(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも４０％の全ポリフェノールを含有する緑茶抽出物と紅茶抽出物の混合物を含有する抗酸化組成物であって、
該混合物が３０％〜７０％の緑茶抽出物と７０％〜３０％の紅茶抽出物とを含有し、
カテキンおよびテアフラビンを最小量で合わせて２０％及びエピガロカテキン‐３‐ガラートを７％〜１４％含有する、抗酸化組成物。
【請求項２】
抽出物が水抽出物である、請求項１に記載の抗酸化物質。
【請求項３】
前立腺腫瘍増殖のないヒトの泌尿器の健康を改善するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
ヒトのＡＵＡ症状スコアを下げるための、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
ヒトの炎症を抑えるための、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前立腺腫瘍増殖のないヒトの下部尿路症状を改善するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前立腺腫瘍増殖のないヒトの性欲を改善するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
改善された身体機能を通じてヒトの生活の質を改善するための、請求項１に記載の組成物であって、該身体機能としては日常生活の活動が挙げられるがこれに限定するものではない、組成物。
【請求項９】
ヒトの前立腺肥大症（ＢＰＨ）を改善するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前立腺腫瘍増殖のないヒトの夜間頻尿を改善するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前立腺腫瘍増殖のないヒトの尿勢低下を改善するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前立腺腫瘍増殖のないヒトの頻尿を改善するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前立腺腫瘍増殖のないヒトの尿線途絶を改善するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前立腺腫瘍増殖のないヒトの残尿を改善するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
ヒトの酸化ストレスを改善するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
ヒトの血圧を低下させるための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
糖尿病でないヒトの空腹時血糖を低下させるための、請求項１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１３年２月１３日出願の米国特許出願第６１／７６４，０１７号および２０１２年１０月１５日出願の米国特許出願第６１／７１３，８９６号に対する優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
下部尿路症状（ＬＵＴＳ）の有病率は加齢と共に増加する。５０代男性の約２５％、男性の５０％が煩わしいＬＵＴＳを経験しており、生活の質の低下につながっている。ＬＵＴＳは排尿症状、蓄尿症状、排尿後症状に分類することができ（Abrams P, Cardozo L, Griffiths D, Rosier P, UlmstenU, Van Kerrebroeck P, Victor A, WeinA（2002）The Standardization of Terminology of Lower Urinary Tract Function（下部尿路機能に関する用語基準）：Report from the StandardisationSub-committee of the International Continence Society（国際禁制学会標準化部会報告）Neurourology and Urodynamics 21:167-178）、患者の報告する生活の質（ＱＯＬ）の低下につながることが多い（Wei J, Calhoun E, Jacobsen S: Urologic diseases in America project：benign prostatic hyperplasia（前立腺肥大症）J Urol 2005; 173: 1256.)。排尿症状としては、排尿の開始または持続の困難、腹圧排尿、滴下、尿勢低下、残尿が挙げられる。蓄尿症状としては、頻尿、特に夜間頻尿または尿意切迫感を伴う頻尿を挙げることができ、主な排尿後症状は排尿後滴下である。ＬＵＴＳの頻度や重症度を数値化するため、診断過程の一環として米国泌尿器科学会（American Urological Association（ＡＵＡ））症状スコアまたは国際前立腺症状スコア（International Prostate Symptom Score（ＩＰＳＳ））などの質問票がよく使用されている。ＡＵＡ症状スコアでは、最高点を３５点とし、８〜１９点が中等度の症状、２０〜３５点が重度の症状を示す。
【０００３】
ＬＵＴＳは慎重な経過観察、薬物療法、または外科的手術のいずれかによって処置される（症状の原因による）。処置は症状の範囲や生活の質への影響に基づく。ＬＵＴＳに対する薬理学的治療としてはαアドレナリン拮抗薬（α遮断薬（アルフゾシン、ドキサゾシン、タムスロシン、テラゾシン、シロドシン））、５α還元酵素阻害薬（５‐ＡＲＩ（デュタステリド、フィナステリド））、抗コリン剤、ＰＤＥ‐５阻害薬（Auffenberg G, Helfan B, McVary K: Established medical therapy for benign prostatic hyperplasia（前立腺肥大症の治療として確立された医学療法）Urol Clin North Am 2009; 36: 443）が挙げられる。外科的治療法としては、経尿道的前立腺切除術（ＴＵＲＰ）、経尿道的ニードルアブレーション（ＴＵＮＡ）、経尿道的マイクロ波温熱療法（ＴＵＭＴ）、開腹前立腺切除術、ホルミウムレーザーによる経尿道的前立腺蒸散術（ＨｏＬＡＰ）（AUA Practice Guidelines）が挙げられる。ＬＵＴＳ治療のための補助的アプローチとして、栄養補助食品や、ノコギリヤシ（Serenoa repens）やピジウム（Pygeum africanum）などの植物療法剤の使用が挙げられるが、これらの薬剤については矛盾した結果が文献で報告されている（Dvorkin L, Song KY. Herbs for benign prostatic hyperplasia.（前立腺肥大症治療のための生薬）6. Ann Pharmacother. 2002 Sep;36(9):1443-52; Tacklind J, MacDonald R, Rutks I, Wilt TJ. Serenoa repens for benign prostatic hyperplasia（前立腺肥大症治療のためのノコギリヤシ）Cochrane Database Syst Rev. 2009 Apr 15;(2):CD001423）。
【０００４】
下部尿路症状（ＬＵＴＳ）は複数の原因によるものと提唱されている。ＬＵＴＳの原因として可能性のあるものは多く、ＬＵＴＳの原因として最も一般的なものは前立腺腫大（前立腺肥大症（ＢＰＨ）としても知られる）である。追加的な原因としては、排尿筋の筋力低下または過活動、尿路感染、慢性前立腺炎、尿路結石、または神経障害が挙げられる。最近の１０年間では、炎症、酸化ストレス、アポトーシス抑制（結果として細胞増殖の不均衡が生じる）がＬＵＴＳの原因である可能性があると考えられてきた。ＬＵＴＳまたはＬＵＴＳ治療を評価する臨床試験では、ＬＵＴＳの原因につながる交絡因子を排除するため、組織学的なＢＰＨが確認された男性またはＢＰＨが示唆されるＬＵＴＳを有する男性を被験者として参加させる（AUA Practice Guidelines Committee, authors. AUA guideline on management of benign prostatic hyperplasia（前立腺肥大症の処置に関するＡＵＡガイドライン）(2003), chapter 1: diagnosis and treatment recommendations（第１章：診断および治療に関する勧告）J Urol. 2003;170(2 pt 1):530-547）。
【０００５】
前立腺は男性に存在する小さな腺で、生殖器系の一部であり、精液の産生を助ける機能を持つ。前立腺は、膀胱の下にあって直腸の真正面の位置にあり、尿道の一部を囲んでいる。最も一般的な前立腺の３つの問題は、非癌性の問題、すなわち炎症（前立腺炎）（Wei J, Calhoun E, Jacobsen S: Urologic diseases in America project: benign prostatic hyperplasia（米国泌尿器疾患プロジェクト：前立腺肥大症）J Urol 2005; 173: 1256）、前立腺肥大症（McVary K: BPH: Epidemiology and Comorbidities（ＢＰＨ：疫学と共存疾患）Am J Manag Care 12 2006; 5 Suppl: S122）、または前立腺がんの場合は癌性の問題（AUA Practice Guidelines Committee, authors. AUA guideline on management of benign prostatic hyperplasia（前立腺肥大症の処置に関するＡＵＡ実務ガイドライン）（2003），chapter 1:diagnosis and treatment recommendations（第１章：診断および治療に関する勧告）J Urol. 2003;170(2 pt 1):530-547）として分類される。前立腺は加齢と共に大きくなる傾向にある。前立腺肥大は生活の質に影響を及ぼしたり、尿路、膀胱、腎臓に問題を起こしたりする可能性がある。前立腺肥大は５０代男性の約５０％に発症しており、８０代男性ではその有病率は９０％まで上昇する（Wei J, Calhoun E, Jacobsen S: Urologic diseases in America project: benign prostatic hyperplasia（米国泌尿器疾患プロジェクト：前立腺肥大症）J Urol 2005; 173: 1256; McVary K: BPH: Epidemiology and Comorbidities（ＢＰＨ：疫学と共存疾患）Am J Manag Care 12 2006; 5 Suppl: S122）。前立腺肥大はＬＵＴＳを引き起こす可能性もある。ＢＰＨの原因と発病機序については、最近の１０年では炎症とアポトーシスが原因である可能性があると考えられてきたが、大部分は不明である。ＭＴＯＰＳ（Medical Therapy of Prostate Symptoms）試験に参加したＢＰＨ患者の前立腺に存在する炎症性浸潤が疾患の進行速度の上昇と関連があるとされた。
【０００６】
大規模な臨床試験において、１３週間にわたり薬理学的治療を受けた、中等度〜重度のＬＵＴＳを有する男性１１４５名に、自分の状態を「悪化した」、「改善がみられない」、「わずかに改善がみられた」、「中程度の改善がみられた」、または「顕著な改善がみられた」と評価させ、ＡＵＡ症状スコアが３点下がれば「わずかに改善がみられた」、５．１点下がれば「中程度の改善がみられた」とした（Barry MJ, Williford WO, Chang Y, et al. Benign prostatic hyperplasia specific health status measures in clinical research: How much change in the American Urological Association symptom index and the benign prostatic hyperplasia impact index is perceptible to patients?（臨床研究における前立腺肥大症に特異的な健康状態の評価：米国泌尿器学会症状スコアと前立腺肥大症影響スコアの変化は患者にどの程度知覚されるか？）Journal of Urology 1995;154:1770-4）。１３週間で症状がわずかに改善したと考えた男性の自己評価したＡＵＡ症状スコアでは、基準スコアに応じて最少知覚差異が異なっていた。ＡＵＡ症状スコアの基準スコアが８〜１９の男性の場合、状態がわずかに改善したと感じた男性ではスコアが２点下がり、状態が中程度に改善したと感じた男性ではスコアが４点下がった。基準スコアが２０以上で状態がわずかに改善したと感じた男性ではスコアが６点下がった。
【０００７】
膀胱が尿道へ向かって狭くなる部分の筋肉を弛緩させるα遮断薬、および前立腺を縮める５α還元酵素阻害薬の単独使用または併用がＢＰＨやＬＵＴＳの臨床的進行を抑えるための有効な薬物治療であることがわかっている。ＬＵＴＳを対象とするその他の一般的な植物性栄養補助剤としては、βシトステロール、ノコギリヤシ、ピジウム、ネトルなどが挙げられる。治療をしなければ、ＬＵＴＳは膀胱の機能低下、尿の逆流による膀胱または腎臓の感染症、尿流の完全な閉塞（急性尿閉としても知られる）、または腎不全を引き起こす可能性がある。前立腺がん（ＰＣ）は世界の男性のがん死亡原因のうち肺がんに続いて２番目に多い。ＰＣは局所病変に始まり、進行すると浸潤能および転移能を得てアンドロゲン依存性の状態からアンドロゲン非依存性の状態へと移行する。前立腺上皮内腫瘍（ＰＩＮ）は前立腺に見られる前癌性の増殖であり、一般的にはＰＣが発生する数年前に起こる。最近の証拠では、ＬＵＴＳを有する男性の前立腺がん発症リスクが同年齢の無症状の男性に比べて高いわけではないと示唆されている（Young, J. M., D. J. Muscatello, et al. (2000). "Are men with lower urinary tract symptoms at increased risk of prostate cancer? A systematic review and critique of the available evidence.（下部尿路症状のある男性は前立腺がんのリスクが高いか？−入手可能な証拠の系統的検討と批評）"BJU International 85(9): 1037-1048）。栄養療法では、ＢＰＨを併発したＬＵＴＳまたはＢＰＨを併発していないＬＵＴＳに加え、ＰＣの疾患リスクやＢＰＨ、ＰＩＮ、ＰＣの進行を抑えることが目標とされてきたが、茶が有望な薬剤であることが明らかになってきた。茶の消費は前立腺がんリスクの低下と関連すると考えられ、ＰＣおよびその他の健康問題の予防を助けるために緑茶を飲むことをMayo Clinicが推奨している（Prostate cancer prevention: What you can do.（前立腺がん予防：あなたができること）Mayo Clinic, 2009.（２０１１年５月１２日にhttp://www.mayoclinic.com/health/prostate-cancer-prevention/MC00027.からアクセス））。前立腺の問題に対する非処方箋治療が望まれており、２５％を超えるＰＣ患者が緑茶および緑茶抽出物を含む代替療法を利用しているという証拠がある（Jacobson, J. S., and Chetty, A. P. (2001) Current oncology reports 3, 448-452）。緑茶および紅茶は強力な抗酸化剤であるポリフェノールを豊富に含有する。緑茶と紅茶は加工技術が異なるため、抗酸化特性がわずかに異なる。収穫後間もない緑茶の葉を蒸してポリフェノールの酸化を防ぐのに対し、紅茶の葉は意図的に乾燥させ、粉砕し、発酵してポリフェノールを酸化させる。乾燥茶葉２ｇから淹出した一般的なカップ１杯分の緑茶には水抽出可能な物質が約３分の１（６６０ｍｇ）含まれている。Kemin Human Nutrition and Healthによる内部分析の結果、市販の淹出緑茶１杯には総カテキン量が１０９〜１７６ｍｇ、総ポリフェノール量が１８０〜２４３ｍｇの範囲で含まれていることがわかった。緑茶カテキンとしては、エピガロカテキン‐３‐ガラート（ＥＧＣＧ）、エピカテキン‐３‐ガラート（ＥＣＧ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、エピカテキン（ＥＣ）が含まれ、ＥＧＣＧが緑茶に最も多く含まれるカテキンである（淹出緑茶１杯あたり約１００〜１５０ｍｇ）。同様に淹出した紅茶１杯には、水抽出可能な物質中にカテキ��３〜１０％、テアフラビン２〜６％、２０％を超えるテアルビジンが含まれている。主なテアフラビン化合物としてはテアフラビン（ＴＦ１）、テアフラビン‐３‐ガラート（ＴＦ２Ａ）、テアフラビン‐３’‐ガラート（ＴＦ２Ｂ）、テアフラビン‐３，３’‐ジガラート（ＴＦ３）が挙げられる。内部分析した市販の淹出紅茶は、１杯あたりテアフラビン４〜８ｍｇ、総カテキン量６９〜８９ｍｇ、総ポリフェノール量１６７〜２１４を含有していた。茶葉のカフェイン含有量は、水抽出可能な物質の約２〜５％である。緑茶と紅茶はいずれも抗酸化活性および抗炎症活性を示したが、いずれも下部尿路症状を抑えるのに有効であるとは実証されていない。
【０００８】
緑茶および紅茶は広く研究されており、大規模な疫学的研究により、酸化ストレスおよび／または慢性炎症の機序に関連する病態を有する様々な疾患、たとえば肥満、糖尿病、心血管疾患、ＢＰＨやＰＣなどの泌尿器の状態などの発生率の低下に茶の摂取が関連することが報告されている（Hsu A, Bray TM, Ho E. Anti-inflammatory activity of soy and tea in prostate cancer prevention（前立腺がん予防における大豆および茶の抗炎症活性）Exp Biol Med (Maywood). 2010 Jun;235(6):659-67; Bettuzzi et al., 2006）。炎症細胞および炎症誘発性サイトカインも前立腺組織の増殖に関与し得ることを示す研究によって、炎症が煩わしいＬＵＴＳを引き起こす原因であると提唱されている（Liao CH, Chung SD, Kuo HC. Serum C-reactive protein levels are associated with residual urgency symptom s in patients with benign prostatic hyperplasia after medical treatment（血清中のＣ反応性タンパク質濃度は治療後の前立腺肥大症患者の残存性尿意切迫症状に関連する）Urology. 2011 Dec;78(6):1373-8）。ＰＣ予防試験から得られたデータにより、Ｃ反応性タンパク質やインターロイキン６などの炎症バイオマーカーの増加によってＢＰＨのリスクが上昇した可能性があることが示された（Schenk JM, Kristal AR, Neuhouser ML, Tangen CM, White E, Lin DW, KratzM, Thompson IM. Biomarkers of systemic inflammation and risk of incident, symptomatic benign prostatic hyperplasia: results from the prostate cancer prevention trial（全身性炎症のバイオマーカーと付随的な症候性前立腺肥大症のリスク：前立腺がん予防試験の結果）Am J Epidemiol. 2010 Mar 1;171(5):571-82）。基礎科学研究により、緑茶および紅茶がいずれも強い抗炎症活性を有することが実証されている。たとえば、緑茶にも紅茶にも存在する（‐）‐エピガロカテキン‐３‐ガラート（ＥＧＣＧ）はＮＦｋＢのｐ６５サブユニットの発現をインビトロで減少させることが示されている（Hastak K, Gupta S, Ahmad N, Agarwal MK, AgarwalML, Mukhtar H. Role of p53 and NF-kappaBin epigallocatechin-3-gallate-induced apoptosis of LNCaP cells（エピガロカテキン‐３‐ガラートが誘発するＬＮＣａＰ細胞のアポトーシスにおけるｐ５３とＮＦ−κＢの役割）Oncogene. 2003 Jul 31;22(31):4851-9）。しかし、緑茶および紅茶の投与と臨床ＬＵＴＳの軽減に着目した臨床研究はない。
【０００９】
近年、動物およびヒトの前立腺組織で茶ポリフェノールが検出された（Henning, S. M., Aronson, W., Niu, Y., Conde, F., Lee, N. H., Seeram, N. P., Lee, R. P., Lu, J., Harris, D. M., Moro, A., Hong, J., Leung, P. S., Barnard, R. J., Ziaee, H. G., Csathy, G., Go, V. L. W., Wang, H., and Heber, D. (2006) Journal of Nutrition 136, 1839-1843）。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにカフェイン除去した紅茶の抽出物（ＢＴＥ）５０mg/g dietを２週間にわたり投与した結果、検出可能な量のポリフェノールおよびテアフラビンが前立腺組織に見られた（同文献）。この実験により、エピガロカテキン‐３‐ガラート（ＥＧＣＧ）に比べてテアフラビンの前立腺への相対的吸収率が７０％高いことが示された。テアフラビンおよびテアフラビン‐３‐モノガラート（ＢＴＥ由来）とエピカテキン（ＥＣ）およびエピガロカテキン（ＥＧＣ）（ＧＴＥ由来）は主に遊離型で前立腺組織に存在した。ヒトを対象とした研究では、限局性前立腺がん患者２０名に、ティーバッグ１袋を淹出した緑茶か紅茶または対照としてソーダを１日５回、前立腺除去前の５日間にわたって摂取させた。前立腺に存在するＥＧＣＧ濃度、ＥＧＣ濃度、４種の茶ポリフェノールの合計濃度は、緑茶投与群でも紅茶投与群でも対照群に比べて高かった（Henning, S. M., Aronson, W., Niu, Y., Conde, F., Lee, N. H., Seeram, N. P., Lee, R. P., Lu, J., Harris, D. M., Moro, A., Hong, J., Leung, P. S., Barnard, R. J., Ziaee, H. G., Csathy, G., Go, V. L. W., Wang, H., and Heber, D. (2006) Journal of Nutrition 136, 1839-1843）。動物やヒトを対象とした研究による新たな証拠は、茶の成分が前立腺組織内で生体利用可能であり保護効果を発揮することができることを示している。
【００１０】
緑茶に関する文献
緑茶と前立腺機能について調べた研究の大部分は、化合物ＥＧＣＧとＰＣに対する効果とに重点を置いている。ＰＣに関するインビトロ研究では、アンドロゲン依存性のＬＮＣａＰ細胞株、またはアンドロゲン非依存性のＤＵ‐１４５細胞株およびＰＣ‐３細胞株が用いられる。トランスジェニックマウス前立腺腺癌（transgenic adenocarcinoma of the mouse prostate（ＴＲＡＭＰ））モデルは広く用いられているインビボ前立腺モデルであり、ＰＩＮからアンドロゲン非依存性疾患へ至るまでのＰＣの進行を見ることができる（Kaplan-Lefko, P. J., Chen, T. M., Ittmann, M. M., Barrios, R. J., Ayala, G. E., Huss, W. J., Maddison, L. A., Foster, B. A., and Greenberg, N. M. (2003) Prostate 55, 219-237）。緑茶がアポトーシス、炎症経路、ＨＧＦ／ｃ‐ＭＥＴ経路、インスリン様成長因子（insulin like growth factor（ＩＧＦ））軸、アンドロゲン受容体経路などの一部の経路に影響を及ぼす能力を有することから、提唱される緑茶の前立腺での作用機序が示された。
【００１１】
ＰＣ細胞株に関するインビトロ研究では、ＥＧＣＧは、用量依存的にアポトーシスすなわちプログラム細胞死の促進を示し、最終的にＰＣの増殖を遅らせた。アポトーシスの制御が行われるミトコンドリアでの変化の根拠としては、ＤＮＡ断片化（Ahmad, N., Feyes, D. K., Nieminen, A. L., Agarwal, R., and Mukhtar, H. (1997) Journal of the National Cancer Institute 89, 1881-1886; Gupta, S., Ahmad, N., Nieminen, A. L., and Mukhtar, H. (2000) Toxicology and Applied Pharmacology 164, 82-90; Paschka, A. G., Butler, R., and Young, C. Y. F. (1998) Cancer Letters 130, 1-7）や、プロカスパーゼ３、プロカスパーゼ８、プロカスパーゼ９（アポトーシスの際に放出されることがわかっている）の切断（Hastak, K., Gupta, S., Ahmad, N., Agarwal, M. K., Agarwal, M. L., and Mukhtar, H. (2003) Oncogene 22, 4851-4859）が挙げられる。転写因子ｐ５３が安定化したことやＢＡＸ／Ｂｃｌ‐２発現比がアポトーシスを促進する比に変わったことからも、アポトーシスが促進されたことがわかった。ＥＧＣＧは、別の転写因子である核内因子κＢ（nuclear factor-kappa B（ＮＦ‐κＢ））に対しても効果を有することがわかっている。ＮＦ‐κＢは炎症、サイトカイン産生および細胞死の様々な下流標的を制御する能力を有することが提唱されているため、ＮＦ−κＢに対する効果は重要である。８０μＭのＥＧＣＧで処理した後に炎症性サイトカインＴＮＦαで刺激したＰＣ細胞ではＮＦ‐κＢのＤＮＡ結合活性が低下し、ｐ６５サブユニットの発現が減少した（同文献)。ＮＦ‐κＢに対するＥＧＣＧの効果はインビボ実験によって裏付けられる。緑茶ポリフェノール０．１ｗ／ｖ％を飲水摂取したＴＲＡＭＰマウスでは、ＮＦ‐κＢと関連タンパク質の発現が対照群に比べて減少した（Gupta et al., 2000; Siddiqui, I. A., Shukla, Y., Adhami, V. M., Sarfaraz, S., Asim, M., Hafeez, B. B., and Mukhtar, H. (2008) Pharmaceutical Research 25, 2135-2142）。別の研究では、緑茶ポリフェノール（ＧＴＰ）およびＥＧＣＧで処置すると血管新生を促進する血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）タンパク質のレベルが減少することが示された（Siddiqui, I. A., Zaman, N., Aziz, M. H., Reagan-Shaw, S. R., Sarfaraz, S., Adhami, V. M., Ahmad, N., Raisuddin, S., and Mukhtar, H. (2006) Carcinogenesis 27, 833-839）。インビトロおよびインビボの研究によって、アポトーシスに関与し増殖の不均衡や異常な前立腺環境を引き起こすタンパク質に影響を及ぼす緑茶成分の能力が示されている。
【００１２】
ＨＧＦ／ｃ‐ＭＥＴ経路は多くのがんの浸潤および転移に関連する経路の重要な制御因子であると考えられている。肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）はｃ‐ＭＥＴ受容体チロシンキナーゼに対する唯一の既知の高親和性リガンドである。ＨＧＦがｃ‐ＭＥＴに結合すると、ｃ‐ＭＥＴの二量体形成、その触媒ドメインのチロシンの自己リン酸化、アダプタータンパク質結合のための多機能結合部位の活性化、およびＲＡＳやフォスファチジルイノシトール３キナーゼ（phosphatidylinositol 3-kinase（ＰＩ３Ｋ））などのシグナル伝達経路の動員が起こる（Comoglio, P. M., Giordano, S., and Trusolino, L. (2008) Nature Reviews Drug Discovery 7, 504-516）。ＨＧＦと接触させたＤＵ‐１４５前立腺がん細胞では、ＥＧＣＧを添加すると二量体形成を引き起こすことなくｃ‐ＭＥＴ受容体のキナーゼドメインにあるチロシン１２３４／１２３５のリン酸化を防ぐことができ、結果的に細胞散乱が阻害される（Duhon, D., Bigelow, R. L. H., Coleman, D. T., Steffan, J. J., Yu, C., Langston, W., Kevil, C. G., and Cardelli, J. A. (2010) Molecular Carcinogenesis 49, 739-749）。ＥＧＣＧの能力がＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路とＭＡＰキナーゼ（ＭＡＰＫ）（いずれも細胞増殖や細胞生存などの細胞活動の制御に関与する）に対して直接的な効果を有することが研究からわかっている。同定されているＭＡＰＫとしては細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ１およびＥＲＫ２）、c-Jun N末端キナーゼ（ＪＮＫ）、ｐ３８アイソフォーム、ＥＲＫ５、ＥＲＫ３／４、ＥＲＫ３、ＥＲＫ７／８が挙げられる（Albrecht, D. S., Clubbs, E. A., Ferruzzi, M., and Bomser, J. A. (2008) Chemico-Biological Interactions 171, 89-95）。ＥＧＣＧはインビトロでｃ‐ＭＥＴのリン酸化を減少させることができただけでなく、ＨＧＦが誘導するＡｋｔおよびＥｒｋのリン酸化も減少させた（Duhon et al., 2010）。インビトロでＤＵ‐１４５およびＬＮＣａＰ細胞ではＥＧＣＧがＰＩ３ＫのレベルとＡｋｔのリン酸化を減少させた（Siddiqui, I. A., Adhami, V. M., Afaq, F., Ahmad, N., and Mukhtar, H. (2004) Journal of Cellular Biochemistry 91, 232-242）。ＧＴＰ０．１％またはＥＧＣＧ０．０６％を飲水摂取したＴＲＡＭＰマウスでは、ＥＲＫ１およびＥＲＫ２のリン酸化が前立腺背側で約５０％減少し（Vayalil, P. K., and Katiyar, S. K. (2004) Prostate 59, 33-42）、前立腺腹側でも約５０％低下した（Harper, C. E., Patel, B. B., Wang, J., Eltoum, I. A., and Lamartiniere, C. A. (2007) Prostate 67, 1576-1589）。ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路では、緑茶ポリフェノールを摂取したＴＲＡＭＰマウスのＰＩ３Ｋレベルは低下し、Ａｋｔのリン酸化が減少した（Adhami, V. M., Siddiqui, I. A., Ahmad, N., Gupta, S., and Mukhtar, H. (2004) Cancer Research 64, 8715-8722)。ＭＡＰＫおよびＰＩ３Ｋ／Ａｋｔシグナル伝達経路はインスリン様成長因子（insulin like growth factor（ＩＧＦ））軸によって制御することができ、緑茶はインスリン様成長因子軸で阻害効果を示した。インスリン様成長因子結合タンパク質（insulin-like growth factor binding protein（ＩＧＦＢＰ））はＩＧＦの輸送とその活性の調整の役割を果たす。ＴＲＡＭＰマウスの飲水中に緑茶ポリフェノール（０．１％）を入れると血清ＩＧＦ−１が阻害され、ＩＧＦＢＰ‐３レベルが回復し(Gupta, S., Hastak, K., Ahmad, N., Lewin, J. S., and Mukhtar, H. (2001) Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 98, 10350-10355)、ＩＧＦ−１とＩＧＦＢＰ��３の比率が変化した（Adhami et al., 2004）。さらに、前立腺はＩＧＦ‐１レベルが減少し（Harper et al., 2007; Adhamiet al., 2004）、ＩＧＦ‐１受容体タンパク質のレベルが減少した（Adhami et al., 2004）。インビトロおよびインビボのＨＧＦ／ｃ‐ＭＥＴ経路内での緑茶の保護効果に関する証拠により、健康な細胞を保護し異常な細胞増殖を制御する機構に幅広く影響することが示されている。
【００１３】
緑茶が前立腺の保護効果を発揮するもうひとつの機序は、アンドロゲン受容体を介するものである。アンドロゲン受容体は、熱ショックタンパク質に結合した不活性体の状態で細胞質内に存在する核内受容体である。アンドロゲン受容体は、リガンド（テストステロンまたは５αジヒドロテストステロンなど）との結合によって、たとえば前立腺特異抗原（ＰＳＡ）などの多くの遺伝子に対するＤＮＡ転写因子として作用することができる。ＥＧＣＧがアンドロゲン作用に対する直接的な拮抗剤としての役割を果たし、結果的に遺伝子転写が減少し、最終的にはアンドロゲンが誘発するＰＣ細胞増殖を抑制する能力が得られるという証拠が現れた（Siddiqui, I. A., Asim, M., Hafeez, B. B., Adhami, V. M., Tarapore, R. S., and Mukhtar, H. (2011) FASEB Journal 25, 1198-1207）。ＥＧＣＧはアンドロゲン応答性ＬＮＣａＰ細胞株でアンドロゲン受容体の遺伝子発現およびタンパク質発現を減少させることが示されている（Ren, F., Zhang, S., Mitchell, S. H., Butler, R., and Young, C. Y. F. (2000) Oncogene 19, 1924-1932）。さらなる研究では、ヒト前立腺がんＣＷＲ２２Ｒｖ１細胞を移植した無胸腺症ヌードマウスにＧＴＰ０．１％を飲水としてインビボ投与した結果ＰＳＡレベルが対照群に比べて低かったことが示され、ＥＧＣＧはＰＳＡの転写と翻訳（すなわちｍＲＮＡとタンパク質両方のレベル）を減少させることができるというインビトロでの証拠がある(Siddiqui et al., 2006)。５α還元酵素はテストステロンをＤＨＴに変換する酵素であるが、テストステロンとＤＨＴはいずれもアンドロゲン受容体のリガンドであるため、５α還元酵素もアンドロゲンシグナル伝達に関与している。しかし、ＤＨＴはテストステロンに比べて４〜５倍の親和性を有する。２種類の異なる５α還元酵素イソ酵素が存在し、前立腺組織では２型イソ酵素が主に発現する（Andersson, S., and Russell, D. W. (1990) Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 87, 3640-3644）。ＥＧＣＧとＥＣＧはヒトのＩ型イソ酵素（非前立腺組織）を阻害することが無細胞生化学アッセイでわかったが、これは全細胞アッセイでは見られなかった（Liao, S., and Hiipakka, R. A. (1995) Biochemical and Biophysical Research Communications 214, 833-838）。緑茶成分がアンドロゲン受容体内の重要な制御点に影響することができるという証拠があるが、このデータのほとんどはインビトロ及びインビボで実証されたものである。ヒトの集団を対象とした研究はこの重要な機構に関する知識を深めるものであり、また、ＰＳＡレベルのモニタリングを頻繁に実施するため臨床関連の意義がある。
【００１４】
動物やヒトを対象とした研究により、緑茶の摂取と早期摂取によって前立腺の予後にもたらされる利点が示されている（Bettuzzi, S., Brausi, M., Rizzi, F., Castagnetti, G., Peracchia, G., and Corti, A. (2006) Cancer Research 66, 1234-1240; Kurahashi, N., Sasazuki, S., Iwasaki, M., and Inoue, M. (2008) American Journal of Epidemiology 167, 71-77; Jian, L., Xie, L. P., Lee, A. H., and Binns, C. W. (2004) International Journal of Cancer 108, 130-135; Adhami, V. M., Siddiqui, I. A., Sarfaraz, S., Khwaja, S. I., Hafeez, B. B., Ahmad, N., and Mukhtar, H. (2009) Clinical Cancer Research 15, 1947-1953）。ＴＲＡＭＰマウスにＧＴＰ０．１％を飲水摂取させると、水を投与した対照群に比べてＰＣの発生が遅れ、全生存期間が延びた（Gupta et al., 2001）。ＰＣ発症前および疾患の早期に投与したことによって、保護効果は増幅された（Adhami et al., 2009)。一方、ＧＴＰの補給を２８週で開始した場合、利点はなく、中程度に分化したがんが見られた。高悪性度のＰＩＮ（前立腺がんの主要な前癌性病変）を有する男性に緑茶カテキンを１日あたり６００ｍｇ補給することを一年続けた後、ＰＳＡレベルには変化が見られなかったが腫瘍の発生率は低下した（Bettuzzi et al., 2006)。この男性のうち高悪性度のＰＩＮとＢＰＨを併発した男性のグループをＬＵＴＳの変化について評価したところ、初期のＩＰＳＳスコアは軽度〜中等度であり、３か月でＩＰＳＳスコアが下がりがんに関する生活の質が向上した。ＧＴＰ補給を行わない１年半〜２年の経過観察期によって、ＰＩＮから前立腺がんへの進行が８０％減っていたことから、ＧＴＰが長期にわたり持続する効果を有していたことが明らかとなった（Brausi et al 2008 Chemoprevention of Human Prostate Cancer by Green Tea Catechins: Two Years Later. A Follow-up Update（緑茶カテキンによるヒト前立腺がんの化学予防：２年後（追跡調査による情報更新））European Urology）。
【００１５】
紅茶に関する文献
前立腺に関する紅茶の研究は非常に限られている。前立腺での紅茶の作用機序のほとんどはインビトロでＰＣ細胞株において調査された。緑茶と同様、紅茶はＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ経路、ＭＡＰＫ、アンドロゲンシグナル伝達に対し効果を示した。紅茶成分はさらに細胞周期の進行と腫瘍の抑制に対して効果を示した。紅茶と非癌性の前立腺状態に関し、動物またはヒトを対象とした有意義な臨床研究はほとんど実施されていない。
【００１６】
テアフラビンで処理したＰＣ細胞で、アポトーシス促進タンパク質カスパーゼ３および抗アポトーシスタンパク質カスパーゼ９の推移（Kalra, N., Seth, K., Prasad, S., Singh, M., Pant, A. B., and Shukla, Y. (2007) Life Sciences 80, 2137-2146; Prasad, S., Kaur, J., Roy, P., Kalra, N., and Shukla, Y. (2007) Life Sciences 81, 1323-1331）、シトクロムＣ発現の用量依存的増加（Kalra et al., 2007)、ミトコンドリア膜電位の用量依存的低下（Prasad et al., 2007）によってアポトーシスが確認された。細胞周期停止はアポトーシスの基礎的な機構のひとつであることが知られている。細胞周期停止はテアフラビンによって、すなわちタンパク質サイクリンＢおよびｃｄｃ２５Ｃの発現の減少とp21 waf1/cip1の増加によって誘発される（Prasad et al., 2007）。アポトーシス開始因子であり腫瘍抑制因子であるＰ５３の発現増加（Kalra et al., 2007)やＰ５３関連タンパク質であるＢａｘおよびＢｃｌ‐２に見られる変化（Kalra et al., 2007; Prasad et al., 2007）からも、アポトーシスの増加と細胞増殖の減少が裏付けられる。その他に観察されたテアフラビンによるインビトロでの変化としては、ＮＦ‐κＢおよびそのｐ６５サブユニットの核転座の用量依存的減少、Ｅｒｋ１／２の下方制御、リン酸化p38 MAPKの減少（Kalra et al., 2007)、ＰＩ３ＫレベルとＡｋｔリン酸化の減少（Adhami et al., 2004）などがあった。アンドロゲンシグナル伝達に対するテアフラビンの効果としては、アンドロゲン受容体タンパク質の減少（Siddiqui et al., 2004）やＣＹＰ１７に対する効果が挙げられる。ＣＹＰ１７はアンドロゲンの生合成に重要な酵素であり、１７αヒドロキシラーゼおよびＣ１７，２０‐リアーゼの両方を触媒する。インビトロでは、テアフラビンはカテキンよりも強力なＣＹＰ１７（Ｃ１７，２０‐リアーゼ）阻害活性を有していた（Kimura, K. I., Itakura, Y., Goto, R., Tojima, M., Egawa, N., and Yoshihama, M. (2007) Bioscience, Biotechnology and Biochemistry 71, 2325-2328）。このことは性ホルモンよりもグルココルチコイドの生合成に有利であり（Gilep, A. A., Sushko, T. A., and Usanov, S. A. (2011) Biochimica et Biophysica Acta - Proteins and Proteomics 1814, 200-209）、アンドロゲン依存性ＰＣを遅らせるのに意義を持つ可能性がある。
【００１７】
ヒト前立腺がんＣＷＲ２２Ｒｖ１細胞を移植した無胸腺症ヌードマウスでは、紅茶の水抽出物とテアフラビンは移植された前立腺腫瘍の増殖を阻害し、血清ＰＳＡを減少させ、ＶＥＧＦタンパク質レベルを減少させ、アポトーシスを誘発することができた（Siddiqui et al., 2006）。活性酸素種に関連する酸化ダメージはＰＣにおいてよく実証されており、あるインビボ研究では、ＢＴＥの投与によって前立腺中の重要な抗酸化酵素の損失が予防されたことを示した。ＢＴＥの投与によって、テストステロンが誘発した酸化ストレスによる前立腺中のカタラーゼ、超酸化物不均化酵素、脂質過酸化、グルタチオン‐Ｓ‐トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素のレベルが回復した（Siddiqui, I. A., Raisuddin, S., and Shukla, Y. (2005) Cancer Letters 227, 125-132）。非癌性の前立腺状態に対する紅茶の効果を研究した動物およびヒトを対象とした試験はほとんどないが、テアフラビンおよびポリフェノールが前立腺組織内でインビボでヒトを対象とした治験において検出されたという知見や、前立腺がんに影響することが知られているカスケードでの利点を示すデータから、本発明者らは前立腺に関連する別の状態であるＬＵＴＳについて利点を得るべく混合製剤に紅茶を含有させることを考えるに至った。
【００１８】
茶と前立腺の健康に関する研究の大部分はＰＣ患者について実施されている。各患者がＬＵＴＳとＰＣを併発する可能性はあるが、同年齢のＬＵＴＳ患者と無症状の男性では前立腺がんの発症リスクは同様である（Young, J. M., D. J. Muscatello, et al. (2000). "Are men with lower urinary tract symptoms at increased risk of prostate cancer? A systematic review and critique of the available evidence. （下部尿路症状のある男性は前立腺がんのリスクが高いか？−入手可能な証拠の系統的検討と批評）" BJU International 85(9): 1037-1048）。しかし、２つの状態にはいくつかの共通点がある。経験される症状とリスクプロファイルは同様である。前立腺特異抗原（ＰＳＡ）は前立腺から血中へ放出されるタンパク質であり、ＰＣａスクリーニングやＰＣａ、ＢＰＨの処置によく用いられる前立腺の健康の指標である。ＰＳＡのレベルは前立腺が肥大するにつれて増加するが、ＰＳＡは一般的に非常に低いレベルで血中に存在する。ＰＳＡレベルは前立腺がんの早期検出に最も役立つ試験のひとつである（Medicine, J. H. (2011) Prostate Cancer（前立腺がん）Remedy Health Media, LLC)。米国国立がん研究所（The National Cancer Institute）は、ＰＳＡレベル０〜２．５ｎｇ／ｄＬを低い、２．６〜１０ｎｇ／ｄＬを軽度〜中程度に高い、１０〜１９．９ｎｇ／ｄＬを中程度に高い、２０ｎｇ／ｄＬ以上を有意に高いと分類している。追跡測定でＰＳＡの漸進的増加が得られた場合は癌性増殖を示す可能性があり、あるいは、ＢＰＨを有する個体のＰＳＡレベルが高い場合は急性尿閉などの合併症やＢＰＨ関連外科手術の必要の可能性（Roehrborn, C. G. (2008) BJU International, Supplement 101, 17-21）が予測された。非癌性の前立腺状態に対する茶の効果に関してはヒトを対象として行われた研究はわずかであるが、ＰＣ患者における研究によって多少の見識が得られ、その他の前立腺状態についての将来の研究への指針として有用である。
【００１９】
前立腺の健康について緑茶と紅茶の併用を調査した実験研究は知られていない。炎症、酸化ストレス、およびアポトーシスがＬＵＴＳの原因であると示唆されているため、これらの細胞間シグナル伝達経路を標的とする化合物が有望である。緑茶とその有効成分はＤＮＡ損傷の保護、転写因子ｐ５３の安定化、ＮＦ‐κＢおよび関連タンパク質の発現減少によってアポトーシスを促進し前立腺腫瘍増殖を抑制することが示された。緑茶は、ＨＧＦ／ｃ‐ＭＥＴ経路、下流ＭＡＰＫ、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔのタンパク質のリン酸化の減少によって細胞増殖と細胞生存に影響する。緑茶のさらなる作用としては、ＩＧＦ−１の阻害とアンドロゲン受容体の発現減少が挙げられる。前立腺に対する紅茶の研究は行われているところであるが、紅茶とその成分は緑茶成分に似た効果的な細胞保護を示している。このことは、紅茶が酸化ストレスの存在下にある前立腺で抗酸化酵素を保護するとともに細胞周期停止タンパク質サイクリンＢ、ｃｄｃ２５Ｃ、p21 waf1/cip1に影響することを示す研究によって裏付けられる。緑茶および紅茶に含まれる活性抗酸化化合物は、合わせると酸化ストレスまたは炎症の条件下にある前立腺に対し相補的な効果を有する可能性がある。
【発明の概要】
【００２０】
本発明は、治療上有効量の緑茶の水抽出物と紅茶の水抽出物との組み合わせを投与することによって、泌尿器の健康を改善する方法、ＬＵＴＳおよびＢＰＨの症状（たとえば残尿量、ＡＵＡ症状スコア、夜間頻尿、尿勢低下、頻尿、尿線途絶、残尿、日常生活動作の困難、性欲および性機能）を軽減する方法、生理的危険因子を軽減（たとえば炎症（ＣＲＰ）、酸化ストレス、血圧の減少）する方法からなる。本発明の緑茶および紅茶抽出物（green and black tea extract（ＧＢＴＥ））の混合物は、ポリフェノールを最小量で４０％、カテキンおよびテアフラビンを最小量で（合わせて）２０％、エピガロカテキン‐３‐ガラート（ＥＧＣＧ）を７％〜１４％含有するよう規格化されることが好ましい。好ましい態様では、本発明の混合物は製品中のカテキンおよびテアフラビンが確認された図４と同様の組成フィンガープリントからなる。
【００２１】
本発明の目的は、緑茶の抽出物と紅茶の抽出物の混合物を含み、同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する抗酸化組成物である。
【００２２】
本発明の別の目的は、該混合物が緑茶抽出物３０％〜７０％と紅茶抽出物７０％〜３０％を含む抗酸化組成物である。
【００２３】
本発明のさらなる目的は、該抽出物が水抽出物である抗酸化物質である。
【００２４】
本発明の目的は、緑茶抽出物と紅茶抽出物の混合物を含有し、同量の緑茶抽出物および紅茶抽出物の抗酸化活性の合計よりも高い抗酸化活性を有する抗酸化組成物である。
【００２５】
本発明の別の目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、ヒトの泌尿器の健康を改善する方法である。
【００２６】
本発明のさらなる目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、ヒトのＡＵＡ症状スコアを下げる方法である。
【００２７】
本発明の目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、ヒトの炎症を抑える方法である。
【００２８】
本発明の別の目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、ヒトの下部尿路症状を改善する方法である。
【００２９】
本発明のさらなる目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、ヒトの性欲を改善する方法である。
【００３０】
本発明の目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、身体機能の改善によってヒトの生活の質を改善する方法であり、身体機能としては日常生活が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００３１】
本発明の別の目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、ヒトの前立腺肥大症（benign prostatic hyperplasia（ＢＰＨ））を改善する方法である。
【００３２】
本発明のさらなる目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、ヒトの夜間頻尿を改善する方法である。
【００３３】
本発明の目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、ヒトの尿勢低下を改善する方法である。
【００３４】
本発明の別の目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、ヒトの頻尿を改善する方法である。
【００３５】
本発明のさらなる目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、ヒトの尿線途絶を改善する方法である。
【００３６】
本発明の目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、ヒトの残尿を改善する方法である。
【００３７】
本発明の別の目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、ヒトの酸化ストレスを改善する方法である。
【００３８】
本発明のさらなる目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、ヒトの血圧を低下させる方法である。
【００３９】
本発明の目的は、有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物とを投与することを含み、該有効量の緑茶抽出物と紅茶抽出物が同量の各抽出物単独の場合よりも高い抗酸化活性を有する、ヒトの空腹時血糖を低下させる方法である。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】図１は、各処置群のＡＵＡ症状スコアの図である。
【図２】図２は、各処置群のＣ反応性タンパク質アッセイの図であり、基準からのパーセント変化率を示す。
【図３】図３は、各処置群の残尿量の図であり、基準からのパーセント変化率を示す。
【図４】図４は、本発明の緑茶と紅茶との混合物の特性を示すＨＰＬＣ‐ＵＶクロマトグラフである。
【図５】図５は、本発明の緑茶と紅茶との混合物の鉄還元抗酸化力（ferric reducing antioxidant power（ＦＲＡＰ））アッセイの図である。
【図６】図６は、紅茶抽出物、緑茶抽出物、または紅茶抽出物と緑茶抽出物との混合物の効果の図であり、２，２‐ジフェニル‐１‐ピクリル‐ヒドラジル（ＤＰＰＨ）フリーラジカルの還元に基づくＵＶ／ＶＩＳ分光光度法を採用している。
【図７】図７は、紅茶抽出物と緑茶抽出物との混合物を３種類の異なる用量で投与した場合の血糖値に対する効果の図である。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
化合物「の投与」または化合物「を投与する」とは、本発明の化合物を、処置の必要な個体に対し、その個体の体内へ治療に有用な形態で治療に有効な量を導入できる形態で与えることを意味すると理解される。このような形態としては、錠剤、カプセル、シロップ剤、懸濁液などの経口剤形、ＩＶ、ＩＭ、ＩＰなどの注入剤形、クリーム剤、ゼリー、粉末剤、パッチなどの経皮剤形、吸入粉末剤、噴霧剤、懸濁液などの口腔剤形、肛門坐剤が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００４２】
本明細書中、「有効量」とは、所望の生物学的反応を誘発するのに必要な量を意味する。当業者によって認識されるように、混合物または生物活性剤の有効量は所望の生物学的評価項目、送達する生物活性剤、封入基質の組成、対象組織などの要因に依存して変化し得る。
【００４３】
本明細書中、「抽出物」とは抽出産物を意味する。抽出物は溶媒中の溶液の形であってもよく、無溶媒または実質的に無溶媒の濃縮物またはエッセンスであってもよい。抽出物とは特定の抽出工程または一連の抽出工程から得られる単一の抽出物であってもよく、別の抽出工程から得られる抽出物の組み合わせであってもよい。たとえば、抽出物「ａ」はクランベリーを水中にアルコール抽出することによって得られてもよく、抽出物「ｂ」はクランベリーを超臨界二酸化炭素抽出することによって得られてもよく、続いて抽出物ａとｂとを組み合わせて抽出物「ｃ」を作ってもよい。したがって、このような抽出物の組み合わせも「抽出物」に包含される。
【００４４】
本明細書中、「画分」とは、何らかの物理化学的特性、物理的特性または化学的特性を特徴とする特定の化合物群を含有する抽出物を意味する。
【００４５】
「予防する」とは、ある状態、たとえばがん、感染症、その他の医学的疾患または医学的状態に関して用いられた場合、当技術分野においてよく理解され、組成物を投与して同組成物を投与しない対象に比べ対象の医学的状態の症状の頻度を下げるかその出現を遅らせることを含む。したがって、たとえばがんの予防としては、予防的処置を受ける患者の集団において検出可能な癌性増殖数を未処置の対照集団よりも減少させること、および／または処置を受ける集団において検出可能な癌性増殖の出現を未処置の対照集団よりも遅らせることが挙げられ、その差はたとえば統計学的におよび／または臨床的に有意な量の差である。感染の予防としては、たとえば、処置を受ける集団における感染の診断の数を未処置の対照集団よりも減らすこと、および／または処置を受ける集団における感染症状の出現を未処置の対照集団よりも遅らせることが挙げられる。
【００４６】
「医薬的に許容される」とは、担体、希釈剤または賦形剤が製剤のその他の成分と混合可能であり、かつ患者にとって有害でないものでなければならないことを意味する。
【００４７】
「相乗的な」とは当技術分野においてよく理解され、２種以上の成分が共に作用し全体の効果が各成分の効果の合計よりも大きいことを意味する。
【００４８】
「治療する」とは、当技術分野においてよく理解され、任意の状態または障害の少なくとも１つの症状を治癒または改善することを意味する。
【００４９】
「予防的または治療的」処置とは、当技術分野においてよく理解され、ホストに対し１種以上の対象組成物を投与することを含む。好ましくない状態（たとえばホスト動物の疾患またはその他の好ましくない状態）の臨床兆候の前に対象組成物が投与される場合、その処置は予防的である。すなわち、その処置はホストがその好ましくない状態を発症するのを予防する。一方、対象組成物がその好ましくない状態が現れた後に投与される場合、その処置は治療的である（すなわち、その処置は既に存在する好ましくない状態またはその副次的効果を軽減、改善または安定させることを意図するものである）。
【００５０】
経口使用を目的とした組成物は、当技術分野において公知の任意の医薬組成物製造方法に従って調製でき、医薬として上質で味の良い製剤を提供するために、甘味料、調味料、着色料、保存料からなる群より選択される１種以上の薬剤を含有してもよい。錠剤は、有効成分と錠剤の製造に適し医薬的に許容される非毒性の賦形剤との混合物を含有する。賦形剤は、たとえば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウム、リン酸ナトリウムなどの不活性な希釈剤、コーンスターチ、アルギン酸などの造粒剤および崩壊剤、澱粉、ゼラチン、アラビアゴムなどの結合剤、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルクなどの滑沢剤であってもよい。錠剤は素錠であってもよいし、消化管での崩壊と吸収を遅らせることによって持続的作用をより長時間にわたって与えるために公知の技術によってコーティング錠としてもよい。経口使用のための組成物は、有効成分を炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンなどの不活性な固形の希釈剤と混合した硬ゼラチンカプセルであってもよく、有効成分を水、またはピーナッツ油、流動パラフィン、オリーブ油などの油性媒質と混合した軟ゼラチンカプセルであってもよい。水性懸濁液は、活性物質と水性懸濁液の製造に適した賦形剤との混合物を含有する。油性懸濁液は、有効成分を適切な油に懸濁することによって処方できる。水中油型乳剤を採用してもよい。水を添加して水性懸濁液を調製するのに適した分散性の粉末剤および顆粒剤では、有効成分が分散剤または湿潤剤、懸濁剤と１種以上の防腐剤と混合されている。
【００５１】
本発明の化合物の医薬組成物は、無菌の注入用水性懸濁液または油性懸濁液の形態であってもよい。また、本発明の化合物を直腸内投与のための坐剤の形態で投与してもよい。局所使用のため本発明の化合物を含有するクリーム剤、軟膏、ゼリー、溶液または懸濁液、などを採用してもよい。本発明の化合物を吸入投与用に処方してもよい。また、本発明の化合物を当技術分野において公知の方法で経皮パッチとして投与してもよい。
【００５２】
本発明の化合物を含有する組成物を単位剤形としてもよく、医薬技術分野において周知の任意の方法によって調製することができる。「単位剤形」とは、患者または薬物を患者に投与する者が全用量の入った１つの容器またはパッケージを開封することができ、２つ以上の容器またはパッケージから成分を混合する必要のないようにすべての有効成分と不活性成分を適切なシステムで組み合わせた一回用量を意味するものと理解される。単位剤形の代表例は経口投与用の錠剤またはカプセル、一回用量の注射バイアル、または直腸内投与用の坐剤である。この単位剤形の列挙は決して限定的なものではなく、単位剤形の医薬技術分野における代表例を示すに過ぎない。本発明の化合物を含有する組成物を、有効成分または不活性成分、担体、希釈剤などである２種以上の成分に患者または薬物を患者に投与する者が実際の剤形を調製するための説明書を添付したキットとしてもよい。このようなキットは必要なすべての材料と成分を含む状態で提供されてもよいし、患者または薬物を患者に投与する者が別途用意しなければならない材料または成分を使用または調製するための説明書を含んでいてもよい。
【００５３】
本明細書に記載する任意の組み合わせを使用する場合、本発明の化合物とその他の活性剤の両方が適当な時間内に患者に投与されると認識される。化合物は同一の医薬的に許容される担体中に存在してもよく、したがって同時に投与されてもよい。また、化合物は同時に服用される従来の経口剤形などの別個の医薬担体中に存在してもよい。「組み合わせ」とは、化合物が別個の剤形で提供され連続して投与される場合も意味する。したがって、例として、１種の有効成分を錠剤として投与し、その後適当な時間内に第２の有効成分を錠剤などの経口剤形または速溶性経口剤形で投与してもよい。「速溶性の経口製剤」とは、患者の舌の上に置くと約１０秒以内に溶ける経口送達形態を意味する。
【００５４】
本発明の化合物は、処置を必要とする患者（ヒトおよび動物（イヌ、ネコ、ウマなどのコンパニオンアニマルを含む））に最適な薬効を与える用量で投与することができる。任意の特定の用途に使用するために必要な用量は、患者によって異なり、選択された特定の化合物または組成物の他、投与経路、処置する状態の性質、年齢、患者の状態、併用薬物または患者が処置の時点で行っている特別な食事制限、当業者が認識するその他の因子によっても異なることが認識される。適切な用量は最終的には担当医師の判断による。
【００５５】
本発明のＧＢＴＥの適切な投与量レベルは１日あたり約２５〜２０００ｍｇであり、１日１回投与しても２回〜３回に分けて投与してもよい。投与量の範囲は各対象につき１日に約５０ｍｇ〜２０００ｍｇであることが好ましく、各対象につき１日に約２５０〜５００または１０００〜１５００ｍｇであることがより好ましい。
【００５６】
緑茶および紅茶抽出物（ＧＢＴＥ）の混合物の適切な投与量レベルは１日約０．０１ｍｇ〜５．０ｍｇ／ｋｇであり、特に約０．１〜約２．５ｍｇ／ｋｇ、たとえば１日約０．５〜約１０ｍｇ／ｋｇである。投与量の範囲は一般的には各対象につき１日約５０〜２０００ｍｇであり、１回投与しても複数回投与してもよい。投与量の範囲は各対象につき１日約１００ｍｇ〜２０００ｍｇであることが好ましく、各対象につき１日約２５０ｍｇ〜１０００ｍｇであることがより好ましい。本発明の化合物の具体的な投与量としては、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇ、５００ｍｇ、１０００ｍｇ、２０００ｍｇが挙げられる。本発明の組成物は有効成分を約２５ｍｇ〜２０００ｍｇ、より好ましくは約５０ｍｇ〜１０００ｍｇ、１００ｍｇ〜５００ｍｇ、または２５０ｍｇ〜１０００ｍｇ含有する製剤として提供されてもよい。
【００５７】
ＧＢＴＥは緑茶の水抽出物と紅茶の水抽出物との組み合わせである。ＧＢＴＥは緑茶の水抽出物が約３０％〜７０％と紅茶の水抽出物が約７０％〜約３０％であることが好ましく、緑茶の水抽出物が約４０％〜６０％と紅茶の水抽出物が約６０％〜約４０％、たとえば５０／５０の緑茶と紅茶の水抽出物の混合物であることがより好ましい。ＧＢＴＥは、ポリフェノールの最小量、カテキンの最小量、テアフラビンの最小量、または／およびエピガロカテキン‐３‐ガラート（ＥＧＣＧ）の最小量を含有するよう規格化されることが好ましい。ポリフェノールの範囲としては、ＧＢＴＥの約１０重量％〜約９０重量％が好ましく、１０％〜７０％がより好ましく、３０％〜６０％、たとえば４０％以上がさらに好ましい。カテキンおよびテアフラビンの範囲としては、ＧＢＴＥの約５重量％〜約６０重量％が好ましく、１０％〜５０％がより好ましく、２０％〜４０％、たとえば２０％以上がさらに好ましい。ＥＧＣＧの範囲としては、ＧＢＴＥの約１重量％〜約３０重量％が好ましく、３％〜２０％がより好ましく、７％〜１４％がさらに好ましい。
【００５８】
実施例１
実施した臨床試験の目的は、中等症〜重症の下部尿路症状（ＬＵＴＳ）を有する男性を対象としたヒト対象臨床試験で緑茶および紅茶抽出物の新規な混合物ＧＢＴＥを評価することである。ＧＢＴＥは水抽出した独特の茶成分であり、強力な抗酸化活性を有する。この試験では、ＬＵＴＳを有する対象男性に対し、無作為プラセボ対照二重盲検比較試験でＧＢＴＥを投与し、試験薬剤が２種類の用量で１２週間の間にＬＵＴＳを軽減させる効果を試験した。本発明者らの知る限りでは、ＬＵＴＳを有する男性に対する緑茶および紅茶抽出物の混合物の効果を調査したのはこの試験が最初である。
【００５９】
患者と方法
試験デザイン
この試験は、前向き研究として設計され、ＩＲＢ（Quorum Institutional Review Board, Seattle, WA）の承認を得、医薬品の臨床試験の実施の基準（Good Clinical Practices）に従って実施されたヒト対象の臨床試験である。選択基準としては、３０〜７０歳の男性であること、スクリーニング時に中等症〜重症（ＡＵＡ症状スコア（ＡＵＡ）８以上２４以下）のＬＵＴＳを有すること、説明同意文書を提出する意思があることなどであった。表１の除外基準に該当する男性を除外した。
【００６０】
【表１−１】
0006279591.tif 000002
【００６１】
【表１−２】
0006279591.tif 000003
【００６２】
選択基準を満たした患者をＧＢＴＥ５００ｍｇ、ＧＢＴＥ１０００ｍｇ、プラセボの３つの試験群のうちの１つに無作為に分け（患者背景の分布を表２に示す）。８０％以上のコンプライアンスをもって試験を完了した対象を評価可能な対象と予め定義した。
【００６３】
【表２】
0006279591.tif 000004
【００６４】
評価した主要評価項目は、下部尿路症状の頻度と重症度を数値化する米国泌尿器科学会症状スコアの点数である。二次的な基準としては、Ｃ反応性タンパク質（C-reactive protein（ＣＲＰ））、残尿量（post void residual（ＰＶＲ））の測定、ショートフォーム３６（Short-Form 36（ＳＦ‐３６））生活の質質問票や国際勃起機能スコア（International Erectile Function Index（ＩＩＥＦ））の数値による質問票の点数などであった。基準点（ＢＬ）、中間点（６週間（ｗｋ）後）、終点（１２週間後）のすべての時点で、すべての基準を評価した。
【００６５】
アメリカ泌尿器科学会症状スコア（American Urologic Association Symptom Index (AUA-SI)）
ＡＵＡ症状スコアは、１９９２年に開発され承認された自己申告による質問票であり、症状の頻度と重症度を数値化するものである（Ko YH, Chae JY, Jeong SM, Kang JI, Ahn HJ, Kim HW, Kang SG, Jang HA, CheonJ, Kim JJ, Lee JG. Clinical Implications of Residual Urine in Korean Benign Prostatic Hyperplasia (BPH) Patients: A Prognostic Factor for BPH-Related Clinical Events（韓国の前立腺肥大症（ＢＰＨ）患者についての残尿量の臨床的意義：ＢＰＨに関連する臨床事象の予後因子）Int Neurourol J. 2010 Dec;14(4):238-44）。ＡＵＡ症状スコアは簡潔で信用性が高く、尿線、排尿回数、尿線途絶、尿排出、尿意切迫感、腹圧排尿、夜間頻尿を評価するための７つの質問からなる。
【００６６】
残尿量（post-void residual volume（ＰＶＲ））
残尿量の測定手段には、超音波検査によって行われる膀胱スキャンを用いた。膀胱スキャンは迅速かつ非侵襲的に膀胱容量を評価し尿の貯留量または残尿量を定量する方法である（AUA Practice Guidelines）。
【００６７】
ショートフォーム３６（short-form 36(ＳＦ‐３６））
ＳＦ‐３６は、３６項目の質問による、多目的の短文形式の健康調査である。ＳＦ‐３６によって身体的健康と精神的健康の２つの集約尺度が得られ、それらはさらに身体機能、身体的健康に関する日常機能、体の痛み、全体的健康感、活力、社会生活機能、情緒的健康に関する日常機能、精神的健康の８つの下位尺度の特性に分けられる（McHorney CA, Ware JE Jr, Lu JF, SherbourneCD. The MOS 36-item Short-Form Health Survey (SF-36): III. Tests of data quality, scaling assumptions, and reliability across diverse patient groups（ＩＩＩ．多様な患者群におけるデータ品質、スケーリング仮定、信頼性の試験）Med Care. 1994 Jan;32(1):40-6）。
【００６８】
国際勃起機能スコア（ＩＩＥＦ）
ＩＩＥＦは男性の勃起機能を評価するためにデザインされ、十分に有効とされた自己申告形式の質問票であり、勃起機能、オーガズム機能、性欲、性交満足感、全般の満足感に関する５つの設問がある(Rosen RC, Cappelleri JC, Gendrano N 3rd. The International Index of Erectile Function (IIEF): a state-of-the-science review（国際勃起機能スコア（ＩＩＥＦ）：最先端科学概説）Int J Impot Res. 2002 Aug;14(4):226-44. Review)。
【００６９】
試験薬剤
試験薬剤は、総用量０ｍｇ（プラセボ）、ＧＢＴＥ５００ｍｇまたはＧＢＴＥ１０００ｍｇとなるようにカプセル化した栄養補助食品である。医薬品製造管理および品質管理基準（Good Manufacturing Practices）に従って試験薬剤を処方し、製造し、カプセル化して、１２０カプセル入りの遮光プラスチック瓶に包装した。製品ロットを重金属、農薬、賦形剤を含む毒物について試験した。プラセボは不活性物質を含有し、試験薬剤と同じ外観とした。試験期間を通じてカプセルの安定性を確認した。
【００７０】
統計分析
統計値は、正常に分布した変数（たとえば年齢）に対する平均値±標準誤差として示す。結果の点数を、SAS Proc Mixedによって実施する反復測定分散分析を用いて評価した。処置の主な効果と時間を、これらの因子間の相互作用とともに評価した。目的とする対比を行い、個々に評価した。一般的に、変化スコア、すなわち基準時（ＢＬ）以後の所定のスコアと、ＢＬ時のその変数の値との差を、任意の所定の分散モデル分析における従属変数とした。ＢＬ時の生の値と処置後の結果の素点について記述統計学を計算したが、分散分析によって評価した変化スコアに関する所見は最小自乗平均を用いて要約した。検定はすべて両側検定であり、統計的有意性をｐ≦０．０５と定義した。処置後の時点（６週間後、１２週間後）でのＢＬからの変化スコアをＡＵＡ、ＣＲＰ、ＰＶＲ、ＩＩＥＦ、ＳＦ‐３６（１２週間後のみ）について分析した。
【００７１】
結果
対象
５９名の対象をスクリーニングし、そのうち４６名が試験に参加し、４０名が試験を完了し、試験完了後に評価可能と決められた。処置群は分布についても臨床的特性についても十分に均衡していた（表２）。平均年齢は５６．７７歳（１．３３）（平均［標準誤差］）であった。３つの群において、基準点でのＡＵＡ症状スコアについては対象間で差がなく、ｐ＝０．８１８であった（表２）。
【００７２】
ＡＵＡ症状スコア
ＡＵＡ症状スコアの平均値は、ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群では１２週間でＢＬから３４．５％減少し、点数はＢＬ時点で１７．８５±１．０４、６週間後で１３．００±１．４５（ＢＬに対しｐ＝０．０３４９）、１２週間後で１１．６９±１．４２（ＢＬに対しｐ＝０．００８３）であった（図１）。ＧＢＴＥ５００ｍｇ投与群の点数はＢＬ時で１９．３３±１．０２、６週間後で１９．２７±１．３１、１２週間後で１５．８７±２．１６であり、プラセボ群の点数はＢＬ時で１８．４２±１．３５、６週間後で１５．３３±１．８５、１２週間後で１５．０８±２．３６であった。ＧＢＴＥ５００ｍｇ投与群とプラセボ投与群のいずれの場合も、どの時点でもＢＬと比較したＡＵＡスコアの変化に有意な差は見られなかった。
【００７３】
ＡＵＡスコアをさらに分析し、スコアを構成する７項目の質問のうち、観察された全体のＡＵＡの差の主な原因となるものを確認したところ、質問１、３、５、７がＧＢＴＥ１０００ｍｇ処置群に見られたスコア低下の主な原因であることがわかった。各質問には、１を最も症状が少ないものとし５を最も重症度が高いものとして、１〜５の段階で点数をつける。したがって、７項目の質問は合計で３５点になる可能性があり、点数が下がると症状が改善したことを示す。
【００７４】
質問１は残尿に関連し、「過去１か月で、排尿後に残尿感を覚えたのは何回ぐらいですか」という質問である。ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群では、１２週間後に報告された点数をＢＬ時と比較した場合の変化は統計学的に有意であった（２．８５±０．２５［ＢＬ］、１．８３±０．２７［１２週間後］、ｐ＝０．０２５５）が、プラセボ群とＧＢＴＥ５００ｍｇ投与群ではＢＬ時と比較して１２週間後に有意な変化は見られなかった。
【００７５】
質問３は尿線途絶について評価する質問で、「過去１か月間で、尿が止まって排尿後に再び出始めることが何度かあったのは何回くらいですか」というものである。ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群では、６週間後に報告された点数をＢＬ時と比較した場合の変化は有意に減少していた（２．３１±０．３７［ＢＬ］、１．４６±０．３１［６週間後］、ｐ＝０．０４１０）が、プラセボ投与群およびＧＢＴＥ５００ｍｇ投与群では６週間後にＢＬと比較して有意な変化はなかった。
【００７６】
質問５は尿勢低下に関連し、「過去１か月間で、尿の勢いが弱かったのは何度くらいですか」というものである。ＢＬから見た１２週間後の変化は、ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群（−１．０５±０．４１）はプラセボ（−０．０９±０．４２）と比べて有意であった（ｐ＝０．０５５９）。また、ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群の場合、１２週間後対ＢＬ時は統計学的に有意であった（２．５４±０．３５［ＢＬ］、１．６４±０．３６［１２週間後］、ｐ＝０．０１４１）。
【００７７】
最後に、質問７は夜間頻尿を評価するもので、「過去１か月間で、就寝してから朝起床するまでの間に排尿のために起きたのは何回ですか」というものである。ＢＬから見た変化をすべての処置群について比較したところ、そのモデルは統計学的に有意であった（ｐ＝０．０４１５）。また、ＧＢＴＥ１０００ｍｇによる処置の結果、プラセボは６週間後（２．６９±０．２９［ＢＬ］、１．５４±０．１８［６週間後］、ｐ＝０．００２）および１２週間後（１．６７±０．２８［１２週間後］、ｐ＝０．００４６）と統計的に異なることがわかった。
【００７８】
二次的測定
Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）は、プラセボ投与群（ＢＬ：３．３９±１．６１に対し１２週間後：３．８４±１．５８［ｐ＝０．０１１２］）およびＧＢＴＥ５００ｍｇ投与群（ＢＬ：２．７６±０．６７に対し１２週間後：４．３３±１．０２［ｐ＝０．００２５］）で有意に増加した。これに対し、１０００ｍｇ投与群ではＢＬから１２週間後まで変化はなかった（ＢＬ：２．２３±０．３６に対し１２週間後：２．０８±０．４２）（図２）。残尿量（ＰＶＲ）は、ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群において６週間後（４１．５５ｍＬ±１０．１０）、ＢＬ（６５．３９ｍＬ±１３．２２、ｐ＝０．０３３８）に比べて有意なＰＶＲの減少がみられた（図３）ことがわかった。
【００７９】
ＩＩＥＦ
ＩＩＥＦスコアを設問ごとに分析すると、性欲について評価する質問に変化が見られた。全体のモデルは有意なグループ効果であった（ｐ＝０．００４７）。ＧＢＴＥ１０００ｍｇを投与した結果、性欲に関する質問についてＢＬと比較して６週間後（ｐ＝０．０４１３）と１２週間後（ｐ＝０．０１４７）に点数が上がったが、プラセボ投与群では変化は見られなかった。
【００８０】
ＳＦ３６
ＳＦ３６スコアを設問ごとに分析すると、身体機能を評価するために設けられた１０項目の質問には全体の集団差があった（ｐ＝０．０５０９）。ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群のＢＬからの変化をプラセボ群と比較して評価すると、１２週間後の身体機能の感じ方について増加を示した（ｐ＝０．００７９）。
【００８１】
血圧
６週間後、ＧＢＴＥ５００ｍｇ投与群の拡張期血圧はプラセボ投与群と比べて統計的に減少し（ｐ＝０．０２）、６週間後、ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群の拡張期血圧はプラセボ投与群と比べて減少した（ｐ＝０．００２７）。
【００８２】
ＢＬと比べた収縮期血圧の変化は、ＧＢＴＥ５００ｍｇ投与群ではプラセボ投与群と比べて減少を示した（ｐ＝０．０９）。ＧＢＴＥ１０００ｍｇの場合、ＢＬから６週間後の収縮期血圧の変化は減少しており（ｐ＝０．０３）、ＢＬから１２週間後の変化はｐ＝０．０８の傾向を示した。
【００８３】
考察
疫学的研究により、心血管疾患、代謝異常、がん（前立腺がんなど）などの多くの状態の発生率の低下に緑茶と紅茶が潜在的な効果を有することが示されてきた（Bettuzzi et al., 2006）。本出願の試験は、水抽出した緑茶および紅茶の抽出物の混合物を投与することによる、中等症〜重症のＬＵＴＳを有する男性の下部尿路症状（ＬＵＴＳ）の軽減効果を分析した最初の試験である。この研究で、緑茶抽出物と紅茶抽出物との混合物１０００ｍｇを補給することによって、ＧＢＴＥ５００ｍｇまたはプラセボを投与した場合には１２週間で変化は見られなかったのに対し、米国泌尿器科学会（American Urological Association（AUA））症状スコアに３４．５％の有意な減少が見られた。このデータは、α遮断薬タムスロシンなどの薬理剤を試験した多数の研究と類似しており（Flannery MT, RamsdellJ, Ranhosky A, Davidai G, Ruoff G. Efficacy and safety of tamsulosinfor benign prostatic hyperplasia: clinical experience in the primary care setting（タムスロシンの前立腺肥大症に対する効果と安全性：初期医療の設定における臨床経験）Curr Med Res Opin. 2006 Apr;22(4):721-30）、ノコギリヤシなどの栄養補助食品剤を試験した一部の研究（6, MacDonald R, TacklindJW, Rutks I, Wilt TJ. Serenoarepens monotherapy for benign prostatic hyperplasia (BPH): an updated Cochrane systematic review（前立腺肥大症（ＢＰＨ）に対するノコギリヤシの単剤療法：Cochrane systematic reviewの更新情報）. BJU Int. 2012 Jun;109(12):1756-61)）よりも優れている。治療を受けた患者で１３週間後に症状がわずかに改善したと考えた男性の自己評価したＡＵＡ症状スコアでは、報告された知覚差異が基準スコアに応じて異なっていた。ＡＵＡ症状スコアの基準スコアが８〜１９の男性の場合、状態がわずかに改善したと感じた男性ではスコアが２点下がり、基準スコアが２０よりも高く状態がわずかに改善したと感じた男性ではスコアが６点下がった。また、基準時のＡＵＡ症状スコアが０〜３５の男性の１３週間後の変化の評価は、ＡＵＡ症状スコアが３点下がれば「わずかに改善された」、５．１点下がれば「中程度に改善された」として報告した（Barry MJ, Fowler FJ Jr, O'Leary MP, Bruskewitz RC, HoltgreweHL, Mebust WK, Cockett AT. The American Urological Association symptom index for benign prostatic hyperplasia. The Measurement Committee of the American Urological Association.（前立腺肥大症に関する米国泌尿器科学会症状スコア：米国泌尿器科学会測定委員会）J Urol. 1992 Nov;148(5):1549-57）。ほとんどの研究では、ＬＵＴＳを有する集団で基準と比較した変化について解釈している。ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群でＡＵＡ症状スコアが６週間後と１２週間後に基準と比較して統計的に有意に改善したことに加え、この試験ではさらに、１２週間後のプラセボと比較して臨床的に関連のある改善が実証された。１２週間のプラセボの効果（基準から３．３４点のＡＵＡ‐ＳＩ減少）を、ＧＢＴＥ１０００ｍｇによる効果（基準から６．１６点のＡＵＡ‐ＳＩ減少）から減算すると、２．８２点の差が得られた。この集団の初期のＡＵＡ症状スコアが１８．５３±０．６４であったことから、プラセボと比較して統計的に有意な差は見られなかったものの、２．８２点減少したことから、１２週間のプラセボと比較して臨床的に関連のある改善があったことが確認される。したがって、この研究データでは中等症と重症いずれのＬＵＴＳを有する個体にもＧＢＴＥの摂取後の効果が示されている。
【００８４】
この試験の結果から、プラセボまたはＧＢＴＥ５００ｍｇを投与したＬＵＴＳ集団では炎症の増加が生じたのに対し１０００ｍｇのＧＢＴＥが炎症増加を防止する能力を有することが実証された。この試験で炎症の評価に用いたバイオマーカーはＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）である。文献によれば、ＣＲＰ濃度はＬＵＴＳを有する対象の重症度が増すとともに高くなることを示している。この研究では、参加した全対象が、試験デザインにおいて交絡因子の可能性を排除するべく、症状を治療するための薬物または栄養補助を中断することに同意している。したがって、プラセボ群に無作為に振り分けられた個体の症状が悪化し、関連するＣＲＰ濃度が上昇した可能性がある。炎症がＬＵＴＳの予測因子である可能性が示唆されてきたため（Liao CH, Chung SD, KuoHC. Serum C-reactive protein levels are associated with residual urgency symptoms in patients with benign prostatic hyperplasia after medical treatment（血清中のＣ反応性タンパク質濃度は治療後の前立腺肥大症患者の残存性尿意切迫症状に関連する）Urology. 2011 Dec;78(6):1373-8; Menschikowski M, Hagelgans A, Fuessel S, Mareninova OA, Neumeister V, Wirth MP, Siegert G. Serum levels of secreted group IIA phospholipase A(2) in benign prostatic hyperplasia and prostate cancer: a biomarker for inflammation or neoplasia?（前立腺肥大症および前立腺がんにおける血清中の分泌型ホスホリパーゼＡ（２）濃度：炎症または腫瘍のバイオマーカーとなるか？） Inflammation. 2012 Jun;35(3):1113-8）、このことは、ＧＢＴＥ栄養補助剤１０００ｍｇの投与が抗炎症作用機序を通じてＬＵＴＳを軽減するよう作用している可能性があることを示唆する。
【００８５】
また、この研究では、ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群では６週間後にＢＬと比較して残尿量に有意な減少があることが実証されている。一方、ＧＢＴＥ５００ｍｇ投与群およびプラセボ投与群では、ＢＬに比べて６週間後に膀胱に残っている残尿量に減少は見られなかった。最近の研究で、ＢＬ時のＰＶＲが高い場合、ＡＵＡスコア（国際前立腺症状スコア）の上昇を含むＢＰＨの臨床事象に関連している可能性があることが示されている（Ko YH, Chae JY, Jeong SM, Kang JI, Ahn HJ, Kim HW, Kang SG, Jang HA, CheonJ, Kim JJ, Lee JG. Clinical Implications of Residual Urine in Korean Benign Prostatic Hyperplasia (BPH) Patients: A Prognostic Factor for BPH-Related Clinical Events（韓国の前立腺肥大症（ＢＰＨ）患者についての残尿量の臨床的意義：ＢＰＨに関連する臨床事象の予後因子）Int Neurourol J. 2010 Dec;14(4):238-44）。また、膀胱に残っている残尿が失禁、頻尿、尿路感染、夜間頻尿、極端に放置した場合には慢性腎不全につながる可能性がある。
【００８６】
ＧＢＴＥ５００ｍｇは１２週間後に残尿量またはＡＵＡスコアを有意に減少させる効果はなかったが、１２週間後までに好ましい方向への減少は見られた。たとえば、６週間後から１２週間後まで、臨床的に有意な改善が得られた対象の割合はプラセボまたはＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群では差がなかった。しかし、１日に５００ｍｇのＧＢＴＥを摂取した別の２０％の対象は、６週間後から１２週間後まで、ＡＵＡ症状スコアにおいて臨床的に有意な改善を得られた。このことによって１日あたり１０００ｍｇ未満の用量の場合には蓄積期間があるという見解が裏付けられる。泌尿器の健康の変化がみられるにはより長い投与段階が必要となる可能性は十分にある。これは、ＧＢＴＥの抗炎症作用機序に加え、考えられる抗酸化作用機序に基づく。
【００８７】
茶に含まれるポリフェノールが動物とヒトいずれの前立腺組織からも検出されたため、ＬＵＴＳを有する男性の体内でＧＢＴＥに含まれる抗酸化物質が泌尿器組織へ移動し、部位特異的なフリーラジカルを失活させ、抗酸化効果を発揮した可能性がある。しかし、ＬＵＴＳの症状やＣＲＰに対し効果を発揮するにはより長い投与期間が必要だったことが考えられる。反対に、健常な男性にＧＢＴＥを用いた臨床試験では用量応答的な血清抗酸化効果が示され、炎症または酸化ストレスが集中している部位がなかった可能性がある。そのため、茶の混合物中の抗酸化物質が体内に存在する一部の有害なフリーラジカルを失活させることができ、残りは用量応答的に血清中で検出可能であった可能性がある。
【００８８】
最後に、文献によれば、この試験は組み合わせた緑茶と紅茶の混合物の抗酸化能力に対する効果を評価した唯一の試験である。図６のデータは、観察された効果が緑茶または紅茶が単独で投与された場合に観察されると思われる効果よりも高いと結論づける論理的根拠を示す。ＤＰＰＨアッセイを用いて、２，２‐ジフェニル‐１‐ピクリル‐ヒドラジル（ＤＰＰＨ）フリーラジカルの還元に基づいてＵＶ／ＶＩＳ分光光度法を採用し、トロロクス（公知の抗酸化物質）との比較によって紅茶抽出物、緑茶抽出物、または紅茶および緑茶抽出物の混合物の抗酸化能力のレベルを求めた。ＧＴＥとＢＴＥとの混合物はＧＴＥまたはＢＴＥ単独の場合よりも高い抗酸化活性を示した（図６）。ＧＴＥとＢＴＥとの５０％／５０％混合物と、単独のＧＴＥおよびＢＴＥとをグラフで比較すると、混合物には予想外に高い抗酸化活性が見られた。当業者は２種類の同量の成分を混合した場合その２種類の成分のおよそ平均であるデータが得られ、それよりも有意に高いレベルのデータは得られないと仮定するため、このような実験的観察は意外であった。本発明の茶の混合物は、個々の茶製品よりも有意に高いレベルの抗酸化能力を達成し、結果的に相乗効果を得た。科学者は５０年以上にわたり抗酸化物質について研究してきたが、このことは特に茶については記録されていない。
【００８９】
結論
本発明は、治療上有効量の緑茶の水抽出物と紅茶の水抽出物との組み合わせを投与することによって、泌尿器の健康を改善する方法、ＬＵＴＳおよびＢＰＨの症状（たとえば残尿量、ＡＵＡ症状スコア、夜間頻尿、尿勢低下、頻尿、尿線途絶、残尿、日常生活動作の困難、性欲および性機能）を軽減する方法、生理的危険因子を軽減（たとえば炎症（ＣＲＰ）、酸化ストレス、血圧の減少）する方法からなる。また、この緑茶と紅茶との混合物は、単独の緑茶または紅茶から予想されるよりも予想外に高い抗酸化剤としての能力を示した。
【００９０】
実施例２
この臨床試験の目的は、健常な男性を対象としたヒト対象臨床試験でＫｅｍｉｎ社のＧＢＴＥを評価し、そのインビボでの抗酸化能力を確認し、抗酸化レベル、用量応答的な効果、副作用／毒性をモニタリングすることである。この試験では、無作為プラセボ対照二重盲検比較試験で健常な男性対象にＧＢＴＥを投与し、試験薬剤を３種類の用量で４週間投与した場合をプラセボと比較して試験した。試験では安全性、忍容性、コンプライアンスおよびその他の二次的評価項目についても評価した。ＧＢＴＥ、つまり緑茶および紅茶の抽出物の組み合わせが健常な男性対象の血清抗酸化レベルを上昇させるのに有利である可能性があるという仮説を立てた。
【００９１】
患者と方法
試験デザイン
この試験は前向き研究として設計され、Institutional Review Board（ＩＲＢ）（Quorum IRB, Seattle, WA）の承認を受け、医薬品の臨床試験の実施の基準（Good Clinical Practices）に従って実施されたヒト対象臨床試験であり、NIS Laboratories（Klamath Falls, OR）で行われた。適格性のある参加者は、２５歳〜７０歳の健常な男性で、初回の試験投与の２週間以内に新たに処方された薬物がなく、試験の要件を満たすことができ、説明同意文書を提出する意思のある男性であった。腎不全または肝不全にかかったことがある場合、待機的手術またはその他の全身麻酔を必要とする手術を試験期間中に予定していた場合、試験期間中または過去３か月以内に献血していた場合、過去１か月以内に治験対象製品を含む別の研究試験に参加していた場合、ビタミンＥ＞４００ＩＵ、ビタミンＣ＞５００ｍｇ、ＣｏＱ‐１０、リコピン、レスベラトロール、ピクノジェノール、同様に「抗酸化製剤」と呼ばれる製剤、抗酸化レベルに影響すると考えられるその他の栄養補助食品を使用していた場合には対象から除外した。１日に茶を２杯以上摂取していたか、コーヒーまたは栄養ドリンクを１日あたり３杯以上摂取していた、あるいは過去３か月以内に喫煙していた男性を試験から除外した（実施例１の表１を参照のこと）。選択基準を満たした対象をＧＢＴＥ２５０ｍｇ（６２．５ｍｇのカプセル２個を１日２回投与）、ＧＢＴＥ１０００ｍｇ（２５０ｍｇのカプセル２個を１日２回投与）、プラセボ（同様にカプセル２個を１日２回投与）の３つの試験群のうちの１つに無作為に分け、いずれの群にも１日に合計でカプセル４個を投与した。介入の間、病歴について報告されたとおりの基準時の薬物や栄養補助剤の摂取を維持し、食事や運動の習慣を変えないよう対象に指示した。評価可能な対象を８０％よりも高いコンプライアンス（薬の数を数えて測定した）をもって試験を完了した対象とあらかじめ規定した。
【００９２】
この試験の主な目的は、４週間のＧＢＴＥの補給による健常なヒトの男性対象の抗酸化状態に対する効果を確認することである。すべての基準について、基準（ＢＬ）と終点（４週間後）の各時点で評価した。２週間後、対象に電話をかけて試験薬剤の摂取を順守するよう通知し、有害事象について確認した。ＢＬ時と４週間後、採血の前１０時間は水以外の飲食を避けるよう対象に依頼した。最終検査に向けて、検査予定日の前日（採血の１８時間前まで）に試験薬剤の最後の用量を摂取するよう対象に依頼した。以下の変数を評価し、製品の安全性と忍容性を評価した：有害事象、臨床検査（血液検査および肝機能）、バイタルサイン（血圧、心拍数、口腔温、呼吸数）。有害事象は重症度（軽症、中等症、重症または致命的）、試験薬物との関係（関連なし、関連していない可能性が高い、関連している可能性がある、関連している可能性が高い、明らかに関連している）に応じて類別した。安全性は４週間の期間にわたって継続的にモニタリングし、試験の開始時、中間時点、終了時点に試験担当医師が参加者に問診と検査を行って確認した。米国国立がん研究所のCommon Terminology Criteria for Adverse Events（有害事象共通用語規準）Version 3.0を用いて有害事象を類別した。
【００９３】
抗酸化試験
血清鉄還元抗酸化力（ferric reducing antioxidant power（ＦＲＡＰ））および細胞の抗酸化保護（ＣＡＰ−ｅ）による抗酸化性試験パネルを実施した。血清ＦＲＡＰでは、鉄を利用して還元能力を測定する。ＣＡＰ−ｅは、NIS Laboratories（NIS Laboratories、オレゴン）が開発した試験で、生体利用性と抗酸化保護能力を細胞レベルで評価するものであり、臨床試験で血清の変化を評価するのに有用である。
【００９４】
試験薬剤
試験薬剤はカプセル化栄養補助食品であり、ＧＢＴＥを０、６２．５ｍｇ、または２５０ｍｇ含有していた。朝食および昼食と共に２カプセルずつ、１日２回服用するよう男性に指示し、合計用量が１日あたり０ｍｇ（プラセボ）、ＧＢＴＥ２５０ｍｇ、またはＧＢＴＥ１０００ｍｇとなるようにした。医薬品製造管理および品質管理基準（Good Manufacturing Practices）に従って試験薬剤を処方し、製造し、カプセル化して、１２０カプセルずつ遮光プラスチック瓶に包装した。製品ロットを重金属、殺虫剤、賦形剤を含む毒物について試験した。プラセボは不活性物質を含有し、試験薬剤と同じ外観とした。試験期間を通じてカプセルの安定性を確認した（データは示さず）。
【００９５】
統計的分析
統計値は、正常に分布した変数（たとえば年齢）に対する平均値±標準誤差として示す。主要評価項目を包括解析（intent to treat（ＩＴＴ））グループと評価可能なグループ両方について評価したが、人口統計分析と二次的分析はすべて評価可能な対象についてのみ行った。４つの処置群に関する人口統計データをＡＮＯＶＡで比較した。主要な評価項目変数について、茶が抗酸化状態に好ましい影響を与える能力を有するという事前知識に基づいて片側ｔ検定によって各群をプラセボと比較し、その他のすべての評価項目判定については両側ｔ検定によって評価した。統計的有意性はｐ≦０．０５と定義した。
【００９６】
結果
対象
ＧＢＴＥ２５０ｍｇ投与群、ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群、プラセボ投与群は、それぞれ対象１２例（１０例）、１３例（１１例）、１２例（１１例）（ＩＴＴ［評価可能］）であった。処置群は、対象の分布について十分に均衡していた（表３）。
【００９７】
【表３】
0006279591.tif 000005
【００９８】
ＦＲＡＰ
ＢＬから４週間後までのＦＲＡＰの平均パーセント変化率は、ＩＴＴ群では用量依存的に増加し、ＢＬから４週間後までのＦＲＡＰ値の平均パーセント変化率は、ＧＢＴＥを１日に２５０ｍｇ摂取した評価可能な対象と１０００ｍｇ摂取した評価可能な対象ではプラセボと比較して増加した（表４）。基準時から４週間後までのＦＲＡＰ値の平均パーセント変化率は、評価可能なＧＢＴＥ２５０ｍｇ投与群とＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群において、プラセボ群が−６．３２±５．１１％であるのに対してそれぞれ１２．６８±７．２０％、１０．４２±５．６８％、１９．４４±１２．６１％であった（ＧＢＴＥ２５０ｍｇおよび１０００ｍｇ投与群についてそれぞれｐ＝０．０２１、ｐ＝０．０３６）。
【００９９】
【表４】
0006279591.tif 000006
【０１００】
ＣＡＰ‐ｅ
ＣＡＰ‐ｅのＢＬからの平均パーセント変化率は、４週間後のＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群（ＩＴＴ）ではプラセボに比べて減少した（抗酸化状態が改善されたことを示す）（−４．０６８±１．７８４％［ＧＢＴＥ１０００ｍｇ］、３．１６２±３．５０４％［プラセボ］、ｐ＝０．０３３９）。ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群には投与を怠った個体はいなかった。したがって、評価可能なデータはＩＴＴと同様である（表４）。
【０１０１】
バイタルサイン
評価可能なＧＢＴＥ２５０ｍｇ投与群では、ＢＬ時に比べて収縮期血圧に有意な改善がみられた（１２５．９０±３．０５（０日目）対１２０．１０±２．５２mm Hg（２８日目）、ｐ＝０．０４７８、表６）。評価可能なＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群では、２８日後に収縮期血圧に有意な減少がみられ（１２５．１１±２．８２（０日目）対１１９．０±２．１５mm Hg（２８日目））、拡張期血圧にも減少傾向がみられた（７９．８９±２．３４（０日目）対７５．９±１．８０mm Hg（２８日目））（ｐ＝０．０１７（収縮期血圧）、ｐ＝０．０６６７（拡張期血圧））。
【０１０２】
【表５】
0006279591.tif 000007
【０１０３】
２８日後、ＧＢＴＥ２５０ｍｇ投与群ではプラセボ群と比較して空腹時血糖値に有意な差がみられた（８８．５０±５．８２（ＧＢＴＥ２５０ｍｇ投与群）対９４．９１±６．０２ｍｇ／ｄＬ（プラセボ群））。また、ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群ではプラセボ群に対し有意となる傾向がみられた（血糖値およびその他の検査値については表８を参照のこと）。
【０１０４】
【表６】
0006279591.tif 000008
【０１０５】
安全性および忍容性
試験を完了した対象では、試験薬剤に関連する可能性が高いと考えられる有害事象としては、胃の不調および胃内ガスの報告（ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群）があった。別の有害事象としては、前腕の裂傷（プラセボ）が報告された。肝機能試験値の上昇、他の臨床検査での臨床的に有意な異常、またはバイタルサインのパラメータのいずれかにおける変化を理由に中断した対象はなかった。全対象に対して対象薬剤は忍容性があり、試験薬剤に関連する臨床検査上の変化はみられなかった。
【０１０６】
考察
この試験の目的は、健常なヒトの男性に新規な緑茶および紅茶の混合物を３種類の異なる用量で投与した場合の血清抗酸化パラメータ、血液化学、バイタルサインについて分析し、試験薬剤の安全性と忍容性を評価することであった。抗酸化化合物は多様な作用機序で作用し得るため、試験パネルは成分の抗酸化能力の評価に有益である。
【０１０７】
この試験から、ＧＢＴＥを２つの用量のうちいずれの用量で摂取した対象でも２８日後にプラセボと比較して血清ＦＲＡＰのレベルが増加していたことがわかり、ＧＢＴＥの投与が血清抗酸化レベルにもたらす有益な効果が実証された。ある食品成分の抗酸化能力を理解することは重要であるため、このことは重要な知見である。ＦＲＡＰアッセイでは、生物学的に活性な抗酸化物質は「酸化基質の濃度よりも低い濃度で存在した場合に、その基質の酸化を有意に遅らせるか防ぐ物質」である（Halliwell, B., and Gutteridge, J. M. C. (1995) Free Radicals Biol. 1321S. Med. 18, 125-126）という概念に基づいて、５９３ｎｍで鉄から鉄イオンへの還元を示すことによって成分の抗酸化能力を確認する。ＣＡＰ‐ｅでは細胞がフリーラジカルを失活させる能力を測定するため、同時に観察されたＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群でのＣＡＰ‐ｅのパーセント変化率からも、ＧＢＴＥの抗酸化能力がわかる（Jensen GS, Ager DM, Redman KA, MitznerMA, Benson KF, Schauss AG. Pain reduction and improvement in range of motion after daily consumption of an Acai（Euterpe oleracea Mart.）pulp-fortified polyphenolic-rich fruit and berry juice blend（アサイー（Euterpe oleracea Mart.）果肉を補充したポリフェノールを豊富に含む果実と液果の果汁混合物を毎日摂取した後の痛みの軽減と可動域の改善）J Med Food. 14 (7/8) 2011, 702-711）。試験薬剤を最後に摂取してから約１８時間後に４週間後の採血をしたことから、ＧＢＴＥの補給によって慢性的な抗酸化効果が得られたと考えられる。これらの結果を総合すれば、ＧＢＴＥは強力な抗酸化物質であり、抗酸化状態の改善は健康促進や、心血管疾患、糖尿病などの代謝性疾患、多くのがんを含む、慢性炎症に関連する多様な疾患の予防の可能性に有益となり得る（Islam MA. Cardiovascular effects of green tea catechins: progress and promise（緑茶カテキンが心血管系へもたらす効果：進歩と有望性）Recent Pat Cardiovasc Drug Discov. 2012 Aug;7(2):88-99; SuliburskaJ, Bogdanski P, SzulinskaM, Stepien M, Pupek-MusialikD, Jablecka A. Effects of green tea supplementation on elements, total antioxidants, lipids, and glucose values in the serum of obese patients（肥満患者の血清中の要素、総抗酸化物質量、脂質、血糖値に対する緑茶補給の効果）Biol Trace Elem Res. 2012 Dec;149(3):315-22; Zheng P, ZhengHM, Deng XM, Zhang YD. Green tea consumption and risk of esophageal cancer: a meta-analysis of epidemiologic studies（緑茶の摂取と食道がんのリスク：疫学的研究のメタ分析）BMC Gastroenterol. 2012 Nov 21;12(1):165）。最近の研究でも、緑茶も紅茶も生体利用可能であり、それらを摂取することによってＦＲＡＰを含む酸化ストレスの指標に有利な影響があることが確認されている（Panza VS, Wazlawik E, Ricardo Schutz G, Comin L, Hecht KC, da Silva EL. Consumption of green tea favorably affects oxidative stress markers in weight-trained men（緑茶の摂取がウェイトトレーニングを受けた男性の酸化ストレスの指標に有利に影響する）Nutrition. 2008 May;24(5):433-42. doi: 10.1016/j.nut.2008.01.009. Epub 2008 Mar 12; Leenen R, Roodenburg AJ, Tijburg LB, Wiseman SA. A single dose of tea with or without milk increases plasma antioxidant activity in humans（ミルクを加えた茶または茶のみを１回摂取するとヒトの血漿抗酸化活性が増加する）Eur J Clin Nutr. 2000 Jan;54(1):87-92）。最終的に、社内で得た生体外の抗酸化データが、本研究では１日ＧＢＴＥ１０００ｍｇを投与した場合に生体内で確認された（データは示さず）。
【０１０８】
この研究によって、ＧＢＴＥ２５０ｍｇ投与群とＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群のいずれにおいても、２８日後にはＢＬと比べて収縮期血圧値が有意に低下し、ＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群では拡張期血圧においても低下傾向がみられたことが実証された。ヒトを対象とした最近の研究から、緑茶抽出物の摂取（１日あたり緑茶抽出物３７９ｍｇ（ＥＧＣＧを２０８ｍｇ含有する））によって、３か月後に収縮期血圧と拡張期血圧が共に有意に減少しそれぞれ４ポイントの差があったことがわかっている（１４５±１０（ＢＬ）対１４１±８（３か月後）［ｐ＝０．００４］、８８±４対８４±３［ｐ＜０．００１］（それぞれ収縮期血圧と拡張期血圧））。この研究では肥満や高血圧のある５６例の対象を研究している（Bogdanski P, Suliburska J, Szulinska M, Stepien M, Pupek-Musialik D, Jablecka A. Green tea extract reduces blood pressure, inflammatory biomarkers, and oxidative stress and improves parameters associated with insulin resistance in obese, hypertensive patients（緑茶抽出物は血圧、炎症バイオマーカー、酸化ストレスを減少させ、肥満で高血圧の患者におけるインスリン抵抗性を改善する）. Nutr Res. 2012 Jun;32(6):421-7）ため、健常な対象での本評価とは異なる。紅茶の急性投与によって健常なヒトの脈波伝播速度が上昇し、増大率（Augumentation Index）が下がり、血流依存性血管拡張を増加させることもわかっている（Jochmann N, Lorenz M, KrosigkA, Martus P, Bohm V, Baumann G, Stangl K, StanglV,.The efficacy of black tea in ameliorating endothelial function is equivalent to that of green tea（紅茶の内皮機能改善効果は緑茶と同等である）Br J Nutr. 2008 Apr;99(4):863-8. Epub 2007 Oct 5;.Vlachopoulos C, Alexopoulos N, Dima I, Aznaouridis K, Andreadou I, Stefanadis C. Acute effect of black and green tea on aortic stiffness and wave reflections（動脈硬化および動脈波反射に対する紅茶および緑茶の急性効果）J Am Coll Nutr. 2006 Jun;25(3):216-23）。
【０１０９】
本試験では、わずか４週間の試験薬剤の投与後、ＧＢＴＥ２５０ｍｇ投与群およびＧＢＴＥ１０００ｍｇ投与群の対象は、プラセボと比較して空腹時血糖値が有意に減少した。Ｂｏｇｄａｎｓｋｉらによる３か月の研究では緑茶抽出物で処置した肥満および高血圧の患者において対照群に比べて空腹時血糖値が改善した（５．５±０．４対５．０±０．３ｍｍｏｌ／Ｌ［ｐ＝０．０１６］（それぞれＢＬ対３か月後））ことが示されたが（Bogdanski, et al., 2012）、それよりも短期間でこのような新規な効果が健常な個体にみられた。
【０１１０】
本試験での制限としては介入期間が短いことが挙げられるが、補給からわずか４週間後に得られた結果によって試験薬剤の効力を示すことができ、この結果はさらに長期的な分析を行う正当な理由である。本試験の強みとしては、複数の用量を無作為プラセボ対照二重盲検比較試験として設計したこと、抗酸化状態を数種の分析によって評価したことが挙げられる。この試験によって、４週間のＧＢＴＥ補給は健常なヒトにおいて血清抗酸化状態の改善や血圧と血糖値の改善につながり、安全であり十分に忍容性があることが実証された。
【０１１１】
結論
ＧＢＴＥを投与した結果、１日ＧＢＴＥ２５０ｍｇ程度の用量で４週間以内に血清抗酸化状態、血糖値、収縮期血圧の改善がみられた。１日に１０００ｍｇまでのＧＢＴＥ投与は安全で十分に忍容性があった。
【０１１２】
以上の説明と図面は本発明の例示的な態様を構成する。本明細書に記載した上記態様と方法は、当業者の能力、経験、好みに応じて変化し得る。方法に含まれる工程をある順序で列挙するのみでは、その方法に含まれる工程の順序を限定することにはならない。以上の説明および図面は本発明を例示するに過ぎず、特許請求の範囲が限定する範囲を除いて本発明はこれに限定されるものではない。開示内容を見た当業者は、本発明の範囲を逸脱することなく、変更および改変をすることができる。
【図１】
0006279591.tif 000009
【図２】
0006279591.tif 000010
【図３】
0006279591.tif 000011
【図４】
0006279591.tif 000012
【図５】
0006279591.tif 000013
【図６】
0006279591.tif 000014
【図７】
0006279591.tif 000015