(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
0006275846.tif 000048
I
から選択される化合物又はその立体異性体、互変異性体、若しくは薬学的に許容される塩（式中、
Ｘ１が、ＣＲ１又はＮであり、
Ｘ２が、ＣＲ２又はＮであり、
Ｘ３が、ＣＲ３又はＮであり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ及びＣ１−Ｃ３アルキルから独立して選択され、
Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７が、ＣＨ及びＮから独立して選択され、
Ｙ１及びＹ２が、ＣＨ及びＮから独立して選択され、
Ｚが、Ｏ又はＮＲであり、Ｒが、Ｈ又はＣ１−Ｃ３アルキルであり、
Ｑが、構造：
0006275846.tif 000049
を有する基から選択され、
Ｒ４が、−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＮ）＝ＣＨ２、−Ｃ≡ＣＣＨ３及び−Ｃ≡ＣＨから選択され、Ｒ５が、Ｈ及びＣ１−Ｃ３アルキルから選択され、
Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ７ａ及びＲ７ｂが、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ及びＣ１−Ｃ３アルキルから独立して選択され、
又はＲ６ａ及びＲ７ａが、５員、６員又は７員カルボシクリル又はヘテロシクリル環を形成しており、
又はＲ５及びＲ６ａが、５員、６員又は７員ヘテロシクリル環を形成しており、
又はＺが窒素である場合、Ｚ及びＲ７ａ又はＺ及びＲ６ａが、５員、６員又は７員ヘテロシクリル環を形成しており、
Ｒ８が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、−Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、−ＣＨ（ＣＦ３）ＯＨ、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、シクロプロピル、シクロプロピルメチル、１−ヒドロキシシクロプロピル、イミダゾリル、ピラゾリル、３−ヒドロキシ−オキセタン−３−イル、オキセタン−３−イル及びアゼチジン−１−イルから選択され、
Ｒ９が、構造：
0006275846.tif 000050
0006275846.tif 000051
から選択され、
波線が、結合部位を指し示しており、
アルキル、カルボシクリル及びヘテロシクリルが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＨＦ２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＣＨ３、−ＣＯＮ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣＯＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、−ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、−ＮＯ２、＝Ｏ、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＳＣＨ３、−Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、シクロプロピル、オキセタニル、アゼチジニル、１−メチルアゼチジン−３−イル）オキシ、Ｎ−メチル−Ｎ−オキセタン−３−イルアミノ、アゼチジン−１−イルメチル、ピロリジン−１−イル、及びモルホリノから独立して選択される１個又は複数の基で置換されていてもよい）。
【請求項２】
Ｘ１が、Ｎである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｘ２が、Ｎである、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘ３が、Ｎである、請求項１から３の何れか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘ１及びＸ３が、Ｎであり、Ｘ１及びＸ２が、Ｎであり、又はＸ２及びＸ３が、Ｎである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘ１及びＸ３が、ＣＨであり、Ｘ２が、ＣＦである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘ４が、Ｎである、請求項１から６の何れか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｘ４及びＸ５が、Ｎである、請求項１から７の何れか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｙ１が、ＣＨであり、Ｙ２が、Ｎである、請求項１から８の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｙ１が、Ｎであり、Ｙ２が、ＣＨである、請求項１から８の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｙ１及びＹ２が、それぞれＣＨである、請求項１から８の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ４が、−ＣＨ＝ＣＨ２である、請求項１から１１の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ５が、Ｈ又は−ＣＨ３である、請求項１から１２の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ７ａ及びＲ７ｂが、Ｈである、請求項１から１３の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ８が、−ＣＨ２ＯＨである、請求項１から１４の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ９が、
0006275846.tif 000052
から選択される、請求項１から１５の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
式Ｉａ：
0006275846.tif 000053
Ia
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
式Ｉｂ：
0006275846.tif 000054
Ib
から選択される、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
基：
0006275846.tif 000055
が、
0006275846.tif 000056
から選択される、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２０】
式Ｉｃ：
0006275846.tif 000057
Ic
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項２１】
式Ｉｄ：
0006275846.tif 000058
Id
から選択される、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｎ−｛２−［（６−｛［５−（２−｛４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル｝−３−（ヒドロキシメチル）ピリジン−４−イル）−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル］アミノ｝ピリジン−２−イル）オキシ］エチル｝プロパ−２−エナミド；
Ｎ−（シアノメチル）−１−（４−｛［５−（２−｛４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル｝−３−（ヒドロキシメチル）ピリジン−４−イル）−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル］アミノ｝ピリミジン−２−イル）ピロリジン−３−カルボキサミド；
Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］プロパ−２−エナミド；
Ｎ−［２−［［６−［［５−［２−（６−ｔｅｒｔ−ブチル−８−フルオロ−１−オキソ−フタラジン−２−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］プロパ−２−エナミド；
Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］アミノ］エチル］プロパ−２−エナミド；及び
Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］ブタ−２−イナミド
から選択される、請求項１から２１の何れか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｎ−［（１Ｓ）−２−［［６−［［５−［２−（７，７−ジメチル−４−オキソ−１，２，６，８−テトラヒドロシクロペンタ［３，４］ピロロ［３，５−ｂ］ピラジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］−１−メチル−エチル］プロパ−２−エナミド；
Ｎ−［（１Ｓ）−２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］−１−メチル−エチル］プロパ−２−エナミド；
Ｎ−［２−［［６−［［５−［２−（７，７−ジメチル−４−オキソ−１，２，６，８−テトラヒドロシクロペンタ［３，４］ピロロ［３，５−ｂ］ピラジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］アミノ］エチル］プロパ−２−エナミド；
Ｎ−［２−［［６−［［５−［２−（７，７−ジメチル−４−オキソ−１，２，６，８−テトラヒドロシクロペンタ［３，４］ピロロ［３，５−ｂ］ピラジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］−メチル−アミノ］エチル］プロパ−２−エナミド；
Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］−メチル−アミノ］エチル］プロパ−２−エナミド；
Ｎ−［２−［［６−［［５−［２−（７，７−ジメチル−４−オキソ−１，２，６，８−テトラヒドロシクロペンタ［３，４］ピロロ［３，５−ｂ］ピラジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］−Ｎ−メチル−プロパ−２−エナミド；
Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］−Ｎ−メチル−プロパ−２−エナミド；
Ｎ−［（３Ｓ）−１−［６−［［５−［２−（７，７−ジメチル−４−オキソ−１，２，６，８−テトラヒドロシクロペンタ［３，４］ピロロ［３，５−ｂ］ピラジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］−３−ピペリジル］プロパ−２−エナミド；
Ｎ−［（３Ｓ）−１−［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］−３−ピペリジル］プロパ−２−エナミド；
Ｎ−［２−［［６−［［５−［２−（７，７−ジメチル−４−オキソ−１，２，６，８−テトラヒドロシクロペンタ［３，４］ピロロ［３，５−ｂ］ピラジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］ブタ−２−イナミド；
２−シアノ−Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］プロパ−２−エナミド；及び
２−シアノ−Ｎ−［２−［［６−［［５−［２−（７，７−ジメチル−４−オキソ−１，２，６，８−テトラヒドロシクロペンタ［３，４］ピロロ［３，５−ｂ］ピラジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］プロパ−２−エナミド
から選択される、請求項１から２１の何れか一項に記載の化合物。
【請求項２４】
請求項１から２３の何れか一項の記載の化合物及び薬学的に許容される担体、流動促進剤、希釈剤又は賦形剤を含む、薬学的組成物。
【請求項２５】
請求項１から２３の何れか一項に記載の化合物を、薬学的に許容される担体、流動促進剤、希釈剤又は賦形剤と混合することを含む、薬学的組成物を作製するための方法。
【請求項２６】
治療的有効量の請求項２４に記載の薬学的組成物を含む、疾患又は障害を治療する医薬。
【請求項２７】
疾患又は障害が、免疫障害である、請求項２６に記載の医薬。
【請求項２８】
免疫障害が、関節リウマチである、請求項２７に記載の医薬。
【請求項２９】
疾患又は障害が、全身性及び局所性炎症、関節炎、免疫抑制に関連した炎症、臓器移植片拒絶反応、アレルギー、潰瘍性大腸炎、クローン病、皮膚炎、喘息、全身性紅斑性狼瘡、腎外性狼瘡、シェーグレン症候群、多発性硬化症、強皮症／全身性硬化症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）脈管炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、乾癬である、請求項２６に記載の医薬。
【請求項３０】
疾患又は障害が、乳がん、卵巣がん、頸がん、前立腺がん、精巣がん、泌尿生殖器がん、食道がん、喉頭がん、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、皮膚がん、ケラトアカントーマ、肺がん、類表皮癌、大細胞癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞癌、肺腺癌、骨がん、結腸がん、腺腫、膵臓がん、腺癌、甲状腺がん、濾胞腺癌、未分化癌、乳頭癌、精上皮腫、メラノーマ、肉腫、膀胱癌、肝臓癌及び胆管がん、腎臓癌、膵臓がん、骨髄障害、リンパ腫、毛様細胞がん、口腔がん、鼻咽頭がん、咽頭がん、口唇がん、舌がん、口のがん、小腸がん、結直腸がん、大腸がん、直腸がん、脳及び中枢神経系のがん、ホジキン病、白血病、気管支がん、甲状腺がん、肝臓がん及び肝内胆管がん、肝細胞がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、神経膠腫／膠芽細胞腫、子宮内膜がん、メラノーマ、腎臓がん及び腎盂がん、膀胱がん、子宮体がん、子宮頸がん、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、骨髄性白血病、口腔がん及び咽頭がん、非ホジキンリンパ腫、メラノーマ並びに絨毛結腸腺腫から選択されるがんである、請求項２６に記載の医薬。
【請求項３１】
疾患又は障害が、血液悪性腫瘍である、請求項２６に記載の医薬。
【請求項３２】
血液悪性腫瘍が、白血病又はリンパ腫である、請求項３１に記載の医薬。
【請求項３３】
抗炎症薬、免疫調節剤、化学療法剤、アポトーシスエンハンサー、神経栄養因子、心血管疾患を治療するための薬剤、肝臓疾患を治療するための薬剤、抗ウイルス薬、血液障害を治療するための薬剤、糖尿病を治療するための薬剤及び免疫不全障害を治療するための薬剤から選択されるさらなる治療剤をさらに含む、請求項２６に記載の医薬。
【請求項３４】
さらなる治療剤が、Ｂｃｌ−２阻害剤である、請求項３３に記載の医薬。
【請求項３５】
Ｂｃｌ−２阻害剤が、ベネトクラックスである、請求項３４に記載の医薬。
【請求項３６】
さらなる治療剤が、Ｂｔｋ阻害剤である、請求項３３に記載の医薬。
【請求項３７】
Ｂｔｋ阻害剤が、イブルチニブである、請求項３６に記載の医薬。
【請求項３８】
さらなる治療剤が、ＪＡＫ阻害剤である、請求項３３に記載の医薬。
【請求項３９】
さらなる治療剤が、抗ＣＤ２０抗体である、請求項３３に記載の医薬。
【請求項４０】
抗ＣＤ２０抗体が、オビヌツズマブ又はリツキシマブである、請求項３９に記載の医薬。
【請求項４１】
ａ）請求項２４に記載の薬学的組成物、及び
ｂ）使用説明書
を含む、ブルトン型チロシンキナーゼによって媒介される疾患又は障害を治療するためのキット。
【請求項４２】
免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害から選択され、ブルトン型チロシンキナーゼによって媒介される疾患又は障害の治療における使用のための、請求項１から２３の何れか一項に記載の化合物。
【請求項４３】
免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害から選択され、ブルトン型チロシンキナーゼによって媒介される疾患又は障害の治療のための医薬の製造における、請求項１から２３の何れか一項に記載の化合物。
【請求項４４】
免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害から選択され、ブルトン型チロシンキナーゼによって媒介される疾患又は障害の治療のための、請求項１から２３の何れか一項に記載の化合物を含む医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に、炎症、免疫障害及びがんを含むブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）によって媒介される障害を治療するための化合物に関し、より具体的には、Ｂｔｋ活性を阻害する化合物に関する。本発明は、哺乳動物細胞又は関連の病理学的状態のインビトロ、ｉｎ  ｓｉｔｕ及びインビボにおける診断又は治療のためにこの化合物を使用する方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
プロテインキナーゼは最大のヒト酵素ファミリーであり、５００個を優に上回るタンパク質を包含する。ブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）は、チロシンキナーゼのＴｅｃファミリーのメンバーであり、早期Ｂ細胞の発生並びに成熟Ｂ細胞の活性化、シグナル伝達及び生存の制御因子である。
【０００３】
Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）を介したＢ細胞シグナル伝達は、多種多様な生物学的生産物をもたらし得るが、こうした多種多様な生物学的生産物は、Ｂ細胞の発生段階に依存する。ＢＣＲシグナルの大きさ及び持続期間は、正確に調節されなければならない。異常なＢＣＲ媒介性シグナル伝達は、複数の自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患をもたらす、無調節のＢ細胞活性化及び／又は病原性自己抗体の形成を引き起こす可能性がある。ヒトにおけるＢｔｋの突然変異により、Ｘ連鎖性無γグロブリン血症（ＸＬＡ）が起きる。この疾患には、Ｂ細胞の成熟障害、免疫グロブリン産生の減少、Ｔ細胞非依存性免疫応答不全、及び、ＢＣＲ刺激時における持続的カルシウムサインの顕著な減衰が伴う。アレルギー性障害及び／又は自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患におけるＢｔｋの役割の根拠は、Ｂｔｋ欠損マウスモデルにおいて確立されてきた。例えば、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）に関する標準的なマウスの前臨床モデルにおいて、Ｂｔｋ欠損は、疾患進行の顕著な改善をもたらすことが示されてきた。さらに、Ｂｔｋ欠損マウスは、コラーゲン誘導性関節炎の発病に対して抵抗性でもあり得るし、ブドウ球菌属誘導性関節炎にもかかりにくくすることができる。数多くの根拠が、自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患の発生機序におけるＢ細胞及び体液性免疫系の役割を支持している。Ｂ細胞を大幅に減少させるために開発されたタンパク質ベース治療薬（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ等）は、いくつかの自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患を治療する手法を代表するものである。Ｂ細胞活性化におけるＢｔｋの役割のため、Ｂｔｋの阻害剤は、Ｂ細胞媒介性病原性活性（自己抗体産生等）の阻害剤として有用であり得る。Ｂｔｋは、破骨細胞、マスト細胞及び単球においても発現するものであり、これらの細胞の機能にとって重要であることが示されてきた。例えば、マウスにおけるＢｔｋ欠損には、ＩｇＥ媒介性マスト細胞活性化障害（ＴＮＦ−α及び他の炎症サイトカインの放出の顕著な現象）が伴い、ヒトにおけるＢｔｋ欠損には、活性化単球によるＴＮＦ−α産生の大幅な低減が伴う。
【０００４】
したがって、Ｂｔｋ活性の阻害は、ＳＬＥ、関節リウマチ、多発性血管炎、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、重症筋無力症、アレルギー性鼻炎及び喘息等、アレルギー性障害並びに／又は自己免疫疾患及び／若しくは炎症性疾患の治療に有用であり得る（Di Paolo等(2011) Nature Chem. Biol. 7(1):41-50；Liu (2011) Drug Metab. and Disposition 39(10):1840-1849；Liu等(2011) Jour. of Pharm. and Exper. Ther. 338(1):154-163；Lou等(2012) J. Med. Chem. 55(10):4539-4550；Farooqui等(2013) Expert Opinion on Orphan Drugs, Volume: 1, Issue: 11: 925-933）。さらに、Ｂｔｋは、アポトーシスにおいて役割を担うことも報告されてきており、したがって、Ｂｔｋ活性の阻害は、がんに対しても有用であり得るし、同様に、Ｂ細胞リンパ腫、白血病及び他の血液悪性腫瘍の治療のためにも有用であり得る（米国特許第７５１４４４４号）。破骨細胞機能におけるＢｔｋの役割を考えれば、Ｂｔｋ活性の阻害は、骨粗鬆症等の骨障害の治療に有用であり得る。特定のＢｔｋ阻害剤が報告されてきた（米国特許第７８８４１０８号、国際公開第２０１０／０５６８７５号、米国特許第７４０５２９５号、米国特許第７３９３８４８号、国際公開第２００６／０５３１２１号、米国特許第７９４７８３５号、米国特許出願第２００８／０１３９５５７号、米国特許第７８３８５２３号、米国特許出願第２０１２／００４０９４９号、米国特許出願第２０１２／０２９５８８５号、米国特許出願第２０１３／００４５９６５号、米国特許第７６８３０６４号、米国特許第７９０２１９４号、米国特許第７９０６５０９号、米国特許第８１２４６０４号、米国特許出願第２００８／０１２５４１７号、米国特許出願第２０１１／０１１８２３３号、国際公開第２０１１／１４０４８８号、米国特許出願第２０１２／００１０１９１号、国際公開第２０１３／０６７２７４号、米国特許出願第２０１３／０１１６２３５号、国際公開第２０１３／０６７２７７号、米国特許出願第２０１３／０１１６２４５号、国際公開第２０１３／０６７２６０号、米国特許出願第２０１３／０１１６２６２号、国際公開第２０１３／０６７２６４号、米国特許出願第２０１３／０１１６２４６号。
【０００５】
不可逆的阻害剤は、チロシンキナーゼ酵素の強力で選択的な阻害を提供するものであり、可逆的チロシンキナーゼ阻害剤を用いると生じる腫瘍抵抗性を克服することもできる（Carmi等(2012) Biochem. Pharmacol. 84(11):1388-1399）。阻害剤と標的との間での共有結合形成による不可逆的標的結合に関して認識されている利点は、有効性、競合を克服する能力、及びクラス内選択性である。固有の難点は、標的依存性応答及び突然変異依存性応答並びに毒性を含む。不可逆的阻害剤は、キナーゼドメインのヌクレオチド結合ポケット内の求核システイン残基との間での共有結合的相互作用によって、当該阻害剤のタンパク質標的を不活性化させる。上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）及び線維芽細胞増殖因子受容体チロシンキナーゼ（ＦＧＦＲ）を対象とする多様な不可逆的チロシンキナーゼ阻害剤が開発されてきており、こうした不可逆的チロシンキナーゼ阻害剤のいくつかは、抗がん剤として臨床的に使用されてきた。
【０００６】
Ｂ細胞悪性腫瘍であるマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）を有する患者を治療するためにＦＤＡによって承認されたイブルチニブ（ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（登録商標）、Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ、Ｊａｎｓｓｅｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｒａｒｉｔａｎ、ＮＪ）を含む、Ｂｔｋとの間に共有結合を形成する化合物が報告されてきた（米国特許第７５１４４４４号、米国特許第８０８８７８１号）。イブルチニブもまた、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）及び小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）における臨床的有効性を実証してきた。さらに、ＰＦ−１１２（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．）は、自己免疫疾患及び炎症性疾患の治療のために開発されている、Ｂｔｋの共有結合的可逆的阻害剤である。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は一般に、その立体異性体、互変異性体又は薬学的に許容される塩を含む、式Ｉの構造：
0006275846.tif 000002
I
を有し、求電子性官能基及びブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）をモジュレートする活性を有する、ヘテロアリールピリドン及びアザ−ピリドンアミド化合物に関する。様々な置換基が本明細書で定義されている。
【０００８】
本発明の一態様は、Ｂｔｋに共有結合的に結合する式Ｉの化合物である。
【０００９】
本発明の別の態様は、Ｂｔｋ、及びＢｔｋ中にあるシステイン４８１のアミノ酸配列位置と相同であるチロシンキナーゼのアミノ酸配列位置の中にシステイン残基を有するチロシンキナーゼとの結合に選択的である式Ｉの化合物である。
【００１０】
一実施態様において、式Ｉの化合物は、標的チロシンキナーゼの活性化型（例えば、チロシンキナーゼのリン酸化型）を選択的且つ不可逆的に阻害する。例えば、活性化Ｂｔｋは、チロシン５５１のところでリン酸基転移される。したがって、こうした実施態様において、一旦標的キナーゼがシグナル伝達事象によって活性化されたら、不可逆的Ｂｔｋ阻害剤は、細胞内の標的キナーゼのみを阻害する。
【００１１】
例示的な一実施態様において、式Ｉの化合物は、マイケルアクセプター部分を有する。
【００１２】
本発明の別の態様は、式Ｉの化合物及び薬学的に許容される担体、流動促進剤、希釈剤又は賦形剤を含む、薬学的組成物である。薬学的組成物は、第２の治療剤をさらに含んでいてもよい。
【００１３】
本発明の別の態様は、式Ｉの化合物を薬学的に許容される担体、流動促進剤、希釈剤又は賦形剤と混合することを含む、薬学的組成物を作製するための方法である。
【００１４】
本発明の別の態様は、治療的有効量の式Ｉの化合物を、免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害から選択され、ブルトン型チロシンキナーゼによって媒介される疾患又は障害を有する患者に投与することを含む、疾患又は障害を治療する方法である。
【００１５】
本発明は、ａ）式Ｉの化合物を含む第１の薬学的組成物、及びｂ）使用説明書を含む、ブルトン型チロシンキナーゼによって媒介される状態を治療するためのキットを含む。
【００１６】
本発明は、医薬としての使用のため、並びに、免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害から選択され、ブルトン型チロシンキナーゼによって媒介される疾患又は障害の治療における使用のための式Ｉの化合物を含む。
【００１７】
本発明は、医薬としての使用のための式Ｉの化合物を含む。
【００１８】
本発明は、免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害から選択され、ブルトン型チロシンキナーゼによって媒介される疾患又は障害の治療における使用のための式Ｉの化合物を含む。
【００１９】
本発明は、疾患又は障害の治療におけるさらなる治療剤と組み合わせた使用のための式Ｉの化合物を含む。
【００２０】
本発明は、免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害の治療のための医薬の製造における、式Ｉの化合物の使用であって、医薬が、ブルトン型チロシンキナーゼを媒介する、式Ｉの化合物の使用を含む。
【００２１】
本発明は、免疫障害、がん、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌機能障害及び神経障害の治療のための、式Ｉの化合物の使用であって、医薬が、ブルトン型チロシンキナーゼを媒介する、式Ｉの化合物の使用を含む。
【００２２】
本発明は、式Ｉの化合物を作製する方法を含む。
【００２３】
本発明は、本明細書に記載の発明を含む。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
ここで、本発明の特定の実施態様について詳細に言及するが、これらの実施態様の例は、付属する構造及び式中で例示する。本発明については、列挙する実施態様と結びつけて記述するが、これらの実施態様が、本発明を当該実施態様に限定することを目的としていないことは、理解されよう。一方、本発明は、特許請求の範囲によって定義された本発明の範囲に含まれ得るすべての代替形態、修正形態及び等価物を包摂することを目的としている。当業者ならば、本発明の実施において使用され得る、本明細書に記載の方法及び材料に類似した又は等価な数多くの方法及び材料を認識している。本発明は、記載された方法及び材料に限定されることは決してない。限定されるわけではないが定義された用語、用語の使用法又は記載された技術等を含む、援用された文献、特許及び類似の材料の１つ又は複数が本出願と相違又は矛盾する場合、本出願が規制する。別途定義のない限り、本明細書で使用されるすべての専門用語及び科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載の方法及び材料に類似した又は等価な方法及び材料を本発明の実施又は試験において使用することもできるが、適切な方法及び材料についても後述している。本明細書で言及されたすべての刊行物、特許出願、特許及び他の参考資料は、その全内容が参照により援用される。本出願で使用される命名法は、別途指示がない限り、ＩＵＰＡＣ式体系的命名法に基づいている。
【００２５】
定義
標準的な化学用語の定義は、Ｍｃｍｕｒｒｙ「ＯＲＧＡＮＩＣ  ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  Ｆｉｆｔｈ  ＥＤ．」（２０００）Ｂｒｏｏｋｓ／Ｃｏｌｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｇｒｏｖｅを含む参考文献に見出すことができる。
【００２６】
置換基の数を指し示す場合、用語「１つ又は複数の」とは、１個の置換基から可能な最大数の置換までの範囲を指し、すなわち、置換基による１個の水素の置き換えからすべての水素原子の置き換えに至るまでを指す。用語「置換基」とは、親分子上の水素原子を置き換える、原子又は原子の基を表す。用語「置換された」とは、指定された基が１個又は複数の置換基を有することを表す。任意の基が複数の置換基を有していてもよく、種々の可能な置換基が提示されている場合、置換基は、独立して選択され、同じである必要がない。用語「無置換」とは、指定された基が置換基を有さないことを意味する。用語「置換されていてもよい」とは、指定された基が無置換であるか又は可能な置換基の群から独立して選択される１つ若しくは複数の置換基で置換されていることを意味する。置換基の数を指し示す場合、用語「１つ又は複数の」とは、１個の置換基から可能な最大数の置換までを意味し、すなわち、置換基による１個の水素原子の置き換えからすべての水素原子の置き換えに至るまでを意味する。
【００２７】
本明細書で使用される用語「アルキル」は、１個から１２個までの炭素原子（Ｃ１−Ｃ１２）の飽和した直鎖又は分岐鎖状の一価の炭化水素基を指しており、アルキル基は、後述する１個又は複数の置換基で独立して置換されていてもよいものであり得る。別の実施態様において、アルキル基は、１個から８個までの炭素原子（Ｃ１−Ｃ８）又は１個から６個までの炭素原子（Ｃ１−Ｃ６）である。アルキル基の例には、限定されるわけではないが、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３、１−ヘプチル、１−オクチル等が挙げられる。
【００２８】
本明細書で使用される用語「アルキレン」とは、１個から１２個までの炭素原子（Ｃ１−Ｃ１２）の飽和した直鎖又は分岐鎖状の二価の炭化水素基を指しており、アルキレン基は、後述する１個又は複数の置換基で独立して置換されていてもよいものであり得る。別の実施態様において、アルキレン基は、１個から８個までの炭素原子（Ｃ１−Ｃ８）又は１個から６個までの炭素原子（Ｃ１−Ｃ６）である。アルキレン基の例には、限定されるわけではないがメチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）及びプロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）等が挙げられる。
【００２９】
用語「アルケニル」とは、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素ｓｐ２二重結合を有する２個から８個までの炭素原子（Ｃ２−Ｃ８）の直鎖又は分岐鎖状の一価の炭化水素基を指しており、アルケニル基は、本明細書に記載の１個又は複数の置換基で独立して置換されていてもよく、「シス」及び「トランス」配向、又は代替的には、「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有する基を含む。例には、限定されるわけではないがエチレニル又はビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）及びアリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）等が挙げられる。
【００３０】
用語「アルケニレン」とは、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素ｓｐ２二重結合を有する２個から８個までの炭素原子（Ｃ２−Ｃ８）の直鎖又は分岐鎖状の二価の炭化水素基を指しており、アルケニレン基は、本明細書に記載の１個又は複数の置換基で独立して置換されていてもよく、「シス」及び「トランス」配向、又は代替的には「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有する基を含む。例には、限定されるわけではないがエチレニレン又はビニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）及びアリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−）等が挙げられる。
【００３１】
用語「アルキニル」とは、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素ｓｐ三重結合を有する２個から８個までの炭素原子（Ｃ２−Ｃ８）の直鎖又は分岐状の一価の炭化水素基を指しており、アルキニル基は、本明細書に記載の１個又は複数の置換基で独立して置換されていてもよい。例には、限定されるわけではないがエチニル（−ＣＨ≡ＣＨ）、プロピニル（プロパルギル、−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）等が挙げられる。
【００３２】
用語「アルキニレン」とは、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち、炭素−炭素ｓｐ三重結合を有する２個から８個までの炭素原子（Ｃ２−Ｃ８）の直鎖又は分岐状の二価の炭化水素基を指しており、アルキニレン基は、本明細書に記載の１個又は複数の置換基で独立して置換されていてもよい。例には、限定されるわけではないがエチニレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロピニレン（プロパルギレン、−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）等が挙げられる。
【００３３】
用語「炭素環」、「カルボシクリル（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｙｌ）」、「炭素環式環」及び「シクロアルキル」とは、単環式環としての３個から１２個までの炭素原子（Ｃ３−Ｃ１２）又は二環式環としての７個から１２個までの炭素原子を有する、一価の非芳香族の飽和した又は部分不飽和の環を指す。７個から１２個までの原子を有する二環式炭素環は、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］又は［６，６］系として配列され得、９個又は１０個の環原子を有する二環式炭素環は、ビシクロ［５，６］又は［６，６］系、又はビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン及びビシクロ［３．２．２］ノナン等の架橋系として配列され得る。スピロ部分もまた、上記定義の範囲に含まれる。単環式炭素環の例は、限定されるわけではないがシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−１−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル及びシクロドデシル等が挙げられる。カルボシクリル基は、本明細書に記載の１個又は複数の置換基で独立して置換されていてもよい。
【００３４】
「アリール」とは、親芳香環系にある単一の炭素原子からの１個の水素原子の抜き取りによって得られた、６−２０個までの炭素原子（Ｃ６−Ｃ２０）の一価の芳香族炭化水素基を意味する。一部のアリール基は、例示的な構造中において「Ａｒ」と表されている。アリールは、飽和環、部分不飽和環又は芳香族炭素環式環に縮合した芳香環を含む、二環式基を含む。典型的なアリール基には、限定されるわけではないがベンゼン（フェニル）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニル、インデニル、インダニル、１，２−ジヒドロナフタレン及び１，２，３，４−テトラヒドロナフチル等に由来する基が挙げられる。アリール基は、本明細書に記載の１個又は複数の置換基で独立して置換されていてもよい。
【００３５】
「アリーレン」とは、親芳香環系にある２個の炭素原子からの２個の水素原子の抜き取りによって得られた、６−２０個までの炭素原子（Ｃ６−Ｃ２０）の二価の芳香族炭化水素基を意味する。一部のアリーレン基は、例示的な構造中において「Ａｒ」と表されている。アリーレンは、飽和環、部分不飽和環、又は芳香族炭素環式環に縮合した芳香環を含む、二環式基を含む。典型的なアリーレン基には、限定されるわけではないが、ベンゼン（フェニレン）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニレン、インデニレン、インダニレン、１，２−ジヒドロナフタレン及び１，２，３，４−テトラヒドロナフチル等に由来する基が挙げられる。アリーレン基は、本明細書に記載の１個又は複数の置換基で置換されていてもよい。
【００３６】
用語「複素環」、「ヘテロシクリル」及び「複素環式環」は、本明細書において互換的に使用されており、３個から約２０個までの環原子の飽和又は部分不飽和（すなわち、１つ又は複数の二重結合及び／又は三重結合を環内に有する）炭素環式基を指しており、この炭素環式基中では、少なくとも１個の環原子が、窒素、酸素、リン及び硫黄から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子が、Ｃであり、１個又は複数の環原子が、後述する１個又は複数の置換基で独立して置換されていてもよい。複素環は、３個から７個までの環員（２個から６個までの炭素原子、並びにＮ、Ｏ、Ｐ及びＳから選択される１個から４個までのヘテロ原子）を有する単環、又は７個から１０個までの環員（４個から９個までの炭素原子、並びにＮ、Ｏ、Ｐ及びＳから選択される１個から６個までのヘテロ原子）を有する二環、例えばビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］又は［６，６］系であってもよい。複素環については、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ  Ａ．、「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９６８）、特に第１章、第３章、第４章、第６章、第７章及び第９章；「Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９５０年版から現行版まで）、特に第１３巻、第１４巻、第１６巻、第１９巻及び第２８巻；及びＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６で記述されている。「ヘテロシクリル」は、複素環基が飽和環、部分不飽和環又は芳香族炭素環式環若しくは複素環式環と縮合している、基も含む。複素環式環の例には、限定されるわけではないが、モルホリン−４−イル、ピペリジン−１−イル、ピペラジニル、ピペラジン−４−イル−２−オン、ピペラジン−４−イル−３−オン、ピロリジン−１−イル、チオモルホリン−４−イル、Ｓ−ジオキソチオモルホリン−４−イル、アゾカン−１−イル、アゼチジン−１−イル、オクタヒドロピリド［１，２−ａ］ピラジン−２−イル、［１，４］ジアゼパン−１−イル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、インドリニル、２Ｈ−ピラニル、４Ｈ−ピラニル、ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニルイミダゾリニル、イミダゾリジニル、３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、３−アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、アザビシクロ［２．２．２］ヘキサニル、３Ｈ−インドリルキノリジニル及びＮ−ピリジルウレアが挙げられる。スピロ部分もまた、上記定義の範囲に含まれる。２個の環原子がオキソ（＝Ｏ）部分で置換された複素環式基の例は、ピリミジノニル及び１，１−ジオキソ−チオモルホリニルである。本明細書における複素環基は、本明細書に記載の１個又は複数の置換基で独立して置換されていてもよい。
【００３７】
用語「ヘテロアリール」とは、５員、６員又は７員環の一価の芳香族基を指しており、窒素、酸素及び硫黄から独立して選択される１個又は複数のヘテロ原子を含有する、５−２０個までの原子の縮合環系（その少なくとも１つが芳香族である）を含む。ヘテロアリール基の例は、ピリジニル（例えば、２−ヒドロキシピリジニルを含む）、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、ピリミジニル（例えば、４−ヒドロキシピリミジニルを含む）、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル及びフロピリジニルである。ヘテロアリール基は、本明細書に記載の１個又は複数の置換基で独立して置換されていてもよい。
【００３８】
複素環又はヘテロアリール基には、複素環又はヘテロアリール基への結合が可能である場所に炭素が結合（炭素結合型）していてもよく、又は窒素が結合（窒素結合型）していてもよい。限定ではなく例として、炭素が結合した複素環又はヘテロアリールは、ピリジンの２位、３位、４位、５位若しくは６位、ピリダジンの３位、４位、５位若しくは６位、ピリミジンの２位、４位、５位若しくは６位、ピラジンの２位、３位、５位若しくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール若しくはテトラヒドロピロールの２位、３位、４位若しくは５位、オキサゾール、イミダゾール若しくはチアゾールの２位、４位若しくは５位、イソオキサゾール、ピラゾール若しくはイソチアゾールの３位、４位若しくは５位、アジリジンの２位若しくは３位、アゼチジンの２位、３位若しくは４位、キノリンの２位、３位、４位、５位、６位、７位若しくは８位又はイソキノリンの１位、３位、４位、５位、６位、７位若しくは８位に結合している。
【００３９】
限定ではなく例として、窒素が結合した複素環又はヘテロアリールは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン又は１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドール又はイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾール又はβ−カルボリンの９位に結合している。
【００４０】
用語「マイケルアクセプター部分」とは、新たな共有結合がマイケルアクセプター部分の一部とドナー部分との間に形成されることになるマイケル反応に関与し得る、官能基を指す。マイケルアクセプター部分は求電子剤であり、「ドナー部分」は求核種である。式Ｉの化合物中に提示された「Ｑ」基は、マイケルアクセプター部分の非限定的な例である。
【００４１】
用語「求核種」又は「求核」とは、電子が豊富な化合物又はその部分を指す。求核種の例には、例えばＢｔｋのＣｙｓ４８１等、ある分子のシステイン残基が挙げられるが、これらに限定されることは決してない。
【００４２】
用語「求電子剤」又は「求電子性」とは、電子が不足した分子若しくは電子が欠乏した分子又はその部分を指す。求電子剤の例には、アクリルアミド、アクリル酸エステル、α，β−不飽和ケトン、アクリロニトリル及びα，β−不飽和ニトロ等のα，β−不飽和アシル官能基等、マイケルアクセプター部分が挙げられるが、これらに限定されることは決してない。
【００４３】
用語「不可逆的阻害剤」は、反応性官能基を介して安定な共有結合を形成し、標的の認識部分に直接結合する、目的化合物を意味する。Ｂｔｋの不可逆的阻害剤は、Ｂｔｋのキナーゼドメインのヌクレオチド結合ポケット内の求核システイン残基との間での共有結合的相互作用によって、当該不可逆的阻害剤のＢｔｋ標的を不活性化させることができる。
【００４４】
用語「治療する」及び「治療」とは、治療的処置を指しており、その目的は、関節炎又はがんの進行又は広がり等の望ましくない生理的変化又は障害を減速させる（軽減する）ことである。本発明に関しては、有益な又は所望の臨床結果には、限定されるわけではないが、検出可能であるか否かにかかわらず、症候の緩和、疾患重症度の低下、病態の安定化（すなわち、悪化がないこと）、疾患進行の遅延又は減速、病態の改善又は緩和、及び寛解（部分的であるか完全であるかにかかわらない）が挙げられる。「治療」とは、治療を受けなかった場合に予想される生存と比較して生存を延長することも意味し得る。治療を必要としているものは、状態又は障害を有するものを含む。
【００４５】
語句「治療的有効量」とは、（ｉ）特定の疾患、状態若しくは障害を治療し、（ｉｉ）特定の疾患、状態若しくは障害の１つ若しくは複数の症候を減じ、改善し、若しくは消失させ、又は（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、状態若しくは障害の１つ若しくは複数の症候の発症を予防若しくは遅延させる、本発明の化合物の量を意味する。がんの場合、薬物の治療的有効量は、がん細胞の数を低減することができ、腫瘍サイズを低減することができ、周辺臓器中へのがん細胞浸潤を阻害することができ（すなわち、ある程度減速させることができ、好ましくは停止させることができ）、腫瘍転移を阻害することができ（すなわち、ある程度減速させることができ、好ましくは停止させることができ）、腫瘍増殖をある程度阻害することができ、且つ／又はある程度がんに関連した症候の１つ若しくは複数を軽減することができる。薬物が既存のがん細胞の増殖を予防することができ、且つ／又は既存のがん細胞を殺滅することができる限り、薬物は、細胞分裂停止性及び／又は細胞傷害性であり得る。がんの治療に関しては、有効性は、例えば、無増悪期間（ＴＴＰ）の検定及び／又は奏功率（ＲＲ）の決定によって測定することができる。
【００４６】
本明細書で使用される「炎症性障害」は、過剰な又は無調節の炎症応答が過剰な炎症性症候、宿主組織損傷又は組織機能喪失をもたらす、任意の疾患、障害又は症候群を指し得る。「炎症性障害」は、白血球の流入及び／又は好中球走化性によって媒介される病理学的状態も指す。
【００４７】
本明細書で使用される「炎症」は、組織の傷害又は破壊によって引き起こされて、損傷を与える薬剤と損傷した組織の両方を破壊し、希釈し、又は遮断する（封鎖する）ように働く、限局的な防御応答を指す。炎症には特に、白血球の流入及び／又は好中球走化性が伴う。炎症は、病原性生物体及びウイルスによる感染、並びに、心筋梗塞又は脳卒中後の外傷又は再灌流、外来抗原への免疫応答及び自己免疫応答等の非感染性の手段に起因し得る。したがって、式Ｉの化合物による治療に適合する炎症性障害は、特異的防御系の反応及び非特異的防御系の反応に関連した障害を包摂する。
【００４８】
「特異的防御系」とは、特異的抗原の存在に対して反応する免疫系の成分を指す。特異的防御系の応答に起因した炎症の例には、Ｔ細胞によって媒介される外来抗原への古典的応答、自己免疫疾患及び遅延型過敏症応答が挙げられる。慢性炎症性疾患、移植された固形の組織及び臓器、例えば腎臓移植片及び骨髄移植片の拒絶反応、並びに移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）は、特異的防御系の炎症反応のさらなる例である。
【００４９】
本明細書で使用される用語「非特異的防御系」は、免疫記憶の機能がない白血球（例えば、顆粒球及びマクロファージ）によって媒介される炎症性障害を指す。非特異的防御系の反応に少なくとも部分的に起因した炎症の例には、成人（急性）呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）又は多臓器傷害症候群；再灌流傷害；急性糸球体腎炎；反応性関節炎；急性炎症成分による皮膚疾患；急性化膿性髄膜炎又は脳卒中等の他の中枢神経系炎症性障害；熱傷；炎症性腸疾患；顆粒球輸血関連症候群；並びにサイトカイン誘導性毒性等の状態に関連した炎症が挙げられる。
【００５０】
本明細書で使用される「自己免疫疾患」とは、組織傷害に、身体自体の構成要素への体液性又は細胞媒介性応答が伴う、任意の群の障害を指す。
【００５１】
本明細書で使用される「アレルギー性疾患」は、アレルギーに起因した任意の症候、組織損傷又は組織機能喪失を指す。本明細書で使用される「関節炎型疾患」とは、様々な原因に起因した関節の炎症病変によって特徴を明らかにする、任意の疾患を指す。本明細書で使用される「皮膚炎」とは、様々な原因に起因した皮膚の炎症によって特徴を明らかにする、１つの大きなファミリーの皮膚疾患のいずれかを指す。本明細書で使用される「移植片拒絶反応」とは、移植組織及び周辺組織の機能喪失、疼痛、腫れ、白血球増多及び血小板減少症によって特徴を明らかにする、臓器又は細胞（例えば、骨髄）等の移植組織を対象とする任意の免疫応答を指す。本発明の治療方法は、炎症細胞活性化に関連した障害の治療のための方法を含む。
【００５２】
「炎症細胞活性化」とは、増殖性細胞の応答の刺激（限定されるわけではないが、サイトカイン、抗原又は自己抗体を含む）、可溶型メディエーター（限定されるわけではないが、サイトカイン、酸素ラジカル、酵素、プロスタノイド又は血管作動性アミンを含む）の産生、又は、炎症細胞（限定されるわけではないが、単球、マクロファージ、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、顆粒球（すなわち、好中球、好塩基球及び好酸球等の多形核白血球）、マスト細胞、樹状細胞、ランゲルハンス細胞及び内皮細胞を含む）における新たな若しくは数を増やしたメディエーター（限定されるわけではないが、主要な組織適合抗原又は細胞接着分子を含む）の細胞表面発現による誘導を指す。上記細胞における上記表現型の１つ又は組合せの活性化が、炎症性障害の開始、恒久化又は増悪に寄与し得ることは、当業者には理解されよう。
【００５３】
用語「ＮＳＡＩＤ」とは、「非ステロイド系抗炎症薬」の頭字語であり、鎮痛効果、解熱効果（意識を損なうことなく、高い体温を低下させ、疼痛を和らげる）、及び用量をより多くした場合の抗炎症効果（炎症を低減する）を有する、治療剤である。用語「非ステロイド系」は、これらの薬物を、（多種多様な効果の中でもとりわけ）エイコサノイドを抑制する類似の抗炎症作用を有するステロイドから区別するために使用されている。ＮＳＡＩＤは非麻酔性であるため、鎮痛剤としてＮＳＡＩＤは一般的でない。ＮＳＡＩＤには、アスピリン、イブプロフェン及びナプロキセンが挙げられる。ＮＳＡＩＤは通常、疼痛及び炎症が存在する急性又は慢性状態の治療のために必要とされる。ＮＳＡＩＤは一般に、下記の状態、すなわち、関節リウマチ、変形性関節症、炎症性関節症（例えば、強直性脊椎炎）、乾癬性関節炎、ライター症候群、急性痛風、月経困難症、転移性骨痛、頭痛及び片頭痛、術後痛、炎症及び組織傷害に起因した軽度から中等度までの疼痛、発熱、イレウス並びに腎仙痛の症候を軽減するために必要とされる。大部分のＮＳＡＩＤは、酵素シクロオキシゲナーゼの非選択的阻害剤として作用して、シクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）とシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）アイソエンザイムの両方を阻害する。シクロオキシゲナーゼは、アラキドン酸（このアラキドン酸自体は、ホスホリパーゼＡ２による細胞リン脂質二重層に由来する。）からのプロスタグランジン及びトロンボキサンの形成を触媒する。プロスタグランジンは、炎症のプロセスにおけるメッセンジャー分子として（とりわけ）作用する。ＣＯＸ−２阻害剤には、セレコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、パレコキシブ、ロフェコキシブ、ロフェコキシブ及びバルデコキシブが挙げられる。
【００５４】
用語「がん」とは、無調節の細胞増殖によって典型的には特徴を明らかにする、哺乳類における生理的状態を指し、又はこうした生理的状態について記述する。「腫瘍」は、１つ又は複数のがん性細胞を含む。がんの例には、限定されるわけではないがカルシノーマ、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病又はリンパ系悪性腫瘍が挙げられる。このようながんのより詳細な例には、扁平上皮がん（例えば、上皮性扁平細胞がん）、小細胞肺がん、非小細胞肺がん（「ＮＳＣＬＣ」）、肺腺癌及び肺扁平上皮癌を含む肺がん、腹膜がん、肝細胞がん、胃腸がんを含む胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）又は胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、膵臓がん、膠芽細胞腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜癌又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん又は腎がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝細胞癌、肛門癌、陰茎癌並びに頭頸部がんが挙げられる。
【００５５】
「血液悪性腫瘍（ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ）」（イギリス英語式のつづりでは「ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ」ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ）は、血液、骨髄及びリンパ節に影響するがんの型である。血液、骨髄及びリンパ節の３つは、免疫系を介して密接に接続されているため、血液、骨髄及びリンパ節という３つのうちの１つに影響する疾患は、しばしば、これらの３つのうちの残りにも同様に影響する。リンパ腫はリンパ節の疾患であるが、しばしば、骨髄に拡がって、血液に影響する。血液悪性腫瘍は、悪性腫瘍（「がん」）であり、一般には、血液学及び／又は腫瘍学の専門家によって治療される。一部の機関においては、「血液学／腫瘍学」とは、内科医学の一専門分科となっているが、他の機関においては、「血液学／腫瘍学」とは、別個の部門だと考えられている（腫瘍外科医及び照射がん専門医も存在する。）。すべての血液障害が悪性（「がん性」）であるとは限らないが、こうした他の血液状態もまた、血液病専門医によって管理され得る。血液悪性腫瘍は、２つの主要な血液細胞系譜、すなわち、骨髄及びリンパ系細胞株のいずれかに由来し得る。骨髄細胞株は通常、顆粒球、赤血球、トロンボサイト、マクロファージ及びマスト細胞を産生し、リンパ系細胞株は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞及び形質細胞を産生する。リンパ腫、リンパ性白血病及び骨髄腫は、リンパ球系に由来するが、急性及び慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群並びに骨髄増殖性疾患は、骨髄由来である。白血病には、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性単球性白血病（ＡＭＯＬ）及び小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）が挙げられる。リンパ腫には、ホジキンリンパ腫（４つすべての亜型）及び非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ、すべての亜型）、マントル細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫並びに濾胞性リンパ腫が挙げられる。血液悪性腫瘍には、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症及び多発性骨髄腫も挙げられる。
【００５６】
「化学療法剤」とは、作用機序にかかわらずがんの治療に有用な化合物である。化学療法剤のクラスには、限定されるわけではないがアルキル化剤、代謝拮抗剤、スピンドル毒型植物アルカロイド、細胞傷害性／抗腫瘍性抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、抗体、光感作物質及びキナーゼ阻害剤が挙げられる。化学療法剤は、「標的化療法」及び従来の化学療法で使用される化合物を含む。化学療法剤の例には、イブルチニブ（ＩＭＢＲＵＶＩＣＡ（登録商標）、ＰＣＩ−３２７６５、Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ  Ｉｎｃ．；ＣＡＳ登録番号９３６５６３−９６−１、米国特許第７５１４４４４号）、イデラリシブ（以前はＣＡＬ−１０１、ＧＳ１１０１、ＧＳ−１１０１、Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．、ＣＡＳ登録番号１１４６７０２−５４−６）、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍ．）、ドセタキセル（タキソテール（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、５−ＦＵ（フルオロウラシル、５−フルオロウラシル、ＣＡＳ登録番号５１−２１−８）、ゲムシタビン（ジェムザール（登録商標）、Ｌｉｌｌｙ）、ＰＤ−０３２５９０１（ＣＡＳ番号３９１２１０−１０−９、Ｐｆｉｚｅｒ）、シスプラチン（ｃｉｓ−ジアミン、ジクロロ白金（ＩＩ）、ＣＡＳ番号１５６６３−２７−１）、カルボプラチン（ＣＡＳ番号４１５７５−９４−４）、パクリタキセル（タキソール（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、テモゾロミド（４−メチル−５−オキソ−２，３，４，６，８−ペンタアザビシクロ［４．３．０］ノナ−２，７，９−トリエン−９−カルボキサミド、ＣＡＳ番号８５６２２−９３−１、ＴＥＭＯＤＡＲ（登録商標）、ＴＥＭＯＤＡＬ（登録商標）、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）、タモキシフェン（（Ｚ）−２−［４−（１，２−ジフェニルブタ−１−エニル）フェノキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）、ＩＳＴＵＢＡＬ（登録商標）、ＶＡＬＯＤＥＸ（登録商標））及びドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標））、Ａｋｔｉ−１／２、ＨＰＰＤ及びラパマイシンが挙げられる。
【００５７】
化学療法剤には、Ｂｃｌ−２阻害剤、Ｂｔｋ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、Ｓｙｋ阻害剤、Ｔｙｋ阻害剤及び抗ＣＤ２０抗体が挙げられる。
【００５８】
本発明の化合物と組み合わせた使用のためのｂｃｌ−２阻害剤は、ベネトクラックス（ＣＡＳ登録番号１２５７０４４−４０−８、ＡＢＴ−１９９、ＧＤＣ−０１９９、ＲＧ−７６０１、ＡｂｂＶｉｅ  Ｉｎｃ．、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）である。ベネトクラックスは、タンパク質Ｂｃｌ２の機能をブロックするように設計されたいわゆるＢＨ３−模倣薬であり、多発性骨髄腫、慢性リンパ球性白血病、全身性紅斑性狼瘡、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、急性骨髄性白血病及び非ホジキンリンパ腫の治療のための第３相臨床治験に入っている（Souers等Nat Med.２０１３年１月６日. doi: 10.1038/nm.3048）。ベネトクラックスは、ＩＵＰＡＣ名：４−（４−｛［２−（４−クロロフェニル）−４，４−ジメチルシクロヘキサ−１−エン−１−イル］メチル｝ピペラジン−１−イル）−Ｎ−（｛３−ニトロ−４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）アミノ］フェニル｝スルホニル）−２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−５−イルオキシ）ベンズアミドを有する。
【００５９】
本発明の化合物と組み合わせた使用のための抗ＣＤ２０抗体は、治療未経験者の患者における化学療法と組み合わせた慢性リンパ球性白血病の治療のために２０１３年に米国のＦＤＡによって承認された、オビヌツズマブ（ＣＡＳ登録番号９４９１４２−５０−１、ＧＡＺＹＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）である。オビヌツズマブは、Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０を標的とし、慢性リンパ球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、濾胞中心リンパ腫及びマントル細胞リンパ腫を治療する。
【００６０】
化学療法剤のさらなる例には、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍ．）、スーテント（スニチニブ（登録商標）、ＳＵ１１２４８、Ｐｆｉｚｅｒ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、イマチニブメシル酸塩（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ−５１８（Ｍｅｋ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ、国際公開第２００７／０４４５１５号）、ＡＲＲＹ−８８６（Ｍｅｋ阻害剤、ＡＺＤ６２４４、Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）、ＳＦ−１１２６（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｓｅｍａｆｏｒｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＥＺ−２３５（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ−１４７（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ロイコボリン（フォリン酸）、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）、ロナファルニブ（ＳＡＲＡＳＡＲ（商標）、ＳＣＨ６６３３６、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）、ＢＡＹ４３−９００６、Ｂａｙｅｒ  Ｌａｂｓ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、イリノテカン（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）、ＣＰＴ−１１、Ｐｆｉｚｅｒ）、チピファルニブ（ＺＡＲＮＥＳＴＲＡ（商標）、Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、アブラキサン（商標）（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ無含有）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、Ｉｌ）、バンデタニブ（ｒＩＮＮ、ＺＤ６４７４、ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、クロラムブシル、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ５２７１、Ｓｕｇｅｎ）、テムシロリムス（ＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、パゾパニブ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、カンホスファミド（ＴＥＬＣＹＴＡ（登録商標）、Ｔｅｌｉｋ）、チオテパ及びシクロホスファミド（シトキサン（登録商標）、ＮＥＯＳＡＲ（登録商標））；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン等のスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ及びウレドーパ等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホルアミド及びトリメチロメラミンを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（ＣＣ−１０６５のアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ���を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコディクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムヌスチン等のニトロソウレア類；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、カリケアマイシンγ１Ｉ、カリケアマイシンωＩ１（Angew Chem.Intl. Ed. Engl.(1994年)33:183-186）等の抗生物質；ダイネミシン、ダイネミシンＡ；クロドロネート等のビスホスホネート；エスペラミシン；並びにネオカルジノスタチン発色団及び関連の色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、モルホリノドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノドキソルビシン及びデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、ネモルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣ等のマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等の代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキセート等の葉酸アナログ；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン等のプリンアナログ；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン等のピリミジンアナログ；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）；フォリン酸等の葉酸補給剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルホルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシン及びサンサミトシン等のメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン及びカルボプラチン等の白金アナログ；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（ゼローダ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸等のレチノイド；並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸及び誘導体が挙げられる。
【００６１】
「化学療法剤」の定義にさらに含まれるものは、（ｉ）例えばタモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）；クエン酸タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びフェアストン（登録商標）（トレミフェンクエン酸塩）を含む抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）等、腫瘍へのホルモン作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤；（ｉｉ）例えば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）（エキセメスタン、Ｐｆｉｚｅｒ）、ホルメスタン、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）（ボロゾール）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）及びＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾ−ル、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）等、副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤；（ｉｉｉ）フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド及びゴセレリン；並びにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）等の抗アンドロゲン；（ｉｖ）ＭＥＫ阻害剤（国際公開第２００７／０４４５１５号）等のプロテインキナーゼ阻害剤；（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤；（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関与しているシグナル伝達経路における遺伝子、例えばＰＫＣ−α、Ｒａｆ及びＨ−Ｒａｓの発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド、例えばオブリメルセン（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標）、Ｇｅｎｔａ  Ｉｎｃ．）；（ｖｉｉ）ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標））及びＨＥＲ２発現阻害剤等のリボザイム；（ｖｉｉｉ）遺伝子療法ワクチン等のワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）及びＶＡＸＩＤ（登録商標）；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）等のトポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；（ｉｘ）ベバシズマブ（アバスチン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）等の抗血管新生剤；並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸及び誘導体である。
【００６２】
「化学療法剤」の定義にさらに含まれるものは、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）；パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（商標）、２Ｃ４、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ、Ｃｏｒｉｘｉａ）、及び抗体薬物コンジュゲート、ゲムツズマブオゾガミシン（マイロターグ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）等の治療用抗体である。
【００６３】
本発明のＢｔｋ阻害剤と組み合わせた化学療法剤として治療可能性を有するヒト化モノクローナル抗体には、アレムツズマブ、アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネオズマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブメシタンシン、カンツズマブメルタンシン、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、シドフシツズマブ、シドツズマブ、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、フェルビズマブ、フォントリズマブ、ゲムツズマブオゾガミシン、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ノロビズマブ、ヌマビズマブ、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パシコリズマブ、ペクフシツズマブ、ペクツズマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ラリビズマブ、ラニビズマブ、レスリビズマブ、レスリズマブ、レシビズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ、ソンツズマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ、トラスツズマブ、ツコツズマブセルモロイキン、ツクシツズマブ、ウマビズマブ、ウルトキサズマブ及びビジリズマブが挙げられる。
【００６４】
「代謝物」とは、身体内における指定された化合物又はその塩の代謝によって生成された生成物である。化合物の代謝物は、当該技術分野で公知の常套的技術を使用して同定することができ、化合物の代謝物の活性は、本明細書に記載の試験等の試験を使用して決定することができる。このような生成物は、例えば、投与された化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、脱アミド化、エステル化、脱エステル化及び酵素的切断等から生じ得る。代謝物は、式Ｉの化合物の求電子性官能基へのＢｔｋのシステインチオールのマイケル付加の逆転によっても形成され得る。したがって、本発明は、本発明の式Ｉの化合物の代謝生成物を産生するために十分な時間の期間にわたって本発明の式Ｉの化合物を哺乳類と接触させることを含む方法によって生成された化合物を含む、本発明の化合物の代謝物を含む。
【００６５】
用語「添付文書」は、治療用製品の市販の包装中に慣例的に含まれている指示書を指すために使用され、この指示書は、こうした治療用製品の使用に関する指示、使用法、用量、用法、禁忌及び／又は警告についての情報を内包する。
【００６６】
用語「キラルな」とは、鏡像となる相手と重ね合わせることができないという特性を有する分子を指すが、用語「アキラルな」とは、鏡像となる相手の上に重ね合わせることができる分子を指す。
【００６７】
用語「立体異性体」とは、同一の化学的構成を有するが、空間中の原子又は基の配列が異なる、化合物を指す。
【００６８】
「ジアステレオマー」とは、２つ以上の中心性キラリティーを有する立体異性体であって、ジアステレオマーである分子どうしが互いに対して鏡像にならない、立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物性、例えば融点、沸点、スペクトル特性及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動及びクロマトグラフィー等の高分解能分析手順によって分離してもよい。
【００６９】
「光学異性体」とは、互いに重ね合わせることができない鏡像である、ある化合物の２つの立体異性体を指す。
【００７０】
本明細書で使用される立体化学的定義及び規約は一般に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ編集、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；並びにＥｌｉｅｌ，Ｅ．及びＷｉｌｅｎ，Ｓ．、「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９４に従う。本発明の化合物は、不斉中心又はキラル中心を含有してもよく、したがって、異なる立体異性形態で存在し得る。限定されるわけではないがジアステレオマー、光学異性体及びアトロプ異性体、並びにラセミ混合物等のこれらの混合物を含む、本発明の化合物のすべての立体異性形態が、本発明の一部を形成することが目的とされている。数多くの有機化合物は、光学活性な形態で存在し、すなわち、これらの有機化合物は、平面偏光の平面を回転させることができる。光学活性な化合物について記述しているとき、接頭辞Ｄ及びＬ又はＲ及びＳは、当該化合物のキラル中心（一又は複数）の周りにある分子の絶対立体配置を表すために使用される。接頭辞ｄ及びｌ又は（＋）及び（−）は、化合物による平面偏光の回転に関する符号を示すために使用されており、（−）又は１は、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）又はｄが前に付いた化合物は、右旋性である。所与の化学的構造に関しては、これらの立体異性体は、互いに鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体は、光学異性体と呼ばれることもあり、こうした異性体の混合物は、しばしば、光学異性体混合物と呼ばれる。光学異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物又はラセミ体と呼ばれており、こうしたラセミ混合物又はラセミ体は、化学反応又は化学的プロセス中に立体選択又は立体特異性が存在していなかった場合に生じ得る。用語「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」は、光学活性を有さない２つの光学異性体種の等モル混合物を指す。光学異性体は、超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）等のキラル分離方法によってラセミ混合物から分離してもよい。分離された光学異性体中のキラル中心における立体配置の割り当ては、暫定的なものである可能性があるので、Ｘ線による結晶学的データ等の立体化学決定を待つことになるのだが、説明を目的として構造を表１に示している。
【００７１】
用語「互変異性体」又は「互変異性形態」とは、小さなエネルギー障壁を介して相互変換可能である、異なるエネルギーの構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピーによる互変異性体としても公知である）は、ケト−エノール異性化及びイミン−エナミン異性化等、プロトンの移動による相互変換を含む。原子価による互変異性体は、結合電子のいくつかが再編成されることによる相互変換を含む。
【００７２】
用語「薬学的に許容される塩」とは、生物学的に又は他の観点から望ましくないものでない、塩を表す。薬学的に許容される塩は、酸付加塩と塩基付加塩の両方を含む。語句「薬学的に許容される」とは、物質又は組成物が、製剤を構成する他の成分及び／又はその物質若しくは組成物によって治療される哺乳類と化学的に及び／又は毒物学的に適合性でなければならないことを指し示す。
【００７３】
用語「薬学的に許容される酸付加塩」とは、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、炭酸、リン酸等の無機酸、並びに、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、アントラニル酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、エンボン酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸「メシレート」、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸及びサリチル酸等、脂肪族化合物類、脂環式化合物類、芳香族化合物類、アリール脂肪族化合物類、複素環式化合物類、カルボン酸類及びスルホン酸類の有機酸から選択される有機酸によって形成された、薬学的に許容される塩を表す。
【００７４】
用語「薬学的に許容される塩基付加塩」とは、有機又は無機塩基によって形成された薬学的に許容される塩を表す。許容される無機塩基の例には、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、マンガン塩及びアルミニウム塩が挙げられる。薬学的に許容される無毒性の有機塩基に由来する塩には、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン並びにポリアミン樹脂等、第一級、第二級及び第三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン並びに塩基性イオン交換樹脂の塩が挙げられる。
【００７５】
「溶媒和物」とは、１つ又は複数の溶媒分子と本発明の化合物との会合体又は錯体を指す。溶媒和物を形成する溶媒の例には、限定されるわけではないが水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸及びエタノールアミンが挙げられる。
【００７６】
用語「ＥＣ５０」とは、半数効果濃度であり、インビボにおける特定の効果の最大限度の５０％を得るために要求される特定の化合物の血漿濃度を表す。
【００７７】
用語「Ｋｉ」とは、阻害定数であり、受容体への特定の阻害剤の絶対的な結合親和性を表す。Ｋｉは競合結合アッセイを使用して測定され、競合するリガンド（例えば、放射性リガンド）が存在していなかった場合に特定の阻害剤が受容体の５０％を占有することになる濃度に等しい。Ｋｉ値は、ｐＫｉ値（−ｌｏｇ  Ｋｉ）に対数変換することができ、値が高くなるほど、力価が指数関数的に大きくなることを指し示す。
【００７８】
用語「ＩＣ５０」とは半数阻害濃度であり、生物学的プロセスの５０％阻害をインビトロで得るために要求される特定の化合物の濃度を表す。ＩＣ５０値は、ｐＩＣ５０値（−ｌｏｇ  ＩＣ５０）に対数変換することができ、値が高くなるほど、力価が指数関数的に大きくなることを指し示す。ＩＣ５０値は絶対値ではないが、実験条件、例えば使用される濃度に依存し、チェン−プルソフ式（Biochem. Pharmacol. (1973) 22:3099）を使用して絶対阻害定数（Ｋｉ）に変換することができる。ＩＣ７０、ＩＣ９０等の他のパーセント阻害パラメーターを計算してもよい。
【００７９】
用語「本発明の化合物（ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ｏｆ  ｔｈｉｓ  ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ）」及び「本発明の化合物（ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｅｓｅｎｔ  ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ）」及び「式Ｉの化合物」は、式Ｉの化合物並びにその立体異性体、幾何異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝物及び薬学的に許容される塩及びプロドラッグを含む。
【００８０】
式Ｉの化合物を含む本明細書で与えられている任意の式又は構造は、こうした式Ｉの化合物の水和物、溶媒和物及び多形並びにこれらの混合物を表すことも目的としている。
【００８１】
式Ｉの化合物を含む本明細書で与えられている任意の式又は構造は、式Ｉの化合物の未標識の形態及び同位体標識された形態を表すことも目的としている。同位体標識された化合物は、１個又は複数の原子が、選択された原子質量又は質量数を有する原子によって置き換えされていることを除いて、本明細書で与えられた式によって示される構造を有する。本発明の化合物中に組み込まれ得る同位体の例には、限定されるわけではないが２Ｈ（デューテリウム、Ｄ）、３Ｈ（トリチウム）、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｆ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ及び１２５Ｉ等、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素及び塩素の同位体が挙げられる。様々な同位体標識された本発明の化合物、例えば、３Ｈ、１３Ｃ及び１４Ｃ等の放射性同位体が組み込まれた本発明の化合物。このような同位体標識された化合物は、代謝研究、反応速度論的研究、薬物若しくは基質組織分布アッセイを含む陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）若しくは単一光子放出コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）等の検出技術若しくはイメージング技術、又は患者の放射線治療に有用であり得る。デューテリウム標識された又は置換された本発明の治療用化合物は、分配、代謝及び排泄（ＡＤＭＥ）に関係する、改善されたＤＭＰＫ（薬物代謝及び薬物の薬物動態）特性を有し得る。デューテリウム等のより重い同位体による置換は、代謝安定性の向上に起因した特定の治療的利点、例えばインビボ半減期の延長又は投薬必要量の低減を実現し得る。１８Ｆ標識された化合物は、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴについての研究に有用であり得る。同位体標識された本発明の化合物及びそのプロドラッグは一般に、同位体標識されていない試薬の代わりに容易に入手可能な同位体標識された試薬を用いることにより、後述するスキーム又は例及び調製で開示された手順を実施することによって調製することができる。さらに、より重い同位体、特にデューテリウム（すなわち、２Ｈ又はＤ）による置換は、代謝安定性の向上、例えばインビボ半減期の延長又は投薬必要量の低減又は治療指数の改善に起因した特定の治療的利点を与え得る。上記との関連におけるデューテリウムが式（Ｉ）の化合物中の置換基として考えられると理解しておく。このようなより重い同位体、特にデューテリウムの濃度は、同位体濃縮因子によって定義され得る。本発明の化合物において、特定の同位体だと明確に表されていない任意の原子は、当該原子の任意の安定同位体を表すように意図されている。別途指定のない限り、ある位置が「Ｈ」又は「水素」だと明確に表されている場合、その位置は、当該位置での天然存在度による同位体組成において、水素を有すると理解しておく。したがって、本発明の化合物中において、デューテリウム（Ｄ）だと明確に表された任意の原子は、デューテリウムを表すように意図されている。
【００８２】
求電子性官能基を有するヘテロアリールピリドン及びアザ−ピリドンアミド化合物
本発明は、Ｂｔｋによってモジュレートされる疾患、状態及び／又は障害の治療に潜在的に有用である、式Ｉａ−Ｉｄを含む式Ｉのヘテロアリールピリドン及びアザ−ピリドンアミド化合物並びにこれらの薬学的製剤を提供する。
【００８３】
式Ｉの化合物は、構造：
0006275846.tif 000003
I
又はその立体異性体、互変異性体若しくは薬学的に許容される塩を有する（式中、
Ｘ１が、ＣＲ１又はＮであり、
Ｘ２が、ＣＲ２又はＮであり、
Ｘ３が、ＣＲ３又はＮであり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ及びＣ１−Ｃ３アルキルから独立して選択され、
Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６及びＸ７が、ＣＨ及びＮから独立して選択され、
Ｙ１及びＹ２が、ＣＨ及びＮから独立して選択され、
Ｚが、Ｏ又はＮＲであり、Ｒが、Ｈ又はＣ１−Ｃ３アルキルであり、
Ｑが、構造：
0006275846.tif 000004
を有する基から選択され、
Ｒ４が、−ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、−Ｃ（ＣＮ）＝ＣＨ２、−Ｃ≡ＣＣＨ３及び−Ｃ≡ＣＨから選択され、Ｒ５が、Ｈ及びＣ１−Ｃ３アルキルから選択され、
Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ７ａ及びＲ７ｂが、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ及びＣ１−Ｃ３アルキルから独立して選択され、
又はＲ６ａ及びＲ７ａが、５員、６員又は７員カルボシクリル又はヘテロシクリル環を形成しており、
又はＲ５及びＲ６ａが、５員、６員又は７員ヘテロシクリル環を形成しており、
又はＺが窒素である場合、Ｚ及びＲ７ａ又はＺ及びＲ６ａが、５員、６員又は７員ヘテロシクリル環を形成しており、
Ｒ８が、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＮ、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨ、−Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、−ＣＨ（ＣＦ３）ＯＨ、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、シクロプロピル、シクロプロピルメチル、１−ヒドロキシシクロプロピル、イミダゾリル、ピラゾリル、３−ヒドロキシ−オキセタン−３−イル、オキセタン−３−イル及びアゼチジン−１−イルから選択され、
Ｒ９が、構造：
0006275846.tif 000005
0006275846.tif 000006
から選択され、
波線が、結合部位を指し示しており、
アルキル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール及びヘテロアリールが、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＣＮ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＨＦ２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＮ、−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯＣＨ３、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＯＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＣＨ３、−ＣＯＮ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣＯＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）ＣＯＣＨ３、−ＮＨＳ（Ｏ）２ＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）２ＣＯＮＨ２、−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、−ＮＯ２、＝Ｏ、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＳＣＨ３、−Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、シクロプロピル、オキセタニル、アゼチジニル、１−メチルアゼチジン−３−イル）オキシ、Ｎ−メチル−Ｎ−オキセタン−３−イルアミノ、アゼチジン−１−イルメチル、ピロリジン−１−イル、及びモルホリノから独立して選択される１個又は複数の基で置換されていてもよい。）。
【００８４】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、
Ｘ１が、Ｎであり、
Ｘ２が、Ｎであり、
Ｘ３が、Ｎであり、
Ｘ１及びＸ３が、Ｎであり、Ｘ１及びＸ２が、Ｎであり、若しくはＸ２及びＸ３が、Ｎであり、
Ｘ１及びＸ３が、ＣＨであり、Ｘ２が、ＣＦであり、
Ｘ４が、Ｎであり、
Ｘ４及びＸ５が、Ｎであり、
Ｙ１が、ＣＨであり、Ｙ２が、Ｎであり、
Ｙ１が、Ｎであり、Ｙ２が、ＣＨであり、
Ｙ１及びＹ２が、それぞれＣＨであり、
Ｒ４が、−ＣＨ＝ＣＨ２であり、
Ｒ５が、Ｈ若しくは−ＣＨ３であり、
Ｒ６ａ、Ｒ６ｂ、Ｒ７ａ及びＲ７ｂが、Ｈであり、又は
Ｒ８が、−ＣＨ２ＯＨである
場合を含む。
【００８５】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、Ｒ９が、
0006275846.tif 000007
から選択される場合を含む。
【００８６】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、式Ｉａ−Ｉｄ：
0006275846.tif 000008
Ia
0006275846.tif 000009
Ib
0006275846.tif 000010
Ic
0006275846.tif 000011
Id
の化合物を含む。
【００８７】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、基：
0006275846.tif 000012
が、
0006275846.tif 000013
から選択される場合を含む。
【００８８】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、Ｚが、窒素であり、Ｚ及びＲ６ａが、５員、６員又は７員ヘテロシクリル環を形成しており、ヘテロシクリル環が、ピロリジニルである場合を含む。
【００８９】
式Ｉの化合物の例示的な実施態様は、表１の化合物を含む。
【００９０】
本発明の範囲は、いかなる特定の作用機序、結合特性又は本発明の化合物とＢｔｋ等のキナーゼ標的との相互作用にも限定されないが、式Ｉの化合物の求電子性官能基は、Ｂｔｋとの間に共有結合を形成し得る。このようにして形成された共有結合は、可逆的に形成されてもよいし、又は不可逆的に形成されてもよい。
【００９１】
本発明の式Ｉの化合物は、不斉中心又はキラル中心を含有してもよく、したがって、異なる立体異性形態で存在し得る。限定されるわけではないがジアステレオマー、光学異性体及びアトロプ異性体、並びにラセミ混合物等のこれらの混合物を含む本発明の化合物のすべての立体異性形態も本発明の一部を形成することが目的とされている。
【００９２】
さらに、本発明は、シス−トランス（幾何）異性体及び配座異性体を含む、すべてのジアステレオマーを包摂する。例えば、式Ｉの化合物が二重結合又は縮合環を組み込んでいる場合、シス形態及びトランス形態並びにこれらの混合物も、本発明の範囲に包摂される。
【００９３】
本明細書で示された構造中において、いかなる特定のキラルな原子の立体化学も指定されていない場合、すべての立体異性体が本発明の化合物として想定され、含まれる。立体化学が、特定の立体配置を表す実線のくさび形又は点線によって指定されている場合、その立体異性体は、こうした実線のくさび形又は点線によって指定されているとおりに指定及び定義される。
【００９４】
本発明の化合物は、水及びエタノール等の薬学的に許容される溶媒と溶媒和していない形態及び溶媒和した形態で存在し得、本発明が溶媒和した形態と溶媒和していない形態の両方を包摂することが目的である。
【００９５】
本発明の化合物は、異なる互変異性形態で存在することもでき、こうしたすべての形態は、本発明の範囲に包摂される。用語「互変異性体」又は「互変異性形態」とは、小さなエネルギー障壁を介して相互変換可能である、異なるエネルギーの構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピーによる互変異性体としても公知である）は、ケト−エノール異性化及びイミン−エナミン異性化等、プロトンの移動による相互変換を含む。原子価による互変異性体は、結合電子のいくつかが再編成されることによる相互変換を含む。
【００９６】
生物学的評価
酵素活性（又は他の生物活性）の阻害剤としての式Ｉの化合物の相対的有効性は、各化合物が、あらかじめ定められた程度まで活性を阻害する濃度を決定した後、結果を比較することによって、確立することができる。典型的には、好ましい決定は、生化学的アッセイにおいて活性の５０％を阻害する濃度、すなわち、５０％阻害濃度又は「ＩＣ５０」である。ＩＣ５０値の決定は、当該技術分野で公知の従来の技術を使用して達成することができる。一般に、ＩＣ５０は、研究対象とするある範囲の濃度の阻害剤の存在下で所与の酵素の活性を測定することによって決定することができる。次いで、実験により得られた酵素活性の値を、使用された阻害剤濃度に対してプロットする。（阻害剤が全く存在しないときの活性に比較した）５０％酵素活性を示す阻害剤の濃度は、ＩＣ５０値として取り扱われる。同様に、他の阻害濃度も、活性の適当な測定によって定義することができる。例えば、設定によっては、９０％阻害濃度、すなわち、ＩＣ９０等を確立することが望ましいこともあり得る。
【００９７】
式Ｉの化合物を、生化学的Ｂｔｋキナーゼアッセイによって試験した（実施例９０１）。
【００９８】
式Ｉの化合物を試験するために使用され得る標準的な細胞Ｂｔｋキナーゼアッセイのための一般手順は、Ｒａｍｏｓ細胞Ｂｔｋアッセイである（実施例９０２）。
【００９９】
標準的で細胞を用いる型のＢ細胞増殖アッセイを使用して、Ｂａｌｂ／ｃマウスの脾臓から精製したＢ細胞によって式Ｉの化合物を試験することができる（実施例９０３）。
【０１００】
標準的なＴ細胞増殖アッセイを使用して、Ｂａｌｂ／ｃマウスの脾臓から精製したＴ細胞によって式Ｉの化合物を試験することができる（実施例９０４）。
【０１０１】
ＣＤ８６阻害アッセイを、８−１６週齢Ｂａｌｂ／ｃマウスの脾臓から精製した全マウス脾細胞（実施例９０５）を使用してＢ細胞活性の阻害について式Ｉの化合物に対して実施してもよい。
【０１０２】
Ｂ−ＡＬＬ細胞生存アッセイを式Ｉの化合物に対して実施して、培養物中のＢ−ＡＬＬ生細胞の数を測定することができる（実施例９０６）。
【０１０３】
ＣＤ６９全血アッセイを式Ｉの化合物に対して実施して、表面ＩｇＭとヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（実施例９０７）とを架橋することによって活性化されるヒト全血中のＢリンパ球による、ＣＤ６９の産生を阻害する化合物の能力を決定することができる。ＣＤ６９は、リンパ球遊走及びサイトカイン分泌に関与する、タイプＩＩのＣ型レクチンである。ＣＤ６９発現は、最も早期に利用可能となっていた白血球活性化の指標のうちの１つを表しており、ＣＤ６９発現の迅速な誘導は、転写活性化によって起きる（Vazquez等(2009) Jour. of Immunology  ２００９年１０月１９日公開、doi:10.4049/jimmunol.0900839）。選択的なＢｔｋ阻害剤による抗原受容体刺激の濃度依存性阻害は、リンパ球活性化マーカーＣＤ６９の細胞表面発現を誘導する（Honigberg等(2010) Proc. Natl. Acad. Sci. 107(29):13075-13080）。したがって、選択的なＢｔｋ阻害剤によるＣＤ６９阻害は、特定のＢ細胞障害の治療的有効性と相互に関係付けられ得る。例示的な式Ｉの化合物のＣＤ６９ヒト血液ＦＡＣＳ  ＩＣ７０値を、表１及び表２に示している。
【０１０４】
例示的な式Ｉの化合物の細胞傷害活性又は細胞分裂停止活性は、増殖させる哺乳動物腫瘍細胞株を細胞培地中に確立し、式Ｉの化合物を添加し、約６時間から約５日までの期間にわたって細胞を培養し、細胞生存能力を測定することによって、測定することができる（実施例９０８）。細胞ベースインビトロアッセイは、生存能力、すなわち増殖（ＩＣ５０）、細胞傷害性（ＥＣ５０）及びアポトーシス誘導（カスパーゼ活性化）を測定するために使用され、血液悪性腫瘍及び固形腫瘍に対する臨床的有効性の予測に有用であり得る。
【０１０５】
式Ｉの化合物と化学療法剤との組合せのインビトロ力価は、実施例９０８の細胞増殖アッセイ、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩから市販のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙによって測定することができる。この均一アッセイ方法は、甲虫類ルシフェラーゼ（米国特許第５５８３０２４号、米国特許第５６７４７１３号、米国特許第５７００６７０号）の組み換え発現に基づいており、代謝的に活性な細胞の指標である存在するＡＴＰの定量化に基づいて培養物中の生細胞の数を決定する（Crouch等(1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88、米国特許第６６０２６７７号）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ａｓｓａｙは、９６ウェル又は３８４ウェルフォーマットによって実施すると、自動式ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）に適合するようになる（Cree等(1995) AntiCancer Drugs 6:398-404）。均一アッセイ手順は、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を、血清補充済み培地中で培養された細胞に直接添加することを包含する。細胞の洗浄、培地の除去及び複数回のピペッティング工程は要求されない。こうした系は、３８４ウェルフォーマットにおいて、試薬を添加して混合した後１０分で１ウェル当たりわずか１５個の細胞をも検出する。
【０１０６】
均一「添加−混合−測定」フォーマットにより、細胞溶解が起き、存在するＡＴＰの量に比例した発光シグナルが発生する。ＡＴＰの量は、培養物中に存在する細胞の数に対して正比例する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ａｓｓａｙは、ルシフェラーゼ反応によって生成される「グロータイプ（ｇｒｏｗ−ｔｙｐｅ）」発光シグナルを発生させるが、このグロータイプ発光シグナルは、使用される細胞型及び培地に応じて、一般に５時間超の半減期を有する。生細胞は、相対発光ユニット（ＲＬＵ）に反映される。基質である甲虫ルシフェリンは、組み換えホタルルシフェラーゼによって酸化的脱炭酸され、付随してＡＴＰがＡＭＰに変換され、光子が発生する。半減期の延長により、試薬注入器を使用する必要性がなくなり、複数のプレートの連続処理又はバッチ式処理に柔軟性がもたらされる。この細胞増殖アッセイは、様々なマルチウェルフォーマット、例えば９６ウェル又は３８４ウェルフォーマットによって使用され得る。データは、照度計又はＣＣＤカメラ型イメージング装置によって記録することができる。ルミネセンス出力は、経時的に測定された相対発光量（ＲＬＵ：ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｌｉｇｈｔ  ｕｎｉｔ）として提供される。
【０１０７】
例示的な式Ｉの化合物及び化学療法剤との組合せの抗増殖作用的有効性は、特定の血液学的腫瘍細胞株に対するＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ（実施例９０８）によって測定する。ＥＣ５０値を、試験された化合物及び組合せについて確立する。
【０１０８】
自己免疫疾患を治療するための式Ｉの化合物の投薬は、関節リウマチのマウスモデルにおいて検定することができる。このモデルにおいて、関節炎は、抗コラーゲン抗体及びリポ多糖類を投与することによって、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて誘導される。Ｎａｎｄａｋｕｍａｒ等（２００３）、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ  １６３：１８２７−１８３７を参照されたい。別の例において、Ｂ細胞増殖性疾患の治療のための式Ｉの化合物の投薬は例えば、ヒトＢ細胞リンパ腫細胞（例えば、Ｒａｍｏｓ細胞）が例えばＰａｇｅｌ等（２００５）、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  １１（１３）：４８５７−４８６６に記載の免疫不全マウス（例えば、「ヌード」マウス）に移植される、ヒトからマウスへの異種移植モデルにおいて検査することができる。
【０１０９】
上記疾患の１つに対する式Ｉの化合物の治療的有効性は、治療が進行している間でも最適化することができる。例えば、治療される対象は、病徴又は病的状態の軽減と、所与の用量の式Ｉの化合物を投与することによって得られるインビボＢｔｋ活性の阻害とを相互に関係付けるために診断評価を受けてもよい。当該技術分野で公知の細胞アッセイを使用すると、式Ｉの化合物の存在下又は非存在下におけるＢｔｋのインビボ活性を決定することができる。例えば、活性化Ｂｔｋがチロシン２２３（Ｙ２２３）及びチロシン５５１（Ｙ５５１）のところでリン酸化されるため、Ｐ−Ｙ２２３陽性又はＰ−Ｙ５５１陽性細胞のホスホ特異的な免疫細胞化学的染色は、例えば染色細胞と未染色細胞とを対比させたＦＡＣＳ解析によって、ある集団の細胞におけるＢｔｋの活性化を検出又は定量化するために使用することができる（Nisitani等(1999)、Proc. Natl. Acad. Sci、USA 96:2221-2226）。したがって、対象に投与される式Ｉの化合物の量は、対象の病状を治療するために最適なＢｔｋ阻害のレベルを維持しようとして必要とされる量として、増大又は減少し得る。
【０１１０】
一般に、本明細書に記載の方法で使用される式Ｉの化合物は、インビトロアッセイ、例えば、細胞を用いない型の生化学的アッセイ（ａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｓｓａｙ）又は細胞機能アッセイにおいて同定され、又は特徴を明らかにする。このようなアッセイは、式Ｉの化合物のインビトロＩＣ５０を決定するために有用である。例えば、細胞を用いない型のキナーゼアッセイは、ある範囲の濃度の候補となる不可逆的Ｂｔｋ阻害剤化合物の非存在下又は存在下におけるキナーゼのインキュベーション後のＢｔｋ活性を決定するために使用することができる。実際、式Ｉの化合物が不可逆的Ｂｔｋ阻害剤である場合、Ｂｔｋキナーゼ活性は、阻害剤無含有培地によって繰り返し洗浄しても回復されない（Smaill等(1999)、J. Med. Chem. 42(10):1803-1815）。さらに、Ｂｔｋと候補となる不可逆的Ｂｔｋ阻害剤との間での共有結合的錯体形成は、当該技術分野で公知のいくつかの方法（例えば、質量分析）によって容易に決定され得る、Ｂｔｋの不可逆的阻害の有用な指標である。例えば、一部の不可逆的Ｂｔｋ−阻害剤化合物は、（例えば、マイケル反応によって）ＢｔｋのＣｙｓ４８１との間に共有結合を形成し得る。Ｂｔｋ阻害のための細胞機能アッセイは、ある範囲の濃度の式Ｉの化合物の非存在下又は存在下で細胞株中のＢｔｋ媒介性経路を刺激すること（例えば、Ｒａｍｏｓ細胞におけるＢＣＲ活性化）に応答させて、１つ又は複数の細胞エンドポイントを測定することを含む。ＢＣＲ活性化に対する応答を決定するために有用なエンドポイントには、例えば、Ｂｔｋの自己リン酸化、Ｂｔｋ標的タンパク質（例えば、ＰＬＣ−γ）のリン酸化及び細胞質カルシウムの流動が挙げられる。
【０１１１】
Ｂｔｋと同じ場所にＣｙｓ残基を有する一団のキナーゼ（Ｂｌｋ、Ｂｍｘ、Ｂｔｋ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ４、Ｆｇｒ、Ｉｔｋ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＳＬＫ、Ｓｒｃ、ＴＥＣ及びＴＸＫ）に対する場合、化合物１０１は、１μＭの薬物濃度における％阻害によって測定すると、イブルチニブより良好なＢｔｋに対する選択性を示した。
【０１１２】
ペプチドマッピング及びＬＣＭＳ検出によって、イブルチニブ及び化合物１０１は、野生型Ｂｔｋにのみ不可逆的に結合し、Ｃｙｓ−４８１  Ｓｅｒ突然変異体型Ｂｔｋ（Ｓ４８１Ｃ）には不可逆的に結合しないことが判明したため、Ｃｙｓ−４８１がこうした不可逆的結合に必須であることが指し示された。化合物１０２は、野生型Ｂｔｋへの可逆的バインダーであると判明した。
【０１１３】
表１及び表２の例示的な式Ｉの化合物を作製し、特徴を明らかにし、本発明の方法に従ったＢｔｋの阻害について試験したが、これらの式Ｉの化合物は、下記構造及び対応する名称を有する（ＣｈｅｍＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ、バージョン９．０．１及びＣｈｅｍＢｉｏＤｒａｗ、バージョン１１．０、ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ  Ｃｏｒｐ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＭＡ）。１つより多い名称が式Ｉの化合物又は中間体に関連している場合、化学的構造が当該化合物を定義するものとする。
0006275846.tif 000014
0006275846.tif 000015
0006275846.tif 000016
0006275846.tif 000017
0006275846.tif 000018
0006275846.tif 000019
【０１１４】
化合物１１９を、還元された化合物１０１の飽和二重結合アナログとして調製した。
0006275846.tif 000020
119
化合物１０１は、質量分析法及びＸ線結晶構造分析により、ＢＴＫに共有結合的に結合することが示された。化合物１１９（ＢＴＫ  ＬＣ３Ｋ（Ｋｉ＝０．０００９６３μＭ）は、ＢＴＫに共有結合的に結合しないと予想されていた。
【０１１５】
式Ｉの化合物の投与
本発明の化合物は、治療しようとする状態に適した任意の経路によって投与してもよい。適切な経路には、経口、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、動脈内、皮内、髄腔内及び硬膜外を含む）、経皮、直腸、鼻腔、局所（頬側及び舌下を含む）、膣内、腹腔内、肺内及び鼻腔内が挙げられる。局所的な免疫抑制治療に関しては、上記式Ｉの化合物は、移植前に阻害剤を潅流すること又は移植片を阻害剤と接触させることを含む、病巣内投与によって投与してもよい。好ましい経路が、例えばレシピエントの状態に応じて異なり得ることは、理解されよう。上記式Ｉの化合物が経口投与される場合、上記式Ｉの化合物は、薬学的に許容される担体又は賦形剤と一緒にした丸剤、カプセル、錠剤等として調合してもよい。上記式Ｉの化合物が非経口投与される場合、後で詳述するように、上記式Ｉの化合物は単位投与注射可能形態において、薬学的に許容される非経口ビヒクルと調合してもよい。
【０１１６】
ヒト患者を治療するための用量は、式Ｉの化合物に関しては、約１０ｍｇから約１０００ｍｇまでの範囲であり得る。典型的な用量は、式Ｉの化合物に関しては、約１００ｍｇから約３００ｍｇまでであり得る。用量は、特定の化合物の吸収、分配、代謝及び排泄を含む薬物動態学的特性及び薬力学的特性に応じて、１日１回（ＱＩＤ）、１日２回（ＢＩＤ）又はより頻繁に投与してもよい。さらに、毒性因子は、用量用法レジメンに影響し得る。経口投与される場合、丸剤、カプセル又は錠剤は、指定された期間の時間にわたって、毎日又は頻度をより少なくして摂取することができる。レジメンは、数サイクルの治療法にわたって繰り返してもよい。
【０１１７】
式Ｉの化合物による治療の方法
本明細書に記載の方法は、必要としている対象に、治療的有効量の式Ｉの化合物を含有する組成物を投与することを含む。理論に拘束されるわけではないが、様々な造血細胞機能においてＢｔｋシグナル伝達が担う多様な役割、例えばＢ細胞受容体活性化は、小分子型Ｂｔｋ阻害剤が、例えば自己免疫疾患、異種免疫状態又は疾患、炎症性疾患、がん（例えば、Ｂ細胞増殖性疾患）及び血栓塞栓障害を含む、造血系列に関する数多くの細胞型によって影響され又はこれらの細胞型に影響する様々な疾患の危険性を低減し又はこれらの疾患を治療するために有用であることを示唆している。さらに、本明細書に記載の不可逆的Ｂｔｋ阻害剤化合物は、不可逆的阻害剤との間に共有結合を形成し得るシステイン残基（Ｃｙｓ４８１残基を含む）を有することによってＢｔｋとの間に相同性を共有する、１つの小さなサブセットになった他のチロシンキナーゼを阻害するために使用してもよい。
【０１１８】
本発明の式Ｉの化合物は、免疫障害、心血管疾患、ウイルス感染、炎症、代謝／内分泌障害又は神経障害等、Ｂｔｋに関連した異常な細胞増殖、機能又は挙動に起因した疾患又は障害を患っているヒト又は動物患者を治療するために有用であり、したがって、上記で定義された本発明の化合物を上記ヒト又は動物患者に投与することを含む方法によって治療してもよい。がんを患っているヒト又は動物患者は、上記で定義された本発明の化合物を上記ヒト又は動物患者に投与することを含む方法によって治療してもよい。このようにして治療することにより、患者の状態が好転又は改善され得る。
【０１１９】
式Ｉの化合物は、哺乳動物細胞、生物体又は関連の病理学的状態、例えば全身性及び局所性炎症、免疫性炎症又は自己免疫疾患、例えば関節リウマチ、免疫抑制、臓器移植片拒絶反応、アレルギー、潰瘍性大腸炎、クローン病、皮膚炎、喘息、全身性紅斑性狼瘡、腎外性狼瘡、シェーグレン症候群、多発性硬化症、強皮症／全身性硬化症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）脈管炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、乾癬、乾癬性関節炎、変形性関節症、スティル病、若年性関節炎、糖尿病、重症筋無力症、橋本甲状腺炎、オード甲状腺炎（Ｏｒｄ’ｓ  ｔｈｙｒｏｉｄｉｔｉｓ）、グレーブス病  シェーグレン症候群、多発性硬化症、ギラン−バレー症候群、急性播種性脳炎、アジソン病、オプソクローヌス−ミオクローヌス症候群、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、自己免疫性肝炎、セリアック病、グッドパスチャー症候群、特発性血小板減少性紫斑病、視神経炎、強皮症、原発性胆汁性肝硬変、ライター症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎、温式自己免疫性溶血性貧血、ウェゲナー肉芽腫症、汎発性脱毛症、ベーチェット病、慢性疲労、自律神経失調、子宮内膜症、間質性膀胱炎、神経性筋強直症、強皮症及びヴルヴォディニァのインビトロ、ｉｎ  ｓｉｔｕ及びインビボにおける診断又は治療に有用であり得る。
【０１２０】
本発明の方法は、関節リウマチ、単関節性関節炎、変形性関節症、痛風性関節炎、脊椎炎等の関節炎型疾患；ベーチェット病；敗血症、敗血症性ショック、内毒素性ショック、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症及び毒物ショック症候群；敗血症、外傷又は出血に付随する多臓器傷害症候群；アレルギー性結膜炎、春季カタル、ブドウ膜炎及び甲状腺関連眼病等の眼障害；好酸球性肉芽腫；喘息、慢性気管支炎、アレルギー性鼻炎、ＡＲＤＳ、慢性肺炎症性疾患（例えば、慢性閉塞性肺疾患）、珪肺、肺サルコイドーシス、胸膜炎、肺胞炎、脈管炎、気腫、肺炎、気管支拡張症及び肺酸素中毒等の肺疾患又は呼吸器疾患；心筋、脳又は四肢の再灌流傷害；嚢胞性線維症等の線維症；ケロイド形成又は瘢痕組織形成；アテローム性動脈硬化症；全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺炎、多発性硬化症、一部の型の糖尿病及びレイノー症候群等の自己免疫疾患；並びにＧＶＨＤ及び同種移植片拒絶反応等の移植片拒絶反応障害；慢性糸球体腎炎；慢性炎症性腸疾患（ＣＩＢＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎及び壊死性腸炎等の炎症性腸疾患；接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、乾癬又はじん麻疹等の炎症性皮膚疾患；感染による発熱及び筋肉痛；髄膜炎、脳炎、及び軽微な外傷による脳又は脊髄の傷害等の中枢神経系又は末梢神経系炎症性障害；シェーグレン症候群；白血球漏出を伴う疾患；アルコール性肝炎；細菌性肺炎；抗原−抗体複合体媒介性疾患；血液量減少性ショック；Ｉ型糖尿病；急性及び遅延型過敏症；白血球性悪液質及び転移による病状；熱傷；顆粒球輸血関連症候群；並びにサイトカイン誘導性毒性等の疾患を治療することをさらに含む。
【０１２１】
さらに他の実施態様において、本明細書に記載の方法は、がん、例えば、Ｂ細胞増殖性疾患を治療するために使用することができ、Ｂ細胞増殖性疾患には、限定されるわけではないがびまん性大Ｂ細胞型リンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ球性リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫／ワルデンストレームマクロブリン血症、脾性辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、バーキットリンパ腫／白血病及びリンパ腫様肉芽腫症が挙げられる。
【０１２２】
本発明の方法は、固形腫瘍及び血液悪性腫瘍を治療することをさらに含む。式Ｉの化合物によって治療され得るがんの型には、乳がん、卵巣がん、子宮頸がん、前立腺がん、精巣がん、泌尿生殖器がん、食道がん、喉頭がん、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、皮膚がん、ケラトアカントーマ、肺がん、類表皮癌、大細胞癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、小細胞癌、肺腺癌、骨がん、結腸がん、腺腫、膵臓がん、腺癌、甲状腺がん、濾胞腺癌、未分化癌、乳頭癌、精上皮腫、メラノーマ、肉腫、膀胱癌、肝臓癌及び胆管がん、腎臓癌、膵臓がん、骨髄障害、リンパ腫、毛様細胞がん、口腔がん、鼻咽頭がん、咽頭がん、口唇がん、舌がん、口のがん、小腸がん、結直腸がん、大腸がん、直腸がん、脳及び中枢神経系のがん、ホジキン病、白血病、気管支がん、甲状腺がん、肝臓がん及び肝内胆管がん、肝細胞がん、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、神経膠腫／膠芽細胞腫、子宮内膜がん、メラノーマ、腎臓がん及び腎盂がん、膀胱、子宮体がん、子宮頸がん、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、骨髄性白血病、口腔及び咽頭、非ホジキンリンパ腫、メラノーマ並びに絨毛結腸腺腫が挙げられる。
【０１２３】
本発明の方法は、再灌流傷害、すなわち、組織又は臓器が再灌流後に虚血期間を経験する状況に起因した傷害を患っている又は患う可能性がある、対象の治療に役立ち得る。用語「虚血」とは、動脈血の流入の遮断による限局的な組織の貧血を指す。再灌流に後続する一過性の虚血は、好中球の活性化、及び影響領域中の血管内皮を介した遊出が起きることを特徴とする。次いで、活性化された好中球の蓄積により反応性の酸素代謝物の発生が起こり、この結果、関係のある組織又は臓器の成分を損傷させる。こうした「再灌流傷害」という現象には一般的に、血管発作（全体的虚血及び局所的虚血を含む）、出血性ショック、心筋虚血又は梗塞、臓器移植及び脳血管レン縮等の状態を伴う。例えば、再灌流傷害は、心臓バイパス手順の終了時又は心臓停止中に、血液の受け入れを一旦止められていた心臓が再灌流を開始したときに起きる。Ｂｔｋ活性の阻害は、上述の状況における再灌流傷害の量の低減に帰結し得ると予想される。
【０１２４】
上記の各状態に関する症候、診断試験及び予後試験は、当該技術分野で公知である。例えば、「Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ」、第１６版、２００４、Ｔｈｅ  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ，Ｉｎｃ．Ｄｅｙ等（２００６）、Ｃｙｔｏｊｏｕｒｎａｌ  ３（２４）及び「Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ」（ＲＥＡＬ）分類体系（例えば、ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅが管理しているウェブサイトを参照されたい。）を参照されたい。いくつかの動物モデルが、上記疾患のいずれかを治療するための式Ｉの化合物の治療的有効用量の範囲を確立するのに有用である。
【０１２５】
薬学的製剤
ヒトを含む哺乳類の治療的処置のために本発明の化合物を使用するという目的では、本発明の化合物は通常、標準的な製薬慣行に従って薬学的組成物として調合される。こうした本発明の態様によれば、薬学的に許容される希釈剤又は担体と会合した本発明の化合物を含む、薬学的組成物が提供される。
【０１２６】
本明細書に記載の薬学的製剤には、限定されるわけではないが水性液体分散体、半乳化作用のある分散体、固溶体、リポソーム分散体、エーロゾル、固体剤形、粉末、速放性製剤、放出制御性製剤、速溶融性製剤（ｆａｓｔ  ｍｅｌｔ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）、錠剤、カプセル、丸剤、放出遅延性製剤、持続放出性製剤、パルス式放出製剤、多粒子製剤、及び、即時制御放出混合型製剤が挙げられる。
【０１２７】
本明細書に記載の化合物を含む薬学的組成物は、例にすぎないが従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠作製、研和、乳化、噴霧乾燥、カプセル化、封入又は圧縮、パンコーティング、溶融造粒、造粒、流動層噴霧乾燥又はコート処理（例えば、ワースターコート処理（ｗｕｒｓｔｅｒ  ｃｏａｔｉｎｇ））、接線方向コート処理（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ  ｃｏａｔｉｎｇ）、トップスプレー法（ｔｏｐ  ｓｐｒａｙｉｎｇ）、打錠及び押出成形等による従来の方法によって製造してもよい。典型的な製剤は、本発明の化合物及び担体、希釈剤又は賦形剤を混合することによって調製される。適切な担体、希釈剤及び賦形剤は当業者に周知であり、糖（炭水化物）、ワックス、水溶性及び／又は膨潤性ポリマー、親水性又は疎水性材料、ゼラチン、オイル、溶媒並びに水等の材料が挙げられる。使用される特定の担体、希釈剤又は賦形剤は、本発明の化合物を施用する手段及び目的に依存する。溶媒は一般に、当業者が哺乳類に投与しても安全である（ＧＲＡＳ）と考えている溶媒に基づいて選択される。一般に、安全な溶媒は、水及び水に可溶型の又は水に混和性の他の無毒性溶媒等、無毒性の水性溶媒である。適切な水性溶媒には、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）等及びこれらの混合物が挙げられる。製剤は、１つ又は複数のバッファー、バインダー、安定剤、消泡剤、界面活性剤、湿潤剤、滑沢剤、乳化剤、懸濁化剤、防腐剤、抗酸化剤、不透明化剤、流動促進剤、加工助剤、着色剤、甘味剤、芳香剤、香味剤、及び、薬物（すなわち、本発明の化合物又はその薬学的組成物）の安定な若しくは的確な提供を実現し又は薬学的生成物（すなわち、医薬）の製造に役立てるための他の公知の添加剤をさらに含んでいてもよい。
【０１２８】
バインダーは、凝集性を付与するものであり、例えば、アルギン酸及びアルギン酸の塩；カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース（例えばＭｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標））、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース（例えば、Ｋｌｕｃｅｌ（登録商標））、エチルセルロース（例えば、Ｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標））及び微結晶性セルロース（例えば、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標））等のセルロース誘導体；微結晶性デキストロース；アミロース；ケイ酸アルミニウムマグネシウム；多糖類酸；ベントナイト；ゼラチン；ポリビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体；クロスポビドン；ポビドン；デンプン；アルファ化デンプン；トラガカント、デキストリン、糖、例えばショ糖（例えば、Ｄｉｐａｃ（登録商標））、グルコース、デキストロース、糖蜜、マンニトール、ソルビトール、キシリトール（例えば、Ｘｙｌｉｔａｂ（登録商標））及びラクトース；天然又は合成ゴム、例えばアカシア、トラガカント、イサポルフスク（ｉｓａｐｏｌ  ｈｕｓｋ）ガティガム粘液、ポリビニルピロリドン（例えば、Ｐｏｌｙｖｉｄｏｎｅ（登録商標）ＣＬ、Ｋｏｌｌｉｄｏｎ（登録商標）ＣＬ、Ｐｏｌｙｐｌａｓｄｏｎｅ（登録商標）ＸＬ−１０）、カラマツアラビノガラクタン、Ｖｅｅｇｕｍ（登録商標）、ポリエチレングリコール、ワックス及びアルギン酸ナトリウム等が挙げられる。一般に、２０−７０％のバインダーレベルが、粉末充填済みゼラチンカプセル製剤において使用されている。錠剤製剤中のバインダー使用レベルは、直接的な圧縮、湿式造粒、ローラー圧縮、又はそれ自体が適度なバインダーとして作用し得る充填剤等の他の賦形剤が使用されるかどうかで変動する。当業者の調剤師ならば、製剤のためのバインダーレベルを決定することができるが、錠剤製剤中で最大７０％のバインダー使用レベルが一般的である。
【０１２９】
製剤は、従来の溶解手順及び混合手順を使用して調製してもよい。例えば、バルク原体（すなわち、本発明の化合物又は安定化された形態の本化合物（例えば、シクロデキストリン誘導体又は他の公知の錯化剤との錯体）を、上記賦形剤の１つ又は複数の存在下で適切な溶媒に溶解する。本発明の化合物は典型的には、容易に制御可能な薬物投薬量を提供して、処方されたレジメンを患者が遵守できるようにするために、薬学的剤形中に調合される。
【０１３０】
施用のための薬学的組成物（又は製剤）は、薬物を投与するために使用される方法に応じて、様々な方法で包装することができる。一般に、分配のための物品は、適当な形態の薬学的製剤が内部に収められた容器を含む。適切な容器は当業者に周知であり、ボトル（プラスチック及びガラス）、サシェ剤、アンプル、プラスチック袋及び金属製シリンダー等の材料を含む。容器は、包装の内容物への不注意による利用機会を予防するための不正開封防止用にまとめ上げた要素をさらに含んでいてもよい。さらに、容器は、容器の内容物について記載しているラベルが当該容器上に付着している。ラベルは、適当な警告をさらに含んでいてもよい。
【０１３１】
本発明の化合物の薬学的製剤は、様々な投与経路及び投与方式のために調製することができる。例えば、所望の度合いの純度を有する式Ｉの化合物は、凍結乾燥製剤、破砕紛体又は水溶液の形態において、薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤又は安定剤（Remington's Pharmaceutical Sciences (1980)第16版、Osol, A.編集）と任意選択的に混合してもよい。製剤は、常温において適当なｐＨ且つ所望の度合いの純度で生理的に許容される担体、すなわち、使用される投薬量及び濃度においてレシピエントにとって無毒性の担体と混合することによって実施してもよい。製剤のｐＨは、化合物の特定の使用及び濃度に主に依存するが、約３から約８までの範囲であり得る。ｐＨ５の酢酸バッファー中の製剤は、適切な実施態様である。
【０１３２】
本化合物は通常、固体組成物、凍結乾燥製剤又は水溶液として貯蔵することができる。
【０１３３】
本発明の薬学的組成物は、特定の様式によって調合、投薬及び投与され、すなわち、医学行動規範との間に一貫性がある量、濃度、スケジュール、経過、ビヒクル及び投与経路によって調合、投薬及び投与される。上記との関連において考慮する因子には、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳類、個体患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール策定及び医療施術者に公知の他の因子が挙げられる。投与しようとする化合物の「治療的有効量」は上述の考慮事項に左右され、過剰増殖性疾患を改善又は治療するために必要な最小限の量である。
【０１３４】
一般の条件提示として、用量当たりの非経口投与される阻害剤の初期薬学的有効量は、１日当たり患者体重に対して約０．０１−１００ｍｇ／ｋｇ、すなわち、約０．１ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇまでの範囲であり、使用される化合物の典型的な初期範囲は、０．３ｍｇ／ｋｇ／日から１５ｍｇ／ｋｇ／日までである。
【０１３５】
許容される希釈剤、担体、賦形剤及び安定剤は、使用される投薬量及び濃度においてレシピエントにとって無毒性であり、リン酸、クエン酸及び他の有機酸等のバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロライド；ベンザルコニウムクロライド、ベンゼトニウムクロライド；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；メチルパラベン若しくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース若しくはデキストリンを含む単糖類、二糖類及び他の糖（炭水化物）；ＥＤＴＡ等のキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成処理用対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；並びに／又はＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）若しくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。本明細書に記載の固体剤形における使用のための適切な担体には、限定されるわけではないがアカシア、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、グリセロリン酸カルシウム、リン酸エステル、リン酸塩又はリン酸エステル、乳酸カルシウム、マルトデキストリン、グリセリン、ケイ酸マグネシウム、カゼイン酸ナトリウム、大豆レシチン、塩化ナトリウム、リン酸三カルシウム、リン酸二カリウム、ステアロイル乳酸ナトリウム、カラギーナン、モノグリセリド、ジグリセリド、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート、ショ糖、微結晶性セルロース、ラクトース及びマンニトール等が挙げられる。本明細書に記載の固体剤形における使用のための適切な充填剤には、限定されるわけではないがラクトース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、硫酸カルシウム、微結晶性セルロース、セルロース粉末、デキストロース、デキストレート、デキストラン、デンプン、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート（ＨＰＭＣＡＳ）、ショ糖、キシリトール、ラクチトール、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム及びポリエチレングリコール等が挙げられる。
【０１３６】
医薬品有効成分は、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルジョン中において、例えばコアセルベーション技術又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセルのそれぞれの中に封入されていてもよい。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１９版(Easton, Pa.: Mack Publishing Company、1995)；Ｈｏｏｖｅｒ，Ｊｏｈｎ  Ｅ．、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．１９７５；Ｌｉｂｅｔｍａｎ，Ｈ．Ａ．及びＬａｃｈｍａｎ，Ｌ．編集、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、１９８０；及びＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、第７版(Lippincott Williams & Willins 1999)で開示されている。
【０１３７】
式Ｉの化合物の徐放性調製物を調製してもよい。徐放性調製物の適例には、式Ｉの化合物を含有する固形疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、こうしたマトリックスは、成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタメートとの重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸共重合体及び酢酸ロイプロリドを含む、注射用ミクロスフェア）等の分解性乳酸−グリコール酸共重合体、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０１３８】
製剤は、本明細書で詳述された投与経路に適した製剤を含む。製剤は、簡便には、単位剤形で提供することができ、製薬分野で周知の方法のいずれかによって調製してもよい。技術及び製剤は一般に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ）に見出される。このような方法は、有効成分を、１つ又は複数の副成分を構成する担体と会合させる工程を含む。一般に、製剤は、有効成分を液体担体又は微粉固体担体又はこれらの両方と均一かつ密接に会合させ、次いで必要ならば、生成物の整形も行うことによって調製される。
【０１３９】
経口投与に適した式Ｉの化合物の製剤は、それぞれが所定量の式Ｉの化合物を含有する丸剤、カプセル、カシェ剤又は錠剤等、別個の単位として調製してもよい。圧縮された錠剤は、バインダー、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤又は分散剤と任意選択的に混合される粉末又は顆粒等、自由自在に流動する形態の有効成分を適切な機械内で圧縮することによって調製してもよい。成形された錠剤は、濡らした粉末状有効成分と不活性液体希釈剤との混合物を適切な機械内で成形することによって作製してもよい。錠剤は、任意選択的にコートすることもできるし、又は切れ目を入れることもでき、任意選択的に、当該錠剤から有効成分を緩やかに放出し又は制御放出するように調合される。錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性又は油性懸濁液、分散性粉末又は顆粒、エマルジョン、硬カプセル若しくは軟カプセル、例えばゼラチンカプセル、シロップ剤又はエリキシル剤は、経口による使用のために調製してもよい。経口による使用を目的とした式Ｉの化合物の製剤は、薬学的組成物の製造用として当該技術分野で公知の任意の方法に従って調製してもよく、こうした組成物は、口当たりの良い調製物を提供するために、甘味剤、香味剤、着色剤及び防腐剤を含む、１つ又は複数の薬剤を含有してもよい。錠剤の製造に適した薬学的に許容される無毒性の賦形剤と混合された有効成分を含有する錠剤も許容される。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム又は炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム又はリン酸ナトリウム等の不活性希釈剤；トウモロコシデンプン又はアルギン酸等の顆粒化剤及び崩壊剤；デンプン、ゼラチン又はアカシア等の結合剤；並びにステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルク等の滑沢剤であってもよい。錠剤は、コートなしであってもよいし、又は、消化管中での崩壊及び吸着を遅延させ、これにより、より長期間にわたって持続的な作用を提供するためのマイクロカプセル化を含む公知の技術によってコートしてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリン又はジステアリン酸グリセリル等、時限遅延作用のある材料を単独で使用してもよいし、ワックスと一緒に使用してもよい。
【０１４０】
「崩壊剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ  ａｇｅｎｔ）」又は崩壊剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｎｔ）は、物質の解体又は崩壊を容易化する。崩壊剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ  ａｇｅｎｔ）の例には、デンプン、例えば、コーンスターチ若しくはジャガイモデンプン等の天然デンプン、Ｎａｔｉｏｎａｌ１５５１若しくはＡｍｉｊｅｌ（登録商標）等のアルファ化デンプン、又はＰｒｏｍｏｇｅｌ（登録商標）若しくはＥｘｐｌｏｔａｂ（登録商標）等のデンプングリコール酸ナトリウム、木材製品等のセルロース、微結晶性セルロース、例えばＡｖｉｃｅｌ（登録商標）、Ｅｌｃｅｍｅ（登録商標）、Ｅｍｃｏｃｅｌ（登録商標）、Ｖｉｖａｃｅｌ（登録商標）、Ｍｉｎｇ  Ｔｉａ（登録商標）及びＳｏｌｋａ−Ｆｌｏｃ（登録商標）、メチルセルロース、クロスカルメロース又は架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ａｃ−Ｄｉ−Ｓｏｌ（登録商標））、架橋カルボキシメチルセルロース又は架橋クロスカルメロース等の架橋セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム等の架橋デンプン、クロスポビドン、架橋ポリビニルピロリドン等の架橋ポリマー、アルギン酸又はアルギン酸ナトリウム等のアルギン酸塩等のアルギネート、Ｖｅｅｇｕｍ（登録商標）ＨＶ（ケイ酸アルミニウムマグネシウム）等のクレー、寒天、グアーゴム、ローカストビーンゴム、カラヤンゴム、ペクチンゴム又はトラガカントゴム等のゴム、デンプングリコール酸ナトリウム、ベントナイト、天然スポンジ、界面活性剤、カチオン交換樹脂等の樹脂、柑橘類のパルプ、ラウリル硫酸ナトリウム及びデンプンと組み合わせたラウリル硫酸ナトリウム等が挙げられる。
【０１４１】
分散剤及び／又は「粘度調整剤」は、液体媒体又は造粒方法若しくはブレンド方法によって薬物の拡散及び均一性を制御する、材料を含む。一部の実施態様において、こうした薬剤は、マトリックスをコート又は浸食する効率を向上させもする。例示的な拡散促進剤／分散剤には、例えば、親水性ポリマー、電解質、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０又は８０、ＰＥＧ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ、商業的にはＰｌａｓｄｏｎｅ（登録商標）として知られる）、及び糖（炭水化物）ベース分散剤、例えば例としてヒドロキシプロピルセルロース（例えば、ＨＰＣ、Ｈ−−ＰＣ−ＳＬ及びＨＰＣ−Ｌ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（例えば、ＨＰＭＣ  Ｋ１００、ＲＰＭＣ  Ｋ４Ｍ、ＨＰＭＣ  Ｋ１５Ｍ及びＨＰＭＣ  Ｋ１００Ｍ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートステアレート（ＨＰＭＣＡＳ）、非結晶性セルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、トリエタノールアミン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（Ｓ６３０）、酸化エチレンとホルムアルデヒドとの４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノールポリマー（チロキサポールとしても知られる）、ポロキサマー（例えば、酸化エチレンと酸化プロピレンとのブロック共重合体であるＰｌｕｒｏｎｉｃｓ（登録商標））；並びにポロキサミン（例えば、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ９０８（登録商標）、Ｐｏｌｏｘａｍｉｎｅ（登録商標）としても知られており、酸化プロピレン及び酸化エチレンからエチレンジアミンへの逐次付加に由来する四官能性ブロック共重合体である（ＢＡＳＦ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．））、ポリビニルピロリドンＫ１２、ポリビニルピロリドンＫ１７、ポリビニルピロリドンＫ２５又はポリビニルピロリドンＫ３０、ポリビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（Ｓ−６３０）、ポリエチレングリコール、例えば、約３００から約６０００までの分子量又は約３３５０から約４０００までの分子量又は約７０００から約５４００までの分子量を有し得るポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリソルベート−８０、アルギン酸ナトリウム、ゴム、例えば例としてトラガカントゴム及びアラビアゴム、グアーゴム、キサンタンガムを含むキサンタン、糖類、セルロース系化合物、例えば例としてカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリソルベート−８０、アルギン酸ナトリウム、ポリエトキシ化モノラウリン酸ソルビタン、ポリエトキシ化モノラウリン酸ソルビタン、ポビドン、カルボマー、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、アルギネート、キトサン並びにこれらの組合せが挙げられる。セルロース又はトリエチルセルロース等の可塑剤は、分散剤として使用することもできる。リポソーム分散体及び半乳化作用のある分散体に特に有用な分散剤は、ジミリストイルホスファチジルコリン、鶏卵に由来の天然ホスファチジルコリン、鶏卵、��レステロール及びミリスチン酸イソプロピルに由来の天然ホスファチジルグリセロールである。
【０１４２】
「潤滑剤」及び「流動促進剤」とは、材料の接着又は摩擦を予防、低減又は阻害する化合物である。例示的潤滑剤には、例えば、ステアリン酸、水酸化カルシウム、タルク、ナトリウムステアリルルメレート、鉱油等の炭化水素、又は水素化大豆油（Ｓｔｅｒｏｔｅｘ（登録商標））等の水素化植物油、アルミニウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛等の高級脂肪酸及び高級脂肪酸のアルカリ金属及びアルカリ土類金属の塩、ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、グリセロール、タルク、ワックス、Ｓｔｅａｒｏｗｅｔ（登録商標）、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４０００）又はＣａｒｂｏｗａｘ（商標）等のメトキシポリエチレングリコール、オレイン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、ベヘン酸グリセリル、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸マグネシウム又はラウリル硫酸ナトリウム、Ｓｙｌｏｉｄ（登録商標）、Ｃａｂ−Ｏ−Ｓｉｌ（登録商標）等のコロイダルシリカ、コーンスターチ等のデンプン、シリコーン油及び界面活性剤等が挙げられる。
【０１４３】
眼又は他の外部組織、例えば口及び皮膚の治療に関しては、製剤は好ましくは、例えば０．０７５％ｗ／ｗから２０％ｗ／ｗまでの量の有効成分（一又は複数）を含有する、局所軟膏又はクリームとして施用される。軟膏中に調合される場合、有効成分は、パラフィン系基剤又は水混和性軟膏基剤のいずれかと一緒に使用してもよい。代替的には、有効成分は、水中油型クリーム基剤と一緒にしてクリーム中に調合してもよい。所望ならば、クリーム基剤の水性相は、多価アルコール、すなわち、プロピレングリコール、ブタン１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００を含む）並びにこれらの混合物等、２個以上のヒドロキシル基を有するアルコールを含んでいてもよい。局所製剤は、望ましくは、皮膚又は他の影響領域を介した有効成分の吸収又は浸透を増進する化合物を含み得る。このような経皮浸透エンハンサーの例には、ジメチルスルホキシド及び関連アナログが挙げられる。本発明のエマルジョンの油性相は、公知の方法により公知の成分から構成され得る。この油性相は、乳化剤のみを含んでいてもよいが、望ましくは、少なくとも１つの乳化剤と、脂肪若しくはオイルとの混合物、又は脂肪とオイルの両方との混合物を含む。好ましくは、親水性乳化剤は、安定剤として作用する親油性乳化剤と一緒に含まれる。オイルと脂肪の両方を含むことも好ましい。まとめると、安定剤（一又は複数）の有無にかかわらず乳化剤（一又は複数）は、いわゆる乳化作用のあるワックスを構成しており、油及び脂肪と一緒になったワックスは、クリーム製剤の油性分散相を形成する、いわゆる乳化作用のある軟膏基剤を構成する。本発明の製剤中への使用に適した乳化剤及びエマルジョン安定剤には、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０、Ｓｐａｎ（登録商標）８０、セトステアリルアルコール、ベンジルアルコール、ミリスチルアルコール、モノステアリン酸グリセリル及びラウリル硫酸ナトリウムが挙げられる。
【０１４４】
式Ｉの化合物の水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合された活性材料を含有する。このような賦形剤には、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クロスカルメロース、ポビドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム及びアラビアゴム等の懸濁化剤、並びに、分散剤又は湿潤剤、例えば天然に存在するホスファチド（例えば、レシチン）、酸化アルキレンと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンステアレート）、酸化エチレンと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、酸化エチレンと脂肪酸及びヘキシトール無水物に由来する部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）が挙げられる。水性懸濁液は、エチル又はｎ−プロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル、ヒドロキシ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸エステル又は塩等の１つ又は複数の防腐剤、１つ又は複数の着色剤、１つ又は複数の香味剤及びショ糖又はサッカリン等の１つ又は複数の甘味剤をさらに含有してもよい。
【０１４５】
式Ｉの化合物の薬学的組成物は、滅菌注射用水性又は油性懸濁液等、滅菌注射用製剤の形態であってもよい。この懸濁液は、上記で言及された適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を使用して、公知の技術に従って調合してもよい。滅菌注射用製剤は、１，３−ブタンジオール中溶液等、非経口摂取可能な無毒性の希釈剤又は溶媒に溶かした滅菌注射用溶液又は懸濁液であってもよいし、又は凍結乾燥粉末として調製してもよい。使用され得る許容されるビヒクル及び溶媒の中でもとりわけなのが、水、リンゲル液及び塩化ナトリウム等張液である。さらに、滅菌不揮発性油は一般的に、溶媒又は懸濁培地として使用され得る。こうした目的のために、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含む任意のブランド品不揮発性油が使用され得る。さらに、オレイン酸等の脂肪酸も、注射剤の調製に同様に使用することができる。
【０１４６】
単一剤形を生成するために担体材料と混合され得る有効成分の量は、治療される宿主及び特定の投与様式に応じて変動する。例えば、ヒトへの経口投与を目的とした持効性製剤は、総組成に対して約５％から約９５％（重量：重量）までで変動し得る適当で簡便な量の担体材料と混ぜ合わせた、およそ１ｍｇから１０００ｍｇまでの活性材料を含有してもよい。薬学的組成物は、投与のための容易に測定可能な量を用意するように調製することができる。例えば、静脈内注入目的の水溶液は、約３０ｍＬ／時間の速度で適切な体積の注入を実施できるようにするために、溶液１ミリリットル当たり約３μｇから５００μｇまでの有効成分を含有してもよい。
【０１４７】
非経口投与に適した製剤は、抗酸化剤、バッファー、静菌剤、及び目的のレシピエントの血液を製剤と等張の状態にする溶質、並びに、懸濁化剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性滅菌懸濁液を含有し得る、水性及び非水性の滅菌注射液を含む。
【０１４８】
眼への局所投与に適した製剤は、有効成分が有効成分のための適切な担体、特に水性溶媒に溶解又は懸濁した、点眼薬をさらに含む。有効成分は、約０．５％ｗ／ｗから２０％ｗ／ｗまでの濃度、例えば約０．５％ｗ／ｗから１０％ｗ／ｗまでの濃度、例えば約１．５％ｗ／ｗの濃度で上述の製剤中に存在するのが好ましい。
【０１４９】
口中への局所投与に適した製剤には、通常ショ糖及びアカシア又はトラガカント等の香味剤を主体とする型の有効成分を含むロゼンジ；ゼラチン及びグリセリン又はショ糖及びアカシア等の不活性物質を主体とする型の有効成分を含む香錠；並びに適切な液体担体に溶かした有効成分を含む洗口剤が挙げられる。
【０１５０】
直腸投与のための製剤は、例えばココアバター又はサリチレートを含む適切な基剤と一緒になった坐薬として提供してもよい。
【０１５１】
肺内又は鼻腔投与に適した製剤は、例えば、０．１ミクロンから５００ミクロンまでの範囲（０．５ミクロン、１ミクロン、３０ミクロン、３５ミクロン等、ミクロン単位で増えていく０．１ミクロンから５００ミクロンの間の範囲の粒径を含む）の範囲の粒径を有し、こうした製剤は、鼻腔経路を介した迅速な吸入又は口を介した吸入によって、肺胞嚢に到達するように投与される。適切な製剤には、有効成分の水性又は油性溶液が挙げられる。エーロゾル又はドライパウダー投与に適した製剤は、従来の方法に従って調製してもよく、後述する治療又は予防障害においてこれまでに使用されてきた化合物等、他の治療剤と一緒に送達してもよい。
【０１５２】
膣内投与に適した製剤は、有効成分に加えて適当であると当該技術分野で知られた担体も含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム又はスプレー製剤として提供してもよい。
【０１５３】
製剤は、単位用量又は多回用量容器、例えば密封されたアンプル及びバイアル内に包装されていてもよく、使用直前の注射のために滅菌液体担体、例えば水の添加しか必要としないフリーズドライさせた（凍結乾燥させた）状態で貯蔵してもよい。即時注射液及び懸濁液は、先述した種類の滅菌粉末、顆粒及び錠剤から調製される。好ましい単位投与製剤は、本明細書中の上記に記載された１日用量又は単位１日分割用量の有効成分を含有する単位投与製剤、又は、適当なその画分である。
【０１５４】
したがって、本発明は、獣医学的担体と一緒に上記で定義された少なくとも１つの有効成分を含む、獣医学的組成物をさらに提供する。獣医学的担体は、本組成物を投与するという目的に有用な材料であり、そうでない場合は不活性の又は獣医学的技術分野で許容され且つ有効成分と適合性な固体材料、液体材料又は気体材料であってよい。これらの獣医学的組成物は、非経口投与され、経口投与され、又は所望される任意の他の経路によって投与される。
【０１５５】
併用療法
式Ｉの化合物は、単独で使用してもよいし、又は炎症又は過剰増殖性疾患（例えば、がん）などの本明細書に記載の疾患又は障害の治療のためのさらなる治療剤と組み合わせて使用してもよい。特定の実施態様において、式Ｉの化合物は、組み合わせ医薬製剤において又は併用療法としての投薬レジメンにおいて、抗炎症特性又は抗過剰増殖特性を有し又は炎症、免疫応答障害又は過剰増殖性疾患（例えば、がん）を治療するために有用であるさらなる第２の治療用化合物と混合される。さらなる治療薬は、Ｂｃｌ−２阻害剤、Ｂｔｋ阻害剤、ＪＡＫ阻害剤、抗ＣＤ２０抗体、抗炎症薬、免疫調節剤、化学療法剤、アポトーシス−エンハンサー、神経栄養因子、心血管疾患を治療するための薬剤、肝臓疾患を治療するための薬剤、抗ウイルス薬、血液障害を治療するための薬剤、糖尿病を治療するための薬剤、及び免疫不全障害を治療するための薬剤であってもよい。第２の治療剤は、ＮＳＡＩＤ抗炎症薬であってもよい。第２の治療剤は、化学療法剤であってもよい。組み合わせ医薬製剤又は投薬レジメンの第２の化合物は好ましくは、第２の化合物と式Ｉの化合物とが互いに対して悪影響しないように、式Ｉの化合物に対する補体活性を有する。このような化合物は、目的の成果のために有効な量と相まって適切に存在する。一実施態様において、本発明の組成物は、ＮＳＡＩＤ等の治療剤と組み合わせた、式Ｉの化合物又はその立体異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝物又は薬学的に許容される塩若しくはプロドラッグを含む。
【０１５６】
併用療法は、同時的又は逐次的レジメンとして施行してもよい。逐次的に投与される場合、こうした併用療法は、２回以上の施行にして施行してもよい。組合せ投与は、別個の製剤又は単一の薬学的製剤を使用する共投与、及びいずれかの順序での逐次的投与を含み、好ましくは、両方の（又はすべての）活性作用物質が生物学的活性を同時に発揮する間に、ある時間の期間が存在する。
【０１５７】
上記の共投与される薬剤のいずれかのための適切な投薬量は、現在使用されている投薬量であるが、新たに同定された薬剤と他の治療剤又は治療との複合作用（相乗効果）に起因して少なくなることもある。
【０１５８】
併用療法は、「相乗効果」を提供することができ、「相乗的」であることを実証でき、すなわち、有効成分が一緒に使用された場合に得られる効果が、これらの化合物を別々に使用して生じる効果の合計より大きい。相乗的効果は、有効成分が（１）共調合され、組み合わせる単位投与製剤中に同時に投与若しくは送達され、（２）別個の製剤の代替として若しくは並行して送達され、又は（３）何らかの他のレジメンによる場合に得ることができる。代替療法において送達される場合、相乗的効果は、本化合物が例えば、別個の注射器、別個の丸剤若しくはカプセル、又は別個の注入での異なる注射によって逐次的に投与又は送達された場合に得ることができる。一般に、代替療法中には、有効投薬量の各有効成分が逐次的に、すなわち、段階的に投与されるが、併用療法においては、有効投薬量の２つ以上の有効成分が一緒に投与される。
【０１５９】
治療法に関する特定の実施態様において、式Ｉの化合物又はその立体異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝物又は薬学的に許容される塩若しくはプロドラッグは、本明細書に記載のもの等の他の治療剤、ホルモン剤又は抗体剤と混合してもよいし、同様に、外科療法及び放射線療法と組み合わせてもよい。したがって、本発明による併用療法は、少なくとも１つの式Ｉの化合物又はその立体異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝物又は薬学的に許容される塩若しくはプロドラッグの投与、及び少なくとも１つの他のがん治療法の使用を含む。式Ｉの化合物（一又は複数）及び他の薬学的に活性な治療剤（一又は複数）の量、並びに投与の相対的タイミングは、所望の複合した治療的効果を得るために選択される。
【０１６０】
式Ｉの化合物の代謝物
同様に本発明の範囲に含まれるのが、本明細書に記載の式Ｉのインビボ代謝生成物である。このような生成物は、例えば、投与された化合物の酸化、還元、加水分解、アミド化、脱アミド化、エステル化、脱エステル化、マイケル付加の逆転及び酵素的切断等から生じ得る。したがって、本発明は、本発明の化合物の代謝生成物を産生するために十分な時間の期間にわたって本発明の化合物を哺乳類と接触させることを含む方法によって生成された化合物を含む、式Ｉの化合物の代謝物を含む。
【０１６１】
代謝物生成物は、典型的には、本発明の化合物の放射標識（例えば、１４Ｃ又は３Ｈ）同位体を調製し、この放射標識同位体を検出可能な用量（例えば、約０．５ｍｇ／ｋｇ超）でラット、マウス、モルモット、サル等の動物又は人間に非経口投与し、代謝が起きるのに十分な時間（典型的には約３０秒から３０時間まで）を放置し、尿、血液又は他の生物学的試料から変換生成物を単離することによって、同定される。これらの生成物は、標識されているため容易に単離される（他の生成物は、代謝物中で生存するエピトープを結合させることができる抗体の使用によって単離される）。代謝物構造は、従来の方式で決定され、例えば、ＭＳ分析、ＬＣ／ＭＳ分析又はＮＭＲ分析によって測定される。一般に、代謝物の分析は、当業者に周知の従来の薬物代謝研究と同じ方法で実施される。代謝物生成物は、インビボにおいて見出されない限り、本発明の化合物の治療的投薬のための診断アッセイに有用である。
【０１６２】
製造品
本発明の別の実施態様において、上記疾患及び障害の治療の治療に有用な材料を内包する製造品又は「キット」が提供される。一実施態様において、キットは、式Ｉの化合物又はその立体異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝物又は薬学的に許容される塩若しくはプロドラッグを含む、容器を含む。キットは、容器上にある又は容器に取り付けられたラベル又は添付文書をさらに含んでいてもよい。用語「添付文書」とは、治療用製品の商業用包装中に慣例的に含まれている指示書を指すために使用され、この商業用包装は、こうした治療用製品の使用に関する指示、使用法、用量、用法、禁忌及び／又は警告についての情報を内包する。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、注射器、ブリスターパック等が挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチック等の様々な材料から形成され得る。容器は、状態を治療するために有効な式Ｉの化合物又はその製剤を保持することができ、滅菌アクセスポート（例えば、容器は、皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってもよい。）を有し得る。組成物中の少なくとも１つの活性作用物質は、式Ｉの化合物である。ラベル又は添付文書は、組成物が、がん等、選択された状態を治療するために使用されることを指し示している。さらに、ラベル又は添付文書は、治療しようとする患者が、過剰増殖性疾患、神経変性、心肥大、疼痛、片頭痛又は神経外傷性疾患若しくは事象等の障害を有する患者であることも指し示し得る。一実施態様において、ラベル又は添付文書は、式Ｉの化合物を含む組成物が、異常な細胞増殖に起因した障害を治療するために使用することができることを指し示す。ラベル又は添付文書は、組成物が、他の障害を治療するために使用できることも指し示し得る。代替的には又はさらには、製造品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液等、薬学的に許容されるバッファーを含む、第２の容器をさらに含んでいてもよい。製造品は、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針及び注射器を含む、使用者の観点から望ましい市販の他の材料をさらに含んでいてもよい。
【０１６３】
キットは、式Ｉの化合物、及び存在する場合には、第２の薬学的製剤の投与に関する指導書をさらに含んでいてもよい。例えば、キットが、式Ｉの化合物及び第２の薬学的製剤を含む第１の組成物を含む場合、キットは、そのキットを必要としている患者への第１の薬学的組成物及び第２の薬学的組成物の同時投与、逐次投与又は別々にした投与に関する指導書をさらに含んでいてもよい。
【０１６４】
別の実施態様において、キットは、錠剤又はカプセル等、式Ｉの化合物の固体経口用形態の送達に適している。このようなキットは好ましくはいくつかの単位投与量を含む。このようなキットは、キットの目的の使用における順番に並べられた投薬量を有するカードを含み得る。このようなキットの例は、「ブリスターパック」である。ブリスターパックは、包装産業において周知であり、薬学的単位剤形を包装するために広範に使用されている。所望ならば、備忘録（ｍｅｍｏｒｙ  ａｉｄ）は、例えば、数値、文字又は他のマーキング、又は、投薬量が投与され得る治療スケジュール中の日を表すカレンダー型挿入物の形態で提供することもできる。
【０１６５】
一実施態様によれば、キットは、（ａ）式Ｉの化合物が内部に内包された第１の容器；及び任意選択的に（ｂ）第２の薬学的製剤が内部に内包された第２の容器を含んでいてもよく、第２の薬学的製剤は、抗過剰増殖活性を有する第２の化合物を含む。代替的には又はさらには、キットは、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液等の薬学的に許容されるバッファーを含む、第３の容器をさらに含んでいてもよい。キットは、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針及び注射器を含む、市販されていて使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含んでいてもよい。
【０１６６】
キットが式Ｉの組成物及び第２の治療剤を含む、特定の他の実施態様において、キットは、区分けされたボトル又は区分けされたホイルパケット等、別個の組成物を内包するための容器を含んでいてもよいが、別個の組成物は、区分けされていない単一の容器内に内包されていてもよい。典型的には、キットは、別個の成分の投与に関する指導書を含む。キット形態は、別個の成分が好ましくは異なる剤形（例えば、経口及び非経口）で投与され、異なる投薬量間隔で投与され、又は組合せの個別成分の滴定が処方医師によって所望される場合、特に有利である。
【０１６７】
式Ｉの化合物の調製
式Ｉの化合物は、特に本明細書に内包された記載に照らして、化学技術分野で周知のプロセスと同様のプロセスを含む合成経路によって合成してもよく、下記に記載された他の複素環のための合成経路によって合成してもよい：Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＩＩ、Ｅｄｉｔｏｒｓ  Ｋａｔｒｉｔｚｋｙ  ａｎｄ  Ｒｅｅｓ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９９７、例えば第３巻；Ｌｉｅｂｉｇｓ  Ａｎｎａｌｅｎ  ｄｅｒ  Ｃｈｅｍｉｅ、（９）：１９１０−１６、（１９８５）；Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、４１：１０５２−６０、（１９５８）；Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌ−Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇ、４０（１２）：１３２８−３１，（１９９０）、これらのそれぞれは、参照により明示的に援用する。出発物質は一般に、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）等の販売元から入手可能であり、又は、当業者に周知の方法を使用して容易に調製される（例えば、Louis F. Fieser及びMary Fieser、Reagents for Organic Synthesis、第１−２３巻、Wiley、N.Y. (1967-2006版)、又は、Beilsteins Handbuch der organischen Chemie、４、Aufl. ed. Springer−Verlag、Berlin、増補も含む（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースを介して入手することもできる）において概略的に記載された方法によって調製される）。
【０１６８】
式Ｉの化合物並びに必要な試薬及び中間体の合成に有用な合成化学による形質転換、及び保護基方法（保護及び脱保護）は、当該技術分野で公知であり、例えば、Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ、ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ及びＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９９）；及びＬ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ編集、Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９５）並びにこれらの後続版に記載のものが挙げられる。
【０１６９】
式Ｉの化合物は、個別に調製してもよいし、又は、少なくとも２つ、例えば５つから１，０００までの化合物又は１０から１００までの化合物を含む化合物ライブラリーとして調製してもよい。式Ｉの化合物のライブラリーは、コンビナトリアル「分割混合」手法によって調製してもよいし、又は、溶液相化学反応若しくは固体相化学反応を使用した当業者に公知の手順による複数の並行合成によって調製してもよい。したがって、本発明のさらなる一態様によれば、少なくとも２つの化合物又は薬学的に許容されるその塩を含む、化合物ライブラリーが提供される。
【０１７０】
実施例は、式Ｉの化合物を調製するための例示的方法を提供している。当業者ならば、他の合成経路が式Ｉの化合物を合成するために使用され得ることは、理解されよう。特定の出発物質及び試薬について、図面及び実施例において図示及び論述されているが、他の出発物質及び試薬は、様々な誘導体及び／又は反応条件を提供するために容易に置換することができる。さらに、記載された方法によって調製された例示的化合物の数多くは、本開示に照らして、当業者に周知の従来の化学反応を使用してさらに修飾することができる。
【０１７１】
式Ｉの化合物の調製において、中間体の遠位官能基（例えば、第一級又は第二級アミン）の保護が必要なこともある。こうした保護の必要性は、遠位官能基の性質及び調製方法の条件に応じて変わってくる。適切なアミノ保護基には、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）及び９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が挙げられる。こうした保護の必要性は、当業者ならば容易に判定することができる。保護基及び保護基の使用についての概略的な記載に関しては、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１を参照されたい。
【０１７２】
別途指示がない限り、当該技術分野の技能に含まれる質量分析法、ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、タンパク質化学、生化学、組み換えＤＮＡ技術及び薬理学に関する従来の方法が使用される。特段の定義が設けられていない限り、本明細書に記載の分析化学、有機合成化学、及び、医薬及び調剤系の化学との関連で使用される命名法、並びにこれらの化学に関する実験手順及び技術は、当該技術分野で公知のものである。標準的な技術は、化学合成、化学分析、薬学的調製物、製剤及び送達、並びに患者の治療のために使用することができる。反応及び精製技術は、例えば、製造業者の仕様書のキットを使用して、又は当該技術分野で一般的に達成されるキットを使用して、又は本明細書に記載されたキットを使用して実施することができる。上記技術及び手順は一般に、当該技術分野で周知であり、本明細書を通して引用及び論述された様々な概略的な参考資料及びより具体的な参考資料に記載されている、従来の方法によって実施することができる。
【０１７３】
式Ｉの化合物の調製のために有用な実験手順、中間体及び試薬は、国際公開第２０１１／１４０４８８号；米国特許出願第２０１２／００１０１９１号；国際公開第２０１３／０６７２７４号；米国特許出願第２０１３／０１１６２３５号；国際公開第２０１３／０６７２７７号；米国特許出願第２０１３／０１１６２４５号；国際公開第２０１３／０６７２６０号；米国特許出願第２０１３／０１１６２６２号；国際公開第２０１３／０６７２６４号；米国特許出願第２０１３／０１１６２４６号に見出すことができ、これらは、その全内容が参照により援用される。
【０１７４】
一般調製用手順
0006275846.tif 000021
スズキ式カップリング反応は、式Ｉの化合物及びＡ−３等の中間体の環に結合するように炭素−炭素結合を形成するために有用である（Suzuki (1991) Pure Appl. Chem. 63:419-422；Miyaura及びSuzuki (1979) Chem. Reviews 95(7):2457-2483；Suzuki (1999) J. Organometal. Chem. 576:147-168）。スズキカップリングは、パラジウムに媒介される、Ｂ−２又はＢ−４等のヘテロアリールハライドとＡ−１又はＡ−２等のボロン酸エステルとのクロスカップリング反応である。例えば、Ｂ−２は、約１．５当量の４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）と混合してもよく、約３当量の炭酸ナトリウム中に、１モル水溶液及び等しい体積のアセトニトリルとして溶解させてもよい。触媒量以上のビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）ジクロリド等の低原子価型パラジウム試薬を添加する。場合によっては、酢酸カリウムを炭酸ナトリウムの代わりに使用して、水層のｐＨを調整する。次いで反応物を、加圧下においてマイクロ波反応器（Ｂｉｏｔａｇｅ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）内で約１４０−１５０℃に１０分から３０分まで加熱する。内容物を酢酸エチル又は別の有機溶媒で抽出する。有機層のエバポレーション後、ホウ素エステルＡ−１をシリカ上で精製してもよいし、又は逆相ＨＰＬＣによって精製してもよい。置換基は、定義されたとおりであり、又は保護された置換基の形態若しくは前駆体である。同様に、臭化物中間体Ｂ−４をボロニル化して、Ａ−２を与えることもできる。
【０１７５】
Ｂ−２とＡ−２とのスズキカップリング又はＡ−１とＢ−４とのスズキカップリングは、式Ｉの化合物又は中間体Ａ−３を与える。ボロン酸エステル（又は酸）（１．５当量）Ａ−１又はＡ−２、及びビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（０．０５当量）等のパラジウム触媒を、アセトニトリル及び１Ｍの炭酸ナトリウム水溶液（アセトニトリルと等しい体積）に溶かしたハロ中間体（１当量）Ｂ−２又はＢ−４の混合物に添加する。反応混合物を電子レンジ内で約１５０℃に約１５分加熱する。ＬＣ／ＭＳにより、反応が完了しているか又はさらなる時間若しくは試薬を必要としているのかを指し示す。水を混合物に添加し、沈殿した生成物を濾過し、ＨＰＬＣによって精製して、生成物Ａ−３を得る。置換基は、定義されたとおりであってもよいし、又は、保護された置換基の形態若しくは前駆体であってもよい。Ｒ５は、式Ｉの化合物の調製用の中間体のために有用なアルキル又はアリール等の基である。
【０１７６】
様々な低原子価型Ｐｄ（ＩＩ）及びＰｄ（０）パラジウム触媒、プレ触媒及びリガンドが、スズキカップリング又はスズキ／ミヤウラカップリング工程（Miyaura, N. (2002) Top. Curr. Chem.、219:11-59；Kotha, S.等(2002) Tetrahedron、58:9633-9695；Bellina, F.等(2004) Synthesis、15:2419-2440；Hassan, J.等(2002) Chem. Rev. 102:1359-1470；Littke, A. F.等(2002) Angew. Chem., Int. Ed. 41:4176-4211；Barder, T. E.ら(2005) J. Am. Chem. Soc.、127:4685-4696；Walker, S. D.等(2004) Angew. Chem., Int. Ed.、43:1871-1876；Yin, J.等(2002) J. Am. Chem. Soc.、124:1162-1163）中に使用され得、ＰｄＣｌ２｛ＰｔＢｕ２（ｐ−Ｒ−Ｐｈ）｝２（Guram等(2006) Organic Letters 8(9):1787-1789）、ＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２、Ｐｄ（ｔ−Ｂｕ）３、ＰｄＣｌ２ｄｐｐｆＣＨ２Ｃｌ２、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、Ｐｄ（ＯＡｃ）２／ＰＰｈ３、Ｃｌ２Ｐｄ［（Ｐｅｔ３）］２、Ｐｄ（ＤＩＰＨＯＳ）２、Ｃｌ２Ｐｄ（Ｂｉｐｙ）、［ＰｄＣｌ（Ｐｈ２ＰＣＨ２ＰＰｈ２）］２、Ｃｌ２Ｐｄ［Ｐ（ｏ−トール）３］２、Ｐｄ２（ｄｂａ）３／Ｐ（ｏ−トール）３、Ｐｄ２（ｄｂａ）／Ｐ（フリル）３、Ｃｌ２Ｐｄ［Ｐ（フリル）３］２、Ｃｌ２Ｐｄ（ＰＭｅＰｈ２）２、Ｃｌ２Ｐｄ［Ｐ（４−Ｆ−Ｐｈ）３］２、Ｃｌ２Ｐｄ［Ｐ（Ｃ６Ｆ６）３］２、Ｃｌ２Ｐｄ［Ｐ（２−ＣＯＯＨ−Ｐｈ）（Ｐｈ）２］２、Ｃｌ２Ｐｄ［Ｐ（４−ＣＯＯＨ−Ｐｈ）（Ｐｈ）２］２、及びカプセル化触媒Ｐｄ  ＥｎＣａｔ（商標）３０、Ｐｄ  ＥｎＣａｔ（商標）ＴＰＰ３０及びＰｄ（ＩＩ）ＥｎＣａｔ（商標）ＢＩＮＡＰ３０（米国特許出願第２００４／０２５４０６６号）を含む。
【０１７７】
低原子価型Ｐｄ（ＩＩ）及びＰｄ（０）パラジウム触媒、プレ触媒及びリガンドの例示的な実施態様は、「バックワルド」触媒、パラダサイクル及びリガンドであり、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２，４，６−トリイソプロピルビフェニル（Ｘ−Ｐｈｏｓ、ＣＡＳ登録番号５６４４８３−１８−７）及びクロロ（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル）［２−（２’−アミノ−１，１’−ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（Ｘ−Ｐｈｏｓアミノビフェニルパラジウムクロリドプレ触媒、ＣＡＳ登録番号１３１０５８４−１４−５）、市販品（Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｍａｔｔｈｅｙ、Ｗｅｓｔ  Ｄｅｐｔｆｏｒｄ、ＮＪ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ及び他の供給業者）を含む。米国特許第７２２３８７９号、米国特許第６３９５９１６号、米国特許第６３０７０８７号を参照されたい。
【０１７８】
化合物Ａ−１及びＡ−２を形成するためのＢ−２等のヘテロアリールハライド又はＢ−４等のアリールハライドと、ボロン酸又はボロン酸エステルとの反応は、それぞれ、表３中及び下記に記載されたバックワルドプレ触媒パラダサイクル及びリガンド試薬を用いるバックワルドパラジウム触媒条件下において実施することができる：Ｂｉｓｃｏｅ等（２００８）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３０：６６８６−６６８７；Ｋｉｎｚｅｌ等（２０１０）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３２：１４０７３−１４０７５；Ｍｏｌａｎｄｅｒ等（２０１２）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ． １３４：１１６６７−１１６７３；Ｗａｌｋｅｒ等（２００４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ． ４３：１８７１；Ｂｉｌｌｉｎｇｓｌｅｙ等（２００７）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ． ４６：５３５９−５３６３；米国特許第６９４６５６０号；米国特許第７０２６４９８号；米国特許第７２４７７３１号；米国特許第７５６０５８２号；米国特許第６３０７０８７号；米国特許第６３９５９１６号；米国特許第７２２３８７９号；米国特許第７８５８７８４号、これらは、参照により援用される。このような試薬は、市販されている（Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｍａｔｔｈｅｙ  Ｉｎｃ．、Ｗａｙｎｅ、ＰＡ；Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ；Ｓｔｒｅｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗｂｕｒｙｐｏｒｔ、ＭＡ）。
0006275846.tif 000022
0006275846.tif 000023
0006275846.tif 000024
0006275846.tif 000025
0006275846.tif 000026
【０１７９】
分離方法
式Ｉの化合物を調製する方法において、反応生成物を相互に分離すること及び／又は反応生成物を出発物質から分離することが有利であり得る。各工程又は一連の工程の所望生成物は、当該技術分野で一般的な技術によって、所望の度合いの均一性になるまで分離及び／又は精製される。典型的には、こうした分離は、多相抽出、溶媒若しくは溶媒混合物からの結晶化、蒸留、昇華又はクロマトグラフィーを包含する。クロマトグラフィーは、例えば、逆相及び順相、サイズ排除、イオン交換、高圧、中圧及び低圧液体クロマトグラフィー方法及び装置；小規模な分析用、疑似移動層（ＳＭＢ）及び分取薄層又は厚層クロマトグラフィー、並びに、小規模な薄層クロマトグラフィー及びフラッシュクロマトグラフィーの技術を含む、任意の数の方法を包含し得る。
【０１８０】
別のクラスの分離方法は、分離可能な所望生成物、未反応の出発物質又は反応副生成物等に結合し又はそうでない場合はこれらを分離可能な状態に変えるように選択される試薬によって、ある混合物を処理することを包含する。このような試薬は、活性炭、分子ふるい又はイオン交換媒体等の吸着剤又は吸収剤を含む。代替的には、試薬は、塩基性材料の場合における酸、酸性材料の場合における塩基、結合試薬、例えば抗体、結合タンパク質、選択的キレート剤、例えばクラウンエーテル又は液／液イオン抽出試薬（ＬＩＸ）等であり得る。適当な分離方法の選択は、蒸留及び昇華における沸点及び分子量、クロマトグラフィーにおける極性官能基の存在の有無、及び、多相抽出における酸性及び塩基性媒体中の材料の安定性等、関係する材料の性質に依存する。
【０１８１】
ジアステレオマー混合物は、物理化学的差異に基づいて、クロマトグラフィー及び／又は分別結晶化等の当業者に周知の方法によって、個別のジアステレオマーに分離することができる。光学異性体は、ジアステレオマーを分離し、個別のジアステレオ異性体を変換して（例えば、加水分解して）、相当する純粋な光学異性体にする、適当な光学活性化合物（例えば、キラルなアルコール又はモッシャー酸塩化物等のキラル補助剤）との反応により、光学異性体混合物をジアステレオマー混合物に変換することによって分離することができる。さらに、一部の本発明の化合物は、アトロプ異性体（例えば、置換ビアリール）であってもよく、本発明の一部として考えられる。光学異性体は、キラルＨＰＬＣカラムの使用によって分離することもできる。
【０１８２】
単一の立体異性体、例えば、立体異性体を実質的に無含有の光学異性体は、光学活性な分割剤を使用したジアステレオマーの形成等の方法を使用してラセミ混合物を分割することによって得てもよい（Eliel, E.及びWilen, S. 「Stereochemistry of Organic Compounds」、John Wiley & Sons, Inc.、New York、1994；Lochmuller, C. H.、(1975) J. Chromatogr.、113(3):283-302）。本発明のキラル化合物のラセミ混合物は、（１）イオン性のキラル化合物とのジアステレオマー塩を形成し、分別結晶化又は他の方法によって分離すること、（２）キラルな誘導体化試薬によってジアステレオマー化合物を形成し、ジアステレオマーを分離し、純粋な立体異性体に変換すること、並びに（３）キラル条件下に直に置かれている実質的に純粋な又は富化された立体異性体を分離することを含む、任意の適切な方法によって分離及び単離することができる。「Ｄｒｕｇ  Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ」、Ｉｒｖｉｎｇ  Ｗ．Ｗａｉｎｅｒ編集、Ｍａｒｃｅ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９３）を参照されたい。
【０１８３】
方法（１）においては、ジアステレオマー塩が、ブルシン、キニーネ、エフェドリン、ストリキニーネ及びα−メチル−β−フェニルエチルアミン（アンフェタミン）等の鏡像異性的に純粋でキラルな塩基と、カルボン酸及びスルホン酸等の酸性官能基を有する不斉化合物との反応によって形成され得る。ジアステレオマー塩は、分別結晶化又はイオンクロマトグラフィーによって分離するように誘導してもよい。アミノ化合物の光学異性体の分離に関しては、カンファースルホン酸、酒石酸、マンデル酸又は乳酸等のキラルなカルボン酸又はスルホン酸を添加すると、ジアステレオマー塩の形成を起こすことができる。
【０１８４】
代替的には、方法（２）によって、分割しようとする基質をキラル化合物の一方の光学異性体と反応させて、ジアステレオマー対を形成する（E. and Wilen, S. 「Stereochemistry of Organic Compounds」、John Wiley & Sons, Inc.、1994、p. 322）。ジアステレオマー化合物が、不斉化合物をメンチル誘導体等の鏡像異性的に純粋でキラルな誘導体化試薬を反応させ、続いて、ジアステレオマーを分離し、加水分解して、純粋な又は富化された光学異性体を得ることによって、形成され得る。光学的純度を測定する方法は、ラセミ混合物の塩基又はモッシャーエステル、酢酸α−メトキシ−α−（トリフルオロメチル）フェニル（Jacob III. J. Org. Chem. (1982) 47:4165）の存在において、メンチルエステル、例えば（−）メンチルクロロギ酸エステル等のキラルなエステルを作製すること、及び、アトロプ異性な２つの光学異性体又はジアステレオマーの存在を求めて１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを分析することを包含する。アトロプ異性な安定ジアステレオマーは、アトロプ異性なナフチルイソキノリンの分離のための方法に従った順相及び逆相クロマトグラフィーによって分離及び単離することができる（国際公開第９６／１５１１１号）。方法（３）によって、２つの光学異性体のラセミ混合物は、キラル固定相（「Chiral Liquid Chromatography」(1989) W. J. Lough, Ed.、Chapman and Hall、New York；Okamoto, J. Chromatogr.、(1990) 513:375-378）を使用したクロマトグラフィーによって分離することができる。富化された又は精製された光学異性体は、旋光度及び円二色性等、不斉炭素原子を有する他のキラル分子を区別するために使用される方法によって区別することができる。
【実施例】
【０１８５】
実施例１０１  Ｎ−｛２−［（６−｛［５−（２−｛４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル｝−３−（ヒドロキシメチル）ピリジン−４−イル）−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル］アミノ｝ピリジン−２−イル）オキシ］エチル｝プロパ−２−エナミド  １０１
0006275846.tif 000027
工程１：  ５−ブロモ−３−（６−ヒドロキシピリジン−２−イルアミノ）−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン  １０１ａ
還流コンデンサーを備えた１００ｍＬ丸底フラスコに、６−アミノピリジン−２−オール（１．１ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、３，５−ジブロモ−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（２．６７ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（６．５２ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）、キサントホス（５７６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（４６０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３５ｍＬ）を充填した。この系に、真空／アルゴンによる３サイクルのフラッシュを施し、１００℃で３時間加熱した。次いで系を室温に冷却し、濾過した。濾液をＤＣＭ（５００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（８０ｍＬ×３）で洗浄した。有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物固体を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（３０：１から１５：１まで）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、１０１ａ（５８０ｍｇ、２０％）を黄色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋２９６．０
【０１８６】
工程２：  ２−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルオキシ）エチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル  １０１ｂ
０℃にて無水ＴＨＦ（４０ｍＬ）に溶かした２−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）−ピリジン−２−イルオキシ）エチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５００ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ）、２−ヒドロキシエチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．１ｇ、６．８ｍｍｏｌ）及びＰＰｈ３（１．７８ｇ、６．８ｍｍｏｌ）の混合物に、アゾジギ酸ジイソプロピル溶液（１．３７ｇ、６．８ｍｍｏｌ）を滴下した。この混合物を４０℃で３時間加熱した。次いで混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残留物をＨ２ＯとＤＣＭとに分配した。混合した有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物固体を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（６０：１から４０：１まで）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、１０１ｂ（５２０ｍｇ、７０％）を黄色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋４３８．９
【０１８７】
工程３：  酢酸［４−（５−｛［６−（２−｛［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］アミノ｝エトキシ）ピリジン−２−イル］アミノ｝−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−イル）−２−｛４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル｝ピリジン−３−イル］メチル  １０１ｄ
還流コンデンサーを備えた５０ｍＬ丸底フラスコに、１０１ｂ（５００ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）、酢酸［４−（ジヒドロキシボラニル）−２−｛４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル｝ピリジン−３−イル］メチル  １０１ｃ（４５２ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４（４８３ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ）、ＮａＯＡｃ（１８７ｍｇ、２．２８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４２ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）及びＣＨ３Ｃｎ／Ｈ２Ｏ（２０．０／０．５ｍＬ）を充填した。この系に、真空／アルゴンによる３サイクルのフラッシュを施し、次いでＮ２下において９５℃で１時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮した。残留物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（７０：１から３０：１まで）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製して、１０１ｄ（４００ｍｇ、５０％）を黄色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋７１２．３
【０１８８】
工程４：  酢酸［４−（５−｛［６−（２−アミノエトキシ）ピリジン−２−イル］アミノ｝−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−イル）−２−｛４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル｝ピリジン−３−イル］メチル  １０１ｅ
１０１ｄ（４００ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５ｍＬ）中溶液に、３Ｍ  ＨＣｌ（ジオキサン中）を滴下した。この混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。残留した黄色固体を酢酸エチルで洗浄し、減圧下で乾燥させて、１０１ｅ（２９０ｍｇ、８０％）を黄色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋６１２．３
【０１８９】
工程５：  酢酸（２−｛４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル｝−４−［１−メチル−６−オキソ−５−（｛６−［２−（プロパ−２−エナミド）エトキシ］ピリジン−２−イル｝アミノ）−１，６−ジヒドロピリジン−３−イル］ピリジン−３−イル）メチル  １０１ｆ
１０１ｅ（２５０ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（７８ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、塩化アクリロイル（４２ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ中溶液を滴下した。この混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮して、１０１ｆを黄色固体（粗製物）として得、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋６６６．４
【０１９０】
工程６：  １０１ｆ（２５７ｍｇ、０．３８７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／ｉ−ＰｒＯＨ／Ｈ２Ｏ（５．０／３．０／２．０ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ（４６ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応物を１時間撹拌した。混合物を水（１５ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（１５ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物固体を逆相分取ＨＰＬＣによって精製して、１０１（９５ｍｇ、２工程で３９％）を白色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋６２４．２。1H NMR (500 MHz, CDCl3)δ 8.74 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 9.70 (s, 1H), 7.73 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.50-7.48 (m, 1H), 7.29-7.27 (m, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.46-6.44 (m, 2H), 6.27-6.23 (m, 2H), 6.05-6.00 (m, 1H), 5.61-5.59 (m, 1H), 4.98-4.96 (m, 1H), 4.72-4.70 (m, 1H), 4.55-4.53 (m, 1H), 4.39-4.29 (m, 3H), 4.19-4.16 (m, 2H), 3.96-3.94 (m, 1H), 375-3.73 (m, 4H, 重複), 3.64-3.60 (m, 1H), 2.61-2.59 (m, 2H), 2.53-2.51 (m, 2H), 1.30 (s, 6H).
【０１９１】
実施例１０２  Ｎ−（シアノメチル）−１−（４−｛［５−（２−｛４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル｝−３−（ヒドロキシメチル）ピリジン−４−イル）−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル］アミノ｝ピリミジン−２−イル）ピロリジン−３−カルボキサミド  １０２
0006275846.tif 000028
工程１：  １−（４−アミノピリミジン−２−イル）ピロリジン−３−カルボン酸  １０２ａ
マグネティックスターラー及び還流コンデンサーを備えた１００ｍＬ丸底フラスコに、ピロリジン−３−カルボン酸（１．２０ｇ、１０ｍｍｏｌ）、２−クロロピリミジン−４−アミン（１．３０ｇ、１０ｍｍｏｌ）、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ、４０ｍＬ）及びＴＥＡ（６ｍＬ）を充填した。混合物を８０℃で終夜（Ｏ／Ｎ）加熱した。この時間の後、反応物を室温（ｒ．ｔ．）に冷却した。次いで反応物を濾過し、濾過ケーキをＤＣＭで洗浄して、１０２ａ（１．４ｇ、６７％）を淡黄色固体として得た。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋２０９．１
【０１９２】
工程２：  １−（４−｛［５−（２−｛４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル｝−３−（ヒドロキシメチル）ピリジン−４−イル）−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル］アミノ｝ピリミジン−２−イル）ピロリジン−３−カルボン酸  １０２ｃ。
マグネティックスターラー及び還流コンデンサーを備えた１００ｍＬ丸底フラスコに、１０−［４−（５−ブロモ−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）ピリジン−２−イル］−４，４−ジメチル−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−９−オン  １０２ｂ（４９７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、１０２ａ（３１２ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（９２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、キサントホス（４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン、ＣＡＳ登録番号１６１２６５−０３−８、１１６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（６５２ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（２０ｍＬ）を充填した。真空／アルゴンによる３サイクルのフラッシュ後、混合物を８０℃で４時間加熱した。この時間の後、反応物を室温に冷却した。次いで反応物を濾過し、濾液を減圧下でエバポレートした。残留物を逆相分取ＨＰＬＣによって精製して、１０２ｃ（８２ｍｇ、１３％）を白色固体として得た。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋６２５．４
【０１９３】
工程３：  マグネティックスターラー及び還流コンデンサーを備えた５０ｍＬ丸底フラスコに、１０２ｃ（１００ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ、１５２ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ、８滴）、ＴＨＦ（１０ｍＬ）及び２−アミノアセトニトリル（５滴）を充填した。混合物を３０℃で５時間加熱した。この時間の後、反応物を室温に冷却し、次いで反応物を濾過し、濾液を減圧下でエバポレートした。残留物を逆相分取ＨＰＬＣによって精製して、１０２（３０ｍｇ、２８％）を白色固体として得た。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋６６３．２。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6)δ 8.88 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.47 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.35 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.58-6.55 (m, 2H), 5.02 (s, 1H), 4.53-4.51 (m, 1H), 4.43-4.40 (m, 1H), 4.23-4.15 (m, 重複, 5H), 3.86-3.84 (m, 1H), 3.72-3.69 (m, 1H), 3.62 (s, 3H), 3.60-3.56 (m, 1H), 3.51-3.43 (m, 2H), 3.10-3.08 (m, 1H), 2.62-2.54 (m, 2H), 2.43 (s, 2H), 2.18-2.16 (m, 1H), 2.06-2.04 (m, 1H), 1.22 (s, 6H).
【０１９４】
実施例１０３  Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］プロパ−２−エナミド  １０３
0006275846.tif 000029
【０１９５】
工程１：  ３−（６−（２−アミノエトキシ）ピリジン−２−イルアミノ）−５−ブロモ−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン塩酸塩  １０３ａ
ＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶かした２−ヒドロキシエチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（６．４ｇ、４０ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（７．２ｍＬ、５２ｍｍｏｌ）の混合物に、塩化パラトルエンスルホニル、ＴｓＣｌ（８．４ｇ、４４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温（ｒｔ）で終夜（ＯＮ）撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をＥＡと水とに分配した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝５／１）によって精製して、４−メチルベンゼンスルホン酸２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチル（１０．０ｇ、７９％）を白色固体として得た。
【０１９６】
ＤＭＦ（４０ｍＬ）に溶かした３，５−ジブロモ−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（２．６７ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、６−アミノピリジン−２−オール（１．１ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（４６０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、キサントホス（５７６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（６．５２ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で終夜撹拌した。混合物を濃縮し、残留物をＤＣＭで処理した。沈殿物を濾過によって収集し、乾燥させて、５−ブロモ−３−（６−ヒドロキシピリジン−２−イルアミノ）−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン  １０１ａ（４．０ｇの粗製物）を褐色固体として得た。
【０１９７】
ＤＭＦ（４０ｍＬ）に溶かした化合物１０１ａ（７．０ｇ、２３．７５ｍｍｏｌ）、４−メチルベンゼンスルホン酸２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチル（３．０ｇ、９．５ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（３．７ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で４時間撹拌した。反応混合物を濃縮した。残留物をＥＡで処理し、濾過した。濾液を水で洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、２−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルオキシ）エチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル  １０１ｂ（６５０ｍｇ、２工程で１５％）を黄色固体として得た。ＨＣｌ（５ｍＬ、１，４−ジオキサン中４Ｍ、２０ｍｍｏｌ）に溶かした１０１ｂ（７００ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で終夜撹拌した。反応混合物を濃縮して、１０３ａ（５５０ｍｇ、８３％）を黄色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋３４１．０
【０１９８】
工程２：  ３−（６−（２−アミノエトキシ）ピリジン−２−イルアミノ）−５−ブロモ−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン塩酸塩  １０３ｂ
ＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶かした１０３ａ（９００ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（０．８３ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ）の混合物に、塩化アクリロイル（０．２３ｍＬ、２．８８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、水でクエンチした。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、１０３ｂ（６２０ｍｇ、６６％）を明黄色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋３９３．１
【０１９９】
工程３：  Ｎ−（２−（６−（１−メチル−２−オキソ−５−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルオキシ）エチル）アクリルアミド  １０３ｃ
ジオキサン（１６ｍＬ）に溶かした１０３ｂ（２５０ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）、Ｐｉｎ２Ｂ２（５７０ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１１６ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）、Ｘｐｈｏｓ（１２２ｍｇ、０．２５６ｍｍｏｌ）及びＫＯＡｃ（１２５ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において６５℃で４時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、１０３ｃ（８２５ｍｇの粗製物）を褐色固体として得た。この物質を次の工程に直接使用した。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋４４１．２
【０２００】
工程４：  アセトニトリル（１０ｍＬ）及び水（１ｍＬ）に溶かした１０３ｃ（２５０ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、６−（３−ブロモ−５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６，７，８，９−テトラヒドロジベンゾ［ｂ，ｄ］チエノ［３，２−ｄ］ピリダジン−７（６Ｈ）−オン  １０３ｄ（１９３ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（７１ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）及びＫ３ＰＯ４（２５０ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９０℃で５時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、１０３（４０ｍｇ、２工程で１０％）を白色固体として得た。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.64 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.52-7.49 (m, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.27-7.25 (m, 1H), 7.14 (m, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.47 (m, 1H), 6.23-6.22 (m, 1H), 5.98-5.92 (m, 1H), 5.51 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.40 (s, 2H), 4.29-4.27 (m, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.52 (s, 2H), 3.00-2.98 (m, 2H), 2.88-2.87 (m, 2H), 1.99-1.97 (m, 4H).ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋６４３．２
【０２０１】
実施例１０４  Ｎ−［２−［［６−［［５−［２−（６−ｔｅｒｔ−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］プロパ−２−エナミド  １０４
0006275846.tif 000030
工程１：  酢酸（２−（６−ｔｅｒｔ−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）−４−クロロピリジン−３−イル）メチル  １０４ｂ
テトラヒドロフラン、ＴＨＦ（２．５ｍＬ）に溶かした６−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（４−クロロ−３−（ヒドロキシメチル）ピリジン−２−イル）−８−フルオロフタラジン−１（２Ｈ）−オン  １０４ａ（１５０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン、Ｅｔ３Ｎ（０．１２ｍＬ、０．８４ｍｍｏｌ）の混合物に、塩化アセチル、ＡｃＣｌ（４４μｌ、０．６２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１時間撹拌し、水でクエンチし、酢酸エチル、ＥＡで抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、１０４ｂ（１６０ｍｇ）を無色油状物として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋４０４．１
【０２０２】
工程２：  ３−（アセトキシメチル）−２−（６−ｔｅｒｔ−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）ピリジン−４−イルボロン酸  １０４ｃ
ジオキサン（５ｍＬ）に溶かした１０４ｂ（１５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）、Ｐｉｎ２Ｂ２（３７９ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２８ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）、Ｘｐｈｏｓ（３５ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）及びＫＯＡｃ（１０８ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において６５℃で１５時間撹拌した。反応混合物を濃縮した。残留物をＤＣＭ／ＰＥ（１ｍＬ／２０ｍＬ）で洗浄し、濾過した。濾液を濃縮して、１０４ｃ（１００ｍｇ、６６％）を黄色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋４１４．２
【０２０３】
工程３：  酢酸（４−（５−（６−（２−アクリルアミドエトキシ）ピリジン−２−イルアミノ）−１−メチル−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリジン−３−イル）−２−（６−ｔｅｒｔ−ブチル−８−フルオロ−１−オキソフタラジン−２（１Ｈ）−イル）ピリジン−３−イル）メチル  １０４ｄ
アセトニトリル（２ｍＬ）及び水（０．２ｍＬ）に溶かした１０４ｃ（２５６ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）、３−（６−（２−アミノエトキシ）ピリジン−２−イルアミノ）−５−ブロモ−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン塩酸塩  １０３ｂ（１２０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４７ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ）及びＫ３ＰＯ４（１３１ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９０℃で３時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を石油エーテル、ＰＥで洗浄して、１０４ｄ（１６０ｍｇ）を褐色固体として得た。この物質を、次の工程に直接使用した。
【０２０４】
工程４：  ＴＨＦ／ｉ−ＰｒＯＨ／水（２．０ｍＬ／１．２ｍＬ／０．８ｍＬ）に溶かした１０４ｄ（１４０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）及びＬｉＯＨ（４４ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で１時間撹拌した。混合物をＥＡで抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、１０４（１０ｍｇ、２工程で１０％）を明黄色固体として得た。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.72-8.66 (m, 2H), 8.33 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.59-7.47 (m, 6H), 6.51 (s, 1H), 6.44 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 6.24-6.16 (m, 2H), 5.99-5.94 (m, 1H), 5.50 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.58-4.48 (m, 2H), 4.28-4.21 (m, 2H), 3.99-3.57 (m, 5H), 1.43 (s, 9H).ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋６４０．３
【０２０５】
実施例１０５  Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］アミノ］エチル］プロパ−２−エナミド  １０５
0006275846.tif 000031
工程１：  ６−ブロモピリジン−２−アミン（１７．２ｇ、１００ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ２Ｏ（４５．９ｍＬ、２００ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（４０．４ｍＬ、３００ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（６１０ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）及びｔ−ＢｕＯＨ（２００ｍＬ）の混合物を、６０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、濾過し、乾燥させて、Ｎ，Ｎ−ビス−Ｂｏｃ−６−ブロモピリジン−２−アミン  １０５ａ（２４．０ｇ、６５％）を白色固体として得た。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 7.58-7.25 (m, 3H), 1.46 (s, 18H).
【０２０６】
工程２：  ジオキサン（１００ｍＬ）に溶かした１０５ａ（３．７２ｇ、１０ｍｍｏｌ）、２−アミノエチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．６０ｇ、１０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（９１．６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、キサントホス（１１６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（９．７８ｇ、３０ｍｍｏｌ）の混合物を脱気し、窒素下において９５℃で６時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＥＡ／ＰＥ＝１／１）によって精製して、Ｎ，Ｎ−ビス−Ｂｏｃ−６−（２−Ｎ−Ｂｏｃ−アミノエチル）ピリジン−２−アミン  １０５ｂ（２．６２ｇ、５８％）を黄色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋４５３．３
【０２０７】
工程３：  ジオキサン（５０ｍＬ）に溶かした１０５ｂ（４．５２ｇ、１０ｍｍｏｌ）の混合物に、ＨＣｌ（ジオキサン中４Ｍ、１０ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、濃縮して、Ｎ２−（２−アミノエチル）ピリジン−２，６−ジアミン塩酸塩  １０５ｃ（１．２７ｇ、８４％）を黄色固体として得た。
【０２０８】
工程４：  ＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶かした１０５ｃ（１．８８ｇ、１０ｍｍｏｌ）、アクリル酸（７２０ｍｇ、１０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（３．８０ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（６．９７ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＥＡ／ＭｅＯＨ＝４／１）によって精製して、Ｎ−（２−（６−アミノピリジン−２−イルアミノ）エチル）アクリルアミド  １０５ｄ（１．０７ｇ、５２％）を淡黄色油状物として得た。
【０２０９】
工程５：  ジオキサン（１００ｍＬ）に溶かした１０５ｄ（２．０６ｇ、１０ｍｍｏｌ）、３，５−ジブロモ−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（２．６５ｇ、１０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（９１．６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）、キサントホス（１１６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（９．７８ｇ、３０ｍｍｏｌ）の混合物を脱気し、窒素下において１００℃で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＥＡ／ＰＥ＝５／１）によって精製して、Ｎ−（２−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルアミノ）エチル）アクリルアミド  １０５ｅ（２．５４ｇ、６５％）を黄色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋３９４．１。
【０２１０】
工程６：  ＡＣＮ（１０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）に溶かした１０５ｅ（２３５ｍｇ、０．６０１ｍｍｏｌ）、酢酸（４−フルオロ−２−｛６−オキソ−８−チア−４，５−ジアザトリシクロ［７．４．０．０２，７］トリデカ−１（９），２（７），３−トリエン−５−イル｝−６−（テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メチル  １０８ｃ（２９９ｍｇ、０．６０１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（４２．８ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及びＫ３ＰＯ４（３８２ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）の混合物を脱気し、窒素下において８５℃で４時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＥＡ／ＰＥ＝４／１）によって精製して、Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（アセトキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］アミノ］エチル］プロパ−２−エナミド  １０５ｆ（１２５ｍｇ、３１％）を褐色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋６８４．３
【０２１１】
工程７：  ＴＨＦ（６ｍＬ）、ｉ−ＰｒＯＨ（２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）に溶かした１０５ｆ（１２５ｍｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）の混合物に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（３７ｍｇ、０．９１５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、濃縮した。残留物を水とＤＣＭとに分配した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をＥＡで洗浄し、乾燥させて、１０５（７３ｍｇ、６０％）を灰色固体として得た。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.56 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), ), 8.20 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.42(s, 1H), 7.38-7.32(m, 2H), 7.23(t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.52(s, 1H), 6.35(d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.21-6.15(m, 1H), 6.05-6.02(m, 1H), 5.95(d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.73(s, 1H), 4.33(s, 2H), 3.59(s, 3H), 3.28-3.25(m, 5H), 2.93(bs, 2H), 2.84(bs, 2H), 1.88(bs, 4H).ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６４２［Ｃ３４Ｈ３４ＦＮ７Ｏ５＋Ｈ］＋
【０２１２】
実施例１０６  Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］ブタ−２−イナミド  １０６
0006275846.tif 000032
工程１：  アセトニトリル（１０ｍＬ）及び水（１ｍＬ）に溶かしたＮ−（２−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルオキシ）エチル）ブタ−２−イナミド  １１６ａ（２２４ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、酢酸（４−フルオロ−２−｛６−オキソ−８−チア−４，５−ジアザトリシクロ［７．４．０．０２，７］トリデカ−１（９），２（７），３−トリエン−５−イル｝−６−（テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メチル  １０８ｃ（２４０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（９０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）及びＫ３ＰＯ４（２５０ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９０℃で３時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（アセトキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］ブタ−２−イナミド  １０６ａ（３３０ｍｇの粗製物）を褐色固体として得た。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６９６．８。この物質を、次の工程に直接使用した。
【０２１３】
工程２：  ＴＨＦ／ｉ−ＰｒＯＨ／水（５．０ｍＬ／３．０ｍＬ／２．０ｍＬ）に溶かした１０６ａ（３３０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）及びＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１９６ｍｇ、４．６７ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で１時間撹拌した。混合物をＥＡで抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、１０６（３０ｍｇ、２工程で８％）を白色固体として得た。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.52 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.52 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.13-7.10 (m, 1H), 6.69 (s, 1H), 6.52 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.27 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 2.98-2.97 (m, 2H), 2.87-2.85 (m, 2H), 1.99-1.96 (m, 4H), 1.86 (s, 3H).ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６５５［Ｃ３４Ｈ３１ＦＮ６Ｏ５Ｓ＋Ｈ］＋
【０２１４】
実施例１０７  Ｎ−［（１Ｓ）−２−［［６−［［５−［２−（７，７−ジメチル−４−オキソ−１，２，６，８−テトラヒドロシクロペンタ［３，４］ピロロ［３，５−ｂ］ピラジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］−１−メチル−エチル］プロパ−２−エナミド  １０７
0006275846.tif 000033
工程１：  メタンスルホン酸（Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロピル  １０７ａ
ＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶かした（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１−ヒドロキシプロパン−２−イルカルバメート（３．０ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（４．８ｍＬ、３４．２ｍｍｏｌ）の氷冷混合物に、メタンスルホニルクロリド、ＭｓＣｌ（１．３３ｍＬ、１７．１ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、ＤＣＭで希釈し、水で洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、１０７ａ（３．７２ｇ、８６％）を白色固体として得た。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 4.044-4.033 (d, 2H), 3.164 (s, 3H), 1.385 (s, 9H), 1.065-1.051 (d, 3H)
【０２１５】
工程２：  （Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルオキシ）プロパン−２−イルカルバメート  １０７ｂ
ＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶かした１０７ａ（９６４ｍｇ、５．５ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−３−（６−ヒドロキシピリジン−２−イルアミノ）−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン  １０１ａ（４ｇの粗製物、１６．５ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（５．３８ｇ、１１ｍｍｏｌ）の混合物を、９５℃で１６時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）によって精製して、１０７ｂ（５５０ｍｇ、２２％）を褐色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋４５３．１
【０２１６】
工程３：  （Ｓ）−３−（６−（２−アミノプロポキシ）ピリジン−２−イルアミノ）−５−ブロモ−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン塩酸塩  １０７ｃ
ＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした１０７ｂ（５５０ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）の混合物を、ＨＣｌ（ジオキサン中４Ｍ、３ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、飽和Ｎａ２ＣＯ３でクエンチし、ＤＣＭで抽出した。混合した抽出物をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、１０７ｃ（４００ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を褐色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋３５２．９
【０２１７】
工程４：  （Ｓ）−Ｎ−（１−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルオキシ）プロパン−２−イル）アクリルアミド  １０７ｄ
ＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶かした１０７ｃ（３９０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（０．５３ｍｌ、３．０ｍｍｏｌ）の氷冷混合物に、塩化アクリロイル（０．２３ｍｌ、２．０ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、水でクエンチした。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０／１）によって精製して、１０７ｄ（２８４ｍｇ、７０％）を褐色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋４０９．０
【０２１８】
工程５：  ４−（４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル）［１，２］オキサボロロ［４，３−ｃ］ピリジン−１（３Ｈ）−オール  １０７ｇ
0006275846.tif 000034
４−クロロ−２−｛４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル｝ピリジン−３−カルバルデヒド  １０７ｅを、米国特許第８７１６２７４号、実施例１０８、図８の中間体１０８ａのための手順に従って、米国特許８７２９０７２、実施例１０３ｅの４，４−ジメチル−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−９−オンから調製した。１０７ｅ（１２．０ｇ、３５．０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４０ｍＬ）及びＤＣＭ（４０ｍＬ）中溶液に、ＮａＢＨ４（１．８３ｇ、３８．４ｍｍｏｌ）を小分けにして０℃で添加した。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、水でクエンチし、濃縮した。残留物をＥＡとブラインとに分配した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物４−クロロ−２−｛４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル｝ピリジン−３−カルビノール  １０７ｆを、さらに精製することなく次の工程に使用した（９．６ｇ、８０％）。ＥｔＯＨ（２００ｍＬ）に溶かした化合物１０７ｆ（９．６ｇ、２７．８ｍｍｏｌ）、テトラヒドロキシジボロラン、次亜ジボロン酸（ｈｙｐｏｄｉｂｏｒｉｃ  ａｃｉｄ）（７．４３ｇ、８３．５ｍｍｏｌ）、Ｘｐｈｏｓ−Ｐｄ−Ｇ２（２１８ｍｇ、０．２７８ｍｍｏｌ）、Ｘｐｈｏｓ（３２１ｍｇ、０．５５６ｍｍｏｌ）及びＫＯＡｃ（６．８５ｇ、８３．５ｍｍｏｌ）の混合物を、８０℃で１時間加熱し、濃縮した。残留物を飽和Ｋ２ＣＯ３（１００ｍＬ）に溶解させ、ＤＣＭで４回抽出した。有機相を廃棄し、水層を濃ＨＣｌで中和した。白色沈殿物が発生したら、懸濁液をＤＣＭで抽出した。有機層を混合し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、１０７ｇを灰色固体（６．２１ｇ、５３％）として得た。
【０２１９】
工程６：  アセトニトリル（２０ｍＬ）及び水（５ｍｌ）に溶かした１０７ｄ（１５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、１０７ｇ（１２５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２７ｍｇ、１０ｍｍｏｌ％）及びＫ３ＰＯ４（２３５ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素下において８５℃で４時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝３０／１）によって精製して、１０７（８０ｍｇ、３４％）を黄色固体として得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.61-8.58 (m, 2H), 8.10 (bs, 1H), 7.52-7.45(m, 3H), 7.38-7.34 (m, 2H), 6.86(d, J = 7.6Hz, 1H), 6.51(s, 1H), 6.15(bs, 2H), 6.15-6.01 (m, 1H), 5.56(bs, 1H), 4.97(bs, 1H), 4.39-4.33(m, 2H), 4.19-4.03(m, 6H), 3.87(bs, 1H), 3.61(s, 3H), 2.56-2.42 (m, 4H), 1.21(s, 6H), 0.97-0.91 (m, 3H).ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６３８［Ｃ３５Ｈ３９Ｎ７Ｏ５＋Ｈ］＋
【０２２０】
実施例１０８  Ｎ−［（１Ｓ）−２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］−１−メチル−エチル］プロパ−２−エナミド  １０８
0006275846.tif 000035
工程１：  酢酸（４−フルオロ−２−｛６−オキソ−８−チア−４，５−ジアザトリシクロ［７．４．０．０２，７］トリデカ−１（９），２（７），３−トリエン−５−イル｝−６−（ブロモ）フェニル）メチル  １０８ｂ
８−チア−４，５−ジアザトリシクロ［７．４．０．０２，７］トリデカ−１（９），２（７），３−トリエン−６−オンを、米国特許第８７１６２７４号、実施例１９１ｄの手順に従って調製し、（４−フルオロ−２−｛６−オキソ−８−チア−４，５−ジアザトリシクロ［７．４．０．０２，７］トリデカ−１（９），２（７），３−トリエン−５−イル｝−６−（ブロモ）フェニル）カルビノール  １０８ａに変換した。ＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶かした１０８ａ（４．１ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１．９５ｍＬ、１４ｍｍｏｌ）の混合物に、ＡｃＣｌ（０．８５ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１時間撹拌し、水で希釈し、ＥＡで抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、化合物１０８ｂ（４．０ｇ）を黄色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋４５１．０
【０２２１】
工程２：  酢酸（４−フルオロ−２−｛６−オキソ−８−チア−４，５−ジアザトリシクロ［７．４．０．０２，７］トリデカ−１（９），２（７），３−トリエン−５−イル｝−６−（テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メチル  １０８ｃ
ジオキサン（８０ｍＬ）に溶かした化合物１０８ｂ（４．５ｇ、１０ｍｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）、Ｐｉｎ２Ｂ２（７．６ｇ、３０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３７８ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）及びＫＯＡｃ（２．９ｇ、３０ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９０℃で５時間撹拌した。反応混合物を濃縮した。残留物をＰＥ／ＥＡ（４０ｍＬ／２ｍＬ）によってスラリー化し、濾過して、化合物１０８ｃ（３．５ｇ、７０％）を黄色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋４９８．９
【０２２２】
工程３：  Ｎ−［（１Ｓ）−２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（アセトキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］−１−メチル−エチル］プロパ−２−エナミド  １０８ｄ
アセトニトリル（２０ｍＬ）及び水（５ｍｌ）に溶かした（Ｓ）−Ｎ−（１−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルオキシ）プロパン−２−イル）アクリルアミド  １０７ｄ（１５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、１０８ｃ（２００ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２７ｍｇ、１０ｍｏｌ％）及びＫ３ＰＯ４（２３５ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素下において８５℃で４時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝３０／１）によって精製して、１０８ｄ（７０ｍｇの粗製物）を黄色固体として得た。
【０２２３】
工程４：  ＴＨＦ（６ｍＬ）、ｉ−ＰｒＯＨ（２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）に溶かした１０８ｄ（７０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の混合物に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（４２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、１０８（２０ｍｇ、２工程で８％）を黄色固体として得た。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.61 (d, J = 10 Hz, 2H), 8.49 (s, 1H), 8.04-8.03 (m, 1H), 7.52-7.50(m, 2H), 7.40-7.35(m, 2H), 6.87(d, J = 8 Hz, 1H), 6.21-6.15(m, 2H), 6.05-6.02(m, 1H), 5.54(d, J = 10 Hz, 1H), 4.73(bs, 1H), 4.30 (bs, 2H), 4.15(bs, 2H), 4.02(bs, 1H), 3.61(s, 3H), 2.93(bs, 2H), 2.84(bs, 2H), 1.86(bs, 4H), 0.97(bs, 3H).ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６５７．３［Ｃ３４Ｈ３３ＦＮ６Ｏ５Ｓ＋Ｈ］＋
【０２２４】
実施例１０９  Ｎ−［２−［［６−［［５−［２−（７，７−ジメチル−４−オキソ−１，２，６，８−テトラヒドロシクロペンタ［３，４］ピロロ［３，５−ｂ］ピラジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］アミノ］エチル］プロパ−２−エナミド  １０９
0006275846.tif 000036
アセトニトリル（１０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）に溶かしたＮ−（２−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルアミノ）エチル）アクリルアミド  １０５ｅ（１００ｍｇ、０．２５５ｍｍｏｌ）、４−（４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル）［１，２］オキサボロロ［４，３−ｃ］ピリジン−１（３Ｈ）−オール  １０７ｇ（８６ｍｇ、０．２５５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２０ｍｇ、１０ｍｏｌ％）、キサントホス（３０ｍｇ、２０ｍｏｌ％）及びＫ３ＰＯ４（１６０ｍｇ、０．７６５ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素下において８５℃で４時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、１０９（１０ｍｇ、６％）を黄色固体として得た。1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 8.69 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 8.22 (t, J = 5.0 Hz, 1H), 8.18(s, 1H), 7.55(s, 1H), 7.35(d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.24(t, J = 8.0 Hz, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.44(bs, 1H), 6.38(d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.19-6.14(m, 1H), 6.06-6.02(m, 1H), 5.96(d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.55(d, J = 12.5 Hz, 1H), 5.09(bs, 1H), 4.52-4.43(m, 2H), 4.25-4.19(m, 3H), 3.86-3.84(m, 1H), 3.61(s, 3H), 3.29-3.27(m, 2H), 3.24-3.22(m, 2H), 2.59-2.51(m, 2H), 2.42(s, 2H), 1.22(s, 6H).ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６２３．０［Ｃ３４Ｈ３８Ｎ８Ｏ４＋Ｈ］＋
【０２２５】
実施例１１０  Ｎ−［２−［［６−［［５−［２−（７，７−ジメチル−４−オキソ−１，２，６，８−テトラヒドロシクロペンタ［３，４］ピロロ［３，５−ｂ］ピラジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］−メチル−アミノ］エチル］プロパ−２−エナミド  １１０
0006275846.tif 000037
工程１：  ＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶かしたＮ，Ｎ−ビス−Ｂｏｃ−６−ブロモピリジン−２−アミン  １０５ａ（５．０ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）、２−（メチルアミノ）エチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．５ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（６１０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、キサントホス（７７４ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（１０．９ｇ、３１．５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９５℃で７時間撹拌した。混合物をろ過し、濾液をＥＡ（５０ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝９／１）によって精製して、Ｎ，Ｎ−ビス−Ｂｏｃ−６−（２−Ｎ−Ｂｏｃ−１−メチルアミノエチル）ピリジン−２−アミン  １１０ａ（ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４６７．３）及びＮ−Ｂｏｃ−６−（２−Ｎ−Ｂｏｃ−１−メチルアミノエチル）ピリジン−２−アミン  １１０ｂ（ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝３６７．３）の混合物、２．０ｇ、４０％を黄色固体として得た。
【０２２６】
工程２：  ＨＣｌ（１０ｍＬ、１，４−ジオキサン中４Ｍ、４０ｍｍｏｌ）に溶かした１１０ａ及び１１０ｂ（２．０ｇ、４．３ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で７時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル６−（（２−アミノエチル）（メチル）アミノ）ピリジン−２−イルカルバメート塩酸塩  １１０ｃ（１．２ｇ、９３％）を黄色固体として得、これを次の工程に直接使用した。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝２６７．２
【０２２７】
工程３：  ＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶かした１１０ｃ（１．２ｇ、４．５ｍｍｏｌ）、アクリル酸（０．３７ｍＬ、５．４ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２．０５ｇ、５．４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（４．６ｍＬ、１０．８ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で終夜撹拌した。混合物を水で洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル６−（（２−アクリルアミドエチル）（メチル）アミノ）ピリジン−２−イルカルバメート  １１０ｄ（１．２ｇ、７５％）を褐色油状物として得た。この物質を次の工程に直接使用した。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝３２１．３
【０２２８】
工程４：  ＤＣＭ（１０．０ｍＬ）に溶かした１１０ｄ（２．０ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）及びＴＦＡ（２．０ｍＬ）の混合物を、室温で終夜撹拌した。混合物を濃縮し、ＥＡ（３０ｍＬ）で希釈し、１Ｍ  ＮａＯＨで中和した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝１／１）によって精製して、Ｎ−（２−（（６−アミノピリジン−２−イル）（メチル）アミノ）エチル）アクリルアミド  １１０ｅ（５５０ｍｇ、４０％）を黄色油状物として得た。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝２２１．２
【０２２９】
工程５：  ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶かした１１０ｅ（４００ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ）、３，５−ジブロモ−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（５３４ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（８３ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）、キサントホス（１０５ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（１．４８ｇ、４．５５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９５℃で７時間撹拌した。混合物をＥＡ（５０ｍＬ）で希釈し、濾過した。濾液を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝１／２）によって精製して、Ｎ−（２−（（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イル）（メチル）アミノ）エチル）アクリルアミド  １１０ｆ（１６０ｍｇ、２２％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４０８．０
【０２３０】
工程６：  アセトニトリル（５ｍＬ）及び水（１ｍＬ）に溶かした１１０ｆ（８０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、４−（４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル）［１，２］オキサボロロ［４，３−ｃ］ピリジン−１（３Ｈ）−オール  １０７ｇ（８３ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）及びＫ３ＰＯ４（１０６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９０℃で７時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＥＡ／ＭｅＯＨ＝２０／１）によって精製して、１１０（６０ｍｇ、４８％）を明黄色固体として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.63 (s, 1H), 8.46-8.45 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.41-7.34 (m, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 6.19-6.18 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.03-5.95 (m, 2H), 5.72-5.65 (m, 1H), 5.42-5.39 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.96-3.98 (m, 7H), 3.71 (s, 3H), 3.53-3.22 (m, 3H), 2.99 (s, 3H), 2.57 (s, 2H), 2.51 (s, 2H), 1.27 (s, 6H).ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６３７［Ｃ３５Ｈ４０Ｎ８Ｏ４＋Ｈ］＋
【０２３１】
実施例１１１  Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］−メチル−アミノ］エチル］プロパ−２−エナミド  １１１
0006275846.tif 000038
工程１：  アセトニトリル（５ｍＬ）及び水（１．０ｍＬ）に溶かしたＮ−（２−（（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イル）（メチル）アミノ）エチル）アクリルアミド  １１０ｆ（１２０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、酢酸（４−フルオロ−２−｛６−オキソ−８−チア−４，５−ジアザトリシクロ［７．４．０．０２，７］トリデカ−１（９），２（７），３−トリエン−５−イル｝−６−（テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メチル  １０８ｃ（１７９ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２３ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）及びＫ３ＰＯ４（１５９ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９０℃で７時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＥＡ／ＭｅＯＨ＝２５／１）によって精製して、Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（アセトキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］−メチル−アミノ］エチル］プロパ−２−エナミド  １１１ａ（１５０ｍｇ、６０％）を明黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６９８．２
【０２３２】
工程２：  ＴＨＦ／ｉ−ＰｒＯＨ／水（２．０ｍＬ／１．０ｍＬ／１．０ｍＬ）に溶かした１１１ａ（１３０ｍｇ、０．１８６ｍｍｏｌ）及びＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（４０ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で２時間撹拌した。混合物をＥＡで抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０／１）によって精製して、１１１（４０ｍｇ、３３％）を白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.53 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.39-7.35 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.26-7.23 (m, 1H), 7.10-7.08 (m, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.18-6.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.08-6.00 (m, 2H), 5.85-5.79 (m, 1H), 5.47-5.44 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.30-4.28 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 4.02-3.99 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.75-3.69 (m, 5H), 3.47-3.45 (m, 2H), 3.02-2.98 (m, 5H), 2.86 (m, 2H),1.98 (m, 4H).ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６５６［Ｃ３４Ｈ３４ＦＮ７Ｏ４Ｓ＋Ｈ］＋
【０２３３】
実施例１１２  Ｎ−［２−［［６−［［５−［２−（７，７−ジメチル−４−オキソ−１，２，６，８−テトラヒドロシクロペンタ［３，４］ピロロ［３，５−ｂ］ピラジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］−Ｎ−メチル−プロパ−２−エナミド  １１２
0006275846.tif 000039
工程１：  ＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶かした２−（メチルアミノ）エタノール（５．０ｇ、６６．６ｍｍｏｌ）の混合物に、（Ｂｏｃ）２Ｏ（１５．０ｇ、６７．９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、ＥＡ（１００ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、２−ヒドロキシエチル（メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル  １１２ａ（１０．０ｇ、８６％）を無色油状物として得た。
【０２３４】
工程２：  ＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶かした１１２ａ（９．０ｇ、５１ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１８．６ｍＬ、５１ｍｍｏｌ）の混合物に、ＴｓＣｌ（９．７７ｇ、５１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で４時間撹拌し、濃縮した。残留物をＥＡで希釈し、水で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮して、４−メチルベンゼンスルホン酸２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ）エチル  １１２ｂ（１０．０ｇ、６１％）を明黄色油状物として得た。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝２３０．０
【０２３５】
工程３：  ＤＭＦ（４０ｍＬ）に溶かした１１２ｂ（３．３ｇ、１０ｍｍｏｌ）、５−ブロモ−３−（６−ヒドロキシピリジン−２−イルアミノ）−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン  １０１ａ（７．４ｇ、２５ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（４．１ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で４時間撹拌した。混合物をＥＡと水とに分配した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、２−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルオキシ）エチル（メチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル  １１２ｃ（１．０ｇ、２２％）を黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４５４．９
【０２３６】
工程４：  ＨＣｌ（５ｍＬ、１，４−ジオキサン４Ｍ、２０ｍｍｏｌ）に溶かした１１２ｃ（９００ｍｇ、１．９９ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、５−ブロモ−１−メチル−３−（６−（２−（メチルアミノ）エトキシ）ピリジン−２−イルアミノ）ピリジン−２（１Ｈ）−オン塩酸塩  １１２ｄ（６６０ｍｇ、８５％）を黄色固体として得た。この物質を、次の工程に直接使用した。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝３５４．９（遊離塩基）
【０２３７】
工程５：  ＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶かした１１２ｄ（８００ｍｇ、２．２７ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（０．７９ｍＬ、５．６７ｍｍｏｌ）の混合物に、塩化アクリロイル（０．２３ｍＬ、２．８４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌し、水でクエンチした。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、Ｎ−（２−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルオキシ）エチル）−Ｎ−メチルアクリルアミド  １１２ｅ（２５０ｍｇ、２７％）を明黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４０７．０
【０２３８】
工程６：  アセトニトリル（５ｍＬ）及び水（１ｍＬ）に溶かした１１２ｅ（２００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、４−（４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル）［１，２］オキサボロロ［４，３−ｃ］ピリジン−１（３Ｈ）−オール  １０７ｇ（１８５ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（３７ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）及びＫ３ＰＯ４（２６５ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９０℃で１６時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＥＡ／ＭｅＯＨ＝２５／１）によって精製して、１１２（７０ｍｇ、２２％）を明黄色固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 80℃): δ 8.47-8.45 (m, 2H), 8.34 (s, 1H), 7.51 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 6.69-6.58 (m, 1H), 6.55 (s, 1H), 6.19 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.03-5.97(m, 1H), 5.53 (bs, 1H), 4.76 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.48-4.46 (m, 2H), 4.32 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 4.21-4.17 (m, 2H), 3.67 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.61(s, 3H), 3.04 (s, 3H), 2.88 (bs, 2H), 2.57 (s, 2H), 2.44 (s, 2H), 1.23 (s, 6H).ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６３８．０［Ｃ３５Ｈ３９Ｎ７Ｏ５＋Ｈ］＋
【０２３９】
実施例１１３  Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］−Ｎ−メチル−プロパ−２−エナミド  １１３
0006275846.tif 000040
工程１：  アセトニトリル（５ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）に溶かしたＮ−（２−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルオキシ）エチル）−Ｎ−メチルアクリルアミド  １１２ｅ（１００ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、酢酸（４−フルオロ−２−｛６−オキソ−８−チア−４，５−ジアザトリシクロ［７．４．０．０２，７］トリデカ−１（９），２（７），３−トリエン−５−イル｝−６−（テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メチル  １０８ｃ（１８７ｍｇ、０．３７５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１９ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）及びＫ３ＰＯ４（１３３ｍｇ、０．６２５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９０℃で６時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝１／４）によって精製して、Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（アセトキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］−Ｎ−メチル−プロパ−２−エナミド  １１３ａ（１００ｍｇ、５７％）を明黄色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋６９９．２
【０２４０】
工程２：  ＴＨＦ／ｉ−ＰｒＯＨ／水（３．０ｍＬ／１．０ｍＬ／１．０ｍＬ）に溶かした１１３ａ（８０ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）及びＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２４ｍｇ、０．５７３ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で６時間撹拌した。混合物をＥＡで抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＥＡ／ＭｅＯＨ＝２５／１）によって精製して、１１３（５０ｍｇ、６７％）を白色固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 80℃): δ 8.42 (s, 2H), 8.35 (s, 1H), 7.52 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.33-7.30 (m, 2H), 6.81 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.68-6.59 (m, 1H), 6.19 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.05-5.99 (m, 1H), 5.56 (m, 1H), 4.37-4.32 (m, 2H), 3.68 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.07 (s, 3H), 2.95-2.86 (m, 6H), 1.91-1.89 (m, 4H).ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６５７．３［Ｃ３４Ｈ３３ＦＮ６Ｏ５Ｓ＋Ｈ］＋
【０２４１】
実施例１１４  Ｎ−［（３Ｓ）−１−［６−［［５−［２−（７，７−ジメチル−４−オキソ−１，２，６，８−テトラヒドロシクロペンタ［３，４］ピロロ［３，５−ｂ］ピラジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］−３−ピペリジル］プロパ−２−エナミド  １１４
0006275846.tif 000041
工程１：  ＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶かしたＮ，Ｎ−ビス−Ｂｏｃ−６−ブロモピリジン−２−アミン  １０５ａ（５．０ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルピペリジン−３−イルカルバメート（４ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（６１０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、キサントホス（７７４ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（１０．９ｇ、３１．５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９５℃で７時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液をＥＡ（５０ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝９／１）によって精製して、（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−６−（３−（ビス−Ｂｏｃ−アミノ）ピペリジン−１−イル）ピリジン−２−アミン  １１４ａ及び（Ｓ）−Ｎ−Ｂｏｃ−６−（３−（Ｂｏｃ−アミノ）ピペリジン−１−イル）ピリジン−２−アミン  １１４ｂ（２．３ｇ、３５％）の混合物を黄色固体として得た。
【０２４２】
工程２：  ＨＣｌ（１０ｍＬ、１，４−ジオキサン中４Ｍ、４０ｍｍｏｌ）に溶かした１１４ａ及び１１４ｂ（２．３ｇ、４．６９ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で７時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル６−（３−アミノピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イルカルバメート塩酸塩  １１４ｃ（１．３９ｇ、９０％）を黄色固体として得、これを次の工程に直接使用した。
【０２４３】
工程３：  ＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶かした１１４ｃ（１．３９ｇ、４．２２ｍｍｏｌ）、アクリル酸（０．３ｍＬ、４．５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１．７ｇ、４．５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（３．８ｍＬ、９ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で終夜撹拌した。混合物を水で洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル６−（３−アクリルアミドピペリジン−１−イル）ピリジン−２−イルカルバメート  １１４ｄ（８８０ｍｇ、６０％）を褐色油状物として得た。この物質を、次の工程に直接使用した。
【０２４４】
工程４：  ＤＣＭ（１０．０ｍＬ）に溶かした１１４ｄ（８８０ｍｇ、２．５３ｍｍｏｌ）及びＴＦＡ（２．０ｍＬ）の混合物を、室温で終夜撹拌した。混合物を濃縮し、ＥＡ（３０ｍＬ）で希釈し、１Ｍ  ＮａＯＨで中和した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝１／１）によって精製して、（Ｓ）−Ｎ−（１−（６−アミノピリジン−２−イル）ピペリジン−３−イル）アクリルアミド  １１４ｅ（４４０ｍｇ、７０％）を黄色油状物として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋２４７．２
【０２４５】
工程５：  ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶かした１１４ｅ（４４０ｍｇ、１．７９ｍｍｏｌ）、３，５−ジブロモ−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（５３４ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（８３ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）、キサントホス（１０５ｍｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（１．４８ｇ、４．５５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９５℃で７時間撹拌した。混合物をＥＡで希釈し、濾過した。濾液を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝１／２）によって精製して、（Ｓ）−Ｎ−（１−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イル）ピペリジン−３−イル）アクリルアミド  １１４ｆ（２２０ｍｇ、２８％）を黄色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋４３３．３
【０２４６】
工程６：  アセトニトリル（５ｍＬ）及び水（１ｍＬ）に溶かした１１４ｆ（８６ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、４−（４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル）［１，２］オキサボロロ［４，３−ｃ］ピリジン−１（３Ｈ）−オール  １０７ｇ（８３ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）及びＫ３ＰＯ４（１０６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９０℃で７時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、１１４（２５ｍｇ、１９％）を灰色固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 80℃): δ 8.39 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.82 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 7.32-7.46 (m, 6H), 6.51 (s, 1H), 6.42 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.03-6.24 (m, 3H), 5.54 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 4.65 (bs, 1H), 4.41 (bs, 2H), 4.21-4.07 (m, 3H), 3.94-3.77 (m, 4H), 3.60 (s, 3H), 2.95 (bs, 2H), 2.58 (s, 2H), 2.44 (s, 2H), 1.85 (bs, 1H), 1.63-1.48 (m, 3 H), 1.24 (s, 6H).ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６６３［Ｃ３７Ｈ４２Ｎ８Ｏ４＋Ｈ］＋
【０２４７】
実施例１１５  Ｎ−［（３Ｓ）−１−［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］−３−ピペリジル］プロパ−２−エナミド  １１５
0006275846.tif 000042
工程１：  アセトニトリル（５ｍＬ）及び水（１．０ｍＬ）に溶かした（Ｓ）−Ｎ−（１−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イル）ピペリジン−３−イル）アクリルアミド  １１４ｆ（１２７ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、酢酸（４−フルオロ−２−｛６−オキソ−８−チア−４，５−ジアザトリシクロ［７．４．０．０２，７］トリデカ−１（９），２（７），３−トリエン−５−イル｝−６−（テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メチル  １０８ｃ（１７９ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２３ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）及びＫ３ＰＯ４（１５９ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９０℃で７時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を分取ＴＬＣ（ＥＡ／ＭｅＯＨ＝２５／１）によって精製して、Ｎ−［（３Ｓ）−１−［６−［［５−［５−フルオロ−２−（アセトキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］−３−ピペリジル］プロパ−２−エナミド  １１５ａ（７３ｍｇ、３３％）を黄色固体として得た。ＭＳ−ＥＳＩ：［Ｍ＋Ｈ］＋７２４．３
【０２４８】
工程２：  ＴＨＦ／ｉ−ＰｒＯＨ／水（２．０ｍＬ／１．０ｍＬ／１．０ｍＬ）に溶かした１１５ａ（７３ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（４０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で２時間撹拌した。混合物をＥＡで抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、１１５（２０ｍｇ、２９％）を灰色固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 80℃): δ 8.42 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.77 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 7.41-7.29 (m, 5H), 6.44 (d, J = 3 Hz, 1H), 6.25-6.17 (m, 2H), 5.55-5.50 (m, 1H), 4.35 (s, 2H), 3.98-3.76 (m, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.09-2.87 (m, 7H), 1.93-1.87 (m, 6H), 1.71 (bs, 1H), 1.49-1.45 (m, 2H).ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６８２［Ｃ３６Ｈ３６ＦＮ７Ｏ４Ｓ＋Ｈ］＋
【０２４９】
実施例１１６  Ｎ−［２−［［６−［［５−［２−（７，７−ジメチル−４−オキソ−１，２，６，８−テトラヒドロシクロペンタ［３，４］ピロロ［３，５−ｂ］ピラジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］ブタ−２−イナミド  １１６
0006275846.tif 000043
工程１：  ＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶かした３−（６−（２−アミノエトキシ）ピリジン−２−イルアミノ）−５−ブロモ−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン塩酸塩  １０３ａ（１．０ｇ、２．６６ｍｍｏｌ）、ブタ−２−イン酸（２６８ｍｇ、３．１９ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１．２１ｇ、３．１９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．１４ｍＬ、６．６５ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で終夜撹拌した。反応混合物をＥＡで希釈し、水で洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をＰＥ／ＥＡ（２ｍＬ／２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させて、Ｎ−（２−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルオキシ）エチル）ブタ−２−イナミド  １１６ａ（８００ｍｇ、７４％）を明黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４０４．９
【０２５０】
工程２：  アセトニトリル（５ｍＬ）及び水（１ｍＬ）に溶かした１１６ａ（１５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）、４−（４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル）［１，２］オキサボロロ［４，３−ｃ］ピリジン−１（３Ｈ）−オール  １０７ｇ（１５０ｍｇ、０．４４５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２８ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）及びＫ３ＰＯ４（１９６ｍｇ、０．９２５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９０℃で１６時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、１１６（２０ｍｇ、１０％）を明黄色固体として得た。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8.66 (s, 1H), 8.56-8.55 (m, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.48 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.49 (s, 1H), 6.44 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.05-3.97 (m, 8H), 3.72 (s, 3H), 3.59-3.57 (m, 2H), 2.57 (s, 2H), 2.51 (s, 2H), 1.91 (s, 3H), 1.27 (s, 6H).ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６３６．９［Ｃ３５Ｈ３７Ｎ７Ｏ５＋Ｈ］＋
【０２５１】
実施例１１７  ２−シアノ−Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］プロパ−２−エナミド  １１７
0006275846.tif 000044
工程１：  ＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした３−（６−（２−アミノエトキシ）ピリジン−２−イルアミノ）−５−ブロモ−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン  １０３ａ（４８０ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）、２−シアノアクリル酸（７９０ｍｇ、２．８４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１．２ｍＬ、７．１２ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（８１０ｍｇ、２．１３ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝１／２）によって精製して、Ｎ−（２−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルオキシ）エチル）−２−シアノアクリルアミド  １１７ａ（４００ｍｇ、６７％）を緑色固体として得た。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４２０．０
【０２５２】
工程２：  アセトニトリル（１０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）に溶かした１１７ａ（３００ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、酢酸（４−フルオロ−２−｛６−オキソ−８−チア−４，５−ジアザトリシクロ［７．４．０．０２，７］トリデカ−１（９），２（７），３−トリエン−５−イル｝−６−（テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）メチル  １０８ｃ（４３０ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（５２ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）、ＫＦ（１２５ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素下において７５℃で３時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥＡ＝１／３）によって精製して、２−シアノ−Ｎ−［２−［［６−［［５−［５−フルオロ−２−（アセトキシメチル）−３−（４−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロベンゾチオフェノ［２，３−ｄ］ピリダジン−３−イル）フェニル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］プロパ−２−エナミド  １１７ｂ（８０ｍｇ、１５％）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝７０９．８
【０２５３】
工程３：  ＴＨＦ（５ｍＬ）に溶かした１１７ｂ（８０ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）中のＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１０ｍｇ、０．２２４ｍｍｏｌ）を添加して、ｐＨ１０−１１にした。反応混合物を室温で４時間撹拌し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣによって精製して、１１７（１２ｍｇ、１６％）を白色固体として。アミド結合を、塩基性条件下で部分的に切断した。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ8.57 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.99 (bs, 1H), 7.49(t, J = 8 Hz, 2H), 7.26-7.24 (m, 1H), 7.12(d, J = 10 Hz, 1H), 6.48(d, J = 8 Hz, 1H), 6.26(d, J = 8 Hz, 1H), 4.41(t, J = 5 Hz, 2H), 4.31 (bs, 2H), 4.00-3.98 (m, 1H), 3.72(s, 3H), 3.63(t, J = 5.5 Hz, 1H), 3.58-2.56(m, 1H), 2.99(t, J = 5 Hz, 2H), 2.87(t, J = 5 Hz, 2H), 2.00-1.96(m, 4H).ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６６８．０［Ｃ３４Ｈ３０ＦＮ７Ｏ５Ｓ＋Ｈ］＋
【０２５４】
実施例１１８  ２−シアノ−Ｎ−［２−［［６−［［５−［２−（７，７−ジメチル−４−オキソ−１，２，６，８−テトラヒドロシクロペンタ［３，４］ピロロ［３，５−ｂ］ピラジン−３−イル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジル］−１−メチル−２−オキソ−３−ピリジル］アミノ］−２−ピリジル］オキシ］エチル］プロパ−２−エナミド  １１８
0006275846.tif 000045
アセトニトリル（５ｍＬ）及び水（０．５ｍＬ）に溶かしたＮ−（２−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルオキシ）エチル）−２−シアノアクリルアミド  １１７ａ（６０ｍｇ、０．１４４ｍｍｏｌ）、４−（４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル）［１，２］オキサボロロ［４，３−ｃ］ピリジン−１（３Ｈ）−オール  １０７ｇ（５８ｍｇ、０．１７３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１１ｍｇ、０．０１４４ｍｍｏｌ）及びＫＦ（２５ｍｇ、０．４３２ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において７５℃で６時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。残留物をＰＥ／ＥＡ（１／５）による分取ＴＬＣによって精製して、１１８（２０ｍｇ、２２％）を明黄色固体として得た。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 80℃): δ 8.43 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.56-7.32 (m, 6H), 6.81 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.23 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.66-3.99 (m, 8H), 3.62 (s, 3H), 3.52-3.43 (m, 3H), 2.58 (s, 2H), 2.45 (s, 2H), 1.24 (s, 6H).ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６４９［Ｃ３５Ｈ３６Ｎ８Ｏ５＋Ｈ］＋
【０２５５】
実施例１１９  Ｎ−｛２−［（６−｛［５−（２−｛４，４−ジメチル−９−オキソ−１，１０−ジアザトリシクロ［６．４．０．０２，６］ドデカ−２（６），７−ジエン−１０−イル｝−３−（ヒドロキシメチル）ピリジン−４−イル）−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル］アミノ｝ピリジン−２−イル）オキシ］エチル｝プロパンアミド  １１９
0006275846.tif 000046
工程１：  ＤＣＭ（１５ｍＬ）に溶かした３−（６−（２−アミノエトキシ）ピリジン−２−イルアミノ）−５−ブロモ−１−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン塩酸塩  １０３ａ（２５０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（０．２３ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ）の混合物に、塩化プロピオニル（７０μＬ、０．７９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を水（２０ｍＬ×２）で洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮して、Ｎ−（２−（６−（５−ブロモ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イルアミノ）ピリジン−２−イルオキシ）エチル）プロピオンアミド  １１９ａ（１４０ｍｇ、５４％）を明黄色固体として得た。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝３９５．１。
【０２５６】
工程２：  ＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）及び水（１ｍＬ）に溶かした１１９ａ（１２０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、化合物９（１１１ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２３ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）及びＫ３ＰＯ４（１６０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２下において９０℃で７時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、粗生成物を得た。この粗生成物を分取ＨＰＬＣによって精製して、１１９（４０ｍｇ、２１％）を白色固体として得た。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝６２６．３
【０２５７】
実施例９０１  生化学的Ｂｔｋアッセイ
式Ｉの化合物を試験するために使用され得る標準的な生化学的Ｂｔｋキナーゼアッセイのための一般化された手順は、下記のとおりである。１×細胞シグナル伝達キナーゼバッファー（２５ｍＭ  トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、５ｍＭ  β−グリセロホスフェート、２ｍＭジチオスレイトール、０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２）、０．５μＭ  Ｐｒｏｍｅｇａ  ＰＴＫビオチン化ペプチド基質２及び０．０１％ＢＳＡを含有する、マスターミックスマイナスＢｔｋ酵素を調製する。１×細胞シグナル伝達キナーゼバッファー、０．５μＭ  ＰＴＫビオチン化ペプチド基質２、０．０１％ＢＳＡ及び１００ｎｇ／ウェル（０．０６ｍＵ／ウェル）Ｂｔｋ酵素を含有する、マスターミックスプラスＢｔｋ酵素を調製する。Ｂｔｋ酵素を下記のように調製する。Ｃ末端Ｖ５及び６ｘＨｉｓタグが付いた完全長ヒト野生型Ｂｔｋ（寄託番号ＮＭ−００００６１）を、このエピトープタグ付きＢｔｋを有するバキュロウイルスを作製するために、ｐＦａｓｔＢａｃ（登録商標）ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）内にサブクローニングした。バキュロウイルスの発生を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎが公開しているプロトコール「Ｂａｃ−ｔｏ−Ｂａｃ  Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号１０３５９−０１６及び１０６０８−０１６）に詳述されているＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎの指示書に基づいて実施する。継代３回目のウイルスを使用して、組み換えＢｔｋタンパク質を過剰発現するようにＳｆ９細胞を感染させる。次いでＢｔｋタンパク質を、Ｎｉ−ＮＴＡカラムを使用して均一になるまで精製する。最終的なタンパク質調製物の純度は、感度の良いＳｙｐｒｏ−Ｒｕｂｙ染色に基づいて９５％超である。２００μＭ  ＡＴＰ溶液を水中で調製し、１Ｎ  ＮａＯＨによってｐＨ７．４に調整する。１．２５μＬの量の５％ＤＭＳＯ中化合物を、９６ウェルハーフエリアＣｏｓｔａｒポリスチレンプレートに移す。化合物を、１１点式用量−応答曲線を用いて１つずつ試験する（出発濃度は１０μＭである。１：２希釈）。１８．７５μＬの量のマスターミックスマイナス酵素（ネガティブコントロールとして）及びマスターミックスプラス酵素を、９６ウェルハーフエリアｃｏｓｔａｒポリスチレンプレート中の適当なウェルに移す。５μＬの２００μＭ  ＡＴＰを、４０μＭの最終ＡＴＰ濃度を目指して、９６ウェルハーフエリアＣｏｓｔａｒポリスチレンプレート中の上記混合物に添加する。反応物を、室温で１時間インキュベートする。反応を、３０ｍＭ  ＥＤＴＡ、２０ｎＭ  ＳＡ−ＡＰＣ及び１ｎＭ  ＰＴ６６Ａｂを含有するＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  １×検出バッファーによって停止させる。プレートを、励起フィルター３３０ｎｍ型、発光フィルター６６５ｎｍ型及び第２の発光フィルター６１５ｎｍ型を使用するＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎによって、時間分解型蛍光を使用して読み取る。続いて、ＩＣ５０値を計算する。代替的には、Ｌａｎｔｈａｓｃｒｅｅｎアッセイを使用して、このアッセイにおけるリン酸化ペプチド生成物の定量化によってＢｔｋ活性��評価することもできる。ペプチド生成物上のフルオレセインと検出抗体上のテルビウムとの間で起きるＦＲＥＴ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ：蛍光共鳴エネルギー移転）は、ペプチドのリン酸化を低減するＢｔｋの阻害剤の添加に伴って減少する。２５μＬの最終的な反応物体積として、Ｂｔｋ（ｈ）（０．１ｎｇ／２５μｌ反応物）を、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＭｎＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ、０．２ｍＭ  ＮａＶＯ４、０．０１％ＢＳＡ及び０．４μＭフルオレセインポリ−ＧＡＴと一緒にインキュベートする。反応を、ＡＴＰを（ＡＴＰのＫｍ）２５μＭになるまで添加することによって開始する。室温における６０分のインキュベーション後、反応を、６０ｍＭ  ＥＤＴＡ中２ｎＭの最終濃度のＴｂ−ＰＹ２０検出抗体を室温で３０分添加することによって停止する。検出は、３４０ｎＭにおける励起並びに４９５ｎｍ及び５２０ｎｍにおける発光を用いて、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎによって判定する。
【０２５８】
代替的には、ＬａｂＣｈｉｐ３０００（登録商標）というマイクロ流体移動度シフト機器（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を使用して検出することになる、ＢＴＫにより触媒される合成ペプチドのチロシンリン酸化を定量化する、インビトロＢＴＫ生化学的アッセイを実施することもできる。基質ペプチドであるＰｒｏｆｉｌｅｒＰｒｏ（登録商標）ＦＬ−Ｐｅｐｔｉｄｅ２２（製品番号７６０３６６、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）は、アミノ末端蛍光性５−カルボキシフルオレセイン基（５−ＦＡＭ）、及びＢＴＫによってリン酸化され得るチロシン残基：５−ＦＡＭ−ＥＥＰＬＹＷＳＦＰＡＫＫＫ−ＮＨ２を有する。精製された触媒活性な組み換えヒト完全長ＢＴＫタンパク質を、Ｃａｒｎａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（製品番号０８−０８０、Ｋｏｂｅ、Ｊａｐａｎ）から得た。
【０２５９】
ＢＴＫアッセイ混合物は、最終濃度０．５％（体積対体積［ｖ／ｖ］）のＤＭＳＯに溶かした５０ｍＭ  ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸バッファー（ｐＨ７．５）、１０ｍＭ塩化マグネシウム、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、１ｍＭジチオスレイトール、１μＭ  ＦＬ−Ｐｅｐｔｉｄｅ２２、４５μＭ  ＡＴＰ、１ｎＭ  ＢＴＫ及び滴定１回分の最大１０，０００ｎＭの試験品を含有していた。滴定実験において、試験品濃度のそれぞれ（１０又は１２種の濃度）２連で試験した。ブランク反応物は、ＡＴＰ、ペプチド及びＤＭＳＯを含有するがＢＴＫ又は試験品を含有しない一方で、無阻害のコントロール反応物は、ＡＴＰ、ペプチド、ＢＴＫ及びＤＭＳＯを含有するが試験品を含有しない。
【０２６０】
反応物を、３８４ウェルプレート内のウェル１つ当たり２０μＬの最終体積として、室温（２２℃−２３℃）で３０分インキュベートした。ＢＴＫとペプチドとの混合物１０マイクロリットルを、ＡＴＰ及び試験品（又はビヒクル）の混合物１０μＬに添加して、反応を開始した。反応を、ｐＨ８．０において１０μＬの０．２５Ｍエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を各ウェルに添加することによって停止させた。毎回の反応において、残留したＦＬ−Ｐｅｐｔｉｄｅ２２基質（Ｓ）及び生成したホスホ−ペプチド生成物（Ｐ）を、ＬａｂＣｈｉｐ３０００機器を使用して分離した。基質分子からの生成物分子の電気泳動式分離を、それぞれ−５００及び−２２５０Ｖの下流側電圧及び上流型電圧を使用して、−１ｐｓｉの動作圧において実施した。基質と生成物ペプチドの両方に存在する５ＦＡＭ基を４８８ｎｍにおいて励起し、５３０ｎｍにおける蛍光を検出し、ピーク高さを報告した。
【０２６１】
データ分析：  生成物への基質の変換度（又はパーセント）を、ＨＴＳ  Ｗｅｌｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒソフトウェア、バージョン５．２（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）及び下記の式：
％変換＝［（Ｐ）÷（Ｓ＋Ｐ）］×１００
を使用して電気記録図中の対応するピーク高さから計算した（式中、Ｓ及びＰは、基質及び生成物のピーク高さをそれぞれ表す。）。ＢＴＫを内包しないブランク用ウェルからのあらゆるベースラインシグナルをすべての試験ウェルのシグナルから差し引いた後、％変換データを、式２に示された画分活性に変換し、ｖｉ及びｖｏは、それぞれ試験品の存在下及び非存在下における％変換である。ＢＴＫ及びＤＭＳＯビヒクルを内包するが試験品を含有しない無阻害のコントロール反応ウェルにおいて観察された％変換は、画分活性＝１（この場合、試験品が存在せず、ｖｉ＝ｖｏである。）を有するように定義したが、ＢＴＫを含まないブランク用ウェルは、画分活性＝０を有するものとして定義した。画分活性を試験品濃度に対してプロットし、データを、Ｇｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒソフトウェア（Ｇｅｎｅｄａｔａ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用して、見かけの共結合阻害定数（Ｋｉａｐｐ）モリソン式［Williams, J.W.及びMorrison, J. F. (1979) The kinetics of reversible tight-binding inhibition. Methods Enzymol 63:437-67］に当てはめた。下記の式を使用して、画分活性及びＫｉａｐｐを計算した：
0006275846.tif 000047
（式中、［Ｅ］Ｔ及び［Ｉ］Ｔは、それぞれ、活性酵素（０．００１μＭ＝１ｎＭの固定値）及び試験品（例えば、阻害剤、可変パラメーター）の総濃度である。）。
【０２６２】
例示的なＢｔｋ阻害ＩＣ５０値が表１に含まれている。
【０２６３】
実施例９０２  Ｒａｍｏｓ細胞Ｂｔｋアッセイ
式Ｉの化合物を試験するために使用され得る標準的で細胞を用いる型のＢｔｋキナーゼアッセイのための一般化された別の手順は、下記のとおりである。Ｒａｍｏｓ細胞を、０．５×１０７個細胞／ｍｌの密度において、試験化合物の存在下にて３７℃で１時間インキュベートする。次いで細胞を、１０μｇ／ｍｌの抗ヒトＩｇＭ  Ｆ（ａｂ）２と一緒に３７℃で５分インキュベートすることによって刺激する。細胞をペレット化し、溶解させ、タンパク質アッセイを、澄んだ溶解物に対して実施する。タンパク質量が等しい各試料に、抗ホスホＢｔｋ（Ｔｙｒ２２３）抗体（Ｅｐｉｔｏｍｉｃｓ、カタログ番号２２０７−１）若しくはホスホＢｔｋ（Ｔｙｒ５５１）抗体（ＢＤ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｌａｂｓ  ＃５５８０３４）のいずれかによってＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロット法を施して、Ｂｔｋ自己リン酸化を検定し、又は、抗Ｂｔｋ抗体（ＢＤ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｌａｂｓ  ＃６１１１１６）によってＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロット法を施して、各溶解物中のＢｔｋの合計量に照合した。
【０２６４】
実施例９０３  Ｂ細胞増殖アッセイ
式Ｉの化合物を試験するために使用され得る標準的で細胞を用いる型のＢ細胞増殖アッセイのための一般化された手順は、下記のとおりである。Ｂ細胞を、Ｂ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号１３０−０９０−８６２）を使用して８−１６週齢Ｂａｌｂ／ｃマウスの脾臓から精製する。試験化合物を０．２５％ＤＭＳＯ中に希釈し、２．５×１０５個の精製済みマウス脾臓Ｂ細胞と一緒に３０分インキュベートした後、１０μｇ／ｍｌのヤギＦ（ａｂ’）２抗マウスＩｇＭ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  カタログ番号１０２２−１４）を、１００μｌの最終体積として、添加する。５２時間のインキュベーション後、１μＣｉ  ３Ｈ−チミジンを添加し、プレートをさらに１６時間インキュベートした後、ＳＰＡ［３Ｈ］チミジン取り込みアッセイ系（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＃ＲＰＮＱ０１３０）のための製造業者のプロトコールを使用して収集する。ＳＰＡビーズを主体とした蛍光を、マイクロベータカウンター（Ｗａｌｌａｃｅ  ＴｒｉｐｌｅＸ１４５０、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）によって計数する。
【０２６５】
実施例９０４  Ｔ細胞増殖アッセイ
式Ｉの化合物を試験するために使用され得る標準的なＴ細胞増殖アッセイのための一般化された手順は、下記のとおりである。Ｔ細胞を、Ｐａｎ  Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号１３０−０９０−８６１）を使用して８−１６週齢Ｂａｌｂ／ｃマウスの脾臓から精製する。試験化合物を０．２５％ＤＭＳＯ中に希釈し、２．５×１０５個の精製済みマウス脾臓Ｔ細胞と一緒にして１００μｌの最終体積として、プリコート済み透明平底プレート内において３７℃で９０分、それぞれ１０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３（ＢＤ＃５５３０５７）抗体及び抗ＣＤ２８（ＢＤ＃５５３２９４）抗体を用いてインキュベートする。２４時間のインキュベーション後、１μＣｉ  ３Ｈ−チミジンを添加し、プレートをさらに３６時間インキュベートした後、ＳＰＡ［３Ｈ］チミジン取り込みアッセイ系（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＃ＲＰＮＱ０１３０）のための製造業者のプロトコールを使用して収集する。ＳＰＡビーズを主体とした蛍光を、マイクロベータカウンター（Ｗａｌｌａｃｅ  ＴｒｉｐｌｅＸ１４５０、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）によって計数した。
【０２６６】
実施例９０５  ＣＤ８６阻害アッセイ
式Ｉの化合物を試験するために使用され得るＢ細胞活性の阻害用の標準的なアッセイのための一般化された手順は、下記のとおりである。全マウス脾細胞を、赤血球溶解（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ＃５５５８９９）によって８−１６週齢Ｂａｌｂ／ｃマウスの脾臓から精製する。試験化合物を０．５％ＤＭＳＯに希釈し、２００μｌの最終体積の１．２５×１０６個の脾細胞と一緒に透明平底プレート（Ｆａｌｃｏｎ３５３０７２）内において３７℃で６０分インキュベートする。次いで細胞を、１５μｇ／ｍｌのヤギＦ（ａｂ’）２抗マウスＩｇＭ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  カタログ番号１０２２−１４）の添加によって刺激し、３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートする。２４時間のインキュベーション後、細胞を円錐底透明９６ウェルプレートに移し、１２００×ｇ×５分における遠心分離によってペレット化する。細胞をＣＤ１６／ＣＤ３２（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ＃５５３１４２）によって予備ブロックし、続いてＣＤ１９−ＦＩＴＣ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ＃５５３７８５）、ＣＤ８６−ＰＥ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ＃５５３６９２）及び７ＡＡＤ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ＃５１−６８９８１Ｅ）によって三重染色する。細胞を、ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（登録商標）フローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）によって選別し、ＣＤ１９＋／７ＡＡＤ−集団にゲーティングした。ゲーティングした集団におけるＣＤ８６表面発現のレベルを、試験化合物濃度に対比させて測定する。
【０２６７】
実施例９０６  Ｂ−ＡＬＬ細胞生存アッセイ
下記は、ＸＴＴ読み出しを使用して生細胞の数を測定する、標準的なＢ−ＡＬＬ（急性リンパ芽球性白血病）細胞生存についての研究のための手順である。このアッセイは、培養物中のＢ−ＡＬＬ細胞の生存を阻害する能力について式Ｉの化合物を試験するために使用することができる。使用され得るヒトＢ細胞急性リンパ芽球性白血病系統の１つは、ＡＴＣＣから入手できるＳＵＰ−Ｂ１５というヒトプレＢ細胞ＡＬＬ系統である。
【０２６８】
ＳＵＰ−Ｂ１５というプレＢ−ＡＬＬ細胞を、複数の９６ウェルマイクロタイタープレート内において１００μｌのＩｓｃｏｖｅ培地＋２０％ＦＢＳ中で、５×１０５個細胞／ｍｌの濃度にしてプレート化する。次いで試験化合物を、最終濃度０．４％のＤＭＳＯと一緒に添加する。細胞を３７℃、５％ＣＯ２において最大３日インキュベートする。３日後、細胞を１：３に分割して、試験化合物を内包する新たな９６ウェルプレートに入れ、最大でさらに３日増殖する。２４時間の期間が経った後毎回、５０μｌのＸＴＴ溶液を、反復用９６ウェルプレートの１つに添加し、吸光度の読み取りを、製造業者の指導書に従って２時間、４時間及び２０時間で実施する。次いで、アッセイの直線範囲（０．５−１．５）内でＤＭＳＯのみにより治療された細胞に対してＯＤによって実施される読み取りを実施し、化合物により処理されたウェル内の生細胞の百分率を、ＤＭＳＯのみにより処理された細胞に対比させて測定する。
【０２６９】
実施例９０７  ＣＤ６９全血アッセイ
ヒト血液を、下記の制約によって健康な志願者から得る：１週間の間薬物が使われておらず、非喫煙者であること。血液（８つの化合物を試験するためのおよそ２０ｍｌ）を、Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）（Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．）菅中への静脈穿刺によって、ヘパリンナトリウムを用いて収集する。
【０２７０】
１０ｍＭの式Ｉの化合物のＤＭＳＯ中溶液を、１００％ＤＭＳＯ中で１：８希釈し、次いで、１０点式用量−応答曲線用に１００％ＤＭＳＯ中で３倍段階希釈によって希釈する。化合物をＨ２Ｏ中でさらに１：１２．５希釈し、次いで、各化合物のアリコート５．５μｌを、２ｍｌ  ９６ウェル平方形上面／テーパ形Ｖ底ディープウェルプレート（カタログ番号５９６２３−２３、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓａｌｅｓ  ａｎｄ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｐｏｍｐｔｏｎ  Ｐｌａｉｎｓ、ＮＪ）に２連で添加し、５．５μｌのＨ２Ｏ中８％ＤＭＳＯをコントロール用無刺激ウェルとして添加する。ヒト全血−ＨＷＢ（１００μｌ）を各ウェルに添加する。混合した後、プレートを３７℃、５％ＣＯ２、湿度１００％で６０分インキュベートする。ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＭ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  カタログ番号２０２２−１４、５００μｇ／ｍｌ溶液１０μｌ、５０μｇ／ｍｌ  最終時点）を、混合しながら各ウェル（無刺激ウェルを除く）に添加し、プレートをさらに１６時間インキュベートする。１６時間のインキュベーションが終了したら、試料を、蛍光性標識された抗体と一緒に３７℃、５％ＣＯ２、湿度１００％で３０分インキュベートする。補正調整及び初期電圧設定のための、誘導されたコントロール用で未染色の単一の染料を組み入れる。次いで試料を、製造業者の指示書に従ってＰｈａｒＭ  Ｌｙｓｅ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）によって溶解させ、１％ウシ血清アルブミンを含有するＰＢＳに溶かした１％パラホルムアルデヒド中に固定する。次いで試料を、ＬＳＲＩＩ機械上のＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＨＴＳ９６ウェル系上での運転に適した９６ウェルプレートに移す。取得データ及び平均蛍光発光強度値を、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＤＩＶＡ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを使用して得た。結果は、ＦＡＣＳ解析ソフトウェア（Ｆｌｏｗ  Ｊｏ）によって初期に分析する。試験化合物の阻害濃度（ＩＣ５０、ＩＣ７０、ＩＣ９０等）は、抗ＩｇＭによって刺激されたやはりＣＤ１９陽性且つＣＤ２７陰性である細胞におけるＣＤ６９発現の平均蛍光発光強度を例えば５０％低下させる、濃度として定義されている。ＩＣ７０値を、非線形後退曲線当てはめを使用してＧｅｎｅｄａｔａ  Ｓｃｒｅｅｎｅｒによって計算し、表１及び表２に示している。
【０２７１】
実施例９０８  インビトロ細胞増殖アッセイ
式Ｉの化合物の有効性を、下記プロトコール（Mendoza等(2002) Cancer Res. 62:5485-5488）を使用する細胞増殖アッセイによって測定する。試薬及びプロトコールを含むＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙが、市販されている（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ＴＢ２８８）。上記アッセイは、化合物が細胞に進入して細胞増殖を阻害することができる度合いを検定する。アッセイ原理は、均一アッセイにおいて存在するＡＴＰを定量化することによる、存在する生細胞の数の測定に基づいており、ここで、Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ試薬を添加すると、細胞溶解が起き、ルシフェラーゼ反応によって発光シグナルが発生する。発光シグナルは、存在するＡＴＰの量に比例する。
【０２７２】
一団のＢ細胞リンパ腫細胞株（例えば、ＢＪＡＢ、ＳＵＤＨＬ−４、ＴＭＤ８、ＯＣＩ−Ｌｙ１０、ＯＣＩ−Ｌｙ３、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２）を、正常増殖培地中の３８４ウェルプレート内にプレート化し、段階希釈されたＢＴＫ阻害剤又はＤＭＳＯのみを、各ウェルに添加した。細胞生存能力を、９６時間のインキュベーション後にＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって検定する。データは、ＤＭＳＯにより処理されたコントロール細胞に対する、ＢＴＫ阻害剤により処理された細胞の相対的な細胞生存能力として提供してもよい。データ点は、各用量レベルにおける４つの反復の平均である。エラーバーは、平均からのＳＤを表す。
【０２７３】
手順：  １日目−  細胞をプレート（３８４ウェル黒色、透明底、マイクロクリア、Ｆａｌｃｏｎ＃３５３９６２で覆ったＴＣプレート）に播種し、細胞を収集し、細胞を、１ウェルごとに５４μｌ当たり１０００個の細胞において、３日アッセイのために３８４ウェル細胞プレート中に播種する。細胞培地：ＲＰＭＩ又はＤＭＥＭ高グルコース、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、Ｐ／Ｓ。３７℃、５％ＣＯ２においてＯ／Ｎインキュベートする。
【０２７４】
２日目−  薬物を細胞に添加し、化合物をＤＭＳＯプレートで希釈し（９点用に段階的１：２）、２０μｌの化合物を、１０ｍＭにおいて、９６ウェルプレートの２番目の列に添加する。段階的１：２を、プレート（１０μｌ＋２０μｌ  １００％ＤＭＳＯ）にわたって合計で９点用に、Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎを使用して実施する。Ｎｕｎｃ製の培地プレート９６ウェル円錐底ポリプロピレンプレート（カタログ番号２４９９４６）（１：５０希釈）。１４７μｌの培地をすべてのウェル内に添加する。ＤＭＳＯプレート内の各ウェルから３μｌのＤＭＳＯ＋化合物を、Ｒａｐｉｄｐｌａｔｅ（登録商標）を使用して培地プレート上の対応する各ウェルに移す。
【０２７５】
薬物を細胞に添加し、細胞をプレート化し（１：１０希釈）、６μｌの培地＋化合物を細胞（すでに細胞上で５４μｌの培地）に直接添加する。３７℃、５％ＣＯ２において、頻繁に開くことがないインキュベータ内で３日インキュベートする。
【０２７６】
５日目−  プレートを展開し、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏバッファーを室温で解凍する。細胞プレートを３７℃から取り出し、約３０分室温に平衡化する。Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  ＧｌｏバッファーをＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ基質（ボトルからボトル）に添加する。３０μｌのＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ cat．＃Ｇ７５７２）を各ウェルの細胞に添加する。プレートシェーカー上に約３０分置いておく。Ａｎａｌｙｓｔ  ＨＴ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（１ウェル当たり２分の１秒）によってルミネセンスを読み取る。
【０２７７】
細胞生存能力アッセイ及び組合せアッセイ：  細胞を、１０００−２０００個細胞／ウェルにおいて、３８４−ウェルプレート内で１６時間播種した。２日目に、９つの段階的１：２化合物希釈を、９６ウェルプレート内のＤＭＳＯ中で実施する。化合物を、Ｒａｐｉｄｐｌａｔｅ（登録商標）ロボット（Ｚｙｍａｒｋ  Ｃｏｒｐ．、Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ、ＭＡ）を使用して増殖培地中にさらに希釈する。次いで希釈済み化合物を、３８４ウェル細胞プレート内の４連ウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートする。４日後、生細胞の相対数を、Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して製造業者の指示書に従ってルミネセンスによって測定し、Ｗａｌｌａｃ  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｒｅａｄｅｒ（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ）によって読み取る。ＥＣ５０値を、Ｐｒｉｓｍ（登録商標）４．０ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）を使用して計算する。式Ｉの化合物及び化学療法剤は、すべてのアッセイにおいて、同時に添加され、又は、４時間隔てる（一方の後に他方）。
【０２７８】
さらなる例示的なインビトロ細胞増殖アッセイは、下記工程を含む：
１．  培地中に約１０４個の細胞を含有する細胞培養物のアリコート１００μｌを、３８４ウェル不透明壁型プレートの各ウェル内に堆積する。
２．  培地を含有し、細胞を含まないコントロールウェルを調製する。
３．  化合物を実験用ウェルに添加し、３−５日インキュベートする。
４．  プレートをおよそ３０分室温に平衡化する。
５．  各ウェル中に存在する細胞培地の体積に等しい体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を添加する。
６．  内容物をオービタルシェーカー上で２分混合して、細胞溶解を誘導する。
７．  プレートを室温で１０分インキュベートして、発光シグナルを安定化する。
８．  ルミネセンスを、ＲＬＵ＝相対発光ユニットとしてグラフ中に記録し、報告する。
【０２７９】
上記発明については、理解を明瞭にする目的で説明及び例としていくらか詳細に記載してきたが、記載及び例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈すべきでない。したがって、すべての適切な修正形態及び等価物は、下記の特許請求の範囲によって定義された本発明の範囲に含まれると考えることができる。本明細書で引用されたすべての特許及び科学技術文献の開示は、それらの全内容を参照により明示的に援用する。