(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
0004842475.tif 000060
（式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ2は、Ｈ、α−ＯＨ又はβ−ＯＨであり、
Ｒ3は、直鎖状又は分岐鎖状のＣ1〜Ｃ4アルキル基又はベンジル基である）
の化合物の製造方法であって、
ホウ水素化ナトリウムの存在下で、かつ、ＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）及びＮＭＰ（Ｎ−メチルピロリドン）からなる群より選択される極性非プロトン性溶媒中、一般式（III）
【化２】
0004842475.tif 000061
（式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、式（Ｉ）における意味と同じ意味を有する）
の化合物を還元して、一般式（IV）
【化３】
0004842475.tif 000062
（式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、式（Ｉ）における意味と同じ意味を有する）
の化合物を製造し、その後、酸処理による脱保護を含む方法。
【請求項２】
一般式（Ｉａ）
【化４】
0004842475.tif 000063
（式中、Ｒ3は、請求項１における意味と同じ意味を有し、Ｒ4は、水素原子又はヒドロキシ基である）
の化合物を製造するための、請求項１記載の方法。
【請求項３】
一般式（Ｉｂ）
【化５】
0004842475.tif 000064
（式中、Ｒ3は、請求項１における意味と同じ意味を有する）
の化合物を製造するための、請求項２記載の方法。
【請求項４】
式（Ｉｃ）
【化６】
0004842475.tif 000065
の化合物を製造するための、請求項３記載の方法。
【請求項５】
ホウ水素化ナトリウムによる還元を、ＤＭＡ及びＮＭＰから選択される極性非プロトン性溶媒中で実施する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
ホウ水素化ナトリウムの基質に対するモル当量数が１．２〜０．８５の範囲である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
ホウ水素化ナトリウムによる還元を、極性非プロトン性溶媒中、ｐＨ７．５〜９の緩衝溶液の存在下で実施する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
式（IV）の化合物を、場合によっては水と混合した極性非プロトン性溶媒中、鉱酸又は有機酸の存在下における処理により、式（Ｉ）の化合物に転換する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
鉱酸がＨＣｌのメタノール溶液である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
一般式（IV）
【化８】
0004842475.tif 000066
（式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ2は、Ｈ、α−ＯＨ又はβ−ＯＨであり、
Ｒ3は、直鎖状又は分岐鎖状のＣ1〜Ｃ4アルキル基又はベンジル基である）
の化合物。
【請求項１１】
請求項１０記載の化合物としての、式（IVｃ）
【化９】
0004842475.tif 000067
の（３β，５β，１２α）−１２−ヒドロキシ−３−〔〔（２−ヒドロキシメチル）ベンゾイル〕アミノ〕コラン−２４−酸メチルエステル。
【請求項１２】
Ｆｅ(2+)、Ｆｅ(3+)、Ｃｕ(2+)、Ｃｒ(3+)、Ｇｄ(3+)、Ｅｕ(3+)、Ｄｙ(3+)、Ｌａ(3+)、Ｙｂ(3+)及びＭｎ(2+)からなる群より選択される常磁性の二ないし三価金属イオンをキレート化することができる、式（IX）
【化１０】
0004842475.tif 000068
（式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ2は、Ｈ、α−ＯＨ又はβ−ＯＨであり、
Ｒ5は、水素原子又は非置換であるか、カルボキシル基で置換されている（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル基であり、
Ｘは、エチレンジアミノ四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミノ五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＤＯ３Ａ）、１０−（２−ヒドロキシプロピル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＨＰＤＯ３Ａ）及び４−カルボキシ−５，８，１１−トリス（カルボキシメチル）−１−フェニル−２−オキサ−５，８，１１−トリアザトリデカン−１３−酸（ＢＯＰＴＡ）からなる群より選択される、ポリアミノカルボン酸配位子のカルボキシル基又はカルボキシルメチル基又はその誘導体から誘導して得られる残基であり、
Ｌは、式
【化１１】
0004842475.tif 000069
の残基であり、
ｍは、１〜１０の整数であり、１を超える値の場合、ｐ及びｑの値は、モノマー単位において異なることができ、
ｑは、０又は１であり、
ｐは、０〜１０の範囲であることができ、ｐ及びｑは、同時にゼロであることはない）
のキレート化剤の製造方法であって、
以下の工程
【化１２】
0004842475.tif 000070
ａ）式（II）の化合物から出発して、Mitsunobu法にしたがって、ＴＨＦ、ジオキサン、トルエン及びＤＭＦからなる群より選択される溶媒中、１５〜２５℃の範囲の温度で、１．１〜１．３モル当量のＤＥＡＤ（ジエチルアゾジカルボキシレート）及びＤＩＡＤ（ジイソプロピルアゾジカルボキシレート）から選択されるアゾジカルボキシレートの存在下で、フタルイミドとの反応によって式（III）の化合物を製造する工程と、
ｂ）式（III）の化合物をＮａＢＨ4で還元して式（IV）の化合物を得る工程と、
ｃ）式（IV）の化合物を酸加水分解したのち中和して、式（Ｉ）の化合物を得る工程と、
ｄ）式（Ｉ）の化合物を、上記で定義したポリアミノカルボン酸配位子のカルボキシル基又はカルボキシルメチル基を誘導して得られるモノアシル反応性残基Ｘ−Ｌを有する化合物と縮合させる工程と
を含む請求項１〜９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
式（IXａ）
【化１３】
0004842475.tif 000071
（式中、Ｒ4は、請求項２における意味と同じ意味を有し、Ｒ5、Ｘ及びＬは、請求項１２における意味と同じ意味を有する）
の化合物を製造するための、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
式（IXｂ）
【化１４】
0004842475.tif 000072
（式中、Ｘ、Ｌ及びＲ5は、請求項１２における意味と同じ意味を有する）
の化合物を製造するための、請求項１２記載の方法。
【請求項１５】
式（Ｘ）
【化１５】
0004842475.tif 000073
（式中、Ｒ6は、水素原子又はカルボキシル基であり、Ｒ4は、請求項２における意味と同じ意味を有し、Ｌ及びＲ5は、請求項１２における意味と同じ意味を有する）
の化合物を製造するための、請求項１２記載の方法。
【請求項１６】
式（Ｘａ）
【化１６】
0004842475.tif 000074
（式中、Ｒ4は、請求項２における意味と同じ意味を有し、Ｌ及びＲ5は、請求項１２における意味と同じ意味を有する）
の化合物を製造するための、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
以下の化合物
〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸、
〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸、
〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−１，４−ジオキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
を製造するための、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
式（Ｘｂ）
【化１７】
0004842475.tif 000075
（式中、Ｒ4は、請求項２における意味と同じ意味を有し、Ｒ5及びＬは、請求項１２における意味と同じ意味を有する）
の化合物を製造するための、請求項１２記載の方法。
【請求項１９】
以下の化合物
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸、
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸、
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔６−〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−１−オキソヘキシル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
を製造するための、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
式（XI）
【化１８】
0004842475.tif 000076
（式中、Ｒ4は、請求項２における意味と同じ意味を有し、Ｒ5及びＬは、請求項１２における意味と同じ意味を有する）
の化合物を製造するための、請求項１２記載の方法。
【請求項２１】
以下の化合物
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔Ｎ−〔Ｎ−〔２−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−Ｎ−（カルボキシメチル）グリシル〕グリシル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸、
１８−〔〔（３β，５β，７α，１２α）−２３−カルボキシ−７，１２−ジヒドロキシ−２４−ノルコラン−３−イル〕アミノ〕−３，６，９−トリス（カルボキシメチル）−１１，１８−ジオキソ−３，６，９，１２−テトラアザオクタデカン酸
を製造するための、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
式（XII）
【化１９】
0004842475.tif 000077
（式中、Ｒ4は、請求項２における意味と同じ意味を有し、Ｒ5及びＬは、請求項１２における意味と同じ意味を有する）
の化合物を製造するための、請求項１２記載の方法。
【請求項２３】
式（XIII）
【化２０】
0004842475.tif 000078
（式中、Ｒ4は、請求項２における意味と同じ意味を有し、Ｒ5及びＬは、請求項１２における意味と同じ意味を有する）
の化合物を製造するための、請求項１２記載の方法。
【請求項２４】
以下の化合物
〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔〔５−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−１，４−ジオキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸、
〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸、
〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−オキソコラン−２４−酸
を製造するための、請求項１２記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、アミノ基が３β位置に存在する胆汁酸誘導体の新規な製造方法に関する。
【０００２】
もっとも重要な胆汁酸は、以下のスキーム１で示されるものである。
【０００３】
【化２１】
0004842475.tif 000002
【０００４】
より具体的には、本発明は、式（II）の化合物から式（Ｉ）の化合物を製造する方法に関する。
【０００５】
【化２２】
0004842475.tif 000003
【０００６】
式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ2は、Ｈ、α−ＯＨ又はβ−ＯＨであり、
Ｒ3は、直鎖状又は分岐鎖状のＣ1〜Ｃ4アルキル基又はベンジル基である。
【０００７】
一般式（Ｉ）の化合物は、数多くの薬学的用途に有用な化合物の製造にとって重要な中間体である。これらは、たとえば、胆汁酸の腸吸収の阻害剤の製造に使用されたり（ＥＰ−Ａ−０４８９４２３を参照）、腸肝循環における活性化合物の担体として使用されたり（ＥＰ−Ａ−０４１７７２５を参照）する。
【０００８】
最後に、劣らず重要なことは、常磁性の二価及び三価金属イオン、特にガドリニウムイオンをキレート化することができる、胆汁酸とキレート剤との結合体から得られる、磁気共鳴を利用する医療診断のための造影剤、たとえばＷＯ−Ａ−９５／３２７４１又は出版物Anelli P. L. et al., Acta Radiologica, 38, 125, 1997に記載の造影剤の製造におけるその使用である。
【０００９】
ＥＰ−Ａ−６１４，９０８は、一般式（Ｉ）の誘導体の製造であって、以下の工程
ａ）一般式（II）の化合物をフタルイミドと反応させることによって一般式（III）
【００１０】
【化２３】
0004842475.tif 000004
【００１１】
のフタルイミド誘導体を形成する工程と、
ｂ）ヒドラジン水和物又はフェニルヒドラジンで一般式（III）の化合物を処理する工程と、
ｃ）その後、工程ｂ）からの反応生成物を鉱酸で処理して付加塩を形成する工程と、
ｄ）塩から遊離させて一般式（Ｉ）の化合物を得る工程と
を含む製造を開示している。
【００１２】
ＥＰ−Ａ−６１４，９０８ですでに広く論じられているように、フタルイミド誘導体の形成は、周知のMitsunobu反応（Synthesis, 1, 1981; Org. React. Vol. 42, 335 (1992)）によって、すなわち、有機溶媒、たとえばジオキサン又はテトラヒドロフラン中、２０〜５０℃の範囲の温度で、適当なホスフィン及びＤＥＡＤ（ジエチルアゾジカルボキシレート）又はＤＩＡＤ（ジイソプロピルアゾジカルボキシレート）の存在下で実施される。Mitsunobu反応は、配置が逆転した最終生成物を与える。
【００１３】
例示した方法は、確認された発ガン性のせいで特に危険な生成物であるヒドラジン水和物又はフェニルヒドラジンを使用する。
【００１４】
今、驚くべきことに、式（III）の化合物のフタルイミド基の還元を、ホウ水素化ナトリウムを用いて有利に実施することができることがわかった。
【００１５】
したがって、本発明の目的は、以下のスキーム２にしたがって、ホウ水素化ナトリウムの存在下における一般式（III）の化合物の還元反応を含む、式（Ｉ）の化合物の製造方法である。
【００１６】
【化２４】
0004842475.tif 000005
【００１７】
式中、
Ｒ1は、Ｈ又はＯＨであり、
Ｒ2は、Ｈ、α−ＯＨ又はβ−ＯＨであり、
Ｒ3は、直鎖状又は分岐鎖状のＣ1〜Ｃ4アルキル基又はベンジル基である。
【００１８】
本発明のさらなる目的は、以下のスキーム３にしたがって、ホウ水素化ナトリウムの存在下で一般式（III）の化合物を還元して一般式（IV）の新規な化合物を形成したのち、その化合物を酸で処理することによって脱保護することを含む、一般式（Ｉ）の化合物の製造方法である。
【００１９】
【化２５】
0004842475.tif 000006
【００２０】
式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、上記で定義した意味を有する。
【００２１】
一般式（IV）の化合物は、スキーム３の方法における新規で有用な中間体であり、それらの回収は実験部分で記載する。
【００２２】
特に好ましいものは、スキーム３にしたがって、コール酸又はデオキシコール酸の誘導体である式（IIIａ）の化合物から出発して、式（Ｉａ）の化合物を製造する方法である。
【００２３】
【化２６】
0004842475.tif 000007
【００２４】
式中、
Ｒ3は、上記で定義した意味を有し、
Ｒ4は、水素原子又はヒドロキシ基であることができる。
【００２５】
本発明のさらなる目的は、スキーム４にしたがって、デオキシコール酸誘導体である式（IIIｂ）の化合物から出発して、式（Ｉｂ）の化合物を製造する方法である。
【００２６】
【化２７】
0004842475.tif 000008
【００２７】
式中、Ｒ3は、上記で定義した意味を有する。
【００２８】
特に好ましいものは、スキーム５にしたがって、デオキシコール酸誘導体である化合物（IIIｃ）から出発して、化合物（Ｉｃ）を製造する方法である。
【００２９】
【化２８】
0004842475.tif 000009
【００３０】
式（IIIｃ）及び（IVｃ）の化合物、すなわち（３β，５β，１２α）−３−〔１，３−ジヒドロ−１，３−ジオキソ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル及び（３β，５β，１２α）−１２−ヒドロキシ−３−〔〔（２−ヒドロキシメチル）ベンゾイル〕アミノ〕コラン−２４−酸メチルエステルはそれぞれ新規であり、デオキシコール酸誘導体である式（Ｉｃ）の化合物の製造に有用な中間体である。
【００３１】
式（III）の化合物は、すでに上記し、ＥＰ−Ａ−６１４，９０８で例示されている一般的手法にしたがって合成される。
【００３２】
好ましい反応条件は、
１）１５〜２５℃の反応温度を選択して、それにより、ジイソプロピルアゾジカルボキシレートの量を化学量論的量をわずかに超える量にまで減らすことと、
２）２−ＰｒＯＨの代わりにＭｅＯＨからフタルイミド誘導体（III）を結晶化させて、それにより、結晶化溶媒の量を少なくとも１／４に減らすこととを含む。
【００３３】
ＮａＢＨ4によるフタルイミド誘導体の還元は、本発明の化合物の分野でこれまで記載されたことはないが、この還元剤を大きく過剰（５〜１０モル）に使用してフタルイミド基を脱保護することを報告する参考文献は存在する（T. W. Greene; P. G. M. Wuts “Protective groups in Organic Synthesis”; 3rd Ed John Wiley and sons, New York, 1999）。
【００３４】
もっとも重要な論文〔Osby, Tetrahedron Letters, Vol. 25, 2093 (1984)〕に含まれる教示、すなわち還元溶媒としての２−ＰｒＯＨ／Ｈ2Ｏ＝６／１の使用は、本発明の方法に全く不適当であることがわかった。実際、式（III）の化合物の不十分な溶解性のため、約４０℃及び最大濃度２．５％で作業しなければならなかった。これは当然、工業的には受け入れられない。
【００３５】
他方、Osbyは、提案した条件が、エステル官能基を含む誘導体からフタルイミド基を脱保護するのに特に適してはいないことをすでに証明している。実際、Osby自らも、前記誘導体におけるこの基の脱保護が、エステル基の還元及び加水分解を伴い、結果的に反応収率を下げることを確認した。
【００３６】
本出願人は、Osby条件下で式（III）の化合物を還元すると、式（Ｉ）の化合物が約６５％の収率で回収されるが、顕著な量の副生成物、主に２４位におけるエステル基のアルコールへの還元からの生成物によって汚染されるということを見いだした。この現象は、ＮａＢＨ4過剰を著しく減らした場合でもなお有意である。副生成物の生成をよりよく理解するために、Osby条件下で実施する反応を、ＮａＢＨ4での還元の終了ののち酸加水分解の前に処理すると、シリカクロマトグラフィーによって回収された副生成物は、式（Ｖ）〜（VIII）を有するものであった。これらの副生成物は当然、式（Ｉ）の化合物で認められる不純物の前駆体であり、低い反応収率を説明づける。
【００３７】
【化２９】
0004842475.tif 000010
【００３８】
実験部分では、特にデオキシコール酸の場合の種々の中間体の回収及び特性決定を報告する。
【００３９】
式（IV）の化合物は、種々の溶媒からの結晶化によって化合物（Ｖ）から分離することは実質的にできない。化合物（IV）を式（VI）の対応する酸に転換するとしても、式（Ｖ）の副生成物を除去することはできない。
【００４０】
驚くことに、Osbyによって記載されているアルコール溶媒、たとえばイソプロパノールに代えて極性非プロトン性溶媒、たとえばＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＮＭＰ（Ｎ−メチルピロリドン）を使用すると、これらの問題を解消できることがわかった。特に好ましいものは、ジメチルアセトアミド及びＮ−メチルピロリドンである。
【００４１】
前記溶媒を使用すると、副生成物の量を増すことなく、化合物（III）の濃度を１０％超まで高めることができる。
【００４２】
そのうえ、本発明の条件下、ＮａＢＨ4過剰を、上記で報告されたものよりも減らすことができる。
【００４３】
特に、反応収率に悪影響を及ぼすことなく、還元剤のモル当量を、基質に対して強い過剰値（約５）から実質的に化学量論的な値（１．２〜０．８５）まで下げることができる。
【００４４】
本発明のさらなる態様は、反応中のｐＨを制御することを可能にする、ｐＨ７．５〜９の緩衝溶液の、極性非プロトン性溶媒との同時使用である。これは、影響を受けやすい官能基の加水分解を阻害して、副生成物（VI）〜（VIII）の形成を最小限にすることができる。
【００４５】
そして、式（IV）の化合物を、場合によっては水と混合した極性非プロトン性又はアルコール溶媒中、鉱酸又は有機酸（たとえば酢酸）の存在下における処理により、式（Ｉ）の化合物に転換する。
【００４６】
特に好ましいものは、ＨＣｌのメタノール溶液の使用である。その後、上記溶媒いずれか中の溶液を水性塩基（たとえばＮａＯＨ、Ｎａ2ＣＯ3）で処理することにより、塩からの遊離塩基の遊離を実施する。
【００４７】
すでに上述したように、式（Ｉ）の化合物は、血漿中コレステロール濃度を下げるための医薬（ＥＰ−Ａ−４１７，７２５又はＥＰ−Ａ−４８９，４２３）又はＷＯ−Ａ−９５／３２７４１に記載されているように、核磁気共鳴診断の造影剤の製造に有用である。
【００４８】
後者の場合、公知の合成法は、以下のスキーム６で表すように、Mitsunobu反応にしたがって、化合物（II）を、３β位置におけるアジ化物の中間体形成によって対応する化合物（Ｉ）に転換することを含むものであった。
【００４９】
【化３０】
0004842475.tif 000011
【００５０】
この合成スキームは、アジ化物が潜在的に危険であり、主要試薬（ジフェニルホスホリルアジド）がきわめて高価であるため、スケールアップには不適当である。
【００５１】
本発明は、Ｆｅ(2+)、Ｆｅ(3+)、Ｃｕ(2+)、Ｃｒ(3+)、Ｇｄ(3+)、Ｅｕ(3+)、Ｄｙ(3+)、Ｌａ(3+)、Ｙｂ(3+)又はＭｎ(2+)からなる群より選択される常磁性の二ないし三価金属イオンをキレート化することができる、一般式（IX）
【００５２】
【化３１】
0004842475.tif 000012
【００５３】
（式中、
Ｒ1及びＲ2は、上記で定義した意味を有し、
Ｒ5は、水素原子又は非置換であるか、カルボキシル基で置換されている（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル基であり、
Ｘは、エチレンジアミノ四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミノ五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＤＯ３Ａ）、〔１０−（２−ヒドロキシプロピル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＨＰＤＯ３Ａ）、４−カルボキシ−５，８，１１−トリス（カルボキシメチル）−１−フェニル−２−オキサ−５，８，１１−トリアザトリデカン−１３−酸（ＢＯＰＴＡ）からなる群より選択される、ポリアミノカルボン酸配位子及びその誘導体の残基であり、
Ｌは、式
【００５４】
【化３２】
0004842475.tif 000013
【００５５】
の残基であり、
ｍは、１〜１０の整数であり、１を超える値の場合、ｐ及びｑの値は、モノマー単位において異なることができ、
ｑは、０又は１であり、
ｐは、０〜１０の範囲であることができ、ｐ及びｑは、同時にゼロであることはない）
のキレート化剤の製造方法であって、
以下の工程
【００５６】
【化３３】
0004842475.tif 000014
【００５７】
ａ）化合物（II）から出発して、Mitsunobu法にしたがって、ＴＨＦ、ジオキサン、トルエン及びＤＭＦからなる群より選択される溶媒中、１５〜２５℃の範囲の温度で、１．１〜１．３モル当量の範囲の量のＤＥＡＤ（ジエチルアゾジカルボキシレート）又はＤＩＡＤ（ジイソプロピルアゾジカルボキシレート）から選択されるアゾジカルボキシレートの存在下で、フタルイミドとの反応によって化合物（III）を形成する工程と、
ｂ）化合物（III）をＮａＢＨ4で還元して化合物（IV）を得る工程と、
ｃ）化合物（IV）を酸加水分解したのち中和して、化合物（Ｉ）を得る工程と、
ｄ）化合物（Ｉ）を、上記で定義したポリアミノカルボン酸配位子の反応性残基とで縮合させる工程と
を含む方法に関する。
【００５８】
特に好ましいものは、以下のスキーム７にしたがって、コール酸又はデオキシコール酸誘導体である化合物（IXａ）を製造する方法である。
【００５９】
【化３４】
0004842475.tif 000015
【００６０】
式中、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は、上記で定義した意味を有する。
【００６１】
さらに、特に好ましいものは、式（IXａ）において、残基Ｘが、鎖上で中心位置が置換されているＤＴＰＡであり、Ｒ6が水素原子又はカルボキシル基であることができ、Ｌ鎖、Ｒ4及びＲ5が、上記で定義した意味を有する化合物（Ｘ）の製造方法である。
【００６２】
【化３５】
0004842475.tif 000016
【００６３】
特に好ましいものは、化合物（Ｘａ）
【００６４】
【化３６】
0004842475.tif 000017
【００６５】
（式中、Ｌ鎖、Ｒ4及びＲ5は、上記で定義した意味を有する）
の製造方法である。
【００６６】
さらには、特に好ましいものは、以下の一般式（Ｘａ）
【００６７】
【化３７】
0004842475.tif 000018
【００６８】
の新規な化合物：
〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸
の製造方法である。
【００６９】
このクラスに属する、その製造がＷＯ−Ａ−９５／３２７４１にすでに記載されている他の化合物は、以下のものである。
【００７０】
〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
【００７１】
【化３８】
0004842475.tif 000019
【００７２】
〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−１，４−ジオキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
【００７３】
【化３９】
0004842475.tif 000020
【００７４】
さらに好ましいものは、式（Ｘ）においてＲ6が水素原子であり、Ｒ4、Ｒ5及びＬが上記で定義した意味を有する以下の式（Ｘｂ）の化合物の製造方法である。
【００７５】
【化４０】
0004842475.tif 000021
【００７６】
同じく好ましいものは、一般式（Ｘｂ）のクラスに属する以下の新規な化合物の製造方法である。
【００７７】
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
【００７８】
【化４１】
0004842475.tif 000022
【００７９】
ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１ですでに記載されている、このクラスに属する他の化合物は、以下のものである。
【００８０】
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
【００８１】
【化４２】
0004842475.tif 000023
【００８２】
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔６−〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−１−オキソヘキシル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
【００８３】
【化４３】
0004842475.tif 000024
【００８４】
また、特に好ましいものは、式（IXａ）において残基ＸがＤＴＰＡから誘導され、Ｒ4、Ｒ5及びＬが上記で定義した意味を有する式（XI）の化合物の製造方法である。
【００８５】
【化４４】
0004842475.tif 000025
【００８６】
このクラスに属する、その製造がＷＯ−Ａ−９５／３２７４１ですでに記載されている他の化合物は、以下のものである。
【００８７】
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔Ｎ−〔Ｎ−〔２−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−Ｎ−（カルボキシメチル）グリシル〕グリシル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
【００８８】
【化４５】
0004842475.tif 000026
【００８９】
１８−〔〔（３β，５β，７α，１２α）−２３−カルボキシ−７，１２−ジヒドロキシ−２４−ノルコラン−３−イル〕アミノ〕−３，６，９−トリス（カルボキシメチル）−１１，１８−ジオキソ−３，６，９，１２−テトラアザオクタデカン酸
【００９０】
【化４６】
0004842475.tif 000027
【００９１】
また、特に好ましいものは、式（IXａ）において残基ＸがＤＯＴＡであり、Ｒ4、Ｒ5及びＬが上記で定義した意味を有する以下の式（XII）の化合物の製造方法である。
【００９２】
【化４７】
0004842475.tif 000028
【００９３】
さらに、好ましいものは、式（IXａ）において残基ＸがＥＤＴＡであり、Ｒ4、Ｒ5及びＬが上記で定義した意味を有する式（XIII）の化合物の製造方法である。
【００９４】
【化４８】
0004842475.tif 000029
【００９５】
特に好ましいものは、以下の式（XIII）の化合物の製造方法である。
【００９６】
〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔〔５−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−１，４−ジオキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
【００９７】
【化４９】
0004842475.tif 000030
【００９８】
〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔〔２−〔〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸
【００９９】
【化５０】
0004842475.tif 000031
【０１００】
〔３β（Ｓ），５β〕−３−〔〔４−〔〔２−〔〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−オキソコラン−２４−酸
【０１０１】
【化５１】
0004842475.tif 000032
【０１０２】
使用した実験条件は、実験部分で詳細に説明する。
【０１０３】
実験部分
例１
（３β，５β，１２α）−３−〔１，３−ジヒドロ−１，３−ジオキソ−２Ｈ−イソインドール−２−イル）〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
【０１０４】
【化５２】
0004842475.tif 000033
【０１０５】
フタルイミド（２０２．８g、１．３７８mol）を、ＴＨＦ（１．５Ｌ）中（３β，５β，１２α）−３，１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（Steroids, vol. 37, 239に記載のようにして調製）（５１１．９g、１．２５９mol）及びトリフェニルホスフィン（３７２．７g、１．４２１mol）の溶液に懸濁させたのち、ＴＨＦ（０．４９Ｌ）中ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（２８４．７g、１．４０８mol）の溶液を、温度を１５℃に維持しながら１．５時間かけてその中に滴下した。得られた溶液を室温で１８時間放置した。溶媒を留去し、油状の残渣にＭｅＯＨ（３．２Ｌ）を加え、２０時間攪拌した。得られた結晶質の生成物をろ過し、ＭｅＯＨ（１．４Ｌ）で洗浄し、乾燥させて目的生成物（４８１．３g、０．８９８mol）を得た。母液及び洗液を濃縮して、生成物の第二の回収分（６１．６g、０．１１４mol）を得た。
【０１０６】
【表１】
0004842475.tif 000034
【０１０７】
1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、表記の構造と合致していた。
【０１０８】
例２
Osby, Tetrahedron Letters, Vol. 25, 2093 (1984)に記載の手順と同様な手順による式（III）の化合物の還元
（３β，５β，１２α）−３−アミノ−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
【０１０９】
【化５３】
0004842475.tif 000035
【０１１０】
例１で調製した化合物（７５g、０．１４mol）を７５℃で２−ＰｒＯＨ（２．５Ｌ）に溶解した。溶液を激しく攪拌し、５０℃に冷ましたのち、Ｈ2Ｏ（４３０ml）を加えて懸濁液を得て、これに、固形ＮａＢＨ4（２６．５g、０．７０mol）を少しずつ３０分かけて加えた。反応混合物を４０℃で２．５時間攪拌した。ＣＨ3ＣＯＯＨをｐＨ４．５〜５まで注意しながら加え、混合物を、ＣＨ3ＣＯＯＨの繰り返し添加によってｐＨ４．５〜５を維持しながら８０℃で２４時間加熱した。室温まで冷まし、溶媒を蒸発させたのち残渣を得て、これを水（１Ｌ）に溶解した。溶液を２Ｍ  ＮａＯＨでｐＨ１０にアルカリ化して沈殿物を得て、これを１時間攪拌したのち、ろ過し、水洗し、乾燥させた。
アセトニトリル（１．２Ｌ）から結晶化させて目的生成物を得た（３６．９g、０．０９１mol）。
【０１１１】
【表２】
0004842475.tif 000036
【０１１２】
粗化合物をシリカゲルクロマトグラフィーで処理して、次式の主な副生成物（２．５g）を得た。
【０１１３】
【化５４】
0004842475.tif 000037
【０１１４】
ｍ．ｐ．：１７４〜１７５℃
元素分析  Ｃ          Ｈ          Ｎ
％計算値：７６．３４  １１．４８  ３．７１
％実測値：７６．１８  １１．６５  ３．５２
【０１１５】
1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、表記の構造と合致していた。
【０１１６】
上記条件下で実施したもう一つの反応で、還元の終了時、ＮａＢＨ4過剰物を酢酸で分解し、反応混合物（ほぼ中性ｐＨ）を蒸発させ、水にとって粗生成物を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。目的化合物（IVｂ）（例３を参照）とともに、分析特性ともども以下に報告する顕著な量の副生成物を回収した。これが、８０℃で酢酸を用いる加水分解後の化合物（Ｉｂ）の低い回収率を説明づけるものであった。
【０１１７】
Ｎ−〔（３β，５β，１２α）−１２，２４−ジヒドロキシコラン−３−イル〕−２−（ヒドロキシメチル）ベンズアミド
【０１１８】
【化５５】
0004842475.tif 000038
【０１１９】
【表３】
0004842475.tif 000039
【０１２０】
（３β，５β，１２α）−１２−ヒドロキシ−３−〔〔２−（ヒドロキシメチル）ベンゾイル〕アミノ〕コラン−２４−酸
【０１２１】
【化５６】
0004842475.tif 000040
【０１２２】
【表４】
0004842475.tif 000041
【０１２３】
Ｎ−〔（３β，５β，１２α）−１２−ヒドロキシ−２４−メトキシ−２４−オキソコラン−３−イル〕−２−（ヒドロキシメチル）ベンズアミド
【０１２４】
【化５７】
0004842475.tif 000042
【０１２５】
この生成物は、アンモニウム塩として特性決定された。
【０１２６】
【表５】
0004842475.tif 000043
【０１２７】
（３β，５β，１２α）−１２−ヒドロキシ−３−〔〔２−カルボキシベンゾイル〕アミノ〕コラン−２４−酸
【０１２８】
【化５８】
0004842475.tif 000044
【０１２９】
【表６】
0004842475.tif 000045
【０１３０】
1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、表記の構造と合致していた。
【０１３１】
例３
（３β，５β，１２α）−１２−ヒドロキシ−３−〔〔（２−ヒドロキシメチル）ベンゾイル〕アミノ〕コラン−２４−酸メチルエステル
【０１３２】
【化５９】
0004842475.tif 000046
【０１３３】
例１で調製した化合物（２２５g、０．４２mol）をＤＭＡ（１．７５Ｌ）中３４℃で激しく攪拌した溶液を２Ｍリン酸緩衝剤ｐＨ８（５００ml）で希釈して、４３℃の混合物を得た。固形ＮａＢＨ4（１５．４５g、０．４０８mol）を５分かけて加え、懸濁液を４７〜４８℃で攪拌した。５５分後、ほぼ清澄な溶液を得て、これにＣＨ3ＣＯＯＨを加えて水素化物過剰物を中和し、ｐＨを１２．８から約８に調節した。
【０１３４】
混合物をＨ2Ｏに注加し、３時間攪拌し、沈殿物をろ過し、Ｈ2Ｏに懸濁させたのち、３０分間攪拌した。最後に、沈殿物をろ過し、Ｈ2Ｏで洗浄し、乾燥させて目的生成物を得た（２２４．６g、０．４１６mol）。
【０１３５】
【表７】
0004842475.tif 000047
【０１３６】
1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、表記の構造と合致していた。
【０１３７】
例４
（３β，５β，１２α）−３−アミノ−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル塩酸塩
【０１３８】
【化６０】
0004842475.tif 000048
【０１３９】
ＭｅＯＨ（１．５Ｌ）及び３７％ＨＣｌ（５２ml、０．６３mol）中の、例３で調製した化合物（２２３．５g、０．４１４mol）の懸濁液を攪拌しながら５０℃で加熱した。約１．５時間後、溶液が得られ、さらに２時間後、反応が完了した。溶媒を蒸発させ、残渣をＣＨ3ＣＮとともに６０℃で２時間攪拌した。室温で１５時間後、沈殿物をろ過し、ＣＨ3ＣＮで洗浄し、乾燥させて目的生成物を得た（１８３．３g、０．４１４mol）。
【０１４０】
【表８】
0004842475.tif 000049
【０１４１】
例５
（３β，５β，１２α）−３−アミノ−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
【０１４２】
【化６１】
0004842475.tif 000050
【０１４３】
例４で調製した化合物（８９．５g、０．２０２mol）を５５℃でＭｅＯＨ（４６０ml）に溶解したのち、溶液を約４０℃に冷まし、強力に攪拌しながら、固形Ｎａ2ＣＯ3を加えてｐＨ９．８を維持しながらＨ2Ｏに注加した。２時間攪拌したのち、懸濁液をろ過し、固体をＨ2Ｏに懸濁させ、２時間攪拌し、ろ過し、Ｈ2Ｏで洗浄した。乾燥後、目的生成物を得た（７４．９g、０．１８５mol）。
【０１４４】
【表９】
0004842475.tif 000051
【０１４５】
1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、表記の構造と合致していた。
【０１４６】
同様にして、式及び分析データを以下に報告する式（Ｉ）の化合物を調製した。
【０１４７】
【表１０】
0004842475.tif 000052
【０１４８】
1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルならびに元素分析は、表記の構造と合致していた。
【０１４９】
例６
〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸
【０１５０】
【化６２】
0004842475.tif 000053
【０１５１】
Ａ）〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−（１，１−ジメチルエトキシ）−１，５−ジオキソペンチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
トリエチルアミン（２．２３g、２２mmol）を、０℃のＤＭＦ３００ml中〔３β，５β，１２α〕−３−アミノ−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（例５で調製）８．９３g（２２mmol）、Ｎ，Ｎ−ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕−Ｌ−グルタミン酸（１，１−ジメチルエトキシ）エステル（ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１、例１５に記載のようにして調製）１６．４１g（２２mmol）及びジエチルシアノホスフェート３．９１g（２４mmol）の溶液に加えた。０℃で１．５時間及び室温で１８時間後、反応混合物を蒸発させ、残渣をＡｃＯＥｔに溶解した。溶液をＮａＨＣＯ3飽和溶液及びＨ2Ｏで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、蒸発させた。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製して目的生成物を得た（２０．６７g、１８．２mmol）。
【０１５２】
【表１１】
0004842475.tif 000054
【０１５３】
1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、表記の構造と合致していた。
【０１５４】
Ｂ）〔３β（Ｓ），５β，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−１２−ヒドロキシコラン−２４−酸
工程Ａ）で調製した化合物（１９．７２g、１７．４mmol）を室温でＣＦ3ＣＯ2Ｈ１０５mlに溶解した。２６時間後、溶液を蒸発させ、残渣をＨ2Ｏで処理した。固体をろ過し、Ｈ2Ｏで洗浄し、真空下で部分的に乾燥させた。得られた中間体を、１Ｍ  ＮａＯＨでｐＨ１３を維持しながらＨ2Ｏに溶解した。
【０１５５】
室温で５時間後、溶液にｐＨ１．４の０．５Ｍ  ＨＣｌを滴下した。室温で１５時間後、沈殿物をろ過し、Ｈ2Ｏで洗浄し、真空下で乾燥させて粗生成物を得て、それをAmberlite（登録商標）XAD  1600樹脂上でクロマトグラフィーによって精製して目的生成物を得た（９．９２g、１１．８mmol）。
【０１５６】
【表１２】
0004842475.tif 000055
【０１５７】
1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、表記の構造と合致していた。
【０１５８】
例７
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
【０１５９】
【化６３】
0004842475.tif 000056
【０１６０】
Ａ）Ｎ−〔〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕グリシン
グリシルグリシン６．５g（４９．３mmol）をＨ2Ｏ：ＥｔＯＨ１：１混合物１００mlに懸濁させ、１０Ｍ  ＮａＯＨ（４．８ml）を用いてｐＨ１０で溶解した。ＥｔＯＨ４０ml中Ｎ−（２−ブロモエチル）−Ｎ〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕グリシン−１，１−ジメチルエチルエステル（４２g、１１０．９mmol）を、１０Ｍ  ＮａＯＨ（５．８ml）でｐＨを１０．５に維持しながら２時間かけて滴下した。溶液はすぐにエマルションに変わり、それを、２．５時間後、１０Ｍ  ＮａＯＨの添加によって溶解した。２２時間後、溶媒を蒸発させ、残渣を水で希釈し、ＣＨ2Ｃｌ2で抽出した。有機相をＨ2Ｏで洗浄し、乾燥させ、蒸発させて残渣を得て、これをフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。残渣を水に溶解し、１Ｍ  ＨＣｌの添加によってｐＨを４．５に調節し、溶液をクロロホルムで抽出した。有機相をＨ2Ｏで洗浄し、乾燥させ、蒸発させて目的化合物１３g（１９．３mmol）を得た。
【０１６１】
【表１３】
0004842475.tif 000057
【０１６２】
1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、表記の構造と合致していた。
【０１６３】
Ｂ）（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔〔〔ビス〔２−〔ビス〔２−（１，１−ジメチルエトキシ）−２−オキソエチル〕アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル
ＴＥＡ２．８ml（２０．２mmol）を、０℃で攪拌しながら、ＤＭＦ（２９０ml）中、工程Ａ）で調製した化合物１３．６g（２０．２mmol）、（３β，５β，７α，１２α）−３−アミノ−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステル（例５で調製）８．５２g（２０．２mmol）及びＤＥＰＣ（３．４ml、２２．２mmol）の溶液に５分かけて滴下した。１時間後、反応物を室温まで温まらせ、溶液を６．５時間攪拌した。ＤＥＰＣ０．３ml（２mmol）を加え、溶液をさらに１５．５時間攪拌した。ＤＭＦを蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、水性ＮａＨＣＯ3で洗浄し、次いで水洗し、最後に乾燥させた。フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、目的生成物１３．７g（１２．７mmol）を得た。
【０１６４】
【表１４】
0004842475.tif 000058
【０１６５】
1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、表記の構造と合致していた。
【０１６６】
Ｃ）（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸
工程Ｂ）で調製した化合物１２．８５g（１２mmol）を０〜５℃で攪拌しながらＴＦＡ（２１０ml）に溶解した。１６時間後、ＴＦＡを蒸発させて残渣を得て、それをｐＨ１３の０．８Ｍ  ＮａＯＨ９０mlに溶解し、室温で１５時間攪拌した。溶液を５０mlに濃縮し、０．６Ｍ  ＨＣｌ  １０５mlに滴下し、２時間攪拌した。固体をろ過し、０．１Ｍ  ＨＣｌで洗浄し、乾燥させて粗生成物を得て、それをクロマトグラフィーによって精製した。塩化した形の目的化合物を含有する画分を蒸発させて残渣を得て、それを水に溶解し、ｐＨ１．４５の１Ｍ  ＨＣｌに滴下した。沈殿物をろ過し、０．１Ｍ  ＨＣｌで洗浄し、乾燥させて目的生成物２．６g（３．１mmol）を得た。
【０１６７】
【表１５】
0004842475.tif 000059
【０１６８】
1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ及びＭＳスペクトルは、表記の構造と合致していた。
【０１６９】
例８
コール酸誘導体キレート化剤の製造
例５に記載のようにして調製した（３β，５β，７α，１２α）−３−アミノ−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸メチルエステルを使用し、ＷＯ−Ａ−９５／３２７４１に記載の手順にしたがって、以下のキレート化剤を調製した。
【０１７０】
〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−４−カルボキシ−１−オキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸、
〔３β（Ｓ），５β，７α，１２α〕−３−〔〔４−〔〔５−〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕−５−カルボキシペンチル〕アミノ〕−１，４−ジオキソブチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸、
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸、
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔６−〔〔〔ビス〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕アミノ〕アセチル〕アミノ〕−１−オキソヘキシル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸、
（３β，５β，７α，１２α）−３−〔〔Ｎ−〔Ｎ−〔２−〔〔２−〔ビス（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕（カルボキシメチル）アミノ〕エチル〕−Ｎ−（カルボキシメチル）グリシル〕グリシル〕アミノ〕−７，１２−ジヒドロキシコラン−２４−酸、
１８−〔〔（３β，５β，７α，１２α）−２３−カルボキシ−７，１２−ヒドロキシ−２４−ノルコラン−３−イル〕アミノ〕−３，６，９−トリス（カルボキシメチル）−１１，１８−ジオキソ−３，６，９，１２−テトラアザオクタデカン酸