(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
約１０μｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在するグリセロールモノラウレート（ＧＭＬ）、約０．１重量％〜約１０重量％の植物油、ゲルおよび薬学的に許容可能な局所用担体を含む組成物であって、該ゲルがプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、およびヒドロキシプロピルセルロースもしくはヒドロキシエチルセルロースからなる、組成物。
【請求項２】
約１０μｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在するＧＭＬ、約６５重量％〜約８０重量％の濃度のプロピレングリコール、約２０重量％の濃度のポリエチレングリコール、および約０．１重量％〜約５．０重量％の濃度のヒドロキシプロピルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースを含む組成物。
【請求項３】
植物油をさらに含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記植物油が、パーム油、オリーブ油、コーン油、キャノーラ油、ココナッツ油、大豆油、小麦胚芽油、ホホバ油、ヒマシ油、それらの組み合わせ、オリーブ油と大豆油の組み合わせ、ココナッツ油と小麦胚芽油の組み合わせ、またはホホバ油、パーム油およびヒマシ油の組み合わせである、請求項１または３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ヒドロキシプロピルセルロースもしくはヒドロキシエチルセルロースが、約０．１重量％〜約５．０重量％の濃度で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
プロピレングリコールが、約６５重量％〜約８０重量％の濃度で存在する、請求１に記載の組成物。
【請求項７】
ポリエチレングリコールが、約２０重量％〜約３５重量％の濃度で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
ポリエチレングリコールが、約３００〜約６００の範囲の分子量である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
ＧＭＬが前記組成物の約０．００１重量／体積％〜約１０重量／体積％を含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項１０】
水性溶媒をさらに含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項１１】
前記水性溶媒が、水、生理食塩水、培地またはそれらの組み合わせである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物のｐＨが、約４．０〜約４．５である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項１３】
前記薬学的に許容可能な局所用担体がワセリンである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項１４】
促進剤をさらに含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記促進剤が、有機酸、キレート剤、抗生物質、抗真菌剤、抗ウイルス剤またはそれらの組み合わせである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記促進剤がＥＤＴＡである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
それを必要とする被験者における微生物感染症またはウイルス感染症の治療のための組成物であって、前記組成物は、請求項１〜３のいずれか一項に記載の有効量の組成物を含み、前記組成物は前記被験者へ局所的に投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項１８】
抗生物質、抗真菌剤および抗ウイルス剤から成る群から選択される第二の活性剤をさらに含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記被験者が細菌感染症を有している、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
前記細菌感染症が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染症である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記細菌感染症が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記細菌感染症が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２３】
前記細菌感染症が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記細菌感染症が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
前記細菌感染症が、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ感染症である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２６】
前記細菌感染症が、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓである、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記細菌感染症が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ感染症である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２８】
前記細菌感染症が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉである、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記細菌感染症が、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ感染症である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項３０】
前記細菌感染症が、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記細菌感染症が、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染症である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項３２】
前記細菌感染症が、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓである、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記被験者がウイルス感染を有している、請求項１７に記載の組成物。
【請求項３４】
前記ウイルス感染が、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３６】
前記ウイルス感染が、インフルエンザである、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３７】
前記被験者が真菌感染症を有している、請求項１７に記載の組成物。
【請求項３８】
前記真菌感染症が、Ｃａｎｄｉｄａ感染症である、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記真菌感染症が、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓである、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記被験者がヒトである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項４１】
前記組成物が、スポンジ、ワイプまたはスワブを用いて、局所的に塗布されることを特徴とする、請求項１７に記載の組成物。
【請求項４２】
前記組成物が、細菌の形質膜に干渉する、請求項１９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１２年４月２０日に出願された米国仮出願番号第６１／６３６，２０３号、および２０１２年５月２３日に出願された米国仮出願番号第６１／６５０，７５５号の優先権を主張し、それぞれは参照によりその全体が組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
一部の細菌性病原体は、無傷のまたは損傷した粘膜または皮膚表面から、人間の病気を引き起こす。これらの病原体の多くは、他の人または動物から、内因性感染源から、または多数の環境要因感染源から取得される。一旦ヒトに入ると、病原体が生物のバイオフィルムとして、主に表面にコロニーを形成し、バイオフィルムは、多糖質、タンパク質および核酸の複雑なネットワークを介して宿主組織、医療機器および他の細菌へ付着した生物の薄膜として定義される。これらの細菌はまた、血流および粘膜分泌物などのいくつかの宿主組織環境において、プランクトン様（ブロス）培養物としても存在しうる。同様に、無数の非生物環境において、生物膜またはプランクトン様培養物のいずれかとして、これらの潜在的な病原体が存在しうる。
【０００３】
グリセロールモノラウレート（ＧＭＬ）は、以前より抗微生物、抗ウイルスおよび抗炎症特性を有することが示されている、天然に存在するグリセロールベースの化合物である。本発明は、様々な微生物感染症および一つまたは複数の微生物感染症に起因する病気の治療のための、ＧＭＬ組成物および方法を提供する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ヒトおよび他の脊椎動物の皮膚および粘膜表面への効果的なレベルでのＧＭＬなどの抗微生物化合物を塗布するための、簡単かつ安価で、良好な耐用性を示す方法および組成物が必要とされている。本発明は、この方法および他の必要性に対処する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一態様において、本発明は、グリセロールモノラウレート（ＧＭＬ）またはその誘導体および植物油を含む組成物に関する。一実施形態において、植物油は、パーム油、オリーブ油、コーン油、キャノーラ油、ココナッツ油、大豆油もしくは小麦油またはそれらの組み合わせである。さらなる実施形態において、植物油は、約１０％〜約９９％、約２０％〜約９０％、約３０％〜約８０％、または約４０％〜約７０％で、組成物中に存在する。一実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体および植物油を含む組成物は、さらに、例えば、ワセリンなどの、薬学的に許容される局所用担体を含む。一実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体は、約１０μｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬまたは約５００μｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの濃度で組成物中に存在する。別の実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体および植物油を含む組成物は、さらに、例えば、ヒドロキシプロピルセルロースもしくはヒドロキシエチルセルロースまたはそれらの組み合わせであるセルロース誘導体を含む。さらなる実施形態において、セルロース誘導体は、組成物中に最大１．２５重量％存在する。
【０００６】
別の態様において、本発明は、ＧＭＬまたはその誘導体および非水性ゲルを含む組成物に関する。一実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体および非水性ゲルを含む組成物は、約４．０〜約４．５のｐＨを有する。一実施形態において、非水性ゲルは、ポリエチレングリコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースまたはそれらの組み合わせを含む。さらなる実施形態において、ポリエチレングリコールは、組成物中、約２５重量％で存在する。一実施形態において、ヒドロキシプロピルセルロールおよびヒドロキシエチルセルロースは、それぞれ、約１．２５重量％の濃度で、組成物中に両方存在する。
【０００７】
一実施形態において、非水性ゲルを含むＧＭＬ組成物は、約３００〜約４０００の分子量範囲を有するポリエチレングリコールを含む。さらなる実施形態において、ポリエチレングリコールは、約４００〜約１０００の分子量を有する。
【０００８】
一実施形態において、非水性ゲルを含むＧＭＬ組成物は、さらに、例えばワセリンなどの局所用担体を含む。さらなる実施形態において、組成物は植物油を含む。
【０００９】
一実施形態において、本明細書に記載の組成物は、総組成物の約０．００１重量／体積％〜約１０重量／体積％の濃度で、ＧＭＬまたはその誘導体を含む。さらなる実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体は、組成物の約０．００５重量／体積％〜約５重量／体積％で存在する。さらなる実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体は、約０．０１〜約１％で存在する。さらに別の実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体は、組成物の約０．１重量／体積％〜約０．５重量／体積％で存在する。
【００１０】
一実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体は、約１０μｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で組成物中に存在する。さらなる実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体は、組成物に約５０μｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬを含む。さらなる実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体は、約１００μｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬを含む。さらに別の実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体は、約５００μｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬを含む。
【００１１】
一実施形態において、本明細書に記載のＧＭＬ組成物は、約６５重量％〜約８０重量％の濃度で、プロピレングリコールを含む。別の実施形態において、ポリエチレングリコールは、約２０重量％〜約３５重量％の濃度で組成物中に存在する。一実施形態において、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールの両方が、局所用組成物中に存在する。
【００１２】
一実施形態において、組成物はセルロース誘導体を含む。さらなる実施形態において、組成物は、ヒドロキシプロピルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースを含む。さらに別の実施形態において、セルロースは、約０．１重量％〜約５．０重量％の濃度で存在する。
【００１３】
一実施形態において、ＧＭＬ組成物は、水性溶媒を含む。さらなる実施形態において、水性溶媒は、水、生理食塩水、培地またはそれらの組み合わせである。
【００１４】
一実施形態において、薬学的に許容可能な局所用担体は、ワセリンである。
【００１５】
一実施形態において、本明細書に記載のＧＭＬ組成物のｐＨは、約４．０〜約５．５である。
【００１６】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の組成物は、一つまたは複数の促進剤を含む。さらなる実施形態において、促進剤は、有機酸、キレート剤、抗細菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤またはそれらの組み合わせである。さらなる実施形態において、促進剤はキレート剤である。さらに別の実施形態において、促進剤はＥＤＴＡである。
【００１７】
別の態様において、本明細書に記載のＧＭＬ組成物は、抗細菌、抗ウイルスおよび／または抗炎症活性を有する。例えば、一実施形態において、本明細書に記載の組成物は、例えば、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓまたはＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓなどの細菌、真菌またはウイルス感染の治療のために、ヒトおよび他の脊椎動物へ局所的に適用される。
【００１８】
したがって、一実施形態において、本発明は、それを必要とする被験者における微生物感染の治療方法を提供する。一実施形態において、その方法は、有効量の本明細書に記載のＧＭＬ組成物を、それを必要とする被験者へ局所的に適用することを含む。一実施形態において、組成物は、ＧＭＬまたはその誘導体、植物油、および薬学的に許容可能な局所用担体を含む。別の実施形態において、組成物は、ＧＭＬまたはその誘導体、非水性ゲルおよび薬学的に許容可能な局所用担体を含む。さらなる実施形態において、組成物は、ＧＭＬまたはその誘導体、植物油、非水性ゲル、および薬学的に許容可能な局所用担体を含む。
【００１９】
一実施形態において、本明細書に開示の組成物を、スポンジ、ワイプまたはスワブを用いて、局所的に塗布する。
【００２０】
一実施形態において、被験者は、細菌感染を有する。さらなる実施形態において、細菌感染は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓなど）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅもしくはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅなど）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなど）、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓなど）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓなど）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓもしくはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｈｌｅｉなど）またはＣｈｌａｍｙｄｉａ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓなど）である。
【００２１】
別の実施形態において、本明細書に記載のＧＭＬ組成物のうちの一つを用いて治療される被験者は、真菌感染を有する。さらなる実施形態において、真菌感染は、Ｃａｎｄｉｄａ（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓなど）、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ種、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ種、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ種またはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種である。
【００２２】
別の実施形態において、本発明の方法は、抗真菌剤、抗ウイルス剤および抗生物質から成る群から選択された第二の活性剤を投与することを含む。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
グリセロールモノラウレート（ＧＭＬ）またはその誘導体、植物油、および薬学的に許容可能な局所用担体を含む組成物。
（項目２）
非水性ゲルをさらに含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）
ＧＭＬ、非水性ゲルおよび薬学的に許容可能な局所用担体を含む組成物。
（項目４）
植物油をさらに含む、項目３に記載の組成物。
（項目５）
前記植物油が、パーム油、オリーブ油、コーン油、キャノーラ油、ココナッツ油、大豆油、小麦胚芽油、またはそれらの組み合わせである、項目１または４に記載の組成物。
（項目６）
前記非水性ゲルが、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、セルロース誘導体またはそれらの組み合わせからなる、項目２または３に記載の組成物。
（項目７）
前記セルロース誘導体が、ヒドロキシプロピルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースである、項目６に記載の組成物。
（項目８）
前記セルロース誘導体が、約０．１重量％〜約５．０重量％の濃度で存在する、項目６に記載の組成物。
（項目９）
プロピレングリコールが、約６５重量％〜約８０重量％の濃度で存在する、項目６に記載の組成物。
（項目１０）
ポリエチレングリコールが、約２０重量％〜約３５重量％の濃度で存在する、項目６に記載の組成物。
（項目１１）
ポリエチレングリコールが、約３００〜約６００の範囲の分子量である、項目６に記載の組成物。
（項目１２）
ＧＭＬが前記組成物の約０．００１重量／体積％〜約１０重量／体積％を含む、項目１または３に記載の組成物。
（項目１３）
ＧＭＬが約１０μｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、項目１または３に記載の組成物。
（項目１４）
水性溶媒をさらに含む、項目１または３に記載の組成物。
（項目１５）
前記水性溶媒が、水、生理食塩水、培地またはそれらの組み合わせである、項目１４に記載の組成物。
（項目１６）
前記組成物のｐＨが、約４．０〜約４．５である、項目１または３に記載の組成物。
（項目１７）
前記薬学的に許容可能な局所用担体がワセリンである、項目１または３に記載の組成物。
（項目１８）
促進剤をさらに含む、項目１または３に記載の組成物。
（項目１９）
前記促進剤が、有機酸、キレート剤、抗生物質、抗真菌剤、抗ウイルス剤またはそれらの組み合わせである、項目１８に記載の組成物。
（項目２０）
前記促進剤がＥＤＴＡである、項目１８に記載の組成物。
（項目２１）
それを必要とする被験者における微生物感染症またはウイルス感染症の治療方法であって、前記方法は、前記被験者へ、項目１〜４のいずれか一項に記載の有効量の組成物を局所的に投与することを含む、治療方法。
（項目２２）
抗生物質、抗真菌剤および抗ウイルス剤から成る群から選択される第二の活性剤を投与することをさらに含む、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記被験者が細菌感染症を有している、項目２１に記載の方法。
（項目２４）
前記細菌感染症が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ感染症である、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記細菌感染症が、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓである、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記細菌感染症が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ感染症である、項目２３に記載の方法。
（項目２７）
前記細菌感染症が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅである、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記細菌感染症が、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅである、項目２６に記載の方法。
（項目２９）
前記細菌感染症が、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ感染症である、項目２３に記載の方法。
（項目３０）
前記細菌感染症が、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓである、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記細菌感染症が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ感染症である、項目２３に記載の方法。
（項目３２）
前記細菌感染症が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉである、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記細菌感染症が、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ感染症である、項目２３に記載の方法。
（項目３４）
前記細菌感染症が、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓである、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記細菌感染症が、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染症である、項目２３に記載の方法。
（項目３６）
前記細菌感染症が、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓである、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記被験者がウイルス感染を有している、項目２１に記載の方法。
（項目３８）
前記ウイルス感染が、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）である、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記ウイルス感染が、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）である、項目３７に記載の方法。
（項目４０）
前記ウイルス感染が、インフルエンザである、項目３７に記載の方法。
（項目４１）
前記被験者が真菌感染症を有している、項目２１に記載の方法。
（項目４２）
前記真菌感染症が、Ｃａｎｄｉｄａ感染症である、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
前記真菌感染症が、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓである、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記被験者がヒトである、項目２１に記載の方法。
（項目４５）
前記方法が、前記組成物を局所的に塗布するために、スポンジ、ワイプまたはスワブを用いることをさらに含む、項目２１に記載の方法。
（項目４６）
前記組成物が、細菌の形質膜に干渉する、項目２３に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、いくつかの微生物の増殖へのオリーブ油中の様々な濃度のＧＭＬの影響を示すグラフである（ＣＦＵ／ｍＬとして測定）。バーは、左から以下の微生物を表す：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ＭＮＰＥ（メチシリン感受性株）、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＭＷ２（メチシリン耐性株）、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅおよびＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ。
【図２】図２は、いくつかの微生物の増殖へのパーム油中の様々な濃度のＧＭＬの影響を示すグラフである（ＣＦＵ／ｍＬとして測定）。バーは、左から以下の微生物を表す：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ＭＮＰＥ（メチシリン感受性株）、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＭＷ２（メチシリン耐性株）、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅおよびＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ。
【図３】図３は、いくつかの微生物の増殖へのコーン油中の様々な濃度のＧＭＬの影響を示すグラフである（ＣＦＵ／ｍＬとして測定）。バーは、左から以下の微生物を表す：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ＭＮＰＥ（メチシリン感受性株）、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＭＷ２（メチシリン耐性株），Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅおよびＧａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ。
【図４】図４は、６０００倍の倍率（左）または９０００倍の倍率（右）での、セルロースアセテート透析チューブ内の、タンポン繊維上における生物膜としてのＳ．ａｕｒｅｕｓ増殖を示す、走査型電子顕微鏡写真のセットである。
【図５】図５は、セルロースアセテート透析チューブ内の、タンポン繊維上で増殖させた生物膜中の、超抗原ＴＳＳＴ−１の蓄積を示すグラフである。
【図６】図６は、２４または４８時間、指示濃度のＧＭＬの存在または非存在下で、９６ウェルプラスチック製マイクロタイタープレート中で培養された、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＭＮ８（メチシリン感受性株、上部パネル）、ＭＮＷＨ（メチシリン耐性株、中央パネル）およびＭＷ２（メチシリン耐性株、下部パネル）から形成された生物膜からの、測定されたＣＦＵ／ｍＬを示す一連のグラフである。
【図７】図７は、２４または４８時間、指示濃度のＧＭＬの存在または非存在下で、９６ウェルプラスチック製マイクロタイタープレート中で培養された、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＭＮ８（メチシリン感受性株、上部パネル）、ＭＮＷＨ（メチシリン耐性株、中央パネル）およびＭＷ２（メチシリン耐性株、下部パネル）から形成された生物膜のクリスタルバイオレット染色後に、５９５ｎｍで測定された生物膜の吸光度を示す一連のグラフである。
【図８】図８は、２４または４８時間、指示濃度のＧＭＬの存在または非存在下で、９６ウェルプラスチック製マイクロタイタープレート中で培養された、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ生物膜からの、測定されたＣＦＵ／ｍＬ（上）およびクリスタルバイオレット染色後の５９５ｎｍでの吸光度（下）を示すグラフのセットである。
【図９】図９は、５００μｇ／ｍＬＧＭＬで処理したＳ．ａｕｒｅｕｓまたはＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ生物膜からの、測定されたＣＦＵ／ｍＬ（左）およびクリスタルバイオレット染色後の５９５ｎｍでの吸光度（右）を示すグラフのセットである。
【図１０】図１０は、１００μｇ／ｍＬのＧＭＬの存在または非存在下、増加する濃度のＥＤＴＡの存在下で、２４時間培養したＥ．ｃｏｌｉ培養物からのＣＦＵ／ｍＬを示すグラフである。
【図１１】図１１は、１００μｇ／ｍＬのＧＭＬのみ、増加する濃度のＥＤＴＡのみ、または１００μｇ／ｍＬのＧＭＬ存在下で増加する濃度のＥＤＴＡ中で、２４時間培養したＥ．ｃｏｌｉ培養物からのＣＦＵ／ｍＬを示すグラフである。
【図１２】図１２は、指示ｐＨおよび指示濃度のＧＭＬで培養したＳ．ａｕｒｅｕｓ培養物からのＣＦＵ／ｍＬを示すグラフである。
【図１３】図１３は、１μｇ／ｍＬのＧＭＬ存在下で、指示ｐＨで培養したＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ培養物からのＣＦＵ／ｍＬを示すグラフのセットである。
【図１４】図１４は、指示ｐＨおよび指示濃度のＧＭＬで培養したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ培養物からのＣＦＵ／ｍＬを示すグラフである。
【図１５】図１５は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓの増殖への、指示濃度のＧＭＬのみ（黒）、１０％の非水性ゲル担体中のＧＭＬ（白色）または２５％非水性ゲル担体中ＧＭＬ（灰色）の影響（ＣＦＵ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図１６】図１６は、４．０〜４．５の範囲のｐＨでの、ＧＭＬ中のテノホビル（１０ｍｇ／ｍＬ）の溶解度を示すグラフである。バーが存在しないのは、１０ｍｇ／ｍＬのテノホビルは組成物中に可溶性ではなかったことを示し、一方、バーが存在していることは、１０ｍｇ／ｍＬのテノホビルは組成物中に可溶性であったことを示す。
【図１７】図１７は、指示された形態のＧＭＬの、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓに対する殺菌活性を示すグラフのセットである。
【図１８】図１８は、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓの存在下での、ラウリン酸と比較したＧＭＬの殺菌活性（ＣＦＵ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図１９】図１９は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓの存在下での、ラウリン酸と比較したＧＭＬの殺菌活性（ＣＦＵ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図２０】図２０は、ＧＭＬまたはラウリン酸存在下での、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＴＳＳＴ−１）またはＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ（ＳＰＥＡ）からの超抗原の産生を示すグラフである。
【図２１】図２１は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓまたはＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓを用いて前処理したあとの、ＧＭＬの殺菌活性を示すグラフである。
【図２２】図２２は、非水性ゲル中で、５％ＧＭＬで処理した三人のヒト被験者の前鼻孔中のブドウ球菌数（ＣＦＵ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図２３】図２３は、ヒトの歯および歯茎線上の好気性細菌（ＣＦＵ／ｍＬ）を減少させるための、非水性ゲル中の５％ＧＭＬの能力を示すグラフである。
【図２４】図２４は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＭＮ８およびＰＢＳまたは５％ＧＭＬのいずれかで拭き取った後２４時間後のウサギの外科切開部位における黄色ブドウ球菌の存在を示すグラフである。
【図２５】図２５は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＭＮ８および次に、ＧＭＬゲル（左）またはＰＢＳ（右）で２４時間処理したニュージーランド白ウサギの外科的切開部位での炎症の存在を示す。矢印で示すように、炎症は、手術部位の濃灰色の着色として明らかである。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明の詳細な説明
本発明は、局所用ＧＭＬ組成物および、例えば局所的塗布によって、該組成物を用いた治療方法を提供する。本明細書に記載された組成物および方法は、一実施形態において、例えば、ヒトなどの被験者の皮膚または粘膜表面への、有効量のＧＭＬまたはその誘導体の送達を促進することにより、局所的に感染症を治療するために使用される。理論に束縛されることを望まないが、抗微生物化合物および抗ウイルス化合物の従来用いられていた局所的製剤に対して、組成物の刺激がより少ないという性質のため、本発明の組成物は、局所的な自己投与のために、より多くの患者の服薬遵守につながると考えられている。
【００２５】
本明細書で使用される用語「抗微生物性」は、微生物の成長または病原作用を、予防、阻害または阻止するのに有効であることを意味する。本明細書では「微生物」は、任意の細菌、ウイルスまたは真菌を意味するために用いられる。一実施形態において、本発明の製剤は、一つまたは複数の以下の微生物の成長を予防、阻害または阻止するために用いられる：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（例えば、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉｃａｅまたはＳまたはＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃａｅ（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）または単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）。
【００２６】
「抗細菌性」または「抗真菌性」は、本明細書において、細菌もしくは真菌の死、または、それぞれの細菌もしくは真菌の病理作用の減少もしくは阻害を誘導する、細菌もしくは真菌の増殖の阻害もしくは阻止、細菌性もしくは真菌性疾患の重症度または細菌性もしくは真菌性疾患を発症する可能性の低減を意味する。「殺菌性」は、「抗細菌性」と同義的に使用される。
【００２７】
本明細書で使用される「抗ウイルス性」は、ウイルス感染またはウイルス複製の阻害、ウイルスへ暴露された被験者のウイルス性疾患にかかる可能性の低減、またはウイルス性疾患の重症度の低減を示す。
【００２８】
本明細書で使用される用語「有効量」は、微生物を殺す、または、微生物の感染、増殖もしくは毒性を阻害することを含むがそれらに限定されない、有効なまたは所望の抗菌活性をもたらすのに十分な量を意味する。ＧＭＬの有効量は、約１０μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、または約１００ｍｇ／ｍＬである。
【００２９】
用語「治療する」、「治療」および「治療している」は、例えば、臨床結果などの、有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチを意味する。本発明の目的について、有益なまたは所望の結果は、微生物の増殖の阻害もしくは抑制または微生物の死滅、微生物が細胞または被験者へ感染する一つまたは複数のプロセスの阻害、微生物感染によって引き起こされる疾患または症状の阻害または改善、またはそれらの組み合わせを含みうる。また、用語「治療する」、「治療」または「治療している」は、感染症の予防も意味する。いくつかの実施形態において、本発明の製剤は、尿路感染症、膣微生物感染症、歯周病の原因となるものなどの口腔感染症、呼吸器感染症を含む術後感染症、傷もしくは外科切開部位感染症、または毒素性ショック症候群を含む毒素の産生を特徴とする感染症の治療のために用いられる。
【００３０】
本明細書で使用される「予防」は、感染症もしくは疾患の完全な防止、または、感染症もしくは疾患の症状の発症の防止、感染症もしくは疾患もしくはその症状の発症の遅延、または、その後に発症した感染症もしくは疾患もしくはその症状の重症度の減少を意味することができる。
【００３１】
本明細書で使用される用語「被験者」は、ヒトおよび他の動物を含む。被験者は、一実施形態において、ヒトである。
【００３２】
本明細書で使用される用語「局所的」は、任意の皮膚または粘膜表面への組成物の塗布を意味する。「皮膚表面」は、脊椎動物の身体の保護外皮を意味し、一般に、表皮細胞の層および真皮細胞の層を含む。本明細書で使用される「粘膜表面」は、粘液を分泌する器官または体腔の組織の内側を意味し、口腔、膣、直腸、胃腸および鼻腔表面を含むがそれらに限定されない。一実施形態において、本発明の製剤は、歯および歯茎、皮膚、鼻腔または膣領域に局所的に投与される。
【００３３】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容可能な局所用担体」は、過度の毒性、刺激またはアレルギー反応なしで、皮膚または粘膜表面へ塗布することができる、材料、希釈剤、ビヒクルを意味する。
【００３４】
「薬学的に許容可能な賦形剤」は、一般的に安全で、非毒性であり、生物学的にも他の点でも望ましくなくない医薬組成物を調製するのに有用である賦形剤を意味し、獣医学的使用およびヒトの医薬用途にも許容可能である賦形剤を含む。本出願で使用される「薬学的に許容可能な賦形剤」は、一つおよび複数のそのような賦形剤の両方を含む。
【００３５】
本明細書で使用する用語「植物油」は、室温において液体形態で存在する、植物または種子から抽出された物質を意味する。好適な植物油は、パーム油、オリーブ油、コーン油、キャノーラ油、ココナッツ油、大豆油、小麦胚芽油、ホホバ油、ヒマワリ油、ゴマ油、落花生油、綿実油、ベニバナ油、大豆油、菜種油、アーモンド油、ブナ実油、カシュー油、ヘーゼルナッツ油、マカダミア油、モンゴンゴ実油、ピーカン油、松の実油、ピスタチオ油、クルミ油、グレープフルーツシード油、レモン油、オレンジ油、ゴーヤ油、ユウガオ油、水牛ヒョウタン油、バターナッツスクワッシュシード油、エグシシード油、カボチャシード油、スイカシード油、アサイ油、ブラックシード油、ブラックカラントシード油、ボラジシード油、月見草油、亜麻仁油、ユーカリ油、アマランサス油、アプリコット油、アップルシード油、アルガン油、アボガド油、ババス油、コリアンダーシード油、グレープシード油、マスタード油、ケシ油、米ぬか油、ヒマシ油、またはそれらの混合物を含むがそれらに限定されない。混合物は、例えば、これらに限定されないが、オリーブ油と大豆油の組み合わせ、ココナッツ油と小麦胚芽油の組み合わせ、またはホホバ油、パーム油およびヒマシ油の組み合わせとすることができる。植物油の組み合わせは、二成分、三成分、四成分またはそれ以上の混合物とすることができる。
【００３６】
本明細書で使用される用語「促進剤」は、組成物へ添加される場合、組成物の抗菌特性を増強するまたは寄与するという効果を有する、化合物、物質、液体、粉末または混合物を意味する。促進剤は、それらには限定されないが、乳酸、アスコルビン酸、クエン酸、ギ酸、安息香酸、およびシュウ酸を含む有機酸でありうる。促進剤は、別の実施形態において、キレート剤であり、一実施形態において、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジメルカプロール、ジメルカプトコハク酸（ＤＭＳＡ）、２，３−ジメルカプト−１−プロパンスルホン酸（ＤＭＰＳ）、αリポ酸（ＡＬＡ）またはそれらの組み合わせから選択される。別の実施形態において、促進剤は、抗生物質、抗真菌剤、抗ウイルス剤またはそれらの組み合わせから選択される。本発明で使用するための抗生物質としては、例えば、アミノグリコシド、カルバセフェム、セファロスポリン、グリコペプチド、リンコサミド、リポペプチド、マクロライド、モノバクタム、ニトロフラン、ペニシリン、ポリペプチド、キノロン、スルホンアミドおよびテトラシクリンが挙げられる。抗真菌剤は、それらに限定されないが、アゾールクラス、ポリエンクラスまたはエキノキャンディンクラスのもの、ヌクレオシド類似体、アリルアミン、グリセオフルビン、トルナフテート、またはセレン化合物が挙げられる。抗ウイルス剤としては、例えば、それらに限定されないが、アシクロビル、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、アバカビル、エノホビル（ｅｎｏｆｏｖｉｒ）、ラミブジン、エムトリシタビン、ジドブジン、テノホビル、エファビレンツ、ラルテグラビル、エンフビルチド、マラビロク、リバビリン、アマンタジン、リマンタジン、インターフェロン、オセルタミビル、ザナミビルが挙げられる。
【００３７】
本明細書で使用される用語「セルロース誘導体」は、任意のセルロース系化合物を意味し、例えば、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたは酢酸セルロースを含みうる。
【００３８】
本明細書で使用される「生物膜」は、通常は細菌性であり、互いに接着し、表面上で増殖する微生物の集合体を意味する。生物膜中の微生物細胞は、典型的には、細胞外高分子物質として知られている細胞外マトリクスを産生する。多くの場合、その集合体自体のマトリクスおよび密度は、大幅に、生物膜中の細菌の抗生物質耐性を増加させる。生物膜は、尿路感染症、耳の感染症および歯茎炎などの歯の疾患に関与する可能性があり、また、人工器官、カテーテルまたは心臓弁などの移植されるデバイスの表面上に形成する可能性がある。
【００３９】
一態様において、本発明は、グリセロールモノラウレート（ＧＭＬ）またはその誘導体を含む局所用組成物を提供する。さらなる実施形態において、組成物は、植物油もしくは非水性ゲルまたはそれらの組み合わせを含む。非水性ゲルは、一実施形態において、セルロース誘導体を含む。本明細書に記載の局所用組成物は、一実施形態において、薬学的に許容可能な局所用担体を含む。
【００４０】
一実施形態において、本明細書に記載の組成物は、モノグリセリドＧＭＬを含む。ＧＭＬは、グリセロールの脂肪酸エステル、ラウリン酸の誘導体であり、化学式Ｃ１５Ｈ３０Ｏ４を有する。ＧＭＬはまた、グリセリルラウレートまたはモノラウリンとしても当該技術分野で知られている。ＧＭＬは、天然に、母乳および一部の植物中で発見され、食品および化粧品添加剤として使用されている。ＧＭＬおよび他のグリセリドは、米国食品医薬品局の一般に安全と認められる物質のデータベースに記載されている。ＧＭＬおよび関連化合物は、以前に、米国特許出願第１０／５７９，１０８号（２００４年１１月１０日に出願）および米国特許出願第１１／１９５，２３９号（２００５年８月２日に出願）中に開示されており、それらのそれぞれの開示は、本明細書中に、全ての目的のために参照により組み込まれる。
【００４１】
ＧＭＬは、ＲおよびＳ光学異性体の両方など複数の形態および１／３位および２位にラウリン酸を有する形態で合成することができる。本明細書で提供される組成物は、一実施形態において、ＧＭＬのＲ異性体を含む。別の実施形態において、本明細書に提供される組成物は、ＧＭＬのＳ異性体を含む。さらに別の実施形態において、異性体のラセミ混合物が、組成物中に提供される。
【００４２】
同様に、局所用組成物は、１／３位にラウリン酸を有するＧＭＬ、２位にラウリン酸を有するＧＭＬ、またはそれらの組み合わせを含みうる。それぞれの形態のＲおよびＳ異性体およびそれらのラセミ混合物は、本発明の使用に適している。
【００４３】
１／３位にラウリン酸を有するＧＭＬの化学構造は、以下に示す。
【化１】
0006353437.tif 000002
【００４４】
２位にラウリン酸を有するＧＭＬの化学構造は、以下に示す。
【化２】
0006353437.tif 000003
【００４５】
別の実施形態において、局所用組成物は、例えば、式Ｉ−ＶＩの一つから選択された化合物などの、ＧＭＬ誘導体を含む。そのような化合物の例としては、例示の目的でありそれらに限定されるものではないが、グリセロールモノカプリレート、グリセロールモノカプレート、グリセロールモノミリスタート、グリセロールモノパルミテート、およびドデシルグリセロールが挙げられる。
【００４６】
【化３】
0006353437.tif 000004
式中、Ｘのそれぞれは、独立して、−Ｏ−または−Ｓ−であり、
ｎは、５〜２０の整数（両端を含む）である。
【００４７】
別の実施形態において、局所用組成物は、少なくとも一つのＧＭＬの誘導体を含み、少なくとも一つのその誘導体は、式Ｖまたは式ＶＩのいずれかの化合物である。そのような化合物の例は、それらに限定されるものではないが、グリセロールジラウレート、グリセロールジカプリレート、グリセロールジミリスタート、グリセロールトリラウレート、およびグリセロールトリパルミテートを含む。
【００４８】
【化４】
0006353437.tif 000005
式中、Ｘのそれぞれは、独立して、−Ｏ−または−Ｓ−であり、
ｎのそれぞれは、独立して、５〜２０の整数（両端を含む）である。
【００４９】
一実施形態において、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物は、本発明の局所用組成物中に存在し、少なくとも一つの−Ｘ−は−Ｓ−である。一実施形態において、−Ｘ−のの一つは、−Ｓ−であり、−Ｘ−の残りは、−Ｏ−である。
【００５０】
一実施形態において、式ＶまたはＶＩの化合物は、本発明の局所用組成物中に存在し、ｎのそれぞれは１０であり、少なくとも一つの−Ｘ−は−Ｏ−である。
【００５１】
本明細書に提供される局所用組成物は、一実施形態において、ＧＭＬおよびＧＭＬ誘導体を含む。例えば、一実施形態において、本明細書に提供される局所用組成物は、ＧＭＬおよび式ＶＩの化合物を含む。さらなる実施形態において、ｎのそれぞれは１０であり、少なくとも一つの−Ｘ−は−Ｏ−である。
【００５２】
一実施形態において、局所用組成物は、ＧＭＬまたはその誘導体を、組成物の約０．００１重量／体積％〜約１０重量／体積％含む。さらなる実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体は、組成物の約０．００５重量／体積％〜約５重量／体積％である。さらに別の実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体は、組成物の約０．０１重量／体積％〜約１．０重量／体積％である。さらに別の実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体は、組成物の約０．０５重量／体積％〜約０．５重量／体積％である。
【００５３】
別の実施形態において、局所用組成物は、約１０μｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度でＧＭＬまたはその誘導体を含む。さらなる実施形態において、局所用組成物は、約５０μｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの濃度でＧＭＬまたはその誘導体を含む。さらなる実施形態において、局所用組成物は、約１００μｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬの濃度でＧＭＬまたはその誘導体を含む。さらに別の実施形態において、局所用組成物は、約５００μｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの濃度でＧＭＬまたはその誘導体を含む。
【００５４】
一実施形態において、局所用組成物は、約１０μｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬ、約５００μｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬまたは約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で、ＧＭＬまたはその誘導体を含む。
【００５５】
組成物中のＧＭＬまたはその誘導体の量は、治療される適応症／疾患および治療される被験者の特性に応じて調整することができる。組成物中のＧＭＬの量は、例えば、感染症または病気の性質、投与部位、被験者の病歴、被験者の体重、年齢、性別および治療される表面積、ならびに、被験者が他の薬を投与されているかどうかなどに依存して変化しうる。
【００５６】
上述したように、一態様において、本発明は、ＧＭＬまたはその誘導体を含む局所用組成物に関する。一実施形態において、局所用組成物は、少なくとも一つのグリコールを含む。例えば、一実施形態において、局所用組成物は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールまたはそれらの組み合わせを含む。一実施形態において、ポリエチレングリコールは、約３００〜約１０，０００の分子量（ＭＷ）範囲を有する。さらなる実施形態において、ポリエチレングリコールは、約３００〜約１，０００の分子量を有する。さらに別の実施形態において、ポリエチレングリコールは、約４００の分子量を有する。
【００５７】
一実施形態において、ポリエチレングリコールは、局所用組成物中に存在する。さらなる実施形態において、ポリエチレングリコールは、約４００、約５００または約１，０００の分子量を有する。一実施形態において、ポリエチレングリコールは、約１５重量％〜約５０重量％、約２０重量％〜約４０重量％、または約２５重量％〜約３５重量％、例えば、約１５重量％、約２０重量％、約２５重量％、約３０重量％、約３５重量％、約４０重量％、約４５重量％、または約５０重量％の濃度で局所用組成物中に存在する。さらなる実施形態において、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールの両方が、局所用組成物中に存在する。さらなる実施形態において、プロピレングリコールは、約７０％〜約８０％の濃度で存在し、ポリエチレングリコールは、約２０％〜約３０％の濃度で存在する。さらに別の実施形態において、ポリエチレングリコールは、ポリエチレングリコール４００である。
【００５８】
別の実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体を含む局所用組成物を提供する。さらなる実施形態において、プロピレングリコールが組成物中に存在する。さらに別の実施形態において、プロピレングリコールが、約６０％〜約８０％、例えば、約６０％、約６５％、約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％または約８０％の濃度で、組成物中に存在する。
【００５９】
別の実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体を含む局所用組成物を提供する。一実施形態において、局所用組成物は、少なくとも一つのセルロース誘導体を含む。さらなる実施形態において、組成物は、一つのセルロース誘導体または二つのセルロース誘導体を含む。一実施形態において、セルロース誘導体は、ヒドロキシプロピルセルロースである。別の実施形態において、セルロース誘導体は、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはヒドロキシメチルセルロースである。さらに別の実施形態において、組成物は、ヒドロキシエチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロースの組み合わせを含む。一実施形態において、セルロース誘導体は、約０．１重量％〜約５．０重量％の濃度で存在する。さらなる実施形態において、組成物中、複数のセルロース誘導体が同じ濃度で存在する。さらなる実施形態において、二つのセルロース誘導体が存在し、それぞれが、約１．２５重量％の濃度で存在する。セルロース誘導体としては、例えば、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、または酢酸セルロースが挙げられる。
【００６０】
一実施形態において、本明細書に記載の局所用組成物は、ＧＭＬまたはその誘導体、少なくとも一つのセルロース誘導体、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールを含む。
【００６１】
別の実施形態において、ＧＭＬまたはその誘導体を含む局所用組成物を提供する。さらなる実施形態において、組成物は、少なくとも一つの植物油、例えば、少なくとも一つの上記の植物油（例えば、パーム油、オリーブ油、コーン油など）を含む。一実施形態において、植物油は、約０．１重量％〜約１０重量％の濃度で、組成物中に存在する。さらなる実施形態において、植物油は、約１重量％〜約８重量％の濃度で、組成物中に存在する。さらなる実施形態において、植物油は、約１重量％〜約６重量％の濃度で、組成物中に存在する。さらなる実施形態において、植物油は、約１重量％〜約４重量％の濃度で、組成物中に存在する。一実施形態において、植物油は、約０．１重量％、約０．５重量％、約１．０重量％、約１．２５重量％、約１．５重量％、約１．７５重量％または約２．０重量％の濃度で組成物中に存在する。
【００６２】
一実施形態において、本明細書に記載の局所用組成物は、植物油および少なくとも一つのセルロース誘導体を含む。例えば、一実施形態において、局所用組成物は、ヒドロキシプロピルセルロースおよび植物油、またはヒドロキシエチルセルロースおよび植物油、またはヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよび植物油の組み合わせを含む。一実施形態において、セルロース誘導体および植物油（例えば、パーム油またはコーン油）は、それぞれ同じ濃度（重量パーセント）で存在する。さらなる実施形態において、セルロース誘導体および植物油は、それぞれ約１重量％〜約５重量％で、組成物中に存在する。さらに別の実施形態において、セルロース誘導体は、ヒドロキシプロピルセルロースおよびヒドロキシエチルセルロースの組み合わせであり、それぞれは、約１．２５重量％で組成物中に存在している。一実施形態において、組成物は、植物油および二つのセルロース誘導体を含む。さらなる実施形態において、二つのセルロース誘導体は、ヒドロキシプロピルセルロースおよびヒドロキシエチルセルロースであり、組成物中のセルロース誘導体の総濃度は、約１．２５重量％である。セルロース誘導体としては、例えば、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたは酢酸セルロースが挙げられる。
【００６３】
いくつかの実施形態において、本明細書において提供される局所用組成物は、一つまたは複数の促進剤を含む。さらなる実施形態において、促進剤は、有機酸、キレート剤、抗細菌剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤またはそれらの組み合わせである。さらなる実施形態において、促進剤はキレート剤である。さらに別の実施形態において、促進剤はＥＤＴＡである。
【００６４】
促進剤は、一実施形態において、ＥＤＴＡである。さらなる実施形態において、本明細書において提供されるＧＭＬ組成物は、約０．００００５Ｍ、約０．０００５Ｍ、約０．００５または約０．０５Ｍの濃度でＥＤＴＡを含む。別の実施形態において、キレート剤は、約０．００００５Ｍ〜約０．０５Ｍ、約０．０００５Ｍ〜約０．００５Ｍ、または約０．００５Ｍ〜約０．０５Ｍの濃度で、組成物中に存在する。
【００６５】
一実施形態において、局所用組成物は、植物油および促進剤の両方、例えばパーム油およびＥＤＴＡを含む。別の実施形態において、促進剤は有機酸であり、植物油を含む製剤中に存在する。一実施形態において、本明細書において提供される局所用組成物は、促進剤および非水性ゲル、例えば、セルロース誘導体を含むゲルを含む。別の実施形態において、局所用組成物は、ＧＭＬまたはその誘導体、植物油、非水性ゲル（例えば、一つまたは複数のセルロース誘導体を含むゲルなど）および促進剤を含む。
【００６６】
一実施形態において、組成物は、少なくとも一つの薬学的に許容可能な賦形剤を含む。薬学的に許容可能な賦形剤は、当業者によく知られており、緩衝剤（例えば、リン酸緩衝液およびクエン酸緩衝液）、アミノ酸、アルコールのほか、血清アルブミンなどのタンパク質、パラベン（例えば、メチルパラベン）またはマンニトールを含みうる。
【００６７】
一実施形態において、組成物のｐＨは約３．５〜約７．０である。さらなる実施形態において、組成物のｐＨは約４．０〜約６．０である。さらに別の実施形態において、組成物のｐＨは、約４．０〜約４．５である。
【００６８】
一実施形態において、本明細書に提供される組成物は、ＧＭＬまたはその誘導体および薬学的に許容可能な局所用担体を含む。一実施形態において、薬学的に許容可能な局所用担体は、例えば、パラフィンワックスまたはワセリンなどの炭化水素の混合である。ワセリンは、炭化水素の水不溶性、疎水性、半固体混合物のいずれかである。薬学的に許容可能な局所用担体を、本明細書に記載の任意の製剤へ加えることができる。
【００６９】
別の実施形態において、組成物は水性溶媒を含む。水性溶媒を含む組成物は、薬学的に許容可能な局所用担体を含んでもよいし、または含まなくてもよい。一実施形態において、水性溶媒が存在し、水、生理食塩水、培養培地（例えば、微生物培養培地もしくは細胞培養培地）またはそれらの組み合わせである。さらなる実施形態において、水性溶媒および薬学的に許容可能な局所用担体の両方が、局所用組成物中に存在する。さらに別の実施形態において、局所用組成物は、少なくとも一つのセルロース誘導体を含む。
【００７０】
一実施形態において、組成物は、水性溶媒としてトッドヒューイット培地などの細菌培養培地を含む。一実施形態において、水性溶媒は、約１重量％〜約２５重量％の濃度で存在する。さらなる実施形態において、水性溶媒は、組成物の約２重量％〜５重量％である。
【００７１】
一実施形態において、組成物は液体溶液である。別の実施形態において、組成物はゲルである。別の実施形態において、組成物は、固体、半固体、発泡体、ワックス、クリームまたはローションである。
【００７２】
一実施形態において、組成物は、表１に記載の製剤のうちの一つを含む。植物油は、一実施形態において、パーム油、オリーブ油またはコーン植物油である。表１は、本発明で使用することができる、組成物の成分および濃度の単なる例示である。
【表１−１】
0006353437.tif 000006
【表１−２】
0006353437.tif 000007
【００７３】
一態様において、本発明は、それを必要とする被験者における微生物感染症の治療方法を提供する。微生物感染症は、一実施形態において、細菌感染症、ウイルス感染症、真菌感染症またはそれらの組み合わせである。
【００７４】
理論に束縛されることを望まないが、本明細書に記載のＧＭＬ局所用組成物は、現在承認されている抗微生物組成物よりも刺激が少なく、したがって、現在当該技術分野で使用されている他の抗微生物組成物と比較して、より良好な患者の服薬遵守率をもたらす。
【００７５】
一実施形態において、方法は、本明細書に記載のＧＭＬまたはその誘導体を含む局所用組成物を被験者へ投与することを含む。一実施形態において、方法は、ＧＭＬまたはその誘導体（例えば、式Ｉ〜ＶＩの一つの化合物）、植物油、および薬学的に許容可能な局所用担体を含む、有効量の組成物を被験者へ局所的に投与することを含む。別の実施形態において、方法は、ＧＭＬ、非水性ゲル、および薬学的に許容可能な局所用担体を含む有効量の組成物を局所的に投与することを含む。さらに別の実施形態において、方法は、被験者へ、表１に記載の組成物の一つを投与することを含む。
【００７６】
一実施形態において、微生物感染症を治療する方法は、有効量の本明細書に記載のＧＭＬ組成物の一つまたは複数を、被験者の少なくとも一つの皮膚または粘膜表面へ塗布することを含む。
【００７７】
いくつかの実施形態において、組成物を、ワイプ、スポンジ、スワブまたは他の材料へ塗布または含浸させ、次に、それぞれの材料を用いて被験者の皮膚または粘膜表面へ塗布する。本明細書で使用される用語「スワブ」は、液体、ゲル、ワックス、クリームもしくはローションを皮膚もしくは粘膜表面へ塗布する、または皮膚もしくは粘膜表面に液体、ゲル、ワックス、クリームもしくはローションを塗布する行為、または皮膚もしくは粘膜の表面から液体、ゲル、ワックス、クリーム、ローションまたは流動体を収集する行為に適した材料を意味する。いくつかの実施形態において、材料は、例えば、スティック、ワイヤ、ロッド、またはアプリケータなどのホルダーへ取り付けられている。さらなる実施形態において、ホルダーへ取り付けられている材料は、その一つの端または両端において取り付けられている。いくつかの実施形態において、ワイプ、スポンジ、スワブまたは他の材料は、事前に組成物を装填されているまたは組成物と一緒に包装されている。
【００７８】
特定の細菌は、ＧＭＬの抗菌作用に対して耐性であることが示されている。そのような細菌は、例えば、大腸菌および緑膿菌などの腸内細菌科の種などの、密なＬＰＳ層を有するものを含む。さらに、リパーゼまたは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓによって産生される、エステラーゼＧＥＨなどの他の加水分解酵素の産生により、ＧＭＬの抗菌活性は阻害される可能性がある。
【００７９】
理論に束縛されることは望まないが、それらには限定されないが、直接の微生物毒性、脊椎動物細胞への感染性微生物の侵入の阻害、微生物の増殖の阻害、毒素などの病原性因子の産生もしくは活性の阻害、脊椎動物細胞の安定化、またはそうでなければ、感染プロセスを向上させる炎症または免疫刺激性媒介物質の誘導の阻害を含む、いくつかのメカニズムのうちの一つまたは複数により、ＧＭＬは微生物感染を阻害すると考えられている。
【００８０】
環境変化に対応および適応し、病原性因子を産生するために、細菌は、二成分シグナル伝達系を使用する。理論に束縛されることは望まないが、ＧＭＬは、細菌の原形質膜との相互作用により、直接的または間接的に、ＧＭＬは、細菌のシグナル伝達を妨害すると考えられている。一実施形態において、ＧＭＬの殺菌作用は、細菌の原形質膜での相互作用により少なくとも部分的に媒介される。さらなる実施形態において、ＧＭＬは、細菌の原形質膜と関連して感知することができるが、細胞膜に関連して感知することができない。
【００８１】
一実施形態において、細菌膜の直接的にＧＭＬ媒介する妨害は、膜内のシグナル伝達タンパク質の局在との干渉、またはシグナル伝達タンパク質に結合するリガンドとの干渉を含む。一実施形態において、ＧＭＬは、二成分シグナル伝達系に間接的な影響を有し、該影響は、シグナル伝達機能を実行する膜貫通タンパク質の能力との干渉する膜構造への修飾、細菌の原形質膜電位の損失、膜を横断するｐＨ勾配の変化から選択される。
【００８２】
一実施形態において、上述した間接的な効果は、例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａおよび特定の乳酸菌株によって産生されるものなどの、一つまたは複数のテトラミン酸により媒介される。これらの生物によって作られるテトラミン酸は、２，４−ピロリジンジオン環および１２個の炭素側鎖を含む。それらの特性は、広いスペクトルの抗菌効果および抗炎症活性を含む。理論に束縛されることを望まないが、テトラミン酸およびＧＭＬ間の機械的類似性が、なぜＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａおよび乳酸桿菌がＧＭＬ抗菌活性に対して非常に耐性があるのかを説明しうる。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａについて、テトラミン酸は、ホモセリンラクトンクオラムセンシング系のために重要である。例えば、ｐＨ７．０で、高濃度のＧＭＬ存在下（＞２０００μｇ／ｍＬ）で増殖させたＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａは、顔料を含む多数の病原性因子の上方調節された産生を有すると考えられ、クオラムセンシング系の活性化に関連した効果と一致する。
【００８３】
Ｓ．ａｕｒｅｕｓ中で見つけられる例示的な二成分系としては、ａｇｒ制御系およびＷａｌｋ／Ｒが挙げられる。ＧＭＬは、ａｇｒ制御系に影響し、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ中のいくつかの病原性因子を制御することが示されている。Ｗａｌｋ／Ｒは、微生物の生存に必須である。理論に束縛されることは望まないが、Ｗａｌｋ／Ｒなどの微生物の生存能力にとって重要である一つまたは複数の二成分系は、例えば、直接的に、高用量でＧＭＬにより阻害される可能性があり、その結果、微生物の迅速な死がもたらされる。
【００８４】
細菌の細胞膜へのＧＭＬの推定上の影響と同様に、ＧＭＬは、ウイルス脂質エンベロープを破壊することによって、特性のウイルスを不活性化することが示されている［Ｔｈｏｒｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ７２４；４６５］。
【００８５】
一実施形態において、本明細書に記載の方法は、膣微生物感染症の患者を治療するために使用される。さらなる実施形態において、膣微生物感染症は、外陰膣カンジダ症（ＶＶＣ）または細菌性膣炎（ＢＶ）である。ＢＶの成人女性は、骨盤内炎症性疾患、子宮内膜炎、膣カフ蜂巣炎の危険にさらされており、ＢＶの妊婦は、低出生体重、早期陣痛、早産、および絨毛羊膜炎のさらなる危険にさらされている。ＶＶＣまたはＢＶの患者において、通常は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ種によって支配されている膣内細菌嚢は、他の細菌および／または真菌種が支配するように変更される。Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓおよび他の嫌気性細菌は、一般にＢＶに関連があり、Ｃａｎｄｉｄａ種、通常、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓは、ＶＶＣに関連がある。したがって、一実施形態において、本明細書に記載の方法は、嫌気性細菌感染症を有する患者を治療するために使用される。さらなる実施形態において、感染症は、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓまたはＣａｎｄｉｄａ感染症（例えば、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）である。
【００８６】
本明細書で提供されるＧＭＬ組成物は、一実施形態において、毒素の産生を阻害する方法において使用される。例えば、一実施形態において、細菌毒素を阻害し、かつ／または細菌毒素に関連した病気を減らすために、方法が提供される。さらなる実施形態において、この方法は、本明細書に記載の一つまたは複数の局所用組成物をタンポンまたは創傷被覆材へ塗布することを含み、これはその後被験者により使用される、または被験者へ塗布される。さらなる実施形態において、本明細書に記載の方法により治療される細菌性疾患は、毒素性ショック症候群（ＴＳＳ）であり、これは、ＴＳＳ毒素−１（ＴＳＳＴ−１）または、よりまれに、Ｓ．ａｕｒｅｕｓによるエンテロトキシンＡ、ＢおよびＣなどの他の毒素の産生により引き起こされる。ＴＳＳの症状および後遺症は、急性発熱、発疹、低血圧、倦怠感、多臓器不全、昏睡、皮膚剥離または死亡を含みうる。ＴＳＳは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染症の任意の個体、特に皮膚創傷の個体において発生する可能性があるが、ＴＳＳのほとんどの症例は、月経中のタンポンの使用に関連している。
【００８７】
尿路感染症（ＵＴＩ）は、成人女性および高齢者において特に一般的である。尿路感染症は、一般的に下部尿路（即ち、尿道および膀胱）で始まり、一般的に、症状の発症後、抗生物質で治療される。治療せずに放置した場合、ＵＴＩは腎臓へ波及し、恒久的な腎障害をもたらす可能性がある。ＵＴＩは、典型的には、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉにより引き起こされるが、また、他のＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、他のグラム陽性細菌、または、まれにウイルスもしくは真菌種によっても引き起こされる可能性がある。一実施形態において、本明細書に記載の方法は、尿路感染症を有する被験者を治療するために用いられる。この方法は、一実施形態において、本明細書に記載の一つまたは複数の組成物を、患者の皮膚または粘膜表面へ局所的に塗布することを含む。さらなる実施形態において、患者は、組成物の局所塗布する前に、長期間の抗生物質治療を受けている。
【００８８】
宿主被検体における感染を確立するために、ＨＩＶおよびＳＩＶなどのウイルスは、その後ウイルスによって感染する、ＣＤ４＋Ｔ細胞の感染部位への漸増をもたらす初期の炎症反応を必要とすると考えられている。一実施形態において、本明細書に記載の方法は、ＨＩＶおよび／またはＳＩＶ感染症の治療のために用いられる。該方法は、一実施形態において、患者の皮膚または粘膜表面へ、本明細書に記載の一つまたは複数の組成物を局所的に塗布することを含む。さらなる実施形態において、組成物は膣内投与される。
【００８９】
毎年米国では、手術後のＳ．ａｕｒｅｕｓ感染症の５０万以上の事例があると推定されており、そのような感染症の８０％は、患者の前鼻孔で発見されているのと同じ細菌に起因することが示されている。さらに、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓによる上部気道感染症に関連した、連鎖球菌咽頭炎および連鎖球菌毒素性ショック症候群の大流行、例えば、Ｍ３菌株の激増があった。上部気道の他の部分の可能な除菌および手術部位での病原体を殺す外科用スクラブの使用を組み合わせる場合、これらの事実は、鼻の除菌が、術後の感染症および他の呼吸器感染の防止および治療に有効でありうることを示唆している。いくつかの実施形態において、本明細書で提供されるＧＭＬ組成物は、連鎖球菌性咽頭炎、連鎖球菌毒素性ショック症候群、または外科手術後のＳ．ａｕｒｅｕｓ感染症を低減するために、気道、他の粘膜表面または外科切開部位をコロニー分離（ｄｅｃｏｌｏｎｉｚｅ）させるための方法において用いられる。いくつかの実施形態において、方法は、被験者の前鼻孔に本明細書で提供される一つまたは複数の組成物を塗布することを含む。例えば、一実施形態において、１０％非水性ゲル中の１ｍｇ／ｍＬＧＭＬを、スワブへ塗布し、該スワブを各鼻孔の周りで鼻骨まで３回回転させる。
【００９０】
口腔連鎖球菌は、歯周病および虫歯に、ならびに、感受性個体における感染性心内膜炎に関与していることが報告されている。虫歯、歯周病および感染性心内膜炎につながる連鎖球菌感染症を予防または治療するために、本明細書で提供されるＧＭＬ組成物は、いくつかの実施形態で使用されている。一実施形態において、該方法は、本明細書で提供される一つまたは複数の組成物を、被験者の歯および歯肉線へ塗布することを含む。例えば、一実施形態において、５％非水性ゲル中のＧＭＬ１ｍｇ／ｍＬを、スワブを用いて、被験者の歯および歯肉線へ塗布する。
【００９１】
いくつかの実施形態において、被験者は細菌感染症を有する。本明細書で提供される局所用組成物を用いて治療可能な細菌感染症は、それらに限定されないが、以下の細菌により引き起こされる感染症を含む：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ（例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、群Ａ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（例えば、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、群Ｂ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（例えば、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉｃａｅ）、群Ｃ、ＦおよびＧ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Pｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｅ  ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ  ｆｒａｇｉｌｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｂｏｒｄａｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃａｅ（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）Ｐ．ａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａおよびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ（例えば、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓおよびＭ．ｐｈｌｅｉ）。
【００９２】
さらに、本明細書に記載の局所用組成物は、一実施形態において、表２にリストされた一つまたは複数の細菌により引き起こされる一つまたは複数の細菌感染を治療するために使用される。表２は、最適な増殖条件下で増殖された様々な細菌に対するＧＭＬの抗菌活性を試験する実験の結果を示す。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａと以前は名付けられており、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに関連しているＢｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａは、５００μｇ／ｍＬの濃度で、ＧＭＬによって殺傷された。マイコバクテリア種は、典型的には、大量の複合体脂肪酸を産生する。しかしながら、これらの生物は、５０μｇ／ｍＬ以上の濃度でＧＭＬにより殺傷された。グラム陽性菌の増殖を阻害することに加えて、試験したそのような生物（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ、群Ｃ、ＦおよびＧ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉおよびＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）の全てについて、増殖の阻害から独立して、ＧＭＬは外毒素の産生を阻害した。ＧＭＬによる殺傷を最も受けやすい生物は、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａおよびＣａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｊｅｊｕｎｉであり、それらの全ては、ＧＭＬ（１μｇ／ｍＬ）により殺傷された。
【表２−１】
0006353437.tif 000008
【表２−２】
0006353437.tif 000009
【００９３】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の局所用組成物の一つまたは複数を用いて治療される被験者は、ウイルス感染症を有する。さらなる実施形態において、ウイルス感染症は、以下のウイルスまたはウイルス分類の一つまたは複数により引き起こされる：インフルエンザウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス２）、レンチウイルス（例えば、ヒト免疫不全ウイルス）。
【００９４】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の局所用組成物の一つまたは複数を用いて治療される被験者は、真菌感染症を有する。さらなる実施形態において、真菌感染症は、以下の生物種の一つまたは複数により引き起こされる：Ｃａｎｄｉｄａ種（例えば、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ種、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ種、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ  ｆｌｏｃｃｏｓｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ種、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ。
【００９５】
細菌、ウイルスまたは真菌感染症を識別し、診断する方法は、一般的に当業者に周知である。本明細書に開示の製剤の、感染症の治療における有用性を評価するために、当業者に公知の方法を用いることができる。例えば、ＢＶ感染は、治療前、および治療後に、膣細胞の顕微鏡検査により評価することができる。
【００９６】
一実施形態において、方法を、一つまたは複数の微生物を含む生物膜を除去または死滅させるために用いる。生物膜は、尿路感染症、耳の感染症、および歯茎炎などの歯の疾患に関与する可能性があり、また、人工器官、カテーテルまたは心臓弁など、移植デバイスの表面上に形成する可能性がある。一実施形態において、方法は、直接的に生物膜へ塗布することにより、局所用組成物を投与することを含む。
【００９７】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ＧＭＬまたはＧＭＬ誘導体とともに、第二の活性剤を投与することを含む。追加の活性剤は、本明細書に記載の組成物中に存在しうる、または別々に投与されうる。一実施形態において、一つまたは複数の追加の活性剤を、局所用ＧＭＬ組成物の前、または後に投与する。例えば、二つの活性剤を、局所的に連続的に投与、または連続的に異なる投与経路により投与することができる。
【００９８】
一実施形態において、追加の活性剤（複数可）を、本発明の組成物の投与の前、間、後に投与する。別の実施形態において、追加の活性剤（複数可）を、組成物と同じ経路または異なる経路により投与する。例えば、追加の活性剤（複数可）を、一実施形態において、以下の投与経路の一つにより投与する：局所、鼻腔内、皮内、静脈内、筋肉内、経口、膣、直腸、耳、眼、皮下。追加の活性剤の用量は、例えば、感染症または疾患の性質、投与部位、被験者の体重、年齢、性別および表面積、併用薬、および医学的判断に依存する。
【００９９】
追加の活性剤は、例えば、抗生物質、抗ウイルス剤および抗真菌剤を含む。抗生物質は、それらに限定されないが、アミノグリコシド、カルバセフェム、セファロスポリン、グリコペプチド、リンコサミド、リポペプチド、マクロライド、モノバクタム、ニトロフラン、ペニシリン、ポリペプチド、キノロン、スルホンアミドおよびテトラシクリンを含む。抗真菌剤は、それらに限定されないが、アゾールクラス、ポリエンクラスまたはエキノカニンクラスのもの、ヌクレオシド類似体、アリルアミン、グリセオフルビン、トルナフテートまたはセレン化合物を含む。抗ウイルス剤は、それらに限定されないが、例えば、アシクロビル、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、アバカビル、エノホビル、ラミブジン、エムトリシタビン、ジドブジン、テノホビル、エファビレンツ、ラルテグラビル、エンフビリジド（ｅｎｆｕｖｉｒｄｉｄｅ）、マラビロク、リバビリン、アマンタジン、リマンタジン、インターフェロン、オセルタミビル、ザナミビルを含む。
【実施例】
【０１００】
本発明を、以下の実施例を参照することによりさらに説明する。しかしながら、これらの実施例は、上述した実施形態と同様に、例示であって、決して本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではないことに注意されたい。
【０１０１】
実施例１：植物油中のＧＭＬの抗微生物効果
いくつかの細菌または真菌性微生物の増殖を阻害するオリーブ油、パーム油、またはコーン油中の様々な濃度のＧＭＬの能力を評価するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験を行った。
【０１０２】
オリーブ油中（図１）、パーム油中（図２）またはコーン油中（図３）のＧＭＬを、ＧＭＬを溶融するために３７℃に予熱し、次に、１０μｇ／ｍＬ〜５０００μｇ／ｍＬの範囲の濃度で、丸底管中の１ｍＬトッドヒューイット（Ｄｉｆｃｏ、デトロイトＭＩ）ブロスへ加えた。以下の微生物を、指示濃度で管へ加えた：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ  ＭＮＰＥ（メチシリン感受性、１×１０７／ｍＬ）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓＭＷ２（メチシリン耐性、１×１０７／ｍＬ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（１×１０７／ｍＬ）、Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ（１×１０７／ｍＬ）またはＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ（１×１０６／ｍＬ）
【０１０３】
管を、標準的な大気中で、１８時間、毎分２００回転（ＲＰＭ）で、３７℃で振とうした。菌数測定は、コロニー形成単位／ｍＬ（ＣＦＵ／ｍＬ）を決定するために行った。
【０１０４】
１０μｇ／ｍＬ程度のわずかなＧＭＬの存在下では、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓＣＦＵ／ｍＬは、試験した三つの全ての植物油において減少し、試験した全ての三つの植物油において、濃度２０μｇ／ｍＬ以上のＧＭＬでは、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓおよびＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅの両方の増殖が完全にまたはほぼ完全に阻害された。さらに、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓおよびＳ．ａｕｒｅｕｓの両方の株の増殖は、１００μｇ／ｍＬＧＭＬで阻害され、試験した全ての三つの植物油において、５００μｇ／ｍＬおよび５０００μｇ／ｍＬＧＭＬで、ＧＭＬにより完全に阻害された。このようにして、ＧＭＬは、オリーブ油、パーム油またはコーン油と混合した場合に、効果的な抗微生物性であった。
【０１０５】
実施例２：生物膜として増殖する微生物へのＧＭＬの影響
生物膜へのＧＭＬの影響を評価するために、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ生物膜を増殖した。Ｓ．ａｕｒｅｕｓ１２８（毒素性ショック症候群毒素−１（ＴＳＳＴ−１）を発現する生物）をその一端で縛られた予め湿らせた透析管の内側に１０７／０．１ｍＬでインキュベートした。タンポンをその後透析管へ挿入し、その管を０．８％寒天含有トッドヒューイットブロス（Ｄｉｆｃｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、デトロイト、ミシガン州）に含浸した。増殖微生物の唯一の栄養源が、透析管を通って吸収された培地であるように、透析管の開口端を、寒天表面上に残した。図４は、６０００倍（Ａ）および９０００倍（Ｂ）の倍率での、１８時間インキュベーション後の、タンポン繊維およびセルロースアセテート透析管上で増殖した生物膜を示す。
【０１０６】
タンポン嚢を固化した寒天中でインキュベートした。４、８、１２および１６時間の時点で、流体増加分を決定するために、タンポン嚢を寒天から除去し、切り開き、秤量した。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を添加することにより、ＴＳＳＴ−１を溶出した。最初に４倍量の無水エタノールを添加することにより溶出された流体を濃縮し、その後蒸留水へ再可溶化し、ウェスタンイムノブロットにより分析することにより、ＴＳＳ−１の蓄積量を定量した。図５は、時間の経過に伴う、タンポン中のＴＳＳＴ−１の存在量の増加を示している。ＴＳＳＴ−１は、５％ＧＭＬの存在下では検出されなかった（データは示さず）。
【０１０７】
生物膜の形成へのＧＭＬの効果を直接的に評価するために、９６ウェルプラスチックマイクロタイタープレートに、約１０６／ｍＬのＳ．ａｕｒｅｕｓの三つの株（ＭＮ８、メチシリン感受性株、ＭＮＷＨ、メチシリン耐性株、またはＭＷ２、メチシリン耐性株）のうちの一つまたは、非型付けＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅで接種した。ウェルは、２４時間および４８時間、３７℃で固定的に培養した（図６〜８）。対照として、各微生物に対して三つのウェルを１セットとして、ウェルをピペット操作により上下させて３回攪拌した。ＧＭＬの殺菌活性は、上清中のＣＦＵ／ｍＬを測定することにより決定した。上清を除去した後、未結合細胞を除去するためにウェルをＰＢＳで３回洗浄し、次に、３０分間クリスタルバイオレットで処理した。未結合のクリスタルバイオレットを除去するために、ウェルを再びＰＢＳで３回洗浄した。最終的に、生物膜関連のクリスタルバイオレットを可溶化するために、ウェルをエタノールで処理した。生物膜形成を測定するために、５９５ｎｍにおける吸光度を、ＥＬＩＳＡリーダーにより測定した。
【０１０８】
図６、７および８は、研究結果を提供する。三つ全てのＳ．ａｕｒｅｕｓ株の増殖は、ＣＦＵ／ｍＬごとに測定されるように、２４時間および４８時間の両方の時点で、５００μｇ／ｍＬでのＧＭＬにより完全に阻害された（図６、破線は出発接種物量を示す、＊出発接種物と比較して、平均ＣＦＵ／ｍＬは大幅に低減した、ｐ＜０．００１）。対照的に、細菌の増殖を阻害するのに必要なものよりも、１０倍低いＧＭＬ濃度で、マイクロタイタープレートのウェル中の保持された生物膜材料の低減されたクリスタルバイオレット染色により測定されるように、生物膜形成は有意に阻害された（図７、＃ＧＭＬを含まないウェルと比較して、５９５ｎｍにおける平均吸光度の有意な減少、ｐ＜０．０１）。
【０１０９】
同様に、５０μｇ／ｍＬの濃度で生物膜との関連で、ＧＭＬは非型付けＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅに対して殺菌性であった（図８、上部、破線は出発接種物量を示す。＊出発接種物と比較した平均ＣＦＵ／ｍＬの有意な減少、ｐ＜０．００１）。さらに、１．０μｇ／ｍＬの低い濃度で、２４および４８時間で測定されるように、ＧＭＬはＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ生物膜形成を阻害した（図８、底部、＃ＧＭＬを含まない対照と比較して、５９５ｎｍで、平均吸光度の有意な減少、ｐ＜０．０１）。
【０１１０】
事前に形成された生物膜へのＧＭＬの影響を評価するために、インキュベーションを通じてＧＭＬで処理せず、生物膜がウェル内に形成されたことを示す、４８時間で５９５ｎｍでの高い吸光度を有するサイドバイサイドウェルを、３７℃で６０分間５００μｇ／ｍＬのＧＭＬで処理した。上清を除去し、殺菌活性は、ＣＦＵ／ｍＬで測定することにより決定した（図９、左、＃ＧＭＬを含まない対照と比較して、５９５ｎｍでの平均吸光度の有意な減少、ｐ＜０．０１）。上述したように、ウェルを次に洗浄し、クリスタルバイオレットで染色した。
【０１１１】
図９は、試験結果を提供する。４８時間後、５００μｇ／ｍＬのＧＭＬは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓおよびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの両方を死滅させた（図９、左）。同様に、５００μｇ／ｍＬのＧＭＬは、ＧＭＬ処理したウェル中のクリスタルバイオレット染色の損失により示されるように、ウェルへ付着した生物膜材料をほとんど完全に除去した（図９、右）。
【０１１２】
実施例３：Ｅ．ｃｏｌｉの増殖へのＧＭＬおよびＥＤＴＡの相乗効果
以前の試験では、Ｅ．ｃｏｌｉなどの腸内細菌種だけではなく、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａは、ＧＭＬの抗菌効果に耐性であることを示し、ＬＰＳ高密度層がこれらの生物においてＧＭＬから保護的であることを示唆していた。ＧＭＬ組成物へのＥＤＴＡの追加が、ＧＭＬ組成物の抗微生物特性を促進するかどうかを判断するために、追加の試験を行った。
【０１１３】
Ｅ．ｃｏｌｉ（ワトソン株）を、トッドヒューイット培地中で、１．２×１０７／ｍＬに調整した。１００μｇ／ｍＬのＧＭＬの存在下または非存在下で、０．５Ｍ〜０．００００５Ｍの範囲の様々な濃度のＥＤＴＡをウェルに加えた。培養物を、２４時間、振とうしながら（２００ＲＰＭ）インキュベートし、その時、サンプルを菌数測定のために取り出した。
【０１１４】
試験結果を図１０に示す。ＥＤＴＡ単独では、用量依存的に、Ｅ．ｃｏｌｉの増殖をやや阻害した。１００μｇ／ｍＬＧＭＬとＥＤＴＡとの組み合わせは、増加した抗細菌活性を示した（＊ｐ＜０．００１；破線は、出発接種物量を示す）。
【０１１５】
ＧＭＬおよびＥＤＴＡの組み合わせた効果をさらに評価するために、実験を上述したように行い、ＥＤＴＡ単独またはＧＭＬおよびＥＤＴＡの組み合わせのＥ．ｃｏｌｉの増殖への比較効果を、ＧＭＬ単独との直接的比較により評価した。結果を図１１に示す。上述の実験におけるように、ＥＤＴＡ単独は、高濃度である程度のＥ．ｃｏｌｉの増殖を阻害した一方、１００μｇ／ｍＬのＧＭＬと、ＥＤＴＡとの組み合わせは、用量依存的に増加した抗細菌活性を示した。ＧＭＬ単独では、Ｅ．ｃｏｌｉに対するいかなる細菌活性も示さなかった。したがって、ＧＭＬおよびＥＤＴＡは、相乗的な抗細菌効果を発揮した。
【０１１６】
実施例４：病原微生物に対するＧＭＬ活性へのｐＨの影響
ＥＤＴＡの存在は、Ｅ．ｃｏｌｉがＧＭＬの影響を受けやすくするため、Ｅ．ｃｏｌｉまたはＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの表面のプロトン化は、二価カチオンの反発によりＧＭＬ活性を増加させ、それによってＬＰＳの完全性を崩壊させうることが仮定された。
【０１１７】
様々なｐＨレベルの存在下で、Ｅ．ｃｏｌｉの増殖へのＧＭＬの効果を決定するために実験を行った。Ｅ．ｃｏｌｉ（ワトソン株）を、トッドヒューイット培地中で増殖し、１０７ＣＦＵ／ｍＬに調整した。酢酸緩衝液を用いて、培養物のｐＨを、５．０、６．０または７．０へ調節した。ＧＭＬを、５０００、５０または０．１μｇ／ｍＬの濃度で培養物へ加え、培養物を振とうしながら（２００ＲＰＭ）３７℃でインキュベートした。サンプルを、２４時間後ＣＦＵ／ｍＬを数えるために取り出した。
【０１１８】
試験結果を図１２に示す。５０００μｇ／ｍＬもの多くのＧＭＬを培養物へ加えた場合でさえ、ｐＨ７．０でＥ．ｃｏｌｉは、ＧＭＬに対して感受性ではなかった。しかしながら、これらの培養物中において、５０μｇ／ｍＬＧＭＬが殺菌性である、ｐＨ６．０では、Ｅ．ｃｏｌｉはＧＭＬに対して非常に感受性が高く、０．１μｇ／ｍＬＧＭＬのみが殺菌性である、ｐＨ５．０では、ＧＭＬに対してさらにより影響を受けやすかった。各単位のｐＨの低下により、Ｅ．ｃｏｌｉはＧＭＬに対して５００倍感受性が高くなると考えられる（＊ｐ＜０．００１；破線は、出発接種物量を示す）。
【０１１９】
同様の実験を、様々なｐＨで、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの増殖へのＧＭＬの影響を評価するために行った。ｐＨ７．０では、１μｇ／ｍＬのＧＭＬは、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの増殖への影響はなかった（図１３）。しかしながら、ｐＨ６．０では、１μｇ／ｍＬのＧＭＬは、４、８、２４時間後に、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの増殖を完全に抑止した（図１３）。
【０１２０】
濃度の範囲およびｐＨレベルの範囲の存在下での、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの増殖へのＧＭＬの影響もまた、測定した。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（ＰＡ０１株）を、５．７×１０６／ｍＬで、トッドヒューイットブロス中に接種した。ＧＭＬを、１０μｇ／ｍＬ〜５０００μｇ／ｍＬの濃度範囲で、培養物へ加え、ｐＨを５．０、６．０または７．０へ調整した。２４時間のインキュベーション後に、ＣＦＵ／ｍＬを測定した。試験の結果を図１４に示す。ｐＨ６．０または７．０において、ＧＭＬの濃度は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの増殖を阻害しなかった。ｐＨ５．０、ＧＭＬ非存在下で、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ増殖を幾分か阻害した。しかしながら、ｐＨ５．０における培養物へのＧＭＬの添加は、用量依存的に、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの増殖をさらに阻害した（＊ｐ＜０．００１；破線は、出発接種物量を指す）。
【０１２１】
試験の結果は、ＧＭＬおよび低下させたｐＨは、相乗的に病原性微生物の増殖を阻害したことを示した。
【０１２２】
実施例５：ＧＭＬの抗微生物活性への非水性ゲルの影響
プロピレングリコール（７３．５５重量％）、ポリエチレングリコール４００（２５重量％）およびヒドロキシプロピルセルロース（Ｇａｌｌｉｐｏｔ、セントポール、ミネソタ州；１．２５重量％）からなる非水性ゲルを、ＧＭＬの存在下または非存在下で、６５℃へ加熱した。成分を可溶化した後、ゲルを、１０％または２５％まで、トッドヒューイットブロスで希釈した。ＧＭＬ単独も、追加の対照として機能するように、トッドヒューイットブロスで同等に希釈した。様々な濃度の非水性ゲル中で１μｇ／ｍＬ〜５０００μｇ／ｍＬの範囲の濃度でのＧＭＬの存在下、または同じ濃度でＧＭＬ単独の存在下で、振とうしながら（２００ＲＰＭ）、３７℃で、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（株ＭＮ８、毒素ショック症候群株）をインキュベートした。２４時間後、菌数（ＣＦＵ／ｍＬ）を測定した。
【０１２３】
図１５は、試験の結果を示す。１００μｇ／ｍＬ以上の濃度で、ＧＭＬはＳ．ａｕｒｅｕｓの増殖を阻害した。１０％および２０％の非水性（ＮＡ）ゲル濃度およびＧＭＬ濃度範囲は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓの増殖への用量依存的影響を示した。２５％非水性ゲル中のＧＭＬは、ＧＭＬ単独よりも、約５００倍高い活性を有し、１０％非水性送達ビヒクル中のＧＭＬは、ＧＭＬ単独よりも、約１０倍高い活性を有していた（図１５；＊ｐ＜０．００１；破線は、出発接種物量を示す）。したがって、非水性ゲルおよびＧＭＬの組み合わせは、強力な抗微生物効果を有していた。
【０１２４】
実施例６：ＧＭＬゲル中のテノホビルの溶解度
プロピレングリコール（７３．５５重量％）、ポリエチレングリコール４００（２５重量％）、およびヒドロキシプロピルセルロース（１．２５重量％）からなる非水性ゲルを、４．０〜４．５のｐＨの範囲で調製した。抗ＨＩＶ薬であるテノホビルを、該薬が組成物中において可溶性であるかどうかを判断するために、１０ｍｇ／ｍＬの濃度でゲルへ加えた。
【０１２５】
試験の結果を図１６に示す。テノホビル（１０ｍｇ／ｍＬ）は、ｐＨ４．０〜４．３では非水性ゲル中で可溶性ではなかったが、ｐＨ４．４または４．５では、非水性ゲル中で可溶性であった。
【０１２６】
実施例７：様々な形態のＧＭＬの有効性
ＲまたはＳ光学異性体、およびグリセロールの１／３位または２位において結合されたラウリン酸エステルを含むＧＭＬを含む、複数の形態のＧＭＬが存在する。光学異性体間の電位差を試験するために、市販のＧＭＬのＲ形態を、ＲおよびＳ形態のＧＭＬラセミ混合物と比較した。異なるグリセロール位置へ結合したラウリン酸を含むＧＭＬ間の電位差について試験するために、市販の精製した２位のラウリン酸ＧＭＬを、２位および１／３位ラウリン酸ＧＭＬの混合物と比較した。ＧＭＬのこれらの形態の抗菌効果を、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ（株５９４）において評価した。
【０１２７】
試験結果を図１７に示す。Ｒ形態ＧＭＬならびに、ＲよびＳ形態ＧＭＬの混合物は、同じ抗菌活性を有していた（左パネル；破線は出発接種物量を示す）。しかしながら、２位にラウリン酸を含むＧＭＬ形態は、ＧＭＬ形態の混合物よりも２倍活性が高かった（右パネル；＊ｐ＜０．００１；破線は、出発接種物量を示す）。したがって、結果は、ＧＭＬ活性は、キラル性には依存しないが、ラウリン酸の位置にはある程度依存することを示した。
【０１２８】
実施例８：ラウリン酸に対するＧＭＬの抗菌活性
ラウリン酸（ＧＭＬの主要な切断産物）と比較した、ＧＭＬの殺菌活性および外毒素の産生を阻害する能力を測定した。グリセロールエステルヒドロラーゼ（ＧＥＨ）を生成する生物であるＳ．ａｕｒｅｕｓ、およびＧＥＨを生成しないＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓを試験した。
【０１２９】
ＧＭＬおよびラウリン酸の殺菌活性についての試験結果を、図１８および１９に示す。ＧＭＬおよびラウリン酸を、３７℃で２４時間、約５×１０６ＣＦＵ／ｍＬＳ．ａｕｒｅｕｓ  ＭＮ８（図１８）またはＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ（図１９）を用いて、指示濃度で三通りのインキュベートを行った。Ｓ．ａｕｒｅｕｓについて、プレートを振とうしながら（２００ＲＰＭ）インキュベートした。Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓについて、プレートを、７％ＣＯ２の存在下で、静止的にインキュベートした。菌数測定を、ＣＦＵ／ｍＬを測定するために使用した。殺菌活性は、少なくとも３ログＣＦＵを減少させるために必要な、ＧＭＬまたはラウリン酸の最小濃度として定義された。ＧＭＬはラウリン酸よりも２００倍低い濃度で、Ｓ．ａｕｒｅｕｓについて殺菌性であった（図１８；＊ｐ＜０．００１；破線は出発接種物量を示す）。ＧＭＬは、ラウリン酸よりも５００倍低い濃度で、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓについて殺菌性であった（図１９；＊ｐ＜０．００１、破線は出発接種物量を示す）。さらに、二つの生物に対するＧＭＬの殺菌活性を比較すると、Ｓ．ａｕｒｅｕｓについてよりも、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓについて、ＧＭＬは５倍殺菌活性が高かった。
【０１３０】
超抗原の産生を阻害するための、ＧＭＬおよびラウリン酸の相対的な能力を測定するために、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＭＮ８およびＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓを、ＧＭＬまたはラウリン酸の存在下で、８時間培養した。Ｓ．ａｕｒｅｕｓＭＮ８によるＴＳＳＴ−１産生および、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓによる連鎖球菌発熱性外毒素Ａ（ＳＰＥＡ）産生を、ウェスタン免疫ブロット分析により定量した。
【０１３１】
超抗原産生についての試験結果を、図２０に示す。ＧＭＬおよびラウリン酸の両方は、増殖阻害のなかった濃度で、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＭＮ８およびＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓによる外毒素産生を有意に阻害した。しかしながら、外毒素産生の阻害のために必要とされるＧＭＬ濃度は、外毒素産生の阻害のために必要とされるラウリン酸の濃度と比較して、両方の生物について低かった。ＧＭＬは、０．２μｇ／ｍＬの濃度でＳ．ａｕｒｅｕｓＴＳＳＴ−１の産生を阻害し、０．０２５μｇ／ｍＬの濃度で、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅ  ＳＰＥＡの産生を阻害した一方、ラウリン酸は、２．５μｇ／ｍＬの濃度で、ＴＳＳＴ−１およびＳＰＥ−Ａの両方の産生を阻害した。（＊ｐ＜０．０１）。
【０１３２】
ＧＭＬ活性について、Ｓ．ａｕｒｅｕｓおよびＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓの間の違いをさらに評価するために、Ｓ．ａｕｒｅｕｓＭＮ８またはＳ．ｐｙｏｇｅｎｅｓからの０．１ｍＬの静止相の滅菌培養流動体を用いて、トッドヒューイットブロス１０００μｇ／０．４ｍＬの濃度で一晩インキュベートすることにより、ＧＭＬを前処理した。
【０１３３】
試験の結果を図２１に示す。上述したアッセイで２４時間測定すると、Ｓ．ａｕｒｅｕｓを用いたプレインキュベーションにより、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ  ＭＮ８に対するＧＭＬ抗菌活性を排除した。しかしながら、Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓを用いたプレインキュベーションは、ＧＭＬの抗菌活性へ影響しなかった（＊ｐ＜０．００１；破線は、出発接種物量を示す）。これらの結果は、ＧＥＨなどのＳ．ａｕｒｅｕｓにより産生されたエステラーゼが、ＧＭＬ活性を阻害することを示唆した。
【０１３４】
実施例９：Ｓ．ＡｕｒｅｕｓにおけるＧＭＬに対する耐性の発現
Ｓ．ａｕｒｅｕｓがＧＭＬに対して耐性を発現したかどうかを判断するために、一年間、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ培養物を準最適濃度のＧＭＬ（５０μｇ／ｍＬ）を用いて処理した。毎週、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＭＮ８を、５０μｇ／ｍＬのＧＭＬを含むトッドヒューイット寒天プレートへ移し、４８時間培養した。この準最適ＧＭＬ濃度は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓが４８時間増殖することを可能にする。増殖した生物は、５０μｇ／ｍＬのＧＭＬを含む新しいプレートへ毎週移し、またはＳ．ａｕｒｅｕｓが通常増殖することができない濃度である、１００μｇ／ｍＬのＧＭＬを含むプレートへ移し、２４時間増殖した。さらに、５０μｇ／ｍＬのＧＭＬプレートを、ＧＭＬを結晶化させるために、毎週４℃に置いた。個別のＳ．ａｕｒｅｕｓコロニーの周りの非結晶化領域についてプレートを分析し、これは、ＧＭＬのＧＥＨ切断の指標である。
【０１３５】
Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、多くの抗生物質への耐性の急速な発現を示すという事実にもかかわらず、１００μｇ／ｍＬＧＭＬプレート上で増殖することができたＳ．ａｕｒｅｕｓはなかった。したがって、Ｓ．ａｕｒｅｕｓは、一年間の期間にわたって、ＧＭＬに対する耐性を発現しなかった。さらに、一年の経過の間に、上方制御されたＧＨＥ産生を有する変異体は同定されなかった（データ示さず）。
【０１３６】
実施例１０：脱コロニー化試験
非水性ゲル中で形成された、ＧＭＬ（５％重量／体積）の、ヒトの気道のコロニーを分離させるため、および実験したウサギ中の汚染された外科切開部位のコロニーを分離させるための能力を評価するために、試験を行った。
【０１３７】
ＧＭＬが気道のコロニーを分離させることができるかどうかを評価するために、三人のヒト被験者は、前鼻孔にスワブを受けた。スワブを、事前に０．１ｍＬのＰＢＳの取り込みをもたらすことが示されているリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に浸漬し、次に、各被験者の前鼻孔を拭き取るために使用した。三回、鼻骨まで、スワブを各鼻孔の周りを回転させた。スワブからの微生物のコロニー形成単位は、血液寒天培地およびマンニトール塩寒天上における菌数により測定した。前鼻孔は、次に、ＧＭＬゲルに一回浸漬したスワブを用いて、同じ方法で処理した。最大２４時間までの指定された期間で、各被験者の前鼻孔を拭き取り、スワブをＳ．ａｕｒｅｕｓおよびコアグラーゼ陰性ブドウ球菌について培養した。
【０１３８】
この試験から得られたデータを、図２２に示す。三名の被験者中に存在するＣＦＵの高い変動性のために、統計を行う前に、データをログへ変換した。三人の被験者の左右の前鼻孔は、それぞれ、ＧＭＬ処理の前に、平均１．６または１．５のログＣＦＵ／ｍＬのＳ．ａｕｒｅｕｓを含んでいた。ＧＭＬ処理は、２４時間後を含む処理後の全ての試験された時点において、両方の鼻孔中のＳ．ａｕｒｅｕｓカウントを０ＣＦＵ／ｍＬまで有意に低減した（スチューデントｔ検定分析により、ｐ＜０．０５）。三名の被験者の左右の前鼻孔は、それぞれ、ＧＭＬ処理の前に、平均３．９および３．８のコアグラーゼ陰性ブドウ球菌のログＣＦＵ／ｍＬを含んでいた。ＧＭＬ処理は、２４時間後を含む処理後の４時間後以降の試験した時点で、両方の鼻孔中のコアグラーゼ陰性ブドウ球菌数を有意に低減した（ｐ＜０．０５）。
【０１３９】
一人の被験者について、Ｓ．ａｕｒｅｕｓおよびコアグラーゼ陰性ブドウ球菌の低減されたＣＦＵの持続性を、３日間試験した。Ｓ．ａｕｒｅｕｓカウントは、試験した期間の三日間全体の間、０のままであった。コアグラーゼ陰性ブドウ球菌のＣＦＵも、期間全体で低いままであった（最初は、右および左の鼻孔中に、それぞれ５６０および８８０ＣＦＵ／ｍＬ存在した；３日後、右および左の鼻孔中で、それぞれ８および０ＣＦＵ／ｍＬのコアグラーゼ陰性ブドウ球菌が検出された；データは示さず）。
【０１４０】
次に、５％ＧＭＬゲルは、口腔好気性細菌の歯をコロニー分離することができるかどうかを評価するために、試験を行った。ヒト被験者を、口の左側の歯および歯茎線全体をＰＢＳ−飽和させたスワブで消毒し、血液寒天プレート上でその後増殖させた総細菌のＣＦＵ／ｍＬについて試験した。次に、口の右側の歯および歯茎線全体をゲルで拭き取ることにより、ＧＭＬゲルで同じ個人を消毒した。歯および歯茎線の全表面を被覆するために、十分なゲルを使用した。処理から３０分後、被験者は、右側をＰＢＳ飽和させたスワブで拭き取り、総ＣＦＵ／ｍＬを測定した。
【０１４１】
単純に最初のスワブによる細菌の除去により、得られたデータは差が認められなかったことを確認するために、処理前後のスワブについて、歯および歯茎線の異なる側を使用した。歯および歯茎線の両側の細菌数は、ほぼ等しくなることが推定され、試験前のスワブは、このような場合であることを確認した。
【０１４２】
試験結果を図２３に示す。被験者間のＣＦＵ／ｍＬにおける高い変動性を考慮するために、データをログ変換した。処理前のスワブおよび処理後のスワブの間のＣＦＵにおいて、５ログ超の減少が存在し、ＧＭＬが歯に付着している主に口腔内連鎖球菌である細菌を殺したことを示している。ＧＭＬは菌数を減らすのに有効であったので、データはまた、ＧＭＬゲルが、歯の上に存在することが予想される生物膜中の細菌を除去および／または殺すのに有効であることも示唆していた。データは、スチューデントｔ検定分析では、非常に有意に（ｐ＜０．００１）異なっていた。
【０１４３】
最後の試験において、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ株ＭＮ８（１×１０１０ＣＦＵ）を、群当たり三羽のウサギの外科的切開部位を被覆するために使用した。外科的切開部位は、４つの絹縫合糸（Ｅｔｈｉｃｏｎ、コーネリア、ジョージア州）を用いて閉じられた４ｃｍの皮下切開であった。閉じた後、ＧＭＬ５％重量／体積非水性ゲルを、三匹の動物の切開部位上につけ、ＰＢＳを対照動物の切開部位へつけた。表面の均一な被覆を提供するために、十分なＧＭＬゲルをつけた。２４時間後、感染（切開部位における赤みによって決定）、およびＰＢＳ飽和させたスワブで切開部位を拭くことにより得られた総ＣＦＵ／ｍＬについてウサギを試験した。
【０１４４】
試験の結果を図２４および２５に示す。ＰＢＳを用いて拭いたウサギは、２４時間経過後、平均８．８ログＣＦＵ／ｍＬのＳ．ａｕｒｅｕｓを有しており（図２４）、手術部位で明らかな炎症を有していた（図２５）。対照的に、ＧＭＬで処理したウサギは、２４時間経過後に全くＣＦＵは検出されず（図２４；ログ変換データのスチューデントｔ検定分析によりｐ＜＜０．００１）、手術部位での感染はほとんどなかった（図２５）。
【０１４５】
まとめると、本試験で示されたデータは、５％のＧＭＬ非水性ゲルは、潜在的病原体によるヒトの鼻孔および口腔ならびにウサギの外科的切開部位のコロニー形成を減少させるために、効果的に使用できることを示した。
【０１４６】
実施例１１：膣感染におけるＧＭＬの臨床効果
以下の予言的実施例は、ＢＶまたはＶＶＣの治療のための、ＧＭＬ、植物油、および薬学的に許容される局所用担体を含む組成物の相対的有効性が決定される提案された臨床試験を提供する。この予言的実施例は、本発明の原理を例示することを意図する。
【０１４７】
試験設計は、６０名の被験者、治療群当たり２０名の被験者の単一施設二重盲検試験、である。被験者は膣感染症の種類（ＢＶ、ＶＶＣまたは両方）および年齢に基づいて、層別化する。
【０１４８】
試験被験者は、インフォームドコンセントに署名した、ＢＶまたはＶＶＣの（スクリーニング来院時に行った婦人科の試験により決定される）１８〜５０歳の女性である。妊娠中の女性、月経中の女性、およびそれまでの４週間以内に、全身感染症を有していた、または、膣抗微生物薬、抗炎症薬または免疫抑制薬を使用していた女性は除外される。
【０１４９】
試験のエンドポイントおよび治療の評価：膣スワブを、ベースライン来院時に収集する。被験者は、２日間、１２時間ごとに以下の：オリーブ油中、０％（ビヒクル対照）、０．５％、または５％ＧＭＬのいずれか一つを全部で四回投与で膣に自己投与する。膣スワブを試験薬またはビヒクル対照を最終投与してから１２および４８時間後に収集する。コロニー形成単位（ＣＦＵ）は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓおよびＣａｎｄｉｄａについて、ベースラインおよび治療後のフォローアップの膣スワブ上で測定する。被験者はその後３ヶ月間、臨床所見と日和見感染を含む、全ての有害事象について記録される。
【０１５０】
提案した試験の結果は、ＢＶまたはＶＶＣの治療のための臨床プロトコルの開発に使用されるものとする。
【０１５１】
実施例１２：尿路感染症におけるＧＭＬの臨床使用
以下の予言的実施例は、本明細書に開示の製剤が示されている状況を説明することを意図している。
【０１５２】
尿路感染症の危険性のある被験者（例えば、女性や高齢者）は、スポンジへ５０μｇ／ｍＬＧＭＬを含む組成物を塗布し、次に、尿路口または穴の領域へ該スポンジを適用することができる。組成物は、尿路感染症を予防するために、一日一回適用してもよい。組成物は、ＥＤＴＡおよび／または非水性ゲルなどの促進剤を追加的に含むことができる。
【０１５３】
実施例１３：蜂巣炎におけるＧＭＬの臨床使用
以下の予言的実施例は、本明細書に開示の製剤が示されている状況を説明することを意図している。
【０１５４】
蜂巣炎と診断された被験者は、感染症が解決されるまで、薬学的に許容される局所用担体中５μｇ／ｍＬＧＭＬおよび２５％非水性ゲルを含む組成物を、一日に二回、皮膚の感染部位へ、局所的に自己投与することができる。医学的に示されている場合、患者はまた、抗菌剤を投与されうる。
【０１５５】
本出願を通じて引用されている、全ての文書、特許、特許出願、出版物、製品説明およびプロトコルは、全ての目的について、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５６】
本明細書に示され、説明されている実施形態は、本発明を製造および使用させるために発明者へ知られている最良の方法を当業者へ教示することのみを意図している。上記の教示に照らして当業者に理解されるように、本発明から逸脱することなく、本発明の上記の実施形態の修正および変形が可能である。したがって、特許請求の範囲およびその均等物の範囲内で、本発明を具体的に説明した以外の方法で実施することができる。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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