(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）で示されるヘテロ環カルボキサミド誘導体又はその塩。
【化１】
0004622047.tif 000027
［式中の記号は以下の意味を有する。
A：置換基を有していてもよい低級アルキレン、置換基を有していてもよいアリーレン、置換基を有していてもよいヘテロアリーレン又は置換基を有していてもよいシクロアルキレン、
X：NR4、
Y及びZ間の点線：結合の存在（Y＝Z）、
Y＝Z：N＝C(R6)、C(R7)＝N、N＝N又はC(R7)＝C(R7)、
R1、R4：H、低級アルキル、−CO−低級アルキル又は−SO2−低級アルキル、
R2：H、低級アルキル、ハロゲン、ハロゲンで置換された低級アルキル、−O−低級アルキル、−S−低級アルキル、−O−アリール、−O−低級アルキレン−アリール、−S−低級アルキレン−アリール、ニトロ又はシアノ基、
R3：−CO2H、−CO2−低級アルキル、−低級アルキレン−CO2H、−低級アルキレン−CO2−低級アルキル、−CONHOH、−CONHO−低級アルキル、−低級アルキレン−CONHOH、−低級アルキレン−CONHO−低級アルキル、−NH2、−（プロドラッグ化されたNH2）、−低級アルキレン−NH2又は−低級アルキレン−（プロドラッグ化されたNH2）、
R6：低級アルキル、−OH、−O−低級アルキル、−O−置換基を有していてもよいアリール、−O−低級アルキレン−置換基を有していてもよいアリール、−NR1−置換基を有していてもよいアリール、−CO−低級アルキル又は−置換基を有していてもよいアリール基、
R7：同一あるいは互いに異なって、H又はR6と同一の基。
ここに、プロドラッグ化されたNH2とは、(Z)-3-[2-(アセトキシ)フェニル]-2-プロペノイルアミノ、(アセトキシ)メトキシカルボニルアミノ、4-アジドベンジルオキシカルボニルアミノ、(5-メチル-2-オキソ-1,3-ジオキソル-4-エン-4-イル)メトキシカルボニルアミノ及び[(2-ヒドロキシフェニル)(フェニル)メチリデン]アミノから選択される基を意味する。］
【請求項２】
XがNR4かつAが低級アルキレン又はシクロアルキレンである請求項１記載の化合物又はその塩。
【請求項３】
Y＝Zが、N＝C(R6)、C(R7)＝N又はC(R7)＝C(R7)である請求項２記載の化合物又はその塩。
【請求項４】
6-(2-アミノエチルアミノ)-2-(3-エチルアニリノ)ピリジン-3-カルボキサミド、6-(2-アミノエチルアミノ)-2-(3-トリフルオロメチルアニリノ)ピリジン-3-カルボキサミド、2-(2-アミノエチルアミノ)-4-ヒドロキシ-6-(3-メチルアニリノ)ピリミジン-5-カルボキサミド、6-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-2-(3-メチルアニリノ)ピリジン-3-カルボキサミド、6-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-2-(3,5-ジメチルアニリノ)ピリジン-3-カルボキサミド、5-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-3-(3-メチルアニリノ)ピラジン-2-カルボキサミド、5-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-3-(3-メトキシアニリノ)ピラジン-2-カルボキサミド、5-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-3-(3-フェノキシアニリノ)ピラジン-2-カルボキサミド、5-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-3-(4-メチルスルファニルアニリノ)ピラジン-2-カルボキサミド、5-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-3-(3,5-ジメトキシアニリノ)ピラジン-2-カルボキサミド、2-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-4-ヒドロキシ-6-(3-メチルアニリノ)ピリミジン-5-カルボキサミド、2-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-4-(3-ブロモアニリノ)-6-ヒドロキシピリミジン-5-カルボキサミド及び2-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-4-(2-クロロフェノキシ)-6-(3-メチルアニリノ)ピリミジン-5-カルボキサミドから選択される請求項１記載の化合物又はその塩。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、医薬、特にSyk阻害剤として有用なヘテロ環カルボキサミド誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】
気管支喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎に代表されるアレルギー疾患において中心的な役割を果たすＩ型（即時型）アレルギー反応は、花粉やハウスダスト等の外来性抗原とそれに特異的なイムノグロブリンＥ（IgE）との相互作用によって開始される事が知られている。IgEは高親和性のIgE受容体（FcεRI）を発現している肥満細胞及び好塩基球の細胞表面に捕獲されており、これに抗原が結合し受容体を架橋すると細胞が活性化され、アナフィラキシー反応を惹起するヒスタミン、セロトニン等の炎症性メディエーターが細胞内分泌顆粒から放出され、また炎症反応の進展に寄与する種々のサイトカイン産生が亢進する事が知られている。
このFcεRI活性化に伴う細胞内シグナル伝達には、少なくとも２種類の細胞質チロシンキナーゼ、すなわち、Lyn（Eiseman, E. 及びBolen, J. B., Nature 355：78-80 (1992)）、及びSpleen tyrosine kinase (Syk)（Taniguchi, T. 等、J. Biol. Chem. 266：15790-15796 (1991)）が関与している事が知られている。Sykは抗原によるFcεRIの架橋後にLynによりチロシンリン酸化され、そのチロシンキナーゼ活性が上昇する事が知られている（Hutchcroft, J. E. 等、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89：9107-9111 (1992)）。さらにFcεRI活性化により惹起される脱顆粒やサイトカイン産生亢進にはSykの活性が必要不可欠である事が示されている（Rivera, V. M. 及びBrugge, J. S., Mol. Cell. Biol. 15：1582-1590 (1995)）。
【０００３】
また、SykのアンチセンスオリゴヌクレオチドはGM-CSFの好酸球延命作用を抑制することから、SykがGM-CSF受容体を介する好酸球の寿命延長シグナルに必須である事が知られている（Yousefi, S. 等、J. Exp. Med. 183:1407-1414 (1996)）。
以上のように、Sykは肥満細胞、好塩基球及び好酸球の機能を制御することで、アレルギー若しくは炎症反応に関与しているとされている。
その他にも、下記の如くSykは種々の疾患への関与が示唆されている。
SykはB細胞抗原受容体刺激によるホスファチジルイノシトール代謝及び細胞内カルシウム濃度の上昇に深く関与し、B細胞の活性化に重要な役割を果たしている事が報告されている（Hutchcroft, J. E. 等、J. Biol. Chem. 267:8613-8619 (1992)及びTakata, M. 等、EMBO J. 13:1341-1349 (1994)）。従って、Syk阻害剤はB細胞の機能を抑制し、B細胞が産生する抗体が関与する疾患の治療剤となりうると考えられる。
【０００４】
また、SykはT細胞抗原受容体に会合し、受容体の架橋により速やかにチロシンリン酸化され活性化される事が報告されている。従って、LckやZAP-70等の他のチロシンキナーゼと協同的に働き、T細胞活性化シグナルに関与する可能性が示されている（Couture, C. 等、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91:5301-5305 (1994)及びCouture, C. 等、Mol. Cell. Biol. 14:5249-5258 (1994)）。
また、Syk欠損マウス由来マクロファージでは、イムノグロブリンＧ（IgG）受容体（FcγR）刺激により惹起される細胞内タンパクのチロシンリン酸化と貪食反応が著しく抑制される事が報告されている（Crowley, M. T. 等、J. Exp. Med. 186:1027-1039 (1997)）。従って、SykはFcγRを介するマクロファージの貪食作用に極めて重要な役割を果たしており、抗体依存性細胞性細胞障害反応（ADCC）により引き起こされる組織障害への関与が示されている。
【０００５】
更に、Syk欠損マウス由来の血小板では、コラーゲンにより誘発されるアラキドン酸やセロトニンの遊離及び血小板凝集が顕著に抑制されていることが報告されており（Poole, A. 等、EMBO J. 16:2333-2341 (1997)）、血栓への関与が示されている。
そして、Syk阻害作用を有する化合物として、下式で示される２−アニリノピリミジン誘導体（WO98／18782号公報）、
【０００６】
【化２】
0004622047.tif 000002
【０００７】
（式中、Arは、置換されてもよい芳香環基を、R2は、H、ハロゲン又は-X1-R2aで表わされる基をそれぞれ示す。その他の記号は当該公報を参照。）
及び、植物由来の天然物であるPiceatannol（Oliver, J. M. 等、J. Biol. Chem. 269：29697-29703 (1994)）が報告されている。
また、置換アミノ基を有するヘテロ環カルボキサミド誘導体として、Indian J. Chem., Sect. B, 16B(10), 932-933 (1978)に下記化合物が
【０００８】
【化３】
0004622047.tif 000003
【０００９】
EP475206及びUS5104877に下記化合物が、
【化４】
0004622047.tif 000004
【００１０】
特開昭49-94677に下記化合物が
【化５】
0004622047.tif 000005
開示されているが、これらの化合物のSykへの作用については開示も示唆もない。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
これまでに報告されたSyk阻害剤は活性が低く、優れたSyk阻害剤の創製が切望されていた。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、Sykを阻害する化合物につき、鋭意検討した結果、ヘテロ環カルボキサミド誘導体が良好なSyk阻害作用を有し、Sykの関与する疾患の予防、治療若しくは診断剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。
即ち、本発明は、下記一般式（Ｉ）で示される新規なヘテロ環カルボキサミド誘導体又はその製薬学的に許容される塩、並びにこれらを有効成分として含む医薬に関する。
【００１３】
【化６】
0004622047.tif 000006
【００１４】
（式中の記号は以下の意味を有する。
A：置換基を有していてもよい低級アルキレン、置換基を有していてもよいアリーレン、置換基を有していてもよいヘテロアリーレン及び置換基を有していてもよいシクロアルキレン又はH、
X：NR4、CONR4、NR4CO、O又はS、
Y及びZ間の点線：結合の存在（Y＝Z）又は非存在（Y−Z）、
Y−Z：N(R5)−C(O)、C(O)−N(R5)、N(R5)−N(R5)又はC(O)−C(O)、
Y＝Z：N＝C(R6)、C(R7)＝N、N＝N又はC(R7)＝C(R7)、
R1、R4：H、低級アルキル、−CO−低級アルキル又は−SO2−低級アルキル、
R2：H、低級アルキル、ハロゲン、ハロゲンで置換された低級アルキル、−O−低級アルキル、−S−低級アルキル、−O−アリール、−O−低級アルキレン−アリール、−S−低級アルキレン−アリール、ニトロ又はシアノ基、
R3：−CO2H、−CO2−低級アルキル、−低級アルキレン−CO2H、−低級アルキレン−CO2−低級アルキル、−CONHOH、−CONHO−低級アルキル、−低級アルキレン−CONHOH、−低級アルキレン−CONHO−低級アルキル、−NH2、−（プロドラッグ化されたNH2）、−低級アルキレン−NH2又は−低級アルキレン−（プロドラッグ化されたNH2）、
R5：H又は低級アルキル基、
R6：低級アルキル、−OH、−O−低級アルキル、−O−置換基を有していてもよいアリール、−O−低級アルキレン−置換基を有していてもよいアリール、−NR1−置換基を有していてもよいアリール、−CO−低級アルキル又は−置換基を有していてもよいアリール基、
R7：同一あるいは互いに異なって、H又はR6と同一の基。以下同様。）
【００１５】
尚、式中Y＝ZがN＝C(R6)、C(R7)＝N、N＝N又はC(R7)＝C(R7)の場合、中心ヘテロ環部
【化７】
0004622047.tif 000007
は次式のいずれかを表し、
【００１６】
【化８】
0004622047.tif 000008
【００１７】
式中Y−ZがN(R5)−C(O)、C(O)−N(R5)、N(R5)−N(R5)又はC(O)−C(O)の場合、中心ヘテロ環部は次式のいずれかを表す。
【化９】
0004622047.tif 000009
上記式において、例えば、N＝C(R6)のR6がOHの化合物とN(R5)−C(O)のR5がHの化合物や、C(R7)＝NのR7がOHの化合物とC(O)−N(R5)のR5がHの化合物のように、互変異性体の存在する場合がある。本発明はそれらの異性体も包含する。
また、本発明によれば、上記ヘテロ環カルボキサミド誘導体又はその塩を含有することを特徴とする医薬組成物、殊にSykチロシンキナーゼ阻害剤が提供される。
【００１８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本明細書中、「低級」なる語は、炭素数１〜６個の直鎖状又は分枝状の炭化水素鎖を意味する。「低級アルキル基」としては、好ましくは炭素数１〜４の低級アルキル基であり、より好ましくは、メチル、エチル及びイソプロピル基である。「低級アルキレン」としては、好ましくは炭素数１〜４個のアルキレンであり、特に好ましくはメチレン、エチレン及びブチレンである。
「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩを示す。「ハロゲンで置換された低級アルキル」としては、好ましくは、フルオロメチル、トリフルオロメチル及びトリフルオロエチル基である。
「アリーレン」、「ヘテロアリーレン」及び「シクロアルキレン」とは、それぞれ「アリール基」、「ヘテロアリール基」及び「シクロアルキル基」より任意の位置の水素原子を除去してなる２価基を示す。
【００１９】
「アリール基」として、好ましくは炭素数６乃至１４個の単環乃至３環式アリール基である。更に好ましくは、フェニル及びナフチル基である。また、フェニル基に５乃至８員のシクロアルキル環が縮環し、例えば芳香環より結合するインダニルや5,6,7,8-テトラヒドロナフチル基を形成していても良い。「アリーレン」として、好ましくは1,2-フェニレン及び1,4-フェニレンである。
「シクロアルキル基」は、好ましくは炭素数３乃至８個のシクロアルキル基であり、「シクロアルキレン」として更に好ましくは、シクロヘキサン-1,1-ジイル、1,2-シクロペンチレン、1,2-シクロヘキシレン及び1,4-シクロヘキシレンである。また、シクロアルキル基にベンゼン環が縮環し、例えば1-もしくは2-インダニルや1,2,3,4-テトラヒドロナフチル基を形成していても良い。
「ヘテロアリール基」としては、O、S及びNから選択されるヘテロ原子を１乃至４個含有する５乃至６員の単環ヘテロアリール基であり、好ましくは、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、チエニル、フリル及びチアゾリル基である。
【００２０】
「置換基を有していてもよい低級アルキレン」、「置換基を有していてもよいアリーレン」、「置換基を有していてもよいヘテロアリーレン」、「置換基を有していてもよいシクロアルキレン」及び「置換基を有していてもよいアリール」における置換基は、これらの環の置換基として用いることができる基であれば特に制限はないが、好ましくは下記の群より選択される基であり、これらの置換基を１〜４個有していてもよい。
−低級アルキル、−ハロゲン、−ハロゲンで置換された低級アルキル、−シクロアルキル、−ヘテロアリール、−含窒素飽和ヘテロ環、−ビニル、−(1-プロペニル)、−エチニル、−OH、−O−低級アルキル、−O−低級アルキレン−アリール、−O−アリール、−O−低級アルキレン−アリール−O−低級アルキル、−S−低級アルキレン−アリール、−S−低級アルキレン−アリール−O−低級アルキル、−CONHOH、−CONH−低級アルキル、−CON(低級アルキル)2、−NO2及び−CN。
【００２１】
また、「プロドラッグ化されたNH2」とは、生理学的条件下において−NH2となる当業者に公知の基を意味し、例えば、Prog. Med., 5, 2157-2161 (1985)や「医薬品の開発」（廣川書店、1990年）第７巻  分子設計163-198に記載の基が挙げられる。好ましくは、(Z)-3-[2-(アセトキシ)フェニル]-2-プロペノイルアミノ、(アセトキシ)メトキシカルボニルアミノ、4-アジドベンジルオキシカルボニルアミノ、(5-メチル-2-オキソ-1,3-ジオキソル-4-エン-4-イル)メトキシカルボニルアミノ及び[(2-ヒドロキシフェニル)(フェニル)メチリデン]アミノであり、他のこの種の当業者に知られた基を包含する。また、OH、COOH等の基のプロドラッグも本発明に包含する。
【００２２】
本発明化合物の内、式（Ｉ）におけるAとしては、好ましくは、低級アルキレン及びシクロアルキレンであり、更に好ましくは、エチレン及びシクロへキシレンである。R3としては、好ましくは、−CO2H、−CO2−低級アルキル、−低級アルキレン−CO2H、−低級アルキレン−CO2−低級アルキル、−NH2、−（プロドラッグ化されたNH2）、−低級アルキレン−NH2又は−低級アルキレン−（プロドラッグ化されたNH2）であり、更に好ましくは、−NH2、−（プロドラッグ化されたNH2）、−低級アルキレン−NH2又は−低級アルキレン−（プロドラッグ化されたNH2）であり、より好ましくは、−NH2又は−（プロドラッグ化されたNH2）である。Xとしては好ましくはNR4である。Y−Z及びY＝Zとしては、好ましくは、N(R5)−C(O)、C(O)−N(R5)、N＝C(R6)、C(R7)＝N及びC(R7)＝C(R7)であり、更に好ましくは、N＝C(R6)、C(R7)＝N及びC(R7)＝C(R7)である。
【００２３】
本発明化合物の内、最も好ましい化合物としては以下の化合物が挙げられる：6-(2-アミノエチルアミノ)-2-(3-エチルアニリノ)ピリジン-3-カルボキサミド、6-(2-アミノエチルアミノ)-2-(3-トリフルオロメチルアニリノ)ピリジン-3-カルボキサミド、2-(2-アミノエチルアミノ)-4-ヒドロキシ-6-(3-メチルアニリノ)ピリミジン-5-カルボキサミド、6-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-2-(3-メチルアニリノ)ピリジン-3-カルボキサミド、6-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-2-(3,5-ジメチルアニリノ)ピリジン-3-カルボキサミド、5-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-3-(3-メチルアニリノ)ピラジン-2-カルボキサミド、5-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-3-(3-メトキシアニリノ)ピラジン-2-カルボキサミド、5-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-3-(3-フェノキシアニリノ)ピラジン-2-カルボキサミド、5-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-3-(4-メチルスルファニルアニリノ)ピラジン-2-カルボキサミド、5-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-3-(3,5-ジメトキシアニリノ)ピラジン-2-カルボキサミド、2-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-4-ヒドロキシ-6-(3-メチルアニリノ)ピリミジン-5-カルボキサミド、2-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-4-(3-ブロモアニリノ)-6-ヒドロキシピリミジン-5-カルボキサミド、2-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-4-(2-クロロフェノキシ)-6-(3-メチルアニリノ)ピリミジン-5-カルボキサミド。
【００２４】
本発明化合物は置換基の種類によっては、幾何異性体や互変異性体が存在する場合があるが、本発明にはこれらの異性体の分離したもの、あるいは混合物を包含する。更に本発明化合物は、不斉炭素原子を有する場合があり、不斉炭素原子に基づく異性体が存在しうる。本発明はこれら光学異性体の混合物や単離されたものを包含する。
【００２５】
また、本発明化合物は、酸付加塩又は置換基の種類によっては塩基との塩を形成する場合もある。かかる塩としては、製薬学的に許容される塩であり、具体的には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マイレン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等の有機酸との酸付加塩、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム等の無機塩基、メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、リジン、オルニチン等の有機塩基との塩やアンモニウム塩等が挙げられる。さらに、本発明は、本発明化合物（Ｉ）及びその塩の各種の水和物や溶媒和物及び結晶多形の物質をも包含する。
【００２６】
（製造法）
本発明化合物及びその製薬学的に許容される塩は、その基本骨格あるいは置換基の種類に基づく特徴を利用し、種々の公知の合成法を適用して製造することができる。その際、官能基の種類によっては、当該官能基を原料ないし中間体の段階で適当な保護基、すなわち容易に当該官能基に転化可能な基に置き換えておくことが製造技術上効果的な場合がある。しかるのち、必要に応じて保護基を除去し、所望の化合物を得ることができる。このような官能基としては例えばアミノ基、水酸基、カルボキシル基等を挙げることができ、それらの保護基としては例えばグリーン（Greene）及びウッツ（Wuts）著、「Protective Groups in Organic Synthesis（第２版）」に記載の保護基を挙げることができ、これらを反応条件に応じて適宜用いればよい。
以下本発明化合物の代表的な製造法を説明する。
第１製法
【００２７】
【化１０】
0004622047.tif 000010
（式中、Ｌは脱離基を示す。他の記号は前記の意味を有する。）
【００２８】
本製法は化合物（II）と化合物（III）を反応させ一般式（Ｉ）で示される本発明化合物を得る方法である。ここで、Ｌの脱離基としては、例えばハロゲン、メチルスルファニル、1H-ベンゾトリアゾール-1-イルオキシ、メチルスルフィニル、メタンスルホニル、メタンスルホニルオキシ、p-トルエンスルホニルオキシ、トリフルオロメタンスルホニルオキシ基等が挙げられる。
反応は無溶媒中もしくはベンゼン、トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン（THF）、ジオキサン等のエーテル類、ジクロロメタン、1,2-ジクロロエタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、N,N-ジメチルホルムアミド（DMF）、N,N-ジメチルアセトアミド(DMA)、N-メチルピロリドン、酢酸エチル、アセトニトリル等反応に不活性な溶媒中、化合物（II）と化合物（III）を等モル乃至一方を過剰量用い、冷却下乃至加熱還流下に行うことができる。反応温度は化合物に応じて適宜設定できる。化合物によっては、有機塩基（好ましくは、ジイソプロピルエチルアミン、N-メチルモルホリン、ピリジン、4-(N,N-ジメチルアミノ)ピリジン）又は金属塩塩基（好ましくは、水素化ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム）の存在下に行うのが有利な場合がある。
第２製法
【００２９】
【化１１】
0004622047.tif 000011
（式中の記号は前記同様。）
【００３０】
本製法はニトリル化合物（IV）のニトリル基を種々の条件下においてカルボキサミド基へと変換し、本発明化合物（Ｉ）を得る方法である。反応は無溶媒若しくは芳香族炭化水素類、エーテル類、ハロゲン化炭化水素類、メタノール、エタノール等のアルコール類、DMF、ピリジン、水、ジメチルスルホキシド（DMSO）等反応に不活性な溶媒中、硫酸、塩酸、臭化水素酸等の鉱酸、ギ酸、酢酸等の有機酸又は水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウムあるいはアンモニア等の塩基存在下、室温乃至加熱還流下行うことが出来る。さらに過酸化水素等の存在下に反応させるのが、反応を円滑に進行させる上で有利な場合がある。反応温度は化合物により適宜設定できる。
【００３１】
原料化合物の製法
本発明化合物の原料化合物（II）及び（IV）は、例えば下記合成経路図に示される公知の反応を用いて常法により製造できる。
製法１
【００３２】
【化１２】
0004622047.tif 000012
（式中、L1は前記Lと同様の脱離基を示す。他の記号は前記同様。）
【００３３】
原料化合物（II）は、化合物（VIII）とアニリン誘導体（IX）との置換反応により製造できる。条件は前記第１製法と同様に行うことができる。
中間体（VIII）は、カルボン酸化合物（VI）を縮合剤（例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（DCC）、ジイソプロピルカルボジイミド（DIPC）、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド（WSC）、1,1'-カルボニルビス-1H-イミダゾール（CDI）等）、場合によっては、更に添加剤（例えば、N-ヒドロキシスクシンイミド（HONSu）、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（HOBt）等）の存在下、アンモニアで処理することにより製造することができる。溶媒としては、例えば、芳香族炭化水素類、エーテル類、ハロゲン化炭化水素類、DMF、ピリジン等が挙げられる。これらの溶媒は単独で、又は２種以上混合して用いられる。
【００３４】
中間体（VI）は、化合物（V）に種々の条件下においてカルボン酸を導入することにより製造できる。反応はエーテル類、ヘキサン等の反応に不活性な溶媒中、塩基性条件下（例えば、n-ブチルリチウム、sec-ブチルリチウム、tert-ブチルリチウム、2,2,6,6-テトラメチルピペリジンリチウム塩（LiTMP）、ジイソプロピルアミンリチウム塩（LDA）等、あるいはこれに反応を補助するN,N,N',N'-テトラメチルエチレンジアミン（TMEDA）、ヘキサメチルフォスフォラミド（HMPA）、DMA等を添加しても良い）においてアニオン化したのち、ドライアイスを加えるもしくは二酸化炭素を吹き込むことにより、−78℃乃至氷冷下行うことが出来る。反応温度は化合物により適宜設定できる。
また、中間体（VIII）は、ニトリル化合物（VII）の加水分解によっても製造できる。条件は、前記第２製法と同様の条件を適用することができる。
【００３５】
【化１３】
0004622047.tif 000013
（式中、L2は前記Lと同様の脱離基又はR6もしくはR7を、R8は−置換基を有していてもよいアリール、−低級アルキレン−置換基を有していてもよいアリール又は−置換基を有していてもよいアリール基を、WはO又はNR1をそれぞれ示す。他の記号は前記同様。）
【００３６】
原料化合物（IVb）は、化合物（IVa）と化合物（XII）を反応させることにより製造できる。芳香族炭化水素類、エーテル類、ハロゲン化炭化水素類、DMF、DMSO、ピリジン等の反応に不活性な溶媒を用い、冷却下乃至加熱下に反応を行う。金属塩塩基存在下に反応させるのが、反応を円滑に進行させる上で有利な場合がある。
原料化合物（IVa）は、化合物（XI）を化合物（III）と反応させることによって製造できる。条件は、前記第１製法と同様に行うことができる。
中間体（XI）は、ニトリル化合物（X）とアニリン誘導体（IX）との置換反応により製造できる。条件は前記第１製法と同様に行うことができる。
また、置換基R1がアルキル、−CO−低級アルキル又は−SO2−低級アルキル基である化合物は、R1がHである化合物を用い常法により製造できる。アルキル基の導入は、ハロゲン化アルキルやアルキルエステルを用い、前記第１製法と同様に行うことができる。−CO−低級アルキル又は−SO2−低級アルキル基の導入は、ハロゲン化炭化水素類、エーテル類、DMF等の不活性溶媒中、冷却下乃至加熱下、酸ハライド法、混合あるいは対称酸無水物法、活性エステル法、縮合剤（DCC、WSC、CDI等）法等により行うことができる。塩基の存在下に反応させるのが、反応を円滑に進行させる上で有利な場合がある。
【００３７】
上記各製法により得られた反応生成物は、遊離化合物、その塩あるいは水和物など各種の溶媒和物として単離され、精製される。塩は通常の造塩処理に付すことにより製造できる。
単離、精製は、抽出、濃縮、留去、結晶化、濾過、再結晶、各種クロマトグラフィー等通常の化学操作を適用して行われる。
各種異性体は異性体間の物理化学的な差を利用して常法により単離できる。例えば、光学異性体は一般的な光学分割法、例えば分別結晶化又はクロマトグラフィー等により分離できる。また、光学異性体は、適当な光学活性な原料化合物より製造することもできる。
【００３８】
【発明の効果】
本発明化合物は医薬製剤の活性成分として有用である。特にSyk阻害作用を有するため、Sykの関与する以下の疾患の予防・治療薬として有用である。アレルギー若しくは炎症反応が主たる病因となる疾患（喘息、鼻炎、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、蕁麻疹、食物アレルギー、結膜炎、春季カタル等）、自己免疫疾患（慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、乾せん等）、癌等、免疫反応が関与する疾患（臓器移植時の拒絶反応、移植片対宿主病等）、ADCCが関与する疾患（自己免疫性溶血性貧血、重症筋無力症等）及び血小板凝集が関与する血栓等。
【００３９】
本発明化合物の作用は以下の薬理試験によって確認された。
１．Sykチロシンキナーゼ阻害試験
１）Syk蛋白質作製：
ヒトSyk遺伝子は、Jurkat細胞より調製したtotal RNAから、3'-末端に８アミノ酸残基から成るFLAGタグの遺伝子を結合させた形で、RT-PCR法を用いてクローニングした。増幅させたcDNAをバキュロウィルス発現システム（GIBCO BRL社）に含まれるベクター、pFASTBAC HTに組み込んだ。pFASTBAC HTはSykの5'-末端にヒスチジン６残基から成るHisタグを融合できる設計になっている。このプラスミドDNAをバキュロウィルス発現システムに含まれるコンピテントセル、DH10BACに形質導入し、組み換えウィルスのDNAを作製した。さらに組み換えウィルスのDNAをSf-9細胞（ATCC社）にトランスフェクションすることにより組み換えウィルス（培養上清）を得た。
この組み換えウィルスを感染させたSf-9細胞を回収し１％Triton X-100を含む溶菌バッファーで細胞を溶解した。可溶性画分を遠心分離した後、上清をTALONレジン（CLONTECH社）と混合し、レジンにSykのHisタグ融合蛋白質を吸着させた。レジンを数回洗浄した後、イミダゾールを含むバッファーでSykのHisタグ融合蛋白質を溶出した。
【００４０】
２）Band 3ペプチド作製：
ヒト赤血球Band 3（Harrison, M. L. 等、J. Biol. Chem. 269：955-959 (1994)）のTyr-8を含む18アミノ酸残基のペプチド（MEELQDDYEDMMEENLEQ）（配列番号：１）をペプチド合成機を用いて合成した。Pierce社のビオチン化キットを用いて、レジンに結合した状態でペプチドのN-末端をビオチン化し、HPLCを用いて精製した。
３）SPA系を用いたSykチロシンキナーゼ活性の測定：
SPA（Scintillation Proximity Assay）とは、Amersham社により開発された、シンチレーターを封入したプラスチックビーズの表面に放射活性を有する分子が近接（結合）した場合にシンチレーションが起こる事を利用したシステムである。このビーズには予めストレプトアビジンがコーティングしてあり、基質ペプチドのビオチン部分がこれに結合するものである。
反応液（組成：0.2 μg Syk、50 mM Tris-HCl (pH 8)、10 mM MgCl2、50 mM NaCl、1 mM DTT、0.4 μM Band 3ペプチド及び0.1 μCi [γ-33P]ATP (10 mCi/ml, Amersham社) 50 μlに、被験化合物のDMSO溶液を、1ウェル当たり2 μl（最終DMSO濃度は4%）添加した。これをOptiPlateTM（PACKARD社）に調製し、室温（20〜25℃）で1時間静置しチロシンリン酸化を行った。
0.25 mg SPAビーズ、50 μM ATP、5 mM EDTA及び1% Triton X-100を含むPBS（反応停止液）を1ウェル当たり150 μl添加して反応を停止させた。
プレートをシールして攪拌し、室温で１５分間静置した後、プレートを1,500回転で３分間遠心し、SPAビーズを沈降させた。TOP COUNT（PACKARD社）を用いて各ウェルの放射活性を測定し、Sykによるチロシンリン酸化活性を算出した。
４）結果：
本発明の実施例化合物はSykに対し、IC50値0.05μM以下の阻害活性を示した。また、カルボキサミド基に置換基を有する比較化合物（2-(2-アミノエチルアミノ)-N-メチル-4-(3-トリフルオロメチルアニリノ)ピリミジン-5-カルボキサミド及び2-(2-アミノエチルアミノ)-N,N-ジメチル-4-(3-トリフルオロメチルアニリノ)ピリミジン-5-カルボキサミド）は、1μMで全く阻害作用を示さなかった。
【００４１】
２．セロトニン遊離試験
Collado-Escobar（Collado-Escobar, D. 等、J. Immunol. 144：3449-3457 (1990)）らにより報告された方法に従った。
実施例１、２、１３、１５及び１６の化合物はセロトニンの遊離に対し、IC50値0.1μM以下の阻害活性を示した。
【００４２】
３．マウス受身皮膚アナフィラキシー反応（PCA）試験
５週齢雄性ICR（CD-1）マウスをエーテルによる軽麻酔下、右耳介皮下に抗ジニトロフェニル-IgE（DNP-IgE）（DNP-IgE産生ハイブリドーマを腹腔内投与したBalb/cマウスの腹水粗精製品を1,000倍希釈したもの）を10 μl皮下投与することにより感作した。感作の24時間後に50 μgのDNP化牛血清アルブミンを含む0.5%エバンスブルー溶液、200 μlを静脈内投与し、さらにその30分後にマウスを放血致死させ両耳を採取した。被験化合物およびコントロールとしてベヒクルのみを抗原チャレンジの30分前に皮下投与あるいは２時間前に経口投与した。組織中の色素はホルムアミドにより抽出し、620 nmで比色定量した。PCA反応により組織に漏出した色素量は右耳の色素含量より左耳の色素含量を除した値を用いた。
被験化合物によるPCA抑制率は次式により計算した。なお、式中、C：ベヒクルのみ投与時PCA反応により組織に漏出した色素量、X：被験化合物投与時PCA反応により組織に漏出した色素量を示す。
抑制率（%）＝（C−X）×100／C
実施例１、２、１３、１５及び１６の化合物はPCA反応を良好に抑制した。
上記の１〜３実験結果より、本発明化合物は炎症性メディエーターの遊離を阻害し、アナフィラキシー反応を抑制、特にSyk阻害作用を有する事が確認され、Sykの関与する疾患の予防・治療薬として有用である事が明らかである。
【００４３】
一般式（Ｉ）で示された化合物又はその塩の１種又は２種以上を有効成分として含有する医薬組成物は、当分野において通常用いられている薬剤用担体、賦形剤等を用いて通常使用されている方法によって調製することができる。投与は錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等による経口投与、又は、静注、筋注等の注射剤、坐剤、点眼剤、眼軟膏、経皮用液剤、軟膏剤、経皮用貼付剤、経粘膜液剤、経粘膜貼付剤、吸入剤等による非経口投与のいずれの形態であってもよい。
本発明による経口投与のための固体組成物としては、錠剤、散剤、顆粒剤等が用いられる。このような固体組成物においては、ひとつ又はそれ以上の活性物質が、少なくともひとつの不活性な希釈剤、例えば乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等と混合される。組成物は、常法に従って、不活性な希釈剤以外の添加剤、例えばステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤や繊維素グリコール酸カルシウムのような崩壊剤、ラクトースのような安定化剤、グルタミン酸又はアスパラギン酸のような溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの糖衣又は胃溶性若しくは腸溶性物質のフィルムで被膜してもよい。
【００４４】
経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に可溶化剤、湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
非経口投与のための注射剤としては、無菌の水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を含有する。水性の溶液剤、懸濁剤としては、例えば注射用蒸留水及び生理食塩液が含まれる。非水溶性の溶液剤、懸濁剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート80（商品名）等がある。このような組成物は、さらに等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えば、ラクトース）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。これらはまた無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解、懸濁して使用することもできる。
【００４５】
経鼻剤等の経粘膜剤としては固体、液体、半固体状のものであり、自体公知の方法に従って製造することができる。例えば公知のpH調整剤、防腐剤、増粘剤や賦形剤が適宜添加され、固体、液体若しくは半固体状に成形される。経鼻剤は通常のスプレー器具、点鼻容器、チューブ、鼻腔内挿入具等を用いて投与される。
通常経口投与の場合、１日の投与量は、体重当たり約0.001から100 mg/kg、好ましくは0.1〜10 mg/kgが適当であり、これを１回であるいは２乃至４回に分けて投与する。静脈投与される場合は、１日の投与量は、体重当たり約0.0001から10 mg/kgが適当で、１日１回乃至複数回に分けて投与する。また、経粘膜剤としては、体重当たり約0.001から10 mg/kgを１日１回乃至複数回に分けて投与する。投与量は症状、年令、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定される。
【００４６】
【実施例】
以下、実施例に基づき本発明を更に詳細に説明する。本発明化合物は下記実施例に記載の化合物に限定されるものではない。また原料化合物の製法を参考例に示す。
参考例１
2,2,6,6-テトラメチルピペリジンのTHF溶液に氷冷下n-ブチルリチウムを加え、更に、2,6-ジクロロピラジンのTHF溶液を-78℃で加えた。30分攪拌後、反応溶液にドライアイスを加え30分攪拌後、1M塩酸を加え、以下常法により精製して、3,5-ジクロロピラジン-2-カルボン酸を得た（淡黄色固体）。FAB-MS: 191 (M-H)-。
【００４７】
参考例２
3,5-ジクロロピラジン-2-カルボン酸に塩化チオニルを加え、30分加熱還流し、溶媒を減圧下留去した。残渣にジクロロメタンを加え、アンモニア水を氷冷下加え１時間攪拌後、以下常法により精製して、3,5-ジクロロピラジン-2-カルボキサミドを得た（淡黄色固体）。FAB-MS: 192 (M+H)+。
参考例３
文献（W. H. Schlichter及びA. W. Frahm、Arch. Pharm., 326, 429-436（1993)）に記載の方法により合成した(1'S,1R,2S)-N-[2-(1'-フェニルエチルアミノ)シクロヘキシルアミノ]ベンズアミド 一塩酸塩に濃塩酸を加え、3日間加熱還流した。以下常法により精製後造塩して、(1'S,1R,2S)-2-(1'-フェニルエチルアミノ)シクロヘキシルアミン 二塩酸塩を得た（無色固体）。FAB-MS: 219 (M+H)+。
【００４８】
参考例４
3,5-ジクロロピラジン-2-カルボキサミドのアセトニトリル溶液に3-メチルアニリン及びN,N-ジイソプロピルエチルアミンを加え17時間加熱還流後、以下常法により精製して、5-クロロ-3-(3-メチルアニリノ)ピラジン-2-カルボキサミドを得た（黄色固体）。
参考例５
6-(3-ブロモアニリノ)-2-[cis-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキシルアミノ]-4-クロロピリミジン-5-カルボニトリルのDMSO溶液に炭酸カリウム及び、31%過酸化水素水を加え、室温下13時間攪拌後、常法により精製して、6-(3-ブロモアニリノ)-2-[cis-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキシルアミノ]-4-ヒドロキシピリミジン-5-カルボキサミドを得た（黄色固体）。
【００４９】
参考例６
2-[cis-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキシルアミノ]-4-クロロ-6-(3-メチルアニリノ)ピリミジン-5-カルボニトリル及びDMFの混合物にo-クロロフェノール及び60%水素化ナトリウムを氷冷下加え、室温下３０分間、７０℃で５時間攪拌後、常法により精製して、2-[cis-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキシルアミノ]-4-(2-クロロフェノキシ)-6-(3-メチルアニリノ)ピリミジン-5-カルボニトリルを得た（無色結晶）。
参考例７
ベンジルアルコールとDMFの混合物に60%水素化ナトリウムを氷冷下加え、この混合物に2-[cis-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキシルアミノ]-6-クロロ-4-(3-メチルアニリノ)ピリミジン-5-カルボニトリルを加え、60℃にて40分間攪拌し、反応液に蒸留水を加え生じた沈殿物を濾取した。この濾物を以下参考例４と同様に処理して、2-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-4-ベンジルオキシ-6-(3-メチルアニリノ)ピリミジン-5-カルボキサミドを得た（無色固体）。
以下、市販の化合物あるいは文献等で公知の化合物を用い、上記の参考例４の方法と同様にして表１又は表２に示す参考例８〜２８の化合物を、参考例５の方法と同様にして表２に示す参考例２９及び３０の化合物を、それぞれ対応する原料を使用して製造した。参考例４〜３０の化合物の構造及び参考例１〜３０の化合物の物理化学的データを表１及び表２に示す。
【００５０】
実施例１
6-クロロ-2-(3-メチルアニリノ)ピリジン-3-カルボキサミド 223 mgとトルエンの混合物にcis-1,2-シクロヘンキサンジアミン 486 mgを加え、５日間加熱還流した。反応混合液を室温に戻し生じた沈殿物を濾取し、6-(cis-2-アミノヘキシルアミノ)-2-(3-メチルアニリノ)ピリジン-3-カルボキサミド  一塩酸塩 172 mgを褐色固体として得た。
実施例２
5-クロロ-3-(3-メチルアニリノ)ピラジン-2-カルボキサミド 605 mgとアセトニトリル 10 mlの混合物にcis-1,2-シクロヘキサンジアミン 2.76 mlを加え、4時間加熱環流した。反応混合液を室温に戻し生じた沈殿物を濾取した。得られた固体をクロロホルム及び2-プロパノールの混合溶媒に溶解し、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をDMF−酢酸エチルの混合溶媒から再結晶して、5-(cis-2-アミノヘキシルアミノ)-3-(3-メチルアニリノ)ピラジン-2-カルボキサミド 230 mgを黄色結晶として得た。
【００５１】
実施例３
2-(cis-2-アミノヘキシルアミノ)-4-ベンジルオキシ-6-(3-メチルアニリノ)ピリミジン-5-カルボキサミド 558 mg、エタノール 10 ml及びTHF 20 mlの混合物に10%パラジウム−炭素粉末 200 mgを加え、常圧水素雰囲気下、室温にて１時間攪拌した。反応混合液に蒸留水を加え濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をエタノール−水の混合溶媒から再結晶して、2-(cis-2-アミノヘキシルアミノ)-4-ヒドロキシ-6-(3-メチルアニリノ)ピリミジン-5-カルボキサミド 267 mgを無色固体として得た。
実施例４
6-(3-ブロモアニリノ)-2-[cis-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ヘキシルアミノ]-4-ヒドロキシピリミジン-5-カルボキサミド 326 mgとメタノール10 mlの混合物に4M塩酸−酢酸エチル溶液5 mlを加えて室温にて12時間攪拌した。反応後、析出物を濾取することにより6-(3-ブロモアニリノ)-2-(cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ)-4-ヒドロキシピリミジン-5-カルボキサミド 110 mgを得た（無色結晶）。
【００５２】
以下、上記の実施例１の方法と同様にして表３に示す実施例５〜７の化合物を、実施例２の方法と同様にして表３に示す実施例８〜１８の化合物を、実施例３の方法と同様にして表３に示す実施例１９〜２１の化合物を、実施例４の方法と同様にして表３に示す実施例２２及び２３の化合物を、それぞれ対応する原料を使用して製造した。実施例１〜２３の化合物の構造及び物理化学的データを表３に示す。
また、表４〜１２に本発明の別の化合物の構造を示す。これらは、上記の製造法や実施例に記載の方法及び当業者にとって自明である方法、又はこれらの変法を用いることにより、容易に合成することができる。
【００５３】
表中、次に示す略号を用いる。また、置換基の前の数字は置換位置を示し、数字が複数個あるものは複数の置換を示す。例えば3,5-Meは3,5-ジメチルを示す。
Rex：参考例番号、Ex：実施例番号、Cmpd：化合物番号、Ph：フェニル、Me：メチル、Et：エチル、tBu：tert-ブチル、Boc：tBuO-CO-、Bn：ベンジル、Ac：アセチル、BCA：cis-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキシルアミノ、PEA：(1'S,1R,2S)-2-(1'-フェニルエチルアミノ)シクロヘキシルアミノ、CCA：cis-2-アミノシクロヘキシルアミノ、ACA：(1R,2S)-2-アミノシクロヘキシルアミノ。Sal：塩（空欄：フリー体；HCl：塩酸塩）、Dat：物理化学的データ（F：FAB-MS(M+H)+；FN：FAB-MS(M-H)-；M：融点（℃）；A：比旋光度[α]D（MeOH））。また、R2が3,4-(CH)4の化合物は、隣接するベンゼン環と一体となって2-ナフチル基を、OCH2Oはメチレンジオキシ基をそれぞれ示す。
【００５４】
【表１】
0004622047.tif 000014
【００５５】
【表２】
0004622047.tif 000015
【００５６】
【表３】
0004622047.tif 000016
【００５７】
【表４】
0004622047.tif 000017
【００５８】
【表５】
0004622047.tif 000018
【００５９】
【表６】
0004622047.tif 000019
【００６０】
【表７】
0004622047.tif 000020
【００６１】
【表８】
0004622047.tif 000021
【００６２】
【表９】
0004622047.tif 000022
【００６３】
【表１０】
0004622047.tif 000023
【００６４】
【表１１】
0004622047.tif 000024
【００６５】
【表１２】
0004622047.tif 000025
【配列表】
0004622047.tif 000026