(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する、血球貪食症候群の検出方法。
【請求項２】
以下の工程を含む、請求項１に記載の検出方法；
被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して測定値を得る工程、及び、
前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程。
【請求項３】
さらに以下の工程を含む請求項２に記載の検出方法；
前記測定値が前記基準値よりも高値である場合に、血球貪食症候群が検出されたと判定する工程。
【請求項４】
さらに以下の工程を含む請求項２又は請求項３に記載の検出方法；
被検者由来の血液検体中のＣ反応性蛋白濃度を測定して測定値を得る工程、
前記Ｃ反応性蛋白濃度の測定値を基準値と比較する工程、及び、
前記測定値が前記基準値よりも低値であるか否かを判定する工程。
【請求項５】
さらに以下の工程を含む請求項２から請求項４のいずれか１項に記載の検出工程；
被検者由来の血液検体中のフェリチン濃度を測定して測定値を得る工程、
前記フェリチン濃度の測定値を基準値と比較する工程、及び、
前記測定値が前記基準値よりも高値であるか否かを判定する工程。
【請求項６】
さらに以下の工程を含む請求項２から請求項５のいずれか１項に記載の検出工程；
被検者由来の血液検体中の乳酸脱水素酵素濃度を測定して測定値を得る工程、
前記乳酸脱水素酵素濃度の測定値を基準値と比較する工程、及び、
前記測定値が前記基準値よりも高値であるか否かを判定する工程。
【請求項７】
前記被検者が、同種造血幹細胞移植を受けた患者である請求項１から請求項６のいずれか１項に記載の検出方法。
【請求項８】
前記被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を、免疫学的測定法により測定する請求項１から請求項７のいずれか１項に記載の検出方法。
【請求項９】
前記被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を、配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体を用いて測定する請求項１から請求項８のいずれか１項に記載の検出方法。
【請求項１０】
前記被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して血球貪食症候群を検出するためのキットであって、前記血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する手段を含むことを特徴とするキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プレセプシン測定による血球貪食症候群の検出方法及び検出キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
血球貪食症候群（Ｈｅｍｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ、以下「ＨＰＳ」とも称する。）は、マクロファージによる血球貪食を特徴とする疾患である。ＨＰＳは、発熱、リンパ節浮腫、肝脾腫、汎血球減少、凝固異常、肝機能障害等の多彩な症状を呈することが知られている（非特許文献１）。また、ＨＰＳは極めて重篤な致死的疾患であるため、正確に病態を把握し、適切な治療を開始することが求められる。一般的にＨＰＳでは、高フェリチン血症又は高乳酸脱水素酵素血症等の検査値異常が認められると考えられている。
しかし、高フェリチン血症や高乳酸脱水素酵素血症を呈さない症例が存在するとの報告もある（非特許文献２及び３）。
そのため、ＨＰＳの診断に際しては、血球数、乳酸脱水素酵素値、ＬＤＨ値等の検査値の他に、臨床症状の確認と、骨髄、脾臓又はリンパ節等の病理組織における血球貪食像の確認とを行う必要がある。
【０００３】
ｓＣＤ１４−ＳＴ（可溶性ＣＤ１４抗原サブタイプ、別名：プレセプシン（Ｐｒｅｓｅｐｓｉｎ））は、血液中で細菌が増殖する全身感染症である敗血症の診断マーカーとして有用であることが報告されている（特許文献１）。
また、ｓＣＤ１４−ＳＴについては、白血球等が外来微生物等を貪食し消化する過程で産生されることが報告されている。さらに、関節炎等のような局所における炎症や感染に伴う貪食が生じている疾患においては、関節液等の局所検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度が上昇することが報告されている。そのため、例えば、関節液中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定することにより、関節リウマチ等の疾患を検出することが可能であることが報告されている（特許文献２）。
一方、ｓＣＤ１４−ＳＴは、白血球等から産生されると推測されているため、化学療法等で白血球が減少している患者では菌感染があってもｓＣＤ１４−ＳＴ濃度が高値を示さないことがあると報告されている（非特許文献４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００５／１０８４２９号公報
【特許文献２】国際公開第２００９／１４２３０３号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】南山堂  医学大辞典  １９版  ２００６年３月１０日発行
【非特許文献２】血栓止血学会誌（２００８）  １９（２）：２１０−２１５
【非特許文献３】Ｍｏｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．（２００４）：１４：２０５−２１５
【非特許文献４】Ｃｙｔｏｋｉｎｅ（２０１３）  ６２（１）：３４−３７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
簡便に測定可能なバイオマーカーを用いて、ＨＰＳを検出できる方法については、新たな技術開発が待ち望まれていた。
【０００７】
本発明は、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して血球貪食症候群を簡便に検出する方法及びキットを提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は以下のとおりである。
＜１＞  被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する、血球貪食症候群の検出方法。
＜２＞  以下の工程を含む、＜１＞に記載の検出方法；被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して測定値を得る工程、及び、前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程。
＜３＞  さらに以下の工程を含む＜２＞に記載の検出方法；前記測定値が前記基準値よりも高値である場合に、血球貪食症候群が検出されたと判定する工程。
＜４＞  さらに以下の工程を含む＜２＞又は＜３＞に記載の検出方法；被検者由来の血液検体中のＣ反応性蛋白濃度を測定して測定値を得る工程、前記Ｃ反応性蛋白濃度の測定値を基準値と比較する工程、及び、前記測定値が前記基準値よりも低値であるか否かを判定する工程。
＜５＞  さらに以下の工程を含む＜２＞から＜４＞のいずれか１つに記載の検出工程；被検者由来の血液検体中のフェリチン濃度を測定して測定値を得る工程、前記フェリチン濃度の測定値を基準値と比較する工程、及び、前記測定値が前記基準値よりも高値であるか否かを判定する工程。
＜６＞  さらに以下の工程を含む＜２＞から＜５＞のいずれか１つに記載の検出工程；被検者由来の血液検体中の乳酸脱水素酵素濃度を測定して測定値を得る工程、前記乳酸脱水素酵素濃度の測定値を基準値と比較する工程、及び、前記測定値が前記基準値よりも高値であるか否かを判定する工程。
＜７＞  前記被検者が、同種造血幹細胞移植を受けた患者である＜１＞から＜６＞のいずれか１つに記載の検出方法。
＜８＞  前記被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を、免疫学的測定法により測定する＜１＞から＜７＞のいずれか１つに記載の検出方法。
＜９＞  前記被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を、配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体を用いて測定する＜１＞から＜８＞のいずれか１つに記載の検出方法。
＜１０＞  前記被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して血球貪食症候群を検出するためのキットであって、前記血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する手段を含むことを特徴とするキット。
＜１１＞  血球貪食症候群患者の治療方法であって、血球貪食症候群患者に血球貪食症候群治療剤を投与することを含み、前記血球貪食症候群患者が、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して検出される患者である血球貪食症候群患者の治療方法。
＜１２＞  血球貪食症候群患者の治療剤の製造における、血球貪食症候群治療剤を有効成分として含有する組成物の使用であって、前記血球貪食症候群患者が、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して検出される患者である、前記使用。
＜１３＞  血球貪食症候群患者検出用キットの製造における、抗ｓＣＤ１４−ＳＴ抗体の使用であって、前記血球貪食症候群患者が、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して検出される患者である、前記使用。
＜１４＞  前記キットが免疫学的測定法キットである、＜１３＞に記載の血球貪食症候群検出用キットの製造における、抗ｓＣＤ１４−ＳＴ抗体の使用。
＜１５＞  前記抗ｓＣＤ１４−ＳＴ抗体は、配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体である、＜１３＞又は＜１４＞に記載の血球貪食症候群検出用キットの製造における、抗ｓＣＤ１４−ＳＴ抗体の使用。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して血球貪食症候群を簡便に検出する方法及びキットを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】血球貪食症候群非罹患患者及び血球貪食症候群罹患患者の血清ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を平均値及び標準誤差で示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明について詳細に説明する。
＜血球貪食症候群の検出方法＞
本発明の血球貪食症候群の検出方法は、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定することによる検出方法である。
また、本発明における検出方法は、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して測定値を得る工程、及び、前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程を含んでいてもよい。また、本発明における検出方法は、さらにその他の工程を含んでいてもよい。
本発明における検出方法によれば、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標とすることにより、ＨＰＳへの罹患を簡便に検出することができる。また、簡便にＨＰＳを検出することにより、医師は早い段階で適切な治療の選択が可能となる。また、本発明の検出方法は、医師がＨＰＳと最終診断する前にＨＰＳを補足できる可能性がある。つまり、本発明の検出方法は、医師が、骨髄、脾臓又はリンパ節等の病理組織における血球貪食像を確認し、患者をＨＰＳであると最終診断する前の補助方法として用いることができる。なお、本発明の検出方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで行うことができる。
【００１２】
本発明の検出方法は、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して測定値を得る工程を含む。
【００１３】
本発明の検出方法において、被検者は基礎疾患等が特に制限されるものではない。被検者としては、例えば、同種造血幹細胞移植を受けた患者、血液悪性疾患患者、ウイルス感染患者又は自己免疫疾患患者等が挙げられる。中でも、被検者としては、同種造血幹細胞移植を受けた患者又は血液悪性疾患患者が適している。
なお、本発明においては、必要に応じて、被検者は患者と読み替えることができ、患者は被検者と読み替えることもできる。
また、本発明の検出方法において、被検者は血球貪食症候群の罹患が疑われる患者であってもよい。具体的には、７日以上高熱が持続し、ピークが３８．５℃以上である患者等が挙げられる。
【００１４】
また、被検者としては、白血球数が正常値又は低値を示す被検者であってもよい。さらに、白血球数が正常値に比べて低値を示す被検者であってもよい。ここで、白血球数が正常値に比べて低値を示す被検者とは、例えば、白血球数が健常人に比較して減少している被検者等が挙げられる。
例えば、被検者としては、被検者の白血球数が４０００（４０００個／ｍｍ３）／μＬ〜８０００（８０００個／ｍｍ３）／μＬの被検者であってもよいし、４０００／μＬ（４０００個／ｍｍ３）より低値の被検者であってもよく、３０００／μＬ（３０００個／ｍｍ３）より低値の被検者であってもよく、１０００／μＬ（１０００個／ｍｍ３）より低値の被検者であってもよい。
本発明は、被検者の白血球数が正常値に比べて低値を示す場合にも、その効果を奏しうるため、被検者の白血球数は４０００／μＬ（４０００個／ｍｍ３）より低値であっても測定できる。なお、健常人における白血球数は、４０００／μＬ〜８０００／μＬである。
白血球数の測定は、血球計算器を用いて行うことができる。測定頻度は特に制限されるものではなく、適宜設定することができる。
【００１５】
なお、菌血症、敗血症、呼吸器感染症、炎症性腸炎疾患及び発熱性好中球減少症からなる群より選ばれる患者は、本発明における被検者から除くことが好ましい。
【００１６】
血液検体としては、特に限定されず、全血、血漿、血清のいずれを用いてもよい。
血液検体は採血後、ＥＤＴＡ、ヘパリン、クエン酸等の抗凝固剤を加えた検体でもよい。
【００１７】
本発明の検出方法において、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する被検者由来の検体として、血液検体以外の尿、骨髄液等の被検者の体液由来の検体を用いて行うこともできる。具体的には、被検者の体液由来の検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して測定値を得る工程、及び、前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程を含む、血球貪食症候群の検出方法が挙げられる。
ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度測定の際に、血液検体の代わりに被検者の体液由来の検体を用いる場合には、本発明の検出方法で説明する事項を、被検者由来の血液検体を、被検者の体液由来の検体に読み替えて、そのまま適用することができる。また、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度測定の際に、被検者の体液由来の検体を用いる場合にも、血液検体を用いる場合と同様に、その他の工程を含んでいてもよい。その他の工程としては、例えば、血液検体を用いる検出方法において説明した事項をそのまま適用することができる。
被検者由来の血液検体及び被検者の体液由来の検体の採取方法は常法に従えばよい。
【００１８】
ｓＣＤ１４−ＳＴは可溶性ＣＤ１４の分子種の一つであり、非還元条件下ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて分子量１３±２ｋＤａに泳動されることを特徴とし、ＣＤ１４のＮ端部を保持しているものである。
また、ｓＣＤ１４−ＳＴは全長ＣＤ１４と比べると、Ｃ端側が大きく欠失したアミノ酸配列を有しており、両者は立体構造の点で異なるため、異なる免疫原性を示す。そのため、結合する抗体により両者を区別することが可能であり、ｓＣＤ１４−ＳＴは配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体に特異的に結合する、という性質を有する。さらに、ｓＣＤ１４−ＳＴは、配列番号３に記載のヒト全長可溶型ＣＤ１４蛋白質のアミノ酸配列の１７番目〜２６番目からなるペプチドに結合する抗体に特異的に結合すること、３Ｃ１０抗体に結合しないこと、ＭＥＭ−１８抗体に結合しないこと、ＬＰＳ結合能を有さないこと、ヒト血液から得られうること、という特徴のうち任意の一つ以上を付け加えることができる。ｓＣＤ１４−ＳＴはアミノ酸配列としては、Ｎ末端配列に配列番号１のアミノ酸配列を有する、という特徴を有し、より詳細には、Ｎ末端が配列番号３に記載のアミノ酸配列の１位であり、Ｃ末端が配列番号３に記載のアミノ酸配列の５９〜９０位のいずれかである、という特徴により特定することができる。ｓＣＤ１４−ＳＴは詳細には国際公開第２００５／１０８４２９号に開示されている。本明細書中においてｓＣＤ１４−ＳＴは、特に断りのない限りヒトｓＣＤ１４−ＳＴを意味する。
ここで、配列番号１に記載のアミノ酸配列は、配列番号３に記載のヒト全長可溶型ＣＤ１４蛋白質のＮ末端のアミノ酸配列と一致する。また、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるペプチドは、配列番号３に記載のヒト全長可溶型ＣＤ１４蛋白質のアミノ酸配列の５３位から６８位までの１６アミノ酸残基に該当する。
【００１９】
血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定は公知の手法又は公知の装置により行うことができる。例えば、国際公開第２００４／０４４００５号公報又は国際公開第２００５／１０８４２９号公報に開示されているｓＣＤ１４−ＳＴを特異的に検出する免疫学的測定系を用いることができる。
また、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度は、パスファースト（ＰＡＴＨＦＡＳＴ（登録商標）、ＬＳＩメディエンス社）によって測定することも可能である。
【００２０】
被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定に用いる抗体としては、ｓＣＤ１４−ＳＴの測定が可能であれば特に制限されるものではないが、例えば配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体を用いて測定すること等が挙げられる。
また、配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体（Ｓ６８抗体）と、配列番号３に記載のアミノ酸配列の１７位〜２６位からなるペプチドに結合する抗体又は該抗体と競合する抗体（Ｆ１１０６−１３−３抗体又はＦ１０３１−８−３抗体）との組み合わせによるサンドイッチ免疫測定系が好適である。これらの抗体は、好ましくは、ラット（由来）抗体、マウス（由来）抗体、又はウサギ（由来）抗体のいずれかである。
特に、配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体は、ｓＣＤ１４−ＳＴ特異抗体であり、単独でｓＣＤ１４−ＳＴの検出が可能である。配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体は、ｓＣＤ１４−ＳＴに対し解離定数（Ｋｄ）として１０−９Ｍ未満の親和性を示す。配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体は、ラット（由来）抗体、マウス（由来）抗体、又はウサギ（由来）抗体のいずれかであることが好ましいが、より好ましくはウサギ抗体又はウサギ由来抗体であることが挙げられる。
【００２１】
本発明においては、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定は、経時的に行ってもよい。測定を経時的に行うことにより、ＨＰＳの検出、選択又は決定を、より適切なタイミングで行うことができる。
【００２２】
血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値は定量値、半定量値又は定性値のいずれを用いてもよい。半定量値を用いる場合、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を０、１、２、３あるいは−、＋、＋＋、＋＋＋、といった段階で表示できる。この段階は、定量的なｓＣＤ１４−ＳＴ濃度と相関するので、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度が予め定めた基準値以上であるかどうかは、半定量の段階表示と定量的なｓＣＤ１４−ＳＴ濃度との相関関係に基づき判断すればよい。あるいは、半定量の場合、基準値未満を０又は−（マイナス）といった段階に設定してもよい。定性値を用いる場合、基準値未満である場合を陰性とし、基準値以上である場合を陽性となるよう設定すればよい。
【００２３】
本発明の検出方法は、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程を含む。
【００２４】
本発明において、基準値は、正常人及びＨＰＳ罹患患者の集団を識別するために予め設定される血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を意味する。本発明の検出方法、患者の選択方法、タイミングの決定方法、治療方法で用いる基準値は、同一でもよく、必要な場合は異なる値を用いてもよい。個々の患者群、患者個人、又は測定時の条件によって同一基準値を用いてもよいし異なる基準値を用いてもよい。
基準値は、偽陽性と偽陰性とのバランスがとれるようにスクリーニング効率がよい値に設定してもよいし、ＨＰＳ罹患患者の出現頻度が急激に上昇し始める値に設定してもよいし、病理学的・生理学的に理論づけられた値に設定してもよいし、統計的に定められた値に設定してもよい。
より詳細には、基準値は、例えば、医学的に健康な人の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値の平均値及び標準偏差（ＳＤ）を求め、平均値＋０．５ＳＤ〜＋５ＳＤの範囲内、具体的には、平均値＋ＳＤ、平均値＋２ＳＤ、平均値＋３ＳＤなどに設定してもよいし、前記平均値の５〜９５、１０〜９０、１５〜８５又は２５〜７５パーセンタイル値に設定してもよい。基準値は、前記平均値＋２ＳＤ又は平均値＋３ＳＤに設定することが好ましい。具体的な数値としては、４００ｐｇ／ｍＬ〜６００ｐｇ／ｍＬが挙げられ、５００ｐｇ／ｍＬ〜６００ｐｇ／ｍＬが好ましく、より好ましくは６００ｐｇ／ｍＬであるが、これらに限定されるものではない。
また、検体として、冷凍保存等された保存検体を用いる場合の基準値としては、例えば、４００ｐｇ／ｍＬ〜２０００ｐｇ／ｍＬが挙げられ、５００ｐｇ／ｍＬ〜１５００ｐｇ／ｍＬが好ましく、より好ましくは６００ｐｇ／ｍＬ〜１４００ｐｇ／ｍＬ等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２５】
本発明における検出方法は、測定値が基準値よりも高値である場合に、ＨＰＳが検出されたと判定する工程を含んでいてもよい。あるいは、本発明における検出方法は、測定値が基準値よりも高値であることが、被検者が血球貪食症候群である、又はその疑いがあることを示してよい。
【００２６】
本発明における検出方法において、ＨＰＳが検出されたと判定された患者は、医師による診断の後に、常法に従い、デキサメタゾン、エトポシド及びシクロスポリンの併用療法等による免疫抑制療法、基礎疾患に応じた治療等を行うことができる。
また、本発明における検出方法によって、ＨＰＳが検出されたと判定された患者には、基礎疾患に応じた治療以外で発熱等を抑制するために投与される、不必要な抗生剤、抗真菌剤、抗がん剤等の投与を中止することができる。
【００２７】
本発明における検出方法は、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して測定値を得る工程、及び、前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程の他に、被検者由来の血液検体中のＣ反応性蛋白濃度を測定して測定値を得る工程、前記Ｃ反応性蛋白濃度の測定値を基準値と比較する工程、及び、前記測定値が前記基準値よりも低値であるか否かを判定する工程を含んでいてもよい。
ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度にＣ反応性蛋白濃度を組合せることにより、ＨＰＳへの罹患を簡便且つ感度よく検出することができる。また、これにより、他の疾患からのＨＰＳの識別性を高めることができ、ＨＰＳの検出といった、ＨＰＳ診断の補助方法として、より信頼性を高めることができる。
【００２８】
本発明におけるＣ反応性蛋白（Ｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ、以下、「ＣＲＰ」とも称する。）は、急性炎症あるいは組織崩壊性病変で増加する代表的な炎症マーカーであり、炎症性病巣の存在や病変の程度を鋭敏に反映する。このため感染症、膠原病など炎症性疾患の活動性や重症度、経過観察及び予後判定の指標として用いられるマーカーである。
ＣＲＰ濃度の測定は特に限定されるものではないが、例えば、被検者血清を用いて、ラテックス凝集比濁法等により定量的に測定し、測定値を得ることができる。
【００２９】
本発明におけるＣＲＰの基準値としては、５．０ｍｇ／ｄｌ〜１０．０ｍｇ／ｄｌが好ましく、５．０ｍｇ／ｄｌ〜８．０ｍｇ／ｄｌがより好ましく、５．０ｍｇ／ｄｌ〜６．０ｍｇ／ｄｌが更に好ましい。
なお、健常人におけるＣＲＰ濃度は０．３ｍｇ／ｄｌであり、重症敗血症等の重体な疾患の発症の可能性が危惧される場合のＣＲＰ濃度は１５．０ｍｇ／ｄｌ〜２０．０ｍｇ／ｄｌである。
本発明における検出方法では、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値がｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の基準値よりも高値であり、且つ、ＣＲＰ濃度の測定値がＣＲＰ濃度の基準値よりも低値であれば、血球貪食症候群が検出されたと判定することができる。あるいは、本発明における検出方法では、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値がｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の基準値よりも高値であり、且つ、ＣＲＰ濃度の測定値がＣＲＰ濃度の基準値よりも低値であることが、被検者が血球貪食症候群である、又はその疑いがあることを示すのでもよい。また、この場合には、敗血症、呼吸器感染症、炎症性腸炎疾患及び発熱性好中球減少症ではなく、血球貪食症候群が検出されたと判定することもできる。
【００３０】
本発明における検出方法は、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して測定値を得る工程、及び、前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程の他に、被検者由来の血液検体中のフェリチン濃度を測定して測定値を得る工程、前記フェリチン濃度の測定値を基準値と比較する工程、及び、前記測定値が前記基準値よりも高値であるか否かを判定する工程を含んでいてもよい。
ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度にフェリチン濃度を組合せることにより、ＨＰＳへの罹患を簡便且つ感度よく検出することができる。また、これにより、他の疾患からのＨＰＳの識別性を高めることができ、ＨＰＳの検出といった、ＨＰＳ診断の補助方法として、より信頼性を高めることができる。
また、例えば被検者由来の血液検体中のＣＲＰ濃度が高い場合であっても、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度にフェリチン濃度を組合せることにより、ＨＰＳへの罹患を補足することができる。
【００３１】
本発明におけるフェリチン（ｆｅｒｒｉｔｉｎ）は、アポフェリチンの中に鉄を貯蔵する分子量約４４万の可溶性蛋白である。また、フェリチンは、慢性炎症性疾患などにみられる網内系への鉄貯留や、肝炎などの細胞破壊による血中への逸脱などにより上昇するマーカーである。また、フェリチンは、ヘモクロマトーシス、ヘモジデローシス、炎症性疾患、悪性腫瘍、肝炎、心筋梗塞及び糖尿病等で高値を示すことが知られている。
【００３２】
フェリチン濃度の測定は特に限定されるものではないが、例えば、被検者血清を用いて、蛍光酵素免疫測定法（ＦＥＩＡ法）等により定量的に測定し、測定値を得ることができる。
【００３３】
本発明において、例えば血清フェリチン濃度の基準値としては、１０００ｎｇ／ｍｌが好ましい。
なお、健常人における血清フェリチン濃度は男性で１８．６ｎｇ／ｍｌ〜２６１ｎｇ／ｍｌであり、女性で４．０ｎｇ／ｍｌ〜６４．２ｎｇ／ｍｌである。
本発明における検出方法では、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値がｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の基準値よりも高値であり、且つ、フェリチン濃度の測定値がフェリチン濃度の基準値よりも高値であれば、血球貪食症候群が検出されたと判定することができる。あるいは、本発明における検出方法では、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値がｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の基準値よりも高値であり、且つ、フェリチン濃度の測定値がフェリチン濃度の基準値よりも高値であることが、被検者が血球貪食症候群である、又はその疑いがあることを示すのでもよい。
【００３４】
本発明における検出方法は、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して測定値を得る工程、及び、前記ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値を基準値と比較する工程の他に、被検者由来の血液検体中の乳酸脱水素酵素濃度を測定して測定値を得る工程、前記乳酸脱水素酵素濃度の測定値を基準値と比較する工程、及び、前記測定値が前記基準値よりも高値であるか否かを判定する工程を含んでいてもよい。
ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度に乳酸脱水素酵素濃度を組合せることにより、ＨＰＳへの罹患を簡便且つ感度よく検出することができる。また、これにより、他の疾患からのＨＰＳの識別性を高めることができ、ＨＰＳの検出といった、ＨＰＳ診断の補助方法として、より信頼性を高めることができる。
また、例えば被検者由来の血液検体中のＣＲＰ濃度が高い場合であっても、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度に乳酸脱水素酵素濃度を組合せることにより、ＨＰＳへの罹患を補足することができる。
【００３５】
本発明における乳酸脱水素酵素（ｌａｃｔａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ、以下「ＬＤＨ」とも称する。）は、可溶性分画に属する酵素でほとんどの組織や臓器に広く分布する酵素であり、ＬＤＨが含まれている臓器が損傷を受けると、その組織からＬＤＨが逸脱し血清中濃度が上昇するマーカーである。溶血性貧血、悪性貧血、心筋梗塞、白血病、悪性腫瘍、急性肝炎、感染症等で高値を示すことが知られている。
【００３６】
乳酸脱水素酵素濃度の測定は特に限定されるものではないが、例えば、被検者血清を用いて、日本臨床化学会（ＪＳＣＣ）酵素専門委員会が定める方法に準じた測定法（酵素法）等により定量的に測定し、測定値を得ることができる。
【００３７】
本発明において、例えば、血清ＬＤＨ濃度の基準値としては、２５０ＩＵ／Ｌが好ましい。
なお、健常人における血清ＬＤＨ濃度は１２０ＩＵ／Ｌ〜２４０ＩＵ／Ｌである。
本発明における検出方法では、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値がｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の基準値よりも高値であり、且つ、ＬＤＨ濃度の測定値がＬＤＨ濃度の基準値よりも高値であれば、血球貪食症候群が検出されたと判定することができる。あるいは、本発明における検出方法では、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定値がｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の基準値よりも高値であり、且つ、ＬＤＨ濃度の測定値がＬＤＨ濃度の基準値よりも高値であることが、被検者が血球貪食症候群である、又はその疑いがあることを示すのでもよい。
【００３８】
本発明における検出方法においては、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度と、ＣＲＰ濃度、フェリチン濃度及びＬＤＨ濃度からなる群より選ばれる少なくとも１種のマーカーとを組合せることができる。これにより、確度の高い血球貪食症候群の判定が可能になる。
例えば、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度とＣＲＰ濃度との組合せ、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度とフェリチン濃度との組合せ、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度とＬＤＨ濃度との組合せ、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度と、ＣＲＰ濃度と、フェリチン濃度又はＬＤＨ濃度との組合せ、被検者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度とＣＲＰ濃度とフェリチン濃度とＬＤＨ濃度との組合せ等が好ましい。
【００３９】
＜血球貪食症候群の検出キット＞
本発明の血球貪食症候群を検出するための検出キットは、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する手段を含む。
本発明における検出キットによれば、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標とすることで、血球貪食症候群への罹患を簡便に検出することができる。また、簡便に血球貪食症候群を検出することにより、医師はより適切な治療の選択が可能となる。また、本発明の検出方法を用いることで、医師が血球貪食症候群と最終診断する前に血球貪食症候群を補足できる可能性がある。
【００４０】
本発明における検出キットとしては、特に制限されるものではないが、好ましくは、免疫学的測定法キット（Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｋｉｔ）等が挙げられる。本発明における検出キットは、所望により、配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体（Ｓ６８抗体）、配列番号３に記載のアミノ酸配列の１７位〜２６位からなるペプチドに結合する抗体又は該抗体と競合する抗体（Ｆ１１０６−１３−３抗体又はＦ１０３１−８−３抗体）、マルチウェルプレート及び分光光度計からなる群より選択される少なくとも１つを含んでもよい。
【００４１】
本発明における検出キットは、好ましくは、Ｓ６８抗体とＦ１１０６−１３−３抗体又はＦ１０３１−８−３抗体との組合せによるサンドイッチ免疫測定法により、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定することができる。
より好ましくは、本発明における検出キットは、Ｓ６８抗体とＦ１１０６−１３−３抗体との組合せによるサンドイッチ免疫測定法により、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定することができる。
本発明における検出キットには、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定する手段として、例えば、Ｓ６８抗体、Ｆ１１０６−１３−３抗体等のｓＣＤ１４−ＳＴの検出に使用しうる抗体の他に、サンドイッチ免疫測定法に必要な試薬又は器具（免疫学的測定法キット）、及び血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定するために必要な試薬又は器具等を含むものであるが、これらに限定されることなく、この他に検出キットは、標準物質、必要な試薬、試料、器具、備品等も含むことができる。
ｓＣＤ１４−ＳＴの検出に使用しうる抗体としては、例えば上述したＳ６８抗体、Ｆ１１０６−１３−３抗体又はＦ１０３１−８−３抗体と同程度のｓＣＤ１４−ＳＴへの結合活性を有する抗体が挙げられる。ここで結合活性を評価する方法は特に制限されるものではなく、公知の方法を用いることができる。
【００４２】
＜血球貪食症候群患者の治療方法＞
本発明の血球貪食症候群患者の治療方法は、血球貪食症候群患者に血球貪食症候群治療剤を投与することを含み、前記血球貪食症候群患者が、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して検出される患者である治療方法である。本発明の治療方法は、以上の工程を含むものであるが、更にその他の工程を含んでいてもよい。
本発明の治療方法によれば、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標とすることにより、ＨＰＳへ罹患した患者を簡便に検出することができるため、医師は比較的早い段階で血球貪食症候群治療剤を投与することが可能になる。
なお、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して血球貪食症候群患者を検出する方法については、前述した事項をそのまま適用することができる。
【００４３】
血球貪食症候群治療剤としては、血球貪食症候群を治療し得る薬剤であれば特に制限されるものではない。例えば、免疫抑制剤、基礎疾患の治療剤等が挙げられる。免疫抑制剤としては、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、シクロスポリン、ガンマグロブリン製剤等が挙げられる。基礎疾患の治療剤としては、抗癌剤、抗ウイルス剤等が挙げられる。
【００４４】
＜血球貪食症候群患者の治療剤の製造＞
本発明は、血球貪食症候群患者の治療剤の製造における、血球貪食症候群治療剤を有効成分として含有する組成物の使用であって、前記血球貪食症候群患者が、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して検出される患者である、組成物の使用を提供する。
本発明の治療剤の製造において、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標として患者を検出することにより、ＨＰＳへ罹患した患者を簡便に検出することができるため、医師は比較的早い段階で血球貪食症候群治療剤を投与することが可能になる。
なお、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して血球貪食症候群患者を検出する方法については、前述した事項をそのまま適用することができる。
また、血球貪食症候群治療剤についても、前述した事項をそのまま適用することができる。
【００４５】
＜血球貪食症候群患者検出用キットの製造＞
本発明の血球貪食症候群患者検出用キットの製造における、抗ｓＣＤ１４−ＳＴ抗体の使用であって、前記血球貪食症候群患者が、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して検出される患者である、抗ｓＣＤ１４−ＳＴ抗体の使用を提供する。
本発明の血球貪食症候群患者検出用キットの製造において、血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標として患者を検出することにより、ＨＰＳへ罹患した患者を簡便に検出することができるため、医師は比較的早い段階で血球貪食症候群治療剤を投与することが可能になる。
なお、患者由来の血液検体中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定して血球貪食症候群患者を検出する方法については、前述した事項をそのまま適用することができる。
本発明における血球貪食症候群患者検出用キットにおいては、その測定原理は特に限定されるものではないが、免疫学的測定法キットを用いることが好ましい。
本発明における血球貪食症候群患者検出用キットにおいては、抗ｓＣＤ１４−ＳＴ抗体は特に限定されるものではないが、配列番号２に記載の１６アミノ酸残基からなるペプチドを抗原として作製した抗体を用いることが好ましい。
【００４６】
以下の実施例により本発明を更に詳述するが、本発明はこれら実施例に限定して理解されるべきものではない。
【実施例】
【００４７】
（実施例１）検体の採取
急性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群、急性リンパ性白血病、悪性リンパ腫又は成人Ｔ細胞白血病の治療のために同種造血幹細胞移植を受けた入院患者において、文書による同意を得られた患者５８名より、同種造血幹細胞移植から約４週後に末梢血液を採取した。採取された末梢血液を４℃にて遠心分離（３０００ｒｐｍ、５分）することにより血清を分離した。なお、これら５８名の患者は菌血症及び敗血症ではないことが確認されている。
【００４８】
（実施例２）ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の測定
国際公開第２００４／０４４００５号に記載のＦ１１０６−１３−３抗体及びＳ６８抗体を用いた、サンドイッチＥＬＩＳＡ系を用いて血清中のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を測定した。なお、ｓＣＤ１４−ＳＴ蛋白質標準品としては、国際公開第２００５／１０８４２９号に記載のｒｓＣＤ１４―ＳＴを用いた。
【００４９】
（実施例３）血球貪食症候群罹患患者及び非罹患患者におけるｓＣＤ１４−ＳＴ濃度
実施例１に記載の患者５８名のうち、病理所見又は臨床所見により血球貪食症候群を発症したと判断した６名の患者と、血球貪食症候群を発症していないと判断した５２名の患者との血清ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度とを比較した。
その結果を図１に示す。血球貪食症候群を発症した患者の血清ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の平均値は８７４３．２ｐｇ／ｍｌであり、血球貪食症候群を発症していない患者の血清ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の平均値は１３７５．６ｐｇ／ｍｌであり、血球貪食症候群を発症した患者の血清ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度は、血球貪食症候群を発症していない患者の血清ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度に比べて、有意に高かった。
図１は、血球貪食症候群罹患患者６名と非罹患患者５２名との血清ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を、平均値及び標準誤差で示す。図１中、縦軸は血清ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示し、「＊」はマン・ホイットニーのＵ検定にてｐ＜０．０５を示す。
この結果より、ｓＣＤ１４−ＳＴは、血球貪食症候群に罹患しているか否かの検出マーカーとして有用であることが示唆された。
【００５０】
（実施例４）血清ＣＲＰ濃度の測定
実施例３において、血球貪食症候群を発症したと判断した６名の患者について、血清ＣＲＰ濃度を測定した。
血清中のＣＲＰの濃度は、自動分析装置ＬＡＢＯＳＰＥＣＴ００８（日立ハイテクノロジ−ズ株式会社）を用いて、ラテックス凝集比濁法により測定した。
６名の患者の血清ＣＲＰ濃度の平均値は４．９ｍｇ／ｄＬであった。ＣＲＰは、急性期炎症マーカーとして広く知られており、敗血症、細菌感染症、発熱性好中球減少症に罹患した場合には、上昇するパラメーターであることが知られている。例えば敗血症の場合には、血清ＣＲＰ濃度は約１５ｍｇ／ｄＬ〜約２０ｍｇ／ｄＬ程度となる。
そのため、血清ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度が高値を示し、且つ、血清ＣＲＰ濃度が１５ｍｇ／ｄＬより低い場合には、敗血症、細菌感染症、発熱性好中球減少症に患者が罹患している可能性を排除することができ、且つ、患者は血球貪食症候群に罹患したものと判定し得ることが示唆された。
【００５１】
（実施例５）血清フェリチン濃度の測定
実施例３において、血球貪食症候群を発症したと判断した６名の患者について、血清フェリチン濃度を測定した。
血清中フェリチンの濃度は、全自動エンザイムイムノアッセイ装置  ＡＩＡ２０００（東ソー株式会社）を用いて、蛍光酵素免疫測定法（ＦＥＩＡ法）により測定した。
６名の患者の血清フェリチン濃度の平均値は１２２７９．２ｎｇ／ｍｌであった。一方、健常人の血清フェリチン濃度は約４ｎｇ／ｍｌ〜約２６１ｎｇ／ｍｌである。
この結果より、血清ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度が高値を示し、血清フェリチン濃度が１０００ｎｇ／ｍｌより高い場合には、患者が血球貪食症候群を発症したと判定し得ることが示唆された。
【００５２】
（実施例６）血清ＬＤＨ濃度の測定
実施例３において、血球貪食症候群を発症したと判断した６名の患者について、血清ＬＤＨ濃度を測定した。
血清中ＬＤＨの濃度は、自動分析装置ＬＡＢＯＳＰＥＣＴ００８（日立ハイテクノロジ−ズ株式会社）を用いて、ＪＳＣＣ標準化対応法（酵素法）により測定した。
６名の患者の血清ＬＤＨ濃度の平均値は４３６ＩＵ／Ｌであった。一方、健常人の血清ＬＤＨ濃度は約１２０ＩＵ／Ｌ〜約２４０ＩＵ／Ｌである。
この結果より、血清ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度が高値を示し、血清ＬＤＨ濃度が２５０ＩＵ／Ｌより高い場合には、患者が血球貪食症候群を発症したと判定し得ることが示唆された。
【００５３】
（実施例７）白血球数の測定
実施例３において、血球貪食症候群を発症したと判断した６名の患者について、白血球数を測定して、白血球数がｓＣＤ１４−ＳＴ産生に与える影響を確認した。白血球数は、血球計算器を用いて測定した。６名のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の平均値は、８７４３．２ｐｇ／ｍＬであり、白血球数の平均値は１０５０／μＬであった。
６名中３名は、白血球数が０（検出感度未満）であったが、これら３名のｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の平均値は、６１６２．９ｐｇ／ｍｌであり、６名全体の平均値と同様にｓＣＤ１４−ＳＴ濃度は高値を示した。
この結果より、白血球数が０又は減少している患者においても、ｓＣＤ１４−ＳＴ濃度を指標に血球貪食症候群への罹患を検出することが可能であることが示唆された。また、血球貪食症候群におけるｓＣＤ１４−ＳＴ濃度の上昇は、血中に存在する白血球による菌体貪食とは異なる場合におけるｓＣＤ１４−ＳＴ産生であることが示唆された。
【図１】
0006445840.tif 000002
【配列表】
0006445840000001.app