(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩：
【化１】
0006412563.tif 000073
式中、
GがNであるとき、DがCであり、そしてEが-CH-であり；
GがCであるとき、DおよびEがNであり；
R1はアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよび-OR6から成る群から選択され、該アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ独立してハロゲン、シアノ、ニトロ、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；
R2はアルキルであり、該アルキルはアリールおよびヘテロアリールから選択される１以上の基でさらに置換されていてもよく、該アリールおよびヘテロアリールはそれぞれハロゲン、アルキル、ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(O)OR6、-C(O)NR7R8、-OC(O)NR7R8、-OR6、-NHS(O)mR6、-NHC(O)R6および-NR7R8から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；
R3はアリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、該アリールおよびヘテロアリールはそれぞれハロゲン、アルキル、ハロアルキル、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-C(O)R6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHS(O)mR6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；
R4はアルキルであり；
R5は水素、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、-OR5、-NR7R8および-NR7S(O)mR6から成る群から選択され、該アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれハロゲン、オキソ、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NR7S(O)mR6、-S(O)mR6、-C(O)R6および-NHC(O)R6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；
R6は水素、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、該アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ独立してアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、カルボン酸およびカルボン酸エステルから成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；
R7およびR8はそれぞれ独立して水素、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、該アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ独立してアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、カルボン酸およびカルボン酸エステルから成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；
または、R7およびR8は結合したN原子と一緒になって複素環を形成してもよく、該複素環はN、OまたはS(O)mの１以上のヘテロ原子を含有し、そして該複素環はアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、カルボン酸およびカルボン酸エステルから成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；
ｍは０，１または２であり；そして
ｎは１，２，３または４である。
【請求項２】
式（II）の化合物またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩；
【化２】
0006412563.tif 000074
（式中：ｎおよびＲ１〜Ｒ５は請求項１で定義した通りである。）である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項３】
式（III）の化合物またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩；
【化３】
0006412563.tif 000075
（式中：ｎおよびＲ１〜Ｒ５は請求項１で定義した通りである。）である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項４】
R1がアリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、該アリールおよびヘテロアリールはそれぞれハロゲン、シアノ、ニトロ、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキルおよび-OR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよい、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項５】
R1がフェニルおよびピリダジニルから成る群から選択され、該フェニルおよびピリダジニルはそれぞれハロゲン、シアノ、ニトロ、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキルおよび-OR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよい、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項６】
R2がベンジルであり、該ベンジルはハロゲン、アルキル、ハロアルキル、シアノ、ニトロおよび-OR6から成る群から選択される１以上の基で任意に置換されていてもよい、請求項１〜５のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項７】
R3がアリールであり、該アリールは-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよい、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項８】
R3がフェニルであり、該フェニルは-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよい、請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項９】
R3がフェニルであり、該フェニルは-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよい、請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項１０】
R４がメチルである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
R５が水素であり、ｎが１または２である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項１２】
式（IV）の化合物またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩；
【化４】
0006412563.tif 000076
（式中：n、D、E、G、R1、R2、R4およびR5は請求項１で定義した通りであり、
Rａはアルキルおよび-OR6から成る群から選択され、該アルキルはアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、カルボン酸およびカルボン酸エステルから成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；そして
R６はアルキルであり、該アルキルはアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、カルボン酸およびカルボン酸エステルから成る群から選択される１以上の基で任意に置換されていてもよい。）である、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項１３】
化合物が、
【化５】
0006412563.tif 000077
から成る群から選択される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項１４】
工程：
【化６】
0006412563.tif 000078
（式中：Ｘはハロゲンであり;ｎ，Ｄ，Ｅ，ＧおよびＲ１〜Ｒ５は請求項１で定義した通りである。）
式（IA）の化合物をNH(R4)(CH2)nR5のアミンと反応させ；得られた生成物を任意に還元または/およびアシル化をして式（Ｉ）の化合物を得ることを含む、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩の製造方法。
【請求項１５】
工程：
【化７】
0006412563.tif 000079
（式中：Ｘはハロゲンであり;ｎ，Ｄ，Ｅ，ＧおよびＲ１〜Ｒ５は請求項１）で定義した通りである。）
式（IB）の化合物をアルカリ試薬の存在下にR2Xと反応させ；得られた生成物を任意に還元または/およびアシル化をして式（Ｉ）の化合物を得ることを含む、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩の製造方法。
【請求項１６】
式（Ｉ）の化合物の製造において中間体として使用される、式（IA）の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩：
【化８】
0006412563.tif 000080
式中：Ｘはハロゲンであり；Ｄ，Ｅ，ＧおよびＲ１〜Ｒ３は式（Ｉ）で定義した通りである。
【請求項１７】
式（Ｉ）の化合物の製造において中間体として使用される、式（IB）の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩：
【化９】
0006412563.tif 000081
式中：ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｇ、Ｒ１およびＲ３〜Ｒ５は式（Ｉ）で定義した通りである。
【請求項１８】
工程：
【化１０】
0006412563.tif 000082
（式中：Ｄ，Ｅ，ＧおよびＲ１〜Ｒ３は請求項１で定義した通りである。）
式（Ib）の化合物のハロゲン化反応を行って式（IA）の化合物を得ることを含む、請求項１６に記載の式（IA）の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩の製造方法。
【請求項１９】
工程：
【化１１】
0006412563.tif 000083
（式中：ｎ、Ｄ，Ｅ，Ｇ、Ｒ１およびＲ３〜Ｒ５は請求項１で定義した通りであり、Ｒｂはアルキルである。）
式（Ig）の化合物の環化反応を行って式（IB）の化合物を得ることを含む、請求項１７に記載の式（IB）の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩の製造方法。
【請求項２０】
【化１２】
0006412563.tif 000084
から成る群から選択される、化合物またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項２１】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の式（I）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩の治療上の有効量、および1以上の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含有する、医薬組成物。
【請求項２２】
GnRH受容体アンタゴニストとしての薬剤の製造における、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の式（I）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、または請求項２１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２３】
性腺ホルモン関連疾患の治療のための薬剤の製造における、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の式（I）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、または請求項２１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２４】
性ホルモン依存性がん、性ホルモン依存性がんの骨転移、前立腺肥大症、子宮筋腫、子宮内膜症、子宮類線維症、思春期早発症、無月経症、月経前症候群、月経困難症、多胞性卵巣症候群、多嚢胞性卵巣症候群、ざ瘡、脱毛症、アルツハイマー病、不妊症、過敏性大腸症候群、ホルモン非依存性かつLH−RH感受性である良性または悪性腫瘍、または紅潮の疾患の治療または予防のための薬剤の製造における；または生殖調節薬、避妊ピル、排卵誘発剤の製造における；または前立腺がん、子宮がん、乳がんおよび下垂体がんから成る群から選択される性ホルモン依存性がんの術後再発の予防のための薬剤の製造における、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の式（I）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、または請求項２１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２５】
前立腺がん、子宮がん、乳がん、子宮内膜症または子宮筋腫の治療または予防のための薬剤の製造における、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の式（I）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、または請求項２１に記載の医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規のピラゾロピリミドン誘導体またはピロロトリアゾン誘導体およびそれらの薬学的に許容される塩、それらの製造方法、およびそれを含む医薬組成物、並びにゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）受容体アンタゴニストとして、特に子宮内膜症などの疾患の治療剤としてのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
子宮内膜症は一般的なエストロゲン依存性婦人科疾患であり、しばしば出産適齢期の婦人に生じ、メカニズムは不明と考えられている。子宮内膜症の難しい診断と不明確な原因が効果的な治療の発見を著しく妨げている。現在、子宮内膜症は主に腹腔鏡検査によって診断され、そして外科手術で治療され、または体内のエストロゲン濃度を下げるために避妊薬、ＧｎＲＨ受容体アンタゴニストまたはプロゲストーゲンを摂ることによってコントロールされている。
【０００３】
現在では、子宮内膜症の発症率は高くなっている。Datamonitor 2009の統計データは子宮内膜症を患う女性患者数は２つの国（インドと中国）だけで６８００万人になった（インドで31,288,000、中国で37,535,500）ことを示し、一方７つの主要な市場におけるデータは１７００万人以上になっている。Datamonitorは，２００９−２０１８年の期間で、子宮内膜症薬市場は２００９年の７６４００万ドル（米国で５９６００万ドル、ＥＵで１１７００万ドル、日本で５１００万ドル）から２０１８年に１１５６００万ドル（米国で８４４００万ドル、ＥＵで２０６００万ドル、日本で１０６００万ドル）西移調すると予想しており、中国市場での成長速度はもっと大きくなるであろう。
【０００４】
ゴナドトロピン放出ホルモン（ゴナドリベリン、GnRH）は、黄体ホルモン放出ホルモン（LHRH）としても知られているが、視床下部の神経内分泌細胞により合成されるデカペプチドホルモン（pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2）であり、内分泌生殖器系の中枢制御因子である。GnRHは、視床下部下垂体門脈循環系を通して下垂体に輸送され、次いで下垂体前葉でGnRH受容体細胞に結合し、黄体ホルモン（LH）や卵胞刺激ホルモン（FSH）などのゴナドトロピン黄体ホルモンの分泌と放出を促進して、卵巣と黄体の通常の発生を制御することにより視床下部‐下垂体‐生殖腺軸系において重要な役割を果たしている。GnRH受容体は、カルシウム ホスファチジルイノシトール セカンドメッセンジャー系を活性化することができるGタンパクとカップリングすることによってその調整機能を果たし；LHは性ステロイドの産生を調整し；そしてFSHは雄の精子形成と雌の卵胞成熟を調整する。
【０００５】
LHとFSHは血行中に放出され、そして卵巣または精巣の特異的細胞上のレセプターと結合してステロイド産生を刺激する。子宮内膜症、子宮筋腫および前立腺癌などの疾患は性ステロイドの存在下で悪化する。長時間作用型ペプチドGnRH受容体アゴニストおよびアンタゴニストを投与して疾患をコントロールすることが必要である。
【０００６】
ペプチドGnRH受容体アンタゴニストとしては、GnRH由来の直鎖ペプチド（特許文献１）、環状ヘキサペプチド誘導体（特許文献２）、二環式ペプチド誘導体（非特許文献１）などが挙げられ；ペプチドGnRH受容体アゴニストとしては、リュープロレリン（pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-d-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt）が挙げられる。しかしながら、経口での吸収、剤形、投与容量、薬物安定性、持続作用、および代謝安定性などのペプチド化合物に対する多くの未解決の問題点がある。小分子GnRH受容体アンタゴニスト療法が既存のペプチドベースの療法よりも優れている第一の理由は、主に便利で効果のある小分子GnRH受容体アンタゴニストの経口投与のためである。研究は小分子アンタゴニストが子宮内膜症、思春期早発症、前立腺癌などのホルモン依存性疾患に対して顕著な効果を有することを示している。
【０００７】
GnRHアゴニストによって媒介される間接的な腫瘍抑制メカニズムは、GnRHアゴニストが性ホルモンの分泌を減少させ、次いで視床下部‐下垂体‐生殖腺軸に対する長時間の効果によって腫瘍細胞の増殖を間接的に阻害し、これが下垂体ゴナドトロピン（FSH、LH）の減少に導く。一方、GnRH受容体アンタゴニストは下垂体ゴナドトロピンの放出を直接阻害し、次いで腫瘍細胞の増殖を阻害する。
【０００８】
ペプチドGnRH受容体アンタゴニストの限界を考慮して、一定の非ペプチドGnRH受容体アンタゴニストが提案され、開発、臨床試験および市場段階におかれている。例えば、エラゴリックス（NBI-56418またはABT-620としても知られる）はAbbottとNeurocrine Biosciences Incによって共同開発された小分子GnRH受容体アンタゴニストであり、現在第III相臨床段階にあり、子宮内膜症（第III相）および子宮筋腫（第II相）の治療に主として用いられる。２０１２年６月に、子宮内膜症第II相臨床試験のデータがHouston での94th Annual Meeting of the Endocrine Societyで提出され：エラゴリックス（150または250 mg qd）、リュープロレリン徐放性製剤（3.75 mg sc、月１回で１２週間）またはプラセボで治療した子宮内膜症の婦人１３１名中、エラゴリックス治療群患者の血清エストロゲン濃度はリュープロレリン治療群およびプラセボ群のものより低い。一方、エラゴリックスの安全性と許容性は良く立証された。
【０００９】
Relugolixは、TAK-385としても知られ、日本の武田薬品によって開発された経口の小分子GnRH受容体アンタゴニストであり、子宮内膜症、子宮筋腫および前立腺癌の治療に用いられる。子宮内膜症と子宮筋腫の治験は２０１１年において第II相臨床試験にあり、前立腺癌の治験は同年において第Ｉ相臨床試験にある。
現在、特許文献３〜６などの小分子GnRH受容体アンタゴニストに関する一連の特許出願が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】US 5,171,835
【特許文献２】US 2002/0065309
【特許文献３】WO2006096785
【特許文献４】WO2010026993
【特許文献５】WO2011076687
【特許文献６】WO2012175514
【００１１】
【非特許文献１】Journal of Medicinal Chemistry, 1993; 36: 3265-73
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
数多くの意義のある研究がこの分野でなされているにも拘らず、より効果のある小分子GnRH受容体アンタゴニストを開発する必要が残されている。本発明は新しい構造のGnRH受容体アンタゴニストを提供し、そのような構造を持つ化合物が良い活性を有し、内分泌生殖器系疾患に優れた治療効果を示すことを見い出した。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、式（Ｉ）の化合物、それらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、またはジアステレオマー、またはそれらの混合物、およびそれらの薬学的に許容される塩の提供に関する：
【化１】
0006412563.tif 000002
式中、
GがNであるとき、DがCであり、そしてEが-CH-であり；
GがCであるとき、DおよびEがNであり；
R1はアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリールおよび-OR6から成る群から選択され、該アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ独立してハロゲン、シアノ、ニトロ、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6、-NHC(O)OR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；
R2はアルキルであり、該アルキルはアリールおよびヘテロアリールから選択される１以上の基でさらに置換されていてもよく、該アリールおよびヘテロアリールはそれぞれハロゲン、アルキル、ハロアルキル、シアノ、ニトロ、-C(O)OR6、-C(O)NR7R8、-OC(O)NR7R8、-OR6、-NHS(O)mR6、-NHC(O)R6および-NR7R8から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく、該ハロアルキルは好ましくはトリフルオロメチルであり；
R3はアリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、該アリールおよびヘテロアリールはそれぞれハロゲン、アルキル、ハロアルキル、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-C(O)R6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHS(O)mR6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；
R4はアルキルであり；
R5は水素、シクロアルキル、複素環、アリール、ヘテロアリール、-OR5、-NR7R8および-NR7S(O)mR6から成る群から選択され、該アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれハロゲン、オキソ、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NR7S(O)mR6、-S(O)mR6、-C(O)R6および-NHC(O)R6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；
R6は水素、アルキル、シクロアルキル、複素環、アリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、該アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ独立してアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、カルボン酸およびカルボン酸エステルから成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；
R7およびR8はそれぞれ独立して水素、アルキル、シクロアルキル、複素環、アリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、該アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリールおよびヘテロアリールはそれぞれ独立してアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、カルボン酸およびカルボン酸エステルから選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；
または、R7およびR8は結合したN原子と一緒になってヘテロシクリルを形成してもよく、該ヘテロシクリルはN、OまたはS(O)mの１以上のヘテロ原子を含有し、そして該ヘテロシクリルはアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、カルボン酸およびカルボン酸エステルから成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；
ｍは０，１または２であり；
ｎは１，２，３または４であり；そして
ｐは０，１または２である。
【００１４】
本発明の好ましい実施態様において、式（Ｉ）の化合物またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩は、式（II）の化合物またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩であり；
【化２】
0006412563.tif 000003
式中：ｎ、Ｒ１〜Ｒ５は式（Ｉ）で定義した通りである。
【００１５】
本発明の他の好ましい実施態様において、式（Ｉ）の化合物またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩は、式（III）の化合物またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩であり；
【化３】
0006412563.tif 000004
式中：ｎ、Ｒ１〜Ｒ５は式（Ｉ）で定義した通りである。
【００１６】
本発明の他の好ましい実施態様において、式（Ｉ）の化合物またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩で、R1はアリールおよびヘテロアリールから成る群から選択され、好ましくはフェニルおよびピリダジニルであり、該アリールおよびヘテロアリールはそれぞれハロゲン、シアノ、ニトロ、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキルおよび-OR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよい。
【００１７】
本発明の他の好ましい実施態様において、式（Ｉ）の化合物またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩で、R2はベンジルであり、該ベンジルはハロゲン、アルキル、ハロアルキル、シアノ、ニトロおよび-OR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよい。
【００１８】
本発明の他の好ましい実施態様において、式（Ｉ）の化合物またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩で、R3はアリールから選択され、好ましくはフェニルであり、該アリールは-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から選択される１以上の基で、好ましくは-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6で任意にさらに置換されていてもよい。
【００１９】
本発明の他の好ましい実施態様において、式（Ｉ）の化合物またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩で、R４はメチルである。
【００２０】
本発明の他の好ましい実施態様において、式（Ｉ）の化合物またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩で、R５は水素であり、ｎは１または２である。
【００２１】
本発明の他の好ましい実施態様において、式（Ｉ）の化合物またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩は、式（IV）の化合物またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩であり；
【化４】
0006412563.tif 000005
式中：n、D、E、G、R1、R2、R4およびR5は式（Ｉ）で定義した通りであり、
Rａはアルキルおよび-OR6から成る群から選択され、該アルキルはアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、カルボン酸およびカルボン酸エステルから成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよく；そして
R６はアルキルであり、該アルキルはアルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、アルコキシ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、カルボン酸およびカルボン酸エステルから成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよい。
【００２２】
本発明の代表的化合物としては、以下のものに限定されないが：
0006412563.tif 000006
0006412563.tif 000007
0006412563.tif 000008
0006412563.tif 000009
0006412563.tif 000010
またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。
【００２３】
他の態様において、本発明は、工程：
【化５】
0006412563.tif 000011
（式中：Ｘはハロゲンであり;ｎ，Ｄ，Ｅ，ＧおよびＲ１〜Ｒ５は式（Ｉ）で定義した通りである。）
式（IA）の化合物をNH(R4)(CH2)nR5のアミンと反応させ；得られた生成物を任意に還元または/およびアシル化をして式（Ｉ）の化合物を得ることを含む、
式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩の製造方法を提供する。
【００２４】
還元剤としては、これらに限定されないが、水素または鉄粉が挙げられ;
アシル化剤としては、これらに限定されないが、カルボン酸、塩化アシル、塩化スルフリル、ハロゲン化ギ酸メチル、イソシアネートまたはトリホスゲンおよびメトキシアミンが挙げられる。
【００２５】
他の態様において、本発明は、工程：
【化６】
0006412563.tif 000012
（式中：Ｘはハロゲンであり;ｎ，Ｄ，Ｅ，ＧおよびＲ１〜Ｒ５は式（Ｉ）で定義した通りである。）
式（IB）の化合物をアルカリ試薬の存在下にR2Xと反応させ；得られた生成物を任意に還元または/およびアシル化をして式（Ｉ）の化合物を得ることを含む、
式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩の製造方法を提供する。
【００２６】
アルカリ試薬としては、これらに限定されないが、有機塩基および無機塩基が挙げられ、該有機塩基としては、これらに限定されないが、トリエチルアミン、ピリジン、2,6-ルチジン、ナトリウムメトキシド、ヘキサメチルジシラザンリチウム、ヘキサメチルジシラザンナトリウム、n-ブチルリチウム、カリウムtert-ブトキシドおよびテトラブチルアンモニウムブロミドが挙げられ；そして無機塩基としては、これらに限定されないが、水素化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素カリウム、炭酸セシウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムが挙げられ；好ましくは炭酸カリウムおよびナトリウムメトキシドである。
還元剤としては、これらに限定されないが、水素または鉄粉が挙げられ;
アシル化剤としては、これらに限定されないが、カルボン酸、塩化アシル、塩化スルフリル、ハロゲン化ギ酸メチル、イソシアネートまたはトリホスゲンおよびメトキシアミンが挙げられる。
【００２７】
式（IA）または式（IB）の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩は、式（Ｉ）の化合物の製造において中間体として使用される：
【化７】
0006412563.tif 000013
式中：Ｘはハロゲンであり；ｎ，Ｄ，Ｅ，ＧおよびＲ１〜Ｒ５は式（Ｉ）で定義した通りである。
【００２８】
式（IA）の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩の製造方法は、工程：
【化８】
0006412563.tif 000014
（式中：Ｄ，Ｅ，ＧおよびＲ１〜Ｒ３は式（Ｉ）で定義した通りである。）
式（Ib）の化合物のハロゲン化反応を行って式（IA）の化合物を得ることを含む。
【００２９】
式（IB）の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩の製造方法は、工程：
【化９】
0006412563.tif 000015
（式中：ｎ、Ｄ，Ｅ，ＧおよびＲ１、Ｒ３〜Ｒ５は式（Ｉ）で定義した通りであり、Ｒｂはアルキルである。）
式（Ig）の化合物の環化反応を行って式（IB）の化合物を得ることを含む。
【００３０】
式（IA）の代表的化合物としては、以下のものに限定されないが：
0006412563.tif 000016
0006412563.tif 000017
またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。
【００３１】
式（IVA）の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩は、式（IV）の化合物の製造において中間体として使用される：
【化１０】
0006412563.tif 000018
式中：ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４およびＲ５は、式（Ｉ）で定義した通りである。
【００３２】
式（IVA）の代表的化合物としては、以下のものに限定されないが：
0006412563.tif 000019
0006412563.tif 000020
またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩が挙げられる。
【００３３】
式（IV）の化合物の製造方法は、工程： 
【化１１】
0006412563.tif 000021
（式中：ｎ，Ｄ，Ｅ，Ｇ，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ４およびＲ５は、式（Ｉ）で定義した通りである。）
式（IVA）の化合物をアシル化剤とさらに反応させて式（IV）の化合物を得ることを含む。
アシル化剤としては、これらに限定されないが、カルボン酸、塩化アシル、塩化スルフリル、ハロゲン化ギ酸メチル、イソシアネートまたはトリホスゲンおよびメトキシアミンが挙げられる。
【００３４】
本発明は、さらに式（I）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩の治療上の有効量、および1以上の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含有する、医薬組成物に関する。
【００３５】
本発明は、さらにGnRH受容体アンタゴニストとしての薬剤の製造における、式（I）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、またはそれらを含有する医薬組成物の使用に関する。
【００３６】
本発明は、さらに性腺ホルモン関連疾患の治療のための薬剤の製造における、式（I）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、またはそれらを含有する医薬組成物の使用に関する。
【００３７】
本発明は、さらに性ホルモン依存性がん疾患（例、前立腺がん、子宮がん、乳がん、下垂体がん等）、性ホルモン依存性がんの骨転移、前立腺肥大症、子宮筋腫、子宮内膜症、子宮類線維症、思春期早発症、無月経症、月経前症候群、月経困難症、多胞性卵巣症候群、多嚢胞性卵巣症候群、ざ瘡、脱毛症、アルツハイマー病、不妊症、過敏性大腸症候群、ホルモン非依存性かつLH−RH感受性である良性または悪性腫瘍、または紅潮の治療または予防のための薬剤の製造における；または生殖調節薬、避妊薬、および排卵誘発剤の製造における；または性ホルモン依存性がん、好ましくは前立腺がん、子宮がん、乳がん、子宮内膜症または子宮筋腫の術後再発の治療または予防のための薬剤の製造における、式（I）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、またはそれらを含有する医薬組成物の使用に関する。
【００３８】
本発明は、さらに式（I）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、またはそれらを含有する医薬組成物の治療上の有効量をそれらを必要とする患者に投与することを含む、GnRH受容体の活性を阻害する方法に関する。
【００３９】
本発明は、さらに式（I）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、またはそれらを含有する医薬組成物の治療上の有効量をそれらを必要とする患者に投与することを含む、性腺ホルモン関連疾患の治療方法に関する。
【００４０】
本発明は、さらに性ホルモン依存性がん（例、前立腺がん、子宮がん、乳がん、下垂体がん等）、性ホルモン依存性がんの骨転移、前立腺肥大症、子宮筋腫、子宮内膜症、子宮類線維症、思春期早発症、無月経症、月経前症候群、月経困難症、多胞性卵巣症候群、多嚢胞性卵巣症候群、ざ瘡、脱毛症、アルツハイマー病、不妊症、過敏性大腸症候群、ホルモン非依存性かつLH−RH感受性である良性または悪性腫瘍、または紅潮、好ましくは前立腺がん、子宮がん、乳がん、子宮内膜症または子宮筋腫の予防または治療の；または生殖調節、避妊または排卵誘発のための；または性ホルモン依存性がんの術後再発の予防の方法に関する。
【００４１】
本発明は、またGnRH受容体の活性を阻害する薬剤として使用するための、式（I）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、またはそれらを含有する医薬組成物に関する。
【００４２】
本発明は、また性ホルモン関連疾患を治療するための薬剤として使用するための、式（I）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、またはそれらを含有する医薬組成物に関する。
【００４３】
本発明は、さらにホルモン依存性疾患の予防または調節薬として使用するための、特に；または性ホルモン依存性がん（例、前立腺がん、子宮がん、乳がん、下垂体がん等）、前立腺肥大症、子宮筋腫、子宮内膜症、子宮類線維症、思春期早発症、無月経症症候群、月経前症候群、多胞性卵巣症候群、ざ瘡、脱毛症、アルツハイマー病等の予防または治療剤として使用するための；または妊娠調節剤（避妊薬など）、不妊症治療剤または月経調節剤として使用するための；または過敏性大腸症候群の予防または治療剤として使用するための；または性ホルモン依存性がん等、好ましくは前立腺がん、子宮がん、乳がん、子宮内膜症または子宮筋腫の術後再発の予防剤として使用するための、式（I）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩、またはそれらを含有する医薬組成物に関する。
【００４４】
活性成分を含有する医薬組成物は、経口投与に適した形態、例えば、錠剤、トローチ剤、口内錠（lozenge）、水性または油性懸濁剤、分散性粉末または顆粒剤、乳剤、ハードまたはソフトカプセル、またはシロップ剤またはエリキシル剤であってもよい。経口組成物は技術分野において公知の医薬組成物の製造方法に従って製造できる。そのような組成物は心地よくて味の良い製剤を提供するために、甘味剤、芳香剤、着色剤および保存剤から成る群から選択される１以上の添加剤を含んでいてもよい。錠剤は、活性成分と錠剤の製造に適した非毒性の薬剤的に許容される賦形剤を含有している。これらの賦形剤は、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性な賦形剤；結晶セルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、コーンスターチまたはアルギン酸などの造粒剤および崩壊剤；デンプン、ゼラチン、ポリビニルピロリドンまたはアラビアゴムなどの結合剤；およびステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクなどの滑沢剤であってもよい。錠剤はコーティングしなくても、または公知の技術でコーティングして薬物の味をマスクしたり、または消化管での崩壊と薬物の吸収を遅らせ、それにより長時間にわたる持続放出を提供してもよい。例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースやヒドロキシプロピルセルロースなどの水溶性の味をマスクする物質、またはエチルセルロースまたは酢酸酪酸セルロースなどの時間を延長させる物質が本発明で用いられる。
【００４５】
経口製剤は活性成分が炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンなどの不活性な固形希釈剤と混合されたハードゼラチンカプセルとして、または活性成分をポリエチレングリコールなどの水溶性担体や例えばピーナッツオイル、流動パラフィン、またはオリーブ油などのオイル媒体と混合したソフトゼラチンカプセルとして提供してもよい。
【００４６】
水性懸濁剤は、水性懸濁剤の製造に適した賦形剤との混合物で活性成分を含んでいる。そのような賦形剤はカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドンおよびアラビアゴムなどの懸濁剤であり；レシチンなどの天然起源のリン脂質、またはステアリン酸ポリオキシエチレンなどの脂肪酸とアルキレンオキシドの縮合生成物、またはヘプタデカエチレンオキシセタノールなどの長鎖脂肪族アルコールとエチレンオキシドの縮合生成物、またはポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなどの脂肪酸とヘキシトールから誘導した部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物、またはポリエチレンソルビタンモノオレエートなどの脂肪酸とヘキシトール無水物から誘導した部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物である分散剤または湿潤剤である。水性懸濁剤はまたエチルパラベンまたはｎ−プロピルパラベンなどの１以上の保存剤、１以上の着色剤、１以上の香味料、およびショ糖、サッカリンまたはアスパルテームなどの１以上の甘味料を含んでいてもよい。
【００４７】
油性懸濁剤は、活性成分をピーナッツオイル、オリーブオイル、ゴマ油またはヤシ油などの植物油に、または流動パラフィンなどの鉱物油に懸濁させて製造される。油性懸濁剤はミツロウ、固形パラフィンまたはセチルアルコールなどの増ちょう剤を含んでいてもよい。前述の甘味料や香味料は味の良い製剤を供給するために添加してもよい。これらの組成物はブチル化ヒドロキシアニソールやα-トコフェロールなどの抗酸化剤を添加して保存することができる。
【００４８】
水を加えて水性懸濁剤を製造するのに適した分散性粉末剤および顆粒剤は、分散または湿潤剤、懸濁剤または１以上の保存剤と混合して活性成分を供給する。適当な分散または湿潤剤および懸濁剤としては、既に上述したものが挙げられる。甘味料、香味料および着色剤などの更なる賦形剤も添加してもよい。これらの組成物はアスコルビン酸などの抗酸化剤を添加して保存してもよい。
【００４９】
本発明の医薬組成物はまたＯ/Ｗ型乳剤の形態であってもよい。油相はオリーブオイルまたはピーナッツオイルなどの植物油、または流動パラフィンなどの鉱物油、またはそれらの混合物でもよい。適切な乳化剤は、大豆レシチンなどの天然由来のリン脂質、ソルビタンモノオレエートなどの脂肪酸とヘキシトール無水物から誘導したエステルまたは部分エステル、およびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなどの該部分エステルとエチレンオキシドの縮合生成物である。乳剤は甘味料、芳香剤、保存剤および抗酸化剤を含んでいてもよい。シロップ剤およびエリキシル剤はグリセリン、プロピレングリコール、ソルビトールまたはショ糖などの甘味料と製剤化してもよい。そのような製剤はまた粘滑剤、保存剤、着色剤および抗酸化剤を含んでいてもよい。
【００５０】
医薬組成物は無菌の注射用水溶液の形態でもよい。用いられる許容される溶剤または溶媒としては、水、リンゲル液および等張の食塩液である。無菌の注射用製剤は活性成分が油相に溶解した無菌の注射用Ｏ/Ｗ型マイクロエマルションであってもよい。例えば、活性成分を先ず大豆油とレシチンの混合物に溶解し、次いでオイル溶液を水とグリセリンの混合物に入れ、そしてマイクロエマルションを形成させる。注射用溶液またはマイクロエマルションは局所迅速投与により個々の血流に導入してもよい。または、本発明化合物の一定の循環濃度を維持するような方法で該溶液またはマイクロエマルションを投与するのが有利である。そのような一定の濃度を維持するために、持続静脈輸送デバイスが用いられる。そのようなデバイスの例としては、Deltec CADD-PLUS. TM. model 5400静脈内注入ポンプがある。
【００５１】
医薬組成物は筋肉内または皮下投与のための無菌の注射用水性または油性懸濁液の形態であってもよい。そのような懸濁液は公知技術によって前述のように適当な分散または湿潤剤および懸濁剤を用いて製造できる。無菌の注射用製剤は、また非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒で、例えば、1,3-ブタンジオール溶液で製造された無菌の注射用溶液または懸濁液あってもよい。さらに、無菌の不揮発性オイルが溶媒または懸濁媒体として容易に用いられる。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドなどの不揮発性オイルが用いられる。また、オレイン酸のような脂肪酸が注射剤の製造に用いられる。
【００５２】
本発明の化合物は直腸投与のための坐剤の形態で投与してもよい。これらの医薬組成物は薬物を、常温では固体であるが直腸では液体であり、それ故直腸内で融解して薬物を放出する適切な非刺激性賦形剤と混合することによって製造できる。そのような物質としては、カカオバター、グリセロゼラチン、水添植物油、ポリエチレングリコールと種々の分子量を持つポリエチレングリコールの脂肪酸エステルの混合物が挙げられる。
【００５３】
薬物の用量は、これらに限られないが、以下の因子：特定化合物の活性、患者の年齢、患者の体重、患者の一般的な健康、患者の挙動、患者の食事、投与時間、投与ルート、排泄速度、併用薬剤等を含む、種々の因子に依存することが当業者に知られている。また、治療モデルや、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩のタイプの一日量などのベストの治療が、伝統的な治療プログラムによって証明できる。
【発明を実施するための形態】
【００５４】
発明の詳細な説明
特に言及しない限り、本明細書および特許請求の範囲で用いた用語は以下に述べる意味を有する。
【００５５】
「アルキル」とは、Ｃ１−Ｃ２０の直鎖および分岐鎖基を含む飽和脂肪族炭化水素基、好ましくは１〜１０個の炭素原子を持つアルキル、より好ましくは１〜６個の炭素原子を持つアルキル、さらに好ましくは１〜４個の炭素原子を持つアルキル、そして最も好ましくはメチルである。代表例としては、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルプロピル、１，２−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、ｎ−ヘキシル、１−エチル−２−メチルプロピル、１，１，２−トリメチルプロピル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、２，３−ジメチルブチル、ｎ−ヘプチル、２−メチルヘキシル、３−メチルヘキシル、４−メチルヘキシル、５−メチルヘキシル、２，３−ジメチルペンチル、２，４−ジメチルペンチル、２，２−ジメチルペンチル、３，３−ジメチルペンチル、２−エチルペンチル、３−エチルペンチル、ｎ−オクチル、２，３−ジメチルヘキシル、２，４−ジメチルヘキシル、２，５−ジメチルヘキシル、２，２−ジメチルヘキシル、３，３−ジメチルヘキシル、４，４−ジメチルヘキシル、２−エチルヘキシル、３−エチルヘキシル、４−エチルヘキシル、２−メチル−２−エチルペンチル、２−メチル−３−エチルペンチル、ｎ−ノニル、２−メチル−２−エチルヘキシル、２−メチル−３−エチルヘキシル、２，２−ジエチルペンチル、ｎ−デシル、３，３−ジエチルヘキシル、２，２−ジエチルヘキシル、およびそれらの分岐鎖異性体が挙げられる。より好ましくは、アルキル基は１〜６個の炭素原子を持つ低級アルキルである。代表例としては、これらに限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルプロピル、１，２−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、ｎ−ヘキシル、１−エチル―２−メチルプロピル、１，１，２−トリメチルプロピル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２−エチルブチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、２，３−ジメチルブチル等が挙げられる。該アルキル基は置換されていても、無置換であってもよい。置換されている場合、置換基はどの置換可能な位置で置換していてもよく、置換基は好ましくは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルオキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、複素環式アルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、オキソ、アミノ、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から独立して選択される１以上の基である。
【００５６】
「アルケニル」とは、少なくとも２つの炭素原子と少なくとも１つの炭素‐炭素二重結合を有する上記で定義したアルキルをいい、例えば、ビニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−，２−または３−ブテニルなど、好ましくはＣ２−１０アルケニル、より好ましくはＣ２−６アルケニル、そして最も好ましくはＣ２−４アルケニルである。該アルケニル基は置換されていても、無置換であってもよい。置換されている場合、置換基は好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオール、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、オキソ、アミノ、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００５７】
「アルキニル」とは、少なくとも２つの炭素原子と少なくとも１つの炭素‐炭素三重結合を有する上記定義のアルキルをいい、例えば、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−，２−または３−ブチニルなど、好ましくはＣ２−１０アルキニル、より好ましくはＣ２−６アルキニル、そして最も好ましくはＣ２−４アルキニルである。該アルキニル基は置換されていても、無置換であってもよい。置換されている場合、置換基は好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオール、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、オキソ、アミノ、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００５８】
「シクロアルキル」とは、飽和または部分的に不飽和の単環式または多環式炭化水素基で、３〜２０個の炭素原子、好ましくは３〜１２個の炭素原子、より好ましくは３〜１０個の炭素原子、さらに好ましくは３〜６個の炭素原子を持つものをいい、最も好ましくはシクロプロピルである。単環式シクロアルキルの代表例としては、これらに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロヘプタトリエニル、シクロオクチル等、好ましくはシクロプロピル、またはシクロヘキセニルが挙げられる。多環式シクロアルキルとしては、スピロ環、縮合環または架橋環を持つシクロアルキルが挙げられる。該シクロアルキル基は置換されていても、無置換であってもよい。置換されている場合、置換基は好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオール、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、オキソ、アミノ、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００５９】
「ヘテロシクリル」とは、３〜２０員の飽和または部分的に不飽和の単環式または多環式炭化水素基であって、環原子としてＮ，Ｏ、およびＳ（Ｏ）ｍ（式中、ｍは０〜２の間の整数である）から成る群から選ばれる１以上のヘテロ原子を有するが、環内に−Ｏ−Ｏ−，−Ｏ−Ｓ−または−Ｓ−Ｓ−はなく、残りの環原子がＣであるものをいう。ヘテロシクリルは、好ましくは、１〜４個の原子がヘテロ原子である、３〜１２個の環原子を有し；より好ましくは３〜１０個の原子；最も好ましくは５〜６個の環原子を有する。単環式ヘテロシクリルの代表例としては、これらに限定されないが、ピロリジル、ピペリジル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ホモピペラジニル、ピラニル、テトラヒドロフラニルなどが挙げられる。多環式ヘテロシクリルとしては、スピロ環、縮合環または架橋環を持つヘテロシクリルが挙げられる。該ヘテロシクリル基は置換されていても、無置換であってもよい。置換されている場合、置換基は好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルオキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、オキソ、アミノ、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００６０】
「アリール」とは、６〜１４員の全て炭素の単環式環または多環式縮合環（「縮合」環系とは、各環が隣り合った炭素原子対を系内の他の環と共有していることを意味する）をいい、完全に共役したπ電子系を持っている。アリールは、好ましくは６〜１０員であり、より好ましくはフェニルおよびナフチル、もっとも好ましくはフェニルである。該アリールは、ヘテロアリール、ヘテロシクリルまたはシクロアルキルの環に縮合していてもよく、ここでは親構造に結合した環がアリールである。代表例としては、これらに限定されないが、以下の基が挙げられる：
【化１２】
0006412563.tif 000022
アリール基は置換されていても、無置換であってもよい。置換されている場合、置換基は好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００６１】
「ヘテロアリール」とは、完全に共役したπ電子系を持った、O、SおよびNから成る群から選択される１〜４個のヘテロ原子を含有する、５〜１４員の全て炭素の単環式環または多環式縮合環をいう。ヘテロアリールは、好ましくは５〜１０員、より好ましくは５または６員で、最も好ましくは、フリル、チエニル、ピリジル、ピロリル、Ｎ−アルキルピロリル、ピリミジニル、ピラジニル、イミダゾリル、テトラゾリルなどである。該ヘテロアリールは、アリール、ヘテロシクリルまたはシクロアルキルの環と縮合してもよく、ここでは親構造に結合する環がヘテロアリールである。代表例としては、これらに限定されないが、以下の基が挙げられる：
【化１３】
0006412563.tif 000023
該ヘテロアリール基は、置換されていても、無置換であってもよい。置換されている場合、置換基は好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００６２】
「アルコキシ」とは、−Ｏ−（アルキル）および−Ｏ−（無置換シクロアルキル）基の両者をいい、ここでアルキルおよびシクロアルキルは上記で定義した通りである。代表例としては、これらに限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ等が挙げられる。該アルコキシルは置換されていても、無置換であってもよい。置換されている場合、置換基は好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ハロゲン、チオール、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルコキシ、ヘテロシクロアルコキシ、シクロアルキルチオ、ヘテロシクロアルキルチオ、アミノ、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、-OR6、-C(O)OR6、-OC(O)R6、-NHS(O)mR6、-C(O)R6、-NHC(O)R6、-NHC(O)OR6、-NR7R8、-OC(O)NR7R8、-C(O)NR7R8、-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から独立して選択される１つ以上の基である。
【００６３】
「ハロアルキル」とは、１以上のハロゲンで置換されたアルキル基をいい、ここでアルキルは上記で定義した通りである。
「ヒドロキシ」とは、−ＯＨ基をいう。
「ヒドロキシアルキル」とは、ヒドロキシ基で置換されたアルキル基をいい、ここでアルキルは上記で定義した通りである。
「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素または臭素をいう。
「アミノ」とは、−ＮＨ２基をいう。
「シアノ」とは、‐ＣＮ基をいう。
「ニトロ」とは、‐ＮＯ２基をいう。
「オキソ基」とは、＝Ｏ基をいう。
「カルボン酸」とは、（アルキル）または（シクロアルキル）-C(O)OHをいう。
「塩化スルフリル」とは、（アルキル）または（シクロアルキル）-S(O)m-X(halo)をいう。
「イソシアネート」とは、（アルキル）または（シクロアルキル）-N=C=Oをいう。
「トリホスゲン」とは、ビス（トリクロロメチル）カーボネートをいう。
「カルボキシル」とは、-C(O)OH基をいう。
「アルコキシカルボニル」とは、-C(O)O(アルキル)または (シクロアルキル)をいい、ここでアルキルおよびシクロアルキルは上記で定義した通りである。
【００６４】
「任意の」または「任意に」は、続いて記載した出来事や状況が必ずしも生じなくてもよいことを意味する。その記載は出来事や状況の事例が生じても、生じなくてもよいことを含んでいる。例えば、「アルキルで任意に置換された複素環式基」は、アルキル基が存在しても、必ずしも存在しなくてもよいことを意味し、そのような表現は複素環式基がアルキルで置換されている場合と複素環式基がアルキルで置換されていない場合を含んでいる。
【００６５】
「置換された」は、基内の１以上の水素原子、好ましくは５まで、より好ましくは１〜３の水素原子が、対応する数の置換基でそれぞれ独立して置換されていることをいう。置換基はそれらの化学的に可能な位置にのみ存在することは言うまでもない。当業者は過剰な努力を払うことなく経験や理論により置換が可能かどうか判断することができる。例えば、フリーの水素を持つアミノまたはヒドロキシル基が不飽和結合を持つ炭素原子（例、オレフィン）と結合している場合は不安定である。
【００６６】
「医薬組成物」は、本発明記載の１以上の化合物またはそれらの生理学的/薬学的に許容される塩またはプロドラッグおよび生理学的/薬学的に許容される担体や賦形剤などの他の化学成分の混合物をいう。医薬組成物の目的は、生体への薬物投与を容易にすることであり、これにより活性成分の吸収を助け、生物活性を実現できる。
ここで、Ｒ６〜Ｒ８は式（Ｉ）で定義した通りである。
【００６７】
本発明化合物の合成方法
本発明の目的を達成するため、本発明は以下の技術的解決法を適用する：
式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を製造する方法で、次の工程を含む：
【化１４】
0006412563.tif 000024
スキーム１
式（Ia）の化合物をアルカリ試薬の存在下にR2Xと反応させて式（Ib）の化合物を得て；式（Ib）の化合物を触媒下ハロゲン化反応に付して式（IA）の化合物を得て、ここで触媒は好ましくはアゾビスイソブチロニトリルであり、ハロゲン化剤は好ましくはN-ブロモコハク酸イミドであり；式（IA）の化合物をNH(R4)(CH2)nR5のアミンと反応させて式（I）の化合物を得る；
式中：Xはハロゲンであり；ｎ、D、E、G、およびR1〜R5は式（I）で定義した通りであり；
R3は好ましくはアリール、より好ましくはフェニルであり、該アリールは-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよい。
【００６８】
式（Ｉ）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を製造する方法で、次の工程を含む：
【化１５】
0006412563.tif 000025
スキーム２
式（Ic）の化合物を反応させて触媒下ハロゲン化反応に付して式（Id）の化合物を得、ここで触媒は好ましくはアゾビスイソブチロニトリルであり、ハロゲン化剤は好ましくはN-ブロモコハク酸イミドであり；式（Id）の化合物をNH(R4)(CH2)nR5のアミンと反応させて式（Ie）の化合物を得て；式（Ie）の化合物をさらにトリフルオロ酢酸の下で加熱して式（If）の化合物を得て；式（If）の化合物をトリホスゲンおよびR1NH2のアミンと続けて反応させて式（Ig）の化合物を得て；式（Ig）の化合物をアルカリの下で環化反応に付して式（IB）の化合物を得て；式（IB）の化合物をアルカリ試薬の存在下にR2Xと反応させて式（I）の化合物を得る；
式中：
Xはハロゲンであり；Rbはアルキルであり；
ｎ、D、E、G、R1〜R5は式（I）で定義した通りであり；そして
R3は好ましくはアリール、より好ましくはフェニルであり、該アリールは-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよい。
【００６９】
式（II）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を製造する方法で、次の工程を含む：
【化１６】
0006412563.tif 000026
スキーム３
式（IIa）の化合物をトリフルオロ酢酸の下で加熱して式（IIb）の化合物を得て；式（IIb）の化合物をトリホスゲンおよびR1NH2のアミンと続けて反応させて式（IIc）の化合物を得て；式（IIc）の化合物をアルカリの下で環化反応に付して式（IId）の化合物を得て；式（IId）の化合物をアルカリ試薬の存在下にR2Xと反応させて式（IIe）の化合物を得て；式（IIe）の化合物を触媒下でハロゲン化反応に付して式（IIA）の化合物を得る、ここで触媒は好ましくはアゾビスイソブチロニトリルであり、ハロゲン化剤は好ましくはN-ブロモコハク酸イミドであり；式（IIA）の化合物をNH(R4)(CH2)nR5のアミンと反応させて式（II）の化合物を得る；
式中：Xはハロゲンであり；Rbはアルキルであり；
ｎ、R1〜R5は式（I）で定義した通りであり；
R3は好ましくはアリール、より好ましくはフェニルであり、該アリールは-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよい。
【００７０】
式（III）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を製造する方法で、次の工程を含む：
【化１７】
0006412563.tif 000027
スキーム４
式（IIIa）の化合物をトリホスゲンおよびR1NH2のアミンと続けて反応させて式（IIIb）の化合物を得て；式（IIIb）の化合物をアルカリ化で反応させて式（IIIc）の化合物を得て；式（IIIc）の化合物をアルカリ試薬の存在下にR2Xと反応させて式（IIId）の化合物を得て；式（IIId）の化合物を触媒下でハロゲン化反応に付して式（IIIA）の化合物を得る、ここで触媒は好ましくはアゾビスイソブチロニトリルであり、ハロゲン化剤は好ましくはN-ブロモコハク酸イミドであり；式（IIIA）の化合物をNH(R4)(CH2)nR5のアミンと反応させて式（III）の化合物を得る；
式中：Xはハロゲンであり；Rbはアルキルであり；
ｎ、R1〜R5は式（I）で定義した通りであり；
R3は好ましくはアリール、より好ましくはフェニルであり、該アリールは-NHC(O)NHR6および-NHC(O)NHOR6から成る群から選択される１以上の基で任意にさらに置換されていてもよい。
【００７１】
式（IV）の化合物、またはそれらの互変異性体、メソマー、ラセミ体、鏡像体、ジアステレオマー、またはそれらの混合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を製造する方法で、次の工程を含む：
【化１８】
0006412563.tif 000028
スキーム５
式（IVa）の化合物をスキーム１−４に従って調製する；式（IVa）の化合物をアルカリ試薬の存在下にR2Xと反応させて式（IVb）の化合物を得て；式（IVb）の化合物を触媒下でハロゲン化反応に付して式（IVc）の化合物を得る、ここで触媒は好ましくはアゾビスイソブチロニトリルであり、ハロゲン化剤は好ましくはN-ブロモコハク酸イミドであり；式（IVc）の化合物をNH(R4)(CH2)nR5のアミンと反応させて式（IVd）の化合物を得て；式（IVd）の化合物を塩化アンモニウムの存在は鉄を用いて還元反応に付してニトロ基をアミノ基に還元して式（IVA）の化合物を得て；式（IVA）の化合物をさらにアシル化剤と反応させて式（IV）の化合物を得る；
式中：Xはハロゲンであり；ｎ、D、E、G、Ra、R1〜R5は式（I）で定義した通りである。
【００７２】
上記技術的解決において、アルカリ条件は有機塩基または無機塩基によって供給され、該有機塩基としては、これらに限られないが、トリエチルアミン、ピリジン、2,6-ルチジン、ナトリウムメトキシド、ヘキサメチルジシラザンリチウム、ヘキサメチルジシラザンナトリウム、n-ブチルリチウム、カリウムtert-ブトキシドまたはテトラブチルアンモニウムブロミドが挙げられ；そして無機塩基としては、これらに限られないが、水素化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素カリウム、炭酸セシウム、水酸化リチウム、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムが挙げられる。本発明の方法において、環化のアルカリ条件は好ましくは有機塩基、より好ましくはナトリウムメトキシドである。
還元剤としては、これらに限られないが、水素または鉄粉が挙げられる。
アシル化剤としては、これらに限られないが、カルボン酸、塩化アシル、塩化スルフリル、ハロゲン化ギ酸メチル、イソシアネートまたはトリホスゲンおよびメトキシアミンが挙げられる。
【００７３】
本発明を以下の具体的実施例に基づいてさらに説明する。これらの実施例は単に発明を明示するためのもので、発明の範囲を限定するものではない。
具体的な条件が示されていない以下の実施例における実験方法は慣用的な条件または原料物質や製品製造者の推奨の条件に従って実施できる。具体的な起源が示されていない実験試薬は市場から一般に購入できる慣用的な試薬である。
以下の実施例は本発明をさらに説明するためのものであって、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【００７４】
実施例
化合物の構造は、核磁気共鳴（NMR）及び/または質量分析（MS）で同定した。NMRケミカルシフト（δ）は10-6 (ppm)で示した。NMRはBruker AVANCE-400で測定した。NMR用溶媒は重水素化ジメチルスルホキシド（DMSO-d6）、重水素化クロロホルム（CDCl3）及び重水素化メタノール（CD3OD）であった。内部標準はテトラメチルシラン（TMS）であった。
MSはFINNIGAN LCQAd (ESI) 質量分析計（メーカー：Thermo社、型式：Finnigan LCQ advantage MAX）で測定した。
高速液体クロマトグラフィー（HPLC）はAgilent 1200DAD高圧液体クロマトグラフィー装置（Sunfire C18 150×4.6 mmクロマトグラフィーカラム）及びWaters 2695-2996高圧液体クロマトグラフィー装置（Gimini C18 150×4.6 mmクロマトグラフィーカラム）で測定した。
酵素の平均阻害率及びIC50はNovoStar ELISA (BMG Co.社、ドイツ) で測定した。
薄層シリカゲルクロマトグラフィー（TLC）には、Yantai Huanghai HSGF254 または Qingdao GF254シリカゲルプレートを使用した。TLCで使用したプレートの寸法は0.15 mm 〜 0.2 mmで、生成物の精製で使用したプレートの寸法は0.4 mm 〜 0.5 mmであった。
カラムクロマトグラフィーでは、担体としてYantai Huanghai 200 〜 300メッシュのシリカゲルを用いた。
本発明の実施例で用いた公知の出発物質は、先行技術における公知の方法により合成できるか、ABCR GmbH & Co. KG、Acros Organics、Aldrich Chemical Company、Accela ChemBio Inc.またはDari Chemical Company等から購入できる。
実施例で特に明記しない限り、反応は窒素またはアルゴン雰囲気下で行われた。
「アルゴンまたは窒素雰囲気」とは、反応フラスコが１Ｌのアルゴンまたは窒素の風船を備えていることをいう。
実施例で特に明記しない限り、溶液は水溶液をいう。
実施例で特に明記しない限り、反応温度は室温で、20℃ 〜 30℃の範囲である。
実施例における反応の進行は薄層クロマトグラフィー（TLC）でモニターし、展開溶媒の系は：A:ジクロロメタンとメタノール系、B:ｎ−ヘキサンと酢酸エチル系、C:石油エーテルと酢酸エチル系、D:アセトンを含む。溶媒の容積比は化合物の極性により調節した。
カラムクロマトグラフィー及び薄層クロマトグラフィーによる化合物精製の溶出系としては：A：ジクロロメタンとメタノール系、Ｂ：ｎ−ヘキサンと酢酸エチル系、C:ジクロロメタンとアセトン系、D:酢酸エチルとジクロロメタン系、E:酢酸エチル、ジクロロメタン及びｎ−ヘキサン系、F:酢酸エチル、ジクロロメタン及びアセトン系を含む。溶媒の容積比は化合物の極性により調節し、そして少量のアルカリ性試薬、例えば、トリエチルアミンまたは酸性試薬、例えば、酢酸が添加できる。
【００７５】
実施例 1
N-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)アセトアミド
0006412563.tif 000029
0006412563.tif 000030
工程 1
エチル3-アミノ-5-メチル-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート
250 mLの茄子型フラスコの中にエチル3-(tert-ブチルアミノ)-5-メチル-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート1a (12.10 g, 34.93 mmol,“合成, 1988, (3), 203-207”に開示された既知の方法を用いて調製されたもの) 及びトリフロロ酢酸100 mLを逐次に入れた。この混合物を85oCで2.5時間撹拌した後、反応を停止させた。この反応溶液を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残渣に重炭酸ナトリウム飽和溶液を滴下し、pHを7以上に調整した後に濾過した。濾過ケーキをジクロロメタンに溶解し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をジクロロメタン及びメタノール (V/V = 20:1)の混合物50 mLでスラリー化した後、濾過した。その生成物を乾燥し、黄色固体5.30 gを得た。その母液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物 エチル3-アミノ-5-メチル-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート1b (生成物の合計：6.07 g,黄色固体)を収率60.1%で得た。
MS m/z (ESI): 291.2 [M+1]
工程 2
エチル3-(3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)ウレイド)-5-メチル-1-(4-ニト
ロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート
エチル3-アミノ-5-メチル-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート1b (550 mg, 1.89 mmol) をジクロロメタン50 mLに溶解したが、室温において完全に溶解できない混合物を得た。これにトリエチルアミン(0.66 mL, 4.75 mmol)及びトリホスゲン(225 mg, 0.76 mmol)を加え、完全に溶解するまでに撹拌した。30分間撹拌した後, 反応溶液に2-フルオロ-3-メトキシアニリン(283 mg, 2 mmol)を加え、室温で12 時間撹拌した。その後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣に水20 mLを加え、ジクロロメタン(50 mL × 2)で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物エチル3-(3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)ウレイド)-5-メチル-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート1c (640 mg,白色固体)を収率73.9%で得た。
MS m/z (ESI): 458.1 [M+1]
工程 3
5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピ
ラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
エチル3-(3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)ウレイド)-5-メチル-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート1c(640 mg, 1.40 mmol)をエタノール30 mLに溶解して、ナトリウムメトキシド(190 mg, 3.52 mmol)を添加した。室温で3 時間反応した後、反応溶液を80oCに加熱し、さらに1時間反応した。次に、反応を停止させた。反応溶液は室温に冷却し、1 M 塩酸溶液3.5 mLを加え、濾過した。濾過ケーキを水(20 mL × 1)、エタノール(10 mL × 1)及びメチルtert-ブチルエーテル(5 mL×1)で連続して洗浄し、乾燥して、標題化合物5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン1d (536 mg, 淡黄色固体)を収率93.2%で得た。
MS m/z (ESI): 412.2 [M+1]
工程 4
7-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン1d (530 mg, 1.29 mmol)、2-(クロロメチル)-1,3-ジフルオロベンゼン(230 mg, 1.41 mmol)、ヨウ化カリウム(235 mg, 1.41 mmol)及び炭酸カリウム(196 mg, 1.42 mmol)を順次にN、N-ジメチルホルムアミド15 mLに溶解した。室温で24 時間反応した後に反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、撹拌しながら残渣に水30 mL及びメチルtert-ブチルエーテル20 mLを加え、濾過した。濾過ケーキをジクロロメタン50 mLに溶解し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、固体570 mgを得た。その母液を抽出し、有機相を水(20 mL × 3)及び塩化ナトリウム飽和溶液(20 mL × 1)で連続して洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残渣をn-ヘキサン及びメチルtert-ブチルエーテル(V/V = 1:1)の混合物15 mLでスラリー化し、濾過した。濾過ケーキを乾燥し、固体110 mgを得た。標題化合物7-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン1e (生成物合計680 mg, 黄褐色固体)を収率98.3%で得た。
MS m/z (ESI): 538.2 [M+1]
工程 5
3-(ブロモメチル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
アルゴン雰囲気下で7-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン1e(660 mg, 1.23 mmol)、アゾビスイソブチロニトリル (24 mg, 0.15 mmol)及びN-ブロモスクシンイミド(262 mg, 1.47 mmol)をジクロロベンゼン20 mLに順次に溶解した。85oCで12時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液は室温に冷却して、塩化ナトリウム飽和溶液(15 mL × 1)及びチオ硫酸ナトリウム飽和溶液(15 mL × 1)で連続して洗浄した。水相はジクロロメタン(40 mL × 2)で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液は減圧下で濃縮し、粗表題化合物3-(ブロモメチル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン1f (900 mg, 淡黄色固体)を得た。これを次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI): 616.1 [M+1]
工程 6
7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフ
ェニル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
粗3-(ブロモメチル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H, 7H)-ジオン1f (900 mg, 1.46 mmol)をジメチルアミンのテトラヒドロフラン溶液3 mLに溶解した。室温で12 時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、溶出系Dを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製し、粗化合物627 mgを得た。 溶出系Eを用いた薄層クロマトグラフィーでこの粗化合物を精製し、標題化合物7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン1g (223 mg、淡黄色固体)を収率31.0%で得た。
MS m/z (ESI): 581.3 [M+1]
工程 7
2-(4-アミノフェニル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-
フルオロ-3-メトキシフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン1g (212 mg, 0.36 mmol)をギ酸8 mLに溶解した後、4 M HCl の1,4-ジオキサン溶液0.25 mL及び10% パラジウム炭素(40 mg)を添加した。この混合物を水素で３回パージし、常圧及び水素雰囲気下で2時間反応した。 その後反応を停止させ、反応混合物を濾過した。濾過ケーキをメタノール(20 mL × 2)で洗浄し、有機相は減圧下で濃縮した。残渣にジクロロメタン50 mL及び重炭酸ナトリウム飽和溶液15 mLを添加し、10分間撹拌した。次に、重炭酸ナトリウム飽和溶液を滴下し、pHを7以上に調整し、水相を抽出に提供した。水相はジクロロメタン(20 mL × 3)で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物2-(4-アミノフェニル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン1h (180 mg, 白色固体)を収率89.5%で得た。
MS m/z (ESI): 551.3 [M+1]
工程 8
N-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)アセトアミド
2-(4-アミノフェニル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン1h(33 mg, 0.059 mmol)をジクロロメタン5 mLに溶解し、トリエチルアミン(13 μL, 0.094 mmol)及び無水酢酸(7 μL, 0.072 mmol)を添加した。室温で12 時間反応した後、反応は未完了であった。それに無水酢酸5 μLを追加し、混合物を35oCに加熱し、さらに2 時間反応した。その後反応を停止させ、反応溶液に重炭酸ナトリウム飽和溶液2 mLを添加し、10分間撹拌した後、抽出を行った。水相をジクロロメタン(15 mL × 3)で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物 N-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)アセトアミド 1 (25 mg, 白色固体)を収率71.4%で得た。
MS m/z (ESI): 593.1 [M+1]
1H NMR (400MHz, CDCl3)   7.89 (d, 2H), 7.67 (d, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.25-7.30 (m, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.08 (t, 1H), 7.89-7.94 (m, 3H), 5.45 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.69-3.70 (m, 2H), 2.35 (s, 6H), 2.25 (s, 3H).
【００７６】
実施例 2
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素
0006412563.tif 000031
0006412563.tif 000032
工程 1
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素
2-(4-アミノフェニル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン1h(30 mg, 0.054 mmol)をジクロロメタン5 mLに溶解し、トリエチルアミン(0.045 mL , 0.32 mmol)及びトリホスゲン(6.5 mg, 0.022 mmol)を添加した。1時間反応した後、反応溶液にメトキシアミン(6.8 mg, 0.081 mmol)を添加し、室温でさらに12時間反応した。次に、トリホスゲン(18 mg, 0.061 mmol)を追加し、35oCでさらに1時間反応した後、メトキシアミン(100 mg, 1.20 mmol)を添加し、35oCで2 時間反応を継続した。その後反応を停止させ、反応溶液に重炭酸ナトリウム飽和溶液10 mLを添加し、抽出を行った。水相をジクロロメタン(15 mL × 3)で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素2 (12 mg, 淡黄色固体)を収率35.3%で得た。
MS m/z (ESI): 624.5 [M+1]
1H NMR (400MHz, CDCl3)  7.90 (d, 2H), 7.71 (s, 1H), 7.67 (d, 2H), 7.20-7.30 (m, 3H), 7.06-7.08 (m, 1H), 6.89-6.94 (m, 3H), 5.45 (s, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 2.35 (s, 6H).
【００７７】
実施例 3
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-エチル尿素
0006412563.tif 000033
0006412563.tif 000034
工程 1
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-エチル尿素
2-(4-アミノフェニル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン1h (26 mg, 0.047 mmol)をテトラヒドロフラン3 mLに溶解し、イソシアン酸エチル(55 μL , 0.69 mmol)を添加した。35oCで12 時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣に水10 mL及びジクロロメタン20 mLを添加し、抽出を行った。水相をジクロロメタン(15 mL × 3)で抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-エチル尿素3 (12 mg, 白色固体)を収率41.4%で得た。
MS m/z (ESI): 622.5 [M+1]
1H NMR (400MHz, CDCl3)  7.80 (d, 2H), 7.45 (d, 2H), 7.22-7.26 (m, 2H), 7.13-7.15 (m, 1H), 6.99-7.04 (m, 1H), 6.84-6.89 (m, 3H), 6.45 (s, 1H), 5.40 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.65 (s, 2H), 3.33-3.35 (m, 2H), 2.30 (s, 6H), 1.20 (t, 3H).
【００７８】
実施例 4
メチル(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)カルバメート
0006412563.tif 000035
0006412563.tif 000036
工程 1
メチル(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)カルバメート
2-(4-アミノフェニル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン1h (35 mg, 0.064 mmol)をジクロロメタン5 mLに溶解し、トリエチルアミン(0.8 mL, 5.8 mmol)及びクロロギ酸メチル(0.5 mL, 4.14 mmol)を添加した。35oCで12時間反応した後、反応を停止させ、室温に冷却した。反応溶液に重炭酸ナトリウム飽和溶液10 mLを添加し、抽出を行った。水相をジクロロメタン(15 mL × 3)で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物メチル(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)カルバメート4 (24 mg, 白色固体)を収率61.5%で得た。
MS m/z (ESI): 609.5 [M+1]
1H NMR (400MHz, CDCl3)  7.88 (d, 2H), 7.55 (d, 2H), 7.25-7.27 (m, 1H), 7.18-7.20 (m, 1H), 7.06-7.08 (m, 1H), 6.88-6.94 (m, 3H), 6.78 (s, 1H), 5.45 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 3.65-3.73 (m, 2H), 2.35 (s, 6H).
【００７９】
実施例 5
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ）メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メチル尿素
0006412563.tif 000037
0006412563.tif 000038
工程 1
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ）メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メチル尿素
酢酸(46 mg, 0.77 mmol)をトルエン1 mLに溶解し、N、N-ジイソプロピルエチルアミン(0.2 mL, 1.13 mmol)及びジフェニルホスホリルアジド(0.16 mL, 0.73 mmol)を添加した。この混合物を70oCで１時間撹拌した後、氷浴の中で冷却した。次に、氷浴の中で2-(4-アミノフェニル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン1h(30 mg, 0.050 mmol)及びジクロロメタン2 mLを添加した。この混合物は室温で12時間反応した。その後反応を停止させ、反応溶液に重炭酸ナトリウム飽和溶液10 mLを加え、ジクロロメタン(25 mL × 1)で抽出した。有機相を水(10 mL × 1)及び塩化ナトリウム飽和溶液(10 mL × 1)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)- 5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メチル尿素5 (8 mg, 白色固体)を収率24.4%で得た。
MS m/z (ESI): 607.9 [M+1] 
1H NMR (400MHz, CDCl3)  7.79 (d, 2H), 7.50 (d, 2H), 7.27-7.30 (m, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.06 (t, 1H), 6.880-6.93 (m, 4H), 5.44 (s, 2H), 4.95 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.78 (s, 2H), 2.88 (d, 3H), 2.39 (s, 6H).
【００８０】
実施例 6
1-(4-(3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-エチル尿素
0006412563.tif 000039
0006412563.tif 000040
工程 1
5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン1d (1.90 g, 4.62 mmol)、2-（ブロモメチル）-1-フルオロ-3-（トリフルオロメチル）ベンゼン(1.31 g, 5.10 mmol)、ヨウ化カリウム(844 mg, 5.08 mmol)及び炭酸カリウム(702 mg, 5.09 mmol)を順次にN、N-ジメチルホルムアミド 54 mLに溶解した。室温で20 時間撹拌した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣に水及びエーテルを添加し、１時間スラリー化した。その後濾過し、濾過ケーキをエーテル(10 mL × 3)で洗浄した。それを乾燥し、標題化合物5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン6a (1.91 g, 白色固体)を収率70.7%で得た。
MS m/z (ESI): 588.1 [M+1]
工程 2
3-(ブロモメチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン6a (1.81 g, 3.08 mmol)、アゾビスイソブチロニトリル (61 mg, 0.37 mmol)及びN-ブロモスクシンイミド(660 mg, 3.71 mmol)をジクロロベンゼン53 mLに溶解した。得られた溶液をアルゴンで３回パージし、85oC及びアルゴン雰囲気下で19 時間反応した。その後反応を停止させた。反応溶液をチオ硫酸ナトリウム飽和溶液(30 mL × 1)及び塩化ナトリウム飽和溶液(50 mL × 2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗標題化合物3-(ブロモメチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン6b (2.18 g, 淡黄色固体)を得た。これを次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI): 666.0 [M+1]
工程 3
3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
粗3-(ブロモメチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン6b (2.18 g, 3.27 mmol) 及びジメチルアミン(2 MのTHF溶液)(6.8 mL, 13.6 mmol)を反応フラスコに入れ、室温で12 時間撹拌した。その後反応を停止させ、反応溶液を減圧下で濃縮した。分取法で残渣を精製し、標題化合物3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン6c (455 mg, 白色固体)を収率22.1%で得た。
MS m/z (ESI): 630.8 [M+1]
工程 4
2-(4-アミノフェニル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン6c(200 mg, 0.32 mmol)をギ酸8 mLに溶解し、4 M HClの1,4-ジオキサン溶液0.25 mL及び10% Pd/C(50 mg)を添加した。この混合物を水素で３回パージし、室温で2時間撹拌した。その後反応を停止させ、濾過した。濾過ケーキを少量のメタノールで洗浄し、濾液を減圧下で濃縮し、 ジクロロメタン50 mL及び重炭酸ナトリウム溶液20 mLを添加して、10 分間撹拌した。水相をpH 8に調整し、抽出を行った。水相をジクロロメタン(25 mL × 2)で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物2-(4-アミノフェニル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン6d (135 mg, 白色固体)を収率71.1%で得た。
MS m/z (ESI): 600.9 [M+1]
工程 5
1-(4-(3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-エチル尿素
2-(4-アミノフェニル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン6d (30 mg, 0.050 mmol)をジクロロメタン1 mLに溶解し、イソシアン酸エチル(0.06 mL, 0.76 mmol)を添加した。35oCで12 時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液に重炭酸ナトリウム飽和溶液5 mL及びジクロロメタン溶液20ｍLを添加し、抽出に提供した。有機相を水 (10 mL × 1)及び塩化ナトリウム飽和溶液(5 mL × 1)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(4-(3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-エチル尿素6 (15 mg, 白色固体)を収率44.1%で得た。
MS m/z (ESI): 671.9 [M+1]
1H NMR (400MHz, CDCl3)  7.75 (d, 2H), 7.51 (d, 1H), 7.46 (d, 2H), 7.37-7.40 (m, 1H), 7.18-7.24 (m, 2H), 7.15 (t, 1H), 6.91 (t, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.60 (s, 2H), 4.92 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.69-3.76 (m, 2H), 3.28-3.35 (m, 2H), 2.35 (s, 6H), 1.19 (t, 3H).
【００８１】
実施例 7
1-(4-(3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メチル尿素
0006412563.tif 000041
0006412563.tif 000042
工程 1
1-(4-(3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メチル尿素
2-(4-アミノフェニル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン6d (30 mg, 0.050 mmol)をジクロロメタン3 mLに溶解し、トリエチルアミン(0.07 mL, 0.50 mmol)及びトリホスゲン(15 mg, 0.051 mmol)を添加した。室温で１時間反応した後、反応を停止させ、反応溶液に水10 mLを加え、ジクロロメタン(25 mL × 1)で抽出した。有機相を重炭酸ナトリウム飽和溶液(10 mL × 1)、水(10 mL × 1)及び塩化ナトリウム飽和溶液(10 mL × 1)で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(4-(3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メチル尿素7(12 mg, 白色固体)を収率33.6%で得た。
MS m/z (ESI): 673.8 [M+1]
1H NMR (400MHz, CDCl3)  7.85 (d, 2H), 7.64-7.70 (m, 3H), 7.53 (d, 1H), 7.39-7.42 (m, 1H), 7.23-7.28 (m, 3H), 7.06 (t, 1H), 6.92 (t, 1H), 5.57-5.65 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.72 (s, 2H), 2.36 (s, 6H).
【００８２】
実施例 8
1-(4-(3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メチル尿素
0006412563.tif 000043
0006412563.tif 000044
工程 1
1-(4-(3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メチル尿素
酢酸(62 mg, 1.03 mmol)をトルエン1 mLに溶解し、N、N-ジイソプロピルエチルアミン(0.28 mL, 1.58 mmol)及びジフェニルホスホリルアジド(0.20 mL, 0.98 mmol)を添加した。70oCで1.5 時間反応した後、反応溶液に2-(4-アミノフェニル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン6d (30 mg, 0.050 mmol) 及びジクロロメタン1 mLを添加し、室温でさらに12時間反応した後、反応を停止させた。次に、反応溶液に重炭酸ナトリウム飽和溶液5 mLを添加し、ジクロロメタン(25 mL × 1)で抽出した。有機相を水(10 mL × 1)及び塩化ナトリウム飽和溶液(10 mL × 1)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(4-(3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メチル尿素8(13 mg, 白色固体)を収率39.4%で得た。
MS m/z (ESI): 658.2 [M+1] 
1H NMR (400MHz, CDCl3)  7.76 (d, 2H), 7.51-7.53 (m, 1H), 7.47 (d, 2H), 7.39-7.40 (m, 1H), 7.24 (t, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.04 (t, 1H), 6.89 (t, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.56-5.64 (m, 2H), 4.85 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.77 (s, 2H), 2.88 (d, 3H), 2.38 (s, 6H).
【００８３】
実施例 9
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メチル尿素
0006412563.tif 000045
0006412563.tif 000046
工程 1
エチル5-(ブロモメチル)-3-(tert-ブチルアミノ)-1-(4-ニトロフェニル)-1H-
ピラゾール-4-カルボキシレート
1 Lの一口反応フラスコの中に、エチル3-(tert-ブチルアミノ)-5-メチル-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート1a (23 g, 66.40 mmol)、アゾビスイソブチロニトリル (2.18 g, 13.28 mmol)、N-ブロモスクシンイミド(14.18 g, 79.68 mmol)及びクロロベンゼン400 mLを入れた。この反応溶液を均一に撹拌し、アルゴンで３回パージした。85oCで64 時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣にジクロロメタン300 mLを添加し、水(100 mL × 2)、チオ硫酸ナトリウム飽和溶液(100 mL × 2)及び塩化ナトリウム飽和溶液(100 mL × 2)で順次に洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、粗表題化合物エチル5-(ブロモメチル)-3-(tert-ブチルアミノ)-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート9a (25 g, 褐色油)を得た。これを次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI): 427.1 [M+2]
工程 2
エチル3-(tert-ブチルアミノ)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート
500 mLの一口反応フラスコの中に、粗エチル5-(ブロモメチル)-3-(tert-ブチルアミノ)-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート9a (25 g, 58.78 mmol)、ジメチルアミンのTHF溶液(88 mL, 176.35 mmol)及びTHF 120 mLを入れ、溶解するまで撹拌した。室温で3 時間撹拌した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、溶出系Cを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物エチル3-(tert-ブチルアミノ)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート9b(6 g, 褐色油)を収率26.2%で得た。
MS m/z (ESI): 390.2 [M+1]
工程 3
メチル3-アミノ-5-((ジメチルアミノ)メチル)-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート
100 mLの一口反応フラスコの中に、エチル3-(tert-ブチルアミノ)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート9b (6 g, 15.41 mmol) 及びトリフロロ酢酸80 mLを入れ、均一に撹拌した。この混合物を還流するまでに１時間加熱し、その後反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣にジクロロメタン50 mLを添加した。次に、重炭酸ナトリウム飽和溶液を滴下し、pHを7以上に調整した。有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過して、減圧下で濾液を濃縮した。残渣にメタノール100 mL及びジクロロメタン20 mLを添加し、溶解するまでに撹拌した。得られた溶液に炭酸カリウム(6.37 g, 46.16 mmol)を添加し、室温で17時間撹拌した後、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Bを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物メチル3-アミノ-5-((ジメチルアミノ)メチル)-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート9c (3.30 g, 黄色固体)を収率67.1%で得た。
MS m/z (ESI): 320.2 [M+1]
工程 4
メチル5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)ウレイド)-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート
250 mLの一口反応フラスコの中に、メチル3-アミノ-5-((ジメチルアミノ)メチル)-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート9c (3.30 g, 10.33 mmol) 及びジクロロメタン100 mLを入れ、均一に撹拌した。得られた溶液にトリエチルアミン(5.8 mL, 41.32 mmol)及びトリホスゲン(1.84 g, 6.20 mmol)を添加し、室温で１時間撹拌した。この反応溶液に3-アミノ-6-メトキシピリダジン(1.94 g, 15.50 mmol, “Journal of Medicinal Chemistry, 2006, 49(14), 4409-4424”に開示された既知方法を用いて調製されたもの)を加え、室温で2時間撹拌した後、反応を停止させた。次に、反応溶液に水200 mLを加え、ジクロロメタン(100 mL × 3)で抽出した。有機相を減圧下で濃縮し、溶出系Bを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物メチル5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)ウレイド)-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート9d (2.80 g, 黄色固体)を収率57.6%で得た。
MS m/z (ESI): 470.9 [M+1]
工程 5
3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2-(4-ニトロフェニ
ル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
250 mLの一口反応フラスコの中に、メチル5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)ウレイド)-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート9d (2.80 g, 5.95 mmol) 及びメタノール120 mLを入れ、均一に撹拌した。得られた溶液にナトリウムメトキシド(1.61 g, 29.76 mmol)を添加した。この混合物を50oCに加熱し、4時間撹拌した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣に水100 mLを加え、次に、濃塩酸を滴下し、pHを5〜6に調整した。この溶液をジクロロメタン(100 mL × 3)で抽出し、有機相を減圧下で濃縮し、溶出系Bを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン9e (1.80 g, 黄色固体)を収率69.0%で得た。
MS m/z (ESI): 438.9 [M+1]
工程 6
7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-
イル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
100 mLの一口反応フラスコの中に、 3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン9e(900 mg, 2.05 mmol)及びN、N-ジメチルホルムアミド50 mLを入れ、均一に撹拌した。この溶液に2,6-ジフルオロベンジルクロリド(367 mg, 2.26 mmol)及び炭酸カリウム(850 mg, 6.16 mmol)を添加した。 この混合物を40oCに加熱し、17時間撹拌した後、反応を停止させた。反応溶液に水250 mLを加え、20分間撹拌した。この混合物を濾過し、濾過ケーキを真空下で乾燥し、標題化合物7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン9f(1.10 g, 黄色固体)を収率94.9%で得た。
MS m/z (ESI): 564.9 [M+1]
工程 7
2-(4-アミノフェニル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-（6-
メトキシピリダジン-3-イル）-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6（5H,7H）-ジオン
250 mLの一口反応フラスコの中に、7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン9f (1 g, 1.77 mmol)、10% パラジウム炭素(200 mg)及びメタノール80 mLを添加し、均一に撹拌した。得られた溶液を水素で６回パージした後、室温で17 時間撹拌した。その後反応を停止させ、反応溶液を濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、標題化合物2-(4-アミノフェニル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-（6-メトキシピリダジン-3-イル）-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)ジオン9g (785 mg, 黄色固体)を収率82.9%で得た。
MS m/z (ESI): 534.9 [M+1]
工程 8
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イ
ル)フェニル)-3-メチル尿素
600 mLのオートクレーブの中に、酢酸(483 mg, 8.04 mmol)及びトルエン15 mLを入れ、溶解するまでに撹拌した。得られた溶液にN、N-ジイソプロピルエチルアミン(2.1 mL, 12.07 mmol)及びジフェニルホスホリルアジド(2.22 g, 8.07 mmol)を順次に添加した。この混合物を75oCに加熱し、1.5時間撹拌した。0oCの氷浴の中でこの反応溶液に2-(4-アミノフェニル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-（6-メトキシピリダジン-3-イル）-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン9g (480 mg, 0.80mmol)のTHF溶液10 mLを添加した。添加終了後に反応溶液を55oCに加熱し、16時間撹拌した後、反応を停止させた。反応溶液にジクロロメタン20 mL及び水20 mLを加え、抽出に提供した。有機相を重炭酸ナトリウム飽和溶液(50 mL × 1)、水(50 mL × 1)及び塩化ナトリウム飽和溶液(50 mL × 1)で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製し、粗生成物を得た。溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーでこれを精製し、粗生成物(387 mg, 褐色固体)を収率81.3%で得た。２バッチの粗生成物を合わせ、総生成物823 mgを得た。溶出系Fを用いた薄層クロマトグラフィーでこれを精製した。得られた生成物をメタノールに溶解し、減圧下で固体が分離されるまでに濃縮した。これを再結晶し、標題化合物1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メチル尿素9 (450 mg, 白色固体)を総収率36.0%で得た。
MS m/z (ESI): 592.3[M+1]
1H NMR (400MHz, CDCl3)  8.17 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.42-7.45 (m, 4H), 7.24-7.30 (m, 2H), 6.88 (t, 2H), 5.95 (s, 1H), 5.38 (s, 2H), 4.23 (s, 3H), 3.69 (s, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.33 (s, 6H).
【００８４】
実施例 10
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-エチル尿素
0006412563.tif 000047
0006412563.tif 000048
工程 1
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-エチル尿素
2-(4-アミノフェニル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6（5H,7H）-ジオン9g(22 mg, 0.041 mmol)をジクロロメタン2 mLに溶解し、イソシアン酸エチル(0.1 mL, 1.26 mmol)を添加した。35oCで12時間反応した後、反応を停止させた。この反応溶液に重炭酸ナトリウム飽和溶液5 mLを加え、ジクロロメタン(30 mL × 1)で抽出した。有機相を水(10 mL × 1)、塩化ナトリウム 飽和溶液(10 mL × 1)で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-エチル尿素10 (10 mg, 白色固体)を収率40.0%で得た。
MS m/z (ESI): 606.2 [M+1] 
1H NMR (400MHz, CDCl3)  8.07 (s, 1H), 7.55 (d, 1H), 7.38-7.43 (m, 4H), 7.25-7.28 (m, 2H), 6.858 (t, 2H), 5.87 (t, 1H), 5.38 (s, 2H), 4.23 (s, 3H), 3.50 (s, 2H), 3.37 (t, 2H), 2.25 (s, 6H), 1.23 (t, 3H).
【００８５】
実施例 11
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素
0006412563.tif 000049
0006412563.tif 000050
工程 1
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素
2-(4-アミノフェニル)-7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン9g (100 mg, 0.18 mmol) をジクロロメタン5 mLに溶解し、N、N-ジイソプロピルエチルアミン(0.5 mL, 2.90 mmol)及びトリホスゲン(46 mg, 0.15 mmol)を添加した。この混合物は室温で45分間反応した後、メトキシアミン塩酸塩(92 mg, 1.12 mmol)を加えた。この混合物は40oCでさらに12 時間反応した後、反応を停止させた。この反応溶液を重炭酸ナトリウム飽和溶液5 mLで洗浄し、ジクロロメタン(25 mL × 1)で抽出した。有機相を水 (10 mL × 1)及び塩化ナトリウム飽和溶液(10 mL × 1)で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、粗生成物62 mgを得た。これをさらに溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで２回精製し、標題化合物1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素11 (45 mg, 白色固体)を収率24.7%で得た。
MS m/z (ESI): 608.3 [M+1]
1H NMR (400MHz, CDCl3)  7.90 (d, 2H), 7.73 (s, 1H), 7.68 (d, 2H), 7.41 (d, 1H), 7.26-7.30 (m, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.92 (t, 2H), 5.44 (s, 2H), 4.21 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 3.70 (s, 2H), 2.35 (s, 6H).
【００８６】
実施例 12
1-(4-(3-((ジメチルアミノ)メチル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メチル尿素
0006412563.tif 000051
0006412563.tif 000052
工程 1
エチル3-(3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)ウレイド)-5-メチル-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート
エチル3-アミノ-5-メチル-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート1b (10.80 g, 37.20 mmol) をジクロロメタン500 mLに溶解し、トリエチルアミン(20 mL, 144 mmol)及びトリホスゲン(5.20 g, 17.5 mmol)を順次に添加した。室温で１時間反応した後、反応溶液に3-アミノ-6-メトキシピリダジン(6.60 g, 52.3 mmol)を添加し、室温で12 時間撹拌した後、反応を停止させた。得られた生成物を合わせ、水100 mLを加えた。この溶液を抽出に提供した。有機相を水(100 mL × 1)及び塩化ナトリウム飽和溶液(100 mL × 1)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Cを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物エチル3-(3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)ウレイド)-5-メチル-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート 12a (8.72 g, 淡黄色固体)を収率53.0%で得た。
工程 2
5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
エチル3-(3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)ウレイド)-5-メチル-1-(4-ニトロフェニル)-1H-ピラゾール-4-カルボキシレート12a(8.72 g, 19.70 mmol)をメタノール150 mLに溶解し、ナトリウムメトキシド(2.70 g, 50 mmol)を添加した。この混合物を55oCに加熱し、12時間撹拌した後、反応を停止させた。この反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣に1 M 塩酸溶液を滴下し、pHを7以下に調整し、濾過した。濾過ケーキを水(30 mL × 1)、メタノール(30 mL × 1)及びエーテル(20 mL × 1)で順次に洗浄し、真空下で乾燥し、粗表題化合物5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン12b (8.34 mg, 淡黄色固体)を得た。これを次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI): 396.0 [M+1]
工程 3
7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
2-(ブロモメチル)-1-フルオロ-3-(トリフルオロメチル)ベンゼン(シノファーム化学試薬株式会社より入手、製品番号：XW239870821) (308 mg, 1.20 mmol) をN、N-ジメチルホルムアミド20 mLに溶解し、粗5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン12b (395 mg, 1 mmol)及び炭酸カリウム(276 mg, 2 mmol)を順次に添加した。室温で2時間反応した後、反応を停止させた。この反応溶液を水100 mLに注ぎ入れ、濾過した。濾液ケーキを乾燥し、標題化合物7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H, 7H)-ジオン12c(465 mg, 黄色固体)を収率81.4%で得た。
MS m/z (ESI): 570.0 [M-1]
工程 4
3-(ブロモメチル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6（5H,7H）-ジオン
100 mLの反応フラスコの中に、7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-3-メチル-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン12c(465 mg, 0.81 mmol)、アゾビスイソブチロニトリル(13 mg, 0.081 mmol)、N-ブロモスクシンイミド (174 mg, 0.97 mmol)及びクロロベンゼン20 mLを入れ、アルゴン雰囲気下及び80oCで17時間反応した。その後反応を停止させ、反応溶液を減圧下で濃縮し、粗標題化合物3-(ブロモメチル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6（5H,7H）-ジオン12d (600 mg, 黄色油)を得た。これを次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI): 650.1 [M+1]
工程 5
3-((ジメチルアミノ)メチル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
粗3-(ブロモメチル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H, 7H)-ジオン12d(15 mg, 0.033 mmol)をTHF 20 mLに溶解し、2M ジメチルアミンのTHF溶液(1 mL, 2.03 mmol)を添加した。この混合物は室温で2 時間反応した後、反応を停止させた。次に、反応溶液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物3-((ジメチルアミノ)メチル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン12e (85 mg, 黄色固体)を収率17.0%で得た。
MS m/z (ESI): 615.2 [M+1]
工程 6
2-(4-アミノフェニル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン
3-((ジメチルアミノ)メチル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2-(4-ニトロフェニル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン12e (100 mg, 0.14 mmol)をギ酸5 mLに溶解し、10%パラジウム炭素(48 mg)を添加した。常圧下でこの混合物を水素で３回パージし、水素雰囲気下及び室温で3 時間反応した。その後反応を停止させ、濾過した。濾液を水10 mLに注ぎ入れ、重炭酸ナトリウム飽和溶液を滴下し、pHを7以上に調整した。この溶液をジクロロメタン(25 mL × 3)で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物2-(4-アミノフェニル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン12f (50 mg, 白色固体)を収率53.0%で得た。
MS m/z (ESI): 585.2 [M+1]                                                              
工程 7
1-(4-(3-((ジメチルアミノ)メチル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メチル尿素
酢酸(51 mg, 0.85 mmol)及びN、N-ジイソプロピルエチルアミン(0.22 mL, 1.28 mmol)をトルエン2 mLに溶解し、ジフェニルホスホリルアジド(236 mg, 0.86 mmol)を添加した。75oCで1.5 時間反応した後、反応溶液に2-(4-アミノフェニル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-4,6(5H,7H)-ジオン12f(15 mg, 0.033 mmol)のTHF溶液2 mLを添加した。得られた溶液は50oCで12 時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液に重炭酸ナトリウム飽和溶液10 mLを加え、ジクロロメタン(20 mL × 1)で抽出した。有機相を収集し、水(10 mL × 1)及び塩化ナトリウム飽和溶液(10 mL × 1)で順次に洗浄した。有機相を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(4-(3-((ジメチルアミノ)メチル)-7-(2-フルオロ-6-(トリフルオロメチル)ベンジル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メチル尿素12 (20 mg, 白色固体)を収率36.3%で得た。
MS m/z (ESI): 642.3 [M+1]
1H NMR (400MHz, CDCl3)  8.19 (s, 1H), 7.56 (d, 1H), 7.43-7.46 (m, 3H), 7.34-7.39 (m, 3H), 7.27 (d, 1H), 7.16 (t, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 4.22 (s, 3H), 3.48 (s, 2H), 2.93 (d, 3H), 2.21 (s, 6H).
【００８７】
実施例 13
1-(4-(1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-エチル尿素
0006412563.tif 000053
0006412563.tif 000054
工程 1
(E)-4-(ジメチルアミノ)-3-(4-ニトロフェニル)-3-ブテン-2-オン
50 mLの フラスコの中に、1-（4-ニトロフェニル）プロパン-2-オン13a (3.8 g, 21.21 mmol) 及びN、N-ジメチルホルムアミドジメチルアセタールを入れた。100oCで30 分間反応した後、反応を停止させ、撹拌しながらジクロロメタン150 mLを添加した。溶出系Aを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで得られた生成物を精製し、標題化合物(E)-4-(ジメチルアミノ)-3-(4-ニトロフェニル)-3-ブテン-2-オン13b(3 g, 黄色固体)を収率60.5%で得た。
MS m/z (ESI): 235.0 [M+1] 
工程 2
エチル3-メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート
(E)-4-(ジメチルアミノ)-3-(4-ニトロフェニル)-3-ブテン-2-オン13b(1.50 g, 6.48 mmol)及び2-アミノアセチルアセテート塩酸塩(1.40 g, 7.78mmol)を酢酸40 mLに溶解した。この混合物は室温で16 時間反応した後、100oCで5 時間反応した。その後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、残渣にジクロロメタン120 mLを加え、重炭酸ナトリウム飽和溶液(50 mL × 1)で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチル15 mLでスラリー化した後、濾過した。濾過ケーキを乾燥し、標題化合物エチル3-メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート13c(412 mg, 黄色固体)を収率24.5%で得た。
MS m/z (ESI): 273.1 [M-1] 
工程 3
エチル1-アミノ-3-メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート
エチル3-メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート13c(412 mg, 1.50 mmol)をN、N-ジメチルホルムアミド6 mLに溶解し、氷浴中で水素化ナトリウム(72 mg, 1.80 mmol)を添加した。この混合物は室温で30分間反応した後、クロラミン溶液20 mLを添加した。この混合物は室温でさらに2 時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液にチオ硫酸ナトリウム飽和溶液50 mLを加え、10分間撹拌した。次に、水相をエーテル (30 mL × 3)で抽出した。有機相を塩化ナトリウム飽和溶液(100 mL × 2)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、標題化合物エチル1-アミノ-3-メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート13d (381 mg, 黄色固体)を収率87.7%で得た。
MS m/z (ESI): 290.2 [M+1]
工程 4
エチル1-(3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)ウレイド)-3-メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート
エチル1-アミノ-3-メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート13d (381 mg, 1.30 mmol) をジクロロメタン30 mLに入れ、溶解するまでに撹拌した。次に、トリエチルアミン(328 mg, 3.25 mmol)及びトリホスゲン(157 mg, 0.53 mmol)を添加した。室温で30分間反応した後、反応溶液に2-フルオロ-3-メトキシアニリン(202 mg, 1.43 mmol)を添加した。この混合物は室温でさらに2時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を濾過し、濾過ケーキを水(10 mL × 2)及び酢酸エチル(2 mL × 3)で順次に洗浄して、乾燥し、標題化合物エチル1-(3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)ウレイド)-3-メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート13e (296 mg, 黄色固体)を収率49.9%で得た。
MS m/z (ESI): 457.3 [M+1] 
工程 5
3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-5-メチル-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン
エチル1-(3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)ウレイド)-3-メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート13e(290 mg, 0.64 mmol)及び 水素化ナトリウム(128 mg, 3.20 mmol)をジクロロメタン10 mLに溶解した。80oCで2時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を室温に冷却し、1 M 塩酸溶液を滴下し、pHを3〜4に調整した。固体を分離し、濾過した。濾過ケーキを水(20 mL × 3)及びエタノール(10 mL × 1)で順次に洗浄し、標題化合物3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-5-メチル-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン13f (192 mg, 灰色固体)を収率73.3%で得た。
MS m/z (ESI): 411.0 [M+1] 
工程 6
1-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-5-メチル-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン
3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-5-メチル-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン13f(192 mg, 0.47 mmol)、2-(クロロメチル)-1,3-ジフルオロベンゼン(84 mg, 0.52 mmol)及び炭酸カリウム(162 mg, 1.75 mmol)をN、N-ジメチルホルムアミド10 mL に溶解した。50oCで16時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮した。残渣に水20 mL(20 mL × 1)を加え、ジクロロメタン(20 mL×1)で抽出した。水相をジクロロメタン(10 mL × 3)で抽出した。有機相を収集し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-5-メチル-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン13g (160 mg, 黄色固体)を収率 63.7%で得た。
MS m/z (ESI): 537.0 [M+1]
工程 7
5-(ブロモメチル)-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-(2-フルオロ3-メトキシフェニル)-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H) -ジオン
1-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-5-メチル-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン13g(120 mg, 0.22 mmol)、アゾビスイソブチロニトリル(8 mg, 0.044 mmol)及びN-ブロモスクシンイミド(47 mg, 0.26 mmol)をクロロベンゼン5 mLに溶解した。この混合物は85oC及びアルゴン雰囲気下で16時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。 残渣に水10 mLを加え、ジクロロメタン(10 mL × 1)で抽出した。水相をジクロロメタン(10 mL × 3)で抽出した。有機相を合わせ、塩化ナトリウム飽和溶液(20 mL × 1)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、標題化合物5-(ブロモメチル)-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-(2-フルオロ3-メトキシフェニル)-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン13h(130 mg, 黄色固体)を収率96.2%で得た。
MS m/z (ESI): 616.0 [M+1] 
工程 8
1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン
粗5-(ブロモメチル)-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-(2-フルオロ3-メトキシフェニル)-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン13h(130 mg, 0.21 mmol)及びN、N-ジイソプロピルエチルアミン(81 mg, 0.63mmol)をTHF 5 mL に溶解した後、ジメチルアミンのテトラヒドロフラン溶液1.6 mLを添加した。この混合物は0〜5oCで１時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン13i (40 mg, 黄色固体)を収率 33.1%で得た。
MS m/z (ESI): 580.2 [M+1] 
工程 9
6-(4-アミノフェニル)-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン
1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン13i (40 mg, 0.069 mmol)、塩化アンモニウム(30 mg, 0.55 mmol)及び鉄(16 mg, 0.28 mmol)をエタノール及び水(V/V = 4:1)の混合物5 mLに溶解した。この混合物は80oCで１時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液に水20 mLを加え、ジクロロメタン(10 mL × 3)で抽出した。有機相を合わせ、塩化ナトリウム飽和溶液(20 mL × 1) で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物6-(4-アミノフェニル)-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン13j (20 mg, 黄色固体)を収率52.6%で得た。
MS m/z (ESI): 550.2 [M+1] 
工程 10
1-(4-(1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-エチル尿素
30 mLの密封チューブの中で6-(4-アミノフェニル)-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン13j (20 mg, 0.036 mmol)及びイソシアン酸エチル(13 mg, 0.18 mmol)をテトラヒドロフラン5 mLに溶解した。50oCで16時間反応した後、反応を停止させた。この反応溶液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(4-(1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-エチル尿素13 (15 mg, 白色固体)を収率68.1%で得た。
MS m/z (ESI): 621.3 [M+1]
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)  7.87-7.77 (m, 4H), 7.69 (s, 1H), 7.58-7325 (m, 4H), 7.12-7.08 (m, 1H), 6.80-6.71 (m, 1H), 4.42 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.45-3.50 (m, 2H), 3.20-3.31 (m, 2H), 2.16 (s, 6H), 1.12-1.03 (m, 3H)
【００８８】
実施例 14
1-(4-(1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-メチル尿素
0006412563.tif 000055
0006412563.tif 000056
工程 1
1-(4-(1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-メチル尿素
酢酸(70 mg, 1.12 mmol)及びN、N-ジイソプロピルエチルアミン(0.32 mL, 1.80 mmol)をトルエン1 mLに溶解した後、ジフェニルホスホリルアジド(0.25 mL, 1.20 mmol)を添加した。70oCで1.5時間反応した後、反応溶液に6-(4-アミノフェニル)-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン13j(30 mg, 0.054 mmol)のジクロロメタン溶液1 mLを添加した。反応溶液は室温でさらに12 時間反応した後、水15 mLを加え、ジクロロメタン(30 mL × 1)で抽出した。有機相を重炭酸ナトリウム飽和溶液(10 mL × 1)、水(10 mL × 1)及び塩化ナトリウム飽和溶液(10 mL × 1 )で順次に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(4-(1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-メチル尿素14(9 mg, 白色固体)を収率27.3%で得た。
MS m/z (ESI): 606.9 [M+1] 
1H NMR (400 MHz, CDCl3) 8.86 (s, 1H), 7.55 (s, 2H), 7.24-7.35 (m, 3H), 7.68-7.14 (m, 6H), 6.21 (s, 1H), 5.60-5.74 (m, 2H), 4.54-4.59 (m, 2H), 3.97 (s, 3H), 2.77 (s, 3H), 2.55 (s, 6H).
【００８９】
実施例 15
1-(4-(1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素
0006412563.tif 000057
0006412563.tif 000058
工程 1
1-(4-(1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素
6-(4-アミノフェニル)-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン13j(55 mg, 0.10 mmol)をテトラヒドロフラン4 mLに溶解した後、4-ニトロフェニルクロロホルメート(30 mg, 0.15 mmol)及びピリジン(32 mg, 0.40 mmol)を添加した。30oCで3時間反応した後、反応溶液にメトキシアミン塩酸塩(25 mg, 0.30 mmol)を添加し、密封下で8時間反応した。その後反応を停止させ、反応溶液を減圧下で濃縮した。溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(4-(1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(2-フルオロ-3-メトキシフェニル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素15 (5 mg, 黄色固体)を収率 8.1%で得た。
MS m/z (ESI): 623.4 [M+1]
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)  7.90-7.87 (m, 2H), 7.85-7.80 (m, 2H), 7.60 (s, 1H), 7.55-7.25 (m, 4H), 7.09-7.02 (m, 1H), 6.71-6.65 (m, 1H), 4.50 (s, 2H), 3.84(s, 3H), 3.67 (s, 3H), 3.54 (s, 2H), 2.15(s, 6H)
【００９０】
実施例 16
1-(4-(1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-メチル尿素
0006412563.tif 000059
0006412563.tif 000060
工程 1
エチル3-メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-1-tert-ブチルカルボキシレート-2-カルボキシレート
エチル3-メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート13c (4.30 g, 15.70 mmol) をジクロロメタン200 mLに溶解し、トリエチルアミン(21.7 mL, 157 mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(192 mg, 1.57 mmol)及びジ-tert-ブチルカルボニル(5.14 g, 23.50 mmol)を順次に添加した。室温で12 時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮した。残渣に水100 mLを加え、ジクロロメタン(50 mL × 4)で抽出した。有機相を合わせ、塩化ナトリウム飽和溶液(150 mL × 1)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Bを用いたシリカゲルクロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物エチル3-メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-1-tert-ブチルカルボキシレート-2-カルボキシレート16b (4 g, 黄色固体)を収率68.1%で得た。
MS m/z (ESI):273.1 [M-100] 
工程 2
エチル3-ブロモメチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-1-tert-ブチルカルボキシレート-2-カルボキシレート
エチル3-メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-1-tert-ブチルカルボキシレート-2-カルボキシレート16b(4 g, 10.70 mmol)、アゾビスイソブチロニトリル(351 mg, 2.14 mmol)及びN-ブロモスクシンイミド(2.28 g, 12.80 mmol)を順次にジクロロベンゼン40 mLに溶解した。この反応溶液は80oC及びアルゴン雰囲気下で16時間反応した。その後反応を停止させ、室温に冷却した。反応溶液を減圧下で濃縮し、真空下で乾燥し、標題化合物エチル3-ブロモメチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-1-tert-ブチルカルボキシレート-2-カルボキシレート16c(5.2 g, 黄色固体)を得た。これを次の工程に直接使用した。
MS m/z (ESI):453.0[M-100] 
工程 3
エチル3-(ジメチルアミノ)メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-1-tert-ブチルカルボキシレート-2-カルボキシレート
エチル3-ブロモメチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-1-tert-ブチルカルボキシレート-2-カルボキシレート16c(4.80 g, 10.70 mmol)をテトラヒドロフラン50 mLに溶解した後、ジメチルアミンのテトラヒドロフラン溶液(26 mL, 53.50 mmol)を添加した。室温で3時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いたシリカゲルクロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物エチル3-(ジメチルアミノ)メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-1-tert-ブチルカルボキシレート-2-カルボキシレート16d (3 g, 黄色固体)を収率67.4%で得た。
MS m/z (ESI): 317.0 [M-100] 
工程 4
エチル3-((ジメチルアミノ)メチル)-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート
エチル3-(ジメチルアミノ)メチル-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-1-tert-ブチルカルボキシレート-2-カルボキシレート16d(3 g, 7.18 mmol)を2 M 塩酸のメタノール溶液30 mLに溶解した。室温で3時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮した。残渣に炭酸ナトリウム飽和溶液30 mLを加え、ジクロロメタン(30 mL × 4)で抽出した。有機相を合わせ、塩化ナトリウム飽和溶液(60 mL × 1)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、標題化合物エチル3-((ジメチルアミノ)メチル)-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート16e (2 g, 黄色固体)を収率90.9%で得た。
MS m/z (ESI): 318.1 [M+1] 
工程 5
エチル1-アミノ-3-((ジメチルアミノ)メチル)-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート
エチル3-((ジメチルアミノ)メチル)-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート16e(1.8 g, 5.68 mmol)をN、N-ジメチルホルムアミド20 mLに溶解し、60%水酸化ナトリウム(307 mg, 7.66 mmol)を添加した。室温で30分間反応した後、反応混合物にクロラミン50 mLを添加し、さらに室温で2時間反応した。その後反応を停止させ、反応溶液に水200 mLを加え、エーテル(50 mL × 3)で抽出た。有機相を合わせ、塩化ナトリウム飽和溶液(100 mL × 1)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、標題化合物エチル1-アミノ-3-((ジメチルアミノ)メチル)-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート16f(620 mg, 黄色固体)を収率32.9 %で得た。
MS m/z (ESI): 333.2 [M+1] 
工程 6
エチル3-((ジメチルアミノ)メチル)-1-(3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)ウレイド)-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート
エチル1-アミノ-3-((ジメチルアミノ)メチル)-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート16f(420 mg, 1.26 mmol)をジクロロメタン15 mLに溶解し、トリエチルアミン(382 mg, 3.78 mmol)、リホスゲン(131 mg, 0.44 mmol)及び3-アミノ-6-メトキシピリダジン(236 mg, 1.89 mmol)を順次に添加した。室温で2時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物エチル3-((ジメチルアミノ)メチル)-1-(3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)ウレイド)-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート16g (298 mg, 黄色固体)を収率30.2%で得た。
工程 7
5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン
エチル3-((ジメチルアミノ)メチル)-1-(3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)ウレイド)-4-(4-ニトロフェニル)-1H-ピロール-2-カルボキシレート16g(260 mg, 0.54 mmol)をメタノール10 mLに溶解し、ナトリウムメトキシド(151 mg, 2.69 mmol)を添加した。50oCで3時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮した。溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン16h (76 mg, 黄色固体)を収率32.3%で得た。
MS m/z (ESI): 438.3 [M+1] 
工程 8
1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン
5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン16h(78 mg, 0.18 mmol)、2-クロロメチル-1,3-ジフルオロフェニル(35 mg, 0.21 mmol)及び炭酸カリウム(37 mg, 0.26 mmol)をN、N-ジメチルホルムアミド5 mL に溶解した。50oCで16 時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮した。溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン16i(72 mg, 黄色固体)を収率72.0%で得た。
MS m/z (ESI): 564.1 [M+1] 
工程 9                                  
6-(4-アミノフェニル)-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン
1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-6-(4-ニトロフェニル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン16i(72 mg, 0.13 mmol)、鉄(29 mg, 0.51 mmol)及び塩化アンモニウム(55 mg, 1.02 mmol)をエタノール及び水(V/V = 4:1)の混合物20 mLに溶解した。80oCで１時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を室温に冷却し、水20 mLを加え、ジクロロメタン(10 mL × 4)で抽出した。有機相を合わせ、塩化ナトリウム飽和溶液(10 mL × 1)で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物6-(4-アミノフェニル)-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン16j (25 mg,カーキ色の固体)を収率42.8%で得た。
MS m/z (ESI): 534.3[M+1] 
工程 10
1-(4-(1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-メチル尿素
25 mLの密封チューブに酢酸(51 mg, 0.84 mmol)を入れ、トルエン2 mL、N、N-ジイソプロピルエチルアミン(163 mg, 1.26 mmol)及びジフェニルホスホリルアジド(231 mg, 0.84 mmol)を順次に添加した。密封チューブの中で１時間反応した。その後、0oCに冷却し、反応溶液に6-(4-アミノフェニル)-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン16j(45 mg,0.084 mmol)のジクロロメタン溶液2 mLを添加し、40oCで密封チューブの中でさらに16時間反応した。その後反応を停止させ、反応溶液を減圧下で濃縮した。溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(4-(1- (2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-メチル尿素16(18 mg, 白色固体)を収率36.0%で得た。
MS m/z (ESI): 591.3 [M+1] 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)  7.92-7.87 (m, 2H), 7.77-7.70 (m, 2H), 7.69 (s, 1H), 7.60-7.55 (m, 1H), 7.25-7.13 (m, 2H), 7.05-6.99 (m, 1H), 6.79-6.71 (m, 1H), 4.48 (s, 2H), 4.06 (s, 3H), 3.54 (s, 2H), 2.75 (s, 3H), 2.16 (s, 6H)
【００９１】
実施例 17
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-ヒドロキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素
0006412563.tif 000061
0006412563.tif 000062
工程 1
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-ヒドロキシピダリジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素
1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素11(122 mg, 0.20 mmol) をテトラヒドロフラン6 mLに溶解し、完全に溶解するまでに撹拌した。次に、この溶液に40%臭化水素酸(103 mg, 0.51 mmol)を添加し、室温で12時間撹拌した。その後反応を停止させ、反応溶液に重炭酸ナトリウム飽和溶液5 mLを加え、 さらに5分間撹拌した。得られた混合物を抽出した。有機相を合わせ、溶出系Aを用いたシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、標題化合物1-(4-(7-(2,6-ジフルオロベンジル)-3-((ジメチルアミノ)メチル)-5-(6-ヒドロキシピリダジン-3-イル)-4,6-ジオキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-2H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-2-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素17(16 mg, 白色固体)を収率13.5%で得た。
MS m/z (ESI): 594.3 [M+1] 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)   13.36-13.18 (m, 1H), 9.69 (s, 1H), 9.21-9.14 (m, 1H), 7.83-7.76 (m, 2H), 7.71-7.64 (m, 2H), 7.52-7.46 (m, 1H), 7.46-7.36 (m, 1H), 7.09 (s, 3H), 5.32-5.21 (m, 2H), 3.71-3.62 (m, 5H), 2.17 (s, 6H)
【００９２】
実施例 18
1-(4-(1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素
0006412563.tif 000063
0006412563.tif 000064
工程 1
1-(4-(1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素
6-(4-アミノフェニル)-1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-2,4(1H,3H)-ジオン16j(170 mg, 0.319 mmol)、メチル4-ニトロフェニルメトキシアミノギ酸塩(81 mg, 0.382 mmol,“WO 2011090935”に開示された既知の方法で調製されたもの)及びN、N-ジイソプロピルエチルアミン(109 μL, 0.638 mmol)をテトラヒドロフラン10 mLに溶解した。室温で4 時間反応した後、反応を停止させた。反応溶液を減圧下で濃縮し、溶出系Aを用いた薄層クロマトグラフィーで残渣を精製し、標題化合物1-(4-(1-(2,6-ジフルオロベンジル)-5-((ジメチルアミノ)メチル)-3-(6-メトキシピリダジン-3-イル)-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロ-ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジン-6-イル)フェニル)-3-メトキシ尿素18(15 mg, 黄色固体)を収率7.8%で得た。
MS m/z (ESI): 607.2 [M+1] 
【試験例】
【００９３】
生物学的評価
試験例１
本発明化合物のヒトGnRHr（GnRH受容体）活性試験
In vitro GnRHrタンパク活性を以下の方法により試験した。
この試験はヒトGnRHr/CHOを安定に遺伝子導入した細胞株によって発現したヒトGnRHrタンパクの活性に対する本発明化合物の阻害効果を測定するために用いた。
１．試験物質と装置
１）Fluo-4 NW Calcium Assay Kits (F36206, invitrogen)
２）DMEM/F12 (SH30023.01B, thermo)
３）G418 (11811-031, invitrogen)
４）FlexStation3 Microplate Reader
２．試験プロトコール
ヒトGnRHr遺伝子を含む哺乳類発現ベクターを、Plus(登録商標）含有のリポフェクタミンLTX試薬を添加することによってCHO細胞に遺伝子導入した；抗生物質をスクリーニングのため翌日に添加し、モノクローナル細胞株を取り出した。
ヒトGnRHr/CHOの安定な遺伝子導入細胞株を９６穴プレートに25,000/ウェルの播種密度で播種した。培養液を翌日取り除き、Fluo-4 dyeを含有する添加液をプレート（100μL/ウェル）に添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。プレートを室温に移して１０分間平衡をとった。各化合物は100μM, 10μM, 1μM, 0.1μM, 0.01μM, 0.001μM, 0.0001μMの７つの濃度勾配にDMSOで希釈した。次いで、各勾配の1 μLを各ウェルに添加し、室温で１０分間インキュベートした。GnRHポリペプチド刺激薬溶液50μLを自動的に添加した後、直ちにMicroplate Reader（flexstation 3）により494/516nMで値を測定した。化合物のIC50値は種々の対応する濃度での異なる蛍光シグナルからソフトウェアにより計算した。
本発明化合物のヒトGnRHrに対する阻害活性を上記試験により測定した。IC50値は表１に示す。
表１  ヒトGnRHr活性に対する本発明化合物の阻害効果のIC50
0006412563.tif 000065
結論：本発明化合物は顕著なヒトGnRHr阻害活性を有する。
【００９４】
試験例２
本発明化合物のサルGnRHr阻害活性試験
この試験はサルGnRHr/CHOを安定に遺伝子導入した細胞株によって発現したサルGnRHrタンパクの活性に対する本発明化合物の阻害効果を測定するために用いた。
１．試験物質と装置
１）Fluo-4 NW Calcium Assay Kits (F36206, invitrogen)
２）DMEM/F12 (SH30023.01B, thermo)
３）G418 (11811-031, invitrogen)
４）FlexStation3 Microplate Reader
２．試験プロトコール
サルGnRHr遺伝子を含む哺乳類発現ベクターを、Plus(登録商標）含有のリポフェクタミンLTX試薬を添加することによってCHO細胞に遺伝子導入した；抗生物質をスクリーニングのため翌日に添加し、モノクローナル細胞株を取り出した。
サルGnRHr/CHOの安定な遺伝子導入細胞株を９６穴プレートに25,000/ウェルの播種密度で播種した。培養液を翌日取り除き、Fluo-4 dyeを含有する添加液をプレート（100μL/ウェル）に添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。プレートを室温に移して１０分間平衡をとった。各化合物は100μM, 10μM, 1μM, 0.1μM, 0.01μM, 0.001μM, 0.0001μMの７つの濃度勾配にDMSOで希釈した。次いで、各勾配の1 μLを各ウェルに添加し、室温で１０分間インキュベートした。GnRHポリペプチド刺激薬溶液50μLを自動的に添加した後、直ちにMicroplate Reader（flexstation 3）により494/516nMで値を測定した。化合物のIC50値は種々の対応する濃度での異なる蛍光シグナルからソフトウェアにより計算した。
本発明化合物のサルGnRHrに対する阻害活性を上記試験により測定した。IC50値は表１に示す。
表２  ヒトGnRHr活性に対する本発明化合物の阻害効果のIC50
0006412563.tif 000066
結論：本発明化合物は顕著なサルGnRHr阻害活性を有する。
【００９５】
試験例３
本発明化合物のウサギGnRHr阻害活性試験
この試験はウサギGnRHr/CHOを安定に遺伝子導入した細胞株によって発現したウサギGnRHrタンパクの活性に対する本発明化合物の阻害効果を測定するために用いた。
１．試験物質と装置
１）Fluo-4 NW Calcium Assay Kits (F36206, invitrogen)
２）DMEM/F12 (SH30023.01B, thermo)
３）G418 (11811-031, invitrogen)
４）FlexStation3 Microplate Reader
２．試験プロトコール
ウサギGnRHr遺伝子を含む哺乳類発現ベクターを、Plus(登録商標）含有のリポフェクタミンLTX試薬を添加することによってCHO細胞に遺伝子導入した；抗生物質をスクリーニングのため翌日に添加し、モノクローナル細胞株を取り出した。
ウサギGnRHr/CHOの安定な遺伝子導入細胞株を９６穴プレートに25,000/ウェルの播種密度で播種した。培養液を翌日取り除き、Fluo-4 dyeを含有する添加液をプレート（100μL/ウェル）に添加し、３７℃で３０分間インキュベートした。プレートを室温に移して１０分間平衡をとった。各化合物は100μM, 10μM, 1μM, 0.1μM, 0.01μM, 0.001μM, 0.0001μMの７つの濃度勾配にDMSOで希釈した。次いで、各勾配の1 μLを各ウェルに添加し、室温で１０分間インキュベートした。GnRHポリペプチド刺激薬溶液50μLを自動的に添加した後、直ちにMicroplate Reader（flexstation 3）により494/516nMで値を測定した。化合物のIC50値は種々の対応する濃度での異なる蛍光シグナルからソフトウェアにより計算した。
本発明化合物のウサギGnRHrに対する阻害活性を上記試験により測定した。IC50値は表１に示す。
表３  ウサギGnRHr活性に対する本発明化合物の阻害効果のIC50
0006412563.tif 000067
結論：本発明化合物は顕著なウサギGnRHr阻害活性を有する。
薬物動態評価
【００９６】
試験例４
本発明の実施例２、実施例３、実施例５、実施例９、実施例１０、実施例１１および実施例１３の化合物のラット薬物動態試験
１．サマリー
Sprague-Dawley（SD）ラットを試験動物として用いた。種々の時点における血漿濃度を実施例２、実施例３、実施例５、実施例９、実施例１０、実施例１１および実施例１３の化合物の胃内投与および実施例１１の化合物の静脈内投与後にＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより測定した。ラットにおける本発明化合物の薬物動態挙動を研究し、薬物動態の特徴を評価した。
２．試験プロトコール
２．１サンプル
実施例２、実施例３、実施例５、実施例９、実施例１０、実施例１１および実施例１３の化合物
２．２試験動物
３２匹の健康な成体SDラット（雌半分および雄半分）を均等に８グループに分けた（各グループ４匹）。動物はShanghai Super B&K Laboratory Animal Corp. Ltd (laboratory animal production Certificate No. SCXK (HU)2008-0016)から購入した。
２．３薬物処方
サンプルの適当な量を秤量し、0.5% CMC-Naを加えて、超音波処理で１ｍｇ/ｍｌ懸濁液を調製した；
薬物の適当な量を秤量し、０．５ｍｌのDMSOおよび０．５ｍｌのTween 80で溶解し；生理食塩水を加えて最終容量にした。
２．４投与
３２匹のSDラット（雌半分および雄半分）を均等に８グループ（各グループ４匹）に分けて、一晩絶食後、１０ｍＬ/ｋｇの容量で、それぞれ経口胃管栄養または静脈内注射（i.v.）（１０ｍｇ/ｋｇまたは３０ｍｇ/ｋｇの投与量での経口胃管栄養、および５．０ｍｇ/ｋｇの投与量でのi.v.）により投与した。
３．方法
血液０．１ｍＬを投与前および投与後０．５、１、２、４、６、８、１１、２４時間に採取し、ヘパリン処理した試験管に集め、１０分間、３５００ｒｐｍで遠心分離を行って血漿を分離して、−２０℃で保存した。動物は投与後２時間で餌を与えた。
経口胃管栄養による化合物投与後のラット血漿中の試験化合物の含量はＬＣ/ＭＳ/ＭＳで測定した。
４．薬物動態パラメータの結果
本発明化合物の薬物動態パラメータは次の表４に示す：
0006412563.tif 000068
結論：本発明化合物はラットにおいて経口でよく吸収され、明らかな薬物動態吸収を有している。実施例１１は特に好ましい経口のバイオアベイラビリティを有している。
【００９７】
試験例５
本発明の実施例１１のウサギ薬物動態試験
１．サマリー
ウサギを試験動物として用いた。種々の時点における血漿濃度をウサギへの実施例１１の化合物の胃内投与および実施例１１の化合物の静脈内投与後にＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより測定した。ウサギにおける本発明化合物の薬物動態挙動を研究し、薬物動態の特徴を評価した。
２．試験プロトコール
２．１サンプル
実施例１１の化合物
２．２試験動物
６匹のニュージーランドウサギ（雌）を均等に２グループに分けた。動物はJie Sijie Corp. Ltdから購入した。
２．３薬物処方
サンプルの適当な量を秤量し、0.5% CMC-Naを加えて、超音波処理で３ｍｇ/ｍｌ懸濁液を調製した；
薬物の適当な量を秤量し、１ｍｌのDMSOおよび１ｍｌのTween 80で溶解し；生理食塩水を加えて最終容量にした。
２．４投与
６匹の健康なニュージーランドウサギ（雌）を均等に２グループに分けて、一晩絶食後、経口胃管栄養または静脈内注射（i.v.）（５ｍｌ/ｋｇの投与容量での３０ｍｇ/ｋｇの投与量の経口胃管栄養、および２ｍｌ/ｋｇの投与容量での５ｍｇ/ｋｇの投与量のi.v.）により投与した。
３．方法
血液０．２ｍＬを静脈内投与前および投与後５分、０．２５、０．５、１、２、４、８、１１、２４時間に採取し、ヘパリン処理した試験管に集め、１０分間、３５００ｒｐｍで遠心分離を行って血漿を分離し、−２０℃で保存した。血液を経口投与前および投与後０．５、１、２、４、６、８、１１、２４時間に採取し、静脈内投与群と同様にして処理した。
経口胃管栄養および静脈内注射による化合物投与後のウサギ血漿中の試験化合物の含量はＬＣ/ＭＳ/ＭＳで測定した。
４．薬物動態パラメータの結果
本発明化合物の薬物動態パラメータは次の表５に示す：
0006412563.tif 000069
結論：本発明の実施例１１の化合物はウサギにおいてよく吸収され、好ましい経口のバイオアベイラビリティを有している。
【００９８】
試験例６
本発明の実施例１１のビーグル薬物動態試験
１．サマリー
ビーグルを試験動物として用いた。種々の時点における血漿濃度をビーグルへの実施例１１の化合物の胃内投与および実施例１１の化合物の静脈内投与後にＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより測定した。ビーグルにおける本発明化合物の薬物動態挙動を研究し、薬物動態の特徴を評価した。
２．試験プロトコール
２．１サンプル
実施例１１の化合物
２．２試験動物
８匹の健康なビーグル（雌半分および雄半分）を均等に２グループに分けた。動物はSuzhouXishan Zhongke Laboratory Animal Corp. Ltdから購入した。
２．３薬物処方
サンプルの適当な量を秤量し、0.5% CMC-Naを加えて、超音波処理で１．０ｍｇ/ｍｌ懸濁液を調製した；
薬物の適当な量を秤量し、５ｍｌのDMSOおよび５ｍｌのTween 80で溶解し；生理食塩水を加えて最終容量にした。
２．４投与
８匹の健康なビーグル（雌半分および雄半分）を均等に２グループに分けて、一晩絶食後、経口胃管栄養または静脈内注射（i.v.）（５ｍｌ/ｋｇの投与容量での５ｍｇ/ｋｇの投与量の経口胃管栄養、および２ｍｌ/ｋｇの投与容量での２ｍｇ/ｋｇの投与量のi.v.）により投与した。
３．方法
血液１．０ｍＬを経口投与前および投与後０．２５、０．５、１、２、４、６、８、１２、２４時間に前脚静脈から採取し、ヘパリン処理した試験管に集め、１０分間、３５００ｒｐｍで遠心分離を行って血漿を分離し、−２０℃で保存した。動物は投与後２時間で餌を与えた。血液を静脈内投与前および投与後０．２５、０．５、１、２、４、６、８、１２、２４時間に採取し、上記と同様にして処理した。
経口胃管栄養および静脈内注射による化合物投与後のビーグル血漿中の試験化合物の含量はＬＣ/ＭＳ/ＭＳで測定した。
４．薬物動態パラメータの結果
本発明化合物の薬物動態パラメータは次の表６に示す：
0006412563.tif 000070
結論：本発明の実施例１１の化合物はビーグルにおいてよく吸収され、好ましい経口のバイオアベイラビリティを有している。
【００９９】
試験例７
ラットにおける本発明の実施例１１の化合物のIn vivo薬力学試験
１．サマリー
子宮内膜症モデルをウサギで確立し、実施例１１の化合物で処理したウサギ子宮内膜症に対する薬力学スクリーニング試験を行った。
２．試験プロトコール
２．１サンプル
実施例１１の化合物
２．２試験動物
１５匹の健康なニュージーランドウサギ（雌）を均等に３グループに分けた。動物はShanghai Songjiang District Songlian Laboratory Animal Farm (laboratory animal production Certificate No. SCXK (HU) 2008-0016)から購入した。
２．３方法
ウサギは適応飼育して７日間隔離し、外科手術前２日間、安息香酸エストラジオール30μg/kgを一日一回皮下注射した；モデルが確立すると、３％ペントバルビタールナトリウムで麻酔し、無菌的に開腹した。次いで、子宮の片側を分離して、子宮直腸間膜の血管を結紮した。次いで、子宮の切片を切り取って暖かい生理食塩水皿に置き、次いで縦方向に解剖し、子宮筋と子宮内膜に分けた。子宮内膜の切片（約0.5cm・0.5cm）を腹腔に面した内膜表面を持つ血管に富んだ腹壁に縫い合わせた。子宮内膜植付け３週間後、ウサギを開腹して移殖片内膜の大きさをチェックした。成功したモデルの１５匹の動物を、それぞれ溶媒対照群、低用量群（実施例１１の化合物10mg/kg）および高用量群（実施例１１の化合物30mg/kg）である３グループ（各グループ５匹）にランダムに分割した。各群に、成功したモデリング後連続して２８日間５ml/kgの容量で一日一回経口胃管栄養法により投与した。最終的に、ウサギは加重し、そして異所性子宮内膜の容量を測定して子宮内膜活性に対する本発明化合物の効果を評価した。
２．４結果
コントロールとして同量の0.5% CMC-Naの経口投与を用い、ウサギ子宮内膜症モデルに４週間実施例１１の化合物30mg/kgを投与した後は、異所性子宮内膜の増殖は著しく抑制され、一方、10mg/kgでは異所性子宮内膜容量に対する実施例１１の化合物の抑制は明らかでなかった。それ故、ウサギ子宮内膜症モデルにおいて実施例１１の化合物の毒性学的NOAEL用量（ダメージの無い効果用量が観察される用量）は30mg/kgである。
【０１００】
試験例８
ラットにおける実施例１１の化合物の７日間毒物動態学評価
１．サマリー
SDラットを試験動物として用いた。種々の時点における血漿濃度を７日間経口胃管栄養法により実施例１１の化合物の投与後にＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより測定した。齧歯動物における化合物毒性は潜在的な毒性反応と体の重症度レベルに基づいて予備的に評価した。
２．試験プロトコール
２．１サンプル
実施例１１の化合物
２．２試験動物
２４匹の健康な成体SDラット（雌半分および雄半分）を均等に４グループに分けた（各グループ６匹）。動物はShanghai SLAC Laboratory Animal Corp. Ltd (laboratory animal production Certificate No. SCXK (HU) 2012-0002)から購入した。
２．３薬物処方
サンプルの適当な量を正確に秤量し、少量の0.5% CMC-Naを加えて、超音波破砕処理して均一な懸濁液を調製し、次いで最終容積に希釈した。１日目と７日目の残りのサンプル溶液は毒物動態学の投与濃度の判定のために保存した。
２．４投与
反復経口投与量は８０，２４０および７２０ｍｇ/ｋｇであり、投与濃度はそれぞれ８，２４および７２ｍｇ/ｍｌであった。投与容量は１０ｍｌ/ｋｇ、一日一回７日間であった。
３．方法
血液は、１日目の経口投与前および投与後１、２、４、８および２４時間、そして７日目の経口投与前および投与後１、２、４、８、２４および４８時間のサンプリング時間で、投与後１日目と７日目に採取した。血液サンプルはヘパリン処理した試験管に集め、遠心分離して血漿を分離し、−２０℃で保存した。経口胃管栄養による化合物投与後のラット血漿中の試験化合物の含量はＬＣ/ＭＳ/ＭＳで測定した。
４．結果
４．１．臨床症状への影響
４．１．１死亡
実施例１１の化合物７２０ｍｇ/ｋｇ毒性群のNo.1ラットが投与前の７日目に死亡し
た；実施例１１の化合物７２０ｍｇ/ｋｇ毒物動態学群のNo.5ラットが投与前の７日目に死亡し、そしてNo.6が9日目に死亡した。
４．１．２臨床所見
投与中、溶媒対照群に比べ、７２０ｍｇ/ｋｇ毒性群と毒物動態学群のラットは、実施例１１の化合物の投与後6日目に全て体重減少とメンタル状態の不良を示した；7日目の実施例１１の化合物投与後の７２０ｍｇ/ｋｇ毒性群と毒物動態学群のラットは、全て食物摂取量減少、体重減少、活動減少、メンタル状態の不良、くすんだ背中の毛、毛髪の逆立ち、ローチバック、鼻と目の周りの出血、下痢および不潔な下尾を示した。
４．２．体重への影響
溶媒対照群に比べ、高用量群の体重変化パーセントは実施例１１の化合物投与後3日目と7日目で有意な減少（P<0.05）を示した。
４．３．食物摂取への影響
溶媒対照群に比べ、147280の720 mg/kg用量群の食物摂取量は3日目と7日目で有意に減少した。
４．４．血液学的検査結果
溶媒対照群に比べ、実施例１１の化合物720mg/kg用量群のラットのWBC（白血球細胞）、Neut（好中球相対値および好中球絶対数）、Lymph（リンパ球絶対数）、EO（好酸球細胞絶対数）およびRET（網状赤血球相対値および網状赤血球絶対数）は有意に減少（P<0.05）した。
４．５．血液生化学試験結果
溶媒対照群に比べ、実施例１１の化合物720mg/kg用量群のラットのBUN（血中尿素窒素）、CHOL（全コレステロール）、CREA（クレアチニン）、TBIL（全ビリルビン）、TP（全タンパク）、AST（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）は有意に増加した（P<0.05）。ALT（アラニンアミノトランスフェラーゼ）に統計的な差はなかったが、２匹の動物のALTは有意に増加した。ALB（アルブミン）、ALP（アルカリホスファターゼ）は有意に減少した（P<0.05）。一方、鉄検出結果はSHR147280の720 mg/kg用量群の血液サンプル不足のため欠けた。他の明らかな毒性学的な異常は検出できなかった。
４．６．凝固パラメータ
溶媒対照群に比べ、実施例１１の化合物の80mg/kg用量群と240mg/kg用量群のラットは有意な差を示さなかった。凝固パラメータはSHR147280 720 mg/kg用量群の血液サンプル不足のため欠けた。
４．７．尿検査
溶媒対照群に比べ、処置群は尿指数の規則的な異常変化を示さなかった。
４．８．一般病理学結果
剖検は一般に見ることができる。溶媒対照群に比べ、実施例１１の化合物の720mg/kg用量群は胸腺の出血と萎縮；脾臓の萎縮とうっ血；フレーク状灰赤色の壊死性病変を持つ肝葉のうっ血程度の変化；肺の充血と出血；副腎の出血と肥大；卵巣の出血とうっ血；胃腸壁薄化；胃の白色内容物；小腸の黄色内容物、腸管出血、結腸直腸出血、および腸管ムコイドを示した。また、死亡した動物は心臓の壊死性病変を示した。残りの群は目に見える以上は示さなかった。
４．９．臓器係数結果
溶媒対照群に比べ、実施例１１の化合物の720mg/kg群の雄および雌ラットの胸腺、心臓、肺および脾臓の絶対湿重量は有意に減少し（P<0.05）、逆に副腎の絶対湿重量は有意に増加した（P<0.05）。胸腺、脾臓の相対臓器係数は有意に減少し（P<0.05）、一方、脳、肝臓、肺、腎臓および副腎の相対臓器係数は有意に増加した（P<0.05）。
４．１０．毒物動態学パラメータ結果
胃内投与後の雌ラットの毒物動態学パラメータ
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注：−は、データ不足のために計算できないパラメータを示す。
このように、実施例１１の化合物の毒性学NOAEL容量は240mg/kgであり、致死量は720mg/kgである。可能性のある毒性の標的器官は骨髄造血系、胸腺、心臓、肝臓、肺、脾臓、卵巣および消化器系であった。
結論：試験例５の薬物動態試験、試験例７の薬力学試験および試験例８の毒物動態学試験を比較すると、実施例１１の化合物の安全性面の予備的評価は次のようであった：
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