(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
(a)ブロンズマスカダインポマースのみの溶媒抽出物と、(b)紫マスカダインポマースのみの溶媒抽出物およびホール紫マスカダインブドウ溶媒抽出物とを組み合わせる工程；
（a）および(b)を組み合わせる前に別々に、または(a)および（b）を組み合わせた後一緒にのいずれかで、(a)および(b)をろ過する工程；ならびに
抽出された糖を取り除くために、ろ過する前または後に(a)および(b)を発酵させる工程
を含む、マスカダイン抽出物を製造する方法。
【請求項２】
前記方法が、0.1〜10（重量対重量）の範囲の比で(a)および(b)を組み合わせることを含み、マスカダイン抽出物が少なくとも2％のポリフェノール含量を有する、請求項1記載の方法。
【請求項３】
マスカダイン抽出物が、少なくとも約4％の総ポリフェノール含量を有する、請求項2記載の方法。
【請求項４】
(b)に対する(a)の比が、０．３〜３（重量対重量）の範囲である、請求項2に記載の方法。
【請求項５】
(a)および(b)を組み合わせる工程が、ポマースのみの溶媒抽出物を提供するために、紫マスカダインポマースのみを溶媒抽出しかつブロンズマスカダインポマースのみを溶媒抽出する工程、次いでポマースのみの溶媒抽出物と、ブロンズマスカダインポマースのみおよびホール紫マスカダインブドウ由来の溶媒抽出物とを組み合わせる工程を含む、請求項１記載の方法。
【請求項６】
(a)および(b)を組み合わせる工程が、少なくとも2％のポリフェノール含量を有するマスカダイン抽出物を製造するために、(a)および(b)を組み合わせる前にブロンズマスカダインポマースのみ、紫マスカダインポマースのみ、およびホール紫マスカダインブドウを溶媒抽出することを含む、請求項1記載の方法。
【請求項７】
溶媒抽出物が水抽出物である、請求項1記載の方法。
【請求項８】
ろ過した後に(a)および(b)を発酵することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項９】
(a)および(b)のそれぞれまたは両方が液体中20％〜50％固形物を含むように、(a)および(b)を濃縮することをさらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
(a)および(b)のそれぞれまたは両方が、液体中約40％固形物を含む、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
(a)および(b)をろ過した後に、(a)および(b)を濃縮する、請求項9記載の方法。
【請求項１２】
マスカダイン抽出物が、液体中約40％固形物を含む、請求項11記載の方法。
【請求項１３】
マスカダイン抽出物に賦形剤または追加成分を添加する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項１４】
マスカダイン抽出物にレスベラトロールまたはアントシアニンを添加する工程をさらに含む、請求項13記載の方法。
【請求項１５】
マスカダイン抽出物の製造が、ホール紫マスカダインブドウおよびブロンズマスカダインポマースのみを、1:5〜1:12（重量：重量）の範囲の比で溶媒抽出することを含む、請求項1記載の方法。
【請求項１６】
マスカダイン抽出物の製造が、0.5:1〜5:1（重量：重量）の範囲であるアントシアニン 対 エラグ酸の比を含む出発物質の混合物から溶媒抽出することを含む、請求項1記載の方法。
【請求項１７】
(a)ブロンズマスカダインポマースのみの溶媒抽出物と、(b)紫マスカダインポマースのみの溶媒抽出物およびホール紫マスカダインブドウ溶媒抽出物とを組み合わせる工程；
（a）および(b)を組み合わせる前に別々に、または(a)および（b）を組み合わせた後一緒にのいずれかで、(a)および(b)をろ過する工程；ならびに
抽出された糖を取り除くために、ろ過する前または後に(a)および(b)を発酵させる工程
を含む、マスカダイン抽出物を製造する方法であって、
(a)と(b)とを組み合わせる工程は、ブロンズマスカダインポマースのみおよび紫マスカダインポマースのみを組み合わせ、ブロンズマスカダインポマースのみおよび紫マスカダインポマースのみを同時に溶媒抽出し、それから、ホール紫マスカダインブドウ抽出物を加えることを含む、方法。
【請求項１８】
(a)ブロンズマスカダインポマースのみの溶媒抽出物と、(b)紫マスカダインポマースのみの溶媒抽出物およびホール紫マスカダインブドウ溶媒抽出物とを含むマスカダイン抽出組成物であって、
(b)に対する(a)の比が0.1〜10（重量対重量）の範囲であり、マスカダイン抽出物が少なくとも2％のポリフェノール含量を有し、マスカダイン抽出物がろ過および／または発酵されている、マスカダイン抽出組成物。
【請求項１９】
非飲料食品、飲料、栄養補助食品、または化粧用組成物において提供される、請求項18記載の組成物。
【請求項２０】
（a）および(b)が共に20〜50％固形物を含む、請求項18記載の組成物。
【請求項２１】
抗酸化性補助物質を含む、請求項18記載の組成物。
【請求項２２】
(b)に対する(a)の比が約0.3〜3（重量対重量）の範囲である、請求項18記載の組成物。
【請求項２３】
マスカダインポマース以外の供給源由来のレスベラトロールまたはマスカダインポマース以外の供給源由来のアントシアニンをさらに含む、請求項18記載の組成物。
【請求項２４】
レスベラトロールを含む、請求項23記載の組成物。
【請求項２５】
レスベラトロールがイタドリ（Japanese knotweed）抽出物由来である、請求項24記載の組成物。
【請求項２６】
マスカダインポマース以外の供給源由来のアントシアニンをさらに含む、請求項18記載の組成物。
【請求項２７】
マスカダインポマース以外の供給源由来のアントシアニンが紫マスカダインブドウの果汁由来である、請求項26記載の組成物。
【請求項２８】
アントシアニンが有色果実由来である、請求項26記載の組成物。
【請求項２９】
有色果実が、エルダーベリー、ブルーベリー、ブラックベリーまたはラズベリーを含む、請求項28記載の組成物。
【請求項３０】
アントシアニンが果実加工廃棄物由来である、請求項28記載の組成物。
【請求項３１】
固形組成物として形成された、請求項18記載の組成物。
【請求項３２】
固形組成物が、粉末、丸剤、錠剤またはカプセルを含む、請求項31記載の組成物。
【請求項３３】
付加的な栄養分を含む、請求項18記載の組成物。
【請求項３４】
付加的な栄養分が、1つまたは複数のビタミンまたはミネラルである、請求項33記載の組成物。
【請求項３５】
付加的な栄養分が、鉄、亜鉛、銅、カルシウム、リン、ナイアシン、チアミン、葉酸、パントテン酸、ヨウ素、ビタミンA、ビタミンC、ビタミンB2、ビタミンB3、ビタミンB6、ビタミンB12、ビタミンD、ビタミンEおよびビタミンKのうちの1つまたは複数である、請求項33記載の組成物。
【請求項３６】
食物繊維をさらに含む、請求項18記載の組成物。
【請求項３７】
(a)ブロンズマスカダインポマースのみの溶媒抽出物と、(b)紫マスカダインポマースのみの溶媒抽出物およびホール紫マスカダインブドウ溶媒抽出物とを組み合わせる工程；
（a）および(b)を組み合わせる前に別々に、または(a)および（b）を組み合わせた後一緒にのいずれかで、(a)および(b)をろ過する工程；ならびに
抽出された糖を取り除くために、ろ過する前または後に(a)および(b)を発酵させる工程
を含む、マスカダイン抽出物を製造する方法であって、
マスカダイン抽出物の製造が、ホール紫マスカダインブドウとブロンズおよび紫マスカダインポマースのみの混合物とを、1:7〜1:16（重量：重量）の範囲である比で、溶媒抽出物することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
参照により組み入れられる、2013年3月14日出願の米国出願第13/828,707号に対する優先権も主張する。
【０００２】
分野
本発明は、マスカダインブドウ抽出物、特にブロンズおよび紫マスカダインブドウから得られる抽出物を含む抗酸化組成物を作製する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景
活性酸素種（ROS）は、好気的代謝で必ず発生する副産物であり、そのためヒトおよび他の生物において継続的に生成されている。ヒトは、外部／環境源、例えば汚染、日光および食事からのROSにもさらされる。ROSには異なる化学的形態が存在するが、それらはすべて細胞構成成分および高分子の構造および機能に対して有害な作用を示す。ROS生成／被爆の度合いは、酸化的ストレスと呼ばれる。
【０００４】
酸化的ストレスは、慢性炎症疾患、例えば糖尿病、癌、アテローム性動脈硬化および他の心臓血管疾患の発病、ならびに神経変性疾患、例えばアルツハイマー病およびパーキンソン病に関与すると考えられている。さらに、複数種の証拠が、酸化的ストレスが正常な老化の根底にある中心的メカニズムであるという見方を支持している。したがって、酸化的ストレスを抑制する組成物および方法を開発する必要がある。
【０００５】
適度なワインの利用が、ワインを飲む集団における心臓血管疾患の発病率およびそれらの結果としての死亡率を低下させることが報告されている。適度なワイン摂取はまた、認知症に対して神経保護効果を提供することが報告されている。ブドウは、フラボノイド（例えば、フラバン-3-オールおよびプロアントシアニジンとして公知のそれらのオリゴマー；フラボノール、アントシアニンおよびフラバノン）ならびに非フラボノイド（例えば、フェノール酸、タンニンおよびスチルベン誘導体、例えばレスベラトロール）を含む数種の生物活性ポリフェノール化合物を含んでいる。非フラボノイドであるレスベラトロールは、ヒトの心臓血管系に対するブドウ産物の有益な効果の多くを媒介すると考えられている。フラボノイドの保護的および抗炎症的な効果は、フリーラジカル捕捉、細胞のシグナル伝達経路、および遺伝子発現に対する様々な効果ならびに迅速かつ異常に増殖する哺乳動物細胞の細胞分裂周期に影響する多くの因子との選択的干渉によるものと考えられている。
【発明の概要】
【０００６】
要旨
ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物の混合物を含むマスカダインポマース溶媒抽出組成物を製造するための方法および組成物が、本明細書に開示される。予想外にも、異なる色のブドウ由来の抽出物の組み合わせが同組成物におけるエラグ酸溶解度を望ましく増加させることが見出された。エラグ酸の溶解度が、ポマースのみの抽出物から得られないアントシアニンを組成物および／または抽出方法に含めることによってさらに増加し得ることも見出された。アントシアニンは、例えば、ホール紫マスカダインブドウもしくは別の有色果実、例えばブルーベリー、ブラックベリー、もしくはラズベリーまたは果実加工廃棄物から得られてもよい。他の例において、アントシアニンは、そのような有色果実の果汁もしくは果皮またはその両方から得られる。1つの特定の開示される態様において、ブロンズマスカダインブドウポマースのみおよびホール紫マスカダインブドウ（ポマースおよび果汁）が、組み合わされた抽出物がホール紫マスカダインブドウ由来のアントシアニンを含むよう、例えば水を用いて、別々にまたは一緒にのいずれかで溶媒抽出される。いくつかの態様において、組み合わされた抽出物は、次いで、予想外に増加したエラグ酸溶解度を示す組成物を製造するために、紫マスカダインポマースのみの抽出物と組み合わされ得る。
【０００７】
したがって、この方法の1つの態様において、紫マスカダインポマースは、ホール紫マスカダインブドウに含まれるポマースを含み、紫マスカダインポマース抽出物は、少なくとも一部、ホール紫マスカダインブドウ由来の抽出物を含む。紫マスカダインポマース抽出物は、したがって、（a）ホール紫マスカダインブドウ由来の抽出物；および（b）果汁をすでに抽出した紫マスカダインブドウのポマースのみ部分由来の抽出物の混合物を含み得る。あるいは、マスカダインブドウ抽出物は、もっぱらブロンズおよび紫マスカダインポマースのみ由来であり得、ポマースのみは、果汁を含まないポマースから本質的になる。いずれの場合も、ブロンズマスカダインポマース抽出物は、ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物が0.1〜10（重量対重量）の範囲の比で存在し、マスカダインポマース抽出物が少なくとも2％、例えば約4％またはそれ以上のポリフェノール含量を有するマスカダインポマース抽出物を製造するために、紫マスカダインポマース抽出物（例えば、紫マスカダインポマースのみの抽出物）と組み合わされ得る。より具体的な例において、ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物は、0.3〜3の範囲の比で存在する。これらの比率で、「ポマース抽出物」は、ポマースのみおよび／またはホールブドウのポマース成分由来の抽出物を含む。
【０００８】
ブロンズおよび紫抽出物は、同時にまたは順次にのいずれかで製造され得る。同時抽出の1つの例において、ブロンズマスカダインポマースのみ（ホールブドウを含まない）およびホール紫マスカダインブドウが組み合わされ、そして（a）ブロンズポマースのみおよび（b）（ホール紫ブドウに含まれる果汁の抽出物およびホール紫ブドウのポマースのみ部分の抽出物を含む）ホール紫ブドウの抽出物由来の混合抽出物を提供するよう、同時に溶媒抽出される。あるいは、ブロンズおよび紫マスカダインポマースのみ（ブロンズまたは紫ホールブドウを含まない）が組み合わされ、そして同時に抽出される。さらに別の例において、ブロンズポマースのみ、紫ポマースのみおよびホール紫ブドウが組み合わされ、そして3つすべてが同時に抽出される。順次抽出の例において、ホールブドウ以外由来の紫マスカダインポマース（例えば、ポマースのみ）およびホールブドウ以外由来のブロンズマスカダインポマース（例えば、ポマースのみ）が別々に抽出され、次いでこれらの抽出物が組み合わされる。順次抽出のさらなる例において、組み合わされた紫／ブロンズ抽出物は、次いで、紫マスカダインポマース（ホールブドウでない）由来の抽出物もしくはホールマスカダインブドウ由来の抽出物またはホール紫ブドウ由来の抽出物およびブロンズポマース（ホールブドウでない）由来の抽出物の組み合わせと組み合わされる。
【０００９】
いくつかの特定の開示される態様において、ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物は、少なくとも2％のポリフェノール含量を有するマスカダインポマース抽出物を製造するようにブロンズマスカダインポマース抽出物と紫マスカダインポマース抽出物とを組み合わせる前に調製される。例えば、ブロンズマスカダインポマースおよび紫マスカダインポマースは、少なくとも2％のポリフェノール含量を有するマスカダインポマース抽出物を製造するようにブロンズマスカダインポマース抽出物と紫マスカダインポマース抽出物とを組み合わせる前にブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物を製造するために、水で抽出される。
【００１０】
ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物の調製は、少なくとも2％のポリフェノール含量を有するマスカダイン抽出物を製造するために、ブロンズマスカダイン抽出物および紫マスカダイン抽出物を、（a）それらを組み合わせる前に別々にまたは（b）それらを組み合わせた後に一緒にろ過することをさらに含み得る。ブロンズおよび紫ポマース抽出物はまた、抽出された糖の除去を助けるために、別々にまたは組み合わせてのいずれかで発酵され得る。そのような発酵は、マスカダインポマース抽出物のろ過の前または後のいずれかで行われ得る。
【００１１】
ブロンズおよび紫マスカダイン抽出物はさらに、各抽出物が液体中20％〜50％固形物、例えば液体中約40％固形物を含むよう濃縮され得る。いくつかの例において、マスカダインポマース抽出物は、マスカダインポマース抽出物をろ過した後に濃縮される。
【００１２】
賦形剤または追加成分が、例えば抗酸化組成物を作製するために、抽出後に抽出物に添加され得る。追加成分は、レスベラトロールまたはアントシアニンを含み得る。1つの特定の例において、アントシアニンは、ブドウのポマースおよびブドウ果汁中に存在するアントシアニンを同時に抽出するようホール紫マスカダインブドウを抽出することによって、抽出時に添加される。
【００１３】
上記または他の方法によって作製される組成物も開示される。特定の例において、組成物中の、紫マスカダインポマース抽出物に対するブロンズマスカダインポマース抽出物の比は、0.1〜10（重量〜重量）の範囲の比で存在し、マスカダインポマース抽出物は、少なくとも2％のポリフェノール含量を有する。これらの組成物は、細胞老化に関連する1つまたは複数のプロセス、例えばフリーラジカル形成または活性を予防または抑制することによって細胞老化を抑制するために、それらを必要とする対象に投与され得る。いくつかの態様において、紫マスカダインポマース抽出物は、（a）ホール紫マスカダインブドウの抽出物；（b）ホールブドウ以外由来の紫マスカダインポマースの抽出物；または（c）（a）および（b）の混合物を含む。組成物は、非飲料食品、飲料、栄養補助食品、化粧用組成物、またはアンチエイジングサプリメントに含まれ得る。組成物は、酸化的ストレスを軽減または抑制するのに十分な組成物の用量を、それを必要とする対象に投与することにより酸化的ストレスを抑制する方法において使用され得る。いくつかの態様において、用量は、食事の10〜30分前または後に投与される。
【００１４】
マスカダイン組成物は、抗酸化組成物中にマスカダインポマースまたはマスカダインブドウ以外の供給源由来のレスベラトロールまたはアントシアニンを含み得る。例えば、組成物は、抗酸化組成物中にイタドリ（Japanese knotweed）抽出物由来のレスベラトロールまたはマスカダインポマース以外の供給源、例えばホール紫マスカダインブドウの果汁由来のアントシアニンもしくは抽出プロセスの間に添加される別の有色果実、例えば、クロスグリ、ブルーベリー、ブラックベリーまたはラズベリー由来のアントシアニンを含み得る。1つの態様において、アントシアニンは、果実加工廃棄物由来であり得る。例えば、廃棄物のアントシアニンは、ピューレ、ゼリー、ジャムおよび果汁濃縮物加工後の有色果実の果皮由来であり得る。廃棄物は、抽出プロセスの間に添加され、抽出プロセスが完了した後に事後的に組成物に添加されない。しかし、最終製品である抗酸化組成物はまた、それに添加された追加の（例えば、エリダーベリー抽出物由来の）アントシアニンを有し得る。いくつかの態様において、抽出物は、0.5：1〜5：1（重量：重量）、例えば1：1（重量：重量）または1.3：1（重量：重量）の範囲のアントシアニン対エラグ酸の出発物質における比率を含む出発物質の混合物（例えば、マスカダインポマースおよび添加されたアントシアニン供給源）から調製される。例えば、追加の果実物質、例えばクロスグリ、ブルーベリー、ブラックベリーまたはラズベリーと組み合わされたマスカダインポマース物質は、少なくとも0.5：1の、例えば5：1という大きなアントシアニン 対 エラグ酸比を有する。他の例において、比は、少なくとも1：1、2：1、もしくは3：1であり、および／または5：1もしくは4：1以下である。他の例において、組み合わされた出発物質におけるアントシアニン 対 エラグ酸の重量比は、0.5：1、1：1、10：1または20：1を超える。他の例において、組み合わされた出発物質におけるアントシアニン 対 エラグ酸の重量比は、30：1、40：1、または50：1以下である。他の例において、抽出物は、抽出物の混合物（例えば、マスカダインポマース抽出物および添加された有色果実、例えばエルダーベリー果実の抽出物由来のアントシアニン）から調製され、組み合わされた抽出物質におけるアントシアニン 対 エラグ酸の重量比は、0.5：1、1：1、10：1、または20：1を超える、例えばそれは24：1であり得る。他の例において、組み合わされた出発物質におけるアントシアニン 対 エラグ酸の重量比は、30：1、40：1、または50：1以下である。
【００１５】
いくつかの例において、マスカダインポマース抽出物は、1：5〜1：12（重量：重量）の範囲の比、例えば1：7（重量：重量）または1：9（重量：重量）または1：10（重量：重量）のホール紫マスカダインブドウ 対 ブロンズマスカダインポマースの比でホール紫マスカダインブドウおよびブロンズマスカダインポマースを含むまたはそれらを同時に抽出することによって調製される。別の例において、マスカダインポマース抽出物は、1：7〜1：16（重量：重量）の範囲、例えば1：9（重量：重量）または1：12（重量：重量）の（a）対（b）比で、（a）ホール紫マスカダインブドウと（b）ブロンズおよび紫マスカダインポマースの混合物とを含むかまたはそれらを抽出することによって得られる。あるいは、マスカダインポマース抽出物は、それらにおけるアントシアニン 対 エラグ酸の比が少なくとも0.5：1、例えば0.5：1〜5：1（重量：重量）の範囲の比、例えば1：1（重量：重量）または1.3：1（重量：重量）であるホール紫マスカダインブドウ、紫マスカダインポマースおよびブロンズマスカダインポマースから調製される。
【００１６】
[本発明1001]
ブロンズマスカダインポマース抽出物と、ブロンズマスカダインポマースから得られない追加のアントシアニンを組み合わせる工程を含む、エラグ酸溶解度が改善されたマスカダイン抽出物を製造する方法であって、追加のアントシアニンが、
（a）ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫ホールマスカダインブドウ抽出物が溶媒抽出物である、紫ホールマスカダインブドウ抽出物、または
（b）クロスグリ、ブルーベリー、ラズベリー、もしくはブラックベリーの果実由来のアントシアニン含有抽出物であって、該アントシアニン含有抽出物および紫ホールマスカダインブドウ抽出物が溶媒抽出物である、該アントシアニン含有抽出物
から得られる、方法。
[本発明1002]
追加のアントシアニンが、紫ホールマスカダインブドウ抽出物から得られる、本発明1001の方法。
[本発明1003]
紫マスカダインポマース抽出物と、ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫ホールマスカダインブドウ抽出物とを組み合わせる工程をさらに含む、本発明1002の方法。
[本発明1004]
マスカダイン抽出物を製造するためにブロンズマスカダインポマース抽出物と紫ホールマスカダインブドウ抽出物とを組み合わせる工程が、0.1〜10（重量対重量）の範囲の比でブロンズマスカダインポマース抽出物および紫ホールマスカダインブドウ抽出物を組み合わせることを含み、マスカダイン抽出物が少なくとも2％のポリフェノール含量を有する、本発明1002の方法。
[本発明1005]
マスカダイン抽出物が、少なくとも約4％の総ポリフェノール含量を有する、本発明1004の方法。
[本発明1006]
ブロンズマスカダインポマース抽出物と紫ホールマスカダインブドウ抽出物とを組み合わせる工程が、ブロンズマスカダインポマースおよび紫ホールマスカダインブドウを組み合わせることと、同時抽出によってブロンズマスカダインポマースおよび紫ホールマスカダインブドウから抽出物を製造することとを含む、本発明1002〜1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
ポマースのみの抽出物を提供するために、紫マスカダインポマースを溶媒抽出しかつブロンズマスカダインポマースを溶媒抽出する工程、次いでポマースのみの抽出物と、ブロンズマスカダインポマースおよびホール紫マスカダインブドウ由来の抽出物とを組み合わせる工程をさらに含む、本発明1002の方法。
[本発明1008]
ブロンズマスカダインポマース抽出物と紫ホールマスカダインブドウ抽出物とを組み合わせる工程が、少なくとも2％のポリフェノール含量を有するマスカダインポマース抽出物を製造するために、ブロンズマスカダインポマース抽出物と紫ホールマスカダインブドウ抽出物とを組み合わせる前にブロンズマスカダインポマース抽出物および紫ホールマスカダインブドウ抽出物を調製することを含む、本発明1002の方法。
[本発明1009]
溶媒抽出物が水抽出物である、本発明1001〜1008のいずれかの方法。
[本発明1010]
ブロンズマスカダインポマース抽出物、紫マスカダインポマース抽出物、および／または紫ホールマスカダインブドウ抽出物を調製する工程が、少なくとも2％のポリフェノール含量を有するマスカダインポマース抽出物を製造するために、ブロンズマスカダインポマース抽出物ならびに紫マスカダインポマース抽出物および／または紫ホールマスカダインブドウ抽出物を、（a）組み合わせる前に別々にまたは（b）組み合わせた後一緒にのいずれかでろ過することをさらに含む、本発明1003の方法。
[本発明1011]
マスカダインブドウ抽出物から抽出された糖を取り除くために、マスカダインポマース抽出物をろ過する前または後にマスカダイン抽出物を発酵させる工程をさらに含む、本発明1001〜1010のいずれかの方法。
[本発明1012]
マスカダイン抽出物が、マスカダインポマース抽出物をろ過した後に発酵される、本発明1011の方法。
[本発明1013]
マスカダイン抽出物が、液体中20％〜50％固形物に濃縮される、本発明1002〜1012のいずれかの方法。
[本発明1014]
マスカダイン抽出物が、液体中約40％固形物に濃縮される、本発明1013の方法。
[本発明1015]
マスカダイン抽出物が液体中20％〜50％固形物を含むよう、マスカダイン抽出物をろ過した後にマスカダイン抽出物を濃縮することによって、マスカダイン抽出物が濃縮される、本発明1013の方法。
[本発明1016]
マスカダイン抽出物が、液体中約40％固形物を含む、本発明1015の方法。
[本発明1017]
マスカダイン抽出物に賦形剤または追加成分を添加する工程をさらに含む、本発明1001〜1016のいずれかの方法。
[本発明1018]
マスカダイン抽出物にレスベラトロールまたはアントシアニンを添加する工程をさらに含む、本発明1001〜1017のいずれかの方法。
[本発明1019]
本発明1001〜1018のいずれかの方法によって作製される、組成物。
[本発明1020]
（a）ブロンズマスカダインポマース抽出物の、
（b）紫ホールマスカダインブドウ抽出物および／または紫マスカダインポマース抽出物
に対する比が0.1〜10（重量対重量）の範囲であり、マスカダイン抽出物が少なくとも2％のポリフェノール含量を有する、本発明1019の組成物。
[本発明1021]
追加のアントシアニンが、クロスグリ、ブルーベリー、黒ラズベリー、赤ラズベリー、またはブルーベリーの果実由来のアントシアニン含有抽出物から得られる、本発明1001の組成物。
[本発明1022]
アントシアニン含有抽出物が、果実加工廃棄物由来である、本発明1021の組成物。
[本発明1023]
それを必要とする対象に、該対象における細胞酸化を予防または抑制するのに十分な本発明1019〜1022のいずれかの組成物を投与する工程を含む、細胞酸化を抑制する方法。
[本発明1024]
細胞酸化の抑制が、前記組成物を摂取した対象におけるフリーラジカル形成または活性の予防または抑制を含む、本発明1023の方法。
[本発明1025]
紫ホールマスカダインブドウ抽出物に対するブロンズマスカダインポマース抽出物の比が0.1〜10（重量対重量）の範囲であり、マスカダインポマース抽出物が少なくとも2％のポリフェノール含量を有する、ブロンズマスカダインポマース溶媒抽出物および紫ホールマスカダインブドウ溶媒抽出物を含むマスカダイン抽出組成物。
[本発明1026]
非飲料食品、飲料、栄養補助食品、または化粧用組成物において提供される、本発明1019または本発明1025の組成物。
[本発明1027]
ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物が共に20〜50％固形物を含む、本発明1019または本発明1025の組成物。
[本発明1028]
抗酸化性補助物質を含む、本発明1019または本発明1025の組成物。
[本発明1029]
マスカダイン以外の供給源由来のレスベラトロールおよび／またはマスカダイン以外の供給源由来のアントシアニンをさらに含む、本発明1025の組成物。
[本発明1030]
レスベラトロールをさらに含む、本発明1029の組成物。
[本発明1031]
レスベラトロールがイタドリ（Japanese knotweed）抽出物由来である、本発明1030の組成物。
[本発明1032]
マスカダインポマース以外の供給源由来のアントシアニンをさらに含む、本発明1029の組成物。
[本発明1033]
アントシアニンが有色果実由来である、本発明1032の組成物。
[本発明1034]
有色果実が、クロスグリ、ブルーベリー、黒ラズベリー、赤ラズベリー、およびブラックベリーのうち1つまたは複数を含む、本発明1033の組成物。
[本発明1035]
アントシアニンが果実加工廃棄物由来である、本発明1032の組成物。
[本発明1036]
マスカダインポマース抽出物の製造が、ホール紫マスカダインブドウおよびブロンズマスカダインポマースのみを、1:5〜1:12（重量：重量）の範囲の比で抽出することを含む、本発明1002の方法。
[本発明1037]
マスカダインポマース抽出物の製造が、（a）ホール紫マスカダインブドウと（b）ブロンズおよび紫マスカダインポマースのみの混合物との抽出物を、1:7〜1:16（重量：重量）の範囲である（a）対（b）の比で含む抽出物を製造することを含む、本発明1002の方法。
[本発明1038]
追加のアントシアニン 対 エラグ酸の比が0.5:1〜24:1（重量：重量）の範囲である、本発明1001の方法。
[本発明1039]
マスカダインポマース抽出物の製造が、0.5:1〜5:1（重量：重量）の範囲であるアントシアニン 対 エラグ酸の比を含む出発物質の混合物から抽出物を製造することを含む、本発明1001の方法。
本発明の上記およびその他の目的、特徴および利点は、添付図面を参照しつつ進められる以下の詳細な説明からより明らかになるであろう。以下のページでは本発明の具体例が議論されているが、具体的な要素、成分または量の説明は、本発明の任意のそのような局面が必須であることを暗示するものではない。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
詳細な説明
I. 略語および用語：
（a）略語
FRAP：血漿の鉄還元能
mg：ミリグラム
μg：マイクログラム
ml：ミリリットル
ORAC：酸素ラジカル吸収能
ROS：活性酸素種
TE：トロロックス換算量
TEAC：トロロックス換算抗酸化能
wt：重量
【００１８】
（b）用語
以下の用語および方法の説明は、本開示をより丁寧に説明し、本開示の実施にあたって当業者の手引きをするために提供される。「または、もしくは」という用語は、文脈がそうでないことを明確に示していない限り、言及されている択一的な要素の中の単一の要素または2つもしくはそれ以上の要素の組み合わせを表す。本明細書で使用される場合、「含む（comprises）」は「含む（includes）」を意味する。したがって、「AまたはBを含む（comprising A or B）」は、追加要素を排除することなく、「A、BまたはAおよびBを含む（including A, B, or A and B）」を意味する。
【００１９】
それ以外の説明がなされていない限り、本明細書で使用されるすべての技術および科学用語は、本開示の属する技術の分野における通常の知識を有する者に一般に理解されているのと同じ意味を有する。本開示の実施または試験には本明細書に記載されているのと同様または等価な方法および材料が使用され得るが、以下では適当な方法および材料が記載されている。すべての百分率および比率は、そうでないことが示されていない限り、重量により計算される。
【００２０】
投与：任意の有効な経路によって対象に作用物質を提供することまたは与えること。例示的な投与経路は、経口、注射（例えば、皮下、筋内、皮内、腹腔内、静脈内および腫瘍内）、舌下、経皮、鼻内、局所および吸入経路を含むがこれらに限定されない。
【００２１】
アントシアニン：pHに依存して赤色、紫色または青色を呈し得る多くの植物で見出される水溶性の空胞色素。アントシアニンは、フェニルプロパノイド経路を通じて合成されるフラボノイドと呼ばれる親分子クラスに属する。アントシアニンは、以下に示される一般化学構造を有する：
0006445518.tif 000002
【００２２】
「マスカダイン以外の供給源由来のアントシアニン」は、マスカダインブドウ以外の供給源から得られるアントシアニンを表す。そのような非マスカダイン供給源の例は、エルダーベリー、クロスグリ果実、ブルーベリー、黒ラズベリー、赤ラズベリー、ビルベリー、ブドウまたは紫ニンジンを含む。
【００２３】
抗酸化活性：酸化的ストレスを、例えば酸化性フリーラジカルを捕捉および中和することによって還元する活性。抗酸化活性は、本明細書に開示される方法ならびに酸素ラジカル吸収能（ORAC）アッセイ、血漿の鉄還元能（FRAP）アッセイおよびトロロックス換算抗酸化能（TEAC）アッセイを含む当技術分野で公知の方法を用いて測定され得る。例えば、組成物は、ポリフェノール1 mgあたり少なくとも24μmolのトロロックス換算量（μmolTE/mgポリフェノール）の総ORACを有する場合、抗酸化活性を有し、抗酸化物質として使用され得る。
【００２４】
抗酸化組成物：抗酸化活性を有する組成物。
【００２５】
抗酸化有効量：その量の組成物が投与された対象において抗酸化作用を誘導するのに十分な量。いくつかの例において、組成物は、その組成物の個々の成分のORAC親油性値の和から予想されるものよりも高い程度までORAC親油性を増加させることによって、ORAC親油性抗酸化活性の選択的な相乗的増加を誘導する。
【００２６】
ブラックベリー：食用ブラックベリー果実を生産するバラ科のキイチゴ属の多年生植物。
【００２７】
クロスグリ：苦味のあるクロスグリベリーを生産するスグリ科の低木。
【００２８】
ブルーベリー：スノキ属のシアノコカス節の藍色のベリーを有する多年生顕花植物。これらの植物のブルーベリー果実は、赤紫色であり成熟時には最終的に濃紫色となるベリーである。
【００２９】
エルダーベリー（セイヨウニワトコ（Sambucus nigra））：欧州および北米で見られる、数種の地域種または亜種を有するレンプクソウ科に属する植物。その花は平坦な散房花序となる。そのベリーは黒色から淡い青色であり、アントシアニンおよび他のポリフェノール類（例えば、プロアントシアニジンおよびフラボノール、例えばケルセチン）を含んでおり、アントシアニンおよび他のポリフェノール類の量およびタイプは種類によって異なる。
【００３０】
「エルダーベリー抽出物」は、それが所望の活性（例えば、色安定活性、抗酸化活性またはそれらの組み合わせ）を有する限り、当業者に公知の任意の抽出方法にしたがいエルダーベリーを抽出することによって得られる物質である。例えば、エルダーベリー抽出物は、エルダーベリー果実を圧縮することによって得られる果汁または公知の抽出方法、例えば溶媒（例えば水）抽出にしたがいホールエルダーベリー果実もしくはその果実の果皮もしくは種の適当な部分を抽出することによって得られる抽出物を含み得る。また、エルダーベリー果実または乾燥させたエルダーベリー果実の濃縮物の破砕産物が、「エルダーベリー抽出物」として使用され得る。エルダーベリー果実（またはその抽出物）は、マスカダインブドウ抽出物中でのエラグ酸の溶解度を改善するためにマスカダインブドウ抽出物に添加される追加のアントシアニンの供給源として使用され得る。
【００３１】
賦形剤：組成物の活性成分の担体として使用される不活性物質。賦形剤は、非常に強い活性を有する成分を含む処方物のバルクとして使用される物質を含み得、便利かつ正確な投薬を可能にし得、活性成分を安定化し得、かつその送達システムを光学的および／または官能的に許容可能にし得る。薬学的賦形剤の例は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等を含む。特定の例において、開示されるアンチエイジングサプリメントは、以下の成分を含む：グリセリン、ソルビトール、コロイド二酸化ケイ素および自然調味料添加物。
【００３２】
抽出物：物質をマトリックスから分離すること。抽出物はまた、例えば圧力または溶媒、例えばエタノールおよび／もしくは水を用いることによって、原材料の一部を抽出することによって得られる物質である。抽出物は、液体または粉末形態であり得る。本明細書に開示される抽出物の特定の例は、液体形態である。「溶媒抽出物」は、生産物中に含まれる所望の物質を溶解する液体溶媒に標的を曝露することによって得られる抽出物を表す。「水抽出物」は、生産物の水抽出によって得られる抽出物である。溶媒抽出は、溶媒中での標的物質の溶解度にしたがい生産物から標的物質を取り出す。本明細書に開示される特定の抽出物は、溶媒抽出物、例えば水抽出物である。
【００３３】
細胞老化の抑制（予防を含む）：細胞老化に関連する1つまたは複数のプロセスの抑制（例えば、予防）、例えば組成物を摂取した対象におけるフリーラジカル形成または活性の抑制。細胞老化の予防は、細胞老化の兆候または症状を改善する介入を表す。予防は、細胞老化に関連する1つまたは複数のプロセスの発生を遅らせる予防を含む。細胞老化の予防または抑制は、細胞老化の完全な消去を必要としない。特定の例において、開示される組成物は、細胞老化に関連するプロセスを少なくとも10％、少なくとも20％、少なくとも50％または少なくとも90％をも減少させるまたは遅らせる。そのような減少は、本明細書に開示される方法および当技術分野で公知の方法を用いて測定され得る。
【００３４】
イタドリ（ファロピア・ジャポニカ（Fallopia japonica）、ポリゴナム・クスピダツム（Polygonum cuspidatum））：東アジアの日本、中国、および韓国に生息する大葉の多年生植物。これはレスベラトロールおよびそのグルコシドであるピセイドの高濃度供給源である（新鮮重の最大0.05〜0.2％）。
【００３５】
マスカダインブドウ（ビタス・ロツンジフォリア（Vitus rotundifolia）：米国南東に生息し、デラウェアからメキシコ湾ならびにミズーリ、カンザス、オクラホマおよびテキサスの西方で野生していることが見出されるブドウ。マスカダインは、米国南東の高温多湿条件に良く適応している。ヨーロッパブドウおよびアメリカブドウの大きな、詰まった束の特徴と全く異なり、この果実は、3〜40個のブドウの小さな緩やかな房として実をつける。丸みのある1から1〜1/2インチの果実は厚く丈夫な果皮を有し、最大5個の堅い楕円形の種を含む。色に関して、この果実は緑色がかったブロンズ〜ブロンズ、ピンク色がかった赤色、紫色およびほぼ黒色の範囲である。
【００３６】
Black Beauty、Black Fry、Darlene、Fry、Higgins、Jumbo、Scuppernong、Sugargate、Summit、SupremeおよびSweet Jenny等の女性（雌）品種およびCarlos、Cowart、Dixieland、Dixie Red、Fry Seedless、Magnolia、Nesbitt、Noble、Redgate、RegaleおよびSterling等の自家受精品種を含む多くの異なるマスカダインブドウ種が入手可能である。
【００３７】
例えば、マスカダインブドウのブロンズ色品種は、Carlos、Chowan、Doreen、Higgins、Magnolia、Nevermiss、Pamlico、Roanoke、Scuppernong、SterlingおよびSummit栽培品種を含むことが当業者によって確認される。紫色品種は、ブロンズ色品種よりも暗色の果皮を有するものであり、Albermarle、Bountiful、Cowart、GA-1、Hunt、NC-1、Noble、Regale、TarheelおよびJumboを含む。紫色品種のいくつかは黒色品種とも称される。
【００３８】
ホールマスカダインブドウの植物化学的構成成分は、ビティス・ビニフェラ（Vitis vinifera）と異なる。マスカダインは、高いエラグ酸、没食子酸およびフラボノイドグリコシド濃度によって識別されるより高い総フェノール含量を有する。マスカダインブドウにおけるエラグ酸の存在は独特であり、遊離エラグ酸、エラグ酸グリコシド、メトキシル化誘導体およびエラジタンニンの形態で見出される。別の独特の特徴は、マスカダインにおいて観察されるアントシアニン化学である。非アシル化形態のデルフィニジン、シアニジン、ペツニジン、ペオニジンおよびマルビジンの（3-グルコシドではなく）3,5-ジグルコシドとしての存在が理由で、これらの化合物およびこのブドウ中に存在する他のアントシアニンからの自然な色彩的影響は、紫品種から得られる果汁およびポマースに暗紫の色を与える。紫ポマース抽出物はアントシアニンを含み、ブロンズポマース抽出物は含まない。
【００３９】
紫マスカダインブドウにおいて見出される赤色および紫色のアントシアニンは、抗酸化特性を有するポリフェノール化合物である。紫およびブロンズマスカダインブドウは、ホールマスカダインにおいて最も豊富に存在するクラスであるフラバン-3-オールおよびそれらのオリゴマーならびに2番目に豊富に存在するフラボノイドであるフラボノールを含むいくつかの異なるクラスのポリフェノールを含む。マスカダインの果皮画分に関して報告されている主要なポリフェノールは（上位から）、エラグ酸、ミリセチン、ケルセチンおよびケンペロールであり、種に関して報告されているものは、エピカテキン、カテキンおよび没食子酸である（Pastrana-Bonilla et al, J. Agric. Food Chem. 51:5497-5503, 2003）。
【００４０】
マスカダインブドウは、ポマースおよび果汁を含む。「ホールブドウ以外」は、果汁の少なくとも一部が抽出され、いくつかの例では、そのブドウ中の当初の果汁の95％または90％未満を含むマスカダインブドウを含む。
【００４１】
薬学的に許容されるビヒクル：本開示において有用な薬学的に許容されるビヒクル（担体）は、従来的なものである。E. W. MartinによるRemington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 19th Edition (1995)は、1つまたは複数の組成物、例えば1つまたは複数のマスカダイン組成物および追加の薬学的作用物質の薬学的送達に適した組成物および処方物を記載している。
【００４２】
一般に、ビヒクルの性質は、採用される個々の投与様式に依存するであろう。例えば、非経口処方物は、通常、ビヒクルとして薬学的および生理学的に許容される流体、例えば水、生理食塩水、平衡塩溶液、水性デキストロース、グリセロール等を含む注射可能な流体を含む。固形組成物（例えば、粉末、丸剤、錠剤またはカプセル形態）の場合、従来的な非毒性の固形ビヒクルは、例えば、医薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプンまたはステアリン酸マグネシウムを含み得る。生物学的に中性のビヒクルに加えて、薬学的組成物は、微量の非毒性補助物質、例えば湿潤または乳化剤、保存剤およびpH緩衝剤等、例えば酢酸ナトリウムまたはモノラウリン酸ソルビタンを含み得る。
【００４３】
ポリフェノール（ポリヒドロキシフェノール、フェノール類およびポリフェノール類としても公知）：複数のフェノール構造単位の存在によって特徴づけられる有機化合物のクラス。それらの多くは植物由来であり、一般にフラボノイド、フェノール酸およびスチルベンに分類され得るが、フラボノイドおよびフェノール酸には複数のサブクラスが存在する。植物において見出されるポリフェノールは、通常、異なるポリフェノールクラスの複雑な混合物であり、さらに糖基にコンジュゲートしている場合（ポリフェノールグリコシド）または（糖基が付加していない）アグリコン形態で生じる場合がある。「マスカダイン以外の供給源由来のポリフェノール」は、マスカダインブドウ以外の生産物中に存在するまたは生産物から得られるポリフェノールを表し、複数のクラスのポリフェノール、例えばフラボノイド、タンニンおよびフェノール酸を含む。そのような非マスカダイン供給源の例は、エルダーベリー、クロスグリ、ブルーベリー、黒ラズベリー、赤ラズベリー、ブラックベリー、ビルベリー、クラウドベリー、チョークベリー、グーズベリー、ザクロ、ブドウまたは紫ニンジンを含む。
【００４４】
ポマース：果汁の抽出後に残存する果皮、種およびパルプ。1つの例において、ポマース抽出物は、ブロンズマスカダインポマース抽出物、紫マスカダインポマース抽出物またはそれらの組み合わせである。マスカダインブドウポマースの多くの異なる種が、出発物質として利用可能であり、女性（雌）品種、例えばBlack Beauty、Black Fry、Darlene、Fry、Higgins、Jumbo、Scuppernong、Sugargate、Summit、SupremeおよびSweet Jennyならびに自家受精品種、例えばCarlos、Cowart、Dixieland、Dixie Red、Fry Seedless、Magnolia、Nesbitt、Noble、Redgate、RegaleおよびSterlingを含む。マスカダインポマースは、抗酸化特性を有する、没食子酸およびエラグ酸を含む、フェノール化合物を含む。
【００４５】
ポマースは、ブドウの果汁の少なくとも90％もしくは95％を含むホールブドウ中に存在し得、またはブドウが果汁を取り出すために一旦圧縮された場合は、ポマースは実質的に単離されており、本質的にポマースのみからなり得る。
【００４６】
ポマースのみ：例えばブドウの圧縮によって果汁が取り出されたブドウのポマース部分。本明細書で使用される場合、「ポマースのみ」は、その重量の百分率で1％以下の果汁を含むポマースを表す。いくつかの態様において、ポマースのみは、その重量の百分率で0.5％以下の果汁を含むポマースを表す。
【００４７】
精製された：精製されたという用語は絶対的な純粋性を必要とするのではなく；それは相対的な用語であることが意図されている。したがって、例えば、精製された物質は、例えば果実（例えば、ブドウ）内のその自然環境における物質よりも濃縮されているものである。1つの態様において、調製物は、その物質がその調製物の全体量の少なくとも約5％（例えば、少なくとも10％、20％、30％、40％、50％、70％、80％、90％、95％、98％または99％であるがこれらに限定されない）となるよう精製される。1つの例において、開示される抗酸化活性を有する組成物は、（重量で）レスベラトロール調製物全体の少なくとも50％、70％、80％、90％、95％、98％または99％の最低純度のトランス-レスベラトロールを含む。1つの例において、「精製されたポマース」は、果汁の一部または実質的にすべてが取り出されたブドウのポマースである。
【００４８】
紫ニンジン（ダウカス・キャロタ（Daucus carota））：アントシアニン色素を含むニンジンの栽培品種。「紫ニンジン抽出物」は、その抽出物が所望の活性（例えば、色安定活性、抗酸化活性またはそれらの組み合わせ）を有する限り、当技術分野で公知の任意の抽出方法、例えば圧縮または溶媒抽出にしたがい紫ニンジンを抽出することによって取得され得る。1つの例において、紫ニンジン抽出物は、マスカダインの色素を安定化させる特性を有し、したがって後で色安定化添加物として利用され得る。
【００４９】
ラズベリー：食用のラズベリー果実を生産するキイチゴ属の植物品種、例えばルーバス・イダエウス（Rubus idaeus）（赤ラズベリー）またはルーバス・オクシデンタリス（Rubus occidentalis）（黒ラズベリー）。
【００５０】
レスベラトロール：スチルベンの誘導体であるスチルベノイドであり、酵素スチルベンシンターゼの補助により植物中で生産されるフィトアレキシン。レスベラトロールは、2つの構造異性体：シスおよびトランス-レスベラトロールとして存在する。トランス-レスベラトロールは、加熱または紫外線照射に曝露されたときにシス形態への異性化を起こし得る。
【００５１】
レスベラトロールは、非常に多様な微量で見出され、ブドウ、ラズベリー、マルベリー、プラム、ピーナツ、ブルーベリー、ビルベリーおよびクランベリーを含むスノキのベリーならびに一部のマツ、例えばスコッチパインおよびイースタンホワイトパインで測定された場合、平均でそれは（新鮮重の）0.0001％未満であり；レスベラトロールアグリコンの最も豊富な天然供給源（新鮮重の最大0.05％）は、オオイタドリおよびイタドリの根および茎である。ブドウに存在するレスベラトロールは、主として果皮および種で見出される。ブドウの果皮で見出されるレスベラトロールの量はブドウの栽培品種、その地理的起源および真菌感染への曝露によって異なる。しかし、上記のように、それは典型的に、微量でのみ存在する。
【００５２】
本明細書で使用される場合、レスベラトロールという用語は、植物、例えばブドウから抽出される天然のトランス-レスベラトロールまたは合成性のトランス-レスベラトロールを含み得る。本明細書で使用される場合、レスベラトロールという用語は、トランス-レスベラトロールの改良処方物、例えばマイクロカプセル化形態または水分散形態を含み得る。
【００５３】
「マスカダイン以外の供給源由来のレスベラトロール」は、マスカダインブドウ（またはマスカダインブドウの任意の付随成分、例えばその種）以外の生産物中に存在するまたは生産物から得られるレスベラトロールを表す。レスベラトロールは、溶媒抽出（例えば、水抽出）されたマスカダインポマースに実質的に存在せず、いくつかの開示される例において、マスカダインポマース溶媒抽出物は、別の供給源由来のレスベラトロールが抽出物に添加されるまでレスベラトロールを実質的に含まない。
【００５４】
対象：ヒトおよび獣医学的対象、例えばネコ、イヌまたはウマを含むコンパニオンアニマルの両方を含むカテゴリーである生きた多細胞脊椎動物。「ミトコンドリアの生物発生および／または抗酸化活性の増加を必要とする対象」は、そのような増加からの利益を享受し得る対象、例えば老化の兆候を減少させ、酸化により引き起こされる組織損傷を補填しおよび／または心臓血管の、神経学的な、腫瘍関連の、肌の見た目のまたは酸化的ストレスに関連するその他の状態を改善することを望む対象である。
【００５５】
治療有効量：単独でまたは追加の作用物質（例えば、追加の抗酸化剤）と共に所望の応答を誘導する（例えば、細胞老化を予防または抑制する）組成物の量。本明細書に開示される調製物は、治療有効量で投与され得る。
【００５６】
廃棄物：所望の最終生産物の生産の中で廃棄されるかそうでなければ非生産的とみなされる特定の生産プロセス由来の物質。例えば、ピューレ、ゼリー、ジャム、および果汁濃縮物を生産するための多くの果実の処理の中で、果実の果皮は取り除かれ、そしてそのプロセスにより生産される生産物において使用されない場合がある。その場合、果実の果皮は、その生産プロセスにおける廃棄物の一部とみなされるであろう。
【００５７】
ホールブドウ：それが自然界で見出されるままの、または例えば輸送過程によって若干圧縮されたブドウ。「ホールブドウ」は、ポマースおよび当初の果汁含量の少なくとも90％（例えば95％）を含む。
【００５８】
II. 様々な態様の説明
植物性物質は、酸化的ストレスを減少させるために使用され得る栄養補給剤の潜在的な供給源として広く研究されている。赤ブドウは、多くの食物の中でも特に熱心な研究の対象となっている。赤ブドウの抗酸化作用は、多くはポリフェノール化合物、例えばレスベラトロールおよびプロシアニジンに起因するものであり、後者はブドウにおいて相当量で見られる。
【００５９】
過去のいくつかのマスカダインポマース抽出物の使用に伴う問題は、抽出物におけるエラグ酸の溶解度が、特にブロンズ抽出物において望ましくないくらい低いことであった。WO 2010/014870およびWO 2010/014873に示されるように、発明者らは、ブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物を組み合わせることによってマスカダインポマース抽出物におけるエラグ酸の溶解を促進する方法を開発した。ブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物の組み合わせは、驚くべきことに組み合わされた抽出物におけるエラグ酸の溶解度を増加させることが見出された。エラグ酸の溶解度は、驚くべきことに、未濃縮および濃縮の両方の形式においてブロンズに対する紫抽出物の比が低い（例えば、0.1〜10または0.3〜3の範囲の比）場合でさえも増加した。（マスカダイン以外の供給源由来の）補助的なレスベラトロールと共に増加したレベルのエラグ酸を含む組成物は、驚くべきことに、特にORACによって測定される場合、相乗的な親油性抗酸化物質活性を有することが見出された。この親油性ORAC（ORAC親油性）における相乗的な抗酸化活性は、その抗酸化活性が、低密度リポタンパク質（LDL）において見出されるような親油性環境において特に効果的であることを示唆した。特定の例において、レスベラトロールの外部供給源は、イタドリ抽出物であった。
【００６０】
レスベラトロールをマスカダインポマース抽出物およびポリフェノールの追加供給源、例えばアントシアニンの供給源、例えばエルダーベリー果実の混合物と組み合わせることによってさらなる相乗効果が獲得できることも決定された。2013年3月4日に出願された米国出願第13/784,566号を参照のこと。
【００６１】
A. 組み合わされたブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物におけるエラグ酸の溶解度の増加
マスカダインポマース抽出物における（マスカダインブドウに固有の）エラグ酸の最大溶解度の決定により、増強されたエラグ酸溶解度を示す抽出物を調製する（およびポマースのポリフェノールプロフィールを把握する）ことができ、それにより改善された抗酸化活性を有する抽出物を調製することができた。（参照により本明細書に組み入れられる）WO 2010/014870およびWO 2010/014873に開示されるように、改善されたエラグ酸溶解度を示すマスカダイン抽出物は、非飲料食品、飲料、栄養補助食品、または局所軟膏において単独でまたは他の化合物と組み合わせて投与され得る。組み合わされた抽出物を作製する様々な方法、例えばブロンズマスカダインポマース抽出物と紫マスカダインポマース抽出物とを組み合わせて、紫マスカダインポマース抽出物に対するブロンズマスカダインポマース抽出物の比が0.1〜10（重量対重量）、例えば0.3〜3（重量対重量）の範囲であるマスカダインポマース抽出物を生成する方法、が開示されている。組み合わされた抽出物は、ブロンズおよび紫マスカダインブドウを別々に抽出しその後にこれらの抽出物を組み合わせることによって、または所望の比で組み合わされたブロンズおよび紫マスカダインブドウを同時に抽出することによって、抽出され得る。
【００６２】
WO 2010/014870およびWO 2010/014873において、発明者らは、ORACアッセイによって測定された場合の、個別および（混合物または栄養補助食品のいずれかにおける）組み合わせとしての、98％トランス-レスベラトロールに対して標準化された、開示されるマスカダインポマース抽出物およびイタドリ抽出物の抗酸化能を決定した。サンプルの親水性抗酸化能および親油性抗酸化能の両方が測定された。これらの研究は、98％トランス-レスベラトロールに対して標準化された、マスカダインポマース抽出物およびイタドリ根抽出物の混合物の強い相乗的親油性抗酸化作用を示した。親油性条件下で示された選択的な相乗作用は、予想外であった。組成物において利用されるマスカダイン抽出物は天然抽出物であり得、それは種および抽出プロセスによって異なり得るが、相乗的親油性抗酸化活性を維持している。特定の例において、マスカダインポリフェノール対レスベラトロールの具体的に開示されている比が、組成物に存在する。
【００６３】
マスカダインポマース抽出物と組み合わせて、98％トランス-レスベラトロールに対して標準化された、イタドリ抽出物を含む組成物は、この組成物に含まれる個々の抽出物によってもたらされる親油性抗酸化能の和と比較して改善された親油性抗酸化能を有する。親油性環境で生じる酸化的プロセスは、多くの疾患状態、例えばアテローム性動脈硬化における低密度リポタンパク質（LDL）の酸化およびII型糖尿病における肥満誘導インスリン抵抗性の発症を開始すると考えられる。さらに、胃腸管内での食物脂質の酸化は、細胞毒性および遺伝毒性の脂質過酸化産物、例えばマロンジアルデヒド（MDA）の吸収をもたらす。親油性抗酸化物質は、脂質過酸化および脂質過酸化によって生じる産物、例えば架橋性の作用物質を抑制することによって様々なタイプの皮膚損傷を減少させるのに効果的であることが見出された。酸化的ストレスは正常な老化の根底にある中心的メカニズムなので、開示される抗酸化組成物は、フリーラジカル生成または活性を抑制し、それによって細胞老化に関連するプロセスを鈍化させるのに有用である。
【００６４】
出願人のWO 2010/014870およびWO 2010/014873は、改善された抗酸化活性を有するマスカダインポマース抽出組成物を開示している。このマスカダインポマース抽出組成物は、非飲料食品、飲料、液体もしくは固体栄養補助食品または局所軟膏の構成成分として開示された。開示された組成物を製造する方法は、少なくとも2％のポリフェノール含量を有するマスカダイン（ビティス・ロツンジフォリア（Vitis rotundifolia））ポマース抽出物および少なくとも5％の最低純度を有するマスカダイン以外の供給源由来のトランス-レスベラトロールを、マスカダインポリフェノール 対 トランス-レスベラトロールの比が0.1/1〜10/1（重量対重量）の範囲となるよう組み合わせる工程を含む。開示された組成物を製造する方法は、少なくとも2％のポリフェノール含量を有するマスカダイン（ビティス・ロツンジフォリア）ポマース抽出物および少なくとも5％の最低純度を有するマスカダイン以外の供給源由来のトランス-レスベラトロールを、マスカダインポマース抽出物 対 トランス-レスベラトロールの比が0.2/1〜50/1（重量対重量）例えば、20/1〜50/1（重量対重量）、例えば18対1（重量対重量）を含む5/1〜50/1（重量対重量）の範囲となるよう組み合わせ、それによって抗酸化活性を有するマスカダインポマース抽出物・トランス-レスベラトロール混合物を製造する工程を含む。いくつかの態様において、以下でさらに詳細に記載されるように、紫マスカダインポマース抽出物に対するブロンズの比は0.1〜10、例えば0.3〜3の範囲である。
【００６５】
B. マスカダインポマース抽出物
WO 2010/014870およびWO 2010/014873に開示されるマスカダインポマース抽出物は、ブロンズマスカダインポマースおよび紫マスカダインポマースから得られる。いくつかの態様において、マスカダインポマース抽出物中での、紫マスカダインポマース抽出物に対するブロンズマスカダインポマース抽出物の比は、0.1〜10（重量対重量）、例えば0.3〜3（重量対重量）の範囲である。例えば、ブロンズマスカダインポマース抽出物 対 紫マスカダインポマース抽出物の比は、約2.75 対 約1（重量対重量）、2.5 対 約1（重量対重量）、約2.25 対 約1（重量対重量）、約2 対 約1（重量対重量）、約1.5 対 約1（重量対重量）または約1 対 約1（重量対重量）である。他の態様において、比は、約10 対 約1、約7.5 対 約1または約5 対 約1である。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、±0.5と定義される。特定の例において、ブロンズマスカダインポマース抽出物 対 紫マスカダインポマース抽出物の比は、約2.25 対 約1（重量対重量）である。
【００６６】
特定の態様において、マスカダイン（ビティス・ロツンジフォリア）ポマース抽出物は、少なくとも2％のポリフェノール含量を有する。例えば、ポリフェノール含量は、少なくとも3％、少なくとも3.5％、少なくとも4％、少なくとも4.5％、少なくとも5％、少なくとも6％、少なくとも8％、少なくとも10％、少なくとも12％または少なくとも14％である。特定の態様において、マスカダイン（ビティス・ロツンジフォリア）ポマース抽出物は、約4％のポリフェノール含量を有する。
【００６７】
いくつかの態様において、開示されるマスカダインポマース抽出物は、液体中20％〜50％固形物、例えば少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも37％、少なくとも40％、少なくとも42％、少なくとも44％、少なくとも46％または少なくとも48％を含む。特定の態様において、抽出物は、液体中約40％固形物を含む。
【００６８】
マスカダインポマースは、ホールブドウに存在している間にまたはブドウ果汁を実質的に含まない精製されたポマースから抽出され得る。特定の例において、精製されたポマースは、ブドウ中の少なくとも50％の果汁が取り出された後に残存する果皮、種およびパルプである。他の例において、精製されたポマースは、ポマースが本質的に果皮、種およびパルプのみからなるよう、ブドウ中の少なくとも60％、70％、80％または90％の果汁が取り出された後に残存する果皮、種およびパルプである。
【００６９】
ホールブドウに含まれるブドウポマースから調製される抽出物は、ブドウポマースおよびブドウ果汁の両方から抽出される成分を含むという利点を有する。紫マスカダインブドウは、それらの果汁の中にアントシアニンを含み、そのため紫ブドウの溶媒抽出は、組み合わされたブロンズ・紫マスカダインブドウ抽出物においてエラグ酸を溶解させる紫マスカダイン抽出物の能力に寄与する追加量のアントシアニンを含む抽出物を提供する。
【００７０】
C. マスカダインポマース抽出物を作製する方法
WO 2010/014870およびWO 2010/014873はまた、ブロンズマスカダインポマース抽出物 対 紫マスカダインポマース抽出物の比が0.1〜10（重量対重量）、例えば0.3〜3（重量対重量）であるマスカダインポマース抽出物を作製する方法を開示している。この抽出物は任意の抽出方法、例えば加圧下でのプレスまたは溶媒を用いた抽出によって取得され得るが、特定の例は溶媒抽出、例えばアルコール、水（例えば温水）またはアルコールおよび水の組み合わせを用いる溶媒抽出である。1つの開示される態様において、マスカダインポマース抽出物は、ブロンズおよび紫抽出物の望ましい比を達成する比率で存在するブロンズマスカダインポマースおよび紫マスカダインポマースから同時に抽出することによって調製される。他の例において、ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物は、別々に調製される。例えば、ブロンズマスカダインポマースおよび紫マスカダインポマースは、水、好ましくは温水を用いて個別に抽出される。
【００７１】
抽出物はさらに、抽出された糖を除去するために発酵され得る。1つの例において、発酵は、ブロンズマスカダインポマースおよび紫マスカダインポマースを抽出した後であるがブロンズマスカダインポマース抽出物と紫マスカダインポマース抽出物とを組み合わせる前に行なわれ、開示されるマスカダインポマース抽出物が製造される。他の例において、発酵は、ブロンズマスカダインポマース抽出物と紫マスカダインポマース抽出物を所望の抽出後の比（例えば、約2：25〜1のブロンズ 対 紫の比）で組み合わせた後に行われる。
【００７２】
発酵は、本明細書に記載される方法を含む、当業者に公知の任意の方法によって行われ得る。例えば、酵母および酵母栄養分がポマースに添加され、そして残留する糖分がエタノールに変換されるまで発酵が継続され得る。1つの例において、1倍（未濃縮）抽出物1000ガロンあたり2ポンドの酵母が添加され；発酵は典型的に3日後に完了する。他の例において、酵母の量および／または株ならびに発酵の期間および温度は、当業者に公知の個別の方法にしたがい変更され得る。いくつかの例において、ポマース抽出物中の残留物を浄化するおよび／もしくは落ち着かせるためまたは抽出収量を改善するために酵素が使用される。そのような酵素の例は、Scott Laboratories等の販売元から市販されているペクチナーゼまたはアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）由来の酵素ブレンドを含む。これらの酵素は、発酵前または発酵中にポマース抽出物に添加され得る。
【００７３】
いくつかの態様において、ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物は、発酵前および／または後にろ過される。ろ過は、当業者に公知の一般的方法にしたがい行われ得る。特定の例において、抽出物は、適当なメッシュサイズのふるい、例えばUSPメッシュ（典型的に120メッシュ）または同等の布製フィルター（例えば、Millipore Corporationから市販されているフィルター）を通じてろ過される。
【００７４】
特定の態様において、マスカダインポマース抽出物を作製する方法はさらに、各抽出物が液体中20％〜50％固形物、例えば少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも37％、少なくとも40％、少なくとも42％、少なくとも44％、少なくとも46％または少なくとも48％を含むよう、ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物を濃縮する工程を含む。特定の態様において、抽出物は、各抽出物が液体中約40％固形物を含むよう濃縮される。本明細書に開示されるサンプル濃縮方法を含む、一般的に公知となっているサンプル濃縮方法がブロンズおよび紫抽出物を濃縮するために使用され得る。
【００７５】
特定の例において、40％固形物のマスカダインポマース抽出物を調製するために、マスカダインポマース抽出物は、粉末形態に乾燥されそして40％固形物レベルで水により再構成される。あるいは、より許容される市販のアプローチは、バッチまたは連続プロセスを用いる減圧下での蒸発を通じた抽出溶媒の除去による濃縮である。バッチプロセスは、溶媒の蒸気圧を上昇させるためのエネルギーを提供するために容器ジャケットを加熱しつつ20〜29''水銀の減圧下の容器に抽出物を置くことを含む。溶媒の蒸気は、容器の外で凝縮され、凝縮速度は凝縮物の温度を制御する。同じ原理が、連続蒸発プロセスにも適用されるが、こちらには凝縮物が短期間高温にさらされるという利点がある。両方のプロセスが、本明細書に記載されるマスカダインポマース抽出物の濃縮に適用可能である。
【００７６】
特定の態様において、ブロンズおよび紫ポマースは別々に抽出され、そして抽出物の各々は、ブロンズおよび紫ポマース抽出物を所望の比で組み合わせる前にろ過される。いくつかの例において、この方法はさらに、抽出された糖を除去するために、組み合わされたマスカダインポマース抽出物を発酵させる工程を含み得る。1つの例において、例えば発酵前および後に抽出物をろ過することによって、複数のろ過工程が使用される。いくつかの例において、この方法はさらに、本明細書に記載されるようにして抽出物を濃縮する工程を含み得る。例えば、抽出物は、減圧下での蒸発を通じた抽出溶媒の除去により濃縮される。
【００７７】
今回、上記の任意の抽出方法の例において、ホール紫ブドウを紫ポマースと置き換えることができることが見出された。紫マスカダインポマース抽出物は、（a）ホール紫マスカダインブドウの抽出物；（b）ホールブドウ以外由来の紫マスカダインポマースの抽出物；または（c）（a）および（b）の混合物を含み得る。ホール紫ブドウは、ブドウポマース以外由来のアントシアニンの供給源であるブドウ果汁を含み、そして今回、ホールブドウから溶媒抽出されたとき、これらのアントシアニンは、ブロンズおよび紫マスカダインブドウ抽出物の混合物におけるエラグ酸の溶解度を驚くほど向上させることが見出された。しかし、アントシアニンの追加供給源は、紫マスカダインブドウ以外の有色果実または有色果実の副産物、例えば、ブルーベリー、ブラックベリーまたはラズベリー果実によっても提供され得る。他の例において、アントシアニンは、果実加工工程の生産物、例えば果汁濃縮物、または果実加工工程の副産物、例えば果実ピューレ加工工程から分離される果皮由来である。ホール紫マスカダインブドウまたは他の有色果実由来の追加のアントシアニンは、マスカダインブドウ中の望ましい抗酸化物質であるエラグ酸の溶解度を実質的に増加させる。
【００７８】
いくつかの抽出方法の例において、マスカダインポマース抽出物は、1：5〜1：12（重量：重量）の範囲の比のホール紫マスカダインブドウおよびブロンズマスカダインポマースから同時に抽出することによって製造される。他の例においては、1：7〜1：16（重量：重量）の範囲の（a）対（b）の比で、（a）ホール紫マスカダインブドウと（b）ブロンズおよび紫マスカダインポマースの混合物との抽出物を含む抽出物が製造される。他の態様において、マスカダインポマース抽出物は、出発物質（ホールブドウおよびポマース）におけるアントシアニン 対 エラグ酸の比が0.5：1〜5：1（重量：重量）の範囲である任意の組み合わせのホール紫マスカダインブドウ、ブロンズマスカダインポマースおよび紫マスカダインポマースから得られる。他の例において、マスカダインポマース抽出物は、アントシアニン 対 エラグ酸の比が0.5：1〜5：1（重量：重量）の範囲である、アントシアニンの追加の供給源（例えば、ホール紫マスカダインブドウまたは他の有色果実、例えばブラックベリー、ラズベリー、クロスグリもしくはブルーベリー果実、またはこれらの果実のいずれかの廃棄物）と組み合わされたブロンズマスカダインポマースおよび紫マスカダインポマースから得られる。
【００７９】
D. 抗酸化活性を有する組成物
改善された抗酸化活性を有する組成物が本明細書に開示される。いくつかの開示される態様において、組成物は、少なくとも2％のポリフェノール含量を有するマスカダイン（ビティス・ロツンジフォリア）ポマース抽出物および少なくとも5％の最低純度を有するマスカダインブドウ以外の供給源（例えば、イタドリ根抽出物）由来のトランス-レスベラトロールを含み、マスカダインポリフェノール 対 トランス-レスベラトロールの比が0.1/1〜10/1（重量対重量）の範囲であり、それによって抗酸化活性を有する組成物を提供する。そうでないことが示されていない限り、これらおよびすべての他の特定の例および態様は、本発明の個別実施を意図したものであり、本発明の範囲を限定するものではなく、いかなる具体例も、本発明が特定の特徴に限定されることを暗示することを意図していない。
【００８０】
いくつかの例において、組成物は、少なくとも3％、少なくとも3.5％、少なくとも4％、少なくとも4.5％、少なくとも5％、少なくとも6％、少なくとも8％、少なくとも10％、少なくとも12％または少なくとも14％の総ポリフェノール含量を有するマスカダイン（ビティス・ロツンジフォリア）ポマース抽出物および少なくとも5％、少なくとも10％、少なくとも25％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも97％または少なくとも98％の最低純度を有するマスカダインブドウ以外の供給源由来のトランス-レスベラトロールを含む。特定の例において、組成物は、約4％のポリフェノール含量を有するマスカダイン（ビティス・ロツンジフォリア）ポマース抽出物および少なくとも98％の最低純度を有するマスカダインブドウ以外の供給源由来のトランス-レスベラトロールを含む。
【００８１】
いくつかの態様において、組成物は、液体中20％〜50％固形物、例えば少なくとも23％、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも35％、少なくとも37％、少なくとも40％、少なくとも42％、少なくとも44％、少なくとも46％または少なくとも48％を含むマスカダインポマース抽出物を含む。特定の例において、抽出物は、液体中約40％固形物を含む。
【００８２】
他の態様において、レスベラトロールは、少なくとも5％のトランス-レスベラトロール、例えば、少なくとも10％のトランス-レスベラトロール、少なくとも20％のトランス-レスベラトロール、少なくとも30％のトランス-レスベラトロール、少なくとも40％のトランス-レスベラトロール、少なくとも50％のトランス-レスベラトロール、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも97％または少なくとも98％のトランス-レスベラトロールを含む。特定の態様において、レスベラトロールは、イタドリ（ポリゴナム・クスピダツム）の根から抽出された少なくとも50％のトランス-レスベラトロール、例えば、少なくとも55％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも97％または少なくとも98％のトランス-レスベラトロールを含む。合成性のトランス-レスベラトロールを含む他のトランス-レスベラトロール供給源が開示される組成物において使用され得ることが想定されている。
【００８３】
特定の態様において、開示される抗酸化組成物は、少なくとも0.1対1（重量対重量）、例えば0.25対1、0.5対1、0.6対1、0.65対1、0.7対1、0.75対1、0.8対1、0.9対1、または1対1（重量対重量）のマスカダインポリフェノール 対 トランス-レスベラトロールの比を有する。他の態様において、マスカダインポリフェノール 対 トランス-レスベラトロールの比は、10対1（重量対重量）という高いもの、例えば2対1、3対1、4対1、5対1、7.5対1または9対1（重量対重量）であり得る。特定の例において、開示される抗酸化組成物は、0.75対1（重量対重量）のマスカダインポリフェノール 対 トランス-レスベラトロールの比を有する。
【００８４】
特定の態様において、開示される抗酸化組成物は、0.2/1〜50/1（重量対重量）、例えば0.5対1、1対1、5対1、10対1、15対1、20対1、22対1、25対1、30対1、35対1、40対1または45対1（重量対重量）の範囲のマスカダインポマース抽出物 対 トランス-レスベラトロールの比を有する。
【００８５】
いくつかの態様において、抗酸化活性を有する開示される組成物は、ポリフェノール1mgあたり少なくとも21μmolのトロロックス換算量（μmolTE/mgポリフェノール）、例えば少なくとも22μmolTE/mgポリフェノール、少なくとも24μmolTE/mgポリフェノール、少なくとも26μmolTE/mgポリフェノール、少なくとも28μmolTE/mgポリフェノールまたは少なくとも30μmolTE/mgポリフェノールの総ORACを有する。1つの例において、開示される組成物は、24μmolTE/mgポリフェノールの総ORACを有する。
【００８６】
開示される組成物のいくつかの例はさらに、エルダーベリー抽出物、紫ニンジン抽出物、賦形剤（例えば、グリセリン、ソルビトール、コロイド二酸化ケイ素もしくは自然調味料添加物）またはそれらの組み合わせを含む。例えば、エルダーベリー抽出物および紫ニンジン抽出物は、組成物に色を提供するためにまたはさらなる抗酸化活性のために含められ得る。
【００８７】
この方法の具体的に開示される方法において、抗酸化組成物はさらに、マスカダイン以外の供給源由来のポリフェノール（例えば、アントシアニン）と組み合わされる。特定の態様において、組成物は、抗酸化組成物が少なくとも10％のポリフェノール、例えば最大35％のポリフェノール、例えば12〜32％を含むよう組み合わされる。特定の開示される例において、エルダーベリー抽出物は、マスカダイン／エルダーベリー混合物中の総ポリフェノールの少なくとも4分の1、例えば、総ポリフェノールの3分の1〜3分の2、およびマスカダイン／エルダーベリー混合物中のアントシアニンの少なくとも5分の1、例えば25％〜90％を提供する。
【００８８】
特定の態様において、抽出物は、ブロンズマスカダインポマース抽出物およびブロンズマスカダインポマースから得られない追加のアントシアニン、ここで追加のアントシアニンは、紫ホールマスカダインブドウ抽出物から得られ、ここでブロンズマスカダインポマース抽出物および紫ホールマスカダインブドウ抽出物は溶媒抽出物であり；ならびに／またはクロスグリ、ブルーベリー、黒ラズベリー、赤ラズベリーもしくはブルーベリーの果実由来のアントシアニン含有抽出物を含む。
【００８９】
任意の開示される組成物は、非飲料食品、飲料または液体もしくは固体栄養補助食品において提供され得る。いくつかの例において、開示される組成物は、飲料として提供される。本明細書の組成物（特に食品、飲料、および栄養補助食品組成物）は、1つまたは複数の栄養分、特に1つまたは複数のビタミンおよび／またはミネラルで補強され得る。そのようなビタミンおよびミネラルの非限定的な例は、鉄、亜鉛、銅、カルシウム、リン、ナイアシン、チアミン、葉酸、パントテン酸、ヨウ素、ビタミンA、ビタミンC、ビタミンB2、ビタミンB3、ビタミンB6、ビタミンB12、ビタミンD、ビタミンEおよびビタミンKを含む。ビタミンおよびミネラルの市販の供給源もまた、本発明の組成物に含まれ得る。
【００９０】
いくつかの例において、食品および飲料組成物はまた、1つまたは複数の食物繊維を含み得る。「食物繊維」は、哺乳動物の酵素による消化に対して耐性がある複合糖質、例えば、植物の細胞壁および海藻において見出されるまたは微生物発酵によって生産される糖質を意味する。これらの複合糖質の例は、ぬか、セルロース、ヘミセルロース、ペクチン、ゴムおよび粘液、海藻抽出物および生合成ゴムである。セルロース繊維の供給源は、野菜、果物、種子、穀物および人造繊維（例えば、細菌合成によるもの）を含む。市販の繊維、例えば精製された植物セルロースまたはセルロース粉末もまた使用され得る。天然に存在する繊維は、ホールシトラスピール、シトラスアルベド（albedo）、サトウダイコン、シトラスパルプおよびベシクル固形物、リンゴ、アプリコットおよびスイカ外皮由来の繊維を含む。
【００９１】
飲料の酸性は、従来的な方法、例えば食品等級の酸性緩衝液の使用によって所望の範囲内で調節および所望の範囲内で維持され得る。典型的に、上記の範囲内の飲料の酸性は、微生物の抑制のための最大酸性と所望の飲料の風味のための最適酸性の間のバランスである。いくつかの例において、飲料組成物は、約2〜約8、例えば約2〜約4.5または約2.7〜約4.2のpHを有する。
【００９２】
有機および無機の食用酸が、飲料組成物のpHを調節するために使用され得る。酸は、それらの非解離形態またはリン酸水素カリウムもしくはナトリウム、リン酸二水素カリウムもしくはナトリウム塩を含むそれら各々の塩として存在し得る。いくつかの例において、酸は、クエン酸、リンゴ酸、フマル酸、アジピン酸、リン酸、グルコン酸、酒石酸、アスコルビン酸、酢酸、リン酸、ピルビン酸またはそれらの混合物を含む。酸味料はまた、飲料成分を安定化させるための抗酸化物質として機能し得る。広く使用されている抗酸化物質の例は、アスコルビン酸、EDTA（エチレンジアミン四酢酸）およびそれらの塩を含むがこれらに限定されない。
【００９３】
E. 抗酸化活性を有するマスカダイン組成物を作製する方法
抗酸化活性を有するマスカダインポマース抽出組成物は、様々な方法によって作製され得る。例えば、この組成物は、すべての成分を単独でまたは適当な組み合わせで一緒に、かつ適当な場合は水中で、溶解、分散またはそれ以外の方法で混合し、そしてすべての成分が溶解または十分に分散するまでその混合物を機械的撹拌器を用いて撹拌することによって調製され得る。個別の溶液または混合物は、組み合わされ得る。最終混合物は、任意で、保存安定性を向上させるために適当な処理条件下で低温殺菌または無菌充填され得る。
【００９４】
いくつかの態様において、少なくとも2％のポリフェノール含量を有するマスカダイン（ビティス・ロツンジフォリア）ポマース抽出物は、マスカダイン以外の供給源由来のレスベラトロールと組み合わされ、ここでレスベラトロールは、少なくとも5％（例えば、少なくとも10％、少なくとも20％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％または少なくとも99％）の最低純度を有し、ここでマスカダインポリフェノール 対 トランス-レスベラトロールの比は、0.1/1〜10/1（重量対重量）、例えば0.75対1であり、それによって抗酸化活性を有するマスカダインポマース抽出物およびトランス-レスベラトロールの混合物が製造される。開示される方法はさらに、マスカダインポマース抽出物とトランス-レスベラトロールを組み合わせる前にマスカダインポマース抽出物を調製する工程を含み得る。
【００９５】
1つの特定の例において、マスカダインポマース抽出物は、ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物を組み合わせることによって調製される。他の例において、マスカダインポマース抽出物は、ブロンズマスカダインポマースおよび紫マスカダインポマースの混合物から同時に抽出することによって調製され；いくつかの例において、ポマースは、抽出がブロンズポマースおよび紫マスカダインブドウの混合物に対して実施され得るよう、ホール紫マスカダインブドウに含まれる。マスカダインポマース抽出物は、公知の方法、例えば圧縮、プレス、抽出、ろ過（複数回）ならびに減圧蒸発による抽出物の濃縮およびその後の凍結、にしたがい調製され得る。1つの例において、抽出プロセスに水のみが利用され、抽出物自体に追加成分（例えば、溶媒、担体または保存剤）は添加されない。このプロセスは、ポリフェノール化合物を保存しつつ他の分子、例えば大部分の糖、の存在を減らす条件下で行われる。他の例において、エタノールまたはエタノールおよび水の混合物が、抽出プロセスに利用される。特定の例において、抽出プロセスはさらに、浄化または抽出の促進のための酵素の使用を含み得る。例えば、アスペルギルス・ニガー由来の酵素ブレンドまたはペクチナーゼが、これらの目的で使用され得る。市販品の例は、Scott Laboratories製のScottzyme KSおよびScottzymePEC5Lを含む。
【００９６】
他の例において、組成物は、少なくとも2％の総フェノール濃度を有するマスカダインポマース抽出物を利用することによって調製される。例えば、少なくとも2％の総フェノール濃度を有する市販のマスカダイン抽出物が、抗酸化活性を有する開示される組成物を調製するために使用され得る。
【００９７】
特定の例において、抗酸化活性を有する組成物は、マスカダインポマース抽出物およびレスベラトロールを果実抽出物と組み合わせることによって調製され、果実抽出物は、マスカダインポマース抽出物中のエラグ酸の溶解度を実質的に増加させるのに十分な量で存在する。
【００９８】
別の開示される態様は、マスカダイン（ビティス・ロツンジフォリア）ポマース抽出物とマスカダイン以外の供給源由来のレスベラトロールを組み合わせることによって抗酸化組成物を作製する方法であり、ここでマスカダインポマース抽出物のポリフェノール 対 トランス-レスベラトロールの比は0.1/1〜10/1（重量対重量）の範囲であり、得られる組成物は少なくとも2％のポリフェノール含量を有する。マスカダインポマース抽出物は、任意で、それをマスカダイン以外の供給源由来のレスベラトロールと組み合わせる前に濃縮され得る。いくつかの例において、マスカダインポマース抽出物およびレスベラトロールは、マスカダイン以外の供給源（例えば、アントシアニンの供給源）由来、例えばエルダーベリー、クロスグリ、ブルーベリー、黒ラズベリー、赤ラズベリー、ブラックベリー、ビルベリー、クラウドベリー、チョークベリー、グーズベリー、ブドウまたは紫ニンジンの抽出物の1つまたは複数由来のポリフェノールと組み合わされる。
【００９９】
特定の態様において、この方法は、ブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物ならびに少なくとも5％のポリフェノール含量を有するエルダーベリー果実抽出物の混合物をイタドリ根抽出物と組み合わせる工程を含む。特定の例において、イタドリ根抽出物は少なくとも98％レスベラトロールであり、および／またはマスカダインポマース抽出物はブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物の混合物である。この方法のいくつかの態様において、ブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物は、0.1〜10の範囲の比で組み合わされるまたはそうでなければ存在する。
【０１００】
別の態様において、ブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物は、溶解したエラグ酸を含むブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物の混合物を得るために、別々にまたは一緒にのいずれかで溶媒抽出され、ついでブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物の混合物は、例えば少なくとも40％の固形物含量となるよう濃縮される。濃縮されたブロンズ・紫マスカダインポマース抽出物混合物は、抗酸化混合物を得るために、抗酸化混合物におけるマスカダインポマース抽出物のポリフェノール 対 トランス-レスベラトロールの比が0.1/1〜10/1（重量対重量）の範囲であり、得られる抗酸化組成物が少なくとも2％のポリフェノール含量を有するよう、マスカダインポマース抽出物以外の供給源由来のレスベラトロールと組み合わされる。
【０１０１】
他の方法の態様において、抗酸化組成物はさらに、例えば抗酸化組成物に有色果実抽出物を添加することによって、マスカダイン以外の供給源由来のポリフェノール（例えば、アントシアニン）と組み合わされる。他の態様において、アントシアニンは、マスカダインブドウのポマース以外の供給源由来、例えば抽出プロセスの間に導入されたマスカダインブドウの果汁由来のアントシアニンである。特定の態様において、成分は、抗酸化組成物が少なくとも10％ポリフェノール、例えば最大35％ポリフェノール、例えば12〜32％を含むよう組み合わされる。
【０１０２】
F. 細胞老化を抑制（例えば、予防）するための方法およびキット
開示される組成物は、驚くべき相乗的親油性抗酸化活性を有する。酸化的ストレスは、正常な老化の根底にある中心的メカニズムであることが公知である。親油性抗酸化物質が様々なタイプの皮膚損傷を抑制することができることも公知である。これらの観察に基づき、例えばフリーラジカル生成または活性を抑制するまたは減少させることによって、細胞老化を抑制する方法が開示される。1つの例において、組成物の用量は、抗酸化活性を必要とする対象に投与され、用量は、細胞老化に関連する1つまたは複数のプロセス、例えば対象におけるフリーラジカル形成または活性を抑制するまたは減少させるのに十分である。
【０１０３】
組成物はまた、酸化的ストレスに関連する任意の障害を処置するためにも有用である。本発明の抽出物および組み合わされた組成物は、慢性炎症疾患、例えば糖尿病、癌、アテローム性動脈硬化およびその他の心臓血管疾患ならびに中枢神経系または脳の変性疾患、例えばアルツハイマー病およびパーキンソン病の病理に関連する酸化的ストレスを減少させる、予防するまたは処置するために使用され得る。
【０１０４】
いくつかの方法の態様は、マスカダインポマース抽出物を単独でまたはレスベラトロールを含むがこれに限定されない追加の活性成分と組み合わせてのいずれかで含む溶液または局所軟膏を適用することによって、皮膚細胞におけるフリーラジカル形成または活性を抑制するまたは減少させることによって肌質を改善する。1つの例において、溶液または局所軟膏は、レスベラトロールを含まない開示されるマスカダインポマース抽出物を含む。別の例において、溶液または局所軟膏は、開示されるマスカダインポマース抽出物およびレスベラトロールの両方を含む、例えば約0.75対1（重量対重量）のマスカダインポリフェノール 対 レスベラトロールの比を有するマスカダインポマース抽出物を含む。さらに他の態様において、組成物は、マスカダイン以外の供給源、例えばエルダーベリー果実抽出物由来のポリフェノール（例えば、アントシアニン）を含む。この方法は、臨床家もしくはその他のヘルスケア提供者によって実施され得、または、家庭での使用のために設計され得る。この方法は、老化に関連する皮膚の変化が露見するのを減少させ得、ヒトの皮膚のしわを見た目上減少させ得、および皮膚のきめを改善し得る。抗酸化活性を有する開示される組成物（経口用もしくは局所用を含む）またはマスカダイン抽出物および1つもしくは複数の追加のアンチエイジング組成物、例えば1つもしくは複数の追加の抗酸化物質を含み得る肌質を改善するための方法およびキットもまた提供される。
【０１０５】
マスカダインポマース抽出組成物は、家庭内でまたは臨床家、例えば医師または美容師によって使用される肌質改善キットに含まれ得る。このキットは、組成物を皮膚に適用するためのアプリケータおよび使用説明書を含み得る。説明書は、書面または電子機器、例えばコンピュータ、CDプレーヤー、mp3プレーヤーまたはDVDプレーヤー等で使用するためのデジタル形態（例えば、ビデオテープ、DVDまたはCD）であり得る。別の例において、キットは家庭内での使用に適したものである。いくつかの例において、キットは、2つの別個の容器にまたは単一の容器内の単一組成物としてのいずれかで、マスカダイン組成物および1つまたは複数の追加のアンチエイジング化合物、例えば別の抗酸化物質（例えば、ビタミンC、ビタミンE、セレニウムおよび／またはベータ-カロテン）を含む。
【０１０６】
G. 薬学的担体を含む組成物
開示されるマスカダインポマース抽出物および組成物は、1つまたは複数の酸化的プロセス、例えば細胞老化等の細胞イベントに関連するフリーラジカル形成の抑制に有用であり得る。組成物は、薬学的担体および単独またはマスカダイン以外の供給源由来のレスベラトロールと組み合わされた少なくとも1つの開示されるマスカダインポマース抽出物を含み得る。いくつかの態様において、組成物はまた、マスカダイン以外由来の補助的なポリフェノール供給源を含む。薬学的担体は、薬学的または非薬学的使用、例えば特定目的での、例えば医薬品としての販売の前に規制当局の承認が必要な場合と必要ない場合がある使用のためのものであり得る。しかし、本明細書で使用される「薬学的組成物」は、薬学的に適合する担体を含む組成物を表す。適当な薬学的担体は、組み入れられる米国特許出願第13/056,536号；同第13/056,559号；および同第13/784,566号により詳細に記載されている。
【０１０７】
H. 開示される抽出物および組成物の投与
特定の例において、組成物は、非飲料食品、飲料、または栄養補助食品の形態で、哺乳動物対象、例えばヒト、に経口投与される。別の例において、組成物は、哺乳動物対象、例えばヒト、の皮膚表面に局所投与される。
【０１０８】
投与される作用物質の治療有効量は、望まれる効果および処置される対象によって異なり得る。1つの例において、この方法は、対象（例えば、ヒト対象）への少なくとも1mgの組成物の毎日の投与を含む。例えば、ヒトは、少なくとも1gまたは少なくとも10gの組成物を毎日、例えば1g〜5gを毎日、5g〜10gを毎日、例えば7gを毎日投与され得る。1つの例において、対象はマスカダインポマース抽出物およびレスベラトロールを含む少なくとも5gの組成物を投与される。他の例において、対象は、少なくとも6.3gのそのような組成物を経口投与される。投薬は、分割された用量で（例えば、1日あたり2、3もしくは4つに分割された用量で）または毎日1回の投薬で行われ得る。
【０１０９】
特定の例において、対象は、複数日投薬スケジュールで、例えば少なくとも2日連続、10日連続等で治療組成物を投与され、そしてそれが数週、数月または数年の期間継続され得る。1つの例において、組成物は、少なくとも30日間の期間、例えば、少なくとも2月間、少なくとも4月間、少なくとも6月間、少なくとも12月間、少なくとも24月間または少なくとも36月間毎日投与される。
【０１１０】
本開示の主題は、以下の非限定的な実施例によってさらに説明される。
【実施例】
【０１１１】
実施例1
マスカダインポマース抽出物におけるエラグ酸溶解度の決定
この実施例は、未濃縮および濃縮抽出物の両方における、エラグ酸溶解度に対する様々な特定のブロンズ対紫ポマース抽出物比の効果を示す。ブロンズおよび紫抽出物の混合物は、エラグ酸溶解度を増加させる。
【０１１２】
別々に発酵させたブロンズおよび紫ポマース抽出物を加熱し、次いで100mlの総容積で表1に提供される比で混合した。
【０１１３】
（表１）1倍濃縮物における様々なブロンズ／紫ポマース抽出物比
0006445518.tif 000003
【０１１４】
個々のブロンズおよび紫ポマース抽出物を濃縮しなかったため、得られた抽出物の混合物は1倍濃縮物であった。1倍濃縮物は、典型的に、約2％固形物溶液（2グラムの乾燥抽出物に相当する100グラムの溶液）を含んでいた。およそ20ミリリットルの各比率をそれぞれのガラス試験管に移し、そしてホイルで蓋をした。サンプルを85℃で30分間加熱し、次いで熱源から取り除き、室温まで戻した。次いでサンプルを、それらのエラグ酸含量を決定するために0.45μm PTFEフィルターw/GMFを通じてろ過し、HPLC/MSによって分析した。ブロンズおよび紫ポマース抽出物の両方におけるエラグ酸のベースライン値を決定するためならびに紫ポマース抽出物におけるアントシアニンの含量を決定するために、個々のブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物も、同じプロセスを通じて分析した。次いでサンプルにおけるエラグ酸の総面積を、[M-H]- = 301 amuで抽出イオンクロマトグラム（EIC)を用いるイオントラップ質量検出器とタンデム接続された254nmでUV-VIS検出を行う逆相HPLCによって決定した。
【０１１５】
40％固形物で様々なブロンズ／紫ポマース抽出物比を調製するために、1倍の個々のブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物を乾燥させて粉末形態にし、これを水で再構成して40％固形物を含む液体を作製した。次いでこれらの2つの個々の溶液を容積ではなく重量（wt）にしたがい様々な比で混合した。評価した様々な比が、表2Aおよび2Bに提供されている。
【０１１６】
（表２Ａ）1倍濃縮物における様々なブロンズ／紫抽出物比の下でのエラグ酸溶解度の決定
0006445518.tif 000004
【０１１７】
（表２Ｂ）およそ20倍濃縮または40％固形物レベルにおける様々なブロンズ／紫抽出物比の下でのエラグ酸溶解度の決定
0006445518.tif 000005
【０１１８】
およそ10ミリリットルの各比率をそれぞれのガラス試験管に移し、そしてホイルで蓋をした。サンプルを85℃で30分間加熱し、次いで熱源を取り除き、室温まで戻した。次いでサンプルを、それらのエラグ酸含量を決定するために0.45μm PTFEフィルターw/GMFを通じてろ過し、HPLC/MCによって分析した。ブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物の両方におけるエラグ酸のベースライン値を決定するためならびに紫マスカダインポマース抽出物におけるアントシアニンの含量を決定するために、個々のブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物も同じプロセスを通じて分析した。サンプルにおけるエラグ酸の総面積を決定するために、認証された試験方法C205を、[M-H]- = 301 amuで抽出イオンクロマトグラム（EIC)を用いるイオントラップ質量検出器とタンデムs接続で使用した。
【０１１９】
紫マスカダインポマース抽出物をブロンズマスカダインポマース抽出物と混合することにより、混合物中でのエラグ酸の溶解度が増加した。これらの研究から、1倍濃縮レベルで、65％対35％のブロンズ対紫ポマース抽出物（容積対容積）の比が2つのポマース抽出物の混合物において最大溶解度を達成するのに十分であることが見出された。さらに、40％固形物レベルで、エラグ酸の溶解度は、紫マスカダインポマース抽出物の含量が混合物において増加するのに伴い増加し続けた。これらの発見は、40％固形物レベルで、固体形態で存在するエラグ酸の量が多いほど、より多量の紫ポマース抽出物が混合物中に存在するすべてのエラグ酸を十分に溶解するのに役立つことを示唆している。これらの研究はまた、アントシアニン、例えば紫マスカダインポマース抽出物に含まれるそれがブロンズマスカダインポマース抽出物中に含まれるエラグ酸の溶解度に影響することを示唆している。
【０１２０】
実施例2
アンチエイジング栄養補助食品およびそれらの調製物
細胞老化に関連する1つまたは複数のプロセスを予防または抑制するために消費され得る栄養補助食品は、参照により組み入れられるWO 2010/014870およびWO 2010/014873に開示されている。
【０１２１】
栄養補助食品は、投薬に関する説明書を含む。例えば、説明書は、5ミリリットルの液体サプリメント（およそティースプーン1杯）が毎日食前に摂取され、細胞老化に関連する1つまたは複数のプロセスを抑制するためのアンチエイジングサプリメントとして使用され得ることを示すものであり得る。
【０１２２】
実施例3
マスカダインポマース抽出物およびイタドリ根抽出物の混合物の抗酸化能
この実施例は、酸素ラジカル吸収能（ORAC）アッセイによって測定される、イタドリ抽出物およびマスカダインポマース抽出物の混合物の改善された抗酸化能を示す。
【０１２３】
2つの植物抽出物の個別のまたは組みあわせとしての抗酸化能を、ORACアッセイを用いて評価した。このアッセイは、幅広い範囲の食物および飲料の抗酸化能を測定するために使用され、これはUSDA ORACデータベースに含まれるデータの基礎である。この試験によって、親水性抗酸化能および親油性抗酸化能の両方を測定することができる。
【０１２４】
以下のサンプルを分析した：（1）最低98％トランス-レスベラトロール（実際の含量は100％トランス-レスベラトロールであった）に対して標準化された乾燥／粉末化イタドリ根抽出物；（2）14.4％の総ポリフェノール含量を含む乾燥／粉末化マスカダインポマース抽出物（2:1のブロンズ 対 紫ポマース比）；および（3）上記の乾燥／粉末化イタドリおよび乾燥／粉末化マスカダインポマース抽出物の1:5.36（wt:wt）比の混合物（総ポリフェノール含量は混合物の27.5％であり、マスカダインポリフェノール 対 トランス-レスベラトロールの比は0.75対1であった）。親水性、親油性および総ORAC値を測定し（総ORAC値は親水性および親油性値の和である）、結果がポリフェノール1ミリグラムあたりのμmolトロロックス換算量（μmolTE/mgポリフェノール）で表されている。結果が表3に示されている。
【０１２５】
（表３）μmolTE/mgポリフェノールで表されるサンプル1〜3の親水性、親油性、および総ORAC値
0006445518.tif 000006
【０１２６】
表3に示されているように、混合物の測定された親水性ORAC値は、これら2つの抽出物の加算効果に基づき予想された値と同等であった。しかし、混合物の測定された親油性ORAC値は、予想された加算値よりも5倍大きく、総ORAC値で20％増加した。表4は、（表3に示されるポリフェノール1mgあたりに対する）物質1グラムあたりのORAC値で表される結果を示している。表4に示されるように、親油性抗酸化能の発現におけるマスカダインポマース抽出物およびイタドリ根抽出物の混合物の相乗的効果は、値が物質1グラムあたりのORACで表されたときも維持される。
【０１２７】
（表４）物質1グラムあたりのORAC値で表されるサンプル1〜4の親水性、親油性、および総ORAC値
0006445518.tif 000007
【０１２８】
添加されたレスベラトロールの優れた抗酸化作用が前の実施例によって説明されているが、マスカダイン／レスベラトロール混合物の改善された抗酸化活性は、この実施例3で試験された特定のマスカダインおよびレスベラトロールの比に限定されない。
【０１２９】
実施例4
マスカダインポマース抽出物におけるエラグ酸溶解度に対するエルダーベリー果実抽出物の効果
実施例1に示されるように、ブロンズポマース抽出物への紫ポマース抽出物の添加は、ブロンズポマース抽出物中に含まれるエラグ酸の溶解度を向上させた。この効果は、（2％固形物レベルに対して）40％固形物レベルに濃縮された抽出物において非常に高かった。
【０１３０】
エルダーベリー果実抽出物は、相当量のアントシアニンを含んでおり（しかしエラグ酸を含んでおらず）、したがってマスカダインポマース抽出物（ブロンズおよび紫ポマース混合物）中の可溶性エラグ酸含量がエルダーベリー果実抽出物由来のアントシアニンの添加によって影響されるかどうかを決定する実験を行った。この実施例は、マスカダインポマース抽出物中の可溶性エラグ酸含量が、おそらくそれがアントシアニンを含んでいることが理由で、エルダーベリー果実抽出物の添加によって有意に影響されることを示している。この実施例で試験した特定の量は、本発明自体を限定するものではなく、特許請求の範囲内の実際の態様の具体例として含まれるものにすぎない。エルダーベリー果実抽出物はときどき食品着色料として低濃度（0.5％未満）で使用されるが、これらの実験で添加されたエルダーベリー果実抽出物の相対量は、食品着色料としてのみ使用される場合の量よりもずっと多い。例えば、エルダーベリー果実抽出物の粉末は、エルダーベリー果実抽出物の粉末およびマスカダインブドウ抽出物の粉末を合わせた重量の少なくとも20％、30％、40％、50％、60％または65％であり得る。加えて、組み合わされた粉末におけるアントシアニン 対 エラグ酸の重量比は、0.5:1、1:1、10:1または20:1超であり、例えば実施例4で提供される実施例において、組み合わされた粉末におけるアントシアニン 対 エラグ酸の重量比は24:1である。この実施例はまた、添加されるアントシアニンが当初の抽出物質中に存在する必要がなく、初期抽出後に混合される抽出物（または抽出物の粉末形態でもよい）中に存在してよいことを示している。
【０１３１】
例示目的にすぎないが、エラグ酸濃度を、（1）乾燥粉末化マスカダインポマース抽出物（2：1のブロンズ 対 紫ポマース比）ならびに（2）1：1.86比（wt:wt）の上記のマスカダインポマース抽出物および乾燥粉末化エルダーベリー果実抽出物（6.5％アントシアニン含有）の混合物、において測定した。各サンプルの溶液を、40％、20％、10％および2％固形物を提供する様々な濃度で調製した。各溶液を85℃で30分加熱し、熱源から取り除き、そして室温にした（1時間で完了）。次いでサンプルを0.45μmPTFEフィルターw/GMFを通じてろ過し、そして可溶性エラグ酸の含量を決定するためにHPLC/MSを通じて分析した。エラグ酸の総面積は、[M-H]- = 301 amuで抽出イオンクロマトグラム（EIC)を用いるイオントラップ質量検出器とタンデム接続された254nmでUV-VIS検出を行う逆相HPLCによって評価した。結果が表5に示されている。
【０１３２】
（表５）マスカダインポマース抽出物中の可溶性エラグ酸含量に対するエルダーベリー果実抽出物（アントシアニン）の効果
0006445518.tif 000008
【０１３３】
マスカダインポマース抽出物の粉末の重量よりも多いエルダーベリー果実抽出物の粉末の重量を用いて得られたこれらの結果は、マスカダインポマース抽出物／エルダーベリー果実抽出物がマスカダインポマース抽出物の寄与により予想されるものよりも非常に多量の（40％〜60％多い）可溶性エラグ酸を含んでいたことを明確に示している。マスカダインポマース抽出物はブロンズおよび紫ポマース抽出物の混合物から調製され、したがって（エラグ酸の溶解を促進する）紫ポマース由来のアントシアニンを含んでいたが、マスカダイン以外の供給源（エルダーベリー果実抽出物）由来の十分量のアントシアニンの添加は、予想外に、エラグ酸の溶解をさらに増強した。
【０１３４】
この予想外の結果の確認を、マスカダインポマース抽出物における総エラグ酸の絶対値を測定し、上記の条件下で総エラグ酸含量のどのくらいの割合が溶解しているかを学ぶことによって行った。サンプル中に含まれる総エラグ酸の絶対値を決定するため、各乾燥粉末（サンプル1および2）をDMSOに溶解させ、そしてそれらのエラグ酸含量を上記のようにして評価した（エラグ酸の総面積を、[M-H]- = 301 amuで抽出イオンクロマトグラム（EIC)を用いるイオントラップ質量検出器とタンデム接続された254nmでUV-VIS検出を行う逆相HPLCによって測定した）。以下の表（6および7）は、可溶性になった総エラグ酸の比率が内部マスカダインポマースアントシアニンおよびエルダーベリー果実抽出物由来の外部アントシアニンの添加の両方によって上昇したことを示している。
【０１３５】
（表６）マスカダインポマース抽出物における総エラグ酸の溶解度に対するマスカダインポマースアントシアニンの効果
0006445518.tif 000009
【０１３６】
表6は、（紫ポマース由来の）マスカダインポマース抽出物中の内部アントシアニンが、可溶性になる総エラグ酸の比率を上昇させたことを示している。固形物含量のレベルの増加は内部アントシアニンの含量を増加させ、それによって可溶性エラグ酸の比率はマスカダインポマース抽出物中に含まれる総エラグ酸含量の34％〜50％に上昇した。とはいうものの、紫ポマース由来の内部アントシアニン含量によっては、マスカダインポマース抽出物の総エラグ酸含量の最大50％しか可溶化しなかった。
【０１３７】
（表７）マスカダインポマース抽出物における総エラグ酸の溶解度に対するエルダーベリー果実抽出物（アントシアニン）の効果
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【０１３８】
表7は、エルダーベリー果実抽出物由来の追加の外部アントシアニンの添加がマスカダインポマース抽出物中に含まれるエラグ酸の溶解度を大きくかつ予想外に上昇させ、50％、60％または70％を超える可溶性エラグ酸が溶解したことを示している。固形物のレベルが増加すると、総アントシアニン（内部および外部）の含量もまた増加し、可溶性エラグ酸の比率はマスカダインポマース抽出物の総エラグ酸含量の51％〜75％に上昇した。さらに、エルダーベリー果実抽出物由来の外部アントシアニンの添加は、マスカダインポマース抽出物単独と比較して、すべての固形物含量レベルでエラグ酸の溶解度を向上させた。実際、40％固形物レベルで、エルダーベリー抽出物由来の外部アントシアニンの添加は、総エラグ酸含量の75％を可溶化させ、一方、紫ポマース由来の内部アントシアニンは総エラグ酸含量の50％しか可溶化しなかった。結論として、紫マスカダインポマースにおいて見出されるアントシアニンはマスカダインポマース抽出物のエラグ酸溶解度を向上させるが、マスカダイン以外の供給源由来の十分量の追加のアントシアニンはエラグ酸溶解度のさらなる驚くべき増加を提供する。この実施例は、マスカダインポマース抽出物（またはブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物の混合物）への追加のアントシアニンの添加の驚くべき結果を示しており、かつ追加のアントシアニンが抽出される当初の原材料に存在する必要がないことを示しているが、この実施例は本発明をこの実施例4で試験された特定の比に限定するものではない。
【０１３９】
実施例5
ホールブドウに含まれるポマース由来の抽出物
これまでの実施例で、マスカダインポマース（例えば、果汁がポマースのみの重量の1％未満を占めるポマースのみ）の使用を開示した。これらの実施例において、マスカダインポマース抽出物は、様々な比のブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物の組み合わせから得た。ブロンズマスカダインポマース抽出物および紫マスカダインポマース抽出物は、それらを特定比で組み合わせる前に別々に調製され得、またはブロンズマスカダインポマースおよび紫マスカダインポマースが様々な比で組み合わされ、次いで同時に抽出され得る。
【０１４０】
本実施例に開示されるプロセスは、紫マスカダインポマースがその当初の果汁のすべてを有するかまたは果汁含量の5％もしくは10％以下が抽出されたかのいずれかであるホールマスカダインブドウに含まれ得る点を除いて、同様である。紫マスカダインポマース成分を含むホール紫マスカダインブドウは、したがって、紫マスカダインポマースのみの代わりに使用される。ホールブロンズマスカダインブドウでブロンズマスカダインポマースを置き換えることもできるが、本実施例では、ホールブロンズマスカダインブドウは使用されず、ブロンズポマースのみが使用される。したがって、この実施例における出発物質は、ブロンズマスカダインポマースのみ、紫マスカダインポマースのみおよびホール紫マスカダインブドウである。（部分的に破砕または圧縮されたホール紫マスカダインブドウを含む）ホール紫マスカダインブドウは、ブロンズマスカダインポマースのみまたはブロンズおよび紫マスカダインポマースのみの混合物に添加され得る。ブロンズおよび紫マスカダインポマースのみの混合物は、ホール紫ブドウと同時に抽出され得る。ホール紫マスカダインブドウが、ブロンズマスカダインポマースのみと、これら2つの出発物質の同時抽出のために混合される場合、得られる抽出物は、再度、様々な比で紫マスカダインポマースのみの抽出物に添加され得る。ホール紫マスカダインブドウ中に見いだされる（ホールブロンズマスカダインブドウでは見出されない）アントシアニンは、抽出物においてエラグ酸を予想外に溶解させ出発物質の全ポリフェノール含量を保持するのを助ける抽出物への追加のアントシアニンに貢献すると考えられる。
【０１４１】
他の態様において、有色（アントシアニン含有）果実加工廃棄物、例えばブルーベリー果皮が、ホール紫マスカダインブドウに加えてまたはその代わりとして、ブロンズマスカダインポマースまたはブロンズおよび紫マスカダインポマースのみの混合物と混合され得る。ブルーベリー果皮は、それらがブルーベリージュースまたはブルーベリーピューレの生産の副産物である場合、この実施例における「廃棄物」の一部である。ブルーベリー果皮は典型的に、ブルーベリージュースおよび／またはピューレの生産プロセスからの廃棄物として破棄されるが、それらは代わりにマスカダインポマース抽出物におけるエラグ酸の溶解のためのアントシアニンの追加供給源として使用され得る。この実施例は有色果実加工廃棄物（例えば、ブルーベリー果皮）の使用を開示しているが、紫マスカダインブドウおよび／または紫マスカダインポマース以外の任意のアントシアニン供給源が使用され得る（例えば、アントシアニンが豊富な果汁濃縮物または抽出物）。有色果実（例えば、黒色、赤色、青色または紫色の果実）由来の果汁濃縮物は、抽出物におけるエラグ酸の溶解度を望ましく向上させるためにブロンズおよび紫マスカダインポマース抽出物と共に抽出され得るアントシアニンの特に豊富な供給源である。
【０１４２】
上述のように、組み合わされた溶媒抽出物において、ブロンズマスカダインポマース 対 紫マスカダインポマースの比は、10:1（重量対重量）〜1:10（重量：重量）の範囲である。
【０１４３】
いくつかの例において、組み合わされた溶媒抽出物は、1:5〜1:12（重量：重量）の範囲の比のホール紫マスカダインブドウ 対 ブロンズマスカダインポマースを含む抽出物を含むまたはそれから調製される。
【０１４４】
他の例において、溶媒抽出物は、1:7〜1:16（重量：重量）の範囲の比のホール紫マスカダインブドウ対ブロンズ・紫マスカダインポマース混合物から構成されるまたはそれから調製される。
【０１４５】
出発物質（ブロンズマスカダインポマースのみ、紫マスカダインポマースのみおよびホール紫マスカダインブドウ）におけるアントシアニン 対 エラグ酸の比は、0.5:1〜5:1（重量：重量）の範囲である。他の例において、比は少なくとも1:1、2:1または3:1であり、および／または5:1もしくは4:1以下である。他の例において、組み合わされた出発物質におけるアントシアニン 対 エラグ酸の重量比は、0.5:1、1:1、10:1、または20:1を超える。他の例において、組み合わされた出発物質におけるアントシアニン 対 エラグ酸の重量比は、30:1、40:1、または50:1以下である。
【０１４６】
すべての他の工程、例えば温水抽出、酵素処理、ろ過、発酵、濃縮およびポリフェノール含量は、本明細書の以前の実施例に記載される他の抽出方法と同じであり得る。
【０１４７】
実施例6
（A）ブロンズ／紫ポマースのみの混合物と、（B）紫ポマースのみと混合されたホール紫ブドウおよびブロンズマスカダインポマースのみとに由来する抽出物における、エラグ酸溶解度の比較
マスカダインブドウにおけるエラグ酸の存在は、ブドウ（ビタス種）の中でも特有である。実施例1に記載されるように、ブロンズマスカダインポマースのみの抽出物への紫マスカダインポマースのみの抽出物の添加は、エラグ酸の溶解度を向上させる。（紫マスカダインブドウ／ポマースにおいて見出されるがブロンズでは見出されない）アントシアニンがこの効果の一部または全部を媒介することが見出された。実施例1に示されるように、2:1のブロンズ：紫マスカダインポマースのみの抽出物の比が、1倍濃縮物（2％固形物）の抽出物におけるエラグ酸の溶解度の最大増加を達成するのに十分であったが、この方法は、溶解度の最大増加のみの達成に限定されない。ブロンズポマースのみへの（紫ポマースのみに代わる）ホールまたは部分破砕ホール紫マスカダインブドウの添加も同様にマスカダイン抽出物においてエラグ酸の溶解を促進するかどうかを決定する実験をさらに行った。「ポマースのみ」という用語は、果汁含量の少なくとも95％が取り出されたブドウのブドウポマースを表し、「ホールブドウ」は、その当初の果汁含量の少なくとも90％（いくつかの例では少なくとも95％）を含むブドウを表す。
【０１４８】
2つのマスカダインポマース抽出物（AおよびB）を、パイロット規模の試験で調製した。抽出物Aについては、ブロンズマスカダインポマースのみおよび紫マスカダインポマースのみを温水中で別々に抽出し、次いで2:1（重量：重量）比（ブロンズマスカダインポマースのみの抽出物：紫マスカダインポマースのみの抽出物）で混合した。次いで、組み合わせた抽出物を、以前に記載されたようにろ過し、発酵させ、再ろ過し、そして40％固形物に濃縮した。抽出物Bは、8.7:1（重量：重量）比（ブロンズマスカダインポマースのみ：ホール紫ブドウ）のブロンズマスカダインポマースのみおよびホール紫ブドウを抽出し、紫マスカダインポマースのみを別に抽出し、次いで得られた抽出物を、ブロンズマスカダインポマースのみの抽出物、紫マスカダインポマースのみの抽出物、およびホール紫マスカダインブドウ抽出物の比が13.8:1:1.6となるよう、15:1（重量：重量）比で混合することによって調製した。重量基準で、ホール紫ブドウは、およそ25％のポマースを生じるので、抽出物Bは、10:1比（ブロンズ：紫、重量対重量）のブロンズマスカダインポマースのみおよび紫マスカダインポマースのみの抽出物の混合物と表現することもできる。抽出物Bを、抽出物Aに関して説明されたようにろ過し、発酵させ、再ろ過し、そして40％固形物に濃縮した。
【０１４９】
抽出物AおよびBのサンプルを乾燥（凍結乾燥）させて粉末形態にした。各抽出物の総エラグ酸含量を決定するために、粉末化サンプルをDMSOに溶解させ、HPLC/MS（認証された試験方法C2505）を通じて分析した。エラグ酸の総面積は、[M-H]- = 301 amuで抽出イオンクロマトグラム（EIC)を用いるイオントラップ質量検出器とタンデム接続された254nmでUV-VIS検出を行う逆相HPLCによって評価した。可溶性エラグ酸の含量を決定するために、抽出物AおよびBの溶液を、40％および2％固形物を提供する様々な濃度で調製した。各溶液を85℃で30分加熱し、熱源から取り除き、そして室温にした（1時間で完了）。次いでサンプルを0.45μmPTFEフィルターw/GMFを通じてろ過し、上記のように分析した。結果が表8および9に示されている。
【０１５０】
（表８）2％固形物レベルでの抽出物AおよびBの可溶性エラグ酸含量
0006445518.tif 000011
【０１５１】
（表９）40％固形物レベルでの抽出物AおよびBの可溶性エラグ酸含量
0006445518.tif 000012
【０１５２】
これらの結果は、抽出物AおよびBのエラグ酸溶解度が両方の濃度（2％および40％固形物）で実質的に同一であることを示している。ブロンズ対紫マスカダインポマース抽出物の比が抽出物Aの2:1に対して抽出物Bでは10:1（ホールブドウによるポマースの寄与を含む）であることから、これは予想外であった。したがって、出発物質としてのホール紫マスカダインブドウの添加は、実施例1で予想されたよりも大きくエラグ酸溶解度を有意に向上させる。
【０１５３】
実施例1で示されたように、2:1より大きいブロンズポマースのみの抽出物 対 紫ポマースのみの抽出物の比（例えば、3:1、または実施例で示されるように25:75の紫／ブロンズ比）の1倍濃度（2％固形物）のポマースのみの抽出物の混合物は、無視できる程度のエラグ酸溶解度の増加（4.4％）を示した。エラグ酸溶解度の同様の増加（約10％）は、2:1、1:1および1:2のブロンズ：紫比で観察され、このことは、エラグ酸溶解度の最大増加が少なくとも2:1のブロンズ 対 紫ポマースのみの抽出物の比（または2部のブロンズに対して少なくとも1部の紫）を必要とすることを示唆している。この実験は、アントシアニンが（紫ポマースのみに対して）ホール紫マスカダインブドウの形態で導入される場合、エラグ酸溶解度の最大増加が10:1のブロンズ：紫マスカダインポマースの比（10部のブロンズに対して1部の紫）で達成され得ることを示している。紫マスカダインブドウ中の実質的にすべて（＞95％）のアントシアニン含量がポマースの構成要素である果皮に存在するので、これはさらに驚くべきことである。したがってこの実験は、驚くべきことに、ホールブドウの形態の非常に少量の追加のアントシアニンの添加でさえマスカダインポマースのみの抽出物のエラグ酸溶解度を大きく改善することを見出した。この溶解度の増加は、任意のホールブドウの添加により起こり、ホールブドウの量の増加と共に増加する。本発明は、特定量のホールブドウの添加に限定されないが、特定の例は、出発物質（ポマースおよびホールブドウ）の混合物が0.5対1のアントシアニン対エラグ酸の重量比を含む例であり、他の例は重量比が5:1以下のものである。
【０１５４】
開示されている発明の原理が適用され得る多くの可能性のある態様に照らして、示されている態様は本発明の好ましい例にすぎず、本発明の範囲を限定するものとみなすべきではない。最適な特徴（例えば、最適なエラグ酸溶解度を提供する物質の比）の特定は、本発明をその特定の最適条件に限定することを意図していない。そうではなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義される。したがって我々は、我々の発明として、特許請求の範囲およびその精神に包含されるすべてを特許請求する。