(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
重量平均分子量が５，０００〜５０，０００のガラクトマンナン分解物、およびツバキ科植物の熱水抽出画分より得られるポリフェノール化合物を含有する、糖尿病および／または糖尿病性腎症の予防、改善または治療用組成物。
【請求項２】
ガラクトマンナン分解物が、グアガム、ローカストビーンガムおよびタラガムからなる群より選択されるガラクトマンナンの分解物である、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
ガラクトマンナン分解物が、ガラクトマンナンをβ−ガラクトマンナナーゼで分解して得られるものである、請求項１又は２記載の組成物。
【請求項４】
ガラクトマンナン分解物の糖鎖の８０％以上が、２２〜４７単位のマンノース重合度である、請求項１〜３いずれか記載の組成物。
【請求項５】
ガラクトマンナン分解物の５℃、５重量％水溶液の粘度が、ブルックフィールド粘度計で１３０ｍＰａ・ｓ以下である、請求項１〜４いずれか記載の組成物。
【請求項６】
ツバキ科植物が茶である、請求項１〜５いずれか記載の組成物。
【請求項７】
ポリフェノール化合物が、緑茶の熱水抽出画分より得られるものである、請求項１〜６いずれか記載の組成物。
【請求項８】
ポリフェノール化合物が、（＋）−カテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−ガロカテキンガレート、（−）−エピカテキン、（−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキン、（−）−カテキンガレート、（−）−エピガロカテキンガレート、没食子酸、遊離型テアフラビン、テアフラビンモノガレートＡ、テアフラビンモノガレートＢおよびテアフラビンジガレートからなる群より選択される１種以上である、請求項１〜７いずれか記載の組成物。
【請求項９】
糖尿病がＩＩ型糖尿病である、請求項１〜８いずれか記載の組成物。
【請求項１０】
重量平均分子量が５，０００〜５０，０００のガラクトマンナン分解物の投与患者に投与するための、ツバキ科植物の熱水抽出画分より得られるポリフェノール化合物を含有する、糖尿病および／または糖尿病性腎症の予防、改善または治療用組成物。
【請求項１１】
ツバキ科植物の熱水抽出画分より得られるポリフェノールの投与患者に投与するための、重量平均分子量が５，０００〜５０，０００のガラクトマンナン分解物を含有する、糖尿病および／または糖尿病性腎症の予防、改善または治療用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、糖尿病および／または糖尿病性腎症に罹患している患者、または罹患の疑いのあるヒトに使用することのできる予防、改善、または治療用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】  糖尿病は、多飲、多尿、体重減少などの症状、慢性の高血糖を主な特徴とし、一般的に、網膜症、腎症、末梢神経障害などの合併症を伴う疾患である。糖尿病は、病因により、一次性糖尿病（インスリン依存性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、インスリン非依存性糖尿病（ＩＩ型糖尿病））、二次性糖尿病（膵臓性糖尿病、膵外性／内分泌性糖尿病、薬剤誘発性糖尿病）などに分類されている。さらに、糖尿病は、心筋梗塞、脳梗塞などの動脈硬化性疾患の危険因子となることが知られている。【０００３】  従来、糖尿病の治療方法として、例えば、食事療法、運動療法などによる生活改善をはじめ、インスリン注射、薬物投与などの治療方法が行われていた。また、植物由来の物質も糖尿病の治療に用いられている（例えば、特許文献１参照）。【０００４】  一方、糖尿病性腎症の治療方法として、従来は、例えば、哺乳動物の腸管粘膜由来のスロデキサイド（特許文献２参照）、塩酸エホニジピン（特許文献３参照）、サルビエミルチオルヒゼラディクスハーブ（特許文献４）などの治療方法が行われていた。
【特許文献１】特開２００２−０６８９９５号公報
【特許文献２】特開平６−３２９５４１号公報
【特許文献３】特開平１１−２４６４１７号公報
【特許文献４】特表２００３−５１０２８６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】  しかしながら、従来の治療方法を適用しても、所望の効果が得られない症例もある。また、薬物療法においては、その薬物による治療効果のほかに副作用が生じるおそれがあるなどの問題を有している。【０００６】  従って、本発明の目的は、副作用などの問題が生じにくく、安全性の高い糖尿病および／または糖尿病性腎症の予防、改善または治療用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、
〔１〕重量平均分子量が５，０００〜５０，０００のガラクトマンナン分解物、およびツバキ科植物の熱水抽出画分より得られるポリフェノール化合物を含有する、糖尿病および／または糖尿病性腎症の予防、改善または治療用組成物、
〔２〕重量平均分子量が５，０００〜５０，０００のガラクトマンナン分解物の投与患者に投与するための、ツバキ科植物の熱水抽出画分より得られるポリフェノール化合物を含有する、糖尿病および／または糖尿病性腎症の予防、改善または治療用組成物、ならびに
〔３〕ツバキ科植物の熱水抽出画分より得られるポリフェノールの投与患者に投与するための、重量平均分子量が５，０００〜５０，０００のガラクトマンナン分解物を含有する、糖尿病および／または糖尿病性腎症の予防、改善または治療用組成物
に関する。
【発明の効果】
【０００８】  本発明により、投与による副作用などの問題が生じにくく、安全性の高い糖尿病および／または糖尿病性腎症の予防、改善または治療用組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は糖尿病性腎症に関するパラメーターを比較した図である。左のグラフはグルコースを、右のグラフはグリコシル化タンパク質を示す。グラフ中、＃は正常ラットに対してｐ＜０．００１である場合を表し、＊は糖尿病性腎症を有する対照ラットに対してｐ＜０．０５である場合を表し、＊＊は糖尿病性腎症を有する対照ラットに対してｐ＜０．０１である場合を表し、＊＊＊は糖尿病性腎症を有する対照ラットに対してｐ＜０．００１である場合を表す。
【図２】図２は糖尿病性腎症に関するパラメーターを比較した図である。左上のグラフは尿素窒素を、左下のグラフはトリグリセリド、右のグラフはＭＤＡを示す。グラフ中、＃は正常ラットに対してｐ＜０．０１である場合を表し、＃＃は正常ラットに対してｐ＜０．００１である場合を表し、＊は糖尿病性腎症を有する対照ラットに対してｐ＜０．０１である場合を表し、＊＊は糖尿病性腎症を有する対照ラットに対してｐ＜０．００１である場合を表す。
【図３】図３は糖尿病性腎症に関するパラメーターを比較した図である。左のグラフは尿タンパク質を、右のグラフは血清クレアチニンを示す。グラフ中、＃は正常ラットに対してｐ＜０．００１である場合を表し、＊は糖尿病性腎症を有する対照ラットに対してｐ＜０．０１である場合を表し、＊＊は糖尿病性腎症を有する対照ラットに対してｐ＜０．００１である場合を表す。
【図４】図４は糖尿病性腎症誘発ラットの糸球体の顕微鏡写真である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】  本発明者らは、鋭意研究を行なった結果、特定の食物繊維および／またはポリフェノール化合物を含有する組成物が顕著な糖尿病および／または糖尿病性腎症の予防、改善または治療作用を有することを見出し、本発明を完成させるに至った。【００１１】  すなわち、本発明の組成物は、特定の食物繊維および／またはポリフェノール化合物を含有することを一つの特徴とする。【００１２】  本発明の組成物は、Ｉ型糖尿病またはＩＩ型糖尿病のいずれの糖尿病の予防、改善または治療にも利用可能である。【００１３】  本発明に用いられる特定の食物繊維は、ガラクトマンナン分解物、難消化性デキストリン、ポリデキストロース、イヌリン、アラビノガラクタン、コーンファイバー、水溶性大豆多糖類、サイリウム、および低分子化アルギン酸ナトリウムからなる群より選択される１種以上の食物繊維であり、豆科植物由来という消費者の天然志向および食物繊維として古くから食経験があり、さらに安全性が明らかにされている観点から、ガラクトマンナン分解物が好ましい。【００１４】  本発明において、ガラクトマンナンとは、マンノースを主成分とする糖鎖にガラクトースを主成分とする側鎖が結合した多糖類をいい、その具体例としては、グアガム、ローカストビーンガム、タラガムなどが挙げられ、好ましくは、グアガムまたはローカストビーンガムである。ガラクトマンナンの市販品としては、ネオソフトＧ（太陽化学社製）、ネオソフトＬ（太陽化学社製）などが挙げられる。【００１５】  本発明において、ガラクトマンナン分解物は、上記ガラクトマンナンの１種または２種以上を混合して分解あるいは分解して混合することにより得られる。【００１６】  ガラクトマンナンを分解する方法としては、特に限定されないが、酵素分解法、酸分解法などが挙げられ、一定の品質のものが得られやすいため酵素分解法が好ましい。酵素分解法に用いられる酵素としては、マンノースを主成分とする糖鎖を加水分解するものであれば、市販のものでも天然由来のものでもよいが、好ましくは、アスペルギルス属菌またはリゾープス属菌由来のβ−ガラクトマンナナーゼ、より好ましくはアスペルギルス属菌由来のβ−ガラクトマンナナーゼである。なお、分解に使用される酵素は、１種または２種以上を使用してもよい。【００１７】  上記のようにして得られたガラクトマンナン分解物の５重量％溶液の５℃における粘度は、ブルックフィールド粘度計（Ｂ型粘度計）を用いて測定した場合、加工上の操作性および治療効果の維持の観点から、５〜１３０ｍＰａ・ｓであることが好ましく、５〜５０ｍＰａ・ｓであることがより好ましく、５〜２０ｍＰａ・ｓであることがさらに好ましい。【００１８】  ガラクトマンナン分解物は、治療効果の維持の観点から、好ましくは糖鎖の８０％（この「％」は下記高速液体クロマトグラフィーの曲線下面積における面積比率をいう）以上が２２〜４７単位のマンノース重合度、より好ましくは３０〜４２単位のマンノース重合度であり、さらに好ましくは３２〜４０単位のマンノース重合度を有する。なお、マンノース重合度は、ガラクトマンナン分解物を水に溶解し、Ｇ３０００ＰＷ（東ソー社製）を用いて高速液体クロマトグラフィーで測定す��。このとき糖鎖単位の標準試薬としては、グルコース重合度が既知の直鎖デキストリン（グルコースの重合度：５０、１００、１５０）を用いる。【００１９】  また、ガラクトマンナン分解物の重量平均分子量は、治療効果の維持の観点から、３，０００〜１００，０００であることが好ましく、５，０００〜５０，０００であることがより好ましく、１０，０００〜３０，０００であることがさらに好ましい。なお、重量平均分子量は、ポリエチレングリコール（分子量：２，０００、２０，０００および２００，０００）を分子量マーカーとする高速液体クロマトグラフィー（ワイエムシイ社製カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｄｉｏｌ−１２０）に供し、その分子量分布を得、それを分子量マーカーにより得られた検量線に当てはめて数値化し、得られた値を平均することにより求めることができる。【００２０】  さらにガラクトマンナン分解物の繊維含量は、ＡＯＡＣ公定法（Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＡＯＡＣ  ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ，１６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌｕｍｅ  ＩＩ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３２，ｐ．７）で測定する場合、本発明の効果をさらに高める観点から、好ましくは６０重量％以上であり、より好ましくは６５重量％以上であり、さらに好ましくは７５重量％以上である。【００２１】  以上の操作により、ガラクトマンナン分解物が得られる。得られた分解物はそのまま、または所望により、さらに水などで洗浄して使用することもできる。また、市販のものを用いることもできる。市販品としては、例えば、サンファイバー（太陽化学社製）、ファイバロン（大日本製薬社製）などが挙げられる。【００２２】  難消化性デキストリンの市販品としては、例えば、ファイバーソル２（松谷化学工業社製）、パインファイバー（松谷化学工業社製）、ニュートリオース（ロケット社製）が挙げられる。ポリデキストロースの市販品としては、例えば、ライテス（ダニスコ・ジャパン社製）、ライテスＩＩ（ダニスコ・ジャパン社製）、ライテスＩＩＩ（ダニスコ・ジャパン社製）、ＳＴＡ−ＬＩＴＥ  ＩＩＩ（Ａ．Ｅ．ＳＴＡＬＥＹ  ＭＦＧ．Ｃｏ製）が挙げられる。イヌリンの市販品としては、例えば、ラフティリン（日本シーベルヘグナー社製）、ラフティノース（日本シーベルヘグナー社製）、フジＦＦ（フジ日本精糖社製）が挙げられる。アラビノガラクタンの市販品としては、例えば、ファイバーエイド（ＭＲＣポリサッカライド社製）、アラビノガラクタン（生物有機化学研究所社製）が挙げられる。コーンファイバーの市販品としては、例えば、水溶性コーンファイバー（日本食品化工社製）、日食アラビノキシラン（日本食品化工社製）、トウモロコシ植物繊維（富士産業社製）が挙げられる。水溶性大豆多糖類の市販品としては、例えば、ソヤファイブ（不二製油社製）、ＳＭ−７００（三栄源エフ・エフ・アイ社製）が挙げられる。サイリウムの市販品としては、例えば、サイリウム８０ＰＳ（備前化成株式会社製）、サイリウムシードガム（敷島紡績社製）が挙げられる。低分子化アルギン酸ナトリウムの市販品としては、例えば、ソルギン（カイゲン株式会社製）が挙げられる。【００２３】  本発明の組成物における前記食物繊���の含有量は、単糖類などの不純物による吸湿性を低減する観点から、単独で使用される場合、好ましくは６０〜９５重量％、より好ましくは７０〜９０重量％であり、後述のポリフェノール化合物と混合して使用される場合、好ましくは２０〜８０重量％、より好ましくは４０〜６０重量％である。【００２４】  本発明に用いられるポリフェノール化合物としては、特に限定されないが、ツバキ科植物、ココア、ブドウ種子、サツマイモおよび赤ワイン由来のポリフェノール化合物が好ましく、植物体そのまま、植物体からの抽出物、または抽出残渣が用いられ、あるいは化学合成品を用いてもよい。植物体からの抽出物は、熱水抽出画分、アルコール、酢酸エチル、石油エーテルなどの有機溶媒による溶剤抽出画分、水蒸気蒸留画分、圧搾画分、油脂吸着画分、液化ガス抽出画分、超臨界抽出画分、または乾留画分により得られる抽出物が挙げられる。なかでも、ポリフェノール化合物の組成比の割合の観点から、ツバキ科植物の熱水抽出画分より得られたポリフェノール化合物がより好ましい。【００２５】  前記ツバキ科植物の中では、茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ  Ｌ．）が好ましく、なかでもポリフェノール化合物は、緑茶、ウーロン茶または紅茶の抽出物が好ましく、特に、緑茶の抽出物が好ましい。前記熱水抽出画分は、例えば、特開平８−１０３２２５号公報記載の方法により調製することができる。さらに好ましくは、治療効果を阻害せず、カフェインによる副作用の低減の観点から、該緑茶の抽出物からカラムクロマトグラフィーによってカフェインを取り除いた抽出物である。茶抽出物中のポリフェノール化合物の含有量は、食品に用いた際の味の低減を防止する観点から、乾燥物に換算して７０重量％以上であることが好ましく、７５重量％以上がより好ましく、８０重量％以上がさらに好ましい。該含有量は、以下の実施例に記載の方法により測定することができる。茶抽出物中のカフェインの含有量は、治療効果を阻害せず、カフェインによる副作用の低減の観点から、乾燥物に換算して１．５重量％以下であることが好ましく、１．０重量％以下がより好ましく、０．５重量％以下がさらに好ましい。【００２６】  前記ポリフェノール化合物の具体例としては、例えば、（＋）−カテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−ガロカテキンガレート、（−）−エピカテキン、（−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキン、（−）−エピガロカテキンガレート、没食子酸、遊離型テアフラビン、テアフラビンモノガレートＡ、テアフラビンモノガレートＢ、テアフラビンジガレートなどが挙げられる。前記ポリフェノール化合物は単独でまたは混合して用いることができる。前記ポリフェノール化合物の中では、（−）−ガロカテキンガレート、（−）−エピカテキンガレート、（−）−エピガロカテキンガレートからなる群より選ばれた少なくとも１種のポリフェノール化合物が好ましい。【００２７】  前記ポリフェノール化合物を混合して用いる場合、ポリフェノール化合物混合物中の各ポリフェノール化合物の含量が、（＋）−カテキン０．２〜５．０重量％、（＋）−ガロカテキン０．５〜１０．０重量％、（−）−ガロカテキンガレート３．０〜８．０重量％、���−）−エピカテキン３．０〜１０．０重量％、（−）−エピカテキンガレート５．０〜１５．０重量％、（−）−エピガロカテキン２．０〜１８．０重量％、（−）−エピガロカテキンガレート２５．０〜７５．０重量％、没食子酸０〜２．０重量％、遊離型テアフラビン０〜２０．０重量％、テアフラビンモノガレートＡ０〜５．０重量％、テアフラビンモノガレートＢ０〜５．０重量％、テアフラビンジガレート０〜５．０重量％であることが好ましい。【００２８】  本発明の組成物におけるポリフェノール化合物の含有量は、カフェインによる副作用の低減、効果発現など観点から、単独で使用される場合、好ましくは５０〜９５重量％、より好ましくは７０〜９０重量％であり、前述の食物繊維と混合して使用される場合、好ましくは２０〜８０重量％、より好ましくは４０〜６０重量％である。【００２９】  本発明の組成物が前記食物繊維とポリフェノール化合物を共に含有する場合、食物繊維およびポリフェノール化合物の混合比率（食物繊維／ポリフェノール化合物）（重量比）は、好ましくは１／５〜５／１であり、より好ましくは１／３〜３／１であり、さらに好ましくは１／２〜２／１である。【００３０】  本発明の組成物は、前記食物繊維とポリフェノール化合物を共に含有することにより、糖尿病および／または糖尿病性腎症に対してさらに優れた予防、改善または治療効果を奏する。【００３１】  また、本発明の組成物としては、日常の使用に適するという観点から、食品または医薬品が好ましい。【００３２】  本発明に包含される食品としては、乾燥食品、サプリメントなどの固形食品、また、清涼飲料やミネラルウォーター、嗜好飲料、アルコール飲料などの液状食品が挙げられる。固形食品としては、特に限定されるものではないが、練り製品、大豆加工品、調味料、ムース、ゼリー、冷菓、飴、チョコレート、ガム、クラッカー、ケーキ、パンなどが挙げられる。また、液状食品としては、特に限定されるものではないが、緑茶、ウーロン茶、紅茶、ハーブティーなどの茶類、濃縮果汁、濃縮還元ジュース、ストレートジュース、果実ミックスジュース、果肉入り果実ジュース、果汁入り飲料、果実・野菜ミックスジュース、野菜ジュース、炭酸飲料、清涼飲料、乳飲料、日本酒、ビール、ワイン、カクテル、焼酎、ウイスキーなどが挙げられる。本発明に含有される食品としてはまた、アミノ酸、タンパク質、ミネラルなどの各種栄養素を含有する栄養食品、栄養補助食品なども挙げられる。さらに、本発明に含有される食品としては、流動食などの医療食、とろみ調整食品、嚥下用補助食品などの医療用補助食品、とろみ調整剤、嚥下食用テクスチャー改良剤、粘度調整剤などの医療用補助剤なども挙げられる。【００３３】  また、本発明に包含される医薬品としては、溶液、懸濁物、粉末、固体成型物などのいずれでもよく、その剤型としては、錠剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、ドリンク剤、注射剤、貼付剤、坐剤、吸入剤などが挙げられる。【００３４】  本発明の組成物の製法は、一般的な食品または医薬品の製法を適用することができる。【００３５】  本発明の所望の効果を得るための本発明の組成物の投与量は、食物繊維として、好ましくは０．３〜１０ｇ／日、より好ましくは、０．５〜５ｇ／日であり、ポリフェノール化合物として、好ましくは０．１〜３ｇ／日、より好ましくは、０．２〜１．５ｇ／日である。ただし、個体差（疾患の重篤度、性別、年齢など）があるため、本発明における投与量は、かかる範囲にのみ限定されるものではなく、本発明の所望の効果が得られるように、個別具体的に投与量を適宜設定すればよい。【００３６】  本発明の組成物の投与方法としては、特に限定されないが、好ましくは、経口投与、静脈投与、経直腸投与、より好ましくは、経口投与であり、前記の好適範囲で投与すればよい。【００３７】  本発明の組成物を患者へ投与する際には、前記食物繊維または前記ポリフェノール化合物のいずれかを単独で患者に投与してもよく、食物繊維およびポリフェノール化合物の両方を同時に患者に投与してもよく、食物繊維を患者に投与し、さらにポリフェノール化合物を該患者に投与してもよく、あるいはポリフェノール化合物を患者に投与し、さらに食物繊維を患者に投与してもよい。【００３８】  さらに本発明の組成物は、従来の糖尿病または糖尿病性腎症の治療薬と併用して用いることもできる。【００３９】  本発明の組成物により、糖尿病性腎症ラットにおいて、血液中のグルコース濃度、グリコシル化タンパク質量、尿素窒素濃度、トリグリセリド濃度、クレアチニン濃度およびＭＤＡ濃度、ならびに尿タンパク質量の低下がもたらされることが見出されている。また、本発明の組成物により、糖尿病性腎症ラットの糸球体における滲出性病変、細動脈硬化およびメサンギウム基質の増生の改善作用が見出されている。さらに、本発明の組成物により、Ｉ型糖尿病患者またはＩＩ型糖尿病患者においては、血糖降下、血中インスリン濃度の上昇、脂質の低下がもたらされることが見出されている。従って、本発明の組成物は、糖尿病または糖尿病性腎症を予防、改善および治療するために使用することができる。【００４０】  以下に本発明を実施例と試験例により説明するが、本発明の範囲がこれらによって限定されるものではない。
【実施例】
【００４１】実施例１
水８９８重量部にグアガム粉末１００重量部を加えて混合し、１０重量％クエン酸水溶液を用いてｐＨを３．０に調整した。この混合物に、アスペルギルス属菌由来のβ−ガラクトマンナナーゼ（ノボノルディクバイオインダストリー社製、商品名：Ｖｉｓｃｏｚｙｍｅ、１，０００単位）０．２重量部と水２重量部とを混合したものを添加して４０〜４５℃で２４時間酵素反応させた。反応終了後、９０℃で１５分間加熱して酵素を失活させた。濾別して不溶物を除去し、得られた透明な溶液を減圧濃縮した。得られた濃縮物（固形分２０％）を噴霧乾燥し、ポリガラクトマンナンの白色粉末６５重量部を得た。【００４２】  得られたガラクトマンナン分解物について、重量平均分子量、マンノース重合度、粘度および繊維含量を以下のように測定した。【００４３】重量平均分子量
ガラクトマンナン分解物を水に溶解させて０．５（ｗ／ｖ）％濃度の水溶液を調製し、ポリエチレングリコール（分子量；２，０００、２０，０００、１００，０００など）をマーカーとする、高速液体クロマトグラフ法（カラム；ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｄｉｏｌ−１２０、ワイエムシィー社製）に供して重量平均分子量を測定した。【００４４】マンノース重合度
固定層としてカラムにＧ３０００ＰＷ（東ソー社製）を用いて高速液体クロマトグラフィー（流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、４０℃、溶出液：０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．９））で測定した結果、ガラクトマンナン分解物の糖鎖の８０％以上はマンノース重合度が３０〜４０単位の範囲内に包含されていた。このとき糖鎖単位の標準試薬として、グルコース重合度が既知の直鎖デキストリン（グルコースの重合度：５０、１００、１５０）を用いた。【００４５】粘度
ガラクトマンナン分解物を水に溶解させて０．５（ｗ／ｖ）％濃度の水溶液を調製し、その粘度をＢ型粘度計（東機産業社製）で５℃にて測定した。【００４６】繊維含量
ガラクトマンナン分解物の繊維含量をＡＯＡＣ公定法（Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＡＯＡＣ  ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ，１６ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌｕｍｅ  ＩＩ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３２，ｐ．７）で測定した。【００４７】  得られたガラクトマンナン分解物は、重量平均分子量、マンノース重合度、粘度および繊維含量はそれぞれ２０，０００、３０〜４０単位、１３ｍＰａ・ｓおよび７５重量％であった。【００４８】実施例２
緑茶（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ  Ｌ．）１，０００ｋｇに約１５００Ｌの水を加え撹拌し、８０℃で３時間抽出し、濾過して濾液を得た。この濾液を酢酸エチルで分配し、酢酸エチルを蒸発除去することでポリフェノール化合物１００ｋｇを得た。【００４９】  得られたポリフェノール化合物の含量は、（＋）−カテキン０．６重量％、（＋）−ガロカテキン４．６重量％、（−）−ガロカテキンガレート６．３重量％、（−）−エピカテキン６．５重量％、（−）−エピカテキンガレート９．８重量％、（−）−エピガロカテキン１４．５重量％、（−）−エピガロカテキンガレート４５．８重量％、および没食子酸０．５重量％であった。また、総ポリフェノール化合物含量は８５．７重量％であり、カフェインは０．１重量％であった。【００５０】試験例１
ウィスター系雄性ラット（体重：１２０〜１３０ｇ、日本ＳＬＣ社から購入）を用い、室温を２５℃として湿度約６０％に保ち、針金底のケージを使い、照明の条件は１２時間明／１２時間暗とした。実験飼料は２４．０重量％タンパク質／３．５重量％脂質／６０．５重量％炭水化物を含むクレア（ＣＬＥＡ）社のものを用い、水は自由に与え、数日間適応させた。その後、一夜絶食させて、クエン酸バッファーに溶解させたストレプトゾトシン（Ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ、（ＳＴＺ、シグマケミカル社製））５０ｍｇ／ｋｇを腹腔内に注射し、糖尿病誘発ラットを作製した。【００５１】  注射から１週間経過後、食物繊維として実施例１で調製したガラクトマンナン分解物、難消化性デキストリン（松谷化学工業株式会社製、商品名：ファイバーソル２）、ポリデキストロース（カルター・フードサイエンス株式会社製、商品名：ライテス）、イヌリン（日本シーベルヘグナー株式会社製、商品名：ラフティリン）、アラビノガラクタン（ＭＲＣポリサッカライド株式会社製、商品名：ファイバーエイド）、コーンファイバー（日本食品化工株式会社製、商品名：水溶性コーンファイバー）、水溶性大豆多糖類（不二製油株式会社製、商品名：ソヤファイブ）、サイリウム（備前化成株式会社製、商品名：サイリウム８０ＰＳ）、低分子化アルギン酸ナトリウム（カイゲン株式会社製、商品名：ソルギン）を用い、ポリフェノール化合物として実施例２で調製したポリフェノール化合物を用い、表１で示した組成と試験群で５０日間連続的に経口的に糖尿病誘発ラットに投与した。【００５２】
【表１】
0004705628.tif 000002
【００５３】  被験物質の投与５０日目に血液を採取し、血清を分離して、血清中のグルコース濃度、グリコシル化タンパク質量およびクレアチニン濃度を測定し、その結果を表２に示す。【００５４】  なお、グルコース濃度、グリコシル化タンパク質量およびクレアチニン濃度は、下記の方法を用いて測定した。【００５５】グルコース濃度
グルコース濃度の測定には、グルコースＣＩＩ試験キット（和光純薬社製）を用いた。肝臓、腎臓のグルコースについては、各組織を０．１５Ｍ  Ｂａ（ＯＨ）２と５重量％ＺｎＳＯ４を含んだ氷冷生理的食塩水の９倍量で磨砕し、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１５分）し、上清（０．５ｍＬ）について上記キットにて測定した。【００５６】グリコシル化タンパク質量
タンパク質のグリコシル化の程度をタンパク質と非酵素的に結合したグルコースが５−ヒドロキシメチルフルフラール（５−ＨＭＦ）として放出されるのを測定した。すなわち、ＦｌｕｃｋｉｇｅｒとＷｉｎｔｅｒｈａｌｔｅｒの方法に従い、血清０．１ｍＬを１．０ｍＬに希釈し、０．１Ｍシュウ酸０．５ｍＬと混合して、１００℃で４．５時間加水分解したのち、チオバルビツール酸（ＴＢＡ）と反応させ、４４３ｎｍにおける吸光度を測定した。【００５７】クレアチニン濃度
クレアチニン濃度はＣＲＥ−ＥＮ  Ｋａｉｎｏｓ（カイノス研究所製）を用いて測定した。【００５８】
【表２】
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【００５９】  表２に示したように、本発明品を投与したＡ群〜Ｉ群は、グルコース濃度とグリコシル化タンパク質量が低下することで糖尿病の改善効果を示し、クレアチニン濃度が低下することで糖尿病の合併症である糖尿病性腎症を抑制することがわかった。【００６０】試験例２
インスリン非依存性（ＮＩＤＤ）糖尿病患者に対する試験薬の治療効果を調べるため、総３０名のＮＩＤＤ患者を対象とした経口ブドウ糖負荷試験（ｏｒａｌ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｅｓｔ）とインスリン分泌能試験（ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｔｅｓｔ）を実施した。【００６１】  実験対象者は、内院治療を受けたＩＩ型糖尿病患者から６０日以上継続して治療を受けた３０名の患者を用いた。被験物質として、一食当たり実施例１で調製したガラクトマンナン分解物０．４ｇ、実施例２で調製したポリフェノール化合物５０ｍｇを三食毎に摂取させた。【００６２】  被験者の選定基準は、１９９８年のＷＨＯ診断基準により下記の１項目に符合する場合とした。
（１）静脈血糖値の測定結果、空腹時の血糖値が７．８ｍｍｏｌ／Ｌ（１４０ｍｇ／ｄｌ）以上、または食後血糖が１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄｌ）以上を示す人
（２）空腹時の血糖値が７．８ｍｍｏｌ／Ｌ（１４０ｍｇ／ｄｌ）以下でも経口ブドウ糖負荷試験の結果、１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄｌ）以上を示す人
（３）経口ブドウ糖負荷試験を行い、１時間後の血糖値と２時間後の血糖値がそれぞれ１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄｌ）以上、または空腹時の血糖が７．８ｍｍｏｌ／Ｌ（１４０ｍｇ／ｄｌ）以上を示す人【００６３】  また、被験者の脱落基準は、上記選定基準に符合される人々のうち、下記の場合に該当する被験者とした。
（１）試験薬を与える前の血糖値は選定基準に該当されても、運動療法や食事療法を通して空腹時の血糖値が７．８ｍｍｏｌ／Ｌ（１４０ｍｇ／ｄｌ）以下、または２時間後の血糖値が１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄｌ）以上を示す人
（２）試験規定を違反して結果算出に影響をきたす人
（３）インスリン依存型糖尿病（Ｉ型糖尿病）患者として診断された人
（４）試験開示の１か月内に糖尿病性ケトージス患者や酸性症患者として判定された人
（５）重症の合併症を有する人、精神病患者
（６）治療中断者、資料に異常があるひと
（７）１５歳以下のひと、または妊産婦や産婦【００６４】  観察方法は下記に従った。
１）一般的観察
各被験者に対する血糖値等、一般的な身体検査および一部の該当患者に対する心臓・腎臓・肝・血中脂質を測定・記録する。
２）効果測定
（１）空腹時や食事２時間後の血糖値を測定する（投薬開示後の１０〜１５日ごとに測定）
（２）経口ブドウ糖負荷試験（ｏｒａｌ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｅｓｔ）
（３）インスリン分泌能試験（ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｔｅｓｔ）
（４）血中ａｍｉｎｏ−ｆｒｕｃｔｏｓｅの測定【００６５】  上に述べた（１）は必須的に測定し、以外の項目は必要に応じて測定した。その後、投与６０日後に試験前の測定値と比較した。【００６６】  判定基準は、下記とした。
１）顕著
−投薬後に基本的な症状の消失とともに、空腹時の血糖値が７．２ｍｍｏｌ／Ｌ（１３０ｍｇ／ｄｌ）以下、食事をたべさせ２時間後の血糖値が８．３ｍｍｏｌ／Ｌ（１５０ｍｇ／ｄｌ）以下
−血糖値または尿糖値が治療前と比較して３０％以上に減少した場合
２）有効
−投薬後に症状の改善ともに、空腹時の血糖値が８．３ｍｍｏｌ／Ｌ（１５０ｍｇ／ｄｌ）以下、食事をたべさせ２時間後の血糖値が１０ｍｍｏｌ／Ｌ（１８０ｍｇ／ｄｌ）以下
−血糖値または尿糖値が治療前と比較して１０％以上に減少した場合
３）無効
−投薬後に症状の改善がないし、血糖値または尿糖値の減少程度が上記基準にまだ達しないこと【００６７】  以上の臨床試験の結果を下記に示した。【００６８】１．血糖値降下
総３０名のＩＩ型糖尿病患者のうち、顕著な効果は２１例（７１．２％）、有効な効果は８例（２６．３％）、無効は１例（２．４８％）であって、総有効率は９７．５％が認められた。【００６９】２．血糖値降下百分率
３０名の被験者のうち、２５例（８２．２％）が３０％以上の血糖値降下を示し、４例（１５．２％）が１０％以上の血糖値降下を示した。治療後に血糖値が低下されずに増加した症例は１例であった。しかし、３０％以上の血糖値降下を示した人に対して血糖値を測定した結果、７．２ｍｍｏｌ／Ｌ（１３０ｍｇ／ｄｌ）以上を示した症例が４例あり、これを顕著の代わりに有効と判定した。【００７０】３．血糖値降下平均時間
３０例の平均血糖値降下所要時間は４０．９日であった。【００７１】試験例３
インスリン非依存性糖尿病に対して、本発明による組成物の治療効果を調べるため、２４名のＩＩ型糖尿病患者を選んで試料を投与し、投与前後の血糖値変化、インスリン分泌量の確認および血中脂質濃度を測定した。被験物質として、一食当たり実施例１で調製したガラクトマンナン分解物０．４ｇ、実施例２で調製したポリフェノール化合物５０ｍｇ三食毎に摂取させた。【００７２】  なお、被験者の選定は試験例２に準じた。【００７３】  測定方法は下記に従った。
１）投与期間：投与後５０日を治療周期とした。
２）測定時期：治療期間中、毎週月曜日に血糖値を測定し、投薬の開示前と投薬６０日後に空腹時の血糖値および食後の１時間、２時間に血中インスリン濃度を測定した。
３）測定機器：米国のＪｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ社のｏｎｅ−ｔｏｕｃｈ形血糖測定器を使用し、血中インスリン濃度は先免疫計数観測セットを使用した。
４）投与方法：被験者を試験群と対照群として各１２名ずつ２群に分け、試験群には被験物質と市販の糖尿病治療薬、対照群には市販の糖尿病治療薬を経口投与した。
５）測定方法：治療前後期間中、毎週症状、血圧、体重を測定し、酵素法により空腹時、食事の２時間後に血清中のグルコース濃度（血糖値）、インスリン濃度、総コレステロール（ＴＣ）濃度および中性脂質（ＴＧ）濃度ならびに尿中のグルコース濃度（尿糖値）を測定した。【００７４】  なお、グルコース濃度は前記の方法に従い、インスリン濃度、総コレステロール（ＴＣ）濃度および中性脂質（ＴＧ）濃度ならびに尿中のグルコース濃度は、下記の方法を用いて測定した。【００７５】インスリン濃度
インスリン濃度はインスリン測定キット（ベルトールドジャパン社製）を用いて測定した。【００７６】総コレステロール濃度
総コレステロール濃度はコレステロールＥ−Ｔｅｓｔ  Ｗａｋｏ（和光純薬社製）を用いて測定した。【００７７】中性脂質濃度
中性脂質濃度はトリグリセライドＥ−Ｔｅｓｔ  Ｗａｋｏ（和光純薬社製）を用いて測定した。【００７８】尿中のグルコース濃度
血清の代わりに尿を使用することによる以外は前記と同様に測定を行った。【００７９】  結果を下記に示した。
１．判定基準
１）良好
−投薬後に基本的な症状の消失とともに、空腹時の血糖値が７．２ｍｍｏｌ／Ｌ（１３０ｍｇ／ｄｌ）以下、食事をたべさせ２時間後の血糖値が８．３ｍｍｏｌ／Ｌ（１５０ｍｇ／ｄｌ）以下
−血糖値または尿糖値が治療前と比較して３０％以上に減少した場合
２）有効
−投薬後に症状の改善ともに、空腹時の血糖値が８．３ｍｍｏｌ／Ｌ（１５０ｍｇ／ｄｌ）以下、食事をたべさせ２時間後の血糖値が１０ｍｍｏｌ／Ｌ（１８０ｍｇ／ｄｌ）以下
−血糖値または尿糖値が治療前と比較して１０％以上に減少した場合【００８０】２．効果
試験群と対照群の血糖値は顕著に低下された（ｐ＜０．０１）。試験群（１２例）の場合には良好は７例、有効は４例であったが、対照群の場合には良好は４例、有効は４例と認められた。総有効率は９１．６７％／６６．７％として、試験群は対照群より高い血糖値降下効果が確かめられた。血糖値降下に所要される期間においても、対照群の２６．９３日に比べ、試験群は２０．１５日であって、試験薬の優れた治療効果が認められた。【００８１】３．血中インスリン濃度の変化
試験群の１２例に対して、治療前後の空腹時、食後の１時間、２時間に血中インスリン濃度を測定した。空腹時と食後の２時間後に測定した血中インスリン濃度は、治療前後に特異の変化はなかった（ｐ＞０．０５）。しかし、食後の１時間後に測定した血中インスリン濃度は著しく上昇した。その結果を表３に示した。【００８２】４．脂質の変化
試験群と対照群の血中ＴＣ濃度とＴＧ濃度を測定した。その結果、試験群でＴＣとＴＧの濃度は著しく低かった。その結果を表３に示した。【００８３】
【表３】
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【００８４】５．症状改善
試験群の患者において、多飲、多尿、多食症状がなくなり、体力も顕著に改善された。皮膚等の合併症（４例）では、症状消失（３例）が確かめられた。糖尿病患者の要求事項としては、血糖調節をはじめ、正常人の機能、体質への回復が挙げられる。本実験によると、本発明の試料は上記問題点を充分に解決することができると判断された。【００８５】試験例４．インスリン依存型糖尿病（Ｉ型糖尿病）患者への投与例
症例１
１）患者概要
５８歳の女性で、１９９２年に多飲、多尿、多食症状が現れ、また２か月の間に彼女の体重が６８ｋｇから６１ｋｇまで急激に減少した。内院時に糖尿病として診断され、１９９８年には急激な血糖値上昇（空腹時に２８０ｍｇ／ｄｌ）と視力減退等の合併症のため、４０日間入院した。退院後にインスリンを２０単位ずつ投与し、インスリンの投与期間中には空腹時の血糖値は１８０〜２００ｍｇ／ｄｌであった。
２）投与
患者本人および家族の同意を求め、実施例１で調製したガラクトマンナン分解物０．４ｇおよび実施例２で調製したポリフェノール化合物５０ｍｇを三食毎に摂取させた。３週間の服用後に血糖値が１３８ｍｇ／ｄｌに改善され、インスリン投与量が１５単位にまで減少された。さらに１週間後に再度血糖値を測定したところ、測定値は１４０ｍｇ／ｄｌであり、インスリン投与量を５単位に減少させた。同じ方法により服用後６週目にインスリン投与を中断したが、空腹時の血糖値が１４０〜１８０ｍｇ／ｄｌに維持された。また視力低下も改善された。【００８６】症例２
１）患者概要
１９３７年生まれの女性。１０年前の退職時に身体検査でＩ型糖尿病として診断され、その後に定期的なインスリン投与（１日３回、毎回１０単位）と通院治療等により、本発明品の投与前に測定された空腹時の平均血糖値は２１０〜２３０ｍｇ／ｄｌであった。入院記録はなく、多飲、多尿、多食症状、体重減少、または糖尿病による合併症は認められなかったが、定期的なインスリン投与により注射部位の発赤、掻痒、肥厚が顕著になっていた。
２）投与
患者本人および家族の同意を求め、実施例１で調製したガラクトマンナン分解物０．４ｇおよび実施例２で調製したポリフェノール化合物５０ｍｇを三食毎に摂取させた。血糖値を測定した結果、１８０ｍｇ／ｄｌを維持すればインスリン投与量を毎５単位ずつ減少するように勧めた。５週間の服用後に血糖値が１３２〜１６７ｍｇ／ｄｌに改善され、インスリン投与量を投与毎に５単位ずつ減少した。発赤、掻痒、肥厚のような副作用も改善することが認められた。【００８７】試験例５
ウィスター系雄性ラット（体重：１２０〜１３０ｇ、日本ＳＬＣ社から購入）を用い、室温を２５℃として湿度約６０％に保ち、針金底のケージを使い、照明の条件は１２時間明／１２時間暗とした。実験飼料は２４．０重量％タンパク質／３．５重量％脂質／６０．５重量％炭水化物を含むクレア（ＣＬＥＡ）社のものを用い、水は自由に与え、数日間適応させた。その後、腎臓の３／４を切除し、クエン酸バッファーに溶解させたストレプトゾトシン（Ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ、（ＳＴＺ、シグマケミカル社製））２５ｍｇ／ｋｇを腹腔内に注射し、糖尿病性腎症ラットを作製した。【００８８】  注射から１週間経過後、実施例１で調製したガラクトマンナン分解物と実施例２で調製したポリフェノール化合物を用い、表４で示した組成と試験群で５０日間連続的に経口的に糖尿病性腎症誘発ラットに投与した。【００８９】
【表４】
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【００９０】  被験物質の投与５０日目に血液を採取し、血清を分離して、血清中のグルコース濃度、グリコシル化タンパク質量、尿素窒素濃度、トリグリセリド濃度、ＭＤＡ濃度およびクレアチニン濃度を測定した。また被験物質の投与５０日目に、ラットの尿を採取し、尿タンパク質量を測定した。その結果を図１〜３に示す。【００９１】  なお、グリコシル化タンパク質量およびクレアチニン濃度は試験例１と同様に測定した。グルコース濃度、尿素窒素濃度、トリグリセリド濃度、ＭＤＡ濃度および尿タンパク質は以下のようにして測定した。【００９２】グルコース濃度
グルコースＢ試験キット（和光純薬社製）を使用して測定した。【００９３】尿素窒素濃度
Ａ／Ｇ  Ｂ  Ｔｅｓｔ  Ｗａｋｏ（和光純薬社製）を使用して測定した。【００９４】トリグリセリド濃度
トリグリセリドＥ−Ｔｅｓｔ  Ｗａｋｏ（和光純薬社製）を使用して測定した。【００９５】ＭＤＡ濃度
血液中のマロンジアルデヒドをチオバルビツル酸と反応させ、その赤色吸収波長５９５ｎｍを分光光度計（島津製作所社製）を用いて測定した。【００９６】尿タンパク質量
スルホサリチル酸による比濁法により測定した。【００９７】  図１〜３に示すように、ＧＴＰ＋ＰＨＧＧ群では、グルコース濃度、グリコシル化タンパク質量、尿素窒素濃度、トリグリセリド濃度、ＭＤＡ濃度、尿タンパク質量およびクレアチニン濃度の低下を示し、ＧＴＰ群では、グルコース濃度、トリグリセリド濃度、ＭＤＡ濃度、尿タンパク質量およびクレアチニン濃度の低下を示し、ＰＨＧＧ群では、グルコース濃度、トリグリセリド濃度、ＭＤＡ濃度および尿タンパク質量の低下を示し、いずれの群も対照と比較し、糖尿病性腎症の改善効果を示した。【００９８】  上記測定の後、ラットの腎臓を摘出し、光学顕微鏡（ニコン社製）を用いて腎臓の腎糸球体におけるメサンギウム領域の病理組織学的変化を観察した。ラットの腎糸球体の顕微鏡写真を図４に示す。【００９９】  顕微鏡写真から、対照群の糸球体（図４の（Ｂ）および（Ｃ））では、滲出性病変、細動脈硬化、そして一部にはメサンギウム基質の増生など糖尿病性腎症類似の糸球体病変が観察されたが、本発明の組成物を投与した群の糸球体（図４の（Ｄ）、（Ｅ）および（Ｆ））ではこのような病変が改善されていることが観察された。
【産業上の利用可能性】
【０１００】  本発明の組成物は、糖尿病および／または糖尿病性腎症の予防、改善および治療に使用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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