(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、並びにポロキサマー１８８である界面活性剤を含んで成る液体医薬組成物であって、フェノール及びｍ−クレゾールから選択される静菌剤を更に含んで成る液体医薬組成物。
【請求項２】
卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）、並びにポロキサマー１８８である界面活性剤を含んで成る液体医薬組成物であって、フェノール及びｍ−クレゾールから選択される静菌剤を更に含んで成る液体医薬組成物。
【請求項３】
黄体形成ホルモン（ＬＨ）、並びにポロキサマー１８８である界面活性剤を含んで成る液体医薬組成物であって、フェノール及びｍ−クレゾールから選択される静菌剤を更に含んで成る液体医薬組成物。
【請求項４】
上記卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）が、１５０ＩＵ／ｍｌ〜１，２００ＩＵ／ｍｌの濃度において存在する、請求項１又は２に記載の液体医薬組成物。
【請求項５】
上記卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）が、３００ＩＵ／ｍｌ〜９００ＩＵ／ｍｌの濃度において存在する、請求項４に記載の液体医薬組成物。
【請求項６】
上記卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）が、６００ＩＵ／ｍｌの濃度において存在する、請求項５に記載の液体医薬組成物。
【請求項７】
上記黄体形成ホルモン（ＬＨ）が、１５０ＩＵ／ｍｌ〜１，２００ＩＵ／ｍｌの濃度において存在する、請求項２又は３に記載の液体医薬組成物。
【請求項８】
上記黄体形成ホルモン（ＬＨ）が、３００ＩＵ／ｍｌ〜７５０ＩＵ／ｍｌの濃度において存在する、請求項７に記載の液体医薬組成物。
【請求項９】
卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、及びポロキサマー１８８である界面活性剤を含んで成るフリーズドライ製剤を含む製品であって、フェノール及びｍ−クレゾールから選択される静菌剤を含有する再構成のための溶媒を更に含む製品。
【請求項１０】
黄体形成ホルモン（ＬＨ）、及びポロキサマー１８８である界面活性剤を含んで成るフリーズドライ製剤を含む製品であって、フェノール及びｍ−クレゾールから選択される静菌剤を含有する再構成のための溶媒を更に含む製品。
【請求項１１】
卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、並びに黄体形成ホルモン（ＬＨ）、及びポロキサマー１８８である界面活性剤を含んで成るフリーズドライ製剤を含む製品であって、フェノール及びｍ−クレゾールから選択される静菌剤を含有する再構成のための溶媒を更に含む製品。
【請求項１２】
上記卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）が、全製剤の０．１〜１０μｇ／ｍｌの濃度（ｗ／ｗ）において存在する、請求項９又は１１に記載の製品。
【請求項１３】
上記卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）が、全製剤の０．３〜５μｇ／ｍｌの濃度において存在する、請求項１２に記載の製品。
【請求項１４】
上記卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）が、全製剤の０．３７〜２μｇ／ｍｌの濃度において存在する、請求項１３に記載の製品。
【請求項１５】
上記黄体形成ホルモン（ＬＨ）が、全製剤の０．１〜３μｇ／ｍｌの濃度において存在する、請求項１０又は１１に記載の製品。
【請求項１６】
上記黄体形成ホルモン（ＬＨ）が、全製剤の０．１〜１μｇ／ｍｌの濃度において存在する、請求項１５に記載の製品。
【請求項１７】
上記黄体形成ホルモン（ＬＨ）が、全製剤の０．１〜０．６μｇ／ｍｌの濃度において存在する、請求項１６に記載の製品。
【請求項１８】
上記卵胞刺激ホルモンがヒト卵胞刺激ホルモンであり、及び／又は上記黄体形成ホルモン（ＬＨ）がヒト黄体形成ホルモン（ＬＨ）である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
【請求項１９】
上記卵胞刺激ホルモンが尿ヒト卵胞刺激ホルモンであり、及び／又は上記黄体形成ホルモン（ＬＨ）が尿ヒト黄体形成ホルモン（ＬＨ）である、請求項１８に記載の液体医薬組成物。
【請求項２０】
上記卵胞刺激ホルモンが組換えヒト卵胞刺激ホルモンであり、及び／又は上記黄体形成ホルモン（ＬＨ）が組換えヒト黄体形成ホルモン（ＬＨ）である、請求項１８に記載の液体医薬組成物。
【請求項２１】
上記ＬＨに対するＦＳＨの割合が、６：１〜１：６の範囲である、請求項２、４〜８及び１８〜２０のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
【請求項２２】
上記ＬＨに対するＦＳＨの割合が、４：１〜１：２の範囲である、請求項２１に記載の液体医薬組成物。
【請求項２３】
上記ＬＨに対するＦＳＨの割合が、３：１〜１：１の範囲である、請求項２２に記載の液体医薬組成物。
【請求項２４】
上記ＬＨに対するＦＳＨの割合が、２：１〜１：１の範囲である、請求項２３に記載の液体医薬組成物。
【請求項２５】
上記静菌剤がｍ−クレゾールである、請求項１〜８及び１８〜２４のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
【請求項２６】
０．３％（質量／溶媒質量）の濃度におけるｍ−クレゾールを含んで成る、請求項２５に記載の液体医薬組成物。
【請求項２７】
スクロースを更に含んで成る、請求項１〜８及び１８〜２６のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
【請求項２８】
メチオニンを更に含んで成る、請求項１〜８及び１８〜２７のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
【請求項２９】
６．０〜８．０のｐＨにおけるリン酸バッファーを更に含んで成る、請求項１〜８及び１８〜２８のいずれか一項に記載の液体医薬組成物。
【請求項３０】
７．０のｐＨにおけるリン酸バッファーを更に含んで成る、請求項２９に記載の液体医薬組成物。
【請求項３１】
以下の成分：組換えＦＳＨ、ポロキサマー１８８、スクロース、メチオニン、ｍ−クレゾール、及び７．０のｐＨにおける水性リン酸バッファーを含んで成る、請求項３０に記載の液体医薬組成物。
【請求項３２】
上記組換えＦＳＨが６００ＩＵ／ｍｌの濃度において存在し、上記ポロキサマー１８８が０．１ｍｇ／ｍｌの濃度において存在し、上記スクロースが６０ｍｇ／ｍｌの濃度において存在し、上記メチオニンが０．１ｍｇ／ｍｌの濃度において存在し、上記ｍ−クレゾールが３ｍｇ／ｍｌの濃度において存在し、そして上記リン酸バッファーがリン酸中、１０ｍＭにおいて存在する、上記請求項３１に記載の液体医薬組成物。
【請求項３３】
上記卵胞刺激ホルモンがヒト卵胞刺激ホルモンであり、及び／又は上記黄体形成ホルモン（ＬＨ）がヒト黄体形成ホルモンである（ＬＨ）、請求項９〜１７のいずれか一項に記載の製品。
【請求項３４】
上記卵胞刺激ホルモンが尿ヒト卵胞刺激ホルモンであり、及び／又は上記黄体形成ホルモン（ＬＨ）が尿ヒト黄体形成ホルモンである、請求項３３に記載の製品。
【請求項３５】
上記卵胞刺激ホルモンが組換えヒト卵胞刺激ホルモンであり、及び／又は上記黄体形成ホルモン（ＬＨ）が組換えヒト黄体形成ホルモンである、請求項３３に記載の製品。
【請求項３６】
上記ＬＨに対するＦＳＨの割合が、６：１〜１：６の範囲である、請求項１１〜１７及び３３〜３５のいずれか一項に記載の製品。
【請求項３７】
上記ＬＨに対するＦＳＨの割合が、４：１〜１：２の範囲である、請求項３６に記載の製品。
【請求項３８】
上記ＬＨに対するＦＳＨの割合が、３：１〜１：１の範囲である、請求項３７に記載の製品。
【請求項３９】
上記ＬＨに対するＦＳＨの割合が、２：１〜１：１の範囲である、請求項３８に記載の製品。
【請求項４０】
上記静菌剤がｍ−クレゾールである、請求項９〜１７及び３３〜３９のいずれか一項に記載の製品。
【請求項４１】
０．３％（質量／溶媒質量）の濃度におけるｍ−クレゾールを含んで成る、請求項４０に記載の製品。
【請求項４２】
スクロースを更に含んで成る、請求項９〜１７及び３３〜４１のいずれか一項に記載の製品。
【請求項４３】
メチオニンを更に含んで成る、請求項９〜１７及び３３〜４２のいずれか一項に記載の製品。
【請求項４４】
６．０〜８．０のｐＨにおけるリン酸バッファーを更に含んで成る、請求項９〜１７及び３３〜４３のいずれか一項に記載の製品。
【請求項４５】
７．０のｐＨにおけるリン酸バッファーを更に含んで成る、請求項４４に記載の製品。
【請求項４６】
以下の成分：組換えＦＳＨ、ポロキサマー１８８、スクロース、メチオニン、ｍ−クレゾール、及び７．０のｐＨにおける水性リン酸バッファーを含んで成る、請求項４５に記載の製品。
【請求項４７】
上記組換えＦＳＨが６００ＩＵ／ｍｌの濃度において存在し、上記ポロキサマー１８８が０．１ｍｇ／ｍｌの濃度において存在し、上記スクロースが６０ｍｇ／ｍｌの濃度において存在し、上記メチオニンが０．１ｍｇ／ｍｌの濃度において存在し、上記ｍ−クレゾールが３ｍｇ／ｍｌの濃度において存在し、そして上記リン酸バッファーがリン酸中、１０ｍＭにおいて存在する、上記請求項４６に記載の製品。
【請求項４８】
３２．７５μｇの組換えＦＳＨ、９．０μｇの組換えＬＨ、１５．０ｍｇのスクロース、０．０５２ｍｇのＮａＨ2ＰＯ4 Ｈ2Ｏ、０．８２５ｍｇのＮａ2ＨＰＯ4 ２Ｈ2Ｏ、０．０５ｍｇのポロキサマー１８８、及び０．０５ｍｇのＬ−メチオニンを含んで成る、請求項１１に記載の製品。
【請求項４９】
６５．５μｇの組換えＦＳＨ、１８．０μｇの組換えＬＨ、３０．０ｍｇのスクロース、０．１０４ｍｇのＮａＨ2ＰＯ4 Ｈ2Ｏ、１．６５ｍｇのＮａ2ＨＰＯ4 ２Ｈ2Ｏ、０．１０ｍｇのポロキサマー１８８、及び０．１０ｍｇのＬ−メチオニンを含んで成る、請求項１１に記載の製品。
【請求項５０】
卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ポロキサマー１８８である界面活性剤、及び液体希釈剤の溶液を形成し、そしてさらにメチオニン並びにフェノール及びｍ−クレゾールから選択される静菌剤を添加する工程を含んで成る医薬組成物の製造方法。
【請求項５１】
バイアル、アンプル、又はカートリッジ中に、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、及びポロキサマー１８８である界面活性剤を含んで成る溶液を入れ、そしてさらにメチオニン並びにフェノール及びｍ−クレゾールから選択される静菌剤を入れる工程を含んで成るパッケージ医薬組成物の製造方法。
【請求項５２】
ＬＨ及び／又はＦＳＨ、並びにポロキサマー１８８である界面活性剤の混合物を形成する工程、メチオニンを添加し、そして当該混合物を凍結乾燥にかける工程、並びにフェノール及びｍ−クレゾールから選択される静菌剤を含有する再構成のための溶媒を提供する工程を含んで成る、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の製品の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の医薬製剤、黄体形成ホルモン（ＬＨ）の製剤、及びＦＳＨと黄体形成ホルモン（ＬＨ）の混合物、並びにこのような製剤の生産方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、及び絨毛性ゴナドトロピン（ＣＧ）は、ゴナドトロピンのクラスに分類される注射用タンパク質である。ＦＳＨ、ＬＨ及びｈＣＧは、女性及び男性患者の両方において単独で、及び不妊症の処置及び生殖疾患の組み合わせにおいて使用される。
【０００３】
本質的に、ＦＳＨ及びＬＨは脳下垂体において産出される、医薬的使用のためにＦＳＨ及びＬＨ及びこれらの変異体は組換え的（ｒＦＳＨ及びｒＬＨ）に産出され、又はこれらは閉経後の女性の尿から産出することができる。
【０００４】
ＦＳＨは、補助生産医療（ＡＲＴ）のために、排卵誘発（ＯＩ）及び調節卵巣過剰刺激（ＣＯＨ）における女性の患者において使用される。典型的な排卵誘発のための処置療法において、患者は、約６〜約１２日間、ＦＳＨ又は変異体（約７５〜３００ＩＵ  ＦＳＨ／日）の毎日の注射が投与される。調節卵巣過剰刺激の処置療法のために、患者は、約６〜約１２日間、ＦＳＨ又は変異体（約１５０〜６００ＩＵ  ＦＳＨ／日）の毎日の注射が投与される。
【０００５】
またＦＳＨは、過少精子に苦しむ男性において精子形成を誘発するために使用される。週に２回の２，５００ＩＵ  ｈＣＧとの組み合わせにおいて週に３回の１５０ＩＵ  ＦＳＨを使用する療法は、低ゴナドトロピン性生殖機能不全１に苦しむ男性における精子数の向上を達成することにおいて成功的であった。
【０００６】
ＬＨは、ＯＩ及びＣＯＨにおけるＦＳＨと併用して、女性の患者、特に極めて低い内因性ＬＨレベル、又はＬＨに対する抵抗力を有する患者、例えば、低ゴナドトロピン生殖機能不全に苦しむ患者（ＨＨ、ＷＨＯグループ１）、又は高齢の患者（即ち３５歳以上）、及び胚移植、又は早期流産が問題となる患者において使用される。ＦＳＨとの組み合わせにおけるＬＨは、伝統的に、閉経後の女性の尿から抽出されるヒト閉経期ゴナドトロピン（ｈＭＧ）と呼ばれる調製物において利用されてきた。ｈＭＧはＦＳＨ：ＬＨの活性割合が１：１を有する。
【０００７】
ＣＧはＬＨとしての同じレセプターにおいて作用し、同じ応答を誘発する。ＣＧはＬＨよりも長い循環半減期を有し、従ってＬＨ活性の通常長期間持続性の資源として使用される。ＣＧは、ＯＩ及びＣＯＨ療法において、天然ＬＨのピークを模倣し、そして排卵を誘引するために使用される。ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）の注射は、ＦＳＨ又はＦＳＨとＬＨの混合物での刺激の最後に排卵を誘引するために使用される。ＣＧはまた、ＯＩ及びＣＨＯのための刺激の間、例えば、上述のようにＬＨ活性が所望される患者における刺激の間、ＬＨ活性を供するためにＦＳＨとともに使用することができる。
【０００８】
ＦＳＨ、ＬＨ及びＣＧは、チロイド刺激ホルモン（ＴＳＨ）も含むヘテロ二量体である糖タンパク質ホルモンファミリーのメンバーである。当該ファミリーのメンバーは、α−及びβ−サブユニットを含んで成るヘテロ二量体である。当該サブユニットは、非共有結合性相互作用により共に維持される。当該ヒトＦＳＨ（ｈＦＳＨ）へテロ二量体は、（ｉ）他のヒトファミリーメンバー（即ち、絨毛性ゴナドトロピン（「ＣＧ」）、黄体形成ホルモン（「ＬＨ」）及びチロイド刺激ホルモン（「ＴＳＨ」）にも共通である、成熟した９２のアミノ酸糖タンパク質アルファサブユニット；及び（ii）ＦＳＨ2に対してユニークである成熟した１１１のアミノ酸ベータサブユニットから成る。ヒトＬＨへテロ二量体は（ｉ）成熟した９２のアミノ酸糖タンパク質アルファサブユニット；及び（ii）ＬＨ3に対してユニークである成熟した１１２のアミノ酸ベータサブユニットから成る。当該糖タンパク質のアルファ及びベータサブユニットは、防腐剤、界面活性剤及び他の賦形剤との相互作用により、製剤において解離する傾向にある。サブユニットの解離は、生物効果４の損失を導く。
【０００９】
ＦＳＨは、筋肉内（ＩＭ）又は皮下（ＳＣ）の注射のために処方される。ＦＳＨは、２〜２５℃で保管した場合、一年半〜二年の有効期間を伴い７５ＩＵ／バイアル及び１５０ＩＵ／バイアルのバイアル又はアンプルにおいて凍結乾燥（固形）形態において供される。注射のための溶液は、注射用水（ＷＦＩ）で凍結乾燥製品を再構成することにより形成される。排卵誘発又は調節卵巣過剰刺激のために、７５ＩＵ〜６００ＩＵの開始用量を伴う毎日の注射は、およそ１０日間まで推奨される。患者の応答に依存して、増加用量のＦＳＨでの処置の３周期まで使用することができる。凍結乾燥製剤により、患者は希釈剤で新しいバイアルの凍結乾燥物質を再構成すること、そして毎日、再構成後直ぐに投与することが必要とされる[Package insert N1700101A, published in February 1996, for Fertinex (urofollitropin for injection, purified) for subcutaneous injection, by Serono Laboratories, Inc., Randolph, MA]。
また、ＦＳＨは、バイアル又はアンプル中に、単用量及び複数用量液体製剤の両方において処方されている。単用量製剤は使用前の保管において安定性及び効力を維持しなければならない。複数用量製剤は、使用前の保管における安定性及び効力だけでなく、アンプルを開封後、複数用量が投与される使用計画期間にわたり、安定性、効力、及び細菌の相対的除外を維持しなければならない。当該理由のために、複数用量製剤は、しばしば静菌剤を含む。
【００１０】
ＬＨは、筋肉内（ＩＭ）又は皮下（ＳＣ）注射のために使用される。ＬＨは、２〜２５℃で保管した場合、一年半〜二年の有効期間を伴い７５ＩＵ／バイアル及び１５０ＩＵ／バイアルのバイアル又はアンプルにおいて凍結乾燥（固形）形態において供される。注射のための溶液は、注射用水（ＷＦＩ）で凍結乾燥製品を再構成することにより形成される。排卵誘発又は調節卵巣過剰刺激のために、ＦＳＨとの組み合わせにおいて、７５ＩＵ〜６００ＩＵの開始用量を伴う毎日の注射は、およそ１０日間まで推奨される。
【００１１】
EP 0 618 808 (Applied Research Systems ARS Holding N. V. )は、ゴナドトロピンの固形親和混合物、並びに単独及びグリシンとの組み合わせにおける安定量のスクロースを含んで成る医薬組成物を開示する。
【００１２】
EP 0 814 841 (Applied Research Systems ARS Holding N. V. )は、組換えヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、及び安定量のマンニトールを含んで成る安定な液体医薬組成物を開示する。
【００１３】
EP 0 448 146 (AKZO N. V. )は、１重量部のゴナドトロピン；及び２００〜１０，０００重量部のゴナドトロピンに付随したジカルボン酸塩安定剤を含んで成る凍結乾燥体を含む安定化ゴナドトロピンを開示する。
【００１４】
EP 0 853 945 (Akzo Nobel N. V. )は、製剤がゴナドトロピン及び安定量のポリカルボン酸又はその塩、及びそのチオエステル化合物を含んで成ることにおいて特徴付けられる、液体ゴナドトロピン−含有製剤を開示する。
【００１５】
WO 00/04913 (Eli Lilly and Co.)は、アルファ及びベータサブユニットを含むＦＳＨ又はＦＳＨ変異体、並びにフェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、ベンズアルコニウムクロリド、ベンズエトニウムクロリド、ヒドロ酢酸ナトリウム、及びチメロサール、又はこれらの混合体から選択される防腐剤を水性希釈剤中に含んで成る製剤を開示する。
【００１６】
これらの単用量又は複数用量のいずれかの投与のための、ＦＳＨ又はＦＳＨ変異体、及びＦＳＨとＬＨの混合物の安定な液体製剤のために必要性を残す。
【発明の開示】
【００１７】
発明の概要
本発明の目的は、ＦＳＨ又はＦＳＨ変異体、ＬＨ又はＬＨ変異体の新規なフリーズドライ、並びに液体製剤を供すること、これらの調製方法、及び不妊疾患の処置におけるこれらの医薬的又は獣医学的使用方法を供することである。
【００１８】
本発明の更なる目的は、ＦＳＨとＬＨの混合物の新規なフリーズドライ及び液体製剤を供すること、これらの調製方法、及び不妊疾患の処置におけるこれらの医薬的又は獣医学的使用方法を供することである。
【００１９】
最初の観点において、本発明はＦＳＨ又はその変異体、並びにエチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、好ましくは、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成るフリーズドライ及び液体医薬組成物を供する。
【００２０】
第二の観点において、本発明はＦＳＨ又はその変異体、並びにエチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、好ましくは、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤、並びにＷＦＩの溶液を形成することを含んで成る、液体医薬組成物の製造方法を供する。
【００２１】
第三の観点において、本発明はＦＳＨ、並びにエチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、好ましくは、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成る溶液を容器に分配することを含んで成る、パッケージ医薬組成物の製造方法を供する。
【００２２】
第四の観点において、本発明はＦＳＨ又はＦＳＨ変異体、並びにエチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、好ましくは、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤の溶液を含んで成るバイアル、そしてこのような溶液が最初の使用後、約２４時間又はそれ以上にわたり維持することを記載する記載資料を含んで成るヒト医薬の使用のための製品を供する。
【００２３】
第五の観点において、本発明はＦＳＨ及びＬＨ、並びにエチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、好ましくは、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成るフリーズドライ及び液体医薬組成物を供する。
【００２４】
第六の観点において、本発明はＦＳＨ及びＬＨ、並びにエチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、好ましくは、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤の溶液を形成することを含んで成る、フリーズドライ及び液体医薬組成物の製造方法を供する。
【００２５】
第七の観点において、本発明はＦＳＨ及びＬＨ、並びにエチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、好ましくは、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成る溶液を容器に分配することを含んで成る、パッケージ医薬組成物の製造方法を供する。
【００２６】
第八の観点において、本発明はＦＳＨ及びＬＨ、並びにエチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、好ましくは、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤の溶液を含んで成るバイアル、そしてこのような溶液が最初の使用後、約２４時間又はそれ以上にわたり維持することを記載する記載資料を含んで成るヒト医薬の使用のための製品を供する。
【００２７】
第九の観点において、本発明は、フリーズドライＦＳＨ又はＦＳＨ変異体、並びにエチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、好ましくは、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成る第一容器、そして再構成のための溶媒、好ましくは静菌剤、好ましくはｍ−クレゾールを含む水溶液を含んで成る第二容器を含んで成る、ヒト医薬の使用のための製品を供する。
【００２８】
第十の観点において、本発明は、フリーズドライＬＨ又はＬＨ変異体、並びにエチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、好ましくは、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成る第一容器、そして再構成のための溶媒、好ましくは静菌剤、好ましくはｍ−クレゾールを含む水溶液を含んで成る第二容器を含んで成る、ヒト医薬の使用のための製品を供する。
【００２９】
第十一の観点において、本発明は、フリーズドライＦＳＨ及びＬＨ、又はＦＳＨ若しくはＬＨの変異体、並びにエチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、好ましくは、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成る第一容器、そして再構成のための溶媒、好ましくはｍ−クレゾール伴う水溶液を含んで成る第二容器を含んで成る、ヒト医薬の使用のための製品を供する。
【００３０】
発明の詳細な説明
本発明の液体及びフリーズドライＦＳＨ又はＦＳＨ及びＬＨ製剤は、向上した、又はより適当な特性又は安定性を有し、そして女性及び／又は男性における不妊治療のために有用である。これらの製剤及び製品は、注射用の使用、及び他の送達系、例えば、制限することなく、経鼻、肺、経粘膜、経皮、経口、皮下、筋肉内、又は開放を維持する非経口において更に適当である。特に好ましい態様において、本発明の製剤は、皮下及び／又は筋肉内注射のためのものである。供されたＦＳＨ又はＦＳＨ及びＬＨ変異体溶液及び製剤はまた、活性又は安定性の損失を防ぐこと、あるいは減少させることにより、あるいは投与の有効性又は所望性のいずれかの観点、例えば、少なくとも１つのモード、頻度、薬用量、快適性、使用の容易性、試験管内又は生体内における生物活性等を向上することにより、既知の商業製品と比較して、時間の経過における増加した生体内効果を有することができる。
【００３１】
本明細書にいて使用される卵胞刺激ホルモン又はＦＳＨは、制限することなくヒトＦＳＨ又は「ｈＦＳＨ」を含む完全長の成熟タンパク質として産出されたＦＳＨ、あるいは組換え的に産出された、又はヒト資源、例えば、閉経前の女性の尿から単離されたものを意味する。
【００３２】
「ＦＳＨ変異体」の表現は、アミノ酸配列、グリコシル化パターン、又はサブユニット間の結合がヒトＦＳＨとは異なるが、ＦＳＨ活性を示すこれらの分子を包含することを意味する。例は、野生型α−サブユニット及びハイブリッドβ−サブユニットから成る長期作用的に改変された組換えＦＳＨであるＣＴＰ−ＦＳＨ（ここでｈＣＧのカルボキシ末端ペプチドは、ＦＳＨのβ−サブユニットのＣ−末端を融合している）を含む（LaPolt et al. ; Endocrinology; 1992, 131, 2514- 2520 ; 又は Klein et al. ; Development and characterization of a long-acting recombinant hFSH agonist ; Human Reprod. 2003,18, 50-56）。また、以下の配列（Ｎ−末端からＣ−末端）から成る一本鎖分子である一本鎖ＣＴＰ−ＦＳＨも含まれる。
【表１】
0004699991.tif 000002
Klein et aｌに説明されるとおり、上記βＦＳＨはＦＳＨのβ−サブユニットを表し、βｈＣＧ  ＣＴＰ（１１３〜１４５）はｈＣＧのカルボキシ末端ペプチドを表し、そしてαＦＳＨはＦＳＨのα−サブユニットを表す。ＦＳＨ変異体の他の例は、WO 01/58493 (Maxygen)において開示される、特にWO 01/58493 の請求項１０及び１１において開示される、α−及び／又はβ−サブユニットにおいて組み込まれた追加的なグリコシル化部位を有するＦＳＨ分子、及びWO 98/58957において開示されるサブユニット内Ｓ−Ｓ結合を伴うＦＳＨ分子を含む。
【００３３】
本明細書に関するＦＳＨ変異体は、配列番号２の完全長成熟タンパク質よりも短いベータサブユニットのカルボキシ末端欠損も含む。ヒトベータサブユニットのカルボキシ末端欠損は、配列番号３、４、及び５において供される。ベータ鎖のカルボキシ末端変異体は、ＦＳＨ変異体ヘテロ二量体を形成するために既知のアルファサブユニットと二量体を形成することが理解される。
【００３４】
ＦＳＨヘテロ二量体、又はＦＳＨ変異体へテロ二量体は、いずれかの適当な方法、例えば、組換え的な方法により、可能ならば、天然資源から単離若しくは精製により、又は化学合成により、又はこれらのいずれかの組み合わせにより産出することができる。
【００３５】
「組換え」の語の使用は、組換えＤＮＡ技術（例えば、WO 85/01985を参照のこと）を使用して産出されるＦＳＨ、ＬＨ、又はＦＳＨ及びＬＨ変異体の調製物を意味する。ＦＳＨのゲノム及びｃＤＮＡクローンのための配列は、いくつかの種6のα及びベータサブユニットのために既知である。組換え技術を使用するＦＳＨ又はＬＨの発現方法の１つの例は、真核生物細胞をＦＳＨ又はＬＨのアルファ及びベータサブユニットをコードするＤＮＡ配列、あるいは欧州特許EP 0 211 894 及び EP 0 487 512において説明されるように分離したプロモーターを有する各サブユニットを伴う供された１つのベクター又は２つのベクターでトランスフェクションすることによるものである。ＦＳＨ又はＬＨを産出するための組換え技術の使用の他の例は、欧州特許EP 0 505 500 (Applied Research Systems ARS Holding NV)において説明されているように、ＦＳＨ又はＬＨのサブユニットをコードする内因性配列に対して、操作的コネクションにおける異種制御セグメントを挿入するための異種組換えの使用によるものである。
【００３６】
本発明に関して使用されるＦＳＨ又はＦＳＨ変異体は、哺乳類細胞由来を含む組換え手段だけでなく、他の生物資源、例えば、尿資源から精製することができる。受容可能な方法は、Hakola, K. Molecular and Cellular Endocrinology, 127: 59-69,1997 ; Keene, et al., J. Biol. Chem. , 264: 4769- 4775,1989 ; Cerpa-Poijak, et al., Endocrinology, 132: 351-356,1993 ; Dias, et al., J. Biol. Chem., 269 : 25289-25294, 1994; Flack, et al., J. Biol. Chem., 269: 14015-14020, 1994;及びValove, et al., Endocrinology, 135: 2657-2661,1994, 米国特許第3,119, 740号、及び米国特許第5,767, 067号において説明されるものを含む。
【００３７】
本明細書において使用される黄体形成ホルモン又はＬＨは、制限することなく、ヒトＬＨ又は「ｈＬＨ」として産出される完全長の成熟細胞、並びに組換え的に産出され、又はヒト資源、例えば、閉経前の女性の尿から単離されるものを意味する。ヒト糖タンパク質アルファサブユニットのタンパク質配列は配列番号１において供され、そしてヒトＬＨベータサブユニット７は配列番号６において供される。好ましくは態様において、ＬＨは組換え体である。
【００３８】
「ＬＨ変異体」の表現は、アミノ酸配列、グリコシル化パターン、又はサブユニット間の結合がヒトＬＨとは異なるが、ＬＨ活性を示すこれらの分子を包含することを意味する。
【００３９】
ＬＨヘテロ二量体、又はＬＨ変異体ヘテロ二量体は、いずれかの適当な方法、例えば、組換え的な方法により、可能ならば、天然資源から単離若しくは精製により、又は化学合成により、又はこれらのいずれかの組み合わせにより産出することができる。
【００４０】
「投与する」又は「投与すること」の語は、本発明の製剤を疾患又は状態の処置を必要とする患者の身体に導入することを意味する。
【００４１】
「患者」の語は、疾患又は状態を処置される哺乳類を意味する。患者は、制限することなく、以下の期限、ヒト、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、ウサギ等である。
【００４２】
ＦＳＨ活性に関する「効力」の語は、ＦＳＨに関連する生物応答、例えば、スチールマン−ポーリーアッセイ8における卵巣重量増加、又は女性患者における卵胞成長を誘発するためのＦＳＨ製剤又は混合製剤の能力を意味する。女性患者における卵胞成長は、例えば、８日間の刺激における平均直径が約１６ｍｍを有する卵胞の数に関して超音波により評価することができる。生物活性は、ＦＳＨのために受容可能な標準に関して評価される。
【００４３】
ＬＨ活性に関する「効力」の語は、ＬＨに関連する生物応答、例えば、精嚢重量増加法９に関するＬＨ製剤又は混合製剤の能力を意味する。ＬＨの生物活性は、ＬＨのために受容可能な標準に関して評価される。
【００４４】
「水性希釈剤」の語は、水を含む液体溶媒を意味する。水性溶媒系は、専ら水を含んでよく、水プラス１又は複数の混和性溶媒から成ってよく、そして溶解性溶質、例えば、糖、バッファー、塩又は他の賦形剤を含んでよい。より一般的に使用される非−水性溶媒は、短鎖有機アルコール、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、短鎖ケトン、例えば、アセトン、及びポリアルコール、例えば、グリセロールである。
【００４５】
「等張剤」は、物理的に許容され、そして、水の正味の流れが当該製剤と接触する細胞膜を越えることを防ぐために適当な等張性を製剤に分け与える化合物である。グリセリンのような化合物は、既知の濃度において、このような目的のために通常使用される。他の適当な等張剤は、制限することなく、アミノ酸又はタンパク質（例えば、グリシン、又はアルブミン）、塩（例えば、塩化ナトリウム）、及び糖（例えば、でキストロース、スクロース、及びラクトース）を含む。
【００４６】
「静菌的な」又は「静菌剤」の語は、抗細菌剤として作用するために製剤に添加される化合物又は組成物である。本発明の保存されたＦＳＨ若しくはＦＳＨ変異体、又はＦＳＨ及びＬＨ含有製剤は、好ましくは、好ましくはヒトにおいて商業的に利用できる複数使用製品とするための保存効果のための規定又は調整されたガイドラインに適合する。静菌剤の例は、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、ベンズアルコニウムクロリド、ベンズエトニウムクロリド、ヒドロ酢酸ナトリウム、及びチメロサールを含む。
【００４７】
「バッファー」又は「生理的に受容可能なバッファー」の語は、製剤において医薬又は獣医学的使用に安全であることが知られた、そして製剤のために所望されるｐＨ範囲における製剤のｐＨを維持又は調整する効果を有する化合物の溶液を意味する。中程度の酸性ｐＨから中程度の塩基性ｐＨにおいてｐＨを調整するための受容可能なバッファーは、制限することなく、リン酸、酢酸、クエン酸、アルギニン、ＴＲＩＳ、及びヒスチジン等の化合物を含む。「ＴＲＩＳ」は、２−アミノ−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール、及びいずれかの生理的に受容可能なその塩を意味する。好ましくは、バッファーは生理食塩水又は受容可能な塩を伴うリン酸バッファーである。
【００４８】
「リン酸バッファー」の語は、所望するｐＨに調整したリン酸又はその塩を含む溶液を意味する。一般的にリン酸バッファーは、リン酸、又は制限することなく、ナトリウム及びカリウム塩を含むリン酸の塩から調製される。リン酸のいくつかの塩、例えば、酸のナトリウム及びカリウムの一塩基性、二塩基性、及び酸塩基性塩は、当業界において既知である。リン酸の塩はまた、塩を生じる水和物として発生することが知られている。リン酸バッファーは、例えば、約ｐＨ４〜約ｐＨ１０の範囲を網羅でき、及び好ましくは約ｐＨ５〜約ｐＨ９の範囲、最も好ましくは約ｐＨ６．０〜約ｐＨ８．０の範囲であり、最も好ましくは約ｐＨ７．０である。
【００４９】
「バイアル」の語は広く、無菌状態において含まれる固形又は液体形態におけるＦＳＨを維持するための適当な容器を意味する。本明細書において使用されるバイアルの例は、アンプル、カートリッジ、ブリスターパッケージ、又はシリンジ、ポンプ（浸透圧性を含む）、カテーテル、経皮パッチ、肺、又は経粘膜スプレーを介して患者にＦＳＨを送達するために適当な他のこのような容器を含む。非経口的、肺、経粘膜、又は経皮投与のためのパッケージ製品に適当なバイアルは、当業界において周知であり、認識されている。
【００５０】
「安定性」の語は、本発明の製剤におけるＦＳＨ及びＬＨの物理的、化学的、及び高次構造的な安定性を意味する（生物効果の維持を含む）。タンパク質製剤の不安定性は、化学的分解又はより高次のポリマーを形成するためのタンパク質分子の凝集により、ヘテロ二量体の単量体への解離、脱グリコシル化、グリコシル化の修飾、酸化（特にα−サブユニット）、又は本発明に含まれるＦＳＨポリペプチドの少なくとも１つの生物活性を減少するいずれかの他の構造的修飾により生じうる。
【００５１】
「安定な」溶液又は製剤は、タンパク質の分解、修飾、生物活性の減少等の程度が受容可能的に調整され、そして時間を伴い非受容性を増加しないものである。好ましくは、当該製剤は、約２〜８℃、より好ましくは約２〜８℃、より好ましくは約４〜５℃の温度における６ヶ月間にわたりラベルＦＳＨ活性の少なくとも約８０％、ラベルＬＨ活性の少なくとも約８０％を維持する。ＦＳＨ活性は、スチールマン−ポーリー卵巣重量増加バイオアッセイ5を使用して測定することができる。ＬＨ活性は、精嚢重量増加バイオアッセイ10を使用して測定することができる。
【００５２】
「処置すること」の語は、ＦＳＨ及び／又はＬＨ投与が卵胞又は精巣刺激又はＦＳＨ及び／又はＬＨにより調節されるいずれかの他の生理応答の目的に望ましい患者への投与、追跡、管理及び／又はケアを意味する。従って、処置することは、男性における精子の質の誘導又は向上、テストステロン放出を刺激、又は女性における卵胞発達、又は排卵誘発のために、制限することなく、ＦＳＨ及び／又はＬＨの投与を含んでよい。
【００５３】
「複数用量使用」の表現は、ＦＳＨ製剤の１つのバイアル、アンプル、又はカートリッジ、又はＦＳＨ及びＬＨの製剤の１回以上の注射、例えば、２、３、４、５、６又はそれ以上の注射の使用を含むことを意図する。当該注射は、少なくとも約１２時間、２４時間、４８時間等、好ましくはおよそ１２日未満の期間にわたりされる。当該注射は例えば、６、１２、２４、４８又は７２時間の期間の間隔に分けることができる。
【００５４】
タンパク質の「塩」は酸又は塩基添加塩である。このような塩は、好ましくはタンパク質中のいずれか１以上の帯電基、及びいずれか１以上の生理的に受容可能な、非毒性のカチオン又はアニオンの間に好ましくは形成される。有機及び無機塩は、例えば、、酸、例えば、塩酸、硫酸、スルホン酸、酒石酸、フマル酸、臭化水素酸、グリコール酸、クエン酸、マレイン酸、リン酸、コハク酸、酢酸、硝酸、安息香酸、アスコルビン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸、カルボン酸等、又は例えば、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム又はマグネシウムから調製されるものを含む。
【００５５】
本発明者は、ＦＳＨ及びＦＳＨとＬＨの混合物を、エチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、好ましくは、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８（登録商標）、特に好ましくはプルロニックＦ６８（ＢＡＳＦ、プルロニックＦ６８はポロキサマー１８８としても知られる）から選択される界面活性剤で処方することにより、彼らは、バイアル及び／又は送達器具（例えば、シリンジ、ポンプ、カテーテル等）の表面に吸着することにより乗じる活性成分（ＦＳＨ又はＦＳＨ及びＬＨ）の損失を最小にする安定な製剤をえることを発見した。
【００５６】
本発明者は、更に、ＦＳＨ及びＦＳＨとＬＨの混合物を、エチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー、好ましくは、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８（登録商標）、特に好ましくはプルロニックＦ６８（ＢＡＳＦ、プルロニックＦ６８はポロキサマー１８８としても知られる）から選択される界面活性剤で処方することにより、彼らは、静菌剤、例えば、ｍ−クレゾール及びフェノールの存在下における沈殿の問題を回避する安定な製剤を得ることを発見した。ＴＷＥＥＮ２０をｍ−クレゾール又はフェノールとともに使用する場合、濁った又は乳白の溶液の製剤をもたらす沈殿が生じる。
【００５７】
プルロニック界面活性剤は、エチレンオキシド（ＥＯ）とプロピレンオキシド（ＰＯ）のブロックコポリマーである。当該プロピレンオキシドブロック（ＰＯ）は、２つのエチレンオキシド（ＥＯ）ブロックに挟まれる。
【化１】
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【００５８】
プルロニック界面活性剤は２工程のプロセスにおいて合成される：
１．プロピレングリコールの２つのヒドロキシル基に対してプロピレンオキシドの制御的に付加することにより所望する分子量の疎水部分を作製する；及び
２．エチレンオキシドを親水性基の間に疎水部分を挟むために、エチレンオキシドを添加する。
【００５９】
プルロニック（登録商標）Ｆ７７において、ポリエチレン（伸水性）のパーセンテージは７０％であり、疎水性部分（ポリプロピレン）の分子量は約２，３０６Ｄａである。
【００６０】
プルロニックＦ８７において、ポリエチレン（伸水性）のパーセンテージは７０％であり、疎水性部分（ポリプロピレン）の分子量は約２，６４４Ｄａである。
【００６１】
プルロニックＦ８８において、ポリエチレン（伸水性）のパーセンテージは８０％であり、疎水性部分（ポリプロピレン）の分子量は約２，６４４Ｄａである。
【００６２】
プルロニックＦ６８において、ポリエチレン（伸水性）のパーセンテージは８０％であり、疎水性部分（ポリプロピレン）の分子量は約１，９６７Ｄａである。
【表２】
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【表３】
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【表４】
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【００６３】
上記に挙げたものと同様の特性を有する他のポリマーもまた、本発明の製剤において使用することができる。好ましい界面活性剤は、プルロニックＦ６８であり、そして同様な統特性を有する界面活性剤である。
【００６４】
プルロニック、特にプルロニックＦ６８は、好ましくは所望する保管期間（例えば、６〜１２〜２４ヶ月）にわたりＦＳＨ及び／又はＬＨ安定性を維持するために十分な濃度において、又は例えば、バイアル、アンプル、又はカートリッジ、又はシリンジの表面における吸着によるタンパク質の減少を防止するために十分な濃度において当該製剤中に存在する。
【００６５】
好ましくは、液体製剤中のプルロニック、特にプルロニックＦ６８の濃度は、約０．０１ｍｇ／ｍｌ〜約１ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約０．５ｍｇ／ｍｌ、より特に好ましくは約０．２ｍｇ／ｍｌ〜約０．４ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌである。
【００６６】
フリーズドライ製剤中の卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）は、好ましくは、全製剤の約０．１〜１０μｇ／ｍｌの濃度（ｗ／ｗ）において存在する。ある態様において、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）は全製剤の約０．３〜５μｇ／ｍｌの濃度において存在する。更なる態様において卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）は全製剤の約０．３７〜２μｇ／ｍｌの濃度において存在する。
【００６７】
フリーズドライ製剤中の黄体形成ホルモン（ＬＨ）は、好ましくは、全製剤の約０．１〜３μｇ／ｍｌの濃度において存在する。ある態様において、黄体形成ホルモン（ＬＨ）全製剤の約０．１〜１μｇ／ｍｌの濃度において存在する。更なる態様において黄体形成ホルモン（ＬＨ）は全製剤の約０．１〜０．６μｇ／ｍｌの濃度において存在する。
【００６８】
ＦＳＨを含んで成る液体製剤−再構成した製剤を含む−において、製剤中のＦＳＨの濃度は、約１５０ＩＵ／ｍｌ〜約２，０００ＩＵ／ｍｌ、より好ましくは約３００ＩＵ／ｍｌ〜約１，５００ＩＵ／ｍｌ、より特に好ましくは約４５０ＩＵ／ｍｌ〜約７５０ＩＵ／ｍｌ、最も好ましくは約６００ＩＵ／ｍｌである。
【００６９】
ＬＨを含んで成る液体製剤−再構成した製剤を含む−において、製剤中のＬＨの濃度は、約５０ＩＵ／ｍｌ〜約２，０００ＩＵ／ｍｌ、より好ましくは約１５０ＩＵ／ｍｌ〜約１，５００ＩＵ／ｍｌ、より特に好ましくは約３００ＩＵ／ｍｌ〜約７５０ＩＵ／ｍｌ、最も好ましくは約６２５ＩＵ／ｍｌである。
【００７０】
ＦＳＨ及びＬＨの療法を含んで成る製剤において、ＬＨに対するＦＳＨの割合（ＦＳＨ：ＬＨ、ＩＵ：ＩＵ、ＦＳＨは卵巣重量増加アッセイで測定し、ＬＨは精嚢重量増加アッセイで測定した）は、好ましくは約６：１〜約１：６、より好ましくは約４：１〜約１：２、より特に好ましくは約３：１〜約１：１の範囲における。特に好ましい割合は１：１及び２：１である。
【００７１】
フリーズドライ製剤において、界面活性剤、例えば、プルロニックＦ６８は、好ましくは全製剤１ｍｇあたり約０．００１〜約０．１ｍｇ、より好ましくは約０．０１〜約０．０７５ｍｇ／ｍｇの濃度において存在する。
【００７２】
好ましくは再構成製剤中、プルロニック、特にプルロニックＦ６８の濃度は、約０．０１〜約１ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．０５〜約０．５ｍｇ／ｍｌ、より特に好ましくは約０．２ｍｇ／ｍｌ〜約０．４ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌである。
【００７３】
好ましくは、ＦＳＨ及びＬＨは組換え的に産出され、特に好ましくはこれらは、ＦＳＨ又はＬＨのヒト糖タンパク質アルファ−サブユニット及びベータ−サブユニットをコードするＤＮＡを含んで成る１つのベクター又は複数のベクターでトランスフェクションされた中国ハムスターの卵巣細胞において産出される。アルファ−サブユニット及びベータ−サブユニットをコードするＤＮＡは、同一又は異なるベクターにおいて存在してもよい。
【００７４】
組換えＦＳＨ及びＬＨは、これらの尿中の対応物にわたりいくつかの有利性を有する。組換え細胞を使用する培養及び単離技術はバッチ間の一貫性を許容する。反対に尿ＦＳＨ及びＬＨはバッチ間において、例えば、サブユニットの純度、グリコシル化パターン、シアル化及び酸化等の特徴において顕著に異なる。組換えＦＳＨ及びＬＨの顕著なバッチ間の一貫性及び純度により、当該ホルモンは、等電点電気泳動（ＩＥＦ）のような技術を使用して容易に同定及び定量することができる。組換えＦＳＨ及びＬＨが同定及び定量することができることの容易性は、バイオアッセイによる充填よりもホルモン量によるバイアルの充填（フィル−バイ−マス）を許容する。
【００７５】
本発明のＦＳＨの好ましい製剤は、約ｐＨ７．０、ｐＨ７．２、ｐＨ７．４を含む約６．０〜約８．０、より好ましくは約６．８〜約７．８のｐＨを有する。好ましいバッファーは、好ましくはナトリウム又はカリウムイオンであるカウンターイオンを伴うリン酸である。リン酸生理食塩水バッファー、例えば、ダルベッコリン酸バッファー生理食塩水は当業界において周知である。全溶液中のバッファー濃度は、約５ｍＭ、９．５ｍＭ、１０ｍＭ、５０ｍＭ、１００ｍＭ、１５０ｍＭ、２００ｍＭ、２５０ｍＭ、及び５００ｍＭの間で変化してもよい。好ましいバッファー濃度は、約１０ｍＭである。特に好ましくはｐＨ７．０を有するリン酸イオン中の１０ｍＭのバッファーである。
【００７６】
本発明のＦＳＨとＬＨの混合物の製剤は、好ましくは、ｐＨ７．０、ｐＨ８．０、ｐＨ８．２を含む約６．０〜約９．０、より好ましくは約６．８〜約８．５のｐＨを有し、最も好ましくは約ｐＨ８．０である。
【００７７】
本発明は、液体製剤、並びに、溶媒が注射用水において再構成することができるフリーズドライ（凍結乾燥製剤）製剤に導かれる。液体製剤は単用量又は複数用量であってよい。複数用量の使用のための本発明のこれらの液体並びにフリーズドライＦＳＨ及び／又はＬＨ製剤は、好ましくは静菌剤、例えば、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、チモール、ベンズアルコニウムクロリド、ベンズエトニウムクロリド、ヒドロ酢酸ナトリウム、及びチメロサールを含んで成る。特に好ましくはフェノール、ベンジルアルコール、及びｍ−クレゾールであり、より好ましくはフェノール、及びｍ−クレゾールであり、最も好ましくはｍ−クレゾールである。当該静菌剤は、複数用量の注射期間にわたり、ここで当該期間は約１２又は２４時間〜約１２又は１４日間であり、好ましくは約６〜約１２日間である、当該製剤が本質的に細菌を含まないように維持するために有効である濃度を生じる量において使用される（注射用に適当）。当該静菌剤は、約０．１％（静菌剤質量／溶媒質量）〜約２．０％、より好ましくは約０．２％〜約１．０％の濃度において存在する。ベンジルアルコールの場合、特に好ましくは０．９％の濃度である。フェノールの場合、特に好ましくは約０．５％の濃度である。ｍ−クレゾールの場合、特に好ましくは約０．３％（例えば、ＷＦＩ中約３ｍｇ／ｍｌ）の濃度である。
【００７８】
好ましい態様において、本発明は、ＦＳＨ又はその変異体、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤、並びにｍ−クレゾール及びフェノール、好ましくはｍ−クレゾールから選択される静菌剤含んで成る、好ましくは複数用量の使用のための液体医薬組成物を供する。
【００７９】
更に好ましい態様において、本発明は、ＬＨ、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤、並びにｍ−クレゾール及びフェノール、好ましくはｍ−クレゾールから選択される静菌剤含んで成る、好ましくは複数用量の使用のための液体医薬組成物を供する。
【００８０】
更に好ましい態様において、本発明は、ＦＳＨ及びＬＨ、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤、並びにｍ−クレゾール及びフェノール、好ましくはｍ−クレゾールから選択される静菌剤含んで成る、好ましくは複数用量の使用のための液体医薬組成物を供する。好ましくはＦＳＨ及びＬＨは、約２：１〜約１：１の割合（ＦＳＨ：ＬＨ）において存在する。
【００８１】
更なる好ましい態様において、本発明は、ＦＳＨ又はその変異体、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤、並びにｍ−クレゾール及びフェノール、好ましくはｍ−クレゾールから選択される静菌剤、並びにＷＦＩの水溶液を形成することを含んで成る、好ましくは複数用量の使用のための液体医薬組成物の製造方法を供する。
【００８２】
更なる好ましい態様において、本発明は、ＬＨ、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤、並びにｍ−クレゾール及びフェノール、好ましくはｍ−クレゾールから選択される静菌剤、並びにＷＦＩの水溶液を形成することを含んで成る、好ましくは複数用量の使用のための液体医薬組成物の製造方法を供する。
【００８３】
更なる好ましい態様において、本発明は、ＦＳＨ及びＬＨ、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤、並びにＷＦＩの水溶液を形成することを含んで成る、好ましくは複数用量の使用のための液体医薬組成物の製造方法を供する。
【００８４】
更に他の好ましい態様において、本発明はＦＳＨ、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤、並びにｍ−クレゾール及びフェノール、好ましくはｍ−クレゾールから選択される静菌剤を含んで成る溶液を容器に分配することを含んで成る、パッケージ医薬組成物の製造方法を供する。
【００８５】
更に他の好ましい態様において、本発明はＦＳＨ及びＬＨ、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤、並びにｍ−クレゾール及びフェノール、好ましくはｍ−クレゾールから選択される静菌剤を含んで成る溶液を容器に分配することを含んで成る、パッケージ医薬組成物の製造方法を供する。
【００８６】
更に他の好ましい態様において、本発明は、ＦＳＨ又はＦＳＨ変異体、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤、並びにｍ−クレゾール及びフェノール、好ましくはｍ−クレゾールから選択される静菌剤の溶液を含んで成るバイアル、そしてこのような溶液が最初の使用後、約２４時間又はそれ以上にわたり維持することを記載する記載資料を含んで成るヒト医薬の使用のための製品を供する。好ましくは、当該記載資料は、当該溶液が最初の使用後約１２又は１４日間まで維持されることができることを記載する。
【００８７】
更に他の好ましい態様において、本発明は、ＦＳＨ及びＬＨ、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤、並びにｍ−クレゾール及びフェノール、好ましくはｍ−クレゾールから選択される静菌剤の溶液を含んで成るバイアル、そしてこのような溶液が最初の使用後、約２４時間又はそれ以上にわたり維持することを記載する記載資料を含んで成るヒト医薬の使用のための製品を供する。好ましくは、当該記載資料は、当該溶液が最初の使用後約１２又は１４日間まで維持されることができることを記載する。
【００８８】
特に好ましい態様において、当該製剤は、ｍ−クレゾール及びプルロニックＦ６８を含んで成る。本発明者は、プルロニックＦ６８を含んで成る製剤が、他の界面活性剤で観察される問題であるｍ−クレゾールの存在下において沈殿をしないという驚くべき発見をした。
【００８９】
最初の使用前、即ち、バイアル、アンプル、又はカートリッジを開封する前に、本発明の製剤は、少なくとも６ヶ月間、１２ヶ月間、又は２４ヶ月間保つことができる。好ましい保管条件下において、最初の使用前、当該製剤は明るい光を避け（好ましくは暗い場所で）、約２〜８℃、より好ましくは約４〜５℃の温度において保たれる。
【００９０】
特別な態様において、本発明は、ＦＳＨ又はその変異体、並びにプルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８、好ましくはプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成る、好ましくは複数用量の使用のための再構成用フリーズドライ製剤を供する。
【００９１】
更なる特別な態様において、本発明は、ＬＨ、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８、好ましくはプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成る、好ましくは複数用量の使用のための再構成用フリーズドライ製剤を供する。
【００９２】
更なる特別な態様において、本発明は、ＦＳＨ及びＬＨ、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８、好ましくはプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成る、好ましくは複数用量の使用のための再構成用フリーズドライ製剤を供する。好ましくは、ＦＳＨ及びＬＨは約２：１〜約１：１の割合（ＦＳＨ：ＬＨ）において存在する。
【００９３】
更に特別な態様において、本発明は、ＦＳＨ又はその変異体と、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８、好ましくはプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤の混合物を形成すること、並びに当該混合物を凍結乾燥にかけることを含んで成る、好ましくは再構成後の複数用量の使用のためのフリーズドライ製剤の製造方法を供する。
【００９４】
更に特別な態様において、本発明は、ＬＨと、プルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８、好ましくはプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤の混合物を形成すること、並びに当該混合物を凍結乾燥にかけることを含んで成る、好ましくは再構成後の複数用量の使用のためのフリーズドライ製剤の製造方法を供する。
【００９５】
更に特別な態様において、本発明は、ＦＳＨ及びＬＨ、及びプルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８、好ましくはプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤の混合物を形成すること、並びに当該混合物を凍結乾燥にかけることを含んで成る、好ましくは再構成後の複数用量の使用のためのフリーズドライ製剤の製造方法を供する。
【００９６】
更に他の好ましい態様において、本発明は、ＦＳＨ、並びにプルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成るフリーズドライ混合物を分配することを含んで成る、パッケージ医薬組成物の製造方法を供する。
【００９７】
更に他の好ましい態様において、本発明は、ＬＨ、並びにプルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成るフリーズドライ混合物を容器に分配することを含んで成る、パッケージ医薬組成物の製造方法を供する。
【００９８】
更に他の好ましい態様において、本発明は、ＦＳＨ及びＬＨ、並びにプルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成るフリーズドライ混合物を容器に分配することを含んで成る、パッケージ医薬組成物の製造方法を供する。
【００９９】
更に他の好ましい態様において、本発明は、フリーズドライＦＳＨ又はＦＳＨ変異体、並びにプルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成る第一容器又はバイアルを含んで成る、ヒト医薬の使用のための製品を供する。第二容器又はバイアルは、再構成のための希釈剤、好ましくは水、並びにｍ−クレゾール及びフェノール、好ましくはｍ−クレゾールから選択される静菌剤を含む。
【０１００】
更に他の好ましい態様において、本発明は、フリーズドライＬＨ又はＬＨ変異体、並びにプルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成る第一容器又はバイアルを含んで成る、ヒト医薬の使用のための製品を供する。第二容器又はバイアルは、再構成のための希釈剤、好ましくは水、並びにｍ−クレゾール及びフェノール、好ましくはｍ−クレゾールから選択される静菌剤を含む。
【０１０１】
更に他の好ましい態様において、本発明は、フリーズドライＦＳＨ又はＦＳＨ変異体、及びＬＨ又はＬＨ変異体、並びにプルロニック（登録商標）Ｆ７７、プルロニックＦ８７、プルロニックＦ８８、及びプルロニックＦ６８から選択される界面活性剤を含んで成る第一容器又はバイアルを含んで成る、ヒト医薬の使用のための製品を供する。第二容器又はバイアルは、再構成のための希釈剤、好ましくは水、並びにｍ−クレゾール及びフェノール、好ましくはｍ−クレゾールから選択される静菌剤を含む。
【０１０２】
特に好ましい態様において、再構成のための溶媒は、ｍ−クレゾールを含む。本発明者は、プルロニックＦ６８を含んで成るフリーズドライ製剤が、他の界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎで観察される問題であるｍ−クレゾールを含む希釈剤で再構成する場合に沈殿しないことを発見した。
【０１０３】
本発明のフリーズドライ製剤は、少なくとも６ヶ月間、１２ヶ月間、又は２４ヶ月間保つことができる。好ましい保管条件下において、最初の使用前、当該製剤は明るい光を避け（好ましくは暗い場所で）、約２５℃、好ましくは約２〜８℃、より好ましくは約４〜５℃の温度において保たれる。
【０１０４】
液体又は再構成した複数用量製剤の最初の使用後、それは少なくとも２４時間、好ましくは少なくとも約４、５、６日間、より好ましくは１２又は１４日間保ち、そして使用することができる。最初の使用後、当該製剤は、好ましくは室温以下（即ち、約２５℃以下）、より好ましくは約１０℃以下、より好ましくは約２〜８℃、最も好ましくは約５〜０℃で保管される。
【０１０５】
本発明の好ましい製剤は、抗酸化剤、例えば、メチオニン、亜硫酸水素ナトリウム、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）の塩、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、及びブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）を含む。最も好ましくはメチオニンである。当該抗酸化剤は、ＦＳＨ及びＬＨ（特にはα−サブユニット）の酸化を防ぐ。
【０１０６】
液体及び／又は再構成された製剤中のメチオニンは、好ましくは約０．０１〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．０５〜約０．５ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌの濃度において存在する。
【０１０７】
好ましくは本発明の製剤は、モノ−若しくはジッサッカライド、又は安定家財及び等張剤として、糖アルコール、例えば、スクロース、デキストロース、ラクトース、マンニトール及び／又はグリセロールを含む。最も好ましくははスクロースであり、好ましくは約６０ｍｇ／ｍｌの濃度における。
【０１０８】
上述のように、本発明は、静菌剤を含む、あるいは製剤が再構成される時に静菌剤が添加される、１回の使用及び複数用量の使用のための液体製剤を供する。本発明の製剤は、医薬的又は獣医学的使用に適当である。
【０１０９】
上述のように、好ましい態様において、本発明は、パッケージ材料、及び水性希釈剤において、ＦＳＨ又はその変異体、ＬＨ、又はＦＳＨ及びＬＨ、並びにプルロニックＦ６８、並びに、任意的にバッファー及び／又は他の賦形剤を伴うｍ−クレゾール及びフェノールから選択される静菌剤の溶液を含んで成るバイアルを含んで成る製品を供する。ここで、上記パッケージ材料は、このような溶液が最初の使用後、約２４時間又はそれ以上にわたり維持することを記載する記載資料を含んで成る。本発明は、更に、パッケージ材料、本発明に従うＦＳＨ又はＦＳＨ変異体の製剤を含んで成るバイアルを含んで成る製品を供する。ここで上記パッケージ材料は、患者に対して、２４時間又はそれ以上にわたり維持することができる溶液を形成するために、ＦＳＨ又はＦＳＨ変異体を水性希釈剤において再構成することを示す記載資料を含んで成る。
【０１１０】
上述のように、好ましい態様において、本発明は、パッケージ材料、並びにフリーズドライＦＳＨ又はＦＳＨ変異体、ＬＨ又はＬＨ変異体、又はＦＳＨ及びＬＨ、プルロニックＦ６８を含んで成るバイアルを含んで成る製品を供する。希釈剤を含む第二容器中の静菌剤は、任意的に更に賦形剤を伴いフェノール及びｍ−クレゾールから選択される。ここで、上記パッケージ材料は、このような溶液が最初の使用後、約２４時間又はそれ以上にわたり維持できることを示す記載資料を含んで成る。
【０１１１】
本発明の製剤中のタンパク質ホルモンの範囲は、再構成において産出する量である、約１．０μｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの濃度を含むが、より低い及びより高い濃度も実施可能であり、そして意図される送達媒体に依存する。例えば、溶液製剤は、経皮パッチ、肺、経粘膜、又は浸透圧若しくはマイクロポンプによる方法とは異なるであろう。当該タンパク質ホルモン濃度は、好ましくは約５．０μｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約１０μｇ／ｍｌ〜約１ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約５０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌである。
【０１１２】
本発明の製剤中のタンパク質ホルモンの範囲は、再構成において産出する量である、約１．０μｇ／ｍｌ〜約５０ｍｇ／ｍｌの濃度を含むが、より低い及びより高い濃度も実施可能であり、そして意図される送達媒体に依存する。例えば、溶液製剤は、経皮パッチ、肺、経粘膜、又は浸透圧若しくはマイクロポンプによる方法とは異なるであろう。当該タンパク質ホルモン濃度は、好ましくは約５．０μｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約１０μｇ／ｍｌ〜約１ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは約５０μｇ／ｍｌ〜約２００μｇ／ｍｌである。
【０１１３】
好ましくは、本発明の製剤は、２４ヶ月の期間にわたるパッケージ期間（最初の使用前）においてＦＳＨ活性及び／又はＬＨ活性の少なくとも約８０％を維持する。ＦＳＨ活性はスチールマン−ポーリー卵巣重量増加バイオアッセイ5を使用して測定することができる。ＬＨ活性は精嚢重量増加バイオアッセイを使用して測定することができる。
【０１１４】
本発明の液体製剤は、固体として、ＦＳＨ若しくはＦＳＨ変異体、ＬＨ、又はＦＳＨとＬＨの混合物、並びにプルロニックＦ６８、並びにフェノール及びｍ−クレゾールから選択される静菌剤を混合すること、あるいはＦＳＨ若しくはＦＳＨ変異体、ＬＨ、又はＦＳＨとＬＨの混合物（「タンパク質」）、並びにプルロニックＦ６８、並びにフェノール及びｍ−クレゾールから選択される静菌剤を水性希釈剤において溶解させることを含んで成るプロセスにより調製することができる。当該成分の混合及びこれらの水性希釈剤における溶解は、慣習的な溶解及び混合手順を使用して行われる。適当な製剤を調製するために、例えば、緩衝溶液中の測定量のＦＳＨ若しくはＦＳＨ変異体、ＬＨ、又はＦＳＨとＬＨの混合物を、緩衝溶液中のプルロニックＦ６８、並びにフェノール及びｍ−クレゾールから選択される静菌剤と所望する濃度において組み合わされる。生じた溶液は、それからバイアル、アンプル又はカートリッジに分配される。当該プロセスの変更は、当業者に認識されるだろう。例えば、当該成分の添加する順番、更なる添加剤を使用するかどうか、製剤が調製される温度及びＰＨは、使用される投与の濃度及び手段のために最適化することができる全ての因子である。
【０１１５】
好ましい態様において、本発明の液体製剤は、製剤の全ての成分の既知の濃度の個々のストック溶液を調製することにより（例えば、緩衝リン酸ナトリウム、スクロース、ＴＷＥＥＮ、メチオニン、ＦＳＨ及び／又はＬＨ）、そして最終製剤として同じ組成の「母液」を形成するために測定量を等分することにより作製される。当該「母液」は、好ましくは微生物を除去するために、Duropore（登録商標）(Millipore) 0.22 ミクロンPDF 膜を通してろ過し、それから一定分量を個々の容器、例えば、バイアル、アンプル、又はカートリッジに分配する。
【０１１６】
本発明のフリーズドライ製剤は、ＦＳＨ若しくはＦＳＨ変異体、ＬＨ、又はＦＳＨとＬＨの混合物、並びにプルロニックＦ６８、並びに更なる賦形剤、例えば、抗酸化剤及び／又はバッファーを混合すること、そして当該混合物を凍結乾燥にかけることを含んで成るプロセスにより調製することができる。当該成分の混合及びこれらの凍結乾燥は、慣習的な溶解及び混合手順を使用して行われる。適当な製剤を調製するために、例えば、測定量のＦＳＨ若しくはＦＳＨ変異体、ＬＨ、又はＦＳＨとＬＨの混合物をプルロニックＦ６８と組み合わされ、そして生じた混合物を凍結乾燥し、それからバイアル、アンプル、又はカートリッジに分配する。当該プロセスの変更は、当業者に認識されるだろう。例えば、当該成分の添加する順番、更なる添加剤を使用するかどうか、製剤が調製される温度及びＰＨは、使用される投与の濃度及び手段のために最適化することができる全ての因子である。
【０１１７】
本発明の製剤は、既知の器具を使用して投与することができる。これらのシリンジバイアル系を含んで成る例は、溶液の送達のためのペン型注射器、例えば、EasyJect（登録商標）、Gonal-F（登録商標）Pen、 Humaject（登録商標）、NovoPen（登録商標）、B- D（登録商標）Pen、AutoPen（登録商標）及びOptiPen（登録商標）を含む。
【０１１８】
本請求項の製品は、パッケージ材料を含む。当該パッケージ材料は、調節機関により必要とされる情報に加えて、製品が使用できる条件を供する。本発明のパッケージ材料は、患者に対して、溶液を形成し、当該溶液を２４時間又はそれ以上にわたり使用するために、水性希釈剤中のＦＳＨ又はＦＳＨ変異体を再構成するための、２つのバイアル、湿／乾製品のための指示を供する。１つのバイアルである溶液製品のために、当該ラベルはこのような溶液が最初の使用後、２４時間又はそれ以上、好ましくは１２又は１４日間までの期間にわたり保管することができることを示す。本請求項の製品は、ヒト医薬製品の使用に有用である。
【０１１９】
安定な保存製剤は、透明な溶液として患者に供することができる。当該溶液は、１回の使用であってよく、又は複数回再利用することができ、そして患者の処置の単一又は複数周期に十分であるため、現在利用できるものよりも簡便な処置療法を供する。
【０１２０】
本明細書において説明される、安定又は保存製剤又は溶液中のＦＳＨ若しくはＦＳＨ変異体、ＬＨ、又はＦＳＨとＬＨの混合物は、ＳＣ又はＩＭ注射、；経皮、肺、経粘膜、インプラント、浸透圧ポンプ、カートリッジ、マイクロポンプ、経口、又は当業界において周知として当業者に認識されている他の手段を含む多様な送達方法を介して、本発明に関する患者に対して投与することができる。
【０１２１】
以下の実施例は、専ら本発明の製剤及び組成物の調製を更に説明するために供される。本発明の範囲は、以下の実施例のみから成るものとして理解すべきではない。
【実施例１】
【０１２２】
比較製剤
物質
【表５】
0004699991.tif 000007
【０１２３】
器具
【表６】
0004699991.tif 000008
【０１２４】
以下の実験は多量の製剤のために以下のパラメータを評価した：
・界面活性剤及び静菌剤の適応性
・アルファ−サブユニットの酸化
【０１２５】
当該製剤は、複数用量製剤であり、ＴＷＥＥＮ２０又はプルロニックＦ６８のいずれか、並びに静菌剤を含んだ。以下の３つの静菌剤を評価した：
・ベンジルアルコール  ０．９％
・ｍ−クレゾール  ０．３％
・フェノール  ０．５％
【０１２６】
ＴＷＥＥＮ２０及びプルロニックＦ６８を以下の濃度範囲において使用した：
・ＴＷＥＥＮ２０：１０〜１００μｇ／ｇ
・プルロニックＦ６８：１０〜１００μｇ／ｇ
【０１２７】
調製した溶液を表１に挙げる。
【表７】
0004699991.tif 000009
【０１２８】
【表８】
0004699991.tif 000010
【０１２９】
【表９】
0004699991.tif 000011
【０１３０】
【表１０】
0004699991.tif 000012
【０１３１】
製剤の視覚的調査により、ＴＷＥＥＮ２０及びｍ−クレゾール、並びにＴＷＥＥＮ２０及びフェノールを含むＦＳＨ製剤は乳白色の懸濁液を生じたため、ＴＷＥＥＮ２０は、ｍ−クレゾール及びフェノールと共に使用することができないことが決定された。反対にプルロニックＦ６８を含むＦＳＨ製剤は、ｍ−クレゾール及びフェノールを伴う問題を示さなかった。プルロニックＦ６８の使用は、フェノール及びｍ−クレゾールの使用を許容する。
【０１３２】
抗酸化剤を伴うＦＳＨ及びプルロニックＦ６８の組み合わせ
以下の抗酸化剤は、プルロニックＦ６８の存在下においてα−サブユニットの酸化を阻害する能力のために評価した：
・メチオニン：１０〜１００μｇ／ｇの範囲
・アスコルビン酸：１０〜１００μｇ／ｇの範囲
【０１３３】
スクロース及びマンニトールを等張剤として使用し、そしてＴＷＥＥＮ２０又はプルロニックを１００μｇ／ｇの濃度において添加した。
【０１３４】
調製した製剤を表２に挙げる。
【表１１】
0004699991.tif 000013
【０１３５】
【表１２】
0004699991.tif 000014
【０１３６】
【表１３】
0004699991.tif 000015
【０１３７】
【表１４】
0004699991.tif 000016
【０１３８】
２０ｇの各製剤を、ファルコン  ポリプロピレンチューブ中で調製し、そして３ｃｍ2の０．２２μｍ  Millex-GV Syringe Driven filter unit Durapore を通してろ過し、それからｔ＝０における値を分析した。それから当該溶液を４０℃で保管して、以下のスキームに従い試験した：
【表１５】
0004699991.tif 000017
【０１３９】
表１からわかるように、逆相ＨＰＬＣは、ＦＳＨ、プルロニックＦ６８、ｍ−クレゾール及びメチオニン（１０及び１００μｇ／ｍｌ）を含む溶液において、当該製剤を４０℃で保管した場合ＦＳＨのα−サブユニットの酸化が、メチオニンを含まない製剤に対して顕著に減少されたことを明らかにした。２つの実験の平均に基づき、メチオニンを含まない製剤において、酸化α−サブユニットのパーセンテージはＴ＝０において２．３、Ｔ＝１週間において４．０、Ｔ＝２週間において７．１である。１０μｇ／ｍｌのメチオニンを含む製剤において、酸化α−サブユニットのパーセンテージはＴ＝０において２．０、Ｔ＝１週間において３．２、Ｔ＝２週間において３．８である。１００μｇ／ｍｌのメチオニンを含む製剤において、酸化α−サブユニットのパーセンテージはＴ＝０において１．８、Ｔ＝１週間において１．７、Ｔ＝２週間において１．３である。
【実施例２】
【０１４０】
皮下又は筋肉内注射のための組換えＦＳＨの液体単用量製剤
実施例１の結果に基づき、以下の製剤を調製した。
【０１４１】
表３に挙げる成分１〜７は、ＷＦＩ中で測定量の溶液として調製した。各溶液の一定量を、「母液」を形成するために混合容器に添加した。当該母液を１０．９マイクログラム（１５０ＩＵ）又は５．４５マイクログラム（７５ＩＵ）のＦＳＨを含むようにバイアルに分配した。
【０１４２】
組換えＦＳＨで、生物活性及び特異活性は一貫し、ＦＳＨをバイオアッセイよりもフィルド  バイ  マスとすることを許容する。
【表１６】
0004699991.tif 000018
【０１４３】
当該バイアルを無菌条件下において充填させ、密封した。
【実施例３】
【０１４４】
皮下又は筋肉内注射のための組換えＦＳＨの液体複数用量製剤
実施例１の結果に基づき、以下の複数用量製剤を調製した。
【０１４５】
表４に挙げる成分１〜７は、ＷＦＩ中で測定量の溶液として調製した。各溶液の一定量を、「母液」を形成するために混合容器に添加した。当該母液を２２．２マイクログラム（３０５ＩＵ）、３３．３（４５８ＩＵ）、及び６６．７マイクログラム（９１６ＩＵ）のＦＳＨを含むようにバイアルに分配した。生じた製剤は、全部で３００、４５０及び９００ＩＵのＦＳＨを送達する。
【０１４６】
当該カートリッジを無菌条件下において充填させ、密封した。当該複数用量の製剤は、最初の使用まで約２年間、約２〜８℃、より好ましくは約４〜５℃で保管することができる。最初の使用後、当該カートリッジは、約２〜８℃、より好ましくは約４〜５℃で、複数用量期間（２４時間、２日間、又は１２若しくは１４日間未満）にわたり保管するべきである。
【０１４７】
【表１７】
0004699991.tif 000019
【実施例４】
【０１４８】
皮下又は筋肉注射のための組換えＬＨの液体単用量製剤
以下の製剤を調製した。
【０１４９】
表５に挙げる成分１〜７は、ＷＦＩ中で測定量の溶液として調製した。各溶液の一定量を、「母液」を形成するために混合容器に添加した。当該母液を３マイクログラム（７５ＩＵ）のＬＨを含むようにバイアルに分配した。生じた製剤は単用量の７５ＩＵ  ＬＨを送達する。
【０１５０】
組換えＬＨで、生物活性及び特異活性は一貫し、ＬＨをバイオアッセイよりもフィルド  バイ  マスとすることを許容する。
【０１５１】
【表１８】
0004699991.tif 000020
【０１５２】
当該バイアルを無菌条件下において充填させ、密封した。当該製剤は２年未満の有効期間を有する。
【実施例５】
【０１５３】
皮下又は筋肉内注射のための組換えＦＳＨ及びＬＨ（２：１）の液体複数用量製剤
ＦＳＨ：ＬＨが２：１の割合を伴うＦＳＨ及びＬＨの以下の複数用量製剤を調製した。
【０１５４】
表６に挙げる成分１〜８は、ＷＦＩ中で測定量の溶液として調製した。各溶液の一定量を、「母液」を形成するために混合容器に添加した。母液のｐＨは、必要であれば、ＮａＯＨ又はＨＣｌを添加して８．０に調節した。当該母液を、６用量の各１５０ＩＵ  ＦＳＨを含むことを意図し、６６．７マイクログラムのＦＳＨ（９１６ＩＵ）を伴う１６．３マイクログラムのＬＨ（４５７ＩＵ）；３用量の各１５０ＩＵ  ＦＳＨを含むことを意図し、３３．３マイクログラムのＦＳＨ（４５８ＩＵ）を伴う９．２マイクログラムのＬＨ（２３０ＩＵ）；２用量の各１５０ＩＵ  ＦＳＨを含むことを意図し、２２．２３マイクログラムのＦＳＨ（３０５ＩＵ）を伴う６．１マイクログラムのＬＨ（１５２．５ＩＵ）を含むようにカートリッジに分配した。
【０１５５】
当該カートリッジを無菌条件下において充填させ、密封した。当該複数用量の製剤は、最初の使用まで約２年間、約２〜８℃、より好ましくは約４〜５℃で保管することができる。最初の使用後、当該カートリッジは、約２〜８℃、より好ましくは約４〜５℃で、複数用量期間（２４時間、２日間、又は１２若しくは１４日間未満）にわたり保管するべきである。
【０１５６】
【表１９】
0004699991.tif 000021
【実施例６】
【０１５７】
皮下又は筋肉内注射のための組換えＦＳＨ及びＬＨ（１：１）の液体複数用量製剤
ＦＳＨ：ＬＨが１：１の割合を伴うＦＳＨ及びＬＨの以下の複数用量製剤を調製した。
【０１５８】
表７に挙げる成分１〜８は、ＷＦＩ中で測定量の溶液として調製した。各溶液の一定量を、「母液」を形成するために混合容器に添加した。母液のｐＨは、必要であれば、ＮａＯＨ又はＨＣｌを添加して８．０に調節した。当該母液を、６用量の各１５０ＩＵ  ＦＳＨを含むことを意図し、６６．７マイクログラムのＦＳＨ（９１６ＩＵ）を伴う３６．６マイクログラムのＬＨ（９１４ＩＵ）；３用量の各１５０ＩＵ  ＦＳＨを含むことを意図し、３３．３マイクログラムのＦＳＨ（４５８ＩＵ）を伴う１８．４マイクログラムのＬＨ（４６０ＩＵ）；２用量の各１５０ＩＵ  ＦＳＨを含むことを意図し、２２．２３マイクログラムのＦＳＨ（３０５ＩＵ）を伴う１２．２マイクログラムのＬＨ（３０５ＩＵ）を含むようにカートリッジに分配した。
【０１５９】
当該カートリッジを無菌条件下において充填させ、密封した。当該複数用量の製剤は、最初の使用まで約２年間、約２〜８℃、より好ましくは約４〜５℃で保管することができる。最初の使用後、当該カートリッジは、約２〜８℃、より好ましくは約４〜５℃で、複数用量期間（２４時間、２日間、又は１２若しくは１４日間未満）にわたり保管するべきである。
【０１６０】
【表２０】
0004699991.tif 000022
【実施例７】
【０１６１】
ＬＨと混合したＦＳＨの液体複数用量製剤のための安定性実験
７．１．タンパク質含量のための逆相ＨＰＬＣ分析
実施例５（６用量）の製剤をＦＳＨ及びＬＨの両方のタンパク質含量のために、逆相ＨＰＬＣ法を使用して評価した。
【０１６２】
タンパク質含量（ＦＳＨ及びＬＨ）をゼロ時、並びに４℃での製剤の保管による１、２、３、及び６ヶ月後において測定した。当該結果を溶媒の１グラムあたりのＦＳＨ又はＬＨのマイクログラムとして表８に挙げる。
【０１６３】
７．２．酸化アルファ−サブユニット
実施例５の製剤中の酸化アルファ−サブユニットのパーセンテージは、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）法により測定した。
【０１６４】
酸化アルファ−サブユニットのパーセンテージをゼロ時、並びに４℃での１、２、３、及び６ヶ月の保管後において測定した。当該結果を表８に挙げる。
【０１６５】
７．３．ＦＳＨのための生体内アッセイ
実施例５（６用量）の製剤を、スチールマン−ポーリー卵巣重量増加バイオアッセイを使用してＦＳＨ活性のためにゼロ時、並びに４℃での１、２、３、及び６ヶ月の保管後において試験した。当該結果は溶媒１グラムあたりの国際単位（ＩＵ）として表８に挙げる。
【０１６６】
７．４．ＬＨのための生体内アッセイ
実施例５（６用量）の製剤を、精嚢重量増加バイオアッセイを使用してＬＨ活性のためにゼロ時、並びに４℃での１、２、３、及び６ヶ月の保管後において試験した。当該結果は溶媒１グラムあたりの国際単位（ＩＵ）として表８に挙げる。
【０１６７】
７．５．遊離サブユニット（ｒＦＳＨ＋ｒＬＨ）の評価
実施例５の製剤のためにＳＤＳ−ＰＡＧＥにより遊離サブユニットのパーセンテージを評価した。
【０１６８】
測定は、ゼロ時、並びに４℃での１、２、３、及び６ヶ月の保管後に行われた。当該結果は全タンパク質（ｒＦＳＨ＋ｒＬＨ）のパーセンテージとして報告し、表８に挙げる。
【０１６９】
７．５．凝集の評価
実施例５の製剤のために、全タンパク質（ｒＦＳＨ＋ｒＬＨ）のパーセンテージとしてより高い分子量の凝集体を測定したことを除き、７．５．における遊離サブユニットの評価において上述したとおり、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより凝集のパーセンテージを評価した。測定は、ゼロ時、並びに４℃での１、２、３、及び６ヶ月の保管後に行われた。結果を表８に挙げる。
【０１７０】
７．６．視覚的粒子
実施例５の製剤は、ゼロ時、並びに４℃での３及び６ヶ月の保管後に粒子のために視覚的に評価した。結果を表８に挙げる。
【０１７１】
７．７．ｐＨ
実施例５の製剤のｐＨを、ゼロ時、並びに４℃での１、２、３、及び６ヶ月の保管後に測定した。結果を表８に挙げる。
【０１７２】
【表２１】
0004699991.tif 000023
【実施例８】
【０１７３】
ＦＳＨ及びＬＨのフリーズドライ複数用量製剤
以下の組成物を有する２つのフリーズドライ製剤Ａ及びＢを調製した：
【表２２】
0004699991.tif 000024
【０１７４】
上記製造プロセスは、上記薬物を上記成分と直接混合すること、得られた溶液をろ過すること、及び当該ろ過したものを凍結乾燥することから成る。
【０１７５】
上記プロセスの各工程の説明を以下に示す：
−風袋容器にＷＦＩ、リン酸水素二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム一水和物、スクロース、５％におけるプルロニックＦ６８、及びＬ−メチオニンを添加し、溶解が完了するまで１０分間撹拌する。
−当該ｐＨをチェックし、最終的にｐＨ７．００±０．２となるように、ＮａＯＨ１０％又は希Ｈ3ＰＯ4で補正する。
−上記調製した混合物にＦＳＨ及びＬＨを添加し、そして得られた溶液を１０分間静かに
撹拌する。
−ｐＨを再度チェックし、そして最終的に７．００±０．２となるように、１０％ＮａＯＨ又は希Ｈ3ＰＯ4で調節する。
−当該溶液を、１．５ａｔｍ以下の圧力を伴う窒素ガス流下において、１５ｇ／ｃｍ2以下のろ過比を有する 0. 22 μｍの Durapore 膜でろ過する。
−当該溶液をあらかじめ無菌化したフラスコに回収する。
−ろ過した溶液をガラス容器に充填し、ストッパーで密封し、ステンレススチールトレイ中に充填したバイアルを置く。
−上記トレイをフリーズドライヤーにかけ、そして当該生成物を以下のフリーズドライサイクルを使用して凍結乾燥する：
・＋４℃で約２０分間平衡化する。
・シェルフ温度を−２５℃にし、そして２時間維持する。
・シェルフ温度を−１５℃にし、そして１時間維持する。
・シェルフ温度を−４５℃にし、そして３時間維持する。
・コンデンサー温度を−６５℃にする。
・当該チャンバーを真空にする。
・真空状態が７×１０-2ｍＢａｒに達したら、シェルフ温度を−１０℃まで上昇させ、そして１４時間維持する。
・８時間においてシェルフ温度を＋３５℃まで上昇させ、そして当該サイクルの終了まで維持する（１４時間）。
・乾燥窒素をチャンバー中に入れ、真空状態を中止する。
・フリーズドライヤーの自動システムによりストッパリングを行う。
・適当なフリップオフキャップで栓をしたバイアルを密封する。
【０１７６】
製剤Ａ及びＢは２５±２℃で保管し、以下に示すように安定性及び生物活性を試験した。当該組成物を分析する前に、これらは静菌剤として０．３％のｍ−クレゾールを含んで成る注射用水を使用して再構成される。
【０１７７】
安定性及び生物活性値は、以下の通り測定した：
・ＦＳＨの生体内アッセイ：当該製剤をスチールマン−ポーリー卵巣重量増加バイオアッセイを使用してＦＳＨ活性のために試験した。
・ＬＨの生体内アッセイ：当該製剤を精嚢重量増加バイオアッセイを使用してＬＨ活性のために試験した。
・酸化アルファ−サブユニットのアッセイ：酸化アルファ−サブユニットのパーセンテージは逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）により測定した。
・遊離サブユニット（ｒＦＳＨ＋ｒＬＨ）の評価：遊離サブユニットのパーセンテージはＳＤＳ−ＰＡＧＥにより評価した。
・凝集の評価：凝集のパーセンテージは、遊離サブユニットの評価のために上述のとおり、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより評価した。
【０１７８】
生物学的試験は欧州薬局方の規定を伴うコンプライアンスにおいて行われた。特に、試験は「メノトロピン」のモノグラフィーにおいて報告される。
【０１７９】
表９は製剤Ａの安定性及び生物活性に関する分析試験の結果を概要する。当該値は、４つのチェックポイントにおいて測定された：ゼロ時、並びに２５±２℃の温度の保管において、１ヶ月、３ヶ月、及び６ヶ月の保管後。
【０１８０】
【表２３】
0004699991.tif 000025
【０１８１】
表１０は製剤Ｂの安定性及び生物活性に関する分析試験の結果を概要する。当該値は、４つのチェックポイントにおいて測定された：ゼロ時、並びに２５±２℃の温度の保管において、３ヶ月、６ヶ月、及び９ヶ月の保管後。
【０１８２】
【表２４】
0004699991.tif 000026
【０１８３】
表９及び１０から、製剤Ａ及びＢの生物活性は、９ヶ月の保管後に良く保存されていると結論することができる。当該製剤は高い安定性を有する。
【０１８４】
当該高い安定性は多量の組換えＦＳＨ及び組換えＬＨにより影響されない。
【０１８５】
引用
【表２５】
0004699991.tif 000027
【図面の簡単な説明】
【０１８６】
【図１】図１は、ゼロ時、１週間、及び２週間における、メチオニンを伴わない製剤（「メチオニン無」）に対するプルロニックＦ６８、１０μｇ／ｍｌ（「Ｍｅｔｈ  １０ｍｃｇ／ｍｌ」）及び１００μｇ／ｍｌ（「Ｍｅｔｈ  １００ｍｃｇ／ｍｌ」）におけるメチオニンを含むＦＳＨの製剤中の酸化α−サブユニットのパーセンテージを示す。
【配列表フリーテキスト】
【０１８７】
配列番号１：ヒト糖タンパク質のα−サブユニット；
配列番号２：ｈＦＳＨ  β−サブユニット
配列番号３：ｈＦＳＨ  β−サブユニット  変異体１
配列番号４：ｈＦＳＨ  β−サブユニット  変異体２
配列番号５：ｈＦＳＨ  β−サブユニット  変異体３
配列番号６：ｈＬＨ  β−サブユニット
【図１】
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【配列表】
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