(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゴンドイン酸、ガドレイン酸及び５−イコセン酸から選択される少なくとも１種の炭素数２０のモノエン酸と、前記の炭素数２０のモノエン酸とアルカリ金属との塩と、前記の炭素数２０のモノエン酸とメタノール又はエタノールとのエステルと、前記の炭素数２０のモノエン酸のモノ、ジ又はトリグリセライドとからなる群から選択される少なくとも１種１重量部、並びにエルカ酸、セトレイン酸及び５−ドコセン酸から選択される少なくとも１種の炭素数２２のモノエン酸と、前記の炭素数２２のモノエン酸とアルカリ金属との塩と、前記の炭素数２２のモノエン酸とメタノール又はエタノールとのエステルと、前記の炭素数２２のモノエン酸のモノ、ジ又はトリグリセライドとからなる群から選択される少なくとも１種０．１乃至１７重量部を有効成分として含有するナチュラルキラー細胞活性化剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、免疫力の低下した者の免疫賦活によるウイルス性疾患、腫瘍等に対する治療及び予防を目的としたナチュラルキラー細胞活性化剤に関する。
【０００２】
更に詳しくは、本発明は、炭素数２０のモノエン酸及び／又はその誘導体、並びに炭素数２２のモノエン酸及び／又はその誘導体を有効成分として含有するナチュラルキラー細胞活性化剤に関するものである。
【０００３】
【従来の技術】
従来、手術侵襲により術後の免疫力の低下した患者の免疫賦活、特にナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性化に有用なω−３系脂肪酸又はその誘導体を含有する油脂加工品が知られている（特開平４−２７９５２３号公報。以下、従来技術１と記載する。）。
しかしながら、これらの従来技術には、次に記載するとおりの不都合があった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
前記従来の技術に開示されているとおり、ω−３系脂肪酸又はその誘導体を含有する免疫賦活油脂加工品が開発されていた。しかしながら、従来技術１には、ω−３系脂肪酸又はその誘導体にナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性化作用があることが開示されているものの、モノエン酸にナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性化作用があることについては開示されていない。更に、従来技術１の免疫賦活油脂加工品の一実施例として、ω−３系脂肪酸を主成分とし、その他の成分として炭素数１６及び炭素数１８のモノエン酸を含有する油脂加工品が例示されているものの、ナチュラルキラー細胞活性化に、高級モノエン酸である炭素数２０のモノエン酸及び／又はその誘導体、並びに炭素数２２のモノエン酸及び／又はその誘導体を組み合わせて使用することは、一切検討されていなかった。
【０００５】
本発明は前記事情に鑑みてなされたものであり、新規なナチュラルキラー細胞活性化剤を提供することを課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記従来技術に鑑みて、油脂成分中より、一層強力なナチュラルキラー細胞活性化剤を探索すべく、種々の食用高級脂肪酸について試験を行った。
【０００７】
その結果、炭素数２０のモノエン酸及び／又はその誘導体、並びに炭素数２２のモノエン酸及び／又はその誘導体を組み合わせて使用することが、後記する試験例の結果からも明らかなとおり、従来のモノエン酸である炭素数１６又は炭素数１８のモノエン酸を使用する場合に比較して、ナチュラルキラー細胞活性化の効果が高いことを見い出し、本発明を完成した。
【０００８】
前記課題を解決する本発明は、ゴンドイン酸、ガドレイン酸及び５−イコセン酸から選択される少なくとも１種の炭素数２０のモノエン酸と、前記の炭素数２０のモノエン酸とアルカリ金属との塩と、前記の炭素数２０のモノエン酸とメタノール又はエタノールとのエステルと、前記の炭素数２０のモノエン酸のモノ、ジ又はトリグリセライドとからなる群から選択される少なくとも１種１重量部、並びにエルカ酸、セトレイン酸及び５−ドコセン酸から選択される少なくとも１種の炭素数２２のモノエン酸と、前記の炭素数２２のモノエン酸とアルカリ金属との塩と、前記の炭素数２２のモノエン酸とメタノール又はエタノールとのエステルと、前記の炭素数２２のモノエン酸のモノ、ジ又はトリグリセライドとからなる群から選択される少なくとも１種０．１乃至１７重量部を有効成分として含有するナチュラルキラー細胞活性化剤である。
【０００９】
【発明の実施の形態】
次に、本発明について詳細に説明する。
本発明のナチュラルキラー細胞活性化剤の有効成分である炭素数２０のモノエン酸及び／又はその誘導体、並びに炭素数２２のモノエン酸及び／又はその誘導体は、具体的には、炭素数２０のゴンドイン酸（ゴンドウ酸）、ガドレイン酸、５−イコセン酸等のイコセン酸（エイコセン酸）及び／又はその誘導体、並びに炭素数２２のエルカ酸（エルシン酸）、セトレイン酸、５−ドコセン酸等のドコセン酸及び／又はその誘導体である。
【００１０】
本発明に使用される高級モノエン酸である炭素数２０のモノエン酸、並びに炭素数２２のモノエン酸は、医薬的又は食品的に許容されるものであれば特に制限はなく、これらの高級モノエン酸の含有量が多い天然油脂、例えば、サメ肝油、鯨油、タラ肝油、ナタネ油、カラシ油、キャベツ種子油、ホホバ油、メドウフォーム油等を、そのまま又は適宜組み合わせて使用することが可能であり、また、これらの天然油脂から、イコセン酸又はドコセン酸を常法、例えば分別蒸留、結晶化、溶媒抽出、尿素包接化、又はクロマトグラフィーにより抽出、精製して使用することも可能である。尚、簡便には、市販のゴンドイン酸、又はエルカ酸（いずれもシグマ社製）を使用することができる。
【００１１】
本発明に使用される高級モノエン酸である炭素数２０のモノエン酸、並びに炭素数２２のモノエン酸の誘導体、いわゆる高級モノエン酸の誘導体には、高級モノエン酸の塩のほか、種々のエステル等の誘導体を包含する。具体的には、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩、メタノール、エタノール等の低級脂肪族アルコールとのエステル、モノ、ジ、又はトリグリセライド等を例示することができる。
【００１２】
また、後記する試験例の結果からも明らかなとおり、炭素数２０のモノエン酸及び／又はその誘導体、並びに炭素数２２のモノエン酸及び／又はその誘導体の使用比率は、炭素数２０のモノエン酸及び／又はその誘導体１重量部に対して、炭素数２２のモノエン酸及び／又はその誘導体を０．１乃至１７重量部の重量比（以下、特定範囲の重量比と記載することがある。）であることが、特定範囲の重量比でない場合に比較して、ナチュラルキラー細胞活性化の効果が高いことから望ましい。即ち、炭素数２０のモノエン酸及び／又はその誘導体１重量部に対して、炭素数２２のモノエン酸及び／又はその誘導体を０．１乃至１７重量部の重量比で含有する油脂を有効成分とするナチュラルキラー細胞活性化剤がナチュラルキラー細胞活性化の効果を高めることから望ましい。
【００１３】
本発明のナチュラルキラー細胞活性化剤は、投与方法として、例えば、静注、経口、経管、及び経腸によりヒト又は動物に投与することができ、これらの投与方法及び治療目的に応じて、一般的な医薬製剤の形態である各種の剤形が選択可能である。その代表的なものとして錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、注射剤（液剤、懸濁剤等）等を例示することができる。
【００１５】
本発明のナチュラルキラー細胞活性化剤の有効投与量は経口投与の場合（食事療法の場合も同じ。）、マウスによる試験結果から、炭素数２０のモノエン酸及び／又はその誘導体、並びに炭素数２２のモノエン酸及び／又はその誘導体（以下、高級モノエン酸類と記載することがある。）からなる有効成分の量を基準として５〜４００ｍｇ／体重ｋｇ／１日であることが判明した。
【００１６】
また、本発明のナチュラルキラー細胞活性化剤の有効成分である高級モノエン酸類は、マウスを用いた経口投与による急性毒性試験の結果、毒性が極めて低く、ＬＤ50は１０ｇ／体重ｋｇ以上であり、ヒト又は動物に対して安全に、かつ副作用が極めて少ない状態で使用することができる。
【００１７】
更に、本発明のナチュラルキラー細胞活性化剤は、他のモノエン酸、多価不飽和脂肪酸等のナチュラルキラー細胞活性化作用を有する物質と組み合わせて使用することも可能である。特に、炭素数２４のモノエン酸及び／又はその誘導体を含有することが、ナチュラルキラー細胞活性化の効果を相乗的に高めることから望ましい。
【００１８】
また、炭素数２４のモノエン酸及び／又はその誘導体の含有量は、本発明の態様１のナチュラルキラー細胞活性化剤中の炭素数２０のモノエン酸及び／又はその誘導体１重量部に対して、炭素数２４のモノエン酸及び／又はその誘導体０．１乃至１０重量部の重量比で含有することが、ナチュラルキラー細胞活性化の効果を相乗的に一層高めることから望ましい。即ち、炭素数２０のモノエン酸及び／又はその誘導体１重量部に対して、炭素数２２のモノエン酸及び／又はその誘導体を０．１乃至１７重量部、並びに炭素数２４のモノエン酸及び／又はその誘導体０．１乃至１０重量部の重量比で含有する油脂を有効成分とするナチュラルキラー細胞活性化剤がナチュラルキラー細胞活性化の効果を一層高めることから望ましい。
【００１９】
尚、炭素数２４のモノエン酸及び／又はその誘導体は、具体的には、炭素数２４のネルボン酸（セラコレイン酸、鮫油酸）等のテトラコセン酸及び／又はその誘導体である。
【００２０】
次に試験例を示して本発明を詳細に説明する。
試験例１
この試験は、ナチュラルキラー細胞活性化作用を指標として、従来技術と本発明を比較するために行った。
（１）試料の調製
次に示す７種類の試料を調製した。
試料１：本発明の炭素数２０のモノエン酸であるゴンドイン酸１重量部及び炭素数２２のモノエン酸であるエルカ酸１重量部からなる高級モノエン酸混合物
試料２：ゴンドイン酸
試料３：エルカ酸
試料４：従来技術１の実施例１の炭素数16及び１８のモノエン酸を含有する油脂加工品
試料５：炭素数１８のモノエン酸であるオレイン酸１重量部及びエルカ酸１重量部からなるモノエン酸混合物
試料６：オレイン酸１重量部及びゴンドイン酸１重量部からなるモノエン酸混合物
試料７：対照としてのラード
尚、ゴンドイン酸、エルカ酸、及びオレイン酸はいずれも市販品（シグマ社製）を使用した。また、ラードは市販品（太陽油脂社製）を使用した。
【００２１】
（２）試験方法
（ａ）被検者及び投与方法
平均体重が６５ｋｇであって、ナチュラルキラー細胞活性値が基準値範囲内（１７．１乃至４８．７％）で、かつ比較的低値（２０％未満）を示す社内男性ボランティア各試料群４名、計２８名を試験した。
各試料群に対応する試料を、１日当り５ｇの投与量で１２週間摂取させた。尚、特別な食餌制限は行わなかった。
【００２２】
（ｂ）ナチュラルキラー細胞活性値の試験方法
試料摂取前及び１２週間摂取後に、全血１０ｍｌを、被検者より採血し、分析試料とした。ナチュラルキラー細胞活性値は、商業的分析を実施している大手臨床検査会社である株式会社ビー・エム・エル社（本社：〒１５１−００５１東京都渋谷区千駄ヶ谷５−２１−３；http：//www.bml.co.jp/）に外注して、51Ｃｒ遊離法で分析し、分析結果を百分率表示した。具体的には、標的細胞として腫瘍細胞であるＫ５６２を使用し、標的細胞数（Ｔ）と分析試料中のリンパ球数（Ｅ）の割合であるＥ／Ｔ比が２０：１の条件で、標的細胞から遊離する51Ｃｒ放射活性を測定する方法により分析した。リンパ球無添加の場合の51Ｃｒ放射活性を０％とし、標的細胞から完全に51Ｃｒが遊離した場合の51Ｃｒ放射活性を１００％として、前記分析結果の51Ｃｒ放射活性の値を百分率表示した。
【００２３】
（３）試験結果
この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１から明らかなとおり、本発明の高級モノエン酸混合物試料１は、試料摂取前のナチュラルキラー細胞活性の値及び試験試料としてラード（太陽油脂社製）を使用した対照群（試料７）のナチュラルキラー細胞活性の値と比較して顕著な活性化が確認された。
【００２４】
また、本発明の高級モノエン酸混合物試料１は、従来技術の炭素数１６及び１８のモノエン酸を含有する試料４に比較して、ナチュラルキラー細胞活性が優れていることが認められた。
【００２５】
更に、本発明の高級モノエン酸混合物試料１は、ゴンドイン酸の単独使用の試料２、及びエルカ酸の単独使用の試料３に比較して、ナチュラルキラー細胞活性が優れており、また、試料１のゴンドイン酸をオレイン酸に置換したモノエン酸混合物である試料５及び試料１のエルカ酸をオレイン酸に置換したモノエン酸混合物である試料６に比較して、ナチュラルキラー細胞活性が優れていることから、ナチュラルキラー細胞活性化には、炭素数２０のモノエン酸であるゴンドイン酸及び炭素数２２のモノエン酸であるエルカ酸を組み合わせて使用すること、即ち、炭素数２０のモノエン酸及び／又はその誘導体、並びに炭素数２２のモノエン酸及び／又はその誘導体を組み合わせて使用することが有効であることが判明した。
【００２６】
尚、ゴンドイン酸に変えて炭素数２０のガドレイン酸、５−イコセン酸、若しくはこれらの誘導体、又はエルカ酸に変えて炭素数２２のセトレイン酸、５−ドコセン酸、若しくはこれらの誘導体を使用して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。また、試料１のモノエン酸の重量比を、ゴンドイン酸１重量部に対してエルカ酸０．１乃至１７重量部の範囲内で適宜変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。更に、試料５及び試料６のモノエン酸の重量比を適宜変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
【００２７】
【表１】
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【００２８】
試験例２
この試験は、ナチュラルキラー細胞活性を指標として、炭素数２０のモノエン酸及び／又はその誘導体、並びに炭素数２２のモノエン酸及び／又はその誘導体の重量比を調べるために行った。
（１）試料の調製
次に示す４種類の試料を調製した。
試料８：炭素数２０のモノエン酸であるゴンドイン酸１重量部及び炭素数２２のモノエン酸であるエルカ酸０．０５重量部からなる高級モノエン酸混合物
試料９：炭素数２０のモノエン酸であるゴンドイン酸１重量部及び炭素数２２のモノエン酸であるエルカ酸０．１重量部からなる高級モノエン酸混合物
試料10：炭素数２０のモノエン酸であるゴンドイン酸１重量部及び炭素数２２のモノエン酸であるエルカ酸１７重量部からなる高級モノエン酸混合物
試料11：炭素数２０のモノエン酸であるゴンドイン酸１重量部及び炭素数２２のモノエン酸であるエルカ酸１８重量部からなる高級モノエン酸混合物
【００２９】
（２）試験方法
各試料のナチュラルキラー細胞活性を、前記試験例１と同一の方法により試験した。
【００３０】
（３）試験結果
この試験の結果は、表２に示すとおりである。表２から明らかなとおり、炭素数２０のモノエン酸であるゴンドイン酸１重量部に対して、炭素数２２のモノエン酸であるエルカ酸が０．１乃至１７重量部の重量比である場合に、ナチュラルキラー細胞活性が一層優れていることから、ナチュラルキラー細胞活性化には、炭素数２０のモノエン酸及び／又はその誘導体１重量部に対する炭素数２２のモノエン酸及び／又はその誘導体の比率は、０．１乃至１７重量部が望ましい範囲であることが判明した。
【００３１】
尚、ゴンドイン酸に変えて炭素数２０のガドレイン酸、５−イコセン酸、若しくはこれらの誘導体、又はエルカ酸に変えて炭素数２２のセトレイン酸、５−ドコセン酸、若しくはこれらの誘導体を使用して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
【００３２】
【表２】
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【００３３】
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００３４】
【実施例】
実施例１
ゴンドイン酸（シグマ社製）３００ｇ及びエルカ酸（シグマ社製）３００ｇの高級モノエン酸混合物６００ｇを使用して、これを日本薬局方１号ゼラチンカプセル（アリメント工業社製）に３００ｍｇずつ充填し、カプセルのキャップとボディーの接合部をゼラチンを用いてシールし、ナチュラルキラー細胞活性化用カプセル剤１９００個を製造した。
得られたカプセル剤を、社内ボランティア１０名に１日当り１０個を１０週間投与した結果、ナチュラルキラー細胞が活性化された。
【００３５】
実施例２
ゴンドイン酸（シグマ社製）５００ｇ、エルカ酸（シグマ社製）１ｋｇ、及び無水エタノール（和光純薬工業社製）１．５ｋｇを混合し、均一溶媒とした。次いで、この混合溶液に炭酸カルシウム（和光純薬工業社製）８．５ｋｇを添加し、練り合わせ均一なものとしたものを４０℃で乾燥し、エタノールを除去する。
得られた組成物を打錠機（畑鉄鋼所社製）を使用して、３ｔ／ｍ２の圧力で直接打錠し、直径１０ｍｍ、重量４００ｍｇの錠剤を得た。
【００３６】
錠剤の表面を、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（信越化学社製）８．５ｋｇとアセトン（三井石油化学社製）１００ｋｇとの均一混合溶液で噴霧方式により被覆し、重量４４０ｍｇのナチュラルキラー細胞活性化用錠剤２０，０００個を製造した。
得られた錠剤を、社内ボランティア１０名に１日当り３０個を１０週間投与した結果、ナチュラルキラー細胞が活性化された。
【００３７】
実施例３
カラシ油（美ノ久社製。ゴンドイン酸１４％、及びエルカ酸２１％を含有。）４．０ｋｇ及びソルビタン脂肪酸エステル（花王社製。ＨＬＢ３．８）２０ｇを添加し、均一に混合し、油相を形成した。油相をカゼインナトリウム［ニュージーランド・デイリー・ボード（New Zealand Dairy Board ）製］３．０ｋｇを溶解した水溶液９６ｋｇと混合し、該混合液をプロペラ攪拌機により７０℃で５分間予備乳化し、原料溶液約１００ｋｇを調製した。
【００３８】
次いで、該原料溶液を６０℃に加温して、ホモゲナイザー（三丸機械工業社製）で２段階均質化（１５ＭＰａ及び５ＭＰａ）し、超高温加熱殺菌機（森永乳業社製）を用いて、１３５℃で１５秒間殺菌処理し、ナチュラルキラー細胞活性化用合成乳約９０ｋｇを製造した。
得られた合成乳を、社内ボランティア１０名に１日当り２００ｍｌを１０週間給与した結果、ナチュラルキラー細胞が活性化された。
【００３９】
参考例１
カゼイン［ニュージーランド・デイリー・ボード（New Zealand Dairy Board）製］４．２ｋｇ、デキストリン（参松工業社製。ＤＥ＝２７）１４．０ｋｇ、及び難消化性デキストリン（松谷化学工業社製）２．０ｋｇを水道水７５．３５ｋｇに分散し、溶解し、これに表３に示す配合量で混合されたミネラル混合物０．３ｋｇを添加して水相を形成した。水相に乳化剤としてグリセリン脂肪酸エステル（太陽化学社製）０．０３ｋｇを添加し、カラシ油（美ノ久社製。ゴンドイン酸１４％、及びエルカ酸２１％を含有。）４．０ｋｇと混合し、該混合液をプロペラ攪拌機により７０℃で５分間予備乳化し、原料溶液約１００ｋｇを調製した。
【００４０】
次いで、該原料溶液を高圧均質機［エイ・ピイ・ブイ・ラニエ（APV Rannie）社製］を使用し、３０ＭＰａの圧力で均質化処理した。均質化処理後、得られた乳化液に、表４に示す配合量で混合されたビタミン混合物０．０２ｋｇ及びバニラフレ−バ−（三栄源エフ・エフ・アイ社製）０．１ｋｇを添加し混合し、レトルトパウチ（東洋製罐社製）に２００ｍｌずつ充填し、密封し、栄養組成物入りレトルトパウチ４００個を製造した。該充填済レトルトパウチをレトルト殺菌機（日阪製作所社製）を使用して１２５℃で１０分間滅菌処理し、流動食としてのナチュラルキラー細胞活性化用栄養組成物４００個を製造した。
得られた流動食を、社内ボランティア１０名に１日当り３個を１０週間使用した結果、ナチュラルキラー細胞が活性化された。
【００４１】
【表３】
0004786030.tif 000004
【００４２】
【表４】
0004786030.tif 000005
【００４３】
【発明の効果】
以上詳記したとおり、本発明は、炭素数２０のモノエン酸及び／又はその誘導体、並びに炭素数２２のモノエン酸及び／又はその誘導体を有効成分とするナチュラルキラー細胞活性化剤に関するものであり、本発明により奏せられる効果は次のとおりである。
本発明のナチュラルキラー細胞活性化剤は、ナチュラルキラー細胞の活性化に基く、免疫力の低下した者の免疫賦活によるウイルス性疾患、腫瘍等に対する治療及び予防に有用である。