(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物：
【化１】
0006322770.tif 000064
（式中、
Ｒ１は、水素、２−メトキシエチル、２−（シクロプロポキシ）エチル、２−ヒドロキシエチル、２−（２，２−ジフルオロエトキシ）エチル、２−（トリジュウテリオメトキシ）エチル、２−（トリフルオロメトキシ）エチル、２−メトキシプロピル、（２Ｒ）−２−メトキシプロピル、または（２Ｓ）−２−メトキシプロピルであり、
Ｒ２およびＲ３は、独立して、水素、メチル、もしくはエチルであるか、またはＲ２およびＲ３は一緒になってシクロプロピルまたはシクロペンチルを形成してもよく、
Ｒ４は、水素、メチル、エチル、イソプロピル、シクロプロピル、ジフルオロメチル、２−フルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、または２−メトキシエチルであり、
Ｒ５は、水素、メチルまたはシクロプロピルである）
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ２およびＲ３はメチルである、請求項１に記載の化合物または塩。
【請求項３】
Ｒ１は２−メトキシエチルである、請求項２に記載の化合物または塩。
【請求項４】
Ｒ４はメチルである、請求項３に記載の化合物または塩。
【請求項５】
Ｒ５は水素である、請求項３に記載の化合物または塩。
【請求項６】
５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンである、請求項４に記載の化合物または塩。
【請求項７】
５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物または塩と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物または塩を含む、癌を治療するための医薬組成物。
【請求項１０】
前記癌は、黒色腫、大腸癌、膵癌、および非小細胞肺癌からなる群から選択される、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記癌は、大腸癌である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記癌は、膵癌である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記癌は、非小細胞肺癌である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
療法に使用するための請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項１５】
癌の治療に使用するための請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項１６】
前記癌は、黒色腫、大腸癌、膵癌、および非小細胞肺癌からなる群から選択される、請求項１５に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項１７】
前記癌は、大腸癌である、請求項１６に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項１８】
前記癌は、膵癌である、請求項１６に記載の使用のための化合物または塩。
【請求項１９】
前記癌は、非小細胞肺癌である、請求項１６に記載の使用のための化合物または塩。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）の活性を阻害し、癌を治療するのに有用であり得るチエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン化合物またはその薬学的に許容可能な塩、およびその化合物を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＥＲＫ／ＭＡＰＫ経路は細胞増殖に重要であり、多くの腫瘍において活性化されることが頻繁に観察される。ＥＲＫ／１／２の上流であるＲａｓ遺伝子は、大腸癌、黒色腫、非小細胞肺癌ならびに乳房および膵臓腫瘍を含むいくつかの癌において変異される。高いＲａｓ活性は多くのヒト腫瘍において上昇したＥＲＫ活性を伴う。研究によりまた、ＥＲＫはＲａｓシグナル伝達の重要な構成要素であることが示されている。これらの観察により、広範囲のヒト腫瘍における抗癌治療の開発に関してＥＲＫ１／２シグナル伝達経路が魅力的であることが支持される。
【０００３】
ＥＲＫ阻害剤は当該分野において公知であり、例えば特許文献１を参照のこと。より特には癌を治療するための代替のＥＲＫ阻害剤を提供する必要性が存在したままである。したがって、本発明は、癌を治療するのに有用であり得るＥＲＫ１／２阻害剤を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２０１３１３０９７６号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、以下の式の化合物：
【化１】
0006322770.tif 000002
（式中、
Ｒ１は、水素、２−メトキシエチル、２−（シクロプロポキシ）エチル、２−ヒドロキシエチル、２−（２，２−ジフルオロエトキシ）エチル、２−（トリジュウテリオメトキシ）エチル、２−（トリフルオロメトキシ）エチル、２−メトキシプロピル、（２Ｒ）−２−メトキシプロピル、または（２Ｓ）−２−メトキシプロピルであり、
Ｒ２およびＲ３は、独立して、水素、メチル、もしくはエチルであるか、またはＲ２およびＲ３は一緒になってシクロプロピルまたはシクロペンチルを形成してもよく、
Ｒ４は、水素、メチル、エチル、イソプロピル、シクロプロピル、ジフルオロメチル、２−フルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、または２−メトキシエチルであり、
Ｒ５は、水素、メチルまたはシクロプロピルである）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【０００６】
本発明は、Ｒ１が２−メトキシエチルである、式Ｉの化合物についての実施形態を提供する。
【０００７】
本発明はまた、Ｒ２およびＲ３が独立してメチルである、式Ｉの化合物についての実施形態を提供する。
【０００８】
本発明はまた、Ｒ４がメチルである、式Ｉの化合物についての別の実施形態を提供する。
【０００９】
本発明はまた、Ｒ５が水素である、式Ｉの化合物についてのなおさらなる実施形態を提供する。
【００１０】
好ましくは、本発明は、５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンである化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１１】
特定の実施形態において、本発明は、５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンである化合物を提供する。
【００１２】
本発明は、５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン、またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、もしくは賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。本発明は、５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンと、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。
【００１３】
本発明は、有効量の５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン、またはその薬学的に許容可能な塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。本発明は、有効量の５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンを、それを必要とする患者に投与することを含む、癌を治療する方法を提供する。
【００１４】
本発明は、療法に使用するための、５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。本発明は、癌の治療に使用するための、５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン、またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。本発明は、癌を治療するのに使用するための医薬組成物であって、５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン、またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を提供する。
【００１５】
本発明はまた、療法に使用するための５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンを提供する。本発明は、癌の治療に使用するための５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンを提供する。本発明は、癌を治療するのに使用するための医薬組成物であって、５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンを含む医薬組成物を提供する。
【００１６】
本発明は、癌の治療のための医薬の製造における５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン、またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明はまた、癌の治療のための医薬の製造における５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンの使用を提供する。
【００１７】
本発明は、結晶形の５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンを提供する。本発明はまた、２θ±０．２°において、８．０°、１２．８°、１５．９°、１６．８°および１９．５°からなる群から選択されるピークの１つ以上と組み合わせて２４．２°で生じる特性ピークを有するＸ線粉末回折パターンによって特徴付けられる結晶形（結晶形１）の５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンを提供する。本発明はさらに、２θ±０．２°において、８．５°、９，２°、１６．５°、２０．３°および２３．３°からなる群から選択されるピークの１つ以上と組み合わせて１８．５°で生じる特性ピークを有するＸ線粉末回折パターンによって特徴付けられる結晶形（結晶形２）の５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンを提供する。
【００１８】
さらに、本発明は、癌が、黒色腫、大腸癌、膵癌、および非小細胞肺癌からなる群から選択される、本明細書に記載される方法および使用の好ましい実施形態を提供する。好ましい癌は、大腸癌、膵癌、および非小細胞肺癌である。
【００１９】
本発明はまた、癌の治療における１種以上の化学療法剤と組み合わせた同時、別々または連続的投与に使用するための５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンまたはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２０】
本発明は好ましくは、以下の置換基を有する式Ｉの化合物を含む：
ａ）Ｒ１は２−メトキシエチルであり、
ｂ）Ｒ２はメチルであり、
ｃ）Ｒ３はメチルであり、
ｄ）Ｒ４はメチルであり、または
ｅ）Ｒ５は水素である。
【００２１】
より好ましくは、本発明は、以下の置換基の組み合わせを有する式Ｉの化合物を含む：
ａ）Ｒ２およびＲ３はメチルであり、
ｂ）Ｒ１は２−メトキシエチルであり、Ｒ２はメチルであり、Ｒ３はメチルであり、
ｃ）Ｒ１は２−メトキシエチルであり、Ｒ４はメチルであり、Ｒ５は水素であり、
ｄ）Ｒ２はメチルであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はメチルであり、Ｒ５は水素であり、または
ｅ）Ｒ１は２−メトキシエチルであり、Ｒ２はメチルであり、Ｒ３はメチルであり、Ｒ４はメチルであり、Ｒ５は水素である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
上記および本発明の記述全体にわたって使用される場合、以下の用語は、別段の指示がない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする。
【００２３】
「薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤」は、哺乳動物、例えば、ヒトへの生物学的活性剤の送達のために当該技術分野において一般的に認められた媒体である。
【００２４】
「薬学的に許容可能な塩」または「１つの薬学的に許容可能な塩」とは、比較的非毒性の、本発明の化合物の無機および有機の塩を指す。
【００２５】
「有効量」は、研究者、獣医師、医師または他の臨床医によって求められている組織、器官、動物、哺乳動物またはヒトへの生物学的もしくは医学的反応または所望の治療効果を誘発するであろう、本発明の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、あるいは本発明の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含有する医薬組成物の量を意味する。
【００２６】
「治療」、「治療する」、「治療すること」および同類の用語は、障害の進行を遅らせるまたは逆転させることを含むことが意図される。これらの用語は、たとえ障害または状態が実際に解消されないおよび障害または状態の進行自体が遅くならないもしくは逆転しないとしても、障害または状態の１種または複数の症状を軽減する、改善する、弱める、解消する、または減少することも含む。
【００２７】
本発明の化合物は塩を形成できることは当業者により理解されるであろう。本発明の化合物は塩基性複素環を含有し、したがって複数の無機および有機酸のいずれかと反応して薬学的に許容可能な酸付加塩を形成する。このような薬学的に許容可能な酸付加塩およびそれらを調製するための一般的な方法は当該分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら、ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＡＬＴＳ：ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，ＳＥＬＥＣＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＵＳＥ、（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００８）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｖｏｌ  ６６、Ｎｏ．１、１９７７年１月を参照のこと。
【００２８】
本発明の化合物は、好ましくは、様々な経路によって投与される医薬組成物として製剤化される。好ましくは、このような組成物は経口投与用である。このような医薬組成物およびそれらを調製するための方法は、当該分野において周知である。例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ  ＳＣＩＥＮＣＥ  ＡＮＤ  ＰＲＡＣＴＩＣＥ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＹ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら、第２１版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、２００５）を参照のこと。
【００２９】
本発明の化合物は概して広範な投薬範囲にわたって効果的である。例えば、１日当たりの投薬量は、通常、１日に約１〜２０００ｍｇの範囲内である。好ましくは、このような用量は、１日に５０〜１０００ｍｇの範囲内である。より好ましくは、このような用量は１日に１２５〜４００ｍｇの範囲内である。一部の場合、上述の範囲の下限値未満の投薬レベルが十分以上であってもよく、一方、他の場合、さらに多くの用量が利用されてもよく、したがって上記の投薬範囲は本発明の範囲を限定することを決して意図していない。実際に投与される化合物の量は、治療される状態、選択される投与経路、投与される実際の１つまたは複数の化合物、個々の患者の年齢、体重および反応、ならびに患者の症状の重症度を含む、関連状況を考慮して、医師により決定されることは理解されるであろう。
【００３０】
当業者は、本発明の特定の化合物が少なくとも１つのキラル中心を含有することを理解するであろう。本発明は、全ての個々のエナンチオマーまたはジアステレオマー、ならびにラセミ体を含む前記化合物のエナンチオマーとジアステレオマーの混合物を意図する。少なくとも１つのキラル中心を含有する本発明の化合物は単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーとして存在することが好ましい。単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーは、キラル試薬で開始して、または立体選択的もしくは立体特異的合成技術によって調製され得る。あるいは、単一のエナンチオマーまたはジアステレオマーは、標準的なキラルクロマトグラフまたは結晶化技術によって混合物から単離されてもよい。
【００３１】
化合物名において「異性体１」の指定は、本発明の対応する中間体または化合物が、エナンチオマーの対の混合物がキラルクロマトグラフィーにより分離される場合、２つの溶出しているエナンチオマーのうちの１番目であることを表す。化合物名において「異性体２」の指定は、本発明の対応する中間体または化合物が、エナンチオマーの対の混合物がキラルクロマトグラフィーにより分離される場合、２つの溶出しているエナンチオマーのうちの２番目であることを表す。
【００３２】
本発明の化合物は、当該分野において周知で理解されている合成法に従って調製され得る。これらの反応の工程についての適切な反応条件は当該分野において周知であり、溶媒および共試薬の適切な置換は当業者の範囲内である。同様に、合成中間体は、必要または所望の場合、様々な周知の技術によって単離および／または精製され得ること、ならびに高い頻度で、ほとんどまたは全く精製せずに後の合成工程において様々な中間体を直接使用できることは当業者により理解されるであろう。さらに、当業者は、一部の状況において、部分が導入される順序は重要ではないことを理解するであろう。本発明の化合物を生成するのに必要とされる工程の特定の順序は、熟練の化学者によって十分に理解されるように、合成される特定の化合物、出発化合物、および置換部分の相対的傾向に依存する。他に示されない限り、全ての置換基は以前に定義されている通りであり、全ての試薬は当該分野において周知であり、理解されている。
【００３３】
本明細書で使用される場合、以下の用語は示した意味を有する：「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指し；「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指し；「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを指し；「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し；「ＤＴＴ」はジチオスレイトールを指し；「ＥＤＴＡ」はエチレンジアミン四酢酸を指し；「ＥＧＴＡ」はエチレングリコール四酢酸を指し；「ＥＬＩＳＡ」は酵素結合免疫吸着測定法を指し；「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し；「ＥｔＯＨ」はエタノールを指し；「ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を指し；「ＨＢＳＳ」はハンクス平衡塩溶液を指し；「ＩＣ５０」は半数阻害濃度を指し；「ＩＶＴＩ」はインビボ標的阻害を指し；「ＭＳ」は質量分析を指し；「ＭｅＯＨ」はメタノールを指し；「ＮＭＲ」は核磁気共鳴を指し；「ＰＢＳＴ」はＴｗｅｅｎ−２０を含有するリン酸緩衝生理食塩水を指し；「ＴＥＤ５０」は閾値有効量５０を指し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し；「ＵＶＷ」は紫外線波長を指し、「ＸＲＤ」はＸ線回折を指す。
【００３４】
反対に示さない限り、本明細書に例示される化合物は、ＡＣＤＬＡＢＳまたはＡｃｃｅｌｒｙｓ  Ｄｒａｗ  ４．１のいずれかを使用して命名され、番号付けされる。
【００３５】
本発明の化合物は以下のスキームに例示されるように合成され得、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は以前に定義されている通りである。
【００３６】
【化２】
0006322770.tif 000003
スキーム１：式Ｉの化合物の合成
スキーム１は式Ｉの化合物を作製するための合成方法を例示する。化合物１は周知のパラジウムカップリング反応条件下で化合物２と反応して、式Ｉの化合物が得られる。より具体的には、式Ｉの化合物は、炭酸セシウムまたはｔｅｒｔ−ブトキシドなどの適切な塩基、酢酸パラジウム（ＩＩ）またはビス（トリ−ｏ−トリルホスフィン）パラジウム（０）などの適切な触媒、および４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテンまたは（Ｒ）−１−［（Ｓｐ）−２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）フェロセニル］エチルジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィンなどの適切なリガンド剤の存在下で、１，４−ジオキサンまたはトルエンなどの適切な溶媒中で高温下で化合物１および化合物２を反応させることによって得られる。Ｒ１’がＮ−保護基である場合、カップリング生成物は、ＤＣＭなどの適切な溶媒中でトリフルオロ酢酸などの適切な脱保護剤でさらに処理されて、Ｒ１が水素である式Ｉの化合物が得られる。
【００３７】
式Ｉの化合物は、スキーム１に例示されるような代替の方法で合成されてもよい。化合物２は、周知のパラジウムカップリング反応条件下で２，４−ジクロロピリジンと反応して、化合物３が得られる。より具体的には、化合物３は、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）などの適切な触媒および炭酸セシウムなどの適切な塩基の存在下で１，４−ジオキサンなどの適切な溶媒中で高温にて化合物２および２，４−ジクロロピリジンを反応させることによって得られる。化合物３は、周知のパラジウムカップリング反応条件下でビス（ピナコラト）ジボロンと反応して、化合物４が得られる。より具体的には、化合物３、ビス（ピナコラト）ジボロン、適切なリガンド剤、例えば２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニルおよび適切な触媒、例えばクロロ（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル）［２−（２’−アミノ−１，１’−ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）は、無水ＥｔＯＨなどの適切な溶媒中で高温にて加熱されて、化合物４が得られる。化合物４は、周知のパラジウムカップリング反応条件下で化合物５と反応して、式Ｉの化合物が得られる。
【００３８】
【化３】
0006322770.tif 000004
スキーム２：化合物１の合成
スキーム２は化合物１の合成方法を例示する。化合物６は、周知のパラジウムカップリング反応条件下で２−クロロピリジン−４−ボロン酸と反応して、化合物１が得られる。より具体的には、化合物６は、ＥｔＯＨと水の混合物などの適切な溶媒中で高温にて１，２−クロロピリジン−４−ボロン酸、適切な塩基、例えば炭酸ナトリウム、適切な触媒、例えばｔｒａｎｓ−ジクロロ−ビス−トリフェニルホスフィンパラジウム（ＩＩ）と反応して、化合物１が得られる。
【００３９】
【化４】
0006322770.tif 000005
スキーム３：Ｒ１’がＲ１である場合の化合物１の代替合成
スキーム３は、Ｒ１’がＲ１である場合の化合物１の代替合成方法を例示する。Ｒ１’が適切なＮ−保護基である場合、スキーム２に例示されているような合成方法によって作製され得る化合物７は、ＤＣＭなどの適切な溶媒中でトリフルオロ酢酸などの適切な脱保護剤と反応して、化合物８が得られる。化合物８は、適切に置換されたアルキル化剤とさらに反応して、以前に定義されているＲ１’がＲ１である場合の化合物１が得られる。より具体的には、化合物７は、水素化ナトリウムなどの適切な塩基で処理され、次いでその後、ＤＭＦなどの適切な溶媒中でヨウ化メチルまたはヨードエトキシシクロプロパンなどの適切に置換されたアルキル化剤と反応して、以前に定義されているＲ１’がＲ１である場合の化合物１が得られる。
【００４０】
【化５】
0006322770.tif 000006
スキーム４：化合物２の合成
化合物２は市販されているか、またはスキーム４に例示される合成方法によって作製される。化合物９は、ＴＨＦとＤＣＭの混合物などの適切な溶媒中でジフェニルホスホリルアジドおよび適切な塩基、例えばトリエチルアミンで処理されて、化合物１０が得られる。次いで化合物１０は高温下でｔｅｒｔ−ブチルアルコールと反応して、化合物１１が得られる。化合物１１は、ＤＣＭなどの適切な溶媒中で塩化水素などの適切な脱保護剤で処理されて、化合物２が得られる。
【００４１】
【化６】
0006322770.tif 000007
スキーム５：化合物６の合成
スキーム５は化合物６についての合成方法を例示する。化合物１２は、ＡＣＮなどの適切な溶媒中でＮ−ブロモスクシンイミドなどの適切な臭素化剤と反応して、化合物１３が得られる。化合物１３は、Ｎ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、水素化ナトリウムまたはナトリウムヘキサメチルジシリルアジドなどの適切な塩基、および２−メトキシエチルブロミド、２−クロロエトキシシクロプロパン、またはジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートなどの適切なＮ−アルキル化剤またはＮ−保護剤と反応して、化合物６が得られる。
【実施例】
【００４２】
調製例１
２−メトキシプロピル４−メチルベンゼンスルホネート
【化７】
0006322770.tif 000008
氷水浴中でピリジン（１２．５ｍＬ）およびＤＣＭ（１９ｍＬ）中の２−メトキシプロパン−１−オール（１．０ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）の溶液を冷却し、４−メチルベンゼンスルホニルクロリド（２．５４ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）を加える。温度を周囲温度までゆっくりと上昇させながら混合物を一晩撹拌する。反応を水（４０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）でクエンチする。相を分離し、さらなるＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で水相を２回抽出する。合わせた有機溶液を飽和塩化アンモニウム水溶液および飽和ＮａＣｌで洗浄する。無水硫酸マグネシウムで有機物を乾燥する。濾過し、濾液を濃縮して、標題化合物２．７１ｇ（９１％）を無色の油状物として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４５（Ｍ＋１）。
【００４３】
以下の化合物を本質的に調製例１の方法によって調製する。
【００４４】
【表１】
0006322770.tif 000009
【００４５】
調製例３
２−ヨードエトキシシクロプロパン
【化８】
0006322770.tif 000010
マイクロ波反応器において、アセトン（６２ｍＬ）中の２−クロロエトキシシクロプロパン（７５０ｍｇ、６．２ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（２．８ｇ、１８．７ｍｍｏｌ）の溶液を７５℃にて１８時間加熱する。反応混合物をヘキサンとペンタンの１：１混合物で希釈する。混合物をセライト（登録商標）プラグで濾過し、固体をエーテルで洗浄する。濾液を減圧下で室温にて濃縮する。生成物をエーテル（５ｍＬ）で希釈し、混合物を水浴中で超音波処理する。得られた懸濁液をさらなるセライト（登録商標）プラグで濾過し、固体をエーテルで洗浄する。濾液を最小体積（３．５ｍＬ）に濃縮し、硫酸マグネシウムを加える。この溶液を次の工程に使用する。１Ｈ  ＮＭＲ（３９９．８３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ３．６５（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），３．３５−３．３０（ｍ，１Ｈ），３．３０（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），０．４９−０．４５（ｍ，２Ｈ），０．４３−０．３８（ｍ，２Ｈ）。
【００４６】
調製例４
ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−（ジフルオロメチル）ピラゾール−３−イル］カルバメート
【化９】
0006322770.tif 000011
氷水浴中でＴＨＦ（１６．５ｍＬ）およびＤＣＭ（１９ｍＬ）中の２−（ジフルオロメチル）ピラゾール−３−カルボン酸（２．０ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）の溶液を冷却し、トリエチルアミン（２．６ｍＬ、１８．５ｍｍｏｌ）およびジフェニルホスホリルアジド（４．０ｍＬ、１８．５ｍｍｏｌ）を加える。反応温度をゆっくりと上昇させながら反応物を一晩撹拌する。ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（２．３ｍＬ、２４．７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を７０℃にて２時間加熱する。熱を除去し、反応混合物を２日間撹拌する。反応混合物を７０℃にてさらに１８時間加熱し、次いで室温まで冷却する。混合物を減圧下で濃縮し、ヘキサン中の０〜１００％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２２０ｇカラム）により残渣を精製する。所望の生成物を含有する画分を合わせ、減圧下で濃縮する。得られた残渣を逆相クロマトグラフィー（１５ｇのＣ−１８逆相Ｇｏｌｄカラム；０％を５分間保持、０〜２０％ＡＣＮ／水溶出勾配）により精製する。ＤＣＭ中の０〜３０％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出するシリカゲルカラム（２２０ｇ）クロマトグラフィーによって得られた物質をさらに精製して、標題化合物１．２８ｇ（４４％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２３４（Ｍ＋１）。
【００４７】
以下の化合物を本質的に調製例４の方法によって調製する。
【００４８】
【表２】
0006322770.tif 000012
【００４９】
調製例７
２−（ジフルオロメチル）ピラゾール−３−アミン塩酸塩
【化１０】
0006322770.tif 000013
ＤＣＭ（１１ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチルＮ−［２−（ジフルオロメチル）ピラゾール−３−イル］カルバメート（１．２８ｇ、５．５ｍｍｏｌ）の溶液を塩化水素（１，４−ジオキサン中に４．０Ｍ、５．５ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）で処理する。混合物を室温にて２日間撹拌する。混合物を減圧下で濃縮して、標題化合物９２０ｍｇ（９９％）を白色固体として得る。１Ｈ  ＮＭＲ（３９９．８３ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．５−８．７７（ｂｒＳ，３Ｈ），７．５８（ｔ，Ｊ＝５５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｓ，１Ｈ），５．３１（ｓ，１Ｈ）。
【００５０】
以下の化合物を本質的に調製例７の方法によって調製する。
【００５１】
【表３】
0006322770.tif 000014
【００５２】
調製例１０
６，６−ジメチルチエノ［２，３−ｃ］フラン−４−オン
【化１１】
0006322770.tif 000015
２０Ｌの３つ口フラスコにおいて、ＴＨＦ（９７５０ｍＬ）中の３−チオフェンカルボン酸（２５０ｇ、１．９５ｍｏｌ）の溶液を−７０℃に冷却する。この溶液に、温度を−５５℃未満に維持しながらｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中に２．５Ｍ、１８７２ｍＬ、４．６８ｍｏｌ）をゆっくり加える。反応混合物を−７０℃にて１時間撹拌する。アセトン（１８７ｍＬ、２．５５ｍｏｌ）を−７０℃にてゆっくり加える。反応混合物を０℃に加温し、０℃にて３時間撹拌する。得られた溶液に０℃にて４Ｍ塩酸（１５００ｍＬ）を加え、反応混合物を室温に加温する。得られた混合物を一晩撹拌する。反応混合物を珪藻土パッドで濾過し、パッドをトルエン（３×５００ｍＬ）で洗浄する。濾液を減圧下で濃縮する。得られた粗残渣をトルエン（３７５０ｍＬ）および水（２５０ｍＬ）に溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸（１００．１ｇ、０．５２６ｍｏｌ）を室温にて加える。反応混合物を１００℃にて１６時間還流する。反応物を室温に冷却し、減圧下５０℃にて濃縮する。得られた残渣を水に溶解し、ＥｔＯＡｃ（２×１０Ｌ）で抽出する。有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液および水で洗浄する。合わせた有機抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、５０℃にて減圧下で濃縮して、標題化合物２００ｇ（６１％）を褐色の粘性液体として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６９（Ｍ＋１）。
【００５３】
調製例１１
６，６−ジメチル−５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化１２】
0006322770.tif 000016
水酸化アンモニウム（１０００ｍｌ）中の６，６−ジメチルチエノ［２，３−ｃ］フラン−４−オン（１５０ｇ、０．８９１ｍｏｌ）の溶液を５Ｌのオートクレーブに充填する。密閉した環境において、反応混合物を注意深く２００℃の温度にし、２００℃にて４時間撹拌する。４時間後、反応混合物を室温に冷却し、アンモニアガスを放出する。反応混合物をＤＣＭ（３×７５０ｍＬ）で抽出する。有機層を水（１×７５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を５０℃にて減圧下で濃縮して、標題化合物１００ｇ（６７％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６８（Ｍ＋１）。
【００５４】
調製例１２
メチル２−ブロモチオフェン−３−カルボキシレート
【化１３】
0006322770.tif 000017
ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）中の２−ブロモチオフェン−３−カルボン酸（６５ｇ、３１４ｍｍｏｌ）の溶液を室温にて塩化チオニル（１３．５ｇ、１１３ｍｍｏｌ）で処理する。混合物を室温にて３０分間撹拌し、次いで混合物を３時間加熱還流する。一晩撹拌しながら混合物を冷却する。反応混合物を減圧下で濃縮する。ＥｔＯＡｃを加え、得られた有機溶液を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄する。層を分離し、さらなるＥｔＯＡｃで水溶液を逆抽出する。有機溶液を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させる。溶液を濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。生成物を２２０ｇのプレカラムに充填し、ＤＣＭ中の１０〜２５％のＥｔＯＡｃの勾配を用いて３３０ｇのカラム上でプレカラムを溶出することによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製する。適切な画分を合わせ、減圧下で濃縮して、標題化合物７１ｇを得る。その物質をさらに精製せずに使用する。１Ｈ  ＮＭＲ（４００．１５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．３６−７．３４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２２−７．２０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ）。
【００５５】
調製例１３
メチル２−アセチルチオフェン−３−カルボキシレート
【化１４】
0006322770.tif 000018
１，４−ジオキサン（３５０ｍＬ）中のメチル２−ブロモチオフェン−３−カルボキシレート（５８．５ｇ、２６５ｍｍｏｌ）および（１−エトキシエテニル）トリメチルスタンナン（１０６ｇ、２９４ｍｍｏｌ）の溶液を窒素で５分間パージする。ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（３．７１ｇ、５．２９ｍｍｏｌ）を一度に全て加え、反応物を９５℃にて２４時間加熱する。反応物を室温に冷却し、反応物を１Ｎの塩酸（１００ｍＬ）で処理する。混合物を３０分間激しく撹拌する。減圧下で反応体積を５０％減少させる。混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈し、得られた溶液をセライト（登録商標）で濾過する。固体をさらなるＥｔＯＡｃで洗浄し、濾液を分液漏斗に移す。有機溶液を飽和ＮａＣｌで洗浄する。さらなるＥｔＯＡｃで水溶液を逆抽出する。有機溶液を合わせ、減圧下で濃縮する。生成物を２２０ｇのプレカラムに充填し、ヘキサン中の１０〜２５％のＥｔＯＡｃの勾配を用いて３３０ｇのカラム上でプレカラムを溶出することによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、標題化合物４２．７ｇ（８８％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８５（Ｍ＋１）。
【００５６】
調製例１４
メチル２−［１−（２−メトキシエチルアミノ）エチル］チオフェン−３−カルボキシレート
【化１５】
0006322770.tif 000019
温度を上昇させないように水浴を使用してＭｅＯＨ（４５ｍＬ）中のメチル２−アセチルチオフェン−３−カルボキシレート（４２．７ｇ、２３２ｍｍｏｌ）の溶液を２−メトキシエチルアミン（３５ｇ、４６６ｍｍｏｌ）を滴下して処理する。混合物を室温にて一晩静置する。混合物を５％パラジウム炭素（２８ｇ）で処理し、混合物を５０℃にて１８時間水素雰囲気（５０ＰＳＩ）に供する。混合物を室温に冷却し、ガスを排気する。混合物を濾過し、固体をＭｅＯＨで洗浄する。混合物を濃縮して標題化合物４７ｇ（８３％）を琥珀色の油状物として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４４（Ｍ＋１）。
【００５７】
調製例１５
５−（２−メトキシエチル）−６−メチル−６Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化１６】
0006322770.tif 000020
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中のメチル２−［１−（２−メトキシエチルアミノ）エチル］チオフェン−３−カルボキシレート（９．４ｇ、３９ｍｍｏｌ）の溶液を、ビス（トリメチルアルミニウム）−１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン付加物（０．１ｇ、０．４ｍｍｏｌ）で処理し、得られた混合物を６０℃にて一晩加熱する。反応物を室温に冷却する。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液、続いて１Ｎの塩酸を滴下して注意深くクエンチする。ＥｔＯＡｃを加え、抽出する。層を分離し、溶液が透明になるまで水層をさらなる１Ｎの塩酸で処理する。４部のＥｔＯＡｃで水溶液を抽出する。有機抽出物を合わせ、溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させる。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、標題化合物８ｇ（９８％）を琥珀色の油状物として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２１２（Ｍ＋１）。
【００５８】
調製例１６
スピロ［５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−６，１’−シクロプロパン］−４−オン
【化１７】
0006322770.tif 000021
ジエチルエーテル（１４５ｍＬ）中のメチル２−シアノチオフェン−３−カルボキシレート（３ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）およびチタンテトラ（イソプロポキシド）（５．４４ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）の−７０℃の溶液を、ジエチルエーテル（１２．８ｍＬ、３８．３ｍｍｏｌ）中の臭化エチルマグネシウムの溶液で処理する。反応混合物を３０分間撹拌する。冷却浴を取り除き、混合物を１時間にわたって室温にゆっくり加温する。三フッ化ホウ素エーテラート（４．４ｍＬ、３４．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物をさらに１時間撹拌する。１Ｎの塩酸（８７ｍＬ）で反応をクエンチする。反応物をジエチルエーテル（２００ｍＬ）で希釈する。層を分離し、水層をさらなるジエチルエーテルで逆抽出する。有機抽出物を合わせ、飽和重炭酸ナトリウム水溶液および飽和ＮａＣｌで洗浄する。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。生成物を２５ｇのプレカラム上に充填し、８０ｇのカラム上のプレカラムをＥｔＯＡｃで溶出することによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、標題化合物１．０２ｇ（３５％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６６（Ｍ＋１）。
【００５９】
調製例１７
５−ブロモ−２−メチル−チオフェン−３−カルボン酸
【化１８】
0006322770.tif 000022
氷水浴中で酢酸（７５ｍＬ）およびＤＭＦ（３００ｍＬ）中の２−メチルチオフェン−３−カルボン酸（５０ｇ、３５２ｍｍｏｌ）の溶液を冷却し、Ｎ−ブロモスクシンイミド（６９ｇ、３８７ｍｍｏｌ）を加える。添加後、氷浴を除去し、反応混合物を２時間撹拌する。反応物を氷片に注ぎ、ＥｔＯＡｃを加える。層を分離し、有機層を２部の水、１部の飽和重炭酸ナトリウム水溶液および飽和ＮａＣｌで洗浄する。元の水溶液を３部のＥｔＯＡｃで抽出する。全てのＥｔＯＡｃ抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させる。溶液を濾過し、さらなるＥｔＯＡｃで固体を洗浄する。濾液を濃縮して固体にする。水を加え、フラスコを振とうして固体を分散させる。固体を濾過し、固体を水で洗浄する。固体を回収し、真空オーブン中で乾燥させる。濾液を３部のＥｔＯＡｃで抽出し、抽出物を合わせ、濃縮して固体にする。全ての固体を合わせて、標題化合物４６ｇ（５９％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２２１／２２３（Ｍ＋１／Ｍ＋３）。
【００６０】
調製例１８
５−ブロモ−２−（ジブロモメチル）チオフェン−３−カルボン酸
【化１９】
0006322770.tif 000023
四塩化炭素（５００ｍＬ）中の５−ブロモ−２−メチル−チオフェン−３−カルボン酸（４６ｇ、２０８ｍｍｏｌ）の溶液をＮ−ブロモスクシンイミド（９３ｇ、５２０ｍｍｏｌ）および過酸化ベンゾイル（２．５ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）で処理する。反応混合物を８０℃にて一晩加熱する。混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮乾固する。水を加え、混合物を振盪して固体を粉砕する。混合物を濾過し、固体を水（１Ｌ）で洗浄する。得られた固体を風乾して、標題化合物６６ｇ（８４％）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００．１５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８３（ｓ，１Ｈ），７．４０（ｓ，１Ｈ）。
【００６１】
調製例１９
５−ブロモ−２−ホルミル−チオフェン−３−カルボン酸
【化２０】
0006322770.tif 000024
１，４−ジオキサン（５９４ｍＬ）および水（１３２ｍＬ）中の５−ブロモ−２−（ジブロモメチル）チオフェン−３−カルボン酸（６６ｇ、１５０ｍｍｏｌ）の溶液を硫酸（１２．６ｍＬ）で処理し、混合物を８０℃にて一晩撹拌する。反応物を残渣に濃縮する。水を加え、混合物を振盪して沈殿物を形成する。焼結したガラス漏斗中で真空濾過によって固体を回収し、洗浄ｐＨが４を超えるまで固体を水で洗浄する。固体を乾燥させて、標題化合物３６ｇを得る。この化合物をさらに精製せずに使用する。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２３５／２３７（Ｍ＋１／Ｍ＋３）。
【００６２】
調製例２０
メチル５−ブロモ−２−［［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（２−メトキシエチル）アミノ］メチル］チオフェン−３−カルボキシレート
【化２１】
0006322770.tif 000025
ＭｅＯＨ（３００ｍＬ）中の５−ブロモ−２−ホルミル−チオフェン−３−カルボン酸（９ｇ、３８ｍｍｏｌ）の溶液を２−メトキシエチルアミン（５．０１ｍＬ、５７ｍｏｌ）で処理し、混合物を室温にて一晩撹拌する。反応物をシアノ水素化ホウ素ナトリウム（７．２ｇ、１１５ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を２時間撹拌する。さらにシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２ｇ、３２ｍｍｏｌ）を加え、混合物をさらに１時間撹拌する。反応混合物を濃縮乾固し、１部のＤＣＭで共蒸発させる。残渣を１，４−ジオキサン（２８０ｍＬ）および水（７５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を炭酸カリウム（１１．５ｇ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（１６．７ｇ）で処理する。混合物を室温にて一晩撹拌する。反応物を水および飽和ＮａＣｌで希釈する。３部のＥｔＯＡｃで抽出する。有機抽出物を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させる。生成物を２６０ｇのプレカラム上に充填し、ＤＣＭ中の０〜１００％のＥｔＯＡｃの勾配、次いでＤＣＭ中の１００％のＥｔＯＡｃ〜７％のＭｅＯＨの第２の勾配を用いて３３０ｇのカラム上でプレカラムを溶出することによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、標題化合物２．７６ｇ（１８％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０８／４１０（Ｍ＋１／Ｍ＋３）。
【００６３】
調製例２１
メチル５−ブロモ−２−［（２−メトキシエチルアミノ）メチル］チオフェン−３−カルボキシレート
【化２２】
0006322770.tif 000026
５−ブロモ−２−［［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（２−メトキシエチル）アミノ］メチル］チオフェン−３−カルボンキシレート（２．７５ｇ、６．７ｍｍｏｌ）を塩化水素（１，４−ジオキサン中に４Ｍ、３０ｍＬ、１２０ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を４５分間撹拌する。混合物を濃縮乾固する。残渣をＡＣＮに溶解し、混合物を炭酸カリウム（１．５ｇ）で処理する。混合物を４時間加熱還流する。混合物を濃縮乾固し、ＤＣＭを加える。懸濁液を濾過し、濾液を濃縮して、標題化合物２．０５ｇ（９９％）を暗色の油状物として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０８／３１０（Ｍ＋１／Ｍ＋３）。
【００６４】
調製例２２
５−ブロモ−２−［（２−メトキシエチルアミノ）メチル］チオフェン−３−カルボン酸
【化２３】
0006322770.tif 000027
ＴＨＦ（７５ｍＬ）および水（２５ｍＬ）中のメチル５−ブロモ−２−［（２−メトキシエチルアミノ）メチル］チオフェン−３−カルボキシレート（２．０５ｇ、６．７ｍｍｏｌ）の溶液を水酸化リチウム（５５８ｍｇ、１３ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を一晩撹拌する。混合物をほぼ乾燥状態に濃縮し、残渣を塩酸（１，４−ジオキサン中に４Ｍ、７ｍＬ）で処理する。混合物を１分間撹拌し、濃縮乾固する。残渣をＤＣＭ中の５％のＭｅＯＨに溶解し、得られた混合物を硫酸マグネシウムで乾燥させる。混合物を濾過し、濾液を濃縮する。その物質を真空オーブン中で５０℃にて一晩乾燥させて、標題化合物１．９６ｇ（１００％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２９４／２９６（Ｍ＋１／Ｍ＋３）。
【００６５】
調製例２３
２−ブロモ−５−（２−メトキシエチル）−６Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化２４】
0006322770.tif 000028
ＤＣＭ（１０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１０ｍＬ）中の５−ブロモ−２−［（２−メトキシエチルアミノ）メチル］チオフェン−３−カルボン酸（１．９６ｇ、６．７ｍｍｏｌ）の溶液をＤＭＦ（５ｍＬ）で処理する。得られた溶液をＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（５．１ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を１時間撹拌する。反応物をＤＣＭおよび水で希釈し、層を分離する。水溶液を２部のＤＣＭで抽出する。有機抽出物を合わせ、水および飽和ＮａＣｌで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。生成物を２５ｇのプレカラム上に充填し、ヘキサン中の２０〜８０％のＥｔＯＡｃの勾配を用いて１２０ｇのカラム上でプレカラムを溶出することによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、標題化合物０．９２０ｇ（５０  ％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７６／２７８（Ｍ＋１／Ｍ＋３）。
【００６６】
調製例２４
メチル２−（シクロペンテン−１−イル）チオフェン−３−カルボキシレート
【化２５】
0006322770.tif 000029
−７５℃にてＴＨＦ（５００ｍＬ）中の３−チオフェンカルボン酸（２０ｇ、１５６ｍｍｏｌ）の溶液をｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中に２．５Ｍ、１５０ｍＬ、３７５ｍｍｏｌ）を滴下して処理し、反応混合物を−７５℃にて１時間撹拌する。シクロペンタノン（１７ｍＬ、９３ｍｍｏｌ）を１０分にわたって滴下して加え、冷却浴を取り除き、混合物を２時間にわたって室温に加温する。混合物を０℃に冷却し、塩酸（１，４−ジオキサン中に４Ｍ、１２０ｍＬ、４８０ｍｍｏｌ）を３０分にわたってゆっくり加える。混合物を水および飽和ＮａＣｌで洗浄する。有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。残渣をＭｅＯＨ（３００ｍＬ）に溶解し、塩酸（１，４−ジオキサン中に４Ｍ、３０ｍＬ、４６８ｍｍｏｌ）を加える。得られた混合物を２日間加熱還流する。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮する。残渣をＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３００ｍＬ）で洗浄する。水層をＤＣＭ（２×１５０ｍＬ）で逆抽出し、有機物を合わせる。合わせた有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ＤＣＭを有するシリカゲルのプラグ上に物質を充填し、ヘキサン中の２５％のＥｔＯＡｃでプラグを溶出することによって残渣を精製して、標題化合物１５ｇ（６７％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２０９（Ｍ＋１）．１Ｈ  ＮＭＲ（３９９．８０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）ｄ７．４１−７．４２（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．３０−７．３１（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），６．１７−６．２１（ｑ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），２．５８−２．７１（ｍ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），２．５０−２．９３（ｍ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），１．８７−１．９８（ｍ，２Ｈ）。
【００６７】
調製例２５
２−ブロモスピロ［５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−６，１’−シクロペンタン］−４−オン
【化２６】
0006322770.tif 000030
ＰＡＲＲ（登録商標）オートクレーブにおいて、アンモニア（ＭｅＯＨ中に７Ｎ、２５０ｍＬ）中のメチル２−（シクロペンテン−１−イル）チオフェン−３−カルボキシレート（１２ｇ、５８ｍｍｏｌ）の溶液を２００℃にて３日間加熱する。反応物を室温に冷却し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）で希釈する。ＥｔＯＡｃ（２×２５０ｍＬ）で混合物を抽出する。有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。残渣をＡＣＮ（２５０ｍＬ）およびＮ−ブロモスクシンイミド（４．４ｇ、２５ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を室温にて５時間撹拌する。反応混合物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で希釈し、有機混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（３００ｍＬ）、水（３×３００ｍＬ）、および飽和ＮａＣｌ（２００ｍＬ）で洗浄する。有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。ヘキサンからＥｔＯＡｃの勾配で溶出するシリカゲルカラム（３３０ｇ）クロマトグラフィーによって残渣を精製する。生成物を含有する画分を合わせ、減圧下で濃縮する。ヘキサンからＥｔＯＡｃの勾配で溶出するシリカゲルカラム（３３０ｇ）クロマトグラフィーによって残渣を再び精製して、標題化合物３．６ｇ（２３％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７２／２７４（Ｍ＋１／Ｍ＋３）。
【００６８】
調製例２６
２−ブロモ−６，６−ジメチル−５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化２７】
0006322770.tif 000031
６，６−ジメチル−５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（８３５ｇ、４．９９ｍｏｌ）を含有する２０ＬのフラスコにＡＣＮ（１０Ｌ）を加え、溶液を１０℃に冷却する。反応混合物にＮ−ブロモスクシンイミド（４４４．４ｇ、２．４９ｍｏｌ）を４等分して加え、２５℃にて６時間撹拌する。反応混合物を減圧下で濃縮し、得られた化合物を水中でスラリーにし、ＥｔＯＡｃ（３×４．１Ｌ）で抽出する。合わせた有機層を水（３×４．１Ｌ）および飽和ＮａＣｌ（４．１Ｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過する。さらなるバッチと組み合わせるために有機溶液を保存する。
【００６９】
上記と同じプロセスを使用して、６５０ｇおよび８３５ｇの６，６−ジメチル−５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンからそれぞれ出発する２つのさらなるバッチを調製する。３回全ての実験からの有機溶液を合わせ、５０℃にて減圧下で濃縮して、２−ブロモ−６，６−ジメチル−５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンを茶色の粘性物質として得る。得られた生成物をジエチルエーテル／ヘキサン（２：１ｖ／ｖ）中でスラリーにし、濾過して、標題化合物１５４２ｇ（４５％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４６／２４８（Ｍ＋１／Ｍ＋３）。
【００７０】
以下の化合物を本質的に調製例２６の方法によって調製する。
【００７１】
【表４】
0006322770.tif 000032
【００７２】
調製例２９
２−ブロモ−６−エチル−５−（２−メトキシエチル）−６−メチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化２８】
0006322770.tif 000033
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の２−ブロモ−５−（２−メトキシエチル）−６−メチル−６Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（１．０ｇ、３．４ｍｍｏｌ）の溶液を水素化ナトリウム（鉱油中に６０％、４５０ｍｇ、１１ｍｍｏｌ）で処理する。反応混合物を室温にて一晩撹拌する。ヨードエタン（１．４ｍＬ、１７ｍｍｏｌ）を滴下して加え、混合物をさらに２４時間撹拌する。反応物を氷水浴中で冷却し、ＭｅＯＨでクエンチする。ＥｔＯＡｃを加え、得られた有機溶液を飽和ＮａＣｌで洗浄する。水層をさらなるＥｔＯＡｃで逆抽出する。有機抽出物を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させる。濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。生成物を４０ｇのプレカラム上に充填し、ＤＣＭ中の２０％のＥｔＯＡｃを用いて３２０ｇのカラム上でプレカラムを溶出することによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、標題化合物４０３ｍｇ（３７％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１８／３２０（Ｍ＋１／Ｍ＋３）。
【００７３】
調製例３０
ｔｅｒｔ−ブチル２−ブロモ−６，６−ジメチル−４−オキソ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−５−カルボキシレート
【化２９】
0006322770.tif 000034
ＡＣＮ（４８１ｍＬ）中の２−ブロモ−６，６−ジメチル−５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（２５ｇ、１０２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（１．２５ｇ、１０ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２４ｍＬ、１３８ｍｍｏｌ）の溶液をジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（３５ｇ、１６２ｍｍｏｌ）で処理する。混合物を室温にて一晩撹拌する。Ｎ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（５６０ｍｇ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１２ｍＬ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（１２ｇ）を加え、さらに４時間撹拌を継続する。反応混合物をシリカゲルパッドで濾過し、パッドをヘキサン中の２０％のＤＣＭで溶出する。濾液を濃縮乾固する。反応混合物をさらなるシリカゲルパッドで濾過し、パッドをヘキサン中の５％のＤＣＭで溶出する。濾液を濃縮乾固して標題化合物３１ｇ（８８％）を橙色の油状物として得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００．１５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．４１（ｓ，１Ｈ），１．６９（ｓ，６Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ）。
【００７４】
調製例３１
２−ブロモ−５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化３０】
0006322770.tif 000035
合成法１：
窒素雰囲気下で丸底フラスコにおいて、２−ブロモ−６，６−ジメチル−５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（２５ｇ、１０２ｍｍｏｌ）および２−メトキシエチルブロミド（１２ｍＬ、１２７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２５０ｍＬ）に溶解し、反応混合物を０℃に冷却する。水素化ナトリウム（鉱油中に６０ｗｔ％、４．４６９ｇ、１１２ｍｍｏｌ）を加え、反応物を一晩室温にする。室温にて、さらなる２−メトキシエチルブロミド（２ｍＬ、２１ｍｍｏｌ）、続いて水素化ナトリウム（鉱油中に６０ｗｔ％、１．２５ｇ、３１ｍｍｏｌ）を加える。反応物を２．５時間撹拌し、水で希釈する。得られた溶液を３部のＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機抽出物を１：１の飽和ＮａＣｌ／水溶液、次いで飽和ＮａＣｌで洗浄する。有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。その物質を真空下で２日間乾燥させる。残渣を、ヘキサン中の３０〜５０％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出するシリカゲル（１ｋｇ）クロマトグラフィーによって精製して、淡黄色の固体として標題化合物２５．７８ｇ（８３％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０４／３０６（Ｍ＋１／Ｍ＋３）。
【００７５】
合成法２：
２−メチルテトラヒドロフラン（１．５Ｌ）中の２−ブロモ−６，６−ジメチル−５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（１５０ｇ、６１０ｍｍｏｌ）の溶液をナトリウムヘキサメチルジシリルアジド（ＴＨＦ中に２Ｍ、４０５ｍＬ、８１０ｍｍｏｌ）で３０分にわたって処理する。２−メトキシエチルブロミド（１９０ｇ、１３７２ｍｍｏｌ）を３０分にわたって加える。反応物を１８時間加熱還流する。さらなる２−メトキシエチルブロミド（１９ｇ、１４０ｍｍｏｌ）を加え、さらに６時間還流を継続する。反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（２．５Ｌ）および水（２．５Ｌ）で希釈する。層を分離し、水溶液をＥｔＯＡｃ（２×１．５Ｌ）で逆抽出する。有機抽出物を合わせ、飽和ＮａＣｌ（２×２Ｌ）で洗浄する。有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。ヘプタン中の１０〜２５％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（７００ｇ）によって残渣を精製して、２−ブロモ−５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンを得る。固体を室温にて１５分間ヘキサン（５００ｍＬ）で粉砕し、濾過し、固体を乾燥させて、白色固体として標題化合物１２６ｇ（６８％）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００．１５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．４１（ｓ，１Ｈ），１．６９（ｓ，６Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ）。
【００７６】
調製例３２
２−ブロモ−５−［２−（シクロプロポキシ）エチル］−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化３１】
0006322770.tif 000036
２−メチルテトラヒドロフラン（１６３ｍＬ）中の２−ブロモ−６，６−ジメチル−５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（２０ｇ、８１ｍｍｏｌ）の溶液をナトリウムヘキサメチルジシリルアジド（ＴＨＦ中に１Ｍ、１００ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）で３０分にわたって処理する。２−クロロエトキシシクロプロパン（２４．５ｇ、２０３ｍｍｏｌ）を３０分にわたって加える。反応物を１８時間加熱還流する。反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）および飽和重炭酸ナトリウム（３００ｍＬ）で希釈する。層を分離し、水溶液をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で逆抽出する。有機抽出物を合わせ、飽和重炭酸ナトリウム（３００ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（３００ｍＬ）で洗浄する。有機溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。ＤＣＭ中の０〜５％のアセトンの勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（３３０ｇ）によって残渣を精製して、標題化合物２２ｇ（８２％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３０／３３２（Ｍ＋１／Ｍ＋３）。
【００７７】
以下の化合物を本質的に調製例３２の方法によって調製する。
【００７８】
【表５】
0006322770.tif 000037
【００７９】
調製例３７
２−（２−クロロ−４−ピリジル）−５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化３２】
0006322770.tif 000038
合成法１：
密閉可能な反応容器中に２−ブロモ−５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（２４．７８ｇ、８１．４６ｍｍｏｌ）、２−クロロピリジン−４−ボロン酸（１４．１ｇ、８９．６０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（３３．８ｇ、２４４．３７ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサン（７５０ｍＬ）および水（１５０ｍＬ）を合わせ、窒素で５分間脱気する。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（７．０６０ｇ、６．１１ｍｍｏｌ）を加え、窒素を数分間反応混合物に通して泡立てる。密閉した反応物を８０℃にて一晩加熱する。さらなる２−クロロピリジン−４−ボロン酸（２ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１ｇ、０．９ｍｍｏｌ）を加え、さらに６．５時間加熱を維持する。さらなる２−クロロピリジン−４−ボロン酸（２．５ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１ｇ、０．９ｍｍｏｌ）を加え、加熱をさらに１．５時間維持する。さらなる２−クロロピリジン−４−ボロン酸（２ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．４ｇ、０．３ｍｍｏｌ）を加え、加熱を一晩維持する。さらなる２−クロロピリジン−４−ボロン酸（２ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．５ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を加え、加熱をさらに２時間維持する。反応混合物を室温に冷却する。反応混合物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄する。水溶液を２部のＤＣＭで逆抽出する。有機溶液を合わせ、飽和ＮａＣｌで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。ヘキサン中の３０〜７０％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出するシリカゲル（１ｋｇ）クロマトグラフィーによって精製して、２−（２−クロロ−４−ピリジル）−５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン１３．１ｇ（４８％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３７（Ｍ＋１）。シリカゲルカラムをＥｔＯＡｃで洗浄してさらなる物質を得る。その物質をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで粉砕し、濾過して、標題化合物７．９ｇ（２９％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３７（Ｍ＋１）。
【００８０】
合成法２：
ＥｔＯＨ（２Ｌ）中の２−ブロモ−５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（２００ｇ、６４７ｍｍｏｌ）および２−クロロピリジン−４−ボロン酸（１４３ｇ、９０６ｍｍｏｌ）の溶液を炭酸ナトリウム（水中に２Ｍ、９７０ｍＬ、１９４２ｍｍｏｌ）で処理する。混合物に窒素を１５分間注入する。トランス−ジクロロ−ビス−トリフェニルホスフィンパラジウム（ＩＩ）（４５ｇ、６４．７ｍｍｏｌ）を加える。混合物に窒素をさらに１５分間注入する。反応混合物を２２時間加熱還流する。混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮する。得られた固体を水（１Ｌ）で室温にて１５分間スラリーにし、濾過する。得られた固体をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２Ｌ）で１５分間スラリーにし、濾過する。得られた固体をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１Ｌ）で１５分間スラリーにし、濾過する。固体をＤＣＭ（１Ｌ）に溶解し、混合物をシリカゲル（２００ｇ）に吸収させる。混合物を、ヘプタン中の５０〜８０％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出するシリカゲルカラム（１．５ｋｇ）に通して溶出して、２−（２−クロロ−４−ピリジル）−５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンを得る。得られた固体をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２５０ｍＬ）で１５分間粉砕し、濾過して、標題化合物１２４．５ｇ（５７％）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．３９（ｍ，１Ｈ），７．５８（ｓ，１Ｈ），７．４７（ｍ，１Ｈ），７．３６（ｍ，１Ｈ），３．６１（ｍ，４Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ），１．５９（ｓ，６Ｈ）．ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３７（Ｍ＋１）。
【００８１】
合成法３：
３つの別個のマイクロ波バイアルにそれぞれ、２−ブロモ−５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（１ｇ、３．３ｍｍｏｌ）、２−クロロピリジン−４−ボロン酸（５８０ｍｇ、３．６２ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１５２ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、トリシクロヘキシルホスフィンテトラフルオロボラート（３６３ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム三塩基性Ｎ水和物（３．５６ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）、水（７．６ｍＬ）および１，４−ジオキサン（８ｍＬ）を入れた。バイアルをマイクロ波反応器中で１２０℃にて９０分間加熱する。バイアルを室温に冷却し、バイアルの内容物を合わせる。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、無水硫酸ナトリウムを加える。混合物を１５分間撹拌し、混合物をセライト（登録商標）で濾過する。固体をＥｔＯＡｃで洗浄し、濾液を減圧下で濃縮する。残渣を２５ｇのプレカラム上に充填し、ヘキサン中の５〜２５％のアセトンの勾配を用いてさらなる１２０ｇのシリカゲルカラム上でプレカラムを溶出することによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、標題化合物２．５５ｇ（７７％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３７（Ｍ＋１）。
【００８２】
調製例３８
２−（２−クロロ−４−ピリジル)−５−［２−（シクロプロポキシ）エチル］−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化３３】
0006322770.tif 000039
ＥｔＯＨ（２Ｌ）中の２−ブロモ−５−［２−（シクロプロポキシ）エチル］−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（１５．８ｇ、４８ｍｍｏｌ）および２−クロロピリジン−４−ボロン酸（１０．５ｇ、６７ｍｍｏｌ）の溶液を炭酸ナトリウム（水中に２Ｍ、５０ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）で処理する。混合物に窒素を１５分間注入する。トランス−ジクロロ−ビス−トリフェニルホスフィンパラジウム（ＩＩ）（１．０ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を加える。混合物に窒素をさらに１５分間注入する。反応混合物を６０℃にて５時間加熱する。さらなる２−クロロピリジン−４−ボロン酸（２．２ｇ）を加え、反応物を８０℃にてさらに２時間加熱する。混合物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈する。有機溶液を飽和ＮａＣｌで洗浄する。有機溶液を減圧下で濃縮する。ＤＣＭ中の０〜１０％のアセトンの勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（２２０ｇ）によって残渣を精製して、標題化合物１２．９ｇ（７４％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６３（Ｍ＋１）。
【００８３】
以下の化合物を本質的に調製例３８の方法によって調製する。
【００８４】
【表６】
0006322770.tif 000040
【００８５】
調製例４６
２−（２−クロロ−４−ピリジル）−６，６−ジメチル−５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化３４】
0006322770.tif 000041
ＤＣＭ（５６ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（２−クロロ−４−ピリジル）−６，６−ジメチル−４−オキソ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−５−カルボキシレート（７．３８ｇ、１９．５ｍｍｏｌ）の溶液をトリフルオロ酢酸（６５ｍＬ、８５９ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を２時間撹拌する。混合物を濃縮して乾燥させる。ＤＣＭおよび飽和重炭酸ナトリウム水溶液を加え、層を分離する。さらなるＤＣＭで水層を逆抽出する。有機抽出物を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させる。濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。生成物を６５ｇの充填カラム上に充填し、ＤＣＭ中の０〜７０％のＡＣＮの勾配を用いて２２０ｇのカラム上にカラムを溶出することによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、標題化合物２ｇ（３７％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７９（Ｍ＋１）。
【００８６】
調製例４７
２−（２−クロロ−４−ピリジル）−５−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化３５】
0006322770.tif 000042
ＤＭＦ（２．７８ｍＬ）中の２−（２−クロロ−４−ピリジル）−６，６−ジメチル−５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（４５０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−（＋）−プロピレンオキシド（１．１３ｍＬ、１６．１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．１３ｍＬ、８．１ｍｍｏｌ）の溶液を、密閉したチューブにおいて１２０℃にて一晩加熱する。混合物を室温に冷却し、混合物をＥｔＯＡｃで希釈する。有機溶液を３部の５％塩化リチウム水溶液で洗浄する。水溶液を合わせ、ＥｔＯＡｃで逆抽出する。有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させる。混合物を濾過し、濾液を濃縮乾固する。ＤＣＭ中の７０〜１００％のＥｔＯＡｃの勾配を用いて２４ｇのカラム上でシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、標題化合物３９５ｇ（７３％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３７（Ｍ＋１）。
【００８７】
調製例４８
２−（２−クロロ−４−ピリジル）−５−（２Ｒ）−２−メトキシプロピル）−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化３６】
0006322770.tif 000043
氷水浴中で、ＴＨＦ（８ｍＬ）中の２−（２−クロロ−４−ピリジル）−５−［（２Ｒ）−２−ヒドロキシプロピル］−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（４１５ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）の溶液を冷却する。混合物を水素化ナトリウム（鉱油中の６０ｗｔ％の懸濁液、７９ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）で処理し、この温度にて１５分間撹拌する。混合物をヨウ化メチル（３０７μＬ、４．９ｍｍｏｌ）で処理し、氷水浴を取り除き、混合物を一晩撹拌する。混合物を減圧下で濃縮乾固する。残渣をＤＣＭで処理し、混合物を濾過して固体を除去する。固体をさらなるＤＣＭで洗浄し、濾液を減圧下で濃縮乾固する。ヘキサン中の３０〜７０％のＥｔＯＡｃの勾配を用いて２４ｇのカラム上でシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、標題化合物３７９ｍｇ（８８％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５１（Ｍ＋１）。
【００８８】
調製例４９
２−（２−クロロ−４−ピリジル）−５−［２−（シクロプロポキシ）エチル］−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化３７】
0006322770.tif 000044
氷水浴中で、ＤＭＦ（１８ｍＬ）中の２−（２−クロロ−４−ピリジル）−６，６−ジメチル−５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（５００ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）の溶液を冷却する。この混合物を水素化ナトリウム（鉱油中の６０ｗｔ％の懸濁液、１０８ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）で処理し、この温度にて１５分間撹拌する。混合物を２−ヨードエトキシシクロプロパン（７６１ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）で処理し、氷水浴を取り除き、混合物を４時間撹拌する。反応物をＥｔＯＡｃおよび飽和ＮａＣｌでクエンチする。有機溶液を数回に分けて飽和ＮａＣｌで洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウムで乾燥させる。溶液を濾過し、固体をＥｔＯＡｃで洗浄する。濾液を減圧下で濃縮して、標題化合物６５１ｍｇ（９９％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６３（Ｍ＋１）。
【００８９】
調製例５０
２−（２−クロロ−４−ピリジル）−５−［２−（２，２−ジフルオロエトキシ）エチル］−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化３８】
0006322770.tif 000045
氷水浴中で、ＤＭＦ（１８ｍＬ）中の２−（２−クロロ−４−ピリジル）−６，６−ジメチル−５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（５００ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）の溶液を冷却する。この混合物を水素化ナトリウム（鉱油中の６０ｗｔ％の懸濁液、１０８ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）で処理し、この温度にて１５分間撹拌する。混合物を２−（２−ブロモエトキシ）−１，１−ジフルオロエタン（６７８ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）で処理し、氷水浴を取り除き、混合物を一晩撹拌する。反応物を水でクエンチし、得られた沈殿物を回収する。固体を水およびジエチルエーテルで洗浄して、標題化合物６２５ｍｇ（９０％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８７（Ｍ＋１）。
【００９０】
以下の化合物を本質的に調製例５０の方法によって調製する。
【００９１】
【表７】
0006322770.tif 000046
【００９２】
調製例５４
４−クロロ−Ｎ−（２−メチルピラゾール−３−イル）ピリジン−２−アミン
【化３９】
0006322770.tif 000047
１，４−ジオキサン（７５０ｍＬ）中の２，４−ジクロロピリジン（１５．３ｇ、１０３ｍｍｏｌ）、１−メチル−５−アミノピラゾール（１１ｇ、１１３ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（６ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（４．７ｇ、５ｍｍｏｌ）の溶液を密閉容器中で７５℃にて一晩加熱する。反応物を室温に冷却し、水（１．５Ｌ）で希釈する。混合物を３部のＤＣＭで抽出する。水層を濾過して固体を除去し、濾液を２部のＥｔＯＡｃで抽出する。全ての有機抽出物を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濾液を濃縮する。生成物を２６０ｇのプレカラム上に充填し、ＤＣＭ中の１〜５％のＭｅＯＨの勾配を用いて７５０ｇのカラム上でプレカラムを溶出することによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、標題化合物１６．８ｇ（７８％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２０９（Ｍ＋１）。
【００９３】
調製例５５
ｔｅｒｔ−ブチル６，６−ジメチル−２−［２−［（２−メチルピラゾール−３−イル）アミノ］−４−ピリジル］−４−オキソ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−５−カルボキシレート
【化４０】
0006322770.tif 000048
１，４−ジオキサン（８ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２−（２−クロロ−４−ピリジル）−６，６−ジメチル−４−オキソ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−５−カルボキシレート（４００ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）、１−メチル−５−アミノピラゾール（３０８ｍｇ、３．１７ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（１．０３ｇ、３．１７ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（９ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）および４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（３７ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の溶液を、密閉容器中で９５℃にて１６時間加熱する。１−メチル−５−アミノピラゾール（１０３ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（３３４ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（９ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）および４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（３７ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を加える。混合物を９５℃にて一晩加熱する。反応物を室温に冷却し、水およびＤＣＭで希釈する。層を分離した後、ＤＣＭ中の１０％のＭｅＯＨで水層を抽出する。有機抽出物を合わせ、減圧下で濃縮する。生成物を５ｇの充填カラム上に充填し、ＤＣＭ中の５〜１５％のＭｅＯＨの勾配を用いて４０ｇのカラム上でカラムを溶出することによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製して、標題化合物７５ｍｇ（１６％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４０（Ｍ＋１）。
【００９４】
実施例１
５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化４１】
0006322770.tif 000049
合成法１：
２つのスクリュートップガラス圧力容器において、以下の量、２−（２−クロロ−４−ピリジル）−５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（１３ｇ、３８．５９ｍｍｏｌ）、１−メチル−５−アミノピラゾール（１１．２４５ｇ、１１５．７８ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（３７．７２４ｇ、１１５．７８ｍｍｏｌ）、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（２．０１０ｇ、３．４７ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（５２０ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ）および１，４−ジオキサン（３５０ｍＬ）を２等分に分け、合わせる。各容器を密閉し、１１０℃にて一晩加熱する。反応混合物をＤＣＭ（２Ｌ）中の１０％のＭｅＯＨで希釈し、得られた溶液を飽和ＮａＣｌで洗浄する。ＤＣＭで水溶液を逆抽出し、有機溶液を合わせる。合わせた溶液を無水硫酸ナトリウムと無水硫酸マグネシウムの混合物で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。残渣をＤＣＭを有する２６０ｇの充填カラム上に充填し、次いでヘキサン中のＥｔＯＡｃ中の１０％ＭｅＯＨの６０〜１００％の勾配を用いて７５０ｇのシリカゲルカラム上で充填カラムを溶出することによるシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、標題化合物８．４ｇ（５５％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９８（Ｍ＋１）。
【００９５】
合成法２：
トルエン（１．５Ｌ）中の２−（２−クロロ−４−ピリジル）−５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（１００ｇ、２９８ｍｍｏｌ）、１−メチル−５−アミノピラゾール（４３ｇ、４４６ｍｍｏｌ）およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５７ｇ、５９５ｍｍｏｌ）の溶液に１５分間窒素を注入する。得られた混合物を、（Ｒ）−１−［（ＳＰ）−２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）フェロセニル］エチルジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン（１．６１ｇ、３ｍｍｏｌ）およびビス（トリ−ｏ−トリルホスフィン）パラジウム（０）（２．１２ｇ、３ｍｍｏｌ）で処理する。混合物に窒素をさらに１５分間注入し、３時間還流する。反応物を１０℃に冷却し、濾過により得られた固体を回収する。固体をＤＣＭ（４Ｌ）に溶解し、半飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２Ｌ）で洗浄する。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。固体をジエチルエーテル（５００ｍＬ）で３０分間スラリーにし、次いで濾過する。固体をＤＣＭ（１Ｌ）に溶解し、シリカゲル（３００ｇ）に吸収させる。ＤＣＭ中の５％のＭｅＯＨを有するシリカゲルカラム（６００ｇ）上で混合物を溶出して、５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン１０７ｇ（８２％）を得る。使用する塩基（炭酸カリウム）が異なる１つのバッチを用いて、上記の方法を使用して生成物のいくつかのバッチを作る。５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（２５４ｇ）の合わせたバッチをＤＣＭ（２．５Ｌ）に溶解する。この溶液をＳｉｌｉａＭｅｔＳ（登録商標）チオール（７５ｇ、１．２８ｍｍｏｌ／ｇ、４０〜６３ミクロン）で処理し、反応物を１８時間撹拌する。混合物を濾過して固体を除去し、第２の部のＳｉｌｉａＭｅｔＳ（登録商標）チオール（７５ｇ、１．２８ｍｍｏｌ／ｇ、４０〜６３ミクロン）で濾液を処理する。混合物をさらに１８時間撹拌する。濾過して固体を除去し、濾液を減圧下で濃縮する。得られた固体をトルエン（６００ｍＬ）中で４０℃にて３０分間粉砕する。真空濾過により固体を回収する。得られた固体をトルエン（３００ｍＬ）中で４０℃にて３０分間粉砕する。真空濾過により固体を回収し、真空下３０℃にて１４時間乾燥させて、標題化合物２２３ｇを得る。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．１５（ｄ，１Ｈ），７．５４（ｄ，１Ｈ），７．４６（ｓ，１Ｈ），７．０２（ｂｒｓ，１Ｈ），６．９５（ｍ，１Ｈ），６．６３（ｄ，１Ｈ），６．１９（ｄ，１Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），３．６０（ｍ，４Ｈ），３．３６（ｓ，３Ｈ），１．５６（ｓ，６Ｈ）．ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９８（Ｍ＋１）。
【００９６】
実施例１、結晶形１
５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（結晶形１）
丸底フラスコにおいて、最小量のＤＣＭを有するＭｅＯＨおよびＥｔＯＡｃ中で５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（１５．３１ｇ）をスラリーにし、その物質が、可能な限り少量の溶媒を有する溶液に溶けるまでロータリーエバポレーターで加熱する。溶液を濃縮乾固する。わずかに着色した固体沈殿物が自由に流れるまで、得られた固体をＥｔＯＡｃおよび少量のＭｅＯＨで希釈する。溶液をエーテルおよびヘキサンで希釈し、ロータリーエバポレーターで回転させる。スラリーを超音波処理機で粉砕し、次いでスラリーを静置する。真空濾過により固体を回収し、エーテルおよびヘキサンで洗浄する。固体を真空オーブン中で乾燥させて、標題化合物１４．１ｇを得る。
【００９７】
実施例１、結晶形２
５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（結晶形２）
透明な溶液が持続するまで、ＥｔＯＨ（２００プルーフ、１２００ｍＬ）および水（４００ｍＬ）中の５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（２２３ｇ）を６０℃にて加熱する。溶液を４５〜５０℃に冷却し、溶液を水（１６００ｍＬ）で１時間にわたって希釈する。混合物を室温に冷却し、真空濾過により固体を回収する。得られた固体を真空下で３５℃にて１８時間乾燥させて、標題化合物２０９ｇを得る。
【００９８】
実施例２
５−［２−（シクロプロピルオキシ）エチル］−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化４２】
0006322770.tif 000050
合成法１：
ガラス圧力容器において、２−（２−クロロ−４−ピリジル）−５−［２−（シクロプロポキシ）エチル］−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（３５０ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）、１−メチル−５−アミノピラゾール（１８７ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（９４３ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（８４ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）および１，４−ジオキサン（８ｍＬ）を合わせる。混合物を１５分間脱気し、酢酸パラジウム（ＩＩ）（２２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加える。容器を密閉し、９０℃にて一晩加熱する。混合物をセライト（登録商標）で濾過し、ＥｔＯＡｃおよびＤＣＭで洗浄する。濾液を濃縮する。残渣を、逆相クロマトグラフィー（１００ｇのＲＥＤＩＳＥＰ  ＲＦ  ＧＯＬＤ（登録商標）高速Ｃ１８逆相カラム、５〜１００％のギ酸／ギ酸中のＡＣＮ／水、３０カラム体積勾配）によって精製する。適切な画分を最小体積に濃縮し、得られた水溶液をＤＣＭと飽和重炭酸ナトリウム水溶液との間で分配する。層を分離し、有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥させる。溶液を濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。残渣を５０℃にて１時間真空乾燥させて標題化合物２４７ｍｇ（６０％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２４（Ｍ＋１）。
【００９９】
合成法２：
トルエン（１５０ｍＬ）中の２−（２−クロロ−４−ピリジル）−５−［２−（シクロプロポキシ）エチル］−６，６−ジメチル−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（１３．９ｇ、１２１ｍｍｏｌ）、１−メチル−５−アミノピラゾール（１１ｇ、１１３ｍｍｏｌ）およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（６．５ｇ、６８ｍｍｏｌ）の溶液に１５分間窒素を注入する。得られた混合物を（Ｒ）−１−［（Ｓｐ）−２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）フェロセニル］エチルジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィン（２００ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）およびビス（トリ−ｏ−トリルホスフィン）パラジウム（０）（２５０ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）で処理する。反応混合物を１時間加熱還流する。反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈する。有機溶液を水（３００ｍＬ）で洗浄する。有機相を分離し、減圧下で濃縮する。残渣をＤＣＭ（１５０ｍＬ）に溶解し、溶液をＳＩＬＩＡＭＥＴＳ（登録商標）チオール（４０ｇ、１．２８ｍｍｏｌ／ｇ、４０〜６３ミクロン）で処理し、混合物を４時間撹拌する。濾過して固体を除去し、濾液を減圧下で濃縮して、標題化合物１１．１ｇ（８６％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２４（Ｍ＋１）。
【０１００】
以下の化合物を本質的に実施例２の方法によって調製する。触媒、リガンドおよび／または塩基の変化を示す。
【０１０１】
【表８−１】
0006322770.tif 000051
【表８−２】
0006322770.tif 000052
【表８−３】
0006322770.tif 000053
【表８−４】
0006322770.tif 000054
【表８−５】
0006322770.tif 000055
【０１０２】
実施例２５
５−（２−メトキシエチル）−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化４３】
0006322770.tif 000056
無水ＥｔＯＨ（１７０ｍＬ）中の４−クロロ−Ｎ−（２−メチルピラゾール−３−イル）ピリジン−２−アミン（２．０ｇ、９．６ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（４．９ｇ、１９ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（３．３ｇ、３４ｍｍｏｌ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（２２８ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）およびクロロ（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル）［２−（２’−アミノ−１，１’−ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（２２６ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の溶液に窒素を２分間注入する。混合物を６０℃にて２．５時間加熱する。加熱を７５℃に上昇させ、一晩加熱する。反応物を室温に冷却し、生成物を溶液として使用する。この溶液（４０ｍＬ）の一部を、さらなるＥｔＯＨ（２４ｍＬ）中の２−ブロモ−５−（２−メトキシエチル）−６Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（３００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、リン酸カリウム三塩基性Ｎ水和物（６９２ｍｇ、３．２６ｍｍｏｌ）と合わせる。反応物を７５℃にて１時間加熱する。混合物を水（９ｍＬ）で処理し、反応物を７５℃にて一晩加熱する。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２００ｍｇ）を加え、加熱を６時間継続する。反応物を室温に冷却し、反応物をＤＣＭで希釈する。有機溶液を飽和ＮａＣｌで洗浄する。水溶液をさらなるＤＣＭで逆抽出する。有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させる。混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。生成物を２５ｇの充填カラム上に充填し、ＤＣＭ中の０〜５％のＭｅＯＨの勾配を用いて４０ｇのカラム上でカラムを溶出することによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって生成物を精製して、標題化合物９０ｍｇ（２３％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７０（Ｍ＋１）。
【０１０３】
実施例２６
６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン
【化４４】
0006322770.tif 000057
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル６，６−ジメチル−２−［２−［（２−メチルピラゾール−３−イル）アミノ］−４−ピリジル］−４−オキソ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−５−カルボキシレート（１２０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の溶液をトリフルオロ酢酸（５ｍＬ）で処理する。得られた混合物を２時間撹拌する。反応物を減圧下で濃縮し、残渣をＤＣＭに溶解する。有機溶液を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄する。層を分離し、水層をＤＣＭ中の１０％のＭｅＯＨで逆抽出する。有機溶液を合わせ、減圧下で濃縮する。生成物を５ｇのプレカラム上に充填し、ＥｔＯＡｃ中の４〜１０％のＭｅＯＨの勾配を用いて４０ｇのカラム上でプレカラムを溶出することによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製する。適切な画分を合わせ、減圧下で濃縮する。生成物を２５ｇのプレカラム上に充填し、ＥｔＯＡｃ中の０〜１０％ＭｅＯＨの勾配を用いて４０ｇのカラム上でプレカラムを溶出することによるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって残渣を精製する。適切な画分を合わせ、減圧下で濃縮して、標題化合物８７ｍｇ（９４％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４０（Ｍ＋１）。
【０１０４】
実施例２７
６−エチル−５−（２−メトキシエチル）−６−メチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン、異性体１
【化４５】
0006322770.tif 000058
キラルクロマトグラフィーによって６−エチル−５−（２−メトキシエチル）−６−メチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オン（実施例２０）を精製する。Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）ＩＡ；ＭＰ：０．２％のイソプロピルアミンを含有するＡＣＮ中の１０％のＭｅＯＨ；流量：１．０ｍＬ／分；ＵＶＷ：２２５ｎｍ；４．９６分、ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１２（Ｍ＋１）。
【０１０５】
以下の化合物を本質的に実施例２７の方法によって調製する。代替の精製条件を示す。
【０１０６】
【表９】
0006322770.tif 000059
【０１０７】
Ｘ線粉末回折
結晶性固体のＸＲＤパターンを、３５ｋＶおよび５０ｍＡで作動する、ＣｕＫａ源（λ＝１．５４０６０Å）およびＶａｎｔｅｃ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒ  Ｄ４  ＥｎｄｅａｖｏｒＸ線粉末回折装置上で得る。試料を、２θでの４〜４０°で、２θでのステップサイズ０．００９°および走査速度０．５秒／ステップを用い、ならびに０．６ｍｍの発散、５．２８ｍｍの固定抗散乱、および９．５ｍｍの検出器スリットを用いて走査する。乾燥粉末を石英試料ホルダに詰めて、滑面をスライドガラスを使用して得る。結晶形回折パターンを周囲温度および相対湿度で得る。結晶学技術分野において周知なのは、任意の所与の結晶形に関して、回折ピークの相対強度が、結晶形および晶癖などの因子から生じる優先配向に起因して異なる可能性があることである。優先配向の効果が存在する場所では、ピーク強度が変化するが、多形体の特徴的ピーク位置は変化しない。さらに、任意の所与の結晶形に関して、ピーク角度位置が若干変化する場合があるということも結晶学技術分野では周知である。例えば、試料を解析する温度もしくは湿度の変動、試料変位、または内部標準の存在もしくは非存在に起因して、ピーク位置はシフト可能である。この場合、２θでの±０．２のピーク位置変動は、示される結晶形の明白な同定を妨げることなく、これらの潜在的変動を考慮にいれることにする。結晶形の確認は、区別可能なピーク（°２θ単位での）、典型的にはより顕著なピークの任意の特有の組み合わせに基づいてなされ得る。周囲温度および相対湿度で得られる結晶形回折パターンを、８．８５３および２６．７７４°２θでのＮＩＳＴ６７５標準ピークに基づいて調整する。
【０１０８】
実施例１、結晶形１のＸ線粉末回折
実施例１の結晶形１の調製した試料を、ＣｕＫａ放射線を使用してＸＲＤパターンによって、以下の表１０に記載される回折ピーク（２θ値）を有し、特に、０．２°の回折角に対する許容誤差で、８．０°、１２．８°、１５．９°、１６．８°および１９．５°からなる群から選択されるピークの１つ以上と共に２４．２°でのピークを有すると特徴付ける。
【０１０９】
【表１０】
0006322770.tif 000060
【０１１０】
実施例１、結晶形２のＸ線粉末回折
実施例１の結晶形２の調製した試料を、ＣｕＫａ放射線を使用してＸＲＤパターンによって、以下の表１１に記載される回折ピーク（２θ値）を有し、特に、０．２°の回折角に対する許容誤差で、８．５°、９．２°、１６．５°、２０．３°および２３．３°からなる群から選択されるピークの１つ以上と共に１８．５°でのピークを有すると特徴付ける。
【０１１１】
【表１１】
0006322770.tif 000061
【０１１２】
いくつかの系統の証拠により、腫瘍発生、成長および進行に関与するプロセスが、癌細胞における１つ以上のシグナル伝達経路の活性化によって媒介されることが示される。マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）経路は細胞増殖および生存の重要な調節因子である。ＥＲＫはこの経路の下流メンバーであり、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＶＥＧＦＲなどの活性化受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）からの細胞外シグナルの伝達において中心的役割を果たす。この経路は、ＲＡＦ、ＭＥＫおよびＥＲＫ（細胞外シグナル調節キナーゼ）キナーゼからなる３つの段階的キナーゼカスケードであり、この経路の活性化はＲＡＳ、低分子ＧＴＰａｓｅの活性化により開始する。ＲＡＳの活性化により、ＲＡＦの動員、セリン／トレオニンキナーゼおよびその活性化が生じる。次いで活性化したＲＡＦはリン酸化し、ＭＲＫ１／２を活性化し、それは次にリン酸化し、ＥＲＫ１／２を活性化する。活性化すると、ＥＲＫ１／２は、細胞増殖、成長、生存およびＥＭＴ（上皮から間葉の変化）に関与するいくつかの下流の細胞質および核標的物をリン酸化する。
【０１１３】
ＲＡＳ／ＭＡＰＫ経路は細胞増殖についての最も重要な経路の１つであり、この経路は全てのヒト癌の約３０％において頻繁に活性化されると考えられる。構成的ＭＡＰＫ経路活性化は、ＲＡＳ、ＢＲＡＦ、ＭＥＫ１における変異の活性化、腫瘍抑制因子ＮＦ１の損失または変異によって媒介される上流活性化、ＲＴＫの増幅またはリガンド媒介活性化に起因し得る。３つ全てのＲＡＳファミリー遺伝子（ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳおよびＨＲＡＳ）は、最も一般的にはコドン１２、１３および６１における一点変異の結果として、大腸癌、黒色腫、肺癌および膵癌を含む、いくつかの癌において体細胞変異することが示されている。これらの変異は、増加したＥＲＫ１／２活性および成長シグナル伝達を伴うＲＡＳの構成的活性化を引き起こす。ＫＲＡＳのコドン１２、１３および６１における変異は、ＥＧＦＲを阻害する化合物およびモノクローナル抗体に耐性を与える。ＫＲＡＳ変異は、肺癌の３０％、膵癌の９０％、胃癌の１０％および大腸癌の５０％において見出される。ＮＲＡＳ変異は黒色腫の約１０〜２５％において検出された。さらに、ＲＡＳ変異（ＨＲＡＳ、ＫＲＡＳおよびＮＲＡＳ）は甲状腺癌の約５５〜６０％において識別されている。ＢＲＡＦにおける体細胞点突然変異は、ヒト腫瘍の約８％、最も頻繁には黒色腫（６０％）、大腸癌（１０％）および甲状腺癌（５０％）において発生する。黒色腫において、全てのＢＲＡＦ変異はキナーゼドメイン内であるように見え、単一置換（Ｔ→Ａ、Ｖ６００Ｅ）は変異の８０％を占める。ＢＲＡＦ変異は、まれな例外として、ＲＡＳ変異との相互排他的パターンにおいて見出され、これらの遺伝子変化は共通の下流エフェクターを活性化することが示唆される。
【０１１４】
生物学的アッセイ
以下のアッセイは、本発明の例示的な化合物がＥＲＫ１およびＥＲＫ２キナーゼ活性の阻害剤であることを実証している。以下のアッセイの結果はまた、本発明の例示的な化合物が癌細胞におけるＥＲＫシグナル伝達を阻害することを実証している。さらに、実施例１の化合物は、癌の特定の異種移植腫瘍モデルにおけるＥＲＫ経路標的阻害を実証している。さらに、実施例１の化合物は癌の特定の異種移植腫瘍モデルにおける腫瘍成長を阻害する。
【０１１５】
ＥＲＫ１キナーゼアッセイ
このアッセイの目的は、ＥＲＫ１キナーゼ活性を阻害する化合物の能力を測定することである。ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイを使用してインビトロでＥＲＫ１キナーゼアッセイを実施する。３８４ウェルＰＲＯＸＩＰＬＡＴＥ（商標）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、＃ＧＲＮ６２６０）において、５μＬのＥＲＫ１酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＰＲ５２５４Ｂ、最終濃度１００ｎｇ／ｍＬ）と基質ＧＦＰ−ＡＴＦ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＰＶ４４４５、最終濃度０．２μＭ）、キナーゼ緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ  ｐＨ７．４、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍＭのＥＧＴＡ、０．０１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１ｍＭのＤＴＴ）中で調製した５μＬのＡＴＰ溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＰＶ３２２７、最終濃度１０μＭ）およびＤＭＳＯ溶液中の２．５μＬの試験化合物（最終４％、ｖ／ｖ）を加えることによって反応（１２．５μＬ）を開始する。反応混合物を室温にて６０分間インキュベートする。ＴＲ−ＦＲＥＴ希釈緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＰＶ３５７４）中の１２．５μＬの停止緩衝液（１０ｍＭのＥＤＴＡ、２ｎＭのＴｂ−抗ｐＡＴＦ２（ｐＴｈｒ７１）抗体、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＰＶ４４４８）を加えることによって反応を停止させる。プレートを室温にてさらに６０分間インキュベートし、励起波長３４０ｎｍにてＥＮＶＩＳＩＯＮ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）プレートリーダーで読み取る。ＧＦＰアクセプター放出シグナル（５２０ｎｍにて）をＴｂドナー放出シグナル（４９５ｎｍにて）で割ることによってＴＲ−ＦＲＥＴ比を算出する。オンプレートＭａｘ（ＤＭＳＯ対照）およびＭｉｎ（酵素添加なし）対照ウェルＴＲ−ＦＲＥＴ比データに対して化合物処理したウェルを使用して阻害パーセントを算出する｛阻害％＝１００−［（試験化合物−中央値Ｍｉｎ）／（中央値Ｍａｘ−中央値Ｍｉｎ）×１００］｝。１：３の希釈スキームを使用して１０の濃度（２０μＭ〜０．００１μＭ）にて全ての化合物を試験する。ＡＣＴＩＶＩＴＹＢＡＳＥ（登録商標）７．３（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ）を使用して阻害パーセントおよび１０点濃度データを４−パラメーター非線形ロジスティック式（式２０５）に適合することによってＡｂｓ＿ＩＣ５０値を導く。
【０１１６】
本発明の範囲内の例示した化合物を実質的に上記のようにこのアッセイにおいて試験する。このアッセイの結果は、例示した化合物の全てが、０．１５μＭ未満のＩＣ５０値でＥＲＫ１キナーゼ活性を阻害することを実証している。例えば、実施例１の化合物は１．５０ｎＭ（±０．６０８、ｎ＝１６）のＩＣ５０値を有する。
【０１１７】
ＥＲＫ２キナーゼアッセイ
このアッセイの目的は、ＥＲＫ２キナーゼ活性を阻害する化合物の能力を測定することである。ＴＲ−ＦＲＥＴアッセイを使用してインビトロでＥＲＫ２キナーゼアッセイを実施する。３８４ウェルＰＲＯＸＩＰＬＡＴＥ（商標）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、＃ＧＲＮ６２６０）において、５μＬのＥＲＫ２酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＰＶ３５９５Ｂ、最終濃度５０ｎｇ／ｍＬ）と基質ＧＦＰ−ＡＴＦ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＰＶ４４４５、最終濃度０．２μＭ）、キナーゼ緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ  ｐＨ７．４、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍＭのＥＧＴＡ、０．０１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１ｍＭのＤＴＴ）中で調製した５μＬのＡＴＰ溶液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＰＶ３２２７、最終濃度１０μＭ）およびＤＭＳＯ溶液中の２．５μＬの試験化合物（最終４％、ｖ／ｖ）を加えることによって全ての反応（１２．５μＬ）を開始する。反応物を室温にて６０分間インキュベートする。ＴＲ−ＦＲＥＴ希釈緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＰＶ３５７４）中の１２．５μＬの停止緩衝液（１０ｍＭのＥＤＴＡ、２ｎＭのＴｂ−抗ｐＡＴＦ２（ｐＴｈｒ７１）抗体、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃ＰＶ４４４８）を加えることによって反応を停止させる。プレートを室温にてさらに６０分間インキュベートし、励起波長３４０ｎｍにてＥＮＶＩＳＩＯＮ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）プレートリーダーで読み取る。ＧＦＰアクセプター放出シグナル（５２０ｎｍにて）をＴｂドナー放出シグナル（４９５ｎｍにて）で割ることによってＴＲ−ＦＲＥＴ比を算出する。オンプレートＭａｘ（ＤＭＳＯ対照）およびＭｉｎ（酵素添加なし）対照ウェルＴＲ−ＦＲＥＴ比データに対して化合物ウェルを使用して阻害パーセントを算出する｛阻害％＝１００−［（試験化合物−中央値Ｍｉｎ）／（中央値Ｍａｘ−中央値Ｍｉｎ）×１００］｝。１：３希釈スキームを使用して１０の濃度（２０μＭ〜０．００１μＭ）で全ての化合物を試験する。ＡＣＴＩＶＩＴＹＢＡＳＥ７．３（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ）を使用して阻害パーセントおよび１０点濃度データを４−パラメーター非線形ロジスティック式（式２０５）に適合することによってＡｂｓ＿ＩＣ５０値を導く。
【０１１８】
本発明の範囲内の例示した化合物を実質的に上記のようにこのアッセイにおいて試験する。このアッセイの結果は、例示した化合物の全てが、０．１５μＭ未満のＩＣ５０値でＥＲＫ２キナーゼ活性を阻害することを実証している。例えば、実施例１の化合物は１．９３ｎＭ（±０．６８２、ｎ＝１７）のＩＣ５０値を有する。
【０１１９】
ＥＲＫ１／２細胞機構アッセイ（ｐＲＳＫ１アルファスクリーンアッセイ）
このアッセイの目的は、インビトロで癌細胞におけるＥＲＫシグナル伝達を阻害する化合物の能力を測定することである。ＨＣＴ１１６大腸癌細胞株（ＡＴＣＣ、＃ＣＣＬ−２４７）を使用してｐＲＳＫ１アルファスクリーンアッセイを実施する。Ｔ−１５０フラスコ内で５％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ、＃１６０００−０４４）を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ、＃ＳＨ３００２２）成長培地中でＨＣＴ１１６細胞を慣用的に培養し、３７℃にて５％ＣＯ２インキュベーター内でインキュベートする。細胞がコンフルエントになると細胞を採取し、「アッセイの準備ができた凍結細胞」として１×１０ｅ７細胞／ｍＬにて凍結培地中で凍結させ、液体窒素中で保存する。アッセイを実施するために、９６ウェル組織培養プレートに４０，０００ＨＣＴ１１６細胞／ウェルを播種し、５％ＣＯ２インキュベーター内で３７℃にて一晩インキュベートする。２０μＭの最も高い濃度で開始して１０の濃度で化合物を試験し、０．５％（ｖ／ｖ）の最終ＤＭＳＯ濃度で１：３希釈スキーム（２０μＭ〜０．００１μＭ）を利用する。２０μＬの無血清成長培地中に化合物を加え、３７℃にて２時間インキュベートする。成長培地を取り除き、１×ｈｏｌｔプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテル［Ｔｈｅｒｍｏ、＃７８４４１］を含有する５０μＬの１×溶解緩衝液［Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃９８０３］を各ウェルに加え、振盪器で室温にて１０分間インキュベートする。各ウェルからの４μＬの細胞溶解物を３８４ウェルアッセイプレート［Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、＃６００６２８０］におけるそれぞれのウェルに移し、５μＬの反応混合物［２０００部の１×アッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、＃Ａ１０００）、１部のビオチン−ＲＳＫ１抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、＃ｓｃ−２３１−Ｂ−Ｇ）、４部のｐＲＳＫ１抗体（Ａｂｃａｍ、＃ａｂ３２４１３）、３５部のアクセプタービーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、＃６７６０６１７Ｒ）］を加える。プレートをホイルプレートシール（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ、＃５３８６１９）で密閉し、室温にて２時間インキュベートする。２μＬのドナービーズ［２０部の１×アッセイ緩衝液、１部のドナービーズ］を各ウェルに加え、プレートを透明なプレートシール（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、＃４３１１９７１）で密閉し、暗所で室温にて２時間インキュベートする。ＥＮＶＩＳＩＯＮ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）プレートリーダーでプレートを読み取ることによって各ウェルにおける蛍光強度を測定する。ＡＣＴＩＶＩＴＹＢＡＳＥ（登録商標）７．３（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ）を使用してｐＲＳＫ１阻害パーセント［阻害％＝１００−［（試験化合物−中央値Ｍｉｎ）／（中央値Ｍａｘ−中央値Ｍｉｎ）×１００］および１０点濃度データを４−パラメーター非線形ロジスティック式（Ａｂａｓｅ式２０５）に適合することによってＲｅｌ  ＩＣ５０値を導く。
【０１２０】
本発明の範囲内の例示した化合物を実質的に上記のようにこのアッセイにおいて試験する。このアッセイの結果は、例示した化合物の全てが、腫瘍細胞において３μＭ未満のＩＣ５０値でＥＲＫ基質（ＲＳＫ）リン酸化を阻害することを実証している。例えば、実施例１の化合物は０．２６１μＭ（±０．０８７６、ｎ＝１０）のＩＣ５０値を有する。
【０１２１】
インビボでの標的阻害（ＩＶＴＩ）アッセイ（ｐＲＳＫ１  ＥＬＩＳＡアッセイ）
このアッセイの目的は、動物モデルにおけるＥＲＫ１／２基質リン酸化を阻害する試験化合物の能力を測定することである。Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのメスの無胸腺ヌードマウス（２２〜２５ｇ）に、２００μＬの１：１のハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）＋マトリゲル溶液中の５×１０ｅ６のＨＣＴ１１６大腸癌細胞（ＡＴＣＣ、＃ＣＣＬ−２４７）を右脇腹領域の皮下に移植する。移植の７日後に開始して１週間に２回、腫瘍成長および体重を測定する。腫瘍サイズが３００〜５００ｍｍ３に到達したとき、動物を無作為化し、５匹の動物の群に分類する。化合物特異的ビヒクル中の適切な用量の化合物またはビヒクル単独（ビヒクル：１％ＨＥＣ／０．２５％Ｔｗｅｅｎ８０／０．０５％消泡剤）のいずれかを動物に経口投与し、投与後、所望の時間間隔で腫瘍および血液を採取する。イソフルラン麻酔と頸椎脱臼を使用して動物を屠殺する。腫瘍を急速冷凍し、ＥＬＩＳＡアッセイによってｐＲＳＫ１レベルを処理するまで−８０℃で保存する。ＥＤＴＡチューブ内に血液を回収し、血漿を沈殿させ、９６ウェルプレート内で−８０℃にて凍結する。標準的な方法を使用して化合物曝露を測定する。
【０１２２】
液体窒素中で腫瘍を粉砕し、冷室（４℃）でＦａｓｔＰｒｅｐ−２４（商標）細胞破壊器（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ）においてマトリクスＤビーズ（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ、＃６９１３−５００）を使用して、１×ｈａｌｔプロテアーゼおよびリン酸塩阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃０８６１２８１）、１ｍＭのフッ化フェニルメタンスルホニル（ＰＭＳＦ）（Ｓｉｇｍａ、＃９３４８２−５０ＭＬ−Ｆ）および１μＭのメタバナジン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ、＃５９００８８）を含有する１×溶解緩衝液（ＭＳＤ、＃Ｒ６０ＴＸ−３）中に溶解する。４℃、１４０００ｒｐｍにて２０分間回転させた後、腫瘍溶解物を新たなチューブに移す。Ｐｉｅｒｃｅ  ＢＣＡタンパク質アッセイキット（カタログ番号２３２２５、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して腫瘍または細胞溶解物のタンパク質濃度を測定する。このキットは、３つの主な成分−（１）０．１Ｍの水酸化ナトリウム中に炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、ビシンコニン酸および酒石酸ナトリウムを含有するＢＣＡ試薬Ａ、（２）４％の硫酸銅を含有するＢＣＡ試薬Ｂ、ならびに（３）０．９％の生理食塩水および０．０５％のアジ化ナトリウム中で２ｍｇ／ｍＬを含有するアルブミン標準アンプルを含む。９６ウェルプレート中に、二連ウェルにおいて２５μＬで２０〜２０００ｕｇ／ｍＬの濃度範囲のウシ血清アルブミンタンパク質標準物を加えて標準曲線を生成する。２５μＬの１×ＰＢＳ中で希釈した細胞または腫瘍溶解物を二連試験ウェルに加える。２％の試薬Ｂを試薬Ａに加える（２ｍＬのＢ＋９８ｍＬのＡ）ことによって作業ＢＣＡ試薬を調製し、ウェルを混合し、２００μＬを各試料または標準物に加える。ウェルを混合し、プレートを覆い、３７℃にて３０分間インキュベートする。プレートを室温に冷却し、５６２ｎｍにおいてまたは５６２ｎｍ付近で吸光度をプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ製のＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー）で測定する。ブランク標準複製物の平均５６２ｎｍ吸光測定値を全ての他の個々の標準および未知（細胞または腫瘍溶解物）試料複製物の５６２ｎｍ測定値から差し引く。各々のウシ血清アルブミン標準物についての平均ブランク補正５６２ｎｍ測定値をその濃度（μｇ／ｍＬ）に対してプロットすることによって標準曲線を作成する。標準曲線を使用して、各々の未知の試料のタンパク質濃度をＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌでの曲線適合対数を使用して決定する。−８０℃にて腫瘍溶解物を凍結させたままにする。一度凍結解凍した腫瘍溶解物を使用して、サンドイッチＥＬＩＳＡによってｐＲＳＫ１発現を測定する。
【０１２３】
９６ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ、＃１５０４２）を４℃にて一晩、４０ｎｇのＲＳＫ１ヤギ抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、＃ｓｃ−２３１−Ｇ）でコーティングし、室温にて１時間、次いで４℃にて一晩インキュベートする。３００μＬのＰＢＳＴ（０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０を含有する１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））で３回プレートを洗浄し、１００μＬ／ウェルの遮断緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃３７５３２）で遮断し、室温にて２時間インキュベートする。３００μＬのＰＢＳＴでプレートを３回洗浄し、２０μｇの腫瘍溶解物を各ウェルに移し、４℃にて一晩インキュベートする。３００μＬのＰＢＳＴでプレートを３回洗浄し、１００μＬのｐＲＳＫ１（Ｔ３５９／Ｓ３６３）ウサギ抗体（遮断緩衝液中で１：１０００希釈）と室温にて１時間インキュベートする。３００μＬのＰＢＳＴでプレートを３回洗浄し、１００μＬの抗ウサギＨＲＰコンジュゲート二次抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＵＫ、＃ＮＡ９３４Ｖ；遮断緩衝液中で１：１００００希釈）とインキュベートする。室温にて１時間インキュベートする。３００μＬのＰＢＳＴでプレートを３回洗浄し、１００μＬのＳＵＰＥＲＳＩＧＮＡＬ（登録商標）ＥＬＩＳＡ  Ｆｅｍｔｏ最大感度基質（Ｔｈｅｒｍｏ、＃３７０７５）を加え、振盪器で１分間インキュベートする。ＥＮＶＩＳＩＯＮ（登録商標）プレートリーダーを使用して発光シグナルを決定する。ビヒクル（ビヒクル：１％ＨＥＣ／０．２５％Ｔｗｅｅｎ８０／０．０５％消泡剤）単独で処理した動物由来の腫瘍溶解物を１００％とみなすことによって各腫瘍溶解物においてｐＲＳＫ１レベルを決定する。各試料を二連で分析し、計算のために平均数を使用する。ＥｘｃｅｌおよびＸＬ  Ｆｉｔを使用してＴＥＤ５０を算出する。
【０１２４】
本発明の範囲内である化合物を実質的に上記のようにこのアッセイにおいて試験する。このアッセイの結果は、実施例１の化合物が腫瘍異種移植モデルにおいてＲＳＫ１リン酸化を阻害することを実証している。例えば、実施例１の化合物は１２ｍｇ／ｋｇのＴＥＤ５０値を有する。
【０１２５】
異種移植腫瘍モデル
このアッセイの目的は、試験化合物投与に反応する腫瘍体積の減少を測定することである。培養物中でヒト大腸癌細胞ＨＣＴ１１６（ＡＴＣＣ、＃ＣＣＬ−２４７）またはヒト非小細胞肺癌細胞ＮＣＩ−Ｈ３５８（ＡＴＣＣ、＃ＣＲＬ−５８０７）を増殖させ、採取し、２００μＬの１：１のＨＢＳＳ＋マトリゲル溶液中の５×１０ｅ６細胞を、メスの無胸腺ヌードマウス（２２〜２５ｇｍ、Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の後部右脇腹に皮下注射する。培養物中でヒト膵癌細胞ＳＷ１９９０（ＡＴＣＣ、＃ＣＲＬ−２１７２）を増殖させ、採取し、２００μＬの１：１のＨＢＳＳ＋マトリゲル溶液中の２×１０ｅ６細胞を、メスの無胸腺ヌードマウス（２２〜２５ｇｍ、Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の後部右脇腹に皮下注射する。培養物中でヒト膵癌細胞ＭＩＡ  ＰＡＣＡ−２（ＡＴＣＣ、＃ＣＲＬ−１４２０）またはヒト非小細胞肺癌細胞Ａ５４９（ＡＴＣＣ、＃ＣＣ１−１８５）を増殖させ、採取し、２００μＬの１：１のＨＢＳＳ＋マトリゲル溶液中の５×１０ｅ６細胞を、メスのＣＢ−１７  ＳＣＩＤマウス（２２〜２５ｇｍ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．）の後部右脇腹に皮下注射する。培養物中でヒト黒色腫細胞Ａ−３７５（ＡＴＣＣ、＃ＣＲＬ−１６１９）を増殖させ、採取し、２００μＬの１：１のＨＢＳＳ＋マトリゲル溶液中の５×１０ｅ６細胞を、メスのＮＩＨヌードラット（１４０〜１６０ｇｍ、Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ）の後部右脇腹に皮下注射する。移植の７日後に開始して１週間に２回、腫瘍成長および体重を測定する。腫瘍サイズが２００〜４００ｍｍ３に到達したとき、動物を無作為化し、８〜１０匹の動物の群に分類する。適切なビヒクル（ビヒクル：１％ＨＥＣ／０．２５％Ｔｗｅｅｎ  ８０／０．０５％消泡剤）中に試験化合物を調製し、１４〜２８日間、経口強制投与する。腫瘍反応を、処置過程の間、１週間に２回実施する腫瘍体積測定によって決定する。
【０１２６】
本発明の範囲内である化合物を実質的に上記のようにこのアッセイにおいて試験する。実施例１の化合物は以下の表１２に提供されるようなデルタＴ／Ｃ％値を有することが見出される。これらの結果は、実施例１の化合物が、ＨＣＴ１１６、ＭＩＡ  ＰＡＣＡ−２、ＣＡＬＵ−６、ＳＷ１９９０、ＮＣＩ−Ｈ３５８、Ａ５４９およびＡ−３７５を含む、いくつかのヒト癌異種移植モデルにおいて有意な抗腫瘍活性を実証していることを示す。
【０１２７】
【表１２】
0006322770.tif 000062
本発明は、以下の態様を含む。
［１］
以下の式の化合物：
【化４６】
0006322770.tif 000063
（式中、
Ｒ１は、水素、２−メトキシエチル、２−（シクロプロポキシ）エチル、２−ヒドロキシエチル、２−（２，２−ジフルオロエトキシ）エチル、２−（トリジュウテリオメトキシ）エチル、２−（トリフルオロメトキシ）エチル、２−メトキシプロピル、（２Ｒ）−２−メトキシプロピル、または（２Ｓ）−２−メトキシプロピルであり、
Ｒ２およびＲ３は、独立して、水素、メチル、もしくはエチルであるか、またはＲ２およびＲ３は一緒になってシクロプロピルまたはシクロペンチルを形成してもよく、
Ｒ４は、水素、メチル、エチル、イソプロピル、シクロプロピル、ジフルオロメチル、２−フルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、または２−メトキシエチルであり、
Ｒ５は、水素、メチルまたはシクロプロピルである）
またはその薬学的に許容可能な塩。
［２］
Ｒ２およびＲ３はメチルである、［１］に記載の化合物または塩。
［３］
Ｒ１は２−メトキシエチルである、［２］に記載の化合物または塩。
［４］
Ｒ４はメチルである、［３］に記載の化合物または塩。
［５］
Ｒ５は水素である、［３］に記載の化合物または塩。
［６］
５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンである、［４］に記載の化合物または塩。
［７］
５−（２−メトキシエチル）−６，６−ジメチル−２−｛２−［（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アミノ］ピリジン−４−イル｝−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピロール−４−オンである、［６］に記載の化合物。
［８］
［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物または塩と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物。
［９］
有効量の［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物または塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、癌を治療する方法。
［１０］
前記癌は、黒色腫、大腸癌、膵癌、および非小細胞肺癌からなる群から選択される、［９］に記載の方法。
［１１］
前記癌は、大腸癌である、［１０］に記載の方法。
［１２］
前記癌は、膵癌である、［１０］に記載の方法。
［１３］
前記癌は、非小細胞肺癌である、［１０］に記載の方法。
［１４］
療法に使用するための［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物または塩。
［１５］
癌の治療に使用するための［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物または塩。
［１６］
前記癌は、黒色腫、大腸癌、膵癌、および非小細胞肺癌からなる群から選択される、［１５］に記載の使用のための化合物または塩。
［１７］
前記癌は、大腸癌である、［１６］に記載の使用のための化合物または塩。
［１８］
前記癌は、膵癌である、［１６］に記載の使用のための化合物または塩。
［１９］
前記癌は、非小細胞肺癌である、［１６］に記載の使用のための化合物または塩。