(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
微粒子であって、約１マイクロメートル〜約２０００マイクロメートルの範囲の直径を有するポリマーを含み、前記ポリマーが、少なくとも１種類の重合化モノマーと、キレート剤と、を含み、前記キレート剤が、ラジオアイソトープをキレート化するように構成され、該キレート剤は、
0006373961.tif 000035
｛式中、ｎは、１から１８の間（１又は１８であり得る）であり；
ＸａおよびＸｂは、独立して、Ｏ、Ｓ、又はＮであってよく；かつ
Ｒは、アルキル又はＨであってよい｝を含む、微粒子。
【請求項２】
前記微粒子がミクロスフェアである、請求項１に記載の微粒子。
【請求項３】
前記ポリマーが、アクリレート、アクリルアミド、アクリル系、ビニル、アセタール、アリル、セルロース系、メタクリレート、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリイミド、ポリオレフィン、ポリホスフェート、ポリウレタン、シリコーン、スチレン系、及び多糖類のうち少なくとも１つから選択される、１つ以上の重合化モノマーを含む、請求項１又は２に記載の微粒子。
【請求項４】
前記ポリマーが、ゼラチン、架橋ゼラチン、酸化デンプン、アルギン酸、ジェラン、アラビアゴム、ガラクタン、アラビノガラクタン、キトサン、ヒアルロナン、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、カルボキシメチルセルロース、酸化セルロース、アクリレート、メタクリレート、エチレングリコールメタクリレートホスフェート、ビニルホスホネート、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−メチレン−ビス−アクリルアミド、Ｎ’，Ｎ’−ジアリル−酒石酸ジアミド、及びグリオキサール−ビス−アクリルアミドのうち少なくとも１つから選択される、１つ以上の重合化モノマーを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項５】
前記ポリマーが、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−アクリルアミド及びアクリル酸ナトリウムのうち少なくとも１つから選択される、１つ以上の重合化モノマーを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項６】
前記ポリマーが、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−アクリルアミド及びアクリル酸ナトリウムのコポリマーを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項７】
前記キレート剤が、高分子微粒子が形成された後に、前記微粒子に共有結合的に結合する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項８】
前記キレート剤が、前記微粒子の重合中に前記微粒子と結合する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項９】
前記キレート剤がメルカプトアセチルトリグリシンから形成される、請求項１に記載の微粒子。
【請求項１０】
前記ラジオアイソトープがβ放射体及びγ放射体の両方である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項１１】
前記微粒子がミクロスフェアである、請求項１０に記載の微粒子。
【請求項１２】
前記ラジオアイソトープが、90Ｙ、32Ｐ、99mＴｃ、111Ｉｎ、67Ｇａ、166Ｄｙ、201Ｔｈ、131Ｉ、140Ｌａ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、166Ｈｏ、169Ｅｒ、175Ｙｂ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、及び188Ｒｅのうち少なくとも１つから選択される、請求項１０又は１１に記載の微粒子。
【請求項１３】
前記ラジオアイソトープが、186Ｒｅ又は188Ｒｅである、請求項１２に記載の微粒子。
【請求項１４】
前記ポリマーが、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−アクリルアミド及びアクリル酸ナトリウムのうち少なくとも１つから選択される、１つ以上の重合化モノマーを含み、前記キレート剤が、メルカプトアセチルトリグリシンから形成される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項１５】
前記ポリマーが、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−アクリルアミド及びアクリル酸ナトリウムのうち少なくとも１つから選択される、１つ以上の重合化モノマーを含み、前記キレート剤がメルカプトアセチルトリグリシンから形成され、前記ラジオアイソトープが、186Ｒｅ又は188Ｒｅである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項１６】
前記ラジオアイソトープが、３ヶ月の期間にわたって、元の量の約３重量％を超える程度まで微粒子から浸出されない、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項１７】
前記ラジオアイソトープが、３ヶ月の期間にわたって、元の量の約１重量％を超える程度まで微粒子から浸出されない、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項１８】
コントラスト増強剤を更に含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項１９】
前記コントラスト増強剤が、放射線不透過性物質、常磁性物質、重原子、遷移金属、ランタニド、アクチニド、及び染料からなる群から選択される、請求項１８に記載の微粒子。
【請求項２０】
直径が、約１０マイクロメートル〜約２００マイクロメートルの範囲である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項２１】
直径が、約２５マイクロメートル〜約３５マイクロメートルの範囲である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項２２】
直径が、約３０マイクロメートルである、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項２３】
塞栓性ミクロスフェアである、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の微粒子。
【請求項２４】
式ＩＩの微粒子であって、
Ｐ−Ｘ−Ｍ
式ＩＩ
式中、Ｐが、アクリレート、アクリルアミド、アクリル系、ビニル、アセタール、アリル、セルロース系、メタクリレート、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリイミド、ポリオレフィン、ポリホスフェート、ポリウレタン、シリコーン、スチレン系、及び多糖類のうち少なくとも１つから選択される重合化モノマーを含むポリマーであり、
Ｘが
0006373961.tif 000036
｛式中、ｎは、１から１８の間（１および１８を含む）であり；
ＸａおよびＸｂは、独立して、Ｏ、Ｓ、又はＮであってよく；かつ
Ｒは、アルキル又はＨであってよい｝を含むキレート基を表し、
Ｍがラジオアイソトープである、微粒子。
【請求項２５】
前記キレート剤が、高分子微粒子が形成された後に、前記微粒子に共有結合的に結合する、請求項２４に記載の微粒子。
【請求項２６】
前記キレート剤が、前記微粒子の重合中に前記微粒子と結合する、請求項２４又は２５に記載の微粒子。
【請求項２７】
ラジオアイソトープ標識化微粒子の調製方法であって、
１）請求項１〜２６のいずれか一項に記載の微粒子を作製する工程と、
２）得られた微粒子をラジオアイソトープと結合する工程と、を含む、方法。
【請求項２８】
前記微粒子を作製する工程が、前記微粒子の重合中にキレート剤を重合する工程を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記微粒子を作製する工程が、前記微粒子が形成された後に、前記キレート剤を前記微粒子に共有結合的に結合する工程を含む、請求項２７又は２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記微粒子をラジオアイソトープと結合する工程が、前記ラジオアイソトープの活性化後に行われる、請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記微粒子をラジオアイソトープと結合する工程が、前記ラジオアイソトープの活性化前に行われる、請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
請求項１〜２６のいずれか一項に記載の微粒子とラジオアイソトープとを含む、治療的血管塞栓術において用いるための組成物。
【請求項３３】
原発性又は転移性肝臓癌を治療することに用いるための、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
請求項１〜２６のいずれか一項に記載の微粒子とラジオアイソトープとを含む、コントラスト増強剤。
【請求項３５】
コントラスト増強剤を投与された対象において微粒子の分布をモニタリングすることに用いるための、請求項３４に記載のコントラスト増強剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１３年３月１３日に出願された米国特許仮出願第６１／７７９，７１２号、表題「ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳ  ＡＮＤ  ＡＳＳＯＣＩＡＴＥＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＦＯＲ  ＲＡＤＩＯＩＳＯＴＯＰＥ−ＢＩＮＤＩＮＧ  ＭＩＣＲＯＰＡＲＴＩＣＬＥＳ」の利益を主張するものであり、この開示は参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
（発明の分野）
本開示は概して、ラジオアイソトープを含有する微粒子である組成物、これらの送達方法、これらの治療上の使用方法、及びこれらのキットに関する。特定の態様では、本開示は、特定の癌の治療に対する、ラジオアイソトープを含有する高分子ミクロスフェアを送達するための組成物及び方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【０００３】
【図１】凍結乾燥後かつキレート剤と共役する前の実施例４の微粒子の顕微鏡像である。
【図２】キレート剤と共役するための第１の手順後かつ超音波処理前の実施例４の微粒子の顕微鏡像である。
【図３】キレート剤と共役するための第１の手順後かつ超音波処理後の実施例４の微粒子の顕微鏡像である。
【図４】キレート剤と共役するための第２の手順後かつ超音波処理前の実施例４の微粒子の顕微鏡像である。
【図５】キレート剤と共役するための第２の手順後かつ超音波処理後の実施例４の微粒子の顕微鏡像である。
【図６】凍結乾燥前かつキレート剤と共役する前の実施例５の微粒子の顕微鏡像である。
【図７】凍結乾燥後かつキレート剤と共役する前の実施例５の微粒子の顕微鏡像である。
【図８】キレート剤と共役した後の実施例６の微粒子の顕微鏡像である。
【図９】キレート剤と共役した後の実施例７の微粒子の顕微鏡像である。
【図１０】キレート剤と共役した後かつふるい分け後の実施例７の微粒子の顕微鏡像である。
【図１１】キレート剤と共役した後かつふるい分け後の実施例７の微粒子の追加の顕微鏡像である。
【発明を実施するための形態】
【０００４】
本開示は、ラジオアイソトープを含有する微粒子である組成物、これらの送達方法、これらの治療上の使用方法、及びこれらのキットを提供する。
【０００５】
治療的血管塞栓術は、生体内の特定の病的状態を治療又は予防するために用いられる。通常は、標的の血管内に固体又は液体の塞栓用剤を配置するため、カテーテル又は注射器を撮像制御下で用いて実施される。
【０００６】
塞栓術を利用して、脳、肝臓、及び脊髄などの様々な臓器の血管を部分的又は完全に閉塞でき、血流量の低下、又は血管の完全な閉塞をもたらす。塞栓術の１つの適用例は、出血性状態における血流の遮断又は低下である。別の適用例は、血液供給及び栄養素の組織への送達の遮断、例えば、固形癌への血液供給の低下又は遮断である。血管奇形の場合、塞栓術は、正常組織への血流を可能にし、手術時に役立ち、出血のリスクを制限する場合がある。病態に応じて、塞栓術を一次的並びに永続的治療目的で使用することができる。
【０００７】
塞栓術は、様々な物質、例えば、ガラス、ポリビニルアルコール粒子、ゼラチン粒子、液体塞栓性生成物、及び球状固体ヒドロゲルなどの小さな耐久性物品を用いて行われている。市販の塞栓性物質は、比較的透明であり、投与前及び投与中に通常の光ではっきりと見えないため、生体内で見る又は追跡することが難しい場合があり、又は、放射線不透過性ではなく、磁気共鳴法、超音波法、又は核医学法を用いて検出可能にする特性を欠くため、投与後に検出が難しい。
【０００８】
血管閉塞用栓子を含む生体適合性高分子物質の標識化は、埋め込んだ又は注入した物質の効果を適切に検出する、制御する、及び／又は研究するために有用である。化学染料、磁気共鳴剤、及び造影剤／放射線不透剤は全て、このような目的を果たすために使われている。放射線不透過標識している高分子物質は、埋め込まれた物質の大部分を構成し、最も注目を集めている。ポリマーの放射性視認性を向上するため、重元素をポリマー内に組み込んで、平均電子密度及び比重を増加させることができる。しかしながら、放射線不透過性高分子物質はＸ線によってのみ可視化され、特定の医学的状態での使用に適切ではない場合がある。生体適合性高分子物質を標識化するための更なる方法が有益であろう。
【０００９】
１つの可能性のある方法は、放射性同位元素による標識化を含む、同位体標識によるものである。ラジオアイソトープで標識した生体適合性高分子物質は、腫瘍の治療など治療的に、並びに分析又は診断目的で有用であり得る。
【００１０】
しかしながら、特定の放射性同位元素の高分子微粒子への結合は難しい。放射活性がポリマーの物理的安定性に影響を及ぼす場合があるため、標識に使用される同位元素の活性と選択される高分子物質の種類との間のバランスを見出す必要がある。場合によっては、高分子物質を分解する同位元素の使用、例えば生分解性高分子物質などが有利な場合がある。別の場合では、より耐久性のある高分子物質の使用が好まれる。ラジオアイソトープの微粒子との結合の様式（すなわち、共有性又はイオン性）及びタイミング（すなわち、注入／埋め込みの直前、又は微粒子の重合中）を同様に考慮しなければならず、これもおそらく用途に依存するであろう。
【００１１】
加えて、放射性核種療法のためのミクロスフェアなどの微粒子の開発は、ミクロスフェアの生体内分布の判定が困難であるため複雑である。微粒子は、腫瘍又は治療される生理学的領域に物理的にごく接近しなければならないため、微粒子の生体内分布は放射線療法において重要である。組織中の放射線量分布が判定可能となる、検出可能で無害のシグナルを放射可能な微粒子を有する物質を結合することが有用であろう。そうすると、有効な放射線療法を免れた任意の腫瘍組織（「コールドスポット」）が検出でき、再治療の必要を示し得る。かかるシグナルの例は、適当なエネルギーのγ光子（ガンマ光子）である。画像診断に好適なγ光子を放出するラジオアイソトープとして、テクネチウム９９ｍ、インジウム１１１、ガリウム６７、ヨウ素１３１、ホルミウム１６６、レニウム１８８、レニウム１８６、ランタン１４０、サマリウム１５３、ジスプロシウム１６６、エルビウム１６９、イッテルビウム１７５、ルテチウム１７７、及びタリウム２０１が挙げられる。同様に、18Ｆ（アニオンとして）を使用できるが、18Ｆは直接的にガンマ光子を放出せず、周囲の電子と反応してガンマ光子を発生する陽電子を放出する。
【００１２】
最も臨床的な放射性医薬品は、配位した配位子の物理的特性又は代謝的特性によって、静脈内注射後に特定の臓器に局在するγ放出性放射性核種を組み込んでいる診断薬である。得られる画像は、臓器構造又は機能を反映できる。これらの画像は、放射性分子によって放出される電離放射線の分布を検出するγカメラによって得られる。
【００１３】
多くの場合、全身スキャンを受ける患者に投与された放射性医薬品が放出する放射線を検出することによって、体内の潜在的腫瘍の画像をもたらすγカメラを用いて、哺乳類の癌が同定される。かかる全身性手法では、疑われる腫瘍部位はより高濃度の放射性医薬品を集め、より高い計数率と、それによる腫瘍部位とその周囲との間の検出可能なコントラストが得られる。
【００１４】
γカメラは、患者の体から放出されるガンマ光子に焦点を合わせるコリメータ、ガンマ光子を光量子に変換する（すなわちシンチレーション）シンチレータ、及び、それぞれがシンチレーションを電気パルスに変換する光電子増倍管アレイを有する。かかる検出システムに続いて処理装置及び表示装置があり、これらを用いて、画像の取得中に、患者内の放射性同位元素の分布に関する画像投影を得ることができる。
【００１５】
放射性核種療法において生体適合性高分子物質を使用することにより、放射標識されたミクロスフェアなどの微粒子が、様々な種類の癌を患っている患者に対する有望な治療選択肢を与え得ることを示唆する。この治療選択肢は、極めて予後が不良である、及び／又は他の適当な治療法がない癌、例えば肝臓の原発性悪性腫瘍及び転移性悪性腫瘍に特に望ましい場合がある。総肝動脈を介する微粒子送達は、原発性肝臓癌及び転移性肝臓癌が正常肝臓組織と比較してよく血管新生されており、総肝動脈からほとんどの血液供給を受けるため、これらの腫瘍の両方に特に有効である見込みがある。加えて、多種類の放射標識された粒子及び放射性核種が、肝臓、肺、舌、脾臓及び四肢の軟組織などの臓器中の様々な腫瘍の局所療法において試験されている。例えば、Ｇｏｎｓａｌｖｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．２（４），４５３〜４５６（２００８）及びＬｉｅｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，１５（３），２６１〜２６５（２０００）を参照されたい。
【００１６】
放射性ビームによる外部送達と比べて放射能の内部送達は、浸透性が低い放射能源の利用を可能にし、当然のことながら、標的に到達するために健康組織を横切る必要がない。したがって、放射性微粒子による腫瘍性血管床の塞栓によって、周囲組織の放射線障害を最小限にしながら、高い放射線量を腫瘍に直接送達することを可能にする。その場で発生する放射線は、粒子塞栓に伴う欠点である再疎通を軽減することもできる。この種の治療は、好適な放射性粒子（例えば、高エネルギーβ放射体など）を高選択的に適用し、周囲組織の障害を最小限にしながら、高用量の治療放射線を腫瘍に送達する。
【００１７】
中性子の活性化によりβ粒子を放出する物質と結合したガラス、樹脂、アルブミン、及び高分子微粒子が説明されている。ポリマー系微粒子は、特にその近プラズマ密度、生体適合性、及び所望される場合、その生分解能において、他の物質に対して多くの利点がある。中性子の活性化は、通常は炉心内又はその近傍でβ粒子を結合した物質を高流束の熱中性子に曝すことによって達成できる。
【００１８】
原発性又は転移性腫瘍の患者は、カテーテルを介して、又は針を用いて微粒子を腫瘍に直接注入することによって、放射線塞栓術で治療できる。以前の研究は、カテーテルの先端部を総肝動脈内に留置することによる、カテーテルを介する患者への微粒子投与について説明している。粒子は、最終的に肝臓及び腫瘍の微小血管系内に詰まり、ラジオアイソトープが完全に崩壊するまで留まっている。また、肝臓内の血流量を血管収縮薬の単回注入によって腫瘍の方に一時的に向けることもでき、その後、粒子は動脈循環内で塞栓を形成できる。外照射は、３０〜３５Ｇｙを超える用量で放射線肝炎を引き起こすが、このような内部放射性核種療法を用いると、肝臓は、８０〜１５０Ｇｙまで耐えることができる。かかる治療後は、患者寿命の延長、疼痛緩和、腫瘍応答性、及び総括的な臨床的改善が頻繁に報告されている。
【００１９】
微粒子栓子として使用される市販の放射性粒子は、放射性β放出性粒子と、化学染料、磁気共鳴剤、又は造影剤と、を含有していることがある。しかしながら、一般にはこれらの微粒子は、γカメラによる可視化などの核医学手法を用いて、これらを検出可能にする特性を欠いている。
【００２０】
したがって、一般には埋め込み可能な又は注入可能な高分子物質、特に小型塞栓性物質が放射線撮像技術によって容易に検出できるように、これらの物質を標識化する方法に対するニーズがある。同時に、埋め込み部位又は注入部位において、標識は生体適合性であり、物理的に安定でなければならない。
【００２１】
本開示は、ラジオアイソトープと結合する高分子物質、標識された高分子物質、注入可能な溶液、及びこの物質を含むキットの製造プロセス、並びに、予防的適用及び治療的適用におけるこの物質の使用方法を提供する。本開示は、キレート化によってラジオアイソトープを高分子物質に結合するための２つの方法、１つは、キレート化部分と物質を形成するのに使用されるポリマーとの重合（すなわち、モノマーとして）を伴う方法、１つは、物質がまず重合された後に高分子物質へのキレート化部分の付加を伴う方法について説明する。これらの方法を本明細書で説明する。
【００２２】
Ｉ．定義
別途記載のない限り、本明細書で使用される専門用語は、当該技術分野において理解される標準的な意味を有する。以下の用語を、明確にするために具体的に定義する。
【００２３】
冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、１つ又は２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）のこの冠詞の文法上の目的語を意味するために本明細書で使用される。例として、「ある（an）元素」は、１つの元素又は２つ以上の元素を意味する。
【００２４】
本明細書で使用されるとき、用語「金属」は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、遷移金属、ポスト遷移金属、半金属、希土類金属、ランタニド、及びアクチニドを含む、化学的金属性特徴を有する元素を指す。金属はラジオアイソトープであってよい。
【００２５】
本明細書で使用されるとき、用語「キレート」又は「キレート化」は、配位子（又は、「キレート剤」）と金属カチオン（例えば、同位元素）との間の相互作用を説明する物理化学的プロセスを指し、このとき金属カチオンは、少なくとも２つの結合によってキレート剤に結合し、金属を有する環を画定する。この結合は、共有結合、イオン結合、又はファンデルワールス結合を含む、任意の種類の物理的又は化学的相互作用によって形成できる。
【００２６】
本明細書で使用されるとき、用語「放射性核種」は、放射性同位元素（すなわち、ラジオアイソトープ）又は放射性元素を指す。
【００２７】
本出願を通して、微粒子への言及は、ポリマー又はポリマーの組み合わせによって製造され、様々な寸法を有する本体に形成された粒子を意味し、不規則形状であり得る及び球状であり得る粒子を含む。微粒子として、例えば、ミクロスフェア又はミクロビーズが挙げられる。微粒子は、複合物質のように、微粒子に結合した、つまりキレート化されたラジオアイソトープを含んでよい。
【００２８】
本明細書で使用されるとき、用語「ミクロスフェア」は、実質的に球状であり、直径が約２ｍｍ以下の微粒子を指す。例えば、微粒子は実質的に球状であってよく、直径が約１ｍｍ以下である。
【００２９】
本明細書で使用されるとき「実質的に球状」とは、外部表面積が最も小さい体積と定義される、完全な球形に近い形状を一般に意味する。具体的には、本明細書で使用されるとき「実質的に球状」は、粒子の任意の断面から見るとき、平均大径と平均小径との間の差が２０％未満、例えば１０％未満であることを意味する。本明細書に開示されるミクロスフェアの表面は、最大１０００倍の倍率下で平滑に見え得る。ミクロスフェアは、粒子に加えて、本明細書に記載され、定義される他の物質を含んでよい。
【００３０】
本明細書で使用されるとき、語句「使用時」は、ミクロスフェアが患者又は被験者に埋め込まれている時間を意味する。
【００３１】
本明細書で使用されるとき、語句「結合する」は、２つ以上の物質が任意の種類の物理的接触を有している状態を意味する。例えば、高分子物質が金属又は金属粒子と「結合する」とき、金属粒子は、任意の種類の物理的又は化学的相互作用によって、例えば共有結合、イオン結合、若しくはファンデルワールス結合によって、又は含浸、挿入、若しくは吸着によって、高分子物質の表面上、物質内部、又は、物質が多孔性である場合、物質の孔の内部に付着されていてよい。語句「結合する」は、例えば、キレート化を含む。本明細書で使用されるとき、高分子物質が金属又は金属粒子（例えば、金属カチオン）と結合する場合、金属又は金属化合物粒によって「標識化」される。
【００３２】
本明細書で使用されるとき、用語「埋込物」は、少なくとも一部が哺乳類の組織内に配置されている、つまり埋め込まれている物質を意味する。「埋め込み可能な」物質は、様々な手段によって組織内に配置される、つまり埋め込まれることが可能である。例えば、本明細書の意味において、哺乳類の皮膚組織内に配置される、又は皮膚組織によって包含される微粒子などの物質と同様に、従来の人工器官は埋込物である。
【００３３】
本明細書で使用されるとき、用語「塞栓形成」及び「塞栓」は、血管の閉塞又は遮断を指す。閉塞又は遮断は、生理的状態を受けた血栓又は栓子によって、又は、塞栓性物質の人工的作用によって起こり得る。この点において、本発明によると、栓子は埋込物とは異なる。
【００３４】
本明細書で使用されるとき、用語「ポリマー」及び「重合する」は、２つ以上のモノマー単位の化学的結合によって形成される分子を指す。モノマー単位は、通常共有結合によって結合される。ポリマーがホモポリマーと呼ばれる場合、ポリマー中の２つ以上のモノマー単位は全て同じであってよい。これらは異なっていてもよく、このとき、ポリマーは異なるモノマー単位の組み合わせであろう。これらのポリマーはコポリマーと呼ばれる。
【００３５】
本明細書で使用されるとき、用語「ヒドロゲル」は、少なくとも５０重量％の水を含むポリマー組成物を指し、様々なポリマー組成物と、孔構造と、を含み得る。
【００３６】
用語「コントラスト増強」は、かかる物質をモニタリングし、検出するための方法、例えば、Ｘ栓撮影法又は透視診断法によって、哺乳類の被験体に注入中にモニタリング可能な物質を指す。コントラスト増強剤の非限定例は、放射線不透過性物質、常磁性物質、重原子、遷移金属、ランタニド、アクチニド、及び染料である。放射線不透過性物質を含むコントラスト増強剤は、水溶性又は非水溶性であってよい。水溶性放射線不透過性物質の非限定例として、メトリザミド、イオパミドール、イオタラム酸ナトリウム、ヨウ化ナトリウム（iodomide sodium）、及びメグルミンが挙げられる。非水溶性放射線不透過性物質の非限定例として、金属及び金属酸化物、例えば、鉄、金、チタン、銀、ステンレス鋼、これらの酸化物、酸化アルミニウム、及び酸化ジルコニウムが挙げられる。
【００３７】
本明細書で使用されるとき、用語「注入可能」は、針、カテーテル、又はその他同様の方法によって体内に投与、送達、運搬可能なことを意味する。
【００３８】
「患者」は、本明細書に開示される放射性核種標識化ミクロスフェアが優れた効果を発揮する動物を指す。一実施形態では、患者はヒトである。
【００３９】
ＩＩ．組成物
本明細書に記載される組成物は、少なくとも１つの重合化モノマーと、キレート剤と、ラジオアイソトープを重合化モノマーに結合するため、キレート剤によってキレート化されるラジオアイソトープと、を含み得る微粒子である。当然のことながら、必要に応じて、本明細書に記載される組成物は、１つ以上の追加の成分、例えばコントラスト増強剤を含み得る。更に、本開示を利用して当業者に理解されるように、本明細書に記載される組成物の構成成分の変更及び組み合わせを使用できる。例えば、２つ以上の架橋剤を使用できる。別の方法としては、１つ以上のラジオアイソトープの送達に２つ以上の微粒子組成物を使用してよい。一実施形態では、微粒子は、２つの重合化モノマーのコポリマーを含む。
【００４０】
本開示によると、ラジオアイソトープ含有高分子物質（「複合物質」）は、医学的応用において使用でき、埋め込み可能な及び／又は注入可能なデバイスとして好適である。特定の実施形態では、複合物質は微粒子形態であり、予防的又は治療的塞栓術において栓子として有用である。したがって、本開示の複合物質は、微粒子又はミクロスフェアなどの小粒子として、注入可能な埋め込み又は塞栓において好適である。これらの微粒子は、体内に注入した後、検出が難しい場合がある。特定の実施形態では、微粒子は、好適なβ放出性及び／又はγ放出性ラジオアイソトープと結合することによって検出可能になる。
【００４１】
様々な疾患の治療に対する微粒子を用いる放射性核種による治療技術は、微粒子の標的への送達の精密性と正確性に依存する。この治療選択肢は、従来の治療選択肢、例えば、化学療法、放射線療法、又は外科的切除に伴う重大な欠点である、近接する健康組織への障害を最小限にしつつも、病変部に直接的に治療法を送達する可能性を提供する。しかしながら、ミクロスフェアなどの放射性核種微粒子を使用する治療の有効性は、使用場所（例えば、病院の放射性医薬品関連業務担当部門）での配合によって向上できる。これにより、医師は、患者に合わせた放射線量を処方できる。したがって、使用場所で放射性同位元素と結合できる微粒子が望ましい。本明細書に開示されるように、ポリマー及びキレート剤を含む微粒子は、治療用β粒子を放出するラジオアイソトープと結合するように設計されている。特定の実施形態では、治療用β粒子を放出するラジオアイソトープは、診断用γ線も放出する。
【００４２】
特定の実施形態では、高分子物質は、生体適合性、親水性、実質的に球状、非生分解性、かつ、非毒性のポリマーをベースとするミクロスフェアを含む。ミクロスフェアは、注入可能及び／又は埋め込み可能であり、哺乳類の免疫系、リンパ系、腎臓系、肝臓系、肺系、又は胃腸系、ないしは別の方法による消化又は排泄の影響を受けにくくてよい。いくつかの実施形態では、ミクロスフェアは、哺乳類によって排泄できる。
【００４３】
上述のように、塞栓術は、塞栓形成剤を血管又は動脈に送達するために、透視下又はＸ線下などのガイド及びモニタリングを伴う血管造影法を用いて実施できる。更に、血管拡張薬（例えば、アデノシン）を塞栓術の前、同時、又は後に患者に投与し、この処置を促進してよい。
【００４４】
本開示の一部には、塞栓術の特定の臨床的応用について記載しているが、全ての種類の塞栓術のプロセスが、記載される方法の意図に含まれると考えられる。具体的には、医学的、つまり塞栓形成技術の当業者は、１つ以上の所望の血管の制限、閉塞、充填、又は詰まり、及び血管を通る血流量の低下、又は停止を引き起こすための、所望の血管身体部位に送達メカニズムを誘導し、ある量のミクロスフェアをその部位に送達することによる、種々の塞栓プロセスにおける本明細書に記載の微粒子の使用方法を理解し、認識するであろう。任意の特定の塞栓術に対するプロセスを適用するにあたり、考慮、制御、又は調節すべき因子として、選択された微粒子組成物（例えば、放射線不透過性粒子物質の撮像、追跡、及び検出の主な原因）、身体部位に送達される微粒子の量、使用される特定の装置（例えば、カテーテル）を含む送達法、並びに、所望の身体部位において装置の分配末端部の留置に使用される方法及び経路が挙げられ得る。これらの因子はそれぞれ、当業者に認識されており、無数の塞栓プロセスに対して記載の方法を適用するため容易に対処できる。
【００４５】
本開示を利用して、様々なモノマー、キレート剤及びラジオアイソトープを本明細書に開示される微粒子に組み込みできることが、当業者によって理解されるであろう。開示されるモノマー、キレート剤、及びラジオアイソトープは例であり、制限するものではない。
【００４６】
（ｉ）モノマー
本明細書に開示される微粒子は、任意の親水性ポリマー又はコポリマーから作製できる。高分子物質として、天然及び合成ポリマーが挙げられる。例えば、天然ポリマー又はその誘導体は、ゼラチン、架橋ゼラチン、酸化デンプン、アルギン酸、ジェラン、アラビアゴム、ガラクタン、アラビノガラクタン、キトサン、ヒアルロナン、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸、カルボキシメチルセルロース、酸化セルロース、又は関連ポリマーを含んでよい。特定の実施形態では、物質は、アクリレート、アクリルアミド、アクリル系、ビニル、アセタール、アリル、セルロース系、メタクリレート、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリイミド、ポリオレフィン、ポリホスフェート、ポリウレタン、シリコーン、スチレン系、及び／又は多糖類から選択される１つ以上のポリマーを含む。
【００４７】
特定の実施形態では、１つ以上の重合化モノマーは、アクリレート、アクリルアミド、メタクリレート、メタクリルアミド、アクリル酸ナトリウム、エチレングリコールメタクリレートホスフェート、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−アクリルアミド、ビニルホスホネート、Ｎ，Ｎ−メチレン−ビス−アクリルアミド、Ｎ’，Ｎ’−ジアリル−酒石酸ジアミド、及びグリオキサール−ビス−アクリルアミドのうち、少なくとも１つから選択される。特定の実施形態では、微粒子の高分子物質は、エラストマー、ヒドロゲル、水膨潤性ポリマー、若しくはこれらの組み合わせであるか、又は、これらから作製される。
【００４８】
ポリマーは架橋されていてよい。架橋剤は生分解性又は非生分解性であってよい。架橋剤は、患者によって吸収可能であってよく、又は非吸収性であってよい。
【００４９】
一実施形態では、高分子物質は、ポリメタクリレート、例えば、ポリ（メチルメタクリレート）又はポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）である。
【００５０】
一実施形態では、高分子物質はアクリル酸ナトリウムを含んでよい。一実施形態では、高分子物質は、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−アクリルアミド及びアクリル酸ナトリウムのコポリマーを含んでよい。モノマーは、親水性ポリマー又はコポリマーであってよく、高分子物質は２種類以上のモノマーを含んでよい。
【００５１】
特定の実施形態では、微粒子は、親水性コポリマーを含む高分子物質を含み、共重合形態で、約１重量％〜約９９重量％のアクリル酸ナトリウムと、約９９重量％〜約１重量％のＮ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］−アクリルアミドと、を含有する。
【００５２】
一実施形態では、高分子物質は、約１μｍ〜約２０００μｍの範囲の寸法の微粒子形態である。いくつかの実施形態では、微粒子は、約１０μｍ〜約２００μｍの範囲の直径を有する実質的に球状のミクロスフェアである。特定の実施形態では、直径は約２５μｍ〜約３５μｍの範囲内である。別の実施形態では、直径は約２５μｍ以下、又は約３５μｍ以上である。一実施形態では、直径は約３０μｍである。
【００５３】
本開示の微粒子は、治療的血管塞栓目的に好適である。
【００５４】
（ｉｉ）キレート剤
本明細書に開示される微粒子は、キレート剤を含んでよい。一実施形態では、キレート剤は、ラジオアイソトープをキレート化し、重合化モノマーと結合させる。一実施形態では、キレート剤は、水に可溶性のままであるために十分短いが、適当なラジオアイソトープをキレート化するのに十分長くてよい。例えば、キレート剤は、４〜１８個の非水素原子、例えば、炭素原子、酸素原子、イオウ原子、及び窒素原子を有する骨格鎖を含有してよい。キレート剤は、部分的又は完全に環式又は複素環式であってよく、例えば、環状エーテル、ピリジン、又はイミダゾール環を含む。キレート剤の種類は可変であり、周囲の生理的ｐＨにおいて共役塩基型で存在し得る。
【００５５】
特定の実施形態では、微粒子は、ラジオアイソトープを結合するためのキレート剤を含む。キレート剤は、微粒子の重合後に微粒子に結合されてよく、又は、重合中にモノマーとして微粒子中に組み込まれてよい。特定の実施形態では、キレート剤を、別々の工程で（例えば、グラフト反応により）ポリマー内に導入してよい。
【００５６】
微粒子に結合され得る代表的なキレート剤として、メルカプトアセチルトリグリシン（ＭＡＧ−３）、並びにＥＤＴＡ及びそれらの誘導体、例えば、ＥＧＴＡ、ＢＡＰＴＡ、ＤＯＴＡ、ＤＴＰＡモノアミド、ＤＯＴＡ−Ｒ、ＤＯ３Ａ−Ｒ、ＮＯＴＡ−Ｂｎ−Ｒ、ＮＯＤＡＳＡ−Ｒ、及びＮＯＤＡＧＡ−Ｒが挙げられる。これらの代表的なキレート剤をより詳細に以下で説明する。
【００５７】
以下に示すように、メルカプトアセチルトリグリシンは、Ｒｅをキレート化でき、更にペプチドと結合できる。
【００５８】
【化１】
0006373961.tif 000002
【００５９】
同様に、上で示すようなエステル結合によるペプチド基のメタクリレートなどの重合性基との置換は、ミクロスフェアと結合されるメルカプトアセチルトリグリシンキレート基の使用を可能にする。
【００６０】
【化２】
0006373961.tif 000003
【００６１】
微粒子の重合中のかかるモノマーの使用は、メルカプトアセチルトリグリシンが微粒子のポリマー内に組み込まれることを可能にする。
【００６２】
別の方法としては、重合性基を、ＣＨ2基を介在することなく、エステル化によってメルカプトアセチルトリグリシン基に直接結合できる。
【００６３】
【化３】
0006373961.tif 000004
【００６４】
同様に、重合性基を、ＣＨ2基を介在して、又は介在せずに、アミド化によってメルカプトアセチルトリグリシン基に直接結合できる。
【００６５】
【化４】
0006373961.tif 000005
【００６６】
一実施形態では、重合性基は、メタクリルアミドなどのアクリレート誘導体である。例えば、アミド結合型及びエステル結合型メルカプトアセチルトリグリシンキレート基の両方をメタクリルアミドと共に用いて、ＣＨ2基を介在して、又は介在せずに、ＭＡＧ−３キレート基を重合性基に結合できる。
【００６７】
【化５】
0006373961.tif 000006
【００６８】
例えば、次のＭＡＧ−３誘導体をキレート剤として使用できる。
【００６９】
【化６】
0006373961.tif 000007
【００７０】
一実施形態では、キレート剤は式Ｉに示されるＭＡＧ−３誘導体である。
【００７１】
【化７】
0006373961.tif 000008
これは重合性基を含み、式中、ｎは１〜１８（１及び１８を含む）であってよく、Ｘａ及びＸｂは、独立して、Ｏ、Ｓ又はＮであってよく、Ｒはアルキル又はＨであってよい。特定の実施形態では、ｎは３、Ｘａ及びＸｂはＯ、Ｒはメチルである。別の実施形態では、ｎは１である。更なる実施形態では、ｎは１〜１０（１及び１０を含む）であり、又は、１〜４（１及び４を含む）である。キレート剤は、例えばモノマーとして、粒子の重合中に微粒子に組み込まれてよい。
【００７２】
いくつかの実施形態では、キレート剤はＭＡＧ−３誘導体であり、微粒子が形成された後に、微粒子中に存在する官能基を介して微粒子に結合される。例えば、微粒子はカルボキシレート官能基を含有してよく、ＭＡＧ−３誘導体のアミン基と反応できる。
【００７３】
【化８】
0006373961.tif 000009
【００７４】
ＥＤＴＡ及びその誘導体は、レニウム（Ｒｅ）を含む多くの金属と錯体形成できる。ＥＤＴＡ、エチレンジアエミン四酢酸の構造は以下のとおりである。
【００７５】
【化９】
0006373961.tif 000010
【００７６】
例えば、エステル又はアミド結合によってメタクリレートなどの重合性基をＥＤＴＡに付加すると、ミクロスフェアと結合されるＥＤＴＡキレート基の使用を可能にする。
【００７７】
【化１０】
0006373961.tif 000011
【００７８】
微粒子の重合中のかかるモノマーの使用は、ＥＤＴＡが微粒子のポリマー内に組み込まれることを可能にする。
【００７９】
別の方法としては、重合性基を、ＣＨ2基を介在することなく、エステル化によってＥＤＴＡ基に直接結合できる。
【００８０】
【化１１】
0006373961.tif 000012
【００８１】
ＥＤＴＡは、ＥＧＴＡ、ＢＡＰＴＡ及びＤＯＴＡなどの多くの既知の誘導体を有している。
【００８２】
【化１２】
0006373961.tif 000013
【００８３】
以下の代表的なＥＤＴＡ誘導体は、Ｒｅをキレート化できる。
【００８４】
【化１３】
0006373961.tif 000014
【００８５】
例えば、エステル又はアミド結合によってメタクリレートなどの重合性基を、誘導体の１つ以上のカルボン酸基に、又はＲ基としてＥＤＴＡ誘導体に付加すると、微粒子と結合されるＥＤＴＡ誘導体キレート基の使用を可能にする。
【００８６】
【化１４】
0006373961.tif 000015
【００８７】
微粒子の重合中のかかるモノマーの使用は、ＥＤＴＡ誘導体が微粒子のポリマー内に組み込まれることを可能にする。
【００８８】
別の方法としては、重合性基を、ＣＨ2基を介在することなく、エステル化又はアミド化によってＥＤＴＡ誘導体基に直接結合できる。
【００８９】
【化１５】
0006373961.tif 000016
【００９０】
一実施形態では、キレート剤は化合物ＡのＤＯＴＡ誘導体である。
【００９１】
【化１６】
0006373961.tif 000017
これは重合性基を含み、式中、ｎは０〜１６（０及び１６を含む）であってよく、Ｘａ及びＸｂは、独立して、Ｏ、Ｓ又はＮであり、ＺはＣ、Ｏ、Ｓ又はＮであってよく、Ｒはアルキル又はＨであってよい。特定の実施形態では、ｎは１、Ｘａ及びＸｂはＯ、Ｒはメチルである。別の実施形態では、ｎは０である。更なる実施形態では、ｎは０〜１０（０及び１０を含む）であり、又は、０〜４（０及び４を含む）である。キレート剤は、例えばモノマーとして、粒子の重合中に微粒子に組み込まれてよい。
【００９２】
いくつかの実施形態では、キレート剤はＤＯＴＡ誘導体であり、微粒子が形成された後に、微粒子中に存在する官能基を介して微粒子に結合される。例えば、微粒子はアミン官能基を含有してよく、ＤＯＴＡの１つ以上の酸性基と反応できる。
【００９３】
【化１７】
0006373961.tif 000018
【００９４】
クラウンエーテル誘導体は、微粒子の重合中又は重合後に、微粒子中にキレート剤として組み込まれてもよい。本開示を利用して当業者に理解されるように、様々な大きさのクラウンエーテル環を使用できる。特定の実施形態では、キレート剤は化合物Ｂの、重合性ベンゾ−１８−クラウン−６である。
【００９５】
【化１８】
0006373961.tif 000019
【００９６】
重合中に微粒子中に組み込まれ得る非限定的な代表的キレート剤として、イミノ二酢酸；スチレン；ブチルアクリレート；グリシジルメタクリレート；ＥＤＴＡ；アミノカルボン酸、例えばアルキレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸−（メタ）アクリルアミド（ＭＡＭ−ＥＤＴＡ）；アクリル酸；ブチルメタクリレート；ブロモメチルアクリレート；α−クロロメタクリロイルクロリド；イソニコチニルヒドラゾン；２−メタクリルオキシ−５−メチルベンゾフェノン；ピリドキサールイソニコチニルヒドラゾン；ペプチド；オリゴマー；アミノ酸；ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー；ジメルカプトコハク酸；ペンテト酸；メルカプトアセチルトリグリシン（ＭＡＧ−３）；ヒドロキシエチリジンジホスホネート；４−ヘキサデシル−２，２，９，９−テトラメチル−４，７−ジアザ−１，１０−デカンジチオール（ＨＤＤ）；エチルシステイナートダイマー／リピオドール混合物；又は、ビス（ジエチルジチオカルバマト）ニトリド（ＤＥＤＣ）キレート剤から形成されるものが挙げられる。これらの代表的なキレート剤をより詳細に以下で説明する。
【００９７】
重合中に微粒子中に組み込まれ得るキレート剤として、イミノ二酢酸、スチレン、又はブチルアクリレート、及びグリシジルメタクリレートから形成されるものが挙げられる。イミノ二酢酸（ＩＤＡ）は、モノマーとして、又はグリシジルメタクリレートの重合後にグリシジルメタクリレート（ＧＭＡ）と反応し、ＧＭＡ−ＩＤＡポリマー（以下に示す）を形成できる。
【００９８】
【化１９】
0006373961.tif 000020
【００９９】
ＧＭＡのコポリマーは、スチレン又はブチルアクリレートを用いて合成することもできる。ＧＭＡ−ＩＤＡ系コポリマーは、Ｃｄ、Ｃｕ、Ｎｉ、Ｚｎ、及びＣｏなどの様々な金属と錯体形成できる。１つの錯化スキームを以下に示す。
【０１００】
【化２０】
0006373961.tif 000021
【０１０１】
微粒子中に組み込まれ得るキレート剤としては更に、アルキレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸−（メタ）アクリルアミド（ＭＡＭ）及びＥＤＴＡなどのアミノカルボン酸から形成されるものも挙げられる。ＥＤＴＡは、Ｙ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｈｏ、及びＤｙなどの希土類金属をキレート化するために、水溶性ポリアリルアミンに添加してよい。別の使用法として、キレート化モノマーであるアミノカルボン酸及びＨＥＭＡ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）の添加が挙げられ、これらは続いて金属イオンと錯体形成できる。この種のキレート化モノマーの２つの例は以下のものである。
【０１０２】
【化２１】
0006373961.tif 000022
【０１０３】
上記のアミノカルボン酸中にメタクリレート重合性基が存在することにより、微粒子と結合されるキレート基としてのこれらの化合物の使用を可能にする。微粒子の重合中のかかるモノマーの使用は、アミノカルボン酸誘導体が微粒子のポリマー内に組み込まれることを可能にする。
【０１０４】
ＭＡＭ−ＥＤＴＡモノマー、例えば以下に示されるものは、水溶性であり、カルシウムイオンに対する親和性を有する。これらはＥＤＴＡ無水物及びヒドロキシルアクリルアミドから調製され、引き続き生じるポリマーは加水分解に耐性を示し得る。
【０１０５】
【化２２】
0006373961.tif 000023
【０１０６】
上記のＭＡＭ−ＥＤＴＡモノマー中にメタクリルアミド重合性基が存在することにより、微粒子と結合されるキレート基としてのこれらの化合物の使用を可能にする。微粒子の重合中のかかるモノマーの使用は、ＭＡＭ−ＥＤＴＡ誘導体が微粒子のポリマー内に組み込まれることを可能にする。
【０１０７】
アクリル酸、ブチルアクリレート、ブチルメタクリレート、スチレン、イミノ二酢酸、ブロモメチルアクリレート、及び／又はα−クロロメタクリロイルクロリドのコポリマーも、キレート剤として使用できる。
【０１０８】
微粒子中に組み込まれ得るキレート剤としては更に、イソニコチニルヒドラゾンから形成されるものも挙げられる。メタクリルオキシベンゾフェノン系ポリマーは、例えば、ＤＶＢを架橋剤として用いて調製され、その後イソニコチニルヒドラゾンで処理され得る。２−メタクリルオキシ−５−メチルベンゾフェノン及びピリドキサールイソニコチニルヒドラゾン由来の、これらの種類のキレート剤に対する代表的なモノマーを以下に示す。
【０１０９】
【化２３】
0006373961.tif 000024
【０１１０】
同様に、例えばＲｅ、Ｙ、及び／又はＩと錯体形成される、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー、ジメルカプトコハク酸、ペンテト酸及びＭＡＧ３、ヒドロキシエチリジンジホスホネート、４−ヘキサデシル−２，２，９，９−テトラメチル−４，７−ジアザ−１，１０−デカンジチオール（ＨＤＤ）、エチルシステイナートダイマー／リピオドール混合物、及びビス（ジエチルジチオカルバマト）ニトリド（ＤＥＤＣ）キレート剤を使用できる。
【０１１１】
これらの剤は、クラウンエーテル、ピリジン、イミダゾール、チオフェン、チアゾール、フラン、プリン、ピリミジン、ヒドロキシキノリン、金属錯化染料などといった複素環を含む化学的部分を含有し得る。
【０１１２】
一実施形態では、キレート剤は、イミノ二酢酸及びグリシジルメタクリレートから形成される。
【０１１３】
一実施形態では、キレート剤は、微粒子の約１重量％〜約２０重量％で存在する。
【０１１４】
特定の実施形態では、式ＩＩの構造を有する微粒子が提供される。
Ｐ−Ｘ−Ｍ
式ＩＩ
式中、Ｐは、アクリレート、アクリルアミド、アクリル系、ビニル、アセタール、アリル、セルロース系、メタクリレート、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリイミド、ポリオレフィン、ポリホスフェート、ポリウレタン、シリコーン、スチレン系、及び多糖類のうち少なくとも１つから選択される重合化モノマーを含むポリマーであり、
ＸはＹ−Ｚを表し、
Ｚは、メルカプトアセチルトリグリシン（ＭＡＧ−３）、メルカプトアセチルトリグリシン誘導体；ＥＤＴＡ；ＥＧＴＡ、ＢＡＰＴＡ、ＤＯＴＡ、ＤＴＰＡモノアミド、ＤＯ３Ａ、ＮＯＴＡ−Ｂｎ、ＮＯＤＡＳＡ、及びＮＯＤＡＧＡなどのＥＤＴＡ誘導体；クラウンエーテル、イミノ二酢酸；スチレン；ブチルアクリレート；グリシジルメタクリレート；アルキレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸−（メタ）アクリルアミド（ＭＡＭ−ＥＤＴＡ）などのアミノカルボン酸；アクリル酸；ブチルメタクリレート；ブロモメチルアクリレート；α−クロロメタクリロイルクロリド；イソニコチニルヒドラゾン；２−メタクリルオキシ−５−メチルベンゾフェノン；ピリドキサールイソニコチニルヒドラゾン；ペプチド；オリゴマー；アミノ酸；ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー；ジメルカプトコハク酸；ペンテト酸；ヒドロキシエチリデンジホスホネート；４−ヘキサデシル−２，２，９，９−テトラメチル−４，７−ジアザ−１，１０−デカンジチオール（ＨＤＤ）；エチルシステイナートダイマー／リピオドール混合物；及びビス（ジエチルジチオカルバマト）ニトリド（ＤＥＤＣ）キレート剤のうち、少なくとも１つから選択されるキレート基であり、
Ｙは、独立して、Ｃ、Ｎ、Ｏ又はＳのうち少なくとも１つから選択される１〜１８個の非水素原子を有する鎖を含み、
Ｍはラジオアイソトープである。
【０１１５】
一実施形態では、キレート基は、例えばモノマーとして、粒子の重合中に微粒子に組み込まれる。キレート基は、メタクリル又はアクリル部分などの二重結合を含有してよい。
【０１１６】
特定の実施形態では、キレート基は、高分子微粒子が形成された後に、微粒子中に存在する官能基を介して微粒子に結合される。例えば、微粒子はアミン又は酸官能基を含有してよく、ＭＡＧ−３又はＭＡＧ−３誘導体などのキレート基に共有結合的に結合する、ハンドルとして作用し得る。
【０１１７】
（ｉｉｉ）ラジオアイソトープ
いくつかの実施形態では、微粒子は、β放射体であるラジオアイソトープと結合する。特定の実施形態では、微粒子は、β及びγの両方の放射体であるラジオアイソトープと結合する。β粒子の崩壊中、不安定原子核中の中性子は、陽子、電子、及び中性微子に変換される。加えて、エネルギーが生成して、電子及び中性微子に与えられる運動エネルギーの形態で放出される。組織を通過すると、放出されたβ粒子は他の原子と相互作用し、エネルギーを失って、励起されイオン化された原子に至る。これらの活性種は治療効果に関与している。γ粒子の崩壊中、エネルギーが生成し、光子の形態で放出される。これらの活性種は診断効果に関与しており、例えば、γカメラによって生体内の微粒子の検出を可能にする。
【０１１８】
本明細書に開示される微粒子は、所望により、遷移金属、ランタニド、若しくは族ＩＩＩＡ−ＩＶＡの酸化物、水酸化物、アルコキシド、カルボキシレート、又はこれらの組み合わせを含有し、約１μｍ〜約２０００μｍの範囲の寸法を有する。あるいは、寸法は、約１μｍ〜約１００μｍ、又は約１０μｍ〜約４０μｍの範囲であってよい。
【０１１９】
特定の実施形態では、ラジオアイソトープは、186Ｒｅ及び188Ｒｅを含む、レニウムである。
【０１２０】
ポリマー内へのラジオアイソトープの結合は、高分子物質上若しくは高分子物質中へのラジオアイソトープの直接付着、又は、金属塩溶液（例えば、金属ハライド、スルホネート、カルボキシレート、ニトレート、又はアルコキシドの溶液）の沈殿、還元、若しくは酸化プロセス、又は、これらの任意の組み合わせのいずれかの結果であってよい。別の方法としては、ポリマー内への金属、金属カチオン、及び／又は金属酸化物の粒子オン結合は、ラジオアイソトープ含有溶液、懸濁液、又はコロイドの存在下で重合を行うことによって達成され得る。
【０１２１】
一実施形態では、本出願において好適な放射性核種は、微粒子のキレート剤に対する親和性を有する。この親和性は、錯イオン又はコロイドなどの好適な化学種中にラジオアイソトープを組み込むことによって与えられ得る。かかるラジオアイソトープの例は、スズと錯体形成した186Ｒｅであり、例えば、過レニウム酸186Ｒｅ水溶液をＳｎＣｌ2と処理することによって調製できる。
【０１２２】
レニウムは、186Ｒｅ及び188Ｒｅ同位元素として放射線療法で使用される元素である。186Ｒｅは、約９０時間の半減期を有し、β粒子及びγ粒子を放出しながら崩壊する。188Ｒｅは、約１７時間の半減期を有し、同様にβ粒子及びγ粒子を放出しながら崩壊するが、β粒子の最大エネルギーはより高い（１．０８ＭｅＶと比べて約２．１２ＭｅＶ）。したがって、レニウムラジオアイソトープは、診断放射線及び治療放射線の両方をもたらすのに有用であり得る。
【０１２３】
イオン型の特定の他のラジオアイソトープは、微粒子に対して十分な親和性を有し得、その例は、90Ｙの３+イオンである。β放出性ラジオアイソトープは、例えば、撮像目的にγカメラによって検出可能なγ光子も放出できる。好適なβ放出性放射性核種は、ランタニド、イットリウム、ストロンチウム、金、リン、及びイリジウムからなる群から選択される。放射性パラジウム（103Ｐｄ）及びイッテルビウム（169Ｙｂ）も意図されるが、これらはβ粒子よりも軟Ｘ線を放出する。特定の実施形態では、放射性核種は、90Ｙ、32Ｐ、99mＴｃ、111Ｉｎ、67Ｇａ、166Ｄｙ、201Ｔｈ、131Ｉ、140Ｌａ、153Ｓｍ、165Ｄｙ、166Ｈｏ、169Ｅｒ、175Ｙｂ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、又はこれらの組み合わせである。
【０１２４】
天然レニウムは、２つの同位元素である185Ｒｅ及び187Ｒｅからなり、中性子活性化によって、それぞれ、β放出性の186Ｒｅ及び188Ｒｅラジオアイソトープを形成する。レニウムラジオアイソトープの核及び線量測定特性は、90Ｙに相当するが、画像形成可能なγ光子を更に有する。レニウムラジオアイソトープと同様に、166Ｈｏはβ粒子及びγ光子を放出し、131Ｉも同様である。
【０１２５】
放射性ポリマー系微粒子は、ポリマーをラジオアイソトープに接触させることによって、又は、非放射性前駆体同位元素を含浸させた高分子物質の中性子活性化によって、形成できる。ポリマーの微粒子形態への作製中、又は作製後に、放射活性を組み込むことができる。一実施形態では、中性子活性化によるポリマー分解を限定するため、ラジオアイソトープは、ポリマーと結合する前に活性化された中性子である。
【０１２６】
一実施形態では、放射活性は188Ｗ／188Ｒｅ発生装置によってもたらされ、無担体188Ｒｅをその［188ＲｅＯ4］-アニオンとして提供できる。
【０１２７】
開示される微粒子は、病院の放射性医薬品関連業務担当部門など、使用場所において放射能で容易に標識化できる。この特徴により、医師は、患者に合わせた放射線量を処方できる。微粒子は、治療（例えば、β放射体）及び／又は撮像（例えば、γ放射体）を目的として同位元素で放射標識できる。本明細書に記載の微粒子は、これらの種を引き寄せ、適切な投与を促進し、望まれない放射性廃棄物を最小限にする。
【０１２８】
ラジオアイソトープの結合を測定でき、一実施形態では、ラジオアイソトープは、元の量の約３重量％を超える程度まで微粒子から浸出されない。別の実施形態では、ラジオアイソトープは、元の量の約１重量％を超える程度まで微粒子から浸出されない。
【０１２９】
一実施形態では、ラジオアイソトープは、微粒子の約１重量％〜約３０重量％の範囲内で存在する。
【０１３０】
特定の実施形態では、微粒子は、追加の造影剤、並びにラジオアイソトープと結合できる。例えば、微粒子は、ラジオアイソトープとの結合に加えて、ＭＲＩ検出性造影剤（例えば、酸化鉄）を含んでよい。いくつかの実施形態では、微粒子は更に、ヨウ素標識したＭＲＩ検出性造影剤を含む。
【０１３１】
ＩＩＩ．キット
本開示の方法は、塞栓形成キットを用いて実行することもできる。かかるキットは、滅菌形態の微粒子を含有してよく、生理食塩水などの許容可能な再構成液の滅菌容器を備えてよい。好適な再構成液は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ及びＴｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｉａ  Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙに開示されている。かかるキットは、必要に応じて、例えば１つ以上のキャリア、及び／又は１つ以上の追加の混合用バイアルなど、他の従来のキット用構成要素を含んでもよい。塞栓性組成物及びキャリアの量、これらの構成成分の混合方法、及び投与手順を示す、挿入文書又はラベルとしての説明書もキットに含んでよい。容器及びキットに含まれる任意の材料の滅菌、並びに塞栓性組成物の凍結乾燥（フリーズドライとも呼ばれる）を、当業者には既知である従来の滅菌及び凍結乾燥法を用いて実施できる。いくつかの実施形態では、凍結乾燥物質を真空下又は不活性雰囲気で保存してよい。
【０１３２】
塞栓形成キットにおいて有用な凍結乾燥助剤として、マンニトール、ラクトース、ソルビトール、デキストラン、フィコール、及びポリビニルピロリジン（ＰＶＰ）が挙げられるが、これらに限定されない。塞栓形成キットにおいて有用な安定化助剤として、アスコルビン酸、システイン、モノチオグリセロール、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、ゲンチシン酸、及びイノシトールが挙げられるが、これらに限定されない。塞栓形成キットにおいて有用な制菌剤として、ベンジルアルコール、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、及びメチル、プロピル又はブチルパラベンが挙げられるが、これらに限定されない。塞栓形成キット中の構成成分は、２つ以上の機能を果たしてもよい。例えば、還元剤は安定化助剤としての機能も果たすことができ、緩衝剤は配位子としての機能も果たすことができ、凍結乾燥助剤は補助又は共配位子としての機能も果たすことができる。
【０１３３】
塞栓形成キットの各成分の絶対量及び相対量は、ある場合は成分に対して特異的に、別の場合は他の成分の量、又は任意成分の存在及び量に応じて、種々考慮して決定される。一般に、処方の所望の効果を与える、各構成成分の最小量が使用される。処方の所望の効果とは、塞栓形成キットのエンドユーザが本発明の塞栓形成法を、被験体に悪影響を及ぼさない、高い確信度で実施できることである。
【０１３４】
塞栓形成キットは、実施するエンドユーザのために、説明書を含んでもよい。これらの説明書は、１つ以上のバイアル、若しくはバイアルが輸送用にパッケージ化された容器に添付されてよく、又は、添付文書と呼ばれる別個の挿入文書であってよい。
【０１３５】
本開示は、哺乳類の予防的又は治療的処置を実行するためのキットを提供する。このキットは、滅菌容器と、ラジオアイソトープと結合可能な滅菌生体適合性高分子微粒子と、を含んでよい。別の実施形態では、哺乳類の予防的又は治療的処置を実行するためのキットは、針又はカテーテルと、かかる針又はカテーテルを通して液体系組成物を注入する手段と、ラジオアイソトープと結合可能な滅菌高分子微粒子と、を含む。一実施形態では、キットの微粒子は、予めラジオアイソトープと結合していてよい。この点において、本明細書に開示される微粒子の様々な実施形態も、本発明のキットに包含される。
【０１３６】
ＩＶ．方法
本開示はまた、１）微粒子を作製する工程と、２）得られた微粒子をラジオアイソトープと結合する工程と、を含む、ラジオアイソトープ標識化微粒子を調製する方法にも関する。
【０１３７】
本開示の別の態様は、モノマーと、キレート剤と、ラジオアイソトープと、を含む、治療的有効量の放射性微粒子を哺乳類に投与する工程を含む、ある医学的状態を患っている哺乳類を治療する方法に関する。
【０１３８】
本開示の更なる態様は、放射性遷移金属、ランタニド、又は族１３〜１４金属粒子を高分子物質でキレート化するプロセスに関する。一実施形態では、このプロセスは、重合化モノマーでキレート化されるラジオアイソトープを伴う。一実施形態では、キレート化プロセスは、水に可溶性のままであるために十分短いが、適当なラジオアイソトープをキレート化するのに十分長い、キレート化剤を含んでよい。例えば、キレート剤は、４〜１８個の非水素原子、例えば、炭素原子、酸素原子、及び窒素原子を有する骨格鎖を含有してよい。キレート剤は、部分的又は完全に環式又は複素環式であってよく、例えば、クラウンエーテル、ピリジン、又はイミダゾール環を含む。キレート剤の種類は可変であり、周囲の生理的ｐＨにおいて共役塩基型であってよい。
【０１３９】
特定の実施形態では、キレート化プロセスは、微粒子モノマーの重合後に微粒子に結合するキレート剤を含む。別の方法としては、キレート化プロセスは、重合中に微粒子中に組み込まれる、すなわち、キレート剤がモノマーであるキレート剤を含む。特定の実施形態では、キレート剤を、別々の工程で（例えば、グラフト反応又はカップリング反応により）ポリマー内に導入してよい。
【０１４０】
したがって、放射性遷移金属、ランタニド、又は族１３〜１４金属粒子は、同位元素を高分子物質でキレート化するのに十分な時間と温度で、高分子物質をラジオアイソトープ溶液と接触させることによって、高分子物質によってキレート化され得る。一実施形態では、このプロセスは、治療（例えば、β放射体）及び撮像（例えば、γ放射体）を目的とする同位元素を含む。一実施形態では、このプロセスは、188Ｗ／188Ｒｅ発生装置によってもたらされるラジオアイソトープを含んで、無担体188Ｒｅをその［188ＲｅＯ4］-アニオンとして提供し、これが高分子物質でキレート化され得る。特定の実施形態では、高分子物質は、ラジオアイソトープに加え、ヨウ素を含むＭＲＩ検出性造影剤などの造影剤とも結合する。
【０１４１】
高分子物質でラジオアイソトープをキレート化する別のプロセスは、ラジオアイソトープ又はその対応する塩溶液又はコロイドを、高分子物質の初期重合溶液又は懸濁液に添加する工程を含む。かかる重合／結合プロセスでは、好ましくは、高分子物質自体の重合プロセスの変化はない。したがって、高分子物質を生成する任意の重合プロセスは、ラジオアイソトープ溶液、コロイド、又は懸濁液を初期重合溶液若しくは懸濁液に添加することによる、本開示のプロセスに組み込まれてよい。
【０１４２】
ラジオアイソトープをキレート化するプロセスを測定できる。一実施形態では、ラジオアイソトープのキレート化プロセスによってラジオアイソトープ標識化微粒子が得られ、このときラジオアイソトープは、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、又は１年といった特定の時間にわたって、元の量の約１０重量％を超える程度まで微粒子から浸出されない。別の実施形態では、ラジオアイソトープのキレート化プロセスによってラジオアイソトープ標識化微粒子が得られ、このときラジオアイソトープは、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、又は１年にわたって、元の量の約３重量％を超える程度まで微粒子から浸出されない。更なる実施形態では、ラジオアイソトープのキレート化プロセスによってラジオアイソトープ標識化微粒子が得られ、このときラジオアイソトープは、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、又は１年にわたって、元の量の約１重量％を超える程度まで微粒子から浸出されない。
【０１４３】
本開示の別の態様は、放射性遷移金属、ランタニド、又は族１３〜１４金属粒子を高分子物質と結合するプロセスに関する。結合プロセスは、少なくとも３種類の方法で達成できる。第１には、化学反応によって、粒子を高分子物質と結合、又は高分子物質の孔の中に沈殿させることができる。第２には、物質と粒子の溶液又は懸濁液との間の直接的接触によって、粒子を高分子物質上及び／又は高分子物質内に付着させることができる。第３には、ラジオアイソトープ塩溶液、懸濁液、又はコロイドを、高分子物質の初期重合溶液若しくは懸濁液に、又は初期重合後に導入し、キレート剤と結合することによって、ラジオアイソトープ含有高分子物質を生成できる。３つの方法全てにおいて、金属粒子は高分子物質、又はその孔の内部に結合させ、埋め込み用途において、かかる物質の検出及び制御が可能にする。上述した様々な高分子物質は、本明細書に記載の結合プロセスに好適である。
【０１４４】
したがって、放射性遷移金属、ランタニド、又は族１３〜１４金属粒子は、同位体塩を高分子物質上又は高分子物質内に付着される同位元素含有粒子内に結合、会合、還元、酸化、又は沈殿させるのに十分な時間と温度で、高分子物質をラジオアイソトープ塩溶液と接触させることによって、高分子物質と結合され得る。特定の実施形態では、高分子物質は多孔性であり、このプロセスは、多孔性物質が物質の孔の中に少なくとも一部の金属粒子を含むことを可能にする。このような場合、金属粒子の寸法は、孔の断面で測定するとき、物質の孔の寸法より大きくても小さくてもよい。
【０１４５】
高分子物質とラジオアイソトープとを結合する別のプロセスは、放射性同位元素粒子又はその対応する塩溶液若しくはコロイドを、高分子物質の初期重合溶液又は懸濁液に添加する工程を含む。一実施形態では、得られる高分子物質は多孔性であり、このプロセスは、多孔性物質が物質の孔の中に少なくとも一部のラジオアイソトープを含むことを可能にする。かかる重合／結合プロセスでは、好ましくは、高分子物質自体の重合プロセスの変化はない。したがって、高分子物質を生成する任意の重合プロセスは、ラジオアイソトープ塩溶液、コロイド、又は懸濁液を初期重合溶液又は懸濁液に添加することによる、本発明のプロセスに組み込まれてよい。
【０１４６】
一実施形態では、このプロセスは、治療（例えば、β放射体）及び撮像（例えば、γ放射体）を目的とする同位元素を含む。一実施形態では、このプロセスは、188Ｗ／188Ｒｅ発生装置によってもたらされるラジオアイソトープを含んで、無担体188Ｒｅをその［188ＲｅＯ4］-アニオンとして提供し、これが高分子物質と結合し得る。特定の実施形態では、このプロセスは、ラジオアイソトープに加え、ヨウ素を含むＭＲＩ検出性造影剤などの造影剤を含む。
【０１４７】
ラジオアイソトープを結合するプロセスを測定できる。一実施形態では、ラジオアイソトープの結合プロセスによってラジオアイソトープ標識化微粒子が得られ、このときラジオアイソトープは、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、又は１年といった特定の時間にわたって、元の量の約１０重量％を超える程度まで微粒子から浸出されない。別の実施形態では、ラジオアイソトープの結合プロセスによってラジオアイソトープ標識化微粒子が得られ、このときラジオアイソトープは、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、又は１年にわたって、元の量の約３重量％を超える程度まで微粒子から浸出されない。更なる実施形態では、ラジオアイソトープの結合プロセスによってラジオアイソトープ標識化微粒子が得られ、このときラジオアイソトープは、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、又は１年にわたって、元の量の約１重量％を超える程度まで微粒子から浸出されない。
【０１４８】
ミクロスフェアを、注射器又はカテーテルを用いて、単独又は血管収縮薬と併用して、ミクロスフェアが、例えば、癌性組織又は担癌組織に効果的に埋め込まれるようになる任意のその他投与手段によって、患者に投与できる。
【０１４９】
投与目的で、ミクロスフェアを生体適合性液状媒質中に懸濁してよい。媒質は、投与操作中に、ミクロスフェアが懸濁液中に沈殿するのを遅らせる又は防ぐのに、十分な密度又は粘度を有してよい。媒質は、Ｘ線撮像により検出可能であるように十分不透明であり（すなわち、放射線不透過性）、注入の可視化を可能にすることもできる。ミクロスフェア懸濁液の代表的な液体溶媒として、濃度０．９重量％の水性塩化ナトリウム、ＧＡＦ  Ｃｏｒｐから商品名Ｐｌａｓｄｏｎｅ  Ｋ−３０及びＰｏｖｉｄｏｎｅで販売されているポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）から商品名Ｖｉｓｉｐａｑｕｅ又はＯｍｎｉｐａｑｕｅで販売されている造影剤；Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ，Ｉｎｃ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）から商品名Ｏｐｔｉｒａｙで販売されている造影剤、Ｎｙｅｇａｒｄ  ＆  Ｃｏ．（Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）から商品名メトリザミドで販売されている造影剤、Ｅ．Ｒ．Ｓｑｕｉｂｂ  ＆  Ｃｏ．から商品名Ｒｅｎｏｇｒａｆｉｎ  ７６で販売されている造影剤、５０％デキストロース溶液、並びに生理食塩水が挙げられる。
【０１５０】
放射標識されたミクロスフェアは、放射線増感剤などの放射線療法の有効性を増強する剤と併用して患者に投与することもできる。理論に制限されるものではないが、放射線増感剤は、放射線療法による細胞への障害を増幅すること、又は、放射線による障害を受けた細胞が自身で増幅若しくは修復するのを防ぐことのいずれかによって、放射線の治療効果を高めると考えられる。放射線増感剤の例として、ゲムシタビン、ドセタキセル、及び硝酸化イミダゾール、例えばメトロニダゾール及びニモラゾールが挙げられる。
【０１５１】
本明細書に含まれる特定の実施例は、単に例示目的であり、本開示を制限するものとしてみなされない。以下の実施例に使用された任意の剤及び試薬は、市販されているか、有機合成に関する当業者によって標準的な文献的手法によって調製できるかのいずれかである。
【実施例】
【０１５２】
実施例１：ＭＡＧ−３キレート基（化合物４）の合成
ＭＡＧ−３基（化合物４）を次の合成経路によって合成した。
【０１５３】
【化２４】
0006373961.tif 000025
【０１５４】
２００ｍＬの水及び２００ｍＬのアセトン中の化合物１（Ｈ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ；３０グラム）の懸濁液に、炭酸カリウム（４４グラム）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、クロロアセチルクロリド（化合物２；１５．１ｍＬ）を滴状で加え、混合物を０℃で１．５時間撹拌した。減圧下でアセトンを除去し、得られた溶液を０℃で１２Ｎ  ＨＣｌを用いて酸性化し、その後、４℃で２時間放置した。ブフナー漏斗内で沈殿物を回収し、水及びアセトンでリンスしてから、真空下で乾燥して、２６．９グラム（収率６４％）の化合物３を白色固体として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ；１２．５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），８．４（ｔ，１Ｈ），８．３（ｔ，１Ｈ），８．２（ｔ，１Ｈ），４．１（ｓ，２Ｈ），３．８（ｍ，６Ｈ）。
【０１５５】
メタノール（３００ｍＬ）中ナトリウム（７．８グラム）溶液を０℃に冷却し、チオ安息香酸（４６．５ｍＬ）を加えた。メタノール（１Ｌ）中化合物３（３０グラム）懸濁液をこの溶液に加え、混合物を４時間還流してから、周囲温度で更に１２時間撹拌した。減圧下でメタノールを除去して残留物を得、これに３００ｍＬの２Ｎ  ＨＣｌを加えて、その後、１時間撹拌した。沈殿物を濾過し（ブフナー漏斗）、水及びクロロホルムで洗浄して乾燥し、化合物４（３６．９グラム、収率８９％）をピンク色固体として得た。粗物質を、温メタノール／水（８／２）混合液中に溶解することによって精製し、２４０ｎｍにおけるＨＰＬＣによる純度＞９５％の物質を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ；１２．６（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）；８．５（ｔ，１Ｈ），８．２（ｄｔ，２Ｈ），７．９（ｄ，２Ｈ），７．７（ｔ，１Ｈ），７．６（ｔ，２Ｈ），３．９（ｓ，２Ｈ），３．８（ｍ，６Ｈ）ＭＳ  ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：ＭＨ＋３６８．１，７３５．３；Ｍ−３６６．１，７３３．３。
【０１５６】
実施例２：Ｏ結合ＭＡＧ−３配位子の合成
化合物４からのエステル結合によって、次の合成経路を用いてＭＡＧ−３キレート基（化合物４）をメタクリロイル重合性基（化合物８）に結合した。
【０１５７】
【化２５】
0006373961.tif 000026
【０１５８】
３−（ＢＯＣ−アミノ）−１−プロパノール（化合物５；９．８ｍＬ）及びＤＩＥＡ（１９ｍＬ）の混合物に、ＤＭＦ（１４４ｍＬ）中化合物４（２０グラム）の溶液を加えた。混合物を撹拌しながら０℃まで冷却し、ＨＡＴＵ（２１．７グラム）を加え、その後、溶液を０℃で１時間撹拌し、更に周囲温度で１２時間撹拌した。ＤＭＦを減圧下で除去し、残留物をジエチルエーテル及びエチルアセテートの混合液（１：１）と共に１２時間粉砕した。得られた固体をブフナー漏斗中に回収し、アセトニトリルと共に１２時間粉砕して、その後再度ブフナー漏斗を通して濾過し、ＨＰＬＣ（２５４ｎｍ）による純度９０％の栗色固体として化合物６（２２グラム、収率７９％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ；８．５（ｔ，１Ｈ），８．３（ｍ，２Ｈ），７．９（ｍ，２Ｈ），７．７（ｔ，１Ｈ），７．６（ｔ，２Ｈ），６．９（ｔ，１Ｈ），４．０（ｍ，２Ｈ）；３．９（ｓ，２Ｈ），３．７〜３．８（ｍ，６Ｈ），３．０（ｍ，２Ｈ），１．７（ｍ，２Ｈ），１．４（ｓ，９Ｈ）ＭＳ  ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：ＭＨ＋５２５．３，４２５．２；Ｍ−５６９．４，５２３．３，３６２．２。
【０１５９】
−１５℃に冷却した無水ＤＣＭ（４ｍＬ）中化合物６（１グラム）の溶液に、ＴＦＡ（２．９ｍＬ）を滴状で加えた。−１０℃で２時間後、ジエチルエーテルを加えて沈殿物を形成させ、これをブフナー漏斗に集めてジエチルエーテルで洗浄した。生成物を凍結乾燥し、化合物７（５９０ｍｇ、収率５９％）のＴＦＡ塩を、純度約７０〜９０％の白色固体として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ；８．５（ｍ，１Ｈ），８．３（ｍ，２Ｈ），７．９（ｍ，２Ｈ），７．７（ｍ，３Ｈ），７．６（ｔ，２Ｈ），４．１（ｍ，２Ｈ）；３．９（ｓ，２Ｈ），３．７〜３．８（ｍ，８Ｈ），２．９（ｍ，２Ｈ），１．９（ｍ，２Ｈ）。
【０１６０】
ＤＣＭ／ＴＨＦ（１０ｍＬ／１０ｍＬ）の混合物中、化合物７／ＴＦＡ（９９０ｍｇ）の冷却した（０℃）懸濁液に、まずメタクリロイルクロリド（methacrylolyl chloride）（化合物８；２．７ｍＬ）を、次にＤＩＥＡ（５ｍＬ）を滴状で加えた。反応混合物を０℃で２．５時間撹拌した後、減圧下で濃縮して生成物を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９７／３）によって精製して、純度＞９５％のベージュ色固体として化合物９（２５０ｍｇ、収率２７％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）：ｐｐｍ  δ；８．５（ｍ，１Ｈ），８．２（ｍ，２Ｈ），７．９（ｍ，３Ｈ），７．７（ｍ，１Ｈ），７．６（ｔ，２Ｈ），５．６（ｓ，１Ｈ），５．３，（ｓ，１Ｈ），４．１（ｔ，２Ｈ）；３．９（ｓ，２Ｈ），３．８〜３．９（ｍ，６Ｈ），３．２（ｍ，２Ｈ），１．９（ｓ，３Ｈ），１．８（ｔ，２Ｈ）。
【０１６１】
実施例３：Ｎ結合ＭＡＧ−３配位子の合成
同様に、化合物４のエステル基をアミド基に修飾することによって、次の合成経路を用いてＭＡＧ−３キレート基（化合物４）をメタクリロイル基に結合した。
【０１６２】
【化２６】
0006373961.tif 000027
【０１６３】
化合物１５は次の方法で合成した。アルゴン下で、ＤＣＭ（１６０ｍＬ）中Ｂｏｃ2Ｏ（３０グラム）溶液を、ＤＣＭ（３３０ｍＬ）中１，２−プロパンジアミン（化合物１４；１８．４ｍＬ）及びトリエチルアミン（１１４ｍＬ）の溶液に滴状で加えた。反応混合物を周囲温度で一晩撹拌した。この溶液を２Ｎ重炭酸ナトリウム（１５０ｍＬ）で中和し、ＤＣＭ（２ｘ）で抽出した。有機相を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で蒸発させて白色固体を得、これをシリカゲル（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９：１の後、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｅｔ3Ｎ  ８：８：１）を通して精製し、化合物１５（１３グラム、収率５９％）を無色の油として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ；４．９（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），３．２（ｍ，２Ｈ）；２．７（ｔ，２Ｈ），１．６（ｍ，２Ｈ），１．５（ｍ，１１Ｈ）。
【０１６４】
ＤＭＦ（２６０ｍＬ）中化合物４（２６．８グラム）の溶液に、ＨＡＴＵ  ９２９．１グラム）及びＤＩＥＡ（１２．３ｍＬ）を加えた。この溶液を１０分間撹拌し、その時にＤＭＦ（５０ｍＬ）中化合物１５（１４グラム）溶液を加えた。この溶液を室温で一晩攪拌した。ＤＣＭ（２００ｍＬ）を加え、固体を濾過して（ブフナー漏斗）、アセトニトリル（２５０ｍＬ）と共に２回粉砕し、２４５ｎｍにおいて純度９６％の薄ピンク色固体として化合物１６（３５．２グラム、収率９２％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ；８．５（ｔ，１Ｈ），８．２（ｔ，１Ｈ），８．１（ｔ，１Ｈ），７．９（ｄ，２Ｈ），７．７（ｍ，２Ｈ），７．６（ｔ，２Ｈ），６．８（ｍ，１Ｈ），３．９（ｓ，２Ｈ），３．８（ｍ，５Ｈ），３．７（ｄ，２Ｈ），２．９（ｍ，２Ｈ），２．７（ｍ，２Ｈ），１．５（ｍ，２Ｈ），１．４（ｓ，９Ｈ）ＭＳ  ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：ＭＨ＋５２４．３，４２４．３；Ｍ−５６８．３，５２２．３，３６１．２。
【０１６５】
ジオキサン（１８６ｍＬ）中４Ｎ  ＨＣｌ溶液を、４０℃のＴＨＦ（６００ｍＬ）中化合物１６（４８．６グラム）溶液に加えた。反応混合物を４０℃で一晩撹拌した後、０℃で１時間冷却した。得られた沈殿物を濾過し（ブフナー）、４００ｍＬのアセトニトリルと共に粉砕して、純度約８５〜９０％のＨＣｌ塩（３７．１グラム、収率８７％）として化合物１２を得た。この固体を水に溶解して濾過し、凍結乾燥して、ＨＰＬＣ（２５４ｎｍ）による純度＞９８％のＨＣｌ塩（３０．２グラム、収率７０％）の化合物１２を白色固体として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ；８．６（ｍ，１Ｈ），８．３（ｍ，１Ｈ），８．２（ｍ，１Ｈ），７．９〜８．０（ｍ，５Ｈ），７．７（ｍ，１Ｈ），７．６（ｔ，２Ｈ），３．９（ｓ，２Ｈ），３．７〜３．８（ｍ，４Ｈ），３．７（ｄ，２Ｈ），３．１（ｍ，２Ｈ），２．７（ｍ，２Ｈ），１．７（ｍ，２Ｈ）ＭＳ  ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：ＭＨ＋４２４．２；Ｍ−４６８．２，２６１．１。
【０１６６】
３５０ｍＬのＤＣＭ中、化合物１２／ＨＣｌ（１４．４グラム）の冷却した（０℃）懸濁液に、メタクリロイルクロリド（化合物８；１５．１ｍＬ）及びＤＩＥＡ（２７．３ｍＬ）を滴状で加えた。反応混合物を０℃で３時間撹拌した後、周囲温度まで加温し、固体をブフナー漏斗で回収した。生成物を１５０ｍＬの水で洗浄し、純度約８０〜９０％の明ピンク色固体に乾燥した。この固体をアセトニトリル（１２０ｍＬ）と共に１時間粉砕して、濾過し、１２０℃に加熱しながら１００ｍＬのＤＭＳＯに再懸濁し、完全に溶解した。冷却によって沈殿した固体を濾過し、アセトニトリルでリンスして真空下で乾燥した。ＨＰＬＣ（２６５ｎｍ）による純度約９０％の純度の薄ピンク色固体として、化合物１３（５．４グラム；収率３５％）が得られた。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ；８．５（ｔ，１Ｈ），８．３（ｔ，１Ｈ），８．２（ｔ，１Ｈ），７．９〜８．０（ｍ，３Ｈ），７．７（ｍ，２Ｈ），７．６（ｔ，２Ｈ），５．６（ｓ，１Ｈ），５．３（ｓ，１Ｈ），３．９（ｓ，２Ｈ），３．７〜３．８（ｍ，４Ｈ），３．７（ｄ，２Ｈ），３．１（ｍ，４Ｈ），１．９（ｓ，３Ｈ），１．６（ｍ，２Ｈ）ＭＳ  ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：ＭＨ＋４９２．４；Ｍ−３２９．２。
【０１６７】
メタクリロイルクロリド（化合物８）の化合物１２／ＨＣｌとの共役の収率が低かったため、以下のスキームに示されるような、別のより集約させた化合物１３までの経路を導き出した。
【０１６８】
【化２７】
0006373961.tif 000028
【０１６９】
無水ＤＣＭ（４０ｍＬ）中化合物１５（３．９グラム）の溶液に、メタクリロイルクロリド（化合物８；４．４ｍＬ）を加えた。反応混合物を周囲温度で１８時間撹拌した。２Ｎ  重炭酸ナトリウム溶液を加え、混合物をＤＣＭ（３ｘ）で抽出した。混合した有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、減圧下で濃縮した。生成物をシリカゲル（ＤＣＭの後、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  ９７／３）を通して精製し、ＨＰＬＣ（２５４ｎｍ）よる純度約９８％の白色固体として、化合物１７（２．７グラム、収率５０％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）：ｐｐｍ  δ；７．９（ｍ，１Ｈ），６．８（ｍ，１Ｈ），５．６（ｓ，１Ｈ），５．３（ｓ，１Ｈ），３．１（ｍ，２Ｈ），２．９（ｍ，２Ｈ），１．９（ｍ，３Ｈ），１．５（ｔ，２Ｈ），１．４（ｓ，９Ｈ）ＭＳ  ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：ＭＨ＋２４３．１，１８７．１，１２６．１；Ｍ−２８７．２。
【０１７０】
室温で、３０ｍＬのＭｅＯＨ中化合物１７（１０．５グラム）の溶液に４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（２１．７ｍＬ）の溶液を加え、混合物を１６時間撹拌した。この溶液を減圧下で濃縮し、固体を８０ｍＬのトルエンと共に粉砕した。濾過（ブフナー）後、白色固体として化合物１８（７．５グラム、収率９６％）が得られた。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）：ｐｐｍ  δ；８．２（ｍ，１Ｈ），８．０（ｍ，３Ｈ），６．３（ｂｒ．ｓ），５．７（ｓ，１Ｈ），５．３（ｓ，１Ｈ），３．２（ｍ，２Ｈ），２．８（ｍ，２Ｈ），１．９（ｓ，３Ｈ），１．７（ｍ，２Ｈ）。
【０１７１】
ＨＡＴＵ（１１．９グラム）及びＤＩＥＡ（５．２ｍＬ）の溶液に、１２０ｍＬのＤＭＦ中化合物４（１１グラム）溶液を加えた。１０分間撹拌後、ＤＭＦ（２４ｍＬ）中、化合物１８（５．８８グラム）、ＤＩＥＡ（５．２ｍＬ）及び触媒量のフェノチアジンの溶液を加えた。１６時間後、反応をＨＰＬＣで観測したが、完全に変換されていないことがわかったため、追加量のＨＡＴＵ（７グラム）及びＤＭＦ（３０ｍＬ）中化合物１８（８．９グラム）、ＤＩＥＡ（８．７ｍＬ）溶液を加えた。混合物を更に１６時間撹拌した。ＤＣＭ（１００ｍＬ）を加えた後、固体を濾過して（ブフナー）、アセトニトリル（１５０ｍＬ）と共に２回粉砕し、純度約９５％（２６５ｎｍ）の薄ピンク色固体として化合物１３（１３．７グラム、収率９２％）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ｍＨｚ；ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ；８．５（ｔ，１Ｈ），８．３（ｔ，１Ｈ），８．２（ｔ，１Ｈ），７．９−８．０（ｍ，３Ｈ），７．７（ｍ，２Ｈ），７．６（ｔ，２Ｈ），５．６（ｓ，１Ｈ），５．３（ｓ，１Ｈ），３．９（ｓ，２Ｈ），３．７−３．８（ｍ，４Ｈ），３．７（ｄ，２Ｈ），３．１（ｍ，４Ｈ），１．９（ｓ，３Ｈ），１．６（ｍ，２Ｈ）ＭＳ  ＥＳＩ（ｍ／ｚ）：ＭＨ＋４９２．４；Ｍ−３２９．２。
【０１７２】
微粒子へのＭＡＧ−３の結合
少なくとも２つの基本方法、すなわち（１）重合性基のリンカーを介したキレート基への付加、及び、重合による微粒子の形成（例えば、別の重合性モノマーの存在下で）によるもの、又は、（２）微粒子を別々に形成してから、物質を最初に重合した後に、キレート基をリンカーを介して微粒子に共役させることによるもの、によって、ＭＡＧ−３キレート基を微粒子に結合できる。これらの基本方法の例を以下に示す。
【０１７３】
方法１：
【０１７４】
【化２８】
0006373961.tif 000029
【０１７５】
方法２：
【０１７６】
【化２９】
0006373961.tif 000030
【０１７７】
実施例４：方法１の例
方法１の例を以下のスキームに示す。
【０１７８】
【化３０】
0006373961.tif 000031
【０１７９】
アクリル酸ナトリウム及びＮ−トリス−ヒドロキシ−メチルメチルアクリルアミドモノマーを用いるミクロスフェアの調製のため、水／油エマルション−懸濁−重合法を使用した。この方法では、６．７５グラムのＮ，Ｎ−メチレン−ビス−アクリルアミド、２５．１８グラムのＮ−トリス−ヒドロキシ−メチルメチルアクリルアミド、及び２．２グラムのアクリル酸ナトリウム（９７％）を、２５０ｍＬの酢酸緩衝液（５８グラムのＮａＣｌ、２７．２グラムの酢酸ナトリウム、４００ｍＬの水及び３００ｍＬのグリセリンを用いて、ｐＨを酢酸で６．０で調整して調製した）に５０℃で加えた。水相のｐＨを５０％水性酢酸で調製し、ｐＨを６．０に維持した。水相を濾過し、過硫酸アンモニウム溶液（水５ｍＬ中、過硫酸アンモニウム０．３４グラム）を追加した。機械的撹拌機を２８８ｒｐｍで用いて、６０℃で水相を油相中に分散することによって、エマルションを形成した。１ｍＬのＴＥＭＥＤ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラエチルメチレンジアミン）を加えて、反応を触媒した。エマルションを９０分間撹拌した。重合反応が完了したとき、脱イオン水を加え、懸濁液を３５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清からミクロスフェアを分離し、脱イオン水で４回洗浄した。ミクロスフェアを１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ  １．５に酸性化し、脱イオン水で６回洗浄した。
【０１８０】
粒度測定（Ｅｌｌｉｘソフトウェア）のため、ミクロスフェアのサンプルを０．９％の水性ＮａＣｌに懸濁した。この結果は、ミクロスフェアの直径が約２７．２６μｍ〜約１４０．３４μｍの範囲であり、平均直径が約７３．７１μｍであることを示した。
【０１８１】
ミクロスフェアの形態は、画像解析のためコンピュータに連結した光学顕微鏡を用いて、ミクロスフェアの凍結乾燥後に評価した。凍結乾燥後の実施例４のミクロスフェアについて、鏡検結果を図１に示す。図に示されるように、実施例４で形成されたミクロスフェアは実質的に球状である。
【０１８２】
実施例４の微粒子のＭＡＧ−３配位子との共役
実施例４の微粒子へのＭＡＧ−３配位子のグラフト化又は共役のため、以下の２つの手順を用いた。
【０１８３】
第１の手順では、乾燥ミクロスフェア（２５０ｍｇ）を３．６ｍＬのＤＭＦ溶媒に分散した。ＤＩＥＡ（５２．５ｍｇ）及び化合物１２のＨＣｌ塩（９８ｍｇ）をスラリーに加えた。懸濁液を氷浴中に置き、ＨＡＴＵ（８１ｍｇ）を０℃で懸濁液に加えた時点で、懸濁液が蛍光黄色に変化した。懸濁液を０℃で１時間、室温で１９時間維持した。上清からミクロスフェアを分離し、脱イオン水で４回洗浄した。
【０１８４】
第２の手順では、乾燥ミクロスフェア（２５０ｍｇ）を３．６ｍＬのＤＭＦ溶媒に分散した。ＤＩＥＡ（５２．５ｍｇ）をスラリーに加えた。懸濁液を氷浴中に置き、ＨＡＴＵ（８１ｍｇ）を０℃で懸濁液に加えた。ＨＡＴＵ添加２分後、化合物１２のＨＣｌ塩（９８ｍｇ）を加えた時点で、懸濁液が黄褐色に変化した。懸濁液を０℃で１時間、室温で１９時間維持した。上清からミクロスフェアを分離し、脱イオン水で４回洗浄した。
【０１８５】
各手順からのミクロスフェアのサンプルの形態は、画像解析のためコンピュータに連結した光学顕微鏡を用いて、微粒子凝集体を分散する超音波処理の前後で評価した。
【０１８６】
超音波処理前の実施例４の第１手順のミクロスフェアについて、鏡検結果を図２に示す。超音波処理後の実施例４の第１手順のミクロスフェアについて、鏡検結果を図３に示す。図に示されるように、実施例４のミクロスフェアのＭＡＧ−３との共役によって形成されたミクロスフェアは実質的に球状である。
【０１８７】
超音波処理前の実施例４の第２手順のミクロスフェアについて、鏡検結果を図４に示す。超音波処理後の実施例４の第２手順のミクロスフェアについて、鏡検結果を図５に示す。図に示されるように、実施例４のミクロスフェアのＭＡＧ−３との共役によって形成されたミクロスフェアは実質的に球状である。
【０１８８】
実施例５：方法１の追加例
方法１の追加例は以下のとおりである。
アクリル酸ナトリウムモノマーを用いるミクロスフェアの調製のため、水／油エマルション−懸濁−重合法を使用した。この方法では、６．７５グラムのＮ，Ｎ−メチレン−ビス−アクリルアミド、及び２７グラムのアクリル酸ナトリウム（９７％）を、２５０ｍＬの酢酸緩衝液（５８グラムのＮａＣｌ、２７．２グラムの酢酸ナトリウム、４００ｍＬの水及び３００ｍＬのグリセリンを用いて、ｐＨを酢酸で６．０で調整して調製した）に４０℃で加えた。水相のｐＨを５０％水性酢酸で調製し、ｐＨを６．０に維持した。水相を濾過し、過硫酸アンモニウム溶液（水５ｍＬ中、過硫酸アンモニウム０．３４グラム）を追加した。機械的撹拌機を２８８ｒｐｍで用いて、６０℃で水相を油相中に分散することによって、エマルションを形成した。１ｍＬのＴＥＭＥＤ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラエチルメチレンジアミン）を加えて、反応を触媒した。エマルションを９０分間撹拌した。重合反応が完了したとき、生理食塩溶液（２．７％水性ＮａＣｌ）を加え、懸濁液を３５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清からミクロスフェアを分離し、生理食塩溶液で４回洗浄した。ミクロスフェアを１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ  １．５に酸性化し、生理食塩溶液で２回、脱イオン水で６回洗浄した。
【０１８９】
粒度測定（Ｅｌｌｉｘソフトウェア）のため、ミクロスフェアのサンプルを０．９％の水性ＮａＣｌに懸濁した。この結果は、ミクロスフェアの直径が約１１．６６μｍ〜約６８．２４μｍの範囲であり、平均直径が約３０．２３μｍであることを示した。
【０１９０】
ミクロスフェアの形態は、画像解析のためコンピュータに連結した光学顕微鏡を用いて、凍結乾燥前後に評価した。
【０１９１】
凍結乾燥前の実施例５のミクロスフェアについて、鏡検結果を図６に示す。凍結乾燥後の実施例５のミクロスフェアについて、鏡検結果を図７に示す。図に示されるように、実施例５で形成されたミクロスフェアは実質的に球状である。
【０１９２】
実施例５の微粒子のＭＡＧ−３配位子との共役
実施例５の微粒子へのＭＡＧ−３配位子の共役のため、以下の手順を用いた。
【０１９３】
乾燥ミクロスフェア（２５０ｍｇ）を４．５ｍＬのＤＭＦ溶媒に分散した。ＤＩＥＡ（５２．５ｍｇ）及び化合物１２のＨＣｌ塩（９８ｍｇ）をスラリーに加えた。懸濁液を氷浴中に置き、ＨＡＴＵ（８１ｍｇ）を０℃で懸濁液に加えた時点で、懸濁液が蛍光黄色に変化した。懸濁液を０℃で１時間、室温で２１時間維持した。上清からミクロスフェアを分離し、脱イオン水で４回洗浄した。
【０１９４】
同様の基本手順を、２０μｍの寸法のカルボキシレート官能化ポリスチレン微粒子（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｅｌｌｅｌｈｉｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手可能なＰｏｌｙｂｅａｄｓ（登録商標））のサンプルへのＭＡＧ−３配位子の共役に用いた。乾燥ミクロスフェア（２５ｍｇ）を２．７ｍＬのＤＭＦ溶媒に分散した。ＤＩＥＡ（５．２ｍｇ）及び化合物１２のＨＣｌ塩（９．８ｍｇ）をスラリーに加えた。懸濁液を氷浴中に置き、ＨＡＴＵ（８．１ｍｇ）を０℃で懸濁液に加えた時点で、懸濁液が蛍光黄色に変化した。懸濁液を０℃で１時間、室温で１９時間維持した。上清からミクロスフェアを分離し、脱イオン水で４回洗浄した。
【０１９５】
実施例６：方法２の例
方法２の例を以下のスキームに示す。
【０１９６】
【化３１】
0006373961.tif 000032
【０１９７】
ＭＡＧ−３キレート基を含有するミクロスフェアの調製のため、水／油エマルション−懸濁−重合法を使用した。化合物１３（１．０８グラム）を、５０ｍＬのｐＨ  ６の酢酸ナトリウム緩衝液に溶解した。Ｎ，Ｎ−メチレン−ビス−アクリルアミド（６．７５グラム）及びＮ−トリス−ヒドロキシ−メチルメチルアクリルアミド（２５．９２グラム）を化合物１３の溶液に加え、追加の緩衝剤を用いて量を２００ｍＬに調節した。溶液を５０℃まで加熱した。水相を濾過し、過硫酸アンモニウム水溶液（水５ｍＬ中０．３４グラム）を追加した。混合物を３．５グラムの界面活性剤（Ａｒｌａｃｅｌ）を含む１Ｌのパラフィン油に流し込んだ。機械的撹拌機を２８８ｒｐｍで用いて、６０℃で水相を油相中に分散することによって、エマルションを形成した。１ｍＬのＴＥＭＥＤ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラエチルメチレンジアミン）を加えて、反応を触媒した。エマルションを少なくとも９０分間撹拌し、その時に脱イオン水を加え、懸濁液を３５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清からミクロスフェアを分離し、脱イオン水で４回洗浄した。
【０１９８】
重合されるモノマー混合物中に使用された化合物１３の量によって決定するとき、これらのミクロスフェアは約３％の化合物１３を含有する。
【０１９９】
実施例７：方法２の追加例
方法２の追加例は以下のとおりである。
【０２００】
ＭＡＧ−３キレート基を含有するミクロスフェアの調製のため、水／油エマルション−懸濁−重合法を使用した。化合物１３（２．１５グラム）を、５０ｍＬのｐＨ  ６の酢酸ナトリウム緩衝液に溶解した。Ｎ，Ｎ−メチレン−ビス−アクリルアミド（６．７５グラム）及びＮ−トリス−ヒドロキシ−メチルメチルアクリルアミド（２４．８５グラム）を化合物１３の溶液に加え、追加の緩衝剤を用いて量を２００ｍＬに調節した。溶液を５０℃まで加熱した。水相を濾過し、過硫酸アンモニウム水溶液（水５ｍＬ中０．３４グラム）を追加した。混合物を３．５グラムの界面活性剤（Ａｒｌａｃｅｌ）を含む１Ｌのパラフィン油に流し込んだ。機械的撹拌機を２８８ｒｐｍで用いて、６０℃で水相を油相中に分散することによって、エマルションを形成した。１ｍＬのＴＥＭＥＤ（Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラエチルメチレンジアミン）を加えて、反応を触媒した。エマルションを少なくとも９０分間撹拌し、その時に脱イオン水を加え、懸濁液を３５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清からミクロスフェアを分離し、脱イオン水で４回洗浄した。
【０２０１】
重合されるモノマー混合物中に使用された化合物１３の量によって決定するとき、これらのミクロスフェアは約６％の化合物１３を含有する。
【０２０２】
実施例６及び７のミクロスフェアの分析
粒度測定（Ｅｌｌｉｘソフトウェア）のため、実施例６及び７から形成されたミクロスフェアのそれぞれのサンプルを０．９％の水性ＮａＣｌに懸濁した。結果を以下の表に示す。
【０２０３】
【表１】
0006373961.tif 000033
【０２０４】
ミクロスフェアの形態及びその分散性は、画像解析のためコンピュータに連結した光学顕微鏡を用いて評価した。
【０２０５】
実施例６のミクロスフェアについて、鏡検結果を図８に示す。図に示されるように、実施例６で形成されたミクロスフェアは実質的に球状である。
【０２０６】
実施例７のミクロスフェアについて、鏡検結果を図９に示す。図に示されるように、実施例７で形成されたミクロスフェアは実質的に球状である。
【０２０７】
ミクロスフェアをふるい分けし、所望の寸法範囲を得ることができる。例えば、顕微鏡像の取得後、実施例６及び７のミクロスフェアを、約２０μｍ〜約４０μｍの範囲の寸法にふるい分けした。図１０及び１１は、実施例７のふるい分けしたミクロスフェアのサンプルの鏡検結果を示す。
【０２０８】
実施例８：方法２の別の例
方法２の追加の特定例は以下のとおりである。
１００ｍＬの脱塩水を含むビーカー内で、５８ｇの塩化ナトリウム及び２７ｇの酢酸ナトリウムを溶解する。４００ｍＬのグリセロールを加え、続いてｐＨを５．９〜６．１に調整する。その後、９０ｇのＮ−トリス−ヒドロキシ−メチルメチルアクリルアミド、３５グラムの化合物１３、及び１０ｇのＮ，Ｎ−メチレン−ビス−アクリルアミドを加える。６０〜７０℃に加熱し、１００ｍＬの熱した３００ｍｇ／ｍＬのゼラチン溶液を加える。熱水を加えることによって混合物の総量を９８０ｍＬに調節し、その後、２０ｍＬの７０ｍｇ／ｍＬ過硫酸アンモニウム溶液及び４ｍＬのＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミンを加える。
【０２０９】
この溶液を５０〜７０℃のパラフィン油に撹拌しながら流し込む。数分後、温度が上昇することによって、アクリルモノマーの重合反応が明らかになる。その後、デカンテーションによってミクロスフェアを回収し、慎重に洗浄して選別し、緩衝化媒質中でオートクレーブで滅菌する。
【０２１０】
球体の回収後、２５％グルタルアルデヒド溶液を用いてゼラチンを網状化できる。この処理は、４℃で一晩撹拌しながら実施する。その後脱塩水で洗浄する。
【０２１１】
ミクロスフェアと共役しているＭＡＧ−３配位子によるレニウムのキレート化
ＭＡＧ−３キレート基を用いて、以下の合成経路によって、188レニウムなどのラジオアイソトープをキレート化できる。
【０２１２】
【化３２】
0006373961.tif 000034
【０２１３】
実施例９：ＭＡＧ−３に結合したミクロスフェアによるレニウムのキレート化
実施例４、５、６、７、又は８の任意のものからのミクロスフェアのサンプルを、放射性過レニウム酸塩［188ＲｅＯ4］-（施設内での188Ｗ／188Ｒｅ発生装置から得られる）が、適切なｐＨの０．５Ｍリン酸緩衝液、及び０．０５Ｎ  ＨＣｌ中ＳｎＣｌ2二水和物中に含まれるもので処理し、６０℃で３０分間放置する。このサンプルを１６００×ｇで１０分間遠心分離し、上清を除去すると、ミクロスフェアは患者の放射線塞栓術で使用するのに好適である。
【０２１４】
実施例１０：ＭＡＧ−３に結合したミクロスフェアによるレニウムのキレート化の追加例
実施例４、５、６、７、又は８の任意のものからのミクロスフェアのサンプルを、０．９％生理食塩水（水中ＮａＣｌ）中の１ｍＬの188Ｒｅ過レニウム酸ナトリウム溶出物でも処理し、その後、ガラスバイアル中で、３０ｍｇのアスコルビン酸、４０ｍｇのシュウ酸カリウム、及び７．８ｍｇのＳｎＣｌ2と混合してよい。続いて、約５ｍｇのミクロスフェアを溶液に加える。反応は、室温又は９０℃で起こしてよい。溶液を加熱すると、反応速度が上昇する。約１時間後、ミクロスフェアを遠心分離し、沈殿物を０．１Ｎ  ＨＣｌと水（２回）で洗浄してよい。
【０２１５】
当業者は、単なる通常の実験方法を用いて、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態の多くの等価物を認識し、確認できるだろう。かかる等価物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
0006373961.tif 000043
【図８】
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【図９】
0006373961.tif 000045
【図１０】
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【図１１】
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