(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
エゾウコギの茎の表面部を断面積比が５％、炭化度が１０％になるように焼いた後に、水、熱水、アルコールの何れか１つ、若しくはこれらを任意に組み合わせた溶媒で抽出して得られることを特徴とするエゾウコギ抽出物の製造方法。
【請求項２】
エゾウコギの茎の表面部を断面積比が５％、炭化度が１０％になるように焼いた後に、水、熱水、アルコールの何れか１つ、若しくはこれらを任意に組み合わせた溶媒で抽出して得られることを特徴とするエゾウコギ抽出物。
【請求項３】
エゾウコギの茎の表面部を断面積比が５％、炭化度が１０％になるように焼いた後に、水、熱水、アルコールの何れか１つ、若しくはこれらを任意に組み合わせた溶媒で抽出して得られる被抽出物を有効成分として含有することを特徴とするパーキンソン病の予防薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、パーキンソン病の予防効果があるエゾウコギを用いた薬剤、並びにその薬剤をエゾウコギから製造する方法等に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ウコギ科ウコギ属に分類される植物であるエゾウコギ（本発明のいうエゾウコギとは学名Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ ｈａｒｍｓが指す植物と同じである）の有効成分を抽出したエキスは、従来よりストレスに起因する胃粘膜損傷、免疫機能の低下、高血圧等を予防することで知られている。エゾウコギは、中国では、刺五加と呼ばれており、血圧調整、強壮、精神安定、リウマチ性関節痛等に用いられる。また、旧ソ連では、Ｓｉｂｅｒｉａｎ Ｇｉｎｓｅｎｇ（旧学名“Ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｃｏｃｕｓ ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ Ｍａｘｉｍ”）と呼ばれており、降圧作用、精腺や副腎皮質機能亢進作用、抗ストレス作用を有することが知られる。
エゾウコギの効果は、同じウコギ科で、より高価な朝鮮人参の効果と類似しているため、朝鮮人参に代わる安価な漢薬として用いられる。朝鮮人参の有効成分のほとんどは、すでに明らかにされているといわれる。一方、エゾウコギの有効成分や、その生化学的な作用機構はそれほど明らかにされておらず、さらなる解明が待望されている。
【０００３】
本発明者は、長らくエゾウコギの研究に携わっており、多くの研究開発を行ってきている。例えば、特開２００２−２８４６９５号公報、特開２００２−３３９１号公報には、本発明者の成果の一部が開示されている。
ところで、パーキンソン病とは、黒質でのドパミン産生細胞の異常な低下とニューロンの変性を特徴とする脳疾患である。脳の黒質でつくられたドパミンは、線条体に送られ、アセチルコリンと協働して筋肉に運動の指令を送る。パーキンソン病になると、ドパミンをつくる黒質の神経細胞が何らかの原因で障害され、線条体にドパミンを充分に送ることができなくなり、線条体が正常に機能しなくなって、無動、筋硬直、振戦等の運動機能障害が生じる。パーキンソン病の原因は十分に解明されてはいないものの、農薬のロテノン（Ｒｏｔｅｎｏｎｅ）が実験動物にパーキンソン病を発症させることが判明している。
【０００４】
パーキンソン病の治療薬としては、減少したドパミンを補う目的でレボドパＬｅｖｏｄｏｐａ（Ｌ−ＤＯＰＡ）の投与が広く応用されている。この他にパーキンソン病の治療薬としては、ドパミン受容体を直接刺激する薬剤（非麦角アルカロイド、麦角アルカロイドなど）、アセチルコリンの働きを押さえてドパミンとのバランスを調整する薬剤（抗コリン薬など）、ドパミン神経終末からドパミン遊離を促進させるドパミン遊離促進薬、さらには脳内で不足したノルアドレナリンを補充するノルアドレナリンのプロドラッグ等が用いられている。
【０００５】
これらの薬を用いることによってパーキンソン病の症状は改善されるが、それぞれ副作用を伴う。例えば、Ｌ−ＤＯＰＡ製剤では、胃部不快感、嘔気、嘔吐などの消化器症状や、起立性低血圧、不整脈等の循環器症状や、幻覚、妄想等の精神症状が現れる場合がある。また、ドパミン受容体刺激薬においては、投与初期に胃部不快感、嘔気、嘔吐等の消化器症状、眠気、幻覚、妄想等の精神症状、ふらつき、起立性低血圧等の循環器症状が現れることがある。抗コリン剤では、こうかつ、便秘、排尿障害等の消化器症状、幻覚、妄想等の精神症状が現れる場合がある。更に、抗コリン剤の長期投与は、かえって痴呆症状を促進させる懸念があるとされている。また、ドパミン遊離促進剤では、興奮、幻覚、せん妄等の精神症状が出現することがある。ノルアドレナリンのプロドラッグでは、幻覚、妄想等の精神症状や血圧上昇が現れる場合がある。このようにパーキンソン病の治療薬としては、充分に満足できるものが提供されていない現状がある。
また、パーキンソン病の予防剤については、候補物質として期待される薬剤はあったが、顕著な効果を有し、副作用が無く、製造が容易なものは知られていない。
前述のように、本発明者が提供したエゾウコギの抽出物を主成分とし、明確な効能としてパーキンソン病予防が含まれる薬剤があるものの（特開２００２−２８４６９５号公報）、未だに改良の余地が残されていた。
【０００６】
一方で、うつ病の予防薬、治療薬は数多く知られており、さらに副作用の軽減された医薬組成物も知られている。例えば、治療効果、即効性などが高い上、副作用が少ないものとして選択的セロトニン再吸収阻害剤がある。選択的セロトニン再吸収阻害剤にはフルオキセチン、サートラリン、パロキセチン、フルボキサミン、シタロプラム等がある。また、セントジョンズウォートと称されるハーブは、軽度から中等度のうつ症状に有効な天然の抗うつ剤として使用されているが、このハーブは肝臓で多くの薬剤の代謝を阻害し、薬剤の作用増強を引き起こす重大な副作用が知られている。また、このハーブの飲用は人の光感受性を高めるため、太陽光線によって皮膚に湿疹や痒みが生じる場合があることが報告されている。
【０００７】
本発明者は、エゾウコギの抽出物を主成分とするうつ病の予防及び治療薬を提供しているものの（特開２００２−２８４６９５号公報）、未だに改良の余地が残されていた。また、エゾウコギには、全体が炭状となるまで蒸焼させた後に、抽出物を製造する方法があるが（特開平５−１８６３６０号）、この修治エゾウコギ（ＭＡＳＨ）には、後述のように通常状態においても脳内神経細胞からドパミンを過剰に放出させ、細胞内のドパミンの枯渇を引き起こしてしまうという副作用が認められることから、改良の余地がある。
【特許文献１】特開２００２−２８４６９５号公報
【特許文献２】特開２００２−３３９１号公報
【特許文献３】特開平５−１８６３６０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上記のように、従来しられていたエゾウコギ抽出物についても、更なる改良の余地が残されていた。本発明は、上記した事情に鑑みてなされたものであり、その目的は、パーキンソン病の予防に対して高い効果を有するエゾウコギを用いた薬剤を提供すること、及びその薬剤をエゾウコギから製造する方法等を提供することにある。
【課題を解決するための手段、発明の作用、及び発明の効果】
【０００９】
本発明者は、鋭意努力して検討した結果、エゾウコギの抽出物を得るために新規な製造方法を見出すに至った。更に、この製造方法が、他の木質系生薬の有用物質の抽出方法にも応用可能であることに思い至り、基本的には本発明を完成するに至った。
従来、木質系生薬材料から有用物質を抽出するには、材料をそのまま或いは適当に乾燥させた後に、溶媒で抽出するという方法が取られている。また、材料全体を蒸焼した後に、溶媒で抽出するという方法もしられている。
しかしながら、本発明者の研究によれば、これら木質系生薬材料の表面のみを焼いた後に、溶媒で抽出することにより、従来には得られなかった新規な効果を備えた有用物質が抽出されることが見出されるに至ったのである。
こうして、第１の発明に係る抽出物の製造方法は、エゾウコギの表面部を断面積比が５％、炭化度が１０％になるように焼いた後に、水、熱水、アルコールの何れか１つ、若しくはこれらを任意に組み合わせた溶媒で被抽出物を抽出することを特徴とする。
【００１０】
「木質系生薬材料」とは、従来から漢方等で用いられている材料（例えば、皮類生薬の基原植物：キハダ(Phellodendron amurense Rupr., P. Chinese Schneid)、Cinnamomum cassia Blume、セイロンケイヒ(Cinnamomum. zeylanicum Nees)叉は他の近縁植物、ホウノキ（ホオノキ）(Magnolia obovata Thunb叉は他の近縁植物、ヤマザクラ(Prunus jamasakura Sieb.)叉は他の近縁植物、ウコギ(Acanthopanax sieboldianus Makino)叉は他の近縁植物、ヌルデ(Rhus javanica L.)、ヌルデシロアラブムシ(Schlechtendalia chinesis Bell)、ザクロ(Punica granatum L.)、タラノキ(Aralia elata Seem.)、クヌギ(Quercus acutissima Carruth.)叉は他の近縁植物、ヤマモモ(Myrica rubra. Sied. Et Zucc.)等。茎及び枝類生薬の基原植物：ニガキ(Picrasma quassioides Benn.)、アケビ(Akebia quinata Decne、トチュウ(Eucommia ulmoides D. Oliver)、ミツバアケビ(A.trifoliate Koidz、オオツズラフジ(Sinomenium acutum Rehd. Ey Wils)、アオツズラフジ(Cocculus trilobus DC.)、エゾウコギ(Acanthopanax senticosus Harms)、ウラルカンゾウ(Glycyrrhiza uralensis Fisch)、スペインカンゾウ(G.glabra L. )、チャ(Thea sinensis)叉は他の近縁植物等。）であり、枝・幹・根からの抽出物を取り出して用いることが可能なものを意味している。
「表面部」とは、具体的には、断面上の表面から内部に向かって約５％〜約８０％の断面積を意味している。
「焼いた」とは、材料の表面部分を火にかけることを意味している。
「炭化度」とは、焼いた後の木質系生薬材料において、炭化した表面部を剥ぎ取った際に、「炭化した表面部の重量／木質系生薬材料の重量ｘ１００」（％）を意味している。炭化度は、好ましくは約５％〜約６０％、更に好ましくは約１０％〜約４０％である。
「溶媒」とは、例えば、水または熱水、アルコール等の有機溶媒、或いはアルコール等の有機溶媒と水との適当な混合比の混合溶媒を意味している。熱水の場合には、約５０℃以上に熱せられた水を用いることができる。抽出時間については、木質系生薬材料の種類・溶媒量等に応じて、適宜に設定することができる。一般的には、抽出時間としては、数時間以上〜約１昼夜以上が好ましく、約２昼夜がさらに好ましい。
【００１１】
第１の発明によれば、従来に用いられていたエゾウコギから、新規或いは顕著な効果を備えた抽出物が得られる。エゾウコギ（特に、地上茎、及び枝が好ましい）表面部の約５％程度を炭化度が約１０％以上となるまで焼いた後に、熱水抽出をした場合には、単に従来の効果を量的に加えたものに留まらず、質的に異なる効果を備えた抽出物が得られる（実施例を参照）。なお、本発明の方法によって、従来法とは質的に異なる抽出物が得られる理由については必ずしも明確ではなく、その機序については今後の検討が待たれるところである。なお、木質系生薬材料としては、地上茎を選択することが好ましい。この場合には、材料の根部分を地中に残しているので、その後に根部分から地上茎部分が生えてくる。このため、資源の枯渇が懸念される生薬材料（例えば、日本国のエゾウコギ）の場合には、資源の有効利用という点で有効な方法となる。
【００１２】
第１の発明に係るエゾウコギ抽出物の製造方法は、エゾウコギの表面部を断面積比が５％、炭化度が１０％になるように焼いた後に水、熱水、アルコールの何れか１つ、若しくはこれらを任意に組み合わせた溶媒で前記エゾウコギから抽出物を抽出する工程を含むことを特徴とする。
第２の発明に係るエゾウコギ抽出物は、エゾウコギの表面部を断面積比が５％、炭化度が１０％になるように焼いた後に水、熱水、アルコールの何れか１つ、若しくはこれらを任意に組み合わせた溶媒で抽出された抽出物であることを特徴とする。
第３の発明に係るパーキンソン病の予防薬は、エゾウコギの表面部を断面積比が５％、炭化度が１０％になるように焼いた後に抽出された抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
第１の発明及び第２の発明において、エゾウコギの表面部は、少なくとも断面積の約５％〜約８０％を焼いた後に抽出することが好ましい。本発明者の知見に基づけば、エゾウコギ（特に、地上茎）においては、その表面部分に有効成分が集中しているように考えられた。このため、この部分を焼くことによって、高い効率で有効成分を抽出すると共に、新たな抽出物を得ることが可能となるからである。また、エゾウコギの地上茎の表面部を焼いて抽出物を抽出する場合には、その抽出工程において、エゾウコギ由来の他部位の材料（例えば、葉、枝など）は、そのまま或いは地上茎と同様に表面部を焼いて抽出物を抽出することが好ましい。
【００１３】
このように本発明によれば、予め木質系生薬材料の表面部を焼いた後に、適当な溶媒で抽出することにより、新規かつ有効な抽出物を得ることができる。この発明は、実施例に示したエゾウコギのみならず、他の木質系生薬材料にも有効に適用することができるものと考えられた。
なお、本発明の抽出物は、経口投与物として用いることができる。また、これらの抽出物は、常法により液剤、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、軟カプセル剤、ドライシロップ剤などの剤型にすることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
次に、本発明の実施形態について、図面を参照しつつ詳細に説明するが、本発明の技術的範囲は、下記の実施形態によって限定されるものではなく、その要旨を変更することなく、様々に改変して実施することができる。また、本発明の技術的範囲は、均等の範囲にまで及ぶものである。
【実施例】
【００１５】
＜実施例１＞エゾウコギ抽出物の製造方法
本発明をエゾウコギに応用した実施例について説明する。
エゾウコギ（７年以内）の地上茎、枝、及び葉を木質系生薬材料として用いた。この材料のうち、直径が約１ｃｍ〜約７ｃｍの地上茎の表面部分を焼いた。焼く面積としては、地上茎の断面積の少なくとも約５％程度とした。また、その炭化度は約１０％であった。こうして焼かれた地上茎、枝、及び葉を、約５倍量の約６０℃に熱した水（熱水）中に入れて、有効成分を抽出した。抽出時間は約２昼夜とした。抽出後の溶液を遠心分離して、抽出液１と残渣１とに分離した。
残渣１については、更に３倍量の約１００℃に熱した水（熱水）中に入れて、有効成分を約１昼夜抽出した。抽出後の溶液を遠心分離して、抽出液２と残渣２とに分離した。
上記抽出液１と抽出液２とを１：３の液量で混合した後、液量が半分になるまで濃縮したものを「ＭＡＳＨ０３１２」と命名し、以下の薬効評価試験に供した。
なお、抽出液１と抽出液２とは、エキス含量を増加させるために混合したものであり、いずれか一方を単独で用いても、以下の効果は同等か、そのエキス含量に依存する。また、抽出液１と抽出液２とを混合する場合には、その量比は特に限定されないが、１：１００〜１００：１の間の任意の比率で混合することができる。
【００１６】
＜実施例２＞ＭＡＳＨ０３１２を経口投与したラットにロテノンによるパーキンソン病疾患誘導を行なった場合の運動機能障害に及ぼす効果確認試験
試験方法：農薬であるロテノン（Ｒｏｔｅｎｏｎｅ）を投与することにより、ラットにパーキンソン病の病態を発生させられることが知られている。本試験では、このロテノンをモデル動物作製用に用いた。また、薬物投与群として、ＭＡＳＨ（エゾウコギを炭化するまで蒸焼した後に、抽出物を製造したもの。特開平５−１８６３６０号公報に開示の技術に基づいて製造されたものを用いた。）、またはＭＡＳＨ０３１２（実施例１）を用いた。
【００１７】
ラットＡ１群：予備飼育し、ゾンデを用いて、ＭＡＳＨ（０.５％）を一日一回、８週間に渡って経口投与した。
ラットＡ２群：予備飼育し、ゾンデを用いて、ＭＡＳＨ（０.５％）を一日一回、８週間に渡って経口投与した。また、ＭＡＳＨの投与開始から４週間して、ロテノン（２.５ｍｇ／ｋｇ）を一日一回、４週間に渡って腹腔内注射した。
ラットＢ１群：予備飼育し、ゾンデを用いて、ＭＡＳＨ０３１２（０.５％）を一日一回、８週間に渡って経口投与した。
ラットＢ２群：予備飼育し、ゾンデを用いて、ＭＡＳＨ０３１２（０.５％）を一日一回、８週間に渡って経口投与した。また、ＭＡＳＨ０３１２の投与開始から４週間して、ロテノン（２.５ｍｇ／ｋｇ）を一日一回、４週間に渡って腹腔内注射した。
ラットＣ１群（陰性コントロール）：予備飼育し、通常に８週間に渡って飼育した。
ラットＣ２群（陽性コントロール）：予備飼育し、４週間して、ロテノン（２.５ｍｇ／ｋｇ）を一日一回、４週間に渡って腹腔内注射した。
【００１８】
上記６群（１群当り４例）の各被験群について、試験開始時点（０）、試験開始後１、４、５、６、７及び８週目にポール試験を行なって運動機能を調べた。
ポール試験は、（１）被験ラットを上端部にグリップの付いた１００ｃｍのポールに上向きに掴ませ、その時点を試験開始時点とし、（２）試験開始時点からラットが下向きに方向転換するまでの時間（Ｔｉｍｅ ｔｏ ｔｕｒｎ ｄｏｗｎｗａｒｄ）、及び（３）ラットが下向きに方向を転換してからポールを降りて地面に達するまでの時間(Ｔｉｍｅｔｏ ｒｅａｃｈ ｔｈｅ ｆｌｏｏｒ)を計測した。
【００１９】
試験結果：図１は、ラットが試験開始時点から下向きに方向転換するまでの時間を計測した結果を示したグラフである。グラフの縦軸はラットが方向転換に要した秒数（Ｔｉｍｅ ｔｏ ｔｕｒｎ ｄｏｗｎｗａｒｄ）を、横軸は飼育日数であって各被験群に投与を開始してから経過した日数（週：ｗｅｅｋ）をそれぞれ示している。
図１において、ラットＣ１群（Ｈ２Ｏ）では、試験開始０週目〜８週目までに渡って、方向転換までに要した秒数は、ほぼ同等または学習効果による減少傾向を示した。また、ラットＣ２群（Ｈ２Ｏ＋Ｒｏｔｅｎｏｎｅ（２.５ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ））では、試験開始４週目（ロテノンの投与開始週）から秒数が増加し、８週目まで増加し続けた。８週目では、試験開始時（約８秒）の約４倍（約３２秒）まで増加し、パーキンソン病の病態を発症していることが確認された。
【００２０】
その他の４群（Ａ１群、Ａ２群、Ｂ１群、Ｂ２群）については、ロテノンの投与を開始した４週目〜８週目のいずれの期間においても、試験開始０週目との間に大きな差違は認められなかった。このことより、ＭＡＳＨ及びＭＡＳＨ０３１２のいずれにも、ロテノンが誘導するパーキンソン病を予防する効果があることが示された。
図２は、ラットが試験開始時点からポールを降りて地面に達するまでの時間を計測した結果を示したグラフである。グラフの縦軸はラットが地面に達するまでの秒数（Ｔｉｍｅ ｔｏ ｒｅａｃｈ ｔｈｅ ｆｌｏｏｒ）を、横軸は飼育日数であって各被験群に投与を開始してから経過した日数（週：ｗｅｅｋ）をそれぞれ示している。図２において、ラットＣ１群（Ｈ２Ｏ）では、試験開始０週目〜８週目までに渡って、やや増減は認められるものの、全体として、ほぼ同等の秒数を示した。また、ラットＣ２群（Ｈ２Ｏ＋Ｒｏｔｅｎｏｎｅ（２.５ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ））では、試験開始４週目（ロテノンの投与開始週）から徐々に秒数が増加し、６週目〜８週目まで顕著に増加した。８週目では、試験開始時（約１２秒）の約３倍（約３５秒）まで増加し、パーキンソン病の病態を発症していることが確認された。
【００２１】
その他の４群（Ａ１群、Ａ２群、Ｂ１群、Ｂ２群）については、ロテノンの投与を開始した４週目〜８週目のいずれの期間においても、試験開始０週目との間に大きな差違は認められなかった。このことより、ＭＡＳＨ及びＭＡＳＨ０３１２のいずれにも、ロテノンが誘導するパーキンソン病を予防する効果があることが示された。
なお、投与開始時（グラフの横軸が０）におけるポールを降りて地面に達するまでの秒数の各被験群間の差は統計学上有意な差ではない。このことから、予備飼育の段階で、個々のラットの運動能力差にかかる各被験群間の運動能力差が生じないように予め調整した後試験がなされていることが示される。
【００２２】
＜実施例３＞ＭＡＳＨ０３１２を経口投与したラットにロテノンによるパーキンソン病疾患誘導を行なった場合のカタレプシーに及ぼす効果確認試験
試験方法：薬物として、ＭＡＳＨ０３１２（実施例１）、及びＭＡＳＨを用いた。
実施例２と同様にして飼育された６群のラット（Ａ１群，Ａ２群，Ｂ１群，Ｂ２群，Ｃ１群，Ｃ２群；各群について、Ｎ＝４）を用意した後、各群について、試験開始時点（０）、試験開始後１、４、５、６、７及び８週目にカタレプシー（Ｃａｔａｌｅｐｓｙ）試験を行なった。
カタレプシー試験は、不動化状態の試験であって、まず被験ラットの両後足が地面に着いた状態で両前足を箱の上に載せた時点を試験開始時点とし、ラットがその体姿勢をとり続ける不動状態時間（秒数）を計測した。
【００２３】
試験結果：図３は、カタレプシー試験の測定結果を示したグラフである。グラフの縦軸はラットの不動状態時間（Ｃａｔａｌｅｐｓｙ）を、横軸は飼育日数であって各被験群に投与を開始してから経過した日数（週：ｗｅｅｋ）をそれぞれ示している。
図３において、ラットＣ１群（Ｈ２Ｏ）では、試験開始０週目〜８週目までに渡って、不動状態時間は、ほとんど０秒に近いままであり、増加または減少は見られなかった（すなわち、被験ラットは、試験開始後、速やかに前足を箱から離して、通常の四足歩行の姿勢に戻った）。また、ラットＣ２群（Ｈ２Ｏ＋Ｒｏｔｅｎｏｎｅ（２.５ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ））では、試験開始６週目（ロテノンの投与開始から２週目）から秒数が増加し、８週目まで顕著に増加した。８週目では、試験開始時の約０秒から約１２０秒）まで増加し、うつ状態を示すことが確認された。
【００２４】
その他の４群（Ａ１群、Ａ２群、Ｂ１群、Ｂ２群）については、ロテノンの投与を開始した４週目〜８週目のいずれの期間においても、試験開始０週目との間に差違は認められなかった。このことより、ＭＡＳＨ及びＭＡＳＨ０３１２のいずれにも、ロテノンが誘導するうつ状態を予防する効果があることが示された。また、黒質線条体系とうつ行動との関係が示唆された。
【００２５】
＜実施例４＞脳内各部位のドパミン（ＤＡ）濃度に及ぼす効果確認試験
試験方法：ＭＡＳＨ０３１２（実施例１）、ＭＡＳＨ、及びＡＳＨ（エゾウコギを１００％エタノール、５０％エタノール、蒸留水で順次抽出したエキスを混合した混合エキスであり、商品名リンパザイムとして市販されているもの）を用いた。
【００２６】
ラットＡＳＨ群：予備飼育し、ゾンデを用いて、ＡＳＨ（０.５％）を一日一回、４週間に渡って経口投与した。
ラットＭＡＳＨ群：予備飼育し、ゾンデを用いて、ＭＡＳＨ（０.５％）を一日一回、４週間に渡って経口投与した。
ラットＭＡＳＨ０３１２群：予備飼育し、ゾンデを用いて、ＭＡＳＨ０３１２（０.５％）を一日一回、４週間に渡って経口投与した。
コントロール群（Ｈ２Ｏ）：予備飼育し、通常に４週間に渡って飼育した。
上記４群の各被験群について、試験開始から４週間目にラットを解剖し、脳内各部位（大脳皮質、視床下部、線条体、海馬、及び黒質）におけるＤＡ濃度を測定した。下表１には、コントロール群（Ｈ２Ｏ）との濃度を比較したものを示した。
【００２７】
【表１】
0004774481.tif 000002
この表より、エゾウコギからの抽出物（ＡＳＨ、ＭＡＳＨ、及びＭＡＳＨ０３１２）は、いずれもコントロール群に比べると、脳内ＤＡ濃度を上昇させる効果があることが示された。また、その効果は、ＡＳＨ ＜ ＭＡＳＨ０３１２ ＜ ＭＡＳＨの順に強いことが示された。
【００２８】
＜実施例５＞ＭＡＳＨ０３１２を経口投与したラットにロテノンによるパーキンソン病疾患誘導を行なった場合の黒質（substantia nigra）内のDA陽性細胞数に及ぼす効果確認試験
試験方法：実施例２及び３に示したロテノンによるパーキンソン病ラットモデルを用いた。また、薬物として、ＡＳＨ、ＭＡＳＨ、及びＭＡＳＨ０３１２を用いた。
コントロール群（Ｎｏｒｍａｌ）：ラットを予備飼育し、通常に８週間に渡って飼育した。
ＡＳＨ群：ラットを予備飼育し、ゾンデを用いて、ＡＳＨ（０.５％）を一日一回、８週間に渡って経口投与した。
ＭＡＳＨ群：ラットを予備飼育し、ゾンデを用いて、ＭＡＳＨ（０.５％）を一日一回、８週間に渡って経口投与した。
【００２９】
ＭＡＳＨ０３１２群：ラットを予備飼育し、ゾンデを用いて、ＭＡＳＨ０３１２（０.５％）を一日一回、８週間に渡って経口投与した。
ロテノン群（Ｈ２Ｏ＋Ｒｏｔｅｎｏｎｅ）：ラットを予備飼育し、４週間して、ロテノン（２.５ｍｇ／ｋｇ）を一日一回、４週間に渡って腹腔内注射した。
ＡＳＨ−ロテノン群（ＡＳＨ＋Ｒｏｔｅｎｏｎｅ）：ラットを予備飼育し、ゾンデを用いて、ＡＳＨ（０.５％）を一日一回、８週間に渡って経口投与した。また、ＡＳＨの投与開始から４週間して、ロテノン（２.５ｍｇ／ｋｇ）を一日一回、４週間に渡って腹腔内注射した。
ＭＡＳＨ−ロテノン群（ＭＡＳＨ＋Ｒｏｔｅｎｏｎｅ）：ラットを予備飼育し、ゾンデを用いて、ＭＡＳＨ（０.５％）を一日一回、８週間に渡って経口投与した。また、ＭＡＳＨの投与開始から４週間して、ロテノン（２.５ｍｇ／ｋｇ）を一日一回、４週間に渡って腹腔内注射した。
ＭＡＳＨ０３１２−ロテノン群（ＭＡＳＨ０３１２＋Ｒｏｔｅｎｏｎｅ）：ラットを予備飼育し、ゾンデを用いて、ＭＡＳＨ０３１２（０.５％）を一日一回、８週間に渡って経口投与した。また、ＭＡＳＨ０３１２の投与開始から４週間して、ロテノン（２.５ｍｇ／ｋｇ）を一日一回、４週間に渡って腹腔内注射した。
上記８群（１群当り５例）の各被験群について、試験開始から８週後にラットを解剖し、黒質内のDA陽性細胞数の増減を調べた。
【００３０】
試験結果：図４は、コントロール群（Ｎｏｒｍａｌ）の黒質内DA陽性細胞数を１００％としたときの各群におけるDA陽性細胞数の増減状態を計測した結果を示したグラフである。ロテノン群（Ｈ２Ｏ＋Ｒｏｔｅｎｏｎｅ）では、コントロール群に比べて、有意に（＊＊）DA陽性細胞数が減少していることから、パーキンソン病の病態を発症していることが確認された。
また、図の右半部に示すようにエゾウコギ抽出物を投与した三つのエゾウコギ抽出物＋ロテノン群（ＡＳＨ＋Ｒｏｔｅｎｏｎｅ、ＭＡＳＨ＋Ｒｏｔｅｎｏｎｅ、ＭＡＳＨ０３１２＋Ｒｏｔｅｎｏｎｅ）では、いずれもロテノン群に比べて、有意に（＃＃＃）DA陽性細胞数が上昇していた。このことから、エゾウコギ抽出物は、ロテノン誘導パーキンソン病を予防する効果があることが示された。また、ＡＳＨ＋Ｒｏｔｅｎｏｎｅ投与群では、コントロール群との間に有意さ（＊）が認められ、充分にDA陽性細胞数が上昇していないのに対し、ＭＡＳＨ及びＭＡＳＨ０３１２を投与した群では、コントロール群との間には有意さが認められなかった。これより、ＭＡＳＨ及びＭＡＳＨ０３１２は、ＡＳＨに比べると、パーキンソン病を予防する効果が高いことが示された。なお、ＭＡＳＨとＭＡＳＨ０３１２との効果は、共に同等であることが示された。
【００３１】
また、図の左半部には、ロテノンを投与しない場合の黒質内DA陽性細胞数の増減を示した。これによれば、ＡＳＨ群及びＭＡＳＨ０３１２群では、コントロール群との間に有意なDA陽性細胞数の減少は認められないものの、ＭＡＳＨ群にいては、有意に（＊＊）細胞数の減少が認められた。このことから、ＭＡＳＨを継続的に投与することにより、通常状態においては、脳内DA陽性細胞が減少させる副作用が懸念されることが示された。一方、ＭＡＳＨ０３１２については、通常状態においてはそのような副作用は小さいことが分かった（なお、ＡＳＨについては、そのような副作用は更に小さい）。
以上の結果を総合的に判断すると、ＭＡＳＨ０３１２は、パーキンソン病を予防する効果においてはＭＡＳＨと同等であり、かつ副作用が小さいことから、ＡＳＨ及びＭＡＳＨよりも効果の高い抽出物であることが示された。
【００３２】
＜実施例６＞ＭＡＳＨ０３１２の胃潰瘍に対する抑制効果確認試験
試験方法：薬物として、ＡＳＨ、ＭＡＳＨ、及びＭＡＳＨ０３１２を用いた。
コントロール群（Ｈ２Ｏ）：ラットを予備飼育し、そのまま継続して飼育した。
ＡＳＨ群：ラットを予備飼育し、ゾンデを用いて、ＡＳＨ（０.５％）を一日一回、２週間に渡って経口投与した。
ＭＡＳＨ群：ラットを予備飼育し、ゾンデを用いて、ＭＡＳＨ（０.５％）を一日一回、２週間に渡って経口投与した。
ＭＡＳＨ０３１２群：ラットを予備飼育し、ゾンデを用いて、ＭＡＳＨ０３１２（０.５％）を一日一回、２週間に渡って経口投与した。
薬物投与開始後、速やかにラットの首から下部位を７時間、水に浸漬した後に、ラットを解剖し、胃潰瘍の大きさを確認した。なお、いずれの群においても、一群５例とした。
【００３３】
試験結果：図５は、胃潰瘍の大きさ（ｍｍ）を測定した結果を示したグラフである。コントロール（Ｈ２Ｏ）群では、平均して約５８ｍｍの大きさの胃潰瘍が確認された。これに対し、ＡＳＨ群では、胃潰瘍の大きさは約２３ｍｍであり、コントロール群に比べて有意な（＊＊＊）胃潰瘍形成抑制効果が認められた（抑制率６０.２％）。また、ＭＡＳＨ０３１２群では、胃潰瘍の大きさは約３８ｍｍであり、コントロール群に比べて有意な（＊＊）胃潰瘍形成抑制効果が認められた（抑制率３９.１％）。一方、ＭＡＳＨ群では、胃潰瘍の大きさは約５６ｍｍであり、コントロール群との間に有意さは認められなかった（抑制率５.８％））。なお、ＡＳＨ群とＭＡＳＨ０３１２群との間には、統計的に有意な（＃）差違が認められた。
これらのことより、エゾウコギ抽出物のうち、ＡＳＨ及びＭＡＳＨ０３１２には、有意に胃潰瘍抑制効果が認められ、その効果はＡＳＨの方が強いことがわかった。また、ＭＡＳＨには、そのような効果は認められないことがわかった。
【００３４】
＜まとめ＞
以上のように、本実施形態によれば、木質系生薬材料であるエゾウコギの表面を焼いた後に抽出物を抽出した物質（ＭＡＳＨ０３１２）には、それ以外の方法により得られた抽出物（例えば、そのまま抽出した物質（ＡＳＨ）、或いは全体を焼いた（内部まで炭化させた）後に抽出した物質（ＭＡＳＨ））に比べると、量的のみならず、質的にも異なる物質を得られることが判明した。
また、本実施形態の新規なエゾウコギ抽出物であるＭＡＳＨ０３１２は、パーキンソン病の発症を有効に予防できることが明らかになった。このとき、ＭＡＳＨ０３１２は、パーキンソン病に対する予防効果が他の抽出物（ＡＳＨ）よりも高く、かつ通常状態における副作用は他の抽出物（ＭＡＳＨ）よりも小さいことから、より有効で、そして安全性を高めたエゾウコギ抽出物であることが示された。
【００３５】
本実施形態のＭＡＳＨ０１３２によれば、エゾウコギは朝鮮人参等の漢薬と比較して安価であり、しかもエタノール等の有機物による抽出工程を含まず、抽出法が簡易であるので製造が容易である。従って、安価に入手することが可能となり、長期服用時の服用者の経済的な負担が比較的少ないという効果もある。
また、エゾウコギは朝鮮人参等の漢薬や、レボドパ等の薬剤の欠点である副作用の心配がないことが近年報告されているので、長期服用時の副作用の心配のないパーキンソン病の予防薬を提供することが可能となる。
更に、本実施形態のＭＡＳＨ０３１２は、うつ病を予防することから、副作用のないうつ病の予防薬を提供することができる。
また、今回の試験では、ロテノンがパーキンソン病だけでなく、うつ病も発症させることがわかり、パーキンソン病患者がうつ病を併発している可能性が示唆された。更に、ＭＡＳＨ０３１２はパーキンソン病を誘導するロテノンによって発症したうつ病を予防したことから、パーキンソン病にうつ病が伴う場合の予防に対しても有効であると考えられた。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】ロテノンによるパーキンソン病疾患誘導を行った場合の運動機能障害に対するエゾウコギ抽出物の効果を示すグラフである。
【図２】ロテノンによるパーキンソン病疾患誘導を行った場合の運動機能障害に対するエゾウコギ抽出物の効果を示すグラフである。
【図３】ロテノンによるパーキンソン病疾患誘導を行った場合のうつ行動に対するエゾウコギ抽出物の効果を示すグラフである。
【図４】ロテノンによるパーキンソン病疾患誘導を行った場合の黒質内のDA陽性細胞数の減少に対するエゾウコギ抽出物の効果を示すグラフである。
【図５】ラット胃潰瘍モデルに対するエゾウコギ抽出物の効果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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