(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
人間医学および獣医学において使用するための眼科適用の局所性抗菌皮膚用組成物であって、脂質に結合している少なくとも１つのカチオン性抗菌ペプチド、および１００ｋＤａと８００ｋＤａとの間の分子量を備えるヒアルロン酸またはそれらの塩を組み合わせて含み、当該抗菌ペプチドがジスルフィド架橋を含みパルミチン酸に結合しているヘキサペプチドである、組成物。
【請求項２】
ヒアルロン酸が２００ｋＤａと６００ｋＤａとの間の分子量を有することを特徴とする、請求項１に記載の皮膚用組成物。
【請求項３】
ヒアルロン酸塩が、アルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩から選択されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
ヒアルロン酸塩が、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸カルシウム、またはヒアルロン酸マグネシウムであることを特徴とする、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
抗菌ペプチドが共有結合を介して脂質に結合していることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
キチンまたはキトサンをまた含むことを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
組成物の総重量に対して、０．００５重量％と２重量％との間のヒアルロン酸、および０．００１重量％と１重量％との間のカチオン性抗菌ペプチドを含むことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
外用局所適用のための形態にあることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
瘢痕形成剤、抗炎症剤、抗感染剤、およびビタミンＡまたはビタミンＥのようなビタミンから選択される１つ以上の二次活性剤をまた含むことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
多糖による抗炎症剤をまた含むことを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
局所性抗菌皮膚用組成物が、眼瞼炎、マイボーム腺炎、または結膜炎の処置のためであることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
抗菌ペプチドが両親媒性であることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
ヒアルロン酸が加水分解ヒアルロン酸であることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
人間医学および獣医学において使用するための眼科適用の局所性抗菌皮膚用組成物であって、共有結合を介して脂質に結合している少なくとも１つのカチオン性抗菌ペプチド、および１００ｋＤａと８００ｋＤａとの間の分子量を備えるヒアルロン酸またはそれらの塩を組み合わせて含み、当該抗菌ペプチドが、両親媒性であり、ジスルフィド架橋を含みパルミチン酸に結合しているヘキサペプチドである、組成物。
【請求項１５】
抗菌ペプチドがパルミトイルヘキサペプチド−２６を含むことを特徴とする、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療において有用であり、および抗菌特性を有する新規な組成物に、ならびにより詳細には、細菌感染の処置のために、人間医学および獣医学において、特に皮膚科学および眼科学において有用である、ヒアルロン酸およびカチオン性抗菌ペプチドに基づく新規な組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、生体解剖学的領域、および身体とその環境との間の受け渡し区域の両方であり、その有効性は、良好な恒常性の均衡の維持に影響を及ぼす。皮膚はそれ自身、表層（表皮）から始まり、真皮、および皮下組織の最深層に至るまで、いくつかの集積された層を含む１つの器官であり、これらの各層のそれぞれが機能を果たし、全体がその環境に反応および適合することを許容する。
【０００３】
表皮は、主にケラチン生成細胞、メラニン細胞、およびランゲルハンス細胞からなり、身体の異なる部分によって変化する厚みを有し、そして身体をその外部環境に対して防御するための皮膚の外層を構成する。真皮は最も厚い層であり、神経線維および血管が張り廻らされ、そして主にコラーゲン、エラスチン、プロテオグリカン、およびグリコサミノグリカンからなり、主に真皮線維芽細胞によって合成される。コラーゲン線維は、皮膚に機械的強度および組織を与え、エラスチンはその弾力性を担い、そしてグリコサミノグリカンおよびプロテオグリカンは、皮膚の構造および湿潤化において重要な役割を果たす。皮膚の最深層は、皮下組織を形成し、脂質を産生し、そして筋肉、骨、および内蔵を衝撃から防御する脂肪層を形成する脂肪細胞を含む。
【０００４】
湿潤性の増加または種々の原因の炎症もしくは皮膚創傷の存在のような表皮の構造における変化、または皮膚病の発症は、病原性微生物による皮膚の定着および感染を促進する。結果として生じる微生物増殖は、瘢痕形成状態の改変を、それを遅延または阻止することにより、および初期創傷からの感染の拡散を促進することにより影響する。
【０００５】
従って、皮膚は病原性微生物による絶え間ない攻撃にさらされるが、表皮の角化層は、そのｐＨ、比較的低い含水量、および殺菌作用を有する抗菌ペプチドの存在のために、これらの病原性微生物に対する最前線の抗菌防御物として作用する。
【０００６】
細菌コロニーの大部分は、生物膜（微生物生存のための膜構造）になり、抗菌防御プロセスが効率的に作用することを妨げる炎症を生じさせることにより、増殖因子および瘢痕形成因子を迂回する。非常に広範な、および場合によって過剰な、抗生物質の使用のために、細菌は抗生物質に耐性を生じ、このことは抗生物質の抗菌効果を制限し、さらには無効にする。生物膜細菌は、大部分の抗生物質および防腐剤に耐性であり、そしてそれゆえ、可能な限り皮膚の恒常性を配慮しながら、病原性微生物と効果的に闘い得、そしてヒトおよびその環境に有害である耐性株の発生を促進しないことが可能な、組成物を開発することが必要である。
【０００７】
カチオン性抗菌特性は、カチオン性ペプチドと、グラム陰性細菌の膜の外部構造に見出される負に荷電したリン脂質との間の静電的結合により、細菌の膜に対して効果を有し、一方グラム陽性細菌の場合において、結合は、そのペプチドと、細菌の原形質膜の周囲のペプチドグリカンの構成成分との間で行われることが知られる。抗菌ペプチドのカチオン性質は、細菌のアニオン性膜に対するそれらの親和性を説明し、そして結合は、荷電の大きさに比例して容易である。結合後、ペプチドは膜透過性を改変して孔を形成し、これは浸透圧溶解、次いで細菌の死をもたらす。
【０００８】
従って、抗菌ペプチド、特にカチオン性ペプチドは、細菌の感染および炎症に対して皮膚を防御することにより、皮膚に対して作用する。
【０００９】
デフェンシンは、非特異的な、または先天性の免疫に関与する、天然の抗菌ペプチドのファミリーを構成する。それらは、小さなカチオン性抗菌ペプチドであり、３６〜４２個のアミノ酸鎖から成り、分子内ジスルフィド架橋を含む。ヒトにおいて、それらは広範囲の非常に効果的な抗菌活性および抗真菌活性を有し、そして２つのグループ、主に、α−デフェンシンおよびβ−デフェンシンに分類される。後者は、皮膚上皮、涙管、および頬粘膜を含む全ての上皮に、ならびに多数の器官に存在し、そして感染に対する応答において重要な役割を果たす。β−デフェンシンは、特異的受容体、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の活性化後に放出される。
【００１０】
研究は、共生細菌叢および病原菌叢が異なるβ−デフェンシン誘導経路を有することを示した。従って、皮膚は、細菌を識別し、そして闘うための分子手段を有する。
【００１１】
「Ｔｏｌｌ様受容体」（ＴＬＲ）は、病原性微生物の認識および先天性免疫の活性化において基本的な役割を有する、ＴＬＲ遺伝子のファミリーによって発現される膜受容体である。それらは効果的な免疫に必要なサイトカインの産生を調節する。ＴＬＲ４およびＴＬＲ２は、グラム陰性細菌に存在するリポ多糖（ＬＰＳ）の認識の間、活性である。ＬＰＳは、炎症誘発性細菌内毒素である。より詳細には、ＴＬＲ２はグラム陽性細菌のペプチドグリカンを認識し、およびＴＬＲ４はグラム陰性細菌のＬＰＳを認識する。皮膚において、タンパク質ＴＬＲ２およびＴＬＲ４は、ケラチン生成細胞に、ならびにＴＬＲ２は、皮脂腺に発現される。
【００１２】
デフェンシンは、誘導因子（すなわち、生物の防御機構を誘発し得る分子）の独特な役割を果たす。従って、皮膚中に天然に存在し、それらは刺激されて、弱められた皮膚の防御を強化する。しばしば不利である環境において、健全なおよび健康な皮膚の質および状態を維持するために、生物学的機能を助けることは重要である。誘導因子の概念は、外部攻撃にさらされる場合、より良好に応答するために皮膚に存在する生物学的経路を誘発することを包含する。
【００１３】
ヒトβ−デフェンシン（ＨＢＤ−３）の抗菌特性は、特許文献１に記載される。
【００１４】
ヒアルロン酸は、グルコシド結合を介して連結されるＤ−グルクロン酸およびＮ−アセチルグルコサミン単位を含む天然の二糖ベースのポリマーである。その特性は非常に可変性であり、その分子量に依存する。１０００ｋＤａよりも大きな高分子量を伴うヒアルロン酸は、それらが構成する親水性炭水化物網により、皮膚の湿潤化を促進するために本質的に使用される。約５０ｋＤａ未満の低分子量のヒアルロン酸は、角質層境界を通過して、真皮においてヒアルロン酸の新規合成を担うＣＤ４４受容体を刺激し得る。
【００１５】
ヒアルロン酸は、コラーゲンのように、真皮の細胞外マトリクスの主な構成要素の１つであり、そしてこれは細胞増殖においておよび湿潤化の維持において、重要な役割を果たす。皮膚老化の過程において、真皮におけるその濃度の減少が観察される。ヒアルロン酸は、化粧品および皮膚科学的組成物において、一般にヒアルロン酸ナトリウムの形態で、特に、湿潤化を促進するために、ならびに皮膚の瘢痕形成および天然の防御を刺激するために、しばしば使用されるグリコサミノグリカンである。これはまた、しわを充填するために美容外科において、関節症を闘うための医学的処置において、および眼科学において使用される。酵素分解に対して良好な耐性を示し、および化粧品組成物において特に使用され得る、種々の架橋されたまたは架橋されないヒアルロン酸誘導体は、例えば、特許文献２に記載されている。ヒアルロン酸の種々の形態は周知であり、そして市販されている。
【００１６】
ヒアルロン酸または誘導体と、特許文献３におけるように、コンドロイチン硫酸とを、または、特許文献４におけるように、レチノイドおよびオリゴ糖とを、組み合わせることが提案されている。ヒアルロン酸の重金属塩はまた、特許文献５に記載されるように抗菌組成物において提案されている。特許文献６は、低分子量、すなわち５０〜２００ｋＤａのヒアルロン酸を使用し、ペプチドまたはタンパク質、例えば成長ホルモンを取り込むマトリクスを形成する薬学的組成物を記載する。特許文献７は、好ましくは１５〜４０個のアミノ酸を含有するペプチドに関し、これは一方でヒアルロン酸に、および他方でヒアルロン酸を含有する細菌カプセルに結合し得、そして脂質の存在下で使用されて、リポソームを形成し得る。ラクトフェリンおよびヒアルロン酸に由来するペプチドを含む薬学的組成物は、特許文献８に記載される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】国際公開第０１／９２３０９号パンフレット（ＷＯ  ０１／９２３０９）
【特許文献２】国際公開第２０１１／０８０  ４５０号パンフレット（ＷＯ  ２０１１／０８０  ４５０）
【特許文献３】国際公開第２００９／０７３  ４３７号パンフレット（ＷＯ  ２００９／０７３  ４３７）
【特許文献４】仏国特許発明第２  ８９４  ８２７号明細書（ＦＲ  ２  ８９４  ８２７）
【特許文献５】国際公開第８７／０５５１７号パンフレット（ＷＯ  ８７／０５５１７）
【特許文献６】米国特許第６  １８０  ６０１号明細書（ＵＳ  ６  １８０  ６０１）
【特許文献７】国際公開第２００６／１３０  ９７４号パンフレット（ＷＯ  ２００６／１３０  ９７４）
【特許文献８】国際公開第２０１０／０８１  ８００号パンフレット（ＷＯ  ２０１０／０８１  ８００）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
出願人によって行われた研究は、カチオン性抗菌ペプチドと、中間分子量のヒアルロン酸とを組み合わせることにより、局所性消毒剤および抗菌剤の抗菌活性に等価な、有効な抗菌活性を得ることが可能であること、ならびにカチオン性ペプチドの抗菌活性は、β−デフェンシンの産生を刺激するヒアルロン酸との組み合わせによって増強されることを実証した。用語「抗菌活性」は、抗菌活性および／または抗ウイルス活性および／または抗真菌活性を意味する。
【００１９】
本発明の目的は、化学的な消毒剤または抗菌剤に頼ることなく、皮膚の細菌感染を効率的に処置すること、および皮膚の自然防御を増強することを可能にする、抗菌特性を有する新規な局所性組成物を提案することである。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
従って、本発明の主題は、少なくとも１つのカチオン性抗菌ペプチドと、中間分子量のヒアルロン酸またはそれらの塩とを合わせて含む、皮膚用組成物である。
【００２１】
本発明の主題はまた、脂質に結合された少なくとも１つのカチオン性抗菌ペプチド、および１００ｋＤａと８００ｋＤａとの間の分子量を備える、ヒアルロン酸またはそれら塩を組み合わせて含む、局所性抗菌皮膚用組成物である。
【００２２】
最後に、本発明の主題は、皮膚、外皮、または粘膜の細菌感染の処置における使用のための、脂質に結合された少なくとも１つのカチオン性抗菌ペプチドと、中間分子量のヒアルロン酸またはそれらの塩とを、組み合わせて含む組成物である。
【００２３】
このような組成物は、その抗菌特性により、皮膚創傷を処置するためにヒト皮膚科学において有用である。
【００２４】
これはまた、皮膚科学および眼科学において、より詳細には、慢性急性創傷と関連される感染、毛嚢炎、皮膚炎症性疾患の過剰感染、眼瞼炎、マイボーム腺炎、および結膜炎を処置するために有用である。
【００２５】
本発明によれば、カチオン性抗菌ペプチドは、好ましくは５０個未満のアミノ酸、より好ましくは３個と３０個との間のアミノ酸を含むペプチドであり、そしてグラム陽性細菌およびグラム陰性細菌に対して広範な抗菌スペクトルを有する。
【００２６】
例えば、らせん構造を伴う直鎖状ペプチド、１つ以上のジスルフィド架橋を含むペプチド、およびあるアミノ酸が豊富な直鎖状ペプチドから選択される、カチオン性抗菌ペプチドの使用がなされ得る。
【００２７】
５０個未満の、および好ましくは３０個未満のアミノ酸を含む本発明のカチオン性抗菌ペプチドが、例えば、マゲイニン、プロテグリン、インドリシジン、およびヒスタチンの誘導体から選択され得る。インドリシジンアナログであるオミガナンペンタヒドロクロリド、塩酸イセガナン（合成プロテグリン）、および酢酸ペキシガナン（マゲイニンアナログ）のような合成カチオン性ペプチドの使用がまたなされ得る。これらのペプチドは共有結合によって脂質と、および好ましくはパルミチン酸のような脂肪酸と結合される。より詳細には、この共有結合はリポソーム性ではない。オリゴペプチド−１０（Ｇｒａｎｔ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）またはＳｈｉｅｌｄ  Ｂａｃｔ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｉｎｆｉｎｉｔｅｃ）（これはジスルフィド架橋を含みパルミチン酸に結合しているヘキサペプチドである）のような市販のペプチドの使用がまたなされ得る。
【００２８】
本発明の組成物の抗菌活性は、後述されるようにインビトロ研究およびエクスビボ研究を介して実証され、細菌エンドトキシンを中和してＴｏｌｌ様受容体に対する要求を最小化すること、β−デフェンシンの作用を模倣して迅速な抗感染効果を提供すること、および炎症反応を調節することからなる３つの作用を実証した。
【００２９】
抗菌ペプチドは、好ましくは両親媒性であるべきである。この両親媒性の性質は、カチオン性ペプチドと、脂質、および特に、直鎖状または分岐状の、飽和または不飽和脂肪酸、好ましくは６〜２２個の炭素原子を含む、例えば、オレイン酸、リノール酸、ラウリン酸、サピエン酸、ステアリン酸、またはパルミチン酸とを、結合することにより増強される。ペプチドとの脂肪酸の結合は、好ましくは、ペプチドの少なくとも１つの構成アミノ酸との共有結合を介して行われる。共有結合は、例えば、ペプチドのＮ末端におけるアミド結合であり得る。行われた研究は、このように増強された両親媒性の性質が、細菌の表面へのカチオン性ペプチドの結合を促進し、そして結果として；
−細菌膜の外層の構造破壊
−膜界面での、ミセルの形態における脂肪酸の集積
−イオンチャンネルの作製によるこの二重膜の穿孔
を有することを示す。
【００３０】
この三つの作用の結果は、その膜の不浸透性の喪失と、および細胞質内のアニオン性の標的に対するカチオン性ペプチドの作用と関連される溶菌である。
【００３１】
さらに、本発明のカチオン性抗菌ペプチドは、以下：
−グラム陰性細菌およびグラム陽性細菌、ならびに真菌、ウイルス、および寄生虫の感染を防御する広範囲の活性、
−細菌における、脂肪酸により攻撃された複数の標的と関連される高速の作用、
−従来の抗生物質を用いて観察される耐性と比較した場合、耐性の出現の非常に低い危険性、
を示す。
【００３２】
行われた研究はまた、本発明において使用された抗菌カチオン性ペプチドが、タイプに関係なく、細菌（グラム陰性細菌またはグラム陽性細菌）に依存して、それらが産生する細菌エンドトキシンに対する宿主細胞の応答を中和し得ることを示した。従って、これは、ＴＬＲの活性およびＴＮＦ−αの産生を制限することにより、先天性の免疫応答を調節し、これは炎症カスケードおよび生じるサイトカインストーム（ＩＬ−６、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−１ａ）を弱める。
【００３３】
これはまた、単球および多核好中球に対する走化性作用により、単球によるヒスタミンの放出により、ならびにプロテアーゼが組織破壊を制限しおよび組織修復を刺激することを阻害することにより、先天性免疫と関連した他の特性を有する。
【００３４】
行われた研究は、細菌攻撃の存在下でこの先天性免疫の防御機構が、好ましくはアミノ酸に連結されたカチオン性抗菌ペプチドと、中間分子量のヒアルロン酸とを組み合わせることによって至適化され得ることを示した。微生物に対する迅速な作用は、それらが分泌するエンドトキシンの中和化によって補足される。
【００３５】
結果として、炎症誘発性サイトカインの放出は減少され、そしてヒアルロン酸の内因性作用は次いで、Ｔｏｌｌ様受容体への促進された結合およびβ−デフェンシンの増加された分泌により、十分に発現され得、従って、微生物に対する第２の防御手段を生み出す。並行して、真皮の防御効果を迅速に回復するために修復機構が刺激される。
【００３６】
本発明の記載によれば、用語「ヒアルロン酸」は、中間分子量の、すなわち、好ましくは、１００と８００ｋＤａとの間の、およびより好ましくは２００と６００ｋＤａとの間の、単独の形態にある、またはそれらのアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、例えば、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸カルシウム、もしくはヒアルロン酸マグネシウムの形態にある、ヒアルロン酸を意味する。
【００３７】
本発明において使用され得るヒアルロン酸は、その意図される使用に適合される種々の形態で市販される。これは、ニワトリのトサカのような動物組織からの抽出により、細菌発酵により、またはあるいは植物物質、例えば小麦からバイオ技術プロセスを介して、大量に工業的に生産され得る。
【００３８】
例えば、２００と６００ｋＤａとの間の分子量を備える加水分解ヒアルロン酸またはヒアルロン酸のナトリウム塩、例えば、３００ｋＤａに近い分子量を備えるＰｒｉｍａｌＨｙａｌ  ３００（Ｓｏｌｉａｎｃｅ）、または４５０ｋＤａの領域における分子量を備えるＰｒｉｍａｌＨｙａｌ  ４５０の商品名のもとに市販される製品の使用がなされ得る。
【００３９】
本発明の組成物は、効果的な量の上述の各活性剤、例えば、組成物の総重量に対して、０．０５重量％と２重量％との間のヒアルロン酸、および０．００１重量％と１重量％との間のカチオン性抗菌ペプチドを含み得る。
【００４０】
本発明の組成物はまた、ヒアルロン酸と抗菌ペプチドとの組み合わせの活性を有利に増強または補足する１つ以上のさらなる活性剤を含み得、そしてこれらは混合可能であり、すなわち、互いに反応する傾向がなく、ならびにそのそれぞれの効果を遮蔽および制限する傾向がない。
【００４１】
例えば、それらはキトサン、またはキチンを含み得、これは、ヒアルロン酸と組み合わせることにより、ケラチノサイト増殖因子の内因性の産生を促進し、線維芽細胞活性を誘導し、コラーゲン産生を増加し、そして線維芽細胞および筋線維芽細胞の分化を加速する防御架橋網効果を有する。それらはまた、スフィンゴイド塩基、例えばスフィンガニン（ｓｐｈｉｎｇａｍｉｎｅ）およびフィトスフィンゴシンを含み得、これは抗菌効果を至適化し、そしてペプチドの抗炎症効果を増強する。
【００４２】
種々の二次活性剤が、組成物に有利に添加され得、そして例えば、瘢痕形成剤、抗炎症剤、抗感染剤、およびビタミンＡまたはＥのようなビタミンから選択され得る。瘢痕形成剤は、例えば、亜鉛塩またはオリゴガラクトマンナンが豊富なイナゴマメ抽出物であり得る。抗炎症剤は、細胞接着を阻害し、そして炎症反応を制限するＲｈａｍｎｏｓｏｆｔ（登録商標）もしくはＴｅｆｌｏｓｅ（登録商標）（Ｓｏｌａｂｉａ）のような多糖、またはロイコトリエン合成の酵素的阻害を介して作用するＢｏｓｗｅｌｌｉａ  Ｓｅｒｒａｔａの抽出物（Ｓｏｏｔｈｅｘ（登録商標））であり得る。さらなる抗感染剤は、シラノールおよびメチルカプロイルチロシナート（Ｄｅｆｅｎｓａｍｉｄｅ（登録商標））のような抗菌ペプチド形成活性化因子から選択され得る。
【００４３】
本発明の組成物は、任意のガレヌス製剤の形態にあり得、これは局所適用について、特に外用局所適用について共通である。それらは、例えば、水溶液または水性アルコール溶液、ミセル溶液、噴霧用溶液、洗髪液、分散液、美容液、ふき取り液、制御された放出を伴うパッチ、メッシュ、または包帯、ゲル（水性、無水性、親油性）、オレオゲル（ｏｌｅｏｇｅｌ）（脂質ゲル）、軟膏、懸濁液、イオン性または非イオン性のベシクル分散液、および液体または半液体（例えば、乳液）、固体または半固体の乳濁液の形態にあり得る。乳濁液は、水中油（Ｏ／Ｗ）または油中水（Ｗ／Ｏ）のタイプ、例えば、ゲルまたはクリームであり得る。
【００４４】
本発明の組成物の調製のために使用され得る賦形剤および支持体は、皮膚科学的使用のために調製物中で一般に使用されるものであり得、そして投与の選択された形態に応じて選択される。言及され得る例としては、乳化剤、増粘剤、ゲル化剤、軟化剤、保存剤、安定剤、懸濁剤、ならびにまた洗浄塩基および香料が挙げられる。
【００４５】
乳化剤は、例えば、高分子量のカルボキシビニルポリマー、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ２０（登録商標）、Ｔｗｅｅｎ  ６０（登録商標）のようなポリソルベート、ソルビタンエステル、およびより詳細にはステアリン酸ソルビタン、パルミチン酸ソルビタン、またはラウリン酸ソルビタン、例えば、Ａｒｌａｃｅｌ（登録商標）から選択され得る。また使用され得る乳化剤としては、ステアリン酸またはパルミチン酸の誘導体、例えば、ステアリン酸ポリエチレングリコール、ステアリン酸グリセリル、ＰＥＧ  １００  ｓｔｅａｒａｔｅ（登録商標）（例えばＡｒｌａｃｅｌ  １６５（登録商標））、ステアレス（ｓｔｅａｒｅｔｈ）もしくはセテアレス、ステアリルアルコール、カプリリルアルコール、もしくはセテアリルアルコールのような脂肪アルコール、例えば、Ｍｏｎｔａｎｏｖ  ６８（登録商標）、または乳化シリコンが挙げられる。
【００４６】
ゲル化剤および増粘剤は、その流動性を改善するために組成物中に取り込まれる。それらは、カーボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）型のポリアクリルアミド、アクリレート／アクリル酸コポリマー（例えば、Ａｃｕｌｙｎ（登録商標））、架橋化アクリレート（例えば、Ｃａｒｂｏｐｏｌ  Ｕｌｔｒｅｚ（登録商標））、セルロース誘導体（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース）、または天然ゴム（例えば、キサンタンゴムおよびトラガガントゴム）から選択され得る。
【００４７】
組成物中で使用され得る湿潤剤および軟化剤は、例えば、プロピレングリコール、グリセロール、ブチレングリコールおよびシアバター、ならびにまた脂肪アルコールから選択され得る。適切な懸濁剤は、例えば、ベントナイトまたはスメクタイトのような粘土である。
【００４８】
真皮への浸透を促進するコスモペリンのような薬剤がまた、有利に添加され得る。
【００４９】
本発明の組成物は、投与の選択形態、ヒアルロン酸またはそれらの塩の所望の量に応じて、通常の技術を介して、抗菌ペプチド、ならびに必要に応じてキチンまたはキトサン、ならびに支持体および賦形剤とともに生理学的に受容される媒体中で混合され、調製される。
【００５０】
本発明の目的のために、用語「生理学的に受容される」は、人間医学において皮膚用組成物に一般に使用されるタイプの支持体および腑形剤を意味し、これは使用される活性成分に関してニュートラルであり、毒性の影響をなんら有さず、そして皮膚に対して有害な副作用をなんら惹起しない。
【００５１】
例えば、クリームの場合において、プロセスは、水中油乳濁液を得るために、または、逆に、油中水乳濁液を調製するために、水相中に脂肪相を分散することにより行われ得、活性成分は、どちらかの相に存在する。
【００５２】
本発明の組成物は、例えばクリームの形態で、好ましくは、１日当たり２〜３回、処置を必要とする皮膚の領域に、症状の重篤度に依存して数日から４週間にわたり得る期間、塗布される。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
以下の実施例は、本発明を、その範囲を制限することなくより詳細に説明する。以下の全て組成の例において、言及しない限り、割合は重量基準で表わされる。
【実施例１】
【００５４】
水性ゲルを、以下に示される順に室温にて成分を混合することにより調製する。
【００５５】
脱塩水                                                       ７８．６０
Ｃａｒｂｏｐｏｌ  Ｕｌｔｒｅｚ  ２０                         ０．８０
水酸化ナトリウム（３２％水溶液）                             ０．５０
グリセロール                                                 ２．００
Ｓｈｉｅｌｄ  Ｂａｃｔ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（登録商標）（０．１％溶液）  ５．００
脱塩水                                                       １０．００
ヒアルロン酸（ＰｒｉｍａｌＨｙａｌ  ４５０  （登録商標））   ０．１０
脱塩水                                                       ２．００
ペンチレングリコール                                         １．００
【００５６】
このように構成された水性ゲルは、処置される症状の重篤度に依存して、典型的に、連続した数日間、１日当たり２〜３回、使用され得る。
【実施例２】
【００５７】
以下の組成を有するローションを、標準的な技術を介して調製する。
【００５８】
脱塩水                                                       ８２．６５
Ｃａｒｂｏｐｏｌ  Ｕｌｔｒｅｚ  ２０                         ０．４５
水酸化ナトリウム（３２％水溶液）                             ０．３０
脱塩水                                                       ７．００
ヒアルロン酸（ＰｒｉｍａｌＨｙａｌ  ４５０（登録商標））     ０．１０
グリセロール                                                 ２．００
Ｔｅｆｌｏｓｅ（登録商標）（Ｓｏｌａｂｉａ）                 ２．００
ＰＥＧ−７  オリーブオイルエステル                           ２．００
Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ２０                                 ０．５０
Ｓｈｉｅｌｄ  Ｂａｃｔ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（登録商標）（０．１％溶液）  ３．００
【００５９】
この溶液は、眼瞼炎のような眼の症状の処置のために、数日間、１日当たり１〜２回、使用され得る。
【実施例３】
【００６０】
抗菌クリームを、以下に示す成分を含む相を連続的に添加することにより、通常の技術を介して調製し、Ａ相およびＢ相を加温（６５〜７０℃）しながら混合し、次いで５０℃にてＣ相を添加し、注意深く混合し、続いてＤ相を添加する。
【００６１】
Ａ相
非イオン性乳化剤（Ｍｏｎｔａｎｏｖ  ６８）                     ４．００
ミリスチルアルコール                                           ２．００
ステアリルアルコール                                           ０．５０
Ｃｅｔｉｏｌ  ＲＬＦ（登録商標）                               ３．００
ステアリン酸グリセリル                                         ３．００
オレイン酸ヒマワリ油                                           ４．００
【００６２】
Ｂ相
脱塩水                                                         ６７．９０
Ｃａｒｂｏｐｏｌ  Ｕｌｔｒｅｚ  ２１（登録商標）               ０．４５
プロパンジオール                                               ２．００
【００６３】
Ｃ相
グリセロール                                                   ２．００
Ｓｈｉｅｌｄ  Ｂａｃｔ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（登録商標）（０．１％溶液）    ６．００
【００６４】
Ｄ相
水酸化ナトリウム（３２％  水溶液）                             ０．０５
脱塩水                                                         ５．００
ヒアルロン酸（ＰｒｉｍａｌＨｙａｌ  ３００（登録商標））       ０．１０
【００６５】
この組成物のｐＨを、３２％水酸化ナトリウムの添加により、６．５に調製する。
【００６６】
このクリームは、医師によって決定される期間、１日当たり１〜２回、処置される皮膚の領域に塗布することにより使用され得、そして期間は、処置される症状の性質および重篤度に依存して、１〜３週間にわたり得る。
【実施例４】
【００６７】
β−デフェンシンの産生およびケラチン生成細胞増殖に対するヒアルロン酸の選択の効果を以下のように測定した。
【００６８】
【表１】
0006440637.tif 000002
【００６９】
上述の表中、「＋」符号は、非常に弱い（＋）から非常に強い（＋＋＋＋）までの効力を示す。ＮＳは、「有意でない」ことを示す。
【００７０】
使用したヒアルロン酸（ＨＡ）は、高分子量（ｈｍｗ）、本発明の中間分子量（ｍｍｗ−約４５０ｋＤａ）、低分子量（ｌｍｗ）、または超低分子量（ｖｌｍｖ）である。
【００７１】
β−デフェンシンの産生：
コンフルエントなケラチン生成細胞培養物を、１８時間、０．２％ｍｍｗ  ＨＡ、またはポジティブコントロール（大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）由来のＬＰＳ５μｇ／ｍｌ）で、または：
・一方は、高分子量ヒアルロン酸（ｈｍｗ  ＨＡ）
・他方は、低分子量ヒアルロン酸（２０ｋＤａのＨＡおよび１０ｋＤａのＨＡ）で処理した。
【００７２】
ＨＢＤ２の放出を、ＥＬＩＳＡキットを用いて上清において評価した。示した値は、結果の平均である。
【００７３】
【表２】
0006440637.tif 000003
【００７４】
ケラチン生成細胞増殖：
Ｄ０において、創傷を、コンフルエントなケラチン生成細胞単層（ＨａＣａＴ）上に作製する。次いで、細胞を、ＨＡを含有しない（参照条件）または漸増する分子量（ＨＡ５０、ＨＡ３００，ＨＡ１０００）のＨＡを含有する、２．５％  ＦＣＳ（胎児ウシ血清）中で、３７℃にて処理する。
【００７５】
創傷の２端間の幅を、Ｄ０およびＤ１にて、それぞれの処理について、同じ写真上で異なる３点にて測定する。各実験を５回独立して行う。平均を統計学的に処理する（分散の１因子分析、続いてＤｕｎｎｅｔｔ検定（ＳｉｇｍａＳｔａｔ））。
【００７６】
ｍｍｗ  ＨＡ（ＨＡ  ３００）のみが、ケラチン生成細胞増殖を介する皮膚修復プロセスを加速することを可能にする（ＨａＣａｔ）。
【００７７】
細菌防御の刺激：
３つの溶液を調製する：
溶液Ａ：０．１０％  ｍｍｗ  ＨＡ
溶液Ｂ：０．０５％  ヘキサペプチド
溶液Ｃ：０．０５％  ヘキサペプチド  ＋０．１０％  ｍｍｗ  ＨＡ
【００７８】
使用するヘキサペプチドは、市販されるＳｈｉｅｌｄ  Ｂａｃｔ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（登録商標）である（Ｉｎｆｉｎｉｔｅｃ）。ヒアルロン酸（ｍｍｗ  ＨＡ）は、３００ｋＤａの平均分子量を有する。
【００７９】
処理（溶液Ａ、Ｂ、Ｃ、または媒体のみ）後のヒト皮膚生検由来のタンパク質を、５％酢酸およびプロテアーゼ阻害剤（０．０２ｍＭ  ＰＭＳＦ，２ｎｇ／ｍｌ  ペプスタチンおよび２ｎｇ／ｍｌ  ロイペプチン）を含有する溶液中で、２時間、穏やかに撹拌して、抽出する。
【００８０】
上清の可溶性タンパク質を減圧下で乾燥し、０．０１％酢酸溶液中でホモジナイズする。
【００８１】
１０４細菌／ｍｌのＥ．ｃｏｌｉ（ＡＴＣＣ  ４１５７）を、リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中の対数増殖培地に、１００μｌの最終容量でインキュベートする。
【００８２】
このＥ．ｃｏｌｉ懸濁液と、３０μｇのタンパク質抽出物と、プロテアーゼ阻害剤を含有する１０μｌの０．０１％酢酸溶液とを混合し（ネガティブコントロール）、混合液を１２０分間、３７℃にてインキュベートする。
【００８３】
インキュベーションの終了時に、１０μｌを採取し、そして１／１０および１／１００希釈物を、カゼイン−ダイズ液を含有するペトリ皿中に三連で播種し、そして３７℃にて一晩、インキュベートする。
【００８４】
ペトリ皿における播種および３７℃にて一晩のインキュベーション後、ＣＦＵ数を各サンプルについて測定する。
【００８５】
以下の結果の表は、本発明の中間分子量のヒアルロン酸と、パルミチン酸と結合した抗菌ヘキサペプチドとの組み合わせ（溶液Ｃ）が、最も効果的であることを証明し、ＣＦＵ形成の阻害パーセントは１００％であることを示す。
【００８６】
【表３】
0006440637.tif 000004
【実施例５】
【００８７】
２つの臨床研究を、異なる品種のイヌに対して行い、および１つの臨床研究を、ヒト皮膚科学において、患者に対して行った。
【００８８】
イヌに対する第１の研究：
両眼において感染性眼瞼結膜炎を示す３歳〜１０歳の異なる品種の５匹のイヌを、以下のように調製した溶液で処置した：
−溶液Ａ：本発明に従う、０．１０％のｍｍｗ  ＨＡおよび０．０３％のヘキサペプチドを含有するミセル溶液を右眼に滴下
−溶液Ｂ：０．０３％のヘキサペプチドを含有する溶液を、左眼に滴下。
【００８９】
組成物のヒアルロン酸の平均分子量は４５０ｋＤａであり、そしてヘキサペプチドは、Ｓｈｉｅｌｄ  Ｂａｃｔ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｉｎｆｉｎｉｔｅｃ）である。
【００９０】
臨床的変化を、４、８、１２、２４、および４８時間にて検査した。結果を以下の表に報告する。
【００９１】
【表４】
0006440637.tif 000005
【００９２】
結果は、本発明に従う溶液Ａで、感染の症状においてより迅速な改善を示し、これは、８時間目から表わされ、１２および２４時間にて裏付けされる。
【００９３】
イヌに対する第２の研究：
症例１：数年間乾性角結膜炎を示し、およびシクロスポリンでの処理が首尾よくいかなかったエアデールテリア（１０歳）。眼は乾燥し、過剰感染性結膜炎および瞼裂の減少を伴う。１日１回、８日間の、上述のローションＡの滴下は、目覚ましい改善（澄明、開眼、疼痛の消失を伴う）をもたらす。
【００９４】
症例２：通常の処置で改善を伴わず、長期間の知覚マヒ後に重篤な角膜潰瘍を示すマルチーズビション（１５歳）。眼は乾燥したままであり、潰瘍は深在し、そして疼痛は急性である。１日２回、８日間の、本発明に従うローションＡの使用は、瘢痕形成および疼痛の消失をもたらす。
【００９５】
症例３：８ｍｍの肉芽組織を伴う角膜腫瘍を示すウエストボクサー（７歳）。１日２回、８日間の、ローションＡを使用することにより、治癒を得る。
【００９６】
症例４：角膜潰瘍および疼痛を伴い、乾性角結膜炎を示すシーズバンス。３週間の従来の処置は効果のないままである。１日２回、８日間の、本発明に従うローションＡの使用は、痛みの実質的な低減をもたらし、潰瘍のいずれの顕著な変化も伴わない。シクロスポリンへの変更は、８日内に潰瘍の臨床的改善をもたらす。
【００９７】
症例５：眼球穿孔により悪化された重篤なコリーザを示す子猫。抗生物質治療は、任意の改善を与えない。治療的眼瞼閉鎖の失敗。次いで、本発明に従うローションＡを１日３回使用し、そして迅速な改善を得る。
【００９８】
ヒトにおける研究：
アトピー性皮膚炎は、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）に対するある特定の感受性によって特徴づけられる。その役割は、湿疹突発の間に顕著であり、皮膚の表面上での増殖の制御は、症状を改善するために不可欠である。
【００９９】
成人患者４人について、主な解剖学的折り畳み部分（腕の屈曲部、膝窩）に位置する過剰感染性湿疹突発を示す、１８歳〜３１歳の、２人の男性および２人の女性を２種類の液体乳濁液で処置した：
−乳濁液Ａ  ヘキサペプチドを単独で、０．０５％にて含有し、右側に塗布；
−乳濁液Ｂ  ヘキサペプチド（０．０５％）およびｍｍｗ  ＨＡ（０．２０％）を含有し、左側に塗布。
【０１００】
ヒアルロン酸の平均分子量は３００ｋＤａである。ヘキサペプチドは、Ｓｈｉｅｌｄ  Ｂａｃｔ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（Ｉｎｆｉｎｉｔｅｃ）である。
【０１０１】
掻痒、浸出、および過剰感染の基準を、変化値を規定するために、０〜４で記録した。
【０１０２】
【表５】
0006440637.tif 000006
【０１０３】
これらの結果は、両方のクリームが効果的であるが、１２時間目から明らかであるように、クリームＢは、症状に対してより迅速な作用を有することを示す。
【０１０４】
過剰感染は、２４時間にて制御される。
【０１０５】
全体の改善は、本発明に従うクリームＢを用いてより顕著である。