(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者のために１人以上のドナーから同種造血細胞ドナーを選択する方法を実施するために、コンピューター上で実行するコンピューター読み取り可能プログラムを有する非一過性のコンピューター読み取り記録媒体であって、前記プログラムが、
前記１人以上のドナーの各ドナーに関する第１のスコアを、ドナーの割り当てた複合ＫＩＲ３ＤＬ１対立遺伝子と患者及び／又はドナーの割り当てた複合ＨＬＡ−Ｂ遺伝子型との間の抑制潜在性に従って決定する工程と、
前記ドナーに関する第２のスコアを、ドナーのＫＩＲ２ＤＳ１遺伝子型及びドナーの複合ＨＬＡ−Ｃ遺伝子型に従って決定する工程と、
前記ドナーに関する第３のスコアをＣｅｎ割り当てに基づいて決定する工程と、
前記ドナーに関する第４のスコアをドナーのＫＩＲ３ＤＳ１遺伝子型に基づいて決定する工程と、
前記１人以上のドナーの各ドナーに関する前記第１、第２、第３及び第４のスコアを、第１、第２、第３及び第４の重み係数でそれぞれ重み付けする工程であって、前記第１の重み係数は第２、第３及び第４の重み係数よりも大きい工程と、
各ドナーに関する重み付けした第１、第２、第３及び第４のスコアを足して、各ドナーの最終スコアを決定する工程と、
前記１人以上のドナーの前記最終スコアを、最高スコアから最低スコアで分類し、分類ドナーリストを作成する工程と、
前記分類ドナーリストを表示する工程と、
をコンピューターに実行させる命令を含む、前記非一過性のコンピューター読み取り記録媒体。
【請求項２】
前記抑制潜在性がドナーの割り当てた複合ＫＩＲ３ＤＬ対立遺伝子及び患者の割り当てた複合ＨＬＡ−Ｂ遺伝子型に基づいて決定される、請求項１に記載の非一過性のコンピューター読み取り記録媒体。
【請求項３】
前記患者の複合ＨＬＡ−Ｂ遺伝子型が、
母性対立遺伝子及び父性対立遺伝子に関して前記対立遺伝子がＢｗ６又はＢｗ４であるかを決定し、前記対立遺伝子がＢｗ４である場合、Ｂｗ４−Ｉ８０、Ｂｗ４−Ｔ８０、Ｂ２７又はＢ５７であるかを決定することと、
決定した患者の母性及び父性対立遺伝子に基づいて前記複合ＨＬＡ−Ｂ遺伝子型を患者に割り当て、ここで、複合ＨＬＡ−Ｂ遺伝子型はＢｗ６、Ｂｗ４−Ｉ８０、Ｂｗ４−Ｔ８０及びＢｗ４−Ｂ２７／Ｂ５７から成る群から選択されることと、を含むプロセスによって割り当てられる、請求項２に記載の非一過性のコンピューター読み取り記録媒体。
【請求項４】
前記患者のＨＬＡ−Ｂの母性及び父性対立遺伝子が、前記患者の母性及び父性ＨＬＡ−Ｂ配列をデータベースの配列と比較することで決定される、請求項３に記載の非一過性のコンピューター読み取り記録媒体。
【請求項５】
前記ドナーの複合ＫＩＲ３ＤＬ１対立遺伝子型が、
前記ドナーの母性及び父性ＫＩＲ３ＤＬ１対立遺伝子をそれぞれＫＩＲ３ＤＬ１−ｈ、ＫＩＲ３ＤＬ１−１、ＫＩＲ３ＤＬ１−ｎ又はＫＩＲ３ＤＳ１として決定することと、
前記ドナーの母性及び父性ＫＩＲ３ＤＬ対立遺伝子に基づいて複合ＫＩＲ３ＤＬ対立遺伝子型を前記ドナーに割り当て、ここで、前記複合ＫＩＲ３ＤＬ対立遺伝子型がＫＩＲ３ＤＬ１−Ｈ、ＫＩＲ３ＤＬ１−Ｌ、ＫＩＲ３ＤＬ１−Ｎ及びＫＩＲ３ＤＳ１から成る群から選択されることと、を含むプロセスによって割り当てられる、請求項１に記載の非一過性のコンピューター読み取り記録媒体。
【請求項６】
前記ドナーのＫＩＲ３ＤＬ１母性及び父性対立遺伝子が、前記ドナーの母性及び父性対立遺伝子の配列を取得し、前記配列をＫＩＲ３ＤＬ１対立遺伝子配列を含むデータベースの配列と比較することで決定される、請求項５に記載の非一過性のコンピューター読み取り記録媒体。
【請求項７】
前記第２の重み係数が前記第３の重み係数よりも大きく、前記第３の重み係数が前記第４の重み係数よりも大きい、請求項１に記載の非一過性のコンピューター読み取り記録媒体。
【請求項８】
前記コンピューターがモバイルデバイスである、請求項１に記載の非一過性のコンピューター読み取り記録媒体。
【請求項９】
前記コンピューターが、クラウド・コンピューティングであり、前記プログラムが遠隔アクセスされる、請求項１に記載の非一過性のコンピューター読み取り記録媒体。
【請求項１０】
前記プログラムがモバイルデバイス上のアプリケーションとして実行される、請求項１に記載の非一過性のコンピューター読み取り記録媒体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年３月１５日出願の、米国仮特許出願第６１／７９１，４０２号の優先権の利益を主張し、当該仮特許出願の内容全体が参照により本明細書に組込まれる。
【０００２】
連邦政府による資金提供を受けた研究又は開発の記載
本発明は、アメリカ国立衛生研究所によって与えられた契約番号ＡＩ０６９１９７、ＨＬ０８８１３４を基に、政府援助を得てなされたものである。米国政府は本発明において一定の権利を有する。
【０００３】
本発明は、ＨＬＡ及びＫＩＲ遺伝子型に基づいて造血細胞ドナーを順位付け及び選択するための方法及びアルゴリズムに関する。
【背景技術】
【０００４】
同種造血幹細胞移植（ＨＣＴ）は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を有する患者のための治療上の選択肢であり、原発性ＡＭＬ及び二次性ＡＭＬの双方とも先在する骨髄異形成症候群から進行する。ＨＣＴの予後を向上させようと１０個の対立遺伝子適合が行われるＨＬＡ遺伝子同定における改善にも関わらず、５０％超の患者は再発、ＣＭＶ再活性化及びＧｖＨＤといったＨＣＴ後の合併症を経験する。ＮＫ細胞は、これら予後のそれぞれに関するリスクを著しく向上し得る。
【０００５】
悪性に形質転換又はウイルス感染した細胞に対する自然免疫にとって重要であるＮＫ細胞は、ＫＩＲを包含する細胞表面受容体が処理する一連の活性化及び抑制信号によって調節される（Lanier、Annu Rev Immunol 23:225-274 (2005)）。ＮＫ細胞表面上の抑制性ＫＩＲと、周囲の自己細胞上の自己ＨＬＡクラスＩ抗原との相互作用は、抑制信号を産生し、自己細胞の殺滅を控える（Moestaら、The Journal of Immunology 180(6):3969-3979 (2008)）。抑制性ＫＩＲに加えて、多くの個体は複数の活性化ＫＩＲを有する。単一のハプロタイプ上の最大１５個の抑制性及び活性化遺伝子及び偽遺伝子から構成されるＫＩＲ遺伝子レパートリーは、幅広い個体相互の遺伝子型変異を伴い、著しく多様性である。各ＫＩＲ遺伝子はＨＬＡ領域の多形的な多様性を想起させ、多くの対立遺伝子を有し、ＫＩＲ３ＤＬ１が最も良く特徴づけされた抑制性ＫＩＲ座である（Gardinerら、J Immunol 166:2992-3001 (2001））。そのようなＫＩＲ遺伝子多様性の臨床的な意義は、同種ＨＣＴで、自己と非自己の相互作用が生じるウイルス感染（Carringtonら、Cur Top Microbiol Immunol 298:225-257 (2006)；Martinら、Nat Genet 39:733-740 (2007)；Martinら、Nature Genetics 31:429-434 (2002) ；Kamyaら、J Virol 85:5949-5960 (2011)）及び白血病に対する免疫応答に焦点が当たっている。ＡＭＬは、同種ＨＣＴに関して最も一般的な徴候であり、ドナーＮＫのアロ反応性はこの意味で強力な抗白血病効果を発し得る（Ruggeriら、Blood 94:333-339 (1999); Ruggeriら、Science 295(5562):2097-2100 (2002)）。ＨＣＴの免疫遺伝子学の研究によって、ＮＫアロ反応性を予測するＫＩＲ／ＨＬＡ複合遺伝子型の白血病再発及び生存に対する影響が評価されており、ＡＭＬに対する強力なＮＫ効果の原因である複数のメカニズムが識別されている（Ruggeriら、Blood 94:333-339 (1999)；Ruggeriら、Science 295(5562):2097-2100 (2002)；Ruggeriら、Blood 110:433-440 (2007)；Giebelら、Blood 102(3):814-819 (2003)；Hsuら、Biol Blood Mar Transpl 12:828-836 (2006)；Hsuら、Blood 105:4878-4884 (2005)；Cookら、Blood 103:1521-1526 (2004)；Stringarisら、Biol Blood MarrTranspl 16:1257-1264 (2010)；Venstromら、Blood 115(15):3162-3165 (2010)）。ＭＤＳに対するＮＫ効果の明確性はより低いが、ＭＤＳの前白血病性質を踏まえると、存在し得る。
【０００６】
ＨＬＡがミスマッチの移植片は、ドナーＮＫ細胞側でのレシピエントのドナーＨＬＡ  ＫＩＲリガンドの欠如の認識を通して、ＮＫアロ反応性を捕捉する（「自己性喪失（ｍｉｓｓｉｎｇ  ｓｅｌｆ）」活性化）（Ruggeriら、Blood 94:333-339 (1999)）。しかし、ＨＬＡがマッチしたＨＣＴでは、強力な抗白血病効果が低抑制性ドナーＫＩＲ３ＤＬ１アロタイプ及び同族ＨＬＡ−Ｂｗ４リガンドアロタイプと関係することが示されている（Giglioら、Biol Blood Marr Transpl (2012)）。
【０００７】
活性化ＫＩＲ遺伝子としてはＫＩＲ２ＤＳ１、２ＤＳ２、２ＤＳ３、２ＤＳ４、２ＤＳ５及びＫＩＲ３ＤＬ１の３ＤＳ１対立遺伝子が挙げられる。ＨＬＡ−Ｃ１陽性ドナー由来のＫＩＲ２ＤＳ１陽性ＮＫ細胞は、抗白血病細胞傷害性を媒介し、ＨＣＴ後の再発を軽減し得る（Venstromら、New England Journal of Medicine 367:805-816 (2012)）。ＫＩＲ２ＤＳ２を含むセントロメアの部分ＫＩＲハロタイプ（ｃｅｎＢ）の再発に対する保護効果も報告されている（Cooleyら、Blood 113:726-732 (2009；Cooleyら、Blood 116:2411-2419 (2010)）。ドナーのＫＩＲ３ＤＳ１はまた、ＧｖＨ及び移植関連死（ＴＲＭ）からも保護することが分かっている（Venstromら、New England Journal of Medicine 367:805-816 (2012)；Cooleyら、Blood 113:726-732 (2009)；Cooleyら、Blood 116:2411-2419 (2010)；Venstromら、Blood 115:3162-3165 (2010)）。最後に、ドナー活性化ＫＩＲは、ＨＣＴ後の患者においてＣＭＶ再活性化から保護する（Cookら、Blood 107:1230-1232 (2006)）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ＨＣＴにおいてＮＫアロ反応性を利用する重要性は明らかである。しかし、臨床効果のためにどのようにＫＩＲ／ＨＬＡ遺伝子学を利用するかは、同種ＨＣＴではつかみどころのない目標であり、それは部分的に、ＨＬＡの文脈におけるＫＩＲ遺伝子及び対立遺伝子の生物学に関する知識のギャップのためである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本開示は、ＡＭＬ又は骨髄異形成症候群を有する患者のために、候補となるＨＬＡ適合の非血縁造血細胞ドナー（ＵＲＤ）をスコア化及び順位付けするための方法を対象とする。候補ドナーは、ＫＩＲ／ＨＬＡ対立遺伝子及び遺伝子型の組合せに基づいてスコア化される。スコア化の基準と考えられる具体的なパラメータとしては、ドナーの複合ＫＩＲ３ＤＬ１対立遺伝子型及びドナー／患者の複合ＨＬＡ−Ｂ遺伝子型の組合せ、ドナーのＫＩＲ２ＤＳ１遺伝子型及びドナーの複合ＨＬＡ−Ｃ遺伝子型の組合せ、そのＫＩＲ遺伝子型に基づいたドナーのセントロメア（「Ｃｅｎ」）の遺伝子型、並びに、ドナーのＫＩＲ３ＤＳ１遺伝子型が挙げられる。ドナーをスコア化する際には、ＫＩＲ３ＤＬ／ＨＬＡ−Ｂの組合せがＫＩＲ２ＤＳ１／ＨＬＡ−Ｃの組合せよりも優先され、ＫＩＲ２ＤＳ１／ＨＬＡ−Ｃの組合せは、Ｃｅｎの割り当て及びＫＩＲ３ＤＳ１遺伝子型の双方よりも優先される。
【００１０】
本開示はまた、非一過性のコンピューター読み取り可能媒体上に提供し得るアルゴリズムを対象とする。そのような媒体は、コンピューター上で処理され得、例えばコンピューターでＣＰＵを用い、コンピューターにその方法の工程を実行させる。コンピューターは、携帯電話、ＰＤＡ又は他の手持ちコンピューター等といったモバイルデバイスであり得る。１つの態様では、アルゴリズム又はアルゴリズムを実行するプログラムは、モバイルデバイスのアプケーションとして実行され得る。さらに、アルゴリズムは、クラウド・コンピューティングを介して提供され得、遠隔アクセスされ得る。
【００１１】
本明細書で開示される方法及びアルゴリズムは、造血幹細胞移植の向上した臨床転帰を予測する好都合なドナーの順位付け及び選択を可能にする。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、本発明の一実施形態を例示するフローチャートを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本明細書で開示されるのは、原発性若しくは二次性ＡＭＬ又は骨髄異形成症候群を有する患者のために、候補となるＨＬＡ適合の非血縁造血細胞ドナー（ＵＲＤ）を順位付けするための方法及び関連アルゴリズムである。候補ドナーは、ＫＩＲ／ＨＬＡ遺伝子型の組合せに基づいて順位付けされる。すなわち、本発明の方法では、既存のＨＬＡに基づいたドナー選択スキームとは対照的に、候補ドナーの順位付けでＨＬＡ及びＫＩＲ遺伝子型の双方を考慮する。さらに、候補ドナーの順位付けにおいて、本方法では、活性化ＫＩＲの抗白血病効果よりも抑制性ＫＩＲ／ＨＬＡの組合せの抗白血病効果を優先する。
【００１４】
ドナー及び患者のＨＬＡ  ＫＩＲリガンドの欠如が白血病再発からの多少の保護と関係することが以前から確立されている（Hsuら、Biol Blood Mar Transpl 12:828-836 (2006)；Hsuら、Blood 105:4878-4884 (2005)）。本開示に従って、抑制性ＫＩＲ／ＨＬＡの組合せ、特にＫＩＲ３ＤＬ１／ＨＬＡ−Ｂｗ４の組合せは、活性化ＫＩＲの抗白血病効果に代わって、ＨＬＡがマッチしたＨＣＴにおける抗白血病ＮＫ挙動の最も強力な予測因子であることが認識されている。ドナーＫＩＲ及びレシピエントＨＬＡ間のより低い抑制性の関係は、より高いＮＫ活性化及びより良好な白血病の排除を可能にする。
【００１５】
したがって、本発明の方法及びアルゴリズムの根底にある一般概念に従って、患者のための候補となる造血細胞ドナーをスコア化、又は、複数の候補ドナーを順位付けするために、患者及び候補ドナー（複数可）の関連対立遺伝子及び遺伝子型を決定し、次いで、活性化ＫＩＲ／ＨＬＡの組合せよりも抑制性ＫＩＲ／ＨＬＡの組合せを優先することで、候補ドナーをスコア化（及び複数のドナーを順位付け）し、前記活性化ＫＩＲ／ＨＬＡの組合せは次に、２つの追加した有益な因子：ドナーのＫＩＲ遺伝子型に基づいたＣｅｎ割り当て、及び、ドナー（複数可）内のＫＩＲ３ＤＳ１の存在又は不在よりも優先される。
【００１６】
あるパラメータを「優先する（ｐｒｉｏｒｉｔｉｚｉｎｇ）」又は「優先する（ｇｉｖｉｎｇ  ｐｒｉｏｒｉｔｙ）」ことは、造血細胞移植（ＨＣＴ）の臨床転帰に対して他のパラメータよりも有意に有益であるパラメータの効果の結果、他のパラメータに比べて全体の順位付けでより重みがそのパラメータに置かれることを意味する。ＨＣＴの臨床転帰は、例えば、再発、ＴＲＭ（移植関連死）、ＧｖＨＤ（移植片対宿主病）、ＣＭＶ再活性化及び全生存を反映する。
【００１７】
本発明に従うと、重み係数を様々なパラメータに割り当てることで優先化が達成され得、パラメータに付与する重み係数が大きいほど、より高い優先順位となる。例えば、４つのパラメータが患者及び候補ドナーに関して評価され得：抑制性ＫＩＲ／ＨＬＡの組合せ（例えば、ＫＩＲ３ＤＬ１／ＨＬＡ−Ｂの組合せ）、活性化ＫＩＲ／ＨＬＡの組合せ（例えば、ＫＩＲ２ＤＳ１／ＨＬＡ−Ｃの組合せ）、Ｃｅｎ（ドナーのセントロメアのＫＩＲ遺伝子型に基づいて）及びドナーのＫＩＲ３ＤＳ１の状態である。これら４つのパラメータの優先度の順位付けは、抑制性ＫＩＲ／ＨＬＡの組合せが活性化ＫＩＲ／ＨＬＡの組合せよりも優先され、活性化ＫＩＲ／ＨＬＡの組合せは次に、ドナーのＣｅｎ及びＫＩＲ３ＤＳ１の状態よりも優先される。これらパラメータはそれぞれ、以下でさらに説明される通りにスコア化され得；及び、スコアは、重み付けしたスコアを足して候補ドナーに関する最終スコアを提供できるように、パラメータに割り当てた各重み係数で重み付けする。
ＫＩＲ／ＨＬＡの抑制的な組み合わせに基づくドナーの採点
【００１８】
本発明によれば、最も高い優先度はＫＩＲ／ＨＬＡの抑制的な組み合わせに付される。具体的な実施形態においては、与えられた患者とドナー候補について、ドナーの複式ＫＩＲ３ＤＬ１対立遺伝子型と、患者ないしドナーの複式ＨＬＡ−Ｂ遺伝型との組み合わせの判定を行う。
【００１９】
ここで「複式」という語は、与えられた遺伝子について母系の対立遺伝子と父系の対立遺伝子の組み合わせを反映するために用いられる。
【００２０】
ドナーの複式ＫＩＲ３ＤＬ１（「３ＤＬ１」ともいう）対立遺伝子型を判定するために、ドナーの母系父系両方の３ＤＬ１対立遺伝子を判定する。３ＤＬ１対立遺伝子には、ヌル（ｎ）、低（ｌ）、高（ｈ）、３ＤＳ１の４種類がある。
【００２１】
ここで、「ＫＩＲ３ＤＬ１−ｈ」は、ＫＩＲ３ＤＬ１受容体に対応する抗体（例えば、Ｚ２７又はＤＸ９）を用いた細胞表面染色により検出される、ＮＫ細胞表面に高密度でＫＩＲ３ＤＬ１受容体を発現する対立遺伝子、又は、表面染色では特徴付けられていないが、細胞表面染色で検出される、ＮＫ細胞表面に高密度でＫＩＲ３ＤＬ１受容体を発現する対立遺伝子と実質的な配列類似度を共有する対立遺伝子を指す。「実質的な配列類似度」という語は、関連する配列が、ヌクレオチドレベルで少なくとも約９０％、９５％、９８％、９９％またはそれ以上の同一性を共有するか、又は、アミノ酸レベルで少なくとも約９０％、９５％、９８％、９９％、又はそれ以上の類似度又は同一性を共有するという意味で用いる。ＫＩＲ３ＤＬ１−ｈ対立遺伝子には、例えば、ＫＩＲ３ＤＬ１＊００１、＊００２、＊００８、＊０１５、＊０２０、＊０３３、＊０５２を含むがこれらに限られない、細胞表面染色により特徴付けられる対立遺伝子、及び、＊００９、＊０１６、＊０４３、＊０６７、＊０２６、＊０３４、＊０３５、＊０２２、＊０１７、＊０６６、＊０２９、＊０３８、＊０２５、＊０５４、＊０１８、＊０５１、＊０６８、＊０２３、＊０２８、＊０６２、＊０３０、＊０２４Ｎ、＊０３１、＊０４２、＊０５７を含むがこれらに限られない、高密度細胞表面染色により特徴付けられるＫＩＲ３ＤＬ１−ｈ対立遺伝子と実質的な配列類似度を共有する対立遺伝子が含まれる。
【００２２】
ここで、「ＫＩＲ３ＤＬ１−ｌ」は、（例えば、Ｚ２７又はＤＸ９を用いて）細胞表面染色により検出される、ＮＫ細胞表面に低密度でＫＩＲ３ＤＬ１受容体を発現する対立遺伝子、又は、表面染色では特徴付けられていないが、細胞表面染色で検出される、ＮＫ細胞表面に低密度でＫＩＲ３ＤＬ１受容体を発現する対立遺伝子と実質的な配列類似度を共有する対立遺伝子を指す。例えば、文献により知られているＫＩＲ３ＤＬ１−ｌ対立遺伝子としては、ＫＩＲ３ＤＬ１＊００５、＊００７、＊０５３を含むがこれらに限られない細胞表面染色により特徴付けられる対立遺伝子、及び、＊０４４、＊０４１を含むがこれらに限られない、低密度細胞表面染色により特徴付けられるＫＩＲ３ＤＬ１−ｌ対立遺伝子と実質的な配列類似度を共有する対立遺伝子が含まれる。
【００２３】
ここで、「ＫＩＲ３ＤＬ１−ｎ」は、＊００４、＊０１９、＊０５６等の、細胞内に保持されるＫＩＲ３ＤＬ１分子を発現し（例えば、Ｚ２７又はＤＸ９を用いた）細胞表面染色により検出されない対立遺伝子、及び、＊０２１、＊０３６、＊０３７、＊０３９、＊０７２、＊０６２、＊０４０等の、表面染色では特徴付けられていないが、低密度細胞表面染色で特徴付けられるＫＩＲ３ＤＬ１−ｎ対立遺伝子と実質的な配列類似度を共有する対立遺伝子を指す。
【００２４】
ＫＩＲ３ＤＳ１対立遺伝子はＫＩＲ３ＤＳ１分子を発現する。これはＺ２７を用いた表面染色で検出されるが、ＤＸ９を用いると検出されない。文献により知られているＫＩＲ３ＤＳ１対立遺伝子にはＫＩＲ３ＤＳ１＊０１３、＊０４７、＊０１０、＊０１１、＊０１２、＊０１４、＊０４５、＊０４６、＊０４８、＊０４９Ｎ、＊０５０、＊０５５、＊０５８が含まれるが、これらに限られない。
【００２５】
ドナーの３ＤＬ１対立遺伝子を判定するための一つの手法としては、ドナーから母系、父系両方の３ＤＬ１対立遺伝子の配列を入手しデータベース上で文献により知られている３ＤＬ１対立遺伝子の配列と比較してドナーがヌル（ｎ）、低（ｌ）、高（ｈ）、３ＤＳ１のいずれの型かを判定するというものがある。この手法では、文献により知られている３ＤＬ１対立遺伝子配列を含むデータベースをホストするコンピューター、又は、文献により知られている３ＤＬ１対立遺伝子配列を含むデータベースをホストはしていないが、そのようなデータベースにアクセスできるコンピューターに、ドナーの３ＤＬ１対立遺伝子配列を入力する。コンピューターは、配列を比較し、ドナーの配列とデータベースの３ＤＬ１対立遺伝子配列の間の実質的な配列類似度に基づいて対立遺伝子型を判定する。先の記載の場合と同様に、ここで「実質的な配列類似度」という用語は、関連する配列が、ヌクレオチドレベルで少なくとも約９０％、９５％、９８％、９９％、又はそれ以上の同一性を共有するか、あるいは、アミノ酸レベルで少なくとも約９０％、９５％、９８％、９９％、又はそれ以上の類似性又は同一性を共有するという意味で用いる。この比較と判定を行うコンピューターは、本方法の他のステップを行うコンピューターと同じでも異なっていてもよい。異なるコンピューターを用いる場合は、ドナーの対立遺伝子型の判定結果を、本方式の他のステップに用いるコンピューターに入力することができる。
【００２６】
第２の手法では、配列決定に基づく手法ではなく、ＰＣＲやハイブリダイゼーションに基づく分析により、ドナーの母系、父系の３ＤＬ１対立遺伝子型を判定する。そのような分析による判定をコンピューターに入力し保存することができる。
【００２７】
ドナーの母系、父系の３ＤＬ１対立遺伝子判定の後、母系、父系の対立遺伝子判定に基づいて、ドナーに複式ＫＩＲ３ＤＬ１対立遺伝子型を割り当てる。一定の実施形態において、複式ＫＩＲ３ＤＬ１対立遺伝子型を、母系、父系の対立遺伝子に基づいて以下のように割り当てる。
【００２８】
【表１】
0006353894.tif 000002
【００２９】
ドナーの複式ＫＩＲ３ＤＬ１対立遺伝子型に加え、ＫＩＲ３ＤＬ１／ＨＬＡ−Ｂの組み合わせを判定するために、患者又はドナーの複式ＨＬＡ−Ｂ遺伝型の判定も行う。多くの場合、患者とドナーのＨＬＡ−Ｂ分子が一致し、複式ＨＬＡ−Ｂ遺伝型の割り当てを、患者のＨＬＡ−Ｂ対立遺伝子またはドナーの対立遺伝子に基づいて行うことができる。まれに患者とドナーのＨＬＡ−Ｂ分子が一致しないことがあるが、この場合、患者とドナーの母系、父系のＨＬＡ−Ｂ対立遺伝子を判定し、ドナーに複式ＨＬＡ−Ｂ遺伝型を割り当て、患者に別の複式遺伝型が表れた場合には、それを患者に割り当てる。
【００３０】
具体的な実施形態において、患者とドナーのＨＬＡ−Ｂ分子が一致し、複式ＨＬＡ−Ｂ遺伝型の割り当てを、患者のＨＬＡ−Ｂ対立遺伝子またはドナーの対立遺伝子に基づいて行うことができる。典型的な実施形態においては、患者のＨＬＡ−Ｂ対立遺伝子を判定する。一つの手法においては、患者から母系、父系のＨＬＡ−Ｂ対立遺伝子を入手しデータベース上で文献により知られているＨＬＡ−Ｂ対立遺伝子の配列と比較して、患者がＨＬＡ−Ｂｗ４又はＨＬＡ−Ｂｗ６対立遺伝子を持っているかを判定する。もし前者を持っていれば、その対立遺伝子がＢｗ４−Ｉ８０かＢｗ４−Ｔ８０か、Ｂ２７０５かＢ５７かを判定する。この手法では、文献により知られているＨＬＡ−Ｂ対立遺伝子配列を含むデータベースをホストするコンピューター、ないし、文献により知られているＨＬＡ−Ｂ対立遺伝子配列を含むデータベースにアクセスできるコンピューターに、ドナーのＨＬＡ−Ｂ対立遺伝子配列を入力する。コンピューターは、配列を比較し、母系、父系のＨＬＡ−Ｂ対立遺伝子型を判定する。コンピューターは、本方法の他のステップを行うコンピューターと同じでも異なっていてもよい。ＨＬＡ−Ｂ遺伝型の判定には、配列決定に基づくものではない別の手法を用いることもでき、判定結果は、本方式の他のステップに用いるコンピューターに入力し保存しておくことができる。
【００３１】
母系、父系のＨＬＡ−Ｂ対立遺伝子確認の後、複式ＨＬＡ−Ｂ遺伝型を割り当てる。具体的な実施形態において、複式ＨＬＡ−Ｂ遺伝型を、母系、父系の対立遺伝子判定に基づいて以下のように割り当てる。
【００３２】
【表２】
0006353894.tif 000003
【００３３】
ＨＬＡ−Ｂ２７０５及び／又はＨＬＡ−Ｂ５７対立遺伝子があるときには、ＨＬＡ−Ｂの割り当て方に例外的な扱いが必要になる。Ｂ２７０５とＢ５７はともにＢｗ４対立遺伝子である。Ｂ５７対立遺伝子はすべてＢｗ４−Ｉ８０であり、大部分のＢ２７０５対立遺伝子はＢｗ４−Ｔ８０である。Ｂ２７０５又はＢ５７があるときには、複式ＨＬＡ−Ｂ遺伝型としてＢｗ４−Ｂ２７０５／Ｂ５７が割り当てられる。従って、複式遺伝型には、Ｂ２７０５／Ｂ２７０５、Ｂ２７０５／Ｂ５７、Ｂ５７／Ｂ５７、Ｂ２７０５／Ｂｗ６、Ｂ５７／Ｂｗ６、及び、Ｂ２７０５又はＢ５７と別の非Ｂ２７０５、非Ｂ５７のＢｗ４対立遺伝子との組み合わせが含まれる。
【００３４】
ドナーの複式３ＤＬ１対立遺伝子型とドナー／患者の複式ＨＬＡ−Ｂ遺伝型が確認された後、患者とドナーの間の抑制性が以下のとおり判定される。
【００３５】
【表３】
0006353894.tif 000004
【００３６】
ＨＬＡ−Ｂ５７及びＢ２７０５対立遺伝子はＫＩＲ３ＤＬ１−ｈ対立遺伝子に結合し、その相互作用がＮＫ機能と抑制性の増大につながる。従って、Ｂ２７０５はＢｗ４−Ｉ８０対立遺伝子ではないが、複式対立遺伝子型がＫＩＲ３ＤＬ１−Ｈであるドナーとの組み合わせでは、ＨＬＡ−Ｂ５７と同様に、より悪い結果を生じる場合として分類される。
【００３７】
まれなケースとして患者とドナーの複式ＨＬＡ−Ｂ型の割り当てが一致しない場合においては、まず、患者に割り当てた複式ＨＬＡ−Ｂ型を用いて、ドナーの複式３ＤＬ１対立遺伝子型との組み合わせで抑制性スコアを判定する。もし患者がＢｗ６についてホモ接合であり、ドナーの複式型の割り当てがＢｗ４であれば、ドナーの複式ＨＬＡ−Ｂ遺伝型を用いることができる。
【００３８】
抑制性に基づいて、第１の点数をドナーに割り振る。点数は抑制性に反比例する。１つの手法では、第１の点数は１から１０の数値で表すことができる。例えば、１を「非常に悪い」、１０を「良い」として、その間の数を悪いから中間までとする。例えば、表３に示すように、患者ないしドナーの複式ＨＬＡ−Ｂ型が「Ｂｗ４−Ｉ８０」であり、ドナーの複式３ＤＬ１型が「３ＤＬ１−Ｈ」の場合の組み合わせでは、抑制性が「高い」となり、第１の点数は２（「悪い」）となる。また、患者ないしドナーの複式ＨＬＡ−Ｂ型が「Ｂｗ４−Ｉ８０」であり、ドナーの複式３ＤＬ１型が「３ＤＬ１−Ｌ」の場合の組み合わせでは、抑制性が「低い」となり、第１の点数は１０（「良い」）となる。更にまた、患者ないしドナーの複式ＨＬＡ−Ｂ型が「Ｂｗ４−Ｉ８０」であり、ドナーの複式３ＤＬ１型が「３ＤＬ１−Ｎ」の場合の組み合わせでは、抑制性が「ヌル」となり、第１の点数は５（「中位」）となる。また、患者ないしドナーの複式ＨＬＡ−Ｂ型が「Ｂｗ６」であれば、ドナー複式３ＤＬ型が何であれ、その組み合わせの抑制性は「ヌル」となり、第１の点数は５（「中位」）となる。複式ＨＬＡ−Ｂ遺伝型が何であれ、ドナーの複式３ＤＬ１対立遺伝子型が「３ＤＳ１」であれば、その組み合わせの抑制性は「ヌル」となり、第１の点数は５（「中位」）となる。適当な場合には、１から２０、１から３０、１から４０、１から５０、１から６０、１から７０、１から８０、１から９０、１から１００等の、他の範囲の数値を用いることもできる。この判定は、非一過性コンピューター記録媒体に保存したコンピューター・プログラムを実行可能なコンピューターを用いて行うことができる。
【００３９】
（活性ＫＩＲ／ＨＬＡ組み合わせに基づくドナーのスコアリング）
本発明によれば、第２の優先事項が、活性ＫＩＲ／ＨＬＡ組み合わせに与えられる。具体的な実施態様においては、ある任意の患者及びあるドナー候補に対して、ドナーのＫＩＲ２ＤＳ１遺伝子型及びドナーの複合ＨＬＡ−Ｃ遺伝子型が決定される。ＫＩＲ２ＤＳ１／ＨＬＡ−Ｃの組み合わせは、評価され、ドナーに対して第２のスコアを割り当てるための基準を形成する。
【００４０】
ドナーの複合ＨＬＡ−Ｃ遺伝子型を決定するために、母系及び父系ＨＬＡ−Ｃ対立遺伝子の配列をドナーから取得し、そして、患者が有するＫＩＲリガンド群の対立遺伝子がＨＬＡ−Ｃ１であるかＨＬＡ−Ｃ２であるかを決定するためのデータベース中の裏づけのあるＨＬＡ−Ｃ対立遺伝子の配列と比較される。ドナーのＨＬＡ−Ｃ配列は、裏づけのあるＨＬＡ−Ｃ対立遺伝子の配列を含むデータベースのホストコンピューターであるか又は裏づけのあるＨＬＡ−Ｃ対立遺伝子の配列を含むデータベースにアクセスする能力を有するコンピューターに、入力することが可能である。またコンピューターは、配列を比較し、母系及び父系ＨＬＡ−Ｃ対立遺伝子についてＨＬＡ−Ｃ１であるかＨＬＡ−Ｃ２であるかの決定を下す。ＨＬＡ−Ｃ対立遺伝子の決定をするコンピューターは、本方法の他のステップを実行するコンピューターと同じものであっても異なるものであってもよい。他の非配列を基にしたアプローチもまたＨＬＡ−Ｃ遺伝子型の決定に用いることができ、決定の結果は、本方法の他のステップを実行するコンピューターに入力することができる。
【００４１】
ドナーについて、母系及び父系ＨＬＡ−Ｃ対立遺伝子がひとたび確認されると、複合ＨＬＡ−Ｃ遺伝子型は、以下の通り、Ｃ１／Ｃ１、Ｃ１／Ｃ２又はＣ２／Ｃ２がドナーに割り当てられる。
【００４２】
さらに、ドナーにおけるＫＩＲ２ＤＳ１遺伝子の状態が決定される。ＰＣＲ−ＳＳＰ法、ＰＣＲ−ＳＳＯＰ法又はＳＢＴ法（ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｂａｓｅｄ  ｔｙｐｉｎｇ）などの標準遺伝子タイピング法により、ドナーが所有する遺伝子が、ＫＩＲ２ＤＳ１（例えば、ＫＩＲ２ＤＳ１＋）であるか又はそうではないか（例えば、ＫＩＲ２ＤＳ１−）を決定することができる。
【００４３】
ドナーのＫＩＲ２ＤＳ１遺伝子型及びドナーの複合ＨＬＡ−Ｃ遺伝子型が与えられることにより、ドナーはＫＩＲ２ＤＳ１／ＨＬＡ−Ｃ組み合わせに基づいて評価され、以下の通りスコア化される。
【００４４】
【表４】
0006353894.tif 000005
【００４５】
第２のスコアは、ＫＩＲ２ＤＳ１／ＨＬＡ−Ｃ組み合わせに基づいて与えられる。あるアプローチにおいては、第２のスコアは、１を“不良”、５を“中”、１０を“良”として、１から１０の数値とすることが可能である。例えば、表４に示すように、ドナーの複合ＨＬＡ−Ｃ遺伝子型の“Ｃ１／Ｃ１”と組み合わせたドナーのＫＩＲ  ２ＤＳ１の“２ＤＳ１＋”が、第２のスコアを１０（“良”）と決定する。同様に、ドナーの複合ＨＬＡ−Ｃ遺伝子型の“Ｃ１／Ｃ２”と組み合わせたドナーのＫＩＲ２ＤＳ１の“２ＤＳ１＋”が、第２のスコアを１０と決定する。また、ドナーの複合ＨＬＡ−Ｃ遺伝子型の“Ｃ２／Ｃ２”と組み合わせたドナーのＫＩＲ  ２ＤＳ１の“２ＤＳ１＋”が、第２のスコアを５（“中”）と決定する。さらに、ドナーの複合ＨＬＡ−Ｃ遺伝子型の“Ｃ１／Ｃ１”、“Ｃ１／Ｃ２”又は“Ｃ２／Ｃ２”のいずれかと組み合わせたドナーのＫＩＲ２ＤＳ１の“２ＤＳ１−”が、第２のスコアを５と決定する。差異、並びに、良、中及び不良の度合いを反映させるために、例えば、１から２０、１から３０、１から４０、１から５０、１から６０、１から７０、１から８０、１から９０、１から１００などのような他の数値を用いてもよい。その決定は、非一時的なコンピューター読み取り可能な媒体に記憶されたコンピュータープログラムを実行可能なコンピューターで行うことができる。
【００４６】
（Ｃｅｎに基づくドナーのスコアリング）
ドナーは、そのセントロメアのＫＩＲハプロタイプ（又は“Ｃｅｎ割り当て”）に基づいてスコア化することができる。セントロメアの一部分のＫＩＲハプロタイプＢ（又はｃｅｎＢ）は、再発に対して予防的であることが示されている。
【００４７】
ドナーのＫＩＲ遺伝子型、特に、ＫＩＲ２ＤＬ１、２ＤＬ２、２ＤＬ３及び２ＤＳ１の陽性又は陰性は、ＰＣＲ−ＳＳＰ法、ＰＣＲ−ＳＳＯＰ法又はＳＢＴ法などの標準遺伝子タイピング法により決定することができる。ドナーのＫＩＲ遺伝子型に基づいて、以下の通り、ドナーについてＣｅｎ割り当てが決定される（例えば、コンピューターによって）。
【００４８】
【表５】
0006353894.tif 000006
【００４９】
ドナーはその後、以下に基づいて、Ｃｅｎ割り当てによってスコア化される。
【００５０】
【表６】
0006353894.tif 000007
【００５１】
第３のスコアは、そのＣｅｎ割り当てによって与えられる。あるアプローチにおいては、この第３のスコアは、１から１０の数値とすることができる。例えば、表６に示すように、Ｃｅｎが“ＢＢ”であるとき、第３のスコアは１０（“良”）である。Ｃｅｎが“ＡＡ”であるとき、第３のスコアは５（“中”）であり、Ｃｅｎが“ＡＢ”であるとき、第３のスコアは１（“不良”）である。同様に、必要であれば、不良から良までの度合いに反映させるために、例えば、１から２０、１から３０、１から４０、１から５０、１から６０、１から７０、１から８０、１から９０、１から１００などの他の数値を用いることができる。
【００５２】
（ＫＩＲ３ＤＳ１に基づくドナーのスコアリング）
ドナーはまた、移植片対宿主（ＧｖＨ）及び移植関連死亡率（ＴＲＭ）から予防的であることが示されているＫＩＲ３ＤＳ１陽性についてスコア化される。
ＰＣＲ−ＳＳＰ法、ＰＣＲ−ＳＳＯＰ法又はＳＢＴ法などの標準遺伝子タイピング法により、ドナーがＫＩＲ３ＤＳ１陽性であるかそうでないかが決定される。
【００５３】
ＫＩＲ３ＤＳ１陽性のドナーは、ＫＩＲ３ＤＳ１陰性のドナーよりもより高いスコアが与えられる。あるアプローチにおいては、この第４のスコアは、１を“不良”そして１０を“良”とするような、１から１０の数値とすることができる。必要であれば、不良から良までの度合いに反映させるために、例えば、１から２０、１から３０、１から４０、１から５０、１から６０、１から７０、１から８０、１から９０、１から１００などの他の数値を用いることができる。
【００５４】
（重み因子）
本発明によれば、より高い優先順位であるパラメータに対してより大きな重み因子を与えるように、考慮するパラメータ間の優先順位の階層に反映させるために重み因子を利用する。
【００５５】
上記したように、ＫＩＲ３ＤＬ１／ＨＬＡ−Ｂ組み合わせ、ＫＩＲ２ＤＳ１／ＨＬＡ−Ｃ組み合わせ、Ｃｅｎ及びＫＩＲ３ＤＳ１の４つのパラメータで、患者及びドナー候補を評価することが可能であり、ドナーは第１、第２、第３及び第４のスコアをそれぞれ提供する４つの各パラメータについてスコア化される。この開示によれば、ＫＩＲ３ＤＬ１／ＨＬＡ−Ｂ組み合わせは、ＫＩＲ２ＤＳ１／ＨＬＡ−Ｃ組み合わせを超える優先順位となり、順に、Ｃｅｎ及びＫＩＲ３ＤＳ１を超える優先順位となる。重み因子は、ＫＩＲ３ＤＬ１／ＨＬＡ−Ｂ組み合わせに割り当てられる重み因子が最も大きく（“第１の重み因子”）、ＫＩＲ２ＤＳ１／ＨＬＡ−Ｃ組み合わせに割り当てられる重み因子が２番目に大きく（“第２の重み因子”）、Ｃｅｎの第３の重み因子とＫＩＲ３ＤＳ１の第４の重み因子とが後に続くように、４つのパラメータのそれぞれに割り当てられる。いくつかの実施形態においては、ＣｅｎがＫＩＲ３ＤＳ１を超える優先順位となり、その場合、第３の重み因子が第４の重み因子よりも大きくなる。
【００５６】
４つのパラメータについてのスコアは、それぞれの重み因子に重み付けされ、重み付けされたスコアを合計して候補ドナーの最終スコアを出すことができる。
【００５７】
あるアプローチにおいては、第１の重み因子を１，０００，０００（百万）とすることができ、第２の重み因子を１００，０００（十万）とすることができ、第３の重み因子を１０，０００（一万）とすることができ、第４の重み因子を１００（百）とすることができる。重み因子は、必要に応じて、それぞれに見合った第１から第４のスコアの関連性を示すように変更してもよい。例えば、一実施形態においては、第４の重み因子は１０，０００であることが可能で、第３の重み因子は１００であることが可能であるように、ＣｅｎはＫＩＲ３ＤＳ１を超える優先順位をとる。他の実施形態においては、第１の重み因子は１００，０００、第２の重み因子は１０，０００、第３の重み因子は１，０００、第４の重み因子は１００とするように、各重み因子がより近くなるようにしてもよい。さらに他の実施形態においては、例えば、それぞれを１，０００、５００、１００及び１０とし、各重み因子がより一層近くなるようにしてもよい。
【００５８】
患者に対して、唯一のＨＬＡ−適合ドナー候補が特定された場合には、そのようなドナーは本明細書に開示される方法によって評価され、スコア化される。そのスコアは、治療する医者及び患者にＨＣＴの考察及びリスクの関連事項を与える。複数のＨＬＡ−適合ドナーが識別された例においては、本明細書に開示される方法に従って決定されたスコアに基づいて、ドナーに順位をつけることができる。
【００５９】
母集団及びＨＣＴ患者集団（１７、１８、２１、２３）間の遺伝子型頻度は、ＫＩＲ／ＨＬＡ遺伝子型に基づくドナー選択アルゴリズムに適用する実現可能性を支持する。患者間でＨＬＡ−Ｂｗ４は５９．２％の頻度で生じる。Ｂｗ４−Ｔ８０を持つ患者について、低親和性ＫＩＲ３ＤＬ１アロタイプ（ＫＩＲ３ＤＬ１−Ｌグループ）を持つＫＩＲ３ＤＬ１陽性ドナーは、８１％の可能性で３人のドナーになり得る人の中から識別することが可能で、高親和性ＫＩＲ３ＤＬ１アロタイプドナーの回避は、９８％の可能性で生じることが可能である。同様に、Ｂｗ４−Ｔ８０を持つ患者について、３人のドナーになり得る人の中の低親和性ＫＩＲ３ＤＬ１アロタイプ（ＫＩＲ３ＤＬ１−Ｈグループ）のＫＩＲ３ＤＬ１陽性ドナーの識別は、６１％の可能性で生じるだろう。そして、高親和性ＫＩＲ３ＤＬ１アロタイプドナーの回避は、９２％の可能性で生じることが可能である。顕著で有利な活性ＫＩＲ遺伝子型が発生する頻度は、以下の通りで、ＨＬＡ−Ｃ１リガンドを有するドナーを持つ患者についてはＫＩＲ２ＤＳ１が３５％の頻度で生じ、ＣｅｎＢＢドナーは１２％の頻度で生じ、そして、ＫＩＲ３ＤＳ１＋ドナーは３５％の頻度で生じる。これらの活性ＫＩＲ組み合わせ間においては、これらの遺伝子型の少なくともひとつを持つあるドナーの識別の可能性は７２％である。全体的に見て、ＫＩＲ−ＨＬＡ組み合わせに基づいて選択した３ドナーの中で有利なドナーの識別可能性は７０％である。ＨＬＡ−Ｂｗ４の患者について、高リスクドナー回避の可能性は９５％で、高有利ドナーの識別可能性は７１％である。
【００６０】
これらの推定は、公知のＫＩＲ並びにＨＬＡの遺伝子型及びアロタイプの頻度に基づいて算出される。従って、本明細書に開示するＫＩＲ／ＨＬＡに基づくドナーのスコアリング及び順位付けアルゴリズムの処理は、ドナー選出に適しており、ＨＣＴ後の予後の改善、再発、ＴＲＭ、ＧｖＨＤのリスクの減少、ＣＭＶ再活性化及び全生存を導くだろう。
【００６１】
本開示の態様において、コンピューターは、プロセッサーと、ＲＡＭ、ＲＯＭ及び固定記憶域などであってこれらに限定されない少なくともひとつのデータ記憶装置と、外部インターフェースとを有する。プロセッサーは、コンピューター読み取り可能な記憶装置に記憶された１つ以上のプログラムを実行するために配置される。コンピューター読み取り可能な記憶装置は、ＲＡＭ、固定記憶域又はリムーバブル記憶装置であってもよい。例えば、プロセッサーは、ＲＡＭにロードされるであろうプログラムにおいて指示を実行することができる。プロセッサーは、１つ以上の演算処理装置を含む。プロセッサーは、限定されるものではないが、ＣＰＵ又はＧＰＵであってもよい。
【００６２】
記憶装置は、一時的な基礎の上及び永久的な基礎の上のどちらでも／一時的な基礎の上又は永久的な基礎の上のいずれかに、例えば、データ、プログラム、指示、プログラムコード、及び／又は、他の適した情報などの情報を記憶することが可能であればどのようなハードウェア部品でもよい。
【００６３】
本開示の他の態様において、特定用途向け集積回路（ＡＳＩＣ）、利用者書き込み可能グリッドアレイ（ＦＰＧＡ）、プログラマブルアレイロジック（ＰＡＬ）及びプログラマブルロジックアレイ（ＰＬＡ）をプロセッサーとして用いてもよい。
【００６４】
この開示の様々な態様は、コンピューター、プロセッサー及び／又は機械上で実行されたとき、コンピューター又は機械が使用可能又は読み取り可能な媒体で、又は、コンピューター又は機械に方法のステップを実行させる媒体群で実施され、又は、記憶されるプログラム、ソフトウェア又は電算機命令として実施してもよい。本開示に記載される様々な機能及び方法を実行するための機械によって実行可能な指示プログラムを明白に実施する機械（例えば、コンピューター読み取り可能な媒体）で読み取り可能なプログラム記憶装置もまた提供される（例えば、コンピュータープログラム製品）。
【００６５】
非一時的なコンピューター読み取り可能な媒体は、コンピューター読み取り可能な記憶装置であってもよい。コンピューター読み取り可能な記憶装置は、例えば、磁気的、光学的、電子的、電磁気的、赤外線又は半導体系の器具、又は、上記のいかなる適した組み合わせであってもよい。しかしながら、コンピューター読み取り可能な記憶装置は、コンピューター読み取り可能な信号媒体を除外するコンピューター読み取り可能な記憶装置を除いたこれらの例に限定されない。
コンピューター読み取り可能な記憶装置のさらなる例としては、ポータブルフロッピー（登録商標）ディスク、ハードディスク、磁気記憶装置、ポータブルコンパクトディスク読み出し専用メモリ（ＣＤ−ＲＯＭ）、ランダムアクセスメモリ（ＲＡＭ）、読み出し専用メモリ（ＲＯＭ）、消去及びプログラム可能な読み出し専用メモリ（ＥＰＲＯＭ又はフラッシュメモリ）、光学記憶装置、又は、上記のいかなる適切な組み合わせを含むことが可能である。しかしながら、コンピューター読み取り可能な記憶装置は、また、これらの例に限定されるものではない。指示実行するシステム、器具又は装置によって使用、又は、連結されるプログラムを含むこと又は記憶することが可能であれば、どのような有形媒体でも、非一時的コンピューター読み取り可能な記憶装置となりうる。
【図１】
0006353894.tif 000008