(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
亜鉛ピリチオン、トリクロサン及びカルボキシメチルセルロースを含有する、一年生および多年生の植物種子または農業用具の滅菌のためのコーティング製剤であって、滅菌は抗ウイルス作用、抗真菌作用、抗細菌作用および抗カンジダ作用からなる群から選択される少なくとも１つを含む、コーティング製剤。
【請求項２】
最終混合物において0.5〜2質量％の亜鉛ピリチオンを含有する、請求項1に記載のコーティング製剤。
【請求項３】
最終混合物において0.01〜0.1質量％のトリクロサンを含有する、請求項2に記載のコーティング製剤。
【請求項４】
滅菌は、細菌  プソイドモナス シリンガ（Pseudomonas syringae）、クラビバクテル spp.（Clavibacter spp.）、ブルコルデリア spp.（Burkholderia spp.）、クルトバクテリウム spp.（Curtobacterium spp.）、アシネトバクテルバウマンニイ（Acinetobacterbaumannii）、バシルス spp.（Bacillus spp.）、プソイドモナサエルギノサ（Pseudomonasaeruginosa）、エルウィニア spp.（Erwinia spp.）、キサントモナサキソノポジス（Xanthomonasaxonopodis）、キサントモナスカンペストリス（Xanthomonascampestris）、およびアグロバクテリウム spp.（Agrobacterium spp.)に対する作用を含む、請求項3に記載のコーティング製剤。
【請求項５】
滅菌は、酵母  カンジダ（Candida spp.）に対する作用を含む、請求項3に記載のコーティング製剤。
【請求項６】
滅菌は、真菌  アスペルギルス spp.（Aspergillus spp.）、ボトリチス spp.（Botrytis spp.）、フサリウム spp.（Fusarium spp.）、ペニシリウム spp.（Penicillium spp.）、リゾプス spp.（Rhizopus spp.）、アルテルナリア spp.（Alternaria spp.）、リゾクトニア spp.（Rhizoctonia spp.）およびスクレロチニア spp.（Sclerotinia spp.）に対する作用を含む、請求項3に記載のコーティング製剤。
【請求項７】
滅菌は、植物に病気をもたらすDNAおよびRNAウイルスに対する作用を含む、請求項3に記載のコーティング製剤。
【請求項８】
一年生および多年生の植物種子に適用するための、請求項3に記載のコーティング製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一年生および多年生の植物種子および農業用具の滅菌のために開発されたコーティング製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
種子は、植物生産において使用される最も重要な生殖および繁殖要素である。世界において1年間で127,400,000トンの種子が使用されているとの推定が報告されている。この量の経済的価値は約4〜500億ドルである。いくつかの見積もりによると、商業的種子生産は約3000万ドルである。種子媒介病原体は、植物の生産の異なる方法において影響があり、重大な損失を引き起こす可能性がある。種子媒介病原体は、特に植物生産において非常に重大な生産性および品質の損失を引き起こすことが知られている[1]。種子によって運ばれる植物生産における病気を引き起こす病原体は、「種子媒介病原体」と呼ばれる[3]。農業地域で使用される種子の発芽品質を向上させて、種子病原体に起因する製品損失を低減または完全に排除するために実施される、全ての種類の滅菌は高い重要性を有する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
種子媒介真菌および細菌の病気は、有機および従来の農法の両方によって得られる製品に深刻な問題を引き起こす可能性がある。したがって、農業生産における種子または土壌由来植物病因子の潜在的な害を排除するために、種子処理（種子に農薬を塗布する）が行われる。この目的のために、種子媒介真菌病の制御のための従来の農業用途に使用される殺菌剤の使用が可能である[4,5]。さらに、Kasselakiらが2007年に行った研究に、いくつかの代替的な改良技術が有機農業で使用されたことが記載されている[6]。しかしながら、今日使用されている方法が種子媒介細菌性病原体の制御に部分的に有効であるという事実は、有機農業および従来の農業において遭遇する最も重要な問題の1つである[7,8]。したがって、種子媒介病原体の排除のための新しい改善法を開発することは非常に重要である。
【０００４】
種子媒介病原体が深刻な問題をもたらす期間の1つが、苗期間である。病原体微生物による種子の汚染は、微生物の生存率および新たな広い範囲へと伝播することを助長する。温室条件では、高密度、高相対湿度、高温およびスプリンクラー灌漑などの要因が植物病害の伝播をサポートする役割を果たすため、敏感な植物の病気に起因する深刻な経済的損失リスクは非常に高い。これらの条件下で、最も効果的な病害管理の方法は廃棄である。この意味で、病原体のスキャニング検査は種子ロットで行われ、汚染されたものを除去した後、健康な種子が播種物質として使用される[9]。
【０００５】
汚染と侵入とは、病原体と種子との間の受動的関係を指す用語である。種子への病原体の汚染は、圃場での生産中の農業的実践に伴うことがあるため、収穫、混合、梱包、輸送または保管中にも発生する可能性がある[2]。
【０００６】
種子への病原体の汚染は、収穫中または収穫後において、種子への吸着細菌細胞、真菌胞子（クルアミドスポレス（Clamidospores）、オオスポレス（Oospores）、テリオスポレス（Teliospores）、ウレドスポレス（Uredospores））またはビリオンとして観察される。経済的重要性を有するいくつかの植物の種子中に移動され得る細菌性病原体およびその誘導された病気を、先行技術表1に示す。真菌病およびこれらの病気を引き起こす真菌を、先行技術表2に示す。
【０００７】
種子媒介細菌性病原体は、生産量の減少（15〜30％）；種子の発芽能力の低下または損失；植物における病気の発生；種子における色、形態または生化学的変化および毒素形成、種子形成または成熟の阻害；種子の崩壊；および種子の湿潤腐敗[10,11]などの症状をもたらす。
【０００８】
植物には細菌、真菌、ウイルス誘発感染を引き起こす約11000の疾患因子がある[12]。世界中の生産量の約13％の損失が、植物の病気によって引き起こされる。 この損失の大部分はウイルス誘発性病原体によって引き起こされる[13,14]。農産物の病原体による経済的損失は、年ごと、季節ごと、地域ごと、製品ごとに異なる。しかし、推定によると、植物ウイルス性病によって毎年約600億ドルの製品損失が発生している[14-16]。先行技術表3は、様々な植物におけるいくつかのウイルスによって引き起こされる年間の損失を示す。
【０００９】
【表１】
0006427261.tif 000002
【００１０】
【表２】
0006427261.tif 000003
【００１１】
【表３】
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【００１２】
【表４】
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【００１３】
【表５】
0006427261.tif 000006
【００１４】
種子表面の滅菌に関する最新技術には様々な研究がある。文献に、種子表面を1〜5％次亜塩素酸ナトリウム溶液で滅菌することが記載されている[17-20]。しかし、いくつかの研究では、1〜5％の次亜塩素酸ナトリウム溶液を塗布した種子ではアスペルギルス胞子（Aspergillus spores）を除去できないことが観察されている[21,22]。
【００１５】
Wilson氏は、1915年に実施された研究において、2％の塩素を含む次亜塩素酸カルシウムで30の異なる種子を滅菌した結果、3種の種子のみに菌が出現し、次亜塩素酸カルシウムは種子の滅菌に適していると主張している[23]。
【００１６】
Negaら（2003）は、有機農業で使用される種子が化学滅菌プロセスに曝されることを避けるために、異なる温度および時間で暖かい水を用いて種子を殺菌しようと試み、種子の発芽能力を失うことなく、種子中の病原体微生物の数を減少させることに成功した[8]。しかしながら、いずれのこの方法によっても、種子上の病原体微生物を完全に除去することはできない。細菌量は一定の割合でしか減少できない。
【００１７】
種子の改良方法および組成物は、特許文献国際公開第2012152737号および国際公開第2009021986号において、開発されている[24,25]。
【００１８】
米国特許明細書第US20130005811号において、種皮の外表面に存在する細菌を減少させる製剤が記載されている[26]。しかしながら、前記滅菌方法のいずれも、同時に種子の内外において、細菌、真菌、酵母およびウイルスに対して何らかの影響を有することは示されていない。
【００１９】
当該技術分野で知られる、日本の特許文献第JP2007209267号は、抗細菌性組成物に関する。前記出願は、種皮を消毒することが可能な組成物を開示する。
【００２０】
当該技術分野で知られる欧州特許文献EP1865032号は、雲母表面に使用できる顔料混合物を開示している。この顔料は、酸化亜鉛およびその誘導体を用いて種皮における抗微生物性表面を得るためにも適用することができる。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明の目的は、亜鉛ピリチオン、トリクロサン及びカルボキシメチルセルロースを含有する抗真菌性コーティング製剤を提供することである。
【００２２】
本発明の別の目的は、亜鉛ピリチオン、トリクロサン及びカルボキシメチルセルロースを含有する抗カンジダコーティング製剤を提供することである。
【００２３】
本発明のさらなる目的は、亜鉛ピリチオン、トリクロサン及びカルボキシメチルセルロースを含有する抗細菌性コーティング製剤を提供することである。
【００２４】
本発明の別の目的は、亜鉛ピリチオン、トリクロサンおよびカルボキシメチルセルロースを含有する抗ウイルス性コーティング製剤を提供することである。
【００２５】
本発明の更なる目的は、一年生および多年生植物の種子に適用することができるコーティング製剤を提供することである。
【００２６】
本発明の別の目的は、微生物の増殖を防止することによって種子の発芽能力を高めるコーティング製剤を提供することである。
【００２７】
本発明の更なる目的は、一年生および多年生植物の種子に発生する感染の結果としての製品損失を低減又は排除するコーティング製剤を提供することである。
【００２８】
本発明の別の目的は、一年生および多年生の植物種子の使用領域、ならびに、播種前に種子が保存されるサイロ、貯蔵所および倉庫の表面に起因する、真菌、細菌およびウイルスの汚染が存在する表面の滅菌のためのコーティング製剤を提供することである。
【００２９】
本発明の別の目的は、農業用具および装置の滅菌に使用することができるコーティング製剤を提供することである。
【００３０】
本発明のさらなる目的は、本発明の製剤によって得られる抗微生物性製品を提供することである。
【００３１】
発明の詳細な説明
【００３２】
種子の表面および内部の両方に存在し、種子の発芽能力に害を及ぼさない、すべての種類の病理学的因子（細菌、真菌およびウイルス）に対して有効である種子コーティング製剤が本発明により開発される。このコーティング製剤は、あらゆる種類の種子に殺菌効果を示す。前記製剤が使用される場合、種子媒介病が制御され、土壌由来病原体損失も低減される。開発された製品は、1つではなく全ての種子の種類に対して同等の抗微生物活性および抗ウイルス活性を示す。
【００３３】
表面滅菌のための亜鉛ピリチオン(C10H8N2O2S2Zn)、トリクロサン(C12H7Cl3O2)およびカルボキシメチルセルロースを含有する種子コーティング製剤を開発するプロセスは以下のように行われる。
【００３４】
5gのカルボキシメチルセルロースを、完全に均質で粘性になるまで50℃で964.16gの水の中で混合し、1000gの溶液を得る。次いで、0.5gのトリクロサンおよび20.83gの亜鉛ピリチオンを添加する。得られた混合物を約30分間撹拌する。最終比として、0.01〜0.1体積％のトリクロサンおよび0.5〜2体積％の亜鉛ピリチオンが得られる。この調製された製剤は、室温に冷却された後、種子表面をコーティングするために使用される。亜鉛ピリチオン、トリクロサン及びカルボキシメチルセルロースを含有する前記製剤は、以下、「ZTC」（略称）と称される。
【００３５】
種子を製剤でコーティングするプロセスは以下のように実施される。
【００３６】
室温（25℃）において種子を溶液でコーティングするプロセスを実施するために、まず溶液および種子をフラコンに入れる。コーティングプロセスは、フラコン中の溶液が種子の表面を完全にコーティングするように、25〜30℃の室温で15分間12rpmで行われる。種子に抗微生物性を付与することができる最後のステップでは、種子をろ過し、次いで乾燥オーブン中25〜30℃で乾燥させる。
【００３７】
同じ製剤は、表面全体をコーティングするように、浸漬または噴霧によって、農業用具および貯蔵庫表面に適用することができる。
【００３８】
コーティング製剤を用いて得られた生成物は、コーティングすることによって種子表面、農業用具および貯蔵庫表面を滅菌する。
【００３９】
本発明の目的を達成するために開発された「種子および表面滅菌のためのコーティング製剤」は添付図面に示されている。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】図1は、クラビバクテル ミキガネンシス（Clavibacter michiganensis）細菌に対する、ZTCを含有するコーティング製品の抗細菌活性を示す図である。
【図２】図2は、真菌ボトリチスspp.（Botrytis spp.）に対する、ZTCを含有するコーティング製品の抗真菌活性の図である。
【図３】図3は、真菌フサリウム spp.（Fusarium spp.）に対する、ZTCを含有するコーティング製品の抗真菌活性を示す図である。
【図４】図4は、ベニバナ種子のプソイドモナス シリンガ（Pseudomonas syringae）及び何も適用されていないベニバナ種子に対する、ZTCを含有するコーティング製品の抗細菌活性を示す図である。
【図５】図5は、ZTCを含有するコーティング製品を適用したトウモロコシの種子の発芽を示す図である。
【図６】図6は、コーティングが行われていないトウモロコシの種子を示す図である。
【図７】図7は、ZTCを含有するコーティング製品を適用したヒマワリの種子の発芽を示す図である。
【図８】図8は、コーティングが行われていないヒマワリの種子を示す図である。
【図９】図9は、ZTCを含有するコーティング製品を適用したコムギ種子の発芽を示す図である。
【図１０】図10は、コーティングが行われていないコムギの種子を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
実験的研究
【００４２】
抗微生物試験
【００４３】
本発明の抗微生物種子コーティング製剤は、下記のコーティング方法により種子に適用した。等量のコーティングされた種子および未処理の種子を栄養寒天培地（NA）、サブロー寒天培地（SDA）およびポテトデキストロース寒天培地（PDA）それぞれに入れ、種子表面上の微生物の増殖を観察した。細菌、酵母および真菌の増殖に適した培地を含むペトリ皿は、細菌については25±1℃で24時間、酵母については36±1℃で48時間、真菌については25±1℃で72時間、保たれた。未処理種子をネガティブコントロールとして使用した。種子の周囲で増殖する微生物を考慮して、種子上の抗微生物種子コーティング製剤の抗微生物活性を評価した。試験された亜鉛ピリチオン、トリクロサン及びカルボキシメチルセルロースを含有する抗微生物性種子コーティング製品でコーティングした種子の抗微生物活性試験結果を先行技術表1に要約する。全ての試験を少なくとも2回繰り返した。
【００４４】
コーティングされた種子の抗微生物活性試験；
【００４５】
上記のようなZTCを含有する製剤を用いて作製した植物種子の抗微生物活性試験を、2つの異なる方法を用いて同時に実施した。第1の試験方法では；細菌  プソイドモナス シリンガ（Pseudomonas syringae）、クラビバクテル spp.（Clavibacter spp.）、ブルコルデリア spp.（Burkholderia spp.）、クルトバクテリウム spp.（Curtobacterium spp.）、バシルス spp.（Bacillus spp.）、プソイドモナサエルギノサ（Pseudomonasaeruginosa）、エルウィニア spp.（Erwinia spp.）、キサントモナサキソノポジス（Xanthomonasaxonopodis）、キサントモナスカンペストリス（Xanthomonascampestris）およびアグロバクテリウム spp.（Agrobacterium spp.）；酵母  カンジダ spp.（Candida spp.）ならびに 真菌  アスペルギルス spp.（Aspergillus spp.）、ボトリチス シネレア（Botrytis cinerea）、フサリウム spp.（Fusarium spp.）、ペニシリウム spp.（Penicillium spp.）、リゾプス spp.（Rhizopus spp.）、アルテルナリア spp.（Alternaria spp.）、リゾクトニア spp.（Rhizoctonia spp.）およびスクレロチニア spp.（Sclerotinia spp.）の単離菌を適切な培地（それぞれNA、SDAおよびPDA）を含むペトリ皿に接種した。ZTC含有製剤でコーティングされた種子を、接種したペトリ皿上に置いた。接種したペトリ皿を細菌については24時間、酵母については48時間、36±1℃で、真菌については72時間、25±1℃で、インキュベートした。種子の抗微生物活性は、適用された試料の周囲に形成された阻害区域（微生物が増殖しない区域）を観察することによって評価した。
【００４６】
第2の方法では、ZTC含有製剤でコーティングされた種子を乳鉢および乳棒を用いて破砕して、種子中の内生微生物量に対する製剤の効果を観察した。破砕した種子を栄養ブロス（NB）培地およびサブローデキストロースブロス（SDB）培地でそれぞれインキュベートした。25±1℃で100rpmで1時間攪拌したサンプルを、栄養寒天培地（NA）、サブローデキストロース寒天培地（SDA）、およびポテトデキストロース寒天培地（PDA）それぞれに、各培地に100μlが存在するようマイクロピペットを用いて添加し、ドリガルスキーの助けによる拡散法で接種した。接種された試料を細菌については24時間、酵母については48時間、36±1℃で、真菌については72時間、25±1℃で、インキュベートして、微生物の増殖を調べることにより、種子中の内生微生物量に対する製剤の効果を観察した。
【００４７】
コーティング種子および非コーティング種子の発芽試験
【００４８】
亜鉛ピリチオン、トリクロサンおよびカルボキシメチルセルロースを含む製剤でコーティングした種子およびコントロール群として何も処理されていない種子をNAおよびPDA培地上に置いた。 発芽に適した環境を提供するために発芽キャビンに入れられたペトリ皿中の種子の発芽率および種子の発芽に対する培地中の汚染の影響が一定の間隔で観察された。
【００４９】
抗ウイルス試験
【００５０】
亜鉛ピリチオンの抗ウイルス活性試験；
【００５１】
ヒト単層腫瘍細胞であるHEp-2細胞（ATCC CCL-23）の完全層を使用し、ヒトアデノウイルス5型アデノイド75株およびポリオウイルス1型チャット株ウイルスを産生させて、実験を実施した。ウイルスタイトレーションを決定するために、参照ヒトアデノウイルス5型アデノイド75株およびポリオウイルス1型チャット株を、連続希釈を行い、HEp-2細胞へ接種し、倒立顕微鏡で認識できる細胞変性効果を生じるウイルス希釈物をベースにして、スピアマン−カルバー法を用いてウイルスタイトレーションを計算した。これらのウイルスはモデルDNAおよびRNAウイルスとして試験された。これらのウイルスに対して有効な製剤は、他の植物およびヒト病原体ウイルスに対して有効であると認められている。亜鉛ピリチオンのサブ細胞毒性濃度を測定するために、液体亜鉛ピリチオンをイーグル最小必須培地（MEM）で10倍段階希釈し、細胞培地において、無毒性濃度を検出し、この濃度を実験に使用した。コントロールとして、MEM接種HEp-2細胞、亜鉛ピリチオンが添加されていない全層HEp-2細胞、10倍希釈の参照ウイルスタイトレーションコントロール、ホルムアルデヒドコントロールおよび毒性濃度の亜鉛ピリチオンを含有するコントロールを、ウイルスの代わりのネガティブコントロールとして使用した。
【００５２】
細胞培養培地および化学物質の調整
【００５３】
MEM培地：細胞が表面に吸着して増殖するための、酵素、ホルモンおよび成長因子を含む10％血清（FBS）；真菌および細菌汚染を防ぐための、ペニシリン40IU / ml、ストレプトマイシン0.04mg / ml、グルタミン0.5mg / ml；および緩衝液として1％重炭酸ナトリウムを添加した。
FBS：不活性化およびマイコプラズマフリー
重炭酸ナトリウム：滅菌7.5％溶液
ウイルス接種に使用した培地：真菌および細菌汚染を防ぐための1％の抗生物質（ペニシリン、ストレプトマイシン、アンフォテリシンB）および緩衝液として1％重炭酸ナトリウムを含む培地。 FBS血清はこの培地に添加しなかった。
【００５４】
クリーンおよび汚染培地の調整
【００５５】
クリーン培地；0.3gのウシ血清アルブミン画分Vを100mlの滅菌水に溶解する。 得られた溶液をメッシュサイズ0.22μMのフィルターに通して滅菌した。
【００５６】
汚染培地；ヒツジ赤血球およびBSAが、汚染培地に使用される。3gのBSAを100mlの滅菌水に溶解し、濾過する。97mlのBSAに対して3mlのヒツジ赤血球が完成した。
【００５７】
赤血球；8mlの新鮮なヒツジ血液を800Gで10分間回転させ、次いでその上清を除去した。その上に8mlのリン酸緩衝塩（PBS）を添加した後、ピペッティングを行い、再び800Gで10分間回転させた。この手順を3回繰り返した。
【００５８】
分析
【００５９】
最初に、液体亜鉛ピリチオンを細胞培養培地（MEM）で連続希釈し、その無毒性濃度を計算した。試験される亜鉛ピリチオン8mlを硬水2mlと混合した。得られた溶液をMEMで連続希釈した（希釈段階1:10）。それを96ウェルの単層細胞でインキュベートした後、生じた微視的変化を記録した。細胞変性効果（CPE）を示す濃度を決定した。亜鉛ピリチオンとホルムアルデヒドCPE値とを比較した。細胞の亜鉛ピリチオンの非毒性濃度を決定した後、クリーンおよび汚染培地における1〜60分間の適用期間の結果としてのウイルスタイトレーションに対する亜鉛ピリチオンの効果を調べた。コントロールとして、MEM接種HEp-2細胞、亜鉛ピリチオンが添加されていない全層HEp-2細胞、10倍希釈参照ウイルスタイトレーションコントロール、ホルムアルデヒドコントロールおよび毒性濃度の亜鉛ピリチオンを含有するコントロールを、ウイルスの代わりのネガティブコントロールとして使用した。倒立顕微鏡で認識できる細胞変性効果が形成されるウイルス希釈物をベースとして、スピアマン-カルバー法を用いてウイルスタイトレーションをTCID50値として計算した。TS EN 14476（2007年3月）の基準によると、消毒剤は、抗ウイルス活性としてウイルスタイトレーションを4またはそれ以上のlogで減少させるべきとされている。
【００６０】
実験結果
【００６１】
亜鉛ピリチオン、トリクロサンおよびカルボキシメチルセルロースを含有する製剤を、インビトロ条件下で種子に適用した。実施された抗微生物活性試験によれば、亜鉛ピリチオン、トリクロサンおよびカルボキシメチルセルロースを含有する製剤を用いて製造された種子コーティングは、試験したすべての微生物（細菌、酵母および真菌）の増殖を阻害する効果を有することが観察された（表1）。
【００６２】
【表６】
0006427261.tif 000007
【００６３】
作製された種子における抗微生物活性を、細菌  プソイドモナス シリンガ（Pseudomonas syringae）、クラビバクテル spp.（Clavibacter spp.）、ブルコルデリア spp.（Burkholderia spp.）、クルトバクテリウム spp.（Curtobacterium spp.）、バシルス spp.（Bacillus spp.）、プソイドモナサエルギノサ（Pseudomonasaeruginosa）、エルウィニア spp.（Erwinia spp.）、キサントモナサキソノポジス（Xanthomonasaxonopodis）、キサントモナスカンペストリス（Xanthomonascampestris）およびアグロバクテリウム spp.（Agrobacterium spp.）；酵母  カンジダ spp.（Candida spp.） ならびに 真菌  アスペルギルス spp.（Aspergillus spp.）、ボトリチス シネレア（Botrytis cinerea）、フサリウム spp.（Fusarium spp.）、ペニシリウム spp.（Penicillium spp.）、リゾプス spp.（Rhizopus spp.）、アルテルナリア spp.（Alternaria spp.）、リゾクトニア spp.（Rhizoctonia spp.）およびスクレロチニア spp.（Sclerotinia spp.）の単離菌を用いて試験した。得られた結果によれば、亜鉛ピリチオン、トリクロサンおよびカルボキシメチルセルロースを含有する抗微生物種子コーティング製剤を適用した種子は、試験した全ての微生物に対して抗微生物活性を有することが観察された（表2,3,4）。さらに、本発明は、植物に病気をもたらす全ての種類のDNAウイルスおよびRNAウイルスに対して抗ウイルス活性を有する。
【００６４】
【表７】
0006427261.tif 000008
【００６５】
【表８】
0006427261.tif 000009
【００６６】
【表９】
0006427261.tif 000010
【００６７】
実験的研究の結果、亜鉛ピリチオン、トリクロサンおよびカルボキシメチルセルロースを含有する抗微生物種子コーティング製品は、微生物に対して抗微生物活性を有することが観察された（図1、図2、図3）。
亜鉛ピリチオン、トリクロサンおよびカルボキシメチルセルロースを含有する抗微生物性種子コーティング製品で処理した種子には微生物汚染は観察されず；未処理の種子は微生物汚染に曝されていることが判明した（図4）。
【００６８】
亜鉛ピリチオン、トリクロサンおよびカルボキシメチルセルロースを含有する抗微生物種子コーティング製品で処理した種子を置いた培地では、汚染は観察されず（図5、図7、図9）；種子の発芽率はネガティブコントロールよりも高いことが判明した（図6、図8、図10）。
【００６９】
試験した亜鉛ピリチオンの10％、1％および0.1％の懸濁液は、細胞培養における細胞に対して細胞変性効果を示したので、細胞変性効果を示さない前記亜鉛ピリチオン溶液の最も低い比率、すなわち0.01％を使用した。
【００７０】
試験の結果得られた計算では、1/1の割合で、室温（20℃）、クリーンおよび汚染培地において、1分と60分の適用時間の間で、亜鉛ピリチオンが、すべての実験条件（表5および表6）におけるウイルスタイトレーションで少なくとも4logの減少が、適用の結果もたらされたことが観察された。米国EPA抗微生物剤部門基準によれば、消毒剤は殺ウイルス活性としてウイルスタイトレーションを4log以上減らすべきとされている。
【００７１】
【表１０】
0006427261.tif 000011
【００７２】
【表１１】
0006427261.tif 000012
【００７３】
結論として；これらの実験結果は、1分と60分の適用時間の間で、室温（20℃）で希釈せずに直接使用する場合、亜鉛ピリチオンがヒトアデノウイルス5型ウイルスに対して99.9％活性であり、かつ、ポリオウイルス1型ウイルスに対して99.9％活性であることを示す。
【００７４】
トルコ標準協会（TSE）のTS EN 14476（2007年3月）の基準にしたがえば、DNAモデルウイルス試料であるヒトアデノウイルス5型に対する殺ウイルス活性が研究されているこの製品は、少なくとも上記の溶解度および期間で使用されるならばHBVのような実験室で実際に試験することができない他のエンベロープまたは非エンベロープDNAウイルスに対して、かつ洗浄、拭き取り、含浸（濡れ/浸漬）の手法のいずれか１つとともに使用されるならば他の植物病原体ウイルスに対して、同様の殺ウイルス活性を示すことが認められる。さらに、RNAモデルウイルス試料であるポリオウイルス1型に対する殺ウイルス活性が研究されているこの製品は、少なくとも上記の溶解度および期間で使用されるならばHCVおよびHIVのような実験室で実際に試験することができない他のエンベロープまたは非エンベロープRNAウイルスに対しても同様の殺ウイルス活性を示すことが認められる。
【００７５】
本発明は、上記に与えられた種子に限定されず、すべての一年生および多年生の植物種子に適用することができる。
【００７６】
本発明の種子コーティング製剤はまた、植物生産において使用される移植、剪定およびホーイングのような農業の実施中に生じる汚染を除去し、農業用具の滅菌に使用することができる。
【００７７】
この製剤はまた、木材表面上の細菌または真菌の汚染の結果として生じる生物学的分解および劣化を防止するために製品をコーティングする際の保護剤または添加剤として使用することもできる。
【００７８】
本発明の製剤の内容物は、異なる材料の製品形態に入れることができる。
【００７９】
参照
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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