(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼に治療薬を送達するためのデバイスであって、前記デバイスは、
少なくとも１つの生体適合性材料を含むヒドロゲルマトリクスと、
前記ヒドロゲルマトリクス内に配置された複数のリザーバと
を備え、
前記複数のリザーバの開放端を含む前記ヒドロゲルマトリクスの表面の少なくとも一部は、ユーザの眼の表面に接触し、かつ、前記ユーザの眼の前記表面との接触に応じて、溶解するように構成され、前記ユーザの眼の前記表面に接触する前記ヒドロゲルマトリクスの前記表面部分の溶解により、前記リザーバ内の物質の一部が放出される、
デバイス。
【請求項２】
ヒドロゲルマトリクスの前記表面部分の溶解は、所定の率で生じる、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
溶解の前記所定の率は、少なくとも前記生体適合性材料に基づく、請求項２に記載のデバイス。
【請求項４】
前記少なくとも１つの生体適合性材料は、デキストラン、ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリラクチド−コ−グリコリド（ＰＬＧＡ）、ポリヒドロキシエチルメタクリレート（ポリＨＥＭＡ）、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ゼラチン材料、コラーゲン材料、および、それらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つを含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項５】
前記デバイスは、少なくとも５日間、前記リザーバ内の前記物質を放出するように構成される、請求項１に記載のデバイス。
【請求項６】
前記リザーバ内の前記物質は、治療薬を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項７】
前記治療薬は、化合物、抗炎症剤を含む薬物および薬物マトリクス、他の小分子薬物、抗体、抗生物質、ｓｉＲＮＡ、ペプチド、コルチコステロイドを含むステロイド、生物学的抗真菌薬、アミノ酸、ｍＲＮＡ、栄養サプリメント、または、それらの任意の組み合わせから成る群から選択される、請求項６に記載のデバイス。
【請求項８】
前記ヒドロゲルマトリクスは、所定の時間区間後に完全に溶解するように構成される、請求項１に記載のデバイス。
【請求項９】
少なくとも１つのリザーバは、深さ約５００ｎｍを有する、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１０】
前記ヒドロゲルマトリクスは、表面積約１ｍｍ２〜１５０ｍｍ２を有する、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１１】
眼に治療薬を送達するための治療薬分与デバイスを製作するための方法であって、前記方法は、
基部構成要素と前記基部構成要素の表面に取り付けられた複数の支柱とを備えるテンプレートを形成するステップと、
生体適合性材料層に、前記基部部分に隣接する、前記支柱の長さを上回る厚さを提供するステップと、
前記生体適合性材料層を前記テンプレートから分離することにより、前記支柱に対応する複数のリザーバを伴うヒドロゲルマトリクスを形成するステップと、
治療薬を少なくとも１つのリザーバ内に注入するステップと
を含み、
前記複数のリザーバの開放端を含む前記ヒドロゲルマトリクスの表面の少なくとも一部は、ユーザの眼の表面に接触し、かつ、前記ユーザの眼の前記表面との接触に応じて、溶解するように構成され、前記ユーザの眼の前記表面に接触する前記ヒドロゲルマトリクスの前記表面部分の溶解により、前記リザーバ内の物質の一部が放出される、
方法。
【請求項１２】
前記治療薬は、化合物、抗炎症剤を含む薬物および薬物マトリクス、他の小分子薬物、抗体、抗生物質、ｓｉＲＮＡ、ペプチド、コルチコステロイドを含むステロイド、生物学的抗真菌薬、アミノ酸、ｍＲＮＡ、栄養サプリメント、または、それらの任意の組み合わせから成る群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
テンプレートを形成する前記ステップは、前記テンプレートを微細加工するステップを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記微細加工は、プラズマエッチングが後に続く電子ビームリソグラフィを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
個体における眼の医学的状態を治療するための、請求項１に記載のデバイスであって、前記複数のリザーバのうちの少なくとも１つは、少なくとも１つの治療薬組成物を備え、前記デバイスは、前記個体の眼に適用されることを特徴とする、デバイス。
【請求項１６】
前記眼の医学的状態は、角膜疾患、角膜炎症、角膜傷害、ドライアイ疾患、眼の感染症（細菌性、真菌性、または、ヘルペス性の角膜炎）、眼傷害、眼の熱傷（化学的、熱的）、創傷治癒、角膜傷害後、ＬＡＳＩＫ後、または、角膜移植後の神経再生、角膜潰瘍、角膜の血管新生および脈管形成の防止／治療、角膜シスチン症、緑内障、糖尿病網膜症、および、黄斑変性症から成る群から選択される、請求項１５に記載のデバイス。
【請求項１７】
前記眼の医学的状態は、眼表面の炎症、感染症、または、両方である、請求項１５に記載のデバイス。
【請求項１８】
前記眼の医学的状態は、シスチン症である、請求項１５に記載のデバイス。
【請求項１９】
前記デバイスは、角膜上、結膜上、または、円蓋において適用される、請求項１５に記載のデバイス。
【請求項２０】
前記治療薬組成物は、薬物を含む、請求項１５に記載のデバイス。
【請求項２１】
前記薬物は、リボフラビン、ドキシサイクリン、デキサメタゾン、タクロリムス、トピラマート、エチホキシン、ビナキサトン、および、ネオトロフィン、ソラフェニブ、スニチニブ、シクロスポリンＡ、アバスチン、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、エリスロマイシン、アジスロマイシン、アシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、システアミン、ブルセラミン（ｂｒｕｃｅｌｌａｍｉｎｅ）、チオプロニン、抗ＩＦＮγ、輪部幹細胞、または、それらの組み合わせである、請求項２０に記載のデバイス。
【請求項２２】
前記薬物は、システアミン、ブルセラミン（ｂｒｕｃｅｌｌａｍｉｎｅ）、チオプロニン、ポリチオール、チオポリマー（チオマー）、または、それらの組み合わせである、請求項２０に記載のデバイス。
【請求項２３】
少なくとも１つの眼における神経再生のために、少なくとも１つの治療薬組成物を個体に送達するための請求項１に記載のデバイスであって、前記複数のリザーバのうちの少なくとも１つは、前記治療薬組成物を備える、デバイス。
【請求項２４】
前記個体は、ＬＡＳＩＫ手術後、神経再生の必要がある、請求項２３に記載のデバイス。
【請求項２５】
前記個体は、角膜移植または角膜傷害の後、神経再生の必要がある、請求項２３に記載のデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｙｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによって授与されたＲ０１  ＥＹ０１１９１５−１４の下で政府の支援を用いて行われた。政府は本発明において一定の権利を有する。
【０００２】
本願は、２０１２年８月６日に出願された米国仮特許出願第６１／６７９，９０８号に対する優先権を主張し、かつ、２０１３年３月１１日に出願された米国仮特許出願第６１／７７５，８９１号に対する優先権を主張し、それらの出願の両方は、参照により本明細書にその全体が援用される。
【０００３】
本開示は、概して、溶解性ヒドロゲルマトリクスを通した局所的治療薬の送達等、個体における制御された治療薬の放出に関する。特定の実施形態では、技術分野として、少なくとも、細胞生物学、分子生物学、医用生体工学、および、医薬品が挙げられる。
【背景技術】
【０００４】
医薬品、例えば、薬物を用いた傷害、疾患、および、炎症の治療は、多くの場合、傷害部位のみだけではなく、全身をそれらの医薬品の毒性および／または副作用に曝すことを伴う。これは、薬物が、多くの場合、局所送達ではなく、摂取を通して投与されるためである。したがって、薬剤が、身体内の特定の部分または臓器のみに影響する、または、それらを治療する場合、薬剤をその部分または臓器のみに投与することが望ましい。そのような局所送達は、他の非標的部分または臓器への副作用を最小限にし、全身投与が、多くの場合、局所送達と同一の効果を達成するために、より多い用量を要求するため、薬剤の無駄を低減させる。傷害の部位への治療薬剤の局所送達は、多くの場合、最も効果的治療形態であるが、現在の薬物送達形態は、ピークおよび終息薬物放出プロファイルと関連付けられ、持続薬物放出が、望ましい。局所薬物送達デバイスおよび方法は、現在利用可能であるが、これらのアプローチにはいくつかの制限がある。
【０００５】
眼内局所送達も、利用されている。眼は、その解剖学的構造および固有の生理学的および防御機構のため、独特な臓器である。他の粘膜上皮と異なり、眼の平滑かつ湿潤した粘膜表面は、直接、外部環境に暴露され、傷害、乾燥、および、炎症誘発性刺激を受けやすい。毎年、２．５百万例を上回る眼傷害が発生しており、５０，０００人が、その視力の一部または全部を永久的に失っており、約３．２百万人の５０歳以上の女性および１．６８百万人の５０歳以上の男性が、ドライアイ症候群に罹患している（２０１１年４月のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙによって編纂された眼の健康に関する月例統計）。眼表面の不浸透性質および涙液浄化のため、適切な作用部位への薬物の標的化は、通常、薬物送達における最大の課題の１つである（Ｇｉｐｓｏｎ，  ２００７；Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１；Ｇａｕｄａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８）。薬物療法成功のために、薬物は、所定の時間区間の間、治療上効果的な濃度において、標的部位（角膜または結膜）に存在すべきである。薬物の生物学的利用能は、薬物の物理化学的特性、標的組織、薬物吸収、分布、排除、および、薬物送達システムに依存する。薬物のほとんどに対して、薬物動態および有効性が、十分に理解されているが、しかしながら、規定された時間区間の間、治療上効果的な濃度においての標的部位への薬物の送達は、課題である。
【０００６】
１．眼球薬物送達
【０００７】
概して、眼への薬物治療は、局部眼球、全身、および、眼球内または眼球周囲注入によって送達される。眼球疾患は、一般に、薬物溶液（すなわち、点眼薬または軟膏）の局部適用を用いて治療される。これらの従来の投薬形態は、その単純性、安全性、および、患者による容認性のため、現在利用可能な市販の製剤のほぼ９０％を占める。しかしながら、眼表面障壁は、眼における薬物吸収およびその生物学的利用能を制限し得る。局部眼球薬物投与は、点眼薬によって達成されるが、眼表面上と短い時間しか接触しない。典型的には、薬物の＜５％は、角膜を通して浸透し、眼球内組織に到達する。結果として、点眼薬の複数回の投与が、療法効果のために要求される（Ｓｕｌｔａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７；ＫｕｎｏおよびＦｕｊｉｉ、２０１１；Ｇａｕｄａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。１日数回の点眼薬の投与は、短時間の治療上効果的範囲に加え、高低薬物濃度プロファイル、すなわち、毒性範囲内の高濃度および非効果的範囲内の低濃度をもたらす（図１０）。これらの従来の投薬形態の主な不利点は、非常に低生物学的利用能を呈することである。薬物接触時間および薬物作用の持続時間は、ゲル製剤、軟膏、および、眼球挿入物を開発することによって改善されている。全身投与される薬剤は、一般に、眼球浸透が制限され、毒性の潜在性を伴う高周辺薬物レベルを要求し得る。薬剤の眼球または眼球周囲注入は、外傷性および侵襲性であって、急速に希釈され、適正な薬物レベルのために、反復手技を要求し得る。
【０００８】
２．眼球薬物動態および眼表面にわたる薬物輸送
【０００９】
眼球薬物動態研究は、特殊送達システムを用いて、または、用いずに、局所または全身薬物投与後、眼球組織中の薬物濃度を分析する簡単なインビボ実験である。別の種類の眼球薬物動態は、物理化学薬物特性と浸透性との間の関係が評価される、薬物浸透性研究を含む（Ｍａｎｎｅｒｍａａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６）。これらの研究は全て、関連障壁内の浸透の機構を理解することを目的とせずに、眼球薬物動態に関する基本情報を提供するために臨床的に進められる。しかしながら、角膜および結膜にわたる薬物分子拡散の完全な理解は、臨床的に移行可能なナノ薬物送達システムの開発に重要である。
【００１０】
角膜上皮中の薬物分子の受動拡散
【００１１】
局部的に送達される薬物（点眼薬または軟膏）は、角膜を通した拡散によって、眼の前房に進入する。約２０〜６０分の遅延時間が、薬物が房水に到達するために要求される。遅延時間は、角膜にわたる薬物分子の拡散率に等しい。一般に、角膜を通して拡散する薬物の量は、涙液膜中のその濃度に線形比例する。涙中の薬物濃度（ひいては、角膜に浸透する薬物の濃度）の低下は、一次速度則に従い、その率は、新しく分泌された涙による希釈率に依存する（図１０）。ヒトでは、薬物溶液の単回２０μｌの液滴の半減期は、２〜２０分に及ぶ。故に、局部的に適用された薬物のわずか１〜５％しか、前房に到達せず、薬物の残りは、涙液膜、鼻涙排液系、ならびに、鼻粘膜および腸粘膜からの全身吸収によって浄化されるであろう（Ｕｒｔｔｉ，  ２００６）。
【００１２】
涙液から角膜への薬物分子の拡散は、眼表面上の送達システムの滞留／接触時間および角膜内への薬物浸透性によって制御される。角膜内への薬物浸透性は、受動拡散または能動輸送によるものである。能動輸送は、角膜上皮内の輸送体の発現を要求する。受動拡散は、輸送体タンパク質に依存せず、細胞膜の脂質二重層内の薬物分子の分配および拡散を決定する物理的化学パラメータによって左右される（Ｍａｎｎｅｒｍａａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６）。角膜は、薬物吸収に対して非常に緊密な障壁である。角膜上皮の浸透性は、１０−７〜１０−５ｃｍ／秒であって、局部眼球投与後の眼球の薬物生物学的利用能は、小親油性分子に対してさえ、５％未満である（Ｕｒｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０）。角膜上皮は、薬物吸収に対する周知の障壁である（Ｍａｕｒｉｃｅ  ａｎｄ  Ｍｉｓｈｉｍａ，  １９８４）。親油性分子の低速放出に対する障壁および薬物貯蔵所としての角膜上皮の役割は、Ｓｉｅｇ  ａｎｄ  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（１９７６）によって実装されている。したがって、角膜上皮は、親水性分子に対する障壁として、または、小親油性分子に対する障壁および貯蔵所として機能することができる。角膜にわたる親油性薬物の速やかな浸透のために、ｌｏｇＤ値は、２〜３であるべきであって、浸透性は、親油性上皮の強固な結合のため、より高いｌｏｇＤ値（＞３）に伴って低下する。
【００１３】
角膜上皮内への薬物分子の能動輸送
【００１４】
薬物分子の角膜浸透性は、受動拡散および能動輸送の和であって、能動輸送の効果は、受動拡散の程度に依存する。角膜上皮では、親水性薬物分子の能動輸送は、親水性分子の低受動拡散のため、親油性薬物より有意に高くなるであろう。輸送体発現は、角膜上皮細胞の頂端表面上で有意であるため、角膜上皮にわたる親水性薬物分子の能動輸送は、親油性薬物分子より高くなるであろう。Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ−Ｍｅｎｔｅｎ式によると、薬物分子の能動輸送は、薬物濃度、輸送体に対するその親和性（Ｋｍ）、および、膜内の輸送体の発現レベル（すなわち、最大容量）（Ｖｍ）に依存する（Ｍａｎｎｅｒｍａａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６）。
【００１５】
薬物の物理化学特性
【００１６】
薬物分子は、経細胞または傍細胞経路を介して、角膜上皮にわたって拡散する。概して、親油性薬物は、経細胞経路を介して拡散する一方、親水性薬物は、細胞間空間を通して、傍細胞経路によって拡散する（Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ，  １９９０）。局部的に適用された薬物の場合、濃度勾配に沿った経細胞または傍細胞経路を介した受動拡散が、好ましい。角膜内の薬物浸透率は、分子サイズ、形状、電荷、イオン化度、溶解度、および、親油性等の薬物の物理化学特性によって影響される（Ｓｃｈｏｅｎｗａｌｄ  ａｎｄ  Ｈｕａｎｇ，  １９８３；Ｇｒａｓｓ  ａｎｄ  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  １９８８；Ｌｉａｗ  ａｎｄ  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  １９９２；Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９；Ｒｏｊａｎａｓａｋｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２；Ｌｉａｗ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２；Ｓｉｅｇ  ａｎｄ  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  １９７７；Ｍａｒｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｎｋｏｗｓｋｉ，  １９８５；Ｂｒｅｃｈｕｅ  ａｎｄ  Ｍａｒｅｎ，  １９９３）。親油性角膜上皮は、非常に親水性の薬物の拡散に対してその率を制限する障壁である一方、角膜上皮から親水性間質への分配は、非常に親水性の薬物に対してその率を制限し、角膜浸透性を決定する。その率を制限する障壁は、やや親油性のβ-遮断薬に対して、上皮のまさに表面に位置する一方、角膜上皮全体は、親水性化合物に対する障壁である（Ｓｈｉｈ  ａｎｄ  Ｌｅｅ，  １９９０）。イオン性薬物の拡散は、涙液内のイオン化薬物と非イオン化薬物との間の化学的平衡に依存する（Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３）。非イオン化薬物分子は、イオン化形態より容易に脂質膜を通して拡散する。例えば、遊離ピロカルピン塩基の経角膜浸透は、インビトロでイオン化形態より２〜３時間を上回った（Ｆｒａｎｃｏｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３；Ｍｉｔｒａ  ａｎｄ  Ｍｉｋｋｅｌｓｏｎ，  １９８８）。
【００１７】
３．眼球薬物送達における障壁および課題
【００１８】
治療上効果的な濃度における眼の前部への薬物の送達は、角膜および眼表面の感染症ならびに炎症の治療に不可欠である。角膜および結膜は、前部薬物吸収の主要経路であるが、しかしながら、角膜上皮の不浸透性、涙動態、円蓋結膜内における一時的滞留、および、全身吸収等の要因が、薬物の生物学的利用能および療法有効性に影響を及ぼす。眼内の薬物浸透性および吸収を増加させることによる生物学的利用能の改善は、大きな課題である。また、標的部位において最適薬物濃度を達成することも重要である。
【００１９】
角膜障壁
【００２０】
健康な角膜は、眼の透明な一次水晶体である。角膜直径は、約１１．７ｍｍである。角膜上皮は、厚さ約５０μｍの最前層である。頂端角膜上皮細胞は、平坦であって、細胞間空間内に緊密な結合を形成し、ほとんどの微生物に対してだけではなく、また、治療薬物に対しても効果的障壁として作用する。これらの緊密な結合は、最頂端表面細胞層内のみに位置し、涙液から眼の前房への薬物吸収に対する拡散障壁を提供する（Ｒｅｉｎｓｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４；Ｈｉｔｚｅｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４；Ｇｒａｓｓ  ａｎｄ  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  １９８８）。角膜上皮は、角膜薬物吸収および経角膜薬物浸透における主要な制限障壁である（Ｍａｕｒｉｃｅ  ａｎｄ  Ｍｉｓｈｉｍａ，  １９８４）。
【００２１】
結膜障壁
【００２２】
結膜は、眼瞼の内側表面を被覆し、強膜の前部を被覆する、血管化粘膜である。表部の結膜上皮の緊密な結合は、結膜にわたる薬物浸透のための主要な障壁であるが、結膜上皮は、角膜より広い細胞間空間を有する。結膜上皮はまた、角膜（１ｃｍ２）と比較して、はるかに大きい表面積（１６〜１８ｃｍ２）を被覆する（Ｄａｒｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｙｅ）。結膜上皮の相対的漏出性、豊富な血流、および、大表面積のため、涙液からの局部的に適用された薬物の結膜取り込みは、典型的には、角膜取り込みより１桁大きい。しかしながら、結膜内の毛細血管およびリンパ管の存在のため、薬物の大部分は、全身循環に損失され、それによって、眼球生物学的利用能を低下させるであろう。結膜取り込みに続く全身薬物吸収のため、結膜嚢内の眼球挿入物薬物送達システムによる薬物滞留時間の実質的向上でも、常時、眼球薬物吸収において有意な改善をもたらさない場合がある（Ｎｅｗｅｌｌ，  １９８６；Ａｈｍｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８７）。まとめると、角膜および結膜は、眼の前部における薬物吸収に対してその率を制限する障壁である。
【００２３】
涙動態
【００２４】
涙液膜は、高代謝率およびゲル状粘液層のため、動的障壁として作用する。基礎涙流は、約１．２μｌ／分（０．５〜２．２μｌ／分）であって、反射刺激は、最大３００μｌ／分まで涙液分泌を増加させることができる（Ｄａｒｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｙｅ；Ｍｉｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９６６）。点眼薬の局部投与は、反射流涙を刺激し、薬物は、適用後、涙液膜によって急速に洗浄される。ＭＵＣ５ＡＣ等のゲル形成粘液は、眼表面上皮の細胞外被と界面接触し、細胞残骸、異物、および、病原を浄化する、親水性層を生成する。約２〜３μｌ粘液が、毎日分泌され、薬物吸収の障壁として作用する（Ｇｉｐｓｏｎ  ａｎｄ  Ａｒｇｕｅｓｏ，  ２００３）。
【００２５】
涙液からの鼻涙排液系による薬物排除
【００２６】
眼の滞留涙体積は、概して、７〜１０μｌであるため、ほとんどの局部的に投与される溶液は、適用から１５〜３０秒以内で洗浄される（ｄｅ  ｌａ  Ｆｕｅｎｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。局部的に投与された薬物は、主に、反射流涙によって前角膜涙液から排除され、鼻涙系に排液される。通常の市販点眼器は、約４０μｌの液滴を送達する。点眼薬が、滴下されると、ヒトの眼は、一時的に、約３０μｌの体積を含有するが、滴下された溶液は、涙がその通常の体積（７μｌ）に戻るまで、結膜嚢からの溢出または涙点を通して涙管排液系への損失によって、急速に除去される（Ｌｅｄｅｒｅｒ  ａｎｄ  Ｈａｒｏｌｄ，  １９８６；Ｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８６）。点眼薬の体積が、５〜１０μｌまで減少し、適用された用量が、濃度を増加させることによって、一定に保たれる場合、薬物の眼球生物学的利用能は、改善されることができる（Ｃｈｒａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９７３）。刺激性薬物の眼球投与は、反射涙液分泌のため、前角膜面積からさらなる範囲に薬物損失を増加させる（Ｍｅｓｅｇｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３；Ｃｒａｉｇ，  ２００２）。
【００２７】
全身吸収
【００２８】
眼科薬物送達システムの目標は、従来、全身吸収を最小限にすることではなく、眼球薬物吸収を最大限にすることであった（Ｕｒｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０）。点眼薬の滴下後、滴下された用量の５％未満は、眼内に吸収される一方、全身吸収は、多くの場合、滴下された用量の５０％を上回る（Ｕｒｔｔｉ  ａｎｄ  Ｓａｌｍｉｎｅｎ，  １９９３；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３）。全身吸収の主要部位は、結膜および鼻粘膜である。眼球から適用された薬物の全身吸収は、多くの場合、ほぼ完全であって、軽度から生命を脅かす事象まで及ぶ全身副作用につながり得る。全身副作用を生じさせ得る眼科薬物の場合、薬物送達システムは、制御放出方式において、標的組織のみに薬物を送達し、したがって、薬物の全身吸収を最小限にしなければならない。局部的に適用された薬物の臨床投与は、多くの場合、流涙、視力のぼやけ、および、炎症等のその眼球／全身副作用によって制限される（Ｓｈｅｌｌ，  １９８４）。炎症は、眼表面組織上の薬物濃度に関連するため、制御放出薬物送達システムは、炎症を最小限にし、患者コンプライアンスを向上させることができる。
【００２９】
４．ナノ薬物送達方式
【００３０】
従来の溶液および懸濁薬物製剤は、依然として、最も頻繁に使用される投薬形態であるが、いくつかの新しい薬物送達システムが、「ピークおよび終息」効果を最小限にし、長期間の間、薬物濃度を効果的レベルに維持するために開発されている（Ｖａｎｄｅｒｖｏｏｒｔ  ａｎｄ  Ｌｕｄｗｉｇ，  ２００７）。局部眼球薬物送達における最近の進歩は、点眼薬の改善からエマルション、リポソーム、脂質ナノ粒子、および、眼球挿入物に及ぶ（Ｓｕｌｔａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１；Ｋａｐｏｏｒ  ａｎｄ  Ｃｈａｕｈａｎ，  ２００８；Ｍａｈｍｏｕｄ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８；Ｓｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０；Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８；Ｓｅｙｆｏｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０；Ｍａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）。これらの努力は全て、眼に長期または持続送達を提供することによって、あるいは経角膜浸透を促進することによって、薬物生物学的利用能の向上を目的とする。それにもかかわらず、市場で成功している代替薬物送達システムは、非常に少ない。現在、製品の９５％は、従来の点眼薬瓶を介して送達される（表１）。
【表１】
0006275137.tif 000002
【表２】
0006275137.tif 000003
【００３１】
５．ナノ薬物送達システム
【００３２】
ナノ粒子、リポソーム、ミセル、および、デンドリマー等のナノ薬物送達システムが、眼球薬物送達の向上を目的として開発されている（Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１；Ｇａｕｄａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８；Ｓｕｌｔａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７；Ｋｕｎｏ  ａｎｄ  Ｆｕｊｉｉ，  ２０１１；Ｇａｕｄａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。これらのシステムは、眼表面における長期滞留時間を提供し、自然な眼の浄化システムの効果を最小限にすることが求められている。制御された薬物送達と組み合わせると、作用部位に長時間薬物療法レベルを提供可能であるはずであると主張されている。ナノおよびマイクロ粒子が、全身薬物送達のために開発されているが、しかしながら、眼球疾患を治療するためのナノ技術に基づく薬物送達システムの開発における進歩は、ほとんど認められていない。最近、エマルション、マイクロ、および、ナノ粒子が、眼球薬物送達において使用されるが、その成功は、制限されている（Ｄｉｅｂｏｌｄ  ａｎｄ  Ｃａｌｏｎｇｅ，  ２０１０；Ｇｅｒｓｈｋｏｖｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８；Ｃｈｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８；Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。現在開発中のナノ粒子薬物送達システムのいくつかが、表２に列挙されている。ナノ粒子懸濁液でさえ、同様に、眼から急速に浄化され、制限された薬物の有効性につながる。マイクロ／ナノ粒子ベースの送達システムは、調製が容易であるが、低薬物装填量、バースト薬物放出動態、ならびに、円蓋内および眼瞼の縁に沿った粒子の凝集等の制限を呈する。また、非常に短い周期の薬物放出（約１〜３時間）のため、療法有効性は、非常に限定され、複数回の投与を要求する。眼内における薬物滞留時間を改善するために、原位置ゲル形成システムが、開発されている（Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８）。薬物を含有する溶液が、点眼薬としての滴下に応じて、眼表面上において、ゾル／ゲル相転移を被る。原位置で形成されたゲルは、より長い時間区間の間、薬物を保持し、したがって、その生物学的利用能を向上させることが期待される。しかしながら、これらの原位置で形成するゲルは、薬物滞留時間を数時間まで増加させ得る。薬物が装填されたコンタクトレンズが、眼内の薬物滞留時間を改善するために開発されている（Ｇｕｌｓｅｎ  ａｎｄ  Ｃｈｕａｕｈａｎ，  ２００４；Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。コンタクトレンズは、角膜と常時接触するため、薬物が装填されたコンタクトレンズは、薬物滞留時間を３０分超まで向上させることが期待される。これらのシステムに関する問題は、薬物の大部分が、１時間以上以内に拡散することである。さらなる前進として、薬物が充填されたリポソーム、ミセル、マイクロエマルション、または、ナノ粒子が装填されたコンタクトレンズが、開発されている（Ｇａｒｈｗａｌ  ｅｅｔ  ａｌ．，  ２０１２；Ｐｅｎｇ  ａｎｄ  Ｃｈａｕｈａｎ，  ２０１１；Ｙａｎｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。これらのアプローチは、薬物滞留時間が数時間に改善されているが、しかしながら、１日から１週間の長期放出のためにはあまり好適ではない。最近、薬物が装填されたＰＬＧＡフィルムが、エコナゾールの長期放出のために、コンタクトレンズの内側に封入された（Ｃｉｏｌｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。これらのシステムは、最大１ヶ月まで薬物を送達し得るが、厚いＰＬＧＡフィルムのため、透明性の低下および低酸素浸透性によって制限される（Ｊｕｎｇ  ａｎｄ  Ｃｈａｕｈａｎ，  ２０１２）。また、ＰＬＧＡの生体分解性性質のため、これらのコンタクトレンズは、ＰＢＳ内にパッケージ化されることができない。概略すると、これらのシステムは全て、薬物滞留時間を数時間まで延長させ得るが、長期間の間、制御放出方式において、薬物を放出することができない。故に、高薬物含有量および長期薬物放出属性を伴うプログラム可能薬物送達システムの開発が非常に必要とされる。
【００３３】
６．現在の眼球薬物送達システムにおける欠落
【００３４】
眼球薬物送達は、損傷健康な組織を損傷しない方法によって、標的眼球組織に対して適切な療法用量において、正しい薬理学的薬剤を得るという単純目標にまとめられ得る。しかしながら、眼球疾患の治療では、本単純目標は、前述のように、薬物浸透に対して非常に敏感な眼球組織および眼表面障壁のため、より困難となる。課題は、これらの保護眼表面障壁を慎重に迂回し、恒久的組織損傷を生じさせずに、薬物を標的部位（角膜または結膜）に送達することである。持続的努力にもかかわらず、新しいナノ薬物送達システムの開発および最適化は、非常にゆっくりである。
【００３５】
眼科薬物の療法有効性を改善するために、薬物送達システムは、以下の属性を包含しなければならない。（ｉ）眼表面上における薬物滞留時間の増加、（ｉｉ）薬物吸収の増加、（ｉｉｉ）薬物の生物学的利用能の改善、（ｉｖ）薬物の全身吸収の最小限化、（ｖ）薬物送達システムの局所耐性の改善、および、（ｖｉ）患者コンプライアンス。眼表面への薬物送達に対処する主要な課題は、薬物作用を標的部位内に局所化し、治療薬物レベルを維持する一方、全身への影響を最小限にする方法である。また、患者コンプライアンスの問題は、眼球薬物送達において深刻に検討されなければならない。薬物が、慢性疾患を治療するとき、例えば、治療薬組織濃度に到達するために、１週間、１時間毎に与えられなければならない場合、全くではないにしても、一貫して与えられる可能性は非常に低い。
【００３６】
本開示の実施形態は、より長い持続時間の間（例えば、１日から１週間）、治療上効果的な濃度において薬物を放出することができる、制御放出眼球薬物送達システムを提供するという当技術分野における長年にわたる必要性を満たす。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００３７】
【非特許文献１】Ａｈｍｅｄ  Ｉ，  Ｇｏｋｈａｌｅ  ＲＤ，  Ｓｈａｈ  ＭＶ，  Ｐａｔｔｏｎ  ＴＦ．  Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａ，  ｓｃｌｅｒａ．  ａｎｄ  ｃｏｒｎｅａ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  １９８７；  ７６，  ５８３−５８６．
【非特許文献２】Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ  ＲＴ．  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｂａｒｒｉｅｒｓ  ｕｓｉｎｇ  ｃｅｌｌ  ａｎｄ  ｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｓｙｓｔｅｍｓ．  Ｄｒｕｇ．  Ｄｅｖ．  Ｉｎｄ．  Ｐｈａｒｍ．  １９９０；１６：２５９５−２６１２．
【非特許文献３】Ｂｒｅｃｈｕｅ  ＷＦ，  Ｍａｒｅｎ  ＴＨ．  ｐＨ  ａｎｄ  ｄｒｕｇ  ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ａｆｆｅｃｔｓ  ｏｃｕｌａｒ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｌｏｗｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｔｏｐｉｃａｌ  ｃａｒｂｏｎｉｃ  ａｎｈｙｄｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｖｉｓ．  Ｓｃｉ．  １９９３；  ３４：２５８１−２５８７．
【非特許文献４】Ｃｈａｎｇ  Ｅ，  ＭｃＣｌｅｌｌａｎ，  ＡＪ，  Ｆａｒｌｅｙ  ＷＪ，  Ｌｉ  Ｄ−Ｑ，  Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒ  ＳＣ，  Ｄｅ  Ｐａｉｖａ，  Ｃ．  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ＰＬＧＡ−ｂａｓｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｆｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ｏｃｕｌａｒ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｕｎｄｅｒ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｕｒｉｎｅ  ｄｒｙ  ｅｙｅ．  Ｊ  Ｃｌｉｎｉｃ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ２０１１；２：１９１．  ｄｏｉ：１０．４１７２／２１５５−９５７０．１０００１９１
【非特許文献５】Ｃｈｏｙ  ＹＢ，  Ｐａｒｋ  Ｊ−Ｈ，  ＭｃＣａｒｅｙ  ＢＥ，  Ｅｄｅｌｈａｕｓｅｒ  ＨＦ，  Ｐｒａｕｓｎｉｔｚ  ＭＲ．  Ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｖｅ  ｍｉｃｒｏｄｉｓｃｓ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｆｏｒ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ：  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｇｅｏｍｅｔｒｙ  ａｎｄ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｐｒｅｏｃｕｌａｒ  ｒｅｓｉｄｅｎｃｅ  ｔｉｍｅ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ２００８；４９：４８０８−４８１５．
【非特許文献６】Ｃｈｒａｉ  ＳＳ，  Ｐａｔｔｏｎ  ＴＦ，  Ｍｅｈｔａ  Ａ，  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＪＲ．  Ｌａｃｒｉｍａｌ  ａｎｄ  ｉｎｓｔｉｌｌｅｄ  ｆｌｕｉｄ  ｄｙｎａｍｉｃｓ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔ  ｅｙｅ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  １９７３；  ６２：１１１２−１１２１．
【非特許文献７】Ｃｉｏｌｉｎｏ  ＪＢ，  Ｈｕｄｓｏｎ  ＳＰ，  Ｍｏｂｂｓ  ＡＮ，  Ｈｏａｒｅ  ＴＲ，  Ｉｗａｔａ  ＮＧ，  Ｆｉｎｋ  ＧＲ，  Ｋｏｈａｎｅ  ＤＳ．  Ａ  ｐｒｏｔｏｔｙｐｅ  ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ２０１１；５２：  ６２８６−６２９．
【非特許文献８】Ｃｒａｉｇ，  Ｊ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｅｏｃｕｌａｒ  ｔｅａｒ  ｆｉｌｍ．  Ｉｎ  Ｔｈｅ  ｔｅａｒ  ｆｉｌｍ；  Ｋｏｒｂ，  Ｄ．Ｒ．，  Ｃｒａｉｇ，  Ｊ．，  Ｄｏｕｇｈｔｙ，  Ｍ．，  Ｇｕｉｌｌｏｎ，  Ｊ．，  Ｓｍｉｔｈ，  Ｇ．，  Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，  Ａ．，  Ｅｄｓ．；  Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ−Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ：  Ｏｘｆｏｒｄ，  ＵＫ，  ２００２；  ｐｐ．  １８−５０．
【非特許文献９】Ｄａｒｔｔ  ＤＡ，  Ｈｏｄｇｅｓ  ＲＲ，  Ｚｏｕｋｈｒｉ  Ｄ．  Ｔｅａｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ．  Ｉｎ：  Ｆｉｓｃｈｂａｒｇ  Ｊ．  （ｅｄｉｔｏｒ）  Ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｙｅ．  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ２１−８２．
【非特許文献１０】ｄｅ  ｌａ  Ｆｕｅｎｔｅ  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｈｉｔｏｓａｎ−ｂａｓｅｄ  ｎａｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ：  ａ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｆｏｒ  ｏｃｕｌａｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．  Ａｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．  Ｒｅｖ．  ２０１０；  ６２：１００−１１７．
【非特許文献１１】Ｄｉｅｂｏｌｄ  Ｙ，  Ｃａｌｏｎｇｅ  Ｍ．  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｉｎ  ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎａ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２０１０；２９：５９６−６０９．
【非特許文献１２】Ｆｒａｎｃｏｕｅｒ  Ｍ，  Ａｈｍｅｄ  Ｉ，  Ｓｉｔｅｋ  Ｓ，  Ｐａｔｔｏｎ  ＴＦ．  Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ．  ＩＩＩ．  Ｃｏｒｎｅａｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  １９８３；  １６：２０３−２１３．
【非特許文献１３】Ｇａｒｈｗａｌ  Ｒ，  Ｓｈａｄｙ  ＳＦ，  Ｅｌｌｉｓ  ＥＪ，  Ｅｌｌｉｓ  ＪＹ，  Ｌｅａｈｙ  ＣＤ，  ＭｃＣａｒｔｈｙ  ＳＰ，  Ｃｒａｗｆｏｒｄ  ＫＳ，  Ｇａｉｎｅｓ  Ｐ．  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ  ｕｓｉｎｇ  ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ  ａｎｄ  ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ２０１２；５３：  １３４１−１３５２．
【非特許文献１４】Ｇａｕｄａｎａ  Ｒ，  Ｊｗａｌａ  Ｊ，  Ｂｏｄｄｕ  ＳＨＳ，  Ｍｉｔｒａ  ＡＫ．  Ｒｅｃｅｎｔ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  ２００８；２６：１１９７−１２１６．
【非特許文献１５】Ｇａｕｄａｎａ  Ｒ，  Ａｎａｎｔｈｕｌａ  ＨＫ，  Ｐａｒｅｎｋｙ  Ａ，  Ｍｉｔｒａ  ＡＫ．  Ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ａｍ  Ａｓｓｏｃ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｊ．  ２０１０；１２：３４８−３６０．
【非特許文献１６】Ｇｅｒｓｈｋｏｖｉｃｈ  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｉｐｉｄ−ｂａｓｅｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ，ｄｅｒｍａｌ，  ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ，  ａｎｄ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｖ．  Ｔｈｅｒ．  Ｄｒｕｇ  ２００８；  ２５：５４５−５８４．
【非特許文献１７】Ｇｉｐｓｏｎ  Ｉ．Ｋ，  Ａｒｇｕｅｓｏ  Ｐ．  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｍｕｃｉｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｒｎｅａｌ  ａｎｄ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａ．  Ｉｎｔ．  Ｒｅｖ．  Ｃｙｔｏｌ．  ２００３；  ２３１：１−４９．
【非特許文献１８】Ｇｉｐｓｏｎ  ＩＫ．  Ｔｈｅ  ｏｃｕｌａｒ  ｓｕｒｆａｃｅ：  Ｔｈｅ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｔｏ  ｅｎａｂｌｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｃｔ  ｖｉｓｉｏｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉ．  ２００７；４８：４３９１−４３９８．
【非特許文献１９】Ｇｒａｓｓ  ＧＭ，  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  Ｊ．Ｒ．  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｄｒｕｇ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ＩＩ：  Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｍｏｖｅｍｅｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  １９８８；  ７７，  １５−２３．
【非特許文献２０】Ｇｕｌｓｅｎ  Ｄ，  Ｃｈａｕｈａｎ  Ａ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓｅｓ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ４５：  ２３４２−２３４７，  ２００４．
【非特許文献２１】Ｈｉｔｚｅｎｂｅｒｇｅｒ  ＣＫ，  Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒ  Ａ，  Ｄｒｅｘｌｅｒ  Ｗ，  Ｆｅｒｃｈｅｒ  ＡＦ．  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｉｃ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  ｗｉｔｈ  ｍｉｃｒｏｍｅｔｅｒ  ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ．  Ａｍ．  Ｊ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １９９４；  １１８：４６８−４７６．
【非特許文献２２】Ｈｕａｎｇ  ＡＪＷ，  Ｔｓｅｎｇ  ＳＣＧ，  Ｋｅｎｙｏｎ  ＫＲ．  Ｐａｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｃｏｒｎｅａ１  ａｎｄ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｖｉｓ．  Ｓｃｉ．  １９８９；  ３０：６８４−６８９．
【非特許文献２３】Ｊｕｎｇ  ＨＪ，  Ｃｈａｕｈａｎ  Ａ．  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓｅｓ  ｆｏｒ  ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２０１２；３３：２２８９−２３００．
【非特許文献２４】Ｋａｐｏｏｒ  Ｙ，  Ｃｈａｕｈａｎ  Ａ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  Ａ  ｆｒｏｍ  Ｂｒｉｊ−９７  ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ−ｌａｄｅｎ  ｐ−ＨＥＭＡ  ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  ２００８；  ３６１：２２２−２２９．
【非特許文献２５】Ｋｕｎｏ  Ｎ，  Ｆｕｊｉｉ  Ｓ．  Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ．  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２０１１；３：１９３−２２．
【非特許文献２６】Ｌｅｄｅｒｅｒ  ＣＭ，  Ｈａｒｏｌｄ  ＲＥ．  Ｄｒｏｐ  ｓｉｚｅ  ｏｆ  ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ  ｇｌａｕｃｏｍａ  ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ａｍ．  Ｊ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １９８６；１０１：  ６９１−６９４．
【非特許文献２７】Ｌｅｅ  Ｙ−Ｈ，  Ｋｏｍｐｅｌｌａ  ＵＢ，  Ｌｅｅ  ＶＨＬ．  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｏｆ  ｔｏｐｉｃａｌｌｙ  ａｐｐｌｉｅｄ  β−ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｒａｂｂｉｔ．  Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  １９９３；  ５７：３４１−３４９．
【非特許文献２８】Ｌｉ  Ｘ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｎａｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ  ｌｉｐｉｄ  ｃａｒｒｉｅｒｓ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  ２００８；  ３６３：１７７−１８２．
【非特許文献２９】Ｌｉａｗ  Ｊ，  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＪＲ．  （１９９２）  Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｏｎ  ｃｏｒｎｅａ１  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｒｓ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  １９９２；  ８８：１２５−１４０．
【非特許文献３０】Ｌｉａｗ  Ｊ，  Ｒｏｊａｎａｓａｋｕｌ  Ｙ，  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＪＲ．  Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｃｈａｒｇｅ  ｔｙｐｅ  ａｎｄ  ｃｈａｒｇｅ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｏｎ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  １９９２；  ８８：１１１−１２４．
【非特許文献３１】Ｍａｃｋ  ＢＣ，  Ｗｒｉｇｈｔ  ＫＷ，  Ｄａｖｉｓ，  ＭＥ．  Ａ  ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ｆｉｌａｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ｊ．  Ｃｏｎｔｒｏｌ．  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２００９；  １３９：２０５−２１１
【非特許文献３２】Ｍａｈｍｏｕｄ  ＳＳ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ  ｆｏｒ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ２００８；  ９７：２６９１−２７０１
【非特許文献３３】Ｍａｎｎｅｒｍａａ  Ｅ，  Ｖｅｌｌｏｎｅｎ  Ｋ−Ｓ，  Ｕｒｔｔｉ  Ａ．  Ｄｒｕｇ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｉｎ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ  ａｎｄ  ｂｌｏｏｄ−ｒｅｔｉｎａ  ｂａｒｒｉｅｒ：  Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ  ｉｎ  ｏｃｕｌａｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ．  Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．  ２００６；５８：１１３６−１１６３．
【非特許文献３４】Ｍａｒｅｎ  ＴＨ，  Ｊａｎｋｏｗｓｋａ  Ｌ．  Ｏｃｕｌａｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅｓ：  ｔｈｅ  ｃｏｒｎｅａ  ａｓ  ｂａｒｒｉｅｒ  ａｎｄ  ｄｅｐｏｔ．  Ｃｕｒｒ．  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  １９８５；  ４：３９９−４０８．
【非特許文献３５】Ｍａｕｒｉｃｅ  ＤＭ，  Ｍｉｓｈｉｍａ  Ｓ．  Ｏｃｕｌａｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ．  Ｓｅａｒｓ，  ＭＣ  （Ｅｄ．），  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．  ６９，  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｙｅ．  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  Ｂｅｒｌｉｎ−Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  １９８４；１９−１１６．
【非特許文献３６】Ｍｅｓｅｇｕｅｒ  Ｇ，  Ｇｕｒｎｙ  Ｒ，  Ｂｕｒｉ  Ｐ，  Ｒｏｚｉｅｒ  Ａ，  Ｐｌａｚｏｎｎｅｔ  Ｂ．  Ｇａｍｍａ  ｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｉｃ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｐｒｅｃｏｒｎｅａｌ  ｄｒａｉｎａｇｅ  ａｎｄ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｉｏｔｉｃ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ  ｏｆ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  １９９３；  ９５：２２９−２３４．
【非特許文献３７】Ｍｉｓｈｉｍａ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｅａｒ  ｖｏｌｕｍｅ  ａｎｄ  ｔｅａｒ  ｆｌｏｗ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １９６６；  ５：  ２６４−２７６．
【非特許文献３８】Ｍｉｔｒａ  ＡＫ，  Ｍｉｋｋｅｌｓｏｎ  ＴＪ．  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｃｏｒｎｅａｌ  ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  １９８８；７７：７７１−７７５．
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【非特許文献４０】Ｐｅｎｇ  Ｃ−Ｃ，  Ｃｈａｕｈａｎ  Ａ．  Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｂｙ  ｓｉｌｉｃｏｎｅ−ｈｙｄｒｏｇｅｌ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓｅｓ．  Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２０１１；１５４：  ２６７−２７４．
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【非特許文献４２】Ｒｏｊａｎａｓａｋｕｌ  Ｙ，  Ｗａｎｇ  Ｌ−Ｙ，  Ｂｈａｔ  Ｍ，  Ｇｌｏｖｅｒ  ＤＤ，  Ｍａｌａｎｇａ  Ｃ，  Ｍａ  ＪＫＨ．  Ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｏｆ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａ：  ａ  ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｎ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｃｈａｒｇｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｂｂｉｔ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  １９９２；  ９：１０２９−１０３４．
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【非特許文献４４】Ｓｅｙｆｏｄｄｉｎ  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｏｌｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．  ２０１０；  １７：４６７−４８９．
【非特許文献４５】Ｓｈｅｌｌ  ＪＷ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ．  Ｓｕｒｖ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １９８４；  ２９：  １１７−１２８．
【非特許文献４６】Ｓｈｉｈ  Ｒ−Ｌ，  Ｌｅｅ  ＶＨＬ．  Ｒａｔｅ  ｌｉｍｉｔｉｎｇ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｃｕｌａｒ  ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｖｅ  β−ｂｌｏｃｋｅｒｓ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｒａｂｂｉｔ．  Ｊ．  Ｏｃｕｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １９９０；  ６：３２９−３３６．
【非特許文献４７】Ｓｉｅｇ  ＪＷ，  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＪＲ．  Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｒａｎｓｃｏｒｎｅａｌ  ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  １９７６；  ６５：１８１６−１８２２．
【非特許文献４８】Ｓｉｅｇ  ＪＷ，  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  ＪＲ．  （１９７７）  Ｖｅｈｉｃｌｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ＩＩ：  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  １９７７；  ６６：１２２２−１２２８．
【非特許文献４９】Ｓｉｎｇｈ  Ｖ，  Ａｈｍａｄ  Ｒ，  Ｈｅｍｉｎｇ  Ｔ．  Ｔｈｅ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ｏｆ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ：  Ａ  ｒｅｖｉｅｗ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．  ２０１１；３：５６−６２
【非特許文献５０】Ｓｏｕｔｏ  ＥＢ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ．  Ｃｕｒｒ．  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ２０１０；  ３５：５３７−５５２．
【非特許文献５１】Ｓｕｌｔａｎａ  Ｙ，  Ａｑｉｌ  Ｍ，  Ａｌｉ  Ａ，  Ｓａｍａｄ  Ａ．  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｏｐｉｃａｌ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，  ２００７；  ２（２）：３０９−２３．
【非特許文献５２】Ｓｕｌｔａｎａ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｉｎ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ：  ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ．  Ｄｒｕｇｓ  Ｔｏｄａｙ  ２０１１；  ４７：４４１−４５５．
【非特許文献５３】Ｕｒｔｔｉ  Ａ，  Ｓａｌｍｉｎｅｎ  Ｌ．  Ｍｉｎｉｍｉｚｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｏｐｉｃａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇｓ．  Ｓｕｒｖ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １９９３；  ３７：４３５−４５６．
【非特許文献５４】Ｕｒｔｔｉ  Ａ，  Ｐｉｐｋｉｎ  ＪＤ，  Ｒｏｒｋ  Ｇ，  Ｓｅｎｄｏ  Ｔ，  Ｆｉｎｎｅ  Ｕ，  Ｒｅｐｔａ  ＡＪ．  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｄｅｖｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｏｃｕｌａｒ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｉｍｏｌｏｌ  ２．  Ｏｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．１９９０；  ６１：２４１−２４９．
【非特許文献５５】Ｕｒｔｔｉ  Ａ．  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ａｎｄ  ｏｂｓｔａｃｌｅｓ  ｏｆ  ｏｃｕｌａｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．  ２００６；５８：１１３１−１１３５．
【非特許文献５６】Ｖａｎｄｅｒｖｏｏｒｔ  Ｊ，  Ｌｕｄｗｉｇ  Ａ．  Ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ：  ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ｎａｎｏｍｅｄ  ２００７；  ２：１１−２１．
【非特許文献５７】Ｙａｎｅｚ  Ｆ，  Ｍａｒｔｉｋａｉｎｅｎ  Ｌ，  Ｂｒａｇａ  ＭＥＭ，  Ａｌｖａｒｅｚ−Ｌｏｒｅｎｚｏ  Ｃ，  Ｃｏｎｃｈｅｉｒｏ  Ａ，  Ｄｕａｒｔｅ  ＣＭＭ，  Ｇｉｌ  ＭＨ，  ｄｅ  Ｓｏｕｓａ  ＨＣ．  Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｌｕｉｄ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｐｒｉｎｔｅｄ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓｅｓ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ａｃｔａ  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｉａ  ２０１１；７：  １０１９−１０３０．
【非特許文献５８】Ｚａｋｉ  Ｉ，  Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｐ，  Ｈａｒｄｙ  ＪＧ，  Ｗｉｌｓｏｎ  ＣＧ．  Ａ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｒｅｃｏｒｎｅａｌ  ｒｅｓｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔ  ａｎｄ  ｍａｎ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １９８６；  ３８：４６３−４６６．
【非特許文献５９】Ｓｉｎｇｈ  Ｋ，  Ｎａｉｒ  ＡＢ，  Ｋｕｍａｒ  Ａ，  Ｋｕｍｒｉａ  Ｒ．  Ｎｏｖｅｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｉｎ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｕｓｉｎｇ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓｅｓ．  Ｊ  Ｂａｓｉｃ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０１１；２：８７−１０１．
【非特許文献６０】Ｓｉｎｇｈ  Ｖ，  Ａｈｍａｄ  Ｒ，  Ｈｅｍｉｎｇ  Ｔ．  Ｔｈｅ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ｏｆ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ：  Ａ  ｒｅｖｉｅｗ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．  ２０１１；３：５６−６２．
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００３８】
本発明は、例えば、以下を提供する：
（項目１）
眼に治療薬を送達するためのデバイスであって、前記デバイスは、
少なくとも１つの生体適合性材料を含むヒドロゲルマトリクスと、
前記ヒドロゲルマトリクス内に配置された複数のリザーバと
を備え、
前記複数のリザーバの開放端を含む前記ヒドロゲルマトリクスの表面の少なくとも一部は、ユーザの眼の表面に接触し、かつ、前記ユーザの眼の前記表面との接触に応じて、溶解するように構成される、
デバイス。
（項目２）
ヒドロゲルマトリクスの前記表面部分の溶解は、所定の率で生じる、項目１に記載のデバイス。
（項目３）
溶解の前記所定の率は、少なくとも前記生体適合性材料に基づく、項目２に記載のデバイス。
（項目４）
前記少なくとも１つの生体適合性材料は、デキストラン、ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリラクチド−コ−グリコリド（ＰＬＧＡ）、ポリヒドロキシエチルメタクリレート（ポリＨＥＭＡ）、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ゼラチン材料、コラーゲン材料、および、それらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つを含む、項目１に記載のデバイス。
（項目５）
前記デバイスは、前記ユーザの眼の前記表面との接触に応じて、前記リザーバ内に含まれる物質の一部を放出するように構成される、項目１に記載のデバイス。
（項目６）
前記デバイスは、少なくとも５日間、前記リザーバ内の前記物質を放出するように構成される、項目５に記載のデバイス。
（項目７）
前記ユーザの眼の前記表面に接触する前記ヒドロゲルマトリクスの前記表面部分の溶解は、前記リザーバ内の前記物質の一部を放出する、項目５に記載のデバイス。
（項目８）
前記リザーバ内の前記物質は、治療薬を含む、項目５に記載のデバイス。
（項目９）
前記治療薬は、化合物、抗炎症剤を含む薬物および薬物マトリクス、他の小分子薬物、抗体、抗生物質、ｓｉＲＮＡ、ペプチド、コルチコステロイドを含むステロイド、生物学的抗真菌薬、アミノ酸、ｍＲＮＡ、栄養サプリメント、または、それらの任意の組み合わせから成る群から選択される、項目８に記載のデバイス。
（項目１０）
前記ヒドロゲルマトリクスは、所定の時間区間後に完全に溶解するように構成される、項目１に記載のデバイス。
（項目１１）
少なくとも１つのリザーバは、深さ約５００ｎｍを有する、項目１に記載のデバイス。
（項目１２）
前記ヒドロゲルマトリクスは、表面積約１ｍｍ２〜１５０ｍｍ２を有する、項目１に記載のデバイス。
（項目１３）
治療薬分与デバイスを製作するための方法であって、前記方法は、
基部構成要素と前記基部構成要素の表面に取り付けられた複数の支柱とを備えるテンプレートを形成するステップと、
生体適合性材料層に、前記基部部分に隣接する、前記支柱の長さを上回る厚さを提供するステップと、
前記生体適合性材料層を前記テンプレートから分離することにより、前記支柱に対応する複数のリザーバを伴うヒドロゲルマトリクスを形成するステップと、
治療薬を少なくとも１つのリザーバ内に注入するステップと
を含む、方法。
（項目１４）
前記治療薬は、化合物、抗炎症剤を含む薬物および薬物マトリクス、他の小分子薬物、抗体、抗生物質、ｓｉＲＮＡ、ペプチド、コルチコステロイドを含むステロイド、生物学的抗真菌薬、アミノ酸、ｍＲＮＡ、栄養サプリメント、または、それらの任意の組み合わせから成る群から選択される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
テンプレートを形成する前記ステップは、前記テンプレートを微細加工するステップを含む、項目１３に記載の方法。
（項目１６）
前記微細加工は、プラズマエッチングが後に続く電子ビームリソグラフィを含む、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
個体における眼の医学的状態を治療する方法であって、前記方法は、項目１に記載のデバイスを前記個体の眼に適用するステップを含み、前記複数のリザーバのうちの少なくとも１つは、少なくとも１つの治療薬組成物を備える、方法。
（項目１８）
前記眼の医学的状態は、角膜疾患、角膜炎症、角膜傷害、ドライアイ疾患、眼の感染症（細菌性、真菌性、または、ヘルペス性の角膜炎）、眼傷害、眼の熱傷（化学的、熱的）、創傷治癒、角膜傷害後、ＬＡＳＩＫ後、または、角膜移植後の神経再生、角膜潰瘍、角膜の血管新生および脈管形成の防止／治療、角膜シスチン症、緑内障、糖尿病網膜症、および、黄斑変性症から成る群から選択される、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記眼の医学的状態は、眼表面の炎症、感染症、または、両方である、項目１７に記載の方法。
（項目２０）
前記眼の医学的状態は、シスチン症である、項目１７に記載の方法。
（項目２１）
前記デバイスは、角膜上、結膜上、または、円蓋において適用される、項目１７に記載の方法。
（項目２２）
前記治療薬組成物は、薬物を含む、項目１７に記載の方法。
（項目２３）
前記薬物は、リボフラビン、ドキシサイクリン、デキサメタゾン、タクロリムス、トピラマート、エチホキシン、ビナキサトン、および、ネオトロフィン、ソラフェニブ、スニチニブ、シクロスポリンＡ、アバスチン、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、エリスロマイシン、アジスロマイシン、アシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、システアミン、ブルセラミン（ｂｒｕｃｅｌｌａｍｉｎｅ）、チオプロニン、抗ＩＦＮγ、輪部幹細胞、または、それらの組み合わせである、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記薬物は、システアミン、ブルセラミン（ｂｒｕｃｅｌｌａｍｉｎｅ）、チオプロニン、ポリチオール、チオポリマー（チオマー）、または、それらの組み合わせである、項目２０に記載の方法。
（項目２５）
少なくとも１つの眼における神経再生のために、少なくとも１つの治療薬組成物を個体に送達する方法であって、前記方法は、項目１に記載のデバイスを前記個体に適用するステップを含み、前記複数のリザーバのうちの少なくとも１つは、前記治療薬組成物を備える、方法。
（項目２６）
前記個体は、ＬＡＳＩＫ手術後、神経再生の必要がある、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記個体は、角膜移植または角膜傷害の後、神経再生の必要がある、項目２５に記載の方法。
本開示は、制御された様式において、治療薬の局所送達を提供することに関する。本開示の実施形態は、特に、ドライアイ疾患、眼の感染症（細菌性、真菌性、および、ウイルス性）、眼傷害、創傷治癒、角膜傷害後、ＬＡＳＩＫ後、または、角膜移植後の神経再生、角膜潰瘍、角膜の血管新生および脈管形成の防止／治療、角膜シスチン症、緑内障、糖尿病網膜症、黄斑変性症、眼表面、角膜、あるいは眼球内炎症等の種々の病気または状態を治療するための眼への治療薬の持続投与に適用可能である。本開示の実施形態はまた、角膜移植患者等の臓器移植患者のための免疫抑制剤および抗炎症薬物の長期局所および／または全身送達においても使用されることができる。
【００３９】
本開示の実施形態は、概して、溶解性基質を通した局所的治療薬の送達を含む、個体における治療薬の制御放出に関する。具体的実施形態では、溶解性基質は、マトリクスであって、マトリクスの実施例は、粘膜付着性ポリマーヒドロゲルマトリクス等のヒドロゲルマトリクスである。
【００４０】
本開示の実施形態は、個体上または内に局所的に容易に留置されることができる、制御放出ナノウエハ薬物送達システムを包含する。具体的実施形態では、ナノウエハ薬物送達システムは、眼に利用され、特定の実施形態では、本システムは、いかなる臨床手技も伴わずに、例えば、患者の指先によって、または、アプリケータを用いて、角膜または結膜上で利用される。
【００４１】
一側面によると、眼に治療薬を送達するためのデバイスであって、少なくとも１つの生体適合性材料を含むヒドロゲルマトリクスと、ヒドロゲルマトリクス内に配置された複数のリザーバとを備え、複数のリザーバの開放端を含むヒドロゲルマトリクスの表面の少なくとも一部は、ユーザの眼の表面に接触し、かつ、ユーザの眼の表面との接触に応じて、溶解するように構成される、デバイスが、提供される。１つの実施形態において、ヒドロゲルマトリクスの表面部分の溶解は、所定の率で生じる。別の実施形態では、溶解の所定の率は、少なくとも生体適合性材料に基づく。デバイスは、少なくとも円形、楕円形、長方形、正方形、卵形等を含む、任意の好適な形状であってもよい。リザーバは、少なくとも円形、楕円形、長方形、正方形、卵形等を含む、任意の好適な形状であってもよい。具体的実施形態では、デバイスは、２つ、３つ、または、それ以上の異なる形状等、異なる形状リザーバを有してもよい。別の実施形態では、２つ以上の薬物が、独立して、あるいは混合物または懸濁液として、ナノウエハ内に装填されるであろう。
【００４２】
ある実施形態では、生体適合性材料は、デキストラン、ヒアルロナン、ヒアルロン酸、ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリラクチド−コ−グリコリド（ＰＬＧＡ）、ポリヒドロキシエチルメタクリレート（ポリＨＥＭＡ）、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ゼラチン材料、コラーゲン材料、および、それらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つを含む。別の実施形態では、デバイスは、ユーザの眼の表面との接触に応じて、リザーバ内に含まれる少なくとも１つの物質の一部を放出するように構成される。別の実施形態では、デバイスは、少なくとも１〜３０日間、リザーバ内の物質を放出するように構成される。さらに別の実施形態では、ユーザの眼の表面に接触するヒドロゲルマトリクスの表面部分の溶解は、リザーバから物質の一部を放出する。
【００４３】
ある他の実施形態では、ヒドロゲルマトリクスは、所定の時間区間後に完全に溶解するように構成される。１つの実施形態において、少なくとも１つのリザーバは、深さ約５００ｎｍを有する。別の実施形態では、ヒドロゲルマトリクスは、表面積約１ｍｍ２〜１５０ｍｍ２、好ましくは、約１ｍｍ２〜１００ｍｍ２、または、約１ｍｍ２〜約５０ｍｍ２、または、約１ｍｍ２〜約２５ｍｍ２、または、約５ｍｍ２〜約１５ｍｍ２を有する。
【００４４】
別の側面によると、治療薬分与デバイスを製作するための方法であって、基部構成要素および基部構成要素の表面に取り付けられた複数の支柱を備えるテンプレートを形成するステップと、生体適合性材料層に、該基部部分に隣接する、支柱の長さを上回る厚さを提供するステップと、該生体適合性材料層を該テンプレートから除去し、支柱に対応する複数のリザーバとともにヒドロゲルマトリクスを形成するステップと、治療薬を少なくとも１つのリザーバ内に注入するステップとを含む、方法が、提供される。
【００４５】
１つの実施形態において、個体における眼の医学的状態を治療する方法であって、本開示の少なくとも１つのデバイスを個体の眼に適用するステップを含み、複数のリザーバのうちの少なくとも１つは、少なくとも１つの治療薬組成物を備える、方法である。眼の医学的状態は、角膜疾患、角膜炎症、角膜傷害、ドライアイ疾患、眼の感染症（細菌性、真菌性、または、ヘルペス性の角膜炎）、眼傷害、眼の熱傷（化学的、熱的）、創傷治癒、角膜傷害後、ＬＡＳＩＫ後、または、角膜移植後の神経再生、角膜潰瘍、角膜の血管新生および脈管形成の防止／治療、角膜シスチン症、緑内障、糖尿病網膜症、および、黄斑変性症から成る群から選択され得る。少なくともいくつかの場合には、眼の医学的状態は、眼表面の炎症、感染症、または、両方である。眼の医学的状態は、シスチン症であり得る。
【００４６】
特定の実施形態では、本開示の少なくとも１つのデバイスは、角膜上、結膜上、または、円蓋において適用される。少なくとも１つの側面では、治療薬組成物は、薬物を含み、薬物は、少なくとも、リボフラビン、ドキシサイクリン、デキサメタゾン、タクロリムス、トピラマート、エチホキシン、ビナキサトン、および、ネオトロフィン、ソラフェニブ、スニチニブ、シクロスポリンＡ、アバスチン、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、エリスロマイシン、アジスロマイシン、アシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、システアミン、ブルセラミン（ｂｒｕｃｅｌｌａｍｉｎｅ）、チオプロニン、抗ＩＦＮγ、輪部幹細胞、または、それらの組み合わせを含む、任意の種類であってもよい。個体がシスチン症を有するとき等、ある場合には、薬物は、システアミン、ブルセラミン（ｂｒｕｃｅｌｌａｍｉｎｅ）、チオプロニン、ポリチオール、チオポリマー（チオマー）、または、それらの組み合わせであってもよい。
【００４７】
１つの実施形態において、少なくとも１つの眼における神経再生のために、少なくとも１つの治療薬組成物を個体に送達する方法であって、本開示の少なくとも１つのデバイスを個体に適用するステップを含み、複数のリザーバのうちの少なくとも１つは、治療薬組成物を備える、方法である。ある実施形態では、個体は、ＬＡＳＩＫ手術後あるいは角膜移植または角膜傷害の後等、神経再生の必要がある。
【００４８】
前述は、以下の本開示の発明を実施するための形態が、より理解され得るように、本開示の特徴および技術的利点をむしろ広義に概略している。本開示は、他の分野でも使用されることができることを理解されたい。本開示の実施形態の付加的特徴および利点は、本開示の請求項の主題を形成する、本明細書に後述される。開示される概念および具体的実施形態は、本開示の同一の目的を実施するための他の構造、物質、および、プロセスを修正または設計するための基礎として容易に利用され得ることは、当業者によって理解されるはずである。そのような同等構造、物質、方法、プロセス、または、装置が、添付の請求項に記載の本開示の精神および範囲から逸脱しないことは、当業者によって認識されるはずである。その編成および動作方法の両方に関して、本開示の特性であると考えられる、新規特徴は、さらなる目的および利点とともに、付随の図と併せて検討されることによって、以下の説明からより理解されるであろう。しかしながら、図はそれぞれ、例証および説明の目的のためだけに提供され、本開示の制限の定義として意図されるものではないことは、明示的に理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
本発明の特徴および利点は、それらが、明細書、請求項、および、添付の図面を参照することによってより理解されるにつれて明確になるであろう。
【００５０】
【図１】図１は、本開示の治療薬分与デバイスの一実施形態の例証である。
【００５１】
【図２】図２Ａおよび２Ｂは、図１に描写される治療薬分与デバイスの横断面図である。
【００５２】
【図３】図３は、本開示の側面による、例示的治療薬分与デバイスを製作するための一実施形態を図示する、概略である。
【００５３】
【図４】図４Ａ−４Ｄは、種々の物質が装填された本開示の治療薬分与デバイスの一実施形態の画像である。
【００５４】
【図５】図５Ａおよび５Ｂは、本開示の治療薬分与デバイスの実施形態からのデキサメタゾンの薬物放出プロファイルである。
【００５５】
【図６】図６は、本開示の治療薬分与デバイスのある実施形態の例示的適用の例証である。
【００５６】
【図７】図７Ａ−７Ｃは、ドキシサイクリンが装填された本開示の治療薬分与デバイスの一実施形態の画像である。
【００５７】
【図８】図８Ａ−８Ｃは、（Ａ）空包ＰＶＡナノウエハ（制御）、（Ｂ）ドキシサイクリンが装填されたナノウエハ、および、（Ｃ）デキサメタゾンが装填されたナノウエハが装填された本開示の治療薬分与デバイスの一実施形態を用いて治療されたドライアイ誘発マウスにおける角膜平滑度評価の画像である。
【００５８】
【図９】図９は、ドキシサイクリンまたはデキサメタゾンが装填された本開示の治療薬分与デバイスの一実施形態を用いて治療されたあるマウスにおける炎症誘発性サイトカイン、ＭＭＰ、および、ＩＬ−１７Ａの遺伝子発現分析を示す、グラフである。
【００５９】
【図１０】図１０は、従来の投与方法に対する典型的薬物濃度プロファイルを図示する。
【００６０】
【図１１】図１１は、本開示の治療薬デバイスの実施形態に対する例示的薬物濃度プロファイルを図示する。
【００６１】
【図１２−１】図１２は、角膜薬物送達のための制御放出ナノウエハ薬物送達システムを示す。略図は、（Ａ）ナノウエハ、（Ｂ）断面ナノウエハ、（Ｃ）角膜と直接接触するナノ薬物リザーバの開放面からの薬物放出、（Ｄ）角膜上に留置されたナノウエハ、（Ｅ）角膜上に留置されたナノウエハを伴う眼の断面、（Ｆ）ナノウエハから角膜内への薬物分子の拡散、および、（Ｇ）ナノウエハの予期される制御薬物放出プロファイルを描写する。
【図１２−２】図１２は、角膜薬物送達のための制御放出ナノウエハ薬物送達システムを示す。略図は、（Ａ）ナノウエハ、（Ｂ）断面ナノウエハ、（Ｃ）角膜と直接接触するナノ薬物リザーバの開放面からの薬物放出、（Ｄ）角膜上に留置されたナノウエハ、（Ｅ）角膜上に留置されたナノウエハを伴う眼の断面、（Ｆ）ナノウエハから角膜内への薬物分子の拡散、および、（Ｇ）ナノウエハの予期される制御薬物放出プロファイルを描写する。
【図１２−３】図１２は、角膜薬物送達のための制御放出ナノウエハ薬物送達システムを示す。略図は、（Ａ）ナノウエハ、（Ｂ）断面ナノウエハ、（Ｃ）角膜と直接接触するナノ薬物リザーバの開放面からの薬物放出、（Ｄ）角膜上に留置されたナノウエハ、（Ｅ）角膜上に留置されたナノウエハを伴う眼の断面、（Ｆ）ナノウエハから角膜内への薬物分子の拡散、および、（Ｇ）ナノウエハの予期される制御薬物放出プロファイルを描写する。
【図１２−４】図１２は、角膜薬物送達のための制御放出ナノウエハ薬物送達システムを示す。略図は、（Ａ）ナノウエハ、（Ｂ）断面ナノウエハ、（Ｃ）角膜と直接接触するナノ薬物リザーバの開放面からの薬物放出、（Ｄ）角膜上に留置されたナノウエハ、（Ｅ）角膜上に留置されたナノウエハを伴う眼の断面、（Ｆ）ナノウエハから角膜内への薬物分子の拡散、および、（Ｇ）ナノウエハの予期される制御薬物放出プロファイルを描写する。
【００６２】
【図１３−１】図１３は、ヒドロゲルテンプレート方式を介したナノウエハ加工を示す。無充填ナノウエハを含有する空のウェル（それぞれ、直径および深さ５００ｎｍ）の（Ａ）明視野像、（ＢおよびＣ）原子間力顕微鏡写真、蛍光薬物ドキシサイクリンが充填されたナノウエハの（Ｄ）明視野像、および、（Ｅ）蛍光画像である。
【図１３−２】図１３は、ヒドロゲルテンプレート方式を介したナノウエハ加工を示す。無充填ナノウエハを含有する空のウェル（それぞれ、直径および深さ５００ｎｍ）の（Ａ）明視野像、（ＢおよびＣ）原子間力顕微鏡写真、蛍光薬物ドキシサイクリンが充填されたナノウエハの（Ｄ）明視野像、および、（Ｅ）蛍光画像である。
【図１３−３】図１３は、ヒドロゲルテンプレート方式を介したナノウエハ加工を示す。無充填ナノウエハを含有する空のウェル（それぞれ、直径および深さ５００ｎｍ）の（Ａ）明視野像、（ＢおよびＣ）原子間力顕微鏡写真、蛍光薬物ドキシサイクリンが充填されたナノウエハの（Ｄ）明視野像、および、（Ｅ）蛍光画像である。
【図１３−４】図１３は、ヒドロゲルテンプレート方式を介したナノウエハ加工を示す。無充填ナノウエハを含有する空のウェル（それぞれ、直径および深さ５００ｎｍ）の（Ａ）明視野像、（ＢおよびＣ）原子間力顕微鏡写真、蛍光薬物ドキシサイクリンが充填されたナノウエハの（Ｄ）明視野像、および、（Ｅ）蛍光画像である。
【００６３】
【図１４】図１４は、異なる薬物送達システムの薬物放出プロファイル、すなわち、点眼薬製剤のピークおよび終息薬物可用性プロファイル（短破線および点線）、持続薬物放出プロファイル（長破線および点線）、および、制御薬物放出プロファイル（実線）を図示する。
【００６４】
【図１５】図１５は、ナノウエハからのドキシサイクリンのインビトロ薬物放出プロファイルを示す。
【００６５】
【図１６】図１６は、ナノウエハから角膜内へのナノ粒子の拡散を示す。角膜内に拡散された赤色蛍光ナノ球体（６０ｎｍ）のレーザ共焦点蛍光画像の（Ａ）対照（ナノウエハを伴わない）、（Ｂ）２日後、（Ｃ）５日後と、角膜内の金ナノ球体（６０ｎｍ）の拡散を実証する、透過電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）の（Ｄ）対照（ナノウエハを伴わない）、（Ｅ）２日後、および、（Ｆ）５日後である。
【００６６】
【図１７】図１７は、円蓋においてナノウエハが留置されたドライアイ誘発マウスにおける白色光のリングの反射による角膜平滑度の評価を提供するものであって、（Ａ）空包ＰＶＡナノウエハ（対照）、（Ｂ）ドキシサイクリンが装填されたナノウエハ、および、（Ｃ）デキサメタゾンが装填されたナノウエハである。スケールバーは、１０００μｍである。
【００６７】
【図１８】図１８は、炎症誘発性サイトカイン、ＭＭＰ、ＣＣＬ２０、および、ＩＬ−１７Ａの遺伝子発現分析を実証する。ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、および、ＩＬ−６を除く全炎症サイトカインが、ドキシサイクリンまたはデキサメタゾンを含有するナノウエハを受容したドライアイ群において、角膜発現を減少させた。
【００６８】
【図１９】図１９は、角膜傷害治癒に及ぼすナノウエハの有効性を示す。空包ナノウエハ（薬物を含有しない）と比較した上皮剥離後２４時間における角膜の創傷、傍中心、および、中心における好中球蓄積に及ぼすデキサメタゾンが装填されたナノウエハの阻害作用。Ｐ＜０．０１、ｎ＝４。
【００６９】
【図２０】図２０は、シスチノシン（Ｃｔｎｓ−／−）マウスモデルにおける角膜結晶成長進行を示す。
【００７０】
【図２１】図２１は、Ｃｔｎｓ−／−マウスにおける角膜シスチン症を実証する。（Ａ）３ヶ月時における、後部中心／周辺間質内の非常に反射性の針形状結晶、（Ｂ）７ヶ月時における、後中央部中心／周辺間質内のより大量の針形状結晶、（Ｃ）１０ヶ月時における、後部および前部間質内のより短く厚い結晶、および、（Ｄ）１２ヶ月時における、より点状かつより少ない針形状結晶である。
【００７１】
【図２２】図２２は、薬物漸増試験を示し、毒性を伴わずに、１５０ｎｇ／ウエハでナノウエハ中の最適薬物濃度を実証する。
【００７２】
【図２３】図２３は、シスチン症ノックアウトマウスにおけるシステアミンナノウエハの有効性を提供する。
【００７３】
【図２４】図２４は、シスチン症ノックアウトマウスにおけるインビボシステアミン−ナノウエハの有効性を示す。共焦点蛍光撮像法は、（Ａ）１日目に、最大結晶密度が存在し、（Ｂ）４日毎に１回、システアミンが装填されたナノウエハを用いた治療によって、２７日以内に結晶の大部分が溶解したことを実証する。
【００７４】
【図２５−１】図２５（Ａ）は、両眼球が熱傷＋乾燥ストレスに曝された眼の代表的デジタル画像である。３ｍｍの直径のドキシサイクリンが装填されたナノウエハが、眼球熱傷の表面に適用された。画像は、初期病変後、６時間（ｈ）〜７日（Ｄ）にわたって撮影された。ドキシサイクリンは、４８８ｎｍ励起下、自己蛍光性である。上部パネル内のナノウエハ自己蛍光のサイズ（実線白色線によって包囲される）は、経時的に減少することに留意されたい。赤色線は、眼瞼縁を描出する。下部パネルは、明視野条件下で撮影された同一の眼を示す。点線は、ナノウエハ膜を示す。（Ｂ）は、Ａにおける画像と同時に角膜上で測定されたドキシサイクリン−ナノウエハ膜の強度（グレーレベル）／ｍｍ２の平均±標準偏差である。
【図２５−２】図２５（Ａ）は、両眼球が熱傷＋乾燥ストレスに曝された眼の代表的デジタル画像である。３ｍｍの直径のドキシサイクリンが装填されたナノウエハが、眼球熱傷の表面に適用された。画像は、初期病変後、６時間（ｈ）〜７日（Ｄ）にわたって撮影された。ドキシサイクリンは、４８８ｎｍ励起下、自己蛍光性である。上部パネル内のナノウエハ自己蛍光のサイズ（実線白色線によって包囲される）は、経時的に減少することに留意されたい。赤色線は、眼瞼縁を描出する。下部パネルは、明視野条件下で撮影された同一の眼を示す。点線は、ナノウエハ膜を示す。（Ｂ）は、Ａにおける画像と同時に角膜上で測定されたドキシサイクリン−ナノウエハ膜の強度（グレーレベル）／ｍｍ２の平均±標準偏差である。
【００７５】
【図２６】図２６Ａおよび２６Ｂは、局部（Ｔ）ドキシサイクリン（ＡにおけるＤｏｘｙ）、デキサメタゾン（ＢにおけるＤｅｘａ）、または、その媒介体のいずれかを用いて治療された、眼球熱傷（ＯＢ）に曝され、同時に乾燥ストレス（ＤＳ）を伴う、眼内の眼球穿孔率を実証する。ＣおよびＤは、ドキシサイクリン（Ｃ）またはデキサメタゾン（Ｄ）のいずれかが装填されたマイクロウエハ（ＭＷ）を用いて局部的に治療された眼球熱傷（ＯＢ）＋乾燥ストレス（ＤＳ）を受けた角膜内の炎症サイトカインおよびＭＭＰの遺伝子発現。＊ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１，＊＊＊Ｐ＜０．００１；ＮＳ＝有意ではない。
【００７６】
図面は、必ずしも、正確な縮尺ではなく、開示される実施形態は、時として、図式的かつ部分的図に図示されることを理解されたい。ある事例では、開示される方法および装置の理解のために必要ではない、または、他の詳細を分かりにくくさせる詳細は、省略され得る。当然ながら、本開示は、本明細書に図示される特定の実施形態に制限されないことを理解されたい。
【発明を実施するための形態】
【００７７】
用語「結合される」は、必ずしも、直接に、かつ必ずしも、機械的にではないが、接続されるとして定義される。すなわち、「結合される」２つのアイテムは、相互に一体型であってもよい。用語「ａ」および「ａｎ」は、本開示が、明示的に、別様に要求しない限り、１つ以上として定義される。用語「実質的に」、「およそ」、および、「約」は、当業者によって理解されるように、必ずしも指定されるもの全体的ではないが、大部分として定義される。
【００７８】
用語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（備える）」（ならびに「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」および「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」等の任意の形態のｃｏｍｐｒｉｓｅ）、「ｈａｖｅ」（ならびに「ｈａｓ」および「ｈａｖｉｎｇ」等の任意の形態のｈａｖｅ）、「ｉｎｃｌｕｄｅ」（ならびに、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」および「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」等の任意の形態のｉｎｃｌｕｄｅ）、および、「ｃｏｎｔａｉｎ」（ならびに「ｃｏｎｔａｉｎｓ」および「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ」等の任意の形態のｃｏｎｔａｉｎ）は、非制限連結動詞である。その結果、１つ以上のステップを「備える」、「有する」、「を含む」、または、「含有する」方法は、それらの１つ以上のステップを保有するが、それらの１つ以上のステップのみの所有に制限されない。同様に、１つ以上の要素を「備える」、「有する」、「含む」、または、「含有する」デバイスは、それらの１つ以上の要素を所有するが、それらの要素のみの所有に制限されない。
【００７９】
本開示の実施形態は、制御放出薬物送達基質を用いて局所病状を治療するための組成物および／または方法を提供する。局所化は、眼またはその一部内にあって、および、任意の好適な眼の医学的状態が、治療され得る。実施形態はまた、基質を作製する方法と、デバイスとも称され得る、基質自体を含む。
【００８０】
具体的場合では、眼の医学的状態は、角膜に関する。角膜無血管状態は、角膜の透明性、したがって、視力の透明性を助長する（Ｃｕｒｓｉｅｆｅｎ，  ２００７；Ａｚａｒ，  ２００６）。しかしながら、角膜感染症、外傷、化学傷害、可能性として、ウイルス感染症、および、角膜移植の拒絶反応による眼表面への損傷は、角膜の血管新生を誘発し、再上皮化および神経再生を阻害し、それによって、視力を損なわせ得る（ＤｅＳｔａｆｅｎｏ  ａｎｄ  Ｋｉｍ，  ２００７）。眼への傷害は、多くの場合、角膜、結膜、および、眼瞼縁を被覆する上皮を損傷し、さらに深刻な場合には、これらの上皮を蘇らせる幹細胞を破壊する。多くの場合、支持間質細胞およびマトリクスが、損傷され、慢性的炎症が、誘発される。炎症細胞（単球／マクロファージ、好中球）の出現、角膜細胞（主に、角化細胞）の活性化、ならびに、上皮細胞および後続間質血管新生は、多くの場合、角膜の混濁および視力の低下につながる。これらの事象は、角膜における再上皮化および神経再生の阻害、および、涙の枯渇／ドライアイを生じさせ得る。眼球傷害および炎症のための現在利用可能な治療モダリティは、頻繁な投与を要求し、多くの場合、最小療法効果を生み出す。故に、長期間、治療上効果的な濃度において薬物を放出することができる長期薬物放出属性を伴う、広く適用可能であるナノウエハ薬物送達システムの開発の満たされていない必要性がある。
【００８１】
ナノウエハ薬物送達システムは、眼内への設置に応じて、制御放出方式において、より長い持続時間の間（例えば、１日から１ヶ月）、薬物を放出し、したがって、薬物の有効性を向上させ、患者コンプライアンスを改善するであろう。薬物分子は、ナノウエハのポリマーマトリクスからゆっくりと拡散するため、分解および急速放出から保護される。ナノウエハの全成分、すなわち、ＰＶＡ（ポリビニルアルコール）、ＰＬＧＡ（ポリ（乳酸−コ−グリコール酸））、および、提案される薬物の大部分は、ＦＤＡ承認であるため、ドライアイ疾患を治療するために、診療所に容易に移行されることができる。ナノウエハは、市販の人工涙液中で現在使用されているポリマーを用いて加工されてもよく、したがって、これらのポリマーを用いて加工されたナノウエハは、薬物送達システムとして、また、潤滑剤としての両方で機能し得る。さらに、角膜／眼表面疾患を治療するために開発されたナノウエハ薬物送達システムは、ドライアイ疾患、眼の感染症（細菌性、真菌性、および、ヘルペス性の角膜炎）、眼傷害、眼の熱傷（化学的、熱的）、創傷治癒、角膜傷害後、ＬＡＳＩＫ後、または、角膜移植後の神経再生、角膜潰瘍、角膜の血管新生および脈管形成の防止／治療、角膜シスチン症、緑内障、糖尿病網膜症、黄斑変性症、眼表面角膜および眼球内炎症等を治療する際にその用途を見出すことができる。
【００８２】
さらに、ナノウエハ薬物送達システムは、制御薬物送達に加え、機械的障壁を提供し、傷害眼を乾燥および／または微生物および／または炎症細胞浸潤から保護し、したがって、失明に至る眼の傷害の緊急管理を促進することができる。実施形態は、数時間から１日、少なくとも１週間、薬物を放出し、したがって、薬物の有効性を向上させ、薬物の全身損失を最小限にし、患者コンプライアンスを改善することができる、制御放出ナノウエハ薬物送達システムを提供する。
【００８３】
１．角膜疾患を治療するための制御放出薬物送達ナノウエハ
【００８４】
ナノ加工技術および制御放出薬物送達技術を統合することによって、ナノパターン化されたヒドロゲルウエハ（ナノウエハ）薬物送達システムが、現在利用可能な眼球薬物送達システムの制限を克服するように提供される。ナノウエハ薬物送達システムは、より長い持続時間の間、すなわち、１日から１週間、薬物治療上効果的な濃度において放出することができる（図１２Ａ）。ナノウエハは、指先等を用いて眼表面（図１２Ｄ）上に適用されることができ、変位されることなく、常時瞬きに耐えることができる、微小円板（２〜４ｍｍ直径）であってもよい。ナノリザーバの開放面は、角膜と近接近するため、ある実施形態では、薬物分子は、ナノウエハから角膜組織内に拡散することができる（図１２Ｂ−Ｆ）。ナノウエハは、緊密な制御方式において薬物を放出し、薬物濃度を治療上効果的範囲内に維持することができる。規定された薬物放出周期の終了時、ナノウエハは、特定の側面では、溶解し、消失するであろう。
【００８５】
ナノウエハ設計
【００８６】
ナノウエハは、ヒドロゲルテンプレート方式を介して加工されてもよい（Ａｃｈａｒｙａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１；Ａｃｈａｒｙａ，  Ｓｈｉｎ，  Ｖｅｄｅｎｔｈａｍ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０；Ａｃｈａｒｙａ，  Ｓｈｉｎ，  ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。ナノウエハは、例えば、水溶性、生体適合性、水に近い屈折率を伴う材料の透明性、および、眼の曲率に容易に付着および適合するような粘膜付着性特性等の属性を保有するポリマーを選定することによって加工されてもよい。一連の寸法（２００ｎｍ〜３μｍ）のリザーバを伴うナノウエハが、設計され、電子ビームリソグラフィおよびフォトリソグラフィによって加工されてもよい。薬物リザーバ寸法は、薬物含有量および放出動態を定義し、ある実施形態では、したがって、ナノウエハにプログラム可能属性を備え付け得る。加えて、ナノウエハ薬物送達システムは、少なくともある側面である、薬物放出を制御し、療法効率を最大限にし、毒性副作用を最小限にする（図１２Ｅ）。薬物放出の過程の間、ナノウエハは、ある実施形態では、ゆっくりと溶解し、消失する。
【００８７】
ナノウエハは、眼内への設置に応じて、制御放出方式において、より長い持続時間の間（少なくとも１日から１ヶ月）、薬物を放出し、したがって、薬物の有効性を向上させ、患者コンプライアンスを改善する。薬物分子は、ナノウエハのポリマーマトリクスからゆっくりと拡散するため、分解および急速放出から保護される。ナノウエハの成分（薬物およびポリマー）は全て、ＦＤＡ承認であるため、ドライアイ疾患を治療するために、診療所に容易に移行されることができる。ナノウエハは、市販人工涙液中で現在使用されているポリマーを用いて加工されてもよく、したがって、これらのポリマーを用いて加工されるナノウエハは、薬物送達システムとして、また、潤滑剤としての両方で機能し得る。さらに、ドライアイおよび角膜炎症のために開発されたナノウエハ薬物送達システムは、視力を脅かす傷害を含む、他の角膜疾患を治療する際にも有用である。
【００８８】
特定の実施形態では、ナノウエハは、長期薬物放出属性の高薬物含有量を伴う生体分解性（溶解性）ナノウエハの開発を可能にする。本アプローチの最も有意な利点は、ナノウエハが、ヒドロゲルテンプレート方式を介して容易に加工されることができることである。ナノウエハのポリマーマトリクスは、薬物分子を酸化分解から保護する。薬物分子は、ナノウエハから周囲組織にゆっくり拡散し、したがって、より長い持続時間の間、薬物の可用性を可能にする。所望の薬物放出プロファイルは、異なる寸法の薬物リザーバを含有するナノウエハを加工することによって得られることができる。薬物リザーバの開放面は、結膜と常時接触し、放出された薬物分子は、結膜組織にゆっくり進入し、したがって、一定生物学的利用能を向上させるであろう。ナノウエハ材料は、薬物放出の過程の間、ゆっくりと溶解し、最終的に、消散するであろう。ナノウエハ材料は、少なくともいくつかの実施形態では、ゆっくりとした溶解に応じて、潤滑剤として機能し、したがって、必要な鎮静および快適性を提供するように選択されるであろう。新しいプログラム可能ナノウエハ薬物送達システムは、臨床使用のために、単純で、より有効であって、かつ制御された放出ナノ治療薬システムを提供することができる。ナノウエハ薬物送達システムは、その単純加工方法、長期薬物放出能力、粘膜付着性性質、および、広範囲の可用性のため、独特であって、眼球薬物送達の新しい形態を提供する。広範囲に適用可能であるナノウエハ薬物送達システムの開発は、長時間の間、治療上効果的な濃度において、薬物を放出することができる、高薬物含有量を伴う長期放出薬物送達システムのこれまで満たされたいない必要性を満たす。現在、利用可能なそのようなデバイスは存在せず、ナノウエハ薬物送達システムの開発は、眼球薬物送達の分野の大きな前進である。
【００８９】
いかなる臨床手技も伴わずに、個体の指先によって、眼の角膜、結膜上、または、円蓋内（例えば）に容易に留置されることができる、長期放出ナノウエハ薬物送達システムの開発は、非常に便宜的であるだけではなく、また、少なくとも角膜疾患、慢性ドライアイ、角膜炎症および傷害、血管新生、緑内障、ならびに、他の眼表面炎症／感染症を治療するために最も望ましい。
【００９０】
２．ヒドロゲルテンプレート方式を介したナノウエハの加工
【００９１】
相可逆ヒドロゲルは、組織工学、薬物送達において、バイオセンサとして使用されている（Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３；Ｐｅｐｐａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６；Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８）。最近、ヒドロゲルテンプレート方式が、制御放出薬物送達システムとして機能することができる、ナノパターン化ヒドロゲルウエハの加工のために開発された（Ａｃｈａｒｙａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１；Ａｃｈａｒｙａ，  Ｓｈｉｎ，  Ｖｅｄｅｎｔｈａｍ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０；Ａｃｈａｒｙａ，  Ｓｈｉｎ，  ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。ヒドロゲルテンプレート方式の側面は、図３に提示される。ある場合には、第１のステップは、シリコンウエハ上の垂直支柱のアレイのナノ加工である（図３Ａ）。そのように加工されたシリコンウエハは、ヒドロゲルナノウエハの転写のために使用された。シリコンウエハの上部に、ヒドロゲル形成ポリマー溶液が注がれ、３０分間、７０℃で加熱された（図３Ｂ）。ポリマー層が、固化されると、シリコンウエハから剥がされる（図３Ｃ）。ナノリザーバが、例えば、超音波噴霧ノズルを使用して、または、マイクロ注入によって、薬物ＰＬＧＡマトリクスが充填される（図３Ｄ）。種々の天然および合成ヒドロゲル形成材料が、検討され、ＰＶＡが、ナノパターン化ウエハ（ナノウエハ）の加工のための有用システムとして選択された。ＰＶＡは、ＦＤＡ承認材料であって、点眼薬内の潤滑剤として使用されている。５００ｎｍ特徴を有するシリコンウエハが、電子ビームリソグラフィによって加工された。ナノウエハは、具体的実施形態では、角膜、結膜上、または、下側眼瞼下に指先で適用されることができる、微小円板（２〜５ｍｍ直径）である（図１３Ａ−Ｃ）。ウエハのナノリザーバは、ドキシサイクリン−ＰＬＧＡマトリクスが装填される（図１３Ｄおよび１３Ｅ）。薬物分子は、ゆっくりと拡散し、したがって、眼内の薬物の一定可用性を可能にする。
【００９２】
３．インビトロ薬物放出プロファイルの評価
【００９３】
ナノウエハからの薬物放出は、少なくともある場合には、正しい薬物リザーバ寸法および薬物装填濃度を選択することによってプログラムされることができる。リザーバ寸法が小さいほど、薬物分子のゆっくりとした拡散およびゆっくりとした放出を可能にする一方、薬物分子は、より大きいリザーバからは急速に拡散する。同様に、低薬物装填濃度は、よりゆっくりとした放出をもたらす一方、より高い濃度は、急速放出につながる。ナノウエハからの薬物放出は、３つのパラメータ、すなわち、初期バースト放出の大きさ、薬物放出の程度、および、初期バースト放出に続く薬物放出動態に基づいて、２つのカテゴリに分類されることができる（図１４）。現在利用可能な点眼薬製剤は、眼表面上にピークおよび終息薬物濃度をもたらし、薬物のわずか１〜５％のみ、角膜内に吸収されるであろう。持続薬物放出ナノ粒子の場合、薬物濃度は、短時間区間の間、療法範囲内にあって、その後、非効果的範囲へとゆっくりと低下する。制御薬物放出ナノウエハの場合、薬物濃度は、療法範囲内に急速に到達し、要求に応じて、１日から１週間等の所定の時間区間の間、そこに留まり続ける。したがって、制御薬物放出ナノウエハからの薬物放出は、患者の要件に適する薬物の長期有効性を有するようにプログラムされることができる。
【００９４】
デキサメタゾン、ドキシサイクリン、リボフラビン、トピラマート、タクロリムス、ソラフェニブ、スニチニブ、アバスチン、および、抗ＩＦＮγ（実施例にすぎない）の薬物放出プロファイルが、薬物装填（すなわち、薬物の総量のパーセンテージ）、能動薬物の特性（分子量および疎水性）等の製剤パラメータの関数として検討される。制御薬物放出動態に加え、ナノウエハはまた、眼と直接接触する表面からのみ薬物放出を可能にする（図１２）。その結果、放出された薬物は、結膜と常時接触し、したがって、薬物の有効性を向上させる。初期研究では、５００ｎｍ直径リザーバのアレイを有するナノウエハが、加工され、マイクロ注入によって、例示的薬物ドキシサイクリンが充填された。ドキシサイクリンが装填されたナノウエハからの薬物放出が、ＵＶ分光光度分析によって研究された。図１５から分かるように、４時間後のドキシサイクリン放出は、約５０％であって、治療上効果的な濃度範囲に急速に到達した後、最大２日間、ほぼゼロ次放出が続いた。ある実施形態では、例えば、１週間、デキサメタゾン放出を達成するために、ナノウエハの加工および薬物装填パラメータを最適化することができる。
【００９５】
４．ナノウエハから角膜および結膜内への蛍光ナノ球体のインビボ拡散
【００９６】
角膜内における薬物分子の拡散およびその滞留時間の増加におけるナノウエハの有効性を実証するために、（ｉ）赤色蛍光ナノ球体（６０ｎｍ直径）が装填されたナノウエハと、（ｉｉ）金ナノ球体（６０ｎｍ直径）が装填されたナノウエハが加工された。これらのナノウエハは、健康なマウスの角膜上に留置された。マウスは、それぞれ、２および５日後、屠殺され、眼が、回収された。眼は、５μｍのスライスを得るためにミクロトームで切断され、ナノ球体の拡散および滞留時間を見極めるために、共焦点蛍光撮像法および電子透過顕微鏡（ＴＥＭ）によって検討された。図１６Ａ−Ｃから分かるように、赤色蛍光ナノ球体が、角膜内に拡散し、５日後でさえ、そこに留まっていた。さらに、角膜内のナノ粒子拡散を確認するために、金ナノ球体が装填されたナノウエハが、健康なマウスの角膜上に設置され、ミクロトームで切断された５μｍのスライスが、ＴＥＭ撮像によって検討された。ＴＥＭ分析は、共焦点蛍光撮像法によって得られた結果を再確認した。図１６Ｄ−Ｆから分かるように、金ナノ粒子（画像内の微小黒色点）は、角膜上皮および間質内に拡散し、５日後、金ナノ粒子の密度は、わずかのみ少なくなった。まとめると、これらの結果は、ドライアイ誘発マウスでの角膜粗度の減少における薬物が装填されたナノウエハの有効性の向上が、滞留時間の向上ならびに結膜および角膜内への薬物分子の拡散によるものであることを確認する（図１７および１８）。角膜創傷治癒、神経再生、および、角膜の血管新生の阻害におけるナノウエハ薬物送達システムの有効性が、特徴付けられる。
【００９７】
５．ドライアイ誘発マウスモデルにおけるナノウエハのインビボ有効性
【００９８】
例示的研究では、ナノウエハから放出される薬物の有効性が、ドライアイ誘発マウスモデルにおいて調査された。薬物、すなわち、デキサメタゾンおよびドキシサイクリンが装填された５００ｎｍナノリザーバを有するナノウエハが、研究において使用された。約１．５ｍｍ直径の円形薬物ナノウエハが、ベースライン時に全身麻酔下でマウスの下側および上側眼瞼下に設置され、局部治療を伴わずに、５日間、乾燥ストレスに曝された。マウスは、安楽死され、５日後、光学顕微鏡および遺伝子発現分析によって、薬物の有効性に関して検討された。マウス角膜から反射する白色光リングの規則性が、角膜平滑度を評価するために使用された。リングの真円度は、角膜表面の平滑度に比例する（ｄｅ  Ｐａｉｖａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６）。角膜平滑度の増加は、ナノウエハから放出される薬物の有効性を示す。図１７Ａから分かるように、角膜リングは、空包ナノウエハ（対照）によって治療された実験ドライアイにおいて非常に不規則である一方、ドキシサイクリン−ナノウエハ（図１７Ｂ）またはデキサメタゾン−ナノウエハ（図１７Ｃ）のいずれかを受けたマウスでは、角膜表面は、平滑かつ均一であった。これらの結果は、ナノウエハからの制御薬物放出が、ドライアイ誘発角膜不規則性を改善する際に効果的であることを確認する。
【００９９】
さらに、ナノウエハのインビボ有効性を評価するために、炎症サイトカイン（ＩＣＫ）およびマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）濃度のレベルが、リアルタイムＰＣＲ分析によって分析された。ドライアイでは、ＩＣＫおよびＭＭＰの産生が増加し、故に、ナノウエハのインビボ有効性は、ＩＣＫおよびＭＭＰ発現を定量化することによって評価されることができる（Ｌｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４；Ｓｏｌｏｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１；Ａｆｏｎｓｏ  ｅｔ  ａｌ，．  １９９９；Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５；ｄｅ  Ｐａｉｖａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６；Ｌｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４；Ｄｅ  Ｐａｉｖａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９）。ＩＣＫおよびＭＭＰ発現の減少は、ナノウエハ薬物送達システムの有効性の増加を確認する。初期研究は、ドライアイ誘発マウスの結膜におけるデキサメタゾンまたはドキシサイクリンが装填されたナノウエハの単回投与が、実験ドライアイの５日後の対照として使用された空包ナノウエハと比較して、角膜上皮中の炎症誘発性サイトカインであるＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−９、ＣＣＬ２０、および、Ｔｈ−１７シグニチャサイトカインであるＩＬ−１７Ａの発現を有意に減少させたことを実証する（図１８）。
【０１００】
角膜傷害および治癒マウスモデルにおけるナノウエハのインビボ有効性
【０１０１】
標準的角膜剥離研究が、２ヶ月齢および４ヶ月齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスで行われた（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２）。全身麻酔下、角膜の中心領域が、２ｍｍ直径の穿孔器を使用して、オスまたはメスマウスにおいて限界され、上皮および基底下神経叢が、ゴルフ刀を用いて除去される（Ａｃｃｕｔｏｍｅ，  Ｉｎｃ．，  Ｍａｌｖｅｒｎ，  ＰＡ）。本標準化病変に対する自然治癒応答として、１８時間時のピーク上皮細胞分裂、２４時間以内の創傷閉鎖、９６時間以内の上皮の全厚層化の回復、および、９６時間以内の創傷面積内の基底下神経密度の約２０％回復が挙げられる（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６；Ｂｙｅｓｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９；Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。傷害後３時間までに、剥離によって直接傷害されていない上皮は、一連の炎症誘発性サイトカイン、ケモカイン、付着分子、および、成長因子の発現を亢進し、角膜縁小静脈は、有意な膨張および好中球溢出を呈する（Ｂｙｅｓｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９；Ｌｉ，  Ｂｕｒｎｓ，  Ｈａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１；Ｌｉ，  Ｂｕｒｎｓ，  Ｂｙｅｓｅｄａ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１；Ｌｉ，  Ｂｕｒｎｓ，  Ｓｍｉｔｈ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１）。３時間時の好中球は、大部分が、前部角膜縁に制限され、経時的に蓄積し続け、前部間質内の角膜実質細胞と接触するように移動し、６時間以内に元の創傷縁に到達し、オスマウスでは、１２時間以内に、メスマウスでは、１８時間以内に、角膜内でピークに達する（Ｂｙｅｓｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００９；Ｌｉ，  Ｂｕｒｎｓ，  Ｈａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１；Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６ａ；Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００６ｂ；Ｐｅｔｒｅｓｃｕ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７；Ｇａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０；Ｂｕｒｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５）。
【０１０２】
好中球移動および分裂上皮細胞に及ぼすナノウエハの効果を調査するために、空包ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）ナノウエハが、角膜剥離マウスモデルにおける角膜の剥離部位上に設置された。角膜全組織標本が、中心上皮剥離が好中球および分裂上皮細胞に対して染色された後、２４時間時に回収された。剥離直後に適用された空包ナノウエハ（薬物を伴わない）は、元の創傷縁（ｎ＝６）における好中球／視野の有意な減少と、角膜の角膜縁（Ｌ）、傍角膜縁（ＰＬ）、元の創傷縁（Ｗ）、傍中心（ＰＣ）、および、中心（Ｃ）における分裂上皮細胞／視野の分布の変化をもたらした（図１９）。総分裂上皮細胞は、治療を伴わない創傷角膜（角膜あたりの傍角膜縁領域内の合計４つの無作為に選択された視野）と異ならなかった。デキサメタゾンが装填されたナノウエハの場合、好中球の創傷の部位への移動が、顕著に示された（図１９）。小数の好中球が、創傷面積に移動し、好中球は、創傷の傍中心および中心領域では観察されなかった。比較では、空包ナノウエハは、創傷部位への好中球の移動を阻害する影響を有していない。これらのナノウエハ（空包およびデキサメタゾンが装填されたものの両方）は、上皮治癒に影響を及ぼすと考えられ、空包ナノウエハ（薬物を伴わない）および薬物が装填されたナノウエハ（デキサメタゾン、タクロリムス）を用いた本影響の程度の詳細な分析を要求するであろう。
【０１０３】
概略すると、これらの実験結果は、（ｉ）研究概念の実行可能性、（ｉｉ）ナノウエハ加工および制御薬物放出属性、（ｉｉｉ）機械的コンプライアンスおよびナノウエハの粘膜付着性、（ｉｖ）ナノウエハの単回留置が、点眼薬製剤として、１日に２回局部的に投与されるドキシサイクリンおよびデキサメタゾン薬物溶液と比較して、実験ドライアイ誘発マウスの５日後の眼表面の平滑度を有意に改善し得ること、ならびに、（ｖ）デキサメタゾンが装填されたナノウエハが、マウス角膜剥離モデルにおける角膜の好中球浸潤を低下させることを実証する。
【０１０４】
異なる薬物リザーバ寸法のナノウエハの加工
【０１０５】
ナノウエハは、より長い持続時間（例えば、数時間から１日、１週間、または、それ以上）の間、制御放出方式において、薬物を放出することができる。加えて、薬物は、治療上効果的な濃度において放出され、有意な有効性を引き出し、全身毒性を最小限にする。薬物放出動態の緊密な制御を維持するために、ナノウエハ内の薬物リザーバ寸法は、慎重に設計および最適化されなければならない。初期研究として、５００ｎｍ薬物リザーバを有するナノウエハが、モデルシステムとして、ＰＶＡを使用して加工された。これは、ナノウエハ加工の実行可能性を実証したが、薬物含有量および薬物放出動態は、インビボ療法の有効性のために最適化されてもよい。正しい薬物リザーバ寸法、総薬物含有量を選定することによって、薬物放出動態および薬物投薬は、制御されることができる。薬物リザーバが大きいほど、より多い薬物装填量およびより長い放出持続時間を可能にする一方、薬物の量が少ないほど、短期間放出のためのより小さいリザーバ内に装填されることができる。例示的実施形態では、薬物リザーバ寸法１００ｎｍ、２５０ｎｍ、５００ｎｍ、１μｍ、１．５μｍ、および、３μｍを伴うナノウエハが、設計され、例えば、電子ビームリソグラフィおよびフォトリソグラフィによって加工される。薬物リザーバ寸法は、少なくともいくつかの実施形態では、薬物含有量および放出動態を定義し、したがって、ナノウエハにプログラム可能属性を備え付けさせることができる。加えて、ナノウエハ薬物送達システムは、薬物放出を緊密に制御し、療法効率を最大限にし、毒性副作用を最小限にすることが予期される（図１２Ｅ）。薬物放出の過程の間、ナノウエハは、ゆっくりと溶解し、消失する。
【０１０６】
ポリマー
【０１０７】
本研究では、ナノウエハは、異なるポリマーを使用して加工される。異なるポリマーのスクリーニングは、具体的薬物のための正しいポリマーの選択を可能にする。異なるポリマーは、ひいては、薬物放出動態に影響を及ぼすであろう、水素結合、ファン・デル・ワールス相互作用、疎水性相互作用等を介して、異なる薬物と様々に相互作用する。例えば、薬物が、ポリマーと強固に水素結合している場合、薬物放出率は、非常にゆっくりであることができ、組織内の薬物の生物学的利用能は、非常に乏しく、薬物の有効性に影響を及ぼすであろう。また、少なくともいくつかの場合には、ナノウエハ開発成功のために、結膜の粘液層に良好に付着し、無傷のまま、常時瞬きに耐えるべきである。ヒドロゲルナノウエハの加工のために、以下の属性を有するポリマーが、いくつかの実施形態では、選定されるであろう。（ｉ）ポリマーの水溶性性質、（ｉｉ）生体適合性、（ｉｉｉ）ナノウエハの透明性、（ｉｖ）粘膜付着性特性、（ｖ）眼の曲率に容易に適合するような機械的コンプライアンス、および、（ｖｉ）臨床使用におけるＦＤＡ承認ポリマー。本研究では、具体的実施形態において、以下の合成および天然バイオポリマーが、検討される。ＰＶＡ、デキストラン、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、（ヒドロキシプロピル）メチルセルロース、ゼラチン、および、コラーゲンが、ナノウエハの加工のために使用されるであろう。
【０１０８】
薬物
【０１０９】
広範囲に適用可能であるナノウエハシステムを開発するために、ナノウエハ有効性研究が、以下の薬物／治療薬を使用して実施されるであろう。リボフラビン、ドキシサイクリン、デキサメタゾン、ホスホデキサメタゾン（ｐｈｏｓｐｈｏ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、タクロリムス、トピラマート、エチホキシン、ビナキサトン、および、ネオトロフィン、ソラフェニブ、スニチニブ、シクロスポリンＡ、アバスチン、シプロフロキサシン、レボフロキサシン、エリスロマイシン、アシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、システアミン、塩酸システアミン、酒石酸システアミン、ブルセラミン（ｂｒｕｃｅｌｌａｍｉｎｅ）、チオプロニン、抗ＩＦＮγ、および、輪部幹細胞。
【０１１０】
シクロスポリンＡ点眼薬は、すでに臨床で使用されており、シクロスポリンＡが装填されたナノウエハの有効性は、市販の点眼薬製剤と比較されることができる。結膜の病理学的アポトーシスおよびドライアイ状態の悪化におけるＩＦＮγの影響は、公知である（Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２；Ｇａｙｔｏｎ，  ２００９）。実施形態では、抗ＩＦＮγが装填されたナノウエハの療法効果が、ドライアイ疾患を治療するために提供される。デキサメタゾンは、コルチコステロイドであって、ＦＤＡ承認抗炎症薬物である。しかしながら、デキサメタゾン点眼薬は、糖尿病患者における血糖値の増加等の副作用を生じさせる。デキサメタゾンが装填されたナノウエハは、角膜および結膜内のその制御薬物放出および局所薬物分布のため、その有効性および角膜剥離マウスモデルにおける全身副作用の最小限化に関して検討される。傷害角膜内の神経再生を刺激するために、タクロリムスが装填されたナノウエハが、調査される。タクロリムスは、神経再生および神経機能の回復を助長するが、しかしながら、また、顕著な免疫抑制傾向を実証する。結果として、タクロリムス点眼薬および全身注入は、制限された成功となる。ナノウエハは、制御放出方式において、傷害角膜部位に局所的に薬物を送達することができるため、タクロリムスが装填されたナノウエハの療法の有効性は、神経再生の刺激および全身副作用を最小限にするために利用される。
【０１１１】
傷害後の角膜の血管新生を阻害するために、抗血管新生薬物、すなわち、ソラフェニブ、スニチニブ、および、アバスチンが装填されたナノウエハが、利用される。これらの薬物は、抗血管新生治療薬として、すでに臨床で使用されている。しかしながら、全身副作用を防止するために、制御放出方式において、これらの薬物を角膜に局所的に送達することは、困難なタスクである。ナノウエハは、制御放出方式において、これらの薬物を角膜傷害の部位に局所的に送達することができるため、抗血管新生薬物が装填されたナノウエハの療法の有効性が、角膜の血管新生マウスモデルにおいて、脈管形成の阻害および血管新生能の退行のために利用される。
【０１１２】
ドライアイ誘発マウスモデルにおけるナノウエハ有効性の調査
【０１１３】
ドライアイは、炎症、ぼやけた波動性視力、涙液膜の不安定性、涙液オスモル濃度の増加、および、眼表面上皮疾患を伴う、異常眼表面をもたらし得る、多因子疾患である（Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７）。ドライアイ疾患は、機能的視力および通常の日常活動を行う能力を低下させることによって、生活の質に深刻な影響を及ぼす（Ｚｏｕｋｈｒｉ，  ２００６）。ドライアイの原因要素として、眼表面、涙腺、マイボーム腺、および、神経網に影響を及ぼす自己永続的一連の事象を引き起こす、炎症、ホルモンの不均衡、年齢、および、環境要因が挙げられる（Ｍｉｌｊａｎｏｖｉａｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７；Ｌｐｅｚ  ａｎｄ  Ｕｂｅｌｓ，  １９９１；Ｌｏｐｅｚ  ａｎｄ  Ｕｂｅｌｓ，  １９９３；Ｎａｇｅｌｈｏｕｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５）。涙腺機能不全は、ドライアイ疾患患者の涙液膜内で同定される炎症性サイトカインの産生を誘発する、高浸透圧血症等の涙液組成物の変化につながる。炎症は、重要な病原因子であると考えられ、それを治療することによって、眼表面を回復することができる。軽度ドライアイは、一時的な緩和のために、人工涙液点眼薬を用いて治療される。炎症の結果としての慢性ドライアイは、それぞれ、ドキシサイクリン、デキサメタゾン、および、シクロスポリン等の局部抗炎症薬物または免疫抑制剤を含有する点眼薬を用いて治療される（Ａｖｕｎｄｕｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００３）。
【０１１４】
Ｔヘルパー細胞サイトカインＩＦＮ−γは、結膜扁平上皮化生の助長、粘液産生杯細胞の損失、ドライアイ、および、表面上皮アポトーシスにおける重要な役割を果たすものとして同定されている。局部または全身投与された抗ＩＦＮ−γは、上皮アポトーシスを防止し、杯細胞を保存することができる（Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２；Ｇａｙｔｏｎ，  ２００９）。マウスドライアイモデルにおけるドライアイの治療のためのＩＦＮ−γ等の生物製剤の使用は、大きな前進となるであろうが、しかしながら、眼表面への抗体の送達は、製剤の不安定性、タンパク質分解、瞬き、および、涙管排液系内への浄化のため、困難なタスクである。結果として、高価な抗体溶液の複数回の投与が、療法効果を得るために眼に要求される。１日数回の点眼薬の投与は、治療上効果的範囲に加え、高低薬物濃度プロファイル、すなわち、毒性範囲内の高濃度および非効果的範囲内の低濃度をもたらす（図１０）。ドライアイにおける眼表面上皮疾患に及ぼす抗ＩＦＮ−γが装填されたナノウエハの療法の有効性を特性評価するために、実験ドライアイ誘発マウスモデルが、利用される。本マウスモデルは、ドライアイ疾患状態を厳密に複製し、抗ＩＦＮ−γが装填されたナノウエハの有効性を検証するあるパラメータが、細かく立証される。安定制御放出様式において、生物製剤を送達するための新規薬物送達システムの開発は、角膜および眼表面疾患の治療における大きな前進である。
【０１１５】
角膜上皮治癒および神経再生におけるナノウエハの有効性の調査
【０１１６】
薬物の組み込みの有無によって、角膜における炎症および治癒の状態に関して、ナノウエハの影響を分析することができる。治癒は、上皮復元および感覚神経の再生を含み、角膜内の炎症の状態は、薬物が装填されたナノウエハに対する炎症性および抗炎症性応答の理解を伴う。傷害に対する炎症性応答は、治癒に重要な影響を及ぼす、複合的段階状の要因および細胞タイプを伴う。これは、回復に対する重要な側面に寄与するが、無調節である場合、組織損傷を悪化させ、治癒を妨害し得る。段階における重要なステップの状態の定義は、創傷治癒および角膜神経再生のための最適なナノウエハ送達システムを査定するための有用な洞察を提供する。例えば、（ｉ）上皮神経密度および創傷治癒に及ぼすデキサメタゾンが装填されたナノウエハの影響、ならびに、（ｉｉ）基底下および上皮感覚神経再生に及ぼすタクロリムスが装填されたナノウエハの影響の２つの異なる試験設定を検討することができる。
【０１１７】
例示的デバイス
【０１１８】
ナノおよびマイクロ粒子が、全身薬物送達のために開発されているが、しかしながら、眼球疾患を治療するためのナノ技術ベースの薬物送達システムの開発は、あまり進歩していない。最近、マイクロおよびナノ粒子は、眼球薬物送達において使用されているが、その成功は、制限されている。ナノ粒子懸濁液もまた、眼から急速に浄化され、制限された薬物の有効性につながる。マイクロ／ナノ粒子ベースの送達システムは、調製が容易であるが、低薬物装填、バースト薬物放出動態、および、粒子の凝集等の制限を呈する。また、非常に短い周期の薬物放出（約１〜３時間）のため、療法の有効性は、非常に制限され、複数回の投与を要求する。眼内の薬物滞留時間を改善するために、原位置ゲル形成システムが、開発されている。点眼薬としての滴下に応じて、薬物を含有する溶液は、眼表面上でゾル／ゲル相転移を被る。原位置で形成されるゲルは、より長い時間区間の間、薬物を保持し、したがって、その生物学的利用能を向上させることが予期される。しかしながら、これらの原位置形成ゲルは、薬物滞留時間を数時間まで増加させ得る。薬物が装填されたコンタクトレンズが、眼内の薬物滞留時間を改善するために開発されている。コンタクトレンズは、角膜と常時接触するため、薬物が装填されたコンタクトレンズは、薬物滞留時間を３０分超まで向上させることが予期される。これらのシステムに関する問題は、薬物の大部分が、１時間以上以内に拡散することである。さらなる前進として、薬物が充填されたリポソーム、ミセル、マイクロエマルション、または、ナノ粒子が装填されたコンタクトレンズが、開発されている。これらのアプローチは、数時間、薬物滞留時間を改善したが、しかしながら、１日から１週間の長期間放出にはあまり好適ではない。最近、薬物が装填されたポリラクチド−コ−グリコリド（ＰＬＧＡ）フィルムが、エコナゾールの長期放出のために、コンタクトレンズの内側に封入された。これらのシステムは、最大１ヶ月間、薬物を送達し得るが、厚いＰＬＧＡフィルムのため、透明性の減少および低酸素浸透性によって制限される。また、ＰＬＧＡの生体分解性性質のため、これらのコンタクトレンズは、ＰＢＳ内にパッケージ化されることができない。概略すると、これらのシステムは全て、薬物滞留時間を数時間延長させ得るが、長時間の間、制御放出方式において、薬物を放出することができない。これらの制限を考慮して、いかなる臨床手技も伴わずに、患者の指先を用いて、眼の角膜、結膜上、または、円蓋において容易に留置され得る、長期放出ナノウエハ薬物送達システムの開発が、非常に便宜的であるだけではなく、また、慢性ドライアイ、緑内障、角膜潰瘍、および、他の眼球炎症／感染症を治療するために最も望ましいであろう。
【０１１９】
本開示は、所望の持続時間の間、治療上効果的な濃度において薬物を放出する、薬物送達システムのある実施形態を提供する。一側面では、本開示の実施形態は、他の送達システムよりも長い時間区間の間、例えば、少なくとも、１日から１週間、治療上効果的な濃度を放出する。本開示の薬物送達システムのある実施形態は、局所または全身かどうかにかかわらず、局部投与または注入を通してではなく、デバイスが、直接、罹患または傷害部位、例えば、眼の表面上に設置され、そこに留まることを可能にする、長期薬物放出のための生体溶解性ヒドロゲルマトリクスを備える治療薬分与デバイスを備える。
【０１２０】
具体的例示的実施形態では、図１は、ヒドロゲルマトリクス１０２および薬物リザーバ１０４を伴う、治療薬分与デバイス１００を示す。図１は、円形であるように治療薬分与デバイス１００を示すが、所望に応じて、あるいは用途および／または傷害の部位によって決定されるように、規則的または不規則的任意の形状を有することができる。ある実施形態では、治療薬分与デバイス１００の形状は、少なくとも、ヒドロゲルマトリクス１０２の材料に基づく。治療薬分与デバイス１００はまた、リザーバ深さ等のある寸法がナノメートル範囲内である場合、「ナノウエハ」と呼ばれ、寸法がマイクロメートル範囲内である場合、「マイクロウエハ」と呼ばれ得る。ある事例では、これらの用語は、同じ意味で使用され、サイズ基準に固執しない。図２Ａ−２Ｂは、治療薬分与デバイス１００の断面を示す。治療薬分与デバイス１００は、ヒドロゲルマトリクス１０２全体を通して配置される、一連の薬物リザーバ１０４を備える。薬物リザーバ１０４は、好ましくは、パターン化アレイ内に配列される。治療薬分与デバイス１００は、薬物リザーバ１０４の上部が暴露された開放面１０６と、それに向かって下部薬物リザーバ１０４が位置する閉鎖面１０８とを有する。図２Ｂを参照すると、好ましい実施形態では、開放面１０６は、罹患または傷害部位に隣接して設置され、開放面１０６の周囲のヒドロゲルマトリクス１０２の部分が眼の表面上で流体（例えば、涙）の循環によってゆっくりと浄化されるにつれて、制御様式で薬物リザーバ１０４から薬物を送達する。治療薬分与デバイス１００の開放面１０６の溶解は、薬物リザーバ１０４を周囲組織にゆっくりと暴露し、したがって、治療薬分与デバイス１００の材料がある溶解率を有するように構成することによって、薬物放出の持続時間が制御されることを可能にする。ヒドロゲルマトリクス１０２は、周囲組織に暴露されない薬物が、身体内の種々のシステムによって放出または浄化されないように保護する。ある実施形態では、薬物リザーバ１０４内に含有される治療薬は、種々の化合物、抗炎症剤を含む薬物および薬物マトリクス、他の小分子薬物、抗体、抗生物質、ｓｉＲＮＡ、ペプチド、コルチコステロイドを含むステロイド、生物学的抗真菌薬、アミノ酸、ｍＲＮＡ、タンパク質、栄養サプリメント、または、それらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つを含む。
【０１２１】
ヒドロゲルマトリクス１０２は、好ましくは、経時的に溶解または分解し、薬物リザーバ内の薬物を放出する、生体適合性材料を含む。生体適合性材料は、好ましくは、デキストラン、ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリラクチド−コ−グリコリド（ＰＬＧＡ）、ポリヒドロキシエチルメタクリレート（ポリＨＥＭＡ）、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ゼラチン材料、コラーゲン材料、および、それらの任意の組み合わせを含む。ＰＶＡ、ポリＨＥＭＡ、および、ＰＬＧＡは、縫合糸、骨プレート、コンタクトレンズ、および、長期放出医薬品における安全なヒトでの使用歴を伴う、ＦＤＡ承認バイオポリマーである。ヒドロゲルマトリクス１０２がＰＬＧＡを含む、ある実施形態では、経時的に、ＰＬＧＡポリマーは、乳酸およびグリコール酸に分解し、身体によって完全に代謝され、二酸化炭素および水として排除され、それによって、薬物リザーバ１０４内の薬物を放出する。理論によって拘束されることを意図するわけではないが、ＰＬＧＡマトリクスは、埋込に応じて、ほぼ瞬時に水を吸収し始め、ヒドロゲルマトリクス１０２の膨張につながる。好ましい実施形態では、本プロセスは、ヒドロゲルマトリクス１０２の表面またはその近傍に存在する薬物リザーバ１０４から少量の薬物が放出される位相を開始する。経時的に、涙等の眼内または眼の表面上の流体は、ポリマー構造をゆっくりと分解し、薬物の放出を可能にし、埋込部位に薬物の持続的供給をもたらす。ポリマーマトリクスは、最終的に、オリゴマーおよびモノマーに分解し、所望の持続時間の終了時に薬物の完全放出をもたらす。さらに、ヒドロゲルマトリクス１０２は、好ましくは、薬物リザーバ１０４をそれらの周囲の瘢痕組織の増殖から保護する。
【０１２２】
好ましい実施形態では、ヒドロゲルマトリクス１０２は、経時的にさらに分割される比較的により大きい部分に分解する、生体分解性材料ではなく、溶液中で個々の単位に分解する、生体溶解性材料を含む。マトリクスの溶解は、薬物の放出の制御を可能にし、溶液に暴露される部分のみ溶解し、デバイスの残りを無傷のままにするであろうため、好ましい。さらに、溶解された粒子は、身体、特に、傷害部位への損傷のリスクをほとんど呈さない。
【０１２３】
好ましい実施形態では、治療薬分与デバイス１００は、直径約２〜９ｍｍを有する。薬物リザーバ１０４は、好ましくは、深さ約２００ナノメートル〜５０マイクロメートル、好ましくは、約２５０ｎｍ、５００ｎｍ、１マイクロメートル、１．５マイクロメートル、および、３マイクロメートルを有する。薬物リザーバ１０４の形状は、所望に応じて、変動することができる。薬物リザーバ１０４の数、深さ、形状、および、他の寸法は、あるサイズの治療薬分与デバイス１００上に設置される所望の量の治療薬を達成するように変動することができる。すなわち、治療薬分与デバイス１００および薬物リザーバ１０４の寸法は、制限ではないが、薬物のタイプ、所望の薬物の量、ヒドロゲルマトリクス１０２の材料、治療薬分与デバイス１００が設置されるであろう臓器または場所を含む、いくつかの要因に基づいて、調節されることができる。
【０１２４】
薬物は、治療薬分与デバイス１００の開放面１０６が溶解されるにつれてのみ放出されるため、本開示のある実施形態は、他の従来の薬物放出方法と比較して、少なくとも１日（または、２４時間）のより長期間の薬物放出を可能にする。例えば、摂取を通して投与される薬物が、３〜１２時間の間のみ、治療上効果的用量で全身内に留まる、または、点眼薬を通して投与される薬物が、１時間未満の間、眼内に留まる。これは、薬物濃度ピークならびに急速降下を示し、後続投薬が、薬物濃度が治療のための療法範囲内となることが要求される、図１０における薬物濃度プロファイルによって実証される。従来の方法と異なり、治療薬分与デバイス１００の材料は、患者要件に好適であるように構成またはプログラムされることができる。加えて、所望の薬物放出プロファイル（例えば、所望の時間区間にわたって持続的または可変）が、デキストラン、ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリラクチド−コ−グリコリド（ＰＬＧＡ）、ポリヒドロキシエチルメタクリレート（ポリＨＥＭＡ）、ポリヒドロキシエチルアクリレート、または、それらの任意の組み合わせ等の異なるポリマーを使用して、ヒドロゲルマトリクス１０２を加工することによって得られることができる。図１１は、本開示の治療薬分与デバイスのある実施形態を用いて達成されることができる、例示的薬物プロファイル濃度を図示し、１回の用量が、数時間、数日、および／または数週間等、長期時間区間にわたって、薬物濃度を療法範囲内に維持することができ、放出率および／または治療周期は、プログラムされる（例えば、制御される）ことができる。
【０１２５】
本開示の治療薬分与デバイスのある実施形態のための特定の用途の１つは、低刺激の一時的な緩和のみを提供する、生物学的活性を伴わない人工涙液点眼薬を用いて治療される、軽度ドライアイである。涙液膜高浸透圧に応答して生じる慢性ドライアイおよび炎症は、それぞれ、デキサメタゾンおよびシクロスポリン等の局部ステロイドまたは免疫抑制剤を含有する点眼薬を用いて治療される。瞬きおよび涙管排液系によるその急速浄化のため、長時間の間、薬物の治療上効果的な濃度を維持することは非常に困難である。結果として、複数回の投与が、療法効果を得るために、眼内に要求される。１日数回の点眼薬の投与は、治療上効果的範囲に加え、高低薬物濃度プロファイル、すなわち、毒性範囲内の高薬物濃度および非効果的範囲内の低濃度をもたらす（図１０）。
【０１２６】
前述のように、ナノウエハからの薬物放出は、正しい薬物リザーバ寸法および薬物装填濃度を選定することによってプログラムされることができる。リザーバ寸法が小さいほど、薬物分子のゆっくりとした拡散およびゆっくりとした放出を可能にする一方、薬物分子は、より大きいリザーバからは急速に拡散する。同様に、低薬物装填濃度は、よりゆっくりとした放出をもたらす一方、より高い濃度は、急速放出につながる。ナノウエハからの薬物放出は、３つのパラメータ、すなわち、初期バースト放出の大きさ、薬物放出の程度、および、バースト放出後の薬物放出動態に基づいて、４つのカテゴリに分類され得る。好ましい放出プロファイルは、典型的には、総装填薬物の２０％を下回る、小バースト放出後、薬物の大部分が放出されるまで、長期間、ほぼゼロ次放出が続くものである。２つのプロファイル間の差異は、初期バースト放出の程度であり得る。あるプロファイルは、高バースト放出後、薬物の定常放出が続いてもよい。
【０１２７】
本開示の別の側面は、本開示の治療薬分与デバイスのある実施形態を加工する方法を提供する。好ましい実施形態では、本開示の治療薬分与デバイスの実施形態は、電子ビームリソグラフィおよびバイオ加工を使用する。図３を参照すると、治療薬分与デバイス３００は、基部３０６に連結された一連の支柱３０４を有するテンプレート３０２を使用して加工される。治療薬分与デバイス３００の薬物リザーバ３０８は、支柱３０４と同一の寸法および配列を有する。故に、支柱３０４は、薬物リザーバ３０８の所望の寸法を伴って構成される。さらに、治療薬分与デバイス３００のヒドロゲルマトリクス３１０の形状および寸法は、基部３０６と同一である。例えば、各リザーバが１マイクロメートル深さの４列の５つの薬物リザーバのパターンで配列される２０の薬物リザーバを有する、直径２ｍｍを伴う円形治療薬分与デバイスを製作するために、テンプレートは、２ｍｍの円形基部と、所望の寸法およびパターンを伴う対応する数の支柱とを有するであろう。テンプレート３０２は、好ましくは、シリコンまたは石英ガラスを含む。テンプレート３０２は、好ましくは、電子ビームリソグラフィに続いて、プラズマエッチングを使用して、マイクロ加工されることができる。
【０１２８】
図３Ａを参照すると、第１のステップは、基質３０６上に垂直支柱３０４のパターンを有するテンプレート３０２を形成することを含む。代替実施形態では、概して、図３Ｃにおけるヒドロゲルマトリクスに類似する鋳型が、中間テンプレート（図示せず）を形成するために使用されることができる。例えば、鋳型は、剛性材料から作製されることができ、所望の薬物リザーバに対応する複数のリザーバを有する。中間テンプレートのための材料は、シリコーンゴムまたはポリジメトキシシラン（ＰＤＭＳ）等、可撓性であることができ、固化に先立って、液体形態で存在することができる。中間テンプレートの材料は、図３Ａのテンプレート３０２に類似する中間テンプレートを形成するように鋳型に注がれ、硬化されることができる。図３Ｂを参照すると、ヒドロゲルマトリクスとして使用するための所望の組成物を伴う生体適合性材料の溶液が、テンプレート３０２上に注がれ、組成物の特性に従って、固化される。例えば、ＰＶＡ溶液が、ヒドロゲルマトリクスとして使用される場合、溶液は、好ましくは、約３０分間、約７０℃で加熱される。図３Ｃを参照すると、生体適合性材料層３１２が固化されると、剥がされ、平坦ガラスプレートに取り付けられ、薬物リザーバ３０８を暴露する。図３Ｄを参照すると、薬物リザーバ３０８は、マイクロ注入を使用して、好ましくは、超音波噴霧ノズルを使用して、種々の抗炎症剤を含む薬物および薬物マトリクス、他の小分子薬物、抗体、抗生物質、ｓｉＲＮＡ、ペプチド、コルチコステロイドを含むステロイド、生物学的抗真菌薬、アミノ酸、ｍＲＮＡ、または、それらの任意の組み合わせを含む、治療薬等の所望の物質が充填される。
【０１２９】
本開示の治療薬分与デバイスの実施形態の完全性は、共焦点蛍光およびＳＥＭ撮像によって特徴付けられることができる。図４Ａは、ＰＶＡ溶液を使用して、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ−デキストラン蛍光染料が充填された、本開示の側面に従って加工された治療薬分与デバイスの明視野画像である。薬物リザーバ寸法は、５００ｎｍ直径および５００ｎｍ深さである。図４Ｂは、同一のデバイスの蛍光画像であって、ナノサイズ薬物リザーバを充填する、開示されるプロセスを実証する。図４Ｃおよび４Ｄは、異なる倍率における、ＰＶＡ溶液を使用して、デキサメタゾン薬物が充填された、本開示の側面に従って加工された治療薬分与デバイスの明視野画像である。
【０１３０】
図５Ａ−５Ｂは、デキサメタゾンが装填された本開示の治療薬分与デバイスの薬物放出動態を示す。試験されるデバイスは、例示であって、限定ではないことが意図される、以下のプロトコルに従って形成された。
【０１３１】
リザーバをデキサメタゾンが充填する
【０１３２】
加工された治療薬分与デバイスが、マイクロ注入によって、デキサメタゾン溶液で充填される。５％デキサメタゾン溶液が、デバイスを充填するために使用された。薬物溶液の濃度（１〜２０％）は、要求される投薬および放出持続時間に好適であるように調節されることができる。
【０１３３】
リザーバをドキシサイクリンが充填する
【０１３４】
別の加工された治療薬分与デバイスが、マイクロ注入によって、ドキシサイクリン溶液で充填される。５％ドキシサイクリン溶液が、ナノウエハを充填するために使用された。薬物溶液の濃度（１〜２０％）は、要求される投薬および放出持続時間に好適であるように調節されることができる。
【０１３５】
デバイスからのデキサメタゾンのインビトロ放出
【０１３６】
典型的実験では、３つのデキサメタゾンが装填されたナノウエハ（１ｃｍ×１ｃｍ）が、３つの１０ｍｌガラスバイアルに別個に計量され、５ｍｌのＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ−２０（ｐＨ７．４）離型剤が、各バイアルの中に移された。これらのバイアルは、一定撹拌を用いて、３７℃に維持されたオービタルシェーカー内に保たれた。２時間の時間間隔時に、５ｍｌの離型剤が、バイアルから抜取され、同一の量の新しい媒体と交換された。したがって、回収されたサンプルは、ガラスバイアルの中に移され、冷蔵庫で保管された。離型剤のサンプリングは、５日間、継続された。各サンプルは、０．５μｍ注入器フィルタを通して濾過され、ＨＰＬＣ分析を受けた。本研究では、メタノール（９０％）および酢酸アンモニウム（１０％、ｐＨ７）の混合物が、０．２２μｍ膜フィルタを通した濾過後、移動相として使用された。
【０１３７】
Ｄｅｘ−ナノウエハ内の総デキサメタゾン含有量の判定
【０１３８】
ナノウエハ内に装填されたデキサメタゾンの総量が、正確に計量されたデキサメタゾンが装填されたナノウエハ（１ｃｍ×１ｃｍ）を５ｍｌ水中に溶解した後、エタノール（９ｍｌ）の添加によって判定された。沈殿ＰＶＡは、遠心分離によって除去された。透明溶液が、回転蒸発され、形成された固体が、１０ｍｌの移動相（９０％メタノールおよび１０％酢酸アンモニウム、ｐＨ７）中に再溶解された。本溶液の分割量が、０．５μｍ注入器フィルタを通して濾過され、ＨＰＬＣによって分析され、標準曲線と比較され、デキサメタゾン含有量を定量化した。
【０１３９】
図５Ａ−５Ｂから分かるように、６時間後の初期放出は、２０％未満である。比較的に低初期放出のため、治療薬分与デバイスは、挿入部位に留まり、少なくとも３日間、薬物リザーバ内の薬物を放出し続けることができる。
【０１４０】
図６を参照すると、本開示の治療薬分与デバイスの実施形態は、多くの用途を有するが、特に、長期持続時間（例えば、少なくとも１日）の間、眼内に治療薬の制御放出を提供するように適用可能である。図６では、治療薬分与デバイス６００は、眼６０６内に挿入され、ヒドロゲルマトリクス６０２が、所定の様式および持続時間において溶解するにつれて、薬物リザーバ６０４内の物質を送達する。ヒドロゲルマトリクス６０２の組成物は、治療薬分与デバイス６００が、所定の時間の間、眼６０６内に留まり、薬物を保護された環境内に留保し、ヒドロゲルマトリクス６０２が所定の様式において溶解するにつれてのみ、それを周囲組織に放出するように構成される。好ましい実施形態では、デバイス６００は、所定の時間区間内に完全に溶解するように構成される。別の実施形態では、デバイス６００は、所定の時間区間後に除去されることができる。
【０１４１】
標的における長期放出周期は、薬物が短時間区間（約２０分）の間のみ利用可能であって、薬物の大部分が、損失されるであろう、点眼薬を通した送達に優る利点である。さらに、点眼薬は、特に、反復用量が慢性状態を治療するために要求されるとき、不便である。本開示の治療薬分与デバイスの実施形態はまた、Ｏｃｕｓｅｒｔ、Ｖｉｔｒａｓｅｒｔ、Ｒｅｔｉｓｅｒｔ、および、Ｉｌｕｖｉｅｎを含む、現在利用可能な眼球薬物送達インプラントに優る利点を提供する。Ｏｃｕｓｅｒｔ薬物送達システムは、緑内障を治療するためのピロカルピンの送達のために、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって開発され、ＶｉｔｒａｓｅｒｔおよびＲｅｔｉｓｅｒｔ等の他の眼球インプラントは、Ｂａｕｓｃｈ＆Ｌｏｍｂによって開発された。これらのインプラントは全て、非生体分解性材料から作製され、外科手術埋込を要求する。
【０１４２】
本開示の治療薬分与デバイスの実施形態はまた、局所送達を可能にするが、他の短所に悩まされる、薬物が装填されたマイクロまたはナノ粒子の注入に優る利点を有する。例えば、注入されたマイクロまたはナノ粒子は、少量の薬物のみ保持するため、制限される。さらに、その放出動態は、容易に制御されない（例えば、一気に薬物を放出する）。加えて、その注入は、注入部位における粒子の凝集または嚢胞形成につながるこれらの凝集の周囲の瘢痕組織の成長につながり得る。注入された粒子は、眼から急速に浄化されるため、短期間の薬物放出（約１〜３時間）を提供する。したがって、注入されたマイクロまたはナノ粒子の療法の有効性は、非常に制限され、それによって、反復用量を要求する。
【０１４３】
本開示の治療薬分与デバイスの実施形態は、他のシステムが達成不可能であった、少なくとも６時間の長期放出周期を提供する。例えば、薬物を含有する溶液または懸濁液と原位置でゲルを形成するシステムは、角膜または結膜の表面上でゾル／ゲルゲル相転移を被る、点眼薬としての滴下に応じて、薬物滞留持続時間を数時間までしか増加させない。また、薬物が装填されたコンタクトレンズは、薬物滞留持続時間を３０分超しか向上させることができない。ポリ（２−ヒドロキシエチルメタアクリレート）コンタクトレンズの内側に封入される、薬物が装填されたＰＬＧＡフィルムのより最近のシステムでさえ、厚いＰＬＧＡフィルムのため、透明性の低下および低酸素浸透性によって制限される。
【０１４４】
説明されるように、本開示の治療薬分与デバイスは、他の送達システムと比較して、高薬物装填能力、所定の薬物放出動態、および、長期送達周期を有する。例えば、治療薬分与デバイスの組成物の少なくとも２０％、好ましくは、２５％は、注入されたマイクロまたはナノ粒子等の他のシステムより多く送達される物質、例えば、薬剤を備えることができる。
【０１４５】
本開示の治療薬分与デバイスは、任意の形状で形成されることができるが、眼球挿入物のために好ましい形状は、図７Ａ、７Ｂ、および、８Ａに示されるように、円形円板である。円板は、角膜疾患の治療のために、眼瞼に粘着せずに、角膜全体を適正に被覆する表面積を有する、または、瞬きとともに移動する、あるいは眼表面疾患、緑内障、または、眼球炎症疾患の治療のために、眼球または眼瞼結膜に接着することが好ましい。これらの目的を達成するための好ましい直径は、約９ｍｍである。
【０１４６】
図７では、ドキシサイクリン（５％）が装填されたナノウエハが、提示されている。各ウエハは、直径約３ｍｍである。ドキシサイクリンが装填されたマイクロウエハの代表的写真である。（Ａ）明視野画像（２倍）、（Ｂ）蛍光画像（２倍）、（Ｃ）より高い倍率下で視覚化されたＢにおける画像（５倍）。
【０１４７】
高速（３〜５日）分解可能ドキシサイクリンマイクロウエハを使用して、眼の連続撮像が、マイクロウエハの設置後、６時間〜７日にわたって行われた。ｄｏｘｙ−マイクロウエハの自己蛍光の強度が、マイクロウエハによって占有される総面積を境界することによって、デジタル画像内で測定され、結果が、群内で平均化された。３−ｍｍのｄｏｘｙ−ウエハの初期溶解は、設置後６時間で見られ、その消失は、７日の周期に及び得る。自己蛍光は、マイクロウエハ内の薬物含有量に反比例する。
【０１４８】
別の研究である、ある例示的研究では、ナノウエハから放出された薬物の有効性が、ドライアイ誘発マウスモデルにおいて調査された。薬物が装填されたナノウエハ、すなわち、（１）デキサメタゾン−ナノウエハおよび（２）ドキシサイクリン−ナノウエハが、本研究において使用された。約２ｍｍ直径の円形薬物−ナノウエハが、マウスの下側眼瞼下に設置され、光学顕微鏡によって、薬物の有効性に関して、５日後、検討された。角膜平滑度が、顕微鏡で撮影された反射光リングの画像内で評価された。リングの真円度は、角膜表面の平滑度に比例する。角膜平滑度の増加は、ナノウエハから放出される薬物の有効性を示す。図７Ａから分かるように、角膜は、対照として留置された空包マイクロウエハによって治療された実験ドライアイでは、非常に不均等である。ドキシサイクリン−ナノウエハ（図７Ｂ）およびデキサメタゾン−ナノウエハ（図７Ｃ）が留置されたマウスの場合、角膜表面は、平滑かつ均一であって、ナノウエハからの制御薬物放出が、ドライアイ誘発角膜上皮疾患を改善する際に効果的であることを確認した。比較では、ドキシサイクリンおよびデキサメタゾン点眼薬が１日２回投与された、マウスにおいて誘発されたドライアイは、５日後、角膜表面の平滑度にあまり改善を示さなかった。本研究は、単回ナノウエハ留置が、いくつかの毎日投薬する点眼薬と比較して、５日以上の間でも、非常に有効であることを確認する。
【０１４９】
図８Ａ−８Ｃは、本開示のナノウエハの例示的実施形態から放出される薬物の有効性を評価するための研究において撮影された画像を示す。本特定の研究では、ドライアイ誘発マウスモデルが、使用された。以下の薬物が装填されたナノウエハが、研究では使用された。（１）デキサメタゾン−ナノウエハおよび（２）ドキシサイクリン−ナノウエハ。約２ｍｍ直径の円形薬物−ナノウエハが、マウスの下側眼瞼下に設置され、５日後、光学顕微鏡によって、薬物の有効性について検討された。角膜平滑度が、顕微鏡で撮影された反射光リングの画像内で評価された。リングの真円度は、角膜表面の平滑度に比例する。２３角膜平滑度の増加は、ナノウエハから放出される薬物の有効性を示す。図８Ａから分かるように、角膜は、対照としての役割を果たす、任意の治療薬が充填されていない例示的実施形態によって治療された実験ドライアイでは、非常に不均衡である。ドキシサイクリン−ナノウエハ（図８Ｂ）およびデキサメタゾン−ナノウエハ（図８Ｃ）が留置されたマウスの場合、角膜表面は、平滑かつ均一であって、本開示のナノウエハの例示的実施形態からの制御薬物放出が、ドライアイ誘発角膜上皮疾患を改善する際に効果的であることを確認した。比較では、ドキシサイクリンおよびデキサメタゾン点眼薬が１日２回投与された、マウスにおいて誘発されたドライアイは、５日後、角膜表面の平度にあまり改善を示さなかった。本研究は、いくつかの毎日投薬する点眼薬と比較して、単回の例示的ナノウエハ留置が、５日以上の間でさえ、非常に有効であることを確認する。
【０１５０】
図９は、炎症誘発性サイトカインおよびマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の遺伝子発現に及ぼす本開示のナノウエハの例示的実施形態を用いた治療の効果の別の例示的研究において得られた分析を示す。炎症誘発性サイトカインおよびＭＭＰは、ドライアイにおいて改変された角膜障壁機能および表面不規則性に関わることが分かっている。ストレスを受けた眼表面および腺上皮細胞ならびにこれらの組織に浸潤する炎症細胞による、炎症誘発性サイトカイン（インターロイキン（ＩＬ）−１、腫瘍壊死要因（ＴＮＦ）−α）、および、タンパク質分解酵素の産生増加および活性化が、ドライアイにおいて報告されている。ＭＭＰ−９等のこれらの酵素は、角膜上皮基底膜の成分を含む種々の異なる基質および角膜上皮障壁機能を維持する緊密な結合タンパク質（ＺＯ−１およびオクルジン等）を溶解する。ドライアイにおけるＭＭＰ−９活性の増加は、乱れた角膜上皮障壁機能、角膜上皮落屑の増加、および、角膜表面不規則性と関連付けられる。図９に示されるように、研究は、デキサメタゾンまたはドキシサイクリンが装填されたナノウエハの例示的実施形態が、炎症誘発性サイトカインＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、および、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）−３およびＭＭＰ−９、ならびに、Ｔｈ−１７シグニチャサイトカインＩＬ−１７Ａの発現を低下させたことを実証する。ＩＬ−６を除く、全炎症性サイトカインは、ドキシサイクリンまたはデキサメタゾンのいずれかを含有するナノウエハの例示的実施形態を受けたドライアイ群において、結膜発現を減少させた。これらのパイロット研究は、統計的有意性に到達する確率は、わずか５０％であるが、サンプルサイズを計算するために有用であった。ＳｔａｔｅＭａｔｅ（登録商標）ソフトウェアを使用して、理想的サンプルサイズが、群あたり１２匹の動物に対して計算された。以下の仮定が行われた。ａ＝０．０５、空包ナノウエハとドキシサイクリンとの間のＩＬ−１αの遺伝子発現の５０％差異は、有意であると見なされ、検出力は、３９０％となるであろう。
【０１５１】
実施例
以下の段落は、本開示の治療薬分与デバイスの例示的かつ非制限的実施形態を提供する。
【実施例１】
【０１５２】
ポリビニルアルコールマイクロウエハの加工
【０１５３】
透明ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）溶液（水中１５％ｗ／ｖ、５ｍｌ）が、ピペットを用いて、円形柱（例えば、５００ｎｍ直径および５００ｎｍ高さ）を含有するＰＤＭＳテンプレート（３インチ直径）上に移された。ＰＶＡ溶液が、ＰＤＭＳテンプレートを完全に被覆する薄フィルムを形成するように均等に拡散され、７０℃で３０分間、オーブン内に保たれた。本ステップは、薄く、かつ機械的に強固なＰＶＡテンプレートの形成をもたらした。ＰＶＡテンプレートは、ＰＤＭＳテンプレートから剥がされた。得られたＰＶＡテンプレートは、約３インチの直径であって、円形ウェル（例えば、５００ｎｍ直径および５００ｎｍ深さ）を含有していた。ＰＶＡテンプレートは、明視野反射率顕微鏡下で検討され、その構造上の完全性を判定した。
【実施例２】
【０１５４】
ポリアクリル酸マイクロウエハの加工
【０１５５】
透明ポリアクリル酸（ＰＡＡ）溶液（エタノール中１０％ｗ／ｖ、５ｍｌ）が、ピペットを用いて、円形柱（例えば、５００ｎｍ直径および５００ｎｍ高さ）を含有するＰＤＭＳテンプレート（３インチ直径）上に移された。ＰＡＡ溶液が、ＰＤＭＳテンプレートを完全に被覆する薄フィルムを形成するように均等に拡散され、７０℃で３０分間、オーブン内に保たれた。本ステップは、薄く、かつ機械的に強固なＰＡＡテンプレートの形成をもたらした。ＰＡＡテンプレートは、ＰＤＭＳテンプレートから剥がされた。得られたＰＡＡテンプレートは、約３インチの直径であって、円形ウェル（例えば、５００ｎｍ直径および５００ｎｍ深さ）を含有していた。ＰＶＡテンプレートは、明視野反射率顕微鏡下で検討され、その構造上の完全性を判定した。
【実施例３】
【０１５６】
ポリメタクリル酸ヒドロキシエチルマイクロウエハの加工
【０１５７】
透明ポリＨＥＭＡ溶液（エタノール中１２％ｗ／ｖ、５ｍｌ）が、ピペットを用いて、円形柱（例えば、５００ｎｍ直径および５００ｎｍ高さ）を含有するＰＤＭＳテンプレート（３インチ直径）上に移された。ＰＶＡ溶液が、ＰＤＭＳテンプレートを完全に被覆する薄フィルムを形成するように均等に拡散され、７０℃で３０分間、オーブン内に保たれた。本ステップは、薄く、かつ機械的に強固なポリＨＥＭＡテンプレートの形成をもたらした。ポリＨＥＭＡテンプレートは、ＰＤＭＳテンプレートから剥がされた。得られたポリＨＥＭＡテンプレートは、約３インチの直径であって、円形ウェル（例えば、５００ｎｍ直径および５００ｎｍ深さ）を含有していた。ポリＨＥＭＡテンプレートは、明視野反射率顕微鏡下で検討され、その構造上の完全性を判定した。
【実施例４】
【０１５８】
ゼラチンマイクロウエハの加工
【０１５９】
５０〜５５℃における透明ゼラチン溶液（水性溶液中２０％ｗ／ｖ、３ｍｌ）が、ピペットを用いて、円形柱（例えば、５００ｎｍ直径および５００ｎｍ高さ）を含有するシリコンマスタテンプレート（３インチ直径）上に移された。ゼラチン溶液が、マスタテンプレートを完全に被覆する薄フィルムを形成するように均等に拡散され、１５分間、それを冷蔵庫に保つことによって、４℃まで冷却された。冷却は、ゼラチンテンプレートの形成をもたらし、続いて、マスタテンプレートから剥がされた。得られたゼラチンテンプレートは、約３インチの直径であって、円形ウェル（例えば、５００ｎｍ直径および５００ｎｍ深さ）を含有していた。
【０１６０】
提供されるように、本開示は、所定の時間区間内に溶解するにつれて、埋込または挿入部位で物質を放出するように構成されることができる、治療薬分与デバイスのある実施形態を提供する。本開示の治療薬分与デバイスは、特に、治療薬を眼に提供するために適用可能であって、いかなる外科手術手技も伴わずに、指先（コンタクトレンズのように）を用いて眼（角膜または結膜）上または円蓋において留置されることができ、これは、非常に便宜的であるだけではなく、また、最も望ましい。本開示の治療薬分与デバイスは、埋込のために外科手術を要求せず、患者にいかなる不快感ももたらさず、患者の視力を妨害または遮断せず、不便な過剰な反復投薬も要求しない。
【０１６１】
薬物が装填されたナノウエハの加工
【０１６２】
実施形態は、薬物マトリクスが充填されたナノリザーバでパターン化されたポリマーウエハを提供する。本プロジェクトにおける新しいアプローチの有用側面は、ナノウエハの加工のためのテンプレートとしての役割を果たすだけではなく、また、長期放出のために、薬物マトリクスの安定化成分としても機能する、ヒドロゲルテンプレート方式の使用である。アプローチにおける重要な処理ステップは、ヒドロゲルテンプレート方式を介してナノウエハを加工するための水溶性ポリマーの使用である（Ａｃｈａｒｙａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１１；Ａｃｈａｒｙａ，  Ｓｈｉｎ，  Ｖｅｄｅｎｔｈａｍ，  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０；Ａｃｈａｒｙａ，  Ｓｈｉｎ，  ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１０）。ナノウエハは、すでに臨床で使用されている以下のポリマーを使用して加工される。ＰＶＡ、デキストラン、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、および、（ヒドロキシプロピル）メチルセルロース。これらの中から、最良性能のポリマー−薬物の組み合わせが、選択され得る。モデルシステムとして、ＰＶＡナノウエハの加工が、本明細書で詳細に説明される。
【実施例５】
【０１６３】
ＰＶＡナノウエハの加工
【０１６４】
透明ＰＶＡ溶液（１０％ｗ／ｖ、１０ｍｌ）が、ピペットを用いて、スピンコーティングシステム（ＳＣＳ  Ｐ６７０８  Ｓｐｉｎ  Ｃｏａｔｅｒ，  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｏａｔｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）上に設置された正方形支柱（例えば、５００ｎｍ×５００ｎｍ正方形および５００ｎｍ高さ）を含有するシリコンマスタテンプレート（３インチ直径）上に移される。スピンスピードは、５００ｒｐｍに調節され、１５０μｍ厚のナノウエハを得るために、４５秒間、スピンされた。ポリマー溶液の濃度、スピンコーティング機のスピードおよび時間は、ナノウエハの要求される厚さを得るために変動されることができる。スピンコーティング後、ウエハは、７０℃で３０分間、焼成され、本周期の終了時、形成されたＰＶＡナノウエハが、シリコンウエハマスタテンプレートから慎重に剥がされる。そのように得られたＰＶＡナノウエハは、約３インチ直径であって、所定の寸法（５００ｎｍ５００ｎｍ×５００ｎｍ正方形および５００ｎｍ深さ）のナノリザーバを有する。ナノウエハは、明視野顕微鏡およびＦＥＳＥＭによって特性評価され、その構造上の完全性を判定する。初期研究は、１５％ポリマーの溶液が、さらなる処理を可能にするために十分に機械的に強固である、ナノウエハを形成することを示す。
【実施例６】
【０１６５】
ナノウエハのリザーバを薬物−ＰＬＧＡマトリクスで充填する
【０１６６】
そのように加工されたナノウエハは、超音波噴霧器またはマイクロ注入によって、薬物−ＰＬＧＡ溶液が充填される。１〜５％範囲内の薬物濃度の場合、溶液は、超音波噴霧器によって容易に噴霧されることができる。超音波噴霧器を使用したナノリザーバの充填は、ＰＶＡナノウエハの表面上に過剰薬物−ＰＬＧＡ溶液の薄フィルムを形成し、これは、かみそり刃を用いて、表面を掃引することによって除去されることができる。本プロセスでは、正しい溶媒の使用は、高速蒸発による薬物フィルムの早期形成を防止するために重要である。より高い薬物濃度（５〜２０％）の場合、溶液は、濃く、ナノウエハは、マイクロ注入によって充填される。薬物−ＰＬＧＡ溶液（１−２０％）の濃度は、要求される投薬および放出持続時間に好適であるように調節されることができる。
【実施例７】
【０１６７】
Ｄｅｘ−ナノウエハからのデキサメタゾンのインビトロ放出
【０１６８】
典型的研究では、Ｄｅｘ−ナノウエハ（１ｃｍ×１ｃｍ）が、３つの１０ｍｌガラスバイアルに別個に計量され、５ｍｌのＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ−２０（ｐＨ７．４）離型剤が、各バイアルに移される。これらのバイアルは、一定撹拌を用いて３７℃に維持されたオービタルシェーカー内に保たれる。２時間の時間間隔時、５ｍｌの離型剤が、バイアルから抜取され、同一量の新しい媒体と交換される。したがって、回収されたサンプルは、ガラスバイアルに移され、冷蔵庫内に保管される。離型剤のサンプリングは、５日間、継続され得る。各サンプルは、０．５μｍ注入器フィルタを通して濾過され、ＨＰＬＣ分析を受ける。本研究では、メタノール（９０％）および酢酸アンモニウム（１０％、ｐＨ７）の混合物が、０．２２μｍ膜フィルタを通した濾過後、移動相として使用される。
【実施例８】
【０１６９】
Ｄｅｘ−ナノウエハ内の総デキサメタゾン含有量の判定
【０１７０】
ナノウエハ内に装填されたデキサメタゾンの総量が、正確に計量されたデキサメタゾン−ナノウエハ（１ｃｍ×１ｃｍ）を５ｍｌ水中に溶解した後、エタノール（９ｍｌ）の添加によって判定される。沈殿したＰＶＡは、遠心分離によって除去される。透明溶液は、回転蒸発され、形成された固体は、１０ｍｌの移動相（９０％メタノールおよび１０％酢酸アンモニウム、ｐＨ７）内に再溶解される。本溶液の分割量が、０．５μｍ注入器フィルタを通して濾過され、ＨＰＬＣによって分析され、標準曲線と比較され、含有量を定量化する。本研究は、３回行われ得る。本研究から、ナノウエハの単位面積あたりのデキサメタゾンの量が、判定され得る。
【０１７１】
ＨＰＬＣ分析
【０１７２】
ＨＰＬＣ実験は、Ｈｉｔａｃｈｉ  ＬａＣｈｒｏｍ−７０００  ＨＰＬＣシステム上で行われる。分析用カラムは、Ｗａｔｅｒｓ製Ｘ−Ｔｅｒｒａ  Ｃ−１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）である。本システムは、自動サンプラ、インライン脱ガス装置、および、室温に設定されたカラムオーブンを具備する。移動相は、メタノール（９０％）および酢酸アンモニウム（１０％、ｐＨ７）の混合物であって、０．２２μｍ膜フィルタを通した濾過後、使用されるであろう。注入体積６５μｌ、流量率１．０ｍｌ／分、および、圧力１２００ｍｍである。デキサメタゾンは、２８０ｎｍにおけるＵＶ吸収によって検出され、滞留時間は、約２．１±０．１分である。デキサメタゾン濃度は、標準およびサンプルのピーク面積を比較することによって計算される。
【０１７３】
正確度および精度
【０１７４】
正確度および精度は、２００μｇ／ｍｌ濃度のデキサメタゾンを使用して査定される。行われる各一式の研究の開始および終了時、複製サンプルが、評価される。正確かつ精密な方法のために、％ＲＳＤ（相対標準偏差）は、少なくともある側面では、２．０％未満である。
【０１７５】
デキサメタゾン濃度の標準曲線の線形性
【０１７６】
線形性研究が、定量化の限界値から昇順に一連の濃度のデキサメタゾン溶液の単回測定によって行われる。得られたデータは、回帰係数（Ｒ２）の計算のために、統計的に処理される。ほとんどの状況下において、Ｒ２＝０．９９９である。Ｌａｍｂｅｒｔ  Ｂｅｅｒの法則に従う検出の線形範囲は、分析される薬物および使用される検出器に依存する。０．５μｇ／ｍｌおよび５０μｇ／ｍｌの濃度範囲内の薬物に対するＲ２値が、計算される。標準曲線は、少なくともある側面では、１〜５０μｇ／ｍｌ濃度のデキサメタゾンに完璧な線形性を示す。
【実施例９】
【０１７７】
薬物安定性分析
【０１７８】
デキサメタゾンが装填されたナノウエハが、異なる時間間隔で分析され、溶液が物理的および化学的ストレスから保護されている間の薬物のピーク面積の任意の変化を査定した。本研究のために、２８のデキサメタゾンナノウエハ（１ｃｍ×１ｃｍ）が、冷蔵条件下に保たれ、２８日間、２４時間間隔で分析された。ＨＰＬＣ分析は、付加的ピークが、デキサメタゾン以外、観察されなかったため、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｅｎ−２０中のデキサメタゾンが、２８日間、安定することを明らかにした。
【実施例１０】
【０１７９】
マウス涙液洗液の回収
【０１８０】
涙液洗液が、以前に報告された方法（Ｇｒａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８）によって回収される。簡潔に説明すると、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する１．５μＬのＰＢＳが、結膜嚢に滴下される。涙液は、外眼角内の涙液メニスカスから毛細管作用によって、１μＬ体積のガラス毛細管チューブ（Ｄｒｕｍｍｏｎｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏ．，  Ｂｒｏｏｍｈａｌｌ，  ＰＡ）を用いて回収される。涙洗液は、涙液アッセイが行われるまで、−８０℃で保管される。ｏｒｅｇｏｎ  ｇｒｅｅｎデキストランが装填されたナノウエハの場合、涙洗液内の濃度は、ｏｒｅｇｏｎ  ｇｒｅｅｎデキストランの標準曲線と比較される（５０μｇ／μｌから）。デキサメタゾンナノウエハから涙液内への薬物放出は、デキサメタゾン標準曲線を使用して測定される。
【実施例１１】
【０１８１】
コリン作動性受容体遮断および乾燥環境によるマウスにおけるドライアイの生成
【０１８２】
ドライアイの乾燥ストレス（ＤＳ）マウスモデルが、以前に報告されたように生成される。２．５ｍｇ／ｍＬ臭化水素酸スコポラミン、（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）の皮下注射が、１日４回、交互に側腹部に与えられる（Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２；Ｇａｙｔｏｎ，  ２００９）。６〜８週齢のメスＣ５７ＢＬ／６が、両側にスクリーンを伴う特別に設計されたケージ内に置かれ、次いで、５または１０日間、１日１６時間、チャンバ内に位置するファンの正面から６インチに置かれる。部屋の湿度は、３０％以下に維持される。
【実施例１２】
【０１８３】
ドライアイ誘発マウスにおける薬物−ナノウエハのインビボ有効性の評価
【０１８４】
ナノウエハのインビボ有効性は、角膜および結膜上皮アポトーシスを阻害することが分かっている抗ＩＦＮ−γを使用して、マウスドライアイモデルにおいて評価される（Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０１２；Ｇａｙｔｏｎ，  ２００９）。ドライアイの導入に先立って、マウスは、Ａｖｅｒｔｉｎで麻酔され、２ｍｍ円形ナノウエハが、鉗子を使用して、円蓋に隣接する下眼球結膜に適用される。ナノウエハは、結膜に接着し、瞬きに伴って移動しない。麻酔から回復後、ＤＳが、前述のように誘発される。対照マウスは、眼球局部治療を受けない。有効性パラメータとして、結膜杯細胞密度、杯細胞ムチンＭＵＣ５ＡＣ発現、ならびに、ＤＳの１０日後に得られた角膜および結膜組織切片内および溶解物（カスパーゼ３活性）内のアポトーシスのマーカー（ＴＵＮＥＬおよび活性化カスパーゼ３染色）が挙げられる。１ｍｇ／ｍｌの抗ＩＦＮγを含有するナノウエハが、最初に評価され、より高いまたは低い濃度が、生物学的応答に基づいて評価される。
【０１８５】
対照研究
【０１８６】
別のドライアイマウスの群は、ドライアイ誘発眼表面疾患の開発に及ぼすナノウエハ材料単独の効果を査定するために、デキサメタゾンに対する対照として空包ナノウエハまたは抗ＩＦＮ−γに対する対照としてラットＩｇＧ、１ｍｇ／ｍＬ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を受ける。空包およびＩｇＧが装填されたナノウエハは、薬物が装填されたナノウエハとして、同一の方法によって調製される。薬物が装填された群のために使用される有効性測定値が、評価され、結果が、薬物−ナノウエハ治療から得られたものと比較される。
【実施例１３】
【０１８７】
点眼薬を用いたドライアイ誘発マウスの局部治療
【０１８８】
ドライアイマウス群は、１０日間、１日２回、デキサメタゾン０．１％または抗ＩＦＮγ点眼薬（１０μＬの抗ＩＦＮγハイブリドーマ−１ｍｇ／ｍＬ、Ｒ４−６Ａ２；カタログ番号ＨＢ−１７０；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，  Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，  ＭＤ）を用いて治療される。ナノウエハ治療群で査定される同一のＧＣおよびアポトーシスマーカーも、１０日間、評価される。
【実施例１４】
【０１８９】
有効性パラメータの実施例
【０１９０】
過ヨウ素酸シッフ染色および杯細胞測定
【０１９１】
除核マウス眼が、１０％ホルマリン中に固定され、パラフィン内に埋め込まれる。眼球切片が、眼の中心で切断され、水晶体は、その最大直径を有する。切片は、杯細胞密度を測定するために、過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）試薬で染色され、デジタルカメラ（ＤＳ−Ｆｉ１を伴うＥｃｌｉｐｓｅ  Ｅ４００；Ｎｉｋｏｎ）を具備する顕微鏡を用いて検討および撮影される。上および下結膜内の杯細胞の数が、画像分析ソフトウェア（ＮＩＳ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，  バージョン３．０，  ＢＲ，  Ｎｉｋｏｎ）を使用して、各眼から３００ｍｍ離れた３つの切片内で測定され、杯細胞／ｍｍの数として表される。
【０１９２】
ＭＵＣ５ＡＣ  ＥＬＩＳＡ
【０１９３】
市販のマウスＭＵＣ５サブタイプＡＣ  ＥＬＩＳＡキットが、結膜溶解物中のＭＵＣ５ＡＣタンパク質の濃度を測定するために使用されてもよい。結果は、溶解物のタンパク質濃度によって正規化される。マウスドライアイモデルにおける組織学的切片内で測定されたＭＵＣ５ＡＣタンパク質のレベルと結膜杯細胞密度との間に良好な相関が存在する。
【０１９４】
眼表面上皮アポトーシスの査定
【０１９５】
ＴＵＮＥＬアッセイおよびカスパーゼ−３免疫染色
【０１９６】
ＴＵＮＥＬアッセイが、市販のキット（ＡｐｏｐＴａｇ；Ｉｎｔｅｒｇｅｎ  Ｃｏ，  Ｐｕｒｃｈａｓｅ，  ＮＹ）を使用して行われる。活性化カスパーゼ−３（５ｇ／ｍＬ；ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、カスパーゼ−８（未希釈血清、１：１００；Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，  Ｌｉｔｔｌｅｔｏｎ，  ＣＯ）、および、カスパーゼ−９（未希釈血清、１：１００；Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）に対して染色された低温切片が、ヤギ抗ウサギＡｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ  ４８８−共役抗体を使用して生成される。同時に行われる陰性対照は、一次抗体の代わりに、ＰＢＳでインキュベートされた切片から成る。中心角膜の代表的面積および結膜の杯細胞が豊富な面積のデジタル画像（５１２×５１２画素）が、レーザ走査共焦点顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ，  Ｔｈｏｒｎｗｏｏｄ，  ＮＹ）を用いて捕捉される。染色の強度は、ＮＩＳ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ（Ｎｉｋｏｎ）を使用して測定される。
【０１９７】
活性化カスパーゼ３、８、および、９に対する蛍光定量アッセイ
【０１９８】
カスパーゼ３、８、および、９の活性が、その個別の蛍光定量キット（それぞれ、Ｂｉｏｖｉｓｉｏｎ  Ｋ１０５−２５、Ｋ１１２−２５、および、Ｋ１８９−１００）の製造業者によって提供されるプロトコルに従って、角膜上皮および結膜生検において測定される。角膜上皮は、掻爬され、結膜は、外科手術的に切除され、キットを用いて提供される溶解バッファ中に設置される。溶解物のタンパク質濃度は、マイクロＢＳＡタンパク質アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ａｕｓｔｉｎ，  ＴＸ）を使用して測定され、５０μｇの角膜／結膜溶解物が、アッセイ毎に使用される。任意のタンパク質を伴わない溶解バッファは、空包対照としての役割を果たす。群／系統あたり５つのサンプルが、使用され、各サンプルは、４匹のマウスからの貯蔵された角膜または結膜サンプルから成る。蛍光光度が、４００−ｎｍ励起および５０５−ｎｍ放出フィルタを伴うＴｅｃａｎ  Ｓｐｅｃｔｒａ  Ｆｌｕｏｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒを使用して読み取られる。
【０１９９】
ＴＵＮＥＬおよびＭＵＣ５ＡＣ免疫染色
【０２００】
ＴＵＮＥＬアッセイが、市販のキット（ＡｐｏｐＴａｇ；Ｉｎｔｅｒｇｅｎ  Ｃｏ．，  Ｐｕｒｃｈａｓｅ，  ＮＹ）を使用して行われる。低温切片が、１％パラホルムアルデヒド中に固定され、２：１エタノール／酢酸溶液で透過処理される。サンプルは、３７℃で４時間、ＴｄＴ酵素および１１−ジゴキシゲニンｄＵＴＰでインキュベートされる。反応物を急冷後、サンプルは、遮断溶液で遮断され、室温で６０分間、抗ジゴキシゲニンＦＩＴＣ共役抗体でインキュベートされる。初期ＴＵＮＥＬ手技の完了後、低温切片は、説明されるように、ＭＵＣ５ＡＣの発現（ウサギ抗ＭＵＣ５ＡＣ一次抗体；１：１００、ｓｃ−２０１１８；Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）のために染色される。眼瞼結膜の代表的面積のデジタル画像（５１２×５１２画素）が捕捉され、２００μｍ長の区画内の結膜上皮中のＴＵＮＥＬ陽性細胞が、計数される。
【実施例１５】
【０２０１】
角膜シスチン症を治療するための制御放出性システアミンナノウエハ
【０２０２】
シスチン症は、腎臓、甲状腺、脳、および、眼を含む、種々の組織内のシスチン結晶の蓄積によって特徴付けられる、常染色体劣性リソソーム蓄積症である。本疾患は、リソソームからの二硫化物シスチンアミノ酸の輸送に関わる、膜貫通タンパク質である、シスチノシンをコードする、ＣＴＮＳ遺伝子（１７ｐ１３）の突然変異と結び付けられる。異なるＣＴＮＳ突然変異は、臨床疾患のスペクトルと関連付けられるが、しかしながら、角膜結晶は、あらゆる形態の疾患で存在する（図２０および２１）。
【０２０３】
経口システアミン（ＨＳ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ３）は、２０年にわたって、療法の中心である。システアミン中の遊離チオール基が、シスチンと反応し、単一硫化物アミノ酸システインに加え、システイン−システアミン混合二硫化物を産生し、それによって、輸送体欠陥を回避する。経口システアミンは、全体的予後を有意に完全するが、疾患の眼球兆候における改善は、全身治療を用いて実証されていない。毎時間適用される局部システアミンは、角膜結晶を減少させる際に効果的であるが、炎症、赤み、および、他の副作用の増加のため、非実践的であって、コンプライアンス不良につながる。角膜結晶の濃度増加と関連付けられた進行性羞明、再発性角膜びらん、および、視覚低下が、したがって、角膜シスチン症に罹患する個体にとって、主な長期的負担となる。本実施例では、従来の点眼薬製剤および長時間（１〜７日）の間の放出性システアミンの欠点を克服する、ナノウエハ薬物送達システムの開発が、説明される。
【０２０４】
５００ｎｍ直径ウェルを含有する例示的ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）ナノウエハが、システアミンおよびシステアミン−ＰＬＧＡマトリクスで充填された。したがって、加工されたナノウエハは、シスチノシン（Ｃｔｎｓ−／−）ノックアウトマウスにおいて、インビボ有効性に関して試験された。マウス角膜内のシステアミンナノウエハの潜在的角膜毒性（角膜間質混濁、角膜の血管新生、または、角膜上皮変化）が、ナノウエハ中の５つのシステアミン濃度５００、２００、１００、５０、および、０ｎｇ／ウエハ（０＝空包ウエハ）を試験することによって評価された。３〜５ヶ月齢の２５匹のＣＴＮＳ＋／−マウスが、群あたり５匹の動物を伴う５群に分割された。システアミンナノウエハが、１週間、３日毎に、各動物の右角膜に適用された。視認可能な角膜毒性は、空包ウエハあるいは５０または１００ｎｇ／ウエハ用量において認められなかった。４日目に、５００ｎｇ／ウエハ角膜の５０％が、角膜間質混濁を示し、７日目には、１００％が、間質混濁を示した。２００ｎｇシステアミン／ウエハ群の場合、１つの角膜が、７日目に、わずかな疑わしい角膜混濁を示した（図２２）。
【０２０５】
これらの結果に基づいて、１５０および１７５ｎｇ／ウエハのシステアミン濃度を伴うナノウエハで、角膜結晶濃度に及ぼす影響を評価した（図２２）。７月齢のＣＴＮＳ−／−マウスが、５匹の２つの群に分割された。基線角膜シスチン結晶体積が、各動物の右眼において、時間ゼロ時に、インビボ共焦点顕微鏡を使用して定量化された。１５０または１７５ｎｇ／ウエハのいずれかのシステアミンナノウエハが、２７日間、３日毎に右眼に設置された。２７日目に、角膜結晶体積が、インビボ共焦点顕微鏡を使用して、再測定された。結果は、角膜結晶体積が劇的に減少し（約９０％）、システアミンが毎時間投与されたシステアミン点眼薬と比較して、ナノウエハの有意に向上した有効性をもたらすことを実証した（図２３および２４）。
【実施例１６】
【０２０６】
眼の熱傷のための制御放出ナノウエハ
【０２０７】
眼の表面に対する化学的および熱的傷害は、失明を生じさせる潜在性が高い。これらの傷害は、多くの場合、角膜、結膜、および、眼瞼縁を被覆する上皮を損傷し、より重度の場合、これらの上皮を再生する幹細胞を破壊する。角膜に対するアルカリ熱傷は、重度かつ恒久的視力低下を生じさせ得る、深刻な問題である。多くの場合、支持間質細胞およびマトリクスが、損傷され、慢性炎症は、誘発される。炎症細胞（単球／マクロファージ、好中球）の出現、角膜細胞（主に、角化細胞）および上皮細胞の活性化、ならびに、後続間質血管新生が、角膜にアルカリ組織後損傷として伴う（Ｓａｉｋａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５）。さらに、重度の眼表面傷害を伴うほとんどの患者は、涙を産生する細胞の破壊のため、二次ドライアイを発症し、転帰を悪化させる。眼表面を潤滑化させることに加え、涙は、創傷修復ならびに炎症および組織破壊の抑制に不可欠な多数の成長および抗炎症因子を含有する。即時相または急性期が、傷害時に生じ、角膜および結膜上皮損傷またはネクローシス死ならびに間質、前房、毛様体、および、虹彩内への化学物質の侵入をもたらす。眼熱傷の後期（中間期から慢性期）が、翌日から数ヶ月にわたって生じ、長引く炎症および傷害に対する創傷治癒応答を制御するために、眼科的および眼科的専門家による医療および外科手術管理を要求する。
【０２０８】
眼表面外傷は、メタロプロテイナーゼの放出／活性化を誘発する。何十年にもわたって、眼表面化学的／熱的傷害は、創傷治癒段階の一部として、組織分解酵素の産生を刺激することが認識されている（Ｓｏｓｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００５，  Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００７）。メタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）を含むマトリクス分解酵素は、特に、ドライアイおよび眼球熱傷において、眼表面の炎症および創傷治癒応答における重要な因子として同定されている。創傷治癒の間のその誘発は、細胞外マトリクス再構築、サイトカイン活性化、および、脈管形成の調整に役割を果たすと考えられる（Ｃｏｒｒａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ，  ２００６）。ＭＭＰ族として、線維状コラーゲンタイプＩ、ＩＩ、および、ＩＩＩ型（ＭＭＰ−１，−８，−１３）を分解する、コラゲナーゼ；コラーゲンＩＶ、Ｖ、ＶＩＩ、および、Ｘ型、ならびに、基底膜（ＭＭＰ−２、−９）内に見出されるデコリン、フィブロネクチン、および、ラミニンを分解する、ゼラチナーゼ；ストロメライシン（ＭＭＰ−３および−１０）；プロテオグリカン、ラミニン、および、糖タンパク質（ＭＭＰ−７および−２６）を分解する、マトリリシン；ならびに上皮細胞膜に結合され、その構造および基質特異性に従って、ＭＭＰを活性化させることができる、膜型ＭＭＰ（ＭＭＰ−１４から−１７および−２４）に分割され得る、２５を超える要素が挙げられる。９−１２集合的に、これらは、細胞外マトリクスおよび基底膜成分全体を分解することが可能である。非創傷角膜ではほとんど検出されないが、ＭＭＰは、創傷治癒の間、顕著に誘発される。これらのうち、ＭＭＰ−９は、ストレスを受けた角膜および結膜上皮細胞によって産生されるという大きな役割を果たし、マトリクス分解性および炎症誘発性活性の両方を有する（Ｆｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ，  １９９２；Ｍａｔｓｕｂａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１）。
【０２０９】
眼球傷害のための新しい治療方式が、必要である。眼表面化学的／熱的傷害のための療法方式が、急性期の間、上皮治癒を助長し、炎症および組織分解を抑制することを目的として進められている（Ｒｅｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）。解剖学的続発症を含む、慢性期の治療は、時として、集学的アプローチ、および、非常に多くの場合、羊膜移植または幹細胞移植等の外科手術手技を要求する。２８これらのアプローチは、若干、改善された視覚的転帰を改善するがこれらの傷害からの視覚的転帰は、依然として、主に、創傷治癒応答の炎症およびタンパク質分解成分の不適正な制御のため、不良のままである。
【０２１０】
ナノウエハ眼球薬物送達システムの開発の必要性。点眼薬の形態での眼への治療薬剤の送達は、これまで、治療の最も効果的形態である。これは、薬物送達の非常に単純な形態であるが、薬物は、短時間（約３０分）の間のみ、利用可能であって、薬物の大部分は、眼角から、または、鼻の中の排出管への吸収によって損失されるであろう。局所送達はまた、薬物装填粒子を含有する点眼薬懸濁液を使用することによって達成されることができる。マイクロ／ナノ粒子ベースの送達システムは、調製が容易であるが、ある制限、すなわち、（ａ）低薬物装填、（ｂ）バースト薬物放出動態、（ｃ）潜在的に、感染症につながる、眼内のナノ／マイクロ粒子の凝集、および、（ｄ）嚢胞形成につながる、これらの凝集の周囲の瘢痕組織の成長を呈する。故に、高薬物含有量および長期薬物放出属性を伴う、プログラム可能薬物送達システムの開発が非常に必要とされる。
【０２１１】
抗炎症剤の長期投与のための制御放出ナノウエハ薬物送達システムは、失明に至る眼傷害および感染症の管理の大きな前進となるであろう。制御放出薬物送達システムとしての役割を果たし、眼を感染症から保護するための機械的障壁を提供し、消失（生体分解／溶解）することができる、ナノウエハ薬物送達デバイスの開発が、最も望ましい。いくつかの保護コンタクトレンズが、市場にあるが、これらの機能を効果的に果たすことができる、現在利用可能なデバイスはない。これらの問題に対処するために、我々は、ナノウエハ薬物送達システムを開発し、眼球熱傷マウスモデルにおいて、その有効性を評価した。
【０２１２】
ナノウエハからのインビボ薬物放出。高速（３〜５日）分解可能ドキシサイクリンナノウエハを使用して、ナノウエハの設置後、６時間〜７日にわたって、眼の連続撮影を行った。ｄｏｘｙ−ナノウエハの自己蛍光の強度が、マイクロウエハによって占有される総面積を境界することによって、デジタル画像内で測定され、結果が、群内で平均化された。我々の結果は、図２５に示され、３−ｍｍのｄｏｘｙ−ナノウエハの初期溶解は、設置後６時間で見られ、その消失は、７日の周期に及び得る。自己蛍光は、マイクロウエハ内の薬物含有量に反比例する。
【０２１３】
ドキシサイクリンまたはデキサメタゾンのいずれかを用いた局部治療は、ＯＢ＋ＤＳを受けた角膜の運命を有意に変化させる。４回／日の従来の局部ドキシサイクリン点眼薬を受けた角膜は、角膜穿孔の数を有意に低下させ、初期損傷の２日後、ＩＬ−１β、ＭＭＰ３、−８、−９発現を有意に減少させた（図２６）。これらの結果は、早期療法が眼球傷害の管理に必須であることを示す。
【０２１４】
ナノウエハは、接触保護レンズとして作用する。我々の結果は、ナノウエハとＰＶＡ媒介体の併用が、機械的障壁のため、従来の点眼薬よりさらなる保護をもたらし（図２５Ｂ）、治癒上皮を眼表面内のプロテアーゼおよび炎症性サイトカインから保護することを示す。これらの結果は、従来の点眼薬療法に優るナノウエハが装填された薬物の使用のさらなる利点を示す。
【０２１５】
ドキシサイクリンまたはデキサメタゾンが装填されたマイクロウエハはさらに、局部薬物と比較して、ＯＢ＋ＤＳを受けた角膜の遺伝子発現を減少させる。薬物が装填されたナノウエハは、媒介体マイクロウエハの局部治療と比較して、炎症／プロテアーゼメディエーターの発現をさらに減少させることによって、ＯＢ＋ＤＳを受けた角膜にさらなる保護を提供する（図２５Ｃおよび２５Ｄ）。
【０２１６】
本開示の実施形態およびその利点が、詳細に説明されたが、種々の変更、代用、および、改変が、添付の請求項によって定義される本開示の精神および範囲から逸脱することなく、本明細書に行なわれ得ることを理解されたい。加えて、本開示によって教示される方法および装置は、無機物および流体の原位置水素化の分野にも明確かつ明白な用途を有する。さらに、本願の範囲は、本明細書に説明されるプロセス、機械、製造、組成物、手段、方法、および、ステップの特定の実施形態に制限されることを意図しない。当業者が、本開示の開示から容易に理解するであろうように、本明細書に説明される対応する実施形態と実質的に同一の機能を行なう、または、実質的に同一の結果を達成する、既存のまたは後に開発される、プロセス、デバイス、製造、組成物、手段、方法、または、ステップは、本開示に従って利用されてもよい。故に、添付の請求項は、その範囲内に、そのようなプロセス、デバイス、製造、組成物、手段、方法、または、ステップを含むものと意図される。
【０２１７】
参考文献
以下の刊行物は、各個々の刊行物が、参照することによって組み込まれるように具体的かつ個々に示される場合と同様に、参照することによって本明細書に組み込まれる。
【０２１８】
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【０２１９】
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Ｄａｒｔｔ  ＤＡ，  Ｈｏｄｇｅｓ  ＲＲ，  Ｚｏｕｋｈｒｉ  Ｄ．  Ｔｅａｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ．  Ｉｎ：  Ｆｉｓｃｈｂａｒｇ  Ｊ．  （ｅｄｉｔｏｒ）  Ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｙｅ．  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ２１−８２．
【０２４７】
Ｄｅ  Ｃａｍｐｏｓ，  Ａ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００１）  Ｃｈｉｔｏｓａｎ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ：  ａ  ｎｅｗ  ｖｅｈｉｃｌｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｄｒｕｇｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｏｃｕｌａｒ  ｓｕｒｆａｃｅ．  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ  Ａ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  ２２４，  １５９−１６８．
【０２４８】
ｄｅ  ｌａ  Ｆｕｅｎｔｅ  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｈｉｔｏｓａｎ−ｂａｓｅｄ  ｎａｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ：  ａ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｐｌａｔｆｏｒｍ  ｆｏｒ  ｏｃｕｌａｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．  Ａｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．  Ｒｅｖ．  ２０１０；  ６２：１００−１１７．
【０２４９】
Ｄｅ  Ｐａｉｖａ  ＣＳ，  Ｃｈｏｔｉｋａｖａｎｉｃｈ  Ｓ，  Ｐａｎｇｅｌｉｎａｎ  ＳＢ，  ｅｔ  ａｌ．  ＩＬ−１７  ｄｉｓｒｕｐｔｓ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｄｅｓｉｃｃａｔｉｎｇ  ｓｔｒｅｓｓ．  Ｍｕｃｏｓａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００９；２：２４３−５３．
【０２５０】
ｄｅ  Ｐａｉｖａ  ＣＳ，  Ｃｏｒｒａｌｅｓ  ＲＭ，  Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌ  ＡＬ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ  ａｎｄ  ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ  ｓｕｐｐｒｅｓｓ  ＭＭＰ−９  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  ＭＡＰＫ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｄｒｙ  ｅｙｅ．  Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ２００６；８３：５２６−５３５．
【０２５１】
ｄｅ  Ｐａｉｖａ  ＣＳ，  Ｃｏｒｒａｌｅｓ  ＲＭ，  Ｖｉｌｌａｒｒｅａｌ  ＡＬ，  Ｆａｒｌｅｙ  Ｗ，  Ｌｉ  Ｄ−Ｑ，  Ｓｔｅｒｎ  ＭＥ，  Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒ  ＳＣ．  Ａｐｉｃａｌ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｕｒｉｎｅ  ｄｒｙ  ｅｙｅ  ｉｓ  ａｂｒｏｇａｔｅｄ  ｂｙ  ｍｅｔｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ  ａｎｄ  ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ２００６；４７：２８４７−２８５６．
【０２５２】
ＤｅＳｔａｆｅｎｏ  ＪＪ，  Ｋｉｍ  Ｔ．  Ｔｏｐｉｃａｌ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ．  Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ２００７；１２５：８３４−８３６．
【０２５３】
Ｄｉｅｂｏｌｄ  Ｙ，  Ｃａｌｏｎｇｅ  Ｍ．  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｉｎ  ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｔｉｎａ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２０１０；２９：５９６−６０９．
【０２５４】
Ｅｌ−Ｇａｚａｙｅｒｌｙ，  Ｏ．Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｃｅｔａｚｏｌａｍｉｄｅ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ａｓ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  １５８，  １２１−１２７．
【０２５５】
Ｅｙｅ  ｈｅａｌｔｈ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ａｔ  ａ  ｇｌａｎｃｅ，  Ｃｏｍｐｉｌｅｄ  ｂｙ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，  Ａｐｒｉｌ  ２０１１  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａａｏ．ｏｒｇ／ｎｅｗｓｒｏｏｍ／ｕｐｌｏａｄ／Ｅｙｅ−Ｈｅａｌｔｈ−Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ−Ａｐｒｉｌ−２０１１．ｐｄｆ
【０２５６】
Ｆａｎｔｉｎ，  Ａ．，  Ｖｉｅｉｒａ，  Ｊ．  Ｍ．，  Ｇｅｓｔｒｉ，  Ｇ．，  Ｄｅｎｔｉ，  Ｌ．，  Ｓｃｈｗａｒｚ，  Ｑ．，  Ｐｒｙｋｈｏｚｈｉｊ，  Ｓ．，  Ｐｅｒｉ，  Ｆ．，  Ｗｉｌｓｏｎ，  Ｓ．  Ｗ．  ａｎｄ  Ｒｕｈｒｂｅｒｇ，  Ｃ．  （２０１０）  ‘Ｔｉｓｓｕｅ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ａｃｔ  ａｓ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｈａｐｅｒｏｎｅｓ  ｆｏｒ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓ  ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ  ｏｆ  ＶＥＧＦ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｔｉｐ  ｃｅｌｌ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ’，  Ｂｌｏｏｄ  １１６（５）：  ８２９−８４０．
【０２５７】
ＦＤＡ，  Ｃｈｉｒｏｎ  Ｖｉｓｉｏｎ  ｆｉｌｅｓ  ＦＤＡ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｍａｒｋｅｔ  ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ  ｉｍｐｌａｎｔ  ｆｏｒ  ＣＭＶ  ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ．  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｉｎｔ  Ａｓｓｏｃ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ  ＡＩＤＳ  Ｃａｒｅ，１９９５．  １（６）：  ｐ．  ３７．
【０２５８】
Ｆｉａｌｈｏ，  Ｓ．Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｎｅｗ  ｖｅｈｉｃｌｅ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ａ  ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｏｐｉｃａｌ  ｏｃｕｌａｒ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ．  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ３２，  ６２６−６３２．
【０２５９】
Ｆｌａｃｈ，  Ａ．，  Ｔｈｅ  ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ  Ｏｃｕｓｅｒｔ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ．  Ｔｒａｎｓ  Ｐａｃ  Ｃｏａｓｔ  Ｏｔｏｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｓｏｃ  Ａｎｎｕ  Ｍｅｅｔ，  １９７４．  ５５：  ｐ．  １７９−２０８．
【０２６０】
Ｆｒａｎｃｏｕｅｒ  Ｍ，  Ａｈｍｅｄ  Ｉ，  Ｓｉｔｅｋ  Ｓ，  Ｐａｔｔｏｎ  ＴＦ．  Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ．  ＩＩＩ．  Ｃｏｒｎｅａｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  １９８３；  １６：２０３−２１３．
【０２６１】
Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈ  ＳＷ，  Ｃｈｅｎｇ  Ｙ−Ｌ，  Ｓａｖｉｌｌｅ  ＢＡ．  Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ  ｃｏｒｎｅａ１  ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｉｏｎｉｚａｂｌｅ  ｄｒｕｇｓ．  Ｊ．  Ｏｃｕｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １９９３；  ９：２２９−２４９．
【０２６２】
Ｇａｇｅｎ  Ｄ，  Ｌａｕｂｉｎｇｅｒ  Ｓ，  Ｌｉ  Ｚ  ｅｔ  ａｌ．  ＩＣＡＭ−１  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｓ  ａｎｄ  ｋｅｒａｔｏｃｙｔｅｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ａｂｒａｓｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ．  Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２０１０；９１：６７６−８４．
【０２６３】
Ｇａｒｃｉａ−Ｈｉｒｓｃｈｆｅｌｄ  Ｊ，  Ｌｏｐｅｚ−Ｂｒｉｏｎｅｓ  ＬＧ，  Ｂｅｌｍｏｎｔｅ  Ｃ：  Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ  ｏｎ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ．  Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  １９９４，  ５９：５９７−６０５．
【０２６４】
Ｇａｒｈｗａｌ  Ｒ，  Ｓｈａｄｙ  ＳＦ，  Ｅｌｌｉｓ  ＥＪ，  Ｅｌｌｉｓ  ＪＹ，  Ｌｅａｈｙ  ＣＤ，  ＭｃＣａｒｔｈｙ  ＳＰ，  Ｃｒａｗｆｏｒｄ  ＫＳ，  Ｇａｉｎｅｓ  Ｐ．  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ  ｕｓｉｎｇ  ｎａｎｏｓｐｈｅｒｅｓ  ａｎｄ  ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ２０１２；５３：  １３４１−１３５２．
【０２６５】
Ｇａｒｔｙ，  Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ  ｉｎ  ｓｕｂｍｉｃｒｏｎ  ｅｍｕｌｓｉｏｎ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｃｕｌａｒ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ：  ａ  ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｃｌｉｎｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｖｉｓ．  Ｓｃｉ．  ３５，  ２１７５．
【０２６６】
Ｇａｕｄａｎａ  Ｒ，  Ａｎａｎｔｈｕｌａ  ＨＫ，  Ｐａｒｅｎｋｙ  Ａ，  Ｍｉｔｒａ  ＡＫ．  Ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ａｍ  Ａｓｓｏｃ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｊ．  ２０１０；１２：３４８−３６０．
【０２６７】
Ｇａｕｄａｎａ  Ｒ，  Ｊｗａｌａ  Ｊ，  Ｂｏｄｄｕ  ＳＨＳ，  Ｍｉｔｒａ  ＡＫ．  Ｒｅｃｅｎｔ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  ２００８；２６：１１９７−１２１６．
【０２６８】
Ｇａｙｔｏｎ，  ＪＬ．  Ｅｔｉｏｌｏｇｙ，  ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ，  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｄｒｙ  ｅｙｅ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ３：４０５−４１２，  ２００９．
【０２６９】
Ｇｅｒｓｈｋｏｖｉｃｈ  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｉｐｉｄ−ｂａｓｅｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ，ｄｅｒｍａｌ，  ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ，  ａｎｄ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ｃｒｉｔ．  Ｒｅｖ．  Ｔｈｅｒ．  Ｄｒｕｇ  ２００８；  ２５：５４５−５８４．
【０２７０】
Ｇｅｒｔｅｎ  Ｇ．  Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  （ａｖａｓｔｉｎ）  ａｎｄ  ａｒｇｏｎ  ｌａｓｅｒ  ｔｏ  ｔｒｅａｔ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ｓｕｒｇｅｒｙ．  Ｃｏｒｎｅａ．  ２００８；２７：１１９５−１１９９．
【０２７１】
Ｇｉｐｓｏｎ  Ｉ．Ｋ，  Ａｒｇｕｅｓｏ  Ｐ．  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｍｕｃｉｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｒｎｅａｌ  ａｎｄ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａ．  Ｉｎｔ．  Ｒｅｖ．  Ｃｙｔｏｌ．  ２００３；  ２３１：１−４９．
【０２７２】
Ｇｉｐｓｏｎ  ＩＫ．  Ｔｈｅ  ｏｃｕｌａｒ  ｓｕｒｆａｃｅ：  Ｔｈｅ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｔｏ  ｅｎａｂｌｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｃｔ  ｖｉｓｉｏｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉ．  ２００７；４８：４３９１−４３９８．
【０２７３】
Ｇｏｕｌｄ，  Ｄ．  Ｊ．，  Ｖａｄａｋｋａｎ，  Ｔ．  Ｊ．，  Ｐｏｃｈｅ，  Ｒ．  Ａ．  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，  Ｍ．  Ｅ．  （２０１１）  ‘Ｍｕｌｔｉｆｒａｃｔａｌ  ａｎｄ  ｌａｃｕｎａｒｉｔｙ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ’，  Ｍｉｃｒｏｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １８（２）：  １３６−５１．
【０２７４】
Ｇｒａｓｓ  ＧＭ，  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  Ｊ．Ｒ．  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｄｒｕｇ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ＩＩ：  Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｍｏｖｅｍｅｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  １９８８；  ７７，  １５−２３．
【０２７５】
Ｇｕｌｓｅｎ  Ｄ，  Ｃｈａｕｈａｎ  Ａ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓｅｓ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ４５：  ２３４２−２３４７，  ２００４．
【０２７６】
Ｈａｒｍｉａ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９８６）  Ａ  ｓｏｌｉｄ  ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｙｅ：  ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎ  ｉｎ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ．  Ｊ．  Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌ．  ３，  ３−１２．
【０２７７】
Ｈｅ  Ｃ，  Ｋｉｍ  ＳＷ，  Ｌｅｅ  ＤＳ，  Ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｇｅｌｌｉｎｇ  ｓｔｉｍｕｌｉ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｂｌｏｃｋ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ  ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，  Ｊ．  Ｃｏｎｔｒｏｌ．  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２００８；１２７：１８９−２０７．
【０２７８】
Ｈｉｔｚｅｎｂｅｒｇｅｒ  ＣＫ，  Ｂａｕｍｇａｒｔｎｅｒ  Ａ，  Ｄｒｅｘｌｅｒ  Ｗ，  Ｆｅｒｃｈｅｒ  ＡＦ．  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｉｃ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  ｗｉｔｈ  ｍｉｃｒｏｍｅｔｅｒ  ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ．  Ａｍ．  Ｊ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １９９４；  １１８：４６８−４７６．
【０２７９】
Ｈｕａｎｇ  ＡＪＷ，  Ｔｓｅｎｇ  ＳＣＧ，  Ｋｅｎｙｏｎ  ＫＲ．  Ｐａｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｃｏｒｎｅａ１  ａｎｄ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｖｉｓ．  Ｓｃｉ．  １９８９；  ３０：６８４−６８９．
【０２８０】
Ｉｒａｃｈｅ，  Ｊ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ａｌｂｕｍｉｎ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒａｌ  ｄｒｕｇｓ．  Ｍｉｎｉ．  Ｒｅｖ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ５，  ２９３−３０５．
【０２８１】
Ｊａｆｆｅ，  Ｇ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｆｌｕｏｃｉｎｏｌｏｎｅ  ａｃｅｔｏｎｉｄｅ  ｉｍｐｌａｎｔ  （Ｒｅｔｉｓｅｒｔ）  ｆｏｒ  ｎｏｎｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｕｖｅｉｔｉｓ：  ｔｈｉｒｔｙ−ｆｏｕｒ−ｗｅｅｋ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，  ２００６．  １１３（６）：  ｐ．  １０２０−７．
【０２８２】
Ｊｕｎｇ  ＨＪ，  Ｃｈａｕｈａｎ  Ａ．  Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓｅｓ  ｆｏｒ  ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２０１２；３３：２２８９−２３００．
【０２８３】
Ｋａｎｅ，  Ｆ．Ｅ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｌｕｖｉｅｎ：  ａ  ｎｅｗ  ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｆｏｒ  ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｅｙｅ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ，  ２００８．  ５（９）：  ｐ．  １０３９−４６．
【０２８４】
Ｋａｐｏｏｒ  Ｙ，  Ｃｈａｕｈａｎ  Ａ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  Ａ  ｆｒｏｍ  Ｂｒｉｊ−９７  ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ−ｌａｄｅｎ  ｐ−ＨＥＭＡ  ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  ２００８；  ３６１：２２２−２２９．
【０２８５】
Ｋｈａｌｉｌ，  Ｒ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ  ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ．  Ｅｇｙｐｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａ．  Ｓｃｉ．  ３３，  ６６７−６６８
【０２８６】
Ｋｒｉｓｔｉｎｓｓｏｎ  ＪＫ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ−ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ−ｐｏｌｙｍｅｒ  ｃｏ−ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｉｎ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｅｙｅ  ｄｒｏｐｓ．  Ａｑｕｅｏｕｓ  ｈｕｍｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  Ｖｉｓ．  Ｓｃｉ．  ３７，  １１９９−１２０．
【０２８７】
Ｋｕｂｉｌｕｓ  ＪＫ，  Ｌｉｎｓｅｎｍａｙｅｒ  ＴＦ：  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｉｎｎｅｒｖａｔｉｏｎ：  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｎｅｒｖｅｓ  ａｎｄ  ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ  ａｐｉｃａｌ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２０１０，  ５１：７８２−７８９．
【０２８８】
Ｋｕｎｏ  Ｎ，  Ｆｕｊｉｉ  Ｓ．  Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ．  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２０１１；３：１９３−２２．
【０２８９】
Ｌｅｄｅｒｅｒ  ＣＭ，  Ｈａｒｏｌｄ  ＲＥ．  Ｄｒｏｐ  ｓｉｚｅ  ｏｆ  ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ  ｇｌａｕｃｏｍａ  ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ａｍ．  Ｊ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １９８６；１０１：  ６９１−６９４．
【０２９０】
Ｌｅｅ  Ｙ−Ｈ，  Ｋｏｍｐｅｌｌａ  ＵＢ，  Ｌｅｅ  ＶＨＬ．  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｏｆ  ｔｏｐｉｃａｌｌｙ  ａｐｐｌｉｅｄ  β−ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｒａｂｂｉｔ．  Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  １９９３；  ５７：３４１−３４９．
【０２９１】
Ｌｅｅ，  Ｐ．，  Ｙ．  Ｓｈｅｎ，  ａｎｄ  Ｍ．  Ｅｂｅｒｌｅ，  Ｔｈｅ  ｌｏｎｇ−ａｃｔｉｎｇ  Ｏｃｕｓｅｒｔ−ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｇｌａｕｃｏｍａ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，  １９７５．  １４（１）：  ｐ．  ４３−６．
【０２９２】
Ｌｅｓｌｉｅ−Ｂａｒｂｉｃｋ，  Ｊ．  Ｅ．，  Ｓａｉｋ，  Ｊ．  Ｅ．，  Ｇｏｕｌｄ，  Ｄ．  Ｊ．，  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，  Ｍ．  Ｅ．  ａｎｄ  Ｗｅｓｔ，  Ｊ．  Ｌ．  （２０１１）  ‘Ｔｈｅ  ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）  ｄｉａｃｒｙｌａｔｅ  ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ  ｂｙ  ａｎ  ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  ＶＥＧＦ−ｍｉｍｅｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ’，  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ３２（２５）：  ５７８２−９．
【０２９３】
Ｌｉ  Ｘ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｎａｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ  ｌｉｐｉｄ  ｃａｒｒｉｅｒｓ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  ２００８；  ３６３：１７７−１８２．
【０２９４】
Ｌｉ  Ｚ，  Ｂｕｒｎｓ  ＡＲ，  Ｂｙｅｓｅｄａ  ＭＳ，  Ｓｍｉｔｈ  ＣＷ．  ＣＣＬ２０，  ｛ｇａｍｍａ｝｛ｄｅｌｔａ｝  Ｔ  ｃｅｌｌｓ，  ａｎｄ  ＩＬ−２２  ｉｎ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｈｅａｌｉｎｇ．  ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ２０１１；２５：２６５９−６８．
【０２９５】
Ｌｉ  Ｚ，  Ｂｕｒｎｓ  ＡＲ，  Ｈａｎ  Ｌ，  Ｒｕｍｂａｕｔ  ＲＥ，  Ｓｍｉｔｈ  ＣＷ．  ＩＬ−１７  ａｎｄ  ＶＥＧＦ  ａｒｅ  ｎｅｃｅｓｓａｒｙ  ｆｏｒ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｎｅｒｖｅ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．  Ａｍｅｒ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ２０１１；１７８：１１０６−１６．
【０２９６】
Ｌｉ  Ｚ，  Ｂｕｒｎｓ  ＡＲ，  Ｓｍｉｔｈ  ＣＷ．  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ−１−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｗｏｕｎｄ  ｈｅａｌｉｎｇ．  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００６；１６９：１５９０−６００．
【０２９７】
Ｌｉ  Ｚ，  Ｂｕｒｎｓ  ＡＲ，  Ｓｍｉｔｈ  ＣＷ．  Ｔｗｏ  ｗａｖｅｓ  ｏｆ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｅｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ａｂｒａｓｉｏｎ：  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２００６；４７：１９４７−５５．
【０２９８】
Ｌｉ  Ｚ，  Ｒｕｍｂａｕｔ  ＲＥ，  Ｂｕｒｎｓ  ＡＲ，  Ｓｍｉｔｈ  ＣＷ．  Ｐｌａｔｅｌｅｔ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｃｏｒｎｅａｌ  Ａｂｒａｓｉｏｎ  Ｉｓ  Ｎｅｃｅｓｓａｒｙ  ｆｏｒ  Ａｃｕｔｅ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  Ｒｅ−ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２００６；４７：４７９４−８０２．
【０２９９】
Ｌｉａｗ  Ｊ，  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＪＲ．  （１９９２）  Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｏｎ  ｃｏｒｎｅａ１  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｒｓ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  １９９２；  ８８：１２５−１４０．
【０３００】
Ｌｉａｗ  Ｊ，  Ｒｏｊａｎａｓａｋｕｌ  Ｙ，  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＪＲ．  Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｃｈａｒｇｅ  ｔｙｐｅ  ａｎｄ  ｃｈａｒｇｅ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｏｎ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  １９９２；  ８８：１１１−１２４．
【０３０１】
Ｌｉｍ，  Ｌ．Ｌ．，  Ｊ．Ｒ．  Ｓｍｉｔｈ，  ａｎｄ  Ｊ．Ｔ．  Ｒｏｓｅｎｂａｕｍ，  Ｒｅｔｉｓｅｒｔ  （Ｂａｕｓｃｈ  ＆  Ｌｏｍｂ／Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）．  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ，  ２００５．  ６（１１）：  ｐ．  １１５９−６７．
【０３０２】
Ｌｉｕ  Ｑ，  Ｓｍｉｔｈ  ＣＷ，  Ｚｈａｎｇ  Ｗ，  Ｂｕｒｎｓ  ＡＲ，  Ｌｉ  Ｚ．  ＮＫ  Ｃｅｌｌｓ  Ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｔｈｅ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｃｏｒｎｅａｌ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ａｂｒａｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒｅｂｙ  Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｗｏｕｎｄ  Ｈｅａｌｉｎｇ．  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ２０１２．
【０３０３】
Ｌｏｆｔｓｓｏｎ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ  ｏｎ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｆｒｏｍ  ａｑｕｅｏｕｓ  ２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ−s−ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  １０４，  １８１−１８４．
【０３０４】
Ｌｏｐｅｚ  ＢＤ，  Ｕｂｅｌｓ  ＪＬ．  Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  ｔｅａｒ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄａｍａｇｅｄ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ．  Ｃｏｒｎｅａ．  １９９３；１２：１１５−１２０．
【０３０５】
Ｌｏｐｅｚ  ＢＤ，  Ｕｂｅｌｓ  ＪＬ．  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｂａｒｒｉｅｒ：  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  ｔｅａｒｓ  ａｎｄ  ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ．  Ｃｕｒｒ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  １９９１；１０：６４５−６５６．
【０３０６】
Ｌｕｏ  Ｌ，  Ｌｉ  ＤＱ，  Ｄｏｓｈｉ  Ａ，  Ｆａｒｌｅｙ  Ｗ，  Ｃｏｒｒａｌｅｓ  ＲＭ，  Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒ  ＳＣ．  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｄｒｙ  ｅｙｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ＭＭＰ−９  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ＭＡＰＫ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｏｃｕｌａｒ  ｓｕｒｆａｃｅ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ２００４；４５：４２９３−４３０１．
【０３０７】
Ｍａｃｋ  ＢＣ，  Ｗｒｉｇｈｔ  ＫＷ，  Ｄａｖｉｓ，  ＭＥ．  Ａ  ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ｆｉｌａｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ｊ．  Ｃｏｎｔｒｏｌ．  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２００９；  １３９：２０５−２１１
【０３０８】
Ｍａｃｋｉｅ  ＩＡ：  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｎｅｒｖｅｓ  ｉｎ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｒｎｅａ．  Ｔｒａｎｓ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｓｏｃ  ＵＫ  １９７８，  ９８：３４３−３４７．
【０３０９】
Ｍａｃｏｕｌ，  Ｋ．Ｌ．  ａｎｄ  Ｄ．  Ｐａｖａｎ−Ｌａｎｇｓｔｏｎ，  Ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ  ｏｃｕｓｅｒｔ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｏｃｕｌａｒ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．  Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，  １９７５．  ９３（８）：  ｐ．  ５８７−９０．
【０３１０】
Ｍａｈｍｏｕｄ  ＳＳ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ  ｆｏｒ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ２００８；  ９７：２６９１−２７０１  
【０３１１】
Ｍａｎｎｅｒｍａａ  Ｅ，  Ｖｅｌｌｏｎｅｎ  Ｋ−Ｓ，  Ｕｒｔｔｉ  Ａ．  Ｄｒｕｇ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｉｎ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ  ａｎｄ  ｂｌｏｏｄ−ｒｅｔｉｎａ  ｂａｒｒｉｅｒ：  Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ  ｉｎ  ｏｃｕｌａｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ．  Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．  ２００６；５８：１１３６−１１６３．
【０３１２】
Ｍａｒｅｎ  ＴＨ，  Ｊａｎｋｏｗｓｋａ  Ｌ．  Ｏｃｕｌａｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅｓ：  ｔｈｅ  ｃｏｒｎｅａ  ａｓ  ｂａｒｒｉｅｒ  ａｎｄ  ｄｅｐｏｔ．  Ｃｕｒｒ．  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  １９８５；  ４：３９９−４０８．
【０３１３】
Ｍａｕｒｉｃｅ  ＤＭ，  Ｍｉｓｈｉｍａ  Ｓ．  Ｏｃｕｌａｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ．  Ｓｅａｒｓ，  ＭＣ  （Ｅｄ．），  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．  ６９，  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｙｅ．  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  Ｂｅｒｌｉｎ−Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  １９８４；１９−１１６．
【０３１４】
Ｍｅｓｅｇｕｅｒ  Ｇ，  Ｇｕｒｎｙ  Ｒ，  Ｂｕｒｉ  Ｐ，  Ｒｏｚｉｅｒ  Ａ，  Ｐｌａｚｏｎｎｅｔ  Ｂ．  Ｇａｍｍａ  ｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｉｃ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｐｒｅｃｏｒｎｅａｌ  ｄｒａｉｎａｇｅ  ａｎｄ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｉｏｔｉｃ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ  ｏｆ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  １９９３；  ９５：２２９−２３４．
【０３１５】
Ｍｉｌｊａｎｏｖｉａｅ  Ｂ，  Ｄａｎａ  Ｒ，  Ｓｕｌｌｉｖａｎ  ＤＡ，  Ｓｃｈａｕｍｂｅｒ  ＤＡ．  Ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｄｒｙ  ｅｙｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｏｎ  ｖｉｓｉｏｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｆｅ．  Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ２００７；１４３：４０９−４１５．
【０３１６】
Ｍｉｓｈｉｍａ  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｅａｒ  ｖｏｌｕｍｅ  ａｎｄ  ｔｅａｒ  ｆｌｏｗ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １９６６；  ５：  ２６４−２７６．
【０３１７】
Ｍｉｔｒａ  ＡＫ，  Ｍｉｋｋｅｌｓｏｎ  ＴＪ．  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｃｏｒｎｅａｌ  ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  １９８８；７７：７７１−７７５．
【０３１８】
Ｍｏｏｎ，  Ｊ．  Ｊ．，  Ｓａｉｋ，  Ｊ．  Ｅ．，  Ｐｏｃｈｅ，  Ｒ．  Ａ．，  Ｌｅｓｌｉｅ−Ｂａｒｂｉｃｋ，  Ｊ．  Ｅ．，  Ｌｅｅ，  Ｓ．  Ｈ．，  Ｓｍｉｔｈ，  Ａ．  Ａ．，  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，  Ｍ．  Ｅ．  ａｎｄ  Ｗｅｓｔ，  Ｊ．  Ｌ．  （２０１０）  ‘Ｂｉｏｍｉｍｅｔｉｃ  ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ’，  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ３１（１４）：  ３８４０−７．
【０３１９】
Ｍｕｌｌｅｒ  ＬＪ，  Ｍａｒｆｕｒｔ  ＣＦ，  Ｋｒｕｓｅ  Ｆ，  Ｔｅｒｖｏ  ＴＭ：  Ｃｏｒｎｅａｌ  ｎｅｒｖｅｓ：  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，  ｃｏｎｔｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．  Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２００３，  ７６：５２１−５４２．
【０３２０】
Ｎａｇｅｌｈｏｕｔ  ＴＪ，  Ｇａｍａｃｈｅ  ＤＡ，  Ｒｏｂｅｒｔｓ  Ｌ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｅａｒ  ｆｉｌｍ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｉｎｊｕｒｙ  ｂｙ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｉｎ  ａ  ｒａｂｂｉｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｌａｃｒｉｍａｌ  ｇｌａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｒｙ  ｅｙｅ．  Ｊ  Ｏｃｕ  Ｐｈａｒｍａｃｏ  Ｔｈｅｒ．  ２００５；２１：１３９−１４８．
【０３２１】
Ｎｅｗｅｌｌ  ＦＷ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，  ６ｔｈ  ｅｄｎ．  １９８６；  Ｃ．Ｖ  Ｍｏｓｂｙ  Ｃｏ．，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ．
【０３２２】
Ｐａｒｋ  Ｋ，  Ｓｈａｌａｂｙ  ＷＳＷ，  Ｐａｒｋ  Ｈ．  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，  Ｔｅｃｈｎｏｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，  Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，  ＰＡ，  １９９３．
【０３２３】
Ｐｅｎｇ  Ｃ−Ｃ，  Ｃｈａｕｈａｎ  Ａ．  Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｂｙ  ｓｉｌｉｃｏｎｅ−ｈｙｄｒｏｇｅｌ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓｅｓ．  Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２０１１；１５４：  ２６７−２７４．
【０３２４】
Ｐｅｐｐａｓ  ＮＡ，  Ｈｉｌｔ  ＪＺ，  Ｋｈａｄｅｍｈｏｓｓｅｉｎｉ  Ａ，  Ｌａｎｇｅｒ  Ｒ．  Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ：  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｔｏ  ｂｉｏｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ａｄｖ．  Ｍａｔｅｒ  ２００６；１８：  １３４５−１３６０．
【０３２５】
Ｐｅｔｒｅｓｃｕ  ＭＳ，  Ｌａｒｒｙ  ＣＬ，  Ｂｏｗｄｅｎ  ＲＡ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｋｅｒａｔｏｃｙｔｅｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｗｏｕｎｄ  ｈｅａｌｉｎｇ：  ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ＣＤ１８  ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２００７；４８：５０２３−９．
【０３２６】
Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒ  ＳＣ，  Ｆａｒｌｅｙ  Ｗ，  Ｌｕｏ  Ｌ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−９  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｃｏｎｆｅｒｓ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｄｒｙ  ｅｙｅ．  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．  ２００５；１６６：６１−７１．
【０３２７】
Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒ  ＳＣ，  Ｇｅｅｒｌｉｎｇ  Ｇ，  Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ  Ｓ，  Ｌｅｍｐ  ＭＡ，  ＭｃＣｕｌｌｅｙ  Ｊ，  Ｎｅｌｓｏｎ  Ｄ，  Ｎｏｖａｃｋ  ＧＮ，  Ｓｈｉｍａｚａｋｉ  Ｊ，  Ｗｉｌｓｏｎ  Ｃ．  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｄｒｙ  ｅｙｅ  ｄｉｓｅａｓｅ：  Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｓｕｂｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｄｒｙ  ｅｙｅ  ｗｏｒｋｓｈｏｐ．  Ｏｃｕｌ  Ｓｕｒｆ  ５：１６３−１７８，  ２００７．
【０３２８】
Ｐｉｇｎａｔｅｌｌｏ，  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ｆｌｕｒｂｉｐｒｏｆｅｎ−ｌｏａｄｅｄ  ａｃｒｙｌａｔｅ  ｐｏｌｙｍｅｒ  ｎａｎｏｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２３，  ３２４７−３２５５．
【０３２９】
Ｐｏｃｈｅ，  Ｒ．  Ａ．，  Ｌａｒｉｎａ，  Ｉ．  Ｖ．，  Ｓｃｏｔｔ，  Ｍ．  Ｌ．，  Ｓａｉｋ，  Ｊ．  Ｅ．，  Ｗｅｓｔ，  Ｊ．  Ｌ．  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，  Ｍ．  Ｅ．  （２００９）  ‘Ｔｈｅ  Ｆｌｋ１−ｍｙｒ：：ｍＣｈｅｒｒｙ  ｍｏｕｓｅ  ａｓ  ａ  ｕｓｅｆｕｌ  ｒｅｐｏｒｔｅｒ  ｔｏ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ｏｃｕｌａｒ  ｂｌｏｏｄ  ｖｅｓｓｅｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ’，  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｄｙｎａｍｉｃｓ  ：  ａｎ  ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎａｔｏｍｉｓｔｓ  ２３８（９）：  ２３１８−２６．
【０３３０】
Ｐｏｃｈｅ，  Ｒ．  Ａ．，  Ｓａｉｋ，  Ｊ．  Ｅ．，  Ｗｅｓｔ，  Ｊ．  Ｌ．  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，  Ｍ．  Ｅ．  （２０１０）  ‘Ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｃｏｒｎｅａ  ａｓ  ａ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｓｉｔｅ  ｆｏｒ  ｌｉｖｅ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｔｉｓｓｕｅ  ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓ’，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ２０１０（４）：  ｐｄｂ  ｐｒｏｔ５４１６．
【０３３１】
Ｑｉａｎ，  Ｂ．，  Ｄｅｎｇ，  Ｙ．，  Ｉｍ，  Ｊ．  Ｈ．，  Ｍｕｓｃｈｅｌ，  Ｒ．  Ｊ．，  Ｚｏｕ，  Ｙ．，  Ｌｉ，  Ｊ．，  Ｌａｎｇ，  Ｒ．  Ａ．  ａｎｄ  Ｐｏｌｌａｒｄ，  Ｊ．  Ｗ．  （２００９）  ‘Ａ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｅｘｔｒａｖａｓａｔｉｏｎ，  ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｇｒｏｗｔｈ’，  ＰｌｏＳ  ｏｎｅ  ４（８）：  ｅ６５６２．
【０３３２】
Ｒａｅ，  Ｆ．，  Ｗｏｏｄｓ，  Ｋ．，  Ｓａｓｍｏｎｏ，  Ｔ．，  Ｃａｍｐａｎａｌｅ，  Ｎ．，  Ｔａｙｌｏｒ，  Ｄ．，  Ｏｖｃｈｉｎｎｉｋｏｖ，  Ｄ．  Ａ．，  Ｇｒｉｍｍｏｎｄ，  Ｓ．  Ｍ．，  Ｈｕｍｅ，  Ｄ．  Ａ．，  Ｒｉｃａｒｄｏ，  Ｓ．  Ｄ．  ａｎｄ  Ｌｉｔｔｌｅ，  Ｍ．  Ｈ．  （２００７）  ‘Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒｏｐｈｉｃ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｍｕｒｉｎｅ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｂａｓｅｄ  ｕｐｏｎ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ａ  Ｃｓｆ１ｒ−ＥＧＦＰ  ｔｒａｎｓｇｅｎｅ  ｒｅｐｏｒｔｅｒ’，  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ３０８（１）：  ２３２−４６．
【０３３３】
Ｒｅｉｍ  Ｍ，  Ｒｅｄｂｒａｋｅ  Ｃ，  Ｓｃｈｒａｇｅ  Ｎ．  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  ｔｈｅｒｍａｌ  ｉｎｊｕｒｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｙｅｓ．  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｆｉｎｄｉｎｇｓ．  Ａｒｃｈ  Ｓｏｃ  Ｅｓｐ  Ｏｆｔａｌｍｏｌ．  ２００１；７６：７９−１２４．
【０３３４】
Ｒｅｉｎｓｔｅｎ  ＤＺ，  Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＲＨ，  Ｒｏｎｄｅａｕ  ＭＪ，  Ｃｏｌｅｍａｎ  ＤＪ．  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ａｎｄ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ  ｂｙ  ｈｉｇｈ−ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ  ｄｉｇｉｔａｌ  ｓｉｇｎａｌ  ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １９９４；１０１：１４０−１４６．
【０３３５】
Ｒｏｊａｎａｓａｋｕｌ  Ｙ，  Ｗａｎｇ  Ｌ−Ｙ，  Ｂｈａｔ  Ｍ，  Ｇｌｏｖｅｒ  ＤＤ，  Ｍａｌａｎｇａ  Ｃ，  Ｍａ  ＪＫＨ．  Ｔｈｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｏｆ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａ：  ａ  ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｎ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｃｈａｒｇｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｂｂｉｔ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  １９９２；  ９：１０２９−１０３４．
【０３３６】
Ｓａｉｋ，  Ｊ．  Ｅ．，  Ｇｏｕｌｄ，  Ｄ．  Ｊ．，  Ｋｅｓｗａｎｉ，  Ａ．  Ｈ．，  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，  Ｍ．  Ｅ．  ａｎｄ  Ｗｅｓｔ，  Ｊ．  Ｌ．  （２０１１ａ）  ‘Ｂｉｏｍｉｍｅｔｉｃ  ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ  ｗｉｔｈ  ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  ｅｐｈｒｉｎＡ１  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ’，  Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  １２（７）：  ２７１５−２２．
【０３３７】
Ｓａｉｋ，  Ｊ．  Ｅ．，  Ｇｏｕｌｄ，  Ｄ．  Ｊ．，  Ｗａｔｋｉｎｓ，  Ｅ．  Ｍ．，  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，  Ｍ．  Ｅ．  ａｎｄ  Ｗｅｓｔ，  Ｊ．  Ｌ．  （２０１１ｂ）  ‘Ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ  ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−ＢＢ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｂｉｏｍｉｍｅｔｉｃ  ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）  ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ’，  Ａｃｔａ  ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｉａ  ７（１）：  １３３−４３．
【０３３８】
Ｓａｉｋａ  Ｓ，  Ｉｋｅｄａ  Ｋ，  Ｙａｍａｎａｋａ  Ｏ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｏｆ  ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ−７  ｏｎ  ａ  ｃｏｒｎｅａｌ  ａｌｋａｌｉ  ｉｎｊｕｒｙ  ｍｏｄｅｌ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２００５；８５：４７４−４８６．
【０３３９】
Ｓａｓｍｏｎｏ，  Ｒ．  Ｔ．，  Ｏｃｅａｎｄｙ，  Ｄ．，  Ｐｏｌｌａｒｄ，  Ｊ．  Ｗ．，  Ｔｏｎｇ，  Ｗ．，  Ｐａｖｌｉ，  Ｐ．，  Ｗａｉｎｗｒｉｇｈｔ，  Ｂ．  Ｊ．，  Ｏｓｔｒｏｗｓｋｉ，  Ｍ．  Ｃ．，  Ｈｉｍｅｓ，  Ｓ．  Ｒ．  ａｎｄ  Ｈｕｍｅ，  Ｄ．  Ａ．  （２００３）  ‘Ａ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｃｏｌｏｎｙ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｇｒｅｅｎ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｒａｎｓｇｅｎｅ  ｉｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ  ｔｈｅ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｐｈａｇｏｃｙｔｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ’，  Ｂｌｏｏｄ  １０１（３）：  １１５５−６３．
【０３４０】
Ｓｃｈｏｅｎｗａｌｄ  ＲＤ，  Ｈｕａｎｇ  Ｈ−Ｓ．  （１９８３）  Ｃｏｒｎｅａｌ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｂｅｈａｖｉｏｒ  ｏｆ  β−ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ  Ｉ：  ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｆａｃｔｏｒｓ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  １９８３；７２，  １２６６−１２７２．
【０３４１】
Ｓｅｙｆｏｄｄｉｎ  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｏｌｉｄ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．  ２０１０；  １７：４６７−４８９．  
【０３４２】
Ｓｈｅｌｌ  ＪＷ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ．  Ｓｕｒｖ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １９８４；  ２９：  １１７−１２８．
【０３４３】
Ｓｈｉｈ  Ｒ−Ｌ，  Ｌｅｅ  ＶＨＬ．  Ｒａｔｅ  ｌｉｍｉｔｉｎｇ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｃｕｌａｒ  ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｖｅ  β−ｂｌｏｃｋｅｒｓ  ａｃｒｏｓｓ  ｔｈｅ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｒａｂｂｉｔ．  Ｊ．  Ｏｃｕｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １９９０；  ６：３２９−３３６．
【０３４４】
Ｓｉｅｇ  ＪＷ，  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＪＲ．  Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｒａｎｓｃｏｒｎｅａｌ  ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  １９７６；  ６５：１８１６−１８２２．
【０３４５】
Ｓｉｅｇ  ＪＷ，  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  ＪＲ．  （１９７７）  Ｖｅｈｉｃｌｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ  ＩＩ：  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  １９７７；  ６６：１２２２−１２２８．
【０３４６】
Ｓｉｎｇｈ  Ｋ，  Ｎａｉｒ  ＡＢ，  Ｋｕｍａｒ  Ａ，  Ｋｕｍｒｉａ  Ｒ．  Ｎｏｖｅｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｉｎ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｕｓｉｎｇ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓｅｓ．  Ｊ  Ｂａｓｉｃ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０１１；２：８７−１０１．
【０３４７】
Ｓｉｎｇｈ  Ｖ，  Ａｈｍａｄ  Ｒ，  Ｈｅｍｉｎｇ  Ｔ．  Ｔｈｅ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ｏｆ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ：  Ａ  ｒｅｖｉｅｗ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．  ２０１１；３：５６−６２．
【０３４８】
Ｓｏｌｏｍｏｎ  Ａ，  Ｄｕｒｓｕｎ  Ｄ，  Ｌｉｕ  Ｚ，  Ｘｉｅ  Ｙ，  Ｍａｃｒｉ  Ａ，  Ｐｆｌｕｇｆｅｌｄｅｒ  ＳＣ．  Ｐｒｏ−  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｆｏｒｍｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｅａｒ  ｆｌｕｉｄ  ａｎｄ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｄｒｙ−ｅｙｅ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．  ２００１；４２：２２８３−２２９２．
【０３４９】
Ｓｏｕｔｏ  ＥＢ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ．  Ｃｕｒｒ．  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ２０１０；  ３５：５３７−５５２．
【０３５０】
Ｓｕｌｔａｎａ  Ｙ，  Ａｑｉｌ  Ｍ，  Ａｌｉ  Ａ，  Ｓａｍａｄ  Ａ．  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｏｐｉｃａｌ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，  ２００７；  ２（２）：３０９−２３．
【０３５１】
Ｓｕｌｔａｎａ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｉｎ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ：  ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ．  Ｄｒｕｇｓ  Ｔｏｄａｙ  ２０１１；  ４７：４４１−４５５．
【０３５２】
Ｓｗｅｅｔ，  Ｍ．  Ｊ．  ａｎｄ  Ｈｕｍｅ，  Ｄ．  Ａ．  （２００３）  ‘ＣＳＦ−１  ａｓ  ａ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ’，  Ａｒｃｈｉｖｕｍ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉａｅ  ｅｔ  ｔｈｅｒａｐｉａｅ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｉｓ  ５１（３）：  １６９−７７．
【０３５３】
Ｕｆｒｅｔ−Ｖｉｎｃｅｎｔｙ，  Ｒ．Ｌ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ  ｒｅｔｉｎｉｔｉｓ  ａｆｔｅｒ  ｆｌｕｏｃｉｎｏｌｏｎｅ  ａｃｅｔｏｎｉｄｅ  （Ｒｅｔｉｓｅｒｔ）  ｉｍｐｌａｎｔ．  Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，  ２００７．  １４３（２）：  ｐ．  ３３４−５．
【０３５４】
Ｕｒｔｔｉ  Ａ，  Ｐｉｐｋｉｎ  ＪＤ，  Ｒｏｒｋ  Ｇ，  Ｓｅｎｄｏ  Ｔ，  Ｆｉｎｎｅ  Ｕ，  Ｒｅｐｔａ  ＡＪ．  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｄｅｖｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｏｃｕｌａｒ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｉｍｏｌｏｌ  ２．  Ｏｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．１９９０；  ６１：２４１−２４９．
【０３５５】
Ｕｒｔｔｉ  Ａ，  Ｓａｌｍｉｎｅｎ  Ｌ．  Ｍｉｎｉｍｉｚｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｏｐｉｃａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｄｒｕｇｓ．  Ｓｕｒｖ．  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １９９３；  ３７：４３５−４５６．
【０３５６】
Ｕｒｔｔｉ  Ａ．  Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ａｎｄ  ｏｂｓｔａｃｌｅｓ  ｏｆ  ｏｃｕｌａｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．  ２００６；５８：１１３１−１１３５．
【０３５７】
Ｖａｎｄａｍｍｅ，  Ｔ．Ｆ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）  Ｐｏｌｙ（ａｍｉｄｏａｍｉｎｅ）  ｄｅｎｄｒｉｍｅｒｓ  ａｓ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｖｅｈｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ  ｎｉｔｒａｔｅ  ａｎｄ  ｔｒｏｐｉｃａｍｉｄｅ．  Ｊ．  Ｃｏｎｔｒ．  Ｒｅｌ．  １０２，  ２３−３８．
【０３５８】
Ｖａｎｄｅｒｖｏｏｒｔ  Ｊ，  Ｌｕｄｗｉｇ  Ａ．  Ｏｃｕｌａｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ：  ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ｎａｎｏｍｅｄ  ２００７；  ２：１１−２１．
【０３５９】
Ｗａｔｓｋｙ  ＭＡ，  Ｊａｂｌｏｎｓｋｉ  ＭＭ，  Ｅｄｅｌｈａｕｓｅｒ  ＨＦ．  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａｌ  ａｎｄ  ｃｏｒｎｅａｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ａｒｅａｓ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ．  Ｃｕｒｒ．  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  １９８８；  ７：４８３−４８６．
【０３６０】
Ｙａｎｅｚ  Ｆ，  Ｍａｒｔｉｋａｉｎｅｎ  Ｌ，  Ｂｒａｇａ  ＭＥＭ，  Ａｌｖａｒｅｚ−Ｌｏｒｅｎｚｏ  Ｃ，  Ｃｏｎｃｈｅｉｒｏ  Ａ，  Ｄｕａｒｔｅ  ＣＭＭ，  Ｇｉｌ  ＭＨ，  ｄｅ  Ｓｏｕｓａ  ＨＣ．  Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  ｆｌｕｉｄ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｐｒｉｎｔｅｄ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｌｅｎｓｅｓ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ．  Ａｃｔａ  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｉａ  ２０１１；７：  １０１９−１０３０．
【０３６１】
Ｚａｋｉ  Ｉ，  Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｐ，  Ｈａｒｄｙ  ＪＧ，  Ｗｉｌｓｏｎ  ＣＧ．  Ａ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｒｅｃｏｒｎｅａｌ  ｒｅｓｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔ  ａｎｄ  ｍａｎ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １９８６；  ３８：４６３−４６６．
【０３６２】
Ｚｈａｎｇ，  Ｊ．，  Ｃａｏ，  Ｒ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｙ．，  Ｊｉａ，  Ｔ．，  Ｃａｏ，  Ｙ．  ａｎｄ  Ｗａｈｌｂｅｒｇ，  Ｅ．  （２００９）  ‘Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ＰＤＧＦＲ−ａｌｐｈａ  ａｎｄ  ＰＤＧＦＲ−ｂｅｔａ  ｉｎ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｖｅｓｓｅｌ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ’，  Ｔｈｅ  ＦＡＳＥＢ  ｊｏｕｒｎａｌ  ：  ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２３（１）：  １５３−６３．
【０３６３】
Ｚｏｕｋｈｒｉ  Ｄ．  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｌａｃｒｉｍａｌ  ｇｌａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．  Ｅｘｐ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ２００６；８２：８８５−８９８．
【図１】
0006275137.tif 000004
【図２】
0006275137.tif 000005
【図３Ａ】
0006275137.tif 000006
【図３Ｂ】
0006275137.tif 000007
【図３Ｃ】
0006275137.tif 000008
【図３Ｄ】
0006275137.tif 000009
【図４Ａ】
0006275137.tif 000010
【図４Ｂ】
0006275137.tif 000011
【図４Ｃ】
0006275137.tif 000012
【図４Ｄ】
0006275137.tif 000013
【図５】
0006275137.tif 000014
【図６】
0006275137.tif 000015
【図７Ａ】
0006275137.tif 000016
【図７Ｂ】
0006275137.tif 000017
【図７Ｃ】
0006275137.tif 000018
【図８Ａ】
0006275137.tif 000019
【図８Ｂ】
0006275137.tif 000020
【図８Ｃ】
0006275137.tif 000021
【図９】
0006275137.tif 000022
【図１０】
0006275137.tif 000023
【図１１】
0006275137.tif 000024
【図１２−１】
0006275137.tif 000025
【図１２−２】
0006275137.tif 000026
【図１２−３】
0006275137.tif 000027
【図１２−４】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１３−３】
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【図１３−４】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
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【図１６Ｅ】
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【図１６Ｆ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【図２１Ｄ】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５−１】
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【図２５−２】
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【図２６】
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