性成分は、滅菌固形物の無菌単離又は適切な媒体、例えば、滅菌のパイロジェン除去水での使用前構成のための溶液からの凍結乾燥によって得られた、粉末形態であってもよい。
【００９１】
本発明の化合物は、軟膏、クリーム若しくはローションとして又は経皮パッチとして、表皮への局所投与のために製剤化し得る。軟膏及びクリームは、例えば、適切な増粘剤及び／又はゲル化剤を添加した水性又は油性基剤と共に製剤化してもよい。ローションは、水性又は油性基剤と共に製剤化してもよく、一般に一又は複数の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤又は着色料を含む。口腔における局所投与に適した製剤は、通常ショ糖及びアカシア又はトラガカントである香味基剤中に活性剤を含むロゼンジ；ゼラチン及びグリセリン又はショ糖及びアカシア等の不活性基剤中に活性成分を含む香錠；並びに適切な液体担体中に活性成分を含む洗口剤を含む。
【００９２】
本発明の化合物は、坐薬としての投与のために製剤化し得る。低融点ろう、例えば、脂肪酸グリセリド又はココア脂の混合物を最初に溶融させ、例えば、撹拌によって、活性成分を均質に分散させる。次いで、溶融均質混合物を、手頃な大きさの型の中に注ぎ、冷却及び固化させる。
【００９３】
本発明の化合物は、膣投与のために製剤化し得る。活性成分に加えて、担体を含むペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム又はスプレーは、当技術分野において適切であると知られている。
【００９４】
本発明の化合物は、鼻腔投与のために製剤化し得る。溶液又は懸濁液は、従来の手段、例えば、ドロッパー、ピペット又はスプレーによって鼻腔に直接適用する。製剤は、単回投与又は多回投与形態で提供してもよい。ドロッパー又はピペットの後者の場合、患者が適切な所定量の溶液又は懸濁液を投与することによって、これを達成し得る。スプレーの場合、これは、例えば、計量噴霧スプレーポンプによって達成し得る。
【００９５】
本発明の化合物は、エアロゾル投与（特に気道への、及び鼻腔内投与を含む）のために製剤化し得る。化合物は、一般に、例えば、５ミクロン以下のオーダーの小粒径を有する。このような粒径は、当技術分野で知られた手段、例えば、微細化によって得てもよい。活性成分は、クロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン若しくはジクロロテトラフルオロエタン又は二酸化炭素あるいは他の適切なガス等の適切な推進剤と共に加圧パックで提供される。エアロゾルは、簡便にレシチン等の界面活性剤を含んでもよい。薬剤の用量は、計量弁で制御してもよい。あるいは、活性成分は、乾燥粉末、例えば、ラクトース、デンプン、デンプン誘導体（ヒドロキシプロピルメチルセルロース等）及びポリビニルピロリジン（ＰＶＰ）等の適切な粉末基剤中化合物の混合粉体の形態で提供されてもよい。粉末担体は、鼻腔においてゲルを形成する。粉末組成物は、粉末を吸入器によって投与し得る、例えばゼラチンのカプセル若しくはカートリッジ又はブリスターパックなどの、単位用量形態で提示されてもよい。
【００９６】
所望される場合、製剤は、活性成分の持続又は制御放出投与に適合させた腸溶コーティングを用いて調製され得る。例えば、本発明の化合物は、経皮又は皮下薬剤送達装置において製剤化され得る。これらの送達システムは、化合物の持続放出が必要である場合及び治療レジメンの患者コンプライアンスが不可欠である場合に有利である。経皮送達システム中の化合物は、しばしば皮膚接着性固体支持体に付着させられる。関心対象の化合物はまた、浸透増強剤、例えば、アゾン（１−ドデシルアザ−シクロヘプタン−２−オン）と組み合わせられ得る。持続放出送達システムは、外科手術又は注射によって皮下層中に皮下挿入される。皮下インプラントは、脂溶性膜（例えば、シリコンゴム）又は生分解性ポリマー（例えば、ポリ乳酸）中に化合物をカプセル化する。
【００９７】
適切な製剤については、医薬担体、希釈剤及び賦形剤と共に、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvaniaに記載されている。熟練した製剤科学者は、本発明の組成物を不安定にさせることもそれらの治療活性を損なうこともなく、本明細書の教示内で製剤を変更して、特定の投与経路のための多数の製剤を提供し得る。
【００９８】
水又は他の媒体中でより可溶性にさせる本化合物の変更は、例えば、十分に当技術分野の通常の技術内である、わずかな変更（塩生成、エステル化等）によって容易に行われ得る。患者における最大の有益な効果のための本化合物の薬物動態を取り扱うために、特定の化合物の投与経路及び投与方式を変更することも十分に当技術分野の通常の技術内である。
【００９９】
本明細書で使用される場合の「治療的有効量」なる用語は、個体における疾病の症状を低減させるために必要とされる量を意味する。この用量は、それぞれの特定の場合における個々の要件に対して調整される。その投与量は、治療される疾病の重症度、患者の年齢及び全身健康状態、患者に治療で用いられている他の薬剤、投与の経路及び形態、並びに関与する医療従事者の選好及び経験などの多数の要因に応じて、広い限度内で変わり得る。経口投与では、１日当たり約０.０１〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重の１日投与量が、単独療法及び／又は併用療法において適当であるはずである。好ましい１日投与量は、１日当たり約０.１〜約５００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０.１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重、最も好ましくは１.０〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重である。したがって、７０ｋｇのヒトへの投与では、投与量範囲は、１日当たり約７ｍｇ〜０.７ｇである。１日投与量は、典型的には１日当たり１〜５回の投与量で、単一投与量又は分割投与量として投与され得る。一般に、治療は、化合物の最適用量未満である、より少ない投与量で開始される。その後、投与量は、個々の患者の最適効果に達するまで、少しずつ増加させる。本明細書で記載される疾病を治療している当業者は、過度の実験を行わずに、個人的な知識、経験及び本出願の開示に依拠して、所与の疾病及び患者に対して本発明の化合物の治療的有効量を確定し得る。
【０１００】
薬学的調合剤は、好ましくは単位投薬形態である。このような形態において、調合剤は、適当量の活性成分を含む単位用量に細分される。単位投薬形態は、包装された調合剤であり得、この包装は、パケット錠剤、カプセル及びバイアル又はアンプル中散剤等の、離散量の調合剤を含む。また、単位投薬形態、カプセル、錠剤、カシェ若しくはロゼンジそれ自体であってもよいし、又は包装形態中適当数のこれらの何れかであってもよい。
【０１０１】
製剤
様々な経路による送達のための薬学的調合剤は、以下の表に示すとおりに製剤化される。表中に使用する場合の「活性成分」又は「活性化合物」とは、一又は複数の式Iの化合物を意味する。
【０１０２】
0006404215.tif 000018
【０１０３】
成分を混合し、それぞれを約１００ｍｇ含むカプセルに分注する。１カプセルは１日の総服用量と見積もられるであろう。
【０１０４】
0006404215.tif 000019
【０１０５】
成分を、メタノール等の溶媒を使用して結合し、粒状にする。次いで、製剤を乾燥させ、適切な錠剤機を用いて錠剤に形成する（２０ｍｇの活性化合物を含む）。
【０１０６】
0006404215.tif 000020
【０１０７】
成分を混合して、経口投与用の懸濁液に形成する。
【０１０８】
0006404215.tif 000021
【０１０９】
活性成分を注射用の水の一部に溶解する。次いで、十分な量の塩化ナトリウムを撹拌しながら添加し、等張液を作製する。残りの注射用の水を加えて溶液を作製し、０.２ミクロンのメンブランフィルターを通して濾過し、無菌状態下で包装する。
【０１１０】
0006404215.tif 000022
【０１１１】
成分を共に融解させ、蒸気浴上で混合し、合計量２.５ｇを含む型に流し込む。
【０１１２】
0006404215.tif 000023
【０１１３】
水を除く全ての成分を撹拌しながら、混合し、約６０℃まで加熱する。次いで、約６０℃の十分な量の水を激しく撹拌しながら添加し、成分を乳化させ、次いで水を適量、約１００ｇ添加する。
【０１１４】
鼻腔スプレー製剤
約０.０２５〜０.５パーセントの活性化合物を含む数種の水性懸濁液を、鼻腔スプレー製剤として調製する。この製剤は、例えば、微結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストロースなどの不活性成分を含んでもよい。ｐＨを調整するために塩酸を添加してもよい。鼻腔スプレー製剤は、典型的には１回の作動当たり約５０〜１００マイクロリットルの製剤を送達する、鼻腔スプレー計量ポンプによって送達してもよい。典型的な投与スケジュールは、４〜１２時間ごとに２〜４回のスプレーである。
【０１１５】
治療の適用及び方法
本明細書で記載される化合物は、キナーゼ阻害剤、特にＳＹＫ阻害剤である。これらの阻害剤は、哺乳動物における、キナーゼ阻害に応答性の一又は複数の疾病（ＳＹＫ阻害及び／又はＢ細胞増殖の阻害に応答性の疾病を含む）の治療に有用であり得る。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むことなく、本発明の化合物とＳＹＫとの相互作用は、ＳＹＫ活性の阻害、したがって、これらの化合物の薬学的有用性をもたらすと考えられている。したがって、本発明は、ＳＹＫ活性の阻害に応答性の疾病を有し、及び／又はＢ細胞増殖を阻害する、哺乳動物、例えば、ヒトを治療するための方法であって、このような疾病を有する哺乳動物に、本明細書で提供される少なくとも一種の化学的実体の有効量を投与することを含む方法を含む。有効濃度は、例えば、化合物の血中濃度をアッセイすることによって実験的に、又は生物学的利用能を計算することによって、理論的に確定されてもよい。ＳＹＫに加えて影響を受け得る他のキナーゼには、他のチロシンキナーゼ及びセリン／スレオニンキナーゼが含まれるが、これらに限定されない。
【０１１６】
キナーゼは、増殖、分化及び死（アポトーシス）等の基本的な細胞過程を制御するシグナル伝達経路で注目すべき役割を果たす。異常なキナーゼ活性は、多発がん、自己免疫疾病及び／又は炎症性疾病並びに急性炎症反応を含む、広範な疾病に関連づけられている。重要な細胞シグナル伝達経路におけるキナーゼの多面的な役割は、キナーゼ及びシグナル伝達経路を標的とする新規な薬剤を同定するために有意義な機会を与える。
【０１１７】
本願は、炎症状態又は自己免疫状態を治療するための方法であって、それを必要としている患者に、式Iの化合物の治療的有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【０１１８】
本願は、化学療法若しくは抗増殖剤、抗炎症剤、免疫調節若しくは免疫抑制剤、神経栄養因子、心臓血管病を治療するための薬剤、糖尿病を治療するための薬剤又は免疫不全疾患を治療するための薬剤から選択される追加の治療剤を投与することを更に含む、上記の方法を提供する。
【０１１９】
本願は、炎症状態を治療するための方法であって、それを必要としている患者に、式Iの化合物の治療的有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【０１２０】
本願は、関節リウマチを治療するための方法であって、それを必要としている患者に、式Iの化合物の治療的有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【０１２１】
本願は、喘息を治療するための方法であって、それを必要としている患者に、式Iの化合物の治療的有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【０１２２】
本願は、狼瘡、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、Ｉ型糖尿病、臓器移植による合併症、異種移植、糖尿病、がん、喘息、アトピー性皮膚炎、自己免疫甲状腺疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、アルツハイマー病及び白血病を含む免疫疾患を治療するための方法であって、それを必要としている患者に、式Iの化合物の治療的有効量を投与することを含む、方法を提供する。
【０１２３】
本願は、炎症状態を治療するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的有効量の抗炎症化合物を式Iの化合物と組み合わせて共投与することを含む、方法を提供する。
【０１２４】
本願は、免疫疾患を治療するための方法であって、それを必要としている患者に、治療的有効量の免疫抑制化合物を式Iの化合物と組み合わせて共投与することを含む、方法を提供する。
【実施例】
【０１２５】
略語
一般に使用される略語は：アセチル（Ａｃ）、アゾ−ビス−イソブチリルニトリル（ＡＩＢＮ）、大気（Ａｔｍ）、９−ボラビシクロ［３.３.１］ノナン（９−ＢＢＮ又はＢＢＮ）、２,２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１,１’−ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピロカーボネート又はｂｏｃ無水物（ＢＯＣ２Ｏ）、ベンジル（Ｂｎ）、ブチル（Ｂｕ）、ケミカルアブストラクト登録番号（ＣＡＳＲＮ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ又はＺ）、カルボニル ジイミダゾール（ＣＤＩ）、１,４−ジアザビシクロ［２.２.２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（ＤＡＳＴ）、ジベンジリデンアセトン（ｄｂａ）、１,５−ジアザビシクロ［４.３.０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１,８−ジアザビシクロ［５.４.０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、Ｎ,Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１,２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）、ジエチル アゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ）、ジ−イソ−プロピルアゾジカルボキシレート（ＤＩＡＤ）、ジ−イソ−ブチルアルミナムヒドリド（ＤＩＢＡＬ又はＤＩＢＡＬ−Ｈ）、ジ−イソ−プロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、Ｎ,Ｎ−ジメチル アセトアミド（ＤＭＡ）、４−Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチル スルホキシド（ＤＭＳＯ）、１,１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）エタン（ｄｐｐｅ）、１,１’−ビス−（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（ｄｐｐｆ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）、２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１,２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、エチル（Ｅｔ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、２−エトキシ−２Ｈ−キノリン−１−カルボン酸 エチル エステル（ＥＥＤＱ）、ジエチル エーテル（Ｅｔ２Ｏ）、エチル イソプロピル エーテル（ＥｔＯｉＰｒ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ’Ｎ’−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスファート 酢酸（ＨＡＴＵ）、酢酸（ＨＯＡｃ）、１−Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イソ−プロパノール（ＩＰＡ）、イソプロピルマグネシウムクロリド（ｉＰｒＭｇＣｌ）、ヘキサメチル ジシラザン（ＨＭＤＳ）、液体クロマトグラフィー質量分光法（ＬＣＭＳ）、リチウム ヘキサメチル ジシラザン（ＬｉＨＭＤＳ）、メタ−クロロペロキシ安息香酸（ｍ−ＣＰＢＡ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、融点（ｍｐ）、ＭｅＳＯ２−（メシル又はＭｓ）、メチル（Ｍｅ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、ｍ−クロロ過安息香酸（ＭＣＰＢＡ）、質量スペクトル（ｍｓ）、メチル ｔ−ブチル エーテル（ＭＴＢＥ）、メチル テトラヒドロフラン（ＭｅＴＨＦ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、ｎ−ブチルリチウム（ｎＢｕＬｉ）、Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）、Ｎ−クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、Ｎ−メチルピ��リドン（ＮＭＰ）、ピリジニウム クロロクロマート（ＰＣＣ）、ジクロロ−（（ビス−ジフェニルホスフィノ）フェロセニル）パラジウム（II）（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２）、酢酸パラジウム（II）（Ｐｄ（ＯＡｃ）２）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（Ｐｄ２（ｄｂａ）３）、ピリジニウム  ジクロメート（ＰＤＣ）、フェニル（Ｐｈ）、プロピル（Ｐｒ）、イソ−プロピル（ｉ−Ｐｒ）、１平方インチ当たりポンド（ｐｓｉ）、ピリジン（ｐｙｒ）、１,２,３,４,５−ペンタフェニル−１’−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）フェロセン（Ｑ−Ｐｈｏｓ）、室温（周囲温度、ｒｔ又はＲＴ）、ｓｅｃ−ブチルリチウム（ｓＢｕＬｉ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル又はｔ−ＢｕＭｅ２Ｓｉ（ＴＢＤＭＳ）、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム フルオリド（ＴＢＡＦ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ又はＥｔ３Ｎ）、２,２,６,６−テトラメチルピペリジン １−オキシル（ＴＥＭＰＯ）、トリフラート又はＣＦ３ＳＯ２−（Ｔｆ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、１,１’−ビス−２,２,６,６−テトラメチルヘプタン−２,６−ジオン（ＴＭＨＤ）、Ｏ−ベンゾトリアゾル−１−イル−Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’−テトラメチルウロニウム テトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、トリメチルシリル又はＭｅ３Ｓｉ（ＴＭＳ）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（ＴｓＯＨ又はｐＴｓＯＨ）、４−Ｍｅ−Ｃ６Ｈ４ＳＯ２−又はトシル（Ｔｓ）、及びＮ−ウレタン−Ｎ−カルボキシ無水物（ＵＮＣＡ）を含む。ノルマル（ｎ）、イソ（ｉ−）、第二級（ｓｅｃ−）、第三級（ｔｅｒｔ−）及びネオを含む慣用の命名法による名称は、アルキル部分とともに使用される場合、それらの通常の意味を有する。（J. Rigaudy and D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford）
【０１２６】
一般条件
別段の記載がない限り、融点（すなわち、ＭＰ）を含む全ての温度は、摂氏（℃）である。示された及び／又は所望された生成物を生成する反応が、初期に添加された二種の反応試薬の組合せから必ずしも直接生じるとは限らないことがある、すなわち、示された及び／又は所望された生成物の形成を最終的にもたらす混合物中で生成される一又は複数の中間体が存在してもよいことを理解するべきである。先の略語は、調製及び実施例で使用してもよい。名称は全て、Ａｕｔｏｎｏｍ又はＣｈｅｍＤｒａｗを使用して作成した。
【０１２７】
以下の調製及び実施例は、当業者が本発明をより明確に理解し、実施できるようにするために与えられる。これらは、本発明の範囲を限定するものと見なされるべきではなく、単にそれらを説明及び代表するものである。
【０１２８】
調製例
実施例１
手順１
２−ブロモ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒド
0006404215.tif 000024
【０１２９】
方法Ａ
工程１
（２−ブロモ−７−ヒドロキシメチル−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−５−イル）−メタノール
0006404215.tif 000025
２−ブロモ−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン（５.０ｇ、２５.２ｍｍｏｌ）が入った１,４−ジオキサン（１００ｍＬ）の部分懸濁液に、２.０Ｍ ＮａＯＨ水溶液（２５ｍＬ、５０.０ｍｍｏｌ）及び３７％ホルムアルデヒド水溶液（１９ｍＬ、２５２ｍｍｏｌ）を添加した。濃色の均質反応混合物を室温で一晩撹拌した。有機物を減圧下で蒸発させた。水性層を１.０Ｍ ＨＣｌで中和し、ＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出した。混合有機物を濃縮し、２.６ｇの橙色の固体を得た。この状態で、濃厚な褐色の沈殿物を水性層中に形成した。沈殿物を濾過により収集し、乾燥させた。褐色の固体を高温の１０％のＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ（３ｘ２００ｍＬ）で抽出した。抽出物を混ぜ合わせ、蒸発させて、３.０５ｇの橙色の固体を追加で得た。総収量は、５.６５ｇ（８７％）の（２−ブロモ−７−ヒドロキシメチル−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−５−イル）−メタノールであった。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz):δ (ppm) 8.43 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 6.71 (t, J=7.3 Hz, 1H), 5.59 (d, J=7.6 Hz, 2H), 5.10 (t, J=5.3 Hz, 1H), 4.66 (d, J=5.6 Hz, 2H)。
【０１３０】
工程２
（２−ブロモ−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−イル）−メタノール
0006404215.tif 000026
（２−ブロモ−７−ヒドロキシメチル−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−５−イル）−メタノール（５.６５ｇ、２１.９ｍｍｏｌ）が入ったＴＨＦ（１５０ｍＬ）の懸濁液に、２.０Ｍ ＮａＯＨ水溶液（３３ｍＬ、６６ｍｍｏｌ）を添加した。均質反応混合物を一晩撹拌し、有機物を減圧下で除去した。水性残留物を１.０Ｍ 水性ＨＣｌでｐＨ４にした。得られた沈殿物を濾過を通して収集して、Ｈ２Ｏで洗い流し、３.６８ｇの黄色の固体を得た。濾液をＥｔＯＡｃ（２ｘ）で抽出し、有機物を減圧下で濃縮して、０.９２ｇの黄色の固体を追加で得た。総収量は、４.６０ｇ（９２％）の（２−ブロモ−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−イル）−メタノールであった。1H NMR (DMSO-d6, 300 MHz):δ (ppm) 12.19 (br. s., 1H), 8.33 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 4.96 (t, J=5.3 Hz, 1H), 4.62 (d, J=4.9 Hz, 2H)。
【０１３１】
工程３
２−ブロモ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒド
0006404215.tif 000027
濃縮したＨ２ＳＯ４（２.３ｍＬ）をＣｒＯ３（２.６７ｇ）に慎重に添加し、次いでＨ２Ｏで１０ｍＬに希釈して、Ｊｏｎｅｓ試薬のストック溶液（２.６７Ｍ）を調製した。（２−ブロモ−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−イル）−メタノール（４.６ｇ、２０.１ｍｍｏｌ）が入ったアセトン（３００ｍＬ）の部分懸濁液に、Ｊｏｎｅｓ試薬（９ｍＬ、２４.０ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。添加中、出発物質を徐々に溶解し、濃厚な緑色の沈殿物を形成させた。反応混合物を１５分間撹拌し、ｉ−ＰｒＯＨ（２ｍＬ）でクエンチし、セライト上で濾過し、アセトンで洗い流した。濾液を濃縮して４.７６ｇの２−ブロモ−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒドを黄橙色の固体として得て、更なる精製をせずに使用した。この固体が入ったＤＭＦ（５０ｍＬ）の０℃の溶液に、ＮａＨ（鉱油中６０％、１.２ｇ、３０.１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで冷却して０℃に戻し、２−（トリメチルシリル）エトキシメチルクロリド（４.３ｍＬ、２４.１ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。反応混合物を室温に温め、１時間撹拌し、次いでＨ２Ｏでクエンチして、ＥｔＯＡｃ（３ｘ）で抽出した。混合有機物をＨ２Ｏ（３ｘ）及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濃縮した。残留物をＳｉＯ２クロマトグラフィー（２０％から３０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製し、３.８２ｇ（５３％）の２−ブロモ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒドを黄色の固体として単離した。1H NMR (CDCl3, 300 MHz):δ (ppm) 10.37 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 5.73 (s, 2H), 3.53 - 3.70 (m, 2H), 0.90 - 1.05 (m, 2H), 0.00 (s, 9H)。
【０１３２】
方法Ｂ
工程１
２−ブロモ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン
0006404215.tif 000028
乾いた丸底フラスコ中で、２−ブロモ−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン（５.０ｇ、２５.２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解した。反応混合物を０℃に冷却し、水素化ナトリウム（鉱油中６０％分散、１.２２ｇ、３０.６ｍｍｏｌ）。反応混合物を室温に温め、１５分間撹拌し、次いで冷却して０℃に戻して、ＳＥＭ−Ｃｌ（５.４ｍＬ、３０.４ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。添加完了後、氷浴を外して、反応混合物を室温で１.５時間撹拌した。反応混合物を５０ｍＬの水でクエンチし、１５０ｍＬのジエチルエーテル（２ｘ）で抽出した。混合有機層を３０ｍＬの水で二度、３０ｍＬのブラインで一度洗浄し、次いで硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を〜２０ｇのＳｉＯ２に吸収させ、２００ｇのＳｉＯ２上でＥｔＯＡｃ／ヘキサン（勾配：０−１５％のＥｔＯＡｃ）を用いてクロマトグラフした。生成物を含む全画分を混ぜ合わせて、濃縮し、２−ブロモ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン（６.６１ｇ、８０％）を、徐々に固体化する浅黄色の油として得た。1H NMR (CDCl3, 300 MHz):δ (ppm) 8.38 (s, 1H), 7.70 (d, J=3.8 Hz, 1H), 6.76 (d, J=3.8 Hz, 1H), 5.68 (s, 2H), 3.50 - 3.65 (m, 2H), 0.88 - 1.03 (m, 2H), 0.00 (s, 9H)。
【０１３３】
工程２
２−ブロモ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒド
0006404215.tif 000029
丸底フラスコ中で、２−ブロモ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン（６.５８ｇ、２０.０ｍｍｏｌ）をクロロホルム（ペンテン安定化、１２０ｍＬ）に溶解し、クロロメチレンジメチルイミニウムクロリド（１０.３ｇ、８０.２ｍｍｏｌ）を添加した。一定流の窒素ガスをこの反応混合物に通して泡立てながら、還流で８時間撹拌した。濃褐色の溶液を室温に冷却し、一晩撹拌した。反応混合物を〜１００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液（注意：発熱性）で慎重にクエンチし、次いで２００ｍＬのジエチルエーテルで二度抽出した。有機層を混ぜ合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して、濃縮した。残留物を〜２０ｇのＳｉＯ２に吸収させ、２００ｇのＳｉＯ２上でＥｔＯＡｃ／ヘキサン（勾配：０−２５％のＥｔＯＡｃ）を用いてクロマトグラフした。生成物を含む全画分を混ぜ合わせて、濃縮し、２−ブロモ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒド及び２−クロロ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒドがおよそ３：１の５.９２ｇ（８３％）の混合物を黄色の固体として得た。臭化物：1H NMR (CDCl3, 300 MHz):δ (ppm) 10.37 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 5.73 (s, 2H), 3.56 - 3.67 (m, 2H), 0.91 - 1.02 (m, 2H), 0.00 (s, 9H)；塩化物：1H NMR (CDCl3, 300 MHz):δ (ppm) 10.36 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 5.74 (s, 2H), 3.56 - 3.67 (m, 2H), 0.91 - 1.02 (m, 2H), 0.00 (s, 9H)。
【０１３４】
手順２
２−ブロモ−５−（２−トリメチルシラニルエトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸
0006404215.tif 000030
フラスコ中で、２−ブロモ−５−（２−トリメチルシラニルエトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒド（３.１１ｇ、８.７４ｍｍｏｌ）をジオキサン（１２０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（３０ｍＬ）に溶解し、混合物を０℃で冷却した。スルファミン酸（５.０９ｇ、５２.４ｍｍｏｌ）を添加し、続いて亜塩素酸ナトリウム（１.２８ｇ、１１.４ｍｍｏｌ）及びリン酸二水素カリウム（１４.３ｇ、１０４.９ｍｍｏｌ）が入ったＨ２Ｏの溶液（７５ｍＬ）を漏斗を介して１５分にわたって添加した。混合物を２時間にわたって室温に温めた。得られた黄色の固体を濾過して取り、Ｈ２Ｏ及びヘキサンで洗浄して、乾燥させた。次いで、濾液をＥｔＯＡｃで抽出し、混合有機物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させて、濃縮し、追加の生成物を得た。全部で３.７１ｇの２−ブロモ−５−（２−トリメチルシラニルエトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸を黄色の固体として得た。1H NMR (CDCl3, 400 MHz):δ (ppm) 8.52 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 5.73 (s, 2H), 3.56 - 3.65 (m, 2H), 0.90 - 1.02 (m, 2H), 0.00 (s, 9H)。
【０１３５】
手順３
２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000031
１００ｍｌの丸底フラスコ中で、２−ブロモ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸（１.００ｇ、２.６９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６ｍＬ）に溶解した。ｔｅｒｔ−ブチルアミン（１.７ｍＬ、１６.２ｍｍｏｌ）を添加し、その後、ＨＡＴＵ（１.１２ｇ、２.９５ｍｍｏｌ）を添加した。黄色の懸濁液を室温で７２時間撹拌し、次いで水でクエンチし、ジエチルエーテルとＥｔＯＡｃの混合物で抽出した。有機層を水で二度、ブラインで一度洗浄し、次いで混ぜ合わせ、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して濃縮した。残留物を石油エーテルで粉砕し、９８９ｍｇ（８６％）の２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミドをオフホワイトの粉末として得た。1H NMR (CDCl3, 300 MHz):δ (ppm) 8.40 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 5.65 (s, 2H), 3.46 - 3.58 (m, 2H), 1.54 (s, 9H), 0.84 - 0.98 (m, 2H), -0.04 (s, 9H)。
【０１３６】
手順４
２−ブロモ−Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000032
２−ブロモ−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸（２ｇ、５.３７ｍｍｏｌ）、２−アミノ−２−メチルプロパン−１−オール（５７５ｍｇ、６.４５ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２.２５ｇ、５.９１ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＩＰＥＡ（２.０８ｇ、２.８１ｍＬ、１６.１ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（１８ｍＬ）を添加した。混合物を室温で１６時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ及び１０％のクエン酸で希釈した。層を分離させ、次いで有機層を１０％のクエン酸、ＮａＨＣＯ３及びブラインで連続して洗浄した。有機相を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過してクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２０−６０％の酢酸エチル）で精製し、２−ブロモ−Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１.９５ｇ、４.４ｍｍｏｌ、８２％）を白色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δppm: 8.47 (s, 1 H), 8.34 (s, 1 H), 8.13 (s, 1 H), 5.69 (s, 2 H), 3.78 (s, 2 H), 3.57 (t, J=8.4 Hz, 3 H), 1.52 (s, 60.96 (t, J=8.4 Hz, 3 H),0.00 (s, 9 H)。
【０１３７】
実施例１
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−メチルピリジン−２−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
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工程１
５−メチルピリジン−２−アミン（３８.０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１００ｍｇ、２３４μｍｏｌ）（Ｒ）−（＋）−２,２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１,１’ビナフチル（７.２８ｍｇ、１１.７μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１３.１ｍｇ、５８.５μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５６.２ｍｇ、５８５μｍｏｌ）の混合物に、ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）を添加し、混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。生成された濃色の混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機層を混ぜ合わせ、ブラインで洗浄し、乾燥させ（硫酸マグネシウム）、濾過して、クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中３０−７０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−メチルピリジン−２−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（６２ｍｇ、１３６μｍｏｌ、５８％）をオフホワイト色の固体として得た。MS (EI/CI) m/z: 455.3 [M+H]。
【０１３８】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−メチルピリジン−２−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１６２ｍｇ、３５６μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（３ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（８１３ｍｇ、５４９μＬ、７.１３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。次いで、混合物を真空で濃縮し、得られた残留物をジクロロメタン（３ｍＬ）、メタノール（１ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.６ｍＬ）に溶解し、混合物を室温で３０分間撹拌した。形成された黄色の沈殿物を濾過により収集し、乾燥させた。母液をクロマトグラフィー（シリカ、５−２５％、ジクロロメタン中メタノール：ジクロロメタンが１：４の溶液）で精製し、固体と混ぜ合わせてＮ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−メチルピリジン−２−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（７７ｍｇ、２３７μｍｏｌ、６７％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.37 (s, 1 H), 9.88 (s, 1 H), 8.38 (s, 1 H), 8.13 (d, J=2.5 Hz, 1 H), 8.04 (d, J=3.2 Hz, 1 H), 7.88 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 7.74 (s, 1 H), 7.51 (dd, J=8.2, 2.3 Hz, 1 H), 2.25 (s, 3 H), 1.47 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 325.1 [M+H]。
【０１３９】
実施例２
Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−２−（５−メチルピリジン−２−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
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工程１
５−メチルピリジン−２−アミン（７２.１ｍｇ、６６６μｍｏｌ）、２−ブロモ−Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１９７ｍｇ、４４４μｍｏｌ）、（Ｒ）−（＋）−２,２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１,１’−ビナフチル（１３.８ｍｇ、２２.２μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（２４.９ｍｇ、１１１μｍｏｌ）とナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１０７ｍｇ、１.１１ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＭＦ（２ｍＬ）及びトルエン（１ｍＬ）を添加し、次いでマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。生成された濃色の混合物を水に注ぎ、酢酸エチル（３ｘ）で抽出した。有機層を混ぜ合わせ、ブライン（２ｘ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中６５−１００％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−２−（５−メチルピリジン−２−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（６６ｍｇ、１４０μｍｏｌ、３２％）を淡黄色の固体として得た。MS (EI/CI) m/z: 471.4。
【０１４０】
工程２
Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−２−（５−メチルピリジン−２−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（６６ｍｇ、１４０μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（１.５ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（３２０ｍｇ、２１６μＬ、２.８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、次いで残留物をジクロロメタン（２ｍＬ）、メタノール（０.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.３ｍＬ）に溶解した。室温で３０分間撹拌した後、混合物を真空で濃縮し、エーテル及び水で粉砕した。黄色の沈殿物を濾過により収集し、水、次いでエーテルで洗浄し、Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−２−（５−メチルピリジン−２−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（３１ｍｇ、９１.１μｍｏｌ、６５％）を黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δ ppm:  12.38 (s, 1 H), 9.86 (s, 1 H), 8.39 (s, 1 H), 8.12 (d, J=2.5 Hz, 1 H), 8.04 (d, J=3.3 Hz, 1 H), 7.95 (d, J=8.4 Hz, 1 H), 7.74 (s, 1 H), 7.54 (dd, J=8.6, 2.3 Hz, 1 H), 5.06 (s, 1 H), 3.58 (s, 2 H), 2.25 (s, 3 H), 1.39 (s, 6 H); MS (EI/CI) m/z: 341.1 [M+H]。
【０１４１】
実施例３
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
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工程１
２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（２００ｍｇ、４６８μｍｏｌ）、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（６８.２ｍｇ、７０２μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１４.６ｍｇ、２３.４μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（２６.３ｍｇ、１１７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１１２ｍｇ、１.１７ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＭＦ（１.０１ｍＬ）及びトルエン（５０３μＬ）を添加し、混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を冷却し、次いで水で希釈し、酢酸エチル中に抽出した。有機層を混ぜ合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２０−１００％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１４０ｍｇ、３１６μｍｏｌ、６７％）を黄色の固体として得た。MS (EI/CI) m/z: 444.3。
【０１４２】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１４０ｍｇ、３１６μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（３.５ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（７２０ｍｇ、４８６μＬ、６.３１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、得られた残留物をジクロロメタン（３ｍＬ）、メタノール（１.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.６５ｍＬ）に溶解し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を真空で濃縮し、次いでエーテル及び水で粉砕した。固体を濾過により収集し、真空で乾燥させ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（４４ｍｇ、１４０μｍｏｌ、４５％）を褐色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, メタノール-d)δppm: 8.07 (s, 1 H), 7.93 (s, 1 H), 7.81 (s, 1 H), 7.35 (d, J=2.2 Hz, 1 H), 6.32 (d, J=2.2 Hz, 1 H), 3.67 (s, 3 H), 1.35 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 314.1 [M+H]。
【０１４３】
実施例４
Ｎ−イソプロピル−２−（５−メチルピリジン−２−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000036
工程１
２−ブロモ−Ｎ−イソプロピル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３６３μｍｏｌ）、５−メチルピリジン−２−アミン（５８.９ｍｇ、５４４μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１１.３ｍｇ、１８.１μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（２０.４ｍｇ、９０.７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８７.２ｍｇ、９０７μｍｏｌ）の混合物に、ＤＭＦ（７８０μＬ）及びトルエン（３９０μＬ）を添加し、混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。混合物を冷却し、次いで水及び酢酸エチルで希釈した。混合物を酢酸エチル（３ｘ）で抽出し、次いで有機抽出物を混ぜ合わせ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中３０−７０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−イソプロピル−２−（５−メチルピリジン−２−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（９０ｍｇ、２０４μｍｏｌ、５６％）をオフホワイトの固体として得た。MS (EI/CI) m/z: 441.3 [M+H]。
【０１４４】
工程２
Ｎ−イソプロピル−２−（５−メチルピリジン−２−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（９０ｍｇ、２０４μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（２.５ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（４６６ｍｇ、３１５μＬ、４.０９ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、得られた残留物をジクロロメタン（３ｍＬ）、メタノール（１.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.４５ｍＬ）に溶解した。室温に置いて３時間後、混合物を真空で濃縮し、次いで水及びエーテルで粉砕した。固体を濾過により収集し、Ｎ−イソプロピル−２−（５−メチルピリジン−２−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（２３ｍｇ、７４.１μｍｏｌ、３６％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.40 (s, 1 H), 9.92 (s, 1 H), 8.43 (s, 1 H), 8.14 (s, 1 H), 8.09 (d, J=3.2, 1 H), 7.86 (s, 1 H), 7.85 (d, J=15.1 Hz, 1 H), 7.55 (dd, J=8.5, 2.3 Hz, 1 H), 4.16 (m, 1 H), 2.26 (s, 3 H), 1.25 (d, J=6.5, 6 H); MS (EI/CI) m/z: 311.1 [M+H]。
【０１４５】
実施例５
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000037
工程１
２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−アミン塩酸塩（７０.３ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１０.９ｍｇ、１７.５μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１９.７ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８４.３ｍｇ、８７７μｍｏｌ）の混合物に、ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）を添加した。マイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した後、反応混合物を冷却し、水で希釈し、酢酸エチル（３ｘ）で抽出した。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させ、クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中３０−７０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８９ｍｇ、２０１μｍｏｌ、５７％）を黄色の固体として得た。MS (EI/CI) m/z: 314.1 [M+H]。
【０１４６】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８９ｍｇ、２０１μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（３ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（４５８ｍｇ、３０９μＬ、４.０１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を真空で濃縮し、次いでジクロロメタン（３ｍＬ）、メタノール（１.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.４５ｍＬ）に溶解し、混合物を室温で１時間撹拌した。真空で濃縮後、混合物を水で粉砕し、濾過して固体を収集した。固体をエーテルで洗浄して乾燥させ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（５８ｍｇ、１８５μｍｏｌ、９２％）を褐色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.18 (s, 1 H), 9.11 (s, 1 H), 7.90 (d, J=3.2, 1 H), 7.86 (s, 1 H), 7.85 (s, 1 H), 7.72 (s, 1 H), 7.55 (s, 1 H), 3.80 (s, 3 H), 1.43 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 314.1 [M+H]。
【０１４７】
実施例６
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（６−メチルピリジン−３−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000038
工程１
ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、６−メチルピリジン−３−アミン（５６.９ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１０.９ｍｇ、１７.５μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１９.７ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８４.３ｍｇ、８７７μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を冷却し、次いで水で希釈し、酢酸エチル中に抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中３０−７０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（６−メチルピリジン−３−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（５７ｍｇ、１２５μｍｏｌ、３６％）を褐色の固体として得た。MS (EI/CI) m/z: 455.2 [M+H]。
【０１４８】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（６−メチルピリジン−３−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（５５ｍｇ、１２１μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（１.９ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（２７６ｍｇ、１８６μＬ、２.４２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、次いで得られた残留物をジクロロメタン（２ｍＬ）、メタノール（１ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.２５ｍＬ）に溶解し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を濃縮して水で粉砕し、次いで濾過し、固体を得、これをエーテルで洗浄して乾燥させ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（６−メチルピリジン−３−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（３３ｍｇ、１０２μｍｏｌ、８４％）を褐色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.23 (s, 1 H),  9.41 (s, 1 H), 8.60 (d, J=2.3, 1 H), 7.91 (m, 3 H), 7.59 (s, 1 H), 7.06 (d, J=8.5, 1 H), 2.31 (s, 3 H), 1.32 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 325.1 [M+H]。
【０１４９】
実施例７
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−メチルピリミジン−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000039
工程１
ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、２−メチルピリミジン−５−アミン（５７.４ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１０.９ｍｇ、１７.５μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１９.７ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８４.３ｍｇ、８７７μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、次いで酢酸エチル中に抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中４０−８０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−メチルピリミジン−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（７８ｍｇ、１７１μｍｏｌ、４９％）を褐色の固体として得た。MS (EI/CI) m/z: 456.2 [M+H]。
【０１５０】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−メチルピリミジン−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（７８ｍｇ、１７１μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（２.５ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（３９０ｍｇ、２６４μＬ、３.４２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、得られた残留物をジクロロメタン（２.５ｍＬ）、メタノール（１.２ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.３５ｍＬ）で希釈し、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、次いで水で粉砕した。固体を濾過により収集して水で洗浄し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−メチルピリミジン−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（４３ｍｇ、１３２μｍｏｌ、７７％）を褐色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.31 (s, 1 H), 9.57 (s, 1 H), 8.90 (s, 2 H), 7.96 (d, J=3.3, 1 H), 7.92 (s, 1 H), 7.53 (s, 1 H), 2.46 (s, 3 H), 1.32 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 326.1 [M+H]。
【０１５１】
実施例８
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−メチルピラジン−２−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000040
工程１
ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）に２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、５−メチルピラジン−２−アミン（５７.４ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１０.９ｍｇ、１７.５μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１９.７ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８４.３ｍｇ、８７７μｍｏｌ）を添加した混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を、水で希釈し、次いで酢酸エチル中に抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中３０−７０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−メチルピラジン−２−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（７２ｍｇ、１５８μｍｏｌ、４５％）をオフホワイトの固体として得た。MS (EI/CI) m/z: 456.2 [M+H]。
【０１５２】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−メチルピラジン−２−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（７２ｍｇ、１５８μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（２.５ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（３６０ｍｇ、２４３μＬ、３.１６ｍｍｏｌ）を添加して、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮して、得られた残留物をジクロロメタン（２.５ｍＬ）、メタノール（１.２ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.３５ｍＬ）で希釈し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を濃縮して、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水及びエーテルで洗浄し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−メチルピラジン−２−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（２６ｍｇ、７９.９μｍｏｌ、５１％）を淡緑色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.45 (s, 1 H), 10.12 (s, 1 H), 9.17 (d, J=1.5, 1 H), 8.40 (s, 1 H), 8.21 (s, 1 H), 8.10 (d, J=3.2, 1 H), 7.73 (s, 1 H), 2.42 (s, 3 H), 1.46 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 326.1 [M+H]。
【０１５３】
実施例９
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000041
工程１
ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（５１.１ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１０.９ｍｇ、１７.５μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１９.７ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８４.３ｍｇ、８７７μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、次いで酢酸エチル中に抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中５０−１００％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（２７ｍｇ、６０.９μｍｏｌ、１７.３％）を褐色の固体として得た。MS (EI/CI) m/z: 444.3 [M+H]。
【０１５４】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（２５ｍｇ、５６.４μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（１ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１２９ｍｇ、８６.８μＬ、１.１３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮して、得られた残留物をジクロロメタン（１ｍＬ）、メタノール（０.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.１５ｍＬ）で希釈して、室温で１時間撹拌した。クロマトグラフィー（シリカ、２０−５０％［１０％メタノール／ジクロロメタン／０.５％水酸化アンモニウム］／ジクロロメタン）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１０ｍｇ、３１.９μｍｏｌ、５７％）を淡褐色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.19 (s, 1 H), 10.12 (s, 1 H), 9.53 (s, 1 H), 8.07 (s, 1 H), 7.93 (d, J=3.0, 1 H), 7.81 (s, 1 H), 6.33 (s, 1 H), 2.19 (s, 3 H), 1.45 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 314.1 [M+H]。
【０１５５】
実施例１０
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ピリジン−３−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000042
工程１
ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、ピリジン−３−アミン（４９.５ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１０.９ｍｇ、１７.５μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１９.７ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８４.３ｍｇ、８７７μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、次いで酢酸エチル中に抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中３０−７０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ピリジン−３−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（４４ｍｇ、９９.９μｍｏｌ、２８.５％）を黄色の固体として得た。MS (EI/CI) m/z: 311.1 [M+H]。
【０１５６】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ピリジン−３−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（４４ｍｇ、９９.９μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（１.６ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（２２８ｍｇ、１５４μＬ、２.００ｍｍｏｌ）を添加して、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮して、得られた残留物をジクロロメタン（１.６ｍＬ）、メタノール（０.８ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.２ｍＬ）で希釈して、室温で１時間撹拌した。混合物を濃縮して、水で粉砕した。固体を濾過により収集して水及びエーテルで洗浄し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ピリジン−３−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（２４ｍｇ、７７.３μｍｏｌ、７７％）を褐色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.26 (s, 1 H), 9.54  (s, 1 H), 8.77 (d, J=2.5, 1 H), 8.04 (d, J=4.6, 1 H), 7.98 (d, J=8.5, 1 H), 7.92 (d, J=3.3, 1 H), 7.91 (s, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 7.19 (m, 1 H), 1.31 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 311.1 [M+H]。
【０１５７】
実施例１１
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−フルオロ−４−メチルフェニルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000043
工程１
ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、２−フルオロ−４−メチルアニリン（６５.９ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１０.９ｍｇ、１７.５μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１９.７ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８４.３ｍｇ、８７７μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、次いで酢酸エチル中に抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（シリカ、２０−５０％の酢酸エチル／ヘキサン）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−フルオロ−４−メチルフェニルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８７ｍｇ、１８４μｍｏｌ、５３％）をオフホワイトの固体として得た。MS (EI/CI) m/z: 470.1 [M-H]。
【０１５８】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−フルオロ−４−メチルフェニルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８７ｍｇ、１８４μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（３ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（４２１ｍｇ、２８４μＬ、３.６９ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮して、得られた残留物をジクロロメタン（３ｍＬ）、メタノール（１.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.４ｍＬ）で希釈して、室温で１時間撹拌した。混合物を濃縮して、水で粉砕した。固体を濾過により収集して、水及びエーテルで洗浄し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−フルオロ−４−メチルフェニルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（５８ｍｇ、１７０μｍｏｌ、９２％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.27 (s, 1 H),  8.97  (s, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 7.96 (d, J=2.3, 1 H), 7.81 (t, J=8.6, 1 H), 7.70 (s, 1 H), 7.10 (d, J=12.4, 1 H), 6.95 (d, J=8.0, 1 H), 2.29 (s, 3 H), 1.32 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z:  342.1 [M+H]。
【０１５９】
実施例１２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ｐ−トリルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000044
工程１
ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、ｐ−トルイジン（５６.４ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１０.９ｍｇ、１７.５μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１９.７ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８４.３ｍｇ、８７７μｍｏｌ）の混合物を、マイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、次いで酢酸エチル中に抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２０−４５％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ｐ−トリルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８０ｍｇ、１１６μｍｏｌ、３３％）を褐色のゴムとして得た。MS (EI/CI) m/z: 454.4 [M+H]。
【０１６０】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ｐ−トリルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８０ｍｇ、１７６μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（３ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（４０２ｍｇ、２７２μＬ、３.５３ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濾過して、得られた残留物をジクロロメタン（３ｍＬ）、メタノール（１.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.４ｍＬ）で希釈して、室温で１時間撹拌した。混合物を濃縮して、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水及びエーテルで洗浄した。クロマトグラフィー（シリカ、ジクロロメタン中２０−４０％の、メタノール：ジクロロメタン：水酸化アンモニウムが１０：８９.５：０.５の溶液）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（ｐ−トリルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１７ｍｇ、５２.６μｍｏｌ、３０％）を淡黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.26 (s, 1 H), 9.34 (s, 1 H), 7.97 (s, 1 H), 7.96 (d, J=3.3, 1 H), 7.76 (s, 1H), 7.57 (t, J=8.5, 2 H), 7.09 (d, J=8.1, 2 H), 2.26 (s, 3 H), 1.44 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 324.1 [M+H]。
【０１６１】
実施例１３
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−（メチルスルホニル）フェニルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000045
工程１
ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、３−（メチルスルホニル）アニリン塩酸塩（１０９ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１０.９ｍｇ、１７.５μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１９.７ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１０１ｍｇ、１.０５ｍｍｏｌ、当量：３）の混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、次いで酢酸エチル中に抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２０−５０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−（メチルスルホニル）フェニルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（６１ｍｇ、１１８μｍｏｌ、３４％）を褐色のゴムとして得た。(EI/CI) m/z: 518.3 [M+H]。
【０１６２】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−（メチルスルホニル）フェニルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（６１ｍｇ、１１８μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（１.８ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（２６９ｍｇ、１８２μＬ、２.３６ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮して、得られた残留物をジクロロメタン（１.８ｍＬ）、メタノール（０.９ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.２５ｍＬ）で希釈して、室温で１時間撹拌した。混合物を濃縮して、水で粉砕した。固体を濾過により収集し、水及びエーテルで洗浄した。クロマトグラフィー（シリカ、勾配未確認 ジクロロメタン／メタノール／０.５％水酸化アンモニウム）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−（メチルスルホニル）フェニルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（２６ｍｇ、６７.１μｍｏｌ、５７％）を黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.42 (s, 1 H), 9.87 (s, 1 H), 8.33 (d, J=8.2, 1 H), 8.05 (d, J=3.4, 1 H), 8.03 (s, 1H), 7.79 (t, J=2.0, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 7.54 (t, J=8.0, 1 H), 7.47 (d, J=7.7, 1 H), 3.21 (s, 3 H), 1.42 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 388.2 [M+H]。
【０１６３】
実施例１４
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000046
工程１
ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−アミン塩酸塩（５１.８ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１０.９ｍｇ、１７.５μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１９.７ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１０１ｍｇ、１.０５ｍｍｏｌ、当量：３）の混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、次いで酢酸エチル中に抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中４０−８０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８２ｍｇ、１７９μｍｏｌ、５１％）を黄色のゴムとして得た。(EI/CI) m/z: 458.4 [M+H]。
【０１６４】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８２ｍｇ、１７９μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（２.７ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（４０９ｍｇ、２７６μＬ、３.５８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮して、得られた残留物をジクロロメタン（３ｍＬ）、メタノール（１.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.４ｍＬ）で希釈して、室温で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、１５−６５％ジクロロメタン／［１０％ジクロロメタン／メタノール／０.５％水酸化アンモニウム］）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−エチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（３３ｍｇ、１０１μｍｏｌ、５６％）を黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.16 (s, 1 H), 9.06 (s, 1 H), 7.90 (d, J=3.3, 1 H), 7.85 (s, 1 H), 7.84 (s, 1H), 7.73 (s, 1 H), 7.59 (s, 1 H), 4.08 (q, J=7.3, 2 H), 1.42 (s, 9 H), 1.36 (t, J=7.3, 3 H);  MS (EI/CI) m/z: 328.1 [M+H]。
【０１６５】
実施例１５
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−（ジメチルカルバモイル）フェニルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000047
工程１
２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（５.５ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（８００ｍｇ、５４１μＬ、７.０２ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮して、得られた残留物をジクロロメタン（５ｍＬ）、メタノール（２.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.７ｍＬ）で希釈して、室温で１時間撹拌した。混合物を濃縮して、水で粉砕した。固体を濾過により収集して、水及びエーテルで洗浄し、２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８０ｍｇ、２６９μｍｏｌ、７７％）をオフホワイトの固体として得た。
【０１６６】
工程２
ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８０ｍｇ、２６９μｍｏｌ）、２−アミノ−Ｎ,Ｎ−ジメチルベンズアミド塩酸塩（８１.０ｍｇ、４０４μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（８.３８ｍｇ、１３.５μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１５.１ｍｇ、６７.３μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（７７.６ｍｇ、８０８μｍｏｌ、当量：３）の混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、次いで酢酸エチル中に抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（１５−４５％ジクロロメタン／［１０％ジクロロメタン／メタノール／０.５％水酸化アンモニウム］）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２（２（ジメチルカルバモイル）フェニルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１６ｍｇ、４２.１μｍｏｌ、１６％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.25 (s, 1 H), 8.77 (s, 1 H), 8.06 (s, 1 H), 7.96 (d, J=3.0, 1 H), 7.91 (d, J=7.9, 1 H), 7.78 (s, 1H), 7.38 (t, J=7.7, 1 H), 7.30 (d, J=7.5, 1 H), 7.11 (t, J=7.5, 1 H), 2.88 (s, 3 H), 2.80 (s, 3 H), 1.27 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 381.2 [M+H]。
【０１６７】
実施例１６
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１,５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000048
工程１
ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、１,５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−アミン二塩酸塩（９６.９ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１０.９ｍｇ、１７.５μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１９.７ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１１８ｍｇ、１.２３ｍｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、次いで酢酸エチル中に抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（ヘキサン中５０−１００％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１,５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（４５ｍｇ、９８.３μｍｏｌ、２８％）を黄色のゴムとして得た。(EI/CI) m/z: 458.3 [M+H]。
【０１６８】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１,５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（４５ｍｇ、９８.３μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（１.５ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（２２４ｍｇ、１５２μＬ、１.９７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮して、得られた残留物をジクロロメタン（１.５ｍＬ）、メタノール（０.７５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.２ｍＬ）で希釈して、室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、ジクロロメタン中１０−４５％の、メタノール：ジクロロメタンが１：４の溶液）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１,５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１８ｍｇ、５５.０μｍｏｌ、５６％）を黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.10 (s, 1 H), 8.39 (s, 1 H), 7.87 (s, 1 H), 7.86 (s, 1 H), 7.85 (d, J=3.3, 1 H), 3.71 (s, 3 H), 2.16 (s, 3 H), 1.30 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 328.2 [M+H]。
【０１６９】
実施例１７
Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000049
工程１
ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３３８μｍｏｌ）、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−アミン塩酸塩（６７.８ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１０.５ｍｇ、１６.９μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１９.０ｍｇ、８４.６μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８１.３ｍｇ、８４６μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、次いで酢酸エチル中に抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（シリカ、ジクロロメタン中２０−６５％の、メタノール：ジクロロメタン：水酸化アンモニウムが１０：８９.５：０.５の溶液）で精製し、Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（２８ｍｇ、６０.９μｍｏｌ、１８％）淡黄色の固体として得た。(EI/CI) m/z: 460.3 [M+H]。
【０１７０】
工程２
Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（２６ｍｇ、５６.６μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（１ｍＬ）に、トリフルオロ酢酸（１２９ｍｇ、８７.２μＬ、１.１３ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮して、得られた残留物をジクロロメタン（１ｍＬ）、メタノール（０.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.１５ｍＬ）で希釈して、室温で２時間撹拌した。混合物を濃縮して、水で粉砕した。固体を濾過により収集して水及びエーテルで洗浄し、Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１２ｍｇ、３６.４μｍｏｌ、６４％）を褐色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.19 (s, 1 H), 9.16 (s, 1 H), 8.01 (s, 1 H), 7.91 (d, J=3.0, 1 H), 7.86 (s, 1H), 7.70 (s, 1 H), 7.49 (s, 1 H), 5.15 (t, J=5.7, 1 H), 3.82 (s, 3 H), 3.57 (d, J=5.9, 2 H), 1.37 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 330.2 [M+H]。
【０１７１】
実施例１８
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチルイソチアゾール−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000050
工程１
ＤＭＦ（１.２ｍＬ）及びトルエン（６００μＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、３−メチルイソチアゾール−５−アミン塩酸塩（７９.３ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１０.９ｍｇ、１７.５μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（１９.７ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１０１ｍｇ、１.０５ｍｍｏｌ、当量：３）の混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、次いで酢酸エチル中に抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中５０−１００％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチルイソチアゾール−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（３２ｍｇ、６９.５μｍｏｌ、２０％）を黄色の固体として得た。(EI/CI)m/z: 461.3 [M+H]。
【０１７２】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチルイソチアゾール−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（３２ｍｇ、６９.５μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（１.２ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１５８ｍｇ、１０７μＬ、１.３９ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮して、得られた残留物をジクロロメタン（１.２ｍＬ）、メタノール（０.６ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.１５ｍＬ）で希釈して、室温で２時間撹拌した。混合物を濃縮して、水で粉砕した。固体を濾過により収集して水及びエーテルで洗浄し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチルイソチアゾール−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１８ｍｇ、５４.５μｍｏｌ、７８.４％）を褐色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.55 (s, 1 H), 11.39 (s, 1 H), 8.15 (d, J=3.2, 1 H), 8.11 (s, 1 H), 7.37 (s, 1H), 6.70 (s, 1 H), 2.33 (s, 3 H), 1.55 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 331.1 [M+H]。
【０１７３】
実施例１９
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２,４−ジメチルフェニルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000051
工程１
ＤＭＦ（１ｍＬ）及びトルエン（５００μＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（２００ｍｇ、４６８μｍｏｌ）、２,４−ジメチルアニリン（８５.１ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１４.６ｍｇ、２３.４μｍｏｌ）、酢酸パラジウム（II）（２６.３ｍｇ、１１７μｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１１２ｍｇ、１.１７ｍｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１４０℃で２０分間加熱した。反応混合物を水で希釈し、次いで酢酸エチル中に抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物をブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウム上で乾燥させた。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２０−６０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２,４−ジメチルフェニルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８２ｍｇ、１７５μｍｏｌ、３７.５％）を褐色のゴムとして得た。(EI/CI) m/z: 468.4 [M+H]。
【０１７４】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２,４−ジメチルフェニルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８２ｍｇ、１７５μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（２.７ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（４００ｍｇ、２７０μＬ、３.５１ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮して、得られた残留物をジクロロメタン（３ｍＬ）、メタノール（１.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.４ｍＬ）で希釈して、室温で１時間撹拌した。混合物を濃縮して、水で粉砕した。固体を濾過により収集して水及びエーテルで洗浄し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２,４−ジメチルフェニルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（７ｍｇ、２０.７μｍｏｌ、１２％）を黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl-3-d)δppm: 9.19 (s, 1 H), 8.12 (d, J=3.0, 1 H), 7.95 (s, 1 H), 7.86 (s, 1H), 7.50 (d, J=7.8, 1 H), 7.15 (s, 1 H), 7.08 (d, J=8.2, 1 H), 6.33 (s, 1 H), 2.38 (s, 3 H), 2.34 (s, 1 H), 1.49 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 338.2 [M+H]。
【０１７５】
実施例２０
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（４−（メチルスルホニル）フェニルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000052
工程１
ジオキサン（２ｍＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１２５ｍｇ、２９２μｍｏｌ）、４−（メチルスルホニル）アニリン（７５.１ｍｇ、４３９μｍｏｌ）、キサントホス（５０.８ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２６.８ｍｇ、２９.２μｍｏｌ）及び炭酸セシウム（１９１ｍｇ、５８５μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１５０℃で２０分間加熱した。混合物を冷却し、セライトを通して濾過し、濾液を真空で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２０−７５％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（４−（メチルスルホニル）フェニルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（９０ｍｇ、１７４μｍｏｌ、５９％）を淡黄色の固体として得た。(EI/CI) m/z: 518.3 [M+H]。
【０１７６】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（４−（メチルスルホニル）フェニルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（９０ｍｇ、１７４μｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（３９６ｍｇ、２６８μＬ、３.４８ｍｍｏｌ）で処理した。室温で１６時間撹拌した後、混合物を真空で濃縮して、次いでジクロロメタン（３ｍＬ）、メタノール（１.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.３５ｍＬ）に再溶解し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を真空で濃縮し、次いで水で希釈し、粉砕して濾過した。得られた固体をエーテルで洗浄し、次いで乾燥させ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（４−（メチルスルホニル）フェニルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（６５ｍｇ、１６８μｍｏｌ、９７％）を黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.55 (s, 1 H), 10.12 (s, 1 H), 8.19 (d, J=2.8, 1 H), 8.16 (s, 1H), 7.95 (d, J=8.8, 2 H), 7.88 (d, J=8.8, 2 H), 7.75 (s, 1 H), 3.22 (s, 3 H), 1.54 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 388.2 [M+H]。
【０１７７】
実施例２１
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（メチル（ピリジン−３−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000053
工程１
ジオキサン（２ｍＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１２５ｍｇ、２９２μｍｏｌ）、Ｎ−メチルピリジン−３−アミン（４７.４ｍｇ、４３９μｍｏｌ）、キサントホス（５０.８ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２６.８ｍｇ、２９.２μｍｏｌ）及び炭酸セシウム（１９１ｍｇ、５８５μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１５０℃で２０分間加熱した。混合物を冷却して、次いでセライトのパッドを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、酢酸エチルが入ったヘキサン）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（メチル（ピリジン−３−イル）アミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（３８ｍｇ、８３.６μｍｏｌ、２９％）を黄色のゴムとして得た。(EI/CI) m/z: 455.4 [M+H]。
【０１７８】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（メチル（ピリジン−３−イル）アミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（３８ｍｇ、８３.６μｍｏｌ）をジクロロメタン（１.５ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（１９１ｍｇ、１２９μＬ、１.６７ｍｍｏｌ）で処理した。１６時間後、混合物を濃縮して、残留物をジクロロメタン（１.５ｍＬ）、メタノール（０.７５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.２ｍＬ）に再溶解し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、次いで水で粉砕して濾過し、固体を得た。これをエーテルで洗浄し、次いで乾燥させ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（メチル（ピリジン−３−イル）アミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１６ｍｇ、４９.３μｍｏｌ、５９％）を淡黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.33 (s, 1 H), 8.64 (d, J=2.5, 1 H), 8.40 (dd, J=4.7, 1.2, 1 H), 8.05 (d, J=3.1, 1 H), 7.96 (s, 1H), 7.92 (s, 1 H), 7.82 (m, 1 H), 7.46 (m, 1 H), 3.50 (s, 3 H), 1.32 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 325.1 [M+H]。
【０１７９】
実施例２２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチルイソオキサゾール−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000054
工程１
ジオキサン（２ｍＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１２５ｍｇ、２９２μｍｏｌ）、３−メチルイソオキサゾール−５−アミン（４３.０ｍｇ、４３９μｍｏｌ）、キサントホス（５０.８ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２６.８ｍｇ、２９.２μｍｏｌ）及び炭酸セシウム（１９１ｍｇ、５８５μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１５０℃で２０分間加熱した。混合物を冷却し、次いでセライトのパッドを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２０−７５％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチルイソオキサゾール−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（３３ｍｇ、７４.２μｍｏｌ、２５.４％）を黄色の固体として得た。(EI/CI) m/z: 455.3 [M+H]。
【０１８０】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチルイソオキサゾール−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（３３ｍｇ、７４.２μｍｏｌ）をジクロロメタン（１.３ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（１６９ｍｇ、１１４μＬ、１.４８ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で１６時間撹拌し、次いで濃縮して、ジクロロメタン（１.３ｍＬ）、メタノール（０.６５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.２ｍＬ）に再溶解し、室温で１時間撹拌した。混合物を濃縮して、水で希釈し、粉砕して濾過した。得られた固体をエーテルで洗浄して乾燥させ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチルイソオキサゾール−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１６ｍｇ、４５.８μｍｏｌ、６２％）を黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm:12.53 (s, 1 H), 11.06 (s, 1 H), 8.14 (d, J=3.0, 1 H), 8.09 (s, 1 H), 7.57 (s, 1H), 6.18 (s, 1 H), 2.17 (s, 3 H), 1.48 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 315.1 [M+H]。
【０１８１】
実施例２３
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（６−（メチルスルホニル）ピリジン−３−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000055
工程１
ジオキサン（２.４ｍＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、６−（メチルスルホニル）ピリジン−３−アミン（９０.７ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、キサントホス（６０.９ｍｇ、１０５μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（３２.１ｍｇ、３５.１μｍｏｌ）及び炭酸セシウム（２２９ｍｇ、７０２μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１５０℃で２０分間加熱した。混合物を冷却し、次いでセライトのパッドを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２０−９５％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（６−（メチルスルホニル）ピリジン−３−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（９７ｍｇ、１８７μｍｏｌ、５３％）を黄色の固体として得た。(EI/CI) m/z: 458.3 [M+H]。
【０１８２】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（６−（メチルスルホニル）ピリジン−３−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（９７ｍｇ、１８７μｍｏｌ）をジクロロメタン（２.８８ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（４２６ｍｇ、２８８μＬ、３.７４ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、次いでジクロロメタン（３ｍＬ）、メタノール（１.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.５ｍＬ）に再溶解し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を真空で濃縮し、次いで水で粉砕して濾過した。得られた固体をエーテルで洗浄し、次いで乾燥させ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（６−（メチルスルホニル）ピリジン−３−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（７１ｍｇ、１８３μｍｏｌ、９８％）を黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.51 (s, 1 H), 10.26 (s, 1 H), 8.99 (d, J=2.5, 1 H), 8.37 (dd, J=8.4, 2.7, 1 H), 8.14 (s, 1H), 8.11 (s, 1 H), 7.92 (d, J=8.7, 1 H), 7.62 (s, 1 H), 3.21 (s, 3 H), 1.45 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 389.2 [M+H]。
【０１８３】
実施例２４
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−（１−ヒドロキシエチル）フェニルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000056
工程１
ジオキサン（２ｍＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、１−（３−アミノフェニル）エタノール（７２.２ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、キサントホス（６０.９ｍｇ、１０５μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（３２.１ｍｇ、３５.１μｍｏｌ）及び炭酸セシウム（２２９ｍｇ、７０２μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１５０℃で２０分間加熱した。混合物を冷却し、次いでセライトのパッドを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中４０−７０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−（１−ヒドロキシエチル）フェニルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１４３ｍｇ、１４８μｍｏｌ、４２％）を黄色の固体として得た。(EI/CI) m/z: 519.3 [M+H]。
【０１８４】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−（１−ヒドロキシエチル）フェニルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１４３ｍｇ、２９６μｍｏｌ）をジクロロメタン（４.５ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（６７４ｍｇ、４５６μＬ、５.９１ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、次いでジクロロメタン（４ｍＬ）、メタノール（３ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.７ｍＬ）に再溶解し、混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、メタノールが入ったジクロロメタン）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−（１−ヒドロキシエチル）フェニルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（５５ｍｇ、１５６μｍｏｌ、５３％）を黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.29 (s, 1 H), 9.44 (s, 1 H), 8.00 (s, 1 H), 7.99 (s, 1 H), 7.98 (d, J=2.8, 1 H), 7.78 (s, 1 H), 7.19 (m, 2 H), 6.91 (d, J=7.5, 1 H), 5.17 (d, J=4.0, 1 H), 4.70 (m, 1 H), 3.38 (q, J=7.2, 1 H), 1.43 (s, 9 H), 1.34 (d. J=6.3, 3 H), 1.09 (t, J=7.2, 1 H); MS (EI/CI) m/z: 354.2 [M+H]。
【０１８５】
実施例２５
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−メトキシピリミジン−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000057
工程１
ジオキサン（２ｍＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、２−メトキシピリミジン−５−アミン（６５.９ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、キサントホス（６０.９ｍｇ、１０５μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（３２.１ｍｇ、３５.１μｍｏｌ）及び炭酸セシウム（２２９ｍｇ、７０２μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１５０℃で２０分間加熱した。混合物を冷却し、次いでセライトのパッドを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中４０−８０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−メトキシピリミジン−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（９９ｍｇ、２１０μｍｏｌ、６０％）を黄色の固体として得た。(EI/CI) m/z: 484.3 [M+H]。
【０１８６】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−メトキシピリミジン−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１００ｍｇ、２１２μｍｏｌ）をジクロロメタンに溶解し、トリフルオロ酢酸（４８４ｍｇ、３２７μＬ、４.２４ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、次いでジクロロメタン（３ｍＬ）、メタノール（１.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.４５ｍＬ）に再溶解し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を真空で濃縮し、次いで水で粉砕して濾過した。得られた固体をエーテルで洗浄し、次いで乾燥させ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−メトキシピリミジン−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（６４ｍｇ、１８７μｍｏｌ、８８％）を黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.35 (s, 1 H), 9.48 (s, 1 H), 8.86 (s, 2 H), 8.01 (s, 1 H), 7.97 (s, 1H), 7.63 (s, 1 H), 3.88 (s, 3 H), 1.38 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 342.1 [M+H]。
【０１８７】
実施例２６
Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−２−（ピリジン−３−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000058
工程１
ジオキサン（２ｍＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３３８μｍｏｌ）、ピリジン−３−アミン（４７.８ｍｇ、５０７μｍｏｌ）、キサントホス（５８.７ｍｇ、１０１μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（３１.０ｍｇ、３３.８μｍｏｌ）及び炭酸セシウム（２２０ｍｇ、６７７μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１５０℃で２０分間加熱した。混合物を冷却し、次いでセライトのパッドを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中勾配４０−１００％の酢酸エチル、次いでジクロロメタン／メタノール）で精製し、Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−２−（ピリジン−３−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（３２ｍｇ、５９.６μｍｏｌ、１８％）を淡黄色の固体として得た。(EI/CI) m/z: 472.3 [M+H]。
【０１８８】
工程２
Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−２−（ピリジン−３−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（３２ｍｇ、７０.１μｍｏｌ）をジクロロメタン（１.２ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（１６０ｍｇ、１０８μＬ、１.４ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、次いでジクロロメタン（１ｍＬ）、メタノール（０.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.２ｍＬ）に再溶解し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を真空で濃縮し、次いで水で粉砕して濾過した。得られた固体をエーテルで洗浄し、次いで乾燥させ、Ｎ−（１−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−２−イル）−２−（ピリジン−３−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（２１ｍｇ、６４.３μｍｏｌ、９２％）を淡黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.39 (s, 1 H), 9.66 (s, 1 H), 8.85 (d, J=2.5, 1 H), 8.21 (m, 1 H), 8.16 (dd, J=4.7, 1.6, 1 H), 8.04 (s, 1 H), 8.03 (s, 1 H), 7.67 (s, 1 H), 7.33 (m, 1 H), 5.05 (t, J=5.6, 1 H), 3.58 (d, J=5.9, 2 H), 1.36 (s, 6 H); MS (EI/CI) m/z: 327.1 [M+H]。
【０１８９】
実施例２７
２−（３−（１−アミノエチル）フェニルアミノ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000059
工程１
ジオキサン（２ｍＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル １−（３−アミノフェニル）エチルカルバメート（１２４ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、キサントホス（６０.９ｍｇ、１０５μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（３２.１ｍｇ、３５.１μｍｏｌ）及び炭酸セシウム（２２９ｍｇ、７０２μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１５０℃で２０分間加熱した。混合物を冷却し、次いでセライトのパッドを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、次いでクロマトグラフィーで精製し（シリカ、ヘキサン中２０−４０％の酢酸エチル）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル１−（３−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−２−イルアミノ）フェニル）エチルカルバメート（１５０ｍｇ、２５７μｍｏｌ、７３％）を黄色のゴムとして得た。(EI/CI) m/z: 583.5 [M+H]。
【０１９０】
工程２
ｔｅｒｔ−ブチル １−（３−（７−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−２−イルアミノ）フェニル）エチルカルバメート（１５０ｍｇ、２５７μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（４ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（５８７ｍｇ、３９７μＬ、５.１５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、次いでジクロロメタン（４ｍＬ）、メタノール（２ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.７ｍＬ）に再溶解し、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、６−１０％メタノール／ジクロロメタン）で精製し、２−（３−（１−アミノエチル）フェニルアミノ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（６４ｍｇ、１８２μｍｏｌ、７１％）を黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 9.44 (s, 1 H), 8.01 (s, 1 H), 7.99 (d, J=7.9, 1 H), 7.98 (s, 1 H), 7.77 (s, 1H), 7.22 (t, J=7.8, 1 H), 7.20 (s, 1 H), 6.98 (d, J=7.8, 1 H), 4.05 (q, J=6.1, 1 H), 1.43 (s, 9 H), 1.32 (d, J=6.5, 3 H); MS (EI/CI) m/z: 353.2 [M+H]。
【０１９１】
実施例２８
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−（メチルスルホニル）ピリジン−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000060
工程１
ジオキサン（２ｍＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１２０ｍｇ、２８１μｍｏｌ）、２−（メチルスルホニル）ピリジン−４−アミン（５５ｍｇ、３１９μｍｏｌ）、キサントホス（４８.７ｍｇ、８４.２μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２５.７ｍｇ、２８.１μｍｏｌ）及び炭酸セシウム（１８３ｍｇ、５６２μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１５０℃で２０分間加熱した。混合物を冷却し、次いでセライトのパッドを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中３５−７０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−（メチルスルホニル）ピリジン−４−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１２７ｍｇ、２４５μｍｏｌ、８７％）を淡黄色のゴムとして得た。(EI/CI) m/z: 519.1 [M+H]。
【０１９２】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−（メチルスルホニル）ピリジン−４−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１２７ｍｇ、２４５μｍｏｌ）が入ったジクロロメタンの溶液に、トリフルオロ酢酸（５５８ｍｇ、３７７μＬ、４.９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、次いでジクロロメタン（４ｍＬ）、メタノール（２ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.７ｍＬ）に再溶解し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を真空で濃縮し、次いで水で粉砕して濾過した。得られた固体をエーテルで洗浄し、次いで乾燥させ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−（メチルスルホニル）ピリジン−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（９４ｍｇ、２４２μｍｏｌ、９９％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.51 (s, 1 H), 10.36 (s, 1 H), 8.39 (d, J=5.9, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 8.01 (s, 1H), 7.99 (dd, J=5.3, 2.3, 1 H), 7.83 (d, J=2.1, 1 H), 7.52 (s, 1 H), 3.15 (s, 3 H), 1.35 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 389.1 [M+H]。
【０１９３】
実施例２９
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−（メチルスルホニル）ピリジン−３−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000061
工程１
ジオキサン（２ｍＬ）に入った２−アミノ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（９２ｍｇ、２５３μｍｏｌ）、３−ブロモ−５−（メチルスルホニル）ピリジン（７７.７ｍｇ、３２９μｍｏｌ）、キサントホス（４３.９ｍｇ、７５.９μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２３.２ｍｇ、２５.３μｍｏｌ）及び炭酸セシウム（１６５ｍｇ、５０６μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１５０℃で２０分間加熱した。混合物を冷却し、次いでセライトのパッドを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中３０−７０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−（メチルスルホニル）ピリジン−３−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１２５ｍｇ、２４１μｍｏｌ、９５％）を黄色のゴムとして得た。(EI/CI) m/z: 519.3 [M+H]。
【０１９４】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−（メチルスルホニル）ピリジン−３−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１２５ｍｇ、２４１μｍｏｌ）が入ったジクロロメタンの溶液に、トリフルオロ酢酸（５５０ｍｇ、３７１μＬ、４.８２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、次いでジクロロメタン（３.７ｍＬ）、メタノール（１.６ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.５ｍＬ）に再溶解し混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を真空で濃縮し、次いで水で粉砕して濾過した。得られた固体をエーテルで洗浄し、次いで乾燥させ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（５−（メチルスルホニル）ピリジン−３−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（９２ｍｇ、２３７μｍｏｌ、９８％）を黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.38 (s, 1 H), 9.90 (s, 1 H), 9.40 (d, J=2.5, 1 H), 8.55 (d, J=1.9, 1 H), 8.06 (t, J=2.2, 1H), 8.01 (s, 1 H), 7.96 (s, 1 H), 7.54 (s, 1 H), 3.22 (s, 3 H), 1.31 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 389.1 [M+H]。
【０１９５】
実施例３０
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１,３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000062
工程１
ジオキサン（２ｍＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、１,３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−アミン（５８.５ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、キサントホス（６０.９ｍｇ、１０５μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（３２.１ｍｇ、３５.１μｍｏｌ）及び炭酸セシウム（２２９ｍｇ、７０２μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１５０℃で２０分間加熱した。混合物を冷却し、次いでセライトのパッドを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２５−１００％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１,３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８９ｍｇ、１９４μｍｏｌ、５５％）を黄色のゴムとして得た。(EI/CI) m/z: 458.3 [M+H]。
【０１９６】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１,３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８９ｍｇ、１９４μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（３ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（４４３ｍｇ、３００μＬ、３.８９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、次いでジクロロメタン（３ｍＬ）、メタノール（１.５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.４５ｍＬ）に再溶解し、混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、ジクロロメタン中５−８％のメタノール）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１,３−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（４０ｍｇ、１２２μｍｏｌ、６３％）を淡褐色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.13 (s, 1 H), 8.44 (s, 1 H), 7.91 (s, 1 H), 7.87 (d, J=3.2, 1 H), 7.82 (s, 1 H), 7.81 (s, 1 H), 3.71 (s, 3 H), 2.09 (s, 3 H), 1.35 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 328.1 [M+H]。
【０１９７】
実施例３１
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチル−１,２,４−チアジアゾール−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000063
工程１
ジオキサン（２ｍＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５０ｍｇ、３５１μｍｏｌ）、３−メチル−１,２,４−チアジアゾール−５−アミン（６０.６ｍｇ、５２６μｍｏｌ）、キサントホス（６０.９ｍｇ、１０５μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（３２.１ｍｇ、３５.１μｍｏｌ）及び炭酸セシウム（２２９ｍｇ、７０２μｍｏｌ）の混合物を、マイクロ波で１５０℃で２０分間加熱した。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中３０−７０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチル−１,２,４−チアジアゾール−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１２８ｍｇ、２７７μｍｏｌ、７９％）を橙色の固体として得た。(EI/CI) m/z: 462.3 [M+H]。
【０１９８】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチル−１,２,４−チアジアゾール−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１２８ｍｇ、２７７μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（４.３ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（６３２ｍｇ、４２７μＬ、５.５５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、次いでジクロロメタン（４ｍＬ）、メタノール（２ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.６ｍＬ）に再溶解し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を真空で濃縮し、次いで水で粉砕して濾過した。得られた固体をエーテルで洗浄し、次いで乾燥させ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（３−メチル−１,２,４−チアジアゾール−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（９０ｍｇ、２７２μｍｏｌ、９８％）を淡黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.80 (s, 1 H), 12.57 (s, 1 H), 8.35 (s, 1 H), 8.34 (s, 1 H), 7.34 (s, 1 H), 2.53 (s, 3 H), 1.62 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 332.1 [M+H]。
【０１９９】
実施例３２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−メチル−６,７−ジヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−イル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
工程１
４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン
0006404215.tif 000064
２５０ｍＬのＰａｒｒボトルに、１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン（２ｇ、１６.８ｍｍｏｌ、Ｊ＆Ｗ ＰｈａｒｍＬａｂ，ＬＬＣから入手）が入ったＴＦＡ（２０.０ｍＬ）の溶液及び酸化白金（ＩＶ）（３８１ｍｇ、１.６８ｍｍｏｌ）を充填した。反応混合物を水素で二度抜き、５５ｐｓｉの水素圧下で２４時間振とうさせた。反応混合物をセライトを通して濾過して、濾過ケーキを５％のメタノールが入ったＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。濾液を真空で濾過し、淡褐色の油を得、これをメタノール（２０ｍＬ）に溶解した。濃縮した水酸化アンモニウム溶液を、ｐＨが塩基性（ｐＨ８）になるまで滴下した。混合物を真空で濃縮し、次いで残留物をシリカゲルに吸着させて、クロマトグラフィー（シリカ、１５０ｇカラム、Ａｎａｌｏｇｉｘから５０μｍ、ジクロロメタン中０から５％の、メタノール：水酸化アンモニウムが９：１の溶液、１５分間）で精製し、黄色の油を得た。この油を高真空下で乾燥させて固体化し、４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン（１.７１２ｇ、１３.９ｍｍｏｌ、８３％）を黄色の固体として得た。1H NMR (クロロホルム-d) d: 7.09 (s, 1H), 3.14 - 3.25 (m, 2H), 2.76 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 1.88 - 2.02 (m, 2H). MS (EI/CI) m/z: 124.1 [M+H]+。
【０２００】
工程２
ｔｅｒｔ−ブチル ６,７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−カルボキシレート
0006404215.tif 000065
４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン（１６８ｍｇ、１.３６ｍｍｏｌ）が入ったメタノール（１０ｍＬ）の無色の溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（３２７ｍｇ、３４８μＬ、１.５ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温で９０分間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、粗残留物をクロマトグラフィー（４０ｇカラム、Ａｎａｌｏｇｉｘから５０μｍ、ＣＨ２Ｃｌ２中メタノール：水酸化アンモニウムが９：１の０から５％、２０分間）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル ６,７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−カルボキシレート（１８８ｍｇ、６２％）を無色の油として得た。1H NMR (クロロホルム-d)δ: 11.38 (br. s., 1H), 7.43 - 8.06 (m, 1H), 3.69 (br. s., 2H), 2.75 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 1.89 - 2.02 (m, 2H), 1.43 - 1.65 (m, 9H).MS (EI/CI) m/z: 224.1 [M+H]+。
【０２０１】
工程３
ｔｅｒｔ−ブチル ２−メチル−６,７−ジヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−カルボキシレート及びｔｅｒｔ−ブチル １−メチル−６,７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−カルボキシレート
0006404215.tif 000066
ｔｅｒｔ−ブチル ６,７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−カルボキシレート（１８８ｍｇ、８４２μｍｏｌ）が入ったＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（５.０ｍＬ）の溶液を撹拌しながら０℃に冷却し、次いでカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（ＴＨＦ中１Ｍ、１.１８ｍＬ、１.１８ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりと添加した。３０分間撹拌した後、ヨウ化メチル（１６７ｍｇ、７３.７μＬ、１.１８ｍｍｏｌ）を添加した。３０分後、混合物を室温に温めて、更に１８時間撹拌した。混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液が入った水でクエンチし、生成物をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ３０ｍＬ）で抽出した。混合有機物を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、次いで真空で濃縮し、オフホワイトの固体を得た。この固体をトルエンに溶解し、フラッシュクロマトグラフィー（１１５ｇカラム、Ａｎａｌｏｇｉｘから５０μｍのシリカゲル、ヘキサン中０−２０％の酢酸エチル、１５分間）で精製し、二種のアルキル化生成物を得た。低極性のＮ−２アルキル化生成物であるｔｅｒｔ−ブチル ２−メチル−６,７−ジヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−カルボキシレート（５６ｍｇ、２８％）を淡黄色の固体として得た。1H NMR(クロロホルム-d)δ: 7.22 - 7.78 (m, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.56 - 3.70 (m, 2H), 2.71 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.87 - 2.00 (m, 2H), 1.46 - 1.59 (m, 9H).MS (EI/CI) m/z: 238.1 [M+H]+。高極性のＮ−１アルキル化生成物であるｔｅｒｔ−ブチル １−メチル−６,７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−カルボキシレート（５５ｍｇ、２８％）を淡黄色の固体として得た。1H NMR (クロロホルム-d)δ:7.52 (br. s., 1H), 3.73 (s, 3H), 3.66 (br. s., 2H), 2.65 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.91 - 2.06 (m, 2H), 1.57 (br. s., 9H). MS (EI/CI) m/z: 238.1 [M+H]+。
【０２０２】
工程４
２−メチル−４,５,６,７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン
0006404215.tif 000067
ｔｅｒｔ−ブチル ２−メチル−６,７−ジヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−カルボキシレート（５６ｍｇ、２３６μｍｏｌ）が入ったＣＨ２Ｃｌ２（４.００ｍＬ）の撹拌溶液に、ＴＦＡ（７４０ｍｇ、５００μＬ、６.４９ｍｍｏｌ）を室温で添加した。１８時間後、反応混合物を真空で濃縮し、得られた残留物をクロマトグラフィー（４０ｇカラム、Ａｎａｌｏｇｉｘから５０μｍのシリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２中メタノール：水酸化アンモニウムが９：１の０から５％、２０分間）で精製し、２−メチル−４,５,６,７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン（２５ｍｇ、７７％）を得た。1H NMR (クロロホルム-d)δ: 6.81 (s, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.11 - 3.18 (m, 2H), 3.04 (s, 1H), 2.73 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.86 - 2.00 (m, 2H)。
【０２０３】
工程５
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−メチル−６,７−ジヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−イル）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000068
ジオキサン（２ｍＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（７７.９ｍｇ、１８２μｍｏｌ）、２−メチル−４,５,６,７−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン（２５ｍｇ、１８２μｍｏｌ）、キサントホス（３１.６ｍｇ、５４.７μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１６.７ｍｇ、１８.２μｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（１１９ｍｇ、３６４μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波バイアルに充填した。混合物をアルゴンでパージし、次いでマイクロ波照射下で１５０℃で２０分間加熱した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈して、次いでセライトのパッドを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、残留物をクロマトグラフィー（４０ｇカラム、Ａｎａｌｏｇｉｘから５０μｍのシリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２中メタノール：水酸化アンモニウムが９：１の０から５％、２０分間）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−メチル−６,７−ジヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−イル）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８７ｍｇ、９９％）を黄色の泡として得た。1H NMR (クロロホルム-d)δ: 8.20 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 5.64 (s, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.50 - 3.63 (m, 2H), 2.93 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.15 - 2.30 (m, 2H), 1.53 - 1.62 (m, 11H), 0.86 - 1.05 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).MS (EI/CI) m/z: 484.0 [M+H]+。
【０２０４】
工程６
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−メチル−６,７−ジヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−イル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000069
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−メチル−６,７−ジヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−イル）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（８７ｍｇ、１８０μｍｏｌ）が入ったＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）の撹拌溶液に、ＴＦＡ（７４０ｍｇ、５００μＬ、６.４９ｍｍｏｌ）を添加した。２４時間後、混合物を真空で濃縮し、残留物を（ＣＨ２Ｃｌ２／メタノール／水酸化アンモニウム；６０：１０：１）の５ｍＬの混合物に溶解し、混合物を室温で２４時間撹拌し、次いで蒸発させて、黄色の固体を得、これをクロマトグラフィー（２０−４５μｍのシリカ球、２３ｇ、Ｖｅｒｓａｆｌａｓｈ Ｓｕｐｅｌｃｏ、ＣＨ２Ｃｌ２中メタノール：水酸化アンモニウムが９：１の０から５％、３０分間）で精製して残留物を得、これをＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、次いでシクロヘキサンで沈殿させた。母液をデカントして黄色の固体を得て、高真空下で乾燥させ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−メチル−６,７−ジヒドロ−２Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−イル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（２３ｍｇ、３６％）を得た。1H NMR (クロロホルム-d)δ: 9.46 (br. s., 1H), 8.08 - 8.21 (m, 2H), 7.97 (br. s., 1H), 7.82 (s, 1H), 3.88 (m, 5H), 2.89 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.14 - 2.28 (m, 2H), 1.56 (s, 9H). MS (EI/CI) m/z: 354.1 [M+H]+。
【０２０５】
実施例３３
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−メチル−６,７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−イル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
工程１
１−メチル−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン
0006404215.tif 000070
ｔｅｒｔ−ブチル １−メチル−６,７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−カルボキシレート（５５ｍｇ、２３２μｍｏｌ）が入ったＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）の撹拌溶液に、ＴＦＡ（７４０ｍｇ、５００μＬ、６.４９ｍｍｏｌ）を添加した。１８時間後、反応混合物を真空で濃縮し、得られた残留物をクロマトグラフィー（４０ｇカラム、Ａｎａｌｏｇｉｘから５０μｍのシリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２中メタノール：水酸化アンモニウムが９：１の０から５％、２０分間）で精製し、１−メチル−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン（２２ｍｇ、６９％）を得た。1H NMR (クロロホルム-d)δ: 7.05 (s, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.08 - 3.21 (m, 2H), 2.88 (br. s., 1H), 2.64 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.84 - 2.01 (m, 2H).MS (EI/CI) m/z: 138.2 [M+H]+。
【０２０６】
工程２
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−メチル−６,７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−イル）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000071
２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（６８.５ｍｇ、１６０μｍｏｌ）、１−メチル−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン（２２ｍｇ、１６０μｍｏｌ）、キサントホス（２７.８ｍｇ、４８.１μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１４.７ｍｇ、１６.０μｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１０５ｍｇ、３２１μｍｏｌ）及びジオキサン（２ｍＬ）の混合物をマイクロ波バイアルに充填した。反応混合物をアルゴンでパージし、次いでマイクロ波照射下で１５０℃で２０分間加熱した。混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈して、次いでセライトのパッドを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、残留物をクロマトグラフィー（４０ｇカラム、Ａｎａｌｏｇｉｘから５０μｍのシリカゲル、ＣＨ２Ｃｌ２中メタノール：水酸化アンモニウムが９：１の０から５％、２０分間）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−メチル−６,７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−イル）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（７７ｍｇ、９９％）を黄色の泡として得た。1H NMR (クロロホルム-d)δ: 8.29 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 5.63 (s, 2H), 3.93 - 4.01 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.52 - 3.63 (m, 2H), 2.80 - 2.91 (m, 2H), 2.16 - 2.29 (m, 2H), 1.55 - 1.61 (m, 11H), 0.87 - 1.02 (m, 2H), 0.00 (s, 9H).MS (EI/CI) m/z: 484.0 [M+H]+。
【０２０７】
工程３
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−メチル−６,７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−イル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000072
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−メチル−６,７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−イル）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（７７ｍｇ、１５９μｍｏｌ）が入ったＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）の撹拌溶液に、ＴＦＡ（７４０ｍｇ、５００μＬ、６.４９ｍｍｏｌ）を添加した。２４時間後、溶媒を蒸発させ、残留物を（ＣＨ２Ｃｌ２／メタノール／水酸化アンモニウム；６０：１０：１）の５ｍＬの混合物に再溶解した。室温で２４時間撹拌した後、混合物を真空で濃縮して黄色の固体を得、これをクロマトグラフィー（２０−４５μｍのシリカ球、２３ｇ、Ｖｅｒｓａｆｌａｓｈ Ｓｕｐｅｌｃｏ、ＣＨ２Ｃｌ２中メタノール：水酸化アンモニウムが９：１の０から５％、３０分間）で精製し、生成物を得、これをＣＨ２Ｃｌ２に溶解して、シクロヘキサンを添加して沈殿させた。形成された黄色の固体を母液のデカントにより分離させ、次いで高真空下で乾燥させ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（１−メチル−６,７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４,３−ｂ］ピリジン−４（５Ｈ）−イル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（３３ｍｇ、５９％）を黄色の固体として得た。1H NMR (クロロホルム-d)δ: 8.95 (br. s., 1H), 8.24 (s, 1H), 8.02 - 8.14 (m, 2H), 7.85 (s, 1H), 3.88 - 3.99 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 2.81 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.08 - 2.24 (m, 2H), 1.55 (s, 9H).MS (EI/CI) m/z: 354.1 [M+H]+。
【０２０８】
実施例３４
３−メチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルアミド
工程１
３,５−ジブロモ−６−メチル−ピラジン−２−イルアミン
0006404215.tif 000073
Ｓａｔｏ（Sato, N., J. Het. 13(1980)(17)143-147）によって記載された方法に従って６−メチル−ピラジン−２−イルアミンを臭素化することにより、３,５−ジブロモ−６−メチル−ピラジン−２−イルアミンを調製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 2.34 (s, 3 H), 6.86 (br s, 2 H, -NH2); MS (EI/CI) m/z: 266 [M+H]。
【０２０９】
工程２
５−ブロモ−６−メチル−３−トリメチルシラニルエチニル−ピラジン−２−イルアミン
0006404215.tif 000074
３,５−ジブロモ−６−メチル−ピラジン−２−イルアミン（７.４８ｇ、２８ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（１.０７ｇ、５.６ｍｍｏｌ）、ビス−トリフェニルホスフィン 二塩化パラジウム（１.９７ｇ、２.３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３.５４２ｇ、３５ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（７５ｍＬ）の冷却した（およそ１５℃の水浴）混合物に、トリメチルシリルアセチレン（１.０３ｇ、２９.４ｍｍｏｌ）が入ったテトラヒドロフラン（２ｍＬ）の溶液を滴下した。混合物をアルゴン大気下で１６時間撹拌し、その間、反応物を周囲温度に温めた。反応混合物を水に注ぎ、ヘキサン−酢酸エチル（２：１）で抽出した。有機層を飽和塩化アンモニウム溶液、水、次いで再度飽和塩化アンモニウム溶液、水で連続して洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、活性炭で処理し、セライトを通して濾過して、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２０％の酢酸エチル）で精製し、（６.１９ｇ、７７％）の５−ブロモ−６−メチル−３−トリメチルシラニルエチニル−ピラジン−２−イルアミンをオフホワイトの固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 0.26 (s, 9 H), 2.39 (s, 3 H), 6.71 (br s, 2 H, -NH2)。
【０２１０】
工程３
２−ブロモ−３−メチル−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン
0006404215.tif 000075
テトラヒドロフラン（２４ｍＬ）と１Ｍのカリウム ｔ−ブトキシドが入ったテトラヒドロフラン（２４ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）の溶液に、５−ブロモ−６−メチル−３−トリメチルシラニルエチニル−ピラジン−２−イルアミン（６.１９ｇ、２１.８ｍｍｏｌ）が入ったテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）の溶液をアルゴン大気下で滴下し、これを水浴で−３０℃で冷却した。混合物を１時間撹拌し、冷却浴を外して、混合物を室温で撹拌した。１９時間後、混合物を氷浴で冷却し、０.５Ｍの塩酸（４８ｍＬ）を添加してクエンチした。次いで、混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで二度抽出した。混合酢酸エチル層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、活性炭で処理し、セライトを通して濾過して、減圧下で濃縮し、橙色の固体（３.８３ｇ）を得、これは、大部分は２−ブロモ−３−メチル−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジンで、少量の脱シアル化した出発物質も含んでいた。この物質を、更なる精製をせずに次の工程で使用した。別個の反応で調製した物質からＮＭＲデータを入手し、クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン−酢酸エチルが７０：３０）で精製した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 2.64 (s, 3 H), 6.57 (d, d, J=1.5, 3.3 Hz, 1 H), 7.84 (t, J=3.3 Hz, 1 H), 12.12 (br s, 1 H, NH)
MS (EI/CI) m/z: 212 [M+H]。
【０２１１】
工程４
２−ブロモ−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ ピラジン
0006404215.tif 000076
上記で調製した粗２−ブロモ−３−メチル−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン（３.８３ｇ、１８ｍｍｏｌ）とＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（２５ｍＬ）の混合物に、アルゴン大気下で氷浴で冷却して、９５％の水素化ナトリウム油分散液（０.９１２ｇ、３６ｍｍｏｌ）を添加した（ガス発生）。混合物を１５分間撹拌し、次いで（２−クロロメトキシ−エチル）−トリメチルシラン（３.６１ｇ、２２ｍｍｏｌ）が入ったＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）を滴下した。１０分後、冷却浴を外して、混合物を更に室温で３時間半撹拌した。混合物を氷浴で冷却し、追加の水でクエンチして、次いで水に注ぎ、エーテルで三度抽出した。混合エーテル抽出物を水で二度洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過して、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中１５％の酢酸エチル）で精製し、２−ブロモ−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ ピラジン（３.４７ｇ、５６％）を琥珀色の固体として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm -0.11 (s, 9 H), 0.82 (m, 2 H), 2.67 (s, 3 H), 3.51 (m, 2 H), 5.59 (s, 2 H), 6.67 (d, J=3.5 Hz, 1 H), 8.01 (d, J=3.5 Hz, 1 H)。
【０２１２】
工程５
２−ブロモ−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ ピラジン−７−カルバルデヒド
0006404215.tif 000077
Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（２４ｍＬ）に、アルゴン大気下で、冷却（氷浴）しながら無水トリフルオロ酢酸（１０.２ｍＬ、６０.８ｍｍｏｌ）を滴下した。冷却浴を１５分間外して、撹拌を促進して、次いで戻した。２−ブロモ−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ ピラジン（３.４７ｇ、１０.１ｍｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（５ｍＬ）の溶液を滴下した。冷却浴を外した；混合物を１５分間撹拌し、次いで４５℃の温浴にセットし、１６時間撹拌した。混合物を冷却し、次いで炭酸ナトリウム（１３ｇ）を含む氷水（２００ｍＬ）に注ぎ、エーテルで四度抽出した。混合エーテル抽出物を水で二度洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過して、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２０％の酢酸エチル）で精製し、２−ブロモ−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ ピラジン−７−カルバルデヒド（３.１７ｇ、８４％）を淡黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm -0.09 (s, 9 H), 0.85 (t, J=8.0 Hz, 2 H), 2.71 (s, 3 H), 3.58 (t, J=8.0 Hz, 2 H), 5.68 (s, 2 H), 8.87 (s, 1 H), 10.04 (s, 1 H)。
【０２１３】
工程６
２−ブロモ−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ ピラジン−７−カルボン酸
0006404215.tif 000078
２−ブロモ−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒド（３.１７ｇ、８.５５ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブタノール（１０ｍＬ）、テトラヒドロフラン（１０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）の撹拌混合物に、スルファミン酸（３.３２ｇ、３４ｍｍｏｌ）を添加し、次いでリン酸二水素カリウム（８.８５ｇ、６５ｍｍｏｌ）及び亜塩素酸ナトリウム（１.９３ｇ、２１ｍｍｏｌ）が入った水溶液（４２ｍＬ）を添加した。１時間後、混合物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで一度洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過して、減圧下で濃縮し、２−ブロモ−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸（３.０２ｇ、９１％）を淡黄色の固体として得た。この物質を、更なる精製をせずに次の工程で使用した。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm -0.10 (s, 9 H), 0.83 (t, J=8.0 Hz, 2 H), 2.69 (s, 3 H), 3.55 (t, J=8.0 Hz, 2 H), 5.64 (s, 2 H), 8.64 (s, 1 H), 12.46 (br s, J=9.06 Hz, 1 H, -COOH)。
【０２１４】
工程７
２−ブロモ−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ ピラジン−７−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルアミド
0006404215.tif 000079
２−ブロモ−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸（１.１６ｇ、３ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ［１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−ベンゾトリアゾリウム３−オキシド、ヘキサフルオロホスファート（１−）（１：１）（１.４８ｇ、３.９ｍｍｏｌ）、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（１２ｍＬ）及びトリエチルアミン（０.６１ｇ、６ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１時間撹拌し、次いでｔｅｒｔ−ブチルアミン（０.６３ｍＬ、６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を更に１時間撹拌し、ついで酢酸エチルで希釈し、０.５Ｍの炭酸ナトリウムで一度、水で二度、ブラインで一度洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２０％の酢酸エチル）で精製し、２−ブロモ−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルアミド（１.２２ｇ、９２％）を白色の結晶性固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm -0.09 (s, 9 H), 0.83 (t, J=8.2 Hz, 2 H), 1.43 (s, 9 H), 2.71 (s, 3 H), 3.54 (t, J=8.2 Hz, 2 H), 5.64 (s, 2 H), 7.64 (s, 1 H), 8.49 (s, 1 H)。
MS (EI/CI) m/z: 441 [M+H] 
【０２１５】
工程８
３−メチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルアミド
0006404215.tif 000080
アルゴン大気下で、トルエン（２.５ｍＬ）に入った２−ブロモ−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（０.１１０ｇ、０.２５ｍｍｏｌ）、１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミン １.３５−ＨＣｌ塩（０.０７３ｇ、０.５ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０.０１１ｇ、０.０１２５ｍｍｏｌ）、ラセミ ＢＩＮＡＰ［ｒａｃ−２,２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１,１’−ビナフチル］（０.０２３ｇ、０.０３８ｍｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０.０９４ｇ、０.９８ｍｍｏｌ）の混合物を加熱して、密封したベッセル中で１１０℃で１８.５時間撹拌した。冷却した反応混合物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで一度洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中７０％の酢酸エチル）で精製し、０.１０４ｇの僅かに不純な３−メチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミドを黄褐色の固体として得た。この物質を、別個の、低収率の、カップリング反応（トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウムの代わりに酢酸パラジウムを使用した）から得られた０.０２２ｇの部分的に精製された生成物と混ぜ合わせ、クロマトグラフィー（シリカ、酢酸エチル）で精製し、３−メチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（０.１１２ｇ）を淡黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm -0.08 (s, 9 H), 0.83 (t, J=8.2 Hz, 2 H), 1.38 (s, 9 H), 2.54 (s, 3 H), 3.51 (t, J=8.2 Hz, 2 H), 3.80 (s, 3 H), 5.55 (s, 2 H), 7.61 (s, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 7.85 (s, 1 H), 8.01 (s, 1 H), 8.19 (s, 1 H); MS (EI/CI) m/z: 458 [M+H]。
【０２１６】
工程９
３−メチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド
0006404215.tif 000081
３−メチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（０.１１０ｇ、０.２４ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２.５ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（０.５ｍＬ）の混合物を室温で１３時間置き、次いで減圧下で濃縮した。黄色の残留物を、ジクロロメタン−メタノール−水酸化アンモニウム（５０：１０：１、１０ｍＬ）と１.５時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残留物を酢酸エチル中に取り出して、０.５Ｍの炭酸ナトリウム、水、次いでブラインで連続して洗浄した。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して、減圧下で濃縮し、０.０８２ｇの淡黄色の固体を得た。ｎｍｒでは変換が不完全であったため、混合物を更に２時間撹拌し、ジクロロメタン−メタノール−水酸化アンモニウム（５：５：１）と１.５時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、水で一度、ブラインで一度洗浄した。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して、減圧下で濃縮し、０.０７５ｇの淡黄色の固体を得た。アセトニトリル−メタノールからの再結晶により、３−メチル−２−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（０.０４７ｇ、４１％）を淡黄色の結晶性固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 1.38 (s, 9 H), 2.52 (s, 3 H), 3.80 (s, 3 H), 7.60 (s, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 7.79 (s, 1 H), 7.84 (s, 1 H), 8.07 (s, 1 H, -NH), 11.97 (br s, 1 H, -NH). MS (EI/CI) m/z: 328 [M+H]。
【０２１７】
実施例３５
２−（３−メタンスルホニル−フェニルアミノ）−３−メチル−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド
工程１
２−（３−メタンスルホニル−フェニルアミノ）−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルアミド
0006404215.tif 000082
アルゴン大気下で、トルエン（２.５ｍＬ）に入った２−ブロモ−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（０.１１０ｇ、０.２５ｍｍｏｌ）、３−メタンスルホニル−フェニルアミン（０.０８６ｇ、０.５ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０.０１１ｇ、０.０１２５ｍｍｏｌ）、ラセミＢＩＮＡＰ ［ｒａｃ−２,２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１,１’−ビナフチル］（０.０２３ｇ、０.０３８ｍｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０.０６０ｇ、０.６３ｍｍｏｌ）の混合物を加熱して、密封したベッセル中で１１０℃で２１.５時間撹拌した。冷却した反応混合物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで一度洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中７５％の酢酸エチル）で精製し、０.１０７ｇの僅かに不純な２−（３−メタンスルホニル−フェニルアミノ）−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミドを黄色のガラスとして得た。反応を上記のように繰り返し、混ぜ合わせた僅かに不純な生成物を更にクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中３３％の酢酸エチル）で精製し、２−（３−メタンスルホニル−フェニルアミノ）−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルアミド（０.１６９ｇ、６４％）を淡黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm -0.07 (s, 9 H), 0.85 (t, J=8.2 Hz, 2 H), 1.30 (s, 9 H), 2.64 (s, 3 H), 3.19 (s, 3 H), 3.54 (t, J=8.2 Hz, 2 H), 5.59 (s, 2 H), 7.49 (m, 1 H), 7.56 (m, 1 H), 7.62 (s, 1 H), 7.96 (m, 1 H), 8.05 (m, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 8.74 (s, 1 H).MS (EI/CI) m/z: 532 [M+H]。
【０２１８】
工程２
２−（３−メタンスルホニル−フェニルアミノ）−３−メチル−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルアミド
0006404215.tif 000083
２−（３−メタンスルホニル−フェニルアミノ）−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（０.１６７ｇ、０.３１ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２.５ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（０.５ｍＬ）の混合物を室温で１４時間置き、次いで減圧下で濃縮した。黄色の残留物をジクロロメタン−メタノール−水酸化アンモニウム（３：３：１、７ｍＬ）で３時間撹拌した。次いで、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで一度洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、減圧下で濃縮し、０.１２６ｇの淡黄色の固体を得た。生成物をアセトニトリル−メタノールから再結晶させ、２−（３−メタンスルホニル−フェニルアミノ）−３−メチル−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（０.０６３ｇ、５０％）を淡黄色の結晶性固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 1.30 (s, 9 H), 2.61 (s, 3 H), 3.19 (s, 3 H), 7.46 (m, 1 H), 7.54 (m, 1 H), 7.64 (s, 1 H), 7.94 (m, 1 H), 7.96 (s, 1 H), 8.04 (m, 1 H), 8.66 (s, 1 H), 12.21 (br s, 1 H).MS (EI/CI) m/z: 402 [M+H]。
【０２１９】
実施例３６
３−メチル−２−（３−メチル−イソチアゾール−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド
工程１３−メチル−２−（３−メチル−イソチアゾール−５−イルアミノ）−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド
0006404215.tif 000084
アルゴン大気下で、トルエン（３.５ｍＬ）に入った２−ブロモ−３−メチル−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（０.２２１ｇ、０.５ｍｍｏｌ）、３−メチル−イソチアゾール−５−イルアミン塩酸塩（０.１５１ｇ、１ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０.０２３ｇ、０.０２５ｍｍｏｌ）、ラセミＢＩＮＡＰ ［ｒａｃ−２,２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１,１’−ビナフチル］（０.０４７ｇ、０.０７５ｍｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（０.１４４ｇ、１.５ｍｍｏｌ）の混合物を加熱して、密封したベッセル中で１１０℃で１９時間撹拌した。冷却した反応混合物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで一度洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して、減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中７５％の酢酸エチル、次いでヘキサン中５０％の酢酸エチルで繰り返し、再度、４０％の酢酸エチルＩヘキサン）で精製し、３−メチル−２−（３−メチル−イソチアゾール−５−イルアミノ）−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（０.１０１ｇ、４３％）を黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm -0.08 (s, 9 H), 0.84 (t, J=8.0 Hz, 2 H), 1.55 (s, 9 H), 2.35 (s, 3 H), 2.67 (s, 3 H), 3.53 (t, J=8.0 Hz, 2 H), 5.61 (s, 2 H), 6.94 (s, 1 H), 7.34 (s, 1 H), 8.25 (s, 1 H), 10.49 (s, 1 H).MS (EI/CI) m/z: 475 [M+H]。
【０２２０】
工程２
３−メチル−２−（３−メチル−イソチアゾール−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド
0006404215.tif 000085
３−メチル−２−（３−メチル−イソチアゾール−５−イルアミノ）−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（０.０９９ｇ、０.２１ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２.５ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（０.５ｍＬ）の混合物を室温で１４時間置き、次いで減圧下で濃縮した。黄色の残留物をジクロロメタン−メタノール−水酸化アンモニウム（３：３：１、７ｍＬ）で３時間撹拌した。次いで、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで一度洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させて、減圧下で濃縮し、０.０７９ｇの淡黄色の固体を得た。生成物をアセトニトリル−メタノールから再結晶させ、３−メチル−２−（３−メチル−イソチアゾール−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（０.０４６ｇ、６４％）を淡黄色の結晶性固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ ppm 1.55 (s, 9 H), 2.34 (s, 3 H), 2.65 (s, 3 H), 6.92 (s, 1 H), 7.32 (s, 1 H), 8.04 (d, J=1.5 Hz, 1 H), 10.41 (s, 1 H), 12.36 (s, 1 H).MS (EI/CI) m/z: 345 [M+H]。
【０２２１】
実施例３７
２−フェニルアミノ（Ｄ５）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド
0006404215.tif 000086
工程１
ジオキサン（２ｍＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１２５ｍｇ、２９２μｍｏｌ）、アニリン−Ｄ５（４３.１ｍｇ、４３９μｍｏｌ）、キサントホス（５０.８ｍｇ、８７.７μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２６.８ｍｇ、２９.２μｍｏｌ）及び炭酸セシウム（１９１ｍｇ、５８５μｍｏｌ）の混合物を、マイクロ波で１５０℃で２０分間加熱した。反応混合物をセライトのパッドを通して濾過し、次いで濾液を真空で濃縮して、クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中２０−６０％の酢酸エチル）で精製し、２−フェニルアミノ（Ｄ５）−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（４０ｍｇ、９０.０μｍｏｌ、３１％）を淡黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3-d)δppm: 8.15 (s, 1 H), 7.99 (s, 1 H), 7.93 (s, 1 H), 6.70 (s, 1 H), 5.63 (s, 2 H), 3.57 (t, J= 8.2, 2 H), 1.57 (s, 9 H), 0.96 (t, J=8.1, 2 H), 0.01 (s, 9 H)。
【０２２２】
工程２
２−フェニルアミノ（Ｄ５）−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（４０ｍｇ、９０.０μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（１.５ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（２０５ｍｇ、１３９μＬ、１.８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、次いでジクロロメタン（１.５ｍＬ）、メタノール（０.７５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.２ｍＬ）に再溶解し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を真空で濃縮し、次いで水で粉砕して濾過した。得られた固体をエーテルで洗浄し、次いで乾燥させ、２−フェニルアミノ（Ｄ５）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルアミド（２４ｍｇ、７６.３μｍｏｌ、８５％）を黄色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.31 (s, 1 H), 9.47 (s, 1 H), 8.00 (s, 1 H), 7.99 (s, 1 H), 7.76 (s, 1 H), 1.44 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 315.1 [M+H]。
【０２２３】
実施例３８
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−クロロ−２−（３−メチルイソチアゾール−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−クロロ−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000087
工程１
３,５−ジブロモ−６−クロロ−ピラジン−２−イルアミン
0006404215.tif 000088
６−クロロ−ピラジン−２−イルアミン（５.０ｇ、３８.８ｍｍｏｌ）が入ったクロロホルム（１９４ｍＬ）の溶液に、窒素大気下で、Ｎ−ブロモスクシンイミド（２０.７ｇ、１１６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で５時間撹拌した。得られた混合物をＫ２ＣＯ３の水溶液（３００ｍＬ）に注ぎ、ジクロロメタン（２００ｍＬｘ４）で抽出した。混合有機抽出物を乾燥させ、クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中１０−２０％の酢酸エチル）で精製し、３,５−ジブロモ−６−クロロ−ピラジン−２−イルアミン（４.２ｇ、３８％）を黄色の固体として得た。LC-MS: 286.0 (M-H)。
【０２２４】
工程２
５−ブロモ−６−クロロ−３−トリメチルシラニルエチニル−ピラジン−２−イルアミン
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３,５−ジブロモ−６−クロロ−ピラジン−２−イルアミン（５.０ｇ、１７.４２ｍｍｏｌ）が入った無水ＴＨＦ（４０ｍＬ）の撹拌溶液に、トリエチルアミン（３.５２ｇ、３４.８４ｍｍｏｌ）及びＣｕＩ（０.３３３ｇ、１.７４ｍｍｏｌ）を添加した。１０分間アルゴンを泡立てながら混合物を脱ガスし、次いで空にして、アルゴンで戻した。これを２０分間アルゴンで完全にパージし、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（０.３５５ｇ、０.５２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を−５℃に冷却し、ＴＭＳ−アセチレン（１.９０ｇ、１９.１６ｍｍｏｌ）を非常にゆっくりと添加し、３時間かけて温度を１５℃にゆっくりと上昇させた。反応混合物を水（３０ｍＬ）で希釈して、酢酸エチル（１００ｍＬｘ３）で抽出した。混合有機層を真空で濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中５％の酢酸エチル）で精製し、５−ブロモ−６−クロロ−３−トリメチルシラニルエチニル−ピラジン−２−イルアミン（４.０ｇ、７５％）を黄色の固体として得た。LC-MS: 304.0 (M+H)。
【０２２５】
工程３
２−ブロモ−３−クロロ−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン
0006404215.tif 000090
窒素大気下で、５−ブロモ−６−クロロ−３−トリメチルシラニルエチニル−ピラジン−２−イルアミン（２.０ｇ、６.５８ｍｍｏｌ）が入ったＴＨＦ（２８ｍＬ）の撹拌溶液に、ＫＯｔＢｕが入ったＴＨＦ（７.２４ｍＬ、７.２４ｍｍｏｌ）の１Ｍの溶液を０℃でゆっくりと添加した。反応混合物を０℃で１０分間撹拌し、次いで室温に温めた。２時間後、混合物を真空で濃縮し、得られた残留物を水（７.５ｍＬ）及び飽和水性ＮａＨＣＯ３（７.５ｍＬ）に懸濁させ、室温で一晩撹拌した。この固体を濾過し、水及びヘキサンで洗浄し、次いで８０℃のオーブンで乾燥させ、２−ブロモ−３−クロロ−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン（１.６４ｇ）を褐色の固体として得た。LC-MS: 232 (M-H)。これを更なる精製をせずにそのまま使用した。
【０２２６】
工程４
２−ブロモ−３−クロロ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−５−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル エステル
0006404215.tif 000091
２−ブロモ−３−クロロ−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン（１.５２ｇ、６.５５ｍｍｏｌ）が入ったアセトニトリル（２５ｍＬ）の撹拌懸濁液に、ＤＭＡＰ（０.００８ｇ、０.０７ｍｍｏｌ）を添加した。５分後、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル ジカーボネート（１.８２ｍＬ、８.５２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、次いで得られた残留物をクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中７％の酢酸エチル）で精製し、２−ブロモ−３−クロロ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−５−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（二工程にわたり、１.０ｇ、４６％）を黄色の固体として得た。LC-MS: 334.2 (M+H)。
【０２２７】
工程５
（２−ブロモ−３−クロロ−７−ヒドロキシメチル−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−５−イル）−メタノール
0006404215.tif 000092
２−ブロモ−３−クロロ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−５−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（６.０ｇ、１８.０ｍｍｏｌ）が入った１,４−ジオキサン（１００ｍＬ）の撹拌溶液に、メタナール（５.４ｇ、１８０.４ｍｍｏｌ）及び１Ｍ ＮａＯＨ溶液（５４ｍＬ）を添加し、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物がｐＨ７となるまで、１.２Ｎ ＨＣｌを反応混合物に添加した。反応混合物を真空で濃縮し、得られた残留物を水（５０ｍＬ）で希釈して、酢酸エチル（１５０ｍＬｘ３）で抽出した。有機層を混ぜ合わせ、真空で濃縮し、（２−ブロモ−３−クロロ−７−ヒドロキシメチル−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−５−イル）−メタノール（４.４ｇ、８３％）を黄色の固体として得た。LC-MS: 292.2 (M-H)。これを更なる精製をせずにそのまま使用した。
【０２２８】
工程６：
２−ブロモ−３−クロロ−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒド
0006404215.tif 000093
（２−ブロモ−３−クロロ−７−ヒドロキシメチル−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−５−イル）−メタノール（２.０ｇ、６.８４ｍｍｏｌ）が入ったアセトン（６７ｍＬ）の撹拌懸濁液に、Ｊｏｎｅ’ｓ試薬（２.１２ｍＬ）を添加し、混合物を室温で２０分間撹拌した。混合物を冷却し、次いでセライトのパッドを通して濾過して、濾液を真空で濃縮した。残留物をＴＨＦ（３５ｍＬ）及び１Ｎ ＮａＯＨ溶液（１８ｍＬ）で希釈した。得られた混合物を室温で１６時間撹拌し、次いで真空で濃縮して〜２０ｍＬにし、１Ｎ ＨＣｌを添加してｐＨ７となるように調整した。混合物を酢酸エチル（１００ｍＬｘ３）で抽出し、乾燥させて濃縮し、２−ブロモ−３−クロロ−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒド（１.４ｇ、８０％）を褐色の固体として得た。LC-MS: 260.2 (M-H).これを更なる精製をせずにそのまま使用した。
注：Ｊｏｎｅ’ｓ試薬の調製：ＣｒＯ３（１３.６６ｇ）が入った水溶液（２０ｍＬ）を０℃に冷却し、濃Ｈ２ＳＯ４（１１.５ｍＬ）をゆっくりと添加した。得られる溶液の体積が５０ｍＬとなるように水を添加して、Ｊｏｎｅ’ｓ試薬を得た。
【０２２９】
工程７
２−ブロモ−３−クロロ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒド
0006404215.tif 000094
２−ブロモ−３−クロロ−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒド（２.０ｇ、７.６９ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、ＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ）（９.４６ｍＬ、９.４６ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。１時間後、トリメチルシリルエトキシメトキシクロリド（１.５ｍＬ、８.４６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を３０分かけて室温に温めた。反応混合物をＮａ２ＣＯ３水溶液（３５ｍＬの水中１.５６ｇ）で希釈し、次いで酢酸エチル（１００ｍＬｘ３）で抽出した。混合有機層をブラインで洗浄し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中５−１０％の酢酸エチル）で精製し、２−ブロモ−３−クロロ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒド（１.９６ｇ、６５％）を褐色の固体として得た。LC-MS: 392.2 (M+H)。
【０２３０】
工程８
２−ブロモ−３−クロロ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸
0006404215.tif 000095
２−ブロモ−３−クロロ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルバルデヒド（１.９６ｇ、５.０３ｍｍｏｌ）が入った１,４−ジオキサン：水が１：１の混合溶媒系（１０５ｍＬ）に、スルファミン酸（２.９３ｇ、３０.１５ｍｍｏｌ）、亜塩素酸ナトリウム（０.５９１ｇ、６.５３ｍｍｏｌ）及びリン酸二水素カリウム（８.２０ｇ、６０.３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で一晩撹拌した。得られた混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（１５０ｍＬｘ３）で抽出した。混合有機相をブラインで洗浄し、乾燥させて真空で濃縮し、黄色の固体を得、これをヘキサンで完全に洗浄し、２−ブロモ−３−クロロ−５−（２−トリメチルシラニル−エトキシメチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸（１.６２ｇ、７９％）をオフホワイトの固体として得た。LC-MS: 406.2 (M-H)。
【０２３１】
工程９
２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−クロロ−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000096
２−ブロモ−３−クロロ−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボン酸（６００ｍｇ、１.４８ｍｍｏｌ）が入ったＤＭＦ（５ｍＬ）の溶液に、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（６５０ｍｇ、３.３９ｍｍｏｌ）及びＨＯＢＴ（５２０ｍｇ、３.３９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。２−メチルプロパン−２−アミン（４３２ｍｇ、５.９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌し、次いで１０％のクエン酸及び酢酸エチルで希釈した。有機層を分離させ、１０％のクエン酸、飽和水性ＮａＨＣＯ３及びブラインで洗浄し、次いで真空で濃縮して、クロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中５−２０％の酢酸エチル）で精製し、２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−クロロ−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（５３０ｍｇ、１.１５ｍｍｏｌ、７８％）を白色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d)δppm: 8.30 (s, 1 H), 7.72 (s, 1 H), 5.64 (s, 2 H), 3.57 (t, J=8.3 Hz, 2 H), 1.56 (s, 9 H), 0.96 (t, J=8.3 Hz, 2 H), 0.01 (s, 9 H)。
【０２３２】
工程１０
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−クロロ−２−（３−メチルイソチアゾール−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000097
ジオキサン（１.５ｍＬ）に入った２−ブロモ−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−クロロ−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１２５ｍｇ、２７１μｍｏｌ）、３−メチルイソチアゾール−５−アミン塩酸塩（６１.２ｍｇ、４０６μｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２４.８ｍｇ、２７.１μｍｏｌ）、キサントホス（４７.０ｍｇ、８１.２μｍｏｌ）及び炭酸セシウム（２６５ｍｇ、８１２μｍｏｌ）の混合物をマイクロ波で１５０℃で２０分間加熱した。Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２４.８ｍｇ、２７.１μｍｏｌ）及びキサントホス（４７.０ｍｇ、８１.２μｍｏｌ）を添加し、引き続きマイクロ波で１５０℃で３０分間加熱した。混合物を冷却し、次いでセライトのパッドを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、次いでクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン中１０−５０％の酢酸エチル）で精製し、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−クロロ−２−（３−メチルイソチアゾール−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（４０ｍｇ、４８.５μｍｏｌ、１７.９％）を褐色のゴムとして得た。(EI/CI) m/z: 495.1 [M+H]。
【０２３３】
工程１１
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−クロロ−２−（３−メチルイソチアゾール−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド
0006404215.tif 000098
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−クロロ−２−（３−メチルイソチアゾール−５−イルアミノ）−５−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（４０ｍｇ、８０.８μｍｏｌ）が入ったジクロロメタン（１.５ｍＬ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１８４ｍｇ、１２４μＬ、１.６２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、次いでジクロロメタン（１.５ｍＬ）、メタノール（０.７５ｍＬ）及び水酸化アンモニウム（０.２ｍＬ）に再溶解し、混合物を室温で１時間撹拌した。混合物を真空で濃縮し、次いで水で粉砕して濾過した。得られた固体をエーテルで洗浄し、次いで乾燥させ、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−クロロ−２−（３−メチルイソチアゾール−５−イルアミノ）−５Ｈ−ピロロ［２,３−ｂ］ピラジン−７−カルボキサミド（１５ｍｇ、３７.０μｍｏｌ、４６％）を濃橙色の固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d)δppm: 12.76 (s, 1 H), 10.91 (s, 1 H), 8.30 (d, J=3.2, 1 H), 7.33 (s, 1 H), 7.13 (s, 1 H), 2.42 (s, 3 H), 1.62 (s, 9 H); MS (EI/CI) m/z: 365.0 [M+H]。
【０２３４】
生物学的実施例
ＳＹＫアッセイ情報
脾臓チロシンキナーゼ（ＳＹＫ）阻害のＩＣ５０の決定：
ＳＹＫキナーゼアッセイは、９６ウェルプレートフォーマットに適合した標準的なキナーゼアッセイである。このアッセイは、９６−ウェルフォーマット中、１０の半対数希釈及び４０μＬの反応容量を示した８試料によるＩＣ５０決定のために実施する。このアッセイは、天然に存在するホスホアクセプターコンセンサス配列に由来する、Ｎ−末端ビオチン化ペプチド基質（ビオチン−１１ａａＤＹ＊Ｅ）への放射標識化３３ＰγＡＴＰの取込みを測定する。リン酸化生成物をＥＤＴＡとの反応の停止及びストレプトアビジンコートビーズの添加時に検出した。代表的な結果は、上の表IIにある。
【０２３５】
アッセイプレート：９６−ウェルＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ０.６５ｕｍフィルタープレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号：ＭＡＤＶＮＯＢ１０）
ストレプトアビジンコートビーズ：ストレプトアビジンＳｅｐｈａｒｏｓｅ ＴＭ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ／ＰＢＳ希釈（１：１００）中懸濁液５.０ｍＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、カタログ番号１７−５１１３−０１）
化合物：１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中１０ｍＭ、最終濃度：１０％ＤＭＳＯ中０.００３〜１００μＭの化合物。
酵素：ＳＹＫ ＲＰＡ精製-、脾臓チロシンキナーゼの不完全コンストラクトａａ３６０−６３５、ストック溶液１ｍｇ／ｍＬ、ＭＷ：３１.２ＫＤａ、最終濃度：０.０００５μＭ
ペプチド１：ビオチン化ペプチドは、天然に存在するホスホ−アクセプター-コンセンサス配列に由来する（ビオチン−ＥＰＥＧＤＹＥＥＶＬＥ）、ＱＣＢからの特注品、ストック溶液２０ｍＭ、最終濃度：５.０μＭ
ＡＴＰ：アデノシン−５’−三リン酸２０ｍＭ（ＲＯＣＨＥカタログ番号：９３２０２７２０）、最終濃度：２０μＭ
バッファー：ＨＥＰＥＳ：２−ヒドロキシエチル ピペラジン−２−エタンスルホン酸（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号：Ｈ−３３７５）最終濃度：５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７.５
ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン第Ｖ画分、脂肪酸を含まない（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ、カタログ番号：９１００２２１）、０.１％の最終濃度に希釈。
ＥＤＴＡ：ＥＤＴＡストック溶液５００ｍＭ、（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号：１５５７５−０３８）最終濃度：０.１ｍＭ
ＤＴＴ：１,４−ジチオスレイトール（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ、カタログ番号：１９７７７７）、最終濃度：１ｍＭ
ＭｇＣｌ２ ｘ ６Ｈ２Ｏ：ＭＥＲＣＫ、カタログ番号：１０５８３３.１０００、最終濃度：１０ｍＭ
アッセイ希釈バッファー（ＡＤＢ）：５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０.１ｍＭ ＥＧＴＡ、０.１ｍＭ バナジン酸Ｎａ、０.１ｍＭ β−グリセロリン酸、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＤＴＴ、０.１％ ＢＳＡ、ｐＨ７.５
ビーズ洗浄バッファー：２Ｍ ＮａＣｌ＋１％リン酸を含む、１０ｇ／Ｌ ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）。
【０２３６】
実験方法：
４０μＬ容量において、２６μＬのＡＤＢで希釈した精製済組換えヒトＳＹＫ３６０−６３５［０.５ｎＭ］を、４μＬの１０Ｘ濃度の試験化合物（［１０％］ＤＭＳＯ中［通常１００μＭ−０.００３μＭ］）と混合し、この混合物を室温で１０分間インキュベートした。
【０２３７】
ＤＹＥペプチド基質［０又は５μＭ］、ＡＴＰ［２０μＭ］及び３３ＰγＡＴＰ［２μＣｉ／ｒｘｎ］を含む１０μＬの４ｘ基質カクテルの添加によって、キナーゼ反応を開始した。３０℃で１５分間インキュベーションした後、ＰＢＳ中に２００μＬの５ｍＭ ＥＤＴＡ及び２０％ストレプトアビジンコートビーズを含む、９６ウェル０.６５μｍ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＭＡＤＶＮＯＢ膜／プレートに、２５μＬの反応試料を移すことによって、反応を停止させた。
【０２３８】
非結合放射性ヌクレオチドを、真空下、３×２５０μＬの２Ｍ ＮａＣｌ；２×２５０μＬの２Ｍ ＮａＣｌ＋１％リン酸；１×２５０ＬのＨ２Ｏで洗浄した。最後の洗浄後、膜／プレートをアダプタプレートに移し、６０℃で１５分間加熱乾燥させ、５０μＬのシンチレーションカクテルを、各ウェルに添加し、４時間後、放射活性の量をトップカウンターで計数した。
【０２３９】
阻害パーセントは、阻害されていない酵素の比率に基づいて計算した：
阻害％＝１００／（１＋（ＩＣ５０／阻害剤濃度）ｎ）
ＩＣ５０は、ＸＬｆｉｔソフトウェア（ID Business Solu-tion Ltd., Guilford, Surrey, UK）で非線形曲線フィットを用いて計算した。
【０２４０】
ラモスカルシウム流入ＦＬＩＰＲアッセイ
ＲＰＭＩ−１６４０中で、ヒトＢ細胞リンパ腫細胞株ラモスを１０％ウシ胎児血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と培養した。メーカーの指示に従い（Beckton Dickinson Calcium Kit、カタログ番号80500）、細胞をアッセイプレートへ播種し、３０μＬの染料ロードバッファーを添加することにより、カルシウム染料でロードした。次いで、刺激前に、細胞を連続希釈化合物で３０分間処理した。基線蛍光は、約２０秒間で記録され、その後ラモス細胞に対しマウス抗ヒトＩｇＭ（１０μｇ／ｍＬ、クローンＭ２Ｅ６、Antibody Solutions Inc.）で刺激し、各ウェルの最大蛍光計数を記録した。各ウェルに対する基線の倍率変化として定義される、基線計数により分けられた最大計数をＩＣ５０計算に使用した。
【０２４１】
ヒト全血中のＢ細胞ＣＤ６９上方制御アッセイ
ヒト血液を健康なボランティアからヘパリンナトリウムを含むバキュテナー（BD Biosciences,San Joe, CA）中へ収集した。試験化合物をＤＭＳＯ中に懸濁させ、９の半対数連続希釈液を作製した。アッセイ中化合物の濃度は、０.５％であった。１００μＬの全血を化合物と一緒に３０分間予備インキュベートし、次いでヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（５０μｇ／ｍＬ、Southern Biotech）で２０時間刺激した。２０時間のインキュベーションの最後で、試料を蛍光色素コンジュゲート抗体、ＰＥマウス抗ヒトＣＤ２０及びＡＰＣマウス抗ヒトＣＤ６９（BD Biosciences）と一緒に３０分間インキュベートした。次いで、試料をＬｙｓｅ溶液（ＢＤ）で溶解し、２％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＰＢＳで洗浄した。蛍光シグナルをフローサイトメーターＬＳＲII（ＢＤ）で取得し、データをＦｌｏｗ Ｊｏで解析した。活性化（ＣＤ６９ｈｉ）Ｂ細胞リンパ球（ＣＤ２０＋）のパーセントは、基準ガイドラインとして非刺激（負対照）及び刺激（正対照）ウェルを使用して決定した。阻害パーセントを計算し、ＩＣ５０曲線を、シグモイド曲線フィッティングを用いたグラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを使用して構築した。
【０２４２】
データを以下の表IIのＭに示す。
【０２４３】
0006404215.tif 000099
【０２４４】
前述の発明は、明瞭さと理解を目的として、例示及び実施例によっていくらか詳細に記載した。添付の特許請求の範囲内で変更及び修正が実施され得ることが当業者には明らかであろう。したがって、上記の説明は例示的なものであって制限的なものではないことを意図していることが理解される。したがって、本発明の範囲は、上記の説明を参照して決定されるべきではなく、以下に添付の特許請求の範囲並びにそのような特許請求の範囲が付与される等価物の全範囲を参照して決定されるべきである。
【０２４５】
本出願に引用した特許、特許出願及び刊行物の全ては、あたかもそれぞれ個別の特許、特許出願又は刊行物がそのように個別に示されるのと同じ程度に、全ての目的のためにそれらの全体が出典明示により本明細書に援用される。
【配列表】
0006404215000001.app