(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
物理的吸着法又は化学的吸着法を用いて、少なくとも１種類の核酸を、少なくとも１本の繊維に固定した核酸固定繊維が、抄き込まれてなる、用紙。
【請求項２】
前記１種類の核酸が多数の繊維に固定されてなる、請求項１記載の用紙。
【請求項３】
前記１本の繊維に複数の核酸が固定されてなる、請求項１記載の用紙。
【請求項４】
前記核酸が、マイクロカプセルに封入されてなる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の用紙。
【請求項５】
前記核酸が、ＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の用紙。
【請求項６】
前記核酸固定繊維に機能性材料が付与されてなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の用紙。
【請求項７】
前記機能性材料が、蛍光物質、赤外吸収物質、燐光物質、蓄光物質,着色物質、示温材料、フォトクロミック又はサーモクロミックである、請求項６記載の用紙。
【請求項８】
前記核酸が、識別情報を有してなる、請求項１〜７のいずれか１項に記載の用紙。
【請求項９】
前記識別情報が、個別情報又は製造情報の秘匿情報である、請求項８記載の用紙。
【請求項１０】
前記識別情報が、核酸の塩基鎖長、電気泳動パターン又は塩基配列データに付与されたものである、請求項８又は９記載の用紙。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の用紙の偽造防止用紙としての使用。
【請求項１２】
水、アルコール又は水とアルコールとの混合溶液に核酸を溶解させた核酸溶液中に、繊維を浸漬する工程と、
前記核酸溶液から繊維を取り出し、その繊維を乾燥、ベーキング又は紫外線照射することにより、核酸を前記繊維に固定する工程とを含んでなる、核酸固定繊維の製造方法。
【請求項１３】
核酸をアミノ基で修飾し、該核酸を有する繊維を構成するセルロース等の水酸基と架橋させることにより、核酸を前記繊維に固定する、核酸固定繊維の製造方法。
【請求項１４】
前記繊維を、予め乾燥状態にしておく工程を、さらに含んでなる、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
物理的吸着法又は化学的吸着法を用いて、少なくとも１種類の核酸を、少なくとも１本の繊維に固定した核酸固定繊維を、製紙用パルプを主体として調整したスラリーに添加する工程と、前記繊維が添加されたスラリーを抄紙して乾燥する工程とを含んでなる、製紙方法。
【請求項１６】
物理的吸着法又は化学的吸着法を用いて、少なくとも１種類の核酸を、少なくとも１本の繊維に固定した核酸固定繊維を、抄紙された基紙の表面に付着させる工程と、前記繊維が付着した基紙を乾燥する工程とを含んでなる、製紙方法。
【請求項１７】
識別情報が付与された少なくとも１種類の核酸を、外部エネルギーにより呈色する繊維に固定した核酸固定繊維を用紙中に抄き込んでなる用紙を識別する識別方法であって、
前記用紙に外部エネルギーを照射し、外部エネルギーにより呈色する核酸固定繊維のみを前記用紙から抜き取り、又は呈色する部分を用紙から切り取る工程、
前記核酸固定繊維または切り取った用紙から核酸を抽出する工程、
前記抽出した核酸を調べる工程、及び
前記核酸と、予め調べておいた核酸とを比較して、真偽の判別を行う工程とを含んでなる、用紙の真偽識別方法。
【請求項１８】
前記外部エネルギーにより呈色する機能性物質が、蛍光物質、赤外吸収物質、燐光物質、蓄光物質、示温材料、フォトクロミック又はサーモクロミックである、請求項１７記載の用紙の真偽識別方法。
【請求項１９】
前記外部エネルギーが、蛍光、可視光、赤外線、紫外線、または、温度である、請求項１７又は１８記載の用紙の真偽識別方法。
【請求項２０】
識別情報が付与された少なくとも１種類の核酸を、着色剤で着色された繊維に固定した核酸固定繊維を用紙中に抄き込んでなる用紙を識別する識別方法であって、
前記用紙の着色された核酸固定繊維のみを前記用紙から抜き取り、又は着色された部分を用紙から切り取る工程、
前記核酸固定繊維または切り取った用紙から核酸を抽出する工程、
前記抽出した核酸を調べる工程、及び
前記核酸と、予め調べておいた核酸とを比較して、真偽の判別を行う工程、とを含んでなる、用紙の真偽識別方法。
【請求項２１】
前記着色剤が、染料、顔料又は有色蛍光物質である、請求項２０記載の用紙の真偽識別方法。
【請求項２２】
抽出した前記核酸を、濃縮して増幅する工程をさらに含んでなる、請求項１７〜２１のいずれか１項に記載の用紙の真偽識別方法。
【請求項２３】
前記抽出した核酸を調べる工程が、所定のプライマーを用いてＰＣＲによる増幅反応を行い、核酸の増幅をして、電気泳動パターンを得るものである、請求項１７〜２２のいずれか１項に記載の用紙の真偽識別方法。
【請求項２４】
前記核酸に付与される識別情報が、個別情報又は製造情報の秘匿情報である、請求項１７〜２３のいずれか１項に記載の用紙の真偽識別方法。
【請求項２５】
前記識別情報が、核酸の塩基鎖長、電気泳動パターン又は塩基配列データに付与されてなる、請求項１７〜２４のいずれか１項に記載の用紙の真偽識別方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸を１本の繊維に固定した核酸固定繊維を用紙に抄き込んだ偽造防止用紙、該用紙の製造方法及び該用紙の識別方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、紙に対する偽造防止技術としては、紙料中に着色繊維やフォトクロミック繊維等の特殊繊維を混入させて紙を製造する技術、着色又は印刷された高分子フィルムや紙の断片を紙に抄き込む技術、安全細線を紙層中に挿入する技術等が開示されている。
【０００３】
着色繊維を混抄する方法は、繊維の有り無しで用紙を鑑別するため、偽造され易い欠点がある。また、紙の断片を抄き込む方法では、その部分の紙層強度の低下が生じる等の問題がある。
【０００４】
一方、紙層に抄き込んだり、紙層に含有させる識別物について、近年核酸（ＤＮＡ）を用いた方法に注目が集まっている。この核酸を繊維に固定化する技術として、核酸を中空繊維に樹脂で固定化し、さらに、中空繊維の束を含む核酸固定化中空配列体及び核酸固定化中空配列体の繊維断面を有する薄片としたものが開示されている（例えば、特許文献１参照）。
【０００５】
また、バクテリアセルロース小塊を用紙に含有させ、染料、顔料等で着色させた偽造防止用紙が開示されている（例えば、特許文献２参照）。
【０００６】
また、物品の真偽を判別するための標識方法で、核酸、抗体又は抗原から選択した非粒子巨大分子の第一化合物（シグナル化合物）、例えば、核酸を品物又は物質の製造中にその中へ入れ、品物又は物質が本物である場合にシグナル化合物に結合することができる標識された核酸プローブをシグナル化合物が占め得る領域に接触させ、このプローブがこの領域でシグナル化合物とハイブリダイズするかどうかを判定する方法が開示されている（例えば、特許文献３参照）。
【０００７】
ＤＮＡを迅速かつ効率的に固定支持させる方法としては、シート状の支持体にDNA溶液を付着させ、支持体に付着させたＤＮＡ溶液を乾燥させることによって支持体にＤＮＡを固定させる方法が開示されている（例えば、特許文献４参照）。
【０００８】
しかしながら、核酸固定化中空配列体の繊維断面を有する薄片としたものは、一定の厚みを持っているので、用紙の紙層に抄き込むには無理があり、また、耐久性にも問題があった。
【０００９】
また、バクテリアセルロース小塊は、平均直径が0．5ｍｍ以上であることが必要であり、肉眼での識別に適した技術ではあるが、この方法では、あらかじめバクテリアセルロースを培養により生産するといった煩雑な操作が必要であり、また、バクテリアセルロースを染料、顔料等で着色させた場合には、デザイン上の制約を受けるといった問題もあった。
【００１０】
また、核酸、抗体又は抗原から選択した非粒子巨大分子の第一化合物（シグナル化合物）を用いる方法では、タグの上にシグナル化合物を特定するための数を記載する必要があった。
【００１１】
さらに、ＤＮＡをシート状の支持体にDNA溶液を付着する方法では、ＤＮＡが水溶性の物質であることから、ＤＮＡを用紙に固定化することが困難であった。
【特許文献１】特開２０００−２４５４６０号公報
【特許文献２】特許第３２６８０５７号公報
【特許文献３】特許第２７２６８７７号公報
【特許文献４】特開２０００−１４６９５８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、上述した従来技術の問題点を解決するためになされたもので、核酸を簡易に繊維に固定化でき、偽造防止効果が高く、かつ真偽の判別が容易にできる用紙及びこれら用紙と偽造された用紙とを迅速かつ確実に識別できる方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者は今般、核酸を溶解させた所定溶液に乾燥状態にある繊維を浸漬することにより、容易に繊維に核酸を固定でき、また、これら繊維に蛍光物質を付与することにより、核酸固定繊維の特定が容易に行えるとの知見を得た。本発明は、かかる知見によるものである。
すなわち、本発明の用紙は、少なくとも１種類の核酸を、少なくとも１本の繊維に固定した核酸固定繊維を含んでなるものである。
【００１４】
また、本発明の別の態様としての核酸固定繊維の製造方法は、水、アルコール又は水とアルコールとの混合溶液に核酸を溶解させた核酸溶液中に繊維を浸漬する工程と、前記核酸溶液から繊維を取り出し、その繊維を乾燥、ベーキング又は紫外線照射することにより、核酸を前記繊維に固定する工程とを含んでなるものである。
【００１５】
さらに、本発明の態様としての製紙方法は、少なくとも１種類の核酸を、少なくとも１本の繊維に固定した核酸固定繊維を、製紙用パルプを主体として調整したスラリーに添加する工程と、前記繊維が添加されたスラリーを抄紙して乾燥する工程とを含んでなるものである。
【００１６】
また、さらに、本発明の別の態様としての用紙の真偽識別方法は、識別情報が付与された少なくとも１種類の核酸を、外部エネルギーにより呈色する繊維に固定した核酸固定繊維を用紙中に抄き込んでなる用紙を識別する識別方法であって、前記用紙に外部エネルギーを照射し、外部エネルギーにより呈色する核酸固定繊維のみを前記用紙から抜き取り、又は呈色する部分を用紙から切り取る工程、前記核酸固定繊維又は切り取った用紙から核酸を抽出する工程、前記抽出した核酸を調べる工程及び、前記核酸と、予め調べておいた核酸とを比較して、真偽の判別を行う工程とを含んでなるものである。
【００１７】
また、さらに、本発明の別の態様としての用紙の真偽識別方法は、識別情報が付与された少なくとも１種類の核酸を、着色剤で着色された繊維に固定した核酸固定繊維を用紙中に抄き込んでなる用紙を識別する識別方法であって、前記用紙の着色された核酸固定繊維のみを前記用紙から抜き取り、又は着色された部分を用紙から切り取る工程、前記核酸固定繊維または切り取った用紙から核酸を抽出する工程、前記抽出した核酸を調べる工程、及び前記核酸と、予め調べておいた核酸とを比較して、真偽の判別を行う工程とを含んでなるものである。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、核酸を１本の繊維に固定した核酸固定繊維を用紙に抄き込んだ用紙を得ることができ、また、該用紙の真偽判別を識別する識別法が提供される。また、このような用紙は、例えば、紙幣、パスポート、身分証明書、有価証券、貴重印刷物等の偽造防止を要求される分野に好適に利用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明を実施の形態に基づき説明する。核酸固定繊維の作製方法の実施例について説明する。核酸を固定する繊維の材質としては、天然繊維、合成繊維、半合成繊維等が挙げられ、核酸としてはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）やリボ核酸（ＲＮＡ）が挙げられる。
【００２０】
１．偽造防止用紙およびその製造方法
本発明による用紙は、少なくとも１種類の核酸を、少なくとも１本の繊維に固定した核酸固定繊維を含んでなるものである。以下、本発明に用いられる繊維及び核酸について説明する。
【００２１】
核酸を固定する繊維の材質としては、天然繊維、合成繊維、半合成繊維等が上げられる。また、核酸としては、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）やリボ核酸（ＲＮＡ）が好適に使用できる。
【００２２】
また、本発明に用いられる核酸は、市販のものでも良く〔例えば、ＩＣＡＮ  ＤＮＡ（商標名）：タカラバイオ社〕、また、生細胞などから得られた核酸でも良い。具体的には、ヒト、動物、植物、微生物などの各生物種、生体内の血液、細胞、毛髪、爪などの組織、細胞内小器官由来物質などから抽出したものを用いることができる。これらの物質から核酸を抽出する方法としては、特に限定されるものではなく、従来の公知の方法、例えばＤＮＡの抽出については、Blinらの方法（Blin et al., Nucleic Acids Res. 3: 2303 (1976)）等により、また、ＲＮＡの抽出については、Favaloroの方法（Favoloro et al., methods Enymol.65:718(1980)）等により行うことができる。また、これらの抽出を行った核酸を適当な制限酵素を単独で又は組み合わせることで適当な大きさに断片化して用いる。
【００２３】
核酸は、あらかじめ定められた暗号化の規則に従って合成したものを使用することもできる。一例として、核酸としてＤＮＡを用いた場合に関して説明する。
【００２４】
ＤＮＡの構造特性は、１本の鎖上の塩基配列によって決まり、その塩基配列を組み合わせることで、非常に多くの種類とすることが可能である。本発明においては、用紙の製造工場、製造機械等の製造情報及び個別情報等を識別データとして、使用するＤＮＡの採取の由来物質、用いた制限酵素の種類、ＤＮＡ塩基配列、ＤＮＡ鎖長又は電気泳動パターンを用いる。このような識別データを核酸に付与することにより、後述する、偽造防止用紙についての真偽判別が可能となる。
【００２５】
ＤＮＡを繊維へ固定する方法としては、一般に公知の物理的吸着法又は化学的吸着法、すなわち、繊維に存在する官能基とＤＮＡを構成する成分との化学的又は物理的な相互作用を用いることができる。繊維中のＤＮＡの含有量は、抽出したDNAが増幅可能な量であれば、特に制限はない。
【００２６】
核酸の繊維への固定は、例えば、物理的吸着法を用いる場合は、核酸溶液中に繊維を浸漬し、当該繊維を乾燥、ベーキング又は紫外線照射処理を行うことにより行うことができる。核酸溶液としては水又はメタノール、エタノール、ブタノールなどのアルコール溶液を単独で、又は水と混合して用いることができる。
【００２７】
また、核酸を付与する繊維は、あらかじめ乾燥状態としておくことが好ましい。このような乾燥状態にある繊維を用いることにより、繊維に核酸溶液を含浸させる際に、繊維中に核酸が入りやすくなるからである。ここで、「乾燥状態」とは、繊維中の水分量が１０％以下の状態を意味するものである。なお、繊維の形状や材質については特に制限されるものではない。核酸溶液中に繊維を浸漬した後、必要に応じて繊維を乾燥、ベーキング、又は紫外線照射の処理を行うことにより、核酸を繊維に固定できる。
【００２８】
化学的吸着法を用いた、核酸の繊維への固定化は、例えば、核酸をアミノ基で修飾し、該核酸を繊維を構成するセルロース等の水酸基とを架橋させることにより、繊維に核酸を固定することができる。具体的には、ＤＮＡの末端ヌクレオチド分子をそのアミノ基や水酸基又は化学的修飾により導入された官能基を介して支持体（繊維）に結合させることにより、得られた固定化ＤＮＡは、種々の部位で支持体（繊維）に結合するため、この部位を用いて繊維に固定化することができる。
【００２９】
本発明においては、核酸をマイクロカプセル化したものを用いることが好ましい。マイクロカプセル化された核酸を繊維に固定することにより、耐酸性や耐候性が格段に向上する。ＤＮＡを封入したマイクロカプセルは、一般に公知の方法で得ることができる。このようにＤＮＡを封入したマイクロカプセルを、上記に説明したような物理的吸着法または化学的吸着法により、繊維に固定することができる。
【００３０】
物理的吸着法又は化学的吸着法でＤＮＡを付着させた繊維は、膨大な情報を保持することができ、この核酸固定繊維を、用紙に抄き込んだり、又は用紙表面に付着させることにより、真偽判別が可能な用紙を得ることができる。
【００３１】
本発明においては、少なくとも１種類の核酸を、少なくとも１本の繊維に固定した核酸固定繊維を、製紙用パルプを主体として調整したスラリーに添加し、核酸固定繊維が添加された該スラリーを抄紙して乾燥することにより、真偽判別が可能な用紙を得ることができる。
【００３２】
また、本発明の別の態様として、抄紙された基紙の表面に核酸固定繊維を付着させ、該基紙を乾燥することにより、真偽判別が可能な用紙を得ることができる。
【００３３】
このようにして得られた用紙は、後述するように、該用紙に混抄されたＤＮＡ固定繊維を抽出し、この抽出した繊維に固定されたＤＮＡに付与された識別データを判別することにより、真偽を判別することができる。具体的には、これらＤＮＡには、個別情報や製造情報が特定されており、これらの情報は、一部の者のみが知る情報であるので、真偽判別が可能となる。
【００３４】
本発明による用紙は、ＤＮＡ等の核酸が固定された繊維が用紙に含まれているものであるが、ＤＮＡの存在は、肉眼で見ることは不可能であるため、これら繊維が用紙に抄き込んであったり、又は用紙表面に付着してあるということが悟られにくいという効果を有する。また、たとえＤＮＡ等の核酸が固定された繊維が用紙に入っていることを悟られたとしても、用いているＤＮＡを特定するためには、特殊な設備や技術が必要であり、したがって、同様の用紙を第三者が作製することは、ほぼ不可能となる。
【００３５】
ＤＮＡ固定繊維のＤＮＡは、情報を保持しているので、用紙中に含まれるＤＮＡ固定繊維のＤＮＡの塩基配列を、用紙の製造工場や用紙のロット毎等に異なるようにしておけば、該用紙を偽造することは、ほぼ不可能となる。
【００３６】
２．用紙の真偽識別方法
本発明による用紙の真偽判別方法は、上記の核酸固定繊維に機能性材料を付与しておく。機能性材料としては、蛍光物質、燐光物質、蓄光物質、赤外吸収物質、着色物質、フォトクロミック材料、示温材料又はサーモクロミック材料等があるが、本実施の形態では、上記の核酸固定繊維に機能性材料として蛍光物質を付与しておき、この繊維を含む用紙に紫外線を照射し、蛍光発色する核酸固定繊維のみを前記用紙から抜き取り、又は蛍光発色する部分を用紙から切り取る工程と、前記核酸固定繊維又は切り取った用紙から核酸を抽出する工程と、前記抽出した核酸の特徴を調べる工程と、この核酸の特徴と、あらかじめ調べておいた核酸の特徴とを比較して真偽の判別を行う工程とを含むものである。
【００３７】
用紙の真偽判別をするにあたっては、上記のように、ＤＮＡ固定繊維を混抄又は用紙表面に付着させたＤＮＡを用紙から採取して、そのＤＮＡに書き込まれた個別情報を判読する必要がある。しかしながら、ＤＮＡは、目視によっては判別できないことから、ＤＮＡ固定繊維が用紙のどこに抄き込まれているか（又は付着しているか）わからない。本発明にあっては、該繊維に蛍光物質等の機能性材料を付与することにより、用紙の中からＤＮＡ固定繊維のみを確実に抽出することができる。なお、核酸固定繊維は、用紙中のあらかじめ意図した個所に抄き込んでいても（表面に付着されていても）よい。
【００３８】
本発明にあっては、抽出した核酸を、濃縮して増殖する工程をさらに含む。この工程の一例を以下に説明するが、これらに限定されるものではなく、従来の公知の方法により行うことも可能である。
【００３９】
ＤＮＡ固定繊維だけを抜き取り、又はＤＮＡ固定繊維を含む部分を切り取り、このＤＮＡ固定繊維又は切り取った部分を用いて、イオン性又は非イオン性の界面活性剤とエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム水塩を混合した緩衝液を用いてＤＮＡの抽出を行う。この場合イオン性又は非イオン性の界面活性剤とトリス塩酸緩衝液とエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム水塩を混合した緩衝液を用いてもよい。その後必要に応じて、フェノール抽出又はフェノールクロロホルム抽出を行ってＤＮＡの精製をした後、エタノール沈殿又はブタノール沈殿を行い、ＤＮＡの濃縮を行う。
【００４０】
上記の手順により精製・濃縮したＤＮＡの増幅を、ＰＣＲ反応を用いて行う。ＰＣＲ（Polymerase  Chain  Reaction）はＤＮＡポリメラーゼを用いて、一定の温度サイクルを繰り返し、目的とするＤＮＡを指数関数的に増幅する方法である。
【００４１】
本発明にあっては、上記のようにして、抽出、精製及び増幅された核酸の特徴、すなわち、核酸に付与された識別情報を調べる工程を含むものである。以下、核酸（ＤＮＡ）に付与された識別情報を判読する方法について説明する。
【００４２】
まず、高温でＤＮＡを変性させ、次に温度を下げ、所定のプライマーを会合させ、ＤＮＡポリメラーゼにより相補的なＤＮＡ断片を合成させる。この場合、使用するプライマーの塩基配列がＰＣＲ反応を用いて増幅を行おうとするＤＮＡの塩基配列と相補的であることが必要である。また、このＰＣＲを用いた増幅反応において、例えば蛍光ヌクレオチドを用いてＰＣＲ産物を蛍光標識することも可能である。
【００４３】
次にこのＰＣＲ産物の識別を、電気泳動を行うことにより識別する。電気泳動とは、タンパク質・アミノ酸などの荷電を有する物質を適当なｐＨ、緩衝液及び支持体を選んで電場をかけると、それらの物質の持つ荷電の差に基づいて固有の移動鎖で陰極または陽極へ向かって移動する現象である。支持体としては、ポリアクリルアミドゲル又はアガロースゲルを用いることができる。緩衝液に電場をかけると負の電荷をもつＤＮＡ断片は、陽極に向かってゲルの中を移動するが、ＤＮＡサイズが大きいほど遅く移動するため、鎖長の長い断片と短い断片とが区分されてバンドのパターンが形成される。電気泳動の終了後に、例えばエチジウムブロミド染色液を用いて染色し、紫外線下でゲルを観察するなどの従来の方法により、結果を確認する。
【００４４】
この場合、ＤＮＡ分子量マーカーを標準物質として同時に電気泳動を行うことで、塩基鎖長を読み取り、又は電気泳動パターンそのものをデータとすることが可能となる。したがって、電気泳動パターンの情報は、真偽判別に有効であり、塩基配列を決定しなくても迅速な真偽判別が行うことが可能となる。
さらに必要ならば、塩基配列を決定し、ＤＮＡに付与された秘匿情報を解読することもできる。
【００４５】
また、あらかじめ、ＤＮＡに検出チップを埋め込む場合は、例えば、放射性リンを用いてＤＮＡをラベル化し、放射線フィルムに感光させる方法、蛍光色素でラベル化する方法、ナフタレンジイミドのフェロセン誘導体を用いる電気化学的方法などが挙げられる。これらの方法は、極めて検出感度が高く、また、電気泳動を行わなくても真偽判別を行えるという利点がある。
【実施例】
【００４６】
以下、本発明の用紙を実施例により更に詳細に説明するが、本発明がこれら実施例に限定されるものではない。
ＤＮＡ固定繊維の作製
まず、繊維にＤＮＡを固定させる方法として、物理的吸着法を用いた例を以下に示す。ＤＮＡとしては、タカラバイオ製のラットの遺伝子断片（塩基鎖長３００）をＩＣＡＮ法により増幅したものを、また、ＤＮＡを固定する繊維として、紫外線下で蛍光を有するＰＶＡ繊維を用いた。
【００４７】
まず、ＰＶＡ繊維を１０５℃で４時間乾燥させ、デシケーターケーの中で放冷した。このＰＶＡ繊維をＤＮＡを含むエタノール溶液（エタノール濃度３０〜７０％）２ｍＬに浸漬（４８時間）し、ＤＮＡを繊維に固定化させた。ＤＮＡ溶液の濃度及びＰＶＡ繊維重量は下記のとおりであった。このＰＶＡ繊維を含む溶液をそのまま、ＮＢＫＰのパルプ懸濁液に投入し、公知の方法で手漉きシートを作製し、室温で乾燥を行うことにより、用紙１を得た。用紙１の風乾後の重量は、２．０１ｇであった。
ＤＮＡ溶液        １２５μｇ/ｍｌ
ＰＶＡ繊維        ０．００５ｇ
【００４８】
次に、核酸にＤＮＡを固定させる方法として、化学的吸着法を用いた実施例を以下に示す。ＤＮＡは、タカラバイオバイオ製のラットの遺伝子断片（塩基鎖長３００）の末端に、5‘末端にＮＨ２（ＣＨ２）6−を付与したものを用いた。このＤＮＡを１０ｍＭリンカリウム溶液緩衝液２ｍＬに溶解させ、その後、このＤＮＡ溶液をＮＢＫＰのパルプ懸濁液に投入して、室温で２４時間時間撹拌しながら浸漬した。このパルプ懸濁液を用いて公知の方法で手漉きシートを作製し、室温で乾燥を行うことにより、用紙２を得た。用いたＤＮＡと得られた用紙２の風乾後の重量は以下のとおりであった。
ＤＮＡ            ２５０μｇ
用紙２            ２．０１ｇ
【００４９】
２．ＤＮＡ固定繊維を用いた用紙の識別
得られた用紙１及び２について、それぞれの用紙に紫外線を照射することにより、ＤＮＡ固定繊維が用紙に含まれているか確認を行った。紫外線照射下で用紙を観察すると、ＰＶＡ繊維のみが蛍光を有していることが観察できた。
用紙１について、蛍光を有する繊維を抜き取り、非イオン性の界面活性剤とエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム水塩（ＥＤＴＡ）を使用して抽出を行った。この抽出物を固着に有したＤＮＡに対応する所定のプライマーを用いてＰＣＲによる増幅反応を行い、ＤＮＡの増幅を行った。得られたＰＣＲ産物、分子量マーカー及びＤＮＡ−Ａに対して電気泳動を行い、エチジウムプロミド染色液を用いて染色し、紫外線下でゲルを観察し、電気泳動パターンを得た。得られた電気泳動パターンを図１に示す。
【００５０】
図1のレーンa及びレーンｄは分子量マーカー、レーンｂは前記繊維からの抽出物のＰＣＲ産物、レーンｃはＤＮＡを電気泳動したときに得られるパターンである。
図１から、繊維の抽出物のＰＣＲ産物の電気泳動パターンは、ＤＮＡの電気泳動パターンと同一であることがわかる。さらに、レーンa及びレーンｄの分子量マーカーを参照に用いると、前記繊維からの抽出物のＰＣＲ産物のＤＮＡ鎖が、繊維に固定したＤＮＡと同じ、塩基鎖長３００であることが判明した。
【００５１】
また、得られた用紙２について、蛍光発色している部分について、５ｍｍφに打ち抜き、非イオン性の界面活性剤とエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム水塩（ＥＤＴＡ）を使用して抽出を行った。この抽出物を固着に有したＤＮＡに対応する所定のプライマーを用いてＰＣＲによる増幅反応を行い、ＤＮＡの増幅を行った。得られたＰＣＲ産物、分子量マーカー及びＤＮＡ−Ａに対して電気泳動を行い、エチジウムプロミド染色液を用いて染色し、紫外線下でゲルを観察し、電気泳動パターンを得た。
【００５２】
ＰＣＲ産物の電気泳動パターンは、ＤＮＡの電気泳動パターンと同一であった。さらに、分子量マーカーを参照に用いることで、手すきシートからの抽出物のＰＣＲ産物のＤＮＡ鎖が、繊維をシートに固着させたＤＮＡと同じ塩基鎖長３００であることが確認された。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】実施例の電気泳動パターンを示したものである。
【符号の説明】
【００５４】
ａ  分子量マーカー
ｂ  抽出物のＰＣＲ産物
ｃ  ＤＮＡ
ｄ  分子量マーカー
【図１】
0004752041.tif 000002