(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（I）に示す化合物若しくはその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又はその混合物、又は薬学的に許容されるその塩：
【化１】
0006412656.tif 000023
式中、
Ａ、ＢがＣＲ４から選択され、ここで、Ｒ４が水素、ハロゲン、及びアルキルから選択され、
ＸがＯ又はＮＲ５から選択され、ここで、Ｒ５が水素及びアルキルから選択され、
Ｒ１がアルキル及びヘテロシクロアルキルから選択され；前記アルキル及びヘテロシクリルアルキルが更に１又は複数の、水素、ハロゲン、及びアルキルから選択される置換基に置換され、
Ｒ２がアルキルスルホニル、ヘテロシクロアルキル、アルコキシ、アルキルアシル、フェノキシ、アルキルアミノから選択され；前記アルキルスルホニル、ヘテロシクロアルキル、アルコキシ、アルキルアシル、フェノキシ、アルキルアミノが更に１又は複数の、水素、ハロゲン、及びアルキルから選択される置換基に置換され、
Ｒ３が水素、ハロゲン、及びアルキルから選択される。
【請求項２】
Ａ、ＢがＣＲ４から選択され、Ｒ４が水素から選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）に示す化合物若しくはその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又はその混合物、又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
前記化合物が以下のいずれかの化合物から選択される，請求項１又は２に記載の式（Ｉ）に示す化合物若しくはその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又はその混合物、又は薬学的に許容されるその塩。
【化２】
0006412656.tif 000024
【請求項４】
有効な投与量の請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物若しくはその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又はその混合物、又は薬学的に許容されるその塩；及び薬学的に許容される担体、賦形剤、又は希釈剤を含有する、医薬組成物。
【請求項５】
胃酸分泌抑制薬である、請求項１〜４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
Ｈ＋／Ｋ＋ＡＴＰａｓｅ阻害剤の調製における請求項５に記載の医薬組成物の使用。
【請求項７】
カリウムイオン競合型アシッドブロッカーの調製における請求項６に記載の医薬組成物の使用。
【請求項８】
消化性潰瘍、ゾリンジャー・エリスン症候群、胃炎、びらん性食道炎、逆流性食道炎、症候性胃食道逆流症、バレット食道、機能性消化不良、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃癌、胃ＭＡＬＴリンパ腫、非ステロイド系抗炎症薬誘発性胃潰瘍、手術後ストレスによる胃酸過多若しくは潰瘍の予防・治療用薬の調製、又は消化性潰瘍、急性ストレス潰瘍、出血性胃炎・侵入的ストレスによる上部消化管出血を抑制するための薬物の調製における、請求項７に記載の医薬組成物の使用。
【請求項９】
前記消化性潰瘍が胃潰瘍、十二指腸潰瘍、又は吻合部潰瘍を含み、前記症候性胃食道逆流症が非びらん性逆流症、食道炎のない胃食道逆流症を含む、請求項８に記載の医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規なピロールスルホニル誘導体及びその製造方法、該誘導体を含有する医薬組成物、並びにその治療薬としての、特に胃酸分泌抑制剤やカリウムイオン競合型アシッドブロッカー（Ｐ−ＣＡＢｓ）としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
１９８８年以来、オメプラゾールを初めとするプロトンポンプ阻害剤が、胃酸分泌を抑制することにより、消化性潰瘍、逆流性食道炎、ゾリンジャー・エリスン症候群等を治療することは、臨床診療において広く使用されていた。従来のプロトンポンプ阻害剤は、長期的臨床応用において、薬物動態学的・薬力学的側面において制限、例えば、投薬時間から薬効への影響、夜間胃酸急増に対する効果発現の遅延、酸性環境での不安定性（腸溶製剤にする必要）、ＣＹＰ４５０酵素に対する依存（著しい個体差につながる）等があることに気付いた。
【０００３】
カリウムイオン競合型アシッドブロッカー（Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ−Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ  Ａｃｉｄ  Ｂｌｏｃｋｅｒ，Ｐ−ＣＡＢｓ）は直接・可逆過程を通じて競合的にＨ＋／Ｋ＋−ＡＴＰ酵素にあるＫ＋を抑制する。従来のプロトンポンプ阻害剤に比べて、Ｐ−ＣＡＢｓは親油性、弱塩基性、高解離定数及び低pＨの条件下での安定性という特徴がある。酸性環境では、Ｐ−ＣＡＢｓはイオン化形態でＨ＋／Ｋ＋−ＡＴＰ酵素と結合し、Ｈ＋の輸送及び胃内腔へ酸の分泌を抑制することにより、急速に胃のｐＨ値を上げる。動物実験及び臨床研究によると、Ｐ−ＣＡＢｓは効果発現が早く、１時間以内に最大限の治療効果を得ることができ、また、血漿中濃度が経口投与量と線形関係になり、容易に最もよい酸抑制効果を得ることができると認められた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、これまで様々なカリウムイオン競合型アシッドブロッカーが開示されたが、構造タイプがより豊かで、よりドラッガブルである新規な化合物を開発する必要がある。たゆまない努力を通じて、本発明は式（Ｉ）に示す構造を持つ、優れた効果を有する化合物を開示する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本願は、式（Ｉ）に示す胃酸分泌阻害剤及びその使用方法を提供し、以下に詳述する。
【０００６】
本願は、式（Ｉ）に示す化合物若しくはその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又はその混合物、又は薬学的に許容されるその塩を提供する。
【化１】
0006412656.tif 000002
【０００７】
式中、
Ａ、Ｂが独立してＮ又はＣＲ４から選択され、ここで、Ｒ４が水素、ハロゲン、及びアルキルから選択され、
ＸがＯ又はＮＲ５から選択され、ここで、Ｒ５が水素及びアルキルから選択され、
Ｒ１がアルキル及びヘテロシクロアルキルから選択され；前記アルキル及びヘテロシクリルアルキルが更に１又は複数の、水素、ハロゲン、及びアルキルから選択される置換基に置換され、
Ｒ２がアルキルスルホニル、ヘテロシクロアルキル、アルコキシ、アルキルアシル、フェノキシ、アルキルアミノから選択され；前記アルキルスルホニル、ヘテロシクロアルキル、アルコキシ、アルキルアシル、フェノキシ、アルキルアミノが更に１又は複数の、水素、ハロゲン、及びアルキルから選択される置換基に置換され、
Ｒ３が水素、ハロゲン、及びアルキルから選択される。
【０００８】
更に、Ａ、ＢがＣＲ４から選択され、Ｒ４が水素から選択される。
【０００９】
更に、前記化合物は以下のいずれかの化合物から選択される。
【化２】
0006412656.tif 000003
【００１０】
本発明に係る医薬組成物は、請求項１〜３のいずれかに示す有効な投与量の化合物、若しくはその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又はその混合物、或いは薬学的に許容されるその塩及び薬学的に許容される担体・賦形剤・希釈剤を含有する。
【００１１】
本発明に係る胃酸分泌を抑制するための方法は、治療を必要とする患者に対し、有効な投与量の、式（Ｉ）に示す化合物、若しくはその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又はその混合物、或いは薬学的に許容されるその塩又はそれを含有する医薬組成物を投与する。
【００１２】
本発明は、式（Ｉ）に示す化合物、若しくはその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又はその混合物、或いは薬学的に許容されるその塩又はそれを含有する医薬組成物を、Ｈ＋／Ｋ＋−アデノシントリホスファターゼ（Ｈ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ）阻害剤の調製に使用する用途も提供する。
【００１３】
本発明は、式（Ｉ）に示す化合物、若しくはその互変異性体、メソ体、ラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、又はその混合物、或いは薬学的に許容されるその塩又はそれを含有する医薬組成物を、カリウムイオン競合型アシッドブロッカー（Ｐ−ＣＡＢｓ）の調製に使用する用途も提供する。
【００１４】
本発明は、消化性潰瘍、ゾリンジャー・エリスン症候群、胃炎、びらん性食道炎、逆流性食道炎、症候性胃食道逆流症、バレット食道、機能性消化不良、ヘリコバクター・ピロリ感染、胃癌、胃ＭＡＬＴリンパ腫、非ステロイド系抗炎症薬誘発性胃潰瘍、手術後ストレスによる胃酸過多や潰瘍の予防・治療用薬の調製に使用され、あるいは消化性潰瘍、急性ストレス潰瘍、出血性胃炎・侵入的ストレスによる上部消化管出血を抑制するための薬物の調製に使用される方法を提供する。そのうち、前記消化性潰瘍が胃潰瘍、十二指腸潰瘍又は吻合部潰瘍を含み、前記症候性胃食道逆流症が非びらん性逆流症、食道炎のない胃食道逆流症を含む。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
反対の表記がない限り、明細書及び特許請求の範囲に使用される以下の用語は、次の意味がある。
【００１６】
アルキルとは飽和脂肪族炭化水素基を言う。１〜２０個の炭素原子より構成される直鎖状基又は分枝鎖基を含有する。１〜６個の炭素原子を含有する中サイズのアルキルが好適である。例えば、メチル、エチル、プロピル、２−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル等。１〜４個の炭素原子を含有する低級アルキルがさらに好適である。例えば、メチル、エチル、プロピル、２−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル等。アルキルは置換又は非置換であってもよい。置換の場合、ハロゲン、Ｃ２−Ｃ６アルケニル基、Ｃ６−Ｃ１０アリール基、Ｃ５−Ｃ１０ヘテロアリール基、ハロゲン化Ｃ１−Ｃ６アルキル、４〜８員ヘテロ脂環基、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ基、Ｃ６−Ｃ１０アリールオキシ基が好適である。
【００１７】
ヘテロシクロアルキルは単環又は縮合環基を指す。環に５〜９個の環原子を有し、その中の１個又は２個の環原子がＮ、Ｏ又はＳ（Ｏ）ｐ（そのうち、ｐは０〜２の整数である）から選択されるヘテロ原子であり、残った環原子がＣである。これらの環は１又は複数の二重結合を持つことができるが、完全に共役したπ：電子システムを持たない。未置換のヘテロ脂環基の非限定的な例としては、ピロリジニル、ピペリジノ、ピペラジノ、モルフォリノ、チオモルホリノ、ホモピペラジンジノ等がある。ヘテロ脂環基は置換又は非置換であってもよい。置換の場合、１又は複数の置換基が好適であり、１個、２個、又は３個の置換基がより好適であり、１個又は２個の置換基が更に好適である。前記置換基は水素、ヒドロキシル、メルカプト、オキソ、低級アルキル、低級アルコキシ、低級シクロアルキル、低級ヘテロ脂環基、低級ハロアルコキシ、アルキルチオ基、ハロゲン、低級ハロアルキル、低級ヒドロキシアルキル、低級シクロアルキレン、低級ヘテロ脂環基アルキ、アリール、ヘテロアリール、アルコキシカルボニル、アミノ、アルキルアミノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アルキルアミノスルホニル、アリールアミノスルホニル、アルキルスルホニルアミノ、アリールスルホニルアミノ、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノから選択される。特に明記しない限り、ヘテロ脂環基の例としてモルホリニル、ピペラジニル、ピペリジニル、アゼチジン、ピロリジニル、ヘキサヒドロアゼピノ、オキセタニル、テトラヒドロフラ、テトラヒドロチエニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、テトラヒドロピラニ、チオモルホリノ、キヌクリジニル、及びイミダゾリニルを含むが、これらに限定されない。上記のように各原子団は二環式であってもよい。例えば、３，８−ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン、２，５−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン又はオクタヒドロ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，４］オキサジンが挙げられる。そのヘテロ脂環基（及び誘導体）は、そのイオン形態を含む。
【００１８】
「アルコキシ」は−Ｏ−（非置換のアルキル）及び−Ｏ（非置換のシクロアルキル）である。代表的な例として、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ等を含むがこれらに限定されない。
【００１９】
「アルキルスルホニル」は、−Ｓ（Ｏ２）−アルキルである。
【００２０】
「アルキルアミノ」は−ＮＨ−アルキルである。
【００２１】
「アルキルアシル」は
【化３】
0006412656.tif 000004
であり、Ｒは低級アルキルである。
【００２２】
「ヒドロキシ」は−ＯＨ原子団である。
【００２３】
「ハロゲン」はフッ素、塩素、臭素、又はヨウ素であり、フッ素又は塩素が好適である。
【００２４】
「いずれか」とは、後発事象又は状況が発生するか発生しない可能性があり、かつ、この表記に含まれる物事や状況が発生するか発生しない可能性があり、かつ、この表記に含まれる物事や状況が発生するか発生しないことをいう。
【００２５】
一部の実施形態において、「１又は複数の基に置換される」とは、指定された原子又は原子団にある１個、２個、３個、又は４個の水素原子が、それぞれ指定範囲における基から選択される同一又は異なる基に置換されることをいう。
【００２６】
「薬学的に許容されるその塩」とは、親化合物の生物学的有効性及び性質を保持しているその塩をいう。このような塩として次のものを含む。
【００２７】
（１）酸付加塩。親化合物の遊離塩基と無機酸又は有機酸との反応により得るものであり、無機酸として塩酸、臭化水素酸、硝酸、リン酸、メタリン酸、硫酸、亜硫酸、過塩素酸等を含み、有機酸として酢酸、プロピオン酸、アクリル酸、シュウ酸、（Ｄ）又は（Ｌ）リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、ヒドロキシ安息香酸、γ−ヒドロキシ酪酸、メトキシ安息香酸、フタル酸、メシル酸、エチルスルホン酸、ナフタレン−１−スルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サルチル酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、マンデル酸、コハク酸、マロン酸等を含む。
【００２８】
（２）親化合物にある酸性プロトンが金属イオンに置換されるか、有機塩基との配位化合による塩；金属イオン（アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオンやアルミイオン等）、有機塩基（エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミン等）。
【００２９】
「医薬組成物」とは、１又は複数の本発明に係る化合物又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、アコ錯体、若しくはプロドラッグと、薬学的に許容される担体等のその他の化学成分との混合物を言う。医薬組成物は、動物への投与のプロセスを促進することを目的とする。
【００３０】
「薬学的に許容される担体」とは、有機体に有意な刺激を引き起こさなく、且つ、投与される化合物の生物学的活性と性質に影響しない医薬組成物にある不活性成分を言う。例えば、炭酸カルシウムやリン酸カルシウム、種々の糖（例えばラクトース、マンニトール等）、デンプン、シクロデキストリン、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、炭酸マグネシウム、アクリルポリマー、メタクリルポリマー、ゲル、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エチレングリコール、ヒマシ油、水添ヒマシ油、ポリエトキシル水添ヒマシ油、ゴマ油、トウモロコシ油、ピーナッツ油等。
【００３１】
前述医薬組成物は、薬学的に許容される担体に加え、薬学（薬物）的に一般的に使用される補助剤を含む。例えば、抗菌剤、抗真菌剤、抗微生物剤、品質保証剤、調色剤、可溶化剤、増粘剤、界面活性剤、錯化剤、タンパク質、アミノ酸、脂肪、炭水化物、ビタミン、ミネラル、微量元素、甘味剤、着色料、香料又はそれらのものの結合物等。
【実施例】
【００３２】
以下実施例と結びつけて本発明を更に説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【００３３】
実施例１
１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（３−メトキシプロポキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ１）の合成
【化４】
0006412656.tif 000005
【００３４】
１）１−（３−メトキシプロポキシ）−ニトロベンゼン（化合物２）の合成
３−ニトロフェノール（化合物１、１．０ｇ、７．１９ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（２．９ｇ、２１．６ｍｍｏｌ）及び１−ブロモ−３−メトキシプロパン（１．６５ｇ、１０．７９）を無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、９０℃で一晩攪拌し、水（５０ｍＬ）を加え、酢酸エチルで抽出し（５０ｍＬ×３）、有機相を合わせ乾燥・濃縮を行い、黄色固体の１−（３−メトキシプロポキシ）−ニトロベンゼン（化合物２、１．５ｇ、収率１００％）を得た。
【００３５】
２）１−（３−メトキシプロポキシ）−アニリン（化合物３）の合成
１−（３−メトキシプロポキシ）−ニトロベンゼン（化合物２、１．０ｇ、４．７４ｍｍｏｌ）、Ｒａｎｅｙ  Ｎｉ（１００ｍｇ）を無水メタノール（２０ｍＬ）溶液に溶解し、水素雰囲気下、室温で一晩攪拌した。濾過し、脱水機にかけ固体の１−（３−メトキシプロポキシ）−アニリン（化合物３、０．８０ｇ、収率９１％）を得た。
【００３６】
３）１−（３−メトキシプロポキシ）−塩化ベンゼンスルホニル（化合物４）の合成
０℃で亜硝酸ナトリウム（５７１ｍｇ、８．２９ｍｍｏｌ）を何回かに分けて１−（３−メトキシプロポキシ）−アニリン（化合物３、１．０ｇ、５．５２ｍｍｏｌ）の酢酸（１０ｍＬ）・塩酸水溶液（２Ｎ、１０ｍＬ）に加える。０℃で２５分間攪拌し、溶液Ｉを得た。０℃で塩化第一銅（１９０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を二酸化イオウの酢酸溶液（１０ｍＬ、２Ｎ）に加え、溶液ＩＩを得た。０℃で溶液Ｉを溶液ＩＩに滴加し、滴加が終了後、自然な状態で室温に温め、３時間攪拌・反応した。酢酸エチル（１５０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ乾燥・濃縮・カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１）を行い、黄色のオイル状物質１−（３−メトキシプロポキシ）−塩化ベンゼンスルホニル（化合物４、８００ｍｇ、収率５５%）を得た。
【００３７】
４）５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（３−メトキシプロポキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−ホルムアルデヒド（化合物５）の合成
０℃でｔ−ＢｕＯＫ（２３３ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を５−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピロール−３−ホルムアルデヒド（２００ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に加え、０℃で３０分間攪拌して反応させた。反応終了後、１５−クラウン（ｃｒｏｗｎ）−５（５４２ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）と１−（３−メトキシプロポキシ）−塩化ベンゼンスルホニル（化合物４、４１２ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を加えた。添加後、自然な状態で室温に温め、９０分間攪拌して反応させた。反応終了後、氷水（５０ｇ）で急冷し、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ、乾燥・濃縮・カラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝８：１）を行い、黄色固体の５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（３−メトキシプロポキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−ホルムアルデヒド（２６０ｍｇ、収率６０％）を得た。
【００３８】
５）１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（３−メトキシプロポキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ１）の合成
５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（３−メトキシプロポキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−ホルムアルデヒド（化合物５、５００ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）、酢酸（１４４ｍｇ、２．３９ｍｍｏｌ）、メタンアミンのアルコール溶液（１ｍＬ）を無水メタノール３ｍＬに溶解し、室温で４時間攪拌した。ＮａＢＨ３ＣＮ（２１２ｍｇ、３．５９ｍｍｏｌ）を加え、６０分間撹拌した。氷水（３０ｇ）で急冷し、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機相を合わせ乾燥、濃縮、カラムクロマトグラフィーを行い、白色固体の１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（３−メトキシプロポキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ１、１００ｍｇ、２０％）を得た。
【００３９】
ＨＰＬＣ：９９．４％；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３３．０；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．７２（s、１Ｈ），７．７８（ｄ，１Ｈ），７．４６−７．５５（ｍ，２Ｈ），７．２１−７．３２（ｍ，３Ｈ），６．８５−７．１１（ｍ，２Ｈ），６．８３−６．８５（ｍ，１Ｈ），６．４４（ｄ，１Ｈ），３．９５−４．０２（ｍ，４Ｈ），３．４７（ｔ，２Ｈ），３．３２（ｓ，３Ｈ），２．５２（ｍ，３Ｈ），１．９４（ｔ，２Ｈ）ｐｐｍ。
【００４０】
実施例２
１−（３−（３−（（２−（２−フルオロフェニル）−４−（（メチルアミノ）メチル）−１Ｈ−ピロール−１−イル）スルホニル）フェノキシ）ピロリジン−１−イル）エチル−１−オン（ＥＸＰ２）の合成
【化５】
0006412656.tif 000006
【００４１】
実施例１の合成方法を参照し、白色の固体化合物１−（３−（３−（（２−（２−フルオロフェニル）−４−（（メチルアミノ）メチル）−１Ｈ−ピロール−１−イル）スルホニル）フェノキシ）ピロリジン−１−イル）エチル−１−オン（ＥＸＰ２）を得た。収率は６５％である。
【００４２】
ＨＰＬＣ：９４．８％；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７２．１；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．７５（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），７．４８−７．５３（ｍ，２Ｈ），７．３５（ｔ，１Ｈ），７．２２−７．２５（ｍ，２Ｈ），７．０４−７．０９（ｍ，２Ｈ），６．８６−６．８８（ｍ，１Ｈ），６．４５（ｄ，１Ｈ），４．７７−４．７９（ｍ，１Ｈ），４．０１（ｓ，２Ｈ），３．３９−３．６４（ｍ，４Ｈ），２．５５（ｄ，３Ｈ），１．８６−２．０９（ｍ，４Ｈ）ｐｐｍ。
【００４３】
実施例３
１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ３）の合成
【化６】
0006412656.tif 000007
【００４４】
実施例１の合成方法を参照し、化合物１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（２−メトキシエトキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ３）８０ｍｇを得た。収率は１０％であった。
【００４５】
ＨＰＬＣ：９６．５％；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４１９．２；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ：７．４４（ｄ，１Ｈ），７．４２（ｍ，１Ｈ），７．３７（ｔ，１Ｈ），７．０４−７．１９（ｍ，５Ｈ），６．８９（ｔ，１Ｈ），６．２８（ｄ，１Ｈ），４．０３（ｔ，２Ｈ），３．７２（ｔ，２Ｈ），３．６３（ｓ，２Ｈ），３．４２（ｄ，３Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。
【００４６】
実施例４
１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（３−メチルスルホプロポキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ４）の合成
【化７】
0006412656.tif 000008
【００４７】
実施例１の合成方法を参照し、化合物１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（３−メチルスルホプロポキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ４）７０ｍｇを得た。収率は２０％であった。
【００４８】
ＨＰＬＣ：９４．２８％；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８１．２；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ：７．４５（ｍ，２Ｈ），７．３４（ｔ，１Ｈ），７．０６−７．１９（ｍ，５Ｈ），６．８９（ｔ，１Ｈ），６．２８（ｄ，１Ｈ），４．０６（ｔ，２Ｈ），３．５９（ｓ，２Ｈ），３．３４（ｍ，２Ｈ），３．４２（ｄ，３Ｈ），３．０１（ｓ，３Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），２．２７（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ。
【００４９】
実施例５
１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（２−モルホリニルエトキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ５）の合成
【化８】
0006412656.tif 000009
【００５０】
１）４−（２−（３−ブロモフェノキシ）エチル）モルホリン（化合物Ａ）の合成
３−ブロモフェノール（ＳＭ−１、５ｇ、２９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、Ｎ−（２−クロロエチル）モルホリン（ＳＭ−２、４．３ｇ、２９ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、及び炭酸カリウム（８ｇ、５８ｍｍｏｌ、２ｅｑ）を乾燥ＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解し、室温で一晩攪拌し、ＴＬＣで反応が完了したことを検出した。水を加え、ＥＡで抽出し、有機層を乾燥するまで蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによる分離で化合物Ａ（９ｇ、収率９０%）を得た。
【００５１】
２）３−（２−モルホリニルエトキシ）塩化ベンゼンスルホニル（化合物Ｂ）の合成
化合物Ａ（４ｇ、１４ｍｍｏｌ、１ｅｑ）を無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解し、−７８℃まで冷却させ、ｎ−ＢｕＬｉ（１３ｍＬ、２１ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加え、−７８℃で１時間攪拌し、反応溶液に二酸化硫黄ガスを２０分間導入し、且つ２時間内に−７８℃から０℃まで昇温させた。反応溶液を濃縮し乾燥するまで蒸発させ、ＤＣＭ（５０ｍＬ）及びＮ−クロロスクシンイミド（ＮＣＳ，２．８ｇ、２１ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加え、継続的に１２時間撹拌した。反応溶液について直接カラムクロマトグラフィーによる分離を行い、化合物Ｂ（２ｇ、収率５０%）を得た。
【００５２】
３）５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（２−モルホリニルエトキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−ホルムアルデヒド（化合物Ｃ）の合成
化合物ＳＭ−３（１．２ｇ、６．５ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解し、０℃まで冷却させ、ＮａＨ（０．４ｇ、９．８ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）を加え、０℃で０．５時間攪拌した。化合物Ｂ（２ｇ、６．５ｍｍｏｌ、１ｅｑ）と１５−ｃｒｏｗｎ−５（２ｇ）を反応溶液に加え、室温で０．５時間撹拌し、水を加え、ＥＡで抽出し、有機層を乾燥するまで蒸発させ、カラムクロマトグラフィーによる分離で化合物Ｃ（７００ｍｇ、収率３０%）を得た。
【００５３】
４）１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（２−モルホリニルエトキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ５）の合成
化合物Ｃ（０．７ｇ、１．５３ｍｍｏｌ、１ｅｑ）をメタノール（５ｍＬ）に溶解し、メタンアミンのアルコール溶液（４ｍＬ）を加え、０℃で酢酸（２ｍＬ）を加えて２時間撹拌し、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（０．９ｇ、１５．３ｍｍｏｌ、１０ｅｑ）を加えて継続的に１４時間撹拌し、ＬＣ−ＭＳで反応が完了したことを検出してから、炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、ＥＡで抽出し、有機層を乾燥するまで蒸発させ、化合物ＥＸＰ５（１００ｍｇ、収率１５%）を得た。
【００５４】
ＨＰＬＣ：９６．０６％；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７４．６；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：７．４２−７．５１（ｍ，３Ｈ），
７．１７−７．２７（ｍ，３Ｈ），７．０８−７．１２（ｍ，１Ｈ），７．０２（ｄ，１Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），６．３２（ｓ，１Ｈ），４．０３（ｔ，２Ｈ），３．５７（ｔ，４Ｈ），３．５０（ｓ，２Ｈ），２．６６（ｔ，２Ｈ），２．４５−２．５０（ｍ，４Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。
【００５５】
実施例６
３−（（２−（２−フルオロフェニル）−４−（（メチルアミノ）メチレン）−１Ｈ−ピロール−１−イル）スルホニル）−Ｎ−（２−モルホリニルエチル）アニリン（ＥＸＰ６）の合成
【化９】
0006412656.tif 000010
【００５６】
実施例５の合成方法を参照し、化合物３−（（２−（２−フルオロフェニル）−４−（（メチルアミノ）メチレン）−１Ｈ−ピロール−１−イル）スルホニル）−Ｎ−（２−モルホリニルエチル）アニリン（ＥＸＰ６）１００ｍｇを得た。収率は２０％であった。
【００５７】
ＨＰＬＣ：９６．９９％；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７３．６；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：７．５７（ｄ，１Ｈ），７．４８（ｑ，１Ｈ），７．１７−７．２４（ｍ，３Ｈ），７．０８−７．１２（ｍ，１Ｈ），６．８５（ｄ，１Ｈ），６．５５−６．５８（ｍ，１Ｈ），６．３８（ｓ，１Ｈ），６．１１（ｔ，１Ｈ），３．８３（ｓ，２Ｈ），３．５９（ｓ，４Ｈ），３．０３（ｑ，２Ｈ），２．３９−２．４４（ｍ，９Ｈ）ｐｐｍ。
【００５８】
実施例７
３−（３−（（２−（２−フルオロフェニル）−４−（（メチルアミノ）メチレン）−１Ｈ−ピロール−１−イル）スルホニル）フェノキシ）−Ｎ−メチル−ｎ−プロピルアミン（ＥＸＰ７）の合成
【化１０】
0006412656.tif 000011
【００５９】
実施例５の合成方法を参照し、化合物３−（３−（（２−（２−フルオロフェニル）−４−（（メチルアミノ）メチレン）−１Ｈ−ピロール−１−イル）スルホニル）フェノキシ）−Ｎ−メチル−ｎ−プロピルアミン（ＥＸＰ７）８０ｍｇを得た。収率は４０％であった。
【００６０】
ＨＰＬＣ：９５．８４％；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３２．２；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：７．４０−７．５１（ｍ，３Ｈ），７．１８−７．２５（ｍ，３Ｈ），７．０３−７．１３（ｍ，１Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），６．３１（ｓ，１Ｈ），３．３９（ｔ，２Ｈ），３．４６（ｓ，２Ｈ），２．５９（ｔ，２Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），１．８１（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ。
【００６１】
実施例８
１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（モルホリニル−２−イルメトキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ８）の合成
【化１１】
0006412656.tif 000012
【００６２】
実施例５の合成方法を参照し、化合物１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（モルホリニル−２−イルメトキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン１００ｍｇを得た。収率は２０％であった。
【００６３】
ＨＰＬＣ：９５．７５％；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４６０．２，［Ｍ＋Ｎａ］＋＝４８２．２；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：７．４４−７．４７（ｍ，３Ｈ），７．１８−７．２８（ｍ，３Ｈ），７．０４−７．１３（ｍ，１Ｈ），７．０２（ｄ，１Ｈ），６．８６（ｓ，１Ｈ），６．３１（ｄ，１Ｈ），３．８６（ｄ，２Ｈ），３．６５−３．７５（ｍ，２Ｈ），３．４４−３．４８（ｍ，３Ｈ），２．８２−２．８５（ｍ，１Ｈ），２．６４−２．６７（ｍ，３Ｈ），２．４５−２．５１（ｍ，１Ｈ），２．２３（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。
【００６４】
実施例９
１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（３−メトキシ−２，２−ジメチルプロポキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ９）の合成
【化１２】
0006412656.tif 000013
【００６５】
実施例１の合成方法を参照し、１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（３−メトキシ−２，２−ジメチルプロポキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ９）５９ｍｇを得た。収率は１５％である。
【００６６】
ＨＰＬＣ：９６．４％；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４６１．５；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：７．８５（ｔ，１Ｈ），７．６８−７．７５（ｍ，３Ｈ），７．４６−７．４９（ｍ，２Ｈ），７．２７−７．３５（ｍ，２Ｈ），６．８０−６．８３（ｍ，１Ｈ），６．３４（ｓ，１Ｈ），３．７９−３．８５（ｍ，４Ｈ），３．６１（ｔ，２Ｈ），３．２６（ｓ，３Ｈ），２．３８（ｍ，３Ｈ），０．８９（ｓ，６Ｈ）ｐｐｍ。
【００６７】
実施例１０
１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（２−フェノキシエトキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ１０）の合成
【化１３】
0006412656.tif 000014
【００６８】
実施例１の合成方法を参照し、化合物１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（２−フェノキシエトキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ１０）７４ｍｇを得た。収率は２５％であった。
【００６９】
ＨＰＬＣ：９８．４％；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４８１．５；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：７．６５−７．８１（ｍ，４Ｈ），７．４６−７．５０（ｍ，２Ｈ），７．２５−７．３３（ｍ，４Ｈ），６．８９−６．９３（ｍ，４Ｈ），６．１３（ｓ，１Ｈ），４．５１（ｓ，４Ｈ），３．６１（ｓ，２Ｈ），３．２１（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。
【００７０】
実施例１１
１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（２−ピペリジン−１−イル）エトキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ１１）の合成
【化１４】
0006412656.tif 000015
【００７１】
実施例１の合成方法を参照し、化合物１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−（２−ピペリジン−１−イル）エトキシ）フェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ１１）１７４ｍｇを得た。収率は３５％であった。
【００７２】
ＨＰＬＣ：９８．１％；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４７２．６；１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：７．４８−７．７２（ｍ，３Ｈ），７．１８−７．３２（ｍ，３Ｈ），７．１０−７．１５（ｍ，２Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），６．２３（ｓ，１Ｈ），４．０３（ｔ，２Ｈ），３．５０（ｓ，２Ｈ），２．６６（ｔ，２Ｈ），２．４１−２．５２（ｍ，４Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），１．３７−１．５１（ｍ，６Ｈ）ｐｐｍ。
【００７３】
実施例１２
１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−メトキシフェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ１２）の合成
【化１５】
0006412656.tif 000016
【００７４】
国際公開ＷＯ２００６／０３６０２４号公報及びＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１２），５５（９），４４４６−４４５６に記載の合成方法を参照し、化合物１−（５−（２−フルオロフェニル）−１−（（３−メトキシフェニル）スルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（ＥＸＰ１２）１０５ｍｇを得た。収率は２０％であった。
【００７５】
ＨＰＬＣ：９５．４%；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／z：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３７５．５。
【００７６】
実施例１３
５−（２−フルオロフェニル）−Ｎ−メチル−１−（３−ピリジルスルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−メタンアミンフマル酸塩（ＴＡＫ−４３８）の合成
【化１６】
0006412656.tif 000017
【００７７】
国際公開ＷＯ２００６／０３６０２４号公報及びＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１２），５５（９），４４４６−４４５６に記載の合成方法を参照し、化合物５−（２−フルオロフェニル）−Ｎ−メチル−１−（３−ピリジルスルホニル）−１Ｈ−ピロール−３−メタンアミンフマル酸塩（ＴＡＫ−４３８）５．０ｇを得た。収率は４０％であった。
【００７８】
ＨＰＬＣ：９９．８%；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４７．１，１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１０．７１（ｓ，３Ｈ），８．８６（ｄｄ，１Ｈ），８．５５（ｄ，１Ｈ），７．８３−７．８５（ｍ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），７．５５−７．６０（ｍ，１Ｈ），７．４６−７．５０（ｍ，１Ｈ），７．１３−７．１９（ｍ，１Ｈ），７．０７−７．１０（ｍ，１Ｈ），６．４９−６．５１（ｍ，３Ｈ），３．９４（ｓ，２Ｈ），２．５０（s，３Ｈ）ｐｐｍ。
【００７９】
実施例１４
２−（３−（（２−（２−フルオロフェニル）−４−（（メタンアミン）メチル）−１Ｈ−ピロール−１−イル）スルホニル）フェノキシ）−Ｎ−メチルアセトアミド（ＥＸＰ１４）の合成
【化１７】
0006412656.tif 000018
【００８０】
国際公開ＷＯ２０１４／０７５５７５号公報に記載の合成方法を参照し、化合物２−（３−（（２−（２−フルオロフェニル）−４−（（メタンアミン）メチル）−１Ｈ−ピロール−１−イル）スルホニル）フェノキシ）−Ｎ−メチルアセトアミド（ＥＸＰ１４）５０ｍｇを得た。収率は４０％であった。
【００８１】
ＨＰＬＣ：９６．４％；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３２．３。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：７．７５（ｓ，１Ｈ），７．３９−７．４９（ｍ，２Ｈ），７．２７−７．２９（ｍ，１Ｈ），７．０５−７．１７（ｍ，４Ｈ），６．９６（ｓ，１Ｈ），６．３９（ｄ，１Ｈ），４．４５（ｓ，２Ｈ），４．０９（ｓ，２Ｈ），３．３１（ｓ，３Ｈ），２．７９（ｓ，３Ｈ），２．６８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ。
【００８２】
実験例１
Ｈ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ生物学的評価
以下のインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）スクリーニング実験は、本発明の化合物によるＨ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅの酵素活性の阻害作用を評価するためのものである。
【００８３】
実験材料と機器：
１）ウサギ胃粘膜のミクロソーム（Ｈ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅが豊富で、自己抽出）
２）５−アデノシン三リン酸ＡＴＰ（シグマ−アルドリッチ社，品番：Ａ２３８３）
３）マラカイトグリーン（百霊威化学技術有限公司、品番：９１３１２０）
４）モリブデン酸アンモニウム（百霊威化学技術有限公司、品番：１２８３２１）
５）バリノマイシン（百霊威化学技術有限公司、品番：２２７３０４）
【００８４】
実験手順：
試薬の調製：
１）化合物はＤＭＳＯで溶解され、適切な濃度に調製した。
２）緩衝液：５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＨＥＰＥｓ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ＝６．５、５ｍｍｏｌ／Ｌ塩化マグネシウム、１０μｍｏｌ／Ｌバリノマイシン。
３）緩衝液：５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＨＥＰＥｓ−Ｔｒｉｓ、ｐＨ＝６．５、５ｍｍｏｌ／Ｌ塩化マグネシウム、１０μｍｏｌ／Ｌバリノマイシン、５ｍｍｏｌ／Ｌ塩化カリウム。
４）ＡＴＰ：緩衝液１でＡＴＰを５ｍＭに希釈する。
５）マラカイトグリーン溶液：０．１２％マラカイトグリーンを２．５ｍｏｌ／Ｌの硫酸に溶解し、７．５％（ｖ／ｖ）モリブデン酸アンモニウム及び１１％Ｔｗｅｅｎ  ２０（ｖ／ｖ）を使用する時、１００：２５：２の割合で混合した。
６）ウサギ胃粘膜のミクロソーム（Ｈ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅが豊富）について、抽出方法はショ糖勾配遠心：ウサギの胃を水道水、３Ｍ  ＮａＣｌ溶液で洗浄し、濾紙で表面の水分を除去した。冷えた均質化緩衝液（４ｍＬ／ｇ組織）を加え、組織ホモジナイザーで２〜５分間均質化した。均質化後、比較的大きな組織粒子がある場合、遠心分離（６００ｇ、１０分間）で除去でき、上澄液をクリーンな遠心管に移動して２００００ｇで３０分間遠心分離してから、上澄液をクリーンな遠心管に移動し、更に遠心した。１０００００ｇで９０分間遠心分離した後、沈殿物を収集した。沈殿物をホモジネートに懸濁させ、沈殿を行い、均一に分散させ、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法でタンパク質濃度を測定し、濃度を１０ｍｇ／ｍＬに調整した。７．５％Ｆｉｃｏｌｌ成層液を等比例的に加え、１０００００ｇで６０分間遠心分離してから、中層（Ｈ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅが豊富な胃粘膜）をクリーンな遠心管に収集し、ホモジネートで４〜５倍希釈し、引き続き１０００００ｇで９０分間遠心分離し、沈殿物を収集した。沈殿物をホモジネートに懸濁させ、沈殿を行い、ガラスホモジナイザーで均一にホモジネートし、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法でタンパク質濃度を測定し、濃度を２２．５ｍｇ／ｍＬに調整し、−８０℃に冷凍した。
【００８５】
実験プロセス：
４５μＬの緩衝液２に５μＬの胃粘膜のミクロソーム（Ｈ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ）を加え、そして５μＬの化合物溶液を加え、５ｍＭのＡＴＰを５μＬ加えて反応を開始し、３７℃で３０分間予備反応を行った。マラカイトグリーン溶液１５μＬを加えて反応を終了させ、室温で２０分間平衡化してから、６２０ｎｍでの光吸収値を測定した。
【００８６】
また、同じ体積で塩化カリウムが加えられない反応をバックグランドとして実施し、酵素活性を計算する時に差し引いた。
【００８７】
化合物のＩＣ５０値は、異なる濃度での抑制率により算出した。
【００８８】
実験結果：化合物のＩＣ５０値
Ｈ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅの活性に対する本発明で提供する式Ｉに示す化合物の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）
【００８９】
【表１】
0006412656.tif 000019
【００９０】
実験例２
ｈＥＲＧカリウムチャネルに対する化合物ＥＸＰ１、ＴＡＫ−４３８、及びＥＸＰ１２の効果に関する研究
【００９１】
実験システム
１）細胞培養：ｈＥＲＧ細胞株を通常の培養で、１０％ウシ胎児血清及び２５０μｇ／ｍＬのＧ４１８を含有するＤＭＥＭにおいて継代した。
２）液体調製：全細胞パッチクランプ実験技術法で使用する細胞外液の成分（ｍＭ）は：ＮａＣｌ  １４５；ＭｇＣｌ２  １；ＫＣｌ  ４；グルコース  １０；ＨＥＰＥＳ  １０；及びＣａＣｌ２  ２であり、ＮａＯＨでｐＨ値を７．４に調整し、スクロースで浸透圧を３００ｍＯｓｍに調整した。細胞内液の成分（ｍＭ）は：ＫＣｌ  １４０；ＭｇＣｌ２  １；ＥＧＴＡ  ５；ＨＥＰＥＳ  １０；及びＮａ２ＡＴＰ４であり、ＫＯＨでｐＨ値を７．２に調整しスクロースで浸透圧を２９０ｍＯｓｍに調整した。
【００９２】
0006412656.tif 000020
【００９３】
実験方法
１）電気生理学的記録：実験においてペトリ皿を取り出し、細胞外液で２回洗い、倒立の顕微鏡ステージに置いた。室温で全細胞パッチクランプ実験を行い、ホウケイ酸ガラスの微小電極先端の抵抗は３〜５ＭΩである。
２）電圧刺激策及び電流記録：全細胞記録モード確立後、膜電位を−８０ｍＶに抑え、３０秒毎に細胞に＋５０ｍＶの脱分極電圧刺激を与え、２秒間継続してから−５０ｍＶに再分極し、３秒間継続してｈＥＲＧテール電流を出した。脱分極電圧刺激の前に、細胞に５０ｍｓで−５０ｍＶの再分極電圧を与え、この電圧で記録される電流がｈＥＲＧテール電流を計算するためのベースラインである。記録標準に達した細胞のみが実験対象化合物の検出に使用される。化合物を加える前に、ｈＥＲＧテール電流は細胞外液において少なくとも３分間安定に記録される。灌流投与後、ｈＥＲＧテール電流の振幅変動が＜５％の場合、薬物効果が定常状態になったと認められる。電流が６分以内に定常状態にならない場合、当該濃度での化合物の検出も終了する。
３）検出基準：実験において膜抵抗が１，０００ＭΩより大きい。初期電流が３００ｐＡより大きい。全細胞記録モード確立後、直列抵抗が１２ＭΩより小さい。リーク電流がイオンチャネル電流の１０％（−８０ｐＡは最大値）より小さい。
【００９４】
データ分析
生データにはＣｌａｍｐｅｘ１０．２記録を使用し、＊ａｂｆファイルに保存した。データ収集・分析にはｐＣＬＡＭＰ１０．１プログラムを使用した。化合物を加える前に電流が定常状態になった４〜５つのｓｗｅｅｐを選出し、比較用電流の振幅として平均ピークを算出した。化合物を加えた後に電流が定常状態になった４〜５つのｓｗｅｅｐを選出し、電流が抑制された後の残りの振幅として平均ピークを算出した。実験対象化合物のｈＥＲＧ電流に対する抑制率は、以下の式に従って計算した。
％抑制率＝｛１−（電流の残りの振幅）／（比較用電流の振幅）｝＊１００
【００９５】
上記の式により複数の濃度での実験対象化合物のｈＥＲＧ電流に対する抑制率（平均値±標準偏差）を得てから、ロジスティック方程式でデータフィッティングを行い、ＩＣ５０値を得た。
【００９６】
【表２】
0006412656.tif 000021
【００９７】
実験例３
ヒスタミン誘発性胃酸分泌に対する化合物ＥＸＰ１、ＴＡＫ−４３８、及びＥＸＰ１４の効果に関する研究
【００９８】
実験材料
１）動物
ＳＤラット、ＳＰＦ級、雄、１８０〜２２０ｇ、浙江省実験動物センターより提供され、生産ライセンス番号：ＳＣＸＫ（浙）２０１４−０００１。
２）薬物及び試薬
化合物ＥＸＰ１：使用の直前に少量の酢酸（約１．１０Ｎ  ＥＸＰ１）、０．９％の塩化ナトリウム溶液で所望の濃度の透明な溶液に溶解した。
化合物ＴＡＫ−４３８：使用の直前に０．９％の塩化ナトリウム溶液で所望の濃度の透明な溶液に溶解した。
化合物ＥＸＰ１４：使用の直前に少量の酢酸（約１．１０Ｎ  ＥＸＰ１４）、０．９％の塩化ナトリウム溶液で所望の濃度の透明な溶液に溶解した。
０．９％の塩化ナトリウム溶液：安徽雙鶴薬業有限責任公司、ロット番号：１３１２０２。
ヒスタミン二塩酸塩：ａｌａｄｄｉｎ、ロット番号：Ｈ１１０８６８。
抱水クロラール：国薬集団化学試剤有限公司、ロット番号：２０１３０３１４、使用の直前に０．９％の塩化ナトリウム溶液で３％の抱水クロラール溶液に調製した。
フェノールフタレイン：国薬集団化学試剤有限公司、ロット番号：Ｆ２０１１０１２５、使用の直前に９５％のエタノールで１％のフェノールフタレイン溶液に調製した。
３）器具
電子天秤：北京賽多利斯儀器系統有限公司製
遠心分離機：上海医療器械（集団）有限公司手術器械廠製
アルカリビュレット：中国薬科大学分析教研室より提供された。
【００９９】
方法と結果
１８０〜２２０ｇのＳＰＦ級ＳＤラットを６０匹用意し、体重により無作為に５つの群、即ち、実験対象化合物ＥＸＰ１群（２ｍｇ／ｋg）、ＴＡＫ−４３８群（２ｍｇ／ｋg、遊離塩基により）、ＥＸＰ１４群（２ｍｇ／ｋg）、陰性対照群（同体積の生理食塩水）、及びモデル対照群（同体積の生理食塩水）に分けた。各群のラットは１２匹である。２４時間断食で、断水なし。２４時間後、実験対象化合物Ａ，Ｂ，Ｃ群には強制経口投与を行い、投与の容積が１ｍＬ／１００ｇで、各群に１回投与した。陰性対照群及びモデル対照群には、同体積の生理食塩水を強制経口投与した。その後、ラットを抱水クロラール３００ｍｇ／ｋg（１ｍＬ／１００ｇ）で麻酔してから、ラットボードに固定させ、胸骨剣状突起の下部から腹中線に沿って腹壁を切り、切開部が２〜３ｃｍであり、左肋骨縁部に指で押し上げ、胃を切開部から露出させた。幽門の下部に糸を通し、幽門を結紮してから（隣の血管は結紮しない）、腹壁の切開部を縫合した。動物への実験対象化合物又は生理食塩水の強制経口投与から１時間後、ヒスタミン二塩酸塩（３０ｍｇ／１０ｍ／ｋg）を皮下投与した。ヒスタミン二塩酸塩投与から３時間後、過剰なＣＯ２による窒息でラットを殺し、胃を取り出し、内容物を収集した。３０００ｒｐｍ／分で１０分間遠心分離し、０．１ｍｏｌ／ＬのＮａＯＨで酸液をｐＨ７．０に滴定した。３時間の間の全酸を計算した。その結果は表３に示す。
【０１００】
【表３】
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【０１０１】
実験例４
化合物ＥＸＰ１、ＴＡＫ−４３８のラット強制経口投与の急性毒性実験報告
【０１０２】
対象薬物：化合物ＥＸＰ１（約１．１０Ｎ  ＥＸＰ１）、ＴＡＫ−４３８（投与量は遊離塩基による）
実験内容：単回投与量：２０００ｍｇ／ｋｇ、６００ｍｇ／ｋｇ、１回強制経口投与。投与の容積：１０ｍｌ／ｋｇ。１４日間観察し、毎日ラットの行動と体重を観察した。
動物：ＳＰＦ級ＳＤラット、体重１８０〜２２０ｇ、浙江省実験動物センターより提供された。動物合格証番号：ＳＣＸＫ（浙）２０１４−０００１。
グルーピング：対照群、６００ｍｇ／ｋｇ群、２０００ｍｇ／ｋｇ群、各群に４匹あり、雌雄同数。
【０１０３】
実験結果：
ＥＸＰ１：６００ｍｇ／ｋｇ又は２０００ｍｇ／ｋｇの単回経口投与で動物の死亡なし。６００ｍｇ／ｋｇの単回経口投与の場合、動物の体重に有意な影響がない。
ＴＡＫ−４３８：２０００ｍｇ／ｋｇ：全部死亡、６００ｍｇ／ｋｇ：体重増加の抑制。
【０１０４】
説明・理解のために、例示及び実施例を通じて上記の発明を詳細に説明した。当業者には、特許請求の範囲において変更及び修正を行えることは勿論である。従って、以上の説明は例示であって制限的なものではないことを意図していることが理解されるべきである。従って、本発明の範囲は明細書により決定されるはずではなく、特許請求の範囲及び特許請求の範囲により授権される等価物の全ての範囲により決定されるべきである。