(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼の繊維症および眼の血管新生の少なくとも１つを処置または予防するための医薬組成物であって、
医薬組成物は、薬学的に適切な担体または希釈剤、およびある量の合成低分子量化合物を３００ｎｇ〜７５０μｇの投与量範囲で含み、但し、合成低分子量化合物はポリマーではなく、天然に存在しないという条件で、合成低分子量化合物はガラクトピラノース環を含み、合成低分子量化合物の量は、眼の繊維症および眼の血管新生の少なくとも１つを阻害するのに十分なガレクチンタンパク質またはその一部の活性を阻害または調節するように操作され、医薬組成物は眼の硝子体内または結膜下に投与され、
医薬組成物は、ビス−｛３−Ｏ−［（５，６−ジフルオロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−オン−３−イル）−メチル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝スルファン、または、以下の構造を有する合成低分子量化合物の１つ以上を含み、
【化１】
0006366598.tif 000028
合成低分子量化合物は血管新生を阻害する、医薬組成物。
【請求項２】
ガレクチンタンパク質は、ガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７、およびガレクチン−８の群から選択され、
合成低分子量化合物は、眼の血管新生に関連した疾患または疾病の処置または予防に有効であり、例えば、前記疾患または疾病は過度の血管新生に関連付けられ、前記疾患または疾病は、瘢痕に関連付けられる手術、例えば、緑内障ろ過手術、血管新生緑内障、角膜外傷、結膜炎後瘢痕、翼状片、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、例えば、湿潤型ＡＭＤまたは乾燥型ＡＭＤ、乾燥型ＡＭＤから湿潤型ＡＭＤへの変換、増殖性糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、および角膜血管新生（トラコーマ）の群から選択され、
合成低分子量化合物は、抗血管新生、抗腫瘍、抗ウイルス、抗菌性、抗ミコバクテリア、抗菌、抗増殖、および、抗アポトーシスからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤をさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
被験体における、または、被験体からの細胞における、眼の血管新生または眼の繊維症を処置または予防するためのキットであって、
キットは、
ガレクチンタンパク質またはその一部を阻害する医薬組成物であって、ガレクチンタンパク質に結合してＶＥＧＦ／ＶＥＧＦ受容体−２経路またはＴＧＦ−β経路を調節するか、あるいは、ガレクチンタンパク質の活性を調節する、医薬組成物、
使用説明書、および、
容器を含み、
医薬組成物は、請求項１または２に記載されている、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
＜関連出願＞
本出願は、発明者、Ｎｏｏｒｊａｈａｎ  Ｐａｎｊｗａｎｉ，  Ｗｅｉ−Ｓｈｅｎｇ  Ｃｈｅｎ，  Ｈａｋｏｎ  Ｌｅｆｆｌｅｒ  ａｎｄ  Ｕｌｆ  Ｎｉｌｓｓｏｎによって、「Ｍｅｔｈｏｄｓ，  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｋｉｔｓ  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｉｎｇ，  ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ，  ｏｒ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ  ｏｃｕｌａｒ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｒ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ａ  ｓｕｂｊｅｃｔ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｇａｌｅｃｔｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」と題され、２０１２年１１月１５日に出願された、米国の仮特許出願第６１／７２６，９９８号、の利益を主張し、この文献は参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【０００２】
被験体の眼の血管新生または眼の繊維症を阻害する際に使用される医薬組成物を用いた方法とキットが提供される。
【０００３】
（政府支援）
本発明は、国立衛生研究所によって与えられた助成金ＥＹ００７０８８の下、政府の支援を受けて作られた。政府は本発明において一定の権利を有している。
【背景技術】
【０００４】
脈絡膜血管新生などの目の血管新生に関連する障害は、目の出血や繊維症、および、視力喪失をもたらす。血管新生に関連する障害は、加齢黄斑変性、目のヒストプラズマ症症候群、血管新生緑内障、後水晶体線維増殖症、病的近視、網膜色素線条症、特発性障害、脈絡膜炎、脈絡膜破裂、脈絡膜母斑の重なり（ｏｖｅｒｌｙｉｎｇ  ｃｈｏｒｏｉｄ  ｎｅｖｉ）、移植片拒絶反応、単純ヘルペス性角膜炎、リーシュマニア症、オンコセルカ症、ドライアイ症候群などの特定の炎症性疾患、および、目（例えば角膜）に対する外傷を含んでいる。
【０００５】
脈絡膜血管新生は、出血、繊維症、および視力喪失を引き起こす血管新生に関連する障害である（２００９年８月２０日に公開された、Ｋｕｍａｒ−Ｓｉｎｇｈらの特許文献１）。正常な角膜は血管を欠いているが、しかしながら、脈絡膜血管新生などの特定の病理学的状態では、毛細管は、縁の角膜周囲の血管網から角膜に伸びている。角膜は血管新生化するにつれて曇るようになり、患者の視力を減少させる。
【０００６】
加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、６５歳以上の人々の重篤な視力喪失の主要な原因である（ｒｅｓｓｌｅらの非特許文献１、Ｇｕｙｅｒらの非特許文献２、Ｈｙｍａｎらの非特許文献３、Ｋｌｅｉｎ  ＆  Ｋｌｅｉｎの非特許文献４、および、Ｌｅｉｂｏｗｉｔｚらの非特許文献５）。臨床病理学的な記載はＡＭＤで作られているが、疾患の原因や病因に関してはほとんど理解されていない。
【０００７】
乾燥型ＡＭＤは黄斑変性症のより一般的な形態であり、中心視力の緩慢かつ進行性の喪失と共に、ドルーゼンの形成、黄斑の色素性および萎縮性の変化を特徴とする。浸潤型またはｃＡＭＤは、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）の形成に続発する網膜下出血、繊維症、および体液と、急激かつ顕著な視力喪失を特徴とする。血管新生ＡＭＤは、乾燥型ＡＭＤほど一般的ではないが、ＡＭＤによる重篤な視力喪失の８０％を占める。米国だけで毎年約２００，０００件、血管新生ＡＭＤが診断されている（２００６年１０月２４日に発行されたＭｉｌｌｅｒらの特許文献２を参照のこと。この文献は参照により本明細書に組み込まれる）。
【０００８】
現在のところ、浸潤型ＡＭＤと乾燥型ＡＭＤのような目の血管新生に関連する障害の有効な処置はごくわずかしかない。最近まで、レーザー光凝固術は、血管新生ＡＭＤの選択された事例に利用可能な唯一の治療であった。不運なことに、血管新生ＡＭＤの患者の大多数はレーザー光凝固術治療の基準を満たしていない。血管新生ＡＭＤの患者の約８５％は、定義が不十分な、難解な、あるいは、比較的広範囲な中心窩下脈絡膜血管新生を有しており、いずれの場合もレーザー療法を受けることができない。加えて、レーザー光凝固術は、ＣＮＶ組織に対する熱損傷に依存しており、これは重なっている網膜神経感覚上皮を破損し、結果的に視覚機能の喪失を伴う。レーザー光凝固術では事例の約５０％で生じる再発も悩みの種である。
【０００９】
光力学療法（ＰＤＴ）は、望ましくないＣＮＶを取り除き、血管新生ＡＭＤを処置することに関しては将来有望な結果を示している（Ｍｉｌｌｅｒらの非特許文献６、Ｓｃｈｍｉｄｔ−Ｅｒｆｕｒｔｈらの非特許文献７、非特許文献８、および、Ｈｕｓａｉｎらの非特許文献９）。ＰＤＴは、光増感剤またはＰＤＴ色素（腫瘍や新しく形成された血管などの増殖組織で蓄積する光増感剤または色素）を全身に投与し、その後、色素の吸収ピークに対応する波長において、低い強度および熱を生じない光で標的組織を照射することを含んでいる（Ｏｌｅｉｎｉｃｋらの非特許文献１０）。色素の励起により一重項酸素および遊離基（活性酸素種として一層よく知られている）が形成され、これは標的組織に対して光化学的損傷を引き起こす（Ｗｅｉｓｈａｕｐｔらの非特許文献１１）。
【００１０】
ＣＮＶを処置するためにＰＤＴを使用する研究によれば、光増感剤投与量、レーザー光用量、および放射のタイミングの適切な処置パラメーターを用いて、網膜血管、大きな脈絡膜血管を残しつつ、かつ、網膜神経感覚上皮内で最小の変化しかもたらさずに、実験的なＣＮＶに対する相対的な選択的損傷を達成することができる（Ｈｕｓａｉｎらの非特許文献１２、Ｈｕｓａｉｎらの非特許文献１３、Ｍｉｌｌｅｒらの非特許文献１４、およびＫｒａｍｅｒらの非特許文献１５）。緑のポルフィリン色素を使用するＰＤＴに基づく手順は、血管新生ＡＭＤの処置で使用するために、最近では様々な国々で承認されている。
【００１１】
しかしながら、臨床研究において、調査者たちは、処置の１〜３か月後に少なくともＣＮＶの一部で再発が生じたと報告した。光増感剤または光の用量を増加させてもこの再発を防げず、網膜血管に対する望ましくない非選択的な損傷を与え得ることさえあり得る（Ｍｉｌｌｅｒらの非特許文献１６）。３か月ごとに適用された反復ＰＤＴ療法を研究するために、複数の複数機関によるフェーズ３治験が進行中である。調査者たちは、ＰＤＴ療法を用いて中程度の視力喪失の割合が減ることを望んでいる（非特許文献８）。しかしながら、繰り返しのＰＤＴ療法により、網膜色素上皮（ＲＰＥ）や脈絡毛細管に対する損傷が蓄積し、進行性の処置に関連する視力喪失を引き起こしている。
【００１２】
被験体のＡＭＤの処置のために開発されたタンパク質は、アバスチン（商標）（ベバシズマブ（商標））、および、ルセンティス（商標）（ラニビズマブ（商標））のような血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、および、アイリーア（商標）（アフリベルセプト（商標））のようなＶＥＧＦデコイ受容体に特異的な抗体を含んでいる。しかしながら、何人かの患者が状態の改善を経験しているものの、医療サービス提供者はこれらの処置の効果はそれぞれの患者の独特の生態に基づいて高度に個別化されていることを知っている。したがって、これらのタンパク質で処置されたすべての患者が改善を経験するとは限らない。
【００１３】
眼疾患のいくつかのタイプ、とりわけ、網膜と角膜の疾患は瘢痕組織の形成を伴う。これは、瘢痕組織形成の予防の特定の阻害が、視覚的な予後の改善をもたらす可能性が高い程度までは、視力喪失に寄与する。
【００１４】
目における瘢痕組織形成は、加齢黄斑変性における脈絡膜血管新生に関連し発生することもあり、瘢痕組織は盛んに滲み出て出血する血管成長期の退縮の後に最も顕著であり、それゆえ、瘢痕組織は中心窩の光受容体の後ろの網膜下の空間全体を占領することもあり、それにより、網膜神経感覚上皮の光受容体を、機能している網膜色素上皮と接触させない。現在のところ、網膜線維症、角膜繊維症、または網膜下線維症などの眼の繊維症や付随する視力喪失の処置に利用可能な方法はない。網膜下線維症の予防または抑制は、光凝固、ベルテポルフィン光力学療法、または、血管内皮細胞増殖因子の硝子体内の薬理学的な阻害によって達成することができる。しかしながら、こうした処置は網膜下血管新生における網膜下線維症を完全に防ぐことができるとは示されていない。網膜下線維症の他の原因としては、変性近視、脈絡膜破裂、外部の網膜瘢痕、および、脈絡膜炎、色素線条、または外部の網膜損傷の他の原因を伴うブルッフ膜瘢痕が挙げられる。
【００１５】
目における瘢痕組織形成は、例えば、増殖性糖尿病性網膜症、網膜静脈閉塞、鎌状赤血球症、および、ぶどう膜炎を含む、網膜前のおよび／または視神経乳頭の血管新生の形成をもたらす疾患に関連して生じることもある。瘢痕組織形成は一般に新しい血管新生よりもピークに達するのが遅く、同じ位置で新しい血管の退縮と同時であることが多い。近年の臨床観察によると、増殖性糖尿病性網膜症では、血管内皮細胞増殖因子阻害剤（ラニビズマブまたはベバシズマブ）の硝子体内での投与の後に、網膜前の新しい血管の迅速な退行が来る場合がある。不運なことに、攻撃的な網膜前線維症はこうした処置の数週間後に起こり、硝子体を早期に切除する必要に迫られることになる場合もある。
【００１６】
目における瘢痕組織形成は、増殖性硝子体網膜症として知られている状態である、裂孔原性網膜剥離を伴うことも分かっている。この状態では、事前に新しい血管が形成されなくとも繊維症は生じ、繊維細胞は、硝子体のおよび網膜の内表面上での、または、網膜下の空間内での異所性網膜色素上皮細胞の形質転換の結果、形成されると考えられている。現在のところ、網膜前膜切除による硝子体切除は、牽引性網膜剥離の一般に認可された唯一の処置方法である。
【００１７】
目における瘢痕組織形成は、末熟児網膜症の結果、一見すると、未熟な周辺の網膜内の血管新生化された組織と血管新生化されていない組織の間の分界線から出た新しい血管の形成に対する結果として、生じることもある。無血管性網膜の凍結融解壊死治療および光学的切除（ｐｈｏｔｏａｂｌａｔｉｏｎ  ）を含む現在の処置方法は、完全に網膜前線維症膜の収縮により引き起こされた牽引性網膜剥離に続発する視力喪失を防ぐには不十分である。現在のところ、網膜前膜の切除による硝子体切除が牽引性網膜剥離の認可された唯一の処置である。脈絡膜の新しい脈管による網膜下の空間の侵入は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）における視力喪失の主な原因である。血管新生ＡＭＤは血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）を特異的に阻害する処置の恩恵を受けるが、この治療ではごくわずかな患者の視力が正規化されるだけで、処置にもかかわらず約３０％がかなりの視力喪失を経験する（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄらの非特許文献１７、Ｂｒｏｗｎらの非特許文献１８）。
【００１８】
網膜下線維症は、視覚機能の局所的な喪失を伴って、網膜神経感覚上皮の下の瘢痕組織による網膜色素上皮の置き換えを引き起こす。増殖性の、すなわち、主として血管増殖性の（ｖａｓｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ）糖尿病性網膜症において、ラニビズマブまたはベバシズマブを使用するＶＥＧＦ−阻害剤処置は、病理学的な新しい血管の灌流を塞ぐ、すなわち、除去することができると報告されている。不運なことに、この潜在的に有益な反応は、ＶＥＧＦ阻害剤処置の導入後に数週間以内に起こる攻撃的な繊維症反応によって、ある程度相殺される。
【００１９】
目の前部における血管新生と炎症は、網膜疾患、脈絡膜疾患、または視神経疾患と同様に、前部疾患も悪化させることもある。重篤な事例は、虹彩上、毛様体上、および、前房隅角内での線維膜の形成を伴うこともあり得る。
【００２０】
繊維症が前記疾患における視力喪失をもたらすプロセスの不可欠な部分であるため、繊維症を除去することが困難または不可能であるため、および、繊維症によって引き起こされた損傷を修復することが困難または不可能なこともあり得るため、前記疾患の繊維症成分を除去するまたは減らすことができる治療法を施すことへの強力な論理的根拠がある。
【００２１】
一種の原発性白内障である前嚢下白内障（ＡＳＣ）は、前嚢の真下の濃い光散乱繊維症領域を特徴とする。この種の白内障は眼の外傷、炎症、および刺激作用（例えば、アトピー性皮膚炎）に関連付けられる。
【００２２】
結膜の瘢痕および繊維症は、繊維症が線維柱帯切除気泡（ｔｒａｂｅｃｕｌｅｃｔｏｍｙ  ｂｌｅｂ）への房水ドレナージを妨害する、緑内障を処置するためのろ過手術といった眼の手術後の特定の問題であるように思われる。
【００２３】
感染症（例えば、ヘルペス性角膜炎のようなウイルス感染）、角膜深くにおける手術、外傷、化学的／熱による火傷、および、遺伝性のジストロフィーを含む様々な角膜損傷は、炎症性の治癒反応を刺激することもあり、このとき、繊維症は、不透明化、規則的な弯曲の変化、および視力の低下をもたらす。
【００２４】
水晶体線維症は、白内障後手術または水晶体嚢の損傷後といった水晶体の創傷治癒とともに観察されることもある。白内障手術の後、後嚢の不透明化（ＰＣＯ）は一般に目の透明性の低下と移植された水晶体の偏位を引き起こし、これらは両方とも視力の低下を招く。
【００２５】
慢性的な紫外線暴露に関連付けられる結膜の非悪性の成長である翼状片は、線維性血管性組織を特徴とする。翼状片は局所刺激を引き起こすこともあり、乱視を誘発するまたは視軸に直接影響することによって視覚障害を引き起こすこともある。手術後の再発リスクは存在する。
【００２６】
繊維症は、特定の続発性閉塞隅角緑内障の病態生理学に関与している（例えば、血管新生緑内障における虹彩から線維性血管膜の成長は前房隅角の閉鎖をもたらす）。加えて、一連の証拠は、原発性開放隅角緑内障の進行において、線維柱帯網ＥＣＭ沈着と、結果として生じる水性排出の妨害を密接に結び付ける。
【００２７】
いくつかの増殖因子は繊維症を実験的に刺激するために記載されている。具体的には、形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β）について、眼内繊維症の促進と網膜色素上皮細胞の繊維細胞への変化とにおける役割が実証されてきた。血管新生に関連する障害と線維症に関連する障害を処置または予防するための改善された組成物と方法が依然として必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２８】
【特許文献１】国際出願番号ＷＯ  ２００９／１０２４８８号
【特許文献２】米国特許７，１２５，５４２号
【非特許文献】
【００２９】
【非特許文献１】１９８８  Ｓｕｒｖ．  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．  ３２：  ３７５  ４１３
【非特許文献２】１９８６  Ａｒｃｈ．  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．  １０４：  ７０２−７０５
【非特許文献３】１９８３  Ａｍ．  Ｊ．  Ｅｐｉｄｅｍｏｌ．  １８８：  ８１６−８２４
【非特許文献４】１９８２  Ａｒｃｈ．  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．  １００：  ５７１−５７３
【非特許文献５】１９８０  Ｓｕｒｖ．  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．  ２４：  ３３５−６１０
【非特許文献６】１９９９  Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １１７：  １１６１−１１７３
【非特許文献７】１９９９  Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １１７：  １１７７−１１８７
【非特許文献８】ＴＡＰ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ  １９９９  Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １１７：  １３２９−１３４５
【非特許文献９】１９９９  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：  Ｍｏｓｂｙ  ２９７−３０７
【非特許文献１０】１９９８  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １５０：  Ｓ１４６−Ｓ１５６
【非特許文献１１】１９７６  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ３６：  ２３２６−  ２３２９
【非特許文献１２】１９９６  Ａｒｃｈ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １２１１４：  ９７８−９８５
【非特許文献１３】１９９７  Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １２：  １４−２５
【非特許文献１４】１９９５  Ａｒｃｈ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １１３：  ８１０−８１８
【非特許文献１５】１９９６  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １０３（３）：  ４２７−４３８
【非特許文献１６】１９９９  Ａｒｃｈ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １１７：  １１６１−１１７３
【非特許文献１７】ＮＥＪＭ  ２００６；３５５：１４１９−
【非特許文献１８】ＮＥＪＭ  ２００６；３５５：１４３２−
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００３０】
本発明の態様は、眼の血管新生または眼の繊維症を阻害する際に使用される医薬組成物を提供し、医薬組成物は薬学的に適切な担体または希釈剤を含み、医薬組成物の量は、眼の血管新生または眼の繊維症を阻害するのに十分なガレクチンタンパク質またはその一部の活性を阻害または調節するのに有効である。特定の実施形態では、阻害剤は、炭水化物認識ドメインの少なくとも１つのアミノ酸を含むガレクチンタンパク質の一部に結合する。
【００３１】
組成物の様々な実施形態では、ガレクチンタンパク質は、ガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７、および、ガレクチン−８の群から選択される。様々な実施形態における組成物は以下の少なくとも１つから選択される：薬物、ポリマー、タンパク質、ペプチド、炭水化物、低分子量化合物、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、および、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの遺伝物質。例えば、遺伝物質は、ガレクチンの発現を否定的に調節するｓｉＲＮＡである。様々な実施形態における薬物は、治療上、予防的に、および／または、薬理学的あるいは生理学的に有益な、活性薬剤、物質、または、その混合物であり、細胞または被験体に送達されて、所望の有益な効果をもたらす。薬物は例えば、タンパク質、ペプチド、または核酸を含む。
【００３２】
様々な実施形態における医薬組成物は、眼の血管新生に関連した疾患または疾病を処置または予防するのに有効である。本明細書で使用されているように、眼の「疾患または疾病」との用語は、以下の少なくとも１つによって特徴付けられた任意の障害を意味する：目に対する過度の血管新生、外傷、または損傷、瘢痕に関連付けられる手術、例えば、緑内障ろ過手術；血管新生緑内障；角膜外傷；結膜炎後瘢痕；翼状片、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、例えば、湿潤型ＡＭＤ、乾燥型ＡＭＤ；乾燥型ＡＭＤから湿潤型ＡＭＤへの変換；増殖性糖尿病性網膜症；糖尿病性黄斑浮腫；および、角膜血管新生（トラコーマ）。あるいは、「障害または疾病」との用語は、眼の血管新生によって引き起こされた、または、眼の血管新生に由来する、任意の病状である。様々な実施形態では、障害または疾病は、眼の血管新生、網膜浮腫、糖尿病性網膜症、網膜虚血に関連する後遺症、後部血管新生、および血管新生緑内障と関連付けられる。
【００３３】
様々な実施形態における医薬組成物は、眼の繊維症に関連した疾患または疾病を処置または予防するのに有効である。本明細書で使用されているように、眼の「疾患または疾病」との用語は、以下の少なくとも１つによって特徴付けられた任意の障害を意味する：眼の１つ以上の解剖位置における過度な繊維症またはコラーゲン沈着、とりわけ眼に対する外傷または他の損傷による繊維症、手術によって引き起こされる瘢痕、例えば、緑内障ろ過手術；血管新生緑内障；角膜外傷；結膜炎後瘢痕；翼状片、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、例えば、湿潤型ＡＭＤまたは乾燥型ＡＭＤ；乾燥型ＡＭＤから湿潤型ＡＭＤへの変換；増殖性糖尿病性網膜症；糖尿病性黄斑浮腫；病的な近視、未熟児網膜症、網膜色素の上皮の分離、スティーヴェンズ−ジョンソン症候群、ぶどう膜炎、前嚢下白内障、ドライアイ疾患、および、角膜血管新生（トラコーマ）。あるいは、「障害または疾病」との用語は、眼の繊維症によって引き起こされた、または、眼の繊維症に由来する、任意の病状である。様々な実施形態では、障害または疾病は、眼の繊維症、網膜の瘢痕、糖尿病性網膜症、網膜虚血に関連付けられる後遺症、および緑内障に関連する。
【００３４】
様々な実施形態における医薬組成物はβガラクトシドである。様々な実施形態では、医薬組成物は誘導体化または機能化される。様々な実施形態では、医薬組成物は代謝可能ではないか、または、代替的な実施形態では代謝可能である。
【００３５】
関連する実施形態における組成物は、抗血管新生、抗腫瘍、抗ウイルス、抗菌性、抗ミコバクテリア、抗菌、抗増殖、抗炎症、および、抗アポトーシスからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤をさらに含んでいる。例えば、薬剤は目における感染症を防ぐ、抗菌性分子である。
【００３６】
眼の血管新生または眼の繊維症の阻害に使用される組成物は、様々な実施形態で、以下の一般式を含み：
【００３７】
【化１】
0006366598.tif 000002
ピラノース環の構造はＤ−ガラクトであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ４からなる群から選択されるか、または、単結合であり、Ｙは、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ４からなる群から選択されるか、または、単結合であり、Ｒ１は、糖類、水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基、および複素環からなる群から選択され、Ｒ２は、ＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ、ＰＯ、およびＰＯ２からなる群から選択され、Ｒ３は、以下からなる群：少なくとも４つの炭素原子のアルキル基、少なくとも４つの炭素原子のアルケニル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４つの炭素原子のアルキル基またはアルケニル基、カルボキシ基とアミノ基の両方で置換された少なくとも４つの炭素原子のアルキル基、および、ハロゲンで置換された少なくとも４つの炭素原子のアルキル基；フェニル基、カルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、アルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンと少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンと少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、ニトロ基で置換されたフェニル基、スルホ基で置換されたフェニル基、アミン基で置換されたフェニル基、ヒドロキシ基で置換されたフェニル基、カルボニル基で置換されたフェニル基、および、置換されたカルボニル基で置換されたフェニル基；および、フェニルアミノ基から選択され、または、Ｒ４は、水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基、および、複素環からなる群から選択される。
【００３８】
組成物の関連する実施形態では、糖類（Ｒ１）は、グルコース、マンノース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フコース、フルクトース、キシロース、シアル酸、グルクロン酸、イズロン酸、二糖類、または、上記の糖類の少なくとも２つを含むオリゴ糖、および、これらの誘導体からなる群から選択される。
【００３９】
組成物の様々な実施形態では、ＹはＮＨであり、ＸはＯであり、または、ハロゲンは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩからなる群から選択される。
【００４０】
様々な実施形態における組成物は以下から選択される：メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［３−カルボキシプロパンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［（｛Ｚ｝−３−カルボキシプロペンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド）；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−ベンズアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（β−Ｄ−グルコピラノシド）；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［２−カルボキシ−ベンズアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［４−メトキシ−２，３，５，６−テトラフルオロベンズ（ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｂｅｎｚ）−アミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド）；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［２−カルボキシ−３，４，５，６−テトラフルオロベンズアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−メタンスルホンアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［−４−ニトロベンゼンスルホンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−フェニルアミノカルボニルアミノ（ａｍ−ｉｎｏ）−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−アミノアセトアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（−３−［｛２Ｓ｝−２−アミノ−３−カルボキシ−プロパンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド。
【００４１】
様々な実施形態の組成物は、以下の一般式を含み、
【００４２】
【化２】
0006366598.tif 000003
ピラノース環の１つの構造はβ−Ｄ−ガラクトであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ５からなる群から選択され、Ｙは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ５からなる群から選択されるか、または、単結合であり、Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ５からなる群から選択されるか、または、単結合であり、Ｒ１とＲ３は、ＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ、ＰＯ２、ＰＯ、およびＣＨ２からなる群から独立して選択されるか、または、単結合であり、Ｒ２とＲ４は、以下からなる群：少なくとも４つの炭素のアルキル基、少なくとも４つの炭素のアルケニル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４つの炭素のアルキル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４つの炭素のアルケニル基、アミノ基で置換された少なくとも４つの炭素のアルキル基、アミノ基で置換された少なくとも４つの炭素のアルケニル基、アミノ基とカルボキシ基の両方で置換された少なくとも４つの炭素のアルキル基、アミノ基とカルボキシ基の両方で置換された少なくとも４つの炭素のアルケニル基、および、１つ以上のハロゲンで置換されたアルキル基；少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたフェニル基、および、少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたフェニル基；または、ナフチル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたナフチル基、および、少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたナフチル基；ヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたヘテロアリール基、���なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたヘテロアリール基、および、少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ６とＲ８は、水素、アシル基、アルキル基、ベンジル基、および、糖類からなる群から独立して選択され、Ｒ７は、水素、アシル基、アルキル基、およびベンジル基からなる群から選択され、および／または、Ｒ９は水素、メチル基、ヒドロキシメチル基、アシルオキシメチル基、アルコキシメチル基、および、ベンジルオキシメチル基からなる群から選択される。
【００４３】
組成物の様々な実施形態では、ＹはＮＨである。組成物の様々な実施形態では、ＺはＮＨである。組成物の様々な実施形態では、ＸはＳである。組成物の様々な実施形態では、Ｒ１はＣＯである。組成物の様々な実施形態では、Ｒ３はＣＯである。組成物の様々な実施形態では、Ｒ２またはＲ４は芳香族であり、例えば芳香環であり、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８のいずれかは水素であり、または、Ｒ９はヒドロキシメチル基である。
【００４４】
様々な実施形態における組成物は、ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−ベンズアミド−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン（１７）、ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−メトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−（３，５−ジメトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−ニトロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ（３−デオキシ−３−（２−ナフトアミド（ｎａｐｈｔｈａｍｉｄｏ））−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−メトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−ニトロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−［４−（ジメチルアミノ）−ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−メチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−クロロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−アセチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−［２−（３−カルボキシ）−ナフトアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−［３−デオキシ−３−（３，４−メチレンジオキシ）ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−メトキシカルボニルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−カルボキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−ヒドロキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３，５−ジベンジルオキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−メトキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−ノニロキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−ヒドロキシ−５−メトキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−ヒドロキシ−５−ノニロキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−［３−ベンジルオキシ−５−（４−フルオロ−ベンジルオキシ）−ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−［３−メトキシ−５−（４−メチル−ベンジルオキシ）−ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；または、ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−アリルオキシ−５−ベンジルオキシ−ベンズアミド）−β−���−ガラクトピラノシル）スルファンである。
【００４５】
組成物は、様々な実施形態で、ガラクトシド、例えば、３−トリアゾリル（ｔｒｉａｘｏｌｙｌ）−ガラクトシドを含んでいる。様々な実施形態では、組成物は、以下に示される一般式を含み、
【００４６】
【化３】
0006366598.tif 000004
ピラノース環の構造はＤ−ガラクトであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ４からなる群から選択されるか、または、単結合であり、Ｙは、ＣＨ２、ＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ、ＰＯ２、およびＰＯ、フェニル、からなる群から選択されるか、または、単結合であり、Ｒ１は、糖類、置換された糖類、Ｄガラクトース、置換されたＤガラクトース、Ｃ３−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル−置換されたＤガラクトース、水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基、および、複素環、ならびに、これらの誘導体、および、アミノ基、置換されたアミノ基、イミノ基、または、置換されたイミノ基からなる群から選択され、および／または、Ｒ２は、水素、アミノ基、置換されたアミノ基、アルキル基、置換されたアルキル基、アルケニル基、置換されたアルケニル基、アルキニル基、置換されたアルキニル基、アルコキシ基、置換されたアルコキシ基、アルキルアミノ基、置換されたアルキルアミノ基、アリールアミノ基、置換されたアリールアミノ基、アリールオキシ基、置換されたアリールオキシ基、アリール基、置換されたアリール基、ヘテロアリール基、置換されたヘテロアリール基、および、複素環、置換された複素環からなる群から選択される。
【００４７】
組成物の関連する実施形態における糖類は、グルコース、マンノース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フコース、フルクトース、キシロース、シアル酸、グルクロン酸、イズロン酸、ガラクツロン酸、二糖類、または、少なくとも上記の糖類の２つを含むオリゴ糖、および、これらの誘導体からなる群から選択される。
【００４８】
組成物の様々な実施形態では、ＹはＣＯ、ＳＯ２、または単結合である。組成物の様々な実施形態では、Ｒ２はアミンまたはアリール基である。組成物の様々な実施形態では、Ｒ２は置換されたフェニル基であり、置換基は、ハロゲン、アルコキシ、アルキル、ニトロ、スルホ、アミノ、ヒドロキシ、または、カルボニルの基からなる群から選択された１つ以上である。組成物の様々な実施形態では、Ｒ１はガラクトース、グルコース、またはＮ−アセチルグルコサミンである。組成物の様々な実施形態では、Ｒ１は置換されたガラクトースである。組成物の様々な実施形態では、Ｒ１は、置換されたガラクトース、置換されたグルコース、または、置換されたＮ−アセチルグルコサミンのいずれかである。組成物の様々な実施形態では、Ｒ１はＣ３−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル−置換されたガラクトースである。組成物の様々な実施形態では、ＸはＯまたはＳである。
【００４９】
様々な実施形態における組成物は、以下から選択された基の少なくとも１つを含んでいる：メチル３−デオキシ−３−（１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−（４−プロピル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−（４−メトキシカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−（４−（１−ヒドロキシ−１−シクロヘキシル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−（４−フェニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−（４−ｐ−トリルスルホニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ｇａｌ−ａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）；メチル３−（４−メチルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−（４−ブチルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−（４−ベンジルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−｛４−（３−ヒドロキシプロプ（ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐ）−１−イルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−｛４−［２−（Ｎ−モルホリノ）−エチルアミノカルボニル］−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−（４−メチルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド、ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］）−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（３−メトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（４−メトキシフェニル）−Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（３，５−ジメトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デ���キシ−３−｛４−（１−ナフチル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−ナフチル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（３−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（４−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−３−インドール（ｉｎｄｏｌ）−カルバルドキシム（ｃａｒｂａｌｄｏｘｉｍ）；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−３−インドール−カルバルドキシム；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２−ヒドロキシ−５−ニトロ−フェニル）−カルバルドキシム；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２−ヒドロキシ−５−ニトロ−フェニル）−カルバルドキシム；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２，５−ジヒドロキシフェニル）−カルバルドキシム；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２，５−ジヒドロキシフェニル）−カルバルドキシム；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−１−ナフチル−カルバルドキシム；または、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−１−ナフチル−カルバルドキシム。
【００５０】
様々な実施形態における組成物は、ジガラクトシド（ｄｉｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ）またはチオジガラクトシド（ｔｈｉｏｄｉｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ）を含んでおり、例えば、組成物は、以下に示される一般式を含み、
【００５１】
【化４】
0006366598.tif 000005
ピラノース環の構造はＤ−ガラクトであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、およびＳＯからなる群から選択され、ＹとＺは、独立して、ＣＯＮＨまたは１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環から選択され、Ｒ１とＲ２は、独立して、以下からなる群から選択される：少なくとも４つの炭素のアルキル基、少なくとも４つの炭素のアルケニル基、少なくとも４つの炭素のアルキニル基；カルバモイル基、アルキル基で置換されたカルバモイル基、アルケニル基で置換されたカルバモイル基、アルキニル基で置換されたカルバモイル基、アリール基で置換されたカルバモイル基、置換されたアルキル基で置換されたカルバモイル基、および、置換されたアリール基で置換されたカルバモイル基；少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルキル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのトリフルオロメチル基で置換されたフェニル基；少なくとも１つのトリフルオロメトキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたフェニル基、および、少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたフェニル基；ナフチル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルキル基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたナフチル基、および、少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたナフチル基；ヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたヘテロアリール基、および、少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたヘテロアリール基；ならびに、チエニル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたチエニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたチエニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたチエニル基、および、少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたチエニル基。
【００５２】
組成物の様々な実施形態では、ＹはＣＯＮＨであり、例えば、ＣＯＮＨ基はＮ原子によってピラノース環に結合される。組成物の様々な実施形態では、ＺはＣＯＮＨである。組成物の様々な実施形態では、ＣＯＮＨ基はＮ原子によってシクロヘキサンに結合される。組成物の様々な実施形態では、Ｙは１Ｈ−１，２，３−トリアゾールであり、例えば、組成物の関連する実施形態では、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環はＮ１原子によってピラノース環に結合される。組成物の様々な実施形態では、Ｒ１は１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環のＣ４原子に結合される。
【００５３】
組成物の様々な実施形態では、Ｚは１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環である。例えば、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環は、Ｎ１原子によってシクロヘキサンに結合される。組成物の様々な実施形態では、Ｒ２は１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環のＣ４原子に結合される。
【００５４】
組成物の様々な実施形態では、Ｒ１とＲ２は、カルバモイル基、アルキル化したカルバモイル基、アルケニル化したカルバモイル基、アリール化したカルバモイル基、フェニル基、置換されたフェニル基、ハロゲン化したフェニル基、フッ素化したフェニル基、塩素化したフェニル基、臭素化したフェニル基、アルキル化したフェニル基、アルケニル化したフェニル基、トリフルオロメチル化したフェニル基、メトキシ化したフェニル基、トリフルオロメトキシ化したフェニル基、ナフチル基、置換されたナフチル基、ヘテロアリール基、置換されたヘテロアリール基、チエニル基、および、置換されたチエニル基からなる群から独立して選択される。
【００５５】
組成物の様々な実施形態では、Ｒ１は、アルキル化したカルバモイル基、フッ素化したフェニル基、または、チエニル基である。組成物の様々な実施形態では、Ｒ２は、アルキル化したカルバモイル基、フッ素化したフェニル基、または、チエニル基である。組成物の様々な実施形態では、ＸはＯまたはＳである。
【００５６】
様々な実施形態における組成物は、以下からなる群から選択される：（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（Ｎ−（１−プロピル）−カルバモイル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）シクロヘキシル）−３−デオキシ−（３−（４−（Ｎ−（１−プロピル）−カルバモイル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル））−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−シクロヘキシル）−３−デオキシ−３−（４−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−シクロヘキシル）−３−デオキシ−３−（４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−シクロヘキシル）−３−デオキシ−３−（４−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（３−チエニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−シクロヘキシル）−３−デオキシ−３−（４−（３−チエニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（Ｎ−（１−プロピル）−カルバモイル）１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−シクロヘキシル）−３−デオキシ−３−（４−（Ｎ−（１−プロピル）−カルバモイル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、および、（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−クロロベンズアミド）−シクロヘキシル）３−デオキシ−３−（４−クロロベンズアミド）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド。組成物の様々な実施形態では、阻害剤は、ＴＤ１３９、化合物３２、あるいは、その一部またはホモログを含む。
【００５７】
様々な実施形態における組成物はジガラクトシドを含み、例えば、組成物は一般式（１３）を含み、
【００５８】
【化５】
0006366598.tif 000006
ピラノース環の少なくとも１つの構造はβ−Ｄガラクトであり、Ｘは単結合であり、Ｒは、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびトリフルオロメチルからなる群から選択された１つ以上の置換基によって、任意の位置で置換されたフェニル基であり、あるいは、Ｒはチエニル基である。
【００５９】
組成物の様々な実施形態では、Ｒは、フルオロ、クロロ、およびブロモからなる群から選択された１つ以上の置換基によって、任意の位置で置換されたフェニル基である。例えば、Ｒは、フルオロから選択された１つ以上の置換基によって任意の位置で置換されたフェニル基である。一般に、両方のピラノース環の構造はＤ−ガラクトである。
【００６０】
本発明の態様は、被験体の眼の血管新生または眼の繊維症を処置または予防する方法を提供し、該方法は、治療上有効な量の少なくとも１つの組成物を被験体に投与する工程を含み、組成物はガレクチンタンパク質またはその一部の阻害剤を含む。被験体は、例えばヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、げっ歯類、および雌ウシなどの哺乳動物である。
【００６１】
方法の様々な実施形態における眼の血管新生または眼の繊維症は、瘢痕、例えば、緑内障ろ過手術、血管新生緑内障；角膜外傷；結膜炎後瘢痕；翼状片、ＡＭＤ、例えば、湿潤型ＡＭＤまたは乾燥型ＡＭＤ、乾燥型ＡＭＤから湿潤型ＡＭＤへの変換；増殖性糖尿病性網膜症；糖尿病黄斑浮腫；または、角膜血管新生（トラコーマ）に関連付けられる手術によって従来処置される疾患または疾病に関連付けられる。
【００６２】
方法の様々な実施形態におけるガレクチンタンパク質は、以下の群から選択される：ガレクチン−１タンパク質、ガレクチン−３タンパク質、ガレクチン−７タンパク質、および、ガレクチン−８タンパク質、ならびに、組成物は以下の少なくとも１つから選択される：薬物、ポリマー、タンパク質、ペプチド、炭水化物、低分子量化合物、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、および、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの遺伝物質。
【００６３】
様々な実施形態における方法は、疾患または疾病のパラメーターまたは指標の低下を観察する工程を含み、例えば、パラメーターまたは指標はマーカーである。例えば、マーカーは、眼の血管新生または眼の繊維症の存在または不在を示す分子（例えば増殖因子）である。
【００６４】
様々な実施形態における方法は、組成物を投与する前に組成物を操作する工程をさらに含み、組成物はガレクチンタンパク質に結合し、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦ受容体−２経路を調節するか、あるいは、組成物はガレクチンタンパク質の発現を調節する。様々な実施形態における方法は、組成物を投与する前に組成物を操作する工程をさらに含み、組成物はガレクチンタンパク質に結合して繊維芽細胞増殖因子経路を調節するか、あるいは、組成物はガレクチンタンパク質の発現を調節する。
【００６５】
本発明の態様は、被験体の眼の血管新生または眼の繊維症を処置または予防する方法を提供し、該方法は、治療上有効な量の少なくとも１つの組成物を被験体に投与する工程を含み、組成物は、ガレクチンタンパク質またはその一部の阻害剤を含み、投与する工程は、本明細書に記載される医薬組成物のいずれかを被験体を接触させる工程を含む。方法のいくつかの実施形態では、被験体は哺乳動物である。
【００６６】
様々な実施形態における方法は、繊維症の減少を観察または検知する工程をさらに含んでいる。方法の様々な実施形態において、投与する工程は、少なくとも以下の投与量を含む組成物を、被験体または被験体の組織に接触させる工程を含む：約０．０１ナノグラム（ｎｇ）〜約１ｎｇ（ｎｇ）、約１ｎｇ〜約１０ｎｇ、約１０ｎｇ〜約２０ｎｇ、約２０ｎｇ〜約３０ｎｇ、約３０ｎｇ〜約４０ｎｇ、約４０ｎｇ〜約５０ｎｇ、約５０ｎｇ〜約１００ｎｇ、１００ｎｇ〜約２００ｎｇ、２００ｎｇ〜約３００ｎｇ、約３００ｎｇ〜約４００ｎｇ、約４００ｎｇ〜約６００ｎｇ、約６００ｎｇ〜約８００ｎｇ、約１マイクログラム（μｇ）〜約５μｇ、約５μｇ〜約２０μｇ、約２０μｇ〜約４０μｇ、約４０μｇ〜約６０μｇ、約６０μｇ〜約８０μｇ、約８０μｇ〜約１００μｇ、約１００μｇ〜約２００μｇ、約２００μｇ〜約３００μｇ、および、約３００μｇ〜約４００μｇ。例えば、投与量は、約０．０１ｎｇ〜約１０ｎｇ、または、約１０ｎｇ〜約１００ｎｇ、約１００ｎｇ〜約５００ｎｇ、約５００ｎｇ〜約２μｇ、または、約２μｇ〜約２５０μｇ、または、約２５０μｇ〜約７５０μｇである。
【００６７】
様々な実施形態では、被験体に投与する前に、該方法は、阻害剤をコード化するポリヌクレオチド配列を操作する工程をさらに含み、阻害剤は、ガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７、または、ガレクチン−８の炭水化物認識ドメインを模倣する結合タンパク質である。例えば、阻害剤は融合タンパク質である。
【００６８】
様々な実施形態における方法は、投与する前に、注射、点眼薬、パッチ、軟膏、ゲル、または噴霧剤からなる群から選択された眼内送達のための組成物を処方する工程をさらに含む。例えば、阻害剤は、ｐＨ中性で、緩衝され、および、等張である組成物中で処方される。
【００６９】
方法の様々な実施形態において被験体に組成物を投与する工程は、眼球内、硝子体内、角膜内、結膜内、結膜下、静脈内、または、テノン嚢（ｔｅｎｏｎｌｙ）などの経路によって、組成物を注入する工程を含んでいる。様々な実施形態では、眼の血管新生または眼の繊維症は、目の血管新生、網膜浮腫、糖尿病性網膜症、網膜虚血に関連付けられる後遺症、後部血管新生、および、血管新生緑内障に関連付けられる。方法の様々な実施形態では、阻害剤は、ＴＤ１３９、化合物３２、あるいは、その一部またはホモログを含む。
【００７０】
本発明の態様は、被験体における、または、被験体からの細胞における、眼の血管新生または眼の繊維症を処置または予防するためのキットを提供し、キットは、ガレクチンタンパク質またはその一部を阻害する医薬組成物であって、ガレクチンタンパク質に結合してＶＥＧＦ／ＶＥＧＦ受容体−２経路または繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）経路を調節するか、あるいは、医薬組成物はガレクチンタンパク質の発現を調節する、医薬組成物、使用説明書；および、容器を含む。医薬組成物は、本明細書に記載される組成物のいずれかを含んでいる。
【００７１】
本発明の態様は、被験体における、または、被験体からの細胞における、眼の血管新生または眼の繊維症を処置または予防するためのキットを提供し、キットは、ガレクチンタンパク質またはその一部を阻害する医薬組成物であって、活性化合物がガレクチンタンパク質に結合してＶＥＧＦ／ＶＥＧＦ受容体−２経路を調節するか、あるいは、医薬組成物がガレクチンタンパク質の発現を調節する、医薬組成物、使用説明書；および、キットを含む。医薬組成物は、例えば、ＴＤ１３９化合物または化合物３２化合物を含む、本明細書に記載される組成物のいずれかを含む。
【００７２】
様々な実施形態におけるキットは、組成物を投与するための塗布器または装置をさらに含み、例えば、塗布器または装置は、シリンジ、針、噴霧器、スポンジ、ゲル、ストリップ、テープ、包帯、トレー、ストリング、または、ナノ構造体である。
【００７３】
キットの様々な実施形態における組成物は、以下の少なくとも１つから選択される：薬物、ポリマー、タンパク質、ペプチド、炭水化物、低分子量化合物、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、および、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの遺伝物質。関連する実施形態では、組成物は薬学的に適切な担体または希釈剤で処方される。
【００７４】
様々な実施形態におけるキットは、対照、例えば、アバスチン（商標）（ベバシズマブ（商標））、ルセンティス（商標）（ラニビズマブ（商標））、または、アイリーア（商標）（アフリベルセプト（商標））を含み、対照はＶＥＧＦに特異的に結合し、ＶＥＧＦによって引き起こされた血管新生を阻害する。様々な実施形態では、対照は、ＦＧＦまたはＦＧＦ経路に結合するか阻害する。キットの様々な実施形態では、医薬組成物は、以下の群：ガレクチン−１タンパク質、ガレクチン−３タンパク質、ガレクチン−７タンパク質、および、ガレクチン−８タンパク質から選択されるガレクチンタンパク質に結合する。
【００７５】
本発明の態様は、眼の血管新生または眼の繊維症の疾病の阻害に使用される医薬組成物を提供し、医薬組成物は薬学的に適切な担体または希釈剤を含み、医薬組成物の量は、眼の血管新生または眼の繊維症を阻害するのに十分なガレクチンタンパク質またはその一部の活性を阻害または調節するのに有効である。一般に、担体と希釈剤は、被験体の目に適合し、無毒で、かつ、刺激しないように特別に選択される。
【００７６】
医薬組成物の様々な実施形態では、ガレクチンタンパク質は、ガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７およびガレクチン−８の群から選択される。ガレクチン−タンパク質は、例えば、ヒト、マウス、ラット、またはウサギに由来する。
【００７７】
様々な実施形態における医薬組成物は以下の少なくとも１つから選択される：薬物、ポリマー、タンパク質、ペプチド、炭水化物、低分子量化合物、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、および、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの遺伝物質。例えば、タンパク質はガレクチンタンパク質のエピトープに特異的に結合する抗体であり、抗体はガレクチンタンパク質の活性を阻害する。特定の実施形態では、抗体は、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、またはその一部である。例えば、抗体はガレクチン炭水化物結合ドメイン領域またはその一部に特異的に結合する。
【００７８】
様々な実施形態における医薬組成物は、眼の血管新生または眼の繊維症に関連した疾病を処置または予防するのに有効であり、例えば、疾患または疾病は過度の血管新生に関連付けられる。様々な実施形態における医薬組成物は、以下の群から選択された疾病を処置または予防するのに有効である：目またはその一部（例えば、網膜、レンズ、および角膜）に対する外傷または損傷；瘢痕に関連付けられる手術、例えば、緑内障ろ過手術；血管新生緑内障；角膜外傷；角膜ジストロフィー、結膜炎後瘢痕；翼状片、ＡＭＤ、例えば湿潤型ＡＭＤまたは乾燥型ＡＭＤ；乾燥型ＡＭＤから湿潤型ＡＭＤへの変換；増殖性糖尿病性網膜症；糖尿病性黄斑浮腫；および、角膜血管新生（トラコーマ）。
【００７９】
様々な実施形態では、医薬組成物は、眼の繊維症、または、疾病に関連する別のタイプの繊維症を処置または予防するのに有効である。
【００８０】
様々な実施形態における医薬組成物は、以下の構造を有する化合物を含み、
【００８１】
【化６】
0006366598.tif 000007
化合物は被験体の眼の血管新生の疾病を阻害する。
【００８２】
関連する実施形態における医薬組成物は、誘導体化または機能化されるベータ・ガラクトシドであり、例えば、組成物は以下の一般式を有し、
【００８３】
【化７】
0006366598.tif 000008
ピラノース環の構造はＤ−ガラクトであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ４からなる群から選択されるか、または、単結合であり、Ｙは、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ４からなる群から選択されるか、または、単結合であり、Ｒ１は、ｃ）糖類、ｄ）水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基、および、複素環からなる群から選択され、Ｒ２は、ＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ、ＰＯ、およびＰＯ２からなる群から選択され、Ｒ３は、以下からなる群：少なくとも４つの炭素原子のアルキル基、少なくとも４つの炭素原子のアルケニル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４つの炭素原子のアルキル基またはアルケニル基、カルボキシ基とアミノ基の両方で置換された少なくとも４つの炭素原子のアルキル基、および、ハロゲンで置換された少なくとも４つの炭素原子のアルキル基；フェニル基、カルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、アルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンと少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンと少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、ニトロ基で置換されたフェニル基、スルホ基で置換されたフェニル基、アミン基で置換されたフェニル基、ヒドロキシ基で置換されたフェニル基、カルボニル基で置換されたフェニル基、および、置換されたカルボニル基で置換されたフェニル基；および、フェニルアミノ基から選択され、Ｒ４は、水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基、および、複素環からなる群から選択される。
【００８４】
様々な実施形態では、組成物は代謝可能であるか代謝可能ではない。医薬組成物の様々な実施形態では、糖類Ｒ１は、グルコース、マンノース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フコース、フルクトース、キシロース、シアル酸、グルクロン酸、イズロン酸、二糖類、または、上記の糖類の少なくとも２つを含むオリゴ糖、および、これらの誘導体からなる群から選択される。
【００８５】
医薬組成物の様々な実施形態では、ＹはＮＨであり、ＸはＯであり、または、ハロゲンは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩからなる群から選択される。
【００８６】
様々な実施形態における医薬組成物は以下から選択される１つである：メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［３−カルボキシプロパンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［（｛Ｚ｝−３−カルボキシプロペンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド）；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−ベンズアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（β−Ｄ−グルコピラノシド）；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［２−カルボキシ−ベンズアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［４−メトキシ−２，３，５，６−テトラフルオロベンズ（ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｂｅｎｚ）−アミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド）；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［２−カルボキシ−３，４，５，６−テトラフルオロベンズアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−メタンスルホンアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（−３［−４−ニトロベンゼンスルホンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−フェニルアミノカルボニルアミノ−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−アミノアセトアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；および、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（−３−［｛２Ｓ｝−２−アミノ−３−カルボキシ−プロパンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド。
【００８７】
様々な実施形態では、医薬組成物は以下の一般式を有し、
【００８８】
【化８】
0006366598.tif 000009
ピラノース環の１つの構造はβ−Ｄ−ガラクトであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＨ、ＣＨ２、および、ＮＲ５からなる群から選択され、Ｙは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２、および、ＮＲ５からなる群から選択されるか、または、単接合であり、Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ５からなる群から選択されるか、または、単結合であり、Ｒ１とＲ３は、ＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ、ＰＯ２、ＰＯ、およびＣＨ２からなる群から独立して選択されるか、または、単結合であり、Ｒ２とＲ４は、以下からなる群：少なくとも４つの炭素のアルキル基、少なくとも４つの炭素のアルケニル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４つの炭素のアルキル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４つの炭素のアルケニル基、アミノ基で置換された少なくとも４つの炭素のアルキル基、アミノ基で置換された少なくとも４つの炭素のアルケニル基、アミノ基とカルボキシ基の両方で置換された少なくとも４つの炭素のアルキル基、アミノ基とカルボキシ基の両方で置換された少なくとも４つの炭素のアルケニル基、および、１つ以上のハロゲンで置換されたアルキル基；少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたフェニル基、および、少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたフェニル基；ナフチル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたナフチル基、および、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたナフチル基、および、少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたナフチル基；ヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたヘテロアリール���、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたヘテロアリール基、および、少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ６とＲ８は、水素、アシル基、アルキル基、ベンジル基、および、糖類からなる群から独立して選択され、Ｒ７は、水素、アシル基、アルキル基、およびベンジル基からなる群から選択され、または、Ｒ９は水素、メチル基、ヒドロキシメチル基、アシルオキシメチル基、アルコキシメチル基およびベンジルオキシメチル基からなる群から選択される。
【００８９】
医薬組成物の様々な実施形態では、ＹはＮＨであり、ＺはＮＨであり、ＸはＳであり、Ｒ１はＣＯであり、Ｒ３はＣＯであり、Ｒ２またはＲ４は芳香族であり、例えば、芳香環であり、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８のいずれかは水素であり、または、Ｒ９はヒドロキシメチル基である。
【００９０】
様々な実施形態における医薬組成物は、以下の群から選択された少なくとも１つを含んでいる：ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−ベンズアミド−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン（１７）、ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−メトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−（３，５−ジメトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−ニトロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ（３−デオキシ−３−（２−ナフトアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−メトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−ニトロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−［４−（ジメチルアミノ）−ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−メチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−クロロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−アセチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−［２−（３−カルボキシ）−ナフトアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−［３−デオキシ−３−（３，４−メチレンジオキシ）ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−メトキシカルボニルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−カルボキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−ヒドロキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３，５−ジベンジルオキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−メトキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−ノニロキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−ヒドロキシ−５−メトキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−ヒドロキシ−５−ノニロキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−［３−ベンジルオキシ−５−（４−フルオロ−ベンジルオキシ）−ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−［３−メトキシ−５−（４−メチル−ベンジルオキシ）−ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；または、ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（３−アリルオキシ−５−ベンジルオキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン。
【００９１】
様々な実施形態における医薬組成物は、３−トリアゾリル−ガラクトシドを含み、例えば、医薬組成物は以下に示される一般式を含み、
【００９２】
【化９】
0006366598.tif 000010
ピラノース環の構造はＤ−ガラクトであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ４からなる群から選択されるか、または、単結合であり、Ｙは、ＣＨ２、ＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ、ＰＯ２、およびＰＯ、フェニル、からなる群から選択されるか、または、単結合であり、Ｒ１は、以下からなる群：糖類、置換された糖類；Ｄ−ガラクトース；置換されたＤ−ガラクトース；Ｃ３−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル−置換されたＤ−ガラクトース；水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基、および、複素環、ならびに、これらの誘導体；および、アミノ基、置換されたアミノ基、イミノ基、または、置換されたイミノ基；および、Ｒ２は、水素、アミノ基、置換されたアミノ基、アルキル基、置換されたアルキル基、アルケニル基、置換されたアルケニル基、アルキニル基、置換されたアルキニル基、アルコキシ基、置換されたアルコキシ基、アルキルアミノ基、置換されたアルキルアミノ基、アリールアミノ基、置換されたアリールアミノ基、アリールオキシ基、置換されたアリールオキシ基、アリール基、置換されたアリール基、ヘテロアリール基、置換されたヘテロアリール基、および、複素環、置換された複素環からなる群から選択される。
【００９３】
医薬組成物の実施形態における糖類は、グルコース、マンノース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フコース、フルクトース、キシロース、シアル酸、グルクロン酸、イズロン酸、ガラクツロン酸、二糖類、または、少なくとも上記の糖類の２つを含むオリゴ糖、および、これらの誘導体からなる群から選択される。
【００９４】
医薬組成物の様々な実施形態では、ＹはＣＯ、ＳＯ２、または単結合であり、Ｒ２はアミンまたはアリール基であり、Ｒ１はガラクトース、グルコース、または、Ｎ−アセチルグルコサミンであり、Ｒ１は置換されたガラクトース、グルコース、または、Ｎ−アセチルグルコサミンであり、Ｒ１はＣ３−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル−置換されたガラクトースであり、あるいは、ＸはＯまたはＳである。
【００９５】
組成物の様々な実施形態では、Ｒ２は置換されたフェニル基であり、置換基は、ハロゲン、アルコキシ、アルキル、ニトロ、スルホ、アミノ、ヒドロキシ、または、カルボニルの基からなる群から選択された１つ以上である。
【００９６】
様々な実施形態における医薬組成物は、眼内送達のために処方される。様々な実施形態では、組成物は、注入薬、点眼薬、または軟膏として、眼内送達のために処方される。例えば、注入薬は、硝子体内注入、眼球内注入、結膜下注入、およびテノン嚢下（ｓｕｂｔｅｎｏｎ）注入からなる群から選択される。
【００９７】
医薬組成物は、以下から選択された様々な実施形態である／を含む：メチル３−デオキシ−３−（１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−（４−プロピル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−（４−メトキシカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−（４−（１−ヒドロキシ−１−シクロヘキシル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−（４−フェニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−（４−ｐ−トリルスルホニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ｇａｌ−ａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）；メチル３−（４−メチルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−（４−ブチルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−（４−ベンジルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−｛４−（３−ヒドロキシプロプ−１−イルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−｛４−［２−（Ｎ−モルホリノ）−エチルアミノカルボニル］−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−（４−メチルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド、ｂｉｓ−（３−デオキシ−３−（４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（３−メトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（４−メトキシフェニル）−Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（３，５−ジメトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（１−ナフチル）−１Ｈ−［１，���，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−ナフチル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（３−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（４−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−３−インドール（ｉｎｄｏｌ）−カルバルドキシム（ｃａｒｂａｌｄｏｘｉｍ）；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−３−インドール−カルバルドキシム；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２−ヒドロキシ−５−ニトロ−フェニル）−カルバルドキシム；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２−ヒドロキシ−５−ニトロ−フェニル）−カルバルドキシム；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２，５−ジヒドロキシフェニル）−カルバルドキシム；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２，５−ジヒドロキシフェニル）−カルバルドキシム；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−１−ナフチル−カルバルドキシム；または、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−１−ナフチル−カルバルドキシム。
【００９８】
様々な実施形態において、医薬組成物はチオジガラクトシドを含んでおり、例えば、医薬組成物は、以下に示される一般式を含み、
【００９９】
【化１０】
0006366598.tif 000011
ピラノース環の構造はＤ−ガラクトであり、Ｘは、Ｏ、Ｓ、およびＳＯからなる群から選択され、ＹとＺは、独立して、ＣＯＮＨまたは１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環から選択され、Ｒ１とＲ２は、独立して、以下からなる群から選択される：少なくとも４つの炭素のアルキル基、少なくとも４つの炭素のアルケニル基、少なくとも４つの炭素のアルキニル基；カルバモイル基、アルキル基で置換されたカルバモイル基、アルケニル基で置換されたカルバモイル基、アルキニル基で置換されたカルバモイル基、アリール基で置換されたカルバモイル基、置換されたアルキル基で置換されたカルバモイル基、および、置換されたアリール基で置換されたカルバモイル基；少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルキル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのトリフルオロメチル基で置換されたフェニル基；少なくとも１つのトリフルオロメトキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたフェニル基、および、少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたフェニル基；ナフチル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルキル基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたナフチル基、および、少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたナフチル基；ヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたヘテロアリール基、および、少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたヘテロアリール基；ならびに、チエニル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたチエニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたチエニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたチエニル基、および、少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたチエニル基。
【０１００】
医薬組成物の様々な実施形態では、ＹはＣＯＮＨであり、例えば、ＣＯＮＨ基はＮ原子によってピラノース環に結合され、ＺはＣＯＮＨであり、ＣＯＮＨ基はＮ原子によってシクロヘキサンに結合され、Ｙは１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環であり、例えば、Ｎ１原子によってピラノース環に結合され、Ｒ１は１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環のＣ４原子に結合され、Ｚは１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環であり、例えば、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環は、Ｎ１原子によってシクロヘキサンに結合され、あるいは、Ｒ２は１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環のＣ４原子に結合される。
【０１０１】
様々な実施形態では、医薬組成物のＲ１とＲ２は、カルバモイル基、アルキル化したカルバモイル基、アルケニル化したカルバモイル基、アリール化したカルバモイル基、フェニル基、置換されたフェニル基、ハロゲン化したフェニル基、フッ素化したフェニル基、塩素化したフェニル基、臭素化したフェニル基、アルキル化したフェニル基、アルケニル化したフェニル基、トリフルオロメチル化したフェニル基、メトキシ化したフェニル基、トリフルオロメトキシ化したフェニル基、ナフチル基、置換されたナフチル基、ヘテロアリール基、置換されたヘテロアリール基、チエニル基、および、置換されたチエニル基からなる群から独立して選択される。
【０１０２】
医薬組成物の様々な実施形態におけるＲ１は、アルキル化したカルバモイル基、フッ素化したフェニル基、またはチエニル基である。
【０１０３】
医薬組成物の様々な実施形態では、Ｒ２は、アルキル化したカルバモイル基、フッ素化したフェニル基、またはチエニル基であり、あるいは、ＸはＯまたはＳである。
【０１０４】
様々な実施形態における医薬組成物は以下からなる群から選択される：（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（Ｎ−（１−プロピル）−カルバモイル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）シクロヘキシル）−３−デオキシ−（３−（４−（Ｎ−（１−プロピル）−カルバモイル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル））−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−シクロヘキシル）−３−デオキシ−３−（４−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−シクロヘキシル）−３−デオキシ−３−（４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−シクロヘキシル）−３−デオキシ−３−（４−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（３−チエニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−シクロヘキシル）−３−デオキシ−３−（４−（３−チエニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（Ｎ−（１−プロピル）−カルバモイル）１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−シクロヘキシル）−３−デオキシ−３−（４−（Ｎ−（１−プロピル）−カルバモイル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、および、（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−クロロベンズアミド）−シクロヘキシル）３−デオキシ−３−（４−クロロベンズアミド）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド。
【０１０５】
様々な実施形態では、医薬組成物はジガラクトシドを含んでおり、例えば、医薬組成物は一般式（１３）を含み、
【０１０６】
【化１１】
0006366598.tif 000012
ピラノース環の少なくとも１つの構造はＤ−ガラクトであり、Ｘは単結合であり、Ｒは、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびトリフルオロメチルからなる群から選択された１つ以上の置換基によって、任意の位置で置換されたフェニル基であり、あるいは、Ｒはチエニル基である。
【０１０７】
組成物の様々な実施形態では、Ｒは、フルオロ、クロロ、およびブロモからなる群から選択された１つ以上の置換基によって、任意の位置で置換されたフェニル基である。例えば、Ｒは、フルオロから選択された１つ以上の置換基によって任意の位置で置換されたフェニル基である。一般に、両方のピラノース環の構造はＤ−ガラクトである。
【０１０８】
本発明の態様は、被験体の眼の血管新生または眼の繊維症状態を処置または予防する方法を提供し、該方法は、治療上有効な量の少なくとも１つの組成物を被験体に投与する工程を含み、組成物はガレクチンタンパク質またはその一部の阻害剤を含む。様々な実施形態における被験体は哺乳動物である。
【０１０９】
方法の様々な実施形態における疾病は、以下の群から選択される：瘢痕に関連付けられる手術、例えば、緑内障ろ過手術；血管新生緑内障；角膜外傷；結膜炎後瘢痕；翼状片、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、例えば、湿潤型ＡＭＤまたは乾燥型ＡＭＤ；乾燥型ＡＭＤから湿潤型ＡＭＤへの変換；増殖性糖尿病性網膜症；糖尿病性黄斑浮腫；および、角膜血管新生（トラコーマ）。
【０１１０】
方法の様々な実施形態では、ガレクチンタンパク質は、ガレクチン−１タンパク質、ガレクチン−３タンパク質、ガレクチン−７タンパク質、および、ガレクチン−８の群から選択され、組成物は、以下の少なくとも１つから選択される：薬物、ポリマー、タンパク質、ペプチド、炭水化物、低分子量化合物、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、および、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの遺伝物質。
【０１１１】
様々な実施形態における方法は、疾患または疾病のパラメーターまたは指標の低下を観察する工程をさらに含み、例えば、パラメーターまたは指標はマーカーである。
【０１１２】
様々な実施形態では、方法は、組成物を投与する前に組成物を操作する工程をさらに含み、組成物はガレクチンタンパク質に結合し、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦ受容体−２経路を調節するか、あるいは、組成物はガレクチンタンパク質の発現を調節する。関連する実施形態では、阻害剤はＦＧＦを調節し、ＦＧＦによって引き起こされた血管新生を阻害する。
【０１１３】
本発明の態様は、疾病、被験体の眼の血管新生または眼の繊維症を処置または予防する方法を提供し、該方法は、治療上有効な量の少なくとも１つの組成物を被験体に投与する工程を含み、組成物はガレクチンタンパク質またはその一部の阻害剤を含み、投与する工程は本明細書に記載された医薬組成物のいずれかに被験体を接触させる工程を含む。いくつかの実施形態では、被験体は哺乳動物である。
【０１１４】
様々な実施形態では、方法は繊維症の減少を観察または検知する工程をさらに含んでいる。
【０１１５】
方法の様々な実施形態において組成物を投与する工程は、少なくとも以下の投与量を、被験体または被験体の組織に接触させる工程を含む：約０．０１ｎｇ〜約１ｎｇ（ｎｇ）、約１ｎｇ〜約１０ｎｇ、約１０ｎｇ〜約２０ｎｇ、約２０ｎｇ〜約３０ｎｇ、約３０ｎｇ〜約４０ｎｇ、約４０ｎｇ〜約５０ｎｇ、約５０ｎｇ〜約１００ｎｇ、１００ｎｇ〜約２００ｎｇ、２００ｎｇ〜約３００ｎｇ、約３００ｎｇ〜約４００ｎｇ、約４００ｎｇ〜約６００ｎｇ、約６００ｎｇ〜約８００ｎｇ、約１マイクログラム（μｇ）〜約５μｇ、約５μｇ〜約２０μｇ、約２０μｇ〜約４０μｇ、約４０μｇ〜約６０μｇ、約６０μｇ〜約８０μｇ、約８０μｇ〜約１００μｇ、約１００μｇ〜約２００μｇ、約２００μｇ〜約３００μｇ、および、約３００μｇ〜約４００μｇ。
【０１１６】
様々な実施形態における方法は、投与する前に、注入薬、点眼薬、パッチ、軟膏、ゲル、または噴霧剤の群から選択された眼球内送達のための組成物を処方する。
【０１１７】
方法の様々な実施形態において組成物を投与する工程は、例えば、眼球内、硝子体内、角膜内、結膜内、または、テノン嚢（ｔｅｎｏｎｌｙ）に、組成物を注入する工程を含んでいる。例えば、注入薬は被験体の粘膜層または目の外部の層に投与される。
【０１１８】
本発明の態様は、被験体におけるまたは被験体からの細胞における眼の血管新生または眼の繊維症を処置または予防するためのキットを含み、キットは、ガレクチンタンパク質またはその一部を阻害する医薬組成物であって、ガレクチンタンパク質に結合してＶＥＧＦ／ＶＥＧＦ受容体−２経路を調節するか、あるいは、ガレクチンタンパク質の発現を調節する、医薬組成物、使用説明書、および、容器を含む。例えば、医薬組成物は、ＴＤ１３９、化合物３２、あるいは、そのアナログまたは誘導体を含む。
【０１１９】
本発明の態様は、被験体における、または、被験体からの細胞における、眼の血管新生または眼の繊維症の状態を処置または予防するためのキットを提供し、キットは、ガレクチンタンパク質またはその一部を阻害する医薬組成物であって、ガレクチンタンパク質に結合してＶＥＧＦ／ＶＥＧＦ受容体−２経路を調節するか、あるいは、ガレクチンタンパク質の発現を調節する、本明細書に記載されるいずれかの医薬組成物、使用説明書、および、容器、を含む。例えば、医薬組成物は、ＴＤ１３９、化合物３２、または、そのアナログまたは誘導体などの少なくとも１つのガレクチン阻害剤を含んでいる。
【０１２０】
様々な実施形態におけるキットはさらに、組成物を投与するための塗布器または装置を含み、塗布器または装置は、シリンジ、針、噴霧器、スポンジ、ゲル、ストリップ、テープ、包帯、トレー、ストリング、または、ナノ構造体である。
【０１２１】
キットの様々な実施形態における組成物は、以下の少なくとも１つから選択される：薬物、ポリマー、タンパク質、ペプチド、炭水化物、低分子量化合物、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、および、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの遺伝物質。
【０１２２】
キットの様々な実施形態では、組成物は、薬学的に適切な担体または希釈剤で処方される。関連する実施形態では、キットは、対照、例えば、アバスチン（商標）（ベバシズマブ（商標））、ルセンティス（商標）（ラニビズマブ（商標））、または、アイリーア（商標）（アフリベルセプト（商標））を含む。様々な実施形態における対照は、ＶＥＧＦに結合して眼の血管新生を阻害するために、対照の被験体またはサンプルと共に使用されるか、あるいは、眼の血管新生を阻害するために医薬組成物と組み合わせて使用される。キットの関連する実施形態では、アバスチン（商標）はＶＥＧＦに特異的に結合し、ＶＥＧＦによって引き起こされた血管新生を阻害する。様々な実施形態では、対照はＦＧＦまたはＦＧＦの経路に結合するかＦＧＦまたはＦＧＦの経路を阻害する。キットの様々な実施形態では、組成物は、ガレクチン−１タンパク質、ガレクチン−３タンパク質、ガレクチン−７タンパク質およびガレクチン−８の群から選択されたガレクチンタンパク質に特異的に結合してこれを阻害する。
【０１２３】
本発明の態様は、ガレクチンタンパク質またはその一部を阻害し、眼の血管新生または眼の繊維症を阻害または調節するのに有効な、本明細書に記載された医薬組成物と、抗血管新生剤または繊維症治療剤とを含む生成物を提供し、生成物は抗血管新生または抗繊維症治療で使用するのに有効である。様々な実施形態では、生成物は、同時投与、別々の投与、または、連続した投与のために組み合わされた調製物である。例えば、抗血管新生剤は、アバスチン（商標）（ベバシズマブ（商標））、ルセンティス（商標）（ラニビズマブ（商標））、および、アイリーア（商標）（アフリベルセプト（商標））の少なくとも１つである。
【０１２４】
本発明の態様は、上に記載された生成物を用いて、眼の血管新生または眼の繊維症を阻害または調節する方法を提供し、該方法は、本明細書に記載された少なくとも１つの医薬組成物と別の抗血管新生剤を投与する工程を含む。例えば、組成物および／または別の抗血管新生剤は、血管新生シグナル伝達経路の分子の発現または活性を調節する。様々な実施形態において、組成物および／または別の抗血管新生剤は、薬物、タンパク質、ペプチド、炭水化物、または、小分子である。様々な実施形態において、組成物および／または別の抗血管新生剤は、キナーゼ受容体の阻害剤、または、チロシンキナーゼ受容体の阻害剤を含む。様々な実施形態では、受容体は、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、アンジオポエチン受容体（例えば、Ｔｉｅ−１およびＴｉｅ−２）、繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）、または、内皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）から選択される。様々な実施形態では、別の血管新生剤は、アバスチン（商標）（ベバシズマブ（商標））、ルセンティス（商標）（ラニビズマブ（商標））またはアイリーア（商標）（アフリベルセプト（商標））である。
【図面の簡単な説明】
【０１２５】
【図１】図１は、ヒトのガレクチン−３タンパク質のアミノ酸配列および組成物を描写する（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＢＡＡ２２１６４ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ， ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １）。
【図２】図２は、ヒトのガレクチン−７タンパク質のアミノ酸配列および組成物を描写する（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． １５５４６９ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ， ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２）。
【図３】図３は、ウサギのガレクチン−３タンパク質（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＪＣ４３００ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ）、ニワトリのガレクチン−３タンパク質（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＡＡＢ０２８５６ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ）、およびハムスターのガレクチン−３タンパク質（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ＣＡＡ５５４７９ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ）のアミノ酸配列を有する、ヒトのガレクチン−３タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １）のアミノ酸配列のＣＬＵＳＴＡＬ Ｗアラインメントを描写する。図中の第１（上の）配列は、ヒトのガレクチン−３タンパク質のアミノ酸１乃至２５０（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １）であり、図中の第２配列は、ハムスターのガレクチン−３タンパク質のアミノ酸１乃至２４５であり、図中の第３配列は、ウサギのガレクチン−３タンパク質のアミノ酸１乃至２４２であり、および図中の第４（下の）配列は、ニワトリのガレクチン−３タンパク質のアミノ酸１乃至２６２である。
【図４】図４は、ラットのガレクチン−７タンパク質（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． Ｐ９７５９０ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ）およびマウスのガレクチン−７タンパク質（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ． ０５４９７４ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ）のアミノ酸配列を有する、ヒトのガレクチン−７のアミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２）のＣＬＵＳＴＡＬ Ｗアラインメントを描写する。図中の第１（上の）配列は、ラットのガレクチン−７タンパク質のアミノ酸１乃至１３６であり、図中の第２配列は、マウスのガレクチン−７タンパク質のアミノ酸１乃至１３６であり、および図中の第３（下の）配列は、ヒトのガレクチン−７タンパク質のアミノ酸１乃至１３６である。
【図５】図５は、ヒトのガレクチン−３タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １）のＰＲＯＳＩＴＥスキャンの結果の概要である。
【図６】図６は、ヒトのガレクチン−７タンパク質（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２）のＰＲＯＳＩＴＥスキャンの結果の概要である。
【図７】図７は、ヒトのガレクチン−３タンパク質のガラクトシド−結合ドメインの、ＰＦＡＭからの隠れマルコフモデル（ＨＭＭ）に由来する、コンセンサスアミノ酸配列（ＰＦ００３３７）とのアラインメントを描写する。上の配列は、コンセンサスアミノ酸配列（ＰＦ００３３７．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３）であり、一方で下のアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １のアミノ酸１１７乃至２４７に対応している。
【図８】図８は、ヒトのガレクチン−７タンパク質のガラクトシド−結合ドメインの、ＰＦＡＭからの隠れマルコフモデル（ＨＭＭ）に由来する、コンセンサスアミノ酸配列（ＰＦ００３３７）とのアラインメントを描写する。上の配列は、コンセンサスアミノ酸配列（ＰＦ００３３７．ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３）であり、一方で下のアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２のアミノ酸５乃至１３５に対応している。
【図９Ａ】図９Ａは、ＴＤ １３９のガレクチン−３阻害剤が、ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）において、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）誘発性の毛細血管形成を実質的に減少させたことを示す棒グラフである。  図９Ａは、２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦ、２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび１０ミクロモルのＴＤ１３９、または２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび５０ミクロモルのＴＤ１３９のいずれかによる処置（横座標）に応じて、対照ＨＵＶＥＣ（縦座標）と比較した、ＨＵＶＥＣにおける毛細血管形成の倍変化を示す棒グラフである。対照ＨＵＶＥＣは、ＶＥＧＦまたはＴＤ１３９では処置されなかった。２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦのみで処置されたＨＵＶＥＣと比較して、２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび１０ミクロモルのＴＤ１３９で処置されたＨＵＶＥＣ、および２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび５０ミクロモルのＴＤ１３９で処置されたＨＵＶＥＣに対して、毛細血管形成の減少が観察された。
【図９Ｂ】図９Ｂは、ＴＤ １３９のガレクチン−３阻害剤が、ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）において、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）誘発性の毛細血管形成を実質的に減少させたことを示す顕微鏡写真である。  図９Ｂのデータは、以下のいずれかで処置されたＨＵＶＥＣの１セットの顕微鏡写真である：２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦ（左）；２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび１０ミクロモルのＴＤ１３９（真中）；または２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび５０ミクロモルのＴＤ１３９（右）。顕微鏡写真は、ＶＥＧＦおよびＴＤ１３９のガレクチン−３タンパク質阻害剤と接触させられたＨＵＶＥＣと比較した、ＶＥＧＦと接触させられたＨＵＶＥＣに対する広範囲な毛細血管形成を示す。２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦと１０ミクロモルのＴＤ１３９との混合物で処置されたＨＵＶＥＣと比較した、２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦと５０ミクロモルのＴＤ１３９（右）との混合物で処置されたＨＵＶＥＣにおいて、毛細血管形成の減少が観察された。
【図１０Ａ】図１０Ａは、ガレクチン−３阻害剤ＴＤ１３９が、ＨＵＶＥＣのインビトロの血管新生／新芽形成のアッセイにおいて、ＶＥＧＦ誘発性の毛細血管の新芽形成を実質的に減少させたことを示す棒グラフである。  図１０Ａは、２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦ； ２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび１０ミクロモルのＴＤ１３９のガレクチン−３タンパク質阻害剤； または２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび５０ミクロモルのＴＤ１３９のガレクチン−３タンパク質阻害剤のいずれかでの処置（横座標）に応じた、ＨＵＶＥＣの個々のスフェロイド（縦座標）のセントラルプレインから生じるすべての毛細血管様の新芽の累積的な長さを示す棒グラフである。対照ＨＵＶＥＣは、ＶＥＧＦまたはＴＤ１３９では処置されなかった。データは、ＶＥＧＦのみでの処置されたＨＵＶＥＣが、結果的に、対照細胞と比較して、実質的な新芽形成の長さをもたらしたことを示す。スフェロイドの長さは、２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび１０ミクロモルのＴＤ１３９、または２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび５０ミクロモルのＴＤ１３９で処置されたＨＵＶＥＣに対して縮小することが観察された。新芽形成の長さのＶＥＧＦ誘発性の増加の最も大きな減少が、５０ミクロモルのＴＤ１３９で処置されたＨＵＶＥＣに対して観察された。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、ガレクチン−３阻害剤ＴＤ１３９が、ＨＵＶＥＣのインビトロの血管新生／新芽形成のアッセイにおいて、ＶＥＧＦ誘発性の毛細血管の新芽形成を実質的に減少させたことを示す顕微鏡写真である。  図１０Ｂのデータは、２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦ（右上）； ２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび１０ミクロモルのＴＤ１３９のガレクチン−３タンパク質阻害剤（左下）； または２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび５０ミクロモルのＴＤ１３９のガレクチン−３タンパク質阻害剤（右下）のいずれかで処置されたＨＵＶＥＣのスフェロイドを示す一連の顕微鏡写真である。対照ＨＵＶＥＣは、ＶＥＧＦまたＴＤ１３９では処置されなかった（図１０Ｂの左上）。顕微鏡写真は、対照細胞と比較した、ＶＥＧＦと接触させられたＨＵＶＥＣに対するその新芽形成および新芽形成の長さを示す。ＶＥＧＦ誘発性の新芽形成は、ＶＥＧＦとＴＤ１３９との混合物と接触させられたＨＵＶＥＣにおいて減少された。２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦのみで処置された細胞と比較した、２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦと１０ミクロモルのＴＤ１３９との混合物で処置されたヒト内皮細胞と比較する、２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦと５０ミクロモルのＴＤ１３９（右）との混合物で処置されたヒト内皮細胞において、減少した毛細血管形成が観察された。
【図１１Ａ】図１１Ａは、ＴＤ１３９がインビボでの抗血管新生効果を有することを示す図面である。血管新生は、眼を硝酸銀で焼灼することによってマウスの角膜において誘発された。  図１１Ａは、ネズミ被験体の株Ｃ５７Ｂ／６Ｌにおける薬物の投与のための実験的なレジメンの図面である。被験体は、０日目、２日目および４日目の各々に、結膜下注射によって、０．５％のＤＭＳＯを含有しているＰＢＳ中の１０マイクロリットル（μｌ）のＴＤ１３９（３２５ｎｇ）、または１０μｌのビヒクルのみ（０．５％のＤＭＳＯを含有しているＰＢＳ）のいずれかを投与された。さらに、１０μｌのビヒクル単独または５０μΜのＴＤ１３９が、毎日１回点眼剤によって適用された。被験体の眼を焼灼するために、硝酸銀が０日目に適用された。マウスは５日目に屠殺され、角膜のフラットマウント（ｆｌａｔ ｍｏｕｎｔｓ）が、血管を視覚化するために抗ＣＤ３１で染色された。図１１Ｂ−Ｃで示されるデータは、図１１Ａに記載されるように処置された被験体からのものであった。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、ＴＤ１３９がインビボでの抗血管新生効果を有することを示す一連の顕微鏡写真である。血管新生は、眼を硝酸銀で焼灼することによってマウスの角膜において誘発された。  図１ＩＢは、焼灼の５日後の、図１１Ａに記載されているように処置されたＣ５７Ｂ／６Ｌ被験体の代表的な眼（上の列）および角膜のフラットマウント（下の列）の顕微鏡写真である。示される角膜のフラットマウントの代表的な写真は、抗ＣＤ３１で染色された。顕微鏡写真は、図１１Ａに記載されるような、ＴＤ１３９（右のカラム）で処置された被験体、または０．５％のＤＭＳＯを含有しているＰＢＳで処置された対照被験体のいずれかの眼組織を示す。倍率は、×１００であった。図１１Ｂ−Ｃで示されるデータは、図１１Ａに記載されるように処置された被験体からのものであった。
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、ＴＤ１３９がインビボでの抗血管新生効果を有することを示すグラフである。血管新生は、眼を硝酸銀で焼灼することによってマウスの角膜において誘発された。  図１１Ｃは、図１１Ａにおけるような、ＴＤ１３９を投与された被験体の眼内の血管のパーセント領域（縦座標）を示すグラフである。対照被験体は、０．５％のＤＭＳＯを含有しているＰＢＳを投与された。全体の角膜を覆う血管の密度は、ＩｍａｇｅＪ．によって定量化された。データは、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定で分析された。血管は、対照被験体の角膜のおよそ４０％を覆い、ＴＤ１３９処置された被験体の角膜の２８％を覆った。焼灼後の眼内の血管新生の反応は、対照被験体と比較して、ＴＤ１３９のガレクチン阻害剤を投与された被験体に対して著しく阻害された。図１１Ｂ−Ｃで示されるデータは、図１１Ａに記載されるように処置された被験体からのものであった。
【図１２】図１２は、ガレクチン−１およびガレクチン−３がＶＥＧＦＲ−２で相互作用したことを示すウエスタンブロットの顕微鏡写真である。ＨＵＶＥＣ溶解物は、０．１Ｍのスクロースまたはラクトースの存在下または欠如下での、ガレクチン−１およびガレクチン−３−アガロースのビーズでインキュベートされた。対照サンプルは、ＨＵＶＥＣの溶解物またはビーズのみを包含した。結合された物質は、Ｌａｅｍｍｌｉのサンプル緩衝液で溶出され、４−２０％のＳＤＳ−ＰＡＧＥのゲル剤に加えられ、電気泳動にかけられた。ゲル剤は、膜ブロット上に移され、その後、抗ＶＥＧＦＲ−２抗体でプローブされた（ｐｒｏｂｅｄ）。ＶＥＧＦＲ−２抗体は、ビーズのみの対照ではなく、ＨＵＶＥＣ溶解物の対照に対する結合が観察された。ＶＥＧＦ−２抗体は、ＨＵＶＥＣが、ビーズを表示するガレクチン−１およびビーズを表示するガレクチン−３の両方に結合したことを示す。ビーズを表示するガレクチン−１およびガレクチン−３に対するＶＥＧＦ−２抗体の結合は、レクチン競合の（ｌｅｃｔｉｎ ｃｏｍｐｅｔｉｎｇ）糖類、ラクトースの存在によって阻害され、非競合の（ｎｏｎｃｏｍｐｅｔｉｎｇ）糖類，スクロースによっては阻害されなかった。したがって、ＶＥＧＦＲ−２と、ガレクチン−１およびガレクチン−３との間の相互作用は、本明細書において、炭水化物依存性であると観察された。
【図１３Ａ】図１３Ａは、ＴＤ１３９が、ＶＥＧＦ−Ａ誘発性の内皮細胞の新芽形成および遊走を妨害したことを示す一連の棒グラフである。ＴＤ１３９は、用量依存性の方法でＶＥＧＦ−Ａ誘発性の新芽形成および遊走を著しく阻害した。ＨＰＦは強拡大視野を示す。データは、平均±ＳＥとして図示され、一元配置分散分析によって分析される。＊Ｐ＜０．０５ 対 対照；＊＊＊Ｐ＜０．００１ 対 対照；＃＃＃Ｐ＜０．００１ 対 ＶＥＧＦ−Ａ。  図１３Ａは、（０．０１μΜ、０．１μΜ、１μΜ、５μΜ、または１０μΜの各々で）ＴＤ１３９を用いる又はそれなしでの、（横座標）ＶＥＧＦ−Ａ（１００ｎｇ／ｍＬ）で処置されたＨＵＶＥＣ細胞、およびＴＤ１３９なしの又はそれを単独（１０μΜ）で用いる対照の新芽の長さ（縦座標）を示す棒グラフである。ＨＵＶＥＣスフェロイドは、タイプ１コラーゲンゲルへと調製および播種された。重合されたコラーゲンは、２０μΜのＴＤ１３９または５０μΜのＴＤ１３９のいずれかを補足されたＥＢＭ−２中で、１００μｌのＥＢＭ−２および２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦを重ねられた。対照コラーゲンサンプルは、ＥＢＭ−２中で１００μｌのＥＢＭ−２および２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦで処置された。６時間の前処置後、ゲル剤は、ＶＥＧＦ−Ａ（１００ｎｇ／ｍｌ）のみ、ＶＥＧＦ−Ａ（１００ｎｇ／ｍｌ）およびＴＤ１３９（０．０１μΜ、０．１μΜ、１μ、５μΜ、または１０μΜ）、またはＴＤ１３９（１０μΜ）のみで処理された２４時間のインキュベーション後、スフェロイドは、カルセインＡＭ色素で染色され、蛍光顕微鏡によって撮影された。ゲル剤中のＨＵＶＥＣに対する累積的な新芽の長さは、ＩｍａｇｅＪによって定量化された。ＨＵＶＥＣを、０．１μΜ、１μΜ、５μΜまたは１０μΜのいずれかのＴＤ１３９と接触させることによって、用量依存性の方法でＶＥＧＦ−Ａ誘発性の新芽形成が著しく阻害されたことが観察された。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、ＴＤ１３９が、ＶＥＧＦ−Ａ誘発性の内皮細胞の新芽形成および遊走を妨害したことを示す一連の棒グラフである。ＴＤ１３９は、用量依存性の方法でＶＥＧＦ−Ａ誘発性の新芽形成および遊走を著しく阻害した。ＨＰＦは強拡大視野を示す。データは、平均±ＳＥとして図示され、一元配置分散分析によって分析される。＊Ｐ＜０．０５ 対 対照；＊＊＊Ｐ＜０．００１ 対 対照；＃＃＃Ｐ＜０．００１ 対 ＶＥＧＦ−Ａ。  図１３Ｂは、図１３Ａで示されるような、ＶＥＧＦ−Ａを用いて又はそれなしで、（横座標）ＶＥＧＦ−Ａで処置されたＨＵＶＥＣ細胞の遊走距離（遊走指数、縦座標）を示すグラフである。ＨＵＶＥＣは、一晩血清不足にされ、タンパク質分解性および膠原溶解性の酵素生成物Ａｃｃｕｔａｓｅ（商標）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｉｎｃ．）で引き離され、１％のＦＢＳ／Ｍ１９９中で再懸濁され、その後、遊走試験システムの上部チャンバーに加えられた。システムの下部チャンバーは、１％のＦＢＳ／Ｍ１９９中の変化する濃度のＴＤ１３９（１μΜ、１０μΜ、１００μΜ、または１０００μΜ）の存在下または欠如下で、ＶＥＧＦ−Ａ（１００ｎｇ／ｍＬ）を充填された。３時間のインキュベーション後、膜の下側面に遊走したＨＵＶＥＣが数えられた。１ｎＭもの低い濃度でのＴＤ１３９の存在によって、より高い濃度で、ＶＥＧＦ−Ａ誘発性の走化性が著しく抑制されたことが観察された。ＴＤ１３９は、用量依存性の方法で、ＶＥＧＦ−Ａ誘発性の遊走を著しくさらに阻害した。
【図１４Ａ】図１４Ａは、ＴＤ１３９がＨＵＶＥＣに対して無毒であることを示す一連の棒グラフである。ＨＵＶＥＣは、一晩１％のＦＢＳ／Ｍ１９９でインキュベートされ、その後３時間、０．１％のＤＭＳＯ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００、または５μΜのＴＤＩ３９のいずれかで処置された。その後、ＨＵＶＥＣは、カルセインＡＭ色素またはＷＳＴ−１（テトラゾリウム塩）のいずれかでインキュベートされた。カルセインＡＭおよびＷＳＴ−１は、細胞増殖および細胞生存度の指標である。蛍光信号が、分光光度計によって検出された。ＨＵＶＥＣ生存度は、ＴＤ１３９処置後に変更せず、これは、ＴＤ１３９ガレクチン阻害剤によるＶＥＧＦ−Ａ誘発性の機能の阻害が、細胞生存度の変化が原因ではなかったことを示している。陽性対照のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００は、生存度をなくし（ｅｌｉｍｉｎａｔｅｄ）、データは、平均±ＳＥＭで図示され、一元配置分散分析によって分析される。＊＊＊Ｐ＜０．００１ 対 対照。  図１４Ａは、一晩１％のＦＢＳ／Ｍ１９９中でインキュベートされ、その後、（横座標）３時間０．１％のＤＭＳＯ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００、または５μΜのＴＤ１３９のいずれかで処置されたＨＵＶＥＣのカルセインＡＭ蛍光（縦座標）を示す棒グラフである。対照細胞は、ＤＭＳＯ、Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００またはＴＤ１３９によっては処置されなかった。処置された細胞は、３０分間カルセインＡＭでインキュベートされた。データは、ＤＭＳＯおよび対照細胞で処置された細胞と比較した、ＴＤ１３９細胞に対する匹敵するカルセインＡＭ蛍光を示す。Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００で処置された細胞は、ＴＤ１３９で処置された細胞と比較して、減少した蛍光を示した。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは、ＴＤ１３９がＨＵＶＥＣに対して無毒であることを示す一連の棒グラフである。ＨＵＶＥＣは、一晩１％のＦＢＳ／Ｍ１９９でインキュベートされ、その後３時間、０．１％のＤＭＳＯ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００、または５μΜのＴＤＩ３９のいずれかで処置された。その後、ＨＵＶＥＣは、カルセインＡＭ色素またはＷＳＴ−１（テトラゾリウム塩）のいずれかでインキュベートされた。カルセインＡＭおよびＷＳＴ−１は、細胞増殖および細胞生存度の指標である。蛍光信号が、分光光度計によって検出された。ＨＵＶＥＣ生存度は、ＴＤ１３９処置後に変更せず、これは、ＴＤ１３９ガレクチン阻害剤によるＶＥＧＦ−Ａ誘発性の機能の阻害が、細胞生存度の変化が原因ではなかったことを示している。陽性対照のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００は、生存度をなくし（ｅｌｉｍｉｎａｔｅｄ）、データは、平均±ＳＥＭで図示され、一元配置分散分析によって分析される。＊＊＊Ｐ＜０．００１ 対 対照。  図１４Ｂは、一晩１％のＦＢＳ／Ｍ１９９中でインキュベートされ、その後、（横座標）３時間０．１％のＤＭＳＯ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００、または５μΜのＴＤ１３９のいずれかで処置されたＨＵＶＥＣのＷＳＴ−１蛍光（縦座標）を示す棒グラフである。対照細胞は、ＤＭＳＯ、Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００またはＴＤ１２９では処置されなかった。ＷＳＴ−１は、処置された細胞に加えられ、２時間インキュベートされた。データは、ＤＭＳＯおよび対照細胞で処置された細胞と比較して、ＴＤ１３９細胞に対する匹敵する細胞生存度を示す。Ｔｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ−１００で処置された細胞は、ＴＤ１３９で処置された細胞と比較して、減少したＷＳＴ−１蛍光を示した。
【図１５】図１５は、細胞中のＶＥＧＦＲ２発現が、ＴＤ１３９処置による影響を受けなかったことを示すウエスタンブロットの写真である。ＨＵＶＥＣは、一晩１％のＦＢＳ／Ｍ１９９でインキュベートされ、その後、６時間、０．１％のＤＭＳＯおよび１０μΜのＴＤ１３９で処置された。細胞溶解物は、４−２０％のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル剤中で電気泳動によって分析された。ゲル剤は、ウエスタンブロットの膜に移され、抗ＶＥＧＦＲ−２抗体（図１５の上の列）またはβ−アクチン抗体（図１５の下の列）でプローブされた。ＶＥＧＦＲ２発現レベルは、対照およびＴＤ１３９処置された細胞の両方において類似していることが観察された。ＴＤ１３９のガレクチン阻害剤での内皮細胞の処置は、合計のＶＥＧＦＲ２発現を減少させなかった。
【図１６】図１６は、ガレクチン−３阻害化合物３２が、インビボでの角膜血管新生を阻害したことを示す、棒グラフおよび顕微鏡写真である。８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスの角膜は、５秒間硝酸銀で焼灼され、血管新生を誘発した。１０μｌの化合物３２のガレクチン−３阻害剤（０．５％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に１００μΜ）が、０日目、およびその後、２日目、４日目および６日目に角膜に結膜下注入された。対照被験体は、１０μｌのＤＭＳＯビヒクルのみ（ＰＢＳ中に０．５％のＤＭＳＯ）を結膜下注入された。  化合物３２を注入された被験体は、化合物３２の点眼剤（５μｌ）を毎日投与され、対照被験体は、ＤＭＳＯビヒクルの点眼剤（５μｌ）を毎日投与された。７日目に、角膜が切除され、角膜中の血管およびリンパ管が、視覚化および定量化された。２つの別々の結果からの組み合わされたデータが、図１６の左の棒グラフで示される。代表的な画像が図１６の右に示される。  図１６は、１０μｌの化合物３２のガレクチン−３阻害剤（０．５％のＤＭＳＯ中に１００μΜ；横座標）を結膜下注入された被験体における角膜中の血管領域のパーセンテージ（ＢＶ％；縦座標）を示す棒グラフである。対照被験体は、１０μｌのＤＭＳＯビヒクルのみ（ＰＢＳ中に０．５％のＤＭＳＯ；横座標）を結膜下注入された。化合物３２またはＤＭＳＯビヒクルの点眼剤（５μｌ）は、それぞれの眼に毎日投与された。７日目に、マウスの角膜は切除され、角膜中の血管の領域が定量化された。データは、ＤＭＳＯビヒクルのみを注入された対照被験体と比較した、化合物３２を注入された被験体の角膜中の血管領域の著しい減少を示す。化合物３２を注入された被験体の角膜中の血管のパーセンテージ領域は、２９％であり、対照被験体に対する角膜中の血管のパーセンテージ領域は、４２％であった。図１６のデータは、平均±ＳＥＭとして図示され、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定を使用して分析された。  図１６の顕微鏡写真は、１０μｌの化合物３２のガレクチン−３阻害剤（０．５％のＤＭＳＯ中に１００μΜ；図１６の右下）を結膜下注入された被験体における代表的な角膜の写真である。対照被験体は、ＤＭＳＯビヒクルのみ（ＰＢＳ中に０．５％のＤＭＳＯ；図１６の右上）を結膜下注入された。それぞれの眼は、化合物３２またはＤＭＳＯビヒクルのいずれかの点眼剤（５μｌ）を毎日投与された。角膜は、切除され、視覚化された。ＤＭＳＯビヒクルのみを注入された対照被験体と比較して、化合物３２を注入された被験体の角膜において、減少した数の血管が観察された。
【図１７Ａ】図１７Ａは、ＴＤ１３９が角膜線維症を阻害したことを示す、一連の写真である。Ｃ５７ＢＪ／６マウスは、ケタミンとキシラジンとの混合物の腹腔内注入によって麻酔をかけられた。被験体の角膜は、プロパラカインの点眼剤を適用することによって、局所的に麻酔をかけられた。０．１５Ｍの水酸化ナトリウムの１．５μｌの点滴が、各被験体の中央角膜に１分間適用された。各眼は、すぐにＰＢＳ中で広範囲に洗浄され、角膜上皮および縁上皮は、ＡＬＧＥＢＲＵＳＨ（商標）の光学デバイス（Ｓｔｏｒｚ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）でそっと除去された。各角膜は、抗生物質軟膏で覆われた。５０ｍＭのＴＤ１３９、１０μｌが、１４日間毎日、結膜下注入された。対照被験体は、対照ビヒクルＰＢＳを結膜下注入された。角膜は、混濁に関して視覚化および分析され、線維症に関してタンパク質マーカーが、下記に記載されるように定量化された。  眼の角膜混濁は、以下の基準を使用して、手術後の７日目および１４日目に採点された（任意単位）：０は、角膜が透明であることを示す；１は、瞳孔未満の不透明度の領域を示す；２は、不透明度の領域が瞳孔より大きいことを示す；３は、不透明度の領域が角膜領域の２／３より大きいことを示す；および、４は、全体の角膜が不透明であることを示す。マウスは、ケタミンとキシラジンとの混合物を使用して、手術後の１日目に屠殺された。マウスの角膜は、切開され、５ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのＰＭＳＦ、１ｍＭのＤＴＴ、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ｍＭのＥＤＴＡ、４００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．１％のＮＰ−４０、およびプロテアーゼ阻害剤のカクテル生成物（Ｒｏｃｈｅ）を含有している氷冷の溶解緩衝液中に溶解された。分割量の角膜のタンパク質（２０μｇ）が、ゲルの各レーンに充填され、ニトロセルロース膜上に移された。ブロットは、平滑筋アクチン（１０，０００ 希釈；Ａｂｅａｍ Ｉｎｃ．， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， Ｅｎｇｌａｎｄ）に特異的なウサギ抗体、またはβ−アクチンに特異的な対照抗体のいずれかによって４℃で一晩プローブされた。ブロットは、広範囲に洗浄され、ヤギ抗ウサギＩＲＤｙｅ ８００ＣＷ抗体（１：１０，０００の希釈比；ＬＩ−Ｃｏｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ； Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｎｅｂｒａｓｋａ）でインキュベートされた。膜は、Ｏｄｅｓｓｅｙのイメージングシステム（Ｌｉ−Ｃｏｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、走査され、定量化された。  図１７Ａは、５０μΜのＴＤ１３９、１０μｌ（図１７Ａの下の列）を結膜下注入された被験体、およびビヒクルのみ（図１７Ｂの上の列）を結膜下注入された対照被験体における、代表的な角膜の一連の写真である。ＴＤ１３９を投与された被験体からの角膜が、ＰＢＳビヒクルのみを注入された対照被験体と比較して、角膜混濁の量／程度を減少させたことが観察された。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、ＴＤ１３９が角膜線維症を阻害したことを示すグラフである。Ｃ５７ＢＪ／６マウスは、ケタミンとキシラジンとの混合物の腹腔内注入によって麻酔をかけられた。被験体の角膜は、プロパラカインの点眼剤を適用することによって、局所的に麻酔をかけられた。０．１５Ｍの水酸化ナトリウムの１．５μｌの点滴が、各被験体の中央角膜に１分間適用された。各眼は、すぐにＰＢＳ中で広範囲に洗浄され、角膜上皮および縁上皮は、ＡＬＧＥＢＲＵＳＨ（商標）の光学デバイス（Ｓｔｏｒｚ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）でそっと除去された。各角膜は、抗生物質軟膏で覆われた。５０ｍＭのＴＤ１３９、１０μｌが、１４日間毎日、結膜下注入された。対照被験体は、対照ビヒクルＰＢＳを結膜下注入された。角膜は、混濁に関して視覚化および分析され、線維症に関してタンパク質マーカーが、下記に記載されるように定量化された。  眼の角膜混濁は、以下の基準を使用して、手術後の７日目および１４日目に採点された（任意単位）：０は、角膜が透明であることを示す；１は、瞳孔未満の不透明度の領域を示す；２は、不透明度の領域が瞳孔より大きいことを示す；３は、不透明度の領域が角膜領域の２／３より大きいことを示す；および、４は、全体の角膜が不透明であることを示す。マウスは、ケタミンとキシラジンとの混合物を使用して、手術後の１日目に屠殺された。マウスの角膜は、切開され、５ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのＰＭＳＦ、１ｍＭのＤＴＴ、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ｍＭのＥＤＴＡ、４００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．１％のＮＰ−４０、およびプロテアーゼ阻害剤のカクテル生成物（Ｒｏｃｈｅ）を含有している氷冷の溶解緩衝液中に溶解された。分割量の角膜のタンパク質（２０μｇ）が、ゲルの各レーンに充填され、ニトロセルロース膜上に移された。ブロットは、平滑筋アクチン（１０，０００ 希釈；Ａｂｅａｍ Ｉｎｃ．， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， Ｅｎｇｌａｎｄ）に特異的なウサギ抗体、またはβ−アクチンに特異的な対照抗体のいずれかによって４℃で一晩プローブされた。ブロットは、広範囲に洗浄され、ヤギ抗ウサギＩＲＤｙｅ ８００ＣＷ抗体（１：１０，０００の希釈比；ＬＩ−Ｃｏｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ； Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｎｅｂｒａｓｋａ）でインキュベートされた。膜は、Ｏｄｅｓｓｅｙのイメージングシステム（Ｌｉ−Ｃｏｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、走査され、定量化された。  図１７Ｂは、１０μｌのＴＤ１３９（ＰＢＳ中に５０ｍＭ；横座標）を結膜下注入された被験体における角膜中の角膜混濁の量（任意の不透明度スコア；縦座標）を示す棒グラフである。対照被験体は、１０μｌの対照ビヒクルのみを結膜下注入された。角膜は、１４日間、水酸化ナトリウムで処置され、ＴＤ１３９または対照ＰＢＳが、それぞれの眼に毎日投与された。１４日目に、マウスの角膜は切除され、角膜中の不透明度が定量化された。データは、ＰＢＳビヒクルのみを注入された対照被験体と比較して、ＴＤ１３９を注入された被験体の角膜における著しく減少した程度の不透明度を示す。ＴＤ１３９を注入された被験体は、瞳孔の部位まわり未満の不透明度の領域を有した。
【図１７Ｃ】図１７Ｃは、ＴＤ１３９が角膜線維症を阻害したことを示す、ウエスタンブロットの写真である。Ｃ５７ＢＪ／６マウスは、ケタミンとキシラジンとの混合物の腹腔内注入によって麻酔をかけられた。被験体の角膜は、プロパラカインの点眼剤を適用することによって、局所的に麻酔をかけられた。０．１５Ｍの水酸化ナトリウムの１．５μｌの点滴が、各被験体の中央角膜に１分間適用された。各眼は、すぐにＰＢＳ中で広範囲に洗浄され、角膜上皮および縁上皮は、ＡＬＧＥＢＲＵＳＨ（商標）の光学デバイス（Ｓｔｏｒｚ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）でそっと除去された。各角膜は、抗生物質軟膏で覆われた。５０ｍＭのＴＤ１３９、１０μｌが、１４日間毎日、結膜下注入された。対照被験体は、対照ビヒクルＰＢＳを結膜下注入された。角膜は、混濁に関して視覚化および分析され、線維症に関してタンパク質マーカーが、下記に記載されるように定量化された。  眼の角膜混濁は、以下の基準を使用して、手術後の７日目および１４日目に採点された（任意単位）：０は、角膜が透明であることを示す；１は、瞳孔未満の不透明度の領域を示す；２は、不透明度の領域が瞳孔より大きいことを示す；３は、不透明度の領域が角膜領域の２／３より大きいことを示す；および、４は、全体の角膜が不透明であることを示す。マウスは、ケタミンとキシラジンとの混合物を使用して、手術後の１日目に屠殺された。マウスの角膜は、切開され、５ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのＰＭＳＦ、１ｍＭのＤＴＴ、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ｍＭのＥＤＴＡ、４００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．１％のＮＰ−４０、およびプロテアーゼ阻害剤のカクテル生成物（Ｒｏｃｈｅ）を含有している氷冷の溶解緩衝液中に溶解された。分割量の角膜のタンパク質（２０μｇ）が、ゲルの各レーンに充填され、ニトロセルロース膜上に移された。ブロットは、平滑筋アクチン（１０，０００ 希釈；Ａｂｅａｍ Ｉｎｃ．， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， Ｅｎｇｌａｎｄ）に特異的なウサギ抗体、またはβ−アクチンに特異的な対照抗体のいずれかによって４℃で一晩プローブされた。ブロットは、広範囲に洗浄され、ヤギ抗ウサギＩＲＤｙｅ ８００ＣＷ抗体（１：１０，０００の希釈比；ＬＩ−Ｃｏｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ； Ｌｉｎｃｏｌｎ Ｎｅｂｒａｓｋａ）でインキュベートされた。膜は、Ｏｄｅｓｓｅｙのイメージングシステム（Ｌｉ−Ｃｏｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、走査され、定量化された。  図１７Ｃは、ＴＤ３３９処置が、外傷を有する眼内での線維症を減少させたことを示す、ウエスタンブロットの写真である。被験体の角膜は、水酸化ナトリウムと接触させられ、１４日間連続して毎日、５０ｍＭのＴＤ１３９の量（１０μｌ）を結膜下注入された。対照被験体は、ビヒクル（ＰＢＳ）のみを結膜下注入された。角膜細胞溶解物（２０ｕｇ）または対照β−アクチン物質は、ゲル電気泳動およびウエスタンブロットによって分析された。膜は、マウス抗ＳＭＡ（平滑筋アクチン）抗体（図１７Ｃの上の列）でプローブされたか、または対照抗体に特異的なβ−アクチン（図１７Ｃの下の列）でプローブされた。ＴＤ１３９を注入された眼におけるＳＭ���（平滑筋アクチン）発現レベルは、ＰＢＳを注入された対照の眼と比較して、３０％減少されたことが観察された。
【図１８】図１８は、ＴＤ１３９処置が、眼内の網膜神経膠症を減少させたことを示す、ウエスタンブロットの一連の写真である。ネズミ被験体の角膜は、水酸化ナトリウムと接触させられた。５０ｍＭの溶液のＴＤ１３９、１０μｌが、１４日間連続して毎日、結膜下注入された。対照被験体は、ＰＢＳ対照ビヒクルのみで結膜下注入された。被験体は、手術後の１４日目にケタミンおよびキシラジンによって屠殺された。マウスの角膜は、切開され、５ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのＰＭＳＦ、１ｍＭのＤＴＴ、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ｍＭのＥＤＴＡ、４００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．１％のＮＰ−４０、およびプロテアーゼ阻害剤のカクテル生成物（Ｒｏｃｈｅ）を含有している氷冷の溶解緩衝液中に溶解された。溶解物からの分割量の網膜のタンパク質（３０μｇ）、または対照β−アクチン物質が、ゲル剤に充填され、ニトロセルロース膜上に移された。ブロットは、神経膠線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ；５０，０００ 希釈；Ａｂｅａｍ Ｉｎｃ．；図１８の上の列）に特異的なウサギ抗マウス抗体、またはβ−アクチンに特異的な対照抗体のいずれかによって４℃で一晩プローブされた。ＧＦＡＰは、網膜神経膠症を暗示する中間径フィラメントに対するマーカーである。対照ブロットは、β−アクチンに特異的なウサギ抗体でプローブされた（図１８の下の列）。プローブは、洗浄され、ヤギ抗ウサギＩＲＤｙｅ ８００ＣＷ抗体（１：１０，０００の希釈比；ＬＩ−Ｃｏｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でインキュベートされた。膜は、Ｏｄｅｓｓｅｙのイメージングシステム（Ｌｉ−Ｃｏｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、走査され、定量化された。ＴＤ１３９を注入された被験体からの網膜が、ＰＢＳを注入された対照被験体と比較して、ＧＦＡＰの発現を減少させたことが観察された。
【発明を実施するための形態】
【０１２６】
血管新生、または予め存在する脈管構造からの新しい血管の成長は、胚発生、創傷治癒、および性機能などの、一連の正常過程、および腫瘍成長および腫瘍転移、イールス病、血管新生緑内障、および加齢性黄斑変性などの眼の障害および疾病、虚血、糖尿病性微小血管障害、および関節リウマチに関係する（Ｍａｒｋｏｗｓｋａ ｅｔ ａｌ． ２０１ １ Ｊ ｏｆ Ｂｉｏ Ｃｈｅｍ Ｖｏｌ． ２８６ （３４）： ２９９１３−２９９２１ ； ａｎｄ Ｏｃｕｌａｒ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ： Ｄｉｓｅａｓｅｓ， Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ， ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ （Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ） １ｓｔ ｅｄｉｌｉｏｎ， Ｊｏｙｃｅ Ｔｏｍｂｒａｎ−Ｔｉｎｋ ａｎｄ Ｃｏｌｉｎ Ｊ． Ｂａｒｎｓｔａｂｌｅ （ｅｄｉｔｏｒｓ） Ｈｕｍａｎ ｐｒｅｓｓ ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ Ａｐｒｉｌ １ ， ２００６ ｐａｇｅｓ １ −４２８、その各々は引用によってその全体が本明細書に組み込まれる）。血管新生は、基底膜および周囲細胞からの内皮細胞の解放（ｌｏｏｓｅｎｉｎｇ）によって促進され、新しい毛細管腔の遊走、増殖、および最終的な形成を促進する（Ｏｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ． ２００６ Ｒｅｖ． Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． ７： ｐａｇｅｓ ３５９−３７１）。多くのサイトカイン受容体およびシグナル伝達因子の中で、ＶＥＧＦ−ＡおよびＶＥＧＦ受容体２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）とのその相互作用が、生理学的および病理学的両方の血管新生のための主要な陽性信号伝達経路の構成要素として特定された。ＶＥＧＦ−Ｒ２に対するＶＥＧＦ−Ａの結合は、受容体の二量体化、キナーゼ活性化、および二量体複合体内の複数のチロシン残留物の自己リン酸化を促進する。自己リン酸化は、ｐ４２／４４マップキナーゼ経路などの、細胞内シグナル伝達経路を活性化し、これは、内皮細胞の増殖、遊走、および生存に関係する。
【０１２７】
ガラクトシド結合タンパク質のガレクチンファミリーのメンバーである、ガレクチン−３は、インビトロでの内皮細胞の遊走および毛細血管の形成を促進し、インビボでの血管新生を増強する（Ｍａｒｋｏｗｓｋａ ｅｔ ａｌ． ２０１ １ Ｊ ｏｆ Ｂｉｏ Ｃｈｅｍ Ｖｏｌ． ２８６ （３４）： ２９９１３−２９９２１、その全体が引用によって本明細書に組み込まれる）。ＶＥＧＦ−Ａ媒介性の血管新生は、優性の陰性ガレクチン−３の付加によって、汎（ｐａｎ）−ガレクチン阻害剤（例えば、ラクトース）によって、およびガレクチン−３のノックダウンによって、インビトロで減少される。さらに、ＶＥＧＦ−Ａ誘発性の血管新生は、インビボでのＧａｌ３−／−マウスで著しく減少された。
【０１２８】
原発性開放隅角緑内障（ＰＯＡＧ）は、房水の不十分な流出が原因の眼内圧の上昇を特徴とする、主要な失明を引き起こす疾患である。房水流出経路を覆う（ｌｉｎｉｎｇ）線維柱帯網（ＴＭ）は、房水流出の能力（ｆａｃｉｌｉｔｙ）を調整する（Ｄｉｓｋｉｎ ｅｔ ａｌ． ２００９ Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ １９ （１）： ２９−３７、その全体が引用によって本明細書に組み込まれる）。ＴＭ細胞中のＲｈｏシグナル伝達に影響を及ぼすＴＭ細胞接着、細胞基質相互作用、および因子は、房水流出の調節に中心的な役割を果たす。ガレクチン−８タンパク質は、β１インテグリンに結合し、Ｒｈｏシグナル伝達を誘発することによって、ＴＭ細胞の接着および細胞骨格の配置を調整する。
【０１２９】
ガレクチン−８タンパク質は、ＴＭ細胞が、ガレクチン−１コーティングされたウェルまたはガレクチン−３コーティングされたウェルではなく、ガレクチン−８コーティングされたウェルに接着する及びその上に展着すると、ＴＭ細胞の接着および展着を媒介することが示された。本明細書において（Ｉｂｉｄ．）、ガレクチン−８コーティングされたウェルに対するＴＭ細胞の接着は、競合の糖、β−ラクトースを投与することによって、阻害されたか又は妨げられたが、スクロースなどの、非競合の糖を投与することによっては阻害されなかった。ガレクチン−８タンパク質のアミノ末端の糖認識ドメイン（ＣＲＤ）に特異的に結合する、三糖類、ＮｅｕＡｃα２−３Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃは、ガレクチン−８タンパク質コーティングされたウェルに対するＴＭ細胞の展着を阻害した。対照的に、ガレクチン−８に対する親和性を欠くＮｅｕＡｃα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃは、ＴＭ細胞の展着に効果がなかった。
ガレクチン−８の親和性カラムを有する細胞抽出液の親和性クロマトグラフィーおよび植物レクチン、イヌエンジュ（Ｍａａｃｋｉａ ａｍｕｒｅｎｓｉｓ）およびセイヨウニワトコ（Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｎｉｇｒａ）を用いる結合実験は、α３β１、α５β１、およびανβ１のインテグリンが、ＴＭ細胞中のガレクチン−８の主要な対抗受容体であること、およびそのＴＭ細胞β１のインテグリンが、Ｇａｌ１またはＧａｌ３ではなく、Ｇａｌ８に対する高親和性のリガンドである、α２−３−シアル酸付加のグリカンを主に運ぶ（ｃａｒｒｙ）ことを明らかにしている。ガレクチン−８タンパク質は、インテグリン上のインテグリン上と相互作用することによって、ＴＭ細胞の接着および展着を調整する。
【０１３０】
ガレクチンは、糖認識ドメイン（ＣＲＤ）を含有している（Ｎｉｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、２０１１年６月２日に公開された、米国特許公開番号２０１１／０１３０５５３、その全体が引用によって本明細書に組み込まれる）。ＣＲＤは、β−ガラクトース結合部位および約７つのアミノ酸（そのほとんど（約６つの残留物）が、β−ガラクトース結合部位を作り上げる）の配列モチーフの十分な類似性の２つの特性を備える、約１３０のアミノ酸（約１５ｋＤａ）の堅く折り重ねられたβ−サンドイッチである。さらに、隣接する部位が、天然の糖類の堅い結合に必要とされ、これらの異なる優先性（ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）は、ガレクチンに、天然の糖類に対する異なる微細特異性を与えている。
【０１３１】
ヒト、マウスおよびラットのゲノム配列の完了は、種間でわずかな変動を有して、１つの哺乳動物ゲノムにおいて約１５のガレクチンおよびのガレクチン様のタンパク質を明らかにしている（Ｌｅｆｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ． ２００４ Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ． Ｊ． １９： ４３３−４４０； Ｈｏｕｚｅｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ． ２００４ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｅｖｏｌ． ２１ （７）： １ １７７−１１８７）。
【０１３２】
ガレクチンのサブユニットは、単一のペプチド鎖内に１つまたは２つのＣＲＤを含有している。第１カテゴリーの、モノ−ＣＲＤのガレクチンは、脊椎動物において単量体または二量体（２つのタイプ）として生じる。ガレクチン−１は二量体であり、ガレクチン−３は、溶液および凝集物（ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ）中で単量体であり、リガンドと遭遇して多量体となる（Ｌｅｆｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ． ２００４ Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ． Ｊ． １９： ４３３−４４０； Ａｈｍａｄ ｅｔ ａｌ． ２００４ Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７９： １０８４１−１０８４７）。
【０１３３】
ガレクチンは、シグナルペプチドなしで、遊離型リボソーム上のサイトゾルタンパク質として合成される。ガレクチンタンパク質のＮ末端は、アセチル化され、サイトゾルタンパク質の典型的な修飾、およびガレクチンが、長い間サイトゾルにとどまる（分泌されたタンパク質の典型的ではない）。サイトゾルから、ガレクチンは、特定のサイトゾルの部位である、核に対して標的とされ、あるいはまだ知られていないが、インターロイキン−１、ＩＬ−１の排出（ｅｘｐｏｒｔ）に恐らく類似した、非古典的（非ＥＲ−Ｇｉｌｇｉ）経路によって分泌される（誘発されるか又は構成的に）（Ｌｅｆｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ， ２００４ Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ． Ｊ． １９： ４３３−４４０）。
【０１３４】
ガレクチンは、すべてのこれらの区画において機能する、例えば、ガレクチン−３は、核内のＮＡスプライシング、サイトゾル内のアポトーシスの阻害、および細胞シグナル伝達および接着に対する様々な細胞外の効果に関係する。ガレクチン−７およびのガレクチン−１２は、アポトーシスを増強し、特定の細胞において細胞周期および分化を調節することによって、サイトゾルにおいて作用する（Ｌｅｆｆｌｅｒ， Ｈ．． ｅｄｉｔｏｒ， （２００４ｂ） Ｓｐｅｃｉａｌ Ｉｓｓｕｅ ｏｎ Ｇａｌｅｃｔｉｎｓ． Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ． Ｊ． １９： ４３３−６３８）。ほとんどのガレクチンは、可能性として超分子の順序配列を形成することより糖タンパク質（例えば、ラミニン、インテグリン、およびｌｇＥ受容体）を交差結合することによって、細胞外で機能し（Ｂｒｅｗｅｒ ｅｔ ａｌ． ２００２ Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｓｔｒｕｃｔ． Ｂｉｏｌ． １２： ６１６−６２３）、それによって、細胞接着を調節して、細胞内の信号を誘発する。ガレクチンタンパク質のためのアミノ酸配列および相同性のデータは、Ｐａｎｊｗａｎｉ、２０１０年１月７日に公開された、米国特許出願番号２０１０／０００４１６３ Ａ１で示され、その全体が引用によって本明細書に組み込まれる。
【０１３５】
作用の特定の理論または機構に限定されることなく、ガレクチンタンパク質が、血管新生の重要な調節物質であり、ガレクチンタンパク質の発現及び／又は活性の阻害剤が、ＶＥＧＦ受容体に結合することによりＶＥＧＦシグナル伝達を調整することによって血管新生を阻害することが本明細書で想定される。
【０１３６】
ガレクチン阻害剤
本明細書には、ガレクチンタンパク質の発現及び／又は活性のガラクトシド阻害剤を投与することによって、眼の血管新生または眼の線維症を処置または予防するための、組成物、方法およびキットが提供される。特定の実施形態では、ガラクトシド阻害剤ＴＤ１３９は、ガレクチン−３タンパク質の活性を調整するために、および眼の血管新生または眼の線維症を阻害するために使用される。血管新生または線維症を阻害するための本明細書における様々な組成物、方法およびキットで使用されるガレクチン阻害剤は、例えば、Ｎｉｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、２００４年７月２９日に公開された、米国特許公開番号２００４／０１４７７３０ Ａ１（シリアルナンバー１０／４６６，９３３）；Ｎｉｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、２００７年８月７日に公開された、米国特許公開番号２００７／０１８５０３９（シリアルナンバー１１／５６１，１２４）；Ｌｅｆｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ．、２００７年８月９日に公開された、米国特許公開番号２００７／０１８５０４１（シリアルナンバー１１／５６１，４６５）；Ｎｉｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、２００４年７月２９日に公開された、米国特許公開番号２０１１／０１３０５５３（シリアルナンバー１２／９９２，３２８）；およびＬｅｆｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ．、２０１２年６月２８日に公開された、米国特許公開番号２０１２／０１６５２７７（シリアルナンバー１３／２６６，９６０）に見られ、その各々は引用によってその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１３７】
本明細書に記載される、組成物、方法およびキットは、身体における他の所望のプロセスにマイナスの影響を与えることなく、血管新生または線維症を選択的に阻害および調整するために、ガレクチンタンパク質の阻害剤を使用する。ガレクチン阻害剤は、本明細書において、眼の血管新生のためのモデル系におけるＶＥＧＦ受容体−２を介するＶＥＧＦシグナル伝達に関係する、血管新生経路を調整することが、実施例において示される。
【０１３８】
ガレクチン−３は、細胞表面滞留を引き延ばし、それ故、ＴＧＦ−β受容体の反応性を増強することが示され（Ｐａｒｔｒｉｄｇｅ ｅｔ ａｌ． ２００４ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０６： １２０−１２４）、これは、Ｍ２マクロファージへの代替的なマクロファージ分化を調節する（ＭａｃＫｉｎｎｏｎ ｅｔ ａｌ． ２００８． Ｊ． Ｉｍｍｕｎ． １８０： ２６５０−２６５８）。ガレクチン−３はまた、線維芽細胞の動員および活性化に中心的な役割を果たし、それ故、腎臓、肝臓および肺を含む様々な臓器において瘢痕組織を形成することが示された（ＭａｃＫｉｎｎｏｎ ｅｔ ａｌ Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ ２０１２； １８５（５）：５３７−４６， Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ ２００８： １７２；２８８， Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ２００６： １０３（１３）；５０６０）。作用の特定の理論または機構に限定されることなく、ガレクチン−３が、ＴＧＦ−βシグナル伝達および代替的なマクロファージ分化の内因性の促進剤であり、ガレクチン−３阻害剤が、眼の線維症および有害な組織リモデリングを処置するのに有用であることが想定される。
【０１３９】
免疫組織化学的研究は、癌内のガレクチンに対する異常な発現のパターンおよびレベルを示した（ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｒｕｌｅ ｅｔ． ａｌ． ａｎｄ Ｂｉｄｏｎ ｅｔ ａｌ． ｉｎ Ｌｅｆｆｌｅｒ， Ｈ．， ｅｄｉｔｏｒ， （２００４ｂ） Ｓｐｅｃｉａｌ Ｉｓｓｕｅ ｏｎ Ｇａｌｅｃｔｉｎｓ． Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ． Ｊ． １９： ４３３−６３８）。ガレクチン−３は、甲状腺癌の組織化学的マーカーであり、ガレクチン−４の新たな発現は、初期の乳癌の有望なマーカーである（Ｈｕｆｌｅｊｔ， Ｍ． Ｅ． ａｎｄ Ｌｅｆｆｌｅｒ， Ｈ． ２００４ Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ． Ｊ． ２０： ２４７−２５５； ａｎｄ Ｌｅｆｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ． ２００４ Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ． Ｊ． １９： ４３３−４４０）。癌内のガレクチン−３の役割に対する証拠は、マウスモデルなどのモデル系で得られた（Ｔａｋｅｎａｋａ ｅｔ ａｌ． ｉｎ Ｌｅｆｆｌｅｒ， Ｈ．． ｅｄｉｔｏｒ， （２００４ｂ） Ｓｐｅｃｉａｌ Ｉｓｓｕｅ ｏｎ Ｇａｌｅｃｔｉｎｓ． Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ． Ｊ ． １９： ４３３−６３８）。（ガレクチン−３の減少または増加した発現とともに）対になった腫瘍細胞株を使用して、ガレクチン−３の誘導（ｉｎｄｕｃｔｉｎｇ）は被験体における腫瘍および転移の増加をもたらし、ガレクチン−３の抑制は、結果として、より少ない腫瘍および転移をもたらした。
【０１４０】
作用の特定の理論または機構に限定されることなく、ガレクチンタンパク質（例えば、ガレクチン−３）の阻害剤が、眼内の血管新生または線維症の障害の阻害に有効である。
【０１４１】
活性化Ｔ細胞におけるガレクチン−１誘発性のアポトーシスは、インビボでの自己免疫性疾患に対する顕著な免疫抑制効果を有していた。癌内のガレクチンの過剰発現は、宿主（ルービンスタインら、２００４年の癌細胞５：２４１−２５１）によって引き起こされたＴ細胞反応に対する腫瘍防御の助けとなるかもしれない。
【０１４２】
ガレクチン−１およびガレクチン−３の欠損マウスが作り出され（Ｐｏｉｒｉｅｒ ２００２ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｓｙｍｐ． ６９： ９５−１０３）、これらの被験体は、健康であり、通常、動物住宅疾病において再生することが観察された。ガレクチン−３欠損マウスに関する続く研究は、ガレクチン−１欠損マウスに対する、好中球およびマクロファージの機能、および骨形成、および神経および平滑筋の細胞の再生／分化における表現型を明らかにした（Ｌｅｆｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ． ２００４ Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ． Ｊ． １９： ４３３−４４０； Ｐｏｉｒｉｅｒ ２００２ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｓｙｍｐ． ６９： ９５− １０３；およびＷａｔｔ ｉｎ ｉｎ Ｌｅｆｆｌｅｒ， Ｈ．， ｅｄｉｔｏｒ， （２００４ｂ） Ｓｐｅｃｉａｌ Ｉｓｓｕｅ ｏｎ Ｇａｉｅｃｔｉｎｓ． Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ． Ｊ． １９： ４３３−６３８）。ガレクチン−７およびガレクチン−９の欠損マウスは、動物住宅疾病において健康である。発現、特異性および他の特性の部位の違いによって、異なるガレクチンは互いに機能的に取って代わりにくくなる。ヌル変異体マウスの観察は、ガレクチンが、正常な動物住宅疾病で観察され得るような基本的な生命維持機能にとって不可欠ではないことを示すだろう。代わりに、ガレクチンタンパク質は、正常機能のオプティマイザー（ｏｐｔｉｍｉｚａｒｓ）であり得る、及び／又は動物住宅疾病で見られないストレス状態で不可欠であり得る。ヌル変異体マウス中の強力な効果の欠如は、ガレクチン阻害剤を、潜在的薬物して、より好都合なものとし得る。レクチンタンパク質の阻害は、不要な副作用をより少なくする傾向がある。
【０１４３】
固相の結合はアッセイおよび阻害アッセイは、ガレクチンを結合する能力を有する糖類および糖複合体を特定した（Ｌｅｆｆｅｒ ｅｔ ａｌ． ２００１ Ｇａｉｅｃｔｉｎｓ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ − ａ ｓｙｎｏｐｓｉｓ （Ｉｎ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｃｒｏｃｋｅｒ， Ｐ． ， ｅｄ．， ｐａｇｅｓ ５７−８３；およびＬｅｆｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ． ２００４ Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ ． Ｊ． １９： ４３３−４４０によって検討された）。ガレクチンは、０．５−１ｍＭの解離定数（ＫＤ）でラクトースと結合する。ＫＤは、結合定数の逆であり、より低いＫＤは、分子間の増大した結合親和性を示す。ガレクチンに対するＤ−ガラクトースの結合親和性は、一般に、ガレクチンに対するラクトースの結合親和性よりも約５０倍から１００倍低い。Ｎ−アセチルラクトサミンおよび関連する二糖類の結合親和性は、これらの分子が、ガレクチンのサブセットの他に、ラクトース（約０．５−１ｍＭのＫＤ）、および他のガレクチンと、ラクトースよりも約１０倍以上低く結合するために、可変的である。小さな糖類のリガンドは、ラクトースまたはｌａｃＮＡｃ−残留物に付けられた血液型Ａ−決定因子を運ぶガレクチン−３タンパク質の結合に有効であり、ラクトースに対する結合親和性より約５０倍高く結合することが観察された。ガレクチン−１は、これらの糖類に対する優先性を示さない。
【０１４４】
ポリラクトサミン型のより大きな糖類は、ガレクチン−１ではなく、ガレクチン−３タンパク質などのガレクチンに対する好ましいリガンドとして提案された（Ｌｅｆｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ． １９８６ Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６１ ： １０１１９−１０１２６）。修飾された植物ペクチン多糖類は、ガレクチン−３に結合すると測定された（Ｐｉｅｎｔａ ｅｔ ａｌ． １９９５ Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ． １９９５ Ｍａｒ ｌ ；８７（５）：３４８−５３）。
【０１４５】
ガレクチン−３リガンドとして特定された上述の天然の糖類は、医薬組成物中の有効分としての使用に適しておらず、なぜなら、それらは、胃内の酸性の加水分解および酵素分解に弱いからである。さらに、天然の糖類は、本質的に親水性であり、経口投与後に消化管から容易に吸収されない。
【０１４６】
阻害剤の合成
抗癌活性を有するアミノ酸に連結された糖類は、血清中の天然の化合物であり、合成アナログが作られた（Ｇｌｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ． １ ９６ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５６： ５３１９−５３２４）。アミノ酸に連結されたラクトースまたはガラクトースを有する糖類は、ガレクチンを阻害し、対応する非誘導体化された（ｕｎｄｅｒｉｖａｔｉｚｅｄ）糖と同じ効能を有する。かんきつペクチンの化学修飾された形態（Ｐｌａｔｔ ｅｔ ａｌ． １９９２ Ｊ． Ｎａｔｌ． Ｃａｎｃｅｒ． Ｉｎｓｔ． ８４： ４３８−４４２）は、ガレクチン−３の阻害剤およびインビボでの抗腫瘍薬剤として記載された（Ｐｉｅｎｔａ ｅｔ ａｌ．， １９９５ Ｊ． Ｎａｔｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ． ９４： １８５４− １８６２）。
【０１４７】
天然のオリゴ糖、糖クラスター、糖デンドリマー、および糖コポリマーは、身体に効果的に吸収する、および幾つかの場合に、患者内で免疫反応を生成するには、あまりにも極性である且つ大き過ぎる。さらに、それらは、胃内の酸性の加水分解および酵素加水分解に弱い。
【０１４８】
チオジガラクトシド分子は、合成的であり、加水分解的に安定しており、およびＮ−アセチルラクトサミンと略同じくらい効率的である（Ｌｅｆｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ． １９８６ Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６１： １０１１９−１０１２６）。ペンタペプチドのライブラリーは、ガラクトースのＫＤ値と同様のＫＤ値を有している、ガレクチン−１および−３のタンパク質の低親和性阻害剤を得るために使用された（Ａｒｎｕｓｃｈ ｅｔ ａｌ． ２００４ Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ． １４： １４３７−１４４０）。さらに、ペプチドは、加水分解に弱く、典型的に極性であるために、インビボでガレクチンを標的ためのそれほど理想的な薬剤ではない。Ｃ−３’での芳香族アミドまたは置換されたベンジルエーテルを運ぶＮ−アセチルラクトサミン誘導体は、ガレクチン−３の非常に効率的な阻害剤であって、４．８μΜもの低いＩＣ５０値を有し、これは、天然のＮ−アセチルラクトサミンの二糖類と比較して、２０倍の阻害の改善である（Ｓｏｒｍｅ Ｐ ｅｔ ａｌ． ２００２ Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ． ３（２−３）： １ ８３− １８９；およびＳｏｒｍｅ Ｐ ｅｔ ａｌ． ２００３ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ． ３６３： １５７− １６９）。Ｎ−アセチルラクトサミン誘導体は、芳香族アミド部分の存在が原因で、全体的にそれほど極性ではなく、それ故、インビボでのガレクチンの阻害のための薬剤としてより適切である。さらに、Ｃ３−トリアゾリルガラクトシドは、幾つかのガレクチンの対応するＣ３−アミドと同じくらい強力な阻害剤であることが実証された。したがって、あらゆる適切に構造化されたガラクトースＣ３−置換基が、増強されたガレクチン親和性を与え得る。
【０１４９】
Ｃ３−アミド−およびＣ３−トリアゾリル誘導体化された化合物は、ガラクトースおよびＮ−アセチルラクトサミンの糖類部分におけるグリコシド結合の存在が原因で、インビボでの加水分解に弱く、それらは、ガレクチン−３の強力な小分子阻害剤であるが、さらなる親和性および安定性さえも望まれる。したがって、チオジガラクトシドの３，３’−ジアミド−または３，３’−ジトリアゾリル−誘導体化に基づく阻害剤が開発され（Ｃｕｍｐｓｔｅｙ ｅｔ ａｌ．２００５ Ａｎｇｅｗ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４４：５１１０−５１１２；Ｃｕｍｐｓｔｅｙ ｅｔ ａｌ．２００８ Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．１４：４２３３−４２４５；およびＤａｍ ｅｔ ａｌ．２００８ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４７：８４７０−８４７６；国際出願番号ＷＯ２００５１１３５６９およびＷＯ２００５１１３５６８、米国特許公開番号２００７／１８５０４１、および米国特許第７，６３８，６２３ Ｂ２号、その各々は、引用によってその全体が本明細書に組み込まれる）、これは、０−グリコシドの加水分解的に及び酵素学的に不安定な結合を欠いている。
【０１５０】
しかしながら、３，３’誘導体化されたチオジガラクトシドは、３−Ｎ誘導体化されたガラクトース構築ブロックを得るための二重反転反応に関係する多段階の合成を含む欠点を有する。さらに、チオジガラクトシド分子における１つのガラクトース環のシクロヘキサン置換は、ガラクトース環を模倣し、これらのガレクチン−１および−３の阻害剤に、ジアミド−およびジトリアゾリル−チオジガラクトシドの誘導体に近い効率を提供する（国際公開番号ＷＯ２０１０／１２６４３５、その全体が引用によって組み込まれる）。Ｄ−ガラクトピラノースのユニットの、置換されたシクロヘキサンとの置き換えは、極性に加えて代謝感受性も減少させ、それによって、薬物のような特性を改善する。
【０１５１】
既知の化合物は、以下に示される一般式を有し：
【０１５２】
【化１２】
0006366598.tif 000013
【化１３】
0006366598.tif 000014
式中、第２構造において、Ｒ１は、Ｄガラクトースであり得る。
【０１５３】
例えばガラクトシドおよび中間物のためにガレクチンタンパク質阻害剤を合成的に調製する方法が、Ｎｉｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、２００４年７月２９日に公開された、米国公開番号２００４／０１４７７３０ Ａ１（シリアルナンバー１０／４６６，９３３）；Ｎｉｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、２００７年８月７日に公開された、米国公開番号２００７／０１８５０３９（シリアルナンバー１１／５６１、１２４）；Ｌｅｆｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ．、２００７年８月９日に公開された、米国公開番号２００７／０１８５０４１（シリアルナンバー１１・／５６１，４６５）；Ｎｉｌｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、２００４年７月２９日に公開された、米国公開番号２０１１／０１３０５５３（シリアルナンバー１２／９９２，３２８）；およびＬｅｆｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ．、２０１２年６月２８日に公開された、米国特許公開番号２０１２／０１６５２７７（シリアルナンバー１３／２６６，９６０）、に記載され、その各々は、引用によってその全体が本明細書に組み込まれる。ガラクトシドを合成する方法は、３−アジド−ガラクトシルチウロニウム塩誘導体（これは、対応するインサイツのチオールに対して活性化される）を、３，３’−ジ−アジド−チオ−ジ−ガラクトシドを結果としてもたらす３−アジド−ガラクトシルブロミドと反応させる工程を含む。
【０１５４】
特定の実施形態では、眼内の血管新生または線維症を阻害するための医薬組成物は、ビス−（３−デオキシ−３−｛３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾル−１−イル｝−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンを含み、これは以下に示される構造を有し：
【０１５５】
【化１４】
0006366598.tif 000015
それによって、化合物は、被験体の眼内の血管新生を阻害する。Ｍａｃｋｉｎｎｏｎ ｅｔ ａｌ． Ａｍ． Ｊ． Ｒｅｓｐｉｒ． Ｃｒｉｔ． Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． Ｍａｒｃｈ １， ２０１２ ｖｏｌ． １８５ ｎｏ． ５５３７−５４６を参照し、これはその全体が引用によって本明細書に組み込まれる。様々な実施形態では、組成物は、誘導体化または機能化される、ベータ−ガラクトシドであり、例えば、組成物は、以下の一般式を有し：
【０１５６】
【化１５】
0006366598.tif 000016
ピラノース環の構成は、Ｄ−ガラクトであり；Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ４から成る群から選択されるか、または単結合であり；Ｙは、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ４から成る群から選択されるか、または単結合であり；Ｒ１は、糖類；水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基、および複素環から成る群から選択され；Ｒ２は、ＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ、ＰＯ、およびＰＯ２から成る群から選択され；Ｒ３は、少なくとも４つの炭素原子のアルキル基、少なくとも４つの炭素原子のアルケニル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４つの炭素原子のアルキル基またはアルケニル基、カルボキシ基とアミノ基の両方で置換された少なくとも４つの炭素原子のアルキル基、およびハロゲンで置換された少なくとも４つの炭素原子のアルキル基；フェニル基、カルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、アルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンおよび少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンと少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、ニトロ基で置換されたフェニル基、スルフォ基で置換されたフェニル基、アミン基で置換されたフェニル基、水酸基で置換されたフェニル基、カルボニル基で置換されたフェニル基、および置換されたカルボニル基で置換されたフェニル基；あるいはフェニルアミノ基、から成る群から選択され；およびＲ４は、水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基、および複素環から成る群から選択される。様々な実施形態では、組成物は、非代謝性であるか、代替的に、様々な実施形態における組成物は、代謝可能である。
【０１５７】
特定の実施形態では、糖類（Ｒ１）は、グルコース、マンノース、ガラクトース、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フコース、フルクトース、キシロース、シアル酸、グルクロン酸、イズロン酸、二糖類、または上述の糖類の少なくとも２つを含むオリゴ糖、およびそれらの誘導体、から成る群から選択され、特定の実施形態では、ＹはＮＨであり、ＸはＯであり、およびハロゲンは、Ｆ、ＣＩ、ＢｒおよびＩから成る群から選択される。
【０１５８】
特定の実施形態における組成物は、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［３−カルボキシプロパンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［（｛Ｚ｝−３−カルボキシプロペンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−ベンズアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［２−カルボキシ−ベンズアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［４−メトキシ−２，３，５，６−テトラフルオロベンズアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［２−カルボキシ−３，４，５，６−テトラフルオロベンズアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−メタンスルホンアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［−４−ニトロベンゼンスルホンアミド］−３デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−フェニルアミノカルボニルアミノ−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−アミノアセトアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド；およびメチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（−３−［｛２Ｓ｝−２−アミノ−３−カルボキシ−プロパンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、から成る群から選択される。
【０１５９】
様々な実施形態における組成物は、以下の一般式を有し：
【０１６０】
【化１６】
0006366598.tif 000017
それによって、ピラノース環の１つの構成は、β−Ｄ−ガラクトであり；Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ５から成る群から選択され、Ｙは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ５から成る群から選択されるか、または単結合であり；Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ２、およびＮＲ３から成る群から選択されるか、または単結合であり；Ｒ１およびＲ３は、ＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ、ＰＯ２、ＰＯ、およびＣＨ２から成る群から独立して選択されるか、または単結合であり；およびＲ２およびＲ４は、少なくとも４つの炭素のアルキル基、少なくとも４つの炭素のアルケニル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４つの炭素のアルキル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４つの炭素のアルケニル基、アミノ基で置換された少なくとも４つの炭素のアルキル基、アミノ基で置換された少なくとも４つの炭素のアルケニル基、アミノ基とカルボキシ基の両方で置換された少なくとも４つの炭素のアルキル基、アミノ基とカルボキシ基の両方で置換された少なくとも４つの炭素のアルケニル基、および１つ以上のハロゲンで置換されたアルキル基；または少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのスルフォ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つの水酸基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたフェニル基、および少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたフェニル基；またはナフチル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのスルフォ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つの水酸基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたナフチル基、および少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたナフチル基；あるいはヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのスルフォ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたヘテロアリ���ル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つの水酸基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたヘテロアリール基、および少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたヘテロアリール基、からなる群から独立して選択される。Ｒ６およびＲ８は、水素、アシル基、アルキル基、ベンジル基、および糖類から成る群から独立して選択される。Ｒ７は、水素、アシル基、アルキル基、およびベンジル基から成る群から選択される。Ｒ９は、水素、メチル基、ヒドロキシメチル基、アシルオキシメチル基、アルコキシメチル基、およびベンジルオキシメチル基から成る群から選択される。
【０１６１】
特定の実施形態では、ＹはＮＨであり、ＺはＮＨであり、ＸはＳであり、Ｒ１はＣＯであり、Ｒ３はＣＯであり、Ｒ２またはＲ４は、芳香族化合物、例えば、芳香環であり；Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、水素であり；あるいは、Ｒ９は、ヒドロキシメチル基であり、特定の実施形態では、組成物は、ビス−（３−デオキシ−３−ベンズアミド−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−メトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−（３，５−ジメトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（４−ニトロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（２−ナフトアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（４−メトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（３−ニトロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシルｌ）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−［４−（ジメチルアミノ）−ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（４−メチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（４−クロロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（４−アセチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）；ビス−（３−デオキシ−３−［２−（３−カルボキシ）−ナフトアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−［３−デオキシ−３−（３，４−メチレンジオキシ）ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（４−メトキシカルボニルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（３−カルボキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−ヒドロキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（３，５−ジベンジルオキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−メトキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−ノニロキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（３−ヒドロキシ−５−メトキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−（３−ヒドロキシ−５−ノニロキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−［３−ベンジルオキシ−５−（４−フルオロ−ベンジルオキシ）−ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；ビス−（３−デオキシ−３−［３−メトキシ−５−（４−メチル−ベンジルオキシ）−ベ��ズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン；
あるいはビス−（３−デオキシ−３−（３−アリルオキシ−５−ベンジルオキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、である。
【０１６２】
様々な実施形態における組成物は、３−トリアキソリル（ｔｒｉａｘｏ ｌｙｌ）−ガラクトシドを含み、例えば、組成物は、以下に示される一般式を有し：
【０１６３】
【化１７】
0006366598.tif 000018
それによって、ピラノース環の構成は、Ｄ−ガラクトであり；Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｈ、ＣＨ２、およびＮＲ４から成る群から選択されか、または単結合であり；Ｙは、ＣＨ２、ＣＯ、ＳＯ２、ＳＯ、ＰＯ２およびＰＯ、フェニルから成る群から選択されか、または単結合であり；Ｒ１は、糖類；置換された糖類；Ｄ−ガラクトース；置換されたＤ−ガラクトース；Ｃ３−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル置換されたＤ−ガラクトース；水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基、および複素環、ならびにそれらの誘導体；あるいはアミノ基、置換されたアミノ基、イミノ基、または置換されたイミノ基、から成る群から選択され；およびＲ２は、水素、アミノ基、置換されたアミノ基、アルキル基、置換されたアルキル基、アルケニル基、置換されたアルケニル基、アルキニル基、置換されたアルキニル基、アルコキシ基、置換されたアルコキシ基、アルキルアミノ基、置換されたアルキルアミノ基、アリールアミノ基、置換されたアリールアミノ基、アリールオキシ基、置換されたアリールオキシ基、アリール基、置換されたアリール基、ヘテロアリール基、置換されたヘテロアリール基、および複素環、置換された複素環、から成る群から選択される。
【０１６４】
様々な実施形態における糖類は、グルコース、マンノース、ガラクトース、Ｎ‐アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フコース、フルクトース、キシロース、シアル酸、グルクロン酸、イズロン酸、ガラクツロン酸、上述の糖類の少なくとも２つを含む、二糖類またはオリゴ糖、およびそれらの誘導体、から成る群から選択される。
【０１６５】
組成物の様々な実施形態では、Ｙは、ＣＯ、ＳＯ２、または単結合であり；Ｒ２は、アミンまたはアリール基であり；Ｒ１は、ガラクトース、グルコース、またはＮ−アセチルグルコサミンであり；Ｒ１は、置換されたガラクトース、グルコース、またはＮ−アセチルグルコサミンであり；Ｒ１は、Ｃ３−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル置換されたガラクトースであり；あるいはＸは、ＯまたはＳである。
【０１６６】
組成物の様々な実施形態では、Ｒ２は、置換されたフェニル基であり、ここで前記置換されたフェニル基は、ハロゲン、アルコキシ、アルキル、ニトロ、スルフォ、アミノ、ヒドロキシ基またはカルボニル基から成る群から選択される１つ以上である。
【０１６７】
様々な実施形態における組成物は、メチル３−デオキシ−３−（１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−（４−プロピル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−（４−メトキシカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−（４−（１−ヒドロキシ−１−シクロヘキシル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−（４−フェニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−（４−ｐ−トリルスルフォニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−（４−メチルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−（４−ブチルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−（４−ベンジルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−｛４−（３−ヒドロキシプロプ−１−イルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−｛４−［２−（Ｎ−モルホリノ）−エチルアミノカルボニル］−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−（４−メチルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド、ビス−（３−デオキシ−３−（４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（３−メトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（４−メトキシフェニル）−Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（３，５−ジメトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（１−ナフチル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メ��ル３−デオキシ−３−｛４−（２−ナフチル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（３−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；メチル３−デオキシ−３−｛４−（４−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；Ｏ−｛−３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−３−インドル−カルバルドキシム；Ｏ−｛−３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−３−インドル−カルバルドキシム；Ｏ−｛−３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２−ヒドロキシ−５−ニトロ−フェニル）−カルバルドキシム；Ｏ−｛−３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２−ヒドロキシ−５−ニトロ−フェニル）−カルバルドキシム；Ｏ−｛−３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２，５−ジヒドロキシフェニル）−カルバルドキシム；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２，５−ジヒドロキシフェニル）−カルバルドキシム；Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−１−ナフチル−カルバルドキシム；あるいはＯ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾル−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−１−ナフチル−カルバルドキシム、である。
【０１６８】
様々な実施形態における組成物は、チオジガラクトシドを有し、例えば、組成物は、以下に示される一般式を有し：
【０１６９】
【化１８】
0006366598.tif 000019
それによって、ピラノース環の構成は、Ｄ−ガラクトであり；Ｘは、Ｏ、Ｓ、およびＳＯから成る群から選択され；ＹおよびＺは、ＣＯＮＨまたは１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環から独立して選択され；Ｒ１およびＲ２は、少なくとも４つの炭素のアルキル基、少なくとも４つの炭素のアルケニル基、少なくとも４つの炭素のアルキニル基；カルバモイル基、アルキル基で置換されたカルバモイル基、アルケニル基で置換されたカルバモイル基、アルキニル基で置換されたカルバモイル基、アリール基で置換されたカルバモイル基、置換されたアルキル基で置換されたカルバモイル基、および置換されたアリール基で置換されたカルバモイル基；少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルキル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのトリフルオロメチル基で置換されたフェニル基；少なくとも１つのトリフルオロメトキ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのスルフォ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つの水酸基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたフェニル基、および少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたフェニル基；ナフチル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルキル基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのスルフォ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つの水酸基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたナフチル基、および少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたナフチル基；ヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのスルフォ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つの水酸基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたヘテロアリール基、および少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたヘテロアリール基；およびチエニル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたチエニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのスルフォ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つの水酸基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたチエニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたチエニル基、および少なくとも１つの置換されたカルボニル基で置換されたチエニル基、から成る群から独立して選択される。
【０１７０】
様々な実施形態における組成物は、化学式を有し、式中、ＹはＣＯＮＨであり；ＣＯＮＨ基は、Ｎ原子を介してピラノース環に連結され；Ｚは、ＣＯＮＨであり、例えば、ＣＯＮＨ基は、Ｎ原子を介してシクロヘキサンに連結され；あるいは、Ｙは、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環であり、例えば、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環は、Ｎ１原子を介してピラノース環に連結される。組成物の様々な実施形態では、Ｒ１は、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環のＣ４原子に連結され；Ｚは、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環であり、例えば、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環は、Ｎ１原子を介してシクロヘキサンに連結され；あるいは、Ｒ２は、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環のＣ４原子に連結される。様々な実施形態では、組成物は、ジガラクトシドを含み、例えば、組成物は、以下の一般式（１３）を含み：
【０１７１】
【化１９】
0006366598.tif 000020
式中、ピラノース環の少なくとも１つの構成は、Ｄ−ガラクトであり；Ｘは、単結合であり；Ｒは、任意の位置で、メチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびトリフルオロメチルから成る群から選択される１つ以上の置換基で置換される、フェニル基であるか、あるいはＲはチエニル基である。
【０１７２】
組成物の様々な実施形態では、Ｒは、任意の位置で、フルオロ、クロロ、およびブロモから成る群から選択される１つ以上の置換基で置換される、フェニル基である。例えば、Ｒは、任意の位置で、フルオロから選択される１つ以上の置換基で置換される、フェニル基である。典型的には、両方のピラノース環の構成は、Ｄ−ガラクトである。
【０１７３】
本明細書で使用されるような用語「アルキル基」は、単結合によって結合される水素および炭素原子のみから成る、化学化合物を含む。例えば、アルキル基は、約１つの炭素原子から約７つの炭素原子を含み、様々な実施形態では、約１つの炭素原子から約４つの炭素原子を含む。アルキル基は、直鎖または分枝鎖であってもよく、３、４、５、６、または７つの炭素原子などの、３乃至７の炭素原子を含む環（ｃｙｃｌｅ）も形成し得る。したがって、アルキルは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、３−メチルブチル、２，２−ジメチルプロピル、ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、ｎ−ヘプチル、２−メチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルペンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、および１−メチルシクロプロピルのいずれかを指す。
【０１７４】
本明細書で使用されるような用語「アルケニル基」は、少なくとも１つの二重結合を含む任意の官能基または置換基である。アルケニル基は、約２つの炭素原子から約７つの炭素原子を含む。アルケニル基は、ビニル、アリル、ブタ−１−エニル、ブタ−２−エニル、２，２−ジメチルエテニル、２，２−ジメチルプロプ−１−エニル、ペンタ−１―エニル、ペンタ−２−エニル、２，３−ジメチルブタ−１−エニル、ヘキサ−１−エニル、ヘキサ−２−エニル、ヘキサ−３−エニル、プロプ−１，２−ジエニル、４−メチルヘキサ−１−エニル、シクロプロプ−１−エニル基のいずれか、および他のものを含む。
【０１７５】
本明細書で使用されるような用語「アルキル化された」は、アルキル基で置換されることを意味する。本明細書で使用されるような用語「アルケニル化された」は、アルケニル基で置換されることを指す。
【０１７６】
本明細書で使用されるような用語「アリール基」は、芳香環に由来し、約４つの炭素原子から約１２の炭素原子を有している、任意の官能基または置換基を指す。アリール基は、例えば、フェニル基またはナフチル基であり得る。前述の基は、有機化学の技術分野内で、任意の他の既知の置換基で置換されてもよい。基はまた、置換基の２つ以上で置換されてもよい。置換基の例は、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルコキシ、ニトロ、スルフォ、アミノ、ヒドロキシ、およびカルボニルの基である。ハロゲン置換基は、ブロモ、フルオロ、ヨード、およびクロロである。アルキル基は、例えば、約１つの炭素原子から約７つの炭素原子を含む。アルケニル基は、例えば、２つの炭素原子または４つの炭素原子などの、２乃至７の炭素原子を含む。アルコキシ基は、不飽和の炭素原子を含有し得る、１つの炭素原子から７つの炭素原子を含む。置換基の組み合わせは、トリフルオロメチルなどとして存在すし得る。
【０１７７】
本明細書で使用されるような用語「アルコキシ基」は、例えば、約１つの炭素原子から約７つの炭素原子などの、酸素に結合される炭素原子を含む、官能基または置換基である。アルコキシ基は、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ペントキシ基、イソペントキシ基、３−メチルブトキシ基、２，２−ジメチルプロポキシ基、ｎ−ヘキソキシ基、２−メチルペントキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、２，３−ジメチルブトキシ基、ｎ−ヘプトキシ基、２−メチルヘキソキシ基、２，２−ジメチルペントキシ基、２，３−ジメチルペントキシ基、シクロプロポキシ基、シクロブトキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基、シクロヘプチルオキシ基、および１−メチルシクロプロピルオキシ基であり得る。
【０１７８】
本明細書で使用されるような用語「アルキルアミノ基」は、孤立電子対を有する窒素原子に結合したアルキル基（約１つの炭素原子から約７つの炭素原子）を含む、官能基または置換基である。例えば、アルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、３−メチルブチル、２，２−ジメチルプロピル、ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、ｎ−ヘプチル、２−メチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルペンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、および１−メチルシクロプロピルのいずれかである。
【０１７９】
本明細書で使用されるような用語「アリールアミノ基」は、アンモニアの誘導体に結合されるアリール基であり、アンモニアの誘導体は、孤立電子対を有する塩基性窒素原子を含有している。アリールアミノ基は、例えば、約４つの炭素原子から約７つの炭素原子を有しているアリール基を有する。アリールアミノ基は、例えば、アニリン、カルボキシル化されたアニリン、ハロゲン化されたアニリンであり、ハロゲンは、上に定義されている通りである。
【０１８０】
本明細書で使用されるような用語「アリールオキシ基」は、酸素に結合したアリール官能基である。例えば、アリールオキシ基は、約４つの炭素原子から約１２の炭素原子を含む。アリールオキシ基は、フェノール、カルボキシル化されたフェノールまたはハロゲン化されたフェノールであり得、ハロゲンは、上に定義された通りである。
【０１８１】
本明細書で使用されるような用語「ヘテロアリール基」は、約４つの炭素原子から約１８の炭素原子を含むアリール基であり、環の少なくとも１つの原子は、ヘテロ原子であり、すなわち、炭素ではない。様々な実施形態では、ヘテロ原子は、Ｎ、ＯまたはＳである。特定の実施形態におけるヘテロアリール基は、ピリジン、またはインドールの基である。
【０１８２】
前述の基は、有機化学の技術分野内で、任意の他の既知の置換基で置換されてもよい。
基はまた、置換基の２つ以上で置換されてもよい。置換基の例は、ハロゲン、アルコキシ、ニトロ、スルフォ、アミノ、ヒドロキシ、およびカルボニルの基である。ハロゲン置換基は、ブロモ、フルオロ、ヨード、およびクロロである。様々な実施形態では、アルキル基は、約１つの炭素原子から約７つの炭素原子を含む。様々な実施形態におけるアルケニル基は、約２つの炭素原子から約７つの炭素原子を含む。様々な実施形態におけるアルコキシは、約１つの炭素原子から約７つの炭素原子、好ましくは、１乃至４つの炭素原子を含み、不飽和の炭素原子を含有し得る。
【０１８３】
本明細書で使用されるような用語「被験体」は、様々な実施形態において、哺乳動物を指し、ヒト、霊長類、家畜動物（例えば、ヒツジ、ブタ、牛、馬、およびロバ）、実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、およびモルモット）、ペット（例えば、犬および猫）、および高価な動物園での動物および野生動物（例えば、狐、カンガルー、象、およびシカ）を含む。
【０１８４】
ポリヌクレオチド阻害剤
本発明の実施形態は、本明細書において、眼の血管新生または眼の線維症、眼の血管新生に関連する障害または眼の線維症に関連する障害を阻害または予防するための方法を提供し、該方法は、細胞または組織を、ガレクチンタンパク質の阻害剤または調節物質、または調節物質の発現のソースを含む、医薬組成物と接触させる工程を含む。例えば、阻害剤は、インサイツまたはエキソビボで投与された組換え生成されたタンパク質である。用語「組換え型（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ）」は、遺伝子組換え体、例えば、培養中の微生物または真核細胞の操作によって生成されたタンパク質を指す。
【０１８５】
本発明の実施形態では、組成物、方法およびキットは、阻害剤である調節物質のソースを含み、例えば、阻害タンパク質をコード化するポリヌクレオチド配列は、組換え型ＤＮＡ分子へと操作されて、阻害タンパク質またはその一部の発現を、適切な宿主細胞へと配向する。生物学的に活性な阻害剤を発現するために、阻害剤をコード化するヌクレオチド配列、または機能的に同等な配列は、適切な発現ベクター、すなわち、阻害タンパク質のアミノ酸配列をコード化するヌクレオチド配列に操作可能に連結された、挿入されたコード配列の転写および翻訳を調節する要素をコード化する必要な核酸を含む、ベクターへと挿入される。
【０１８６】
例えば、適切な転写および翻訳の調節要素に操作可能に連結されたタンパク質またはペプチドをコード化する核酸配列を包含している、発現ベクターを構築するために、当業者に周知である方法が使用される。これらの方法は、インビトロでの組換え型ＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボでの組換え又は遺伝子組換えを含む。Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ， ＮＹ， １９８９において技術が記載されている。
【０１８７】
様々な市販の発現ベクター／宿主のシステムが、タンパク質またはペプチドをコード化する配列を含む及び発現するのに有用である。これらは、限定されないが、組換え型のバクテリオファージ、プラスミドまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターによって形質転換された細菌；酵母発現ベクターによって形質転換された酵母；ウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）と接触させられた昆虫細胞系；ウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワー・モザイク・ウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）によって形質移入された、または細菌の発現ベクター（例えば、Ｔｉ、ｐＢＲ３２２、またはｐＥＴ２５ｂプラスミド）によって形質転換された、植物細胞系；あるいは動物細胞系、などの微生物を含む。Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， ＮＹ， １９８９を参照。
【０１８８】
ウイルスベクターは、限定されないが、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、およびヘルパー依存性のアデノウイルスベクターを含む。例えば、ベクターは、本明細書に示されるように筋サテライト細胞の分化転換を調整する転写（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）に結合する転写因子または薬剤をコード化する、核酸配列を送達する。アデノウイルス・パッケージング・ベクターは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ （Ｍａｎａｓｓａｓ， ＶＡ）から市販で入手可能である。アデノウイルスベクターを構築し、アデノウイルスベクターを使用する方法は、Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ， １ １４：２５３−２６２， ２００７ ａｎｄ ｖａｎ Ｌｅｅｕｗｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．， １８：８４５−８５４， ２００３に示される。
【０１８９】
アデノウイルスベクターは、真核細胞遺伝子の発現（Ｌｅｖｒｅｒｏ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ， １０１ ： １９５−２０２， １９９１）およびワクチン開発（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ： Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ７， （Ｍｕｒｒａｙ， Ｅｄ．）， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｌｉｆｔｏｎ， ＮＪ， １０９−１２８， １９９１）において使用されてきた。さらに、組換え型アデノウイルスベクターは、遺伝子療法に使用される（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．、２００７年６月２６日に発行された、米国特許第７，２３５，３９１号）。
【０１９０】
組換え型アデノウイルスベクターは、例えば、シャトルベクターとプロウイルスベクターとの間の相同遺伝子組換えから生成される（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．、米国特許第７，２３５，３９１号）。これらの組換え型アデノウイルスベクターで使用するためのヘルパー細胞株は、２９３個のヒト胎生腎細胞、筋細胞、造血細胞または他のヒト胚性の間葉細胞または上皮細胞などの、ヒト細胞に由来し得る。代替的に、ヘルパー細胞は、ヒトアデノウイルスに許容的な他の哺乳動物の種の細胞、例えば、ベロ細胞または他のサル胚性の間葉細胞または上皮細胞に由来し得る。ヘルパー細胞株を使用するこれらの複製欠損のアデノウイルスベクターの生成および増殖が、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ， １９９７ Ｊ． Ｇｅｎ． Ｖｉｒｏｌ．， ３６：５９−７２， １９７７に記載される。
【０１９１】
レンチウイルスベクターのパッケージングベクターは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ （Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）から市販で入手可能である。レンチウイルスベクターの生成用のＨＩＶベースのパッケージングシステムは、Ｎａｌｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７２： ２６３−２６７， １９９６； Ｚｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， １５： ８７１−８７５， １９９７；およびＤｕｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ７２： ８４６３−８４７１ ， １９９８における構成物を使用して調製される。
【０１９２】
多くのベクター構成物は、第三世代のレンチウイルスＳＩＮベクターバックボーンに基づき、システムを使用してパッケージングされて利用可能である（Ｄｕｌｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ７２： ８４６３−８４７１ ， １９９８）。例えば、ベクター構成物、ｐＲＲＬｓｉｎＣＭＶＧＦＰｐｒｅは、ＨＩＶプロモーター配列がラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）の配列と置き換えられている５’ＬＴＲ、Ｕ３プロモーター領域の欠失を含んでいる自己不活性化３’ＬＴＲ、ＨＩＶパッケージングシグナル、ＣＭＶプロモーターによって促進されたオワンクラゲの緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）から成るマーカー遺伝子カセットに連結されたＲＲＥシーケンス、および核輸出を増強するようである、ウッドチャック肝炎ウイルスのＰＲＥ要素、を含む。ＧＦＰマーカー遺伝子は、ＵＶ蛍光顕微鏡法またはフローサイトメトリーの直接観察による形質移入または形質導入の効率の定量化を可能にする（Ｋａｆｒｉ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．， １７： ３１４−３１ ７， １９９７およびＳａｋｏｄａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｃａｒｄｉｏｌ．， ３ １ ： ２０３７−２０４７， １９９９）。
【０１９３】
タンパク質をコード化する遺伝子を含有しているレトロウイルスベクターを構築するためのレトロウイルス核酸の操作、および細胞においてパッケージングするための方法は、当該技術分野に既知の技術を使用して達成される。Ａｕｓｕｂｅｌ， ｅｔ ａｌ．， １９９２， Ｖｏｌｕｍｅ １， Ｓｅｃｔｉｏｎ ＩＩＩ （ｕｎｉｔｓ ９．１０．１ −９． １４．３）； Ｓａｍｂｒｏｏｋ， ｅｔ ａｌ．， １９８９． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ． Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ． Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．； Ｍｉｌｌｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ． ７：９８１ −９９０， １９８９； Ｅｇｌｉｔｉｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ． ６：６０８−６１４， １９８８； 米国特許第４，６５０，７６４号， 第４，８６１ ，７１９号， 第４，９８０，２８９号， 第５，１２２，７６７号，および第５，１２４，２６３号；およびＰＣＴ特許公開番号ＷＯ ８５／０５６２９ 、 ＷＯ ８９／０７１５０ 、ＷＯ ９０／０２７９７ 、ＷＯ ９０／０２８０６ 、ＷＯ ９０／１３６４１ 、ＷＯ ９２／０５２６６ 、ＷＯ ９２／０７９４３ 、ＷＯ ９２／１４８２９ 、およびＷＯ ９３／１４１８８、を参照。
【０１９４】
レトロウイルスベクターは、広宿主性のパッケージングシステムを使用して、無感染の形質導入するウイルス粒子（ビリオン）へと構築且つパッケージングされる。そのようなパッケージングシステムの例は、例えば、Ｍｉｌｌｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． ６：２８９５−２９０２， １９８６； Ｍａｒｋｏｗｉｔｚ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ６２： １ １２０− １ １２４， １９８８； Ｃｏｓｓｅｔ， ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ６４： １０７０−１０７８， １９９０； 米国特許第４，６５０，７６４号、第４，８６１ ，７１９号、第４，９８０，２８９号、第５，１２２，７６７号、および第５，１２４，２６３号、およびＰＣＴ特許公開番号ＷＯ ８５／０５６２９、ＷＯ ８９／０７１５０、ＷＯ ９０／０２７９７、ＷＯ ９０／０２８０６、ＷＯ ９０／１３６４１、ＷＯ ９２／０５２６６、ＷＯ ９２／０７９４３、ＷＯ ９２／１４８２９、およびＷＯ ９３／１４１８８、で見られる。
【０１９５】
「プロデューサー細胞」の生成は、レトロウイルスベクターをパッケージング細胞へと導入することによって達成される。そのようなレトロウイルスベクターの例は、例えば、Ｋｏｒｍａｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ． ８４：２１５０− １５４， １９８７； Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． １ ８：３５８７−３５９６， １９９０；米国特許第４，４０５，７１２号、第４，９８０，２８９号、および５，１ １２，７６７号；およびＰＣＴ特許公開番号ＷＯ ８５／０５６２９、ＷＯ ９０／０２７９７、およびＷＯ ９２／０７９４３、で見られる。ヘルペスウイルスのパッケージングベクターは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，（Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）から市販で入手可能である。典型的なヘルペスウイルスは、水痘帯状疱疹ウイルスまたは仮性狂犬病ウイルスなどの、ヘルペスウイルス；ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２などの、単純性疱疹ウイルス；あるいはエプスタイン−バーウイルスなどの、ヘルペスウイルス、である。所望のヌクレオチド部分（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｇｍｅｎｔ）とパッケージングされ得る中空の（ｅｍｐｔｙ）ヘルペスウイルス粒子を調製するための方法は、Ｆｒａｅｆｅｌ ｅｔ ａｌ．、１９９９年１２月７日に発行された米国特許第５，９９８，２０８号、で示される。
【０１９６】
ヘルペスウイルスＤＮＡベクターは、当業者によく知られている技術を使用して構築され得る。例えば、ヘルペスウイルスの全体のゲノムをコード化するＤＮＡ断片は、大きなＤＮＡ断片、例えば、コスミド（Ｅｖａｎｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ ７９， ９−２０， １９８９）、酵母人工染色体（ＹＡＣＳ）（Ｓａｍｂｒｏｏｋ， Ｊ． ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｉｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ ．Ｙ ．，１９８９）、または大腸菌Ｆ要素プラスミド（Ｏ'Ｃｏｎｎｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４： １３０７−１３１３， １９８９）を運ぶことができる、多くのベクターの中から分断される。例えば、エプスタイン−バーウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、仮性狂犬病ウイルスおよびＨＳＶ−１を含む、様々なヘルペスウイルスの全体のゲノムを表わす重複するクローンを含有している、一連のコスミドは単離されている。Ｍ． ｖａｎ Ｚｉｊｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ６２， ２１９１ ， １９８８； Ｃｏｈｅｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ'ｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ９０， ７３７６， １９９３； Ｔｏｍｋｉｎｓｏｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ６７， ７２９８， １９９３；およびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．， Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １９７， １ １６， １９９３、を参照。
【０１９７】
ＡＡＶは、培養細胞中の増殖性感染を受けるために、別のウイルス（アデノウイルスまたはヘルペスウイルスファミリーのメンバーのいずれか）との同時感染に依存するという点で、依存性のパルボウイルスである（Ｍｕｚｙｃｚｋａ， Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ， １５８：９７ １２９， １９９２）。例えば、組換え型ＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ウイルスは、対象の遺伝子、例えば、Ｎｋｘ３．２遺伝子を含有しているプラスミドを同時形質移入することによって作られる。細胞もまた、アデノウイルス、またはＡＡＶヘルパー機能に必要とされるアデノウイルス遺伝子を運ぶプラスミドと接触させられるか又は形質移入される。そのような方法で作られた組換え型ＡＡＶウイルスのストックは、（例えば、塩化セシウム密度の遠心分離によって）組換え型ＡＡＶ粒子から物理的に分離されなければならない、アデノウイルスとともに含まれる。
【０１９８】
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）のパッケージングベクターは、ＧｅｎｅＤｅｔｅｃｔ （Ａｕｃｋｌａｎｄ， Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ）から市販で入手可能である。ＡＡＶは、高頻度の統合（ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ）を有することが示されており、非分裂細胞を感染させ、そのため、遺伝子の、組織培養中の哺乳動物細胞への送達に有用である（Ｍｕｚｙｃｚｋａ， Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ， １５８：９７ １２９， １９９２）。ＡＡＶは、感染力に対して広範囲の宿主領域を有する（Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．， ４：２０７２ ２０８１， １９８４； Ｌａｕｇｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．， ６０（２）：５１５ ５２４， １９８６； Ｌｅｂｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．， ８（１０）：３９８８ ３９９６， １９８８； ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．， ６２（６）：１９６３ １９７３， １９８８）。
【０１９９】
ＡＡＶベクターを構築及び使用する方法は、例えば米国特許第５，１３９，９４１号及び同第４，７９７，３６８号に記載される。遺伝子送達におけるＡＡＶの使用は更に、ＬａＦａｃｅらのＶｉｒｏｌｏｇｙ，  １６２（２）：４８３  ４８６，  １９８８；ＺｈｏｕらのＥｘｐ．  Ｈｅｍａｔｏｌ，  ２１：９２８  ９３３，  １９９３；ＦｌｏｔｔｅらのＡｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ７（３）：３４９  ３５６，  １９９２；及び、ＷａｌｓｈらのＪ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ，  ９４：１４４０  １４４８，  １９９４に記載される。
【０２００】
組み換え型ＡＡＶベクターは、マーカー遺伝子のインビトロ及びインビボでの形質導入（ＫａｐｌｉｔｔらのＮａｔ  Ｇｅｎｅｔ．  ，  ８（２）：１４８  ５４，  １９９４；ＬｅｂｋｏｗｓｋｉらのＭｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ８（１０）：３９８８  ３９９６，  １９８８；ＳａｍｕｌｓｋｉらのＥＭＢＯ  Ｊ．，  １０：３９４１  ３９５０，１９９１；ＳｈｅｌｌｉｎｇとＳｍｉｔｈのＧｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  １：  １６５  １６９，  １９９４；ＹｏｄｅｒらのＢｌｏｏｄ，  ８２  （Ｓｕｐｐ．）：  １：３４７Ａ，  １９９４；  ＺｈｏｕらのＥｘｐ．  Ｈｅｍａｔｏｌ，  ２１：９２８  ９３３，  １９９３；ＴｒａｔｓｃｈｉｎらのＭｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ５：３２５８  ３２６０，  １９８５；ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎらのＪ．  Ｖｉｒｏｌ．  ，  ６２（６）：１９６３  １９７３，  １９８８）と、ヒト疾患に関与する遺伝子の形質導入（ＦｌｏｔｔｅらのＡｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ７（３）：３４９  ３５６，  １９９２；ＯｈｉらのＧｅｎｅ，  ８９（２）：２７９  ２８２，  １９９０；ＷａｌｓｈらのＪ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ，  ９４：１４４０  １４４８，  １９９４；及びＷｅｉらのＧｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  １：２６１  ２６８，  １９９４）に使用されてきた。
【０２０１】
＜抗体阻害剤＞
様々な実施形態における本発明は、血管新生（例えば眼の血管新生）を調節するガレクチンタンパク質の阻害剤を含む。タンパク質であるガレクチン阻害剤の一実施形態は、ガレクチンタンパク質に結合する、又は、ガレクチンタンパク質の発現又は活性に影響する分子に結合する抗体を含む。本明細書で言及される用語「抗体」は、全体の抗体、抗原結合フラグメント（即ち、「抗原結合部分」）、又はこれらの単一の鎖を含む。自然発生の「抗体」は、ジスルフィド結合により相互に接続される、少なくとも２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖を備える糖タンパク質である。
【０２０２】
様々な実施形態において、「特にガレクチンタンパク質に結合する」抗体は、血管新生を阻害する又は調節するのに十分なＫＤ（例えば、ＫＤは、５×１０−９Ｍ以下、２×１０−９Ｍ以下、又は１×１０−１０Ｍ以下である）によりガレクチンタンパク質に結合する抗体を指す。例えば、抗体はモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体である。本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」は、単一の分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、転写因子、又は転写因子の特定のエピトープのための、単一の結合特異性及び親和性を表示する。抗体は、例えばＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４などのＩｇＧを含む。
【０２０３】
用語「ポリクローナル抗体」又は「ポリクローナル抗体組成物」は、各々が免疫抗原に見出される多くの異なるエピトープの１つに特異的であり、且つ各々がそのエピトープのための特異親和性を特徴とする、大きなセットの抗体を指す。エピトープは、タンパク質に関して長さ６乃至８の残基を含む、抗原の最も小さな決定因子である（Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ，  Ｊ．  ａｎｄ  Ｉ．  Ｂｅｒｋｏｗｅｒ，  （１９９３）  ｉｎ  Ｐａｕｌ，  Ｗ．，  Ｅｄ．，  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎ．Ｙ．，  ｐ．２４６）。親和性は、低いもの（例えば、１０−６Ｍ）から高いもの（例えば、１０−１１Ｍ）にまで及ぶ。哺乳動物の血清から集めたポリクローナル抗体の画分は、ＩｇＧ画分を得るために、周知の技術、例えば、タンパク質Ａなどの免疫グロブリン分子を選択的に結合する親和性マトリックスを用いたクロマトグラフィーにより、分離される。抗体の純度と特異性を増強するために、特異抗体は、固相に付けられた免疫抗原を使用する、免疫親和性クロマトグラフィーによって更に精製されてもよい。免疫抗原が固相に付けられた免疫複合体を形成する抗体分子と免疫反応するのに十分な期間、抗体は、固相に付けられた免疫抗原と共に接触される。結合された抗体は、標準の技術（ｐＨを減少させる又はイオン強度を高めるためのバッファーの使用など）により固相から溶出され、溶出した画分はアッセイされ、特異抗体を含むものが組み合わされる。
【０２０４】
また、本明細書に置ける方法には、組み換え型抗体である抗体が有用である。本明細書で使用される用語「組み換え型ヒト抗体」は、組み換え手段によって調製、発現、作成、又は分離される抗体を含む。本明細書における方法において使用される組み換え型抗体を発現するための哺乳動物宿主細胞は、例えば、Ｒ．Ｊ．  ＫａｕｆｍａｎとＰ．Ａ．  Ｓｈａｒｐらによる１９８２  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．  １５９：６０１−６２１に記載されている、ＤＨ  ＦＲ選択可能なマーカーを用いた、ＵｒｌａｕｂとＣｈａｓｉｎによる論文Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０，１９８０に記載された、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズ・ハムスター・オーバーレイ（ＣＨＯ細胞）と、ＮＳＯ骨髄腫細胞と、ＣＯＳ細胞と、ＳＰ２細胞とを含む。特に、ＮＳＯ骨髄腫細胞を用いるための、別の発現システムは、ＷＯ８７／０４４６２、ＷＯ８９／０１０３６、及びＥＰ３３８，８４１に示される、ＧＳ遺伝子発現システムである。抗体を生成するために、抗体遺伝子をコードする発現ベクターは、哺乳動物宿主細胞へと導入され、該宿主細胞は、宿主細胞内への抗体の発現、又は、宿主細胞が成長している培養培地内への抗体の分泌を可能にするのに十分な期間、培養される。抗体は、標準タンパク質精製方法を用いて培養培地から回収される。
【０２０５】
種々の種の標的への抗体の結合能力を評価するための標準アッセイが、例えば、ＥＬＩＳＡ法、ウェスタンブロット法、放射免疫測定法（ＲＩＡ）を含め、知られている。また抗体の結合キネティクス（例えば、結合親和力）は、Ｂｉａｃｏｒｅ分析などの、当該技術分野で既知の標準アッセイによって評価され得る。
【０２０６】
抗血清の生成のために動物を選ぶ際に考慮されるべき基準を含む、抗体産生のための一般的な方法論は、Ｈａｒｌｏｗらによる論文Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｐｐ．  ９３−１１７，１９８８に記載されている。例えば、ヤギ、イヌ、ヒツジ、マウス、又はラクダ等の、適切なサイズの動物が、免疫反応をもたらすのに有効な、例えば、インタクトタンパク質、又は、ヒト転写因子からのエピトープを含むそのタンパク質等の、ある量の免疫原の投与によって免疫性が与えられる。典型的なプロトコルは、動物の大きさに依存してアジュバント（例えば完全フロイントアジュバント）を備えた１００マイクログラム乃至１００ミリグラムの免疫原の腹腔内注射の３週間後の、動物のサイズに依存した、１００マイクログラム乃至１００ミリグラムの抗原の皮下注射を含む。アジュバント（例えば、フロイント不完全アジュバント）の、２週間毎の追加の腹腔内注射が、動物の血中に適切な抗体の力価が達成されるまで、投与される。典型的な力価、少なくとも、約１：５０００又は１：１００００以上の力価を含み、即ち、最も大きな希釈物が、検出可能な抗体活性を有していることを示す。抗体は、例えば、ヒトＭＡＣを有するカラムへの結合を使用する親和性精製によって、精製される。
【０２０７】
モノクローナル抗体は、ヒトリンパ球のインビトロでの免疫化によって作成される。ヒトリンパ球のインビトロでの免疫化のための技術は、ＩｎａｉらのＨｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ９９（５）：３３５  ３６２，  Ｍａｙ  １９９３；ＭｕｌｄｅｒらのＨｕｍ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ，  ３６（３）：１８６  １９２，  １９９３；ＨａｒａｄａらのＪ．  Ｏｒａｌ  Ｐａｔｈｏｌ．  Ｍｅｄ．  ，  ２２（４）：１４５  １５２，  １９９３；ＳｔａｕｂｅｒらのＪ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ，  １６１（２）：１５７  １６８，  １９９３；及びＶｅｎｋａｔｅｓｗａｒａｎらのＨｙｂｒｉｄｏｍａ，  １１（６）  ７２９  ７３９，  １９９２に記載される。これら技術は、抗原特異性のＩｇＧを含む抗原反応性のモノクローナル抗体、及びＩｇＭモノクローナル抗体を生産するために使用され得る。任意の抗体、又は、転写因子のための親和性及び特異性を持つそのフラグメントは、本明細書に提供される修飾物質組成物の範囲内にある。
【０２０８】
本明細書で言及される用語「抗体」は、全体の抗体、及び任意の抗原結合性フラグメント（即ち、「抗原結合部分」）、又はその単一の鎖（例えば、Ｆｖフラグメント）を含む。自然発生の「抗体」は、ジスルフィド結合により相互に接続される、少なくとも２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖を備える糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと省略）と重鎖定常領域とで構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと省略）と軽鎖定常領域とで構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ）で構成される。ＶＨとＶＬの領域は更に、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より良く保存される領域が点在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域へと細分され得る。各ＶＨ及びＶＬは、以下の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４で、アミノ末端からカルボキシ末端まで配置される、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成される。重鎖と軽鎖の可変領域は、抗原と相互に作用する結合領域を含む。抗体の定常領域は、免疫系（例えば、エフェクター細胞）と古典的な補体系の第１構成要素（Ｃｌｑ）の様々な細胞を含む、宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介してもよい。
【０２０９】
本明細書で使用される、抗体の「抗原結合部分」（又は単に「抗原部分」）との用語は、標的（例えば、ガレクチン、又はガレクチンのフラグメント、又はガレクチン阻害剤、又は組織中のガレクチンのリガンド）と特異的に結合する能力を保持する抗体の完全長の又は１以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、完全長の抗体のフラグメントによって実行され得ることが示されてきた。抗体の「抗原結合部分」との用語の中に包含される結合フラグメントの例は、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１のドメインから成る一価フラグメントであるＦａｂフラグメント；ヒンジ領域にてジスルフィド架橋により結合した２つの抗原結合性フラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ）２フラグメント；ＶＨとＣＨ１のドメインから成るＦｄフラグメント；抗体の単一の腕のＶＬとＶＨのドメインから成るＦｖフラグメント；ＶＨドメインから成るｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  １９８９  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４）；及び、分離された相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【０２１０】
更に、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン（ＶＬとＶＨ）は別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、ＶＬとＶＨの領域が一価分子を形成するように対となる単一タンパク質鎖（単一の鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄ  Ｒ．Ｅ．らの１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３；及びＨｕｓｔｏｎ，  Ｊ．Ｓ．らの１９８８  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８５：５８７９を参照）としてそれらを作ることを可能にする合成リンカーによる、組み換え法を使用して、連結され得る。そのような単一鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」との用語の中に包含されるように意図される。これら抗体フラグメントは、当業者に既知の従来技術を使用して得られるものであり、フラグメントは、無傷の抗体であるような同じ方法で有用性のためにスクリーンされる。
【０２１１】
本明細書で使用される「分離した抗体」は、異なる抗原特異性を持つ他の抗体が実質的にない（例えば、ガレクチン、又はガレクチンのフラグメント、又はガレクチン阻害剤、又は組織中のガレクチンのリガンドなどの標的と特異的に結合する、分離した抗体は、この標的以外に抗原と特異的に結合する抗体が実質的にない）抗体を指す。しかし、ＤＥＣ２０５と特異的に結合する、分離した抗体は、他の種からの対応する標的分子などの、他の抗原に対する交差反応性を持っていてもよい。更に、分離した抗体は、他の細胞材料及び／又は化学品が実質的になくてもよい。
【０２１２】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」は、単一の分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープのための単一の結合特異性と親和性を表示する。
【０２１３】
本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、フレームワークとＣＤＲ領域の両方がヒト起源の配列に由来する可変領域を持つ抗体を含むように意図される。更に、抗体が定常領域を含む場合、定常領域はまた、そのようなヒト配列（例えば、ヒト生殖系列配列）、又はヒト生殖系列配列の突然変異したバージョンに由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト配列（例えば、インビトロのランダム突然変異又は部位突然変異、或いは、インビボの体細胞突然変異により導入された突然変異）によってコードされないアミノ酸残基を含んでもよい。しかし、本明細書で使用される用語「ヒト抗体」は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含むようには意図されない。
【０２１４】
用語「ヒトモノクローナル抗体」は、フレームワークとＣＤＲ領域の両方がヒト配列に由来する可変領域を持つ単一の結合特異性を表示する抗体を指す。１つの実施形態において、ヒトモノクローナル抗体は、永久増殖細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子と軽鎖導入遺伝子とを含むゲノムを持つトランスジェニックの非ヒト動物（例えばトランスジェニックマウス）から得たＢ細胞を含む、ハイブリドーマによって生成される。
【０２１５】
本明細書で使用される用語「組み換え型ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリン遺伝子又はそこから調製されるハイブリドーマのためにトランスジェニックである又はトランス染色体（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ）である動物（例えばマウス）から分離した抗体、例えばトランスフェクトーマからヒト抗体を発現するために形質転換された宿主細胞から分離した抗体、組み換え型で組み合わせ型のヒト抗体ライブラリから分離した抗体、及び、ヒト免疫グロブリン遺伝子、他のＤＮＡ配列に対する配列の全て又は一部のスプライシングに関与する任意の他の手段により調製、発現、作成、又は分離される抗体などの、組み換え手段によって調製、発現、作成、又は分離される全てのヒト抗体を含む。そのような組み換え型ヒト抗体は、フレームワークとＣＤＲ領域がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を持つ。しかし、特定の実施形態において、そのような組み換え型ヒト抗体は、インビトロでの突然変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列にについてトランスジェニック動物（ａｎｉｍａｌ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ）が用いられる場合は、インビボでの突然変異誘発）にさらすことができる。故に、組み換え型抗体のＶＨとＶＬの領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨとＶＬの配列に由来及び関連する一方でインビボでのヒト抗体生殖系列レパートリー内に自然に存在し得ない配列である。
【０２１６】
本明細書で使用されるように、「アイソタイプ」は、重鎖定常域遺伝子によって提供される抗体クラス（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４などのＩｇＧ）を指す。
【０２１７】
「抗原を認識する抗体」と「抗原に特異的な抗体」との句は、用語「抗原と特異的に結合する抗体」と、本明細書で互換的に使用される。
【０２１８】
本明細書で使用されるように、樹状細胞受容体（例えば、具体的にはヒト組織中のガレクチンのリガンドなどのヒト標的である標的）と特異的に結合する、抗体又は抗体融合タンパク質は、約５×１０−９Ｍ以下、約２×１０−９Ｍ以下、又は約１×１０−１Ｍ以下のＫＤを用いてヒト標的と結合する抗体を指すように、意図される。「ヒト標的以外の抗原と交差反応する」抗体は、約０．５×１０−８Ｍ以下、約５×１０−９Ｍ以下、又は約２×１０−９Ｍ以下のＫＤを用いて抗原と結合する抗体を指すように意図される。「特定の抗原と交差反応しない」抗体は、約１．５×１０−８Ｍ以上のＫＤ、約５−１０×１０−８Ｍ又は約１×１０−７Ｍ以上のＫＤを用いて抗原と結合する抗体を指すように意図される。特定の実施形態において、抗原と交差反応しない、そのような抗体は、標準結合アッセイにおいてこれらタンパク質に対する、本質的に検出不能な結合を示す。
【０２１９】
本明細書で使用されるように、ガレクチンへの標的の結合を阻害する抗体は、約１ｎＭ以下、約０．７５ｎＭ以下、約０．５ｎＭ以下、又は約０．２５ｎＭ以下のＫを用いて標的が受容体に結合するのを阻害する抗体を指す。ＧＬ１１７は、細菌性の抗−β−ガラクトシダーゼの非特異性のアイソタイプと一致した、ラット・モノクローナル抗体の負の対照である（Ｈａｗｉｇｅｒらの２００１  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９４：  ７６９−７７９）。
【０２２０】
本明細書で使用される「Ｋａｓｓｏｃ」又は「Ｋａ」との用語は、抗体抗原相互作用の会合速度を指すように意図され、一方で、本明細書で使用される「Ｋｄｉｓ」又は「ＫＤ」との用語は、特定の抗体抗原相互作用の解離速度を指すように意図される。本明細書に使用される用語「ＫＤ」は、Ｋａに対するＫｄの比率（即ち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、且つモル濃度（Ｍ）として発現される、解離定数を指すように意図される。抗体に関するＫＤ値は、当該技術分野において十分に確立された方法を用いて決定され得る。抗体のＫＤを決定する方法は、表面プラズモン共鳴の使用、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサシステムの使用によるものである。
【０２２１】
本明細書で使用されるように、用語「親和性」は、単一の抗原部位での抗体と抗原間の相互作用の強度を指す。各抗原部位内では、抗体の「腕」の可変領域は、多数の部位での抗原との弱い非共有結合力を介して相互に作用し、相互作用が多くなると、親和性は強くなる。
【０２２２】
本明細書で使用されるように、用語「結合活性」は、抗体と抗原の複合体の全体的な安定性又は強度の有益な尺度を指す。それは、３つの主要な因子、即ち抗体エピトープ親和性、抗原と抗体の両方の原子価、及び相互に作用する部分の構造配列により制御される。最終的に、これらの因子は、抗体の特異性（即ち、特定の抗体が正確な抗原エピトープに結合している可能性）を定める。
【０２２３】
本明細書で使用されるように、用語「交差反応性」は、他の抗原上でのエピトープに結合する抗体、又はその抗体の集まりを指す。これは、抗体の低い結合活性又は特異性により、或いは、同一又は非常に類似したエピトープを持つ多数の異なる抗原により、引き起こされ得る。抗原の関連する群への一般的な結合を望む場合、又は、抗原エピトープ配列が進化において高度に保存されない時に異種間の標識化を試みる場合、交差反応性が望ましいこともある。
【０２２４】
本明細書で使用されるように、ＩｇＧ抗体に関して用語「高親和性」は、標的抗原に関して１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、又は１０−１０Ｍ以下のＫＤを持つ抗体を指す。しかし、「高親和性」結合は、他の抗体アイソタイプとは異なり得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプに関する「高親和性」結合は、１０−７Ｍ以下又は１０−８Ｍ以下のＫＤを持つ抗体を指す。
【０２２５】
様々な種の何れかの標的に対する抗体の結合能力を評価するための標準アッセイが、例えば、ＥＬＩＳＡ法、ウェスタンブロット法、ＲＩＡ法を含め、知られている。適切なアッセイは実施例で詳しく記載する。また抗体の結合キネティクス（例えば、結合親和力）は、Ｂｉａｃｏｒｅ分析などの、当該技術分野で既知の標準アッセイによって評価され得る。抗体の機能特性に対する抗体の効果（例えば、受容体結合、自己免疫疾患を妨げる又は回復させる）を評価するためのアッセイは、実施例で更に詳しく記載する。
【０２２６】
従って、当該技術分野に既知の、及び本明細書に記載される方法論に従って決定されるように、これらのガレクチン関連性の機能特性（例えば、生化学的、免疫化学的、細胞性、生理的、又は他の生物活性など）の１以上を「阻害する」抗体は、抗体の欠如下で見られるものに関連する特定の活性の、統計的に深刻な減少に関係することが理解されよう（例えば、又は無関係の特異性の対照抗体が存在する場合に）。ガレクチン関連性活性を阻害する抗体は、測定したパラメータの少なくとも１０％まで、少なくとも５０％、８０％、又は９０％までの、そのような統計的に深刻な減少に影響し、及び特定の実施形態において、本発明の抗体は、ガレクチン機能活性の９５％、９８％、又は９９％より多くを阻害し得る。
【０２２７】
＜ＲＮＡ干渉＞
阻害剤には、は核酸が血管新生を調節するように、ガレクチンタンパク質をコードするか、又はガレクチンタンパク質の活性を調節する分子をコードする核酸に結合するＲＮＡ干渉剤が挙げられる。核酸への結合のための方法と組成は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を利用することを含む。ＲＮＡｉは、細胞に存在する、短い（例えば、３０のヌクレオチド）二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子によって誘発される。これらの短いｄｓＲＮＡ分子は、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）と呼ばれ、ｓｉＲＮＡと配列相同性を共有するメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の破壊を引き起こす。Ｂｅａｃｈらの、２００３年７月３１日公開の国際公開番号ＷＯ／２００３／０６２３９４；ＭｃＳｗｉｇｇｅｎらの、２００５年２月１０日公開の米国特許公開番号２００５／００３２７３３；Ｃｉｃｃｉａｒｅｌｌｉらの、２０１２年８月７日発行の米国特許第８，２３６，７７１号。様々な実施形態において、標的核酸配列は、ガレクチンタンパク質又はその一部をコードする。例えば、ＲＮＡ干渉剤は、ガレクチン１−１１又はその一部（例えば、炭水化物結合領域）の何れかの発現を負に調節する。
【０２２８】
合成ｓｉＲＮＡ又はアンチセンス発現カセットを構築してベクターの組み換え設計した核酸（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｌｙ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ）に挿入する方法は、当該技術分野で周知であり、例えば、Ｒｅｉｃｈらの２０１０年１２月７日発行の米国特許第７，８４７，０９０号、Ｒｅｉｃｈらの２０１０年３月９日発行の米国特許第７，６７４，８９５号、Ｋｈｖｏｒｏｖａらの２０１０年１月５日発行の米国特許第７，６４２，３４９号に示される。例えば、本明細書記載の発明は、センスＲＮＡ鎖とアンチセンスＲＮＡ鎖を含む合成ｓｉＲＮＡを含み、それにより、センスＲＮＡ鎖は、細胞中に標的核酸配列と実質的に同一のヌクレオチド配列を含む。故に、細胞がｓｉＲＮＡをコードするウイルス・ベクターと接触される状況下で、細胞は、後に標的核酸配列の発現を負に調節するｓｉＲＮＡを発現する。
【０２２９】
＜ガレクチン＞
レクチンタンパク質は、特異的に炭水化物、膠着性細胞に結合する（全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開番号ＷＯ／２００６／１１３３１１を参照）。レクチンは、細胞−細胞と細胞−基質の相互作用を含む、種々様々な細胞機能に関係すると示された。レクチンは、植物、無脊椎動物、及び哺乳動物中で広がっている。動物レクチンは、次のファミリー：Ｃ型レクチン；Ｐ型レクチン；ガレクチン（以前はＳ型レクチンと称された）；及びペントラキシンにグループ化された（例えば、ＢａｒｏｎｄｅｓらのＪ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６９：２０８０７，  １９９４を参照）。
【０２３０】
哺乳動物のガレクチンは、ラクトース及び関連するガラクトシドを認識する。全ての哺乳動物ガレクチンが小さなβガラクトシドのために同様の親和性を共有する一方で、これらは、より複雑な糖複合体のための結合特異性とは著しく異なることを示す（ＨｅｎｒｉｃｋらのＧｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ８：４５，  １９９８；ＳａｔｏらのＪ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６７：６９８３，  １９９２；及びＳｅｅｔｈａｒａｍａｎらのＪ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７３：１３０４７，  １９９８）。βガラクトシド糖への結合に加え、ガレクチンは血球凝集活性を持つ。ラミニン（多数のポリラクトサミン鎖を包含する、自然に発生の糖タンパク質）は、特定のガレクチンのための天然リガンドであると示された。ラミニンは、基底膜の構成要素、即ち、全ての上皮の基礎となり且つ個々の筋肉、脂肪、及びシュワン細胞を包囲する細胞外マトリックスである。細胞と基底膜の間の相互作用は、哺乳動物の成長中に様々な細胞型の移動及び／又は分化に影響を及ぼすと知られている。ガレクチンは、膜輸送を特定するが、細胞内で分泌され且つ位置付けられる、従来の配列を包含しない。βガラクトシド糖のためのそれらの親和性に加えて、ガレクチンファミリーのメンバーは、炭水化物認識ドメイン（ＣＲＤ；炭水化物結合ドメインとも称される）、Ｘ線結晶解析により決定されたそれらの関連するアミノ酸残基における、重要な配列類似性を共有する（上述のＬｏｂｓａｎｏｖらのＪ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６７：２７０３４，  １９９３及びＳｅｅｔｈａｒａｍａｎらの文献）。ガレクチンは、細胞粘着（ＣｏｏｐｅｒらのＪ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  １１５：１４３７，  １９９１）、成長調節（ＷｅｌｌｓらのＣｅｌｌ  ６４：９１，  １９９１）、細胞移動（Ｈｕｇｈｅｓ，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．  ２：６８７，  １９９２）、悪性形質転換（ＲａｚらのＩｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ４６：８７１，  １９９０）、及び免疫反応（ＯｆｆｎｅｒらのＪ．  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．  ２８：１７７，  １９９０）を含む、種々様々な生物学的機能に密接に結び付けられた。
【０２３１】
＜ガレクチン−１＞
ガレクチン−１は、１４キロダルトンのサブユニットのホモダイマーを形成し、各サブユニットには単一の結合部位がある。ガレクチン−１は、レクチンがモノマーの形態で蓄積する哺乳動物細胞のサイトゾル中で合成される（Ｃｕｍｍｉｎｇｓらの、１９９９年９月７日発行の米国特許第５，９４８，６２８号；Ｃｕｍｍｉｎｇｓらの、２００１年５月１日発行の米国特許第ＵＳ６２２５０７１号；Ｈｏｒｉｅらの、２００５年５月１０日発行の米国特許第６，８９０，５３１号；及びＣａｍｂｙらの、２０１１年６月２１日発行の米国特許第７，９６４，５７５号）。ヒトガレクチン−１のアミノ酸配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）を、以下に示す：
【０２３２】
【化２０】
0006366598.tif 000021
【０２３３】
＜ガレクチン−３＞
タンパク質のガレクチン−３ファミリーのメンバー（以前は、ＣＢＰ−３５、Ｍａｃ−２、Ｌ−３４、εＢＰ、及びＲＬ−２９として知られている）は典型的に、約２４０乃至２７０のアミノ酸の配列を有し、約２５乃至約２９ｋＤａの分子量を有する。ガレクチン−３タンパク質は一般に、短いＮ−末端ドメイン、ガラクトシド結合領域を含むＣ−末端ドメイン、及び介在するプロリン、並びに、７−１０の保存されたアミノ酸の繰り返しを含むチロシンが豊富なドメインからなる（ＬｉｕらのＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３５：６０７３，  １９９６及びＣｈｅｒａｙｉｌらのＰｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８７：７３２４，  １９９０）。縦列反復は、コラーゲン遺伝子のスーパーファミリーに見出されるものに類似する。繰り返しの数は、ガレクチン−３タンパク質間で異なり、異なる種からのガレクチン−３タンパク質の間での大きさの差を占める。ガレクチン−３のＮ−末端ドメインにより、タンパク質は、糖複合体リガンドを包含する表面に結合した後にマルチマー化を受けることが可能となる。
【０２３４】
ガレクチン−３は、様々な炎症細胞（例えば、活性化マクロファージ、好塩基球、及びマスト細胞）、及び様々な組織上皮と繊維芽細胞の中で発現される（Ｐｅｒｉｌｌｏらの、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  ７６：４０２，  １９９８）。それは、細胞表面上で、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）内で、細胞質において、及び細胞の核において見出される。細胞表面上で、又はＥＣＭにおいて、ガレクチン−３は、多くのＥＣＭと細胞表面の分子に見出されるポリラクトサミン鎖を包含する相補的な糖複合体に結合することにより、細胞−細胞及び細胞−基質の相互作用を媒介すると考えられる。ガレクチン−３は、ラミニンに結合することにより細胞−基質の接着を阻害すると考えられる。細胞の核において、ガレクチン−３は、周知の細胞接着分子（例えば、α６β１、α４β７インテグリン、ＷａｒｌｆｉｅｌｄらのＩｎｖａｓｉｏｎ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  １７：１０１，  １９９７及びＭａｔａｒｒｅｓｅらのＩｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ８５：５４５，  ２０００）、及びサイトカイン（例えば、ＩＬ−１、ＪｅｎｇらのＩｍｍｕｎｏｌ．  Ｌｅｔｔ．  ４２：  １１３，  １９９４）の発現に影響を及ぼすことにより、細胞−基質の相互作用に間接的に影響を及ぼし得る。ガレクチン−３発現は、腎臓などの選択した臓器において啓発的に調節され、肺の乳腺細胞及び肝細胞におけるその発現レベルは、損傷後に上方調節される。ガレクチン−３は、増殖中に特定の細胞型の核に集中すると示された。ガレクチン−３の発現は特定の腫瘍において上昇し、ガレクチン−３が転移において役割を果たすことを示唆する。実際、弱い転移性の細胞株におけるガレクチン−３の過剰発現は、転移性の潜在性の深刻な増加を引き起こした（上述のＲａｚらの文献）。
【０２３５】
ヒトガレクチン−３は、長さ２５０のアミノ酸であり、２６．１ｋＤａのおよその分子量を持つ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、図１）。図１、３、５、及び７に図示されるように、ヒトガレクチン−３は、次のドメイン、特徴的配列、又は他の構造特徴を含む（ＰＳとＰＦの接頭語の識別番号に関する一般的な情報については、ＳｏｎｎｈａｍｍｅｒらのＰｒｏｔｅｉｎ  ２８：４０５，  １９９７を参照）：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸残基１乃至１４の周囲に位置するＮ−末端ドメイン；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸残基１５乃至１１６の周囲に位置するプロリン、グリシン、及びチロシンが豊富なドメイン；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸残基１１７乃至２４７の周囲に位置するガラクトシド結合ドメイン；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸１８１乃至２００の周囲に位置するガラプチン特徴的配列：（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００３０９）；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸４乃至７の周囲に位置する１つの潜在的なＮ−糖鎖付加部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００１）；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸１３７乃至１３９、及び１９４乃至１９６の周囲に位置する２つの潜在的なタンパク質キナーゼＣリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００５）；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸６乃至９、及び１７５乃至１７８の周囲に位置する２つの潜在的なカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００６）；及び、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸２４乃至２９、２７乃至３２、３４乃至３９、４３乃至４８、５２乃至５７、６１乃至６６、６５乃至７０、及び６８乃至７３の周囲に位置する８つの潜在的なミリストイル化部位：（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００８）。
【０２３６】
本明細書に定義されるように、「ガレクチン−３タンパク質」は、ガレクチン−３「Ｎ−末端ドメイン」、ガレクチン−３「プロリン、グリシン、及びチロシンが豊富なドメイン」、及び／又はガレクチン−３「ガラクトシド−結合ドメイン」を含むこれらドメインは更に以下のように定められる。
【０２３７】
本明細書で使用されるように、ガレクチン−３「Ｎ−末端ドメイン」は、約１０乃至２０のアミノ酸のアミノ酸配列、好ましくは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸１乃至１４と少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、約１４のアミノ酸を含む。Ｎ−末端ドメインは、Ｎ−糖鎖付加部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００１）及び／又はカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００６）を含み得る。ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎ−糖鎖付加部位は、共通配列：Ｎ−｛Ｐ｝−［ＳＴ］−｛Ｐ｝を持ち、ＰＲＯＳＩＴＥ  カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位は、共通配列：［Ｓｔ］−Ｘ（２）−［ＤＥ］を持つ。上記の共通配列、及び、本明細書に記載の他のモチーフ又は特徴的配列において、アミノ酸のための標準ＩＵＰＡＣの１文字のコードが使用される。パターン形成における各要素は、ダッシュ（−）によって分離され；角括弧（［］）は、その位置で受けられる特定の残基を示し；Ｘは、任意の残基がその位置で受けられることを示し；及び、丸括弧（（））の中の数字は、残基の数が付随のアミノ酸によって表わされることを示す。特定の実施形態において、Ｎ−末端ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸Ｌ７とＬ１１を含む。図３に示されるように、これらアミノ酸は、ガレクチン−３の様々な哺乳動物種にわたって保存されるため、触媒及び／又は構造的な役割を果たし得る。
【０２３８】
本明細書で使用されるように、ガレクチン−３「プロリン、グリシン、及びチロシンが豊富なドメイン」は、約６０乃至約１４０のアミノ酸のアミノ酸配列、より好ましくは約８０乃至１２０のアミノ酸、又は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸１５乃至１１６と少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、約９０乃至１１０のアミノ酸を含む。プロリン、グリシン、及びチロシンが豊富なドメインはまた、共通配列：Ｇ−｛ＥＤＲＫＨＰＦＹＷ｝−Ｘ（２）−［ＳＴＡＧＣＮ］−｛Ｐ｝を持つ、１、２、３、４、５、６、７、又は８のＮ−ミリストイル化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００８）を含み得る。特定の実施形態において、プロリン、グリシン、及びチロシンが豊富なドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の以下のアミノ酸と領域を含む：Ｇ２１、Ｐ２３、Ｇ２７、Ｎ２８、Ｐ３０、Ｇ３２、Ｇ３４、Ｐ３７、Ｙ４１−Ｐ４６、Ｇ５３、Ｙ５５−Ｇ５７、Ｐ６１、Ｇ６２、Ｇ６６、Ｐ７２、Ｇ７３、Ｇ７７、Ｙ７９−Ｇ８１、Ｐ８３、Ｇ８７、Ｙ８９、Ｐ９０、Ｇ９９、Ｙ１０１、Ｐ１０２、Ｐ１０６、Ｙ１０７、Ａ１０９、Ｌ１１４、及びＶ１１６。これらのアミノ酸と領域は、様々な哺乳動物種のガレクチン−３にわたって保存され、触媒及び／又は構造的な役割を果たし得る（図３において「＊」で示されるアミノ酸を参照）。
【０２３９】
本明細書で使用されるように、ガレクチン−３「ガラクトシド−結合ドメイン」は、少なくとも１５０のＰＦＡＭ（ＩＤ  ＮＯ：３）からの共通配列ＰＦ００３３７に対する配列のアラインメントに関する少量のスコア（ｂｉｔ  ｓｃｏｒｅ）を有する、約８０乃至約１８０のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。好ましくは、ガレクチン−３ガラクトシド−結合ドメインは、少なくとも約１００乃至１６０のアミノ酸、より好ましくは約１１０乃至１５０のアミノ酸、又は約１２０乃至約１４０のアミノ酸を含み、且つ、少なくとも１５０、少なくとも１７５、又は２００以上のＰＦＡＭ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）からの共通配列ＰＦ００３３７に対する配列のアラインメントに関する少量のスコアを有する。
【０２４０】
ＰＦＡＭからの共通配列ＰＦ００３３７に対する特定の配列のアラインメントに関する少量のスコアを計算するために、ｗｗｗ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／Ｓｏｆｔｗａｒｅ／Ｐｆａｍにて利用可能なデフォルトパラメーターを使用して、対象の配列を、ＨＭＭのＰＦＡＭデータベース（例えば、ＰＦＡＭデータベース、リリース２．１）に照らして検索することができる。ＰＦＡＭデータベースの記載は、上述のＳｏｎｎｈａｍｍｅｒらの文献において見出され得、ＨＭＭの詳細な記載は、例えばＧｒｉｂｓｋｏｖらのＭｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：１４６，  １９９０及びＳｔｕｌｔｚらのＰｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．  ２：３０５，  １９９３において見出され得る。
【０２４１】
ガレクチン−３ガラクトシド−結合ドメインは更に、プロテインキナーゼＣリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００５）；カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位；（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００６）；及び／又は、ガラプチン特徴的配列（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００３０９）の１つ、好ましくは２つを含む。プロテインキナーゼＣリン酸化部位は、共通配列：［Ｓｔ］Ｘ−［ＲＫ］を持つ。ガラプチン特徴的配列は、共通配列：Ｗ−［ＧＥＫ］−Ｘ−［ＥＱ］−Ｘ−［ＫＲＥ］−Ｘ（３，６）−［ＰＣＴＦ］−［ＬＩＶＭＦ］−［ＮＱＥＧＳＫＶ］−Ｘ−［ＧＨ］−Ｘ（３）−［ＤＥＮＫＨＳ］−［ＬＩＶＭＦＣ］を持つ。特定の実施形態において、ガレクチン−３ガラクトシド結合ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の次のアミノ酸と領域を含む：Ｐ１１７、Ｙ１１８、Ｌ１２０−Ｌ１２２、Ｇ１２５、Ｐ１２８、Ｒ１２９、Ｌ１３１−Ｉ１３４、Ｇ１３６−Ｖ１３８、Ｎ１４１、Ｎ１４３、Ｒ１４４、Ｌ１４７、Ｆ１４９、Ｒ１５１、Ｇ１５２、Ｄ１５４、Ａ１５６−Ｆ１６３、Ｅ１６５、Ｒ１６９−Ｎ１７４、Ｎ１７９−Ｇ１８２、Ｅ１８４−Ｒ１８６、Ｆ１９０−Ｅ１９３、Ｇ１９５、Ｐ１９７−Ｋ１９９、Ｑ２０１−Ｌ２０３、Ｅ２０５、Ｄ２０７−Ｑ２２０、Ｎ２２２、Ｒ２２４、Ｌ２２８、Ｉ２３１、Ｉ２３６、Ｇ２３８−Ｉ２４０、及びＬ２４２−Ｓ２４４。これらのアミノ酸と領域は、様々な哺乳動物種のガレクチン−３にわたって保存され、触媒及び／又は構造的な役割を果たし得る（図３において「＊」で示されるアミノ酸を参照）。
【０２４２】
特定のガレクチン−３タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１によって表わされるようなヒトガレクチン−３のアミノ酸配列を含む。他のガレクチン−３タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含む。用語「実質的に同一の」は、本明細書において、第１のアミノ酸を指すように使用される。第１のアミノ酸は、第２のアミノ酸配列中のアラインしたアミノ酸残基と同一である十分な数の、又は少数のアミノ酸残基を含み、それにより、第１のアミノ酸と第２のアミノ酸の配列は、共通の構造ドメイン及び／又は共通の機能活性を持ち得る。例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対する少なくとも約６０％又は６５％の同一性、好ましくは少なくとも７５％の同一性、より好ましくは少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を持つ共通の構造ドメインを含む、アミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸配列と実質的に同一であると称される。特に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の特定のアミノ酸残基の欠失、追加、置換、又は修飾などの、偶然又は故意に誘発された変化を含むタンパク質は、本明細書に提供されるガレクチン−３の定義に該当し得る。本明細書で定義されるように、ガレクチン−３タンパク質は、ウシ、イヌ、ネコ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ネズミ、及びウマの種を含むがこれらに限定されない他の哺乳動物種から得たガレクチン−３のアミノ酸配列によって表わされる領域を含み得ることが、理解される。
【０２４３】
配列間の配列同一性の計算は以下のように行われる。２つのアミノ酸配列の百分率同一性を決定するために、配列は、最適な比較目的のためにアラインされる（例えば、最適なアラインメントのために、第１及び第２のアミノ酸配列の１つ又は両方に隙間を導入することができる）。その後、対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置にあるアミノ酸残基が比較される。第１の配列における位置が、第２の配列における対応する位置として同じアミノ酸残基又はヌクレオチドに占有されると、その後、タンパク質はその位置にて同一である。２つの配列間の百分率同一性は、配列により共有される同一の位置の数の関数であり、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要のある隙間の数、そして各隙間の長さを説明する。
【０２４４】
配列の比較と、２つの配列間の百分率同一性の決定は、数学アルゴリズムを使用して達成することができる。好ましい実施形態において、２つのアミノ酸配列間の百分率同一性は、デフォルトパラメーターを使用するアラインメントソフトウェアプログラムを使用して決定される。適切なプログラムは、例えば、ＴｈｏｍｐｓｏｎらによるＣＬＵＳＴＡＬ  Ｗ（Ｎｕｃ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２２：４６７３，  １９９４  （ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｃｌｕｓｔａｌｗ））、ＴａｔｕｓｏｖａとＭａｄｄｅｎによるＢＬ２ＳＥＱ（ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  Ｌｅｔｔ．  １７４：２４７，  １９９９  （ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｌａｓｔ／ｂｌ２ｓｅｑ／ｂｌ２．ｈｔｍｌ））、ＮｏｔｒｅｄａｍｅとＨｉｇｇｉｎｓによるＳＡＧＡ（Ｎｕｃ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２４：１５１５，  １９９６  （ｉｇｓ−ｓｅｒｖｅｒ．ｃｎｒｓ−ｍｒｓ．ｆｒ／〜ｃｎｏｔｒｅｄ））、及びＭｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎらによるＤＩＡＬＩＧＮ（Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １４：２９０，  １９９８  （ｂｉｂｉｓｅｒｖ．ｔｅｃｈｆａｋ．ｕｎｉ−ｂｉｅｌｅｆｅｌｄ．ｄｅ／ｄｉａｌｉｇｎ））を含む。
【０２４５】
＜ガレクチン−７＞
タンパク質のガレクチン−７ファミリーのメンバーは典型的に、約１３０乃至１４０のアミノ酸を含み且つ約１５乃至約１６ｋＤａの分子量を持つモノマーとして存在する（例えば、ＭａｇｎａｌｄｏらによるＤｅｖｅｌｏｐ．  Ｂｉｏｌ．  １６８：２５９，  １９９５及びＭａｄｓｅｎらによるＪ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：５８２３，  １９９５を参照）。ガレクチン−７の発現は、上皮の層化の発症に関係していた（ＴｉｍｍｏｎｓらによるＩｎｔ．  Ｊ．  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．  ４３：２２９，  １９９９）。ガレクチン−７は、細胞−基質及び細胞間の相互作用における役割を果たすと考えられる。ガレクチン−７は、（例えば、ヒト上皮の上部層における）細胞間の接触の領域において見出される。その発現は、足場非依存性の角化細胞において急激にダウンレギュレートされるものであり、悪性角化細胞の細胞株には存在しない。ガレクチン−７は、正常な角化細胞の維持に必要とされ得る（上述のＭａｄｓｅｎらによる文献を参照）。
【０２４６】
ヒトガレクチン−７は、１３６のアミノ酸を含み、１５．１ｋＤａのおよその分子量を持つ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、図２）。図２、４、６、及び８に示されるように、ヒトガレクチン−７は、以下のドメイン、特徴的配列、又は他の構造特徴を含む：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸残基５乃至１３５の周囲に位置するガラクトシド結合ドメイン；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸７０乃至８９の周囲に位置するガラプチン特徴的配列：（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００３０９）；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸２９乃至３２の周囲に位置する１つのＮ−糖鎖付加部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００１）；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸位置１３２乃至１３４の周囲に位置する１つのタンパク質キナーゼＣリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００５）；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸９乃至１２の周囲に位置する１つのカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００６）；及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸１３乃至１８、及び４４乃至４９の周囲に位置する２つのミリストイル化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００８）。
【０２４７】
本明細書に定義されるように、「ガレクチン−７タンパク質」は、ガレクチン−７「ガラクトシド−結合ドメイン」を含む。このドメインは更に以下のように定められる。
【０２４８】
本明細書で使用されるように、ガレクチン−７「ガラクトシド−結合ドメイン」は、少なくとも８０のＰＦＡＭ（ＩＤ  ＮＯ：３）からの共通配列ＰＦ００３３７に対する配列のアラインメントに関する少量のスコアを有する、約８０乃至約１８０のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。好ましくは、ガレクチン−７ガラクトシド−結合ドメインは、少なくとも約１００乃至１６０のアミノ酸、又は約１１０乃至１５０のアミノ酸、又は約１２０乃至１４０のアミノ酸を含み、且つ、少なくとも８０、より好ましくは少なくとも１００、最も好ましくは１２０以上のＰＦＡＭ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）からの共通配列ＰＦ００３３７に対する配列のアラインメントに関する少量のスコアを有する。ガレクチン−７ガラクトシド−結合ドメインは、１つのＮ−グリコシル化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００１）；１つのプロテインキナーゼＣリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００５）；１つのカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位；（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００６）；１又は２つのミリストイル化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００８）；及び／又は、ガラプチン特徴的配列（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００３０９）を含み得る。特定の実施形態において、ガレクチン−７ガラクトシド結合ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の以下のアミノ酸と領域を含む：Ｍ１、Ｓ２、Ｈ６、Ｋ７、Ｌ１０、Ｐ１１、Ｇ１３、Ｒ１５、Ｇ１７−Ｖ１９、Ｒ２１−Ｇ２４、Ｖ２６、Ｐ２７、Ａ３０、Ｒ３２−Ｑ４３、Ｄ４６−Ｎ６３、Ｋ６５、Ｑ６７、Ｇ６８、Ｗ７０−Ｇ７６、Ｇ７８、Ｐ８０−Ｌ９０、Ｉ９２、Ｇ９７−Ｋ９９、Ｖ１０１、Ｇ１０３、Ｄ１０４、Ｙ１０７、Ｈ１０９、Ｆ１１０、Ｈ１１２、Ｒ１１３、Ｐ１１５、Ｖ１１９、Ｒ１２０、Ｖ１２２−Ｌ１３０、Ｓ１３２、Ｉ１３５、及びＦ１３６。これらのアミノ酸と領域は、様々な哺乳動物種のガレクチン−７にわたって保存され、触媒及び／又は構造的な役割を果たし得る（図４において「＊」で示されるアミノ酸を参照）。
【０２４９】
特定のガレクチン−７タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２によって表わされるようなヒトガレクチン−７のアミノ酸配列を含む。他のガレクチン−７タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含む。特に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の特定のアミノ酸残基の欠失、追加、置換、又は修飾などの、偶然又は故意に誘発された変化を含むタンパク質は、本明細書におけるガレクチン−７の定義に該当し得る。本明細書で定義されるように、ガレクチン−７タンパク質は、ウシ、イヌ、ネコ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ネズミ、及びウマの種を含むがこれらに限定されない他の哺乳動物種から得たガレクチン−７のアミノ酸配列によって表わされる領域を含み得ることが、理解される。
【０２５０】
＜ガレクチン−８＞
ガレクチン−８は、例えば、肝臓、心臓、筋肉、腎臓、脾臓、後肢、及び脳に存在する、広く発現したタンパク質であり、ヒト及びラットのガレクチン−８遺伝子とタンパク質の配列が利用可能である（例えばＨａｄａｒｉらによるＴｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｌｙｃｏｓｃｉ  ａｎｄ  Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ９：  １０３−１１２，  １９９７を参照）。ムチンのＯ結合オリゴ糖に見出されるＧａｌβ１−４ＧｌｃＮＡＣ二糖類への結合のための、非常に親水性の特徴及び機能は、このタンパク質を、眼乾燥症候群を処置するための理想的な薬剤にする。
【０２５１】
ヒトガレクチン−８のためのアミノ酸配列の代替的な形態は、例えば、３１６のアミノ酸形態（受入番号Ｏ００２１４、１９９７年１１月１日に作成）及び３５９のアミノ酸形態（受入番号Ｑ８ＴＥＶ１、２００２年６月１日に作成）と知られている。これらの配列は、かなりの長さに関して同様又は同一である一方で、全体的な単なる長さの変異体ではなく、異なる部分がある。１文字のアミノ酸コードを使用する３１６の形態のアミノ酸配列は、以下のように示される（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）：
【０２５２】
【化２１】
0006366598.tif 000022
【０２５３】
より長い形態のアミノ酸配列は、以下のように示される（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）：
【０２５４】
【化２２】
0006366598.tif 000023
【０２５５】
本明細書に定義されるように、「ガレクチン−８タンパク質」は、ガレクチン−８「Ｎ−末端ドメイン」、ガレクチン−８「プロリン、グリシン、及びチロシンが豊富なドメイン」、及び／又はガレクチン−８「ガラクトシド−結合ドメイン」を含み得るこれらドメインは更に以下のように定められる。
【０２５６】
本明細書で使用されるように、ガレクチン−８「Ｎ−末端ドメイン」は、約１０乃至２０のアミノ酸のアミノ酸配列、好ましくは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４又は５のアミノ酸１乃至１４と少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、約１４のアミノ酸を含む。Ｎ−末端ドメインは、Ｎ−糖鎖付加部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００１）及び／又はカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００６）を含み得る。ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎ−糖鎖付加部位は、共通配列：Ｎ−｛Ｐ｝ｐ｝−［ＳＴ］−｛Ｐ｝を持ち、ＰＲＯＳＩＴＥ  カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位は、共通配列：［Ｓｔ］−Ｘ（２）−［ＤＥ］を持つ。上記の共通配列、他のモチーフ、又は特徴的配列における。
【０２５７】
本明細書で使用されるように、ガレクチン−８「プロリン、グリシン、及びチロシンが豊富なドメイン」は、約６０乃至１４０のアミノ酸のアミノ酸配列、より好ましくは約８０乃至１２０のアミノ酸、又は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４及び５の各々のアミノ酸１５乃至１１６と少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、約９０乃至１１０のアミノ酸を含む。プロリン、グリシン、及びチロシンが豊富なドメインはまた、共通配列：Ｇ−｛ＥＤＲＫＨＰＦＹＷ｝−Ｘ（２）−［ＳＴＡＧＣＮ］−｛Ｐ｝を持つ、１、２、３、４、５、６、７、又は８のＮ−ミリストイル化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００８）を含み得る。特定の実施形態において、プロリン、グリシン、及びチロシンが豊富なドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４の以下のアミノ酸と領域：Ｇ２０、Ｐ２３、Ｐ２８、Ｇ２９、Ｇ３６、Ｐ３９、及び、当業者に明白な他の残基などを含む。これらのアミノ酸及び領域は、ガレクチン−８の様々な哺乳動物種にわたって保存され、そして触媒及び／又は構造的な役割を果たし得る。特定の実施形態において、プロリン、グリシン、及びチロシンが豊富なドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５の以下のアミノ酸と領域：Ｇ２１、Ｐ２４、Ｐ２９、Ｇ３０、Ｇ３７、Ｐ４０、及び、当業者に明白な他の残基などを含む。
【０２５８】
本明細書で使用されるように、ガレクチン−４「ガラクトシド−結合ドメイン」は、少なくとも１５０のＰＦＡＭ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）からの共通配列ＰＦ００３３７に対する配列のアラインメントに関する少量のスコアを持つ、約８０乃至１８０のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。好ましくは、ガレクチン−３ガラクトシド−結合ドメインは、少なくとも約１００乃至１６０のアミノ酸、より好ましくは約１１０乃至１５０のアミノ酸、又は約１２０乃至１４０のアミノ酸を含み、且つ、少なくとも１５０、より好ましくは少なくとも１７５、最も好ましくは２００以上のＰＦＡＭ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３）からの共通配列ＰＦ００３３７に対する配列のアラインメントに関する少量のスコアを有する。
【０２５９】
ＰＦＡＭからの共通配列ＰＦ００３３７に対する特定の配列のアラインメントに関する少量のスコアを計算するために、ｗｗｗ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／Ｓｏｆｔｗａｒｅ／Ｐｆａｍにて利用可能なデフォルトパラメーターを使用して、対象の配列を、ＨＭＭのＰＦＡＭデータベース（例えば、ＰＦＡＭデータベース、リリース２．１）に照らして検索することができる。ＰＦＡＭデータベースの記載は、上述のＳｏｎｎｈａｍｍｅｒらの文献において見出され得、ＨＭＭの詳細な記載は、例えばＧｒｉｂｓｋｏｖらのＭｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：１４６，  １９９０及びＳｔｕｌｔｚらのＰｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．  ２：３０５，  １９９３において見出され得る。
【０２６０】
ガレクチン−８ガラクトシド−結合ドメインは更に、プロテインキナーゼＣリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００５）；カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位；（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００６）；及び／又は、ガラプチン特徴的配列（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００３０９）の１つ又は２つを含み得る。プロテインキナーゼＣリン酸化部位は、共通配列：［Ｓｔ］Ｘ−［ＲＫ］を持つ。ガラプチン特徴的配列は、共通配列：Ｗ−［ＧＥＫ］−Ｘ−［ＥＱ］−Ｘ−［ＫＲＥ］−Ｘ（３，６）−［ＰＣＴＦ］−［ＬＩＶＭＦ］−［ＮＱＥＧＳＫＶ］−Ｘ−［ＧＨ］−Ｘ（３）−［ＤＥＮＫＨＳ］−［ＬＩＶＭＦＣ］を持つ。特定の実施形態において、ガレクチン−８ガラクトシド−結合ドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４の以下のアミノ酸と領域：Ｌ１２３−Ｌ１２４、Ｇ１２６、Ｐ１３１、Ｒ１２８、Ｌ１４０−Ｉ１４６、及び上述のものと同様の他の部位を含む。これらのアミノ酸と領域は、様々な哺乳動物種のガレクチン−８にわたって保存され、触媒及び／又は構造的な役割を果たし得る（図３において「＊」で示されるアミノ酸を参照）。
【０２６１】
特定のガレクチン−８タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４及び５によって表わされるようなヒトガレクチン−８のアミノ酸配列を含む。他のガレクチン−８タンパク質は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４又は５のアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含む。用語「実質的に同一の」は、本明細書において、第１のアミノ酸を指すように使用される。第１のアミノ酸は、第２のアミノ酸配列中のアラインメントしたアミノ酸残基と同一である十分な数の、又は少数のアミノ酸残基を含み、それにより、第１のアミノ酸と第２のアミノ酸の配列は、共通の構造ドメイン及び／又は共通の機能活性を持ち得る。例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４又は５に対する少なくとも約６０％又は６５％の同一性、好ましくは少なくとも７５％の同一性、より好ましくは少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を持つ共通の構造ドメインを含む、アミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４又は５のアミノ酸配列と実質的に同一であると称される。特に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４又は５の特定のアミノ酸残基の欠失、追加、置換、又は修飾などの、偶然又は故意に誘発された変化を含むタンパク質は、本明細書におけるガレクチン−８の定義に該当し得る。本明細書で定義されるように、ガレクチン−８タンパク質は、ウシ、イヌ、ネコ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ネズミ、及びウマの種を含むがこれらに限定されない他の哺乳動物種から得たガレクチン−８のアミノ酸配列によって表わされる領域を含み得ることが、理解される。
【０２６２】
＜ガレクチンタンパク質の調製＞
本発明のガレクチンは、任意の利用可能なソースから得ることができることを、当業者は理解するであろう。これらは、自然源から分離され、例えば固相手順により組み換え型に又は合成的に製造されるタンパク質であるが、これに限定されない。本発明に従い、ガレクチン−３、ガレクチン−７、又はガレクチン−８をコードするポリヌクレオチド配列は、適切な宿主細胞において本発明のガレクチンの発現を誘導する、組換え型ＤＮＡ分子において使用されてもよい。上述のＣｈｅｒａｙｉｌらの文献、上述のＭａｄｓｅｎらの文献、及びＨａｄｒｉらの文献には、ヒトガレクチン−１、ヒトガレクチン−３、ヒトガレクチン−７、及びヒトガレクチン−８それぞれのクローン作成が詳しく記載される。生物学的に活性なガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７、又はガレクチン−８を発現するために、ガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７、ガレクチン−８、又はそれらの機能的な同等物をコードするヌクレオチド配列は、適切な発現ベクター、即ち、挿入されたコード配列の転写と翻訳に必要な要素を含むベクターに挿入される。当業者に周知の方法は、ガレクチン−１−コード化配列、ガレクチン−３−コード化配列、ガレクチン−７−コード化配列、又はガレクチン−８−コード化配列、及び、適切な転写又は翻訳の対照を含む発現ベクターを構築するために使用され得る。これらの方法は、インビトロの組換ＤＮＡ技術、合成技術、及びインビボの組換え又は遺伝子組換えを含む。欠失、追加、又は置換の導入は、例えばＰＣＲベースの突然変異生成を使用する、当業者に既知の任意の技術を用いて達成される。そのような技術は、ＳａｍｂｒｏｏｋらのＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，  ＮＹ，  １９８９、及びＡｕｓｕｂｅｌらのＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ＮＹ，  １９８９に記載されている。様々な発現ベクター／ホストシステムは、ガレクチン−１−コード化配列、ガレクチン−３−コード化配列、ガレクチン−７−コード化配列、又はガレクチン−８−コード化配列を含み、且つこれらを示すために利用されてもよい。これらは、限定されないが、組み換え型バクテリオファージ、プラスミド、又はコスミドＤＮＡ発現ベクターにより変形される細菌などの微生物；酵母菌発現ベクターにより変形される酵母菌；ウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウィルス）に感染した昆虫細胞系；ウイルス発現ベクターにより変形される植物細胞系（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）、又は細菌発現ベクターにより変形される植物細胞系（例えば、Ｔｉ、ｐＢＲ３２２、又はｐＥＴ２５ｂのプラスミド）；又は、動物細胞系を含む。代替的に、ガレクチンは、ガレクチン−１アミノ酸配列、ガレクチン−３アミノ酸配列、ガレクチン−７アミノ酸配列、又はガレクチン−８アミノ酸配列を、全体的又は部分的に合成する化学方法を使用して製造される。例えば、ペプチド合成は、様々な固��法（ＲｏｂｅｒｇｅらのＳｃｉｅｎｃｅ  ２６９：２０２，  １９９５）を使用して行われ、自動合成は、例えば、メーカーによって提供される説明書に従い、４３１Ａペプチド合成機（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ｏｆ  Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，  ＣＡから入手可能）を使用して達成され得る。
【０２６３】
＜医薬組成物＞
本発明の１つの態様において、ガレクチンタンパク質（例えば、ガレクチン−１タンパク質、ガレクチン−３タンパク質、ガレクチン−７タンパク質、及びガレクチン−８タンパク質）の活性の少なくとも１つの阻害剤、及び随意に薬学的に許容可能な担体を含むように、医薬組成物が提供される。特定の実施形態において、これらの組成物は、随意に、１以上の追加の治療剤を更に含む。特定の実施形態において、追加の治療剤又は薬剤は、増殖因子、抗炎症剤、昇圧薬、コラゲナーゼ阻害剤、局所用ステロイド、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、アスコルビン酸塩、アンジオテンシンＩＩ、アンジオテンシンＩＩＩ、カルレティキュリン、テトラサイクリン、フィブロネクチン、コラーゲン、トロンボスポンジン、形質転換増殖因子（ＴＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、表皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、ｎｅｕ分化因子（ｎｅｕ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）（ＮＤＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、ビオチンなどのビタミンＢ，及びヒアルロン酸から成る群から選択される。
【０２６４】
「薬学的に許容可能な担体」及び「薬学的に適切な担体」との句は、本明細書で互換的に使用され、且つ、所望の特定の剤形に適するように、溶媒、希釈剤、又は他の液状ビヒクル、分散剤又は懸濁補助剤（ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ  ａｉｄｓ）、表面活性剤、等張剤、増粘剤又は乳化剤、防腐剤、固体の結合剤、潤滑剤の何れか及び全てを含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｅｄ．  ｂｙ  Ｇｅｎｎａｒｏ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ，  １９９５には、医薬組成物を処方する際に用いられる様々な担体、及びその調製のための既知の技術が開示される。薬学的に許容可能な担体として役立つことができる材料の幾つかの例は、限定されないが、グルコース及びスクロースなどの糖；トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプンなどのデンプン；カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロースなどのセルロース、及びその誘導体；トラガント粉末；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバター及び坐薬のワックスなどの賦形剤；落花生油、綿実油、サフラワー油、胡麻油、オリーブオイル、トウモロコシ油および大豆油などの油；プロピレングリコールなどのグリコール；オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなどのエステル；寒天；水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張の食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール、及びリン酸緩衝液、同様に、ラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウムなどの他の無毒な適合性の潤滑剤、着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味料、香味剤及び芳香剤、防腐剤及び抗酸化剤を含み、これらはまた、処方する人の判断によって組成物中に存在し得る。
【０２６５】
＜治療上有効な投与量＞
また別の態様において、本発明の処置方法に従い、眼の血管新生（例えば、血管新生関連性の障害又は疾病）又は眼の繊維症（例えば、繊維症関連性の疾患又は疾病）の処置は、本明細書に記載されるように、目を医薬組成物と接触させることにより行われる。故に、本発明は、眼の血管新生関連性の障害又は繊維症関連性の障害の処置方法を提供し、該方法は、所望の結果を達成するのに必要な量及び時間で、必要とする被験体に、ガレクチン−３、ガレクチン−７、及び／又はガレクチン−８を素材する活性薬剤を含む医薬組成物の治療上効果的な量を投与する工程を含む。前記方法は、眼の血管新生又は眼の繊維症を阻害するための治療手段として、又は、加齢黄斑変性、眼のヒストプラズマ症候群、血管新生緑内障、後水晶体線維形成症、病的近視、網膜色素線条症、特発性疾患、脈絡膜炎、脈絡膜破裂、被覆する脈絡膜の母斑、移植片拒絶反応、単純ヘルペス角膜炎、リーシュマニア症、オンコセルカ症、及び特定の炎症性疾患などの、眼の血管新生関連性の障害又は眼の繊維症関連性の障害に関連する合併症を最小化するための治療手段として、本発明の医薬品を投与する工程を含むことが、理解される。特定の実施形態において、医薬組成物の「治療上効果的な量」は、血管新生関連性の障害又は繊維症関連性の障害を調節する、具体的には眼の血管新生又は眼の繊維症を下方調節するのに効果的な量である。本発明の方法に従って、組成物は、眼又は他の組織を処置するのに効果的な任意の投与量及び任意の投与経路を使用して投与されてもよい。正確な投薬は、処置される患者を考慮して個々の医師によって選択される。投与量と投与は、十分なレベルの活性薬剤を提供し、又は所望の効果を維持するように調節される。考慮され得る追加の要因は、疾患状態の重症度（例えば、血管新生の範囲、又は繊維症の範囲）、疾病の履歴；患者の年齢、体重及び性別；食事、投与の時間及び頻度；複合薬；反応感受性；及び治療に対する耐性／反応を含む。長時間作用型の医薬組成物は、特定の組成物の半減期及びクリアランス率に依存して、１日数回、毎日、３〜４日ごと、毎週、又は２週間に１回、投与され得る。
【０２６６】
本発明の活性薬剤は、好ましくは、投与のし易さ及び投薬の均一性のために投薬ユニット形態で処方される。本明細書に使用される表現「投薬ユニット形態」は、処置される患者に適切な活性薬剤の、物理的に別個のユニットを指す。しかし、組成物の合計の毎日の使用量は、正当な医学上の判断の範囲内で、主治医によって決定されることが理解される。任意の活性薬剤に関して、治療上有効な投与量は、細胞培養アッセイにおいて、又は、動物モデル（通常、マウス、ウサギ、イヌ、又はブタ）において、最初に推定され得る。動物モデルはまた、望ましい濃度範囲と投与経路を達成するために使用される。眼への直接の適用は、投与経路として想定される一方で、そのような情報は、その後、ヒトにおける投与に関する有用な用量と追加の経路を決定するために使用され得る。治療上有効な用量は、症状又は疾病を改善する活性薬剤の量を指す。活性薬剤の治療上の有効性及び毒性、例えば、ＥＤ５０（その用量は個体群の５０％に治療上有効である）、及びＬＤ５０（その用量は個体群の５０％に致死性である）は、細胞培養又は実験動物における標準の製薬の手順によって決定され得る。毒性の治療効果に対する用量比は、治療指数であり、比率ＬＤ５０／ＥＤ５０として表され得る。大規模な治療指数を示す医薬組成物が好ましい。細胞培養アッセイと動物研究から得たデータは、ヒトへの使用のための投与量の範囲を調製するために使用され得る。
【０２６７】
＜医薬組成物の投与＞
所望の投与量における適切な薬学的に許容可能な担体による処方の後、本発明の医薬組成物は、（ゲル、軟膏、又はドロップにより）ヒト人又は他の動物の眼に直接、即ち、眼の外部組織に直接適用するように、投与され得る。処置される疾病の重症度に依存して、硝子体内（ｉｎｖｉｔｒｅａｌｌｙ）、テノン嚢（ｓｕｂｔｅｎｏｎａｌｌｙ）、及び網膜化、又は経口、直腸、非経口、大槽内、膣内、腹腔内、頬側、又は経鼻の投与を含む眼への注射などの、代替的及び付加的な経路が想定される。眼への注射は、水様液又は硝子体液への眼内注射、又は結膜下注射或いはテノン嚢下注射などの眼の外層への注射を含む。経口投与が、合成小分子阻害剤に有効なものとして想定される。
【０２６８】
眼への投与のための液体剤形は、バッファーと可溶化剤を含み、好ましくは、水などの希釈剤、チモソール（ｔｈｙｍｏｓｏｌ）などの防腐剤、及び、ポリエチレングリコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒアルロン酸ナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、又はタマリンドガムなどの、溶液を含有するための１以上のバイオポリマー又ポリマーを含む。
【０２６９】
経口投与のための液体の剤形は、限定されないが、薬学的に許容可能なエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ剤、及びエリキシル剤を含む。活性薬剤に加えて、液体の剤形は、例えば水又は他の溶媒などの当該技術分野で一般的に使用される不活性な希釈剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実、落花生類、トウモロコシ、胚、オリーブ、カスター、及び胡麻の油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、及びソルビタンの脂肪酸エステル、及びそれらの組み合わせなどの可溶化剤及び乳化剤を含み得る。不活性の希釈剤に加えて、経口組成物はまた、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味料、香味料、及び芳香剤などのアジュバントを含み得る。
【０２７０】
本発明の医薬組成物の局所投与又は経皮投与のための投薬形態は、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、噴霧、吸入、又はパッチを含む。活性薬剤は、無菌条件下で、薬学的に許容可能な担体と、所望され得る任意の必要な防腐剤又は緩衝剤と、混合される。例えば、眼又は皮膚の感染は、水滴、霧、エマルジョン、又は、クリームによって処置され得る。投与は、治療又は予防のためのものでも良い。予防的な製剤が、潜在的な創傷の部位又は創傷の原因に存在するか、又はそれらに適用され、コンタクトレンズ、コンタクトレンズの洗浄溶液及びすすぎ溶液、コンタクトレンズの保管又は持ち運び用の容器、コンタクトレンズを取り扱うためのデバイス、目薬、外科用洗浄液、点耳液、アイパッチ、及び、クリーム、ローション、マスカラ、アイライナー、及びアイシャドウを含む眼の周り用の化粧品などである。本発明は、眼科用デバイス、外科用デバイス、聴覚科学デバイス、又は、開示された組成物を含む製品（例えば、ガーゼ包帯又はガーゼ片）、並びに、そのようなデバイス又は製品の製造又は使用の方法を含む。これらデバイスは、開示された組成物によりコーティングされ、含浸され、結合され、又は他に処理されてもよい。
【０２７１】
軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、及びゲル剤は、本発明の活性薬剤に加えて、動物及び植物の脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、酸化亜鉛、又はそれらの混合物などの賦形剤を含み得る。
【０２７２】
粉末剤及び噴霧剤は、本発明の薬剤に加えて、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、ポリアミド粉末、又はこれら物質の混合物などの賦形剤を含み得る。噴霧剤は付加的に、クロロフルオロヒドロカーボンなどの通常の噴射剤を含む。
【０２７３】
経皮パッチは、身体への活性成分の制御送達を提供するという追加の利点を持つ。そのような剤形は、適切な培地において化合物を溶かす又は分配することにより作られ得る。吸収促進剤も、皮膚にわたる化合物の流出を増加させるために使用され得る。速度は、細胞膜を制御する速度の提供により、又は、ポリマーマトリクス又はゲルにおいて化合物を分散させることにより、制御され得る。
【０２７４】
注射可能な製剤、例えば、無菌の注射可能な水溶性又は油性の懸濁液が、適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を使用する、既知の技術に従って処方されてもよい。無菌の注射可能な製剤はまた、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として、無毒な非経口的に許容可能な希釈剤又は溶媒における、無菌の注射可能な溶液、懸濁液、又はエマルジョンでもよい。使用してもよい許容可能なビヒクル及び溶媒の中には、水、リンガー溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．及び塩化ナトリウム溶液がある。加えて、無菌の固定油は従来、溶媒又は懸濁培地として使用される。この目的のために、合成のモノグリセリド又はジグリセリドを含む、任意の穏やかな固定油が使用され得る。加えて、オレイン酸などの脂肪酸が、注射剤の調製において使用される。注射可能な製剤は、例えば、細菌保持フィルターによる濾過によって、又は、使用前に滅菌水或いは他の無菌の注射可能な培地に溶解される又は分散され得る、無菌の固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことによって、滅菌され得る。活性薬剤の効果を延長するために、皮下注射又は筋肉注射からの薬剤の吸収を遅くすることが、望ましいことが多い。非経口投与した活性薬剤の遅延された吸収は、油型ビヒクル中に薬剤を溶解する又は懸濁することにより達成され得る。注射可能なデポー剤の形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に薬剤のマイクロカプセルマトリックスを形成することにより作られる。活性薬剤のポリマーに対する比率、及び使用された特定のポリマーの性質に依存して、活性薬剤の放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例は、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）を含む。デポー剤の注射可能な製剤も、体内組織との適合性があるリポソーム又はマイクロエマルジョン中に薬剤を封入することによって、調製される。
【０２７５】
経口投与のための固形剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉末剤、及び果粒剤を含む。そのような固形剤形において、活性薬剤は、クエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウムなどの少なくとも１つの不活性な、薬学的に許容可能な賦形剤又は担体、及び／又は、ａ）デンプン、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸などの充填剤又は増量剤、ｂ）例えばカルボキシメチルセルロース、アルギニン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及びアカシアなどの結合剤、ｃ）グリセロールなどの湿潤剤、ｄ）寒天−観点、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカのデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、ｅ）パラフィンなどの溶液緩和剤、ｆ）四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、ｇ）例えばセチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、ｈ）カオリン及びベントナイト粘土などの吸収剤、及びｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形のポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムなどの潤滑剤、及びそれらの混合物と混合される。
【０２７６】
同様のタイプの固体の組成物も、高分子量ポリエチレングリコールなどと同様に、乳糖などの賦形剤を使用して、軟性及び剛性の充填ゼラチンカプセル中に充填剤として使用してもよい。錠剤、ドラゼー、カプセル剤、丸剤、及び果粒剤の固形剤形は、腸溶コーティング、放出制御コーティング、及び製薬調剤技術の分野で周知の他のコーティングなどの、コーティング及びシェルにより調製され得る。そのような固形剤形において、活性薬剤は、スクロース又はデンプンなどの少なくとも１つの不活性な希釈剤と混合してもよい。通常の慣例であるように、そのような剤形はまた、不活性な希釈剤以外の追加の物質、例えば、タブレット潤滑剤（ｔａｂｌｅｔｉｎｇ  ｌｕｂｒｉｃａｎｔｓ）、及びステアリン酸マグネシウムと微結晶性セルロースなどの他のタブレット補助剤（ｔａｂｌｅｔｉｎｇ  ａｉｄｓ）を含み得る。カプセル剤、錠剤、及び丸剤の場合、剤形はまた、緩衝剤を含んでもよい。それらは、随意に乳白剤を含み、且つ、それらが活性剤のみを、又は優先的に、消化管の特定の部分において、随意に遅延した様式で、放出する組成物であり得る。使用され得る組成物を埋め込む例は、ポリマー物質とワックスを含む。
【０２７７】
＜医薬組成物の使用＞
上述されるように、且つ実施例において更に詳しく記載されるように、ガレクチン−３、ガレクチン−７、及びガレクチン−８の少なくとも１つの阻害剤は、眼のＶＥＧＦ受容体を結合することにより、眼のＴＧＦ−ｓ受容体に結合することにより、他の受容体又は調節タンパク質に結合することにより、又は、任意の特定の理論又は作用機構に制限されることなく膜貫通性ムチン（又は他の糖タンパク質）に分泌するムチンのオリゴ糖鎖に結合することにより、アクチンの血管新生又は繊維症疾病を処置又は調節するのに有用である。一般的に、ガレクチンのこれらの阻害剤は、例えば、過度の新血管新生、血管新生、又は繊維症に関連する疾病を含む、眼の血管由来又は繊維症の障害の進行を抑えるのに、臨床的に有用であると考えられる。
【０２７８】
一般的に、ガレクチンのこれらの阻害剤は、角膜上皮；網膜の上皮、眼の血液の内皮、及びリンパ管を含むがこれらに限定されない、任意の上皮又は内皮の組織に関連する、血管新生又は繊維症を抑えるのに臨床的に有用であることが、本明細書で示される。
【０２７９】
ガレクチン１−１１の何れか（例えば、ガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７、及びガレクチン−８）の少なくとも１つの阻害剤を含む医薬組成物は、例えば、本明細書において、血管新生又は繊維症の標準レベルを促進するのに有用である。
【０２８０】
ガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７、及び／又はガレクチン−８の阻害剤は、様々な病理学的状態によって引き起こされる、眼に対する過剰な血管新生又は繊維症による損傷を減らす又は妨げるために、予防的に投与され得る。例えば、急性又は慢性の肺損傷を予防する、弱める、又は処置するために肺胞及び細気管支の上皮の修復を促進するために使用される、適正量のガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７、及び／又はガレクチン−８が、本明細書における組成物により制御され得る。細気管支の上皮と肺胞の壊死を引き起こす、気腫（肺胞の進行性損失の結果として生じる）、及び、吸入損傷（即ち、煙吸入と熱傷から結果として生じる）は、ガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７、及び／又はガレクチン−８の阻害剤を使用して効果的に処置され得、ガレクチンの処置後、化学療法、放射線治療、肺癌、喘息、黒色肺、及び他の肺が損傷する状態に起因する損傷を引き起こし得る。
【０２８１】
これらの例に記載される全ての動物処置は、視力研究での動物の使用と、実験動物のケア及び使用のためのＮＩＨガイドの推薦にて、視覚と眼科学分解能の研究協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ｖｉｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）に順応した。
【０２８２】
本発明の様々な実施形態は、以下の特許請求の範囲と実施例と図面により例証されるものであり、これらは単なる例示目的のためのものであり、更なる制限を与えるものとして解釈されるものではない。付属物Ａ、Ｂ、及びＣは、その全体を引用することによって、本明細書に組み込まれる。本出願において引用された、非特許文献引用、交付済み特許、及び公表された特許出願を含む全ての引用の内容は、その全体を引用することによって、本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０２８３】
（実施例１．ｂｉｓ（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンの合成の材料および器具）
ｂｉｓ（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン（ＴＤ１３９）は、Ｈａｋｏｎ  Ｌｅｆｆｌｅｒ教授及び  Ｕｌｆ  Ｎｉｌｓｓｏｎ（ルンド大学）教授より与えられ、本明細書中に記載された材料および方法を用いて調製した。
【０２８４】
融点をコフラー装置（Ｋｏｆｌｅｒ  ａｐｐａｒａｔｕｓ）（Ｒｅｉｃｈｅｒｔ）に記録し未訂正である。プロトン核磁気共鳴（１Ｈ）スペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＲＸ  ４００（４００ＭＨｚ）またはＢｒｕｋｅｒ  ＡＲＸ  ３００（３００ＭＨｚ）分光計を使用して記録した；多様性は、シングレット（ｓ）、ダブレット（ｄ）、ダブレットのダブレット（ｄｄ）、トリプレット（ｔ）、明白なトリプレット（ａｔ）又はダブレットの明白なトリプレット（ａｔｄ）として引用される。炭素核磁気共鳴（１３Ｃ）スペクトルをＢｒｕｋｅｒ  ＤＲＸ  ４００（１００．６ＭＨｚ）分光計を使用して記録した。スペクトルをＣＯＳＹ、ＨＭＱＣおよびＤＥＰＴ実験を使用して割り当てた。すべての化学シフトを、百万分の一（ＰＰＭ）でｄ−スケールで引用する。
【０２８５】
低分解能および高分解能（ＦＡＢ−ＨＲＭＳ）高速原子衝撃質量スペクトルをＪＥＯＬ  ＳＸ−１２０器具を使用して記録し、低分解能および高分解能（ＥＳ−ＨＲＭＳ）をＭｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｑ−ＴＯＦ機により記録した。旋光度をＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ３４１の偏光計上で１ｄｍの路程にて測定した；濃度は１００ｍＬ中のｇ数で与えられる。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）法をＭｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌシートを使用して実行し、６０Ｆ２５４シリカであらかじめ被覆した。プレートを１０％の硫酸を使用して展開した。フラッシュ・カラムクロマトグラフィーをシリカ（Ｍａｔｒｅｘ、６０Å、３５−７０μｍ、Ｇｒａｃｅ  Ａｍｉｃｏｎ）で行った。アセトニトリルを水素化カルシウムから蒸留し、４Åモレキュラーシーブ上に保存した。ＤＭＦを４Ａモレキュラーシーブから蒸留し、４Åモレキュラーシーブ上に保存した。
【０２８６】
ｂｉｓ（３−デオキシ−３−（３−フルオロフェニル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン（ＴＤ１３９）を以下のような反応模式図１に従って調製した：
【０２８７】
【化２３】
0006366598.tif 000024
【０２８８】
化合物１（上記反応１）はＣａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｉｍｉｔｅｄ  ８  ＆  ９  Ｏｌｄ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｐａｒｋ  −  Ｃｏｍｐｔｏｎ  −  Ｂｅｒｋｓｈｉｒｅ  −  ＲＧ２０  ６ＮＥ−  ＵＫから得られ、またはＤガラクトース（Ｌｉ，Ｚ．およびＧｉｌｄｅｒｓｌｅｅｖｅ，Ｊ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００６，１２８，１１６１２−１１６１９を参照されたい）から３つのほぼ定量的な工程において合成した。
【０２８９】
（実施例２．フェニル２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−３−Ｏ−トリフルオロメタンスルホニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（模式図１の構造２）の合成）
化合物１（１０．５グラム、２９．２ｍｍｏｌ）を、乾燥したピリジン（４．７３ｍＬ（５８．４ｍｍｏｌ））および乾燥したＣＨ２Ｃｌ２（１３２ｍＬ）に溶かした。反応混合物を−２０℃（氷とＮａＣｌ３：１の槽）まで撹拌して冷やした。ゆっくり、およびＮ２大気の下で、Ｔｆ２Ｏ（５．６８ｍＬ，３３．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ，１：１およびトルエン：アセトン，１０：１）によってモニターした。反応が完了した時、ＡｃＣｌ（２．２９ｍＬ，３２．１のｍｍｏｌ）を加え、および撹拌を維持し、および温度を室温まで上昇させた。この混合物をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ，１：１およびトルエン：アセトン，１０：１）によってモニターした。反応が完了した時、それをＣＨ２Ｃｌ２でクエンチし、５％のＨＣｌ、ＮａＨＣＯ３（飽和させられた）およびＮａＣｌ（飽和させられた）で洗った。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧化でろ過し、および濃縮した。
【０２９０】
（実施例３．フェニル２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（模式図１の構造３）の合成）
テトラブチルアンモニウム亜硝酸塩（２５．３ｇ、８７．７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１１０ｍＬ）において化合物２（１５．６ｇ、２９．２ｍｍｏｌ）の溶液に加え、および５０℃で、Ｎ２大気の下で、撹拌し続けた。その反応は、初めに紫色を呈し、その後暗紅色を呈することが観察された。その反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ，１：１およびトルエン：アセトン，１０：１）によってモニターし、ＣＨ２Ｃｌ２で急冷した。その混合物を５％ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ３（飽和させられた）およびＮａＣｌ（飽和させられた）で洗った。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、および減圧化で濃縮し、続いてフラッシュ・クロマトグラフィー（溶離剤ヘプタン：ＥｔＯＡｃ，１：１およびヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：２）によって精製し、および、ＥｔＯＡｃおよびヘプタン（１：３）の混合物から再結晶する。ＣＤＣｌ３における１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ７．６０−７．５７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ），７．４３−７．４０（ｍ，２Ｈ，Ａｒ），７．３７−７．３４（ｍ，３Ｈ，Ａｒ），７．２９−７．２５（ｍ，３Ｈ，Ａｒ），５．５０（ｓ，１Ｈ，ＰｈＣＨ），５．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２９  Ｈｚ，Ｈ−１），５．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２７  Ｈｚ，２．８５  Ｈｚ，Ｈ−２），４．３６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．４９  Ｈｚ，１．４  Ｈｚ，Ｈ−６），４．１８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，Ｈ−３），４．０８  （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５９  Ｈｚ，１．０４Ｈｚ，Ｈ−６），４．０３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５３  Ｈｚ，１．７５  Ｈｚ，  Ｈ−４），３．８８  （ｓ，２Ｈ，Ｈ−５＋ＯＨ），２．１２（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）．
【０２９１】
（実施例４．フェニル２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−３−Ｏ−トリフルオロメタンスルホニル−β−Ｄ−グルコピラノシド（模式図１の構造４）の合成。）
化合物３（１．００ｇ，２．４８ｍｍｏｌ）を、乾燥したＣＨ２Ｃｌ２（１２．５ｍＬ）および乾燥したピリジン（０．４０ｍＬ，４．９６のｍｍｏｌ）に溶かした。反応混合物を−２０℃（氷とＮａＣｌ３：１の槽）まで撹拌して冷やした。ゆっくり、およびＮ２大気の下で、Ｔｆ２Ｏ（０．４８ｍＬ，２．８５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ，１：１およびトルエン：アセトン，１０：１）によってモニターし、反応が完了した時、ＣＨ２Ｃｌ２でクエンチし、５％のＨＣｌ、ＮａＨＣＯ３（飽和させられた）およびＮａＣｌ（飽和させられた）で洗った。有機層を、乾燥するまで、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、および減圧化で濃縮して乾燥した。
【０２９２】
（実施例５．フェニル２−Ｏ−アセチル−３−アジド−４，６−Ｏ−ベンジリデン−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（模式図１の構造５））
テトラブチルアンモニウムアジ化物（２．１２ｇ、７．４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）において、撹拌しながら、Ｎ２大気の下で、５０℃で、化合物４（１．３２５６ｇ，２．４８ｍｍｏｌ）の溶液に注意深く加えた。その反応をＴＬＣ（Ｅ：Ｈ，１：１）によってモニターし、および減圧化で濃縮し、続いてフラッシュ・クロマトグラフィー（溶離剤ヘプタン：ＥｔＯＡｃ，２：１およびヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１）によって精製した。ＣＤＣｌ３における１Ｈ  ＮＭＲδ７．６１−７．５８（ｍ，２Ｈ，Ａｒ），７．４４−７．４１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ），７．３９−７．３６（ｍ，３Ｈ，Ａｒ），７．３０−７．２４（ｍ，３Ｈ，Ａｒ），５．５９（ｓ，１Ｈ，ＰｈＣＨ），５．３５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．９５Ｈｚ，Ｈ−２），４．７３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．６３Ｈｚ，Ｈ−１），４．４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２４Ｈｚ，１．６０Ｈｚ，Ｈ−６），４．３５−４．３４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．３３Ｈｚ，０．８８Ｈｚ，Ｈ−４），４．１１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．４８Ｈｚ，１．６７Ｈｚ，Ｈ−６），３．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．１５Ｈｚ，Ｈ−５），３．４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２１Ｈｚ，３．２９Ｈｚ，Ｈ−３），２．１７（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）．
【０２９３】
（実施例６．フェニル２−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（模式図１の構造６）の合成）
化合物５（４７０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を８０％の酢酸（７５ｍＬ）に溶かし、および、混合物を加熱し６０℃で維持した。反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１）によってモニターした。反応が完了した時、混合物を減圧化で熱により濃縮した。
【０２９４】
（実施例７．フェニル２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（模式図１の構造７）の合成。）
無水酢酸（３０ｍＬ）を、乾燥ピリジン（３０ｍＬ）において、化合物６（３７３ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ，１：１）によってモニターし、および完了した時、減圧化で濃縮した。（ＣＤＣｌ３における１ＨＮＭＲ  δ７．５４−７．５１（ｍ，２Ｈ，Ａｒ），７．３５−７．３０（ｍ，３Ｈ，Ａｒ），５．４６（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−４），５．２３（ｔ，１Ｈ，Ｈ−２），４．７３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１），４．１５（ｄ，２Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−６），３．９４（ｄｔ，１Ｈ，Ｈ−５），３．６８（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３），２．１８（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），２．１５（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ），２．０６（ｓ，３Ｈ，ＯＡｃ）．
【０２９５】
（実施例８．２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシルブロミド（模式図１の構造８）の合成）
化合物７（２３７．４ｍｇ、５６０μｍｏｌ）を乾燥したＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）に溶かし、および臭素（３２μｌ，６２０μｍｏｌ）を加えた。反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１）によってモニターした。完了する時、少量のシクロペンテンを反応混合物に加えて、残る未処理のＢｒ２を除去した。混合物を減圧化で濃縮し、速いフラッシュ・クロマトグラフィー（溶離剤：５００ｍＬヘプタン：ＥｔＯＡｃ，２：１）によって精製した。
【０２９６】
（実施例９．２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノース−１−イソチウロニウム  ブロミド（模式図１の構造９）の合成）
高感度なブロミド化合物８（７０．６ｍｇ、１８０μｍｏｌ）を、乾燥アセトニトリル（１．７ｍＬ）に直ちに溶かし、４時間Ｎ２の下でチオ尿素（１３．７ｍｇ、１８０μｍｏｌ）で還流した。その反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１）によってモニターし、および、完了したとき、混合物を冷やした。
【０２９７】
（実施例１０．ｂｉｓ（２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−ｂ−Ｄ−ガラクトピラノシル）−スルファン（模式図１の構造１０）の合成）
高感度なブロミド化合物８（７７．０ｍｇ、１９６μｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（６０μｌ（４３０μｍｏｌ））を、先の混合物（化合物９）に加えた。その反応をＴＬＣ（ヘプタン：  ＥｔＯＡｃ、１：１）によってモニターした。反応が完了した時、混合物は熱を加えることなく減圧化で濃縮した。残留物をフラッシュ・クロマトグラフィー（溶離剤：ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１）によって精製した。ＣＤＣｌ３における１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ５．５０（ｄｄ，２Ｈ，Ｈ−４，），５．２３（ｔ，２Ｈ，Ｈ−２，Ｈ−２’），４．８３（ｄ，２Ｈ，Ｈ−１，Ｈ−１’），４．１５（ｄｄ，４Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−６，Ｈ−６’，Ｈ−６’），３．８９（ｄｔ，２Ｈ，Ｈ−５，Ｈ−５’），３．７０（ｄｄ，２Ｈ，Ｈ−３，Ｈ−３’），２．１９（ｓ，６Ｈ，２ＯＡｃ），２．１５（ｓ，６Ｈ，２ＯＡｃ），２．１８（ｓ，６Ｈ，２ＯＡｃ）．
【０２９８】
（実施例１１．ｂｉｓ（３−アジド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−スルファン（模式図１の構造１１）の合成）
化合物１０（１６０ｍｇ、０．０００２４ｍｏｌ）を乾燥ＭｅＯＨ（２．６ｍＬ）および乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１．６ｍＬ）に溶かし、およびＮａＯＭｅ（１Ｍ、２４μＬ、２４μｍｏｌ）を加えた。その反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ１：１およびＤ：Ｍ５：１）によってモニターした。反応が完了した時、混合物をｐＨ７になるまでＤｕｏｌｉｔｅ  Ｃ４３６で中和し、およびろ過し、ＭｅＯＨで洗った。ろ過された溶液を、減圧化で濃縮した。純粋な化合物１１（７４．１ｍｇ、７５％）を与えるために、残留物をフラッシュ・クロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ、５：１）によって精製した。ＣＤＣｌ３における１Ｈ  ＮＭＲ  δ  ４．７２  （ｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝９．７  Ｈｚ，  Ｈ−１，  Ｈ−１’），  ３．９５  （ｂｒ  ｓ，  ２Ｈ，  Ｈ−４，  Ｈ−４’），  ３．８４  （ｔ，  ２Ｈ，  Ｊ＝  ９．８  Ｈｚ，  Ｈ−２，  Ｈ−２’），  ３．７４  （ｄｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝  １１．４７  Ｈｚ，  ７．２３  Ｈｚ，  Ｈ−６，  Ｈ−６’），  ３．６４  （ｄｄ，２Ｈ，  Ｊ＝  １１．４８  Ｈｚ，  ４．７２  Ｈｚ，  Ｈ−６，  Ｈ−６’），  ３．６０−３．５５  （ｄｄｄ，  ２Ｈ，  ７．１５  Ｈｚ，  ４．６７  Ｈｚ，  ０．９３  Ｈｚ，  Ｈ−５，  Ｈ−５’），  ３．３６  （ｄｄ，  ２Ｈ，  Ｊ＝  １０  Ｈｚ，  ３．０５  Ｈｚ，  Ｈ−３，  Ｈ−３’）．
【０２９９】
（実施例１２：ｂｉｓ−｛３−デオキシ−３−［４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝スルファン（ＴＤ１３９）の合成）
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ（１００ｍＬ／ｍｍｏｌスルファン）において、Ｃｕ（Ｉ）（０．２ｅｑ）、トリエチルアミン（２ｅｑ．）と共に、ｂｉｓ−（３−アジド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−スルファンと３−フルオロフェニルアセチレン（３ｅｑ．）の間のＣｕ（Ｉ）に触媒される付加環化によって、外界温度でＴＤ１３９を合成した。反応を完了するまでＴＬＣによってモニターし、および濃縮し、および最初はフラッシュ・クロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ、８：１）によって、その後は予備のＨＰＬＣによって精製し、ＴＤ１３９を７６％の産出量で白い非晶質固体として産出した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）ｄ８．５９（ｓ，２Ｈ，トリアゾール−Ｈ），７．６３（ｂｒ  ｄ，２Ｈ，７．６Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．５７（ｂｒ  ｄ，２Ｈ，８．４Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．４１（ｄｔ，２Ｈ，６，０および８．０Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．０５（ｂｒ  ｄｔ，２Ｈ，２．４および６．４Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），４．９３（ｄｄ，２Ｈ，２，４および１０．４Ｈｚ，Ｈ３），４．９２（ｄ，２Ｈ，１０．４Ｈｚ，Ｈ１），４．８４（２Ｈ，１０．４Ｈｚ，Ｈ２），４．１８（ｄ，２Ｈ，２．４Ｈｚ，Ｈ４），３．９２（ｄｄ，２Ｈ，４．２および７．６Ｈｚ，Ｈ５），３．８４（ｄｄ，２Ｈ，７．６および１１．４Ｈｚ，Ｈ６），３．７３（ｄｄ，２Ｈ，４．２および１１．４Ｈｚ，Ｈ６）；ＦＡＢ−ＨＲＭＳｍ／ｚ  ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２８Ｈ３０Ｆ２Ｎ６ＮａＯ８Ｓ（Ｍ＋Ｎａ＋），６７１．１７１２；ｆｏｕｎｄ，６７１．１７０５．
【０３００】
化合物ＴＤ１３９の構造は下のように示される：
【０３０１】
【化２４】
0006366598.tif 000025
【０３０２】
（実施例１３．毛細管形成アッセイ（ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｔｕｂｕｌｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙｓ）において用いられる材料）
Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｄｕｃｅｄ  Ｍａｔｒｉｇｅｌ（カタログ番号３５４２３０）材料を、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社（Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，  ＮＪ）から得た。８マイクロメートル（ミクロン、μｍ）の孔径を有するＴｒａｎｓ−ｗｅｌｌ  ｉｎｓｅｒｔｓを、Ｃｏｒｎｉｎｇ社（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ；カタログ番号３４２２）から得た。内皮の基本培地をＬｏｎｚａ社（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，  ＭＤ；カタログ番号ＣＣ−３１５６）から得た。血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）をセル・シグナル社（Ｃａｎｔｏｎ、ＭＡ；  カタログ番号ＣＲＶ００１Ａ）から得た。
【０３０３】
（実施例１４．毛細管形成アッセイに対する阻害剤の効果）
Ｍａｔｒｉｇｅｌを４．５ｍｇ／ｍＬの濃度に希釈し、８チャンバースライド（ｅｉｇｈｔ−ｃｈａｍｂｅｒ  ｓｌｉｄｅ）（２００μｌ／チャンバー）に加え、２０分間３７℃で重合した。ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、容器において培養し、および０．２５％のトリプシン−エチレンジアミン四酢酸を用いて容器の表面から持ち上げることにより分離した。
【０３０４】
溶液を、１％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）が補われた内皮の基本培地２（ＥＢＭ−２）に２５ナノグラム（ｎｇ）／ｍＬのＶＥＧＦを含むように準備した。ＨＵＶＥＣサンプル（２０，０００細胞／サンプル）を次のどちらかに投与した：ＥＢＭ−２中に２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび１０マイクロモル濃度（μＭ）のＴＤ１３９ガレクチン−３阻害剤（６００の分子量）、またはＥＢＭ−２中に２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび５０μＭのＴＤ１３９。
【０３０５】
対照ＨＵＶＥＣを、ＥＢＭ−２中の２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦのみで処理した。異なるＨＵＶＥＣサンプルの各々を、マトリゲルチャンバー内で６時間、３７Ｃ、５％ＣＯ２でインキュベートした。
【０３０６】
代表的な写真の画像（１チャンバー当たり４画像）を得た。毛細管形成のデータを得て、分岐点の数を数えることにより、定量化した。データを、１％のＦＢＳのみ（ＶＥＧＦもＴＤ１３９阻害剤も加えられない）が補われたＥＢＭ−２培地で処理した対照サンプルに規格化した。
【０３０７】
Ｘ４０／０．７５（ｆ／１．２５）の対物レンズ（Ｍａｒｋｏｗｓｋａら、２０１１  Ｊ  ｏｆ  Ｂｉｏ  Ｃｈｅｍ  Ｖｏｌ．  ２８６  （３４）：  ２９９１３‐２９９２１を参照）を装備する、ライカＤＭ  ＩＲＥ共焦点レーザー顕微鏡（Ｌｅｉｃａ  Ｌａｓｅｒｔｅｃｈｎｉｋ，  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、共焦点画像を得た。ＣＦＩ  Ｐｌａｎ  Ｆｌｕｏｒ  Ｘ４  （ｆ／０．１３）  又は  ＣＦＩ  Ｐｌａｎ  Ｆｌｕｏｒ  Ｘ２０  （ｆ／０．５０）の対物レンズを備えたＥｃｌｉｐｓｅ  Ｅ４００  顕微鏡  （Ｎｉｋｏｎ，  Ｔｏｋｙｏ，  Ｊａｐａｎ）  を用いて、蛍光画像を取得した。細胞の出芽の画像を、ＣＦＩ  Ｐｌａｎ  Ｆｌｕｏｒ  Ｘ４  および  ＣＦＩ  Ｐｌａｎ  Ｆｌｕｏｒ  Ｘ１０  （ｆ／０．３０）  対物レンズを備えたＮｉｋｏｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＴＥ２００位相差顕微鏡で撮影した。画像は、ＳＰＯＴ  ＲＴ  ｃｏｌｏｒ  ｄｉｇｉｔａｌ  ｃａｍｅｒａ  （Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，  Ｓｔｅｒｌｉｎｇ  Ｈｅｉｇｈｔｓ，  ＭＩ）およびＳＰＯＴ  Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ４．０．６  （Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）により、室温で取得された。データはスチューデントのｔ検定により分析した（表１）。
【０３０８】
【表１】
0006366598.tif 000026
【０３０９】
ＥＢＭ−２および１０μＭのＴＤ１３９ガレクチン−３阻害剤で処理したＨＵＶＥＣ、又は、ＥＢＭ−２および１０μＭのＴＤ１３９で処理したＨＵＶＥＣのいずれと比較しても、２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦで処理されたＨＵＶＥＣにおいては増強された毛細管形成が、観察された（１−３倍）（表１，図．９Ａおよび図．９Ｂ）。１０μＭのＴＤ１３９阻害剤によるＨＵＶＥＣの処理は、ＶＥＧＦのみで処理したＨＵＶＥＣと比較して、ＨＵＶＥＣ内でのＶＥＧＦを媒介とする毛細管形成を減少させた（表２および図９Ｂ）。
【０３１０】
最も重要なことに、５０μＭのＴＤ１３９阻害剤でのＨＵＶＥＣの処理は、ＶＥＧＦのみで処理したＨＵＶＥＣと比較して、ＶＥＧＦを媒介とした毛細管形成の範囲を著しく減少させた（ｎ＝３、ｐ＜０．０５；図９Ｂ）。ガレクチン阻害剤が、実質的にはＴＤ１３９が、ＶＥＧＦに引き起こされる毛細管形成を阻害した、ということをこれらのデータは示す。
【０３１１】
（実施例１５．３次元のインビトロ血管新生アッセイ／出芽アッセイにおける材料）
メチル・セルロース（カタログ番号Ｍ０５１２）をＳｉｇｍａ社，（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より得て、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ；カタログ番号１１９６５）をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）から得た。Ｉ型コラーゲン（カタログ番号３５４−４２３６）をＢｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社から得た。濃縮（１０ｘ）培地１９９（カタログ番号１１８２５）を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社から得た。濃縮（１００ｘ）ペニシリン‐ストレプトマイシン溶液（カタログ番号１５１４０）を、Ｇｉｂｃｏ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）から得た。
【０３１２】
ポリスチレン浮遊培養マイクロプレート（プレート当たり９６ウェル；カタログ番号６５０１８５）を、Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ  Ｏｎｅ  （Ｆｒｉｃｋｅｎｈａｕｓｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から得た。ＶＥＧＦ（カタログ番号１００−２００）をＰｅｐｔｏＴｅｃｈ社（Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，ＮＨ）から得た。内皮の増殖培地−２（ＥＧＭ−２）（カタログ番号ＣＣ４１７６）およびＥＢＭ−２（カタログ番号ＣＣ３１５６）を、Ｌｏｎｚａ社から得た。
【０３１３】
（実施例１６．メチル・セルロースの調製）
メチル・セルロース粉末（６ｇ）を５００ｍＬ瓶中で磁気棒を使用して撹拌しながらオートクレーブした。粉末を６０℃で３０分間撹拌しながらＤＭＥＭ培地２５０ｍＬに溶かし、およびその後、室温のＤＭＥＭ２５０ｍＬを加え、混合物を４℃で２時間撹拌した。その後、結果として生じる混合物を、５０ｍＬ円筒形チューブへ分注し、室温で２時間遠心分離して（毎分回転数６１７０）、球状体構造（ｓｐｈｅｒｏｉｄ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ）と干渉する細片を除去する。透明な上清を遠心分離したチューブから収集する。
【０３１４】
（実施例１７．内皮細胞球状体（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ−ｓｐｈｅｒｏｉｄ）の調製）
内皮細胞（ＥＣ）を容器において培養し、０．２５％のトリプシンで容器表面から分離した。トリプシン処理したＥＣ細胞のｐＨをＤＭＥＭで中和した。メチルセルロース３．７５ｍＬ、ＦＢＳ１．７５ｍＬ、ペニシリン／ストレプトマイシン１７．５μｌ、および９０，００００の内皮細胞を混ぜ合わせ、ＤＭＥＭを加えて全容積を１７．５ｍＬに至らせることによって、球状体溶液をチューブ内に調製する。チューブを転倒させることにより球状体溶液を混合し、多チャンネルピペッターおよび広口チップ（ｗｉｄｅ  ｍｏｕｔｈ  ｔｉｐｓ）を使用して、１５０μｌのアリコートを９６ウェルプレートのウェルの各々に加えた。球状体を固定し、５％ＣＯ２において２４時間３７℃でインキュベートした。
【０３１５】
（実施例１８．コラーゲンの調製）
それぞれの９６ウェルプレートは、２４ウェルプレートの４ウェルのために十分な球状体を産出した。コラーゲン溶液を、２．３ｍＬの（３．９ｍｇ／ｍＬ）Ｉ型コラーゲン、４００μｌの１０ｘＭ１９９培地、２００μｌのＦＢＳ、および１．１ｍＬ水を使用して調製した。コラーゲン溶液を、カラーｐＨ指示薬（ｃｏｌｏｒ  ｐＨ  ｉｎｄｉｃａｔｏｒ）を使用して水酸化ナトリウムで中和した。メチル・セルロース溶液（４．５ｍＬ）を、１．５ｍＬのＤＭＥＭと組み合わせて、ウォーターバスで３７℃に暖めた。ＥＣ球状体を、広口ピペット（ｗｉｄｅ  ｍｏｕｔｈ  ｐｉｐｅｔｔｅ）を使用して集め、３分間室温で遠心分離した（毎分７００回転）。
【０３１６】
結果として生じる上清を除去し、およびメチル・セルロース溶液２ｍＬをペレットに加えた。中和されたコラーゲン溶液（２ｍＬ）を、混合物に加え、および泡形成を避けるためにピペットを使用して注意深く混合した。
【０３１７】
混合されたコラーゲン溶液のアリコート（１ｍＬ）を２４ウェルプレートの４ウェルに加え、およびプレートを３７Ｃ５％ＣＯ２で３０分間インキュベートして、コラーゲンを重合した。重合されたコラーゲンを、２０μＭのＴＤ１３９又は５０μＭのＴＤ１３９のいずれかで補った、１００μｌのＥＢＭ−２およびＥＢＭ−２中の２５ｎｇ／ｍＬＶＥＧＦで覆った。対照コラーゲン・サンプルを、１００μｌのＥＢＭ−２およびＥＢＭ−２中の２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦで処理した。出芽および管形成を、時間に応じて倒立位相差顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ）で観察し、ＳＰＯＴ  ＲＴ  カラーデジタルカメラ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓｔｅｒｌｉｎｇ  Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＭＩ）およびＳＰＯＴ  Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎソフトウェアバージョン４．０．６（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して撮影した。Ｍｅｙｅｒら２００３  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７８（１８）：１６３４７−５５を参照されたい。インキュベートされたサンプルの代表的な画像を得て、内皮細胞の出芽の任意単位における累積の長さを、ＩｍａｇｅＪの加工および解析手法によって決定した。データをスチューデントのｔ検定によって解析した（表２）。
【０３１８】
統計解析：ＶＥＧＦのみの存在と比較された対照は０．００１２である；１０μＭの阻害剤およびＶＥＧＦの存在と比較して、ＶＥＧＦのみの存在は、０．１１９である；５０μＭの阻害剤およびＶＥＧＦの存在と比較して、ＶＥＧＦのみの存在は、０．０７９である。
【０３１９】
データは、ＶＥＧＦ２５ｎｇ／ｍＬのみを投与されたＥＣ球状体が、培地のみで処理した対照ＥＣ球状体と比較して、４倍の内皮細胞の出芽を生み出したことを示す（ＦＩＧ．  １０Ａ）。ＴＤ１３９阻害剤１０μＭの投与は、ＶＥＧＦのみと接触したＥＣ球状体と比較して、ＶＥＧＦを媒介としたＥＣ出芽の量の約３分の１だけ、出芽を減少させた、ということを観察した（表２および図１０Ｂ）。ＴＤ１３９阻害剤５０μＭの投与は、ＴＤ１３９阻害剤１０μＭで処理したＥＣ球状体と比較して、ＶＥＧＦを媒介とした出芽の程度（約３分の２）を著しくさらに減少させた（ｎ＝３、ｐ＜０．０１）。従って、ガレクチン阻害剤は実質的に血管新生のプロセス、すなわち、ＶＥＧＦに引き起こされる毛細管出芽を阻害し、阻害は投与された阻害剤の量に関して用量依存的であった。
【０３２０】
【表２】
0006366598.tif 000027
【０３２１】
（実施例１９．ガレクチンタンパク質阻害はインビボのＶＥＧＦ受容体経路を調節する）
ＶＥＧＦ受容体−２（ＶＥＧＦＲ２）を通じた血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）シグナルは、第一の血管新生経路であり、ガレクチン−１タンパク質およびガレクチン−３タンパク質がその重要な修飾因子である。ＴＤ１３９は、ガレクチン−１（１２ｎＭの平衡解離定数またはＫＤ）およびガレクチン−３（ＫＤ＝１４ｎＭ）に対して高い親和性を有する。引用によって本明細書全体に組み込まれる、Ｌｅｐｕｒ  Ａら２０１２  Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．１８２０（７）：８０４−１８を参照されたい。化合物ＴＤ１３９はガレクチン−１およびガレクチン−３それぞれと特異的に結合する。
【０３２２】
本明細書における実施例は、ガレクチン−１およびガレクチン−３の両方を標的とするＴＤ１３９がＶＥＧＦ−Ａ／ＶＥＧＦＲ２シグナルに影響したことを示す。病的な血管新生を阻害するＴＤ１３９の効果を、本明細書の実施例において示す。任意の特定の理論または作用機序によって限定的されないが、ＴＤ１３９処理はＶＥＧＦ−Ａ／ＶＥＧＦＲ２シグナルに干渉し、およびＶＥＧＦ−Ａ−に引き起こされる血管新生を抑止することが、本明細書で予見される。
【０３２３】
眼における新生血管形成を、硝酸銀を使用した焼灼によってマウス角膜に引き起こした。図１１Ａは、Ｃ５７Ｂ／６Ｌマウス被験体のための、レジメン／投与の予定を示す。被検体のグループに、０．５％ＤＭＳＯを含むＰＢＳ中のＴＤ１３９（３２５ｎｇ）１０μＬを、一日おきに結膜下注射した。対照被験体に、ビヒクルのみ（０．５％ＤＭＳＯのみを含むＰＢＳ）を結膜下注射した。被験体の別のグループに、１０μｌのビヒクルのみ又はビヒクル中の５０μＭのＴＤ１３９のいずれかの点眼剤を、１日当たり１回投与した。
【０３２４】
結膜下注射処理または点眼薬処理のいずれかの５日後、被験体を屠殺し、角膜のフラットマウント（ｆｌａｔ  ｍｏｕｎｔｓ）を切除し、撮影し、および抗ＣＤ３１で染色して血管を可視化した（図１１Ｂ、倍率はｘ１００である）。角膜全体を覆う血管の密度を、ＩｍａｇｅＪによって定量し、スチューデントｔ検定で解析した（図１１Ｃ）。
【０３２５】
焼灼後５日の被験体からの眼の代表的な写真を、図１１Ｂの最上列に示す。ＰＢＳで処理された対照被験体の眼は、血管新生および新しい血管の形成の強力な徴候を示す（図１１Ｂ、左側の欄、最上列）。最も重要なことに、ＴＤ１３９処理された眼の写真の解析は、対照被験体と比較して減少した血管新生を示す（図１１Ｂ、右側の欄、最上列）。
【０３２６】
抗ＣＤ３１で染色された角膜のフラットマウントからの代表的な部分を、図１１Ｂ底列に示す。ＰＢＳのみで処理された対照被験体からの眼は、強力なＣＤ３１染色を示す（図１１Ｂ、左側の欄、底列）。最も重要なことに、ＴＤ１３９処理された角膜で処理された被検体からの角膜は、ＰＢＳのみで処理された対照被験体からの眼と比較して、減少したＣＤ３１染色を示す。
【０３２７】
さらに、ＰＢＳのみで処理された対照被験体からの角膜をカバーする血管の密度は、約４０％であった。ＴＤ１３９で処理された被験体からの角膜をカバーする血管の密度は、有意に減少した（２８％）。図１１Ｃを参照されたい。ＴＤ１３９点眼剤の結膜下注射および局所的投与の両方が、インビボで焼灼により引き起こされる角膜血管新生を、減少させた。したがって、ＴＤ１３９は角膜血管新生の効果的なインビボの阻害剤であり、それは眼の血管新生の重要なシステムである、と観察された。
【０３２８】
（実施例２０．ガレクチン−１およびガレクチン−３タンパク質は、ＶＥＧＦＲ−２と結合しおよびそれと相互作用する）
ＶＥＧＦＲ−２を発現するＨＵＶＥＣからの溶解物を、０．１モル濃度（Ｍ）ショ糖または０．１Ｍのラクトース存在下において、ガレクチン−１タンパク質が結合されたアガロースビーズ、またはアガロースビーズと結合されたガレクチン−３タンパク質とインキュベートした。対照ＨＵＶＥＣ溶解物を、ガレクチン−１アガロースビーズ、または、ガレクチン−３アガロースビーズのみでインキュベートした。ビーズをすすいで非結合の材料を除去した。
【０３２９】
ビーズに結合するＨＵＶＥＣ溶解物材料を、Ｌａｅｍｍｌｉサンプル緩衝液で溶出し、ゲル電気泳動（４−２０％のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル剤）を使用して分析した。ブロッキングに引き続き、メンブレンブロット（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｂｌｏｔｓ）を抗ＶＥＧＦＲ−２抗体（図１２）を使用してプローブした。データは、ＶＥＧＦＲ−２を発現するＨＵＶＥＣからの溶解物が、アガロース・ビーズと結合されたガレクチン−１タンパク質、または、アガロース・ビーズと結合されたガレクチン−３タンパク質にそれぞれ特異的に結合した、ということを示す。ガレクチン−１およびガレクチン−３タンパク質ビーズの各々へのＨＵＶＥＣ溶解物材料の結合は、ラクトース、競合する糖類での処理によって阻害されることが観察された。さらに、ＶＥＧＦＲ２  ＨＵＶＥＣ溶解物のビーズへの結合は、ショ糖、競合する糖類で処理されるビーズについては観察されなかった。
【０３３０】
任意の特定の理論または作用機序によって限定されないが、ＶＥＧＦＲ−２およびガレクチン−１タンパク質間の、およびＶＥＧＦＲ−２およびガレクチン−３タンパク質間の相互作用は、炭水化物依存性であることが、本明細書で予見される。ガレクチン−１およびガレクチン−３の炭水化物結合ドメインは、ＶＥＧＦＲ２と特異的に結合および相互作用した。
【０３３１】
（実施例２１．ＴＤ１３９はＶＥＧＦ−Ａにより引き起こされる内皮細胞の出芽を阻害した）
本明細書中の実施例に記述されるようにＨＵＶＥＣ球状体を調製し、該球状体をＩ型コラーゲンゲルの中にまいた。６時間インキュベートした後、ゲルを次のいずれかで処理した：ＶＥＧＦ−Ａ（１００ｎｇ／ｍｌ）のみ、ＶＥＧＦ−Ａ（１００ｎｇ／ｍｌ）およびＴＤ１３９（０．０１μＭ、０．１μＭ、１μＭ、５μＭまたは１０μＭ）、またはＴＤ１３９（１０μＭ）のみ。対照球状体はＶＥＧＦ−ＡでもＴＤ１３９でも処理されなかった。処理の２４時間の後、球状体を、カルセインＡＭ、真核細胞における細胞の生存率を示す細胞浸透性の色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）で染色し、球状体を蛍光顕微鏡を用いて撮影した。累積の出芽の長さを、ＩｍａｇｅＪによって定量した。
【０３３２】
ＶＥＧＦ−Ａのみで処理されるＨＵＶＥＣ球状体は、ＶＥＧＦで処理されていない対照細胞と比較して、出芽するＨＵＶＥＣを増加させたことが観察された（図１３Ａ）。最も重要なことに、ＴＤ１３９で処理されるＨＵＶＥＣ球状体は、ＶＥＧＦ−Ａのみで処理されるＨＵＶＥＣ球状体と比較して、出芽の長さを減少させたことが観察された（図１３Ａ）。０．１μＭ、１μＭ、５μＭおよび１０μＭのＴＤ１３９各々による処理は、ＨＵＶＥＣのＶＥＧＦ−Ａに引き起こされる出芽を有意に阻害した。
【０３３３】
（実施例２２．ＴＤ１３９はＶＥＧＦ−Ａに引き起こされる内皮細胞の移動を阻害した）
ＨＵＶＥＣを、血清なしで夜通しインキュベートし、Ａｃｃｕｔａｓｅで分離し、１％ＦＢＳ／Ｍ１９９中に再懸濁し、メンブレンにより底部チャンバーから分離されている上部チャンバー中に加えた。１％ＦＢＳ／Ｍ１９９中の異なる濃度（１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、１０００ｎｍまたは５０００ｎＭ）のＴＤ１３９存在下で、あるいはＴＤ１３９なしの対照の存在下で、底部チャンバーをＶＥＧＦ−Ａで充たした。対照ＨＵＶＥＣは、ＶＥＧＦ−ＡでもＴＤ１３９でも処理されなかった。
【０３３４】
３時間インキュベートした後、ＨＵＶＥＣは、メンブレンのより下側に移動したことが観察され、高倍率視野（ｈｉｇｈ−ｐｏｗｅｒ  ｆｉｅｌｄ）（ＨＰＦ）解析を使用して数えられた（図１３Ｂ）。データを平均±ＳＥＭとしてプロットし、一元配置分散分析で解析した。＊Ｐ＜０．０５ｖｓ対照；＊＊＊Ｐ＜０．００１ｖｓ対照；＃＃＃Ｐ＜０．００１ｖｓＶＥＧＦ−Ａ。
【０３３５】
ＶＥＧＦ−Ａは、ＶＥＧＦでもＴＤ１３９でも処理されない対照ＨＵＶＥＣと比較して、ＨＵＶＥＣの走化性を増加させたことが観察された。ＴＤ１３９は、ＶＥＧＦのみで処理されたＨＵＶＥＣと比較して、ＨＵＶＥＣ内でのＶＥＧＦ−Ａに引き起こされた走化性を阻害した。
【０３３６】
三次元の出芽アッセイを用いて、ＴＤ１３９がＶＥＧＦ−Ａに引き起こされる走化性および遊走を、用量依存性の様式で有意に抑止したことが観察された。
【０３３７】
（実施例２３．ＴＤ１３９はＨＵＶＥＣに無毒である）
ＨＵＶＥＣを１％ＦＢＳ／Ｍ１９９内で夜通しインキュベートし、その後、０．１％ＤＭＳＯ、０．１％のトリトン（商標）Ｘ−１００（死滅の陽性対照）またはＴＤ１３９（５μＭ）のいずれかで３時間処理した。対照ＨＵＶＥＣを、ＤＭＳＯ、トリトンン（商標）Ｘ−１００またはＴＤ１３９のいずれも含まないビヒクルで処理した。
【０３３８】
処理されたＨＵＶＥＣおよび対照ＨＵＶＥＣの細胞の生存率を、細胞の生存率を決定するのに使用される２つのシステム、カルセインＡＭおよびＷＳＴ−１それぞれで決定した。カルセインＡＭを処理されたＨＵＶＥＣのグループに加え、それを３０分インキュベートした（図１４Ａ）。処理されたＨＵＶＥＣの別のグループを、ＷＳＴ−１、細胞増殖の決定のために用いられ、細胞の生存率の指標であるテトラゾリウム塩、で２時間インキュベートした（図１４Ｂ）。データを平均±ＳＥＭにプロットし、一元配置分散分析で解析する。＊＊＊Ｐ＜０．００１ｖｓ対照。
【０３３９】
蛍光放射を、カルセインＡＭまたはＷＳＴ−１のいずれかと接触したそれぞれの処理グループについて、分光光度計で検知した。カルセインＡＭまたはＷＳＴ−１システムの両方は類似する結果を示し、データは特に、対照の未処理のＨＵＶＥＣと比較して、トリトンン（商標）Ｘ−１００で処理したＨＵＶＥＣについて、細胞の生存率が減少したことを示す。ＨＵＶＥＣの生存率は、対照のＨＵＶＥＣと比較して、ＴＤ１３９処理またはＤＭＳＯ処理のいずれの後でも減少しなかった（図１４Ｂ）。したがって、ＶＥＧＦ−Ａに引き起こされる出芽および移動に対するＴＤ１３９の阻害効果は、２つの異なる試薬、カルセインＡＭおよびＷＳＴ−１で評価されるような細胞の生存率の変化の結果ではなかった。
【０３４０】
（実施例２４．ＶＥＧＦＲ２発現はＴＤ１３９処理に影響されない）
ＨＵＶＥＣを、１％ＦＢＳ／Ｍ１９９において夜通しインキュベートし、その後、６時間０．１％のＤＭＳＯおよび１０μＭＴＤ１３９を含むＰＢＳで処理した。対照ＨＵＶＥＣはＴＤ１３９で処理されなかった。細胞溶解物をゲル電気泳動（４−２０％のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル剤）を用いて解析し、およびメンブレンブロットを抗ＶＥＧＦＲ−２抗体あるいはβ−アクチン抗体のいずれかでプローブした。データは、ＶＥＧＦＲ２発現レベルおよびβ‐アクチン発現レベルが、対照のＨＵＶＥＣおよびＴＤ１３９処理されたＨＵＶＥＣの各々において、類似していたことを示す。ＨＵＶＥＣのＴＤ１３９処理は、ＶＥＧＦＲ２の全タンパク発現に対して、ほとんどまたはまったく効果がないことが観察された（図１５）。
【０３４１】
本明細書中の実施例は、ＴＤ１３９がガレクチン−１タンパク質およびガレクチン−３タンパク質をターゲットとしたこと、および、ＴＤ１３９が培養中の細胞において、および組織において、およびインビボの被験体において、病的な血管新生を改善したことを示す。本明細書に記述されるガラクトシド化合物を使用するガレクチン−１およびガレクチン−３の阻害は、眼の血管新生について、および加齢黄斑変性および角膜血管新生を含む眼の血管新生と関係する様々な疾患状態について、有効な処置および予防的な養生法であることが示された。
【０３４２】
（実施例２５：眼の血管新生を妨げるガレクチン阻害剤の送達）
代替のガレクチン阻害剤および化合物を投与するルートを、目の血管新生を処置する又は妨げるために調製した。
【０３４３】
ガレクチンタンパク質（ガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７およびガレクチン−８）又はガレクチンタンパク質をコードするヌクレオチド配列について特異的な阻害剤を準備した。阻害剤は、抗体、小さなガラクトシド化合物、ｓｉＲＮＡ、およびガレクチン活性のタンパク質修飾物質をコードするベクターを含んでいた。被験体に、以下から選ばれた投与のルートを経由して、阻害剤を投与した（ａｄｍｉｎｓｔｅｒｅｄ）：静脈内、筋肉内、腹腔内、皮内、肺内、膣内、経口、頬側、局所的、舌下、鼻腔内、局所的および眼内。対照の被験体に、リン酸緩衝生理食塩水または修飾物質をコードしない空ベクターを投与する。本明細書中に記述されるような焼灼を使用して、目の血管新生および（または）新生血管形成が起きるよう、動物を誘導する。動物を屠殺し、組織サンプルを内皮細胞の出芽を含む血管新生の兆候に関して解析した。
【０３４４】
ガレクチン阻害剤の投与は、対照被験体の結果と比較して、被験体の眼の血管新生を阻止する結果をもたらすことが観察された。ガレクチン阻害剤で処理された被験体からの組織は、使用される阻害剤の各タイプ（すなわち抗体、ガラクトシド、ｓｉＲＮＡおよびベクター）および投与のルートを用いて、被験体からの組織と比較して低いレベルの眼の血管新生を示した。
【０３４５】
（実施例２６：ガレクチン阻害剤の送達は眼の線維症を防ぐ）
眼の視覚の疾患は、異常な血管新生、創傷治癒、組織虚血、または炎症の結果として、破滅的な視力喪失を引き起こす（Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ，  Ｍ．  ２００７  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  １  １７（３）：５７６−５８６、これは引用によって本明細書に全体として組み込まれる）。線維症は、炎症、虚血、および変性疾患に対する反応を含む物理的な創傷または代謝性機能不全によってしばしば引き起こされる。眼の線維症は、炎症細胞、繊維芽細胞または繊維芽細胞様の細胞の、眼および眼組織（例えば網膜）への浸潤に関与し、および新血管新生および変更される血管透過性のような状態にもまた関与する。
【０３４６】
眼の線維症のための動物モデルおよびインビトロのモデルは、基本溶液（例えば水酸化ナトリウム）、タンパク質（例えばディスパーゼ）、およびマクロファージに富んだ腹腔滲出細胞のような細胞を含む、多くの異なるシステムを使用する（Ｏｋａｄａら２００１  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  １７８（６）：２６５４−２６６４；Ｔａｎら  ２０１２  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｖｉｓｉｏｎ  １８：８８７−９００；および  Ｚｈａｎｇら．２０１２  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ５（３）：３０７−３１１を参照し、これらは引用によって本明細書に全体として組み込まれる）。
【０３４７】
被験体の眼に適用される水酸化ナトリウム溶液を使用する眼の線維症のモデル（Ｏｋａｄａ  ら．  ２００１  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  １７８（６）：  ２６５４−２６６４）は、眼の線維症を阻害するか、防ぐか、あるいは調節するために本明細書に記述される医薬組成物の能力を試験するために本明細書中で使用される。ガレクチンタンパク質（ガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７およびガレクチン−８）またはガレクチンタンパク質をコードするヌクレオチド配列に特異的な阻害剤を調製する。阻害剤は、抗体、小さなガラクトシド化合物、ｓｉＲＮＡ、およびガレクチン活性のタンパク質修飾物質をコードするベクターを含んでいた。被験体に、以下から選ばれる投与の経路によって阻害剤を投与する：静脈内、筋肉内、腹腔内、皮内、肺内、膣内、経口、頬側、局所的、舌下、鼻腔内、局所的、眼内。対照被験体に、リン酸緩衝生理食塩水または修飾物質をコードしない空ベクターを投与する。動物は、本明細書中に記述されるような眼の線維症を誘発させられる。動物を屠殺し、組織サンプルを除去し、繊維芽細胞の増殖を含む眼の線維症の兆候に関して解析する。
【０３４８】
ガレクチン阻害剤の投与は、対照被験体の結果と比較して、被験体の眼の線維症を阻止する結果をもたらすことが観察される。ガレクチン阻害剤で処理された被験体からの組織は、使用される阻害剤の各タイプ（すなわち抗体、ガラクトシド、ｓｉＲＮＡおよびベクター）および投与のルートを用いて、被験体からの組織と比較して低いレベルの眼の血管新生を示した。
【０３４９】
（実施例２７：ガレクチン−３特異的阻害剤は角膜血管新生を低下させた）
外傷、手術、または疾患から起きることがある角膜における血管新生は、疼痛、霧視、流涙、発赤および光への極端な感受性を引き起こす。ガレクチン−３に対する高い特異的な親和性を備えた阻害剤が被験体の眼内での新血管新生を減少させるかどうか決定するために、外傷（ｔｒｕｍａ）のある動物モデルを使用して、血管をほぼ又は全く含まない正常な被験体の角膜に傷をつけて、眼の機能に影響する角膜において新血管新生を引き起こす。
【０３５０】
化合物を合成し、化合物がガレクチン−１およびガレクチン−３に特異的に結合するかどうか試験した。ガレクチンへの分子の結合を決定する方法を以下に記述する。Ｂｒｅｖｅｔｔｏらの２００４年７月２９日に公表された米国特許公開公報番号２００４／０１４７７３０も参照されたい。微量定量プレートウェルを、組み換え型のガレクチン−１またはガレクチン−３（１０μｇ／ｍｌ、５０μｌ／ウェル）で被覆し、次に、ＰＢＳと洗剤を含む洗浄溶液で洗った。ウェルをＢＳＡで遮断し、洗浄溶液／緩衝液で洗った。化合物３２（さらに以下に記述される）、ＴＤ１３９（上に記述する）または非特異性のレクチンそれぞれのある量を調製し、複製したウェルに加えた（１００μＬ／ウェル）。対照ウェルはＰＢＳのみを含んでいた。ガレクチン−１またはガレクチン−３のいずれかに特異的な、ガレクチン受容体‐ＨＲＰ共役（１００μＬ／ウェル、１ｍｇ／ｍＬ）のある量を、それぞれのウェルに加えた。ウェルを１時間インキュベートし、次に、室温で緩衝液で洗った。西洋わさびペルオキシダーゼ酵素反応を、ＴＭＢペルオキシダーゼ基質キット（ＢｉｏＲａｄ社）を使用して行なった。１時間後、１Ｎ硫酸（１００μＬ／ｗｅｌｌ）の追加により反応を止め、光学濃度を４５０ｎｍで読みとった。データは、化合物３２がガレクチン−３へ特異的に結合し、ガレクチン−１へ結合しなかったこと、およびＴＤ１３９は結合ガレクチン−１およびガレクチン−３に特異的に結合したことを示す。非特異的なレクチンはガレクチン−１またはガレクチン−３のどちらにも結合しなかった。
【０３５１】
化合物３２は、ＮｉｌｓｓｏｎらのＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１３／０５１３３９、２０１３年８月１日に公開された国際公開番号ＷＯ２０１３／１１０７０４  Ａ１に記述される方法によって同定され、調製され、これら文献の内容は引用によって本明細書に組み込まれる。
【０３５２】
８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスの角膜を５秒間硝酸銀で焼灼した。０、２、４および６日目において、試験被験体に、角膜に結膜下注射される化合物３２（０．５％ＤＭＳＯ中に１００μＭ）１０μｌを投与した。対照被験体の焼灼された角膜に、ＤＭＳＯビヒクルのみ（ＰＢＳ中に０．５％のＤＭＳＯ）を結膜下注射し、および、試験被験体および対照被験体にそれぞれ、化合物３２または対照ＤＭＳＯビヒクルそれぞれのいずれかを、毎日の点眼剤（５μｌ）で投与した。７日目で、角膜を切除し解析した。
【０３５３】
化合物３２、ガレクチン−３阻害剤を結膜下注入された被験体は、ビヒクルのみを注射された対照被験体と比較して、より低い血管の面積の割合を示した（化合物３２を注射した被験体について２９％；対照被験体について４２％）。２つの独立の結果から組み合わされたデータを、図１６のＡ内に示す。対照または化合物３２のいずれかを結膜下注射された被験体の焼灼された眼からの角膜の代表的な蛍光イメージングを、図１６のＢにおいて示す。ＤＭＳＯおよびＰＢＳ対照ビヒクルを注射された対照被験体からの角膜と比較して、化合物３２を結膜下に注射された被験体からの角膜において、有意に少ない血管および減少した新血管新生の量が観察された。図１６のＡにおけるデータは、平均±ＳＥＭとしてプロットされ、スチューデントｔ検定を使用して解析される。
【０３５４】
（実施例２８：角膜の繊維症および網膜神経膠症を引き起こすためのモデル・システム）
マウス・モデル・システムを使用して、角膜の繊維症および網膜神経膠症を減少させるための、ガレクチン−３阻害剤ＴＤ１３９の効果を決定した（Ｐａｒａｎｔｈａｎ，Ｒ．Ｒ．ら  ２０１１  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｖｉｓｉｏｎ  １７：１９０１−１９０８を参照されたい）。Ｃ５７ＢＪ／６マウスに、ケタミンおよびキシラジン混合物の腹腔内（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｅｏｎｅａｌ）注射によって麻酔をかけた。角膜に、プロパラカイン点眼薬の適用によって局所的に麻酔をかけた。希釈した０．１５Ｍ水酸化ナトリウムの一滴（１．５μｌ）を、１分間各マウスの角膜中央に適用した。角膜をＰＢＳで直ちに広範囲に洗い、角膜および角膜縁上皮（ｌｉｍｂａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ）をＡＬＧＥＢＲＵＳＨ（商標）光学デバイス（Ｓｔｏｒｚ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で穏やかに除去した。抗生物質軟膏を各角膜を被覆するために適用した。ＴＤ１３９（５０ｍＭ）またはＰＢＳビヒクルのある量（１０μｌ）を、アルカリ処理／外科手術の後に１４日間連続して、毎日結膜下腔に注射した。
【０３５５】
角膜の不透明度は以下の基準を使用して、アルカリ処理後７日目および１４日目に計算した：０は透明を示す；１は、不透明領域／サイズが瞳孔のそれ未満であることを示す；２は、不透明領域が瞳孔より大きいことを示す；３は、不透明領域が角膜の２／３の領域より大きいことを示す；４は、角膜全体が不透明であることを示す。被験体を、ケタミンとキシラジンの混合物を使用するアルカリ手術（ａｌｋａｌｉｓｕｒｇｅｒｙ）後１４日目に屠殺する。角膜と網膜を解剖し、５ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのＰＭＳＦ、１ｍＭのＤＴＴ、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ｍＭのＥＤＴＡ、４００ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＥＧＴＡ、０．１％のＮＰ−４０およびプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ）を含む氷冷した溶解緩衝液中に溶解した。角膜のタンパク質（２０μｇ）および網膜のタンパク質（３０μｇ）のアリコートを、ゲルの各レーンにロードし、ニトロセルロースメンブレン上に転送した。ブロットは、マウスαーＳＭＡに対して特異的なウサギ抗体（１：１０，０００；Ａｂｃａｍ）またはＧＦＡＰに対して特異的なウサギ抗体（網膜神経膠症において見出される中間フィラメントのためのマーカー；１：５０，０００；Ａｂｃａｍ）により、４℃で夜通しプローブした。メンブレンを洗い、ヤギ抗ウサギＩＲＤｙｅ  ８００ＣＷ抗体（１：１０，０００；Ｌｉ−Ｃｏｒ  社）でインキュベートし、そのメンブレンをＯｄｅｓｓｅｙ画像システム（Ｌｉ−Ｃｏｒ  社）でスキャンし、定量した。
【０３５６】
（実施例２９：ＴＤ１３９は、角膜の繊維症を阻害する）
ＳＭＡ（平滑筋アクチン）は角膜の繊維症のマーカーである。眼を実施例２８に述べられているようなアルカリで処理して、ＴＤ１３９が角膜の繊維症を阻害するかどうか決定するためのモデル・システム中で使用する。被験体の眼は、アルカリ処理後に１４日間連続して、５０ｍＭのＴＤ１３９の１０μｌを、結膜下に（ｓｕｂｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｅｌｙ）注射した。対照被験体に、対照ＰＢＳビヒクルのみを結膜下に注射した。眼の不透明性を７日目および１４日目に計算した。角膜を収集し溶解緩衝液中に溶解した。図１７Ａは、アルカリ処理後およびＴＤ１３９の結膜下注射後７日目の、１セットの代表的な画像である。生体顕微鏡検法、および以下の不透明性の規模を使用するアルカリ処理後７日目に、ＴＤ１３９で処理された被験体の角膜混濁の定量化を行った：０は不透度のない透明な目を示す；１は、不透明領域が瞳孔の領域／面積未満であることを示す；２は、不透明領域が瞳孔の領域よりも大きいことを示す、３は、不透明領域が角膜領域の３分の２より大きいことを示す、４は、不透明体が角膜領域全体よりも大きいことを示す。（ｎ＝９匹のマウス／グループ）ｐ＜０．０５。図１７Ｂ。
【０３５７】
ＴＤ１３９の注射は、対照ＰＢＳビヒクルでの注射と比較して、眼内での角膜混濁を減少させたことが観察された。角膜細胞溶解物のウエスタンブロット解析は、ＰＢＳを注射された対照被験体と比較して、α−ＳＭＡ発現がＴＤ１３９の注射によって３０％減少したことを示す。図１７Ｃ。
【０３５８】
（実施例３０：ＴＤ１３９は網膜神経膠症を阻害する。）
グリア細胞繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）は網膜神経膠症を示す中間フィラメントのためのマーカーである。ネズミの眼を、実施例２８に記述されるようにアルカリで処理して、ＴＤ１３９が網膜神経膠症を阻害するかどうか決定した。５０ｍＭのＴＤ１３９のある量（１０μｌ）を、アルカリ処理後に１４日間連続して、結膜下に注射した。対照被験体に、対照ＰＢＳビヒクルのみを結膜下に注入した。被験体を屠殺し、網膜を回収し、溶解緩衝液中に溶解させた。網膜細胞溶解物のウエスタンブロットにより、ＴＤ１３９は、ＰＢＳを投与された対照被験者と比較して、ＧＦＡＰの発現を減少させたことが観察された。図１８。ＴＤ１３９の投与は、眼内での網膜神経膠症（図１８）を減少させ、角膜の繊維症を減少させた（図１７Ａ−Ｃ）。
【０３５９】
上に記述されるように、ガレクチン阻害剤を含む組成物は、角膜と網膜の繊維症および神経膠症を含む眼の障害および疾患の処置での使用に有効であること、および傷ついたまたは病変の組織における新血管新生および血管増殖と同様に繊維症を阻害するのに有効であることが本明細書で示される。ガレクチンは異なる組織に広く分布しているので、１以上の特定のガレクチンを選択的に標的とし阻害するための、特定のピラノースベースの阻害剤の使用は、望まれない付随的な相互作用を最小化し一般的な視覚の処置を提供するという見通しを提供し、一方で、局所的な視覚の環境は、他の体内組織における腫瘍および疾患に適用されるガレクチンの調節または阻害による治療的な処置について予測する、いくつかの血管新生のおよび組織成長過程の詳細な組織学的観察を可能にする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１８】
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【配列表】
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