(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0004682495.tif 000007
で表わされる化合物またはその薬理学的に許容される塩もしくは水和物を有効成分として含有する眼疾患の予防、治療剤。
【請求項２】
有効成分が、Ｎ−［ｏ−（ｐ−ピバロイルオキシベンゼンスルホニルアミノ）ベンゾイル］グリシン・モノナトリウム塩・４水和物である請求の範囲第１項記載の予防、治療剤。
【請求項３】
局所投与用の剤形である請求の範囲第１項記載の予防、治療剤。
【請求項４】
点眼剤である請求の範囲第３項記載の予防、治療剤。
【請求項５】
水性懸濁点眼液である請求の範囲第４項記載の予防、治療剤。
【請求項６】
眼軟膏剤である請求の範囲第３項記載の予防、治療剤。
【請求項７】
眼炎症疾患の予防、治療用である請求の範囲第１項記載の予防、治療剤。
【請求項８】
角結膜における炎症疾患の予防、治療用である請求の範囲第７項記載の予防、治療剤。
【請求項９】
角膜潰瘍の予防、治療用である請求の範囲第１項記載の予防、治療剤。
【請求項１０】
感染性角膜潰瘍の予防、治療用である請求の範囲第９項記載の予防、治療剤。
【請求項１１】
有効成分を０．００１〜５％（ｗ／ｖ）含有する水性懸濁点眼液であり、１日１〜８回投与することを特徴とする請求の範囲第５項記載の予防、治療剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、白血球（好中球）由来のエラスターゼ活性阻害作用を有する眼疾患の予防、治療剤に関する。
背景技術
特公平５−８１５８６号および特開平５−１９４３６６号（対応ヨーロッパ公開５３９２２３号）は、ヒト好中球由来のエラスターゼ活性阻害作用を有し、肺気腫、アテローム性動脈硬化、リウマチ性関節炎などの予防、治療に有用な、式（Ｉ）：
0004682495.tif 000002
で表わされる化合物（以下、式（Ｉ）の化合物という）ならびにその塩および水和物を開示している。
一方、眼領域において、白血球や、そのエラスターゼが関与する種々の疾患が報告されている。例えば、眼感染症、角膜外傷、角膜潰瘍やぶどう膜炎などである。眼感染症では、白血球の細胞浸潤により、眼内に膿瘍が形成される［Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．，４０，３８５−３９１（１９９９）］。角膜外傷の一つであるアルカリ外傷（腐食）では、アルカリ腐食の早期から白血球が角膜実質細胞に出現し、さらにアルカリ腐食２〜３週間後から白血球エラスターゼの活性が認められることが報告されている［Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ．Ｒｅｓ．，２９，１５４−１６０（１９９７）］。また、角膜潰瘍においても、角膜創傷や角膜剥離などにより角膜実質内に白血球が浸潤し、エラスターゼやコラーゲンなどのたん白分解酵素が放出あるいは分泌される［Ｋｌｉｎ．Ｍｏｎａｔｓｂｌ．Ａｕｇｅｎｈｅｉｌｋｄ，１８８，５９３−５９５（１９８６）］。ぶどう膜炎、特に、ベーチェット病では血漿中の白血球エラスターゼ量の増加が確認されている［Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ  ２３６：１２９−１３４（１９９５），Ａｃｔａ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｓｃａｎｄ．７５：２８７−２８９（１９９７），Ｊ．Ｒｅｕｍａｔｏｌ．２５：３２６−３２８（１９９８）］。このように眼疾患において、白血球や、そのエラスターゼの関与が示唆されているが、実際にエラスターゼ阻害剤を投与して、その効果を確認したものではない。
特開平５−２２１８７２号（対応ヨーロッパ公開５１９３５４号）および特表平６−５０９２３２号（対応ヨーロッパ公開５９６１１８号）には、ある種の微生物由来のヒト白血球エラスターゼ阻害活性を有する物質が、角膜瘢痕組織の形成および線維芽細胞増殖［眼の凝固（火傷、機械的および化学的損傷、角膜結膜炎）など］の予防、治療剤として有用であることが一般的に記載されているが、実際に投与して、眼疾患に対する効果を確認したものではなく、また、これらの物質は、式（Ｉ）の化合物とは全く異なるものである。
発明の目的
本発明の主な目的は、式（Ｉ）の化合物を有効成分として含有する眼疾患の予防、治療剤を開発することである。
本発明のこの目的ならびに他の目的および効果を、添付の図面を参照して以下に説明する。
発明の概要
本発明者らは、式（Ｉ）の化合物またはその薬理学的に許容される塩もしくは水和物が、各種の眼疾患に対し顕著な予防、治療効果を奏することを見出した。
すなわち、本発明は、上記式（Ｉ）の化合物またはその薬理学的に許容される塩もしくは水和物を有効成分として含有することを特徴とする眼疾患、特に眼炎症性疾患および角膜潰瘍の予防、治療剤を提供するものである。
本発明はまた、上記有効成分を眼疾患の予防、治療の必要な哺乳動物に投与することからなる眼疾患の予防、治療法を提供するものである。
さらに、本発明は、上記有効成分の眼疾患の予防、治療剤の製造への使用も提供するものである。
さらに、本発明は、上記有効成分の水性懸濁点眼液を提供するものである。
発明の詳細な説明
本発明の予防、治療剤は、特に点眼剤や眼軟膏剤のような局所投与用の剤形のものが好ましく、眼感染症（例えば、角膜ヘルペス、細菌性角膜炎、細菌性結膜炎、真菌性角膜炎、アカントアメーバ角膜炎、感染性眼内炎、感染性角膜潰瘍など）、角膜外傷、瘢痕性角結膜疾患（例えば、アルカリ腐食角結膜炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、眼類天庖瘡など）、角膜潰瘍（例えば、モーレン潰瘍、慢性関節リウマチや膠原病に続発する角膜潰瘍、テリエン角膜変性、カタル性角膜潰瘍、感染性角膜潰瘍など）、ビタミンＡ欠乏による角膜軟化症、壊死性角膜炎、神経麻痺性角膜炎、糖尿病性角膜症、乾性角結膜炎、コンタクトレンズ装着時の角結膜炎、春季カタル、結膜アレルギー、ぶどう膜炎、ベーチェット病、白内障術後炎症および偽翼状片など様々な眼炎症疾患、特に角結膜における炎症疾患（例えば、角膜ヘルペス、細菌性角膜炎、細菌性結膜炎、真菌性角膜炎、アカントアメーバ角膜炎、角膜外傷、アルカリ腐食角結膜炎、角膜潰瘍、ビタミンＡ欠乏による角膜軟化症、壊死性角膜炎、神経麻痺性角膜炎、糖尿病性角膜症、乾性角結膜炎、コンタクトレンズ装着時の角結膜炎、春季カタル、結膜アレルギーなど）の予防、治療に有用である。また、角膜潰瘍（上記の種々の角膜潰瘍およびそれ以外の原因に起因する角膜潰瘍も含む。）、特に感染性角膜潰瘍の予防、治療に有用である。
本発明の有効成分として用いる式（Ｉ）の化合物またはその薬理学的に許容される塩は、特公平５−８１５８６号に記載されている公知化合物であり、そこに開示の製造法に従って、ｐ−ピバロイルオキシベンゼンスルホニルクロライドをアミド化反応に付し、さらに場合により、公知の方法で塩に変換することで製造できる。また、このようにして得られた化合物を公知の方法により水和物に変換できる。
式（Ｉ）の化合物の薬理学的に許容される塩としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩のような無機酸塩、酢酸塩、乳酸塩、酒石酸塩，安息香酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、グルクロン酸塩、グルコン酸塩のような有機酸塩、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩など）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩など）、アンモニウム塩、薬理学的に許容されるアミン塩（テトラメチルアンモニウム塩、トリエチルアミン塩、メチルアミン塩、ジメチルアミン塩、シクロペンチルアミン塩、ベンジルアミン塩、フェネチルアミン塩、ピペリジン塩、モノエタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩、リジン塩、アルギニン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン塩など）が挙げられる。
本発明で用いる有効成分として、とりわけ、式（Ｉ）の化合物のナトリウム塩・４水和物である式（Ｉ−Ａ）
0004682495.tif 000003
で表されるＮ−［ｏ−（ｐ−ピバロイルオキシベンゼンスルホニルアミノ）ベンゾイル］グリシン・モノナトリウム塩・４水和物（特開平５−１９４３６６号（対応ヨーロッパ公開５３９２２３号）の実施例３に記載）が好ましい。
本発明の眼疾患の予防、治療剤は、白血球由来のエラスターゼ活性阻害作用に基づいて、眼感染症（例えば、角膜ヘルペス、細菌性角膜炎、細菌性結膜炎、真菌性角膜炎、アカントアメーバ角膜炎、感染性眼内炎、感染性角膜潰瘍など）、角膜外傷、瘢痕性角結膜疾患（例えば、アルカリ腐食角結膜炎、スティーブンス−ジョンソン症候群、眼類天庖瘡など）、角膜潰瘍（例えば、モーレン潰瘍、慢性関節リウマチや膠原病に続発する角膜潰瘍、テリエン角膜変性、カタル性角膜潰瘍、感染性角膜潰瘍など）、ビタミンＡ欠乏による角膜軟化症、壊死性角膜炎、神経麻痺性角膜炎、糖尿病性角膜症、乾性角結膜炎、コンタクトレンズ装着時の角結膜炎、春季カタル、結膜アレルギー、ぶどう膜炎、ベーチェット病、白内障術後炎症および偽翼状片など様々な眼炎症疾患、特に角結膜における炎症疾患（例えば、角膜ヘルペス、細菌性角膜炎、細菌性結膜炎、真菌性角膜炎、アカントアメーバ角膜炎、角膜外傷、アルカリ腐食角結膜炎、角膜潰瘍、ビタミンＡ欠乏による角膜軟化症、壊死性角膜炎、神経麻痺性角膜炎、糖尿病性角膜症、乾性角結膜炎、コンタクトレンズ装着時の角結膜炎、春季カタル、結膜アレルギーなど）の予防、治療に有用である。また、角膜潰瘍（上記の種々の角膜潰瘍およびそれ以外の原因に起因する角膜潰瘍も含む。）、特に感染性角膜潰瘍の予防、治療に有用である。
本発明の眼疾患の予防、治療剤は、それ自体公知の薬理学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤などと混合し、自体公知の方法に従って、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、注射剤、点眼剤、眼軟膏剤などの各種の経口、非経口用の剤形の医薬または獣医薬組成物とすることができ、特に局所投与用の剤形、好ましくは、点眼剤、眼軟膏剤として用いることが望ましい。
点眼剤には、例えば、水性点眼液、水性懸濁点眼液、粘性点眼液、可溶化点眼液などの水性点眼剤、非水性点眼液、非水性懸濁点眼液などの非水性点眼剤が包含されるが、水性点眼剤が好ましい。とりわけ水性懸濁点眼液が好ましい。
水性点眼剤には、通常用いられる各種の添加剤、例えば、緩衝剤（例、リン酸塩緩衝剤、ホウ酸塩緩衝剤、クエン酸塩緩衝剤、酒石酸塩緩衝剤、酢酸塩緩衝剤、アミノ酸、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムなど）、等張化剤（例、ソルビトール、グルコース、マンニトールなどの糖類、グリセリン、濃グリセリン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどの多価アルコール類、塩化ナトリウムなどの塩類など）、保存剤または防腐剤（例、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、パラオキシ安息香酸メチルやパラオキシ安息香酸エチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、ソルビン酸またはその塩、チメロサール、クロロブタノールなど）、溶解補助剤または安定化剤（例、シクロデキストリン類およびその誘導体、ポリビニルピロリドンなどの水溶性高分子、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０）などの界面活性剤など）、ｐＨ調整剤（例、塩酸、酢酸、リン酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウムなど）、増粘剤（例、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースおよびその塩など）、キレート剤（例、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、縮合リン酸ナトリウムなど）などを適宜配合できる。
水性懸濁点眼液には、上記添加剤の他、懸濁化剤（例、ポリビニルピロリドン、モノステアリン酸グリセリンなど）および分散剤（例、チロキサポール、ポリソルベート８０などの界面活性剤、アルギン酸ナトリウムなどのイオン性高分子など）などを配合することにより、より均一な微細粒子でかつ分散性の良好な水性懸濁点眼液を製造することができる。
水性懸濁点眼液を製造する際、ｐＨ調整剤を用いて、酸性側（ｐＨ４〜５．５）にすることが好ましい。ｐＨ調整剤として、好ましくは塩酸である。
水性懸濁点眼剤に配合する緩衝剤としては、クエン酸ナトリウムまたは酢酸ナトリウムが好ましく、等張化剤としては、濃グリセリンおよび／またはプロピレングリコールが好ましく、懸濁化剤としては、ポリビニルピロリドンが好ましい。また、分散剤としては界面活性剤および／またはアルギン酸ナトリウムが好ましい。該界面活性剤として、好ましくはチロキサポールまたはポリソルベート８０である。
眼軟膏剤には、精製ラノリン、ワセリン、プラスチベース、流動パラフィン、ポリエチレングリコールなどのような自体公知の軟膏基剤が用いられる。
本発明の予防、治療剤は、眼疾患に罹患した、またはそのおそれのある哺乳動物（例、ヒト、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、サルなど）に投与することができる。投与ルートや投与量は、症状、患者の年齢、体重などによっても異なるが、例えば、成人に点眼剤として用いる場合、式（Ｉ）の遊離の化合物として、約０．００１〜５（ｗ／ｖ）％、好ましくは、約０．０１〜３（ｗ／ｖ）％程度含有する水性点眼剤として、症状に応じて１回量１〜数滴を１日１〜８回投与することが望ましい。
眼軟膏剤として用いる場合、式（Ｉ）の遊離の化合物として、約０．００１〜５（ｗ／ｗ）％、好ましくは、約０．０１〜３（ｗ／ｗ）％程度含有する眼軟膏剤を、症状に応じて１日１〜４回投与することが望ましい。
本発明の予防、治療剤には、その目的に反しないかぎり、さらに他の薬効剤、例えば、ステロイド性抗炎症剤（デキサメサゾン、プレドニゾロンなど）、非ステロイド性抗炎症剤（ジクロフェナクナトリウム、プラノプロフェンなど）、抗アレルギー剤（トラニラスト、フマル酸ケトチフェン、クロモグリク酸ナトリウムなど）、抗ヒスタミン剤（塩酸ジフェンヒドラミンなど）、緑内障用薬（塩酸ピロカルピン、サリチル酸フィゾスチグミン、チモロール、イソプロピルウノプロストンなど）、抗生物質（硫酸ゲンタマイシン、硫酸フラジオマイシン、トブラマイシン、スルベニシリン、セフメノキシム、エリスロマイシン、コリスチン、オキシテトラサイクリン、ポリミキシンＢ、クロラムフェニコール、ミクロノマイシン、ジベカシン、シソマイシンなど）、抗菌剤（スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、オフロキサシン、ノルフロキサシン、塩酸ロメフロキサシン、エノキサシン、塩酸シプロフロキサシン、シノキサシン、スパルフロキサシン、トシル酸トスフロキサシン、ナリジクス酸、ピペミド酸三水和物、ピペミド酸、フレロキサシン、レボフロキサシンなど）、抗ウイルス剤（イドクスウリジン、アシクロビルなど）、抗真菌剤（ピマリシン、フルコナゾール、ミコナゾール、アムホテリシンＢ、フルシトシン、イトラコナゾールなど）を適宜配合または併用してもよい。
本発明の予防、治療剤は、特に眼感染症に起因する炎症、角膜潰瘍などの予防、治療において、上記抗生物質、抗菌剤、抗ウイルス剤および抗真菌剤の少なくとも１種と共に用いることが好ましい。かかる場合、抗生物質、抗菌剤、抗ウイルス剤および抗真菌剤は本発明の予防、治療剤と合剤としてもよく、個別に各々点眼してもよい。個別に点眼する場合、本発明の予防、治療剤並びに抗生物質、抗菌剤、抗ウイルス剤および抗真菌剤は同時に点眼してもよく、各々一定時間ごとに点眼してもよい。なお、同時に点眼する場合、本発明の予防、治療剤、あるいは抗生物質、抗菌剤、抗ウイルス剤または抗真菌剤の何れかを点眼したのち、該点眼した薬剤を洗い流さないように暫時経過後、他方の薬剤を点眼するのがよい。また上記抗生物質、抗菌剤、抗ウイルス剤および抗真菌剤は、内服または点滴静注により全身投与としてもよい。
以下に、試験例および実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は、これらに限定されるものではない。
試験例１
眼炎症疾患に対する化合物Ａの効果を以下のとおり試験した。
眼感染症でしばしば検出される緑膿菌由来のエンドトキシンを用いたウサギ角膜炎モデルおよびウサギ角膜アルカリ腐食モデルに対する化合物Ａの点眼投与による効果を検討した。
実験材料および方法
（１）使用動物
福崎養兎組合から購入した体重約２〜２．５ｋｇの雄性日本白色ウサギを用いた。飼育は温度２４±４℃、湿度５５±１５％の条件で行った。
（２）試験物質
化合物Ａを投与する際には、化合物Ａを基剤（０．１％ＮａＨ２ＰＯ４、０．１％ポリソルベート８０および０．９％ＮａＣｌ、ｐＨ５．０）に懸濁した１．０％化合物Ａ点眼液を用いた。ポジティブコントロール薬剤として０．１％ベタメタゾン点眼液（リンデロンＴＭ液、塩野義）を用いた。また、対照群には基剤を投与した。
（３）試験方法
１）エンドトキシン誘発角膜炎に対する効果
体重２〜２．５ｋｇの日本白色雄性ウサギ１６匹を用いた。ウサギを４匹ずつ４群に群分けし、５％塩酸ケタミンおよび２％塩酸キシラジン等量混合液を１ｍＬ／ｋｇずつ筋肉内投与し全身麻酔を施した。生理食塩液に溶解した緑膿菌由来エンドトキシン１％溶液をウサギの両眼角膜実質層にそれぞれ１０μＬずつ注入した。エンドトキシン注入の翌日から３０日目まで５日毎にスリットランプを用いて前眼部の状態を観察し、表１の基準に従い角膜混濁、角膜潰瘍および血管新生などについて採点評価した。各試験物質はエンドトキシン注入直後から点眼投与を開始し、以後２時間おきに２０μＬを毎日４回点眼投与した。
２）アルカリ腐食角膜炎に対する効果
体重２〜２．５ｋｇの日本白色雄性ウサギ１６匹を用いた。ウサギを４匹ずつ４群に群分けし、５％塩酸ケタミンおよび２％塩酸キシラジン等量混合液の筋肉内投与による全身麻酔および塩酸オキシブプロカインによる点眼局所麻酔をウサギに施した。２Ｎ  ＮａＯＨに浸した直径１０ｍｍのろ紙をウサギの右眼角膜中央部に１分間接触させてアルカリ腐食を作成し、ただちに１０ｍＬ以上の生理食塩液で洗浄した。アルカリ腐食５日目から５日毎に３０日目まで角膜潰瘍の深度および新生血管の観察をスリットランプを用いて行い、表１の基準に従って採点評価した。各試験物質はアルカリ腐食を行なった直後から点眼投与を開始し、以後２時間おきに２０μＬを毎日４回点眼投与した。
0004682495.tif 000004
0004682495.tif 000005
結果および考察
１）エンドトキシン誘発角膜炎に対する効果
エンドトキシン注入後５日目〜３０日目までの角膜炎症状の経時的変化を図１〜３に示した。対照群ではいずれの症状も１５日目にピークに達した後、徐々に回復し、３０日目にはほぼ消失した。化合物Ａ点眼液投与群では角膜混濁、角膜潰瘍および血管新生のすべての項目で対照群に対する抑制効果が観察された。ポジティブコントロールとして用いた０．１％リン酸ベタメタゾン点眼群では観察期間中、角膜炎の発症がほぼ完全に抑制された。各症状がピークに達する１５日目の各群の採点合計値を示したのが図４で、化合物Ａ点眼液投与群の対照群に対する抑制率は５９．４％になり、統計学的有意差も認められた。
この結果から、眼感染症時の角膜炎の諸症状に対して化合物Ａ点眼液が有効に作用することが判明した。
また、今回、ポジティブコントロールとして用いたリン酸ベタメタゾン点眼液は非常に強い抗炎症作用を示したが、臨床での眼感染症においてはステロイド剤の長期投与は感染増悪という副作用も示すことから、その使用は制限される場合が多い。
したがって、感染増悪の危険性が少ないと考えられる化合物Ａ点眼液は眼感染症に対し有効な薬剤になる。
２）アルカリ腐食角膜炎に対する効果
角膜アルカリ処理後５日目〜３０日目までの角膜炎症状の経時的変化を図５〜７に示した。対照群では角膜アルカリ処理後２０〜２５日目にピークに達した。化合物Ａ点眼液投与群では２０日目の角膜潰瘍に有意な抑制効果が観察されたが、血管新生および角膜混濁に関して抑制効果は認められなかった。ポジティブコントロールとして用いた０．１％リン酸ベタメタゾン点眼群では１５日目に血管新生の有意な抑制を認めた。
試験例２
実験材料および方法
（１）使用動物
北山ラベスから購入した体重約２ｋｇの雄性日本白色種ウサギを用いた。飼育は温度２３±３℃、湿度５５±１０％の条件で行った。
（２）試験物質
化合物Ａを投与する際には、化合物Ａを基剤（０．１％酢酸ナトリウム、０．１％ポリソルベート８０、０．９％ＮａＣｌ；ｐＨ５．０）に懸濁した１．０％化合物Ａ点眼液を用いた。抗菌剤は０．３％塩酸ロメフロキサシン（ＬＦＬＸ）点眼液を、対照物質として生理食塩液を使用した。
（３）試験方法
１）瞬膜の切除
０．４％塩酸オキシブプロカインの点眼投与により局所麻酔を施した後、瞬膜を切除した。
２）菌の接種
起炎菌は眼科臨床分離株である緑膿菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａホー１３４株を用いた。ウサギに、５％塩酸ケタミンおよび２％塩酸キシラジン（等量混合液）で全身麻酔を施した後、３０Ｇ針をつけた１００μＬのマイクロシリンジに３．９×１０４ＣＦＵ／ｍＬの菌懸濁液３０μＬ（１．１７×１０３ＣＦＵ／角膜）を片眼の角膜実質内に注入して接種を行った。
３）点眼投与
角膜実質内に菌懸濁液を注入し、確実に接種できた動物を、菌接種直後からの試験物質点眼群として▲１▼生理食塩液点眼群（対照群、ｎ＝６）、▲２▼１．０％化合物Ａ点眼液点眼群（化合物Ａ群、ｎ＝６）、菌接種１日後（角膜潰瘍発症後）からの点眼群として▲３▼１．０％化合物Ａ点眼液点眼群（化合物Ａ後投与群、ｎ＝５）、▲４▼０．３％ＬＦＬＸ点眼液点眼群（ＬＦＬＸ群、ｎ＝６）、▲５▼１．０％化合物Ａ点眼液−０．３％ＬＦＬＸ点眼液併用点眼群（化合物Ａ−ＬＦＬＸ併用群、ｎ＝６）となるよう群分けをし、菌接種直後あるいは菌接種１日後（角膜潰瘍発症後）から、各試験物質を１日４回５０μＬ点眼投与した。化合物Ａ−ＬＦＬＸ併用群の場合は、０．３％ＬＦＬＸ点眼液を点眼投与し、その約１０分後に１．０％化合物Ａ点眼液を点眼投与した。
４）感染症状の観察
菌接種後２４時間おきに、表２のウサギ角膜病変採点基準（Ｂａｒｌｅｔｔａ  Ｊ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ３７：２０−２８，１９９６．）に従い、角膜潰瘍について観察し、採点評価を行った。
0004682495.tif 000006
結果および考察
１）緑膿菌感染性角膜潰瘍に対する効果−菌接種直後から点眼開始による効果−
菌接種直後より点眼開始した結果を図８に示した。角膜潰瘍は、対照群（生理食塩液群）では徐々に進行し菌接種５日後には広範囲の角膜潰瘍形成が認められた。それに対し、化合物Ａ群は菌接種３日後から対照群と比較して角膜潰瘍の形成が抑制され、統計学的有意差も認められた（図８）。
２）緑膿菌感染性角膜潰瘍に対する効果−菌接種１日後からの点眼開始による効果−
菌接種１日後（角膜潰瘍発症後）から点眼を開始した化合物Ａ後投与群では、菌接種３日後から角膜潰瘍の形成が抑制された。ＬＦＬＸ群では対照群と同様な推移を示し、角膜潰瘍の形成抑制が認められなかった（図９）。化合物Ａ−ＬＦＬＸ併用群では菌接種３日後から角膜潰瘍の形成が強く抑制され、統計学的有意差も認められた（図９）。
今回の試験結果より、エラスターゼ阻害剤である化合物Ａが細菌感染性の角膜潰瘍に対して有効であることが判った。また、エラスターゼ阻害剤と抗菌剤とを併用すると、各薬剤を単独で使用するよりも細菌感染性角膜潰瘍に対し極めて有効であることが判った。
実施例１
以下の処方により水性点眼液剤を調製した。
成分                                    量
化合物Ａ                                ０．１ｇ
塩化ナトリウム                          ０．９ｇ
酢酸ナトリウム                          ０．１ｇ
塩化ベンザルコニウム                    ０．００５ｇ
塩酸                                    適量
水酸化ナトリウム                        適量
滅菌精製水                              全量１００ｍＬ（ｐＨ６．０）
精製水約８０ｍＬに化合物Ａ、塩化ナトリウム、酢酸ナトリウムおよび塩化ベンザルコニウムを溶解した。塩酸と水酸化ナトリウムでｐＨを６．０に調整した。滅菌精製水を加え、全量１００ｍＬとし、水性点眼液剤を調製した。
実施例２
以下の処方により水性懸濁点眼液剤を調製した。
成分                                    量
化合物Ａ                                １．０ｇ
塩化ナトリウム                          ０．９ｇ
酢酸ナトリウム                          ０．１ｇ
ポリソルベート８０                      ０．２ｇ
塩化ベンザルコニウム                    ０．００５ｇ
塩酸                                    適量
水酸化ナトリウム                        適量
滅菌精製水                              全量１００ｍＬ（ｐＨ５．０）
精製水約８０ｍＬに塩化ナトリウム、酢酸ナトリウム、ポリソルベート８０および塩化ベンザルコニウムを溶解した。塩酸と水酸化ナトリウムでｐＨを５．０に調整し、化合物Ａを加えホモジナイザーにより均一に懸濁させた。滅菌精製水を加え、全量１００ｍＬとし、水性懸濁点眼液剤を調製した。
実施例３
以下の処方により水性懸濁点眼液剤を調製した。
成分                                    量
化合物Ａ                                ０．５ｇ
濃グリセリン                            ２．６ｇ
酢酸ナトリウム                          ０．１ｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース      ０．２ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                ０．０３ｇ
パラオキシ安息香酸プロピル              ０．０２ｇ
塩酸                                    適量
水酸化ナトリウム                        適量
滅菌精製水                              全量１００ｍＬ（ｐＨ５．０）
精製水約８０ｍｌを加温してパラオキシ安息香酸メチルおよびパラオキシ安息香酸プロピルを溶解した。この溶液にヒドロキシプロピルメチルセルロースを分散させた後、室温まで冷却して溶かした。この溶液に濃グリセリンおよび酢酸ナトリウムを加え塩酸と水酸化ナトリウムでｐＨを５．０に調製した。この液に化合物Ａを添加し、ホモジナイザーにより均一に懸濁させた。滅菌精製水を加え、全量１００ｍＬとし、水性懸濁点眼液剤を調製した。
実施例４
以下の処方により眼軟膏を調製した。
化合物Ａ                                ２．０ｇ
流動パラフィン                          ２．０ｇ
白色ワセリン                            全量１００ｇ
流動パラフィン、白色ワセリンを予め加熱滅菌した。次いで、化合物Ａを流動パラフィンと十分混和後、白色ワセリンと練りあわせて、眼軟膏を調製した。
実施例５
以下の処方により水性懸濁点眼液剤を調製した。
成分                                量
化合物Ａ                            １．０ｇ
クエン酸ナトリウム                  ０．１ｇ
濃グリセリン                        １．２ｇ
パラオキシ安息香酸メチル            ０．０２６ｇ
パラオキシ安息香酸プロピル          ０．０１４ｇ
プロピレングリコール                １．０ｇ
ポリビニルピロリドン（Ｋ−２５）    ０．５ｇ
アルギン酸ナトリウム                ０．２ｇ
塩酸                                適量
精製水                              全量１００ｍＬ（ｐＨ５．０）
精製水約８０ｍＬにクエン酸ナトリウム、濃グリセリン、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピル、プロピレングリコールおよびポリビニルピロリドンを溶解した。この溶液に化合物Ａを溶解し０．２２μｍメンブランフィルターでろ過した後、塩酸でｐＨ５．０に調整し、化合物Ａの微細結晶（２〜３μｍ）を析出させた。アルギン酸ナトリウムを溶解し、精製水を加え、全量１００ｍＬとし、水性懸濁点眼液剤を調製した。
本水性懸濁点眼液剤を６０℃、４週保存後の化合物Ａの残存率は１０１．７％で、かつ凝集がなく再分散性も良好であった。
実施例６
以下の処方により水性懸濁点眼液剤を調製した。
成分                                量
化合物Ａ                            １．０ｇ
クエン酸ナトリウム                  ０．１ｇ
濃グリセリン                        １．２ｇ
パラオキシ安息香酸メチル            ０．０２６ｇ
パラオキシ安息香酸プロピル          ０．０１４ｇ
プロピレングリコール                １．０ｇ
ポリビニルピロリドン（Ｋ−２５）    ０．５ｇ
アルギン酸ナトリウム                ０．２ｇ
チロキサポール                      ０．１ｇ
塩酸                                適量
精製水                              全量１００ｍＬ（ｐＨ５．０）
精製水約８０ｍＬにクエン酸ナトリウム、濃グリセリン、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピル、プロピレングリコールおよびポリビニルピロリドンを溶解した。この溶液に化合物Ａを溶解し０．２２μｍメンブランフィルターでろ過した後、塩酸でｐＨ５．０に調整し、化合物Ａの微細結晶（２〜３μｍ）を析出させた。アルギン酸ナトリウムおよびチロキサポールを溶解し、精製水を加え、全量１００ｍＬとし、水性懸濁点眼液剤を調製した。
本水性懸濁点眼液剤を６０℃、２週保存後の化合物Ａの残存率は１０２．５％で、かつ凝集がなく再分散性も良好であった。
実施例７
以下の処方により水性懸濁点眼液剤を調製した。
成分                                量
化合物Ａ                            １．０ｇ
クエン酸ナトリウム                  ０．１ｇ
濃グリセリン                        １．２ｇ
パラオキシ安息香酸メチル            ０．０２６ｇ
パラオキシ安息香酸プロピル          ０．０１４ｇ
ポリビニルピロリドン（Ｋ−２５）    ０．５ｇ
アルギン酸ナトリウム                ０．２ｇ
チロキサポール                      ０．１ｇ
塩酸                                適量
精製水                              全量１００ｍＬ（ｐＨ５．０）
精製水約８０ｍＬにクエン酸ナトリウム、濃グリセリン、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピルおよびポリビニルピロリドンを溶解した。この溶液に化合物Ａを溶解し０．２２μｍメンブランフィルターでろ過した後、塩酸でｐＨ５．０に調整し、化合物Ａの微細結晶（２〜３μｍ）を析出させた。アルギン酸ナトリウムおよびチロキサポールを溶解し、精製水を加え、全量１００ｍＬとし、水性懸濁点眼液剤を調製した。
実施例８
以下の処方により水性懸濁点眼液剤を調製した。
成分                                量
化合物Ａ                            １．０ｇ
クエン酸ナトリウム                  ０．１ｇ
濃グリセリン                        １．２ｇ
塩化ベンザルコニウム                ０．００５ｇ
ポリビニルピロリドン（Ｋ−２５）    ０．５ｇ
アルギン酸ナトリウム                ０．２ｇ
チロキサポール                      ０．１ｇ
塩酸                                適量
精製水                              全量１００ｍＬ（ｐＨ５．０）
精製水約８０ｍＬにクエン酸ナトリウム、濃グリセリンおよびポリビニルピロリドンを溶解した。この溶液に化合物Ａを溶解し０．２２μｍメンブランフィルターでろ過した後、塩酸でｐＨ５．０に調整し、化合物Ａの微細結晶（２〜３μｍ）を析出させた。アルギン酸ナトリウムおよびチロキサポールを溶解後、塩化ベンザルコニウムを溶解した。精製水を加え、全量１００ｍＬとし、水性懸濁点眼液剤を調製した。
産業上の利用の可能性
本発明によれば、眼疾患、特に眼炎症性疾患および角膜潰瘍の予防、治療に有用な医薬または獣医薬組成物が提供できる。
【図面の簡単な説明】
図１は、エンドトキシン誘発角膜炎に対するＮ−［ｏ−（ｐ−ピバロイルオキシベンゼンスルホニルアミノ）ベンゾイル］グリシン・モノナトリウム塩・４水和物（以下、化合物Ａという）点眼液の効果（角膜混濁に対する効果）を示すグラフである。各シンボルは平均値±標準偏差（ｎ＝４）を示す。対照群に対する統計的有意差＊：ｐ＜０．０５（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定、片側）。
図２は、エンドトキシン誘発角膜炎に対する化合物Ａ点眼液の効果（角膜潰瘍に対する効果）を示すグラフである。各シンボルは平均値±標準偏差（ｎ＝４）を示す。対照群に対する統計的有意差＊：ｐ＜０．０５（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定、片側）。
図３は、エンドトキシン誘発角膜炎に対する化合物Ａ点眼液の効果（血管新生に対する効果）を示すグラフである。各シンボルは平均値±標準偏差（ｎ＝４）を示す。
図４は、エンドトキシン誘発角膜炎惹起後１５日における化合物Ａ点眼液の効果を示すグラフである。各カラムは平均値±標準偏差（ｎ＝４）を示す。対照群に対する統計的有意差＊：ｐ＜０．０５（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定、片側）。
図５は、アルカリ腐食角膜炎に対する化合物Ａ点眼液の効果（角膜混濁に対する効果）を示すグラフである。各シンボルは平均値±標準偏差（ｎ＝４）を示す。
図６は、アルカリ腐食角膜炎に対する化合物Ａ点眼液の効果（角膜潰瘍に対する効果）を示すグラフである。各シンボルは平均値±標準偏差（ｎ＝４）を示す。対照群に対する統計的有意差＊：ｐ＜０．０５（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定、片側）。
図７は、アルカリ腐食角膜炎に対する化合物Ａ点眼液の効果（血管新生に対する効果）を示すグラフである。各シンボルは平均値±標準偏差（ｎ＝４）を示す。
図８は、緑膿菌感染性角膜潰瘍における菌接種直後からの化合物Ａ点眼の効果を示すグラフである。各シンボルは平均±標準誤差（ｎ＝６）を示す。対照群に対する統計学的有意差＊：ｐ＜０．０５（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定、片側）。
図９は、緑膿菌感染性角膜潰瘍における菌接種１日後からの化合物Ａおよびロメフロキサシン点眼の効果を示すグラフである。各シンボルは平均±標準誤差（ｎ＝５−６）を示す。対照群に対する統計学的有意差＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１（Ｓｔｅｅｌ検定、片側）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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