(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種の脂質が有機溶媒に溶解している油相と水相とを含む混合物を、第１のタンクと循環経路とを有する装置の前記第１のタンク内で攪拌する工程を含むリポソームの製造方法であって、
（ｉ）前記第１のタンクが前記混合物で満たされておりかつ前記タンクと前記循環経路の合計容量に対する前記循環経路の容量の比が０．４以下である、及び／又は
（ｉｉ）前記混合物が第１のタンクを排出してから第１のタンクに戻るまでの時間が２．０分以内である、
リポソームの製造方法。
【請求項２】
前記装置が、循環経路の途中に第２のタンクを有している、請求項１に記載のリポソームの製造方法。
【請求項３】
前記第２のタンク内が飽和蒸気化されている、請求項２に記載のリポソームの製造方法。
【請求項４】
前記第１のタンク内の混合物に圧力が負荷される、請求項１から３の何れか一項に記載のリポソームの製造方法。
【請求項５】
ダイヤフラムポンプ又はロータリーポンプを用いて、前記混合物を、第１のタンク及び循環経路において循環させる、請求項１から４の何れか一項に記載のリポソームの製造方法。
【請求項６】
断続ジェット流発生型乳化装置を用いて、前記混合物を前記第１のタンク内で攪拌する、請求項１から５の何れか一項に記載のリポソームの製造方法。
【請求項７】
前記脂質が、ポリエチレングリコール修飾脂質を含む、請求項１から６の何れか一項に記載のリポソームの製造方法。
【請求項８】
製造されるリポソームの平均粒子径が、６０ｎｍ以下である、請求項１から７の何れか一項に記載のリポソームの製造方法。
【請求項９】
第１のタンクの容量が１０Ｌ以上１００Ｌ以下である、請求項１から８の何れか一項に記載のリポソームの製造方法。
【請求項１０】
前記タンクと前記循環経路の合計容量に対する前記循環経路の容量の比が０．４以下であり、及び前記混合物が第１のタンクを排出してから第１のタンクに戻るまでの時間が２．０分以内である、請求項１から９の何れか一項に記載のリポソームの製造方法。
【請求項１１】
第１のタンクと循環経路とを有するリポソーム製造装置であって、前記タンクと前記循環経路の合計容量に対する前記循環経路の容量の比が０．４以下であるリポソーム製造装置。
【請求項１２】
前記循環経路の途中に第２のタンクを有している、請求項１１に記載のリポソーム製造装置。
【請求項１３】
前記循環経路の途中にポンプを有している、請求項１１又は１２に記載のリポソーム製造装置。
【請求項１４】
前記ポンプが、ダイヤフラムポンプ又はロータリーポンプである、請求項１１から１３の何れか一項に記載のリポソーム製造装置。
【請求項１５】
前記第１のタンクに、断続ジェット流発生型乳化装置が設置されている、請求項１１から１４の何れか一項に記載のリポソーム製造装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はリポソームの製造方法及びリポソーム製造装置に関する。本発明は、好適に医薬品用途として用いることのできるリポソームの製造方法及びリポソーム製造装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
リポソーム（以下、脂質小胞体とも呼ばれる）は、脂質を用いた脂質二重膜で形成される閉鎖小胞体であり、リポソームを分散している水溶液（外水相）と、その閉鎖小胞の空間内に水相（内水相）を有する。リポソームは、バリア能、化合物保持能、生体適合性、粒径設定の自由度、易分解性、表面修飾性等の特徴を生かして、免疫センサー、人工赤血球、薬物送達システムのキャリヤーなど多様な応用が検討されてきた。キャリヤーの用途において、リポソームは、水溶性化合物、脂溶性低分子、高分子と幅広い物質を内包することができる。リポソームを特に薬物送達システムのキャリヤーとして用いる場合、生体膜での透過の観点から、粒子サイズは小さいことが好ましい。
【０００３】
リポソームは、水相と油相とを攪拌装置内で攪拌して乳化することにより製造することができる。攪拌装置内での乳化の際には発泡が生じることがあり、脱泡手段を講じることが好ましい。
【０００４】
脱泡手段としては、例えば、特許文献１には、液面が上下に変動する状態で被処理液を収容するタンク本体と、その被処理液の上方から消泡用液を拡散させて噴出する複数の消泡用ノズルを備え、それら複数の消泡用ノズルから被処理液の液面に向けて消泡用液を散布して被処理液に含有される気泡を消泡する消泡タンクが記載されており、この消泡タンクは、固形物浮上装置の一例である浮上濃縮塔６に接続して使用することが記載されている。特許文献２には、発泡性液体の予熱貯槽、脱泡機およびコンデンサ−とからなる液循環型減圧濃縮装置において、回転体を脱泡機内に設け、予熱貯槽で予熱された発泡性液体を脱泡機の回転体に給液し、液滴を微分散微粒子化して回転体から放出することで、発泡を防止するように構成することが記載されている。特許文献３には、液体と、液体より比重の小さい固形物を含んだ混合物から、固形物を除去するための遠心沈降型の遠心分離装置であって、インサイドディスクを有するローターを設けたことを特徴とする遠心分離装置が記載されており、消泡タンクを設けることも記載されている。特許文献４には、油剤タンクと油剤付与装置とを油剤送管及び油剤戻り管で連結してなる油剤装置において、油剤タンク内の泡を吸引するための吸引口を有する吸引装置を、油剤タンク内の油剤液面と吸引口との距離が５０〜１１０ｍｍとなるように設けたことを特徴とする油剤消泡装置が記載されている。特許文献５には、液面より泡を吸い上げ、回転体の遠心力により破泡し、再び液面に膨潤液を戻す機能を有する脱泡装置について記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００８−３０２２６４号公報
【特許文献２】特開２００６−２９７３６０号公報
【特許文献３】特開平０７−３２８６２０号公報
【特許文献４】特開２０００−０２７０２４号公報
【特許文献５】特開２００３−１１３５９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
脱泡タンクを設け、発泡による乳化エネルギーの損失を抑制することは試みられている。通常は乳化した油滴・分散物は安定であり、短時間での再合一は起こさないので、公知の乳化タンクと脱泡タンクの組合せにおいては、スケールアップ適性の観点から、乳化タンクの大きさは最小限で固定し、外部タンクを大きくする構成となっている。すなわち乳化タンクの容量より、脱泡タンクの容量の方が大きい。しかし、油相と水相とを含む混合物を攪拌する工程を含むリポソームの製造方法においては、乳化タンク内での滞留により再合一が生じることがあるため、乳化時間を延長しても所望の微細化を達成できないという問題がある。
【０００７】
また、一般の乳化物では、上記の通り乳化した油滴・分散物は安定であるので、乳化タンクと脱泡タンク間の循環流量は特に考慮されていない。しかし、リポソームの乳化においては、循環流量が小さいと循環経路での滞留時間の分だけ、再合一が進み、一定以上の微細化ができなかった。
【０００８】
上記の通り、乳化法でのリポソームの調製においては、乳化後に溶媒を除去するまでは、微細化した分散物が再合一により粒径が増大する不安定な平衡系となっている。そのため、製造スケールが大きくなった場合、単純に乳化時間を延長するだけでは、微細化は一定の粒径で限界になり、それ以上、微細化することはできない。所定の微細化を達成するためには、乳化装置により投入する液量当たりのエネルギーを大きくする必要がある。しかし、単純に乳化装置のサイズを大きくし、出力を上げるだけでは、空気の巻き込みが激しくなり、せん断エネルギーの大部分が空気をせん断し発泡することにより浪費され、所定の粒径を達成することはできない。
【０００９】
本発明は、大規模な製造スケールにおいて微細化したリポソームを製造する方法、及び上記方法に使用するためのリポソーム製造装置を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、油相と水相とを含む混合物を、第１のタンクと循環経路とを有する装置の上記第１のタンク内で攪拌する工程を含むリポソームの製造方法において、上記タンクと上記循環経路の合計容量に対する上記循環経路の容量の比を０．４以下とするか、及び／又は上記混合物が第１のタンクを排出してから第１のタンクに戻るまでの時間を２．０分以内とすることによって、大規模な製造スケールにおいて微細化したリポソームを製造できることを見出し、本発明を完成するに至った上記。すなわち、本発明によれば以下の発明が提供される。
【００１１】
（１）  少なくとも１種の脂質が有機溶媒に溶解している油相と水相とを含む混合物を、第１のタンクと循環経路とを有する装置の上記第１のタンク内で攪拌する工程を含むリポソームの製造方法であって、上記タンクと上記循環経路の合計容量に対する上記循環経路の容量の比が０．４以下である、及び／又は上記混合物が第１のタンクを排出してから第１のタンクに戻るまでの時間が２．０分以内であるリポソームの製造方法。
（２）  上記装置が、循環経路の途中に第２のタンクを有している、（１）に記載のリポソームの製造方法。
（３）  上記第２のタンク内が飽和蒸気化されている、（２）に記載のリポソームの製造方法。
（４）  上記第１のタンクが上記混合物で満たされている、（１）から（３）の何れか一に記載のリポソームの製造方法。
（５）  上記第１のタンク内の混合物に圧力が負荷される、（１）から（４）の何れか一に記載のリポソームの製造方法。
（６）  ダイヤフラムポンプ又はロータリーポンプを用いて、上記混合物を、第１のタンク及び循環経路において循環させる、（１）から（５）の何れか一に記載のリポソームの製造方法。
（７）  断続ジェット流発生型乳化装置を用いて、上記混合物を上記第１のタンク内で攪拌する、（１）から（６）の何れか一に記載のリポソームの製造方法。
（８）  上記脂質が、ポリエチレングリコール修飾脂質を含む、（１）から（７）の何れか一に記載のリポソームの製造方法。
（９）  製造されるリポソームの平均粒子径が、６０ｎｍ以下である、（１）から（８）の何れか一に記載のリポソームの製造方法。
（１０）  第１のタンクの容量が１０Ｌ以上１００Ｌ以下である、（１）から（９）の何れか一に記載のリポソームの製造方法。
（１１）  上記タンクと上記循環経路の合計容量に対する上記循環経路の容量の比が０．４以下であり、及び上記混合物が第１のタンクを排出してから第１のタンクに戻るまでの時間が２．０分以内である、（１）から（１０）の何れか一に記載のリポソームの製造方法。
（１２）  第１のタンクと循環経路とを有するリポソーム製造装置であって、上記タンクと上記循環経路の合計容量に対する上記循環経路の容量の比が０．４以下であるリポソーム製造装置。
（１３）  上記循環経路の途中に第２のタンクを有している、（１２）に記載のリポソーム製造装置。
（１４）  上記循環経路の途中にポンプを有している、（１２）又は（１３）に記載のリポソーム製造装置。
（１５）  上記ポンプが、ダイヤフラムポンプ又はロータリーポンプである、（１２）から（１４）の何れか一に記載のリポソーム製造装置。
（１６）  上記第１にタンクに、断続ジェット流発生型乳化装置が設置されている、（１２）から（１５）の何れか一に記載のリポソーム製造装置。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、大規模な製造スケールにおいて微細化したリポソームを製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、本発明のリポソーム製造装置の構成例を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本明細書において「工程」との語は、独立した工程だけではなく、他の工程と明確に区別できない場合であってもその工程の所期の目的が達成されれば、本用語に含まれる。
また本明細書において「〜」を用いて示された数値範囲は、「〜」の前後に記載される数値をそれぞれ最小値および最大値として含む範囲を示す。
本明細書において組成物中の各成分の量は、組成物中に各成分に該当する物質が複数存在する場合、特に断らない限り、組成物中に存在する上記複数の物質の合計量を意味する。
【００１５】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明によるリポソームの製造方法は、少なくとも１種の脂質が有機溶媒に溶解している油相と水相とを含む混合物を、第１のタンクと循環経路とを有する装置の上記第１のタンク内で攪拌する工程を含むリポソームの製造方法であって、上記タンクと上記循環経路の合計容量に対する上記循環経路の容量の比が０．４以下である、及び／又は上記混合物が第１のタンクを排出してから第１のタンクに戻るまでの時間が２．０分以内である方法である。
【００１６】
本発明においては、第1のタンク（乳化タンク）の外部に、好ましくは第２のタンク（脱泡タンク）を含む循環経路を設けることで、空気のせん断によるエネルギー損失を抑制し、乳化装置のエネルギーを効率的にリポソームの微細化のために使用することができる。さらに、第1のタンクと循環経路の合計容量に対する循環経路の容量の比が０．４以下とすることにより、滞留によるリポソームの再合一を抑制することができ、及び／又は、混合物が第１のタンクを排出してから第１のタンクに戻るまでの時間が２．０分以内とすることにより、リポソームの再合一を抑制することができ、所望の微細化を達成することができる。分散と再合一との平衡系で存在するというリポソームの特殊性から見て、特に製造スケールが大規模である場合において、上記した条件下においてリポソームを製造することによって微細なリポソームを製造できることは全く予期できない有利な効果である。
【００１７】
（リポソーム）
リポソームとは、脂質分子を含む脂質二重層から形成される脂質小胞体であり、具体的には、脂質分子の疎水性基と親水性基の極性に基づいて生じる脂質二重層により外界から隔てられた空間を有する閉鎖された脂質を含む小胞体を意味する。リポソームは、脂質を用いた脂質二重膜で形成される閉鎖小胞体であり、その閉鎖小胞の空間内に水相（内水相）を有する。内水相には、水等が含まれる。リポソームはシングルラメラ（単層ラメラ、ユニラメラ、二重層膜が一重）であっても、多層ラメラ（マルチラメラ、タマネギ状の構造をした多数の二重層膜で、個々の層は水様の層で仕切られている）であってもよいが、本発明では、医薬用途での安全性及び安定性の観点から、単層ラメラのリポソームであることが好ましい。
【００１８】
リポソームは、薬物を内包することのできるリポソームが好ましく、その形態は特に限定されない。「内包」とは、リポソームに対して薬物が内水相および膜自体に含まれる形態をとることを意味する。例えば、膜で形成された閉鎖空間内に薬物を封入する形態、膜自体に内包する形態などが挙げられ、これらの組合せでもよい。
【００１９】
リポソームの大きさ（平均粒子径）は特に限定されないが、球状またはそれに近い形態をとることが好ましく、好ましくは１００ｎｍ以下、より好ましくは３０〜７０ｎｍ、さらに好ましくは４０〜６０ｎｍ、特に好ましくは４０〜５５ｎｍである。なお、本発明において、「平均粒子サイズ」とは、動的光散乱法により測定されるリポソームの直径の体積平均値を意味する。
【００２０】
リポソームの脂質二重層を構成する成分（膜成分）は、脂質から選ばれる。脂質として、水溶性有機溶媒及びエステル系有機溶媒の混合溶媒に溶解するものであれば任意に使用することができる。脂質として、具体的には、リン脂質、リン脂質以外の脂質、コレステロール類及びそれらの誘導体等が挙げられる。これらの成分は、単一種又は複数種の成分から構成されてよい。
【００２１】
リン脂質としては、ホスファチジルコリン（レシチン）、ホスファジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、カルジオリピン等の天然あるいは合成のリン脂質、又はこれらに水素添加したもの（例えば、水素添加大豆ホスファチジルコリン（HSPC））等が挙げられる。これらのなかでも、水素添加大豆ホスファチジルコリンなどの水素添加されたリン脂質、スフィンゴミエリン等が好ましい。なお、本発明において、「リン脂質」とはリン脂質に修飾を加えたリン脂質誘導体も包含する。
【００２２】
リン脂質以外の脂質としては、リン酸を含まない脂質が挙げられ、特に限定されないがリン酸部分をその分子内に有しないグリセロ脂質、リン酸部分をその分子内に有しないスフィンゴ脂質等が挙げられる。なお、本発明において、「リン脂質以外の脂質」とはリン脂質以外の脂質に修飾を加えたリン脂質以外の脂質の誘導体も包含する。
【００２３】
リン脂質以外の脂質が塩基性官能基を含む場合、例えば、脂質に塩基性官能基を有する化合物が結合した物質である場合、脂質はカチオン化脂質と呼ばれる。カチオン化脂質は、例えば、リポソームの膜を修飾することが可能となり、標的部位である細胞との接着性等を高めることができる。
【００２４】
コレステロール類としては、シクロペンタヒドロフェナントレンを基本骨格とし、その一部あるいはすべての炭素が水素化されているコレステロール及びその誘導体を挙げることができる。具体例としては、特に限定されないがコレステロールが挙げられる。平均粒子サイズが１００ｎｍ以下に微細化していくと脂質膜の曲率が高くなる。リポソームにおいて配列した膜のひずみも大きくなるため、水溶性薬物は更に漏出しやすくなる。しかし、漏出性を抑制する手段として、脂質による膜のひずみを埋める（膜安定化効果）ために、コレステロールなどを添加することが有効である。
【００２５】
リポソーム組成物において、コレステロール類の添加は、リポソームの膜のすきまを埋めるなどして、リポソームの膜の流動性を下げる作用をすると期待される。一般には、リポソームにおいて、コレステロール類の量は、脂質成分の合計（総脂質）mol中、通常５０mol％程度までの量で含むことが望ましいとされている。
本発明では、リポソーム組成物の脂質成分の合計（リポソーム組成物に含まれる総脂質）mol中、好ましくはコレステロール類の含有率は１０〜３５mol％であり、より好ましくは１５〜２５mol％、より好ましくは１７〜２１mol％である。
【００２６】
リポソームには、上記の成分の他に、血中滞留性の改善のために親水性高分子等、膜構造の安定剤として脂肪酸、ジアセチルホスフェート等、抗酸化剤としてα−トコフェロール等を加えてもよい。本発明では、医薬用途において静脈注射用途での使用が認められていない分散助剤などの添加剤、例えば、界面活性剤等を用いないことが好ましい。
【００２７】
リポソームには、リン脂質、リン脂質以外の脂質、コレステロール類及びそれらの誘導体として、リン脂質、リン脂質以外の脂質、コレステロール類を親水性高分子で修飾することが含有することが好ましい。
【００２８】
親水性高分子としては、特に限定されないがポリエチレングリコール類、ポリグリセリン類、ポリプロピレングリコール類、ポリビニルアルコール、スチレン−無水マレイン酸交互共重合体、ポリビニルピロリドン、合成ポリアミノ酸などが挙げられる。上記の親水性高分子は、それぞれ単独でまたは２種以上を組み合わせて使用することができる。
これらの中でも、製剤の血中滞留性の観点から、ポリエチレングリコール類、ポリグリセリン類、ポリプロピレングリコール類が好ましく、ポリエチレングリコール（PEG）、ポリグリセリン（PG）、ポリプロピレングリコール（PPG）がより好ましく、ポリエチレングリコール（PEG）は最も汎用であり、血中滞留性を向上させる効果があり、好ましい。
【００２９】
PEGの分子量は、特に限定されない。PEGの分子量は500〜10,000ダルトンであり、好ましくは1,000〜7,000ダルトン、より好ましくは2,000〜5,000ダルトンである。
【００３０】
リポソームでは、リポソームに含まれる主たる脂質とともに、PEGによって修飾された脂質（PEG修飾脂質）を用いることが好ましい。具体例として、例えば、1 , 2−ジステアロイル−3−ホスファチジルエタノールアミン−PEG（DSPE-PEG；日本油脂製；具体的には、1 , 2−ジステアロイル−3−ホスファチジルエタノールアミン−PEG2000、又は1 , 2−ジステアロイル−3−ホスファチジルエタノールアミン−PEG5000であることが好ましい。）、ジステアロイルグリセロール−PEG2000（日本油脂製）等が挙げられる。これらのPEG修飾脂質は、全脂質量に対して0. 3〜50質量％、好ましくは0. 5〜30質量％、より好ましくは1〜20質量％含有するように添加すればよい。
【００３１】
リポソームでは、水素添加大豆ホスファチジルコリン（リポソームに含まれる主たる脂質）、1 , 2−ジステアロイル−3−ホスファチジルエタノールアミン−PEG（主たる脂質と併用する脂質）の脂質の組合せが好ましい。
【００３２】
リポソームでは、アニオンポリマー（ポリアニオン）を含まないことが好ましい。本発明では、内水相の浸透圧でリリース性をコントロールできるため、汎用性に優れ、リポソームに使用できる薬物が限定されることがないという利点を有する。
【００３３】
（リポソームの製造方法）
本発明のリポソームの製造方法は、少なくとも１種の脂質が有機溶媒に溶解している油相と水相とを含む混合物を、第１のタンクと循環経路とを有する装置の上記第１のタンク内で攪拌する工程を含むリポソームの製造方法であって、上記タンクと上記循環経路の合計容量に対する上記循環経路の容量の比が０．４以下である、及び／又は上記混合物が第１のタンクを排出してから第１のタンクに戻るまでの時間が２．０分以内である方法である。
【００３４】
上記タンクと上記循環経路の合計容量に対する上記循環経路の容量の比が０．４以下であるという条件、及び上記混合物が第１のタンクを排出してから第１のタンクに戻るまでの時間が２．０分以内であるという条件を共に満たす場合が特に好ましい。
【００３５】
リポソームの製造方法は、必要に応じて、乳化工程で用いた有機溶媒を蒸発させる蒸発工程等、他の工程を含んでよい。
【００３６】
乾燥固化工程を経ずに、有機溶媒に溶解した混合脂質を乳化することでリポソームを形成する乳化工程では、乳化する工程であれば限定されることはないが、好ましくは高せん断をかけ、有機溶媒を含む乳化工程で微粒子化する工程である。必要に応じて、乳化工程で用いた有機溶媒を蒸発させる（脱溶媒する）ことでリポソームを形成することができる。
【００３７】
（油相）
油相として用いられる有機溶媒として、水溶性有機溶媒及びエステル系有機溶媒の混合溶媒を用いる。本発明では、有機溶媒として、クロロホルム、塩化メチレン、ヘキサン、又はシクロヘキサンといった有機溶媒を実質的に用いないことが好ましく、これらの有機溶媒をまったく用いないことがより好ましい。
【００３８】
水溶性有機溶媒は、特に限定されないが、水と任意に混じりあう性質をもつ有機溶媒であることが好ましい。水溶性有機溶媒は、具体的には、メタノール、エタノール、n-プロパノール、イソプロパノール、n-ブタノール、イソブタノール、t-ブタノールなどのアルコール類、グリセリン、エチレングリコール、プロピレングリコールなどのグリコール類、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール類などが挙げられる。これらのなかでも、アルコール類が好ましい。アルコールは、エタノール、メタノール、２-プロパノール、及びｔ-ブタノールから選ばれる少なくとも１種であることが好ましく、エタノール、２-プロパノール、ｔ-ブタノールから選ばれる少なくとも１種であることがより好ましく、エタノールであることがさらに好ましい。
【００３９】
エステル系有機溶媒は、特に限定されないが、有機酸およびアルコールの反応から得られるエステルであることが好ましい。エステル系有機溶媒は、具体的には、酢酸エチル、酢酸メチル、酢酸イソプロピル、酢酸ｔ-ブチル、及びプロピオン酸メチルから選ばれる少なくとも１種であることが好ましく、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、プロピオン酸メチルがより好ましく、酢酸エチルがさらに好ましい。
【００４０】
水溶性有機溶媒及びエステル系有機溶媒の混合比率は、特に限定されないが質量比で９０：１０〜２０：８０程度、好ましくは７０：３０〜２５：７５程度であればよい。水溶性有機溶媒及びエステル系有機溶媒の混合溶媒は、さらに水又は緩衝液など下記に述べる水性溶媒を含んでいてもよい。水性溶媒は、例えば１〜３０質量％の範囲で加えられていてもよい。混合溶媒のpHは、特に限定されないが、４〜１０程度の範囲が好ましく、６〜９程度であることがより好ましい。エステル系有機溶媒にはこれら溶媒に可溶な各種薬物などの生理活性物質などを含んでいてもよい。
【００４１】
脂質の濃度は、特に限定されず、適宜調整することが可能であるが、水溶性有機溶媒とエステル系有機溶媒の混合液を溶媒とする溶液として、40g/L〜250g/L、好ましくは100g/L〜200g/Lであればよい。
【００４２】
（水相）
リポソームを製造する際に、膜成分を分散させる水相（水溶液）としては、水（蒸留水、注射用水等）、生理食塩水、各種緩衝液、糖類の水溶液及びこれらの混合物（水性溶媒）が好ましく用いられる。緩衝液としては、有機系、無機系に限定されることはないが、体液に近い水素イオン濃度付近に緩衝作用を有する緩衝液が好適に用いられ、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、グッドバッファーなどがあげられる。水相のｐHは特に限定されないが、5.0〜9.0、好ましくは7.0〜8.0であればよい。例えば、リン酸緩衝液（例えば、ｐＨ＝７．４）を用いることが好ましい。最終的にリポソームの内水相に含まれる水溶液は、リポソームを製造する際に、膜成分を分散させる水溶液であってもよいし、新たに添加される、水、生理食塩水、各種緩衝液、糖類の水溶液及びこれらの混合物をあってもよい。水相（水溶液）として用いる水は、不純物（埃、化学物質等）を含まないことが好ましい。
【００４３】
（乳化工程）
乳化工程では、少なくとも１種の脂質が有機溶媒に溶解している油相と水相とを混合して脂質を含む水溶液を攪拌して乳化する。脂質が有機溶媒に溶解している油相及び水相を混合し撹拌し、乳化することで、油相及び水相がO/W型に乳化した乳化液が調製される。混合後、油相由来の有機溶媒の一部または全部を後述する蒸発工程によって除去することにより、リポソームが形成される。又は、油相中の有機溶媒の一部又は全部が撹拌・乳化の過程で蒸発して、リポソームが形成される。
【００４４】
撹拌する方法としては、粒子微細化のために、超音波又は機械的せん断力が用いられるが、好ましい乳化装置においては本明細書中後述する。また、粒子径の均一化のためには、一定の孔径のフィルターを通すエクストルーダー処理又はマイクロフルイザイザー処理を行うことができる。エクストルーダー等を用いれば、副次的に形成された多胞リポソームをばらして単胞リポソームにすることができる。本発明では、薬物をローディングしない状態のリポソームを、エクストリュージョン処理せずに次の工程に用いることが、製造工程の簡略化の観点から好ましい。
【００４５】
本発明においては、第１のタンクと循環経路の合計容量に対する循環経路の容量の比が０．４以下である、及び／又は上記混合物が第１のタンクを排出してから第１のタンクに戻るまでの時間が２．０分以内である。第１のタンクと循環経路の合計容量に対する循環経路の容量の比は好ましくは０．３以下であり、さらに好ましくは０．２０以下であり、一例としては０．１９である。第１のタンクと循環経路の合計容量に対する循環経路の容量の比の下限は特に限定されないが、一般的には０．１０以上である。
上記混合物が第１のタンクを排出してから第１のタンクに戻るまでの時間は好ましくは１．０分以内であり、より好ましくは０．８分以内であり、さらに好ましくは０．６分以内であり、上記時間の下限は特に限定されないが、脱泡効果の観点から一般的には０．１分以上である。
【００４６】
乳化は、第１のタンクと循環経路とを有する装置の上記第１のタンク内で攪拌することによって行う。第１のタンクの容量は特に限定されないが、大きな製造スケールが好ましいという観点から、好ましくは１０Ｌ以上１００Ｌ以下であり、より好ましくは２０Ｌ以上１００Ｌ以下である。
【００４７】
好ましくは、第１のタンクは混合物で満たされている。乳化タンクを満水化することにより、気液界面がなくなり、発泡によるエネルギーの損失を更に抑制することができる。
好ましくは、第１のタンク内の混合物に圧力を負荷することができる。これにより、発泡によるエネルギーの損失を更に抑制することができる。圧力の負荷は、例えば第１のタンクから導出される循環経路の途中に、流路を絞るバルブを設けることで実現できる。
【００４８】
本発明において、好ましくは、循環経路の途中に、脱泡のための第２のタンクを設けることができる。第２のタンクを設けることにより、脱泡を効率よく行うことができる。なお、循環経路が第2のタンクを有する場合、上記の循環経路の容量とは、第２のタンクを含む循環経路全体の容量を意味する。また、第２のタンク内は飽和蒸気化されていることが、乾燥による皮張りから発生する粗大物を抑制する観点から好ましい。なお循環流量を安定化させる等の必要に応じ、第２のタンク内に圧力を負荷することもできる。圧力負荷は、例えば第２のタンクに圧縮空気または圧縮窒素を導入することで実現できる。
【００４９】
乳化の際には、ポンプを用いて、混合物を、第１のタンク及び循環経路において循環させることが好ましい。ポンプとしては、ターボ型ポンプ（遠心ポンプ、斜流ポンプ、軸流ポンプ）、容積形往復ポンプ（ピストンポンプ、プランジャーポンプ、ダイヤフラムポンプ）、  容積形回転ポンプ（ロータリーポンプ、ギヤポンプ、ベーンポンプ、ねじポンプ）、チューブポンプなどを用いることができる。上記の中でも好ましくは、摺動面を持たない、チューブポンプ又はダイヤフラムポンプを使用することができる。また好ましくは循環流量の脈動が小さい容積形回転ポンプを使用することができる。特に好ましくは、大流量の確保が容易なダイヤフラムポンプ又はロータリーポンプである。
【００５０】
乳化は、乳化装置を用いて、混合物を第１のタンク内で攪拌することが好ましい。乳化装置としては、インペラー式、のこぎり歯ブレード式、閉式ローター式、ローター／ステーター式、  スタティックミキサー式、コロイドミル式、高圧ホモジナイザイー式などを用いることができる。その中で好ましくは、タンク内でのバッチ処理に適したインペラー式、のこぎり歯ブレード式、閉式ローター式、ローター／ステーター式である。
【００５１】
特に好ましくは、微細化のために高速回転によって処理液内にジェット流を生じさせ、液と液または液と壁面のせん断力を十分発揮させることができる、ローター／ステーター式である。一例としては、断続ジェット流発生型乳化装置を用いることができる。
【００５２】
断続ジェット流発生型乳化装置はローターとスクリーンによって構成され、スクリーンと微少なクリアランスを保ちローターが高速回転する。高速回転するローターにより、運動エネルギーを与えられた処理物が、スクリーンスリット部を通過することにより速度が増大する。速度が増大した処理物は、槽内の処理物中に断続ジェット流を形成しその速度界面で液−液剪断力を発生させる。この断続ジェット流による剪断力で微粒化を行うことができる。ローターとスクリーンの組み合わせにより、粒子径・粒度分布をコントロールすることができる。
【００５３】
本発明では、撹拌の速度および時間を任意に選択することで、調製するリポソームの平均粒子サイズを制御することができる。安全性及び安定性を有するリポソームを得る観点において、脂質を含む水溶液に周速１５m/sec以上のせん断を与えることが好ましい。せん断としては、限定されないが、具体的には、周速１５m/sec以上３５m/sec以下のせん断を与えることが好ましく、周速２０m/sec以上３５m/sec以下のせん断を与えることがより好ましく、周速２３m/sec以上３０m/sec以下のせん断を与えることがさらに好ましい。
【００５４】
（リポソーム製造装置）
本発明のリポソーム製造装置は、第１のタンクと循環経路とを有し、上記タンクと上記循環経路の合計容量に対する上記循環経路の容量の比は０．３以下である。上記比の好ましい範囲は、本明細書中上記の通りである。また、第１のタンクの容量の好ましい範囲も本明細書中上記の通りである。
【００５５】
本発明のリポソーム製造装置の構成の一例を図１に示す。
乳化タンクである第１のタンク１には、循環経路２が設けられ、第１のタンク１内の液は、第１のタンク１から排出されて循環経路２を循環して、第１のタンク１に戻ってくる。第１のタンク１には乳化装置３が設けられ、乳化装置３を作動することによって、第1のタンク１内において液体を攪拌して乳化を行う。循環経路２の途中には、脱泡タンクである第２のタンク４とポンプ５が設けられている。第２のタンク４内において、泡を分離して除去することができる。また、ポンプ５を作動させることにより、液を循環経路内において循環させることができる。また、ポンプの出力を調節することにより、循環流量を調節することができる。
【００５６】
（蒸発工程）
本発明では、必要に応じて蒸発工程を設けてもよい。蒸発工程では、乳化工程で得られたリポソームを含む水溶液から有機溶媒を蒸発させる。本発明において、蒸発工程とは、油相由来の有機溶媒の一部または全部を蒸発工程として強制的に除去する工程、及び油相中の有機溶媒の一部または全部が撹拌・乳化の過程で自然に蒸発する工程の少なくとも一つを含む。
【００５７】
蒸発工程における有機溶媒を蒸発させる方法は、特に限定されないが、例えば、有機溶媒を加熱することにより蒸発させる工程、乳化後に静置または緩やかな撹拌を継続する工程、及び真空脱気を行う工程の少なくとも一つを行えばよい。
【００５８】
本発明では、有機溶媒を蒸発させる工程において、リポソームを含む水溶液に含まれる有機溶媒の濃度を、有機溶媒を蒸発させる工程の開始後から３０分以内に、１５質量％以下にすることが好ましい。
【００５９】
本発明の製造方法を実施する際の液温は、適宜調整することが可能であるが、油相と水相との混合時の液温を使用する脂質の相転移温度以上とすることが好ましく、例えば、相転移温度が３５〜４０℃の脂質を使用する場合、３５℃以上７０℃以下とすることが好ましい。
【００６０】
乳化工程を経て調製されたリポソームを含む水溶液は、リポソームに含まれなかった成分の除去、又は濃度や浸透圧の調整のために、遠心分離、限外ろ過、透析、ゲルろ過、凍結乾燥等の方法で後処理をしてもよい。
【００６１】
得られたリポソームは、透析法、濾過法、エクストリュージョン処理等を用いて粒子径を均一にすることができる。本発明のリポソーム組成物の製造方法では、薬物をローディングしない状態の空のリポソームを、エクストリュージョン処理をせずに調製することが好ましい。また、リポソーム内に内包された薬物と内包されない薬物とを分離するには、遠心分離法、透析法、ゲル濾過法等が利用できる。
【００６２】
（薬物ローディング工程）
本発明の方法で得られたリポソームには薬物を内包させることができる。薬物を内包させる薬物ローディング工程では、リポソームに水溶性薬物を封入させる場合、水和・膨潤させる水性媒体に薬物を溶解し、相転移温度以上の加熱、超音波処理又はエクストルージョン等の方法により薬物をリポソームの内水相に内包させることができる。また、脂質乳化時の水相に薬物を溶解させ内水相に内包させることもできる。
【００６３】
リポソームに含まれる薬物は、リポソームに内包することのできる水溶性の薬物であればよく、具体的には、酵素、タンパク質、ペプチド、核酸（DNA、mRNA、siRNA、miRNA）、低分子化合物、糖類（オリゴ糖および多糖）、高分子化合物、抗腫瘍剤、抗菌剤、造影剤、抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤、保湿剤、育毛剤等の生理活性又は薬理学的活性を有する水溶性の物質が挙げられるが、これらに限定されるものではない。リポソームを薬物送達システムのキャリヤーとして用いる場合、安定性の観点から、水溶性薬物は低分子化合物であることが好ましい。
【００６４】
水溶性薬物としては、具体的には、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシンなどのアントラサイクリン系、シスプラチン、オキサリプラチンなどのシスプラチン系、パクリタキセル、ドセタキセルなどのタキサン系、ビンクリスチン、ビンブラスチンなどのビンカアルカロイド系、ブレオマイシンなどのブレオマイシン系、シロリムスなどのシロリムス系の抗がん剤、メトトレキセート、フルオロウラシル、ゲムシタビン、シタラビン、ペメトレキセドなどの代謝拮抗剤等が挙げられる。これらのなかでも、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ペメトレキセド等の水溶性薬物が好ましい。
【００６５】
リポソームに内包した水溶性薬物は、リポソームの内水相に溶解状態で存在している。ここで、溶解状態とは、リポソームの体積に対して充填した薬物の量が、その内水相の組成液での薬物の飽和溶解度以下の場合、溶解状態で内包されたものとみなす。また、飽和溶解度以上においても、Cryo-TEM（クライオ透過型電子顕微鏡）で薬物結晶が観察されない、XRD（Ｘ線回析）測定で結晶格子に起因する回折パターンが観察されない場合は、脂質膜が作る物理化学的な環境による溶解促進や、一部薬物が脂質膜に取り込まれるなどして大部分が溶解していることを示し、溶解状態で内包されたものとみなす。また、リポソーム内部で固体物を形成させて、薬物を封入させるローディング方法により内包したものは、水溶性の高い薬物であっても、溶解状態ではない。
【００６６】
溶解状態で内包させる水溶性薬物としては、水に対して1mg/ml以上の溶解度を持つものが好ましく、10mg/ml以上の溶解度を持つものがより好ましい。
【００６７】
（無菌ろ過）
本発明のリポソームの製造方法によって得られるリポソームを含む水溶液を医薬組成物とするために、無菌ろ過を行うことが好ましい。ろ過の方法としては、中空糸膜、逆浸透膜、メンブレンフィルター等を用いて、リポソームを含む水溶液から不要な物を除去することができる。本発明では、特に限定されないが、滅菌できる孔径をもつフィルター（好ましくは０．２μｍのろ過滅菌フィルター）によってろ過することが好ましい。通常、ろ過工程において、ろ過滅菌フィルターへのリポソームが吸着又は凝集が発生することがある。しかし、本発明では、特定の平均粒子サイズ及び均一な粒子サイズ分布を有するリポソームが得られるため、ろ過を行う時に圧損などの影響が少ないという予想外の効果を有する。
【００６８】
リポソームの変形による平均粒子サイズへの影響を防ぐために、無菌ろ過工程及び後述する無菌充填工程は、リポソームを構成する脂質の相転移温度以下で行うことが好ましい。例えば、脂質の相転移温度が５０℃付近である場合、０〜４０℃程度が好ましく、より具体的には５〜３０℃程度で製造されることが好ましい。
【００６９】
（無菌充填）
無菌ろ過の後に得られたリポソームを含む水溶液は、医療用途として無菌充填することが好ましい。無菌充填の方法は公知のものが適用できる。容器に無菌的に充填することで医療用として好適なリポソーム組成物が調製できる。
【００７０】
本発明によって得られるリポソームを含む水溶液に、適宜、水性溶媒、添加剤等を加えてリポソームを含有する医薬組成物とすることができる。医薬組成物は、投与経路に関連して、医薬的に許容される等張化剤、安定化剤、酸化防止剤、及びｐＨ調整剤の少なくとも一種を含んでもよい。
【００７１】
等張化剤としては、特に限定されないが、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素カリウムのような無機塩類、グリセロール、マンニトール、ソルビトールのようなポリオール類、グルコース、フルクトース、ラクトース、またはスクロースのような糖類が挙げられる。
【００７２】
安定化剤としては、特に限定されないが、例えば、グリセロール、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、またはスロースのような糖類が挙げられる。
【００７３】
酸化防止剤としては、特に限定されないが、例えば、アスコルビン酸、尿酸、トコフェロール同族体（例えば、ビタミンＥ、トコフェロールα、β、γ、δの４つの異性体）システイン、EDTA等が挙げられる。安定化剤および酸化防止剤は、それぞれ単独でまたは２種以上組み合わせて使用することができる。
【００７４】
ｐＨ調整剤としては、水酸化ナトリウム、クエン酸、酢酸、トリエタノールアミン、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ニ水素カリウムなどが挙げられる。
【００７５】
医薬組成物は、医薬的に許容される有機溶媒、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、ゼラチン、寒天、ジグリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、ＰＢＳ、塩化ナトリウム、糖類、生体内分解性ポリマー、無血清培地、医薬添加物として許容される添加物を含有してもよい。
【００７６】
特に、医薬組成物に、硫酸アンモニウム、Ｌ−ヒスチジン、精製白糖、水酸化ナトリウム、塩酸などを含有することが好ましい。
【００７７】
医薬組成物を充填する容器は、特に限定されないが、酸素透過性が低い材質であることが好ましい。例えば、プラスチック容器、ガラス容器、アルミニウム箔、アルミ蒸着フィルム、酸化アルミ蒸着フィルム、酸化珪素蒸着フィルム、ポリビニルアルコール、エチレンビニルアルコール共重合体、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレンナフタレート、ポリ塩化ビニリデン、等をガスバリア層として有するラミネートフィルムによるバック等が挙げられ、必要に応じて、着色ガラス、アルミニウム箔やアルミ蒸着フィルム等を使用したバック等を採用することで遮光することもできる。
【００７８】
医薬組成物を充填する容器において、容器内の空間部に存在する酸素による酸化を防ぐために、容器空間部および薬液中のガスを窒素などの不活性ガスで置換することが好ましい。例えば、注射液を窒素バブリングし、容器への充填を窒素雰囲気下行うことが挙げられる。
【００７９】
医薬組成物の投与方法は、非経口的投与が好ましい。例えば、点滴などの静脈内注射（静注）、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、眼内注射、髄腔内注射を選択することができる。リポソーム組成物の具体的な投与方法としては、シリンジ、点滴による投与が挙げられる。
【００８０】
医薬組成物に含まれる薬物の投与量は、通常、一日につき体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇから１００ｍｇの範囲で選ばれる。しかし、本発明のリポソーム組成物はこれらの投与量に制限されるものではない。
【実施例】
【００８１】
以下、本発明を実施例にて詳細に説明する。しかし、本発明は実施例に何ら限定されるものではない。溶媒組成における混合比は容量比を意味する。例えば、「エタノール/酢酸エチル＝９０/１０」は、容量比で９０％エタノール／１０％酢酸エチルを意味する。
【００８２】
（実施例１）
ａ）乳化設備の準備
スリット外径９０ｍｍの回転部を有する、断続ジェット流発生型乳化装置、満水容量２６Ｌの乳化タンク、並びに脱泡タンクと循環ポンプ（直動ダイアフラムポンプ）とを含む循環経路（循環経路の容量は６Ｌ）を図１に示すように組み合わせ、乳化設備を準備した。なお、循環経路の容量とは、脱泡タンクを含む循環経路全体の容量である。
【００８３】
ｂ）油相の調製
水素添加大豆ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＮ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンナトリウム塩（以下、ＤＳＰＥ-ＰＥＧ）を５７／３８／５のモル比となるように混合し、次いで有機溶媒（エタノール／酢酸エチル＝７５／２５）を加えて７０℃に加温して脂質を溶解し油相とした。この際、油相中の脂質の濃度が７０ｍｍｏｌ／Ｌとなるように調製した。
【００８４】
ｃ）水相の調製
１７７ｍｍｏｌ／Ｌの硫酸アンモニウム水溶液を調製し、水相として乳化タンクに調製した。
【００８５】
ｄ）乳化
ｃ）で調製した水相を７０℃に加温し、乳化装置を周速１５ｍ／秒で運転し、循環ポンプを流速２０Ｌ／分で運転しながら、水相／油相＝８／３の容積比になるようにｂ）で調製した油相を添加した。添加後の総液量は３２Ｌとなり、乳化タンク満水化した後、オーバーフローした６Ｌが、脱泡タンクを含む循環経路を循環した。また、乳化タンクの内圧は３０ｋＰａとした。この状態で、乳化装置の回転を周速３０ｍ／秒に上げ、３０分間攪拌した。
【００８６】
ｅ）脱溶媒
ｄ）で作製した乳化液を、脂質の相転移温度以上に加温しながらエアーを送気することにより有機溶媒を除去し、リポソーム液を製造した。
【００８７】
（実施例２）
循環ポンプを流速１０Ｌ／分で運転すること以外は、実施例１と同様にしてリポソーム液を製造した。
【００８８】
（実施例３）
循環ポンプを流速５Ｌ／分で運転すること以外は、実施例１と同様にしてリポソーム液を製造した。
【００８９】
（比較例１）
循環ポンプを流速２．５Ｌ／分で運転すること以外は、実施例１と同様にしてリポソーム液を製造した。
【００９０】
（比較例２）
乳化タンクの容量を１６Ｌとし、循環経路の容量を１６Ｌとし、循環ポンプを流速１２Ｌ／分で運転すること以外は、実施例１と同様にしてリポソーム液を製造した。
【００９１】
（実施例４）
乳化タンクの容量を１６Ｌとし、循環経路の容量を１６Ｌとし、循環ポンプを流速２４Ｌ／分で運転すること以外は、実施例１と同様にしてリポソーム液を製造した。
【００９２】
（実施例５）
乳化タンクの容量を６Ｌとし、循環経路の容量を２６Ｌとし、循環ポンプを流速３２Ｌ／分で運転すること以外は、実施例１と同様にしてリポソーム液を製造した。
【００９３】
（実施例６）
乳化タンクの内圧を常圧とし、循環ポンプを流速１０Ｌ／分で運転すること以外は、実施例１と同様にしてリポソーム液を製造した。
【００９４】
（実施例７）
乳化タンクの容量を２０．８Ｌとし、循環経路の容量を１１．２Ｌとし、乳化タンク内の液量を８０容量％とし、循環ポンプを流速１４Ｌ／分で運転すること以外は、実施例１と同様にしてリポソーム液を製造した。
【００９５】
（実施例８）
循環ポンプをロータリーポンプに変更したこと以外は、実施例１と同様にしてリポソーム液を製造した。
【００９６】
（動的光散乱法によるリポソームの平均粒子径の測定）
実施例１〜７及び比較例１で製造したリポソーム液を純水で４０倍に希釈して、平均粒子径測定用試料とした。平均粒子径測定用試料の平均粒子径は、大塚電子株式会社製の粒径アナライザーＦＰＡＲ−１０００ＡＳを用いて、体積平均粒子径として測定した。測定の結果を表１に示す。評価は、平均粒子径５５ｍｍ以下をＡ、平均粒子径５６ｎｍ以上６０ｎｍ以下をＢ，平均粒子径６１ｎｍ以上をＣとした。
【００９７】
【表１】
0006373749.tif 000002
【００９８】
表１から分かるように、乳化記タンクと循環経路の合計容量に対する循環経路の容量の比が０．４以下である、及び／又は循環時間（液が乳化タンクを排出してから乳化タンクに戻るまでの時間）が２．０分以内であるという条件を満たす実施例１〜７においては小さい平均粒子径を達成できるが、上記条件を満たさない比較例１は小さい平均粒子径を達成できなかった。
【００９９】
（薬剤内包リポソームの調製）
実施例１で調製した薬剤未封入リポソームをタンジェンシャルフローフィルトレーションによりリポソーム液の脂質濃度を１２０〜１５０ｍｍｏｌ／Ｌの範囲で濃縮しながら、リポソームの外水相を０．０９質量％塩化ナトリウム水溶液に置換した。ここにゲムシタビン塩酸塩をリン酸緩衝液で加温溶解した薬剤溶液を添加し、約７０℃で３０分加温した後に室温まで冷却した。その後、薬剤リポソーム混液を孔径０．２μｍの除菌用フィルターでろ過し、更にタンジェンシャルフローフィルトレーションにより薬剤リポソーム混液を９．４質量％スクロース／１０ｍｍｏｌ／Ｌヒスチジン水溶液で透析精製することで未封入のゲムシタビンを除去し、次にリポソームを孔径 ０．２ μｍの滅菌フィルターでろ過することで無菌の平均粒子径６５ｎｍのゲムシタビン内封リポソーム液を得た。本発明により、医薬用途に使用可能な平均粒子径が１００ｎｍ以下と小さく、かつ単一の分散ピークを有するリポソームが製造できることを確認した。なお、表１の評価に記載したリポソームの平均粒子径は、空のリポソームについて測定したものであるが、薬剤内包リポソームの平均粒子径は１００nm以下であれば医薬用途に使用可能であり、６５ｎｍの平均粒子径は良好な結果である。
【産業上の利用可能性】
【０１００】
本発明によれば、微細化したリポソームを大きな製造スケールにおいて製造することができる。本発明により製造されるリポソームは、医薬品、化粧品、食品など適用可能であり、特に医薬用途に有用である。
【符号の説明】
【０１０１】
１  第１のタンク
２  循環経路
３  乳化装置
４  第２のタンク
５  ポンプ
【図１】
0006373749.tif 000003