(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式：
【化１】
0004674339.tif 000006
で示される(2R,4R)-4-メチル-1-[N2((RS)-3-メチル-1,2,3,4-テトラヒドロ-8-キノリンスルホニル)-L-アルギニル]-2-ピペリジンカルボン酸、その水和物、または薬学的に許容されるそれらの塩を有効成分とする、頭部外傷に伴う脳損傷、くも膜下出血に伴う脳損傷、脳内出血に伴う脳損傷、開頭手術一般の術後脳損傷から選ばれる脳損傷における炎症やはん痕による二次的脳損傷の予防・治療剤。
【請求項２】
化合物が、(2R,4R)-4-メチル-1-[N2((RS)-3-メチル-1,2,3,4-テトラヒドロ-8-キノリンスルホニル)-L-アルギニル]-2-ピペリジンカルボン酸一水和物であることを特徴とする、請求項１に記載の二次的脳損傷の予防・治療剤。
【請求項３】
下記式：
【化２】
0004674339.tif 000007
で示される(2R,4R)-4-メチル-1-[N2((RS)-3-メチル-1,2,3,4-テトラヒドロ-8-キノリンスルホニル)-L-アルギニル]-2-ピペリジンカルボン酸、その水和物、または薬学的に許容されるそれらの塩を有効成分とする、脳浮腫の予防・治療剤。
【請求項４】
化合物が、(2R,4R)-4-メチル-1-[N2((RS)-3-メチル-1,2,3,4-テトラヒドロ-8-キノリンスルホニル)-L-アルギニル]-2-ピペリジンカルボン酸一水和物であることを特徴とする、請求項３に記載の脳浮腫の予防・治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、特定のN2-アリールスルホニル-L-アルギニンアミド類、その水和物、または薬学的に許容されるそれらの塩を有効成分とする、脳損傷の予防・治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
頭部外傷に対しては多くの治療が行われているが、脳挫傷に代表される脳実質損傷に対しては、未だに病態をふまえた有効な治療法は開発されていない。
一方、脳組織損傷の治療剤としては、従来高張輸液剤、メチルプレドニゾロン、デキサメタゾン等のステロイドなどが使用されている。
【０００３】
しかしその作用機序は明らかではなく、腎不全や高血糖などの副作用があり、近年その再検討が行われ、効果については疑問視されているのが現状である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、脳損傷を有効に予防・治療する薬剤を提供するべく検討を重ねてきた結果、特定のN2-アリールスルホニル-L-アルギニンアミド類、その水和物、または薬学的に許容されるそれらの塩が脳組織損傷における炎症性細胞の集ぞく、はん痕形成に関与するビメンチン陽性星状膠細胞の増殖を抑制することを初めて見出し、本発明を完成するに至った。
【０００５】
すなわち本発明の要旨は、下記式：
【０００６】
【化２】
0004674339.tif 000002
【０００７】
で示される(2R,4R)-4-メチル-1-[N2((RS)-3-メチル-1,2,3,4-テトラヒドロ-8-キノリンスルホニル)-L-アルギニル]-2-ピペリジンカルボン酸、その水和物、または薬学的に許容されるそれらの塩を有効成分とする脳損傷の予防・治療剤に存する。
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明薬剤の有効成分となる上記式の化合物は、特公昭61-48829号、同 1-35000号公報等に記載されている通り、公知の化合物である。従ってこの化合物は、特公昭61-48829号、同 1-35000号公報等に記載の方法により、容易に製造することができる。なお、上記の公告公報には、上記式の化合物がほ乳動物体内のトロンビンに対して特異性の高い阻害効果を有し、血栓症の治療および予防、あるいは血小板凝集阻害剤として有用であることが示唆されているが、この化合物が脳損傷の予防・治療剤として有用であることについては、示唆ないし教示されていない。
【０００９】
本発明の脳損傷の予防・治療剤の有効成分としては、遊離形態の上記化合物を用いても良いが、その任意の水和物もしくは溶媒和物、あるいは上記化合物またはその任意の水和物もしくは溶媒和物の薬学的に許容される塩を用いることもできる。本発明においては、特に上記化合物の一水和物を用いることが好ましい。
薬学的に許容される塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、アミン塩等の塩基付加塩、あるいは塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の鉱酸塩、あるいは酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、10-カンファースルホン酸塩等の有機酸塩を挙げることができる。
【００１０】
本発明の脳損傷の予防・治療剤の投与形態は特に制限されず、経口的、非経口的に投与することができる。好ましくは、非経口的に、注射あるいは点滴等により静脈内に投与すればよい。本発明の脳損傷の予防・治療剤は、有効成分として上記式の化合物をそのまま使用してもよいが、好ましくは、有効成分である上記式の化合物に対して、適宜の薬理学的および製剤学的に許容し得る添加物を加え、当業者に周知な形態の製剤として提供される。薬理学的および製剤学的に許容し得る添加物としては、例えば、賦形剤、崩壊剤ないし崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、基剤、溶解剤ないし溶解補助剤、等張化剤、pH調節剤、安定化剤、噴射剤、および粘着剤等を用いることができる。
【００１１】
経口投与に適する製剤の例としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、またはシロップ剤等を挙げることができる。非経口的に投与する製剤としては、例えば、注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、または貼布剤等を挙げることができる。
経口投与、あるいは経皮または経粘膜投与に適する製剤には、薬理学的、製剤学的に許容し得る添加物として、例えば、ブドウ糖、乳糖、D-マンニトール、デンプン、または結晶セルロース等の賦形剤；カルボキシメチルセルロース、デンプン、またはカルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤または崩壊補助剤；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、またはゼラチン等の結合剤；ステアリン酸マグネシウムまたはタルク等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、白糖、ポリエチレングリコールまたは酸化チタン等のコーティング剤；ワセリン、流動パラフィン、ポリエチレングリコール、ゼラチン、カオリン、グリセリン、精製水、またはハードファット等の基剤を用いることができる。また、フロン、ジエチルエーテル、または圧縮ガス等の噴射剤；ポリアクリル酸ナトリウム、ポリビニルアルコール、メチルセルロース、ポリイソブチレン、ポリブテン等の粘着剤；木綿布またはプラスチックシート等の基布等の製剤用添加物を用いて製剤を製造しても良い。
【００１２】
注射あるいは点滴用に適する製剤には、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の水性あるいは用時溶解型注射剤を構成し得る溶解剤または溶解補助剤；ブドウ糖、塩化ナトリウム、D-マンニトール、グリセリン等の等張化剤；無機酸、有機酸、無機塩基または有機塩基等のpH調節剤等の製剤用添加物を添加しても良い。
【００１３】
なお、上記（Ｉ）式で表される化合物の内、(2R,4R)-4-メチル-1-[N2((RS)-3-メチル-1,2,3,4-テトラヒドロ-8-キノリンスルホニル)-L-アルギニル]-2-ピペリジンカルボン酸  一水和物を有効成分とする血栓溶解剤（注射剤）が、既に臨床上使用されているので（一般名「アルガトロバン」；商品名「ノバスタン」、三菱化学株式会社製造、東京田辺製薬株式会社販売、または商品名「スロンノン」、三菱化学株式会社原体製造、第一製薬株式会社製造販売）、本発明の脳損傷の予防・治療剤として、上記市販製剤をそのまま使用することもできる。
【００１４】
本発明の脳損傷の予防・治療剤の投与量は特に制限されず、投与形態や、患者の年齢、脳組織損傷の程度や症状、体重等の条件に応じて適宜選択することができる。例えば静脈内投与の場合には、成人１日あたり、有効成分量として0.1〜50mg/kg、好ましくは0.4〜 3mg/kgを投与すれば良い。
本発明の脳損傷の予防・治療剤は、脳損傷部位近傍において、多核白血球や単球系貪食細胞といった炎症性細胞の集ぞくと、はん痕形成に関与していると考えられるビメンチン陽性星状膠細胞の増殖を抑制する一方、神経栄養因子を分泌すると言われるglial fibrially acidic protein（GFAP）陽性星状膠細胞には影響を与えない。このことは、本発明の脳損傷の予防・治療剤は、脳損傷において炎症やはん痕による二次的脳損傷を抑制し、また外傷性痙攣等の防止や、神経再生を促進させる環境を作り出す可能性を示唆する。従って本発明の脳損傷の予防・治療剤は、頭部外傷（脳挫傷等）に伴う脳損傷、くも膜下出血に伴う脳損傷、脳内出血に伴う脳損傷、開頭手術一般の術後脳損傷等の予防および／または治療に有効であると考えられる。
【００１５】
【発明の効果】
本発明の脳損傷の予防・治療剤は、単球／マクロファージ、多核白血球等の炎症性細胞による脳組織損傷を抑制することから、中枢神経の外傷のみならず、炎症による組織損傷、脳浮腫等に対する治療薬として有用である。
【００１６】
【実施例】
次に、本発明を実施例によって更に具体的に説明するが、本発明はその要旨を越えない限り以下の実施例に限定されるものではない。
実施例１
８〜９週齢の雄性SDラット（体重約200-250g。実験群として41匹、対照群として24匹）を用いた。
【００１７】
ペントバタール 50mg/kgで腹腔内麻酔を施行し、自発呼吸下に剃毛、消毒後に頭部の皮膚を切開した。無菌操作にて、ブレグマから3.5mm右外側、0.2mm後方に直径3.0mmの小開頭を設けた。顕微鏡下に硬膜を切開後、深さ2.5mmの切創を皮質及び皮質下に加えた。
ゼラチン（商品名スポンゼル、山之内製薬(株)製）で止血操作終了後、２mm3 のゼラチンを切創部位に留置し、以下の３種類の溶液を20μｌ滴下した。３種類の溶液は、対照群を生理食塩水（以下、「生食群」と略）とし、治療群としてのアルガトロバン生理食塩水希釈液（以下、「アルガトロバン群」と略）の濃度は0.1μg/ml、0.5μg/mlとした。その後閉頭し、自発呼吸下に管理した。術後１、３、５、７日後にペントバルビタール 50mg/kgで腹腔内麻酔を施行後、10％ホルマリンにて潅流固定し、脳を摘出した。摘出した脳は10％ホルマリンで24時間固定し、脳の損傷部位を中心に厚さ１cmで冠状に切り出し、パラフィン包埋した。パラフィンブロックから５μｍでほぼ連続に近い状態で薄切し、ヘマトキシリン−エオジン（H.E.）染色および免疫染色を行った。
【００１８】
免疫染色は抗ラット単球／マクロファージマウスモノクローナル抗体（ED１，1:500，Chemicon International Inc.）、抗ウシglial fibrially acidic protein（GFAP）ウサギポリクローナル抗体（Z334，1:500，Dako A/S ）、抗ウシビメンチンモノクローナルマウス抗体（Vim 3B4，1:100，Daok A/S）を使用し、それぞれの二次抗体を用いた後。ストレプトアビジン−ビオチン （SAB）法（ニチレイ(株)社）にて行った。
【００１９】
評価は、細胞の走化性、ケモキネシスの面から創部に留置したゼラチンと創縁における細胞の種類、さらに細胞数の時間経過を検討した。具体的には、それぞれの部位に100μｍ×100μｍの関心領域を20ヶ所設定し、1)多核白血球数、2)単球／マクロファージ陽性細胞数、3)GFAP陽性星状膠細胞数、4)ビメンチン陽性星状膠細胞数を生食群とアルガトロバン群の0.1μg/mlと0.5μg/mlの２種類の濃度で創傷を与えてから、１、３、５、７日目に比較検討した。
【００２０】
結果は平均値±標準偏差（SD）で示し、フィッシャーの多重比較検定法を用い、危険率５％以下を有意と判定した。
結果を表１〜表３に示す。
【００２１】
【表１】
0004674339.tif 000003
【００２２】
【表２】
0004674339.tif 000004
【００２３】
【表３】
0004674339.tif 000005
上記表中、PML(G)、Mo/MΦ(G)、PML(E)、Mo/MΦ(E)、GFAP(+)ast.(E)、vim.(+)ast.(E)は、それぞれゼラチン内の多核白血球、ゼラチン内の単球／マクロファージ陽性細胞、創縁における多核白血球、創縁における単球／マクロファージ陽性細胞、創縁におけるGFAP陽性星状膠細胞、創縁におけるビメンチン陽性星状膠細胞を表し、*はP<0.05を、また**はP<0.01を表す。
【００２４】
上記の結果より、アルガトロバンは脳損傷部位近傍において、炎症性細胞の集ぞくとビメンチン陽性星状膠細胞の増殖といった有毒な反応を抑制する一方、神経保護作用的な要素を含むGFAP陽性星状膠細胞には影響を与えないことにより、損傷脳における二次的脳損傷を抑制し、神経再生を促進させる環境を作り出す可能性を示唆した。