(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
電気化学的経路によって、導電性担体または担体の導電性領域に固定された、少なくとも一のリガンドを含むマトリックスの製造方法であって、
導電性担体または担体の導電性領域上にリガンドを分配し、前記リガンドを電気重合可能なモノマーに結合させる工程；
リガンドを担持するポリマーの、導電性担体または担体の導電性領域上における電気的に補助された合成によって、前記リガンドを導電性担体または担体の導電性領域上に電気化学的に固定する工程；
を含み、リガンドが、前記リガンドの電気化学的固定のための電極として使用される、少なくとも1つの部品によって分配され、リガンドの分配とリガンドの電気化学的固定とが同時に行われる、方法。
【請求項２】
前記部品が、電気重合可能なモノマーに結合したリガンドを収容し、且つ導電性部分を有する容器からなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記容器が、リガンド挿入及び排出手段を備えてなる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記部品が、ワイヤまたは針形態の電極からなり、電気重合可能なモノマーに結合したリガンドで外部チャージされてなり、電極によって保留されたリガンドの小滴によって、固定操作の間、前記電極と導電性担体または担体の導電性領域との接触が保証される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
同一または相違するリガンドが、同時または連続的に、同一または相違するリガンドをそれぞれ分配する数個の部品を使用することによって、担体の異なる導電性部位上に固定される、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
少なくとも２の部品が、プリントヘッドを形成するためにまとめられてなる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
少なくとも２の異なるリガンドが、連続的に担体の異なる部位に、単一の部品を使用して、この部品によって分配されるリガンドを少なくとも一度交換することによって固定される、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
導線性領域が、絶縁性担体上に配列された導電性物質の領域から形成される、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
導電性物質の領域が、電気的に連結されている、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
導電性物質の前記領域が、別個に活性化できるように、別々またはグループにおいて電気的にアドレス可能である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
導電性物質が、金、銀、白金、インジウム、及び酸化錫（ITO）、炭素及び導電性有機モノマーからなる群より選択される、請求項８乃至１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
各部品が、電気重合可能なモノマーに結合したリガンド、前記電気重合可能なモノマー、及び任意にドーピング剤を含有するリガンドの溶液を分配する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
電気重合可能なモノマーが、ピロールである、請求項１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
リガンドの固定が、モノマーと前記モノマーに結合したリガンドとの電気共重合によって得られる、請求項１または１３に記載の方法。
【請求項１５】
リガンドが、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、アミノ酸またはペプチドである、請求項１乃至１４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明の主題は、担体上におけるアドレスリガンドの製造方法である。
リガンドは、生物学的活性あるいは、生物学的分子もしくは他の分子、例えばペプチド、オリゴヌクレオチド、レセプターまたは生物学的に重要な他の分子に対する親和性を有する、天然または合成の生成物である。このタイプのマトリックスは、多数の応用、特に生物学的試料中の構成物の検出及び識別のため、及び分子ライブラリーのスクリーニングのための応用を見出しうる。こうしたマトリックスは、特にオリゴヌクレオチドプローブのマトリックスであってもよい。
【０００２】
【従来の技術】
ここ数年、このタイプのマトリックスの製造のための数種類の方法が開発されている。アドレスを、光化学経路または機械的経路または電気化学的経路のいずれかによって行う、三つの方法論が既知である。
【０００３】
Fodor S.らによる文献、Science, 1991, 251, pages 767-773[1]には、光化学アドレスによるオリゴヌクレオチドのマトリックスの製造のための方法が記載されている。この方法によれば、使用される担体は、感光保護基によって保護された官能基によって官能化されており；これらの保護基を、その後生物学的に重要な分子に結合させようとする部分へのマスクを通した照射によって除去し、その後これらの分子を、脱保護した官能基に結合させる。
【０００４】
光化学アドレスのこの方式は、全てのカップリング操作を実行するために、多数の異なるマスクを必要とするという欠点を有する。
【０００５】
文献：Khrapko K. R. et al, DNA Sequence-I. DNA Sequencing and Mapping, 1991, volume 1, pages 375 to 388[2]及びＧＢ-Ａ-２３１９８３８[３]には、機械的アドレスによってマトリックスを製造するための方法が記載されている。文献[２]においては、ヒドラジン基によって所定のアミド基を置換することによって活性化されたポリアクリルアミドゲルで被覆された担体が使用されている。アルデヒド形態で活性化されたオリゴヌクレオチドを、オリゴヌクレオチド溶液を結合させようとする部位に微量ピペットすることによって、ヒドラジン基に固定する。
【０００６】
文献[３]においては、反応性基によって官能化され、同一の生物分子に結合した担体が使用されている。その後、担体を、各々が分子の結合に対応する個別のプラークに切分し、所望の部位に異なる分子を担持する幾つかのプラークを、連続してプレート上に並べる。
【０００７】
これらの機械的アドレス技術の使用は、アドレスしようとする部位に、固定しようとする分子を直接運ばねばならないという欠点を有する。したがって、部位のサイズは、分配される試薬の小滴サイズより小さくてはならない。また、該方法は、それぞれ分配相及び、共有結合相である、二つの相を要する。また該担体は、該担体と固定しようとする分子との間に共有結合が形成されるように変性されねばならない。
【０００８】
文献：Livache T. et al, Nucleic Acids Res., 1994, 22, 15, pages 2915-2921[４]及びＷＯ-Ａ-９４／２２８８９[５]には、生物学的生成物のマトリックスを製造するための電気化学的アドレス技術が記載されている。
【０００９】
この場合は、数個の電極を含む担体が使用され、これらの電極が電気化学的経路によって生物学的分子を固定するために使用される。この目的のために、その電極を取り付けた担体を、固定しようとする分子を含有する溶液中に浸し、所望の電極の活性化によってこれらを電気化学的経路により前記分子で被覆する。このため、分子のデポジットは、連続的方式においてのみ行うことができる。さらにまた、個別にアドレス可能な電極を担持する担体を使用することが必要であり、従って複雑になる可能性のある複合システムを使用することが必要である。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の主題は、担体上に生物学的生成物のマトリックスを製造するための方法であって、これは上述の方法の欠点を矯正し、これによれば、さらに、生物学的分子のアドレス及び固定を、予め担体を官能化する必要なしに単一の段階で行うことが可能なものである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
この目的のため、本発明は、電気化学的経路によって、導電性担体または担体の導電性領域に固定された少なくとも一のリガンドを含むマトリックスの製造方法において、電極として作用する電気重合可能なモノマーに結合させた前記リガンドを分配して、前記リガンドを担持するポリマーの、導電性担体または担体の導電性領域上における、電気的に補助された合成を達成することができる、少なくとも一の部品を使用する工程を含む方法を提示する。
【００１２】
本発明によれば、このように、部品がリガンドを分配することのできる電極として使用される。この部品は、電気重合可能なモノマーに結合したリガンドを収容し、導電性部分を含む容器からなるものであっても、あるいは単に、電気重合可能なモノマーに結させ、固定しようとするリガンドを収容する容器中に浸した後、毛管現象によってこのリガンドでチャージされる、ワイヤまたは針の形態の電極からなるものであってもよい。
【００１３】
本発明による前記部品からなる電極を使用することによって、前記リガンドを導電性担体または担体の導電性領域と接触させておき、その後これを電気化学的活性化、例えば電位差を設定することまたは導電性担体（または導電性領域）と電極として作用する部品との間に電流を発生させることによって、導電性担体（または導電性領域）に直接固定することが可能である。
【００１４】
したがって、担体へのリガンドの分配及び固定は、単一の段階中において行われる。
【００１５】
本発明の第一の実施態様によれば、前記部品は、リガンドで充填され、絶縁性分配ノズル及び前記容器中に並べられた少なくとも一の電極を備えた容器を含み、前記ノズルは、固定操作の間は導電性担体、または少なくとも一の担体の導電性領域と直接接触している。
【００１６】
ノズルは特に、導電性表面上に直接おかれた毛管であってもよい。
【００１７】
本発明の第二の実施態様によれば、前記部品は、リガンドで満たされ、導電性分配ノズルを備えた容器を含み、前記導電性ノズルと導電性担体と導電性担体または少なくとも一の担体の導電性領域との接触は、固定操作の間にノズルから放出されるリガンドの小滴を介して保証される。
【００１８】
この場合は、導電性ノズルは、導電性担体または導電性領域と接触してはいない。前述のように、導電性ノズルは、毛管から形成されていてよい。
【００１９】
本発明の第三の実施態様によれば、前記部品は、ワイヤまたは針形態の電極からなり、電気重合可能なモノマーに結合したリガンドで外部チャージされ、前記電極と導電性担体または担体の導電性領域との接触は、電極によって保留されたリガンドの小滴によって、固定操作の間保証される。
【００２０】
上記の様々な実施態様において、容器は通常、固定しようとするリガンド及び、電気化学的経路によって任意にリガンドの固定を保証する必要があってもよい試薬の溶液を収容する。
【００２１】
本発明によれば、リガンドの電気化学的固定は、特にこれを電気重合可能なモノマーに結合させることによって行われる。この場合は、該溶液は、電気重合可能なモノマーに結合したリガンド、電気化学重合可能なモノマー、及び任意にドーピング剤を含有してもよい。
【００２２】
電気重合可能なモノマーは、特にEmr S. and Yacynych A., Electroanalysis, 1995, 7, pp. 913-923[７]に記載されたものの一つであってよい。これらは、ピロール、アニリン、チオフェン等の導電性ポリマーに至るものと、フェノールまたはベンゼンの誘導体等の絶縁性ポリマーに至るものとの二つのカテゴリーに属する。
【００２３】
この場合は、リガンドの固定は、モノマーと前記モノマーに結合したリガンドとの電気重合によって達成される。
【００２４】
リガンドは、例えば、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、アミノ酸またはペプチドであって良い。
【００２５】
電気化学的固定の前記方法は、オリゴヌクレオチドまたはヌクレオチドであるリガンドについて、文献[５]に記載されている。
【００２６】
この後者の場合において、固定を行った後、固定したオリゴヌクレオチドまたはヌクレオチドの鎖は、所望のヌクレオチドの連続的結合により、但し固定した最後のヌクレオチドの電気化学的脱保護を行うことにより、オリゴヌクレオチドのための従来の合成方法の適用によって延長することができる。
【００２７】
ペプチドについては、所望のアミノ酸を結合させることによるペプチドの鎖を延長させるための同様の技術を使用することができる。
【００２８】
電気化学的経路によるリガンドのデポジット及び固定を達成するための、上記の電極の使用は、以下の利点を有する：
・デポジット及び固定の操作は、単一の工程において行われ、非常に迅速である。
・この技術は、単に機械的デポジット技術、例えば微量ピペットを使用する移動等を使用するため、容易に実行されるが、これは電気化学の空間分解の可能性を伴う。
・この技術によれば、平行して幾つかのデポジットを行うことが可能である。
・また、この方法は変性された、または個別にアドレス可能な電極を担持する担体の使用を必要としない。
【００２９】
導電性物質中の担体としては、これらを完全に電気的伝導性の物質で製造しても、またはこれらを導電性物質の層で被覆された絶縁性物質製としてもよい。
【００３０】
使用可能な導電性物質は、様々なタイプのものであってよく、金、銀及び白金等の金属、またはインジウム及び酸化錫（ITO）等の導電性酸化物、炭素または導電性有機ポリマーであってよい。
【００３１】
担体が導電性領域を含むならば、これらは上述の導電性物質で製造され、絶縁性担体上に配列されてもよい。
【００３２】
絶縁性担体は、例えばガラス、ケイ素またはプラスチック材料製であっても良い。その導電性領域が、該導電性物質の表面上への絶縁性物質のデポジットにより区切られている、導電性物質の担体を使用することもまた可能である。
【００３３】
本発明によれば、導電性領域は、別個に活性化可能であるように、個別またはグループとして互いに連結しても電気的にアドレス可能であってもよい。
【００３４】
本発明の方法は、同一又は相違するリガンドを、担体の様々な導電性部位に固定するように実行してもよい。
この場合は、同一又は相違するリガンドの同時または連続的な固定を、それぞれが同一又は相違するリガンドを分配する幾つかの部品を使用して行ってもよい。この場合は、部品の少なくとも二つは、プリントヘッドを形成するためにまとめられてもよい。
【００３５】
本発明の一つの変形によれば、少なくとも二の異なるリガンドの、担体の異なる部位への連続する固定が、単一の部品を使用して、但しこの部品によって分配されるリガンドを少なくとも一度変えることによって行われる。
【００３６】
上述の全ての実施態様において、主たる利点は、この上なく迅速な方式でアドレスされた分子を担持する担体の製造が可能な、リガンド分配−結合方法にある。
【００３７】
本発明の更なる主題は、導電性担体上または担体の導電性領域上にリガンドのマトリックスを製造するための、
・導電性部分を備えた、少なくとも一のリガンド分配手段、
・第一に導電性担体または担体の導電性領域を、及び第二に発電機に分配手段の導電性部分を、結合させるための手段、及び
・担体及び／または分配手段を、異なる部位において担体上に数カ所のリガンドデポジットが行われるように、互いに対して接触させて配置するように移動及び／または配置する手段、
を備える装置である。
【００３８】
本発明によれば、前記分配手段はリガンド及び容器中に配置された少なくとも一の電極を収容し、前記手段の導電性部分を形成する前記容器を備えていてもよい。
【００３９】
一つの独自の配置によれば、該装置はプリントヘッドの形態に組み立てられた、数個のリガンド分配手段を含む。
【００４０】
本発明の一つの変形によれば、導電性担体または担体の導電性領域上に、リガンドのマトリックスを製造するための装置には、
・前記リガンドで外部チャージすることのできるワイヤまたは針の形態の電極、
・第一に導電性担体または担体の導電性領域を、及び第二に発電機に電極を、結合させるための手段、及び
・担体及び／または電極を、異なる部位において担体上に数カ所のリガンドデポジットが行われるように、互いに対して配置及び／または移動する手段、
が含まれる。
【００４１】
本発明の他の特徴及び利点は、添付の図面を参照して、明らかに詳説の目的のために与えられ、非制限的である、以下の詳細な説明を読むにつれてより明らかになるであろう。
【００４２】
【発明の実施の形態】
図１は、本発明の第一の実施態様を示しており、ここでは電極として、固定しようとするリガンドを充填した容器１を備え、分配ノズル１ａを備えた部品が使用されている。容器１の内部には、例えば白金または金製のカウンター電極３及びコントロール電極５が配置されている。
【００４３】
該容器は、所定数の、例えば千に達してもよいデポジットを実行するために充分な体積の試薬を収容してもよい。
この図１に示した第一の実施態様においては、金層で被覆されたガラス基質を備えていてもよい導電性担体７が使用されている。
【００４４】
この図は、担体をｘ及びｙ方向に沿って、例えば二つのデポジットの間を移動させることによって、前記容器を用いて行われるデポジット９を示す。例えば毛管の形態である、容器のノズル１ａが、絶縁性物質製であるならば、これを導電性担体７上に配置することができ、導電性表面７とカウンター電極３との間の電位または電流に差異を設けることによって、電気的衝撃により導電性表面７に固定されたデポジット９を得ることができる。この場合は、デポジット９のサイズは、電極と導電性表面との間の電界の線内に位置する、容器／担体の境界面のサイズによって決定される。この境界面は、得られるデポジットのサイズを縮小するために、可能な限り小さくなければならない。
【００４５】
図１の容器はまた、導電性物質製のノズル１ａを備えていてもよい。この場合は、該容器中に存在するリガンドの固定は、導電性表面７をノズル１ａから成る電極と、ノズル１ａから放出される小滴によって接触させることによって行われる。この場合は、デポジットのサイズもまた、液体と電界の線内に位置する導電性表面との間の境界面によって調整される。
【００４６】
デポジット９の分解は、図２に示したように連結した導電性領域からなる担体を使用することによって改善してもよい。図２においては、図１と同様の参照番号を用い、ノズル１Ａ、コントロール電極５及びカウンター電極３を装備した容器１を示している。この場合、担体は、互いに絶縁されているが電気的に連結された導電性領域１３を備えた絶縁性担体からなる。これらの導電性領域は、例えばガラスまたはケイ素基体表面の金からなるものでもよい。この場合は、デポジット９は、導電性領域上部にリガンドを分配することによって得られるが、リガンドと接触した導電性領域のみが後者により被覆可能である。したがって、デポジットのサイズは、導電性領域１３のサイズによって調整される。
【００４７】
この場合は、実際に使用される導電性担体は、単一の電極を含むのみであり；このことはその製造を格段に単純化し、導電性物質で被覆されたプラスチック材料の単純なシートを使用してもよいため、必要な費用が非常に低減される。
【００４８】
導電性領域のネットワークの使用により、デポジット９のサイズを縮小することができるが、マトリックスの密度を増大させることはできない。この密度は、毛管ノズル１ａと担体との間の境界面のサイズに直接依存し、ノズルのサイズによって制限される。
【００４９】
それにも関わらず、図３に示されるように、複合電極をなす導電性領域を含む担体を使用することにより、マトリックスの密度を増大させることが可能である。
【００５０】
図３は、図１及び２における容器１のノズル１ａを拡大図として示し、別個に活性化可能であるように電位または電流を適用するための手段に別々に結合した導電性領域１３を備えた絶縁性導電性担体１１の一部を示す。この場合は、デポジットのサイズは、図３の場合に示されるように活性化導電性領域のサイズによって決定される。リガンドと接触している他の導電性領域は、電気的に活性化されていないため、リガンドを固定には導き得ない。このように、高い空間分解及び高いマトリックス密度を同時に達成することが可能である。
【００５１】
図４Ａ及び４Ｂには、本発明の別の実施態様が示され、ここではリガンドを分配することのできる部品はワイヤ形態の電極１５から成る。
【００５２】
この場合、導電性担体７は、図４Ａに示されるように使用可能である。リガンドデポジットを行うためには、固定しようとするリガンドを収容する容器１７中に、電極１５をまず浸し、電極はこのリガンドの小滴１９を保留する。リガンドの小滴１９を収容する電極を、図４Ｂに示すように導電性担体７の上部に移動させて小滴１９によって電気的接触を行う。電極１５と導電性担体７との間に電気的衝撃を与えることによって、リガンドのデポジットが形成される。
【００５３】
この操作の後、電極１５をリンスタンク２１中において濯ぎ、同一のリガンドまたは別のリガンドで別のデポジット９を造ることができるようにする。
【００５４】
このタイプの電極を使用した際には、デポジットの分解は低くてもよいが、この場合は、可能な限り電極１５を濯ぐと、決定的に有利である。
【００５５】
本発明の方法は、まず非常に小体積の反応媒体を使用し、よって結合させようとする生物学的に重要な分子を節約する可能性を提供するため、非常に興味深い。また、担体上に行われるデポジットのサイズが調整可能である一方で、従来の化学活性化方法を含む機械的アドレス法においては、デポジットのサイズは５０未満、１００μm未満にさえなり得なかった。
【００５６】
本発明によれば、デポジットのサイズは、実際には困難な小滴サイズの縮小を行うことによらず、電気的に活性化可能な領域の表面を縮小することにより、非常に容易に縮小可能である。デポジットの分解は、電界の線内に位置する電極／担体境界面のみが活性化可能であるという事実により最適化される；換言すれば、小滴がこの領域外に落ちれば、その内容物は導電性表面に固定されないであろう。
【００５７】
したがって、ノズル１ａと導電性担体との間の境界面の直径が２００μmであるならば、また、そのサイズ寸法がたった１０μmである導電性領域が使用されるならば、この導電性領域のみが生物学的に重要な分子で被覆可能である。
【００５８】
本発明によれば、担体上に様々なリガンドのデポジット９を製造することが可能である。これは、単一の部品を使用して担体の異なる部位に少なくとも二の異なるリガンドを連続的に固定することにより、また前記部品によって分配されるリガンドを交換することによって、達成してもよい。この場合は、デポジットは、図１及び２に示される部品の容器１の内容物を交換することにより、または異なる試薬に浸された図４の電極を使用することにより、連続的に製造してもよい。リガンド添加及び排出手段を備えた、換言すれば、リガンドのための流体入口及び出口を備え、これを動かす必要なく容器の内容物を交換することができる、固定容器を使用することもまた可能である。
【００５９】
図５は、流体入口１ｂ及び出口１ｃを備えた容器１の前記態様を示す。
明らかに、同一または相違するリガンドのデポジット９を製造するために、図１及び４に示されるもののような幾つかの部品を使用することもまた可能である。これらの部品は、任意に、図６に示されるようにプリントヘッドをなすように組み合わせられてもよい。
【００６０】
図６において、プリントヘッドが、リガンドＰ１を充填した第一容器Ｒ１、リガンドＰ２を充填した第二容器Ｒ２、及びリガンドＰ３を充填した第三容器Ｒ３を収容していることがわかる。このタイプの複合ヘッドであれば、リガンドＰ１、Ｐ２、及びＰ３それぞれの三種類のデポジット９を、同時に導電性表面７に行うことが可能である。
【００６１】
デポジットは、不活性の活況下で、または、可能であれば容器内に収容された反応媒体と非混和性の、電気化学的に中性の液体媒体中で行われてもよいことを明記する。
【００６２】
デポジット段階の後、担体を濯いで、従来の方法で使用してもよい。
【００６３】
以下の実施例は、ピロール基を担持するオリゴヌクレオチドまたはペプチドを使用し、これらを文献[５]：ＷＯ-Ａ-９４／２２８８９に記載の方法を使用して電気化学的経路によってピロールと共重合させることにより導電性担体に固定してなる、オリゴヌクレオチドまたはペプチドのマトリックスの製造を示す。
【００６４】
【実施例】
（実施例１：１−オリゴヌクレオチドを担持する担体の製造）
使用した導電性担体は、クロム層（粘着のため）及び０．５μmの金の連続層で被覆したガラスプレートであった。この層は、ＥＧＧ２８３ポテンシオスタットの「作用電極」出口に接続した。
【００６５】
ピロール基を５’に担持する二つの異なるオリゴヌクレオチドをこれらの担体上で共重合化した。これらの配列は以下の通りであった：
0004786034.tif 000002
これらは、[５]にLivacheらにより記載された方法を使用して合成された。
【００６６】
これらのオリゴヌクレオチドを担体に固定するために、０．１MのＬｉＣｌＯ4、２０mMのピロール、及び１μMのピロール基を５’に担持するオリゴヌクレオチドを含有する反応媒体を使用した。
【００６７】
この溶液を、ポテンシオスタットに接続した白金カウンター電極（ＣＥ）を含む円錐形のポリプロピレン製容器に添加した。この容器は、その体積が、反応媒体５０乃至１０００μlであってよい微量ピペットを使用して容易に充填された。この円錐の先端は、およそ０．８mmの直径を有する。別の体積の試薬のためには、より小さなまたは大きな円錐が使用可能である。
【００６８】
円錐の先端を、導電性表面に接触させておき、サイクリックボルタンメトリー（１００mV/sの速度で、−０．３５乃至＋０．８５V/CE）によりコポリマーを製造した。記録された電荷は、生成したポリマーの厚さの決定に使用した。この第一のデポジットの生成後、円錐を空にし、濯ぎ、別のオリゴヌクレオチドを含有する新たな反応媒体を充填した。導電性プレートを移動させ（ｘ／ｙ／ｚ面）、同様の共重合化操作を導電性表面の別の領域に行い、別のオリゴヌクレオチド配列を担持するデポジットの製造を可能にした。
【００６９】
この方法において、ｐｙｒＭ５オリゴヌクレオチドを含むのみの二つのマトリックス及びｐｙｒＣＰオリゴヌクレオチドを含むのみの二つのマトリックスを調製した。
こうして得られたオリゴヌクレオチドのマトリックスが、相補的オリゴヌクレオチドを検出するための所望の特性を有することを、ハイブリダイゼーションによって確認した。
【００７０】
（２−オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション及び検出）
試験した相補的オリゴヌクレオチドは下記のものであった：
−ビオチニル化相補的Ｍ５：ｂｉｏ相補的Ｍ５；
−ビオチニル化相補的ＣＰ：ｂｉｏ相補的ＣＰ。
【００７１】
相補的オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションを、０．５MのＮａＣｌ、１００μg/mlのサケの精子ＤＮＡ（Sigma）、１０mMのＥＤＴＡ、及び１０nMの相補的ビオチニル化オリゴヌクレオチドを含有するＰＢＳ緩衝液（Sigma）中で行った。ハイブリダイゼーションを、４５℃にて体積２０mmにおいて１５分間行った。ＰＢＳ／ＮａＣｌ中で迅速に濯いだ。その後、０．１mg/mlのＲフィコエリスリン（Molecular Probe）を含有するＰＢＳ／ＮａＣｌ溶液中でインキュベートした後、ハイブリッドの検出を行った。エピフルオレッセンス顕微鏡（epifluoresence microscope）に取り付けたコールドカメラ（cold camera）（Hamamatsu）を使用して蛍光を検出した。結果は、灰色の陰として表れた。
【００７２】
直径およそ０．８mmのポリピロールの点が観察され、その蛍光強度を以下に記録した。
−ｐｙｒＭ５担体上のオリゴヌクレオチド、
ｂｉｏ相補的Ｍ５でハイブリダイゼーション：１１０
−ｐｙｒＭ５担体上のオリゴヌクレオチド、
ｂｉｏ相補的ＣＰでハイブリダイゼーション：    ５
−ｐｙｒＣＰ担体上のオリゴヌクレオチド、
ｂｉｏ相補的Ｍ５でハイブリダイゼーション：    ７
−ｐｙｒＣＰ担体上のオリゴヌクレオチド、
ｂｉｏ相補的ＣＰでハイブリダイゼーション：  ８４
優れたハイブリダイゼーション特異性が、高いシグナル／ノイズ比をもって観察された。
【００７３】
（実施例２）
実施例１と同様の操作方法に従い、しかし導電性担体としてインジウム及び酸化錫（ITO）で被覆したプラスチック材料製の担体を使用して、ｐｙｒＭ５及びｐｙｒＣＰオリゴヌクレオチドのマトリックスを調製した。
これらのマトリックスを用いて、ビオチニル化相補的オリゴヌクレオチドの検出について得られた結果は下記の通りであった。
−ｐｙｒＭ５担体上のオリゴヌクレオチド、
ｂｉｏ相補的Ｍ５でハイブリダイゼーション：  ９５
−ｐｙｒＭ５担体上のオリゴヌクレオチド、
ｂｉｏ相補的ＣＰでハイブリダイゼーション：    ５
−ｐｙｒＣＰ担体上のオリゴヌクレオチド、
ｂｉｏ相補的Ｍ５でハイブリダイゼーション：    ７
−ｐｙｒＣＰ担体上のオリゴヌクレオチド、
ｂｉｏ相補的ＣＰでハイブリダイゼーション：１０５
【００７４】
（実施例３）
この実施例では、実施例１と同様の操作方法に従い、しかし内部に白金電極を取り付けてなる容器に代えて、カウンター電極として反応媒体でチャージした白金ワイヤを使用して、ガラスにサポートされた金製の担体上にｐｙｒＭ５及びｐｙｒＣＰオリゴヌクレオチドのマトリックスを調製した。
【００７５】
図４Ａに示されるように、白金ワイヤ１５は、反応媒体を収容する容器１７に浸すことによってこの媒体でチャージさせた。この小滴１９を担持するワイヤを、小滴で接触が行われるまで担体に近づけた。そこで電気化学的衝撃を起こした。該ワイヤを持ち上げ、水で濯いだ。同様に他のデポジットも製造した。この方法で直径およそ１mmのデポジットが得られ、相補的オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションを行うために該マトリックスを使用した際に強い蛍光が見られた。得られた結果は以下の通りであった。
−ｐｙｒＭ５担体上のオリゴヌクレオチド、
ｂｉｏ相補的Ｍ５でハイブリダイゼーション：４００
−ｐｙｒＣＰ担体上のオリゴヌクレオチド、
ｂｉｏ相補的ＣＰでハイブリダイゼーション：  １０
【００７６】
（実施例４）
同様の方法で、ペプチドをデポジットしてもよい。ピロール−ペプチドを、T. Livache et al, Biosensor and Bioelectronics 13, (1998) 629-634[６]に記載の操作を利用して合成した。これらを通常の操作（）にしたがってデポジットした。ＡＣＴＨ（１８−３９）及びＡＣＴＨ（１１−２４）の二つのペプチドを、それぞれビオチニル化抗体Ｍａｂ（３４−３９）及びＭａｂ（１８−２４）で検出した。
ストレプタヴィジンフィコエリスリンを用いてインキュベートした後の蛍光結果は下記の通りであった。
【表１】
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【００７７】
（参考文献）
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【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は、リガンド分配容器及び、導電性担体に前記リガンドを固定するための少なくとも一の電極を備えた部品の図である。
【図２】  図２は、電気的に連結された導電性領域を備えた導電性担体へのリガンドの固定を達成する、図１のものと類似の部品を示す。
【図３】  図３は、拡大図であって、複数の導電性領域を含む担体上にリガンドの固定を行うための、図１における分配容器のノズルを示す。
【図４Ａ】  図４Ａは、ワイヤ形態の電極を使用して導電性担体へのリガンドの固定を達成するために必要な工程を図示する。
【図４Ｂ】  図４Ｂは、ワイヤ形態の電極を使用して導電性担体へのリガンドの固定を達成するために必要な工程を図示する。
【図５】  図５は、二つの異なるリガンド固定操作の間に、流体の充填及び排出を保証するために入口及び出口が取り付けられた分配部品を示す。
【図６】  図６は、同一または相違するリガンドを分配するための幾つかの容器を備えたプリントヘッドの図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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