(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
遠紫外光を含む光を発する光源、前記光源から発せられた光を分光する回折格子、液体が通過するフローセル、前記回折格子で回折された＋１次光の所定の波長を選択して前記フローセルに入射するスリット、前記フローセルを透過した光を検出する第一の光検出器、及び前記回折格子で回折された＋１次光以外の光を検出する第二の光検出器を備える光学系と、
前記光学系を真空排気あるいは窒素ガスで置換する機構と、
前記第一の光検出器の出力信号と前記第二の光検出器の出力信号から吸光度を算出する演算部とを有し、
前記第二の光検出器は固定配置されており、
前記演算部は、測定時の波長変更と同期してベースライン補正を行う、液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置。
【請求項２】
前記回折格子からの光はスリットやビームスプリッタを通過することなく直接前記第二の光検出器に入射する、請求項１記載の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置。
【請求項３】
前記第二の光検出器は前記回折格子の−１次光側に固定配置され、前記第二の光検出器で検出される光の波長幅が前記第一の光検出器で検出される光の波長幅より大きい、請求項１に記載の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置。
【請求項４】
前記第二の光検出器で検出される光の波長幅が４ｎｍ以上５０ｎｍ以下である、請求項１に記載の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置。
【請求項５】
前記光源は前記光学系が窒素ガスで置換された後に点灯される、請求項１に記載の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置。
【請求項６】
前記フローセルを通過する液体が水又はアセトニトリル、あるいはその混合物である、請求項１に記載の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置。
【請求項７】
前記液体に含まれる塩が過塩素酸ナトリウム又はフッ化ナトリウムである、請求項６に記載の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は液体分析装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
液体クロマトグラフ装置では、紫外（ＵＶ）／紫外・可視（ＵＶ・ＶＩＳ）吸光度検出器が最も汎用的に使用されている。特に紫外波長帯（２００〜３８０ｎｍ）には有機化合物中の様々な官能基の吸収波長帯が存在する事から、様々な分野で使用されている。吸光度検出器の利点は、測定波長を物質の極大吸収波長に合わせて感度向上ができること、妨害成分の光吸収が少ない測定波長を用いて妨害物の影響を抑制して試料の測定ができることなどが挙げられる。しかし、ＵＶ検出器では、紫外波長帯に吸収を持たない化合物、例えば、糖、アルコールなどは検出できない。
【０００３】
遠紫外領域の分光法の研究は古くから行われており、紫外領域（２００ｎｍ以上）にほとんど吸収を持たない物質も遠紫外領域には必ず吸収帯を持つことが知られている。しかし、気相状態の物質の研究がほとんどで液体状態の研究はあまり行われていなかった。その理由は、遠紫外領域のスペクトルを測定する場合、空気中の酸素による吸収が強いために分光装置内部を真空にする必要があり、装置が煩雑で高価であることであった。さらに、使用する溶媒の吸収スペクトルが非常に強いため、光がほとんど透過せず、測定が困難であったためである。ここで、一般的に、遠紫外光とは波長１０ｎｍ以上２００ｎｍ以下の光で、紫外光（近紫外光とも呼ばれる）とは波長２００ｎｍから３８０ｎｍの光と定義されている。
【０００４】
近年、分光装置内部の空気を窒素ガス等の不活性ガスで置換することで遠紫外分光測定を簡便に行えるようになり、光路長を０．５ｍｍと短くした透過型セルを使用して１８０ｎｍまでの溶液中の物質の吸収スペクトル測定が可能になった（非特許文献１）。さらに、実効光路長を数十ｎｍと極めて短くした全反射減衰（Attenuated Total Reflection：ＡＴＲ）型の分光装置により１２０ｎｍまでの液体の吸収スペクトルの測定が可能になった（非特許文献２）。
【０００５】
また、遠紫外領域での固体試料の反射率及び透過率スペクトルを測定可能な装置として、試料への入射光の強度低下を防止し、さらに反射率の測定時に試料の傾斜を不要として試料移動機構を小型化して真空排気時間の短縮と共に測定時間を短縮した真空紫外分光装置が知られている（特許文献１）。
【０００６】
図１０は、従来の真空紫外分光装置の概略図である。光源９０１から出た光は、スリット９０２を通って回折格子９０４に入射する。所定の波長の光がスリット９０５を通り、さらに試料９０９を透過した光の強度を第一の光検出器９０７で検出する。この分光装置は、酸素や水蒸気による光吸収の影響を排除するため、真空排気機構９１５を備えている。一般的な分光器では試料の直前にビームスプリッタ等を設置して光路を分岐させ、一方を参照光、もう一方を試料へ入射させる光として吸光度を検出する。しかし、特許文献１では、駆動装置９１０を用いて回折格子９０４の回転に第二の光検出器９０８を連動させ、＋１次光以外の同一波長の光を参照光として第二の光検出器９０８で検出している。
【０００７】
しかし、これらの装置はいずれも吸収スペクトルの取得を主な目的としており、検出感度や、装置の大きさやコストの問題などで液体クロマトグラフ装置の検出器として適用されていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００４−１２３７０号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Analytical Chemistry, 2005, Vol.77, pp.2272-2277.
【非特許文献２】REVIEW OF SCIENTIFIC INSTRUMENTS, Vol.78, 103107.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
図１１は、従来の液体クロマトグラフ用吸光度検出装置の説明図である。従来の液体クロマトグラフ用吸光度検出装置では、紫外光又は可視光を発する光源１００１から出た光がミラー１００２で反射され、入射スリット１００３を通って、回折格子１００４に入射する。回折格子１００４で分光された光のうち、特定の波長の光が出射スリット１００５を通り、ミラー１００９で反射されて、ビームスプリッタ１０３０によって２つの光路に分岐される。一方の光は、フローセル１００６に入射され、フローセル１００６を透過した光は検出光として第一の光検出器１００７で検出される。もう一方の光は、参照光として第二の光検出器１００８で検出される。検出光と参照光の光強度は演算部１０２０に伝達され、演算部１０２０により吸光度が求められ、制御部１０２１に出力される。オートサンプラ１０１４から導入された試料はポンプ１０１１で送液される溶離液１０１０中に注入され、分離カラム１０１２で分離され、フローセル１００６内に順次導入され、廃液容器１０１３に送られる。分離カラム１０１２で分離された各成分について特定波長における吸光度の時間変化を計測することで各成分の濃度を求めることができる。
【００１１】
遠紫外領域では、大気中の酸素や水蒸気に加え、液体クロマトグラフで使用する溶離液（例えば、水、メタノールなど）にも非常に強い吸収があるため、検出に利用する光量が低下して吸光度の検出が困難となる。例えば、水の場合、図１２に示す吸光度スペクトルが知られており、波長が２００ｎｍから１８０ｎｍに変化すると吸光度が４倍以上増加する。一般的に、分光光度計では光量が低下することによりノイズが増加する。ここで、ノイズとは測定対象の試料が無いときの吸光度のゆらぎである。図１３は、吸光度検出器の光量とノイズの関係を示す図である。吸光度検出器では、ノイズ値は光量に反比例する関係にあり、遠紫外領域での光量を確保できなければ高感度化は難しい。
【００１２】
従来のＡＴＲ方式の分光光度計では、光路長が数十ｎｍと極めて短く、水などの液体の吸光度を低く抑えることができ、十分な光量を確保することができるが、光路長が極めて短いため感度が大きく低下する。感度が低くても単体物質の吸収スペクトル測定は可能であるが、高い感度を必要とする液体クロマトグラフには適用できない。分離カラムで分離された成分は溶離液中に微量にしか存在しないため、通常の液体クロマトグラフ用吸光度検出装置のフローセルの光路長は１０ｍｍである。
【００１３】
一方、従来の真空分光装置（図１０）では、ビームスプリッタを用いない光学系を採用して遠紫外領域での光量を確保している。その際、吸光度のスペクトルを取得するために、回折格子９０４の回転に連動した第２の光検出器９０８を用いて、測定波長と同一波長でかつ＋１次光以外の光を参照光として検出する構成になっている。従来の真空分光装置を液体クロマトグラフ用検出器に応用した場合に、参照光を測定する第２の光検出器９０８を回折格子９０４に連動させる必要があり、第２の光検出器９０８を連動させる駆動装置９１０の分だけ装置が複雑になりコストが増大する問題がある。さらに、駆動装置９１０の設置により装置の体積が増加するため、真空排気又は窒素ガス等の不活性ガスによるパージ効率の低下や時間増大を招く問題がある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明による液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置は、遠紫外光を含む光を発する光源、光源から発せられた光を分光する回折格子、液体が通過するフローセル、回折格子で回折された＋１次光の所定の波長を選択してフローセルに入射するスリット、フローセルを透過した光を検出する第一の光検出器、及び回折格子で回折された＋１次光以外の光を検出する第二の光検出器を備える光学系と、光学系を真空排気あるいは窒素ガスで置換する機構と、第一の光検出器の出力信号と第二の光検出器の出力信号から吸光度を算出する演算部とを有し、第二の光検出器は固定配置されている構成を有する。
【００１５】
一例として、第二の光検出器を回折格子の−１次光側に固定配置し、第二の光検出器で検出される光の波長幅を第一の光検出器で検出される光の波長幅より大きく設定することができる。
【００１６】
演算部は、測定時の波長変更と同期してベースライン補正を行うのが好ましい。
一例として、第二の光検出器で検出される光の波長幅を４ｎｍ以上５０ｎｍ以下とすることができる。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によると、検出光の光量低下を防ぎ十分な光量で吸光度測定が可能になる。さらに、参照光用光検出器を回折格子と連動して駆動する駆動装置が不要となることや、光学系の部品点数が減るため、真空排気又は窒素ガス等の不活性ガスによるパージの効率向上や時間短縮ができる。
【００１８】
上記した以外の、課題、構成及び効果は、以下の実施形態の説明により明らかにされる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】本発明の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置の一実施例を示す模式図。
【図２】測定波長変更に伴うベースライン変動の説明図。
【図３】測定波長変更時のベースライン補正の手順を示すフローチャート。
【図４】演算部の一部を示す模式図。
【図５】ソフトウェアによるベースライン補正処理の手順を示すフローチャート。
【図６】糖分析の例を示す図。
【図７】糖の吸収スペクトルを測定した例を示す図。
【図８】ペプチド分析の例を示す図。
【図９】TyrとPheの吸光スペクトルを示す図。
【図１０】従来の真空紫外分光装置の概略図。
【図１１】従来の液体クロマトグラフ用吸光度検出装置の説明図。
【図１２】水の吸光スペクトルを示す図。
【図１３】吸光度検出器の光量とノイズの関係を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
以下、図面を参照して本発明の実施の形態を説明する。
【００２１】
［実施例］
本実施例では、参照光を測定する光検出器を回折格子の−１次光側に固定配置し、吸光度を測定する例を説明する。
【００２２】
図１は、本発明の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置の一実施例を示す模式図である。本実施例の液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置は、重水素ランプ１０１、第一のミラー１０２、入射スリット１０３、分光素子としての凹面回折格子１０４、出射スリット１０５、第二ミラー１０９、フローセル１０６、検出光用光検出器１０７、参照光用光検出器１０８、密閉容器１１５を有し、溶離液１１０の入った容器、オートサンプラ１１４、ポンプ１１１、分離カラム１１２、及び廃液容器１１３に接続されている。
【００２３】
重水素ランプ１０１から発せられた光は、第一のミラー１０２で反射され、入射スリット１０３の開口部に集光され、凹面回折格子１０４へ入射する。凹面回折格子１０４で分光された＋１次光の特定の波長の光が出射スリット１０５を通り、第二ミラー１０９で反射された光がフローセル１０６に導かれる。フローセル１０６を透過した光は、検出光用光検出器１０７で検出される。このとき、入射スリット１０３、出射スリット１０５は凹面回折格子１０４のローランド円周上に設置される。一方、凹面回折格子１０４で分光された−１次光は、装置に固定配置された参照光用光検出器１０８で検出される。
【００２４】
オートサンプラ１１４から導入された試料は、ポンプ１１１で送液される溶離液１１０中に注入され、分離カラム１１２で分離され、フローセル１０６内に順次導入され、廃液容器１１３に送られる。分離カラム１１２により分離された試料液体の種類や濃度の変化に応じてフローセル１０６を透過する光量が変化する。検出光用光検出器１０７で検出された光量と、参照光用光検出器１０８で検出された光量は演算部１２０で処理され、吸光度として制御部１２１に出力される。
【００２５】
遠紫外光は、酸素及び水蒸気によって吸収されるため、光路中の光量低下を防ぐ目的で、密閉容器１１５で光学系全体を密閉し、密閉容器１１５内を窒素ガスで置換又は真空排気する。例えば、窒素パージを実施することで、波長１８５ｎｍの検出光の光量はおよそ２倍増加する。真空排気及び窒素パージは、重水素ランプ１０１の点灯前に実施されることが望ましい。これは酸素を含む雰囲気中で短波長の遠紫外光が発せされると、合成石英のような窓材は白く曇ってしまうことがあるため、光量低下の原因となるからである。
【００２６】
本実施例では、重水素ランプ１０１を光源として用いたが、遠紫外光と紫外光を含む広範囲の波長の光を発する光源が好ましく、例えば水銀ランプ、エキシマランプなどでもよい。本発明では、液体クロマトグラフ用吸光検出器で使用可能な遠紫外光を、水の吸収（ピーク波長１５０ｎｍ付近）の影響を受けにくい、波長１７０ｎｍ以上２００ｎｍ以下の光と定義する。
【００２７】
ミラー１０２，１０９は、遠紫外光及び紫外光で反射損失の少ない材質でコートすることが望ましく、コート材としては例えばアルミやＭｇＦ2などが好適である。２つの光検出器１０７，１０８は、リニアリティレンジが広いフォトダイオードが液体クロマトグラフ用途として好ましいが、光電子増倍管やフォトダイオードアレイなどを使用しても良い。重水素ランプ１０１、フローセル１０６、光検出器１０７，１０８に使用される窓材としては、遠紫外光及び紫外光で高い透過率を持つことが望ましく、例えば合成石英、ＭｇＦ2、ＣａＦ2などが好適である。
【００２８】
通常の真空紫外分光光度計のように、所定の波長での試料の吸光度を求める際には、参照光を検出光と同一の波長とする必要がある。一方、液体クロマトグラフでは所定の波長の吸光度の時間変化を測定し、試料の種類や濃度を測定する。また、波長範囲が狭い範囲（例えば、５０ｎｍ以下）では光源のゆらぎの波長依存性は小さいため、参照光を検出光と同一波長としなくとも、同一波長とした場合に比べてノイズが増加することはない。したがって、検出光と異なる波長の光を参照光として用いてもよい。そこで、本実施例では参照光用光検出器１０８を凹面回折格子１０４によって分光された−１次光を測定できる位置に固定して配置する。
【００２９】
本実施例の光学系を採用することにより、従来の分光光度計のビームスプリッタ１０３０を使用した場合（図１１）に比べて検出光の光量が増加する。例えば、ビームスプリッタ１０３０としてハーフミラーを使用していた場合と比べると、本実施例の光学系では検出光の光量は２倍となる。また、参照光の波長は１つの波長に限定する必要はなく、複数の波長を含む所定の波長帯域の光を利用してもよい。すなわち、参照光用光検出器１０８で検出される光の波長幅を検出光用光検出器１０７で検出される光の波長幅より大きく設定しても良い。例えば、遠紫外領域（１７０ｎｍ〜２００ｎｍ）の一部あるいは全部を含む波長幅４ｎｍ以上５０ｎｍ以下の波長帯の光を参照光として利用すると、測定波長変更時でも参照光の光量が大きく変化し難くなるため、吸光度測定が安定するという利点がある。参照光の波長幅が検出光の波長幅と同程度（検出光の波長幅は４ｎｍ以下）の場合には、参照光として利用する光は凹面回折格子１０４の＋１次光以外かつ検出波長と異なる波長の光であるが、参照光の波長幅が４ｎｍ以上の場合には＋１次光以外の光で検出光と同一波長の光が含まれていても構わない。また、参照光に用いる光は凹面回折格子１０４の−１次光に限らず、±２次以上の光や０次光でもよい。さらに、参照光用光検出器１０８を配置する位置はローランド円上である必要もない。
【００３０】
図２は、測定波長変更に伴うベースライン変動の説明図である。参照光用光検出器１０８は固定されて配置されているため、使用者が測定波長を変更すると凹面回折格子１０４が回転し、参照光の波長も変更されてしまう。したがって、測定途中に波長を変更した場合は、図２に略示するようにベースラインが変動してしまい、定量的な吸光度測定ができない。そこで本実施例では、測定中の波長設定と同期して吸光度のベースラインを補正する。
【００３１】
図３は、測定波長変更時のベースライン補正の手順を示すフローチャートである。
測定開始前に、測定波長及び測定時間を設定する。測定途中で波長を変更する場合には、変更する時刻と変更後の波長を予め設定しておく（Ｓ１１）。測定波長を変更する時刻は、試料が溶出しておらず、溶離液のみが溶出している時刻とする。次に、吸光度測定を開始し、試料が注入された時刻を０秒とし、測定開始時（０秒）に吸光度が０となるようにオフセットを設定する（Ｓ１２）。一定時間が経過し、Ｓ１１で設定した波長変更時刻となったら、波長変更に同期してベースラインを補正し、吸光度が０となるようにオフセットを再度設定する（Ｓ１３）。複数回波長を変更する時にはＳ１３を繰り返す。設定した測定時間が経過したら測定を終了する（Ｓ１４）。
【００３２】
ここで、「波長変更に同期」とは、波長を変更した時刻と同一時刻あるいは変更した時刻からある一定の時間（以降、補正時間とする）以内を指す。この補正時間は、吸光度が安定するまでの時間であり、測定のサンプリング間隔又は積算時間から決定される。サンプリング間隔の１０倍以内又は積算時間の３倍以内とすることで、補正される吸光度の値が安定する。通常１〜２秒以内とすることが望ましい。ベースライン補正は、この補正時間内のある所定の時刻での吸光度又は一定時間内での吸光度の平均値を記録し、その吸光度が０となるようにオフセットを設定することで行われる。
【００３３】
図４は、演算部１２０の一部を示す模式図である。検出光用光検出器１０７と参照光用光検出器１０８で検出される光量に応じた信号は、それぞれ信号処理回路４０３，４０４で電圧に変換及び増幅され、吸光度演算回路４０５で吸光度の信号に変換される。波長変更と同期して検出された吸光度に応じて、補正用可変電圧源４０６の電圧値が設定され、吸光度を打ち消す電圧値が出力され、ベースラインが補正される。また、ベースラインの補正は、制御部１２１においてソフト的にベースライン補正をしても良い。
【００３４】
図５は、ソフトウェアによるベースライン補正処理の手順を示すフローチャートである。波長変更の設定に同期して、演算部１２０から出力された吸光度信号をオフセットとして記録しておき（Ｓ２１）、その後に得られた吸光度信号から記録したオフセット信号を引くことでベースラインが補正される（Ｓ２２）。波長が複数回変更される場合には、波長変更のたびに、ベースラインが補正される。
【００３５】
［測定例１］
実施例に示した液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置を用いて糖分析した例を示す。この測定では、参照光用光検出器を、−１次光側のローランド円上から５ｍｍ外側に離れた位置に固定配置した。検出光の波長が１８５ｎｍのとき、参照光は波長帯１７０〜２００ｎｍの光が参照光用光検出器に入射される位置とした。使用した分析条件を以下に示す。
【００３６】
サンプル；各濃度５ｍｇ／ｍＬのフルクトース、グルコース混合水溶液
注入量；６μＬ
分析カラム；SHODEX製カラム（Asahipak NH2P-50 4E、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）
移動相；水２５％、アセトニトリル７５％の混合溶液
流速；１．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長；１８５ｎｍ
【００３７】
図６は、本装置を用いて測定した糖分析の例を示す図である。光路長１０ｍｍのフローセルを使用した。図６に破線で示すように、破線紫外光である波長２５０ｎｍでは糖の検出が困難である。一方、図６に実線で示すように、遠紫外光である１８５ｎｍの波長を使用することで、ソルベントピーク６０３に続きフルクトース６０１、グルコース６０２の吸光度ピークが分離・検出できた。移動相には、遠紫外領域の波長１７０〜２００ｎｍに吸収がほとんどない水又はアセトニトリル、あるいはその混合物を用いるのが好ましい。
【００３８】
図７は、同様の測定条件で光路長０．５ｍｍのフローセルを用いて糖の吸収スペクトルを測定した例を示す図である。図７のスペクトルは、紫外光では感度が低いため測定が難しく、遠紫外光を用いることで糖の測定が可能になったことを示している。
【００３９】
実施例に示した装置構成により参照光として検出光と異なる波長の光を用いることで、検出光である＋１次光の光量は従来のビームスプリッタを利用した光学系ではほとんど光量がなかったが、光量が５倍以上増加し、１７５ｎｍまでのスペクトルの測定が可能となった。その際、参照光として検出光より広い波長帯の光（検出波長１８５ｎｍに対して参照光は波長帯１７０〜２００ｎｍ）を用いているため、測定波長変更時でも参照光の光量が大きく変化しない利点がある。さらに、光源の揺らぎの波長依存性は今回のように波長範囲が狭い場合（波長幅３０ｎｍ）には、ほとんど無視できるほど小さく、本方式により光源の揺らぎに由来するノイズを低減することができた。
【００４０】
［測定例２］
次に、実施例に示した液体クロマトグラフ用遠紫外吸光度検出装置を用いてペプチドを分析した例を示す。使用した分析条件を以下に示す。
【００４１】
サンプル；各濃度０．０１ｍｇ／ｍＬのGly-Tyr、Val-Tyr-Val、Phe-Asp-Phe-Ser-Phe
注入量；１０μＬ
分析カラム；Vydac製カラム（218TP54、４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）
移動相；水９０％、アセトニトリル１０％の混合溶液から水６０％、アセトニトリル４０％の混合溶液へ３０分かけて線形に組成を変化させたグラジエント分析。５ｍＭの過塩素酸ナトリウム塩を添加。
流速；１．０ｍＬ／ｍｉｎ
【００４２】
図８は、本装置を用いて測定したペプチド分析の例を示す図である。図９は、TyrとPheの吸光スペクトルを示す図である。この測定では、測定開始時（０分）の波長を１９２ｎｍとし、１１．５分経過後に測定波長を１８７ｎｍに設定した。これは、図９に示すように、Tyrの遠紫外領域の吸収ピーク波長が１９２ｎｍにある一方で、Pheの遠紫外領域の吸収ピーク波長が１８７ｎｍとなっているためである。波長を１９２ｎｍから１８７ｎｍに変更することで、Pheを含むペプチドの検出は、約１．５倍の高感度化が可能となる。
【００４３】
参照光用光検出器は、測定例１と同様に−１次光側のローランド円上から５ｍｍ外側に離れた位置に固定配置されている。検出光の波長が１９２ｎｍのとき参照光は波長帯１７０〜２００ｎｍの光が参照光用光検出器に入射され、検出光の波長が１８７ｎｍのとき参照光は波長帯１７６〜２０６ｎｍの光が参照光用光検出器に入射される。
【００４４】
ペプチドの分離のため、イオンペア試薬として遠紫外領域に吸収がほとんどない過塩素酸ナトリウムを使用した。その他に遠紫外領域に吸収がない塩としてフッ化ナトリウム等が挙げられる。ソルベントピーク８０４に続き、Gly-Tyr８０１、Val-Tyr-Val８０２、Phe-Asp-Phe-Ser-Phe８０３が分離され、それぞれの吸収ピークを遠紫外光で高感度に測定できた。１１．５分で波長を変化させたことによるベースラインの補正は、測定後にソフト的に実施した。このベースライン補正により、さらに定量性を向上させることができる。本測定例のように溶出時間が既知である場合には、各成分の吸収ピーク波長を測定波長に設定することで、より高感度に検出可能である。
【００４５】
実施例に示した装置構成により参照光を検出光と異なる波長の光を用いることで、検出光である＋１次光の光量は従来のビームスプリッタを利用した光学系で得られる光量に比べて２倍に増加し、吸光度ノイズは約２倍低下したことで１０μＡＵとなり、ペプチドの高感度測定が可能となった。その際、参照光として検出光より広い波長帯の光を用いているため、測定波長変更時でも参照光の光量が大きく変化しない利点がある。さらに、光源の揺らぎの波長依存性は今回のように波長範囲が狭い場合（波長幅３０ｎｍ）には、ほとんど無視できるほど小さく、本方式により光源の揺らぎに由来するノイズを低減することができ高感度測定が可能になった。
【００４６】
なお、本発明は上記した実施例に限定されるものではなく、様々な変形例が含まれる。例えば、上記した実施例は本発明を分かりやすく説明するために詳細に説明したものであり、必ずしも説明した全ての構成を備えるものに限定されるものではない。また、ある実施例の構成の一部を他の実施例の構成に置き換えることが可能であり、また、ある実施例の構成に他の実施例の構成を加えることも可能である。また、各実施例の構成の一部について、他の構成の追加・削除・置換をすることが可能である。
【符号の説明】
【００４７】
１０１  重水素ランプ
１０４  凹面回折格子
１０６  フローセル
１０７  検出光用光検出器
１０８  参照光用光検出器
１１０  溶離液
１１１  ポンプ
１１２  分離カラム
１１３  廃液容器
１１４  オートサンプラ
１１５  密閉容器
１２０  演算部
１２１  制御部
９１０  駆動装置
１０３０  ビームスプリッタ
【図１】
0006385299.tif 000002
【図２】
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【図３】
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【図４】
0006385299.tif 000005
【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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