(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式
【化１】
0004840845.tif 000003
で示される新規エラグ酸誘導体。
【請求項２】
請求項１記載のエラグ酸誘導体を有効成分（ザクロエキスが有効成分であるものを除く。）として含有するキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
【請求項３】
請求項１記載のエラグ酸誘導体を有効成分（ザクロエキスが有効成分であるものを除く。）として含有する高尿酸血症の予防又は治療剤。
【請求項４】
ザクロから抽出された成分であることを特徴とする、請求項１に記載のエラグ酸誘導体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規エラグ酸誘導体及びそれを含有するキサンチンオキシダーゼ阻害剤等に関する。
【背景技術】
【０００２】
哺乳動物の肝臓、小腸粘膜、乳汁中に多く含まれるキサンチンオキシダーゼは、プリン化合物分解経路の最終段階においてヒポキサンチンからキサンチンを経て尿酸を生成する。
血中における尿酸濃度の上昇は、高尿酸血症としての痛風等の様々な疾病を引き起こすため、高尿酸血症を是正すべく臨床的に尿酸生成阻害剤つまりキサンチンオキシダーゼ阻害剤の投与が行われており、キサンチンオキシダーゼの活性を抑制し得る生理活性物質の開発が注視されている。
ところで、今日までキサンチンオキシダーゼ阻害作用を有する数多くの化合物が報告されているが、それらの多くは化学的手法により合成されたものであり、人体に対する安全性が高いとは決して言えなかった。また最近では、このような人体に対する安全性の観点から天然物由来のキサンチンオキシダーゼ阻害剤も開示されるようになってきたが（例えば、特許文献１，２，３，４，５参照）、これらのキサンチンオキシダーゼ阻害効果は充分満足できるものではなかった。
【０００３】
【特許文献１】特開平５−２４４９６３号公報
【特許文献２】特開平９−２０２７３３号公報
【特許文献３】特開２０００−２９０１８８号公報
【特許文献４】特開２００３−２８６１６５号公報
【特許文献５】特開２００４−１２３７６１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、新規エラグ酸誘導体及びキサンチンオキシダーゼ活性阻害剤の提供を課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、前記の課題を解決するために、既に多年にわたって食用に供され人体に対する安全性が確認されているザクロから、新規エラグ酸誘導体を見出し、さらに該新規エラグ酸誘導体がキサンチンオキシダーゼ阻害剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は、以下に関する。
【０００６】
（１）化１に記載の新規エラグ酸誘導体。
（２）上記（１）記載の新規エラグ酸誘導体を有効成分として含有するキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
（３）上記（１）記載の新規エラグ酸誘導体を有効成分として含有する高尿酸血症の予防又は治療剤。
（４）ザクロから抽出された成分であることを特徴とする、上記（１）記載の新規エラグ酸誘導体。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の各種剤に有効成分として含まれる化１記載の新規エラグ酸誘導体は、キサンチンオキシダーゼ阻害活性を示す。従って、それを使用することによって、高尿酸血症の予防・改善に対して優れた効果が期待される。また、この有効成分を含む各種剤、飲食品、医薬品及び化粧品を経済的に提供することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
１．新規エラグ酸誘導体
本発明は、化１記載の新規エラグ酸誘導体（以下、「本新規エラグ酸誘導体」という。）である。
本新規エラグ酸誘導体は、エラグ酸を出発物質とする化学合成法、植物を出発材料とする抽出法等により得ることができる。抽出法の出発材料となる植物としては、ザクロが好適である。この場合、まず、ザクロ（Ｐｕｎｉｃａ  ｇｒａｎａｔｕｍ）果実を乾燥させた後に粉砕し、次いで６０から９５％エタノール水（熱水を含む）を用いて抽出し、得られた抽出物を酸加水分解する。酸加水分解物をクロマトグラフィー技術によって分離精製することにより本新規エラグ酸誘導体が得られる。
【０００９】
２．キサンチンオキシダーゼ阻害剤
本新規エラグ酸誘導体は、キサンチンオキシダーゼ阻害活性を有しており、キサンチンオキシダーゼ阻害剤として有用である。
【００１０】
３．高尿酸血症の予防又は治療剤
本新規エラグ酸誘導体は、キサンチンオキシダーゼ阻害活性を通じて、生体内における尿酸の生成を抑制するので、高尿酸血症の予防又は治療剤として有用である。さらに、痛風など高尿酸血症に起因して生じる様々な疾患の予防及び治療に利用することができ、更には炎症、老化、発癌、動脈硬化、脳障害など活性酸素に起因して生じる様々な疾患の予防及び治療にも効果を発揮する。
【００１１】
４．本発明の剤の使用法
本発明のキサンチンオキシダーゼ阻害剤、及び高尿酸血症の予防又は治療剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品、食品、飲料などとして使用することができる。例えば、キサンチンオキシダーゼ阻害作用、あるいは高尿酸血症の予防又は治療効果を有するザクロジュースとして提供することもできる。
剤型としては、凍結乾燥或いは噴霧乾燥等により乾燥させて乾燥粉末とすることもできるし、また液剤、錠剤、散剤、顆粒、糖衣錠、カプセル、懸濁液、液剤、乳剤、アンプル、注射剤等とすることもできる。
また、本新規エラグ酸誘導体のみを単独でキサンチンオキシダーゼ阻害剤、あるいは高尿酸血症の予防又は治療剤の有効成分とすることもできるが、その他キサンチンオキシダーゼ阻害作用を有する食品、あるいは抗高尿酸血症剤として知られているアロプリノールやアロキサンチン、尿酸利尿剤として知られるプロベネシド、ベンズブロマロンなどを併用すれば一層効果を高めることができる。
【００１２】
本新規エラグ酸誘導体の投与量は、投与方法と症状の程度、患者の年齢、体重等により異なるが、通常、成人一日あたりの有効成分として０．０１〜２０ｇ、好ましくは０．５〜１０ｇの範囲で選ばれる。また、本新規エラグ酸誘導体を、他の医薬品等と適宜混合して使用することも可能である。本新規エラグ酸誘導体を機能性食品として用いる場合、そのままで、又は他の食品に添加して使用することができる。本新規エラグ酸誘導体を他の食品に添加する場合、食品中に混合する方法、食品表面に塗布する方法等が例示される。その場合は、食品１ｋｇ当たり０．０１ｇ以上、好ましくは、０．５〜１０ｇ程度添加すればよい。
適用できる食品としては、醤油、味噌、つゆ等の調味料、カマボコ、チクワ等の水産練り製品、ハム、ソーセージ等の畜肉加工品、日本酒、洋酒、果実酒等の酒類、清涼飲料、果実飲料等の飲料類、ケーキ、プリン、饅頭等の菓子類が例示される。さらに、本発明物質を、果実、野菜類、缶詰類、惣菜食品等に添加して用いることも可能である。
【実施例１】
【００１３】
（ザクロの抽出及び精製）
図1に示す工程でザクロの抽出及び精製を行い、各分画について後述する測定方法によってキサンチンオキシダーゼ阻害活性を測定した。
カリフォルニア産ザクロ果実全体を強制的に十分乾燥させ、これを粉砕してよく混合した。このサンプル８ｇに４００ｍｌの８０％エタノールを加え、常温で一晩攪拌、抽出した。次に、得られた抽出液に終濃度１Ｍになるように塩酸を加え７０℃で一晩攪拌し、酸加水分解を行い、得られた抽出液をエバポレーターで濃縮、乾燥させ、ザクロ酸加水分解物を得た。
【００１４】
ザクロにはエラジタンニンが豊富に含まれており、これらの成分は酸加水分解することによりエラグ酸を生成することが知られている。また、このエラグ酸には強いキサンチンオキシダーゼ阻害活性があることがすでに知られている。そこで、このザクロ酸加水分解物中のエラグ酸含量を測定し、後述する測定方法でキサンチンオキシダーゼ阻害活性を調べた。結果を図２に示す。このザクロ酸加水分解物は約７０％前後のエラグ酸しか含有していなかったが、図２に示すように純品（含量１００％）のエラグ酸と比較しても優れたキサンチンオキシダーゼ阻害活性を有していることが判明した。この効果は、ザクロ抽出物に含まれるエラグ酸以外の成分も寄与することによるものである。
【００１５】
次にエラグ酸以外の関与成分を同定するため高速液体クロマトグラフィーを用い、ザクロ酸加水分解物を分画し、各分画物についてキサンチンオキシダーゼ阻害活性を測定することとした。
カラムは資生堂社製ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ１２０  ５ｍｍ  ４．６ｍｍ×１５０ｍｍを使用し、１００％Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ含有）から１時間後に５０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ含有）のグラジエントモード、室温条件下、流速１ｍｌ／ｍｉｎで流した。溶出した成分は紫外部吸収２５０ｎｍでモニタリングした。ピーク又は時間で溶出液を、フラクションコレクターを用いて、それぞれ分画し、濃縮後、凍結乾燥により乾燥物を得た。図３には高速液体クロマトグラフィーで分画した際の紫外吸収２５０ｎｍでの溶出パターンを、また、図４に、得られたフラクションのキサンチンオキシダーゼ阻害活性を示した。ピークＮＯ．１を含むフラクション３、及びピークＮＯ．２を含むフラクション４に強いキサンチンオキシダーゼ阻害活性が測定された。図４のエラグ酸、ザクロ酸加水分解物の濃度は０．２μｇ／ｍｌでキサンチンオキシダーゼ阻害活性を測定した。
【実施例２】
【００１６】
（構造解析）
ピークＮＯ．１及びＮＯ．２の物性を以下に示す。
ピークＮＯ．１
性状；黄色粉末
融点（℃）；＞３６０℃（分解）
分子量及び分子式；３０２．２０、Ｃ１４Ｈ６Ｏ８
マススペクトル；ｍ／ｚ ３０１（Ｍ−Ｈ）
ＡＰＣＩ  Ｎｅｇａｔｉｖｅモード、ＪＥＯＬ  Ｂｕ−３０ （日本電子社製）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル；ＤＭＳＯ―ｄ６中、５００ＭＨｚ、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ  ５００  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（Ｂｒｕｋｅｒ社製）δ（ｐｐｍ） ７．４５、
１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル ； ＤＭＳＯ ―ｄ６、１２５ＭＨｚ、δ（ｐｐｍ）１０７．３、１１０．１、１１２．２、１３６．３、１３９．７、１４８．１、１５９．２
ＵＶスペクトル；ＤＭＳＯ溶液中、２５１、３６７ｎｍに吸収
ピークＮＯ．２
性状；褐色粉末
分子量及び分子式；４５４．３０、Ｃ２１Ｈ１０Ｏ１２
マススペクトル；ｍ／ｚ ４５３、３０１（Ｍ−Ｈ）
ＡＰＣＩ  Ｎｅｇａｔｉｖｅモード、ＪＥＯＬ  Ｂｕ−３０（日本電子社製）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル；ＤＭＳＯ―ｄ６中、５００ＭＨｚ、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ  ５００  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（Ｂｒｕｋｅｒ社製）δ（ｐｐｍ）  ７．０９、７．１２、７．７３
１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル；ＤＭＳＯ―ｄ６、１２５ＭＨｚ、δ（ｐｐｍ）１０７．７、１０９．６、１０９．７、１１７．０、１１７．３、１１７．８、１１９．７、１３６．９、１３９．５、１３９．９、１４０．６、１４３．５、１４５．９、１４６．１、１５８．３、１６４．１
ＵＶスペクトル；ＤＭＳＯ溶液中、２４７、３５５ｎｍに吸収
【００１７】
上記機器分析の結果より、ピークＮＯ．１は従来キサンチンオキシダーゼ活性阻害活性を有するといわれているエラグ酸と同一であることがわかった。そこで、ピークＮＯ．１のエラグ酸以外で、特にキサンチンオキシダーゼ活性阻害活性が強かったピークＮＯ．２に分画された成分ついてＮＭＲ及びマススペクトルを用いて機器分析したところ、化１記載の新規エラグ酸誘導体（エラグ酸−４−没食子酸エステル）であると同定できた。
【実施例３】
【００１８】
（キサンチンオキシダーゼ阻害活性の試験方法）
キサンチンオキシダーゼ阻害活性の試験方法は、ＣＨＥＭ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ． ３８，  １２２４−１２２９  （１９９０）に従って測定した。すなわち、試験管に７２０μｌの０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）、３５２μｌの蒸留水、４８μｌのジメチルスルホキシドに溶解した試料溶液に加え混合後、８０μｌの０．１Ｍリン酸緩衝液に溶解したキサンチンオキシダーゼ（Ｒｏｃｈｅ社製、０．０４ｕｎｉｔ／ｍｌ）を加えて、３７℃で１０分間プレインキュベーションした。次に、１２００μｌの０．１ｍＭキサンチン(和光純薬社製)水溶液を基質として加えて３７℃で３０分間反応させた。２００μｌの１Ｎ  ＨＣｌを加えることで反応を停止させ、生成した尿酸をＨＰＬＣにて測定した。
ＨＰＬＣによる尿酸測定は、以下のように行った。カラムはＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８ ＵＧ１２０  ５ｍｍ×４．６ｍｍ×１５０ｍｍ （資生堂社製）を用い、溶離液５０ｍＭ  ＮＨ４Ｈ２ＰＯ４を流速１．０ｍｌ／ｍｉｎで通液し、尿酸を２８０ｎｍで検出した。
キサンチンオキシダーゼの阻害活性は、コントロールとしてサンプルの変わりにＤＭＳＯを添加した場合の尿酸量を１００％として、サンプル添加による尿酸量の減少量により計算した。
対照として、市販のエラグ酸（和光純薬社製）、キサンチンオキシダーゼ阻害剤であるアロプリノール(ＲＯＣＨＥ社製)を使用した。
【実施例４】
【００１９】
（キサンチンオキシダーゼ阻害活性の測定）
本新規エラグ酸誘導体のキサンチンオキシダーゼに対するＩＣ５０を測定したところ、純品のエラグ酸よりも約６倍キサンチンオキシダーゼ阻害活性が強いことが判明した（表１）。表１では、エラグ酸純品、ピークＮＯ．２の精製品である本新規エラグ酸誘導体（エラグ酸−４−没食子酸エステル）及びアロプリノール（ａｌｌｏｐｕｒｉｎｏｌ）のキサンチンオキシダーゼに対するＩＣ５０を示した。ＩＣ５０とはキサンチンオキシダーゼの活性を５０％とするために必要な濃度（μＭ）を表す。
【００２０】
【表１】
0004840845.tif 000002
【００２１】
実施例１で使用した、本新規エラグ酸誘導体は、以下のようにして、飲食品、医薬品又は化粧品に添加し、これらにキサンチンオキシダーゼ阻害作用、或いは高尿酸血症の予防又は治療作用を付与することができる。
【実施例５】
【００２２】
（錠剤タイプの内服剤又は機能性食品）
本新規エラグ酸誘導体５０ｍｇ、乳糖８０ｍｇ、結晶セルロース６０ｍｇ、ショ脂肪酸エステル１０ｍｇ、以上を１錠分として常法により錠剤化する。この錠剤は、内服用の医薬品又は機能性食品として使用できる。
【実施例６】
【００２３】
（乳化液剤タイプ内服剤又は機能性食品）
本新規エラグ酸誘導体５０ｍｇ、中鎖飽和脂肪酸トリグリセリド７０ｍｇ、ビタミンＥ１ｍｇ、オレンジ油２０ｍｇ、デカグリセリンモノステアレート３０ｍｇ、グリセリン７５０ｍｇ、ブドウ糖１０ｇ、クエン酸１ｇ、アスコルビン酸５００ｍｇ、以上を水に加えて全量を１００ｍｌとし、常法により分散乳化処理して、乳化液剤とする。この液剤は、内服用の医薬品又は機能性食品として使用できる。
【実施例７】
【００２４】
（散剤及び顆粒剤タイプの内服剤又は機能性食品）
本新規エラグ酸誘導体５０ｍｇ、トウモロコシデンプン１．１ｇ、乳糖０．８ｇ、以上を一包分とする散剤又は顆粒剤を常法に従い調製する。この散剤又は顆粒剤は、内服剤又は機能性食品として使用できる。
【実施例８】
【００２５】
（注射剤）
本新規エラグ酸誘導体５０ｍｇ、界面活性剤８％、生理食塩水９０％、以上を重量比で含む混合液を加熱滅菌して注射剤とする。
【実施例９】
【００２６】
（キャンディータイプ健康志向食品）
本新規エラグ酸誘導体５０ｍｇ、砂糖４３ｇ、水飴４２ｇ、水７ｇ、果汁３ｇ、増粘剤４ｇ、アスコルビン酸１ｇ、香料０．１ｇ、ビタミンＥ０．１ｇを常法に従い、５ｇ／個のキャンディーとする。
【実施例１０】
【００２７】
（飲料タイプ健康志向食品）
本新規エラグ酸誘導体５０ｍｇ、オレンジジュース（果汁１００％）９９９．９５ｇをミキサーにて混合して均一な飲料とする。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】ザクロ抽出物の製造、分画法の工程例を示した図である。
【図２】ザクロ酸加水分解物のキサンチンオキシダーゼ阻害活性と純品(含量１００％)のエラグ酸のキサンチンオキシダーゼ阻害活性を比較した図である。
【図３】高速液体クロマトグラフィ-による紫外部吸収２５０ｎｍでの溶出パターンを示したグラフである
【図４】純品のエラグ酸、ザクロ酸加水分解物、分画したそれぞれのフラクションのキサンチンオキシダーゼ阻害活性を示したグラフである。
【図１】
0004840845.tif 000004
【図２】
0004840845.tif 000005
【図３】
0004840845.tif 000006
【図４】
0004840845.tif 000007