(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
0006377139.tif 000014
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜３アルキルで任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、水素、Ｃ１〜３アルキル、および−ＣＦ３から独立に選択される；
または、式中
Ｒ２がＲ３と融合してキノリン環構造を形成する］。
【請求項２】
Ｒ１はｎ−ブチルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は水素である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体。
【請求項３】
以下：
【表１】
0006377139.tif 000015
0006377139.tif 000016
0006377139.tif 000017
から選択される化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体とともに含む医薬組成物。
【請求項５】
医薬として使用するための、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８の調節が関与する疾患を治療するための、請求項４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピリドン誘導体、それらの調製方法、医薬組成物、および治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の調節または活性化作用が関与する、ウイルス感染、免疫疾患または炎症性疾患の治療におけるピリドン誘導体の使用に関する。Ｔｏｌｌ様受容体は、ロイシンに富む細胞外ドメイン、および保存領域を含有する細胞質拡張を特徴とする主要な膜貫通タンパク質である。自然免疫系は、一定のタイプの免疫細胞の細胞表面上に発現するこのＴＬＲを介して病原体関連分子パターンを認識することができる。外来病原体を認識すると、サイトカインの産生および食細胞における共刺激分子の上方制御が活性化される。これにより、Ｔ細胞挙動が調節される。
【０００３】
ほとんどの哺乳類種は、１０〜１５種のＴｏｌｌ様受容体を有すると推定されている。（単純にＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３と命名された）１３種のＴＬＲが、ヒトおよびマウスでともに確認されており、これらの多くと同等の形態が、他の哺乳類種において見出されている。しかしながら、ヒトに見られるある特定のＴＬＲに相当するものが、全ての哺乳動物において存在するわけではない。例えば、ヒトのＴＬＲ１０に類似したタンパク質をコードする遺伝子がマウスに存在するが、過去のどこかの時点で、レトロウイルスによって損傷されたようである。一方、マウスは、ヒトでは示されないＴＬＲ１１、１２、および１３を発現する。他の哺乳動物は、ヒトに見られないＴＬＲを発現し得る。他の非哺乳類種は、トラフグに見られるＴＬＲ１４によって示されるような、哺乳動物とは異なるＴＬＲを有し得る。これにより、ヒト自然免疫のモデルとして実験動物を使用するプロセスが複雑になる恐れがある。
【０００４】
Ｔｏｌｌ様受容体に関する詳細な概説については、以下の雑誌論文を参照されたい。Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｊ．Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ，４２６，ｐ３３−３８，２００３；Ａｋｉｒａ，Ｓ．，Ｔａｋｅｄａ，Ｋ．，ａｎｄ  Ｋａｉｓｈｏ，Ｔ．，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２１，ｐ３３５−３７６，２００３；Ｕｌｅｖｉｔｃｈ，Ｒ．Ｊ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４，ｐ５１２−５２０，２００４。
【０００５】
たとえば国際公開第２００６／１１７６７０号パンフレットにはプリン誘導体、国際公開第９８／０１４４８号パンフレットおよび国際公開第９９／２８３２１号パンフレットにはアデニン誘導体、また国際公開第２００９／０６７０８１号パンフレットにはピリミジンなど、Ｔｏｌｌ様受容体に対して活性を示す化合物は既に記載されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、従来技術の化合物と比較して、選択性が好ましく、安全性プロファイルが改善されている新規なＴｏｌｌ様受容体調節剤が強く求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明によって、式（Ｉ）の化合物
【化１】
0006377139.tif 000002
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体
［式中、
Ｒ１は、アリール、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、アシルスルホンアミド、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、スルホン、スルホキシド、スルホンアミド、複素環またはニトリルから独立に選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３ アルコキシ、Ｃ３〜６シクロアルキル、アリール、−ＣＦ３または複素環から独立に選択されるか、
あるいは式中、
Ｒ２がＲ３と融合して環構造を形成するか、
Ｒ３がＲ４と融合して環構造を形成するか、または
Ｒ４がＲ５と融合して環構造を形成する］
が提供される。
【０００８】
第一の実施態様で、本発明は式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒ１はｎブチルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は水素である］の化合物を提供する。
【０００９】
さらなる実施態様で、本発明は式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒ１はｎブチルであり、Ｒ２がＲ３と融合して環構造を形成するか、Ｒ３がＲ４と融合して環構造を形成するか、またはＲ４がＲ５と融合して環構造を形成する］に関する。
【００１０】
式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容される塩、溶媒和物または多形体は、医薬品として、特に、Ｔｏｌｌ様受容体ＴＬＲ７活性および／またはＴｏｌｌ様受容体ＴＬＲ８活性の、特にＴＬＲ７活性の、調節剤としての活性を有する。
【００１１】
さらなる態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体を、１種または複数種の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体とともに含む医薬組成物を提供する。
【００１２】
さらに、本発明による式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体、あるいは式（Ｉ）の前記化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体を含む医薬組成物は、薬剤として使用され得る。
【００１３】
本発明の別の態様は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体、または式（Ｉ）の前記化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体を含む前記医薬組成物が、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８の調節が関与するいずれの障害の処置にも相応に使用され得ることである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
「アルキル」という用語は、規定数の炭素原子を含有する直鎖状または分枝鎖状飽和脂肪族炭化水素を指す。
【００１５】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を指す。
【００１６】
「シクロアルキル」という用語は、規定数の炭素原子を含有する炭素環を指す。
【００１７】
「アルコキシ基」という用語は、例えば、メトキシ基またはエトキシ基のような、酸素原子に単結合しているアルキル（炭素と水素の鎖）基を指す。
【００１８】
「アリール」という用語は、Ｎ、ＯおよびＳから、特にＮおよびＯから選択される１つまたは２つのヘテロ原子を任意選択的に含む芳香環構造を意味する。前記芳香環構造は、５つ、６つまたは７つの環原子を有し得る。特に、前記芳香環構造は、５つまたは６つの環原子を有し得る。
【００１９】
「複素環」という用語は、飽和または部分的に飽和した分子を指し、エチルオキシド、テトラヒドロフラン、ジオキサンまたは他の環状エーテルを含む。窒素を含有する複素環としては、例えば、アゼチジン、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジンなどが挙げられる。他の複素環としては、例えば、チオモルホリン、ジオキソリニル（ｄｉｏｘｏｌｉｎｙｌ）、および環状スルホンが挙げられる。
【００２０】
「環状構造」という用語は、窒素、酸素またはイオウから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を任意選択的に含む、５〜７員、好ましくは６員の、飽和または部分的に飽和した単環部分を意味する。
【００２１】
式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩としては、その酸付加塩および塩基塩が挙げられる。好適な酸付加塩は、非毒性塩を生成する酸から生成される。好適な塩基塩は、非毒性塩を生成する塩基から生成される。
【００２２】
本発明の化合物はまた、非溶媒和および溶媒和形態で存在してもよい。本明細書では、「溶媒和物」という用語は、本発明の化合物と、１種以上の薬学的に許容される溶媒分子、例えば、エタノールとを含む、分子錯体を表すために使用される。
【００２３】
「多形体」という用語は、本発明の化合物が２つ以上の形態または結晶構造で存在できることを指す。
【００２４】
本発明の化合物は、結晶質生成物または非晶質生成物として投与され得る。それらは、沈殿、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥、または蒸発乾燥などの方法によって、例えば、固体プラグ、粉末、またはフィルムとして得ることができる。それらは、単独で、または本発明の１種以上の他の化合物と組み合わされて、または１種以上の他の薬物と組み合わされて投与され得る。一般に、それらは、１種以上の薬学的に許容される賦形剤とともに製剤として投与されるであろう。本明細書では「賦形剤」という用語は、本発明の化合物以外の任意の成分を表すために使用される。賦形剤の選択は、具体的な投与形態、溶解性および安定性に対する賦形剤の影響、および剤形の性質などの要因に大きく左右される。
【００２５】
本発明の化合物またはその任意のサブグループは、投与のために様々な医薬品形態へと製剤化され得る。適切な組成物として、全身投与薬物に通常使用される全ての組成物を挙げ得る。本発明の医薬組成物を調製するには、有効成分としての特定の化合物の有効量を、任意選択により付加塩形態で、薬学的に許容される担体と組み合わせて緊密な混合物とする。この担体は、投与に所望される製剤の形態に応じて、多種多様な形態をとり得る。これらの医薬組成物は、例えば、経口、直腸内、または経皮投与に好適な単一の剤形であるのが望ましい。例えば、経口投与形態の組成物を調製する際、懸濁液、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤および溶液剤などの経口液体製剤の場合には、例えば水、グリコール、油、アルコールなどの通常の医薬媒体の任意のものを使用することができ、また散剤、丸剤、カプセル剤および錠剤の場合には、デンプン、糖、カオリン、希釈剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などの固体担体を使用し得る。投与が容易であるため、錠剤およびカプセル剤は最も有利な経口投与単位剤形を代表するものであり、その場合、固体医薬担体が当然使用される。使用の直前に液体形態に変換され得る固形製剤もまた含まれる。経皮投与に好適な組成物においては、担体は、浸透促進剤および／または好適な湿潤剤を、少量の、任意の性質の好適な添加剤と任意選択により組み合わせて、任意選択により含み、これらの添加剤は、有意な有害作用を皮膚に及ぼすものではない。前記添加剤は、皮膚への投与を容易にすることができ、かつ／または所望の組成物の調製に有用となり得る。これらの組成物は、様々な方法で、例えば、経皮貼付剤として、スポットオン剤として、軟膏剤として投与され得る。本発明の化合物はまた、吸入または吹送による投与のために当該技術分野において使用される方法および製剤を用いて、吸入または吹送によって投与され得る。したがって、一般に、本発明の化合物は、溶液、懸濁液または乾燥粉末の形態で肺に投与され得る。
【００２６】
投与を容易にし、投与量を均一にするために、前述した医薬組成物を単位剤形に製剤化することは特に有利である。本明細書で使用される単位剤形は、単位投与量として好適な物理的に分離した単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と共同して所望の治療効果を生じるよう計算された所定量の有効成分を含有する。そのような単位剤形の例としては、錠剤（分割錠剤またはコーティング錠剤を含む）、カプセル剤、丸剤、粉末パケット、ウエハー、坐剤、注射液、または懸濁剤など、およびそれらの分離複合剤がある。
【００２７】
感染症の治療の当業者は、以下に示される試験結果から有効量を決定することができるであろう。一般に、有効な日量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重であろうと考えられる。必要な用量を２、３、４またはそれより多いサブ用量として、一日の間に適切な間隔を置いて投与することが適切であり得る。前記サブ用量は、例えば、単位剤形当たり１〜１０００ｍｇ、特に、５〜２００ｍｇの有効成分を含有する単位剤形として製剤化され得る。
【００２８】
正確な投与量および投与頻度は、当業者に周知のように、使用する式（Ｉ）の特定の化合物、治療される特定の病態、治療される病態の重症度、特定の患者の年齢、体重および全身的な身体状態、ならびに個体が摂取している可能性のある他の薬剤に応じて決まる。さらに、有効量は、治療される対象の応答に応じて、かつ／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、減少または増加させ得ることは明らかである。したがって、上記の有効量の範囲は指針に過ぎず、本発明の範囲または使用を、いかなる程度であれ限定することは意図されていない。
【００２９】
化合物の調製
式（Ｉ）の化合物は、スキーム１に従って調製される。
スキーム１（１の調製が例として表示されている）：
【化２】
0006377139.tif 000003
【００３０】
スキーム１におけるタイプＡの化合物は、塩基（たとえば、トリエチルアミン）の有無にかかわらず、温熱条件下、極性溶媒、たとえばエタノール中で、アミンを用いて官能化され得る。Ｂのアルデヒド基は、極性溶媒（例えば、メタノール）中で、ＮａＢＨ４のような還元剤によりアルコールに変換され得る。タイプＣの化合物における塩素は、水素雰囲気下、塩基性条件で、Ｐｄ／Ｃを使用して除去し得る。次いで、標準光延条件下でアルコール基を官能化して、ピリドン最終生成物を与える。
【００３１】
中間体ＡおよびＢの調製は、文献（Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１，２００３，ｐ４１６１；Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍ．，２０，４１（１９８３）；Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １３（２００３）ｐ２１７）に記述されている。
【００３２】
Ｂの調製
【化３】
0006377139.tif 000004
Ａ（１０．０ｇ、５２．０８ｍｍｏｌ）をエタノール（１００ｍＬ）に加え、次いでｎ−ブチルアミン（３．８１ｇ、５２．０８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５．２７ｇ、５２．０８ｍｍｏｌ）を、その溶液に加えた。混合物を８時間加熱還流した。溶液を０℃に到達させ、固体を濾過により分離してエタノールで洗浄し、次いで真空下で乾燥してＢ（１０ｇ）を与えた。
ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝２２９（Ｍ＋Ｈ）；１．２０分
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄ−クロロホルム）δ  ｐｐｍ  ０．９５（ｔ，３Ｈ），１．３１−１．４２（ｍ，２Ｈ），１．５３−１．６５（ｍ，２Ｈ），３．４０−３．５０（ｍ，２Ｈ），５．１１（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），９．２２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），１０．０７（ｓ，１Ｈ）
【００３３】
Ｃの調製
【化４】
0006377139.tif 000005
０℃のメタノール中のＢ（８．０ｇ、３５ｍｍｏｌ）の混合物に、ＮａＢＨ４（４ｇ、１０５．７３ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えた。混合物を室温で３０分間撹拌した。混合物を、０℃の飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１００ｍＬ）でゆっくり処理し、次いで室温で１０分間撹拌した。沈殿を濾過により分離し、水（５０ｍＬ）および酢酸エチル：メチルｔ−ブチルエーテル（１：５）で洗浄した。濾液を酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出した。まとめた有機層を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧除去した。残渣を、酢酸エチル：メチルｔ−ブチルエーテル（１：５）で処理した。沈殿を濾過によって分離し、メチルｔ−ブチルエーテルで洗浄した。沈殿を合わせて乾燥し（真空、５０℃、３０分）、Ｃを与えた。
ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝２３１（Ｍ＋Ｈ），０．９０分
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．９０（ｔ，３Ｈ），１．３１（ｍ，２Ｈ），１．５０（ｍ，２Ｈ），３．２８（ｍ，２Ｈ），４．４（ｍ，２Ｈ），４．９２（ｍ，１Ｈ），６．２９（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．５５（ｍ，１Ｈ）
【００３４】
Ｄの調製
【化５】
0006377139.tif 000006
室温で、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）に溶解したＮａＯＨ（１．６ｇ、４０ｍｍｏｌ）の溶液を、エタノール（１５０ｍＬ）に溶解したＣ（５．８ｇ、２１．３７ｍｍｏｌ、純度８５％）の溶液に加えた。１０％  Ｐｄ／Ｃ（０．６ｇ）をこれに加えた。フラスコを密閉し、水素ガスに１５時間曝露した。水素ガスを除去し、窒素に置き換え、触媒を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧除去した。酢酸エチルを加え、混合物をＨ２Ｏ、食塩水で洗浄し、乾燥した（Ｎａ２ＳＯ４）。固体を濾過により除去し、濾液の溶媒を減圧除去した。残渣をメチルｔーブチルエーテルで洗浄した。沈殿を濾過により分離し、メチルｔ−ブチルエーテルで洗浄した。固体を集め、乾燥（真空、５０℃、３０分）してＤを与えた。
ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ＝１９７（Ｍ＋Ｈ）；３．２１分
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ０．９０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ），１．２４−１．４１（ｍ，２Ｈ），１．４１−１．５９（ｍ，２Ｈ），３．２３−３．３４（ｍ，２Ｈ），４．２１（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），４．８５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），５．８７（ｓ，２Ｈ），６．１９（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｓ，１Ｈ）
【００３５】
化合物１の調製
【化６】
0006377139.tif 000007
Ｎ２雰囲気下、０℃で、無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中Ｄ（０．５ｇ、２．２９ｍｍｏｌ、純度９０％）、２−ヒドロキシピリジン（０．３２６ｇ、３．４３ｍｍｏｌ）およびトリブチルホスフィン（１．３４ｇ、６．６２ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＩＡＤ（１．３ｇ、６．４２９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、次いで３時間還流した。混合物を真空下で蒸発させた。残渣を、石油エーエル：メチルｔ−ブチルエーテル（１：１）で処理した。混合物を減圧下で蒸発させた。メチルｔ−ブチルエーテルを加えた。混合物を、０℃で２０分間撹拌した。沈殿を濾過により分離し、メチルｔ−ブチルエーテルで洗浄した。固体を集め、乾燥（真空、５０℃、３０分）して１を与えた。
【００３６】
【表１】
0006377139.tif 000008
【００３７】
【表２】
0006377139.tif 000009
【００３８】
【表３】
0006377139.tif 000010
【００３９】
分析方法。以下の方法を使用して、ＬＣ−ＭＳにより、全ての化合物を特性化した：
【００４０】
【表４】
0006377139.tif 000011
【００４１】
式（Ｉ）の化合物の生物学的活性
生物学的アッセイの説明
ＴＬＲ７およびＴＬＲ８活性の評価
化合物がヒトＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８を活性化する能力を、ＴＬＲ７またはＴＬＲ８発現ベクターおよびＮＦκＢ−ｌｕｃレポーター構築物を一過的にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞を使用して、細胞レポーターアッセイで評価した。
【００４２】
簡潔に述べると、ＨＥＫ２９３細胞を、培養培地（１０％ＦＣＳおよび２ｍＭグルタミンが補充されたＤＭＥＭ）中で成長させた。１５ｃｍ皿内での細胞のトランスフェクションについては、細胞をトリプシン−ＥＤＴＡで剥離し、ＣＭＶ−ＴＬＲ７またはＴＬＲ８プラスミド（１７００ｎｇ）と、ＮＦκＢ−ｌｕｃプラスミド（８５０ｎｇ）と、トランスフェクション試薬との混合物をトランスフェクトし、加湿した５％ＣＯ２雰囲気中３７℃で４８時間インキュベートした。次に、トランスフェクトした細胞をＰＢＳ中で洗浄し、トリプシン−ＥＤＴＡで剥離し、１．２５×１０５個の細胞／ｍＬの密度で培地に再懸濁させた。次に、４０マイクロリットルの細胞を、１００％ＤＭＳＯ中２００ｎＬの化合物が既に存在する、３８４ウェルプレートの各ウェル中に分注した。３７℃、５％ＣＯ２で６時間インキュベートした後、１５μＬのＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を各ウェルに添加し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取りを実施してルシフェラーゼ活性を求めた。４重に実施した測定値から用量反応曲線を作成した。最低有効濃度（ＬＥＣ）値を、アッセイの標準偏差より少なくとも２倍高い効果を誘発する濃度として定義し、各化合物について求めた。
【００４３】
３８４ウェルプレート中で、ＣＭＶ−ＴＬＲ７構築物のみをトランスフェクトした、ウェル当たり４０μＬの細胞（１．２５×１０５個の細胞／ｍＬ）とともに、同様の希釈系列の化合物を使用して、化合物の毒性を並行して求めた。３７℃、５％ＣＯ２で６時間インキュベートした後に、ウェル当たり１５μＬのＡＴＰ  ｌｉｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を添加し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取ることによって、細胞生存率を測定した。データをＣＣ５０として報告した。
【００４４】
並行して、ＮＦκＢ−ｌｕｃレポーター構築物のみをトランスフェクトした、１ウェル当たり４０μＬの細胞（１．２５×１０５個の細胞／ｍＬ）とともに、同様の希釈系列の化合物（１００％ＤＭＳＯ中、２００ｎＬの化合物）を使用した。３７℃、５％ＣＯ２で６時間インキュベートした後、１５μｌのＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を各ウェルに添加し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取りを実施して、ルシフェラーゼ活性を求めた。カウンタースクリーンデータをＬＥＣとして報告した。
【００４５】
ＩＳＲＥプロモーター配列の活性化
ＰＢＭＣからの調整培地によるインターフェロン刺激応答配列（ＩＳＲＥ）の活性化を測定することにより、化合物のＩＦＮ−Ｉ誘導能力も評価した。配列ＧＡＡＡＣＴＧＡＡＡＣＴのＩＳＲＥ配列はＳＴＡＴ１−ＳＴＡＴ２−ＩＲＦ９転写因子に対する応答性が高く、それはＩＦＮ−Ｉがその受容体ＩＦＮＡＲ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、ＰＴ３３７２−５Ｗ）に結合すると活性化される。Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製のプラスミドｐＩＳＲＥ−Ｌｕｃ（ｒｅｆ．６３１９１３）は、このＩＳＲＥ配列を５コピーと、その後にホタルルシフェラーゼＯＲＦを含有する。ｐＩＳＲＥ−Ｌｕｃを安定トランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞株（ＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ）を、調整ＰＢＭＣ細胞培養培地のプロファイルに合うように樹立した。
【００４６】
簡潔に述べると、標準的なＦｉｃｏｌｌ遠心分離プロトコルを使用して、少なくとも２供与体の軟膜からＰＢＭＣを調製した。単離したＰＢＭＣを、１０％ヒトＡＢ血清が補充されたＲＰＭＩ培地に再懸濁させ、２×１０５個の細胞／ウェルを、化合物を含有する３８４ウェルプレート中に分注した（全体積７０μＬ）。終夜インキュベートした後、３０μＬ中５×１０３個のＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ細胞／ウェルを含有する（前日に播種した）３８４ウェルプレートに、上清１０μＬを移した。２４時間インキュベートした後、４０μＬ／ウェルのＳｔｅａｄｙ  Ｌｉｔｅ  Ｐｌｕｓ基質（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用してルシフェラーゼ活性をアッセイすることによって、ＩＳＲＥ配列の活性化を測定し、ＶｉｅｗＬｕｘ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイメージャー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で測定した。ＨＥＫ−ＩＳＲＥｌｕｃ細胞に対する各化合物の刺激活性をＬＥＣ値として報告したが、これを、ＰＢＭＣに適用するとアッセイの標準偏差を少なくとも２倍上回るルシフェラーゼ活性が得られる、化合物濃度と定義した。ここで、ＬＥＣは、規定量のＰＢＭＣ培養培地の移入に対するＩＳＲＥ活性化の程度を示す。組み換えインターフェロンα−２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ）を標準対照化合物として使用した。
【００４７】
式（Ｉ）の化合物の生物学的活性全ての化合物が＞２４ｕＭのＣＣ５０を示した。
【００４８】
【表５】
0006377139.tif 000012
本発明は、以下の態様を包含し得る。
［１］
式（Ｉ）の化合物
【化７】
0006377139.tif 000013
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体
［式中、
Ｒ１は、アリール、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、カルボン酸、カルボン酸エステル、カルボン酸アミド、アシルスルホンアミド、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、スルホン、スルホキシド、スルホンアミド、複素環またはニトリルから独立に選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜６アルキルであり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、Ｃ３〜６シクロアルキル、アリール、ＣＦ３または複素環から独立に選択される；
または、式中
Ｒ２がＲ３と融合して環構造を形成するか、
Ｒ３がＲ４と融合して環構造を形成するか、または
Ｒ４がＲ５と融合して環構造を形成する］。
［２］
Ｒ１はｎ−ブチルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は水素である、上記［１］に記載の式（Ｉ）の化合物。
［３］
Ｒ１はｎ−ブチルであり、Ｒ２がＲ３と融合して環構造を形成するか、Ｒ３がＲ４と融合して環構造を形成するか、またはＲ４がＲ５と融合して環構造を形成する、上記［１］に記載の式（Ｉ）の化合物。
［４］
上記［１］〜［３］のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体とともに含む医薬組成物。
［５］
医薬として使用される、上記［１］〜［３］のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体、または上記［４］に記載の医薬組成物。
［６］
ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８の調節が関与する疾患の治療に使用するための、上記［１］〜［３］のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形体、または上記［４］に記載の医薬組成物。