(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
粘膜における細菌感染を低減し、かつ、粘膜感染に二次性の分泌型免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）欠損症を有する被験体において分泌型ＩｇＡレベルを増大するための使用のための、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子を含む医薬組成物であって、ここで、前記因子が、
ａ）配列番号１０の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメインおよび配列番号１５の３つのＣＤＲを有する可変軽鎖（ＶＬ）ドメイン；
ｂ）配列番号１４の３つのＣＤＲを有するＶＨドメインおよび配列番号１９の３つのＣＤＲを有するＶＬドメイン；および
ｃ）配列番号１４の３つのＣＤＲを有するＶＨドメインおよび配列番号２１の３つのＣＤＲを有するＶＬドメイン
を含むＣＸＣＬ１３に対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントである、医薬組成物。
【請求項２】
前記細菌感染がＨｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ感染である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒが、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ  ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ、およびＨｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ  ｓｕｉｓからなる群より選択される、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記ＨｅｌｉｏｂａｃｔｅｒがＨ．ｓｕｉｓである、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記増大される分泌型ＩｇＡレベルが胃のＩｇＡレベルである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記抗体がキメラ、ヒトまたはヒト化抗体である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ａ）Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って、前記ＶＨが、配列番号１０の３１〜３５番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１０の５０〜６５番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１０の９５〜１０２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含み、かつ、前記ＶＬが、配列番号１５の２４〜３４番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１５の５０〜５６番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１５の８９〜９７番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む；
ｂ）Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従って、前記ＶＨが、配列番号１０の２６〜３２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１０の５２〜５８番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１０の９５〜１０２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含み、かつ、前記ＶＬが、配列番号１５の２６〜３２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１５の５０〜５２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１５の９１〜９６番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む；
ｃ）Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って、前記ＶＨが、配列番号１４の３１〜３５番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１４の５０〜６５番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１４の９５〜１０２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含み、かつ、前記ＶＬが、配列番号１９の２４〜３４番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１９の５０〜５６番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１９の８９〜９７番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む；
ｄ）Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従って、前記ＶＨが、配列番号１４の２６〜３２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１４の５２〜５８番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１４の９５〜１０２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含み、かつ、前記ＶＬが、配列番号１９の２６〜３２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１９の５０〜５２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１９の９１〜９６番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む；
ｅ）Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って、前記ＶＨが、配列番号１４の３１〜３５番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１４の５０〜６５番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１４の９５〜１０２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含み、かつ、前記ＶＬが、配列番号２１の２４〜３４番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号２１の５０〜５６番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号２１の８９〜９７番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む；または
ｆ）Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けシステムに従って、前記ＶＨが、配列番号１４の２６〜３２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号１４の５２〜５８番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号１４の９５〜１０２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含み、かつ、前記ＶＬが、配列番号２１の２６〜３２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ１、配列番号２１の５０〜５２番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ２、および配列番号２１の９１〜９６番目のアミノ酸残基を含むＣＤＲ３を含む；
請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１１に示される配列を有するＣＤＲ１、配列番号１２に示される配列を有するＣＤＲ２、および配列番号１３に示される配列を有するＣＤＲ３を含んでいるＶＨドメイン、ならびに、配列番号１６または２０に示される配列を有するＣＤＲ１、配列番号１７に示される配列を有するＣＤＲ２、および配列番号１８に示される配列を有するＣＤＲ３を含んでいるＶＬドメインを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ＣＸＣＬ１３に対して特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１４に示される配列を有するＶＨドメインおよび配列番号１９に示される配列を有するＶＬドメインを含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記因子が、ＣＸＣＬ１３とＣＸＣＬ１３レセプターとの相互作用を阻害する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記ＣＸＣＬ１３レセプターがＣＸＣＲ５である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記因子がＣＸＣＲ５レセプター内部移行を阻害する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記被験体がヒトである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［ＥＦＳ−ＷＥＢを介するテキストファイルとして提出された配列表に対する参照］
この配列表の正式な写しは、２０１４年１月２０日作成の３５．３キロバイトのサイズを有する４４１４１８ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴという名称のファイルとともに、ＡＳＣＩＩフォーマット配列表としてＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出され、本明細書と同時に提出されている。このＡＳＣＩＩフォーマット文書に含まれる配列表は、本明細書の一部であり、かつ本明細書においてその全体が参照によって援用される。
【０００２】
［発明の分野］
本発明は一般に、免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）の欠損がある被験体において免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）レベルを増大することに関する。
【背景技術】
【０００３】
免疫グロブリンとは、可変ドメインおよび定常ドメインを含む重鎖および軽鎖から構成される構造的に関連する一群のタンパク質である。重鎖および軽鎖の可変領域は、分子全体の分子特異性を決定する。免疫グロブリンは、それらの重鎖の定常領域の同一性に基づいてＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、またはＩｇＡとして分類される。免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）は、その重鎖中にアルファ（α）定常領域を含む。
【０００４】
ＩｇＡは、気道、胃腸管および泌尿生殖器管の粘膜裏打ち層にそって位置する形質細胞によって生成される。ＩｇＡ分子は、侵入する病原体に結合し、かつそれらが粘膜層に侵入する能力、および宿主の内部組織および血流に侵入する能力を弱める。一般的には、Ｊ．Ｇ．Ｎｅｄｒｕｄら、「Ａｄｊｕｖａｎｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｍｕｃｏｓａｌ  Ｉｍｍｕｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍ」、Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，（Ｓｐｉｇｇｓ，Ｄ．Ｅ．，Ｋｏｆｆ，Ｗ．Ｃ．，編集）ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９０）を参照のこと。ＩｇＡは、食作用性白血球の細胞表面上のレセプターに結合し、それによって侵入性病原体の抗体依存性細胞媒介性の殺傷を容易にする。またＩｇＡは、アレルゲン性の物質に結合することができ、それによってそのアレルゲンが、ＩｇＥに結合たり、遅延型過敏症を引き起こすＴ細胞を活性化したりすることを妨げる。
【０００５】
ＩｇＡの欠損は、例えば、特定の薬物に対する暴露の際、または種々の感染に応答して一時的に生じる場合もあるし、または先天性ＩｇＡ欠損症を有する患者におけるように、永続的に生じる場合もある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ＩｇＡ産生が低い個体が、正常なＩｇＡレベルを有する個体よりも、自己免疫疾患およびアレルギーのような種々の炎症性疾患に罹患しやすいことが見出された。従って、総ＩｇＡまたは抗原特異的なＩｇＡのいずれかのレベルを増大することによって、炎症性疾患を治療または予防し得る。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
［発明の要旨］
ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子、例えば、抗ＣＸＣＬ１３抗体を投与することにより、免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）が欠損している被験体において免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）レベルを増大するための方法が本明細書において提供される。さらに、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子を被験体に投与することによって、ＩｇＡが欠損している被験体において炎症性障害を治療するための方法が提供される。ＩｇＡ欠損症は、遺伝的に決定される永続的な欠損症である場合もあるし、または感染もしくは薬物に対する暴露に二次性である場合もある。ＣＸＣＬ１３阻害剤の投与によって、自己免疫障害のような炎症性障害の発症を予防できたり、活動性の炎症性障害を治療できたりする。
【０００８】
以下の実施形態が、本発明によって包含される。
１．免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）が欠損している被験体において免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）レベルを増大するための方法であって、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子の有効量を上記被験体に投与することを包含する、方法。
２．上記ＩｇＡ欠損症が感染または薬物に対する暴露に二次性である、実施形態１に記載の方法。
３．上記感染が粘膜感染である、実施形態２に記載の方法。
４．上記感染が細菌感染である、実施形態２または３に記載の方法。
５．上記細菌感染がＨｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ感染である、実施形態４に記載の方法。
６．上記Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒが、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ  ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ、およびＨｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ  ｓｕｉｓからなる群より選択される、実施形態５に記載の方法。
７．上記ＨｅｌｉｏｂａｃｔｅｒがＨ．ｓｕｉｓである、実施形態６に記載の方法。
８．上記ＩｇＡ欠損症が原発性ＩｇＡ欠損症である、実施形態１に記載の方法。
９．免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）欠損症を有する被験体において炎症性障害を治療するための方法であって、上記被験体に対してＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子の有効量を投与することを包含する、方法。
１０．上記炎症性障害が粘膜感染によって生じる、実施形態９に記載の方法。
１１．上記炎症性障害が細菌感染によって生じる、実施形態９または１０に記載の方法。
１２．上記方法が上記被験体における上記細菌感染の負荷を低減する、実施形態１１に記載の方法。
１３．上記細菌感染が、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ感染である、実施形態１１または１２に記載の方法。
１４．上記Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒが、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ  ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ、およびＨｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ  ｓｕｉｓからなる群より選択される、実施形態１３に記載の方法。
１５．上記ＨｅｌｉｏｂａｃｔｅｒがＨ．ｓｕｉｓである、実施形態１４に記載の方法。
１６．上記粘膜感染が胃の粘膜感染である、実施形態１０〜１５のいずれか１項に記載の方法。
１７．上記炎症性障害がＭＡＬＴリンパ腫である、実施形態９〜１６のいずれか１項に記載の方法。
１８．上記ＭＡＬＴリンパ腫が胃のＭＡＬＴリンパ腫である、実施形態１７に記載の方法。
１９．上記炎症性障害が胃または十二指腸の潰瘍である、実施形態９〜１６のいずれか１項に記載の方法。
２０．上記炎症性障害が、自己免疫障害である、実施形態９に記載の方法。
２１．上記自己免疫障害が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、グレーブス病、１型糖尿病、重症筋無力症、およびセリアック病からなる群より選択される、実施形態２０に記載の方法。
２２．分泌型ＩｇＡレベルが、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する上記因子の投与の際に上記被験体中で増大される、実施形態１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
２３．胃のＩｇＡレベルが、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する上記因子の投与の際に上記被験体中で増大される、実施形態２２に記載の方法。
２４．上記方法が、上記被験体の粘膜組織におけるＩｇＡ抗体応答を増大する、実施形態１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
２５．上記因子が、ＣＸＣＲ５に対して特異的に結合する結合分子である、実施形態１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
２６．上記因子が、ＣＸＣＬ１３に対して特異的に結合する結合分子である、実施形態１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
２７．上記結合分子が、抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、実施形態１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
２８．上記抗体がキメラ、ヒトまたはヒト化抗体である、実施形態２７に記載の方法。
２９．上記抗体がＣＸＣＬ１３に対して特異的に結合し、かつ配列番号１０または１４に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有している可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む、実施形態２７または２８に記載の方法。
３０．ＣＸＣＬ１３に対して特異的に結合する上記抗体が、配列番号１４に示される配列を有するＶＨドメインを含む、実施形態２９に記載の方法。
３１．上記抗体がＣＸＣＬ１３に対して特異的に結合し、かつ配列番号１５、１９または２１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有している可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む、実施形態２７〜３０のいずれか１項に記載の方法。
３２．ＣＸＣＬ１３に対して特異的に結合する上記抗体が、配列番号１９に示される配列を有するＶＬドメインを含む、実施形態３１に記載の方法。
３３．ＣＸＣＬ１３に対して特異的に結合する抗体が、配列番号１４に示される配列を有するＶＨドメインおよび配列番号１９に示される配列を有するＶＬドメインを含む、実施形態３２に記載の方法。
３４．上記抗体が、ＣＸＣＬ１３に対して特異的に結合し、かつ以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ａ）配列番号１１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ１；
ｂ）配列番号１２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ２；
ｃ）配列番号１３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ３；
のうちの少なくとも１つを有するＶＨドメインを含む、実施形態２７または２８に記載の方法。
３５．ＣＸＣＬ１３に対して特異的に結合する上記抗体が、配列番号１１に示される配列を有するＣＤＲ１、配列番号１２に示される配列を有するＣＤＲ２、および配列番号１３に示される配列を有するＣＤＲ３を含んでいるＶＨドメインを含む、実施形態３４に記載の方法。
３６．上記抗体が、ＣＸＣＬ１３に対して特異的に結合し、かつ以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
ａ）配列番号２０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ１；
ｂ）配列番号１７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ２；
ｃ）配列番号１８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ３；
のうちの少なくとも１つを有するＶＬドメインを含む、実施形態２７、２８、３４および３５のいずれか１項に記載の方法。
３７．ＣＸＣＬ１３に対して特異的に結合する上記抗体が、配列番号２０に示される配列を有するＣＤＲ１、配列番号１７に示される配列を有するＣＤＲ２、および配列番号１８に示される配列を有するＣＤＲ３を含んでいるＶＬドメインを含む、実施形態３６に記載の方法。
３８．上記抗体が、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６、およびＭＡｂ３Ｄ２からなる群より選択される、実施形態２７または２８に記載の方法。
３９．上記抗体がｍＡｂ５３７８である、実施形態３８に記載の方法。  
４０．上記因子が可溶型のＣＸＣＲ５である、実施形態１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
４１．上記因子が、ＣＸＣＬ１３とＣＸＣＬ１３レセプターとの相互作用を阻害する、実施形態１〜４０のいずれか１項に記載の方法。
４２．上記ＣＸＣＬ１３レセプターがＣＸＣＲ５である、実施形態４１に記載の方法。
４３．上記因子がＣＸＣＲ５レセプター内部移行を阻害する、実施形態１〜４２のいずれか１項に記載の方法。
４４．上記因子が薬学的に許容される担体とともに投与される、実施形態１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
４５．上記被験体が動物である、実施形態１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
４６．上記動物が哺乳動物である、実施形態４５に記載の方法。
４７．上記哺乳動物がヒトである、実施形態４６に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】リアルタイム定量的ＰＣＲによって測定した、抗ＣＸＣＬ１３抗体またはアイソタイプのコントロール抗体で治療した、Ｈ．ｓｕｉｓ感染マウスの胃粘膜におけるＨ．ｓｕｉｓ特異的リボソームＲＮＡのレベルを示す。
【図２】図２Ａおよび図２Ｂは、アイソタイプのコントロール抗体または抗ＣＸＣＬ１３抗体による治療後のＨ．ｓｕｉｓ感染マウスの胃におけるＴＧＦ−β（図２Ａ）およびＩＬ−６（図２Ｂ）のｍＲＮＡの発現を示す。
【図３】図３Ａおよび図３Ｂは、抗ＣＸＣＬ１３抗体またはアイソタイプのコントロール抗体で治療後のＨ．ｓｕｉｓ感染マウスの抗Ｈ．ｓｕｉｓＩｇＧ（図３Ａ）およびＩｇＡ（図３Ｂ）の血清レベルを示す。
【図４】図４Ａおよび図４Ｂは、抗ＣＸＣＬ１３抗体またはアイソタイプのコントロール抗体で治療したＨ．ｓｕｉｓ感染マウスの胃液中の抗Ｈ．ｓｕｉｓＩｇＧ（図４Ａ）およびＩｇＡ（図４Ｂ）のレベルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本明細書に実証されるとおり、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば、抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその結合フラグメント）は、細菌負荷を低減し、かつ胃感染動物モデル（すなわち、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ細菌で感染させたマウス（Ｎｏｂｕｔａｎｉら、（２０１０）を参照のこと））において、粘膜組織の感染性因子に特異的な免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）のレベルを増大し得る。また、抗ＣＸＣＬ１３抗体の投与は、感染していないマウスの胃において、ＩｇＡレベルの増加に関与するＴＧＦ−βおよびＩＬ−６の発現レベルを増大した。従って、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子はまた、一般に、ＩｇＡ欠損被験体においてＩｇＡレベルを増加させるのに有用である。
【００１１】
「免疫グロブリンＡ」または「ＩｇＡ」という用語は、その重鎖中にアルファ（α）定常領域を有している免疫グロブリンを指す。「免疫グロブリンＡ」および「ＩｇＡ」という用語は、単量体のＩｇＡ（すなわち、単一分子）および多量体のＩｇＡ（２つ以上の分子から構成される）を包含し、これには限定するものではないが、二量体のＩｇＡ（２分子からなる）および三量体のＩｇＡ（３つの分子から構成される）が挙げられる。ＩｇＡ単量体は、多量体（例えば、二量体）として、それらの重鎖の定常領域でＪ鎖によって一緒に連結される。ＩｇＡポリマー中のＪ鎖の存在によって、ＩｇＡ多量体は、上皮細胞によって生成されたタンパク質である分泌成分に結合することが可能になる。
【００１２】
「免疫グロブリンＡ」および「ＩｇＡ」という用語は、ＩｇＡ、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２の両方のサブクラスを指す。ＩｇＡ１の軽鎖は、その重鎖に共有結合される。しかし、ＩｇＡ２の軽鎖は、ジスルフィド結合を通じてお互いに、そして非共有結合的相互作用によってその重鎖に対して結合される。ＩｇＡ１は血清中に顕著に存在し、ここではそのほとんどが単量体として存在する。分泌型のリンパ組織は、非分泌型のリンパ組織よりも多くのＩｇＡ２を産生する。
【００１３】
またＩｇＡは、その存在場所に基づいて分類されてもよい。「免疫グロブリンＡ」および「ＩｇＡ」という用語は、血清ＩｇＡ（すなわち、血清に存在）および分泌型ＩｇＡ（粘膜分泌物（例えば、涙、唾液、初乳、汗、ならびに泌尿生殖器管、消化管、前立腺および呼吸器上皮からの分泌物）に存在）の両方を指す。分泌型ＩｇＡは一般には、Ｊ鎖によって連結され、かつ分泌成分を含んでいる二量体または三量体として存在する。分泌型ＩｇＡの分泌成分は、免疫グロブリンが消化管環境に存在する酵素のようなタンパク質分解性の酵素で分解されることを妨げる。「分泌型免疫グロブリンＡ」および「分泌型ＩｇＡ」という用語は、粘膜分泌物に存在するＩｇＡを指す。従って、「分泌型ＩｇＡ」および「分泌型免疫グロブリンＡ」という用語は、ＩｇＡ多量体、単量体を連結するＪ鎖、および分泌成分を指す場合がある。
【００１４】
ナイーブＢ細胞は最初、それらの表面上でＩｇＭおよび／またはＩｇＤを発現し、一旦活性化されれば、最初に産生される抗体は主にＩｇＭアイソタイプである。これらの活性化されたＢ細胞が特定のシグナル伝達分子に遭遇する場合、Ｂ細胞は「クラススイッチ」を受けて、ＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＥレセプターを発現する細胞に分化し得る。クラススイッチの間、免疫グロブリン重鎖の定常領域は変化するが、可変領域は変化せず、従って、抗原特異性は同じままである。
【００１５】
多数の研究によって、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）が、ＩｇＡクラススイッチを誘導し、かつインターロイキン−６（ＩＬ−６）がＩｇＡ合成を刺激することが示されている（Ｓｏｎｏｄａら、（１９８９）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７０：１４１５−１４２０；Ｂｅａｇｌｅｙら、（１９８９）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １６９：２１３３−２１４８（各々のその全体が参照によって本明細書に援用される））。いかなる理論にも作用機序にも束縛されるものではないが、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子は、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−６のレベルを増大することによってＩｇＡのレベルを増大する。
【００１６】
本明細書に実証されるとおり、ＣＸＣＬ１３活性の阻害は、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−６の発現レベル、ならびにＩｇＡのレベルの増大をもたらし、したがってＩｇＡを欠乏している被験体においてＩｇＡレベルを増大するために有用である。本明細書において用いる場合、「ＩｇＡ欠損症」とは、コントロール被験体と比較した場合、免疫グロブリンＡのレベルの低下を指す。ＩｇＡ欠損症がある被験体は、適切なコントロール被験体と比較した場合、血清ＩｇＡのレベル、分泌型ＩｇＡのレベル、またはその両方が低下していることがあり得る。その被験体は、全ての分泌物および全ての粘膜表面で分泌型ＩｇＡのレベルが低下していてもよく、または１種以上の粘膜表面および／もしくは分泌物においてのみ分泌型ＩｇＡのレベルが低下していてもよい。いくつかの実施形態では、ＩｇＡ欠損症を有する被験体では、適切なコントロールと比較して、胃のＩｇＡのレベルが低下している。
【００１７】
いくつかの実施形態では、ＩｇＡ欠損症を有している被験体のＩｇＡ（血清、分泌または全ＩｇＡ）は、コントロール被験体の約９５％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、またはそれ未満である。
【００１８】
当業者は、ＩｇＡ欠損症を有すると考えられる被験体と比べて適切なコントロール被験体を選択する方法を理解している。適切なコントロール被験体の非限定的な例としては、健常な個体である被験体、活動性の感染（例えば、粘膜感染）もしくは炎症性障害を有さないか、または有していないと考えられる個体、およびＩｇＡ欠損症の遺伝的素因または家族歴を有さない被験体が挙げられる。
【００１９】
被験体が血清ＩｇＡ欠損症を有するこれらの実施形態では、血清ＩｇＡレベルは、約０．１ｇ／Ｌ未満、約０．０９ｇ／Ｌ未満、約０．０８ｇ／Ｌ未満、約０．０７ｇ／Ｌ未満、約０．０６ｇ／Ｌ未満、約０．０５ｇ／Ｌ未満、約０．０４ｇ／Ｌ未満、約０．０３ｇ／Ｌ未満、約０．０２ｇ／Ｌ未満、約０．０１ｇ／Ｌ未満、またはそれ未満である。
【００２０】
「ＩｇＡ欠損症」という用語は、コントロール被験体と比べて、ＩｇＡのレベルが低下している全ての個体を包含するが、ＩｇＡ欠損症を有している多くの個体は、その他の点では、正常なレベルのＩｇＭおよびＩｇＧを有する。
【００２１】
ＩｇＡ欠損症は、原発性（遺伝性）である場合もあるし、または二次性（後天性）である場合もある。原発性のＩｇＡ欠損症は、ほとんどの型の選択性ＩｇＡ欠損のように、遺伝的に決定され、かつ主に先天性である。選択性ＩｇＡ欠損症は、免疫不全に関するパンアメリカングループ（Ｐａｎ−Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｇｒｏｕｐ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）および欧州免疫不全学会（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ）によって、４歳以上の個体であってＩｇＭおよびＩｇＧのレベルは正常で、血清ＩｇＡレベルが０．０７ｇ／Ｌ未満と定義された（Ｎｏｔａｒａｎｇｅｌｏら、（２００９）Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２４：１１６１−１１７８（これはその全体が参照によって本明細書に援用される））。
【００２２】
特定の感染または免疫系を抑制する特定の種類の薬物もしくは他の因子、一般的には一過性である二次的なＩｇＡ欠損症を生じ得る。例えば、免疫抑制剤、Ｄ−ペニシラミン、スルファサラジン、オーロチオグルコース、フェンクロフェナク、金、カプトプリル、ゾニサミド、フェニトイン、バルプロ酸、チロキシン、クロロキン、カラバマゼピン、ヒダントイン、レバミゾール、イブプロフェン、サリチル酸、ベンゼンおよびサイクロスポリンＡが、一過性のＩｇＡ欠損症を引き起こす可能性があり、これはこの薬物のクリアランスによって解消する。二次性のＩｇＡ欠損症を生じ得る感染の非限定的な例としては、風疹、サイトメガロウイルス、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、およびエプスタイン・バーウイルスが挙げられる。
【００２３】
いくつかの実施形態では、この被験体は、粘膜感染に二次性のＩｇＡ欠損症を有する。これらの実施形態のうちいくつかでは、粘膜感染は細菌感染である。特定の実施形態では、二次性の欠損症を生じる細菌感染は、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ感染、例えば、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ、Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ、またはＨ．ｓｕｉｓである。
【００２４】
今回開示される方法のいくつかの実施形態では、ＩｇＡが欠損している被験体に対するＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子の投与は、全ＩｇＡ（血清および分泌型）の増大を生じる。他の実施形態では、ＣＸＣＬ１３阻害剤の投与は、分泌型ＩｇＡの増大を生じる。特定の実施形態では、ＣＸＣＬ１３阻害性因子を投与された被験体では、ＩｇＡの胃でのレベルが増大する。被験体が感染性因子による攻撃を受けているこれらの実施形態では、ＣＸＣＬ１３阻害性因子の投与によって、感染性因子に特異的なＩｇＡのレベルを増大することができ、これによりいくつかの実施形態では、この感染性因子のクリアランスの増大がもたらされ得る。
【００２５】
特定の実施形態では、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子の投与は、被験体において、血清、分泌型、または全ＩｇＡのレベルを約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、またはそれを超えて増大する。
【００２６】
ＣＸＣＬ１３活性のインヒビターが、ＩｇＡレベルを増大し得るならば、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子を、ＩｇＡが欠損している被験体において炎症性障害を治療するのに用いることができる。炎症性疾患は、炎症および組織破壊、またはそれらの組み合わせによって特徴づけられる。「抗炎症性活性」とは、炎症の低減または予防を意図する。「炎症性疾患」または「炎症性障害」としては、開始事象または免疫応答の標的が例えば同種抗原、異種抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、自己抗原、未知抗原またはアレルゲンを含む非自己抗原が関与する任意の炎症性免疫媒介性プロセスが挙げられる。いくつかの実施形態では、炎症性障害は感染性疾患である。いくつかの実施形態では、炎症性障害は、粘膜感染（例えば、細菌、ウイルス）に関連するか、および／または粘膜感染によって生じる。いくつかの実施形態では、炎症性疾患は、細菌感染、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒの感染、例えば、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ、Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ、Ｈ．ａｃｉｎｏｎｙｃｈｉｓ、Ｈ．ａｎｓｅｒｉｓ、Ｈ．ａｕｒａｔｉ、Ｈ．ｂａｃｕｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｈ．ｂｉｌｉｓ、Ｈ．ｂｉｚｚｏｚｅｒｏｎｉｉ、Ｈ．ｂｒａｎｔａｅ、Ｈ．ｃａｎｄａｄｅｎｓｉｓ、Ｈ．ｃａｎｉｓ、Ｈ．ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｕｓ、Ｈ．ｃｉｎａｅｄｉ、Ｈ．ｃｙｎｏｇａｓｔｒｉｃｕｓ、Ｈ．ｅｑｕｏｒｕｍ、Ｈ．ｆｅｌｉｓ、Ｈ．ｆｅｎｅｌｌｉａｅ、Ｈ．ｇａｎｍａｎｉ、Ｈ．ｈｅｐａｔｉｃｕｓ、Ｈ．ｍｅｓｏｃｒｉｃｅｔｏｒｕｍ、Ｈ．ｍａｒｍｏｔａｅ、Ｈ．ｍｕｒｉｄａｒｕｍ、Ｈ．ｍｕｓｔｅｌａｅ、Ｈ．ｐａｍｅｔｅｎｓｉｓ、Ｈ．ｐｕｌｌｏｒｕｍ、Ｈ．ｒａｐｐｉｎｉ、Ｈ．ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｈ．ｓａｌｏｍｏｎｉｓ、Ｈ．ｓｕｉｓ、Ｈ．ｔｒｏｇｏｎｔｕｍ、Ｈ．ｔｙｐｈｌｏｎｉｕｓ、およびＨ．ｗｉｎｇｈａｍｅｎｓｉｓの感染に関連するか、および／またはそれらによって生じる。特定の実施形態では、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ感染は、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ、Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉ、またはＨ．ｓｕｉｓの感染である。
【００２７】
さらなる実施形態では、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）関連炎症性疾患は、ＭＡＬＴリンパ腫（例えば、胃ＭＡＬＴリンパ腫）、胃癌（例えば食道または胃の癌）、胃もしくは十二指腸の潰瘍、胃炎（胃の内壁の炎症）、または胃病変である（例えばＣｈｅｎら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ  ５５（２）：１３３〜７頁（２００２）；Ｇｅｎｔａら、Ｈｕｍ  Ｐａｔｈｏｌ  ２４（６）：５７７〜８３頁（１９９３）；Ｏｋｉｙａｍａら、Ｐａｔｈｏｌ  Ｉｎｔ５５（７）：３９８〜４０４頁（２００５）を参照のこと）。
【００２８】
いくつかの実施形態では、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子の投与は、被験体における感染性因子（例えば、細菌）の負荷の低減を生じる。これらの実施形態のいくつかでは、抗ＣＸＣＬ１３因子の投与は、粘膜における感染性因子（例えば、細菌）の負荷を低減し、かつこれらの実施形態のいくつかでは、少なくとも１つの粘膜分泌物における感染性因子（例えば、細菌）のレベルが減少する。これらの実施形態のいくつかでは、感染を有する被験体に対する抗ＣＸＣＬ１３因子の投与は、被験体において感染性因子（例えば、細菌）のレベルを、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれより多く低下させる。
【００２９】
ＣＸＣＬ１３阻害性因子がＩｇＡ欠損症を有している被験体に投与されるこれらの実施形態のいくつかでは、ＣＸＣＬ１３阻害性因子は、このような被験体の粘膜組織におけるＩｇＡ抗体応答を増大する。これらの実施形態では、抗原特異的ＩｇＡ（例えば、感染性因子を特異的に認識するＩｇＡ）レベルのレベルは増大し、いくつかの実施形態では、感染性因子のさらに効果的なクリアランスを生じる。「炎症性障害」または「炎症性疾患」という用語は、限定するものではないが、アレルゲンに対するアレルギー反応を包含する。アレルギー反応は、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）によって媒介される。ＩｇＡは、アレルゲン物質に結合することができ、それによってアレルゲンがＩｇＥに結合したり、遅延型過敏症を引き起こすＴ細胞を活性化したりすることを妨げる。従って、ＣＸＣＬ１３活性を阻害することによりＩｇＡレベルを増大する因子の投与は、限定するものではないが、特定の食品、薬物、昆虫穿刺、花粉、ラテックスおよび植物毒素を含む種々のアレルゲンに対して応答したアレルギー反応（限定するものではないが、喘息、アレルギー性鼻炎、アレルギー性副鼻腔炎、接触性皮膚炎、皮膚炎、じんま疹、呼吸困難、嘔吐、膨満、および下痢を含む）を治療または予防するために用いられ得る。
【００３０】
さらに、本発明の目的のためには、「炎症性疾患」という用語は、限定するものではないが、本明細書においては「自己免疫障害」とも呼ばれる「自己免疫疾患」を包含する。本明細書において用いる場合、「自己免疫」という用語は、「自己」抗原に関わる炎症性免疫媒介プロセスを包含すると一般的に理解される。自己免疫疾患において、自己抗原は、宿主免疫応答を引き起こす。
【００３１】
いくつかの実施形態では、この炎症性疾患は、感染性因子のクリアランスを妨げたり、限定するものではないが、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、グレーブス病、１型糖尿病、重症筋無力症、シェーグレン症候群、多発性硬化症、またはセリアック病を含む自己免疫疾患を誘発したりする、遺伝的に決定された選択的ＩｇＡ欠損症の結果である（Ｗａｎｇら、（２０１１）Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  １７（１１−１２）：１３８３−１３９６（これはその全体が参照によって本明細書に援用される））。いくつかの実施形態では、この炎症性疾患は、Ｂ細胞媒介性の炎症性疾患である。本明細書において用いる場合、「Ｂ細胞媒介性の炎症性疾患」という用語は、本明細書に記載するように、疾患の病因、進行、または病因と進行の両方が主にＢ細胞の活性に依存する炎症性疾患である。Ｂ細胞媒介性の炎症性疾患の非限定的な例としては、自己抗体の産生によって特徴づけられる疾患が挙げられる。
【００３２】
「Ｂ細胞」は、骨髄内で成熟するリンパ球であって、これにはナイーブＢ細胞、記憶Ｂ細胞、またはエフェクターＢ細胞（形質細胞）が挙げられる。Ｂ細胞とは本明細書においては、正常なＢ細胞であっても、または非悪性のＢ細胞であってもよい。  
【００３３】
「Ｂ細胞表面マーカー」または「Ｂ細胞表面抗原」とは、本明細書において、Ｂ細胞の表面上で発現される抗原であって、それに対して結合するアンタゴニストの標的となり得る抗原である。例示的なＢ細胞表面マーカーとしては、例えば、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤｗ７８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５およびＣＤ８６ならびにＣＸＣＲ５が挙げられる。特に目的となるＢ細胞表面マーカーは、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織と比較してＢ細胞上で優先的に発現され、前駆Ｂ細胞および成熟Ｂ細胞の両方で発現される場合がある。本明細書において好ましいＢ細胞表面マーカーは、ＣＤ１９およびＣＸＣＲ５である。本発明の目的に関して、「炎症性疾患」という用語は、限定するものではないが、「自己免疫疾患」を包含する。
【００３４】
今回開示される方法によれば、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子は、ＩｇＡ欠損症を有している被験体に投与される。特定の実施形態では、ある因子が、炎症性障害の治療のためにそれを必要とする被験体に投与される。
【００３５】
いくつかの実施形態では、治療としては、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば、抗ＣＸＣＬ１３または抗ＣＸＣＲ５結合分子）の被験体に対する適用もしくは投与、または被験体から単離された組織もしくは細胞株に対するこの因子の適用もしくは投与が挙げられる（ここでこの被験体は、炎症性障害、炎症性障害の症状、または炎症性障害になり易い素因を有する）。別の実施形態では、治療とはまた、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば、抗ＣＸＣＬ１３または抗ＣＸＣＲ５結合分子）を含む薬学的組成物の被験体に対する適用もしくは投与、または被験体から単離された組織もしくは細胞株に対するこの因子を含む薬学的組成物の適用もしくは投与を包含するものとする（この被験体は、炎症性障害、炎症性障害の症状、または炎症性障害になり易い素因を有する）。
【００３６】
本発明の方法によれば、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する少なくとも１つの因子（例えば、抗ＣＸＣＬ１３または抗ＣＸＣＲ５結合分子）を用いて、ＩｇＡ欠損症および／または炎症性障害の治療または予防に対する正の治療応答を促進する。炎症性疾患に関する「正の治療応答」とは、この投与された因子の抗炎症活性、抗血管新生活性、抗アポトーシス活性などに関連する疾患の改善および／またはこの疾患に関連する症状の改善を意図する。すなわち、抗増殖効果、ＣＸＣＬ１３発現細胞のさらなる増殖の防止、限定するものではないが、炎症性サイトカイン、接着分子、プロテアーゼ、免疫グロブリン（例えばＣＸＣＬ１３保有細胞がＢ細胞である場合）、それらの組み合わせなどの分泌の低下を含む炎症性応答の低減、抗炎症性タンパク質の生成の増大、自己反応性細胞数の低下、免疫寛容の増大、自己反応性細胞生存の阻害、アポトーシスの低下、内皮細胞移動の低下、自発的単球遊走の増大、異所性リンパ濾胞の数の減少、罹患組織に存在するＢ細胞数の減少、罹患組織へのＢ細胞の遊走の減少、ＣＸＣＬ１３発現細胞の刺激によって媒介される１つ以上の症状の低下および／または減少が観察できる。感染性疾患に関する「正の治療応答」とは、感染性因子、例えば、細菌のクリアランス、および感染に関連する疾患症状の改善を意図する。
【００３７】
このような正の治療応答は、投与経路に限定されず、ドナー、ドナー組織（例えば臓器灌流）、ホスト、それらの任意の組み合わせなどへの投与を包含し得る。臨床応答は、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線撮影イメージング、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、フローサイトメトリーまたは蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）分析、組織学的検査、肉眼所見、および限定するものではないが、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、クロマトグラフィーなどにより検出可能な変化を含む血液化学のようなスクリーニング技術を用いて評価できる。これらの正の治療応答に加えて、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば、抗ＣＸＣＬ１３または抗ＣＸＣＲ５結合分子）を用いる治療を受けている被験体では、炎症性障害に関連する症状が改善する有益な効果がみられることがある。
【００３８】
本明細書において用いる場合、「治療する」または「治療」という用語は、治療的処置および予防的または予防的措置の両方のことを指し、ここで、この目的は、炎症性障害の進行のような望ましくない生理的変化または障害を妨げるかまたは遅くする（少なくする）か、増悪を低減するか、再発を防止することである。有益なまたは所望の臨床的結果としては、限定するものではないが、検出可能であろうと、または検出不能であろうと、症状の軽減、疾患の程度の軽減、疾患の状態の安定化（すなわち悪化しない）、疾患進行の遅延または減速、疾患状態の改善もしくは一次的緩和、および（部分または完全）寛解が挙げられる。また「治療」とは、治療を受けない場合に予期される生存と比較して延長された生存も意味し得る。治療を必要とするものとしては、その病態または障害を既に有するもの、およびその病態もしくは障害を有する傾向にあるもの、またはその病態もしくは障害が予防されるべきものが挙げられる。
【００３９】
「被験体」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」とは、それについての診断、予後または治療が所望される任意の被験体、特に哺乳動物被験体を意味する。哺乳動物被験体としては、ヒト、家畜、畜産動物ならびに動物園、スポーツまたはペットの動物、例えばイヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシなどが挙げられる。
【００４０】
本明細書において用いる場合、「ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子の投与により利益を受け得る被験体」および「治療を必要とする動物」のような句は、治療、すなわち、炎症性障害の緩和または予防のためにＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば、抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体）の投与から利益を受け得る哺乳動物被験体のような被験体を包含する。本明細書でより詳細に記載するように、抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体は、非コンジュゲート形態で用いられてもよいし、または例えば薬物、プロドラッグもしくは同位体にコンジュゲートされてもよい。
【００４１】
ここで開示される方法は、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子を利用する。ＣＸＣＬ１３（他には恒常性Ｂ細胞誘引性ケモカイン１（ＢＣＡ−１）またはＡＮＧＩＥ、ＢＬＣ、ＢＬＲ１Ｌ、ＡＮＧＩＥ２もしくはＳｃｙｂ１３として公知である）は、二次リンパ器官（例えば脾臓、リンパ節およびパイエル板）において濾胞樹状細胞（ＦＤＣ）およびマクロファージにより構成的に発現される。Ｇｕｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ３９１：７９９〜８０３頁（１９９８）およびＣａｒｌｓｅｎら、Ｂｌｏｏｄ  １０４（１０）：３０２１〜３０２７頁（２００４）を参照のこと。ＣＸＣＬ１３は、主に、Ｇタンパク質共役型ＣＸＣＲ５レセプター（バーキットリンパ腫レセプター１）を介して作用する。ＣＸＣＲ５は、例えば成熟Ｂリンパ球、ＣＤ４＋濾胞ヘルパーＴ細胞（Ｔｈｆ細胞）、ＣＤ８＋Ｔ細胞のわずかなサブセットおよび活性化扁桃腺Ｔｒｅｇ細胞上で発現される。Ｌｅｇｌｅｒら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：６５５〜６６０頁（１９９８）；Ｆｏｅｒｓｔｅｒら、Ｂｌｏｏｄ  ８４：８３０〜８４０頁（１９９４）；Ｆａｚｉｌｌｅａｕら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３０：３２４〜３３５頁（２００９）；Ａｎｓｅｌら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０：１１２３〜１１３４頁（１９９９）；Ｌｉｍら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１４（１１）：１６４０〜１６４９頁（２００４）；およびＲ．Ｆｏｅｒｓｔｅｒ、Ｃｈａｐｔｅｒ  ｉｎ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、２０００年８月を参照のこと。
【００４２】
本明細書において用いる場合、「ＣＸＣＬ１３」および「ＣＸＣＬ１３ポリペプチド」という用語は、相互に交換可能なものとして用いられる。特定の実施形態では、ＣＸＣＬ１３とは、完全サイズのＣＸＣＬ１３もしくはそのフラグメント、またはＣＸＣＬ１３改変体ポリペプチドを包含していてもよく、ここで、ＣＸＣＬ１３のフラグメントまたはＣＸＣＬ１３改変体ポリペプチドは、完全サイズのＣＸＣＬ１３のいくらかまたは全ての機能的特性を保持する。ヒトＣＸＣＬ１３ポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列（それぞれ配列番号１および２）は記載されており、例えばＬｅｇｌｅｒら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７（４）：６５５〜６６０頁（１９９８）を参照のこと。マウスＣＸＣＬ１３ポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列（それぞれ配列番号３および４）は記載されており、例えばＧｕｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ３９１（６６６９）：７９９〜８０３頁（１９９８）を参照のこと。さらに、カニクイザルＣＸＣＬ１３ポリペプチド配列は、配列番号５に示すように、記載されている。
【００４３】
本明細書において用いる場合、「ＣＸＣＲ５」および「ＣＸＣＲ５ポリペプチド」という用語は、相互に交換可能なものとして用いられる。特定の実施形態では、ＣＸＣＲ５とは、完全サイズのＣＸＣＲ５もしくはそのフラグメント、またはＣＸＣＲ５改変体ポリペプチドを包含していてもよく、ここで、ＣＸＣＲ５のフラグメントまたはＣＸＣＲ５改変体ポリペプチドは、完全サイズのＣＸＣＲ５のいくらかまたは全ての機能的特性を保持する。「ＣＸＣＲ５」および「ＣＸＣＲ５ポリペプチド」という用語は、可溶型のＣＸＣＲ５も包含する。本明細書において用いる場合、「可溶型のＣＸＣＲ５」という用語は、細胞膜と結合していない形態のＣＸＣＲ５である。全長ＣＸＣＲ５は、７回膜貫通型レセプターである。したがって、可溶型のＣＸＣＲ５の非限定的な例としては、細胞外ドメイン（例えば最初の約６０個のアミノ酸）から本質的になるＣＸＣＲ５のフラグメントが挙げられる。ヒトＣＸＣＲ５ポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列は、当技術分野において公知であり、本明細書においてそれぞれ配列番号６および７として示される。マウスＣＸＣＲ５ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの配列は、当技術分野において公知であり、本明細書においてそれぞれ配列番号８および９として示される。
【００４４】
ＣＸＣＬ１３活性の阻害のために有用な因子としては、低分子、ポリペプチドおよびポリヌクレオチドが挙げられる。特定の実施形態では、この因子は、ＣＸＣＬ１３がそのレセプターに結合することをブロックする。いくつかの実施形態では、この因子は、ＣＸＣＬ１３とＣＸＣＲ５との間の相互作用をブロックする。特別な実施形態では、この因子は、ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５に対して特異的に結合する特異的結合分子である。これらの実施形態のいくつかでは、この因子は、抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体、またはそれらの抗原結合フラグメントである。他の実施形態では、この因子は、可溶型のＣＸＣＲ５である。
【００４５】
本明細書において用いる場合、用語「ポリペプチド」とは、単数の「ポリペプチド」および複数の「ポリペプチド」を包含することを意図しており、アミド結合（ペプチド結合としても公知である）により直鎖状に連結された単量体（アミノ酸）で構成される分子のことをいう。「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸２個以上の任意の鎖のことを指し、特定の長さの生成物のことを指すのではない。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」またはアミノ酸２個以上の鎖のことを指すために用いられる任意の他の用語は、「ポリペプチド」の定義の中に含まれ、「ポリペプチド」という用語は、任意のこれらの用語の代わりに用いてもよいし、または交換可能に用いてもよい。また「ポリペプチド」という用語は、限定はしないがグリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、公知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解切断、または非天然アミノ酸による修飾を含むポリペプチドの発現後修飾の生成物のことを指すことも意図する。ポリペプチドは、自然の生物学的起源に由来してもよいし、または組み換え技術により生成されてもよいが、指定する核酸配列から翻訳される必要はない。これは、化学合成を含む任意の方法で作製されてもよい。
【００４６】
今回開示される方法で有用なポリペプチドは、約３以上、５以上、１０以上、２０以上、２５以上、５０以上、７５以上、１００以上、２００以上、５００以上、１，０００以上または２，０００以上のアミノ酸のサイズのものであってもよい。ポリペプチドは、規定された３次元構造を有してよいが、必ずしもそのような構造を有する必要はない。規定された３次元構造を有するポリペプチドは、折り畳まれたと言われ、規定された３次元構造を有さないがむしろ多数の異なる高次構造を採用できるポリペプチドは、折り畳まれていないと言われる。本明細書において用いる場合、糖タンパク質という用語は、少なくとも１つの炭水化物部分（これは、タンパク質に、アミノ酸残基、例えばセリン残基またはアスパラギン残基の酸素含有または窒素含有側鎖を介して結合される）に結合したタンパク質のことを指す。
【００４７】
「単離された」ポリペプチドまたはそのフラグメント、改変体もしくは誘導体とは、その自然環境にないポリペプチドを意図する。特別なレベルの精製は必要とされない。例えば、単離ポリペプチドは、その天然または自然の環境から取り出すことができる。宿主細胞中で発現された組換え生成ポリペプチドおよびタンパク質は、任意の適切な技術により分離、分画、または部分的もしくは実質的に精製された天然または組換えポリペプチドと同様に、本発明の目的のために単離されたとみなされる。
【００４８】
今回開示される方法において有用なポリペプチドとして、ポリペプチドのフラグメント、誘導体、類似体または改変体、およびそれらの任意の組み合わせも含まれる。「フラグメント」、「改変体」、「誘導体」および「類似体」という用語は、抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体または抗体ポリペプチドのことを指す場合、対応する抗体または抗体ポリペプチドの少なくともいくらかの抗原結合特性を保持する任意のポリペプチドを包含する。ポリペプチドのフラグメントとしては、タンパク質分解フラグメントおよび欠失フラグメントが、本明細書の他のいずれか箇所で考察する特異的抗体フラグメントに加えて挙げられる。抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体の改変体は、上記のフラグメント、またアミノ酸置換、欠失または挿入に起因するアミノ酸配列の改変を有するポリペプチドを含む。改変体は、天然に存在するものであっても、または天然に存在しないものであってよい。天然に存在しない改変体は、当技術分野において公知の突然変異誘発技術を用いて生成できる。改変体ポリペプチドは、保存的もしくは非保存的なアミノ酸置換、欠失または付加を含んでもよい。また改変体ポリペプチドは、本明細書において「ポリペプチド類似体」と呼ばれることもある。本明細書において用いる場合、抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体または抗体ポリペプチドの「誘導体」とは、官能性側基の反応により化学的に誘導体化した１つ以上の残基を有する本発明のポリペプチドのことをいう。「誘導体」としては、２０の標準アミノ酸の１つ以上の天然に存在するアミノ酸誘導体を含有するペプチドも含まれる。例えば、４−ヒドロキシプロリンが、プロリンを置換してもよく；５−ヒドロキシリシンが、リシンを置換してもよく；３−メチルヒスチジンが、ヒスチジンを置換してもよく；ホモセリンが、セリンを置換してもよく；オルニチンが、リシンを置換してもよい。抗ＣＸＣＬ１３抗体および抗ＣＸＣＲ５抗体、ならびに抗体ポリペプチドの誘導体は、参照抗体または抗体ポリペプチドにおいて見られないさらなる特徴を示すように改変されたポリペプチドを含んでもよい。
【００４９】
ポリペプチドに関して「直鎖状配列」または「配列」とは、アミノからカルボキシル末端方向でのポリペプチド中のアミノ酸の順序であり、ここで、配列中で互いに隣にある残基は、ポリペプチドの１次構造において連続的である。
【００５０】
「ポリヌクレオチド」という用語は、単数の核酸および複数の核酸を包含することを意図し、単離核酸分子または構築物、例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）のことを指す。ポリヌクレオチドは、通常のホスホジエステル結合または通常でない結合（例えばペプチド核酸（ＰＮＡ）において見られるようなアミド結合）を含んでもよい。「核酸」という用語は、ポリヌクレオチド中に存在する任意の１つ以上の核酸セグメント、例えばＤＮＡまたはＲＮＡフラグメントのことをいう。「単離」核酸またはポリヌクレオチドとは、その天然の環境から取り出された核酸分子、ＤＮＡまたはＲＮＡを意図する。例えば、ベクターに含まれる、抗ＣＸＣＬ１３または抗ＣＸＣＲ５結合分子、例えば抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする組換えポリヌクレオチドは、本発明の目的のために単離されたとみなされる。単離ポリヌクレオチドのさらなる例としては、異種宿主細胞において維持される組換えポリヌクレオチドまたは溶液中の（部分的または実質的に）精製されたポリヌクレオチドが挙げられる。単離ＲＮＡ分子は、本発明のポリヌクレオチドのインビボまたはインビトロでのＲＮＡ転写産物を含む。本発明による単離ポリヌクレオチドまたは核酸は、合成的に生成されたこのような分子をさらに含む。さらに、ポリヌクレオチドまたは核酸は、プロモーター、リボソーム結合部位または転写ターミネーターのような調節エレメントであってもよいし、またはそれらを含んでもよい。
【００５１】
本明細書において用いる場合、「コード領域」とは、アミノ酸に翻訳されるコドンからなる核酸の一部である。「終止コドン」（ＴＡＧ、ＴＧＡまたはＴＡＡ）はアミノ酸に翻訳されないが、これは、コード領域の一部とみなしてもよく、ただし、任意の隣接する配列、例えばプロモーター、リボソーム結合部位、転写ターミネーター、イントロンなどは、コード領域の一部ではない。今回開示される方法で有用な２つ以上のコード領域が、単一のポリヌクレオチド構築物、例えば単一のベクター上または別々のポリヌクレオチド構築物、例えば別々の（異なる）ベクター上に存在してもよい。さらに、ベクターはいずれも単一のコード領域を含んでもよいし、または２つ以上のコード領域を含んでよく、例えば単一のベクターが、免疫グロブリン重鎖可変領域および免疫グロブリン軽鎖可変領域を別々にコードしてよい。さらに、今回開示される方法において有用なベクター、ポリヌクレオチドまたは核酸は、抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体またはそのフラグメント、改変体もしくは誘導体をコードする核酸と融合しているかまたは融合していない異種コード領域をコードしてもよい。異種コード領域は、限定されないが、分泌シグナルペプチドまたは異種機能性ドメインのような特殊なエレメントまたはモチーフを含む。
【００５２】
特定の実施形態では、今回開示される方法において有用なポリヌクレオチドまたは核酸は、ＤＮＡである。ＤＮＡの場合、ポリペプチドをコードする核酸を含むポリヌクレオチドは、通常、１つ以上のコード領域に作動可能に連結したプロモーターおよび／またはその他の転写もしくは翻訳制御エレメントを含んでもよい。作動可能な連結とは、遺伝子生成物、例えばポリペプチドのコード領域が、遺伝子生成物の発現を調節配列の影響または制御の下におくような様式で１つ以上の調節配列と連結する場合である。２つのＤＮＡフラグメント（例えばポリペプチドコード領域とそれと連結するプロモーター）は、プロモーター機能の誘導が所望の遺伝子生成物をコードするｍＲＮＡの転写をもたらし、２つのＤＮＡフラグメント間の結合の性質が遺伝子生成物の発現を誘導する発現調節配列の能力に干渉しないか、転写されるＤＮＡテンプレートの能力にも干渉しないならば、「作動可能に連結」している。したがって、プロモーター領域は、そのプロモーターが核酸の転写を可能にできるならば、ポリペプチドをコードする核酸と作動可能に連結されている。プロモーターは、所定の細胞においてのみＤＮＡの実質的な転写を誘導する細胞特異的プロモーターであってもよい。プロモーター以外の他の転写制御エレメント、例えばエンハンサー、オペレーター、リプレッサーおよび転写終結シグナルは、ポリヌクレオチドに作動可能に連結して、細胞特異的転写を誘導できる。適切なプロモーターおよび他の転写制御領域は、本明細書に開示されている。
【００５３】
様々な転写制御領域が当業者に公知である。これらとしては、限定はしないが、脊椎動物細胞において機能する転写制御領域、例えば限定するものではないが、サイトメガロウイルス（イントロンＡを連結した最初期プロモーター）、サルウイルス４０（初期プロモーター）、およびレトロウイルス（例えばラウス肉腫ウイルス）由来のプロモーターおよびエンハンサーのセグメントが挙げられる。他の転写制御領域としては、脊椎動物遺伝子に由来するもの、例えばアクチン、熱ショックタンパク質、ウシ成長ホルモンおよびウサギβグロビン、ならびに真核細胞における遺伝子発現を制御できる他の配列が挙げられる。さらなる適切な転写制御領域としては、組織特異的プロモーターおよびエンハンサー、ならびにリンホカイン誘導性プロモーター（例えばインターフェロンまたはインターロイキンにより誘導できるプロモーター）が挙げられる。
【００５４】
同様に、様々な翻訳制御エレメントが当業者に公知である。これらとしては、限定するものではないが、リボソーム結合部位、翻訳開始および終止コドン、ならびにピコルナウイルスに由来するエレメント（特に配列内リボソーム進入部位またはＩＲＥＳ、ＣＩＴＥ配列ともよばれる）が挙げられる。
【００５５】
他の実施形態では、今回開示される方法で有用なポリヌクレオチドは、例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の形態のＲＮＡである。
【００５６】
今回開示される方法において有用なポリヌクレオチドおよび核酸コード領域は、本発明のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドの分泌を誘導する分泌ペプチドまたはシグナルペプチドをコードするさらなるコード領域と連結されてもよい。シグナル仮説によると、哺乳動物細胞により分泌されるタンパク質は、伸長するタンパク質鎖が粗面小胞体を横切って一旦輸送され始めると、成熟タンパク質から切断されるシグナルペプチドまたは分泌リーダー配列を有する。当業者は、脊椎動物細胞により分泌されるポリペプチドが、通常、ポリペプチドのＮ末端に融合したシグナルペプチドを有しており、これは、完全または「全長」ポリペプチドから切断されて分泌型または「成熟」型のポリペプチドを生成することを理解している。特定の実施形態では、天然シグナルペプチド、例えば免疫グロブリン重鎖もしくは軽鎖シグナルペプチド、または作動可能に連結されているポリペプチドの分泌を誘導する能力を保持するその配列の機能的誘導体を用いる。代わりに、異種哺乳動物シグナルペプチドまたはその機能的誘導体を用いてもよい。例えば、野生型リーダー配列は、ヒト組織プラスミノゲン活性化因子（ＴＰＡ）またはマウスβ−グルクロニダーゼのリーダー配列で置換されてもよい。
【００５７】
「発現」という用語は、本明細書において用いる場合、ある遺伝子が生化学的物質、例えばポリペプチドを生成するプロセスのことをいう。このプロセスは、限定するものではないが、遺伝子ノックダウンならびに一過性発現および安定的発現の両方を含む、細胞内での遺伝子の機能的存在の任意の顕在化を含む。これは、限定するものではないが、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）への遺伝子の転写、およびポリペプチドへのそのようなｍＲＮＡの翻訳を含む。所望の最終生成物が生化学的物質であるならば、発現とは、その生化学的物質および任意の前駆体の生成を含む。遺伝子の発現は「遺伝子生成物」を生成する。本明細書において用いる場合、遺伝子生成物は、核酸、例えば、ある遺伝子の転写により生成されるメッセンジャーＲＮＡ、またはある転写産物から翻訳されるポリペプチドのいずれであってもよい。本明細書で記載する遺伝子生成物としては、転写後修飾、例えばポリアデニル化された核酸、または翻訳後修飾、例えばメチル化、グリコシル化、脂質付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、タンパク質分解切断などを受けたポリペプチドがさらに挙げられる。
【００５８】
「結合分子」または「抗原結合分子」とは、その広い意味において、抗原決定基に特異的に結合する分子のことを指す。一実施形態では、結合分子は、ＣＸＣＬ１３（ＢＣＡ−１ともよばれる）に特異的に結合する。別の実施形態では、この結合分子は、ＣＸＣＲ５に特異的に結合する。別の実施形態では、今回開示される方法において有用な結合分子は、抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体である。別の実施形態では、結合分子は、抗体分子の少なくとも１つの重鎖または軽鎖ＣＤＲを含む。別の実施形態では、結合分子は、１つ以上の抗体分子からの少なくとも２つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、結合分子は、１つ以上の抗体分子からの少なくとも３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、結合分子は、１つ以上の抗体分子からの少なくとも４つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、結合分子は、１つ以上の抗体分子からの少なくとも５つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、結合分子は、１つ以上の抗体分子からの少なくとも６つのＣＤＲを含む。特定の実施形態では、１つ以上のＣＤＲは、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６、または３Ｄ２由来である。
【００５９】
いくつかの実施形態では、今回開示される方法は、特定の抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体を包含する。天然に存在する抗体のような完全サイズ抗体と特に言及しない限り、「抗ＣＸＣＬ１３抗体」および「抗ＣＸＣＲ５抗体」という用語は、完全サイズ抗体およびそのような抗体、例えば天然に存在する抗体もしくは免疫グロブリン分子の抗原結合フラグメント、改変体、類似体または誘導体、あるいは抗体分子と同様の様式で抗原に結合する改変抗体分子またはフラグメントを包含する。
【００６０】
本明細書において用いる場合、「ヒト」または「完全ヒト」抗体としては、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体が挙げられ、ヒト免疫グロブリンライブラリーから単離された抗体、または１つ以上のヒト免疫グロブリンを導入した、内因性免疫グロブリンを発現しない動物から単離された抗体（以下に、そして例えばＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる米国特許第５，９３９，５９８号に記載されるような抗体）が挙げられる。「ヒト」または「完全ヒト」抗体としては、少なくとも重鎖の可変ドメインまたは少なくとも重鎖および軽鎖の可変ドメインを含む抗体も挙げられ、ここで、該可変ドメインは、ヒト免疫グロブリン可変ドメインのアミノ酸配列を有する。
【００６１】
「ヒト」または「完全ヒト」抗体とは、公知の抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体分子（例えばＶＨ領域および／またはＶＬ領域）の（誘導体を含む）改変体（この抗体またはそのフラグメントは、ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５ポリペプチドまたはそのフラグメントもしくは改変体に免疫特異的に結合する）を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなる上記の「ヒト」または「完全ヒト」抗体も包含する。限定するものではないが、アミノ酸置換をもたらす部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介突然変異誘発を含む、当業者に公知の標準的な技術を用いて、ヒト抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体をコードするヌクレオチド配列に変異を導入してもよい。好ましくは、（誘導体を含む）改変体は、参照のＶＨ領域、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３、ＶＬ領域、ＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２またはＶＬＣＤＲ３に対して５０未満のアミノ酸置換、４０未満のアミノ酸置換、３０未満のアミノ酸置換、２５未満のアミノ酸置換、２０未満のアミノ酸置換、１５未満のアミノ酸置換、１０未満のアミノ酸置換、５未満のアミノ酸置換、４未満のアミノ酸置換、３未満のアミノ酸置換または２未満のアミノ酸置換をコードする。
【００６２】
特定の実施形態では、アミノ酸置換は、以下にさらに考察される保存的アミノ酸置換である。代わりに、例えば飽和突然変異誘発によりコード配列の全体または一部にわたって無作為に変異を導入されてもよく、得られた変異体を、生物活性についてスクリーニングして、活性（例えばＣＸＣＬ１３ポリペプチドまたはＣＸＣＲ５ポリペプチド、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５に結合する能力）を保持する変異を同定してもよい。「ヒト」または「完全ヒト」抗体のこのような改変体（またはその誘導体）は、「最適化された」または「抗原結合に最適化された」ヒトまたは完全ヒト抗体といってもよく、これには抗原に対する親和性が改善された抗体を包含する。
【００６３】
「抗体」および「免疫グロブリン」という用語は、本明細書において交換可能に用いられる。抗体または免疫グロブリンは、少なくとも重鎖の可変ドメインを含み、通常、少なくとも重鎖および軽鎖の可変ドメインを含む。脊椎動物系における基本的な免疫グロブリン構造は、比較的よく理解されている。例えばＨａｒｌｏｗら（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版；Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）を参照のこと。
【００６４】
以下により詳細に考察されるように、「免疫グロブリン」という用語は、生化学的に区別できる様々な広いクラスのポリペプチドを含む。当業者は、重鎖が、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）に、それらのうちのいくつかのサブクラス（例えばγ１〜γ４）とともに分類されることを認識する。抗体の「クラス」をそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ  ＩｇＧまたはＩｇＥとして決定するのが、この鎖の性質である。免疫グロブリンサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１などは、十分に特徴づけられ、機能的に特化されていることが公知である。これらのクラスおよびアイソタイプのそれぞれの改変型は、当業者にとって本開示の観点で容易に認識できるものであり、よって、本発明の範囲内である。全ての免疫グロブリンクラスの使用は、明らかに本開示の方法の範囲内であるが、しかし以下の考察は一般に、免疫グロブリン分子のＩｇＧクラスに関する。ＩｇＧに関して、標準的な免疫グロブリン分子は、およそ２３，０００ダルトンの分子量の２つの同一の軽鎖ポリペプチドと、５３，０００〜７０，０００の分子量の２つの同一の重鎖ポリペプチドとを含む。４つの鎖は、典型的に、ジスルフィド結合により「Ｙ」形状につながれ、軽鎖が、「Ｙ」の口から開始して可変領域全体につながる重鎖を囲む。
【００６５】
軽鎖は、カッパまたはラムダ（κ、λ）のいずれかとして分類される。各重鎖クラスは、カッパまたはラムダ軽鎖のいずれかと結合できる。一般的に、軽鎖および重鎖は、互いに共有結合しており、２つの重鎖の「テール」部分は、共有ジスルフィド結合または非共有結合（免疫グロブリンがハイブリドーマ、Ｂ細胞または遺伝子工学で作製された宿主細胞のいずれかにより作製される場合）によって互いに結合する。重鎖において、アミノ酸配列は、Ｙ形状の分かれた端のＮ末端から、各鎖の底部のＣ末端までに及ぶ。
【００６６】
軽鎖および重鎖は両方とも、構造的および機能的相同な領域に分けられる。「定常」および「可変」という用語は、機能的に用いられる。この点に関して、軽鎖（ＶＬまたはＶＫ）および重鎖（ＶＨ）部分の両方の可変ドメインが抗原認識および特異性を決定することが認識される。逆に、軽鎖（ＣＬ）および重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移行性、Ｆｃレセプター結合、補体結合などのような重要な生物学的特性を付与する。慣例的に、定常領域ドメインの番号付けは、それらが抗体の抗原結合部位またはアミノ末端から遠ざかるにつれて増加する。Ｎ末端部分は可変領域であり、Ｃ末端部分は定常領域である；ＣＨ３およびＣＬドメインは、実際に、それぞれ重鎖および軽鎖のカルボキシ末端を含む。
【００６７】
上述したように、可変領域は、抗体が抗原上のエピトープを選択的に認識してそれに特異的に結合することを可能にする。すなわち、抗体のＶＬドメインおよびＶＨドメイン、またはこれらの可変ドメイン内の相補性決定領域（ＣＤＲ）のサブセットは、組み合わされて、３次元抗原結合部分を規定する可変領域を形成する。この４次の抗体構造は、Ｙの各腕の端に存在する抗原結合部位を形成する。より具体的には、抗原結合部位は、ＶＨおよびＶＬ各鎖上の３つのＣＤＲにより規定される。いくつかの場合、例えばラクダ種に由来する特定の免疫グロブリン分子かまたはラクダ免疫グロブリンに基づいて遺伝子工学的に作製された特定の免疫グロブリン分子において、完全免疫グロブリン分子は、軽鎖を有さず重鎖のみからなってもよい。例えばＨａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ３６３：４４６〜４４８頁（１９９３）を参照のこと。
【００６８】
天然に存在する抗体において、各々の抗原結合ドメインに存在する６つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とは、抗体が水性環境中でその３次元形状をとるように抗原結合ドメインを形成するために特異的に配置されているアミノ酸の短い不連続配列である。「フレームワーク」領域とよばれる抗原結合ドメイン中の残りのアミノ酸は、分子間変動性がより低い。フレームワーク領域は、大部分がβシート高次構造を採用し、ＣＤＲは、βシート構造をつなぎ、その一部を形成する場合もあるループを形成する。すなわち、フレームワーク領域は、鎖間非共有相互作用によってＣＤＲを正しい向きに配置するための足場を形成するように作用する。配置されたＣＤＲにより形成される抗原結合ドメインは、免疫反応性抗原上のエピトープに対する表面相補性を規定する。この相補的表面は、抗体のその同族エピトープへの非共有結合を促進する。任意の与えられた重鎖または軽鎖の可変ドメインについて、当業者は、ＣＤＲおよびフレームワーク領域それぞれを含むアミノ酸を容易に同定できる。なぜなら、これらは精密に定義されているからである（以下を参照のこと）。
【００６９】
ある用語について当技術分野において用いられ、かつ／または受け入れられている２つ以上の定義がある場合、本明細書で用いるその用語の定義は、そうでないと明示的に述べない限り、全てのそのような意味を含むものとする。具体例は、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内で見られる、不連続抗原結合部位を記載するための「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）という用語の使用である。この特定の領域は、Ｋａｂａｔら（１９８３）Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」ならびにＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７頁（１９８７）（これらは本明細書に参照により組み込まれている）により記載され、ここで、これらの定義は、互いに比較した場合にアミノ酸残基のオーバーラップまたはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体またはその改変体のＣＤＲに言及するためにどちらの定義を適用することも、本明細書で定義され用いられる用語の範囲内であることを意図する。上記の引用した参考文献のそれぞれにより定義されるＣＤＲを包含する適切なアミノ酸残基を、比較のために以下の表１に示す。特定のＣＤＲを包含する正確な残基数は、ＣＤＲの配列およびサイズに応じて変動する。当業者は、抗体の可変領域アミノ酸配列を考慮して、特定のＣＤＲがどの残基を含むかを慣例的に決定できる。
【００７０】
【表１】
0006363623.tif 000002
【００７１】
またＫａｂａｔらは、いずれの抗体にも適用できる可変ドメイン配列についての番号付けシステムを定義した。当業者は、「Ｋａｂａｔ番号付け」のこのシステムを、任意の可変ドメイン配列に、配列自体を超えるいずれの実験データにも依存することなく、明確に割り当てることができる。本明細書において用いる場合、「Ｋａｂａｔ番号付け」とは、Ｋａｂａｔら（１９８３）Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」に示される番号付けシステムのことを指す。そうでないと明記しない限り、本発明の抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体中の特定のアミノ酸残基の位置の番号付けについての言及は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従う。
【００７２】
今回開示される方法において有用な抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体としては、限定するものではないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体またはキメラ抗体、単鎖抗体、エピトープ結合フラグメント、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ＶＬもしくはＶＨドメインのいずれかを含むフラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーにより生成されるフラグメント、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）が挙げられる。ＳｃＦｖ分子は、当技術分野において公知であり、例えば米国特許第５，８９２，０１９号に記載されている。今回開示される方法において用いられる免疫グロブリンまたは抗体分子は、任意のタイプ（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２など）またはサブクラスの免疫グロブリン分子であってもよい。
【００７３】
本明細書において用いる場合、「重鎖部分」という用語は、免疫グロブリン重鎖に由来するアミノ酸配列を含む。重鎖部分を含むポリペプチドは、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ（例えば上部、中間および／または下部ヒンジ領域）ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメインまたはその改変体もしくはフラグメントの少なくとも１つを含む。例えば、今回開示される方法で用いるための結合ポリペプチドは、ＣＨ１ドメインを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインとヒンジドメインの少なくとも一部分とＣＨ２ドメインとを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインとＣＨ３ドメインとを含むポリペプチド鎖；ＣＨ１ドメインとヒンジドメインの少なくとも一部分とＣＨ３ドメインとを含むポリペプチド鎖またはＣＨ１ドメインとヒンジドメインの少なくとも一部分とＣＨ２ドメインとＣＨ３ドメインとを含むポリペプチド鎖を含んでもよい。別の実施形態では、今回開示される方法において有用なポリペプチドは、ＣＨ３ドメインを含むポリペプチド鎖を含む。さらに、今回開示される方法で用いるための結合ポリペプチドは、ＣＨ２ドメインの少なくとも一部分（例えばＣＨ２ドメインの全てまたは一部）を欠いてよい。上述したように、当業者は、天然に存在する免疫グロブリン分子からアミノ酸配列が変化するようにこれらのドメイン（例えば重鎖部分）を改変できることを理解する。
【００７４】
本明細書で開示される特定の抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体において、多量体の１つのポリペプチド鎖の重鎖部分は、該多量体の第２のポリペプチド鎖上のものと同一である。あるいは、今回開示される方法において有用な重鎖部分を含有する単量体は、同一でない。例えば、各々の単量体は、例えば二重特異性抗体を形成する異なる標的結合部分を含んでもよい。
【００７５】
本明細書で開示される方法における使用のための結合分子の重鎖部分は、異なる免疫グロブリン分子に由来してよい。例えば、ポリペプチドの重鎖部分は、ＩｇＧ１分子に由来するＣＨ１ドメインと、ＩｇＧ３分子に由来するヒンジ領域とを含んでもよい。別の例では、重鎖部分は、部分的にＩｇＧ１分子と部分的にＩｇＧ３分子とに由来するヒンジ領域を含んでもよい。別の例では、重鎖部分は、部分的にＩｇＧ１分子と部分的にＩｇＧ４分子とに由来するキメラヒンジを含んでもよい。
【００７６】
本明細書において用いる場合、「軽鎖部分」という用語は、免疫グロブリン軽鎖、例えばカッパまたはラムダ軽鎖に由来するアミノ酸配列を含む。好ましくは、軽鎖部分は、ＶＬまたはＣＬドメインの少なくとも１つを含む。
【００７７】
今回開示される方法で有用な抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体は、抗原（例えばそれらが認識または特異的に結合する本明細書で開示される標的ポリペプチド（例えばＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５））のエピトープまたは該抗原の一部分の観点から記載されても、特定されてもよい。抗体の抗原結合ドメインと特異的に相互作用する標的ポリペプチドの一部分が、「エピトープ」または「抗原決定基」である。標的ポリペプチドは、単一のエピトープを含んでもよいが、典型的に、少なくとも２つのエピトープを含み、かつ抗原のサイズ、高次構造およびタイプに応じて、任意の数のエピトープを含んでもよい。さらに、標的ポリペプチド上の「エピトープ」は、非ポリペプチド要素であってよいし、またはそれを含んでよく、例えばエピトープは、炭水化物側鎖を含んでもよいことに注意すべきである。
【００７８】
抗体についてのペプチドまたはポリペプチドエピトープの最小サイズは、約４〜５アミノ酸であると考えられる。ペプチドまたはポリペプチドエピトープは、好ましくは、少なくとも７、より好ましくは少なくとも９、最も好ましくは少なくとも約１５から約３０の間のアミノ酸を含有する。ＣＤＲは、抗原性ペプチドまたはポリペプチドをその３次形態で認識できるので、エピトープを含むアミノ酸は連続的である必要はなく、同じペプチド鎖上にない場合さえある。今回開示される方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体が認識するペプチドまたはポリペプチドエピトープは、ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５の少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、より好ましくは少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５または約１５から約３０の間の連続または不連続アミノ酸の配列を含んでもよい。
【００７９】
「特異的に結合する」とは、一般的に、抗体がエピトープに対してその抗原結合ドメインを介して結合し、この結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間のいくらかの相補性を必然的に伴うことを意味する。この定義に従って、抗体が抗原結合ドメインを介してエピトープに、無作為で無関係のエピトープに結合するよりも容易に結合する場合に、この抗体はエピトープに「特異的に結合する」という。「特異性」という用語は、本明細書において、ある特定の抗体がある特定のエピトープに結合する相対的親和性を述べるために用いられる。例えば、抗体「Ａ」は、抗体「Ｂ」よりも所定のエピトープについてより高い特異性を有するとみなしてもよいし、または抗体「Ａ」は、関連するエピトープ「Ｄ」についてそれが有するよりも高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合するといってもよい。
【００８０】
「優先的に結合する」とは、抗体がエピトープに対して、その抗体が関連する、同様の、相同のまたは類似のエピトープに結合するよりも容易に、特異的に結合することを意味する。したがって、所定のエピトープに「優先的に結合する」抗体は、そのエピトープに対して、関連するエピトープ対してよりも結合する可能性が高いが、それでもそのような抗体は、関連するエピトープと交差反応し得る。
【００８１】
非限定的な例として、第２のエピトープについての抗体の解離定数（ＫＤ）未満のＫＤで、ある抗体が第１のエピトープに結合するならば、その抗体はその第１のエピトープに優先的に結合すると考えてよい。別の非限定的な例では、第２のエピトープについての抗体のＫＤより少なくとも１桁小さいＫＤで、ある抗体が第１のエピトープに結合するならば、その抗体はその第１の抗原に優先的に結合すると考えてよい。別の非限定的な例では、第２のエピトープについての抗体のＫＤよりも少なくとも２桁小さいＫＤで抗体が第１のエピトープに結合するならば、抗体はその第１のエピトープに優先的に結合すると考えてよい。
【００８２】
別の非限定的な例では、第２のエピトープについての抗体のオフレート（ｋ（ｏｆｆ））未満のｋ（ｏｆｆ）で、ある抗体が第１のエピトープに結合するならば、その抗体はその第１のエピトープに優先的に結合すると考えてよい。別の非限定的な例では、第２のエピトープについての抗体のｋ（ｏｆｆ）より少なくとも１桁小さいｋ（ｏｆｆ）で抗体が第１のエピトープに結合するならば、抗体はその第１のエピトープに優先的に結合すると考えてよい。別の非限定的な例では、第２のエピトープについての抗体のｋ（ｏｆｆ）より少なくとも２桁小さいｋ（ｏｆｆ）で抗体が第１のエピトープに結合するならば、抗体はその第１のエピトープに優先的に結合すると考えてよい。本明細書で開示される方法において有用な抗体または抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体は、本明細書で開示される標的ポリペプチド（例えばＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５）またはそのフラグメントもしくは改変体に、５×１０−２ｓｅｃ−１、１０−２ｓｅｃ−１または５×ｌ０−３ｓｅｃ−１以下のオフレート（ｋ（ｏｆｆ））で結合するということができる。特定の実施形態では、ｋ（ｏｆｆ）は、約３×１０−２以下であり、例えばここで抗体は３Ｄ２であり、ＣＸＣＬ１３はヒトまたはマウスである。別の実施形態では、ｋ（ｏｆｆ）は、約３×１０−３以下であり、例えばここで抗体はＭＡｂ５２６１であり、ＣＸＣＬ１３はヒトまたはマウスである。別の実施形態では、ｋ（ｏｆｆ）は、約４×１０−３以下であり、例えばここで抗体はＭＡｂ５３７８であり、ＣＸＣＬ１３はヒトまたはマウスである。一実施形態では、今回開示される方法において有用な抗体は、本明細書で開示される標的ポリペプチド（例えばＣＸＣＬ１３、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３）またはそのフラグメントもしくは改変体に、５×１０−４ｓｅｃ−１、１０−４ｓｅｃ−１、５×１０−５ｓｅｃ−１または１０−５ｓｅｃ−１、５×１０−６ｓｅｃ−１、１０−６ｓｅｃ−１、５×１０−７ｓｅｃ−１または１０−７ｓｅｃ−１以下のオフレート（ｋ（ｏｆｆ））で結合するといってもよい。
【００８３】
本明細書で開示される方法において有用な抗体または抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体は、本明細書で開示される標的ポリペプチド（例えばＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５）またはそのフラグメントもしくは改変体に対して、１０３Ｍ−１ｓｅｃ−１、５×１０３Ｍ−１ｓｅｃ−１、１０４Ｍ−１ｓｅｃ−１、５×１０４Ｍ−１ｓｅｃ−１、１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１、５×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１、１０６Ｍ−１ｓｅｃ−１または５×１０６Ｍ−１ｓｅｃ−１以上のオンレート（ｋ（ｏｎ））で結合するといってもよい。特定の実施形態では、ｋ（ｏｎ）は、約５×１０５以上であり、例えばここで抗体は３Ｄ２であり、ＣＸＣＬ１３はヒトであるか；またはｋ（ｏｎ）は、約１×１０５以上であり、例えばここで抗体は３Ｄ２であり、ＣＸＣＬ１３はマウスである。別の実施形態では、ｋ（ｏｎ）は、約１×１０６以上であり、例えばここで抗体はＭＡｂ５２６１であり、ＣＸＣＬ１３はヒトまたはマウスである。別の実施形態では、ｋ（ｏｎ）は約１×１０６以上であり、例えばここで抗体はＭＡｂ５３７８であり、ＣＸＣＬ１３はヒトまたはマウスである。一実施形態では、今回開示される方法において有用な抗体は、本明細書で開示される標的ポリペプチド（例えばＣＸＣＬ１３、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３）またはそのフラグメントもしくは改変体に対して、１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１、５×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１、１０６Ｍ−１ｓｅｃ−１または５×１０６Ｍ−１ｓｅｃ−１または１０７Ｍ−１ｓｅｃ−１以上のオンレート（ｋ（ｏｎ））で結合するということができる。
【００８４】
ある抗体が、参照抗体、例えば抗ＣＸＣＬ３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体のエピトープへの結合をある程度ブロックする程度までエピトープに優先的に結合するならば、この抗体は、所定のエピトープへの参照抗体の結合を、競合的に阻害するという。競合阻害は、当技術分野において公知の任意の方法、例えば競合ＥＬＩＳＡアッセイにより決定してもよい。抗体は、所定のエピトープへの参照抗体の結合を、少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％または少なくとも５０％競合的に阻害するといってもよい。
【００８５】
本明細書において用いる場合、「親和性」という用語は、免疫グロブリン分子のＣＤＲとの各エピトープの結合強度の尺度のことを指す。例えば、Ｈａｒｌｏｗら（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、第２版）２７〜２８頁を参照のこと。本明細書において用いる場合、「結合活性」という用語は、免疫グロブリン集団と抗原との間の複合体の全体的な安定性、すなわち抗原と免疫グロブリン混合物とが機能的に結合する強度のことをいう。例えば、Ｈａｒｌｏｗの２９〜３４頁を参照のこと。結合活性は、特定のエピトープとの集団中の各免疫グロブリン分子の親和性と、免疫グロブリンおよび抗原の価数との両方に関連する。例えば、二価モノクローナル抗体と、高反復性エピトープ構造を有する抗原、例えばポリマーとの間の相互作用は、高い結合活性の１つである。
【００８６】
今回開示される方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体は、それらの交差反応性の観点で記載または特定してもよい。本明細書において用いる場合、「交差反応性」という用語は、ある抗原に特異的な抗体が第２の抗原と反応する能力のことであって；２つの異なる抗原性物質の間の関係性の尺度を指す。したがって、その形成を誘発したエピトープ以外のエピトープに、ある抗体が結合するならば、その抗体は交差反応性である。交差反応性エピトープは、通常、誘導エピトープと同じ相補性構造特徴の多くを含有し、いくつかの場合では、元のものよりも実際によりうまく適合することもある。
【００８７】
例えば、特定の抗体は、関連するが同一でないエピトープ、例えば参照エピトープと少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６５％、少なくとも６０％、少なくとも５５％および少なくとも５０％の同一性（当技術分野において公知であり、本明細書で記載する方法を用いて算出される）を有するエピトープとこの抗体が結合するという点で、ある程度の交差反応性を有する。ある抗体は、参照エピトープと９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満および５０％未満の同一性（当技術分野において公知であり、かつ本明細書で記載する方法を用いて算出される）を有するエピトープとその抗体が結合しないならば、ほとんどまたは全く交差反応性を有さないということができる。ある抗体が、ある特定のエピトープの任意の他の類似体、オルソログまたはホモログに結合しないならば、その抗体はそのエピトープについて「高度に特異的」であるとみなしてもよい。
【００８８】
今回開示される方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子、例えば抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体は、あるポリペプチド、例えばＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５、例えばヒト、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５に対するそれらの結合親和性の観点で記載しても、または特定してもよい。特定の実施形態では、今回開示される方法において有用な抗体またはその抗原結合フラグメントの結合親和性は、５×１０−２Ｍ、１０−２Ｍ、５×１０−３Ｍ、１０−３Ｍ、５×１０−４Ｍ、１０−４Ｍ、５×１０−５Ｍ、１０−５Ｍ、５×１０−６Ｍ、１０−６Ｍ、５×１０−７Ｍ、１０−７Ｍ、５×１０−８Ｍ、１０−８Ｍ、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、１０−１２Ｍ、５×１０−１３Ｍ、１０−１３Ｍ、５×１０−１４Ｍ、１０−１４Ｍ、５×１０−１５Ｍまたは１０−１５Ｍ未満または以下の解離定数Ｋｄを有するものを含む。一実施形態では、今回開示される方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子、例えば抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５に、約５×１０−９Ｍ未満〜約５×１０−１０ＭのＫｄで結合し、例えばここでこの抗体はＭＡｂ５２６１であり、Ｋｄは約５×１０−９Ｍ以下である。別の実施形態では、抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子、例えば抗体またはその抗原結合フラグメントは、マウスＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５に、約５×１０−７Ｍ未満〜約９×１０−９ＭのＫｄで結合し、例えばここで抗体はＭＡｂ５２６１であり、Ｋｄは約８×１０−９Ｍ以下である。
【００８９】
今回開示される方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体は、「多重特異性」、例えば二重特異性、三重特異性またはそれより多い多重特異性であってよく、これは、これが１つ以上の異なる抗原（例えばタンパク質）上に同時に存在する２つ以上の異なるエピトープを認識し、かつそれに結合することを意味する。したがって、抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体が「単一特異性」または「多重特異性」、例えば「二重特異性」であるか否かは、結合ポリペプチドが反応する異なるエピトープの数のことを指す。多重特異的抗体は、本明細書で記載する標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であってもよいし、または標的ポリペプチドおよび異種エピトープ、例えば異種ポリペプチドもしくは固体支持体材料に特異的であってもよい。
【００９０】
本明細書において用いる場合、「価数」という用語は、結合ポリペプチドまたはＣＸＣＬ１３結合分子もしくはＣＸＣＲ５結合分子、例えば抗体もしくはその抗原結合フラグメント中に存在する、可能性のある結合ドメイン、例えば抗原結合ドメインの数のことを指す。各々の結合ドメインは、１つのエピトープに特異的に結合する。結合ポリペプチドまたはＣＸＣＬ１３結合分子もしくはＣＸＣＲ５結合分子が２つ以上の結合ドメインを含む場合、各々の結合ドメインは、同じエピトープ（２つの結合ドメインを有する抗体について「二価単一特異性」と称する）または異なるエピトープ（２つの結合ドメインを有する抗体について「二価二重特異性」と称する）に特異的に結合し得る。抗体またはその抗原結合フラグメントはまた、二重特異性で、各特異性について二価であってもよい（「二重特異性四価抗体」と称する）。別の実施形態では、四価ミニボディまたはドメイン欠失抗体を作製してもよい。
【００９１】
二重特異性二価抗体およびそれらを作製する方法は、例えば米国特許第５，７３１，１６８号；第５，８０７，７０６号；第５，８２１，３３３号；ならびに米国特許出願公開第２００３／０２０７３４号および第２００２／０１５５５３７号（これらすべての開示は、本明細書に参照により組み込まれている）に記載される。二重特異性四価抗体およびそれらを作製する方法は、例えば国際公開第０２／０９６９４８号および国際公開第００／４４７８８号（これらの開示はともに、本明細書に参照により組み込まれる）に記載される。全般的に、国際公開第９３／１７７１５号；国際公開第９２／０８８０２号；国際公開第９１／００３６０号；国際公開第９２／０５７９３号；Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０〜６９頁（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号；第４，７１４，６８１号；第４，９２５，６４８号；第５，５７３，９２０号；第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７〜１５５３頁（１９９２）を参照のこと。
【００９２】
以前に示したように、様々な免疫グロブリンクラスの定常領域のサブユニット構造および３次元形状は、周知である。本明細書において用いる場合、「ＶＨドメイン」という用語は、免疫グロブリン重鎖のアミノ末端可変ドメインを含み、「ＣＨ１ドメイン」という用語は、免疫グロブリン重鎖の最初（最もアミノ末端側）の定常領域ドメインを含む。ＣＨ１ドメインは、ＶＨドメインに隣接し、免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域に対してアミノ末端側である。
【００９３】
本明細書において用いる場合、「ＣＨ２ドメイン」という用語は、従来の番号付けスキームを用いて、抗体の例えば約２４４残基〜３６０残基（残基２４４〜３６０、Ｋａｂａｔ番号付けシステム；および残基２３１〜３４０、ＥＵ番号付けシステム；Ｋａｂａｔ  ＥＡらを参照のこと）にわたる重鎖分子の一部分を包含する。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接に対形成しない点で、独特である。むしろ、２つのＮ連結分岐炭水化物鎖が、インタクトな天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間に介在する。ＣＨ３ドメインが、ＣＨ２ドメインからＩｇＧ分子のＣ末端まで広がり、およそ１０８残基を含むことも十分に実証されている。
【００９４】
本明細書において用いる場合、「ヒンジ領域」という用語は、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインとをつなぐ重鎖分子の一部分を含む。このヒンジ領域は、およそ２５残基を含み、フレキシブルであり、よって、２つのＮ末端抗原結合領域が独立して動くことを可能にする。ヒンジ領域は、３つの別個のドメイン：上部、中間および下部のヒンジドメインに細分化できる（Ｒｏｕｘら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４０８３頁（１９９８））。
【００９５】
本明細書において用いる場合、「ジスルフィド結合」という用語は、２つの硫黄原子の間に形成される共有結合を含む。アミノ酸システインは、第２のチオール基とジスルフィド結合またはブリッジを形成できるチオール基を含む。最も多く天然に存在するＩｇＧ分子において、ＣＨ１領域とＣＬ領域とは、ジスルフィド結合により連結され、２つの重鎖は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムを用いて２３９および２４２に相当する位置（２２６位または２２９位、ＥＵ番号付けシステム）にて２つのジスルフィド結合により連結される。
【００９６】
本明細書において用いる場合、「キメラ抗体」という用語は、免疫反応性の領域または部位が第１の種から得られるかまたはそれに由来し、定常領域（これは、インタクトであっても、部分的であっても、または本発明に従って改変されていてもよい）が第２の種から得られる任意の抗体を意味するために用いられる。特定の実施形態では、標的結合の領域または部位は、非ヒト起源（例えばマウスまたは霊長類）由来であり、定常領域はヒト（例えば、モノクローナル抗体（ＭＡｂ）１４７６）である。
【００９７】
本明細書において用いる場合、「改変抗体」という用語は、重鎖もしくは軽鎖または両方のいずれかにおける可変ドメインが、特異性が公知の抗体からの１つ以上のＣＤＲの少なくとも部分的な置換により、そして必要であれば、部分的なフレームワーク領域の置換および配列変化により改変された抗体のことをいう。ＣＤＲは、フレームワーク領域が由来する抗体と同じクラスまたはサブクラスの抗体由来であってよいが、ＣＤＲは、異なるクラスの抗体、そして好ましくは異なる種由来の抗体に由来することが構想される。特異性が公知の非ヒト抗体由来の１つ以上の「ドナー」ＣＤＲが、ヒト重鎖または軽鎖フレームワーク領域中にグラフトされている改変抗体は、本明細書において「ヒト化抗体」と呼ばれる。ある可変ドメインの抗原結合能力を別のものに移すために、ドナー可変ドメインの完全ＣＤＲで全てのＣＤＲを置き換える必要はない場合がある。むしろ、標的結合部位の活性を維持するために必要な残基を移すことだけが必要になる場合がある。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ドナー可変重鎖ドメイン由来の１、２または３つのＣＤＲを含む。別の実施形態では、ヒト化抗体は、ドナー可変軽鎖ドメイン由来の１、２または３つのＣＤＲを含む。
【００９８】
ヒト化抗体の重鎖もしくは軽鎖または両方における可変ドメイン中のフレームワーク領域が、ヒト起源の残基のみを含み得ることがさらに認識され、この場合、ヒト化抗体のこれらのフレームワーク領域は、「完全ヒトフレームワーク領域」と呼ばれる。代わりに、ドナー可変ドメインのフレームワーク領域の１つ以上の残基を、ヒト化抗体の重鎖もしくは軽鎖または両方における可変ドメインのヒトフレームワーク領域の対応する位置内で必要に応じて改変して、ＣＸＣＬ１３抗原またはＣＸＣＲ５抗原との適切な結合を維持するかまたは促進してもよい。この様式で改変されたヒトフレームワーク領域は、したがって、ヒトおよびドナーのフレームワーク残基が混合されており、本明細書において「部分的ヒトフレームワーク領域」と呼ばれる。
【００９９】
例えば、抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体のヒト化は、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者（その各々が全体として参照によって本明細書に援用される、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２〜５２５頁（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ、Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３〜３２７頁（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４〜１５３６頁（１９８８））の方法に従って、げっ歯類もしくは変異したげっ歯類のＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗ＣＸＣＬ１３抗体の対応する配列に置換することにより、本質的に行うことができる。米国特許第５，２２５，５３９号；第５，５８５，０８９号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；および第５，８５９，２０５号（参照により本明細書に組み込まれる）も参照のこと。得られるヒト化抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体は、ヒト化抗体の重鎖および／または軽鎖の可変ドメインの完全ヒトフレームワーク領域内に、少なくとも１つのげっ歯類または変異したげっ歯類のＣＤＲを含む。いくつかの場合では、ヒト化抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体の１つ以上の可変ドメインのフレームワーク領域内の残基は、対応する非ヒト（例えばげっ歯類）残基で置き換えられ（例えば、その全体が参照によって本明細書に援用される、米国特許第５，５８５，０８９号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；および第６，１８０，３７０号を参照のこと）、この場合、得られるヒト化抗ＣＸＣＬ１３抗体は、重鎖および／または軽鎖の可変ドメイン内に部分的ヒトフレームワーク領域を含む。
【０１００】
さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体においてもドナー抗体においても見られない残基を含んでもよい。これらの改変は、抗体性能をさらに改良するため（例えば所望の親和性を得るため）に作製される。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、全てまたは実質的に全てのＣＤＲが、非ヒトヒト免疫グロブリンのものに対応し、全てのまたは実質的に全てのフレームワーク領域が、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部分も含む。さらなる詳細について、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ３３１：５２２〜５２５頁（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３〜３２９頁（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３〜５９６頁（１９９２）（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。したがって、このような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインより実質的に少ないものが非ヒト種からの対応する配列で置換された抗体を含んでもよい。実際上、ヒト化抗体は、典型的に、いくつかまたは全てのＣＤＲ残基およびおそらくいくつかのフレームワーク残基が、げっ歯類抗体の類似部位からの残基で置換されているヒト抗体である。例えば米国特許第５，２２５，５３９号；第５，５８５，０８９号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；および第５，８５９，２０５号を参照のこと。また、米国特許第６，１８０，３７０号および国際公開番号ＷＯ０１／２７１６０も参照のこと（ここでは、ヒト化抗体および所定の抗原に関して親和性が改善されたヒト化抗体を生成する技術が開示されている）。
【０１０１】
ＣＸＣＬ１３に結合する市販の抗体、例えばラット抗マウスＭＡｂ４７０（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）およびマウス抗ヒトＭＡｂ８０１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）は、当技術分野において開示されている。さらに、マウス抗ＣＸＣＬ１３抗体は、米国特許出願公開第２００８／０２２７７０４（Ａ１）号（これは、全体として参照によって本明細書に援用される）に開示されている。モノクローナル抗ＣＸＣＬ１３抗体ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６および３Ｄ２は、国際公開番号ＷＯ２０１３／０３１０９９（これは、全体として参照によって本明細書に援用される）に開示されている。
【０１０２】
モノクローナル抗体５２６１は、配列番号１４に示される配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメインと、配列番号１９に示される配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ドメインとを含む。ＭＡｂ５２６１は、その重鎖内にヒトＩｇガンマ１−Ｆアロタイプ定常領域と、その軽鎖内にヒトカッパ定常領域とを含む。モノクローナル抗体５３７８は、配列番号１４に示される配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ドメインと、配列番号１９に示される配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ドメインとを含む。ＭＡｂ５３７８は、その重鎖内にマウスＩｇＧ２ａ定常領域と、その軽鎖内にマウスカッパ定常領域とを含む。ＭＡｂ５０８０は、配列番号１４に示される配列を有するＶＨドメインと、配列番号２１に示される配列を有するＶＬドメインとを含む。ＭＡｂ５０８０は、その重鎖内にヒトＩｇＧ１定常領域と、その軽鎖内にヒトカッパ定常領域とを含む。モノクローナル抗体１４７６は、配列番号１０に示される配列を有するＶＨドメインと、配列番号１５に示される配列を有するＶＬドメインとを含む。ＭＡｂ１４７６は、その重鎖内にヒトＩｇＧ１定常領域と、その軽鎖内にヒトカッパ定常領域とを含む。モノクローナル抗体３Ｄ２は、配列番号１０に示される配列を有するＶＨドメインと、配列番号１５に示される配列を有するＶＬドメインとを含む。ＭＡｂ  ３Ｄ２は、その重鎖内にマウスＩｇＧ１定常領域と、その軽鎖内にマウスカッパ定常領域とを含む。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、今回開示される方法は、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６または３Ｄ２抗ＣＸＣＬ１３モノクローナル抗体を利用する。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、今回開示される方法において用いられる抗体は、抗ＣＸＣＬ１３抗体、またはＣＸＣＬ１３に結合するその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体を含む。特定の実施形態では、抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ヒト、霊長類、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３に結合する。特定の実施形態では、今回開示される方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ヒト化されている。他の実施形態では、抗ＣＸＣＬ１３抗体は、そのレセプター、例えばＣＸＣＲ５へのＣＸＣＬ１３の結合をブロックする。特定の実施形態では、今回開示される方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６もしくは３Ｄ２、またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体である。一実施形態では、今回開示される方法は、参照抗体、例えばＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６または３Ｄ２と同じＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５エピトープに特異的に結合する単離された結合分子、例えば抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体および誘導体を利用する。別の実施形態では、今回開示される方法は、ＣＸＣＬ１３に特異的に結合し、かつ参照抗体、例えばＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６または３Ｄ２が、ＣＸＣＬ１３、例えばヒト、霊長類、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３に特異的に結合することを競合的に阻害する、単離された結合分子、例えば抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
【０１０５】
特定の実施形態では、今回開示される方法において有用な結合分子は、参照の抗ＣＸＣＬ１３抗体分子についてのアミノ酸配列の少なくとも約８０％、約８５％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％または約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。さらなる実施形態では、結合分子は、参照抗体と少なくとも約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または１００％の配列同一性を共有する。特定の実施形態では、参照抗体は、ＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６または３Ｄ２である。
【０１０６】
別の実施形態では、今回開示される方法は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合フラグメントを利用し、ここで、ＶＨドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１０または１４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一であるアミノ酸配列を有する。
【０１０７】
別の実施形態では、今回開示される方法は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離された抗体またはその抗原結合フラグメントを利用し、ここで、ＶＨドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１１、１２または１３と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一であるアミノ酸配列を有する。
【０１０８】
別の実施形態では、今回開示される方法は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる単離された抗体またはその抗原結合フラグメントを利用し、ここで、ＶＨドメインは、配列番号１０または１４と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一のアミノ酸配列を有する。
【０１０９】
別の実施形態では、今回開示される方法は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合フラグメントを利用し、ここで、ＶＨドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１０または１４のＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３と１、２、３、４または５つの保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有する。
【０１１０】
別の実施形態では、今回開示される方法は、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合フラグメントを利用し、ここで、ＶＨドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１１、１２または１３と１、２、３、４または５つの保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有する。
【０１１１】
別の実施形態では、今回開示される方法は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合フラグメントを利用し、ここで、ＶＬドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１５、１９または２１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一であるアミノ酸配列を有する。
【０１１２】
別の実施形態では、今回開示される方法は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合フラグメントを利用し、ここで、ＶＬドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１６、１７、１８または２０と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一であるアミノ酸配列を有する。
【０１１３】
別の実施形態では、今回開示される方法は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合フラグメントを利用し、ここで、ＶＬドメインは、配列番号１５、１９または２１と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または同一であるアミノ酸配列を有する。
【０１１４】
別の実施形態では、今回開示される方法は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合フラグメントを利用し、ここで、ＶＬドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１５、１９または２１のＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３と１、２、３、４または５つの保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有する。
【０１１５】
別の実施形態では、今回開示される方法は、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）を含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合フラグメントを利用し、ここで、ＶＬドメインのＣＤＲの少なくとも１つは、配列番号１６、１７、１８または２０と１、２、３、４または５つの保存的アミノ酸置換を除いて同一であるアミノ酸配列を有する。
【０１１６】
さらなる実施形態では、今回開示される方法は、配列番号１５、１９または２１と少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる抗体またはその抗原結合フラグメントを利用し、ここで、コードされるＶＬドメインを含む抗ＣＸＣＬ１３抗体は、ＣＸＣＬ１３に特異的または優先的に結合する。
【０１１７】
特定の実施形態では、今回開示される方法は、配列番号１４に示すアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号１９に示すアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含むか、本質的にそれらからなるかまたはそれらからなる抗体またはその抗原結合フラグメントを利用する。これらの実施形態のいくつかでは、抗体は、その重鎖内にヒトＩｇＧ１定常領域と、その軽鎖内にヒトカッパ定常領域とを含む。
【０１１８】
特定の実施形態では、今回開示される方法は、配列番号１１に示すアミノ酸配列を有するＣＤＲ１と、配列番号１２に示すアミノ酸配列を有するＣＤＲ２と、配列番号１３に示すアミノ酸配列を有するＣＤＲ３とを含むＶＨドメインと、配列番号２０に示すアミノ酸配列を有するＣＤＲ１と、配列番号１７に示すアミノ酸配列を有するＣＤＲ２と、配列番号１８に示すアミノ酸配列を有するＣＤＲ３とを含むＶＬドメインとを含むか、本質的にそれらからなるかまたはそれらからなる抗体またはその抗原結合フラグメントを利用する。これらの実施形態のいくつかでは、抗体は、その重鎖内にヒトＩｇＧ１定常領域と、その軽鎖内にヒトカッパ定常領域とを含む。
【０１１９】
参照の抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体の適切な生物活性改変体を、今回開示される方法において用いてもよい。このような改変体は、親の抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体の所望の結合特性を保持する。抗体改変体を作製する方法は、当技術分野において一般的に利用可能である。
【０１２０】
突然変異誘発およびヌクレオチド配列改変の方法は、当技術分野において周知である。例えば、ＷａｌｋｅｒおよびＧａａｓｔｒａ編（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：４８８〜４９２頁（１９８５）；Ｋｕｎｋｅｌら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７〜３８２頁（１９８７）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．）；米国特許第４，８７３，１９２号；およびその中で引用される参考文献（参照によって本明細書に援用される）を参照のこと。目的とするポリペプチドの生物活性に影響しない適切なアミノ酸置換についての手引きは、Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）、３４５〜３５２頁（全体として参照によって本明細書に援用される）中のＤａｙｈｏｆｆら（１９７８）のモデルで見出すことができる。Ｄａｙｈｏｆｆらのモデルは、点許容変異（Ｐｏｉｎｔ  Ａｃｃｅｐｔｅｄ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ）（ＰＡＭ）アミノ酸相似マトリクス（ＰＡＭ２５０マトリクス）を用いて、適切な保存的アミノ酸置換を決定する。あるアミノ酸を同様の特性を有する別のアミノ酸に交換するような保存的置換が好ましい場合がある。ＤａｙｈｏｆｆらのモデルのＰＡＭ２５０マトリクスによって教示される保存的アミノ酸置換の例としては、限定するものではないが、Ｇｌｙ←→Ａｌａ、Ｖａｌ←→Ｉｌｅ←→Ｌｅｕ、Ａｓｐ←→Ｇｌｕ、Ｌｙｓ←→Ａｒｇ、Ａｓｎ←→ＧｌｎおよびＰｈｅ←→Ｔｒｐ←→Ｔｙｒが挙げられる。
【０１２１】
抗ＣＸＣＬ１３もしくは抗ＣＸＣＲ５結合分子、例えば抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または目的のポリペプチドの改変体の構築において、改変体が継続して所望の特性を有するように、例えばＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５、例えばヒト、霊長類、マウスまたはヒトおよびマウス両方のＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５に特異的に結合できるように改変を行う。明らかに、改変体ポリペプチドをコードするＤＮＡ中に作製されるいずれの変異も、リーディングフレームから外れて配列を配置してはならず、好ましくは、ｍＲＮＡ二次構造を生成し得る相補領域を形成しない。例えば欧州特許第ＥＰ００７５４４４Ｂ１号を参照のこと。
【０１２２】
抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子、例えば抗体またはその抗原結合フラグメントの結合特異性を測定する方法としては、限定するものではないが、標準的競合結合アッセイ、Ｔ細胞またはＢ細胞による免疫グロブリン分泌をモニタリングするアッセイ、Ｔ細胞増殖アッセイ、アポトーシスアッセイ、ＥＬＩＳＡアッセイなどが挙げられる。例えばＷＯ９３／１４１２５；Ｓｈｉら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：６３３〜６４２頁（２０００）；Ｋｕｍａｎｏｇｏｈら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６９：１１７５〜１１８１頁（２００２）；Ｗａｔａｎａｂｅら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６７：４３２１〜４３２８頁（２００１）；Ｗａｎｇら、Ｂｌｏｏｄ９７：３４９８〜３５０４頁（２００１）；およびＧｉｒａｕｄｏｎら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７２（２）：１２４６〜１２５５頁（２００４）（これらは全体として参照によって本明細書に援用される）に開示されるようなアッセイを参照のこと。
【０１２３】
様々な免疫細胞（例えばＢ細胞、濾胞ヘルパーＴ細胞および最近活性化されたＴ細胞）上で見られるそのレセプターであるＣＸＣＲ５を通じて、ＣＸＣＬ１３は、免疫系恒常性の維持、リンパ器官形成、白血球動員および走化性遊走ならびに二次リンパ組織（例えば胚中心）の発達に必要な細胞内変化を誘発する。したがって、「抗ＣＸＣＬ１３活性」または「ＣＸＣＬ１３ブロック活性」とは、ＣＸＣＬ１３と関連する以下の活性のうちの１つ以上を調節する活性を含み得る：そのレセプターとのＣＸＣＬ１３の相互作用の遮断、Ｂ細胞および濾胞ＢヘルパーＴ細胞が炎症性組織に遊走することの阻害、胚中心形成の阻害（例えば自己免疫疾患の場合）、二次もしくは異所性リンパ系濾胞の阻害；がん細胞増殖および腫瘍学的障害における伝播の能力の阻害；またはＣＸＣＬ１３発現細胞に関連する任意の他の活性。抗ＣＸＣＬ１３活性は、限定するものではないが、特定の型の自己免疫疾患（例えば多発性硬化症、関節炎（例えば関節リウマチ）、慢性胃炎、胃リンパ腫、移植片拒絶、シェーグレン症候群（ＳＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、Ｃ型肝炎ウイルス感染における活動性混合型クリオグロブリン血症（ＭＣ）血管炎、若年性皮膚筋炎および重症筋無力症）および特定の癌（例えばバーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫（例えば胃ＭＡＬＴリンパ腫）、癌腫（例えば結腸、前立腺、乳、胃、食道および膵臓）および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ））ならびに他の炎症性疾患、例えばＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ感染誘発性炎症性疾患、例えば胃炎、潰瘍および胃粘膜病変を含むＣＸＣＬ１３発現に関連する疾患の発生率または重症度の低減に起因し得る。
【０１２４】
参照ポリペプチドの定常領域、ＣＤＲ、ＶＨドメインまたはＶＬドメインを含む任意の特定のポリペプチドが、別のポリペプチドと少なくとも約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％またはさらに約１００％同一であるかを本明細書で考察する場合、同一性％は、限定するものではないが、ＢＥＳＴＦＩＴプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｕｎｉｘ（登録商標）用バージョン８、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７１１）のような当技術分野において公知の方法およびコンピュータプログラム／ソフトウェアを用いて決定できる。ＢＥＳＴＦＩＴは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２〜４８９頁の局所的相同性アルゴリズムを用いて、２つの配列間の相同性の最良のセグメントを見出す。ＢＥＳＴＦＩＴまたは任意の他の配列アラインメントプログラムを用いて特定の配列が、本発明による参照配列と例えば９５％同一であるかを決定する場合、パラメータは、当然ながら、同一性のパーセンテージが参照ポリペプチド配列の全長にわたって算出され、参照配列中のアミノ酸の総数の５％までの相同性におけるギャップが許容されるように設定される。
【０１２５】
本発明の目的のために、配列同一性パーセントは、１２のギャップ開始ペナルティ、２のギャップ伸長ペナルティ、６２のＢＬＯＳＵＭマトリクスでアフィンギャップ検索を用いるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを用いて決定してよい。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２〜４８９頁に教示されている。改変体は、例えば、わずか１〜１５のアミノ酸残基、１〜１０、例えばわずか６〜１０のアミノ酸残基、わずか５、わずか４、３、２またはわずか１のアミノ酸残基だけ、参照の抗ＣＸＣＬ１３抗体（例えばＭＡｂ５２６１、ＭＡｂ５３７８、ＭＡｂ５０８０、ＭＡｂ１４７６または３Ｄ２）、または抗ＣＸＣＲ５抗体と異なってもよい。
【０１２６】
ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５に特異的に結合可能であり、所望のＣＸＣＬ１３ブロック活性を保持するポリペプチドの精密な化学構造は、多数の要因に依存する。イオン化可能なアミノおよびカルボキシル基が分子中に存在するので、特定のポリペプチドを、酸性もしくは塩基性の塩としてまたは中性の形態で得てもよい。適切な環境条件においた場合にそれらの生物活性を保持する全てのこのような調製物は、本明細書において用いる場合の抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体の定義に含まれる。さらに、ポリペプチドの１次アミノ酸配列は、糖部分（グリコシル化）を用いる誘導体化、または脂質、リン酸塩、アセチル基などの他の補助分子を用いる誘導体化により増強してよい。これは、糖類とのコンジュゲーションにより増強してもよい。このような増強の特定の態様は、生成宿主の翻訳後プロセシングシステムにより達成される。その他のこのような改変を、インビトロで導入してもよい。いずれの場合でも、このような改変は、抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体の所望の特性が損なわれない限り、本明細書で用いる抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体の定義に含まれる。このような改変は、様々なアッセイにおいて、ポリペプチドの活性を増強または減少させることにより、活性に量的または質的に影響し得ることが予期される。さらに、鎖中の各アミノ酸残基は、酸化、還元または他の誘導体化により改変してもよく、ポリペプチドは、活性を保持するフラグメントを得るために切断されてもよい。所望の特性（例えばＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５についての結合特異性、結合親和性および／またはＣＸＣＬ１３ブロック活性）を損なわないこのような改変では、ポリペプチド配列が、本明細書で用いる目的の抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体の定義から除かれることはない。
【０１２７】
当技術分野は、ポリペプチド改変体の調製および使用に関して実質的な手引きを提供する。抗ＣＸＣＬ１３結合分子またはＣＸＣＲ５結合分子、例えば抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体の調製において、当業者は、天然タンパク質のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対するどの改変が、本発明の方法において用いられる薬学的組成物の治療有効成分として用いるために適切な改変体をもたらすかを容易に決定できる。
【０１２８】
参照の抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体の定常領域は、いくつかの様式で、エフェクター機能を変更するために変異させてよい。例えば、米国特許第６，７３７，０５６Ｂ１号および米国特許出願公開第２００４／０１３２１０１Ａ１号（これらは、Ｆｃレセプターとの抗体結合を最適化するＦｃ変異を開示する）を参照のこと。
【０１２９】
特定の抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体では、Ｆｃ部分は、当技術分野において公知の技術を用いて、エフェクター機能を減少させるために変異させてよい。例えば、定常領域ドメインの欠失または不活性化（点突然変異または他の手段による）は、循環改変抗体のＦｃレセプター結合を低下させ、そのことにより腫瘍局在化を増加させる場合がある。他の場合では、これは、本発明と一貫する定常領域改変が、補体結合を和らげ、それによって血清半減期およびコンジュゲートした細胞毒の非特異的連結を低減することであり得る。定常領域のさらに別の改変を用いてジスルフィド結合またはオリゴ糖部分を改変してよく、このことは、抗原特異性または抗体フレキシビリティの増加により局在化の促進を可能にする。改変の結果として得られる生理的プロフィール、バイオアベイラビリティーならびに腫瘍局在化、生体分布および血清半減期のような修飾の他の生化学的影響は、過度の実験を行うことなく、周知の免疫学的技術を用いて容易に測定および定量できる。
【０１３０】
全般的に、今回開示される方法において有用なＣＸＣＲ５結合分子は、ＣＸＣＲ５レセプターを活性化しない（すなわちこのレセプターのアゴニストでない）。
【０１３１】
「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、同様の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。同様の電荷を有する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えばリシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えばトレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。代わりに、飽和突然変異誘発によるようにコード配列の全体または一部にわたって変異を無作為に導入してもよく、得られた変異体を生物活性についてスクリーニングして、活性（例えばＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５についての結合特異性、結合親和性および／またはＣＸＣＬ１３ブロック活性）を保持する変異体を同定してもよい。
【０１３２】
例えば、抗体分子のフレームワーク領域のみまたはＣＤＲ領域のみに変異を導入することが可能である。導入された変異は、サイレントであってもまたは中立ミスセンス変異であってよく、すなわち抗原と結合する抗体の能力に対して全くまたはほとんど影響しなくてもよい。これらの型の変異は、コドン用法を最適化するため、またはハイブリドーマの抗体生成を改善するために有用であり得る。代わりに、非中立ミスセンス変異は、抗原と結合する抗体の能力を変更し得る。ほとんどのサイレントおよび中立ミスセンス変異の場所は、フレームワーク領域内であることが多いが、ほとんどの非中立ミスセンス変異の場所は、ＣＤＲ内であることが多い（しかし、これは絶対的な要件でない）。当業者は、抗原結合活性に変更がないか、または結合活性に変更がある（例えば抗原結合活性の改善または抗体特異性の変化）ことのような所望の特性を有する変異体分子を設計して試験することが可能である。突然変異誘発の後に、コードされるタンパク質を慣例的に発現させ、コードされたタンパク質の機能的および／または生物学的な活性（例えばＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５ポリペプチドの少なくとも１つのエピトープに免疫特異的に結合する能力）を、本明細書に記載される技術を用いて、または当技術分野において公知の技術を慣例的に改変することによって決定してもよい。
【０１３３】
特定の実施形態では、今回開示される方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体は、参照の抗ＣＸＣＬ１３抗体、または抗ＣＸＣＲ５抗体と比較して、少なくとも１つの最適化相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。「最適化ＣＤＲ」とは、ＣＤＲが改変されていること、かつ最適化ＣＤＲを含む抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体に対して付与される持続性のまたは改善された結合親和性および／もしくは抗ＣＸＣＬ１３活性に基づいて選択される最適化配列を意図する。
【０１３４】
本明細書の他の場所でより詳細に考察されるように、抗ＣＸＣＬ１３もしくは抗ＣＸＣＲ５結合分子、または可溶性ＣＸＣＲ５は、さらに、Ｎ末端もしくはＣ末端にて異種ポリペプチドと組換えにより融合できるか、またはポリペプチドもしくは他の組成物と化学的にコンジュゲート（共有および非共有コンジュゲーションを含む）されてもよい。例えば、抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体、または可溶性ＣＸＣＲ５は、検出アッセイにおいて標識として有用な分子、および異種ポリペプチド、薬物、放射性核種もしくは毒素のようなエフェクター分子と組換えにより融合またはコンジュゲートされてもよい。例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ９２／０８４９５；ＷＯ９１／１４４３８；ＷＯ８９／１２６２４；米国特許第５，３１４，９９５号；および欧州特許第３９６，３８７号を参照のこと。
【０１３５】
本明細書において用いる場合、用語「連結された」、「融合された」または「融合」とは、相互に交換可能なものとして用いられる。これらの用語は、２つ以上の要素または構成要素を、化学的コンジュゲーションまたは組換え手段を含むいずれかの手段により連結することをいう。「インフレーム融合」とは、元のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の正しい翻訳リーディングフレームを維持する様式で、２つ以上のポリヌクレオチドオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を連結して、連続するさらに長いＯＲＦを形成することをいう。したがって、組換え融合タンパク質は、元のＯＲＦによりコードされるポリペプチドに対応する２つ以上のセグメント（これらのセグメントは、自然では、通常、そのようにつながれていない）を含有する単一のタンパク質である。リーディングフレームは、このようにして、融合されたセグメント全体を通して連続的にされるが、このセグメントは、例えばインフレームリンカー配列により物理的または空間的に分けられてもよい。例えば、免疫グロブリン可変領域のＣＤＲをコードするポリヌクレオチドは、インフレームで融合されてもよいが、「融合された」ＣＤＲが連続的ポリペプチドの一部として同時翻訳される限り、少なくとも１つの免疫グロブリンフレームワーク領域またはさらなるＣＤＲ領域をコードするポリヌクレオチドによって分けられてもよい。
【０１３６】
今回開示される方法において有用な抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体は、改変されている誘導体、すなわちＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５に対する抗体の結合を共有結合が妨げないような抗体への任意の種類の分子の共有結合によって改変された誘導体を含んでもよい。例えば、限定するものではないが、抗体誘導体としては、例えばグリコシル化、アセチル化、ペグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞性リガンドまたは他のタンパク質との結合などにより改変された抗体が挙げられる。任意の多数の化学的修飾は、限定するものではないが、特異的化学的切断、アセチル化、ホルミル化などを含む公知の技術により行ってもよい。さらに、誘導体は、１つ以上の非伝統的アミノ酸を含んでもよい。
【０１３７】
抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子、例えば抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体は、ペプチド結合または改変ペプチド結合により互いにつながれたアミノ酸、すなわちペプチドイソスターで構成されてもよく、遺伝子によりコードされる２０種のアミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。例えば抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体は、翻訳後プロセシングのような自然のプロセスにより、または当技術分野において周知の化学改変技術により改変されてもよい。このような改変は、基本的な参考書およびより詳細な研究論文ならびに多数の研究文献に十分に記載されている。改変は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノもしくはカルボキシル末端を含む抗ＣＸＣＬ１３または抗ＣＸＣＲ５結合分子の任意の場所または炭水化物のような部分で生じ得る。所定の抗ＣＸＣＬ１３または抗ＣＸＣＲ５結合分子中のいくつかの部位にて同程度または異なる程度の同じ種類の改変が存在してもよいことが認識される。また、所定の抗ＣＸＣＬ１３または抗ＣＸＣＲ５結合分子は、多くの種類の改変を含んでもよい。抗ＣＸＣＬ１３または抗ＣＸＣＲ５結合分子は、例えばユビキチン化の結果として分岐されてもよく、これらは、分岐または非分岐の環状であってもよい。環状、分岐状、および、分岐した環状の抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子は、翻訳後の自然のプロセスの結果であってもよいし、または合成法により作製されてもよい。改変としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドもしくはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質もしくは脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有的架橋の形成、システインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペグ化、タンパク質分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニン化のようなタンパク質へのアミノ酸のトランスファーＲＮＡ媒介付加、ならびにユビキチン化が挙げられる（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ−Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ＮＹ；第２版（１９９３）；Ｊｏｈｎｓｏｎ編（１９８３）Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｖａｌｅｎｔ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ）、１〜１２頁；Ｓｅｉｆｔｅｒら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：６２６〜６４６頁（１９９０）；Ｒａｔｔａｎら、Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６３：４８〜６２頁（１９９２）を参照のこと）。
【０１３８】
今回開示される方法は、抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体と、異種ポリペプチドとを含む融合タンパク質の使用を包含する。抗体と融合する異種ポリペプチドは、機能のために有用であり得るか、または抗ＣＸＣＬ１３もしくは抗ＣＸＣＲ５ポリペプチド発現細胞を標的にするために有用である。
【０１３９】
一実施形態では、今回開示される方法において有用な融合タンパク質は、抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体の任意の１つ以上のＶＨドメインのアミノ酸配列、または抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体の任意の１つ以上のＶＬドメインのアミノ酸配列あるいはそのフラグメントもしくは改変体と、異種ポリペプチド配列とを有するポリペプチドを含むか、本質的にそれからなるかまたはそれからなる。
【０１４０】
別の実施形態では、本明細書で開示される治療方法において用いるための融合タンパク質は、抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体のＶＨドメインの任意の１、２、３つのＣＤＲのアミノ酸配列またはそのフラグメント、改変体もしくは誘導体および／あるいは抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体のＶＬドメインの任意の１、２、３つのＣＤＲのアミノ酸配列またはそのフラグメント、改変体もしくは誘導体と、異種ポリペプチド配列とを有するポリペプチドを含むか、本質的にそれらからなるかまたはそれらからなる。いくつかの実施形態では、融合タンパク質のＶＨおよびＶＬドメインは、ＣＸＣＬ１３またはＣＸＣＲ５の少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する、単一起源の抗体（またはｓｃＦｖもしくはＦａｂフラグメント）に相当する。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインまたはＶＬドメインの２、３、４、５、６つ以上のＣＤＲは、単一起源の抗体（またはｓｃＦｖもしくはＦａｂフラグメント）に相当する。
【０１４１】
文献において報告されている例示的な融合タンパク質としては、Ｔ細胞レセプター（Ｇａｓｃｏｉｇｎｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８４：２９３６〜２９４０頁（１９８７））；ＣＤ４（Ｃａｐｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ３３７：５２５〜５３１頁（１９８９）；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ３３９：６８〜７０頁（１９８９）；Ｚｅｔｔｍｅｉｓｓｌら、ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．ＵＳＡ９：３４７〜３５３頁（１９９０）；およびＢｙｒｎら、Ｎａｔｕｒｅ３４４：６６７〜６７０頁（１９９０））；Ｌ−セレクチン（ホーミングレセプター）（Ｗａｔｓｏｎら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１０：２２２１〜２２２９頁（１９９０）；およびＷａｔｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ３４９：１６４〜１６７頁（１９９１））；ＣＤ４４（Ａｒｕｆｆｏら、Ｃｅｌｌ６１：１３０３〜１３１３頁（１９９０））；ＣＤ２８およびＢ７（Ｌｉｎｓｌｅｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：７２１〜７３０頁（１９９１））；ＣＴＬＡ−４（Ｌｉｓｌｅｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：５６１〜５６９頁（１９９１））；ＣＤ２２（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃら、Ｃｅｌｌ６６：１１３３〜１１４４頁（１９９１））；ＴＮＦレセプター（Ａｓｈｋｅｎａｚｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：１０５３５〜１０５３９頁（１９９１）；Ｌｅｓｓｌａｕｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：２８８３〜２８８６頁（１９９１）；およびＰｅｐｐｅｌら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：１４８３〜１４８９頁（１９９１））；およびＩｇＥレセプターａ（ＲｉｄｇｗａｙおよびＧｏｒｍａｎ、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．第１１５巻、アブストラクト第１４４８号（１９９１））の融合体が挙げられる。
【０１４２】
本明細書の他の場所で考察されるように、抗ＣＸＣＬ１３または抗ＣＸＣＲ５結合分子、例えば抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体は、異種ポリペプチドと融合させて、ポリペプチドのインビボ半減期を増加させるか、または当技術分野において公知の方法を用いるイムノアッセイにおいて用いてもよい。例えば、一実施形態では、ＰＥＧを抗ＣＸＣＬ１３抗体または抗ＣＸＣＲ５抗体にコンジュゲートして、それらの半減期をインビボにおいて増加させてもよい。Ｌｅｏｎｇら、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ１６：１０６頁（２００１）；Ａｄｖ．ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５４：５３１頁（２００２）；またはＷｅｉｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ３０：５１２頁（２００２）を参照のこと。
【０１４３】
さらに、抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子、例えば抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体は、それらの精製または検出を容易にするためにペプチドのようなマーカー配列と融合してもよい。特定の実施形態では、マーカーアミノ酸配列は、とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、９２５９  Ｅｔｏｎ  Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，Ｃａｌｉｆ．，９１３１１）において提供されるタグのようなヘキサヒスチジンペプチドである（これらの多くは市販で入手可能である）。Ｇｅｎｔｚら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：８２１〜８２４頁（１９８９）に記載されるように、例えば、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製をもたらす。精製に有用な他のペプチドタグとしては、限定するものではないが、「ＨＡ」タグ（これは、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに相当する（Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ３７：７６７頁（１９８４）））および「フラッグ」タグが挙げられる。
【０１４４】
融合タンパク質は、当技術分野において周知の方法を用いて調製してもよい（例えば米国特許第５，１１６，９６４号および第５，２２５，５３８号を参照のこと）。融合の精密な部位は、融合タンパク質の分泌または結合の特徴を最適化するために経験的に選択できる。融合タンパク質をコードするＤＮＡを、次いで、発現のために宿主細胞にトランスフェクトする。
【０１４５】
抗ＣＸＣＬ１３結合分子および抗ＣＸＣＲ５結合分子、例えば抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体は、コンジュゲートされていない形態で用いてもよいし、あるいは例えば分子の治療特性を改善するため、標的検出を容易にするためまたは患者のイメージングもしくは治療のために様々な分子の少なくとも１つとコンジュゲートしてもよい。抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子、例えば抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体は、精製の前もしくは後または精製を行うときに標識しても、またはコンジュゲートしてもよい。
【０１４６】
具体的には、抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体、またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体は、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生物学的応答修飾物質、薬剤またはＰＥＧとコンジュゲートしてもよい。
【０１４７】
当業者はまたコンジュゲートさせる選択された物質に応じた様々な技術を用いてコンジュゲートを形成し得ることも認識している。例えば、ビオチンとのコンジュゲートは、例えば、結合ポリペプチドをビオチンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルのようなビオチンの活性化エステルと反応させることにより調製される。同様に、蛍光マーカーとのコンジュゲートは、カップリング剤、例えば本明細書で列挙するものの存在下で、またはイソチオシアネート、好ましくはフルオレセイン−イソチオシアネートとの反応により調製してもよい。抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体のコンジュゲートは、類似の様式で調製される。
【０１４８】
抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子、例えば抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体を、細胞毒、治療剤または放射活性金属イオンのような治療部分とコンジュゲートしてもよい。細胞毒または細胞傷害作用物質としては、細胞にとって有害な任意の物質が挙げられる。
【０１４９】
様々な部分を抗体、例えば抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体にコンジュゲートするための技術は周知であり、例えば、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｒｅｉｓｆｅｌｄら編（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）、２４３〜５６頁の中のＡｍｏｎら（１９８５）「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編（第２版；Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．）、６２３〜５３頁の中のＨｅｌｌｓｔｒｏｍら（１９８７）「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａら編、４７５〜５０６頁の中のＴｈｏｒｐｅ（１９８５）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎら編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、３０３〜１６頁（１９８５）の中の「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」；およびＴｈｏｒｐｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９〜５８頁（１９８２）を参照のこと。
【０１５０】
必要とする被験体にＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子）を調製して投与する方法は、当業者に周知であるかまたは当業者により容易に決定される。ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子）の投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入によっても、または局所的であってもよい。非経口という用語は、本明細書において用いる場合、例えば静脈内、動脈内、腹腔内、筋内、皮下、直腸または経膣投与を包含する。これらの全ての投与の形態は本発明の範囲内であると明確に考えられるが、投与の形態の例は、注射用、特に静脈内もしくは動脈内注射または点滴用の液剤である。通常、注射用の適切な薬学的組成物は、緩衝液（例えば酢酸塩、リン酸塩またはクエン酸塩緩衝液）、界面活性剤（例えばポリソルベート）、場合によって安定化剤（例えばヒトアルブミン）などを含んでもよい。しかし、本明細書における教示に適合する他の方法において、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子）を、有害な細胞集団の部位に直接送達し、それによって疾患組織を治療剤に対してより多く曝露させてもよい。
【０１５１】
本明細書で考察されるように、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子）は、炎症性障害のインビボ治療のため、およびＩｇＡのレベルの増大のために薬学的に有効な量で投与されてもよい。この点について、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子は、投与を容易にし、かつ活性因子の安定性を促進するように処方されると評価される。特定の実施形態では、本発明に従う薬学的組成物は、生理食塩水、非毒性緩衝剤、防腐剤などのような薬学的に許容される非毒性の滅菌担体を含む。本出願の目的のために、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子）の薬学的有効量は、標的との有効な結合を達成するため、および利益を得るため、例えば疾患もしくは障害の症状を改善するか、または物質もしくは細胞を検出するために十分な量を意味するものとする。
【０１５２】
本発明で用いられる薬学的組成物は、例えばイオン交換物質、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩もしくは電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛の塩、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂を含む薬学的に許容される担体を含む。
【０１５３】
非経口投与用の調製物としては、滅菌水性または非水性の液剤、懸濁剤および乳剤が挙げられる。非水性溶剤の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油および注射用有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体としては、例えば食塩水および緩衝溶媒を含む、水、アルコール性／水性溶液、乳化物、懸濁物が挙げられる。本発明において、薬学的に許容される担体としては、限定するものではないが、０．０１〜０．１Ｍ、例えば０．０５Ｍのリン酸塩緩衝液または０．８％食塩水が挙げられる。他の通常の非経口媒体としては、リン酸ナトリウム溶液、リンゲルブドウ糖、ブドウ糖および塩化ナトリウム、乳酸加リンゲルまたは不揮発性油が挙げられる。静脈内用の媒体としては、流体および栄養補充剤、電解質補充剤、例えばリンゲルブドウ糖に基づくものなどが挙げられる。例えば抗菌剤、抗酸化剤、キレート化剤および不活性ガスなどのような防腐剤および他の添加物も存在してもよい。
【０１５４】
より具体的には、注射用に適切な薬学的組成物としては、滅菌水性液剤（水溶性の場合）または分散剤、および滅菌注射用液剤または分散剤の即時調製用の滅菌散剤が挙げられる。このような場合、組成物は滅菌でなければならず、容易に注射可能である程度に流動性であるべきである。これは、製造および貯蔵の条件下で安定であるべきであり、好ましくは、細菌および真菌のような微生物の汚染作用に備えて保存される。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適切な混合物を含有する溶媒または分散媒であってもよい。適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティングを用いることにより、分散剤の場合には要求される粒径を維持することにより、および界面活性剤を用いることにより維持できる。本明細書で開示される治療方法で用いるための適切な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．）第１６版（１９８０）に記載されている。
【０１５５】
微生物の作用の防止は、様々な抗菌および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより達成し得る。特定の場合には、等張剤、例えば糖類、ポリアルコール類、例えばマンニトール、ソルビトールまたは塩化ナトリウムを組成物中に含めることが好ましい。注射用組成物の持続吸収性は、吸収を遅らせる物質、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中に含めることにより得ることができる。
【０１５６】
いずれの場合でも、滅菌注射用液剤は、活性化合物（例えば抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体をそれ自体または他の活性薬剤との組み合わせで）を必要量で、適切な溶剤中に、必要であれば本明細書で列挙する成分の１つまたはその組み合わせとともに組み込み、その後、ろ過滅菌することにより調製できる。一般的に、分散剤は、活性化合物を、塩基性分散媒および上で列挙したものからの必要な他の成分を含有する滅菌媒体中に組み込むことにより調製される。滅菌注射用液剤の調製のための滅菌散剤の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これにより、予めろ過滅菌された溶液から有効成分に加えて任意のさらなる所望の成分との粉末が得られる。注射用の調製物は、加工され、アンプル、バッグ、瓶、シリンジまたはバイアルのような容器に充填され、当技術分野において公知の方法に従って無菌的条件下で密閉される。さらに、調製物は、米国特許出願第０９／２５９，３３７号に記載されるもののようなキットの形態で包装および販売されてもよい。このような製品は、好ましくは、関連する組成物が、疾患もしくは障害に罹患しているかまたはその素因がある被験体を治療するために有用であることを示すラベルまたは添付文書を有する。
【０１５７】
非経口製剤は、単回ボーラス用量、注入または次いで維持用量で続けられる負荷ボーラス用量であってもよい。これらの組成物は、特定の固定もしくは変動性の間隔で、例えば１日１回、または「必要に応じて」投与されてもよい。
【０１５８】
本発明で用いられる特定の薬学的組成物は、例えばカプセル剤、錠剤、水性懸濁剤または液剤を含む許容される剤形で経口投与されてもよい。また特定の薬学的組成物は、鼻エアロゾルまたは吸入により投与されてもよい。このような組成物は、ベンジルアルコールもしくは他の適切な防腐剤、バイオアベイラビリティーを増大するための吸収促進剤および／または他の従来の可溶化もしくは分散化剤を使用する食塩水中の溶液として調製されてもよい。
【０１５９】
単一剤形を生成するために担体材料と組み合わされてもよいＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子）の量は、治療されるホストおよび具体的な投与形態に応じて変動する。組成物は、単回用量、複数回用量または注入で確立された期間にわたって投与してよい。投与計画も、最適な所望の応答（例えば治療または予防応答）を提供するように調整されてもよい。
【０１６０】
本開示の範囲と一致して、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体）は、ヒトまたは他の動物に、上記の治療の方法に従って、治療効果をもたらすために十分な量で投与されてもよい。ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３抗体もしくは抗ＣＸＣＲ５抗体またはその抗原結合フラグメント、改変体もしくは誘導体）は、そのようなヒトまたは他の動物に、活性薬剤を従来の薬学的に許容される担体または希釈剤と公知の技術に従って組み合わせることにより調製される従来の剤形で投与され得る。薬学的に許容される担体または希釈剤の形態および特徴は、それが組み合わされる有効成分の量、投与経路および他の周知の変数により決定されることが当業者により認識される。当業者は、さらに、１つ以上の種のＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子）を含む多剤併用（ｃｏｃｋｔａｉｌ）が特に効果的であると証明され得ることを認識する。
【０１６１】
「治療有効用量または治療有効量」または「有効量」とは、投与されたときに、治療される疾患を有する患者の治療に関して正の治療応答をもたらすＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子）の量を意図する。
【０１６２】
炎症性障害の治療のため、およびＩｇＡレベルの増大のためにＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子の治療有効用量は、投与の手段、標的部位、患者の生理的状態、患者がヒトであるかまたは動物であるか、投与される他の薬物療法および治療が予防的であるかまたは治療的であるかを含む多くの異なる因子に応じて変動する。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物も治療され得る。治療投与量は、安全性および効力を最適化するために、当業者に公知の慣用的な方法を用いて漸増してもよい。
【０１６３】
投与すべき少なくとも１つのＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子）の量は、本発明の開示に鑑みて、過度の実験を行うことなく当業者により容易に決定される。少なくとも１つのＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子）の投与形態およびそれぞれの量に影響する要因としては、限定するものではないが、疾患の重症度、疾患の履歴、ならびに治療を受ける個体の年齢、身長、体重、健康状態および身体状態が挙げられる。同様に、投与されるＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子）の量は、投与の形態および被験体がこの因子の単回用量または複数回用量を投与されるかに依存する。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、投与されるＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子）の用量は、限定するものではないが約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇおよび約１０ｍｇ／ｋｇを含む約０．１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇまでの範囲である。ある実施形態では、投与される用量は、約１ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇである。特定の実施形態では、約４ｍｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇのＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子）が、それを必要とする被験体に投与される。これらの実施形態のいくつかでは、その因子は、腹腔内注射により投与される。
【０１６５】
また本発明は、炎症性障害を治療するため、およびＩｇＡレベルを増大するための医薬品の製造における、ＣＸＣＬ１３活性を阻害する因子（例えば抗ＣＸＣＬ１３結合分子または抗ＣＸＣＲ５結合分子）の使用も提供する。
【０１６６】
本発明の実施は、そうでないと記載しない限り、当業者の技術の範囲内である細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡおよび免疫学の従来の技術を採用する。このような技術は、文献に完全に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら編（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版；Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら編（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇｓ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、ＮＹ）；Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ編（１９８５）ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、第ＩおよびＩＩ巻；Ｇａｉｔ編（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｍｕｌｌｉｓら、米国特許第４，６８３，１９５号；ＨａｍｅｓおよびＨｉｇｇｉｎｓ編（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；ＨａｍｅｓおよびＨｉｇｇｉｎｓ編（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９８７）Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ）（１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｉｓｅ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｙ．）；ＭｉｌｌｅｒおよびＣａｌｏｓ編（１９８７）Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  Ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｗｕら編、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第１５４および１５５巻；ＭａｙｅｒおよびＷａｌｋｅｒ編（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ）；ＷｅｉｒおよびＢｌａｃｋｗｅｌｌ編、（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  Ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第Ｉ〜ＩＶ巻；Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、（１９８６）；ならびにＡｕｓｕｂｅｌら（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．）を参照のこと。
【０１６７】
抗体工学の全般的な原理は、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編（１９９５）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（第２版；Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ）に示されている。タンパク質工学の全般的な原理は、Ｒｉｃｋｗｏｏｄら編（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  ａｔ  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇ．）に示されている。抗体および抗体−ハプテン結合の全般的な原理は、Ｎｉｓｏｎｏｆｆ（１９８４）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第２版；Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．）；およびＳｔｅｗａｒｄ（１９８４）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｔｈｅｉｒ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ（Ｃｈａｐｍａｎ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．）に示されている。さらに、当技術分野において公知であり具体的に記載されない免疫学における標準的な方法は、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｓｔｉｔｅｓら編（１９９４）Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第８版；Ａｐｐｌｅｔｏｎ＆Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ，Ｃｏｎｎ．）ならびにＭｉｓｈｅｌｌおよびＳｈｉｉｇｉ（編）（１９８０）Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ＮＹ）に全般的に従う。
【０１６８】
免疫学の全般的な原理を示す標準的な参照研究としては、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｋｌｅｉｎ（１９８２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｓｅｌｆ−Ｎｏｎｓｅｌｆ  Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆  Ｓｏｎｓ、ＮＹ）；Ｋｅｎｎｅｔｔら編（１９８０）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ）；Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂｕｒｄｅｎら編，（Ｅｌｓｅｖｅｒｅ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）中のＣａｍｐｂｅｌｌ（１９８４）「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」；Ｇｏｌｄｓｂｙら編（２０００）Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｎｏｌｏｇｙ（第４版；Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎｄ＆Ｃｏ．）；Ｒｏｉｔｔら（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第６版；Ｌｏｎｄｏｎ：Ｍｏｓｂｙ）；Ａｂｂａｓら（２００５）Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第５版；Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）；ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｎ）；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ）；Ｌｅｗｉｎ（２００３）Ｇｅｎｅｓ  ＶＩＩＩ（Ｐｒｅｎｔｉｃｅ  Ｈａｌｌ２００３）；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ）；ＤｉｅｆｆｅｎｂａｃｈおよびＤｖｅｋｓｌｅｒ（２００３）ＰＣＲ  Ｐｒｉｍｅｒ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ）が挙げられる。
【０１６９】
「１つの（ａ：不定冠詞）」または「１つの（ａｎ：不定冠詞）」の実体という用語は、１つ以上のその実体を指すことに注意されたい。例えば、「抗ＣＸＣＬ１３抗体」とは、１つ以上の抗ＣＸＣＬ１３抗体を表すと理解される。したがって、「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）、「１つ以上の」および「少なくとも１つの」という用語は、本明細書において相互に交換可能なものとして用いてもよい。
【０１７０】
本明細書で用いる全ての技術的および科学的用語は、同じ意味を有する。用いる数（例えば量、温度など）に関して正確を期するようにしているが、ある程度の実験誤差および偏差が想定されるべきである。
【０１７１】
本明細書および特許請求の範囲を通して、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、文脈がそうでないことを要求する場合以外は非排他的な意味で用いられる。
【０１７２】
本明細書において用いる場合、ある数値を言及する場合の「約」という用語は、いくつかの実施形態では明記する量から±５０％、いくつかの実施形態では±２０％、いくつかの実施形態では±１０％、いくつかの実施形態では±５％、いくつかの実施形態では±１％、いくつかの実施形態では±０．５％およびいくつかの実施形態では±０．１％の変動を包含することを意味する（そのような変動は、開示する方法を行うかまたは開示する組成物を採用するために適切であるためである）。
【０１７３】
ある範囲の値を示す場合、その範囲内の上限と下限との間の、下限の単位の１０分の１までのそれぞれの介在する値（文脈がそうでないことを明らかに指図しない限り）、およびその言及される範囲の任意の他の言及される値または介在する値は、本明細書に包含されると理解される。より小さい範囲内に独立して含まれ得るこれらの小範囲の上限および下限も、言及する範囲内の任意の具体的に除外される限界に依存して、本発明に包含される。言及する範囲が一方または両方の限界を含む場合、これらの含まれる限界のいずれかまたは両方を除外する範囲も、本発明に包含される。
【０１７４】
以下の実施例は、限定のためではなく説明のために提供される。
【０１７５】
＜実験＞
実施例１．Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ感染についてのマウスモデルにおける抗ＣＸＣＬ１３抗体の評価
Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ感染のマウスモデル。Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ種、例えば、Ｈ．ｈｅｉｌｍａｎｎｉｉおよびＨ．Ｐｙｌｏｒｉは、患者において胃のＭＡＬＴリンパ腫を誘発する。Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ誘発性胃リンパ濾胞のマウスモデルは、Ｎｏｂｕｔａｎｉら（２０１０）ＦＥＭＳ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ６０：１５６〜１６４頁（これは、その全体が参照により本明細書に援用される）に記載された。Ｎｏｂｕｔａｎｉらのマウスモデルは、本明細書において、感染負荷（その組織における細菌の力価を意味する）を低減することにおける抗ＣＸＣＬ１３抗体の影響を試験するために用いられた。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（ｎ＝５）をＨ．ｓｕｉｓに経口感染させた。感染後１週目に開始して、マウスにアイソタイプ抗体コントロール（ＭＡｂ２５１０）または抗ＣＸＣＬ１３抗体（ＭＡｂ５３７８）のいずれかを毎週、１２週間にわたって０．６ｍｇ（ｉ．ｐ．）投与した。
【０１７６】
Ｈ．ｓｕｉｓ感染の１２週後、マウスを屠殺した。マウスからの胃サンプルを、Ｈ．ｓｕｉｓでの感染の相対レベルの指標として、Ｈ．ｓｕｉｓ特異的１６ｓ−ｒＲＮＡ遺伝子の発現についてＰＣＲによって評価した。Ｈ．ｓｕｉｓ特異的１６ｓ−ｒＲＮＡ遺伝子ＰＣＲプライマーを下に示す：
Ｆ：５’−ＴＴＧＧＧＡＧＧＣＴＴＴＧＴＣＴＴＴＣＣＡ−３’（配列番号２２）
Ｒ：５’−ＧＡＴＴＡＧＣＴＣＴＧＣＣＴＣＧＣＧＧＣＴ−３’（配列番号２３）
【０１７７】
ＰＣＲ増幅反応は、１単位のＴａｑ  ＤＮＡポリメラーゼ（日本、大阪、東洋紡）を含有する１×反応緩衝液［２０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１００ｍＭのＫＣｌ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＤＴＴ、０．５％Ｔｗｅｅｎ−２０、０．５％Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ４０および５０％グリセロール］；１０ｎｍｏｌの各デオキシヌクレオチド三リン酸；１０ｐｍｏｌの各オリゴヌクレオチドプライマー；ならびに１μｌの希釈ＤＮＡ（これは、およそ２０〜１００ｎｇ／μｌのＤＮＡ濃度の元のサンプルの１：１０希釈により調製した）を５０μｌの最終容量中に含んだ。１６ｓ  ｒＲＮＡ反応についてのサイクル条件は、９４℃にて３０秒間、５６℃にて３０秒間および７２℃にて３０秒間を３５サイクル含んだ。
【０１７８】
抗ＣＸＣＬ１３抗体は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒに感染したマウスの力価を低下する。ＣＸＣＬ１３抗体またはアイソタイプコントロール抗体で治療したＨ．ｓｕｉｓ感染マウスの胃粘膜中のＨ．ｓｕｉｓの相対数を、リアルタイム定量的ＰＣＲによって決定した。図１のこれらの結果によって、抗ＣＸＣＬ１３抗体で治療した感染マウスの胃におけるＨ．ｓｕｉｓの力価の低下が示される。
【０１７９】
抗ＣＸＣＬ１３抗体は、Ｈ．ｓｕｉｓに感染したマウスの胃のリンパ濾胞中でＴＧＦ−βおよびＩＬ−６を誘発する。アイソタイプコントロールまたは抗ＣＸＣＬ１３抗体（ｍＡｂ５３７８）による治療後のＨ．ｓｕｉｓ感染マウスの胃粘膜中のＴＧＦ−βおよびＩＬ−６のｍＲＮＡのｍＲＮＡ発現レベルを、逆転写ＰＣＲによって決定した。胃の粘膜および粘膜下層を、筋層および漿膜から取り外し、次いで、１ｍｌのＴＲＩＺＯＬ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とともにホモジナイズした。ＲＮＡを、製造業者の使用説明に従ってホモジネートから抽出した。ＲＮＡを、製造業者のプロトコールに従ってＨｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いる逆転写反応に供し、定量的ＰＣＲは、製造業者の指示に従って、Ｐｏｗｅｒ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ  （Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて行った。ＲＮＡ発現レベルの相対的な比較を可能にするために、定量的ＰＣＲ由来のデータを、内因性コントロールとしてβアクチンｃＤＮＡの量に対して正規化した。定量的ＰＣＲについて用いられた特定のプライマー対（日本、札幌、北海道システムサイエンス株式会社）は以下のとおりであった。
【０１８０】
ＴＧＦ−βセンス５’−ＴＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＡＴＣＡＣＡＡＣＴＴＣＡ−３’（配列番号２４）
ＴＧＦ−βアンチセンス５’−ＣＡＣＴＧＡＴＡＣＧＣＣＴＧＡＧＴＧＲ−３’（配列番号２５）  
ＩＬ−６センス  ５’−ＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＡＡＴＣＧＡＡＡ−３’（配列番号２６）
ＩＬ−６アンチセンス５’−ＧＡＧＧＡＴＡＣＣＡＣＴＣＣＣＡＡＣＡＧＡＣＣ−３’（配列番号２７）
β−アクチンセンス５’−ＡＴＣＡＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＴＴＧＣＡＣ−３’
（配列番号２８）
β−アクチンアンチセンス５’−ＡＡＧＧＣＣＡＡＣＣＧＴＧＡＡＡＡＧＡＴ−３’（配列番号２９）。
【０１８１】
定量的リアルタイムＰＣＲは、製造業者の指示に従って、１ｍｌのＴＲＩＺＯＬ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて胃の粘膜および粘膜下層をホモジナイズすること、およびそのホモジネートからＲＮＡを抽出することを包含した。次いで、ＲＮＡを、製造業者の指示に従って、Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いて逆転写反応に供し、定量的リアルタイムＰＣＲを、製造業者の指示に従って、Ｐｏｗｅｒ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）およびＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７５００  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いて行った。ＲＮＡ発現レベルの相対的比較を可能にするために、リアルタイムＰＣＲ由来のデータを内因性コントロールとしてβアクチンｃＤＮＡの量に対して正規化した。
【０１８２】
図２Ａおよび図２Ｂは、アイソタイプコントロールまたは抗ＣＸＣＬ１３抗体（Ｍａｂ５３７８）で治療後のＨ．ｓｕｉｓ感染マウスの胃における、それぞれ、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−６のｍＲＮＡの発現を示す。これらの結果によって、アイソタイプコントロールで治療したマウスおよび未感染のマウスと比較して、抗ＣＸＣＬ１３抗体で治療したＨ．ｓｕｉｓ感染マウスにおける、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−６のｍＲＮＡの両方の発現が有意に増大していることが示される。興味深いことに、未感染のマウスの胃におけるＴＧＦ−βおよびＩＬ−６の発現レベルはまた、抗ＣＸＣＬ１３抗体（ＭＡｂ５３７８）（データ示さず）での治療によって有意に誘導された。
【０１８３】
ＴＧＦ−βおよびＩＬ−６は、ＩｇＡの発現レベルを増大し得るので、これらの結果により、Ｈ．ｓｕｉｓ特異的なＩｇＡがＨ．ｓｕｉｓ感染のマウスの胃において抗ＣＸＣＬ１３抗体治療で増加され得ることが示唆された。従って、抗ＣＸＣＬ１３抗体を用いるＨ．ｓｕｉｓ感染マウスの治療は、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−６依存性経路の活性化を通じてＨ．ｓｕｉｓ特異的なＩｇＡを誘導することを介して、Ｈ．ｓｕｉｓコロニー形成の阻害をもたらしたのかもしれない。
【０１８４】
抗ＣＸＣＬ１３抗体治療は、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒに感染したマウスにおける胃のリンパ濾胞中でＩｇＡ分泌を増大する。Ｈ．ｓｕｉｓ感染の３か月後のマウスの胃を大弯で切除して開口した。感染していない野性型マウス、アイソタイプコントロールおよび抗ＣＸＣＬ１３抗体（ＭＡｂ５３７８）治療マウス由来の胃のサンプルの免疫蛍光染色によって、ＩｇＡおよびアクチンについて（データ示さず）、コントロール治療に比較して抗ＣＸＣＬ１３抗体で治療したＨ．ｓｕｉｓ感染マウスでの胃のリンパ濾胞におけるＩｇＡ分泌の増大が示された。
【０１８５】
Ｈ．ｓｕｉｓ感染後のマウスの血清および胃液中の抗Ｈ．ｓｕｉｓ特異的ＩｇＧおよびＩｇＡのレベル。血清および胃液中のＨ．ｓｕｉｓ特異的ＩｇＧを検出するために、胃液を、１６，０００×ｇで、５分間４℃で遠心分離して、得られた上清を収集した。血清を、１５，０００×ｇで１０分間４℃で遠心分離することによって血液から分離した。９６ウェルプレートを１００μｇ／ｍｌのＨ．ｐｙｌｏｒｉ溶解液を含有する１００μｌの重炭酸溶液（ｐＨ９．６）を用いて４℃で一晩コーティングして、ＢＳＡの１．５％（重量／容積）ＰＢＳ溶液の添加によって１時間３７℃でブロックした。血清および胃液（それぞれ、１：２００および１：１５に希釈）を、プレートに添加し、続いて、０．２％（重量／容積）ＢＳＡおよび抗マウスＩｇＡを含有するＰＢＳＴ中で１：５．０００希釈した１００μｌのＨＲＰコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を添加した。結合した抗体を、ｏ−フェニレンジアミン基質の添加によって検出し、４９０ｎｍでの吸光度の測定を行った。
【０１８６】
Ｈ．ｓｕｉｓ感染したマウスの血清および胃液中の抗Ｈ．ｓｕｉｓ特異的ＩｇＧおよびＩｇＡのレベルを測定した。図３Ａおよび図４Ａは、抗Ｈ．ｓｕｉｓ特異的ＩｇＧはＨ．ｓｕｉｓ感染によって血清および胃液中で誘導されるが、抗ＣＸＣＬ１３抗体（ＭＡｂ５３７８）およびアイソタイプコントロール抗体で治療したマウスの血清または胃液における抗Ｈ．ｓｕｉｓ特異的ＩｇＧのレベルには相違がなかったことを示す。図３Ｂおよび図４Ｂは、抗Ｈ．ｓｕｉｓ特異的なＩｇＡが、Ｈ．ｓｕｉｓ感染によって血清および胃液中で誘導されることを示す。抗ＣＸＣＬ１３抗体およびアイソタイプコントロール抗体で治療したマウスの血清中の抗Ｈ．ｓｕｉｓ種特異的ＩｇＡのレベルには相違がなかったが、抗Ｈ．ｓｕｉｓ特異的なＩｇＡのレベルは、アイソタイプコントロール抗体で治療したマウスに比較して、抗ＣＸＣＬ１３抗体の胃液中で有意に高い。これらの結果によって、感染した組織の炎症細胞によって産生されるＣＸＣＬ１３の阻害は、感染性因子に特異的なＩｇＡの増大を生じ、かつ細菌感染のクリアランス向上に関連することが実証される。
【０１８７】
具体的な実施形態についての前述の記載は、本発明の全般的な性質を完全に明らかにするので、他者は、当技術分野における技術の範囲内の知識を用いることにより、過度の実験を行うことなく、本発明の全般的な概念から逸脱することなく、このような具体的な実施形態の様々な応用のために容易に改変および／または適合できる。したがって、このような適合および改変は、本明細書で示す教示および手引きに基づいて、開示される実施形態の等価物の意味および範囲内であるものとする。本明細書における言葉使いおよび術語は、説明を目的としており、限定を目的とはしないので、本明細書の術語または言葉使いは、教示および手引きに鑑みて当業者により解釈されると理解されるべきである。
【０１８８】
本明細書に示される本発明の多くの改変および他の実施形態は、前述の詳細な説明および関連の図面に示される教示の利点を有する、これらの発明が属する当該分野の当業者に思い浮かぶ。したがって、本発明は、開示された特定の実施形態に限定されないこと、ならびにその改変および他の実施形態は添付の特許請求の範囲内に含まれることが理解されるべきである。本明細書においては特定の用語を使用しているが、それらの用語は、一般的かつ記述的な意味で用いられるに過ぎず、限定の目的ではない。
【０１８９】
本明細書で言及される全ての刊行物および特許出願は、本発明が属する当該技術における当業者の水準を示す。全ての刊行物および特許出願は、あたかも各々の個々の刊行物または特許出願が具体的かつ個別に参照により援用されるように示されるのと同じ程度に、参照によって本明細書に援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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