(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
チダケサシ属に属する植物であるアカショウマ又はトリアシショウマの根及び／又は根茎の抽出物又は精製物を含有してなる膵臓リパーゼ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、特定の植物を原料として使用した膵臓リパーゼ阻害剤、脂肪細胞における脂肪合成阻害剤、及びその利用に関するものである。より詳しくは、アカショウマ等のチダケサシ属に属する植物を含有してなる膵臓リパーゼ阻害剤に関し、参考として、キキョウを含有してなる、脂肪細胞における脂肪合成阻害剤、及びこれらを用いた食用組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、欧米型の食事形態や過食による摂取エネルギーの増加と運動不足による消費エネルギーの減少との格差が増大し、肥満体形が増えており、肥満は生活習慣病の発症要因として注目されている。一般的に、肥満状態とは、摂取エネルギーのうち運動等の諸活動によっても消費されない糖質や脂質等のエネルギー源が生体組織とくに皮下脂肪組織に異常に蓄積された結果、体重が骨格系あるいは生理機能の限界を超えて増加した状態をいう。肥満状態が慢性化すると糖尿病、動脈硬化症、脂肪肝、胆石症、腎臓障害等の疾患を合併症として起こしやすくなるといわれている。
【０００３】
肥満を防止するために、医療分野における治療や予防はもとより、日常的に摂取する食事を通して肥満を予防する試みがこれまでに数多くなされてきた。すなわち、脂肪の代謝や燃焼を促進したり、体脂肪の蓄積を抑制することをねらった食品用素材として、Ｌ−カルニチン又はこれを含む畜肉ペプチド（特開平７−１９６４８５号、特開平１０−６６５１５号、特開２０００−２５６２００号各公報）、藻類の抽出物（特開２０００−７２６４２号公報）、果実ポリフェノール（特開平１０−３３０２７８号公報）、共役ポリエン脂肪酸（特開２０００−３５５５３８号公報）、特定のアミノ酸類とキサンチン誘導体の混合物（特開平１０−３３０２６４号公報）、大豆や卵黄のリン脂質（特開平１０−８４８８０号公報）等が提案されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、これらの素材は実際的には効果が低かったり、実用的ではない簡単な実験結果に基づくものであったり、あるいは通常の食事形態において多量に摂取しなければならず、いずれも十分に満足できる効果を発揮し得るものではなかった。かかる現状に鑑み、本発明では、肥満を防止するために、食事で摂取する脂肪の吸収を効率的に阻害し、あるいは生体組織中の脂肪の代謝を有効に促進させ得る強力な抗肥満作用を有する天然物由来の素材を提供し、これを産業上有用に活用できる態様の組成物として提供することを課題とした。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記課題を解決するために、多数の植物原料及びそのエキス類と脂質代謝との関連性について鋭意検討を行った結果、アカショウマをはじめとするチダケサシ属に属する植物とキキョウが本発明の所望の効果を顕著に奏することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明によれば、チダケサシ属に属する植物を含有してなることを特徴とする膵臓リパーゼ阻害剤が提供される。なお、本発明の参考として、キキョウを含有してなることを特徴とする、脂肪細胞におけるインシュリン誘導によるグルコースからの脂肪合成阻害剤が提供され、これらを配合してなる食用組成物が提供される。ここで、チダケサシ属に属する植物はユキノシタ科のチダケサシ（Ａｓｔｉｌｂｅ）属の植物であり、このうちアカショウマが代表例であり、その根及び／又は根茎の乾燥粉末又は抽出物（以下、エキスということがある）又は精製物を用いてなることが好ましい。チダケサシ属に属する植物の抽出物は水若しくは親水性有機溶媒を用いて、とりわけエタノール、アセトン又はこれらの含水物を用いて抽出されたものであることが望ましく、さらには含水アセトンを用いた抽出物の酢酸エチル可溶画分であることがより望ましい。また、キキョウはキキョウ科に属し、その根及び／又は根茎の乾燥粉末又は抽出物又は精製物を用いてなることが好ましく、該抽出物は水又は親水性有機溶媒を用いて、とりわけ水、エタノール、アセトン又はこれらの含水物を用いて抽出されたものであることが望ましく、さらには水抽出物のエタノール可溶画分であることがより望ましい。本発明の食用組成物は前記の膵臓リパーゼ阻害剤、脂肪細胞におけるインシュリン誘導によるグルコースからの脂肪合成阻害剤を配合してなることを特徴とするものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】
まず、本発明の膵臓リパーゼ阻害剤は、チダケサシ属に属する植物を含有してなることを特徴とするものである。チダケサシ（Ａｓｔｉｌｂｅ）属に属する植物はユキノシタ科に分類され、本発明に係るものの例は後述するように種々あるが、代表例としてアカショウマ（学名：Ａｓｔｉｌｂｅ  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ（ＳＩＥＢ．ｅｔ  ＺＵＣＣ．）ＭＩＱ．）を挙げることができる。アカショウマは日本の山地にも自生する多年草で、その根茎を赤升麻とよび、古来より下熱、解毒、消炎等の目的で升麻（キンポウゲ科のサラシナショウマ：Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａ  ｓｉｍｐｌｅｘ  ＷＯＲＭＳＫＪＯＲＤ  等）の代用品として用いられてきた。本発明では、赤升麻あるいは紅升麻と称せられるものも包含する。
【０００８】
チゲタサシ属の植物の例としてＡｓｔｉｌｂｅ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ、Ａｓｔｉｌｂｅ  ａｕｓｔｒｏｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ａｓｔｉｌｂｅ  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ、Ａｓｔｉｌｂｅ  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ（ＳＩＥＢ．ｅｔ  ＺＵＣＣ．）Ｍｉｑ．：アカショウマ、Ａｓｔｉｌｂｅ  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ（ＳＩＥＢ．ｅｔ  ＺＵＣＣ．）ＭＩＱ．ｖａｒ．ｃｏｎｇｅｓｔａ  ＢＯＩＳＳ．（＝Ａｓｔｉｌｂｅ  ｏｄｏｎｔｏｐｈｙｌｌａ  ＭＩＱ．）：トリアシショウマ、Ａｓｔｉｌｂｅ  ｐｏｌｙａｎｄｒａ、Ａｓｔｉｌｂｅ  ｇｒａｎｄｉｓ、Ａｓｔｉｌｂｅ  ｒｉｖｕｌａｒｉｓ、Ａｓｔｉｌｂｅ  ｊａｐｏｎｉｃａ（ＭＯＲＲ．ｅｔ  ＤＥＣＮＥ．）Ａ．ＧＲＡＹ：アワモリショウマ、Ａｓｔｉｌｂｅ  ｍｉｃｒｏ−ｐｈｙｌｌａ  ＫＮＯＬＬ：チダケサシ等を挙げることができる。
【０００９】
本発明で用いるアカショウマ等のチダケサシ属に属する植物の態様は、前記植物の根及び／又は根茎が望ましく、根及び／又は根茎そのもの、これに乾燥、細断あるいは粉砕等の加工処理を施したもの、これらを溶媒で抽出処理した抽出液、該抽出液から溶媒を除いた抽出物、該抽出物にシリカゲル、ケイ酸マグネシウム、イオン交換樹脂、活性アルミナ、セルロース、活性炭等の吸着剤を用いたカラムクロマトグラフィーや溶剤分別等の精製処理を施した精製物のいずれでもよい。食品用途に使用する場合は、前記植物の根及び／又は根茎を乾燥し適宜に粉砕した粉末、該乾燥物の細断片や粉末を水又は親水性有機溶媒で抽出した抽出物とするのが利便性の点から望ましい。また、医薬品用途に利用する場合は、前記の抽出液、抽出物あるいは高純度の精製物が望ましい。
【００１０】
親水性有機溶媒としてメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級一価アルコール類、プロピレングリコール、１，３−ブタンジオール、グリセリン等の多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトン、エーテル、石油エーテル、酢酸エチル及びこれらの含水物や混合物を例示することができる。本発明の所望の効果を奏するための抽出物を効率的に得るには、エタノール、アセトン、酢酸エチル及びこれらの含水物を抽出用溶媒とすることが好ましい。含水物の水分含量は、例えば、エタノールの場合では１〜９９重量％、より好ましくは１０〜５０重量％であり、アセトンの場合には１〜５０重量％、より好ましくは１０〜３０重量％であり、酢酸エチルの場合は８０〜９９重量％、より好ましくは８５〜９５重量％である。これらの範囲を外れると本発明の所望の効果が減少し又は抽出物の収量が低下する。
【００１１】
本発明に係る抽出物を簡便かつ効率的に得るには、含水エタノール又は含水アセトンで抽出し、該抽出物をさらに酢酸エチルで分別してその可溶画分を採取するのがよい。抽出処理は該処理原料に対して１〜１００重量倍程度の前記抽出用溶媒を加え、常圧もしくは加圧下、常温又は加熱状態で、適宜に攪拌して１０分〜数日間抽出処理する。不溶物を濾過又は遠心分離して除き本発明に係る抽出液を得ることができ、さらに該抽出液から減圧蒸留、噴霧乾燥、凍結乾燥等の公知の手段で溶媒を除去することによって本発明に係る抽出物を得ることができる。
【００１２】
アカショウマ等のチゲタサシ属に属する植物の根と根茎には、デンプンやタンニンのほかにベルゲニン、アスチルビン、アスチルビン酸等のフラボノイド類が含まれていることが知られており、これらの成分が前述の薬理作用を示すといわれている（Ｓｈｉｍａｄａ，Ｈ．ら、Ｙａｋｕｇａｋｕ  Ｚａｓｓｈｉ、第７２巻、第５７８−５８８頁、１９５２年）。これに対して、本発明は、アカショウマ等のチダケサシ属の植物の前記形態のものが動物の脂肪細胞において、ノルエピネフリンによって誘導される脂肪の分解を促進し、アドレノコルチコトロピンホルモン（以下、ＡＣＴＨと略す）誘導の脂肪分解を刺激し、また、インシュリンの誘導によるグルコースからの脂肪形成を阻害する作用、さらに、摂取する脂肪について膵臓リパーゼ活性を阻害する作用を見出したものである。
【００１３】
一方、本発明で用いるキキョウ（Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ  ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ  Ａ．ＤＥＣＡＮＤＯＬＬＥ）はわが国を含む東アジアに自生する多年生草であり、キキョウ科に属する。その根や根茎はプラティコディン（ｐｌａｔｙｃｏｄｉｎ）Ａ、Ｃ、Ｄやポリガラシン（ｐｏｌｙｇａｌａｃｉｎ）Ｄ等のサポニン類を含み、古来より鎮咳、去痰、消炎、排膿等の効能を有する生薬・漢方薬として用いられている。また、キキョウのエキスを利用する例として、プロテアーゼ阻害剤として歯周病の予防や治療のための組成物（特開平６−２５０００号公報）、温浴効果を期待する入浴剤（特開平６−２０６８１４号公報）、養毛・育毛料（特開平８−７３３２４号公報）、アトピー性皮膚炎の予防・治療剤（特開平１１−１９９５００号公報）、抗チロシナーゼ活性をもつ化粧料（特開２０００−１９８７１２号公報）等が提案されている。
【００１４】
本発明において用いるキキョウの形態は、キキョウの根及び／又は根茎が望ましく、根及び／又は根茎自体、これを乾燥、細断あるいは粉砕等の加工処理に供したもの、これらに溶媒を加えて抽出処理した抽出液、該抽出液から溶媒を除いた抽出物、該抽出物にシリカゲル、ケイ酸マグネシウム、イオン交換樹脂、活性アルミナ、セルロース、活性炭等の吸着剤を充填したカラムクロマトグラフィーや溶剤分別等の精製処理を施した精製物のいずれでもよい。本発明の所望の効果を得るためには、食品用途に利用する場合は、キキョウの根及び／又は根茎を乾燥し適宜に粉砕した粉末、該乾燥物の細断物あるいは粉末を水及び／又は親水性有機溶媒を用いて抽出した抽出物が簡便かつ利便であり、医薬品用途に使用する場合は、前記の抽出液、抽出物あるいは精製物が望ましい。
【００１５】
抽出処理に用いる親水性有機溶媒としてメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級一価アルコール類、プロピレングリコール、１，３−ブタンジオール、グリセリン等の多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトン、エーテル、石油エーテル、酢酸エチル及びこれらの混合物を例示できる。本発明の所望の効果を奏する抽出物を効率的に得るための抽出溶媒としては水、エタノール、アセトン又はこれらの含水溶媒を用いるのが好ましく、さらには水又は水分含有率が５０重量％以上の含水エタノールがより好ましい。５０重量％未満では抽出物の収量や所望の活性が低下する。抽出物の好適な態様の例は水で抽出した抽出物をさらにエタノールで分別して得られる可溶画分である。
【００１６】
抽出処理は次のように行えばよい。すなわち、前記形態の原料に対して等重量ないしは約１００重量倍の前記抽出用溶媒を加え、常圧もしくは加圧の下、常温又は加熱状態で、必要に応じて攪拌しながら１０分〜数日間抽出処理し、不溶物を遠心分離又は濾過して除去すれば本発明に係る抽出液を得ることができ、さらに該抽出液から減圧蒸留、凍結乾燥、噴霧乾燥等の手段で溶媒を除去することによって本発明に係る抽出物を得ることができる。
【００１７】
本発明は、キキョウの根及び／又は根茎、その乾燥物、粉末、抽出物、精製物が動物の脂肪細胞において、インシュリンの誘導によるグルコースからの脂肪合成を阻害する作用を見出したものである。
【００１８】
本発明の膵臓リパーゼ阻害剤の望ましい態様は、前述のようにして得られるチダケサシ属に属する植物、例えばアカショウマの根及び／又は根茎、その乾燥物、抽出物あるいは精製物を必須原料として含有せしめてなるものであり、本発明の脂肪細胞におけるインシュリン誘導によるグルコースからの脂肪合成阻害剤の望ましい態様は、キキョウの根及び／又は根茎、その乾燥物、抽出物あるいは精製物を必須原料として含有せしめてなるものである。なお、これらの剤は、本発明の趣旨に照らして、併用することが好ましく、より望ましい態様はチダケサシ属の植物由来のもの及びキキョウ由来のものの両者を含む組成物であり、最も望ましくはアカショウマの根茎の抽出物又は精製物と、キキョウの根茎の抽出物又は精製物とを含有してなるものである。これら二種類の植物由来の原料を併用することによって、本発明の目的である肥満防止効果が相乗的に発現する。この併用組成物における両原料の配合比率は、抗肥満効果を奏するための各々の作用の違い、該組成物の使用目的と用途、製造コスト等により適宜に変動させることができ、チダケサシ属の植物由来原料／キキョウ由来原料（重量比）＝１００／０〜０／１００であるが、より好ましくは１００／０〜５０／５０であり、最も好ましくは９０／１０〜６０／４０である。
【００１９】
本発明の膵臓リパーゼ阻害剤、脂肪細胞における脂肪合成阻害剤においては、本発明の趣旨に反しないかぎり種々の原料や成分を併用して配合することができる。例えば、通常の食品に使用される賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、甘味料、酸味料、調味料、着色料、香料等は好適である。また、肥満の予防や治療、ダイエットあるいは痩身のために用いられる公知の素材を併用してもよい。この具体例としては、ガルシニア・カンボジア果皮エキス、ヒドロキシクエン酸及びその塩、ブドウ種子エキス、リンゴ等の果実ポリフェノール、山査子果実エキス、グアバ葉エキス、ギムネマ・シルベスタ葉エキス、イチョウ葉エキス、リパーゼ阻害剤、α−及びβ−アミラーゼ阻害剤、Ｌ−カルニチン及びこれを含む畜肉ペプチド、アオサやアオノリ等の緑藻類抽出物、コンブ等の褐藻類エキス、共役二重結合を２〜４個有する共役ポリエン高級脂肪酸及びそのエステルや塩、異性化リノール酸、α−リノレン酸、大豆や卵黄由来のホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸等のグリセロリン脂質及びこれらのリゾ体、ボラージ油、月見草油、唐辛子末及びそのエキス、ニンニク抽出エキス、スベリヒユ、プーアール茶葉粉末及びそのエキス、杜仲葉末及びそのエキス、ウーロン茶葉粉末及びそのエキス、サイリウム種皮、キチン、キトサン、キサンチン誘導体、シトラス・アウランチウムの抽出エキス、センナ葉又は茎のエキス、陳皮等を挙げることができる。なお、これらの例は肥満を防止あるいは抑制する作用のあるものの一部であって、本発明を限定するものではない。
【００２０】
前述のように、本発明によれば、膵臓リパーゼの活性を阻害し、摂取する食事性脂肪の腸管吸収を抑制する作用を有する、アカショウマ等のチダケサシ属の植物を含有する膵臓リパーゼ阻害剤と、インシュリンによって誘導されるグルコースからの脂肪の合成を阻害する作用を有するキキョウを含有する、脂肪細胞における脂肪合成阻害剤が提供される。ここで、チダケサシ属の植物及びキキョウの好ましい態様は乾燥粉末、抽出物あるいは精製物である。かかる剤はそのまま本発明の所望の目的のために使用しても差し支えないが、本発明ではこれらを配合してなる組成物も提供される。該組成物の態様としては食用組成物が好適である。
【００２１】
本発明の食用組成物は、前述した剤、すなわち、アカショウマ等のチダケサシ属に属する植物を含有してなる膵臓リパーゼ阻害剤、キキョウを含有してなる脂肪細胞における脂肪合成阻害剤を含む組成物であって、これらの形態が望ましくは根及び／又は根茎の乾燥粉末、抽出物あるいは精製物であるものを必須原料として含有してなる前記剤を配合してなることを特徴とする。
【００２２】
この食用組成物の態様としては、前記の膵臓リパーゼ阻害剤、脂肪細胞における脂肪合成阻害剤を液状、ゲル状、粉末状あるいは固形状の食品、例えば、果実飲料、清涼飲料、茶、スープ、ゼリー、ヨーグルト、プリン、ケーキミックス、ふりかけ、味噌、醤油、ドレッシング、マヨネーズ、焼肉のたれ等の調味料、麺類、ハムやソーセージ等の畜肉魚肉加工食品、ジャム、牛乳、クリーム、バターやチーズ等の粉末状、固形状又は液状の乳製品、マーガリン、パン、ケーキ、クッキー等に添加した形態となすことができる。
【００２３】
また、必要に応じてデキストリン、乳糖、澱粉又はその加工素材、セルロース末等の賦形剤、ビタミン、ミネラル、動植物や魚介類の油脂、たん白、糖質、色素、香料、その他の前記食用添加剤等と共に粉末、顆粒、ペレット、錠剤等に加工したり、ゼラチン等で被覆してカプセルに成形したり、あるいはドリンク類にして、栄養補助食品や健康食品として利用できる。このとき、前記の肥満防止やその治療、ダイエットあるいは痩身のために用いられる公知の食用素材を併用した組成物は好適である。なお、本発明の食用組成物は極めて多種類の形態にわたり、前記の例示に限定されるものではないが、肥満防止の点から油脂類や糖質を多量に含む食品類に添加した形態、前記の栄養補助食品や健康食品の形態が望ましい。
【００２４】
前記の食品類や食用組成物における本発明の膵臓リパーゼ阻害剤、脂肪細胞における脂肪合成阻害剤の配合量は、当該食品や食用組成物の種類、形態、利用目的や本発明の剤の種類、形態等により一律に規定し難いが、一般の加工食品類に添加する場合では、例えば、膵臓リパーゼ阻害剤（アカショウマの根茎を含水率５０重量％の含水エタノールで抽出した抽出物）：脂肪細胞における脂肪合成阻害剤（キキョウの根茎を水で抽出した抽出物）＝５０：５０（重量比）のものであれば、概ね０．０１〜５０重量％であり、より好ましくは０．１〜３０重量％である。この範囲を外れて少ないと経口摂取による本発明の所望効果が小さく、逆に多すぎると食品の種類によっては風味を損ねたり、当該食品を調製することが不可能になる場合がある。なお、本発明の前記剤はそのまま食用に供しても差し支えない。
【００２６】
【実施例】
実施例１
アカショウマ（Ａｓｔｉｌｂｅ  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ（ＳＩＥＢ．ｅｔ  ＺＵＣＣ．）ＭＩＱ．）の乾燥根茎を約５ｍｍ角以下のサイズに破砕し、これをさらに粉砕機で処理して２００タイラーメッシュをパスした微粉末（試料Ａ−１）を調製した。
【００２７】
実施例２
実施例１で得たアカショウマの根茎の破砕片１Ｋｇをステンレス製抽出釜に仕込み、含水率４０重量％の含水エタノール１０Ｌを加え、時々かき混ぜながら６０℃で６時間抽出処理した。ついで、残渣を濾別して抽出液を得、該抽出液から減圧下に溶媒を留去して赤褐色の抽出物（試料Ａ−２）７５ｇを得た。
【００２８】
実施例３
実施例１で得たアカショウマの根茎の微粉末１Ｋｇをステンレス製抽出釜に仕込み、含水率２０重量％の含水アセトン５Ｌを加えて還流下で３時間抽出処理した後、濾過して抽出液と残渣に分けた。該残渣に再び前記含水アセトン５Ｌを添加して同様に処理して抽出液を得た。両抽出液をあわせて減圧下に溶媒を留去して赤褐色の抽出物（試料Ａ−３）６８ｇを調製した。
【００２９】
実施例４
実施例３で得たアカショウマの根茎の抽出物（試料Ａ−３）４５ｇを蒸留水１Ｌに懸濁させ、該懸濁液を酢酸エチル２００ｍＬずつで５回に分けて溶剤分別処理に供し、溶媒を減圧留去して酢酸エチル可溶画分（試料Ａ−４）２９ｇ及び不溶画分（試料Ａ−５）１５ｇの各精製物を調製した。
【００３０】
実施例５
トリアシショウマ（Ａｓｔｉｌｂｅ  ｏｄｏｎｔｏｐｈｙｌｌａ  ＭＩＱ．）の根茎を日干しにして乾燥後、この破砕片１Ｋｇを実施例２と同様に処理して赤茶色の抽出物（試料Ａ−６）８５ｇを得た。
【００３１】
参考実施例１
キキョウ（Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ  ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ  Ａ．ＤＣ．）の根を含む根茎の天日乾燥物を約５ｍｍ角以下のサイズに破砕し、これをさらに粉砕処理して２００タイラーメッシュ通過の微粉末（試料Ｐ−１）を調製した。
【００３２】
参考実施例２
参考実施例１で得たキキョウの根を含む根茎の破砕片１Ｋｇをステンレス製抽出釜に仕込み、蒸留水２０Ｌを加えて還流下で５時間抽出処理した後、残渣を濾別して抽出液を得、該抽出液の水分を蒸発させて褐色の抽出物（試料Ｐ−２）３１０ｇを得た。
【００３３】
参考実施例３
参考実施例２で得たキキョウの根を含む根茎の抽出物（試料Ｐ−２）１５０ｇに含水率５重量％の含水エタノール１Ｌを加え、室温にて時々かき混ぜながら抽出処理して可溶分と不溶分とに分け、溶媒を減圧留去してエタノール可溶画分（試料Ｐ−３）１１０ｇ及び不溶画分（試料Ｐ−４）３５ｇの各精製物を調製した。
【００３４】
試験例
本発明に係るアカショウマ及びキキョウの各種加工処理物について、以下に述べる方法で抗肥満試験を行った。
（Ａ）ノルエピネフリンにより誘導される脂肪細胞の脂肪分解能：
５週齢のウィスター系雄性ラット（日本クレア（株）から購入）に実験用標準飼料（オリエンタル酵母（株）製）及び水を自由摂取させて飼育した６週齢ラット（体重：１５０〜１６０ｇ）を頚椎脱臼により屠殺し、直ちに副睾丸脂肪組織を除去した。ついで、ロドベルの方法（Ｒｏｄｂｅｌｌ，Ｍ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２３９，３７５−３８０，１９６４）により、該脂肪組織から脂肪細胞を単離して採取した。
【００３５】
前記脂肪細胞フラクションの一部（５０μＬ）をハンクス・バランス液（ｐＨ７．４）２００μＬ中で、３７℃にて１時間インキュベートした。なお、ここで使用したハンクス・バランス液は、２．５％ウシ血清アルブミン（和光純薬工業（株）製。但し、遊離脂肪酸を除去処理済み。）、ノルエピネフリン（三共（株）製）２５μＬ（最終濃度として０．０５μｇ／ｍＬ）及び、所定量の試験物質含有溶液（試料Ａ−１〜Ａ−６、Ｐ−１〜Ｐ−４及びこれらの混合物のいずれか１種をハンクス・バランス液（ｐＨ７．４）に所定濃度で溶解ないし分散させた試験溶液として）２５μＬを添加したものである。
【００３６】
インキュベートした後、生成する遊離脂肪酸量を次のようにして測定した。操作はすべて２５℃で行った。すなわち、前記のインキュベートした液２５０μＬを入れた試験管に２％メタノール含有クロロホルム／ｎ−ヘプタン（１／１）混液３ｍＬを加え、振とう器で１０分間水平振とうして抽出処理した後、５分間遠心分離（２０００×ｇ）し、上層を吸引除去した。ついで、下層に銅試薬１ｍＬを添加し、１０分間振とう後、１０分間遠心分離（２０００×ｇ）した。
【００３７】
次に、抽出された脂肪酸の銅塩を含む上部有機層０．５ｍＬを、０．０５％の３−（２）−ｔ−ブチル−４−ヒドロキシアニソール含有のクロロホルム中、０．１重量／容量％濃度の金属キレート化剤（バソキュプロイン：２，９−ジメチル−４，７−ジフェニル−１，１０−フェナンスロリン）０．５ｍＬで処理し、分光光度計（日本分光（株）製、ＯＲＤ／ＵＶ−５スペクトロメーター）で４８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００３８】
脂肪分解能は脂肪細胞１ｍＬから１時間あたりで生成する遊離脂肪酸量（μモル）として求め、各試験物質の脂肪分解能は、対照試験においてノルエピネフリン（添加量：０．０５μｇ／ｍＬ反応混合物）のみによる遊離脂肪酸生成量（実測値：６．１４±０．０８μｍｏｌ／ｍＬ充填脂肪細胞／ｈｒ）を１００としたときの相対値（ｎ＝３〜５の平均値の比較）で示した。なお、本実験系では、ノルエピネフリン及び試験物質を添加しない場合の脂肪分解能はゼロであった。この結果を表１〜表３に示す。
【００３９】
【表１】
0004626081.tif 000002
【００４０】
【表２】
0004626081.tif 000003
【００４１】
【表３】
0004626081.tif 000004
【００４２】
表１〜表３において、（  ）内の数字は３〜５回の実験結果の平均値±標準誤差を示す。表１のデータから、ノルエピネフリンにより誘導される脂肪細胞の脂肪の加水分解能は、試料Ａ−１〜Ａ−４及びＡ−６のいずれによっても濃度依存的に促進され、とりわけアカショウマやトリアシショウマの根茎の乾燥粉末、含水エタノール抽出物、含水アセトン抽出物及びその酢酸エチル可溶画分において顕著な効果を奏することが明らかになった。また、表２及び表３のデータをあわせると、アカショウマ等のチダケサシ属に属する植物の各加工処理物とキキョウの各加工処理物とを併用した場合には脂肪細胞からの脂肪の加水分解能が相乗的に増強されることが明らかになった。
【００４３】
（Ｂ）ＡＣＴＨにより誘導される脂肪細胞の脂肪分解能：
本試験方法は、前述の（Ａ）の試験法において、ノルエピネフリン（三共（株）製）２５μＬ（最終濃度として０．０５μｇ／ｍＬ）をＡＣＴＨ（第一製薬（株）製）２５μＬ（最終濃度として０．５μｇ／ｍＬ）に置きかえること以外は同条件に設定して行った。この結果を表４〜表６に示す。なお、同表において、脂肪分解能はノルエピネフリン添加の場合と同義であり、各試験物質の脂肪分解能は対照試験においてＡＣＴＨ（添加量：０．５μｇ／ｍＬ反応混合物）のみによる遊離脂肪酸生成量（実測値：２．２７±０．０３μｍｏｌ／ｍＬ充填脂肪細胞／ｈｒ）を１００としたときの相対値（ｎ＝３の平均値の比較）で示した。表４〜表６中（  ）内の数字は３回の実験結果の平均値±標準誤差を示す。また、本実験系ではＡＣＴＨ及び試験物質を添加しない場合の脂肪分解能はゼロであった。
【００４４】
【表４】
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【００４５】
【表５】
0004626081.tif 000006
【００４６】
【表６】
0004626081.tif 000007
【００４７】
表４のデータから、ＡＣＴＨにより誘導される脂肪細胞の脂肪の加水分解能は、試料Ａ−１〜Ａ−４及びＡ−６のいずれによっても濃度依存的に促進され、試料Ｐ−１〜Ｐ−３によっても若干促進されるが、とりわけアカショウマやトリアシショウマの根茎の各種加工処理物（乾燥粉末、含水エタノール抽出物、含水アセトン抽出物及びその酢酸エチル可溶画分）において顕著な効果を奏することが明らかになった。また、表５及び表６のデータをあわせると、アカショウマ等のチダケサシ属の植物の各加工処理物とキキョウの各加工処理物とを併用した場合にはＡＣＴＨ誘導による脂肪細胞からの脂肪の加水分解能が相乗的に増強されることが認められた。
【００４８】
（Ｃ）インシュリンにより誘導されるグルコースからの脂肪合成能：前述の（Ａ）の試験法で用いた脂肪細胞のフラクションの一部（５０μＬ）をハンクス・バランス液（ｐＨ７．４）２００μＬ中で、３７℃にて１時間インキュベートした。なお、該ハンクス・バランス液は、２．５％ウシ血清アルブミン（前記（Ａ）の試験法で使用したものと同じ。）、〔Ｕ−１４Ｃ］グルコース２５μＬ（最終濃度として０．５μＣｉ＝１８．５ＫＢｑ／ｍＬ）、インシュリン（シグマ社製、試薬グレード）２５μＬ（最終濃度として１ｎＭ）及び、所定量の試験物質含有溶液（試料Ａ−１〜Ａ−６、Ｐ−１〜Ｐ−４及びこれらの混合物のいずれか１種をハンクス・バランス液（ｐＨ７．４）に所定濃度で溶解ないし分散させた試験溶液として）２５μＬを添加したものである。
【００４９】
ついで、文献（Ｄｏｌｅ，Ｖ．Ｐ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，３５，１５０−１５４，１９５６）に記載のドール抽出混合物５ｍＬを加えて反応を停止させ、試験管を５分間強く振り、さらにヘプタン３ｍＬ及び蒸留水２ｍＬを添加して５分間強く振とうした。上層（ヘプタン層）の３ｍＬを栓付試験管に移し、同量の０．０５モル水酸化ナトリウム含有の５０％エタノールとともに激しく振とうして遊離脂肪酸を除去した。この後、ヘプタン層１ｍＬとシンチレーション液（ＡＣＳＩＩ、アマーシャム社製）１０ｍＬを計測用硝子瓶に採り、パッカード液体シンチレーション・カウンターを用いて放射能値を測定した。
【００５０】
脂肪合成能は脂肪細胞１ｍＬ、１時間あたりのＤＰＭとして求め、各試験物質の脂肪合成能は、対照試験においてインシュリンのみ添加によるＤＰＭ量（実測値：（５７±２）×１０−４／ｍＬ充填脂肪細胞／ｈｒ）を１００としたときの相対値（ｎ＝３の平均値の比較）で示した。この結果を表７〜表９に示す。なお、本実験系では、インシュリン及び試験物質を添加しない場合のＤＰＭ実測値は（２７±２）×１０−４／ｍＬ充填脂肪細胞／ｈｒであり、前記基準の相対値は４７であった。この値は、インシュリン無添加下で各試験物質の添加量を増やしてもほとんど変化がなかった。
【００５１】
【表７】
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【００５２】
【表８】
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【００５３】
【表９】
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【００５４】
これらのデータから、インシュリンの添加により脂肪細胞中でグルコースから脂肪の合成能が増加するが、この脂肪合成能はインシュリン共存下において試料Ａ−１〜Ａ−４及びＡ−６のいずれの添加によっても濃度依存的に抑制されて減少し、とりわけアカショウマやトリアシショウマの根茎の加工処理物（乾燥粉末、含水エタノール抽出物、含水アセトン抽出物及びその酢酸エチル可溶画分）において顕著な脂肪合成抑制効果が認められた。また、アカショウマ等のチダケサシ属に属する植物及びキキョウの各加工処理物を併用すると脂肪細胞における脂肪合成能が相乗的に抑制されることが明らかになった。
【００５５】
（Ｄ）膵臓リパーゼによる脂肪分解能：
シグマ社から購入した試薬グレードのオレイン酸トリグリセリド８０ｍｇ、ホスファチジルコリン１０ｍｇ、タウロコール酸５ｍｇ及び０．１モル／Ｌ塩化ナトリウムを含むトリス緩衝液（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸、ｐＨ７．０）９ｍＬを５分間超音波処理し、この０．１ｍＬに膵臓リパーゼ０．０５ｍＬ（１０ユニット）及び所定濃度の試験物質溶液（前記緩衝液に溶解ないし分散させたもの）０．１ｍＬを加えて３７℃で３０分間インキュベートした。このインキュベート液を前述の（Ａ）の試験法と同様に処理し、生成した遊離脂肪酸量を測定した。膵臓リパーゼ活性、すなわち該リパーゼによる脂肪分解能は前記インキュベート液である反応混合物１Ｌから１時間あたりに生成するオレイン酸のモル数として求め、各試験物質を共存させた場合のリパーゼ活性は、試験物質を添加しない対照試験におけるリパーゼ活性を１００としたときの相対値（ｎ＝４の実測値の平均値の比較）で示した。この結果を表１０に示す。
【００５６】
【表１０】
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【００５７】
表１０のデータから、膵臓リパーゼによる脂肪分解能はキキョウの各加工処理物（試料Ｐ−１〜Ｐ−３）の添加濃度に依存して顕著に抑制されること、これと対比するとアカショウマ等の加工処理物（試料Ａ−１〜Ａ−６）では当該抑制効果が小さいが抽出物や精製物は抑制効果が大きいこと、キキョウ及びアカショウマ等のチダケサシ属植物の各加工処理物を併用すると脂肪分解能の相乗的な抑制効果を奏することが明らかになった。
【００５８】
（Ｅ）高脂肪食の長期投与試験：
３週齢のＩＣＲ系雌性マウス（日本クレア社から購入）を、温度及び湿度の管理下、１２時間の明暗サイクルで、餌料及び水を自由摂取させて１週間飼育後、高脂肪食餌料を８週間にわたり摂取させ、エーテル麻酔下に屠殺し、常法により体重、肝臓組織の中性脂質量及び総コレステロール量を測定した。なお、対照群の高脂肪食餌料組成（単位：重量％）は、牛脂４０、コーンスターチ１０、砂糖９、ミネラル混合物（オリエンタル酵母（株）製、ＡＩＮ−７６）４、ビタミン混合物（同社製、ＡＩＮ  １９７７）１及びカゼイン３６とし、試験物質を添加した場合はカゼインの一部を試験物質（５重量％）に置き換えた餌料とした。
【００５９】
肝臓の中性脂質及び総コレステロールは、肝臓組織の一部（０．５ｇ）をクレブス・リンガーのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）４．５ｍＬ中でホモジナイズし、該ホモジネート０．２ｍＬをクロロホルム／メタノール（２／１、容量比）４ｍＬで抽出、ついで窒素雰囲気下で濃縮して抽出物を得、これを測定用試料としてトリグリセリドＥテストキット及び総コレステロールＥテストキット（いずれも和光純薬（株）製）を用いて測定した。この結果を表１１に示す。同表中の数字は平均値±標準誤差を表わす（ｎ＝１４、ＡＮＯＶＡ統計処理）。なお、本試験の対照群及び試験群ともに摂取エネルギー量に有意差は認められなかった。
【００６０】
【表１１】
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【００６１】
このことから、高脂肪食のみを８週間摂取した場合に比べて、キキョウの各加工処理物（試料Ｐ−１〜Ｐ−３）を添加した場合に体重が減り、肝臓組織中の総コレステロール量は変化しないが、中性脂質量が顕著に減少することが明らかになった。アカショウマ等の各加工処理物（試料Ａ−１〜Ａ−４及びＡ−６）でも当該現象は若干認められた。また、キキョウ及びアカショウマ等のチダケサシ属に属する植物の各加工処理物を併用すると体重減少等の相乗効果が認められた。
【００６２】
参考試作例１
試料Ａ−２及び試料Ｐ−３（１：１、重量比）からなる本発明の混合物１２０ｍｇにガルシニア・カンボジア果皮エキス３０ｍｇ、ミツロウ５０ｍｇ及びボラージ油５０ｍｇを加え、約４５℃で十分に混合して均質な状態にし、これをカプセル充填機に供して一粒あたり内容量が２５０ｍｇのゼラチン被覆カプセル製剤を試作した。本カプセル製剤をダイエット希望のボランティア（体脂肪率基準の肥満度が２０％以上の成人男女）１０名対象に１日あたり１粒、２週間摂取のモニター試験に供したところ９名に体重減少が認められた。この製剤は経口摂取が可能な抗肥満用の食用組成物又は医薬用組成物として利用できる。また、本発明の前記混合物を試料Ａ−３のみ、試料Ａ−６のみ又は試料Ｐ−２のみの各同量とし、他の条件は同一にしてカプセル製剤を試作した。これらにも同様の抗肥満効果が認められた。
【００６３】
参考試作例２
試料Ａ−２：ウーロン茶葉粉末＝３：２（重量比）からなる本発明の混合物５．０Ｋｇを化工澱粉（松谷化学（株）製、商品名：パインフロー（登録商標））３．５Ｋｇ、第三リン酸カルシウム０．３Ｋｇ、ビタミンＢ１０．３Ｋｇ、ビタミンＢ２０．３Ｋｇ、ビタミンＢ６０．２Ｋｇ及びビタミンＣ０．４Ｋｇとともに配合機に仕込み１０分間攪拌混合した。該混合物を直打式打錠機に供給して直径７ｍｍ、高さ４ｍｍ、重量１５０ｍｇのタブレットを作成した後、コーティング機でシェラック薄膜をコーティングして錠剤形状の食品を試作した。
【００６４】
参考試作例３
家庭用ホイッパーにバター１００ｇ、ショートニング１２０ｇ、上白糖９０ｇ及び牛乳１００ｍＬを入れ、攪拌しながら鶏卵１個を加えて十分に混合した後、薄力粉１９０ｇ、ベーキングパウダー１ｇとともに試料Ａ−１及び試料Ｐ−２（３：１、重量比）からなる本発明の混合物１０ｇを添加して十分に捏ねあわせた。これを３０分間ねかせた後、金型で５０個に分割し、オーブンで焼いてバタークッキーを試作した。
【００６５】
参考試作例４
市販の野菜ジュース１Ｌに、試料Ａ−２：試料Ｐ−３：葡萄種子エキス（インターヘルス社製、商品名：アクティビン（登録商標））＝１：２：１（重量比）からなる本発明の混合物５ｇを加えて混合し、肥満防止用野菜ジュースを試作した。これは元の野菜ジュースと比較して何ら遜色のないものであった。
【００６６】
【発明の効果】
本発明によれば、チダケサシ属に属する植物を含有してなる膵臓リパーゼ阻害剤、及び、キキョウを含有してなる、脂肪細胞におけるインシュリン誘導によるグルコースからの脂肪合成阻害剤が提供される。これらの剤は、アカショウマ等のチダケサシ属に属する植物の根及び／又は根茎の乾燥粉末、その抽出物又は精製物等の加工処理物に起因して、膵臓リパーゼによる脂肪の加水分解能を阻害し、したがって腸管からの脂肪の吸収を抑制し、高脂肪食の摂取による体重増加や肝臓中の中性脂質量の上昇を抑制する効果を奏する。また、キキョウの根及び／又は根茎の前記同様の加工処理物に起因して、インシュリンによって誘導される脂肪細胞中のグルコースからの脂肪の合成能を抑制する効果を奏する。さらに、起源が異なる前記加工処理物を併用して含有するものは相乗的に顕著な抗肥満効果を奏する。本発明では、また、前記の膵臓リパーゼ阻害剤、脂肪細胞における脂肪合成阻害剤を配合してなる食用組成物が提供され、これは肥満症状の予防、治療、痩身、減体重、ダイエット等のために有効利用され得るものである。