(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子増幅反応を行なう増幅反応部を持った反応容器を装着する装着部と、
増幅反応部内の増幅反応液に遺伝子増幅反応をさせるために、前記装着部に装着された反応容器の増幅反応部と接触して増幅反応部の温度を制御する増幅部と、
増幅反応液を増幅反応部へ移送し、遺伝子増幅反応終了後に増幅反応終了液を増幅反応部から回収する分注装置とを備え、
前記増幅部は増幅反応部を挟む上部と下部の２つの温度調節ユニットから構成され、前記上部温度調節ユニットは下降して増幅反応部と接触するように支持され、前記下部温度調節ユニットは上昇して増幅反応部と接触するように、かつ該下部温度調節ユニットを上昇させる駆動機構に対して回動可能に支持されている遺伝子解析装置。
【請求項２】
前記装着部は水平方向に移動して反応容器を遺伝子増幅反応を行なう位置に位置決めするように支持され、
前記上部温度調節ユニットは前記装着部とは別の部材に上下動可能に支持されており、
前記下部温度調節ユニットは前記装着部に上下動可能に支持されている請求項１に記載の遺伝子解析装置。
【請求項３】
前記上部温度調節ユニットを下降させる機構と前記下部温度調節ユニットを上昇させる機構は連動して同一駆動源により駆動されるように支持されている請求項２に記載の遺伝子解析装置。
【請求項４】
前記増幅反応部は平板上の基板に形成された反応室となる流路と、反応室への液を出し入れするための少なくとも２つのポートを備えたものである請求項１から３のいずれかに記載の遺伝子解析装置。
【請求項５】
前記増幅反応部は平板上の基板に形成された反応室となる凹形状のウエルと、そのウエルの凹部に入り込んでその一部の空間を占める凸部をもち、ウエルに対して着脱可能な蓋とからなるものである請求項１から３のいずれかに記載の遺伝子解析装置。
【請求項６】
前記反応容器は、前記基板に、凹部として形成され不揮発性液体を収容しフイルムで封止された不揮発性液体収容部をさらに備えたものである請求項１から５のいずれかに記載の遺伝子解析装置。
【請求項７】
前記反応容器は、前記基板に、凹部として形成され複数の多型部位それぞれをはさんで結合する複数のプライマーを含む遺伝子増幅試薬を収容しフイルムで封止された遺伝子増幅試薬収容部をさらに備えたものである請求項１から６のいずれかに記載の遺伝子解析装置。
【請求項８】
前記反応容器は、前記基板に、凹部として形成されタイピング試薬を収容しフイルムで封止されたタイピング試薬収容部と、複数の多型部位のそれぞれに対応して蛍光を発するプローブを個別に保持した複数のプローブ配置部とを備えた遺伝子多型診断用反応容器である請求項１から７のいずれかに記載の遺伝子解析装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医療現場において各種自動解析、例えば遺伝子解析の研究や臨床を行なうのに適する反応容器を用いた遺伝子解析装置に関するものであり、例えば人間を初めとする動物や植物のゲノムＤＮＡの多型、例えばＳＮＰ（一塩基多型）などを検出するための反応容器を扱う遺伝子解析装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
遺伝子多型を利用して病気の罹りやすさなどを予測する方法又は装置として、下記のようなものが提案されている。
患者が敗血症に罹りやすいか否か及び／又は敗血症に急速に進行Ｌやすいか否かを決定するために、患者から核酸サンプルを採取し、該サンプル中におけるパターン２対立遺伝子、又はパターン２対立遺伝子と連鎖不平衡であるマーカー遺伝子を検出し、パターン２対立遺伝子又はパターン２対立遺伝子と連鎖不平衡であるマーカー遺伝子が検出されれば該患者が敗血症に罹りやすいと判定する（特許文献１参照。）。
【０００３】
ヒトのｆｌｔ−１遺伝子中の１又はそれ以上の単一ヌクレオチド多型性の診断のために、ヒトの核酸の１又はそれ以上の位置：１９５３、３４５３、３８８８（各μＥＭＢＬ受理番号Ｘ５１６０２中の位置に従う）、５１９、７８６、１４２２、１４２９（各μＥＭＢＬ受理番号Ｄ６４０１６中の位置に従う）、４５４（配列番号３に従う）及び６９６（配列番号５に従う）の配列を決定し、ｆｌｔ−１遺伝子中の多型性を参照することにより、そのヒトの体質を決定する（特許文献２参照。）。
【０００４】
ＳＮＰ部位の塩基を判別する、いわゆるタイピングについては多くの手法が報告されている。そのうちの代表的なものは次の方法である。
比較的に少量の核酸を用いて数十万箇所に及ぶＳＮＰ部位についてタイピングを行なうために、少なくとも一つの一塩基多型部位を含む複数の塩基配列を、核酸及び複数対のプライマーを用いて同時に増幅し、増幅した複数の塩基配列を用いて、当該塩基配列に含まれる一塩基多型部位の塩基をタイピング工程により判別する。そのタイピング工程として、インベーダ（登録商標）法又はタックマン（登録商標）ＰＣＲ（polymerasechainreaction）法を用いる（特許文献３参照。）。
【０００５】
本発明者らは、試薬収容部一体型でかつタイピング用の複数のプローブがそれぞれ小さな凹部からなるウエルに配置されている反応容器で、試薬収容部のシール材を貫通して分注する方式のものを提案している。そこでは、ウエルの大きさは、例えば直径が１００μｍ〜２ｍｍ、深さが５０μｍ〜１．５ｍｍである。
【０００６】
また、その反応容器には微量の反応液を扱う増幅反応部が設けられている。増幅反応部の遺伝子増幅反応領域は熱交換が容易になるように、外表面との厚みが例えば０．１〜０．５ｍｍに薄くなっている。増幅反応部で扱う増幅反応液の量は、例えば０．１μＬ〜５μＬ程度と微量である。
【特許文献１】特表２００２−５３３０９６号公報
【特許文献２】特開２００１−２９９３６６号公報
【特許文献３】特開２００２−３００８９４号公報
【特許文献４】特許第３４５２７１７号公報
【非特許文献１】Hsu T. M., Law S. M, Duan S, Neri B. P., Kwok P. Y., "Genotyping single-nucleotide polymorphisms by the invader assay with dual-color fluorescence polarization detection", Clin. Chem., 2001 Aug;47(8):1373-7
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
増幅反応部で遺伝子増幅反応を起こさせるためには、増幅反応部の温度を制御する必要がある。その遺伝子増幅反応を行なうために温度調節装置を別途用意し、反応容器をその温度調節装置へ移動して遺伝子増幅反応を起こさせるようにすれば、反応容器を搬送するための機構が必要になって装置構成が大きくなったりコスト高になったりする。
そこで、本発明は増幅反応部で遺伝子増幅反応を行なわせるための温度調節装置を簡略化することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の遺伝子解析装置は、遺伝子増幅反応を行なう増幅反応部を持った反応容器を装着する装着部と、増幅反応部内の増幅反応液に遺伝子増幅反応をさせるために、前記装着部に装着された反応容器の増幅反応部と接触して増幅反応部の温度を制御する増幅部と、増幅反応液と不揮発性液体を増幅反応部へ移送し、遺伝子増幅反応終了後に増幅反応終了液を増幅反応部から回収する分注装置とを備え、前記増幅部は増幅反応部を挟む上下２つの温度調節ユニットから構成され、上部温度調節ユニットは下降して増幅反応部と接触するように支持され、下部温度調節ユニットは上昇して増幅反応部と接触するように支持されている遺伝子解析装置である。
【０００９】
好ましい形態は、前記装着部が水平方向に移動して反応容器を遺伝子増幅反応を行なう位置に位置決めするように支持されるものであり、上部温度調節ユニットが前記装着部とは別の部材に上下動可能に支持されており、前記下部温度調節ユニットが前記装着部に上下動可能に支持されているものである。
【００１０】
さらに好ましい形態は、前記上部温度調節ユニットを下降させる機構と前記下部温度調節ユニットを上昇させる機構が連動して同一駆動源により駆動されるように支持され、前記下部温度調節ユニットがその駆動機構に回動可能に支持されているものである。
【００１１】
反応容器の好ましい一例は、前記増幅反応部が平板上の基板に形成された反応室となる流路と、反応室への液を出し入れするための少なくとも２つのポートを備えたものである。
反応容器の他の好ましい一例は、前記増幅反応部が平板上の基板に形成された反応室となる凹形状のウエルと、そのウエルの凹部に入り込んでその一部の空間を占める凸部をもち、ウエルに対して着脱可能な蓋とからなるものである。
【００１２】
反応容器のさらに好ましい一例は、増幅反応部が設けられている基板に、凹部として形成され不揮発性液体を収容しフイルムで封止された不揮発性液体収容部をさらに備えたものである。
反応容器のさらに好ましい一例は、増幅反応部が設けられている基板に、凹部として形成され複数の多型部位それぞれをはさんで結合する複数のプライマーを含む遺伝子増幅試薬を収容しフイルムで封止された遺伝子増幅試薬収容部をさらに備えたものである。
【００１３】
反応容器のさらに好ましい一例は、増幅反応部が設けられている基板に、凹部として形成されタイピング試薬を収容しフイルムで封止されたタイピング試薬収容部と、複数の多型部位のそれぞれに対応して蛍光を発するプローブを個別に保持した複数のプローブ配置部とを備えた遺伝子多型診断用反応容器である。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の遺伝子解析装置は、増幅部が増幅反応部を挟む上下２つの温度調節ユニットから構成され、増幅反応液を増幅反応部へ移送し、遺伝子増幅反応終了後に増幅反応終了液を増幅反応部から回収する分注装置と一体化されているので、外部の増幅装置へ反応容器を搬送するための機構が不要になるため、装置構成がコンパクトになり安価に製造することができる。
【００１５】
装着部が水平方向に移動して反応容器を遺伝子増幅反応を行なう位置に位置決めするものとし、上部温度調節ユニットが装着部とは別の部材に上下動可能に支持され、下部温度調節ユニットが装着部に上下動可能に支持されたものとすれば、増幅部を簡単な機構で実現することができる。
【００１６】
上部温度調節ユニットを下降させる機構と下部温度調節ユニットを上昇させる機構が連動して同一駆動源により駆動されるようにすれば増幅部の機構をさらに簡略化することができる。その際、下部温度調節ユニットをその駆動機構に回動可能に支持すれば、増幅反応部と下部温度調節ユニットとの密着性を維持することが容易になる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
図１は本発明が適用される遺伝子解析装置の一例を概略的に示したのである。
図には現れていないが、遺伝子増幅反応を行なう増幅反応部を持った反応容器を装着する装着部を備えている。さらに、図１に示されるように、吸引及び吐出のためのノズル２８を移動させて反応容器の液の移送を行なう分注部１１２と、少なくとも分注部１１２の分注動作を制御する制御部１１８を少なくとも備えている。
【００１８】
反応容器は遺伝子多型診断用反応容器であって、試薬収容部として複数の多型部位それぞれをはさんで結合する複数のプライマーを含む遺伝子増幅試薬を収容した遺伝子増幅試薬収容部、及びタイピング試薬を収容したタイピング試薬収容部を備え、反応部として遺伝子増幅試薬とサンプルとの混合液に対して遺伝子増幅反応を行なわせる増幅反応部を備え、さらに複数の多型部位のそれぞれに対応して蛍光を発するプローブを個別に保持した複数のプローブ配置部を備えている。
【００１９】
この遺伝子解析装置は、図１に示されるように、増幅反応部の温度をサンプルと遺伝子増幅試薬との反応液内でＤＮＡを増幅させる遺伝子増幅のための温度に制御する増幅反応温度制御部１２０と、プローブ配置部の温度をサンプルに含まれる核酸とタイピング試薬との反応液をプローブ配置部のプローブと反応させる温度に制御するタイピング反応温度制御部１１０と、各プローブ配置部に励起光を照射して蛍光を検出する蛍光検出部６４とを備え、制御部１１８は増幅反応温度制御部１２０の温度制御、タイピング反応温度制御部１１０の温度制御、及び蛍光検出部６４の検出動作も行なう。
【００２０】
タイピング反応としてインベーダ（登録商標）反応を使用する場合は、タイピング反応温度制御部１１０はインベーダ（登録商標）反応のための温度調節部となる。
遺伝子増幅反応としてＰＣＲ反応を使用する場合は、増幅反応温度制御部１２０はＰＣＲ反応のための温度サイクル用の温度調節部となる。
制御部１１８を外部から操作したり検査結果を表示したりするために、制御部１１８にパーソナルコンピュータ（ＰＣ）１２２を接続してもよい。
【００２１】
本発明による多型検出の対象は特に限定されないが、例えばｃＤＮＡ、ヒトを含む様々な生物の遺伝子、ウイルス及び細菌を含む様々な微生物の遺伝子などが挙げられる。したがって、これら核酸の配列をもつものを核酸増幅のための鋳型核酸とすることができる。また、これら多型検出の対象となる遺伝子としては、ＤＮＡの遺伝子であるかＲＮＡの遺伝子であるかを問わない。
これらの遺伝子を含むサンプルも特に限定されない。すなわち、生体試料、生体由来試料、抽出核酸試料などに対して多型検出を行なうことができる。ここで、生体試料や生体由来試料は、核酸の抽出操作を行なわず、核酸包含体（例えば細胞、真菌、細菌、ウイルスなど、核酸を内部に含有する膜構造体）を維持した形態の試料である。生体試料の例としては、臓器、組織、体液、排泄物などが挙げられる。体液には、血液試料、髄液、唾液、乳などが含まれる。血液試料には、全血、血漿、血清などが含まれる。排泄物には、尿、便などが含まれる。生体由来試料は、生体試料から回収した核酸包含体である。核酸包含体の回収方法は特に限定されないが、遠心・超遠心操作、ポリエチレングリコールなどの共沈剤、吸着担体などを用いた方法が挙げられる。抽出核酸試料は、核酸の抽出操作を行なった試料であり、抽出後さらに核酸を精製した試料であってもよい。抽出方法としては、酵素、界面活性剤、カオトロピック剤などを用いた方法が挙げられる。精製方法としては、フェノール／クロロホルム、イオン交換樹脂、ガラスフィルター、ガラスビーズ、磁気ビーズ、タンパク凝集作用を有する試薬などを用いた方法が挙げられる。
本発明で検出できる多型は、特に限定されず、ＳＮＰ及び複数ヌクレオチドからなる配列にわたる多型の両方を含む。本発明においては、多型にはさらに変異も含む。具体的には、本発明で検出できる多型の例としては、ＳＮＰ、挿入多型、欠失多型、反復配列多型などが挙げられる。
ここで、多型部位とプライマーの関係を示すと、１つの多型部位を増幅するためにはその多型部位をはさんで結合する一対のプライマーが必要になる。対象となる生体サンプルには複数種類の多型部位が存在するので、それらの多型部位が互いに離れた位置に存在する場合には多型部位の種類の数の２倍の種類のプライマーが必要になる。しかし、２つの多型部位が接近している場合には、それらの多型部位それぞれをはさんでプライマーを結合させて増幅することも、またそれらの２つの多型部位の間にはプライマーを結合させず、２つの多型部位の配列の両側にのみプライマーを結合させて増幅することもできる。したがって、必要なプライマーの種類は必ずしも多型部位の種類の数の２倍になるわけではない。本発明における「複数の多型部位それぞれをはさんで結合する複数のプライマー」とは一対のプライマーが１つの多型部位をはさんで結合する場合だけでなく、２又はそれ以上の多型部位をはさんで結合する場合も含めて、複数の多型部位を増幅するのに必要な種類のプライマーという意味で使用している。
遺伝子増幅試薬の一例はＰＣＲ反応試薬である。
【００２２】
ＳＮＰのタイピングには増幅工程に入る段階でゲノムＤＮＡの調整が必須であり、そこに手間とコストがかかる。核酸を増幅するＰＣＲ法だけに着目すれば、前処理なしで血液などのサンプルから直接ＰＣＲ反応を行なわせる方法も提案されている。そこでは、サンプル中の目的とする遺伝子を増幅する核酸合成法において、遺伝子を含むサンプル中の遺伝子包含体、すなわち生体由来試料、もしくは遺伝子を含むサンプルそのもの、すなわち生体試料を増幅反応液に添加して、添加後の該反応液のｐＨが８．５−９．５（２５℃）で遺伝子を含むサンプル中の目的とする遺伝子を増幅する（特許文献４参照。）。
【００２３】
既に構築されているタイピングシステムは、タイピングしようとする複数のＳＮＰ領域をＰＣＲ法で増幅するために、最初に採取する核酸量は少なくてすむが、ＰＣＲ法で増幅する前に予め生体サンプルから核酸を抽出しておくという前処理が必要である。そのためにその前処理に時間と手間がかかる。
【００２４】
直接ＰＣＲ法とタイピング方法を結びつけたときに、タイピングを目的とする複数のＳＮＰ部位について同時に増幅を行なうような自動化システムはこれまで構築されていなかった。
タイピング工程はインベーダ（登録商標）法やタックマン（登録商標）ＰＣＲ法を使用することができる。その場合、タイピング試薬はインベーダ（登録商標）試薬又はタックマン（登録商標）ＰＣＲ試薬である。
【００２５】
図１８は本発明で使用する反応容器を遺伝子多型診断用試薬キットとして使用して遺伝子多型を検出する際の検出方法を概略的に示したものである。ここでは、増幅工程にはＰＣＲ法、タイピング工程にはインベーダ（登録商標）法を使用するものとして説明する。
ＰＣＲ工程では血液などの生体サンプル２にＰＣＲ反応試薬４を添加するか、逆にＰＣＲ反応試薬４に生体サンプル２を添加する。
【００２６】
ＰＣＲ反応試薬４は予め調整されたものであり、測定しようとするＳＮＰ部位のための複数のプライマーを含み、それにｐＨを調整するためのｐＨ緩衝液、４種類のデオキシリボヌクレオチド類、熱安定性合成酵素、及びＭｇＣ１2、ＫＣｌ等の塩類などの必要な試薬が添加されている。その他に、界面活性剤や蛋白などの物質を必要に応じて添加することができる。本発明で用いることのある増幅工程のＰＣＲ法は、目的とする複数のＳＮＰ部位を同時に増幅させるものである。生体サンプルは核酸抽出操作を施しているものであってもよく、核酸抽出操作を施していないものであってもよい。ここで、核酸抽出操作を施していない生体サンプルとは、上述した生体試料、生体由来試料、及び、加熱処理又は凍結処理などの操作によって核酸包含体の膜構造を破壊した状態の生体試料若しくは生体由来試料を含む。核酸抽出操作を施していない生体サンプルから直接ＰＣＲ法によりそれらのＳＮＰ部位を含む複数のゲノムＤＮＡを増幅させる場合には、それらのＳＮＰ部位のための複数のプライマーを含む遺伝子増幅反応試薬を生体サンプルに作用させ、サンプル２と混合したときに２５℃でのｐＨが８．５−９．５となる条件下でＰＣＲ反応を起こさせる。
【００２７】
ｐＨ緩衝液は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンと塩酸、硝酸、硫酸等の鉱酸の組合せのほか、種μのｐＨ緩衝液を使用することができる。ｐＨ調整された緩衝液は、ＰＣＲ反応試薬の中で１０ｍＭから１００ｍＭの間の濃度で使用するのが好ましい。
プライマーはＰＣＲ反応によるＤＮＡ合成の開始点として働くオリゴヌクレオチドをいう。プライマーは合成したものであってもよく、生物界から単離したものであってもよい。
【００２８】
合成酵素はプライマー付加によるＤＮＡ合成用の酵素であり、化学合成系も含む。適切な合成酵素としては、Ｅ．coliのＤＮＡポリメラーゼＩ、Ｅ．coliのＤＮＡポリメラーゼのクレノーフラグメント、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼ、ＴａｑＤＮＡポリメラーゼ、T. litoralis ＤＮＡポリメラーゼ、ＴｔｈＤＮＡポリメラーゼ、ＰｆｕＤＮＡポリメラーゼ、Hot Start Taqポリメラーゼ、KOD ＤＮＡポリメラーゼ、EX Taq ＤＮＡポリメラーゼ、逆転写酵素などがあるが、これらに限定されるものではない。「熱安定性」は、高温下、好ましくは６５−９５℃でもその活性を保持する化合物の性質を意味する。
【００２９】
ＰＣＲ工程では、生体サンプル２とＰＣＲ反応試薬４との混合液を所定の温度サイクルに従ってＰＣＲ反応を行なわせる。ＰＣＲ温度サイクルは、変性、プライマー付着（アニーリング）及びプライマー伸長の３工程を含み、そのサイクルを繰り返すことによりＤＮＡを増幅させる。各工程の一例は、変性工程が９４℃で１分間、プライマー付着工程が５５℃で１分間、プライマー伸長が７２℃で１分間である。生体サンプルは核酸抽出操作を施したものであってもよいが、ここでは核酸抽出操作を施していないものを使用する。核酸抽出操作を施していない生体サンプルであっても、ＰＣＲ温度サイクルの高温下で核酸が血球や細胞から遊離し、ＰＣＲ反応に必要な試薬が核酸に接触して反応が進む。
【００３０】
ＰＣＲ反応終了後、タイピング試薬としてインベーダ（登録商標）試薬６が添加される。インベーダ（登録商標）試薬６には蛍光を発するフレット（FRET）プローブ及びクリベース（Cleavase：構造特異的ＤＮＡ分解酵素）が含まれている。フレットプローブはゲノムＤＮＡと全く無関係な配列をもつ蛍光標識オリゴであり、ＳＮＰの種類によらず配列は共通であることが多い。
【００３１】
次に、インベーダ（登録商標）試薬６が添加された反応液を複数のプローブ配置部８に添加して反応をさせる。各プローブ配置部８には、複数のＳＮＰ部位のそれぞれに対応してインベーダ（登録商標）プローブとレポータープローブが個別に保持されており、反応液がインベーダ（登録商標）プローブと反応し、そのレポータープローブに対応するＳＮＰが存在すれば蛍光を発する。
【００３２】
インベーダ（登録商標）法については、特許文献３の段落［００３２］から［００３４］に詳しく記載されている。
各レポータープローブはそれに対応したＳＮＰの塩基に応じて２種類のものを用意すれば、そのＳＮＰがホモ按合体であるかヘテロ接合体であるかを判別することができる。
【００３３】
タイピング工程で使用するインベーダ（登録商標）法は、アレル特異的オリゴとタイピング対象のＳＮＰを含むＤＮＡとをハイブリダイゼーションすることによりＳＮＰ部位をタイピングする方法であり、タイピング対象のＳＮＰを含むＤＮＡと、タイピング対象のＳＮＰのそれぞれのアレルに特異的な２種類のレポータープローブ及び１種類のインベーダ（登録商標）プローブと、ＤＮＡの構造を認識して切断するという特殊なエンドヌクレアーゼ活性を有する酵素とを用いる方法である（特許文献３参照。）。
【００３４】
図２は本発明の遺伝子解析装置で使用する反応容器の例である。（Ａ）は正面図、（Ｂ）は平面図である。
平板状の基板１０の同じ側に試薬収容部１４及び反応液よりも比重の低い不揮発性液体収容部１６が凹部として形成されている。基板１０の同じ側にはさらに、反応部１８も形成されている。試薬収容部１４と不揮発性液体収容部１６はフイルム２０で封止されており、試薬と不揮発性液体をノズルで吸入して他の場所に移送する際には、そのフイルム２０を取り除いてノズルで吸入するか、又はそのフイルム２０をノズルで貫通可能なものとしておいてノズルを貫通させてノズルで吸入する。
基板１０の表面は、フイルム２０上から、試薬収容部１４、不揮発性液体収容部１６及び反応部１８を被う大きさの剥離可能なシール材２２で被われている。
【００３５】
反応液よりも比重の低い不揮発性液体としては、ミネラルオイル（鉱油）、植物油、動物油、シリコーンオイル又はジフェニルエーテルなどを用いることができる。ミネラルオイルはペトロラタムから蒸留により得られる液体の炭化水素混合物であり、流動パラフィン、流動ペトロラタム、ホワイト油などとも呼ばれ、低比重の軽油も含む。動物油としてはタラの肝油、オヒョウ油、ニシン油、オレンジラフィー油又はサメの肝油などを用いることができる。また、植物油としてはカノーラ油、扁桃油、綿実油、トウモロコシ油、オリーブ油、ピーナツ油、ベニバナ油、ゴマ油、大豆油などを用いることができる。
実施例では、不揮発性液体としてミネラルオイルを使用し、以後、不揮発性液体収容部をミネラルオイル収容部と称す。
【００３６】
この反応容器の具体的な用途の一例は、反応容器内でサンプルからＰＣＲ反応によりＤＮＡを増幅させた後に、インベーダ（登録商標）反応によりＳＮＰを検出する遺伝子多型診断用試薬キットとなったものである。図２を参照して、その遺伝子多型診断用試薬キットとしての実施例を詳細に説明する。
【００３７】
平板状の基板１０ａの同じ側に、サンプル注入部１２、ＰＣＲ終了液注入部３１、遺伝子増幅試薬収容部３０、タイピング試薬収容部１４、ミネラルオイル収容部１６が凹部として形成されている。基板１０ａの同じ側にはさらに、増幅反応部３２と複数のプローブ配置部１８も形成されている。
【００３８】
サンプル注入部１２は核酸抽出操作を施していない生体サンプル又は核酸抽出操作を施した生体サンプルが注入されるものであるが、使用前の状態ではまだサンプルが注入されない空の状態で提供される。ＰＣＲ終了液注入部３１は増幅反応部３２でＰＣＲ反応を終了した反応液とタイピング試薬とを混合するためのもので、使用前の状態では空の状態で提供される。
【００３９】
遺伝子増幅試薬収容部３０は複数の多型部位それぞれを挟んで結合する複数のプライマーを含む遺伝子増幅試薬として、ＰＣＲ反応試薬を２〜３００μＬ収容している。タイピング試薬収容部１４は複数の多型部位に対応して調製されたタイピング試薬を１０〜３００μＬ程度収容している。ミネラルオイル収容部１６は反応液の蒸発を防ぐためのミネラルオイルを２０〜３００μＬ収容している。これらの遺伝子増幅試薬収容部３０、タイピング試薬収容部１４及びミネラルオイル収容部１６はノズルで貫通可能なフイルム２０で封止されている。そのようなフイルム２０は、例えばアルミニウム箔、アルミニウムとＰＥＴ（ポリエチレンテレフタレート）フイルムなどの樹脂との積層膜などであり、容易に剥がれないように融着や接着により貼りつけられている。
増幅反応部３２はＰＣＲ反応試薬とサンプルとの混合液に対して遺伝子増幅反応を行な
わせるものである。
【００４０】
各プローブ配置部１８は複数の多型部位のそれぞれに対応して蛍光を発するプローブを個別に保持しており、ミネラルオイル収容部１６からのミネラルオイルが分注されたときにそのミネラルオイルを保持できる凹部となっている。各プローブ配置部１８の凹部の大きさは、例えば直径が１００μｍ〜２ｍｍ、深さが５０μｍ〜１．５ｍｍの円形である。
【００４１】
基板１０の表面は、フイルム２０上から、サンプル注入部１２、ＰＣＲ終了液注入部３１、遺伝子増幅試薬収容部３０、タイピング試薬収容部１４、ミネラルオイル収容部１６、増幅反応部３２及びプローブ配置部１８を被う大きさの剥離可能なシール材２２で被われている。このシール材２２もアルミニウム箔、アルミニウムと樹脂との積層膜などであるが、貼りつけ強度はフイルム２０よりは弱く、粘着剤などにより剥離可能な程度に貼りつけられている。
【００４２】
基板１０は底面側から蛍光を測定するために、低目蛍光性（それ自身からの蛍光発生が少ない性質のこと）で光透過性の樹脂、例えばポリカーボネートなどの素材で形成されている。基板１０の厚さは０．３〜４ｍｍ、好ましくは１〜２ｍｍである。低目蛍光性の観点から基板１０の厚さは薄い方が好ましい。
【００４３】
増幅反応部３２の一例をその断面を拡大して符号３２−１により図３に示す。図３は図２のＹ−Ｙ線位置での断面図であり、図３には増幅反応部３２−１を挟む上下２つの温度調節ユニット６２，６０も示されている。上部温度調節ユニット６２は下降して増幅反応部３２と接触するように支持され、下部温度調節ユニット６０は上昇して増幅反応部３２と接触するように支持されている。
【００４４】
増幅反応部３２−１は、基板１０ａに形成された反応室となる流路３３と、反応室への液を出し入れするための少なくとも２つのポート３４ａ，３４ｂをその両端に備えたものである。ポート３４ａ，３４ｂはノズル２８の先端形状に対応した形状の上方向に開いた開口３６ａ，３６ｂをもち、ノズル２８の先端に密着できるようにＰＤＭＳ（ポリジメチルシロキサン）やシリコーンゴムなどの弾性素材で構成されている。
【００４５】
増幅反応部３２−１は熱伝導率をよくするためにその部分の基板１０ａの下面側の肉厚が薄くなっている。その部分の肉厚は、例えば１．２〜０．５ｍｍである。
増幅反応部３２−１は基板内に形成された流路状の反応室３３と、反応室３３が構成されている流路の両端につながり、上方に向かって開口したポート３４ａ，３４ｂを備えている。
【００４６】
図４（Ａ）は流路状の反応室３３の第１の形態３３ａを表わしたものであり、その反応室３３ａを構成する流路はポート３４ａ，３４ｂの間に直線状に延びている。
図４（Ｂ）は流路状の反応室３３の第２の形態３３ｂを表わしたものであり、その反応室３３ｂを構成する流路はポート３４ａ，３４ｂの間で「コ」状に折れ曲がっている。
増幅反応部３２の平面状の部分には上下から温度調節ユニット３７ａ，３７ｂが接触して反応室３３ａ，３３ｂ内の反応液の温度を制御し、増幅反応を起こさせる。
【００４７】
図３に戻って説明すると、下側の温度調節ユニット６０は、加熱冷却素子としてペルチェ素子１２０を備え、ペルチェ素子１２０の一方に設けられて増幅反応部３２−１の底面と接触するヒートブロック１２２は熱伝導性の良い金属、例えばアルミニウムから構成され、増幅反応部３２−１の底面と接触する部分の形状が増幅反応部３２−１の底面と合致する凸部をもった形状に形成されている。ペルチェ素子１２０の反対側の面には熱伝導率の良い金属、例えばアルミニウムからなる放熱板１２４が接触している。
【００４８】
増幅反応部３２−１の表面側にも加熱冷却素子としてペルチェ素子１３０が配置され、その一方の面に設けられたヒートブロック１３２が増幅反応部３２−１の表面と接触する部分の形状が増幅反応部３２−１の表面と合致する形状に形成されている。ペルチェ素子１３０の反対側の面には放熱板１３４が接触している。ヒートブロック１３２と放熱板１３４も熱伝導率のよい金属、例えばアルミニウムから構成されている。
図３（Ｂ）で増幅反応部３２−１が上下の温度調節ユニット６２，６０で挟まれた状態でペルチェ素子１３０と１２０により反応部３２−２内の反応液が所定の温度サイクルになるように加熱と冷却が繰り返される。
【００４９】
他の形態の増幅反応部を備えた反応容器の例を図５に示す。図５は反応容器の他の例である。（Ａ）は正面図、（Ｂ）は平面図、（Ｃ）は斜視図である。遺伝子増幅反応部３２−２以外の構成は図２に示された反応容器と同じであるので、説明を省略する。
増幅反応部３２−２は基板１０に形成された反応室となる凹形状のウエル３５と、そのウエル３５の凹部に入り込んでその一部の空間を占める凸部３７ａをもち、ウエル３５に対して着脱可能な蓋３７とからなるものである。図５（Ｃ）は蓋３７をウエル３３から外し、基板１０上の特定の場所に載置した状態を示したものである。
【００５０】
遺伝子増幅反応部３２−２を図６（Ａ）に具体的に示す。ウエル３５は反応容器の基板１０と一体成型された一体型のものであってもよく、基板１０に接着又は融着されたものであってもよいが、この実施例としては別の形態のものを示す。ウエル３５は反応容器の基板１０とは別体として形成されている。ウエル３５は円盤状であり、その中央部に反応液を収容する反応室となる凹部が形成されている。ウエル３５の凹部の肉厚は熱伝導効率をよくするために薄く成形され、その厚さは例えば０．１〜０．５ｍｍである。ウエル３５の周辺には厚みが厚くなったフランジ３５ａが設けられている。基板１０にはウエル３５を取りつけるための円形の穴があけられ、その穴の周囲には基板１０の表面から立ち上がった爪部１１ａが形成されている。ウエル３５は基板１０のその穴に基板１０の表面側にウエルの凹部が向くようにして嵌め込まれ、フランジ３５ａが爪部１１ａと係合することにより基板１０に固定されている。
【００５１】
蓋３７に設けられた凸部３７ａはウエル３５の凹部の空間の一部を占めるためのものであり、その凸部３７ａの外周の直径がウエル３５の凹部の内径と一致するように形成され、蓋３７はその凸部３７ａによってウエル３５の凹部に密閉状態で着脱可能に取りつけられる。蓋３７の凸部３７ａの内側は開口し、その開口部の縁に切込みが形成されていることによって係合部となる突起３７ｂが形成されている。この反応容器による熱処理の際には、凸部３７ａの内側にヒートブロックの凸部が挿入されて接触して熱伝導が行なわれる。
【００５２】
ウエル３５に所定量の反応液３８を入れ、蓋３７でウエル３５を閉じると、凸部３７ａの一部が反応液３８と接触するか、又はウエル３５の凹部の空間ができるだけ小さくなるように、ウエル３５の寸法と凸部３７ａの寸法が設定されている。
【００５３】
図６（Ｂ）はこのようにウエル３５に反応液３８が入れられ、蓋３７で閉じられて、ＰＣＲ反応などで温度制御を行うときの状態を示している。反応部３２−２の下側にはヒートブロック６０が接触させられ、反応部３２−２の上側にはヒートブロック６２が接触させられる。
【００５４】
下側の温度調節ユニット６０は、加熱冷却素子としてペルチェ素子１２０を備え、ペルチェ素子１２０の一方に設けられてウエル３５の底面と接触するヒートブロック１２２は熱伝導性の良い金属、例えばアルミニウムから構成され、ウエル３５の底面と接触する部分の形状がウエルの底面と合致する凹部をもった形状に形成されている。ペルチェ素子１２０の反対側の面には熱伝導率の良い金属、例えばアルミニウムからなる放熱板１２４が接触している。
【００５５】
反応部３２−２の蓋３７側にも加熱冷却素子としてペルチェ素子１３０が配置され、その一方の面に設けられたヒートブロック１３２が蓋３７と接触する部分の形状が蓋３７と合致する凸部をもった形状に形成されている。ペルチェ素子１３０の反対側の面には放熱板１３４が接触している。ヒートブロック１３２と放熱板１３７も熱伝導率のよい金属、例えばアルミニウムから構成されている。
図６（Ｂ）の状態でペルチェ素子１３０と１２０により反応部３２−２内の反応液が所定の温度サイクルになるように加熱と冷却が繰り返される。
【００５６】
図７は上記の反応容器を試薬キットとして用い、生体サンプルのＳＮＰを検出するための簡易型遺伝子解析装置に本発明を適用した一実施例を示したものである。
装置内にヒ一夕として上下に一対の温度調節ユニット６０と６２が配置されている。反応容器装着部は、下側温度調節ユニット６０上に図２に示された反応容器４１がスライドして所定の位置に位置決めされる案内部が形成されていることにより構成されている。反応容器装着部には反応容器４１にサンプルが注入されたものが５枚平行に並べて設置される。これらの温度調節ユニット６０，６２は、矢印で示されるＹ方向に移動することができる。
【００５７】
上下の温度調節ユニット６０，６２は増幅反応部３２の温度を所定の温度サイクルになるように制御する増幅反応温度制御部を構成している。また、両温度調節ユニット６０，６２はまた、プローブ配置部１８の温度をＤＮＡとプローブとを反応させる温度に制御するタイピング反応温度制御部も構成している。増幅反応温度制御部とタイピング反応温度制御部は、図１ではそれぞれ符号１２０，１１０で示されている。増幅反応温度制御部の温度は、例えば９４℃、５５℃及び７２℃の３段階にその順に変化させられ、そのサイクルが繰り返されるように設定されている。タイピング反応温度制御部の温度は、例えば６３℃に設定されている。
【００５８】
増幅反応温度制御部を構成している温度調節ユニット６０，６２の部分を図８と図９により詳細に示す。この実施例では５個の反応容器１０が装着されるようになっており、温度調節ユニット６０，６２の組は反応容器１０ごとに設けられている。上部温度調節ユニット６２は反応容器装着部とは別の部材に上下動可能に支持されており、下部温度調節ユニット６０は反応容器装着部に上下動可能に支持されている。
【００５９】
５個の上部温度調節ユニット６２を同時に下降させるために、各上部温度調節ユニット６２の上面に軸１４４が当接しており、それらの５本の軸１４４の上端を固定する基板１４３の上面に駆動用の棒ネジ１４６の下端が当接している。
下部温度調節ユニット６０はそれぞれの下面側が回動可能なジョイント１４２により共通のレバー１４１の先端側に支持されている。レバー１４１は軸１４０により回動可能に支持され、レバー１４１の基端部には上部温度調節ユニット６２を下降させるための基板１４３と一体化された連結部材の下端部が当接している。
【００６０】
棒ネジ１４６が上がっているときは温度調節ユニット６０，６２が反応容器１０の増幅反応部から離れるように、付勢手段又は自重により温度調節ユニット６０が所定の位置まで下降し、温度調節ユニット６２が所定の位置まで上昇している。棒ネジ１４６が駆動されて下降すると基板１４３を押し下げ、それに伴って上部温度調節ユニット６２が下降させられ、同時に下部温度調節ユニット６０が上昇させられる。下部温度調節ユニット６０は回動可能なジョイント１４２によりレバー１４１に支持されているので、反応容器１０の増幅反応部と良好に密着することができる。
【００６１】
図１０に示されるように、温度調節ユニット６０，６２のうち、タイピング反応温度制御部を構成する上側の温度調節ユニット６２ａはプローブ配置部に対応する位置にのみ開口１５０をもち、下側の温度調節ユニット６０でタイピング反応温度制御部を構成する部分６０ａもプローブ配置部に対応する位置にのみ開口１５２をもっている。温度調節ユニット６２ａ上にはタイピング反応温度制御部カバー１５４が被せられており、そのカバー１５４にも温度調節ユニット６２ａの開口１５０の位置にのみ開口１５６が開けられている。開口１５０，１５６を介してノズル２８で反応容器４１のプローブ配置部へ反応液を分注する。
【００６２】
図７に戻って説明すると、ノズル２８による液の移送や吸入、吐出を行なうために、分注部としてＸ方向、Ｙ方向及びＺ方向に移動する送液アーム６６が設けられており、送液アーム６６はノズル２８を備えている。分注部は図１では符号１１２で示されている。
【００６３】
図１１はノズル２８の先端部を表わしたものである。ノズル２８はその先端に使い捨て可能な分注チップ７０が着脱可能に装着される。（Ａ）はノズル２８に分注チップ７０が装着されていない状態、（Ｂ）はノズル２８に分注チップ７０が装着された状態を表わしている。ノズル２８は分注チップ７０内への液の吸入と吐出を行なう。そのため、ノズル２８はその先端に分注チップ７０を装着する外形寸法をもつ装着部２８ａと、その装着部２８ａの先端にあって、分注する液と接触しない長さで装着部２８ａよりも外形寸法の小さい突出部２８ｂとを備えている。
ノズル２８は液の吸入と吐出を行なうときは先端に分注チップ７０を装着する。
【００６４】
図１０に示されるように、温度調節ユニット６０ａの下部には蛍光検出を行なう蛍光検出部６４が配置されており、蛍光検出部６４は反応容器４１の下面側から温度調節ユニット６０ａの開口１５２を介してプローブ配置部に励起光を照射し、反応容器４１の下面側で温度調節ユニット６０ａの開口１５２を介してプローブ配置部からの蛍光を検出する。蛍光検出部６４は図１０の矢印Ｘ方向に移動してプローブ配置部１８からの蛍光を検出する。反応容器装着部によるプローブ配置部１８のＹ方向移動と、蛍光検出部６４のＸ方向移動により各プローブでの蛍光検出を行なう。
【００６５】
図７に戻って説明すると、温度調節ユニット６０，６２、蛍光検出部６４及び送液アーム６６の動作を制御するために、それらの近くに制御部１１８が配置されている。制御部１１８はＣＰＵを備えて、動作のためのプログラムを保持している。制御部１１８は温度調節ユニット６０，６２により実現されるタイピング反応温度制御部１１０や増幅反応温度制御部１２０の温度制御、蛍光検出部６４の検出動作、並びに分注部１１２の送液アーム６６の分注動作及び増幅反応終了液の回収動作を制御する。
【００６６】
図１２は蛍光検出部６４を詳細に示したものである。蛍光検出部６４は励起光源として４７３ｎｍのレーザ光を発するレーザダイオード（ＬＤ）や発光ダイオード（ＬＥＤ）９２を備え、そのレーザ光を反応容器４１のプローブ配置部の底面に集光して照射する一対のレンズ９４，９６を備えている。レンズ９４はレーザダイオード９２からのレーザ光を集光して平行光にするものであり、レンズ９６は平行にされたレーザ光を反応容器４１の底面に収束させて照射する対物レンズである。対物レンズ９６はまた、反応容器４１から発生する蛍光を集光するレンズとしても作用する。一対のレンズ９４，９６の間にはダイクロイックミラー９８が設けられており、ダイクロイックミラー９８は励起光を透過させ、蛍光を反射させるように波長特性が設定されている。ダイクロイックミラー９８の反射光（蛍光）の光路上にはさらにダイクロイックミラー１００が配置されている。ダイクロイツクミラー１００は５２５ｎｍの光を反射し６０５ｎｍの光を透過するように波長特性が設定されている。ダイクロイックミラー１００による反射光の光路上には５２５ｎｍの蛍光を検出するようにレンズ１０２と光検出器１０４が配置され、ダイクロイックミラー１００による透過光の光路上には６０５ｎｍの蛍光を検出するようにレンズ１０６と光検出器１０８が配置されている。この２つの光検出器１０４，１０８による２種類の蛍光検出により、各プローブ配置位置に固定されたインベーダ（登録商標）プローブに対応したＳＮ．Ｐの有無と、そのＳＮＰがホモ接合体であるかヘテロ接合体であるかが検知される。標識蛍光体としては、例えばＦＡＭ、ＲＯＸ、ＶＩＣ、ＴＡＭＲＡ、Redmond Redなどを使用することができる。
【００６７】
図１３の検出器６４は１光源による励起光で励起し、２波長の蛍光を測定するように構成されているが、検出器６４としては２波長の蛍光測定のために異なる励起波長で励起できるように２光源を使用するように構成してもよい。
【００６８】
この実施例における反応容器の使用方法を示す。ここでは、増幅反応部３２として図３に示されたものを使用した場合を示す。
図１３に示されるように、使用時にシール材２２が剥がされる。タイピング試薬収容部１４、ミネラルオイル収容部１８及び遺伝子増幅試薬収容部３０を封止しているフイルム２０は剥がされないでそのまま残っている。
【００６９】
サンプル注入部１２にサンプル２５がピペット２６などにより０．５〜２μＬ、例えば１μＬ注入される。サンプルは核酸抽出操作を施していない生体サンプル、例えば血液である。サンプルは核酸抽出換作を施した生体サンプルであってもよい。サンプル注入後、この反応容器が遺伝子解析装置に装着される。
また、遺伝子解析装置には使い捨て可能な分注チップがセットされる。
【００７０】
遺伝子解析装置において、分注装置がノズル２８に使い捨て可能な分注チップを装着する。ノズル２８はその先端に分注チップを装着して分注動作を行なう。
ノズル２８がフイルム２０を貫通して遺伝子増幅試薬収容部３０に挿入されてＰＣＲ反応試薬が吸入され、ＰＣＲ反応試薬はそのノズル２８によりサンプル注入部１２に２〜２０μＬ移送される。サンプル注入部１２ではノズル２８による吸入と吐出が繰り返されることにより、サンプル反応液とＰＣＲ反応試薬が混合されてＰＣＲ反応液となる。
【００７１】
次に、そのＰＣＲ反応液がノズル２８により吸入されるが、このとき図１４に示されるように、分注チップ内にミネラルオイル３９、ＰＣＲ反応液３８、ミネラルオイル３９の順に吸引し、分注チップ内では上層にミネラルオイル３９、中間層にＰＣＲ反応液３８、下層にミネラルオイルの３層になる状態にする。
【００７２】
次に、増幅反応部３２へ注入される。すなわち、図１５（Ａ）に示されるようにノズル２８が増幅反応部３２の一方のポート３４ａに挿入されてその分注チップ内の３層の液がそのまま注入されて、注入された液は図１５（Ｂ）に示される状態になる。この状態は、注入されたＰＣＲ反応液３８が、増幅部の遺伝子増幅反応温度制御領域にのみ配置される状態であり、そのような状態になるように制御装置により分注装置でのミネラルオイル３９、ＰＣＲ反応液３８及びミネラルオイル３９の分注量が制御される。また、この状態は、増幅反応部３２での反応中にＰＣＲ反応液３８が蒸発するのを防ぐために、ＰＣＲ反応液３８の両端がミネラルオイル３９で閉じられた状態となる。
【００７３】
ＰＣＲ反応終了後、ＰＣＲ反応終了液３８ａがポート３４ａ又は３４ｂからノズル２８により回収される。このとき、ミネラルオイル３９／ＰＣＲ反応終了液３８ａ／ミネラルオイル３９の３層のまま、又はミネラルオイル３９／ＰＣＲ反応終了液３８ａの２層で回収される。ここで、回収を容易にするために、図１６（Ａ），（Ｂ）に示されるように、増幅反応部３２の一方のポート３４ａからミネラルオイルが注入されてもよい。ＰＣＲ反応終了液３８ａは他方のポート３４ｂに押しやられる。そこで、そのポート３４ｂにノズル２８が挿入され、ＰＣＲ反応終了液３８ａがノズル２８に吸入される。ＰＣＲ反応終了液３８ａの回収に際しては、ノズル２８にはミネラルオイル３９／ＰＣＲ反応終了液３８ａ／ミネラルオイル３９の３層を吸入してもよく、又はミネラルオイル３９／ＰＣＲ反応終了液３８ａの２層を吸入してもよい。ポート３４ａ，３４ｂはその開口３６ａ，３６ｂの形状がノズル２８の形状に合わせて形成され、かつ弾性素材で形成されているので、ノズル２８がポート３４ａ，３４ｂに密着して液漏れを防ぎ、ＰＣＲ反応液の注入と回収の操作が容易である。
ここで、ポート３４ａから注入する液体はミネラルオイル４０に限らず、他の液体であってもよく、好ましくは比重が反応液と同じか反応液よりも低い液体である。
【００７４】
ノズル２８により増幅反応部３２から回収された反応終了後のＰＣＲ反応終了液３８ａはＰＣＲ終了液注入部３１に移送されて注入される。このとき、ＰＣＲ終了液注入部３１には回収した液のうちのミネラルオイル３９層を捨ててＰＣＲ反応終了液３８ａのみ分注してもよいし、そのままミネラルオイル３９ごと分注してもよい。ミネラルオイル３９は次工程の反応を阻害しない。
【００７５】
次に、図１７に示されるように、ノズル２８がフイルム２０を貫通してタイピング試薬収容部１４に挿入されてタイピング試薬が吸入され、タイピング試薬はそのノズル２８によりＰＣＲ終了液注入部３１に移送されて注入される。ＰＣＲ終了液注入部３１ではノズル２８による吸入と吐出が繰り返されることにより、ＰＣＲ反応終了液とタイピング試薬が混合される。
【００７６】
その後、ＰＣＲ反応液とタイピング試薬との反応液がノズル２８により各プローブ配置１８部１８へ０．５〜４μＬずつ分注される。各プローブ配置部１８にはノズル２８によりミネラルオイル収容部１６からミネラルオイルが０．５〜１０μＬずつ分注される。プローブ配置部１８へのミネラルオイルの分注は、プローブ配置部１８への反応液の分注前であってもよい。各プローブ配置部１８ではミネラルオイルが反応液の表面を被い、検出装置のタイピング反応温度制御部での加熱を伴なうタイピング反応時間中の反応液の蒸発を防止する。
各プローブ配置部１８では反応液がプローブと反応して所定のＳＮＰがあればそのプローブから蛍光が発せられる。蛍光は基板１０の裏面側から励起光を照射することにより検出する。
【００７７】
以下、各反応試薬の組成を示して、本発明を詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの反応容器に限定されるものではない。
ＰＣＲ反応試薬は既知のものであり、例えば特許文献３の段落［００４６］に記載されているような、プライマー、ＤＮＡポリメラーゼ及びTaqStart（CLONTECH Laboratories社製）を含む反応試薬を使用することができる。また、ＰＣＲ反応試薬にはＡｍｐＤｉｒｅｃｔ（島津製作所製）が混入されていてもよい。プライマーは、例えば、特許文献３の表１に記載されているＳＮＰ  ＩＤｌ〜２０、配列番号を１〜４０などを使用することができる。
【００７８】
タイピング試薬としてインベーダ（登録商標）試薬を使用する。そのインベーダ（登録商標）試薬としては、インベーダ（登録商標）アッセイキット（Third Wave Technology社製）を使用する。例えば、シグナルバッファー、フレットプローブ、構造特異的ＤＮＡ分解酵素及びアレル特異的プローブを特許文献３の段落［００４６］に記載されているような濃度に調製されたものである。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明は種々の化学反応の測定のほか、例えば遺伝子解析の研究や臨床分野において、種々の自動分析に利用することができ、例えば、人間を初めとして、動物や植物のゲノムＤＮＡの多型、特にＳＮＰなどを検出することができ、さらにその結果を用いて病気罹患率の診断や、投与薬剤の種類と効果及び副作用との関係などの診断のほか、動物や植物の品種判定、感染症診断（感染菌の型判定）などを行なうのにも利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１】本発明が適用される遺伝子解析装置を概略的に示すブロック図である。
【図２】反応容器の一例を示す図であり、（Ａ）は正面図、（Ｂ）は平面図、（Ｃ）は（Ｂ）のＸ−Ｘ線位置での拡大断面図である。
【図３】上下の温度調節ユニットとともに同反応容器における増幅反応部の一例を図２（Ｂ）のＹ−Ｙ線位置で示す拡大断面図である。
【図４】（Ａ），（Ｂ）はそれぞれ図３の増幅反応部の例を透視図として示す斜視図である。
【図５】反応容器の他の例を示す図であり、（Ａ）は正面図、（Ｂ）は平面図、（Ｃ）は斜視図である。
【図６】同反応容器における遺伝子増幅反応部の一例を示す図であり、（Ａ）は蓋が外され、反応液が注入された状態を示す断面図、（Ｂ）はその後、蓋が閉じられＰＣＲ反応を実行する状態を温度制御機構とともに示す断面図である。
【図７】本発明の遺伝子解析装置の一実施例を示す概略斜視図である。
【図８】同実施例における温度調節ユニットの移動機構を示す斜視図である。
【図９】同移動機構を示す側面図である。
【図１０】同実施例におけるタイピング反応温度制御部を示す断面図である。
【図１１】同実施例におけるノズル先端部を表わした正面図であり、（Ａ）はノズルに分注チップが装着されていない状態、（Ｂ）はノズルに分注チップが装着された状態を表わしている。
【図１２】同実施例における蛍光検出部を示す概略構成図である。
【図１３】一実施例において反応容器を使用したＳＮＰ検出方法の工程の前半部を示す図であり、（Ａ）は正面図、（Ｂ）は平面図である。
【図１４】分注ノズル先端の分注チップへの液のＰＣＲ反応液の吸入方法を示す工程図である。
【図１５】（Ａ），（Ｂ）は分注ノズルから増幅反応部への液の注入方法を示す正面断面図である。
【図１６】（Ａ），（Ｂ）は増幅反応部から分注ノズルへのＰＣＲ反応終了液の回収方法を示す正面断面図である。
【図１７】同反応容器を使用したＳＮＰ検出方法の工程の後半部を示す図であり、（Ａ）は正面図、（Ｂ）は平面図である。
【図１８】本発明が関係することのあるＳＮＰ検出方法を概略的に示すフローチャート図である。
【００８１】
２      サンプル
４      ＰＣＲ反応試薬
６      インベーダ（登録商標）試薬
８      プローブ配置部
１０ａ      基板
１２      サンプル注入部
１４      タイピング試薬収容部
１６      ミネラルオイル収容部
１８      プローブ配置部
２０      フイルム
２２      シール材
２８      分注ノズル
３０      遺伝子増幅試薬収容部
３１      ＰＣＲ終了液注入部
３２      増幅反応部
３４ａ，３４ｂ      ポート
３６ａ，３６ｂ      ポートの開口
３８      ＰＣＲ反応液
３８ａ    ＰＣＲ反応終了液
４１      反応容器
６０，６２      温度調節ユニット
６４      蛍光検出部
６６      送液アーム
７０      分注チップ
１１０      タイピング反応温度制御部
１１２      分注部
１１８      制御部
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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