(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
繊維性材料又は発泡材料を含む試料採取部と、
６．８以下のｐＨを有し、ルシフェリン及びルシフェラーゼを含む液体試薬組成物と接触した際に、その液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変えるのに有効な量の、水溶性緩衝成分と塩基を含むｐＨ調整試薬を含む、前記繊維性材料又は発泡材料に備えられたコーティングと
を備える試薬採取装置を使用して所定の量の試料を取得する工程と、
前記所定の量の試料を、前記ｐＨ調整試薬及び試料採取装置の容器内の閉鎖区画内に配設された前記６．８以下のｐＨを有する液体試薬組成物と接触させて、反応混合物を形成する工程と、
照度計を使用して、前記反応混合物から放出された光を検出する工程と、
を含み、
前記容器が、前記照度計に動作可能に結合されるように適合されたキュベット部を備える、液体試料中のＡＴＰを検出するための方法。
【請求項２】
照度計に動作可能に結合されるように適合された開口部及びキュベット部を有する容器と、
ルシフェリン及びルシフェラーゼを含み、閉鎖区画内に配設され、そのｐＨが６．８以下である、液体試薬組成物と、
試料採取部を有する試料採取装置であって、
前記試料採取部が、試料を捕捉し、それを解放可能に保持するように適合され、
前記試料採取部が、繊維性材料又は発泡材料を含み、
前記繊維性材料又は発泡材料が、前記液体試薬組成物と接触した際に、前記液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える有効な量の、水溶性の緩衝成分と塩基を含むｐＨ調整試薬を含むコーティングを備える、試料採取装置と、を備える、液体試料中のＡＴＰを検出するための器具。
【請求項３】
照度計に動作可能に結合されるように適合された開口部及びキュベット部を有する容器と、
ルシフェリン及びルシフェラーゼを含み、閉鎖区画内に配設され、そのｐＨが６．８以下である、液体試薬組成物と、
試料採取部を有する試料採取装置であって、
前記試料採取部が、試料を捕捉し、それを解放可能に保持するように適合され、
前記試料採取部が、繊維性材料又は発泡材料を含み、
前記繊維性材料又は発泡材料が、前記液体試薬組成物と接触した際に、前記液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える有効な量の、水溶性の緩衝成分と塩基を含むｐＨ調整試薬を含むコーティングを備える、試料採取装置と、を備える、液体試料中のＡＴＰを検出するためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１２年７月６日に出願された米国仮特許出願第６１／６６８，５２６号の利益を主張し、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
試料採取プログラムは、食品飲料産業において重要な原材料、中間材料、完成品、及び処理環境を監視するために使用される。定期的な試料採取及び検査により、品質保証担当者はごく初期の段階で、微生物等の望ましくない物質を検出し、設備及び／又は製品の続いて起こる汚染を防止するための処置をとることができる。不必要な物質を検出するために、様々な検査を実施することができる。このような検査の例としては、化学残留物検査（例えば、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）生物発光検査及びタンパク質比色分析検査）、培養方法、遺伝子検査（例えば、ＰＣＲ）、免疫診断検査、及び生物発光検査が挙げられる。
【０００３】
試料採取装置は、典型的に環境検査のための表面試料を採取するために使用される。市販の試料採取装置としては、スポンジ、スワブ等の吸収装置が挙げられる。加えて、ある特定の試料採取装置は、所定の量の液体試料を採取することができる。
【０００４】
ＡＴＰは、試料中の微生物の有無を定期的に検出するために使用される。ＡＴＰの破壊から生成された化学エネルギーは、光エネルギーに変換される。この反応で消費されるＡＴＰの各分子は、光の１つの光子を生成する。この光出力は、照度計内で定量化され得る。試料中のＡＴＰの存在は、微生物の存在の直接の指標であり得る（即ち、ＡＴＰは、微生物に由来する）か、あるいは、ＡＴＰは、微生物の存在の間接的な指標であり得る（即ち、ＡＴＰは、植物性又は動物性物質に由来し、微生物の成長を支援する栄養素が試料中に存在し得ることを示す）。加えて、試料中のＡＴＰの有無は、食品、飲料、他の工業的に加工されたもの、医療（例えば、内視鏡）、並びに冷却及びプロセス水等に対して洗浄プロセスの有効性を評価するために、及び／又は殺生物剤処理が微生物のレベルを減少させるのに有効であったかどうかを決定するために定期的に使用される。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示は、概して、ルシフェラーゼ酵素を用いる試料中のＡＴＰの検出に関する。具体的には、一態様では、本開示は、ｐＨ調整試薬を含むドライコーティングを含む多目的試料採取装置に関する。ｐＨ調整試薬は、ルシフェリンを含む液体試薬組成物と接触するとき、ｐＨ変化を引き起こすことができる。ｐＨ変化は、より低いｐＨでより短期間に実質的に定常状態の発光反応の実現を容易にすることができる。驚くべきことに、試料採取装置は、液体試料と接触することができ、ドライコーティングが液体試薬組成物中に可溶であり得る場合であっても、有効な量のｐＨ調整試薬が試料採取装置上、及び／又はその中に保持され、この有効な量は、それが前述のｐＨ変化をもたらす液体試薬組成物に移され得る。加えて、試料採取装置は、所定の量の液体試料を取得し、それによって操作者が液体試料中のＡＴＰの量を検出し、任意に定量化することを可能にする。
【０００６】
別の態様では、本開示は、ｐＨ調整試薬を含む液体コーティングを含む多目的試料採取装置に関する。ｐＨ調整試薬は、ルシフェリンを含む液体試薬組成物と接触するとき、ｐＨ変化を引き起こすことができる。ｐＨ変化は、より低いｐＨでより短期間に実質的に定常状態の発光反応の実現を容易にすることができる。試料採取装置は、液体及び／又は固体残留物を含み得る表面と接触することができる。驚くべきことに、表面との接触後、有効な量のｐＨ調整試薬が試料採取装置上、及び／又はその中に保持され、この有効な量は、有効な量のｐＨ調整試薬が前述のｐＨ変化をもたらす液体試薬組成物に（試料採取装置によって採取された残留物によって）移され得る。ｐＨ調整試薬及び残留物を液体試薬組成物に移した後、操作者は、残留物中のＡＴＰの量を検出し、任意に定量化することができる。
【０００７】
一態様では、本開示は、キットを提供する。キットは、照度計に動作可能に結合されるように適合された開口部及びキュベット部を有する容器と、ルシフェリンを含む液体試薬組成物と、試料採取部を有する試料採取装置と、を備えることができる。液体試薬組成物は、閉鎖区画内に配設され得る。液体試薬組成物のｐＨは、約６．８以下である。試料採取装置の試料採取部は、試料を捕捉し、それを解放可能に保持するように適合される。試料採取部は、繊維性又は発泡材料を含む。試料採取装置は、液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える有効な量のｐＨ調整試薬を含むコーティングを備える。
【０００８】
別の態様では、本開示は、器具を提供する。器具は、照度計に動作可能に結合されるように適合された開口部及びキュベット部を有する容器と、ルシフェリンを含む液体試薬組成物と、試料採取部を有する試料採取装置と、を備えることができる。液体試薬組成物は、閉鎖区画内に配設され得る。液体試薬組成物のｐＨは、約６．８以下である。試料採取装置の試料採取部は、試料を捕捉し、それを解放可能に保持するように適合される。試料採取部は、繊維性又は発泡材料を含む。試料採取装置は、液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える有効な量のｐＨ調整試薬を含むコーティングを備える。
【０００９】
キット又は器具の上記実施形態のいずれかでは、試料採取部は、所定の量の液体を取得するように適合され得る。キット又は器具の上記実施形態のいずれかでは、コーティングの少なくとも一部分は、試料採取装置の試料採取部上に配設され得る。キット又は器具の上記実施形態のいずれかでは、ｐＨ調整試薬は、水溶性試薬を含むことができる。キット又は器具の上記実施形態のいずれかでは、コーティングは、ドライコーティング又は液体コーティングを含むことができる。キット又は器具の上記実施形態のいずれかでは、閉鎖区画は、脆弱な壁を含むことができる。上記実施形態のいずれかでは、脆弱な壁は、開口部とキュベット部との間の容器内に配設され得る。キット又は器具の上記実施形態のいずれかでは、ｐＨ調整試薬は、Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］（ＨＥＰＥＳ）、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（トリシン）、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される緩衝成分を含むことができる。キット又は器具の上記実施形態のいずれかでは、コーティングは、有効な量の細胞抽出剤を更に含むことができる。キット又は方法の上記実施形態のいずれかでは、ルシフェラーゼ酵素は、対応する非遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素よりも温度変化、イオン性洗剤及び還元剤に対して感受性が低いルシフェラーゼ活性を有する遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素を含むか、又はそれから本質的になり得る。キット又は器具の上記実施形態のいずれかでは、所定の量は、約０．０１ミリリットル〜約０．２５ミリリットルであり得る。
【００１０】
更に別の態様では、本開示は、方法を提供する。本方法は、試料採取装置を使用して、所定の量の試料を取得する工程と、所定の量の試料をｐＨ調整試薬及び容器内の液体試薬組成物と接触させて、反応混合物を形成する工程と、照度計を使用して、反応混合物から放出された光を検出する工程と、を含むことができる。試料採取装置は、繊維性材料又は発泡材料を含む試料採取部を備えることができる。試料採取装置は、約６．８以下のｐＨを有する液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える有効な量のｐＨ調整試薬を含むコーティングを備える。液体試薬組成物は、ルシフェリンを含む。容器は、照度計に動作可能に結合されるように適合されたキュベット部を備える。
【００１１】
更に別の態様では、本開示は、方法を提供する。本方法は、表面を有する試料採取装置を使用して、表面から残留物の試料を取得する工程と、残留物の試料を取得した後、試料及びｐＨ調整試薬を容器内の液体試薬組成物と接触させて、反応混合物を形成する工程と、照度計を使用して、反応混合物から放出された光を検出する工程と、含むことができる。試料採取部は、繊維性材料又は発泡材料を含むことができる。試料採取装置は、約６．８以下のｐＨを有する液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える有効な量のｐＨ調整試薬を含むコーティングを備える。容器は、照度計に動作可能に結合されるように適合されたキュベット部を備えることができる。
【００１２】
本方法の上記実施形態のいずれかでは、コーティングは、ドライコーティング又は液体コーティングを含むことができる。本方法の上記実施形態のいずれかでは、液体試薬組成物は、ルシフェラーゼ酵素を更に含むことができる。本方法の上記実施形態のいずれかでは、ルシフェラーゼ酵素は、対応する非遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素よりも温度変化、イオン性洗剤及び還元剤に対して感受性が低いルシフェラーゼ活性を有する遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素から本質的になり得る。本方法の上記実施形態のいずれかでは、試料を含む試料採取装置を液体試薬組成物と接触させる工程は、１０℃以上、３５℃以下の範囲内の温度で試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることを含むことができる。本方法の上記実施形態のいずれかでは、試料採取装置を液体試薬組成物と接触させた後、実質的に定常状態の量の光が、２０秒未満でその組成物から放出され得る。
【００１３】
用語「好ましい」及び「好ましくは」とは、特定の状況下で、特定の利益をもたらすことができる、本発明の実施形態を指す。しかしながら、同一又は他の環境下で、他の実施形態も好ましい可能性がある。更に、１つ以上の好ましい実施形態の記載は、他の実施形態が有用でないことを示唆するものではなく、また、本発明の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものでもない。
【００１４】
用語「含む（comprise）」及びこの変形は、これらの用語が現れる明細書及び請求項を制限する意図を持たない。
【００１５】
本明細書で使用するとき、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、「少なくとも１つの」、及び「１つ以上の」は、互換可能に使用される。したがって、例えば、細胞抽出剤は、「１つ以上の」細胞抽出剤を意味すると解釈され得る。
【００１６】
用語「及び／又は」は、列挙された要素の１つ又は全てを、若しくは列挙された要素の任意の２つ以上の組み合わせを意味する。
【００１７】
また本明細書では、端点による数値範囲の記載は、その範囲に含まれるすべての数を含む（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５などを含む）。
【００１８】
上記の本発明の課題を解決するための手段は、本発明の開示されるそれぞれの実施形態又は本発明のすべての実施を説明することを目的としたものではない。以下の説明は、例示的な実施形態をより具体的に例示するものである。本出願の全体を通じて幾つかの箇所で、実施例のリストによって指針が与えられるが、これらの実施例は異なる組み合わせで使用することができる。いずれの場合も、記載される列挙は、あくまで代表的な群としてのみの役割を果たすものであって、排他的な列挙として解釈するべきではない。
【００１９】
これらの実施形態及び他の実施形態の更なる詳細を、添付の図面及び以下の説明文に記載する。他の特徴、目的、及び利点は、説明文及び図面、並びに特許請求の範囲から明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】本開示による試料採取装置の一実施形態の側面図である。
【図２】本開示による試料採取装置の代替の実施形態の側面図である。
【図３】本開示による器具の一実施形態の部分断面分解図である。
【図４】互いに対して第１の動作可能位置における試料採取装置及び容器を示す図３の組み立てられた器具の部分断面側面図である。
【図５】互いに対して第２の動作可能位置における試料採取装置及び容器を示す図３の組み立てられた器具の部分断面側面図である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本開示の何らかの実施形態が詳細に説明される前に、本発明はその用途で、以下の説明に記載される又は以下の図面に示される構成の詳細及び構成要素の配置に限定されないことを理解すべきである。本発明には他の実施形態が可能であり、本発明は様々な方法で実施又は実行することが可能である。また、本明細書で使用する語法及び専門用語は、説明を目的としたものであり、発明を限定するものとして見なされるべきでない点は理解されるべきである。「含む（including）」、「備える（comprising）」、又は「有する（having）」、及びこれらの変化形は、その後に列記される要素及びそれらの均等物、並びに更なる要素を包むものである。別段の指定又は限定がない限り、用語「接続された」及び「結合された」並びにその変化形は、広義で使用され、直接的及び間接的な接続及び結合の両方を包含する。更に、「接続される」及び「結合される」は、物理的又は機械的な接続又は結合に限定されない。本開示の範囲から逸脱することなく、他の実施形態が利用されてもよく、構造的又は論理的な変更がなされてもよいことを理解すべきである。更に、「前方」、「後方」、「上」、「下」といった用語は、各要素の互いに対する関係を説明するためにのみ用いられるものであり、装置の特定の向きを説明すること、装置に必要とされる若しくは求められる向きを指示又は示唆すること、又は本明細書に記載される発明が、使用時にどのように使用、装着、表示、又は配置されるかを特定することを目的とするものでは決してない。
【００２２】
本開示は、概して、試料中の有機残留物及び／又は細胞からＡＴＰを検出するための器具及び方法に関する。本開示によれば、細胞からのＡＴＰは、試料を細胞抽出剤と接触させて、ＡＴＰを解放し、かつルシフェリンの存在下でルシフェラーゼ酵素活性で解放されたＡＴＰの反応を伴う酵素反応を用いて解放されたＡＴＰを検出することによって検出され、測定可能な光の生成をもたらす。
【００２３】
具体的には、本開示は、１）所定の量の液体試料を捕捉し、それを解放可能に保持することができ、２）液体試料を使用して、有効な量の乾性の再水和性ｐＨ調整試薬を再水和することができ、３）ルシフェラーゼ触媒の発光反応を容易にするために、液体試料及び有効な量のｐＨ調整試薬を容器に供給することができる、ように適合された試料採取装置を器具及び／又はキットに提供する。有利には、本開示は、グロー型ルシフェラーゼ酵素活性に必要とされる遅延時間を減少させて、ＡＴＰ及びルシフェリンの存在下で、具体的には、より低い温度（例えば、２０℃以下の温度）で安定した光出力（例えば、最大光出力）を実現するために、長期間にわたってルシフェリンを含む水性混合物を保管し、かつこの混合物のｐＨを瞬時に調整するために使用され得るキット及び器具を提供する。
【００２４】
図１は、本開示による器具、キット、及び／又は方法に使用され得る試料採取装置の一実施形態を示す。試料採取装置１００は、操作部２０と、試料採取部３０とを備える。図解された実施形態では、試料採取部３０は、任意のステム１５を介して操作部２０に結合される。典型的に、試料採取装置１００は、対応する容器（図示せず）内に受容されるように成形され、寸法決めされる。操作部２０は、当該技術分野において既知であるプロセスを用いて様々な材料（例えば、木材、金属、プラスチック、ガラス）から作製されてもよく、操作部２０は、試料採取装置１００が使用中に把持及び／又は操作され得る位置として機能する。任意に、操作部は、試料採取装置１００の手動又は機械的つかみ機構を容易にするように成形及び／又は非平滑化されたハンドル２４を備える。
【００２５】
試料採取部３０は、試料供給源から試料を取得し（例えば、接触、毛細管圧、及び／又は吸収によって）、それを保持することができる繊維性材料又は発泡材料を含む。任意の実施形態では、試料採取部３０は、液体試料を保持することができる。任意の実施形態では、試料採取部は、短繊維（例えば、ナイロン繊維）でコーティングされた先端を有するアプリケータシャフト（例えば、固体成型プラスチックアプリケータシャフト）を備えることができ、この繊維は、例えば、米国特許第８，１１４，０２７号に記載される植毛スワブ等の垂直様式で配置され、この特許は、参照によりその全体が本明細書に援用される。任意の実施形態では、試料採取部は、繊維性材料でコーティングされた先端を有するアプリケータシャフト（例えば、固体成型プラスチックアプリケータシャフト）を備えることができ、この繊維は、例えば、米国特許公開第２０１１／０２６２９５１号及び同第２０１１／０２６２９５２号に記載される海島の複合繊維（例えば、ポリエステル／ポリエステル複合繊維糸又はポリエステル／ナイロン複合繊維糸）等であり、この特許は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
【００２６】
任意の実施形態では、液体試料は、所定の最大試料容量を有する液体試料を含むことができる。試料採取部３０は、適切な組成、寸法、多孔性、親水性、及びこれらの組み合わせを有する繊維性又は発泡材料を選択することによって所定の量の試料を取得及び保持するように適合され得る。最大試料量は、例えば、試料で実施された検査の所望の感受性に基づいて選択されてもよい。任意の実施形態では、試料採取部は、表面から残留物（例えば、液体及び／又は固体残留物）を取得（例えば、接触、毛細管圧、及び／又は吸収によって）し、それを保持することができる。
【００２７】
一般的に、試料採取部３０は、所望の試料採取特性を実現する材料からなり、これは、捕捉された試料のタイプに依存してもよい（例えば、いくつかの液体試料は、液体の表面張力に影響を与える溶解又は浮遊固体を含んでもよい）。試料を捕捉及び保持する試料採取部３０の能力に影響を与え得る材料特性としては、例えば、表面エネルギーが挙げられる。例えば、材料は、毛細管力又は吸収によって試料を、例えば、試料採取部３０内に配設された複数の繊維間の１つ以上の空間に引き込むために、特定の表面エネルギーを有するように選択されてもよい。試料採取部が作製される材料の他の特性は、試料に対する実質的な不活性、又は、例えば、試料が試料採取部３０から解放されるとき、ルシフェラーゼ酵素活性に影響を与え得る化学物質若しくは他の汚染物質の比較的低い溶出率を含んでもよい。
【００２８】
環境表面から試料を取得するための発泡物品（例えば、スポンジ、ハンドル上に取り付けられたスポンジ）は、当該技術分野において既知である。図２は、発泡材料を含む試料採取部３０を備える試料採取装置１００’を示す。発泡材料は、液体試料を取得及び保持することができる個々のセル又は空所を備える。本開示の試料採取装置は、発泡材料を含む試料採取部を備えることができる。本開示の試料採取装置に使用するための好適な発泡材料としては、例えば、ポリウレタンフォーム、ポリエチレンフォーム、及びポリスチレンフォームが挙げられる。いくつかの実施形態では、発泡体は、ポリマーの表面をより親水性にするために処理（例えば、コロナ処理、又は電子ビーム処理）されてもよい。発泡材料は、当該技術分野において既知の材料（例えば、接着剤、機械的締結具など）及びプロセスを用いてステム１５及び／又は操作部２０に結合され得る。任意に、試料採取装置１００は、鋭い先端４０を更に備えることができる。
【００２９】
任意に、本開示によるあらゆる試料採取装置は、本開示によるｐＨ調整試薬を含むコーティングが配設され得るコーティング区域（図示せず）を更に備えることができる。コーティング区域は、例えば、試料採取装置のステム及び／又は任意の鋭い先端の一部分に位置してもよい。
【００３０】
本開示の試料採取装置は、ドライコーティングを含む。任意の実施形態では、ドライコーティングは、装置が液体試料に浸漬するとき、コーティングが液体試料と接触するように、装置の試料採取部上及び／又はその中（例えば、繊維性材料の繊維間の間質腔内、又は発泡材料の個々のセル内）に配設され得る。ドライコーティングは、本開示の液体試薬組成物と接触するとき、約６．８以下の初期のｐＨを有する液体試薬組成物のｐＨを約６．９以上の調整されたｐＨに変える有効な量のｐＨ調整試薬を含む。任意の実施形態では、ｐＨ調整試薬は、水溶性試薬を含む。任意の実施形態では、ｐＨ調整試薬は、緩衝成分（例えば、Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］（ＨＥＰＥＳ）、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（トリシン）、及びこれらの組み合わせ）を含む。いくつかの実施形態では、ｐＨ調整試薬は、リン酸塩を含む有効な量の緩衝成分を含まない。液体試薬組成物のｐＨを６．８以下の初期のｐＨから約６．９以上の調整されたｐＨに変えるのに有効なある量のリン酸塩を含む緩衝成分はまた、ルシフェラーゼ酵素活性を少なくとも部分的に抑制するのに十分であり得る。任意の実施形態では、ｐＨ調整試薬は、金属塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム）を更に含む。
【００３１】
任意の実施形態では、コーティングは、ルシフェラーゼ酵素活性を実質的に抑制しない細胞溶解剤を更に含むことができる。好適な細胞溶解剤の例としては、これらに限定されないが、グルコン酸クロルヘキシジン、ＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、リゾチーム、リソスタフィン、バクテリオファージ溶解素、四級アンモニウム化合物（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム）、塩化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）、塩化ドデシルトリメチルアンモニウム（ＤＴＡＢ）、ＴＷＥＥＮ  ２０、ＴＷＥＥＮ  ８０、前述の任意の２つ以上の組み合わせが挙げられる。
【００３２】
試料採取装置上にコーティングされたｐＨ調整試薬の量は、液体試薬組成物のｐＨを６．８以下の初期（即ち、ｐＨ調整試薬との接触前）のｐＨから約６．９以上の調整されたｐＨ（即ち、ｐＨ調整試薬との接触後）に変えるのに十分であるべきである。好ましくは、試料採取装置上にコーティングされたｐＨ調整試薬の量は、液体試薬組成物のｐＨを６．８以下の初期のｐＨから約７．２以上のｐＨに変えるのに十分であるべきである。
【００３３】
本開示の試料採取装置を調製するために使用され得るコーティング溶液の非限定例が表１に示される。このコーティングは、任意の好適なコーティング方法を用いて試料採取装置に塗布され得る。任意の実施形態では、このコーティングは、液体コーティングとして試料採取装置に最初に塗布され得る（即ち、ｐＨ調整試薬は、例えば、水等の溶媒中に溶解又は懸濁される）。溶媒は、その後、試料採取装置上にコーティングされた実質的に乾燥したｐＨ調整試薬を残すように乾燥される。任意の実施形態では、液体コーティングは、試料採取装置（例えば、試料採取装置の試料採取部）をｐＨ調整試薬を含む液体に浸漬することによって塗布される。コーティング液体中に浸漬する間、試料採取装置は、試料採取部の１つ以上の空洞へのコーティング液体の移動を容易にするために撹拌され得る。装置をコーティングした後、コーティングされた部分は、ｐＨ調整試薬及び／又は細胞溶解剤を実質的に劣化させることなく、溶媒を蒸発させるのに十分な条件（例えば、周囲温度又は周囲を超える（温かい）温度）下で乾燥（例えば、気流、対流炉など内で）され得る。
【００３４】
本開示の試料採取装置の代替の実施形態では、このコーティングは、液体コーティングとして試料採取装置に塗布され、使用するまで実質的に液体状態で（例えば、実質的に耐湿性材料から作製された密封容器内に装置を包装することによって）保持され得る。任意に、液体コーティングは、国際特許公開第ＷＯ  ２００９／１４０３５６号に記載されるように、表面上に永続残留物を実質的に残さない濃度で保湿剤（例えば、プロピレングリコール）を含むことができ、この特許は、その全体が参照により本明細書に援用される。いくつかの実施形態では、保湿剤は、液体コーティングの約１重量パーセント〜約５０重量パーセントを構成する。好ましくは、保湿剤は、液体コーティングの約２重量パーセント〜約１０重量パーセントを構成する。液体コーティングを有する試料採取装置は、本開示の任意のキットに使用されてもよい。
【００３５】
本開示のキット及び器具は、容器を更に備える。容器は、試料を本明細書に記載される液体試薬組成物と接触させる管として機能する。容器は、開口部を備え、試料採取装置の少なくとも一部分（例えば、試料採取部）を受容するように構成される（例えば、成形及び寸法決めされる）。図３は、本開示による容器を備える器具の一実施形態の部分断面分解図を示す。器具１０００は、本明細書に記載される実施形態のいずれかによるハンドル２４及び試料採取部３０を有する操作部２０を備える試料採取装置１００を備える。器具１０００は、図３に断面で示される容器２００を更に備える。
【００３６】
容器は、少なくとも１つの壁５０と、試料採取装置１００を受容するように構成された開口部５２とを備える。後述されるように、図３の例示の実施形態に示される開口部５２を有する器具１０００は、試料採取装置１００全体を受容するように成形及び寸法決めされる。容器は、照度計に動作可能に結合されるように適合されたキュベット部５４を更に備える。典型的に、キュベット部５４は、容器２００のキュベット部５４又は容器２００全体を照度計の補完的形状の受容区画に配置することによって照度計に動作可能に結合される。キュベット部５４は、光透過性材料（例えば、ガラス、又はポリマー材料、例としてポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、若しくはポリスチレン）から製造され、この材料は、ルシフェラーゼ酵素によって触媒された反応の生成物として放出された光がキュベット部５４を通って透過するのを可能にする。
【００３７】
容器２００は、例えば、当該技術分野において既知の押し出し及び／又は成形プロセスを用いて単一物品（図示せず）として製造されてもよい。あるいは、図３の例示の実施形態の円筒形のスリーブ５６及びキュベット５５等の容器２００の部分は、別個に製造され、好適な手段を用いて（例えば、接着剤、ヒートシールプロセス、音波溶接、及び／又はスリーブ５６及びキュベット５５を共に圧入することによって）共に結合されてもよい。スリーブ５６は、例えば、ポリプロピレン又はポリエチレン等のプラスチックポリマーを用いて成形又は押し出しプロセスによって製造されてもよい。キュベット５５は、立方体、直方体、円筒、円錐、切頭円錐、他の好適な幾何学形状、及びこれらの組み合わせ等、様々な幾何学形状で形成され得る。好ましくは、キュベット５５の壁は、キュベット５５に入る及び／又はキュベット５５から出る光（例えば、可視光線）を透過させるように構成される。任意に、容器は、薄板６０を更に備えることができる。薄板６０は、キュベット５５をスリーブ５６と一緒にしっかりと保持することができる。薄板６０は、例えば、紙又はプラスチックフィルムから作製することができ、ラベルとして使用されてよい。
【００３８】
本開示のキット及び器具は、液体試薬組成物（図３〜５に示される液体試薬組成物７０）を更に備える。液体試薬組成物は、ルシフェラーゼ、好ましくは、グロー型ルシフェラーゼ、及びＡＴＰの供給源の存在下で発光反応を容易にするのに十分な濃度（例えば、０．３〜０．４ｍｇ／Ｌのルシフェリン）を含む。本開示の方法では、ＡＴＰの供給源は、本明細書に開示されるような試料、又は所定の量若しくは濃度のＡＴＰを含有する溶液（即ち、陽性対照又はＡＴＰ基準）であり得る。任意の実施形態では、液体試薬組成物は、水溶液を含むことができる。本開示の器具又はキットに使用される液体試薬組成物は、６．８以下の初期（即ち、ｐＨ調整試薬との接触前）のｐＨを有する。好ましくは、液体試薬組成物は、６．４以下の初期（即ち、ｐＨ調整試薬との接触前）のｐＨを有する。
【００３９】
本開示による液体組成の非限定例を実施例の表２に列挙する。
【００４０】
本開示によるキット又は器具の任意の実施形態では、液体試薬組成物は任意に、緩衝剤を含むことができる。好適な緩衝剤は、液体試薬組成物のｐＨを６．８以下のｐＨ、好ましくは、６．４以下のｐＨで維持するのに有効であるｐＫａを有する。Ｎ−（２−アセトアミド）−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）が好適な緩衝剤の非限定例である。緩衝剤は、液体試薬組成物のｐＨを有効に維持するのに十分に高いが、それが試料採取装置の試料採取部上にコーティングされたｐＨ調整試薬によって仲介される液体試薬組成物のｐＨの変化を実質的に阻止しないように十分に低い、ある量（例えば、ｐＨ  ６．４〜６．８で４２５マイクロリットルの液体試薬組成物中の約１６ｍＭのＡＤＡ）で、液体試薬組成物中に存在するべきである。任意の実施形態では、液体試薬組成物は、ルシフェラーゼ酵素を更に含むことができる。任意の実施形態では、ルシフェラーゼ酵素は、対応する非遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素よりも温度変化、イオン性洗剤及び還元剤に対して感受性が低いルシフェラーゼ活性を有する遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素から本質的になり得る。ルシフェラーゼ酵素は、例えば、約９ｍｇ／Ｌの濃度で液体試薬組成物中に存在することができる。任意の実施形態では、液体試薬組成物は、マグネシウムイオンの供給源（例えば、二酢酸マグネシウム四水和物）を更に含むことができる。マグネシウムイオンの供給源は、液体試薬組成物が液体試料と混合されるとき、ルシフェラーゼ酵素活性を実質的に妨げない濃度（例えば、約３ｍＭ）で存在し得る。任意の実施形態では、液体試薬組成物は、タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）を更に含むことができる。理論に束縛されるものではないが、タンパク質は、長期保管中にルシフェラーゼ酵素を安定化させる、及び／又はルシフェラーゼ酵素がプロテアーゼ酵素活性の影響を受けにくくすることができる。その作業濃度では、タンパク質は、液体試薬組成物が液体試料と混合されるとき、ルシフェラーゼ酵素活性を実質的に妨げるべきではない。タンパク質は、例えば、約０．０４６重量パーセントの濃度で液体試薬組成物中に存在してもよい。任意の実施形態では、液体試薬組成物は、液体試薬組成物が液体試料と混合されるとき、ルシフェラーゼ酵素活性を実質的に妨げない濃度で防腐剤（例えば、０．０４６重量パーセントのアジ化ナトリウム）を更に含むことができる。任意の実施形態では、液体試薬組成物は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を更に含んでもよい。理論に束縛されるものではないが、ＥＤＴＡは、液体試薬組成物中の防腐剤として作用することができ、液体試薬組成物及び／又は液体試料中に存在するイオンをキレート化するようにも機能することができる。
【００４１】
本開示によるキット又は器具の任意の実施形態では、液体試薬組成物は閉鎖区画内に配設され得る。いくつかの実施形態では、閉鎖区画は、脆弱な壁を含む。図４に例示の実施形態では、容器は、区画６７を形成するキュベット５５に近接して配設された、耐液性の脆弱な壁６５を更に含む。脆弱な壁６５は、例えば、プラスチックフィルム、金属箔、又は金属コーティングされたプラスチックフィルム等の耐水性材料から作製され得る。接着剤、ヒートシール、音波溶接、又は当該技術分野において周知の他の手段によって脆弱な壁６５をキュベット５５及び／又はスリーブ５６に結合させて耐液性シールを形成し、液体試薬組成物７０を区画６７内に保持することができる。
【００４２】
本開示によるキット又は器具の代替の実施形態（図示せず）では、液体試薬組成物は、容器内に配設される脆弱なアンプル（例えば、ガラス又はポリマーアンプル）中に配設されてもよい。液体試薬組成物は、アンプルを破壊するのに十分な力で容器を圧搾することによって、又はアンプルを破壊するのに十分な力でアンプルに対して試料採取装置（例えば、試料採取装置の鋭い先端）を付勢することによって、脆弱なアンプルから解放され得る。
【００４３】
本開示によるキット又は器具の更に別の実施形態（図示せず）では、液体試薬組成物は、試料採取装置内に配設された区画内に配設されてもよい。Ｎａｓｏｎ（米国特許第５，２６６，２６６号、その全体が参照により本明細書に援用される）は、中空ステムを備えるスワブ装置、及びスワブの少なくとも一部分が配設される管への供給のために液体を中空ステムに解放する作動可能な弁（離脱先端）を有する液体含有区画を開示している。本開示の試料採取装置は、Ｎａｓｏｎの中空ステム及び試薬チャンバを含むように修正されてもよい。試薬チャンバは、本開示の液体試薬組成物を収容することができ、液体試薬組成物は、Ｎａｓｏｎによって記載された技術を用いて本開示の容器の中に移されることができる。液体試薬組成物は、本開示による試料採取装置を用いて液体試料が捕捉される前又は後に容器に移され得る。反応（例えば、化学及び／又は酵素反応）に使用される液体試薬組成物を一時的に保管するための他の区画は、当該技術分野において既知であり、当業者であれば、このような区画が本開示の液体試薬組成物を一時的に収容するために使用され得ることを認識するであろう。このような区画の非限定例は、米国特許第７，３９９，９８４号、米国特許第６，５４８，０１８号、米国特許第５，９６５，４５３号、及び米国特許第６，５２４，５３０号に見出すことができ、当該特許は全て参照によりそれら全体が本明細書に援用される。
【００４４】
本開示は、キットを提供する。キットは、例えば、本明細書に記載される方法による液体試料中のＡＴＰの有無を検出するために使用されてもよい。任意の実施形態では、キットは、本明細書に開示される方法の一実施形態を開示する指示を含むことができる。
【００４５】
本開示のキットは、本明細書に開示される実施形態のいずれかによる容器を備える。容器は、照度計に動作可能に結合されるように適合された開口部及びキュベット部を備える。本開示のキットは、本明細書に開示される実施形態のいずれかによるルシフェリンを含む液体試薬組成物を更に備える。液体試薬組成物の初期のｐＨ（即ち、本開示のｐＨ調整試薬との接触前）は、約ｐＨ  ６．８以下、好ましくは、約ｐＨ  ６．４以下である。本開示のキットは、本明細書に開示される実施形態のいずれかによる試料採取部及び操作部を有する試料採取装置を更に備える。液体試薬組成物は、本明細書に開示されるように、容器又は試料採取装置内に配設された閉鎖区画内に配設される。試料採取装置の試料採取部は、繊維性材料又は発泡材料を含み、試料供給源から所定の量の液体試料を取得（例えば、毛細管圧又は吸収によって）し、それを保持するように構成される。試料採取装置の試料採取部は、液体試薬組成物と接触する（例えば、混合される）とき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に、好ましくは、約ｐＨ  ７．２〜８．０に、より好ましくは、約ｐＨ  ７．２〜７．８に変える有効な量のｐＨ調整試薬を含むドライコーティングを含む。任意の実施形態では、ｐＨ調整試薬は、水溶性試薬を含む。
【００４６】
本開示のキット及び器具は、液体試料中のＡＴＰの有無を検出する方法で使用され得る。試料中のＡＴＰの存在は、試料中の有機残留物及び／又は微生物（例えば、病原微生物）が存在する可能性を示すことができる。更に、試料中のＡＴＰの量は、試料中の微生物の相対数の指標であり得る。
【００４７】
本開示の一方法では、試料採取装置は、液体試料中のＡＴＰの有無を検出するために続いて検査される液体試料を取得するために使用される。試料中のＡＴＰの量が試料の洗浄度及び／又は試料中の微生物の存在の指標であり得るため、それは、試料中のＡＴＰの絶対又は相対量を計算することが望ましくあり得る。したがって、試料の単位体積あたりのＡＴＰの量が決定され得るように、所定の量の試料を検査することが望ましい。試料の単位体積あたりのＡＴＰの量は、試料が特定の用途（例えば、食品又は飲料生産）に使用するのに許容できるかどうか、洗浄プロセスが有機残留物を除去するのに有効であったかどうか、及び／又は殺生物剤処理が微生物の数を減少させるのに有効であったかどうかを判定するために、所定の値と比較され得る。
【００４８】
したがって、本開示の第１の方法は、試料採取装置を使用して、所定の量の液体試料を取得することと、所定の量の試料を容器内の液体試薬組成物と接触させて、反応混合物を形成する工程と、照度計を使用して、反応混合物から放出された光を検出することと、を含む。所定の量の液体試料は、約１０マイクロリットル〜約２５０マイクロリットルであり得る。いくつかの実施形態では、所定の量の液体試料は、約１００マイクロリットル〜約２００マイクロリットルであり得る。いくつかの実施形態では、所定の量の液体試料は、約１２５マイクロリットル〜約１７５マイクロリットルであり得る。
【００４９】
本開示の第１の方法によれば、試料は液体を含む。液体は水を含み得る。試料は、液体中に溶解、分散、及び／又は懸濁する固体を更に含み得る。好適な試料の非限定例としては、定置洗浄（ＣＩＰ）洗浄水試料、プロセス及び冷却水試料、並びに内視鏡洗浄水試料が挙げられる。
【００５０】
本開示の第１の方法に使用される試料採取装置は、本明細書に開示される任意の試料採取装置であり得る。試料採取装置は、試料採取部と、操作部とを備える。試料採取部は、所定の量の液体試料を捕捉し、それを解放可能に保持するように適合される。試料採取部は、試料供給源から液体試料を取得し（例えば、毛細管圧又は吸収によって）、それを保持することができる繊維性材料又は発泡材料を含む。試料採取部は、所定の最大試料容量を保持する。第１の方法の任意の実施形態では、装置の試料採取部は、６．８以下の初期のｐＨを有する液体試薬組成物と接触する（例えば、混合される）とき（即ち、ｐＨ調整試薬に接触させる前）、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に調整する有効な量のｐＨ調整試薬を含むドライコーティングを含む。第１の方法のいくつかの実施形態では、装置の試料採取部は、６．８以下の初期のｐＨを有する液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に調整する有効な量のｐＨ調整試薬を含む湿潤（即ち、液体）コーティングを含む。
【００５１】
本開示は、試料中のＡＴＰを検出する第２の方法を更に提供する。第２の方法は、表面上の残留物（例えば、固体表面に見出される液体及び／又は固体残留物中に存在するＡＴＰを検出するために使用される。第２の方法は、例えば、表面を洗浄するために使用されるプロセスの有効性を検出するのに特に有用である。多くの環境（例えば、食品加工施設、病院）では、洗浄プロセスは、検査される表面から検出可能なＡＴＰを実質的に減少又は除去するべきである。本開示の第２の方法のための好適な試料としては、これらに限定されないが、処理設備（例えば、食品処理表面、管、ドレン、コンベヤ、保管容器）、環境表面（例えば、シンク、天板、引き出し、床、壁、天井、ドア、ベッドレール、リネン、コンピュータのタッチスクリーン、キーボード、モニタ）、及び医療設備又は装置（例えば、内視鏡、リトラクタ、トロカール、外科用メス、トレー）が挙げられる。本開示の第２の方法によれば、試料は、表面上に存在する液体及び／又は固体残留物を含むことができる。
【００５２】
本開示の第２の方法に使用される試料採取装置は、本明細書に開示される任意の試料採取装置であり得る。試料採取装置は、試料採取部と、操作部とを備える。試料採取部は、表面残留物の試料を捕捉するように適合される。試料採取部は、表面残留物を取得及び保持することができる繊維性材料又は発泡材料を含む。第２の方法の任意の実施形態では、装置の試料採取部は、６．８以下の初期のｐＨを有する液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に調整する有効な量のｐＨ調整試薬を含むドライコーティングを含む。第２の方法のいくつかの実施形態では、装置の試料採取部は、６．８以下の初期のｐＨを有する液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に調整する有効な量のｐＨ調整試薬を含む湿潤（即ち、液体）コーティングを含む。
【００５３】
本開示の第１又は第２の方法の任意の実施形態に使用される液体試薬組成物は、ルシフェリン（例えば、ホタルルシフェリン）を含む。ルシフェリンは、オキシルシフェリン及び光を生成するルシフェラーゼ酵素活性による酸化を受ける化合物である。ルシフェリン化合物は、６．８を超えるｐＨで溶液中に長期間にわたって保管されるときに不安定であり得る。したがって、本開示の方法に使用される液体試薬組成物は、６．８以下の初期のｐＨを有する。好ましくは、液体試薬組成物は、６．４以下の初期のｐＨを有する。
【００５４】
任意の実施形態では、液体試薬組成物は、ルシフェラーゼ酵素を更に含むことができる。好ましい実施形態では、ルシフェラーゼ酵素は、対応する非遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素よりも温度変化、イオン性洗剤及び還元剤に対して感受性が低いルシフェラーゼ活性を有する遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素を含む。いくつかの実施形態では、ルシフェラーゼ酵素は、対応する非遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素よりも温度変化、イオン性洗剤及び還元剤に対して感受性が低いルシフェラーゼ活性を有する遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素から本質的になる。
【００５５】
任意の実施形態では、液体試薬組成物は、任意に、緩衝剤を含むことができる。緩衝剤は、ルシフェリンを含有する溶液を保管するのに好適である初期ｐＨ（例えば、≦６．８）で液体試薬組成物を維持するために使用され得る。Ｎ−（２−アセトアミド）−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）が好適な緩衝剤の非限定例である。緩衝剤は、液体試薬組成物のｐＨを有効に維持するのに十分に高いが、それが試料採取装置の試料採取部上にコーティングされたｐＨ調整試薬によって仲介される液体試薬組成物のｐＨの変化を実質的に阻止しないように十分に低い、ある量（例えば、ｐＨ  ６．４〜６．８で４２５マイクロリットルの液体試薬組成物中の約１６ｍＭのＡＤＡ）で液体試薬組成物中に存在するべきである。
【００５６】
本開示の第１又は第２の方法の任意の実施形態に使用される容器は、キュベット部を備える。キュベット部は、ルシフェラーゼ酵素によって触媒される反応の生成物として放出された光がキュベット部を通って透過するのを可能にする。キュベット部は、照度計に動作可能に結合されるように適合される（例えば、成形され、寸法決めされる）。いくつかの実施形態では、照度計を使用して、反応混合物から放出された光を検出することは、液体試料中のＡＴＰの有無を検出することを含む。いくつかの実施形態では、照度計を使用して、反応混合物から放出された光を検出することは、液体試料中に存在するＡＴＰの量（例えば、相対量又は絶対量）を測定することを含む。
【００５７】
本開示の第１又は第２の方法の任意の実施形態では、所定の量の試料を容器内の液体試薬組成物と接触させて、反応混合物を形成することは、試料採取装置の試料採取部を容器内の液体試薬組成物と接触させることを含む。この接触は、例えば、液体試薬組成物中の試料採取装置の少なくとも一部、好ましくは、試料採取部全体を浸漬することによって実現されてもよい。この接触は、反応混合物を（例えば、液体試薬組成物への液体試料の少なくとも一部の拡散によって）形成する。それが液体試薬組成物中にまだ存在しない場合、ルシフェラーゼは、反応混合物に添加され得る。したがって、ＡＴＰが液体試料中に存在する場合、ＡＴＰは、ルシフェラーゼ酵素によって触媒される発光反応を容易にすることができる。発光反応は、前述の照度計内で検出され得る。
【００５８】
図４及び５は、所定の量の試料を容器内の液体試薬組成物と接触させて、反応混合物を形成するプロセスの一実施形態を例示する。試料採取装置１００を用いて試料を取得した後、試料採取装置は、容器２００に挿入される。図４は、容器内にステム１５及び試料採取部３０を有する試料採取装置１００を示す。この構成では、試料採取装置１００及び容器２００は、互いに対して第１の動作可能位置に配設され、器具１０００は、試料を区画６７に位置する液体試薬組成物７０と接触させる準備ができている。試料採取装置１００のハンドル２４に対する手動又は機械的圧力を用いて、試料採取部３０は、脆弱な壁６５を断裂するまで区画６７に向かって付勢され、図５に示されるように、試料採取部３０と関連付けられた液体試料（図示せず）を液体試薬組成物７０と接触させる。図５の図解された実施形態では、試料採取装置１００及び容器２００は、互いに対して第２の動作可能位置に配設される。この実施形態では、試料採取装置１００は、容器２００に完全に挿入され、試料採取装置の試料採取部３０は、液体試薬組成物７０に接触している。
【００５９】
本開示による第１又は第２の方法の任意の実施形態では、所定の量の試料を容器内の液体試薬組成物と接触させて、反応混合物を形成することは、容器内の試料及び液体試薬組成物を撹拌する工程を更に含むことができる。これは、例えば、旋回運動、振り子のような運動で容器を急速に振動させることによって、又は容器を、容器を振動させる機械と接触させることによって、手動で又は機械的に行われ得る。
【００６０】
本開示の第１又は第２の方法の任意の実施形態では、容器のキュベット部は、ルシフェラーゼ酵素活性から生じる発光を検出するために照度計に動作可能に結合される。市販の照度計は、本開示の方法の任意の実施形態に使用するのに好適である。好適な照度計の非限定例は、３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮからの市販される３Ｍ（商標）Ｃｌｅａｎ−Ｔｒａｃｅ（商標）ＮＧ照度計である。典型的に、キュベットは、容器の一部分（例えば、キュベット部）又は容器全体を対応する照度計の受容区画の中に配置することによって動作可能に結合される。キュベット部は、反応混合物を形成する前又は後に照度計に動作可能に結合されてもよい。典型的に、キュベット部は、反応混合物が形成された後、照度計に動作可能に結合される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物を形成した後５秒まで、照度計に動作可能に結合される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物を形成した後１０秒まで、照度計に動作可能に結合される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物を形成した後１５秒まで、照度計に動作可能に結合される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物を形成した後２０秒まで、照度計に動作可能に結合される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物を形成した後３０秒まで、照度計に動作可能に結合される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物を形成した後４５秒まで、照度計に動作可能に結合される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物を形成した後６０秒まで、照度計に動作可能に結合される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物を形成した後９０秒まで、照度計に動作可能に結合される。いくつかの実施形態では、キュベット部は、反応混合物を形成した後２分まで、照度計に動作可能に結合される。好ましくは、キュベットは、反応混合物を形成した後約５〜１０秒以の間、照度計に動作可能に結合される。
【００６１】
本開示の第１又は第２の方法の任意の実施形態では、キュベット部を照度計に動作可能に結合した後、発光は、照度計によって監視される。反応混合物が形成された後、反応が比較的安定した発光量に達するのに時間がかかる場合がある。
【００６２】
本開示の第１又は第２の方法の任意の実施形態では、液体試薬組成物は、ルシフェラーゼ及びＡＴＰの供給源の存在下で発光反応を促進するのに十分な濃度（例えば、約０．３〜０．４ｍｇ／Ｌのルシフェリン）でルシフェリンを含む。本開示の方法では、ＡＴＰの供給源は、本明細書に開示されるような液体試料、又は所定の量若しくは濃度のＡＴＰ（即ち、陽性対照又はＡＴＰ基準）を含有する溶液であり得る。任意の実施形態では、液体試薬組成物は、水溶液を含むことができる。本開示の器具又はキットに使用される液体試薬組成物は、６．８以下の初期のｐＨを有する。好ましくは、液体試薬組成物は、６．４以下の初期のｐＨを有する。
【００６３】
本開示の第１又は第２の方法の任意の実施形態では、液体試薬組成物は、任意に、緩衝成分を含んでもよい。好適な緩衝成分は、液体試薬組成物の初期のｐＨを６．８以下のｐＨ、好ましくは、６．４以下のｐＨで維持するのに有効であるｐＫａを有する。Ｎ−（２−アセトアミド）−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）が好適な緩衝剤の非限定例である。緩衝成分は、液体試薬組成物のｐＨを有効に維持するのに十分に高いが、それが試料採取装置の試料採取部上にコーティングされたｐＨ調整試薬によって仲介される液体試薬組成物のｐＨの変化を実質的に阻止しないように十分に低い、ある量（例えば、ｐＨ  ６．４〜６．８で４２５マイクロリットルの液体試薬組成物中の約１６ｍＭのＡＤＡ）で液体試薬組成物中に存在するべきである。第１又は第２の方法の任意の実施形態では、液体試薬組成物は、ルシフェラーゼ酵素を更に含んでもよい。第１又は第２の方法の任意の実施形態では、ルシフェラーゼ酵素は、対応する非遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素よりも温度変化、イオン性洗剤及び還元剤に対して感受性が低いルシフェラーゼ活性を有する遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素から本質的になり得る。ルシフェラーゼ酵素は、例えば、約９ｍｇ／Ｌの濃度で液体試薬組成物中に存在し得る。第１又は第２の方法の任意の実施形態では、液体試薬組成物は、マグネシウムイオン（例えば、二酢酸マグネシウム四水和物）の供給源を更に含むことができる。マグネシウムイオンの供給源は、液体試薬組成物が液体試料と混合されるとき、ルシフェラーゼ酵素活性を実質的に妨げない濃度（例えば、約３ｍＭ）で存在し得る。第１又は第２の方法の任意の実施形態では、液体試薬組成物は、タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）を更に含むことができる。タンパク質は、例えば、約０．０４６重量パーセントの濃度で液体試薬組成物中に存在してもよい。第１又は第２の方法の任意の実施形態では、液体試薬組成物は、液体試薬組成物が液体試料と混合されるとき、ルシフェラーゼ酵素活性を実質的に妨げない濃度で防腐剤（例えば、０．０４６重量パーセントのアジ化ナトリウム）を更に含むことができる。
【００６４】
本開示の第１又は第２の方法の任意の実施形態では、液体試料を含む試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることは、特定の温度（例えば、周囲温度）で試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることを含む。一般的に、接触がより低い温度で生じると、比較的安定した量の発光に達する発光反応のためにより長い期間が必要とされる。逆に、接触がより高い温度で生じると、比較的安定した量の発光に達する発光反応のためにより短い期間が必要とされる。本開示の方法の任意の実施形態では、液体試料を含む試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることは、１０℃以上、３５℃以下の範囲内の温度で液体試料を液体試薬組成物と接触させることを含む。好ましくは、液体試料を含む試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることは、１５℃以上、３０℃以下の範囲内の温度で液体試料を液体試薬組成物と接触させることを含む。
【００６５】
第１又は第２の方法の任意の実施形態では、試料採取装置を液体試薬組成物と接触させた後、ある期間の後、その組成物から実質的に定常状態の量の光が放出される。上述されるように、その期間は、接触が生じる温度の影響を受け得る。本開示の第１又は第２の方法の任意の実施形態では、実質的に定常状態の量の光は、２５秒未満で（例えば、約１０℃〜約２０℃の温度で接触が生じるとき）、その組成物から放出される。本開示の第１又は第２の方法の任意の実施形態では、実質的に定常状態の量の光は、約２２秒以下で（例えば、約１０℃〜約２０℃の温度で接触が生じるとき）、その組成物から放出される。いくつかの実施形態では、実質的に定常状態の量の光は、２０秒未満で（例えば、約１４℃〜約２０℃の温度で接触が生じるとき）、その組成物から放出される。いくつかの実施形態では、実質的に定常状態の量の光は、約１０秒以下で（例えば、約２０℃の温度で接触が生じるとき）、その組成物から放出される。
【００６６】
本発明の方法は、ＡＴＰ及び本開示による液体試薬組成物を含む試料と接触しているルシフェラーゼ酵素が、実質的に定常状態である発光反応を触媒するために必要な時間を、実質的に減少させる。
【００６７】
実施形態
実施形態Ａは、
照度計に動作可能に結合されるように適合された開口部及びキュベット部を有する容器と、
ルシフェリンを含む液体試薬組成物であって、閉鎖区画内に配設され、そのｐＨが約６．８以下である、液体試薬組成物と、
試料採取部を有する試料採取装置であって、
試料採取部が、試料を捕捉し、それを解放可能に保持するように適合され、
試料採取部が、繊維性材料又は発泡材料を含み、
試料採取装置が、液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える有効な量のｐＨ調整試薬を含むコーティングを備える、試料採取装置と、を備える、キットである。
【００６８】
実施形態Ｂは、
照度計に動作可能に結合されるように適合された開口部及びキュベット部を有する容器と、
ルシフェリンを含む液体試薬組成物であって、閉鎖区画内に配設され、そのｐＨが約６．８以下である、液体試薬組成物と、
試料採取部を有する試料採取装置であって、
試料採取部が、試料を捕捉し、それを解放可能に保持するように適合され、
試料採取部が、繊維性材料又は発泡材料を含み、
試料採取装置が、液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える有効な量のｐＨ調整試薬を含むコーティングを備える、試料採取装置と、を備える、器具である。
【００６９】
実施形態Ｃは、試料採取部が、所定の量の液体を取得するように適合される、実施形態Ａに記載のキット又は実施形態Ｂに記載の器具である。
【００７０】
実施形態Ｄは、コーティングの少なくとも一部が、試料採取装置の試料採取部上に配設される、実施形態Ａ〜Ｃのいずれか一つに記載のキット又は器具である。
【００７１】
実施形態Ｅは、ｐＨ調整試薬が水溶性試薬を含む、実施形態Ａ〜Ｄのいずれか一つに記載のキット又は器具である。
【００７２】
実施形態Ｆは、コーティングがドライコーティングを含む、実施形態Ａ〜Ｅのいずれか一つに記載のキット又は器具である。
【００７３】
実施形態Ｇは、コーティングが液体コーティングを含む、実施形態Ａ〜Ｅのいずれか一つに記載のキット又は器具である。
【００７４】
実施形態Ｈは、液体コーティングが保湿剤を含む、実施形態Ｇに記載のキット又は器具である。
【００７５】
実施形態Ｉは、閉鎖区画が脆弱な壁を含む、実施形態Ａ〜Ｈのいずれか一つに記載のキット又は器具である。
【００７６】
実施形態Ｊは、脆弱な壁が、開口部とキュベット部との間の容器内に配設される、実施形態Ｉに記載のキット又は器具である。
【００７７】
実施形態Ｋは、試料採取装置が、閉鎖区画を含み、試料採取装置が、容器から流体組成物を選択的に解放する構造を更に含む、実施形態Ａ〜Ｈのいずれか一つに記載のキット又は器具である。
【００７８】
実施形態Ｌは、ｐＨ調整試薬が、Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］（ＨＥＰＥＳ）、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（トリシン）、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される緩衝成分を含む、実施形態Ａ〜Ｋのいずれか一つに記載のキット又は器具である。
【００７９】
実施形態Ｍは、コーティングが、有効な量の細胞抽出剤を更に含む、実施形態Ａ〜Ｌのいずれか一つに記載のキット又は器具である。
【００８０】
実施形態Ｎは、ルシフェラーゼ酵素が、対応する非遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素よりも温度変化、イオン性洗剤及び還元剤に対して感受性が低いルシフェラーゼ活性を有する遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素を含む、実施形態Ａ〜Ｍのいずれか一つに記載のキット又は器具である。
【００８１】
実施形態Ｏは、ルシフェラーゼ酵素が、対応する非遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素よりも温度変化、イオン性洗剤及び還元剤に対して感受性が低いルシフェラーゼ活性を有する遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素から本質的になる、実施形態Ａ〜Ｍのいずれか一つに記載のキット又は器具である。
【００８２】
実施形態Ｐは、コーティングが、リン酸塩を含む有効な量の緩衝成分を含まない、実施形態Ａ〜Ｏのいずれか一つに記載のキット又は器具である。
【００８３】
実施形態Ｑは、所定の量は、約０．０１ミリリットル〜約０．２５ミリリットルである、実施形態Ａ〜Ｐのいずれか一つに記載のキット又は器具である。
【００８４】
実施形態Ｒは、
試料採取装置を使用して、所定の量の液体試料を取得する工程であって、
試料採取装置が、繊維性材料又は発泡材料を含む試料採取部を備え、
試料採取装置が、約６．８以下のｐＨを有する液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える有効な量のｐＨ調整試薬を含むコーティングを備え、
液体試薬組成物が、ルシフェリンを含む、所定の量の試料を取得する工程と、
所定の量の試料をｐＨ調整試薬及び容器内の液体試薬組成物と接触させて、反応混合物を形成する工程と、
照度計を使用して、反応混合物から放出された光を検出する工程と、を含み、
容器が、照度計に動作可能に結合されるように適合されたキュベット部を備える、方法である。
【００８５】
実施形態Ｓは、
試料採取装置を使用して、表面から残留物の試料を取得する工程であって、
試料採取装置が、繊維性材料又は発泡材料を含む試料採取部を備え、
試料採取装置が、約６．８以下のｐＨを有する液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のｐＨを６．９以上に変える有効な量のｐＨ調整試薬を含むコーティングを備え、
液体試薬組成物が、ルシフェリンを含む、表面から残留物の試料を取得する工程と、
残留物の試料を取得した後、試料及びｐＨ調整試薬を容器内の液体試薬組成物と接触させて、反応混合物を形成する工程と、
照度計を使用して、反応混合物から放出された光を検出する工程と、を含み、
容器が、照度計に動作可能に結合されるように適合されたキュベット部を備える、方法である。
【００８６】
実施形態Ｔは、コーティングが、ドライコーティングを含む、実施形態Ｒ又は実施形態Ｓに記載の方法である。
【００８７】
実施形態Ｕは、コーティングが、液体コーティングを含む、実施形態Ｒ又は実施形態Ｓに記載の方法である。
【００８８】
実施形態Ｖは、容器内の試料採取部及び液体試薬組成物を撹拌する工程を更に含む、実施形態Ｑ〜Ｔのいずれか一つに記載の方法である。
【００８９】
実施形態Ｗは、液体試薬組成物が、ルシフェラーゼ酵素を更に含む、実施形態Ｒ〜Ｖのいずれか一つに記載の方法である。
【００９０】
実施形態Ｘは、ルシフェラーゼ酵素が、対応する非遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素よりも温度変化、イオン性洗剤及び還元剤に対して感受性が低いルシフェラーゼ活性を有する遺伝子組み換え型ルシフェラーゼ酵素から本質的になる、実施形態Ｗに記載の方法である。
【００９１】
実施形態Ｙは、試料を含む試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることは、１０℃以上、３５℃以下の範囲内の温度で試料採取装置を液体試薬組成物と接触させることを含む、実施形態Ｒ〜Ｘのいずれか一つに記載の方法である。
【００９２】
実施形態Ｚは、試料採取装置を液体試薬組成物と接触させた後、実質的に定常状態の量の光が、２０秒未満でその組成物から放出される、実施形態Ｒ〜Ｙのいずれか一つに記載の方法である。
【００９３】
本発明の目的及び利点は、以下の実施例によって更に例示されるが、これらの実施例において列挙された特定の材料及びその量は、他の諸条件及び詳細と同様に本発明を過度に制限するものと解釈されるべきではない。
【実施例】
【００９４】
コーティング配合物１：
コーティング配合物１を表１に列挙される成分から溶液として調製し、実施例１〜５及び８〜１２における試料採取装置の繊維性試料採取部をコーティングするために使用した。コーティング配合物１のｐＨは、約８．５であった。
【００９５】
【表１】
0006377610.tif 000002
【００９６】
液体試薬組成物：
本明細書に記載される液体試薬組成物は、ルシフェリン及びルシフェラーゼ酵素を含む。液体試薬組成物を表２に列挙される成分を用いて溶液として調製した。配合物のｐＨは、約６．４であった。本開示の各容器の密封されたキュベット部内に収容された液体試薬組成物の総量は、約４２５マイクロリットルであった。
【００９７】
【表２】
0006377610.tif 000003
【００９８】
コーティング配合物２：
コーティング配合物２を表３に列挙される成分から溶液として調製し、比較例１〜５及び８〜１２における試料採取装置の繊維性試料採取部をコーティングするために使用した。コーティング配合物２のｐＨは、約７．２であった。
【００９９】
【表３】
0006377610.tif 000004
【０１００】
ＡＴＰ検査器具１の調製：
図４に記載される設計に類似する器具を使用した。２つの異なる市販の製品からの成分（試料採取装置成分及び容器成分）を組み合わせることによって器具を調製した。
【０１０１】
器具の容器成分を３Ｍ  Ｃｌｅａｎ−Ｔｒａｃｅ（商標）Ｗａｔｅｒ  Ｐｌｕｓ−Ｔｏｔａｌ  ＡＴＰ検査装置（製品番号ＡＱＴ２００，３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）から取得した。試料採取装置成分を装置から除去し、廃棄したが、容器成分を保存した。液体試薬組成物を収容した容器のキュベット部を表２に記載する。
【０１０２】
繊維性試料採取部を有する試料採取装置を３Ｍ  Ｃｌｅａｎ−Ｔｒａｃｅ（商標）Ｓｕｒｆａｃｅ  ＡＴＰ検査装置（製品番号ＵＸＬ−１００，３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）から取得した。繊維性試料採取部をポリエチレンテレフタレート繊維から調製した。試料採取装置成分を検査装置から除去し、残りの検査装置（即ち、容器成分）を廃棄した。次に、コーティング配合物１（表１）を用いて試料採取装置をコーティングした。試料採取装置の操作部を保持し、かつ繊維性試料採取部全体がコーティング配合物中に１５秒間浸漬される地点まで、装置の反対端をコーティング配合物１を収容する容器の中に浸すことによって、試料採取装置をコーティングした。試料採取装置をコーティング配合物から取り出した。試料採取装置のステム部を容器の側面で軽く叩くことによって、過剰なコーティング配合物を除去した。試料採取装置を約１７０マイクロリットルの配合物に保持した。試料採取装置及び容器が互いに対して第１の動作可能位置（図４）で組み立てられるように、コーティングされた試料採取装置を３Ｍ  Ｃｌｅａｎ−Ｔｒａｃｅ（商標）Ｗａｔｅｒ  Ｐｌｕｓ−Ｔｏｔａｌ  ＡＴＰ検査装置の容器部と直ちに組み合わせた。
【０１０３】
ＡＴＰ検査器具２の調製：
試料採取装置をコーティングするために使用される手順を除いて、ＡＴＰ検査器具２をＡＴＰ検査器１と同じように調製した。ＡＴＰ検査器２では、試料採取装置の操作部を保持し、かつ繊維性試料採取部全体がコーティング配合物中に１５秒間浸漬される地点まで、装置の反対端をコーティング配合物１を収容する容器の中に浸すことによって、試料採取装置をコーティングした。試料採取装置をコーティング配合物から取り出した。試料採取装置のステム部を容器の側面で軽く叩くことによって、過剰なコーティング配合物を除去した。次に、試料採取装置を薄板フローキャビネット内に配置し、少なくとも３時間にわたり２０℃で空気乾燥した。乾燥工程後、試料採取装置及び容器が互いに対して第１の動作可能位置で組み立てられる（図４）ように、コーティングされた試料採取装置を３Ｍ  Ｃｌｅａｎ−Ｔｒａｃｅ（商標）Ｗａｔｅｒ  Ｐｌｕｓ−Ｔｏｔａｌ  ＡＴＰ検査装置と組み合わせた。
【０１０４】
（実施例１）
上述されるＡＴＰ検査器具１を使用した。試料採取装置をＡＴＰ検査器具から除去し、１０マイクロリットルの１×１０−７Ｍの水溶液のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）をマイクロピペットを用いて繊維性試料採取部の中央部に添加した。試料採取装置を容器に再挿入した。試料採取装置を第１の動作可能位置から第２の動作可能位置まで移動させるために、試料採取装置のハンドルを押した。試料採取装置が容器中で移動することによって、脆弱なシールが破壊され、繊維性試料採取部は液体試薬組成物と直接接触した状態で位置付けられた。容器を垂直位置に保持し、激しく左右に（振り子運動）約５秒間振とうした。容器を振とうさせた後、器具のキュベット部を３Ｍ  Ｃｌｅａｎ−Ｔｒａｃｅ（商標）ＮＧ照度計（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮから市販される）に直ちに挿入し、測定値を相対発光量（ＲＬＵ）で記録した。ＲＬＵ測定値を７０秒間およそ１０秒毎に得た。前回の読み取り後、直ちにその照度計に対して新たな読み取りを開始することによってこれを達成した。計器が新しい読み取りをそれぞれ取得し、提示するのにおよそ１０秒を要するので、約１０秒毎にＲＬＵ測定値を得ることになった。全ての検査を１０℃の環境チャンバ内で行った。全ての材料及び設備を検査前にチャンバ内で平衡化した。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表４に示す。
【０１０５】
試料採取装置を、第１の操作位置から第２の操作位置に移動させることは、キュベットの液体試薬組成物のｐＨをｐＨ約６．４からｐＨ約７．２に上昇させる結果になった。
【０１０６】
比較例１
試料採取装置がコーティング配合物１の代わりにコーティング配合物２でコーティングされたことを除いて、実施例１と同じ手順を用いた。ＲＬＵ測定値を７０秒間１０秒毎に得た。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表５に示す。
【０１０７】
【表４】
0006377610.tif 000005
【０１０８】
【表５】
0006377610.tif 000006
【０１０９】
（実施例２）
検査が１５℃で行われたことを除いて、実施例１に記載したのと同じ手順に従った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表６に示す。
【０１１０】
比較例２
試料採取装置がコーティング配合物１の代わりにコーティング配合物２でコーティングされたことを除いて、実施例２と同じ手順を用いた。ＲＬＵ測定値を７０秒間にわたって１０秒ごとに取った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表７に示す。
【０１１１】
【表６】
0006377610.tif 000007
【０１１２】
【表７】
0006377610.tif 000008
【０１１３】
（実施例３）
検査が２０℃で行われたことを除いて、実施例１に記載したのと同じ手順に従った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表８に示す。
【０１１４】
比較例３
試料採取装置がコーティング配合物１の代わりにコーティング配合物２でコーティングされたことを除いて、実施例３と同じ手順を用いた。ＲＬＵ測定値を７０秒間にわたって１０秒ごとに取った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表９に示す。
【０１１５】
【表８】
0006377610.tif 000009
【０１１６】
【表９】
0006377610.tif 000010
【０１１７】
（実施例４）
検査が２５℃で行われたことを除いて、実施例１に記載したのと同じ手順に従った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表１０に示す。
【０１１８】
比較例４
試料採取装置がコーティング配合物１の代わりにコーティング配合物２でコーティングされたことを除いて、実施例４と同じ手順を用いた。ＲＬＵ測定値を７０秒間にわたって１０秒ごとに取った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表１１に示す。
【０１１９】
【表１０】
0006377610.tif 000011
【０１２０】
【表１１】
0006377610.tif 000012
【０１２１】
（実施例５）
検査が３０℃で行われたことを除いて、実施例１に記載したのと同じ手順に従った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表１２に示す。
【０１２２】
比較例５
試料採取装置がコーティング配合物１の代わりにコーティング配合物２でコーティングされたことを除いて、実施例５と同じ手順を用いた。ＲＬＵ測定値を７０秒間にわたって１０秒ごとに取った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表１３に示す。
【０１２３】
【表１２】
0006377610.tif 000013
【０１２４】
【表１３】
0006377610.tif 000014
【０１２５】
（実施例６）
実施例１〜５及び対応する比較例１〜５の検査試料に対して、第１の時点（１０秒）から第２の時点（２０秒）のＲＬＵ測定値の増加率を以下の等式を用いて計算した。
ＲＬＵの増加％＝｛［（２０秒におけるＲＬＵ）−（１０秒におけるＲＬＵ）］／（１０秒におけるＲＬＵ）｝×１００
【０１２６】
ＲＬＵ測定値の平均増加百分率（ｎ＝５）を表１４に報告する。
【０１２７】
【表１４】
0006377610.tif 000015
【０１２８】
（実施例７）
実施例１〜５及び対応する比較例１〜５の検査試料に対して、最大ＲＬＵ測定値に達するまでの平均時間（ｎ＝５）を決定した。その結果を表１５に報告する。
【０１２９】
【表１５】
0006377610.tif 000016
【０１３０】
（実施例８）
ＡＴＰ検査器具２がＡＴＰ検査器具１の代わりに使用されたことを除いて、実施例１に記載したのと同じ手順に従った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表１６に示す。
【０１３１】
比較例８
試料採取装置がコーティング配合物１の代わりにコーティング配合物２でコーティングされたことを除いて、実施例８と同じ手順を用いた。ＲＬＵ測定値を７０秒間にわたって１０秒ごとに取った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表１７に示す。
【０１３２】
【表１６】
0006377610.tif 000017
【０１３３】
【表１７】
0006377610.tif 000018
【０１３４】
（実施例９）
検査が１５℃で行われたことを除いて、実施例８に記載したのと同じ手順に従った。合計５つの反復試験試料を検査し、結果を表１８に提示する。
【０１３５】
比較例９
試料採取装置がコーティング配合物１の代わりにコーティング配合物２でコーティングされたことを除いて、実施例９と同じ手順を用いた。ＲＬＵ測定値を７０秒間１０秒毎に得た。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表１９に示す。
【０１３６】
【表１８】
0006377610.tif 000019
【０１３７】
【表１９】
0006377610.tif 000020
【０１３８】
（実施例１０）
検査が２０℃で行われたことを除いて、実施例８に記載したのと同じ手順に従った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表２０に示す。
【０１３９】
比較例１０
試料採取装置がコーティング配合物１の代わりにコーティング配合物２でコーティングされたことを除いて、実施例１０と同じ手順を用いた。ＲＬＵ測定値を７０秒間にわたって１０秒ごとに取った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表２１に示す。
【０１４０】
【表２０】
0006377610.tif 000021
【０１４１】
【表２１】
0006377610.tif 000022
【０１４２】
（実施例１１）
検査が２５℃で行われたことを除いて、実施例８に記載したのと同じ手順に従った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表２２に示す。
【０１４３】
比較例１１
試料採取装置がコーティング配合物１の代わりにコーティング配合物２でコーティングされたことを除いて、実施例１１と同じ手順を用いた。ＲＬＵ測定値を７０秒間にわたって１０秒ごとに取った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表２３に示す。
【０１４４】
【表２２】
0006377610.tif 000023
【０１４５】
【表２３】
0006377610.tif 000024
【０１４６】
（実施例１２）
検査が３０℃で行われたことを除いて、実施例８に記載したのと同じ手順に従った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表２４に示す。
【０１４７】
比較例１２
試料採取装置がコーティング配合物１の代わりにコーティング配合物２でコーティングされたことを除いて、実施例１２と同じ手順を用いた。ＲＬＵ測定値を７０秒間にわたって１０秒ごとに取った。合計５つの複製試料の試験を行い、結果を表２５に示す。
【０１４８】
【表２４】
0006377610.tif 000025
【０１４９】
【表２５】
0006377610.tif 000026
【０１５０】
（実施例１３）
実施例８〜１２及び対応する比較例８〜１２の検査試料に対して、第１の時点（１０秒）から第２の時点（２０秒）のＲＬＵ測定値の増加率を以下の等式を用いて計算した。
ＲＬＵの増加％＝｛［（２０秒におけるＲＬＵ）−（１０秒におけるＲＬＵ）］／（１０秒におけるＲＬＵ）｝×１００
【０１５１】
ＲＬＵ測定値の平均増加百分率（ｎ＝５）を表２６に報告する。
【０１５２】
【表２６】
0006377610.tif 000027
【０１５３】
（実施例１４）
実施例８〜１２及び対応する比較例８〜１２の検査試料に対して、最大ＲＬＵ測定値に達するまでの平均時間（ｎ＝５）を決定した。結果を表２７に報告する。
【０１５４】
【表２７】
0006377610.tif 000028
【０１５５】
本明細書に引用するすべての特許、特許出願、及び公開公報、並びに電子的に入手可能な資料の開示内容の全体を、参照により援用する。本出願の開示内容と本明細書に援用されるいずれかの文書の開示内容との間になんらかの矛盾が存在する場合には、本出願の開示内容が優先するものとする。上記の詳細な説明及び実施例は、あくまで理解を助ける明確さのために示したものである。これらによって不要な限定をするものと理解されるべきではない。本発明は、示され記載された厳密な詳細事項に限定されるべきではないが、それは当業者に対して明らかな変形が特許請求の範囲において規定された本発明の範囲に包含されるからである。
【０１５６】
全ての見出しは、読者の利便性のためであり、指定のない限り、その見出しに続く本文の意味を限定するために使用するべきではない。
【０１５７】
本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく様々な改変を行うことが可能である。これら及び他の実施形態は以下の「特許請求の範囲」に含まれる。
【図１】
0006377610.tif 000029
【図２】
0006377610.tif 000030
【図３】
0006377610.tif 000031
【図４】
0006377610.tif 000032
【図５】
0006377610.tif 000033