(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−アセチルグルコサミンアセテート誘導体とチロシン誘導体とを０．１〜１モル／ｌの範囲の反応濃度で反応させ、下記式［Ｉ］
【化１】
0004781597.tif 000003
（式中Ｘはアミノ基の保護基またはＨを表す。Ｙはカルボキシル基の保護基またはＨを表す。Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は水酸基の保護基またはＨを表す。）で表されるＮ−アセチルグルコサミニルチロシン誘導体を製造する方法。
【請求項２】
Ｘがベンジルオキシカルボニル基、Ｙ及びＲ1、Ｒ2、Ｒ3がベンジル基で表されることを特徴とする請求項１記載のＮ−アセチルグルコサミニルチロシン誘導体の製造方法。
【請求項３】
Ｘ、Ｙ及びＲ1、Ｒ2、Ｒ3がＨで表されることを特徴とする請求項１記載のＮ−アセチルグルコサミニルチロシン誘導体の製造方法。
【請求項４】
Ｘが９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基、Ｙ及びＲ1、Ｒ2、Ｒ3がＨで表されることを特徴とする請求項１記載のＮ−アセチルグルコサミニルチロシン誘導体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は糖アミノ酸に関する。具体的にはＮ−アセチルグルコサミンがチロシンの側鎖水酸基にα−Ｏ−グリコシド結合したＮ−アセチルグルコサミニルチロシン誘導体に関する。糖ペプチドは医薬品や試薬などとして注目されている。糖ペプチドの合成には、原料となる糖アミノ酸が必要であり、今日では一般的な糖アミノ酸の合成技術が確立されてきている。
【０００２】
【従来の技術】
医薬品や試薬などとして注目されている糖ペプチドの原料となる糖アミノ酸は、目的とする医薬品等により、特定の糖アミノ酸が必要である。その中で、重要な糖ペプチドの原料となる糖アミノ酸の一つ、即ちＮ−アセチルグルコサミンがチロシンの側鎖水酸基にα−Ｏ−グリコシド結合したＮ−アセチルグルコサミニルチロシン誘導体が多くの産業界から求められている。
【０００３】
しかしながら、Ｎ−アセチルグルコサミンを糖供与体として用いるグリコシル化反応においてはβ−グリコシドの生成が優先されるためα−グリコシド結合を形成させるのは非常に困難である。そのため、Ｎ−アセチルグルコサミンがチロシンの側鎖水酸基にα−Ｏ−グリコシド結合したＮ−アセチルグルコサミニルチロシン誘導体は、今なお製造例がなく、産業界の要求に応じ得ていないのである。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、糖ペプチドの合成原料となるＮ−アセチルグルコサミンがチロシンの側鎖水酸基にα−Ｏ−グリコシド結合したＮ−アセチルグルコサミニルチロシン誘導体を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らはグリコシル化反応の例を参考に鋭意検討し、本発明に到達した。すなわち、本発明は、一般式［Ｉ］
【化２】
0004781597.tif 000002
（式中Ｘはアミノ基の保護基またはＨを表す。Ｙはカルボキシル基の保護基またはＨを表す。Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3は水酸基の保護基または単糖または糖鎖、またはＨを表す。）で表されるＮ−アセチルグルコサミニルチロシン誘導体である。
【０００６】
すなわち、種々検討の結果、１位がアセチルで保護されたＮ−アセチルグルコサミンアセテート誘導体と、チロシン誘導体との反応により、Ｎ−アセチルグルコサミニルチロシン誘導体を製造することに成功したのである。反応を行うにあたっては、特開平１１−１１６５８７に記載された、1位がアセチル基で保護された糖誘導体を活性化剤の存在下、三フッ化ホウ素エーテル錯体共存下で糖受容体と反応させる方法を参考にした。しかし、この特許には本発明の特徴となる反応基質の濃度についての記載がない。発明者は、反応の基質濃度を従来の濃度より高濃度で行うことにより、高収率で目的物が得られることを見出した。本発明のＮ−アセチルグルコサミニルチロシンは、Ｎ−アセチルグルコサミンの還元末端がチロシンの側鎖水酸基にα−Ｏ−グリコシド結合したことを特徴とするＮ−アセチルグルコサミニルチロシンである。本発明により、本発明のＮ−アセチルグルコサミニルチロシンを、これを求めていた医薬等の産業界に供することが可能となった。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
一般式[I]において、アミノ基の保護基としては何ら制限はないが、好ましくはベンジルオキシカルボニル基、９−フルオレニルオキシカルボニル基、第３ブチルオキシカルボニル基である。
カルボキシル基の保護基も何ら制限はないが、例えばメチル基、ベンジル基、第３ブチル基、フェナシル基である。
Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、それぞれ独立して水酸基の保護基、単糖、糖鎖、またはＨである。水酸基の保護基は何ら制限はないが、例えばベンジル基、アセチル基、ベンゾイル基等を挙げることができる。また単糖および糖鎖も何ら制限はない。ピラノースでもフラノースでも、これらに含まれる水酸機基が置換されていてもかまわない。例えば、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、リボース、ラクトース、マルトース等を挙げることができる。
【０００８】
次に本発明化合物の製造法を詳細に説明する。
まず、原料となる糖供与体は１位がアセチルで保護されたＮ−アセチルグルコサミンアセテート誘導体である。またＮ−アセチルグルコサミンの１位以外の水酸基の保護基は周知の保護基を使用することができる。例えば、アセチル基やベンゾイル基等のアシル型保護基や、アリル基やベンジル基等のエーテル型保護基、イソプロピリデン基やベンジリデン基等のアセタール型保護基を挙げることができる。
【０００９】
一方の原料となるチロシン誘導体としては周知の誘導体を使用できる。具体的には、αアミノ基の保護基として周知の保護基を使用できる。例えばベンジルオキシカルボニル基、９−フルオレニルオキシカルボニル基、第３ブチルオキシカルボニル基等を挙げることができる。
【００１０】
また、カルボキシル基の保護基としては周知の保護基を使用できる。例えばメチルエステル、ベンジルエステル、第３ブチルエステル、フェナシルエステル等を挙げることができる。
【００１１】
反応溶媒は、アルコールを除く周知の有機溶媒を使用することができる。例えばベンゼン、トルエン、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、酢酸エチル、エーテル、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル等を挙げることができる。これらの内、原料の溶解性を考慮するとジクロロメタンが好ましい。
【００１２】
反応温度には特に制限がない。通常−７８℃から溶媒の沸点までで、好ましくは、０℃から室温の範囲である。
【００１３】
活性化剤は周知のパーフルオロアルキルスルホン酸希土類塩を使用することができる。具体的にはトリフルオロメタンスルホン酸イッテリビウム（III）、トリフルオロメタンスルホン酸スカンジウム（III）、トリフルオロメタンスルホン酸イットリウム（III）、トリフルオロメタンスルホン酸ランタン（III）、等を挙げることができる。特に目的物のα−グリコシド選択性を考慮すると、トリフルオロメタンスルホン酸イッテリビウム（III）が好ましい。
【００１４】
パーフルオロアルキルスルホン酸希土類塩の使用量についても特に制限はない。通常、糖受容体に対して５〜３００モル％用いることができるが、好ましくは３０〜１５０モル％で使用する。
【００１５】
三フッ化ホウ素エーテル錯体の使用量についても特に制限はない。通常、糖受容体に対して０．５〜３００モル％用いることができるが好ましくは１〜１００モル％で使用する。
【００１６】
反応濃度は、0.1モル／ｌ〜1モル／ｌの範囲である。
【００１７】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はその要旨を超えない限り、以下の実施例に何等制限を受けるものではない。
【００１８】
【実施例１】
アルゴン雰囲気下、トリフルオロメタンスルホン酸イッテリビウム（ＩＩＩ）２．４６ｇ（３．９６ｍｍｏｌ）、２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノシル  アセテート２．５４ｇ（４．７６ｍｍｏｌ）とベンジルオキシカルボニル（Ｚ）−Ｌ−チロシン  ベンジルエステル１．６１ｇ（３．９６ｍｍｏｌ）を２０ｍｌのジクロロメタンに溶解する。これに１．０Ｍ三フッ化ホウ素エーテル錯体のジクロロメタン溶液を０．１２ｍｌ（０．１２ｍｍｏｌ）加え、１９時間室温で撹拌した後に、５％炭酸水素ナトリウム水溶液２０ｍｌとジクロロメタンを１００ｍｌを加えて反応を停止する。反応混合物をジクロロメタンで抽出し、有機層を水、飽和の塩化ナトリウム水溶液で洗浄した後に、無水硫酸ナトリウムで乾燥する。無機塩を濾過した後に、有機溶媒を減圧下留去し、濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：ジクロロメタン／酢酸エチル＝１９：１→４：１）で精製を行い、目的の、請求項２記載のＮ−アセチルグルコサミニルチロシン誘導体であるＮα−ベンジルオキシカルボニル−Ｏ−（２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−チロシン  ベンジルエステルが２．０７ｇ、収率６０％で得られた。
1Ｈ  ＮＭＲ  δ（ＣＤＣｌ3）＝５．４８（Ｈ−１）。
【００１９】
【実施例２】
Ｎα−ベンジルオキシカルボニル−Ｏ−（２−アセトアミド−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−チロシンベンジルエステル  ４４０ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２５ｍｌ）とエタノール（４０ｍｌ）の混合溶媒に溶解させる。これに酢酸０．０３２ｍｌ（０．５５ｍｍｏｌ）とパラジウムカーボン４５０ｍｇを加え、この反応混合物に１８時間室温で水素ガスを通した。パラジウムカーボンをセライトにより濾過したのち、濾液を減圧下留去し、目的の、請求項３記載のＯ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−チロシンが１９１ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）と、定量的に得られた。Ｒｆ値（ジクロロメタン：メタノール：水＝５：５：１）＝０．２１。
【００２０】
【実施例３】
Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−チロシン１９１ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）を水１０ｍｌに溶解させる。これに炭酸水素ナトリウム１６８ｍｇ（２．０ｍｍｏｌ）、１，４−ジオキサン１０ｍｌ、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド（Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ）２８３ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）を加え、４時間室温で反応させる。反応溶液をエーテルで洗浄し、得られた水層にクエン酸を加えて酸性にした。ダイヤイオンＨＰ−２０樹脂を充填したカラムに水層を展開させ固相抽出を行った。樹脂を水で洗浄した後、メタノールで溶出させ目的とする、請求項４記載のＮα−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｌ−チロシンが２７４ｍｇ（０．４５  ｍｍｏｌ）、収率９０％で得られた。
1Ｈ  ＮＭＲ  δ（Ｄ2Ｏ）＝４．７９（Ｈ−１）。
【００２１】
【発明の効果】
本発明化合物であるＮ−アセチルグルコサミニルチロシン誘導体は糖ペプチドの合成原料として、その商業的、工業的価値は大である。