(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
反芻動物の消化活動から発生するメタンの生成を減少させるための、式（Ｉ）
【化１】
0006351047.tif 000019
（式中、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して、Ｈ、−ＣＨ３または−ＣＨ２Ｒ３を表し、Ｒ３は、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨから選択される１つ〜３つの基で置換されていてもよい、飽和または不飽和の、直鎖状、分枝鎖状または環状のＣ１〜Ｃ８炭化水素基であり、前記Ｃ１〜Ｃ８炭化水素基中の１個または２個の炭素原子は窒素原子または酸素原子により置換されていてもよい）
で定義される少なくとも１種のパラニトロアニリン誘導体またはその塩、
および、
式（ＩＩ）
【化２】
0006351047.tif 000020
（式中、Ｙは次の組成：ＣａＨｂＯｄＮｅＳｇ
（但し、
ａは１〜２５に含まれ、
ｂは２〜５１に含まれ、
ｄは０〜８に含まれ、
ｅは０〜５に含まれ、
ｇは０〜３に含まれる）
の有機分子である）
で定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基で任意の位置が置換されている少なくとも１種の有機分子またはその塩）
を含む飼料組成物または飼料添加物の使用。
【請求項２】
Ｒ１はＨまたは−ＣＨ３であり、
Ｒ２はＨ、−ＣＨ３または−ＣＨ２Ｒ３であり、
Ｒ３は飽和の直鎖状または分枝鎖状のＣ１〜Ｃ３−炭化水素基であり、
ａは１〜１０に含まれ、
ｂは２〜２１に含まれ、
ｄは０〜６に含まれ、
ｅは０〜３に含まれ、かつ
ｇは０〜１に含まれる
請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｒ１はＨまたは−ＣＨ３であり、
Ｒ２はＨ、−ＣＨ３または−ＣＨ２Ｒ３であり、
Ｒ３は飽和の、直鎖状または分枝鎖状のＣ１〜Ｃ３−炭化水素基であり、かつ式（ＩＩ）で表される有機分子は、式（ＩＩＩ）
【化３】
0006351047.tif 000021
（式中、
ｎは、０〜６に含まれ、ｎ≠０ならば、炭素鎖は、置換されていないか、または３つまでヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基もしくはニトロオキシ基で置換されていてもよい、直鎖状、環状もしくは分枝鎖状の脂肪族炭素鎖、あるいは、一価不飽和または多価不飽和の、アルケニル炭素鎖またはアルキニル炭素鎖であって、任意の異性体形態であり、
Ｒ４は、独立して、水素原子、または１〜６個の炭素原子を含有する飽和の直鎖状、環状もしくは分枝鎖状のアルキル基もしくはアルケニル基であり、
Ｘは、水素原子、Ｒ５、−ＯＲ５、−ＯＣＯＲ５、−ＯＮＯ２、−ＣＯＯＲ５、−ＣＯＮＲ５Ｒ６であり、
Ｒ５およびＲ６は、独立して、水素原子、置換されていないか、または３つまでヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基もしくはニトロオキシ基で置換された、Ｃ１〜Ｃ１２の直鎖状、分枝鎖状もしくは環状のアルキル鎖、あるいは、一価不飽和または多価不飽和であってよい、アルケニル炭素鎖またはアルキニル炭素鎖であって、任意の異性体形態である）
で表される化合物である
請求項１に記載の使用。
【請求項４】
式（Ｉ）で表される化合物は、（４−ニトロ−フェニル）−アミン、メチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、エチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、ジメチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、（４−ニトロ−フェニル）−プロピル−アミン、イソプロピル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、２−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−エタノール、３−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−プロパン−１−オール、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリン、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリンおよび３−（（４−ニトロ−フェニルアミノ）−メチル）−安息香酸を含む化合物の群から選択され、かつ式（ＩＩ）で表される化合物は、３−ニトロオキシプロパノール、ラセミ体−４−フェニルブタン−１，２−ジイルジニトレート、２−（ヒドロキシメチル）−２−（ニトロオキシメチル）−１，３−プロパンジオール、Ｎ−エチル−３−ニトロオキシ−プロパンスルホンアミド、５−ニトロオキシ−ペンタンニトリル、５−ニトロオキシ−ペンタン、３−ニトロオキシ−プロピルプロピオネート、１，３−ビス−ニトロオキシプロパン、１，４−ビス−ニトロオキシブタン、１，５−ビス−ニトロオキシペンタン、３−ニトロオキシ−プロピルベンゾエート、３−ニトロオキシ−プロピルヘキサノエート、３−ニトロオキシ−プロピル  ５−ニトロオキシ−ヘキサノエート、ベンジルニトレート、イソソルビド−ジニトレート、Ｎ−［２−（ニトロオキシ）エチル］−３−ピリジンカルボキシアミド、２−ニトロ−５−ニトロオキシメチル−フラン、ビス−（２−ニトロオキシエチル）エーテル、３−ニトロオキシプロピオン酸、メチル−３−ニトロオキシプロピオネート、エチル−３−ニトロオキシプロピオネート、エチル−４−ニトロオキシブタノエート、エチル−３−ニトロオキシブタノエート、５−ニトロオキシペンタン酸、エチル−５−ニトロオキシペンタノエート、６−ニトロオキシヘキサン酸、エチル−６−ニトロオキシヘキサノエート、エチル−４−ニトロオキシ−シクロヘキシルカルボキシレート、８−ニトロオキシオクタン酸、エチル−８−ニトロオキオクタノエート、１１−ニトロオキシウンデカン酸、エチル−１１−ニトロオキシウンデカノエート、５−ニトロオキシ−ペンタン酸アミドおよび５−ニトロオキシ−Ｎ−メチル−ペンタン酸アミドから選択される請求項１に記載の使用。
【請求項５】
式（Ｉ）で表される化合物は、（４−ニトロ−フェニル）−アミン、メチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、エチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、ジメチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、（４−ニトロ−フェニル）−プロピル−アミン、イソプロピル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、２−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−エタノール、３−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−プロパン−１−オール、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリン、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリンおよび３−（（４−ニトロ−フェニルアミノ）−メチル）−安息香酸を含む化合物の群から選択され、かつ式（ＩＩ）で表される有機分子は、３−ニトロオキシプロパノールおよび／または１，３−ビス−ニトロオキシプロパンである請求項１に記載の使用。
【請求項６】
式（Ｉ）で表される化合物は、（４−ニトロ−フェニル）−アミンであり、かつ式（ＩＩ）で表される化合物は、３−ニトロオキシプロパノールおよび／または１，３−ビス−ニトロオキシプロパンである請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記反芻動物は、ウシ、ヤギ、ヒツジ、キリン、アメリカバイソン、ヨーロッパバイソン、ヤク、スイギュウ、シカ、ラクダ、アルパカ、ラマ、ヌー、アンテロープ、プロングホーンおよびニルガイからなる群から選択される請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記飼料組成物中の式（Ｉ）で表される化合物の量が飼料１ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜０．２ｇであり、かつ前記飼料組成物中の式（ＩＩ）で表される化合物の量が飼料１ｋｇ当たり１ｍｇ〜１０ｇである請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
式（Ｉ）で表される化合物の式（ＩＩ）で表される化合物に対する重量比が０．０２〜０．２である請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
式（Ｉ）で定義される少なくとも１種のパラニトロアニリン誘導体またはその塩、および式（ＩＩ）で表される少なくとも１種の有機分子またはその塩を含む飼料組成物または飼料添加物。
【化４】
0006351047.tif 000022
（式中、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して、Ｈ、−ＣＨ３または−ＣＨ２Ｒ３を表し、Ｒ３は、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨから選択される１つ〜３つの基で置換されていてもよい、飽和または不飽和の、直鎖状、分枝鎖状または環状のＣ１〜Ｃ８炭化水素基であり、前記Ｃ１〜Ｃ８炭化水素基中の１個または２個の炭素原子は窒素原子または酸素原子により置換されていてもよい）
【化５】
0006351047.tif 000023
（式中、Ｙは次の組成：ＣａＨｂＯｄＮｅＳｇ
（但し、
ａは１〜２５に含まれ、
ｂは２〜５１に含まれ、
ｄは０〜８に含まれ、
ｅは０〜５に含まれ、
ｇは０〜３に含まれる）
の有機分子である）
で定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基で任意の位置が置換されている少なくとも１種の有機分子またはその塩）
【請求項１１】
Ｒ１はＨまたは−ＣＨ３であり、
Ｒ２はＨ、−ＣＨ３または−ＣＨ２Ｒ３であり、
Ｒ３は飽和の直鎖状または分枝鎖状のＣ１〜Ｃ３−炭化水素基であり、
ａは１〜１０に含まれ、
ｂは２〜２１に含まれ、
ｄは０〜６に含まれ、
ｅは０〜３に含まれ、かつ
ｇは０〜１に含まれる
請求項１０に記載の飼料組成物または飼料添加物。
【請求項１２】
Ｒ１はＨまたは−ＣＨ３であり、
Ｒ２はＨ、−ＣＨ３または−ＣＨ２Ｒ３であり、
Ｒ３は飽和の、直鎖状または分枝鎖状のＣ１〜Ｃ３−炭化水素基であり、かつ式（ＩＩ）で表される有機分子は、式（ＩＩＩ）
【化６】
0006351047.tif 000024
（式中、
ｎは、０〜６に含まれ、ｎ≠０ならば、炭素鎖は、置換されていないか、または３つまでヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基もしくはニトロオキシ基で置換されていてもよい、直鎖状、環状もしくは分枝鎖状の脂肪族炭素鎖、あるいは、一価不飽和または多価不飽和の、アルケニル炭素鎖またはアルキニル炭素鎖であって、任意の異性体形態であり、
Ｒ４は、独立して、水素原子、または１〜６個の炭素原子を含有する飽和の直鎖状、環状もしくは分枝鎖状のアルキル基もしくはアルケニル基であり、
Ｘは、水素原子、Ｒ５、−ＯＲ５、−ＯＣＯＲ５、−ＯＮＯ２、−ＣＯＯＲ５、−ＣＯＮＲ５Ｒ６であり、
Ｒ５およびＲ６は、独立して、水素原子、置換されていないか、または３つまでヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基もしくはニトロオキシ基で置換された、Ｃ１〜Ｃ１２の直鎖状、分枝鎖状もしくは環状のアルキル鎖、あるいは、一価不飽和または多価不飽和であってよい、アルケニル炭素鎖またはアルキニル炭素鎖であって、任意の異性体形態である）
で表される化合物である
請求項１０に記載の飼料組成物または飼料添加物。
【請求項１３】
式（Ｉ）で表される化合物は、（４−ニトロ−フェニル）−アミン、メチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、エチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、ジメチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、（４−ニトロ−フェニル）−プロピル−アミン、イソプロピル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、２−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−エタノール、３−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−プロパン−１−オール、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリン、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリンおよび３−（（４−ニトロ−フェニルアミノ）−メチル）−安息香酸を含む化合物の群から選択され、かつ式（ＩＩ）で表される化合物は、３−ニトロオキシプロパノール、ラセミ体−４−フェニルブタン−１，２−ジイルジニトレート、２−（ヒドロキシメチル）−２−（ニトロオキシメチル）−１，３−プロパンジオール、Ｎ−エチル−３−ニトロオキシ−プロパンスルホンアミド、５−ニトロオキシ−ペンタンニトリル、５−ニトロオキシ−ペンタン、３−ニトロオキシ−プロピルプロピオネート、１，３−ビス−ニトロオキシプロパン、１，４−ビス−ニトロオキシブタン、１，５−ビス−ニトロオキシペンタン、３−ニトロオキシ−プロピルベンゾエート、３−ニトロオキシ−プロピルヘキサノエート、３−ニトロオキシ−プロピル  ５−ニトロオキシ−ヘキサノエート、ベンジルニトレート、イソソルビド−ジニトレート、Ｎ−［２−（ニトロオキシ）エチル］−３−ピリジンカルボキシアミド、２−ニトロ−５−ニトロオキシメチル−フラン、ビス−（２−ニトロオキシエチル）エーテル、３−ニトロオキシプロピオン酸、メチル−３−ニトロオキシプロピオネート、エチル−３−ニトロオキシプロピオネート、エチル−４−ニトロオキシブタノエート、エチル−３−ニトロオキシブタノエート、５−ニトロオキシペンタン酸、エチル−５−ニトロオキシペンタノエート、６−ニトロオキシヘキサン酸、エチル−６−ニトロオキシヘキサノエート、エチル−４−ニトロオキシ−シクロヘキシルカルボキシレート、８−ニトロオキシオクタン酸、エチル−８−ニトロオキオクタノエート、１１−ニトロオキシウンデカン酸、エチル−１１−ニトロオキシウンデカノエート、５−ニトロオキシ−ペンタン酸アミドおよび５−ニトロオキシ−Ｎ−メチル−ペンタン酸アミドから選択される
請求項１０に記載の飼料組成物または飼料添加物。
【請求項１４】
式（Ｉ）で表される化合物は、（４−ニトロ−フェニル）−アミン、メチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、エチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、ジメチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、（４−ニトロ−フェニル）−プロピル−アミン、イソプロピル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、２−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−エタノール、３−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−プロパン−１−オール、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリン、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリンおよび３−（（４−ニトロ−フェニルアミノ）−メチル）−安息香酸を含む化合物の群から選択され、かつ式（ＩＩ）で表される有機分子は、３−ニトロオキシプロパノールおよび／または１，３−ビス−ニトロオキシプロパンである
請求項１０に記載の飼料組成物または飼料添加物。
【請求項１５】
式（Ｉ）で表される化合物は、（４−ニトロ−フェニル）−アミンであり、かつ式（ＩＩ）で表される化合物は、３−ニトロオキシプロパノールおよび／または１，３−ビス−ニトロオキシプロパンである
請求項１０に記載の飼料組成物または飼料添加物。
【請求項１６】
ミネラルプレミックス、ビタミンプレミックス、もしくはビタミンおよびミネラルを含むプレミックス、または大丸薬である請求項１０〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
反芻動物の消化活動から発生するメタンの生成を減少させるための方法であって、式（Ｉ）
【化７】
0006351047.tif 000025
（式中、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して、Ｈ、−ＣＨ３または−ＣＨ２Ｒ３を表し、Ｒ３は、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨから選択される１つ〜３つの基で置換されていてもよい、飽和または不飽和の、直鎖状、分枝鎖状または環状のＣ１〜Ｃ８−炭化水素基であり、Ｃ１〜Ｃ８炭化水素基中の１個または２個の炭素原子は窒素原子または酸素原子により置換されていてもよい）
により定義される少なくとも１種のパラニトロアニリン誘導体またはその塩、
および
式（ＩＩ）
【化８】
0006351047.tif 000026
（式中、Ｙは次の組成：ＣａＨｂＯｄＮｅＳｇ
（但し、
ａは１〜２５に含まれ、
ｂは２〜５１に含まれ、
ｄは０〜８に含まれ、
ｅは０〜５に含まれ、かつ
ｇは０〜３に含まれる）
の有機分子である）
により定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基で任意の位置が置換されている少なくとも１種の有機分子またはその塩を含む飼料組成物または飼料添加物を、十分な量、前記動物に経口投与することを含む方法。
【請求項１８】
前記反芻動物は、ウシ、ヤギ、ヒツジ、キリン、アメリカバイソン、ヨーロッパバイソン、ヤク、スイギュウ、シカ、ラクダ、アルパカ、ラマ、ヌー、アンテロープ、プロングホーンおよびニルガイからなる群から選択される請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
式（Ｉ）で表される化合物の式（ＩＩ）で表される化合物に対する重量比が０．０２〜０．２である請求項１７または１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は反芻動物からのメタン排出を削減する分野に関する。特に、本発明は、反芻動物の消化活動から発生するメタンの生成を減少させるため、および／または反芻動物のパフォーマンスを改善するために、少なくとも１種のパラニトロアニリン誘導体、および少なくとも１種のニトロオキシ基により任意の位置が置換されている少なくとも１種の有機分子を含む飼料組成物または飼料添加物の使用に関する。
【０００２】
本発明は、さらに、上記分子を含む動物飼料または動物飼料組成物および飼料添加物に関する。飼料または飼料組成物という用語は、動物が摂取するのに適した、または動物が摂取することを意図した、任意の化合物、調製物、混合物または組成物を意味する。
【０００３】
これに関連して、反芻動物は、植物ベースの食物を、まず反芻胃として知られる、動物の第１の胃の中で柔らかくし、次いで、今日、反芻食塊として知られる半消化の塊を逆流させ、再び咀嚼することにより消化する偶蹄目（Ａｒｔｉｏｄａｃｔｙｌａ）の哺乳動物である。植物質をさらに分解し、消化を刺激するため、反芻食塊を再び咀嚼する過程は、「反芻」と呼ばれる。
【０００４】
反芻胃での醗酵はいくつかの不利をもたらす。嫌気性醗酵の自然な結果としてメタンが生成するが、これは宿主動物にとってはエネルギーの損失を意味する。炭水化物は、通常の乳牛の餌料中において乾燥基準で７０〜８０％を占めるにもかかわらず、消化管からの炭水化物の吸収は通常極めて少ない。その理由は、反芻胃中で炭水化物が、主生成物としてアセテート、プロピオネートおよびブチレートの生成をもたらす広範囲の醗酵が生じるからである。これらの生成物は、いわゆる揮発性脂肪酸（ＶＦＡ）の一部である。
【０００５】
エネルギーの損失に加えて、メタンはまたＣＯ２より何倍も強い温室効果ガスである。大気中のその濃度は、前世紀の間に２倍になり、驚くほどの増加を続けている。反芻動物は、生物起源のメタン生成の主な原因体であり、反芻動物からのメタンの生成を防止すれば、大気中のメタン濃度はほぼ安定するであろうと推定されている。
【０００６】
インビトロの反芻胃シミュレーションモデルを用いた試験で、胆汁酸誘導体がメタン排出の削減に繋がることが最近公表された（国際公開第２０１０／０７２５８４号パンフレット）。しかしながら、適度のメタン排出削減をもたらすのに必要な量は、反芻動物の飼料工業のコスト制約と相容れない。
【０００７】
さらに、インビトロの実験に基づき、多くの天然植物の抽出物（ニンニク：国際公開第２００９／１５０２６４号パンフレット、ユッカ、ニッケイ、ダイオウ…）が、反芻動物からのメタン排出を削減する有効な解決策として、科学文献に記載されている。しかしながら、副作用（牛乳に残留）、インビボの試験での効能の欠如、あるいは有意なメタンの削減を生じさせるために動物に非常に大量の添加物を与える必要があることのために、これらの解決策のどれもが製品の市販化には至っていない。
【０００８】
最近、ニトロオキシ有機分子が、インビトロ、および反芻動物への給餌において、有意なメタン削減効果を有することが示された（国際公開第２０１２／０８４６２９号パンフレット）。しかしながら、単一の機構を標的とするこれらの化合物は、適用時間とともに最終的に耐性の増大につながり、時間とともに効果が失われるおそれがある。このような状況下で、反芻動物によるメタンの生成を減少させ、かつ効果が長時間持続する新規な組成物が依然求められている。メタンの排出を削減することに加えて、そのような組成物は、飼料要求率の改善、飼料摂取量の低減、体重増加の改善、かつ／または屠殺体もしくは乳収量の改善によって、反芻動物のパフォーマンスを向上させることにも貢献し得る。
【０００９】
今や、驚いたことに、本発明者らは、微生物醗酵に対して宿主動物に弊害をもたらすような影響を与えることなく、持続してメタンの生成を実質的に減少させるために、以下に記載する組成物を動物飼料中で使用することに大きな可能性があることを見出した。さらに、本発明の組成物はまた、反芻胃のアセテート／プロピオネート比、飼料要求率、飼料摂取量、体重の増加、屠殺体収量、または乳収量によって測定される、動物の総合的なパフォーマンスにも大きな利点を有する。前記組成物はまた、従来技術に記載されているものより安定であり、動物およびヒトに安全であり、持続的なメタン削減効果をもたらし、旨味に影響せず、工業的規模で動物栄養工業に許容されるコストで製造することができ、とりわけ、補充給餌された動物の牛乳または肉に何らの代謝物質の蓄積を引き起こさず、かつ相乗効果により非常に低濃度で反芻胃に有効である。
【００１０】
したがって、本発明は、反芻動物の消化活動から発生するメタンの生成を減少させるため、および／または反芻動物のパフォーマンスを改善するための、式（Ｉ）で定義される少なくとも１種のパラニトロアニリン誘導体またはその塩、および式（ＩＩ）で定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基で任意の位置が置換されている少なくとも１種の有機分子またはその塩を含む飼料組成物または飼料添加物の使用を提供する。
【００１１】
本発明はまた、式（Ｉ）で定義される少なくとも１種のパラニトロアニリン誘導体またはその塩、および以下に定義する式（ＩＩ）で表される少なくとも１種の有機分子またはその塩を含む、飼料組成物または飼料添加物を提供する。
【００１２】
本発明はさらに、反芻動物の消化活動から発生するメタンの生成を減少させ、かつ／または反芻動物のパフォーマンスを改善するための方法であって、式（Ｉ）で定義される少なくとも１種のパラニトロアニリン誘導体またはその塩、および式（ＩＩ）で定義される少なくとも１種のニトロオキシ基で任意の位置が置換されている少なくとも１種の有機分子またはその塩を含む、十分な量の飼料組成物または飼料添加物を動物に経口投与することを含む方法を提供する。「経口投与」という用語は、本明細書で使用されるとき、単なる給餌、または人の手による大丸薬の投与をいう。
【００１３】
第１の実施形態では、本発明は、反芻動物の消化活動から発生するメタンの生成を減少させ、かつ／または反芻動物のパフォーマンスを改善するための、式（Ｉ）
【化１】
0006351047.tif 000002
（式中、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して、Ｈ、−ＣＨ３または−ＣＨ２Ｒ３を表し、Ｒ３は、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨから選択される１つ〜３つの基で置換されていてもよい、飽和または不飽和の、直鎖状、分枝鎖状または環状のＣ１〜Ｃ８炭化水素基であり、Ｃ１〜Ｃ８炭化水素基中の１個または２個の炭素原子は窒素原子または酸素原子により置換されていてもよい）
で定義される少なくとも１種のパラニトロアニリン誘導体またはその塩（以下、「ニトロアニリン化合物」という）、および、
式（ＩＩ）
【化２】
0006351047.tif 000003
（式中、Ｙは次の組成：ＣａＨｂＯｄＮｅＳｇ
（但し、
ａは１〜２５に含まれ、
ｂは２〜５１に含まれ、
ｄは０〜８に含まれ、
ｅは０〜５に含まれ、
ｇは０〜３に含まれる）
の有機分子である）
で定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基で任意の位置が置換されている少なくとも１種の有機分子またはその塩（以下、「ニトロオキシ化合物」という）
を含む飼料組成物または飼料添加物の使用を提供する。
【００１４】
本発明の全ての実施形態で、式（Ｉ）で表される本発明の好ましい化合物は、Ｒ１がＨまたは−ＣＨ３の化合物である。式（Ｉ）のより好ましい化合物は、Ｒ１がＨまたは−ＣＨ３、Ｒ２がＨ、−ＣＨ３または−ＣＨ２Ｒ３、そしてＲ３が飽和または不飽和の直鎖状または分枝鎖状のＣ１〜Ｃ４炭化水素基の化合物である。式（Ｉ）のより一層好ましい化合物は、Ｒ１がＨまたは−ＣＨ３、Ｒ２がＨ原子、−ＣＨ３または−ＣＨ２Ｒ３、そしてＲ３が飽和の直鎖状または分枝鎖状のＣ１〜Ｃ３炭化水素基の化合物である。
【００１５】
式（Ｉ）で表される本発明の最も好ましい化合物は、表１に記載され、その構造が示されている（４−ニトロ−フェニル）−アミン、メチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、エチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、ジメチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、（４−ニトロ−フェニル）プロピル−アミン、イソプロピル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、２−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−エタノール、３−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−プロパン−１−オール、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリン、４−（（４−ニトロ−フェニルアミノ）−メチル）−安息香酸および３−（（４−ニトロ−フェニルアミノ）−メチル）−安息香酸を含む化合物の群から選択される。
式（Ｉ）で表される本発明の、さらに最も好ましい化合物は、（４−ニトロ−フェニル）−アミンである。
【００１６】
【表１】
0006351047.tif 000004
【００１７】
【表２】
0006351047.tif 000005
【００１８】
本発明の全ての実施形態で、式（Ｉ）で表される化合物が任意の異性体形態であり得ることは理解されるべきである。
【００１９】
式（Ｉ）で表される本発明の化合物はまた、塩の形態であってもよい。塩調製のための好ましいカチオンは、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）、リチウム（Ｌｉ＋）、マグネシウム（Ｍｇ２＋）、カルシウム（Ｃａ２＋）、バリウム（Ｂａ２＋）、ストロンチウム（Ｓｒ２＋）およびアンモニウム（ＮＨ４＋）からなる群から選択することができる。
【００２０】
式（Ｉ）で表される本発明の化合物は、原理上は、当該技術分野でそれ自体公知の合成法により、かつ／またはＰＣＴ／ＩＢ２０１３０５２２３０号明細書に記載の方法に基づいて製造することができる。
【００２１】
これらの全ての場合において、生成物（式（Ｉ）で表される化合物）の適切な精製方法は、当業者により、すなわちカラムクロマトグラフィーにより選択することができ、あるいは式（Ｉ）で表される化合物は、それ自体公知の方法により単離し、精製することができる。
【００２２】
本発明の全ての実施形態で、式（ＩＩ）で定義される化合物は、明らかに、化学的に妥当な化合物に限定される。当業者は、例えば、ａが１で、ｄ、ｅ、およびｇが０ならば、ｂは３である必要があり；同様にａが２で、ｄ、ｅ、およびｇが０ならば、ｂは５である必要があり、あるいはａが３で、ｄ、ｅ、およびｇが０ならば、ｂは７である必要があり、あるいはａが１、ｄが１で、ｅおよびｇが０ならば、ｂは２または３のいずれかであり得ることを理解している。
【００２３】
さらに、本発明の全ての実施形態で、少なくとも１種のニトロオキシ基で任意の位置が置換されている好ましい有機分子またはその塩は、式（ＩＩ）
【化３】
0006351047.tif 000006
（式中、Ｙは次の組成：ＣａＨｂＯｄＮｅＳｇ
（但し、
ａは１〜１０に含まれ、
ｂは２〜２１に含まれ、
ｄは０〜６に含まれ、
ｅは０〜３に含まれ、
ｇは０〜１に含まれる）
の有機分子である）
で表される化合物である。
【００２４】
より好ましくは、式（ＩＩ）で表される本発明の化合物は、式（ＩＩＩ）
【化４】
0006351047.tif 000007
（式中、
ｎは、０〜１２、好ましくは０〜６に含まれ、但し、ｎ≠０ならば、炭素鎖は、置換されていないか、または３つまでヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基もしくはニトロオキシ基で置換されていてもよい、直鎖状、環状もしくは分枝鎖状の脂肪族炭素鎖、あるいは、一価不飽和または多価不飽和の、アルケニル炭素鎖またはアルキニル炭素鎖であって、任意の異性体形態であり、
Ｒ４は、独立して、水素原子、または１〜１２個、好ましくは１〜６個の炭素原子を含有する飽和の直鎖状、環状もしくは分枝鎖状のアルキル基もしくはアルケニル基であり、
Ｘは、水素原子、Ｒ５、Ｒ５≡Ｎ、−ＯＲ５、−ＯＣＯＲ５、−ＮＲ５Ｒ６、−ＯＮＯ２、−ＣＯＯＲ５、−ＣＯＮＲ５Ｒ６、−ＮＨＳＯ２Ｒ５または−ＳＯ２ＮＨＲ５であり、
Ｒ５およびＲ６は、独立して、水素原子、置換されていないか、または３つまでヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基もしくはニトロオキシ基で置換された、Ｃ１〜Ｃ１２の直鎖状、分枝鎖状もしくは環状のアルキル鎖、あるいは、一価不飽和または多価不飽和であってよい、アルケニル炭素鎖またはアルキニル炭素鎖であって、任意の異性体形態である）
で表される化合物である。
【００２５】
本発明の全ての実施形態で、式（ＩＩ）で表される化合物および式（ＩＩＩ）で表される化合物は、任意の異性体形態であり得ることは理解されるべきである。
【００２６】
式（ＩＩＩ）で表される化合物の上記定義において、ｎ＞２のとき、炭素鎖は直鎖状であるか、または炭素鎖の任意の位置で分枝し得ることは理解されるべきである。また、炭素鎖は、その炭素鎖の異なる位置で複数の分枝で分枝し得る。さらに、ｎ＞３のとき、脂肪族炭素鎖は環状部を形成し得る。この環状部は任意の位置（２，３，４）にニトロオキシ部を含むことができ、また、任意の脂肪族基により複数の位置で分枝し得る。分枝した脂肪族基は、好ましくはメチル基、エチル基またはプロピル基である。さらに、炭素鎖はさらに３つまで、ヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基またはニトロオキシ基で置換されていてもよい。
【００２７】
式（ＩＩＩ）で表される誘導体の上記定義において、好ましいＲ４アルキル基は、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、イソブチル基、ペンチル基、ネオペンチル基、ヘキシル基、シクロヘキシル基、ならびに２−エチル−ヘキシル基および２−エチル−オクチル基である。さらに、３個以上の炭素原子を含むアルキル基またはアルケニル基は、直鎖状、分枝鎖状または環状であり得る。さらに、直鎖状または分枝鎖状のＣ２〜Ｃ１０アルケニレン基では、これは１つまたはそれより多い（Ｃ４から）二重結合を有するアルケニレン基を含むことは理解されるべきであり、そのようなアルケニレン基の例には、式−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）３−および−（ＣＨ＝ＣＨ）２−で表されるものがある。
【００２８】
本発明の全ての実施形態で、式（ＩＩ）で表される本発明のより好ましい化合物およびその塩は、表２に化学式とともに記載した、３−ニトロオキシプロパノール、ラセミ体−４−フェニルブタン−１，２−ジイルジニトレート、２−（ヒドロキシメチル）−２−（ニトロオキシメチル）−１，３−プロパンジオール、Ｎ−エチルー３−ニトロオキシ−プロパンスルホンアミド、５−ニトロオキシ−ペンタンニトリル、５−ニトロオキシ−ペンタン、３−ニトロオキシ−プロピルプロピオネート、１，３−ビス−ニトロオキシプロパン、１，４−ビス−ニトロオキシブタン、１，５−ビス−ニトロオキシペンタン、３−ニトロオキシ−プロピルベンゾエート、３−ニトロオキシ−プロピルヘキサノエート、３−ニトロオキシ−プロピル５−ニトロオキシ−ヘキサノエート、ベンジルニトレート、イソソルビド−ジニトレート、Ｎ−［２−（ニトロオキシ）エチル］−３−ピリジンカルボキサミド、２−ニトロ−５−ニトロオキシメチル−フラン、ビス−（２−ニトロオキシエチル）エーテル、３−ニトロオキシプロピオン酸、メチル−３−ニトロオキシプロピオネート、エチル−３−ニトロオキシプロピオネート、エチル−４−ニトロオキシブタノエート、エチル−３−ニトロオキシブタノエート、５−ニトロオキシペンタン酸、エチル−５−ニトロオキシペンタノエート、６−ニトロオキシヘキサン酸、エチル−６−ニトロオキシヘキサノエート、エチル−４−ニトロオキシ−シクロヘキシルカルボキシレート、８−ニトロオキシオクタン酸、エチル−８−ニトロオキシオクタノエート、１１−ニトロオキシウンデカン酸、エチル−１１−ニトロオキシウンデカノエート、５−ニトロオキシ−ペンタン酸アミド、５−ニトロオキシ−Ｎ−メチル−ペンタン酸アミド、およびこれらの塩から選択される。
【００２９】
式（ＩＩ）で表される、本発明の最も好ましい化合物およびその塩は、３−ニトロオキシプロパノール、５−ニトロオキシペンタン、３−ニトロオキシプロパノール、１，３−ビス−ニトロオキシプロパン、エチル−３−ニトロオキシプロピオネート、メチル−３−ニトロオキシプロピオネート、３−ニトロオキシプロピオン酸、１，４−ビス−ニトロオキシブタン、および１，５−ビス−ニトロオキシペンタンから選択される。
【００３０】
式（ＩＩ）で表される、さらに最も好ましい化合物およびその塩は、３−ニトロオキシプロパノールである。
【００３１】
【表３】
0006351047.tif 000008
【００３２】
【表４】
0006351047.tif 000009
【００３３】
【表５】
0006351047.tif 000010
【００３４】
【表６】
0006351047.tif 000011
【００３５】
【表７】
0006351047.tif 000012
【００３６】
式（ＩＩ）で表される本発明の化合物はまた、ニトロオキシ有機分子の塩の形態で存在し得る。塩を調製するための好ましいカチオンは、ナトリウム（Ｎａ＋）、カリウム（Ｋ＋）、リチウム（Ｌｉ＋）、マグネシウム（Ｍｇ２＋）、カルシウム（Ｃａ２＋）、バリウム（Ｂａ２＋）、ストロンチウム（Ｓｒ２＋）、およびアンモニウム（ＮＨ４＋）からなる群から選択し得る。
【００３７】
本発明の組成物の、式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）で表される化合物は、原理上、ニトロオキシ有機分子のそれ自体公知の合成法により、かつ／またはＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６９３３８号およびＰＣＴ／ＥＰ２０１１／０７２７０７号に記載の方法に基づいて製造することができる。
【００３８】
これらの全ての場合に、生成物（式ＩＩおよびＩＩＩで表される化合物）の適切な精製方法は、当業者により選択することができ、すなわち、カラムクロマトグラフィーにより、あるいはそれ自体公知の方法により、例えば、反応後にジエチル−エーテルまたはエチルアセテートなどの溶媒を添加することにより、混合物から粗生成物を分離し、回収した粗生成物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させることにより、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）で表される化合物を単離し、精製することができる。
【００３９】
本発明の好ましい実施形態では、ニトロアニリン化合物は式（Ｉ）（式中、Ｒ１はＨまたは−ＣＨ３であり、Ｒ２はＨ、−ＣＨ３または−ＣＨ２Ｒ３であり、かつＲ３は飽和の、直鎖状または分枝鎖状のＣ１〜Ｃ３−炭化水素基である）で表される化合物の群から選択され、ニトロオキシ化合物は式（ＩＩ）
【化５】
0006351047.tif 000013
（式中、Ｙは次の組成：ＣａＨｂＯｄＮｅＳｇ
（但し
ａは１〜１０に含まれ、
ｂは２〜２１に含まれ、
ｄは０〜６に含まれ、
ｅは０〜３に含まれ、
ｇは０〜１に含まれる）
の有機分子である）
で表される化合物の群から選択される。
【００４０】
より好ましくは、ニトロアニリン化合物は、式（Ｉ）（式中、Ｒ１はＨまたは−ＣＨ３であり、Ｒ２はＨ、−ＣＨ３または−ＣＨ２Ｒ３であり、かつＲ３は飽和の、直鎖状または分枝鎖状のＣ１〜Ｃ３−炭化水素基である）で表される化合物の群から選択され、ニトロオキシ化合物は式（ＩＩＩ）
【化６】
0006351047.tif 000014
（式中、
ｎは、０〜６に含まれ、但し、ｎ≠０ならば、炭素鎖は、置換されていないか、または３つまでヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基もしくはニトロオキシ基で置換されていてもよい、直鎖状、環状もしくは分枝鎖状の脂肪族炭素鎖、あるいは、一価不飽和または多価不飽和の、アルケニル炭素鎖またはアルキニル炭素鎖であって、任意の異性体形態であり、
Ｒ４は、独立して、水素原子、または１〜６個の炭素原子を含有する飽和の直鎖状、環状もしくは分枝鎖状のアルキル基もしくはアルケニル基であり、
Ｘは、水素原子、Ｒ５、−ＯＲ５、−ＯＣＯＲ５、−ＯＮＯ２、−ＣＯＯＲ５、−ＣＯＮＲ５Ｒ６であり、
Ｒ５およびＲ６は、独立して、水素原子、置換されていないか、または３つまでヒドロキシル基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基もしくはニトロオキシ基で置換された、Ｃ１〜Ｃ１２の直鎖状、分枝鎖状もしくは環状のアルキル鎖、あるいは、一価不飽和または多価不飽和であってよい、アルケニル炭素鎖またはアルキニル炭素鎖であって、任意の異性体形態である）
で表される化合物の群から選択される。
【００４１】
本発明においてより一層好ましくは、ニトロアニリン化合物は、（４−ニトロ−フェニル）−アミン、メチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、エチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、ジメチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、（４−ニトロ−フェニル）−プロピル−アミン、イソプロピル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、２−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−エタノール、３−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−プロパン−１−オール、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリン、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリンおよび３−（（４−ニトロ−フェニルアミノ）−メチル）−安息香酸を含む化合物の群から選択され、ニトロオキシ化合物は、３−ニトロオキシプロパノール、ラセミ体−４−フェニルブタン−１，２−ジイルジニトレート、２−（ヒドロキシメチル）−２−（ニトロオキシメチル）−１，３−プロパンジオール、Ｎ−エチル−３−ニトロオキシ−プロパンスルホンアミド、５−ニトロオキシ−ペンタンニトリル、５−ニトロオキシ−ペンタン、３−ニトロオキシ−プロピルプロピオネート、１，３−ビス−ニトロオキシプロパン、１，４−ビス−ニトロオキシブタン、１，５−ビス−ニトロオキシペンタン、３−ニトロオキシ−プロピルベンゾエート、３−ニトロオキシ−プロピルヘキサノエート、３−ニトロオキシ−プロピル  ５−ニトロオキシ−ヘキサノエート、ベンジルニトレート、イソソルビド−ジニトレート、Ｎ−［２−（ニトロオキシ）エチル］−３−ピリジンカルボキシアミド、２−ニトロ−５−ニトロオキシメチル−フラン、ビス−（２−ニトロオキシエチル）エーテル、３−ニトロオキシプロピオン酸、メチル−３−ニトロオキシプロピオネート、エチル−３−ニトロオキシプロピオネート、エチル−４−ニトロオキシブタノエート、エチル−３−ニトロオキシブタノエート、５−ニトロオキシペンタン酸、エチル−５−ニトロオキシペンタノエート、６−ニトロオキシヘキサン酸、エチル−６−ニトロオキシヘキサノエート、エチル−４−ニトロオキシ−シクロヘキシルカルボキシレート、８−ニトロオキシオクタン酸、エチル−８−ニトロオキオクタノエート、１１−ニトロオキシウンデカン酸、エチル−１１−ニトロオキシウンデカノエート、５−ニトロオキシ−ペンタン酸アミドおよび５−ニトロオキシ−Ｎ−メチル−ペンタン酸アミドから選択される。
【００４２】
好ましくは、本発明は、次の一覧（化合物はそれぞれの化合物識別表で個々に定義されている（表１（数字により）、表２（文字により）））に明記されているような、少なくとも１種のニトロアニリン化合物と少なくとも１種のニトロオキシ化合物の組み合わせを含む、飼料組成物または飼料添加物の使用、および飼料組成物または飼料添加物を提供する：１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、１Ｄ、１Ｅ、１Ｆ、１Ｇ、１Ｈ、１Ｉ、１Ｊ、１Ｋ、１Ｌ、１Ｍ、１Ｎ、１Ｏ、１Ｐ、１Ｑ、１Ｒ、１Ｓ、１Ｔ、１Ｕ、１Ｖ、１Ｗ、１Ｘ、１Ｙ、１Ｚ、１（ＡＡ）、１（ＡＢ）、１（ＡＣ）、１（ＡＤ）、１（ＡＥ）、１（ＡＦ）、２Ａ、２Ｂ、２Ｃ、２Ｄ、２Ｅ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｈ、２Ｉ、２Ｊ、２Ｋ、２Ｌ、２Ｍ、２Ｎ、２Ｏ、２Ｐ、２Ｑ、２Ｒ、２Ｓ、２Ｔ、２Ｕ、２Ｖ、２Ｗ、２Ｘ、２Ｙ、２Ｚ、２（ＡＡ）、２（ＡＢ）、２（ＡＣ）、２（ＡＤ）、２（ＡＥ）、２（ＡＦ）、３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ、３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ、３Ｈ、３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ、３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ、３Ｑ、３Ｒ、３Ｓ、３Ｔ、３Ｕ、３Ｖ、３Ｗ、３Ｘ、３Ｙ、３Ｚ、３（ＡＡ）、３（ＡＢ）、３（ＡＣ）、３（ＡＤ）、３（ＡＥ）、３（ＡＦ）、４Ａ、４Ｂ、４Ｃ、４Ｄ、４Ｅ、４Ｆ、４Ｇ、４Ｈ、４Ｉ、４Ｊ、４Ｋ、４Ｌ、４Ｍ、４Ｎ、４Ｏ、４Ｐ、４Ｑ、４Ｒ、４Ｓ、４Ｔ、４Ｕ、４Ｖ、４Ｗ、４Ｘ、４Ｙ、４Ｚ、４（ＡＡ）、４（ＡＢ）、４（ＡＣ）、４（ＡＤ）、４（ＡＥ）、４（ＡＦ）、５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄ、５Ｅ、５Ｆ、５Ｇ、５Ｈ、５Ｉ、５Ｊ、５Ｋ、５Ｌ、５Ｍ、５Ｎ、５Ｏ、５Ｐ、５Ｑ、５Ｒ、５Ｓ、５Ｔ、５Ｕ、５Ｖ、５Ｗ、５Ｘ、５Ｙ、５Ｚ、５（ＡＡ）、５（ＡＢ）、５（ＡＣ）、５（ＡＤ）、５（ＡＥ）、５（ＡＦ）、６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ、６Ｅ、６Ｆ、６Ｇ、６Ｈ、６Ｉ、６Ｊ、６Ｋ、６Ｌ、６Ｍ、６Ｎ、６Ｏ、６Ｐ、６Ｑ、６Ｒ、６Ｓ、６Ｔ、６Ｕ、６Ｖ、６Ｗ、６Ｘ、６Ｙ、６Ｚ、６（ＡＡ）、６（ＡＢ）、６（ＡＣ）、６（ＡＤ）、６（ＡＥ）、６（ＡＦ）、７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅ、７Ｆ、７Ｇ、７Ｈ、７Ｉ、７Ｊ、７Ｋ、７Ｌ、７Ｍ、７Ｎ、７Ｏ、７Ｐ、７Ｑ、７Ｒ、７Ｓ、７Ｔ、７Ｕ、７Ｖ、７Ｗ、７Ｘ、７Ｙ、７Ｚ、７（ＡＡ）、７（ＡＢ）、７（ＡＣ）、７（ＡＤ）、７（ＡＥ）、７（ＡＦ）、８Ａ、８Ｂ、８Ｃ、８Ｄ、８Ｅ、８Ｆ、８Ｇ、８Ｈ、８Ｉ、８Ｊ、８Ｋ、８Ｌ、８Ｍ、８Ｎ、８Ｏ、８Ｐ、８Ｑ、８Ｒ、８Ｓ、８Ｔ、８Ｕ、８Ｖ、８Ｗ、８Ｘ、８Ｙ、８Ｚ、８（ＡＡ）、８（ＡＢ）、８（ＡＣ）、８（ＡＤ）、８（ＡＥ）、８（ＡＦ）、９Ａ、９Ｂ、９Ｃ、９Ｄ、９Ｅ、９Ｆ、９Ｇ、９Ｈ、９Ｉ、９Ｊ、９Ｋ、９Ｌ、９Ｍ、９Ｎ、９Ｏ、９Ｐ、９Ｑ、９Ｒ、９Ｓ、９Ｔ、９Ｕ、９Ｖ、９Ｗ、９Ｘ、９Ｙ、９Ｚ、９（ＡＡ）、９（ＡＢ）、９（ＡＣ）、９（ＡＤ）、９（ＡＥ）、９（ＡＦ）、１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ、１０Ｄ、１０Ｅ、１０Ｆ、１０Ｇ、１０Ｈ、１０Ｉ、１０Ｊ、１０Ｋ、１０Ｌ、１０Ｍ、１０Ｎ、１０Ｏ、１０Ｐ、１０Ｑ、１０Ｒ、１０Ｓ、１０Ｔ、１０Ｕ、１０Ｖ、１０Ｗ、１０Ｘ、１０Ｙ、１０Ｚ、１０（ＡＡ）、１０（ＡＢ）、１０（ＡＣ）、１０（ＡＤ）、１０（ＡＥ）、１０（ＡＦ）、１１Ａ、１１Ｂ、１１Ｃ、１１Ｄ、１１Ｅ、１１Ｆ、１１Ｇ、１１Ｈ、１１Ｉ、１１Ｊ、１１Ｋ、１１Ｌ、１１Ｍ、１１Ｎ、１１Ｏ、１１Ｐ、１１Ｑ、１１Ｒ、１１Ｓ、１１Ｔ、１１Ｕ、１１Ｖ、１１Ｗ、１１Ｘ、１１Ｙ、１１Ｚ、１１（ＡＡ）、１１（ＡＢ）、１１（ＡＣ）、１１（ＡＤ）、１１（ＡＥ）、または１１（ＡＦ）。
【００４３】
本発明のより好ましい組み合わせは、（４−ニトロ−フェニル）−アミン、メチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、エチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、ジメチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、（４−ニトロ−フェニル）−プロピル−アミン、イソプロピル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、２−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−エタノール、３−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−プロパン−１−オール、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリン、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリンおよび３−（（４−ニトロ−フェニルアミノ）−メチル）−安息香酸を含む化合物の群から選択される少なくとも１種のニトロアニリン化合物と、３−ニトロオキシプロパノール、５−ニトロオキシ−ペンタン、１，３−ビス−ニトロオキシプロパン、エチル−３−ニトロオキシプロピオネート、メチル−３−ニトロオキシプロピオネート、３−ニトロオキシプロピオン酸、１，４−ビス−ニトロオキシブタンおよび１，５−ビス−ニトロオキシペンタンから選択される少なくとも１種のニトロオキシ化合物を含む。
【００４４】
本発明の別のより好ましい組み合わせは、（４−ニトロ−フェニル）−アミン、メチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、エチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、ジメチル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、（４−ニトロ−フェニル）−プロピル−アミン、イソプロピル−（４−ニトロ−フェニル）−アミン、２−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−エタノール、３−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−プロパン−１−オール、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリン、４−ニトロ−Ｎ−（ピリジン−２−イルメチル）アニリンおよび３−（（４−ニトロ−フェニルアミノ）−メチル）−安息香酸を含む化合物の群から選択される少なくとも１種のニトロアニリン化合物と、３−ニトロオキシプロパノールおよび／または１，３−ビス−ニトロオキシプロパンから選択される少なくとも１種のニトロオキシ化合物を含む。
【００４５】
本発明の別のより好ましい組み合わせは、少なくとも（４−ニトロ−フェニル）−アミンと、３−ニトロオキシプロパノール、ラセミ体−４−フェニルブタン−１，２−ジイルジニトレート、２−（ヒドロキシメチル）−２−（ニトロオキシメチル）−１，３−プロパンジオール、Ｎ−エチル−３−ニトロオキシ−プロパンスルホンアミド、５−ニトロオキシ−ペンタンニトリル、５−ニトロオキシ−ペンタン、３−ニトロオキシ−プロピルプロピオネート、１，３−ビス−ニトロオキシプロパン、１，４−ビス−ニトロオキシブタン、１，５−ビス−ニトロオキシペンタン、３−ニトロオキシ−プロピルベンゾエート、３−ニトロオキシ−プロピルヘキサノエート、３−ニトロオキシ−プロピル  ５−ニトロオキシ−ヘキサノエート、ベンジルニトレート、イソソルビド−ジニトレート、Ｎ−［２−（ニトロオキシ）エチル］−３−ピリジンカルボキシアミド、２−ニトロ−５−ニトロオキシメチル−フラン、ビス−（２−ニトロオキシエチル）エーテル、３−ニトロオキシプロピオン酸、メチル−３−ニトロオキシプロピオネート、エチル−３−ニトロオキシプロピオネート、エチル−４−ニトロオキシブタノエート、エチル−３−ニトロオキシブタノエート、５−ニトロオキシペンタン酸、エチル−５−ニトロオキシペンタノエート、６−ニトロオキシヘキサン酸、エチル−６−ニトロオキシヘキサノエート、エチル−４−ニトロオキシ−シクロヘキシルカルボキシレート、８−ニトロオキシオクタン酸、エチル−８−ニトロオキオクタノエート、１１−ニトロオキシウンデカン酸、エチル−１１−ニトロオキシウンデカノエート、５−ニトロオキシ−ペンタン酸アミドおよび５−ニトロオキシ−Ｎ−メチル−ペンタン酸アミドから選択される少なくとも１種のニトロオキシ化合物を含む。
【００４６】
本発明の最も好ましい組み合わせは、少なくとも（４−ニトロ−フェニル）−アミンと、３−ニトロオキシプロパノール、５−ニトロオキシ−ペンタン、１，３−ビス−ニトロオキシプロパン、エチル−３−ニトロオキシプロピオネート、メチル−３−ニトロオキシプロピオネート、３−ニトロオキシプロピオン酸、１，４−ビス−ニトロオキシブタン、１，５−ビス−ニトロオキシペンタンから選択される少なくとも１種のニトロオキシ化合物を含む。
【００４７】
本発明の最も好ましい組み合わせは、３−ニトロオキシプロパノールと２−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−エタノール、３−ニトロオキシプロパノールと（４−ニトロ−フェニル）プロピル−アミン、３−ニトロオキシプロパノールと（４−ニトロ−フェニル）−アミン、または１，３−ビス−ニトロオキシプロパンと（４−ニトロ−フェニル）−アミンを含む。
【００４８】
さらに最も好ましいのは、（４−ニトロフェニル）−アミンと、３−ニトロオキシプロパノールおよび／または１，３−ビス−ニトロオキシプロパンを含む本発明の飼料組成物または飼料添加物である。
【００４９】
反芻動物によるメタンの排出は、代謝チャンバーに収容した個別の動物について、当該技術分野で知られた方法により容易に測定することができる（Ｇｒａｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００７  Ｊ．Ｄａｉｒｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ；９０：２７５５−２７６６）。さらに、レーザービームを用いる新しい技術により、厩舎レベルで評価することもできる（ＭｃＧｉｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｎｖｉｒｏｎ−ｍｅｎｔａｌ  Ｑｕａｌｉｔｙ；３８：１７９６−１８０２）。あるいは、酪農反芻動物により生成するメタンは、国際公開第２００９／１５６４５３号パンフレットにしたがい、乳中の脂肪酸プロファイルを測定することによっても評価することができる。
【００５０】
反芻動物のパフォーマンスは、当該技術分野でよく知られた方法により評価することができ、通常、飼料要求率、飼料摂取量、体重の増加、屠殺体収量または乳収量により特徴づけられる。
【００５１】
本発明の飼料組成物または飼料添加物とともに、例えば、酵母、オレガノ抽出物およびエッセンシャルオイル（例えば、チモール、３−メチルフェノール、バニリン、グアイアコールおよびオイゲノール）などのさらなる成分を与えることができよう。
【００５２】
本発明の反芻哺乳類には、ウシ、ヤギ、ヒツジ、キリン、アメリカバイソン、ヨーロッパバイソン、ヤク、スイギュウ、シカ、ラクダ、アルパカ、ラマ、ヌー、アンテロープ、プロングホーンおよびニルガイが含まれる。
【００５３】
本発明の全ての実施形態で、家畜のウシ、ヒツジおよびヤギがより好ましい種である。本発明の目的のために最も好ましい種は家畜のウシである。この用語には、全種類の家畜ウシおよびあらゆる種類の生産用ウシ、特に乳牛および肉牛を含む。
【００５４】
本発明はまた、反芻動物の消化活動から発生するメタンの生成を減少させ、かつ／または反芻動物のパフォーマンスを改善するための、少なくとも１種のニトロアニリン化合物および少なくとも１種のニトロオキシ化合物を含む飼料組成物または使用添加物の使用であって、乾燥物質の摂取量１キログラム当たりのリットル数で計算した、反芻動物からのメタンの生成が、代謝チャンバー内での測定で、少なくとも１０％削減される使用に関する。
【００５５】
メタンの削減は、好ましくは少なくとも１５％、より好ましくは少なくとも２０％、より一層好ましくは少なくとも２５％、最も好ましくは少なくとも３０％である。レーザービームを使用するような、または酪農反芻動物ではメタンの生産と乳中のＶＦＡプロファイルとの相関を使用するような、代替のメタン排出測定法も使用し得る。
【００５６】
本発明はまた、従来のパフォーマンス試験で測定したときに、反芻動物の飼料要求率を少なくとも１％低減させるための、少なくとも１種のニトロアニリン化合物と少なくとも１種のニトロオキシ化合物を含む飼料組成物または飼料添加物の使用に関する。飼料要求率は、好ましくは少なくとも２％、より好ましくは少なくとも２．５％、より一層好ましくは少なくとも３％、最も好ましくは少なくとも３．５％低減される。
【００５７】
畜産学では、飼料要求率（ＦＣＲ）という用語は、動物が飼料質量を体重の増加に変換する効率の尺度である。具体的には、ＦＣＲは、指定された期間に摂取した飼料の質量を体重の増加分で除したものである。ＦＣＲは無次元である。
【００５８】
本発明はまた、少なくとも１種のニトロアニリン化合物と少なくとも１種のニトロオキシ化合物を含む飼料組成物または飼料添加物の使用であって、組成物中のニトロアニリン化合物の量が飼料１Ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜２ｇ、好ましくは飼料１Ｋｇ当たり０．１ｍｇ〜０．２ｇ、より好ましくは飼料１Ｋｇ当たり１ｍｇ〜１０ｍｇであり、組成物中のニトロオキシ化合物の量が飼料１Ｋｇ当たり１ｍｇ〜１０ｇ、好ましくは飼料１Ｋｇ当たり５ｍｇ〜１ｇである飼料組成物または飼料添加物の使用に関する。
【００５９】
本発明はさらに、少なくとも１種のニトロアニリン化合物と少なくとも１種のニトロオキシ化合物を含む飼料組成物または飼料添加物の使用であって、ニトロアニリン化合物のニトロオキシ化合物に対する重量比が０．０２〜０．２、好ましくは０．０５〜０．１である飼料組成物または飼料添加物の使用に関する。
【００６０】
反芻動物用飼料または飼料添加物は、飼料の配合および加工の技術分野でそれ自体公知の方法により調製し得る。
【００６１】
したがって、本発明のさらなる態様は、配合物、すなわち本明細書において定義した組成物を含む、飼料添加物および動物用飼料組成物である。
【００６２】
したがって、本発明はまた、上で定義したように、少なくとも１種のニトロアニリン化合物と少なくとも１種のニトロオキシ化合物を含む、飼料組成物または飼料添加物に関する。
【００６３】
飼料摂取により動物に与えられる本発明の組成物の標準的な一日量は、動物の種類およびその健康状態により変わる。通常、この量は、体重１ｋｇ当たり、化合物約１ｍｇ〜約１０ｇ、好ましくは約１０ｍｇ〜約１ｇ、より好ましくは５０ｍｇ〜５００ｍｇの範囲である。
【００６４】
少なくとも１種のニトロアニリン化合物と少なくとも１種のニトロオキシ化合物を含む組成物は、動物用飼料組成物（規定食）中に含まれる、炭酸カルシウム、塩化アンモニウムなどの電解質、ダイズのあらびき粉などのタンパク質、コムギ、デンプン、ヒマワリのあらびき粉、トウモロコシ、肉および骨のあらびき粉、アミノ酸、獣脂、ビタミン、ならびに微量ミネラルなどの従来の成分と組み合わせて使用し得る。
【００６５】
本発明の組成物の特定の例として、以下のものが挙げられる。
−（ａ）表１から選択される少なくとも１種の化合物および（ｂ）表２から選択される少なくとも１種の化合物、（ｃ）少なくとも１種の脂溶性ビタミン、（ｄ）少なくとも１種の水溶性ビタミン、（ｅ）少なくとも１種の微量ミネラル、ならびに／または（ｆ）少なくとも１種のマクロミネラルを含む動物用飼料添加物；
−ニトロアニリン化合物、ニトロオキシ化合物、および含有率が５０〜８００ｇ／ｋｇ飼料の粗タンパク質を含む動物用飼料組成物。
【００６６】
いわゆるプレミックスは、本発明の動物用飼料添加物の例である。プレミックスは、１種以上の微量成分と、希釈剤および／または担体との、好ましくは均一な混合物をいう。プレミックスは、より大きな混合物中で微量成分が均一に分散するのを促進するために使用される。
【００６７】
本発明の有効組成物は別として、プレミックスは通常、少なくとも１種の脂溶性ビタミン、および／または少なくとも１種の水溶性ビタミン、および／または少なくとも１種の微量ミネラル、および／または少なくとも１種のマクロミネラルを含む。言い換えれば、本発明のプレミックスは、脂溶性ビタミン、水溶性ビタミン、微量ミネラルおよびマクロミネラルからなる群から選択される少なくとも１種の追加成分とともに、本発明の少なくとも１種のニトロアニリン化合物および少なくとも１種のニトロオキシ化合物を含む。
【００６８】
マクロミネラルは、飼料に個別に加えることもできる。したがって、特定の一実施形態では、プレミックスは、本発明の有効成分を、脂溶性ビタミン、水溶性ビタミンおよび微量ミネラルからなる群から選択される少なくとも１種の追加成分とともに含む。
【００６９】
以下は、これらの成分の例の非限定的な一覧である。
−脂溶性ビタミンの例としては、ビタミンＡ、ビタミンＤ３、ビタミンＥおよびビタミンＫ、例えばビタミンＫ３が挙げられる。
−水溶性ビタミンの例としては、ビタミンＢ１２、ビオチンおよびコリン、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ナイアシン、葉酸ならびにパントテン酸塩、例えば、Ｃａ−Ｄ−パントテン酸塩が挙げられる。
−微量ミネラルの例としては、マンガン、亜鉛、鉄、銅、ヨード、セレンおよびコバルトが挙げられる。
−マクロミネラルの例としては、カルシウム、リンおよびナトリウムが挙げられる。
【００７０】
乳牛などの反芻動物用飼料組成物およびその成分に関しては、反芻動物用規定食は、通常、易分解性画分（濃厚飼料と名付けられている）、および繊維に富む、容易には分解しない画分（干し草、まぐさ、粗飼料と名付けられている）からなる。
【００７１】
干し草は、乾燥した牧草、マメ科植物または全粒穀物から作られる。牧草としては、とりわけ、チモシー、ライグラス、フェスキュが挙げられる。マメ科植物としては、とりわけ、クローバー、ルーサンまたはアルファルファ、エンドウマメ、マメおよびベッチが挙げられる。全粒穀物としては、とりわけ、オオムギ、トウモロコシ（コーン）、カラスムギ、ソルガムが挙げられる。他の飼料作物としては、サトウキビ、ケール、セイヨウアブラナおよびキャベツが挙げられる。カブ、スウェーデンカブ、マングル（ｍａｎｇｌｅ）、飼料ビート、およびテンサイ（ビートパルプおよびテンサイ糖蜜を含む）などの根菜類も反芻動物の飼料として使用される。さらに他の作物として、ジャガイモ、キャッサバおよびサツマイモなどの塊茎類がある。サイレージは、サイロに貯蔵された繊維に富む画分（例えば、牧草、マメ科植物または全粒穀物からの）であり、これにより水分含有率の高い物質が、コントロールされた嫌気性醗酵プロセスにより処理（自然発酵または添加剤処理）される。
【００７２】
濃厚飼料は、主として穀類（ビール粕およびウィスキー粕を含むオオムギ、トウモロコシ、コムギ、ソルガム）から作られるが、ダイズ、ナタネ、パーム核、綿実およびヒマワリなどのタンパク質に富む飼料成分を含むことも多い。
【００７３】
乳牛にはまた、混合飼料（ＴＭＲ）、すなわちあらゆる規定食成分、例えば、まぐさ、サイレージおよび濃縮飼料が給餌前に混合されているものを与えることができる。
【００７４】
上述のように、プレミックスは、本発明の組成物を含み得る飼料添加物の一例である。当然のことながら、本組成物を異なる他の形態で動物に投与してもよい。例えば、組成物にはまた、反芻胃に配置され、特定の時間にわたって明確に決められた用量で連続的に有効化合物を放出するであろう大丸薬に含めることもできる。
【００７５】
本発明はさらに、反芻動物の消化活動から発生するメタンの生成を減少させ、かつ／または反芻動物のパフォーマンスを改善するための方法であって、式（Ｉ）
【化７】
0006351047.tif 000015
（式中、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して、Ｈ、−ＣＨ３または−ＣＨ２Ｒ３を表し、Ｒ３は、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨから選択される１つ〜３つの基で置換されていてもよい、飽和または不飽和の、直鎖状、分枝鎖状または環状のＣ１〜Ｃ８−炭化水素基であり、Ｃ１〜Ｃ８炭化水素基中の１個または２個の炭素原子は窒素原子または酸素原子により置換されていてもよい）
により定義される少なくとも１種のパラニトロアニリン誘導体またはその塩、および式（ＩＩ）
【化８】
0006351047.tif 000016
（式中、Ｙは次の組成：ＣａＨｂＯｄＮｅＳｇ
（但し、
ａは１〜２５に含まれ、
ｂは２〜５１に含まれ、
ｄは０〜８に含まれ、
ｅは０〜５に含まれ、かつ
ｇは０〜３に含まれる）
の有機分子である）
により定義される、少なくとも１つのニトロオキシ基で任意の位置が置換されている少なくとも１種の有機分子またはその塩を含む飼料組成物または飼料添加物を、十分な量、経口投与することを含む方法に関する（好ましい実施形態は、上記の通りである）。
【００７６】
加えて、本発明は、さらに、本発明の飼料組成物または飼料添加物を、ジアリルジスルフィド、ニンニク油、アリルイソチオシアネート、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸およびこれらの誘導体からなる群から選択される、少なくとも１種の追加の有効物質と組み合わせて、動物に投与する上述の方法に関する。
【００７７】
本発明はまた、反芻動物がウシ、ヤギ、ヒツジ、キリン、アメリカバイソン、ヨーロッパバイソン、ヤク、スイギュウ、シカ、タクダ、アルパカ、ラマ、ヌー、アンテロープ、プロングホーンおよびニルガイからなる群から選択される、より好ましくはウシ、ヤギおよびヒツジからなる群から選択される、上記方法に関する。
【００７８】
本発明はまた、組成物中のニトロアニリン化合物の量が飼料１Ｋｇ当たり２０ｍｇ〜２００ｇ、好ましくは飼料１Ｋｇ当たり１０ｍｇ〜２０ｇ、より好ましくは飼料１Ｋｇ当たり５０ｍｇ〜１ｇであり、かつ配合組成物中のニトロオキシ化合物の量が飼料１Ｋｇ当たり１ｍｇ〜１０ｇ、好ましくは飼料１Ｋｇ当たり５ｍｇ〜１ｇである上記方法に関する。
【００７９】
本発明はまた、乾燥物質の摂取量１キログラム当たりのリットル数で計算した反芻動物のメタン生産を、代謝チャンバー内の測定で、少なくとも１０％減少させる上記方法に関する。メタンの低減は、好ましくは少なくとも１５％、より好ましくは少なくとも２０％、より一層好ましくは少なくとも２５％、最も好ましくは少なくとも３０％である。レーザービームを使用するような、または酪農反芻動物ではメタンの生産と乳中のＶＦＡプロファイルとの相関を使用するような、代替のメタン排出測定法も使用し得る。
【００８０】
本発明はまた、従来のパフォーマンス試験による測定で、反芻動物の飼料要求率を少なくとも１％減少させる上記方法に関する。飼料要求率を、少なくとも２％減少させることが好ましく、少なくとも２．５％減少させることがより好ましく、少なくとも３％減少させることがより一層好ましく、少なくとも３．５％減少させることが最も好ましい。
【００８１】
本発明はまた、ニトロアニリン化合物のニトロオキシ化合物に対する重量比が０．０２〜０．２、好ましくは０．０５〜０．１である上記方法に関する。
【００８２】
以下の実施例により、本発明をさらに説明するが、それらを本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【００８３】
［実施例］
［実施例１：メタン生産のインビトロ試験。］
インビトロシステムにより模擬される反芻胃機能に対する特定の化合物の効果を試験するために、「Ｈｏｈｅｎｈｅｉｍ  Ｆｏｒａｇｅ  ｖａｌｕｅ  Ｔｅｓｔ（ＨＦＴ）」の修正版を用いた。
【００８４】
［原理：］
反芻胃液組成物、および緩衝液の適切な混合物とともに、飼料をシリンジに加えた。溶液を３９℃でインキュベートする。８時間後に、生成したガス相の量（および組成）を測定し、変換式に入力する。
【００８５】
［試薬：］
主要元素溶液：
−  ６．２ｇのリン酸二水素カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）
−  ０．６ｇの硫酸マグネシウム七水和物（ＭｇＳＯ４＊７Ｈ２Ｏ）
−  ９ｍｌの濃リン酸（１ｍｏｌ／ｌ）
−  蒸留水に溶解させて１ｌにする（ｐＨ約１．６）
［緩衝溶液：］
−  ３５．０ｇの炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）
−  ４．０ｇの炭酸水素アンモニウム（（ＮＨ４）ＨＣＯ３）
−  蒸留水に溶解させて１ｌにする
［微量元素溶液：］
−  １３．２ｇの塩化カルシウム二水和物（Ｃａｃｌ２＊２Ｈ２Ｏ））
−  １０．０ｇの塩化マンガン（ＩＩ）四水和物（ＭｎＣｌ２＊４Ｈ２Ｏ）
−  １．０ｇの塩化コバルト（ＩＩ）六水和物（ＣｏＣｌ２＊６Ｈ２Ｏ）
−  ８．０ｇの塩化鉄（ＩＩＩ）（ＦｅＣｌ３＊６Ｈ２Ｏ）
−  蒸留水に溶解させて１００ｍｌにする
［ナトリウム塩溶液：］
−  １００ｍｇのナトリウム塩
−  蒸留水に溶解させて１００ｍｌにする
［還元溶液：］
−  最初に３ｍｌの水酸化ナトリウム（ｃ＝１ｍｏｌ／ｌ）、次に４２７．５ｍｇの硫化ナトリウム水和物（Ｎａ２Ｓ＊Ｈ２Ｏ）を、７１．２５ｍｌのＨ２Ｏに加える
−  溶液は、媒体溶液に加える直前に調製されなければならない
【００８６】
［手順：］
サンプルの秤量：飼料材料―通常はＴＭＲ（４４％の濃縮飼料、６％の干し草、３７％のトウモロコシサイレージおよび１３％の牧草サイレージ）―を１ｍｍに篩分けし、正確に秤量して６４本のシリンジに入れる。これらのシリンジの４本は、試験化合物の効果を含まないガス生成を示す基質対照である。他の４本のシリンジは、ブロモエタンスルホネートを０．１ｍＭになるように加えた陽性対照である。必要ならば、４本のシリンジは、担体対照を含有する（試験化合物が担体を必要とする場合）。残りのシリンジは、１グループあたり４本のシリンジで、試験物質を含有する。
【００８７】
［媒体溶液の調製：］
以下の順序でウルフ瓶中で成分を混合する。
−  ７１１ｍｌの水
−  ０．１８ｍｌの微量元素溶液
−  ３５５．５ｍｌの緩衝溶液
−  ３５５．５ｍｌの主要元素溶液
完成した溶液を３９℃まで加温し、続いて、１．８３ｍｌのナトリウム塩溶液を加え、３６℃で還元溶液を加える。
指示薬が無色に変わったとき、反芻胃液を加える。
【００８８】
［反芻胃液の抽出：］
連続的に撹拌し、ＣＯ２を流しながら、７５０ｍｌの反芻胃液を約１，４００ｍｌの媒体溶液に加える。
【００８９】
［シリンジへの充填、インキュベーション、ならびにガス体積およびＶＦＡ値の測定：］
希釈した反芻胃液（２４ｍｌ）をガラスシリンジに加える。その後、穏やかに撹拌しながら３９℃で８時間、シリンジをインキュベートする。８時間後、生成したガスの体積を測定し、気相中のメタンのパーセンテージをガスクロマトグラフィーにより決定する。
【００９０】
［結果：］
発酵飼料は、人工ＴＭＲ（４４％の濃厚飼料、６％の干し草、３７％のトウモロコシサイレージ、および１３％の牧草サイレージ）であった。ＰＣＴ／ＩＢ２０１３０５２２３０号明細書に記載のようにして（４−ニトロ−フェニル）−アミンを合成し、０．１％乾燥物質（ＤＭ）の濃度で使用した。ＰＣＴ／ＥＰ２０１１／０７２７０７号明細書に記載のようにして３−ニトロオキシ−プロパノールおよび１，３−ビス−ニトロオキシプロパンをともに合成し、０．００５％ＤＭの濃度で使用した。
【００９１】
結果を以下の表３に示す。驚いたことに、メタン生成の低減に関し、相乗効果が得られた。さらに、化合物（パラニトロアニリンおよびニトロオキシ誘導体）の個々の投与では変化しないアセテート、プロピオネートおよびブチレートが、本発明の組成物（（４−ニトロ−フェニル）−アミン、および３−ニトロキシ−プロパノールまたは１，３−ビス−ニトロオキシプロパン）の場合に、アセテートからプロピオネートへ大きく移行している。アセテート／プロピオネート比のこの移行は、動物にとって、パフォーマンス上の恩恵の追加につながる。
【００９２】
【表８】
0006351047.tif 000017
【００９３】
［実施例２：ニトロアニリン誘導体とニトロオキシ誘導体の異なる組み合わせを用いた、インビトロでのメタン生成の低減。］
上記実施例１に記載のようにして、インビトロでのメタン低減実験を行ったが、用量はここではモル濃度（マイクロモル濃度）で計算される。異なる組み合わせの結果を以下の表４に示す。驚いたことに、メタン生成の低減に関し、相乗効果が得られた。３−ニトロオキシプロパノールと、２−（４−ニトロ−フェニルアミノ）−エタノールまたは（（４−ニトロ−フェニル）−プロピル−アミンとを組み合わせたとき。さらに、化合物（パラニトロアニリンおよびニトロオキシ誘導体）の個々の投与では変化しないアセテート、プロピオネートおよびブチレートが、本発明の組成物の場合には、アセテートからプロピオネートへ大きく移行する（データは示さず）。
【００９４】
【表９】
0006351047.tif 000018