(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１）穀物から得られるタンパク質；高タンパク植物から得られるタンパク質；油を含む植物から得られるタンパク質；および芋類から得られるタンパク質を含む群より選ばれるタンパク質を準備し、
２）ケトースの乾燥重量による濃度が、処理する粗タンパク質の乾燥重量に対して、０．５〜２０％で、前記タンパク質を、３〜５個の炭素原子を含むケトースの少なくとも１種と接触させ、
３）タンパク質とケトースとを数分間以上、６０分間以下、６５〜１０５℃の温度で接触させ、
４）このようにして得られた架橋タンパク質を回収する
タンパク質を架橋する方法。
【請求項２】
タンパク質とケトースとを３０分間接触させる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記穀物から得られるタンパク質が、トウモロコシのタンパク質、小麦のタンパク質および米のタンパク質からなる群より選ばれるものであり、
前記高タンパク植物から得られるタンパク質が、エンドウ豆のタンパク質、アルファルファのタンパク質、ハウチワマメのタンパク質、大麦のタンパク質、キビのタンパク質およびモロコシのタンパク質からなる群より選ばれるものであり、
前記油を含む植物から得られるタンパク質が、大豆タンパク質、菜種タンパク質、亜麻タンパク質、ヒマワリのタンパク質、落花生のタンパク質および綿のタンパク質からなる群より選ばれるものであり、
前記芋類から得られるタンパク質が、じゃがいものタンパク質およびキャッサバのタンパク質からなる群より選ばれるものである請求項１〜２のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
ケトースの乾燥重量による濃度が、処理する粗タンパク質の乾燥重量に対して、１〜１０％で、前記タンパク質を、３〜５個の炭素原子を含むケトースの少なくとも１種と接触させる請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記３〜５個の炭素原子を含むケトースが、ジヒドロキシアセトン、エリトルロース、リブロースおよびキシルロースからなる群より選ばれる請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の方法によって得られる、３〜５個の炭素原子を含むケトースで架橋されたタンパク質。
【請求項７】
動物の飼料における請求項６に記載の架橋タンパク質の使用。
【請求項８】
前記動物の飼料が、反芻動物およびペットの飼料、または水産養殖でのえさ用の飼料である請求項７に記載の使用。
【請求項９】
前記架橋タンパク質が、亜鉛塩でなめされたタンパク質からなる群より選ばれる、無機のなめし剤で処理されたタンパク質の代わりになる請求項７に記載の使用。
【請求項１０】
前記架橋タンパク質が、ホルムアルデヒド、グリオキサールまたはグルタルアルデヒドでなめされたタンパク質からなる群より選ばれる、アルデヒドなめし剤で処理されたタンパク質の代わりになる請求項７に記載の使用。
【請求項１１】
被覆剤、コーティング剤または接着剤用の塗膜形成組成物を調製するための請求項６に記載の架橋タンパク質の使用。
【請求項１２】
前記架橋タンパク質が、エピクロロヒドリン樹脂、ポリアミド−アミン−エピクロロヒドリン樹脂、ポリエチレンイミン樹脂またはイソシアネート樹脂でなめされたタンパク質からなる群より選ばれる、合成なめし剤でなめされたタンパク質の代わりになる請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記架橋タンパク質が、ホルムアルデヒド、グリオキサールまたはグルタルアルデヒドでなめされたタンパク質からなる群より選ばれる、アルデヒドなめし剤でなめされたタンパク質の代わりになる請求項１１に記載の使用。
【請求項１４】
プラスチックフィルム、革製品、紡織繊維、ゼラチン・カプセル、カプセルまたはタンパク質を含む食品組成物からなる群より選ばれる、生分解性または再生可能なタンパク質材料を調製するための請求項６に記載の架橋タンパク質の使用。
【請求項１５】
前記架橋タンパク質が、クロムでなめされたタンパク質からなる群より選ばれる、無機のなめし剤でなめされたタンパク質の代わりになる請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記架橋タンパク質が、ホルムアルデヒド、グリオキサールまたはグルタルアルデヒドでなめされたタンパク質からなる群より選ばれる、アルデヒドなめし剤でなめされたタンパク質の代わりになる請求項１４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、架橋剤が３〜５個の炭素原子を含むケトースである、タンパク質を架橋する方法に関する。
【０００２】
さらに、本発明は、少なくとも１つの３〜５個の炭素原子を含むケトースで、動物の飼料や、被覆剤、コーティング剤または接着剤用の塗膜形成組成物の製造、生分解性または再生可能なタンパク質材料の製造に用いられるタンパク質を架橋する方法に関する。
【０００３】
本発明の目的では、「３〜５個の炭素原子を含むケトース」という表現は、ジヒドロキシアセトン（すなわち１，３−ジヒドロキシ−２−プロパノン）、エリトルロース、キシルロースおよびリブロースからなる群より選ばれるケトースを意味するものである。
【０００４】
本発明は、特に、架橋タンパク質のためのジヒドロキシアセトンの使用に関する。
【０００５】
さらに、「タンパク質架橋剤」あるいは「タンパク質なめし剤」という表現は、それの消化性および水溶性を下げるように、前述のタンパク質と、水素結合、配位結合、共有結合あるいはイオン結合を形成することができる化合物を意味するものである。
【背景技術】
【０００６】
タンパク質架橋剤は、一般に、主に３つの群に分けられる。
【０００７】
第１の群は、２価、３価または多価のカチオン塩、例えばクロム、アルミニウム、鉄、亜鉛、銅、コバルト、チタン、ジルコニウム、ケイ素やセシウムの塩などの無機のなめし作用を有する物質（なめし剤）から成る。
【０００８】
無機のなめし剤は、アルカリ媒体中で特に有効である。塩基性の形では、これらの多価金属塩は、タンパク質のあるアミノ酸の遊離カルボキシル基と安定に結合する。
【０００９】
その適用分野は、特に、生分解性または再生可能なタンパク質材料のなめしの分野、さらには、動物の皮の真皮を構成するコラーゲンをなめすことによる革製品の生産の分野である。
【００１０】
この実施の目的は、つまり、微生物がコラーゲン繊維を攻撃する可能性を無くすことにより、動物の皮を革製品に変換すること、すなわち、腐敗しやすい材料を腐敗しにくい材料に変換することである。
【００１１】
世界中の獣の皮のなめしのおよそ９０％に相当するクロムなめしの場合には、
−  タンパク質のアミノ鎖の遊離カルボキシル基、または、
−  硫酸エステル、ギ酸エステルまたはシュウ酸エステル基を介し、タンパク質のアミノ鎖の遊離アミン基のいずれかと
クロム化合物が複合体を形成し、タンパク質に付着している。
【００１２】
その後、クロム化合物によって、架橋、すなわち２つ以上のペプチド鎖の結合形成が生じる。
これらの無機のなめし剤は特に効果的であるが、大量の環境に有害な廃棄物を生成する。
【００１３】
無機のなめし剤はまた、亜鉛塩や他のカチオンの塩の形で、動物の飼料用のタンパク質のなめし分野でも時々使用される。それが動物にとって有毒な作用になることがあるので、そのようになめされたタンパク質の過剰消費は避けるべきである。
【００１４】
なめし剤の第２の群は、エピクロロヒドリン樹脂、ポリアミド−アミン−エピクロロヒドリン樹脂、ポリエチレンイミン樹脂、およびメチレンジフェニルジイソシアネート等のイソシアネート樹脂などの合成なめし剤から成る。
【００１５】
その適用分野は、特に、にかわ、または接着剤の分野、さらには、木材の接着剤あるいは段ボール紙の接着剤の分野である。
【００１６】
なめし剤の第３の群は、アルデヒド・なめし剤、特にホルムアルデヒド、グリオキサール（エタンジアール）か、グルタルアルデヒド、および様々な縮合体の形で売られている市販のそれらの誘導体すべてから成る。
【００１７】
アルデヒド・なめし剤は共有結合によってタンパク質に結合し、主として縮合物を生成する。二重の縮合反応によっても、架橋物が生成する。
【００１８】
これらの縮合生成物は、一般に、架橋剤のカルボニル基とタンパク質のあるアミノ酸の遊離アミン基（特にリシンのε−アミノ基）との縮合によってイミンを生成する反応により生成する。
【００１９】
アルデヒド・なめし剤は、３つの主な適用分野で特に使用される。
【００２０】
第１の適用分野は、最も一般的にはホルムアルデヒドで架橋する、ミルク・カゼイン、ゼイン、コラーゲン、大豆タンパク質、食肉処理場から出る血液、およびゼラチンからの、例えば、革製品、成形品、紡織繊維、薬剤または食物のカプセル、写真フィルム、自動車の部品および押しボタンなどのタンパク質材料の調製の分野である。
【００２１】
革製品については、アルデヒド基を有するなめし剤が、アルデヒド・なめし剤の基とペプチド鎖の少なくとも２つの基との間に結合を生成することにより、コラーゲンの構造を強化する。特定の革製品はこのようにして得ることができる。
【００２２】
第２の適用分野は、被覆剤、コーティング剤または接着剤用の塗膜形成組成物の製造に用いられるタンパク質のなめしの分野である。
【００２３】
一般に、例えば、紙、ボール紙、粒子、木材または他の材料を接着するために、ゼラチン、血液タンパク質、魚肉タンパク質、ミルク・カゼインまたは植物タンパク質から調製され、通常、接着部分の耐水性および耐湿性、またその接着性を改善するためにホルムアルデヒドまたはグリオキサールが添加された接着剤が使用される。
【００２４】
第３の適用分野は、「耐久性のある」タンパク質の製造のための原材料、特に反芻動物の飼料用のタンパク質のなめしの分野である。
【００２５】
耐久性のあるタンパク質は、それらが第一胃の中のある微生物酵素によって品質を落とされないように変性されたタンパク質である。
【００２６】
しかしながら、第一胃を通り抜けた後、第四胃（皺胃）および小腸に到達すると、これらのタンパク質は、再度十分な消化性を持つ。実際に、酸性のｐＨおよび消化酵素はタンパク質を遊離させ、再びこれらを利用可能にする。
【００２７】
したがって、このなめし作業は、反芻動物の摂取した食糧のよりよい消化吸収を可能にし、畜産業の水準が向上する（肉およびミルクの生産が改善される）。
【００２８】
しかしながら、これらの３つの適用分野で使用されるアルデヒド・なめし剤の大きな欠点は、その高い毒性である。
【００２９】
最も一般的に使用されているアルデヒドの１つは、非常に反応性が高いことから、ホルムアルデヒド（よく用いられる技術的な名称としてホルモールとも言う）である。そして、この化学薬品は、室温で気体状態にあるので、最も有毒で、アルデヒド・なめし剤の中でも最も扱うのが危険なものの１つである。
【００３０】
反芻動物の飼料の分野では、活性であるが、あまりにも有毒なこの物質の使用を減らすために、例えば、特許文献１には、特別の種類のアルデヒド、例えばアルドースを用いてなめし反応を行なうことが提案されている。
【００３１】
これらはキシロース、リボース、マンノース、ラクトースおよびグルコースである。これらの分子は、従来使用されているアルデヒド・なめし剤と異なり、無毒である。
【００３２】
しかしながら、その特許の記載内容から、その特許の著者が「中間の」マイラード生成物ではなく「初期の」マイラード縮合生成物と呼ぶものを得るためには、なめし反応を厳密に制御することが必要であることは明らかである。
【００３３】
さらに、「正統」と言われる食物、つまり総タンパク質に対して１．５：１の比率で食物中にある遊離アミン基を有する一群のタンパク質を含んでいる食物を選択することも必要である。
【００３４】
最後に、４未満のｐＨで縮合生成物を加水分解することと、その中の還元する糖のパーセンテージを制限することとが必要である。
【００３５】
したがって、特許文献１に記載された方法は困難すぎるので、実施することができない。
【００３６】
特許文献１において提案されたアルドースに加えて、ケトースが１つだけ前記特許文献１で言及されている。それはフルクトースである。
【００３７】
しかしながら、この６個の炭素原子を含んでいるケトースは、グルコースとマンノースの中間の還元力を有するために考慮されているだけである。特許文献１は、このケトースを単に例示しているのであって、本当に推奨しているのではない。他のケトースは上記の方法で使用されていない。
【００３８】
さらに、出願人の知っている限りでは、ケトン基を有する他の糖の潜在能力および化学反応性は、本発明が関係のある事業の分野に関しての検討の対象では全くなかった。
【００３９】
一連の糖の中で最も単純なケトースは、式ＣＨ２ＯＨ−ＣＯ−ＣＨ２ＯＨの化合物であるジヒドロキシアセトン（すなわちＤＨＡ）であり、これは１，３−ジヒドロキシ−２−プロパノンとも呼ばれる。
【００４０】
化粧品部門での使用の他にも、皮膚の表皮に色をつける特性（「自己ブロンジング」効果）のための外用でも、ＤＨＡは、単独で使用されるか、あるいはエリトルロースとともに使用されるが、酸化防止、臭気抑制および殺菌特性（抗菌作用および抗菌・抗カビ作用）で特に知られている。
【００４１】
ＤＨＡは、特に、肝臓および含脂肪細胞の脂質含有量の代謝制御を保証するのに、ピルビン酸との混合物として特に推奨されている。それで、この手段によって、哺乳動物の脂質／タンパク質のバランスを制御することが可能である。
【００４２】
このような使用法は、例えば、哺乳動物の体重増加を避けるためにピルビン酸塩およびＤＨＡの経口投与することが特許文献２に記載されており、また、その投与は動物の中のタンパク質濃度を上昇させることが特許文献３に記載されている。
【００４３】
ＤＨＡの別の公知の特性、つまり望ましくない臭気に対する抑制効果を説明するために、特許文献４には、油や脂肪から臭気が再発生するのを防ぐことにＤＨＡを使用することが記載されている。
【００４４】
ＤＨＡの殺菌効果は、それ自体としては、例えば特許文献５に記載されている。それは、特に食品（魚、肉、果物、野菜など）を保存するために、食品添加物として、室温でＤＨＡと食品とを接触させることにより使用されている。
【００４５】
４個または５個の炭素原子を含むケトース（つまり、エリトルロース、リブロースあるいはキシルロース）に関しては、ＤＨＡと異なり、文献によれば、それらの固有の特性が作業研究の対象ではなかったと思われる。
【００４６】
後者の分子は、出願人の知っている限りでは、現在、それらの対応する水素添加物（エリトリトール、リビトール、アラビトールおよびキシリトール）のような付加価値を有する生成物の合成中間体として使用されているのみである。
【特許文献１】欧州特許出願公開第２８４，５４８号明細書
【特許文献２】米国特許第４，４１５，５７５号明細書
【特許文献３】米国特許第４，３５１，８３５号明細書
【特許文献４】特開昭５０−７８０３号公報
【特許文献５】カナダ特許第１，０５４，４３４号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００４７】
上記のことすべてから、架橋剤の代わりになるもの、特に無機のなめし剤、合成なめし剤およびアルデヒド・なめし剤の代わりになるもの、しかも、製造および使用が簡単であり、従来のなめし剤と比較して効果が同等、さらにはより優れたものを持つ必要性が満たされていないということである。
【課題を解決するための手段】
【００４８】
したがって、賞賛されるべきことに、長く飽き飽きする研究から、出願人は、タンパク質架橋剤の代わりとして、３〜５個の炭素原子を含むケトースを少なくとも１つ使用することを提案した。
【発明の効果】
【００４９】
最先端の技術において、３〜５個の炭素原子を含むケトースの使用が、タンパク質をなめすのに適しており、特に、動物の飼料用のタンパク質のなめし、被覆剤、コーティング剤または接着剤用の塗膜形成組成物の製造、および生分解性または再生可能なタンパク質材料の調製といった多様な分野で、通常のタンパク質架橋剤のすべて、またはいくつかに取って代わるかもしれないことは何も示唆しないであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５０】
そして、前記タンパク質は、特にカゼイン、ゼラチンあるいはコラーゲンなどのような動物の組織、牛乳、または血液から得られるタンパク質；特にトウモロコシ、小麦あるいは米のタンパク質などのような穀物から得られるタンパク質；特にエンドウ豆、アルファルファ、ハウチワマメ、大麦、キビあるいはモロコシのタンパク質などのような高タンパク植物から得られるタンパク質；特に例えば大豆かす等の大豆タンパク質、例えば菜種かす等の菜種または亜麻タンパク質、ヒマワリ、落花生または綿のタンパク質などのような油を含む植物から得られるタンパク質；特にじゃがいもまたはキャッサバなどのような芋類から得られるタンパク質を含む群より選ばれる。
【００５１】
本特許出願では、「動物の組織から得られるタンパク質」とは、人間以外の動物すべての組織から得られるタンパク質のことをいう。
【００５２】
有利な実施態様によれば、タンパク質は、特にトウモロコシ、小麦あるいは米のタンパク質などのような穀物から得られるタンパク質；特にエンドウ豆、アルファルファ、ハウチワマメ、大麦、キビあるいはモロコシのタンパク質などのような高タンパク植物から得られるタンパク質；特に例えば大豆かす等の大豆タンパク質、例えば菜種かす等の菜種または亜麻タンパク質、ヒマワリ、落花生または綿タンパク質などのような油を含む植物から得られるタンパク質；特にじゃがいもまたはキャッサバなどのような芋類から得られるタンパク質を含む群より選ばれる。
【００５３】
好ましくは、３〜５個の炭素原子を含むケトース少なくとも１つで完全に、または部分的に置換される架橋剤は、無機のなめし剤、合成なめし剤およびアルデヒド・なめし剤からなる群より選ばれる。
【００５４】
本発明において、３〜５個の炭素原子を含むケトースは、ジヒドロキシアセトン、エリトルロース、リブロースおよびキシルロースからなる群より選ばれ、好ましくはジヒドロキシアセトンである。
【００５５】
出願人は、架橋剤の代わりとして使用される３〜５個の炭素原子を含むケトースの反応性がその分子量（すなわち、その炭素数）に依存することを見出した。したがって、選ばれたケトースは、最も反応性が高い種（３個の炭素原子を含むＤＨＡ）から最も反応性が低い種（５個の炭素原子を含むキシルロースおよびリブロース）まで分けることができる。
【００５６】
したがって、どのケトースを選択するかは、所望の架橋度、または適用しようとする分野に依存する。
【００５７】
３〜５個の炭素原子を含むケトースの第１の使用方法によれば、そのようなケトースが、動物の飼料、特に反芻動物やペットの飼料、または水産養殖でのえさに用いる架橋タンパク質に実際に適しており、推薦できることを出願人は実証した。
【００５８】
これらのタンパク質は、特に、大豆かす、菜種かす、亜麻のかす、乳タンパク質、エンドウ豆のタンパク質、アルファルファのタンパク質、ヒマワリ、ハウチワマメ、落花生、綿、大麦、キビおよびモロコシのタンパク質、トウモロコシ、小麦（特にグルテン）および米のタンパク質、また、じゃがいもおよびキャッサバのタンパク質などのような、動物性タンパク質、穀物タンパク質、高タンパク植物から得られるタンパク質、油を含む植物から得られるタンパク質および芋類から得られるタンパク質からなる群より選ばれる。
【００５９】
３〜５個の炭素原子を含むケトース４つすべては、アルデヒド・なめし剤の代わりになる薬剤として区別なく使用できる。
【００６０】
しかしながら、動物の飼料、特に反芻動物やペットの飼料、または水産養殖でのえさに用いるタンパク質のなめしのためのホルモールの代わりとして好ましくはＤＨＡを使用することを出願人は推奨する。
【００６１】
出願人の知っている限りでは、ＤＨＡを家畜の飼料用のタンパク質のなめしに用いることは記載されたことがないので、アルデヒド・なめし剤の代わりとしてのＤＨＡを選択することは、それ自体、注目に値する。
【００６２】
実際、今までＤＨＡは単にその自己ブロンジング特性のために使用されてきたのに対し、ここでは、タンパク質の架橋は、耐久性のあるタンパク質、すなわち第一胃においてそれほど可溶でなく、それほど体内に吸収されて利用されることのないタンパク質を得るものである。
【００６３】
本発明が、従来、化粧品に使用され、糖尿病の合併症のような病理学的過程、またはタンパク質の熟成においてさえ時々言及されるＤＨＡの架橋特性に関係がないことに注目することは重要である。
【００６４】
ＤＨＡによる処理によって得られた耐久性のあるタンパク質の縮合体は、そのようなタンパク質を調製する元となる天然タンパク質と比較して、特に、リシン、アルギニン、グルタミンおよびアスパラギンなどのような遊離アミン基を有するアミノ酸のうちのいくつかについて、変性されたアミノ酸の含有量が多いことを出願人は実証した。
【００６５】
出願人は、アミノ酸がＤＨＡの単一の、さらには二重の縮合反応の変性生成物の形態でタンパク質中に存在することを見出した。
【００６６】
ＤＨＡは、例えば、リシンやアルギニンと共に、イミンを形成して、優先的に縮合する。二重の縮合物は架橋生成物となることができる。
【００６７】
さらに、ＤＨＡのカルボニル基のα位に水酸基が存在すると、この酸のカルボキシル基と一緒になって環化してδ−ラクトンを形成することができる末端アミノ酸の縮合によってイミンが得られることを出願人は実証した。
【００６８】
出願人によって行なわれた、ホルモールによるタンパク質の変性に関する比較研究もまた、タンパク質を構成するすべてのアミノ酸の中で、リシンおよびアルギニンが変性されないのに対し、チロシンがホルモールによる縮合反応によって変性される傾向があることを示した。
【００６９】
どのような理論によっても裏付けられてはいないが、本発明によるタンパク質縮合物が示す、例えば第一胃でタンパク質が受ける酵素および微生物の攻撃に対する耐久性について説明することを可能にするのは、ケトースとアミノ酸、特にリシンおよびアルギニン型（菜種かすと大豆かす）やグルタミン型（小麦グルテン）の遊離アミン基とのこの縮合であるように思われる。
【００７０】
実際に、これらのアミノ酸との縮合物は、タンパク質の立体障害、または配置の局所的な変化によって、分解酵素がタンパク質に容易に接近するのを防ぐことができる。
【００７１】
大豆かす、菜種かす、亜麻のかす、乳タンパク質、エンドウ豆のタンパク質および小麦（グルテン）のタンパク質からなる群より選ばれるタンパク質は、ＤＨＡでなめすのに特に好適である。
【００７２】
３〜５個の炭素原子を含むケトースの第２の使用方法によれば、被覆剤、コーティング剤または接着剤用の塗膜形成組成物を調製するために使用される、通常のタンパク質架橋剤に有利に取って代わることが可能なことを出願人は示した。
【００７３】
そして、これらのタンパク質は、穀物、芋類、油を含む植物、高タンパク植物、牛乳、血液、および動物の組織から得られるタンパク質、好ましくはカゼイン、ゼラチン、ゼインおよび高タンパク植物からの分離物からなる群より選ぶことができる。
【００７４】
好ましくはＤＨＡを使用することも出願人は推奨する。後で例証されるように、実際に、ｐＨが中性であってもアルカリ性であっても、ＤＨＡは室温でも、顕著なタンパク質の不溶化および架橋効果を示す。その結果、同時にそれらの耐水性を調節しつつ、タンパク質薄膜の機械的特性を向上させることが可能になる。
【００７５】
その特性は実証されているが、時間とともにＤＨＡの架橋効果が向上することも出願人は強調したい。
【００７６】
したがって、ＤＨＡは、その瞬間架橋性が粘性のあまりにも急激な増加を引き起こすホルモールとは異なり、目標とされた応用分野に最も特に適している。
【００７７】
ＤＨＡの遅い反応性が、この結果として、程度の差はあるが水溶性である包装フィルム、保護膜、コーティング膜および表面皮膜を調製するための組成物の配合にＤＨＡを使用することを考えるのを可能にする。
【００７８】
それらの組成物は、洗剤の分野（粉末、芳香剤、酵素などのコーティング）、紙の表面処理の分野（普通紙、ボール紙など）、冶金の分野（シートメタルなど）、建設の分野（セメントまたは顔料のコーティング、アンチグラフィティ膜など）、農業の分野（種子のコーティング、肥料または植物防疫剤（農薬）の徐放製剤など）、獣医の分野（ビタミン、トレースエレメント（微量元素）などのコーティング）、製薬の分野（活性剤のコーティングまたはカプセル化）、あるいは食料品の分野（バリヤーフィルム、食用フィルム、食品、特にデリカテッセン製品および菓子製品のコーティング）を対象とすることができる。
【００７９】
それらの組成物は、また、非常によい耐水性および／または優れた接着力を必要とする接着剤（無機または有機の粒子凝塊形成バインダー、顔料バインダー、壁紙接着剤、ラベル接着剤、木材、コルク、繊維材料用の接着剤）の調製のために用いることができる。
【００８０】
本発明によって得られる被覆剤、コーティング剤または接着剤用の塗膜形成組成物は、とりわけ、可塑剤、防腐剤、酸化防止剤、疎水性物質、防食剤、着色剤、芳香剤および有効成分などのような様々な添加剤を含んでいてもよい。
【００８１】
３〜５個の炭素原子を含むケトースの第３の使用方法によれば、架橋タンパク質を、プラスチックフィルム、革製品、紡織繊維、ゼラチン・カプセル、カプセル、またはタンパク質を含む食品組成物などのような生分解性または再生可能なタンパク質材料の調製に用い得ることを出願人は実証した。
【００８２】
そして、このタンパク質は、穀物、芋類、油を含む植物、高タンパク植物、牛乳、血液、および動物の組織から得られるタンパク質、好ましくはコラーゲン、カゼイン、ゼラチン、ゼインおよび高タンパク植物からの分離物からなる群より有利に選ぶことができる。
【００８３】
それらの組成物は、包装産業（タンパク質フィルム）、写真産業、製薬産業（カプセルおよびゼラチン・カプセル）、ゴム産業（タイヤの添加剤）、繊維工業（タンパク繊維）およびプラスチック技術（タンパク質の成形物または押出物）を対象とすることができる。
【００８４】
さらに、革をなめすために、クロムのような無機のなめし剤、またはホルモールのようなアルデヒド・なめし剤の代わりとして、最も特にＤＨＡを使用することを出願人は推奨する。それよりも反応性は低いが、他の４個および５個の炭素原子を含むケトースも使用することができる。
【００８５】
本発明によって３〜５個の炭素原子を含むケトースを使用してタンパク質を架橋するには、以下の一連の工程が実施される。それは、
１）ケトースの乾燥重量による濃度が、処理する粗タンパク質の乾燥重量に対して、０．５〜２０％、好ましくは０．５〜１０％、より好ましくは０．５〜５％で、タンパク質を、３〜５個の炭素原子を含むケトース少なくとも１つと接触させる工程と、
２）タンパク質とケトースとを数分間以上、好ましくは１０分間〜６０分間、好ましくは３０分間、２０〜１０５℃、好ましくは３５〜１０５℃の温度で接触させる工程と、
３）このようにして得られた架橋タンパク質を回収する工程と
を含む。
【００８６】
選択した３〜５個の炭素原子を含むケトースの種類、処理するタンパク質および目的とする適用分野が何であっても、この基本的な方法は有効である。
【００８７】
しかしながら、後で記述、例証されるように、所望の架橋度に関しては、選んだケトースの機能として時間／温度を変えることを出願人は推奨する。
【００８８】
動物の飼料用のタンパク質をＤＨＡで架橋する方法については、前記方法の第１の工程において、例えば、ＤＨＡの乾燥重量による濃度が、処理する粗タンパク質の乾燥重量に対して、０．５〜１０％、より好ましくは０．５〜５％でタンパク質とＤＨＡとを接触させることを出願人は推奨する。
【００８９】
このように接触させるタンパク質は、後で例証されるように、特に、大豆かす、菜種かす、亜麻のかす、エンドウ豆のタンパク質、可溶性のグルテン、天然の小麦グルテンおよび乳清からなる群より選ばれる。
【００９０】
そして、混合機または混練機中で接触させる温度は、３０分間、より特に４５〜１００℃までで選択される。
【００９１】
本発明によれば、この分野のためにこのようにして得られた、ＤＨＡでなめされたタンパク質は、以下の点から分析される：
−  Ｒ．ＶＥＲＩＴＥとＤ．ＤＥＭＡＲＱＵＩＬＬＹとによる、「Ｑｕａｌｉｔｅ  ｄｅｓ  ｍａｔｉｅｒｅｓ  ａｚｏｔｅｅｓ  ｄｅｓ  ａｌｉｍｅｎｔｓ  ｐｏｕｒ  ｒｕｍｉｎａｎｔｓ」（反芻動物の飼料中の窒素含有物の質）と題する論説、ＩＮＲＡ  １９７８，ｐ．１５４「Ｌａ  ｖａｃｈｅ  Ｌａｉｔｉｅｒｅ」（乳牛）という概説に記載された方法によって測定され、％／ｄｒｙで表される、可溶性の窒素／全窒素の量、これはＤＨＡと反応していないタンパク質の割合を反映している。
【００９２】
−  出願人によって開発された方法によって決定される全アミノ酸組成
全アミノ酸組成を決定するこの方法は、タンパク質の２４時間にわたる酸加水分解、およびイオン交換樹脂を用いた高圧液体クロマトグラフィーによる、放出されたアミノ酸の分析から成る。
【００９３】
タンパク質の加水分解については、まず初めに、６Ｎの塩酸１４ｍｌ中で窒素を２．８ｍｇ含んでいると思われる試料の重量が計られる。
【００９４】
次に、６Ｎの塩酸１４ｍｌが前記重量分の試料に加えられ、この混合物は５分間真空下に置かれる。
【００９５】
チューブを閉じた後、１１５℃で２４時間そのチューブを置いておく。
【００９６】
その後、溶出制御剤として働く１０ｍＭのノルロイシン（シグマ社によって販売されている）１ｍｌを加え、冷やされた溶液をガラスろ過器によってろ過する。
【００９７】
ろ液は２５０ｍｌの丸底フラスコに回収し、＋４℃で蒸発乾固する。残渣は、１００ｍｌの水で洗浄して蒸発乾固し、その後、５０ｍｌの水で洗浄を２回繰り返し、再度乾燥する。
【００９８】
最後に、乾燥させた残渣はリチウム  Ｌｉ  ２８０  緩衝剤（ＬＣテク社によって販売されている）５０ｍｌで回収される。
【００９９】
ＨＰＬＣによるクロマトグラフ分析は、陽イオン交換カラム（ピカリング社製の参照番号０３５３１５０のカラム）で行なわれる。
【０１００】
カラムは、標準アミノ酸溶液（参照番号ＡＡＳ１８でシグマ社によって販売されている）１００μｌおよびノルロイシン溶液２０μｌで検量線が作成される。
【０１０１】
その後、加水分解されたタンパク質溶液１００μｌが、ニンヒドリン溶液を使用し、０．３ｍｌ／ｍｉｎで前記カラムに注入され、アミノ酸が溶離される。
【０１０２】
アミノ酸は、波長５７０ｎｍのＵＶによって検出されて帰属され、得られたクロマトグラムで定量される。
【０１０３】
後で例証されるように、ＤＨＡで処理された、あるいは処理されていない大豆かすについて、全アミノ酸組成は、それらと、ホルモールで処理された大豆かすの全アミノ酸組成と比較して、決定される。
【０１０４】
この適用のためのタンパク質のなめし剤の代わりとして他の４個または５個の炭素原子を含むケトースの使用可能性については、後でまた例証されるように、それは、８０℃の温度における、リシンに対するキシルロースおよびリブロースの反応性の傾向によって説明される。
【０１０５】
薄膜の調製に用いるタンパク質をＤＨＡで架橋するためには、特に、カゼイン、ゼラチンまたは高タンパク植物の分離物を架橋するためには、本方法の第１の工程において、ＤＨＡの乾燥重量による濃度が、処理する粗タンパク質の乾燥重量に対して、１〜１０％、より好ましくは１〜５％で、タンパク質とＤＨＡとを接触させることを出願人は推奨する。
【０１０６】
この接触は室温で数分間行なわれ、このようにして得られる、なめされたタンパク質は、後で例証されるように、粘着性、不溶化効果および得られた薄膜の特性（特に機械抵抗）の点から分析される。
【０１０７】
ＤＨＡでなめされた革製品の調製についても、上述した一連の工程１〜３が適している。
【０１０８】
本発明の他の特徴および利点は、本発明を制限しない下記の実施例を読むと明らかになるであろう。
【実施例】
【０１０９】
実施例１
大豆かす（アニール社によって販売されたもの）、菜種かす（ムーラン  デルサーレによって生産されたもの）、エンドウ豆のタンパク質（商標ピサーネ  ＨＤでコスクラ社によって販売されたもの）、可溶性のグルテン（商標バイテン  ＣＷＳで出願人によって販売されているもの）、天然の小麦グルテン（商標バイテンで出願人によって販売されているもの）および乳清タンパク質（商標プロターマー  ８６５でアーマー  プロテインズ社によって販売されているもの）を使用して、ジヒドロキシアセトンでなめされたタンパク質の縮合体６つが製造される。
【０１１０】
ＤＨＡは純粋なもの（シグマ社によって販売されたもの）を使用することができ、また、直接、ジエステルのグリセリン副生物からＤＨＡを生産する微生物から得られる発酵上清の形で（「工業」ＤＨＡ）使用することもできる。
【０１１１】
純粋なＤＨＡを選んだ場合、ＤＨＡは、まず、最終的なＤＨＡ／タンパク質の比率が所望の値になるように、多量の水で希釈される。
【０１１２】
それは、一般的には、固形分１０〜２５％の溶液である。
【０１１３】
ＤＮＡ溶液は、モノマーの形で安定させるために、３０分間放置される。ｐＨは、０．１Ｎの水酸化ナトリウムで６に調整される。
【０１１４】
タンパク質は混練機中で１００℃で３０分間あらかじめ熱せられた後、ＤＨＡが加えられ、均質になるまで混合される。そして、真にタンパク質とＤＨＡとを接触させるのはさらに３０分間、９５〜１００℃の温度で行なわれる。
【０１１５】
１％、２．５％および５％の量のＤＨＡでなめした後に、乾燥重量／処理したタンパク質の乾燥重量に基づいて、６つのタンパク質縮合体の可溶性の窒素／全窒素の比率を決定することにより、表１中の結果から、ＤＨＡの不溶化特性を評価することができる。
【０１１６】
【表１】
0004785378.tif 000002
ＤＨＡの量が多くなると、可溶性の窒素／全窒素の比率が低くなるが、１％の量で既に顕著な効果が得られる。
【０１１７】
ホルモールで大豆かすをなめした比較試験は、１％の量のＤＨＡで処理することによって実現されたタンパク質の不溶化効果が、１％の量のホルモールで得られる効果と同等であることを示している。
【０１１８】
したがって、ＤＨＡは、それらの性質が何であれ、反芻動物の飼料用のタンパク質をなめすのに全く有効なホルモールの代わりになるものである。
【０１１９】
温度および接触時間の影響を検討するために、菜種かす、および大豆かすについて同様の試験を行なった。
【０１２０】
このように、接触させて最初の１０分間での顕著な結果で、室温でさえも、反応が容易に起こることが示されている。
【０１２１】
大豆が菜種よりも反応性が高いこともまた注目された。
【０１２２】
下記の表２に、天然タンパク質（例として挙げた菜種と大豆）について、そして、１％のＤＨＡで処理されたタンパク質について決定されたアミノ酸の結果を示す。
【０１２３】
【表２】
0004785378.tif 000003
大豆かすのタンパク質および菜種かすのタンパク質を１％のＤＨＡでなめすと、１０．８％（大豆の場合）および１２．７％（菜種の場合）のオーダーのリシンの含有量が減少し、９．９％（大豆の場合）および１６．９％（菜種の場合）のオーダーのアルギニンの含有量が減少することになり、同様に、ＤＨＡでこれらのタンパク質を縮合する反応が、ペプチド鎖を構成する２つのアミノ酸の遊離アミン基をより特にターゲットとすることを示している。
【０１２４】
それに比べると、大豆タンパク質をホルモールで縮合する反応は、大概は、ペプチド鎖のチロシン残留物を生じる。このように、ＤＨＡは、もちろんホルモールよりも毒性が少なく、ホルモールと同様に、ホルモールと同程度の反応性で反芻動物の飼料用のタンパク質と容易に結合するようである。
【０１２５】
実施例２
ＤＨＡで処理した、または処理しなかった実施例１の大豆かすは、α−アミラーゼ（ソルベー・アミラーゼ  −  ソルベー  エンザイムズ社によって販売されたＬＦ６０）と、セルラーゼ（ジェネンコール社によって販売されたスペザイム  ＣＰ）と、ペプシン（シグマ社によって販売されたペプシン  Ｐ−７０００）との併用で消化し、このようにして得られたタンパク質の耐性の程度を測定する。
【０１２６】
この生体外での試験は、第一胃のバイパスの後のなめし反応の有効性およびタンパク質の利用可能性を評価することを可能にする。このペプシンの消化は、また、胃の中のｐＨおよび酵素分解をシミュレーションすることを可能にする。
【０１２７】
この評価については、したがって、２つの消化系：
−  なめし反応の有効性（第一胃の酵素に強いタンパク質）を評価するための２つの酵素、すなわちα−アミラーゼおよびセルラーゼを用いる第１の系（ＡＣプロトコル）、
−  ３つの酵素、すなわちα−アミラーゼ、セルラーゼおよびペプシンを用いる第２の系（ＡＣＰプロトコル）（ペプシン消化は、第一胃を通過した後、ここ胃でのなめしたタンパク質の消化性を反映する）
が平行に実施される。
【０１２８】
なめされたタンパク質またはなめされていないタンパク質の酵素による消化は、以下のプロトコルによって実施される：
１）  乾燥した生成物を２．５ｇ計り分ける、
２）  ｐＨが４、０．０７５Ｎの塩酸を２５ｍｌ加える、
３）  混合物を室温で１時間、撹拌する（必要であれば、ｐＨを４に調整する）、
４）  α−アミラーゼ（６００００ＭＷＵ／ｍｌ．ｍｉｎ）２００μｌおよびセルラーゼ（９０ＧＣＵ／ｍｌ）２００μｌを加える、
５）  混合物を４０℃の水浴中で撹拌しながら３時間放置する、
６）  ｐＨが１．２、０．０７５Ｎの塩酸を２５ｍｌ加える、
７）  混合物を撹拌し、ｐＨを確認する（必要であれば、ｐＨを１．５に調整する）、
８）  この工程で、５ｇ／ｌの濃度のペプシン５００μｌを、調製した後、即座に加える（ＡＣＰプロトコルの場合）、
９）  その後、混合物は４０℃の水浴中に置き、２０時間連続的に撹拌する、
１０）  消化物は集められ、沈降により分離され、２回、１５ｍｌの上澄みが除去され、４０００ｒｐｍで遠心分離を２０分間行なう、
１１）上澄みは回収され、保管のために冷凍することができる。
【０１２９】
タンパク質の加水分解の程度は、トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）で処理したタンパク質の第１アミノ基を分析する方法によって測定される。
【０１３０】
この方法は以下のものから成る：
−  分析する試料２５０μｌに、５％のＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）２５０μｌを加えること、
−  混合物を５０℃で３０分間放置すること、
−  ｐＨ８．２の燐酸緩衝液を２ｍｌ加えること、
−  １％のＴＮＢＳを２ｍｌ加えること、
−  混合物を５０℃の水浴中に１時間置いておくこと、
−  ０．１Ｍの塩酸を４ｍｌ加えること、
−  混合物を室温で３０分間放置すること、
−  ２５０μｌを取り出し、分光光度計で３４０ｎｍで読み取ること。
【０１３１】
標準範囲は１０ｍＭのロイシン溶液で作成される。
【０１３２】
試料についての酵素による消化の結果は、ｍＭｏｌ／ｌまたは％（天然タンパク質に対するＴＮＢＳ反応における減少量）で表されるロイシン換算の濃度（ＬＥ）として表すことができる。
【０１３３】
下記の表３に、実施例１に記載された実施に従って、量を変えたＤＨＡ（１％および２．５％）で処理した大豆かすについて得られた消化性の値を示す。
【０１３４】
【表３】
0004785378.tif 000004
ＤＨＡの量が多くなると、大豆かすはα−アミラーゼおよびセルラーゼで消化されにくくなり（これは第一胃における良好な防御を反映している）、一方で同時にペプシンに対する良好な感応性を持っており、それは十分な（第一胃のバイパスの後の）生物学的利用可能性を反映していることは注目される。
【０１３５】
１％の量のＤＨＡでは、なめされたタンパク質はほとんど消化されていない（％の反応値は６２．２％から６２％になっている）。しかしながら、ペプシンの添加は、利用可能なタンパク質を８５％以上にする。
【０１３６】
しかしながら、ペプシンで処理した後でもタンパク質の５７．５％もが利用可能であるから、２．５％の量のＤＨＡが相当な保護効果を持っていることは注目されるべきである。
【０１３７】
したがって、１％の量のＤＨＡは、反芻動物の飼料用のタンパク質のなめしに選ばれるべきである。
【０１３８】
下記の表４に示されるように、菜種かすでも同等な結果が得られる。
【０１３９】
【表４】
0004785378.tif 000005
このように、ＤＨＡでなめす方法が、菜種かすより大豆かすに対してより有効であること（実施例１の結論のうちの１つを参照）が確認される。
【０１４０】
実施例３
本例では、ＤＨＡで処理した、または処理しなかった実施例１の大豆かすを、トリプシン（シグマ社によって販売された、牛の膵臓から得られるトリプシンＴ  ８００３）を添加した実施例２の酵素の組み合わせで消化する。
【０１４１】
トリプシンを用いるこの生体外の試験は、胃を通過した後の、ＤＨＡで処理した、または処理しなかった大豆かすに対する小腸の酵素の攻撃をシミュレーションすることを可能にする。
【０１４２】
この評価については、したがって、３つの消化系：
−  なめし反応の有効性（第一胃の酵素に強いタンパク質）を評価するための２つの酵素、すなわちα−アミラーゼおよびセルラーゼを用いる第１の系（ＡＣプロトコル）、
−  ３つの酵素、すなわちα−アミラーゼ、セルラーゼおよびペプシンを用いる第２の系（ＡＣＰプロトコル）
−  ４つの酵素、すなわちα−アミラーゼ、セルラーゼ、ペプシンおよびトリプシンを用いる第３の系（ＡＣＰＴプロトコル）
が平行に実施される。
【０１４３】
なめされたタンパク質またはなめされていないタンパク質の酵素による消化は、８番の工程までは実施例２のプロトコルに従って実施される。
【０１４４】
９番の工程およびその後の工程は次の通りである：
９）  混合物を４０℃の水浴中に置き、１８時間連続的に撹拌する、
１０）  ４Ｎの水酸化ナトリウムで、混合物のｐＨを７．５に調整する、
１１）  ５ｇ／１のトリプシン（タンパク質の１００００Ｕ／ｍｇの比活性）５００μｌを加える、
１２）  混合物を６時間撹拌する、
１３）  消化物は集められ、沈降により分離され、２回、１５ｍｌの上澄みが除去され、４０００ｒｐｍで遠心分離を２０分間行う、
１４）上澄みは回収され、保管のために冷凍することができる。
【０１４５】
タンパク質の加水分解の程度も、実施例２のトリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）で処理したタンパク質の第１アミノ基を分析する方法によって測定される。試料についての酵素による消化の結果は、ｍＭｏｌ／ｌで表されるロイシン換算の濃度（ＬＥ）として表すことができる。
【０１４６】
下記の表５に、実施例１に記載された実施に従って、量を変えたＤＨＡ（１％〜１０％）で処理した大豆かすについて得られた消化性の値を示す。
【０１４７】
【表５】
0004785378.tif 000006
下記の表６に示されるように、菜種かすでも同等な結果が得られる。
【０１４８】
【表６】
0004785378.tif 000007
菜種タンパク質と大豆タンパク質のアミン基の遊離化に、アミラーゼおよびセルラーゼによる消化（ＡＣプロトコル）は効果がほとんどないことが注目される。したがって、この消化は、ＤＨＡでなめしたタンパク質を元に戻すことはできない。したがって、これらのタンパク質は、第一胃中において影響を受けずにいるであろう（セルラーゼの活動は第一胃において重要である）。
【０１４９】
このタンパク質のペプシンおよびトリプシンによる消化は、さらなるアミン基を効果的に遊離させる。したがって、大豆タンパク質と菜種タンパク質とをＤＨＡでなめすことから成る反応は、胃および小腸の中での前記タンパク質の生物学的利用可能性が保証された可逆反応である。
【０１５０】
実施例２で注目されたように、大豆タンパク質は、菜種タンパク質よりも、より容易に使用する酵素の複合体によって消化されるようである。
【０１５１】
最後に、得られた結果から、５％以上のＤＨＡでなめしても、反応の効力はもはや大きくならないことが分かる。
【０１５２】
なめしと、ペプシンおよびトリプシンによる消化との両方の点からは、ＤＨＡの量は１％〜２．５％の間である。
【０１５３】
実施例４
カゼインに関してのＤＨＡの架橋効果は以下の方法で評価される：
ストック・カゼイン接着剤がまず調製され、その後、この接着剤を使用して、キャスティングにより薄膜を作製する。
【０１５４】
１）  カゼイン接着剤を調製する方法
ＳＶＰＣ社によって販売されたカゼイン  Ｈの固体１５％を含む水溶液を調製する。
【０１５５】
水酸化ナトリウムを２００ｇ／ｌ加えることによりｐＨを９に調整し、５０℃に加熱し、２０分間１０００ｒｐｍで撹拌して、完全に溶解させる。
【０１５６】
この溶液は室温まで冷却される。そして、ＤＨＡはｐＨが７．５または９に調整されている、固形分５０％を含む溶液状になっているか、なっていない（シグマ社によって販売されているような、純度９７％のＤＨＡ）。
【０１５７】
ＤＨＡ（５０％溶液を５％、すなわち未処理のカゼインに対して乾燥重量で２．５％）で処理した、または処理しなかったカゼイン接着剤について、ｐＨの作用として、ブルックフィールド粘度を測定した結果を下記の表に示す。
【０１５８】
表７には、ＤＨＡなしでの、ｐＨの作用として接着剤の粘度の変化を示す。
【０１５９】
表８には、２．５％のＤＨＡを用いた、ｐＨ７．５またはｐＨ９での接着剤の粘度の変化を示す。
【０１６０】
【表７】
0004785378.tif 000008
【０１６１】
【表８】
0004785378.tif 000009
固形分５０％のＤＨＡ５％（２．５％乾燥重量／カゼイン）の添加により、ｐＨ９で、接着剤の粘度が非常に明瞭であるが緩やかに増加する。
【０１６２】
ｐＨ７．５では、粘度の増加はより遅いが、顕著である。
【０１６３】
それに比べると、等量のホルモールを添加すると、接着剤はほとんど瞬間的に固化した。
【０１６４】
これらの実験は、室温で、時間とともに、ＤＨＡによってカゼインが徐々に架橋されていき、これはｐＨ７．５よりもｐＨ９でより急速に起こる結果を実証している。
【０１６５】
２）  キャスティングにより得られるカゼイン膜を作製する方法
カゼイン膜は、厚さ７００μｍにセットしたシーン１１０２装置を使用してキャストし（支持体上に塗布し）、その後、２０℃、残留湿度６５％で２４時間以上かけてゆっくりと乾燥させることにより作製される。
【０１６６】
得られた薄膜の特性を下記の表９に示す。
【０１６７】
【表９】
0004785378.tif 000010
ｐＨ７．５または９で、乾燥重量／カゼインが２．５％のＤＨＡを用いると、薄膜は１週間以上、殺生剤の存在下、水中においても変化せずにいるので、薄膜の耐水性は特に優れている。このように、ＤＨＡの添加は、優れた耐水性を与える一方で、薄膜の機械的特性を同時に向上させる。
【０１６８】
この点においては、接着剤の粘度が瞬間にあまりにも大きく増加するという事実により、ホルモールの添加ではそのような薄膜を製造することが不可能であることは言及されるべきである。
【０１６９】
実施例５
カゼインに対するＤＨＡの不溶化効果は、出願人によって開発された、可溶物質の含有量を測定する方法によって評価される。
【０１７０】
それは、４００ｍｌのビーカーに脱塩水２００ｍｌを投入し、分析する試料をちょうど５ｇをその中にマグネティックスターラーで撹拌しながら入れることである。
【０１７１】
混合物はマグネティックスターラーによって１５分間、均質化され、その後、５５００ｒｐｍで１５分間遠心分離される。上澄み液２５ｍｌが取り出され、テア結晶器へ導入される。
【０１７２】
試料が完全に脱水するまで、この結晶器は６００ワットで１０分間、９００ワットで５分間、高周波レンジ中に置かれる。その後、室温にまで冷やすために、それはデシケーター中に置かれる。結晶器は再度秤量され、残留物の質量ｍが記録される。
【０１７３】
生成物の重量パーセントで表される、可溶物質の含有量（Ｃｓｍ）は、次の式から得られる：
Ｃｓｍ＝（ｍ×２００×１００）／（２５×５）。
【０１７４】
下記の表１０に、実施例３に記載の条件に従い、固形分１５％のカゼインの溶液を使用して、室温でキャストすることにより作製されたカゼイン薄膜の溶解性の結果を示す。
【０１７５】
【表１０】
0004785378.tif 000011
カゼイン薄膜の水溶解性は、乾燥重量／カゼインで０．５％を越える量のＤＨＡを使用することによって減少する。実質的に水不溶性の薄膜を得るためには、２．５％の量が好ましい。
【０１７６】
実施例６
エンドウ豆のタンパク質の分離物（商標ピサーネ  ＨＤでコスクラ社によって販売されたもの）の水溶液で、マンニトール錠剤（商標パーライトール  ＤＣで出願人によって販売されている）をコーティングする実験を行なう。
【０１７７】
室温で５００ｍＰａ．ｓの範囲に粘度（ブルックフィールド粘度計で測定されるもの）を持っているタンパク質の水溶液３つが調製される：
−  第１の溶液は、５０℃で水１００ｇ当たり乾燥重量１２ｇのピサーネ  ＨＤを分散させて、最終的なｐＨを９．７に調整することによって調製される（溶液Ａ）、
−  第２の溶液は、５０℃で水１００ｇ当たり乾燥重量１２ｇのピサーネ  ＨＤおよび固形分５０％のＤＨＡの水溶液１．２ｇを分散させて、最終的なｐＨを９．７に調整することによって調製される（溶液Ｂ）、
−  第３の溶液は、５０℃で水１００ｇ当たり乾燥重量１２ｇのピサーネ  ＨＤ、固形分５０％のＤＨＡの水溶液１．２ｇおよびグリセリン２．４ｇを分散させて、最終的なｐＨを９．７に調整することによって調製される（溶液Ｃ）。
【０１７８】
これらの溶液は、それぞれ、スプレーすることによって、３０ｒｐｍの速度で回転していて、その中に温度６５℃の乾燥空気がパルスの形で絶えず導入される、エルウィカ塗料槽に置かれたマンニトール錠剤２００ｇをコーティングするのに使用される。
【０１７９】
溶液の流量は、コーティングが４５分で行われるようなものである。そして、乾燥した最終的なタンパク質の被膜は、錠剤の最初の質量のおよそ９％に相当する。
【０１８０】
タンパク質のコーティングによるマンニトールの減少率は、機械的に撹拌しながら脱塩水４５．５ｇ中に錠剤７．５ｇを入れ、時間とともに水中に現われる固体（ブリックスで表される）を測定することにより求められる。
【０１８１】
得られた結果を下記の表１１に示す。
【０１８２】
【表１１】
0004785378.tif 000012
錠剤が溶けることによるマンニトールの減少は、コーティングしていない錠剤と、ＤＨＡを用いていない、ピサーネ  ＨＤ  エンドウ豆タンパク質の溶液でコーティングされた錠剤とで似ていることが注目される。
【０１８３】
一方、ＤＨＡを含む溶液Ｂまたは溶液Ｃでコーティングされた錠剤は、特にコーティング剤がグリセリンと組み合わせてＤＨＡを含んでいる場合、明らかに、マンニトールの減少が少ない。
【０１８４】
これらの溶液Ｂおよび溶液Ｃは、徐放製剤、老化（ＵＶ、酸化、温度、加水分解など）を防ぐ調合物、または感覚刺激性の面（光沢、色など）が改善された組成物を得るために、食品、植物防疫剤（農薬、殺虫剤、除草剤、殺菌剤などに基づく）、獣医製品、医薬品、または他の工業製品（酵素、着色剤、殺生剤などに基づく）の被覆物の調製に適している。
【０１８５】
実施例７
リブロースおよびキシルロースの「なめし」能力は、グルタミン酸と比較して、反芻動物の飼料用のタンパク質の中で最も反応的なアミノ酸の１つ：リシンに対するこれらの２つのケトースの反応性を測定することにより評価される。
【０１８６】
なめし作用は、通常、リシンのε−アミノ基とアルデヒドとを結合させることにより得られる。その後、容易に検出できる黄色の色を生じさせるシッフ塩基が生成する。
【０１８７】
経時的な反応材料の着色は、以下の方法で測定される（ＩＣＵＭＳＡ着色測定）：
−  ｐＨ６の脱塩水に溶解したリブロース、キシルロース、リシンおよびグルタミン酸１Ｍの原液をそれぞれ１０ｍｌ調製する、
−  アミノ酸５ｍｌおよび試験するケトース５ｍｌを試験管に加える、
−  得られた混合物は均質化され、反応させるために８０℃のオイルバス中に置かれる、
−  反応は＋４℃で終える。
【０１８８】
下記の表１２に、リブロースおよびキシルロースのリシンおよびグルタミン酸との縮合反応速度を、着色を反映する波長４２０ｎｍの吸光度によって結果を表して示す。
【０１８９】
対照結果として、リシンとフルクトースとの縮合反応の比較実験と、リブロースおよびキシルロースの対照アミノ酸であるグルタミン酸との縮合反応の実験が平行に行なわれる。
【０１９０】
【表１２】
0004785378.tif 000013
リブロースおよびキシルロースはまた、タンパク質を保護するための優れたなめし剤であるように見える。
【０１９１】
さらに、最初の縮合物が反応開始１５分以内に現われるので、遊離アミノ酸との錯体形成速度がかなり速いことは注目されるべきである。
【０１９２】
また、フルクトースは質の劣るなめし剤であり、本発明がターゲットとする適用分野にまったく適さないように見える。
【０１９３】
５個の炭素原子を含むケトースは、したがって、十分なほど反応的であり、動物の飼料に、または塗膜形成組成物の調製、または他に生分解性または再生可能な材料の調製に用いられるタンパク質のなめしに有効であると考えられる。
【０１９４】
実施例８
小エビのえさを生産する実験は、従来のユリア−ホルモール（アメリカ合衆国、イリノイ州、ジョリエットのアグリサーチ社によって販売されたマキシボンド化合物）の代わりにキシルロースまたはＤＨＡを使用して、タンパク質をなめすことで行なわれる。
【０１９５】
下記の表１３に、このように調製された５つのえさの成分の含有量（重量／重量の％で表される）を示す（パーセンテージは成分の合計重量３ｋｇで計算されている）。
【０１９６】
【表１３】
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このように、えさＮｏ．２はマキシボンドでなめされ、えさＮｏ．３はキシルロースでなめされ、えさＮｏ．４はＤＨＡでなめされ、えさＮｏ．５はなめされていない対照用のえさであることは注目される。
【０１９７】
えさＮｏ．１は、全くグルテンを含まないマキシボンドでなめされた対照である。
【０１９８】
えさは、以下の手順によって調製される：
１）  粉末状の成分（すなわち、処方に従った、小麦粉、グルテン、魚粉、粉にした大豆かす、およびマキシボンド）を、３分間、ホーバート遊星形ミキサーで、速度１で混合する、
２）  大豆油とレシチンとを加える、
３）  混合物は、３分間、ホーバート遊星形ミキサーで、速度１で均質化する、
４）  混合物の温度が８０℃になるまで、混合物を９５℃のオーブン中に置く、
５）  キシルロースまたはＤＨＡを８０℃で水に溶解する、
６）  このようにして溶解したキシルロースまたはＤＨＡを所望の割合で加える、
７）  混合物は、５分間、ホーバートミキサーで、速度１で混合する、
８）  このようにして得られた混合物は、下記の表１４に記載された条件の下、ブーラー一軸スクリュー押出機で、低温状態でテクスチャード加工される、
９）  押出物は、その後、およそ１５時間、８０℃のオーブンで乾燥する。
【０１９９】
【表１４】
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このようにして製造された組成物、それから押出された材料の特性を下記の表１５に示す。
【０２００】
【表１５】
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予想されたように、なめされていないえさＮｏ．５は安定ではなく、海水中で急速に分解する。
【０２０１】
一方、キシルロースまたはＤＨＡでなめされたえさは、ユリア−ホルモールでなめされたえさと同程度の顕著な安定特性を示す。
【０２０２】
出願人は、さらに、えさＮｏ．１の耐水性とえさＮｏ．４の耐水性とが同等であることを観察した。
【０２０３】
そこから、特にこの水産養殖の適用に、ＤＨＡまたはキシルロースが有利にユリア−ホルモールのような、より有毒ななめし剤の代わりになることができることが推測できる。