(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
止血創傷治療装置を作製する方法であって、当該止血創傷治療装置は、
酸化多糖類、生体吸収性の合成高分子またはそれらの混合物から選択された材料から形成された１以上の層を有し、創傷側表面とその反対の表面とを有する生体吸収性スキャフォールドであって、血液でも血漿でもない生体適合性の液体で湿潤される、生体吸収性スキャフォールドと、
湿分によって前記生体吸収性スキャフォールドの少なくとも前記創傷側表面に付着する止血粉末と、を含み、
前記方法は、
（ａ）前記生体吸収性スキャフォールドを前記生体適合性の液体で湿潤させ
（ｂ）前記生体吸収性スキャフォールドを前記止血粉末に接触させ、当該止血粉末の少なくとも一部を、前記生体吸収性スキャフォールドの少なくとも前記創傷側表面に付着させる、方法。
【請求項２】
前記止血粉末は、乾燥フィブリノゲンまたは乾燥トロンビンまたは乾燥フィブリノゲンと乾燥トロンビンとの混合物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記生体適合性の液体は、水溶液、通常生理食塩水、エタノール、及びエタノールと水との混合物からなる群から選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記生体適合性の液体は止血薬を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記生体適合性の液体は、トロンビン、フィブリノゲン、止血促進薬、成長因子、カルシウム塩、吸収性脱凝集補助剤、増量剤、ゼラチン、コラーゲン、タンパク質、プロトロンビン、フィブリン、フィブロネクチン、ヘパリナーゼ、第Ｘ／Ｘａ因子、第ＶＩＩ／ＶＩＩａ因子、第ＩＸ／ＩＸａ因子、第ＸＩ／ＸＩａ因子、第ＸＩＩ／ＸＩＩａ因子、組織因子、バトロキソビン、アンクロッド、エカリン、フォンビルブランド因子、コラーゲン、エラスチン、アルブミン、ゼラチン、血小板表面の糖タンパク質、バソプレシン、バソプレシン類似体、エピネフリン、セレクチン、プロコアグラント毒、プラスミノゲン活性化因子阻害因子、血小板活性化剤、止血活性を有する合成ペプチド、及び／又はそれらの組合わせの少なくとも１つを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記スキャフォールドは、酸化多糖類又は生体吸収性の合成高分子を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記スキャフォールドは、ラクチド−グリコリド高分子層と、酸化再生セルロースを含んだセルロース層とを含んだ多層構造の複合材料である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記止血粉末は前記ラクチド−グリコリド高分子層に付着し、その反対の表面層は前記酸化再生セルロースを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法に使用される、調製キットであって、
ａ）少なくとも１種類の粉末止血材料と、
ｂ）生体吸収性スキャフォールドと、
ｃ）生体適合性の液体と、
ｄ）塗布トレーと、を含み、
構成要素ａ）〜ｄ）が組み合わされて一体化したパッケージユニットとなる、キット。
【請求項１０】
前記少なくとも１種類の粉末止血材料は、フィブリノゲン、トロンビン、及びそれらの混合物からなる群から選択されるタンパク質を含む、請求項９に記載のキット。
【請求項１１】
前記生体適合性の液体は、水、水溶液、通常生理食塩水、トロンビン溶液、フィブリノゲン溶液、アルコール、及びグリセロールからなる群から選択される、請求項９または１０に記載のキット。
【請求項１２】
前記少なくとも１種類の粉末止血材料は、
乾燥フィブリノゲンと乾燥トロンビンとの混合物を含み、かつ前記生体適合性の液体は通常生理食塩水を含むか、
乾燥フィブリノゲンを含み、かつ前記生体適合性の液体はトロンビン溶液を含む、
請求項９に記載のキット。
【請求項１３】
前記生体吸収性スキャフォールドを前記液体で湿潤させるための手段を更に含む、請求項９に記載のキット。
【請求項１４】
前記湿潤させるための手段は、（１）液体移動パッド、（２）噴霧ボトル、（３）移動ペン、又は（４）液体トレーであり、前記液体トレーが、前記生体吸収性スキャフォールドを、前記創傷側の面を前記液体トレーに向けて浸漬するのに適合する大きさを有する、請求項１３に記載のキット。
【請求項１５】
前記液体移動パッドは、外科用ガーゼの束を含む、請求項１４に記載のキット。
【請求項１６】
前記粉末止血材料は前記粉末トレー内にパッケージされる、請求項９〜１５のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１７】
前記生体吸収性スキャフォールドは、生体吸収性多糖類、生体吸収性合成高分子、生体吸収性タンパク質、又はそれらの組合わせである、請求項９〜１６のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１８】
前記生体吸収性スキャフォールドは、布、織布材料、不織布材料、メッシュ、又はそれらの組合わせである、請求項９〜１７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１９】
前記生体吸収性スキャフォールドは、酸化再生セルロースを含んだセルロース層と、ポリグラクチン９１０を含んだ高分子層とを有する多層複合構造体である、請求項９〜１８のいずれか１項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、広義には、止血及び組織封着を促進するための薬剤及び装置に関するものであり、より具体的には、フィブリノゲン及びトロンビンなどの凍結乾燥した止血促進タンパク質を創傷又は損傷器官若しくは組織に送達し得る生体吸収性スキャフォールドを含んだ止血パッドに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
血液とは、液相中に分散した赤血球、白血球、小体、及び血小板を含む、液体の組織である。この液相は血漿であり、血漿は、酸性物質、脂質、溶解した電解質、及びタンパク質を含んでいる。この液相中に懸濁する特定のタンパク質がフィブリノゲンである。出血が発生したとき、フィブリノゲンは水及びトロンビン（酵素）と反応してフィブリンを形成するが、このフィブリンは血液に不溶であり、重合して血塊を形成する。
【０００３】
多種多様な状況において、ヒトを含む動物は、創傷が原因であるいは外科的処置の間に出血に見舞われ得る。いくつかの状況においては、出血は比較的軽いものであり、通常の血液凝固が、簡単な応急処置の実施に加われば、それだけで十分である。他の状況においては、相当な出血が発生し得る。これらの局面では通常、専門的な設備及び物資、並びに適切な救助を施すように訓練された人員が必要となる。
【０００４】
上述の問題に対処する取り組みにおいて、過剰な出血を抑制するための物質が開発されてきた。局所用吸収性止血材（ＴＡＨ）が外科用途で広く使用されている。ＴＡＨは、ポリグラチン９１０、酸化セルロース（ＯＣ）、酸化再生セルロース（ＯＲＣ）、ゼラチン、コラーゲン、キチン、キトサンなどの共重合体に基づいたラクチド−グリコリドを含めて、天然高分子から合成高分子及びそれらの組合わせに至る、通常は少なくとも部分的に再吸収性の材料から作られた様々な織布若しくは不織布又はスポンジに基づいた製品を包含する。止血特性を改善するために、上記の物質に基づくスキャフォールドが、トロンビン及び／又はフィブリノゲンなど、生物学的に誘導された凝固因子と組み合わされ得る。
【０００５】
乾燥粉末、半液状のペースト、液状製剤の形態で塗布されるか、あるいは任意選択により、生体吸収性の布のスキャフォールドなどの支持スキャフォールド上に配設される止血製剤と共に、凍結乾燥フィブリノゲンをたびたび凍結乾燥トロンビンと組み合わせて利用する多数の止血製剤が現在、市販されており、あるいは開発されている。
【０００６】
米国特許第７、３２０、９６２号、名称「Ｈｅｍｏａｃｔｉｖｅ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｉｒ  ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｕｓｅ」には、出血を抑制するための又は薬剤を送達するための乾燥血液活性材料が開示されており、この乾燥血液活性材料は、血液に曝されるとヒドロゲルを形成する架橋生体適合性高分子と、血液に曝されると可溶化する非架橋生体適合性高分子とを含み、架橋高分子は非架橋高分子の乾燥マトリックス中に分散するものである。
【０００７】
米国特許第６、７０６、６９０号、名称「Ｈｅｍｏａｃｔｉｖｅ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｉｒ  ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｕｓｅ」には、血液に曝されるとヒドロゲルを形成する乾燥材料が開示されており、前記材料は、血液に曝されるとヒドロゲルを形成する架橋生体適合性高分子と、血液に曝されると溶解する非架橋生体適合性高分子と、その非架橋生体適合性高分子中に存在する可塑剤とを含み、また、架橋高分子は非架橋高分子の乾燥マトリックス中に分散し、非架橋生体適合性高分子は、血液に曝されると１５分以内に溶解するものである。
【０００８】
ＰＣＴ特許公開第ＷＯ  １９９７／０２８８３２  Ａ１号、名称「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｓｅａｌｉｎｇ  Ｗｏｕｎｄｓ」には、粘性の多糖類、グリコール、又はワセリンなどの粘性の非水系接着剤で繊維性マトリクスに付着された粉末のフィブリノゲンとトロンビンとを含む止血包帯が開示されている。この非水系接着剤は、血液などの体液によって包帯が湿潤されるまでフィブリノゲンとトロンビンとの間に加水分解反応を生じさせず、またその包帯が止血活性を維持しながら長期間にわたって準備及び保管され得ることを教示するものである。この参照文献は更に、出血している開放創に被せて貼り付けられるかあるいは挿入されるパッドとして配置するのに適した繊維性マトリックスと、マトリックスの表面に存在する粉末凝固因子の混ざり合った粒子の混合物とを含む止血創傷包帯を更に教示しており、それらの粒子は、生理学的なｐＨの水性媒体に曝されると血塊を形成するように互いに十分に密着し、それらの粒子は、２０℃で少なくとも１００センチポアズの粘度を有する、粘性の非水系接着剤によってマトリックスに接着され、その非水系接着剤は、それらの粒子が生理学的なｐＨの水性媒体に曝されるまで、混ぜ合わされた粒子同士の凝固反応を抑制するものである。この参照文献は更に、出血している開放創に被せて貼り付けられるかあるいは挿入されるパッドとして配置するのに適した繊維性マトリックスと、生理学的なｐＨの水性媒体に曝されると血塊を形成するように十分に密着してマトリックス全体に存在する粉末凝固因子の混ざり合った粒子の混合物と、を含む止血創傷包帯を更に教示しており、それらの粒子は、それらの粒子が生理学的なｐＨで水溶性媒体に曝されるまで、混ぜ合わされた粒子同士の凝固反応を抑制する粘性の非水系接着剤によってマトリックスに付着され、その接着剤は、多糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセロール、及びワセリンからなる群から選択されるものであり、この接着剤は、３重量％未満の水を含んだ液体の形態でマトリックスに付着されている。
【０００９】
化学及血清療法研究所による米国特許公開第２０１２／０１７７７１８  Ａ１号、名称「Ｗｏｕｎｄ−Ｃｏｖｅｒｉｎｇ  Ｍａｔｅｒｉａｌ」には、手術、外傷、火傷などで生じた創傷部位を保護及び修復する創傷被覆材料が開示されている。この記述は、トロンビンと、フィブリノゲンと、生体吸収性の支持材料とを含む創傷被覆材料に関するものである。この創傷被覆材料は、湿分を保持するための被覆材料で更に覆われてもよい。この創傷被覆材料は、（１）トロンビンとフィブリノゲンとを保持する生体吸収性支持材料、又は（２）トロンビンを保持する生体吸収性支持材料と、フィブリノゲンを保持する生体吸収性支持材料、又は（３）トロンビンと、フィブリノゲンと、生体吸収性支持材料、のいずれかのキットからなり得る。キットの各々は、湿分を保持するための被覆材料と組み合わされ得る。
【００１０】
フェロサン・メディカル・デバイス社（Ferrosan Medical Devices A/S）による米国特許公開第ＵＳ２０１３／００２９０３０  Ａ１号、名称「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ  ａｎｄ／ｏｒ  Ｗｏｕｎｄ  Ｈｅａｌｉｎｇ」には、医薬配合物が超音波噴霧技術で表面に塗布されたマトリックス材料など、医薬配合物を含んだマトリックスが開示されている。一実施形態において、医薬配合物はトロンビンを含む。本発明は更に、超音波噴霧技術を用いてマトリックス材料の表面の上に医薬配合物をコーティングしたマトリックス材料を作製するための方法を表す。特定の一実施形態において、本発明はまた、止血の促進及び／又は創傷治癒のための前記マトリックス材料の使用に関する。本発明はまた、医薬配合物を備えたマトリックスと、引き剥がし可能な蓋を備えた容器とを含む部品キットに関する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
簡潔に言えば、一実施形態において、本発明は、創傷側表面とその反対の表面とを有する生体吸収性スキャフォールドを有する止血創傷治療装置に関する。スキャフォールドは、血液でも血漿でもない生体適合性の液体で湿潤され、かつ止血粉末が、生体適合性の液体からの湿分の結果として、前記生体吸収性スキャフォールドの少なくとも創傷側表面に付着する。止血粉末は、乾燥フィブリノゲンと乾燥トロンビンとの混合物であっても、乾燥フィブリノゲンであっても、乾燥トロンビンであってもよい。本出願において、乾燥とは、実質的にすべての湿分が材料から除去されており、好ましくは残存する水分が４重量％未満、より好ましくは約２重量％未満であることを意味する。止血粉末とは、本願の目的のために、乾燥した粒子の形態をなし、止血の血液凝固のカスケードにおいて何らかの形式で生物学的にあるいは物理的に活性である材料を意味する。
【００１２】
生体適合性の液体は、水溶液、通常生理食塩水、エタノール、又はエタノールと水との混合物からなる群から選択され得る。一実施形態において、生体適合性の液体は止血薬を含み得る。止血薬とは、止血の血液凝固のカスケードにおいて何らかの形式で生物学的にあるいは物理的に活性である物質である。例示的な止血薬には、トロンビン、フィブリノゲン、止血促進剤、成長因子、カルシウム塩、吸収性脱凝集補助剤、増量剤、ゼラチン、コラーゲン、プロトロンビン、フィブリン、フィブロネクチン、ヘパリナーゼ、第Ｘ／Ｘａ因子、第ＶＩＩ／ＶＩＩａ因子、第ＩＸ／ＩＸａ因子、第ＸＩ／ＸＩａ因子、第ＸＩＩ／ＸＩＩａ因子、組織因子、バトロキソビン、アンクロッド、エカリン、フォンビルブランド因子、エラスチン、アルブミン、血小板表面の糖タンパク質、バソプレシン、バソプレシン類似体、エピネフリン、セレクチン、プロコアグラント毒、プラスミノゲン活性化因子阻害因子、血小板活性化剤、止血活性を有する合成ペプチドが挙げられる。
【００１３】
一実施形態において、スキャフォールドは、酸化多糖類、生体吸収性合成高分子、又はそれらの組合わせの材料から構成された１つ以上の層を有する。別の実施形態において、スキャフォールドは、ラクチド−グリコリド高分子層と酸化再生セルロースを含んだセルロース層とを有する多層構造の複合材料であり、このラクチド−グリコリド高分子層とセルロース層は互いに付着される。止血粉末は好ましくは、ラクチド−グリコリド高分子層上に供給され付着するが、その反対側の表面層は、補強及び取扱い層として働く酸化再生セルロースを含む。
【００１４】
本発明はまた、スキャフォールドを生体適合性の液体で湿潤させることと、スキャフォールドを止血粉末と接触させ、止血粉末の少なくとも一部分をスキャフォールドの少なくとも創傷側表面に付着させることと、止血創傷治療パッドの創傷側表面を創傷の上に貼り付けることとによって、上述のように止血創傷治療パッドを作製する方法及び使用する方法に関する。スキャフォールドが止血粉末と最初に接触してから、続いて止血創傷治療パッドが創傷の上に貼り付けられるまでの時間間隔は、好ましくは２分未満である。
【００１５】
本発明はまた、少なくとも１種類の粉末止血材料と、生体吸収性スキャフォールドと、生体適合性の液体と、塗布トレーとを有する、止血創傷治療パッド用の調製キットに関するものであり、これらの構成要素は組み合わされて単体のパッケージユニットとなる。その少なくとも１種類の粉末止血材料は、フィブリノゲン、トロンビン、又はそれらの組合わせからなる群から選択されたタンパク質であってもよい。生体適合性の液体は、水、水溶液、通常生理食塩水、トロンビン溶液、フィブリノゲン溶液、アルコール、又はグリセロールからなる群から選択され得る。一実施形態において、その少なくとも１種類の粉末止血材料は、乾燥フィブリノゲンと乾燥トロンビンとの混合物であり、生体適合性の液体は通常生理食塩水を含む。別の実施形態において、粉末止血材料は乾燥フィブリノゲンであり、生体適合性の液体は、トロンビンを含有する溶液である。このキットは更に、前記生体吸収性スキャフォールドを生体適合性の液体で湿潤させるための手段を含み得る。例示的な湿潤手段は、液体移動パッド、噴霧ボトル、移動ペン、又は液体トレーであり、その液体トレーは、前記生体吸収性スキャフォールドを、創傷側の面を前記液体トレーに向けて浸漬するのに適合する大きさを有する。液体移動パッドは、外科用ガーゼの束を含む。粉末止血材料は、粉末トレーにパッケージされ得る。生体吸収性スキャフォールドは、生体吸収性多糖類、生体吸収性合成高分子、生体吸収性タンパク質、又はそれらの組合わせのうちの１つ以上の個別の層から構成され得る。それに代わって、これらの構造の材料は、一体の層へと組み合わされ得る。生体吸収性スキャフォールドは、布、織布材料、不織布材料、メッシュ、又はそれらの組合わせであってよい。一実施形態において、生体吸収性スキャフォールドは、酸化再生セルロースを含んだセルロース層とポリグラクチン９１０を含んだ高分子層とを有する多層複合構造体であり、その再生セルロース層と高分子層とは、互いに分離しており、別々であり、かつ固定式で付着されるものである。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本発明の止血パッドのアセンブリキットの実施形態を概略的に示している。
【図２】本発明の止血パッドの実施形態を概略的に示している。
【図３】本発明の止血パッドの調製を概略的に示している。
【図４】本発明の止血パッドのアセンブリに関する工程を概略的に示している。
【図５】本発明の止血パッドの調製を概略的に示している。
【図６】本発明の止血パッドのアセンブリに関する工程を概略的に示している。
【図７】本発明の止血パッドのアセンブリキットの構成要素の実施形態を概略的に示している。
【図８】本発明の止血パッドのアセンブリキットの構成要素の実施形態を概略的に示している。
【図９】本発明の止血パッドのアセンブリキットの構成要素の実施形態を概略的に示している。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
簡潔に言えば、本発明は、（ｉ）生物製剤が好ましくは、無菌の水性溶液、より好ましくは無菌の生理食塩水から少なくとも１つの表面領域に湿分によってしっとりと接合される止血パッド、（ｉｉ）必要としている患者に対して出血を止めかつ／又は組織を封着するために使用する十分前に手術室内で、生体吸収性パッドを生物製剤含有止血パッドに変換するためのキット、（ｉｉｉ）その止血パッドを組み立てる方法、並びに（ｉｖ）上述の止血パッドを用いて出血を治療し、止血を提供し、創傷部位又は組織を封着する方法に関する。
【００１８】
ここで図１を参照すると、着脱式キャップ１２で密閉されたバイアル又はボトルを含み、止血粉末２０を収容した止血粉末容器１０を有する、本発明の止血パッドのアセンブリキットの実施形態が示されている。前記止血パッドのアセンブリキットは、好ましくは生体適合性、生体吸収性の織布若しくは不織布材料又はフェルトあるいはそれらの組合わせである、支持マトリックス又はスキャフォールド３０を更に含む。スキャフォールド３０は、創傷側の面３２とその反対の上側面３４とを有し、創傷側の面３２とその反対の上側面３４とは、異なる材料から作られているなど、異なる特性を任意選択によって有する。止血パッドアセンブリキットは、粉末トレー４０及び任意選択の液体トレー５０と、任意選択の液体容器６０とを更に含み、液体容器６０は、着脱式キャップ６２で密閉されたバイアル又はボトルを構成し、液体７０を収容している。
【００１９】
図１に示され、止血粉末容器１０と、スキャフォールド３０と、粉末トレー４０と、任意選択の液体トレー５０と、任意選択の液体容器６０とを含む止血パッドのアセンブリキットは、図２に示される止血パッド１００を調製するために使用され、止血パッド１００は、創傷側の面３２を止血粉末２０でコーティングされたスキャフォールド３０を含んでいる。
【００２０】
特定の実施形態において、発明的な止血パッドのアセンブリキットからの止血パッド１００の調製は、図３〜６に概略的に示されるように実施される。ここで図３を参照すると、止血粉末２０が止血粉末容器１０（図示せず）から粉末トレー４０の中に移動され（図３Ａ）、液体７０が液体容器６０（図示せず）から液体トレー５０の中に移動され（図３Ｂ）、スキャフォールド３０が創傷側の面３２を下にして液体トレー５０の中に浸漬されて、結果としてスキャフォールド３０が液体７０で湿潤され（図３Ｃ）、スキャフォールド３０が創傷側の面３２を下にして粉末トレー４０の中に浸漬され、止血粉末２０と接触されて、結果として止血粉末２０の少なくとも一部分が創傷側の面３２に付着され（図３Ｄ）、結果としてスキャフォールド３０の創傷側の面３２に付着する止血粉末２０を含んだ本発明の止血パッド１００が形成され（図３Ｅ）、その直後に、生物製剤含有パッド１００が創傷に貼り付けられる（図示せず）。
【００２１】
特定の実施形態において、スキャフォールド３０を湿潤させるために供給される液体７０の量は、スキャフォールド３０の体積の約２％〜スキャフォールド３０の体積の９０％又は１００％超である。液体７０の体積がスキャフォールド３０の気孔の量を超えているとき、過剰な液体７０がスキャフォールド３０に完全に吸収されない。好ましい実施形態において、すべての液体７０がスキャフォールド３０に吸収され、かつ液体７０の体積は、スキャフォールド３０の体積の５％又は２５％など、約２％〜約７０％である。最も好ましい実施形態において、すべての液体７０がスキャフォールド３０に吸収され、液体７０のうちの５ｍｌなど、スキャフォールド３０の気孔の体積よりも小さい体積で、供給された液体７０は、１５ｃｍ３の体積と約５０％の気孔率を有するスキャフォールド３０によって完全に吸収され、すなわちスキャフォールド３０の気孔の体積は約７．５ｃｍ３である。
【００２２】
１０ｃｍ×１０ｃｍの辺と、２ｍｍの深さと、結果として２０ｃｍ３の体積を有する例示的な直方体のスキャフォールド３０に関して言えば、スキャフォールド３０を湿潤させるために使用される液体７０の体積は、０．５ｍｌ、２ｍｌ、５ｍｌ、又は１０ｍｌである。スキャフォールドの形状は、２辺が同じ長さであり、第３の辺が異なる長さである直方体に限定されないが、すべての辺が同じ長さである立方体、すべての辺が異なる長さである直角平行６面体、又は、外科手技における使用に適した他の実質的に異なる幾何学形状であってもよい。
【００２３】
ここで図４を参照すると、一実施形態における、本発明の止血パッド１００の調製方法に関する各工程の順序が概略的に示されている。この調製工程は、止血パッドのアセンブリキットを開封する工程と、止血粉末を粉末トレーに加える工程と、液体を液体トレーに加える工程と、スキャフォールドを液体トレーの中に浸漬することによってスキャフォールドの少なくとも創傷側の面を液体で湿潤させる工程と、スキャフォールドの創傷側の面を粉末トレー内の止血粉末と接触させる工程と、湿分によって止血粉末の少なくとも一部分をスキャフォールドの創傷側の面に付着させて止血パッドを形成する工程と、その止血パッドを創傷、組織又は器官の上に貼り付ける工程とを含む。
【００２４】
ここで図５を参照すると、好ましい実施形態において、本発明の止血パッドのアセンブリキットからの、止血パッド１００の調製は、ガーゼ束６９など、中間的な液体移動パッドを使用して実施される。ガーゼ束６９は、少なくとも５重量％〜１０重量％の水を吸収することが可能な任意の無菌の外科用ガーゼから作られ、液体７０を移動させるために利用される。図５を参照すると、止血パッド１００を調製するために、止血粉末２０が止血粉末容器１０（図示せず）から粉末トレー４０の中に移動され（図５Ａ）、ガーゼ束６９が液体７０で湿潤され（任意選択により、液体７０を液体容器６０（図示せず）から任意選択の液体トレー５０ｃに移動し、ガーゼ束６９を任意選択の液体トレー５０ｃの中に浸漬することによって）（図５Ｂ）、吹付けなどによる、ガーゼ束６９を湿潤させる他の方式について以下に記述するが、スキャフォールド３０が次いで、スキャフォールド３０をガーゼ束６９で軽く叩いてガーゼ束６９と接触させることによって、少なくとも一方の創傷側の面３２を湿潤され（図５Ｃ）、スキャフォールド３０が次いで、湿潤された創傷側の面３２を粉末２０に向けて下向きにして粉末トレー４０の中に浸漬され、止血粉末２０と接触され、結果として、止血粉末２０の少なくとも一部分が創傷側の面３２（図５Ｄ）に付着して、湿分によってスキャフォールド３０の創傷側の面３２に付着する止血粉末２０を含んだ本発明の止血パッド１００が形成され（図５Ｅ）、止血パッド１００が形成された実質的直後に（フィブリノゲンがフィブリンへの顕著な変換の前に）、湿った生物製剤含有止血パッドが創傷、組織又は器官の上に貼り付けられる（図示せず）。
【００２５】
ここで図６を参照するが、好ましい実施形態において、液体トレーを使用することなくあるいは任意選択で液体トレーを使用して、ガーゼ束など液体移動パッドを使用して本発明の止血パッド１００を調製する方法の各工程の順序が概略的に示されている。この調製工程は、止血パッドのアセンブリキットを開封する工程と、止血粉末を粉末トレーに加える工程と、中間液体移動パッド、液体噴霧、又は以下に記述する他の方法を用いてスキャフォールドの少なくとも一方の創傷側の面を液体で湿潤させる工程と、止血粉末を湿分によってそれに付着された止血パッドを形成するために、止血粉末の少なくとも一部分をスキャフォールドの少なくとも一方の創傷側の面の上に付着させるように、スキャフォールドの創傷側の面を粉末トレー内の止血粉末と接触させる工程と、フィブリノゲンがフィブリンに実質的に変換する前に、止血パッドを創傷、組織又は器官の上に貼り付ける工程と含む。
【００２６】
図６に示す好ましい実施形態において、湿潤させる工程は、当業者には知られているように、移動パッド、液体噴霧、又はスキャフォールドを液体で湿潤させる他の方法を利用することによって、液体トレーを使用してあるいは使用せずに実施される。
【００２７】
スキャフォールド３０を液体７０で湿潤させる一方法は、外科用ガーゼなどの中間的液体移動パッドを使用することによるものである。この実施形態では、外科用ガーゼが液体７０で湿潤され、次いでその湿潤されたガーゼは、スキャフォールド３０を湿潤されたガーゼで軽く叩くことによって液体７０の一部分をスキャフォールド３０に移動させるために利用される。
【００２８】
本発明の生物製剤含有止血パッド１００が組み立てられた直後に、出血部位に貼り付けられると、止血粉末タンパク質は、凍結乾燥したフィブリノゲン及び／又はトロンビンとして存在するときに、水和され、再構成され、フィブリノゲンからフィブリンへの変換を開始して、止血パッドの創傷側部分、及びそのパッドと接触する創傷、組織又は器官の上にフィブリン凝塊を形成する。フィブリンが創傷／組織／器官の表面に形成されることにより、止血及び組織への付着が促進される。トロンビン及びフィブリノゲンは、組織への付着前であっても、湿った状態に置かれると、反応すること及び転化を開始することが可能である。５分を超えるなど、止血パッド１００の組立から創傷への貼り付けまでの、数分を超える時間のような長時間は、止血及び創傷への付着などに関する性能に悪影響を及ぼし得る。本発明によれば、止血パッド１００は、実質的に組立の直後に創傷に貼り付けられ、止血粉末２０の少なくとも一部分をスキャフォールド３０の創傷側の面３２に付着させる工程から、創傷に貼り付け間の時間は、２秒〜３秒など数秒から５分未満、より好ましくは約５秒から約２分、最も好ましくは、１０秒、３０秒、又は６０秒など、１０秒から１分に及ぶ。スキャフォールド３０が止血粉末２０に最初に接触してから、創傷に貼り付けられるまでの時間は、好ましくは５分未満、最も好ましくは、６０秒、９０秒、又は１２０秒など、約２分以内である。
【００２９】
ここで図７を参照すると、いくつかの実施形態において、止血粉末２０は、粉末トレー４０ａに収容され、粉末トレー４０ａは、粉末トレー４０ａの縁部から引き剥がすことなどによる取外しを容易にするために任意選択の蓋つまみ４２を有する取外し式の蓋で密閉される。この実施形態において、止血パッドアセンブリキットは止血粉末容器１０を含まず、止血粉末２０は直接、粉末トレー４０ａに格納される。
【００３０】
いくつかの実施形態において、液体７０は液体トレー５０ａに収容され、液体トレー５０ａは、取外しを容易にするための任意選択の蓋つまみ５２を有する引き剥がし式の蓋５１などの取外し式の蓋で密閉される。この実施形態において、止血パッドのアセンブリキットは液体容器６０を含まず、液体７０は直接、液体トレー５０ａに格納される。
【００３１】
図７を参照すると、いくつかの実施形態において、液体７０は、液体容器６０の代わりに、噴霧機構６６を有する噴霧ボトル６５に収容される。この実施形態において、湿潤させる工程は、スキャフォールド３０を液体７０で直接、湿潤させるために液体噴霧を利用することによって、任意選択で液体トレーを使用せずに実施される。更に別の実施形態において、創傷側の面３２を上に向けてスキャフォールドを液体トレー内に配置した状態で液体トレーが利用され、続いて、液体７０が噴霧ボトル６５から創傷側の面３２の上に吹き付けられる。いくつかの実施形態において、噴霧機構６６は、吹付けのたびに定量の液体を排出する定量噴霧機構である。
【００３２】
図７を参照するが、いくつかの実施形態において、液体７０は、液体移動フェルトチップ６８を備えたペン様のディスペンサ６７に収容される。この実施形態において、湿潤させる工程は、液体７０をスキャフォールド３０の創傷側の面３２の上にフェルトチップ６８を介して移動させることによって実施される。
【００３３】
図７を参照するが、いくつかの実施形態において、液体７０は液体トレー５０ｃに収容され、少なくとも１０体積％の水を吸収することが可能な任意の無菌の外科用ガーゼから作られたガーゼ束６９が、液体７０を移動させるために利用される。ガーゼ束６９が液体トレー５０ｃの中に浸漬され、次いで、湿潤されたガーゼ束６９がスキャフォールド３０の創傷側の面３２と接触されて、液体７０がスキャフォールド３０に移動される。本開示を吟味すると、液体７０をスキャフォールド３０の創傷側の面の上に移動させるための他の手段も企図され、当業者に容易に明らかとなる。
【００３４】
ここで図８を参照すると、いくつかの実施形態において、乾燥フィブリノゲン粉末２０ａと乾燥トロンビン粉末２０ｂを別々に保管するための、着脱式キャップ１２ａ及び１２ｂで密閉される２つの粉末容器１０ａ及び１０ｂが提供されている。これらの粉末容器１０ａ及び１０ｂは、高温、多湿、及び容器の保存時間という困難な保存条件下において特に、フィブリノゲンとトロンビンが別々にされるがために保存寿命がより良好になるという利点を伴う。使用の際、それぞれ容器１０ａ及び１０ｂから取り出された乾燥フィブリノゲン粉末２０ａと乾燥トロンビン粉末２０ｂが、液体７０で湿潤されたスキャフォールド３０との接触に先立って混合される。一実施形態において、粉末は直接、粉末トレー４０内で混合される。一実施形態において、粉末は、容器１０ａ及び１０ｂなどの貯蔵容器のうちの１つで混合される。更に別の実施形態において、更なる任意選択の混合容器１０ｃが提供され、この混合容器１０ｃ内で乾燥フィブリノゲン粉末２０ａと乾燥トロンビン粉末２０ｂが使用前に混合される。不活性の脱凝集用物体（図８には示さず）が、任意選択の混合容器１０ｃと共に任意選択で供給され、以下で説明される。
【００３５】
スキャフォールド３０は好ましくは、少なくとも一部の液体７０を吸収することが可能な、少なくとも部分的に再吸収性があり、創傷適合性があり、滅菌適合性がある材料から作られる。いくつかの実施形態において、スキャフォールド３０は、ポリグラクチン９１０、酸化セルロース（ＯＣ）、酸化再生セルロース（ＯＲＣ）、ゼラチン、コラーゲン、キチン、キトサンなどのラクチド−グリコリドベースの共重合体を含めて、生体吸収性の天然高分子、生体吸収性の合成高分子、又はそれらの組合わせから作製される。天然の又は遺伝子操作された生体吸収性高分子の例が、タンパク質、多糖類、及びそれらの組合わせである。多糖類には、限定するものではないが、セルロース、酸化セルロース、酸化再生セルロース（ＯＲＣ）、アルキルセルロース、例えばメチルセルロース、アルキルヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、硫酸セルロース、カルボキシメチルセルロース塩、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、キチン、カルボキシメチルキチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩、アルギン酸塩、アルギン酸、アルギン酸プロピレングリコール、グリコーゲン、デキストラン、硫酸デキストラン、カードラン、ペクチン、プルラン、キサンタン、コンドロイチン、硫酸コンドロイチン、カルボキシメチルデキストラン、カルボキシメチルキトサン、キトサン、でんぷん、アミロース、アミロペクチン、ポリ−Ｎ−グルコサミン、ポリマンヌロン酸、ポリグルクロン酸、ポリグルロン酸、及び上記のいずれかの誘導体が挙げられる。
【００３６】
合成の生体吸収性高分子の例が、ポリエステル高分子、ポリエステル共重合体、及び／又はそれらの組合わせである。ポリエステルは、典型的には、乳酸、ラクチド（Ｌ−、Ｄ−、メソ形、及びＤ、Ｌ混合物を含む）、グリコール酸、グリコリド、ε−カプロラクトン、ｐ−ジオキサノン（１，４−ジオキサン−２−オン）、及びトリメチレンカーボネート（１，３−ジオキサン−２−オン）を含むが、これらに限定されないモノマーの開環重合において合成される。
【００３７】
本発明のスキャフォールド３０に好ましい特定の材料は、ポリグラクチン９１０（ＰＧ９１０）不織布繊維の層の下方にある酸化再生セルロース（ＯＲＣ）ニットバッキング層の複合材料マトリックスからなる。ＰＧ９１０は、９０％のグリコリドと１０％のＬ−ラクチドから作られた共重合体からなる合成の吸収性材料である。マトリックス製造プロセスの間、ＰＧ９１０繊維は打延べ綿シートへとカーディングされ、ＯＲＣバッキングにニードルパンチされて、スキャフォールド３０が作製される。マトリックスのＰＧ９１０側は、止血粉末１０でコーティングされる創傷側の面３２である。
【００３８】
スキャフォールド３０の典型的な組成は、約５〜３０ｍｇ／ｃｍ２のＯＲＣ（バッキング及び補強層として）と、５〜３０ｍｇ／ｃｍ２のＰＧ９１０（生物製剤／止血粉末担体層として）であり、全マトリックスは約１０〜６０ｍｇ／ｃｍ２の重量を有する。シェティー（Shetty）らへの米国特許第７、６６６、８０３号、名称「Ｒｅｉｎｆｏｒｃｅｄ  ｂｉｏａｂｓｏｒｂａｂｌｅ  ｍｕｌｔｉｌａｙｅｒｅｄ  ｆａｂｒｉｃ  ｆｏｒ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｄｅｖｉｃｅｓ」の教示が全ての目的のために、すべての内容を参照によって本明細書に組み込まれ、第１の生体吸収性不織布と酸化多糖類を含んだ第２の生体吸収性織布又は編物とを備える多層布を教示する。ゴーマン（Gorman）らによる公開済みの米国特許出願第２００９／０２４６２３８  Ａ１号、名称「Ｒｅｉｎｆｏｒｃｅｄ  Ｂｉｏａｂｓｏｒｂａｂｌｅ  Ｍｕｌｔｉｌａｙｅｒｅｄ  Ｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ  Ｗｏｕｎｄ  Ｄｒｅｓｓｉｎｇ」における教示は、全ての目的のために、すべての内容が参照によって本明細書に組み込まれ、第１の生体吸収性不織布、１つ以上の第２の生体吸収性織布又は編物、トロンビン及び／又はフィブリノゲンを有する多層創傷包帯を作製するための方法を教示し、この方法は、（ａ）１センチメートル当たり約４〜１２の捲縮数（１インチ当たり約１０〜３０の捲縮数）の範囲で生体吸収性高分子繊維又はヤーンを捲縮する工程と、（ｂ）捲縮した繊維又はヤーンを約０．３〜６．４センチメートル（０．１〜２．５インチ）のステープル長に切断する工程と、（ｃ）約１５〜２４℃の室温にて、湿度を約２０〜６０％に制御しながら、ステープルをカーディングして第１の生体吸収性不織布を形成する工程と、（ｄ）第１の生体吸収性不織布を第２の生体吸収性織布又は編物に付着させる工程と含む。この参照文献は、生体吸収性不織布、トロンビン及び／又はフィブリノゲンを含む創傷包帯を作製するための方法を更に開示しており、この方法は、（ａ）トロンビン及び／又はフィブリノゲンを過フッ素化炭化水素中に懸濁させて懸濁液を形成する工程と、（ｂ）その懸濁液を生体吸収性不織布に塗布する工程とを含む。
【００３９】
公開済みの米国特許出願第２００６／００８８５８９  Ａ１号、名称「Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｍａｋｉｎｇ  ａｎ  ａｂｓｏｒｂａｂｌｅ  ｈｅｍｏｓｔａｔ」（ゴーマン（Gorman）ら）における教示が、全ての目的のために、またすべての内容を参照によって本明細書に組み込まれ、創傷包帯を作製する方法を開示しており、前記方法は、トロンビン及び／又はフィブリノゲン粉末をそれらが溶解しない過フッ素化炭化水素の分散媒中に懸濁させる工程と、結果として得られた懸濁液を第１の吸収性不織布に塗布する工程とを含むことを特徴とする。
【００４０】
一実施形態において、スキャフォールド３０は一様な材料であり、創傷側の面３２とその反対の表側の側面３４は同じ特性を有する。いくつかの実施形態において、スキャフォールド３０は、織物又は不織物のＯＲＣ布又はフェルトから作られる。いくつかの実施形態において、スキャフォールド３０は、ＰＧ９１０の織物又は不織物の布又はフェルトから作られる。
【００４１】
いくつかの実施形態において、エシコン社（Ethicon）からＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）ＳＮｏＷ（商標）吸収性止血剤として商業的に入手可能な材料など、不織物のＯＲＣ系材料がスキャフォールド３０として使用され得る。他の実施形態において、エシコン社（Ethicon）からＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）Ｏｒｉｇｉｎａｌ吸収性止血剤及びＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）ＮＵ−ＫＮＩＴ（登録商標）吸収性止血剤として商業的に入手可能な材料など、織物のＯＲＣ系材料、並びに、エシコン社からＳＵＲＧＩＣＥＬ（登録商標）ＦＩＢＲＩＬＬＡＲ（商標）吸収性止血剤として商業的に入手可能な材料など、不織のＯＲＣ系材料が、スキャフォールド３０として使用され得る。
【００４２】
スキャフォールド３０は好ましくは大きさを定められ、治療部位の創傷を完全にあるいは少なくとも部分的に被覆するように選択された寸法を有している。いくつかの実施形態において、スキャフォールド３０は、頂面から又は底面から見て、三角形、矩形、楕円形、多角形、又は任意の他の幾何学的形状を有する平坦な物品である。スキャフォールド３０の厚さは、１ｍｍなど、約０．２ｍｍ〜約５ｍｍ、好ましくは約０．５ｍｍ〜約３ｍｍである。創傷側又はその反対の表面の各寸法は好ましくは、１０ｃｍ×１０ｃｍなど、約２ｃｍ×２ｃｍ以下〜約２０ｃｍ×２０ｃｍ以上の正方形の形状をなす。
【００４３】
乾燥粉末の形態をなす様々な止血材料が、本明細書における使用に企図される。好ましい実施形態において、止血粉末２０は、乾燥（凍結乾燥又は噴霧乾燥などされた）フィブリノゲンと、乾燥（凍結乾燥又は噴霧乾燥などされた）トロンビンとの混合物を、任意選択の更なる構成成分、賦形剤、及び安定剤と共に含む。添加剤には、止血促進剤、成長因子、カルシウム塩、吸収性脱凝集補助剤、増量剤、ゼラチン、コラーゲン、及びそれらの組合わせを更に挙げることができる。止血促進剤には、タンパク質、プロトロンビン、トロンビン、フィブリノゲン、フィブリン、フィブロネクチン、ヘパリナーゼ、第Ｘ／Ｘａ因子、第ＶＩＩ／ＶＩＩａ因子、第ＩＸ／ＩＸａ因子、第ＸＩ／ＸＩａ因子、第ＸＩＩ／ＸＩＩａ因子、組織因子、バトロキソビン、アンクロッド、エカリン、フォンビルブランド因子、コラーゲン、エラスチン、アルブミン、ゼラチン、血小板表面の糖タンパク質、バソプレシン、バソプレシン類似体、エピネフリン、セレクチン、プロコアグラント毒、プラスミノゲン活性化因子阻害因子、血小板活性化剤、止血活性を有する合成ペプチド、及び／又はそれらの組合わせが挙げられる。
【００４４】
一実施形態において、キット全体における止血粉末２０の組成物は、約５０重量％〜約９５重量％のフィブリノゲンであり、残りはトロンビン及び任意選択の賦形剤と安定剤である。止血粉末２０の粒径は、約５〜２０マイクロメートルから約３〜５ｍｍ、より好ましくは約５０マイクロメートルから約２ｍｍである。
【００４５】
いくつかの実施形態において、キット全体における止血粉末２０の量は、１個の止血パッド１００の調製に十分なものであり、また他の実施形態において、２個、３個、５個、又は１０個の止血パッド１００など、数個の止血パッド１００の調製に十分な量である。主に乾燥フィブリノゲン及び／又は乾燥トロンビンである止血粉末を使用する場合、１個の止血パッド１００を調製するための止血粉末２０の重量は、５０ｍｇ、５００ｍｇ、２０００ｍｇなど、約１０ｍｇ〜約５ｇに及ぶ。
【００４６】
止血用生物製剤含有パッド１００の創傷側表面の上に共に塗布されるときのフィブリノゲンとトロンビン（乾燥粉末として）の量は、１０ｍｇ／ｃｍ２のフィブリノゲンなど、好ましくは約１〜２００ｍｇ／ｃｍ２、より好ましくは２〜２０ｍｇ／ｃｍ２のフィブリノゲンと、５０ＩＵ／ｃｍ２のトロンビンなど、１〜５００ＩＵ／ｃｍ２のトロンビン、より好ましくは１〜１５０ＩＵ／ｃｍ２のトロンビンであり、塩化カルシウム、任意選択のアルギニン、グリシン、アルブミン、マンニトール、緩衝塩、及び乾燥した血漿誘導製品に見られる他の任意選択のタンパク質成分など、他の賦形剤も存在する。
【００４７】
止血生物製剤含有パッドの生物学的成分は好ましくは、凍結乾燥又は噴霧乾燥した形態のヒト又は動物源のフィブリノゲン及びヒト又は動物源のトロンビン物質である。フィブリノゲン及びトロンビン物質は別法として、既知の方式で組換えによって得られるかあるいは合成によって誘導され得る。
【００４８】
好ましい実施形態において、液体７０は、無菌の正常生理食塩溶液を含む。他の実施形態において、液体７０は、注射用蒸留水などの純水、又は、賦形剤若しくは止血、血塊の安定性、強度を向上させかつ／あるいは血塊溶解を抑制し得る材料の水溶液を含む。１つの例示的な添加剤がカルシウムであり、滅菌されたカルシウム塩含有溶液の実施形態である。
【００４９】
一実施形態において、液体７０は、エタノール又はエタノール／水の混合物などの非水溶媒を含む。有利にも、エタノール又はエタノール／水の混合物は、止血パッド１００を調製する間、止血粉末の再構成及び結果として生じるフィブリンの形成を緩慢にすると予想される。
【００５０】
一実施形態において、液体７０は、溶解したトロンビン又は別のフィブリノゲン活性化剤を含有し、一方で粉末容器１０は主にフィブリノゲンを収容する。使用の際、スキャフォールド３０は、トロンビンを含有する液体７０で湿潤され、次いでスキャフォールド３０は、フィブリノゲンベースの止血粉末と接触される。有利にも、フィブリノゲンとトロンビンが分離されることにより、そのようなキットは、高い温度、湿度、及び長期の貯蔵時間が予想される困難な貯蔵条件下で特に、より良好な保管寿命を示すはずである。
【００５１】
粉末容器１０及び着脱式キャップ１２は、止血粉末２０の長期貯蔵に十分な防壁を、すなわち非常に低い透気性及び透湿性をなす材料から作られ、当業者に知られている高分子、被覆高分子、及びガラスを含めて、好ましい材料が知られている。粉末容器１０の大きさは、任意選択の無充填空間を粉末容器１０の約１０％〜約９０％として止血用粉末を収容するように選択される。
【００５２】
いくつかの実施形態において、粉末容器１０は、１個の止血パッド１００の調製に十分な量の止血粉末２０を収容し得るが、他の実施形態において、粉末容器１０は、２個、３個、５個、又は１０個の止血パッド１００など、数個の止血パッド１００の調製用に十分な量の止血粉末２０を収容し得る。粉末容器１０の容積は、５ｍｌ、１０ｍｌ、又は２０ｍｌなど、約１ｍｌ〜約５０ｍｌに及び得る。
【００５３】
図９に示すように、一実施形態において、粉末容器１０はまた、少なくとも１個の脱凝集用球１４など、不活性の脱凝集用物体を任意選択で収容し得るが、この脱凝集用物体は、金属、プラスチック、ガラスなど、任意の不活性材料から作られ得るものである。粉末容器１０はまた、容器１０の出口を被覆する目開き１６を備えた篩様のメッシュ１５を任意選択で有し得、目開き１６は、止血粉末２０は流入させるが、任意選択の脱凝集用球１４又は止血粉末２０の大きな凝集体は粉末容器１０から出さないように大きさを定められる。使用の際、止血粉末２０を粉末容器１０から移動させるのに先立って、粉末容器１０は、脱凝集用球１４の有無にかかわらず、止血粉末２０を実質的に脱凝集させるのに十分な時間にわたって、着脱式キャップ１２を依然として粉末容器１０に付けて勢いよく振盪される。止血粉末を脱凝集させる時間は、１０秒など、約３秒〜約６０秒である。
【００５４】
粉末容器６０及び着脱式キャップ６２は、当業者に知られている高分子、被覆高分子、及びガラスを含めた好ましい材料と共に、液体７０の長期貯蔵に対して十分な防壁を、すなわち非常に低い透気性及び透湿性をもたらす材料から作られる。液体容器６０の大きさは、任意選択の無充填空間を液体容器６０の約１０％〜約９０％として液体７０を収容するように選択される。
【００５５】
いくつかの実施形態において、液体容器６０は、１個の止血パッド１００の調製に十分な量の液体７０を収容し得るが、他の実施形態において、液体容器６０は、２個、３個、５個、又は１０個の止血パッド１００など、数個の止血パッド１００の調製用に十分な量の液体７０を収容し得る。液体容器６０の容積は、２ｍｌ、５ｍｌ、１０ｍｌ、又は２０ｍｌなど、約０．５ｍｌ〜約５０ｍｌに及び得る。
【００５６】
粉末トレー４０及び液体トレー５０の寸法は、各トレーにおいてスキャフォールド３０を平坦な配置で十分に収容するように選択される。企図される寸法は次の通りであり、つまり、各トレーの幾何学的形状はスキャフォールド３０の幾何学的形状と同一であるが、スキャフォールド３０の寸法と比べて、１％又は３％など、０％〜１０％だけ大きい寸法をなす。各トレーの深さは、スキャフォールド３０の厚さの約２分の１からスキャフォールド３０の厚さの約１０倍となるように寸法を定められ得る。いくつかの実施形態において、トレーの深さは２ｍｍ、５ｍｍ、又は１０ｍｍである。
【００５７】
一実施形態において、本発明は、止血粉末が湿分によってその少なくとも１つの表面にしっとりと付着する止血又は組織封着材料又はパッドに関する。別の実施形態において、本発明はまた、止血又は組織封着材料又はパッドを調製する又は組み立てる方法に関する。別の実施形態において、本発明はまた、止血治療又は組織封着を創傷部位にもたらす方法に関し、その方法は、（ａ）上述のように止血又は組織封着材料又はパッドを形成する工程と、（ｂ）止血又は組織封着材料を創傷部位に貼り付ける工程とを含む。
【００５８】
本発明者らが、驚くべきことにまた予期せずに発見したこととして、上述のように、事前に活性化されたフィブリノゲン／トロンビン混合物をベースとする止血パッド１００を調製することにより、結果として、止血粉末２０のスキャフォールド３０への優れた付着性が得られ、また、そのように調製された止血パッド１００の創傷組織への優れた付着性が得られるだけでなく、迅速な止血作用が得られた。止血及び付着特性の著しい損失は観察されなかった。本発明者らが更に、驚くべきことにも発見したこととして、スキャフォールド３０の湿潤した表面と乾燥粉末粒子との間に生じる毛管力は、止血パッド１００が創傷部位に移動するのに十分な時間にわたって、乾燥止血粉末をスキャフォールド３０の創傷側の面上に保持するのに十分に強いものであった。
【００５９】
上記の例は、本発明の特定の実施形態を示すものであるが、それらは、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の完全な記述に寄与するものとして解釈されるべきである。
【実施例】
【００６０】
実施例１．本発明の止血パッドの調製及び使用の止血能試験
上述のような、ポリグラクチン９１０（ＰＧ９１０）不織布繊維の層の下方にある酸化再生セルロース（ＯＲＣ）ニットバッキング層の複合材料マトリックスから作られたスキャフォールドを利用した。動物源（ブタ）から誘導された（凍結乾燥された）乾燥止血粉末を利用した。約３９０ｍｇのトロンビン粉末（約２０ＩＵ／ｍｇの活性トロンビンを有する）と約１７００ｍｇのフィブリノゲン粉末（約０．４ｍｇ／ｍｇの凝固性フィブリノゲンを含む）が利用可能であった。止血粉末を、貯蔵中に形成された凝集ケークから脱凝集した。トロンビン及びフィブリノゲン粉末を次いで粉末トレーの中に移動し、十分に混合し、トレー中に均等に分散させた。この試験におけるスキャフォールドは、約１ｃｍの余裕を持たせて腎臓の縁部を被覆する大きさに切断されたものであり、スキャフォールドの大きさは３．５ｃｍ×２．５ｃｍの矩形片となった。
【００６１】
外科施術者が、出血を一時的に停止させるために腎臓にかかる圧力を保持及び維持しながら、遠位側の腎臓の約３ｃｍを外科的に除去することによって、部分的な腎摘出術を実施した。スキャフォールドを滅菌したトレーに置き、外科用ガーゼを食塩水で湿潤させ、次いでスキャフォールドを軽く叩いて、確実にＰＧ９１０ベースのスキャフォールド表面のすべてが湿るようにした。スキャフォールドを次いで、湿潤した表面を下にして、フィブリノゲンとトロンビンの凍結乾燥した止血粉末を含んだトレーの中に置き、短時間に軽く叩いて、確実に止血粉末が十分に吸収及び付着されるようにした。湿ったスキャフォールドが、凍結乾燥した止血粉末を効率的に吸収し、保持することを観察した。
【００６２】
止血粉末をスキャフォールドの一方の側面に付着させたスキャフォールドを次いで、標的の出血部位に直ちに移動させた。６０秒以内にこの移動及び配置を達成した。創傷に配置されたスキャフォールドに圧力を３分間、加えた。
【００６３】
止血粉末が吸収され、湿潤したスキャフォールドに確実に付着したことを本発明者らは観察した。３分の加圧時間は出血を完全に停止させるのに十分であった。止血の制御及び下にある組織への付着性は、乾燥止血粉末がスキャフォールドに事前に付着された既知の止血パッドと同様であった。驚くべきことに、出血部位への移動は、止血及び組織付着の有効性が実質的に低減する程度に止血粉末を時期尚早に活性化することなく達成され得た。
【００６４】
上行動脈の出血モデルにおいては、ブタのモデルにおける腹大動脈の５ｍｍの縦切開部に対し、メスを使用してブタの上行大動脈を露出させた。タンポン挿入法を施して、出血を一時的に停止させた。過剰な血液が吸引された後、上述のように調製した止血粉末装填済みの止血パッドを創傷部位に貼り付け、続いて湿ったガーゼ片を当て、用手圧迫した。３分後、出血が停止し、この止血パッドの止血剤としての有効性が示された。止血パッドの組織への付着性を、ピックアップでサンプルを引っ張ることによって評価した。サンプルを組織から分離するために、比較的大きな力が必要であった。
【００６５】
実施例２．スキャフォールドの湿潤性及び付着性の実証
使用した例示的なスキャフォールド材料は以下の通りである。
試験片ＳＦ：軽量で層状のＯＲＣベースの吸収性止血材料。
試験片ＳＳ：構造化不織布であり、かみ合い繊維でニードルパンチされた、ＯＲＣベースの吸収性止血材料。
試験片ＳＯ：緩く編まれたＯＲＣベースの吸収性止血材料。
試験片ＣＭ又は複合材料マトリックス：止血粉末担体層としてのポリグラクチン９１０（ＰＧ９１０）不織布繊維の層の下方にある酸化再生セルロース（ＯＲＣ）補強ニットバッキング層の複合材料多層マトリックスからなる。止血粉末試験として使用した、凍結乾燥された生物学的材料は、Ｂｉｏｓｅａｌ  Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ（〜８５０ｍｇ／５ｍｌバイアル）、Ｂｉｏｓｅａｌ  Ｔｈｒｏｍｂｉｎ（〜７８ｍｇ／５ｍｌバイアル）であった。
【００６６】
浸漬法それぞれ１つのバイアルのフィブリノゲン及びトロンビンを、それぞれのバイアル内で粉末にミリングし、続いて、両方の止血粉末を組み合わせ、それらを１つのバイアル内で手による振盪で混合した。混合した止血粉末を次いで５ｃｍ×１０ｃｍのプラスチックトレーの中へと移動し、より大きな止血粉末粒子及び凝集塊を乳棒で潰し、混合した脱凝集済みの止血粉末を次いでトレー中に均等に分布させた。５ｍｌの通常生理食塩水を別の５ｃｍ×１０ｃｍのトレーの中に移動した。スキャフォールドを５ｃｍ×１０ｃｍの大きさに切断し、次いで、食塩水を収容したトレーの中に平坦な配置で置き、約１５秒間、浸漬させた。湿潤したスキャフォールドを次いで、混合した脱凝集済みの止血粉末を収容したトレーの中に移動し、止血粉末の中に平坦な配置で置き、スキャフォールドの露出した表側表面をその面積の全体にわたって約３０秒間、軽く叩いて、止血粉末の吸収を増強した。止血粉末装填済みのスキャフォールドを次いで、トレーから取り除き、粉末トレーに残存する止血粉末を観察して、スキャフォールドによる止血粉末の採り上げの完成度を分析した。
【００６７】
吸着試験の結果が示すこととして、試験片ＳＦは溶媒を迅速にかつ完全に吸収し、スキャフォールドの上層は依然として乾燥しており、試験片ＳＦは止血粉末の大部分を浸漬法で吸収し、試験片ＳＳは、液体のすべてはトレーから吸収せず、他の試験基板と比べて最少の止血粉末を吸収した。試験片ＳＯは浸漬の後に変形し、依然として液体が残った。試験片ＳＯは一部の止血粉末を吸収したが、更なる試験では使用されなかった。試験片ＣＭ、つまり複合材料マトリックスは一部の液体を吸収したが、一部をトレーに残した。複合材料マトリックスは止血粉末を吸収せず、その代わりに、止血粉末は湿潤され、粉末トレー中で反応された。全体として、過剰な液体を使用しても、すなわち複合材料マトリックス又は他の試験片を液体中に完全に浸漬させるまでしても、止血粉末の採り上げ及び付着の程度を改善することにはならないことが観察された。
【００６８】
湿潤のためのワイピング法実験の段取り及び材料は、上述の条件及び材料と類似したものであった。トレー内でスキャフォールドを液体で湿潤させる代わりに、外科用ガーゼを液体移動手段として使用し、それにより、ガーゼを、１０ｍｌの通常生理食塩水を収容した容器の中に漬け、湿潤させ、次いで２．５ｃｍ×１０ｃｍのスキャフォールド表面に軽くかつ迅速に当てた。その直後、スキャフォールドを、湿潤した表面を下にして、配合した脱凝集済みの止血粉末のトレーの中に平坦な配置で移動させ、止血粉末と接触させて、スキャフォールドの露出した上面をその面積の全体にわたって約３０秒間、軽く叩いて、止血粉末が吸収されるようにした。止血粉末装填済みのスキャフォールドを次いで、トレーから取り除き、粉末トレーに残存する止血粉末を観察して、スキャフォールドによる止血粉末の採り上げの完成度を分析した。試験の結果は、試験片ＳＳ及び試験片ＣＭ、複合材料マトリックスのスキャフォールドが最多の止血粉末を採り上げたことが示された。
【００６９】
実施例３．組織付着性の評価
上述のような複合材料マトリックス（試験片ＣＭ）と試験片ＳＳを組織付着性に関して更に試験した。止血粉末とスキャフォールドの異なる組み合わせをそれぞれが含む、止血粉末混合物の異なる３つの群（各群の試験回数Ｎ＝４）の評価によって付着強さを試験するために、選択したスキャフォールドを１．９×１０センチメートル（３／４インチ×４インチ）のストリップへと事前に切断し、次いで、配合した脱凝集済みの止血粉末でコーティングした直後に、そのサンプルストリップをウシの真皮の上に置いた。止血粉末の各投与量を試験現場で調製したが、それらは次のもの：つまり、合計で１３０ｍｇ又は６．７ｍｇ／ｃｍ２のフィブリノゲンと、合計で１４５０ＩＵ又は７５ＩＵ／ｃｍ２のトロンビンと、合計で１８ｍｇ又は０．９３ｍｇ／ｃｍ２の塩化カルシウムとを含んだ、配合した脱凝集済みの止血粉末でコーティングした試験片ＳＳ（不織ＯＲＣ）；合計で１３０ｍｇ又は６．７ｍｇ／ｃｍ２のフィブリノゲンと、合計で１４５０ＩＵ又は７５ＩＵ／ｃｍ２のトロンビンと、合計で１８ｍｇ又は０．９３ｍｇ／ｃｍ２の塩化カルシウムとを含んだ、配合した脱凝集済みの止血粉末でコーティングした試験片ＣＭ（複合材料マトリックス）；合計で１３０ｍｇ又は６．７ｍｇ／ｃｍ２のフィブリノゲンと、合計で４８４ＩＵ又は２５ＩＵ／ｃｍ２のトロンビンと、合計で１８ｍｇ又は０．９３ｍｇ／ｃｍ２の塩化カルシウムとを含んだ、脱凝集済みの止血粉末でコーティングした試験片ＣＭ（複合材料マトリックス）；である。
【００７０】
以下の手順は、引剥がし付着強さ試験用のサンプルを調製する工程を要約したものである：バイオシール（Bioseal）社のトロンビンとフィブリノゲンを、スパチュラを使用して元のバイアル内で粉末形態へとミリングする。バイオシール社製トロンビンの３つの５ｍｌバイアルをバイオシール社製フィブリノゲンの１つの５ｍｌバイアルに混合して、７５ＩＵ／ｃｍ２のバイオシール社製トロンビンを必要とする試験グループ用に、６．７ｍｇ／ｃｍ２のフィブリノゲンと７５ＩＵ／ｃｍ２のトロンビンの混合物を得る。止血粉末が十分に混合されるまで、その１つのバイアル内の混合物を手で振盪する。バイオシール社製トロンビンの１つの５ｍｌバイアルをバイオシール社製フィブリノゲンの１つの５ｍｌバイアルと混合して、６．７ｍｇ／ｃｍ２のフィブリノゲンと２５ＩＵ／ｃｍ２のトロンビンの混合物を得る。止血粉末が十分に混合されるまで、バイアル内の混合物を手で振盪する。止血粉末混合物を分配し、止血粉末を５ｃｍ×１０ｃｍのプラスチックトレーの中に均等に分布させる。１ｍｌ〜２ｍｌの食塩水を小さな容器に入れ、ガーゼを食塩水で湿潤させる。食塩水を、湿潤したガーゼから事前に切断されたスキャフォールドの１．９×１０センチメートル（３／４×４インチ）のストリップの上に、ストリップの全体を覆うように軽くかつ迅速に移動させる。湿潤したスキャフォールドを平坦な配置で粉末トレーの中に、湿潤した表面を止血粉末に向けて下向きにして定置し、スキャフォールドを止血粉末の中へと軽く押し付ける。このようにして調製したフィブリンパッドを取り出し、引剥がし力（付着強さ）を直ちに試験するためにそのフィブリンパッドを真皮上に移動する。
【００７１】
付着強さ（引剥がし力）の試験を、以下に記述する標準試験プロトコルに従って周囲条件で実施した。装置は、Ｍｏｄｅｌ  ５５４４  Ｉｎｓｔｒｏｎ  ＴＪ−０４１と、Ｉｎｓｔｒｏｎ  １０−Ｎロードセル（ＬＣ−１４５）と、Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｂａｌａｎｃｅ：ＳＥ−１０９と、ウシのふくらはぎの真皮（ランパイア・バイオロジカルズ社（Lampire Biologicals））とを含む。ふくらはぎの真皮組織に対する組織付着強さを測定するために用いる試験方法は、以下の通りであった。この試験は、ふくらはぎの真皮組織からの止血パッド製品の９０度の引剥がしを実施するのに必要な平均力を直接、測定するものである。簡潔に言えば、止血パッドが真皮組織の表面に貼り付けられ、タンポン挿入法を模するために静荷重が製品に加えられる。引剥がし強さの力は、止血パッドの組織付着特性の指標として測定される。
【００７２】
少なくとも０．１０ｃｍ（０．０４０インチ）の厚さを持つ調製した真皮サンプルを０．１％のＫＯＨ溶液に浸漬し、次いで水ですすいだ。サンプルを次いで食塩液に浸漬した。真皮片を次いで支持体の上に固定し、３７±１℃にした。３ｍｌのＴＢＳを真皮表面の上に均等に吹き付け、次いで過剰な湿分をその表面から除去した。次いで、生物製剤含有側を下に、タンポン挿入法のおもりを上に配置して、止血パッドを真皮組織の上に置いて培養を３分間、進行させた。次いでタンポン挿入法のおもりを取り除き、つかみ具によって止血パッドをＩｎｓｔｒｏｎテンションロッドに連結し、その後に引っ張り試験を開始した。次いで、それらの結果を、計算引剥がし力（Ｎ）／止血パッドストリップ幅（ｍ）＝Ｎ／ｍとして示す。
【００７３】
引剥がし力試験の結果を表１に示す。
【００７４】
【表１】
0006363186.tif 000002
【００７５】
表１のデータの分析から示されることとして、６．７ｍｇ／ｃｍ２のフィブリノゲンと２５ＩＵ／ｃｍ２のバイオシール社製トロンビン（トロンビン：フィブリノゲンの比１：１）又は６．７ｍｇ／ｃｍ２のフィブリノゲンと７５ＩＵ／ｃｍ２のバイオシール社製トロンビン（トロンビン：フィブリノゲンの比３：１）を有する複合材料マトリックスのスキャフォールドは、試験片ＳＳのスキャフォールドと比較して、より高い引剥がし付着強さを有した。６．７ｍｇ／ｃｍ２のフィブリノゲンと２５ＩＵ／ｃｍ２のトロンビン（フィブリノゲン：トロンビンの比１：１）を用いたコーティングは、６．７ｍｇ／ｃｍ２のフィブリノゲンと７５ＩＵ／ｃｍ２のトロンビン（フィブリノゲン：トロンビンの比１：３）を用いたコーティングに対して、いくぶんか高い平均引剥がし強さを生じたが、一部の個々の読みはこれら２つの群で同等であった提示したデータから明らかとなることとして、本発明の方法を用いて本発明の止血装置を調製することにより、乾燥止血粉末を創傷側表面に事前にコーティングして製造及び貯蔵されたフィブリンパッドに匹敵する高度な付着強さが得られた。
【００７６】
本発明について、その詳細な説明と共に述べてきたが、上記の説明は、例示することを意図したものであり、本発明の範囲を限定することを意図したものではなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義されることが理解されよう。他の態様、利点、及び修正も請求項の範囲内である。
【００７７】
〔実施の態様〕
（１）  止血創傷治療装置であって、
創傷側表面とその反対の表面とを有する生体吸収性スキャフォールドであって、血液でも血漿でもない生体適合性の液体で湿潤される、生体吸収性スキャフォールドと、
湿分によって前記生体吸収性スキャフォールドの少なくとも前記創傷側表面に付着する止血粉末と、を含む、止血創傷治療装置。
（２）  前記止血粉末は乾燥フィブリノゲンと乾燥トロンビンとの混合物を含む、実施態様１に記載の止血創傷治療装置。
（３）  前記止血粉末は乾燥フィブリノゲンを含む、実施態様１に記載の止血創傷治療装置。
（４）  前記止血粉末は乾燥トロンビンを含む、実施態様１に記載の止血創傷治療装置。
（５）  前記生体適合性の液体は、水溶液、通常生理食塩水、エタノール、及びエタノールと水との混合物からなる群から選択される、実施態様１に記載の止血創傷治療装置。
【００７８】
（６）  前記生体適合性の液体は止血薬を含む、実施態様５に記載の止血創傷治療装置。
（７）  前記生体適合性の液体は、トロンビン、フィブリノゲン、止血促進薬、成長因子、カルシウム塩、吸収性脱凝集補助剤、増量剤、ゼラチン、コラーゲン、及びそれらの組合わせを含む、実施態様６に記載の止血創傷治療装置。
（８）  前記生体適合性の液体は、タンパク質、プロトロンビン、フィブリン、フィブロネクチン、ヘパリナーゼ、第Ｘ／Ｘａ因子、第ＶＩＩ／ＶＩＩａ因子、第ＩＸ／ＩＸａ因子、第ＸＩ／ＸＩａ因子、第ＸＩＩ／ＸＩＩａ因子、組織因子、バトロキソビン、アンクロッド、エカリン（ecarin）、フォンビルブランド因子、コラーゲン、エラスチン、アルブミン、ゼラチン、血小板表面の糖タンパク質、バソプレシン、バソプレシン類似体、エピネフリン、セレクチン、プロコアグラント毒（procoagulant venom）、プラスミノゲン活性化因子阻害因子、血小板活性化剤、止血活性を有する合成ペプチド、及び／又はそれらの組合わせを含む、実施態様７に記載の止血創傷治療装置。
（９）  前記スキャフォールドは、酸化多糖類又は生体吸収性の合成高分子を含む、実施態様１に記載の止血創傷治療装置。
（１０）  前記スキャフォールドは、ラクチド−グリコリド高分子層と、酸化再生セルロースを含んだセルロース層とを含んだ多層構造の複合材料である、実施態様９に記載の止血創傷治療装置。
【００７９】
（１１）  前記止血粉末は前記ラクチド−グリコリド高分子層に付着し、その反対の表面層は前記酸化再生セルロースを含む、実施態様１０に記載の止血創傷治療パッド。
（１２）  実施態様１に記載の止血創傷治療パッドを作製及び使用する方法であって、
ａ）前記スキャフォールドを前記生体適合性の液体で湿潤させることと、
ｂ）前記スキャフォールドを前記止血粉末と接触させ、前記止血粉末の少なくとも一部分を前記スキャフォールドの少なくとも前記創傷側表面に付着させることと、
ｃ）前記止血創傷治療パッドの前記創傷側表面を創傷の上に貼り付けることと、を含む、方法。
（１３）  前記スキャフォールドが前記止血粉末と最初に接触してから、続いて前記止血創傷治療パッドが前記創傷の上に貼り付けられるまでの時間間隔は２分未満である、実施態様１２に記載の方法。
（１４）  止血創傷治療パッド用の調製キットであって、
ａ）少なくとも１種類の粉末止血材料と、
ｂ）生体吸収性スキャフォールドと、
ｃ）生体適合性の液体と、
ｄ）塗布トレーと、を含み、
構成要素ａ）〜ｄ）が組み合わされて一体化したパッケージユニットとなる、キット。
（１５）  前記少なくとも１種類の粉末止血材料は、フィブリノゲン、トロンビン、及びそれらの混合物からなる群から選択されるタンパク質を含む、実施態様１４に記載のキット。
【００８０】
（１６）  前記生体適合性の液体は、水、水溶液、通常生理食塩水、トロンビン溶液、フィブリノゲン溶液、アルコール、及びグリセロールからなる群から選択される、実施態様１４に記載のキット。
（１７）  前記少なくとも１種類の粉末止血材料は乾燥フィブリノゲンと乾燥トロンビンとの混合物を含み、かつ前記生体適合性の液体は通常生理食塩水を含む、実施態様１４に記載のキット。
（１８）  前記粉末止血材料は乾燥フィブリノゲンを含み、かつ前記生体適合性の液体はトロンビン溶液を含む、実施態様１７に記載のキット。
（１９）  前記生体吸収性スキャフォールドを前記液体で湿潤させるための手段を更に含む、実施態様１４に記載のキット。
（２０）  前記湿潤させるための手段は、（１）液体移動パッド、（２）噴霧ボトル、（３）移動ペン、又は（４）液体トレーであり、前記液体トレーが、前記生体吸収性スキャフォールドを、前記創傷側の面を前記液体トレーに向けて浸漬するのに適合する大きさを有する、実施態様１９に記載のキット。
【００８１】
（２１）  前記液体移動パッドは、外科用ガーゼの束を含む、実施態様２０に記載のキット。
（２２）  前記粉末止血材料は前記粉末トレー内にパッケージされる、実施態様１４に記載のキット。
（２３）  前記生体吸収性スキャフォールドは、生体吸収性多糖類、生体吸収性合成高分子、生体吸収性タンパク質、又はそれらの組合わせである、実施態様１４に記載のキット。
（２４）  前記生体吸収性スキャフォールドは、布、織布材料、不織布材料、メッシュ、又はそれらの組合わせである、実施態様１４に記載のキット。
（２５）  前記生体吸収性スキャフォールドは、酸化再生セルロースを含んだセルロース層と、ポリグラクチン９１０を含んだ高分子層とを有する多層複合構造体である、実施態様１４に記載のキット。
【図１】
0006363186.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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