(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0006322848.tif 000074
［式中、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、Ｈ、又は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基であるアルキル基を表し；
Ｘ及びＹが、それぞれ独立して、Ｎ原子又はＣＨ基を表し；
Ｚ及びＭが、それぞれ独立して、ＮＨ、ＮＲ５、Ｏ、Ｓ、ＣＨ、又はＣＲ５基を表し、ただし、Ｚ及びＭのうちの１つが、ＮＨ、ＮＲ５、Ｏ又はＳであり、Ｒ５が１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基であるアルキル基であり；
Ａ１が、ＮＨを表し；
Ａ２が、アルキレン基を表し、該アルキレン基が１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基であり、１個の水素原子が不存在であり；
Ｑ１が、フェニル又はナフチルを表し；
Ｑ２が、モルホリニル又はメチルピペラジニルを表す］
により定義される化合物、又は薬学的に許容されるその塩若しくは互変異性体若しくは溶媒和物又はそれらの組合せ。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、Ｈ、又は、１〜４個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基であるアルキル基を表し；
Ｘ及びＹが、それぞれ独立して、Ｎ原子又はＣＨ基を表し；
Ｚ及びＭが、それぞれ独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ又はＣＨ基を表し、ただし、Ｚ及びＭのうちの１つが、ＮＨ、Ｏ又はＳであり；
Ａ１が、ＮＨを表し；
Ａ２が、アルキレン基を表し、該アルキレン基が１〜４個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基であり、１個の水素原子が不存在であり；
Ｑ１が、フェニル又はナフチルを表し；
Ｑ２が、モルホリニル又はメチルピペラジニルを表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、Ｈ又はメチルを表し；
Ａ１が、ＮＨを表し；
Ａ２が、ＣＨ２を表し；
Ｑ１が、フェニルを表し；
Ｑ２が、モルホリニル又はメチルピペラジニルを表す、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
４−（４−チエノ［２，３−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１）
４−（４−チエノ［２，３−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２）
４−（４−（６−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３）
４−（４−（６−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４）
４−（４−（５−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−５）
４−（４−（５−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−６）
４−（４−（５，６−ジメチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−７）
４−（４−（５，６−ジメチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−８）
４−（４−チエノ［３，２−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−９）
４−（４−チエノ［３，２−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１０）
４−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１１）
４−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１２）
４−（４−（６−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１３）
４−（４−（６−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１４）
４−（４−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１５）
４−（４−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１６）
４−（４−（５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１７）
４−（４−（５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１８）
４−（４−（６−メチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１９）
４−（４−（６−メチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２０）
４−（４−フロ［２，３−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２１）
４−（４−フロ［２，３−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２２）
４−（４−フロ［３，２−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２３）
４−（４−フロ［３，２−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２４）
４−（４−チエノ［３，２−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２５）
４−（４−チエノ［３，２−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２６）
４−（４−（２−メチルチエノ［３，２−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２７）
４−（４−（２−メチルチエノ［３，２−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２８）
４−（７−チエノ［２，３−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２９）
４−（７−チエノ［２，３−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３０）
４−（７−（３−メチルチエノ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３１）
４−（７−（３−メチルチエノ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３２）
４−（４−フロ［３，２−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３３）
４−（４−フロ［３，２−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３４）
４−（４−（２−メチルフロ［３，２−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３５）
４−（４−（２−メチルフロ［３，２−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３６）
４−（７−フロ［２，３−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３７）
４−（７−フロ［２，３−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３８）
４−（７−フロ［３，２−ｂ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３９）
４−（７−フロ［３，２−ｂ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４０）
４−（４−フロ［２，３−ｂ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４１）
４−（４−フロ［２，３−ｂ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４２）
４−（７−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４３）
４−（７−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４４）
４−（７−（２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４５）
４−（７−（２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４６）
４−（４−（２−メチルチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン）イルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４７）
４−（４−（２−メチルチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン）イルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４８）
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
薬学的に許容される塩が、式（Ｉ）の化合物と以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、マレイン酸又はコハク酸、フマル酸、サリチル酸、フェニル酢酸、アミグダリン酸により形成される酸付加塩；及び無機塩基の酸性塩を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項７】
ＣＤＫ２、オーロラＡに関連する臨床疾患の予防又は治療のための医薬品の製造のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項８】
ＣＤＫ２、オーロラＡに関連する前記疾患が、黒色腫、肝臓癌、腎臓癌、急性白血病、非小細胞肺癌、前立腺癌、甲状腺癌、皮膚癌、結腸直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、乳癌、骨髄異形成症候群、食道癌、胃腸管癌又は中皮腫である、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
ＣＭＧＣファミリーキナーゼ及びＴＫファミリーキナーゼに関連する臨床疾患の予防又は治療のための医薬品の製造のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１０】
ＧＳＫ３ｂ、ＦＬＴ３、ＫＤＲ、ＶＥＧＦＲに関連する臨床疾患の予防又は治療のための医薬品の製造のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
前記臨床疾患が、炎症、ウイルス感染症、ＩＩ型真性糖尿病又は非インスリン依存性真性糖尿病、自己免疫疾患、頭部外傷、脳卒中、てんかん、アルツハイマー病又は運動ニューロン疾患を含む、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
抗真菌剤の製造のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、医薬品化学の分野に属し、４−（５員複素環ピリミジン／ピリジン置換）アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド誘導体、同誘導体を調製する方法及び同誘導体を含有する医薬組成物、並びにそれらの医療用途、特にプロテインキナーゼ阻害剤としての抗腫瘍用途に関する。
【発明の背景】
【０００２】
正常状態において、細胞周期は、細胞周期の阻害又は促進を含む種々の生物学的機能を有する一群の関連するプロテアーゼにより調節され、細胞周期を促進するほとんどのタンパク質はキナーゼに属する。キナーゼは、重要な生理機能を促進するためのタンパク質の調節において決定的な役割を演じる。インビボでのキナーゼの主要機能は、タンパク質受容体の活性化又は不活性化を調節して最終的に細胞周期を調節するように、高エネルギー分子であるアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）のリン酸を受容体に移すことである。しかしながら、多くの癌細胞において、正常な細胞周期を調節するこれらのキナーゼが突然に制御不能となることが見出されている。したがって、これらの調節されていないキナーゼが抑制されれば、癌細胞の増殖が制御されると考えられる。近年、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）、オーロラキナーゼ、ポロ様キナーゼ（ＰＬＫ）、キネシン（キネシンスピンドルタンパク質、ＫＳＰ）及びチェックポイントキナーゼ（ＣＨＫ）並びにいくつかの他の新しい標的が、細胞周期に密接に関係することがわかっている。
【０００３】
それらの中でも、中心体のオーロラキナーゼとＣＤＫの共活性化は、有糸分裂の開始に必須である。オーロラキナーゼとＣＤＫは、相互に関係し、細胞周期及び有糸分裂過程の調節において相互に促進する。これら２つの阻害剤に対応する阻害剤が研究され、様々な化合物が臨床研究されて、抗癌剤開発の有望な見通しを示した。
【０００４】
ほとんどすべての腫瘍が、制御されない細胞成長、細胞分化の障害及び異常なアポトーシスを引き起こし得る細胞周期の調節障害に関連し、ＣＤＫ（サイクリン依存性キナーゼ、ＣＤＫ）の過剰な活性化は、これらの状態の重要な原因の一つであることがわかっている。ＣＤＫは、重要なセリン／スレオニンプロテインキナーゼであり、サイクリンと結びつくまでは、自身で生物活性を発揮しない。ＣＤＫは活性化されると、基質のリン酸化を触媒し、細胞周期の各期を発動させ、ＤＮＡ合成及び有糸分裂を順番に成し遂げて、最終的に細胞の成長及び増殖を誘導することができる。一方、ＣＤＫは、ＣＤＫ阻害剤（ＣＤＩ）と結合して、細胞周期の進行を阻害し、細胞分裂を阻止するように負の調節の役割を演じることもできる。ＣＤＫは、腫瘍細胞の増殖及びアポトーシスの調節において決定的であるため、腫瘍組織でのＣＤＫ活性の選択的阻害は、腫瘍及び悪性疾患の治療において積極的な役割を演じ得る。したがって、ＣＤＫの小分子阻害剤の研究及びスクリーニングは、癌の治療及び新しい化学療法剤の開発におけるホットな分野の一つである。
【０００５】
ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４及びＣＤＫ６は、細胞周期の進行の調節においてより重要なＣＤＫのサブタイプである。細胞周期の調節異常が癌の主要原因であるため、細胞周期がＳ期に入ることを阻止できれば、異常なＤＮＡ複製は起こらない。Ｇ１期からＳ期への過程は、主にＣＤＫ２／サイクリンＥによって調節され、したがって、ＣＤＫ２阻害剤は、さらなるＤＮＡ複製のために細胞周期がＳ期に入ることを阻止することができる。さらに、Ｇ１期からＳ期への制御に加えて、ＣＤＫ２／サイクリンＡも細胞周期の間ずっとＳ期及びＧ２期の進行を制御する。ＣＤＫ２が細胞周期において非常に重要な役割を演じ、したがって、ＣＤＫ２の活性が効果的に阻害できれば、細胞周期は制御され、腫瘍細胞の制御されない増殖が抑制されるとみることができる。
【０００６】
近年、ＣＤＫの小分子阻害剤が多数開示され、それらのほとんどはＣＤＫ２に対して優れた阻害活性を示す。それらは、主にＣＤＫのＡＴＰ活性部位に競合的に結合することによって阻害活性を発揮する。
【０００７】
オーロラファミリーは、セリン／スレオニンプロテインキナーゼである。構造及びヒト細胞における機能の関連性の高いオーロラキナーゼサブタイプの３種類：オーロラＡ、Ｂ及びＣがある。オーロラキナーゼは、中心体複製、双極紡錘体形成及び紡錘体中での染色体再配列などを含む細胞の有糸分裂の調節に関与し、紡錘体チェックポイントを正確に監視し、間違った細胞周期の進行を中断させ、修復過程を完了することができる。細胞周期の進行中、オーロラキナーゼは主にＭ期に対して作用し、ＣＤＫと結びついた有糸分裂の一連の生化学的事象を開始する。
【０００８】
オーロラＡ及びオーロラＢは、腫瘍に密接に関係する。第一に、オーロラＡが２０ｑ１３．２に位置する一方、オーロラＢは１７ｐ１３に位置する。オーロラＡ及びオーロラＢはどちらも転座、欠失又は増幅が活発な染色体セグメントに位置し、これらが自然の不安定性を有することを意味する。これらの研究は、オーロラＡが過剰発現する場合、それは潜在的な発癌遺伝子であることを示唆する。これら２つの染色体領域の増幅は、乳癌及び結腸直腸癌の腫瘍組織並びに乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、神経芽細胞腫及び子宮頸癌の細胞株において広く認められる。現在、オーロラＣの発癌効果に関する研究はほとんどない。
【０００９】
オーロラＡ、Ｂ及びＣは、触媒領域の相同性が高く、調節領域の末端及び触媒ドメインにおける短いアミノ酸配列のみが相違する。阻害剤が結合する活性部位は、ヒンジ領域に位置する。ＡＴＰのプリン環は、オーロラキナーゼの疎水性ポケットに収容され、ヒンジ領域のアミノ酸残基と水素結合を形成することができる。オーロラキナーゼ阻害剤は、オーロラキナーゼのＡＴＰ結合部位と競合的に結合することができ、ＡＴＰ競合阻害剤にも属する。
【００１０】
Ｇ２終末期において、オーロラキナーゼ抗体のマイクロインジェクションが有糸分裂開始を顕著に遅らせ得ることが報告されている。現在、そのメカニズムは、活性化ＣＤＫ／サイクリン複合体のための下流エフェクターとしてのオーロラＡキナーゼが、有糸分裂開始のための一連の生化学事象に関与することであると考えられている。オーロラＡキナーゼは、ＣＤＫ／サイクリン複合体とポジティブフィードバック相互作用活性化ループを形成し、すなわち、ＣＤＫ／サイクリン複合体が最初にオーロラキナーゼを活性化し、今度はオーロラキナーゼがＣＤＫの完全な活性化を促進し、複合体の核内でのポジショニングを容易化する。これら２つの事象は、有糸分裂開始のために重要である。要するに、細胞周期の間、中心体でのオーロラキナーゼとＣＤＫの共活性化は、細胞の有糸分裂開始のために必須の条件の一つであり、ここで、オーロラキナーゼとＣＤＫは細胞周期及び有糸分裂過程の調節において相互に関連している。したがって、オーロラキナーゼとＣＤＫの活性が同時に阻害できれば、腫瘍細胞の異常増殖が二元的に阻害され得る。したがって、新規なＣＤＫ／オーロラマルチターゲット型阻害剤を開発することには大きな価値がある。
【００１１】
細胞周期全体で、Ｇ１期〜Ｓ期の制御に加えて、ＣＤＫ２は、Ｓ期及びＧ２期の細胞プロセスも制御する。したがって、ＣＤＫ２の阻害によって、細胞周期におけるＤＮＡの正常な複製が妨げられ得る。一方、Ｍ期においては、細胞の有糸分裂の調節は主にオーロラＡに依存し、これは、中心体複製、双極紡錘体形成、染色体再配列などにおいて欠くことのできない役割を演じる。したがって、オーロラＡの阻害は、細胞の有糸分裂を阻止し得ると考えられる。それ故に、ＣＤＫ及びオーロラキナーゼを同時に標的とし、複数の方法で癌細胞の細胞周期に影響を及ぼすマルチターゲット型小分子の探索は、癌治療の目的を達成するためのより良い方法である。
【００１２】
これまでにＣＤＫ２及びオーロラＡの多くの結晶構造が解明され、阻害剤の阻害様式及び標的は非常に明確であって、マルチターゲット型阻害剤の構造に基づく薬物設計の基礎として働く。比較すると、ＣＤＫ２及びオーロラＡキナーゼの阻害剤は、ＡＴＰ結合ポケットに競合的に結合し、主に水素結合と疎水性相互作用によって酵素と結合する。小分子阻害剤のこれら２つのキナーゼとの作用様式及びそれらの共同効能領域（ｃｏ−ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｒｅｇｉｏｎ）には以下のいくつかの共通する特徴がある：三次元構造並びに水素結合、疎水性及び親水性空間分布などの物理化学的性質は、ＣＤＫ２及びオーロラＡに関して非常に類似している：１）ヒンジ領域（ヒンジャー）：ヒンジ領域は、すべてのＡＴＰ競合阻害剤にとって最も重要なエリアであり、このエリアにおいては、２つ又は３つの決定的な水素結合があることが多く；水素結合の形成に関与するこれら２つのキナーゼ中の残基は、ＣＤＫ２についてはＧｌｕ８１及びＬｅｕ８３、オーロラＡについては、Ｇｌｕ２１１及びＡｌａ２１３である。さらに、いくらかの疎水性効果を保証するように、多数の疎水性平面セグメントがヒンジ領域に位置することが多い。２）疎水性領域Ａ：この領域は、ヒンジ領域とアスパラギン酸（ＣＤＫ２についてはＡｓｐ１４５及びオーロラＡについてはＡｓｐ２７４）の間に形成された疎水性キャビティを意味し、これは、キナーゼモチーフＤＦＧの領域の近くに位置する。ループ領域がいくらかの柔軟性を有するため、疎水性構造断片の選択はいくらかの多様性を示す。３）親水性領域：２つのキナーゼの活性部位はどちらも親水性領域を含有し、ここで、この領域中の親水性基の導入は、化合物の物理化学的性質の調節のために非常に重要となる。ＣＤＫ２の親水性領域は、Ｇｌｎ８５に近接して位置するが、オーロラＡのそれはＬｅｕ２１５の近くにある。これらの大きく重複した薬力学的効果領域は、発明者らがＣＤＫ／オーロラマルチターゲット型阻害剤を設計することを可能とした。リガンド分子の重複によって作り出されたマルチターゲット型薬物は、小さな分子量、優れた物理的及び化学的性質並びに大いに改善された薬物抵抗性を有する傾向がある。
【００１３】
近年、構造及び遺伝子配列に基づくプロテインキナーゼに関する研究の進展により、タンパク質ファミリーの概念は、類似した構造及び機能を有し、多様なシグナル伝達及び細胞調節に関与する酵素のファミリーとして常に表される。プロテインキナーゼは、タンパク質−チロシン、タンパク質−セリン／スレオニン、脂質などの異なるリン酸化基質に基づいて複数のサブファミリーに分類することができる。プロテインキナーゼは、自己リン酸化、他のキナーゼによるトランスリン酸化、タンパク質−タンパク質相互作用、タンパク質−脂質相互作用及びタンパク質−ポリヌクレオチド相互作用を含む、それらの調節メカニズムにより特徴づけられる。一つのプロテインキナーゼが、多様な調節メカニズムに関与することができる。プロテインキナーゼは、ＡＴＰ末端においてδ−リン酸を触媒し、セリン、スレオニン又はチロシン残基の側鎖ヒドロキシルをリン酸化し、これが、それらの基質活性を調節し、大半の細胞シグナル伝達経路を仲介し、多くの種々の細胞プロセスを調節する。細胞プロセスは、増殖、分化、アポトーシス、運動性、転写、翻訳及び他のシグナリング過程を含むがこれらに限定されない。リン酸化は、標的タンパク質の生物学的機能を調節する分子スイッチとして作用する。標的タンパク質のリン酸化は、様々な細胞外シグナル、細胞周期事象、環境的又は栄養的ストレスなどに応答して起こる。細胞外シグナルは、ホルモン、神経伝達物質、成長因子及び分化因子などを含む。特異的なプロテインキナーゼが、直接的又は間接的に代謝酵素、調節タンパク質、受容体、細胞骨格タンパク質、イオンチャンネル若しくはポンプ、或いは転写因子を活性化又は不活性化する、シグナル伝達経路において役割を果たす。タンパク質リン酸化制御の欠損によって引き起こされる制御されないシグナル伝達は、炎症、癌、糖尿病、アレルギー／喘息、免疫系の疾患及び障害、中枢神経系の疾患及び障害並びに血管新生性の疾患及び障害を含む多くの疾患に関連する。
【００１４】
ヒトプロテインキノームは、９０種のチロシンキナーゼ、３８８種のセリン／スレオニンキナーゼ及び４０種の非古典的キナーゼを含む５１８種のキナーゼメンバーを含有する。系統発生学的分析に基づいて、Ｈａｎｋｓ及びＨｕｎｔｅｒは、ヒトプロテインキナーゼを数回分類した。クローン化されたプロテインキナーゼメンバーが増加するにしたがって、それらの分類はより一層系統的かつ詳細になる。系統樹に基づいて、彼らは１９９３年６月よりも前に公表されたプロテインキナーゼメンバーの触媒ドメイン全体についての分類を提案した。系統樹は、４つの大きなキナーゼファミリー：（ａ）ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼのファミリー（ＰＫＡ及びＰＫＧファミリー）、プロテインキナーゼＣファミリー、Ｂ−アドレナリン受容体キナーゼ（ＢＡＲＫ）ファミリー、リボソームＳ６キナーゼファミリー及び他の関連するキナーゼを含む、ＡＧＣファミリー；（ｂ）Ｃａ２＋／−カルモジュリン調節プロテインキナーゼ（ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ）ファミリー、Ｓｎｆｌ／ＡＭＰＫファミリー及び他の関連するプロテインキナーゼを含む、ＣａＭＫファミリー；（ｃ）ＣＤＫファミリー、Ｅｒｋ（ＭＡＰ）キナーゼファミリー、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）ファミリー、カゼインキナーゼＩＩファミリー、Ｃｌｋファミリー及び他の関連するキナーゼを含む、ＣＭＧＣファミリー；並びに（ｄ）プロテインチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）ファミリーを含有する。系統樹は、４つのファミリーのいずれにも属さない多数のプロテインキナーゼも含む。大きなファミリーのそれぞれは、さらにサブファミリーに分類され、アーベルソンキナーゼ（ＡＢＬ）、Ａｋｔ／プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ／ＰＫＢ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）、混合系統キナーゼ（ＭＬＫ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、イムノグロブリン様ドメイン及びＥＧＦ様ドメインを有するチロシンキナーゼ（ＴＩＥ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦＲ）などの少なくとも１つの例を有する。一次構造に加えて、同じファミリーのメンバーは、トポロジー、調節様式及び基質特異性において不変性が高い。進化論的に類似したメンバーは、類似の機能性を有する。
【００１５】
ＣＭＧＣは、セリン／スレオニンプロテインキナーゼであり、ほとんどのリン酸化部位はプロリンに富む環境中のセリン又はスレオニンに位置する。このファミリーのメンバーは、機能的サブドメインＸ及びＸＩ中に大きな介在配列を有する。Ｄｙｒｋ（ＭＮＢ）、Ｄｙｒｋ２、Ｄｙｒｋ３はＹａｋｌと高い相同性を有するため、それらは一つのファミリーに統合される。ＣＭＧＣファミリーのメンバーとして、ＣＤＫが先に示された。ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ４及びＣＤＫ６は、主に細胞周期全体の調節に関与するが、他のＣＤＫは他の生化学的過程に関連する。例えば、適切なニューロン発達においてはＣＤＫ５が必要とされ、タウ、ＮＵＤＥ−１、シナプシン１、ＤＡＲＰＰ３２及びＭｕｎｃ１８／シンタキシン１Ａ複合体などの数種のニューロンタンパク質のリン酸化に関係があるとされる。通常、ニューロンのＣＤＫ５は、ｐ３５／ｐ３９タンパク質への結合によって活性化される。しかしながら、その活性は、ｐ２５（ｐ３５の切断型）との結合によって障害され得る。ｐ３５のｐ２５への変換及びＣＤＫ５活性の障害は、虚血、興奮毒性及びβアミロイドペプチドによって誘導され得る。したがって、ｐ２５は、アルツハイマー病などの神経変性疾患の発病に関連し、これら疾患の治療のための直接の標的と考えられる。
【００１６】
ＣＤＫ７は、ｃｄｃ２ＣＡＫ活性を有し、サイクリンＨに結合する核タンパク質である。ＣＤＫ７は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩのＣ末端ドメイン（ＣＴＤ）活性を有するＴＦＩＩＨ転写複合体の構成要素である。Ｔａｔにより仲介されるその生化学経路は、ＨＩＶ−１転写の調節と関連する。ＣＤＫ８は、サイクリンＣと結合し、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ  ＣＴＤのリン酸化に関係する。同様に、ＣＤＫ９／サイクリンＴ１複合体（Ｐ−ＴＥＦｂ複合体）は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩの伸長制御に関係する。ＰＴＥＦ−ｂも、サイクリンＴ１と相互作用するためにＨＩＶ−１ゲノムを必要とし、それを介して転写され、ウイルスのトランス活性化されたタンパク質Ｔａｔによって活性化される。したがって、ＣＤＫ７、ＣＤＫ８、ＣＤＫ９及びＰ−ＴＥＦｂ複合体は、抗ウイルス治療のための潜在的な標的である。
【００１７】
分子レベルでのＣＤＫ／サイクリン複合体活性の調節は、リン酸化及び脱リン酸化事象の一連の刺激及び阻害を必要とする。ＣＤＫのリン酸化は、一群のＣＤＫ活性化キナーゼ（ＣＡＫ）及び／又はｗｅｅ１、Ｍｙｔ１及びＭｉｋ１などのいくつかのキナーゼによって行われる。脱リン酸化は、ｃｄｃ２５（ａ及びｃ）、ｐｐ２ａ又はＫＡＰなどのホスファターゼによって行われる。
【００１８】
同時に、サイクリンＤ１の過剰発現が食道癌、乳癌、扁平上皮癌、及び非小細胞肺癌に関係することが発見された。肺癌の発病において、腫瘍抑制遺伝子の不活性化が今やホットスポットである。ｐ１５遺伝子と呼ばれ、ｐ１５タンパク質をコードする腫瘍抑制遺伝子ｐ１５／ＭＴＳ２は、ＩＮＫ４タンパク質ファミリーに属する。これは、ＣＤＫとサイクリンの複合体に対して作用し、特に、ＣＤＫ４キナーゼ及びＣＤＫ１６キナーゼの活性を阻害し、Ｒ６タンパク質のリン酸化を阻止し、Ｇ１期からＳ期への細胞プロセスを制限し、結果として細胞増殖を低減させることができる。
【００１９】
マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）は、ＣＭＧＧキナーゼファミリーの別のメンバーであり、セリン／スレオニンプロテインキナーゼの一種である。ＭＡＰＫは、細胞外シグナルを細胞及び核内に伝達し、保存的な３段階カスケード（ＭＡＰＫＫＫ−ＭＡＰＫＫ−ＭＡＰＫ）による転写因子の活性化によって遺伝子発現を調節する。この経路は、ほとんどの細胞に存在し、細胞移動、アポトーシス、細胞の分化及び増殖などの様々な細胞機能並びに多くの他の生理的過程に関与する。４つのＭＡＰＫシグナル伝達経路が同定されており、そのそれぞれは個々の機能に特異性が高い。これらのシグナル経路は、ある程度のクロストークを有する。様々なシグナル経路についての阻害剤及び活性化剤による研究は、シグナル経路のメカニズムの理解を促進するだけでなく、疾患の診断及び治療のための新しい機会も作り出すことができる。ＥＲＫシグナル経路は、最も完全に研究された経路の一つであり、ここで、ＭＥＫはＲａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫシグナル伝達経路の主要酵素であり、種々の増殖シグナルによる細胞応答を調節する。ＭＥＫには７つのサブタイプがあり、それぞれが下流のＭＡＰＫをリン酸化し、活性化する。ＭＥＫ１及びＭＥＫ２は、ＥＲＫを活性化し；ＭＥＫ３及びＭＥＫ４は、ｐ３８を活性化し；ＭＥＫ５及びＭＥＫ６はＪＮＫを活性化する。したがって、ＭＥＫ１／ＭＥＫ２は一般的に、ＥＲＫシグナル経路研究において有望な抗癌剤を開発するための癌治療標的として使用される。ｐ３８／ＭＡＰＫシグナル経路は、ＭＡＰＫ経路の重要な支流であり、これは、（浸透圧ショック、ＵＶ、低酸素などの）ストレッサー、サイトカイン、インスリン及び成長因子によって活性化することができ、正常な免疫及び炎症反応においてさえ活性化することができる。一方、臨床研究におけるリウマチ性関節炎治療のための主要標的である別のシグナル経路ｐ３８の研究も、近年、ホットスポットとなっている。ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）／ストレス活性化タンパク質（ＳＡＰＫ）シグナル経路は、ｃ−ＪｕｎがＡＰ−１転写因子複合体のメンバーである、ＭＡＰＫの重要なファミリーメンバーであり、細胞の増殖、形質転換、生存及びアポトーシスの制御に関与する。ＪＮＫは、Ｐ５３及びいくつかの非核タンパク質もリン酸化する。ＪＮＫにより仲介される標的タンパク質のリン酸化は非常に重要であり、これは、ＩＬ、ＶＥＧＦ、ＣＯＸ−２、ＭＭＰ−９、ヘムオキシゲナーゼ−１、ＩＣＡＭ−１、ＮＣＸ１、ＧｎＲＨＲ遺伝子及び他のサイトカインの遺伝子発現を誘導することができる。ＪＮＫシグナル経路は、リウマチ性関節炎、過敏性腸症候群及びアテローム性動脈硬化などの炎症及び自己免疫疾患に関与する。Ｋ５／ビッグマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＢＭＫ１）シグナル経路である、ＥＲＫ５／ＢＭＫ１は、ＭＡＰＫファミリーの中で最も新しく発見された経路である。その細胞外ストレッサーは、高糖、低酸素、血流のせん断応力、活性酸素種（ＲＯＳ）、浸透圧、及びＥＧＦ、ＮＧＦなどの様々なマイトジェンを含む。ＥＲＫ５／ＢＭＫ１も、ＭＡＰＫカスケード、ＭＥＫＫ２／３（ＭＡＰＫ−ＫＫ）−ＭＥＫ５（ＭＡＰＫＫ）−ＢＭＫ１／ＥＲ���５（ＭＡＰＫ）をたどる。活性化されると、ＥＲＫ５は細胞質から核内へ移動し、ＭＥＦ２Ｃ、ｃ−Ｍｙｃ、Ｂｉｍ、ＡＰ−１などを含む多数の下流標的をリン酸化する。ＥＲＫ５は、細胞の生存、増殖及び分化において重要な役割を演じる。最新の研究は、ＥＲＫ５が、糖尿病、腎臓病、肝線維症及び腫瘍の発病過程に密接に関連することを発見した。
【００２０】
グリコーゲンシンターゼキナーゼ−３（ＧＳＫ−３）は、ヒトにおいて普遍的に発現される２つのアイソフォーム（ＧＳＫ−３α及びＧＳＫ−３β）として存在するセリン／スレオニンキナーゼである。ＧＳＫ−３は、胚発生、タンパク質合成、細胞増殖、細胞分化、微小管動態、細胞運動性及び細胞アポトーシスに関与する。同様に、ＧＳＫ−３は、糖尿病、癌、アルツハイマー病、脳卒中、てんかん、運動ニューロン疾患及び／又は頭部外傷などの病態の進行に関与する。系統発生学的に、ＧＳＫ−３はＣＤＫに最も密接に関連する。
【００２１】
哺乳動物のインスリン応答経路の一部を形成するため、ＧＳＫ−３は、グリコーゲンシンターゼをリン酸化することができ、それにより不活性化することができる。したがって、ＧＳＫ−３の阻害によるグリコーゲンシンターゼ活性の上方制御とそれによるグリコーゲン合成は、ＩＩ型又は非インスリン依存性真性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）：体の組織がインスリン刺激に対して抵抗性となる病状、に対向する潜在的手段と考えられてきた。例えば「ラパマイシンの哺乳動物標的」であるタンパク質（ｍＴＯＲ）の不活性化によるＧＳＫ−３の阻害は、タンパク質生合成を上方制御することができる。最終的に、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ活性化プロテインキナーゼ１（ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ１又はＲＳＫ）などのキナーゼによるＧＳＫ−３のリン酸化を通じたＭＡＰＫ経路を介するＧＳＫ−３活性の調節に関するいくつかの証拠がある。これらのデータは、ＧＳＫ−３活性が、マイトジェン、インスリン及び／又はアミノ酸による刺激によって調節され得ることを示唆する。
【００２２】
さらに、ＧＳＫ−３βは、脊椎動物のＷｎｔシグナリング経路における主要構成要素である。この生化学経路は、正常な胚発生及び正常組織における細胞増殖の調節にとって決定的なものであることが示されている。Ｗｎｔ刺激に応答して、ＧＳＫ−３は阻害されるようになり、これが、（例えばアキシン、腺腫様ポリープ（ＡＰＣ）遺伝子産物及びβ−カテニンの）ＧＳＫ−３基質の脱リン酸化をもたらすことができる。異常なＷｎｔ経路の調節は、多くの癌に関係する。ＡＰＣ及び／又はβ−カテニンの突然変異は、結腸直腸癌及び他の腫瘍において非常に一般的であり、これは、β−カテニンが細胞接着において非常に重要であることを示す。したがって、ＧＳＫ−３は、ある程度まで細胞接着過程も調節し得る。既に記載した生化学経路とは別に、ＧＳＫ−３がサイクリン−Ｄ１のリン酸化を介して細胞分裂を調節し、ｃ−Ｊｕｎ、ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質α（Ｃ／ＥＢＰα）、ｃ−Ｍｙｃ及び／又は活性化Ｔ細胞（ＮＦＡＴｃ）の核因子、ヒートショック因子１（ＨＳＦ−１）及びｃ−ＡＭＰ応答要素結合タンパク質（ＣＲＥＢ）などの他の基質のような転写因子をリン酸化することを示すデータもある。組織特異性に関わらず、ＧＳＫ−３は、細胞アポトーシスの調節にも役割を果たす。アポトーシス促進メカニズムを介する細胞アポトーシスの調節におけるＧＳＫ−３の役割は、ニューロンのアポトーシスが起こり得る医学的状態に特に関連し得る。例は、頭部外傷、脳卒中、てんかん、アルツハイマー病及び運動ニューロン疾患、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症及びピック病である。ＧＳＫ−３が、微小管関連タンパク質タウを過剰リン酸化できることがインビトロで示されている。タウの過剰リン酸化は、微小管へのその正常な結合を妨害し、細胞内タウ繊維の形成をももたらし得る。これら繊維の進行性の蓄積は、最終的なニューロンの機能不全及び変性に導くと考えられる。ＧＳＫ−３を阻害することによるタウリン酸化の阻害は、このようにして神経変性効果を制限及び／又は防止する手段を提供し得る。
【００２３】
別の重要なプロテインキナーゼファミリーであるプロテインチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）は、ＡＴＰのγ−リン酸基を多くの重要なタンパク質のチロシン残基に触媒し、したがって、フェノールヒドロキシル基をリン酸化する。（神経細胞以外の）正常な細胞において、チロシンのリン酸化はめったに起こらない。リン酸化チロシンが体内のリン酸化アミノ酸のわずか０．５％であるにもかかわらず、チロシンリン酸化は多くの細胞プロセスの調節において重要な役割を演じることが実証されている。これは、細胞シグナルを伝達することによるシグナル伝達において重要な要素である。さらに、ＰＴＫは、一連の細胞機能に関与し、細胞の成長、分化及び増殖に密接に関係する。ＰＴＫは、悪性細胞の成長及び増殖にも非常に重要な役割を演じる。チロシンキナーゼの機能障害は、その下流のシグナリング経路の活性化をもたらし、細胞増殖の障害を誘発し、最終的に腫瘍形成を導き得る。したがって、チロシンキナーゼ阻害剤は、癌の予防及び治療において有益である。
【００２４】
ＰＴＫは、それらが細胞膜受容体に存在するか否かによって、非受容体型チロシンキナーゼ（ＮＲＴＫ）及び受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）に分類することができる。これまで、５８種類のＲＴＫが発見されている。これらのプロテインキナーゼは、約２７０アミノ酸残基から成る、構造が非常に類似した触媒領域を有する。ＲＴＫは、膜貫通タンパク質であり、一般的に、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内キナーゼドメインから成る。臨床研究は、これらの受容体及びそのリガンドが、多くの種類の癌に密接に関連することを暗示する。癌に関与する対応する成長因子の過剰発現は、過剰なチロシンリン酸化シグナルの細胞中への伝達をもたらし得る。ＰＤＧＦ受容体（ＰＤＧＦ受容体α及びβ）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ−Ｉ）受容体（ＣＳＦ−１Ｒ、ｃ−Ｆｍｓ）、ＦＬＴ−３及びｃ−ｋｉｔなどのような成長因子は、細胞増殖及び炎症などの多くの疾患に関連する。それらの中で、１３ｑ１２染色体に位置するＦＬＴ３遺伝子は、１９９１年に発見された初期の造血成長因子であり、コードされるＦＬＴ３受容体は、ＲＴＫ受容体ファミリーの第３の種類に属する。ＦＬＴ３受容体の細胞外ドメインがその内因性リガンドに結合すると、ホモ−又はヘテロ−二量体複合体が形成され、これは、チロシンキナーゼの活性化をもたらし、活性ループを開き、基質タンパク質をＡＴＰ結合部位に結合させる。その結果、基質タンパク質がリン酸化され、これが、細胞の増殖及び分化を引き起こす一連の下流シグナルの伝達に導く。ＦＬＴ３受容体は、造血幹細胞／前駆細胞、胸腺、リンパ、胎盤、脳、生殖腺及び他の多くの組織に広く及ぶ。しかしながら、（主に、膜近傍ドメインの内部縦列重複突然変異及びチロシンキナーゼドメインの点突然変異を含む）ＦＬＴ３遺伝子の突然変異及び過剰発現は、急性骨髄性白血病などの様々な血液悪性腫瘍疾患を引き起こすことができる。結果として、ＦＬＴ−３は、癌治療、特に、血液悪性腫瘍の治療におけるホットスポットとなる。ＦＬＴ−３の過剰発現又は突然変異は、ＦＬＴ３受容体及び下流チャンネルの制御されない誘導をもたらし、これはＲａｓの活性化を引き起こし得る。血液悪性腫瘍は、白血病、リンパ腫（ＮＨＬ）、（ホジキンリンパ腫としても知られる）ホジキン病並びに急性リンパ芽球性リンパ腫（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）、急性未分化白血病（ＡＵＬ）、未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）、未成熟なリンパ球性白血病（ＰＭＬ）、若年性リープ単球性白血病（Ｊｕｖｅｎｉｌｅ  Ｒｅａｐ−ｍｏｎｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）（ＪＭＭＬ）、成人Ｔ細胞ＡＬＬ、三血球系の骨髄形成異常（ＡＭＬ／ＴＭＤＳ）、混合系統白血病（ＭＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄形成異常（ＭＰＤ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）及び脊髄肉腫のような骨髄腫を含む。
【００２５】
一方、ＲＴＫ細胞外ドメインは、成長因子などの特異的なリガンドに結合することができるが、それらの細胞外ドメインはリン酸化される。ＲＴＫによって仲介されるシグナル経路及び生物学的過程は、血管新生に位置する。ＲＴＫにより活性化される経路は、血管新生において選択されることが示されている。ＶＥＧＦＲ又はＰＤＧＦＲなどを介する経路の活性化は、一連の血管疾患に密接に関係する細胞の増殖、遊走、生存及び血管透過性のような血管新生の様々な手順に至ることができる。
【００２６】
現在、細胞質中に継続的に若しくは一時的に存在するか又は細胞中の膜貫通タンパク質に結合する、３２種の非受容体型チロシンキナーゼ（ｎＲＴＫ）がある。したがって、それらは、細胞質チロシンキナーゼとしても知られている。腫瘍組織において、ｎＰＴＫはしばしば活性化されて、細胞増殖を促進し、アポトーシスに抵抗し、腫瘍の形成及び進行を促進する。ｎＲＴＫは主に１０のファミリー：ＳＲＣ、ＡＢＬ、ＪＡＫ、ＡＣＫ、ＣＳＫ、ＦＡＫ、ＦＥＳ、ＦＲＫ、ＴＥＣ、ＳＹＫなどを含有する。サイトカインは、様々な経路を通じてシグナルを伝達して、細胞の成長、分化及びアポトーシスの調節に関与することができる。一般に、サイトカイン受容体は、細胞質中のＲＴＫドメインを含有しないが、その受容体に結合したときにサイトカインによって仲介されるシグナル伝達は、サイトカイン標的細胞中に存在する。中でも、ヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）及びその下流のＳＴＡＴは、重要なシグナリング経路を構成し、多くのサイトカインがＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナリング経路を活性化することができる。サイトカインがそれらの受容体に結合すると、細胞質受容体においてコンフォメーション変化が起こり、それによって、関連するＪＡＫキナーゼファミリー受容体を活性化する。ＪＡＫキナーゼは、対応するリン酸化を促進することによって、ＳＴＡＴの活性化を誘導する。次いで、活性化されたＳＴＡＴは、その受容体から解離し、二量体を形成し、核内に入り、亢進されたＧＡＳファミリーに結合し、こうして転写を活性化し、細胞の形質転換を誘導し、腫瘍形成に重要な役割を演じる細胞の増殖及び生存に関連する何らかの遺伝子発現を調節する。
【００２７】
現在、ＶＥＧＦＲ及びＥＧＦＲなどの受容体型チロシンキナーゼは、大部分が研究され、血管新生阻害剤が全身的な癌治療ストラテジーとして開発されている。初期に市販されたプロテインキナーゼ阻害剤は、主に単一の標的に対するシングルターゲット型阻害剤である。以前、シングルターゲット型阻害剤は、使用時間及び症例が増加して癌治療における顕著な成果を上げたが、だんだんに欠点が増えている。対照的に、マルチターゲット型キナーゼ阻害剤は、いくつかの利点を示す。同時に複数の標的及び複数のキナーゼシグナリング経路を標的とすることによって、マルチターゲット型キナーゼ阻害剤は、単一の標的の突然変異によって引き起こされる薬物抵抗性を回避するだけでなく、それらの抗腫瘍スペクトルを著しく拡大することもできる。シングルターゲット型阻害剤であるＳＵ５４１６及びＳＵ６６６８の失敗は、マルチターゲット型キナーゼ阻害剤が将来的にキナーゼ阻害剤開発の主流になることを示す。ＳＵ５４１６及びＳＵ６６６８は、ＫＤＲ及びＰＤＧＦＲ−βをそれぞれ標的とし、臨床第ＩＩＩ相及び第ＩＩ相における低い有効性のために打ち切られた。しかしながら、ＫＤＲなどの複数のキナーゼを標的とする、マルチターゲット型阻害剤スニチニブは、最終的に市場において成功を収めている。シングルターゲット型阻害剤と比較してより優れた阻害活性及び患者の耐容性を示すために、現在研究されている化合物のほとんどはマルチターゲット型阻害剤である。現在市販されているか又は臨床試験中の小分子チロシン阻害剤は、化学構造によって主に以下のカテゴリー：キナゾリン、インドリノン、ピリダジン、シアノキノリン、ピロロピリミジンなどに分割され得る。血管新生性キナーゼに対する結合能の異なるスニチニブ、ソラフェニブ及びパゾパニブを含む３つの抗血管新生性ＴＫＩが、患者における進行癌（腎細胞癌腫、消化管間質腫瘍及び肝細胞癌腫）の治療のために最近承認された。今、多くの他の抗血管新生性ＴＫＩが、第Ｉ相から第ＩＩＩ相までの臨床試験中である。有益な抗腫瘍活性に加えて、これらの薬物は、臨床の耐容性及び毒性も示した。
【００２８】
タキサン注射の長期かつ高用量の使用は、患者に薬物抵抗性を生じさせ、有効性の低下をもたらした。薬物抵抗性が標的受容体ＴＫＩの有効性を制限し得ることを示す証拠がどんどん出てきている。したがって、新世代抗癌剤の開発のためにそれは極めて重要である。同時に、研究は、キナーゼ関連疾患が内因的に関連しており、シングルターゲット型阻害剤がそれらの阻害活性を発揮するのを困難にしていることを実証する。
【００２９】
増殖細胞におけるＣＤＫ及びオーラロＡ並びにそれらの関連タンパク質の細胞周期の協調及び促進のための本質的役割によって、それらの対応する阻害剤を、癌などの増殖性疾患の治療のため（適用（ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）は一般にＣＤＫ又はＣＤＫ特異的治療法を標的とする）、並びにウイルス感染症、自己免疫疾患、神経変性疾患などのいくつかの他の疾患の治療のために使用することができる。既存の又は新しい治療剤とともに使用される場合、ＣＤＫ標的化療法は、先に記載した疾患の治療における臨床的利益も提供し得る。多くの既存の抗腫瘍剤と比べて、そして、上記のチロシンキナーゼに関して、ＣＤＫの突然変異及びその阻害剤の薬物抵抗性の発生は、比較的少ない。したがって、ＣＤＫ標的化抗癌療法は、それらが直接的にＤＮＡと相互作用せず、したがって、二次腫瘍発生のリスクを減少させるはずであるため、多くの現行の抗腫瘍剤よりも潜在的に利益を有し得る。
【００３０】
フラボピリドール及びＵＣＮ２０１などのマルチターゲット型小分子ＣＤＫ阻害剤は、臨床第Ｉ試験及び第ＩＩ試験において既に良好な抗腫瘍活性を示している。それにもかかわらず、ほとんどの阻害剤はシングルターゲット型であり、多くの会社がこの面における研究を行ってきた。例えば、現在臨床第Ｉ／ＩＩ試験中の新規小分子ＣＤＫ阻害剤ＡＴ７５１９は、ＣＤＫ１／サイクリンＢ、ＣＤＫ２／サイクリンＡ、ＣＤＫ３／サイクリンＥなどの複数の標的に作用する。その間に、ＡＴ７５１９は、そのファミリータンパク質メンバーであるＧＳＫ−３βのリン酸化レベルを下方制御することによってその活性化を誘導し、細胞アポトーシスをもたらすことができる。現在、キナーゼタンパク質ファミリー交差型阻害剤（ｃｒｏｓｓ−ｋｉｎａｓｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆａｍｉｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）の構造タイプの報告は比較的稀であり、したがって、疾患特異的な複数の標的に対して選択的に作用することのできるキナーゼ阻害剤の開発は非常に重要である。
【発明の概要】
【００３１】
ＣＤＫ２及びオーロラＡ小分子阻害剤の研究に基づき、発明者らは、ＣＤＫ２及びオーロラＡの結晶構造に応じて、コンピュータ支援ドラッグデザインツールにより構造活性相関（ＳＡＲ）モデル及び仮想スクリーニングモデルを構築した。さらに、発明者らは、フラグメントグローイング法（ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｇｒｏｗｉｎｇ  ｍｅｔｈｏｄ）によって着目の化合物ライブラリーを構築した。仮想スクリーニングにより、発明者らは、４−（５員複素環ピリミジン／ピリジン置換）アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミドの親構造を有する一連の新しい化合物を同定し、合成した。薬理試験は、本発明の化合物が、ＣＤＫ２及びオーロラＡの優れた二元阻害剤であるだけでなく、様々なＣＭＧＣファミリー及びＴＫファミリーキナーゼに対する阻害活性も発揮することを示した。本発明の化合物は、複数の腫瘍細胞株に対する強力な阻害活性も示し、そのいくつかは、既知のＣＤＫ２阻害剤ＡＴ７５１９、オーロラＡ阻害剤ＡＴ−９２８３及びマルチターゲット型阻害剤スタウロスポリンよりも有利である。
【００３２】
本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
0006322848.tif 000002
｛式中、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル、ジアリールアルキル、アリール又はＨｅｔを表し；
Ｘ及びＹが、それぞれ独立して、Ｎ原子又はＣＨ基を表し、該ＣＨ基が、Ｒ４により置換されていてもよく、Ｒ４が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル、ジアリールアルキル、アリール又はＨｅｔであってもよく；
Ｚ及びＭが、それぞれ独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ又はＣＨ基を表し、ただし、Ｚ及びＭのうちの１つが、ＮＨ、Ｏ又はＳであり、該ＣＨ又はＮＨ基が、それぞれ、独立して、Ｒ５により置換されていてもよく、Ｒ５が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル、ジアリールアルキル、アリール又はＨｅｔであってもよく；
Ａ１が、独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ又はアルキレン基を表し、該ＮＨ又はアルキレン基が、それぞれ、独立して、Ｒ６により置換されていてもよく、Ｒ６が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル、ジアリールアルキル、アリール又はＨｅｔであってもよく；
Ａ２が、独立して、アルキレン、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、アルキレン−Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）−アルキレン、アルキレン−Ｃ（Ｏ）−アルキレン又はＮＨＣ（Ｏ）ＮＨを表し、上記基が、それぞれ、独立して、Ｒ７により置換されていてもよく、Ｒ７が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル、ジアリールアルキル、アリール又はＨｅｔであってもよく；
Ｑ１が、アリール又はＨｅｔから選択され、該アリール又はＨｅｔが、それぞれ、独立して、１つ又は複数のＲ８により置換されていてもよく、Ｒ８が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル、ジアリールアルキル、アリール又はＨｅｔであってもよく；
Ｑ２が、アリール又はＨｅｔから選択され、該アリール又はＨｅｔが、それぞれ、独立して、１つ又は複数のＲ９により置換されていてもよく、Ｒ９が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル、ジアリールアルキル、アリール又はＨｅｔであってもよく；
用語「アルキル」は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基、又は３〜６個の炭素原子を有する環式飽和炭化水素基、又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基に結合した３〜６個の炭素原子を有する環式飽和炭化水素基を意味し；
用語「アルキレン」は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基、又は３〜６個の炭素原子を有する環式飽和炭化水素基、又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基に結合した３〜６個の炭素原子を有する環式飽和炭化水素基を意味し；１個の水素原子が不存在であり；
用語「アルコキシル」は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基、又は３〜６個の炭素原子を有する環式飽和炭化水素基、又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基に結合した３〜６個の炭素原子を有する環式飽和炭化水素基を意味し；各炭素原子が、酸素で置換されていてもよく；
用語「アルキルチオール」は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基、又は３〜６個の炭素原子を有する環式飽和炭化水素基、又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基に結合した３〜６個の炭素原子を有する環式飽和炭化水素基を意味し；各炭素原子が、イオウで置換されていてもよく；
用語「アルコキシルアルキル」は、上で定義されたアルキル基に結合した、上で定義されたアルコキシル基を意味し、
用語「アリール」は、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル、ジアリールアルキル、アリール又はＨｅｔからそれぞれ独立して選択される１、２又は３個の置換基により、それぞれが置換されていてもよい、フェニル、ナフチル、アセナフテニル又はテトラリルから選択される炭素環を意味し；
用語「アラルキル」又は「ジアリールアルキル」は、上で定義されたアルキル基に結合した、上で定義されたアリール基を意味し；
用語「Ｈｅｔ」は、ピペリジル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、フリル、チエニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル若しくはピリダジニルから選択される単環式複素環基、又はキノリル、キノキサリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、２，３−ジヒドロ−１，４−ベンゾジオキシニル若しくは１，３−ベンゾジオキソリルから選択される二環式複素環基を意味し；単環式又は二環式複素環基は、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、アルキル又はアルコキシルからそれぞれ独立して選択される１、２又は３個の置換基により、それぞれ置換されていてもよく；
用語「ハロゲン」は、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）又はヨウ素（Ｉ）から選択される置換基を意味し；
用語「ハロアルキル」は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基、又は３〜６個の炭素原子を有する環式飽和炭化水素基、又は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分岐鎖の飽和炭化水素基に結合した３〜６個の炭素原子を有する環式飽和炭化水素基を意味し；１個又は複数の炭素原子が１個又は複数のハロゲンにより置換されている｝
により定義される化合物、又は薬学的に許容されるその塩若しくは互変異性体に関する。
【００３３】
好ましい実施形態においては、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル又はアリールを表し；
Ｘ及びＹが、それぞれ独立して、Ｎ原子又はＣＨ基を表し、該ＣＨ基が、Ｒ４により置換されていてもよく、Ｒ４が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル又はアリールであってもよく；
Ｚ及びＭが、それぞれ独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ又はＣＨ基を表し、ただし、Ｚ及びＭのうちの１つが、ＮＨ、Ｏ又はＳであり、該ＣＨ又はＮＨ基が、それぞれ、独立して、Ｒ５により置換されていてもよく、Ｒ５が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル又はアリールであってもよく；
Ａ１が、独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ又はアルキレン基を表し、該ＮＨ又はアルキレン基が、それぞれ、独立して、Ｒ６により置換されていてもよく、Ｒ６が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル又はアリールであってもよく；
Ａ２が、独立して、アルキレン、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、アルキレン−Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）−アルキレン、アルキレン−Ｃ（Ｏ）−アルキレン又はＮＨＣ（Ｏ）ＮＨを表し、上記基が、それぞれ、独立して、Ｒ７により置換されていてもよく、Ｒ７が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル又はアリールであってもよく；
Ｑ１が、アリール又はＨｅｔから選択され、該アリール又はＨｅｔが、それぞれ、独立して、１つ又は複数のＲ８により置換されていてもよく、Ｒ８が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル又はアリールであってもよく；
Ｑ２が、アリール又はＨｅｔから選択され、該アリール又はＨｅｔが、それぞれ、独立して、１つ又は複数のＲ９により置換されていてもよく、Ｒ９が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール、アルコキシルアルキル、アラルキル又はアリールであってもよい。
【００３４】
別の好ましい実施形態においては、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルを表し；
Ｘ及びＹが、それぞれ独立して、Ｎ原子又はＣＨ基を表し、該ＣＨ基が、Ｒ４により置換されていてもよく、Ｒ４が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよく；
Ｚ及びＭが、それぞれ独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ又はＣＨ基を表し、ただし、Ｚ及びＭのうちの１つが、ＮＨ、Ｏ又はＳであり、該ＣＨ又はＮＨ基が、それぞれ、独立して、Ｒ５により置換されていてもよく、Ｒ５が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよく；
Ａ１が、独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ又はアルキレン基を表し、該ＮＨ又はアルキレン基が、それぞれ、独立して、Ｒ６により置換されていてもよく、Ｒ６が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよく；
Ａ２が、独立して、アルキレン、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、アルキレン−Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）−アルキレン、アルキレン−Ｃ（Ｏ）−アルキレン又はＮＨＣ（Ｏ）ＮＨを表し、上記基が、それぞれ、独立して、Ｒ７により置換されていてもよく、Ｒ７が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよく；
Ｑ１が、アリール又はＨｅｔから選択され、該アリール又はＨｅｔが、それぞれ、独立して、１つ又は複数のＲ８により置換されていてもよく、Ｒ８が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよく；
Ｑ２が、アリール又はＨｅｔから選択され、該アリール又はＨｅｔが、それぞれ、独立して、１つ又は複数のＲ９により置換されていてもよく、Ｒ９が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよい。
【００３５】
他の好ましい実施形態においては、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルを表し；
Ｘ及びＹが、それぞれ独立して、Ｎ原子又はＣＨ基を表し、該ＣＨ基は、Ｒ４により置換されていてもよく、Ｒ４は、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよく；
Ｚ及びＭが、それぞれ独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ又はＣＨ基を表し、ただし、Ｚ及びＭのうちの１つは、ＮＨ、Ｏ又はＳであり、該ＣＨ又はＮＨ基は、それぞれ、独立して、Ｒ５により置換されていてもよく、Ｒ５は、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよく；
Ａ１が、独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ又はアルキレン基を表し、該ＮＨ又はアルキレン基は、それぞれ、独立して、Ｒ６により置換されていてもよく、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよく；
Ａ２が、独立して、アルキレン、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、アルキレン−Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）−アルキレン、アルキレン−Ｃ（Ｏ）−アルキレン又はＮＨＣ（Ｏ）ＮＨを表し、上記基は、それぞれ、独立して、Ｒ７により置換されていてもよく、Ｒ７は、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよく；
Ｑ１が、フェニル、ナフチル、ピロリル、フリル、チエニル、ピリジル、ピラジニル又はピリミジニルから選択される非置換又は置換芳香環であり、上記基は、それぞれ、独立して、１つ又は複数のＲ８により置換されていてもよく、Ｒ８は、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよく；
Ｑ２が、フェニル、ナフチル、ピラゾリル、フリル、チエニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニルから選択される芳香環；又はＣ３〜Ｃ８脂肪族炭素環；又はテトラヒドロピロリル、ピペリジル、モルホリニル、メチルピペラジニルから選択される脂肪族複素環であり；上記基は、それぞれ、独立して、１つ又は複数のＲ９により置換されていてもよく、Ｒ９は、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよい。
【００３６】
さらに好ましい実施形態においては、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルを表し；
Ｘ及びＹが、それぞれ独立して、Ｎ原子又はＣＨ基を表し、該ＣＨ基が、Ｒ４により置換されていてもよく、Ｒ４が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよく；
Ｚ及びＭが、それぞれ独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ又はＣＨ基を表し、ただし、Ｚ及びＭのうちの１つが、ＮＨ、Ｏ又はＳであり、該ＣＨ又はＮＨ基が、それぞれ、独立して、Ｒ５により置換されていてもよく、Ｒ５が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよく；
Ａ１が、独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ又はアルキレン基を表し、該ＮＨ又はアルキレン基が、それぞれ、独立して、Ｒ６により置換されていてもよく、Ｒ６が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよく；
Ａ２が、独立して、アルキレン、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、アルキレン−Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）−アルキレン、アルキレン−Ｃ（Ｏ）−アルキレン又はＮＨＣ（Ｏ）ＮＨを表し、上記基が、それぞれ、独立して、Ｒ７により置換されていてもよく、Ｒ７が、Ｈ、アルキル、シアノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシル、チオール、アルコキシル、アルキルチオール又はアルコキシルアルキルであってもよく；
Ｑ１が、フェニル、ナフチル、ピロリル、フリル、チエニル、ピリジル、ピラジニル又はピリミジニルから選択される非置換又は置換芳香環であり、該置換基が、１〜２個のハロゲン又はトリフルオロメチルであってもよく；
Ｑ２が、フェニル、ナフチル、ピラゾリル、フリル、チエニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニルから選択される芳香環；又はＣ３〜Ｃ８脂肪族炭素環；又はテトラヒドロピロリル、ピペリジル、モルホリニル、メチルピペラジニルから選択される脂肪族複素環である。
【００３７】
他の好ましい実施形態においては、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、Ｈ又はＣ１〜４アルキルを表し；
Ｘ及びＹが、それぞれ独立して、Ｎ原子又はＣＨ基を表し；
Ｚ及びＭが、それぞれ独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ又はＣＨ基を表し、ただし、Ｚ及びＭのうちの１つが、ＮＨ、Ｏ又はＳであり；
Ａ１が、独立して、ＮＨ、Ｏ、Ｓ又はＣＨ２基を表し；
Ａ２が、独立して、鎖状のＣ１〜４アルキレン、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）又はＮＨＣ（Ｏ）を表し；
Ｑ１が、フェニル、ナフチル、ピロリル、フリル、チエニル、ピリジル、ピラジニル又はピリミジニルから選択される非置換又は置換芳香環であり、該置換基が、１〜２個のハロゲン又はトリフルオロメチルであってもよく；
Ｑ２が、フェニル、ナフチル、ピラゾリル、フリル、チエニル、ピリジル、ピラジニル又はピリミジニルから選択される芳香環；又はＣ３〜Ｃ８脂肪族炭素環；又はテトラヒドロピロリル、ピペリジル、モルホリニル、メチルピペラジニルから選択される脂肪族複素環である。
【００３８】
さらに好ましい実施形態において、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、Ｈ又はメチルを表し；
Ａ１が、ＮＨを表し；
Ａ２が、ＣＨ２を表し；
Ｑ１が、フェニルを表し；
Ｑ２が、モルホリニル又はメチルピペラジニルを表す。
【００３９】
本発明によれば、本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、式Ｉの化合物と以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、マレイン酸又はコハク酸、フマル酸、サリチル酸、フェニル酢酸、アミグダリン酸により形成される酸付加塩を含む。さらに無機塩基の酸性塩、例えば、アルカリ金属カチオン、アルカリ土類金属カチオン又はアンモニウムカチオンを含有する塩が含まれる。イオウが存在する場合及び隣接する原子及び基の性質が許容可能である場合、上記塩は、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−又は−Ｓ（Ｏ）２−の形態で存在してもよい。
【００４０】
式Ｉの化合物において、以下の化合物が好ましい：
４−（４−チエノ［２，３−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１）
４−（４−チエノ［２，３−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２）
４−（４−（６−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３）
４−（４−（６−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４）
４−（４−（５−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−５）
４−（４−（５−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−６）
４−（４−（５，６−ジメチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−７）
４−（４−（５，６−ジメチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−８）
４−（４−チエノ［３，２−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−９）
４−（４−チエノ［３，２−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１０）
４−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１１）
４−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１２）
４−（４−（６−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１３）
４−（４−（６−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１４）
４−（４−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１５）
４−（４−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１６）
４−（４−（５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１７）
４−（４−（５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１８）
４−（４−（６−メチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１９）
４−（４−（６−メチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２０）
４−（４−フロ［２，３−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２１）
４−（４−フロ［２，３−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２２）
４−（４−フロ［３，２−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２３）
４−（４−フロ［３，２−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２４）
４−（４−チエノ［３，２−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２５）
４−（４−チエノ［３，２−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２６）
４−（４−（２−メチルチエノ［３，２−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２７）
４−（４−（２−メチルチエノ［３，２−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２８）
４−（７−チエノ［２，３−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２９）
４−（７−チエノ［２，３−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３０）
４−（７−（３−メチルチエノ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３１）
４−（７−（３−メチルチエノ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３２）
４−（４−フロ［３，２−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３３）
４−（４−フロ［３，２−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３４）
４−（４−（２−メチルフロ［３，２−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３５）
４−（４−（２−メチルフロ［３，２−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３６）
４−（７−フロ［２，３−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３７）
４−（７−フロ［２，３−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３８）
４−（７−フロ［３，２−ｂ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３９）
４−（７−フロ［３，２−ｂ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４０）
４−（４−フロ［２，３−ｂ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４１）
４−（４−フロ［２，３−ｂ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４２）
４−（７−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４３）
４−（７−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４４）
４−（７−（２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４５）
４−（７−（２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４６）
４−（４−（２−メチルチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン）イルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４７）
４−（４−（２−メチルチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン）イルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４８）
【００４１】
本発明の化合物は、以下の手順にしたがって調製することができる：
【化２】
0006322848.tif 000003
【００４２】
本発明の化合物は、置換基の選択及び位置に応じた対応する出発材料を用いて、上記の過程又は同様の過程によって調製され得る。
【００４３】
式（Ｉ）の化合物において、ピラゾール環は、以下の２つの互変異性型Ａ及びＢで存在することができる。
【化３】
0006322848.tif 000004
【００４４】
互変異性型の他の例としては、例えば、ケト−、エノール−及びエノレート型、例えば、以下の互変異性体対：（以下に例示する）ケト／エノール、イミン／エナミン、アミド／イミノアルコール、アミジン／アミジン、ニトロソ／オキシム、チオケトン／エネチオール及びニトロ／アシニトロが挙げられる。
【００４５】
式（Ｉ）の化合物及びそれらの亜群は、ＣＭＧＣファミリーキナーゼ、特に、サイクリン依存性キナーゼ、グリコーゲンシンターゼキナーゼ（ＧＳＫ）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）及びＣＤＫ様キナーゼ（ＣＬＫ）から選択されるもの、の阻害剤である。好ましい化合物は、１つ又は複数のサイクリン依存性キナーゼ、グリコーゲンシンターゼキナーゼ（ＧＳＫ）及びマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）を阻害することができ、該キナーゼは、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、ＧＳＫ３、ＣＨＫ２、ＥＲＫ７、ＦＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＪＡＫ、ＪＮＫ、ＫＤＲ、ＰＤＧＦＲ、Ｃ−ＳＣＲ、オーロラ及びＦＬＴ３から選択される。
【００４６】
本発明の化合物は、ＴＫファミリーキナーゼ、特に、受容体型チロシンキナーゼファミリー（特に、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、神経成長因子受容体（ＮＧＦＲ）、線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）、肝細胞成長因子受容体（ＨＧＦＲ）、血管内皮成長因子受容体（ＶＧＦＲ）ファミリー）阻害剤及び（ＳＲＣ、ＡＢＬ、ＪＡＫ、ＡＣＫ、ＣＳＫ、ＦＡＫ、ＦＥＳ、ＦＲＫ、ＴＥＣ、ＳＹＫなどの１０のファミリーを含む）非受容体型チロシンキナーゼファミリー阻害剤から選択される阻害剤として使用することができる。該化合物は、ＣＭＧＣファミリー及びＴＫファミリーキナーゼの活性を調節又は阻害することができ、したがって、細胞の増殖、分化及び関連するシグナル伝達異常を阻止又は回復するための手段を提供することにおいて有用であると期待される。したがって、該化合物は、癌などの増殖性疾患を治療すること又は予防することにおいて有用であると予想される。また、本発明の化合物は、炎症、ウイルス感染症、ＩＩ型真性糖尿病、又は非インスリン依存性真性糖尿病、自己免疫疾患、頭部外傷、脳卒中、てんかん、（アルツハイマー病などの）神経性疾患、運動ニューロン疾患などの病状を治療することにおいて有用であるとも予想される。
【００４７】
本発明の化合物は、ＧＳＫ３阻害剤としても使用することができる。ＣＤＫキナーゼ及びグリコーゲンシンターゼキナーゼを調節すること又は阻害することにおけるそれらの活性の結果として、本発明の化合物は細胞の異常な分化を阻止又は回復する手段を提供することにおいて有用であると期待される。したがって、該化合物は、癌などの増殖性疾患を治療すること又は予防することにおいて有用であると予想される。また、本発明の化合物は、ウイルス感染症、ＩＩ型真性糖尿病、又は非インスリン依存性真性糖尿病、自己免疫疾患、頭部外傷、脳卒中、てんかん、（アルツハイマー病などの）神経変性疾患、運動ニューロン疾患、進行性核上性麻痺、皮質基底核変性症及びピック病などの病状を治療することにおいて有用であるとも予想される。本発明の化合物が有用であると予想される病態及び病状の１つの亜群は、ウイルス感染症、自己免疫疾患及び神経変性疾患を含む。阻害され得る癌の例としては、癌腫、例えば、膀胱癌、乳癌、結腸癌（例えば、結腸直腸癌）、肺癌が挙げられるが、これらに限定されない。ＧＳＫ−３ｂは、グリコーゲンシンターゼ、ｐ２７などのタンパク因子を調節し、古典的な細胞内シグナル経路に関与することによって、癌細胞の増殖及びアポトーシスを調節し、モノアミン神経受容体の調節に参加することによって、精神神経疾患の発病において重要な役割を演じ、他の因子及び経路による神経変性疾患の発生を仲介することができる。したがって、これは、様々な疾患の治療におけるホットな阻害標的となってきている。
【００４８】
本発明は、細胞又は対象のＦＬＴ３キナーゼ活性を阻害するため又はＦＬＴ３キナーゼの活性又は発現と関連する病状を治療するための本発明の化合物の使用を包含する。
【００４９】
阻害され得る癌の例としては、癌腫、例えば、膀胱癌、乳癌、結腸癌（例えば、結腸腺癌及び結腸腺腫などの結腸直腸癌）、腎臓癌、上皮癌、肝臓癌、肺癌（例えば、腺腫、小細胞肺癌及び非小細胞肺癌）、食道癌、胆嚢癌、卵巣癌、膵臓癌（例えば、膵外分泌癌）、胃癌、子宮頸癌、甲状腺癌、前立腺癌又は皮膚癌（例えば、扁平上皮癌）；リンパ球系統の造血系腫瘍（例えば、白血病、急性リンパ球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリーセルリンパ腫又はバーキットリンパ腫）；骨髄系統の造血器系腫瘍（例えば、急性又は慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群又は前骨髄球性白血病）；甲状腺濾胞癌；間葉起源の腫瘍（例えば、繊維肉腫又は横紋筋肉腫）；中枢神経系又は末梢神経系の腫瘍（例えば、星状細胞種、神経芽細胞腫、神経膠腫又は神経鞘腫）；黒色腫；精上皮腫；奇形癌腫；骨肉腫；色素性乾皮症；角化棘細胞腫；甲状腺濾胞癌；カポシ肉腫；Ｂ細胞リンパ腫及び慢性リンパ球性白血病が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５０】
ＣＭＧＣ及びＴＫファミリーキナーゼの両方のための阻害剤としての本発明の化合物の使用は、以下の実施例における手順によって決定することができ、該化合物の活性レベルは、ＩＣ５０値によって決定することができる。
【００５１】
薬理試験及び結果を以下に概説する。
【００５２】
（１）標的化合物のＣＤＫ２に対する阻害活性のアッセイ
より良い活性を有する化合物をスクリーニングするように、合成された化合物のＣＤＫ２／Ａに関する阻害活性が蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）により決定され、陽性対照薬物と比較された。ＣＤＫ２／Ａは、キットの形態で購入されたか又は精製により得られた。
【００５３】
手順：ＣＤＫ２／Ａが、キナーゼ希釈剤によって好適な濃度まで希釈される。キナーゼ反応混合物は、ＣＤＫ２／Ａ、ペプチド基質、ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、ＢＲＩＪ−３５、ＭｇＣｌ２及びＥＤＴＡを含有する。ＣＤＫ２ホスホペプチド基質が１００％リン酸化の対照として、ＡＴＰフリーが０％リン酸化の対照として使用される。１時間後、希釈した発色試薬Ａが反応系に添加される。次いで、反応を１時間進行させ、その後、停止試薬でクエンチングする。励起波長は４００ｎｍであり、蛍光強度が４４５ｎｍ（クマリン）及び５２０ｎｍ（フルオレセイン）において検出される。被験化合物の阻害が、式にしたがって計算される。
【００５４】
（２）標的化合物のオーロラＡに対する阻害活性のアッセイ
より良い活性を有する化合物をスクリーニングするように、合成された化合物のオーロラＡに関する阻害活性が蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）により決定され、陽性対照薬物と比較された。オーロラＡは、キットの形態で購入されたか又は精製により得られた。
【００５５】
手順：オーロラＡが、キナーゼ希釈剤によって好適な濃度まで希釈される。キナーゼ反応混合物は、オーロラＡ、ペプチド基質、ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、ＢＲＩＪ−３５、ＭｇＣｌ２及びＥＤＴＡを含有する。オーロラＡホスホペプチド基質が１００％リン酸化の対照として、ＡＴＰフリーが０％リン酸化の対照として使用される。１時間後、希釈した発色試薬Ａが反応系に添加される。次いで、反応を１時間進行させ、その後、停止試薬でクエンチングする。励起波長は４００ｎｍであり、蛍光強度が４４５ｎｍ（クマリン）及び５２０ｎｍ（フルオレセイン）において検出される。被験化合物の阻害が、式にしたがって計算される。
【００５６】
（３）ＣＤＫ２、オーロラＡキナーゼ阻害の結果
【表１】
0006322848.tif 000005
【００５７】
（４）被験化合物のマルチターゲットスクリーニング
実験は、標準的な放射標識キナーゼの方法による、ＲＣＢにより提供されたキナーゼスクリーンのためのＨｏｔＳｐｏｔプラットフォームに基づく。（キナーゼドメインを発現する桿状ウイルスにクローニングされ、ＩＣ５０値が決定され、ＦａｓｔＢａｃ桿状ウイルス系が桿状ウイルスとして使用される）キナーゼ、基質及びプロセス（基質＋［３３Ｐ］−ＡＴＰ  ３３Ｐ−基質＋ＡＤＰ）が、試験化合物と３４２種のキナーゼ又は関連変異体に関連する疾患との相互作用を検出するために使用される。この系は、ヒトキナーゼに影響を及ぼす化合物のための最も包括的なハイスループットスクリーニング系である。この実験において、１０μＭのＡＴＰ、［３３Ｐ］ＡＴＰ及びビオチン化ペプチドが使用され、ＳＡ−フラッシュボードが３３Ｐの取り込み率を測定するために使用される。一連のＤＭＳＯ原液により希釈された様々な濃度が使用された。化合物のＩＣ５０値は、様々な濃度に対応するデータを用いる回帰分析により決定されるか、阻害率を決定するために単一濃度が使用される。合成された化合物が、１０μＭの単一用量で、２つの穴において、３４２種のキナーゼに対して標準的なスクリーニングプロセスによりスクリーニングされる。スタウロスポリンが、１０μＭの初回濃度、４倍希釈した１０の用量において、陽性対照として使用される。他の陽性対照は、２０μＭの初回濃度、３倍希釈した１０の用量において使用される。試験した３４２種のキナーゼは、ペンシルバニアのＲｅａｃｔｉｏｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙにより提供される。ＤＭＳＯは、Ｓｉｇｍａ、ＵＳＡから購入された。
【００５８】
試験したキナーゼ：ＡＢＬ１（１）、ＡＢＬ２／ＡＲＧ（２）、ＡＣＫ１（３）、ＡＫＴ１（４）、ＡＫＴ２（５）、ＡＫＴ３（６）、ＡＬＫ（７）、ＡＬＫ１／ＡＣＶＲＬ１（８）、ＡＬＫ２／ＡＣＶＲ１（９）、ＡＬＫ３／ＢＭＰＲ１Ａ（１０）、ＡＬＫ４／ＡＣＶＲ１Ｂ（１１）、ＡＬＫ５／ＴＧＦＢＲ１（１２）、ＡＬＫ６／ＢＭＰＲ１Ｂ（１３）、ＡＲＡＦ（１４）、ＡＲＫ５／ＮＵＡＫ１（１５）、ＡＳＫ１／ＭＡＰ３Ｋ５（１６）、オーロラＡ（１７）、オーロラＢ（１８）、オーロラＣ（１９）、ＡＸＬ（２０）、ＢＬＫ（２１）、ＢＭＰＲ２（２２）、ＢＭＸ／ＥＴＫ（２３）、ＢＲＡＦ（２４）、ＢＲＫ（２５）、ＢＲＳＫ１（２６）、ＢＲＳＫ２（２７）、ＢＴＫ（２８）、ｃ−Ｋｉｔ（２９）、ｃ−ＭＥＲ（３０）、ｃ−ＭＥＴ（３１）、ｃ−Ｓｒｃ（３２）、ＣＡＭＫ１ａ（３３）、ＣＡＭＫ１ｂ（３４）、ＣＡＭＫ１ｄ（３５）、ＣＡＭＫ１ｇ（３６）、ＣＡＭＫ２ａ（３７）、ＣＡＭＫ２ｂ（３８）、ＣＡＭＫ２ｄ（３９）、ＣＡＭＫ２ｇ（４０）、ＣＡＭＫ４（４１）、ＣＡＭＫＫ１（４２）、ＣＡＭＫＫ２（４３）、ＣＤＣ７／ＤＢＦ４（４４）、ＣＤＫ１／サイクリンＡ（４５）、ＣＤＫ１／サイクリンＢ（４６）、ＣＤＫ１／サイクリンＥ（４７）、ＣＤＫ１６／サイクリンＹ（ＰＣＴＡＩＲＥ）（４８）、ＣＤＫ２／サイクリンＡ（４９）、ＣＤＫ２／サイクリンＡ１（５０）、ＣＤＫ２／サイクリンＥ（５１）、ＣＤＫ３／サイクリンＥ（５２）、ＣＤＫ４／サイクリンＤ１（５３）、ＣＤＫ４／サイクリンＤ３（５４）、ＣＤＫ５／ｐ２５（５５）、ＣＤＫ５／ｐ３５（５６）、ＣＤＫ６／サイクリンＤ１（５７）、ＣＤＫ６／サイクリンＤ３（５８）、ＣＤＫ７／サイクリンＨ（５９）、ＣＤＫ９／サイクリンＫ（６０）、ＣＤＫ９／サイクリンＴ１（６１）、ＣＨＫ１（６２）、ＣＨＫ２（６３）、ＣＫ１ａ１（６４）、ＣＫ１ｄ（６５）、ＣＫ１ε（６６）、ＣＫ１ｇ１（６７）、ＣＫ１ｇ２（６８）、ＣＫ１ｇ３（６９）、ＣＫ２ａ（７０）、ＣＫ２ａ２（７１）、ＣＬＫ１（７２）、ＣＬＫ２（７３）、ＣＬＫ３（７４）、ＣＬＫ４（７５）、ＣＯＴ１／ＭＡＰ３Ｋ８（７６）、ＣＳＫ（７７）、ＣＴＫ／ＭＡＴＫ（７８）、ＤＡＰＫ１（７９）、ＤＡＰＫ２（８０）、ＤＣＡＭＫＬ１（８１）、ＤＣＡＭＫＬ２（８２）、ＤＤＲ１（８３）、ＤＤＲ２（８４）、ＤＬＫ／ＭＡＰ３Ｋ１２（８５）、ＤＭＰＫ（８６）、ＤＭＰＫ２（８７）、ＤＲＡＫ１／ＳＴＫ１７Ａ（８８）、ＤＹＲＫ１／ＤＹＲＫ１Ａ（８９）、ＤＹＲＫ１Ｂ（９０）、ＤＹＲＫ２（９１）、ＤＹＲＫ３（９２）、ＤＹＲＫ４（９３）、ＥＧＦＲ（９４）、ＥＰＨＡ１（９５）、ＥＰＨＡ２（９６）、ＥＰＨＡ３（９７）、ＥＰＨＡ４（９８）、ＥＰＨＡ５（９９）、ＥＰＨＡ６（１００）、ＥＰＨＡ７（１０１）、ＥＰＨＡ８（１０２）、ＥＰＨＢ１（１０３）、ＥＰＨＢ２（１０４）、ＥＰＨＢ３（１０５）、ＥＰＨＢ４（１０６）、ＥＲＢＢ２／ＨＥＲ２（１０７）、ＥＲＢＢ４／ＨＥＲ４（１０８）、ＥＲＫ１（１０９）、ＥＲＫ２／ＭＡＰＫ１（１１０）、ＥＲＫ５／ＭＡＰＫ７（１１１）、ＥＲＫ７／ＭＡＰＫ１５（１１２）、ＦＡＫ／ＰＴＫ２（１１３）、ＦＥＲ（１１４）、ＦＥＳ／Ｆ���Ｓ（１１５）、ＦＧＦＲ１（１１６）、ＦＧＦＲ２（１１７）、ＦＧＦＲ３（１１８）、ＦＧＦＲ４（１１９）、ＦＧＲ（１２０）、ＦＬＴ１／ＶＥＧＦＲ１（１２１）、ＦＬＴ３（１２２）、ＦＬＴ４／ＶＥＧＦＲ３（１２３）、ＦＭＳ（１２４）、ＦＲＫ／ＰＴＫ５（１２５）、ＦＹＮ（１２６）、ＧＣＫ／ＭＡＰ４Ｋ２（１２７）、ＧＬＫ／ＭＡＰ４Ｋ３（１２８）、ＧＲＫ１（１２９）、ＧＲＫ２（１３０）、ＧＲＫ３（１３１）、ＧＲＫ４（１３２）、ＧＲＫ５（１３３）、ＧＲＫ６（１３４）、ＧＲＫ７（１３５）、ＧＳＫ３ａ（１３６）、ＧＳＫ３ｂ（１３７）、Ｈａｓｐｉｎ（１３８）、ＨＣＫ（１３９）、ＨＧＫ／ＭＡＰ４Ｋ４（１４０）、ＨＩＰＫ１（１４１）、ＨＩＰＫ２（１４２）、ＨＩＰＫ３（１４３）、ＨＩＰＫ４（１４４）、ＨＰＫ１／ＭＡＰ４Ｋ１（１４５）、ＩＧＦ１Ｒ（１４６）、ＩＫＫａ／ＣＨＵＫ（１４７）、ＩＫＫｂ／ＩＫＢＫＢ（１４８）、ＩＫＫｅ／ＩＫＢＫＥ（１４９）、ＩＲ（１５０）、ＩＲＡＫ１（１５１）、ＩＲＡＫ４（１５２）、ＩＲＲ／ＩＮＳＲＲ（１５３）、ＩＴＫ（１５４）、ＪＡＫ１（１５５）、ＪＡＫ２（１５６）、ＪＡＫ３（１５７）、ＪＮＫ１（１５８）、ＪＮＫ２（１５９）、ＪＮＫ３（１６０）、ＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ２（１６１）、ＫＨＳ／ＭＡＰ４Ｋ５（１６２）、ＬＡＴＳ１（１６３）、ＬＡＴＳ２（１６４）、ＬＣＫ（１６５）、ＬＣＫ２／ＩＣＫ（１６６）、ＬＩＭＫ１（１６７）、ＬＩＭＫ２（１６８）、ＬＫＢ１（１６９）、ＬＯＫ／ＳＴＫ１０（１７０）、ＬＲＲＫ２（１７１）、ＬＹＮ（１７２）、ＬＹＮ  Ｂ（１７３）、ＭＡＰＫＡＰＫ２（１７４）、ＭＡＰＫＡＰＫ３（１７５）、ＭＡＰＫＡＰＫ５／ＰＲＡＫ（１７６）、ＭＡＲＫ１（１７７）、ＭＡＲＫ２／ＰＡＲ−１Ｂａ（１７８）、ＭＡＲＫ３（１７９）、ＭＡＲＫ４（１８０）、ＭＥＫ１（１８１）、ＭＥＫ２（１８２）、ＭＥＫ３（１８３）、ＭＥＫＫ１（１８４）、ＭＥＫＫ２（１８５）、ＭＥＫＫ３（１８６）、ＭＥＬＫ（１８７）、ＭＩＮＫ／ＭＩＮＫ１（１８８）、ＭＫＫ４（１８９）、ＭＫＫ６（１９０）、ＭＬＣＫ／ＭＹＬＫ（１９１）、ＭＬＣＫ２／ＭＹＬＫ２（１９２）、ＭＬＫ１／ＭＡＰ３Ｋ９（１９３）、ＭＬＫ２／ＭＡＰ３Ｋ１０（１９４）、ＭＬＫ３／ＭＡＰ３Ｋ１１（１９５）、ＭＮＫ１（１９６）、ＭＮＫ２（１９７）、ＭＲＣＫａ／ＣＤＣ４２ＢＰＡ（１９８）、ＭＲＣＫｂ／ＣＤＣ４２ＢＰＢ（１９９）、ＭＳＫ１／ＲＰＳ６ＫＡ５（２００）、ＭＳＫ２／ＲＰＳ６ＫＡ４（２０１）、ＭＳＳＫ１／ＳＴＫ２３（２０２）、ＭＳＴ１／ＳＴＫ４（２０３）、ＭＳＴ２／ＳＴＫ３（２０４）、ＭＳＴ３／ＳＴＫ２４（２０５）、ＭＳＴ４（２０６）、ＭＵＳＫ（２０７）、ＭＹＬＫ３（２０８）、ＭＹＯ３ｂ（２０９）、ＮＥＫ１（２１０）、ＮＥＫ１１（２１１）、ＮＥＫ２（２１２）、ＮＥＫ３（２１３）、ＮＥＫ４（２１４）、ＮＥＫ５（２１５）、ＮＥＫ６（２１６）、ＮＥＫ７（２１７）、ＮＥＫ９（２１８）、ＮＬＫ（２１９）、ＯＳＲ１／ＯＸＳＲ１（２２０）、Ｐ３８ａ／ＭＡＰＫ１４（２２１）、Ｐ３８ｂ／ＭＡＰＫ１１（２２２）、Ｐ３８ｄ／ＭＡＰＫ１３（２２３）、Ｐ３８ｇ（２２４）、ｐ７０Ｓ６Ｋ／Ｒ��Ｓ６ＫＢ１（２２５）、ｐ７０Ｓ６Ｋｂ／ＲＰＳ６ＫＢ２（２２６）、ＰＡＫ１（２２７）、ＰＡＫ２（２２８）、ＰＡＫ３（２２９）、ＰＡＫ４（２３０）、ＰＡＫ５（２３１）、ＰＡＫ６（２３２）、ＰＡＳＫ（２３３）、ＰＢＫ／ＴＯＰＫ（２３４）、ＰＤＧＦＲａ（２３５）、ＰＤＧＦＲｂ（２３６）、ＰＤＫ１／ＰＤＰＫ１（２３７）、ＰＨＫｇ１（２３８）、ＰＨＫｇ２（２３９）、ＰＩＭ１（２４０）、ＰＩＭ２（２４１）、ＰＩＭ３（２４２）、ＰＫＡ（２４３）、ＰＫＡｃｂ（２４４）、ＰＫＡｃｇ（２４５）、ＰＫＣａ（２４６）、ＰＫＣｂ１（２４７）、ＰＫＣｂ２（２４８）、ＰＫＣｄ（２４９）、ＰＫＣε（２５０）、ＰＫＣη（２５１）、ＰＫＣｇ（２５２）、ＰＫＣι（２５３）、ＰＫＣｍｕ／ＰＲＫＤ１（２５４）、ＰＫＣｎｕ／ＰＲＫＤ３（２５５）、ＰＫＣθ（２５６）、ＰＫＣζ（２５７）、ＰＫＤ２／ＰＲＫＤ２（２５８）、ＰＫＧ１ａ（２５９）、ＰＫＧ１ｂ（２６０）、ＰＫＧ２／ＰＲＫＧ２（２６１）、ＰＫＮ１／ＰＲＫ１（２６２）、ＰＫＮ２／ＰＲＫ２（２６３）、ＰＫＮ３／ＰＲＫ３（２６４）、ＰＬＫ１（２６５）、ＰＬＫ２（２６６）、ＰＬＫ３（２６７）、ＰＬＫ４／ＳＡＫ（２６８）、ＰＲＫＸ（２６９）、ＰＹＫ２（２７０）、ＲＡＦ１（２７１）、ＲＥＴ（２７２）、ＲＩＰＫ２（２７３）、ＲＩＰＫ３（２７４）、ＲＩＰＫ５（２７５）、ＲＯＣＫ１（２７６）、ＲＯＣＫ２（２７７）、ＲＯＮ／ＭＳＴ１Ｒ（２７８）、ＲＯＳ／ＲＯＳ１（２７９）、ＲＳＫ１（２８０）、ＲＳＫ２（２８１）、ＲＳＫ３（２８２）、ＲＳＫ４（２８３）、ＳＧＫ１（２８４）、ＳＧＫ２（２８５）、ＳＧＫ３／ＳＧＫＬ（２８６）、ＳＩＫ１（２８７）、ＳＩＫ２（２８８）、ＳＩＫ３（２８９）、ＳＬＫ／ＳＴＫ２（２９０）、ＳＮＡＲＫ／ＮＵＡＫ２（２９１）、ＳＲＭＳ（２９２）、ＳＲＰＫ１（２９３）、ＳＲＰＫ２（２９４）、ＳＳＴＫ／ＴＳＳＫ６（２９５）、ＳＴＫ１６（２９６）、ＳＴＫ２２Ｄ／ＴＳＳＫ１（２９７）、ＳＴＫ２５／ＹＳＫ１（２９８）、ＳＴＫ３２Ｂ／ＹＡＮＫ２（２９９）、ＳＴＫ３２Ｃ／ＹＡＮＫ３（３００）、ＳＴＫ３３（３０１）、ＳＴＫ３８／ＮＤＲ１（３０２）、ＳＴＫ３８Ｌ／ＮＤＲ２（３０３）、ＳＴＫ３９／ＳＴＬＫ３（３０４）、ＳＹＫ（３０５）、ＴＡＫ１（３０６）、ＴＡＯＫ１（３０７）、ＴＡＯＫ２／ＴＡＯ１（３０８）、ＴＡＯＫ３／ＪＩＫ（３０９）、ＴＢＫ１（３１０）、ＴＥＣ（３１１）、ＴＥＳＫ１（３１２）、ＴＧＦＢＲ２（３１３）、ＴＩＥ２／ＴＥＫ（３１４）、ＴＬＫ１（３１５）、ＴＬＫ２（３１６）、ＴＮＩＫ（３１７）、ＴＮＫ１（３１８）、ＴＲＫＡ（３１９）、ＴＲＫＢ（３２０）、ＴＲＫＣ（３２１）、ＴＳＳＫ２（３２２）、ＴＳＳＫ３／ＳＴＫ２２Ｃ（３２３）、ＴＴＢＫ１（３２４）、ＴＴＢＫ２（３２５）、ＴＸＫ（３２６）、ＴＹＫ１／ＬＴＫ（３２７）、ＴＹＫ２（３２８）、ＴＹＲＯ３／ＳＫＹ（３２９）、ＵＬＫ１（３３０）、ＵＬＫ２（３３１）、ＵＬＫ３（３３２）、ＶＲＫ１（３３３）、ＶＲＫ２（３３４）、ＷＥＥ１（３３５）、ＷＮＫ１（３３６）、ＷＮＫ２（３３７）、ＷＮＫ３（３３８）、ＹＥＳ／ＹＥＳ１（３３９）、ＺＡＫ／ｍＬＴＫ（���４０）、ＺＡＰ７０（３４１）、ＺＩＰＫ／ＤＡＰＫ３（３４２）。
【００５９】
いくつかの化合物の結果を図１に示す：該化合物は、ほとんど２００種のキナーゼ（キナーゼの番号は外側に記される）に対する９０％超の阻害活性を示し、ＧＭＧＣファミリー：  ＣＤＫファミリーキナーゼであるＣＤＫ６／サイクリンＤ１（５７）、ＣＤＫ６／サイクリンＤ３（５８）、ＣＤＫ４／サイクリンＤ１（５３）、ＣＤＫ４／サイクリンＤ３（５４）、ＣＤＫ５／ｐ３５（５６）、ＧＳＫ３ｂキナーゼ（１３７）、ＣＤＫ５／ｐ２５（５５）、ＣＤＫ１６／サイクリンＹ  ＰＩＭ１（４８）、ＤＡＰＫ２（９８）、ＥＲＫ７／ＭＡＰＫ１５（１１２）；及びＴＫファミリー：ＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ２（１６１）、ＦＬＴ１／ＶＥＧＦＲ１（１２１）、ＦＬＴ４／ＶＥＧＲ３（１２３）、ＦＬＴ３（１２２）に対する選択性を示す。阻害活性は９９％超である。
【００６０】
本発明の化合物が、ＧＭＧＣファミリー及びＴＫファミリーキナーゼに対するＩＣ５０に関して試験される。初回濃度は、１μＭである。各化合物について、１００％ＤＭＳＯ溶液中、３倍で１０段階の一連の希釈液が調製される。反応混合物は、２０μＭのＡＴＰ、キナーゼ及び基質であるビオチン化ペプチドを含有する。検出のための定量的で正確で感受性の３３Ｐ標識アイソトープ標識法によりヒット化合物がスクリーニングされる。％ｔｒｌ＝［（被験化合物シグナル−陽性対照シグナル）／（陰性対照シグナル−陽性対照シグナル）］％。陰性対照＝ＤＭＳＯ（１００％対照）；陽性対照＝対照化合物（０％対照）。ＩＣ５０値は、Ｈｉｌｌの式及び標準用量応答曲線を用いて計算される。Ｐｒｉｓｍ  Ｇｒａｐｈｐａｄ５により計算されたＩＣ５０のいくつかの結果が以下の表に列挙される。
【表２】
0006322848.tif 000006
【００６１】
結果は、合成された化合物が、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＫＤＲ／ＶＥＧＦＲ２、ＦＬＴ１／ＶＥＧＦＲ１、ＦＬＴ３、ＦＬＴ４／ＶＥＧＦＲ３などのチロシンキナーゼ受容体（ＲＴＫ）ファミリー；及びＣＤＫキナーゼ、ＧＳＫ３ｂ、ＪＡＫ、ＥＲＫ７／ＭＡＰＫ１５などのＣＧＣＭファミリーに対する活性及び選択性、特に、キナーゼＣＤＫ、ＧＳＫ３β及びＦＬＴ３に対する高い活性及び選択性を示すことを示す。該化合物は、同時にＶＥＧＦＲ及びＣＤＫに対する阻害活性も示し、大きな重要性を示す。
【００６２】
（４）標的化合物のインビトロの抗腫瘍活性のアッセイ
乳癌細胞株ＭＤＡ２３１、胃癌細胞株ＭＧＣ８０３、胃癌細胞株ＢＳＧ８２３、白血病細胞株Ｋ５６２、乳癌細胞株ＭＣＦ−７、抵抗性乳癌細胞株ＭＣＦ−７、白血病細胞株ＮＢ４、肝臓癌細胞株ＨＥＰＧ２、臍帯静脈内皮細胞株ＨＵＶＥＣ、肺癌細胞株Ａ５４９、結腸癌細胞株ＨＣＴ１１６、大細胞肺癌細胞株Ｈ４６０、肝臓癌細胞株７７２１、肺癌細胞株Ｈ１２２９などの様々な癌細胞株に対する阻害活性が、ＭＴＴ法によって決定される。
【００６３】
ＭＴＴ法：生きた細胞のミトコンドリア中のＮＡＤＰに結合したデヒドロゲナーゼは、外来ＭＴＴを不溶性の青みがかった紫色の結晶（ホルマザン）に還元することができ、これが細胞中に沈殿する。死んだ細胞には、そのような機能がない。ＤＭＳＯ又はＴｒｉｐｌｅ液（１０％ＳＤＳ−５％イソブタノール−０．０１モル／Ｌ  ＨＣＬ）が、細胞中の該結晶を溶解するために使用される。マイクロプレートリーダーにより５７０ｎｍにおいて測定したＯＤは、生きた細胞の量を間接的に反映することができる。
【００６４】
手順：対数増殖期にある腫瘍細胞が９６ウエルプレートに播かれ、２４時間インキュベートされ、ここにスクリーニングのためのサンプルが添加される（懸濁された細胞については、サンプルは直接添加可能である）。細胞は、５％ＣＯ２中、３７℃で４８時間さらにインキュベートされ、次いで、ＭＴＴが添加され、細胞がさらに４時間インキュベートされる。結晶はＤＭＳＯにより溶解され、マイクロプレートリーダーにおいて検出が実施される。
【００６５】
結腸癌細胞ＨＣＴ１１６、肝臓癌細胞７７２１及び肺癌細胞Ｈ１２２９に対する、いくつかの標的化合物のインビトロの抗腫瘍活性が以下に示される：
【表３】
0006322848.tif 000007
【００６６】
乳癌細胞株ＭＤＡ２３１、胃癌細胞株ＭＧＣ８０３、胃癌細胞株ＢＳＧ８２３、白血病細胞株Ｋ５６２、乳癌細胞株ＭＣＦ−７、抵抗性乳癌細胞株ＭＣＦ−７、白血病細胞株ＮＢ４、肝臓癌細胞株ＨＥＰＧ２、臍帯静脈内皮細胞株ＨＵＶＥＣ、肺癌細胞株Ａ５４９、結腸癌細胞株ＨＣＴ１１６、大細胞肺癌細胞株Ｈ４６０に対する、標的化合物（Ｉ−１）の抗腫瘍活性が以下に示される。
【表４】
0006322848.tif 000008
【００６７】
薬理試験の結果は、本発明の化合物が、複数のキナーゼに対する阻害活性を有し、黒色腫、肝臓癌、腎臓癌、急性白血病、非小細胞肺癌、前立腺癌、甲状腺癌、皮膚癌、結腸直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、乳癌、骨髄異形成症候群、食道癌、胃腸管癌又は中皮腫などのキナーゼ阻害剤に関連する臨床疾患の治療又は予防に使用可能であることを実証する。
【００６８】
医薬製剤
活性化合物は、単独で又は医薬組成物（例えば、製剤）の形態で投与することができる。組成物は、少なくとも１つの本発明の活性化合物及び１つ又は複数の薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤、希釈剤、充填剤、安定化剤、保存剤を含む。したがって、さらなる態様において、本発明は、医薬組成物の形態の合成された化合物及びその亜群、例えば、本明細書において定義される式（Ｉ）及びその亜群を提供する。医薬組成物は、経口、非経口、局所、鼻腔内、眼、耳、直腸内、膣内又は経皮投与に好適な任意の形態であることができる。組成物が非経口投与を目的とする場合には、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下投与又は標的器官若しくは組織中への注射、輸注又は他の送達手段による直接送達のために製剤化することができる。
【００６９】
いくつかの医薬製剤が以下のように調製される：
１）凍結乾燥製剤：製剤化された式（Ｉ）の化合物及び本明細書において先に定義されたその亜群のアリコートが、５０ｍＬバイアルに入れられ、凍結乾燥される。凍結乾燥中、組成物は、１ステップの凍結プロトコールを用いて−４５℃で凍結される。アニーリングのために温度を−１０℃まで上げ、その後、凍結のために−４５℃まで下げ、およそ３４００分、２５℃における第１の乾燥、次いで５０℃における第２の乾燥が続く。第１及び第２の乾燥の間の圧力は、８０ミリトルに設定される。２）錠剤製剤：合成された化合物を含有する錠剤組成物（２５２ｍｇ）が、５０ｍｇの化合物を希釈剤としての１９７ｍｇのラクトース（ＢＰ）及び滑沢剤としての３ｍｇのステアリン酸マグネシウムと混合し、既知の方法により圧縮して錠剤を形成することによって調製される。３）カプセル製剤：１００ｍｇの合成された化合物を１００ｍｇのラクトースと混合し、得られた混合物を標準的な不透明のハードゼラチンカプセルに充填することによって、カプセル製剤を調製する。４）注射製剤Ｉ：合成された化合物（例えば、塩形態）を１０％のプロピレングリコールを含有する水に溶解して、１．５重量％の活性化合物濃度とすることによって、注射による投与のための非経口組成物を調製することができる。滅菌のために溶液はろ過され、次いでバイアルが密封される。５）注射製剤ＩＩ：合成された化合物（例えば、塩形態）（２ｍｇ／ｍｌ）を水中のマンニトール（５０ｍｇ／ｍｌ）に溶解することによって、注射用の非経口組成物が調製される。滅菌のために溶液はろ過され、密封できる１ｍｌバイアル又はアンプルに充填される。６）皮下注射製剤：合成された化合物を医薬品グレードのコーン油と混合して、５ｍｇ／ｍｌの濃度とすることによって、皮下投与のための組成物が調製される。該組成物は滅菌され、好適な容器に充填される。
【００７０】
さらなる態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物及び本明細書において定義されたその亜群の抗真菌剤としての使用を可能とする。該化合物は、（例えば、ヒトなどの哺乳動物の治療における）動物医薬品において又は（例えば、農業及び園芸における）植物の処置において又は一般的な抗真菌剤として、例えば、保存剤及び殺菌剤として、使用され得る。別の態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物及び本明細書において上で定義されたその亜群並びに農学的に許容される希釈剤又は担体を含む、（園芸的を含む）農業的使用のための抗真菌組成物を提供する。
【００７１】
例えば、合成された化合物の抗真菌活性は、カンジダ・パラプシローシス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）−ＡＴＣＣ３６０８２及びクリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）を含む以下のプロトコールを用いて決定される。試験微生物は、４℃でサブローデキストロース寒天傾斜培地において維持される。各微生物のシングレット（ｓｉｎｇｌｅｔ）懸濁液は、一夜、２７℃において、アミノ酸を含む酵母窒素原基礎培地（ＹＮＢ）（Ｄｉｆｃｏ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、Ｍｉｃｈ．）（ｐＨ７．０）及び０．０５モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）中、回転ドラムにおいて酵母を培養することによって調製される。次いで、懸濁液が遠心分離され、０．８５％ＮａＣｌで二回洗浄され、洗浄された細胞懸濁液が４秒間超音波処理（Ｂｒａｎｓｏｎ  Ｓｏｎｉｆｉｅｒ、モデル３５０、Ｄａｎｂｕｒｙ、Ｃｏｎｎ．）される。シングレットの分芽胞子が血球計算器において計数され、０．８５％ＮａＣｌ中で所望の濃度に調整される。改変培地微量希釈法を用いて試験化合物の活性が決定される。試験化合物は、１．０ｍｇ／ｍｌの割合までＤＭＳＯ中で希釈され、次いで、ＭＯＰＳを含むＹＮＢ培地（ｐＨ７．０）中で６４μｇ／ｍｌに希釈されて（フルコナゾールが対照として使用される）、各化合物の検量線用溶液を形成する。９６ウエルプレートを用いて、ウエル１及び３〜１２は、ＹＮＢ培地により調製され、化合物溶液の１０倍希釈液がウエル２〜１１において作製される（濃度範囲は、６４〜０．１２５μｇ／ｍｌ）。ウエル１４３１は、無菌対照及び分光光度法アッセイのためのブランクとして働く。ウエル１２は、増殖対照として働く。マイクロタイタープレートは、ウエル２〜１１のそれぞれにおいて１０μｌで播種される（最終的な播種材料は、１０４微生物／ｍｌ）。播種されたプレートは、３５℃において４８時間インキュベートされる。ＭＩＣ値は、ボルテックスミキサー（Ｖｏｒｔｅ−Ｇｅｎｉｅ  ２  Ｍｉｘｅｒ、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｏｌｅｍｉａ、Ｎ．Ｙ．）により２分間、プレートを振とうした後、分光光度法により４２０ｎｍの吸収度を測定すること（Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ、ＤｕＰｏｎｔ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、Ｄｅｌ．）によって決定される。ＭＩＣのエンドポイントは、対照ウエルに比べておよそ５０％（又はそれを超える）の増殖の減少を示す最低の薬物濃度として定義される。濁度アッセイに関しては、これは、ウエル中の濁度が対照の５０％未満である最低の薬物濃度として定義される（ＩＣ５０）。最小細胞溶解濃度（ＭＣＣ）は、９６ウエルプレートのすべてのウエルをサブローデキストロース寒天培地（ＳＤＡ）プレートへ、３５℃において１〜２日インキュベートして継代培養し、次いで、バイアビリティーをチェックすることによって決定される。
【００７２】
いくつかの結果が以下のように示される。
【表５】
0006322848.tif 000009
【００７３】
本発明は、植物又は種子を、上で定義した殺真菌組成物の抗真菌有効量で処置することを含む、植物又は種子における真菌感染を治療する方法も提供する。
【００７４】
該化合物は、アセトンに溶解され、所望の濃度の範囲を得るために続いて連続的にアセトン中で希釈される。最終的な処置体積は、病原体次第で、９体積の０．０５％のトゥイーン−２０（Ｔｗｅｅｎ−２０）（商標）水溶液又は０．０１％のトライトンＸ−１００（ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）（商標）を添加することによって得られる。次いで、組成物は、トマト葉枯病（フィトフトラ・インフェスタンス（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ））に対する本発明の化合物の活性を以下のプロトコールを用いて試験するために使用される。トマト（ラトガース品種）の種子は、苗が１０〜２０ｃｍの高さになるまで、土を含まない泥炭ベースのポッティング混合物（ｐｏｔｔｉｎｇ  ｍｉｘｔｕｒｅ）中で成長させられる。次いで、１００ｐｐｍの割合の試験化合物により洗い流すために植物は噴霧される。２４時間後、試験植物は、フィトフトラ・インフェスタンスの胞子嚢水性懸濁液を噴霧されることによって播種され、デューチャンバー（ｄｅｗ  ｃｈａｍｂｅｒ）中に一夜保存される。次いで、植物は、未処置の対照植物における病気の発生まで、温室に移される。
【００７５】
試験化合物のいくつかの結果が以下のように示される。
【表６】
0006322848.tif 000010
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】３４２種のキナーゼに対するいくつかの化合物の阻害率を示す図であり、該キナーゼは、通し番号で示される（上記を参照のこと）。
【発明の詳細な説明】
【００７７】
融点は、ｂ型融点管により決定し、媒体はメチルシリコーン油であり、温度計は補正されない。Ｎｉｃｏｌｅｔ  Ｉｍｐａｃｔ  ４１０赤外分光計によりＩＲスペクトルが決定され、圧縮がＫＢｒにより実施される。ＪＥＯＬ  ＦＸ９０Ｑフーリエ変換ＮＭＲ分光計、ＢＲＵＫＥＲ  ＡＣＦ−３００  ＮＭＲ分光計及びＢＲＵＫＥＲ  ＡＭ−５００  ＮＭＲ分光計（内部標準ＴＭＳ）により１ＨＮＭＲが実施される。ＭＳは、Ｎｉｃｏｌｅｔ  ２０００フーリエ変換質量分析計及びＭＡＴ−２１２質量分析計により決定される。マイクロ波反応は、ＣＥＭ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒシングルモードマイクロ波装置（ｍｉｃｒｏｗａｖｅｒ）により実施される。
【００７８】
実施例１
４−メチル−１−（４−ニトロベンジル）ピペラジン（Ｉ−ａ）
ｐ−ニトロベンジルブロミド（１０ｇ、４６．３ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（１００ｍＬ）を５００ｍＬのシングルネックフラスコに添加し、ここに、ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のＮ−メチルピペラジン（４．７ｇ、４７．０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（７．１ｇ、７０．３ｍｍｏｌ）の混合物を氷浴下でゆっくりと滴下添加した。反応混合物を１時間還流した。ＴＬＣ（酢酸エチル：石油エーテル＝１：２）により出発材料の喪失を確認した。１５０ｍＬのクロロホルム及び１００ｍＬの飽和重炭酸ナトリウム溶液を反応混合物に添加し、これを室温で３０分間、激しく撹拌した。クロロホルム（１００ｍｌ×３）で反応混合物を抽出した。有機層を合わせ、水及び飽和塩化ナトリウムでそれぞれ１回洗浄した（１００ｍｌ×１）。乾燥硫酸マグネシウムで脱水を行い、続いてろ過した。減圧下で溶媒を除去後、８．５ｇの黄色がかった固体を得た；収率：７８．１％。生成物をさらに精製することなく、次の反応のために使用する。
【数１】
0006322848.tif 000011
【００７９】
実施例２
４−（４−ニトロベンジル）モルホリン（Ｉ−ｂ）
ｐ−ニトロベンジルブロミド（１０ｇ、４６．５ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン（１００ｍＬ）を５００ｍＬのシングルネックフラスコに添加し、ここに、ジクロロメタン（２０ｍＬ）中のモルホリン４．１ｇ（４７．１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（７．１ｇ、７０．３ｍｍｏｌ）の混合物を氷浴下でゆっくりと滴下添加した。反応混合物を１時間還流した。ＴＬＣ（酢酸エチル：石油エーテル＝１：２）により出発材料の喪失を確認した。１５０ｍＬのクロロホルム及び１００ｍＬの飽和重炭酸ナトリウム溶液を反応混合物に添加し、これを室温で３０分間、激しく撹拌した。クロロホルム（１００ｍｌ×３）で反応混合物を抽出した。有機層を合わせ、水及び飽和塩化ナトリウムでそれぞれ１回洗浄した（１００ｍｌ×１）。乾燥硫酸マグネシウムで脱水を行い、続いてろ過した。減圧下で溶媒を除去後、８．７ｇの黄色がかった固体（Ｉ−ｂ）を得た；収率：８４．５％。生成物をさらに精製することなく、次の反応のために使用した。
【数２】
0006322848.tif 000012
【００８０】
実施例３
４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）アニリン（Ｉ−ｃ）
粗製Ｉ−ａ（８．５ｇ、３６．２ｍｍｏｌ）、触媒としてのＦｅＯ（ＯＨ）／Ｃ、２．０ｇ及び９５％エタノール（１００ｍｌ）を５００ｍＬのシングルネックフラスコに添加し、これを還流した。反応系に、２５ｍＬのヒドラジン水和物及び２０ｍＬの９５％エタノールの混合物をゆっくりと滴下添加した。ＴＬＣ（メタノール：クロロホルム＝１：１５）により出発材料の喪失を確認した。反応混合物が熱い間に吸引ろ過を実施した。ろ過ケークを熱エタノールにより２回（３０ｍｌ×２）洗浄した。減圧下で溶媒を除去後、白色固体を得て、これを真空下で乾燥させて、６．７ｇを得た（Ｉ−ｃ）；収率：９０．３％。生成物をさらに精製することなく、次の反応のために使用した。
【数３】
0006322848.tif 000013
【００８１】
実施例４
４−（（４−モリホリノ）メチル）アニリン（Ｉ−ｄ）
粗製Ｉ−ｂ（８．５ｇ、３８．３ｍｍｏｌ）、触媒としてのＦｅＯ（ＯＨ）／Ｃ、２．０ｇ及び９５％エタノール（１００ｍｌ）を５００ｍＬのシングルネックフラスコに添加し、これを還流した。反応系に、２５ｍＬのヒドラジン水和物及び２０ｍＬの９５％エタノールの混合物をゆっくりと滴下添加した。ＴＬＣ（メタノール：クロロホルム＝１：２０）により出発材料の喪失を確認した。反応混合物が熱い間に吸引ろ過を実施した。ろ過ケークを熱エタノールにより２回（３０ｍｌ×２）洗浄した。減圧下で溶媒を除去後、白色固体を得て、これを真空下で乾燥させて、６．６ｇを得た（Ｉ−ｄ）；収率：８９．７％。生成物をさらに精製することなく、次の反応のために使用した。
【数４】
0006322848.tif 000014
【００８２】
実施例５
Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−４−ニトロ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−ｅ）
粗製Ｉ−ｃ（７．５ｇ、３６．６ｍｍｏｌ）、４−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（６．３ｇ、４０．１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（８．４ｇ、４４．０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（６．０ｇ、４４．４ｍｍｏｌ）及び無水ＤＭＦ（１００ｍｌ）を、２５０ｍＬの丸底フラスコに添加し、これを室温で２４時間撹拌した。ＴＬＣ（メタノール：クロロホルム＝１：１０）により出発材料の喪失を確認した。反応混合物を２００ｍＬの氷水に注ぎ、大量の黄色がかった固体沈殿物を得て、これを静置し、吸引ろ過して黄色固体を得た。粗製物を酢酸エチルとメタノールの混合溶媒から再結晶化して、１１．１ｇを得た（Ｉ−ｅ）；収率:  88.2%;  mp:  194-196℃;  MS  [M＋H]+  345.3.
【数５】
0006322848.tif 000015
【００８３】
実施例６
Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−ニトロ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−ｆ）
粗製Ｉ−ｄ（７．５ｇ、３９．０ｍｍｏｌ）、４−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（６．３ｇ、４０．１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（８．４ｇ、４４．０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（６．０ｇ、４４．４ｍｍｏｌ）及び無水ＤＭＦ（１００ｍｌ）を、２５０ｍＬの丸底フラスコに添加し、これを室温で２４時間撹拌した。ＴＬＣ（メタノール：クロロホルム＝１：２０）により出発材料の喪失を確認した。反応混合物を２００ｍＬの氷水に注ぎ、大量の黄色がかった固体沈殿物を得て、これを静置し、吸引ろ過して黄色固体を得た。粗製物を酢酸エチルとメタノールの混合溶媒から再結晶化して、１１．６ｇを得た（Ｉ−ｆ）；収率:  89.7%;  mp:  208-210℃;  MS  [M＋H]+  332.4.
【数６】
0006322848.tif 000016
【００８４】
実施例７
Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−ｇ）
粗製Ｉ−ｅ（６．０ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）、触媒としてのＦｅＯ（ＯＨ）／Ｃ、２ｇ及び９５％エタノール（１００ｍｌ）を２５０ｍＬのシングルネックフラスコに添加し、これを還流した。反応系に、２５ｍＬのヒドラジン水和物及び２０ｍＬの９５％エタノールの混合物をゆっくりと滴下添加した。ＴＬＣ（メタノール：クロロホルム＝１：１０）により出発材料の喪失を確認した。反応混合物が熱い間に吸引ろ過を実施した。ろ過ケークを熱エタノールにより２回（３０ｍｌ×２）洗浄した。減圧下で溶媒を除去後、オフホワイトの固体を得た。粗製物を酢酸エチルとメタノールの混合溶媒から再結晶化して、３．５ｇを得た（Ｉ−ｇ）；収率:  63.9  %.  mp:  199-201℃,  MS  [M＋H]+  315.8.
【数７】
0006322848.tif 000017
【００８５】
実施例８
Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−ｈ）
粗製Ｉ−ｆ（６．０ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）、触媒としてのＦｅＯ（ＯＨ）／Ｃ、２ｇ及び９５％エタノール（１００ｍｌ）を２５０ｍＬのシングルネックフラスコに添加し、これを還流した。反応系に、２５ｍＬのヒドラジン水和物及び２０ｍＬの９５％エタノールの混合物をゆっくりと滴下添加した。ＴＬＣ（メタノール：クロロホルム＝１：１０）により出発材料の喪失を確認した。反応混合物が熱い間に吸引ろ過を実施した。ろ過ケークを熱エタノールにより２回（３０ｍｌ×２）洗浄した。減圧下で溶媒を除去後、オフホワイトの固体を得た。粗製物を酢酸エチルとメタノールの混合溶媒から再結晶化して、３．２ｇを得た（Ｉ−ｈ）；収率:  58.6  %.mp:  216-218℃,  MS  [M＋H]+  302.0.
【数８】
0006322848.tif 000018
【００８６】
実施例９
４−（４−チエノ［２，３−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１）
１２９ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド、７０ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）の４−クロロチエノ［２，３−ｄ］ピリミジン及び２５ｍｌの５０％水性酢酸を５０ｍＬのシングルネックフラスコに添加し、これを還流した。ＴＬＣ（メタノール：クロロホルム＝１：１０）により出発材料の喪失を確認した。反応混合物を室温まで冷却し、飽和ＮａＯＨ水溶液でｐＨ８〜９に調整し、酢酸エチルで３回（５０ｍｌ×３）抽出した。抽出物を合わせ、乾燥硫酸マグネシウムで脱水した。吸引ろ過及び減圧下での溶媒の除去後、黄色がかった固体を得た。粗製物をカラムクロマトグラフィー（移動相：メタノール：クロロホルム＝１：１５）に供して、７０ｍｇを得た（Ｉ−ｌ）。収率:  37.8%;  mp:  285-287℃;  [M＋H]+  449.3.
【数９】
0006322848.tif 000019
【００８７】
実施例１０
４−（４−チエノ［２，３−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２）
１２４ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）の４−クロロチエノ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−２（７８ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  43.6%;  mp:  262-265℃;  MS  [M＋H]+436.2.
【数１０】
0006322848.tif 000020
【００８８】
実施例１１
４−（４−（６−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３）
１２０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び１２０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の４−クロロ−６−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−３（７５ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  42.9%;mp:  235-238℃,  MS  [M＋H]+463.3.
【数１１】
0006322848.tif 000021
【００８９】
実施例１２
４−（４−（６−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４）
１１８ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の４−クロロ−６−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−４（８０ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  47.0%;mp:  >280℃,  MS  [M＋H]+450.3.
【数１２】
0006322848.tif 000022
【００９０】
実施例１３
４−（４−（５−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−５）
１２０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の４−クロロ−５−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−５（７２ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  41.1%;  mp:  245-247℃,  MS  [M＋H]+463.3.
【数１３】
0006322848.tif 000023
【００９１】
実施例１４
４−（４−（５−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−６）
１１８ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の４−クロロ−５−メチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−６（６４ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  37.6%;  mp:  >280℃,  MS  [M＋H]+450.3.
【数１４】
0006322848.tif 000024
【００９２】
実施例１５
４−（４−（５，６−ジメチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−７）
１１１ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）の４−クロロ−５，６−ジメチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−７（６６ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  39.3%;  mp:  264-267℃;  MS  [M＋H]+477.3.
【数１５】
0006322848.tif 000025
【００９３】
実施例１６
４−（４−（５，６−ジメチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−８）
１１０ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）の４−クロロ−５，６−ジメチルチエノ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−８（７３ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  44.5%;  mp:  254-256℃,  MS  [M＋H]+464.3.
【数１６】
0006322848.tif 000026
【００９４】
実施例１７
４−（４−チエノ［３，２−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−９）
１２９ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）の４−クロロチエノ［３，２−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−９（８８ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:47.8%;  mp:>280℃,  MS  [M＋H]+449.3.
【数１７】
0006322848.tif 000027
【００９５】
実施例１８
４−（４−チエノ［３，２−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１０）
１２８ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）の４−クロロチエノ［３，２−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−１０（９３ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:52.0%;  mp:  275-277℃;  MS  [M＋H]+436.3.
【数１８】
0006322848.tif 000028
【００９６】
実施例１９
４−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１１）
１４４ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）の４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−１１（６３ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:32.0%;  mp:  229-230℃,  MS  [M＋H]+432.3.
【数１９】
0006322848.tif 000029
【００９７】
実施例２０
４−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１２）
１４２ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）の４−クロロ−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−１２（７０ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  36.6%;mp:  213-214℃,  MS  [M＋H]+  419.3.
【数２０】
0006322848.tif 000030
【００９８】
実施例２１
４−（４−（６−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１３）
１３２ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）の４−クロロ−６−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−１３（５６ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:23.0%;  mp:  268-270℃,  MS  [M＋H]+446.3.
【数２１】
0006322848.tif 000031
【００９９】
実施例２２
４−（４−（６−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１４）
１３０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）の４−クロロ−６−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−１４（６１ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:33.7%;mp:  271-273℃,  MS  [M＋H]+433.3.
【数２２】
0006322848.tif 000032
【０１００】
実施例２３
４−（４−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１５）
１３２ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）の４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−１５（５３ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:28.3%;mp:  258-261℃,  MS  [M＋H]+446.3.
【数２３】
0006322848.tif 000033
【０１０１】
実施例２４
４−（４−（５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１６）
１３０ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）の４−クロロ−５−メチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−１６（６２ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  34.3%;mp:  267-269℃,  MS  [M＋H]+433.3.
【数２４】
0006322848.tif 000034
【０１０２】
実施例２５
４−（４−（５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１７）
１４４ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）の４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−１７（５０ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  25.4%;mp:  261-263℃,  MS  [M＋H]+432.3.
【数２５】
0006322848.tif 000035
【０１０３】
実施例２６
４−（４−（５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１８）
１４２ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）の４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−１８（６７ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  35.1%;mp:  258-260℃,  MS  [M＋H]+419.3.
【数２６】
0006322848.tif 000036
【０１０４】
実施例２７
４−（４−（６−メチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−１９）
１３２ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）の４−クロロ−６−メチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−１９（５５ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  29.4%;mp:  265-267℃,  MS  [M＋H]+446.3.
【数２７】
0006322848.tif 000037
【０１０５】
実施例２８
４−（４−（６−メチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジニル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２０）
１３０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）の４−クロロ−６−メチル−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−２０（６９ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  38.1%;mp:  268-270℃,  MS  [M＋H]+433.3.
【数２８】
0006322848.tif 000038
【０１０６】
実施例２９
４−（４−フロ［２，３−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２１）
１４３ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）の４−クロロフロ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−２１（４５ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  23.0%;mp:  255-257℃,  MS  [M＋H]+433.3.
【数２９】
0006322848.tif 000039
【０１０７】
実施例３０
４−（４−フロ［２，３−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２２）
１４１ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）の４−クロロフロ［２，３−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−２２（５３ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  27.9%;mp:  >280℃,  MS  [M＋H]+420.3.
【数３０】
0006322848.tif 000040
【０１０８】
実施例３１
４−（４−フロ［３，２−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２３）
１４３ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）の４−クロロフロ［３，２−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−２３（７１ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  36.2%;mp:  277-279℃,  MS  [M＋H]+433.3.
【数３１】
0006322848.tif 000041
【０１０９】
実施例３２
４−（４−フロ［３，２−ｄ］ピリミジニルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２４）
１４１ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４５ｍｍｏｌ）の４−クロロフロ［３，２−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−２４（８０ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  42.1%;mp:  271-273℃,  MS  [M＋H]+420.3.
【数３２】
0006322848.tif 000042
【０１１０】
実施例３３
４−（４−チエノ［３，２−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２５）
１２９ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド、７０ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）の４−クロロチエノ［３，２−ｃ］ピリジン及び１ｍｌの氷酢酸をイソプロパノール（８ｍＬ）に溶解した。１９０℃で３０分間、反応混合物をマイクロ波処理した（３００Ｗ）。減圧下でイソプロパノールを留去し、得られた固体を蒸留水で溶解した。飽和水酸化ナトリウム水溶液を使用してｐＨを８〜９に調整し、酢酸エチルで混合物を３回抽出した（５０ｍＬ×３）。抽出物を合わせ、乾燥硫酸マグネシウムで脱水した。吸引ろ過後、減圧下で溶媒を留去して、黄色がかった固体を得た。粗製物をカラムクロマトグラフィー（移動相：メタノール：クロロホルム＝１：１５）に供し、Ｉ−２５を得た（６７ｍｇ）。収率:  36.4%;mp:  268-270℃,  MS  [M＋H]+448.3.
【数３３】
0006322848.tif 000043
【０１１１】
実施例３４
４−（４−チエノ［３，２−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２６）
１２８ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）の４−クロロチエノ［３，２−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−２６（７１ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:  39.7%;mp:  269-271℃,  MS  [M＋H]+435.3.
【数３４】
0006322848.tif 000044
【０１１２】
実施例３５
４−（４−（２−メチルチエノ［３，２−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２７）
１２１ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の４−クロロ−２−メチルチエノ［３，２−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−２７（６８ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:  38.6%;mp:  267-269℃,  MS  [M＋H]+462.3.
【数３５】
0006322848.tif 000045
【０１１３】
実施例３６
４−（４−（２−メチルチエノ［３，２−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２８）
１１９ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の４−クロロ−２−メチルチエノ［３，２−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−２８（５９ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:  34.5%;mp:  265-267℃,  MS  [M＋H]+449.3.
【数３６】
0006322848.tif 000046
【０１１４】
実施例３７
４−（７−チエノ［２，３−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−２９）
１２９ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）の７−クロロチエノ［２，３−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−２９（５９ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:  30.4%;mp:  274-276℃,  MS  [M＋H]+448.3.
【数３７】
0006322848.tif 000047
【０１１５】
実施例３８
４−（７−チエノ［２，３−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３０）
１２８ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４１ｍｍｏｌ）の７−クロロチエノ［２，３−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−３０（８１ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:45.3%;mp:  271-273℃,  MS  [M＋H]+435.3.
【数３８】
0006322848.tif 000048
【０１１６】
実施例３９
４−（７−（３−メチルチエノ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３１）
１２１ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の７−クロロ−３−メチルチエノ［２，３−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−３１（７１ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:40.3%;mp:  258-260℃,  MS  [M＋H]+462.3.
【数３９】
0006322848.tif 000049
【０１１７】
実施例４０
４−（７−（３−メチルチエノ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３２）
１１９ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の７−クロロ−３−メチルチエノ［２，３−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−３２（７１ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:42.7%;mp:  275-277℃,  MS  [M＋H]+449.3.
【数４０】
0006322848.tif 000050
【０１１８】
実施例４１
４−（４−フロ［３，２−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３３）
１２０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）の４−クロロフロ［３，２−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−３３（７５ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:  38.1%;mp:  268-270℃,  MS  [M＋H]+432.3.
【数４１】
0006322848.tif 000051
【０１１９】
実施例４２
４−（４−フロ［３，２−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３４）
１１９ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）の４−クロロフロ［３，２−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−３４（６８ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:35.6%;mp:  268-271℃,  MS  [M＋H]+419.3.
【数４２】
0006322848.tif 000052
【０１２０】
実施例４３
４−（４−（２−メチルフロ［３，２−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３５）
１４４ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）の４−クロロ−２−メチルフロ［３，２−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−３５（４７ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:  25.1%;mp:  274-276℃,  MS  [M＋H]+446.3.
【数４３】
0006322848.tif 000053
【０１２１】
実施例４４
４−（４−（２−メチルフロ［３，２−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３６）
１４２ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）の４−クロロ−２−メチルフロ［３，２−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−３６（６３ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:34.8%;mp:  275-277℃,  MS  [M＋H]+433.3.
【数４４】
0006322848.tif 000054
【０１２２】
実施例４５
４−（７−フロ［２，３−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３７）
１３２ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）の７−クロロフロ［２，３−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−３７（４５ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:22.8%;mp:  258-261℃,  MS  [M＋H]+432.3.
【数４５】
0006322848.tif 000055
【０１２３】
実施例４６
４−（７−フロ［２，３−ｃ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３８）
１３０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）の７−クロロフロ［２，３−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−３８（４７ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:24.6%;mp:  268-272℃,  MS  [M＋H]+419.3.
【数４６】
0006322848.tif 000056
【０１２４】
実施例４７
４−（７−フロ［３，２−ｂ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−３９）
１４４ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）の７−クロロフロ［３，２−ｂ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−３９（４８ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:24.4%;mp:  268-270℃,  MS  [M＋H]+432.3.
【数４７】
0006322848.tif 000057
【０１２５】
実施例４８
４−（７−フロ［３，２−ｂ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４０）
１４２ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）の７−クロロフロ［３，２−ｂ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−４０（５３ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:27.7%;mp:  275-278℃,  MS  [M＋H]+419.3.
【数４８】
0006322848.tif 000058
【０１２６】
実施例４９
４−（４−フロ［２，３−ｂ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４１）
１４４ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）の４−クロロフロ［２，３−ｂ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−４１（６４ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:  32.5%;mp:  273-276℃,  MS  [M＋H]+432.3.
【数４９】
0006322848.tif 000059
【０１２７】
実施例５０
４−（４−フロ［２，３−ｂ］ピリジルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４２）
１４２ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）の４−クロロフロ［２，３−ｂ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−４２（５６ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:  29.3%;mp:  269-271℃,  MS  [M＋H]+419.3.
【数５０】
0006322848.tif 000060
【０１２８】
実施例５１
４−（７−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４３）
１４５ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）の７−クロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−４３（６４ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:  32.3%;mp:  279-282℃,  MS  [M＋H]+431.3.
【数５１】
0006322848.tif 000061
【０１２９】
実施例５２
４−（７−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４４）
１４３ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４６ｍｍｏｌ）の７−クロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−４４（５２ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:  27.1%;mp:  265-267℃,  MS  [M＋H]+420.3.
【数５２】
0006322848.tif 000062
【０１３０】
実施例５３
４−（７−（２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４５）
１３２ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）の７−クロロ−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−４５（４９ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:26.2%;mp:  276-278℃,  MS  [M＋H]+445.3.
【数５３】
0006322848.tif 000063
【０１３１】
実施例５４
４−（７−（２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジル）アミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４６）
１３１ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．４２ｍｍｏｌ）の７−クロロ−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−４６（７３ｍｇ）をＩ−２５と同様の方法で調製した。収率:40.1%;mp:  254-258℃,  MS  [M＋H]+432.3.
【数５４】
0006322848.tif 000064
【０１３２】
実施例５５
４−（４−（２−メチルチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン）イルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４７）
１２０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル）フェニル−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の４−クロロ−２−メチルチエノ［３，２−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−４７（８５ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:  49.7%;mp:  >280℃,  MS  [M＋H]+463.3.
【数５５】
0006322848.tif 000065
【０１３３】
実施例５６
４−（４−（２−メチルチエノ［３，２−ｄ］ピリミジン）イルアミノ）−Ｎ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド（Ｉ−４８）
１１９ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−（４−（（４−モルホリニル）メチル）フェニル）−４−アミノ−１Ｈ−３−ピラゾールカルボキサミド及び７０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の４−クロロ−２−メチルチエノ［３，２−ｄ］ピリミジンを出発材料として使用して、化合物Ｉ−４８（９３ｍｇ）をＩ−１と同様の方法で調製した。収率:54.4%;mp:  259-262℃,  MS  [M＋H]+450.2.
【数５６】
0006322848.tif 000066
【０１３４】
実施例５７
１．実験材料
試薬及び材料：化合物１、化合物１のメシレート（ＩＳ）、化合物２、化合物２のメシレート（２Ｓ）、アセトニトリル、酢酸エチル、メタノール、クロマトグラフィーカラムＨｙｐｅｒｓｉｌ  ＯＤＳ（４．６ｍｍ×２００ｍｍ、５ｍｍ）、遠心管、ＥＰ管、ピペットチップ、ゴム手袋、シリンジ（１ｍＬ）など。
【０１３５】
２．機器
Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００  ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｇｉｅｓ  Ｃｏ．，ｌｔｄ、ＵＳＡ）、モデルＳＨＺ−８８  水浴恒温振動機（Ｊｉｎｔａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，ｌｔｄ．、Ｃｈｉｎａ）、モデルＫＱ３２００ＤＢ超音波クリーナー（Ｋｕｎｓｈａｎ  Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，ｌｔｄ．、Ｃｈｉｎａ）、モデルＵＶ−２１０２ＰＣＳ紫外分光光度計（Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｌｏｎｇｎｉｋｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，ｌｔｄ．、Ｃｈｉｎａ）、モデルＴＧＬ−１６卓上遠心分離機（Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ａｎｔｉｎｇ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｃｏ．，ｌｔｄ．、Ｃｈｉｎａ）、モデルＸＷ−８０Ａボルテックスミキサー（Ｓｈａｎｇｈａｉ  Ｊｉｎｋｅ、Ｃｈｉｎａ），モデルＰＬ２０３  Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ電子てんびん（Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）。
動物：雄性Ｗｉｓｔａｒラット（体重２００±２０ｇ）（Ｃｈｉｎａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｃｈｉｎａ）。
【０１３６】
３．水溶性の測定
過剰量のサンプルを５０ｍＬの三角フラスコに添加し、ここへ１０ｍＬの蒸留水を添加し、次いで、フラスコを恒温振動機において２５℃で７２時間、振とうした。溶液を１００００ｒ／分で１５分間、遠心分離し、次いで、上清を０．２２μＭの精密ろ過膜でろ過して、溶解していない薬物を除去した。２ｍＬのろ液をメタノールで１０ｍＬに調整した。２０μＬのサンプル注入により、薬物の含量を決定した。結果を表３に示した。
【表７】
0006322848.tif 000067
表３の結果は、化合物Ｉ−１及びＩ−２がメシレート（Ｉ−１−Ｓ）及び（Ｉ−２−Ｓ）を形成すると、その水溶性が増加することを示す。
【０１３７】
４．脂質−水分配係数（ＬｏｇＰ）の測定
ｎ−オクタノール及び蒸留水を、２４時間、相互に飽和させた。５０ｍＬのメスフラスコにサンプルの量を正確に秤量して入れ、水で飽和したｎ−オクタノールで調整した（サンプルを完全に溶解した）。サンプルのｎ−オクタノール溶液１０ｍＬを５０ｍＬの三角フラスコに入れ、ここへｎ−オクタノールで飽和した蒸留水１０ｍＬを添加した。恒温振動機により２５℃において混合物を平衡化した（１２５ｒｐｍ、７２時間）。実験前のｎ−オクタノール原液中及び実験後のｎ−オクタノール層中の薬物の濃度から脂質−水分配係数を計算した。結果を表４に示す。
【表８】
0006322848.tif 000068
表４の結果は、化合物Ｉ−１及びＩ−２の脂質−水分配係数（ＬｏｇＰ）が、メシレート（Ｉ−１−Ｓ）及び（Ｉ−２−Ｓ）と比べて有意な差がないことを示す。
【０１３８】
３．安定性分析
３．１血漿サンプル処理
ラットから集めた３００μＬの血液を、３０μＬのメタノール及び２ｍＬの酢酸エチルと混合した。サンプルを３分間ボルテックスにかけ、４０００ｒｐｍで１５分間、遠心分離した。上清を別の遠心管に導入した。低層を繰り返し抽出し、次いで、上清を合わせて窒素ガスで脱水した。１５０μＬのメタノールで再溶解後、該溶液を０．２２μｍの膜でろ過し、次いで、２０μＬの注入体積による分析に供した。
【０１３９】
３．２血漿安定性
化合物（Ｉ−１及びＩ−２）の標準溶液を血漿で希釈し、０、１、２、４、６、８、１２及び２４時間で集めた。３．１項の方法によりサンプルを調製した。ＨＰＬＣシステムに２０μＬを導入し、分析のためにピーク面積を記録して、血漿中の化合物１及び２の安定性を決定する。結果を表５に示す。
【表９】
0006322848.tif 000069
化合物（Ｉ−１及びＩ−２）が２４時間内の良好な血漿安定性を示すことがわかる。
【０１４０】
４．実験動物
４．１実験設計及び血漿濃度−時間データ
３ｍｇ／ｍＬの薬物を含有するＣＭＣ−Ｎａ水溶液を調製するために、化合物量を正確に採取した。１２匹の健康な雄性Ｗｉｓｔｅｒラットを無作為に２つの群に割り当て、各群は６匹のラットを含んだ。第１の群には、化合物１を経口投与した。第２の群には、化合物２を経口投与した。用量はどちらも（各ラットについて２ｍＬに相当する）３０ｍｇ／ｋｇであった。投与前１２時間、ラットは絶食で、水は自由摂取させた。薬物投与の０．５、１、１．５、２、２．５、３、５、８、１２及び２４時間後に、０．６ｍＬの血液サンプルを静脈洞から集め、先にヘパリンナトリウムですすいだＥＰ管中に添加した。４，０００ｒ／分で１５分間、サンプルを遠心分離し、上部の血漿を得た。３００μＬの血漿を分析に供し、クロマトグラムとピーク面積を記録した。化合物１及び２の血漿濃度を計算して、平均濃度−時間曲線を得た。表６及び７は、結果を要約する。
【表１０】
0006322848.tif 000070
【表１１】
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【０１４１】
４．２データ分析
単回の経口投与後の血漿濃度対時間のデータ（表６、７）を分析するために、ＤＡＳ２．０プログラムを使用した。近似とＡＩＣ法を使用して、モデルを決定した。分析は、近似が大きくＡＩＣが小さいほど、より良いモデルであるという原理に基づいた。経口投与は、２コンパートメントモデルに一致した。統計学的距離パラメータを使用して、薬物動態パラメータに関して２つの化合物を比較する。結果を表８に示した。
【表１２】
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表８から、化合物１及び２の薬物動態パラメータが許容可能であることがわかる。
【０１４２】
実施例５８
動物におけるＳ１８０移植腫瘍に対する薬物による阻害
１．実験材料及び動物
試験薬物：化合物Ｉ−１；陽性薬物：Ｊｉｎａｎ  Ｇｒｅａｔ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄから購入したＡＴ７５１９。
試験動物：Ｙａｎｇｚｈｏｕ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉａｌ  ｃｅｎｔｅｒから提供されたクリーングレードのＩＣＲマウス、ライセンス番号：ＳＣＸＫ（Ｓｕ）２００７−０００１；１８〜２２ｇ、雌性；Ｊｉａｎｇｓｕ  Ｘｉｅｔｏｎｇ  Ｏｒｇａｎｉｓｍ  Ｃｏ．，ｌｔｄにより提供された粒状飼料で飼養；飼養条件：空調室、１８〜２４℃、相対湿度７０％。
腫瘍：Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｔｕｍｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｊｉａｎｇｓｕにより提供されたＳ１８０。
機器：ＹＪ−８７５医療用マイクロベンチ（Ｓｕｚｈｏｕ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）。
【０１４３】
２．手順
腫瘍移植法により、固形腫瘍をＩＣＲマウスに接種した（腫瘍片を滅菌条件下で秤量し、ガラス組織ホモゲナイザーで均質化し、滅菌容器中に入れ、ここへ生理食塩水を添加して、１：３の細胞懸濁液を調製した。容器を氷上に置き、吸引し、各吸引前に細胞を均一に混合した。各マウスに、０．２ｍＬを右前部腋窩に皮下接種した）。接種の２４時間後、マウスを体重測定し、各群が１０匹のマウスを含む５つの群に無作為に分割した。各薬物群に最初は接種の２４時間後に投与した（ｄ１）。マウスに、一日１回、全部で７回、静脈内投与した。投与体積は、０．４ｍｌ／２０ｇであった。接種の８日後（ｄ８）に腫瘍を有するマウスを屠殺した。腫瘍組織を分離し、秤量した。データを統計学的方法（ｔ−検定）により分析した。
用量設定：全部で５群
モデル対照群；陽性対照群：ＡＴ７５１９  １５ｍｇ／ｋｇ；試験薬物：３０ｍｇ／ｋｇ；試験薬物：１５ｍｇ／ｋｇ；試験薬物：７．５ｍｇ／ｋｇ
【０１４４】
４．結果
【表１３】
0006322848.tif 000073
【０１４５】
５．結論
結果は、試験薬物（３０ｍｇ／ｋｇ及び１５ｍｇ／ｋｇ）は、モデル対照に比較して、Ｓ１８０腫瘍の成長に対する非常に有意な阻害効果（Ｐ＜０．０１）を有し、試験薬物（７．５ｍｇ／ｋｇ）は、Ｓ１８０腫瘍の成長に対する有意な阻害効果（Ｐ＜０．０５）を有することを示す。試験薬物（３０ｍｇ／ｋｇ及び１５ｍｇ／ｋｇ）は、実験動物の体重に対する有意な阻害効果を有する（Ｐ＜０．０５）。
【図１】
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