(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アテローム性動脈硬化症、虚血、冠状動脈疾患、狭心症、急性冠症候群、心筋梗塞、腸間膜梗塞、脳卒中、下肢の動脈瘤または動脈症、かつそれらの予後、および中枢神経系に影響を及ぼすアルツハイマー病、パーキンソン病およびリソソーム病から選択される疾病の治療および／または予防のために使用される、モル置換度が０．０５〜１である、少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物。
【請求項２】
前記中枢神経系に影響を及ぼすリソソーム病は、ニーマンピック病であることを特徴とする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ニーマンピック病は、ニーマンピック病Ａ型、ニーマンピック病Ｂ型、またはニーマンピック病Ｃ型から選択されることを特徴とする、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記メチルシクロデキストリンは、モル置換度が０．２〜０．９であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記メチルシクロデキストリンは、モル置換度が０．６〜０．８であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記メチルシクロデキストリンは、メチル−β−シクロデキストリンであることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記メチルシクロデキストリンは、グルコピラノース単位のＣ２炭素の、またはグルコピラノース単位のＣ３および／もしくはＣ６炭素の、またはグルコピラノース単位のＣ２、Ｃ３および／もしくはＣ６炭素の組合せのヒドロキシル基が置換されていることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
メチルシクロデキストリンの組成物は、グルコピラノース単位のＣ２炭素のヒドロキシル基が置換されているメチル−β−シクロデキストリン、グルコピラノース単位のＣ３お
よび／またはＣ６炭素のヒドロキシル基が置換されているメチル−β−シクロデキストリン、ならびにグルコピラノース単位のＣ２、Ｃ３および／もしくはＣ６炭素のヒドロキシル基が置換されているメチル−β−シクロデキストリンからなる群から選択される１つ以上のメチル−β−シクロデキストリンを含み、前記メチル−β−シクロデキストリンは、モル置換度が０．６〜０．８であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
メチルシクロデキストリンの組成物は、グルコピラノース単位のＣ２炭素のヒドロキシル基と置換したメチル基を、少なくとも５０％含むことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む前記組成物はまた、非置換であるシクロデキストリンおよび／または、スルホブチルエーテル基（ＳＢＥ−）もしくはヒドロキシプロピル基（ＨＰ−）で置換されているシクロデキストリンを含むことを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記非置換であるシクロデキストリンはβ−シクロデキストリンであることを特徴とする、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記スルホブチルエーテル基（ＳＢＥ−）もしくはヒドロキシプロピル基（ＨＰ−）で置換されているシクロデキストリンはβ−シクロデキストリンであることを特徴とする、請求項１０または１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む前記組成物は、モル置換度が０．０５〜１．０であることを特徴とする、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
少なくとも１つの追加の活性剤も含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記追加の活性剤は、アテローム性動脈硬化症またはアテロームと関連する合併症の治療のために使用される活性剤、
−スタチン
−アスピリン、クロピドグレル、ダビガトラン、アピキサバン、リバロキサバン、および抗ビタミンＫから選択される血小板凝集阻害剤または抗凝固剤
−ペリンドプリル、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリルもしくはラミプリルから選択されるアンギオテンシン変換酵素阻害剤、およびロサルタン、バルサルタンもしくはカンデサルタンから選択されるアンギオテンシンＩＩ受容体拮抗剤、かつ／またはアセブトロール、ラベタロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロールもしくはプロプラノロールから選択されるベータ遮断薬、から選択される、抗高血圧剤、あるいは
−それらの組合せ
であることを特徴とする、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記追加の活性剤は、ロサルタン、バルサルタンまたはカンデサルタンから選択されるアンギオテンシンＩＩ受容体拮抗剤であることを特徴とする、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記組成物は、経口で、非経口で、皮膚に、または粘膜に投与することができることを特徴とする、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
血中脂肪酸およびトリグリセリドの値の低下を促進するためにも用いられる、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
アテローム斑を減らす、かつ／または予防するために使用される、請求項１〜４および７〜１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記組成物は、リン脂質小胞を含まないことを特徴とする、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
トリグリセリド値を低下させるための、かつ／または遊離脂肪酸の濃度を低下させるための、かつ／またはＨＤＬコレステロール値を上昇させるための、モル置換度が０．０５〜１である少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む組成物の非治療的な使用。
【請求項２２】
前記メチルシクロデキストリンは、モル置換度が０．２〜０．９であることを特徴とする、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記メチルシクロデキストリンは、モル置換度が０．６〜０．８であることを特徴とする、請求項２１または２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記メチルシクロデキストリンは、メチル−β−シクロデキストリンであることを特徴とする、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５】
前記メチルシクロデキストリンは、グルコピラノース単位のＣ２炭素の、グルコピラノース単位のＣ３および／もしくはＣ６炭素の、またはグルコピラノース単位のＣ２、Ｃ３および／もしくはＣ６炭素の組合せのヒドロキシル基が置換されていることを特徴とする、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２６】
メチルシクロデキストリンの前記組成物は、グルコピラノース単位のＣ２炭素のヒドロキシル基が置換されているメチル−β−シクロデキストリン、グルコピラノース単位のＣ３および／またはＣ６炭素のヒドロキシル基が置換されているメチル−β−シクロデキストリン、ならびにグルコピラノース単位のＣ２、Ｃ３および／もしくはＣ６炭素のヒドロキシル基が置換されているメチル−β−シクロデキストリンからなる群から選択される１つ以上のメチル−β−シクロデキストリンを含み、前記メチル−β−シクロデキストリンは、モル置換度が０．６〜０．８であることを特徴とする、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２７】
メチルシクロデキストリンの前記組成物は、グルコピラノース単位のＣ２炭素のヒドロキシル基が置換されているメチル基を、少なくとも５０％含むことを特徴とする、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８】
少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む前記組成物はまた、非置換であるシクロデキストリンおよび／または、スルホブチルエーテル基（ＳＢＥ−）もしくはヒドロキシプロピル基（ＨＰ−）で置換されているシクロデキストリンを含み、モル置換度が０．０５〜１であることを特徴とする、請求項２１〜２７のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、個体中のＨＤＬコレステロール値を上昇させることを可能にする医薬組成物に関する。本発明は、より詳細には、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって治療かつ／または予防することができる疾病の治療および／または予防における、あるいはアテローム性動脈硬化症もしくはアテロームと関連する合併症、または中枢神経系の疾病の治療および／または予防における医薬組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
コレステロールは、多くの生化学プロセスにおいて重要な役割を果たしているステロール類の脂質である。
【０００３】
これは、動物細胞の膜の主要な成分であり、リン脂質の間に挿入されることによって、動物細胞膜の安定性との構造の維持に寄与する。実際にコレステロールは、ゲル化を防ぐことによって膜を硬化させる。これは、脂肪酸の結晶化を防ぎ、そしてまた水溶性分子に対する膜透過性を低下させるためである。膜中に挿入されることによって、コレステロールはまた、機能性タンパク質の固定に不可欠な領域である脂質ラフトを形成することができる。
【０００４】
さらに、コレステロールはまたニューロンにおいても見出され、そこでは、エキソサイトーシスによる神経伝達物質合成を、従って神経伝達を可能とする。これは、ベータ−アミロイドペプチドの形成に、従ってアルツハイマー病の病因に直接関与する。アテローム性動脈硬化症とアルツハイマー病との関連性も実証されている（Ｍｉｋａｅｌ  Ｓｉｍｏｎｓ  ａｎｄ  ａｌ．，“Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂ−ａｍｙｌｏｉｄ  ｉｎ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｎｅｕｒｏｎｓ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ；Ｖｏｌ．９５，ｐｐ．６４６０−６４６４，Ｍａｙ  １９９８，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．）。
【０００５】
コレステロール代謝はまた、多くの分子、例えばステロイドホルモン（コルチゾール、コルチゾンおよびアルドステロン）、ステロイド性ホルモン（プロゲステロン、エストロゲンおよびテストステロン）、ビタミンＤ３、ヘムＡ、プレニル化およびファルネシル化タンパク質、ユビキノンまたは補酵素Ｑ１０、ドリコール、核因子ＮＦカッパＢ、タウタンパク質ならびに胆汁酸塩、の前駆体となる。
【０００６】
コレステロールは、血中において、非常に異なる役割を有する輸送系、即ち、ＬＤＬリポタンパク質（低密度リポタンパク質）およびＨＤＬリポタンパク質（高密度リポタンパク質）によって運ばれる。
【０００７】
ＨＤＬコレステロールは、心血管疾患に関して予防的に作用すると考えられており、しばしば「善玉コレステロール」と表される。
【０００８】
コレステロール輸送ＬＤＬは、動脈壁に侵入し、この動脈壁内に存在する単球およびマクロファージによって、そしてまた平滑筋細胞によって取り込まれる。これは、マクロファージおよび平滑筋細胞における過剰な脂質負荷をもたらし、これらはその後、アテローム性動脈硬化症のプロセスの原因となり、かつアテローム斑形成の第１段階に相当する泡沫細胞に変換される。したがって、これが「悪玉コレステロール」の問題である。
【０００９】
アテロームは、世界保健機構によって、「内側の変化と関連する、脂質、複合糖質、血液およびカルシウムの沈着の局部的集積からなる大・中口径動脈の内膜変化の可変的組合せ」として定義されている。アテロームは、大部分の心血管疾患の原因であり、先進国における罹患率および死亡率の主因である。アテロームは、「脂肪線条」の形成から始まり、これは、血流に影響しない、動脈の内皮と正中との間に位置する脂肪の単純な線形沈着物である。やがて、この線条は次第に大きくなって、脂質、フィブリノゲン、血小板および他の血球ならびにカルシウムが蓄積されて、「アテローム斑」を構成するおそれがある。前記斑は多かれ少なかれ大きくなって、その流速を低下させるほどに動脈の内径を小さくするおそれがある。
【００１０】
２つのタイプの合併症がある：１つ目は、その遅い成長によって、長期にわたって進行するものであり、閉塞によって完全に塞がれるまで血液の流れを低下させる。２つ目は、急速な、かつ急性合併症の原因となるものであり、内皮の損傷または内皮の破裂からなる：形成された穴はその後、血小板の凝集および血塊の形成によって塞がれ、これにより血管が全体的に急速に塞がれるおそれがある。この塊はまた、剥離して、更に下流を塞ぐおそれもある。斑はまた、部分的に剥離し、そしてまた動脈を塞ぐおそれもあり、またはまれに、その中身を放出してコレステロール塞栓をもたらすおそれもある。最後に、斑の容量の増大によって誘導される動脈壁の拡張が、動脈瘤の形成をもたらすおそれがあり、破裂のリスクがある。
【００１１】
適切な食事以外に、アテロームの予防に最も広く用いられている医薬クラスはスタチンであり、これは、血中の脂質およびＬＤＬコレステロール値を下げることを目的としている。しかしながら、スタチンの利点および有用性は、矛盾する統計的試験により、議論されている分析の後、スタチンが期待される治療的利益を患者に提供しないと主張する一部の研究者および臨床医によって厳しく批判されてきた。この内容に加えて、有害かつさらには時として劇的な副作用が究明されており、そしてある場合には、市場から撤回される原因となった。
【００１２】
今日提唱されている他の薬物治療は、以下のものがある：
−アテローム斑からの塊の形成を軽減するアスピリンまたはクロピドグレル等の血小板凝集阻害剤；
−アンギオテンシン変換酵素阻害剤等の抗高血圧剤。
【００１３】
したがって、現時点で存在する医薬治療は、単にアテロームに関連するリスクを減少させることを目的としている。市場に存在する薬物はどれも、アテローム斑を直接攻撃しない。
【００１４】
生命予後が活用される場合、治療は外科的または血管内である。これは、動脈内腔を回復させる、酸素欠乏状態領域を洗浄する、または動脈瘤を除去することを目的とする。これらの技術のうち、血管形成術、動脈内膜切除によるアンブロッキング、およびバイパスを挙げることができる。
【００１５】
最後に、アテロームおよびその合併症に対処する主要な手段は、行動として世界中で今日も依然として残っている。すなわち、禁煙、身体的活動の改善、血圧の制御、脂質異常症の是正、糖尿病の制御、食事制限である。
【００１６】
したがって、アテロームの治療および／または予防の必要性が長い間、明らかに満たされていなかったことに留意しなければならない。
【００１７】
種々のアプローチが試みられた。しかしながら、新しい解決策は保持されなかった。特に、ＨＤＬコレステロールが１９７５年に検討され始め、この時研究者らは、高いＨＤＬコレステロール値と心血管疾病の発生の減少との関係を実証した（Ｒｙｅ  Ｋ．Ａ．２０１３．Ｈｉｇｈ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：ａ  ｎｅｗ  Ｔｈｅｍａｔｉｃ  Ｓｅｒｉｅｓ．Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．５４：（８）２０３１−２０３３）。これらの検討の肯定的な結果により、ＨＤＬコレステロール値を上昇させることを意図する治療の発達が促された。このうち、とりわけこの目的のために、大規模に開発かつ評価された最初の薬剤であるＣＥＴＰ（コレステロールエステル転送タンパク質）酵素の阻害剤が、保持されることとなる。しかしながら、これらの治療はいずれも、心血管イベントの発生の減少を実現しなかった。
【００１８】
最後に、患者におけるＨＤＬコレステロール値の上昇を効果的に誘導することができる、市場で入手可能な薬物は依然としてない。これは特に、関与するメカニズムが、今日でも依然として解明には程遠いためである。特に、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって治療かつ／または予防することができる疾病に効果的かつ積極的に対処することができる、市場で入手可能な薬物はない。また、アテローム性動脈硬化症と、特にアテローム斑形成に対処することができる薬物に対する一定の必要性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
特定のモル置換度が０．０５〜１．５であるメチルシクロデキストリンをベースとする医薬組成物が、ＨＤＬコレステロール値の、特に血漿ＨＤＬコレステロール値の上昇を誘導することを可能にするので、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって治療かつ／もしくは予防することができる疾病の、特にアテローム性動脈硬化症もしくはアテロームと関連する合併症、または中枢神経系の疾病の治療または予防に極めて有利であることを発見したことは、出願人の功績である。
【００２０】
したがって、本発明の目的は、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって治療かつ／または予防することができる疾病の治療および／または予防のために使用される、モル置換度が０．０５〜１．５である少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物を提供することである。
【００２１】
本発明の別の目的は、アテローム性動脈硬化症もしくはアテロームと関連する合併症の、または中枢神経系の疾病の治療および／または予防のために使用される、モル置換度が０．０５〜１．５である少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
優先的には、本発明の組成物は、アテローム性動脈硬化症またはアテロームと関連する合併症の治療および／または予防のために使用される。アテロームと関連する合併症は、典型的には、虚血、例えば心筋虚血、冠状動脈疾病、狭心症、急性冠症候群、心筋梗塞、腸間膜梗塞、脳卒中、下肢の動脈瘤または動脈症、およびそれらの予後（低酸素症／虚血関連の予後、例えばアテローム性動脈硬化症の後の糖尿病）を含む。
【００２３】
別の好ましい態様において、中枢神経系の疾病の治療および／または予防のために使用される本発明の組成物は、中枢神経系に影響を及ぼすアルツハイマー病、パーキンソン病およびリソソーム病から選択される。中枢神経系に影響を及ぼすリソソーム病は、優先的には、ニーマンピック病、優先的にはニーマンピック病Ａ型、ニーマンピック病Ｂ型、またはニーマンピック病Ｃ型から選択される。
【００２４】
本発明の医薬組成物のために使用されるメチルシクロデキストリンは、優先的には、モル置換度が０．２〜１．２、さらにより優先的には０．４〜０．９である。有利には、モル置換度は、０．６〜０．８である。特定の一実施形態において、メチルシクロデキストリンは、メチル−β−シクロデキストリンである。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリンは、グルコピラノース単位のＣ２炭素の、グルコピラノース単位のＣ３および／もしくはＣ６炭素の、またはグルコピラノース単位のＣ２、Ｃ３および／もしくはＣ６炭素、好ましくはＣ２およびＣ６炭素の組合せのヒドロキシル基が置換されている。
【００２５】
好ましくは、メチルシクロデキストリンの組成物は、グルコピラノース単位のＣ２炭素のヒドロキシル基が置換されているメチル−β−シクロデキストリン、グルコピラノース単位のＣ３および／またはＣ６炭素のヒドロキシル基が置換されているメチル−β−シクロデキストリン、ならびにグルコピラノース単位のＣ２、Ｃ３および／もしくはＣ６炭素、好ましくはＣ２およびＣ６炭素のヒドロキシル基が置換されているメチル−β−シクロデキストリンからなる群から選択される１つ以上のメチル−β−シクロデキストリンを含み、前記メチル−β−シクロデキストリンは、モル置換度が０．６〜０．８である。
【００２６】
有利には、メチルシクロデキストリンの組成物は、グルコピラノース単位のＣ２炭素のヒドロキシル基と置換したメチル基を、少なくとも５０％、６０％または７５％含む。
【００２７】
任意選択により、少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む組成物はまた、非置換であるシクロデキストリン、特にβ−シクロデキストリン、ならびに／または、スルホブチルエーテル基（ＳＢＥ−）およびヒドロキシプロピル基（ＨＰ−）で置換されているシクロデキストリン、特にβ−シクロデキストリンを含み、好ましくは、モル置換度が０．０５〜１．５である。
【００２８】
本発明の文脈において用いられる医薬組成物はまた、少なくとも１つの追加の活性剤を含んでよい。
【００２９】
追加の活性剤は、優先的には、アテローム性動脈硬化症またはアテロームと関連する合併症の治療のために使用される活性剤、優先的には
−スタチン、
−好ましくはアスピリン、クロピドグレル、新たな経口抗凝固剤、例えばダビガトラン、アピキサバンまたはリバロキサバン、および抗ビタミンＫから選択される、血小板凝集阻害剤または抗凝固剤、
−好ましくはアンギオテンシン変換酵素阻害剤、例えばペリンドプリル、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリルもしくはラミプリル、およびアンギオテンシンＩＩ受容体拮抗剤、例えばロサルタン、バルサルタンもしくはカンデサルタンから、かつ／またはベータ遮断薬、例えばアセブトロール、ラベタロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロールもしくはプロプラノロールから選択される、抗高血圧剤、あるいは
−それらの組合せ
である。
【００３０】
好ましくは、追加の活性剤は、アンギオテンシンＩＩ受容体拮抗剤、例えばロサルタン、バルサルタンまたはカンデサルタンである。
【００３１】
本発明による医薬組成物は、経口で、非経口的に、皮膚に、または粘膜に投与することができる。
【００３２】
特定の一実施形態において、本発明の組成物はまた、血中脂肪酸およびトリグリセリドの値の低下を促進するために使用される。
【００３３】
別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、アテローム斑の低減、または予防のために使用される。
【００３４】
さらに、別の特定の実施形態において、本発明において用いられる組成物は、リン脂質小胞を含まない、または実質的に含まない。
【００３５】
本発明の追加の主題は、トリグリセリド値を低下させるための、かつ／または遊離脂肪酸の濃度を低下させるための、かつ／またはＨＤＬコレステロール値を上昇させるための、モル置換度が０．０５〜１．５０、好ましくは０．６０〜０．８０である少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む組成物の非治療的な使用に関する。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】本発明によるメチル−β−シクロデキストリンの１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図２】メチル−β−シクロデキストリンのＭＳに応じたコレステロール流出の測定値を示す。
【図３】メチル−β−シクロデキストリンのＭＳに応じたＡＢＣＡ１トランスポータの発現を示す。
【図４】メチル−β−シクロデキストリンのＭＳに応じたＡＢＣＧ１トランスポータの発現を示す。
【図５】メチル−β−シクロデキストリンのＭＳに応じたＳＲ−Ｂ１受容体の発現を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
発明者らは、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって、かつ／またはアテローム斑の減少もしくは予防によって治療かつ／または予防することができる疾病の治療および／または予防における、モル置換度が０．０５〜１．５である少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物の新規な使用を発見した。
【００３８】
特に、発明者らは、驚くべきことに、本発明の組成物が、個体におけるＨＤＬコレステロール値を上昇させ、そしてまた、血中脂肪酸およびトリグリセリドの値を低下させ、かつアテローム斑を減らす効果を有することを発見した。したがって、発明者らは、本発明の組成物が、その種々の性質によって、組織におけるコレステロールの過負荷と、かつ／または貯蔵と、かつ／または蓄積と関連する疾病の、そしてまたその予後の治療および／または予防に特に用いられることを実証した。特に、これらの疾病は、アテローム性動脈硬化症またはアテロームと関連する合併症、および中枢神経系の疾病、特にアルツハイマー病、パーキンソン病またはニーマンピック病Ｃ型を含む。
【００３９】
したがって、本発明は、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって治療かつ／もしくは予防することができる疾病、特にアテローム性動脈硬化症もしくはアテロームと関連する合併症、および／または中枢神経系の疾病、特にアルツハイマー病、パーキンソン病もしくはニーマンピック病Ｃ型の治療および／または予防のために使用される、モル置換度が０．０５〜１．５である少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物に関する。また、アテローム斑の減少によって、またはアテローム斑形成の予防によって治療かつ／または予防することができる疾病の治療および／または予防のために使用される、モル置換度が０．０５〜１．５である少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む
医薬組成物に関する。
【００４０】
本発明はまた、アテローム性動脈硬化症もしくはアテロームと関連する合併症、および／または中枢神経系の疾病、特にアルツハイマー病、パーキンソン病もしくはニーマンピック病Ｃ型の治療および／または予防のために使用される、モル置換度が０．０５〜１．５である少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物に関する。
【００４１】
本発明はまた、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって、かつ／またはアテローム斑の減少もしくは予防によって治療かつ／または予防することができる疾病、特にアテローム性動脈硬化症またはアテロームと関連する合併症、および／あるいは中枢神経系の疾病、特にアルツハイマー病、パーキンソン病またはニーマンピック病Ｃ型に罹患している個体において、治療的に有効な量が投与される、本発明において定義される少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物を用いる方法またはプロセスに関する。
【００４２】
本発明はまた、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって、かつ／またはアテローム斑の減少もしくは予防によって治療かつ／または予防することができる疾病、好ましくはアテローム性動脈硬化症またはアテロームと関連する合併症、および／あるいは中枢神経系の疾病、特にアルツハイマー病、パーキンソン病またはニーマンピック病Ｃ型を治療かつ／または予防する薬剤を調製するための、本出願において定義される少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物の使用に関する。
【００４３】
メチルシクロデキストリン
シクロデキストリンは、デンプンの酵素分解に由来する環状オリゴ糖である。３つの最も一般的な天然のシクロデキストリンは、イス型配座の６個、７個または８個のα−Ｄ−グルコピラノース単位で構成されており、互いにα−１，４結合によって結合されている。これらはより一般的には、それぞれ、α、βまたはγシクロデキストリンと呼ばれている。その三次元構造は円錐台の形態で表示され、その外側は、シクロデキストリンの高い親水性を示すヒドロキシル基が存在する。シクロデキストリンの円錐形の内部または空孔は、Ｃ３およびＣ５炭素に位置する水素原子と、グリコシド結合に関与する酸素原子によって構成されるため、無極性の性質を付与する。親水性の外部および疎水性の空孔を有するシクロデキストリンは、一般に、疎水性化合物を包接する能力を有するために、疎水性活性物質の保護および可溶化の役割のために使用される。したがって従来、食品加工、または製薬の分野において見出され、そこでは、経口投与される医薬製剤における、または局所投与される化粧品製剤における賦形剤として用いられている。
【００４４】
天然のシクロデキストリンの水溶解度を向上させる目的で、種々の基をヒドロキシル官能基上に接合することによって、多くの誘導体が合成されている。実際、シクロデキストリンのグルコピラノース単位は、それぞれ、３つの反応性ヒドロキシル基を含み、これらはＣ２、Ｃ３およびＣ６炭素に位置する。
【００４５】
誘導体の例として、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、メチルシクロデキストリン、およびシクロデキストリンの「硫酸化」誘導体が挙げられる。ＦｒｏｍｍｉｎｇおよびＳｚｅｔｌｉは、特に、メチルシクロデキストリンの場合、メチル化度を上げると、モル置換度が２に等しくなるまで、可溶化が促進されること、そしてこれを超えると可溶化が低下することを示した。
【００４６】
一部の著者らはまた、シクロデキストリンおよびその誘導体の医薬賦形剤の役割以外に、それらに対する関心を示してきた。
【００４７】
例えば、国際公開第０２／４３７４２号パンフレットは、コレステロール代謝における
シクロデキストリンの、またはヒドロキシプロピルシクロデキストリンの、特にマクロファージからのコレステロール流出を促進する役割を記載している。この出願において、著者らは、シクロデキストリンが２つの作用機構を有することを想起している。コレステロールに対して高い親和性を有するシクロデキストリンは、マクロファージの膜コレステロールを複合化することによって直接作用する。一方で、コレステロールに対して低い親和性を有するシクロデキストリンは、細胞膜からの、リン脂質小胞である細胞外の受容体へのコレステロール流出のための触媒として作用する。したがって、後者の場合、コレステロール流出は、外因性の受容体のリン脂質小胞である別の要素の存在下でのみ起こる。したがって、コレステロールに及ぼす薬理的効果が先行技術において言及されている一方で、シクロデキストリンの治療的関心については、議論の余地がかなり残っている。
【００４８】
これは、コレステロールの複合体形成における活性に基づいて、相当な量の高親和性シクロデキストリンが投与される必要があり、このことは薬学的に許容可能でなく、大量の可溶化コレステロールによる毒性の問題を引き起こすためである。
【００４９】
低親和性シクロデキストリンに関しては、リン脂質小胞と同時投与する必要性があるため、現在の知識に照らしてみると、特にリン脂質小胞が非常に不安定であるので、あまりに複雑な技術となる。
【００５０】
他の活性剤として、メチルシクロデキストリンの使用が、アテローム性動脈硬化症の治療において提案された（国際公開第２００６／０３２９０５号パンフレット）。特に、この特許出願は、メチルシクロデキストリンが、酸化ＬＤＬと単球との間の結合を阻害することができることを示唆している。血漿コレステロール値を修正することによって炎症反応を調節する方法における、メチル−β−シクロデキストリンの使用が示唆された（米国特許出願公開第２００８／００３２９２５号明細書）。この出願において用いられるメチル−β−シクロデキストリンは、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈによって販売されており、メチル−β−シクロデキストリンのモル置換度は１．５よりもはるかに高い。
【００５１】
本発明において、発明者らは、患者における、血漿ＨＤＬコレステロール値を有意に上昇させる一方で、毒性に関連する欠点を可能な限り低下させることを目的とする有効成分として作用する、特定のシクロデキストリンの組成物を用いている。本発明の組成物は、その特定の特徴、即ち、特にメチル化の、比較的低い置換度、そしてまたコレステロールに対する低い親和性によって、毒性の問題を退けることを可能とする。
【００５２】
驚くべきことに、そして、コレステロールに対する低い親和性にも拘らず、本発明に従って用いられるメチルシクロデキストリン、特にメチル−β−シクロデキストリンは、その効果を発揮するために、リン脂質小胞の添加を必要としない。
【００５３】
発明者らによって得られた結果は、これらの特定のメチルシクロデキストリンについて、異なる作用機序を示唆しており、これは、コレステロールの複合体形成にも、リン脂質小胞への輸送の触媒反応にも関わらないと思われる。
【００５４】
完全に最初は、これらのメチルシクロデキストリンは、シクロデキストリンともリン脂質小胞とも複合体を形成せず、ＨＤＬコレステロールの形態で、コレステロールの流出を促進すると思われる。
【００５５】
この理由により、本発明による組成物は、リン脂質小胞を含まない、または実質的に含まない。用語「実質的に含まない」は、本明細書中で、組成物がリン脂質を、組成物に対して１０重量％未満、好ましくは５重量％未満、特に好ましくは２重量％、１重量％または０．５重量％未満含むことを示す。用語「実質的に含まない」はまた、シクロデキスト
リンの量とリン脂質の量とのモル濃度比によって定義され、１００、１０００または１００００よりも大きい。
【００５６】
したがって、本発明は、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって、かつ／またはアテローム斑の減少もしくは予防によって治療かつ／または予防することができる疾病の治療および／または予防における、モル置換度が０．０５〜１．５である少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物の新規の使用に関する。
【００５７】
本発明はまた、アテローム性動脈硬化症もしくはアテロームと関連する合併症、または中枢神経系の疾病、特にアルツハイマー病、パーキンソン病もしくはニーマンピック病Ｃ型の治療および／または予防における、モル置換度が０．０５〜１．５である少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物の新規の使用に関する。用語「モル置換度（ＭＳ）」は、グルコピラノース単位あたりの、特にメチル基で、置換されたヒドロキシル基の数を意味することが意図される。モル置換度（ＭＳ）は、分子置換度（ＤＳ）とは異なる点に留意する必要があり、これは、シクロデキストリン分子あたりの、特にメチル基で、置換されたヒドロキシル基の数に相当し、従って、メチルシクロデキストリンを構成するグルコピラノース単位の数を考慮するものである。
【００５８】
ＭＳは、本発明において、プロトン核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって、または質量分析法（エレクトロスプレーイオン化質量分析法（ＥＳＩ−ＭＳ）またはマトリックス支援レーザー脱離／イオン化質量分析法（ＭＡＬＤＩ−ＭＳ））によって決定されてもよい。これらの技術は当業者に周知であるが、本発明によるメチルシクロデキストリンのＭＳを決定するために最適な条件は、以下の参考文献の論文において特によく記載されている：Ｒｏｍａｉｎ  ＪＡＣＱＵＥＴ，“Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｅｓ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｅｓ：ｃａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ  ｅｔ  ｅｔｕｄｅ  ｄｅ  ｌｅｕｒｓ  ｐｒｏｐｒｉｅｔｅｓ  ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｔ  ｃｏｍｐｌｅｘａｎｔｅ．Ｕｔｉｌｉｓａｔｉｏｎ  ｄｅ  ｌａ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｅ  ｅｎ  ｐｈａｓｅ
ｌｉｑｕｉｄｅ  ｅｔ  ｄｅ  ｌａ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｉｅ  ｄｅ  ｍａｓｓｅ”［“Ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ  ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓ：ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅｉｒ  ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｃｏｍｐｌｅｘｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．Ｕｓｅ  ｏｆ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ａｎｄ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ”］。生物学的関心の化合物の化学的性質および理化学に関する論文。Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ  Ｏｒｌｅａｎｓ，２００６。特に：ｈｔｔｐ：／／ｔｅｌ．ａｒｃｈｉｖｅｓ−ｏｕｖｅｒｔｅｓ．ｆｒ／ｄｏｃｓ／００／１８／５５／４２／ＰＤＦ／ｊａｃｑｕｅｔ．ｐｄｆ（２０１３年１１月２７日付で参照）、特に第２章、パートＢ（５９〜８３頁）で入手可能。
【００５９】
好ましくは、ＭＳは、以下の方法に従って、ＮＭＲによって決定される：測定は、Ａｄｖａｎｃｅ  ＤＰＸ  ２５０  ＭＨｚ装置（Ｂｒｕｋｅｒ，Ｒｈｅｉｎｓｔｅｔｔｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で２５℃にて実行される。キャリブレーションは、Ｄ２Ｏシグナルで実行される。本発明によるメチルシクロデキストリンの、そして天然のシクロデキストリン、即ち非メチル化シクロデキストリンのサンプルは、０．７５ｍｌのＤ２Ｏ中５ｍｇの濃度にて調製される。溶液は、窒素気流下で乾燥するまで蒸発させてから、０．７５ｍｌのＤ２Ｏ中で再構成される。この操作を２回繰り返し、ヒドロキシル官能基のプロトンの全交換を確実にする。ＭＳは、天然のシクロデキストリンのスペクトルと本発明によるメチルシクロデキストリンのスペクトルとの積分の差から算出される。典型的なスペクトルが図１に示される。
【００６０】
本発明に従って用いられるメチルシクロデキストリンは、純品に相当するが、通常、様
々な構造のメチルシクロデキストリンの混合物に相当する点に留意する必要がある。これは、例えば、ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＣＲＹＳＭＥＢという名称で出願人によって販売される製品に相当し、これは特に、Ｒｏｍａｉｎ  ＪＡＣＱＵＥＴによる先の論文、特に第２章、パートＢ（５９〜８３頁）において決定された物理化学的性質を有する。
【００６１】
その結果、測定されたＭＳは、この場合、メチルシクロデキストリンの全混合物のグルコピラノース単位の全てで起こる置換の平均である。
【００６２】
この混合物は、特に、天然の残留シクロデキストリン、即ち非メチル化シクロデキストリンを含有し得るが、前記シクロデキストリンは通常ごく僅かな量であり、特に、メチルシクロデキストリンの総乾燥重量に対して、１％未満、優先的には０．５％未満、より優先的には０．１％未満である。
【００６３】
本発明の文脈において、組成物は、モル置換度が０．０５〜１．５である少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む。有利には、メチルシクロデキストリンは、ＭＳが、０．１〜１．４、優先的には０．１〜１．３、優先的には０．２〜１．２、優先的には０．３〜１．１、優先的には０．３〜１、優先的には０．５〜０．９、優先的には０．６〜０．８、例えば０．７、特に０．６７である。例えば、メチルシクロデキストリンは、ＭＳが、０．１０〜１．４０、０．１０〜１．３０、０．１０〜１．２０、０．１５〜１．４０、０．１５〜１．３０、０．１５〜１．２０、０．２０〜１．４０、０．２０〜１．３０、０．２０〜１．２０、０．２０〜１．１０、０．２５〜１．４０、０．２５〜１．３０、０．２５〜１．２０、０．２５〜１．１０、０．１５〜０．９０、０．１５〜０．８０、０．２５〜１．００、０．２５〜０．９０、０．２５〜０．８０、０．３０〜１．４０、０．３０〜１．３０、０．３０〜１．２０、０．３０〜１．００、０．５０〜０．９０、０．６０〜０．８０であってもよい。
【００６４】
好ましくは、本発明の文脈において用いられるメチルシクロデキストリンのメチル基の少なくとも５０％、好ましくは６０％〜８０％、典型的には約７５％が、グルコピラノース単位のＣ２炭素のヒドロキシル基の水平面に位置する。
【００６５】
同並行して、他のメチル基は、通常、大部分が、グルコピラノース単位のＣ３および／またはＣ６炭素のヒドロキシル基の水平面に位置する。
【００６６】
当業者であれば、メチルシクロデキストリンのグルコピラノース単位のヒドロキシル基上のメチル基の分布を測定する方法、例えばＮＭＲを用いた方法について知っている。
【００６７】
有利には、本発明の文脈において用いられるメチルシクロデキストリンは、７α−Ｄ−グルコピラノース単位を含む。したがって、これはメチル−β−シクロデキストリンである。
【００６８】
特定の一実施形態において、メチルシクロデキストリンは、メチル−β−シクロデキストリンであり、ＭＳが、０．０５〜１．５、優先的には０．１〜１．４、優先的には０．１〜１．３、優先的には０．２〜１．２、優先的には０．３〜１．１、優先的には０．４〜１、優先的には０．５〜０．９、優先的には０．６〜０．８、例えば０．７、特に０．６７である。例えば、メチルシクロデキストリンは、ＭＳが、０．１０〜１．４０、０．１０〜１．３０、０．１０〜１．２０、０．１５〜１．４０、０．１５〜１．３０、０．１５〜１．２０、０．２０〜１．４０、０．２０〜１．３０、０．２０〜１．２０、０．２０〜１．１０、０．２５〜１．４０、０．２５〜１．３０、０．２５〜１．２０、０．２５〜１．１０、０．２５〜１．００、０．２５〜０．９０、０．２５〜０．８０、０．３０〜１．４０、０．３０〜１．３０、０．３０〜１．２０、０．３０〜１．００、０．
５０〜０．９０、０．６０〜０．８０であってもよい。
【００６９】
メチルシクロデキストリンは、グルコピラノース単位のＣ２炭素によって、グルコピラノース単位のＣ３および／もしくはＣ６炭素によって、またはグルコピラノース単位のＣ２、Ｃ３および／もしくはＣ６炭素、好ましくはＣ２およびＣ６炭素の組合せのヒドロキシル基が置換されていてもよい。
【００７０】
別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリンは、メチルシクロデキストリン、好ましくはメチル−β−シクロデキストリンであり、メチル基の少なくとも５０％、優先的には６０％〜８０％、典型的には約７５％が、グルコピラノース単位のＣ２炭素のヒドロキシル基の水平面に位置し、ＭＳが、０．０５〜１．５、優先的には０．１〜１．４、優先的には０．１〜１．３、優先的には０．２〜１．２、優先的には０．３〜１．１、優先的には０．４〜１、優先的には０．５〜０．９、優先的には０．６〜０．８、例えば０．７、特に０．６７である。例えば、メチルシクロデキストリンは、ＭＳが、０．１０〜１．４０、０．１０〜１．３０、０．１０〜１．２０、０．１５〜１．４０、０．１５〜１．３０、０．１５〜１．２０、０．２０〜１．４０、０．２０〜１．３０、０．２０〜１．２０、０．２０〜１．１０、０．２５〜１．４０、０．２５〜１．３０、０．２５〜１．２０、０．２５〜１．１０、０．２５〜１．００、０．２５〜０．９０、０．２５〜０．８０、０．３０〜１．４０、０．３０〜１．３０、０．３０〜１．２０、０．３０〜１．００、０．５０〜０．９０、０．６０〜０．８０であってもよい。
【００７１】
好ましい一実施形態において、メチルシクロデキストリンの組成物は、グルコピラノース単位のＣ２炭素のヒドロキシル基が置換されているメチル−β−シクロデキストリン、グルコピラノース単位のＣ３および／またはＣ６炭素のヒドロキシル基が置換されているメチル−β−シクロデキストリン、ならびにグルコピラノース単位のＣ２、Ｃ３および／またはＣ６炭素、好ましくはＣ２およびＣ６炭素のヒドロキシル基が置換されているメチル−β−シクロデキストリンからなる群から選択され、かつＭＳが、０．０５〜１．５、優先的には０．１〜１．４、優先的には０．１〜１．３、優先的には０．２〜１．２、優先的には０．３〜１．１、優先的には０．４〜１、優先的には０．５〜０．９、優先的には０．６〜０．８、例えば０．７、特に０．６７である、１つ以上のメチル−β−シクロデキストリンを含む。例えば、メチルシクロデキストリンは、ＭＳが、０．１０〜１．４０、０．１０〜１．３０、０．１０〜１．２０、０．１５〜１．４０、０．１５〜１．３０、０．１５〜１．２０、０．２０〜１．４０、０．２０〜１．３０、０．２０〜１．２０、０．２０〜１．１０、０．２５〜１．４０、０．２５〜１．３０、０．２５〜１．２０、０．２５〜１．１０、０．２５〜１．００、０．２５〜０．９０、０．２５〜０．８０、０．３０〜１．４０、０．３０〜１．３０、０．３０〜１．２０、０．３０〜１．００、０．５０〜０．９０、０．６０〜０．８０であってもよい。好ましくは、メチルシクロデキストリンの組成物は、グルコピラノース単位のＣ２炭素のヒドロキシル基と置換したメチル基を、少なくとも５０％、６０％または７５％含む。
【００７２】
前述のように、本発明によるメチルシクロデキストリンは、混合物であってもよい。メチル−β−シクロデキストリンであるＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＣＲＹＳＭＥＢ製品の質量分析によれば、特に、これが、ＤＳによって互いに異なる７つの主なメチルシクロデキストリン群を含む多分散製品であることが明らかである。このＤＳは、理論的には、メチル−β−シクロデキストリンについて０〜２１の範囲であり、ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＣＲＹＳＭＥＢ製品において、２〜８の範囲である。
【００７３】
有利には、本発明の組成物は、ＭＳが０．２〜１．２であるメチルシクロデキストリンを少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％または９０％含む、メチルシクロデキストリンの混合物を含む。好ましくは、メチルシクロデキストリンの少なくとも４０％、５０
％、６０％、７０％、８０％または９０％は、ＭＳが０．３〜１．１である。好ましくは、メチルシクロデキストリンの少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％は、ＭＳが０．５〜０．９である。さらにより優先的には、メチルシクロデキストリンの少なくとも２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％は、ＭＳが０．６〜０．８である。
【００７４】
メチルシクロデキストリンの組成物は、任意選択により、本発明において定義される組成物を得るようにＭＳが定義された種々のメチルシクロデキストリンを添加することによって調製されてもよいし、それらの合成の結果として得られてもよい。
【００７５】
したがって、別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリンの、好ましくはメチル−β−シクロデキストリンの組成物は、モル百分率として表される以下の置換プロファイルを有する：
・０〜５％の、２つのメチル基を含むメチル−β−シクロデキストリン（ＤＳは２）；
・５％〜１５％の、３つのメチル基を含むメチル−β−シクロデキストリン（ＤＳは３）；
・２０％〜２５％の、４つのメチル基を含むメチル−β−シクロデキストリン（ＤＳは４）；
・２５％〜４０％の、５つのメチル基を含むメチル−β−シクロデキストリン（ＤＳは５）；
・１５％〜２５％の、６つのメチル基を含むメチル−β−シクロデキストリン（ＤＳは６）；
・５％〜１５％の、７つのメチル基を含むメチル−β−シクロデキストリン（ＤＳは７）；
・０％〜５％の、８つのメチル基を含むメチル−β−シクロデキストリン（ＤＳは８）；
総計は通常約１００％であるが、組成物は、任意選択により、ＤＳが異なるメチルシクロデキストリンを微量に、そしてまた天然のシクロデキストリン、即ち非メチル化シクロデキストリンを微量に含有する。
【００７６】
置換プロファイルは、当業者に周知のあらゆる技術によって、例えばＥＳＩ−ＭＳまたはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳによって決定されてもよい。これらの２つの方法を用いて置換プロファイルを決定するために最適な条件は、特に、Ｒｏｍａｉｎ  ＪＡＣＱＵＥＴによる先の論文の、第２章、パートＢ、ポイントＩＩ．３およびＩＩ．２（６７〜８２頁）ならびに付録ＩＩにおいて、広く議論されている。
【００７７】
１つの好ましい実施形態において、メチルシクロデキストリンの、好ましくはメチル−β−シクロデキストリンの組成物は、メチル基の少なくとも５０％、優先的には６０％〜８０％、典型的には約７５％が、グルコピラノース単位のＣ２炭素のヒドロキシル基の水平面に位置し、かつモル百分率として表される以下の置換プロファイルを有する：
・０〜５％の、２つのメチル基を含むメチル−β−シクロデキストリン（ＤＳは２）；
・５％〜１５％の、３つのメチル基を含むメチル−β−シクロデキストリン（ＤＳは３）；
・２０％〜２５％の、４つのメチル基を含むメチル−β−シクロデキストリン（ＤＳは４）；
・２５％〜４０％の、５つのメチル基を含むメチル−β−シクロデキストリン（ＤＳは５）；
・１５％〜２５％の、６つのメチル基を含むメチル−β−シクロデキストリン（ＤＳは６）；
・５％〜１５％の、７つのメチル基を含むメチル−β−シクロデキストリン（ＤＳは７
）；
・０％〜５％の、８つのメチル基を含むメチル−β−シクロデキストリン（ＤＳは８）；
総計は通常約１００％であるが、組成物は、任意選択により、ＤＳが異なるメチルシクロデキストリンを微量に、そしてまた天然のシクロデキストリン、即ち非メチル化シクロデキストリンを微量に含有する。
【００７８】
さらに、特にこれらのＤＳによれば、メチルシクロデキストリン分子もしくは分子の基の割合を変えること、またはこれを単離することを想定することが、完全に可能である。
【００７９】
したがって、別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリンは、ＤＳが、２〜８の範囲、特に２、３、４、５、６、７または８である整数から選択される、メチル−β−シクロデキストリンである。
【００８０】
別の好ましい実施形態において、メチルシクロデキストリンは、メチル基の少なくとも５０％、優先的には６０％〜８０％、典型的には約７５％が、グルコピラノース単位のＣ２炭素のヒドロキシル基の水平面に位置し、かつＤＳが、２〜８の範囲、特に２、３、４、５、６、７または８である整数から選択される、メチル−β−シクロデキストリンである。
【００８１】
別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル−β−シクロデキストリンは、ＭＳが、０．１〜０．３、特に０．２〜０．３、とりわけ０．２０〜０．３０である。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル−β−シクロデキストリンは、ＭＳが、０．３〜０．５、とりわけ０．３０〜０．５０である。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル−β−シクロデキストリンは、ＭＳが、０．５〜０．６、とりわけ０．５０〜０．６０である。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル−β−シクロデキストリンは、ＭＳが、０．６〜０．７、とりわけ０．６０〜０．７０である。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル−β−シクロデキストリンは、ＭＳが、０．７〜０．８、とりわけ０．７０〜０．８０である。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル−β−シクロデキストリンは、ＭＳが、０．８〜０．９、とりわけ０．８０〜０．９０である。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル−β−シクロデキストリンは、ＭＳが、０．９〜１．１、とりわけ０．９０〜１．１０である。別の特定の実施形態において、メチルシクロデキストリン、特にメチル−β−シクロデキストリンは、ＭＳが、１．１〜１．２、とりわけ１．１０〜１．２０である。
【００８２】
通常、本発明に従って用いられるメチルシクロデキストリンは、還元糖の含有量が、乾燥重量で１％未満、優先的には０．５％未満である。
【００８３】
本発明によるメチル−β−シクロデキストリンの組成物は、米国特許第６６０２８６０Ｂ１号明細書に記載されるプロセスによって得ることができる。そのような組成物の例が、ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＣＲＹＳＭＥＢの商標名でＲＯＱＵＥＴＴＥ  ＦＲＥＲＥＳグループによって販売されており、グルコース単位あたりのモル置換度が０．７、より具体的には０．６７メチル基である。
【００８４】
任意選択により、本発明による組成物はまた、非置換であるシクロデキストリン、特にβ−シクロデキストリン、ならびに／または、スルホブチルエーテル基（ＳＢＥ−）、ヒドロキシエチル基、ヒドロキシプロピル基（ＨＰ−）、カルボキシメチル基、カルボキシエチル基、アセチル基、トリアセチル基、スクシニル基、エチル基、プロピル基、ブチル
基、硫酸基、好ましくはスルホブチル基およびヒドロキシプロピル基で置換されているシクロデキストリン、特にβ−シクロデキストリンを含んでもよく、好ましくは、モル置換度が０．０５〜１．５である。
【００８５】
任意選択により、本発明によるメチルシクロデキストリン、特にメチル−β−シクロデキストリンは、特に先に一覧にされた基から選択された、追加の基で置換されてもよい。したがって、例えば、硫酸化メチル−β−シクロデキストリンであってもよい。
【００８６】
注目すべき一実施形態において、本発明はまた、本発明による、疾病の治療のための、他のシクロデキストリン誘導体の、好ましくは、本発明によるモル置換度が、即ち０．０５〜１．５、優先的には０．１〜１．４、優先的には０．１〜１．３、優先的には０．２〜１．２、優先的には０．３〜１．１、優先的には０．４〜１、優先的には０．５〜０．９、優先的には０．６〜０．８、例えば０．７であるβ−シクロデキストリン誘導体の使用を考慮する。これらのシクロデキストリン誘導体、好ましくはβ−シクロデキストリン誘導体は、スルホブチルエーテル（ＳＢＥ−）およびヒドロキシプロピル（ＨＰ−）から選択される基で置換されている。好ましくは、これらの置換は、主に、典型的には５０％、６０％、７０％または８０％が、グルコピラノース単位のＣ２炭素に位置する。
【００８７】
本発明の１つの代替的な態様において、本出願で定義され、かつ、α−１，４結合によって互いに連結されるα−Ｄ−グルコピラノース単位で構成されるメチルシクロデキストリンは、本発明の医薬組成物において、α−１，６結合によって互いに連結されたα−Ｄ−グルコピラノース単位に部分的に、または全体的に置換されてもよい。
【００８８】
用途
本発明の文脈において、本出願で定義される少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物は、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって、かつ／またはアテローム斑の減少もしくは予防によって治療かつ／または予防することができる疾病、特にアテローム性動脈硬化症またはアテロームと関連する合併症、および／あるいは中枢神経系の疾病、特にアルツハイマー病、パーキンソン病またはニーマンピック病Ｃ型の治療および／または予防のために使用される。
【００８９】
本発明の文脈において、ＨＤＬコレステロール値の上昇は、あらゆるタイプの生体液において測定される。これは、優先的には、血漿ＨＤＬコレステロール値である。このＨＤＬコレステロール値は、当業者に知られているあらゆる方法によって、例えば沈殿によって、または免疫学的技術を用いる直接均質相法によって、測定されてもよい。ＨＤＬを構成するタンパク質部分（Ａｐｏ  Ａ１タンパク質）をアッセイすることも可能である。
【００９０】
ＨＤＬコレステロール値は、通常、血液１リットルあたりの高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）によって輸送されるコレステロールのモル数として表される。ＨＤＬコレステロールは、ＬＤＬによって輸送されるコレステロールとは異なり、「善玉コレステロール」であると考えられる。
【００９１】
本発明に従えば、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって治療かつ／または予防することができる疾病は、ＨＤＬコレステロール値が、治療前のＨＤＬコレステロール値よりも高い場合に、徴候および／または病因が患者において消失または緩和する全ての疾病である。好ましくは、疾病は、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって治療かつ／または予防することができるものである。用語「上昇」は、少なくとも５％、７．５％、１０％、１５％または２０％のＨＤＬコレステロール値の上昇を意味すると理解されてもよい。
【００９２】
ＨＤＬコレステロール値の上昇によって治療かつ／または予防することができる疾病は
、優先的には、組織におけるコレステロールの過負荷と、かつ／または貯蔵と、かつ／または蓄積と関連する疾病、そしてまたそれらの予後である。
【００９３】
組織におけるコレステロールの過負荷と、かつ／または貯蔵と、かつ／または蓄積と関連する疾患の例として、心血管疾患、血管疾患、閉塞性末梢動脈疾患、例えばアテローム性動脈硬化症またはアテロームと関連する合併症に言及することができる。
【００９４】
他の例として、中枢神経系の組織におけるコレステロールの過負荷と、かつ／または貯蔵と、かつ／または蓄積と関連する中枢神経系の疾病に言及することができる。そのような疾病は、非限定的に、中枢神経系に影響を及ぼす、アルツハイマー病、パーキンソン病およびリソソーム病を含む。
【００９５】
リソソーム病の例として、限定されないが、ニーマンピック病、例えばニーマンピック病Ａ型、ニーマンピック病Ｂ型、またはニーマンピック病Ｃ型に言及することができる。
【００９６】
特定の例が、ニーマンピック病Ｃ型であり、中枢神経系（ＣＮＳ）における非エステル型コレステロールの蓄積によって特徴付けられる。
【００９７】
好ましい一実施形態において、疾病は、アルツハイマー病、パーキンソン病およびニーマンピック病Ｃ型から選択される。
【００９８】
別の特定の例が、アルツハイマー病に関する。脳におけるコレステロールの蓄積もまた、アルツハイマー病の原因となり得、ＨＤＬコレステロール値の上昇が、肝臓への輸送を促進し、そこで分解する。データは、脳における、かつ血管系におけるコレステロール代謝の機能障害が、アルツハイマー病におそらく密接に関わるであろうことを強く示唆している。
【００９９】
過度に高いコレステロール値の存在は、多くの場合、認知障害、痴呆、またはパーキンソン病の発生のリスク要因となると考えられている。パーキンソン病のリスク増大へのコレステロールの関与は、いくつかの研究においても言及されている。
【０１００】
この文脈において、過剰コレステロールが肝臓に輸送されてそこで分解するために寄与する、ＨＤＬコレステロール値を上昇させる効果のある治療が、本出願において完全に理にかなっている。実際に、分子値での一連の観察、統計データ、および実験により、アルツハイマー病の発生におけるコレステロール代謝に与えられている役割が増々重要になっている。特に、アテローム性動脈硬化症とアルツハイマー病（ＡＤ）との間の、そしてまたアルツハイマー病とニーマンピック病Ｃ型との間の収束が、堅固に確立された。後者の希少疾患は、神経細胞におけるコレステロールの過剰な蓄積によって特徴付けられる。
【０１０１】
さらに、本発明はまた、アテローム斑の縮小または予防によって治療かつ／または予防することができる疾病に関する。用語「アテローム斑の縮小」は、好ましくは、斑が、治療なしよりも治療ありで表面積がより小さくなることを意味することが意図される。特に、斑の表面積の、１０％、２０％、３０％、４０％または５０％が減少される。好ましくは、この減少は、少なくとも３０％または４０％である。アテローム斑の表面積は、当業者に知られているあらゆる方法によって、特にＭＲＩ（磁気共鳴画像）等の医療画像法によって判定されてもよい。用語「アテローム斑の予防」は、斑の発達または形成の失速を意味することが意図される。
【０１０２】
アテローム斑の縮小または予防によって治療かつ／または予防することができる疾患は、特に、心血管疾患、血管疾患、優先的には閉塞性末梢動脈疾患、例えばアテローム性動
脈硬化症またはアテロームと関連する合併症である。
【０１０３】
本発明に従えば、治療かつ／または予防することができる疾病は、優先的にはアテローム性動脈硬化症またはアテロームと関連する合併症、アルツハイマー病、パーキンソン病、またはニーマンピック病Ｃ型、有利にはアテローム性動脈硬化症またはアテロームと関連する合併症である。
【０１０４】
本発明の少なくとも１つのメチルシクロデキストリンを含む医薬組成物を用いることによって治療かつ／または予防されるアテロームと関連する合併症として、非限定的には、虚血、例えば心筋虚血、冠状動脈疾患、狭心症、急性冠症候群、心筋梗塞、腸間膜梗塞、脳卒中、下肢の動脈瘤または動脈症がある。
【０１０５】
別の特定の実施形態において、用いられる本発明の組成物はまた、少なくとも１つの追加の活性剤を含む。追加の活性剤は、優先的には、アテローム性動脈硬化症またはアテロームと関連する合併症を治療かつ／または予防するための、当業者に知られている活性剤の群から選択される。
【０１０６】
治療される対象は、好ましくはヒトまたは動物、好ましくはヒトである。対象は、証明（診断または確立）された疾病があってもよいし、これを発病するリスクに曝されていてもよい。特に、本発明において、用語「治療」は、病因または徴候の緩和、疾病の出現の遅延、発病の失速、および治癒を意味することが意図される。
【０１０７】
アテローム性動脈硬化症またはアテロームと関連する合併症の治療のために使用される活性剤の例として、以下に言及することができる：
−スタチン；
−抗高血圧剤、特に：
・アンギオテンシン変換酵素阻害剤、例えばペリンドプリル、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリルまたはラミプリル；
・「ｓａｒｔａｎｓ」としても知られているアンギオテンシンＩＩ受容体拮抗剤、例えばロサルタン、バルサルタンまたはカンデサルタン；
・ベータ遮断薬、例えばアセブトロール、ラベタロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロールまたはプロプラノロール；
−血小板凝集阻害剤または抗凝固剤、特に：
・アスピリン；
・クロピドグレル（ＰＬＡＶＩＸ、（登録商標））；
・新たな経口抗凝固剤、例えばダビガトラン／Ｐｒａｄａｘａ（登録商標）、アピキサバン／Ｅｌｉｑｕｉｓ（登録商標）、リバロキサバン／Ｘａｒｅｌｔｏ（登録商標）（心房細動徴候における静脈炎、塞栓または卒中の予防において示される）；
・非常に有効であるが、今日ほとんど用いられていない抗ビタミンＫ（凝固の非常に詳細なモニタリングを必要とするためである）。
【０１０８】
好ましくは、追加の活性剤は、アンギオテンシンＩＩ受容体拮抗剤から優先的に選択されることとなる。
【０１０９】
本発明による組成物は、経口で、非経口的に、経粘膜で、または皮膚に投与することができる。非経口経路は、優先的には、皮膚、静脈内、筋肉内、または腹膜内投与を含むが、後者はむしろ動物用のものである。粘膜経路は、優先的には、鼻投与、肺投与、または直腸粘膜を介した投与を含む。皮膚経路は、有利には、真皮経路を含み、特に経皮デバイス、典型的にはパッチを介する。より詳細には中枢神経系（ＣＮＳ）に影響を及ぼす疾病、特にニーマンピック病Ｃ型、パーキンソン病またはアルツハイマー病に関する投与の他
の経路は、髄腔内経路または脊髄経路である。
【０１１０】
本発明による組成物はまた、薬学的に許容可能な賦形剤を含む。特に皮膚、静脈内、筋肉内、腹膜内、経鼻、肺、直腸、真皮、髄腔内または脊髄経路を介する、特に全身投与を考慮した、優先的には経口投与、非経口投与、皮膚または粘膜投与を考慮した、当業者に知られている生薬形態に適したあらゆる賦形剤を使用することができる。例えば、医薬用途に適合し、当業者に知られている緩衝等張生理食塩水等に言及することができる。組成物は、分散剤、可溶化剤、安定化剤、防腐剤等から選択される１つ以上の剤またはキャリアを含有してもよい。製剤に用いられてもよい剤またはキャリア（液体かつ／または注射可能である）は、特に、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリソルベート８０、マンニトール、ゼラチン、ラクトース、植物油、アラビアゴム、リポソーム等である。組成物は、任意選択により生薬形態、または徐放かつ／もしくは遅延放出を提供するデバイスによって、注射可能な懸濁液、ゲル、油、タブレット、坐薬、粉末、ゲルカプセル、カプセル、エーロゾル等の形態に製剤化されてもよい。このタイプの製剤化のために、有利には、セルロース、炭酸塩またはデンプン等の剤が用いられる。
【０１１１】
有利には、本発明によるシクロデキストリンが、非侵襲性経路による投与後に血流中を通過することができるように、かつ／または、血液脳関門を越えることが所望される場合、この関門を超えることができるように、脂質物質と複合化された形態で投与される生薬形態を想像することが可能である。これらの脂質物質のうち、特に、トコフェロールに言及することができる。
【０１１２】
本発明の文脈において、個体に投与されてもよい組成物は、本発明において定義されるメチルシクロデキストリンを、個体の総体重に対して、１〜１００ｍｇ／ｋｇ、優先的には２０〜７０ｍｇ／ｋｇ、さらにより優先的には３０〜５０ｍｇ／ｋｇ、さらにより好ましくは４０ｍｇ／ｋｇ含む。勿論、当業者は、治療される個体の体重に従って、本出願において定義されるメチルシクロデキストリンの用量を調整することが可能である。
【０１１３】
有利には、組成物は従って、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって治療かつ／または予防することができる疾病を患う個体に、またはそのような疾病を発病する傾向のある個体に、治療的に有効な量が投与されてもよい。用語「治療的に有効な量」は、本発明において定義される疾病を予防かつ／または治療するために、個体に投与することができる組成物の十分な量を意味することが意図される。
【０１１４】
本発明のために使用される組成物は、可変モードに従って投与されてもよい。特に、これらは１週あたり１〜５回、１、２、３もしくは４週間の間、またはさらに１、２、３もしくは数ヵ月間の間、注射することができる。投与モードはまた、数週または数ヵ月間隔の間をおいた治療を含む。有利には、特にアテローム性動脈硬化症の治療および／または予防のための、期間が１週である、３〜６ヵ月間隔（１２ヵ月までに及ぶこともある）での投与が、想定されるであろう。
【０１１５】
本発明の別の主題は、本出願において定義される、血中脂肪酸およびトリグリセリドの値の低下をも促進するための、医薬組成物の使用に関する。
【０１１６】
本発明の追加の主題は、本出願において定義される、アテローム斑を減らすための、医薬組成物の使用に関する。
【０１１７】
本発明の組成物の使用は、同時に、ＨＤＬコレステロール値を上昇させること、血液中を血中トリグリセリドおよび脂肪酸の値を低下させること、かつアテローム斑を減らすこ
とを可能にする。本発明の組成物はまた、アテローム斑、従ってアテロームと関連する合併症を脆弱にする原因となるＭＭＰ−９の減少を誘導することを可能にする。これらの効果は全て、ＬＤＬコレステロール値を変更することなく、かつ毒性が何ら注目されることなく得られる。ＭＭＰ−９の減少はさらに、癌の治療および／または予防のために使用される、本発明による組成物の利点を示唆する。
【０１１８】
本出願において定義される組成物は、健常な対象においても興味深い。本発明の組成物は、特に、トリグリセリド値、および遊離脂肪酸の濃度を下げ、かつ善玉コレステロール（ＨＤＬコレステロール）の値を上昇させるので、対象の良好な健康を促進することを可能にする。結果的に、本発明はまた、本出願において先に定義されたメチルシクロデキストリンの組成物の、トリグリセリド値を低下させるための、かつ／または遊離脂肪酸の濃度を低下させるための、かつ／または善玉コレステロール（ＨＤＬコレステロール）の値を上昇させるための、非治療的な使用に関する。したがって、本発明によるメチルシクロデキストリンの組成物は、栄養補助食品組成物、健康食品、機能性食品または食品補助剤として用いられてもよい。用語「栄養補助食品組成物、健康食品、機能性食品」は、本明細書において、健康に有益な効果を有し、または生理機能を向上させることができる成分を含有する食品を意味することが意図される。用語「食品補助剤」は、通常の食事を補うことが目的の食品を意味することが意図される。
【０１１９】
これらの組成物から利益を得るのに最も適した正常または健常な対象は、４０歳以上の、好ましくは５０歳以上の、例えば、５０〜７０歳の個体である。これらの対象は、いかなる病的状態も患っていない。
【０１２０】
ヒトが消費する食品を対象とした組成物は、あらゆる形態であってよく、特に、液体であってもペーストであっても固体であってもよい。特に、組成物は、乳製品、例えばチーズ、バター、ヨーグルトもしくはクリーム、フルーツをベースとする製品、例えばフルーツジュース、コンポートもしくはフルーツゼリー、飲料、または固体の食品、例えばスナック、クッキー等であってもよい。また、タブレット、粉末、カプセル、タブレット、溶液、濃縮液、シロップ、懸濁液または分散系の形態に製剤化されてもよい。
【０１２１】
以下の実施例は、本発明を例示し、かつ本発明の他の態様および利点を示すのに役立つが、非限定的であると考えられるべきである。
【実施例】
【０１２２】
実施例１：本発明のメチルシクロデキストリンの生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）検討  オス１１週齢Ａｐｏ  Ｅ−／−マウスを用いた。
【０１２３】
用いたメチルシクロデキストリンの組成物は、市販の製品ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＣＲＹＳＭＥＢ（ＲＯＱＵＥＴＴＥ）である。
【０１２４】
マウスを６つの群に分けた：
−通常の食事を１６週間与えたマウスの２群。このアテロームモデルは、早期の疾患によって特徴付けられる。第１の群は、プラセボ溶液で処置し（対照群マウス、ｎ＝９）、第２の群は、４０ｍｇ／ｋｇのＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＣＲＹＳＭＥＢで処置した（処置済みマウス、ｎ＝１２）；
−コレステロールを多く含む食事を１１週間与えたマウスの２群。このアテロームモデルは、進行した疾病によって特徴付けられる。第１の群は、プラセボ溶液で処置し（対照群マウス、ｎ＝９）、第２の群は、４０ｍｇ／ｋｇのＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＣＲＹＳＭＥＢで処置した（処置済みマウス、ｎ＝１１）。
【０１２５】
治療は、２００μｌの容量のプラセボ（ＰＢＳ溶液）、またはＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＣＲＹＳＭＥＢ溶液の、１週あたり３回の腹腔内注射によって実行した。
【０１２６】
処置の１６週または１１週後に、動物を屠殺したときに心臓穿刺によって血液サンプルを採取し、脂質血症に及ぼす処置の影響を判定した。
【０１２７】
他の値、例えば血糖値、ヘマトクリット値（ヘモグロビンレベル、赤血球、白血球、リンパ球および血小板の数）を測定した。マウスの種々の群の間で差異は何ら観察されなかった。したがって、これらの結果は、本明細書中で示さない。
【０１２８】
屠殺後、アテローム表面積の定量化をさらに、コンピュータ支援形態計測によって、マウスの各群に実施した。尖弁から２００、４００、６００および８００μｍの位置にて採った１０μｍの４つの大動脈切片をヘマトキシリンおよびオイルレッドＯで染色した。これは、論文“Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ  Ｇ，Ｇｒｏｙｅｒ  Ｅ，Ｋｈａｌｌｏｕ−Ｌａｓｃｈｅｔ  Ｊ，Ａｌ  Ｈａｊ  Ｚｅｎ  Ａ，Ｓａｉｎｚ  Ｊ，Ｕｒｂａｉｎ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｒｅｄｕｃｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ＣＤ３１＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ  ｏｆ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ｐｌａｑｕｅ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ  ２００５；２５：１６５９−１６６４”に記載されている方法に従った。アテローム斑ＭＭＰ−９の免疫組織化学的標識化もまた実施して定量化し、前記斑の脆性を判定した（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓのキット）。
【０１２９】
得られた結果を表１および表２に示す。
【０１３０】
【表１】
0006322289.tif 000002
【０１３１】
【表２】
0006322289.tif 000003
【０１３２】
これらの結果において、処置に起因する値のシフトが、コレステロールを多く含む食事の後に得られるだけでなく、驚くべきことに、かつ有利には、コレステロールを多く含まない通常の食事の後でも得られることに留意すべきである。
【０１３３】
実際、いずれの場合においても、ＨＤＬコレステロール値の上昇が観察されたので、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって治療かつ／または予防することができる疾病の治療および／または予防のために使用される、本発明によるメチルシクロデキストリンの利点を示している。
【０１３４】
いずれの場合においても、アテローム斑表面積は有意に減少する。アテローム表面積の大幅な減少（４０％に近い）が観察された。これらの結果は、アテローム性動脈硬化症またはアテロームと関連する合併症の治療および／または予防のために使用される、本発明によるメチルシクロデキストリンの利点を実証している。
【０１３５】
トリグリセリド、遊離脂肪酸の値、そしてＭＭＰ−９の値の低下が観察され、これは、
アテローム性動脈硬化症またはアテロームと関連する合併症の治療および／または予防のために使用される、本発明によるメチルシクロデキストリンの利点を補強している。
【０１３６】
実施例２：本発明のメチルシクロデキストリンの生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）実験
この実施例は、大動脈内皮細胞で試験した、コレステロール流出に及ぼす種々のシクロデキストリンの効果を示す。大動脈内皮は、アテローム斑組織であり、血液側と直接接触するので、ＨＤＬと直接接触する。
【０１３７】
材料
細胞：内皮細胞は、成牛大動脈内皮細胞（ＡＢＡＥ）だった。
【０１３８】
シクロデキストリン：用いたシクロデキストリンは、以下のものだった：非メチル化β−シクロデキストリン（以下「β−ＣＤ」と表す）、ＭＳが０．２であるメチル−β−シクロデキストリン（以下「ＭβＣＤ−０．２」と表す）、ＭＳが０．６７であるメチル−β−シクロデキストリン（ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＣＲＹＳＭＥＢ、ＲＯＱＵＥＴＴＥ  ＦＲＥＲＥＳ）（以下「ＭβＣＤ−０．６７」と表す）、ＭＳが１．８であるメチル−β−シクロデキストリン（ＲＡＭＥＢ（登録商標）、ＣＹＣＬＯＬＡＢ）（以下「ＭβＣＤ−１．８」と表す）。
【０１３９】
シクロデキストリンを添加した細胞のインキュベーション：
０．５μＣｉ／ｍｌの３Ｈ−コレステロールを、血清（１０％ウマ血清／子牛血清（ＨＳ／ＣＳ））中に３７℃にて６時間添加し、放射性コレステロールが豊化培地を得た。添加した後、１０％ＨＳ、１０％ＣＳ、１ｎｇ／ｍｌ  ｂＦＧＦ（塩基性線維芽細胞成長因子）、２ｍＭグルタミンおよび５０μｇ／ｍｌゲンタマイシンを添加したＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地）を添加して、培地を完成した。
【０１４０】
その後、細胞をこの放射性培地中で３６時間培養して、放射性コレステロールを取り込ませた。その後、培地を除去し、０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する温めたＤＭＥＭで、細胞を２回リンスした。
【０１４１】
その後、細胞を、各シクロデキストリンを１ｍＭ含有するＤＭＥＭ／１ｎｇ／ｍｌ  ｂＦＧＦ中で２４時間培養した（１．４ｍｌ／ウェル）。
【０１４２】
Ａ．シクロデキストリンによって捕捉されたコレステロールの測定
この実施例において、出願人は、メチル化度に応じた、コレステロール流出に及ぼすシクロデキストリンの効果を検討した。
【０１４３】
各シクロデキストリンの存在下でのインキュベーションの開始２時間後、５００μｌの培地を除去し、シクロデキストリンによって捕捉された放射性コレステロールを、シンチレーションカウンタ（Ｔｒｉ−ｃａｒｂ  ２１００ＴＲ）によって分析した。放射能は、壊変毎分（ＤＰＭ）で測定した。その後、細胞コレステロールを捕捉する各シクロデキストリンの能力を、以下の計算を実行することによって推定した：（（１．４ｍｌ／０．５ｍｌ）×測定ＤＰＭ）。
【０１４４】
その後、１００％を表す、シクロデキストリンなしでインキュベートした条件（対照群）と比較して、百分率の形式に値を変換した。
【０１４５】
各実験を３連で行い、２回繰り返した。
【０１４６】
得られた結果を図２に示す。
【０１４７】
結果：
本発明によるＭβＣＤ−０．２およびＭβＣＤ−０．６７は、本発明によらないβＣＤおよびＭβＣＤ−１．８よりも、引き起こされるコレステロール流出がはるかに低い。
【０１４８】
したがって、発明者らは、コレステロールに関して、本発明によるメチル化シクロデキストリンに対する親和性がより低いことを実証し、これは、シクロデキストリンと、またはリン脂質小胞と複合体を形成したコレステロールの形態ではなく、ＨＤＬコレステロールの形態でのコレステロールの流出を説明する。
【０１４９】
Ｂ．細胞内コレステロール流出の原因となるトランスポータの発現：ＡＢＣＡ１およびＡＢＣＧ１
この実施例において、出願人は、幾種類かのメチル化度のシクロデキストリンによる処置後のコレステロール流出の原因となる２つのトランスポータ、ＡＢＣＡ１受容体およびＡＢＣＧ１受容体の発現について検討した。
【０１５０】
各シクロデキストリンによる処置の２４時間後、冷ＰＢＳ（８ｇ／ｌ  ＮａＣｌ、０．２ｇ／ｌ  ＫＣｌ、０．２ｇ／ｌ  ＫＨ２ＰＯ４、２．８７ｇ／ｌ  ＮＡ２ＨＰＯ４（１２Ｈ２Ｏ）、ｐＨ７．４）中で細胞を２回すすいで、５００μｌのＲＬＴ溶解バッファ（Ｂｉｏｒａｄ）を用いて溶解した。３つのウェルを用いて、各条件についてプールした。ＲＮｅａｓｙの全ＲＮＡ抽出キット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、製造者の推奨に従って、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の精製を実行した。この精製工程の終了時に、２６０、２８０、および３２０ｎｍで得られた吸光度値によって、ｍＲＮＡ濃度を推定した。２６０／２８０比を計算することによってサンプルの純度を確認し、２よりも大きな値を有するサンプルのみを検討の対象とした。
【０１５１】
各サンプルについて、ｉＳｃｒｉｐｔ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ
Ｓｕｐｅｒｍｉｘキット（Ｂｉｏｒａｄ）を用いて、製造者の説明書に従って、２５０ｎｇのｍＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。Ｓｓｏ  Ｆａｓｔ  ＥｖａＧｒｅｅｎ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘキット（ＢｉｏＲａｄ）および出願人が設計かつ最適化したプライマー（表３）を用いて、リアルタイムＰＣＲ実験を実行した。
【０１５２】
【表３】
0006322289.tif 000004
【０１５３】
Ｂｉｏｒａｄ  ＣＦＸ９６サーモサイクラーを用いて、６０℃のハイブリダイゼーション温度による４０サイクルにわたる増幅を実施した。各プライマー対について、融解曲線
を作成することによって増幅の特異性を確認し、希釈曲線を作成することによって効率を測定した。その後、ΔΔＣｔ法を用いてβ−アクチンおよびシクロフィリンＢの発現量について、測定した発現量を正規化した。
【０１５４】
各実験を３連で行い、２回繰り返した。
【０１５５】
得られた結果を図３および図４に示す。
【０１５６】
結果：
結果は、シクロデキストリンによる処置に応じて、概して、内皮細胞によるＡＢＣＡ１およびＡＢＣＧ１受容体の発現は、対照群と比較して、低下していることを示している。
【０１５７】
特に、本発明によるＭβＣＤ−０．２およびＭβＣＤ−０．６７は、βＣＤおよびＭβＣＤ−１．８と比較して、ＡＢＣＡ１およびＡＢＣＧ１受容体発現の更なる低下を引き起こす。
【０１５８】
これらの結果を、上記（点Ａ）と組み合わせることによって、発明者らは、本発明に従わないβＣＤおよびＭβＣＤ−１．８が、ＡＢＣＡ１およびＡＢＣＧ１受容体の発現を強く低下させることによって、コレステロールの迅速かつ多量の流出、および細胞のより激しい反応を誘導することを示した。
【０１５９】
一方、本発明によるＭβＣＤ−０．２およびＭβＣＤ−０．６７は、より低いコレステロール流出を誘導していても、ＡＢＣＡ１およびＡＢＣＧ１受容体の発現をはるかに少ない程度に低下させる。
【０１６０】
したがって、本発明によるメチル化シクロデキストリンのコレステロール流出速度は、本発明によらないシクロデキストリンのものと完全に異なる。発明者らは、本発明によるメチル化シクロデキストリンのこの特定の動態が、細胞のコレステロールホメオスタシスに対して崩壊をそれほど引き起こさないという利点を有すると想定した。
【０１６１】
Ｃ．シクロデキストリンで処置された内皮細胞のＳＲ−Ｂ１受容体（スカベンジャ受容体クラスＢメンバ１）、ＨＤＬ受容体の発現の検討
この実施例において、出願人は、メチル化度に応じたＨＤＬ受容体、ＳＲ−Ｂ１受容体の発現に及ぼすシクロデキストリンの効果を検討した。内皮におけるＳＲ−Ｂ１受容体の役割の１つは、遊離コレステロールの、ＨＤＬへの流出を、血中において促進することである。先に記載したプロトコルに従って、出願人が設計かつ最適化したプライマー（表４）を用いて、ＳＲ−Ｂ１受容体の発現を検討した。
【０１６２】
【表４】
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【０１６３】
各実験を３連で行い、２回繰り返した。
【０１６４】
得られた結果を図５に示す。
【０１６５】
結果：
本発明によるＭβＣＤ−０．６７は、ＳＲ−Ｂ１受容体の発現の強い上昇（基礎的発現のおよそ５０％）を引き起こす。
【０１６６】
結論として、発明者らは、本発明によるメチルシクロデキストリンが、コレステロールに対する低い親和性を示し、コレステロール流出の原因となるトランスポータの減少を制限し、かつＨＤＬ受容体ＳＲ−Ｂ１の発現を上昇させることを示した。これは、血液への細胞質コレステロールの輸送を促進し、従って血漿コレステロール値、特にＨＤＬコレステロールを上昇させる効果を有する。したがって、発明者らは、本発明によるメチルシクロデキストリンが、コレステロールに対する低い親和性にも拘らず、実施例１のｉｎ  ｖｉｖｏの結果（表１および表２）によって説明される効果を発揮するためのリン脂質小胞の追加を必要としないことを実証した。
【０１６７】
これらの結果は、ＨＤＬコレステロール値の上昇によって治療かつ／または予防することができる疾病の治療および／または予防のために使用される、本発明によるメチルシクロデキストリンの利点を補強している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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