(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
センス鎖およびアンチセンス鎖を含有する二本鎖核酸分子であって、前記分子は以下の構造を含み：
【化１】
0006364009.tif 000030
ここで、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｕのうちの任意の１つは、独立して、非修飾リボヌクレオチド、修飾リボヌクレオチド、非修飾デオキシリボヌクレオチド、修飾デオキシリボヌクレオチド、または非従来的な部分であり；
ここで、各「│」は、前記アンチセンス鎖と、前記センス鎖との間の対応する塩基対合を表し；
ここで、ＺおよびＺ’のそれぞれは独立して、存在し、または存在しないが、もし存在する場合、独立して、それが存在する鎖の３’末端に共有結合された、１〜５の連続的なヌクレオチド、１〜５の連続的なヌクレオチドアナログ、もしくは１〜５の連続的な非ヌクレオチド部分、またはそれらの組み合わせ、または結合部分であり；
ここで、ｚ’’は、存在しても、または存在しなくても良いが、もし存在する場合、前記センス鎖の５’末端に共有結合された、キャップ部分または結合部分であり；ならびに、
ここで、前記センス鎖の配列は、前記アンチセンス鎖の配列に対して相補的である（ただし、各ヌクレオチドがデオキシリボヌクレオチドではない場合に限る）、
分子、または、
そのような分子の薬学的に受容可能な塩。
【請求項２】
請求項１に記載の分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩であって、
前記修飾リボヌクレオチドは、糖部分の２’位に修飾を含有し、
特に、前記修飾リボヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであるか；および／または、
前記非従来的な部分は、鏡映ヌクレオチド、トレオース核酸（ＴＮＡ）、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログ、および２’−５’ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドからなる群から選択される、
分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩。
【請求項３】
請求項１または２に記載の分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩であって、
ＺまたはＺ’のうち１つ、または、両方が存在する、
分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩。
【請求項４】
請求項３に記載の分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩であって、
ＺおよびＺ’のそれぞれが、１〜２の連続的な非ヌクレオチド部分である、
分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩。
【請求項５】
請求項４に記載の分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩であって、
各非ヌクレオチド部分が、リン酸化されていても、またはリン酸化されていなくても良い、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）であり、
特に、Ｚが、リン酸化されていても、またはリン酸化されていなくても良い、１つのＣ３非ヌクレオチド部分（Ｃ３）であり；および、ここで、Ｚ’は、リン酸化されていても、またはリン酸化されていなくても良い、２つの連続的なＣ３非ヌクレオチド部分（Ｃ３−Ｃ３）である、
分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩。
【請求項６】
以下のセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する、請求項１に記載の分子であって：
【化２】
0006364009.tif 000031
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２’−５’ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５’＞３’）であり；
ここで、前記アンチセンス鎖および前記センス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、前記センス鎖は、前記鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、前記センス鎖は、前記鎖の５´末端に共有結合された５´キャップz’’を含有し；
ここで、前記アンチセンス鎖は、前記鎖の３’末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、前記センス鎖の３’末端はリン酸化されている（ｐｉ）；分子、または、
そのような分子の薬学的に受容可能な塩。
【請求項７】
請求項６に記載の分子であって、前記センス鎖の５’末端に共有結合された前記５´キャップは、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）であり；および、
前記アンチセンス鎖において、５’末端のリボヌクレオチドはリン酸化されており（ｐｈｏｓ）、および、３’末端の前記オーバーハングはリン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）；分子、または、
そのような分子の薬学的に受容可能な塩。
【請求項８】
請求項６に記載の分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩であって、
前記アンチセンス鎖において、前記鎖の３’末端に共有結合された前記Ｃ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングは、リン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）、
分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩であって、
前記５’キャップz’’が存在し、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、逆位デオキシリボース部分、逆位デオキシ脱塩基部分（ｉｄＡｂ）、アミノ−Ｃ６部分（ＡＭ−ｃ６）、Ｃ６−アミノ−Ｐｉ、非ヌクレオチド部分、特に、１，３−プロパンジオール、モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）、鏡映ヌクレオチド、５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフタレン酪酸ホスホジエステル（ＴＨＮＢ）、および、ビタミン部分または薬剤部分のような結合部分からなる群から選択される、
分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の分子、またはそのような分子の薬学的に受容可能な塩；および、薬学的に受容可能な担体を含有する、組成物。
【請求項１１】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩、もしくは、請求項１０に記載の組成物であって、
ｐ５３の発現と関連した疾患または障害に罹患している対象を治療するための方法において使用され、
前記方法は、前記分子または組成物を、ｐ５３発現の下方制御に十分な量で前記対象へと投与することを含む、
分子または組成物。
【請求項１２】
請求項１１に記載の使用のための分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩、もしくは組成物であって、
前記疾患または障害が、虚血再灌流傷害、難聴、聴覚障害、平衡障害、聴覚損失、化学療法誘発性脱毛症、放射線治療誘発性脱毛症、急性腎不全、急性腎障害、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、抗癌剤療法に関連した副作用、腎移植患者における臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）、脊髄損傷、脳損傷、てんかん発作（ｓｅｉｚｕｒｅ）、脳卒中、神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病、腫瘍、やけど、外傷、高熱、低酸素症、虚血、臓器移植、骨髄移植（ＢＭＴ）、心筋梗塞／心臓発作、心臓毒性、ｐ５３陽性癌および急性肝不全からなる群から選択される、
分子、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩、もしくは組成物。
【請求項１３】
対象のｐ５３陽性癌の治療における使用のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の分子もしくはそのような分子の薬学的に受容可能な塩、または、そのような分子を含有する組成物もしくはそのような分子の薬学的に受容可能な塩を含有する組成物であって、
ここで、前記分子もしくはそのような分子の前記薬学的に受容可能な塩、または、そのような分子を含有する前記組成物もしくはそのような分子の薬学的に受容可能な塩を含有する前記組成物は、ｐ５３遺伝子発現の下方制御に十分な量で投与され、および、それによって、前記対象において、ｐ５３陽性癌が化学療法に対して感受性となる、
分子もしくはそのような分子の薬学的に受容可能な塩、または、そのような分子を含有する組成物もしくはそのような分子の薬学的に受容可能な塩を含有する組成物。
【請求項１４】
造血前駆細胞の増大、または造血刺激における使用のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の分子もしくはそのような分子の薬学的に受容可能な塩、または、そのような分子を含有する組成物もしくはそのような分子の薬学的に受容可能な塩を含有する組成物。
【請求項１５】
ｐ５３ヌル造血幹細胞（ＨＳＣ）のホーミングにおける使用のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の分子もしくはそのような分子の薬学的に受容可能な塩、または、そのような分子を含有する組成物もしくはそのような分子の薬学的に受容可能な塩を含有する組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、「ｐ５３に対する二本鎖オリゴヌクレオチド分子およびその使用方法」という発明の名称の米国仮特許出願第６１／６９９，８８５号（２０１２年９月１２日出願。全ての目的に対し、その全体が、参照により本明細書に援用される）の優先権を主張する。
【０００２】
配列表
本出願は、「２４７−ＰＣＴ１＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名称のファイル（サイズは２９キロバイトであり、ＭＳ−ウィンドウズと互換性のある操作システムを有するＩＢＭ−ＰＣ機器のフォーマットで２０１３年９月３日に作成され、本明細書と共に提出された）に存在する、ヌクレオチド配列および／またはアミノ酸配列を参照により援用する。
【０００３】
技術分野
本出願は、ｐ５３遺伝子を下方制御するための核酸分子、同核酸分子を含有する医薬組成物、およびそれらの使用方法に関する。本明細書に開示される化合物および組成物は、ｐ５３遺伝子の発現に関連する疾患または障害に罹患している対象、または、ｐ５３遺伝子の発現に関連する疾患または障害の発現のリスクを有する対象の治療に有用である。そのような疾患／障害の例としては、限定されないが、虚血再灌流傷害、難聴、聴覚障害、平衡障害、聴覚損失、化学療法誘発性脱毛症（脱毛）、放射線治療誘発性脱毛症、急性腎不全、急性腎障害、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、抗癌剤療法に関連した副作用、腎移植患者における臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）、脊髄損傷、脳損傷、てんかん発作（ｓｅｉｚｕｒｅ）、脳卒中、神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病、腫瘍、やけど、外傷、高熱、低酸素症、虚血、臓器移植、心筋梗塞／心臓発作、心臓毒性および急性肝不全が挙げられる。
【背景技術】
【０００４】
ｓｉＲＮＡおよびＲＮＡ干渉
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ依存性の遺伝子特異的な転写後サイレンシングに関連する現象である。米国特許出願第１３／５０８，４９３号、米国特許出願公開第２００６００６９０５６号、同第２０１０００２９７４６号、同第２０１００２２２４０９号、同第２０１１０１４２９１７号、同第２０１２０１８４５９７号、同第２０１２０１４１３７８号および米国特許第７，８２５，０９９号、同第７，８４２，６７４号、同第７，９１０，５６６号、同第８，１４８，３４２号（すべて、本出願の譲受人に帰属する）は、ｐ５３遺伝子の下方制御に有用な二本鎖ＲＮＡ化合物および組成物に関連し、ならびに、ｐ５３遺伝子の発現に関連する疾患または障害に罹患している患者、または、ｐ５３遺伝子の発現に関連する疾患または障害を発現するリスクのある患者を治療するための、そのような化合物および組成物の使用に関する。
【０００５】
米国特許第６，９８２，２７７号、同第７，００８，９５６号、同第７，０１２，０８７号（イリノイ大学評議会が譲受人となっている）は、細胞に影響を与えているストレス誘導性の事象から回復するために十分な時間の間、宿主正常細胞が可逆的にｐ５３を阻害する方法、可逆的なｐ５３阻害物質の治療有効量を、癌療法と併用してその必要のある哺乳類に対し投与することを含む、癌療法に関連した脱毛を減少させる方法；および、細胞に影響を与えるストレス誘導性事象に起因する、中枢神経系における哺乳類の細胞死を減少させる方法に関連し、当該方法には、ｐ５３活性を可逆的に阻害するために、ｐ５３一過性阻害物質の治療有効量を哺乳類に投与することが含まれている。
【０００６】
米国特許出願公開第２０１０／０２９２３０１号および同第２０１１／０１１２１６８号、ならびに、ＰＣＴ国際特許出願公開第２０１１／０６６４７５号、同第２０１１／０８４１９３号、同第２０１１／０８５０５６号および同第２０１２／０７８５３６号（本発明の譲受人に帰属し、参照により、その全体が本明細書に援用される）は、ｄｓＲＮＡ分子の作製に有用な、核酸配列および修飾を開示する。
【０００７】
米国特許出願公開第２０１１／０１４２９１７号、同第２０１１／０２２９５５７号及び同第２０１２／０１４１３７８号（本発明の譲受人に帰属し、参照により、その全体が本明細書に援用される）は、ｐ５３遺伝子を標的とする二本鎖ＲＮＡ化合物の組成物および使用方法を開示する。
【０００８】
ｐ５３遺伝子の発現に関連する状態、疾患もしくは障害の治療、または軽減に有用であり、非修飾ｄｓＲＮＡのカウンターパートと比較した場合に、生体利用効率の増加、生体内分布の改善、血清循環時間の増加、血清安定性の増加、血清クリアランスの減少、細胞取込の改善、標的外活性の減少、免疫原性の減少、エンドソーム放出の改善、標的組織または細胞への特異的送達の改善、および、ノックダウン活性の増加、を示す、分子、組成物、方法およびキットが必要とされている。
【発明の概要】
【０００９】
ｐ５３遺伝子の発現を下方制御するための核酸分子、ならびに、同核酸分子を含有する組成物およびキット、ならびに、それらを使用する方法が、本明細書において開示される。当該組成物、方法、およびキットは、ｐ５３をコードするヌクレオチド配列（たとえば、ｍＲＮＡ配列）（たとえば、１以上のタンパク質またはタンパク質サブユニットをコードする、ヒトｐ５３に対するｍＲＮＡコード配列（図１〜７の配列番号１〜７））またはその一部に結合する核酸分子（たとえば、低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、または低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）等）の使用を含んでも良い。ある好ましい実施形態において、本明細書に開示される分子、組成物、方法およびキットは、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御、またはｐ５３の発現を阻害する。様々な実施形態において、核酸分子は、非修飾ｄｓＲＮＡまたは化学的に修飾されたｄｓＲＮＡ（たとえば、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御するｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ等）からなる群から選択される。
【００１０】
一部の実施形態において、核酸分子は、ｐ５３の発現を下方制御する、合成された、非修飾二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）化合物である。
【００１１】
一部の好ましい実施形態において、核酸分子は、ｐ５３の発現を下方制御する、合成された、化学修飾二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）化合物である。ある好ましい実施形態において、「ｐ５３」とは、ヒトｐ５３遺伝子を指す。ある好ましい実施形態において、「標的遺伝子」とは、ヒトｐ５３遺伝子を指す。
【００１２】
本明細書において提供される、化学的に修飾された核酸分子および組成物は、非修飾の対応核酸分子と比較して、血清安定性の増加、細胞取込の改善、標的外活性の減少、免疫原性の減少、エンドソーム放出の改善、標的組織または細胞への特異的送達の改善、およびノックダウン／下方制御活性の増加のうちの少なくとも１つを含む、有益な特性を示す。
【００１３】
本明細書において、障害、疾患、損傷もしくは状態の発生または重篤度を治療または予防するための方法であって、その必要のある対象において治療または予防するための方法がさらに開示され、ここで、それらと関連する当該疾患または状態および／または症状または病態は、ｐ５３遺伝子の発現と関連している。一部の実施形態において、そのような障害、疾患、損傷、状態または病態は、内耳の障害、疾患、損傷、状態または病態；腎臓の障害、疾患、損傷、状態または病態；中枢神経系（ＣＮＳ）の障害、疾患、損傷、状態または病態；心臓の障害、疾患、損傷、状態または病態、肝臓の障害、疾患、損傷、状態または病態；心臓の障害、疾患、損傷、状態または病態；臓器移植患者に影響を与える障害、疾患、損傷、状態または病態；抗癌療法を受けている患者が経験する障害、疾患、損傷、状態または病態、を含む群から選択される。一部の実施形態において、そのような障害、疾患、損傷、状態または病態は、虚血再灌流傷害、難聴、聴覚障害、平衡障害、聴覚損失、化学療法誘発性脱毛症（脱毛）、放射線治療誘発性脱毛症、急性腎不全、急性腎障害、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、抗癌剤療法に関連した副作用、腎移植患者における臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）、脊髄損傷、脳損傷、てんかん発作（ｓｅｉｚｕｒｅ）、脳卒中、パーキンソン病、アルツハイマー病、腫瘍、やけど、外傷、高熱、低酸素症、虚血、臓器移植、心筋梗塞／心臓発作、心臓毒性および急性肝不全を含む群から選択される。
【００１４】
特定の実施形態において、ｐ５３を標的とする化学的に修飾されたｄｓＲＮＡ化合物、同化合物を含有する組成物およびキット、ならびに、アポトーシス（細胞のアポトーシス性の（プログラム化された）死である）に関与する状態または病態の治療における、それらの使用方法が提供される。治療される他の状態としては、ｐ５３発現が有害である任意の状態が挙げられ、および、本明細書に提供される化合物および組成物で治療される任意の状態が挙げられる。
【００１５】
１つの態様において、本明細書において、ｐ５３遺伝子を標的とし、下方制御する核酸化合物の作製に有用なオリゴヌクレオチド配列（配列番号８〜３３）が提供される。
【００１６】
別の態様において、ｐ５３遺伝子を標的とし、下方制御する核酸化合物、または、そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。一部の好ましい実施形態において、本明細書に開示される核酸分子は、二本鎖構造を有する。一部の実施形態において、核酸化合物は、二本鎖構造を有し、および、各鎖のそれぞれは、以下の表１に記述される配列から選択されるオリゴヌクレオチド配列（配列番号８〜３３）を含有する。二本鎖構造を有する核酸化合物の一部の実施形態において、当該鎖の一方のオリゴヌクレオチド配列は、配列番号８〜２０のうちの１つから選択され、もう一方の鎖のオリゴヌクレオチド配列は、配列番号２１〜３３のうちの１つから選択される。
【００１７】
一部の実施形態において、（ａ）核酸分子は、センス鎖および相補的なアンチセンス鎖を含有する二本鎖である；（ｂ）核酸分子の各鎖は、１９ヌクレオチドの長さである；（ｃ）アンチセンス鎖の１９ヌクレオチド配列は、哺乳類ｐ５３をコードするｍＲＮＡの連続配列（たとえば、配列番号１〜７）またはその一部に対し相補的である；および、（ｄ）センス鎖およびアンチセンス鎖は、以下の表１に記述されるオリゴヌクレオチド配列（配列番号８〜３３）から選択される、二本鎖構造を有する、核酸分子または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩が開示される。
表１．ｐ５３を標的とする核酸化合物のために選択されたセンス鎖オリゴヌクレオチド配列およびアンチセンス鎖オリゴヌクレオチド配列
【表１】
0006364009.tif 000002
表１に記載される全ての位置は、センス鎖上およびアンチセンス鎖上で、５´>３´である。
【００１８】
別の実施形態において、（ａ）核酸分子は、センス鎖および相補的なアンチセンス鎖を含有する二本鎖である；（ｂ）核酸分子の各鎖は、１９ヌクレオチドの長さである；（ｃ）アンチセンス鎖の１９ヌクレオチド配列は、哺乳類ｐ５３をコードするｍＲＮＡの連続配列（たとえば、配列番号１〜７）またはその一部に対し相補的である；および、（ｄ）センス鎖およびアンチセンス鎖は、以下の表２に記述される配列のペアを含有する、核酸化合物（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
表２．ｐ５３を標的とする二本鎖核酸化合物を作製するために選択されたセンス鎖およびアンチセンス鎖のペア
【表２】
0006364009.tif 000003
表２に記載される全ての位置は、センス鎖上およびアンチセンス鎖上で、５´>３´である。
【００１９】
本明細書に開示される二本鎖核酸分子の好ましい実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖は、センス鎖配列番号１６およびアンチセンス鎖配列番号２９、センス鎖配列番号１９およびアンチセンス鎖配列番号３２、ならびに、センス鎖配列番号１９およびアンチセンス鎖配列番号２８、からなる群から選択される。
【００２０】
本明細書に開示される核酸分子は、好ましくは、非修飾の対応ｄｓＲＮＡ化合物と比較した場合に、活性を増加させうる、安定性を増加させうる、および／または、毒性を最小限化させる、修飾を保有する二本鎖核酸分子である。これらの分子は、標的器官への核酸の送達をもたらす薬学的ビヒクルと混合された場合に、ｐ５３遺伝子と関連した様々な障害の治療に有用で、効果的で、安全で、患者の服薬コンプライアンスが良い治療化合物となる。核酸化合物は、ｐ５３遺伝子発現を下方制御し、ｐ５３遺伝子の機能を減弱させるよう設計される。様々な実施形態において、ｐ５３遺伝子は、配列番号１〜７に記述されるｍＲＮＡポリヌクレオチドのうちの任意の１つへと転写される、ヒトｐ５３遺伝子である。
【００２１】
１つの実施形態において、以下に記述される構造（Ａ）を有する修飾核酸分子が提供され：
(A)   5’     NNNNNNNNNNNNNNNNNN-Z  3’(アンチセンス鎖)
│││││││││││││││││││
3’ Z’-NNNNNNNNNNNNNNNNNNN-z" 5’(センス鎖)
ここで、各Ｎは、独立して、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｕのうちの任意の１つであり、および、独立して、非修飾リボヌクレオチド、修飾リボヌクレオチド、または非従来的な部分であり；
ここで、各「│」は、アンチセンス鎖の各Ｎと、センス鎖の対応するＮの間の塩基対合を表し；
ここで、ＺおよびＺ´のそれぞれは独立して、存在し、または存在しないが、もし存在する場合、独立して、それが存在する鎖の３´末端に共有結合された、１〜５の連続的なヌクレオチド、１〜５の連続的なヌクレオチドアナログ、もしくは１〜５の連続的な非ヌクレオチド部分、またはそれらの組み合わせ、または結合部分であり；
ここで、ｚ´´は、存在しても、または存在しなくても良いが、もし存在する場合、センス鎖の５´末端に共有結合された、キャップ部分または結合部分であり；ならびに、
ここで、センス鎖の配列は、アンチセンス鎖の配列に対して相補的である（ただし、各ＮおよびＮ´が非従来的な部分ではない場合に限る）。
【００２２】
１つの実施形態において、以下に記述される構造（Ａ１）を有する修飾核酸分子が提供され：
（Ａ１）５´          （Ｎ）ｘ−Ｚ        ３´（アンチセンス鎖）
３´    Ｚ´−（Ｎ´）ｙ−ｚ´´  ５´（センス鎖）
ここで、ＮおよびＮ´のそれぞれは、独立して、非修飾リボヌクレオチド、修飾リボヌクレオチド、または非従来的な部分でありうるリボヌクレオチドであり；
ここで、（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのそれぞれは、各連続的なＮまたはＮ´が、共有結合により隣接するＮまたはＮ´に結合されているオリゴヌクレオチドであり；
ここで、ＺおよびＺ´のそれぞれは独立して、存在し、または存在しないが、もし存在する場合、独立して、それが存在する鎖の３´末端に共有結合された、１〜５の連続的なヌクレオチド、１〜５の連続的なヌクレオチドアナログ、もしくは１〜５の連続的な非ヌクレオチド部分、またはそれらの組み合わせ、または結合部分であり；
ここで、ｚ´´は、存在しても、または存在しなくても良いが、もし存在する場合、（Ｎ´）ｙの５´末端に共有結合された、キャップ部分または結合部分であり；
ここで、ｘおよびｙのそれぞれは、独立して、１８〜４０の間の整数であり；
ここで、（Ｎ´）ｙの配列は、（Ｎ）ｘの配列に対して相補的であり；ならびに、
ここで、（Ｎ）ｘは、アンチセンス配列を含有し、（Ｎ´）ｙは、センス配列を含有する（ただし、各ＮおよびＮ´が非従来的な部分ではない場合に限る）。
【００２３】
構造（Ａ１）の様々な実施形態において、ｘ＝ｙである。構造（Ａ１）の好ましい実施形態において、ｘ＝ｙ＝１９である。
【００２４】
１つの実施形態において、以下に記述される構造（Ａ２）を有する修飾核酸分子が提供され：
（Ａ２）５´          Ｎ１−（Ｎ）ｘ−Ｚ        ３´（アンチセンス鎖）
３´    Ｚ´−Ｎ２−（Ｎ´）ｙ−ｚ´´  ５´（センス鎖）
ここで、Ｎ１、Ｎ２、ＮおよびＮ´のそれぞれは、独立して、非修飾リボヌクレオチド、修飾リボヌクレオチド、または非従来的な部分であり；
ここで、（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのそれぞれは、各連続的なＮまたはＮ´が、共有結合により隣接するＮまたはＮ´に結合されているオリゴヌクレオチドであり；
ここで、ｘおよびｙのそれぞれは、独立して、１７〜３９の間の整数であり；
ここで、Ｎ２は、（Ｎ´）ｙに共有結合されており；
ここで、Ｎ１は、（Ｎ）ｘに共有結合されており、および、標的ＲＮＡ（配列番号１〜７）に対して不適合であり、または、標的ＲＮＡに対して相補的な相補的ＤＮＡ部分であり；
ここで、Ｎ１は、天然型ウリジン、修飾された：ウリジン、デオキシリボウリジン、リボチミジン、デオキシリボチミジン、天然型アデノシン、修飾アデノシン、デオキシアデノシン、アデノシンピラゾロトリアジン核酸アナログ、デオキシアデノシンピラゾロトリアジン核酸アナログ、脱塩基リボース部分、および脱塩基デオキシリボース部分からなる群から選択される部分であり；
ここで、ｚ´´は、存在しても、または存在しなくても良いが、もし存在する場合、Ｎ２−（Ｎ´）ｙの５´末端に共有結合された、キャップ部分、ビタミンまたは薬剤部分であり；
ここで、ＺおよびＺ´のそれぞれは独立して、存在し、または存在しないが、もし存在する場合、独立して、それが存在する鎖の３´末端に共有結合された、１〜５の連続的なヌクレオチド、１〜５の連続的なヌクレオチドアナログ、１〜５の連続的な非ヌクレオチド部分、またはそれらの組み合わせ、結合部分であり；
ここで、（Ｎ´）ｙの配列は、（Ｎ）ｘの配列に対して相補的であり；
ここで、（Ｎ）ｘの配列の少なくとも一部は、標的ＲＮＡ中の連続的な配列に対して相補的であり；ならびに、
ここで、Ｎ１−（Ｎ）ｘの配列は、アンチセンス配列を含有し、Ｎ２−（Ｎ´）ｙは、センス配列を含有する（ただし、各ＮおよびＮ´が非従来的な部分ではない場合に限る）。
【００２５】
構造（Ａ２）の様々な実施形態において、ｘ＝ｙである。構造（Ａ２）の好ましい実施形態において、ｘ＝ｙ＝１８である。
【００２６】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の好ましい実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖は、センス鎖配列番号１６およびアンチセンス鎖配列番号２９、センス鎖配列番号１９およびアンチセンス鎖配列番号３２、ならびに、センス鎖配列番号１９およびアンチセンス鎖配列番号２８からなる群から選択される。
【００２７】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の様々な実施形態において、修飾リボヌクレオチドは、糖部分の２´の位置で修飾を含有する。一部の好ましい実施形態において、修飾リボヌクレオチドは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドである。
【００２８】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の様々な実施形態において、非従来的な部分は、鏡映ヌクレオチド、非修飾デオキシリボヌクレオチド、修飾デオキシリボヌクレオチド、トレオース核酸（ＴＮＡ）、ヌクレオチドアナログおよび、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）からなる群から選択される。一部の好ましい実施形態において、ヌクレオチドアナログは、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログである。一部の好ましい実施形態において、非従来的な部分は、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）である。
【００２９】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の様々な実施形態において、ＺまたはＺ´の両方が存在しない。一部の実施形態において、ＺまたはＺ´のうちの少なくとも１つは存在する。一部の実施形態において、ＺおよびＺ´の両方が存在する。一部の実施形態において、ＺおよびＺ´の両方が存在し、ＺおよびＺ´の両方は、１〜５の連続的なヌクレオチドである。一部の実施形態において、ＺおよびＺ´の両方が存在し、ＺおよびＺ´の両方は、２つの連続的なヌクレオチドである。一部の実施形態において、ＺおよびＺ´の両方が存在し、ＺおよびＺ´の両方は、２つの連続的なヌクレオチドであり、各ヌクレオチドは、ｄＴであり、ＺおよびＺ´のそれぞれは、２つの連続的なヌクレオチド（ｄＴｄＴ）を含有する。一部の実施形態において、ＺおよびＺ´の両方が存在し、ＺおよびＺ´のそれぞれは、１〜５の連続的な非ヌクレオチド部分である。一部の実施形態において、ＺおよびＺ´の両方が存在し、ＺおよびＺ´のそれぞれは、１〜２の連続的な非ヌクレオチド部分である。一部の好ましい実施形態において、各非ヌクレオチド部分は、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）［ＣＡＳ  ＲＮ：１３５０７−４２−１］である。一部の好ましい実施形態において、ＺおよびＺ´の両方が存在し、Ｚは、１つのＣ３非ヌクレオチド部分（Ｃ３）であり、Ｚ´は２つの連続的なＣ３非ヌクレオチド部分（Ｃ３−Ｃ３）である。
【００３０】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、ｚ´´は存在しない。構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、ｚ´´は存在する。構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の様々な実施形態において、ｚ´´は存在し、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、逆位の（ｉｎｖｅｒｔｅｄ）脱塩基リボース部分、逆位のデオキシリボース部分、逆位のデオキシ脱塩基部分（ｉｄＡｂ）、アミノ−Ｃ６部分（ＡＭ−ｃ６）、Ｃ６−アミノ−Ｐｉ、非ヌクレオチド部分、鏡映ヌクレオチド、５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフタレン酪酸ホスホジエステル（ＴＨＮＢ）、ビタミンおよび薬剤部分からなる群から選択される。一部の実施形態において、ｚ´´は存在し、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチド部分である。
【００３１】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、アンチセンス鎖およびセンス鎖のそれぞれの３´末端および５´末端のヌクレオチドは、リン酸化されている。一部の実施形態において、アンチセンス鎖およびセンス鎖のそれぞれの３´末端および５´末端のヌクレオチドは、リン酸化されていない。アンチセンス鎖およびセンス鎖のそれぞれにおける一部の実施形態において、３´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されており、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されていない。一部の実施形態において、センス鎖は、３´末端および５´末端の両方でリン酸化されている、または非リン酸化のいずれかである。一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、３´末端および５´末端の両方でリン酸化されている、または非リン酸化のいずれかである。
【００３２】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（１）であって：
5’   cap-GACUCAGACUGACAuucuu-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   AAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｕ、ｃおよび、ｇのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物（１）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００３３】
化合物（１）の１つの実施形態において、センス鎖の５´末端に共有結合された５´キャップは、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）であり、アンチセンス鎖の５´末端のリボヌクレオチドは、リン酸化されており（ｐｈｏｓ）、および、アンチセンス鎖の３´末端のオーバーハングは、リン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）。
【００３４】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（２）であって、：
5’   cap-GACUCAGACUGACAUUCUU-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   AAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｇは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物（２）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００３５】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（３）であって：
5’   cap-GACUCAGACUGACAUUCUU-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   AAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｇは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物（３）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００３６】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（４）であって：
5’   cap-GACUCAGACUGACAUUCUU-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   AAGAAuGUCAGUCUGAGUC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｕは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物（４）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００３７】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（５）であって：
5’   GACUCAGACUGACAUUCUA-dTdT 3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   AAGAAUGUCAGUCUGAGUC-dTdT 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖およびアンチセンス鎖のそれぞれは、当該鎖の３´末端に共有結合された２つのヌクレオチドチミジン−チミジン（ｄＴｄＴ）オーバーハングを含有し、；および、
ここで、センス鎖およびアンチセンス鎖の３´末端はリン酸化されていない；修飾核酸化合物（５）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００３８】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（６）であって：
5’   C3-GACUCAGACUGACAUUCUU-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   phos-AAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｇは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し、および、ここで、当該オーバーハングはリン酸化されており（Ｃ３−ｐｉ）；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合されたＣ３  ５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたリン酸化Ｃ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハング（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）を含有し；および、
ここで、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドは、リン酸化されている（ｐｈｏｓ）；修飾核酸化合物（６）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００３９】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（７）であって：
5’   C3-GACUCAGACUGACAuucuu-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   phos-AAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｃのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｕ、ｃおよび、ｇのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し、および、ここで、当該オーバーハングはリン酸化されており（Ｃ３−ｐｉ）；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合されたＣ３  ５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたリン酸化Ｃ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハング（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）を含有し；および、
ここで、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドは、リン酸化されている（ｐｈｏｓ）；修飾核酸化合物（７）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００４０】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（８）であって：
5’   C3-GACUCAGACUGACAUUCUU-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   phos-AAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｇは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し、および、ここで、当該オーバーハングはリン酸化されており（Ｃ３−ｐｉ）；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合されたＣ３  ５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたリン酸化Ｃ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハング（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）を含有し；および、
ここで、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドは、リン酸化されている（ｐｈｏｓ）；修飾核酸化合物（８）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００４１】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（９）であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGACUGAU-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   AUCAGUcUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し
；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物（９）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００４２】
修飾核酸化合物（９）の１つの実施形態において、当該センス鎖の５´末端に共有結合された５´キャップは、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）であり；当該アンチセンス鎖の５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されており（ｐｈｏｓ）、および、当該アンチセンス鎖の３´末端のオーバーハングはリン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）。
【００４３】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（１０）であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGAcugau-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   AUCAGuCUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ａ、ｕ、ｃおよびｇのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し
；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物（１０）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００４４】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（１１）であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGACUGAU-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   AUCAGuCUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｕは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し
；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物（１１）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００４５】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（１２）であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGACUGAU-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   AUCAGUcUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し
；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物（１２）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００４６】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（１３）であって：
5’   C3-GGGCCUGACUCAGAcugau-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   phos-AUCAGUcUGAGUCAGGCCC-C3-C3-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し、および、ここで、当該オーバーハングはリン酸化されており（Ｃ３−ｐｉ）；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合されたＣ３  ５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたリン酸化Ｃ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハング（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）を含有し；および、
ここで、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されている（ｐｈｏｓ）；修飾核酸化合物（１３）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００４７】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（１４）であって：
5’   C3-GGGCCUGACUCAGAcugau-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   phos-AUCAGUcUGAGUCAGGCCC-C3-C3-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｃは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し、および、ここで、当該オーバーハングはリン酸化されており（Ｃ３−ｐｉ）；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合されたＣ３  ５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたリン酸化Ｃ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハング（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）を含有し；および、
ここで、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されている（ｐｈｏｓ）；修飾核酸化合物（１４）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００４８】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（１５）であって：
5’   C3-GGGCCUGACUCAGACUGAU-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   phos-AUCAGUcUGAGUCAGGCCC-C3-C3-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し、および、ここで、当該オーバーハングはリン酸化されており（Ｃ３−ｐｉ）；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合されたＣ３  ５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたリン酸化Ｃ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハング（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）を含有し；および、
ここで、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されている（ｐｈｏｓ）；修飾核酸化合物（１５）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００４９】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物（１６）であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGACUGAU-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   UUCAGuCUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２８）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｕは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチド（５´>３´）であり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物（１６）、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【００５０】
修飾核酸化合物（１）、（２）、（３）、（４）、（９）、（１０）、（１１）、（１２）および（１６）の様々な実施形態において、アンチセンス鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングは、リン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）。
【００５１】
修飾核酸化合物（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）、（１２）、（１３）、（１４）、（１５）、（１６）および（１７）の様々な実施形態において、５´キャップは、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、逆位デオキシリボース部分、逆位デオキシ脱塩基部分（ｉｄＡｂ）、アミノ−Ｃ６部分（ＡＭ−ｃ６）、Ｃ６−アミノ−ｐｉ、非ヌクレオチド部分、鏡映ヌクレオチド、５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフタレン酪酸ホスホジエステル（ＴＨＮＢ）および結合部分からなる群から選択される。修飾核酸化合物（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）、（１２）、（１３）、（１４）、（１５）、（１６）および（１７）の様々な実施形態において、５´キャップは非ヌクレオチド部分である。修飾核酸化合物（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）、（１２）、（１３）、（１４）、（１５）、（１６）および（１７）の様々な実施形態において、５´キャップ非ヌクレオチド部分は、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）である。
【００５２】
修飾核酸化合物（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）、（１２）、（１３）、（１４）、（１５）、（１６）および（１７）の様々な実施形態において、アンチセンス鎖の５´末端のリボヌクレオチドは、リン酸化されている（ｐｈｏｓ）。
【００５３】
修飾核酸化合物（１）、（２）、（３）、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１１）、（１２）、（１３）、（１４）、（１５）、（１６）および（１７）の様々な実施形態において、アンチセンス鎖の５´末端のリボヌクレオチドは、リン酸化されていない（＄）。
【００５４】
別の態様において、本明細書に記述される核酸分子（たとえば、ｓｉＮＡ分子）、または、そのような分子の薬学的に受容可能な塩を、薬学的に受容可能な担体中に含有する医薬組成物が提供される。ある実施形態において、医薬製剤は、個々（たとえば、患者）への核酸分子（たとえば、ｓｉＮＡ分子等）の送達に適した送達系（たとえば、以下に詳述される送達系）を含有、または包含する。ある実施形態において、本明細書に記述される核酸分子、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩、またはそのような化合物を含有する組成物、または、そのような化合物の薬学的に受容可能な塩を含有する組成物は、対象におけるｐ５３の発現に関連した疾患または障害を治療または予防における使用のためである。
【００５５】
別の態様において、ｐ５３の発現が、障害、疾患、損傷、状態もしくは病態の病因または進行に関連している、障害、疾患、損傷、状態もしくは病態の発生または重篤度を治療（予防することを含む）するための方法が提供される。別の実施形態において、障害、疾患、損傷、状態または病態は、アポトーシス性の（プログラムされた）細胞死を伴っている。一部の実施形態において、限定されないが、虚血再灌流傷害、難聴、聴覚障害、平衡障害、聴覚損失、化学療法誘発性脱毛症（脱毛）、放射線治療誘発性脱毛症、急性腎不全、急性腎障害、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、抗癌剤療法に関連した副作用、腎移植患者における臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）、脊髄損傷、脳損傷、てんかん発作（ｓｅｉｚｕｒｅ）、脳卒中、神経変性疾患、パーキンソン病、アルツハイマー病、腫瘍、やけど、外傷、高熱、低酸素症、虚血、臓器移植、心筋梗塞／心臓発作、心臓毒性、ｐ５３陽性癌および急性肝不全から選択される疾患または障害に罹患している対象の治療方法が提供される。様々な実施形態において、当該方法には、ｐ５３の発現を下方制御するために十分な量で、本明細書に記述される核酸化合物またはその薬学的に受容可能な塩を対象に投与することが含まれる。様々な実施形態において、当該方法には、本明細書に開示される核酸分子、またはそのような分子の薬学的に受容可能な塩の有効量を対象に投与し、それにより、障害または疾患を治療することが含まれる。
【００５６】
一部の実施形態において、対象は、対象において、ｐ５３陽性癌に罹患しており、および、核酸化合物またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩、または、そのような化合物を含有する組成物、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩を含有する組成物を、ｐ５３遺伝子の発現の下方制御に有効な量で投与し、それにより、ｐ５３陽性癌を化学療法に対し感受性化させる。
【００５７】
一部の実施形態において、本明細書に開示される核酸化合物、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩、またはそのような化合物を含有する組成物、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩を含有する組成物は、造血前駆細胞の増大における使用のためであり、または造血刺激における使用のためである。
【００５８】
一部の実施形態において、本明細書に開示される核酸化合物、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩、またはそのような化合物を含有する組成物、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩を含有する組成物は、ｐ５３ヌル造血幹細胞（ＨＳＣ）のホーミングにおける使用のためである。
【００５９】
本明細書においてこれから記述される好ましい方法、物質および例は、単に例示説明のためであり、限定の意図は無い；本明細書に記述されるものと類似または均等な物質および方法を、本発明の実行または検証に用いることができる。本発明の他の特性および利点が、以下の図面、詳細な記述および請求項から明らかになるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００６０】
本明細書において、ヒトｐ５３遺伝子の発現を下方制御する分子および組成物が提供される。ｐ５３遺伝子の発現抑制は、様々な疾患および障害の治療および／または予防に有益であることが示されている。本出願は、特に、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御する二本鎖核酸分子に関するものであり、および、様々な疾患および障害の治療および／または予防における、これらの分子の使用に関するものである。そのような疾患／障害の非限定的なリストを、本明細書に提供する。二本鎖核酸分子の作製に有用なセンス鎖および相補的なアンチセンス鎖を、上記の表１に記述する。ある特定の二本鎖核酸化合物を、以下の表Ａ、ＢおよびＥに記述する。
【００６１】
ｐ５３阻害のための化合物、組成物および方法は、詳細に本明細書において考察され、および、任意の当該化合物またはそのような化合物、組成物の薬学的に受容可能な塩は、ｐ５３遺伝子の発現上昇に関連した疾患／障害に罹患する患者の治療に有益に用いられても良い。
【００６２】
ゆえに、１つの態様において、本開示は、概して、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御する核酸化合物に関連するものであり、および、ｐ５３遺伝子の発現に関連した疾患、障害または損傷（たとえば、限定されないが、本明細書に記述される疾患および障害）に罹患する対象の治療における、これら新規化合物の使用に関するものである。
【００６３】
本明細書に開示される核酸は、たとえば、当該化合物の活性を増加させうる、安定性を増加させうる、および／または、毒性を最小化させうる構造および修飾を含んでいる。
【００６４】
１つの態様において、本開示は、修飾されていないヌクレオチド、および修飾されたヌクレオチド、ならびに／または、非従来的な部分を含有する、抑制性オリゴヌクレオチド化合物を提供する。
【００６５】
一部の実施形態において、本明細書に開示される核酸化合物は、糖修飾、塩基修飾、およびヌクレオチド間結合の修飾からなる群から選択される修飾ヌクレオチドを少なくとも１つ含有し、ならびに、さらに、ＤＮＡ、および修飾ヌクレオチドまたは非従来的な部分（ＬＮＡ（ロックド核酸（ｌｏｃｋｅｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ））、ＥＮＡ（エチレン架橋核酸）、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、アラビノシド、ＰＡＣＥ、鏡映ヌクレオチド、２´−５´ヌクレオチド間結合により隣接するヌクレオチドに結合されたヌクレオチド、または６炭糖を有するヌクレオチドを含む）を含有してもよい。
【００６６】
本明細書に開示される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）の様々な実施形態において、アンチセンス鎖は、１８〜４０ヌクレオチドの長さであってもよい。本明細書に開示される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）の一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、１９ヌクレオチドの長さである。同様に、本明細書に開示される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）のセンス鎖は、１８〜４０ヌクレオチドの長さであってもよい。本明細書に開示される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）の一部の好ましい実施形態において、センス鎖は、１９ヌクレオチドの長さである。本明細書に開示される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）の一部の実施形態において、アンチセンス鎖およびセンス鎖のそれぞれは、１９ヌクレオチドの長さである。本明細書に開示される核酸化合物（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）の様々な実施形態において、化合物の二本鎖の領域は、１９ヌクレオチドの長さである。
【００６７】
ある実施形態において、本明細書に提供される核酸化合物（たとえば、ｄｓＲＮＡ核酸分子）のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、別々のオリゴヌクレオチド鎖である。一部の実施形態において、別々のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、二本鎖構造（たとえば、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対等の水素結合を介した二本鎖としても知られる）を形成する。一部の実施形態において、１以上のヌクレオチド対が、非Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対を形成する。一部の実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖は、互いに共有結合する、２つの別々の鎖である。他の実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖は、センス領域およびアンチセンス領域の両方を有する、単一のオリゴヌクレオチドの一部である；一部の好ましい実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ヘアピン構造を有する。
【００６８】
ある実施形態において、核酸分子は、オーバーハングに関しては、対称性である二本鎖核酸（ｄｓＲＮＡ）分子であり、および、両末端に平滑末端を有する。他の実施形態において、核酸分子は、オーバーハングに関しては対称性であるｄｓＲＮＡであり、および、ヌクレオチド、または非ヌクレオチド、またはヌクレオチドと非ヌクレオチドの組み合わせのオーバーハングを、ｄｓＲＮＡ分子の両末端に有する。一部の実施形態において、対称性ｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖に存在する二本鎖の１つの側に３´−オーバーハングを有しており；および、アンチセンス鎖の３´末端に存在する分子の他側に３´−オーバーハングを有している。ある好ましい実施形態において、核酸分子は、オーバーハングに関して非対称性であるｄｓＲＮＡ分子であり、ｄｓＲＮＡ分子の一方の末端に平滑末端を有し、ｄｓＲＮＡ分子の他端にオーバーハングを有している。一部の実施形態において、非対称性ｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖に存在する二本鎖の１つの側に３´−オーバーハングを、アンチセンス鎖の５´末端に存在する平滑末端を、および、センス鎖の５´末端とアンチセンス鎖の３´末端の両方に存在する分子の他方の側には平滑末端を、有している。一部の実施形態において、オーバーハングは、ヌクレオチドのオーバーハングであり、他の実施形態においては、当該オーバーハングは、非ヌクレオチドのオーバーハングである。
【００６９】
様々な実施形態において、核酸分子はさらに、センス鎖の５´末端に共有結合されたキャップ部分を含有する。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖に存在する二本鎖の１つの側に３´−オーバーハングを有しており；アンチセンス鎖の３´末端に存在する分子の他側に３´−オーバーハングを有しており、センス鎖の５´末端に共有結合されたキャップ部分を有している。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子は、センス鎖に存在する３´−オーバーハング、センス鎖の５´末端に共有結合されたキャップ部分、アンチセンス鎖の５´末端に存在する平滑末端、および、アンチセンス鎖の３´末端に存在する平滑末端を有している。一部の実施形態において、オーバーハングは、ヌクレオチドのオーバーハングであり、他の実施形態においては、オーバーハングは、非ヌクレオチドのオーバーハングである。様々な実施形態において、キャップ部分は、脱塩基リボース部分；脱塩基デオキシリボース部分；逆位脱塩基リボース部分；逆位脱塩基デオキシリボース部分；Ｃ６−イミノ−Ｐｉ；鏡映ヌクレオチド（Ｌ−ＤＮＡおよびＬ−ＲＮＡを含む）；５´ＯＭｅヌクレオチド；ヌクレオチドアナログ（たとえば、限定されないが、４´，５´−メチレンヌクレオチド等）；１−（β−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド；４´−チオヌクレオチド、炭素環ヌクレオチド、α−ヌクレオチド；トレオ−ペントフラノシルヌクレオチド；非環式３´，４´−セコヌクレオチド；３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド，３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド；５´−アミノ−リン酸アルキル；１，３−ジアミノ−２−リン酸プロピル、３−リン酸アミノプロピル；６−リン酸アミノヘキシル；１２−リン酸アミノドデシル；リン酸ヒドロキシプロピル；１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド；５´−５´−逆位脱塩基部分；１，４−リン酸ブタンジオール；５´−アミノ；架橋または非架橋メチルホスホン酸および、５´−メルカプト部分、から選択される。一部の好ましい実施形態において、センス鎖の５´末端に共有結合されたキャップ部分は、逆位脱塩基デオキシリボース部分、ＡＭ−ｃ６、Ｃ３非ヌクレオチド部分およびＴＨＮＢから選択される。
【００７０】
一部の実施形態において、核酸分子は、ヘアピン構造を有し（１つのオリゴヌクレオチド上にセンス鎖とアンチセンス鎖を有する）、一方の末端はループ構造を、他方の末端は平滑末端を有する。一部の実施形態において、核酸分子は、一方の末端はループ構造、他方の末端はオーバーハング末端を有する、ヘアピン構造を有し；ある実施形態においては、オーバーハングは、センス鎖上にあり；ある実施形態においては、オーバーハングは、アンチセンス鎖上にある。
【００７１】
様々な実施形態において、本明細書に開示される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、たとえば本明細書に記述される１以上の修飾、または修飾ヌクレオチドを含有してもよい。たとえば、本明細書に提供される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、修飾された糖を有する修飾ヌクレオチド；修飾されたヌクレオ塩基を有する修飾ヌクレオチド；または、修飾されたリン酸基を有する修飾ヌクレオチド、を含有してもよい。同様に、本明細書に提供される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、修飾されたホスホジエステル主鎖を含有してもよく、および／または修飾された末端リン酸基を含有してもよい。
【００７２】
本明細書に提供される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、たとえば本明細書に記述される、修飾された糖部分を含有する１以上のヌクレオチドを有しても良い。一部の実施形態において、修飾された糖部分は、２’−Ｏ−メチル、２’−メトキシエトキシ、２’−デオキシ、２’−フルオロ、２’−アリル、２’−Ｏ−［２−（メチルアミノ）−２−オキソエチル］、４’−チオ、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’−架橋、２’−ロックド核酸、および、２’−Ｏ−（Ｎ−メチルカルバメート）からなる群から選択される。一部の好ましい実施形態において、核酸は、少なくとも１つの２’−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドを含有する。
【００７３】
本明細書に提供される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、たとえば、本明細書に記述される、１以上の修飾ヌクレオ塩基（複数含む）を有しても良い。
【００７４】
本明細書に提供される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、たとえば、本明細書に記述される、ホスホジエステル主鎖に対する１以上の修飾を有しても良い。
【００７５】
本明細書に提供される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、たとえば、本明細書に記述される、１以上の修飾リン酸基（複数含む）を有しても良い。
【００７６】
本明細書に提供される核酸分子は、たとえば、本明細書に記述される、非修飾のヌクレオ塩基、修飾されていないホスホジエステル主鎖、および、非修飾のリン酸基を含有しても良い。
【００７７】
様々な実施形態において、提供される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、非修飾のアンチセンス鎖および、１以上の修飾を有するセンス鎖を含有しても良い。一部の実施形態において、提供される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、非修飾のセンス鎖および、１以上の修飾を有するアンチセンス鎖を含有しても良い。好ましい実施形態において、提供される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方において、１以上の修飾ヌクレオチドを含有してもよい。
【００７８】
本明細書に提供される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、センス鎖および／またはアンチセンス鎖の５´末端にリン酸基を含有しても良い（すなわち、５´末端リン酸基）。一部の実施形態において、本明細書に開示されるｄｓＲＮＡ分子は、アンチセンス鎖の５´末端にリン酸基を含有しても良い。
【００７９】
本明細書に提供される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、センス鎖および／またはアンチセンス鎖の３´末端にリン酸基を含有しても良い（すなわち、３´末端リン酸基）。一部の実施形態において、本明細書に開示されるｄｓＲＮＡ分子は、アンチセンス鎖の３´末端にリン酸基を含有しても良い。
【００８０】
一部の実施形態において、本明細書に開示される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、アンチセンス鎖の３´末端およびセンス鎖の３´末端にリン酸基を含有しても良い。
【００８１】
一部の実施形態において、本明細書に開示される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、アンチセンス鎖の３´末端およびセンス鎖の３´末端にリン酸基を含有し、そして、アンチセンス鎖の５´末端およびセンス鎖の５´末端は、リン酸化されていない。
【００８２】
一部の実施形態において、本明細書に開示される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、アンチセンス鎖の３´末端およびセンス鎖の３´末端およびアンチセンス鎖の５´末端にリン酸基を含有し、そして、センス鎖の５´末端は、リン酸化されていない。
【００８３】
一部の実施形態において、本明細書に開示される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）は、センス鎖の３´末端およびアンチセンス鎖の５´末端にリン酸基を含有し、そして、センス鎖の５´末端およびアンチセンス鎖の３´末端は、リン酸化されていない。
【００８４】
本明細書に開示される核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）の一部の実施形態において、核酸分子のアンチセンス鎖およびセンス鎖は、３´末端および５´末端の両方ともリン酸化されていない。
【００８５】
１つの実施形態において、以下に記述される構造（Ａ）を有する修飾核酸分子が提供され：
(A)   5’     NNNNNNNNNNNNNNNNNN -Z  3’(アンチセンス鎖)
│││││││││││││││││││
3’ Z’-NNNNNNNNNNNNNNNNNNN-z" 5’(センス鎖)
ここで、各Ｎは、独立して、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｕのうちの任意の１つであり、および、独立して、非修飾リボヌクレオチド、修飾リボヌクレオチド、または非従来的な部分であり；
ここで、各「│」は、アンチセンス鎖の各Ｎと、センス鎖の対応するＮの間の塩基対合を表し；
ここで、ＺおよびＺ´のそれぞれは独立して、存在し、または存在しないが、もし存在する場合、独立して、それが存在する鎖の３´末端に共有結合された、１〜５の連続的なヌクレオチド、１〜５の連続的なヌクレオチドアナログ、もしくは１〜５の連続的な非ヌクレオチド部分、またはそれらの組み合わせ、または結合部分であり；
ここで、ｚ´´は、存在しても、または存在しなくても良いが、もし存在する場合、センス鎖の５´末端に共有結合された、キャップ部分または結合部分であり；ならびに、
ここで、センス鎖の配列は、アンチセンス鎖の配列に対して相補的である（ただし、各ＮおよびＮ´が非従来的な部分ではない場合に限る）。
【００８６】
１つの実施形態において、以下に記述される構造（Ａ１）を有する修飾核酸分子が提供され：
（Ａ１）５´          （Ｎ）ｘ−Ｚ        ３´（アンチセンス鎖）
３´    Ｚ´−（Ｎ´）ｙ−ｚ´´  ５´（センス鎖）
ここで、ＮおよびＮ´のそれぞれは、独立して、非修飾リボヌクレオチド、修飾リボヌクレオチド、または非従来的な部分でありうる、リボヌクレオチドであり；
ここで、（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのそれぞれは、各連続的なＮまたはＮ´が、共有結合により隣接するＮまたはＮ´に結合されているオリゴヌクレオチドであり；
ここで、ＺおよびＺ´のそれぞれは独立して、存在し、または存在しないが、もし存在する場合、独立して、それが存在する鎖の３´末端に共有結合された、１〜５の連続的なヌクレオチド、１〜５の連続的なヌクレオチドアナログ、もしくは１〜５の連続的な非ヌクレオチド部分、またはそれらの組み合わせ、または結合部分であり；
ここで、ｚ´´は、存在しても、または存在しなくても良いが、もし存在する場合、（Ｎ´）ｙの５´末端に共有結合された、キャップ部分または結合部分であり；
ここで、ｘおよびｙのそれぞれは、独立して、１８〜４０の間の整数であり；
ここで、（Ｎ´）ｙの配列は、（Ｎ）ｘの配列に対して相補的であり；ならびに、
ここで、（Ｎ）ｘは、アンチセンス配列を含有し、（Ｎ´）ｙは、センス配列を含有する（ただし、各ＮおよびＮ´が非従来的な部分ではない場合に限る）。
【００８７】
１つの実施形態において、以下に記述される構造（Ａ２）を有する修飾核酸分子が提供され：
（Ａ２）５´          Ｎ１−（Ｎ）ｘ−Ｚ        ３´（アンチセンス鎖）
３´    Ｚ´−Ｎ２−（Ｎ´）ｙ−ｚ´´  ５´（センス鎖）
ここで、Ｎ１、Ｎ２、ＮおよびＮ´のそれぞれは、独立して、非修飾リボヌクレオチド、修飾リボヌクレオチド、または非従来的な部分であり；
ここで、（Ｎ）ｘおよび（Ｎ´）ｙのそれぞれは、各連続的なＮまたはＮ´が、共有結合により隣接するＮまたはＮ´に結合されているオリゴヌクレオチドであり；
ここで、ｘおよびｙのそれぞれは、独立して、１７〜３９の間の整数であり；
ここで、Ｎ２は、（Ｎ´）ｙに共有結合されており；
ここで、Ｎ１は、（Ｎ）ｘに共有結合されており、および、標的ＲＮＡ（配列番号１〜７）に対して不適合であり、または、標的ＲＮＡに対して相補的な相補的ＤＮＡ部分であり；
ここで、Ｎ１は、天然型ウリジン、修飾された：ウリジン、デオキシリボウリジン、リボチミジン、デオキシリボチミジン、天然型アデノシン、修飾アデノシン、デオキシアデノシン、アデノシンピラゾロトリアジン核酸アナログ、デオキシアデノシンピラゾロトリアジン核酸アナログ、脱塩基リボース部分、および脱塩基デオキシリボース部分からなる群から選択される部分であり；
ここで、ｚ´´は、存在しても、または存在しなくても良いが、もし存在する場合、Ｎ２−（Ｎ´）ｙの５´末端に共有結合された、キャップ部分、ビタミンまたは薬剤部分であり；
ここで、ＺおよびＺ´のそれぞれは独立して、存在し、または存在しないが、もし存在する場合、独立して、それが存在する鎖の３´末端に共有結合された、１〜５の連続的なヌクレオチド、１〜５の連続的なヌクレオチドアナログ、１〜５の連続的な非ヌクレオチド部分、またはそれらの組み合わせ、結合部分であり；
ここで、（Ｎ´）ｙの配列は、（Ｎ）ｘの配列に対して相補的であり；
ここで、（Ｎ）ｘの配列の少なくとも一部は、標的ＲＮＡ中の連続的な配列に対して相補的であり；ならびに、
ここで、Ｎ１−（Ｎ）ｘの配列は、アンチセンス配列を含有し、Ｎ２−（Ｎ´）ｙは、センス配列を含有する（ただし、各ＮおよびＮ´が非従来的な部分ではない場合に限る）。
【００８８】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の様々な実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖は、配列番号８〜３３から選択される。構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の好ましい実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖は、センス鎖配列番号１６およびアンチセンス鎖配列番号２９、センス鎖配列番号１９およびアンチセンス鎖配列番号３２、ならびに、センス鎖配列番号１９およびアンチセンス鎖配列番号２８からなる群から選択される。
【００８９】
構造（Ａ２）の一部の実施形態において、Ｎ１およびＮ２は、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対を形成する。他の実施形態において、Ｎ１およびＮ２は、非Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ塩基対を形成する。一部の実施形態において、塩基対は、リボヌクレオチドとデオキシリボヌクレオチドの間に形成される。構造（Ａ２）の一部の実施形態において、ｘ＝ｙ＝１８、ｘ＝ｙ＝１９、または、ｘ＝ｙ＝２０である。好ましい実施形態において、ｘ＝ｙ＝１８である。Ｎ１−（Ｎ）ｘにおいて、ｘ＝１８の場合、Ｎ１は、１位を指し、２〜１９位は、（Ｎ）１８に含まれる。Ｎ２−（Ｎ´）ｙにおいて、ｙ＝１８の場合、Ｎ２は１９位を指し、１〜１８位は（Ｎ´）１８に含まれる。
【００９０】
構造（Ａ２）の一部の実施形態において、Ｎ１は（Ｎ）ｘに共有結合され、配列番号１〜７に記述される標的ｍＲＮＡには適合しない。様々な実施形態において、Ｎ１は、（Ｎ）ｘに共有結合され、配列番号１〜７に記述される標的ｍＲＮＡに対して相補的なＤＮＡ部分である。
【００９１】
構造（Ａ２）の一部の実施形態において、Ｎ２−（Ｎ´）ｙの配列は、Ｎ１−（Ｎ）ｘの配列に対して完全に相補的であり、（Ｎ）ｘの配列は、標的ＲＮＡ（配列番号１〜７）における連続配列に対して相補性を有している。
【００９２】
構造（Ａ２）の一部の実施形態において、Ｎ１は、（Ｎ）ｘに共有結合され、標的ＲＮＡ（配列番号１〜７）に対して適合していないか、または、標的ＲＮＡに対して相補的なＤＮＡ部分である。
【００９３】
構造（Ａ２）の一部の実施形態において、Ｎ１は、標的ＲＮＡ配列中の対応するヌクレオチドがアデノシンである場合、アデノシンおよびデオキシアデノシンからなる群から選択される。構造（Ａ２）の一部の実施形態において、Ｎ１は、標的ＲＮＡ配列中の対応するヌクレオチドがシチジンである場合、アデノシン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、およびデオキシウリジンからなる群から選択される。構造（Ａ２）の一部の実施形態において、Ｎ１は、標的ＲＮＡ配列中の対応するヌクレオチドがグアノシンである場合、アデノシン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、ウリジンおよびデオキシウリジンからなる群から選択される。構造（Ａ２）の一部の実施形態において、Ｎ１は、標的ＲＮＡ配列中の対応するヌクレオチドがウリジンである場合、ウリジンおよびデオキシウリジンからなる群から選択される。構造（Ａ２）の一部の実施形態において、Ｎ１およびＮ２は、天然型または修飾された：ウリジンまたはデオキシウリジン、および、アデノシンまたはデオキシアデノシンの間に塩基対を形成する。他の実施形態において、Ｎ１およびＮ２は、天然型または修飾された：デオキシウリジンおよびアデノシンの間に塩基対を形成する。
【００９４】
構造（Ａ２）の一部の実施形態において、二本鎖核酸分子は、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＮＡまたはｍｉＲＮＡである。本明細書に提供される二本鎖核酸分子はまた、「二重鎖」と呼称される。本明細書に開示される構造（Ａ２）に従う核酸分子の一部の実施形態において、二本鎖核酸分子は、化学的に修飾されたｄｓＲＮＡである。
【００９５】
構造（Ａ２）の一部の実施形態において、Ｎ１は、天然型ウリジンおよび修飾ウリジンから選択される。一部の実施形態において、Ｎ１は、天然型ウリジンである。
【００９６】
構造（Ａ２）の一部の実施形態において、ｘ＝ｙ＝１８であり、Ｎ１−（Ｎ）ｘは、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有し、Ｎ２−（Ｎ´）ｙは、表１、配列番号８〜３３に記述される配列の対に存在するセンスオリゴヌクレオチドを含有する。
【００９７】
構造（Ａ２）の一部の実施形態において、ｘ＝ｙ＝１８であり、ならびに、Ｎ１は、天然型または修飾ウリジン、天然型または修飾アデニン、および、天然型または修飾チミジンから選択される。
【００９８】
構造（Ａ２）の一部の実施形態において、Ｎ１は、２´ＯＭｅ糖修飾ウリジン、または２´ＯＭｅ糖修飾アデノシンである。構造（Ａ２）のある実施形態において、Ｎ２は、２´ＯＭｅ糖修飾リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドである。
【００９９】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、各Ｎは、非修飾リボヌクレオチドからなる。構造（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、各Ｎ´は、非修飾のリボヌクレオチドからなる。一部の好ましい実施形態において、Ｎおよび／またはＮ´の内の少なくとも１つは、化学的に修飾されたリボヌクレオチド、非修飾デオキシリボヌクレオチド、化学的に修飾されたデオキシリボヌクレオチド、または非従来的な部分を含有する（ただし、ＮおよびＮ´のそれぞれがデオキシリボヌクレオチドではない場合に限る）。一部の実施形態において、非従来的な部分は、鏡映ヌクレオチド、脱塩基リボース部分、および脱塩基デオキシリボース部分から選択される。一部の実施形態において、非従来的な部分は、鏡映ヌクレオチド、好ましくはＬ−ＤＮＡ部分である。一部の実施形態において、ＮまたはＮ´のうちの少なくとも１つは、２´ＯＭｅ糖修飾リボヌクレオチドを含有する。
【０１００】
構造（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、（Ｎ´）ｙの配列は、（Ｎ）ｘの配列に対して完全に相補的である。構造（Ａ１）および（Ａ２）の他の実施形態において、（Ｎ´）ｙの配列は、（Ｎ）ｘの配列に対して実質的に相補的である。
【０１０１】
構造（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、（Ｎ）ｘは、配列番号１〜７のうちの任意の１つに記述される標的ｍＲＮＡ中の約１７〜約３９の連続したヌクレオチドに対して完全に相補的であるアンチセンス配列を含有する。構造（Ａ１）および（Ａ２）の他の実施形態において、（Ｎ）ｘは、配列番号１〜７のうちの任意の１つに記述される標的ｍＲＮＡ中の約１７〜約３９の連続したヌクレオチドに対して実質的に相補的であるアンチセンスを含有する。構造（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、二本鎖核酸化合物は平滑末端であり、たとえば、ここで、ｚ´´、ＺおよびＺ´のそれぞれは存在しない。別の実施形態において、ｚ´´、ＺまたはＺ´の内の少なくとも１つは存在する。
【０１０２】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の様々な実施形態において、ＺおよびＺ´のそれぞれは、独立して、存在し、または存在しないが、もし存在する場合、独立して、それが存在する鎖の３´末端に共有結合された、１〜５の連続したヌクレオチド、１〜５の連続したヌクレオチドアナログ、もしくは１〜５の連続した非ヌクレオチド部分、またはそれらの組み合わせ、または結合部分を含有する。構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の様々な実施形態において、ＺおよびＺ´は、独立して、１以上の共有結合された修飾ヌクレオチドまたは非修飾ヌクレオチド（デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドを含む）、または、１以上（好ましくは１〜５、最も好ましくは１〜２）の非従来的な部分（たとえば、逆位脱塩基デオキシリボース部分または脱塩基リボース部分、または鏡映ヌクレオチド）；本明細書に定義される、１以上（好ましくは１〜５、最も好ましくは１〜２）の非ヌクレオチドＣ３部分もしくはそれらの誘導体、非ヌクレオチドＣ４部分もしくはその誘導体、または、非ヌクレオチドＣ５部分もしくはその誘導体、非ヌクレオチドアミノ−Ｃ６部分もしくはそれらの誘導体等、を含有する。
【０１０３】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、Ｚ´は存在せず、ならびに、Ｚは存在し、および、１以上（好ましくは１〜５、最も好ましくは１〜２）の非ヌクレオチドＣ３部分を含有する。一部の実施形態において、Ｚは存在せず、ならびに、Ｚ´は存在し、および、１以上（好ましくは１〜５、最も好ましくは１〜２）の非ヌクレオチドＣ３部分を含有する。一部の実施形態において、ＺおよびＺ´のそれぞれは、独立して、１以上（好ましくは１〜５、最も好ましくは１〜２）の非ヌクレオチドＣ３部分または、１以上の非ヌクレオチドアミノ−Ｃ６部分を含有する。
【０１０４】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、ＺおよびＺ´のそれぞれは、脱塩基部分（たとえば、デオキシリボ脱塩基部分（本明細書において、「ｄＡｂ」と呼称される）またはリボ脱塩基部分（本明細書において、「ｒＡｂ」と呼称される）等）を含有する。一部の実施形態において、Ｚおよび／またはＺ´のそれぞれは、２つの共有結合された脱塩基部分を含有し、および、たとえば、ｄＡｂ−ｄＡｂまたはｒＡｂ−ｒＡｂまたはｄＡｂ−ｒＡｂまたはｒＡｂ−ｄＡｂであり、ここで、各部分は、好ましくはホスホ系の結合を介して、隣接する部分へと共有結合されている。一部の実施形態において、ホスホ系の結合には、ホスホロチオエート、ホスホノ酢酸、またはホスホジエステル結合が含まれる。好ましい実施形態において、ホスホ系の結合は、ホスホジエステル結合である。
【０１０５】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、Ｚおよび／またはＺ´のそれぞれは、独立して、アルキル部分を含み、任意選択的にプロパン［（ＣＨ２）３］部分（Ｃ３）、またはそれらの誘導体（プロパノール（Ｃ３ＯＨ）および、プロパンジオールのホスホ誘導体（"Ｃ３Ｐｉ"）を含む）を含む。一部の実施形態において、Ｚおよび／またはＺ´のそれぞれは、２つのアルキル部分を含有し、一部の例においては、Ｃ３Ｐｉ−Ｃ３ＯＨである。Ｃ３Ｐｉ−Ｃ３ＯＨの例の場合には、アンチセンス鎖の３´末端および／またはセンス鎖の３´末端は、ホスホ系の結合を介してＣ３部分に共有結合されており、および、Ｃ３部分は、ホスホ系の結合を介してＣ３ＯＨ部分に共有結合されている。一部の実施形態において、ホスホ系の結合には、ホスホロチオエート、ホスホノ酢酸、またはホスホジエステル結合が含まれる。好ましい実施形態において、ホスホ系の結合は、ホスホジエステル結合である。
【０１０６】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、Ｚは、Ｃ３Ｐｉ−Ｃ３ＯＨを含有する。構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の特定の実施形態において、Ｚ´は、Ｃ３ＰｉまたはＣ３ＯＨを含有する。構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、二本鎖核酸分子は、アンチセンス鎖の３´末端に共有結合されたＣ３Ｐｉ−Ｃ３ＯＨ部分を含有し、および、センス鎖の３´末端に共有結合されたＣ３ＰｉまたはＣ３ＯＨ部分を含有する。
【０１０７】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、ｚ´´が存在し、ならびに、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、逆位脱塩基リボース部分、逆位デオキシリボース部分、逆位デオキシ脱塩基部分（ｉｄＡｂ）、アミノ−Ｃ６部分（ＡＭ−ｃ６）、Ｃ６−アミノ−Ｐｉ、非ヌクレオチド部分、鏡映ヌクレオチド、５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフタレン酪酸ホスホジエステル（ＴＨＮＢ）、および結合部分からなる群から選択される。一部の実施形態において、結合部分は、ビタミンまたは薬剤部分である。構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、ｚ´´が存在し、ならびに、鏡映ヌクレオチド、脱塩基部分および逆位脱塩基部分から選択される。
【０１０８】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、各Ｎは、非修飾リボヌクレオチドからなる。構造（Ａ１）（Ａ２）の一部の実施形態において、各Ｎ´は、非修飾リボヌクレオチドからなる。好ましい実施形態において、Ｎおよび／またはＮ´のうちの少なくとも１つは、化学的に修飾されたリボヌクレオチド、非修飾デオキシリボヌクレオチド、化学的に修飾されたデオキシリボヌクレオチド、または非従来的部分である（ただし、各ＮおよびＮ´がデオキシリボヌクレオチドではない場合に限る）。
【０１０９】
一部の実施形態において、構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の核酸化合物は、その糖残基が修飾された少なくとも１つのリボヌクレオチドを含有する。一部の実施形態において、化合物は、糖残基の２´の位置に修飾を含有する。一部の実施形態において、２´の位置の修飾は、アミノ、フルオロ、アルコキシ、またはアルキル部分が存在する。ある実施形態において、２´の修飾は、アルコキシ部分を含有する。好ましい実施形態において、アルコキシ部分は、メトキシ部分（２’−Ｏ−メチル；２’ＯＭｅ；２’ＯＭｅ；２’−ＯＣＨ３とも呼称される）である。一部の実施形態において、核酸化合物は、アンチセンス鎖およびセンス鎖のうちの１つ、または両方において、２´Ｏメチル糖修飾交互のリボヌクレオチドを含有する。他の実施形態において、化合物は、アンチセンス鎖、（Ｎ）ｘまたはＮ１−（Ｎ）ｘにのみ、２´ＯＭｅ糖修飾リボヌクレオチドを含有する。一部の実施形態において、２´Ｏメチル糖修飾リボヌクレオチドは、非修飾のヌクレオチドと交互に存在する。ある実施形態において、アンチセンス鎖の中間のリボヌクレオチド（たとえば、１９ｍｅｒの鎖における、１０位のリボヌクレオチド）は修飾されていない。様々な実施形態において、核酸化合物は、少なくとも５つの交互の２´ＯＭｅ糖修飾リボヌクレオチドおよび非修飾リボヌクレオチドを含有する。さらなる実施形態において、構造（Ａ１）および／または（Ａ２）の化合物は、交互する位置で修飾リボヌクレオチドを含有し、ここで、（Ｎ）ｘまたはＮ１−（Ｎ）ｘの５´末端および３´末端の各リボヌクレオチドは、その糖残基が修飾されており、（Ｎ´）ｙまたはＮ２−（Ｎ）ｙの５´末端および３´末端の各リボヌクレオチドは、その糖残基が修飾されていない。様々な実施形態において、交互する位置のリボヌクレオチドは、糖残基の２´の位置で修飾されている。
【０１１０】
構造（Ａ）、（Ａ１）および（Ａ２）の一部の実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖のいずれも、３´末端および５´末端でリン酸化されていない。他の実施形態において、センス鎖および／またはアンチセンス鎖のうちの１つまたは両方が、３´末端でリン酸化されている。他の実施形態において、センス鎖および／またはアンチセンス鎖のうちの１つまたは両方が、５´末端でリン酸化されている。
【０１１１】
構造（Ａ１）および／または（Ａ２）の一部の実施形態において、（Ｎ）ｘおよび／または（Ｎ´）ｙは、鏡映ヌクレオチドおよび、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するヌクレオチドに結合されたヌクレオチドから選択される、非従来的な部分を少なくとも１つ含有する。一部の好ましい実施形態において、非従来的な部分は、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するヌクレオチドに結合されたヌクレオチド（５´>３´）である。一部の実施形態において、非従来的な部分は鏡映ヌクレオチドである。様々な実施形態において、鏡映ヌクレオチドは、Ｌ−リボヌクレオチド（Ｌ−ＲＮＡ）およびＬ−デオキシリボヌクレオチド（Ｌ−ＤＮＡ）から選択される。一部の実施形態において、鏡映ヌクレオチドは、Ｌ−ＤＮＡである。
【０１１２】
構造（Ａ１）および／または（Ａ２）のさらなる実施形態において、（Ｎ´）ｙは、１〜８の修飾リボヌクレオチドを含有し、ここで、修飾リボヌクレオチドは、デオキシリボース（ＤＮＡ）ヌクレオチドである。ある実施形態において、（Ｎ´）ｙは、１、２、３、４、５、６、７または８までのＤＮＡ部分を含有する。
【０１１３】
現時点での好ましい実施形態において、本明細書に提供される阻害物質は、ｐ５３発現を下方制御する、合成された、化学修飾二本鎖核酸化合物であり、表１の配列番号８〜３３から選択されるオリゴヌクレオチドの対を含有する。
【０１１４】
一部の実施形態において、核酸化合物は、表１において、ペア名称ｐ５３＿１３により特定される、アンチセンス鎖５´ＡＧＵＡＧＵＵＵＣＣＡＵＡＧＧＵＣＵＧ３´（配列番号２１）およびセンス鎖５´ＣＡＧＡＣＣＵＡＵＧＧＡＡＡＣＵＡＣＵ３´（配列番号８）を含有する。
【０１１５】
一部の実施形態において、核酸化合物は、表１において、ペア名称ｐ５３＿３４により特定される、アンチセンス鎖５´ＵＵＡＣＡＵＣＵＣＣＣＡＡＡＣＡＵＣＣ３´（配列番号２２）およびセンス鎖５´ＧＧＡＵＧＵＵＵＧＧＧＡＧＡＵＧＵＡＡ３´（配列番号９）を含有する。
【０１１６】
一部の実施形態において、核酸化合物は、アンチセンス鎖５´ＵＵＡＣＡＵＣＵＣＣＣＡＡＡＣＡＵＣＣ３´（配列番号２２）およびセンス鎖５´ＧＧＡＵＧＵＵＵＧＧＧＡＧＡＵＧＵＡＵ３´（配列番号１８）を含有する。
【０１１７】
一部の実施形態において、核酸化合物は、表１において、ペア名称ｐ５３＿３５により特定される、アンチセンス鎖５´ＵＡＧＡＡＵＧＵＣＡＧＵＣＵＧＡＧＵＣ３´（配列番号２３）およびセンス鎖５´ＧＡＣＵＣＡＧＡＣＵＧＡＣＡＵＵＣＵＡ３´（配列番号１０）を含有する。
【０１１８】
一部の実施形態において、核酸化合物は、表１において、ペア名称ｐ５３＿３６により特定される、アンチセンス鎖５´ＵＵＧＵＡＧＡＡＡＣＵＡＣＣＡＡＣＣＣ３´（配列番号２４）およびセンス鎖５´ＧＧＧＵＵＧＧＵＡＧＵＵＵＣＵＡＣＡＡ３´（配列番号１１）を含有する。
【０１１９】
一部の実施形態において、核酸化合物は、表１において、ペア名称ｐ５３＿３７により特定される、アンチセンス鎖５´ＵＡＣＡＵＣＵＣＣＣＡＡＡＣＡＵＣＣＣ３´（配列番号２５）およびセンス鎖５´ＧＧＧＡＵＧＵＵＵＧＧＧＡＧＡＵＧＵＡ３´（配列番号１２）を含有する。
【０１２０】
一部の実施形態において、核酸化合物は、表１において、ペア名称ｐ５３＿３８により特定される、アンチセンス鎖５´ＵＡＣＡＡＧＵＣＵＵＧＧＵＧＧＡＵＣＣ３´（配列番号２６）およびセンス鎖５´ＧＧＡＵＣＣＡＣＣＡＡＧＡＣＵＵＧＵＡ３´（配列番号１３）を含有する。
【０１２１】
一部の実施形態において、核酸化合物は、表１において、ペア名称ｐ５３＿３９により特定される、アンチセンス鎖５´ＵＡＵＣＵＣＣＣＡＡＡＣＡＵＣＣＣＵＣ３´（配列番号２７）およびセンス鎖５´ＧＡＧＧＧＡＵＧＵＵＵＧＧＧＡＧＡＵＡ３´（配列番号１４）を含有する。
【０１２２】
一部の実施形態において、核酸化合物は、表１において、ペア名称ｐ５３＿４０により特定される、アンチセンス鎖５´ＵＵＣＡＧＵＣＵＧＡＧＵＣＡＧＧＣＣＣ３´（配列番号２８）およびセンス鎖５´ＧＧＧＣＣＵＧＡＣＵＣＡＧＡＣＵＧＡＡ３´（配列番号１５）を含有する。
【０１２３】
一部の実施形態において、核酸化合物は、アンチセンス鎖５´ＵＵＣＡＧＵＣＵＧＡＧＵＣＡＧＧＣＣＣ３´（配列番号２８）およびセンス鎖５´ＧＧＧＣＣＵＧＡＣＵＣＡＧＡＣＵＧＡＡ３´（配列番号１９）を含有する。
【０１２４】
一部の実施形態において、核酸化合物は、表１において、ペア名称ｐ５３＿４１により特定される、アンチセンス鎖５´ＡＡＧＡＡＵＧＵＣＡＧＵＣＵＧＡＧＵＣ３´（配列番号２９）およびセンス鎖５´ＧＡＣＵＣＡＧＡＣＵＧＡＣＡＵＵＣＵＵ３´（配列番号１６）を含有する。
【０１２５】
一部の実施形態において、核酸化合物は、表１において、ペア名称ｐ５３＿４２により特定される、アンチセンス鎖５´ＵＵＧＡＧＧＵＡＧＧＵＧＣＡＡＡＵＧＣ３´（配列番号３０）およびセンス鎖５´ＧＣＡＵＵＵＧＣＡＣＣＵＡＣＣＵＣＡＡ３´（配列番号１７）を含有する。
【０１２６】
一部の実施形態において、核酸化合物は、表１において、ペア名称ｐ５３＿４３により特定される、アンチセンス鎖５´ＡＵＡＣＡＵＣＵＣＣＣＡＡＡＣＡＵＣＣ３´（配列番号３１）およびセンス鎖５´ＧＧＡＵＧＵＵＵＧＧＧＡＧＡＵＧＵＡＵ３´（配列番号１８）を含有する。
【０１２７】
一部の実施形態において、核酸化合物は、アンチセンス鎖５´ＡＵＡＣＡＵＣＵＣＣＣＡＡＡＣＡＵＣＣ３´（配列番号３１）およびセンス鎖５´ＧＧＡＵＧＵＵＵＧＧＧＡＧＡＵＧＵＡＡ３´（配列番号９）を含有する。
【０１２８】
一部の実施形態において、核酸化合物は、表１において、ペア名称ｐ５３＿４４により特定される、アンチセンス鎖５´ＡＵＣＡＧＵＣＵＧＡＧＵＣＡＧＧＣＣＣ３´（配列番号３２）およびセンス鎖５´ＧＧＧＣＣＵＧＡＣＵＣＡＧＡＣＵＧＡＵ３´（配列番号１９）を含有する。
【０１２９】
一部の実施形態において、核酸化合物は、表１において、ペア名称ｐ５３＿４５により特定される、アンチセンス鎖５´ＵＧＵＡＧＵＵＵＣＣＡＵＡＧＧＵＣＵＧ３´（配列番号３３）およびセンス鎖５´ＣＡＧＡＣＣＵＡＵＧＧＡＡＡＣＵＡＣＡ３´（配列番号２０）を含有する。
【０１３０】
一部の実施形態において、核酸化合物は、アンチセンス鎖５´ＡＧＵＡＧＵＵＵＣＣＡＵＡＧＧＵＣＵＧ３´（配列番号２１）およびセンス鎖５´ＣＡＧＡＣＣＵＡＵＧＧＡＡＡＣＵＡＣＡ３´（配列番号２０）を含有する。
【０１３１】
構造（Ａ）の一部の実施形態において、各Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｕは、非修飾リボヌクレオチド、または、以下のパターンに従って交互する２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドである：
5’   NNNNNNNNNNNNNNNNNNN  3’  (アンチセンス鎖)
│││││││││││││││││││
3’   NNNNNNNNNNNNNNNNNNN  5’ (センス鎖)
ここで、各Ｎは、非修飾リボヌクレオチドであり、
ここで、各Ｎは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり、
ここで、各「│」はＮとＮの間の塩基対合を表し、
ここで、アンチセンス鎖において、各連続したＮまたはＮは、隣接するＮまたはＮに共有結合されており、
ここで、センス鎖において、各連続したＮまたはＮは、隣接するＮまたはＮに共有結合されており、
ここで、センス鎖の配列は、アンチセンス鎖の配列に対し相補的であり；および、
ここで、アンチセンス鎖配列およびセンス鎖配列は、配列番号８〜３３に記述されているか；または、そのような化合物の薬学的に受容可能な塩である。
【０１３２】
構造（Ａ）の本実施形態による、ある好ましい二本鎖は、以下の表Ａにおいて、記述されている。
表Ａ
【表３】
0006364009.tif 000004
【０１３３】
上述および下述の全ての表において、二本鎖名称は、接頭語「ｐ５３」および「ＴＰ５３」（相互交換可能に用いられる）により特定される。
【０１３４】
表ＡのすべてのｄｓＲＮＡ化合物に対して：
Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃは、非修飾のリボヌクレオチドを示し；
Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃは、２−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドを示す。
【０１３５】
表Ａの核酸化合物の様々な実施形態において、アンチセンス鎖およびセンス鎖のそれぞれの３´末端および５´末端のリボヌクレオチドは、リン酸化されていても、または、リン酸化されていなくても良い。表Ａの各核酸化合物の一部の実施形態において、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、３´末端および５´末端の両方で、リン酸化されていない。
【０１３６】
ｐ５３遺伝子の下方制御のための二本鎖核酸化合物の作製のための、ある好ましい二本鎖は、以下の表Ｂに記述される。さらに好ましい二本鎖は、以下の実施例の項において提供される。
表Ｂ．  ある好ましい二本鎖
【表４】
0006364009.tif 000005
0006364009.tif 000006
【０１３７】
表Ｂのすべての二本鎖核酸化合物に対して：
Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃは、非修飾のリボヌクレオチドを示し；
Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃは、２−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドを示し；
a、u、c、gは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するヌクレオチドに結合されたヌクレオチドを示し（５´>３´）；
ｃａｐは、キャップ部分を示す。一部の好ましい実施形態において、キャップ部分は、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、逆位デオキシリボース部分、逆位デオキシ脱塩基部分（ｉｄＡｂ）、アミノ−Ｃ６部分（ＡＭ−ｃ６）、Ｃ６−アミノ−ｐｉ、非ヌクレオチド部分、鏡映ヌクレオチド、５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフタレン酪酸ホスホジエステル（ＴＨＮＢ）および結合部分からなる群である。
【０１３８】
ｐｉは、３´リン酸を示す。
【０１３９】
ｚは、キャップ部分を示す。
【０１４０】
＄は、末端リン酸が無いことを示す。
【０１４１】
ｄＴ＄は、チミジン（リン酸が無い）ことを示す。
【０１４２】
Ｃ３−は、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）［ＣＡＳ  ＲＮ：１３５０７−４２−１］を示す。
【０１４３】
Ｃ３−Ｃ３は、２つの連続的なＣ３分子を示す。
【０１４４】
上記の表Ｂに示される核酸化合物の様々な実施形態において、アンチセンス鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングはリン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）。
【０１４５】
上記の表Ｂに示される核酸化合物の一部の実施形態において、各核酸化合物の、アンチセンス鎖の５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されている。上記の表Ｂに示される核酸化合物の一部の実施形態において、各核酸化合物の、アンチセンス鎖の５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されていない。
【０１４６】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-CAGACCUAUGGAAACUACU-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号８）
5’   AGUAGUuUCCAUAGGUCUG-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２１）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｕは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。そのような化合物の１つの実施形態において、センス鎖の５´末端に共有結合された５´キャップは、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）であり；および、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されており、３´末端のオーバーハングはリン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）。
【０１４７】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-CAGACCUAUGGAAAcuacu-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号８）
5’   AGUAGUuUCCAUAGGUCUG-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２１）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ａ、ｕおよびｃのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。そのような化合物の１つの実施形態において、センス鎖の５´末端に共有結合された５´キャップは、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）であり；および、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されており、３´末端のオーバーハングはリン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）。
【０１４８】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-CAGACCUAUGGAAACUACU-pi 3’   （センス鎖；配列番号８）
5’   AGUAGUUUCCAUAGGUCUG-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２１）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；および、
ここで、センス鎖およびアンチセンス鎖において、３´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１４９】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-CAGACCUAUGGAAAcuaca-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号２０）
5’   UGUAGUuUCCAUAGGUCUG-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３３）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ａ、ｕおよびｃのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１５０】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-CAGACCUAUGGAAACUACA-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号２０）
5’   UGUAGUUUCCAUAGGUCUG-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３３）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、センス鎖において、３´末端のオーバーハングはリン酸化されており（Ｃ３−ｐｉ）；および、
ここで、アンチセンス鎖において、３´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１５１】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-CAGACCUAUGGAAACUACA-pi 3’   （センス鎖；配列番号２０）
5’   UGUAGUUUCCAUAGGUCUG 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３３）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、センス鎖において、３´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されている、修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１５２】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-CAGACCUAUGGAAACUACA 3’   （センス鎖；配列番号２０）
5’   UGUAGUUUCCAUAGGUCUG 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３３）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有する；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１５３】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   C3-CAGACCUAUGGAAACUACU-C3-pi 3’   （センス鎖；配列番号８）
5’   phos-AGUAGUuUCCAUAGGUCUG-C3-C3-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２１）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｕは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´  Ｃ３キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方の３´末端はリン酸化されており（ｐｉ）；および、
ここで、アンチセンス鎖の５´末端はリン酸化されている（ｐｈｏｓ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１５４】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   C3-CAGACCUAUGGAAAcuaca-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号２０）
5’   phos-AGUAGUuUCCAUAGGUCUG-C3-C3-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２１）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ａ、ｕおよびｃのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´  Ｃ３キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方の３´末端はリン酸化されており（ｐｉ）；および、
ここで、アンチセンス鎖の５´末端はリン酸化されている（ｐｈｏｓ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１５５】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGAUGUUUGGGAGAUGUAA-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号９）
5’   UUACAUcUCCCAAACAUCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１５６】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGAUGUUUGGGAGAuguaa-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号９）
5’   UUACAUcUCCCAAACAUCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ａ、ｕ、ｃおよびｇのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１５７】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGAUGUUUGGGAGAuguaa-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号９）
5’   AUACAUcUCCCAAACAUCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３１）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ａ、ｕ、ｃおよびｇのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１５８】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGAUGUUUGGGAGAUGUAU-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１８）
5’   UUACAUcUCCCAAACAUCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１５９】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGAUGUUUGGGAGAuguau-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１８）
5’   AUACAUcUCCCAAACAUCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３１）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ａ、ｕ、ｃおよびｇのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１６０】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   GGAUGUUUGGGAGAUGUAU-dTdT  3’   （センス鎖；配列番号１８）
5’   AUACAUCUCCCAAACAUCC-dTdT 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３１）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖およびアンチセンス鎖のそれぞれは、当該鎖の３´末端に共有結合された２つのヌクレオチド  チミジン−チミジン（ｄＴｄＴ）オーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端およびアンチセンス鎖の３´末端は、リン酸化されていない；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１６１】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GACUCAGACUGACAuucua-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１０）
5’   UAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２３）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ａ、ｕ、ｃおよびｇのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１６２】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GACUCAGACUGACAUUCUA-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１０）
5’   UAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２３）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｇは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１６３】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GACUCAGACUGACAUUCUA-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１０）
5’   UAGAAuGUCAGUCUGAGUC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２３）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｕは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１６４】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GACUCAGACUGACAUUCUA-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１０）
5’   UAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２３）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｇは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１６５】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   GACUCAGACUGACAUUCUA-dTdT  3’   （センス鎖；配列番号１０）
5’   UAGAAUGUCAGUCUGAGUC-dTdT 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２３）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖およびアンチセンス鎖のそれぞれは、当該鎖の３´末端に共有結合された２つのヌクレオチド  チミジン−チミジン（ｄＴｄＴ）オーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端およびアンチセンス鎖の３´末端は、リン酸化されていない；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１６６】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGACUGAA-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１５）
5’   UUCAGUcUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２８）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１６７】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGAcugaa-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１５）
5’   UUCAGuCUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２８）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ａ、ｕ、ｃおよびｇのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１６８】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGACUGAU-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   UUCAGuCUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２８）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｕは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１６９】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGAcugau-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   AUCAGuCUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ａ、ｕ、ｃおよびｇのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１７０】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGACUGAA-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１５）
5’   UUCAGUcUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２８）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１７１】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGACUGAU-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   AUCAGUcUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１７２】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGACUGAA-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１５）
5’   UUCAGuCUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２８）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｕのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１７３】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   GGGCCUGACUCAGACUGAA-dTdT  3’   （センス鎖；配列番号１５）
5’   UUCAGUCUGAGUCAGGCCC-dTdT 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２８）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖およびアンチセンス鎖のそれぞれは、当該鎖の３´末端に共有結合された２つのヌクレオチド  チミジン−チミジン（ｄＴｄＴ）オーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端およびアンチセンス鎖の３´末端は、リン酸化されていない；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１７４】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GACUCAGACUGACAuucuu-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   AAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｕ、ｃおよびｇのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。そのような化合物の１つの実施形態において、センス鎖の５´末端に共有結合された５´キャップは、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）であり；および、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化され（ｐｈｏｓ）、および、３´末端のオーバーハングはリン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）。
【０１７５】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GACUCAGACUGACAUUCUU-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   AAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｇは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１７６】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GACUCAGACUGACAUUCUU-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   AAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｇは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１７７】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GACUCAGACUGACAUUCUU-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   AAGAAuGUCAGUCUGAGUC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｕは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１７８】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   GACUCAGACUGACAUUCUA-dTdT  3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   AAGAAUGUCAGUCUGAGUC-dTdT 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖およびアンチセンス鎖のそれぞれは、当該鎖の３´末端に共有結合された２つのヌクレオチド  チミジン−チミジン（ｄＴｄＴ）オーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端およびアンチセンス鎖の３´末端は、リン酸化されていない；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１７９】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   C3-GACUCAGACUGACAUUCUU-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   phos-AAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｇは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し、ここで、当該オーバーハングはリン酸化されており（Ｃ３−ｐｉ）；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合されたＣ３  ５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；ならびに、
ここで、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化され（ｐｈｏｓ）、および、３´末端のオーバーハングはリン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１８０】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   C3-GACUCAGACUGACAuucuu-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   phos-AAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｃのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｕ、ｃおよびｇのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し、ここで、当該オーバーハングはリン酸化されており（Ｃ３−ｐｉ）；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合されたＣ３  ５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；ならびに、
ここで、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化され（ｐｈｏｓ）、および、３´末端のオーバーハングはリン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１８１】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   C3-GACUCAGACUGACAUUCUU-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１６）
5’   phos-AAGAAUgUCAGUCUGAGUC-C3-C3-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号２９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｇは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し、ここで、当該オーバーハングはリン酸化されており（Ｃ３−ｐｉ）；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合されたＣ３  ５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；ならびに、
ここで、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化され（ｐｈｏｓ）、および、３´末端のオーバーハングはリン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１８２】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGAUGUUUGGGAGAuguau-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１８）
5’   AUACAUcUCCCAAACAUCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３１）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ａ、ｕ、ｃおよびｇのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端は、リン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１８３】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGAUGUUUGGGAGAUGUAU-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１８）
5’   AUACAUcUCCCAAACAUCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３１）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端は、リン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１８４】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGACUGAU-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   AUCAGUcUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端は、リン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。そのような化合物の１つの実施形態において、センス鎖の５´末端に共有結合された５´キャップは、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）であり；および、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化され（ｐｈｏｓ）、および、３´末端のオーバーハングはリン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）。
【０１８５】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGAcugau-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   AUCAGuCUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ａ、ｕ、ｃおよびｇのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端は、リン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１８６】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGACUGAU-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   AUCAGuCUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｕは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端は、リン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１８７】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-GGGCCUGACUCAGACUGAU-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   AUCAGUcUGAGUCAGGCCC-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端は、リン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１８８】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   C3-GGGCCUGACUCAGAcugau-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   phos-AUCAGUcUGAGUCAGGCCC-C3-C3-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し、および、ここで、当該オーバーハングはリン酸化されており（Ｃ３−ｐｉ）；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合されたＣ３  ５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；ならびに、
ここで、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されており（ｐｈｏｓ）、および、３´末端のオーバーハングはリン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１８９】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   C3-GGGCCUGACUCAGAcugau-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   phos-AUCAGUcUGAGUCAGGCCC-C3-C3-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ｃは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し、および、ここで、当該オーバーハングはリン酸化されており（Ｃ３−ｐｉ）；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合されたＣ３  ５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；ならびに、
ここで、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されており（ｐｈｏｓ）、および、３´末端のオーバーハングはリン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１９０】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   C3-GGGCCUGACUCAGACUGAU-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号１９）
5’   phos-AUCAGUcUGAGUCAGGCCC-C3-C3-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３２）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、ＵおよびＣは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ｃは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し、および、ここで、当該オーバーハングはリン酸化されており（Ｃ３−ｐｉ）；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合されたＣ３  ５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；ならびに、
ここで、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されており（ｐｈｏｓ）、および、３´末端のオーバーハングはリン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１９１】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-CAGACCUAUGGAAAcuaca-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号２０）
5’   UGUAGUuUCCAUAGGUCUG-C3-C3 3’   （アンチセンス鎖；配列番号１９）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、ＵおよびＣは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、ａ、ｕおよびｃのそれぞれは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドであり（５´>３´）；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；
ここで、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有し；および、
ここで、センス鎖の３´末端はリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１９２】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-CAGACCUAUGGAAACUACA-C3-pi  3’   （センス鎖；配列番号２０）
5’   UGUAGUUUCCAUAGGUCUG-pi 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３３）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合された１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）非ヌクレオチドオーバーハングを含有し、および、ここで、当該センス鎖の３´末端はリン酸化されており（ｐｉ）；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；ならびに、
ここで、アンチセンス鎖において、３´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１９３】
１つの実施形態において、以下に記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖を有する修飾核酸化合物であって：
5’   cap-CAGACCUAUGGAAACUACA-pi  3’   （センス鎖；配列番号２０）
5’   UGUAGUUUCCAUAGGUCUG 3’   （アンチセンス鎖；配列番号３３）
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、非修飾のリボヌクレオチドであり；
ここで、Ａ、Ｕ、ＧおよびＣのそれぞれは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドであり；
ここで、アンチセンス鎖およびセンス鎖において、各連続したリボヌクレオチドは、ホスホジエステル結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されており；
ここで、センス鎖は、当該鎖の５´末端に共有結合された５´キャップを含有し；ならびに、
ここで、センス鎖において、３´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されている（ｐｉ）；修飾核酸化合物、または、
そのような化合物の薬学的に受容可能な塩が提供される。
【０１９４】
本明細書に記述される上述の核酸化合物の様々な実施形態において、アンチセンス鎖は、当該鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングを含有する。本明細書に記述される上述の核酸化合物の一部の好ましい実施形態において、アンチセンス鎖の３´末端に共有結合されたＣ３−Ｃ３非ヌクレオチドオーバーハングは、リン酸化されている（−Ｃ３−Ｃ３−ｐｉ）。
【０１９５】
本明細書に記述される核酸化合物の様々な実施形態において、５´キャップは、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、逆位デオキシリボース部分、逆位デオキシ脱塩基部分（ｉｄＡｂ）、アミノ−Ｃ６部分（ＡＭ−ｃ６）、Ｃ６−アミノ−ｐｉ、非ヌクレオチド部分、鏡映ヌクレオチド、５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフタレン酪酸ホスホジエステル（ＴＨＮＢ）、ビタミンおよび薬剤部分からなる群から選択される。
【０１９６】
本明細書に記述される核酸化合物の様々な実施形態において、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドは、リン酸化されている（ｐｈｏｓ）。本明細書に記述される核酸化合物の様々な実施形態において、アンチセンス鎖において、５´末端のリボヌクレオチドは、リン酸化されていない（＄）。
【０１９７】
別の態様において、本明細書に開示されるそのような核酸化合物を１つ以上；および、薬学的に受容可能な担体または賦形剤を含有する組成物が提供される。一部の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子は、裸のｄｓＲＮＡとして投与される。他の実施形態において、ｄｓＲＮＡ分子は、薬学的に受容可能な担体と混合される。さらに他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、薬剤担体に内包化される。
【０１９８】
別の態様において、限定されないが、抗癌療法に関連した脱毛、腎損傷／腎不全（急性腎障害、特に虚血性急性腎不全、および慢性腎障害を含む）；内耳または中耳の疾患または障害（たとえば、聴覚障害、平衡障害等）；目の疾患または障害、臓器移植患者における臓器移植後臓器機能障害、特に、腎臓移植患者における臓器移植後臓器機能障害；脳卒中、脳損傷、脊髄損傷、パーキンソン病、アルツハイマー病、心毒性、心筋梗塞／心不全、から選択される疾患または障害に罹患している対象の治療における、本明細書に開示される分子の使用が提供される。本明細書において、そのような疾患または障害の発生または重篤度を治療または予防するための方法であって、その必要のある対象において治療または予防するための方法が提供され、ここで、当該疾患または障害は、ｐ５３遺伝子の発現に関連している。そのような方法には、ｐ５３遺伝子の発現もしくは活性を阻害または減少させる、本明細書に提供される１以上の化合物の治療有効量または予防有効量を、そのような治療の必要がある哺乳類に対し投与することが含まれる。
【０１９９】
一部の実施形態において、少なくとも２つのｄｓＲＮＡ剤が共に投与される（たとえば、同時に、または順番に）。他の実施形態において、少なくとも２つのｄｓＲＮＡ剤が、それらの組み合わせを含有する医薬組成物中において、投与される。
【０２００】
本明細書において、本明細書に開示される様々な修飾を含有する機能性核酸、そのような修飾機能性核酸を含有する薬品、医薬組成物の製造のためのそれらの使用、および、本明細書に開示される疾患または障害に罹患している患者、または、本明細書に開示される疾患または障害に罹患しやすい患者の治療のための方法が提供される。
【０２０１】
定義
便宜的のため、本明細書、実施例、および請求項中に使用された用語を、本明細書において記述する。
【０２０２】
本明細書において使用される、単数形の「ひとつの（ａ、ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」とは、内容が別段明確に指定しない限り、複数形を含むことに注意されたい。
【０２０３】
態様または実施形態がマーカッシュ形式の群または代替の他の形式の群で記述される場合、当業者であれば、本開示が、当該群の構成要素の任意の亜群、または任意の個々の構成要素としても記述されるものであると、認識するであろう。
【０２０４】
「阻害物質」は、遺伝子の発現、または、そのような遺伝子の産物の活性を（部分的にまたは完全に）、所望の生物学的または生理学的効果を得るのに十分な程度にまで減少させることが出来る化合物である。本明細書において使用される、「阻害物質」という用語は、限定されないが、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、合成ｓｈＲＮＡ；ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡならびにリボザイムを含む、オリゴヌクレオチド阻害物質のうちの１つ以上を指す。
【０２０５】
「二本鎖核酸化合物」または、「ｄｓＲＮＡ分子」または、「ｄｓＲＮＡ阻害物質」は、遺伝子の発現、またはそのような遺伝子の産物の活性を、所望の生理学的または生物学的効果を得るのに十分な程度にまで減少、または下方制御することができる化合物であり、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、合成ｓｈＲＮＡ；ｍｉＲＮＡのうちの１以上を含む。阻害はまた、下方制御（または、ＲＮＡｉに対してはサイレンシング）とも呼称されうる。
【０２０６】
本明細書において使用される、「阻害する」という用語は、遺伝子の発現または、そのような遺伝子の産物の活性を、所望の生物学的または生理学的効果を得るのに十分な程度にまで減少、または下方制御することを指す。阻害は、完全、または部分的なもののいずれかである。
【０２０７】
本明細書において使用される、標的遺伝子の「下方制御」または「阻害」という用語は、遺伝子の発現（転写または翻訳）の阻害、または、標的遺伝子のポリペプチド活性の阻害を意味し、ここで、当該標的遺伝子は、配列番号１〜７のうちの任意の１つに記述されるｍＲＮＡへと転写されたｐ５３、またはそのＳＮＰ（一塩基多型）または他の変異体である。ヒトｐ５３遺伝子の転写変異体のそれぞれのｍＲＮＡに対するｇｉナンバーは、配列番号１〜７に記述されている。標的ｍＲＮＡ配列、または転写変異体のポリヌクレオチド配列は、配列番号１〜７に記述されるｍＲＮＡ配列、またはそれらの任意の相同的な配列（好ましくは、配列番号１〜７に記述されるｍＲＮＡのうちの任意の１つに対して、少なくとも７０％の同一性、より好ましくは８０％の同一性、さらにより好ましくは９０％または９５％の同一性を有する）を指す。それゆえ、本明細書に記述される、変異、修正または修飾を受けた配列番号１〜７の内の任意の１つから誘導されたポリヌクレオチド配列は、本開示に包含される。「ｍＲＮＡポリヌクレオチド配列」、「ｍＲＮＡ配列」、および「ｍＲＮＡ」という用語は相互交換可能に用いられる。
【０２０８】
本明細書において使用される、「オリゴヌクレオチド」および「核酸」という用語は、相互交換可能に用いられても良く、および、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、およびリボ核酸（ＲＮＡ）を含有するヌクレオチド配列を指す。当該用語は、ヌクレオチドアナログから作製されたＲＮＡまたはＤＮＡのいずれかのアナログを、均等物として含むことを理解されたい。
【０２０９】
「オリゴヌクレオチド」または「オリゴマー」は、約２〜約５０ヌクレオチドのデオキシリボヌクレオチド、またはリボヌクレオチドの配列を指す。ＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオチドのそれぞれは、独立して、天然、または合成であってもよく、および／または、修飾されていても、修飾されていなくても良い。修飾には、オリゴヌクレオチド中の糖部分、塩基部分、および／または、ヌクレオチド間の結合に対する変更を含む。本明細書に開示される核酸化合物には、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾デオキシヌクレオチド、修飾リボヌクレオチド、非従来的な部分、およびそれらの組み合わせを含有する分子が包含される（ただし、各ヌクレオチドがデオキシリボヌクレオチドではない場合に限る）。
【０２１０】
本明細書において使用される、「非従来的な部分」という用語には、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、非修飾デオキシリボヌクレオチド、修飾デオキシリボヌクレオチド、鏡映ヌクレオチド（Ｌ−ＤＮＡおよびＬ−ＲＮＡ）、塩基対ではないヌクレオチドアナログ、および２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するヌクレオチドに結合されたヌクレオチド；Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５およびＣ６部分；トレオース核酸（ＴＮＡ）、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）塩基修飾核酸アナログ；モルホリノ；架橋核酸（ＬＮＡを含む）およびエチレン架橋核酸（ＥＮＡ）が含まれる。
【０２１１】
「実質的に相補的」とは、別の配列に対し、約８４％超の相補性を指す。たとえば、１９塩基対からなる二本鎖領域においては、１つのミスマッチは、９４．７％の相補性となり、２つのミスマッチは８９．５％の相補性となり、３つのミスマッチは８４．２％の相補性となり、当該二本鎖領域は実質的に相補的となる。ゆえに、「実質的に同一」とは、別の配列に対し、約８４％超の同一性を指す。
【０２１２】
「ヌクレオチド」は、天然もしくは合成であってもよい、および／または、修飾されていてもよい、もしくは修飾されていなくてもよい、デオキシリボヌクレオチドならびにリボヌクレオチドを包含することを意味する。修飾には、オリゴヌクレオチド中の糖部分、塩基部分および／または、ヌクレオチド間の結合に対する変更が含まれる。
【０２１３】
ヌクレオチドは、天然型塩基、または合成修飾塩基から選択されても良い。天然型塩基としては、アデニン、グアニン、シトシン、チミンおよびウラシルが含まれる。ヌクレオチドの修飾塩基としては、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル、２−プロピルおよび他のアルキルアデニン、５−ハロウラシル、５−ハロシトシン、６−アザシトシン、および６−アザチミン、シュードウラシル、４−チオウラシル、８−ハロアデニン、８−アミノアデニン、８−チオールアデニン、８−チオールアルキルアデニン、８−ヒドロキシルアデニン、および他の８−置換アデニン、８−ハログアニン、８−アミノグアニン、８−チオールグアニン、８−チオアルキルグアニン、８−ヒドロキシルグアニンおよび他の置換グアニン、他のアザおよびデアザアデニン、他のアザおよびデアザグアニン、５−トリフルオロメチルウラシルならびに、５−トリフルオロシトシンが含まれる。一部の実施形態において、オリゴヌクレオチド中の１以上のヌクレオチドはイノシンと置換されている。
【０２１４】
一部の実施形態において、本開示により、修飾されていないヌクレオチドおよび修飾されたヌクレオチド、および／または、非従来的な部分を含有する、阻害性オリゴヌクレオチド化合物が提供される。当該化合物は、糖修飾、塩基修飾、および、ヌクレオチド間結合修飾からなる群から選択される修飾ヌクレオチドを少なくとも１つ含有し、および、たとえば、限定されないが、ＤＮＡ、ＬＮＡ（ロックド核酸）、ＥＮＡ（エチレン架橋核酸）、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、アラビノシド、ホスホノカルボキシレート、またはホスフィノカルボキシレートヌクレオチド（ＰＡＣＥヌクレオチド）、鏡映ヌクレオチド、または６炭糖を有するヌクレオチド等の非従来的な部分を含有しても良い。
【０２１５】
ヌクレオチド／オリゴヌクレオチドのすべてのアナログ、または、ヌクレオチド／オリゴヌクレオチドに対するすべての修飾が、本明細書に開示される核酸化合物に使用される（ただし、当該アナログまたは修飾により、当該核酸化合物の機能が実質的な悪影響を受けない場合に限る）。
【０２１６】
糖修飾には、糖残基の２´部分に対する修飾が含まれ、および、欧州特許第ＥＰ  ０  ５８６  ５２０  Ｂ１号または同第ＥＰ  ０  ６１８  ９２５  Ｂ１号に記述される、特に、アミノ、フルオロ、アルコキシ（たとえば、メトキシ）、アルキル、アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ＣＮ、ＣＦ、イミダゾール、カルボキシレート、チオエート、Ｃ１〜Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリルまたはアラルキル、ＯＣＦ３、ＯＣＮ、Ｏ−、Ｓ−、またはＮ−アルキル；Ｏ−、Ｓ、またはＮ−アルケニル；ＳＯＣＨ３；ＳＯ２ＣＨ３；ＯＮＯ２；ＮＯ２、Ｎ３；ヘテロジクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｚｙｃｌｏａｌｋｙｌ）；ヘテロシクロアルカリル（ｈｅｔｅｒｏｚｙｃｌｏａｌｋａｒｙｌ）；アミノアルキルアミノ；ポリアルキルアミノまたは置換シリルが包含される。
【０２１７】
１つの実施形態において、本明細書に開示される核酸分子は、糖部分に２´修飾を含有する（「２´糖修飾」）リボヌクレオチドを少なくとも１つ含有する。ある実施形態において、化合物は、２’−Ｏ−アルキル、または２’−フルオロ、または２’−Ｏ−アリル、または、任意選択的に交互の位置に対する、任意の他の２’修飾を含有する。他の、安定化修飾もまた、可能である（たとえば、末端修飾）。一部の実施形態において、好ましい２’−Ｏ−アルキルは、２’−Ｏ−メチル（メトキシ）糖修飾である。
【０２１８】
一部の実施形態において、オリゴヌクレオチドの主鎖は修飾され、リン酸−Ｄ−リボース体を含有するが、チオホスフェート−Ｄ−リボース体、トリエステル、チオエート、２’−５’架橋主鎖（５’ − ２’としてもまた呼称されうる）、ＰＡＣＥ等もまた、含有してもよい。
【０２１９】
本明細書において使用される、「対ではないヌクレオチドアナログ」という用語は、塩基対ではない部分（限定されないが、６脱アミノアデノシン（６  ｄｅｓ  ａｍｉｎｏ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ）（ネブラリン（Ｎｅｂｕｌａｒｉｎｅ））、４−Ｍｅ−インドール、３−ニトロピロール、５−ニトロインドール、Ｄｓ、Ｐａ、Ｎ３−ＭｅリボＵ、Ｎ３−ＭｅリボＴ、Ｎ３−Ｍｅ  ｄＣ、Ｎ３−Ｍｅ−ｄＴ、Ｎ１−Ｍｅ−ｄＧ、Ｎ１−Ｍｅ−ｄＡ、Ｎ３−エチル−ｄＣ、Ｎ３−Ｍｅ  ｄＣを含む）を含有する、ヌクレオチドアナログを意味する。一部の実施形態において、塩基対ではないヌクレオチドアナログは、リボヌクレオチドである。他の実施形態において、他の実施形態において、塩基対ではないヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチドである。ヌクレオチドアナログの例は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）であり、ここで、ＤＮＡ（またはＲＮＡ）のデオキシリボース（またはリボース）リン酸主鎖は、ペプチド中に存在するものと類似したポリアミド主鎖と置換されている。ＰＮＡアナログは、酵素分解に対して抵抗性であり、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける安定性を増強させることが示されている。オリゴヌクレオチドに対して行うことができる他の修飾としては、ポリマー主鎖、環状主鎖、非環状主鎖、チオホスフェート−Ｄ−リボース主鎖、トリエステル主鎖、チオエート主鎖、２’−５’架橋主鎖、人工核酸、モルホリノ核酸、グリコール核酸（ＧＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、アラビノシド、および鏡映ヌクレオシド（たとえば、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドの代わりに、β−Ｌ−デオキシリボヌクレオシド）が挙げられる。ＬＮＡヌクレオチドを含有するｄｓＲＮＡ分子の例は、Ｅｌｍｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （ＮＡＲ  ２００５，  ３３（１）：４３９−４４７）に開示されている。
【０２２０】
本開示の化合物は、１以上の逆位ヌクレオチド（たとえば、逆位チミジンまたは逆位アデニン）（たとえば、Ｔａｋｅｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  ＪＢＣ  ２７７（２６）：２３８００−０６を参照のこと）を用いて合成されてもよい。
【０２２１】
「鏡映」ヌクレオチドは、天然型ヌクレオチドまたは普遍的に用いられているヌクレオチドに対して、反転したキラリティーを有するヌクレオチドである（すなわち、天然型（Ｄ−ヌクレオチド）の鏡像（Ｌ−ヌクレオチド）であり、鏡映リボヌクレオチドの場合においては、Ｌ−ＲＮＡ、および「スピーゲルマー（ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ）」とも呼称される）。ヌクレオチドはリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドであっても良く、さらに、少なくとも１つの糖、塩基および／または主鎖修飾を含有しても良い。鏡映ヌクレオチドの例は、米国特許第６，５８６，２３８号に開示されている。米国特許第６，６０２，８５８号は、少なくとも１つのＬ−ヌクレオチド置換を含有する核酸触媒を開示している。
【０２２２】
他の修飾としては、オリゴヌクレオチドの５´部分および／または３´部分への末端修飾が挙げられ、キャップ部分としてもまた知られている。そのような末端修飾は、ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、脂質、ペプチド、糖および逆位脱塩基部分から選択される。
【０２２３】
本明細書に開示される核酸化合物の様々な実施形態において、好ましい修飾としては、センス鎖および／またはアンチセンス鎖中のＴＮＡ部分の組み込みが挙げられる。ＴＮＡ部分を含有するｄｓＲＮＡの例は、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ１１／０６３３６５号（本発明の譲受人と同一）に開示されている。一部の実施形態において、センス鎖の１〜１９リボヌクレオチドが、ＴＮＡと置換されていてもよい。
【０２２４】
本明細書に開示される核酸化合物の様々な実施形態において、好ましい修飾としては、センス鎖および／またはアンチセンス鎖中のピラゾロトリアジン系修飾ヌクレオチド部分の組み込みが挙げられる。ピラゾロトリアジン部分を含有するｄｓＲＮＡおよびピラゾロトリアジン部分の例は、国際出願ＰＣＴ／ＩＬ２０１３／０５０４６５号（本発明の譲受人に共譲渡）に開示されている。ピラゾロトリアジンＤＮＡまたはＲＮＡアナログは、好ましくは、１９ｍｅｒのアンチセンス鎖へ１，５，６または７（５´>３´）の位置において組み込まれる。一部の実施形態において、ピラゾロトリアジンＲＮＡアナログが好ましい。ピラゾロトリアジンＤＮＡアナログまたはピラゾロトリアジンＲＮＡアナログはまた、３´末端オーバーハングとして、センス鎖またはアンチセンス鎖の３´末端に共有結合されていてもよい。
【０２２５】
本明細書において使用される、「結合部分」という用語は、核酸分子、好ましくは、５´末端または３´末端のうちの１つ以上に共有結合されることができる、ペプチド、脂質、薬剤、ビタミン、ミネラル、フルオロフォアを含む部分を指す。理論に拘束されることは望まないが、結合部分により、核酸分子の活性に悪影響を与えることなく、生体分布、エンドソーム脱出、細胞取込、原形質保持、分子の標的化が、変化する。たとえば、好ましいビタミンは、ビタミンＤ、ビタミンＡ、またはビタミンＥ部分であり；好ましい脂質は、スフィンゴ脂質またはコレステロールまたはコレステロール誘導体である。「アルキル部分またはその誘導体」とは、直鎖炭素部分または分枝炭素部分および部分それ自体を指し、または、アルコール、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホノ酢酸を含む、官能基をさらに含有する部分を指し、また、アミン、カルボン酸、エステル、アミド  アルデヒドを含有する。「炭化水素部分」および「アルキル部分」は、相互交換可能に用いられる。
【０２２６】
「末端官能基」には、ハロゲン基、アルコール基、アミン基、カルボン酸基、エステル基、アミド基、アルデヒド基、ケトン基、エーテル基が含まれる。
【０２２７】
本明細書において、ｐ５３遺伝子から転写されるｍＲＮＡを標的とする、核酸化合物の製造に有用なオリゴヌクレオチド配列（配列番号８〜３３）が提供される。
【０２２８】
本明細書において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでｐ５３遺伝子の発現を阻害する方法および組成物が提供される。慨すると、当該ｉｎ  ｖｉｖｏの方法には、オリゴヌクレオチド化合物、特に、ｐ５３遺伝子から転写されたｍＲＮＡを標的とする本明細書に開示される二本鎖核酸化合物、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩、またはそのような化合物を含有する医薬組成物、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩を含有する医薬組成物を、ｉｎ  ｖｉｖｏでｐ５３遺伝子の発現を下方制御するために有効な量で投与することが含まれる。特に、本明細書において、ｐ５３遺伝子の発現に関連した疾患または障害の治療に有用なｉｎ  ｖｉｖｏの方法が開示される。
【０２２９】
特に、本方法を用いて、たとえば、限定されないが、本明細書に開示される疾患または障害または状態等の、疾患または障害または状態の治療のために、ｐ５３遺伝子の発現を阻害することができる。
【０２３０】
本明細書において、配列番号１〜７のうちの任意の１つに記述されるポリヌクレオチド配列を有するｍＲＮＡへと転写されるｐ５３遺伝子の発現を下方制御する、化学修飾ｄｓＲＮＡ化合物、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩、および、そのような化合物を１以上含有する医薬組成物またはそのような化合物の１以上の薬学的に受容可能な塩を含有する医薬組成物が開示される。
【０２３１】
本明細書に開示される核酸化合物の一部の実施形態において、核酸化合物は、ｐ５３遺伝子のｍＲＮＡポリヌクレオチド配列の１８〜４０の連続的なヌクレオチドセグメントに対して、センス鎖が実質的に相補的であり、および、アンチセンス鎖が、当該センス鎖に対して実質的に相補的である、二本鎖オリゴヌクレオチドである。
【０２３２】
概して、標的ｍＲＮＡ配列から多少逸脱しても、ｓｉＲＮＡ活性を損なうことなく、許容することができる（たとえば、Ｃｚａｕｄｅｒｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２００３，  ３１（１１）：２７０５−２７１６に記述されている）。一部の実施形態において、本明細書に開示される核酸化合物は、ｍＲＮＡを破壊し、または、ｍＲＮＡを破壊することなく、転写後レベルで、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御する。理論に拘束されることは望まないが、本明細書に開示される核酸化合物は、特定の開裂および分解のためにｍＲＮＡを標的としてもよく、および／または、標的メッセージからの翻訳を阻害してもよい。
【０２３３】
一部の実施形態において、二本鎖核酸化合物は、一端、または両端が平滑末端である。より具体的には、二本鎖核酸化合物は、第一の鎖の５´末端により規定される末端および、第二の鎖の３´末端により規定される末端が平滑末端であってもよく、または、第一の鎖の３´末端により規定される末端および、第二の鎖の５´末端により規定される末端が平滑末端であってもよい。
【０２３４】
他の実施形態において、２つの鎖の内の少なくとも１つは、それが存在する鎖の３´末端に共有結合されたオーバーハングを有していても良い。各オーバーハングは、独立して、１〜５の連続したヌクレオチド、１〜５のピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログ、１〜５の連続した非ヌクレオチド部分もしくはそれらの組み合わせ、または結合部分からなってもよい。
【０２３５】
二本鎖核酸化合物の二本鎖の長さは、約１８〜約４０ヌクレオチド、好ましくは１９〜２３ヌクレオチドである。さらに、各鎖（オリゴマー）は、独立して、約１８〜約４０塩基、好ましくは１８〜２３塩基、およびさらに好ましくは１９、２０、または２１ヌクレオチドからなる群から選択される長さを有していても良い。
【０２３６】
さらに、ある好ましい実施形態において、核酸化合物は、二本鎖構造を有しており；ここで、鎖の一方のオリゴヌクレオチド配列は、配列番号８〜２０のうちの１つから選択され、および、ここで、もう一方の鎖のオリゴヌクレオチド配列は、配列番号２１〜３３のうちの１つから選択され；または、そのような化合物の薬学的に受容可能な塩である。一部の実施形態において、核酸化合物の鎖のうちの１つと、標的ＲＮＡ（配列番号１〜７）の間の相補性は、完全である。一部の実施形態において、核酸化合物の鎖のうちの１つは、標的ＲＮＡ（配列番号１〜７）に対して、実質的に相補的である（すなわち、当該鎖と標的ＲＮＡの間に、１、２、または３までの不適合を有する）。一部の実施形態において、二本鎖核酸化合物の鎖の間の相補性は、完全である。一部の実施形態において、二本鎖核酸化合物の鎖は、実質的に相補的である（すなわち、鎖の間に、１、２または３までの不適合を有する）。
【０２３７】
さらに、二本鎖核酸化合物の第一の鎖の５´末端は、第二の鎖の３´末端に連結されていてもよく、または、第一の鎖の３´末端は、第二の鎖の５´末端に連結されていてもよく、通常、３〜１００ヌクレオチドの長さ（好ましくは、約３〜約１０のヌクレオチド）を有する核酸リンカーを介して、当該結合はなされている。
【０２３８】
本明細書に開示される二本鎖核酸化合物は、活性増加、安定性増加、毒性の減少、標的外効果の減少、および／または、免疫応答の減少のうちの１以上をもたらす構造および修飾を保有している。好ましい実施形態において、本明細書に開示される二本鎖核酸化合物は、活性増加をもたらす構造および修飾を保有している。本明細書に開示される二本鎖核酸の構造は、標的遺伝子、特にｐ５３遺伝子の発現の妨害または減弱に有用な二本鎖ＲＮＡ化合物に、有益に適用される。
【０２３９】
様々な実施形態において、本明細書に開示される核酸化合物は、糖修飾、塩基修飾、およびヌクレオチド間結合修飾からなる群から選択される修飾ヌクレオチドを少なくとも１つ含有する。したがって、本明細書に開示される化学修飾オリゴヌクレオチド化合物は、たとえば、ＤＮＡ、ＬＮＡ（ロックド核酸）、ＥＮＡ（エチレン架橋核酸）、ＰＮＡ（ペプチド核酸）、アラビノシド、ＰＡＣＥ、鏡映ヌクレオシド、または６炭糖を有するヌクレオチド等の修飾ヌクレオチドを含有しても良い。ＰＡＣＥヌクレオチドおよびアナログの例は、米国特許第６，６９３，１８７号および同第７，０６７，６４１号に開示されている（両特許ともに、参照により本明細書に援用される）。オリゴヌクレオチドはさらに、任意選択的に交互する位置で、２´−Ｏ−メチルまたは２´−フルオロ、または２´Ｏ−アリルまたは、任意の他の２´修飾を含有してもよい。活性を著しく減少させない、他の安定化修飾もまた可能である（たとえば、末端修飾）。オリゴヌクレオチドの活性部分の主鎖は、リン酸−Ｄ−リボース体を含有してもよく、チオリン酸−Ｄ−リボース体、トリエステル、チオエート、２´−５´架橋主鎖（５´−２´ともまた呼称されうる）、ＰＡＣＥ、または任意の他のタイプの修飾も含有してもよい。オリゴヌクレオチドの５´部分および／または３´部分の末端修飾は、存在しても、存在しなくてもよい。そのような末端修飾は、脂質、ペプチド、糖、逆位脱塩基部分または他の分子であっても良い。
【０２４０】
本開示は、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御する核酸化合物（本明細書に記述される新規の修飾二本鎖核酸化合物等）の作製に有用なオリゴヌクレオチド配列（配列番号８〜３３）に関するものである。本発明のオリゴヌクレオチド配列は、ｐ５３遺伝子の発現の妨害または減弱に有用な二本鎖核酸化合物に有益に適用される。２１ｍｅｒまたは２３ｍｅｒのオリゴヌクレオチド配列は、本明細書に開示される１９ｍｅｒの配列の５´延長および／または３´延長により作製されてもよい。そのような延長は、好ましくは、対応するｐ５３ｍＲＮＡ配列に対して相補的である。
【０２４１】
また、本明細書において、様々な疾患または医学的状態の治療における、核酸化合物の使用が開示される。
【０２４２】
ｐ５３遺伝子の発現を下方制御する方法、分子および組成物は、詳細に本明細書において開示および考察され、ならびに、任意の当該分子および／または組成物は、当該状態の１以上に罹患する対象の治療に有益に用いられる。治療される特定の疾患および医学的状態は、本明細書に開示されている。
【０２４３】
ｄｓＲＮＡおよびＲＮＡ干渉
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ依存性遺伝子特異的転写後サイレンシングが関与する現象である。長いｄｓＲＮＡ分子に反応して活性化される、非特異的抗ウイルス防御メカニズムの活性により、実験的に哺乳類細胞を操作し、この現象を研究する最初の試みは妨害されていた（Ｇｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，  ２０００．  ５：１０７−１１４）。後に、２１ヌクレオチドＲＮＡの合成二本鎖が、抗ウイルス包括的防御メカニズムを活性化させることなく、哺乳類細胞における遺伝子特異的ＲＮＡｉを調節しうることが発見された（Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  ２００１，  ４１１：４９４−４９８  ａｎｄ  Ｃａｐｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ  ２００１，  ９８：９７４２−９７４７）。結果として、短い二本鎖ＲＮＡである、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）が、遺伝子発現の阻害および遺伝子機能の解明のために広く用いられるようになった。
【０２４４】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）（Ｆｉｒｅ  ｅｔ  ａｌ，  Ｎａｔｕｒｅ  １９９８，  ３９１：８０６）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）（Ａｍｂｒｏｓ  Ｖ．  Ｎａｔｕｒｅ  ２００４，  ４３１：３５０−３５５）；および、Ｂａｒｔｅｌ  ＤＰ．  Ｃｅｌｌ．  ２００４  １１６（２）：２８１−９７）が介在している。植物において観察された場合、この対応するプロセスは一般的に、特異的翻訳後遺伝子サイレンシングと呼称され、真菌において観察された場合には、クエリング（ｑｕｅｌｌｉｎｇ）と呼称されている。
【０２４５】
ｓｉＲＮＡ化合物は、内因性または外因性遺伝子／ｍＲＮＡの発現を下方制御またはサイレンス（すなわち、完全阻害または部分的阻害）する二本鎖ＲＮＡである。ＲＮＡ干渉は、ある種のｄｓＲＮＡが、特殊なタンパク質複合体へと入り込み、次いで、そこで、相補的な細胞性ＲＮＡを標的とし、それらを特異的に分解する能力に基づいている。ゆえに、ＲＮＡ干渉応答は、ｓｉＲＮＡを含有するエンドヌクレアーゼ複合体（一般的に、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と呼称され、ｓｉＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖に対して相補的な配列を有する一本鎖ＲＮＡの開裂を調節する）を特徴とする。標的ＲＮＡの開裂は、ｓｉＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖に相補的な領域の中間において発生しうる（Ｅｌｂａｓｈｉｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，  ２００１，  １５：１８８）。より詳細には、より長いｄｓＲＮＡが、ＩＩＩ型ＲＮＡａｓｅ（ＤＩＣＥＲ、ＤＲＯＳＨＡ等）によって、短い（１７〜２９ｂｐ）ｄｓＲＮＡ断片（短阻害性ＲＮＡまたは「ｓｉＲＮＡ」とも呼称される）へと消化される（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ２００１，  ４０９：３６３−６、および、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ２００３，  ４２５：４１５−９を参照のこと）。ＲＩＳＣタンパク質複合体は、これらの断片および相補的ｍＲＮＡを認識する。プロセス全体は、標的ｍＲＮＡのエンドヌクレアーゼ開裂によって終了する（ＭｃＭａｎｕｓ  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ  Ｇｅｎｅｔ，  ２００２，  ３：７３７−４７；  Ｐａｄｄｉｓｏｎ  ａｎｄ  Ｈａｎｎｏｎ，  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．  ２００３，  ５（３）：  ２１７−２４）（これらの用語および提言されているメカニズムに関するさらなる情報については、たとえば、Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  ＲＮＡ．  ２００１，  ７（１１）：１５０９−２１；  Ｎｉｓｈｉｋｕｒａ，  Ｃｅｌｌ．  ２００１，  １０７（４）：４１５−８および国際公開第０１／３６６４６号を参照のこと）。
【０２４６】
既知の遺伝子に対応するｄｓＲＮＡ化合物の選択および合成は、広く報告されている；たとえば、Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２００６；  ６５０５２；  Ｃｈａｌｋ  ｅｔ  ａｌ．，    ＢＢＲＣ．  ２００４，  ３１９（１）：２６４−７４；  Ｓｉｏｕｄ  ａｎｄ  Ｌｅｉｒｄａｌ，  Ｍｅｔ．  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．；  ２００４，  ２５２：４５７−６９；  Ｌｅｖｅｎｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍ．  ２００４，  ２０（３）：４３０−２；  Ｕｉ−Ｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ＮＡＲ  ２００４，  ３２（３）：９３６−４８を参照のこと。修飾ｓｉＲＮＡの製造および使用の例については、Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，  ２００３，  ４２（２６）：７９６７−７５；  Ｃｈｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，  ＲＮＡ，  ２００３，  ９（９）：１０３４−４８；ＰＣＴ出願公開第２００４／０１５１０７号（ａｔｕｇｅｎ）；同第０２／４４３２１号（Ｔｕｓｃｈｌら）、および米国特許第５，８９８，０３１号および同第６，１０７，０９４号を参照のこと。
【０２４７】
いくつかの研究グループにより、細胞内でｓｉＲＮＡを作製することができるＤＮＡ系ベクターの開発が報告されている。その方法は多くの場合、細胞内で効果的にプロセシングされ、ｓｉＲＮＡを形成する、短ヘアピンＲＮＡの転写が関与している（Ｐａｄｄｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ２００２，  ９９：１４４３−１４４８；  Ｐａｄｄｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｅｎｅｓ  &Ｄｅｖ  ２００２，  １６：９４８−９５８；  Ｓｕｉ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ２００２，  ８：５５１５−５５２０；および、Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００２，  ２９６：５５０−５５３）。これらの報告には、内因的におよび外因的に発現された多くの遺伝子を特異的に標的化することができるｓｉＲＮＡの作製方法が記述されている。
【０２４８】
実験によって、ｓｉＲＮＡは、哺乳類およびヒトの両方において、ｉｎ  ｖｉｖｏで有効であることが判明している。具体的には、Ｂｉｔｋｏらが、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）のヌクレオカプシドＮ遺伝子に指向する特異的ｓｉＲＮＡが、鼻内投与を行った場合のマウスの治療において有効であることを明らかにしている（Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．  ２００５，  １１（１）：５０−５５）。ｓｉＲＮＡの治療応用に関する概説については、たとえば、Ｂａｒｉｋ  （Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ  ２００５，  ８３：  ７６４−７７３）、および、Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙ（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ２００７  ８（３）：４６９−８２）を参照のこと。さらに、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）を治療するための、ＶＥＧＦＲ１受容体を標的とする短ｓｉＲＮＡを用いた臨床研究が、ヒト患者において行われている（Ｋａｉｓｅｒ，  Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ２００６  １４２（４）：６６０−８）。治療剤としてのｓｉＲＮＡの使用に関するさらなる情報については、Ｄｕｒｃａｎ，  ２００８．  Ｍｏｌ．  Ｐｈａｒｍａ．  ５（４）：５５９−５６６；  Ｋｉｍ  ａｎｄ  Ｒｏｓｓｉ，  ２００８．  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４４：６１３−６１６；  Ｇｒｉｍｍ  ａｎｄ  Ｋａｙ，  ２００７，  ＪＣＩ，  １１７（１２）：３６３３−４１に見いだされ得る。
【０２４９】
化学合成
本発明の化合物は、リボ核酸オリゴヌクレオチド（またはデオキシリボ核酸ヌクレオチド）の合成に関する、当業者公知の任意の方法により合成されてもよい。そのような合成は、特に、Ｂｅａｕｃａｇｅ  ａｎｄ  Ｉｙｅｒ，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９２；  ４８：２２２３−２３１１；Ｂｅａｕｃａｇｅ  ａｎｄ  Ｉｙｅｒ，  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９９３；  ４９：  ６１２３−６１９４、および、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ，  ｅｔ．  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９８７；  １５４：  ２８７−３１３に記述されており；チオエートの合成は、特に、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １９８５；  ５４：  ３６７−４０２に記述されており、ＲＮＡ分子の合成は、Ｓｐｒｏａｔ，  ｉｎ  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  ２００５  ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ  Ｐ．；  Ｋａｐ．  ２：  １７−３１に記述されており、および、各下流プロセスは、特に、Ｐｉｎｇｏｕｄ  ｅｔ．  ａｌ．，  ｉｎ  ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  １９８９  ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｏｌｉｖｅｒ  Ｒ．Ｗ．Ａ．；  Ｋａｐ．  ７：  １８３−２０８に記述されている。
【０２５０】
他の合成方法も当分野に公知であり、たとえば、Ｕｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８７，  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  １０９，  ７８４５；Ｓｃａｒｉｎｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０，  ＮＡＲ．，  １８，  ５４３３；Ｗｉｎｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  ＮＡＲ．  ２３，  ２６７７−２６８４；およびＷｉｎｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏ．，  ７４，  ５９に記述される方法があり、これらの方法において、標準的な核酸保護基およびカップリング基（たとえば、５´末端のジメトキシトリチル、および３´末端のホスホラミダイト等）を使用しても良い。修飾された（たとえば、２´−Ｏ−メチル化）ヌクレオチドおよび、修飾されていないヌクレオチドが、所望により組み込まれる。
【０２５１】
本発明のオリゴヌクレオチドは別々に合成されてもよく、および、たとえば、ライゲーション（Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６，  ９９２３；Ｄｒａｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、国際特許出願公開第９３／２３５６９号；Ｓｈａｂａｒｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  ＮＡＲ  １９，  ４２４７；Ｂｅｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  &  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，  １６，  ９５１；Ｂｅｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  ８，  ２０４）、または、合成および／または脱保護の後のハイブリダイゼーションにより、合成後に共に連結されてもよい。
【０２５２】
市販の機器（とりわけ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから入手可能なもの）を用いても良いことに注意されたい；オリゴヌクレオチドは、本明細書に開示される配列に従い、調製される。化学合成された断片の重複している対は、当分野公知の方法を用いてライゲーションされてもよい（たとえば、米国特許第６，１２１，４２６号を参照のこと）。鎖は別々に合成され、次いで、管内で互いにアニーリングされる。次いで、二本鎖ｓｉＲＮＡは、アニーリングされなかった一本鎖オリゴヌクレオチド（たとえば、それらのうちの１つが超過量であったため）からＨＰＬＣにより単離される。本発明のｓｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ断片に関し、そのような配列の２以上が合成され、本発明における使用のために共に連結されてもよい。
【０２５３】
また、本発明の化合物は、タンデム合成技術（たとえば、米国特許出願公開第２００４／００１９００１号（ＭｃＳｗｉｇｇｅｎ）に記述されている）を用いて合成されてもよく、ここで、ｓｉＲＮＡ鎖の両方は、単一な連続するオリゴヌクレオチド断片として合成され、または、開裂可能なリンカーにより分離される鎖として合成され、次いで、開裂され、別々のｓｉＲＮＡ断片または鎖（ハイブリダイズし、ｓｉＲＮＡ二本鎖の精製が可能となる）が産生される。リンカーは、ポリヌクレオチドリンカーまたは非ヌクレオチドリンカーであっても良い。
【０２５４】
本発明によりさらに、本明細書に記述される任意の疾患および状態を治療するための２以上の核酸分子を含有する医薬組成物が提供され、当該２つの分子は、同等の活性またはさもなければ有益な活性をもたらす量で、医薬組成物中において共に物理的に混合されてもよく、または、共有結合、非共有結合、または核酸リンカー（２〜１００、好ましくは２〜５０または２〜３０ヌクレオチドの範囲の長さ）により共に連結されてもよい。１つの実施形態において、核酸分子は、本明細書に記述される二本鎖核酸構造から構成されており、ここで、２つの核酸分子は、本明細書に記述されるオリゴヌクレオチドから選択される。従って、核酸分子は、タンデムｓｉＲＮＡ化合物を形成するために、共有結合、または非共有結合、またはリンカーにより連結されていてもよい。２つのｓｉＲＮＡ配列を含有する、そのようなタンデムｄｓＲＮＡ分子は、通常、３８〜１５０ヌクレオチドの長さ、より好ましくは３８または４０〜６０ヌクレオチドの長さであり、および、もし３以上のｓｉＲＮＡ配列がタンデム分子に含まれている場合には、それ以上の長さである。内在性細胞プロセシングを介して産生されるｓｉＲＮＡをコードする、２以上の長い配列から構成されるより長いタンデム化合物（たとえば、長いｄｓＲＮＡ）もまた想定され、２以上のｓｈＲＮＡをコードするタンデム分子も想定される。そのようなタンデム分子もまた、本開示の一部であるとみなされる。本明細書に開示される、２つ（タンデム）の、またはそれ以上（ＲＮＡｉｓｔａｒ）のｄｓＲＮＡ配列を含有する化合物が想定される。そのような「タンデム」または「ｓｔａｒ」分子の例は、ＰＣＴ国際特許出願公開第２００７／０９１２６９号（本出願の譲受人と同一であり、その全体が、参照により本明細書に援用される）に開示されている。
【０２５５】
ｐ５３を標的とする核酸分子が医薬組成物中の主な活性成分であっても良く、または、２以上の核酸（または、２以上の核酸をコードする、または内的に産生する分子（それが、２以上の核酸化合物をコードする、分子の混合物であれ、１以上のタンデム分子の混合物であれ））を含有する医薬組成物の１つの活性成分であっても良い（当該医薬組成物はさらに、１以上の追加の遺伝子を標的とする１以上の追加の核酸分子から構成されている）。当該追加の遺伝子（複数含む）の同時阻害は、本明細書に開示される疾患の治療に対し、付加的な、または相乗的な効果をもたらす可能性がある。
【０２５６】
さらに、本明細書に開示される核酸、または、そのような核酸をコードする、もしくは含有する任意の核酸分子は、本明細書に開示される疾患の治療のための標的化増強を得るため、標的細胞上に発現された、内在化可能な細胞表面分子に対する抗体（アプタマー分子を含む）に連結または結合（共有結合または非共有結合）されていても良い。たとえば、抗Ｆａｓ抗体（好ましくは、中和抗体）と任意のｄｓＲＮＡが（共有結合的、または非共有結合的に）組み合わされていてもよい。別の例において、リガンド／抗体のように作用することができるアプタマーを、任意の核酸化合物と（共有結合的、または非共有結合的に）組み合わせても良い。
【０２５７】
本明細書に開示される核酸分子は、直接的に、またはウイルス性ベクターと共に、または非ウイルス性ベクターとともに、のいずれかで送達されても良い。直接送達される場合、配列は通常、ヌクレアーゼ抵抗性の状態にある。あるいは、配列は、当該配列が本明細書の以下に記述される細胞中で発現されるように、発現カセットまたは発現構築物中へと組み込まれていても良い。一般的に、構築物は、配列が標的細胞中で発現されるように、適切な制御配列またはプロモーターを含有している。本発明の化合物の送達のために任意選択的に用いられるベクターは市販されており、および、当業者公知の方法により、本発明の化合物の送達目的のために改変を行っても良い。
【０２５８】
化学的修飾
ヌクレオチド／オリゴヌクレオチドのすべてのアナログ、またはヌクレオチド／オリゴヌクレオチドに対する修飾を、本発明に用いても良い（当該アナログまたは修飾が、ヌクレオチド／オリゴヌクレオチドの機能に対して、実質的に影響を与えない場合に限る）。ヌクレオチドは、天然型塩基または合成修飾塩基から選択されても良い。天然型塩基としては、アデニン、グアニン、シトシン、チミンおよびウラシルが挙げられる。ヌクレオチドの修飾塩基は、本明細書に記述されている。
【０２５９】
さらに、ポリヌクレオチドのアナログが調製されてもよく、ここで、１以上のヌクレオチドの構造は、根本的に改変され、および、治療試薬または実験試薬として、より良く適合されている。ヌクレオチドアナログの例は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）であり、ここで、ＤＮＡ（またはＲＮＡ）中のデオキシリボース（またはリボース）リン酸主鎖は、ペプチド中に存在するものと類似したポリアミド主鎖と置換されている。ＰＮＡアナログは、酵素分解に対して抵抗性であることが示されており、ならびに、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて安定性が増強されていることが示されている。オリゴヌクレオチドに対して行うことができる他の修飾としては、ポリマー主鎖、環状主鎖、非環状主鎖、チオホスフェート−Ｄ−リボース主鎖、トリエステル主鎖、チオエート主鎖、２’−５’架橋主鎖、人工核酸、モルホリノ核酸、ロックド核酸（ＬＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、アラビノシド、および鏡映ヌクレオシド（たとえば、β−Ｄ−デオキシヌクレオシドの代わりに、β−Ｌ−デオキシヌクレオシド）が挙げられる。ＬＮＡヌクレオチドを含有するｄｓＲＮＡ分子の例は、Ｅｌｍｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （ＮＡＲ  ２００５，  ３３（１）：４３９−４４７）に開示されている。
【０２６０】
本発明の核酸化合物は、１以上の逆位ヌクレオチド（たとえば、逆位チミジンまたは逆位アデニン（たとえば、Ｔａｋｅｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  ＪＢＣ  ２７７（２６）：２３８００−０６を参照のこと））を用いて合成されても良い。
【０２６１】
本明細書において使用される、「非従来的な部分」という用語は、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、デオキシリボヌクレオチド、修飾デオキシリボヌクレオチド、鏡映ヌクレオチド、トレオース核酸（ＴＮＡ）、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログ、塩基対ではないヌクレオチドアナログ、および２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するヌクレオチドに結合されたヌクレオチド；Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５およびＣ６部分；架橋核酸（ＬＮＡを含む）およびエチレン架橋核酸（ＥＮＡ）を指す。
【０２６２】
本明細書において使用される、「キャップ」または「キャップ部分」という用語には、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、脱塩基リボース部分および脱塩基デオキシリボース部分の修飾（２´Ｏアルキル修飾を含む）；逆位脱塩基リボース、逆位脱塩基デオキシリボース部分（ｉｄＡｂ）、およびそれらの修飾；アミノ−Ｃ６部分（ＡＭ−ｃ６）、Ｃ６−イミノ−ｐｉ、非ヌクレオチド部分、鏡映ヌクレオチド（Ｌ−ＤＮＡおよびＬ−ＲＮＡを含む）；５´ＯＭｅヌクレオチド；５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフタレン酪酸ホスホジエステル（ＴＨＮＢ）、ビタミン、薬剤部分およびヌクレオチドアナログ（限定されないが、４´，５´メチレンヌクレオチドを含む）；１−（β−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド；４´−チオヌクレオチド、炭素環ヌクレオチド；５´−アミノ−リン酸アルキル；１，３−ジアミノ−２−リン酸プロピル、３−リン酸アミノプロピル；６−リン酸アミノヘキシル；１２−リン酸アミノドデシル；リン酸ヒドロキシプロピル；１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド；α−ヌクレオチド；トレオ−ペントフラノシルヌクレオチド；非環式３´，４´−セコヌクレオチド；３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド；３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド，５´−５´−逆位脱塩基部分；１，４−リン酸ブタンジオール；５´−アミノ；ならびに、架橋または非架橋メチルホスホン酸および５´−メルカプト部分が挙げられる。
【０２６３】
脱塩基デオキシリボース部分としては、たとえば、脱塩基デオキシリボース−３’−リン酸；１，２−ジデオキシ−Ｄ−リボフラノース−３−リン酸；１，４−アンヒドロ−２−デオキシ−Ｄ−リビトール−３−リン酸が挙げられる。逆位脱塩基デオキシリボース部分としては、逆位デオキシリボ脱塩基；３’，５’逆位デオキシリボ脱塩基５’−リン酸が挙げられる。
【０２６４】
「鏡映」ヌクレオチドは、天然型ヌクレオチドまたは普遍的に用いられているヌクレオチドに対して、反転したキラリティーを有するヌクレオチドである（すなわち、天然型（Ｄ−ヌクレオチド）の鏡像（Ｌ−ヌクレオチド））。ヌクレオチドは、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドであっても良く、さらに、少なくとも１つの糖、塩基および／または主鎖の修飾を含有しても良い。米国特許第６，６０２，８５８号に、少なくとも１つのＬ−ヌクレオチド置換を含有する核酸触媒が開示されている。鏡映ヌクレオチドとしては、たとえば、Ｌ−ＤＮＡ（Ｌ−デオキシリボアデノシン−３’−リン酸（鏡映ｄＡ）；Ｌ−デオキシリボシチジン−３’−リン酸（鏡映ｄＣ）；Ｌ−デオキシリボグアノシン−３’−リン酸（鏡映ｄＧ）；Ｌ−デオキシリボチミジン−３’−リン酸（鏡映像ｄＴ））およびＬ−ＲＮＡ（Ｌ−リボアデノシン−３’−リン酸（鏡映ｒＡ）；Ｌ−リボシチジン−３’−リン酸（鏡映ｒＣ）；Ｌ−リボグアノシン−３’−リン酸（鏡映ｒＧ）；Ｌ−リボウラシル−３’−リン酸（鏡映ｄＵ）が挙げられる。
【０２６５】
有用なピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログは、以下の一般式Ｉにより表される：
（Ｉ）
【化１】
0006364009.tif 000007
ここで、
Ｒ１およびＲ４のそれぞれは、独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ２、−Ｏ−ヒドロカルビル、−Ｓ−ヒドロカルビル、−ＣＯ−Ｈ、−ＣＯ−ヒドロカルビル、−ＮＲ８Ｒ９、ヘテロアリール、または、任意選択的に、１以上の基（其々、独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＳＣＮ、または−ＮＯ２である）により置換されたヒドロカルビルから選択され、ここで、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ、独立して、Ｈ、ヒドロカルビル、または、アミン保護基であり；または、Ｒ８およびＲ９は、それらが結合される窒素原子と共に、飽和複素環または不飽和複素環（任意選択的に、酸素、窒素または硫黄から選択される１〜２のさらなるヘテロ原子を含有する）を形成し；
Ｒ２は、Ｈまたは、存在せず；
Ｒ３は、Ｏまたは−ＮＲ１０Ｒ１０’であり、ここで、Ｒ１０およびＲ１０’は、それぞれ、独立して、Ｈ、ヒドロカルビル、−ＣＯ−ヒドロカルビル、またはアミン保護基であり；および、
Ｒ５は、Ｈ、ハロゲン、−Ｏ−、または、−ＯＲ１１であり；
Ｒ６は、−Ｏ−、または−ＯＲ１１であり；
Ｒ７は、−ＯＲ１１、またはリン酸部分であり；
Ｒ１１はそれぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルキレン−ＯＲ１２、（Ｃ１−Ｃ８）アルキレン−ＳＲ１２、（Ｃ１−Ｃ８）アルキレン−ＮＲ１２Ｒ１３、ヒドロキシル保護基、または、式−Ｐ（ＯＲ１４）ＮＲ１５Ｒ１６のホスホラミダイト部分であり、ここで、Ｒ１４は、Ｈまたはシアノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、好ましくはシアノエチルであり、ならびに、Ｒ１５およびＲ１６はそれぞれ、独立して、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、好ましくはイソプロピルであり；
Ｒ１２およびＲ１３はそれぞれ、独立して、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ８）アルキルであり；ならびに、
点線は、４位の炭素原子と、３位の窒素原子またはＲ３残基のいずれかの間の、潜在的な二重結合を表し（ただし、Ｒ２がＨである場合、４位の炭素原子とＲ３の間に二重結合があり、および、Ｒ２が存在しない場合、４位の炭素原子と３位の窒素原子の間に二重結合がある）、しかし、Ｒ５およびＲ６がそれぞれ独立して−ＯＨまたは−Ｏ−である場合のアナログ、および、Ｒ５がＨであり、Ｒ１がヒドロカルビルである場合のアナログは除外する。
【０２６６】
本発明の様々な実施形態において、以下の一般式ＩＩのＰＴヌクレオチドアナログを含有する二本鎖核酸分子が提供される：
【化２】
0006364009.tif 000008
ここで、
Ｒ１およびＲ４のそれぞれは、独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ２、−Ｏ−ヒドロカルビル、−Ｓ−ヒドロカルビル、−ＣＯ−Ｈ、−ＣＯ−ヒドロカルビル、−ＮＲ８Ｒ９、ヘテロアリール、または、任意選択的に、１以上の基（其々、独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＳＣＮ、または−ＮＯ２である）により置換されたヒドロカルビルから選択され、ここで、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ、独立して、Ｈまたはヒドロカルビルであり、または、Ｒ８およびＲ９は、それらが結合される窒素原子と共に、飽和複素環または不飽和複素環（任意選択的に、酸素、窒素または硫黄から選択される１〜２のさらなるヘテロ原子を含有する）を形成し；
Ｒ２は、Ｈまたは、存在せず；
Ｒ３は、Ｏまたは−ＮＲ１０Ｒ１０’であり、ここで、Ｒ１０およびＲ１０’は、それぞれ、独立して、Ｈ、ヒドロカルビル、または−ＣＯ−ヒドロカルビルであり；
Ｒ５は、Ｈ、ハロゲン、−Ｏ−、または、−ＯＲ１１であり；
Ｒ６は、−Ｏ−、または−ＯＲ１１であり；
Ｒ７は、ＯＲ１１、モノリン酸部分またはリン酸結合部分であり；ならびに、
Ｒ１１はそれぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルキレン−ＯＲ１２、（Ｃ１−Ｃ８）アルキレン−ＳＲ１２、または、（Ｃ１−Ｃ８）アルキレン−ＮＲ１２Ｒ１３であり、ここで、Ｒ１２およびＲ１３はそれぞれ、独立して、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ８）アルキルであり；ならびに、
点線は、４位の炭素原子と、３位の窒素原子またはラジカルＲ３のいずれかの間の潜在的な二重結合を表す（ただし、Ｒ２がＨである場合、４位の炭素原子とＲ３の間に二重結合があり、および、Ｒ２が存在しない場合、４位の炭素原子と３位の窒素原子の間に二重結合がある）。
【０２６７】
一部の実施形態において、ＰＴヌクレオチドアナログは、式ＩＩａのアデニンＰＴヌクレオチドアナログ、または式ＩＩｂのグアニンＰＴヌクレオチドアナログ（表Ｉに記載）を含有する。
表Ｉ：式ＩＩａおよび式ＩＩｂの、アデニンおよびグアニンのＰＴヌクレオチドアナログ
【表５】
0006364009.tif 000009
【０２６８】
一部の好ましい実施形態において、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログは、式ＩＩａのアデニンＰＴヌクレオチドアナログであり（すなわち、Ｒ２は存在せず、Ｒ３はＮＨＲ１０である）、ここで、Ｒ１は、Ｈであり、Ｒ１０は、Ｈであり；Ｒ４は、Ｈであり；Ｒ５は、Ｈ、ハロゲン、または−ＯＲ１１であり、ここで、Ｒ１１は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルキレン−ＯＲ１２、（Ｃ１−Ｃ８）アルキレン−ＳＲ１２、または（Ｃ１−Ｃ８）アルキレン−ＮＲ１２Ｒ１３であり、ここで、Ｒ１２およびＲ１３のそれぞれは、独立して、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ８）アルキルであり；Ｒ６は、−Ｏ−または、−ＯＨであり；および、Ｒ７は、ＯＨまたはリン酸結合部分である。一部の実施形態において、Ｒ１１は、Ｈ、ＣＨ３または、（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３である。一部の実施形態において、Ｒ１１は、Ｈである（すなわち、Ｒ５は、ヒドロキシ；２’ＯＨである）。一部の実施形態において、Ｒ１１は、ＣＨ３である（すなわち、Ｒ５は、メトキシ、２’ＯＭｅである）。一部の実施形態において、Ｒ１１は、（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３である（すなわち、Ｒ５は、メトキシエトキシ；２’ＭＯＥである）。
【０２６９】
一部の好ましい実施形態において、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログは、式ＩＩａのデオキシアデノシンＰＴヌクレオチドアナログであり、ここで、Ｒ１は、Ｈであり、Ｒ１０は、Ｈであり；Ｒ４は、Ｈであり；Ｒ５は、Ｈまたはハロゲンであり；Ｒ６は、−Ｏ−または−ＯＨであり；および、Ｒ７は、ＯＨまたはリン酸部分である。一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｈである。一部の実施形態において、Ｒ５は、ハロゲン、好ましくは、フルオロ（Ｆ）である。
【０２７０】
一部の好ましい実施形態において、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログは、式ＩＩｂのグアノシンＰＴヌクレオチドアナログであり、ここで、Ｒ４、Ｒ８およびＲ９のそれぞれは、Ｈであり、Ｒ５は、−ＯＲ１１であり、ここで、Ｒ１１は、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルキレン−ＯＲ１２、（Ｃ１−Ｃ８）アルキレン−ＳＲ１２、または（Ｃ１−Ｃ８）アルキレン−ＮＲ１２Ｒ１３であり、ここで、Ｒ１２およびＲ１３のそれぞれは、独立して、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ８）アルキルであり；Ｒ６は、−Ｏ−または−ＯＨであり；および、Ｒ７は、ＯＨまたはリン酸部分である。一部の実施形態において、Ｒ１１は、Ｈ、ＣＨ３または（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３である。一部の実施形態において、Ｒ１１は、Ｈである（すなわち、Ｒ５は、ヒドロキシ；２’ＯＨである）。一部の実施形態において、Ｒ１１は、ＣＨ３である（すなわち、Ｒ５は、メトキシ、２’−Ｏメチルである）。一部の実施形態において、Ｒ１１は、（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３である（すなわち、Ｒ５は、メトキシメトキシ；２’ＭＯＥである）。
【０２７１】
一部の好ましい実施形態において、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログは、式ＩＩｂのデオキシグアノシンＰＴヌクレオチドアナログであり（すなわち、Ｒ２は、Ｈであり、および、Ｒ３は、Ｏである）、ここで、Ｒ４、Ｒ８およびＲ９のそれぞれは、Ｈであり、Ｒ５は、Ｈ、ハロゲン、または−ＯＲ１１であり；Ｒ６は、−Ｏ−または−ＯＨであり；および、Ｒ７は、ＯＨまたはリン酸結合部分である。一部の実施形態において、Ｒ５は、Ｈである。一部の実施形態において、Ｒ５は、ハロゲン、好ましくはフルオロ（Ｆ）である。
【０２７２】
本明細書に開示される核酸化合物の一部の実施形態において、オリゴヌクレオチドの主鎖は修飾され、および、リン酸−Ｄ−リボース体を含有し、また、チオリン酸−Ｄ−リボース体、トリエステル、チオエート、２´−５´架橋主鎖（２´５´結合ヌクレオチドまたは５´−２´とも呼称されうる）、ＰＡＣＥ等もまた含有してもよい。さらなる修飾としては、可逆的、または、不安定なホスホトリエステル結合（たとえば、それぞれ、米国特許出願公開第２００９００９３４２５号および米国特許出願公開第２０１１０２９４８６９号に開示されている）が挙げられる。
【０２７３】
本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ１およびＡ２）の様々な実施形態において、各連続的なＮまたはＮ´の、隣接するＮまたはＮ´への共有結合は、ホスホジエステル結合である。
【０２７４】
本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、センス鎖は、３´末端および５´末端の両方で、リン酸化、または非リン酸化のいずれかである。本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、アンチセンス鎖は、３´末端および５´末端の両方で、リン酸化、または非リン酸化のいずれかである。本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、アンチセンス鎖およびセンス鎖のぞれぞれの３´末端および５´末端のリボヌクレオチドは、リン酸化されている。本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、アンチセンス鎖およびセンス鎖のぞれぞれの３´末端および５´末端のリボヌクレオチドは、リン酸化されていない。本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、アンチセンス鎖およびセンス鎖のそれぞれにおいて、３´末端のリボヌクレオチドはリン酸化され、５´末端のリボヌクレオチドはリン酸化されてない。
【０２７５】
本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、修飾リボヌクレオチドは、糖部分の２´の位置で修飾を含有する。本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、修飾リボヌクレオチドは、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドである。
【０２７６】
本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、非従来的な部分は、鏡映ヌクレオチド、トレオース核酸（ＴＮＡ）、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログ、および、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するリボヌクレオチドに結合されたリボヌクレオチドから選択される。
【０２７７】
本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、非従来的な部分は、ヌクレオチドアナログである。本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、非従来的な部分は、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログである。本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の好ましい実施形態において、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドが存在する。本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の好ましい実施形態において、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドは、アンチセンス鎖のみに存在する。本明細書に開示される核酸化合物の一部の好ましい実施形態において、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログは、４〜７位（５´>３´）のうちの１つにおいて１つ、アンチセンス鎖に存在する。本明細書に開示される核酸化合物の一部の好ましい実施形態において、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログは、２つ（４、５、６または７位（５´>３´）の内の１つ、および、１位（５´>３´））、アンチセンス鎖において存在する。本明細書に開示される核酸化合物の様々な実施形態において、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログは、オーバーハングが存在する鎖の３´末端に共有結合されているオーバーハング（Ｚおよび／またはＺ´）のうちの１つ、または両方において、および、アンチセンス鎖において、存在する。
【０２７８】
本明細書に開示される核酸化合物の様々な実施形態において、オーバーハング（ＺまたはＺ´）は、独立して、存在し、または存在しないが、もし存在する場合、それが存在する鎖の３´末端に共有結合されている。様々な実施形態において、オーバーハング（ＺまたはＺ´）は、独立して、１〜５の連続的なヌクレオチド、ピラゾロトリアジン（ＰＴ）ヌクレオチドアナログもしくは連続的な非ヌクレオチド部分、またはそれらの組み合わせ、またはビタミン、または薬剤部分（それは、それが存在する鎖の３´末端に共有結合されている）を含有する。本明細書に開示される核酸化合物の一部の実施形態において、オーバーハング（ＺおよびＺ´）の両方が、存在しない。他の実施形態において、ＺまたはＺ´は、存在する。
【０２７９】
本明細書に開示される核酸化合物の一部の実施形態において、Ｚおよび／またはＺ´は、１〜５の連続的なヌクレオチドである。一部の実施形態において、各ヌクレオチドは、ｄＴであり、ＺおよびＺ´のそれぞれは、２つの連続的なヌクレオチド（ｄＴｄＴ）である。
【０２８０】
本明細書に開示される核酸化合物の一部の実施形態において、Ｚおよび／またはＺ´は、１〜５の連続的な非ヌクレオチド部分である。一部の実施形態において、Ｚおよび／またはＺ´のそれぞれは、独立して、非ヌクレオチド部分（たとえば、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５またはＣ６アルキル部分）、任意選択的に、Ｃ３  １，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）［ＣＡＳ  ＲＮ：１３５０７−４２−１］、または、その誘導体（プロパノール（Ｃ３−ＯＨ／Ｃ３ＯＨ）、プロパンジオールおよび、プロパンジオールのホスホジエステル誘導体（「Ｃ３Ｐｉ」）を含む）を含有する。一部の実施形態において、Ｚおよび／またはＺ´は、２つの炭化水素部分を含有し、および、一部の例において、Ｃ３Ｐｉ−Ｃ３ＯＨまたはＣ３Ｐｉ−Ｃ３Ｐｉである。Ｃ３のそれぞれは、共有結合（好ましくは、ホスホ系の結合）を介して、隣接するＣ３に共有結合されている。一部の実施形態において、ホスホ系の結合は、ホスホロチオエート、ホスホノ酢酸、またはホスホジエステル結合である。
【０２８１】
本明細書に開示される核酸化合物の一部の実施形態において、ＺおよびＺ´のそれぞれは、１〜２の連続的な非ヌクレオチド部分である。一部の好ましい実施形態において、各非ヌクレオチド部分は、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）である。本明細書に開示される核酸化合物の一部の好ましい実施形態において、Ｚは、１つのＣ３非ヌクレオチド部分（Ｃ３）であり、Ｚ´は、２つの連続的なＣ３非ヌクレオチド部分（Ｃ３−Ｃ３）である。
【０２８２】
本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、キャップ（ｚ´´）は、存在しない。
【０２８３】
本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、キャップ（ここでは、ｚ´´）は存在する。本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、キャップｚ´´は、脱塩基リボース部分、脱塩基デオキシリボース部分、逆位脱塩基リボース部分、逆位デオキシリボース部分、逆位デオキシ脱塩基部分（ｉｄＡｂ）、アミノ−Ｃ６部分（ＡＭ−ｃ６）、Ｃ６−アミノ−Ｐｉ、非ヌクレオチド部分、鏡映ヌクレオチド、５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフタレン酪酸ホスホジエステル（ＴＨＮＢ）、ビタミンおよび薬剤部分からなる群から選択される。本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、キャップｚ´´は、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（Ｃ３）である。本明細書において開示される核酸化合物（構造Ａ、Ａ１およびＡ２）の一部の実施形態において、Ｎ、Ｎ´、Ｎ１およびＮ２のそれぞれは、非修飾リボヌクレオチドであり、ｚ´´は存在しておらず、ＺおよびＺ´は存在し、およびｄＴｄＴオーバーハングからなる。構造Ａ１の一部の実施形態において、ｘ＝ｙ＝１９であり、および、Ｚは、少なくとも１つのＣ３アルキルオーバーハングを含有する。構造Ａ２の特定の実施形態において、ｘ＝ｙ＝１８であり、および、Ｚは、少なくとも１つのＣ３アルキルオーバーハングを含有する。一部の実施形態において、Ｃ３−Ｃ３オーバーハングは、共有結合（好ましくは、ホスホジエステル結合）を介して、（Ｎ）ｘまたは（Ｎ´）ｙの３´末端に共有結合されている。一部の実施形態において、第一のＣ３と第二のＣ３の間の結合は、ホスホジエステル結合である。一部の実施形態において、３´非ヌクレオチドオーバーハングは、Ｃ３Ｐｉ−Ｃ３Ｐｉである。一部の実施形態において、３´非ヌクレオチドオーバーハングは、Ｃ３Ｐｉ−Ｃ３Ｐｓである。一部の実施形態において、３´非ヌクレオチドオーバーハングは、Ｃ３Ｐｉ−Ｃ３ＯＨ（ＯＨはヒドロキシである）である。一部の実施形態において、３´非ヌクレオチドオーバーハングは、Ｃ３Ｐｉ−Ｃ３ＯＨである。
【０２８４】
様々な実施形態において、アルキル部分は、アルキル誘導体（末端ヒドロキシル基、末端アミノ基、または末端リン酸基を含有する、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、またはＣ６アルキル部分を含む）を含有する。一部の実施形態において、アルキル部分は、Ｃ３アルキルまたはＣ３アルキル誘導体部分である。一部の実施形態において、Ｃ３アルキル部分は、プロパノール、プロピルホスフェート、プロピルホスホロチオエート、またはそれらの組み合わせを含有する。Ｃ３アルキル部分は、（Ｎ´）ｙの３´末端および／または（Ｎ）ｘの３´末端に、ホスホジエステル結合を介して共有結合されている。一部の実施形態において、アルキル部分は、プロパノール、リン酸プロピル、またはプロピルホスホロチオエートを含有する。一部の実施形態において、ＺおよびＺ´のそれぞれは、独立して、プロパノール、リン酸プロピル、プロピルホスホロチオエート、それらの組み合わせ、またはそれらの複数（特に、２または３の共有結合されたプロパノール、リン酸プロピル、プロピルホスホロチオエート、またはそれらの組み合わせ）から選択される。一部の実施形態において、ＺおよびＺ´のそれぞれは、独立して、リン酸プロピル、プロピルホスホロチオエート、プロピルホスホ−プロパノール；プロピル−ホスホ−プロピルホスホロチオエート；プロピルホスホ−リン酸プロピル；（リン酸プロピル）３、（リン酸プロピル）２−プロパノール、（リン酸プロピル）２−プロピルホスホロチオエートから選択される。任意のプロパンまたはプロパノール結合部分が、ＺまたはＺ´に含有されてもよい。
【０２８５】
例示的な３´末端非ヌクレオチド部分の構造は、以下である：
【化３】
0006364009.tif 000010
【０２８６】
フェニルヒドロカルビル結合体
一部の実施形態において、フェニルヒドロカルビル部分（ＰＨＭ）に共有結合された核酸分子が提供される。一部の実施形態において、センス鎖およびアンチセンス鎖を含有する核酸分子が提供され、ここで、少なくとも１つの鎖は、フェニルヒドロカルビル部分（ＰＨＭ）に共有結合されている。
【０２８７】
一部の実施形態において、本明細書に開示される二本鎖核酸は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含有し、ここで、センス鎖、アンチセンス鎖、またはその両方は、直接、またはリンカーを介して、フェニルヒドロカルボニル基を含有する部分に共有結合されており、当該部分は、一般式ＩＩＩにより表される：
【化４】
0006364009.tif 000011
ここで、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１０ヒドロカルビル基、ＯＲ６、ＯＣＯＲ６、ＣＯＯＲ６、ＣＨ２ＯＲ６、ＣＨＯ、ＣＯＲ６、ＮＲ６Ｒ７およびＳＲ６からなる群から選択され；または、Ｒ１およびＲ２は、飽和または不飽和環状Ｃ１−Ｃ７ヒドロカルビル環（任意選択的に、酸素、窒素、または硫黄から選択される２つまでのヘテロ原子により割りこまれており、および、任意選択的に、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ３ヒドロカルビル基、ＯＲ６、ＯＣＯＲ６、ＣＯＯＲ６、ＣＨ２ＯＲ６、ＣＨＯ、ＣＯＲ６、ＮＲ６Ｒ７、ＳＲ６、＝Ｏ、＝Ｓおよび、＝ＮＨからなる群から独立して選択される３つまでの基により置換されている）を形成し；
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ８ヒドロカルビル基（任意選択的に、酸素、窒素、または硫黄から選択される２つまでのヘテロ原子により割りこまれている）であり；
Ｒ４は、ＮＨ、Ｏ、ＳまたはＣＲ６Ｒ７であり；
Ｒ６および、Ｒ７は、それぞれ、独立して、ＨおよびＣ１−Ｃ４ヒドロカルビル基からなる群から選択され；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｌは、１２までのアミノ酸残基のペプチジル鎖、−［ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ］ｍ−、Ｃ１−Ｃ１２ヒドロカルビル基（任意選択的に、Ｏ、ＮまたはＳから選択される２つまでのヘテロ原子により割りこまれている）およびＲ８Ｏ−からなる群から選択され；
Ｒ８は、Ｃ１−Ｃ１２ヒドロカルビル基（任意選択的に、Ｏ、ＮまたはＳから選択される２つまでのヘテロ原子により割りこまれている）であり； 
ｎは、０〜１０の整数であり；
ｍは、１〜１０の整数であり；
Ｒ５は、−Ｐ（Ｏ）（Ｒ９）−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｏ−；−ＮＨ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−；−Ｃ（Ｏ）Ｏ−；−ＮＨＣＳ−；−ＮＨＣＯ−および、単結合からなる群から選択され；
Ｒ９は、Ｏ−、Ｓ−、ＢＨ３−、ＮＲ６Ｒ７またはＣＨ３からなる群から選択され；
または、その薬学的に受容可能な塩であり；
ここで、センス鎖は、ｐ５３遺伝子（配列番号１〜７）に対応するｍＲＮＡのセグメントに対して配列同一性を有する。
【０２８８】
適応症
ｐ５３遺伝子の発現阻害は、様々な疾患および障害の治療および／または予防に有益であることが示されている。本出願は、特に、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御する二本鎖核酸分子に関しており、ならびに、様々な疾患および障害の治療および／または予防における、これらの分子の使用に関している。そのような疾患／障害の例としては、限定されないが、虚血再灌流傷害、難聴、聴覚障害、平衡障害、聴覚損失、化学療法誘発性脱毛症、放射線治療誘発性脱毛症、急性腎不全、急性腎障害、慢性腎疾患（ＣＫＤ）、抗癌剤療法に関連した副作用、腎移植患者における臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）、脊髄損傷、脳損傷、てんかん発作（ｓｅｉｚｕｒｅ）、脳卒中、パーキンソン病、アルツハイマー病、腫瘍、やけど、外傷、高熱、低酸素症、虚血、臓器移植、骨髄移植（ＢＭＴ）、心筋梗塞／心臓発作、心臓毒性および急性肝不全が挙げられる。
【０２８９】
１つの実施形態において、障害は、抗癌治療に関連した副作用であり、および、本明細書に開示される核酸化合物もしくはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩、またはそのような化合物を含有する組成物、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩を含有する組成物が、当該副作用を治療または改善するために、有効量で投与される。そのような抗癌治療は、放射線治療、化学療法、分子標的抗癌治療、および生物学的抗癌治療が含有されても良い。様々な実施形態において、そのような抗癌治療に関連した副作用は、脱毛（脱毛症）、精巣細胞の損傷、腸管上皮細胞の損傷、リンパ系の損傷、または造血系の損傷のうちの１つ以上から選択される。
【０２９０】
１つの実施形態において、疾患は、ｐ５３陽性癌であり、本明細書に開示される核酸化合物もしくはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩、またはそのような化合物を含有する組成物、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩を含有する組成物が、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御するために有効量で投与され、それによって、対象において、ｐ５３陽性癌を化学療法に対し感受性化させる。
【０２９１】
１つの実施形態において、本明細書に開示される核酸化合物もしくはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩、またはそのような化合物を含有する組成物、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩を含有する組成物は、造血前駆細胞の増大、または造血刺激における使用のためのものである。
【０２９２】
１つの実施形態において、本明細書に開示される核酸化合物もしくはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩、またはそのような化合物を含有する組成物、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩を含有する組成物は、ｐ５３ヌルの造血幹細胞（ＨＳＣ）のホーミングにおける使用のためのものである。
【０２９３】
医薬組成物
たとえば、低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）、干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、および低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子等の、ｐ５３遺伝子発現の下方制御を調節することができる、または、ｐ５３遺伝子発現に対するＲＮＡ干渉を調節する核酸分子を用いることにより、ｐ５３の発現を下方制御するための組成物および方法が提供される。
【０２９４】
本明細書に開示される分子を、未加工の化学物質として、またはその薬学的に受容可能な塩として、投与することも可能ではあるが、それらは医薬組成物として提示されることが好ましい。ゆえに、本明細書に開示される１以上の核酸分子；またはその薬学的に受容可能な塩、および、薬学的に受容可能な担体を含有する医薬組成物が提供される。そのような医薬組成物は、２以上の異なる核酸化合物の混合物を含有しても良い。
【０２９５】
本明細書に提供される組成物、方法、およびキットには、ｐ５３タンパク質の発現および／またはｐ５３タンパク質をコードする遺伝子の発現を、独立して、または共同で、調節する（たとえば、下方制御する）１以上の核酸分子および方法が含有されても良い。様々な態様および実施形態が、ｐ５３遺伝子に関連して記述される。しかしながら、それら様々な態様および実施形態は、他の関連遺伝子（たとえば、あるｐ５３遺伝子に関連したホモログ遺伝子および転写変異体ならびに多型（たとえば、一塩基多型（ＳＮＰ））等）も目的とするものである。それゆえ、様々な態様および実施形態はまた、たとえば、本明細書に記述される疾患、特性もしくは状態の維持または発現に関与する、シグナル伝達または遺伝子発現のｐ５３介在経路に関与する、他の遺伝子も目的とするものである。これらの追加の遺伝子は、ｐ５３遺伝子に対して本明細書に記述される方法を用いて、標的部位に関し分析することができる。ゆえに、他の遺伝子の下方制御および、他の遺伝子に関するそのような調節の効果を、本明細書に記述されるように実施、決定および測定することができる。
【０２９６】
さらに、ｐ５３発現を効果的に下方制御する量で、本明細書に開示される核酸化合物の１以上に共有結合された、または非共有結合された、本明細書に開示される核酸化合物の少なくとも１つ；および、薬学的に受容可能な担体を含有する医薬組成物が提供される。化合物は、内在性細胞複合体により、細胞内でプロセシングされ、本明細書に開示される１以上のオリゴヌクレオチドを産生しても良い。
【０２９７】
さらに、ヒトｐ５３の細胞中の発現を効果的に下方制御する量の、本明細書に記述される１以上の化合物（当該化合物は、配列番号８〜３３に記述される配列を含有する）、および薬学的に受容可能な担体を含有する医薬組成物が提供される。
【０２９８】
１つの実施形態において、本明細書に記述されるオリゴヌクレオチド化合物、組成物および方法は、ｐ５３遺伝子を阻害／下方制御する（当該阻害／下方制御は、遺伝子機能の阻害／下方制御、ポリペプチド制御の阻害／下方制御、および、ｍＲＮＡ発現の阻害／下方制御から選択される）。
【０２９９】
１つの実施形態において、本明細書に開示される核酸を用いて、ｐ５３遺伝子ファミリー（当該遺伝子または遺伝子ファミリー配列は、配列相同性を共有している）の発現を阻害してもよい。そのような相同性配列は、たとえば、配列アライメントを用いて、当分野で周知のように特定されても良い。核酸分子は、たとえば、完全相同配列を用いて、または、追加の標的配列をもたらすことができる、非正規型塩基対（たとえば、不適合塩基対および／またはゆらぎ塩基対）を組み込むことにより、そのような相同性配列を標的とするように設計されても良い。不適合が特定されている例において、非正規型塩基対（たとえば、不適合塩基および／またはゆらぎ塩基）を用いて、２以上の遺伝子配列を標的とする核酸分子を作製しても良い。非限定的な例において、非正規型塩基対（たとえば、ＵＵおよびＣＣ塩基対）を用いて、配列相同性を共有する、異なるｐ５３標的の配列を標的とすることができる核酸分子を作製する。ゆえに、本明細書に開示される核酸化合物を用いることの１つの利点は、相同遺伝子の間で保存されているヌクレオチド配列に対して相補的な核酸配列を含有するように、１つの核酸を設計することができることである。この方法で、異なる遺伝子を標的とする２以上の核酸分子を用いる代わりに、１つの核酸で２以上の遺伝子の発現を抑制することができる。
【０３００】
核酸分子を用いて、たとえばｐ５３ファミリー遺伝子等の遺伝子ファミリー（複数含む）に対応する保存配列を標的としてもよい。ゆえに、複数のｐ５３標的を標的とする核酸分子により、治療効果の増加を得ることができる。さらに、核酸を用いて、様々な用途における遺伝子機能の経路の特徴を解明することができる。たとえば、核酸分子を用いて、経路における標的遺伝子（複数含む）の活性を阻害し、機能が不明な遺伝子（複数含む）の機能を、遺伝子機能解析、ｍＲＮＡ機能解析、または、翻訳解析において決定することができる。核酸分子を用いて、医薬開発に向け、様々な疾患および状態に関与する潜在的な標的遺伝子経路を決定することができる。核酸分子を用いて、様々な疾患および状態に関与する遺伝子発現の経路を理解することができる。
【０３０１】
１つの実施形態において、本明細書に提供される核酸化合物、組成物および方法は、ｐ５３ポリペプチドを阻害する（当該阻害は、機能阻害（特に、公知の天然型遺伝子／ポリペプチドの相互作用物質との、酵素アッセイまたは結合アッセイにより分析されてもよい）、タンパク質の下方制御またはタンパク質の阻害（特に、ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、または免疫沈降により分析されても良い）およびｍＲＮＡ発現の阻害（特に、ノーザンブロッティング、定量ＲＴ−ＰＣＲ、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、またはマイクロアレイハイブリダイゼーションにより分析されても良い）から選択される）。
【０３０２】
１つの実施形態において、本明細書に提供される組成物および方法には、ｐ５３ＲＮＡに対するＲＮＡｉの活性を有する核酸分子が含まれ、当該核酸分子は、ｐ５３コード配列（たとえば、配列番号１〜７に記述される配列等）を有する任意のＲＮＡに対し相補的な配列を含有する。別の実施形態において、核酸分子は、ｐ５３ＲＮＡに対するＲＮＡｉの活性を有していても良く、当該核酸分子には、変異体ｐ５３コード配列（たとえば、配列番号１〜７に示されていないが、たとえば、本明細書に記述される疾患／障害／状態の発生および／または維持および／または発現に関連していることが当分野に公知である、他の変異型ｐ５３遺伝子）を有するＲＮＡに対して相補的な配列が含有される。本明細書に記述される化学修飾を、本明細書に開示される任意の核酸構築物に対して適用しても良い。別の実施形態において、本明細書に開示される核酸分子は、ｐ５３遺伝子のヌクレオチド配列と相互作用し、それにより、ｐ５３遺伝子発現の下方制御またはサイレンシングを調節することができるヌクレオチド配列を含有し、たとえば、ここで、当該核酸分子は、クロマチン構造または遺伝子のメチル化パターンを調節し、当該遺伝子の転写を妨害する、細胞内プロセスにより、ｐ５３遺伝子の発現制御を調節するものである。
【０３０３】
より具体的には、本明細書において、表１に記述されるセンス鎖配列およびアンチセンス鎖配列（配列番号８〜３３）、またはそれらのホモログを有する二本鎖核酸分子が提供され、ここで、各末端領域のリボヌクレオチドのうちの１〜２つは、改変されている。
【０３０４】
送達および組成
本発明の核酸分子は、担体または希釈剤とともに調製された裸の分子の直接的な適用により、標的組織へと送達されても良い。
【０３０５】
「裸の核酸」または「裸のｄｓＲＮＡ」または「裸のｓｉＲＮＡ」という用語は、細胞への侵入を補助する、促進する、または容易にさせるよう作用する任意の送達ビヒクル（ウイルス配列、ウイルス粒子、リポソーム製剤、リポフェクチンまたは沈殿剤等を含む）を含まない（ｆｒｅｅである）核酸分子を指す。たとえば、ＰＢＳに溶解したｄｓＲＮＡは、「裸のｄｓＲＮＡ」である。
【０３０６】
本明細書に開示される核酸分子、またはその薬学的に受容可能な塩は、細胞への侵入を補助する、促進する、または容易にさせるよう作用する担体または希釈剤（ウイルスベクター、ウイルス粒子、リポソーム製剤、リポフェクチン、または沈殿剤等を含む）と共に、直接、送達または投与されても良い。
【０３０７】
核酸分子は、対象への投与のために、送達ビヒクル（リポソームを含む）、担体および希釈剤およびそれらの塩を含有しても良く、および／または、薬学的に受容可能な製剤中に存在しても良い。一部の実施形態において、本発明のｄｓＲＮＡ分子は、リポソーム製剤中、およびリポフェクチン製剤中等で送達され、ならびに、当業者公知の方法により調製されてもよい。そのような方法は、たとえば、米国特許第５，５９３，９７２号、同第５，５８９，４６６号、および同第５，５８０，８５９号に記述されている（それらは参照により本明細書に援用される）。
【０３０８】
哺乳類細胞へのｓｉＲＮＡの送達増強および改善を特に目的とした送達系が開発されている（たとえば、Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔ．  ２００３，  ５３９：１１１−１１４；Ｘｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２００２，  ２０：１００６−１０１０；Ｒｅｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｖｉｓｉｏｎ  ２００３，  ９：  ２１０−２１６；Ｓｏｒｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２００３．  ３２７：  ７６１−７６６；Ｌｅｗｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．  Ｇｅｎ．  ２００２，  ３２：  １０７−１０８、および、Ｓｉｍｅｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ＮＡＲ  ２００３，  ３１，１１：  ２７１７−２７２４を参照のこと）。近年、ｓｉＲＮＡを用いた、霊長類における遺伝子発現の阻害が成功している（Ｔｏｌｅｎｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｔｉｎａ  ２４（４）：６６０を参照のこと）。
【０３０９】
特に、耳（任意選択的に、内耳）への、裸のＲＮＡ分子または製剤化ＲＮＡ分子の送達が、点耳薬として処方された所望化合物の投与により、または、中耳腔内注入により、成功している。ｄｓＲＮＡを含有する耳の組成物が、米国特許出願公開第２０１１０１４２９１７号（本出願の譲受人と同一。参照によりその全体が本明細書に援用される）に開示されている。
【０３１０】
所望の対象への、核酸の導入を促進するポリペプチドが、当分野に公知である（たとえば、米国特許出願公開第２００７０１５５６５８号に記述される、たとえば２，４，６−トリグアニジノトライジンおよび２，４，６−トラミドサルコシル（Ｔｒａｍｉｄｏｓａｒｃｏｃｙｌ）メラミン等のメラミン誘導体、ポリアルギニンポリペプチド、ならびに、交互のグルタミンおよびアスパラギン残基を含有するポリペプチド）。
【０３１１】
薬学的に受容可能な担体、溶媒、希釈剤、賦形剤、アジュバントおよびビヒクルならびにインプラント担体は一般的に、本発明の活性成分と反応しない、不活性で、非毒性の固体または液体の充填剤、希釈剤もしくは内包化物質を指し、ならびに、それらには、リポソームおよびミクロスフィアが含まれる。本発明に有用な送達系の例としては、米国特許第５，２２５，１８２号；同第５，１６９，３８３号；同第５，１６７，６１６号；同第４，９５９，２１７号；同第４，９２５，６７８号；同第４，４８７，６０３号；同第４，４８６，１９４号；同第４，４４７，２３３号；同第４，４４７，２２４号；同第４，４３９，１９６号；および同第４，４７５，１９６号が挙げられる。多くの他のそのようなインプラント、送達系およびモジュールが、当業者に公知である。
【０３１２】
特定の実施形態において、投与には、全身投与が含まれる。別の実施形態において、投与には、局所（ｔｏｐｉｃａｌ  ｏｒ  ｌｏｃａｌ）投与が含まれる。化合物のインプラントもまた有用である。液体の剤型も調製される。液体組成物としては、水溶液（有機共溶媒を含有する、および含有しない）、水性懸濁液もしくは油性懸濁液、食用油を伴う乳濁液、ならびに、類似の医薬ビヒクルが挙げられる。組成物はまた、中耳腔内に、または硝子体内に注入されても良い。組成物はまた、点眼薬または点耳薬として適用されても良い。
【０３１３】
核酸分子の送達方法は、Ａｋｈｔａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．，  ２：  １３９  （１９９２）；Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，  ｅｄ．  Ａｋｈｔａｒ，  （１９９５），Ｍａｕｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ．  Ｍｅｍｂｒ．  Ｂｉｏｌ．，  １６：  １２９−１４０  （１９９９）；Ｈｏｆｌａｎｄ  ａｎｄ  Ｈｕａｎｇ，  Ｈａｎｄｂ．  Ｅｘｐ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，  １３７：  １６５−１９２  （１９９９）；および、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ＡＣＳ  Ｓｙｍｐ．  Ｓｅｒ．，  ７５２：  １８４−１９２  （２０００）；米国特許第６，３９５，７１３号；同第６，２３５，３１０号；同第５，２２５，１８２号；同第５，１６９，３８３号；同第５，１６７，６１６号；同第４，９５９２１７号；同第４．９２５，６７８号；同第４，４８７，６０３号；および同第４，４８６，１９４号、および、Ｓｕｌｌｉｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＣＴ国際公開第９４／０２５９５号；ＰＣＴ国際公開第００／０３６８３号およびＰＣＴ国際公開第０２／０８７５４号；および、米国特許出願公開第２００３０７７８２９号に記述されている。これらのプロトコールは、実質的にすべての核酸分子の送達に用いることができる。核酸分子は、当業者公知の様々な方法（限定されないが、イオントフォレーシスによる、または他のビヒクル（たとえば、生体分解性ポリマー、ハイドロゲル、シクロデキストリン（たとえば、Ｇｏｎｚａｌｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，  １０：  １０６８−１０７４  （１９９９）；Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＣＴ国際特許出願公開第０３／４７５１８号および同第０３／４６１８５号を参照のこと）、乳酸-グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）およびＰＬＣＡミクロスフィア（たとえば、米国特許第６，４４７，７９６号および米国特許出願公開第２００２１３０４３０号を参照のこと）、生体分解性ナノカプセル、および、生体付着性ミクロスフィア等）への組み込みにより、または、タンパク質性ベクター（Ｏ’Ｈａｒｅ  ａｎｄ  Ｎｏｒｍａｎｄ，国際ＰＣＴ出願公開第ＷＯ００／５３７２２号）による、リポソーム内への内包化を含む）により、細胞に投与することができる。あるいは、注入ポンプの使用により、または直接注入により、核酸／ビヒクルの組み合わせが局所的に送達される。本発明の核酸分子の直接注入（硝子体内、皮下、中耳腔内、筋肉内または皮内のいずれか）は、標準的な針とシリンジの手法、または針の無い技術（たとえば、Ｃｏｎｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ５：  ２３３０−２３３７  （１９９９）および、Ｂａｒｒｙらの、国際ＰＣＴ出願公開第ＷＯ９９／３１２６２号に記述されているもの）を用いて行うことができる。本発明の分子は、薬剤として用いることができる。薬剤によって、対象における疾患状態の発生が阻害、調節され、または、対象における疾患状態の症状がある程度まで(好適にはすべての症状が)治療もしくは軽減される。本発明の１つの特定の実施形態において、局所性および経皮性製剤が選択されても良い。
【０３１４】
本明細書に開示される、核酸化合物、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩、またはそのような化合物を含有する組成物、またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩を含有する組成物が、個々の対象の臨床状態、治療される疾患、投与部位および投与方法、投与スケジュール、患者の年齢、性別、体重および医療従事者に公知の他の因子が考慮された、適正な医療行為に従って投与および服薬される。
【０３１５】
核酸分子は、カチオン性脂質とともに、リポソーム内にパッケージされて複合体化されても良く、または、別の方法で標的細胞または組織に送達されても良い。核酸または核酸複合体は、バイオポリマーへの組み込みの有無にかかわらず、直接的な皮膚への塗布、経皮適用、または注入を介して、ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで関連組織へ局所投与されても良い。
【０３１６】
送達系としては、ポリ（エチレングリコール）脂質を含有する表面修飾リポソーム（ＰＥＧ修飾もしくは長期循環リポソームまたはステルスリポソーム）が挙げられる。これらの処方により、標的組織における薬剤の蓄積量を増加させる方法がもたらされる。この種類の薬剤担体は、オプソニン化および単核性食細胞系（ＭＰＳまたはＲＥＳ）による排除に対して抵抗性であり、これによって、長期間、血中に循環することができ、内包化された薬剤がより多く組織へと到達する（Ｌａｓｉｃ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｖ．  １９９５，  ９５，  ２６０１−２６２７；Ｉｓｈｉｗａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．  １９９５，  ４３，  １００５−１０１１）。
【０３１７】
核酸分子は、ポリエチレンイミン（たとえば、直鎖ＰＥＩまたは分枝ＰＥＩ）および／またはポリエチレンイミン誘導体（たとえば、ポリエチレンイミン−ポリエチレングリコール−Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＰＥＩ−ＰＥＧ−ＧＡＬ）または、ポリエチレンイミン−ポリエチレングリコール−トリ−Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＰＥＩ−ＰＥＧ−ｔｒｉＧＡＬ）誘導体、グラフト結合ＰＥＩ（たとえば、ガラクトースＰＥＩ、コレステロールＰＥＩ、抗体誘導体化ＰＥＩ、および、それらのポリエチレングリコールＰＥＩ（ＰＥＧ−ＰＥＩ）誘導体等）（たとえば、Ｏｇｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  ＡＡＰＡ  ＰｈａｒｍＳｃｉ，  ３，  １−１１；  Ｆｕｒｇｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，  １４，  ８４０−８４７；Ｋｕｎａｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  １９，  ８１０−８１７；Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１，  Ｂｕｌｌ．  Ｋｏｒｅａｎ  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  ２２，  ４６−５２；Ｂｅｔｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，  １０，  ５５８−５６１；Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，  １３，  ８４５−８５４；Ｅｒｂａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｐｒｅｐｒｉｎｔ，  １，  １−１８；Ｇｏｄｂｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９．，  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，  ９６，  ５１７７−５１８１；Ｇｏｄｂｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，  ６０，  １４９−１６０；Ｄｉｅｂｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ２７４，  １９０８７−１９０９４；Ｔｈｏｍａｓ  ａｎｄ  Ｋｌｉｂａｎｏｖ，  ２００２，  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，  ９９，  １４６４０−１４６４５；Ｓａｇａｒａの、米国特許第６，５８６，５２４号および米国特許出願公開第２００３００７７８２９号を参照のこと）を含む）と複合体化、または製剤化されてもよい。
【０３１８】
核酸分子は、たとえば、米国特許出願公開第２００１０００７６６６号に記述されている、膜破壊剤と複合体化されても良い。膜破壊剤（複数含む）および核酸分子はまた、カチオン性脂質またはヘルパー脂質分子（たとえば、米国特許第６，２３５，３１０号に記述される脂質）と複合体化されてもよい。
【０３１９】
本明細書に開示される核酸分子は、中枢神経系（ＣＮＳ）または末梢神経系（ＰＮＳ）へ投与されても良い。研究により、神経細胞による核酸の効率的なｉｎ  ｖｉｖｏ取込が示されている。たとえば、Ｓｏｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃ．  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．，  ８，  ７５；Ｅｐａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００，  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃ．  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．，  １０，  ４６９；Ｂｒｏａｄｄｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．，  ８８（４），  ７３４；Ｋａｒｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍｏｃｏｌ．，  ３４０（２／３），  １５３；Ｂａｎｎａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ７８４（１，２），  ３０４；Ｒａｊａｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  Ｓｙｎａｐｓｅ，  ２６（３），  １９９；  Ｗｕ−ｐｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９，  ＢｉｏＰｈａｒｍ，  １２（１），  ３２；Ｂａｎｎａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．  Ｐｒｏｔｏｃ．，  ３（１），  ８３；および、Ｓｉｍａｎｔｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６，  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，  ７４（１），  ３９を参照のこと。ゆえに、核酸分子は、ＣＮＳおよび／またはＰＮＳの細胞（たとえば、神経細胞、マクロファージ、白質軸索および内皮細胞等）へと容易に送達および取り込まれることができる。
【０３２０】
送達系としては、たとえば、水性ゲルおよび非水性ゲル、クリーム、多重エマルション、マイクロエマルション、リポソーム、軟膏、水性溶液、非水性溶液、ローション、エアロゾル、炭化水素基材および粉末等を含んでも良く、および、たとえば可溶化剤、透過増強物質（たとえば、脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪アルコールおよびアミノ酸等）、および親水性ポリマー（たとえば、ポリカーボフィルおよびポリビニルピロリドン等）等の賦形剤を含有しても良い。１つの実施形態において、薬学的に受容可能な担体は、リポソームまたは経皮増強物質である。本発明の化合物と使用することができるリポソームの非限定的な例としては、以下が挙げられる：（１）カチオン性脂質Ｎ，ＮＩ，ＮＩＩ，ＮＩＩＩ−テトラメチル−Ｎ、ＮＩ，ＮＩＩ，ＮＩＩＩ−テトラパルミット（ｔｅｔｒａｐａｌｍｉｔ）−ｙ−スペルミン、および、ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）の１：１．５（Ｍ／Ｍ）リポソーム製剤である、ＣｅｌｌＦｅｃｔｉｎ；（２）カチオン性脂質とＤＯＰＥ（Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）の２：１（Ｍ／Ｍ）リポソーム製剤である、Ｃｙｔｏｆｅｃｔｉｎ  ＧＳＶ；（３）ＤＯＴＡＰ  （Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリ−メチル−硫酸メチルアンモニウム）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｈｅｉｍ）；および、（４）ポリカチオン性脂質ＤＯＳＰＡ、中性脂質ＤＯＰＥ（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）およびジアルキル化アミノ酸（Ｄｉ−Ａｌｋｙｌａｔｅｄ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ）（ＤｉＬＡ２）の３：１（Ｍ／Ｍ）リポソーム製剤である、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ。
【０３２１】
送達系には、パッチ、錠剤、座薬、ペッサリー、ゲル、水性溶液および非水性溶液、ローションならびにクリームを含んでも良く、ならびに、たとえば可溶化剤および増強物質（たとえば、プロピレングリコール、胆汁塩およびアミノ酸等）ならびに他のビヒクル（たとえば、ポリエチレングリコール、グリセロール、脂肪酸エステルおよび誘導体、ならびに、たとえばヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびヒアルロン酸等の親水性ポリマー等）等の賦形剤を含有しても良い。
【０３２２】
核酸分子は、バイオ複合体（たとえば、Ｖａｒｇｅｅｓｅらの、米国特許出願第１０／４２７，１６０号；米国特許第６，５２８，６３１号；米国特許第６，３３５，４３４号；米国特許第６，２３５，８８６号；米国特許第６，１５３，７３７号；米国特許第５，２１４，１３６号；米国特許第５，１３８，０４５号に記述される、核酸複合体）を含有しても良い。
【０３２３】
本明細書に開示される組成物、方法およびキットは、本発明の核酸分子を少なくとも１つコードする核酸配列を、当該核酸分子の発現が可能となる様式で含有する発現ベクターを含有しても良い。核酸分子、または二本鎖オリゴヌクレオチド化合物の鎖を発現することができる１以上のベクターを細胞環境中へと導入する方法は、細胞のタイプおよびその環境の組成に依存する。核酸分子またはベクター構築物は、細胞の内へ直接導入されても良く（すなわち、細胞内に）；もしくは、空洞空間、間質腔、生体循環中へ、細胞外に導入されてもよく、経口的に導入されてもよく、または、核酸化合物を含有する溶液に細胞または生体を浸すことにより導入されてもよい。細胞は、好ましくは、哺乳類細胞；より好ましくはヒトの細胞である。発現ベクターの核酸分子は、センス領域およびアンチセンス領域を含有してもよい。アンチセンス領域は、ｐ５３遺伝子をコードするＲＮＡ配列またはＤＮＡ配列に対して相補的な配列を含有してもよく、および、センス領域は、アンチセンス領域に相補的な配列を含有しても良い。核酸分子は、相補的なセンス領域およびアンチセンス領域を有する、２つの異なる鎖を含有してもよい。核酸分子は、相補的なセンス領域およびアンチセンス領域を有する一本鎖を含有してもよい。
【０３２４】
標的ＲＮＡ分子と相互作用し、標的ＲＮＡ分子（たとえば、ｍＲＮＡ、配列番号１〜７）をコードするｐ５３遺伝子を下方制御する核酸分子は、ＤＮＡベクターまたはＲＮＡベクターへと挿入された転写ユニットから発現されても良い。組換えベクターは、ＤＮＡプラスミドまたはウイルスベクターであっても良い。核酸分子発現ウイルスベクターは、限定されないが、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、またはアルファウイルスに基づき、構築されてもよい。核酸分子を発現することが出来る組換えベクターは、本明細書に記述されるように送達され、そして、標的細胞中で存続してもよい。あるいは、核酸分子の一過性発現をもたらすウイルスベクターが用いられても良い。そのようなベクターは、必要に応じて、繰り返し投与することができる。発現した時点で、核酸分子は、たとえばＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を介して、結合し、そして遺伝子機能または発現が下方制御される。核酸分子発現ベクターの送達は、たとえば、静脈内投与または筋肉内投与による全身投与、局所投与、対象から外殖された標的細胞への投与後の、対象への再導入、または、所望の標的細胞へと導入することができる任意の他の手段であっても良い。
【０３２５】
発現ベクターは、本明細書に開示される核酸分子を少なくとも１つ、当該核酸分子を発現することができるような様式で、コードする、核酸配列を含有しても良い。たとえば、ベクターは、二本鎖を含有する核酸分子の両鎖をコードする配列（複数含む）を含有しても良い。ベクターはまた、自己相補的であり、それによって、核酸分子を形成する、一本鎖核酸分子をコードする配列（複数含む）を含有してもよい。そのような発現ベクターの非限定的な例は、Ｐａｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  １９，  ５０５；  Ｍｉｙａｇｉｓｈｉ  ａｎｄ  Ｔａｉｒａ，  ２００２，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  １９，  ４９７；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  １９，  ５００；および、Ｎｏｖｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ａｄｖａｎｃｅ  ｏｎｌｉｎｅ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ７２５に記述されている。発現ベクターはまた、哺乳類（たとえば、ヒト）の細胞に含有されていてもよい。
【０３２６】
発現ベクターは、二本鎖核酸の１つの鎖または両鎖をコードしてもよく、または、二本鎖核酸へと自己でハイブリダイズする、自己相補的な一本鎖をコードしてもよい。核酸分子をコードする核酸配列は、当該核酸分子が発現することができる様式で、操作可能に連結されていてもよい（たとえば、Ｐａｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  １９，  ５０５；Ｍｉｙａｇｉｓｈｉ  ａｎｄ  Ｔａｉｒａ，  ２００２，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  １９，  ４９７；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  １９，  ５００；および、Ｎｏｖｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ａｄｖａｎｃｅ  ｏｎｌｉｎｅ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ７２５を参照のこと）。
【０３２７】
発現ベクターは、以下のうちの１つ以上を含有してもよい：ａ）転写開始領域（たとえば、真核細胞のｐｏｌ  Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩ開始領域）；ｂ）転写終結領域（たとえば、真核細胞のｐｏｌ  Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩ終結領域）；ｃ）イントロンおよび、ｄ）核酸分子のうちの少なくとも１つをコードする核酸配列、ここで、当該配列は、当該核酸分子が発現および／または送達されることができる様式で、開始領域および終結領域に操作可能に連結されている。ベクターは、核酸分子をコードする配列の５´側または３´側に操作可能に連結されたタンパク質に対するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）；および／または、イントロン（介在配列）を任意選択的に含有しても良い。
【０３２８】
核酸分子配列の転写は、真核細胞のＲＮＡポリメラーゼＩ（ｐｏｌ  Ｉ）、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ（ｐｏｌ  ＩＩ）、またはＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ（ｐｏｌ  ＩＩＩ）に対するプロモーターから誘導されても良い。ｐｏｌ  ＩＩまたはｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターからの転写は、全ての細胞中において高レベルで発現され、所与の細胞型の所与のｐｏｌ  ＩＩプロモーターのレベルは、その近くに存在する遺伝制御配列（エンハンサー、サイレンサー等）の性質に依存する。また、適切な細胞中で原核生物のＲＮＡポリメラーゼ酵素が発現される場合であれば、原核生物のＲＮＡポリメラーゼプロモーターが用いられる（Ｅｌｒｏｙ−Ｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｍｏｓｓ，  １９９０，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８７，  ６７４３−７；Ｇａｏ  ａｎｄ  Ｈｕａｎｇ  １９９３，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ２１，  ２８６７−７２；Ｌｉｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，  ２１７，  ４７−６６；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０，  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．，  １０，  ４５２９−３７）。研究者らによって、そのようなプロモーターから発現された核酸分子は、哺乳類細胞中で機能できることが証明されている（たとえば、Ｋａｓｈａｎｉ−Ｓａｂｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓ．  Ｄｅｖ．，  ２，  ３−１５；Ｏｊｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８９，  １０８０２−６；Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ２０，  ４５８１−９；  Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９０，  ６３４０−４；Ｌ’Ｈｕｉｌｌｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  ＥＭＢＯ  Ｊ．，  １１，  ４４１１−８；Ｌｉｓｚｉｅｗｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ，  ９０，  ８０００−４；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ２３，  ２２５９；Ｓｕｌｌｅｎｇｅｒ  &  Ｃｅｃｈ，  １９９３，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２６２，  １５６６）。より具体的には、たとえばＵ６核内低分子（ｓｎＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）およびアデノウイルスＶＡ  ＲＮＡをコードする遺伝子から誘導されたもの等の転写ユニットは、細胞における、所望のＲＮＡ分子（たとえばｓｉＮＡ等）の高濃度産生に有用である（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，上述；Ｃｏｕｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂ，  １９９６，上述；Ｎｏｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．，  ２２，  ２８３０；Ｎｏｏｎｂｅｒｇら、米国特許第５，６２４，８０３号；Ｇｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，  ４，  ４５；Ｂｅｉｇｅｌｍａｎら、国際ＰＣＴ出願公開第ＷＯ９６／１８７３６号）。上述の核酸転写ユニットは、哺乳類細胞への導入のための様々なベクター（限定されないが、プラスミドＤＮＡベクター、ウイルスＤＮＡベクター（たとえば、アデノウイルスベクターまたはアデノ���伴ウイルスベクター等）またはウイルスＲＮＡベクター（たとえば、レトロウイルスベクターまたはアルファウイルスベクター）を含む）へと組み込まれても良い（上述のＣｏｕｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂ，  １９９６を参照のこと）。
【０３２９】
核酸分子は、真核細胞プロモーターから細胞内で発現されても良い（たとえば、Ｉｚａｎｔ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，  １９８５，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２２９，  ３４５；ＭｃＧａｒｒｙ  ａｎｄ  Ｌｉｎｄｑｕｉｓｔ，  １９８６，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ＵＳＡ  ８３，  ３９９；Ｓｃａｎｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８８，  １０５９１−５；Ｋａｓｈａｎｉ−Ｓａｂｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓ．  Ｄｅｖ．，  ２，  ３−１５；Ｄｒｏｐｕｌｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．，  ６６，  １４３２−４１；Ｗｅｅｒａｓｉｎｇｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．，  ６５，  ５５３１−４；Ｏｊｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８９，  １０８０２−６；Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ２０，  ４５８１−９；Ｓａｒｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２４７，  １２２２−１２２５；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ２３，  ２２５９；Ｇｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７，  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  ４，  ４５）。当業者であれば、真核細胞中で、適切なＤＮＡ／ＲＮＡベクターから、任意の核酸を発現することができることを認識している。そのような核酸の活性は、酵素的核酸による初期転写物からの放出により、増大させることができる（Ｄｒａｐｅｒら、ＰＣＴ国際公開第９３／２３５６９号、および、Ｓｕｌｌｉｖａｎら、ＰＣＴ国際公開第９４／０２５９５号；Ｏｈｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｓｙｍｐ．  Ｓｅｒ．，  ２７，  １５−６；Ｔａｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  １９，  ５１２５−３０；Ｖｅｎｔｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ２１，  ３２４９−５５；Ｃｈｏｗｒｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２６９，  ２５８５６）。
【０３３０】
ウイルス粒子へとパッケージされたウイルス構築物により、細胞内への発現構築物の効率的な導入および発現構築物によりコードされたｄｓＲＮＡ構築物の転写の両方が達成される。
【０３３１】
経口導入のための方法としては、生体の食物とＲＮＡの直接混合、ならびに、食物として用いられる種がＲＮＡを発現するよう遺伝子操作を行う遺伝子組み換え法が挙げられ、それら食物は次いで、作用させる生体に与えられる。物理的方法を用いて、細胞内に核酸分子溶液を導入しても良い。核酸を導入する物理的方法としては、核酸分子を含有する溶液の注入、核酸分子により覆われた粒子の照射、ＲＮＡ溶液中での細胞または生体の浸漬、または、核酸分子の存在下での、細胞膜のエレクトロポレーションが挙げられる。本明細書の１つの実施形態において、本明細書に開示される核酸分子を含有する細胞が提供される。
【０３３２】
たとえば、リン酸カルシウム等の、化学物質介在輸送等の、細胞へ核酸を導入するための当分野公知の他の方法を用いても良い。ゆえに、核酸分子は、以下の１以上の活性を果たす成分と共に、導入されてもよい：細胞によるＲＮＡ取り込みの増強、二本鎖のアニーリングの推進、アニーリングされた鎖の安定化、または、別の方法での標的遺伝子の阻害／下方制御の増大。
【０３３３】
ポリマーナノカプセルまたはマイクロカプセルは、内包化された、または結合されたｄｓＲＮＡの細胞への輸送と放出を促進する。それらにはポリマー物質およびモノマー物質（特に、ポリシアノアクリル酸ブチルを含む）が含有される。物質および製造方法の概要は公開されている（Ｋｒｅｕｔｅｒ，  １９９１を参照のこと）。重合生成工程／ナノ粒子生成工程において、モノマー前駆体および／またはオリゴマー前駆体から形成されたポリマー物質は、それ自身、従来技術から知られており、ナノ粒子製造分野の当業者により、当該分野の通常の技術で適切に選択される、重合物質の分子量および分子量分布も同様である。
【０３３４】
核酸分子は、マイクロエマルションとして処方されてもよい。マイクロエマルションは、単一な光学的等方性であり、および熱力学的に安定な液体溶液である、水、油および両親媒性物質の系である。典型的には、マイクロエマルションは、水性界面活性剤溶液中に油を最初に分散させ、次いで、十分な量の第四の成分（一般的には、透明な系を形成するための中間鎖長のアルコール）を添加することにより調製される。
【０３３５】
マイクロエマルションの調製に用いられうる界面活性剤としては、限定されないが、単独または、補助界面活性剤と組み合わせた、イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、Ｂｒｉｊ  ９６、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリグリセロール脂肪酸エステル、テトラグリセロールモノラウレート（ＭＬ３１０）、テトラグリセロールモノオレエート（ＭＯ３１０）、ヘキサグリセロールモノオレエート（ＰＯ３１０）、ヘキサグリセロールペンタオレエート（ＰＯ５００）、デカグリセロールモノカプレート（ＭＣＡ７５０）、デカグリセロールモノオレエート（ＭＯ７５０）、デカグリセロールセスキオレエート（ＳＯ７５０）、デカグリセロールデカオレエート（ＤＡ０７５０）が挙げられる。補助界面活性剤（通常は、エタノール、１−プロパノールおよび１−ブタノール等の単鎖アルコール）は、界面活性剤の膜へと侵入し、その結果として界面活性剤分子の間に生成された隙間により不規則な状態になった膜を生成することにより、界面の流動性を上昇させるものである。
【０３３６】
送達製剤は、水可溶性で、分解可能な架橋ポリマー（１以上の分解可能な架橋脂質部分、１以上のＰＥＩ部分、および／または、１以上のｍＰＥＧ（ＰＥＧのメチルエーテル誘導体（メトキシポリ（エチレングリコール）））を含む）を含有しても良い。
【０３３７】
用量
投与される有用な用量および、投与の特定の方法は、細胞型等の因子、または、ｉｎ  ｖｉｖｏ用途に関しては、年齢、体重および処置される具体的な動物およびその領域、用いられる具体的な核酸および送達方法、企図される治療用途または診断用途、剤型（たとえば、懸濁液、エマルション、ミセルまたはリポソーム）に依存して変化することが、当業者には明らかである。典型的には、用量は、低レベルで投与され、所望の効果が得られるまで、増加するものである。本明細書の目的に対する「治療有効量」とは、ゆえに、そのような点を考慮することにより決定されることが当分野に公知である。投与量は、限定されないが、生存率の改善、またはより早い回復、または症状の改善もしくは消失、および、当業者により適切な測定基準として選択される他の指標を含む改善が効果的に得られるものでなくてはならない。
【０３３８】
適切な量の核酸分子を導入してもよく、および、これらの量は、標準的な方法を用いて経験的に決定することができる。細胞環境中の個々の核酸分子種の有効濃度は、約１フェムトモル、約５０フェムトモル、１００フェムトモル、１ピコモル、１．５ピコモル、２．５ピコモル、５ピコモル、１０ピコモル、２５ピコモル、５０ピコモル、１００ピコモル、５００ピコモル、１ナノモル、２．５ナノモル、５ナノモル、１０ナノモル、２５ナノモル、５０ナノモル、１００ナノモル、５００ナノモル、１マイクロモル、２．５マイクロモル、５マイクロモル、１０マイクロモル、１００マイクロモルか、それ以上であってもよい。
【０３３９】
一般的に、ヒトに対する核酸化合物の活性用量は、単回投与、１〜４週間またはそれ以上の期間に対し、１日当たり１回の投与、１日あたり２回または３回以上の投与のレジメンにおいては、１日当たり、１ｎｇ／ｋｇから約２０〜１００ミリグラム／レシピエントの体重キログラム（ｍｇ／ｋｇ）、好ましくは、１日当たり、約０．０１ｍｇから約２〜１０ｍｇ／レシピエントの体重ｋｇである。核酸分子の適切な投与単位は、1日当たり、０．００１〜０．２５ミリグラム／レシピエント体重キログラムの範囲であってもよく、または、１日当たり、０．０１〜２０マイクログラム／体重キログラムの範囲であってもよく、または、１日当たり、０．０１〜１０マイクログラム／体重キログラムの範囲であってもよく、または、１日あたり、０．１０〜５マイクログラム／体重キログラムの範囲であってもよく、または、１日あたり、０．１〜２．５マイクログラム／体重キログラムの範囲であってもよい。投与量は、０．０１ｕｇ〜１  ｇ／体重ｋｇであってもよい（たとえば、０．１ｕｇ、０．２５ｕｇ、０．５ｕｇ、０．７５ｕｇ、１ｕｇ、２．５ｕｇ、５ｕｇ、１０ｕｇ、２５ｕｇ、５０ｕｇ、１００ｕｇ、２５０ｕｇ、５００ｕｇ、１ｍｇ、２．５ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇ、または５００ｍｇ／体重ｋｇ）。
【０３４０】
１日当たり、約０．１ｍｇ〜約１４０ｍｇ／体重キログラム程度のレベルの投与量が、上述の状態の治療に有用である（１日当たり、約０．５ｍｇ〜約７ｇ／対象）。単回投与製剤を調製するための、担体と組み合わされてもよい活性成分の量は、治療される宿主と、投与の特定の方法により変化する。単位剤形は通常、約１ｍｇ〜約５００ｍｇの活性成分を含有する。
【０３４１】
任意の特定の対象に対する、特定の投与レベルは、様々な因子（使用される具体的な化合物の活性、年齢、体重、一般健康状態、性別、食事、投与時間、投与経路、および排出率、薬剤の組み合わせ、ならびに、治療されている具体的な疾患の重篤度を含む）に依存することが理解される。
【０３４２】
本明細書に開示される核酸分子を含有する医薬組成物は、１日に１度（ＱＤ）、１日に２度（ｂｉｄ）、１日に３度（ｔｉｄ）、１日に４度（ｑｉｄ）、または、任意の期間で、医学的に適切な任意の期間、投与されてもよい。しかしながら、治療剤はまた終日にわたり、適切な間隔で投与される、２、３、４、５、６またはそれ以上の下位投与量（ｓｕｂ−ｄｏｓｅｓ）を含有する投与単位で投与されてもよい。この場合、各下位投与量中に含有される核酸分子は、総一日投与量単位となるために、それに対応して少ない量であってもよい。また、投与単位は、たとえば数日間にわたりｄｓＲＮＡが持続して一定量放出される、標準的な徐放製剤を用いて、数日にわたる単回投与に対して構成されてもよい。徐放製剤は当分野に公知である。投与単位はまた、１日用量の複数回分に相当する量を含有してもよい。組成物は、複数単位の核酸の合計で、十分な用量を含有するように、構成されてもよい。
【０３４３】
医薬組成物、キットおよび容器
また、患者に対し、核酸分子を投与または配分するための、本明細書に提供される、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御するための核酸分子（たとえば、ｓｉＮＡ分子）を含有する組成物、キット、容器および製剤が開示される。キットは、少なくとも１つの容器および少なくとも１つのラベルを含有する。適切な容器としては、たとえば、瓶、バイアル、シリンジおよび試験管が挙げられる。容器は、様々な物質（たとえばガラス、金属またはプラスチック）から形成されてもよい。容器は、核酸配列（複数含む）、および／または、関連する実験、予後予測、診断、予防および治療の目的に必要とされる任意の他の構成要素を保持してもよい。そのような使用の指示書および／または説明書は、その容器の上、または容器と共に含まれても良く、これらの目的のために使用される試薬および他の組成物またはツールも同様である。
【０３４４】
あるいは、容器は、状態を治療、診断、予後予測または予防に効果的な組成物を保持してもよく、および、滅菌アクセスポートを有しても良い（たとえば、容器は、皮下注射針で穴を開けることができるストッパーを有する、点滴溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。組成物中の活性剤は、好ましくは、ｐ５３ｍＲＮＡに特異的に結合することができる核酸分子、および／または、ｐ５３遺伝子の機能を下方制御することができる核酸分子を含有する。
【０３４５】
キットはさらに、薬学的に受容可能な緩衝液（たとえば、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液および／またはデキストロース溶液等）を含有する第二の容器を含有しても良い。さらに、市販およびユーザーの観点から望ましい他の物質（他の緩衝液、希釈剤、充填剤、攪拌機、針、シリンジ、および／または使用指示および／または使用説明の添付文書）を含有してもよい。
【０３４６】
連邦法により、ヒトの治療における医薬組成物の使用には、連邦政府の当局による承認が必要とされる。合衆国において、法の施行は、食品医薬品局（Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）が行い、そのような承認を受けるための適切な法規を公表している（詳細は、２１  Ｕ．Ｓ．Ｃ．  §  ３０１−３９２にある）。生物学的物質（動物の組織から作製された産物を含む）に対する法規は、４２  Ｕ．Ｓ．Ｃ．  §  ２６２に規定されている。同様の承認は、ほとんどの外国においても必要とされる。国ごとに法規は異なるが、個々の手順は当業者に公知であり、本明細書に提供される組成物および方法は、好ましくは、それらに従うものである。
【０３４７】
本明細書に開示される核酸分子を単独で、または他の療法と組み合わせて用いて、ｐ５３に関連した疾患、状態または障害（たとえば、耳、前庭感覚システムにおける疾患、損傷、状態または病態、および、細胞または組織におけるｐ５３のレベルに関連または対応する他の任意の疾患または状態）を治療することができる。ゆえに、本明細書に開示される組成物、キットおよび方法は、ラベルまたは添付文書を含有する、本明細書に開示される核酸分子をパッケージングすることが含んでも良い。ラベルは、たとえば、限定されないが、本明細書に開示される任意の疾患または状態を含む、疾患、障害、損傷および状態の治療または予防のための使用等の、核酸分子の使用のための指示を含んでも良い。ラベルは、そのような疾患、損傷または状態を治療または予防または緩和のための使用等の、核酸分子の使用のための指示を含んでも良い。ラベルは、細胞または組織内のｐ５３のレベルに関連する、または応答する任意の他の疾患または状態の治療または予防のための使用等の、単独、または他の療法と組み合わせた、核酸分子の使用に関する指示を含んでも良い。ラベルは、ｐ５３の発現の減少および／または下方制御における使用のための指示を含んでも良い。「添付文書」とは、適応症、用法、用量、投与法、禁忌、当該治療薬と組み合わされる他の治療薬、および／または、そのような治療薬の使用に関する警告等に関する情報を含む、治療薬の市販パッケージに慣習的に含まれる説明書を指すために用いられる。
【０３４８】
当業者であれば、本明細書の核酸分子（たとえば、ｄｓＲＮＡ分子）と容易に組み合わせることができ、ゆえに、本明細書において企図される、当分野に公知の他の治療、薬剤および療法を、認識するであろう。
【０３４９】
治療方法
別の態様において、本発明は、ｐ５３遺伝子の異常な発現に関連した疾患または障害に対する治療の必要のある対象の治療方法に関連し、ｐ５３遺伝子の発現を減少または阻害する阻害物質の有効量を当該対象に投与することが含まれる。
【０３５０】
１つの実施形態において、核酸分子を用いて、ｐ５３遺伝子の発現、および／もしくは、ｐ５３タンパク質の発現、および／もしくは、疾患または状態（たとえば、虚血等）に関連したハプロタイプ多型の発現を下方制御、または阻害しても良い。ｐ５３遺伝子および／またはタンパク質もしくはＲＮＡレベルの分析を用いて、そのような多型を有する対象を特定してもよく、または、本明細書に記述される形質、状態、または疾患を発現するリスクを有する対象を特定してもよい。これらの対象は、たとえば、本明細書に開示される核酸分子および、ｐ５３遺伝子発現に関連する疾患の治療に有用な他の任意の組成物での治療等の治療に適しているものである。それゆえ、ｐ５３遺伝子および／またはタンパク質もしくはＲＮＡレベルの分析を用いて、治療型を決定および治療対象における治療経過を測定してもよい。タンパク質レベルまたはＲＮＡレベルのモニタリングを用いて、治療結果を予測し、および、形質、状態または疾患に関連したある遺伝子および／もしくはタンパク質のレベルならびに／または活性を調節する化合物および組成物の有効性を決定してもよい。
【０３５１】
一部の実施形態において、本明細書に開示される核酸化合物は、配列番号１〜７のうちの任意の１つに記述されるｍＲＮＡへと転写されるｐ５３遺伝子の発現を、対照と比較して、少なくとも４０％、好ましくは５０％、６０％、または７０％、より好ましくは７５％、８０％、または９０％下方制御する方法における使用のためのものであり、当該方法は、ｐ５３遺伝子のｍＲＮＡ転写物と、当該化合物のうちの１つ以上とを接触させることを含む。
【０３５２】
様々な実施形態において、本明細書に開示される核酸化合物は、遺伝子機能の阻害、ポリペプチドの阻害、およびｍＲＮＡ発現の阻害を含有する群から選択される阻害により、ｐ５３遺伝子を阻害する。
【０３５３】
１つの実施形態において、本明細書に開示される核酸化合物は、機能阻害（たとえば、とりわけ、酵素アッセイまたは、公知の天然型遺伝子／ポリペプチドの相互作用物質との結合アッセイ等により検証されるものである）、タンパク質の阻害（たとえば、とりわけ、ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、または免疫沈降等により検証されるものである）およびＭＲＮＡ発現の阻害（たとえば、とりわけ、ノーザンブロッティング、定量ＲＴ−ＰＣＲ、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションまたはマイクロアレイハイブリダイゼーション等により検証されるものである）を含有する群から選択される阻害により、ｐ５３ポリペプチドを阻害する。
【０３５４】
１つの実施形態において、本明細書に開示される核酸化合物は、機能の下方制御（たとえば、とりわけ、酵素アッセイまたは、天然型遺伝子／ポリペプチドの公知の相互作用物質との結合アッセイ等により検証されるものである）、タンパク質の下方制御（たとえば、とりわけ、ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、または免疫沈降等により検証されるものである）、および、ｍＲＮＡ発現の下方制御（たとえば、とりわけ、ノーザンブロッティング、定量ＲＴ−ＰＣＲ、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションまたはマイクロアレイハイブリダイゼーション等により検証されるものである）を含有する群から選択される下方制御により、哺乳類ｐ５３ポリペプチドを下方制御する。
【０３５５】
本明細書において、ｐ５３遺伝子またはポリペプチドを阻害する方法、分子および組成物を、詳細に考察し、ならびに、当該分子および／または組成物の内の任意のものは、当該状態の内の任意のものに罹患している患者の治療に有益に用いられる。公知の化合物は、本開示から除外されることを、明白に理解されたい。公知の化合物および組成物を用いた、新規の治療方法は、本開示の範囲内にある。当該方法には、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御する、本明細書に開示される１以上の核酸化合物の治療有効量を投与することを含む。当該方法の一部の実施形態において、本明細書に開示される核酸化合物は、毒物への露出に関連する疾患、障害または状態を治療するためのものである。「毒物への露出」とは、哺乳類が、毒物を利用できるようになったこと、または、毒物が哺乳類と接触することを意味する。毒物は、神経系に対して毒性であり得る。毒物への露出は、直接投与により（たとえば、食物、薬剤もしくは治療剤（たとえば、化学療法剤等）の摂取または投与）、偶然の汚染により、または、環境露出により（たとえば、空気曝露または水中曝露）、発生しうる。
【０３５６】
さらに、以下を含有する医薬組成物の調製プロセスが提供される：
本明細書に開示される核酸分子、またはその薬学的に受容可能な塩の１つ以上を提供すること；および、
薬学的に受容可能な担体とともに、当該分子または当該塩を混合すること。
【０３５７】
好ましい実施形態において、医薬組成物の調製に用いられる分子は、薬学的に有効な量で、担体と混合される。特定の実施形態において、本明細書に開示される核酸化合物は、ステロイド、または脂質、または別の適切な分子（たとえば、コレステロール）と結合される。
【０３５８】
本明細書に提供される核酸分子（たとえば限定されないが、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御することができる、または、ｐ５３遺伝子の発現に対するＲＮＡ干渉を調節することができる、低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）、干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、および低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子等）を用いることにより、ｐ５３の発現を下方制御するための組成物および方法が提供される。本明細書に開示される組成物および方法はまた、様々な状態または疾患（たとえば、本明細書に記述される障害、疾患および損傷等）の治療において有用である。
【０３５９】
本明細書に開示される核酸分子は個々に、または、他の薬剤と組み合わせて、または、他の薬剤と併用して、ｐ５３と関連する疾患、形質、状態および／または障害（たとえば、限定されないが、本明細書に記述される疾患、障害および損傷等）を予防または治療するために用いられても良い。
【０３６０】
本明細書に開示される核酸分子は、配列特異的な方式で、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御することができる。核酸分子は、センス鎖および、ｐ５３ｍＲＮＡ（たとえば、配列番号１〜７）の一部に対して少なくとも部分的に相補的である（アンチセンス）連続的なヌクレオチドを含有する、アンチセンス鎖を含有しても良い。
【０３６１】
一部の実施形態において、ｐ５３に特異的な核酸化合物を、他の治療剤および／または、他の分子標的（たとえば、限定されないが、様々なアポトーシス促進遺伝子等）に特異的な核酸化合物と併せて用いられても良い。
【０３６２】
対象または生体における、ｐ５３発現に関連した疾患もしくは状態を治療または予防するための方法は、対象または生体における、ｐ５３遺伝子発現の下方制御に適した条件下で、本明細書に提供される核酸分子と、当該対象または生体を接触させることを含んでも良い。
【０３６３】
好ましい実施形態において、治療される対象は、温血動物、特に、ヒトを含む哺乳類である。
【０３６４】
本明細書に開示される方法には、ｐ５３遺伝子の発現を下方制御する阻害性化合物を１つ以上、対象に投与することを含み、特に、本明細書に記述される核酸化合物を治療有効量で投与し、それにより対象を治療する。
【０３６５】
本明細書に開示される分子、特に、新規の二本鎖核酸化合物は、ｐ５３の発現を下方制御し、および、ｐ５３発現の下方制御が有益な疾患または状態の治療に有用である。ｐ５３を下方制御する方法、分子および組成物は、本明細書において、詳細に考察されており、および、当該分子および／または組成物のうちの任意のものは、当該状態のうちの任意のものに罹患している対象の治療に有益に用いられても良い。核酸化合物の作製に有用なセンス鎖およびアンチセンス鎖のオリゴヌクレオチド配列は、表１（配列番号８〜３３）に記述されている。具体的なオリゴヌクレオチド化合物は、表Ａ、ＢおよびＥに記述されている。好ましい実施形態において、治療される対象は温血動物であり、特に、ヒトを含む哺乳類である。
【０３６６】
「治療」という用語は、治療的な処置および、予防的もしくは防御的な手段の両方を指し、ここで、目的は、障害を予防すること、または、たとえば聴覚障害もしくは難聴（または平衡障害）等の障害の症状を軽減すること、または、本明細書に列挙される聴覚損失関連疾患に関連する細胞死を予防もしくは減少させることである。治療の必要があるのは、当該疾患または状態をすでに経験しているもの、当該疾患または状態を有する傾向にあるもの、および、当該疾患または状態が予防されるべきもの、が挙げられる。本明細書に開示される核酸化合物は、疾患または状態が発生する前、発生している間、または発生した後に投与される。
【０３６７】
一部の実施形態において、本明細書に提供される分子および組成物は、オトトキシン（ｏｔｏｔｏｘｉｎ）と共に投与される。たとえば、アミノグリコシド系抗生物質の投与による、哺乳類の感染治療に対する改善方法が開示され、当該改善方法には、抗生物質に関連したオトトキシン誘導性難聴を軽減または予防する治療の必要のある対象に対し、ｐ５３の発現を下方制御する化合物（特に、新規ｓｉＲＮＡ）の１つ以上の治療有効量を投与することが含まれる。ｐ５３の発現を下方制御する化合物、特に新規ｄｓＲＮＡは、好ましくは、内耳の内に、局所的に投与される。
【０３６８】
さらに別の実施形態において、化学療法化合物の投与による、哺乳類の癌治療に対する改善方法が提供され、ここで、当該改善方法には、当該化学療法剤に関連した、オトトキシン誘導性難聴を軽減または予防する治療の必要のある対象に対し、本発明の組成物の治療有効量を投与することが含まれる。オトトキシン誘導性難聴を軽減または予防する化合物（たとえば、特に、本明細書に開示されるｄｓＲＮＡ分子）は、蝸牛に対し、たとえばＰＢＳまたは他の生理学的な溶液等のビヒクルに溶解した裸のｄｓＲＮＡとして直接投与されるのが好ましいが、上述の送達ビヒクルと共に投与されてもよい。
【０３６９】
一部の実施形態においては、併用療法が好ましい。２つ以上の剤（すなわち、２以上のｄｓＲＮＡ、または、少なくとも１つのｄｓＲＮＡと少なくとも１つの別の治療剤。それぞれ、別々に処方および投与される）を投与することにより、または、２以上の剤を１つの剤型中で投与することにより、併用療法が行われる。他の組み合わせもまた、併用療法に包含される。たとえば、２つの剤が共に処方され、そして、第三の剤を含有する別の製剤と併せて投与されても良い。併用療法中の２以上の剤は同時に投与されてもよいが、そうではなくてもよい。たとえば、第一の剤（または剤の組み合わせ）の投与が、第二の剤（または剤の組み合わせ）の投与に、分単位、時間単位、日単位、または週単位で先行しても良い。ゆえに、２以上の剤が、数分以内で、または１時間または数時間以内で、または１日または数日以内で、または数週以内で、互いに投与されてもよい。一部の場合においては、さらに長い間隔も可能である。併用療法で用いられる２以上の剤は、患者の体内に同時に存在しても、存在しなくても良い。併用療法には、当該組み合わせに用いられた剤の１つ以上の２回以上の投与が含まれる。たとえば、組み合わせにｄｓＲＮＡ１およびｄｓＲＮＡ２が用いられた場合、任意の組み合わせで、１回以上、連続してそれらを投与することができる（たとえば、ｄｓＲＮＡ１−ｄｓＲＮＡ２、ｄｓＲＮＡ２−ｄｓＲＮＡ１、ｄｓＲＮＡ１−ｄｓＲＮＡ２−ｄｓＲＮＡ１、ｄｓＲＮＡ２−ｄｓＲＮＡ１−ｄｓＲＮＡ２、ｄｓＲＮＡ１−ｄｓＲＮＡ１−ｄｓＲＮＡ２、ｄｓＲＮＡ１−ｄｓＲＮＡ２−ｄｓＲＮＡ２等の順番で）。
【０３７０】
本明細書に開示される化合物が治療剤として有用な、ある適応症の詳細は、本明細書に記述されている。
【０３７１】
実施形態は、例示説明的に記述され、用いられている専門用語は、限定ではなくむしろ、記述のための文言として機能することが意図されていることを理解されたい。
【０３７２】
本明細書全体を通じて、様々な公表文献（米国特許を含む）が、著者および年号により、および特許は番号により参照されている。これらの公表文献および特許および特許出願の、その全体の開示内容は、本出願が関連する技術の現状を、より完全に記述するために、参照により本出願に援用される。
【０３７３】
本明細書に提供される組成物および方法は、ここで以下の非限定的な実施例を参照することにより、より詳細に記述される。
【実施例】
【０３７４】
さらなる考察を行うことなく、当業者であれば、上述の記述により、本発明のすべてを活用することができると考えられる。以下の好ましい具体的な実施形態は、それゆえ、単なる例示説明とみなされるべきものであり、本発明を決して限定するものではない。
【０３７５】
本明細書に具体的には記述されていない当分野公知の標準的な分子生物学的プロトコールの多くは、原則的に、以下の文献に従う。Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｎｅｗ−Ｙｏｒｋ  （１９８９，  １９９２）、および、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，  Ｍａｒｙｌａｎｄ  （１９８８）、および、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，  Ｍａｒｙｌａｎｄ  （１９８９）、および、Ｐｅｒｂａｌ，  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８８）、および、Ｗａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ，  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ａｎｄ  ｉｎ  Ｂｉｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ  （ｅｄｓ）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ，  Ｖｏｌｓ．  １−４  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９９８）ならびに、米国特許第４，６６６，８２８号；同第４，６８３，２０２号；同第４，８０１，５３１号；同第５，１９２，６５９号および同第５，２７２，０５７号に記述される技法（参照により本明細書に援用される）。ポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）は、標準的なＰＣＲプロトコールで実施された：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  ＣＡ  （１９９０）。フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）と組み合わせたｉｎ  ｓｉｔｕＰＣＲは、特定のＤＮＡおよびｍＲＮＡの配列を含有する細胞の検出のために用いることができる（Ｔｅｓｔｏｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｌｏｏｄ  １９９６，  ８７：３８２２）。ＲＴ−ＰＣＲを実施する方法は当分野に公知である。
【０３７６】
実施例１．活性ｄｓＲＮＡ化合物の新規配列の作製
独自のアルゴリズムと、ｐ５３遺伝子のｍＲＮＡの公知配列（配列番号１〜７）を用いて、多くの可能性のあるｄｓＲＮＡの配列を作製した。
【０３７７】
オリゴヌクレオチド配列は、ヒト遺伝子発現を標的とするための最適な予測配列として、独自アルゴリズムにおけるそれらのスコアに基づき、優先順位付けがなされた。
【０３７８】
実施例２．活性核酸化合物に対する好ましい新規配列の特定および、新規二本鎖核酸化合物の作製
最適スコアのオリゴヌクレオチド配列を、そのｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性に基づき、さらに優先順位付けを行った。この目的のために、ｄｓＲＮＡ化合物は、以下の修飾パターンを有して合成された：
アンチセンス鎖およびセンス鎖において、修飾されていないリボヌクレオチド、および、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方において、−ｄＴｄＴ＄  ３’−末端オーバーハングを有する、末端「＿Ｓ７０９」により特定されるｄｓＲＮＡ（ｄＴは、チミジンを表し、および、ｄＴ＄は、末端リン酸を有していないチミジンを表す）。
【０３７９】
末端＿Ｓ５００により特定される、ｄｓＲＮＡ化合物は、以下の修飾パターンを有する：
交互に存在する２´−Ｏ−メチル（Ｍｅ）糖修飾リボヌクレオチドは、アンチセンス鎖の第一、第三、第五、第七、第九、第十一、第十三、第十五、第十七および第十九の位置に存在し、全く同じ修飾（すなわち、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチド）は、センス鎖の第二、第四、第六、第八、第十、第十二、第十四、第十六、および第十八の位置に存在する。
【０３８０】
"ｐ５３＿３"、"ｐ５３＿ＱＭＯＮ１"および、"ｐ５３＿１"の接頭辞により特定されるｄｓＲＮＡ化合物は対照として用いられ、これらの対照化合物のアンチセンス鎖およびセンス鎖を、表Ｃに示す。
表Ｃ
【表６】
0006364009.tif 000012
【０３８１】
上記および下記のすべての表において、二本鎖の名称は、接頭辞「ｐ５３」および「ＴＰ５３」（それらは、相互交換可能に用いられる）により、特定される。
【０３８２】
以下のアッセイを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性の実験に用いた。
【０３８３】
活性アッセイ
内因的にｐ５３遺伝子を発現しているヒト試験細胞またはラット試験細胞（ヒトＨＣＴ１１６細胞またはラットＲＥＦ５２細胞）（約１．５〜２×１０５）を、３０〜５０％のコンフルエンスになるまで、１．５ｍｌの増殖培地中、約２４時間、６ウェルプレートにおいて増殖させた。
【０３８４】
次いで、細胞を、リポフェクタミン２０００試薬を用いて、ｄｓＲＮＡ試験化合物（必要とされる最終濃度０．００１〜１００ｎＭ／ウェル）と共にトランスフェクトした。
【０３８５】
実験のトランスフェクション効率を測定するために、５つのウェルを、個々に、リポフェクタミン２０００試薬で処置して、「陰性対照試料」と規定し、および、５つのウェルを個々に、活性ｄｓＲＮＡ（最終濃度は５ｎＭ）でトランスフェクトし、「対照活性試料」（陽性対照）として定義した。Ｃｙ３標識ｓｉＲＮＡトランスフェクト細胞を、トランスフェクション効率の陽性対照として用いた。
【０３８６】
次いで、細胞を、３７±１℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で、４８〜７２時間、インキュベートした。ｄｓＲＮＡトランスフェクト細胞を回収し、ＲＮＡを、ＥＺ−ＲＮＡキット［Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  （＃２０−４１０−１００）］を用いて単離した。逆転写を以下のように行った：ｃＤＮＡを合成し、ヒトおよび／またはラットｐ５３ｍＲＮＡレベルを、リアルタイムｑＰＣＲおよび、各試料に対するサイクロフィリンＡ（ＣＹＮＡ、ＰＰＩＡ）ｍＲＮＡのレベルに対して標準化して、決定した。ｄｓＲＮＡ活性は、トランスフェクトされていない対照試料に対する、ｓｉＲＮＡ処置試料におけるｍＲＮＡ量の比率に基づき、決定された。
【０３８７】
活性実験の結果、ｐ５３遺伝子の下方制御のための新規ｄｓＲＮＡ化合物として好ましい配列が特定された。これらの配列を上述の表１に記述する（配列番号８〜３３）。これらの配列を有する化合物および、末端"＿Ｓ７０９"により特定される修飾パターンを有する化合物で得られた活性の結果を表Ｄに表す。末端"＿Ｓ７０９"により特定されるｄｓＲＮＡ化合物は、アンチセンス鎖およびセンス鎖に修飾されていないリボヌクレオチドを有し、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方に−ｄＴｄＴ＄  ３’−末端オーバーハングを有する（ｄＴはチミジンを表し、ｄＴ＄は末端リン酸の無いチミジンを表す）。
表Ｄ
【表７】
0006364009.tif 000013
0006364009.tif 000014
0006364009.tif 000015
【０３８８】
表Ｄに示すように、二本鎖核酸化合物ｐ５３＿３４＿Ｓ７０９、ｐ５３＿３５＿Ｓ７０９、ｐ５３＿３７＿Ｓ７０９、ｐ５３＿３８＿Ｓ７０９、ｐ５３＿３９＿Ｓ７０９、ｐ５３＿４０＿Ｓ７０９、ｐ５３＿４１＿Ｓ７０９およびｐ５３＿４２＿Ｓ７０９は、標的ヒトｐ５３ｍＲＮＡに対して活性であることが判明した（ｐ５３＿４１＿Ｓ７０９化合物の活性が最も高かった）。
【０３８９】
実施例３．新規修飾二本鎖核酸化合物の作製および試験
好ましい配列（配列番号８〜３３）を用いて、新規修飾二本鎖核酸化合物を作製した。好ましいアンチセンス鎖およびセンス鎖の配列を用いて作製された新規修飾二本鎖核酸化合物は、上述の表Ａおよび表Ｂに記述されている。以下の表Ｅは、好ましいアンチセンス鎖およびセンス鎖の配列（配列番号８〜３３）を用いて作製された一部の好ましい新規修飾二本鎖核酸化合物を示す。
表Ｅ
【表８】
0006364009.tif 000016
【０３９０】
上記および下記のすべての表において、二本鎖の名称は、接頭辞「ｐ５３」および「ＴＰ５３」（それらは、相互交換可能に用いられる）により、特定される。ゆえに、たとえば、接頭辞「ｐ５３＿１３」および「ＴＰ５３＿１３」により特定される化合物は、センス鎖の配列が５’ＣＡＧＡＣＣＵＡＵＧＧＡＡＡＣＵＡＣＵ３’（配列番号８）および、アンチセンス鎖の配列が５’ＡＧＵＡＧＵＵＵＣＣＡＵＡＧＧＵＣＵＧ３’（配列番号２１）を有する二本鎖核酸化合物を表す。
【０３９１】
表ＥのすべてのｄｓＲＮＡ化合物に対して：
Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃは、修飾されていないリボヌクレオチドを表し；
Ａ、Ｕ、Ｇ、Ｃは、２−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチドを表し；
ａ、ｕ、ｃ、ｇは、２´−５´ヌクレオチド間リン酸結合により隣接するヌクレオチドに結合されたヌクレオチド（５´>３´）を表し；
Ｃ３は、１，３−プロパンジオール，モノ（リン酸二水素）（３−ヒドロキシプロパン−１−リン酸キャップ部分［ＣＡＳ  ＲＮ：  １３５０７−４２−１］としてもまた特定される）を表し；
Ｃ３Ｃ３は、２つの連続的なＣ３分子からなるキャップ部分を表し、
ｐｉは、３´リン酸を表し、
５´−ｐｈｏｓは、５´リン酸を表す。
【０３９２】
新規修飾二本鎖核酸化合物の活性を、ヒトＨＣＴ１１６細胞およびラットＲＥＦ５２細胞において実験した。
【０３９３】
表Ｆ１に、ヒトＨＣＴ１１６細胞株における、一部の新規修飾二本鎖核酸化合物に対して得られたｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性結果を要約する。すべての新規ｄｓＲＮＡ化合物は、上述の表Ｅに記述されている。ｐ５３＿１３＿Ｓ５００は、比較目的に用いられた公知の化合物である。ｐ５３＿１３＿Ｓ５００化合物は、上述の表Ｃに記述されるセンス鎖およびアンチセンス鎖配列を有している。
【０３９４】
ｐ５３＿１３＿Ｓ５００化合物は、以下の修飾パターンを有している：
交互に存在する２´−Ｏ−メチル（Ｍｅ）糖修飾リボヌクレオチドは、アンチセンス鎖の第一、第三、第五、第七、第九、第十一、第十三、第十五、第十七および第十九の位置に存在し、全く同じ修飾（すなわち、２´−Ｏ−メチル糖修飾リボヌクレオチド）は、センス鎖の第二、第四、第六、第八、第十、第十二、第十四、第十六、および第十八の位置に存在する。
【０３９５】
表Ｆ１におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性は、対照と比較した、残余標的ｍＲＮＡの％として示されている。
表Ｆ１
【表９】
0006364009.tif 000017
0006364009.tif 000018
0006364009.tif 000019
【０３９６】
ヒトＨＣＴ１１６細胞において行われたｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性実験の結果から、ｐ５３＿４１＿Ｓ７０９、ｐ５３＿４１＿Ｓ２２７９、ｐ５３＿４１＿Ｓ２２９８、ｐ５３＿４１＿Ｓ２２９９、ｐ５３＿４４＿Ｓ２３０１、ｐ５３＿４４＿Ｓ２３０２、ｐ５３＿４４＿Ｓ２３０３および、ｐ５３＿４４＿Ｓ２３０４として特定される化合物（上述の表Ｅにすべて記述されている）が、ヒトｐ５３ｍＲＮＡの下方制御において、最も活性を有することが判明した。
【０３９７】
表Ｆ２において、ラットＲＥＦ５２細胞株における、一部の新規修飾二本鎖核酸分子から得られたｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性結果を要約する。
【０３９８】
表Ｆ２のｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性は、対照と比較した、残余標的ｍＲＮＡの％として示されている。
表Ｆ２
【表１０】
0006364009.tif 000020
0006364009.tif 000021
【０３９９】
ラットＲＥＦ５２細胞において行われたｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性実験の結果から、ｐ５３＿４４＿Ｓ２３０１、ｐ５３＿４４＿Ｓ２３０２、ｐ５３＿４４＿Ｓ２３０３および、ｐ５３＿４４＿Ｓ２３０４として特定される化合物（上述の表Ｅにすべて記述されている）が、本実験で試験した化合物のうち、ラットｐ５３ｍＲＮＡの下方制御において、最も活性を有することが判明した。
【０４００】
実施例４．ｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）−２システムを用いた、新規二本鎖ＲＮＡ分子の潜在的な活性の評価
３つのｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）をベースにした構築物を、潜在的な活性の評価のために調製した。ｐｓｉＣＨＥＣＫ構築物は、合致相補ガイド（ｍａｔｃｈｅｄ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ｇｕｉｄｅ）の単一配列を含有した（ＡＳ−ＣＭ）。１．３〜１．５ｘ１０６ヒトＨｅＬａ細胞を、１０ｃｍのディッシュに播種した。次いで、細胞を３７±１℃、５％ＣＯ２インキュベーター内にて２４時間インキュベートした。増殖培地は、８ｍｌの新しい増殖培地を用いて播種の一日後に交換され、各プレートは、メーカーのプロトコールに従い、ｌｉｐｏｆｅｃｔｍｉｎｅ（商標）２０００試薬を用いて、上述のプラスミドのうちの１つでトランスフェクトされ、３７±１℃、５％ＣＯ２で５時間、インキュベートされた。インキュベーションの後、細胞を、８０μｌの増殖培地中、５ｘ１０３細胞／ウェルの最終濃度で、９６ウェルプレートに再播種した。１６時間後、細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００試薬を用いて、トランスフェクションＲＮＡ化合物でトランスフェクトした（最終濃度は、１００μｌの最終体積中、０．０１ｎＭ〜１００ｎＭの範囲）。次いで、ウミシイタケおよびホタルルシフェラーゼ活性（以下に記述）評価の後、細胞を４８時間、３７±１℃でインキュベートした。
【０４０１】
二本鎖ＲＮＡ化合物でのトランスフェクションの４８時間後、Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ（登録商標）アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ，カタログ番号Ｅ１９６０）を用いて、メーカーの指示に従い、ウミシイタケおよびホタルルシフェラーゼの活性を、各ｓｉＲＮＡトランスフェクト試料において測定した。各試料に対し、ウミシイタケルシフェラーゼ活性値を、ホタルルシフェラーゼ活性値で割った（標準化）。ウミシイタケルシフェラーゼ活性は、対応するｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）−２プラスミドのみでトランスフェクトされた細胞（二本鎖ＲＮＡは無し）において得られた標準値と比較した、試験試料中の標準化活性値のパーセンテージとして最終的に表されている。
【０４０２】
表Ｇ、ＨおよびＩにおいて、ＡＳ−ＣＭ配列に対する、ｐｓｉＣＨＥＣＫシステムを用いた新規二本鎖核酸分子の一部から得られた結果を示す（残余ｍＲＮＡ％）。すべての新規二本鎖核酸化合物は、上述の表Ｅに記述されている。
【０４０３】
表Ｇ、ＨおよびＩにおいて、ＡＳ−ＣＭ配列に対する、ｐｓｉＣＨＥＣＫシステムを用いた新規二本鎖核酸分子の一部から得られた結果を示す（残余ｍＲＮＡ％）。すべての新規ｄｓＲＮＡ化合物は、上述の表Ｅに記述されている。
表Ｇ
【表１１】
0006364009.tif 000022
0006364009.tif 000023
0006364009.tif 000024
表Ｈ
【表１２】
0006364009.tif 000025
0006364009.tif 000026
0006364009.tif 000027
表Ｉ
【表１３】
0006364009.tif 000028
0006364009.tif 000029
ｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）−２システムにおける活性実験の結果から、ＴＰ５３＿４１配列、ＴＰ５３＿１３配列、およびＴＰ５３＿４４配列に基づいた全ての二本鎖核酸化合物は、高い活性を有することが示された。
【０４０４】
実施例５．動物モデル
本発明の活性ｓｉＲＮＡの試験を、動物予測モデルにおいて行っても良い。
【０４０５】
急性腎不全（ＡＲＦ）のモデルシステム
本明細書に開示される活性核酸化合物の、急性腎不全（ＡＲＦ）治療に関する試験は、敗血症誘導性ＡＲＦまたは虚血再灌流誘導性ＡＲＦを用いて行っても良い。
【０４０６】
１．敗血症誘導性ＡＲＦ
敗血症誘導性ＡＲＦの２つの動物予測モデルが、Ｍｉｙａｊｉ  Ｔ，  Ｈｕ  Ｘ，  Ｙｕｅｎ  ＰＳ，  Ｍｕｒａｍａｔｓｕ  Ｙ，  Ｉｙｅｒ  Ｓ，  Ｈｅｗｉｔｔ  ＳＭ，  Ｓｔａｒ  ＲＡ，  ２００３，  Ｅｔｈｙｌ  ｐｙｒｕｖａｔｅ  ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ｓｅｐｓｉｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｃｕｔｅ  ｒｅｎａｌ  ｆａｉｌｕｒｅ  ａｎｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｏｒｇａｎ  ｄａｍａｇｅ  ｉｎ  ａｇｅｄ  ｍｉｃｅ，  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．  Ｎｏｖ；６４（５）：１６２０−３１に記述されている。これらの２つのモデルは、マウス、好ましくは老齢マウスに、リポ多糖の投与および盲腸結紮穿刺を行うものである。
【０４０７】
２．虚血再灌流誘導性ＡＲＦ
この動物予測モデルは、Ｋｅｌｌｙ  ＫＪ，  Ｐｌｏｔｋｉｎ  Ｚ，  Ｖｕｌｇａｍｏｔｔ  ＳＬ，  Ｄａｇｈｅｒ  ＰＣ，  ２００３  Ｊａｎｕａｒｙ，．  Ｐ５３  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｔｈｅ  ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ＧＴＰ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｒｅｎａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉａ−ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ：  ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ａ  ｐ５３  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，  Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．；１４（１）：１２８−３８に記述されている。
【０４０８】
虚血再灌流傷害は、ラットにおいて両側腎動脈クランプを４５分間行い、その後、クランプを開放して、２４時間再灌流を行うことにより誘導される。２５０μｇの試験核酸化合物を、クランプの２時間前、クランプの３０分後に、頚静脈に注射する。追加の試験核酸化合物２５０μｇを、尾静脈を介して、クランプの４時間後および８時間後に投与する。ＧＦＰに対する核酸化合物を、陰性対照として用いる。ＡＲＦの進行は、術前と術後２４時間の血清クレアチニンレベルの測定によりモニターされる。実験の最後に、ラットを、温めたＰＢＳ、次いで４％パラホルムアルデヒドで、大腿留置ラインを介して灌流する。左腎を取り出し、引き続く組織学的分析のために、４％パラホルムアルデヒド中に保存する。急性腎不全は、基準ラインからの血清クレアチニンレベルの急性の上昇としてしばしば定義づけられる。血清クレアチニンの少なくとも０．５ｍｇ／ｄＬの上昇、または４４．２μｍｏｌ／Ｌの上昇が、急性腎不全の指標とみなされている。血清クレアチニンは、術前のゼロ時点およびＡＲＦ術の２４時間後に測定される。
【０４０９】
ラットの腎臓における核酸化合物分布を実験するために、Ｃｙ３標識核酸化合物分子（２ｍｇ／ｋｇ）を、ｉｖで、３〜５分間、投与し、その後、二光子共焦点顕微鏡を用いて、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングを行う。
【０４１０】
腎臓の虚血再灌流損傷に対する核酸化合物の効果はさらに、腎組織における管ネクローシスの程度を分析することにより測定される。肝ネクローシスは、以下のようにスコアリングされてもよい：損傷なし（損傷スコアリング０）、単細胞性の、斑状の分離ネクローシス（損傷スコアリング１）、組織の２５％未満の管ネクローシス（損傷スコアリング２）、組織の２５〜５０％の管ネクローシス（損傷スコアリング３）および、組織の５０％を超える管ネクローシス（損傷スコアリング４）。
【０４１１】
表Ａ、ＢおよびＥの核酸化合物を、急性腎不全（ＡＲＦ）のこれらのモデルにおいて試験し、それらがＡＲＦ治療に有効であることが見出される。
【０４１２】
化学療法誘導性内耳有毛細胞死のモデルシステム
１．カルボプラチン誘導性内耳有毛細胞消失のモデルシステム
８匹のチンチラを、生理食塩水に溶解した試験核酸化合物（１、１０および３０μｇ）の各動物の左耳への直接投与により前処理する。プラセボとして、生理食塩水を、各動物の右耳に投与する。核酸化合物投与の２日後、動物を、カルボプラチン（７５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）で処理する。チンチラを殺処分した後（カルボプラチン処置の２週間後）、内耳有毛細胞（ＩＨＣ）および外有毛細胞（ＯＨＣ）の死細胞の％を、左耳（核酸化合物処理）および右耳（生理食塩水処理）において算出する。
【０４１３】
２．シスプラチン誘導性内耳有毛細胞消失のモデル
オスのＷｉｓｔａｒラットを、シスプラチン処理の前に、クリック音のシグナル（８、１６および３２ｋＨｚ）に対する基礎聴性脳幹反応（ＡＢＲ）閾値について試験する。基礎聴性脳幹反応試験の後、シスプラチンを、３０分にわたり、１３ｍｇ／ｋｇの腹腔内注入として投与する。処置された耳に、ＰＢＳに溶解した試験核酸化合物（１５ｕｇ／４マイクロリットル）を投与する。対照の耳は、非関連のＧＦＰ核酸化合物またはＰＢＳのいずれかで処理する。蝸牛に対する保護効果が可能となるように、核酸化合物分子を、シスプラチン投与の３〜５日前の間に投与する。
【０４１４】
聴性脳幹反応（ＡＢＲ）試験は、シスプラチン投与の３日後に繰り返される。聴性脳幹反応の閾値を、処置前および処置後の間で比較し、閾値の変化を記録する。シスプラチン処置後に閾値が大きく変化すれば、蝸牛中の有毛細胞消失がより重篤であることを示す。聴性脳幹反応試験を繰り返した後、動物を殺処分し、蝸牛を取り出して、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）のために処理し、屈曲領域（高頻度領域）における外有毛細胞（ＯＨＣ）の消失を定量する。外有毛細胞消失の％は、画像野中の外有毛細胞の総数で、重篤なダメージを受けた細胞、または消失した細胞の数を割ることにより算出される。
【０４１５】
表Ａ、ＢおよびＥの核酸化合物を、蝸牛における化学療法誘導性内有毛消失細胞のモデルにおいて試験し、それらが蝸牛における有毛細胞消失の重篤な減少、および化学療法誘導性聴覚損失の治療に有効であることが見出される。
【０４１６】
蝸牛における音響誘導性有毛細胞死のモデルシステム
音響外傷モデルにおける、試験核酸化合物の活性を、チンチラにおいて実験する。７匹の動物群に、音響外傷を施す。４ｋＨｚに集中させたノイズのオクターブ帯に動物を２．５時間、１０５ｄＢで曝す。ノイズに曝されるチンチラの左耳を、約１０μＬの生理食塩水に溶解した３０μｇの核酸化合物で前処置する（音響外傷の４８時間前）；右耳はビヒクル（生理食塩水）で前処理する。複合活動電位（ＣＡＰ）は、蝸牛から伝達される神経活動を測定するための簡便で信頼性のある電気生理学的な方法である。ＣＡＰは、音刺激（たとえば、クリック音または破裂音等）が突如として発生した際に生じる局所電場電位を検出するために、蝸牛底の近くに電極を置くことにより記録される。各耳の機能状態は、音響外傷の２．５週後に評価する。具体的には、正円窓から記録された化合物の活動電位の平均閾値を、音響外傷の２．５週後に測定し、核酸処置された耳における閾値が、未処置（生理食塩水）の耳よりも低い（良い）かどうかを決定する。さらに、内有毛細胞および外有毛細胞の消失の量を、核酸処置耳および対照耳において測定する。結果から、蝸牛の正円窓に投与されたｐ５３ｓｉＲＮＡが、音響外傷により生じた損傷を軽減させることができることが示される。
【０４１７】
表Ａ、ＢおよびＥの核酸化合物を、この音響誘導性聴覚損失モデルにおいて試験し、それらが音響外傷により生じた損傷の減少、および音響外傷誘導性の聴覚損失の治療に有効であることが見出される。
【０４１８】
さらなる聴覚損失モデル
Ａ）モルモットにおける、聴覚再生（可塑性）モデル
聴力損失は、アルビノのモルモットを、カナマイシン（４００〜５００ｍｇ／ｋｇ）の単回ｉｃ注射で全身的に処置し、次いで、エタクリン酸（ＥＡ）の単回ｉｖ（経静脈）注射をすることにより誘導される。この薬理的な聴覚損失により、およそ１〜２日後、両側のすべての有毛細胞が消失し、分化した支持細胞が残される。治療核酸を、中耳腔注射（ＴＴ）により中耳に投与し、または、点耳（ＥｒＤ）により外耳道もしくは鼓膜へと投与する。
【０４１９】
試験核酸化合物の有効性は、以下のように評価する：
１）蝸牛（複数含む）を、ミオシンＶＩＩａ（有毛細胞マーカー）およびファロイジンで全載染色したものとして形態学的に分析する。
２）ＢｒｄＵ組込みを、有毛細胞の増殖率の指標として測定する。
【０４２０】
Ｂ）モルモットにおける、騒音誘導性急性聴覚損失モデル
騒音は、一時的または永続的な感音難聴（ＳＮＨＬ）および耳鳴りを伴う聴覚損傷を引き起こす。ＳＮＨＬおよび耳鳴りは、単体で、または組み合わせで発生しうる。ヒトにおいては、騒音誘導性聴覚損失（ＮＩＨＬ）は、純音オーディオグラム、補充現象、上閾値聴覚試験の病的な結果、および耳の音響放出の振幅減少、における閾値変化により示される。聴覚障害は、継続的な騒音、または衝撃的な騒音への露出により誘導される。さらに、衝撃的な騒音の外傷または、爆発の外傷の可能性を、考慮に入れるべきである。継続的な騒音への露出よりも、衝撃的な騒音への露出により、さらに重篤な内耳の病変がもたらされうる。騒音障害発現の重要な基準は、音圧レベル（ＳＰＬ）、レベル増加速度、露出時間、ならびに、個々の感受性（「脆弱性の内耳」）である。通常、騒音に曝されることにより、閾値の上昇（後に部分的に解消される）がもたらされ、その一時的な構成要素は、「一時的な閾値変化」（ＴＴＳ）と呼ばれる。ＴＴＳ後の回復相において、完全な回復が無かった場合には、永続的な内耳の損傷が生じた可能性がある（永続的な閾値変化＝ＰＴＳ）。非常に強い音響強度により、直接的な細胞死、そして内耳およびＰＴＳにおける構造の機械的な破壊がもたらされる可能性がある。
【０４２１】
このモデルにおいて、両側の病変部位は、騒音に曝されることで誘導される；モルモットは、１１７ｄＢ  ＳＰＬの広帯域雑音に６時間曝される。
【０４２２】
表Ａ、ＢおよびＥの核酸化合物がこのモデルにおいて試験され、それらが聴覚損失の予防または治療に有効であることが見出される。
【０４２３】
褥瘡または床ずれのモデルシステム
褥瘡または床ずれ（糖尿病性潰瘍を含む）は、継続的な圧力（通常、ベッドまたは車椅子からもたらされる）により身体、特に臀部、腰およびかかとの肌の脆弱な部分への循環が断たれた際に発生する、肌および組織の損傷域である。適切な血流が断たれることにより、虚血性ネクローシスが生じ、影響を受けた組織の潰瘍が発生する。褥瘡は、感覚が衰えた、または消失した患者、または、衰弱、飢餓、麻痺もしくは長く寝たきりの患者において最も多く発生する。仙骨、坐骨、大転子、外踝、および踵上の組織は特に影響を受けやすい；他の部位は、患者の状況によって、発生しうる。
【０４２４】
褥瘡および類似の外傷治療のための活性核酸化合物の試験は、Ｒｅｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，  （Ｊ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１１６：１７２−１８０，  ２００４）に記述されるマウスモデルにおいて行われる。
【０４２５】
さらにウサギモデル（Ｍｕｓｔｏｅ  ｅｔ  ａｌ，  （ＪＣＩ，  １９９１．  ８７（２）：６９４−７０３；  Ａｈｎ  ａｎｄ  Ｍｕｓｔｏｅ，  Ａｎｎ  Ｐｌ  Ｓｕｒｇ，  １９９１．  ２４（１）：１７−２３に記述される)を、核酸化合物の試験のために用いる。動物モデルにおける試験により、これらのｓｉＲＮＡ化合物が褥瘡および床ずれを治療および予防することが、示される。
【０４２６】
表Ａ、ＢおよびＥの核酸化合物がこのモデルにおいて試験され、それらが褥瘡、床ずれ、および類似の外傷の治療に有効であることが見出される。
【０４２７】
腎移植患者における臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）のモデルシステム
温虚血−左腎摘出術が行われ、次いで、自家移植が行われる（４５分間の温腎移植片保存期間が生じる）。自家移植の後、右腎摘出術を同じ動物で行う。試験核酸化合物を、腎移植片を摘出する前（ドナー治療を模倣）（「プレ」）、または、腎自家移植の後（レシピエント治療を模倣）、または、摘出前および移植後の両方（ドナー治療とレシピエント治療の組み合わせ）（「プレ−ポスト」）のいずれかに、大腿静脈を介して投与する。
【０４２８】
冷虚血−左腎摘出術をドナー動物に行い、次いで、５時間、摘出腎を冷保存（氷上）する。保存期間の最後に、レシピエントラットに両側腎摘出術を行い、次いで、冷保存された腎移植片の移植を行う。温虚血時間（外科手術中を含む）の合計は３０分である。試験核酸化合物を、腎摘出前のドナー動物に対して（「プレ」）、または、移植後１５分のレシピエント動物に対して（「１５分後」）、または、移植後４時間の動物に対して（「４時間後」）、のいずれかに、大腿静脈を介して投与する。
【０４２９】
移植後の腎機能改善における核酸化合物の有効性を分析するために、血清クレアチニンレベルを、温虚血モデルおよび冷虚血モデルの両方において、移植後１、２および７日目に計測する。
【０４３０】
表Ａ、ＢおよびＥの核酸化合物がＤＧＦ（臓器移植後臓器機能障害）のこのモデルにおいて試験され、それらが冷虚血および温虚血、ならびに、引き続く再灌流に関連したＤＧＦ（臓器移植後臓器機能障害）からの腎臓の保護において有効であることが見出される。
【０４３１】
慢性腎疾患（ＣＫＤ）のモデルシステム
本明細書に開示される活性核酸化合物の、慢性腎疾患（ＣＫＤ）治療に関する試験は、以下のモデルを用いて行っても良い：
この動物モデルは、反復ＡＫＩ／ＡＲＦ発作から生じるＣＫＤの予防またはＣＫＤ進行の減衰に関する、試験化合物の分析に有用である。
【０４３２】
反復ＡＫＩ／ＡＲＦ発作は多くの場合、慢性腎疾患（ＣＫＤ）の増悪、ＣＫＤの進行、またはＣＫＤの発生をもたらす。ＡＲＦは、数日以内に発生する腎機能の急速な低下により特徴付けられる臨床的症候群である。理論に拘らないが、急性腎障害は、たとえば、大きな心臓手術等の大手術を行った患者における腎虚血−再灌流損傷等の、腎虚血−再灌流損傷の結果で発生しうる。ＡＲＦの主な特性は、血中の窒素性廃棄物（尿素、クレアチニン）の滞留をもたらす、糸球体濾過率（ＧＦＲ）の急速な低下である。近年の研究では、腎組織におけるアポトーシスが、ヒトのＡＲＦの大部分のケースにおいて認められている。アポトーシス性の細胞死の主要部位は、遠位ネフロンである。虚血損傷の最初の段階の間にアクチン細胞骨格の統合性が失われ、それによって、刷子縁の消失、限局性の細胞接着の消失、および引き続く、基底層からの細胞の離脱を伴う、上皮の平板化がもたらされる。
【０４３３】
ＣＫＤに対するラットモデルには、以下の繰り返し（５回）虚血−再灌流誘導ＡＲＦが含まれる：４５分、両側腎動脈クランプを行い、および、その後にクランプを開放して２４時間再灌流を行った後に、虚血−再灌流損傷をラットに誘導する。ＰＢＳまたは試験核酸化合物（１２ｍｇ／ｋｇ）を、クランプの４時間後、個々の実験動物にｉ．ｖ．注射する。ＡＲＦの進行を、術前（基準線）、および術後２４時間、２日および７日で、血清クレアチニン（ＳＣｒ）レベルを測定することによりモニターする。処置（Ｉ／Ｒ損傷、試験核酸化合物、ＳＣｒ測定）を、３０日の間隔を置き、４回以上繰り返す（トータルで５回）。５回目のサイクルの７日後、２４時間クレアチニンクリアランス（ＣｒＣｌ）代謝ケージおよび尿素タンパク質を計測する。右腎を、代謝ケージの２日後（５サイクルの１０日後）に外科的に摘出し、腎臓をＣＫＤに関して組織学的に分析する。右腎摘出の３週後、左腎を体外に露出させ、生体二光子顕微鏡を用いて、（Ｃｙ３−ｓｉＲＮａ取込および滞留に関して）ｉｎ  ｖｉｖｏで実験を行う。
【０４３４】
表Ａ、ＢおよびＥの核酸化合物がＣＫＤのこのモデルにおいて試験され、それらがＣＫＤ治療において有効であることが見出される。
【０４３５】
脊髄損傷（ＳＣＩ）のモデルシステム
動物および脊髄損傷：１２５匹のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙのメスラット（１０〜１１週齢）（Ｔａｃｏｎｉｃ，  Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，  ＮＹ）を用いて実験を行った。ＳＣＩ術に関しては、ラットを２％のイソフルラン（ＩｓｏＦｌｏ，  Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂ，  Ｎｏｒｔｈ  Ｃｈｉｃａｇｏ，  ＩＬ）を用いて麻酔し、脊髄をＴ９〜Ｔ１０での椎弓切除により露出させ、次いで、露出させたＴ１１脊髄の上に、１２．５ｍｍまたは２５ｍｍの高さから、１０．０ｇの棒を落とすことにより挫傷を負わせる（Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｉ  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ，  １９９４；  Ｈａｓｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５に記述される）。挫傷および注射（行われた場合には）の後に、筋肉および皮膚を別々に閉じる。セファゾリン（２５ｍｇ／ｋｇ）を全てのラットに投与する。
【０４３６】
試験核酸化合物の注射：損傷部位への注射は、損傷の前の３０分以内に行われる；１μｌ中、１μｇの核酸化合物を、損傷の中心点、および中心点の２ｍｍ吻側部分および尾側部分の３点（合計で３μｌ）それぞれに注射する（Ｈａｓｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５）。各注射は、約１０分の間、約１ｍｍの深さで滅菌５μｌＨａｍｉｌｔｏｎシリンジを用いてゆっくりと行われる。腰椎穿刺に関しては、麻酔されたラットを手術台表面（背面が屈曲され、腰椎領域が挙げられている）に置く。約１ｃｍの長さの切開を、Ｌ３〜５の脊髄突起上に行い、皮膚をけん引する。３０ゲージの針を、Ｌ３〜４またはＬ４〜５で脊柱管へと進め、１００μｌのＨａｍｉｌｔｏｎシリンジを用いて髄腔内へと４０μｌを投与する。針が腰椎髄腔内に適切に置かれたかどうかは、入った瞬間の「へこむ（ｇｉｖｅ）」感触と、尾が振られることにより示される（Ｌｅｐｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５）。この方法により脳脊髄液（ＣＳＦ）が損傷部位領域まで逆流したかどうかを測定するために、４０μｌのＥｖａｎｓ  Ｂｌｕｅ色素を腰膨大に注入し、注入後、数秒以内に色素が椎弓切除ラットの露出Ｔ９〜１０に現れることにより、液流が損傷部位を通過したことが確認される。
【０４３７】
細胞性トータルＲＮＡ調製およびＱ−ＲＴ−ＰＣＲ：ＲＮＡを単離するために、動物に、１００ｍｇ／ｋｇのペントバルビタールを注射し、冷ＰＢＳで灌流する。脊柱をすばやく摘出し、ドライアイス粉末上で凍結させる。損傷（Ｉ）中心点を真ん中とした５ｍｍの脊髄切片を、隣接する５ｍｍの近位切片および遠位切片、ならびに、胸椎レベル１（Ｔ１）の切片と共に解剖する（Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）。一部の実験において、Ｉ切片は、正中線で二分され、それによって脊髄の同一領域を有する２つの組織片を取得し、ＲＮＡおよびタンパク質の分離抽出を行い、ペアとなる組織からの結果同士を比較することができる。ＲＮＡに関しては、組織をポリトロンホモゲナイザー（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ  Ｉｎｃ．）でホモジナイズし、ＲＮＡは、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙ  Ｐｌｕｓ  Ｍｉｎｉプロトコール（Ｑｉａｇｅｎ，  Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ）に従って調製する。ＲＮＡは、Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．）を用いて定量し、１μｇの総ＲＮＡを、ランダムヘキサマーによりプライムされる、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ）を用いた第一鎖ｃＤＮＡに用いた。ＰＣＲ反応は、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ７５００  Ｆａｓｔ装置を用いて、１ｍＭのプライマーおよびＳＹＢＲＧｒｅｅｎマスターミックス（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，  ＣＡ）を用いて、２０μｌの反応液中、４０ｎｇのｃＤＮＡで行う。各遺伝子の発現値は、ＧＡＰＤＨ  ｃＤＮＡの量に対して標準化し、各試料中に存在するＲＮＡの相対量を算出する。
【０４３８】
組織処理および染色：麻酔された動物に、生理食塩水、次いで、４％パラホルムアルデヒドを用いて心臓内に灌流液を送る。脊髄を、印をつけた傷害中心点で摘出し、凍結切片作製のために同じ固定剤、凍結防止剤で固定後４〜５時間包埋し、クライオスタット（Ｈａｃｋｅｒ−Ｂｒｉｇｈｔ）で２０μｍにカットする。Ｃｙ３．５で標識した核酸化合物を、Ｚｅｉｓｓ  Ｓｔｅｍｉ  ＳＶ１１顕微鏡を用いて単離したばかりの脊髄の中から検出し、全体的な分布を測定する。次いで、脊髄を４％パラホルムアルデヒドで固定し、凍結切片を作製する。ＬＦＢ染色および他の手順を、Ｈａｓｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５に記述されるように行う。免疫染色に関しては、切片を、ＰＢＳに溶解した１０％正常ヤギ血清／０．３％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００で２時間ブロッキングし、一次抗体で一晩、４℃でインキュベートする。プロテナーゼＫ（Ｄａｋｏ）での抗原回収の後で、ウサギタンパク質キナーゼＣ−γ（ＰＫＣγ）（１：２００）およびマウスＥＤ１（１：３００）（Ｓｅｒｏｔｅｃ，  Ｒａｌｅｉｇｈ，  ＮＣ）を用いた染色を、２５℃、４分間、同じ切片で行う。切片をＰＢＳで洗浄し、抗ウサギＡｌｅｘａ４８８二次抗体または抗マウスＡｌｅｘａ５６８に次抗体（１：４００）と共に、室温で１時間、インキュベートする。洗浄後、切片をＡｑｕａ−Ｍｏｕｎｔ  （Ｌｅｒｎｅｒ  Ｌａｂ）に乗せる。同時に染色された切片群に対して、Ｚｅｉｓｓ５１０共焦点レーザー走査顕微鏡（ＬＳＭ）またはＺｅｉｓｓ  Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｃｅｌｌ  ｓｃａｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ  ２００Ｍを用いて、画像を撮影する。Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎウサギ５−ＨＴ（１：１０００）（ＩｍｍｕｎｏＳｔａｒ）を用いた染色を、同じ手順で行う（ただし、抗原回収は無く、二次抗体として抗ウサギＡｌｅｘａ５６８（１：２００）を用いている）。
【０４３９】
組織学的な定量：ＬＦＢ染色の定量を用いて、組織スペアリング（ｓｐａｒｉｎｇ）を分析する。分析のためのすべての冠状断面を、同時にＬＦＢに対して染色し、均一に発色させ、次いで、Ｆｉｌｍ  Ｓｃａｎｎｅｒ  ＬＳ−８０００  ＥＤ  （Ｎｉｋｏｎ，  Ｊａｐａｎ）を用いてスキャンする（４０００ｄｐｉの解像度）。カラー画像を、グレースケールへと転換して、個々の切片の輪郭をＰｈｏｔｏｓｈｏｐで描写し、ＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ  Ｊを用いて、各切片に対する総面積ピクセルを得る。一定の閾値を用いて、ＬＦＢ染色の閾値を超えるピクセルを得て、得られた面積を測定する。スペア化された組織を、各切片で輪郭描写された総面積により割られた、閾値を超えた面積として定義する。各脊髄から得られた画像を、１ｍｍ間隔で、１０ｍｍより多く、脊髄（損傷中心点に中心を置く）を測定する。ほとんどすべてのケースにおいて、最小スペア化組織を伴う位置は、指定損傷中心点に相当し、そうではない場合には、０位置として再定義する。次いで、スペア組織の平均を算出し、位置関数としてプロットする。ＥＤ１染色については、１ｍｍ間隔の１１の冠状断面を定量のために各動物から選択する。各位置で全冠状断面を包含するタイル状の画像を、Ａｘｉｏｖｅｒｔ  ２００Ｍ  蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ）上で２０ｘの対物レンズ（Ｎ．Ａ．＝０．７５）で撮影し、Ｚｅｉｓｓ  ＬＳＭヒストグラムソフトウェアを用いて分析する。一定閾値を全ての切片に適用し、それぞれに対し閾値を超える面積を、輪郭描写された総面積で割り、ＥＤ１＋のパーセントを得る。ＣＳＴは、中心管の上の正中線に位置し、この領域におけるＰＫＣγ染色の輪郭を描写し、定量のために抽出する。マクロファージによる自家蛍光の面積を除外した後に各ＣＳＴ抽出領域の閾値を超える面積を取得し、次いで、標準化する。全ての定量分析は、処置群を盲目化された調査者により行われる。
【０４４０】
表Ａ、ＢおよびＥの核酸化合物がＳＣＩのこのモデルにおいて試験され、それらがＳＣＩ治療において有効であることが見出される。
【０４４１】
ラットにおける、肺移植後の虚血再灌流損傷のモデルシステム
肺虚血／再灌流損傷は、Ｍｉｚｏｂｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅａｒｔ  ａｎｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，  Ｖｏｌ  ２３  Ｎｏ．  ７  （２００４）および、Ｋａｚｕｈｉｒｏ  Ｙａｓｕｆｕｋｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，  Ｖｏｌ  ２５，  ｐｐ  ２６−３４  （２００１）に記述されるようにラットの動物モデルで得られる。
【０４４２】
具体的には、イソフルランで麻酔を行った後、１４ゲージのテフロンカテーテルを用いて気管をカニューレ挿管し、１００％酸素を用いたげっ歯類人工呼吸器でラットに機械的に酸素供給を行う（７０呼吸／分の比率、および呼吸終末陽圧は２ｃｍ  Ｈ２Ｏ）。左肺動脈、静脈、および主気管支を、Ｃａｓｔａｎｅｄａクランプで塞ぐ。操作の間、肺は生理食塩水で湿潤に保ち、切開口は、蒸発によるロスを最小限にするために覆っておく。虚血期間は６０分の長さである。虚血期間の最後に、クランプを外し、肺に酸素を供給し、肺虚血導入後さらに４時間、２４時間、および５日間、再灌流する。実験に最後に、肺を静かに摘出し、ＲＮＡ抽出のために凍結、または、引き続く組織学的分析のためにグルタルアルデヒド混合物中で固定する。
【０４４３】
表Ａ、ＢおよびＥの核酸化合物がこのモデルにおいて試験され、それらが肺移植後の虚血再灌流傷害において有効であることが見出される。
【０４４４】
骨髄移植（ＢＭＴ）のモデルシステム
Ｋｅｌｌｙ  ＲＭ  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｌｏｏｄ．  ２０１０  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ４；  １１５（５）：  １０８８−１０９７に記述されるＢＭＴの以下のモデルシステムを用いてもよい：
動物：Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ−２ｂ；Ｂ６と呼ばれる）、［Ｃ５７ＢＬ／６×Ｂａｌｂ／ｃ］Ｆ１（Ｈ−２ｄ／ｂ；ＣＢ６Ｆ１と呼ばれる）メスマウス、ＢＡＬＢ／ｃ  （Ｈ−２ｄ）またはＣ５７ＢＬ／６．Ｌｙ５．１マウス、およびＢｉｍ−／−マウス（Ｂ６バックグラウンドに対し、１０世代超の戻し交配を行った）を用いる。試験核酸化合物を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に溶解し、放射線照射の３０〜４５分前に腹腔内投与を行う。試験核酸化合物投与の選択用量／タイミングにより、最小限の毒性で、ｐ５３機能の最適な阻害が得られる。
【０４４５】
ＢＭＴ：Ｂ６．Ｌｙ５．１（コンジェニック）またはＢＡＬＢ／ｃ（アロジェニック）ドナー由来のＢＭ細胞の単一細胞懸濁液を、９８％超の純度にまでＴ細胞を減少させる。ＣＤ４／８欠損ＢＭ細胞（１０７［アロジェニック］または、５×１０６［コンジェニック］）を、２４時間前にＸ線源から９Ｇｙ（Ｃ５７ＢＬ／６）または１０Ｇｙ（ＣＢ６Ｆ１）ＴＢＩを受けたレシピエントに静脈内投与する。
【０４４６】
蛍光活性化細胞ソーティングによるリンパ球分析：丁重な解離、洗浄、ろ過、懸濁（２％ウシ胎児血清／ＰＢＳ）により胸腺細胞、脾臓細胞、およびＬＮの単一細胞懸濁液を調製し、蛍光色素結合モノクローナル抗体と共に、３０分間、４℃でインキュベートする。用いられた抗体は、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ３、Ｔ−細胞受容体β、ＣＤ１１ｃ、Ｂ２２０、ＣＤ４５．１、ＣＤ６２Ｌ、およびＣＤ４４（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に対するものである。ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏでライブイベント（Ｌｉｖｅ  ｅｖｅｎｔ）（≧１０５）が得られ、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ）で分析する。
【０４４７】
蛍光活性化細胞ソーティングによる胸腺上皮細胞（ＴＥＣ）分析：ＴＥＣを単離する。個々の胸腺を、コラゲナーゼ−Ｄ／ＤＮａｓｅ−Ｉ中で２度、および、コラゲナーゼ／ディスパーゼ／ＤＮａｓｅ−Ｉ（Ｒｏｃｈｅ）中で２度、３７℃でインキュベートする。プールされた消化物を、抗ＣＤ４５−ＰｅｒＣｐ−Ｃｙ５．５、抗−ＥｐＣＡＭ−ＰＥ、抗−Ｌｙ５１／ＣＤＲ１−ビオチン＋ストレプトアビジン結合ＰＥ／Ｃｙ７、抗−ＭＨＣ−ＩＩ−Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、および、ＦＩＴＣ−結合Ｕｌｅｘ−ｅｕｒｏｐａｅｕｓ−アグルチニン−１（ＵＥＡ−１；Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で染色する。マウスＡＩＲＥ特異的ラットｍＡｂ（５Ｈ１２）を、マウス抗ラットＩｇＧ２ｃ−Ｃｙ５を用いて検出する。１試料あたり、トータルで３×１０６個のライブイベントを、得る。
【０４４８】
胸腺移出Ｔ細胞の検出：麻酔したマウスの１つの胸腺小葉に、１０μＬのＰＢＳに溶解した５０μｇのスルホ−ＮＨＳ−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ）を注入する。２４時間後、胸腺および脾臓を、ストレプトアビジン結合ＰＥ／Ｃｙ７、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ３、ＣＤ４５．１、ＣＤ４４、およびＣＤ６２Ｌで染色し、フローサイトメトリーで分析する。
【０４４９】
免疫蛍光顕微鏡：組織をＯＣＴに包埋し、液体窒素中ですぐに凍結する。アセトン固定された８μｍの胸腺切片を、１０％正常ウマ血清／ＰＢＳでブロッキングし、Ｌｙ５１／ＣＤＲ１−ＦＩＴＣおよびウサギ抗マウスＣＫ５ポリクローナル抗体（Ｃｏｖａｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）＋Ｃｙ５結合ヤギ抗ウサギイムノグロブリンＧ（ＩｇＧ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色する。ＬＮ／脾臓分析については、６μｍの凍結切片をアセトン固定し、Ｂ２２０−ＦＩＴＣ（クローンＲＡ３−６Ｂ２；ＢＤ）と共に、ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ−３８（ｇｐ３８；精製クローン８．１．１；ＡＴＣＣ）または、ＣＣＬ２１（Ｒ&Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に対して、３時間、室温で染色する。ＣＣＬ２１およびｇｐ３８シグナルは、メーカー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の説明書に従いＴｙｒａｍｉｄｅ  Ｓｉｇｎａｌ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎキットで増幅する。スライドを、ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で固定し、画像を、１０×／０．４０  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＵＰｌａｎＡｐｏ、または、４０×／０．８０  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＵＰｌａｎＡｐｏ油浸レンズ、およびＯｌｙｍｐｕｓ  ＦＶ５００カメラを介して撮影し、Ｆｌｕｏｖｉｅｗソフトウェア（ｖ．４．３）を用いて編集し、次いで、Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  ＣＳ２で分析およびトリミングを行う。
Ｌｍ感染および器官中のＣＦＵの検出：全長ニワトリオブアルブミン（ＯＶＡ）を発現する組換えＬｍ株Ｌｍ−ＯＶＡおよびΔａｃｔＡ−Ｌｍ−ＯＶＡ（弱毒株）を用いる。マウスに、脳心臓浸出物（ＢＨＩ）ブロス中、３７℃で増殖させた早期対数増殖期の細菌を接種する。コンジェニックＢＭ移植片レシピエントに、１０６コロニー形成単位（ＣＦＵ）のΔａｃｔＡ−Ｌｍ−ＯＶＡを感染させ、１０５  ＣＦＵのＬｍ−ＯＶＡで再チャレンジした。アロジェニックＢＭＴ実験については、マウスに、５×１０４  ＣＦＵで静脈内に免疫し、２×１０６ＣＦＵのＬｍ  ２Ｃで再チャレンジする。第二感染の３日後、肝臓／脾臓を、０．０５％  ＴｒｉｔｏｎＸ−１００／ＰＢＳ中でホモジナイズし、ＢＨＩプレート上に播き、および、Ｌｍコロニーを、２４時間後、３７℃で数える。
【０４５０】
Ｌｍ−ＯＶＡ特異的ＣＤ８Ｔ細胞の定量：ＭＨＣ−Ｉ−ＤｉｍｅｒＸ：マウス−Ｉｇ−ＰＥ（ＢＤ  ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）および精製ＯＶＡ２５７−６４（ＳＩＩＮＦＥＫＬ）ペプチド（Ａｎａｓｐｅｃ）をメーカーの説明書に従い混合して、ＭＨＣ−Ｉ−ＤｉｍｅｒＸ：マウスＩｇ：ＯＶＡ２５７−６４−ＰＥ結合物を形成し、赤血球溶解末梢血と１時間、４℃でインキュベートし、洗浄し、そして、表面マーカーに対する抗体と共にインキュベートする。１試料当たり、１０４を超えるドナーＣＤ８Ｔ細胞が回収される。
【０４５１】
表Ａ、ＢおよびＥの核酸化合物がこのモデルにおいて試験され、それらがＢＭＴ後の胸腺機能の再生において有効であることが見出される。
【０４５２】
造血刺激のモデルシステム
ＫＩ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ  ９：７，  １４３４−１４４３；  Ａｐｒｉｌ  １，  ２０１０に記述される以下のモデルを用いてもよい：
野生型マウスＣ５７Ｂｌ／６およびＢａｌｂ／ｃの２つの系統を用いる。マウスに致死量の全身ガンマ線照射（Ｃ５７Ｂｌ／６に対してはＴＢＩ、９Ｇｙ、および、Ｂａｌｂ／ｃに対しては８Ｇｙ）を行う直前に、試験核酸化合物またはビヒクルを、単回腹腔内（ｉ．ｐ．）注射する。マウスの生存率を記録する。本実験で用いられたＴＢＩの用量は、消化管系のダメージおよび脳血管系のダメージ、ならびに造血（ＨＰ）系のダメージを引き起こす、さらに高用量のものと比較して、主にＨＰシステムに対するダメージに死亡することが知られている。それゆえ、本実験で照射マウスの生存率に対して効果を示す試験核酸化合物は、ＨＰシステムの放射線保護物質として作用することを示す。
【０４５３】
表Ａ、ＢおよびＥの核酸化合物がこのモデルにおいて試験され、それらがＨＰシステムを完全に再配置することができる造血幹細胞（ＨＳＣ）および早期前駆細胞（ＨＰＣ）の長期間機能に対する保護において有効であることが見出される。
【０４５４】
上述の実施例は、本発明の実施形態の実行の特定の方法を例示説明するものであり、当分野の当業者であれば、本明細書に明示されていない、本発明の実施形態実行の別の方法を認識するであろう。本開示は、本発明の主旨の例示と見なされるべきものであり、例示説明される実施形態に本発明を限定する意図は無いことを理解されたい。
【０４５５】
当業者であれば、日常的な実験により、本明細書に記述される本発明の具体的な実施形態の均等物を認識または、確認することができるであろう。そのような均等物は、以下の請求項により包含されることが意図される。
【配列表】
0006364009000001.app