(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
黄色ブドウ球菌 (Staphylococcus aureus)の検出用培地であって、黄色ブドウ球菌培地中に、５−ブロモ−６−クロロ−３−インドキシルホスフェートおよびデフェロキサミンを含むことを特徴とする培地。
【請求項２】
さらに５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルグルコシドを含むことを特徴とする、請求項１に記載の培地。
【請求項３】
下記２種類の色素産生剤：
・５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルガラクトシドおよび
・５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルグルクロニド
の少なくとも一方をさらに含むことを特徴とする、請求項１および２のいずれかに記載の培地。
【請求項４】
下記成分を含むことを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の培地：
・ペプトンおよび酵母エキス              50 g/l
・５−ブロモ−６−クロロ−３−
インドキシルホスフェート           0.100 g/l
・５−ブロモ−４−クロロ−３−
インドキシルグルコシド             0.050 g/l
・５−ブロモ−４−クロロ−３−
インドキシルガラクトシド           0.050 g/l
・５−ブロモ−４−クロロ−３−
インドキシルグルクロニド           0.050 g/l
・デフェロキサミン                   0.050 g/l
・寒天                                  15 g/l。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】
本発明は、黄色ブドウ球菌 (Staphylococcus aureus)を見えるようにするための新規な色素産生培地に関する。
【０００２】
【背景技術】
黄色ブドウ球菌は、外傷治療、注射、カテーテルまたは各種手術を施さなければならない患者がしばしば保有している細菌に関係するので、その検出がますます有利であることが検証されつつある細菌である。この場合、このような患者の処置が始まった途端、遅かれ早かれ感染の非常に大きな危険性がある。
【０００３】
従って、これは、例えば、病院環境における院内感染に関係することが増えている病原菌である。
実際、黄色ブドウ球菌の疫学的監視はますます必要かつ普及するようになってきている。
【０００４】
臨床分野における黄色ブドウ球菌の検出用の従来の培地は、食塩に対する耐性とマンニットの存在下での酸性化という特性に基づいた、マンニット食塩培地である。この試験は、特に感度と特異性に関して、非常に満足できるものではなく、この高度に選択性の培地は、極めて多くの数の擬陰性を生じ、また擬陽性も生ずる。さらに、酸性化に起源をもつコロニーの染色が培地に拡がり、これは、検体が純粋な培養物ではない場合および単離されたコロニーが互いに近接している場合の読取りを難しくする。
【０００５】
別の培地の使用も従来技術において既に提案されている。具体的には、例えば、フェノールフタレインホスフェート指示薬を含む培地と共に、黄色ブドウ球菌の検出用にホスファターゼを使用することを特徴とする (Stevens, D.L. 及びJones S.: 黄色ブドウ球菌とスタフィロコッカス・サプロフィティカス(Staphylococcus saprophyticus)とを区別するためのトレハロース−マンニット−ホスファターゼ寒天の使用、 J. Clin. Microbiol., 20, 977-980, 1984)。しかし、この培地は、拡がることのある染色を生ずるという失敗を示し、このような染色は、検体が純粋な培養物ではない場合および、前の事例と同様に、単離されたコロニーが互いに近接している場合に、問題を生ずる。
【０００６】
【発明の開示】
本発明は、黄色ブドウ球菌に対して擬陰性を実質的に生じない高感度の培地を得ることを可能にし、それに加えて、黄色ブドウ球菌を連鎖球菌 (ストレプトコッカス) 属のような他の種から区別することも可能にする、２種類の色素産生剤を含む、色素産生培地の使用に基づく。
【０００７】
培地が擬陽性または擬陰性を「生じない」または「実質的に生じない」と表記した場合、この表記は試験した菌株に関するものであると、常に理解されべきである。非定形または突然変異菌株が毎日出現する可能性があるので、この表記を全体的に肯定することは不可能である。
【０００８】
より具体的には、本発明は、培地中に
・５−ブロモ−６−クロロ−３−インドキシルホスフェートおよび
・５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルグルコシド、
から選んだ少なくとも１種の化合物を色素産生剤 (色素産生性化合物) として含有し、さらにデフェロキサミン(deferoxamine)を含有する、黄色ブドウ球菌の検出用培地に関する。
【０００９】
好ましくは、上記の両方の色素産生化合物を使用する。５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルグルコシドを使用せずに、５−ブロモ−６−クロロ−３−インドキシルホスフェートを使用する場合には、一般にインドキシルグルコシド型のグルコシダーゼの色素産生性基質と組合わせて使用することが好ましい。
【００１０】
５−ブロモ−６−クロロ−３−インドキシルホスフェートを使用せずに、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルグルコシドを使用する場合には、一般にインドキシルホスフェート型のホスファターゼの色素産生基質と組合わせて使用することが好ましい。
【００１１】
黄色ブドウ球菌培地は公知であり、特にイギリス国RG24 0PW Hampshire, Basingstoke, Wade Road所在の「オキソイド・ユニパス社(Oxoide Unipath Limited)」のマニュアルに記載されている。これは、例えば、酵母エキス、ペプトンおよび寒天を必須主成分とする培地である「普通寒天培地Oxoid CM3(Nutrient Agar Oxoid CM3)」とすることができる。
【００１２】
「色素産生剤」なる用語は、特定の菌株の存在下で、特に該菌株の酵素系の作用下に色を変化させる化合物を意味するものである。
本発明に係る培地を使用すると、黄色ブドウ球菌の存在下で５−ブロモ−６−クロロ−３−インドキシルホスフェートによる藤紫色の染色を観察することが可能となり、一方、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルグルコシドは、黄色ブドウ球菌を染色することなく、大多数のストレプトコッカス菌株を青に染色する。
【００１３】
これは、文献によれば、黄色ブドウ球菌が多くのストレプトコッカス菌株と同様にβ−グルコシダーゼ陽性である (これは、例えば、パラニトロフェニルβ−グルコシドの使用により確認することができる) ことが示されているので、全く予想外の結果である。実際、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルグルコシドは、黄色ブドウ球菌菌株を染色せずに、ストレプトコッカス菌株を青く染色するという予想外の知見が認められ、このことが病院で見られる非常に多くの黄色ブドウ球菌菌株に関して確認された。
【００１４】
さらに、本発明に係る培地中のデフェロキサミンの存在は、黄色ブドウ球菌を阻害せずに、スタフィロコッカス・エピデルミス(Staphylococcus epidermis)の増殖を阻害することを可能にし、それにより、この２種類の微生物を区別することが可能となる。使用濃度は 0.010〜0.100 g/l の範囲内とすることが好ましいであろう。
【００１５】
本発明に係る培地は、下記２種類の色素産生剤の一方または両方を添加することにより改善することもできる：
・５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルガラクトシドおよび
・５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルグルクロニド。
これらは、黄色ブドウ球菌に対して陰性の２つの色素産生剤であり、従って、これらの色素産生剤に対して陽性の菌株から黄色ブドウ球菌を区別することを可能にする。
【００１６】
本発明に係る培地は、好ましくは0.01〜0.500 g/l 、特に0.050 〜0.150 g/l の５−ブロモ−６−クロロ−３−インドキシルホスフェート、好ましくは 0.010〜0.200 g/l の５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルグルコシド、好ましくは 0.010〜0.200 g/l の５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルガラクトシド、好ましくは 0.010〜0.200 g/l の５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルグルクロニドを含有しよう。
【００１７】
下記成分を含有する、本発明に係る好ましい培地は、他の菌株については阻害するかまたは無色もしくは青色のコロニーを生ずるのに対し、黄色ブドウ球菌の微生物をコロニーの藤紫色の染色により区別することができる：
・ペプトンおよび酵母エキス              50 g/l
・５−ブロモ−６−クロロ−３−
インドキシルホスフェート           0.100 g/l
・５−ブロモ−４−クロロ−３−
インドキシルグルコシド             0.050 g/l
・５−ブロモ−４−クロロ−３−
インドキシルガラクトシド           0.050 g/l
・５−ブロモ−４−クロロ−３−
インドキシルグルクロニド           0.050 g/l
・デフェロキサミン                   0.050 g/l
・寒天                                  15 g/l。
【００１８】
本発明の他の特徴と利点は、下記実施例を読むことにより明らかとなろう。
実施例
黄色ブドウ球菌(S. aureus) を目に見えるようにする場合の５−ブロモ−６−クロロ−３−インドキシルホスフェートの使用の利点を実証するため、これを、同種のホスフェート系色素産生剤 (今回は５−ブロモ−４−クロロ−３−インドキシルホスフェートを使用) に対して、下に比較する。
【００１９】
得られた結果を下の表に示す：
37℃で24時間後のコロニーの色
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【００２０】
上記２種類の色素産生剤は、極めて似た化合物であるにもかかわらず、５−ブロモ−６−クロロ−３−インドキシルホスフェート基質は、対応する５−ブロモ−４−クロロ誘導体とは異なり、AR 3917 菌株に関して、擬陰性を排除することを可能にすることが認められる。