(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
生菌体を含有する水相と、油脂、ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル、およびシュークロースアセトイソブチレートを含有する油相とを混合して得られるＷ／Ｏ型エマルジョンが、親水性乳化剤を含有する水相に均一に分散されてなる、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの生菌剤であって、前記ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルは、トリ、テトラ、ペンタ、ヘキサ、ヘプタ、オクタ、ノナ、およびデカグリセリンからなる群より選ばれるいずれか１種のポリグリセリンの含量が、ポリグリセリン組成中３５重量％以上であり、該ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルの含有量が前記油脂１００重量部に対して、０．５〜１０重量部、該シュークロースアセトイソブチレートの含有量が前記油脂１００重量部に対して、０．５〜５０重量部である、生菌剤。
【請求項２】
Ｗ／Ｏ型エマルジョンと親水性乳化剤を含有する水相の重量比（Ｗ／Ｏ型エマルジョン：親水性乳化剤を含有する水相）が、０．５：９９．５〜６０：４０である、請求項１記載の生菌剤。
【請求項３】
請求項１または２記載の生菌剤を含有する飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は生菌剤に関するものである。より詳しくは、本発明は、生菌体を死滅、失活させることなく安定化させた状態で胃を通過させ、腸まで到達させることのできる生菌剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、乳酸菌等の人体にとって有用な作用を及ぼす生菌体は、食品、医薬品分野で幅広く利用されている。生菌体が生体に対して効果を発揮するためには、未変性の状態で胃を通過し、小腸または大腸まで到達させなければならない。しかし、通常胃の内部はｐＨ１〜２の強酸性であり、また胃液中に存在する消化酵素の働きにより、生菌体は胃の中で死滅、失活し効用を失ってしまう。そこで生菌体に耐酸性を付与し、胃中で安定化させ腸内で吸収させるべく様々な製剤化技術が検討されている。
【０００３】
従来からの技術として、ビフィズス菌の生菌体液を最内水相とするＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの利用により最内水相のビフィズス菌を安定化させる方法（特許文献１参照）や、ビフィズス菌の生菌体液を内水相とするＷ／Ｏ型エマルジョンを作成し、このＷ／Ｏ型エマルジョンを多価金属塩溶液に均一に分散し、該分散液と被膜形成溶液とを接触反応させてゲル状被膜を形成させ最内水相を安定化させる方法（特許文献２参照）等が知られている。しかし、これらはいずれの場合もＷ／Ｏ型エマルジョン作成時に親油性乳化剤として、モノグリセリン脂肪酸エステルまたはポリグリセリン脂肪酸エステルを使用していることから、Ｗ／Ｏ型エマルジョンの十分な物理的強度が得られず、乳化安定性、耐酸性の点において欠点があった。
【０００４】
前記欠点に対する手段としては、例えば、本出願人は先に、親油性乳化剤としてポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルを使用する生菌剤を提案している（特許文献３参照）。
【特許文献１】特開昭６２−２２０１８６
【特許文献２】特開平１−２２８４５６
【特許文献３】特開２００３−３３４０６２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、特許文献３における生菌剤は、液状の飲食品に使用された場合に生菌体を内封したエマルジョン粒子（Ｗ/Ｏ型乳化粒子）が分離しやすいために、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの安定性が損なわれやすくなり、長期的な保存には比較的適さないという点において欠点があった。
【０００６】
従って本発明の目的は、生菌体を、胃液の影響により死滅、失活させることなく、腸内に到達させることができる優れた生菌剤、および該生菌剤を含有する飲食品を提供することにある。また、長期保存後であっても、胃液中で長時間にわたって生体菌が死滅、失活しない生菌剤、および該生菌剤を含有する飲食品を提供することにある。更に、液状の飲食品に含有されても、該飲食品においてＷ／Ｏ型乳化粒子が分離しづらく、安定した状態で長期保存できる生菌剤および該生菌剤を含有する飲食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記の目的を達成するために鋭意研究した結果、本発明を完成した。即ち本発明は、
[１]   生菌体を含有する水相と、油脂、ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル、およびシュークロースアセトイソブチレートを含有する油相とを混合して得られるＷ／Ｏ型エマルジョンが、親水性乳化剤を含有する水相に均一に分散されてなる、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの生菌剤であって、前記ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルは、トリ、テトラ、ペンタ、ヘキサ、ヘプタ、オクタ、ノナ、およびデカグリセリンからなる群より選ばれるいずれか１種のポリグリセリンの含量が、ポリグリセリン組成中３５重量％以上であり、該ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルの含有量が前記油脂１００重量部に対して、０．５〜１０重量部、該シュークロースアセトイソブチレートの含有量が前記油脂１００重量部に対して、０．５〜５０重量部である、生菌剤；
[２]    Ｗ／Ｏ型エマルジョンと親水性乳化剤を含有する水相の重量比（Ｗ／Ｏ型エマルジョン：親水性乳化剤を含有する水相）が、０．５：９９．５〜６０：４０である、[１]記載の生菌剤；ならびに
[３]   [１]または[２]記載の生菌剤を含有する飲食品
に関する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、生菌体を、胃液の影響により死滅、失活させることなく、腸内に到達させることができる生菌剤、および該生菌剤を含有する飲食品を提供することができる。また、長期保存後であっても、胃液中で長時間にわたって生体菌が死滅、失活しない生菌剤、および該生菌剤を含有する飲食品を提供することができる。更に、液状の飲食品に含有されても、該飲食品においてＷ／Ｏ型乳化粒子が分離しづらく、安定した状態で長期保存できる生菌剤、および該生菌剤を含有する飲食品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の生菌剤は、トリ、テトラ、ペンタ、ヘキサ、ヘプタ、オクタ、ノナ、およびデカグリセリンからなる群より選ばれるいずれか１種のポリグリセリンの含量が、ポリグリセリン組成中３５重量％以上であるポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル、ならびにシュークロースアセトイソブチレート（ショ糖酢酸イソ酪酸エステルであり、以下、ＳＡＩＢと表記する場合がある）を含有することを１つの大きな特徴とする。また、好ましくは、該生菌剤は、生菌体を含有する水相と、油脂、前記ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル、および前記ＳＡＩＢを含有する油相とを混合してＷ／Ｏ型エマルジョンを得、次いで該Ｗ／Ｏ型エマルジョンを、親水性乳化剤を含有する水相に均一に分散させて得られる、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンである。
【００１０】
本発明の生菌剤は、ＳＡＩＢを含有することから、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの最外水相におけるＷ／Ｏ型乳化粒子の分離を抑制することができるため、安定した状態での長期保存が可能である。また、更に、本発明の生菌剤においては、親油性乳化剤として、トリ、テトラ、ペンタ、ヘキサ、ヘプタ、オクタ、ノナ、およびデカグリセリンからなる群より選ばれるいずれか１種のポリグリセリンの含量が、ポリグリセリン組成中３５重量％以上であるポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルが使用されることから、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの二重乳化安定性に優れ、そのため、長期保存後であっても、酸性下で安定して生菌体を最内水相に維持することができる。よって、本発明の生菌剤は、上記したような優れた効果を奏することができる。
【００１１】
本発明において、生菌体として用いられる微生物は特に限定されるものではないが、例えば、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍｏｒｉｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｉａｃｅｔｙｌａｃｔｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、 Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｃｒｅｍｏｒｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｕｇｕｒｔｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍのような乳酸菌や、Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ、Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ、Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ、Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ、Ｂ．ｂｒｅｖｅ、Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｂ．ａｎｉｍａｌｉｓのようなビフィズス菌、各種アルコール、食酢、醤油、味噌、納豆、パン類等の発酵に利用されている、カビ類、酵母類、キノコ類、バクテリオファージのような一般工業用微生物などが挙げられ、これらは１種で、又は２種以上の混合物として使用される。本発明においては、これらの中でも、社会的需要の観点から、各種乳酸菌若しくは各種ビフィズス菌、又はこれらの２種以上の混合物が好適に用いられる。
【００１２】
本発明において、生菌体を含有する水相（本明細書中において、内水相、または最内水相という場合がある）は、例えば前記のような生菌体を含む水溶液として調製することができる。例えば、生菌体が好ましくは１０３〜１０１４個／ｇ、より好ましくは１０４〜１０１３個／ｇ、更に好ましくは１０６〜１０１２個／ｇの濃度で含まれるように培養された培養液を、生菌体を含有する水相として用いることができる。ここで、培養液としては、生菌体として使用するそれぞれの微生物に対して従来汎用されているものを使用すればよい。
【００１３】
本発明において油相として使用される油脂としては、特に限定されるものではないが、例えば米油、菜種油、パーム油、ヤシ油、紅花油、乳脂、大豆油、コーン油、綿実油、ヒマワリ油、オリーブ油、マカデミヤナッツ油、亜麻仁油、シソ油、魚油、ＤＨＡ油、ＥＰＡ油などの未水素添加油脂が挙げられる。また、米油、菜種油、パーム油、ヤシ油、紅花油、大豆油、コーン油、綿実油、ヒマワリ油、オリーブ油などの植物油脂を水素添加した硬化油；乳脂、牛脂、豚脂、羊脂、馬油、チキン油などの動物油脂を水素添加した硬化油；魚油、イカ油などの水産動物油を水素添加した硬化油などが挙げられる。また、前記未水素添加油脂と前記硬化油とを混合した油脂が挙げられる。また、前記の動植物油脂の部分水素添加硬化油、前記の動植物油脂をエステル交換又は分画して得られた油脂、ＭＣＴ（中鎖脂肪酸トリグリセリド）等の合成油脂、ミツロウ、パラフィンワックスなどが挙げられる。本発明において、前記したこれらの油脂は単独で用いることもでき、また、２種以上の油脂を混合して用いることもできる。また、ショートニングなどの可塑性油脂を用いることもできる。これらの油脂の中では、酸化安定性の観点から、ヤシ油、乳脂、オリーブ油、マカデミヤナッツ油などが好ましく、また、ω3系脂肪酸を含むことから、魚油、亜麻仁油なども好ましい。
【００１４】
また、後述するように、Ｗ／Ｏ型エマルジョンおよびＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの調製は生菌体を死滅させない程度の温度で行うことが好ましいために、本発明に使用される油脂は、後述のようなＷ／Ｏ型エマルジョンおよびＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの好ましい調製温度以下で固化する油脂であることが好ましい。
【００１５】
本発明において使用されるポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルは、トリ、テトラ、ペンタ、ヘキサ、ヘプタ、オクタ、ノナ、およびデカグリセリンからなる群より選ばれるいずれか１種のポリグリセリンの含量が、ポリグリセリン組成中３５重量％以上であり、好ましくは４０重量％以上であり、さらに好ましくは５０重量％以上であることを特徴とする。かかるポリグリセリン組成を有するポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルを使用すれば、長期保存後もＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの二重乳化安定性が良く、生菌体を最内水相に安定して存在させることができるために、好ましい。ここで、ポリグリセリン組成中３５重量％以上含有されるポリグリセリンの種類としては、トリグリセリン以上の重合度のものが好ましく、テトラグリセリン以上の重合度のものがより好ましく、ペンタグリセリン以上の重合度のものが更に好ましい。
【００１６】
また、本発明に使用されるポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルにおける縮合リシノレイン酸の縮合度は、２〜８であることが好ましく、６〜８であることがより好ましい。かかる範囲の縮合度を有する縮合リシノレイン酸を使用すれば、耐酸性に優れた安定なＷ／Ｏ型エマルジョンを得ることができるために好ましい。
【００１７】
本発明の生菌剤における、ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルの含有量は特に限定されるものではないが、酸性下でもＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを安定に保持する観点、および風味に悪影響を及ぼさない観点から、油相として使用される前記のような油脂１００重量部に対して、０．５〜１０重量部であることが好ましく、０．５〜５重量部であることがより好ましく、０．５〜３重量部であることが更に好ましい。
【００１８】
尚、トリ、テトラ、ペンタ、ヘキサ、ヘプタ、オクタ、ノナ、およびデカグリセリンからなる群より選ばれるいずれか１種のポリグリセリンの含量が、ポリグリセリン組成中３５重量％以上であるポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルは、例えば、以下のようにして得ることができる。
【００１９】
まず、以下のようにして精製ポリグリセリンを調製する。公知技術によって合成されたポリグリセリンを、例えば、分子蒸留精製法、水蒸気キャリアを使用する減圧蒸留法、疑似移動床型液体クロマトグラフィー法などを用いて精製することによって、トリ、テトラ、ペンタ、ヘキサ、ヘプタ、オクタ、ノナ、およびデカグリセリンからなる群より選ばれるいずれか１種のポリグリセリンの含量が３５重量％以上である精製ポリグリセリンを得ることができる。尚、ポリグリセリンの精製方法については、上記方法に限定されるものではない。
【００２０】
得られた精製ポリグリセリンを、例えば、トリメチルシリル化して誘導体化する。次いでＧＣ（ガスクロマトグラフィー）法にて分離定量を行い、面積法を用いることによって、精製ポリグリセリンの組成を測定し、確認することができる。ＧＣ法による分析は、例えばメチルシリコーンなどの低極性液相を化学結合させた、フューズドシリカキャピラリー管を用いて、１００〜３２０℃まで１０℃／分の昇温分析を行うことによって容易に実施することができる。また、ガスクロマトグラム上のピークの同定は、例えばガスクロマトグラフを二重収束マススペクトログラフに導入しケミカルアイオニゼーションなどの方法によりイオン化して測定し、次にその親イオンの分子量よりガスクロマトグラム上のピークの分子量を求め、更に化学式よりグリセリンの重合度を求めることにより簡単に行うことができる。
【００２１】
前記のようにして得られた、トリ、テトラ、ペンタ、ヘキサ、ヘプタ、オクタ、ノナ、およびデカグリセリンからなる群より選ばれるいずれか１種のポリグリセリンの含量が３５重量％以上である精製ポリグリセリンを、リシノレイン酸を前記のような好ましい縮合度で縮合して得られた縮合リシノレイン酸と、通常法にてエステル化することによって、本発明に用いられるポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルを得ることができる。また、本発明のポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルにおけるポリグリセリンの組成分析は、通常法に従い、該ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルの加水分解を行って水溶性画分を分離し、前記のようなポリグリセリンの分析法を用いることで、確認することができる。
【００２２】
本発明において使用されるシュークロースアセトイソブチレート（ＳＡＩＢ）としては、例えば、一般的に香料の比重調整剤として使用され、食品添加物として製造されているものを使用することができ、例えばイーストマンケミカルプロダクト社から入手することができる。本発明の生菌剤におけるＳＡＩＢの含有量としては、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの最外水相におけるＷ／Ｏ型エマルジョンの分離をより抑制する観点から、油相として使用される油脂１００重量部に対して、０．５〜５０重量部が好ましく、１〜３０重量部がより好ましく、５〜２０重量部が更に好ましい。
【００２３】
本発明の生菌剤は、例えば、それぞれ前記のような、生菌体を含有する水相と、油脂、ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル、およびＳＡＩＢを含有する油相とを混合してＷ／Ｏ型エマルジョンを得、次いで該Ｗ／Ｏ型エマルジョンを、親水性乳化剤を含有する水相に均一に分散させることによって、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンとして得ることができる。Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンである本発明の生菌剤の調製方法の一例を、以下に示す。
【００２４】
まず、Ｗ／Ｏ型エマルジョンを、例えば以下のように調製することができる。前記のような油脂を、好ましくは５０〜８０℃、より好ましくは６０〜８０℃、さらに好ましくは７０〜８０℃に加温して液状にする。液状にした油脂に、前記のようにして得られたポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルおよびＳＡＩＢを、前記の好ましい含有量となるように加え、混合、攪拌することによって油脂中に均一に分散させて油相を調製する。ここで、攪拌には、例えばプロペラ攪拌機、ディスクダービンやパドル多段翼などの攪拌機、ホモミキサーなどの高速回転乳化分散攪拌機などを用いることができる。攪拌の強さおよび攪拌時間は、ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルおよびＳＡＩＢが油脂中に均一に分散されるように、適宜調整されればよい。
【００２５】
前記のように調製された油相を３０〜３５℃に冷却し、次いで、該油相中に前記のような生菌体を含有する水相を逐次添加し、混合、攪拌することによって油相中に分散させてＷ／Ｏ型エマルジョンを調製する。ここで、生菌体を含有する水相と油相との混合割合については、目的に応じて異なるため一概には言えないが、重量比で、水相：油相＝９：１〜１：９程度であることが好ましい。ここで、攪拌には、例えばホモミキサー等の攪拌機を用いることができる。Ｗ／Ｏ型エマルジョンを調製するための混合、攪拌時の温度については、例えば、生菌体として乳酸菌を使用する場合、その耐熱性を考慮すると、好ましくは４５℃以下、より好ましくは３０〜４０℃、更に好ましくは３０〜３５℃である。かかる温度範囲内であれば、Ｗ／Ｏ型エマルジョン調製時においても生菌体を死滅、失活させないために好ましい。
【００２６】
また、Ｗ／Ｏ型エマルジョンを調製する際の攪拌時間および攪拌の強さは、例えば、生菌体として乳酸菌を使用する場合、Ｗ／Ｏ型エマルジョンにおける内水相の平均径が好ましくは５〜５０μｍ、より好ましくは５〜３０μｍ、さらに好ましくは５〜１０μｍ程度となるように設定することが望ましい。かかる内水相の平均径の範囲内であれば、内水相が微小な水滴となりすぎず、各水滴中に生菌体がきちんと内封されるために好ましい。かかる条件を得るためには、例えば、３５℃でＴＫホモミキサー（特殊機化工業製）を用いて混合、攪拌を行う場合は、１０００〜３００００ｒｐｍで１〜３０分程度の条件で行えばよい。ここで、内水相の平均径は、例えば光学顕微鏡（倍率１００〜５００倍）で観察することによって求めることができる。
【００２７】
前記のようにして得られたＷ／Ｏ型エマルジョンを、例えば、親水性乳化剤を含有する水相（本明細書中において、外水相または最外水相という場合がある）に添加し、混合、攪拌することによって該水相中に均一に分散させて、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンである本発明の生菌剤を得ることができる。
【００２８】
本発明において使用される親水性乳化剤としては、特に限定されるものではないが、例えば、シュガーエステル、レシチン、ポリグリセリン脂肪酸エステル等が挙げられる。また、親水性乳化剤とともにカゼンナトリウム、ゼラチンなどの蛋白質やキサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ペクチンなどの増粘多糖類を併用することもできる。ここで、親水性乳化剤を含有する水相としては、例えば、前記のような親水性乳化剤が、好ましくは０．０３〜１０重量％、より好ましくは０．０５〜５重量％、更に好ましくは０．１〜３重量％含有された水溶液を使用することができる。
【００２９】
前記のようにして得られたＷ／Ｏ型エマルジョンを、例えば、３０〜３５℃に保温し、次いで直ちに前記のような親水性乳化剤を含有する水相（外水相）に添加して、ホモミキサー等の攪拌機もしくはホモジナイザー等の乳化機を用いて混合、攪拌することによって均一に分散させることができる。ここで、Ｗ／Ｏ型エマルジョンと親水性乳化剤を含有する水相との混合割合としては、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの安定性と油脂含量の観点から、重量比で、Ｗ／Ｏ型エマルジョン：親水性乳化剤を含有する水相＝０．５：９９．５〜６０：４０が好ましく、１：９９〜４０：６０がより好ましく、１：９９〜２０：８０が更に好ましい。
【００３０】
Ｗ／Ｏ型エマルジョンを、親水性乳化剤を含有する水相に均一に分散させる際の温度条件としては特に限定するものではないが、生菌体として乳酸菌を使用する場合、その耐熱性を考慮すると、好ましくは４５℃以下、より好ましくは３０〜４５℃、さらに好ましくは３０〜３５℃である。かかる温度範囲内であれば、Ｗ／Ｏ型エマルジョン調製時においても生菌体を死滅、失活させないために好ましい。
【００３１】
また、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを調製する際の攪拌時間および攪拌の強さは、例えば、生菌体として乳酸菌を使用する場合、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンにおける最内水相の平均径が好ましくは５〜５０μｍ、より好ましくは５〜３０μｍ、さらに好ましくは５〜１０μｍ程度となるように設定することが望ましい。かかる平均径の範囲内であれば、最内水相が微小な水滴となりすぎず、また、各水滴中に生菌体がきちんと内封されるために好ましい。かかる平均径を得るための条件を具体的に例示すれば、例えば、３５℃でＴＫホモミキサーを用いて混合、攪拌を行う場合は、１００００ｒｐｍで１分程度、調製すればよい。ここで、内水相の平均径は、前記と同様、例えば光学顕微鏡（倍率１００〜５００倍）で観察することによって求めることができる。
【００３２】
上述のようにしてＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを形成した場合には、混合、攪拌が終了後、直ちに３０℃以下に冷却すると、Ｗ／Ｏ型エマルジョン滴の安定したＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを得ることができるために、好ましい。
【００３３】
上記のような方法により、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンである本発明の生菌剤を得ることができる。本発明の生菌剤は、例えば、飲食品および医薬品の分野で利用することができる。
【００３４】
本発明の生菌剤を含有する飲食品は、例えば、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンである本発明の生菌剤を上記のようにして別途調製し、既存の飲料や食品に加えることによって製造することができる。また、飲料または液状の食品の場合は、本発明におけるＷ／Ｏ型エマルジョンを直接飲食品中に分散させて、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンである飲食品として製造されてもよい。後者のようにＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンとして製造され得る飲食品としては、例えば、乳飲料、発酵乳、乳酸菌飲料、ヨーグルト飲料、ヨーグルト、フルーツヨーグルト、豆乳ヨーグルト、マヨネーズ、果汁飲料、野菜ジュース、ゼリー、プリン、炭酸飲料、栄養補給飲料等が挙げられる。本発明の飲食品の製造方法は特に限定されるものではなく、汎用される食品の製造方法を利用すればよい。なお、飲食品中に含有される本発明の生菌剤の含有量は、特に限定されるものではなく、所望の量の生菌体が摂取されるように、目的に応じて適宜設定されればよい。
【００３５】
以下に実施例を示して本発明とその効果を更に具体的に説明するが、本発明はこれらに制限されるものではない。なお、以下の実施例において、特に明記しない場合、「％」は全て「重量％」を表すものとする。
【実施例】
【００３６】
実施例１：ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル（ペンタグリセリン含量４２％）の調製
５リットル四ツ口フラスコにグリセリン３０００ｇと５０％水酸化ナトリウム水溶液を３０ｇ入れ、窒素気流下で１００Torrの圧力で水を除去しながら２４０℃まで加熱し、３３時間そのまま保持して、ポリグリセリン反応物１６３０ｇを得た。得られたポリグリセリン反応物を、イオン交換樹脂を使用して脱NaOH処理した。該処理物についてトリメチルシリル化し、ガスクロマトグラフィーにより測定したところ、得られたポリグリセリン反応物のポリグリセリン組成は、グリセリン８％、重合度２（ジグリセリン）のポリグリセリン１１％、重合度３（トリグリセリン）のポリグリセリン１３％、重合度４（テトラグリセリン）のポリグリセリン１５％、重合度５（ペンタグリセリン）のポリグリセリン２０％、重合度６以上のポリグリセリン２０％、環状ポリグリセリン１３％であった。また、該ポリグリセリン反応物の水酸基価は８９０であった。
【００３７】
得られたポリグリセリン反応物を原料として、ナトリウム型のスルフォン酸基を有するイオン交換樹脂を充填したカラム４本を用いて疑似移動床型液体クロマトグラフィーを行い、ポリグリセリン分画物を得た。得られたポリグリセリン分画物の組成について、トリメチルシリル化してガスクロマトグラフィーにより測定したところ、重合度２（ジグリセリン）のポリグリセリン３％、重合度３（トリグリセリン）のポリグリセリン５％、重合度４（テトラグリセリン）のポリグリセリン１０％、重合度５（ペンタグリセリン）のポリグリセリン４５％、重合度６以上のポリグリセリン３２％、環状ポリグリセリン５％であった。また、該ポリグリセリン分画物の水酸基価は８８５であった。１リットル四ツ口フラスコに、リシノレイン酸５６０ｇ、水酸化ナトリウム０．７ｇを入れ、窒素気流下で生成水を除去しながら、２００℃で４時間縮合させ、縮合リシノレイン酸を得た。得られた縮合リシノレイン酸を冷却し、前記ポリグリセリン分画物１４０ｇを仕込み、窒素気流下で生成水を除去しながら、２００℃で反応してポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルを得た。得られたポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルを加水分解し、水溶性分部に対して通常処理を行って、ガスクロマトグラフィーにより測定したところ、得られたポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルのポリグリセリン組成中における、重合度５（ペンタグリセリン）のポリグリセリン含量は４２％であった。（ここで得られたポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルを、以降、実施例１で得られた縮合リシノレイン酸ペンタグリセリンという場合がある。なお、実施例１で得られた縮合リシノレイン酸ペンタグリセリンは、太陽化学製 サンソフト＃８１８Rとしても供給されている。）
【００３８】
比較例１：ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル（ペンタグリセリン含量２０％）の調製
実施例1で得られたポリグリセリン反応物を用いて、疑似移動床型液体クロマトグラフィーによる分画精製は行わずに、ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルを調製した。すなわち、グリセリン８％、重合度２（ジグリセリン）のポリグリセリン１１％、重合度３（トリグリセリン）のポリグリセリン１３％、重合度４（テトラグリセリン）のポリグリセリン１５％、重合度５（ペンタグリセリン）のポリグリセリン２０％、重合度６以上のポリグリセリン２０％、環状ポリグリセリン１３％のポリグリセリン反応物（水酸基価８９０）を用いて次の反応を行った。１リットル四ツ口フラスコに、リシノレイン酸５６０ｇ、水酸化ナトリウム０．７ｇを入れ、窒素気流下で生成水を除去しながら、２００℃で４時間縮合させ、縮合リシノレイン酸を得た。得られた縮合リシノレイン酸を冷却し、上記ポリグリセリン反応物１４０ｇを仕込み、窒素気流下で生成水を除去しながら、２００℃で反応してポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルを得た。得られたポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルを加水分解し、水溶性分部に対して通常処理を行って、ガスクロマトグラフィーにより測定したところ、ここで得られたポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルのポリグリセリン組成中における、重合度５（ペンタグリセリン）のポリグリセリンは２０％であった。
【００３９】
実施例２：ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル（ペンタグリセリン含量４２％）およびＳＡＩＢを含有するドリンクヨーグルトの調製
サフラワー油（日清オイリオ製）２００ｇに実施例1で得られた縮合リシノレイン酸ペンタグリセリン（ペンタグリセリン含量４２％、太陽化学製 サンソフト＃８１８R）５ｇとＳＡＩＢ（シュークロースアセトイソブチレート、イーストマンケミカルプロダクト社製）１０ｇを加え、８０℃に加温してホモミキサー（特殊機化工業製）で３０００ｒｐｍ、５分間処理し、十分に分散溶解させ、その後３５℃まで冷却した。ビフィドバクテリウム・ロンガム（ＡＴＣＣ−１５７０７）をブリックスリバーブロス中で培養した生菌体液（４．４×１０８個／ｇ）３００ｇを、上記分散液に逐次添加し、ホモミキサー（特殊機化工業製）で５０００ｒｐｍ、５分間処理し、乳化させて、Ｗ／Ｏ型エマルジョンを得た。次いで、ペンタグリセリンモノステアリン酸エステル（太陽化学製 サンソフトＡ−１８１Ｅ）１．５ｇを添加したドリンクヨーグルト１５００ｇに、３５℃の温度下で上記Ｗ／Ｏ型エマルジョン５００ｇを添加し、ホモミキサー（特殊機化工業製）で１００００ｒｐｍ、１分間処理して乳化を行い、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを得た。その後、得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを、５℃で２週間保存した。
【００４０】
比較例２：ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル（ペンタグリセリン含量４２％）を含有するドリンクヨーグルトの調製
サフラワー油（日清オイリオ製）２１０ｇに実施例1で得られた縮合リシノレイン酸ペンタグリセリン（ペンタグリセリン含量４２％、太陽化学製 サンソフト＃８１８R）５ｇを加え、８０℃に加温して、ホモミキサー（特殊機化工業製）で３０００ｒｐｍ、５分間処理し、十分に分散溶解させ、その後３５℃まで冷却した。ビフィドバクテリウム・ロンガム（ＡＴＣＣ−１５７０７）をブリックスリバーブロス中で培養した生菌体液（４．４×１０８個／ｇ）３００ｇを上記分散液に逐次添加し、ホモミキサー（特殊機化工業製）で５０００ｒｐｍ、５分間処理して乳化させ、Ｗ／Ｏ型エマルジョンを得た。次いで、ペンタグリセリンモノステアリン酸エステル（太陽化学製 サンソフトＡ−１８１Ｅ）１．５ｇを添加したドリンクヨーグルト１５００ｇに、３５℃の温度下で上記Ｗ／Ｏ型エマルジョン５００ｇを添加し、ホモミキサー（特殊機化工業製）で１００００ｒｐｍ、１分間処理して乳化を行い、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを得た。その後、該Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを５℃で２週間保存した。
【００４１】
比較例３：ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル（ペンタグリセリン含量２０％）およびＳＡＩＢを含有するドリンクヨーグルトの調製
サフラワー油（日清オイリオ製）２００ｇに比較例1で得られた縮合リシノレイン酸ペンタグリセリン（ペンタグリセリン含量２０％、太陽化学製 サンソフト＃８１８Ｈ）とＳＡＩＢ（シュークロースアセトイソブチレート、イーストマンケミカルプロダクト社製）１０ｇを加え、８０℃に加温して、ホモミキサー（特殊機化工業製）で３０００ｒｐｍ、５分間処理し、十分に分散させ、その後３５℃まで冷却した。ビフィドバクテリウム・ロンガム（ＡＴＣＣ−１５７０７）をブリックスリバーブロス中で培養した生菌体液（４．４×１０８個／ｇ）３００ｇを上記分散液に逐次添加し、ホモミキサー（特殊機化工業製）で５０００ｒｐｍ、５分間処理して乳化させ、Ｗ／Ｏ型エマルジョンを得た。次いで、ペンタグリセリンモノステアリン酸エステル（太陽化学製 サンソフトＡ−１８１Ｅ）１．５ｇを添加したドリンクヨーグルト１５００ｇに、３５℃の温度下で上記Ｗ／Ｏ型エマルジョン５００ｇを添加し、ホモミキサー（特殊機化工業製）で１００００ｒｐｍ、１分間処理して乳化を行い、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを得た。その後、該Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを、５℃で２週間保存した。
【００４２】
試験例１：各ドリンクヨーグルトにおける生菌数測定試験
胃液中の強酸下を想定し、実施例２、比較例２および比較例３で得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョン状態のドリンクヨーグルト（ｐＨ４．２）に塩酸を加えてｐＨ１．５に調整し、ラボスターラー（アズワン製）で２００ｒｐｍ、３７℃の条件下で攪拌し、処理時間ごとにビフィドバクテリウム・ロンガムの生菌数を測定した。結果を表１に示す。なお上記生菌数の測定は、全国発酵乳・乳酸菌飲料協会の「発酵乳・乳酸菌飲料中のビフィズス菌の検出と菌数測定法」に基づいて行った。
【００４３】
【表１】
0004751143.tif 000002
【００４４】
表１より明らかなように、実施例２で得られた本発明品のドリンクヨーグルトは、２週間保存後も、比較例２および３と比較して２週間保存後でも油滴に分離がなく、更に又塩酸液中においてもビフィドバクテリウム・ロンガムの生存率が高いことがわかった。
【００４５】
実施例３：ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル（ペンタグリセリン含量４２％）およびＳＡＩＢを含有するＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの調製
オリーブ油（日清オイリオ製）２９０ｇに実施例1で得られた縮合リシノレイン酸ペンタグリセリン（ペンタグリセリン含量４２％、太陽化学製 サンソフト＃８１８R）７ｇとＳＡＩＢ（シュークロースアセトイソブチレート、イーストマンケミカルプロダクト社製）１０ｇを加え、８０℃に加温して、ホモミキサー（特殊機化工業製）で３０００ｒｐｍ、５分間処理して十分に分散溶解させ、その後３５℃まで冷却した。脱脂粉乳１２％、酵母エキス０．４％、グルコース４％からなる液体培地にラクトバチルス・アシドフイラス（ＪＣＭ１１３２）を植菌し、３７℃で２４時間、静置培養した。この培養菌体液２００ｇを上記分散液に逐次添加し、ホモミキサー（特殊機化工業製）で９０００ｒｐｍ、５分間処理して乳化させ、Ｗ／Ｏ型エマルジョンを得た。次いで、ペンタグリセリンモノステアリン酸エステル（太陽化学製 サンソフトＡ−１８１Ｅ）５ｇを添加した７％ショ糖水溶液１０００ｇに、３５℃の温度下で上記Ｗ／Ｏ型エマルジョン５００ｇを添加し、ホモミキサー（特殊機化工業製）で５０００ｒｐｍ、１分間処理して乳化を行い、その後５℃に冷却し、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを得た。該Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの菌数をＭＲＳ培地において測定したところ、２．５×１０8個／ｍｌであった。
【００４６】
比較例４：ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル（ペンタグリセリン含量４２％）を含有するＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの調製
オリーブ油（日清オイリオ製）３００ｇに実施例1で得られた縮合リシノレイン酸ペンタグリセリン（ペンタグリセリン含量４２％、太陽化学製 サンソフト＃８１８R）７ｇを加え、８０℃に加温してホモミキサー（特殊機化工業製）で３０００ｒｐｍ、５分間処理して十分に分散溶解させ、その後３５℃まで冷却した。脱脂粉乳１２％、酵母エキス０．４％、グルコース４％からなる液体培地にラクトバチルス・アシドフイラス（ＪＣＭ１１３２）を植菌し、３７℃で２４時間、静置培養した。この培養菌体液２００ｇを上記分散液に逐次添加し、ホモミキサー（特殊機化工業製）で９０００ｒｐｍ、５分間処理して乳化させＷ／Ｏ型エマルジョンを得た。次いで、ペンタグリセリンモノステアリン酸エステル（太陽化学製 サンソフトＡ−１８１Ｅ）５ｇを添加した７％ショ糖水溶液１０００ｇに、３５℃の温度下で上記Ｗ／Ｏ型エマルジョン５００ｇを添加し、ホモミキサー（特殊機化工業製）で５０００ｒｐｍ、１分間処理して乳化を行い、その後５℃に冷却し、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを得た。このＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの菌数をＭＲＳ培地において測定したところ２．５×１０8個／ｍｌであった。
【００４７】
比較例５：ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル（ペンタグリセリン含量２０％）およびＳＡＩＢを含有するＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの調製
オリーブ油（日清オイリオ製）２９０ｇに比較例1で得られた縮合リシノレイン酸ペンタグリセリン（ペンタグリセリン含量２０％、太陽化学製 サンソフト＃８１８Ｈ）７ｇとＳＡＩＢ（シュークロースアセトイソブチレート、イーストマンケミカルプロダクト社製）１０ｇを加え、８０℃に加温してホモミキサー（特殊機化工業製）で３０００ｒｐｍ、５分間処理して十分に分散溶解させ、その後３５℃まで冷却した。脱脂粉乳１２％、酵母エキス０．４％、グルコース４％からなる液体培地にラクトバチルス・アシドフイラス（ＪＣＭ１１３２）を植菌し、３７℃で２４時間、静置培養した。この培養菌体液２００ｇを上記分散液に逐次添加し、ホモミキサー（特殊機化工業製）で９０００ｒｐｍ、５分間処理して乳化させ、Ｗ／Ｏ型エマルジョンを得た。次いで、ペンタグリセリンモノステアリン酸エステル（太陽化学製 サンソフトＡ−１８１Ｅ）５ｇを添加した７％ショ糖水溶液１０００ｇに、３５℃の温度下で上記Ｗ／Ｏ型エマルジョン５００ｇを添加し、ホモミキサー（特殊機化工業製）で５０００ｒｐｍ、１分間処理して乳化を行い、その後５℃に冷却し、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを得た。このＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンの菌数をＭＲＳ培地において測定したところ２．５×１０8個／ｍｌであった。
【００４８】
試験例２：各Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを含有する野菜ジュースにおける生菌数測定試験
実施例３、比較例４、および比較例５で得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョン１５ｇを、それぞれ野菜ジュース３００ｇに添加し、室温にてホモミキサー（特殊機化工業製）で２０００ｒｐｍ、１分間処理し、混合した。各Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを含む野菜ジュースを、５℃で２週間保存した。その後、各Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを含む野菜ジュースを、第１０改正・日本薬局方、溶出試験法の試験液第１液の人工胃液に添加し、ラボスターラー（アズワン製）で２００ｒｐｍ、３７℃の条件下で攪拌し、ＭＲＳ培地で乳酸菌の生菌数を測定した。その結果を表２に示した。
【００４９】
【表２】
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【００５０】
表２より明らかなように、実施例３で得られた本発明品のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルジョンを含む野菜ジュースは、比較例４および比較例５と比較して、２週間保存後でも油滴に分離がなく、更に、人工胃液中でのラクトバチルス・アシドフイラスの生存率が高かった。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明の生菌剤は、例えば乳酸菌などの体内にとって有用な生菌体を、胃液中での強酸性下の影響により、または胃液中に含まれるプロテアーゼにより死滅、失活することなく安定化させ、胃を通過させて、腸まで到達させることができるため、特に食品、医薬品分野に有用である。