(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のポリペプチド融合パートナーおよび第２のポリペプチド融合パートナーを含む改善された生理活性を有する融合タンパク質であって、前記第１の融合パートナーは前記第２の融合パートナーにムチン−ドメインポリペプチドリンカーにより連結され、前記ムチン−ドメインポリペプチドリンカーは、ヒトＭＵＣ２０由来の２つのタンデム反復であり、前記融合タンパク質の生理活性は、ムチン−ドメインポリペプチドリンカーがない前記第１のポリペプチド融合パートナーと前記第２のポリペプチド融合パートナーの融合物と比べて改善され、前記融合タンパク質の改善された生理活性は、向上した標的の生物学的事象を阻害する活性であり、前記第１の融合パートナーは、ＩＬ１−Ｒａ、ｇｐ１３０、ＩＬ−６、エキセンディン−４、ｓＴＮＦＲ２、ＣＴＬＡ４、ＴＡＣＩ、ＬＦＡ、ＩＬ−１ＲＩ、ＩＬ−１ＲＡｃＰ、ＶＥＧＦ受容体、若しくはＧＬＰ−１、又は少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するその相同するアミノ酸配列のいずれかを含み、前記第２のポリペプチド融合パートナーは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、若しくはＩｇＤのＦｃ領域又は少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するその相同するアミノ酸配列のいずれかを含む、融合タンパク質。
【請求項２】
前記ムチン−ドメインポリペプチドリンカーは、配列番号１４又はアミノ酸レベルで少なくとも９０％の配列同一性を有するその相同するアミノ酸配列を含む少なくとも一つのタンデム反復配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
請求項１に記載の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む、単離核酸。
【請求項４】
請求項３に記載のポリヌクレオチド配列を含む発現ベクター。
【請求項５】
さらに、前記ポリヌクレオチド配列に作動可能に連結された組換え調節配列を含む、請求項４に記載の発現ベクター。
【請求項６】
請求項５に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項７】
請求項１に記載の融合タンパク質および少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む、組成物。
【請求項８】
２型糖尿病、血友病、好中球減少症、貧血、血小板減少症、関節リウマチ、クローン病、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、または変形性関節症を治療するための、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記第１の融合パートナーまたは前記第２の融合パートナーの少なくとも１つは循環置換された全長活性タンパク質、活性タンパク質の循環置換された断片または活性タンパク質の循環置換された配列変異体を含み、前記循環置換されたタンパク質、断片もしくは配列変異体は、天然活性タンパク質の少なくとも１つの生物活性を保持する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
前記第１の融合パートナーまたは前記第２の融合パートナーの少なくとも１つは、循環置換されたＩＬ−６（ｃｐＩＬ−６）を含む、請求項９に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
前記第１の融合パートナーはＩＬ１−Ｒａ、ＩＬ−６、若しくはｇｐ−１３０又は少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するその相同するアミノ酸配列のいずれかを含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
配列番号２の２４〜４５２のアミノ酸のアミノ酸配列又は少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するその相同するアミノ酸配列のいずれかを有する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１２年６月８日に出願された米国仮特許出願第６１／６５７，２８５号；２０１３年３月１３日に出願された６１／７７８，８１２号；２０１２年６月８日に出願された６１／６５７，２６４号；２０１３年３月１３日に出願された６１／７７８，５７５号；２０１２年６月８日に出願された６１／６５７，３７８号、２０１２年１１月６日に出願された６１／７２３，０８１号の恩典を主張する。上記出願の全教示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表
本出願は配列表を含み、これは、ＡＳＣＩＩフォーマットでＥＦＳ−Ｗｅｂを介して提出されており、その全体が本明細書で参照により組み込まれる。２０１３年５月３１日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、４０００．３０６０ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、サイズは３８，１４４バイトである。
【０００３】
【背景技術】
【０００４】
融合タンパク質の作成は、２つのタンパク質またはタンパク質のドメインのペプチドリンカーによる連結を含む。適切なリンカー配列の選択が重要であり、というのも、これは、得られた融合タンパク質の機能および物理的特性に影響し得るからである。しばしば可動性で親水性のリンカーが、ドメインの機能を過度に制約せず、よってこれを妨害しないように選択される。リンカーは、ドメインの距離および配向を制御するために使用することができる。生理活性タンパク質またはペプチドの融合しばしば、おそらく、融合パートナーの立体的妨害のために、生理活性の損失になる。加えて、Ｆｃ融合の場合、それらの二量体性質のために、異種タンパク質の２つのコピー間で妨害が起こり得る。
【０００５】
ムチンタンパク質およびタンパク質のムチン−ドメインは高度のグリコシル化を含み、構造的にムチンタンパク質およびムチンドメインを含む他のポリペプチドを補強ランダムコイルとして挙動させる。本発明は、一部には、この補強ランダムコイル構造は、かなりグリコシル化されたムチンドメインを構成する親水性分枝親水性炭水化物と組み合わされて、融合タンパク質におけるリンカーとして特に有用であるという発見に基づく。ムチンドメインの棒状性質は、生理活性タンパク質を融合パートナーから強固に分離することができ、よって、活性損失を受けにくくなる。Ｆｃ融合の場合、Ｆｃから離れた剛性突起により、対象となるタンパク質の各コピー間のより優れた分離が得られ、また、より大きな融合タンパク質がＦｃ融合物として発現可能になる。また、高レベルのグリコシル化のために、ムチンドメインの付加は、タンパク質の物理化学的特性、例えば活性タンパク質の電荷、溶解度およびの濃縮液の粘弾性特性を修飾する可能性を有する。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、第１のポリペプチド融合パートナーおよび第２のポリペプチド融合パートナーを含む、改善された生理活性を有する融合タンパク質を提供し、ここで、第１の融合パートナーは第２の融合パートナーにムチン−ドメインポリペプチドリンカーにより連結され、発明の融合タンパク質の生理活性はムチン−ドメインポリペプチドリンカーがない、第１のポリペプチド融合パートナーと第２のポリペプチド融合パートナーの融合物と比べて改善される。ムチン−ドメインポリペプチドリンカーはムチンドメインを含み、それは、潜在的グリコシル化部位がリッチであり、セリンおよび／またはスレオニンおよびプロリンの含有量が高く、これはムチンドメイン内の４０％超のアミノ酸に相当し、さらにグリカンのために、その質量の少なくとも約６０％を占めることができる。ムチンドメインポリペプチドリンカーは、タンデムアミノ酸反復単位（本明細書ではＴＲとも呼ばれる）を含むことができ、これは、約８アミノ酸〜１５０アミノ酸／各タンデム反復単位で、長さが変動し得る。タンデム反復単位の数は発明のムチン−ドメインポリペプチドリンカーにおいて１〜５の間で変動し得る。
【０００７】
ムチン−ドメインポリペプチドリンカーは、第１および第２のポリペプチド融合パートナーを強固に分離することができ、よって、一方の融合パートナーがもう一方の融合パートナーの生物活性を妨害する可能性を減少させる。ムチン−ポリペプチドリンカーの高レベルのグリコシル化は、タンパク質分解の保護を提供し、潜在的に融合パートナーの１つまたは両方の溶解度を増加させる。融合タンパク質がヒト治療薬である場合、ムチン−ドメインリンカーは、完全ヒト配列に由来することができ、高レベルのグリコシル化はまた、ヒトにおいて免疫原性となる危険を低減させる。融合パートナー間の所望の分離の程度は、ムチンドメインポリペプチドを含むタンデム反復の数を変化させることにより、融合タンパク質の最大活性を提供するようにカスタマイズすることができる。
【０００８】
ムチン−ドメインポリペプチドリンカーは、単独で、または追加の可動性リンカー配列と組み合わせて使用することができ、および、また、精製のためのタグを含み得る。ムチン−ドメインポリペプチドリンカーはまた、ムチン−ドメインポリペプチドリンカーを含まない融合タンパク質に比べて、改善された特性（例えば、薬物動態および／または物理化学的特性）を融合タンパク質に付与することができる。
【０００９】
ポリペプチドをコードする核酸およびポリペプチドを製造するための方法もまた、提供される。この発明の融合タンパク質は、宿主細胞を、融合物をコードする核酸で形質転換し、宿主細胞を培養し、および融合物を培養物から回収することにより、または、代わりに融合物をコードする核酸コンストラクトを生成させ、無細胞系合成によりポリペプチドを生成させることにより、製造することができ、この合成は転写および翻訳反応のカップリングを含み得る。融合タンパク質をコードするベクターおよびポリヌクレオチドもまた、提供される。
【００１０】
融合タンパク質は、精製し、患者への投与のために薬理学的に許容されるビヒクル中で製剤化することができる。発明の１つの実施形態では、融合タンパク質は免疫グロブリンの少なくとも１つのドメイン、例えば可変領域ドメイン；定常領域ドメイン；単鎖Ｆｖ断片；などを含む。そのような融合タンパク質は免疫学的に特異的な試薬として；例えば対象となるポリペプチドの血漿半減期を増加させる、またはタンパク質を特定の細胞型に標的させるために利用される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】基本コンストラクトおよびムチンリンカーを含むコンストラクトを示す図である。ＲＤＢ１８００はＩＬ−１Ｒａ＿Ｆｃ融合タンパク質であり、ＲＤＢ１８１９はＲＤＢ１８００に類似するが、ＩＬ−１ＲａとＦｃドメインの間に介在ムチン配列を含む。同様に、ＲＤＢ１６０１はｇｐ１３０（Ｄ１−Ｄ３）＿Ｆｃ融合タンパク質であり、ｇｐ１３０のＤ１〜Ｄ３ドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインに直接連結され、ＲＤＢ１６１３は、ｇｐ１３０（Ｄ１−Ｄ３）とＦｃドメインの間にムチン配列を含む。
【図２】ＨＥＫ−ｂｌｕｅ（商標）細胞アッセイにおけるＩＬ−１Ｒａ（●）、ＲＤＢ１８００（■）およびＲＤＢ１８１９（▲）によるＩＬ１βシグナル伝達の阻害を示す。ＩＣ５０の推定値が、図の右上隅で報告される。
【図３】ＲＤＢ１８００（薄い灰色）およびＲＤＢ１８１９（点線、濃い灰色）および分子サイズ標準（実線、濃い灰色）のゲル濾過クロマトグラムである。標準の分子量は、それらの溶出ピークの上方に列挙される。
【図４】炎症のマウスＣＡＩＡモデルにおけるＲＤＢ１８００およびＲＤＢ１８１９の単回２０ｍｇ／ｋｇ注射の阻害効果を示す図である。黒の矢印は、モノクローナル抗体カクテル（ｍＡｂ）ならびにＬＰＳおよび処置分子を用いた注射日を示す。足浮腫の％低減を、生理食塩水対照と比較して、各化合物に対して計算した。１０匹のマウスの群を各処置に対して使用した。
【図５】ＲＤＢ１６０１（●）およびＲＤＢ１６１３（▲）によるＭ１細胞のＩＬ−６に媒介される分化の阻害を示す。ＩＣ５０の推定値は表で報告される。
【図６】ＲＤＢ１５４２およびＲＤＢ１５６２によるＭ１細胞のＩＬ−６−に媒介される分化の阻害を示す。
【図７】ＲＤＢ１８４０およびＲＤＢ１８４１によるＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−１β細胞におけるＩＬ−１β依存性シグナル伝達を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
発明の好ましい実施形態の説明は下記の通りである。
【００１３】
定義
本明細書では、下記用語は、特に指定がない限り、それらに帰する意味を有する。
【００１４】
明細書および特許請求の範囲で使用されるように、単数形「１つの（ａ、ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈で明確に別記されない限り、複数の言及を含む。例えば、「１つの細胞」という用語は、それらの混合物を含む、複数の細胞を包含する。
【００１５】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は本明細書では同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマを示す。ポリマは直鎖または分枝であってもよく、修飾されたアミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸により中断されてもよい。その用語はまた、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または任意の他の操作、例えば標識成分とのコンジュゲーションにより、修飾されたアミノ酸ポリマを含む。
【００１６】
本明細書では、「アミノ酸」という用語は、天然および／または非天然または合成アミノ酸のいずれかを示し、例えば、限定はされないが、グリシンおよびＤまたはＬ両方の光学異性体、およびアミノ酸類似体およびペプチド模倣物が挙げられる。標準１または３文字コードがアミノ酸を指定するために使用される。
【００１７】
配列に適用され、本明細書で使用される「非天然起源の」という用語は、哺乳類において見出される野生型または天然起源の配列に対する対応物を有さず、これに相補的でなく、これと高度の相同性を有さないポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列を意味する。例えば、非天然起源のポリペプチドは、好適に整列させた場合、天然配列と比べると、９９％、９８％、９５％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％以下またはそれより少ないアミノ酸配列同一性を共有し得る。
【００１８】
「グリコシル化」および「グリコシル化された」という用語は、本明細書では同じ意味で使用され、タンパク質の炭水化物部分または細胞におけるそれらの産生中に糖類が翻訳後にタンパク質に付着され、糖タンパク質が形成されるプロセスを意味する。タンパク質のＯ結合型グリコシル化は、翻訳後イベントであり、グリカンのセリンおよびスレオニンへ、より少ない程度にヒドロキシプロリンおよびヒドロキシリジンへの付着を意味する。
【００１９】
「断片」は、少なくとも治療および／または生物活性の部分を保持する天然活性タンパク質の切断型である。「変異体」は少なくとも、活性タンパク質の治療および／または生物活性の部分を保持する、天然活性タンパク質に対し配列相同性を有するタンパク質である。例えば、変異タンパク質は参照活性タンパク質と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一性を共有し得る。本明細書では、「活性タンパク質部分」という用語は、計画的に、例えば、部位特異的突然変異誘発、挿入により、または偶発的に突然変異により修飾されたタンパク質を含む。
【００２０】
「宿主細胞」は、個々の細胞または細胞培養物を含み、これらは、対象ベクターのためのレシピエントになり得る、またはそうであった。宿主細胞は、単一の宿主細胞の後代を含む。後代は、天然、偶発的、または計画的突然変異のために、元の親細胞と必ずし完全に同一でなくてもよい（全ＤＮＡ相補体の形態またはゲノムにおいて）。宿主細胞は、インビボでこの発明のベクターにてトランスフェクトされた細胞を含む。
【００２１】
「単離された」は、本明細書で開示される様々なポリペプチドを説明するために使用される場合、同定され、ならびにその自然環境の成分から分離および／または回収されたポリペプチドを意味する。その自然環境の汚染物質成分は、典型的に、ポリペプチドに対する診断的または治療的使用を妨害する材料であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が挙げられる。当業者に明らかなように、非天然起源のポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、またはその断片は、これをその天然起源の対応物から識別するために「単離」を必要としない。加えて、「濃縮された」、「分離された」または「希釈された」ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、またはその断片は、１体積あたりの濃度または分子数が一般に、その天然起源の対応物のものよりも大きいという点で、その天然起源の対応物から識別可能である。一般に、組換え手段により作られ、宿主細胞で発現されたポリペプチドは、「単離された」と考えられる。
【００２２】
「単離された」ポリヌクレオチドもしくはポリペプチドコード核酸または他のポリペプチドコード核酸は、同定され、ポリペプチドコード核酸の自然源において通常、関連する少なくとも１つの汚染物質核酸分子から分離された核酸分子である。単離されたポリペプチドコード核酸分子は、自然で見出される形態または設定以外である。そのため、単離されたポリペプチドコード核酸分子は、特定のポリペプチドコード核酸分子から、それは天然細胞中に存在するために、識別される。しかしながら、単離されたポリペプチドコード核酸分子は、通常、ポリペプチドを発現する細胞中に含まれるポリペプチドコード核酸分子を含み、ここで、例えば、核酸分子は、天然細胞のものとは異なる染色体または染色体外の位置に存在する。
【００２３】
「コンジュゲートされた」、「連結された」「融合された」および「融合」は本明細書では同じ意味で使用される。これらの用語は、化学的コンジュゲーションまたは組換え手段を含む何の手段によってでも、２を超える化学要素または成分を結合させることを示す。例えば、プロモーターまたはエンハンサーは、それが配列の転写に影響する場合、コード配列に作動可能に連結される。一般に、「作動可能に連結された」は、連結されるＤＮＡ配列が、近接しており、読み相またはインフレーム内にあることを意味する。「インフレーム融合」は、元のＯＲＦの正確な読み枠を維持する様式で、２つ以上の翻訳領域（ＯＲＦ）を結合させ、連続するより長いＯＲＦを形成することを示す。よって、得られた組換え融合タンパク質は、元のＯＲＦによりコードされるポリペプチドに対応する２つ以上のセグメントを含む単一タンパク質である（それらのセグメントは通常、自然でそのように結合されない）。
【００２４】
ポリペプチドとの関連で、「直線配列」または「配列」は、アミノ末端からカルボキシル末端方向でのポリペプチド中のアミノ酸の順序であり、この場合、配列中の互いに隣接する残基は、ポリペプチドの一次構造では近接する。「部分配列」は、１つまたは両方方向に追加の残基を含むことが知られているポリペプチドの一部の直線配列である。
【００２５】
「異種」は、比較される実体の残りと遺伝子型で区別可能な実体に由来することを意味する。例えば、その天然コード配列から取り出され、天然配列以外のコード配列に動作可能に連結されたグリシンリッチ配列は異種グリシンリッチ配列である。「異種」という用語は、ポリヌクレオチド、ポリペプチドに適用された場合、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは比較される実体の残りと遺伝子型で区別可能な実体に由来することを意味する。
【００２６】
「ポリヌクレオチド」、「核酸」、「ヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」という用語は同じ意味で使用される。それらは、任意の長さのヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド、またはその類似体のいずれかのポリマ形態を示す。ポリヌクレオチドは任意の３次元構造を有することができ、知られていようが、あるいはいまいが関係なく、任意の機能を実施することができる。下記は、ポリヌクレオチドの非限定的な例である：遺伝子または遺伝子断片のコードもしくは非コード領域、連鎖解析により規定される座位（複数または単数）、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離されたＤＮＡ、任意の配列の単離されたＲＮＡ、核酸プローブ、およびプライマー。ポリヌクレオチドは修飾ヌクレオチド、例えばメチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体を含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾は、ポリマの構築前または後に付与することができる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分により中断され得る。ポリヌクレオチドは、重合後、例えば、とのコンジュゲーションによりさらに修飾され得る。
【００２７】
「組換え」は、ポリヌクレオチドに適用された場合、ポリヌクレオチドは、インビトロクローニング、制限および／またはライゲーション工程の様々な組み合わせ、および宿主細胞において潜在的に発現され得るコンストラクトが得られる他の手順の産物であることを意味する。
【００２８】
「遺伝子」または「遺伝子断片」という用語は本明細書では同じ意味で使用される。それらは、転写および翻訳後に、特定のタンパク質をコードすることができる少なくとも１つの翻訳領域を含むポリヌクレオチドを意味する。遺伝子または遺伝子断片は、ポリヌクレオチドが少なくとも１つの翻訳領域（全コード領域またはそのセグメントをカバーし得る）を含む限り、ゲノムまたはｃＤＮＡであってもよい。「融合遺伝子」は、共に連結された少なくとも２つの異種ポリヌクレオチドから構成される遺伝子である。
【００２９】
「相同性」または「相同」は２つ以上のポリヌクレオチド配列または２つ以上のポリペプチド配列間の配列類似性または互換性を示す。ＢｅｓｔＦｉｔなどのプログラムを使用して、２つの異なるアミノ酸配列間の配列同一性、類似性または相同性を決定する場合、デフォルト設定を使用してもよく、または適切なスコアリングマトリクス、例えばｂｌｏｓｕｍ４５またはｂｌｏｓｕｍ８０を選択して、同一性、類似性または相同性スコアを最適化してもよい。好ましくは、相同なポリヌクレオチドは、本明細書で規定されるストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、それらの配列に対し少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは９５％、より好ましくは９７％、より好ましくは９８％、およびさらにより好ましくは９９％の配列同一性を有するものである。
【００３０】
「ストリンジェントな条件」または「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」という用語は、ポリヌクレオチドがその標的配列に、他の配列よりも検出可能に大きな程度まで（例えば、バックグラウンドの少なくとも２倍）ハイブリダイズする条件への言及を含む。一般に、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、一部には、洗浄工程が実施される温度および塩濃度に関して表される。典型的に、ストリンジェントな条件は、塩濃度がｐＨ７．０〜８．３で約１．５Ｍ  Ｎａイオン未満、典型的に約０．０１〜１．０Ｍ  Ｎａイオン濃度（または他の塩）であり、温度が短いポリヌクレオチド（例えば、１０〜５０ヌクレオチド）では少なくとも約３０℃、および長いポリヌクレオチド（例えば、５０ヌクレオチド超）では少なくとも約６０℃であるものであり、例えば、「ストリンジェントな条件」は、５０％ホルムアミド、１Ｍ  ＮａＣｌ、１％  ＳＤＳ中、３７℃でのハイブリダイゼーション、および１５ｍｉｎの間、各々、０．１×ＳＳＣ／１％ＳＤＳ中、６０〜６５℃での３回の洗浄を含み得る。あるいは、約６５℃、６０℃、５５℃、または４２℃の温度が使用され得る。ＳＳＣ濃度は約０．１〜２×ＳＳＣで変動する可能性があり、ＳＤＳは約０．１％で存在する。そのような洗浄温度は典型的には、規定されたイオン強度およびｐＨでの特定の配列に対する熱融点よりも約５℃〜２０℃低くなるように選択される。Ｔｍは標的配列の５０％が、完全にマッチするプローブにハイブリダイズする、（規定されたイオン強度およびｐＨでの）温度である。核酸ハイブリダイゼーションのためのＴｍおよび条件を計算するための式はよく知られており、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  Ｖｏｌ．  １−３，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ  Ｎ．Ｙ．において見出すことができ；特定的には、Ｖｏｌｕｍｅ  ２およびＣｈａｐｔｅｒ  ９を参照されたい。典型的に、ブロッキング試薬を使用して、非特異的ハイブリダイゼーションをブロックする。そのようなブロッキング試薬としては、例えば、約１００−２００μｇ／ｍｌのせん断および変性サケ精子ＤＮＡが挙げられる。約３５−５０％ｖ／ｖの濃度の有機溶媒、例えばホルムアミドもまた、特定の状況下で、例えば、ＲＮＡ：ＤＮＡハイブリダイゼーションのために使用され得る。洗浄条件に関するこれらの有用な変化は当業者には容易に明らかとなるであろう。
【００３１】
「パーセント同一性」および「％同一性」という用語は、ポリヌクレオチド配列に適用される場合、標準化アルゴリズムを使用して整列させた少なくとも２つのポリヌクレオチド配列間の残基マッチのパーセンテージを示す。そのようなアルゴリズムは、標準化された再現性様式で、比較される配列中にギャップを挿入することができ、２つの配列間の整列を最適化し、よって、２つの配列のより意味ある比較を達成することができる。パーセント同一性は、例えば、特定のＳＥＱ  ＩＤ番号により全規定ポリヌクレオチド配列の長さにわたって測定することができ、または、より短い長さにわたって、例えば、より大きな、規定されるポリヌクレオチド配列から取られた断片、例えば、少なくとも４５、少なくとも６０、少なくとも９０、少なくとも１２０、少なくとも１５０、少なくとも２１０または少なくとも４５０の近接残基の断片の長さにわたって測定することができる。そのような長さは例示にすぎず、本明細書で、表、図または配列表において示される配列によりサポートされる任意の断片長が、パーセンテージ同一性を測定することができる長さを説明するのに使用され得ることが理解される。
【００３２】
「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、本明細書で同定されるポリペプチド配列に関しては、最大パーセント配列同一性を達成するために、配列を整列させ、必要に応じて、ギャップを挿入した後、配列同一性の一部としていずれの保存的置換も考慮せずに、第２の、参照ポリペプチド配列またはその一部のアミノ酸残基と同一である、問い合わせ配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして規定される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するための整列は、当技術分野における技術の範囲内にある様々な様式で、例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、整列を測定するために適切なパラメータを決定することができ、比較される配列の全長にわたって最大整列を達成するのに必要とされる任意のアルゴリズムが挙げられる。パーセント同一性は、例えば、特定のＳＥＱ  ＩＤ番号により規定される、全規定ポリペプチド配列の長さにわたって測定することができ、または、より短い長さにわたって、例えば、より大きな、規定されるポリペプチド配列から取られた断片、例えば、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７０または少なくとも１５０の近接残基の断片の長さにわたって測定することができる。そのような長さは例示にすぎず、本明細書で、表、図または配列表において示される配列によりサポートされる任意の断片長が、パーセンテージ同一性を測定することができる長さを説明するのに使用され得ることが理解される。
【００３３】
「ベクター」は、好ましくは適切な宿主において自己複製する核酸分子であり、これは、挿入された核酸分子を宿主細胞中および／または間に移行させる。この用語は、主としてＤＮＡまたはＲＮＡの細胞への挿入のために機能するベクター、主としてＤＮＡまたはＲＮＡの複製のために機能するベクターの複製、およびＤＮＡまたはＲＮＡの転写および／または翻訳のために機能する発現ベクターを含む。上記機能の２つ以上を提供するベクターもまた、含まれる。「発現ベクター」は、適切な宿主細胞に導入された場合、転写され、およびポリペプチド（複数可）に翻訳され得るポリヌクレオチドである。「発現系」は通常、所望の発現産物を得るように機能することができる発現ベクターを含む好適な宿主細胞を暗示する。
【００３４】
「分解抵抗性」は、ポリペプチドに適用される場合、ポリペプチドが、血液またはその成分（典型的には血清または血漿中のプロテアーゼを含む）中、またはタンパク質のための貯蔵または送達ビヒクルとして意図される製剤内での分解に耐える能力を示す。分解抵抗性は、タンパク質をヒト（または必要に応じて、マウス、ラット、サル）血液、血清、血漿、または製剤と、典型的には数日（例えば０．２５、０．５、１、２、４、８、１６日）の範囲の間、−８０℃、−２０℃、０℃、４℃、２５℃、および３７℃などの特定の温度で組み合わせることにより測定することができる。試料中の無傷のタンパク質はその後、標準タンパク質定量技術により測定される。タンパク質の５０％が分解された時間点を、タンパク質の「分解半減期」とする。
【００３５】
「半減期」という用語は、典型的には、薬物の血漿濃度が半分だけ低減されるのに必要とされる時間を示す。「半減期」、「ｔ１／２」、「排出半減期」および「循環半減期」という用語は本明細書では同じ意味で使用される。
【００３６】
「見かけの分子量」は、特定のアミノ酸配列に示される見かけの分子量の相対増加または減少の測定値を示す用語である。見かけの分子量はサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）および同様の方法を用いて球状タンパク質標準と比較して決定され、「見かけのｋＤ」単位で測定される。
【００３７】
「流体力学半径」は、拡散特性から計算される溶液中の分子の見かけの半径（ｎｍで表したＲｈ）である。タンパク質の「流体力学半径」は、水溶液中でのその拡散速度ならびに、巨大分子のゲルで移動するその能力に影響する。タンパク質の流体力学半径はその分子量により、ならびに、形状および緻密度を含むその構造、およびその水和状態により影響される。流体力学半径を決定するための方法は当技術分野でよく知られており、例えば、ＤＬＳおよびサイズ排除クロマトグラフィーを使用するものである。ほとんどのタンパク質は球状構造を有し、これは、タンパク質が有することができる最も緻密な３次元構造であり、流体力学半径が最も小さい。いくつかのタンパク質はランダムで開いた、不定形の、あるいは「直線」構造を採用し、その結果、同様の分子量の典型的な球状タンパク質に比べてずっと大きな流体力学半径を有する。
【００３８】
「生理的条件」は、生体宿主における条件の組ならびにインビトロ条件を示し、生体被験体のそれらの条件を模倣する温度、塩濃度、ｐＨを含む。インビトロアッセイにおいて使用するために多くの生理的に適切な条件が確立されている。一般に、生理的緩衝液は、生理的濃度の塩を含み、約６．５〜約７．８、好ましくは約７．０〜約７．５の範囲の中性ｐＨに調整される。様々な生理的緩衝液がＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）に列挙される。生理的に適切な温度は約２５℃〜約３８℃、好ましくは約３５℃〜約３７℃の範囲である。
【００３９】
「放出制御剤」、「持続放出剤」、「デポー製剤」または「徐放剤」は同じ意味で使用され、ポリペプチドが薬剤なしで投与された場合の放出持続期間に対し、発明のポリペプチドの放出持続期間を延長することができる薬剤を示す。
【００４０】
「アンタゴニスト」という用語は、本明細書では、本明細書で開示される天然ポリペプチドの生物活性を部分的にまたは完全にブロックする、阻害する、または中和する任意の分子を含む。ポリペプチドのアンタゴニストを同定するための方法は、天然ポリペプチドを候補アンタゴニスト分子と接触させること、および、天然ポリペプチドと通常関連する１つ以上の生物活性における検出可能な変化を測定することを含み得る。本発明との関連で、アンタゴニストはタンパク質、核酸、炭水化物、抗体または活性タンパク質の効果を減少させる任意の他の分子を含み得る。
【００４１】
「アゴニスト」という用語は最も広い意味で使用され、本明細書で開示される天然ポリペプチドの生物活性を模倣する任意の分子を含む。好適なアゴニスト分子としては特定的には、アゴニスト抗体または抗体断片、天然ポリペプチドの断片またはアミノ酸配列変異体、ペプチド、小有機分子、などが挙げられる。天然ポリペプチドのアゴニストを同定するための方法は、天然ポリペプチドを候補アゴニスト分子と接触させること、および、天然ポリペプチドと通常関連する１つ以上の生物活性における検出可能な変化を測定することを含み得る。
【００４２】
「活性」は本明細書における目的のために、対応する天然活性タンパク質のものと一致する、融合タンパク質の成分の作用または効果を示し、ここで「生物活性」または「生理活性」は本明細書では同じ意味で使用され、インビトロまたはインビボ生物学的機能または効果を示し、限定はされないが、受容体結合、アンタゴニスト活性、アゴニスト活性、または細胞もしくは生理的応答が挙げられる。
【００４３】
本明細書では、「治療」もしくは「治療する」または「緩和する」もしくは「寛解させる」は本明細書では同じ意味で使用される。これらの用語は、有益なまたは所望の結果、例えば、限定はされないが、治療効果および／または予防的利益を得るためのアプローチを示す。治療効果により、治療される基礎疾患の根絶または寛解が意味される。また、治療効果は、基礎疾患と関連する１つ以上の生理的症状の根絶または寛解（よって、被験体が依然として、基礎疾患に苦しんでいるにもかかわらず、被験体において改善が観察される）により達成される。予防的利益のために、組成物は、特定の疾患を発症する危険のある被験体、または疾患の１つ以上の生理的症状を報告している被験体に、この疾患の診断がなされていないにも関わらず、投与され得る。
【００４４】
「治療効果」は、本明細書では、活性タンパク質が持つ抗原エピトープに対する抗体の産生を誘導する能力以外の、発明の融合タンパク質により引き起こされる、生理的効果、例えば、限定はされないが、ヒトまたは他の動物における疾患の治癒、緩和、寛解、または防止、あるいは、そうでなければ、ヒトまたは動物の身体的または精神的幸せを増強させることを示す。治療的有効量の決定は、とりわけ本明細書で提供される詳細な開示を考慮すると、十分当業者の能力の範囲内である。
【００４５】
「治療的有効量」および「治療的有効用量」という用語は、本明細書では、被験体に１回または反復投与で投与した場合に、疾患状態または病状の任意の症状、側面、測定されるパラメータまたは特性に対して任意の検出可能な、有益な効果を有することができる、単独、または融合タンパク質組成物の一部のいずれかとしての活性タンパク質の量を示す。そのような効果は、有益であるために絶対的である必要はない。
【００４６】
「治療的有効用量レジメン」という用語は、本明細書では、単独、または融合タンパク質組成物の一部のいずれかとしての活性タンパク質の継続投与される用量のためのスケジュールを示し、ここで、用量は、治療的有効量で与えられ、疾患状態または病状の任意の症状、側面、測定されるパラメータまたは特性に対する持続性の有益な効果が得られる。
【００４７】
融合タンパク質
様々な態様では、本発明は、第２のポリペプチド融合パートナーに、ムチン−ドメインポリペプチドリンカーにより連結された第１のポリペプチド融合パートナーを含む融合タンパク質を提供する。本明細書では、「融合タンパク質」または「融合ポリペプチド」という用語または本明細書における文法的等価物は、複数のタンパク質成分（典型的にはそれらの天然状態では結合されていないが、それらの個々のアミノおよびカルボキシル末端により発明のムチン−ドメインポリペプチドリンカーを介して結合される）からなるタンパク質を示すことを意味する。「タンパク質」は、この状況では、タンパク質、ポリペプチドおよびペプチドを含む。複数は、この状況では少なくとも２つを意味し、好ましい実施形態は一般に、発明によるムチン−ドメインポリペプチドリンカーを介して結合された第１および第２のポリペプチド融合パートナーを使用する。
【００４８】
第１および第２のポリペプチド融合パートナーの少なくとも１つまたは両方は、その用語が本明細書で規定されるように、活性タンパク質および／または治療活性タンパク質である。１つの実施形態では、ポリペプチド融合パートナーの少なくとも１つの治療／生物活性は、他の融合パートナーに発明によるムチン−ドメインポリペプチドリンカーを介して連結された場合、発明によるムチン−ドメインポリペプチドリンカーを介して連結されていない同じポリペプチド融合パートナーと比べて改善される。
【００４９】
ムチンタンパク質およびタンパク質のムチン−ドメインは、高度のグリコシル化を含み、これにより、構造的に、ムチンタンパク質およびムチンドメインを含む他のポリペプチドは補強ランダムコイルとして挙動できるようになる。そのようなものとして、ムチンドメインは、様々な膜に固定された接着分子および受容体（例えば、限定はされないがＬＤＬ受容体、ＣＤ１６４、エンドシアリン、フラクタルカイン、セレクチン、ＴＩＭ（膜貫通Ｉｇムチン）ファミリータンパク質）中に存在し、ここで、それらの機能は最適な相互作用のために細胞表面から「活性」ドメインを延長させることである（Ｆｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，  ２７５（６），  （２０００））。類推によって、補強ランダムコイル構造は、かなりグリコシル化されたムチンドメインを構成する親水性分枝親水性炭水化物と組み合わされて、２つの融合パートナー間の分離の長さおよび強剛性を制御することに関して、２つの融合パートナー間の分離を制御するために特に有用となり得る。
【００５０】
加えて、ムチン−ドメインポリペプチドリンカーのかなりグリコシル化されたムチンドメインを構成する親水性分枝親水性炭水化物は、付加された分子量に基づき単独で予期されるものを超えて、融合タンパク質の流体力学半径を増加させるのに望ましい。流体力学におけるそのような増加は、融合タンパク質に望ましい品質、例えば、例として、治療融合タンパク質の血清半減期の増加を付与する。
【００５１】
ムチンドメインポリペプチドリンカーの付加により提供される高レベルのグリコシル化はまた、タンパク質の物理化学的特性、例えば活性タンパク質の電荷、溶解度および濃縮液の粘弾性特性を改変させる可能性を有する。
【００５２】
１つの融合タンパク質設計は、第１のポリペプチド融合パートナーの結合領域（複数可）を発明のリンカーを介して、免疫グロブリンの全てまたは一部である第２のポリペプチド融合パートナーと組み合わせることである。一般に、この用語が明細書で使用されるように、「免疫グロブリン」または「免疫グロブリンドメイン」は、全ての起源（例えば、ヒト、齧歯類、ウサギ、雌ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、他の哺乳類、ニワトリ、シチメンチョウ、エミュー、他のトリ、など）由来の全ての型の免疫グロブリン（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、など）を含むことが意図される。発明の融合タンパク質がヒトを治療するために使用される場合、ヒト由来の免疫グロブリンが好ましい。
【００５３】
１つの実施形態では、１つ以上の免疫グロブリン融合パートナーは、免疫グロブリン重鎖のヒンジおよびＦｃ領域を含む。典型的には、そのようなＮ末端融合では、コードされた融合ポリペプチドは、免疫グロブリン重鎖の定常領域の少なくとも機能的に活性なヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを保持するであろう。融合はまた、定常ドメインのＦｃ部分のＣ末端に、または重鎖のＣＨ１のＮ末端もしくは軽鎖の対応する領域に接して作られる。
【００５４】
融合が作られる正確な部位は重要ではなく；特定の部位がよく知られており、融合タンパク質の生物活性、分泌または結合特性を最適化するように選択され得る。いくつかの実施形態では、発明の融合タンパク質はモノマ、ヘテロまたはホモ多量体として、特に当技術分野で知られている二量体または四量体として、構築される。免疫グロブリン軽鎖の存在は要求されないが、免疫グロブリン軽鎖は、ポリペプチドに共有結合されまたは直接融合されて存在し得る。
【００５５】
１つの実施形態では、融合パートナーは血清アルブミンまたは血清アルブミンのドメインを含む。発明の融合タンパク質がヒトを治療するために使用される場合ヒト血清アルブミンが好ましい。別の実施形態では、融合パートナーはヒトトランスフェリンを含む。
【００５６】
ムチン−ドメインポリペプチドリンカーがない、活性タンパク質の同じ融合物と比べて、融合タンパク質の生理活性の増加が求められる融合タンパク質が特に興味深い。ムチン−ドメインポリペプチドリンカーがない、活性タンパク質の同じ融合物と比べて、血清半減期などの薬物動態パラメータの増加、溶解度の増加、安定性の増加、またはいくつかの他の医薬特性の増強が求められる融合タンパク質もまた、興味深い。
【００５７】
機能特性または生物および薬理活性および結果として得られるパラメータを含む、本発明の融合タンパク質組成物の活性は、所望の特性を測定するための、当技術分野で知られている任意の好適なアッセイにより決定され得る。融合タンパク質の活性および構造は本明細書で記載されるアッセイ、実施例のアッセイにより、あるいは当技術分野で知られている方法により、測定することができ、発明の融合タンパク質の半減期、溶解度、構造および生物活性の保持、ならびに、発明の融合タンパク質でない活性タンパク質との比較が確認される。生物活性（効力）定量アッセイとしては、インビトロ結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴、熱シフトアッセイ、ＮＭＲ、沈降、シンチレーション近接、ＦＲＥＴ、蛍光偏光測定）、インビトロ細胞アッセイ（例えば、レポーター遺伝子、リン酸化、細胞分化、細胞増殖または生存率、酵素相補性、細胞標識）、およびインビボ薬理学的活性（疾患の動物モデルを含む）によるものが挙げられるが、それらに限定されない。
【００５８】
発明の融合タンパク質は標準発現手段により、さらになるコンジュゲーションおよび精製工程の必要なく生成され得る。ムチン−ドメインポリペプチドリンカーは、融合パートナーのＮまたはＣ末端のいずれかを介して融合パートナーの１つまたは両方に連結され得る。ムチン−ドメインポリペプチドライナーは、嵩が減少し、生理活性への影響のリスクが低減された単量体、非球状タンパク質であるという点で、他の融合パートナーよりも構造的に制限的ではない。
【００５９】
融合タンパク質という場合、「連結された」または「融合された」または「融合」という用語は、ムチン−ドメインポリペプチドリンカーとポリペプチド融合パートナーが細胞内で単一ポリペプチドとして、ムチン−ドメインポリペプチドのＯ結合型グリコシル化を可能にし、活性タンパク質の活性を維持するように、発現されることを示すことが意図される。
【００６０】
発明の融合タンパク質は、標準組換えＤＮＡ技術により生成させることができる。例えば、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡ断片が従来の技術にしたがい、例えば、ライゲーションのための平滑末端またはねじれ型末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、必要に応じて付着末端の充填、望ましくない結合を避けるためのアルカリホスファターゼ処理、および酵素ライゲーションを使用することにより、インフレームで一緒にライゲートされる。別の実施形態では、融合遺伝子は、自動化ＤＮＡ合成機を含む、従来の技術により合成することができる。あるいは、遺伝子断片のＰＣＲ増幅は、２つの連続遺伝子断片の間で相補的オーバーハングを生じさせるアンカープライマーを使用して実施することができ、それらはその後、アニールし、再増幅させることができ、キメラ遺伝子配列が生成される（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．  （ｅｄｓ．）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  １９９２を参照されたい）。多くの発現ベクターが融合部分を助けるために市販されており、以下で、より詳細に記載される。
【００６１】
ムチン−ドメインポリペプチドリンカー
「ムチン−ドメインポリペプチドリンカー」は、１つ以上の融合ポリペプチドパートナーに連結され得る「ムチンドメイン」を含む、任意のタンパク質として本明細書で規定される。ムチンドメインは潜在的グリコシル化部位がリッチであり、セリンおよび／またはスレオニンおよびプロリンの含有量が高く、それらはムチンドメイン内の４０％超のアミノ酸に相当する。ムチンドメインは、主にＯ結合型グリカンによりかなりグリコシル化される。ムチン−ドメインポリペプチドは、グリカンによりその質量の少なくとも約６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％を有する。ムチンドメインは、約８アミノ酸〜１５０アミノ酸／各タンデム反復単位で、長さが変動し得るタンデムアミノ酸反復単位（本明細書ではＴＲとも呼ばれる）を含み得る。タンデム反復単位の数は発明のムチン−ドメインポリペプチドにおいて１〜２５の間で変動し得る。
【００６２】
発明のムチン−ドメインポリペプチドリンカーとしてはムチンタンパク質の全てまたは一部が挙げられるが、それらに限定されない。「その一部」はムチンポリペプチドリンカーが、ムチンタンパク質の少なくとも１つのムチンドメインを含むことを意味する。ムチンタンパク質は、ＭＵＣ遺伝子（例えば、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３Ａ、ＭＵＣ３Ｂ、ＭＵＣ４、ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ６、ＭＵＣ７、ＭＵＣ８、ＭＵＣ９、ＭＵＣ１１、ＭＵＣ１２、ＭＵＣ１３、ＭＵＣ１５、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１７、ＭＵＣ１９、ＭＵＣ２０、ＭＵＣ２１）によりコードされる任意のタンパク質を含む。ムチンタンパク質のムチンドメインは典型的にはどちらかの側で非反復アミノ酸領域と隣接している。ムチン−ドメインポリペプチドは、ムチンタンパク質（例えばＭＵＣ２０）の全てまたは一部を含み得る。ムチン−ドメインポリペプチドは、可溶性ムチンタンパク質のムチンタンパク質の全てまたは一部を含み得る。好ましくは、ムチン−ドメインポリペプチドはムチンタンパク質の細胞外部分を含む。
【００６３】
ムチンドメインポリペプチドはまた、ムチンドメインを含むが、ＭＵＣ遺伝子によりコードされないタンパク質の全てまたは一部を含み得る。ＭＵＣ遺伝子によりコードされないが、ムチンドメインを含むそのような天然起源のタンパク質としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：膜に固定されたタンパク質、例えば膜貫通免疫グロブリンおよびムチンドメイン（ＴＩＭ）ファミリータンパク質、フラクタルカイン（ニューロタクチン）、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド１（ＰＳＧＬ−１、ＣＤ１６２）、ＣＤ３４、ＣＤ４３（ロイコシアリン、シアロホリン）、ＣＤ４５、ＣＤ６８、ＣＤ９６、ＣＤ１６４、ＧｌｙＣＡＭ−１、ＭＡｄＣＡＭ、Ｅ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、赤血球グリコホリン、グリコカリシン、グリコホリン、ＬＤＬ−Ｒ、ＺＰ３、エンドシアリン、崩壊促進因子（ｄａｆ、ＣＤ５５）、ポドカリキシン、エンドグリカン、α−ジストログリカン、ニューロファシン、ＥＭＲ１、ＥＭＲ２、ＥＭＲ３、ＥＭＲ４、ＥＴＬおよびエピグリカニン。
【００６４】
ムチン−ドメインポリペプチドリンカーはまた、本明細書で規定されるムチンドメインを有する非天然起源のポリペプチドを含み得る。１つの実施形態では、ムチン−ドメインポリペプチドは、発明によるムチンドメインを含むように新たに設計される。
【００６５】
１つの実施形態では、ムチン−ドメインポリペプチドリンカーはα１，３，ガラクトシルトランスフェラーゼまたはβ１，６−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼによりグリコシル化されない。１つの実施形態では、融合タンパク質はαＧａｌに特異的な抗体に結合しない。１つの実施形態では、発明の融合タンパク質はＧａｌα１，３Ｇａｌ特異抗体に結合しない。
【００６６】
１つの実施形態では、ムチンドメインポリペプチドリンカーはＰｒｏ、ＳｅｒおよびＴｈｒがリッチなタンデムアミノ酸反復のドメインを含む。この実施形態の１つの態様では、発明のムチン−ドメインポリペプチドリンカー内のタンデム反復単位の数は１〜２５の間である。好ましくは、ムチンドメインポリペプチドリンカー内のタンデム反復単位の数は２〜２０の間である。より好ましくは、ムチンドメインポリペプチド内のタンデム反復単位の数は少なくとも約４である。この実施形態のさらなる態様では、発明のムチンドメインポリペプチド内のセリンおよび／またはスレオニンおよびプロリン残基のパーセンテージは少なくとも１０％である。好ましくは、発明のムチンドメインポリペプチド内のセリンおよび／またはスレオニンおよびプロリン残基のパーセンテージは少なくとも２０％である。より好ましくは、発明のムチンドメインポリペプチド内のセリンおよび／またはスレオニンおよびプロリン残基のパーセンテージは３０％超である。この実施形態の最後の態様では、ムチンドメイン内の各タンデムアミノ酸反復単位は少なくとも８のアミノ酸により構成される。好ましくは、各単位は、少なくとも１６のアミノ酸から構成される。より好ましくは、各単位は、少なくとも１９のアミノ酸から構成され、各単位は約１９アミノ酸〜１５０アミノで、長さが変動し得る。
【００６７】
１つの実施形態では、ムチン−ドメインポリペプチドは、少なくとも４０％のセリン、スレオニン、およびプロリンを含有する少なくとも３２のアミノ酸を含む。１つの実施形態では、発明によるムチン−ドメインポリペプチドは、少なくとも８のアミノ酸の長さ／タンデム反復単位の、少なくとも２、４、８、１０または１２のタンデムアミノ酸反復単位を含む。タンデム反復単位の好ましいアミノ酸配列としては、表Ｉのものが挙げられるが、それらに限定されない。ムチン−ドメインポリペプチド、および／またはムチン−ドメインポリペプチドをコードする核酸は、当技術分野で知られており、ＧｅｎＢａｎｋなどの源から公的に入手可能であるタンパク質のムチン−ドメインコード配列を用いて作成することができる。
【表１】
0006322626.tif 000002
0006322626.tif 000003
ＭＵＣ８およびＭＵＣ９は省略されている；信頼できるデータなし
ＰＴＳ  プロリン／セリン／スレオニンリッチ配列
＊概算；ＴＲ数は、ほとんどの場合、範囲として報告される
＋  Ｕｎｉｐｒｏｔ番号
∞  ＴＲの数ｎは特定の領域では異なる
ＮＡ  公表なし
【００６８】
あるいは、ムチン−ドメインポリペプチドリンカーは野生型タンパク質の天然起源のムチン−ドメイン配列に突然変異を有する変異ムチン−ドメインポリペプチドとして提供される。例えば、変異ムチン−ドメインポリペプチドリンカーは、野生型ムチン−ドメインポリペプチドに比べ、追加のＯ結合型グリコシル化部位を含む。あるいは、変異ムチン−ドメインポリペプチドはアミノ酸配列突然変異を含み、これにより、野生型ムチン−ドメインポリペプチドと比べてセリン、スレオニンまたはプロリン残基の増加が得られる。あるいは、変異ムチン−ドメインポリペプチド配列は、付加された、または除去された荷電残基、例えば、限定はされないが、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、ヒスチジン、およびアルギニン（これらは特定のｐＨで分子のｐＩまたは電荷を変化させる）を含む。
【００６９】
活性タンパク質および治療活性タンパク質
本明細書では、「活性タンパク質」は、ポリペプチド融合パートナーに言及する場合、生物学的、治療、予防的、もしくは診断対象もしくは機能のタンパク質を意味し、および／または生物活性を媒介することができる。本明細書で使用される「治療活性タンパク質」は、ポリペプチド融合パートナーに言及する場合、被験体に投与されると、疾患、障害または病状を防止または寛解させることができるタンパク質である。好ましい実施形態では、発明による活性タンパク質または治療活性タンパク質は、血清アルブミン（またはその任意の断片）、免疫グロブリン分子、免疫グロブリンのＦｃドメイン、またはその任意の断片との融合物を示す。
【００７０】
発明の活性タンパク質は天然、全長タンパク質とすることができ、または循環置換された全長タンパク質とすることができ、または活性タンパク質の断片もしくは配列変異体とすることができ、または活性タンパク質の循環置換された断片もしくは循環置換された配列変異体とすることができ、これは、天然活性タンパク質の治療活性の少なくとも一部を保持する。１つの実施形態では、発明による活性タンパク質は、自然で見られるタンパク質に対応する配列を有する組換えポリペプチドとすることができる。別の実施形態では、活性タンパク質は、天然配列の配列変異体、断片、相同体、および模倣物、または天然配列の循環置換された配列変異体、断片、相同体、および模倣物とすることができ、天然活性タンパク質の生物活性の少なくとも一部を保持する。
【００７１】
活性タンパク質は、発明のポリペプチド融合パートナーに言及する場合、それ自体融合ポリペプチドとすることができる。１つの実施形態では、それ自体融合ポリペプチドである前記活性タンパク質は、２つ以上の天然、全長タンパク質、または２つ以上の循環置換された全長タンパク質、または２つ以上の活性タンパク質の断片もしくは配列変異体、または２つ以上の活性タンパク質の循環置換された断片もしくは循環置換された配列変異体を含む、融合ポリペプチドとすることができる。さらなる実施形態では、それ自体融合ポリペプチドである前記活性タンパク質は、天然全長タンパク質、全長の循環置換されたタンパク質、活性タンパク質の断片もしくは配列変異体、活性タンパク質の循環置換された断片もしくは循環置換された配列変異体の１つ以上の組み合わせを含む、融合ポリペプチドとすることができ、これは天然活性タンパク質の生物活性の少なくとも一部を保持する。別の実施形態では、それ自体発明による融合ポリペプチドである活性タンパク質は、自然で見られるタンパク質に対応する配列を有する組換え融合ポリペプチドを含むことができる。別の実施形態では、それ自体融合ポリペプチドである活性タンパク質は、天然配列の配列変異体、断片、相同体、および模倣物、または天然配列の循環置換された配列変異体、断片、相同体、および模倣物とすることができ、これは天然活性タンパク質の生物活性の少なくとも一部を保持する。
【００７２】
非限定的な例では、活性タンパク質は、天然活性タンパク質または天然活性タンパク質の変異体に対し、少なくとも約８０％の配列同一性、あるいは８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を示す配列とすることができる。そのようなタンパク質としては、下記が挙げられるが、それらに限定されない：生理活性ペプチド（例えば、ＧＬＰ−１、エキセンディン−４、オキシトシン、オピエートペプチド）、サイトカイン、成長因子、ケモカイン、リンホカイン、リガンド、受容体、ホルモン、酵素、抗体および抗体断片、ドメイン抗体、ナノボディ、単鎖抗体、改変抗体「代替足場」、例えばＤＡＲＰｉｎ、センチリン、アドネクチン、および成長因子。受容体の例としては、膜結合受容体の細胞外ドメイン（例えば、ＴＮＦＲＩ、ＴＮＦＲ２、ＶＥＧＦ受容体、ＩＬ−１Ｒ１、ＩＬ−１ＲＡｃＰ、ＩＬ−４受容体、ｈＧＨ受容体、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＩＬ−６Ｒα、ＦＧＦ受容体、サイトカイン受容体またはアクセサリータンパク質）、膜貫通ドメインから切断された可溶性受容体、「ダミー」または「デコイ」受容体（例えば、ＩＬ−１ＲＩＩ、ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＤｃＲ３）、および任意の化学的または遺伝子改変可溶性受容体が挙げられる。酵素の例としては、下記が挙げられる：活性化プロテインＣ、第ＶＩＩ因子、コラゲナーゼ；アガルシダーゼベータ；ドルナーゼアルファ；アルテプラーゼ；ペグ化−アスパラギナーゼ；アスパラギナーゼ；およびイミグルセラーゼ。特異的ポリペプチドまたはタンパク質の例としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）、インターフェロンガンマ誘導因子Ｉ（ＩＧＩＦ）、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、ＲＡＮＴＥＳ（ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｐｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，  ｎｏｒｍａｌ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｐｒｅｓｕｍａｂｌｙ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ）、マクロファージ炎症性タンパク質（例えば、ＭＩＰ−１−αおよびＭＩＰ−１−β、リーシュマニア伸長開始因子（ＬＥＩＦ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、成長因子、例えば、上皮成長因子（ＥＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子、（ＦＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン−２（ＮＴ−２）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、ニューロトロフィン−４（ＮＴ−４）、ニューロトロフィン−５（ＮＴ−５）、グリア細胞由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、ＴＮＦ  ＩＩ型受容体、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、インスリンおよび可溶性糖タンパク質、例えば、ｇｐ１２０およびｇｐ１６０糖タンパク質。ｇｐ１２０糖タンパク質はヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）外被タンパク質であり、���ｐ１６０糖タンパク質は、ｇｐ１２０糖タンパク質の公知の前駆体である。
【００７３】
１つの実施形態では、生物活性ポリペプチドはＧＬＰ−１である。別の実施形態では、生物活性ポリペプチドはネシリチド、ヒトＢ型ナトリウム利尿ペプチド（ｈＢＮＰ）である。さらに別の実施形態では、生物活性ポリペプチドはセクレチンであり、これは、２７のアミノ酸からなる天然起源のブタセクレチンと同一のアミノ酸配列から構成されるペプチドホルモンである。１つの実施形態では、生物活性ポリペプチドはエンフビルチド、直線３６−アミノ酸合成ポリペプチドであり、これは、ＨＩＶ−１のＣＤ４＋細胞との融合の阻害剤である。１つの実施形態では、生物活性ポリペプチドはビバリルジン、特異的で可逆な直接トロンビン阻害剤である。抗血友病因子（ＡＨＦ）は、活性ポリペプチドとして選択され得る。別の実施形態では、エリスロポエチンが生物活性ポリペプチドである。エリスロポエチンは組換えＤＮＡ技術により製造される、１６５アミノ酸糖タンパク質であり、内在性エリスロポエチンと同じ生物学的効果を有する。さらに別の実施形態では、生物活性ポリペプチドはレテプラーゼである。レテプラーゼはヒトｔＰＡのクリングル２およびプロテアーゼドメインを含む、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）の非グリコシル化欠失ムテインである。
【００７４】
１つの好ましい実施形態では、活性ポリペプチドは、アナキンラ（Ａｎａｋｉｒｎａ）、ヒトインターロイキン−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−ＩＲａ）の組換え、非グリコシル化形態である。１つの場合、アナキンラは、１５３のアミノ酸から構成され、１７．３キロダルトンの分子量を有する。これは、組換えＤＮＡ技術により大腸菌細菌発現系を用いて生成され得る。
【００７５】
ベカプレルミンもまた、活性ポリペプチドとして選択され得る。ベカプレルミンは、局所投与のための組換えヒト血小板由来増殖因子（ｒｈＰＤＧＦ−ＢＢ）である。ベカプレルミンは、組換えＤＮＡ技術により、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）のＢ鎖のための遺伝子の酵母株サッカロマイセス・セレビシエへの挿入により生成され得る。ベカプレルミンの１つの形態は、およそ２５ｋＤの分子量を有し、ジスルフィド結合により共に結合された２つの同一ポリペプチド鎖から構成されるホモ二量体である。活性ポリペプチドはオプレルベキンであってもよく、これは、エシェリキア・コリ（大腸菌）において組換えＤＮＡ技術により生成されるインターロイキン１１（ＩＬ−１１）の組換え形態である。１つの実施形態では、選択された生物活性ポリペプチドはおよそ１９，０００ダルトンの分子質量を有し、非グリコシル化である。ポリペプチドは１７７のアミノ酸の長さを有し、１７８のアミノ酸長さの天然ＩＬ−１１とは、アミノ末端プロリン残基の欠如という点においてのみ異なっており、これは、インビトロまたはインビボのいずれかで生理活性の測定可能な差とならないことが知られている。さらに別の実施形態は、生物活性ポリペプチドを提供し、これはグルカゴンであり、血糖を増加させ、胃腸管の平滑筋を弛緩させるヒトグルカゴンと同一のポリペプチドホルモンである。グルカゴンは、グルカゴンのための遺伝子の付加により遺伝子改変された大腸菌細菌の特別な非病原性実験室株において合成され得る。特定の実施形態では、グルカゴンは２９のアミノ酸残基を含み、３，４８３の分子量を有する単鎖ポリペプチドである。
【００７６】
Ｇ−ＣＳＦもまた、活性ポリペプチドとして選択され得る。組換え顆粒球−コロニー刺激因子またはＧ−ＣＳＦが、白血球の回復を刺激するために様々な化学療法治療後に使用される。
【００７７】
１つの実施形態では、生物活性ポリペプチドはインターフェロンアルファ（ＩＦＮα）とすることができる。化学的にＰＥＧ修飾されたインターフェロンアルファ２ａは、Ｃ型肝炎の治療のために臨床的に有効である。別の実施形態では、活性ポリペプチドはインターフェロンガンマとすることができる。
【００７８】
１つの実施形態では、ポリペプチド融合パートナーの生物活性ポリペプチドは循環置換されたＩＬ６とすることができる。好ましい実施形態では、ポリペプチド融合パートナーの生物活性ポリペプチドは、それ自体、循環置換されたＩＬ−６およびｇｐ１３０の置換されていないＤ１ドメインを含む融合ポリペプチドである。
【００７９】
追加の細胞タンパク質としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ｒ１、ＶＥＧＦ−Ｒ２、ＶＥＧＦ−Ｒ３、Ｈｅｒ−１、Ｈｅｒ−２、Ｈｅｒ−３、ＥＧＦ−１、ＥＧＦ−２、ＥＧＦ−３、Ａｌｐｈａ３、ｃＭｅｔ、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０Ｌ、ＬＦＡ−１、ｃ−Ｍｅｔ、ＩＣＯＳ、ＬＦＡ−１、ＩＬ−６、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＯＸ４０、ＩＬ−１ｂ、ＴＡＣＩ、ＩｇＥ、ＢＡＦＦ、またはＢＬｙｓ、ＴＰＯ−Ｒ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ２８、ＩＬ−１−Ｒ１、ＴＮＦα、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、補体受容体１、ＦＧＦａ、オステオポンチン、ビトロネクチン、エフリンＡ１−Ａ５、エフリンＢ１−Ｂ３、α−２−マクログロブリン、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＰＤＧＦ、ＴＧＦｂ、ＧＭＣＳＦ、ＳＣＦ、ｐ４０（ＩＬ１２／１Ｌ２３）、ＩＬ１ｂ、ＩＬ１ａ、ＩＬ１ｒａ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ８、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＩＬ２３、Ｆａｓ、ＦａｓＬ、Ｆｌｔ３リガンド、４１ＢＢ、ＡＣＥ、ＡＣＥ−２、ＫＧＦ、ＦＧＦ−７、ＳＣＦ、ネトリン１，２、ＩＦＮａ，ｂ，ｇ、カスパーゼ−２，３，７，８，１０、ＡＤＡＭ  Ｓ１，Ｓ５，８，９，１５，ＴＳ１，ＴＳ５；アディポネクチン、ＡＬＣＡＭ、ＡＬＫ−１、ＡＰＲＩＬ、アネキシンＶ、アンジオゲニン、アンフィレギュリン、アンジオポエチン−１，２，４、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂｃ１−２、ＢＡＣＥ−１、ＢＡＫ、ＢＣＡＭ、ＢＤＮＦ、ｂＮＧＦ、ｂＥＣＧＦ、ＢＭＰ２，３，４，５，６，７，８；ＣＲＰ、カドヘリン−６，８，１１；カテプシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｌ、Ｓ、Ｖ、Ｘ；ＣＤ１１ａ／ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−３、ＧＰ２ｂ３ａ、ＧＨ受容体、ＲＳＶ  Ｆタンパク質、ＩＬ−２３（ｐ４０、ｐ１９）、ＩＬ−１２、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ａ４Ｐ、１ａ４１３７、ＴＮＦ／リンホトキシン、ＩｇＥ、ＣＤ３、ＣＤ２０、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒ、ＢＬＹＳ／ＢＡＦＦ、ＩＬ−２Ｒ、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＣＤ３３、ＣＤ５２、ジゴキシン、Ｒｈｏ（Ｄ）、水痘、肝炎、ＣＭＶ、破傷風、ワクチニア、抗毒素、ボツリヌス、Ｔｒａｉｌ−Ｒ１、Ｔｒａｉｌ−Ｒ２、ｃＭｅｔ、ＴＮＦ−Ｒファミリー、例えばＬＡ  ＮＧＦ−Ｒ、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ９５、リンホトキシンａ／ｂ受容体、Ｗｓｌ−１、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＢＡＦＦ、ＢＡＦＦ−Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＴＲＡＩＬ  Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＲＡＩＬ  Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６  ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＴＲＯＹ／ＴＮＦＲＳＦ１９、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＢＣＭＡ／ＴＮＦＲＳＦ１７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、Ｇ��ＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、オステオプロテゲリン／ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＲＡＩＬ  Ｒ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦＳＦ１０、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫ  Ｌ／ＴＮＦＳＦ１１、４−１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＴＷＥＡＫ／ＴＮＦＳＦ１２、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦＳ、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＡＰＲＩＬ／ＴＮＦＳＦ１３、ＤｃＲ３／ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ、ＴＮＦ  Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＲＡＩＬ  Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＴＲＡＩＬ  Ｒ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＴＮＦＳＦ１８、ＴＡＣｌ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＮＧＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１６、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＴＲＡＩＬ  Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＲＡＩＬ  Ｒ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＴＷＥＡＫ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１２、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３、ＤＲ６／ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦα／ＴＮＦＳＦ１Ａ、Ｐｒｏ−ＴＮＦα／ＴＮＦＳＦ１Ａ、リンホトキシンβ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ３、リンホトキシンβ  Ｒ（ＬＴｂＲ）／Ｆｃキメラ、ＴＮＦ  Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦβ／ＴＮＦＳＦ１Ｂ、ＰＧＲＰ−Ｓ、ＴＮＦ  Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＥＤＡ−Ａ２、ＴＮＦα／ＴＮＦＳＦ１Ａ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＮＦ  ＲＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ４ＥＢＰ１、１４−３−３ζ、５３ＢＰ１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、８Ｄ６Ａ、４−１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９，８−オキソ−ｄＧ、４−アミノ−１，８−ナフタルイミド、Ａ２Ｂ５、アミノペプチダーゼＬＲＡＰ／ＥＲＡＰ２、Ａ３３、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、Ａａｇ、アミノペプチダーゼＰ２／ＸＰＮＰＥＰ２、ＡＢＣＧ２、アミノペプチダーゼＰ１／ＸＰＮＰＥＰ１、ＡＣＥ、アミノペプチダーゼＰＩＬＳ／ＡＲＴＳ１、ＡＣＥ−２、アムニオンレス、アクチン、アンフィレギュリン、βアクチン、ＡＭＰＫα１／２、アクチビンＡ、ＡＭＰＫα１、アクチビンＡＢ、ＡＭＰＫα２、アクチビンＢ、ＡＭＰＫβ１、アクチビンＣ、ＡＭＰＫβ２、アクチビンＲＩＡ／ＡＬＫ−２、アンドロゲンＲ／ＮＲ３Ｃ４、アクチビンＲＩＢ／ＡＬＫ−４、アンジオゲニン、アクチビンＲＩＩＡ、アンジオポエチン−１、アクチビンＲＩＩＢ、アンジオポエチン−２、ＡＤＡＭＳ、アンジオポエチン−３、ＡＤＡＭ９、アンジオポエチン−４、ＡＤＡＭ１０、アンジオポエチン様１、ＡＤＡＭ１２、アンジオポエチン様２、ＡＤＡＭ１５、アンジオポエチン様３、ＴＡＣＥ／ＡＤＡＭ１７、アンジオポエチン様４、ＡＤＡＭ１９、アンジオポエチン様７／ＣＤＴ６、ＡＤＡＭ３３、アンジオスタチン、ＡＤＡＭＴＳ４、アネキシンＡ１／アネキシンＩ、ＡＤＡＭＴＳＳ、アネキシンＡ７、ＡＤＡＭＴＳ１、アネキシンＡ１０、ＡＤＡＭＴＳＬ−１／プンクチン、アネキシンＶ、アディポネクチン／Ａｃｒｐ３０、ＡＮＰ、ＡＥＢＳＦ、ＡＰサイト、アグリカン、ＡＰＡＦ−１、アグリン、ＡＰＣ、ＡｇＲＰ、ＡＰＥ、ＡＧＴＲ−２、ＡＰＴ、ＡＩＦ、ＡＰＬＰ−１、Ａｋｔ、ＡＰＬＰ−２、Ａｋｔ１、アポリポタンパク質ＡＩ、Ａｋｔ２、アポリポタンパク質Ｂ、Ａｋｔ３、ＡＰＰ、血清アルブミン、ＡＰＲＩＬ／ＴＮＦＳＦ１３、ＡＬＣＡＭ、ＡＲＣ、ＡＬＫ−１、アルテミン、ＡＬＫ−７、アリールスルファターゼＡ／ＡＲＳＡ、アルカリホスファターゼ、ＡＳＡＨ２／Ｎ−アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ−２、α２ｕ−グロブリン、ＡＳＣ、α−１−酸糖タンパク質、ＡＳＧＲ１、α−フェトプロテイン、ＡＳＫ１、ＡＬＳ、ＡＴＭ、アメロブラスチン、ＡＴＲＩＰ、ＡＭＩＣＡ／ＪＡＭＬ、オーロラＡ、ＡＭＩＧＯ、オーロラＢ、ＡＭＩＧＯ２、アキシン−１、ＡＭＩＧＯ３、Ａｘ１、アミノアシラーゼ／ＡＣＹ１、アズロシジン／ＣＡＰ３７／ＨＢＰ、アミノペプチダーゼＡ／ＥＮＰＥＰ、Ｂ４ＧＡＬＴ１、ＢＩＭ、Ｂ７−１／ＣＤ８０、６−ビオチン−１７−ＮＡＤ、Ｂ７−２／ＣＤ８６、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、ＣＸＣＬ１３／ＢＬＣ／ＢＣＡ−１、Ｂ７−Ｈ２、ＢＬＩＭＰ１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂｌｋ、Ｂ７−Ｈ４、ＢＭＩ−１、ＢＡＣＥ−１、ＢＭＰ−１／ＰＣＰ、ＢＡＣＥ−２、ＢＭＰ−２、Ｂａｄ、ＢＭＰ−３、ＢＡＦＦ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＭＰ−３ｂ／ＧＤＦ−１０、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＢＭＰ−４、Ｂａｇ−１、ＢＭＰ−５、ＢＡＫ、ＢＭＰ−６、ＢＡＭＢＩ／ＮＭＡ、ＢＭＰ−７、ＢＡＲＤ１、ＢＭＰ−８、Ｂａｘ、ＢＭＰ−９、ＢＣＡＭ、ＢＭＰ−１０、Ｂｃ１−１０、ＢＭＰ−１５／ＧＤＦ−９Ｂ、Ｂｃ１−２、ＢＭＰＲ−ＩＡ／ＡＬＫ−３、Ｂｃ１−２関連タンパク質Ａ１、ＢＭＰＲ−ＩＢ／ＡＬＫ−６、Ｂｃ１−ｗ、ＢＭＰＲ−ＩＩ、Ｂｃ１−ｘ、ＢＮＩＰ３Ｌ、Ｂｃ１−ｘＬ、ＢＯＣ、ＢＣＭＡ／ＴＮＦＲＳＦ１７、ＢＯＫ、ＢＤＮＦ、ＢＰＤＥ、ベンズアミド、ブラキュリ、共通β鎖、Ｂ−Ｒａｆ、βＩＧ−Ｈ３、ＣＸＣＬ１４／ＢＲＡＫ、ベータセルリン、ＢＲＣＡ１、βデフェンシン２、ＢＲＣＡ２、ＢＩＤ、ＢＴＬＡ、バイグリカン、Ｂｕｂ−１、Ｂｉｋ様キラータンパク質、ｃ−ｊｕｎ、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ｃ−Ｒｅｌ、ＣＤ９４、ＣＣＬ６／Ｃ１０、ＣＤ９７、Ｃｌｑ  Ｒ１／ＣＤ９３、ＣＤ１５１、Ｃ１ｑＴＮＦ１、ＣＤ１６０、Ｃ１ｑＴＮＦ４、ＣＤ１６３、Ｃ１ｑＴＮＦ５、ＣＤ１６４、補体成分Ｃ１ｒ、ＣＤ２００、補体成分Ｃ１ｓ、ＣＤ２００  Ｒ１、補体成分Ｃ２、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、補体成分Ｃ３ａ、ＣＤ２３／Ｆｃ  ε  ＲＩＩ、補体成分Ｃ３ｄ、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、補体成分ＣＳａ、ＣＤＳＬ、カドヘリン−４／Ｒ−カドヘリン、ＣＤ６９、カドヘリン−６、ＣＤＣ２、カドヘリン−８、ＣＤＣ２５Ａ、カドヘリン−１１、ＣＤＣ２５Ｂ、カドヘリン−１２、ＣＤＣＰ１、カドヘリン−１３、ＣＤＯ、カドヘリン−１７、ＣＤＸ４、Ｅ−カドヘリン、ＣＥＡＣＡＭ−１／ＣＤ６６ａ、Ｎ−カドヘリン、ＣＥＡＣＡＭ−６、Ｐ−カドヘリン、ケルベロス１、ＶＥ−カドヘリン、ＣＦＴＲ、カルビンディンＤ、ｃＧＭＰ、カルシニューリンＡ、Ｃｈｅｍ  Ｒ２３、カルシニューリンＢ、ケメリン、カルレティキュリン−２、ケモカインサンプラーパック、ＣａＭキナーゼＩＩ、キチナーゼ３様１、ｃＡＭＰ、キトトリオシダーゼ／ＣＨＩＴ１、カンナビノイドＲ１、Ｃｈｋ１、カンナビノ���ドＲ２／ＣＢ２／ＣＮＲ２、Ｃｈｋ２、ＣＡＲ／ＮＲ１１３、ＣＨＬ−１／Ｌ１ＣＡＭ−２、炭酸脱水酵素Ｉ、コリンアセチルトランスフェラーゼ／ＣｈＡＴ、炭酸脱水酵素ＩＩ、コンドロレクチン、炭酸脱水酵素ＩＩＩ、コーディン、炭酸脱水酵素ＩＶ、コーディン様１、炭酸脱水酵素Ｖａ．、コーディン様２、炭酸脱水酵素ＶＢ、ＣＩＮＣ−１、炭酸脱水酵素ＶＩ、ＣＩＮＣ−２、炭酸脱水酵素ＶＩＩ、ＣＩＮＣ−３、炭酸脱水酵素ＶＩＩＩ、クラスピン、炭酸脱水酵素ＩＸ、クローディン−６、炭酸脱水酵素Ｘ、ＣＬＣ、炭酸脱水酵素ＸＩＩ、ＣＬＥＣ−１、炭酸脱水酵素ＸＩＩＩ、ＣＬＥＣ−２、炭酸脱水酵素ＸＩＶ、ＣＬＥＣＳＦ１３／ＣＬＥＣ４Ｆ、カルボキシメチルリジン、ＣＬＥＣＳＦ８、カルボキシペプチダーゼＡ１／ＣＰＡ１、ＣＬＦ−１、カルボキシペプチダーゼＡ２、ＣＬ−Ｐ１／ＣＯＬＥＣ１２、カルボキシペプチダーゼＡ４、クラスタリン、カルボキシペプチダーゼＢ１、クラスタリン様１、カルボキシペプチダーゼＥ／ＣＰＥ、ＣＭＧ−２、カルボキシペプチダーゼＸ１、ＣＭＶ  ＵＬ１４６、カルジオトロフィン−１、ＣＭＶ  ＵＬ１４７、カルノシンジペプチダーゼ１、ＣＮＰ、カロンテ、ＣＮＴＦ、ＣＡＲＴ、ＣＮＴＦ  Ｒα、カスパーゼ、凝固因子ＩＩ／トロンビン、カスパーゼ−１、凝固因子ＩＩＩ／組織因子、カスパーゼ−２、凝固第ＶＩＩ因子、カスパーゼ−３、凝固因子Ｘ、カスパーゼ−４、凝固因子ＸＩ、カスパーゼ−６、凝固因子ＸＩＶ／タンパク質Ｃ、カスパーゼ−７、ＣＯＣＯ、カスパーゼ−８、コヒーシン、カスパーゼ−９、コラーゲンＩ、カスパーゼ−１０、コラーゲンＩＩ、カスパーゼ−１２、コラーゲンＩＶ、カスパーゼ−１３、共通γ鎖／ＩＬ−２Ｒγ、カスパーゼペプチド阻害剤、ＣＯＭＰ／トロンボスポンジン−５、カタラーゼ、補体成分Ｃ１ｒＬＰ、βカテニン、補体成分Ｃ１ｑＡ、カテプシン１、補体成分Ｃ１ｑＣ、カテプシン３、補体因子Ｄ、カテプシン６、補体因子Ｉ、カテプシンＡ、補体ＭＡＳＰ３、カテプシンＢ、コネキシン４３、カテプシンＣ／ＤＰＰＩ、コンタクチン−１、カテプシンＤ、コンタクチン−２／ＴＡＧ１、カテプシンＥ、コンタクチン−４、カテプシンＦ、コンタクチン−５、カテプシンＨ、コリン、カテプシンＬ、コルヌリン、カテプシンＯ、ＣＯＲＳ２６／Ｃ１ｑＴＮＦ、３、カテプシンＳ、ラット皮質幹細胞、カテプシンＶ、
コルチゾール、カテプシンＸ／Ｚ／Ｐ、ＣＯＵＰ−ＴＦ  Ｉ／ＮＲ２Ｆ１、ＣＢＰ、ＣＯＵＰ−ＴＦ  ＩＩ／ＮＲ２Ｆ２、ＣＣＩ、ＣＯＸ−１、ＣＣＫ−Ａ  Ｒ、ＣＯＸ−２、ＣＣＬ２８、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＣＣＲ１、Ｃ−反応性タンパク質、ＣＣＲ２、クレアチンキナーゼ、筋肉／ＣＫＭＭ、ＣＣＲ３、クレアチニン、ＣＣＲ４、ＣＲＥＢ、ＣＣＲ５、ＣＲＥＧ、ＣＣＲ６、ＣＲＥＬＤ１、ＣＣＲ７、ＣＲＥＬＤ２、ＣＣＲ８、ＣＲＨＢＰ、ＣＣＲ９、ＣＲＨＲ−１、ＣＣＲ１０、ＣＲＩＭ１、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、Ｃｒｉｐｔｏ、ＣＤ２、ＣＲＩＳＰ−２、ＣＤ３、ＣＲＩＳＰ−３、ＣＤ４、クロスベインレス−２、ＣＤ４＋／４５ＲＡ−、ＣＲＴＡＭ、ＣＤ４＋／４５ＲＯ−、ＣＲＴＨ−２、ＣＤ４＋／ＣＤ６２Ｌ−／ＣＤ４４、ＣＲＹ１、ＣＤ４＋／ＣＤ６２Ｌ＋／ＣＤ４４、クリプティック、ＣＤ５、ＣＳＢ／ＥＲＣＣ６、ＣＤ６、ＣＣＬ２７／ＣＴＡＣＫ、ＣＤ８、ＣＴＧＦ／ＣＣＮ２、ＣＤ８＋／４５ＲＡ−、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ８＋／４５ＲＯ−、キュビリン、ＣＤ９、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＤ１４、ＣＸＡＤＲ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＸＣＬ１６、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＸＣＲ３、ＣＤ２８、ＣＸＣＲ４、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＸＣＲ５、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＸＣＲ６、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、シクロフィリンＡ、ＣＤ３４、Ｃｙｒ６１／ＣＣＮ１、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、シスタチンＡ、ＣＤ３８、シスタチンＢ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、シスタチンＣ、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、シスタチンＤ、ＣＤ４３、シスタチンＥ／Ｍ、ＣＤ４４、シスタチンＦ、ＣＤ４５、シスタチンＨ、ＣＤ４６、シスタチンＨ２、ＣＤ４７、シスタチンＳ、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、シスタチンＳＡ、ＣＤ５５／ＤＡＦ、シスタチンＳＮ、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、チトクロムｃ、ＣＤ５９、アポチトクロムｃ、ＣＤ６８、ホロチトクロムｃ、ＣＤ７２、サイトケラチン８、ＣＤ７４、サイトケラチン１４、ＣＤ８３、サイトケラチン１９、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、サイトニン、Ｄ６、ＤＩＳＰ１、ＤＡＮ、Ｄｋｋ−１、ＤＡＮＣＥ、Ｄｋｋ−２、ＤＡＲＰＰ−３２、Ｄｋｋ−３、ＤＡＸ１／ＮＲＯＢ１、Ｄｋｋ−４、ＤＣＣ、ＤＬＥＣ、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、ＤＬＬ１、ＤＣＡＲ、ＤＬＬ４、ＤｃＲ３／ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ、ｄ−ルシフェリン、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＤＮＡリガーゼＩＶ、ＤＣ−ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、ＤＮＡポリメラーゼβ、ＤｃＴＲＡＩＬ  Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ２３、ＤＮＡＭ−１、ＤｃＴＲＡＩＬ  Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ２２、ＤＮＡ−ＰＫｃｓ、ＤＤＲ１、ＤＮＥＲ、ＤＤＲ２、ＤＯＰＡデカルボキシラーゼ／ＤＤＣ、ＤＥＣ−２０５、ＤＰＣＲ−１、デカペンタプレジック、ＤＰＰ６、デコリン、ＤＰＰＡ４、デクチン−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＰＰＡ５／ＥＳＧ１、デクチン−２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＤＰＰＩＩ／ＱＰＰ／ＤＰＰ７、ＤＥＰ−１／ＣＤ１４８、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、デザートヘッジホッグ、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、デスミン、ＤＲ６／ＴＮＦＲＳＦ２１、デスモグレイン−１、ＤＳＣＡＭ、デスモグレイン−２、ＤＳＣＡＭ−Ｌ１、デスモグレイン−３、ＤＳＰＧ３、ディシブルド−１、Ｄｔｋ、ディシブルド−３、ダイナミン、ＥＡＲ２／ＮＲ２Ｆ６、ＥｐｈＡ５、ＥＣＥ−１、ＥｐｈＡ６、ＥＣＥ−２、ＥｐｈＡ７、ＥＣＦ−Ｌ／ＣＨＩ３Ｌ３、ＥｐｈＡ８、ＥＣＭ−１、ＥｐｈＢ１、エコチン、ＥｐｈＢ２、ＥＤＡ、ＥｐｈＢ３、ＥＤＡ−Ａ２、ＥｐｈＢ４、ＥＤＡＲ、ＥｐｈＢ６、ＥＤＧ−１、エフリン、ＥＤＧ−５、エフリン−Ａ１、ＥＤＧ−８、エフリン−Ａ２、ｅＥＦ−２、エフリン−Ａ３、ＥＧＦ、エフリン−Ａ４、ＥＧＦ  Ｒ、エフリン−Ａ５、ＥＧＲ１、エフリン−Ｂ、ＥＧ−ＶＥＧＦ／ＰＫ１、エフリン−Ｂ１、ｅＩＦ２α、エフリン−Ｂ２、ｅＩＦ４Ｅ、エフリン−Ｂ３、Ｅｌｋ−１、Ｅｐｉｇｅｎ、ＥＭＡＰ−ＩＩ、エピモルフィン／シンタキシン２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、エピレギュリン、ＣＸＣＬ５／ＥＮＡ、ＥＰＲ−１／Ｘａ受容体、エンドカン、ＥｒｂＢ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＥｒｂＢ３、エンドグリカン、ＥｒｂＢ４、エンドヌクレアーゼＩＩＩ、ＥＲＣＣ１、エンドヌクレアーゼＩＶ、ＥＲＣＣ３、エンドヌクレアーゼＶ、ＥＲＫ１／ＥＲＫ２、エンドヌクレアーゼＶＩＩＩ、ＥＲＫ１、エンドレペリン／パールカン、ＥＲＫ２、エンドスタチン、ＥＲＫ３、エンドセリン−１、ＥＲＫ５／ＢＭＫ１、エングレイルド−２、ＥＲＲα／ＮＲ３Ｂ１、ＥＮ−ＲＡＧＥ、ＥＲＲβ／ＮＲ３Ｂ２、エンテロペプチダーゼ／エンテロキナーゼ、ＥＲＲγ／ＮＲ３Ｂ３、ＣＣＬ１１／エオタキシン、エリスロポエチン、ＣＣＬ２４／エオタキシン２、エリスロポエチンＲ、ＣＣＬ２６／エオタキシン３、ＥＳＡＭ、ＥｐＣＡＭ／ＴＲＯＰ−１、ＥＲα／ＮＲ３Ａ１、ＥＰＣＲ、ＥＲβ／ＮＲ３Ａ２、Ｅｐｈ、エキソヌクレアーゼＩＩＩ、ＥｐｈＡ１、エキソストシン様２／ＥＸＴＬ２、ＥｐｈＡ２、エキソストシン様３／ＥＸＴＬ３、ＥｐｈＡ３、ＦＡＢＰ１、ＦＧＦ−ＢＰ、ＦＡＢＰ２、ＦＧＦ  Ｒ１−４、ＦＡＢＰ３、ＦＧＦ  Ｒ１、ＦＡＢＰ４、ＦＧＦ  Ｒ２、ＦＡＢＰ５、ＦＧＦ  Ｒ３、ＦＡＢＰ７、ＦＧＦ  Ｒ４、ＦＡＢＰ９、ＦＧＦ  Ｒ５、補体因子Ｂ、Ｆｇｒ、ＦＡＤＤ、ＦＨＲ５、ＦＡＭ３Ａ、フィブロネクチン、ＦＡＭ３Ｂ、フィコリン−２、ＦＡＭ３Ｃ、フィコリン−３、ＦＡＭ３Ｄ、ＦＩＴＣ、線維芽細胞活性化タンパク質α／ＦＡＰ、ＦＫＢＰ３８、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、Ｆｌａｐ、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＦＬＩＰ、ＦＡＴＰ１、ＦＬＲＧ、ＦＡＴＰ４、ＦＬＲＴ１、ＦＡＴＰ５、ＦＬＲＴ２、Ｆｃγ  Ｒ１／ＣＤ６４、ＦＬＲＴ３、Ｆｃγ  ＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、Ｆｌｔ−３、Ｆｃγ  ＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、Ｆｌｔ−３リガンド、Ｆｃγ  ＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、フォリスタチン、Ｆｃγ  ＲＩＩＩ／ＣＤ１６、フォリスタチン様１、ＦｃＲＨ１／ＩＲＴＡ５、ＦｏｓＢ／Ｇ０Ｓ３、ＦｃＲＨ２／ＩＲＴＡ４、ＦｏｘＤ３、ＦｃＲＨ４／ＩＲＴＡ１、ＦｏｘＪ１、ＦｃＲＨ５／ＩＲＴＡ２、ＦｏｘＰ３、Ｆｃ受容体様３／ＣＤ１６−２、Ｆｐｇ、ＦＥＮ−１、ＦＰＲ１、フェチュインＡ、ＦＰＲＬ１、フェチュインＢ、ＦＰＲＬ２、ＦＧＦ酸性、ＣＸ３ＣＬ１／フラクタルカイン、ＦＧＦ塩基性、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−１、ＦＧＦ−３、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−２、ＦＧＦ−４、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−３、ＦＧＦ−５、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−４、ＦＧＦ−６、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−５、ＦＧＦ−８、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−６、ＦＧＦ−９、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−７、ＦＧＦ−１０、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−８、ＦＧＦ−１１、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−９、ＦＧＦ−１２、Ｆｒｋ、ＦＧＦ−１３、ｓＦＲＰ−１、ＦＧＦ−１６、ｓＦＲＰ−２、ＦＧＦ−１７、ｓＦＲＰ−３、ＦＧＦ−１９、ｓＦＲＰ−４、ＦＧＦ−２０、フューリン、ＦＧＦ−２１、ＦＸＲ／ＮＲ１Ｈ４、ＦＧＦ−２２、Ｆｙｎ、ＦＧＦ−２３、Ｇ９ａ／ＥＨＭＴ２、ＧＦＲ  α−３／ＧＤＮＦ  Ｒ  α−３、ＧＡＢＡ−Ａ−Ｒα１、ＧＦＲ  α−４／ＧＤＮＦ  Ｒ  α−４、ＧＡＢＡ−Ａ−Ｒα２、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＧＡＢＡ−Ａ−Ｒα４、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＧＡＢＡ−Ａ−Ｒα５、ＧＬＩ−１、ＧＡＢＡ−Ａ−Ｒα６、ＧＬＩ−２、ＧＡＢＡ−Ａ−Ｒβ１、ＧＬＰ／ＥＨＭＴ１、ＧＡＢＡ−Ａ−Ｒβ２、ＧＬＰ−１Ｒ、ＧＡＢＡ−Ａ−Ｒβ３、グルカゴン、ＧＡＢＡ−Ａ−Ｒγ２、グルコサミン（Ｎ−アセチル）−６−スルファターゼ／ＧＮＳ、ＧＡＢＡ−Ｂ−Ｒ２、ＧｌｕＲ１、ＧＡＤ１／ＧＡＤ６７、ＧｌｕＲ２／３、ＧＡＤ２／ＧＡＤ６５、ＧｌｕＲ２、ＧＡＤＤ４５α、ＧｌｕＲ３、ＧＡＤＤ４５β、Ｇｌｕｔ１、ＧＡＤＤ４５γ、Ｇｌｕｔ２、ガレクチン−１、Ｇｌｕｔ３、ガレクチン−２、Ｇｌｕｔ４、ガレクチン−３、ＧｌｕｔＳ、ガレクチン−３ＢＰ、グルタレドキシン１、ガレクチン−４、グリシンＲ、ガレクチン−７、グリコホリンＡ、ガレクチン−８、グリピカン２、ガレクチン−９、グリピカン３、Ｇａ１ＮＡｃ４Ｓ−６５Ｔ、グリピカン５、ＧＡＰ−４３、グリピカン６、ＧＡＰＤＨ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇａｓ１、ＧＭ−ＣＳＦ  Ｒα、Ｇａｓ６、ＧＭＦ−β、ＧＡＳＰ−１／ＷＦＩＫＫＮＲＰ、ｇｐ１３０、ＧＡＳＰ−２／ＷＦＩＫＫＮ、グリコーゲンホスホリラーゼＢＢ／ＧＰＢＢ、ＧＡＴＡ−１、ＧＰＲ１５、ＧＡＴＡ−２、ＧＰＲ３９、ＧＡＴＡ−３、ＧＰＶＩ、ＧＡＴＡ−４、ＧＲ／ＮＲ３Ｃ１、ＧＡＴＡ−５、Ｇｒ−１／Ｌｙ−６Ｇ、ＧＡＴＡ−６、グラニュライシン、ＧＢＬ、グランザイムＡ、ＧＣＮＦ／ＮＲ６Ａ１、グランザイムＢ、ＣＸＣＬ６／ＧＣＰ−２、グランザイムＤ、Ｇ−ＣＳＦ、グランザイムＧ、Ｇ−ＣＳＦ  Ｒ、グランザイムＨ、ＧＤＦ−１、ＧＲＡＳＰ、ＧＤＦ−３  ＧＲＢ２、ＧＤＦ−５、グレムリン、ＧＤＦ−６、ＧＲＯ、ＧＤＦ−７、ＣＸＣＬ１／ＧＲＯ  α、ＧＤＦ−８、ＣＸＣＬ２／ＧＲＯ  β、ＧＤＦ−９、ＣＸＣＬ３／ＧＲＯ  γ、ＧＤＦ−１１、成長ホルモン、ＧＤＦ−１５、成長ホルモンＲ、ＧＤＮＦ、ＧＲＰ７５／ＨＳＰＡ９Ｂ、ＧＦＡＰ、ＧＳＫ−３α／β、ＧＦＩ−１、ＧＳＫ−３α、ＧＦＲα−１／ＧＤＮＦ  Ｒ  α−１、ＧＳＫ−３  β、ＧＦＲ  α−２／ＧＤＮＦ  Ｒ  α−２、ＥＧＮ１Ｔ、Ｈ２ＡＸ、ヒスチジン、Ｈ６０、ＨＭ７４Ａ、ＨＡＩ−１、ＨＭＧＡ２、ＨＡＩ−２、ＨＭＧＢ１、ＨＡＩ−２Ａ、ＴＣＦ−２／ＨＮＦ−１β、ＨＡＩ−２Ｂ、ＨＮＦ−３β／ＦｏｘＡ２、ＨＡＮＤ１、ＨＮＦ−４α／ＮＲ２Ａ１、ＨＡＰＬＮ１、ＨＮＦ−４γ／ＮＲ２Ａ２、気道トリプシン様プロテアーゼ／ＨＡＴ、ＨＯ−１／ＨＭＯＸ１／ＨＳＰ３２、ＨＢ−ＥＧＦ、ＨＯ−２／ＨＭＯＸ２、ＣＣＬ１４ａ／ＨＣＣ−１、ＨＰＲＧ、ＣＣＬ１４ｂ／ＨＣＣ−３、Ｈｒｋ、ＣＣＬ１６／ＨＣＣ−４、ＨＲＰ−１、αＨＣＧ、ＨＳ６ＳＴ２、Ｈｃｋ、ＨＳＤ−１、ＨＣＲ／ＣＲＡＭ−Ａ／Ｂ、ＨＳＤ−２、ＨＤＧＦ、ＨＳＰ１０／ＥＰＦ、ヘモグロビン、ＨＳＰ２７、ヘパソシン、ＨＳＰ６０、ＨＥＳ−１、ＨＳＰ７０、ＨＥＳ−４、ＨＳＰ９０、ＨＧＦ、ＨＴＲＡ／プロテアーゼＤｏ、ＨＧＦ活性化因子、ＨＴＲＡ１／ＰＲＳＳ１１、ＨＧＦ  Ｒ、ＨＴＲＡ２／Ｏｍｉ、ＨＩＦ−１α、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＨＩＦ−２α、ヒアルロナン、ＨＩＮ−１／セクレトグロブリン３Ａ１，４−ヒドロキシノネナール、Ｈｉｐ、ＣＣＬ１／１−３０９／ＴＣＡ−３、ＩＬ−１０、ｃＩＡＰ（ｐａｎ）、ＩＬ−１０  Ｒα、ｃＩＡＰ−１／ＨＩＡＰ−２、ＩＬ−１０  Ｒβ、ｃＩＡＰ−２／ＨＩＡＰ−１、ＩＬ−１１、ＩＢＳＰ／シアロタンパク質ＩＩ、ＩＬ−１１Ｒα、ＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４、ＩＬ−１２、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０、ＩＣＡＭ−３／ＣＤ５０、ＩＬ−１２Ｒβ１、ＩＣＡＭ−５、ＩＬ−１２Ｒβ２、ＩＣＡＴ、ＩＬ−１３、ＩＣＯＳ、ＩＬ−１３Ｒα１、イズロン酸２−スルファターゼ，／ＩＤＳ、ＩＬ−１３Ｒα２、ＩＦＮ、ＩＬ−１５、ＩＦＮα、ＩＬ−１５Ｒα、ＩＦＮα１、ＩＬ−１６、ＩＦＮα２、ＩＬ−１７、ＩＦＮα４ｂ、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＦＮαＡ、ＩＬ−１７ＲＣＣ、ＩＦＮαＢ２、ＩＬ−１７ＲＤ、ＩＦＮα  Ｃ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＦＮα  Ｄ、ＩＬ−１７Ｂ  Ｒ、ＩＦＮα  Ｆ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＦＮα  Ｇ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＦＮα  Ｈ２、ＩＬ−１７Ｅ、ＩＦＮα  Ｉ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＦＮα  Ｊ１、ＩＬ−１８／ＩＬ−１Ｆ４、ＩＦＮα  Ｋ、ＩＬ−１８  ＢＰａ、ＩＦＮα  ＷＡ、ＩＬ−１８  ＢＰｃ、ＩＦＮα／β  Ｒ１、ＩＬ−１８  ＢＰｄ、ＩＦＮα／β  Ｒ２、ＩＬ−１８  Ｒα／ＩＬ−１  Ｒ５、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１８  Ｒβ／ＩＬ−１  Ｒ７、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１９、ＩＦＮ−γ  Ｒ１、ＩＬ−２０、ＩＦＮ−γ  Ｒ２、ＩＬ−２０  Ｒα、ＩＦＮ−ω、ＩＬ−２０  Ｒβ、ＩｇＥ、ＩＬ−２１、ＩＧＦＢＰ−１、ＩＬ−２１  Ｒ、ＩＧＦＢＰ−２、ＩＬ−２２、ＩＧＦＢＰ−３、ＩＬ−２２  Ｒ、ＩＧＦＢＰ−４、ＩＬ−２２ＢＰ、ＩＧＦＢＰ−５、ＩＬ−２３、ＩＧＦＢＰ−６、ＩＬ−２３  Ｒ、ＩＧＦＢＰ−Ｌ１、ＩＬ−２４、ＩＧＦＢＰ−ｒｐ１／ＩＧＦＢＰ
−７、ＩＬ−２６／ＡＫ１５５、ＩＧＦＢＰ−ｒＰ１０、ＩＬ−２７、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＬ−２８Ａ、ＩＧＦ−Ｉ  Ｒ、ＩＬ−２８Ｂ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＩＬ−２９／ＩＦＮ−λ  １、ＩＧＦ−ＩＩ  Ｒ、ＩＬ−３１、ＩｇＧ、ＩＬ−３１  ＲＡ、ＩｇＭ、ＩＬ−３２  α、ＩＧＳＦ２、ＩＬ−３３、ＩＧＳＦ４Ａ／ＳｙｎＣＡＭ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＩＧＳＦ４Ｂ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＩＧＳＦ８、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＩｇＹ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＩｋＢ−β、ＩＬＴ６／ＣＤ８５ｅ、ＩＫＫ  α、インディアンヘッジホッグ、ＩＫＫ  ε、ＩＮＳＲＲ、ＩＫＫ  γ、インスリン、ＩＬ−１α／ＩＬ−１Ｆ１、インスリンＲ／ＣＤ２２０、ＩＬ−１β／ＩＬ−１Ｆ２、プロインスリン、ＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１Ｆ３、インスリジン／ＩＤＥ、ＩＬ−１Ｆ５／ＦＩＬ１δ、インテグリンα２／ＣＤ４９ｂ、ＩＬ−１Ｆ６／ＦＩＬ１ε、インテグリンα３／ＣＤ４９ｃ、ＩＬ−１Ｆ７／ＦＩＬ１ζ、インテグリンα３β１／ＶＬＡ−３、ＩＬ−１Ｆ８／ＦＩＬ１η、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、ＩＬ−１Ｆ９／ＩＬ−１Ｈ１、インテグリンα５／ＣＤ４９ｅ、ＩＬ−１Ｆ１０／ＩＬ−１ＨＹ２、インテグリンα５β１、ＩＬ−１Ｒ１、インテグリンα６／ＣＤ４９ｆ、ＩＬ−１  ＲＩＩ、インテグリンα７、ＩＬ−１  Ｒ３／ＩＬ−１  Ｒ  ＡｃＰ、インテグリンα９、ＩＬ−１  Ｒ４／ＳＴ２、インテグリンαＥ／ＣＤ１０３、ＩＬ−１  Ｒ６／ＩＬ−１  Ｒ  ｒｐ２、インテグリンαＬ／ＣＤ１１ａ、ＩＬ−１  Ｒ８、インテグリンαＬβ２、ＩＬ−１  Ｒ９、インテグリンαＭ／ＣＤ１１ｂ、ＩＬ−２、インテグリンαＭβ２、ＩＬ−２  Ｒα、インテグリンαＶ／ＣＤ５１、ＩＬ−２  Ｒβ、インテグリンαＶβ５、ＩＬ−３、インテグリンαＶβ３、ＩＬ−３  Ｒα、インテグリンαＶβ６、ＩＬ−３  Ｒβ、インテグリンαＸ／ＣＤ１１ｃ、ＩＬ−４、インテグリンβ１／ＣＤ２９、ＩＬ−４  Ｒ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＩＬ−５、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＩＬ−５  Ｒα、インテグリンβ５、ＩＬ−６、インテグリンβ６、ＩＬ−６  Ｒ、インテグリンβ７、ＩＬ−７、ＣＸＣＬ１０／ＩＰ−１０／ＣＲＧ−２、ＩＬ−７  Ｒα／ＣＤ１２７、ＩＲＡＫ１、ＣＸＣＲ１／ＩＬ−８  ＲＡ、ＩＲＡＫ４、ＣＸＣＲ２／ＩＬ−８  ＲＢ、ＩＲＳ−１、ＣＸＣＬ８／ＩＬ−８、Ｉｓｌｅｔ−１、ＩＬ−９、ＣＸＣＬ１１／１−ＴＡＣ、ＩＬ−９  Ｒ、ジャギド１、ＪＡＭ−４／ＩＧＳＦＳ、ジャギド２、ＪＮＫ、ＪＡＭ−Ａ、ＪＮＫ１／ＪＮＫ２、ＪＡＭ−Ｂ／ＶＥ−ＪＡＭ、ＪＮＫ１、ＪＡＭ−Ｃ、ＪＮＫ２、キニノーゲン、カリクレイン３／ＰＳＡ、キニノスタチン、カリクレイン４、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、カリクレイン５、ＫＩＲ２ＤＬ１、カリクレイン６／ニューロシン、ＫＩＲ２ＤＬ３、カリクレイン７、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄ、カリクレイン８／ニューロプシン、ＫＩＲ２ＤＳ４、カリクレイン９、ＫＩＲ３ＤＬ１、血漿カリクレイン／ＫＬＫＢ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、カリクレイン１０、キレル２、カリクレイン１１、ＫＬＦ４、カリクレイン１２、ＫＬＦＳ、カリクレイン１３、ＫＬＦ６、カリクレイン１４、クロトー、カリクレイン１５、クロトーβ、ＫＣ、ＫＯＲ、Ｋｅａｐ１、クレメン−１、Ｋｅｌｌ、クレメン−２、Ｋ��Ｆ／ＦＧＦ−７、ＬＡＧ−３、ＬＩＮＧＯ−２、ＬＡＩＲ１、リピン２、ＬＡＩＲ２、リポカリン−１、ラミニンα４、リポカリン−２／ＮＧＡＬ、ラミニンγ１，５−リポキシゲナーゼ、ラミニンＩ、ＬＸＲα／ＮＲ１Ｈ３、ラミニンＳ、ＬＸＲβ／ＮＲ１Ｈ２、ラミニン−１、リビン、ラミニン−５、ＬＩＸ、ＬＡＭＰ、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ランゲリン、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＬＡＲ、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ラテキシン、ＬＭＩＲＳ／ＣＤ３００ＬＢ、レイリン、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＬＢＰ、ＬＭＯ２、ＬＤＬ  Ｒ、ＬＯＸ−１／ＳＲ−Ｅ１、ＬＥＣＴ２、ＬＲＨ−１／ＮＲ５Ａ２、ＬＥＤＧＦ、ＬＲＩＧ１、レフティー、ＬＲＩＧ３、レフティー−１、ＬＲＰ−１、レフティー−Ａ、ＬＲＰ−６、レグマイン、ＬＳＥＣｔｉｎ／ＣＬＥＣ４Ｇ、レプチン、ルミカン、レプチンＲ、ＣＸＣＬ１５／ラングカイン、ロイコトリエンＢ４、ＸＣＬ１／リンホタクチン、ロイコトリエンＢ４  Ｒ１、リンホトキシン、ＬＩＦ、リンホトキシンβ／ＴＮＦＳＦ３、ＬＩＦ  Ｒα、リンホトキシンβ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ３、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、Ｌｙｎ、リミチン、Ｌｙｐ、ＬＩＭＰＩＩ／ＳＲ−Ｂ２、リジルオキシダーゼ相同体２、ＬＩＮ−２８、ＬＹＶＥ−１、ＬＩＮＧＯ−１、α２−マクログロブリン、ＣＸＣＬ９／ＭＩＧ、ＭＡＤ２Ｌ１、ミメカン、ＭＡｄＣＡＭ−１、ミンディン、ＭａｆＢ、ミネラルコルチコイドＲ／ＮＲ３Ｃ２、ＭａｆＦ、ＣＣＬ３Ｌ１／ＭＩＰ−１αアイソフォームＬＤ７８  β、ＭａｆＧ、ＣＣＬ３／ＭＩＰ−１α、ＭａｆＫ、ＣＣＬ４Ｌ１／ＬＡＧ−１、ＭＡＧ／シグレック−４−ａ、ＣＣＬ４／ＭＩＰ−１β、ＭＡＮＦ、ＣＣＬ１５／ＭＩＰ−１δ、ＭＡＰ２、ＣＣＬ９／１０／ＭＩＰ−１γ、ＭＡＰＫ、ＭＩＰ−２、マラプシン／パンクレアシン、ＣＣＬ１９／ＭＩＰ−３β、ＭＡＲＣＫＳ、ＣＣＬ２０／ＭＩＰ−３α、ＭＡＲＣＯ、ＭＩＰ−Ｉ、Ｍａｓｈ１、ＭＩＰ−ＩＩ、マトリリン−２、ＭＩＰ−ＩＩＩ、マトリリン−３、ＭＩＳ／ＡＭＨ、マトリリン−４、ＭＩＳ  Ｒ１１、マトリプターゼ／ＳＴ１４、ＭＩＸＬ１、ＭＢＬ、ＭＫＫ３／ＭＫＫ６、ＭＢＬ−２、ＭＫＫ３、メラノコルチン３Ｒ／ＭＣ３Ｒ、ＭＫＫ４、ＭＣＡＭ／ＣＤ１４６、ＭＫＫ６、ＭＣＫ−２、ＭＫＫ７、Ｍｃ１−１、ＭＫＰ−３、ＭＣＰ−６、ＭＬＨ−１、ＣＣＬ２／ＭＣＰ−１、ＭＬＫ４α、ＭＣＰ−１１、ＭＭＰ、ＣＣＬ８／ＭＣＰ−２、ＭＭＰ−１、ＣＣＬ７／ＭＣＰ−３／ＭＡＲＣ、ＭＭＰ−２、ＣＣＬ１３／ＭＣＰ−４、ＭＭＰ−３、ＣＣＬ１２／ＭＣＰ−５、ＭＭＰ−７、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＭＰ−８、Ｍ−ＣＳＦ  Ｒ、ＭＭＰ−９、ＭＣＶ−ＩＩ型、ＭＭＰ−１０、ＭＤ−１、ＭＭＰ−１１、ＭＤ−２、ＭＭＰ−１２、ＣＣＬ２２／ＭＤＣ、ＭＭＰ−１３、ＭＤＬ−１／ＣＬＥＣＳＡ、ＭＭＰ−１４、ＭＤＭ２、ＭＭＰ−１５、ＭＥＡ−１、ＭＭＰ−１６／ＭＴ３−ＭＭＰ、ＭＥＫ１／ＭＥＫ２、ＭＭＰ−２４／ＭＴ５−ＭＭＰ、ＭＥＫ１、ＭＭＰ−２５／ＭＴ６−ＭＭＰ、ＭＥＫ２、ＭＭＰ−２６、メルシン、ＭＭＲ、ＭＥＰＥ、ＭＯＧ、メプリンα、ＣＣＬ２３／ＭＰＩＦ−１、メプリンβ、Ｍ−Ｒａｓ／Ｒ−Ｒａｓ３、Ｍｅｒ、Ｍｒｅｌｌ、メソテリン、ＭＲＰ１メテオリ���、ＭＳＫ１／ＭＳＫ２、メチオニンアミノペプチダーゼ１、ＭＳＫ１、メチオニンアミノペプチダーゼ、ＭＳＫ２、メチオニンアミノペプチダーゼ２、ＭＳＰ、ＭＦＧ−Ｅ８、ＭＳＰ  Ｒ／Ｒｏｎ、ＭＦＲＰ、Ｍｕｇ、ＭｇｃＲａｃＧＡＰ、ＭＵＬＴ−１、ＭＧＬ２、ムサシ−１、ＭＧＭＴ、ムサシ−２、ＭＩＡ、ＭｕＳＫ、ＭＩＣＡ、ＭｕｔＹ  ＤＮＡグリコシラーゼ、ＭＩＣＢ、ＭｙＤ８８、ＭＩＣＬ／ＣＬＥＣ１２Ａ、ミエロペルオキシダーゼ、β  ２ミクログロブリン、ミオカルディン、ミッドカイン、ミオシリン、ＭＩＦ、ミオグロビン、ＮＡＩＰ  ＮＧＦＩ−Ｂ  γ／ＮＲ４Ａ３、ナノグ、ＮｇＲ２／ＮｇＲＨ１、ＣＸＣＬ７／ＮＡＰ−２、ＮｇＲ３／ＮｇＲＨ２、Ｎｂｓ１、ナイドジェン−１／エンタクチン、ＮＣＡＭ−１／ＣＤ５６、ナイドジェン−２、ＮＣＡＭ−Ｌ１、一酸化窒素、ネクチン−１、ニトロチロシン、ネクチン−２／ＣＤ１１２、ＮＫＧ２Ａ、ネクチン−３、ＮＫＧ２Ｃ、ネクチン−４、ＮＫＧ２Ｄ、ネオゲニン、ＮＫｐ３０、ネプリライシン／ＣＤ１０、ＮＫｐ４４、ネプリライシン−２／ＭＭＥＬ１／ＭＭＥＬ２、ＮＫｐ４６／ＮＣＲ１、ネスチン、ＮＫｐ８０／ＫＬＲＦ１、ＮＥＴＯ２、ＮＫＸ２．５、ネトリン−１、ＮＭＤＡ  Ｒ、ＮＲ１サブユニット、ネトリン−２、ＮＭＤＡ  Ｒ、ＮＲ２Ａサブユニット、ネトリン−４、ＮＭＤＡ  Ｒ、ＮＲ２Ｂサブユニット、ネトリン−Ｇｌａ、ＮＭＤＡ  Ｒ、ＮＲ２Ｃサブユニット、ネトリン−Ｇ２ａ、Ｎ−Ｍｅ−６，７−ジＯＨ−ＴＩＱ、ニューレグリン−１／ＮＲＧ１、Ｎｏｄａｌ、ニューレグリン−３／ＮＲＧ３、ノギン、ニューリチン、Ｎｏｇｏ受容体、ＮｅｕｒｏＤ１、Ｎｏｇｏ−Ａ、ニューロファシン、ＮＯＭＯ、ニューロゲニン−１、Ｎｏｐｅ、ニューロゲニン−２、Ｎｏｒｒｉｎ、ニューロゲニン−３、ｅＮＯＳ、ニューロリジン、ｉＮＯＳ、ニューロフィジンＩＩ、ｎＮＯＳ、ニューロピリン−１、Ｎｏｔｃｈ−１、ニューロピリン−２、Ｎｏｔｃｈ−２、ニューロポイエチン、Ｎｏｔｃｈ−３、ニューロトリミン、Ｎｏｔｃｈ−４、ニュールツリン、ＮＯＶ／ＣＣＮ３、ＮＦＡＭ１、ＮＲＡＧＥ、ＮＦ−Ｈ、ＮｒＣＡＭ、ＮＦｋＢ１、ＮＲＬ、ＮＦｋＢ２、ＮＴ−３、ＮＦ−Ｌ、ＮＴ−４、ＮＦ−Ｍ、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＮＧ２／ＭＣＳＰ、ＮＴＨ１、ＮＧＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１６、ヌクレオステミン、β−ＮＧＦ、Ｎｕｒｒ−１／ＮＲ４Ａ２、ＮＧＦＩ−Ｂα／ＮＲ４Ａ１、ＯＡＳ２、オレキシンＢ、ＯＢＣＡＭ、ＯＳＣＡＲ、ＯＣＡＭ、ＯＳＦ−２／ペリオスチン、ＯＣＩＬ／ＣＬＥＣ２ｄ、オンコスタチンＭ／ＯＳＭ、ＯＣＩＬＲＰ２／ＣＬＥＣ２１、ＯＳＭ  Ｒβ、Ｏｃｔ−３／４、オステオアクチビン／ＧＰＮＭＢ、ＯＧＧ１、オステオアドヘリン、Ｏｌｉｇ１、２、３、オステオカルシン、Ｏｌｉｇ１、オステオクリン、Ｏｌｉｇ２、オステオポンチン、Ｏｌｉｇ３、オステオプロテゲリン／ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、オリゴデンドロサイトマーカー０１、Ｏｔｘ２、オリゴデンドロサイトマーカー０４、ＯＶ−６、ＯＭｇｐ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、オプティシン、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、オレキシンＡ、ＯＡＳ２、オレキシンＢ、ＯＢＣＡＭ、ＯＳＣＡＲ、ＯＣＡＭ、ＯＳＦ−２／ペリオスチン��ＯＣＩＬ／ＣＬＥＣ２ｄ、オンコスタチンＭ／ＯＳＭ、ＯＣＩＬＲＰ２／ＣＬＥＣ２１、ＯＳＭ  Ｒβ、Ｏｃｔ−３／４、オステオアクチビン／ＧＰＮＭＢ、ＯＧＧ１、オステオアドヘリン、Ｏｌｉｇ１、２、３、オステオカルシン、Ｏｌｉｇ１、オステオクリン、Ｏｌｉｇ２、オステオポンチン、Ｏｌｉｇ３、オステオプロテゲリン／ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、オリゴデンドロサイトマーカー０１、Ｏｔｘ２、オリゴデンドロサイトマーカー０４、ＯＶ−６、ＯＭｇｐ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、オプティシン、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、オレキシンＡ、ＲＡＣＫ１、Ｒｅｔ、Ｒａｄ１、ＲＥＶ−ＥＲＢα／ＮＲ１Ｄ１、Ｒａｄ１７、ＲＥＶ−ＥＲＢβ／ＮＲ１Ｄ２、Ｒａｄ５１、Ｒｅｘ−１、Ｒａｅ−１、ＲＧＭ−Ａ、Ｒａｅ−１α、ＲＧＭ−Ｂ、Ｒａｅ−１β、ＲＧＭ−Ｃ、Ｒａｅ−１δ、Ｒｈｅｂ、Ｒａｅ−１ε、リボソームタンパク質Ｓ６、Ｒａｅ−１γ、ＲＩＰ１、Ｒａｆ−１、ＲＯＢＯ１、ＲＡＧＥ、ＲＯＢＯ２、Ｒａ１Ａ／Ｒａ１Ｂ、ＲＯＢＯ３、Ｒａ１Ａ、ＲＯＢＯ４、Ｒａ１Ｂ、ＲＯＲ／ＮＲ１Ｆ１−３（ｐａｎ）、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＲＯＲα／ＮＲ１Ｆ１、ＣＣＬ５／ＲＡＮＴＥＳ、ＲＯＲγ／ＮＲ１Ｆ３、Ｒａｐ１Ａ／Ｂ、ＲＴＫ様オーファン受容体１／ＲＯＲ１、ＲＡＲα／ＮＲ１Ｂ１、ＲＴＫ様オーファン受容体２／ＲＯＲ２、ＲＡＲβ／ＮＲ１Ｂ２、ＲＰ１０５、ＲＡＲγ／ＮＲ１Ｂ３、ＲＰＡ２、Ｒａｓ、ＲＳＫ（ｐａｎ）、ＲＢＰ４、ＲＳＫ１／ＲＳＫ２、ＲＥＣＫ、ＲＳＫ１、Ｒｅｇ２／ＰＡＰ、ＲＳＫ２、ＲｅｇＩ、ＲＳＫ３、ＲｅｇＩＩ、ＲＳＫ４、ＲｅｇＩＩＩ、Ｒ−スポンジン１、Ｒｅｇ  Ｍａ、Ｒ−スポンジン２、Ｒｅｇ  ＩＶ、Ｒ−スポンジン３、リラキシン１、ＲＵＮＸ１／ＣＢＦＡ２、リラキシン２、ＲＵＮＸ２／ＣＢＦＡ１、リラキシン３、ＲＵＮＸ３／ＣＢＦＡ３、ＲＥＬＭα、ＲＸＲα／ＮＲ２Ｂ１、ＲＥＬＭβ、ＲＸＲβ／ＮＲ２Ｂ２、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＲＸＲγ／ＮＲ２Ｂ３、レジスチン、Ｓ１００Ａ１０、ＳＬＩＴＲＫ５、Ｓ１００Ａ８、ＳＬＰ１、Ｓ１００Ａ９、ＳＭＡＣ／Ｄｉａｂｌｏ、Ｓ１００Ｂ、Ｓｍａｄ１、ＳＴＯＯＰ、Ｓｍａｄ２、ＳＡＬＬ１、Ｓｍａｄ３、δ−サルコグリカン、Ｓｍａｄ４、Ｓｃａ−１／Ｌｙ６、Ｓｍａｄ５、ＳＣＤ−１、Ｓｍａｄ７、ＳＣＦ、Ｓ
ｍａｄ８、ＳＣＦ  Ｒ／ｃ−ｋｉｔ、ＳＭＣ１、ＳＣＧＦ、α−平滑筋アクチン、ＳＣＬ／Ｔａｌｌ、ＳＭＵＧ１、ＳＣＰ３／ＳＹＣＰ３、Ｓｎａｉｌ、ＣＸＣＬ１２／ＳＤＦ−１、ナトリウム・カルシウム交換輸送体１、ＳＤＮＳＦ／ＭＣＦＤ２、Ｓｏｇｇｙ−１、α−セクレターゼ、ソニックヘッジホッグ、γ−セクレターゼ、ＳまたはＣＳ１、β−セクレターゼ、ＳまたはＣＳ３、Ｅ−セレクチン、ソーティリン、Ｌ−セレクチン、ＳＯＳＴ、Ｐ−セレクチン、ＳＯＸ１、セマフォリン３Ａ、ＳＯＸ２、セマフォリン３Ｃ、ＳＯＸ３、セマフォリン３Ｅ、ＳＯＸ７、セマフォリン３Ｆ、ＳＯＸ９、セマフォリン６Ａ、ＳＯＸ１０、セマフォリン６Ｂ、ＳＯＸ１７、セマフォリン６Ｃ、ＳＯＸ２１セマフォリン６Ｄ、ＳＰＡＲＣ、セマフォリン７Ａ、ＳＰＡＲＣ様１、セパラーゼ、ＳＰ−Ｄ、セリン／スレオニンホスファターゼ基質Ｉ、スピネシン、セルピンＡ１、Ｆ−スポンジン、セルピンＡ３、ＳＲ−ＡＩ／ＭＳＲ、セルピンＡ４／カリスタチン、Ｓｒｃ、セルピンＡ５／タンパク質Ｃ阻害剤、ＳＲＥＣ−Ｉ／ＳＲ−Ｆ１、セルピンＡ８／アンジオテンシノーゲン、ＳＲＥＣ−ＩＩ、セルピンＢ５、ＳＳＥＡ−１、セルピンＣ１／アンチトロンビン−ＩＩＩ、ＳＳＥＡ−３、セルピンＤ１／ヘパリンコファクターＩＩ、ＳＳＥＡ−４、セルピンＥ１／ＰＡＩ−１、ＳＴ７／ＬＲＰ１２、セルピンＥ２、スタビリン−１、セルピンＦ１、スタビリン−２、セルピンＦ２、スタニオカルシン１、セルピンＧ１／Ｃ１阻害剤、スタニオカルシン２、セルピン１２、ＳＴＡＴ１、血清アミロイドＡ１、ＳＴＡＴ２、ＳＦ−１／ＮＲ５Ａ１、ＳＴＡＴ３、ＳＧＫ、ＳＴＡＴ４、ＳＨＢＧ、ＳＴＡＴ５ａ／ｂ、ＳＨＩＰ、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＨＰ／ＮＲＯＢ２、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＨＰ−１、ＳＴＡＴ６、ＳＨＰ−２、ＶＥ−スタチン、ＳＩＧＩＲＲ、Ｓｔｅｌｌａ／Ｄｐｐａ３、シグレック−２／ＣＤ２２、ＳＴＲＯ−１、シグレック−３／ＣＤ３３、サブスタンスＰ、シグレック−５、スルファミダーゼ／ＳＧＳＨ、シグレック−６、スルファターゼ変更因子１／ＳＵＭＦ１、シグレック−７、スルファターゼ変更因子２／ＳＵＭＦ２、シグレック−９、ＳＵＭＯ１、シグレック−１０、ＳＵＭＯ２／３／４、シグレック−１１、ＳＵＭＯ３、シグレック−Ｆ、スーパーオキシドジスムターゼ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、スーパーオキシドジスムターゼ−１／Ｃｕ−Ｚｎ  ＳＯＤ、ＳＩＧＮＲ４、スーパーオキシドジスムターゼ−２／Ｍｎ−ＳＯＤ、ＳＩＲＰ  β１、スーパーオキシドジスムターゼ−３／ＥＣ−ＳＯＤ、ＳＫＩ、サバイビン、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、シナプシンＩ、スリーピングビューティートランスポサーゼ、シンデカン−１／ＣＤ１３８、Ｓｌｉｔ３、シンデカン−２、ＳＬＩＴＲＫ１、シンデカン−３、ＳＬＩＴＲＫ２、シンデカン−４、ＳＬＩＴＲＫ４、ＴＡＣｌ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＭＥＦＦ１／トモレグリン−１、ＴＡＯ２、ＴＭＥＦＦ２、ＴＡＰＰ１、ＴＮＦα／ＴＮＦＳＦ１Ａ、ＣＣＬ１７／ＴＡＲＣ、ＴＮＦβ／ＴＮＦＳＦ１Ｂ、Ｔａｕ、ＴＮＦ  Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＣ２１／Ｒ−Ｒａｓ２、ＴＮＦ  Ｒ１１／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＣＡＭ−１、ＴＯＲ、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＴＰ−１、ＴＣ−ＰＴＰ、ＴＰ６３／ＴＰ７３Ｌ、ＴＤＧ、ＴＲ、ＣＣＬ２５／ＴＥＣＫ、ＴＲα／ＮＲ１Ａ１、テネイシンＣ、ＴＲβ１／ＮＲ１Ａ２、テネイシンＲ、ＴＲ２／ＮＲ２Ｃ１、ＴＥＲ−１１９、ＴＲ４／ＮＲ２Ｃ２、ＴＥＲＴ、ＴＲＡ−１−８５、テスティカン１／ＳＰＯＣＫ１、ＴＲＡＤＤ、テスティカン２／ＳＰＯＣＫ２、ＴＲＡＦ−１、テスティカン３／ＳＰＯＣＫ３、ＴＲＡＦ−２、ＴＦＰＩ、ＴＲＡＦ−３、ＴＦＰＩ−２、ＴＲＡＦ−４、ＴＧＦ−α、ＴＲＡＦ−６、ＴＧＦ−β、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦＳＦ１０、ＴＧＦ−β１、ＴＲＡＩＬ  Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＬＡＰ（ＴＧＦ−β１）、ＴＲＡＩＬ  Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、潜在型ＴＧＦ−β１、ＴＲＡＩＬ  Ｒ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＴＧＦ−β１．２、ＴＲＡＩＬ  Ｒ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＴＧＦ−β２、ＴＲＡＮＣＥ／ＴＮＦＳＦ１１、ＴＧＦ−β３、ＴｆＲ（トランスフェリンＲ）、ＴＧＦ−β５、アポトランスフェリン、潜在型ＴＧＦ−β  ｂｐ１、ホロトランスフェリン、潜在型ＴＧＦ−β  ｂｐ２、Ｔｒａｐｐｉｎ−２／エラフィン、潜在型ＴＧＦ−β  ｂｐ４、ＴＲＥＭ−１、ＴＧＦ−β  ＲＩ／ＡＬＫ−５、ＴＲＥＭ−２、ＴＧＦ−β  ＲＩＩ、ＴＲＥＭ−３、ＴＧＦ−β  ＲＩＩｂ、ＴＲＥＭＬ１／ＴＬＴ−１、ＴＧＦ−β  ＲＩＩＩ、ＴＲＦ−１、サーモリシン、ＴＲＦ−２、チオレドキシン−１、ＴＲＨ分解エクトエンザイム／ＴＲＨＤＥ、チオレドキシン−２、ＴＲＩＭＳ、チオレドキシン−８０、トリペプチジル−ペプチダーゼＩ、チオレドキシン様５／ＴＲＰ１４、ＴｒｋＡ、ＴＨＯＰ１、ＴｒｋＢ、トロンボモジュリン／ＣＤ１４１、ＴｒｋＣ、トロンボポエチン、ＴＲＯＰ−２、トロンボポエチンＲ、トロポニンＩペプチド３、トロンボスポンジン−１、トロポニンＴ、トロンボスポンジン−２、ＴＲＯＹ／ＴＮＦＲＳＦ１９、トロンボスポンジン−４、トリプシン１、サイモポエチン、トリプシン２／ＰＲＳＳ２、胸腺ケモカイン−１、トリプシン３／ＰＲＳＳ３、Ｔｉｅ−１、トリプターゼ−５／Ｐｒｓｓ３２、Ｔｉｅ−２、トリプターゼα／ＴＰＳ１、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、トリプターゼβ−１／ＭＣＰＴ−７、ＴＩＭ−２、トリプターゼβ−２／ＴＰＳＢ２、ＴＩＭ−３、トリプターゼε／ＢＳＳＰ−４、ＴＩＭ−４、トリプターゼγ−１／ＴＰＳＧ１、ＴＩＭ−５、トリプトファンヒドロキシラーゼ、ＴＩＭ−６、ＴＳＣ２２、ＴＩＭＰ−１、ＴＳＧ、ＴＩＭＰ−２、ＴＳＧ−６、ＴＩＭＰ−３、ＴＳＫ、ＴＩＭＰ−４、ＴＳＬＰ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＳＬＰ  Ｒ、ＴＬＲ１、ＴＳＰ５０、ＴＬＲ２、β−ＩＩＩチューブリン、ＴＬＲ３、ＴＷＥＡＫ／ＴＮＦＳＦ１２、ＴＬＲ４、ＴＷＥＡＫ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１２、ＴＬＲＳ、Ｔｙｋ２、ＴＬＲ６、ホスホチロシン、ＴＬＲ９、チロシンヒドロキシラーゼ、ＴＬＸ／ＮＲ２Ｅ１、チロシンホスファターゼ基質Ｉ、ユビキチン、ＵＮＣ５Ｈ３、Ｕｇｉ、ＵＮＣ５Ｈ４、ＵＧＲＰ１、ＵＮＧ、ＵＬＢＰ−１、ｕＰＡ、ＵＬＢＰ−２、ｕＰＡＲ、ＵＬＢＰ−３、ＵＲＢ、ＵＮＣ５Ｈ１、ＵＶＤＥ、ＵＮＣ５Ｈ２、バニロイドＲ１、ＶＥＧＦ  Ｒ、ＶＡＳＡ、ＶＥＧＦ  Ｒ１／Ｆｌｔ−１、バソヒビン、ＶＥＧＦ  Ｒ２／ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１、バソリン、ＶＥ���Ｆ  Ｒ３／Ｆｌｔ−４、バソスタチン、バーシカン、Ｖａｖ−１、ＶＧＳＱ、ＶＣＡＭ−１、ＶＨＲ、ＶＤＲ／ＮＲ１１１、ビメンチン、ＶＥＧＦ、ビトロネクチン、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＬＤＬＲ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ｖＷＦ−Ａ２、ＶＥＧＦ−Ｄ、シヌクレイン−α、Ｋｕ７０、ＷＡＳＰ、Ｗｎｔ−７ｂ、ＷＩＦ−１、Ｗｎｔ−８ａ  ＷＩＳＰ−１／ＣＣＮ４、Ｗｎｔ−８ｂ、ＷＮＫ１、Ｗｎｔ−９ａ、Ｗｎｔ−１、Ｗｎｔ−９ｂ、Ｗｎｔ−３ａ、Ｗｎｔ−１０ａ、Ｗｎｔ−４、Ｗｎｔ−１０ｂ、Ｗｎｔ−５ａ、Ｗｎｔ−１１、Ｗｎｔ−５ｂ、ｗｎｖＮＳ３、Ｗｎｔ７ａ、ＸＣＲ１、ＸＰＥ／ＤＤＢ１、ＸＥＤＡＲ、ＸＰＥ／ＤＤＢ２、Ｘｇ、ＸＰＦ、ＸＩＡＰ、ＸＰＧ、ＸＰＡ、ＸＰＶ、ＸＰＤ、ＸＲＣＣ１、Ｙｅｓ、ＹＹ１、ＥｐｈＡ４。
【００８０】
他の活性ポリペプチドとしては、下記が挙げられる：ＢＯＴＯＸ、Ｍｙｏｂｌｏｃ、Ｎｅｕｒｏｂｌｏｃ、Ｄｙｓｐｏｒｔ（または他の血清型のボツリヌス神経毒）、アルグルコシダーゼアルファ、ダプトマイシン、ＹＨ−１６、絨毛性ゴナドトロピンアルファ、フィルグラスチム、セトロレリクス、インターロイキン−２、アルデスロイキン、テセロイキン、デニロイキンディフチトクス、インターフェロンアルファ−ｎ３（注射薬）、インターフェロンアルファ−ｎ１、ＤＬ−８２３４、インターフェロン、Ｓｕｎｔｏｒｙ（γ−１ａ）、インターフェロンガンマ、チモシンα１、タソネルミン、ＤｉｇｉＦａｂ、ＶｉｐｅｒａＴＡｂ、ＥｃｈｉＴＡｂ、ＣｒｏＦａｂ、ネシリチド、アバタセプト、アレファセプト、レビフ、エプトテルミンアルファ、テリパラチド（骨粗鬆症）、カルシトニン注射剤（骨疾患）、カルシトニン（経鼻、骨粗鬆症）、エタネルセプト、ヘモグロビングルタマー２５０（ウシ）、ドロトレコギンアルファ、コラゲナーゼ、カルペリチド、組換えヒト上皮成長因子（局所ゲル、創傷治癒）、ＤＷＰ−４０１、ダルベポエチンアルファ、エポエチンオメガ、エポエチンベータ、エポエチンアルファ、デシルジン、レピルジン、ビバリルジン、ノナコグアルファ、モノニン、エプタコグアルファ（活性化）、組換え第ＶＩＩ因子Ｉ＋ＶＷＦ、リコネイト、組換え第ＶＩＩ因子Ｉ、第ＶＩＩ因子Ｉ（組換え）、アルファネート、オクトコグアルファ、第ＶＩＩ因子Ｉ、パリフェルミン、インジキナーゼ（Ｉｎｄｉｋｉｎａｓｅ）、テネクテプラーゼ、アルテプラーゼ、パミテプラーゼ、レテプラーゼ、ナテプラーゼ、モンテプラーゼ、ホリトロピンアルファ、ｒＦＳＨ、ｈｐＦＳＨ、ミカファンギン、ペグフィルグラスチム、レノグラスチム、ナルトグラスチム、セルモレリン、グルカゴン、エキセナチド、プラムリンチド、イミグルセラーゼ、ガルスルファーゼ、ロイコトロピン、モルグラモスチム、トリプトレリン酢酸塩、ヒストレリン（皮下植込錠、Ｈｙｄｒｏｎ）、デスロレリン、ヒストレリン、ナファレリン、リュープロリド徐放デポー（ＡＴＲＩＧＥＬ）、リュープロリド植込錠（ＤＵＲＯＳ）、ゴセレリン、ソマトロピン、ユートロピン、ＫＰ−１０２プログラム、ソマトロピン、ソマトロピン、メカセルミン（成長阻害）、エンフビルチド、Ｏｒｇ−３３４０８、インスリングラルギン、インスリングルリジン、インスリン（吸入）、インスリンリスプロ、インスリンデテミル、インスリン（バッカル錠、ＲａｐｉｄＭｉｓｔ）、メカセルミンリンファバート、アナキンラ、セルモロイキン、９９ｍＴｃ−アプシチド注射薬、ミエロピド、ベータセロン、グラチラマー酢酸塩、Ｇｅｐｏｎ、サルグラモスチム、オプレルベキン、ヒト白血球由来αインターフェロン、Ｂｉｌｉｖｅ、インスリン（組換え）、組換えヒトインスリン、インスリンアスパルト、メカセルミン、ロフェロン−Ａ、インターフェロンアルファ２、アルファフェロン、インターフェロンアルファコン−１、インターフェロンアルファ、アボネックス組換えヒト黄体形成ホルモン、ドルナーゼアルファ、トラフェルミン、ジコノチド、タルチレリン、ジボテルミンアルファ、アトシバン、ベカプレルミン、エプチフィバチド、ゼマリア（Ｚｅｍａｉｒａ）、ＣＴＣ−１１１、Ｓｈａｎｖａｃ−Ｂ、ＨＰＶワクチン（四価）、ＮＯＶ−００２、オクトレオチド、ランレオチド、アンセスチム、アガルシダーゼベータ、アガルシダーゼアルファ、ラロニダーゼ、酢酸プレザチド銅（局所ゲル）、ラスブリカーゼ、ラニビズマブ、アクティミューン、ＰＥＧ−イントロン、トリコミン、組換え屋内チリダニアレルギー減感作注射薬、組換えヒト副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）１−８４（ｓｃ、骨粗鬆症）、エポエチンデルタ、トランスジェニックアンチトロンビンＩＩＩ、グランジトロピン、ビトラーゼ、組換えインスリン、インターフェロン−α（経口ロゼンジ）、ＧＥＭ−２１Ｓ、バプレオチド、イデュルスルファーゼ、オマパトリラト、組換え血清アルブミン、セルトリズマブペゴル、グルカルピダーゼ、ヒト組換えＣ１エステラーゼ阻害剤（血管浮腫）、ラノテプラーゼ、組換えヒト成長ホルモン、エンフビルチド（無針注射、Ｂｉｏｊｅｃｔｏｒ２０００）、ＶＧＶ−１、インターフェロン（アルファ）、ルシナクタント、アビプタジル（吸入、肺疾患）、イカチバント、エカランチド、オミガナン、アウログラブ（Ａｕｒｏｇｒａｂ）、ペキシガナン酢酸塩、ＡＤＩ−ＰＥＧ−２０、ＬＤＩ−２００、デガレリクス、シントレデキン・ベスドトクス、ＦａｖＩｄ、ＭＤＸ−１３７９、ＩＳＡｔｘ−２４７、リラグルチド、テリパラチド（骨粗鬆症）、ティファコギン、ＡＡ−４５００、Ｔ４Ｎ５リポソームローション、カツマキソマブ、ＤＷＰ−４１３、ＡＲＴ−１２３、クリサリン、デスモテプラーゼ、アメジプラーゼ、コリフォリトロピンアルファ、ＴＨ−９５０７、テデュグルチド、Ｄｉａｍｙｄ、ＤＷＰ−４１２、成長ホルモン（徐放注射）、組換えＧ−ＣＳＦ、インスリン（吸入、ＡＩＲ）、インスリン（吸入、Ｔｅｃｈｎｏｓｐｈｅｒｅ）、インスリン（吸入、ＡＥＲＸ）、ＲＧＮ−３０３、ＤｉａＰｅｐ２７７、インターフェロンベータ（肝炎Ｃウイルス感染（ＨＣＶ））、インターフェロンアルファ−ｎ３（経口）、ベラタセプト、経皮インスリンパッチ、ＡＭＧ−５３１、ＭＢＰ−８２９８、キセレプト（Ｘｅｒｅｃｅｐｔ）、オペバカン、ＡＩＤＳＶＡＸ、ＧＶ−１００１、リンホスキャン（ＬｙｍｐｈｏＳｃａｎ）、ランピルナーゼ、リポキシサン、リュスピュルチド（ｌｕｓｕｐｕｌｔｉｄｅ）、ＭＰ５２（β−リン酸三カルシウム担体、骨再生）、メラノーマワクチン、シプロイセルＴ、ＣＴＰ−３７、インセジア（Ｉｎｓｅｇｉａ）、ビテスペン、ヒトトロンビン（凍結、手術による出血）、トロンビン、ＴｒａｎｓＭＩＤ、アルフィメプラーゼ、プリカーゼ、テルリプレシン（静脈内、肝腎症候群）、ＥＵＲ−１００８Ｍ、組換えＦＧＦ−１（注射剤、血管疾患）、ＢＤＭ−Ｅ、ロチガプチド、ＥＴＣ−２１６、Ｐ−１１３、ＭＢＩ−５９４ＡＮ、デュラマイシン（吸入、嚢胞性線維症）、ＳＣＶ−０７、ＯＰＩ−４５、エンドスタチン、アンジオスタチン、ＡＢＴ−５１０、ボウマン・バークインヒビター濃縮物、ＸＭＰ−６２９、９９ｍＴｃ−Ｈｙｎｉｃ−アネキシンＶ、カハラリドＦ、ＣＴＣＥ−９９０８、テベレリクス（持続放出）、オザレリクス、ロミデプシン、ＢＡＹ−５０−４７９８、インターロイキン��４、ＰＲＸ−３２１、ペプスカン、イボクタデキン、ｒｈラクトフェリン、ＴＲＵ−０１５、ＩＬ−２１、ＡＴＮ−１６１、シレンギチド、アルブフェロン、ビファシクス（Ｂｉｐｈａｓｉｘ）、ＩＲＸ−２、ωインターフェロン、ＰＣＫ−３１４５、ＣＡＰ−２３２、パシレオチド、ｈｕＮ９０１−ＤＭ１、卵巣癌免疫療法ワクチン、ＳＢ−２４９５５３、オンコバックス−ＣＬ、オンコバックス−Ｐ、ＢＬＰ−２５、セルバックス（ＣｅｒＶａｘ）−１６、マルチエピトープペプチドメラノーマワクチン（ＭＡＲＴ−１、ｇｐ１００、チロシナーゼ）、ネミフィチド、ｒＡＡＴ（吸入）、ｒＡＡＴ（皮膚科学的）、ＣＧＲＰ（吸入、喘息）、ペグスネルセプト、チモシンβ−４、プリチデプシン、ＧＴＰ−２００、ラモプラニン、ＧＲＡＳＰＡ、ＯＢＩ−１、ＡＣ−１００、サケカルシトニン（経口、ｅｌｉｇｅｎ）、カルシトニン（経口、骨粗鬆症）、エクサモレリン、カプロモレリン、カルデバ（Ｃａｒｄｅｖａ）、ベラフェルミン、１３１Ｉ−ＴＭ−６０１、ＫＫ−２２０、ＴＰ−１０、ウラリチド、デペレスタット、ヘマタイド、クリサリン（局所）、ｒＮＡＰｃ２、組換え第ＶＩＩ因子Ｉ（ペグ化リポソーム）、ｂＦＧＦ、ペグ化組換えスタフィロキナーゼ変異体、Ｖ−１０１５３、ソノリシスプロリーゼ（ＳｏｎｏＬｙｓｉｓ  Ｐｒｏｌｙｓｅ）、ニューロバクス、ＣＺＥＮ−００２、島細胞ネオゲネシス療法、ｒＧＬＰ−１、ＢＩＭ−５１０７７、ＬＹ−５４８８０６、エキセナチド（制御放出、Ｍｅｄｉｓｏｒｂ）、ＡＶＥ−００１０、ＧＡ−ＧＣＢ、アボレリン、ＡＯＤ−９６０４、リナクロチド酢酸塩、ＣＥＴｉ−１、ヘモスパン、ＶＡＬ（注射剤）、速効性インスリン（注射剤、Ｖｉａｄｅｌ）、鼻腔内インスリン、インスリン（吸入）、インスリン（経口、ｅｌｉｇｅｎ）、組換えメチオニルヒトレプチン、ピトラキンラ皮下注射薬、湿疹）、ピトラキンラ（吸入乾燥粉末、喘息）、マルチカイン、ＲＧ−１０６８、ＭＭ−０９３、ＮＢＩ−６０２４、ＡＴ−００１、ＰＩ−０８２４、Ｏｒｇ−３９１４１、Ｃｐｎ１０（自己免疫疾患／炎症）、タラクトフェリン（局所）、ｒＥＶ−１３１（点眼用）、ｒＥＶ−１３１（呼吸器疾患）、経口組換えヒトインスリン（糖尿病）、ＲＰＩ−７８Ｍ、オプレルベキン（経口）、ＣＹＴ−９９００７  ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、ＤＴＹ−００１、バラテグラスト、インターフェロンアルファ−ｎ３（局所）、ＩＲＸ−３、ＲＤＰ−５８、タウフェロン、胆汁酸塩刺激リパーゼ、メリスパーゼ（Ｍｅｒｉｓｐａｓｅ）、アルカリホスファターゼ、ＥＰ−２１０４Ｒ、メラノタン−ＩＩ、ブレメラノチド、ＡＴＬ−１０４、組換えヒトマイクロプラスミン、ＡＸ−２００、ＳＥＭＡＸ、ＡＣＶ−１、Ｘｅｎ−２１７４、ＣＪＣ−１００８、ダイノルフィンＡ、ＳＩ−６６０３、ＬＡＢ  ＧＨＲＨ、ＡＥＲ−００２、ＢＧＣ−７２８、マラリアワクチン（ビロソーム、ＰｅｖｉＰＲＯ）、ＡＬＴＵ−１３５、パルボウイルスＢ  １９ワクチン、インフルエンザワクチン（組換えノイラミニダーゼ）、マラリア／ＨＢＶワクチン、炭疽ワクチン、Ｖａｃｃ−５ｑ、Ｖａｃｃ−４×、ＨＩＶワクチン（経口）、ＨＰＶワクチン、Ｔａｔトキソイド、ＹＳＰＳＬ、ＣＨＳ−１３３４０、ＰＴＨ（１−３４）リポソームクリーム（ノバソーム）、オスタボリン−Ｃ、ＰＴＨ類似体（局所、乾癬）、ＭＢＲ１−９３．０２、ＭＴＢ７２Ｆワクチン（結核）、ＭＶＡ−Ａｇ８５Ａワクチン（結核）、ＦＡＲ−４０４、ＢＡ−２１０、組換えペストＦ１Ｖワクチン、ＡＧ−７０２、ＯＸＳＯＤｒｏｌ、ｒＢｅｔＶ１、Ｄｅｒ−ｐ１／Ｄｅｒ−ｐ２／Ｄｅｒ−ｐ７アレルゲン標的ワクチン（チリダニアレルギー）、ＰＲ１ペプチド抗原（白血病）、変異ｒａｓワクチン、ＨＰＶ−１６  Ｅ７リポペプチドワクチン、ラビリンチンワクチン（腺癌）、ＣＭＬワクチン、ＷＴ１−ペプチドワクチン（癌）、ＩＤＤ−５、ＣＤＸ−１１０、ペントリス（Ｐｅｎｔｒｙｓ）、ノレリン、ＣｙｔｏＦａｂ、Ｐ−９８０８、ＶＴ−１１１、イクロカプチド、テルベルミン（皮膚科学的、糖尿病性足部潰瘍）、ルピントリビル、レチキュロス、ｒＧＲＦ、ＰＩＡ、α−ガラクトシダーゼＡ、ＡＣＥ−０１１、ＡＬＴＵ−１４０、ＣＧＸ−１１６０、アンジオテンシン治療ワクチン、Ｄ−４Ｆ、ＥＴＣ−６４２、ＡＰＰ−０１８、ｒｈＭＢＬ、ＳＣＶ−０７（経口、結核）、ＤＲＦ−７２９５、ＡＢＴ−８２８、ＥｒｂＢ２特異免疫毒素（抗癌）、ＤＴ３８８１Ｌ−３、ＴＳＴ−１００８８、ＰＲＯ−１７６２、コンボトックス、コレシストキニン−Ｂ／ガストリン−受容体結合ペプチド、１１１Ｉｎ−ｈＥＧＦ、ＡＥ−３７、トラスツズマブ−ＤＭ１、アンタゴニストＧ、ＩＬ−１２（組換え）、ＰＭ−０２７３４、ＩＭＰ−３２１、ｒｈＩＧＦ−ＢＰ３、ＢＬＸ−８８３、ＣＵＶ−１６４７（局所）、Ｌ−１９系放射免疫療法薬（癌）、Ｒｅ−１８８−Ｐ−２０４５、ＡＭＧ−３８６、ＤＣ／１５４０／ＫＬＨワクチン（癌）、ＶＸ−００１、ＡＶＥ−９６３３、ＡＣ−９３０１、ＮＹ−ＥＳＯ−１ワクチン（ペプチド）、ＮＡ１７．Ａ２ペプチド、メラノーマワクチン（パルス抗原治療薬）、前立腺癌ワクチン、ＣＢＰ−５０１、組換えヒトラクトフェリン（ドライアイ）、ＦＸ−０６、ＡＰ−２１４、ＷＡＰ−８２９４Ａ２（注射剤）、ＡＣＰ−ＨＩＰ、ＳＵＮ−１１０３１、ペプチドＹＹ［３−３６］（肥満、鼻腔内）、ＦＧＬＬ、アタシセプト、ＢＲ３−Ｆｃ、ＢＮ−００３、ＢＡ−０５８、ヒト副甲状腺ホルモン１−３４（経鼻、骨粗鬆症）、Ｆ−１８−ＣＣＲ１、ＡＴ−１００１（セリアック病／糖尿病）、ＪＰＤ−００３、ＰＴＨ（７−３４）リポソームクリーム
（ノバソーム）、デュラマイシン（点眼用、ドライアイ）、ＣＡＢ−２、ＣＴＣＥ−０２１４、糖ペグ化エリスロポエチン、ＥＰＯ−Ｆｃ、ＣＮＴＯ−５２８、ＡＭＧ−１１４、ＪＲ−０１３、第ＸＩＩＩ因子、アミノカンジン、ＰＮ−９５１、７１６１５５、ＳＵＮ−Ｅ７００１、ＴＨ−０３１８、ＢＡＹ−７３−７９７７、テベレリクス（即時放出）、ＥＰ−５１２１６、ｈＧＨ（制御放出、Ｂｉｏｓｐｈｅｒｅ）、ＯＧＰ−Ｉ、シフビルチド、ＴＶ−４７１０、ＡＬＧ−８８９、Ｏｒｇ−４１２５９、ｒｈＣＣ１０、Ｆ−９９１、チモペンチン（肺疾患）、ｒ（ｍ）ＣＲＰ、肝選択的インスリン、スバリン、Ｌ１９−ＩＬ−２融合タンパク質、エラフィン、ＮＭＫ−１５０、ＡＬＴＵ−１３９、ＥＮ−１２２００４、ｒｈＴＰＯ、トロンボポエチン受容体アゴニスト（血小板減少性障害）、ＡＬ−１０８、ＡＬ−２０８、神経成長因子アンタゴニスト（疼痛）、ＳＬＶ−３１７、ＣＧＸ−１００７、ＩＮＮＯ−１０５、経口テリパラチド（ｅｌｉｇｅｎ）、ＧＥＭ−ＯＳ１、ＡＣ−１６２３５２、ＰＲＸ−３０２、ＬＦｎ−ｐ２４融合ワクチン（Ｔｈｅｒａｐｏｒｅ）、ＥＰ−１０４３、肺炎球菌小児ワクチン、マラリアワクチン、髄膜炎菌Ｂ群ワクチン、新生児Ｂ群連鎖球菌ワクチン、炭疽ワクチン、ＨＣＶワクチン（ｇｐＥ１＋ｇｐＥ２＋ＭＦ−５９）、中耳炎治療法、ＨＣＶワクチン（コア抗原＋ＩＳＣＯマトリクス）、ｈＰＴＨ（１−３４）（経皮、ＶｉａＤｅｒｍ）、７６８９７４、ＳＹＮ−１０１、ＰＧＮ−００５２、アビスクミン、ＢＩＭ−２３１９０、結核ワクチン、マルチエピトープチロシナーゼペプチド、癌ワクチン、エンカスチム、ＡＰＣ−８０２４、Ｇ１−５００５、ＡＣＣ−００１、ＴＴＳ−ＣＤ３、血管標的ＴＮＦ（固形腫瘍）、デスモプレシン（頬側制御放出）、オネルセプト、ＴＰ−９２０１。
【００８１】
治療活性タンパク質を含む公知の融合タンパク質（Ｆｃドメイン、アルブミン、またはトランスフェリンに連結、生理活性ペプチドを含む）は特に興味深く、これらは、発明によるムチン−ドメインポリペプチドリンカーを付加する（または既存のリンカーをこれと置換する）ことにより改善することができ、限定はされないが、下記の融合タンパク質が挙げられる：ｓＴＮＦＲ２、ＣＴＬＡ４、ＴＡＣＩ、ＬＦＡ、ＩＬ−１ＲＩ、ＩＬ−１ＲＡｃＰ、ＶＥＧＦ受容体、ＴＰＯ受容体アゴニスト、ＥＰＯ受容体アゴニスト、ＧＬＰ−１、エキセンディン−４。
【００８２】
多くの活性タンパク質の核酸およびアミノ酸配列は当技術分野でよく知られており、説明および配列は、公開データベース、例えばＣｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓデータベース（例えば、ＣＡＳ登録）、ＧｅｎＢａｎｋ、ＧｅｎＰｅｐｔ、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｐｒｏｔｅｉｎ、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ＵｎｉＰｒｏｔ）および購読により提供されるデータベース、例えばＧｅｎＳｅｑ（例として、Ｄｅｒｗｅｎｔ）において入手可能である。ポリヌクレオチド配列は所定の活性タンパク質（例えば、全長か成熟のいずれか）をコードする野生型ポリヌクレオチド配列であってもよく、または場合によっては、配列は野生型ポリヌクレオチド配列の変異体（例えば、野生型活性タンパク質をコードするポリヌクレオチド、ここで、ポリヌクレオチドのＤＮＡ配列は、例えば、特定の種における発現に対し最適化されている；または、野生型タンパク質の変異体、例えば部位特異的突然変異体またはアレル変異体をコードするポリヌクレオチドであってもよい。当技術分野で知られている方法を使用して、および／または本明細書で提供され、実施例においてより完全に記載されるガイダンスおよび方法と併用して、発明により企図される融合タンパク質コンストラクトを生成させるために、活性タンパク質の野生型もしくはコンセンサスｃＤＮＡ配列またはコドン最適化変異体を使用することは、十分当業者の能力の範囲内である。
【００８３】
融合タンパク質の薬物動態特性
本発明は、ムチン−ポリペプチドドメインに連結されていない治療活性タンパク質に比べて増強された薬物動態を有する治療活性タンパク質の融合タンパク質を提供し、これは、本明細書で記載される方法により組成物に対して決定される最適な用量で使用される場合、発明によるムチン−ドメインポリペプチドに連結されていない、同等用量の治療活性タンパク質に比べて増強された薬物動態を達成することができる。本明細書では、「同等用量」は、同等の様式で被験体に投与される治療活性タンパク質に対して等価のモル／ｋｇでの投与を意味する。当技術分野では、融合タンパク質の「同等投与量」は、より大きな重量の作用物質を表すが、融合タンパク質の投与において、本質的に同じモル等価物の治療活性タンパク質を有するおよび／または治療活性タンパク質に対して同じ概算モル濃度を有することが理解されるであろう。
【００８４】
発明によるムチン−ドメインポリペプチドリンカーを用いることにより増強され得る薬物動態特性としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：半減期、Ｔｍａｘ、Ｃｍａｘ（この場合、増強は最高最低間差の低減を示す）、分布、または個々の効果を組み合わせることによる作用持続期間。
【００８５】
物理化学的および医薬特性
治療薬のＰＫ特性の増強に加えて、ムチン−ドメインポリペプチドリンカーを含む融合タンパク質は、治療活性ペプチドまたはタンパク質の医薬または物理化学的特性（例えば、水溶解度）を改善するのに有用であり得る。溶解度改善は、ムチンへの高親水性炭水化物の付加により、ならびに適正なムチン−ポリペプチド配列の選択により媒介させることができ、これは、さらにイオン性残基、例えばアスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、およびアルギニンを含み得る。イオン性残基により、融合タンパク質のｐＩの調節が得られ、よって、製剤中のタンパク質の総電荷が生理的ｐＨおよび浸透圧に到達する。
【００８６】
発明の融合タンパク質は、本明細書で記載される方法を使用して作成することができ、アッセイすることができ、融合タンパク質の物理化学的特性が所望の特性となったことが確認できる。１つの実施形態では、ムチン−ドメインポリペプチドは、融合タンパク質が、融合タンパク質に連結されていない治療活性タンパク質に比べて少なくとも約２５％超、あるいはムチンドメインリンカーを含まない対応する治療活性タンパク質よりも少なくとも約３０％、または少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％、または少なくとも約７５％、または少なくとも約１００％、または少なくとも約２００％、または少なくとも約３００％、または少なくとも約４００％、または少なくとも約５００％、または少なくとも約１０００％超以内にある水溶解度を有するように選択される。
【００８７】
融合タンパク質の使用
別の態様では、本発明は、治療活性タンパク質に媒介される疾患、障害または病状における有益な効果を達成する方法を提供する。本発明は、ムチン−ドメインポリペプチドリンカーなしで、ポリペプチド融合パートナーに融合された場合の治療活性タンパク質のある一定の不利益および／または制限に対処する。
【００８８】
１つの実施形態では、本発明は、被験体に治療的または予防的有効量の融合タンパク質を投与する工程を含む、被験体において有益な効果を達成するための方法を提供する。有効量は疾患または障害を治療するのを助けるのに有益な効果を生成させることができる。場合によっては、有益な効果を達成するための方法は、治療タンパク質またはペプチドが存在しない場合の、疾患および疾患カテゴリに対して被験体を治療するために治療的有効量の融合タンパク質組成物を投与することを含むことができる。
【００８９】
本発明の組成物の投与による治療に適した疾患としては、限定はされないが、下記が挙げられる：癌、炎症疾患、関節炎、骨粗鬆症、感染症、特に肝炎、細菌感染症、ウイルス感染症、遺伝性疾患、肺疾患、糖尿病、ホルモン関連疾患、アルツハイマー病、心疾患、心筋梗塞、深部静脈血栓症、循環系の疾患、高血圧、低血圧、アレルギー、疼痛緩和、低身長症および他の成長障害、中毒、斑状凝固（ｂｌｏｔ  ｃｌｏｔｔｉｎｇ）疾患、自然免疫系の疾患、塞栓症、創傷治癒、熱傷の治癒、クローン病、喘息、潰瘍、敗血症、緑内障、脳血管虚血、呼吸促迫症候群、角膜潰瘍、腎疾患、糖尿病性足部潰瘍、貧血、第ＩＸ因子欠乏症、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、第ＶＩＩ因子欠乏症、粘膜炎、嚥下障害、血小板障害、肺塞栓症、不妊症、性腺機能低下症、白血球減少症、好中球減少症、子宮内膜症、ゴーシェ病、肥満、リソソーム貯蔵疾患、ＡＩＤＳ、月経前症候群、ターナー症候群、悪液質、筋ジストロフィー、ハンチントン病、大腸炎、ＳＡＲＳ、カポジ肉腫、肝臓腫瘍、乳腺腫瘍、神経膠腫、非ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病；ヘアリー細胞白血病；腎細胞癌；肝臓腫瘍；リンパ腫；メラノーマ、多発性硬化症、カポジ肉腫、乳頭腫ウイルス、肺気腫、気管支炎、歯周病、認知症、出産、非小細胞肺癌、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、先端巨大症、乾癬、卵巣腫瘍、ファブリー病、リソソーム貯蔵疾患。
【００９０】
１つの実施形態では、方法は、ムチン−ドメインポリペプチドリンカーを含む発明による融合タンパク質および少なくとも１つの薬学的に許容される担体を、治療の必要な被験体に投与することを含み、融合タンパク質により媒介される少なくとも１つのパラメータ、生理的状態、または臨床転帰において、同等用量で投与されるムチン−ドメインポリペプチドリンカーがない融合タンパク質を含む医薬組成物の投与により媒介される効果に比べ、より大きな改善が得られる。１つの実施形態では、医薬組成物は治療的有効用量で投与される。別の実施形態では、医薬組成物は、複数の同時または連続用量を用い、治療的有効用量レジメン（本明細書で規定される）を使用して、投与期間の長さの間投与される。
【００９１】
融合タンパク質の治療的有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する抗体または抗体部分の能力などの因子によって変動し得る。治療的有効量はまた、融合タンパク質の有毒または有害な効果のいずれよりも治療的に有益な効果が上回るものである。予防的有効量は、所望の予防結果を達成するのに必要とされる期間の間必要とされる融合タンパク質の量を示す。
【００９２】
別の態様では、本発明は、天然治療活性タンパク質と比べて、安定性の増加、水溶性の増加、および／または製剤の容易さが得られる融合タンパク質の製造方法を提供する。１つの実施形態では、発明は、ムチン−ドメインポリペプチドリンカーを含まない融合タンパク質と比べて、融合タンパク質の水溶解度を増加させる方法を含む。融合タンパク質に水溶性の増加を与えるムチン−ドメインポリペプチドリンカーの特性に寄与する因子としては、高いパーセンテージのグリコシル化、グリカンの型、およびムチン−ドメインポリペプチドのアミノ酸上の電荷が挙げられる。いくつかの実施形態では、この方法により、水溶性が、天然治療活性タンパク質と比べ、生理的条件下、または治療的に許容される製剤中で、少なくとも約５０％、または少なくとも約６０％超、または少なくとも約７０％超、または少なくとも約８０％超、または少なくとも約９０％超、または少なくとも約１００％超、または少なくとも約１５０％超、または少なくとも約２００％超、または少なくとも約４００％超、または少なくとも約６００％超、または少なくとも約８００％超、または少なくとも約１０００％超、または少なくとも約２０００％超、または少なくとも約４０００％超、または少なくとも約６０００％超である、融合タンパク質が得られる。
【００９３】
核酸配列
本発明は融合タンパク質をコードする単離されたポリ核酸および発明の融合タンパク質をコードするポリ核酸分子に相補的な配列を提供する。別の態様では、発明は、発明の融合タンパク質をコードするポリ核酸および発明の融合タンパク質に相補的な配列、例えば相同変異体を生成するための方法を含む。一般に、本発明は、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を生成させ、得られた遺伝子産物を発現させる方法を提供し、ムチン−ドメインポリペプチドおよび活性タンパク質の各々をコードするヌクレオチドを構築すること、成分をインフレームで連結すること、コード遺伝子を適切な発現ベクターに組み入れること、適切な宿主細胞を発現ベクターで形質転換すること、および融合タンパク質を形質転換された宿主細胞で発現させること、よって、発明の融合タンパク質を生成させることを含む。分子生物学における標準組換え技術を使用して、本発明のポリヌクレオチドおよび発現ベクターを製造することができる。発明によれば、融合タンパク質をコードする核酸配列を使用して、適切な宿主細胞において融合タンパク質の発現に向かわせる組換えＤＮＡ分子を生成させることができる。いくつかのクローニング戦略が本発明を実施するのに好適であると想定され、それらの多くは融合タンパク質をコードするための遺伝子またはその相補体を含むコンストラクトを生成させるために使用することができる。１つの実施形態では、クローニング戦略は、活性タンパク質およびムチン−ドメインポリペプチドを含む単量体融合タンパク質をコードする遺伝子を作成するために使用することができるであろう。この段落において以上で記載される前の実施形態では、遺伝子は、切断配列（複数可）をもコードし得るスペーサー配列をコードするヌクレオチドをさらに含むことができる。
【００９４】
１つのアプローチでは、融合タンパク質に対応するＤＮＡ配列を含むコンストラクトが最初に調製される。活性タンパク質および／またはムチンポリペプチドドメインをコードするＤＮＡは、標準方法を用いて、活性タンパク質のｍＲＮＡを有し、それを検出可能なレベルで発現すると考えられる組織または単離された細胞から作成されたｃＤＮＡライブラリから入手することができる。必要に応じて、ｃＤＮＡに逆転写されないｍＲＮＡの前駆体およびプロセシング中間体を検出するために、コード配列はＳａｍｂｒｏｏｋ、ｅｔ  ａｌ．、上記で記載される従来のプライマー伸長手順を用いて入手することができる。したがって、ＤＮＡは便宜上、そのような起源から調製されたｃＤＮＡライブラリから入手することができる。コード遺伝子（複数可）はまた、ゲノムライブラリから入手することができ、または当技術分野で知られている標準合成手順（例えば、自動化核酸合成）により、公的に入手可能なデータベース、特許、文献参照またはから入手されるＤＮＡ配列を使用して作成することができる。そのような手順は当技術分野でよく知られており、科学および特許文献においてきちんと記載されている。例えば、活性タンパク質または活性タンパク質の断片もしくは変異体またはムチン−ドメインポリペプチドのアミノ酸配列を含むＣＡＳ登録またはＧｅｎＢａｎｋデータベースにおけるエントリに対応する配列は、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（ＣＡＳ）登録番号（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙにより公開）および／またはワールドワイドウェブ上で、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖにて入手することができる、国立バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）（ＮＣＢＩ）ウェブページを介して入手可能なＧｅｎＢａｎｋ受入番号から入手することができる。
【００９５】
ポリペプチド融合パートナーの１つまたは両方をコードする遺伝子またはポリヌクレオチドは、その後、コンストラクトにクローニングすることができ、これは、生物システムにおける高レベルのタンパク質発現のための適切な転写および翻訳配列の制御下のプラスミドまたは他のベクターとすることができる。後の工程において、ムチン−ドメインポリペプチドリンカーをコードする第２の遺伝子またはポリヌクレオチドは、例えば、ポリペプチド融合パートナーのＮおよび／またはＣ末端をコードするヌクレオチドに、それを融合パートナーをコードするヌクレオチドに隣接して、インフレームでコンストラクトにクローニングすることにより、遺伝的に融合される。
【００９６】
融合タンパク質をコードする得られたポリヌクレオチドはその後、発現ベクターに個々にクローニングすることができる。核酸配列は、ベクターに様々な手順により挿入させることができる。一般に、ＤＮＡは、適切な制限エンドヌクレアーゼ部位（複数可）に、当技術分野で知られている技術を用いて挿入される。ベクター成分としては一般に下記が挙げられるが、それらに限定されない：１つ以上のシグナル配列、複製開始点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列。１つ以上のこれらの成分を含む好適なベクターの作成は、当業者に知られている標準ライゲーション技術を使用する。そのような技術は当技術分野でよく知られており、科学および特許文献においてきちんと説明されている。
【００９７】
好適なベクター、宿主、および発現系は組換え発現の技術分野における当業者によく知られている。様々なベクターが公的に入手可能である。ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ウイルス粒子、またはファージの形態であってもよい。発現およびクローニングベクターのどちらも、ベクターを１つ以上の選択された宿主細胞中で複製させることができ、さらに宿主細胞内での組換えタンパク質の発現および翻訳後修飾を可能にする核酸配列を含む。
【００９８】
本発明はまた、本明細書で開示される単量体融合タンパク質組成物を発現するための宿主細胞を提供する。好適な真核生物宿主細胞の例としては下記が挙げられるが、それらに限定されない：酵母宿主、例えばサッカロマイセス・セレビシエ、ピキア・パストリス、およびハンゼヌラ・ポリモルファ；昆虫宿主、例えばスポドプテラ・フルギペルダＳｆ９、スポドプテラ・フルギペルダＳｆ２１、およびＨｉｇｈ  Ｆｉｖｅ細胞；ならびに哺乳類宿主、例えばマウス線維芽細胞細胞（Ｃ１２７−ＢＰＶ）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ−ＤＨＦＲ、ＣＨＯ−ＮＥＯＳＰＬＡ、ＣＨＯ−ＧＳ）、およびマウス骨髄腫細胞（ＮＳＯ−ＧＳ）。
【００９９】
発現された融合タンパク質は当技術分野で知られている方法を介して、または本明細書で開示される方法により精製され得る。ゲル濾過、親和性精製、塩分別、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイト吸着クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィーおよびゲル電気泳動などの手順が使用され得；それぞれ、個々の宿主細胞により産生された融合タンパク質を回収および精製するように調整される。精製方法は、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｋ．  Ｓｃｏｐｅｓ，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒ．  Ｃａｓｔｏｒ  （ｅｄ．），  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  １９９４、およびＳａｍｂｒｏｏｋ，  ｅｔ  ａｌ．，  上記に記載される。多段階精製分離もまた，Ｂａｒｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １０：１７９−９０  （１９９０）およびＢｅｌｏｗ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．  Ａ．  ６７９：６７−８３  （１９９４）に記載される。
【０１００】
医薬組成物
本発明は発明の融合タンパク質を含む医薬組成物を提供する。１つの実施形態では、医薬組成物は融合タンパク質および少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む。本発明の融合タンパク質は、薬学的に有用な組成物を調製するための公知の方法により製剤化することができ、よって、ポリペプチドは、薬学的に許容される担体ビヒクル、例えば水溶液または緩衝液、薬学的に許容される懸濁液およびエマルジョンと組み合わせられる。非水溶媒の例としては、プロピルエチレングリコール、ポリエチレングリコールおよび植物油が挙げられる。治療製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｏｓｏｌ，  Ａ．  Ｅｄ．  （１９８０）に記載されるように、所望の純度を有する活性成分を任意的な生理的に許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより、凍結乾燥した製剤または水溶液の形態で貯蔵するように調製される。
【０１０１】
医薬組成物は経口的に、鼻腔内に、非経口的にまたは吸入療法により投与することができ、錠剤、ロゼンジ、顆粒、カプセル、丸薬、アンプル、坐薬またはエアロゾル形態の形態をとることができる。それらはまた、水性または非水性希釈剤中の活性成分の懸濁液、溶液およびエマルジョン、シロップ、顆粒または粉末の形態をとることができる。加えて、医薬組成物はまた、他の薬学的に活性な化合物または複数の発明の化合物を含むことができる。
【０１０２】
より特定的には、本医薬組成物は治療法のために、任意の好適な経路、例えば、経口、直腸、経鼻、局所（経皮、エアロゾル、頬側および舌下を含む）、腟内、非経口（皮下、皮下またはくも膜下腔内に注入ポンプにより、筋肉内、静脈内および皮内）、硝子体内、および肺により投与することができる。好ましい経路は治療薬、レシピエントの状態および年齢、および治療される疾患によって変動することもまた認識されるであろう。
【０１０３】
１つの好ましい実施形態では、組成物は、ルーチン手順にしたがい、ヒトへの静脈内投与のために適合された医薬組成物として製剤化される。典型的には、静脈内投与のための組成物は滅菌等張水性緩衝液中の溶液である。組成物が注入により投与される場合、滅菌医薬品グレード水または生理食塩水を含む注入ビンで分注することができる。組成物が注射により投与される場合、注射用の滅菌水または生理食塩水のアンプルが提供され、よって、材料成分は投与前に混合され得る。
【０１０４】
１つの好ましい実施形態では、医薬組成物は皮下投与される。この実施形態では、組成物は投与前に再構成される凍結乾燥した粉末として供給され得る。組成物はまた液体形態で供給することができ、これは直接患者に投与することができる。１つの実施形態では、組成物は予め充填されたシリンジ中の液体として供給され、よって、患者は容易に、組成物を自己投与することができる。
【０１０５】
別の実施形態では、本発明の組成物はリポソームに封入され、それらは制御された様式で長期間にわたり有益な活性剤を送達するのに有用であることが証明されている。リポソームは捕捉された水性容積を含む閉鎖二分子層膜である。リポソームはまた、単一膜二分子層を有する単層小胞または多重膜二分子層を有する多重膜小胞（各々が水層により次のものから分離）であってもよい。得られた膜二分子層の構造は脂質の疎水性（非極性）尾部が二分子層の中心に向かって配向され、親水性（極性）頭部が水相に向かって配向されるようなものである。１つの実施形態では、リポソームは、単核食細胞系の器官、主として肝臓および脾臓による取り込みを回避する可塑性水溶性ポリマでコートされてもよい。リポソームを取り囲む好適な親水性ポリマとしては、下記が挙げられるが、それらに限定されない：ＰＥＧ、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポリメチルオキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリヒドロキシプロピルメタクリレート、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ヒドロキシメチルセルロースヒドロキシエチルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリアスパルタミドおよび米国特許第６，３１６，０２４号；６，１２６，９６６号；６，０５６，９７３号および６，０４３，０９４号（それらの内容は全体として参照により組み込まれる）に記載される親水性ペプチド配列。
【０１０６】
リポソームは、当技術分野で知られている任意の脂質または脂質の組み合わせから構成され得る。例えば、小胞形成脂質は天然起源または合成脂質であってもよく、リン脂質、例えばホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール（ｐｈａｓｐｈａｔｉｄｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ）、ホスファチジルイノシトール、およびスフィンゴミエリン（米国特許第６，０５６，９７３号および５，８７４，１０４号において開示される）が挙げられる。小胞形成脂質はまた、糖脂質、セレブロシド、またはカチオン性脂質、例えば１，２−ジオレイルオキシ−３−（トリメチルアミノ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）；Ｎ−［１−（２，３，−ジテトラデシルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）；Ｎ−［１−（２，３，−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）；Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）；３［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモリ］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）；またはジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）（これらもまた米国特許第６，０５６，９７３号で開示されている）であってもよい。コレステロールはまた、米国特許第５，９１６，５８８号および５，８７４，１０４号に開示されるように、小胞に安定性を付与する適正な範囲で存在し得る。
【０１０７】
液体製剤では、所望の特性は、製剤が静脈内、筋肉内、関節内、または皮下投与のための２５、２８、３０、３１、３２ゲージ針を通過することができる形態で供給されることである。
【０１０８】
他の実施形態では、組成物は鼻腔内、頬側、または舌下経路を介して脳に送達させることができ、活性剤の嗅覚経路を通してのＣＮＳ内へ伝達が可能になり、全身投与の低減が可能になる。この投与経路のために一般に使用される装置は米国特許第６，７１５，４８５号に含まれている。この経路を介して送達される組成物はＣＮＳ投与を増加させ、ある一定の薬物と関連する全身毒性リスクを低減させる総体内負荷を低減させることができる。皮下埋め込み型装置での送達のための医薬組成物の調製は、当技術分野で知られている方法、例えば、例として米国特許第３，９９２，５１８号；５，６６０，８４８号；および５，７５６，１１５号で開示されているものを用いて実施することができる。
【０１０９】
実施例
下記実施例は、例として提供され、決して、特許請求される発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
【０１１０】
実施例１．インビトロでのＩＬ−１Ｒａ−ムチン−Ｆｃ融合タンパク質活性
ヒトＩＬ−１ＲａのＩｇＧ１由来のＦｃドメインとの融合タンパク質を作製した。ここで、ＩＬ−１ＲａをＩｇＧ１ヒンジを介して直接連結させ（ＲＤＢ１８００）（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）、あるいはヒトＭＵＣ２０由来の２つのタンデム反復をＦｃドメインとＩＬ−１Ｒａ（ＲＤＢ１８１９）の間に挿入した（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）。遺伝子を合成的に合成し（Ｇｅｎｅａｒｔ）、ｐｃＤＮＡ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、その後、ＣＨＯ−Ｓ細胞において、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて一時的に発現させた。タンパク質をプロテインＡ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製し、ＰＢＳに対して透析した。
【０１１１】
ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−１β細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）はＮＦ−κＢ／ＡＰ−１経路のＩＬ−１βに誘導される活性化をモニタすることにより、インビトロで細胞生理活性ＩＬ−１βを検出するように特異的に設計されたヒト胚性腎臓である。細胞系は５つのＮＦκｂおよび５つのＡＰ−１結合部位に融合されたＩＦＮ−βミニマルプロモーターの制御下で、誘導性分泌胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター遺伝子を発現する。ＩＬ−１βアンタゴニストアッセイでは、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ＩＬ−１β細胞を５０，０００細胞／ウェルで、２ｍＭのＬ−ｇｌｕおよび１０％の熱失活したＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）および５７ｐＭのＩＬ−１β（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）を含むＤＭＥＭ培地中に蒔いた。細胞を２０時間、３７℃、５％ＣＯ２で、様々な濃度のＩＬ−１Ｒａ、ＲＤＢ１８００またはＲＤＢ１８１９と共にインキュベートした。ＳＥＡＰ産生をＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を添加し、３時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートすることにより検出し、その後、プレートリーダーで６３０ｎｍにて読み取った。
【０１１２】
ＳＥＡＰ遺伝子のＩＬ−１β活性化はＩＬ−１βアンタゴニストＩＬ−１Ｒａにより、用量依存様式で阻害することができる。活性の損失を、Ｆｃに直接融合させた場合、ＩＬ−１Ｒａに対し観察した（ＲＤＢ１８００）。ＩＬ−１ＲａとＦｃの間へのムチンドメインの組み入れはＩＬ−１Ｒａ  Ｆｃ融合分子の阻害活性を、１８００では９８ｎＭのＩＣ５０から、ＲＤＢ１８１９では２３ｎＭまで部分的に回復させる（図２）。
【０１１３】
実施例２．分子量測定
ムチン配列の付加は、おそらく、Ｏ−グリコシル化の大幅な増加に至らしめ、よって、より大きな流体力学体積が得られる。ＲＤＢ１８００およびＲＤＢ１８１９を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００１０／３００ＧＬカラムでの分析用ゲル濾過により特徴付けた（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）。カラムを０．５ｍｌ／ｍｉｎで、ＰＢＳ、ｐＨ７．４を全ての分析物のための泳動用緩衝液として使用して平衡化した。平衡化後、タンパク質分子量標準（ゲル濾過ＨＭＷ較正キット；ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を０．５ｍｌ／ｍｉｎの流速で注入し、溶出体積を決定し、分子量検量線を作成した。ＲＤＢ１８００およびＲＤＢ１８１９の精製試料をその後、別々の実行で０．５ｍＬ／ｍｉｎにて注入し、溶出体積を決定した。ＲＤＢ１８００およびＲＤＢ１８１９の見かけの分子量を内挿により、異なる分子量標準の溶出体積から作成した検量線を用いて決定した。
【０１１４】
ＲＤＢ１８００およびＲＤＢ１８１９の見かけの分子量を分析用サイズ排除クロマトグラフィーにより観察した。ＲＤＢ１８００および１８１９には合計４つのＮ結合型グリコシル化部位が存在し、各ＩＬ−Ｒａアーム中に１つおよび分子の各Ｆｃ部分中に１つである。ＲＤＢ１８００に対し計算した分子量は８５．４ｋＤａであり、観察されたサイズは１１７ｋＤａである。この観察結果は、Ｎ−グリコシル化ならびにＩＬ１ＲａおよびＦｃを連結する可動性ヒンジの存在と一致する。ムチンリンカーの付加は、複数のＯ結合型グリコシル化部位およびより強固な棒状ヒンジ領域を付加し、これにより、ＲＤＢ１８１９に対し計算された９５ｋＤａの分子量に比べ、２２４ｋＤａのサイズが観察される（図３）。
【０１１５】
実施例３．インビボでのＩＬ−１Ｒａ−ムチン−Ｆｃ融合タンパク質活性
コラーゲン抗体誘導性関節炎（ＣＡＩＡ）は、ＩＬ−１経路が関与することが知られている関節リウマチ（ＲＡ）のマウスモデルである。関節炎は、第「−３」日に、コラーゲンＩＩ型中で保存された自己抗原エピトープに対するモノクローナル抗体のカクテルの投与により刺激した。第「０」日に、ＬＰＳエンドトキシンブーストを、２０ｍｇ／ｋｇのＲＤＢ１８００またはＲＤＢ１８１９の単一皮下（ＳＣ）注射と共に投与した。１０匹のマウスの群を各処置に使用した。マウス足体積変位を複数の日数にわたって測定し、足炎症度を評価した。
【０１１６】
ＲＤＢ１８００およびＲＤＢ１８１９は生理食塩水対照群と比べて、著しく足浮腫を、それぞれ、注射後最大１０日および１４日間低減させた。加えて、インビトロＨＥＫバイオアッセイにおいて観察された効力の増加は、ＲＤＢ１８００と比べ、足低減において統計的に有意な差を示す、ＲＤＢ１８１９を用いたインビボＣＡＩＡモデルにおける効力の増加と相関する（図４）。
【０１１７】
実施例４．ｇｐ１３０−ムチン−Ｆｃ融合コンストラクトによるＭ１細胞のＩＬ−６依存性分化の阻害
ドメインＤ１−Ｄ３を含む切断型ヒトｇｐ１３０およびＩｇＧ１由来のＦｃドメイン＋／−ムチンドメインを含む融合タンパク質を作製した（ＲＤＢ１６０１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３およびＲＤＢ１６１３  ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）。遺伝子を合成的に合成し（Ｇｅｎｅａｒｔ）、ｐｃＤＮＡ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、ＣＨＯ−Ｓ細胞においてＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して一時的に発現させた。タンパク質をプロテインＡ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて精製し、ＰＢＳに対して透析した。
【０１１８】
インビトロ生理活性を、ＩＬ−６への曝露後のＣＤ３２陽性細胞のパーセントにより測定される、ＲＤＢ１６０１およびＲＤＢ１６１３のＭ１細胞のＩＬ−６依存性分化を阻害する能力を評価することにより評価した。Ｍ１アッセイでは、７５，０００を４ｎｇ／ｍＬのＩＬ−６および１２５ｎｇ／ｍＬのＩＬ−６Ｒａで、１０％ＦＢＳ、２Ｘ  ＮＥＡＡ、２Ｘビタミン溶液を含むＤＭＥＭ／ＭＥＭ培地の１：１混合物（Ｇｉｂｃｏ）において刺激した。様々な濃度のＲＤＢ１６０１およびＲＤＢ１６１３を添加し、７２時間、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートすることにより阻害を試験した。Ｍ１細胞をその後抗マウスＣＤ３２−ＰＥ抗体（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ）で染色し、フローサイトメトリーにより分析した。
【０１１９】
ＲＤＢ１６０１（非ムチンリンカーコンストラクト）は、Ｍ１細胞のＩＬ−６依存性分化を用量依存様式で２０．１ｎＭのＩＣ５０にて阻害し、一方、ムチン含有コンストラクトＲＤＢ１６１３は２．５ｎＭのＩＣ５０を有した（図５）。よって、ＲＤＢ１６１３は非ムチンリンカーコンストラクトＲＤＢ１６０１よりも８倍強力である。
【０１２０】
実施例５．ｃｐＩＬ−６−ｇｐ１３０Ｄ１−ムチン−（ＩｇＧ２）Ｆｃ融合タンパク質ＲＤＢ１５６２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）によるＭ１細胞のＩＬ−６依存性分化の阻害
循環置換されたＩＬ−６（ｃｐＩＬ−６）、ヒトｇｐ１３０のＤ１ドメイン（ｇｐ１３０Ｄ１）およびＩｇＧ２由来のＦｃドメインを含む融合タンパク質をｇｐ１３０Ｄ１ドメインとＦｃドメインの間に挿入されたヒトＭＵＣ２０由来の２つのタンデム反復あり（ＲＤＢ１５６２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）、およびなし（ＲＤＢ１５４２、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）で発現させた。遺伝子を合成し（Ｇｅｎｅａｒｔ）、ｐｃＤＮＡ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、ＣＨＯ−Ｓ細胞においてＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して一時的に発現させた。タンパク質をプロテインＡ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて精製し、ＰＢＳに対して透析した。インビトロ生理活性を、実施例４に記載されるように、ＩＬ−６への曝露後のＣＤ３２陽性細胞のパーセントにより測定される、ＲＤＢ１５４２およびＲＤＢ１５６２のＭ１細胞のＩＬ−６依存性分化を阻害する能力を評価することにより評価した。
【０１２１】
ＲＤＢ１５４２（非ムチンリンカーコンストラクト）およびＲＤＢ１５６２（ムチン含有コンストラクト）のどちらもＭ１細胞のＩＬ−６依存性分化を用量依存様式で、それぞれ、＞１．０ｍＭおよび２．６ｎＭのＩＣ５０で阻害した（図６）。よって、ムチンドメインのリンカーとしての挿入により、ムチンリンカーを有さない等価の分子よりも＞４００倍強力な分子が得られる。
【０１２２】
実施例６．ＩＬ−１Ｒａ−ムチン−（ＩｇＧ２）Ｆｃ融合タンパク質ＲＤＢ１８４０（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）によるＩＬ−１β依存性シグナル伝達の阻害
ヒトＩＬ−１ＲａのＩｇＧ２由来のＦｃドメインとの融合タンパク質を作製し、ここで、ＩＬ−１ＲａをＩｇＧ２ヒンジを介して直接連結させた（ＲＤＢ１８４１、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）か、またはヒトＭＵＣ２０由来の２つのタンデム反復を、ＦｃドメインとＩＬ−１Ｒａの間に挿入した（ＲＤＢ１８４０、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１）。遺伝子を合成し（Ｇｅｎｅａｒｔ）、ｐｃＤＮＡ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローニングし、ＣＨＯ−Ｓ細胞においてＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ試薬（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して一時的に発現させた。タンパク質をプロテインＡ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて精製し、ＰＢＳに対して透析した。インビトロ生理活性を、実施例１に記載されるように、ＲＤＢ１８４０およびＲＤＢ１８４１の、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）ＩＬ−１β細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）におけるＩＬ−１β依存性シグナル伝達を阻害する能力を評価することにより評価した。
【０１２３】
ＲＤＢ１８４１およびＲＤＢ１８４０はどちらもＩＬ−１β依存性シグナル伝達を用量依存様式で阻害した。ムチンリンカーを含むＲＤＢ１８４０は、シグナル伝達を、ムチンリンカーを欠くＲＤＢ１８４１（６３．０ｎＭのＩＣ５０）よりも約１２倍大きな効力（５．０ｎＭのＩＣ５０）で阻害した（図７）。
【０１２４】
本明細書で言及される特許および科学文献は、当業者が利用できる知識を確立する。本明細書で引用される米国特許および公開または非公開米国特許出願は全て、参照により組み込まれる。本明細書で引用される公開外国特許および特許出願は全て、本明細書によって参照により組み込まれる。本明細書で引用される他の公開された参考文献、文書、原稿および科学文献は全て、本明細書によって参照により組み込まれる。
【０１２５】
この発明についてその好ましい実施形態を参照して特定的に図示し、記載してきたが、形態および細部における様々な変更がその中で、添付の特許請求の範囲により含まれる発明の範囲から逸脱せずに可能であることは、当業者により理解されるであろう。本明細書で記載される実施形態は相互排他的なものではなく、様々な実施形態からの特徴は、発明により、全体として、または一部、組み合わせることができることもまた理解されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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