(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
強迫神経症（ＯＣＤ）およびＯＣＤの関連疾患の治療のための、抗体またはその抗原結合性フラグメントを含む医薬品組成物の製造方法であって、
該抗体またはその抗原結合性フラグメントはアネキシン−１（Ａｎｘ−Ａ１）に結合し、前記抗体が欧州細胞カルチャーコレクション（ＥＣＡＣＣ）に２０１０年６月３日付けで提出され、アクセション  Ｎｏ．１００６０３０１として受理されたハイブリドーマ細胞系により生成される抗体のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含む、製造方法。
【請求項２】
該抗体が配列番号８に示されたアミノ酸配列を有するヒトＡｎｘ−Ａ１タンパク質に対する抗体として産生される、請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
該抗体がモノクローナル抗体である、請求項１または２記載の製造方法。
【請求項４】
該モノクローナル抗体をヒト化する工程を含む、請求項３記載の製造方法。
【請求項５】
該フラグメントはＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはＦｖフラグメントまたはｓｃＦｖ分子である、請求項１から４のいずれか１項記載の製造方法。
【請求項６】
請求項１記載の製造方法であって、前記抗体が、欧州細胞カルチャーコレクション（ＥＣＡＣＣ）に２０１０年６月３日付けで提出され、アクセション  Ｎｏ．１００６０３０１として受理されたハイブリドーマ細胞系により生成される抗体の軽鎖可変領域、またはそのヒト化されたバージョン、および
ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、それぞれは以下のアミノ酸配列を有する製造方法：
ＶＨＣＤＲ１はＧＹＴＦＴＮＹＷＩＧ（配列番号５）、
ＶＨＣＤＲ２はＤＩＹＰＧＧＤＹＴＮＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号６）、
ＶＨＣＤＲ３はＷＧＬＧＹＹＦＤＹ（配列番号７）。
【請求項７】
該抗体がモノクローナル抗体である、請求項６記載の製造方法。
【請求項８】
該モノクローナル抗体をヒト化する工程を含む、請求項７記載の製造方法。
【請求項９】
該抗体またはその抗原結合性フラグメントが配列番号１９に示されたアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む、請求項１から３、および５のいずれか１項記載の製造方法。
【請求項１０】
さらに他の治療的活性成分を加えることを含む、請求項１から９のいずれか１項記載の製造方法。
【請求項１１】
ＯＣＤの関連疾患が、抜毛癖、自傷性皮膚症、トウレット障害（ＴＳ）、アスペルガー症候群、無食欲症、大食症、鬱病、パニック障害、不安発作、双極性障害、沈鬱症、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、社会不安障害、統合失調症、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、および身体醜形障害（ＢＤＤ）から成る群から選択される、請求項１から１０のいずれか１項記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は強迫神経症（obsessive compulsive disorder：ＯＣＤ）および関連疾患の治療における、アネキシン−Ａ１に結合する特異性結合性分子（specific binding molecules）、特に抗体およびそれのフラグメントの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景
強迫性障害（ＯＣＤ）は１−３％の生涯有病率を有する慢性の、そして、再発性の精神医学的苦悩である。精神障害の診断と統計（Statistical Manual of Mental Disorders、４版；  ＤＳＭ  ＩＶ）によると、この疾病の基本的特徴は、反復性強迫、および／または時間がかかる強迫反応（例えば、疑い、チェッキング、洗浄）（すなわち、それらは１日あたり１時間以上かかる）または苦悩または重要な障害を引き起こす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
ＯＣＤのような精神病に関する最も効果的な治療は抗精神病薬および行動性治療である。しかし、患者の約３０％は薬品と行動性療法に低抗性である。さらに、無顆粒球症などの副作用（人の感染症との戦いを助ける白血球の損失）と人の新陳代謝における変化（糖尿病に通じる）は、これらの薬物類の使用を制限する深刻な問題である。したがって、これらの求められていない副作用がない、疾病のための療法が当技術分野で求められている。
【０００４】
発明の要約
本発明者は、以前に、アネキシン−Ａ１（Ａｎｎｅｘｉｎ−１：Ａｎｘ−Ａ１）と呼ばれるタンパク質に結合する抗体がＴ細胞性疾病の治療で役に立つことを発見した。これは、ＷＯ２０１０／０６４０１２として発行されたＰＣＴ出願の主題である。また、発明者は有害な細胞傷害効果が全く無い、Ａｎｘ−Ａ１に結合して、Ｔ細胞活性化の特異的阻害で素晴らしい特性を有するモノクローナル抗体をも製造した。この抗体は、ＷＯ２０１１／１５４７０５として発行されたＰＣＴ出願の主題である。発明者は、今、Ａｎｘ−Ａ１に結合する抗体がＯＣＤと関連疾患の治療で有用であることを予想外に見いだした。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
従って、本発明の第１の態様では、強迫性障害（ＯＣＤ）またはＯＣＤに関連する疾病の治療における使用のための、Ａｎｎｅｘｉｎ−１（Ａｎｘ−Ａ１）に結合する特異性結合性分子を提供する。１つの実施態様では、強迫性障害（ＯＣＤ）またはＯＣＤに関連する疾病の治療における使用のための、図２Ａに示されたアミノ酸配列を有する、ヒトＡｎｘ−Ａ１  蛋白質に対して産生される特異性結合性分子を提供する。
【０００６】
定義
本明細書において使用される時、「特異性結合性分子」は、互いに結合特異性を持っている１組の分子のメンバーである。特異性結合性組のメンバーは、天然由来か、または完全または部分的に人工的に製造することができる。分子対の１つメンバーは、その表面に突出部またはくぼみであることができる領域を有する。これは分子組の他のメンバーの特定の空間的または極性部分と特異的に結合し、したがってそれと補足的であることができる。したがって、組のメンバーは互いに特異的に結合する能力を有している。特異的結合性組のタイプの例は、抗原−抗体、ビオチン−アビジン、ホルモン−ホルモンレセプタ、受容体−配位子、酵素−基質である。一般に、本発明は抗原−抗体タイプの反応に関する。本発明の特異性結合性分子はＡｎｘ−Ａ１へ、他の分子類より大きな親和性で結合する、すなわち、特異的にＡｎｘ−Ａ１に結合する。Ａｎｘ−Ａ１に結合する特異性結合性分子は、アンチＡｎｘ−Ａ１抗体とアプタマー(aptamer)を含んでいる。本発明の特異性結合性分子は典型的には抗体である。
【０００７】
用語「抗体」は本明細書で用いられる場合には免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部位、すなわち、ある抗原と特異的に結合する抗原結合性部位を含む分子を意味し、天然由来か、または完全または部分的に人工的に製造することができる。この用語はまた、抗体結合ドメインであるかまたはそれと相同である結合領域を持っているすべてのポリペプチドまたはタンパク質を包含する。天然源からこれらを得るか、または一部または完全に人工的にそれらを製造できる。抗体は、典型的には２つの同じ重鎖と、重鎖よりも短い２つの同じ軽鎖を含むポリペプチドである。哺乳類には、２つのタイプの軽鎖である、ラムダ（λ）およびカッパ（κ）と呼ばれる鎖がある。重鎖と軽鎖のそれぞれは可変領域と不変領域で構成される。重鎖可変領域はＶＨ領域と呼ばれ、軽鎖可変領域はＶＬ領域と呼ばれる。また、カッパ軽鎖に関しては、ＶＬ領域はＶＫ領域とも呼ばれる。重鎖と軽鎖のそれぞれの可変領域は３つの相補性決定領域（ＣＤＲｓ）、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。これらはそれぞれＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３と命名される。抗体の例としては、免疫グロブリンアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＡ）とそれらのアイソタイプサブクラス；Fab, F(ab')2, Fv, scFv, dAb, Fdのような、抗原結合領域を含むフラグメント；および二特異性抗体（diabody)があげられる。抗体は、ポリクローナル、またはモノクローナルであることができる。モノクロナール抗体は、本明細書において”ｍＡｂ”と呼ぶことがある。
【０００８】
発明の詳細な説明
アネキシンは、カルシウム−、およびりん脂質−結合細胞性蛋白質の群であり、また、リポコルチンとして知られている。アネキシンファミリーには、アネキシン  Ａｌ、アネキシン  Ａ２、およびアネキシン  Ａ５を含む１３のメンバーがある。また、アネキシン−Ａ１はアネキシン−１としても知られ、本明細書では「Ａｎｘ−Ａ１」とも呼ばれる。ヒト  アネキシン−１（Ａｎｘ−Ａ１）は、３７ｋＤａの蛋白質であり、元々、グルココルチコイド類の作用のメディエータとして記述された。ここ数年間にわたって、証拠は、Ａｎｘ−Ａ１が順応性免疫系、特にＴ細胞におけるＴ細胞レセプタ（ＴＣＲ）シグナリングの強度を調節することにより恒常性の役割を果たすことを示している。Ａｎｘ−Ａ１は先天性免疫反応の細胞における炎症の内因のダウンレギュレータとして生体内で機能する。図１Ａは、Ａｎｘ−Ａ１の三次元構造を示しているリボン・ダイヤグラムである。
【０００９】
Ａｎｘ−Ａ１をコード化する８つのヒトヌクレオチド配列がある。もちろん、４つだけが翻訳されるので、ＡＮＸＡ１−００２、ＡＮＸＡ１−００３、ＡＮＸＡ１−００４およびＡＮＸＡ１−００６と指定されたＡｎｘ−Ａ１の４つのアイソフォームがある。これらの配列は、Ｅｎｓｅｍｂｌウェブサイト（www.ensembl.org）から利用可能であり、ＥＮＳＰ０００００２５７４９７（ＡＮＸＡ１−００２）、ＥＮＳＰ０００００３６６１０９（ＡＮＸＡ１−００３）、ＥＮＳＰ０００００４１２４８９（ＡＮＸＡ１−００４）およびＥＮＳＰ０００００４１４０１３（ＡＮＸＡ１−００６）と指定される。ヒトアネキシン−１（Ａｎｘ−Ａ１）の１つのアイソフォームの（ＡＮＸＡ１−００３）のアミノ酸とヌクレオチド配列は図２Ａに示される。ＡＮＸＡ１−００２、ＡＮＸＡ１−００４、およびＡＮＸＡ１−００６のアイソフォームのアミノ酸配列は図２Ｂ、２Ｃ、および２Ｄにそれぞれ示されている。図２から見られるように、アイソフォームＡＮＸＡ１−００２、ＡＮＸＡ１−００４、およびＡＮＸＡ１−００６はＡＮＸＡ１−００３のショートスプライス変形または少ない数のアミノ酸変化があるＡＮＸＡ１−００３の変形のどちらかである。
【００１０】
多くの研究が、Ａｃ．２−２６と名付けられたＡｎｘ−Ａ１のＮ末端基ペプチドが全蛋白質のバイオ活性代用薬として作用することを示した（例えば、 Lim et ol, Proc Natl Acad Sci USA 95, 14535-9, 1998を参照されたい）。
【００１１】
図１Ｂはアネキシン反復とこのバイオ活性配列の位置の略図である。ペプチドＡｃ．２−２６は図２に示されたＡｎｘ−Ａ１の全長アミノ酸配列のアミノ酸残基２−２６の配列を有するアセチル化ペプチドである。ペプチドＡｃ．２−２６の配列は、図１Ｃに示されていて、以下の通りである：
ＣＨ３ＣＯ−ＡＭＶＳＥＦＬＫＱＡＷＦＩＥＮＥＥＱＥＹＶＱＴＶＫ
【００１２】
Ａｎｘ−Ａ１とそのＮ末端基から誘導された生理活性ペプチドは、ホルミルペプチド受容体（ＦＰＲ）ファミリーのメンバーを通してそれらの生体学的効果を仲介する。全長タンパク質Ａｎｘ−Ａ１は、ホルミルペプチド受容体  ライク−１（formyl peptide receptor like-1：ＦＰＲＬ−１）、従来はペプチド受容体２（ＦＰＲ−２／ＡＬＸ）として知られていた、のファミリーの１つのメンバーの直接結合と活性化により、好中球の血管外遊出と先天性免疫への逆−調節性作用（counterregulatory actions）を生む。本発明者は以前に、ｈｒＡｎｘ−Ａ１の存在下でのＴ細胞の刺激が、ＦＰＲＬ−１／ＦＰＲ−２／ＡＬＸの刺激を介してＴ細胞活性化を増加させることを見いだした(D’Acquisto et al., Blood 109: 1095-1102, 2007)。
【００１３】
本発明で使用される特異性結合性分子はアネキシン−１（Ａｎｘ−Ａ１）に結合する。特異性結合性分子が結合するＡｎｘ−Ａ１は、図２Ａに示されたポリペプチド配列を持っているヒトＡｎｘ−Ａ１であるか、または図２Ｂまたは図２Ｃに示されたポリペプチド配列を持っているヒト  Ａｎｘ−Ａ１のアイソフォームなどの変異体、または図１Ｃに示された配列を持っているポリペプチドなどのフラグメント、または図２Ｄに示されたポリペプチド配列を有するヒト  Ａｎｘ−Ａ１のアイソフオームである。特異性結合性分子が結合するＡｎｘ−Ａ１は図２Ａに示されたヌクレオチド配列によって典型的にコード化される。特異性結合性分子は典型的に抗体である。
【００１４】
アンチ−Ａｎｘ−Ａ１  抗体は、例えば、図２Ａ、２Ｂ、２Ｃまたは２Ｄに示されたポリペプチド配列、典型的には図２Ａのポリペプチド配列を有するヒト  Ａｎｘ−Ａ１に対して産生された。別法として、アンチ−Ａｎｘ−Ａ１  抗体は図２のアミノ酸配列を有するヒト  Ａｎｘ−Ａ１の特定のエピトープまたは複数のエピトープに向けられる。例えば、アンチ−Ａｎｘ−Ａ１  抗体は、例えば、Ａｎｘ−Ａ１のＮ末端基フラグメント、たとえば図２Ａに示されたアミノ酸配列のＮ末端からの少なくとも１８８、１００、５０または２５のアミノ酸残基のＮ末端基フラグメントに対して向けられる。あるいはまた、本発明における使用のためのアンチ−Ａｎｘ−Ａ１  抗体は、図１Ｃに示された配列を持っている、Ａｃ２−２６と呼ばれるＡｎｘ−Ａ１のＮ末端基フラグメントに対して、または、それの少なくとも６つのアミノ酸のフラグメントに対して産生された抗体である。したがって、Ａｎｘ−Ａ１に結合する特異性結合性分子は、アンチ−Ａｎｘ−Ａ１  抗体を含み、これは図１Ｃに示された配列を有するＡｎｘ−Ａ１フラグメントＡｃ２−２６、または少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３またはそれの少なくとも２４のアミノ酸のフラグメントに対する抗体である。この実施態様では、アンチ−Ａｎｘ−Ａ１抗体は図１Ｃに示された配列のフラグメントに対して産生される。これは抗原性であり、投与するとＯＣＤと関連疾患の治療に使用する抗体作成を刺激することができる。
【００１５】
第１の態様では、本発明は強迫性障害（ＯＣＤ）またはＯＣＤに関連する疾病の治療における使用のためのＡｎｎｅｘｉｎ−１（Ａｎｘ−Ａ１）に結合する特異性結合性分子を提供する。１つの実施態様では、強迫性障害（ＯＣＤ）またはＯＣＤに関連する疾病の治療における使用のための、図２Ａに示されたアミノ酸配列を有するヒト  Ａｎｘ−Ａ１  蛋白質に対して産生される特異性結合性分子を提供する。本発明の態様は、本発明の第一の態様に関連して定義された特異性結合性分子の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３、またはそれぞれのＣＤＲｓと少なくとも７０％同じアミノ酸配列を含む特異性結合性分子の使用に及ぶ。特異性結合性分子は典型的には抗体である。
【００１６】
１つの実施態様では、特異性結合性分子は相補性決定領域（ＣＤＲｓ）ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３を含み、それぞれは以下のアミノ酸配列を含む。
ＶＬＣＤＲ１はＫＡＳＥＮＶＶＴＹＶＳ、
ＶＬＣＤＲ２はＧＡＳＮＲＹＴ、
ＶＬＣＤＲ３はＧＱＧＹＳＹＰＹＴ、
ＶＨＣＤＲ１はＧＹＴＦＴＮＹＷＩＧ、
ＶＨＣＤＲ２はＤＩＹＰＧＧＤＹＴＮＹＮＥＫＦＫＧ、
ＶＨＣＤＲ３はＷＧＬＧＹＹＦＤＹ、
または、少なくとも７０％が同じアミノ酸配列。
【００１７】
ＣＤＲｓは、保存配列定義部（Kabat et al in "Sequences of Proteins of Immunological Interest", Nat'l. Inst. Health, Bethesda, MD (1987)）と構造定義部（ChothiasとLesk J.Mol Biol.196:901-17(1987))の組み合わせにより指定される。これらの定義はカーター他でも記載される（Proc Nat’Acad Sci USA.89:4285-9 (1992)。
【００１８】
また、本発明は明細書に記載されるタンパク質、ポリペプチド、およびペプチド配列の変異体の使用も含む。本明細書において使用される時、「変異体」という用語は同様のアミノ酸配列を有し、および／または同じ機能を有するタンパク質、ポリペプチド、およびペプチドをいう。例えば、「変異体」という用語は１以上のアミノ酸の付加、欠失、置換または同様のものを含むタンパク質、ポリペプチドおよびペプチドを包含する。本発明の変異体の例は上で定義されたタンパク質、たとえば融合たんぱく質であり、先に定義されたペプチドを含み、１種以上のアミノ酸類の他の１種以上のアミノ酸類での置換を有することができる。当業者は、アミノ酸変異体が同様の特性を有することを認識している。１種以上のそのようなアミノ酸類物質は、その物質の希望の活性を取り除かずに、他の１種以上のそのようなアミノ酸類によってしばしば置換されることができる。
【００１９】
したがって、しばしば互いにアミノ酸類のグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンは置換されることができる（脂肪族側鎖を有するアミノ酸類）。これらの可能な置換では、グリシンとアラニンが互いに置き換えをすることが好ましく（それらは比較的短い側鎖を有するので）、バリン、ロイシン、およびイソロイシンが互いに置き換えをすることが好ましい（疎水性であるより大きい脂肪族側鎖を有するので）。互いにしばしば置換されることができる他のアミノ酸類としては：フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン（芳香族側鎖を有するアミノ酸）；リシン、アルギニン及びヒスチジン（塩基性の側鎖を有するアミノ酸）；アスパラギン酸およびグルタミン酸（酸性の側鎖を有するアミノ酸）；アスパラギンおよびグルタミン（アミド側鎖を有するアミノ酸）；システインとメチオニン（硫黄含有側鎖を有するアミノ酸）が挙げられる。
【００２０】
この種の置換はしばしば「保守的」または「準保守的な」アミノ酸置換と呼ばれる。
【００２１】
したがって、本発明は図２Ａに示されたポリペプチド配列を持っているＡｎｎｅｘｉｎ−１（Ａｎｘ−Ａ１）、または図２Ｂまたは図２Ｃに示されたポリペプチド配列を有する変異体、または図１Ｃまたは図２Ｄに示されたポリペプチド配列を有するそれらのフラグメントであるが、それぞれの配列のどれかに１以上の保存的置換を有するものに結合する特異性結合性分子の使用を含む。
【００２２】
本発明は上記のアミノ酸配列を有するＣＤＲｓを含み、ＣＤＲｓ中に１以上の保守的な置換基を含むもの、たとえば上記のものと少なくとも７０％同じであるＣＦＲｓのアミノ酸配列を含む特異性結合性分子の使用に及ぶ。例えば、それぞれのＣＤＲが上記のＣＤＲｓのアミノ酸配列と比較して、１、２、３、４または５の保守的置換基（ＣＤＲに依存する）を持つことができる。例えば、上記のＶＬＣＤＲ１のアミノ酸配列内に１、２または３の保守的置換基が存在することができ、上記のＶＬＣＤＲ２のアミノ酸配列内に１または２の保守的置換基が存在することができ、上記のＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列内に１または２の保守的置換基が存在することができ、上記のＶＨＣＤＲ１のアミノ酸配列内に１、２または３の保守的置換基が存在することができ、上記のＶＨＣＤＲ２のアミノ酸配列内に１、２、３、４または５の保守的置換基が存在することができ、上記のＶＨＣＤＲ３のアミノ酸配列内に１、２または３の保守的置換基が存在することができるが、配列は上記のＣＤＲ配列と少なくとも７０％の同一性を保有するだろう。
【００２３】
３文字と１文字コードを使用して、以下の通りアミノ酸類について言及できる：グリシン（ＧまたはＧｌｙ）、アラニン（ＡまたはＡｌａ）、バリン（ＶまたはＶａｌ）、ロイシン（ＬまたはＬｅｕ）、イソロイシン（ＩまたはＩｌｅ）、プロリン（ＰまたはＰｒｏ）、フェニルアラニン（ＦまたはＰｈｅ）、チロシン（ＹまたはＴｙｒ）、トリプトファン（ＷまたはＴｒｐ）、リシン（ＫまたはＬｙｓ）、アルギニン（ＲまたはＡｒｇ）、ヒスチジン（ＨまたはＨｉｓ）、アスパラギン酸（ＤまたはＡｓｐ）、グルタミン酸（ＥまたはＧｌｕ）、アスパラギン（ＮまたはＡｓｎ）、グルタミン（ＱまたはＧｌｎ）、システイン（ＣまたはＣｙｓ）、メチオニン（ＭまたはＭｅｔ）、セリン（ＳまたはＳｅｒ）、およびトレオニン（ＴまたはＴｈｒ）。残基がアスパラギン酸またはアスパラギンの場合、シンボルはＡｓｘまたはＢが使用できる。残基がグルタミン酸またはグルタミンの場合、シンボルはＧｌｘまたはＺが使用できる。文脈がそうでないことを示さない限り、アスパラギン酸はアスパラギン酸塩を含み、グルタミン酸はグルタミン酸塩を含む。
【００２４】
アミノ酸欠失または挿入も、上記の融合たんぱく質のようなタンパク質のアミノ酸配列に対して起こることができる。したがって、たとえばポリペプチドの活性に実質的効果を持っていないか、または少なくともそのような活性を取り除かないアミノ酸類を欠失することができる。そのような欠失は利益がある。なぜなら、ポリペプチドの全長と分子量を、活性を保有しつつ、減少することができるからである。これは特定の目的のために必要であるポリペプチドの量の低減を可能にし、例えば、投与量レベルを減少できる。
【００２５】
また、上記の融合たんぱく質の配列に対するアミノ酸挿入も行うことができる。本発明の物質の特性を変更するためにこれを行うことができる（例えば、識別、精製または発現を補助するために）。
【００２６】
上に与えられた配列に対するアミノ酸変化は、例えば、部位特異的突然変異誘発または固体状態合成のような、任意の適当なテクニックを使用して行われることができる。
【００２７】
本発明の範囲内で、アミノ酸の置換または挿入を、天然由来または非天然由来のアミノ酸類を使用することで行うことができることが理解されるべきである。天然の、または合成のアミノ酸類が使用されるか否かに関わりなく、Ｌ−アミノ酸類だけが存在しているのが好ましい。
【００２８】
当技術分野で知られている「同一性」は、二個以上のポリペプチド配列または二以上のポリヌクレオチド配列の間の相関であり、配列、典型的にはその全長にわたる配列を比較することによって決定する。また、当技術分野で同一性は、そのような配列のストリングの間の同一性により決定される、ポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列の間の配列の関連性の度合いも意味する。２つのポリペプチド配列または２つのポリヌクレオチド配列の間の同一性を測定する多くの方法が存在しているが、同一性を決定するのに一般的に使われている方法は、コンピュータプログラムによるものである。
【００２９】
一般に、配列アラインメントへの計算論的アプローチは２つのカテゴリに分けられる：
全体的な配列（global alignments）と局所的な配列（local alignments）。全体的な配列では、あらゆる配列におけるあらゆる残基を並べることが試みられ、その結果、すべての対象の配列の全長にわたり配列を決定する。対象セットにおける配列が類似していてほとんど等しいサイズであるときに、全体的な配列は最も役に立つ。一般的な全体的なアラインメント技術は、ニードルマン−ワンシュ（Needleman-Wunsch）アルゴリズムであり、これは動的プログラミングに基づいている。対照的に、局所的な配列では、全体的に見て大きく異なっている長い配列の中で類似する領域を同定する。局所的な配列はしばしば望ましいが、領域の類似性を同定する追加のチャレンジのため計算するのは、より難しい。局所的な配列は、大きい配列の中の類似した領域または類似するモチーフを含むことが疑われる、類似していない配列において有用である。スミス−ウォーターマンアルゴリズムは一般的な局所的な配列方法であり、動的プログラミングに基づいている。十分に類似する配列では、局所的配列と全体的な配列の間には、相違点が全くない。ハイブリッド法（セミグローバル法または”グローカル法”（グローバル−ローカルの略称）として知られている方法は、１つまたは他の配列の始めと終わりを含む可能な限り良い配列を見つけることを試みる。１つの配列の川下の部分がもう片方の配列の上流の部分に重なるとき、これは特に役に立つ。
【００３０】
２つの配列の間の同一性を決定する好ましいコンピュータプログラムとしては、BLASTp (タンパク質用), BLASTn および BLASTx (ヌクレオチド用)、ギャップド （gapped） BLAST および PSI-BLAST (タンパク質用, Altschul et al., Nucleic Acids Research 25 (17): 3389−402, 1997)を始めとするBLAST (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215, 403 (1990), http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi  で利用可能)、FASTA ( http://www.ebi.ac.uk/Tools/sss/  で利用可能）、ClustalW/ClustalX (Thompson et al., Nucleic Acids Research 22 (22): 4673-4680 (1994), 最新バージョンは 2.1) 、および the GCG program package (Devereux et al., Nucleic Acids Research, 12, 387 (1984)）が挙げられる。
【００３１】
ヌクレオチド配列とアミノ酸配列の両方を比較するのにＣＬＵＳＴＡＬプログラムなどのプログラムを使用することもできる。適宜にいずれかの配列にスペースを挿入することによって、このプログラムはアミノ酸配列を比較して、最適アラインメントを見いだす。最適なアラインメントのためにアミノ酸同一性または類似性について計算（同一性とアミノ酸タイプの保守性）することが可能である。ＢＬＡＳＴｘのようなプログラムは、類似配列の最も長い広がりを並べて、適合性の値を割り当てるだろう。その結果、それぞれが異なったスコアを有するいくつかの領域の類似が見いだされる領域について、比較することが可能である。同一性分析の両方のタイプが本発明で想定される。
【００３２】
２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性パーセントは、最適の比較目的のために配列を並べ（例えば、配列との最も良い並びのために第１の配列にギャップを導入することができる）、対応する位置でアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較することによって決定する。「最も良い並び」は、最も高いパーセントの同一性をもたらす２つの配列の並びである。同一性のパーセントは比べられた配列中の同じアミノ酸残基またはヌクレオチドの数により決定する（すなわち、同一性％＝（同じ位置／位置の総数）×１００の値と等しい）。
【００３３】
２つの配列の間のパーセントの同一性の決定は、当業者に公知の数学的アルゴリズムを使用することで実行される。２つの配列を比較するための数学的アルゴリズムの例はカーリンとアルツチュルのアルゴリズム（Karlin and Altschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268）、およびその改良されたもの（Karlin and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877）である。Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410の、ＢＬＡＳＴｎとＢＬＡＳＴｘプログラムは、そのようなアルゴリズムを取り入れた。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索はＢＬＡＳＴｎプログラムで、スコア＝１００、語長＝１２で実行されて、本発明の核酸分子と相同のヌクレオチド配列を得る。ＢＬＡＳＴタンパク質検索はＢＬＡＳＴｐプログラム、スコア＝５０、語長＝３で実行されて、本発明のタンパク質分子と相同のアミノ酸配列を得る。比較目的のためのギャップを有する配列を得るために、Gapped BLASTがAltschuらに記載されているようにして利用される（Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402）。別法として、ＰＳＩ−Ｂｌａｓｔが、分子間の距離関係を検出する繰り返された検索を実行するのに使用される（同上）。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ−Ｂｌａｓｔプログラムを利用するとき、それぞれのプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴｘとＢＬＡＳＴｎ）のデフォルトパラメータ類が使用される。http://www.ncbi.nlm.nih.gov  を参照されたい。配列の比較に利用された数学的アルゴリズムの別の例はマイアーズとミラー（ＣＡＢＩＯＳ（１９８９））のアルゴリズムである。ＣＧＣ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）はそのようなアルゴリズムを取り入れている。当技術分野で知られている配列分析のための他のアルゴリズムとしては、トレリスとロボッティに記載されているＡＤＶＡＮＣＥとＡＤＡＭ（Torellis and Robotti (1994) Comput. Appl. Biosci., 10 :3-5）、およびＦＡＳＴＡ（Pearson and Lipman (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. 85:2444-8）があげられる。ＦＡＳＴＡでは、ｋｔｕｐは、検索の感受性と速度を設定する制御オプションである。
【００３４】
本明細書に定義されたように、本明細書に記載された特定のタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドの変異体は、オリジナルのタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドの機能を保有するべきである。またはオリジナルのタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドの機能を保有する代わりに、またはそれに加えて、タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドの変異体は典型的に少なくとも７０％の配列同一性を本明細書に記載されたタンパク質、ポリペプチドまたはペプチドと共有する。
【００３５】
そのため、本発明は、ＨＧＭＰ（Human Genome Mapping Project）によって提供されたＢＬＡＳＴコンピュータプログラム（Atschul他、J.MoL Biol.215,403-410(1990)）のデフォルトパラメータ類を使用して、アミノ酸値で、図２Ａに示されたポリペプチド配列、または図２Ｂまたは２Ｃに記載されたポリペプチド配列を有するそれらの変異体、または図１Ｃまたは図２Ｄに示されたポリペプチド配列を有するそれらのフラグメントと少なくとも７０％の同一性がある配列と結合する特異性結合性分子の使用に及ぶ。より典型的には、少なくとも７５％、８０％、８２％、８３％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％の、アミノ酸値で、図２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、２Ｄまたは１Ｃに示された配列と同一性がある配列に特異性結合分子は結合する。
【００３６】
典型的に、本発明で使用される特異性結合性分子のＣＤＲｓのアミノ酸配列は、ＨＧＭＰ（Human Genome Mapping Project）によって提供されたＢＬＡＳＴコンピュータプログラム（Atschul他、J.MoL Biol.215,403-410(1990)）のデフォルトパラメータ類を使用して、アミノ酸値で、上記で説明したＣＤＲｓのアミノ酸配列と少なくとも７０％の同一性がある。より典型的には、ＣＤＲ配列は、少なくとも７５％、８０％、８２％、８３％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％の、アミノ酸値で、上記で説明したアミノ酸配列と同一性がある。典型的には、本発明で使用される特異性結合性分子のＣＤＲ配列のそれぞれは、アミノ酸値で、上記で説明したＣＤＲｓのアミノ酸配列とこのレベルの同一性を有する。あるいはまた、本発明で使用される特異性結合性分子のＣＤＲの１、２、３  ４または５は、上記で説明したＣＤＲｓのアミノ酸配列とこのレベルの同一性を有する。
【００３７】
本発明で使用される特異性結合性分子は典型的に抗体であり、より典型的にはモノクローナル抗体である。１つの実施態様では、本発明で使用されるモノクローナル抗体はヒト化される。
【００３８】
本発明で使用されるモノクローナル抗体は、抗体のアミノ酸配列を変更することによって、ヒト化されることができる。本発明の特異性結合性分子の免疫原性を減少させる方法は、例えば、部位特異的突然変異誘発または他の一般的に使用される分子生物学的手法により、適当な抗体フレームワーク足場または変化する表面残基リモデリングにＣＤＲを移植することを含む（Roguska他、Protein Eng9 895-904(1996))。
【００３９】
他の利用可能な方法としては、分子の中の潜在的Ｔ細胞エピトープの識別、および例えば部位特異的突然変異誘発（反−免疫(de-immunisation)）によるこれらの引き続く取り出しを含む。特異性結合性分子のヒューマニゼーションは、分子が治療薬として使用される時に望ましいことがある。ＣＤＲ領域または周囲のフレームワーク配列のヒューマニゼーションが所望により行われることができる。
【００４０】
オリジナルの抗体の特異性を保持したまま、他の抗体またはキメラ分子を製造するために、モノクローナルと他の抗体を採取して、ＤＮＡ組換え技術を使用することが可能である。そのようなテクニックは、抗体の免疫グロブリン可変領域、または相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を、異なった免疫グロブリンの不変部、または不変部フレームワーク領域にコード化するＤＮＡを挿入することを含むことができる。例えばＥＰ−Ａ−１８４１８７、ＧＢ２１８８６３８ＡまたはＥＰ−Ａ−２３９４００を参照されたい。抗体を製造するハイブリドーマまたは他の細胞が、製造された抗体の結合特異性を変更するかまたはしない遺伝子変異または他の変化に供されることができる。
【００４１】
抗体は多くの方法で変成されることができる。「抗体」という用語は必要な特異性の結合領域を有するすべての特異結合メンバーまたは物質をカバーするものとして理解されるべきである。すなわち、この用語は天然物か、完全に又は一部合成物であるかに関わりなく、すべての免疫グロブリン結合領域を含む全てのポリペプチドをはじめとした、抗体のフラグメント、誘導体、機能的な同等物、および抗体の相同体、ヒト化された抗体をカバーする。免疫グロブリン結合ドメインを含むキメラ分子、または同等物、他のポリペプチドとの融合体も含まれる。キメラ抗体のクローニングと発現はＥＰ−Ａ−０１２０６９４およびＥＰ−Ａ−０１２５０２３に記載されている。ヒト化された抗体（humanised antibody）は非人間の、例えばネズミの抗体の可変部とヒト抗体の不変部を有する変成抗体であることができる。ヒト化された抗体を作るための方法は例えば、米国特許第５２２５５３９号に記載されている。
【００４２】
本発明で使用される特異性結合性分子は抗体のフラグメントであることができる。全体の抗体のフラグメントが抗原を結合する機能を実行できることが示されている。結合フラグメントの例は（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインから成るＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ＶＨ、およびＣＨ１ドメインから成るＦｄフラグメント；（ｉｉｉ）単一抗体のＶＬおよびＶＨドメインから成るＦｖフラグメント；（ｉｖ）ＶＨドメインから成るｄＡｂフラグメント（Ward, E.S. et al., Nature 341:544-546 (1989)）；（ｖ）分離ＣＤＲ領域；（ｖｉ）２つの結合したＦａｂフラグメントを含む２価のフラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｖｉｉ）；単一鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）であって、ＶＨドメインとＶＬドメインがペプチドリンカーによって結合され、２つのドメインが会合し抗原結合部位を形成することを許容するもの(Bird et al. , Science 242:423-426 (1988); Huston et al. , PNAS USA 85:5879-5883 (1988)); （ｖｉｉｉ）二重特異性（bispecific）単一鎖Ｆｖ二量体（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５）および（ｉｘ）遺伝子融合により構成された「ジアボディズ（diabodies）」、多価性または「マルチスペシフィックフラグメント（WO94/13804; P. Hollinger et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993))である。典型的には、フラグメントはＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはＦｖフラグメントまたはｓｃＦｖ分子である。
【００４３】
ジアボディズはポリペプチドのマルチマー（multimer）である。それぞれのポリペプチドは、免疫グロブリン軽鎖の結合領域を含む第１のドメインと、免疫グロブリン重鎖の結合領域を含む第２のドメインとを含み、２つのドメインは例えば、ペプチドリンカーにより結合されるが、互いに会合して抗原結合部位を形成することはできない。抗原結合部位はマルチマー内の１つのポリペプチドの第１のドメインと、マルチマー内の他のポリペプチドの第２のドメインとの会合により形成される（ＷＯ９４／１３８０４）。
【００４４】
二重特異抗体が使用される場合、それらは従来の二重特異抗体であることができ、これらは種々の方法(Hollinger & Winter, Current Opinion Biotechnol. 4:446-449 (1993))で製造することができ、たとえば化学的に製造することができ、またはハイブリッドハイブリドーマから製造することができ、または上記の二重特異抗体フラグメントの任意のものであることができる。抗体全体ではなくむしろｓｃＦｖ二量体またはジアボディを使用することが望ましいかもしれない。ジアボディとｓｃＦｖはＦｃ領域なしで構成され、可変ドメインだけを使用して、潜在的に抗イディオタイプ反応の効果を減少させる。他の形式の二重特異抗体はTraunecker et al. , EMBO Journal 10:3655-3659 (1991)で説明された単一鎖「Ｊａｎｕｓｉｎｓ」を含んでいる。
【００４５】
二重特異性の全体の抗体と対照的に、それらが容易に構成されて大腸菌内で発現されるので、二重特異性のジアボディズもまた有用である場合がある。適切な結合特異性のジアボディズ（および抗体フラグメントなどの他の多くのポリペプチド）は、ライブラリからファージディスプレイ（ＷＯ９４／１３８０４）を使用することで容易に選択される。ジアボディズの１つのアームが一定に保たれるなら、例えば抗原Ｘに対する特異的な指向を有するなら、ライブラリはもう片方のアームが変化できるとしてライブラリを作ることができ、適切な特異性の抗体が選択される。
【００４６】
先に示された相補性決定領域（ＣＤＲｓ）の、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３は、本発明者によって製造されたモノクローナル抗体ＶＪ−４Ｂ６のものである。
モノクローナル抗体  ＶＪ−４Ｂ６は国際特許出願Ｎｏ．ＰＣＴ／ＧＢ２０１１／０００８７６で説明され、特許請求されている。
上記出願はＷＯ２０１１／１５４７０５として発行され、その全体は本明細書に参考として援用される。
【００４７】
モノクローナル抗体ＶＪ−４Ｂ６は本明細書の図３Ａと実施例１で記載された方法で製造された。簡潔には、図２Ａに示された配列を持っているヒト  Ａｎｘ−Ａ１の全長をコード化する相補ＤＮＡが、発現ベクター内にクローンされ、細胞表層発現が確認された。そして、金粒子に吸着されたベクタＤＮＡが、いくつかのネズミの皮内に投与された。マウスＴ細胞は免疫ベクターを発生し、相補ＤＮＡコード蛋白質を発現させ、免疫応答を刺激した。そして、マウスリンパ球はネズミのミエローマ細胞と融合し、ハイブリドーマを製造した。次に、特異性試験が行われ、ハイブリドーマがクローンされ、モノクローナル抗体が製造された。
【００４８】
モノクローナル抗体  ＶＪ−４Ｂ６はハイブリドーマ細胞系ＶＪ−４Ｂ６−Ｅ５−Ｂ１０−Ｄ４によって分泌され、ＶＪ−４Ｂ６−Ｅ５−Ｂ１０−Ｄ４は２０１０年６月３日に欧州細胞カルチャーコレクション（ＥＣＡＣＣ）、ヘルスプロテクションエージンシー、センター  フォー  エマージェンシー  プリペアードネス  アンド  レスポンス、ポートン  ダウン、サリスバリィ  ＳＰ４  ０ＪＧ、英国に、プタペスト条約に基づき寄託され、２０１０年６月９日付けでアクセション  Ｎｏ．１００６０３０１として受理された。
【００４９】
寄託は、クイーンメリーアンドウェストフィールドカレッジ、センター  フォア  バイオケミカル  ファーマコロジー、チャーターハウス  スクエア、ロンドン、ＥＣ１Ｍ  ６ＢＱのフルビオ  ダクイスト（Ｆｕｌｖｉｏ  Ｄ’Ａｃｑｕｉｓｔｏ）により行われた。寄託者は、出願人が出願中に寄託物について言及するのを認可され、欧州特許条約の規則  ３１（ｌ）（ｄ）により公衆にとって利用可能にされる寄託物に、予約不要の取り消せない同意を与えた。
【００５０】
ハイブリドーマ細胞系ＶＪ−４Ｂ６−Ｅ５−Ｂ１０−Ｄ４は特異的にアネキシン−Ａ１に結合するモノクローナル抗体ＶＪ−４Ｂ６を生成する。モノクローナル抗体ＶＪ−４Ｂ６はＩｇＧ２ｂアイソタイプのものである。
【００５１】
抗体ＶＪ−４Ｂ６は図２Ａに示されるアミノ酸配列を有する全長のヒトＡｎｘ−Ａ１  プロテインに対して産生される。
【００５２】
抗体ＶＪ−４Ｂ６の軽鎖可変領域のＤＮＡとアミノ酸配列は図４に示される。図５は、ＣＤＲｓでアノテートされたＶＪ−４Ｂ６（VJ-4B6 with the CDRs annotated）の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。また、図５はＶＪ−４Ｂ６の軽鎖不変部の最初のいくつかのアミノ酸も示す。
【００５３】
抗体ＶＪ−４Ｂ６の重鎖可変領域のＤＮＡとアミノ酸配列は図６に示される。図７は、ＣＤＲｓでアノテートされたＶＪ−４Ｂ６の重鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。また、図７はＶＪ−４Ｂ６の重鎖不変部の最初のいくつかのアミノ酸も示す。
【００５４】
抗体ＶＪ−４Ｂ６のＣＤＲｓは以下の通りである：
ＶＬＣＤＲ１はＫＡＳＥＮＶＶＴＹＶＳ、
ＶＬＣＤＲ２はＧＡＳＮＲＹＴ、
ＶＬＣＤＲ３はＧＱＧＹＳＹＰＹＴ、
ＶＨＣＤＲ１はＧＹＴＦＴＮＹＷＩＧ、
ＶＨＣＤＲ２はＤＩＹＰＧＧＤＹＴＮＹＮＥＫＦＫＧ、
ＶＨＣＤＲ３はＷＧＬＧＹＹＦＤＹ。
【００５５】
本発明は抗体ＶＪ−４Ｂ６のＣＤＲｓを有する特異性結合性分子の使用に及び、また抗体ＶＪ−４Ｂ６のＣＤＲｓの一つ以上と少なくとも７０％、望ましくは少なくとも７５％、８０％、８２％、８３％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％の同一性を有するＣＤＲｓを有する特異性結合性分子の使用にも及ぶ。
【００５６】
また、本発明は抗体ＶＪ−４Ｂ６の軽鎖可変領域、重鎖可変領域または軽鎖可変領域と重鎖可変領域の両方を有する特異性結合性分子の使用に及ぶ。また、本発明は軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域の変異体およびフラグメントに及ぶ。
【００５７】
したがって、具体的な実施態様では、本発明の第１の態様による使用のための、図４、および／または図６に示されたアミノ酸配列を有するかまたはそれの少なくとも７５％、８０％、８２％、８３％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドを含む特異性結合性分子を提供する。
【００５８】
また、本発明のこの実施態様は、図４に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、および／または図６に示されているアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体フラグメント、また、そのようなフラグメントと少なくとも７５％、８０％、８２％、８３％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む抗体フラグメントの使用に及ぶ。例えば、この実施態様は、図４、および／または図６に示されたアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域および／または重鎖可変領域を含むか、またはそれと少なくとも７５％、８０％、８２％、８３％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％の同一性を持っているアミノ酸配列を含むＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、またはＦｖフラグメントおよびｓｃＦｖ分子の使用に及ぶ。
【００５９】
具体的実施態様では、本発明は図４、および／または図６に示された配列を有するポリヌクレオチド、またはそれと少なくとも７５％、８０％、８２％、８３％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％の同一性を持っているポリヌクレオチド配列によりコードされた、本発明の第１の態様による使用のための特異性結合性分子を提供する。また、本発明は図５、および／または図７に示されたアミノ酸配列、またはそれと少なくとも７５％、８０％、８２％、８３％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または少なくとも９９％の同一性を持っているアミノ酸配列を持っているポリペプチドを含む発明の第１の態様による特異性結合性分子の使用に及ぶ。
【００６０】
本発明の具体的な実施態様では、２０１０年６月３日にアクセッション番号１００６０３０１として欧州細胞カルチャーコレクション（ＥＣＡＣＣ）に寄託されたハイブリドーマ細胞系によって生成される、本発明の第１の態様の使用のための特異性結合性分子を提供する。
【００６１】
第２の態様では、本発明は強迫性障害（ＯＣＤ）またはＯＣＤに関連する疾病の治療における使用のための、本発明の第１の態様に関して定義される特異性結合性分子を含む医薬品組成物を提供する。
【００６２】
本発明のこの態様による組成物は使用のために任意の便利なルートにより配合されることができる。通常、本発明の医薬品組成物は本発明の特異性結合性分子に加えて、薬学的に許容可能な担体、賦形剤、希釈剤、助剤、ビヒクル、バッファまたは安定剤を含む。かかる担体としては、限定するものではないが、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）のような緩衝生理食塩水、デキストロース、リポソーム、水、グリセロール、ポリエチレングリコール、エタノール、及びそれらの組合せが挙げられる。患者に投薬する希望の方法に応じて、医薬品組成物は任意の適当な形にすることができる。
【００６３】
それは投与単位形状で提供することができ、一般に、密封容器内に包装して提供され、キットの一部として提供できる。必ずではないが、通常、そのようなキットは使用上の注意を含んでいるだろう。それは複数の前記の投与単位を含むことができる。
【００６４】
医薬品組成物は投与のために任意の適切なルートで適合させる。例えば、経口（口腔剤または舌下剤を含む）、直腸、鼻、局所的（口腔剤、舌下剤または経皮剤を含む）、経膣または非経口的（皮下、筋肉内、静脈内、腹腔内または、皮内を含む）ルートにより投与されることができる。典型的には経口投与される。そのような組成物は医薬品の技術分野で知られている任意の方法で調製されることができ、例えば、無菌状態の下でキャリアまたは賦形剤と有効成分を混合することによって調製されることができる。
【００６５】
経口投与用に適合された医薬品組成物は、たとえばカプセルや錠剤、粉末や顆粒、溶液、シロップまたは懸濁液（水性または非水性液体、可食性泡またはホイップ、またはエマルションとして）のような別個の単位として提供できる。タブレットまたは硬ゼラチンカプセルのための適当な賦形剤としては、乳糖、とうもろこし澱粉、それらの誘導体、ステアリン酸またはそれの塩があげられる。軟ゼラチンカプセルにおける使用のための適当な賦形剤としては、例えば植物油、ワックス、脂肪、半固体もしくは液体のポリオールなどがあげられる。溶液およびシロップの製剤のために使用される賦形剤としては、例えば水、ポリオール、および糖類があげられる。懸濁液の製剤において、油（例えば、植物油）が水中油滴または油中水滴懸濁液を提供するために使用されることができる。
【００６６】
経皮投与のために適合された医薬品組成物は、長期間受容者の表皮に親密な接触のままで残っていることを意図する個々のパッチとして存在することができる。例えば、パッチから一般に、ファーマシューティカル・リサーチ３（６）：３１８（１９８６）に記載されているイオン泳動で有効成分を送達することができる。
【００６７】
局所投与のために適合された医薬品組成物は、軟膏剤、クリーム、懸濁液、ローション、粉末、溶液、ペースト、ゲル、スプレー、エアゾール剤または油として配合されることができる。
【００６８】
直腸投与のために適合させられた医薬品組成物は、坐剤または浣腸剤として提示されることができる。
【００６９】
キャリアが固体である鼻への投与に適合された医薬品組成物は、例えば、粒度が２０〜５００ミクロンの範囲の粗い粉末を含み、鼻吸入法により投与される。すなわち、鼻の近くに保持された粉末の容器からの鼻腔を通る急速な吸入法により投与される。鼻噴霧または点鼻液として投与するための、キャリアが液体である適当な組成物は、有効成分の水溶性または油性溶液を含んでいる。
【００７０】
吸入法での投与のために適合された医薬品組成物は、微粒子粉またはミストを含み、これらは加圧されたエアゾール剤、噴霧装置または注入器のような各種タイプの計量投与器具によって発生させることができる。
【００７１】
膣内投与のために適合された医薬品組成物は、膣坐剤、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレー配合物として提供されることができる。
【００７２】
非経口投与のために適合された医薬品組成物は、抗酸化剤、バッファ、静菌薬および溶質を含むことができる水溶性または非水性の無菌注射液であることができ、該溶質は配合物を投与が意図される患者の血液と実質的にアイソトニックにする。また懸濁剤と増粘剤を含むことができる水性および非水性の無菌懸濁液であることもできる。注射液に使用されることができる添加剤としては、水、アルコール類、ポリオール、グリセリン、および植物油があげられる。組成物は、単位服用量または複数適用量容器中に提供されて、例えば、密封されたアンプルおよびバイアル中に提供され、使用直前に無菌の液体キャリア、たとえば注射用蒸留水の添加だけを必要とする凍結乾燥された条件で貯蔵されることができる。注射液および懸濁液は、無菌粉剤、果粒、およびタブレットから即座に調製されることができる。
【００７３】
医薬品組成物は保存薬剤、可溶化薬剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香料、塩類、バッファ、コーティング剤または酸化防止剤を含むことができる。
【００７４】
また、本発明における使用のための医薬品組成物は、本発明の第１の態様と関連して定義される特異性結合性分子に加えて、他の１種以上の治療的活性薬を含むことができる。１つの実施態様では、本発明の第１の態様と関連して定義される特異性結合性分子に加えて本発明における使用のための医薬品組成物は、１種以上の抗炎症剤または免疫調節薬剤を含むことができる。抗炎症剤または免疫調節薬剤としては（ｉ）  グルココルチコイド類などのステロイド、たとえばプレドニゾン、プレドニソロン、メチルプレドニソロン、コーチゾン、ヒドロコルチゾン、ベタメタゾン、デキサメサゾンおよびトリアムシノロン、（ｉｉ）アスピリン、イブプロフェン、セレコキシブ（ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）およびナプロキセンなどの非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）、（ｉｉｉ）免疫選択性抗炎症薬誘導体Ｉ（ＩｍＳＡＩＤｓ）などの抗炎症のペプチド類があげられる。
【００７５】
本発明の使用のための特異性結合性分子および／または医薬品組成物の用量は治療される疾病または障害、患者の年齢および状態に応じて広い範囲で変化し、医師が最終的に適切な使用用量を決定する。
【００７６】
この投与は適宜繰り返される。副作用が起こった場合には、通常の臨床実務にしたがって、投与量の量、そして／または頻度を減少することができる。
【００７７】
哺乳動物、特に人間への投与において、活性薬の日毎の投与量は、体重当たり、１マイクロｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ、典型的には約１０マイクロｇ／ｋｇから１ｍｇ／ｋｇまでであると予想される。医師はともあれ、患者の年齢、体重、性別および反応をはじめとする要因に応じて、個人に最も適した実際の投与量を決定するだろう。上記の用量は平均的な場合での例示である。もちろん、より高いかまたは低い用量が投与されることができ、これらも本発明の範囲内である。
【００７８】
本明細書に定義される特異性結合性分子、および／または医薬品組成物は、強迫性障害（ＯＣＤ）またはＯＣＤに関連する疾病の治療に使用される。
【００７９】
したがって、本発明はまた、本発明の第１の態様と関連して定義される特異性結合性分子に及び、また本発明の第２の態様と関連して定義される強迫性障害（ＯＣＤ）またはＯＣＤに関連した疾病の治療に使用される医薬品組成物の製造に及ぶ。本発明はまた、本発明の第１の態様と関連して定義される特異性結合性分子の使用に及び、また本発明の第２の態様と関連して定義される強迫性障害（ＯＣＤ）またはＯＣＤに関連した疾病の治療に使用される医薬品の製造における医薬品組成物の使用に及ぶ。
【００８０】
また、本発明は対象者、典型的にはそれを必要とする対象者の、強迫性障害（ＯＣＤ）またはＯＣＤに関連する疾病の治療方法であって、本発明の第２の態様と関連して定義される医薬品組成物、または第１の態様と関連して定義される特異性結合性分子を対象者に投与することを含む治療方法に関する。治療方法は人間または動物に対する治療方法であり、本発明は人間の、および／または獣医学の薬として等しく使用できる。望ましくは、「治療的有効性量」で本発明における使用のための特異性結合性分子、そして／または医薬品組成物は患者に投与される。「治療的有効性量」とは、個人にとって十分な利益を示す量、および／またはＯＣＤの１種以上の症状または関連疾患を改善するか、取り除くか、または予防するために十分な量をいう本明細書において使用される時、「治療」は人間または非人間の動物、望ましくは哺乳動物のためになるすべてのレジームを含む。治療は、既存の条件に対するものであってもよいし、または予防的（予防的な処置）であることができる。
【００８１】
「ＯＣＤに関連した疾病」の用語は、本明細書において本発明の全ての態様と関連し、典型的には以下の疾病の一以上を意味する：抜毛癖、自傷性皮膚症（ｄｅｒｍａｔｉｌｌｏｍａｎｉａ）、トウレット障害（Ｔｏｕｒｅｔｔｅ’ｓ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＴＳ））、アスペルガー症候群、無食欲症、大食症、鬱病、パニック障害、不安発作、双極性障害、沈鬱症、外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、社会不安障害、統合失調症、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、および身体醜形障害（ＢＤＤ）。
【００８２】
本発明の第２の、そして引き続く態様のための好ましい特徴は、第１の態様を準用する。
【００８３】
１つの実施態様では、強迫性障害（ＯＣＤ）またはＯＣＤに関連する疾病の治療における使用のための図２Ａに示されたアミノ酸配列を有する、全長のヒト  Ａｎｘ−Ａ１タンパク質に対して産生された特異性結合性分子を提供する。そのような特異性結合性分子の１つの例は、２０１０年６月３日にアクセション  Ｎｏ．１００６０３０１として欧州細胞カルチャーコレクション（ＥＣＡＣＣ）に寄託されたハイブリドーマ細胞系によって製造されたモノクローナル抗体ＶＪ−４Ｂ６である。
【００８４】
１つの実施態様では、本発明はＯＣＤの治療またはＯＣＤに関連する疾病の治療における使用のために、以下のアミノ酸配列を持っているモノクローナル抗体ＶＪ−４Ｂ６のＣＤＲｓを持っている特異性結合性分子を提供する：
ＶＬＣＤＲ１はＫＡＳＥＮＶＶＴＹＶＳ、
ＶＬＣＤＲ２はＧＡＳＮＲＹＴ、
ＶＬＣＤＲ３はＧＱＧＹＳＹＰＹＴ、
ＶＨＣＤＲ１はＧＹＴＦＴＮＹＷＩＧ、
ＶＨＣＤＲ２はＤＩＹＰＧＧＤＹＴＮＹＮＥＫＦＫＧ、
ＶＨＣＤＲ３はＷＧＬＧＹＹＦＤＹである。
【００８５】
１つの具体的実施態様では、本発明はモノクローナル抗体ＶＪ−４Ｂ６のＶＬおよび／またはＶＨ領域を有する特異性結合性分子を提供する。ＶＪ−４Ｂ６はＯＣＤの治療における使用のために図４と６でそれぞれ示される。１つの実施態様では、モノクローナル抗体ＶＪ−４Ｂ６は投与の前にリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）で希釈される。１つの実施態様では、腹腔内にモノクローナル抗体ＶＪ−４Ｂ６を投与する。
【００８６】
例示の目的でのみ提供される以下の実施例を参照して、さらに本発明について説明する。
実施例では、図が参照される：
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】図１Ａは４つのアネキシン繰り返しとＮ末端ドメインを示すアネキシン−１構造のリボン・ダイヤグラムである。  図１Ｂはアネキシン反復と生物活性配列、Ａｎｎｅｘｉｎ−１ペプチドＡｃ．２−２６の配置を示す模式図である。  図１ＣはペプチドＡｃ．２−２６のアミノ酸配列を示している。Ａｃ．２−２６はＡｎｘ−Ａ１のアセチル化されたＮ末端ペプチドフラグメントである。
【００８８】
【図２】図２Ａは、ヒトアネキシン−１（Ａｎｘ−Ａ１）の１つのアイソフォームの（ＡＮＸＡ１−００３）のｉ）アミノ酸配列とｉｉ）ヌクレオチド配列を示す。  図２Ｂはヒト  Ａｎｎｅｘｉｎ−１（Ａｎｘ−Ａ１）、アイソフオームＡＮＸＡ１−００２のアミノ酸配列を示している。  図２Ｃはヒト  Ａｎｎｅｘｉｎ−１（Ａｎｘ−Ａ１）、アイソフオームＡＮＸＡ１−００４のアミノ酸配列を示している。  図２Ｄはヒト  Ａｎｎｅｘｉｎ−１（Ａｎｘ−Ａ１）、アイソフオームＡＮＸＡ１−００６のアミノ酸配列を示している。
【００８９】
【図３】図３はＶＪ−４Ｂ６の生成を示している。（Ａ）ＶＪ−４Ｂ６を分離して、製造するための戦略の略図。（Ｂ）ヒストグラムは、VJ-4B6の、アネキシン−１  ｃＤＮＡで安定してトランスフェクトさせたセルラインの染色（緑色の線；右側のピーク）、または無関係のコントロール  ｃＤＮＡ（赤色の線；左側のピーク）。
【００９０】
【図４】図４はＶＪ−４Ｂ６の軽鎖可変領域のＤＮＡとアミノ酸配列を示す。
【００９１】
【図５】図５はＣＤＲｓでアノテートされたＶＪ−４Ｂ６の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、および不変部の開始部分をハイライトした。ナンバリングとＣＤＲｓはカバットによった。
【００９２】
【図６】図６はＶＪ−４Ｂ６の重鎖可変領域のＤＮＡとアミノ酸配列を示す。
【００９３】
【図７】図７はＣＤＲｓでアノテートされたＶＪ−４Ｂ６の重鎖可変領域のＤＮＡとアミノ酸配列を示す。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、および不変部の開始部分をハイライトした。ナンバリングとＣＤＲｓはカバットによった。カバットによって定義されるような超可変部領域ではないが、重鎖可変領域残基の２６〜２９は、Ｃｈｏｔｈｉａ（ＣｈｏｔｈｉａとＬｅｓｋ、１９８７）によって定義されたＣＤＲループの一部である。５２、５２ａ、８２、８２ａ、８２ｂ、８２ｃ、１００、および１００ａにおける挿入位置は５２ａ、８２ａｂｃ、１００ａとして示す。
【００９４】
【図８】図８は不安に対するＶＪ−４Ｂ６の効果を示している。雄（ｎ＝６）Ｃ５７／ＢＬ６ネズミ（５−６週間歳）はＶＪ−４Ｂ６（１００ｎｇ／１００ｍｌ）またはＩｇＧ２ｂコントロール（１００ｎｇ／１００ｍｌ）の腹腔内注射を受けた。６日後ネズミは高架式十字路でテストされた。Ａのグラフは迷路のオープンアーム（ＯＡ）またはクローズドアーム（ＣＡ）のエントリーの数を示している。Ｂのグラフはテストの累積（ＯＡ＋ＣＡ）のエントリー数の結果を示している。＊＊＊Ｐ＜０．００１；＊＊ＩｇＧコントロールに対するＰ＜０．００５。
【００９５】
【図９】図９は危険評価行動へのＶＪ−４Ｂ６の効果を示している。雄（ｎ＝６）Ｃ５７／ＢＬ６ネズミ（５−６週間歳）はＶＪ−４Ｂ６（１００ｎｇ／１００ｍｌ）またはＩｇＧ２ｂコントロール（１００ｎｇ／１００ｍｌ）の腹腔内注射を受けた。６日後ネズミは高架式十字路でテストされた。Ａのグラフは以下の開始までの時間を示している。リーチエンドオープンアーム（reach end open arm：ＲＥ−ＯＡ）、ストレッチアテンドポスチャー（stretch attend posture：ＳＡＰ）、およびヘッド・ディップ（head dips：ＨＤ）。Ｂのグラフはそれぞれ具体的事象の合計数を示している。＊＊＊Ｐ＜０．００１。＊＊ＩｇＧコントロールに対するＰ＜０．００５。
【００９６】
【図１０】図１０は社会的相互作用へのＶＪ−４Ｂ６の効果を示している。雄（ｎ＝６）Ｃ５７／ＢＬ６ネズミ（５−６週間歳）はＶＪ−４Ｂ６（１００ｎｇ／１００ｍｌ）またはＩｇＧ２ｂコントロール（１００ｎｇ／１００ｍｌ）の腹腔内注射を受けた。６日間後ネズミはＹ−迷路社会的相互作用テストで評価された。Ａのグラフは対象およびマウスとの相互作用の時間、並びにＹ−迷路のセンターまたはニュートラル・ポジションで費やされた時間の合計を示している。Ｂのグラフはそれぞれ具体的事象の合計数を示している。＊＊＊Ｐ＜０．００１：＊＊ＩｇＧコントロールに対するＰ＜０．００５。
【００９７】
【図１１】図１１は鬱病と絶望へのＶＪ−４Ｂ６の効果を示している。雄（ｎ＝６）Ｃ５７／ＢＬ６ネズミ（５−６週間歳）はＶＪ−４Ｂ６（１００ｎｇ／１００ｍｌ）またはＩｇＧ２ｂコントロール（１００ｎｇ／１００ｍｌ）の腹腔内注射を受けた。６日後ネズミは尾懸垂試験で評価された。Ａのグラフは非可動時間を示し、Ｂのグラフは最初の登りまでの時間を秒単位で示す。＊＊＊Ｐ＜０．００１：＊＊ＩｇＧコントロールに対するＰ＜０．００５。
【００９８】
【図１２】図１２は掘削挙動へのＶＪ−４Ｂ６の効果を示している。雄（ｎ＝６）Ｃ５７／ＢＬ６ネズミ（５−６週間歳）はＶＪ−４Ｂ６（１００ｎｇ／１００ｍｌ）またはＩｇＧ２ｂコントロール（１００ｎｇ／１００ｍｌ）の腹腔内注射を受けた。６日後ネズミは掘削挙動がないかどうかテストされた。Ａのグラフは発作の数を示している。Ｂのグラフは第１の掘削事象までの時間を秒単位で示す。＊＊Ｐ＜０．００５：＊ＩｇＧコントロールに対するＰ＜０．０５。
【００９９】
【図１３】図１３は運動活動性へのＶＪ−４Ｂ６の効果を示している。雄（ｎ＝６）Ｃ５７／ＢＬ６ネズミ（５−６週間歳）はＶＪ−４Ｂ６（１００ｎｇ／１００ｍｌ）またはＩｇＧ２ｂコントロール（１００ｎｇ／１００ｍｌ）の腹腔内注射を受けた。６日後ネズミはロータロッド特性検定でテストされた。グラフは治療の後のネズミの平均速度を示す。
【０１００】
実施例１  抗体ＶＪ−４Ｂ６の生成
新規なアンチ−ＡｎｘＡ１抗体を、図３Ａのスキーム中に示されたように遺伝子免疫法で生成した（Ｇｅｎｏｖａｃ  ＧｍｂＨ、ドイツ）。数匹の免疫されたネズミからの血清がテストされ、ＡｎｘＡ１  ｃＤＮＡで感染させたＩｇＧ認識細胞について３つが陽性の結果を示した。これらのネズミからのひ細胞は、ミエローマ細胞と融合され、ハイブリドーマ細胞を発生させた。３つのハイブリドーマ細胞クローンの１つだけが首尾よくサブクローニングされ、エキスパンドされた。これらのハイブリドーマ細胞はＶＪ−４Ｂ６−Ｅ５−Ｂ１０−Ｄ４と呼ばれる。ハイブリドーマ細胞からの精製されたＩｇＧ２ｂ画分は、ＡｎｘＡ１  ｃＤＮＡで感染された細胞では認識されたが（図３Ｂ、グリーンライン；右側の最高点）、無関係の相補ＤＮＡで感染された細胞ではなかった（図３Ｂ、レッド・ライン；左側の最高点）。
【０１０１】
実施例２  ＶＪ−４Ｂ６の配列
この実施例の目的は、ハイブリドーマ細胞からの抗体の重および軽可変領域遺伝子のクローンを作って、ＤＮＡ配列と相補性決定領域（ＣＤＲｓ）および他の特徴の位置を決定することであった。
【０１０２】
抗体可変領域のクローニングと配列
全ＲＮＡは、ハイブリドーマ細胞の１個の小びんからＱｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙのミニキット（Ｃａｔ  Ｎｏ：  ７４１０４）を使用して調製された。ＲＮＡは、５０マイクロリットルの水中に溶解されて、１．２％のアガロースゲル上でチェックされた。ＶＨとＶＫ（可変カッパ軽鎖）ｃＤＮＡｓは、ＩｇＧとカッパ不変部プライマーと逆転写酵素とを使用して調製された。第１のストランドｃＤＮＡｓは、ＰＣＲによって多量のシグナル配列プライマーを使用して増幅された。増幅されたＤＮＡはゲルで精製され、ベクターｐＧｅｍ（登録商標）Ｔ  Ｅａｓｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）にクローンされた。得られたＶＨとＶＫクローンは予想されたサイズのインサートについてスクリーニングされた。選択されたクローンのＤＮＡ配列は両方向で自動化ＤＮＡ配列決定装置で決定した。配列における相補性決定領域（ＣＤＲｓ）の配置が、他の抗体配列を参照して決定された（カバット、ＥＡ他、１９９１）。
【０１０３】
結果
ＶＪ−４Ｂ６軽鎖
一つのＶＫ配列が同定された。ＶＪ−４Ｂ６  ＶＫのＤＮＡ配列と推定アミノ酸配列は図４に示されている。ＣＤＲｓアノテートされた推定蛋白質配列は図５に示されている。２つの別々の増幅工程からの９つのクローン（７独立）が同じＶ領域配列を与えた。また、ハイブリドーマ融合パートナーから起こる非生産的な異所性ＶＫ配列も多くのクローンに存在していた。配列の中に染色体欠失を有するクローンが１つあった。
【０１０４】
ＶＪ−４Ｂ６重鎖
一つのＶＨ配列が同定された。ＶＪ−４Ｂ６  ＶＨのためのＤＮＡ配列と推定アミノ酸配列は図６に示されている。同じＶ領域配列が９つの独立クローンで見つけられた。２つのクローンは１つの単一塩基対置換を有し、１つのクローンは単一塩基対欠失と１つの単一塩基対置換を有し、１つのクローンは２つの単一塩基対置換があった。１つのみのクローンで、それぞれ５つの単一塩基対置換が起こった。残りの５つのクローンは、同一配列を有していた。ＣＤＲｓでアノテートされた推定蛋白質配列は図７に示されている。
【０１０５】
参照文献
Chothia C and Lesk AM. Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. J Mol Biol. 196: 901-17, 1987.
Kabat EA, Wu TT, Perry HM, Gottesman KS, Foeller C. Sequences of proteins of Immunological Interest, US Department of Health and Human Services, 1991
【０１０６】
実施例３  生体内の強迫性障害（ＯＣＤ）のマウスのモデルでのＶＪ−４Ｂ６の効果
本発明者はＡｎｘ−Ａ１がＴ細胞の中で過剰発現される強迫性障害の遺伝子変異モデルマウスを開発した。これは、本願と同日に出願された同時係属中であるＵＫ特許出願Ｎｏ．１１２１５６１．３の主題である。
【０１０７】
Ｔ細胞中でＡｎｘ−Ａ１（Ａｎｘ−Ａ１ｔｇ）を過剰発現する遺伝子変異マウスは、ＶＡＣＤ２カセットベクタと顕微微量注入（pronuclear microinjection）のテクニックを使用して、Ｃ−末端のＦＬＡＧによってタグ付けをされたＡｎｘ−Ａ１をマウスゲノムに挿入することによって発生させる。簡潔には、ネズミのＡｎｘ−Ａ１  遺伝子は増幅されて、ＦＬＡＧエピトープによってタグ付けをされて、次に、ｐｃＤＮＡ３．１ベクタにクローンされた。Ａｎｘ−Ａ１  ＦＬＡＧをｐｃＤＮＡ３．１ベクタから回収し、次に、リニアライズドＶＡＣＤ２ベクタ（linearised VACD2 vector）にライゲーションした。ＶＡＣＤ２  Ａｎｘ−Ａ１  ＦＬＡＧ構造物は、次に、変成されて、精製されて、次に、顕微注入によりマウスゲノムに挿入された。これらのネズミは以下の本発明の実施例に使用された。
【０１０８】
ネズミはリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）中のＶＪ−４Ｂ６またはコントロールＩｇＧの腹腔内注射を受けた。６日後ネズミは、以下で詳しく述べられるように、テストされた。
【０１０９】
図８および９  高架式十字迷路試験
背景
高架式十字迷路試験は不安様行動のための最も広く使用されるテストの１つである。テストはネズミの開けていて高い領域での自然な嫌悪感、および新しい環境での彼らの天然の突発性探索行動に基づいている。装置は互いに中央で交わるオープンアームとクローズドアーム、およびセンター領域から成る。ネズミはアームの全てにアクセスできるようにされ、それらの間を自由に動くことを許容する。オープンアームへのエントリーの数とオープンアームで費やされた時間は、ネズミのオープンスペース誘発のマウスの不安の指標として使用される。
【０１１０】
テスト
クローズドアームの１つに面するようにして、それぞれのマウスは迷路（５ｃｍ×５ｃｍ）の中央の十字に置かれた。マウスの挙動は１０分間の試験期間の間記録された。エントリーの数、オープンアームとクローズドアームで費やした時間が記録された。データ取得と分析は、自動的にＩｍａｇｅ  ＥＰソフトウェアを使用して実行された。
【０１１１】
ストレッチアテンドポスチャーおよびヘッドディップは、危険評価行動の指標として記録された。これはオープンアーム時間よりも高架式十字迷路での不安のより敏感な指標である(Rodgers, RJ, Cole, JC, Physiol Behav 53: 383-388 (1993); Rodgers RJ, Haller J, Holmes A, Halasz J, Walton TJ, Brain PF, Physiology & Behavior 68: 47−53 (1999))。ストレッチアテンドポスチャーは、後あしを動かすことなくその全長方向へマウスが延び、ついでその元の位置に戻る挙動を言う。ヘッドディップは、ネズミが迷路の端から頭と肩を伸ばして床を見る挙動を言う。
【０１１２】
結果
図８および９は、ＶＪ−４Ｂ６で処理されたネズミが、恐怖の条件、非常に恐ろしいオープンアームとそれほど恐ろしくないクローズドアームに関わりなく、不安が小さいことを示している。彼らが「人生で走行を楽しんで」（オープンアーム端への増加した到達）おり、より好奇心が強く大胆である（ヘッド・ディップの増加）。これは不安がほとんど無いからである。
【０１１３】
図１０  Ｙ迷路
背景
Ｙ迷路は、記憶機能の評価と、齧歯動物の新環境についての調査する意欲を評価するのに使用される行動試験である。Ｙ−迷路は認識への薬物類の効果を評価する際に特に役に立つ。マウスとラットは、典型的には以前に訪問したものよりもむしろ、迷路の新しいアームを調べることを好む時、データは、反復なしでのアームエントリーの回数を測定して分析される。正常な（コントロール）動物は高率で交互に入るので、動物は最後に入ったアームを覚えていることを示す。Ｙ−迷路はマウスが、新規な対象、または既知の対象で時間を過ごすのを好むかどうかを決定するために使用されて、社会的相互作用テストのために使用される。
【０１１４】
テスト
使用される試験装置は、３つの同じアームが互いに１２０°の角度を為して延びるＹ形をしている迷路である。Ｔ迷路の急カーブと比べて、Ｙ−迷路のゆるやかな角度は学習時間を減少させる。動物はＹ迷路のセンターに置かれる。そして、各アームへのエントリーの合計数とエントリーのシークエンスが記録される。
【０１１５】
結果
図１０は、ＶＪ−４Ｂ６での処理が、マウスを「より賢く」していることを示している。なぜなら、動く刺激（別のマウス）に関して同じ注意を維持しつつ、動かない対象ではより少ない時間を過ごすからである。Ｙ迷路のセンターを通り過ぎ、したがって、より多くの時間をアームで過ごすので、彼らは、より社交的であって、フレンドリーである。
【０１１６】
図１１  尾懸垂試験
背景
ＴＳＴは不可避的なストレス状況に置かれた時の、齧歯動物が初期のエスケープ指向の運動の後に無動性姿勢を発現するという観察に基づいている。ＴＳＴの場合では、ストレス状況は彼らの尾によって制御不可能な方法でぶら下がる血行力学ストレスにかかわる。テストの前に抗抑欝薬処置を与えると、対象は、より長い間の期間、エスケープ指向のふるまいにかかわり、活発に続けるだろう。
【０１１７】
テスト
テストの日に、マウスは、実験部屋に移されて、１時間の気候順化がされた。精度の高い線形ロードセルに接続されたテールハンガを備えた自動化された尾懸垂装置が使用された。マウスの尾の１ｃｍの箇所にテールハンガが挿入されて、非刺激性の粘着テープで固定した。ネズミは６分間、テールによって実験台から３５ｃｍの高さで吊られたままで保持された。この間に、ロードセルはマウスの動きを記録して、中央コンピュータに情報を伝えた。次に、それは、セッションの間の無動の比率を記録し、無動の合計の期間を計算した。無動の減少したレベルは抗うつ効力を強く予言する（５７１−６２５  Ｃｒｙａｎ他、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｂｉｏｂｅｈａｖ  Ｒｅｖ  ２９（４−５）：（２００５））。
【０１１８】
結果
さらにより可動であることによってストレスの多い状況（尾懸垂）と戦うので、ＶＪ−４Ｂ６の投与はネズミの絶望を低減する（図１１Ａ）。彼らが彼らの尾で殴ることによってストレスの多い状況と戦おうとするまで、より多くの時間がかかるので、同時に、彼らはより我慢強い（図１１Ｂ）。
【０１１９】
図１２  ビー玉埋めおよび掘り返し行動試験
背景
これらの試験マウスの心配関連のふるまいを評価する。ここ１０年間の間、マウスによるガラスのビー玉を突発的に埋めることと掘ることの抑圧が、抗不安薬の活性の尺度として使用されている。すなわち、ビー玉埋めおよび掘り返し行動試験において、ベンゾジアゼピン系および異なるクラスの抗うつ薬の短期投与が、ビー玉埋めおよび掘り返しを禁止する。
【０１２０】
テスト
テストの日に、マウスは、実験部屋に転移されて、１時間の気候順化がされた。
平坦な表面を作るために軽く押された５ｃｍ厚のおがくずベットの上に、５個×３列で均等におかれた１５個のガラスのビー玉を設置したプラスチックケージ（約２０×３０ｃｍ）内に、マウスをそれぞれ入れた。掘削発作までの待ち時間と、それぞれの掘削の数を測定した。テスト時間は１５分であった。
【０１２１】
結果
図１２Ａの結果は、マウスへのＶＪ−４Ｂ６の投与が、ビー玉埋めおよび掘り返し行動試験において、対照のＩｇＧ２ｂ−処理動物と比較して発作の数を減らすことを示した。これは、抗体の抗不安作用を示唆する。この仮説と一致して、また、第１の発作までの待ち時間（不安挙動の別の指数）も有意に長かった。
【０１２２】
図１３  ロータロッド
背景
ロータロッド特性テストは、通常齧歯動物についておこなわれ、強制的なモーター動力が与えられた回転するロッドに基づくテストである。ロータロッドまたはドラムは頂上に置かれた齧歯動物のための踏み車として機能し、加速されたロータロッドは、齧歯動物の運動調整への薬剤評価と遺伝的影響を評価するために広く使用されている。
【０１２３】
テスト
テストの日に、ネズミは、実験部屋に移されて、１時間の気候順化がされた。それぞれのマウスは静置したロッドの上に置かれ、５ｒｐｍから７０ｒｐｍまで３分間でスムーズに速くした。ロータロッドから落ちるのに必要な速度が、記録された。
【０１２４】
結果
ＶＪ−４Ｂ６での処置はロータロッドテストでは効果がなかったので、先のテストで示された効果が非特異的ではなく、一般的な認知性障害やモーターの特性によるものではないことが示された。
【０１２５】
要約
これらの結果は、抗体ＶＪ−４Ｂ６などのＡｎｘ−Ａ１に結合する抗体が、ＯＣＤおよび、たとえば鬱病などの関連障害の治療に有用であることを示している。
【０１２６】
アペンディックス３  
１４頁
特許出願手続のための微生物寄託の国際承認に関するプタペスト条約
寄託者の氏名および住所
フルビオ  ダクイスト
クイーンメリーアンドウェストフィールドカレッジ、センター  フォア  バイオケミカル  ファーマコロジー、チャーターハウス  スクエア、ロンドン、ＥＣ１Ｍ  ６ＢＱ、英国
１．  微生物の同定
寄託者により与えられた参照の同定
ＶＪ−４Ｂ６−Ｅ５−Ｂ１０−Ｄ４
国際寄託当局により与えられたアクセションナンバー
１００６０３０１
２．  科学的定義および／または提案された分類学上の指定
上記１で定義された微生物は科学的定義を伴う。
３．  領収および受理
この国際寄託当局は上記１で定義された微生物を、２０１０年６月３日に受理した（最初の寄託の日付）
４．  転換のための要求の受理
上記１で定義された微生物は２０１０年６月３日（最初の寄託の日付）に国際寄託当局により受理された。
５．  国際寄託当局
氏名    ＥＣＡＣＣ  特許スーパーバイザー
住所    ヘルス  プロテクション  エージェンシー  カルチャー  コレクションズ
ポートン  ダウン  サリスバリィ  ＳＰ４  ０ＪＧ  英国
国際寄託当局を代表する権原を有する者または代理人の署名
【０１２７】
寄託された微生物または他の生物学的物質の表示
Ａ．  寄託された微生物または他の生物学的物質に関する表示は１６頁、第１−１２行が参照される。
Ｂ．  寄託の表示
寄託施設の表示
欧州細胞カルチャーコレクション（ＥＣＡＣＣ）
寄託施設の住所
ヘルス  プロテクション  エージェンシー  
カルチャー  コレクションズ
センター  フォー  エマージェンシー  プリペアードネス  アンド  レスポンス、ポートン  ダウン、サリスバリィ  ＳＰ４  ０ＪＧ、英国
寄託日    ２０１０年  ６月３日
アクセションナンバー    １００６０３０１
Ｃ．  追加の表示
寄託は、クイーンメリーアンドウェストフィールドカレッジ、センター  フォア  バイオケミカル  ファーマコロジー、チャーターハウス  スクエア、ロンドン、ＥＣ１Ｍ  ６ＢＱ、英国の、フルビオ  ダクイストにより行われた。寄託者は、出願人が出願中に寄託物について言及するのを認可され、欧州特許条約（ＥＰＣ）の規則  ３１（ｌ）（ｄ）により公衆にとって利用可能にされる寄託物に、予約不要の取り消せない同意を与えた。認可および同意の宣言は、この国際出願と同時に提出されている。
【図１Ａ】
0006406642.tif 000002
【図１Ｂ】
0006406642.tif 000003
【図１Ｃ】
0006406642.tif 000004
【図２Ａ】
0006406642.tif 000005
【図２Ｂ】
0006406642.tif 000006
【図２Ｃ】
0006406642.tif 000007
【図２Ｄ】
0006406642.tif 000008
【図３Ａ】
0006406642.tif 000009
【図３Ｂ】
0006406642.tif 000010
【図４】
0006406642.tif 000011
【図５】
0006406642.tif 000012
【図６】
0006406642.tif 000013
【図７】
0006406642.tif 000014
【図８Ａ】
0006406642.tif 000015
【図８Ｂ】
0006406642.tif 000016
【図９Ａ】
0006406642.tif 000017
【図９Ｂ】
0006406642.tif 000018
【図１０Ａ】
0006406642.tif 000019
【図１０Ｂ】
0006406642.tif 000020
【図１１Ａ】
0006406642.tif 000021
【図１１Ｂ】
0006406642.tif 000022
【図１２Ａ】
0006406642.tif 000023
【図１２Ｂ】
0006406642.tif 000024
【図１３】
0006406642.tif 000025
【配列表】
0006406642000001.app