(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−(４−{[２,２,２−トリフルオロエチル)アミノ]メチル}フェニル)チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(Ｎ−エチル−Ｎ−(２−メトキシエチル)アミノ)メチル]フェニル}−チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[ジメチルアミノメチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(２−メトキシエチル)アミノ)メチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)アミノ]メチル}フェニル)チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{メチルアミノメチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{シクロプロピルアミノメチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([(２Ｒ)−２−ヒドロキシプロピル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([(２Ｓ)−２−ヒドロキシプロピル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(４−フルオロベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(１−ナフチルメチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([１−(４−クロロベンジル)−２−ヒドロキシエチル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(ピリジン−３−イルメチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[({２−ヒドロキシ−１−メチル}エチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(３−メトキシベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−フルオロベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(３−フルオロベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([３−(トリフルオロメチル)ベンジル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(４−メトキシベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−フェニルエチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−ヒドロキシエチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(３−メトキシベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{({Ｎ−[３−メチルイソオキサゾール−５−イル]メチル}メチルアミノ)メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{(Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([Ｎ−(２−シアノエチル)−Ｎ−メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)−Ｎ−メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([Ｎ−ベンジル−Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；および
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{(ビス−[２−ヒドロキシエチル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
から成る群から選択される化合物または医薬的に許容し得るその塩。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物または医薬的に許容し得るその塩を、医薬的に許容し得るアジュバント、希釈剤または担体とともに含有してなる医薬組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物または医薬的に許容し得るその塩を、医薬的に許容し得るアジュバント、希釈剤または担体とともに含有してなる噴射吸入(inhalation)もしくは吸気吸入(insufflation)による投与に適合させた医薬組成物。
【請求項４】
請求項２記載の医薬組成物の製造法であって、請求項１に記載の化合物または医薬的に許容し得るその塩を、医薬的に許容し得るアジュバント、希釈剤または担体と混合することを含む方法。
【請求項５】
治療に使用する請求項１に記載の化合物または医薬的に許容し得るその塩。
【請求項６】
炎症性疾患の処置または予防に使用する医薬の製造における請求項１に記載の化合物または医薬的に許容し得るその塩の使用。
【請求項７】
該疾患が関節リウマチである請求項６記載の使用。
【請求項８】
該疾患が慢性閉塞性肺疾患である請求項６記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はチオフェンカルボキサミド誘導体、その製造法、製造に使用する中間体、それを含有してなる医薬組成物、およびその治療における使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＮＦ−κＢ(核因子κＢ)ファミリーは転写因子Ｒelファミリーのホモダイマーおよびヘテロダイマーから構成される。これら転写因子の重要な役割は、サイトカイン、ケモカイン、インターフェロン、ＭＨＣタンパク質、成長因子および細胞接着分子などの広範なスペクトルのプロ炎症性遺伝子の発現を誘発し、調和させることである(参照総説：Verma et. al., Genes Dev. 9:2723-35, 1995; Siebenlist et. al., Ann. Rev. Cell. Biol. 10:405-455, 1994; Bauerle and Henkel, Ann. Rev. Immunol., 12:141-179, 1994; Barnes and Karin, New Engl. J. Med., 336:1066-1071, 1997)。
【０００３】
最も共通に見出されるＲelファミリーダイマー複合体は、ｐ５０ＮＦκＢおよびｐ６５ＲelＡの複合体である(Baeuerle and Baltimore, Cell 53:211-217, 1988; Baeuerle and Baltimore, Genes Dev. 3:1689-1698, 1989)。休止条件下、ＮＦ−κＢダイマーは阻害性タンパク質のＩκＢファミリーのメンバーにより、細胞質中に保持される(Beg et. al., Genes Dev., 7:2064-2070, 1993; Gilmore and Morin, Trends Genet. 9:427-433, 1993; Haskil et. al., Cell 65:1281-1289, 1991)。しかし、様々なサイトカインまたは他の外来刺激による細胞の活性化により、ＩκＢタンパク質は２つの重要な意味のあるセリン残基上でリン酸化され(Traenckner et. al., EMBO J., 14:2876, 1995)、次いでユビキチン化とプロテオソーム仲介の分解を目標とする(Chen, Z.J. et. al., Genes and Dev. 9:1586-1597, 1995; Scherer, D.C. et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:11259-11263, 1996; Alkalay, I. et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:10599-10603, 1995)。放出されたＮＦ−κＢは、次いで、核に位置移動し、遺伝子の転写を活性化する(Beg et.al., Genes Dev., 6:1899-1913, 1992)。
【０００４】
広範な外部刺激がＮＦ−κＢを活性化し得ることは既知である(Baeuerle, P.A., and Baichwal, V.R., Adv. Immunol., 65:111-136, 1997)。大多数のＮＦ−κＢ活性化因子はＩκＢをリン酸化させるが、明らかなことは、多数の経路がこの主要な事象の原因となることである。レセプター仲介ＮＦ−κＢ活性化は、レセプターとアダプター／シグナル伝達分子(例えば、ＴＲＡＤＤ、ＲＩＰ、ＴＲＡＦ、ＭyＤ８８)および関連するキナーゼ(ＩＲＡＫ、ＮＩＫ)間の特定の相互作用に左右される(Song et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:9792-9796, 1997; Natoli et. al., JBC 272:26079-26082, 1997)。環境ストレス、例えば、ＵＶ光およびγ−放射線などは、別のあまり解明されていないメカニズムによりＮＦ−κＢを刺激すると思われる。
【０００５】
最新の文献はＮＦ−κＢの活性化について一部解明している。この研究では特異的なＩκＢ／ＮＦ−κＢ相互作用を調整する３種の重要な酵素：ＮＦ−κＢ誘発キナーゼ(ＮＩＫ)(Boldin et. al., Cell 85:803-815, 1996)、ＩκＢキナーゼ−１(ＩＫＫ−１)(Didonato et. al., Nature 388:548, 1997; Regnier at. al., Cell 90:373 1997)およびＩκＢキナーゼ−２(ＩＫＫ−２)(Woronicz et. al., Science 278:866, 1997; Zandi et. al., Cell 91:243, 1997)を同定した。
【０００６】
ＮＩＫは腫瘍壊死因子とインターロイキン−１が引金を引くＮＦ−κＢシグナル伝達カスケードの共通のメディエーターの代表と思われ、かつＩκＢリン酸化の強力な誘発物質である。しかし、ＮＩＫはＩκＢを直接リン酸化することができない。
【０００７】
ＩＫＫ−１およびＩＫＫ−２はＮＩＫの直ぐ下流に存在すると考えられ、３種ＩκＢサブタイプのすべてを直接リン酸化し得る。ＩＫＫ−１およびＩＫＫ−２はアミノ酸レベルで５２％同一であるが、同様の基質特異性を示すと思われる；しかし、酵素活性は異なると思われる；ＩＫＫ−２はＩＫＫ−１よりも数倍強力である。発現データは、変異誘発性と組合わせたとき、ＩＫＫ−１およびＩＫＫ−２がＣ−末端ロイシンジッパーモチーフを介して、ホモダイマーおよびヘテロダイマーを形成し得るが、ヘテロダイマー形態が好適であることを示唆する(Mercurio et. al., Mol. Cell Biol., 19:1526, 1999; Zandi et. al., Science; 281:1360, 1998; Lee et. al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:9319, 1998)。
【０００８】
ＮＩＫ、ＩＫＫ−１およびＩＫＫ−２はすべてセリン／スレオニンキナーゼである。最近のデータが示すところによると、チロシンキナーゼもまたＮＦ−κＢの活性化制御に役割を果たしている。多くのグループが、ＴＮＦ−α誘発ＮＦ−κＢの活性化は、タンパク質チロシンホスファターゼ(ＰＴＰ)およびチロシンキナーゼにより制御され得ることを示している(Amer et. al., JBC 273:29417-29423, 1998; Hu et. al., JBC 273:33561-33565, 1998; Kaekawa et. al., Biochem. J. 337:179-184, 1999; Singh et. al., JBC 271 31049-31054, 1996)。これら酵素の作用メカニズムは、ＩκＢのリン酸化状況の制御にあると思われる。例えば、ＰＴＰ１Ｂおよび未同定のチロシンキナーゼはＩκＢ−α上のリジン残基(Ｋ４２)のリン酸化を直接制御していると考えられ、それがＩＫＫによるリン酸化の標的として隣接するセリン残基の接近性に重要な影響を与える。
【０００９】
いくつかのグループは、ＩＫＫ−１とＩＫＫ−２が、ＩＫＡＰ(Cohen et. al., Nature 395:292-296, 1998; Rothwarf et. al., Nature 395:297-300, 1998)、ＭＥＫＫ−１、推定ＭＡＰキナーゼホスファターゼ(Lee et. al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:9319-9324, 1998)、ならびにＮＩＫおよびＩκＢなどのさらなるタンパク質と共同して“シグナロソーム”構造の一部を形成することを示している。データは現在出始めているところであり、そのデータは、ＩＫＫ−１とＩＫＫ−２の両方がＮＩＫと共同はするが、個別に活性化され、従って、ＮＦ−κＢを活性化するシグナルのスペクトルにとって重要な組込み点を表し得ることを示唆する。重要なことは、ＭＥＫＫ−１(推定シグナロソーム成分の１つおよびＵＶ光、ＬＰＳ誘発シグナル伝達分子および小ＧＴＰアーゼの標的)はＩＫＫ−２を活性化するが、ＩＫＫ−１については活性化しないことが判明していることである。同様に、ＩＫＫ−１のＮＩＫリン酸化はＩＫＫ−１活性を劇的に上昇させるが、ＩＫＫ−２に対する効果はほんのわずかである(参照総説：Mercurio, F., and Manning, A.M., Current Opinion in Cell Biology, 11:226-232, 1999)。
ＮＦ−κＢ活性化を阻害することは、炎症性疾患の処置における幅広い用途につながると思われる。
【００１０】
ＮＦ−κＢシグナル伝達は癌と転移の展開に重要な役割を果たすという証拠が集まりつつある。ｃ−Ｒel、ＮＦ−κＢ２またはＩκＢαの異常発現は多数の腫瘍型および腫瘍細胞株において記載されており、現在のデータは、ＩＫＫ−２経由の構成的ＮＦ−κＢシグナル伝達が広範囲の腫瘍細胞株にて起こることを示している。この活性は増殖因子シグナル伝達における自己分泌ループの確立、または癌遺伝子生成物、例えば、Ｒas、ＡＫＴ、Ｈer２(これらはＩＫＫ複合体の活性化に関与する)など様々な上流の欠陥につながっている。構成的ＮＦ−κＢ活性は一連の抗アポトーシス遺伝子、例えば、Ａ１／Ｂfi−１、ＩＥＸ−１、ＸＩＡＰなどの活性化を経て癌遺伝子に寄与し、細胞死経路の抑制、および細胞増殖を促進するサイクリンＤ１の転写上方制御に導くと信じられる。他のデータはこの経路もまた細胞接着と細胞表面プロテアーゼの制御に関与しているらしいことを示している。このことは転移の発展におけるＮＦ−κＢ活性に対しさらなる役割のある可能性を示唆している。発癌におけるＮＦ−κＢ活性の関与を確認する証拠は、ＩκＢαの修飾形態(スーパーリプレッサーＩκＢα)の発現におけるインビトロおよびインビボでの腫瘍細胞増殖阻害である。
【００１１】
多くの腫瘍型において観察される構成的ＮＦ−κＢシグナル伝達に加えて、ＮＦ−κＢはまた特定タイプの化学療法に応答して活性化されることが報告されている。化学療法処置と並行して、スーパーリプレッサー型ＩκＢαの発現を介してＮＦ−κＢ活性化を阻害すると、異種移植モデルにおいて化学療法の抗腫瘍効果の上昇することが示されている。従って、ＮＦ−κＢ活性は誘発可能な化学抵抗性にも関係している。
【００１２】
国際特許出願ＷＯ０１／５８８９０号公報は、ＩＫＫ−２インヒビターとして有用なある種のチオフェンカルボキサミド誘導体を開示している。ここで我々は望ましい薬理学的活性プロフィールを有するさらなる一群のチオフェンカルボキサミド誘導体、とりわけ有益な効力の上昇した誘導体を開示する。
【発明の開示】
【００１３】
本発明によると、式(Ｉ)：
【化１】
0004688785.tif 000002
[ただし、式中、
Ｒ１はＨまたはＣＨ３を表す；
Ｒ２は水素、ハロゲン、シアノ、Ｃ１〜２アルキル、トリフルオロメチルまたはＣ１〜２アルコキシを表す； 
Ｒ３およびＲ４は独立してＨまたはＣＨ３を表す；
または基ＣＲ３Ｒ４が一緒になってＣ３〜６シクロアルキル環を表す；
Ａは所望により１個または２個の窒素原子を含む６員の芳香環を表す；また、基−ＣＲ３Ｒ４−Ｘ−Ｒ５はチオフェン環に対し環Ａの４位に結合する；
ＸはＮＲ６を表す；
【００１４】
Ｒ５はＨ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニルまたはＣ３〜６シクロアルキルを表す；当該シクロアルキル基は所望によりＯ、Ｓ(Ｏ)ｎまたはＮＲ７から選択される１個のヘテロ原子を含む；当該アルキル基はさらに所望によりＣＮ、ＯＨ、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｆ、Ｃ５〜１０の単環式もしくは二環式芳香環系から独立して選択される１個以上の基によって置換され、当該芳香環系は所望によりＯ、ＳおよびＮから独立して選択される１個または２個のヘテロ原子を含み、またさらに所望によりハロゲン、Ｃ１〜２アルキル、Ｃ１〜２アルコキシまたはＣＦ３から独立して選択される１個以上の置換基によって置換されている；または当該アルキルはさらに所望によりＣ５〜６シクロアルキル環によって置換され、該シクロアルキル環は所望によりＯ、Ｓ(Ｏ)ｍまたはＮＲ８から選択されるヘテロ原子および／またはカルボニル基を含み、さらに所望によりＯＨによって置換されている；
【００１５】
Ｒ６はＨまたはＣ１〜６アルキルを表す；当該アルキルはさらに所望によりＣＮ、ＯＨ、Ｃ１〜４アルコキシまたは１個以上のフッ素原子によって置換されている；
ｎおよびｍは独立して整数０、１または２を表す；
Ｒ７およびＲ８は独立してＨまたはＣ１〜２アルキルを表す]
で示される化合物および医薬的に許容し得るその塩が提供される。
【００１６】
式(Ｉ)で示される一部の化合物は、立体異性体の形態で存在し得る。理解すべきことは、本発明が式(Ｉ)で示される化合物のすべての幾何異性体および光学異性体ならびにラセミ体を含むその混合物を包含することである。互変異性体とその混合物はまた本発明の一側面を形成する。
一態様において、式(Ｉ)におけるＲ１はＨを表す。
他の態様において、式(Ｉ)におけるＲ２はＨを表す。
他の態様において、Ａは所望により置換基を有するフェニルを表す。
他の態様において、式(Ｉ)におけるＲ３およびＲ４はそれぞれＨを表す。
【００１７】
さらに他の態様において、Ｒ５はＣ１〜４アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルを表す；当該シクロアルキル基は所望によりＯ、Ｓ(Ｏ)ｎまたはＮＲ７から選択されるヘテロ原子を含む；また、当該アルキル基はさらに所望によりＣＮ、ＯＨ、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｆ、Ｃ５〜１０の単環式および二環式芳香環系から独立して選択される１個、２個または３個の基によって置換され、該芳香環系は所望によりＯ、ＳおよびＮから独立して選択される１個または２個のヘテロ原子を含み、またさらに所望によりハロゲン、Ｃ１〜２アルキル、Ｃ１〜２アルコキシおよびＣＦ３から独立して選択される１個、２個または３個の置換基によって置換されている；または当該アルキルはさらに所望によりＣ５〜６シクロアルキル環によって置換され、該シクロアルキル環は所望によりＯ、Ｓ(Ｏ)ｍまたはＮＲ８から選択されるヘテロ原子および／またはカルボニル基を含み、さらに所望により１個のＯＨ基によって置換されている。
【００１８】
他の態様において、Ｒ５はＣ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルを表す；当該シクロアルキル基は所望によりＯ、Ｓ(Ｏ)ｎまたはＮＲ７から選択される１個のヘテロ原子を含む；また、当該アルキル基はさらに所望によりＣＮ、ＯＨ、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｆ、Ｃ５〜１０の単環式もしくは二環式芳香環系から独立して選択される１個、２個または３個の基によって置換され、該芳香環系は所望によりＯ、ＳおよびＮから独立して選択される１個または２個のヘテロ原子を含み、またさらに所望によりハロゲン、Ｃ１〜２アルキル、Ｃ１〜２アルコキシおよびＣＦ３から独立して選択される１個、２個または３個の置換基によって置換されている；または当該アルキルはさらに所望によりＣ５〜６シクロアルキル環によって置換され、該シクロアルキル環は所望によりＯ、Ｓ(Ｏ)ｍまたはＮＲ８から選択されるヘテロ原子および／またはカルボニル基を含み、さらに所望により１個のＯＨ基によって置換されている。
【００１９】
他の態様において、Ｒ６はＨまたはＣ１〜４アルキルを表す；当該アルキルは、所望により、ＣＮ、ＯＨ、Ｃ１〜４アルコキシによって、または１個、２個または３個のフッ素原子によって置換されている。
一態様において、式(Ｉ)におけるカルボキサミド基は、チオフェン環の３位に結合する。
他の態様において、式(Ｉ)におけるカルボキサミド基は、チオフェン環の２位に結合する。
【００２０】
一態様において、本発明は式(Ｉ)で示される一群の化合物に関する；ただし、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４はそれぞれＨを表す；カルボキサミド基はチオフェン環の３位に結合する；式(Ｉ)におけるカルボキサミド基はチオフェン環の２位に結合する；Ａは所望により置換基を有するフェニルを表す；また、Ｒ５およびＲ６は上記定義のとおりである。
【００２１】
他の態様において、本発明は式(Ｉ)で示される一群の化合物に関する；ただし、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４はそれぞれＨを表す；カルボキサミド基はチオフェン環の３位に結合する；式(Ｉ)におけるカルボキサミド基はチオフェン環の２位に結合する；Ａはフェニルを表す；Ｒ６はＨまたはＣ１〜４アルキルである；当該アルキルはさらに所望により、ＣＮ、ＯＨ、Ｃ１〜４アルコキシによって、または１個、２個または３個のフッ素原子によって置換されている；また、Ｒ５は上記定義のいずれかを有する。
【００２２】
他の態様において、本発明は式(Ｉ)で示される一群の化合物に関する；ただし、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４はそれぞれＨを表す；カルボキサミド基はチオフェン環の３位に結合する；式(Ｉ)におけるカルボキサミド基はチオフェン環の２位に結合する；Ａはフェニルを表す；Ｒ６はＨまたはＣ１〜４アルキルである；当該アルキルはさらに所望により、ＣＮ、ＯＨ、Ｃ１〜４アルコキシによって、または１個、２個または３個のフッ素原子によって置換されている；また、Ｒ５はＣ１〜６アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルを表す；当該シクロアルキル基は所望によりＯ、Ｓ(Ｏ)ｎまたはＮＲ７から選択される１個のヘテロ原子を含む；また、当該アルキル基はさらに所望によりＣＮ、ＯＨ、Ｃ１〜４アルコキシ、Ｆ、Ｃ５〜１０の単環式および二環式芳香環系から独立して選択される１個、２個または３個の基によって置換され、該芳香環系は所望によりＯ、ＳおよびＮから独立して選択される１個または２個のヘテロ原子を含み、またさらに所望によりハロゲン、Ｃ１〜２アルキル、Ｃ１〜２アルコキシおよびＣＦ３から独立して選択される１個、２個または３個の置換基によって置換されている；または当該アルキルはさらに所望によりＣ５〜６シクロアルキル環によって置換され、当該シクロアルキル環は、所望によりＯ、Ｓ(Ｏ)ｍまたはＮＲ８から選択されるヘテロ原子および／またはカルボニル基を含み、さらに所望により１個のＯＨ基によって置換されている。
【００２３】
式(Ｉ)で示される化合物および医薬的に許容し得るその塩は、それらが酵素ＩＫＫ−２のインヒビターであるという利点を有する。
本発明はさらに式(Ｉ)で示される化合物または医薬的に許容し得るその塩、エナンチオマーまたはラセミ体の製造法を提供する。
本発明によると、医薬として使用する式(Ｉ)で示される化合物または医薬的に許容し得るその塩もまた提供される。
【００２４】
本発明のもう一つの側面では、ＩＫＫ−２活性の阻害が有益である疾患または症状の処置または予防用の医薬の製造における式(Ｉ)で示される化合物または医薬的に許容し得るその塩の使用が提供される。
本発明のさらに特定の側面では、炎症性疾患の処置または予防用の医薬の製造における式(Ｉ)で示される化合物または医薬的に許容し得るその塩の使用が提供される。
【００２５】
本発明によると、ＩＫＫ−２活性の阻害が有益である疾患または症状を処置するか、またはそのリスクを低減する方法であって、当該疾患または症状に罹患しているかまたはそのリスクのある対象者に、式(Ｉ)で示される化合物または医薬的に許容し得るその塩の治療有効量を投与することを含む方法もまた提供される。
【００２６】
さらに詳しくは、炎症性疾患またはその症状を処置するか、またはそのリスクを低減する方法であって、当該疾患または症状に罹患しているかまたはそのリスクのある対象者に、式(Ｉ)で示される化合物または医薬的に許容し得るその塩の治療有効量を投与することを含む方法もまた提供される。
【００２７】
本発明の具体的な化合物は以下に例示する化合物である：
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−(４−{[２,２,２−トリフルオロエチル)アミノ]メチル}フェニル)チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(イソプロピルアミノ)メチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(ビス−(２−メトキシエチル)アミノ)メチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(Ｎ−エチル−Ｎ−(２−メトキシエチル)アミノ)メチル]フェニル}−チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[ジメチルアミノメチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(Ｎ−(２,２,２−トリフルオロエチル)−Ｎ−(２−メトキシエチル)アミノ)メチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(２−メトキシエチル)アミノ)メチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)アミノ]メチル}フェニル)チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{メチルアミノメチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{シクロプロピルアミノメチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
【００２８】
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([(２Ｒ)−２−ヒドロキシプロピル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([(２Ｓ)−２−ヒドロキシプロピル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(テトラヒドロフラン−２−イルメチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(４−フルオロベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(３−{２−オキソピロリジン−１−イル}プロピル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(１−ナフチルメチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([１−(４−クロロベンジル)−２−ヒドロキシエチル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{(シクロペンチルアミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(ピリジン−３−イルメチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−[ピリジン−２−イル]エチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
【００２９】
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[({２−ヒドロキシ−１,１−ジメチル}エチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[({１,２−ジフェニル}エチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[({２−メトキシ−１−メチル}エチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[({２−ヒドロキシ−１−メチル}エチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−メチルベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(３−メトキシベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−フルオロベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(３−フルオロベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(４−{フェニル}ブチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([３−(トリフルオロメチル)ベンジル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
【００３０】
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(５−シアノペンチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{({２−メチル}プロピルアミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(４−メトキシベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−フェニルエチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−ヒドロキシエチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[({２−メトキシ−２−メチル}プロピル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(４−フルオロベンジル)−Ｎ−メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−{ピリジン−２−イル}エチル)メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(ピリジン−２−イルメチル)メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
【００３１】
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−メトキシエチル)エチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(Ｎ−{２−メトキシエチル})メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−ベンジル−Ｎ−(２−シアノエチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−シアノエチル)−Ｎ−メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−イソプロピル−Ｎ−(２−メトキシエチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(３−メトキシベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−メトキシエチル)−Ｎ−(ピリジン−２−イル)メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(３,５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)メチル]メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{({Ｎ−[３−メチルイソオキサゾール−５−イル]メチル}メチルアミノ)メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
【００３２】
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−メトキシエチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(１,１−ジオキソテトラヒドロ−３−チエニル)メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−ベンジル−Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(テトラヒドロフラン−２−イルメチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−メトキシ−２−メチル)プロピルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−メトキシエチル)メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{(Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([Ｎ−(２−シアノエチル)−Ｎ−メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(Ｎ−ベンジル−Ｎ−シアノエチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)−Ｎ−メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
【００３３】
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([Ｎ−ベンジル−Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド；
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{(ビス−[２−ヒドロキシエチル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド;
および医薬的に許容し得るその塩。
【００３４】
特に断りのない限り、用語“Ｃ１〜６アルキル”とは本明細書では炭素原子１ないし６個の直鎖または分枝のアルキル基をいう。かかる基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチルおよびｔ−ブチルを含む。用語“Ｃ１〜２アルキル”も同様に解釈するものとする。
【００３５】
特に断りのない限り、用語“Ｃ２〜６アルケニル”とは本明細書では炭素原子２ないし６個の直鎖または分枝の、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有するアルキル基をいう。かかる基の例はエテニルおよびプロペニルを含む。
特に断りのない限り、用語“Ｃ３〜６シクロアルキル”とは本明細書では炭素原子３ないし６個の飽和炭素環状環をいう。かかる基の例は、シクロプロピル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを含む。
【００３６】
特に断りのない限り、用語“Ｃ１〜４アルコキシ”とは本明細書では炭素原子１ないし４個の直鎖または分枝のアルコキシ基をいう。かかる基の例は、メトキシ、エトキシおよびイソプロポキシを含む。用語“Ｃ１〜２アルコキシ”も同様に解釈するものとする。
特に断りのない限り、用語“ハロゲン”は本明細書では、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードをいう。
所望により１個または２個の窒素原子を含む６員芳香環の例は、フェニル、ピリジン、ピリダジン、ピリミジンおよびピラジンを含む。
【００３７】
所望によりＯ、Ｓ(Ｏ)ｎまたはＮＲ７から選択される１個のヘテロ原子を含むＣ３〜６シクロアルキル環の例は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチエニル−１,１−ジオキシド、ピロリジニル、ピロリドニルおよびピペリジニルを含む。
【００３８】
所望によりＯ、ＳおよびＮから独立して選択される１個もしくは２個のヘテロ原子を含むＣ５〜１０単環式または二環式芳香環系の例は、フェニル、ピリジル、ナフチル、インドリル、イソオキサゾリルおよびピラゾリルを含む。
所望によりＯ、Ｓ(Ｏ)ｍまたはＮＲ８から選択されるヘテロ原子および／またはカルボニル基を含むＣ５〜６シクロアルキル環の例は、シクロヘキシル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチエニル−１,１−ジオキシド、ピロリジニル、ピロリドニルおよびピペリジニルを含む。
【００３９】
本発明によると、式(Ｉ)で示される化合物またはその医薬的に許容し得る塩、エナンチオマーまたはラセミ体の製造法であって、
(ａ) 式(II)：
【化２】
0004688785.tif 000003
(式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＸは式(Ｉ)に定義のとおりである)
で示される化合物とイソシアナートとを反応させること；または
【００４０】
(ｂ)式(III)：
【化３】
0004688785.tif 000004
(式中、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＸは式(Ｉ)に定義のとおりである)
で示される化合物と式(IV)：
【化４】
0004688785.tif 000005
(式中、Ｒ１は式(Ｉ)に定義のとおりであり、ＬＧは脱離基を表す)
で示される化合物とを反応させること；または
【００４１】
(ｃ) 式(Ｖ)：
【化５】
0004688785.tif 000006
(式中、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＸは式(Ｉ)に定義のとおりであり、ＬＧは脱離基を表す)
で示される化合物と式(VI)：
【化６】
0004688785.tif 000007
(式中、Ｒ１は式(Ｉ)に定義のとおりである)
で示される化合物とを反応させること；または
【００４２】
(ｄ) 式(VII)：
【化７】
0004688785.tif 000008
(式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は式(Ｉ)に定義のとおりであり、ＬＧは脱離基を表す)
で示される化合物と式Ｒ５Ｒ６ＮＨ(式中、Ｒ５およびＲ６は式(Ｉ)に定義のとおりである)で示されるアミンとを反応させること；または
【００４３】
(ｅ) 式(VIII)：
【化８】
0004688785.tif 000009
(式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は式(Ｉ)に定義のとおりである)
で示される化合物と式Ｒ５Ｒ６ＮＨ(式中、Ｒ５およびＲ６は式(Ｉ)に定義のとおりである)で示されるアミンとを還元的アミノ化条件下に反応させること；または
【００４４】
(ｆ) 式(IX)：
【化９】
0004688785.tif 000010
(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＡは式(Ｉ)に定義のとおりである)
で示される化合物とアルデヒドまたはケトンとを、還元的アミノ化条件下に反応させること；そして
必要な場合には、
得られる式(Ｉ)で示される化合物またはその別の塩を医薬的に許容し得る塩に変換するか；または得られる式(Ｉ)で示される化合物を式(Ｉ)で示されるさらなる化合物に変換し；
要すれば、
得られる式(Ｉ)で示される化合物をその光学異性体に変換することを含む方法もまた提供される。
【００４５】
方法(ａ)において、適切なイソシアナート試薬は、イソシアン酸トリメチルシリル、イソシアン酸トリクロロアセチルおよびイソシアン酸ナトリウムを含む。イソシアン酸トリメチルシリルとの反応は、ジクロロメタン／ジメチルホルムアミドなどの溶媒中、適当な高温、例えば、反応混合物の還流温度で実施し得る。イソシアン酸ナトリウムとの反応は、水性酢酸などの適当な溶媒系中、環境温度で実施し得る。イソシアン酸トリクロロアセチルの反応は、アセトニトリルなどの適当な溶媒系中、環境温度で実施し、次いでその混合物をアンモニアで処理し、一般式(Ｉ)の化合物とすることができる。好適な態様において、イソシアナートはイソシアン酸トリクロロアセチルである。
【００４６】
方法(ｂ)および(ｃ)において、式(III)および(IV)で示される化合物または式(Ｖ)および(VI)で示される化合物は、パラジウムまたはニッケルなどの遷移金属錯体により提供される触媒の存在下に共に反応させる。式(III)および(VI)で示される化合物において、適切な条件下、“金属”はマグネシウム、亜鉛、銅、スズ、ケイ素、ジルコニウム、アルミニウムまたはホウ素などの金属または半金属でよい。適当な脱離基は、ヨード、ブロモ、クロロ、トリフレートまたはホスホネートを含む。
【００４７】
方法(ｄ)において、式(VII)で示される化合物は適切な反応条件下にアミンと反応させる。この反応は塩基の存在下または不存在下に行い得る。かかる塩基は無機塩基でも有機塩基でもよい。適当な脱離基はヨード、ブロモ、クロロ、スルホネートおよびトリフレートを含む。
【００４８】
方法(ｅ)において、式(VIII)で示されるカルボニル化合物は適切な還元的アミノ化反応条件下にアミンと反応させる。これら反応用の還元剤は、水素化シアノホウ素ナトリウムおよび水素化トリアセトキシホウ素ナトリウムである。溶媒はオルトギ酸トリメチルおよびメタノールを含む。本方法にはチタン(IV)塩も使用し得る。あるいは、式(VIII)で示される化合物をアミンと反応させて、対応するイミンを形成させ、次いでこれを還元して式(Ｉ)の化合物とすることもできる。このルートの場合、さらなる還元剤、例えば、水素化ホウ素ナトリウムを使用し得る。
方法(ｆ)の条件は、方法(ｅ)についての上記の条件と同様である。
【００４９】
本発明方法においては、当業者も認識するように、出発原料試薬または中間体化合物における一部の官能基、例えば、ヒドロキシルまたはアミノ基などは保護基により保護する必要があり得る。従って、式(Ｉ)で示される化合物の調製では、適切な段階で１つ以上の保護基の付加および除去を含んでもよい。
官能基の保護および脱保護については文献(‘Protective Groups in Organic Chemistry’, edited by J. W. F. McOmie, Plenum Press (1973), および ‘Protective Groups in Organic Synthesis’, 3rd edition, T. W. Greene & P. G. M. Wuts, WileyInterscience (1999))に記載がある。
【００５０】
本発明は塩の形態、とりわけ酸付加塩の形態の式(Ｉ)で示される化合物を含む。適当な塩は有機酸および無機酸とで形成される塩である。かかる酸付加塩は通常医薬的に許容し得るものであるが、医薬的に許容し得ない酸の塩も当該化合物の調製と精製に有用であり得る。従って、好適な塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、メタンスルホン酸およびベンゼンスルホン酸により形成される塩を含む。
【００５１】
式(Ｉ)で示される化合物の塩は、遊離の塩基、またはその塩、エナンチオマーもしくはラセミ体を、１当量以上の適切な酸と反応させることにより形成し得る。反応は、該塩が不溶である溶媒もしくは媒体、または塩が可溶である溶媒(例えば、水、ジオキサン、エタノール、テトラヒドロフランもしくはジエチルエーテル)、またはその混合物中で実施し得る(これら溶媒は減圧下に、または凍結乾燥により除去し得る)。反応は複分解工程であっても、またはイオン交換樹脂上で実施してもよい。
【００５２】
式(II)で示される化合物は、文献(参照例： J. Heterocyclic Chem., 36, 333 (1999))記載の標準的化学手段により調製するか、または式(Ｘ)：
【化１０】
0004688785.tif 000011
(式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＸは式(Ｉ)に定義のとおりであり、ＬＧは脱離基を表す)
で示される化合物とアンモニアとの反応により調製し得る。適当な基ＬＧはハロゲンであり、とりわけクロロである。
【００５３】
式(Ｘ)においてＬＧがハロである場合の化合物は、対応する式(XI)：
【化１１】
0004688785.tif 000012
(式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＸは式(Ｉ)に定義のとおりである)
で示される化合物と、塩化チオニルなどのハロゲン化剤とから調製し得る。
【００５４】
式(III)、(IV)、(Ｖ)、(VI)、(VII)、(VIII)および(IX)で示される化合物は、市販品として入手し得るか、または本明細書に例示した標準的化学法を用いて調製し得る。
一部の新規中間体化合物は本発明のさらなる側面を形成する。
【００５５】
式(Ｉ)で示される化合物は、医薬、とりわけＩＫＫ−２酵素インヒビターとしての活性を有し、ＩＫＫ−２を阻害することが有益であるヒトおよび非ヒト動物の症状／疾患の処置(治療的または予防的)に使用し得る。かかる症状／疾患の例は、炎症性疾患または炎症性成分を伴う疾患である。具体的疾患は、炎症性関節炎症、例えば、関節リウマチ、骨関節症、脊椎炎、ライター症候群、乾癬性関節炎、狼瘡および骨吸収疾患；多発性硬化症、炎症性腸疾患、例えば、クローン病；喘息、慢性閉塞性肺疾患、気腫、鼻炎、重症筋無力症、グレーヴス病、異種移植拒絶反応、乾癬、皮膚炎、アレルギー性障害、免疫複合性疾患、悪液質、ＡＲＤＳ、毒素ショック、心不全、心筋梗塞、アテローム動脈硬化症、再灌流障害、ＡＩＤＳ、癌およびインスリン耐性を特徴とする障害、例えば、糖尿病、高血糖症、高インスリン血症、異脂肪血症、肥満、多のう胞性卵巣疾患、高血圧、心血管疾患および症候群Ｘを含む。
【００５６】
報告によると、発癌性および化学療法剤耐性の両方におけるＮＦ−κＢの役割は、小分子ＩＫＫ−２インヒビターなどのＩＫＫ−２インヒビターの使用によりこの経路を阻害することで、癌に対する新規な単一療法、および／または化学療法剤耐性腫瘍処置用の重要なアジュバント療法を提供することが可能となり、ＩＫＫ−２インヒビターと標準的療法または他の新規な薬剤との組合せ療法の結果としてアポトーシスの相乗的誘導が可能となることを示唆している。
【００５７】
我々は特に、喘息、関節リウマチ、乾癬、クローン病などの炎症性腸疾患、多発性硬化症、慢性閉塞性肺疾患、骨吸収疾患、骨関節症、糖尿病／血糖制御および癌から選択される疾患に興味がある。
従って、本発明は、治療用として、本明細書に定義するように式(Ｉ)で示される化合物または医薬的に許容し得るその塩を提供する。
【００５８】
さらなる側面において、本発明は、治療用医薬の製造において、本明細書に定義するように式(Ｉ)で示される化合物または医薬的に許容し得るその塩の使用を提供する。
なおさらなる側面において、本発明は、ＩＫＫ−２酵素活性の調節が有益である疾患または症状を処置するための医薬の製造において、本明細書に定義するように式(Ｉ)で示される化合物または医薬的に許容し得るその塩の使用を提供する。
本明細書の文面において、用語“治療”とは、特にそれに反する意味のない限り、“予防”の意味も含む。用語“治療的”および“治療的に”も同様に解釈すべきである。
【００５９】
予防は当該疾患または症状について病歴がある個体または罹患の危険性が増大していると考えられる個体の処置に特に適切であると期待される。特定の疾患または症状にかかる危険のある個体は、該疾患または症状の家族病歴を有するもの、または該疾患または症状に特にかかり易いと遺伝子試験またはスクリーニングにより同定されているものである。
【００６０】
本発明はなおさらにＩＫＫ−２仲介疾患の処置方法であって、本明細書に定義したように、式(Ｉ)で示される化合物または医薬的に許容し得るその塩の治療有効量を患者に投与することを含む方法を提供する。
また、本発明は炎症性疾患、とりわけ喘息、関節リウマチまたは多発性硬化症の処置方法であって、当該疾患の罹患患者またはその危険性のある患者において、本明細書に定義したように、式(Ｉ)で示される化合物または医薬的に許容し得るその塩の治療有効量を該患者に投与することを含む方法を提供する。
【００６１】
上記の治療に使用する場合の投与すべき用量は、勿論、採用する化合物、投与方式、所望の処置および指摘された障害により変わり得る。
式(Ｉ)で示される化合物および医薬的に許容し得るその塩はそれ自体で使用し得るが、一般には、式(Ｉ)の化合物／塩(有効成分)を医薬的に許容し得るアジュバント、希釈剤または担体と組み合わせた医薬組成物の形態で投与する。投与方式により、該医薬組成物は、好ましくは、０.０５〜９９％ｗ(重量パーセント)、より好ましくは０.０５〜８０％ｗ、なおより好ましくは０.１０〜７０％ｗ、そしてさらにより好ましくは０.１０〜５０％ｗの有効成分を含んでなる；重量パーセントはすべて総組成物にもとづく。
【００６２】
本発明は、医薬的に許容し得るアジュバント、希釈剤または担体と組み合わせた、本明細書に定義したように式(Ｉ)で示される化合物または医薬的に許容し得るその塩を含有してなる医薬組成物を提供する。
本発明はさらに本発明医薬組成物の製造法であって、本明細書に定義したように、式(Ｉ)で示される化合物または医薬的に許容し得るその塩を医薬的に許容し得るアジュバント、希釈剤または担体と混合することを含む方法を提供する。
【００６３】
該医薬組成物は、溶液、懸濁液、ヘプタフルオロアルカンエーロゾルおよび乾燥粉末製剤の形態で局所的に(例えば、肺および／または気道に、または皮膚に)；または全身的に、例えば、錠剤、カプセル剤、シロップ、粉末または顆粒の形態で経口投与により、または溶液または懸濁液の形態で非経腸投与により、または皮下投与によるかまたは座剤の形態で直腸投与によるかまたは経皮的に投与し得る。適切な医薬製剤の選択と調製の常套的手法については文献(例えば、“Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs”, M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988)に記載がある。
【００６４】
本発明の一態様において、該組成物は噴射吸入(inhalation)または吸気吸入(insufflation)による投与に適合させ得る。例えば、該組成物は、例えば、微細化粉末として、または主に水溶液または懸濁液から形成されるエーロゾルなどの液状エーロゾルとして噴射吸入に、または例えば微細化粉末として吸気吸入に適した形態で投与され得る。
【００６５】
噴射吸入または吸気吸入による送達は、薬物の全身吸収により容易に達成し得る濃度よりも、より高い濃度の薬物を所望の部位、すなわち、肺の上皮内膜に供給することで評価されよう。従って、より少量の用量を使用して、制御すべき特定細胞に局所的に薬物を送達することができる。これにより、薬物の全身性副作用が低減され、処置による有益な効果をより迅速に実現することができる。
【００６６】
かかる投与は圧縮ガスを用いて薬物を容器から放出させるが、例えば、エーロゾル製剤では、加圧下の噴射ガスが搬送する微細な液体もしくは固体粒子を含んでなる製剤を使用し得る。エーロゾルは、液状担体および噴射剤の混合物に溶解、懸濁または乳化した薬物を含む。常套の噴射剤としては、例えば、炭化水素もしくはその他の適当なガスまたはその混合物を使用し得る。常套の定用量エーロゾル呼吸作動型送達装置(ＭＤＩ)を採用し得る。あるいは、常套のネブライザーを用いて薬物投与することもできるが、この場合には、小滴として分散された薬物を含む実質的に均一なサイズの微細液体粒子が生成し、これが患者の気道に浸透する。
【００６７】
あるいは、滑沢剤、担体または噴射剤の存在下または不存在下に薬物を含有する粉末組成物を使用することもできる。例えば、該化合物とラクトースもしくはデンプンなどの適当な粉末基剤との粉末混合物は、吸入器を補助として投与し得る単位投与形態で提供し得る。
【００６８】
しかし、ある患者では肺で夥しい量の粘液を生じることがあり、かかる患者では当初吸入により処置することができないかもしれない。そのような場合、本発明の医薬組成物は注射または経口的に送達するのが好ましい。
本発明組成物は技術上周知の常套の医薬賦形剤を用い、常套の方法により入手することができる。従って、経口使用を企図する組成物は、例えば、１種以上の着色剤、甘味剤、芳香剤および／または保存剤を含み得る。
【００６９】
本発明を以下の実施例により説明する：
以下の略号を使用する：
ＤＣＭ    ：ジクロロメタン；
ＤＭＡ    Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド；
ＤＭＥ    １,２−ジメトキシエタン
ＤＭＦ    Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド；
ＴＨＦ    テトラヒドロフラン
特に断りのない限り、有機溶液は無水硫酸マグネシウムにより乾燥した。
【００７０】
実施例１
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−(４−{[２,２,２−トリフルオロエチル)アミノ]メチル}フェニル)チオフェン−３−カルボキサミド
ａ) Ｎ−(４−ブロモベンジル)−Ｎ−(２,２,２−トリフルオロエチル)アミン
臭化４−ブロモベンジル(１.５ｇ)をＤＭＡ(５ml)中、２,２,２−トリフルオロエチルアミン(０.４８ml)および炭酸カリウム(０.９９ｇ)とともに室温で１８時間撹拌した。次いで、反応混合物を水(４０ml)に注入し、エーテル(３×２０ml)で抽出した。併合した抽出液を水で洗浄し、乾燥、濾過して蒸発させた。残渣をカラムクロマトグラフィーに付し、３〜５％酢酸エチル／ヘキサンの勾配で溶出し、精製して、生成物を粘稠な無色の油状物として得た(０.８８５ｇ)。
MS (ES) 268 (M+H)+。
1H NMR (CDCl3) 3.15 (q, 2H), 3.87 (s, 2H), 7.20 (d, 2H), 7.46 (d, 2H)。
【００７１】
ｂ) ２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−(４−{[２,２,２−トリフルオロエチル)アミノ]メチル}フェニル)チオフェン−３−カルボキサミド
Ｎ−(ブロモベンジル)−Ｎ−(２,２,２−トリフルオロエチル)アミン(０.８８５ｇ)、ビス−(ピナコラト)ジボロン(１.６８ｇ)、酢酸カリウム(０.９７ｇ)、ＰdＣl２(dppf)(０.０９７ｇ)およびＤＭＡ(１５ml)からなる混合物をアルゴン気流中、８０℃で４時間加熱し、次いで放冷した。２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−ブロモ−３−チオフェンカルボキサミド(０.３４９ｇ)を加え、次いで追加量のＰdＣl２(dppf)(０.０９７ｇ)および２Ｍ炭酸水素ナトリウム水(４ml)を加えた。混合物を９０℃で１８時間加熱し、室温に放冷した。溶媒を減圧下に除去し、残渣を２Ｍ水酸化ナトリウム水(５０ml)とＤＣＭ(４０ml)に取り込んだ。層分離し、水層をさらにＤＣＭ(２０ml)で洗浄した。水相を濾過して少量の不溶物を除き、次いで濾液を濃塩酸にて中和した。沈殿生成物を濾取し、水で洗浄し、乾燥した。粗製物質を分取ＨＰＬＣにて精製し、生成物含有フラクションを併合し、濃アンモニア水で中和し、蒸発させ、淡褐色固体として生成物を得た(０.００８ｇ)。
MS (ES) 371 (M-H)-。
1H NMR (DMSO-D6) 2.84−2.95 (m, 1H), 3.11−3.30 (m, 2H), 3.79 (d, 2H), 6.98 (bs, 2H), 7.30 (bs, 1H), 7.36 (d, 2H), 7.50 (d, 2H), 7.67 (bs, 1H), 7.70 (s, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【００７２】
実施例２
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(イソプロピルアミノ)メチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド
ａ) Ｎ−[４−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキソボロラン−２−イル)ベンジル]プロパン−２−アミン
２−[４−(ブロモメチル)フェニル]−４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキソボロラン(０.５ｇ)とジメトキシメタン(１０ml)との溶液に、イソプロピルアミン(０.５ml)を滴下し、得られる溶液を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を減圧下に蒸発させ、直ちに使用した。
【００７３】
ｂ) ２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(イソプロピルアミノ)メチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド
Ｎ−[４−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキソボロラン−２−イル)ベンジル]プロパン−２−アミン(０.４６ｇ)、２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−ブロモチオフェン−３−カルボキサミド(０.２ｇ)、炭酸ナトリウム(０.３２ｇ)およびＤＭＥ(１５ml)／水(１.５ml)混合物からなる溶液をアルゴン気流下に８０℃に加熱した。次いで、テトラキス−(トリフェニルホスフィン)パラジウム(０)(５.１ｇ)を加え、反応物を９０℃で４時間撹拌し、冷却し、減圧下に蒸発させた。残渣をＤＣＭと飽和炭酸ナトリウム間に分配し、層間固体を濾取し、水で洗浄した。純生成物はカチオン交換クロマトグラフィーにより、アンモニア／メタノール混合物で溶出して得た(０.０６ｇ)。
MS (ES) 333 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 1.0 (d, 6H), 2.7 (m, 1H), 3.7 (s, 2H), 6.9 (br, 2H), 7.3 (br, 1H), 7.4 (d, 2H), 7.5 (d, 2H), 7.7 (br, 1H), 7.75 (s, 1H), 11.0 (s, 1H)。
【００７４】
実施例３
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(ビス−(２−メトキシエチル)アミノ)メチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド
ａ) Ｎ−(４−ブロモベンジル)−２−メトキシ−Ｎ−(２−メトキシエチル)エタンアミド
臭化４−ブロモベンジル(５ｇ)とＤＭＦ(２０ml)との溶液にジ−(２−メトキシエチル)アミン(６ml)を環境温度で加えた。環境温度で２時間撹拌した後、混合物を酢酸エチルと飽和炭酸水素ナトリウム溶液に分配した。有機相を乾燥し、溶媒を減圧下に除去し、黄色の油状物を得て、これをカラムクロマトグラフィーにより、０〜２０％酢酸エチル／イソヘキサンの勾配として精製し、標題化合物を澄明な油状物として得た(４.８３ｇ)。
MS (M+H)+ 302。
1H NMR (CDCl3) 2.72 (t, 4H), 3.3 (s, 6H), 3.45 (t, 4H), 3.64 (s, 2H), 7.21 (d, 2H), 7.41 (d, 2H)。
【００７５】
ｂ) ２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(ビス−(２−メトキシエチル)アミノ)メチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド
Ｎ−(４−ブロモベンジル)−２−メトキシ−Ｎ−(２−メトキシエチル)エタンアミド(１.６ｇ)とＴＨＦ(１５ml)との溶液をアルゴン下に−６０℃に冷却した。ブチルリチウム(５ml、１.６Ｍへキサン溶液)を滴下し、混合物をさらに２０分間−６０℃で撹拌した。ホウ酸トリイソプロピル(１.８ml)を加え、次いで混合物を室温に加温した。室温で３.５時間撹拌した後、ＴＨＦを真空下に除去し、ＤＭＥ(２０ml)、水(２ml)および２−(アミノカルボニル)アミノ−５−ブロモ−チオフェン−３−カルボキサミド(０.４７ｇ)を加えた。アルゴンを吹込み、１５分間超音波処理することにより混合物のガスを除去し、炭酸水素ナトリウム(０.４４５ｇ)およびＰd(Ｐh３)４(０.１ｇ)を加え、アルゴン下に１８時間９０℃に加熱した。溶媒を真空下に除去し、残渣を２Ｎ水酸化ナトリウム溶液とＤＣＭに分配した。併合した相を濾過し、水相は５Ｎ塩酸水を加えてｐＨ７とした。沈殿が形成され、これを分取ｈｐｌｃにより精製して生成物を固体として得た(０.０１ｇ)。
MS (M+H)+ 407。
1H NMR (DMSO-D6) 2.62 (t, 4H), 3.19 (s, 6H), 3.39 (t, 4H), 3.61 (s, 2H), 6.87-6.95 (bs, 2H), 7.22-7.31 (m, 3H), 7.44 (d, 2H), 7.61-6.9 (m, 2H), 10.97 (s,1H)。
【００７６】
実施例４
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(Ｎ−エチル−Ｎ−(２−メトキシエチル)アミノ)メチル]フェニル}−チオフェン−３−カルボキサミド
ａ) 標題化合物は実施例３(ｂ)と同様の方法で、Ｎ−(４−ブロモベンジル)−Ｎ−(２−エトキシエチル)エタンアミンから調製した；ただし、このものはイオン交換クロマトグラフィーにより精製してクリーム状固体として得た(０.１８ｇ)。
MS (M+H)+ 377。
1H NMR (DMSO-D6) 0.97 (t, 3H), 2.48 (q, 2H 不明瞭), 2.57 (t, 2H), 3.2 (s, 3H), 3.39 (t, 2H), 3.55 (s, 2H), 6.91 (bs, 2H), 7.21-7.31 (m, 3H), 7.44 (d, 2H), 7.62-7.69 (m, 2H), 10.97 (bs, 1H)。
【００７７】
ｂ) Ｎ−(４−ブロモベンジル)−Ｎ−(２−メトキシエチル)エタンアミン
Ｎ−(２−エトキシエチル)エタンアミン(３.６４ｇ)とＤＭＦ(４０ml)との溶液に、臭化４−ブロモベンジル(４.０１ｇ)を加えた。環境温度で１８時間撹拌した後、混合物をジエチルエーテルと水に分配した。有機相を２Ｎ塩酸水で抽出し、これを次いで、２Ｎ水酸化ナトリウム溶液の添加によりｐＨ１０とした。次いでこれをジエチルエーテルで抽出し、乾燥し、溶媒を真空下に除去して標題化合物を黄色の油状物として得た(４.２５ｇ)。
1H NMR (DMSO-D6) 0.95 (t, 2H), 2.45 (q, 3H), 2.55 (t, 2H), 3.2 (s, 3H), 3.36 (t, 2H), 3.52 (s, 2H), 7.24 (d, 2H), 7.46 (d, 2H)。
【００７８】
実施例５
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[ジメチルアミノメチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド
ａ) 標題化合物は実施例４(ａ)と同様の方法で、臭化４−(ジメチルアミノメチル)フェニル(０.９１ｇ)から調製し、固体として生成物を得た(０.１５５ｇ)。
MS (M+H)+ 319。
1H NMR (DMSO-D6) 2.17 (s , 6H), 3.4 (s, 2H), 7.93 (bs, 2H), 7.21-7.31 (m, 3H), 7.46 (d, 2H), 7.6-7.7 (m, 2H), 10.97 (bs, 1H)。
【００７９】
ｂ) 臭化４−(ジメチルアミノメチル)フェニル
臭化４−ブロモベンジル(５ｇ)とＤＭＦ(２０ml)との溶液に、２Ｍ−エタノール性ジメチルアミン溶液(３０ml)を加えた。混合物を環境温度で１８時間撹拌し、次いで、酢酸エチルと炭酸水素ナトリウム水溶液間に分配した。有機相を乾燥し、蒸発させ、カラムクロマトグラフィーにより０〜５％メタノール／ＤＣＭの勾配で溶出精製して、澄明な油状物として生成物を得た。
MS (M+H)+ 214。
1H NMR (CDCl3) 2.21 (s, 6H), 3.35 (s, 2H), 7.18 (d, 2H), 7.43 (d, 2H)。
【００８０】
実施例６
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(Ｎ−(２,２,２−トリフルオロエチル)−Ｎ−(２−メトキシエチル)アミノ)メチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド
ａ) 標題化合物は、実施例５(ａ)と同様の方法で調製した；ただし、(４−ブロモベンジル)−(２−メトキシエチル)−(２,２,２−トリフルオロエチル)アミンを使用した。
MS(ES) 429 (M-H)-。
1H NMR (DMSO-D6) δ 2.7 (t, 2H), 3.2 (s, 3H), 3.2-3.4 (m, 4H), 3.75 (s, 2H), 6.9 (bs, 2H), 7.2 (bs, 1H), 7.3 (d, 2H), 7.45 (d, 2H), 7.6-7.7 (s + bs, 2H), 10.9 (s, 1H)。
【００８１】
ｂ) (４−ブロモベンジル)−(２−メトキシエチル)−(２,２,２−トリフルオロエチル)アミン
２−ブロモ−１,１,１−トリフルオロエタン(０.７４ml)、トリエチルアミン(１.１３ml)およびＤＭＦ(３０ml)からなる溶液に、(４−ブロモベンジル)−(２−メトキシエチル)アミン(２.０５ｇ)を加えた。得られる混合物を１８時間撹拌した。この混合物を酢酸エチルと水に分配し、有機層を乾燥し、蒸発させて油状物とし、これをカラムクロマトグラフィーにより酢酸エチル(６０〜１００％)／イソヘキサンの勾配で溶出精製して、(４−ブロモベンジル)−(２−メトキシエチル)−(２,２,２−トリフルオロエチル)アミン(１.８４ｇ)を得た。
1H NMR (DMSO-D6) δ 2.1 (bs, 2H), 2.6 (t, 2H), 3.2 (s, 3H), 3.4 (t, 2H), 3.65 (d, 2H), 7.25 (d, 2H), 7.45 (d, 2H)。
【００８２】
ｃ) (４−ブロモベンジル)−(２−メトキシエチル)アミン
４−ブロモベンズアルデヒド(１７.２ｇ)とＴＨＦ(１５０ml)との溶液に、２−メトキシエチルアミン(１６ml)を加えた。氷酢酸(５.３２ｇ)とＭgＳＯ４(０.５ｇ)とを加え、混合物を４５分間撹拌した。水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム(２９.７ｇ)を加え、得られる混合物を４時間撹拌した。この混合物を酢酸エチルと飽和重炭酸ナトリウムに分配した。有機層を乾燥し、濃縮して油状物とし、これをカラムクロマトグラフィーにより酢酸エチル(１０〜１００％)／イソヘキサンの勾配で溶出、次いでメタノール／ＤＣＭ(１０：９０)で溶出精製して、(４−ブロモベンジル)−(２−メトキシエチル)アミン(１３.０ｇ)を黄色の油状物として得た。
MS (ES)  244 (M+H)+.
1H NMR (DMSO-D6) δ 2.05 (bs, 1H), 2.6 (t, 2H), 3.38 (t, 2H), 3.2 (s, 3H), 3.62 (s, 2H), 7.25 (d, 2H), 7.45 (d, 2H)。
【００８３】
実施例７
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(２−メトキシエチル)アミノ)メチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド
ａ) ２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−ホルミルフェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−ブロモチオフェン−３−カルボキサミド(１１.７５ｇ)をＤＭＥ(５００ml)および飽和重炭酸ナトリウム水溶液(１００ml)中で撹拌し、４−ホルミルフェニルホウ酸(１０ｇ)を加えた。フラスコにアルゴンを流し、次いでテトラキス−(トリフェニルホスフィン)パラジウム(０)(５.１ｇ)を加えた。反応物を９０℃で２時間撹拌し、次いで冷却、減圧下に蒸発させた。残渣をＤＣＭ(２００ml)と２Ｎ水酸化ナトリウム溶液(１００ml)で処理し、２０分間撹拌した。次いで、得られる固体を濾過単離し、エタノール(１００ml)中で破砕することにより精製して、淡緑色固体(５.７５ｇ)として生成物を得た。
MS (ES) 290 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 7.05 (s, 2H), 7.40 (s, 1H), 7.75 (m, 3H), 7.90 (d, 2H), 8.00 (s, 1H), 9.95 (s, 1H), 11.10 (s, 1H)。
【００８４】
ｂ) ２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−{４−[(２−メトキシエチル)アミノ)メチル]フェニル}チオフェン−３−カルボキサミド
メタノール(１０ml)、(２−メトキシエチル)アミン(０.１８ml)および水素化シアノホウ素ナトリウム(２００mg)からなる混合物中、２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−ホルミルフェニル]チオフェン−３−カルボキサミド(３００mg)を１８時間撹拌した。４Ｎ塩酸を加え、混合物を酸性とした。これを濾過し、蒸発乾固し、２Ｎ水酸化ナトリウム(５ml)に溶かし、濾過し、固形炭酸カリウムにてｐＨ７に調整した。得られる固体を濾取し、水、エーテルで洗浄し、乾燥して淡黄褐色固体(１８０mg)を生成物として得た。
MS (ES) 349 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.76 (t, 2H), 3.24 (s, 3H), 3.44 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 6.93 (bs, 2H), 7.30 (bs, 1H), 7.36 (d, 2H), 7.48 (d, 2H), 7.66 (bs, 1H), 7.71 (s, 1H), 10.98 (s, 1H)。
【００８５】
実施例８
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−(１Ｈ−インドール−３−イル)エチル)アミノ]メチル}フェニル)チオフェン−３−カルボキサミド
ＤＭＥ(１５ml)、メタノール(１５ml)および氷酢酸(０.１ml)からなる混合物中、２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−(４−ホルミルフェニル)チオフェン−３−カルボキサミド(０.０５ｇ)を撹拌した。トリプタミン(０.１３６ｇ)を加え、反応物を８０℃で２時間撹拌し、次いでポリマーに支持した水素化シアノホウ素(０.１１５ｇ)を加えた。反応物を８０℃でさらに４時間撹拌し、次いでポリマーに支持したベンズアルデヒド(１.３３ｇ)を加えた。樹脂を濾去し、濾液を次いで１０ｇのＳＣＸカラムに通し、メタノール(１００ml)で洗浄した。生成物を１Ｍメタノール性アンモニア(５０ml)で洗浄し、次いでこの溶液を減圧下に蒸発乾固し、残渣をシリカ上のクロマトグラフィーによりＤＣＭ／メタノール(２Ｍ−ＮＨ３)(２０：１)で溶出精製して、黄色粉末(０.０３２ｇ)として生成物を得た。
MS (ES) 434 (M+H)+.
1H NMR (DMSO-D6) 3.00 (s, 4H), 3.96 (s, 2H), 6.95-7.18 (m, 4H), 7.10-7.15 (m, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.47 (d, 2H), 7.54-7.59 (m, 3H), 7.73 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 11.05 (s, 1H)。
【００８６】
実施例９〜３６の化合物は実施例８の一般的な方法を用い、２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−(４−ホルミルフェニル)チオフェン−３−カルボキサミドおよび適切なアミンから調製した。
【００８７】
実施例９
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{メチルアミノメチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 303 (M-H)-。
1H NMR (DMSO-D6) 2.29 (s, 3H), 3.65 (s, 2H), 6.94 (s, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.34 (d, 2H), 7.48 (d, 2H), 7.66 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【００８８】
実施例１０
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{シクロプロピルアミノメチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 329 (M-H)-。
1H NMR (DMSO-D6) 0.23-0.28 (m, 2H), 0.32-0.38 (m, 2H), 2.06 (m, 1H), 3.71 (s, 2H), 6.94 (s, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.34 (d, 2H), 7.46 (d, 2H), 7.63-7.73 (m, 2H), 11.00 (s, 1H)。
【００８９】
実施例１１
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([(２Ｒ)−２−ヒドロキシプロピル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 349 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 1.05 (d, 3H), 2.42 (d, 2H), 3.70 (s, 2H), 4.42 (m, 1H), 6.94 (s, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.34 (d, 2H), 7.47 (d, 2H), 7.64-7.71 (m, 2H), 11.00 (s, 1H)。
【００９０】
実施例１２
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([(２Ｓ)−２−ヒドロキシプロピル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 349 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 1.05 (d, 3H), 2.42 (d, 2H), 3.70 (s, 2H), 4.42 (m, 1H), 6.94 (s, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.34 (d, 2H), 7.47 (d, 2H), 7.64-7.71 (m, 2H), 11.00 (s, 1H)。
【００９１】
実施例１３
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(テトラヒドロフラン−２−イルメチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 375 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 1.47-1.58 (m, 1H), 1.74-1.94 (m, 3H), 2.52-2.56 (m, 2H), 3.56-3.63 (m, 1H), 3.68-3.77 (m, 3H), 3.84-3.92 (m, 1H), 6.94 (s, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.33 (d, 2H), 7.47 (d, 2H), 7.66 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【００９２】
実施例１４
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(４−フルオロベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 399 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 3.69 (bs, 4H), 6.94 (s, 2H), 7.10-7.14 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.34-7.42 (m, 4H), 7.47 (d, 2H), 7.66 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【００９３】
実施例１５
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(３−{２−オキソピロリジン−１−イル}プロピル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 416 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 1.56-1.67 (m, 2H), 1.85-1.95 (m, 2H), 2.19 (t, 2H), 2.45 (2H obscured), 3.21 (t, 2H), 3.30 (2H obscured), 3.68 (s, 2H), 6.94 (s, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.33(d, 2H), 7.47 (d, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 10.99 (s, 1H)。
【００９４】
実施例１６
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(１−ナフチルメチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 431 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 3.81 (s, 2H), 4.14 (s, 2H), 6.94 (s, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.39-7.57 (m, 8H), 7.69 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.90-7.94 (m, 1H), 8.13-8.18 (m, 1H), 10.99 (s, 1H)。
【００９５】
実施例１７
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([１−(４−クロロベンジル)−２−ヒドロキシエチル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 459 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.66-2.75 (m, 3H), 3.30 (1H obscured), 3.74 (s, 2H), 4.54 (m, 1H), 6.94 (s, 2H), 7.21-7.35 (m, 7H), 7.44 (d, 2H), 7.63-7.70 (m, 2H), 10.99 (s, 1H)。
【００９６】
実施例１８
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{(シクロペンチルアミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 359 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 1.28-1.79 (m, 8H), 3.01 (s, 1H), 3.67 (s, 2H), 6.94 (s, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.34 (d, 2H), 7.46 (d, 2H), 7.62-7.73 (m, 2H), 10.99 (s, 1H)。
【００９７】
実施例１９
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(ピリジン−３−イルメチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 382 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 3.69 (s, 2H), 3.72 (s, 2H), 6.94 (s, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.32-7.40 (m, 3H), 7.48 (d, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.77 (d, 1H), 8.45 (d, 1H), 8.54 (s, 1H) 11.00 (s, 1H)。
【００９８】
実施例２０
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−[ピリジン−２−イル]エチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 396 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.88-2.92 (m, 4H), 3.76 (s, 2H), 6.94 (s, 2H), 7.17-7.22 (m, 1H), 7.27 (d, 2H), 7.33 (d, 2H), 7.46 (d, 2H), 7.64-7.71 (m, 3H), 8.47 (m, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【００９９】
実施例２１
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[({２−ヒドロキシ−１,１−ジメチル}エチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 363 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 1.02 (s, 6H), 3.30 (2H obscured), 3.64 (s, 2H), 6.92 (s, 2H), 7.26 (s, 1H), 7.35 (d, 2H), 7.46 (d, 2H), 7.68 (m, 2H), 11.00 (s, 1H)。
【０１００】
実施例２２
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[({１,２−ジフェニル}エチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 471(M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.78-2.88 (m, 1H), 2.94-3.03 (m, 1H), 3.40 (d, 1H), 3.54 (d, 1H), 3.76-3.85 (m, 1H), 6.94 (s, 2H), 7.04-7.09 (m, 2H), 7.12-7.32 (m, 11H), 7.40 (d, 2H), 7.62-7.70 (m, 2H), 11.00 (s, 1H)。
【０１０１】
実施例２３
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[({２−メトキシ−１−メチル}エチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 363(M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 0.99 (d, 3H), 2.80 (m, 1H), 3.16-3.27 (m, 5H), 3.65-3.81 (m, 2H), 6.94 (s, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.34 (d, 2H), 7.47 (d, 2H) 7.63-7.72 (m, 2H), 11.00 (s, 1H)。
【０１０２】
実施例２４
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[({２−ヒドロキシ−１−メチル}エチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 349(M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 0.96 (d, 3H), 3.30 (2H obscured), 3.64-3.80 (m, 2H), 4.48 (m, 1H), 6.94 (s, 2H), 7.27 (s, 1H), 7.35 (d, 2H), 7.47 (d, 2H), 7.64-7.72 (m, 2H), 11.00 (s, 1H)。
【０１０３】
実施例２５
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−メチルベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 395(M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.27 (s, 3H), 3.66 (s, 2H), 3.74 (s, 2H), 6.95 (s, 2H), 7.12-7.17 (m, 3H), 7.28 (s, 1H), 7.31-7.36 (m, 1H), 7.39 (d, 2H), 7.49 (d, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【０１０４】
実施例２６
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(３−メトキシベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 411(M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 3.67 (s, 4H), 3.75 (s, 3H), 6.77-6.82 (m, 1H), 6.88-6.98 (m, 4H), 7.22 (t, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.36 (d, 2H), 7.47 (d, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【０１０５】
実施例２７
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−フルオロベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 399(M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 3.71 (s, 2H), 3.73 (s, 2H), 6.94 (s, 2H), 7.10-7.22 (m, 2H), 7.24-7.33 (m, 2H), 7.37 (d, 2H), 7.45-7.55 (m, 3H), 7.67 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【０１０６】
実施例２８
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(３−フルオロベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 399(M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 3.68 (s, 2H), 3.72 (s, 2H), 6.94 (s, 2H), 7.01-7.08 (m, 1H), 7.15-7.23 (m, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.32-7.40 (m, 3H), 7.48 (d, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【０１０７】
実施例２９
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(４−{フェニル}ブチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 421(M-H)-。
1H NMR (DMSO-D6) 1.38-1.50 (m, 2H), 1.55-1.66 (m, 2H), 2.51 (2H obscured), 2.57 (t, 2H), 3.66 (s, 2H), 6.94 (s, 2H), 7.12-7.21 (m, 3H), 7.23-7.29 (m, 3H), 7.33 (d, 2H), 7.46 (d, 2H), 7.62-7.74 (m, 2H), 11.00 (s, 1H)。
【０１０８】
実施例３０
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([３−(トリフルオロメチル)ベンジル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 447 (M-H)-。
1H NMR (DMSO-D6) 3.69 (s, 2H), 3.79 (s, 2H), 6.95 (s, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.36 (d, 2H), 7.48 (d, 2H), 7.53-7.75 (m, 6H), 11.00 (s, 1H)。
【０１０９】
実施例３１
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(５−シアノペンチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 384 (M-H)-。
1H NMR (DMSO-D6) 1.34-1.50 (m, 6H), 1.51-1.60 (m, 2H), 2.48 (t, 2H), 3.67 (s, 2H), 6.94 (s, 2H), 7.28 (s, 1H), 7.34 (d, 2H), 7.46 (d, 2H), 7.61-7.73 (m, 2H), 11.00 (s, 1H)。
【０１１０】
実施例３２
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{({２−メチル}プロピルアミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
本生成物は逆相分取ＨＰＬＣにより精製し、白色粉末のトリフルオロ酢酸塩(０.０５５ｇ)として得た。
MS (ES) 347 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 0.95 (d, 6H), 1.93-2.02 (m, 1H), 2.75-2.82 (m, 2H), 4.14 (s, 2H), 6.99 (s, 2H), 7.33 (s, 1H), 7.52 (d, 2H), 7.60 (d, 2H), 7.68 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 8.7 (s, 2H), 11.0 (s, 1H)。
【０１１１】
実施例３３
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(４−メトキシベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 411 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 3.65 (bs, 4H), 3.75 (s, 3H), 6.88 (d, 2H), 6.94 (s, 2H), 7.22-7.31 (m, 3H), 7.35 (d, 2H), 7.47 (d, 2H), 7.66 (s, 1H), 7.69 (s,1H), 11.00 (s, 1H)。
【０１１２】
実施例３４
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−フェニルエチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 395 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.74 (s, 4H), 3.72 (s, 2H), 6.94 (s, 2H), 7.14-7.35 (m, 8H), 7.46 (d, 2H), 7.67 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【０１１３】
実施例３５
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−ヒドロキシエチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
本生成物は逆相分取ＨＰＬＣにより精製し、白色粉末のトリフルオロ酢酸塩として得た。
MS (ES) 335 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.99 (t, 2H), 3.64-3.70 (m, 2H), 4.17 (s, 2H), 5.22 (t, 1H), 6.99 (s, 2H), 7.33 (s, 1H), 7.52 (d, 2H), 7.59 (d, 2H), 7.68 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 8.83 (s, 2H), 11.02 (s, 1H)。
【０１１４】
実施例３６
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[({２−メトキシ−２−メチル}プロピル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
MS (ES) 377 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 1.11 (s, 6H), 2.37-2.48 (m, 2H), 3.07 (s, 3H), 3.72 (s, 2H), 6.97 (s, 2H), 7.26-7.40 (m, 3H), 7.44-7.52 (m, 2H), 7.65-7.76 (m, 2H), 11.00 (s, 1H)。
【０１１５】
実施例３７
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(４−フルオロベンジル)−Ｎ−メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
ａ) ２−ブロモチオフェン−４−カルボン酸
文献(J. Am. Chem. Soc., 1954, 76, 2445)記載の方法に従い調製した。
MS (ES) 205 (M-H)-。
1H NMR (DMSO-D6) 7.45 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 12.94 (bs, 1H)。
【０１１６】
ｂ) ２−ブロモ−４−(Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル)アミノチオフェン
２−ブロモチオフェン−４−カルボン酸(３ｇ)を乾燥加温ｔ−ブタノール(２４ml)に溶かした。トリエチルアミン(２.０２ml)を加え、次いでジフェニルホスホリルアジド(３.１２ml)を加えた。この溶液をゆっくりと加熱還流し、還流下の加熱を一夜続けた。次いで、反応混合物を放冷し、水(１５０ml)に注ぎ、酢酸エチル(３×１００ml)で抽出した。併合した抽出液を乾燥し、濾過、蒸発させた。粗製生成物をカラムクロマトグラフィーにより５％酢酸エチル／ヘキサンで溶出精製して、白色固体(１.６９ｇ)を得た。
MS (ES) 276 (M-H)-。
1H NMR (DMSO-D6) 1.44 (s, 9H), 7.03 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 9.65 (s, 1H)。
【０１１７】
ｃ) ５−ブロモ−３−[(ｔ−ブチルオキシカルボニル)アミノ]チオフェン−２−カルボン酸
２−ブロモ−４−(Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル)アミノチオフェン(１.６８ｇ)をアルゴン下、乾燥ＴＨＦ(４５ml)中で撹拌し、この溶液を−７８℃に冷却した。リチウムジイソプロピルアミド(２Ｍ溶液、７.５５ml)を滴下し、撹拌を３.５時間続けた。粉末化したＣＯ２(過剰)を加え、混合物をさらに１０分間撹拌し、次いで室温に加温した。水(５０ml)を加え、ＴＨＦを減圧除去し、水相を酢酸エチル(３×４０ml)で抽出した。併合した抽出液を１Ｍ塩酸(５０ml)、水(５０ml)および塩水(５０ml)で洗浄し、乾燥、濾過して溶媒を蒸発させた。残渣をＤＣＭ中で粉砕し、濾取して淡黄色固体(１.５７ｇ)として生成物を得た。
MS (ES) 320 (M-H)-。
1H NMR (DMSO-D6) 9.38 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 1.42 (s, 9H)。
【０１１８】
ｄ) ５−ブロモ−３−(ｔ−ブチルオキシカルボニル)アミノチオフェン−２−カルボキサミド
５−ブロモ−３−[(ｔ−ブチルオキシカルボニル)アミノ]チオフェン−２−カルボン酸(０.８０ｇ)をアセトニトリル(８０ml)中で撹拌した。ヒドロキシベンズトリアゾール(１.４１ｇ)および１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミド塩酸塩(２.６２ｇ)を加え、室温での撹拌を１０分間続けた。濃アンモニア水溶液(８ml)を加え、反応混合物を１時間加熱還流した。アセトニトリルを蒸発除去した。水(１００ml)を加え、混合物を超音波処理し、破砕した。得られる淡灰白色固体を次いで濾取し、水で洗浄し、真空乾燥した(０.７６３ｇ)。
MS (ES) 319 (M-H)-。
1H NMR (DMSO-D6) 1.45 (s, 9H), 7.63 (brs, 2H), 7.78 (s, 1H), 10.40 (s, 1H)。
【０１１９】
ｅ) ３−アミノ−５−ブロモチオフェン−２−カルボキサミド
５−ブロモ−３−(ｔ−ブチルオキシカルボニル)アミノチオフェン−２−カルボキサミド(０.７６ｇ)をＤＣＭ(３０ml)中で撹拌した。トリフルオロ酢酸(５ml)を加え、溶液を室温で１時間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(２００ml)に注ぎ、ＤＣＭ(３×１００ml)で抽出した。併合した抽出液を塩水(１５０ml)で洗浄し、乾燥し、濾過、蒸発させて黄色固体(０.５１１ｇ)を得た。
MS (ES) 221 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 6.50 (bs, 2H), 6.69 (s, 1H), 6.87 (bs, 2H)。
【０１２０】
ｆ) ３−[(アミノカルボニル)アミノ−５−ブロモチオフェン−２−カルボキサミド
３−アミノ−５−ブロモチオフェン−２−カルボキサミド(０.２５ｇ)を無水ＴＨＦ(１０ml)中で撹拌し、０℃に冷却し、イソシアン酸トリクロロアセチル(０.１４８ml)を滴下した。混合物を環境温度まで加温し、１.５時間撹拌し、２Ｍアンモニア／メタノール(１６ml)を加えた。１.５時間後、溶媒を蒸発させ、残渣をジエチルエーテル中で破砕し、減圧乾燥して、標題化合物を黄色固体(０.２６ｇ)として得た。
MS (ES) 264 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 6.63 (bs, 2H), 7.41 (bs, 2H), 7.97 (s, 1H), 10.02 (s, 1H)。
【０１２１】
ｇ) ３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−ホルミルフェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−ブロモチオフェン−２−カルボキサミド(２ｇ)をＤＭＥ(２００ml)と飽和重炭酸ナトリウム水溶液(４０ml)中で撹拌し、３−ホルミルフェニルホウ酸(１.７ｇ)を加えた。フラスコにアルゴンを流し、次いで、テトラキス−(トリフェニルホスフィン)パラジウム(０)(０.８７８ｇ)を加えた。反応物を９０℃で２時間撹拌し、次いで冷却し、減圧下に蒸発させた。残渣をＤＣＭ(２００ml)と飽和重炭酸ナトリウム水溶液(１００ml)で処理し、２０分間撹拌した。次いで、得られた固体を濾過単離し、エタノール(１００ml)中での超音波処理により精製し、該固体を濾過単離して淡灰白色固体(１.５３ｇ)として生成物を得た。
MS (ES) 288 (M-H)-。
1H NMR (DMSO-D6) 6.68 (s, 2H), 7.52 (s, 2H), 7.67-7.75 (m, 1H), 7.90-7.98 (m, 2H), 8.13 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 10.03-10.12 (m, 2H)。
【０１２２】
ｈ) ３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(４−フルオロベンジル)−Ｎ−メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
標題化合物は実施例８の一般的方法を用い、３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−ホルミルフェニル]チオフェン−２−カルボキサミドから調製した。
MS (ES) 413 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.09 (s, 3H), 3.48-3.56 (m, 4H), 6.64 (s, 2H), 7.12-7.21 (m, 2H), 7.34-7.50 (m, 6H), 7.59 (s, 2H), 8.24 (s, 1H), 10.07 (s, 1H)。
【０１２３】
実施例３８〜５５の化合物は、実施例８の一般的方法を用い、３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−ホルミルフェニル]チオフェン−２−カルボキサミドおよび適切なアミンを用いて調製した。
【０１２４】
実施例３８
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−{ピリジン−２−イル}エチル)メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 410 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.21 (s, 3H), 2.72 (t, 2H), 2.93 (t, 2H), 3.56 (s, 2H), 6.63 (s, 2H), 7.17-7.22 (m, 1H), 7.26-7.34 (m, 3H), 7.43 (s, 2H), 7.54 (d, 2H), 7.66-7.73 (m, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.46 (d, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１２５】
実施例３９
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(ピリジン−２−イルメチル)メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 396 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.10 (s, 3H), 3.56 (s, 4H), 6.64 (s, 2H), 7.36-7.50 (m, 5H), 7.60 (d, 2H), 7.77 (d, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.45-8.59 (m, 2H), 10.06 (s, 1H)。
【０１２６】
実施例４０
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 395 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.10 (s, 3H), 3.49-3.57 (m, 4H), 6.60 (s, 2H), 7.22-7.29 (m, 1H), 7.31-7.48 (m, 8H), 7.60 (d, 2H), 8.23 (s, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１２７】
実施例４１
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−メトキシエチル)エチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 377 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 0.99 (t, 3H), 2.50 (2H, obscured), 2.61 (t, 2H), 3.23 (s, 3H), 3.43 (t, 2H), 3.62 (s, 2H), 6.60 (s, 2H), 7.34-7.47 (m, 4H), 7.57 (d, 2H), 8.23 (s, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１２８】
実施例４２
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(Ｎ−{２−メトキシエチル})メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 363 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.18 (s, 3H), 2.53-2.59 (m, 2H), 3.24 (s, 3H), 3.47 (t, 2H), 3.53 (s, 2H), 6.60 (s, 2H), 7.34-7.48 (m, 4H), 7.58 (d, 2H), 8.23 (s, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１２９】
実施例４３
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−ベンジル−Ｎ−(２−シアノエチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 434 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.63-2.77 (m, 4H), 3.60-3.67 (m, 4H), 6.60 (s, 2H), 7.23-7.29 (m, 1H), 7.32-7.46 (m, 6H), 7.48 (d, 2H), 7.60 (d, 2H), 8.23 (s, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１３０】
実施例４４
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−シアノエチル)−Ｎ−メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 358 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.19 (s, 3H), 2.62-2.74 (m, 4H), 3.57 (s, 2H), 6.59 (s, 2H), 7.35-7.46 (m, 4H), 7.59 (d, 2H), 8.23 (s, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１３１】
実施例４５
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−イソプロピル−Ｎ−(２−メトキシエチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 391 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 0.99 (d, 6H), 2.57 (t, 2H), 2.85-2.93 (m, 1H), 3.18 (s, 3H), 3.30 (2H obscured), 3.60 (s, 2H), 6.60 (s, 2H), 7.34-7.45 (m, 4H), 7.56 (d, 2H), 8.21 (s, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１３２】
実施例４６
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(３−メトキシベンジル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 411 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 3.65-3.79 (m, 7H), 6.60 (s, 2H), 6.77-6.83 (m, 1H), 6.89-6.98 (m, 2H), 7.23 (t, 1H), 7.39 (s, 2H), 7.44 (d, 2H), 7.58 (d, 2H), 8.23 (s, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１３３】
実施例４７
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−メトキシエチル)−Ｎ−(ピリジン−２−イル)メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 440 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.66 (t, 2H), 3.20 (s, 3H), 3.46 (t, 2H), 3.70 (s, 2H), 3.76 (s, 2H), 6.60 (s, 2H), 7.22-7.28 (m, 1H), 7.39 (s, 2H), 7.43-7.61 (m, 5H), 7.74-7.82 (m, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.46-8.51 (m, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１３４】
実施例４８
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(３,５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル)メチル]メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 413 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.01 (s, 3H), 2.07-2.16 (m, 6H), 3.23 (s, 2H), 3.44 (s, 2H), 6.60 (s, 2H), 7.33-7.44 (m, 4H), 7.58 (d, 2H), 8.23 (s, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１３５】
実施例４９
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{({Ｎ−[３−メチルイソオキサゾール−５−イル]メチル}メチルアミノ)メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 400 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.18 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 3.57 (s, 2H), 3.71 (s, 2H), 6.29 (s, 1H), 6.60 (s, 2H), 7.36-7.47 (m, 4H), 7.60 (d, 2H), 8.24 (s, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１３６】
実施例５０
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 349 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.17 (s, 3H), 2.45 (t, 2H), 3.47-3.57 (m, 4H), 4.34-4.39 (m, 1H), 6.60 (s, 2H), 7.32-7.46 (m, 4H), 7.57 (d, 2H), 8.23 (s, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１３７】
実施例５１
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−メトキシエチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 349 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.69 (t, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.42 (t, 2H), 3.77 (s, 2H), 6.60 (s, 2H), 7.34-7.47 (m, 4H), 7.58 (d, 2H), 8.23 (s, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１３８】
実施例５２
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(１,１−ジオキシドテトラヒドロ−３−チエニル)メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 423 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.02-2.19 (m, 4H), 2.28-2.39 (m, 1H), 3.01-3.14 (m, 2H), 3.21-3.38 (2H obscured), 3.44-3.69 (m, 3H), 6.60 (s, 2H), 7.33-7.47 (m, 4H), 7.59 (d, 2H), 8.23 (s, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１３９】
実施例５３
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−ベンジル−Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 425 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.57 (t, 2H), 3.43-3.50 (m, 2H), 3.59-3.64 (m, 2H), 3.70 (s, 2H), 4.35-4.40 (m, 1H), 6.60 (s, 2H), 7.27-7.42 (m, 7H), 7.46 (d, 2H), 7.58 (d, 2H), 8.22 (s, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１４０】
実施例５４
３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(テトラヒドロフラン−２−イルメチル)アミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 375 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 1.47-1.59 (m, 1H), 1.73-1.95 (m, 4H), 3.55-3.77 (m, 5H), 3.84-3.94 (m, 1H), 6.60 (s, 2H), 7.34-7.51 (m, 4H), 7.56 (d, 2H), 8.22 (s, 1H), 10.06 (s, 1H)。
【０１４１】
実施例５５
Ｋ３−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(２−メトキシ−２−メチル)プロピルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−２−カルボキサミド
MS (ES) 377 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 1.09 (s, 6H), 2.42 (s, 2H), 3.04 (s, 3H), 3.73 (s, 2H), 6.60 (s, 2H), 7.31-7.44 (m, 4H), 7.54 (d, 2H), 8.19 (s, 1H), 10.03 (s, 1H)。
【０１４２】
実施例５６
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−メトキシエチル)メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
ａ) Ｎ−(４−ブロモベンジル)−２−メトキシ−Ｎ−メチルエタンアミン
臭化４−ブロモベンジル(１.０２ｇ)およびＮ−(２−メトキシエチル)メチルアミン(０.７３ｇ)をＤＭＦ(２０ml)中、環境温度で１６時間撹拌した。次いで、反応混合物をジエチルエーテル(４０ml)と水(４０ml)に分配した。水相をさらにジエチルエーテル(４０ml)で抽出し、併合した有機相を水(５０ml)で洗浄し、乾燥、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより酢酸エチル(０〜５０％)／イソヘキサンの勾配で溶出精製し、黄色の油状物(０.６７ｇ)として生成物を得た。
MS (ES) 258 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.10 (s, 3H), 2.45 (m, 2H), 3.20 (s, 3H), 3.40 (m, 4H), 7.21 (m, 2H), 7.45 (m, 2H)。
【０１４３】
ｂ) 標題化合物は、実施例３(ｂ)と同様の方法で、Ｎ−(４−ブロモベンジル)−２−メトキシ−Ｎ−メチルエタンアミン(０.６３２ｇ)および２−(アミノカルボニル)アミノ−５−ブロモ−チオフェン−３−カルボキサミド(０.２１５ｇ)から調製した。生成物は後処理後直接褐色固体(０.１４２ｇ)として得た。
MS (ES) 363 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.15 (s, 3H), 2.50 (t, 2H), 3.20 (s, 3H), 3.45 (m, 4H), 6.90 (s, 2H), 7.25 (m, 3H), 7.42 (d, 2H), 7.62 (m, 2H), 10.96 (s, 1H)。
【０１４４】
実施例５７
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{(Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
ＤＭＥ(１０ml)およびＤＭＡ(５ml)中、２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−ホルミルフェニル]チオフェン−３−カルボキサミド(０.１ｇ)を撹拌した。ジエチルアミン(０.２ml)を加え、次いで、オルトギ酸トリメチル(５ml)と酢酸(０.５ml)を加えた。反応物を８０℃で２０分間撹拌し、次いで、ポリマーに支持した水素化シアノホウ素(０.４５ｇ)を加えた。反応物を８０℃でさらに２時間撹拌し、次いで、ポリマー支持イソシアナート(０.５ｇ)を加えた。樹脂を濾去し、濾液を５ｇのＳＣＸカラムに通し、メタノール(２５ml)で洗浄した。生成物を１Ｍメタノール性アンモニア(４５ml)により溶出し、この溶液を減圧下に蒸発乾固させ、残渣をシリカ上のクロマトグラフィーによりＤＣＭ／メタノール(９：１)で溶出精製し、灰白色固体(０.０１２ｇ)として生成物を得た。
MS (ES) 347 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 0.95 (m, 6H), 2.55 (m, 4H), 3.50 (s, 2H), 6.90 (s, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.30 (d, 2H), 7.45 (d, 2H), 7.70 (m, 2H), 11.00 (s, 1H)。
【０１４５】
実施例５８
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([Ｎ−(２−シアノエチル)−Ｎ−メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
標題化合物は実施例５７の一般的方法を用いて調製した。
MS (ES) 358 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.20 (s, 3H), 2.60 (m, 2H), 2.75 (m, 2H), 3.55 (s, 2H), 6.90 (s, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.40 (d, 2H), 7.55 (d, 2H), 7.70 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【０１４６】
実施例５９
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[(Ｎ−ベンジル−Ｎ−シアノエチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
標題化合物は実施例５７の一般的方法を用いて調製した。
MS (ES) 434 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.65 (m, 2H), 2.75 (m, 2H), 3.6 (s, 4H), 6.90 (s, 2H), 7.20−7.35 (m, 6H), 7.40 (d, 2H), 7.55 (d, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【０１４７】
実施例６０
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{[Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)−Ｎ−メチルアミノ]メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
ＤＭＥ(１０ml)およびＤＭＡ(５ml)中、２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−ホルミルフェニル]チオフェン−３−カルボキサミド(０.１ｇ)を撹拌した。２−(メチルアミノ)エタノール(０.１３ｇ)を加え、次いで、オルトギ酸トリメチル(５ml)と酢酸(０.５ml)を加えた。反応物を８０℃で２０分間撹拌し、次いで、ポリマーに担持した水素化シアノホウ素(０.４５ｇ)を加えた。反応物を８０℃でさらに２時間撹拌し、次いで、ポリマー支持ベンズアルデヒド(０.５ｇ)を加えた。樹脂を濾去し、濾液を５ｇのＳＣＸカラムに通し、メタノール(２５ml)で洗浄した。生成物を１Ｍメタノール性アンモニア(４５ml)により溶出し、この溶液を減圧下に蒸発乾固させた。シリカ上のクロマトグラフィーによりＤＣＭ／メタノール(９：１)で溶出精製し、灰白色固体(０.０７２ｇ)として生成物を得た。
MS (ES) 349 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.15 (s, 3H), 2.45 (m, 2H), 3.50 (m, 4H), 4.35 (t, 1H), 6.90 (s, 2H), 7.25 - 7.40 (m, 3H), 7.50 (d, 2H), 7.70 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【０１４８】
実施例６１
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{([Ｎ−ベンジル−Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
標題化合物は実施例６０の一般的方法を用いて調製した。
MS (ES) 425 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.45 (m, 2H), 3.50 (m, 2H), 3.60 (m, 4H), 4.40 (t, 1H), 6.90 (s, 2H), 7.20 - 7.40 (m, 8H), 7.50 (d, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【０１４９】
実施例６２
２−[(アミノカルボニル)アミノ]−５−[４−{(ビス−[２−ヒドロキシエチル]アミノ)メチル}フェニル]チオフェン−３−カルボキサミド
標題化合物は実施例６０の一般的方法を用いて調製した。
MS (ES) 379 (M+H)+。
1H NMR (DMSO-D6) 2.55 (m, 4H), 3.45 (m, 4H), 3.60 (s, 2H), 4.35 (m, 2H), 6.90 (s, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.35 (d, 2H), 7.45 (d, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 11.00 (s, 1H)。
【０１５０】
化合物の薬理学的評価
ＩＫＫ−２フィルターキナーゼアッセイ
フィルターキナーゼアッセイを用いて化合物のＩＫＫ−２の阻害につき試験した。試験化合物はジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)に溶解させ１０ｍＭとした。該化合物は次いでキナーゼバッファー(５０ｍＭトリス、ｐＨ７.４；０.１ｍＭ−ＥＧＴＡ、０.１ｍＭオルトバナジン酸ナトリウムおよび０.１％β−メルカプトエタノール含有)に１対４０に希釈した。この溶液から２.５％ＤＭＳＯ／キナーゼバッファーにより１対３の段階希釈を行った。化合物の希釈液２０μｌを９６穴プレートのウェルに２ウェルずつ加えた。化合物の替わりに、２.５％ＤＭＳＯ／キナーゼバッファー２０μｌを加え、対照ウェル(０％阻害)とした。化合物の替わりに０.５Ｍ−ＥＤＴＡ２０μｌを加え、バックグランドウェル(１００％阻害)とした。
【０１５１】
酢酸マグネシウム、非標識ＡＴＰ、および３３Ｐ−標識ＡＴＰの混合物１０μｌを各ウェルに加え、最終濃度が１０ｍＭ酢酸マグネシウム、１μＭ−ＡＴＰおよび０.１μＣi３３Ｐ−ＡＴＰとなるようにした。ＩＫＫ−２(０.１５μｇ／ウェル)、Ｉ−５３ＧＳＴ−ＩκＢ(０.５μｇ／ウェル)およびウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)(８.５μｇ／ウェル)の混合物２０μｌを各ウェルに加え、反応を開始させた。最終反応容量は５０μｌであった。
【０１５２】
キナーゼ反応物を２１℃で８０分間インキュベートし、等容量(５０μｌ)の２０％トリクロロ酢酸(ＴＣＡ)を加え、タンパク質を沈殿させることにより反応を停止させた。１０分間沈殿を形成させ、次いでＧＦ／Ｃユニフィルター９６穴プレート上で濾過した。各フィルターは約１mlの２％ＴＣＡで２回洗浄した。フィルタープレートを３０〜４０℃で６０分間乾燥し、２０μｌのシンチラントを各ウェルに加え、プレートを封印し、放射活性をパッカード・トップカウント・マイクロプレートシンチレーションカウンターにより計測した。
上記アッセイ法で試験した場合、実施例１〜６２の化合物は１０μＭ未満のＩＣ５０値を与え、これらが有用な治療活性を示すと期待されることを示した。
【０１５３】
ＩＫＫ−１フィルターキナーゼアッセイ
化合物の選択性は、フィルターキナーゼアッセイを用いてＩＫＫ−１の阻害につき試験することにより評価した。アッセイ条件はＩＫＫ−２フィルターキナーゼアッセイと同様であったが、ただし、ＩＫＫ−１(０.２５μｇ／ウェル)と１−５３ＧＳＴ ＩκＢ(９μｇ／ウェル)の混合物を各ウェルに加え、反応を開始させた。
【０１５４】
ＰＢＭＣによるＬＰＳ誘発ＴＮＦα産生の阻害
細胞における核因子κＢ(ＮＦκＢ)活性化に対する試験化合物の効果は、バクテリアリポ多糖類(ＬＰＳ)により刺激したヒト末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)による腫瘍壊死因子アルファ(ＴＮＦα)産生の阻害を測定することにより評価した。
【０１５５】
ヘパリンで抗凝固処理したヒト血液(２５０ml)を健常ボランティアから採血した。血液の一部(２５ml)を５０ml容ポリプロピレン遠沈管中、２０mlのリンホプレップ(Lymphoprep)(ニコメッド；Nycomed)に積層した。遠沈管を２,５００ｒｐｍで３０分間遠心(ソルバール(Sorval)ＲＴ６００Ｂ)した。ＰＢＭＣ含有の白濁層を微細先端パスツールピペットで採取し、８本の清浄ポリプロピレン遠沈管に移し(１管あたり約１０ml)、リン酸緩衝食塩水(ＰＢＳ)にて５０mlに希釈した。これらの遠沈管を２,０００ｒｐｍで８分間遠心した。ＰＢＳ(１０ml)を各細胞ペレットに加え、その細胞をゆるやかに再懸濁した。細胞を４本の遠沈管にプールし、各管にＰＢＳを加えてその容量を５０mlとし、その遠沈管を１,４００ｒｐｍで８分間遠心した。細胞ペレットを再度１０mlのＰＢＳに再懸濁し、２本の遠沈管にプールし、その容量をＰＢＳで５０mlとし、その遠沈管を９００ｒｐｍで１０分間遠心した。
【０１５６】
最終細胞ペレットを１０mlの組織培養培地(１％熱不活化ヒト血清、Ｌ−グルタミンおよびペニシリンとストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ)に、再度ゆるやかに再懸濁し、１本の遠沈管にまとめ、その容量をＲＰＭＩ培地により３０mlとした。細胞を計測し、細胞懸濁液を２.６×１０６細胞／mlに希釈した。
【０１５７】
試験化合物をＤＭＳＯに溶かして１０ｍＭとし、ＲＰＭＩ培地で１対２５０に希釈した(４０μＭ)。次いで、化合物を０.４％ＤＭＳＯ／ＲＰＭＩ培地で１対３に段階希釈した。試験化合物希釈液の一部(５０μｌ)を９６穴プレートに移した。対照ウェルには化合物の替わりに０.４％ＤＭＳＯ／ＲＰＭＩを容れた。
【０１５８】
細胞懸濁液の一部(１００μｌ)を各ウェルに加え、プレートは３７℃で３０分間インキュベートした。５０μｌの４０μｇ／ｍｌ−ＬＰＳ(シグマ、Ｌ−４１３０)をウェルに加え、細胞によるＴＮＦα産生を刺激し、プレートを３７℃で一夜インキュベートした。陰性対照ウェルにはＬＰＳの替わりにＲＰＭＩ培地(５０μｌ)を加えた。最終のインキュベーション容量は２００μｌであった。
【０１５９】
プレートを１,２００ｒｐｍで４分間遠心し、ＴＮＦα濃度測定用に上清を取り出した。残りの細胞ペレットの生存度をＷＳＴ−１試薬(ベーリンガーマンハイム、１０４４８０７)にて測定した。１０μｌのＷＳＴ−１試薬を含有する１００μｌのＲＰＭＩを各ウェルに加え、プレートを０.５〜３時間インキュベートした。次いで、９６穴プレート分光光度計により４５０nmでの吸光度を測定した。
【０１６０】
上清(新たに収穫するか、または−２０℃で凍結保存)中のＴＮＦαは、酵素結合免疫吸着アッセイ(ＥＬＩＳＡ)によって測定した。ＥＬＩＳＡプレートは、９６穴プレートのウェルをヒツジ抗ヒトＴＮＦαモノクローナル抗体(コーティングバッファー(０.２ｇ／ｌのアジ化ナトリウム含有０.５Ｍ炭酸塩／重炭酸塩バッファー、ｐＨ９.６)に希釈した１μｇ／ml抗体、１００μｌ)で被覆し、４℃で一夜インキュベートすることにより調製した。ブランクウェルは被覆しなかった。ウェルを０.０５％トゥイーン含有の０.１％ＢＳＡ／ＰＢＳ(ＰＢＳ／トゥイーン)で洗浄し、次いで室温で１時間、１％ＢＳＡ／コーティングバッファー(２００μｌ)とインキュベートした。次いで、ウェルを０.１％ＢＳＡ／ＰＢＳ／トゥイーンで３回洗浄した。
【０１６１】
ＰＢＭＣインキュベーションからの上清サンプルを１％ＢＳＡ／ＰＢＳ／トゥイーンで１対３に希釈した。これら希釈液の１００μｌ部分をＥＬＩＳＡプレートに加えた。他のウェルには１００μｌのＴＮＦαの標準(１０、３.３、１.１、０.３７、０.１２、０.０４、０.０１４および０ng/ml)を容れた。ＥＬＩＳＡプレートを室温で２時間インキュベートし、次いで、ウェルを０.１％ＢＳＡ／ＰＢＳ／トゥイーンで３回洗浄した。ウサギ抗ヒトＴＮＦａ抗体(２.５μｇ／ｍｌ溶液、１００μｌ)を各ウェルに加え、プレートを室温で１.５時間インキュベートした。次いで、ウェルを０.１％ＢＳＡ／ＰＢＳ／トゥイーンで３回洗浄した。ヤギ抗ウサギＩgＧ−西洋わさびペルオキシダーゼ複合体(ＩＣＮ、６７４３７１；１００μｌ；１対１０,０００希釈)を各ウェルに加え、プレートを室温で１.５時間インキュベートした。ウェルを０.１％ＢＳＡ／ＰＢＳ／トゥイーンで３回洗浄した。
【０１６２】
ペルオキシダーゼ基質は１mgのＴＭＢ錠(シグマ、Ｔ−５５２５)を１００μｌのＤＭＳＯ(１００μｌ)に溶かし、これと３６μｌのＵＨＰＯ(ＢＤＨ、３０５５９；１ｇ錠を蒸留水２５mlに溶解)とを１０mlの０.１Ｍクエン酸／酢酸バッファー(ｐＨ６)に加えることにより調製した。基質１００μｌを各ウェルに加え、プレートを暗所にて室温で約３０分間インキュベートした。各ウェルに２Ｍ硫酸２５μｌを加えて反応を停止させた。４５０nmでの吸光度を９６穴プレート分光光度計にて測定した。
【０１６３】
結  果
【表１】
0004688785.tif 000013