(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハリナシミツバチ類（Ｍｅｌｉｐｏｎｉｎａｅ）に属するメリポナ  ビーチー種（Ｍｅｌｉｐｏｎａ  ｂｅｅｃｈｅｉｉ）が産するプロポリスの精油成分を有効成分とすることを特徴とする経鼻的吸入免疫賦活剤。
【請求項２】
ハリナシミツバチ類（Ｍｅｌｉｐｏｎｉｎａｅ）に属するメリポナ  ビーチー種（Ｍｅｌｉｐｏｎａ  ｂｅｅｃｈｅｉｉ）が産するプロポリスの精油成分を有効成分とすることを特徴とする経鼻的吸入抗疲労剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ハリナシミツバチ類が産するプロポリスの用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロポリスは、ミツバチが種々の植物から集めてきた樹脂を唾液とともに噛み続け、ワックス状にしたもの（原塊）であり、樹脂、ミツロウ、精油、花粉、フラボノイドなどを含む。プロポリスには種々の薬理作用があることが知られているが、中でもよく知られている作用は抗菌作用であり、ミツバチはプロポリスを使って巣壁を構成することで、巣内の衛生管理を行っていると考えられている。プロポリスの薬理作用としては、抗菌作用の他にも、抗ウィルス作用、麻酔作用、抗炎症作用、免疫賦活作用、抗腫瘍作用などが明らかにされており、例えば、特許文献１では、水溶性プロポリス抽出物を有効成分とする免疫賦活剤及び抗腫瘍剤が提案されている。しかしながら、プロポリスを産するミツバチの種類が異なれば、プロポリスの薬理作用も異なる可能性が高いので、必ずしも、世界中に生息するミツバチが産する全てのプロポリスについて、その薬理作用が明らかにされているわけではない。
【０００３】
ところで、世界中で広く養蜂に用いられているミツバチは、ミツバチ類（Apinae）に属するセイヨウミツバチ（Apis mellifera）とトウヨウミツバチ（Apis cerana）の２種であり、通常、プロポリスといえばセイヨウミツバチが産するプロポリスを意味する。ミツバチには、このミツバチ類の他にもハリナシミツバチ類（Meliponinae）がある。昆虫類の中には社会性昆虫類と呼ばれる種が多数存在するが、女王の継代によって巣が永遠に存続するという生態的特性を有する高次真社会性昆虫類の範疇に入るのは、このミツバチ類とハリナシミツバチ類の２つのグループだけとされている。ハリナシミツバチ類とは、進化の途上で刺針を退化させた高次真社会性昆虫類の亜科名であり、ハリナシミツバチ類には、主要な属としてハリナシミツバチ属（Trigona）とオオハリナシミツバチ属（Melipona）がある。前者が全世界の汎熱帯・亜熱帯地域に分布するのに対し、後者は中・南アメリカの地域だけに生息する。中南米には約２５０種類のハリナシミツバチ類が生息していることが知られており、メキシコにおいては、ハリナシミツバチ属及びオオハリナシミツバチ属とも数種類が養蜂種として飼養されていた歴史を持ち、特に後者に属するメリポナ  ビーチー種（Melipona beecheii）は、古い村落内でマヤ族の末裔とみられる村民によって今なお数多く飼養され続けている。しかしながら、ハリナシミツバチ類が産するプロポリスの有する薬理作用については解明が進んでおらず、ミツバチ類が産するプロポリスとは異なった薬理作用を有する可能性が期待される。
【特許文献１】特開平８−１４３４６２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
そこで本発明は、ハリナシミツバチ類が産するプロポリスの薬理作用を解明し、当該作用に基づく用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、ハリナシミツバチ類が産するプロポリスの薬理作用の解明を行うべく、その原塊を入手したところ、驚いたことに、ミツバチ類が産するプロポリスが放つ特有の奇臭がなく、植物性の爽やかな芳香があった。従って、ハリナシミツバチ類が産するプロポリスを構成する成分組成はミツバチ類が産するプロポリスのそれと異なることが推測されたので、その薬理作用を精力的に解明した結果、ハリナシミツバチ類が産するプロポリスのエキスには、種々の注目すべき薬理作用があることがわかった。
【０００６】
本発明は、上記の知見に基づいてなされたものであり、本発明の経鼻的吸入免疫賦活剤は、請求項１記載の通り、ハリナシミツバチ類に属するメリポナ  ビーチー種が産するプロポリスの精油成分を有効成分とすることを特徴とする。
また、本発明の経鼻的吸入抗疲労剤は、請求項２記載の通り、ハリナシミツバチ類に属するメリポナ  ビーチー種が産するプロポリスの精油成分を有効成分とすることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、ハリナシミツバチ類が産するプロポリスの用途として、そのエキスを有効成分とする免疫賦活剤、抗腫瘍剤及び抗疲労剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明において、プロポリスを産するハリナシミツバチ類としては、ハリナシミツバチ属（Trigona）やオオハリナシミツバチ属（Melipona）に属する種が挙げられる。これらの属に属する代表的な種としては、前者に属する種として、オーストラリアに生息するトリゴナ  カーボナリア種（Trigona carbonaria）やパラグアイに生息するスカプトトリゴナ  ビプンクタナ種（Scaptotrigona bipunctana）が、後者に属する種として、メキシコに生息する前述のメリポナ  ビーチー種やメリポナ  クアドリファシアータ種（Melipona quadrifasciata）が挙げられる。しかしながら、プロポリスを産するハリナシミツバチ類は、ここに記載した種に限定されるものではない。
【０００９】
ハリナシミツバチ類が産するプロポリスのエキスの調製方法としては、例えば、原塊に対するヘキサン、酢酸エチル、アセトンなどの有機溶媒並びに水を用いた抽出方法や水蒸気蒸留方法などが挙げられる。エキスは高度精製されているものであってもよいし、粗精製のものであってもよい。各種の方法によって調製されるエキスのうち、免疫賦活剤と抗疲労剤の有効成分としては、水蒸気蒸留方法などによって調製される揮発成分を含むエキス（精油成分）が望ましい。また、抗腫瘍剤の有効成分としては、酢酸エチルを用いて調製されるエキス（抽出物）が望ましい。
【００１０】
本発明の免疫賦活剤、抗腫瘍剤及び抗疲労剤は、各種の製剤形態に製剤化することでそれ自体を医薬品や健康食品として服用や摂取することができる。また、本発明の免疫賦活剤、抗腫瘍剤及び抗疲労剤は、各種の飲食品に配合して摂取することもできる。その適用量は、適用者の年齢や体重、適用形態などによって異なるが、特に制限されるものではない。本発明の免疫賦活剤、抗腫瘍剤及び抗疲労剤を各種の飲食品に配合する場合、その配合量は最終製品中で０．１〜５０重量部であることが望ましい。
【００１１】
また、ハリナシミツバチ類が産するプロポリスの揮発成分を含むエキスを有効成分とする免疫賦活剤と抗疲労剤は、経鼻的吸入によるアロマセラピー的用法で用いることもできる。この適用形態は、特有の奇臭を放つミツバチ類が産するプロポリスでは不可能な適用形態であり、特筆に価する。
【実施例】
【００１２】
以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載によって何ら限定して解釈されるものではない。
【００１３】
試験例１：免疫賦活作用について
芳香を発するハリナシミツバチ類のプロポリス（メキシコ・ユカタン大学養蜂部から入手したメリポナ  ビーチー種のプロポリス：以下同じ）の原塊３０ｇ（鶏卵大）をレースの袋に入れ、特別養護老人ホームの入所者２１人の各対象者のベッド付属頭部ライト根元の生活上支障のない位置に吊り下げた。試験開始前と試験開始２ヵ月後に採血を行い、５１Ｃｒ遊離法（押見和夫著「ＮＫ細胞」基礎から臨床へ：金原出版ｐ２３〜３１を必要ならば参照のこと）に従ってＮＫ細胞活性値を測定し、正常値とされる１８％〜４０％の正常範囲内者の推移を表１に示すクロス表を作成して検定することで調べた。その結果、試験開始後の正常範囲内者は試験開始前の正常範囲内者よりも有意に増加した。このことから、原塊の揮発成分には免疫賦活作用があることがわかった。なお、セイヨウミツバチのプロポリスの原塊を用いて同じ施設の入所者８人に対して上記と同様の試験を行ったところ、奇臭による生活環境の悪化から試験開始１ヵ月後に試験を中断せざるを得なくなった。試験開始前と試験開始１ヵ月後におけるＮＫ細胞活性正常範囲内者の推移を表２に示すクロス表を作成して検定することで調べた結果、試験開始前後において有意な差は認められなかった（ｐ＝０．２５＞０．０５）。
【００１４】
【表１】
0004651962.tif 000002
【００１５】
【表２】
0004651962.tif 000003
【００１６】
ハリナシミツバチ類のプロポリスのエキスとして、揮発成分を含むエキスを、粉末状にしたプロポリス１００ｇ（乾燥重量）から連続蒸留抽出装置を用いた水蒸気蒸留方法によって調製した。具体的には、先にセパラブルフラスコ中に５００ｍｌの超純水とステンレス製のスノコを入れ、その上にガーゼで包んだプロポリス粉末をのせて加熱し、熱水と試料が直接触れないようにして水蒸気のみによる抽出操作を行った。抽出物のトラップにはジエチルエーテル１００ｍｌを用い、抽出時間は２時間で行った。得られた抽出物に含まれる水分を除去するために、Ｎａ２ＳＯ４を抽出物に加えて４℃の冷蔵庫で一晩静置した。その後、ろ過でＮａ２ＳＯ４を取り除き、さらにジエチルエーテル臭がなくなるまで窒素ガスで濃縮し、揮発成分を含むエキスとしての精油成分を得た。こうして得られた精油成分は３２．９３５ｍｇであった。この精油成分をジエチルエーテルに希釈し、その１μｌをＧＣ／ＭＳ（HP-6890 MSD system, HEWLETTPACKARD社）に注入して分析を行った。その結果を図１に示す。また、上記と同様の方法で、セイヨウミツバチの粉末状にしたプロポリス１００ｇ（乾燥重量）から調製した精油成分４９８．８ｍｇについて、上記と同様の分析を行った。その結果を図２に示す。図１と図２から明らかなように、両者の精油成分に含まれるモノテルペンとセスキテルペンの種類と存在比率は大きく異なり、ハリナシミツバチ類のプロポリスの精油成分にはセスキテルペン類が約４０．４％、モノテルペン類が約２０．１％含まれ、セイヨウミツバチのプロポリスの精油成分にはセスキテルペン類が約４６．３％、モノテルペン類が約５．３％含まれていることが確認できた。この違い（特にハリナシミツバチ類のプロポリスの精油成分にはモノテルペン類が１０％以上含まれていること）が芳香と奇臭の違い、さらには薬理作用の違いに寄与しているものと考えられた。
【００１９】
試験例３：抗疲労作用について
特別養護老人ホームの隣接する同じ建物構造のＡ棟とＢ棟に勤務する介護職員１４人（平均年齢２８歳で年齢幅２２〜５３歳：全員が勤務棟の固定はなく勤務日によっていずれかの棟に勤務）に対し、表３に示す３０の疲労感尺度項目を用いて以下の調査を行った。
【００２０】
【表３】
0004651962.tif 000004
【００２１】
（調査方法）
１．第１期
連続する６日間において、勤務終了時に３０項目の判定をしてもらい疲労感を点数化した（YESなら1点、NOなら0点）。出勤日でない者に対してはその日の就寝時に判定をしてもらった。
２．第２期
第１期に続く連続する１２日間において、第１期と同様の判定をしてもらった。この際、Ａ棟の職員休憩室の１ヶ所（開放室）に、水５０ｍｌと、試験例１に記載のハリナシミツバチ類のプロポリスの精油成分の５％／１００ｍｌエタノール溶液０．１ｍｌとを混合して充填した市販のアロマポットを設置して充填液が室内全体に蒸発するようにする一方、Ｂ棟もＡ棟と同様に、水５０ｍｌと、試験例１に記載のセイヨウミツバチのプロポリスの精油成分の５％／１００ｍｌエタノール溶液０．１ｍｌとを混合して充填した市販のアロマポットを設置して充填液が室内全体に蒸発するようにした（蒸発時間は午前１１時から翌日午前１時までの１４時間）。
３．第３期
第２期に続く連続する７日間において、第１期と同様の判定をしてもらった。この際、Ａ棟とＢ棟のいずれの職員休憩室の１ヶ所（開放室）にも、水５０ｍｌとエタノール０．１ｍｌとを混合して充填した市販のアロマポットを設置して充填液が室内全体に蒸発するようにした（蒸発時間は午前１１時から翌日午前１時までの１４時間）。
【００２２】
（調査結果）
表４に示す。Ａ棟における第１期と第２期の対応のあるデータの平均値のｔ検定を行った結果、第１期の疲労感の平均値が有意に高かった。また、Ａ棟における第２期と第３期の対応のあるデータの平均値のｔ検定を行った結果、第３期の疲労感の平均値が有意に高かった。しかしながら、Ｂ棟においてもＡ棟と同様に検定を行ったが、有意な違いは見られなかった。第２期におけるＡ棟とＢ棟の対応のあるデータの平均値のｔ検定を行った結果、Ｂ棟の疲労感の平均値が有意に高かった。以上の結果より、ハリナシミツバチのプロポリスの精油成分は、セイヨウミツバチのプロポリスの精油成分にはない嗅覚を通した吸入による疲労感の減少作用を有し、肉体的疲労や精神的ストレスに伴う疲労に対する予防や改善を図るための抗疲労剤として有用であることがわかった。
【００２３】
【表４】
0004651962.tif 000005
【００２４】
実施例１：医薬品製剤例（錠剤その１）
試験例１に記載のハリナシミツバチ類のプロポリスの精油成分を用い、常法に従って下記の組成の錠剤を製造した。
精油成分                          ２４重量部
乳糖                              ６３〃
ステアリン酸マグネシウム          １３〃
【００２５】
実施例２：医薬品製剤例（錠剤その２）
試験例２に記載のハリナシミツバチ類のプロポリスの酢酸エチル抽出物を用い、常法に従って下記の組成の錠剤を製造した。
酢酸エチル抽出物                  ２４重量部
乳糖                              ６３〃
コーンスターチ                    １２〃
グアーガム                          １〃
【００２６】
実施例３：医薬品製剤例（顆粒剤その１）
実施例１で製造した錠剤を粉砕してから整粒し、篩別して２０〜５０メッシュの顆粒剤を製造した。
【００２７】
実施例４：医薬品製剤例（顆粒剤その２）
実施例２で製造した錠剤を粉砕してから整粒し、篩別して２０〜５０メッシュの顆粒剤を製造した。
【００２８】
実施例５：飲食品配合例（ジュースその１）
試験例１に記載のハリナシミツバチ類のプロポリスの精油成分を用い、常法に従って下記の組成のジュースを製造した。
冷凍濃縮温州みかん果汁              ５重量部
果糖ブドウ糖液糖                  １１〃
クエン酸                            ０．２〃
Ｌ−アスコルビン酸                  ０．０２〃
精油成分                            ０．０５〃
香料                                ０．２〃
色素                                ０．１〃
【００２９】
実施例６：飲食品配合例（ジュースその２）
実施例５で用いたハリナシミツバチ類のプロポリスの精油成分のかわりに、試験例２に記載のハリナシミツバチ類のプロポリスの酢酸エチル抽出物を用いたこと以外は実施例５と同様にしてジュースを製造した。
【産業上の利用可能性】
【００３０】
ハリナシミツバチ類が産するプロポリスの用途として、そのエキスを有効成分とする免疫賦活剤、抗腫瘍剤及び抗疲労剤を提供することができる点において、本発明は産業上の利用可能性を有する。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】実施例におけるハリナシミツバチ類のプロポリスの精油成分に含まれるモノテルペンとセスキテルペンの種類と存在比率を示すグラフ。
【図２】同、セイヨウミツバチのプロポリスの精油成分に含まれるモノテルペンとセスキテルペンの種類と存在比率を示すグラフ。
【図１】
0004651962.tif 000006
【図２】
0004651962.tif 000007