(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（２）
【化１】
0004781546.tif 000022
（式中、Ｒ2〜Ｒ5は、水素原子を示す。）で表わされるイサト酸無水物化合物と次の式（３）
【化２】
0004781546.tif 000023
（式中、Ｒ1は、炭素数１〜２０のアルキル基又は炭素数１〜２０のアルコキシアルキル基を示す。）で表わされるアミン化合物とを反応させ式（４）
【化３】
0004781546.tif 000024
（式中、Ｒ1〜Ｒ5は前記と同じ。）で表されるアントラニル酸化合物を得、次ぎに該アントラニル酸化合物と式（５）
【化４】
0004781546.tif 000025
（式中、Ｒ6〜Ｒ9は、それぞれ独立して水素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、水酸基又は炭素数１〜２０のアルコキシ基を示し、Ａは反応性脱離基を表す。）で表わされるサリチル酸化合物を脱水縮合させることを特徴とする、式（１）のアントラニル酸アミド化合物の製造方法。
【化５】
0004781546.tif 000026
（式中、Ｒ1〜Ｒ9は、前記と同じ。）
【請求項２】
式（４）
【化６】
0004781546.tif 000027
（式中、Ｒ1は、炭素数１〜２０のアルキル基又は炭素数１〜２０のアルコキシアルキル基を示し、Ｒ2〜Ｒ5は、水素原子を示す。）でアントラニル酸化合物と式（５）
【化７】
0004781546.tif 000028
（式中、Ｒ6〜Ｒ9は、それぞれ独立して水素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、水酸基又は炭素数１〜２０のアルコキシ基を示し、Ａは反応性脱離基を表す。）で表わされるサリチル酸化合物を脱水縮合させることを特徴とする、式（１）の製造方法。
【化８】
0004781546.tif 000029
（式中、Ｒ1〜Ｒ9は、前記と同じ。）
【請求項３】
式（１）のアントラニル酸アミド化合物からなるｐＨ官能性蛍光色素材料。
【化９】
0004781546.tif 000030
（式中、Ｒ1は、炭素数１〜２０のアルキル基又は炭素数１〜２０のアルコキシアルキル基を示し、Ｒ2〜Ｒ5は、水素原子を示し、Ｒ6〜Ｒ9は、それぞれ独立して水素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、水酸基又は炭素数１〜２０のアルコキシ基を示す。）
【請求項４】
請求項３に記載のｐＨ官能性蛍光色素材料を溶液のｐＨ測定に利用する、ｐＨ官能性蛍光色素材料の利用法。
【請求項５】
溶液が生体内の溶液或いは細胞内特定部位の溶液である請求項４記載のｐＨ官能性蛍光色素材料の利用法。
【請求項６】
請求項３に記載のｐＨ官能性蛍光色素材料を溶液の金属イオン測定に利用する、ｐＨ官能性蛍光色素材料の利用法。
【請求項７】
溶液が生体内の溶液或いは細胞内特定部位の溶液である請求項６記載のｐＨ官能性蛍光色素材料の利用法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、アントラニル酸アミド化合物及びその製造方法並びに該化合物からなるｐＨ官能性蛍光色素材料及びその色素材料の利用法に関するものである。本発明の化合物を用いた色素材料は微量溶液のｐＨ測定の道具として、特に生体内のｐＨ環境や細胞内のｐＨ環境を測定する手段として、バイオサイエンス分野、基礎医学分野における研究用指示薬として好適である。さらに本発明化合物は外部場の変化によりその分子内の角度構造が変化し蛍光特性、すなわちその蛍光波長や強度応答する蛍光色素材料であり、液晶材料に変わる新規な表示材料として利用できる可能性を持つ。
【０００２】
【従来の技術】
微細環境に関する情報は、生体内、特に細胞内の動的な反応を追跡し、あるいは種々の機能材料の創成において重要な分析手段である。その中でも水素イオン濃度は水溶液に関するもっとも基本的な性質であり、微細環境におけるその測定は種々の生化学的な研究に留まらず、医療分野における新しい診断手法の開発にもつながるものである。
【０００３】
微細環境においてその情報を入手するためには、極めて高感度かつ早い応答性を持つプローブが必要である。フェノールフタレインなどの吸収色の変化により感知するプローブはかなり高濃度の色素を導入する必要があり、その色素の官能基により微細環境そのものの性質を変えてしまう恐れがあり、細胞内などの極微細環境の評価には使用できなかった。
【０００４】
近年、そのような状況に鑑み、より高感度に微細環境の情報を得ることができる環境応答型蛍光色素が多く提案されるに至っている。蛍光色素は、吸収色素に比べて格段に高いSignal/Noise比を持ち、極微量でもその周りの環境に関する情報を見分けることが可能である。たとえばそのような蛍光色素としてフルオレセイン骨格を持つもの、クマリン構造を持つもの、発色団を持つリン酸エステル構造を持つもの、等が知られている[R. P. Hauglad, "Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals, 6th ed." Molecular Probes社、1996年刊]。
【０００５】
これらの色素の多くはカルボン酸部位やリン酸部位のアニオン化とそれに伴う分子骨格の大規模な変化によりその色調変化を起こすものであり、反応に時間がかかる、あるいはジアニオンやトリアニオン等の多くの状態間の平衡を伴うため、目的の変色域を持つ色素の分子設計が難しいという問題点を持っていた。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記のような現状を鑑みてなされたものである。すなわち、置換基を変更することにより比較的その酸解離状況を制御しやすいフェノール水酸基のプロトンの解離を利用して、それにより分子の共有結合的な変化ではなく分子のコンフォメーションの変化を起こさしめることによりその蛍光の色調変化を起こさしめ、外部環境の変化に素早くかつ敏感に応答する蛍光色素の提供を目的とするものであり、新規なｐＨ官能性蛍光色素材料となるアントラニル酸アミド化合物およびその製造方法ならびにｐＨ官能性蛍光色素材料の利用法を提供することを課題とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、次の式（１）
【０００８】
【化８】
0004781546.tif 000002
【０００９】
（式中、Ｒ1〜Ｒ9は、それぞれ独立して水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、ハロゲン原子、水酸基、アルコキシ基、アルコキシアルキル基、アルキルチオ基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、アルキレングリコール基を示す。）
で表わされるアントラニル酸アミド化合物に関する。
【００１０】
また、本発明は式（２）
【００１１】
【化９】
0004781546.tif 000003
【００１２】
（式中、Ｒ2〜Ｒ5は、式（１）と同じ。）
で表わされるイサト酸無水物化合物と次の式（３）
【００１３】
【化１０】
0004781546.tif 000004
【００１４】
（式中、Ｒ1は、式（１）と同じ。）
で表わされるアミン化合物とを反応させ式（４）
【００１５】
【化１１】
0004781546.tif 000005
【００１６】
（式中、Ｒ1〜Ｒ5は式（１）と同じ。）
で表されるアントラニル酸化合物を得、次ぎに該アントラニル酸化合物と式（５）
【００１７】
【化１２】
0004781546.tif 000006
【００１８】
（式中、Ｒ6〜Ｒ9は、式（１）と同じ。Ａは反応性脱離基を表わす。）
で表わされるサリチル酸化合物とを脱水縮合させることを特徴とする式（１）の化合物の製造方法に関する。また、前記式（４）で表されるアントラニル酸化合物と前記式（５）で表されるサリチル酸化合物を脱水縮合させることを特徴とする前記式（１）のアントラニル酸アミド化合物の製造方法に関する。
【００１９】
更に、前記式（１）のアントラニル酸アミド化合物からなるｐＨ官能性蛍光色素材料に及び該ｐＨ官能性蛍光色素材料を溶液のｐＨ測定或いは金属イオンの測定に利用する、ｐＨ官能性蛍光色素材料の利用法に関する。
【００２０】
【発明の実施の形態】
本発明の前記式（１）のアントラニル酸アミド化合物の製造方法は以下の反応スキームで示される。
【００２１】
【化１３】
0004781546.tif 000007
【００２２】
（Ｒ1〜Ｒ9及びＡは前記と同じ）
式（２）のイサト酸無水物化合物と式（３）のアミン化合物の反応は無溶媒でも行うことができるが、通常は溶媒を用いて行う。反応溶媒としては式（２）のイサト酸無水物化合物と式（３）のアミン化合物を適度に溶解するものが好ましく、種々のエーテル系溶媒（例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエ−テル、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、ジオキサン等）、アルコール系溶媒（メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール等の低級アルコール類、エチレングリコール、ジエチレングリコール等のグリコール類）及び水などを例示することができる。水を用いた場合、反応が速やかに進行し、また副生物が水相に留まるため、抽出による単離精製が容易であり特に好ましい。
【００２３】
反応温度は特に限定しないが０℃から用いる溶媒の沸点の範囲で、通常は１０〜４０℃である。生成物は再結晶、蒸留あるいは有機溶媒に溶かしてカラムクロマトグラフ法により容易に精製できる。
【００２４】
このようにして得られた上記式（４）で表わされるアントラニル酸化合物と上記式（５）で表されるサリチル酸化合物とを縮合させることにより上記式（１）で表わされる化合物を調整することができる。
【００２５】
この縮合反応としてはアミド結合を形成するための反応を広く用いることができるが、その他の置換基の反応性を勘案して反応を選択すればよい。反応性の低い置換基を持つ（１）の化合物の合成には、サリチル酸部分を酸ハロゲン化物にし、これを適当な塩基存在下（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化バリウム等の無機水酸化物、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウム等の無機炭酸塩、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリ−ｎ−ブチルアミン、ピリジン等の有機塩基）に脱ハロゲン化水素的に縮合させることにより容易に達成できる。この際に用いる溶媒としては、エーテル系溶媒、例えば、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエ−テル、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、ジオキサン等が挙げられる。生成した式（１）で表されるアントラニル酸アミド化合物は再結晶、蒸留あるいは有機溶媒に溶かしてカラムクロマトグラフ法により容易に精製できる。
【００２６】
式（１）で表されるアントラニル酸アミド化合物において置換基Ｒ1〜Ｒ9は、それぞれ独立して水素原子、アルキル基、シクロアルキル基、ハロゲン原子、水酸基、アルコキシ基、アルコキシアルキル基、アルキルチオ基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基又はアルキレングリコール基を示す。
【００２７】
アルキル基としては炭素数１〜２０で、具体的には、メチル基、エチル基、プロピル基、ｉｓｏ−プロピル基、ブチル基、ｉｓｏ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、３−メチルアミル基、ヘプチル基、２−エチルヘキシル基、オクチル基、２，４−ジメチルヘキシル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、オクタデシル基等が挙げられる。
【００２８】
環状の構造を持つ置換基を有することもある炭化水素基としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基等が挙げられる。
【００２９】
ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又は沃素原子が挙げられる。
【００３０】
アルコキシ基としては、炭素数１〜２０で、具体的には、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ペンチロオキシ基、ヘプチロオキシ基などが挙げられる。
【００３１】
アルコキシアルキル基としては、炭素数１〜２０で、具体的には、メトキシメチル基、エトキシメチル基、プロポキシメチル基、ブトキシメチル基、ペンチロキシメチル基、ヘプチロオキシメチル基、メトキシエチル基、エトキシエチル基、プロポキシエチル基、ブトキシエチル基、ペンチロキシエチル基、ヘプチロオキシエチル基、メトキシプロピル基、エトキシプロピル基、プロポキシプロピル基、ブトキシプロピル基、ペンチロキシプロピル基、ヘプチロオキシプロピル基、メトキシブチル基、エトキシブチル基、プロポキシブチル基、ブトキシブチル基、ペンチロキシブチル基、ヘプチロオキシブチル基、メトキシペンチル基、エトキシペンチル基、プロポキシペンチル基、ブトキシペンチル基、ペンチロキシペンチル基、ヘプチロオキシペンチル基、メトキシヘキシル基、エトキシヘキシル基、プロポキシヘキシル基、ブトキシヘキシル基、ペンチロキシヘキシル基、ヘプチロオキシヘキシル基、メトキシヘプチル基、エトキシヘキシル基、プロポキシヘキシル基、ブトキシヘキシル基、ペンチロキシヘキシル基、ヘプチロオキシヘキシル基等が挙げられる。
【００３２】
アルキルチオ基としては、炭素数１〜２０で、具体的には、メチチオ基、エチルチオ基、プロピルチオ基、イソプロピルチオ基、ブチルチオ基、イソブチルチオ基、ｓｅｃ−ブチルチオ基、ペンチルチオ基、ヘキシルチオ基等が挙げられる。
【００３３】
モノアルキルアミノ基としては、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ブチルアミノ基、ｓｅｃ−ブチルアミノ基、ｔｅｒ−ブチルアミノ基およびイソブチルアミノ基、ペンチルアミノ基、ヘキシルアミノ基、ヘプチルアミノ基、オクチルアミノ基等が挙げられる。
【００３４】
ジアルキルアミノ基としては、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基、Ｎ−メチル−Ｎ−エチルアミノ基およびＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルアミノ基等をあげることができる。
【００３５】
式（５）で表されるサリチル酸化合物のおけるＡの反応性脱離基としては、水酸基、ハロゲン原子、アルコキシ基、アシルオキシ基である。ハロゲン原子としてはフッ素原子、塩素原子、臭素原子又は沃素原子が挙げられ、アルコキシ基としては、炭素数１〜２０どが挙げられる。例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブチルオキシ、ｓｅｃ−ブチルオキシ、ｔｅｒｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、オクチルオキシ基などが挙げられる。
【００３６】
アシルオキシ基としては、例えば、アセトキシ、プロピオニルオキシ、ブチリルオキシ、バレリルオキシ、ヘキサノイルオキシ基などが挙げられる。
【００３７】
これらの置換基のうちＲ1の炭素数を延ばし、あるいはアルキレングリコール基、例えばエチレングリコール、１，２−プロピレングリコール、１，３−プロピレングリコール、１，２−ブチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，４−ブチレングリコール等のノニオン系界面活性剤構造を導入することにより、化合物の溶解度の調整が可能である。また、Ｒ2〜Ｒ5を適宜変更することにより蛍光スペクトルの量子収率や最大蛍光波長（色調）や蛍光スペクトル幅（彩度）の調整が可能である。
【００３８】
更に、Ｒ6〜Ｒ9、特にはＲ7を適宜変更することにより応答ｐＨ領域の調整が可能である。
【００３９】
以上のようにして得られる本発明の前記式（１）で表されるアントラニル酸アミド化合物は、蛍光化合物であり微細領域の水素イオン濃度（ｐＨ）を測定する際に有用な新規なｐＨ官能性蛍光色素材料（以下、特に断らない限り、蛍光化合物という。）となる。
【００４０】
以下に実施例をもって本蛍光化合物の合成の実際とそのｐＨ検知能力について述べる。
【００４１】
【実施例】
実施例１
ａ．５−クロロサリチル酸クロライドの合成
【００４２】
【化１４】
0004781546.tif 000008
【００４３】
５−クロロサリチル酸（６．０４ｇ，３５．０ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（１２ｍＬ，１６５ｍｍｏｌ）、ピリジン（３滴）の混合物を１２時間室温で攪拌した。過剰の塩化チオニルは減圧蒸留により取り除いた。このようにして調製した５−クロロサリチル酸クロライドは後続の反応に精製することなしに使用した。
ｂ．２−アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミドの合成
【００４４】
【化１５】
0004781546.tif 000009
【００４５】
Ｎ−ブチルアミン（７．３２ｇ，１００ｍｍｏｌ）をイサト酸無水物（８．２２ｇ，５０．４ｍｍｏｌ）の水溶液（３００ｍＬ）へと室温で加えた。約５分間の間、攪拌すると白色沈殿が生じた。この白色沈殿はエーテルを（２００ｍＬ）加えることにより溶かした。溶液はエーテルで数回抽出した後に無水硫酸マグネシウムで乾燥しシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製した。精製物は紫色の蛍光を持つ白色固体であった（９．００ｇ，収率９３％）。
【００４６】
得られた化合物の1H NMR及びGC-MSの解析データは以下の通りである。
1H NMR (CDCl3,ppm） 0.95(d,3JHH=7.2Hz,3H),1.3-1.7(m,4H),3.3-3.5(m,2H),5.48 (brs,2H),6.02(brs,1H),6.6-6.7(m,2H),7.1-7.3(m,2 H)．GC-MS 192(M,35),150(9),136(12),120(100),92(29),73(14),65(26).
２−アミノ−Ｎ−メチルベンズアミドの合成
【００４７】
【化１６】
0004781546.tif 000010
【００４８】
上記２−アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミドの合成と同様の方法にて２−アミノ−Ｎ−メチルベンズアミドを白色固体として得た（７．５０ｇ，収率１００％）。
【００４９】
得られた化合物の1H NMR及びGC-MSの解析データは以下の通りである。
1H NMR (CDCl3,ppm） 2.96(d,3JHH=4.9Hz,3H),5.49(brs,2H),6.08(brs,1H),6.6-6.7(m,2 H),7.1-7.3(m,2H)．
GC-MS 150(M, 93),120(100),92(63),65(37).
（２−アミノ−Ｎ−（２−メトキシエチル）ベンズアミドの合成）
【００５０】
【化１７】
0004781546.tif 000011
【００５１】
上記２−アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミドの合成と同様の方法にて２−アミノ−Ｎ−（２−メトキシエチル）ベンズアミドを若干黄色みのかかった液体として得た（０．５７９ｇ，収率９９％）。
【００５２】
この化合物の1H NMR及びGC-MSの解析データは以下の通りである。
1H NMR (CDCl3,ppm） 3.38(s,3H),3.5-3.7(m,4H),5.51(brs,2H),6.44(brs,1H),6.6-6.7(m, 2 H),7.1-7.4(m,2H)．
GC-MS 194(M,33),136(30),120(100),92(36),65(29),45(10).
ｃ．２−（５−クロロ−２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−ブチルベンズアマイド（１）の合成。
【００５３】
【化１８】
0004781546.tif 000012
【００５４】
上記ａで得た５−クロロサリチル酸クロライド（粗生成物，約３５．０ｍｍｏｌ）のエーテル溶液（６０ｍＬ）を、ｂで得た２−アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミド（４．８０ｇ，２５．０ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（８．６２ｇ，６２．４ｍｍｏｌ）の沸騰したエーテル溶液（５０ｍＬ）中に滴下した。約３時間の還流後にエーテル溶媒を留去し、生成物は水で洗いろ別した。茶色の沈殿は７０ｍＬの５％ＮａＯＨ水溶液に溶かし、約１０分間沸騰させた。溶液を冷やした後に酢酸約５．０ｇで中和し、得られた沈殿をろ取した。粗生成物を酢酸中から再結晶することにより薄い青色の蛍光を持つ白色沈殿として目的物を得た（４．７２ｇ，収率５４％）。
【００５５】
得られた化合物の融点、1H NMR及びIR及び元素分析の解析データは以下の通りである。
融点 180.5-182.0 ℃
1H NMR (CDCl3,ppm） 0.98(t,3JHH=7.2Hz,3H),1.45(sext.,2H),1.64(quint.,2H),3.4-3.6(m,2H),6.31(brs,1H),6.95(d,3JHH=8.9Hz,1H),7.1-7.2(m,1H),7.38(dd,3JHH=8.9Hz,4JHH=2.4Hz,1H),7.5-7.6(m,2H),7.76(d,4JHH=2.3Hz,1H),8.63(d,3JHH=8.6Hz,1H),12.4(brs,1H),12.5(brs,1H)．
IR (KBr,cm-1) 3328,2968,2936,2880,1662,1634,1600,1532,1490,1454,1408,1354,1304,1278,1212.
元素分析  分子式  C18H19ClN2O3
計算値  : C, 62.34; H, 5.52; N, 8.08.
測定値  : C, 62.24; H, 5.89; N, 8.45.
２−（５−クロロ−２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−ベンズアマミド（３）の合成。
【００５６】
【化１９】
0004781546.tif 000013
【００５７】
上記２−（５−クロロ−２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミドと同様の方法にて、２−（５−クロロ−２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−ベンズアマイドを白色固体として得た（１．０２ｇ，収率４４％）。
【００５８】
この化合物の融点、1H NMR及びＩＲ及び元素分析の解析データは以下の通りである。
融点：221.0-222.0 ℃
1H NMR (CDCl3,ppm） 3.06(d,3JHH=4.9Hz,3H),6.36(brs,1H),6.96(d,3JHH=8.9Hz,1H),7.21(t,3JHH=7.6Hz,1H),7.38(dd,3JHH=8.9Hz,4JHH=1.4Hz,1H),7.5-7.6(m,2H),7.78(d, 4JHH=1.9Hz,1H),8.63(d,3JHH=8.6Hz,1H),12.3(brs,1H),12.5(brs,1H)
IR (KBr,cm-1) 3452,3312,1654,1636,1604,1540,1488,1456,1416,1368,1334,1302,1278,1216.
元素分析  分子式  C15H13ClN2O3
計算値：C, 59.12; H, 4.30; N, 9.19.
分析値：C, 59.34; H, 4.66; N, 9.34.
２−（５−クロロ−２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ安息香酸（４）の合成。（Ａ法）
【００５９】
【化２０】
0004781546.tif 000014
【００６０】
上記２−（５−クロロ−２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミドと同様の方法にて２−（５−クロロ−２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ安息香酸を白色固体として得た（４．４８ｇ，収率７７％）。
【００６１】
得られた化合物の融点、1H NMR及びＩＲ及び元素分析の解析データは以下の通りである。
融点：240.0-242.0 ℃
1H NMR (DMSO-d6, ppm） 7.02(d,3JHH=8.8Hz,1H),7.20(t,3JHH=7.6Hz,1H),7.46(dd,3JHH=8.8Hz,4JHH=2.7Hz,1H),7.62(dt,3JHH=7.9Hz,4JHH=1.6Hz,1H),7.85(d,4JHH=2.8Hz,1H),8.00(dd,3JHH=7.9Hz,4JHH=1.5Hz,1H),8.61(d,3JHH=8.4Hz,1H),11.7(brs,1H),12.4(brs,1H).
IR (KBr,cm-1) 3320,1674,1652,1612,1588,1546,1470,1456,1418,1328,1304,1264,1208,1172.
元素分析  分子式  C14H10ClNO4
計算値： C, 57.65; H, 3.46; N, 4.80.
分析値： C, 57.33; H, 3.85; N, 4.70.
ｄ．２−（２−ヒドロキシ−５−メトキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミド（２）の合成。
【００６２】
【化２１】
0004781546.tif 000015
【００６３】
５−メトキシサリチル酸クロライド（粗物，１４ｍｍｏｌ）のエーテル溶液（２５ｍＬ）をＮ−ブチルベンズアミド（１．９２ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（３．４６ｇ，２５．０ｍｍｏｌ）の沸騰したエーテル溶液（５０ｍＬ）中に滴下した。約３時間の還流後にエーテル溶媒を留去し、生成物は水で洗いろ別した。茶色の沈殿はジクロロメタンに溶解させた。ジクロロメタンで数回抽出後、溶液は無水硫酸マグネシウムで乾燥し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。エーテルからの再結晶により黄緑色の蛍光を持つ白色沈殿を得た（１．４０ｇ，収率４１％）。
【００６４】
得られた化合物の融点、1H NMR及びＩＲ及び元素分析の解析データは以下の通りである。
融点：145.0-147.0 ℃
1H NMR (CDCl3,ppm） 1.01(t,3JHH=7.1Hz,3 H),1.3-1.7(m,4H),3.4-3.6(m,2H),3.88(s,3H),6.25(brs,1H),6.94(d,3JHH=9.2Hz,1H),7.07(dd,3JHH=9.1Hz,4JHH=2.9Hz,1H),7.15(dt,3JHH=7.1Hz,4JHH=1.3Hz,1H),7.29(dd,3JHH=8.4Hz,4JHH=2.7Hz,1H),7.4-7.6(m,2H),8.68(d,3JHH=8.3Hz,1H),11.8(brs,1H),12.4(brs,1H)
IR (KBr,cm-1)：3328,2968,2880,1662,1630,1592,1530,1498,1454,1424,1360,1336,1300,1280,1210,1178.
元素分析  分子式  C19H22N2O4
計算値： C, 66.65; H, 6.48; N, 8.18.
分析値： C, 66.31; H, 6.42; N, 8.49.
２−（２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミド（５）の合成。
【００６５】
【化２２】
0004781546.tif 000016
【００６６】
上記２−（２−ヒドロキシ−５−メトキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミドの合成と同様の方法にて２−（２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミド を白色固体として得た（０．６９６ｇ，収率４５％）。
【００６７】
得られた化合物の融点、1H NMR及びＩＲ及び元素分析の解析データは以下の通りである。
融点：156.0-157.5 ℃
1H NMR (CDCl3,ppm） 1.01(t,3JHH=7.2Hz,3H),1.3-1.7(m,4H),3.4-3.5(m,2H),6.27(brs,1H),6.9-7.0(m,1H),7.16(t,3JHH=7.1Hz,1H),7.3-7.6(m,3 H),7.79(d,3JHH=8.0Hz,1H),8.67(d,3JHH=8.1Hz,1H),12.3(brs,1H),12.4(brs,1H)．
IR (KBr cm-1) 3344,2968,2936,2876,1658,1634,1600,1534,1452,1368,1338,1314,1278,1224,1168.
元素分析  分子式  C18H20N2O3
計算値： C, 69.21; H, 6.45; N, 8.97.
分析値： C, 68.91; H, 6.79; N, 9.25.
２−（２，３−ジヒドロキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミド（６）の合成。
【００６８】
【化２３】
0004781546.tif 000017
【００６９】
上記２−（２−ヒドロキシ−５−メトキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミドの合成と同様の方法にて２−（２，３−ジヒドロキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミドを桃色固体として得た（２．０１ｇ，収率６１％）。
【００７０】
得られた化合物の融点、1H NMR及びＩＲ及び元素分析の解析データは以下の通りである。
融点：188.5-190.0 ℃
1H NMR (CDCl3,ppm） 0.98(t,3JHH=7.3Hz,3H),1.3-1.7(m,4H),3.4-3.6(m,2H),5.78(s,1H),6.2(brs,1 H),6.88(t,3JHH=8.0Hz,1H),7.0-7.2(m,2H),7.35(dd,3JHH=8.1Hz,4JHH=1.3Hz,1H),7.4-7.6(m,2H),8.67(d,3JHH=8.1Hz,1H),12.4(brs,1H),12.7(brs,1H)
IR (KBr,cm-1) 3500,3324,2936,2876,1652,1632,1596,1534,1494,1454,1334,1272,1230,1174,1164,1152.
元素分析  分子式  C18H20N2O4
計算値： C, 65.84; H, 6.14; N, 8.53.
分析値： C, 66.04; H, 6.17; N, 8.71.
２−（５−クロロ−２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−（２−メトキシエチル）ベンズアミド（７）の合成。
【００７１】
【化２４】
0004781546.tif 000018
【００７２】
上記２−（２−ヒドロキシ−５−メトキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミドの合成と同様の方法にて２−（５−クロロ−２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−（２−メトキシエチル）ベンズアミドを白色固体として得た（４．３２ｇ，収率６２％）。
【００７３】
得られた化合物の融点、1H NMR及びＩＲ及び元素分析の解析データは以下の通りである。
融点：188.5-190.0 ℃
1H NMR (CDCl3, ppm） 3.41(s,3H),3.5-3.8(m,4H),6.76(brs,1H),6.95(d,3JHH=8.9Hz,1H),7.1-7.2(m,1H),7.37(dd,3JHH=8.9Hz,4JHH=2.5Hz,1H),7.5-7.6(m,2 ),7.76 (d,4JHH=2.5Hz,1H),8.64(d,3JHH=8.1Hz,1H),12.3(brs,1H),12.6(brs,1H).
IR (KBr,cm-1) 3500,3324,2936,2876,1652,1632,1596,1534,1494,1454,1334,1272,1230,1174,1164,1152.
元素分析  分子式  C17H17N2O4
計算値： C, 58.84; H, 4.91; N, 8.03.
分析値： C, 58.70; H, 5.02; N, 8.22.
２−（５−クロロ−２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ安息香酸（８）の合成。
【００７４】
【化２５】
0004781546.tif 000019
【００７５】
上記２−（２−ヒドロキシ−５−メトキシベンゾイル）アミノ−Ｎ−ブチルベンズアミドの合成と同様の方法にて２−（５−クロロ−２−ヒドロキシベンゾイル）アミノ安息香酸ブチルを白色固体として得た（２．６０ｇ，収率３７％）。
【００７６】
得られた化合物の融点、1H NMR及びＩＲ及び元素分析の解析データは以下の通りである。
融点：105.0-106.5 ℃
1H NMR (CDCl3,ppm） 1.01(t,3JHH=7.3Hz,3H),1.51(sextet,3JHH=7.4Hz,2 H),1.7-1.9(m,2H),4.41(t,3JHH=6.5Hz,2H),6.98(d,3JHH=8.9Hz,1H),7.19(dt,3JHH=7.7Hz,4JHH=1.2Hz,1H),7.40(dd,3JHH=8.9Hz,4JHH=2.4Hz,1H),7.62(dt,3JHH=7.9Hz,4JHH=1.6Hz,1H),7.78(d,4JHH=2.4Hz,1H),8.12(dd,3JHH=8.0Hz,4JHH=1.4Hz,1H),8.74(dd,3JHH=8.5Hz,4JHH=1.0Hz,1H),12.2(brs,1H),12.3(brs,1H).
IR (KBr,cm-1) 3252,3160,2968,2940,2880,1688,1652,1612,1590,1538,1488,1474,1452,1408,1348,1322,1302,1274,1256,1200,1168,1154.
元素分析  分子式  C18H18ClNO4
計算値： C, 62.16; H, 5.22; N, 4.03.
分析値： C, 61.89; H, 5.40; N, 4.09.
実施例２
蛍光測定
蛍光色素（1）の場合
【００７７】
【化２６】
0004781546.tif 000020
【００７８】
実施例１で合成した蛍光色素（１）の５００μｍｏｌエタノール溶液と各ｐＨ（4.0,5.0,5.5,6.0,6.9,7.5,8.0,9.0）の緩衝液を蛍光セル中で１：１の割合で混合した。その後パスツールピペットで３０秒間撹拌し、蛍光装置の中にセルを設置した。気泡がおさまるまで３０秒間静置し、励起波長３４０ｎｍにおける蛍光スペクトルを測定した。さらに、混合から５分後、１０分後にも同じく蛍光測定を行なった。結果、時間をかけるにつれて各ｐＨにおけるスペクトルが一点で交差する良好なスペクトルが得られることがわかった。混合から１０分後の励起波長３１５ｎｍにおける蛍光スペクトルのｐＨ依存性を図１に示す。
蛍光色素（２）の場合
【００７９】
【化２７】
0004781546.tif 000021
【００８０】
蛍光色素（２）の５００μｍｏｌエタノール溶液と各ｐＨ（4.0,5.0,5.5,6.0,6.9,7.5,8.0,9.0）の緩衝液を蛍光セル中で１：１の割合で混合した。その後パスツールピペットで３０秒間撹拌し、蛍光装置の中にセルを設置した。気泡がおさまるまで３０秒間静置し、励起波長３１５ｎｍにおける蛍光スペクトルを測定した。そして、その１分後に励起波長３５８ｎｍにおける蛍光スペクトルを測定した。さらに、混合から５分後、１０分後に励起波長３１５ｎｍで、混合から６分後、１１分後に励起波長３５８ｎｍで蛍光測定を行なった。結果、時間をかけるにつれて各ｐＨにおけるスペクトルが一点で交差する良好なスペクトルが得られることがわかったが、１、２分後においてもまずまず良好なスペクトルが得られた。
【００８１】
混合から１０分後の励起波長３１５ｎｍでの蛍光スペクトルのｐＨ依存性を図２に、混合から１１分後の励起波長３５８ｎｍでの蛍光スペクトルのｐＨ依存性を図３に示す。
【００８２】
【発明の効果】
本発明のアントラニル酸アミド化合物は蛍光化合物であり微細領域の水素イオン濃度（ｐＨ）を測定する際に有用な新規なｐＨ官能性蛍光色素材料であり、生化学的研究や診断薬的な利用が可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】  実施例２での蛍光色素（1）混合後10分後の励起波長315nmにおける蛍光スペクトルのｐＨ依存性を示す。
【図２】  実施例２での蛍光色素（2）混合後10分後の励起波長315nmにおける蛍光スペクトルのｐＨ依存性を示す。
【図３】  実施例２での蛍光色素（2）混合後11分後の励起波長358nmにおける蛍光スペクトルのｐＨ依存性を示す。
【符号の説明】
１  ｐＨ４
２  ｐＨ５
３  ｐＨ５．５
４  ｐＨ６
５  ｐＨ６．９
６  ｐＨ７．５
７  ｐＨ８
８  ｐＨ９
【図１】
0004781546.tif 000031
【図２】
0004781546.tif 000032
【図３】
0004781546.tif 000033