(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体：
【化１】
0004676676.tif 000082
ここで、
Ｒ１は、−ＣＨ２Ｙである；
Ｙは、ハロゲンである；
Ｒ２は、ＣＯ２Ｈである；
Ａは、Ｃ＝Ｏである；
Ｘ１は、ＣＨ２である；
Ｘ２は、ＣＨ２である；
Ｘ３は、ＣＨ２である；そして
Ｚは、炭素環、アリール、飽和複素環、部分飽和複素環およびヘテロアリールからなる群から選択される、非置換であるかまたは置換した環であり、ここで、Ａは、環Ｚの炭素で該環Ｚに結合されている；
ただし、式Ｉの
【化１Ａ】
0004676676.tif 000083
部分は、非置換であるか、または置換されたインドール−２−カルボニル基：
【化１Ｂ】
0004676676.tif 000084
ではなく；
該誘導体は、該化合物の金属塩である、
化合物。
【請求項２】
Ｙが、Ｆである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｚが、非置換であるか、または置換したアリール環であり、ここで、Ａは、環Ｚの炭素で該環Ｚに結合されている、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
以下の表１：
表１：代表的な化合物
【表１】
0004676676.tif 000085
0004676676.tif 000086
0004676676.tif 000087
0004676676.tif 000088
0004676676.tif 000089
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ａ）請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体；およびｂ）薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントまたはビヒクルを含有する、薬学的組成物。
【請求項６】
被験体における以下：炎症疾患、過剰な食用アルコール摂取疾患、炎症性腹膜炎、骨関節炎、膵炎、成人呼吸窮迫症候群、糸球体腎炎、関節リウマチ、慢性活性肝炎、炎症性腸疾患、クローン病、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、火傷後臓器アポトーシス、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、敗血症、敗血症性ショック、外傷、全身性炎症応答症候群、多臓器不全症候群、脳虚血、心筋虚血、心筋梗塞、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈バイパス移植、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、脳卒中による神経障害、潰瘍性大腸炎、外傷性脳傷害、脊髄傷害、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｇ型肝炎および肝臓病からなる群から選択される疾患を処置または予防するための薬学的組成物であって、ａ）請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物もしくはその薬学的に受容可能な誘導体およびｂ）薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントまたはビヒクルを含む、薬学的組成物。
【請求項７】
前記疾患が、炎症疾患、過剰な食用アルコール摂取疾患、炎症性腹膜炎、糸球体腎炎、慢性活性肝炎、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、敗血症、敗血症性ショック、外傷、全身性炎症応答症候群、多臓器不全症候群、脳虚血、心筋虚血、心筋梗塞、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈バイパス移植、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、脳卒中による神経障害、外傷性脳傷害、脊髄傷害、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｇ型肝炎、肝臓病、または腎多嚢胞病である、請求項６に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
冠状動脈バイパス移植に付随した合併症を治療するための薬学的組成物であって、ａ）請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物もしくはその薬学的に受容可能な誘導体、およびｂ）薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントまたはビヒクルを含む、薬学的組成物。
【請求項９】
細胞を保存する方法であって、生体から採取された細胞を収集する工程、および請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物もしくはその薬学的に受容可能な誘導体の溶液に、該細胞を浸す工程を包含する、方法。
【請求項１０】
前記化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体が、臓器移植に使用されるか、または血液産物を保存するのに使用される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記薬学的組成物が、追加治療薬と共に投与される、請求項６〜８のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
前記追加治療薬が、血小板溶解薬、抗炎症薬、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、サイトカインアンタゴニスト、免疫抑制薬、抗癌薬、抗ウイルス薬、サイトカイン、成長因子、免疫調節薬、プロスタグランジンおよび抗血管過剰増殖化合物からなる群から選択される、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
ＴＮＦ−αのレベルまたは活性を測定するためのキットであって、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物と、該ＴＮＦ−αのレベルまたは活性を測定する器具とを含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、医薬品化学の分野であり、新規化合物およびそれらの薬学的組成物に関し、これらは、細胞アポトーシスおよび炎症を媒介するカスパーゼおよび／またはＴＮＦ−αを阻害し、また、哺乳動物における過剰量のＴＮＦ−αの病態生理学的な効果を阻害する。本発明はまた、カスパーゼおよび／またはＴＮＦ−αの活性が関係している疾患を治療するために本発明の化合物および薬学的組成物を調製するためのプロセスおよび使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
アポトーシス、すなわち、プログラム化された死は、生物が不要な細胞を排除する主な機構である。アポトーシスの調節解除（過剰なアポトーシスまたはそれを受けないことのいずれか）は、多数の疾患（例えば、癌、急性炎症疾患および自己免疫疾患、虚血疾患およびある種の神経変性疾患）に関係している（一般に、Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８，２８１，１２８３〜１３１２；およびＥｌｌｉｓら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９１，７，６６３を参照）。
【０００３】
カスパーゼは、アポトーシスおよび細胞分解の情報伝達経路における重要な媒介物である一群のシステインプロテアーゼ酵素である（Ｔｈｏｒｎｂｅｒｒｙ，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，１９９８，５，Ｒ９７−Ｒ１０３）。これらの情報伝達経路は、細胞型および刺激に依存して変わるが、全てのアポトーシス経路は、重要なタンパク質のタンパク質分解を引き起こす共通エフェクター経路に集中すると思われる。カスパーゼは、この情報伝達経路のエフェクター段階およびその開始におけるさらに上流の両方に関与している。開始事象に関与している上流カスパーゼは、活性化し、順に、アポトーシスの後の段階で関与している他のカスパーゼを活性化する。
【０００４】
カスパーゼ−１は、最初に同定されたカスパーゼであるが、また、インターロイキン変換酵素または「ＩＣＥ」として知られている。カスパーゼ−１は、Ａｓｐ−１１６とＡｌａ−１１７との間でのｐＩＬ−βの特異的開裂により、前駆体であるインターロイキン−１β（「ｐＩＬ−１β」）を炎症誘発性活性形態に変換する。カスパーゼ−１以外に、また、１１種の他の公知のヒトカスパーゼがあり、これらの全ては、アスパルチル残基において、特異的に開裂する。それらはまた、その開裂部位のＮ−末端側にある少なくとも４個のアミノ酸残基に対して、厳しい要件を有することが観察されている。
【０００５】
これらのカスパーゼは、好ましいかまたは最初に認識されたアミノ酸配列に依存して、３つの群に分類されている。カスパーゼ１、４および５を含むカスパーゼの群は、その開裂部位のＮ−末端側にある４位置の疎水性芳香族アミノ酸を好むことが示されている。カスパーゼ２、３および７を含む別の群は、その開裂部位のＮ−末端側にある１位置および４位置の両方のアスパルチル残基を認識し、そして好ましくは、Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｘ−Ａｓｐの配列を認識する。カスパーゼ６、８、９および１０を含む第三の群は、第一認識配列にある多くのアミノ酸に耐性であるが、分枝脂肪族側鎖を備えた残基（例えば、４位置にあるバリンおよびロイシン）を好むように見える。
【０００６】
これらのカスパーゼはまた、それらの認知された機能に従って、分類されている。第一の亜群は、カスパーゼ−１（ＩＣＥ）、４および５からなる。これらのカスパーゼは、炎症誘発性サイトカインプロセシングに関与していることが示されており、従って、炎症において重要な役割を果たす。カスパーゼ−１は、この種の最も研究された酵素であるが、タンパク質分解性の開裂により、ＩＬ−１β前駆体を活性化する。この酵素は、従って、炎症応答において重要な役割を果たす。カスパーゼ−１はまた、インターフェロンガンマ誘発因子（ＩＧＩＦまたはＩＬ−１８）（これは、インターフェロンガンマの産生を刺激し、抗原提示、Ｔ細胞活性化および細胞接着を変調させる重要な免疫調節因子である）のプロセシングに関与している。
【０００７】
残りのカスパーゼは、第二および第三の亜群を構成する。これらの酵素は、アポトーシスを引き起こす細胞内情報伝達経路において、非常に重要な酵素である。１つの亜群は、アポトーシス経路での開始事象（これは、原形質膜からの情報伝達を含む）に関与している酵素からなる。この亜群の構成要素には、カスパーゼ−２、８、９および１０が挙げられる。他の亜群は、エフェクターカスパーゼ３、６および７からなるが、アポトーシスによる細胞の組織的な崩壊および死を引き起こす最終下流開裂事象に関与している。上流情報伝達に関与しているカスパーゼは、下流カスパーゼを活性化し、これは、次いで、ＤＮＡ修復機構を無能にし、ＤＮＡを断片化し、細胞骨格を解体し、最後には、その細胞を崩壊する。
【０００８】
カスパーゼで主に認識された４個のアミノ酸配列の知見は、カスパーゼ阻害剤を設計するのに使用されている。構造ＣＨ３ＣＯ−［Ｐ４］−［Ｐ３］−［Ｐ２］−ＣＨ（Ｒ）ＣＨ２ＣＯ２Ｈを有する可逆性テトラペプチド阻害物が調製され、ここで、Ｐ２〜Ｐ４は、最適なアミノ酸認識配列を表わし、そしてＲは、カスパーゼシステインスルフヒドリルに結合できるアルデヒド、ニトリルまたはケトンである。Ｒａｎｏ  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｎｂｅｒｒｙ，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．４，１４９〜１５５（１９９７）；Ｍｊａｌｌｉら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．３，２６８９〜２６９２（１９９３）；およびＮｉｃｈｏｌｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３７６，３７〜４３（１９９５）。Ｒがアシルオキシメチルケトン（−ＣＯＣＨ２ＯＣＯＲ’）である場合、Ｒ’は、必要に応じて置換したフェニル（例えば、２，６−ジクロロベンジルオキシ）で代表され、そしてＲがＣＯＣＨ２Ｘである場合、Ｘは、脱離基（例えば、ＦおよびＣｌ）である、類似のテトラペプチド認識配列をベースにした非可逆性阻害剤が調製されている。Ｔｈｏｒｎｂｅｒｒｙら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３３，３９３４（１９９４）；およびＤｏｌｌｅら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７，５６３〜５６４（１９９４）。
【０００９】
細胞性アポトーシスの増大に関連した種々の哺乳動物の疾患状態を治療するカスパーゼ阻害剤の有用性は、ペプチド性カスパーゼ阻害剤を使用して、立証されている。例えば、齧歯類モデルにおいて、カスパーゼ阻害剤は、心筋梗塞後の梗塞の大きさを小さくし心筋細胞のアポトーシスを阻止すること、脳卒中（ｓｔｒｏｋｅ）から生じる損傷の容量および神経欠損を少なくすること、外傷性脳傷害における外傷後アポトーシスおよび神経欠損を少なくすること、劇症肝臓破壊を効果的に治療すること、および内毒素ショック後の生存率を高めることが明らかとなっている。Ｙａｏｉｔａら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９７，２７６（１９９８）；Ｅｎｄｒｅｓら、Ｊ  Ｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，１８，２３８，（１９９８）；Ｃｈｅｎｇら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０１，１９９２（１９９８）；Ｙａｋｏｖｌｅｖら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１７，７４１５（１９９７）；Ｒｏｄｒｉｑｕｅｚら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８４，２０６７（１９９６）；ａｎｄ  Ｇｒｏｂｍｙｅｒら、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，５，５８５（１９９９）。
【００１０】
一般に、上記ペプチド阻害剤は、これらのカスパーゼ酵素のいくつかに対して、非常に強力である。しかしながら、この効力は、アポトーシスの細胞モデルにおいて、常に反映されている訳ではない。それに加えて、ペプチド性阻害剤は、典型的には、望ましくない薬理学的特性（例えば、乏しい経口吸収、乏しい安定性および急速な代謝）により、特徴付けられる。Ｐｌａｔｔｎｅｒ  ａｎｄ  Ｎｏｒｂｅｃｋ，ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃｌａｒｋ  ａｎｄ  Ｍｏｏｓ編、（Ｅｌｌｉｓ  Ｈｏｒｗｏｏｄ，  Ｃｈｉｃｈｅｓｔｅｒ，Ｅｎｇｌａｎｄ，  １９９０）。
【００１１】
これらのペプチド性カスパーゼ阻害剤、ペプチドミメティック阻害剤および非天然アミノ酸ペプチド阻害剤の薬理学的特性を改善する必要性が認識されていると報告されている。
【００１２】
ＷＯ９６／４０６４７は、次式のＩＣＥ阻害剤を開示しており：
【００１３】
【化２】
0004676676.tif 000002
ここで、Ｂは、ＨまたはＮ−末端ブロッキング基であり；Ｒ１は、そのＰ１アミノ酸残基のアミノ酸側鎖であり、ここで、このＰ１アミノ酸は、Ａｓｐであり；Ｐｎは、アミノ酸残基またはアミノ酸複素環置換であり、ここで、この複素環は、本明細書中で定義されており；Ｒ４は、ヒドロキシル、アルコキシル、アシル、水素、アルキルまたはフェニルであり；ｍは、０または正の整数であり；そしてＸは、Ｎ、Ｓ、ＯまたはＣＨ２である。
【００１４】
ＷＯ９７／２２６１９は、次式のインターロイキン−１β変換酵素の阻害剤を開示しており：
【００１５】
【化３】
0004676676.tif 000003
ここで、Ｘ１は、−ＣＨであり；ｇは、０または１であり；各Ｊは、独立して、−Ｈ、−ＯＨおよび−Ｆからなる群から選択されるが、但し、第一および第二のＪがＣに結合され、そしてこの第一のＪが−ＯＨであるとき、この第二のＪは、−Ｈであり；ｍは、０、１または２であり；Ｔは、特に、−ＣＯ２Ｈであり；Ｒ１は、
【００１６】
【化４】
0004676676.tif 000004
であり、ここで、各Ｚは、独立して、ＣＯまたはＳＯ２であり；Ｒ３は、本明細書中で定義されるとおりであり；各Ｘは、独立して、＝Ｎ−および＝ＣＨ−からなる群から選択され；そしてＲ２０は、以下：
【００１７】
【化５】
0004676676.tif 000005
を含む群から選択される。
【００１８】
ＷＯ９８／１６５０２は、次式のインターロイキン−１β変換酵素のアスパラギン酸エステル阻害剤を開示しており；
【００１９】
【化６】
0004676676.tif 000006
ここで、Ｒ１は、特に、Ｒ５Ｎ（Ｒａ）ＣＨＲ６ＣＯであり；Ｒ２は、特定の基であり；Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、−（ＣＨ２）ｎアリール、−（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒａ、ヒドロキシ置換Ｃ１〜６アルキルまたはイミダゾール置換Ｃ１〜６アルキルであり；各Ｒａは、独立して、水素、Ｃ１〜６アルキルまたは（ＣＨ２）ｎアリールであり；そしてＲ５は、特に、ＣＯＮＲａＲａである。
【００２０】
ＷＯ９９／１８７８１は、次式を有するジペプチドアポトーシス阻害剤を開示しており；
【００２１】
【化７】
0004676676.tif 000007
ここで、Ｒ１は、Ｎ−末端保護基であり；ＡＡは、任意の天然α−アミノ酸またはβ−アミノ酸の残基であり；Ｒ２は、ＨまたはＣＨ２Ｒ４であり、ここで、Ｒ４は、電気陰性ＬＧ（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＴｓＯ−、ＭｅＯ−、ＡｒＯ−、ＡｒＣＯＯ−、ＡｒＮ−およびＡｒＳ−）であり；そしてＲ３は、アルキルまたはＨである。
【００２２】
ＷＯ９９／０４７１５４は、次式を有するジペプチドアポトーシス阻害剤を開示しており；
【００２３】
【化８】
0004676676.tif 000008
ここで、Ｒ１は、Ｎ−末端保護基であり；ＡＡは、任意の非天然アミノ酸またはアミノ酸残基であり；そしてＲ２は、本明細書中で定義されるように、必要に応じて置換したアルキルまたはＨである。
【００２４】
ＷＯ００／０２３４２１は、次式を有する（置換）アシルジペプチドアポトーシス阻害剤を開示しており；
【００２５】
【化９】
0004676676.tif 000009
ここで、ｎは、０、１または２であり；ｑは、１または２であり；Ａは、任意の天然または非天然アミノ酸であり；Ｂは、水素原子、重水素原子、Ｃｌ〜１０直鎖または分枝アルキル、シクロアルキル、フェニル、置換フェニル、ナフチル、置換ナフチル、２−ベンゾキサゾリル、置換２−オキサゾリル、（ＣＨ２）ｍシクロアルキル、（ＣＨ２）ｍフェニル、（ＣＨ２）ｍ（置換フェニル）、（ＣＨ２）ｍ（１−または２−ナフチル）、（ＣＨ２）ｍヘテロアリール、ハロメチル、ＣＯ２Ｒ１３、ＣＯＮＲ１４Ｒ１５、ＣＨ２ＺＲ１６、ＣＨ２ＯＣＯアリール、ＣＨ２ＯＣＯ（置換アリール）、ＣＨ２ＯＣＯ（ヘテロアリール）、ＣＨ２ＯＣＯ（置換ヘテロアリール）またはＣＨ２ＯＰＯ（Ｒ１７）Ｒ１８であり、ここで、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８およびｍは、本明細書中で定義されるとおりであり；Ｒ２は、水素、アルキル、シクロアルキル、フェニル、置換フェニルおよび（ＣＨ２）ｍＮＨ２からなる群から選択され；Ｒ３は、水素、アルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、フェニルアルキルまたは置換フェニルアルキルであり；Ｘは、ＣＨ２、Ｃ＝Ｏ、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨまたはＣＨ２ＯＣＯＮＨであり；そしてＺは、酸素原子またはイオウ原子である。
【００２６】
ＷＯ００／０６１５４２は、次式を有するジペプチドアポトーシス阻害剤を開示しており；
【００２７】
【化１０】
0004676676.tif 000010
ここで、Ｒ１は、必要に応じて置換されたアルキルまたは水素基であり；Ｒ２は、水素または必要に応じて置換したアルキルであり；Ｙは、天然または非天然アミノ酸の残基であり；Ｒ３は、アルキル基、飽和炭素環式基、部分飽和炭素環式基、アリール基、飽和複素環式基、部分飽和複素環式基またはヘテロアリール基であり、ここで、上記の基は、必要に応じて、置換されており；そしてＸは、Ｏ、Ｓ、ＮＲ４または（ＣＲ４Ｒ５）ｎであり、ここで、Ｒ４およびＲ５は、各出現例において、独立して、水素、アルキルおよびシクロアルキルからなる群から選択され、そしてｎは、０、１、２または３であり；あるいはＸは、ＮＲ４であり、そしてＲ３およびＲ４は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、飽和複素環式基、部分飽和複素環式基またはヘテロアリール基を形成し、ここで、上記の基は、必要に応じて、置換されているか；あるいはＸは、ＣＲ４Ｒ５であり、Ｒ３およびＲ４は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、飽和炭素環式基、部分飽和炭素環式基、アリール基、飽和複素環式基、部分飽和複素環式基または酸素含有ヘテロアリール基を形成し、ここで、上記の基は、必要に応じて、置換されているが；但し、ＸがＯのとき、Ｒ３は、非置換ベンジルでもｔ−ブチルでもなく；また、ＸがＣＨ２のとき、Ｒ３は、Ｈではない。
【００２８】
一般に、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）との用語は、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ、カケクチン）および腫瘍壊死因子−β（リンホトキシン、ＴＮＦ−β）として知られている２種の密接に関連したサイトカイン（これらは、別々の遺伝子でコードされる）を意味する。両方のサイトカインは、同じ細胞膜レセプタと相互作用し、両方共、ヒトの疾病の病原性媒介物として、関係している。
【００２９】
ＴＮＦ−αは、細胞のアポトーシスおよび炎症を調節するシグナル伝達経路に関与している。ＴＮＦ−αはまた、ＴＮＦＳＦ２、ＴＮＦＡおよびＤＩＦとして、知られている。ＴＮＦ−αは、それが特定の細胞レセプタと相互作用することによって、細胞効果を誘発できる炎症誘発性の哺乳動物タンパク質である。それは、主に、活性化した単球およびマクロファージにより、産生される。グラム陰性最近の細胞壁由来のリポ多糖（ＬＰＳ；これはまた、エンドトキシンとも呼ばれている）は、ＴＮＦ−α合成の強力な刺激因子である。
【００３０】
ＴＮＦ−αの過剰な産生または制御されていない産生から生じ得る悪影響が原因で、ＴＮＦ−αの血清レベルを調節する相当な努力が行われている。多数の疾患の病状は、ＴＮＦ−αの影響を受け、これには、再狭窄、中枢神経系の炎症疾患、神経系の脱髄疾患、多発性硬化症、敗血症性関節炎、動脈瘤性大動脈疾患、外傷性関節傷害、歯周病、黄斑変性症、糖尿病性網膜炎、眼球炎症、円錐角膜、シェーグレン症候群、角膜移植片拒絶、悪液質および拒食症が挙げられる。
【００３１】
多数のカスパーゼおよびＴＮＦ−α阻害剤が報告されているものの、それらが治療上有用な適当な薬理学的特性を持っているかどうかは明らかではない。従って、引き続いて、インビボでアポトーシスを効果的に阻止する強力で安定で良好な膜貫入性を有する小分子カスパーゼおよびＴＮＦ−α阻害剤が必要とされている。このような化合物は、カスパーゼ酵素および／またはＴＮＦ−αサイトカインが一定の役割を果たしている前記疾患状態を治療するのに、非常に有用である。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００３２】
（発明の要旨）
本発明の化合物およびそれらの薬学的組成物は、カスパーゼの阻害剤として、ＴＮＦ−αのレベルまたは活性の調節因子として、および細胞アポトーシスおよび炎症応答の阻害剤として、特に有効である。これらの化合物は、一般式Ｉを有する：
【００３３】
【化１１】
0004676676.tif 000011
ここで、
Ｒ１は、水素、ＣＮ、ＣＨＮ２、Ｒまたは−ＣＨ２Ｙであり；
Ｒは、脂肪族基、置換脂肪族基、アリール基、置換アリール基、アラルキル基、置換アラルキル基、非芳香族複素環式基または置換非芳香族複素環式基であり；
Ｙは、電気陰性脱離基、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＯＣ＝Ｏ（Ｒ）または−ＯＰＯ（Ｒ３）（Ｒ４）であり；
Ｒ３およびＲ４は、独立して、ＲまたはＯＲであり；
Ｒ２は、ＣＯ２Ｈ、ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、または必要に応じて置換したエステル、アミドまたはそれらのアイソスターであり；
Ａは、Ｃ＝ＯまたはＳＯ２であり；
Ｘ１は、酸素、イオウ、−ＮＨまたは−ＣＨ２であり、ここで、−ＮＨは、必要に応じて、アルキル基、シクロアルキル基、（シクロアルキル）アルキル基、アミノ酸Ｎ−末端保護基またはＣＯＲで置換されており、そして−ＣＨ２は、必要に応じて、フッ素、アルキル基、シクロアルキル基、（シクロアルキル）アルキル基、アラルキル基、アリール基、アルキルオキシ基、アルキルチオキシ基、アリールオキシ基、アリールチオキシ基、オキソ基（すなわち、＝Ｏ）またはＮＨＣＯＲ基で置換され；
Ｘ２は、酸素、イオウ、−ＮＨまたは−ＣＨ２であり、ここで、−ＮＨは、必要に応じて、アルキル基またはアミノ酸Ｎ−末端保護基で置換されており、そして−ＣＨ２は、必要に応じて、アルキル基、アリール基、アルキルオキシ基、アルキルチオキシ基、アリールオキシ基、アリールチオキシ基、オキソ基（すなわち、＝Ｏ）またはＮＨＣＯＲ基で置換され；Ｘ１およびＸ２は、必要に応じて、隣接環Ｑと縮合されたフェニル環の一部をなし；
Ｘ３は、ＣＨ２であるか、またはＸ２およびＸ３は、必要に応じて、隣接環Ｑに縮合したフェニル環の一部をなすが、但し、Ｘ２がＸ３と環を形成するとき、Ｘ２は、Ｘ１と環を形成せず；
環Ｑの隣接位置に結合された任意の２個の水素は、必要に応じて、二重結合で置き換えられ；そして
Ｚは、必要に応じて、炭素環式、アリール、飽和複素環、部分飽和複素環およびヘテロアリールからなる群から選択される置換した環であり、ここで、該環は、環炭素にあるＡに結合されている。
【００３４】
本発明の化合物は、カスパーゼおよびＴＮＦ活性の強力な阻害剤である。それらは、アポトーシスおよび炎症の細胞モデルにおいて、良好な効能を備えた一定範囲のカスパーゼ標的にわたる阻害活性を有する。それに加えて、これらの化合物は、細胞浸透特性および薬物動態特性が改良されると予想され、また、それらの効力の結果として、カスパーゼおよび／またはＴＮＦ−αが関係している疾患に対する効能が改良されると予想されている。
【００３５】
本発明はまた、本発明の化合物および組成物を使用して、種々の細胞からのＴＮＦ−αの放出を阻害するかＴＮＦ−αのレベルまたは活性を低下させる方法に関する。本発明はまた、ＴＮＦ−αのレベルまたは活性を低下させるのに有用な薬剤を同定する方法およびＴＮＦ媒介疾患を治療する方法に関する。本発明は、さらに、本発明の化合物または組成物と、ＴＮＦ−αのレベルまたは活性を測定する器具とを含むキットに関する。
【００３６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、カスパーゼ阻害剤および／またはＴＮＦ−αのレベルまたは活性の調節因子として特に有効な新規化合物およびそれらの薬学的に受容可能な誘導体を提供する。本発明はまた、これらの化合物を使用して哺乳動物におけるカスパーゼおよび／またはＴＮＦ−α媒介疾患を治療する方法を提供する。これらの化合物は、一般式Ｉを有する：
【００３７】
【化１２】
0004676676.tif 000012
ここで、
Ｒ１は、水素、ＣＮ、ＣＨＮ２、Ｒまたは−ＣＨ２Ｙであり；
Ｒは、脂肪族基、置換脂肪族基、アリール基、置換アリール基、アラルキル基、置換アラルキル基、非芳香族複素環式基または置換非芳香族複素環式基であり；
Ｙは、電気陰性脱離基、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＯＣ＝Ｏ（Ｒ）または−ＯＰＯ（Ｒ３）（Ｒ４）であり；
Ｒ３およびＲ４は、独立して、ＲまたはＯＲであり；
Ｒ２は、ＣＯ２Ｈ、ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、または必要に応じて置換したエステル、アミドまたはそれらのアイソスターであり；
Ａは、Ｃ＝ＯまたはＳＯ２であり；
Ｘ１は、酸素、イオウ、−ＮＨまたは−ＣＨ２であり、ここで、−ＮＨは、必要に応じて、アルキル基、シクロアルキル基、（シクロアルキル）アルキル基、アミノ酸Ｎ−末端保護基またはＣＯＲで置換されており、そして−ＣＨ２は、必要に応じて、フッ素、アルキル基、シクロアルキル基、（シクロアルキル）アルキル基、アラルキル基、アリール基、アルキルオキシ基、アルキルチオキシ基、アリールオキシ基、アリールチオキシ基、オキソ基（すなわち、＝Ｏ）またはＮＨＣＯＲ基で置換され；
Ｘ２は、酸素、イオウ、−ＮＨまたは−ＣＨ２であり、ここで、−ＮＨは、必要に応じて、アルキル基またはアミノ酸Ｎ−末端保護基で置換されており、そして−ＣＨ２は、必要に応じて、アルキル基、アリール基、アルキルオキシ基、アルキルチオキシ基、アリールオキシ基、アリールチオキシ基、オキソ基（すなわち、＝Ｏ）またはＮＨＣＯＲ基で置換され；Ｘ１およびＸ２は、必要に応じて、隣接環Ｑと縮合されたフェニル環の一部をなし；
Ｘ３は、ＣＨ２であるか、またはＸ２およびＸ３は、必要に応じて、隣接環Ｑに縮合したフェニル環の一部をなすが、但し、Ｘ２がＸ３と環を形成するとき、Ｘ２は、Ｘ１と環を形成せず；
環Ｑの隣接位置に結合された任意の２個の水素は、必要に応じて、二重結合で置き換えられ；そして
Ｚは、必要に応じて、炭素環式、アリール、飽和複素環、部分飽和複素環およびヘテロアリールからなる群から選択される置換した環であり、ここで、該環は、環炭素にあるＡに結合されている。
【００３８】
他に指示されていなければ、本明細書中で使用する以下の定義が適用される。「状態」または「病態」との用語は、被験体において有害な生物学的結果を生じる任意の疾患、障害または効果を意味する。
【００３９】
本発明によれば、「ＴＮＦ」または「ＴＮＦα」とは、ＴＮＦ−αを意味する。
【００４０】
「被験体」との用語は、動物、または動物から誘導した１個以上の細胞を意味する。好ましくは、この動物は、哺乳動物であり、最も好ましくは、ヒトである。これらの細胞は、任意の形態であり得、これには、組織に保持された細胞、細胞クラスター、不死化細胞、トランスフェクトまたは形質転換した細胞、および身体的または表現型的に変化した動物由来の細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４１】
「インターフェロンγ誘発因子」または「ＩＧＩＦ」との用語は、ＩＦＮ−γの内生産生を刺激できる因子を意味する。
【００４２】
「脂肪族」との用語は、直鎖、分枝または環状のＣ１〜Ｃ１２炭化水素を意味し、これらは、完全に飽和されているか、または１個以上の不飽和単位を含有する。例えば、適当な脂肪族基には、置換または非置換で直鎖、分枝または環状のアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基およびそれらのハイブリッド（例えば、（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキルおよび（シクロアルキル）アルケニル）が挙げられる。「アルキル」との用語は、単独で使用されるか、基またはそれより大きい部分の一部として使用されるが、１〜１２個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖の両方を意味する。
【００４３】
「ハロゲン」との用語は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを意味する。「ヘテロ原子」との用語は、窒素、酸素またはイオウを意味し、そして窒素およびイオウの任意の酸化形態（例えば、Ｎ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）およびＳ（Ｏ）２、および窒素四級化形態）を含む。本発明の化合物は、天然に存在しているか化学的に安定なものに限られることが理解できるはずである。
【００４４】
置換基または可変基（ｖａｒｉａｂｌｅ）の組合せは、このような組合せが安定な化合物または化学的に実現可能な化合物を生じる場合にのみ、許容できる。安定な化合物または化学的に実現可能な化合物とは、水分も他の化学的に反応性の状態もなしで、少なくとも１週間にわたって、４０℃以下の温度で保ったとき、実質的に変化しないものである。
【００４５】
「アリール」との用語は、単独で使用されるか、基またはそれより大きい部分の一部として使用されるが、単環式または多環式の芳香族炭素環系、および単環式または多環式のヘテロ芳香族環系（これは、１個以上のヘテロ原子を含有する）を意味し、これらは、５〜１４個の原子を有する。このような基には、フェニル、ナフチル、アントリル、フラニル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、インドリジニル、インドリル、イソインドリル、インドリニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、プリニル、キノリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、１，８−ナフチリジニル、プテリジニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、テトラヒドロフラニル、フタルイミジニル、テトラゾリルおよびクロマニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４６】
「アラルキル」との用語は、アリール基で置換されたアルキルを意味する。「ヘテロアリール」との用語は、１個以上のヘテロ原子を含有するアリール基を意味する。「ヘテロアラルキル」との用語は、１個以上のヘテロ原子を含有するアラルキル基を意味する。
【００４７】
「複素環式基」または「複素環」との用語は、飽和および不飽和の単環式または多環式の環系であって、１個以上のヘテロ原子を含有し環の大きさが３員〜８員であるものを意味する。このような基には、アジラニル、オキシラニル、アゼチジニル、テトラヒドロフラニル、ピロリニル、ピロリジニル、ジオキソラニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピラニル、ピペリジニル、ジオキサニル、モルホリニル、ジチアニル、チオモルホリニル、ピペラジニル、トリチアニル、キヌクリジニル、オキセパニルおよびチエパニルが挙げられるが、これらに限定されない「複素環式環」との用語は、飽和であれ不飽和であれ、また、必要に応じて置換した環を意味する。「ヘテロシクリルアルキル」との用語は、複素環で置換されたアルキル基を意味する。
【００４８】
「炭素環式基」または「炭素環」との用語は、飽和または不飽和で非芳香族の単環式または多環式の炭素環系を意味し、これらは、アリール基または複素環式基に縮合できる。例には、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロブチル、シクロプロピル、インダニル、テトラヒドロナフチルなどを挙げることができる。「カルボシクリルアルキル」との用語は、炭素環式基で置換されたアルキルを意味する。
【００４９】
アリール基（ヘテロアリールを含めて）またはアラルキル基（ヘテロアラルキルを含めて）（例えば、ベンジルまたはフェネチル）は、１個以上の置換基を含有できる。アリール基またはアラルキル基の適当な置換基の例には、ハロゲン、ＣＦ３、−Ｒ５、−ＯＲ５、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＳＲ５、保護したＯＨ（例えば、アシルオキシ）、およびＷｕｔｓ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９）で記述されたもの、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＨ２、−ＮＨＲ５、−Ｎ（Ｒ５）２、−ＮＨＣＯＲ５、−ＮＨＣＯＮＨＲ５、−ＮＨＣＯＮ（Ｒ５）２、−ＮＲ５ＣＯＲ５、−ＮＨＣＯ２Ｒ５、−ＣＯ２Ｒ５、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯＲ５、−ＣＯＮＨＲ５、−ＣＯＮ（Ｒ５）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ５、−ＳＯＮＨ２、−Ｓ（Ｏ）Ｒ５、−ＳＯ２ＮＨＲ５または−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ５が挙げられ、ここで、Ｒ５は、脂肪族基または置換脂肪族基（これは、好ましくは、１〜３個の炭素原子を有する）、またはアリール基または置換アリール基であるが、但し、Ｒ５が置換アリール基のとき、該アリールは、置換アリールで置換できる。
【００５０】
脂肪族基または非芳香族複素環は、１個以上の置換基を含有できる。脂肪族基または非芳香族複素環の適切な置換基の例には、アリール基またはアラルキル基について上で列挙したもの、ならびに以下が挙げられる：＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＨＲ６、＝ＮＮ（Ｒ６）２、＝Ｎ−ＯＲ６、＝ＮＮＨＣＯＲ６、＝ＮＮＨＣＯ２Ｒ６、＝ＮＮＨＳＯ２Ｒ６および＝ＮＲ６であって、ここで、Ｒ６は、脂肪族基または置換脂肪族基である。
【００５１】
芳香族または非芳香族の複素環上の置換可能な窒素は、必要に応じて、置換できる。この窒素上の適切な置換基には、Ｒ６、ＣＯＲ６、Ｓ（Ｏ）２Ｒ６およびＣＯ２Ｒ６が挙げられる。
【００５２】
「電気陰性脱離基」との用語は、当業者に公知の定義を有する（Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９２）。電気陰性脱離基の例には、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩ）、アリールスルホニルオキシ基およびアルキルスルホニルオキシ基、トリフルオロメタンスルホニルオキシ、ＯＲ７、ＳＲ７、−ＯＣ＝Ｏ（Ｒ７）、−ＯＰＯ（Ｒ８）（Ｒ９）が挙げられ、ここで、Ｒ７は、脂肪族基、アリール基、アラルキル基、炭素環式基、カルボシクロアルキル基、複素環式基またはヘテロシクリルアルキル基であり、そしてＲ８およびＲ９は、独立して、Ｒ７またはＯＲ７である。
【００５３】
「アミノ酸Ｎ−末端保護基」との用語は、当業者に公知の定義を有する。アミノ酸Ｎ−末端保護基の例には、Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９９で記述されてものが挙げられる。
【００５４】
カルボン酸およびエステルのアイソスターまたはバイオアイソスターは、親カルボン酸またはエステルと類似の生体特性を備えた新規化合物を作製するために、原子または原子群の交換から得られる。このバイオアイソスター置換は、物理化学的または位相幾何学的に基づき得る。カルボン酸に対するアイソスター置換の一例には、ＣＯＮＨＳＯ２Ｊがあり、ここで、Ｊは、アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）である。
【００５５】
本発明の化合物（ここで、Ｒ２は、ＣＯ２ＨまたはＣＨ２ＣＯ２Ｈであり、それぞれ、γ−ケト酸またはδ−ケト酸である）は、開放形態（ａ）または環化ヘミケタール形態（ｂ）のいずれかとして、溶液中で存在できる（γ−ケタールについて、ｙ＝１であり、δ−ケタールについて、ｙ＝２である）。いずれかの異性体形態の本明細書中での描写は、他のものを含むことを意味する。
【００５６】
【化１３】
0004676676.tif 000013
同様に、本発明の特定の化合物は、互変異性形態または水和形態で存在でき、このような形態の全てが本発明の範囲内であることは、当業者に明らかである。他に述べられていなければ、本明細書中で描写した構造はまた、これらの構造の全ての立体化学形態（すなわち、各不斉中心に対するＲ形態およびＳ形態）を含むことを意味する。従って、本発明の化合物の単一立体化学異性体、ならびに鏡像異性体およびジアステレオマーの混合物は、本発明の範囲内である。他に述べない限り、本明細書中に記載される構造はまた、１つ以上の同位体的に濃縮された原子の存在のみ異なる化合物を含むことを意味する。例えば、水素を重水素または三重水素で置換したこと以外または炭素を１３Ｃまたは１４Ｃに富んだ炭素で置換したこと以外は本発明の構造を有する化合物は、本願の範囲内である。
【００５７】
好ましいＲ１基は、ＣＨ２Ｙであり、ここで、Ｙは、電気陰性脱離基、ＯＲ、ＳＲまたは−ＯＣ（＝Ｏ）（Ｒ）であり、最も好ましくは、Ｙは、Ｆである。
【００５８】
好ましくは、Ｒ２は、ＣＯ２Ｈ、エステル、アミドまたはそれらのアイソスターである。
【００５９】
Ｘ１は、好ましくは、ＣＨ２である；Ｘ２は、好ましくは、ＣＨ２である；またはＸ１およびＸ２は、結合して、環Ｑに縮合された必要に応じて置換されたフェニル環の一部をなす。より好ましくは、Ｘ１およびＸ２は、ともにＣＨ２である。
【００６０】
Ａは、好ましくは、ＣＯである。
【００６１】
Ｚは、好ましくは、必要に応じて置換したアリールであり、該アリールは、環炭素にあるＡに結合されている。
【００６２】
本発明の化合物の代表的な例は、以下の表１で示す。
【００６３】
（表１．代表的な化合物）
【００６４】
【表２】
0004676676.tif 000014
0004676676.tif 000015
0004676676.tif 000016
0004676676.tif 000017
本発明の化合物は、一般に、以下の一般スキームＩおよびＩＩで図示しているように、類似の化合物について当業者に公知の方法により、また、それに続く調製実施例により、調製できる。
【００６５】
（スキームＩ）
【００６６】
【化１４】
0004676676.tif 000018
試薬：（ａ）ＣｂｚＯＳｕｃ／ＴＨＦ／ＴＥＡ；（ｂ）ＬｉＯＨ／ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ；（ｃ）ＥＤＣ／ＤＭＡＰ／ＨＯＢｔ；（ｄ）Ｈ２／Ｃ担持１０％Ｐｄ／ＥｔＯＡｃ；（ｅ）ＴＢＴＵ／ＤＩＰＥＡ／ＤＭＦ；（ｆ）Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン；（ｇ）ＴｉＣｌ４／ＤＣＭ；および（ｋ）ＴＦＡ／ＤＣＭ。
【００６７】
スキームＩは、本発明の化合物を製造する一般的な方法を示す。出発物質であるエステル塩酸塩１は、まず、塩基（例えば、ＴＦＡ（トリエチルアミン、工程ａ））の存在下にて、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）中で、公知のアミノ酸Ｎ−保護プロトコル（例えば、Ｃｂｚ−ＯＳｕｃ（ベンジルオキシカルボニル−Ｏ−スクシンイミジル））を使用して、保護される。エステル２は、次いで、塩基を使用して、またはそのエステルがｔ−ブチル基であるとき、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を使用して、加水分解される。酸３は、次いで、例えば、ＥＤＣ（１−（３−ジメチル−アミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩）、ＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノピリジン）およびＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）を使用して、アミノアルコール４とカップリングされて、５が得られる。Ｒ１およびＲ２の性質に依存して、４の代わりにアミノケトンが使用できるが、これにより、次の酸化工程が回避される。Ｒ１がＣＨ２Ｆであるフルオロメチルケトンの場合、アミノアルコール４は、Ｒｅｖｅｓｚら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９４，３５，９６９３の方法に従って、得ることができる。カーバメート５は、次いで、触媒水素化（例えば、ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）中にて、Ｃ担持Ｐｄと共にＨ２）または酸分解を使用して、脱保護される。アミン６は、次いで、ＤＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）の存在下にて、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）中で、例えば、工程ｅで図示した標準方法を使用して、所望のアシル化剤またはスルホン化剤、ＴＢＴＵ（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート）でＮ−置換される。化合物７の水酸基は、次いで、例えば、工程ｆで図示した標準方法により、酸化される。最後に、化合物８は、ＤＣＭ（ジクロロメタン）中のＴｉＣｌ４またはＤＣＭ中のＴＦＡを使用して、Ｒ２の性質に従って、適切に処理されて、Ｉを発生させる。例えば、もし、Ｉには、Ｒ２がカルボン酸である必要があるなら、４中のＲ２は、好ましくは、エステルであり、このスキームの最終工程は、加水分解である。
【００６８】
（スキームＩＩ）
【００６９】
【化１５】
0004676676.tif 000019
試薬：（ｈ）
【００７０】
【化１６】
0004676676.tif 000020
；（ｌ）
【００７１】
【化１７】
0004676676.tif 000021
；（ｉ）ＬｉＯＨ／ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ；（ｍ）ＫＯＨ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ；（ｊ）ＥＤＣ／ＤＭＡＰ／ＨＯＢｔ；（ｆ）Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペリヨージナン；（ｇ）ＴｉＣｌ４／ＤＣＭ；および（ｋ）ＴＦＡ／ＤＣＭ。
【００７２】
スキームＩＩは、本発明の化合物を製造する代替方法を表わす。出発物質であるエステル塩酸塩１は、まず、公知のアミド結合形成反応を使用して、カルボン酸または酸塩化物のいずれかと反応される。アミド９は、次いで、塩基を使用して加水分解される。酸１０は、次いで、アミノアルコール４とカップリングされて、１１が得られる。Ｒ１およびＲ２の性質に依存して、４の代わりにアミノケトンが使用できるが、これにより、次の酸化工程が回避される。Ｒ１がＣＨ２Ｆであるフルオロメチルケトンの場合、アミノアルコール４は、Ｒｅｖｅｓｚら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９４，３５，９６９３の方法に従って、得ることができる。化合物１１の水酸基は、次いで、例えば、工程ｆで図示した標準方法により、酸化される。最後に、化合物１２は、Ｒ２の性質に従って、適切に処理されて、Ｉを発生させる。例えば、もし、Ｉには、Ｒ２がカルボン酸である必要があるなら、４中のＲ２は、好ましくは、エステルであり、このスキームの最終工程は、加水分解である。
【００７３】
本発明のある種の化合物は、以下のようにして得ることができる。スキームＩで使用される親化合物である複素環エステル１またはそれらの酸または誘導体は、市販されているか、または標準方法を使用して調製できるか、いずれかである。例えば、親化合物である複素環エステル１（ここで、Ｘ１〜２は、それぞれ、ＣＨ２である）は、市販されている（Ｈ−ホモプロリン−ＯＭｅ）。親化合物である複素環エステル１（ここで、Ｘ１は、ＣＨ２である；そしてＸ２は、酸素である）は、標準方法（Ｗｏｌｆｅら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９７９，３９１３）により、調製できる。親化合物である複素環エステル１（ここで、Ｘ１は、ＣＨ２であり、そしてＸ２は、イオウである）は、標準方法（Ｍｉｙａｚａｋｉら、Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．，１９９３，６６，５３６）により、調製できる。親化合物である複素環エステル１（ここで、Ｘ２は、ＣＨ２である；そしてＸ１は、酸素である）は、標準方法（Ｋｏｇａｍｉら、Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．，１９８７，６０，２９６３；Ａｓｈｅｒら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９８１，１４１；およびＢｒｏｗｎら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．Ｉ，１９８５，２５７７）により、調製できる。このＦｍｏｃ  Ｎ−保護アミノ酸はまた、市販されている。親化合物である複素環エステル１（ここで、Ｘ２は、ＣＨ２である；そしてＸ１は、イオウである）は、標準方法（Ｋｏｇａｍｉら、Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．，１９８７，６０，２９６３；およびＳａｋａｉら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１９８１，２９，１５５４）により、調製できる。対応している遊離アミノ酸もまた、市販されている。親化合物である複素環エステル１（ここで、Ｘ１〜２は、ＣＨ２であり、そして種々の置換基を有する）は、標準方法（Ｓｈｕｍａｎら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９０，５５，７３８；Ａｇａｍｉら、Ｓｙｎｌｅｔｔ，１９９７，７９９；およびＮａｚｉｈら、Ｓｙｎｌｅｔｔ，１９９８，１３３７）により、調製できる。
【００７４】
本発明の化合物は、特に、カスパーゼ活性を阻害するように、および／またはＴＮＦ−αのレベルまたは活性を低下させるように、設計されている。これらの化合物は、例えば、アポトーシスを阻止し、ＩＬ−１βの放出を阻止し、カスパーゼ活性を阻害し、および／またはＴＮＦ−αのレベルまたは活性を低下させるために、アッセイできる。これらの活性の各々のアッセイは、当該技術分野で公知であり、実施例において、以下で詳細に記述する。従って、これらの化合物は、カスパーゼ（例えば、ＩＬ−１）、アポトーシス、ＩＧＩＦ、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αが媒介する疾患における事象、および炎症疾患、自己免疫疾患、破壊性骨障害、増殖性障害、感染性疾患および変性疾患における関連タンパク質の最終活性を標的にして阻害できる。
【００７５】
本発明の化合物はまた、ＩＣＥを阻害することにより、プロ−ＩＧＩＦが活性で成熟したＩＧＩＦに変換するのを阻止する。「インターフェロンガンマ誘発因子」または「ＩＧＩＦ」との用語は、ＩＦＮ−γの内生を刺激できる因子を意味する。
【００７６】
ＩＣＥは、成熟ＩＧＩＦ（ＩＬ−１８）の産生に必須であるので、ＩＣＥを阻害すると、成熟ＩＧＩＦの産生を阻害することにより、ＩＧＩＦが媒介する生理学的効果および症状の開始が効果的に阻止される。ＩＧＩＦは、次には、ＩＦＮ−γの産生に必須である。ＩＣＥは、従って、成熟ＩＧＩＦの産生を阻害してＩＦＮ−γの産生を阻害することにより、ＩＦＮ−γが媒介する生理学的な効果および症状の開始を効果的に阻止する。
【００７７】
本発明の化合物はまた、活性化細胞からのＴＮＦ−αの放出を阻止する。
【００７８】
本発明の薬学的組成物および方法は、従って、インビボでのカスパーゼおよびＴＮＦ−αの活性を制御するのに有用である。本発明の組成物および方法は、それゆえ、インビボでのカスパーゼ、ＩＬ−１、ＩＧＩＦ、ＩＦＮ−γまたはＴＮＦ−αのレベルを制御するのに有用であり、また、カスパーゼ、ＩＬ−１、アポトーシス、ＩＧＩＦ、ＩＦＮ−γ、またはＴＮＦ−αが媒介する疾患（疾患、障害または影響を含めて）の進行、重症度または影響を治療または軽減するのに有用である。
【００７９】
他の実施形態によれば、本発明は、上記のような本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体、および薬学的に受容可能なキャリアを含有する組成物を提供する。
【００８０】
他の実施形態によれば、本発明の組成物は、さらに、他の治療剤を含有できる。このような治療剤には、血栓溶解薬（例えば、組織プラスミノーゲン活性化剤およびストレプトキナーゼ）、抗炎症剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、サイトカインアンタゴニスト、免疫抑制剤、抗癌剤、抗ウイルス剤、サイトカイン、成長因子、免疫調整剤（例えば、ブロピリミン、抗ヒトアルファインターフェロン抗体、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、メチオニンエンケファリン、インターフェロンアルファ、ジエチルジチオカーバメート、腫瘍壊死因子、ナルトレキソンおよびｒＥＰＯ）、プロスタグランジンまたは抗血管過剰増殖化合物が挙げられるが、それらに限定されない。
【００８１】
「薬学的に受容可能なキャリア」との用語は、本発明の化合物と共に患者に投与できる非毒性のキャリアであって、その薬理学的な活性を損なわないものを意味する。
【００８２】
これらの組成物で使用できる薬学的に受容可能なキャリアには、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク（例えば、ヒト血清アルブミン）、緩衝液基質（例えば、リン酸塩）、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質（例えば、硫酸プロタミン）、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの基質、ポリエチレングリコール、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８３】
「薬学的に受容可能な誘導体」とは、本発明の化合物の任意の薬学的に受容可能な塩、エステル、エステルの塩または他の誘導体であって、レシピエントに投与した際、本発明の化合物またはそれらの阻害活性代謝物もしくは残留物を、直接的または間接的のいずれかで提供できるものを意味する。本発明の化合物の塩またはエステルを調製する方法は、当業者に公知である。
【００８４】
本発明の化合物の薬学的に受容可能な誘導体には、エステル、アミノ酸エステル、リン酸エステル、金属塩およびスルホン酸エステルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８５】
活性成分として式Ｉの化合物だけを含有する薬学的組成物では、これらの組成物を投与する方法はさらに、被験体にさらなる治療剤を投与する工程を包含し得る。このような治療剤には、血栓溶解薬（例えば、組織プラスミノーゲン活性化剤およびストレプトキナーゼ）、抗炎症剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、サイトカインアンタゴニスト、免疫抑制剤、抗癌剤、抗ウイルス剤、サイトカイン、成長因子、免疫調整剤（例えば、ブロピリミン、抗ヒトアルファインターフェロン抗体、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦ、メチオニンエンケファリン、インターフェロンアルファ、ジエチルジチオカーバメート、腫瘍壊死因子、ナルトレキソンおよびｒＥＰＯ）、プロスタグランジン、または抗血管過剰増殖化合物が挙げられるが、それらに限定されない。第二の治療剤が使用される場合、第二の治療剤は、別の投薬形態としてか、または本発明の化合物もしくは組成物との単一の投薬形態の一部としてのいずれかで、投与され得る。
【００８６】
上記組成物中に存在する化合物の量は、実施例で記述したアッセイのいずれかにより測定される場合、疾患の重症度、カスパーゼ活性および／または細胞アポトーシス、あるいはＴＮＦ−α活性および／または細胞アポトーシスにおいて、検出可能な減少を引き起こすのに十分であるべきである。
【００８７】
本発明の化合物は、インビボでのＩＧＩＦレベルおよびＩＮＦ−γレベルを制御するため、およびカスパーゼ、ＩＬ−１、アポトーシス、ＩＧＩＦ、ＩＦＮ−γ、およびＴＮＦ−αにより媒介される疾患を治療するかまたはその影響の進行および重症度を軽減するための従来の様式で使用され得る。このような治療方法、それらの投薬レベルおよび必要条件は、利用可能な方法および技術から、当業者により選択され得る。
【００８８】
これらの組成物において、本発明の化合物の薬学的に受容可能な塩が使用される場合、それらの塩は、好ましくは、無機または有機の酸または塩基からから誘導される。このような酸塩には、以下が含まれる：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、亜硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩（ｈｅｍｉｓｕｌｆａｔｅ）、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシラート、およびウンデカン酸塩。塩基塩には、アンモニウム塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩およびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩およびマグネシウム塩）、有機塩基との塩（例えば、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン）、およびアミノ酸との塩（例えば、アルギニン、リシンなど）が挙げられる。
【００８９】
また、塩基性窒素含有基は、ハロゲン化低級アルキル（例えば、塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピルおよびブチル）；硫酸ジアルキル（例えば、硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチルおよびジアミル）、長鎖ハロゲン化物（例えば、塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリル）、ハロゲン化アラルキル（例えば、臭化ベンジルおよびフェネチル）などのような試薬で四級化され得る。それにより、水溶性または油溶性または水分散性または油分散性の生成物が得られる。
【００９０】
本発明の組成物および方法で使用される化合物はまた、選択的な生物学的特性を高めるために、適切な官能基を付加することにより改変され得る。このような改変は、当該技術分野で公知であり、これには、所定の生体系（例えば、血液、リンパ系、中枢神経系）への生物学的浸透性を高める改変、経口適用性を高める改変、注射による投与を可能にするために溶解性を高める改変、代謝を変える改変、および排出速度を変える改変が挙げられる。
【００９１】
好ましい実施形態によれば、本発明の組成物は、哺乳動物（好ましくは、ヒト）への薬学的投与のために処方される。
【００９２】
本発明のこのような薬学的組成物は、経口的に、非経口的に、吸入噴霧により、局所的に、直腸内に、鼻内に、頬内に、膣内に、または移植したレザバを介して、投与され得る。本明細書中で使用する「非経口的」との用語は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、鞘内、肝臓内、病巣内および頭蓋内の注射および注入方法を含む。好ましくは、これらの組成物は、経口的または静脈内で投与される。
【００９３】
本発明の組成物の無菌注射可能形態は、水性懸濁液または油性懸濁液であり得る。これらの懸濁液は、適当な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて、当該技術分野で公知の方法に従って処方され得る。この無菌注射可能調製物はまた、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液として、非毒性の非経口的に受容可能な希釈剤または溶媒中の無菌注射可能溶液または懸濁液であり得る。使用され得る受容可能な賦形剤および溶媒には、水、リンガー溶液および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の非揮発性油が、溶媒または懸濁媒体として、従来から使用されている。この目的のために、任意の穏やかな非揮発性油が使用でき、これには、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドが含まれる。脂肪酸（例えば、オレイン酸）およびそのグリセリド誘導体は、天然の薬学的に受容可能な油（例えば、オリーブ油またはひまし油、特に、それらのポリオキシエチレン化した形態）と同様に、注射可能物の調製に有用である。これらの油溶液または懸濁液はまた、長鎖アルコール希釈剤もしくは分散剤（例えば、カルボキシメチルセルロース）または類似の分散剤（これらは、一般的に、乳濁液または懸濁液を含む薬学的に受容可能な投薬形態を処方する際に、使用される）を含有し得る。他の一般的に使用される界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎｓ、Ｓｐａｎｓおよび他の乳化剤）または生体利用能向上剤（これらは、薬学的に受容可能な固体、液体または他の投薬形態を製造する際に、一般的に使用される）もまた、処方の目的のために、使用され得る。
【００９４】
固形キャリアが使用される場合、調製物は、錠剤化され得、粉末形態もしくはペレット形態で硬質ゼラチンカプセル中に加えられるか、またはトローチまたは薬用ドロップの形状であり得る。固体キャリアの量は、例えば、約２５ｍｇから４００ｍｇまでで、変化する。液体キャリアが使用される場合、調製物は、例えば、シロップ、乳濁液、軟質ゼラチンカプセル、無菌注射可能液（例えば、アンプルまたは非水性液状懸濁液）の形態であり得る。この組成物がカプセルの形態である場合、例えば、硬質ゼラチンカプセル殻にて上記キャリアを使用する任意の慣用的なカプセル化が適当である。
【００９５】
シロップ処方は、香料または着色剤を含む、この化合物の液体キャリア（例えば、エタノール、グリセリン、または水）懸濁液または溶液からなり得る。エアロゾル調製物は、この化合物の液体キャリア（例えば、水、エタノール、またはグリセリン）溶液または懸濁液からなるのに対して、粉末乾燥エアロゾルでは、調製物は、例えば、湿潤剤を含有し得る。
【００９６】
本発明の処方は、その１種以上の受容可能なキャリアおよび必要に応じて、任意の他の治療成分と共に、活性成分を含有する。このキャリアは、その処方の他の成分と相溶性でありレシピエントに有害ではないという意味で、「受容可能」であるべきである。
【００９７】
本発明の薬学的組成物は、任意の経口的に受容可能な投薬形態（これには、カプセル、錠剤、および水性懸濁液または水性溶液が含まれるが、それらに限定されない）で、経口投与され得る。経口用途のための錠剤の場合には、一般的に使用されるキャリアには、ラクトースおよびコーンスターチが挙げられる。代表的に、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）もまた、添加される。カプセル形態での経口投与に有用な希釈剤には、ラクトースおよび乾燥コーンスターチが挙げられる。経口用途のために水性懸濁液が必要な場合、活性成分は、乳化剤および懸濁剤と組み合わされる。所望の場合、特定の甘味料、香料または着色剤がまた添加され得る。
【００９８】
あるいは、本発明の薬学的組成物は、直腸投与のための座剤の形態で投与され得る。これらは、この試薬と、適当な非刺激性の賦形剤（これは、室温で固体であるが、直腸温では液体であり、従って、直腸で融解し活性成分を放出する）と混合することにより、調製され得る。このような物質には、ココアバター、密ろうおよびポリエチレングリコールが挙げられる。
【００９９】
本発明の薬学的組成物はまた、特に、治療の標的が局所的な適用により容易にアクセスできる領域または器官（目、皮膚または下部腸管の疾患を含む）を含む場合、局所的に投与され得る。これらの領域または器官のそれぞれに適切な局所処方物は、容易に調製される。
【０１００】
下部腸管に対する局所適用は、直腸座剤処方（上記）により、または適当な浣腸処方にて、行なわれ得る。局所的な経皮パッチもまた、使用され得る。
【０１０１】
局所的な適用のために、この薬学的組成物は、１種以上のキャリアに懸濁するかまたは溶解した活性成分を含む適当な軟膏で処方され得る。本発明の化合物の局所投与用のキャリアには、鉱油、液状石油、ホワイト石油、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックスおよび水が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、この薬学的組成物は、１種以上の薬学的に受容可能キャリアに懸濁するかまたは溶解した活性成分を含む適切なローションまたはクリームで処方され得る。適当なキャリアには、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０２】
眼科用途には、この薬学的組成物は、防腐剤（例えば、ベンジルアルコニウムクロライド）と共にまたはそれなしで、ｐＨを調整した等張性無菌生理食塩水の微細化懸濁液として、または、好ましくは、ｐＨを調整した等張性無菌生理食塩水の溶液として、処方され得る。あるいは、眼科用途のために、この薬学的組成物は、軟膏（例えば、ペトロラタム）で処方され得る。
【０１０３】
本発明の薬学的組成物はまた、鼻エアロゾルまたは鼻吸入により投与され得る。このような組成物は、製薬処方の当該技術分野で周知の技術に従って調製され、生理食塩水中の溶液として、当該分野で公知のベンジルアルコールまたは他の適当な防腐剤、生物学的利用能を高めるための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／または他の通常の可溶化剤または分散剤を使用して調製され得る。
【０１０４】
この薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤の形態および特性は、それと混ぜ合わせる活性成分の量、投与経路および他の周知の可変基により支配されることが当業者に認識されている。
【０１０５】
上記化合物および組成物は特に、以下の疾患に関連した治療用途に有用である：ＩＬ−１媒介疾患、アポトーシス媒介疾患、炎症疾患、自己免疫性疾患、破壊性骨障害、増殖性障害、感染性疾患、変性疾患、皮膚疾患、細胞死関連疾患、過剰食用アルコール摂取疾患、ウイルス媒介疾患、網膜障害、ブドウ膜炎、炎症性腹膜炎、骨関節炎、膵炎、喘息、成人呼吸窮迫症候群、糸球体腎炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、硬皮症、慢性甲状腺炎、グレーヴス病、自己免疫性胃炎、糖尿病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性好中球減少症、血小板減少症、慢性活性肝炎、重症筋無力症、炎症性腸疾患、クローン病、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、瘢痕、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、火傷後臓器アポトーシス、骨粗鬆症、白血病および関連障害、脊髄形成異常症候群、多発性骨髄腫関連骨疾患、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、転移性骨髄腫、カポジ肉腫、多発性骨髄腫、出血症性ショック、敗血症、敗血症性ショック、火傷、外傷、全身性炎症応答症候群、多臓器不全症候群、志賀赤痢、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏症、ケネディ病、プリオン病、脳虚血、癲癇、心筋虚血、急性および慢性心臓病、心筋梗塞、うっ血性心不全、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈バイパス移植、脊髄筋萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、ＨＩＶ関連脳炎、老化、脱毛症、脳卒中による神経障害、潰瘍性大腸炎、外傷性脳傷害、脊髄傷害、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｇ型肝炎、黄熱病、デング熱、日本脳炎、種々の形態の肝臓病、腎臓病、腎多嚢胞病、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ菌関連胃潰瘍および十二指腸潰瘍、ＨＩＶ感染、結核および髄膜炎。
【０１０６】
上記化合物および組成物はまた、ＴＮＦ媒介疾患に関連した治療用途において、有用である。用語「ＴＮＦ−α媒介疾患」とは、ＴＮＦ−αそれ自体の過剰産生または放出により、またはＴＮＦ−αがその疾患を誘発または増悪する事象（例えば、他の病態生理学的な生化学剤またはサイトカインの産生または放出）を引き起こすことにより、いずれかにより、ＴＮＦ−αが一定の役割を果たす全ての疾患状態を意味する。好ましい１実施形態では、ＴＮＦ−αは、直接的な役割を果たす。
【０１０７】
このようなＴＮＦ−α媒介疾患には、例えば、再狭窄、炎症疾患（例えば、中枢神経系の炎症疾患）、神経系の脱髄疾患、多発性硬化症、敗血症性関節炎、動脈瘤性大動脈疾患、外傷性関節傷害、歯周病、黄斑変性症、糖尿病性網膜炎、眼球炎症、円錐角膜、シェーグレン症候群、角膜移植片拒絶、悪液質および拒食症を挙げることができる。
【０１０８】
過剰なＴＮＦ−α組織レベルは、以下を含めた多数の疾患を媒介または悪化させることに関係している：関節リウマチ、リウマチ様脊椎炎、骨関節炎、痛風性関節炎および他の関節病；また、一般敗血症、グラム陰性敗血症、敗血症性ショック、内毒素ショック、毒素ショック症候群、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、脳性マラリア、慢性肺炎症疾患、ケイ肺症、アスベスト肺、肺サルコイドーシス、骨再吸収疾患、対宿主性移植片反応、異系移植片拒絶；また、細菌またはウイルス感染（例えば、インフルエンザ）が原因の発熱および筋肉痛；後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の次の悪液質、ケロイド形成、瘢痕組織形成、クローン病、潰瘍性大腸炎またはピレシス（ｐｙｒｅｓｉｓ）；多数の「自己免疫疾患」（例えば、多発性硬化症、自己免疫糖尿病および全身性エリテマトーデス）。
【０１０９】
ＴＮＦ−α阻害剤は、以下を含めた種々のアレルギー性、外傷性および他の傷害性疾患を治療する際に有用である：喘息、慢性気管支炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、好酸球性肉芽腫、潰瘍性大腸炎、クローン病、心筋および脳の再灌流傷害、慢性糸球体腎炎および成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）。
【０１１０】
本発明の化合物は、ＴＮＦ−αの放出を阻止でき、それゆえ、傷害部位または手術部位でのＴＮＦ−αのいくつかの病態生理学的な効果を抑制または阻止するのに有用であり得、従って、また、細胞からの他の病態生理学的な生化学産物（例えば、ヒスタミン、プロスタグランジン、ブラジキニンおよびペルオキシダーゼ）の放出を阻止できる。
【０１１１】
上述のように、ＴＮＦ−α阻害剤は、細胞、組織または臓器の傷害または手術に続く障害を治療する際に、非常に有効であり得、また、これらの薬剤に共通した副作用なしに、コルチコステロイドまたは免疫抑制薬と同程度に有効であり得るか、それらよりも強力であり得る。
【０１１２】
本発明はまた、ヒトを含めた哺乳動物において、（１）細胞からのＴＮＦ−αの放出を阻止し、そして（２）過剰な組織レベルのＴＮＦ−αの有害、毒性または致死的な影響を妨げる治療方法に関する。この方法は、哺乳動物に、効果的なＴＮＦ−α阻害有効量の１種以上の上記化合物を投与する工程を包含する。この方法はまた、ＴＮＦ−α媒介疾患またはそれに従って悪化する、特定の疾患の予防的治療または予防に使用できる。本発明は、治療が必要なヒトを含めた哺乳動物に有効量のこのような化合物を投与することにより、アレルギー性、外傷性、放射性、化学的、微生物的および他の傷害性の障害を治療する方法を提供する。
【０１１３】
これらの化合物は、ＴＮＦ−αの放出を阻害または阻止するか、ＴＮＦ−αのレベルおよび活性だけでなくこれらの各状況における過剰なレベルのＴＮＦ−αの病態生理学的な作用を低下させることにより、直接的に、組織または臓器の損傷の阻止または回復を促進し、また、正常な機能の修復を促進する。それと共に、これらの作用は、組織の外傷、または感染、アレルギー、免疫現象、火傷、放射線暴露、新生物病、毒性化学物質により引き起こされる他の傷害性の障害であって、心血管障害、神経傷害、腎障害、肝障害、膵臓障害だけでなく、腹水症、局所浮腫、皮膚障害および皮膚疱疹として顕れる障害を治療する際に、それらの新規な用途を関連づける。
【０１１４】
用語「ＴＮＦ−αの放出を阻止する」とは、以下を意味する：ａ）哺乳動物（例えば、ヒト）におけるインビボＴＮＦ−αレベルの低下；またはｂ）インビトロまたはインビボでのＴＮＦ−αレベルの下方制御；またはｃ）ＴＮＦ−αの直接合成または移植後事象の阻止による、ＴＮＦ−αの活性の下方制御。
【０１１５】
これらの化合物は、単球、マクロファージ、神経細胞、内皮細胞、上皮細胞、間葉細胞（例えば、線維芽細胞、骨格筋細胞、平滑筋細胞、心筋細胞）および多くの他の種類の細胞によるＴＮＦ−αの放出を阻止する際に、有用であり得る。
【０１１６】
用語「状態」または「病態」とは、被験体において有害な生物学的結果を生じる任意の疾患、障害または効果を意味する。
【０１１７】
患者または細胞培養物（すなわち、細胞および／または細胞培地中）の血液または細胞中でのＴＮＦ−αタンパク質のレベルは、ＴＮＦ−αへの、または活性ＴＮＦ−αの存在の結果として産生することが知られているタンパク質への免疫特異的な結合をアッセイすることにより、決定できる。このようなアッセイは、当該技術分野で公知である。例えば、使用できるイムノアッセイには、以下のような技術を使用する競合および非競合アッセイシステムが挙げられるが、これらに限定されない：ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、蛍光イムノアッセイ、ＦＡＣＳ分析およびプロテインＡイムノアッセイ。このようなアッセイは、当該技術分野で周知である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら著、１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋを参照；その内容は、本明細書中で参考として援用されている）。
【０１１８】
競合結合アッセイはまた、ＴＮＦ−αのレベルを決定するのに使用できる。競合結合アッセイの一例には、未標識ＴＮＦ−αの量を増加させつつ、ＴＮＦ−αを発現する細胞由来の標識タンパク質（例えば、３Ｈまたは１２５Ｉ）をＴＮＦ−α抗体と共にインキュベートする工程および標識ＴＮＦ−αに結合したＴＮＦ−α抗体を検出する工程を包含するラジオイムノアッセイがある。
【０１１９】
ＴＮＦ−αのレベルはまた、当該技術分野で公知の活性アッセイにより、アッセイできる。例えば、処理した細胞培養物のサンプルまたは患者の血液由来のサンプルは、当該技術分野で公知のＴＮＦ−α活性アッセイで使用できる（例えば、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９５，１７８，７１〜７６；Ｂｕｒｎｓ，１９９４，２０（１），４０〜４４）。
【０１２０】
単独療法では、１日あたり約０．０１ｍｇ／体重１ｋｇと約１００ｍｇ／体重１ｋｇの間、好ましくは、１日あたり約０．５ｍｇ／体重１ｋｇと約７５ｍｇ／体重１ｋｇの間、最も好ましくは、１日あたり約１ｍｇ／体重１ｋｇと約５０ｍｇ／体重１ｋｇの間の投薬レベルの活性成分化合物が有用である。
【０１２１】
典型的には、本発明の薬学的組成物は、１日あたり、約１〜５回、あるいは、連続注入として、投与される。このような投与は、長期療法または短期療法として、使用できる。単一投薬形態を生じるためにキャリア物質と混ぜ合わされ得る活性成分の量は、治療するホストおよび特定の投与様式に依存して、変わる。典型的な調製物は、約５重量％〜約９５重量％の活性化合物を含有する。好ましくは、このような調製物は、約２０重量％〜約８０重量％の活性化合物を含有する。
【０１２２】
本発明の組成物が式Ｉの化合物および１種以上の追加治療剤の組合せを含有するとき、この化合物および追加治療剤の両方は、単独療法レジメン（ｒｅｊｉｍｅ）で通常投与される投薬量の約１０％〜８０％の間の投薬量レベルで、存在するべきである。
【０１２３】
患者の状態の改善の際に、必要であれば、本発明の化合物、組成物、またはその組合せの維持用量が投与され得る。続いて、投与の投薬量もしくは頻度、またはその両方は、症候が所望のレベルに軽減され、処置を止めるべき場合に、改善された状態が保持されるレベルまで、症候の関数として低減され得る。しかし、患者は、いずれの再発または疾患症候の長期基礎に対する断続的処置を必要とし得る。
【０１２４】
あらゆる特定の患者のための特定の投薬量および処置レジメンは、種々の因子（使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食事制限、投与時間、排泄率、薬物の組合せ、および処置する医師の判断、ならびに処置されるべき特定の疾患の重篤度を含む）に依存することもまた理解されるべきである。活性成分の量もまた、その組成物中の特定の化合物および他の治療剤（もし存在するなら）に依存する。
【０１２５】
本発明の１つの実施形態は、被験体におけるＩＬ−１媒介疾患またはアポトーシス媒介疾患を治療または予防する方法を提供し、該方法は、該被験体に、本明細書中で記載された任意の化合物、薬学的組成物または組合せを投与する工程を包含する。
【０１２６】
本発明の別の実施形態は、被験体におけるカスパーゼ媒介機能を阻止する方法を提供し、該方法は、該被験体に、記載された任意の化合物、薬学的組成物または組合せを投与する工程を包含する。
【０１２７】
本発明の別の実施形態は、被験体におけるＩＧＩＦまたはＴＮＦ−γの産生を減らす方法を提供し、該方法は、該被験体に、記載された任意の化合物、薬学的組成物または組合せを投与する工程を包含する。
【０１２８】
本発明の別の実施形態は、被験体における冠状動脈バイパス移植に付随した合併症を治療する方法を提供し、該方法は、該被験体に、本明細書中で記載された任意の化合物、薬学的組成物または組合せを投与する工程を包含する。
【０１２９】
本発明の別の実施形態は、細胞を保存する方法を提供し、該方法は、本明細書中で記載された任意の化合物の溶液に、該細胞を浸す工程を包含する。カスパーゼ阻害剤を使用するこのような方法は、報告されている［Ｓｃｈｉｅｒｌｅら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，５，ｐ．９７（１９９９）；およびＮａｔｏｒｉら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，６８，ｐｐ．８９〜９６（１９９９）］。必要なカスパーゼ阻害剤の量は、所定細胞型に対するその阻害剤の有効性およびアポトーシス細胞死から細胞を保護するのに必要な時間に依存している。
【０１３０】
本発明の別の実施形態は、本明細書中で記載された任意の化合物、薬学的組成物または組合せを使用して、臓器移植または血液産物保存に必要な細胞を保存する方法を提供する。Ｌｉら、Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，４０，ｐｐ．１３２０〜１３２９（２０００）。
【０１３１】
本発明の別の実施形態は、被験体における種々の形態の癌を治療する方法を提供し、該方法は、該被験体に、免疫療法の１要素として、本明細書中で記載された任意の化合物、薬学的組成物または組合せを投与する工程を包含する。Ｄｒｏｉｎら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１６，ｐｐ．２８８５〜２８９４（１９９８）；Ｂｏｕｄａｒｄら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ，１４，ｐｐ．２０４５〜２０５１（２０００）；Ｆａｄｅｒｌら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５，ｐｐ．４０４１〜４０４７（１９９９）；Ｏｚｏｒｅｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０，ｐｐ．６２５９〜６２６５（２０００）；Ｓａｓａｋｉら、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｕｒｏｌｏｇｙ，８１，ｐｐ．８５２〜８５５（１９９８）；およびＨｅｄｌｕｎｄら、Ｐｒｏｓｔａｔｅ，３６，ｐｐ．９２〜１０１（１９９８）。
【０１３２】
好ましい実施形態では、本発明は、前記疾患の１つに罹った哺乳動物を治療する方法を提供し、該方法は、該哺乳動物に、上記薬学的に受容可能な組成物を投与する工程を包含する。この実施形態では、もし、患者がまた、別の治療剤またはカスパーゼ阻害剤を投与される場合、それは、単一投薬形態でまたは別々の投薬形態として、本発明の化合物と共に送達され得る。別々の投薬形態として投与するとき、他のカスパーゼ阻害剤または薬剤は、本発明の化合物を含有する薬学的に受容可能な組成物を投与する前、投与と同時、または投与に続いて、投与され得る。
【０１３３】
本発明に従うキットは、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な誘導体または薬学的組成物と、インビトロまたはインビボでＴＮＦ−αのレベルおよび／または活性を測定する器具とを含む。このキットは、さらに、その内容物の使用説明書を含む。本発明のＴＮＦ−αのレベルを測定する器具は、ＴＮＦ遺伝子産物（すなわち、ＲＮＡまたはタンパク質）または活性を測定するために使用され得る物質を意味する。このような方法は、例えば、上記されている。従って、本発明に従う器具は、例えば、抗−ＴＮＦ抗体、ＴＮＦ−αＤＮＡプローブまたは遺伝子工学によって合成した細胞系（これは、上記ＴＮＦ−αレベルに応答性である）を含み得る。
【０１３４】
本発明に従うＴＮＦ−αの活性および／またはレベルを低下させる化合物または組成物を同定する方法には、複数の化合物または組成物がＴＮＦ−αの活性および／またはレベルを低下させる性能について、これらの化合物または組成物をスクリーニングする方法が挙げられる。例えば、高い処理能力のスクリーニングは、本発明の望ましい実施形態である。本発明の１実施形態によれば、高い処理能力のスクリーニングは、培養物中の細胞をマイクロタイタープレート中の複数のウェルに入れることにより、各ウェルに異なる化合物または組成物を加えることにより、そして各細胞培養物中のＴＮＦ−αのレベルおよび／または活性を、コントロールウェルの細胞培養物中に存在しているＴＮＦ−αのレベルまたは活性と比較することにより、達成できる。本発明による比較工程に有用なコントロールとしては、化合物または組成物で処理していない細胞または被験体、およびＴＮＦ−αのレベルまたは活性に効果がないことが知られている化合物または組成物で処理した細胞または被験体が挙げられる。本発明の１実施形態によれば、この高い処理能力のスクリーニングは、その化合物または組成物の添加後、データ収集および分析まで、そのプレートに細胞を加えることを含む工程が機械で行われるように、自動化される。本発明の比較工程で有用な用具（例えば、標識した対象（例えば、放射標識した対象、蛍光対象または着色した対象）またはそれ自体検出可能な対象を検出できる用具）は、市販されているか、および／または当該技術分野で公知である。従って、ＴＮＦ−αのレベルおよび／または活性を低下させるのに有用な本発明の化合物および組成物は、迅速かつ効率的にスクリーニングできる。
【０１３５】
本発明をさらに充分に理解するために、以下の調製実施例および試験実施例を示す。これらの実施例は、例示の目的だけのものであり、いずれの様式でも、本発明の範囲を限定するものとして解釈すべきではない。
【実施例】
【０１３６】
（実施例１：［３Ｓ／Ｒ（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−（２−フェニル−トリアゾール−４−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸（化合物１））
【０１３７】
【化１８】
0004676676.tif 000022
（方法Ａ：（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニル）−２−ピペリジンカルボン酸メチルエステル）
【０１３８】
【化１９】
0004676676.tif 000023
（Ｓ）−ピペリジンカルボン酸メチルエステル塩酸塩（２．００ｇ、１１．１３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（４０ｍｌ）攪拌懸濁液を、室温で、トリエチルアミン（３．４１ｍｌ、２４．５０ｍｍｏｌ）で処理した。その反応混合物を、室温で、３０分間攪拌した後、Ｎ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド（３．０５ｇ、１２．２３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を２時間攪拌した後、酢酸エチル（２０ｍｌ）で希釈し、２Ｎ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして濃縮した。その残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の２０％酢酸エチル）で精製すると、無色オイル（２．００８５ｇ、６５％）として、副題化合物が得られた：
【０１３９】
【化２０】
0004676676.tif 000024
。
（方法Ｂ：（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニル）−２−ピペリジンカルボン酸）
【０１４０】
【化２１】
0004676676.tif 000025
（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニル）−２−ピペリジンカルボン酸メチルエステル（２．００ｇ、７．２１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）攪拌溶液を、室温で、水（１０ｍｌ）で処理した。水酸化リチウム（１９０ｍｇ、７．９３ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を、室温で、３時間攪拌した。追加量の水酸化リチウム（４０ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を２時間攪拌した後、その有機溶媒を除去した。得られた溶液をジエチルエーテルで洗浄し、残留している水層を２Ｎ  ＨＣｌで酸性にした後、酢酸エチルによる第二抽出工程を行った。次いで、その有機層を回収し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして濃縮すると、無色オイル（１．９９２７ｇ、１０５％）が現れ、これを放置すると、結晶化した：
【０１４１】
【化２２】
0004676676.tif 000026
。
（方法Ｃ：［３Ｓ／Ｒ，４Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−ヒドロキシ−３−［１−（ベンジルオキシカルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル）
【０１４２】
【化２３】
0004676676.tif 000027
（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニル）−２−ピペリジンカルボン酸（４．８２ｇ、１８．３１ｍｍｏｌ）、３−アミノ−５−フルオロ−４−ヒドロキシ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．９９ｇ、１９．２５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２．７２ｇ、２０．１３ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２．５７ｇ、２１．０４ｍｍｏｌ）および無水ＴＨＦ（６０ｍｌ）の攪拌混合物を、０℃まで冷却した後、ＥＤＣ（３．８６ｇ、２０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を、１６時間にわたって、室温まで暖めた後、減圧下にて、濃縮した。その残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の６０％酢酸エチル）で精製すると、白色発泡体（７．３７５４ｇ、７２％）として、副題化合物が得られた：
【０１４３】
【化２４】
0004676676.tif 000028
。
（方法Ｄ：［３Ｓ／Ｒ，４Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−ヒドロキシ−３−［２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル）
【０１４４】
【化２５】
0004676676.tif 000029
［３Ｓ／Ｒ，４Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−ヒドロキシ−３−［１−（ベンジルオキシカルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７．３７ｇ、１６．２９ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（１５０ｍｌ）攪拌溶液を、１０％Ｐｄ／Ｃ（８３０ｍｇ）で処理した。次いで、その反応混合物を完全に脱気し、そして水素バルーン下に置いた。得られた混合物を、室温で、３時間攪拌し、その後、セライトで濾過し、そして濃縮して、無色ゴム状物（５．１７ｇ、１００％）として、副題化合物を得た：
【０１４５】
【化２６】
0004676676.tif 000030
。
（方法Ｅ：［３Ｓ／Ｒ，４Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−ヒドロキシ−３−［１−（２−フェニル−チアゾール−４−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル）
【０１４６】
【化２７】
0004676676.tif 000031
［３Ｓ／Ｒ，４Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−ヒドロキシ−３−［２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５２０ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（９．７ｍｌ）攪拌溶液を、室温で、ＤＩＰＥＡ（３１１μｌ、１．８０ｍｍｏｌ）で処理した。得られた混合物を３０分間攪拌させた後、２−フェニル−チアゾール−４−カルボン酸（３３５ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）およびＴＢＴＵ（５２４ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）で処理した。この混合物を、室温で、１６時間攪拌し、次いで、酢酸エチルで希釈した。得られた溶液を２Ｎ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして濃縮すると、オイルが現れた。その残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の６０％酢酸エチル）で精製すると、無色オイル（４６３ｍｇ、５６％）として、副題化合物が得られた：
【０１４７】
【化２８】
0004676676.tif 000032
。
（方法Ｆ：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−（２−フェニル−チアゾール−４−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル）
【０１４８】
【化２９】
0004676676.tif 000033
［３Ｓ／Ｒ，４Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−ヒドロキシ−３−［１−（２−フェニル−チアゾール−４−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４６２ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２５ｍｌ）攪拌溶液を、０℃で、１，１，１−トリアセトキシ−１，１−ジヒドロ−１，２−ベンズヨードキソール−３（１Ｈ）−オン（４２６ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）で処理した。得られた混合物を、０℃で、２時間保ち、ＤＣＭで希釈し、そして飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３・５Ｈ２Ｏ水溶液、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして濃縮した。その残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の３３％酢酸エチル）で精製すると、白色固体（３７６ｍｇ、８２％）として、副題化合物が得られた：
【０１４９】
【化３０】
0004676676.tif 000034
0004676676.tif 000035
。
（方法Ｇ：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−（２−フェニル−チアゾール−４−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸）
【０１５０】
【化３１】
0004676676.tif 000036
［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−（２−フェニル−チアゾール−４−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３７０ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２０ｍｌ）攪拌溶液を、−１０℃で、１Ｍの四塩化チタンＤＣＭ溶液（３．６７ｍｌ、３．６７ｍｍｏｌ）で処理した。得られた混合物を０℃まで暖め、この温度で、１時間保った。次いで、得られた混合物をＤＣＭで希釈し、そして２Ｎ  ＨＣｌ、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして濃縮した。その残留物を逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水）で精製すると、白色発泡体（１０２ｍｇ、３１％）として、表題化合物が得られた：
【０１５１】
【化３２】
0004676676.tif 000037
。
【０１５２】
（実施例２：［３Ｓ／Ｒ（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−（イソキノリン−１−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸、トリフルオロ酢酸塩（化合物２））
【０１５３】
【化３３】
0004676676.tif 000038
（方法Ｈ：（Ｓ）−１−（イソキノリン−１−カルボニル）−２−ピペリジンカルボン酸メチルエステル）
【０１５４】
【化３４】
0004676676.tif 000039
（Ｓ）−１−ピペリジン−カルボン酸メチルエステル塩酸塩（１．００ｇ、５．５７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍｌ）攪拌溶液を、室温で、ＤＩＰＥＡ（２．１２ｍｌ、１２．２５ｍｍｏｌ）で処理した。得られた混合物を３０分間攪拌させた後、１−イソキノリンカルボン酸（９６４ｍｇ、５．５７ｍｍｏｌ）およびＴＢＴＵ（１．７９ｇ、５．５７ｍｍｏｌ）で処理した。その混合物を、室温で、４時間攪拌し、酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして濃縮した。その残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の６７％酢酸エチル）で精製すると、無色ゴム状物（１．０５ｇ、６３％）として、副題化合物が得られた：
【０１５５】
【化３５】
0004676676.tif 000040
。
（方法Ｉ：（Ｓ）−１−（イソキノリン−１−カルボニル）−２−ピペリジンカルボン酸）
【０１５６】
【化３６】
0004676676.tif 000041
（Ｓ）−１−（イソキノリン−１−カルボニル）−２−ピペリジンカルボン酸メチルエステル（１．０５ｇ、３．５２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）攪拌溶液を、室温で、水（１０ｍｌ）で処理した。次いで、水酸化リチウム（８４ｍｇ、３．５１ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を、室温で、１６時間攪拌した。得られた混合物を濃縮して、有機溶媒を除去した。次いで、得られた溶液をジエチルエーテルで洗浄し、残留している水層を、２Ｎ  ＨＣｌで酸性にした。得られた溶液を酢酸エチルで抽出し、その有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして濃縮すると、白色固体（９０２ｍｇ、９０％）が現れた：
【０１５７】
【化３７】
0004676676.tif 000042
。
（方法Ｊ：［３Ｓ／Ｒ，４Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−ヒドロキシ−３−［１−（イソキノリン−１−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル）
【０１５８】
【化３７Ａ】
0004676676.tif 000043
（Ｓ）−１−（イソキノリン−１−カルボニル）−２−ピペリジンカルボン酸（２７８ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）、３−アミノ−５−フルオロ−４−ヒドロキシ−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２１３ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１４５ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（１３７ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）および無水ＴＨＦ（２５ｍｌ）の攪拌混合物を、０℃まで冷却した後、ＥＤＣ（２０６ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物、１６時間にわたって、室温まで暖め、次いで、減圧下にて、濃縮した。その残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の５％メタノール）で精製すると、白色発泡体（４２５ｍｇ、９２％）として、表題化合物が得られた：
【０１５９】
【化３８】
0004676676.tif 000044
。
（［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−（イソキノリン−１−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル）
【０１６０】
【化３８Ａ】
0004676676.tif 000045
この副題化合物を、方法Ｆで記述した手順と類似の手順を使用して調製し、白色発泡体（２６８ｍｇ、６３％）を得た：
【０１６１】
【化３９】
0004676676.tif 000046
。
（方法Ｋ：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−ヒドロキシ−３−［１−（イソキノリン−１−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸トリフルオロ酢酸塩）
【０１６２】
【化４０】
0004676676.tif 000047
トリフルオロ酢酸（５ｍｌ）の無水ＤＣＭ（５ｍｌ）氷冷溶液を、［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−（イソキノリン−１−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２４０ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１５ｍｌ）攪拌氷冷溶液に加えた。その混合物を、０℃で、２時間、そして４℃で、４０時間攪拌した。この混合物を減圧下にて濃縮し、その残留物を無水ＤＣＭに溶解した。過剰のトリフルオロ酢酸を除去するために、この工程を４回繰り返した。そのゴム状物をジエチルエーテルで粉砕すると、灰白色固体（１２６ｍｇ、５３％）として、表題化合物が得られた。
【０１６３】
【化４１】
0004676676.tif 000048
。
【０１６４】
（実施例３：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−ベンジル−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸（化合物３））
【０１６５】
【化４２】
0004676676.tif 000049
（方法Ｌ：（Ｓ）−１−ベンゾイル−２−ピペリジンカルボン酸メチルエステル）
【０１６６】
【化４３】
0004676676.tif 000050
（Ｓ）−ピペリジンカルボン酸メチルエステル塩酸塩（１．００９ｇ、５．６５ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（７ｍｌ）攪拌懸濁液を、０℃で、ジイソプロピルアミン（３ｍｌ、１７．３４ｍｍｏｌ）で処理し、次いで、塩化ベンゾイル（０．７２ｍｌ、６．２１ｍｍｏｌ）で処理した。次いで、得られた混合物を、０℃で、４時間攪拌した後、ＤＣＭで希釈した。得られた溶液を、１Ｎ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして濃縮すると、オイルが現れた。その残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の２０％酢酸エチル）で精製すると、無色オイル（１．２２１ｇ、８７％）として、表題化合物が得られた：
【０１６７】
【化４４】
0004676676.tif 000051
。
（方法Ｍ：（Ｓ）−１−ベンゾイル−２−ピペリジンカルボン酸）
【０１６８】
【化４５】
0004676676.tif 000052
水（５ｍｌ）中のメタノール（５ｍｌ）の溶液中の（Ｓ）−１−ベンゾイル−２−ピペリジンカルボン酸メチルエステル（１．２２１ｇ、４．９４ｍｍｏｌ）の攪拌溶液を、０℃で、水酸化カリウム（３０５ｍｇ、５．４３ｍｍｏｌ）で処理した。得られた混合物を、０℃で、２時間攪拌した。次いで、追加量の水酸化カリウム（１１１ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を１．５時間攪拌し、次いで、濃縮した。次いで、得られた水溶液をＤＣＭで洗浄し、残留している水層を１Ｎ  ＨＣｌで酸性にした。得られた溶液を酢酸エチルで抽出し、その有機物を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして濃縮すると、結晶性固形物（８７０ｍｇ、７６％）が現れた：
【０１６９】
【化４６】
0004676676.tif 000053
次いで、（Ｓ）−１−ベンゾイル−２−ピペリジンカルボン酸を、方法Ｊ、ＦおよびＫで記述した手順と類似の手順にかけることにより、この表題化合物を調製した。その生成物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ）後、白色発泡体（２５ｍｇ、最終工程で１０％）として、単離した。
【０１７０】
【化４７】
0004676676.tif 000054
。
【０１７１】
（実施例４：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−（２−メチル−４−トリフルオロ−チアゾール−５−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸（化合物４））
【０１７２】
【化４８】
0004676676.tif 000055
方法Ａ〜Ｇで記述した手順と類似の手順を使用して、表題化合物を調製した。その生成物を、白色発泡体（２７．１ｍｇ、最後の工程で８％）として、単離した：
【０１７３】
【化４９】
0004676676.tif 000056
。
【０１７４】
（実施例５：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−（７−メトキシベンゾフラン−２−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸（化合物５））
【０１７５】
【化５０】
0004676676.tif 000057
方法Ａ〜Ｇで記述した手順と類似の手順を使用して、表題化合物を調製した。その生成物を、白色発泡体（２４．０ｍｇ、最後の工程で１２％）として、単離した：
【０１７６】
【化５１】
0004676676.tif 000058
。
【０１７７】
（実施例６：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−（３−クロロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸（化合物６））
【０１７８】
【化５２】
0004676676.tif 000059
方法Ａ〜Ｇで記述した手順と類似の手順を使用して、表題化合物を調製した。その生成物を、白色発泡体（１６３ｍｇ、最後の工程で３８％）として、単離した：
【０１７９】
【化５３】
0004676676.tif 000060
。
【０１８０】
（実施例７：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−（３−クロロチオフェン−２−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸（化合物７））
【０１８１】
【化５４】
0004676676.tif 000061
方法Ｈ〜Ｊ、ＦおよびＫで記述した手順と類似の手順を使用して、表題化合物を調製した。その生成物を、白色発泡体として、単離した：
【０１８２】
【化５５】
0004676676.tif 000062
。
【０１８３】
（実施例８：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−（ベンゾフラン−２−カルボニル）−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸（化合物８））
【０１８４】
【化５６】
0004676676.tif 000063
方法Ａ〜Ｇで記述した手順と類似の手順を使用して、表題化合物を調製した。その生成物を、白色発泡体（３．７ｍｇ、最後の工程で６％）として、単離した：
【０１８５】
【化５７】
0004676676.tif 000064
。
【０１８６】
（実施例９：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−［２−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−チアゾール−４−カルボニル］−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸（化合物９））
【０１８７】
【化５８】
0004676676.tif 000065
方法Ａ〜Ｇで記述した手順と類似の手順を使用して、表題化合物を調製した。その生成物を、白色発泡体（３１ｍｇ、最後の工程で１１％）として、単離した：
【０１８８】
【化５９】
0004676676.tif 000066
。
【０１８９】
（実施例１０：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−［１−［２−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−フラン−４−カルボニル］−２−ピペリジンカルボキサミド］−ペンタン酸（化合物１０））
【０１９０】
【化６０】
0004676676.tif 000067
方法Ａ〜Ｇで記述した手順と類似の手順を使用して、表題化合物を調製した。その生成物を、白色発泡体（８２ｍｇ、最後の工程で１８％）として、単離した：
【０１９１】
【化６１】
0004676676.tif 000068
。
【０１９２】
（実施例１１：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−３−｛［１−（３−メチル−５−フェニル−チオフェン−２−カルボニル）ピペリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−４−オキソ−ペンタン酸（化合物１１））
【０１９３】
【化６２】
0004676676.tif 000069
方法Ｎ：５−ブロモ−３−メチル−チオフェン−２−カルボアルデヒド
３−メチルチオフェン−２−カルボアルデヒド（１０ｇ、０．０７９ｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍｌ）溶液を、室温で、臭素（４．０８ｍｌ、０．０７９ｍｏｌ）のジクロロメタン（１５ｍｌ）攪拌溶液に滴下した。得られた混合物を、３時間にわたって、還流温度まで加熱した後、室温まで冷却し、水（３×５０ｍｌ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２×２５ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下にて溶媒を除去して、褐色固形物（１４．７ｇ、収率６６％）として、副題化合物を得た：
【０１９４】
【化６３】
0004676676.tif 000070
。
方法Ｏ：３−メチル−５−フェニル−チオフェン−２−カルボアルデヒド
５−ブロモ−３−メチル−チオフェン−２−カルボアルデヒド（１．００ｇ、４．８８ｍｍｏｌ）のエチレングリコールジメチルエーテル（９ｍｌ）溶液に、フェニルボロン酸（０．７７３ｇ、６．３４ｍｍｏｌ）、２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３溶液（６．３ｍｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．２８２ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を１８時間加熱し、冷却し、減圧下で溶媒を除去すると、褐色残留物が残り、これを、水（１５ｍｌ）とジクロロメタン（２０ｍｌ）との間で分割した。その有機物を分離し、水（２×５ｍｌ）、ブライン（１０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、そして減圧下で溶媒を除去して、褐色オイルを得た。フラッシュカラムクロマトグラフィー（６：１のペトロール４０〜６０℃／酢酸エチル）で精製すると、黄色オイル（０．９０ｇ、収率９１％）として、副題が得られた：
【０１９５】
【化６４】
0004676676.tif 000071
。
方法Ｐ：３−メチル−５−フェニル−チオフェン−２−カルボン酸
３−メチル−５−フェニルチオフェン−２−カルボアルデヒド（０．２００ｇ、０．９９ｍｍｏｌ）および２−メチル−２−ブテン（２．７７ｇ、０．０４０ｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（４ｍｌ）攪拌溶液に、０℃で、水（５ｍｌ）中のＮａＣｌＯ２（０．８９４ｇ、９．８９ｍｍｏｌ）およびＮａＨ２ＰＯ４（１．０９ｇ、７．９１ｍｍｏｌ）を加えた。その溶液を室温まで暖め、そして１８時間攪拌した。減圧下で溶媒を除去し、その残留物を、ジクロロメタン（１０ｍｌ）と１Ｎ  ＨＣｌ溶液（１０ｍｌ）との間で分割した。その有機物を分離し、その水層をジクロロメタン（２×５ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下にて溶媒を除去して、黄色オイルを得た。フラッシュクロマトグラフィー（５０％酢酸エチル／ペトロール４０〜６０℃）で精製すると、白色固形物（０．１４ｇ、収率６９％）として、副題化合物が得られた：
【０１９６】
【化６５】
0004676676.tif 000072
。
方法Ｑ：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−３−｛［１−（３−メチル−５−フェニル−チオフェン−２−カルボニル）−２−ピペリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−４−オキソ−ペンタン酸
方法Ｆ、Ｈ〜Ｋで記述した手順と類似の手順を使用して、３−メチル−５−フェニル−チオフェン−２−カルボン酸から、表題化合物を調製した。その生成物を、白色発泡体（０．０６６ｇ、収率８１％）として、単離した：
【０１９７】
【化６６】
0004676676.tif 000073
。
【０１９８】
（実施例１２：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−３−（｛１−［３−メチル−５−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−チオフェン−２−カルボニル］−ピペリジン−２−カルボニル｝−アミノ）−４−オキソ−ペンタン酸（化合物１２））
【０１９９】
【化６７】
0004676676.tif 000074
方法Ｆ、Ｈ〜Ｋ、Ｎ〜Ｐで記述した手順と類似の手順を使用して、３−メチルチオフェン−２−カルボアルデヒドから、表題化合物を調製した。その生成物を、淡桃色固形物（０．１６ｇ、９４％）として、単離した：
【０２００】
【化６８】
0004676676.tif 000075
。
【０２０１】
（実施例１３：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−（｛１−［５−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−チオフェン−２−カルボニル］−ピペリジン−２Ｓ−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン酸（化合物１３））
【０２０２】
【化６９】
0004676676.tif 000076
方法Ｆ、Ｈ〜Ｋ、Ｎ〜Ｐで記述した手順と類似の手順を使用して、チオフェン−２−カルボアルデヒドから、表題化合物を調製した。その生成物を、淡黄色固形物（０．２３ｇ、９３％）として、単離した：
【０２０３】
【化７０】
0004676676.tif 000077
。
【０２０４】
（実施例１４：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−５−フルオロ−４−オキソ−３−｛［１−（ピリジン−２−カルボニル）−ピペリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−ペンタン酸（化合物１４））
【０２０５】
【化７１】
0004676676.tif 000078
方法Ｆ、Ｈ〜Ｋで記述した手順と類似の手順を使用して、ピリジン−２−カルボン酸から、表題化合物を調製した。その生成物を、白色固形物（０．１０ｇ、９３％）として、単離した：
【０２０６】
【化７２】
0004676676.tif 000079
。
【０２０７】
（実施例１５：［３Ｓ／Ｒ，（２Ｓ）］−３−｛［１−（ビフェニル−３−カルボニル）ピペリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−５−フルオロ−４−オキソ−ペンタン酸（化合物１５））
【０２０８】
【化７３】
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方法Ｆ、Ｈ〜Ｋで記述した手順と類似の手順を使用して、３−ビフェニルカルボン酸から、表題化合物を調製した。その生成物を、白色固形物（０．１３ｇ、９７％）として、単離した：
【０２０９】
【化７４】
0004676676.tif 000081
。
【０２１０】
（生物学的方法）
（実施例１６：酵素アッセイ）
カスパーゼ阻害についてのアッセイは、精製した組換え型ヒトカスパーゼ−１、−３、−７または−８による蛍光原性基質に基づいている。これらのアッセイは、ＷＯ０１／４２２１６で報告された様式と実質的に同じ様式で、実行する。
【０２１１】
実施例１〜１５の化合物は、カスパーゼ−１、−３および−８に対して、５，０００Ｍ−１ｓ−１より大きいのＫｉｎａｃｔ値を有する。
【０２１２】
（実施例１７：末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の混合集団からのＩＬ−１β分泌の阻害）
カスパーゼ−１のプレＩＬ−１βのプロセシングは、種々の細胞源を使用して、細胞培養物で測定できる。健康なドナーから得たヒトＰＢＭＣは、リンパ球細胞および単核細胞の混合集団を提供し、これらは、多くの種類の生理学的刺激装置に応答して、一連のインターロイキンおよびサイトカインを産生する。末梢血単核細胞の混合集団からのＩＬ−１β分泌の阻害に使用されるアッセイ条件は、ＷＯ０１／４２２１６で見出だされる。
【０２１３】
上記化合物の阻害効力は、ＩＣ５０値で表わすことができ、これは、正対照と比較して、その上澄み液中で成熟ＩＬ−１βの５０％が検出される阻害剤濃度である。本発明の化合物１０は、上記方法で決定したように、末梢血単核細胞からのＩＬ−１β分泌の阻害について、０．５μＭ未満のＩＣ５０を示した。
【０２１４】
（実施例１８：抗−Ｆａｓ誘発アポトーシスアッセイ）
細胞アポトーシスは、Ｆａｓ配位子（ＦａｓＬ）をそのレセプタであるＣＤ９５（Ｆａｓ）に結合することにより、誘発できる。カスパーゼ−８−媒介アポトーシス経路の阻害に対する化合物の効果を測定するためのアッセイ条件は、ＷＯ０１／４２２１６に見出だされる。
【０２１５】
本発明の化合物３は、このＦＡＳ誘発アポトーシスアッセイにおいて、０．０５μＭ未満のＩＣ５０を示した。
【０２１６】
（実施例１９：全血からのＴＮＦ放出の阻害）
ヒト血液を健康なドナーから新たに引き出し、そして真空容器で収集した。血液を、無菌容器にて、ＰＢＳ（組織培養物、発熱物質なし）中で、１：２で希釈し、そして反転してよく混合した。血液混合物の０．５ｍｌアリコートを、９６ウェルフォーマットで、クラスターチューブに分配した。
【０２１７】
これらの化合物の１００ｍＭ  ＤＭＳＯストックを取り出し、エッペンドルフにて、ＲＰＭＩ媒体中で、１：１０に希釈して、１０ｍＭストックを得ることにより、これらの試験化合物の希釈物を調製した。これらのストック溶液から、１：５の連続希釈物を調製した。
【０２１８】
ＬＰＳを、ＰＢＳ中にて、凍結ストック（−２０℃）で保ち、次いで、ＲＰＭＩ媒体で、１：１０まで希釈し、最終的に、この媒体中にて、再度、１：３５０に希釈した。これらの血液試料に、各試験化合物（第一濃度は、１００μＭであった）５０μｌを加え、次いで、１０μｌ  ＬＰＳ（そのウェル中の最終濃度は、５ｎｇ／ｍｌであった）で刺激した。それらの内容物を、８ウェルマルチチャンネルピペットを使用して穏やかに混合し、そして３７℃で、一晩インキュベートした。このインキュベーション時間の終わりに、内容物を穏やかに混合し、次いで、１０００×ｇで、５分間にわたって、２０℃で、遠心沈殿した。その血清上澄み液を、そのＲＢＣｓを乱すことなく、新しいプレートに移し、そして希釈剤ＲＤ６Ｃで１：２に希釈した。
【０２１９】
Ｒ＋ＤシステムＥＬＩＳＡキットを使用し、Ｒ＋Ｄシステムプロトコルを使用して、上澄み液のＴＮＦ−αレベルをアッセイした。試料を、４５０ｎｍで読み取った。本発明の最も好ましい化合物は、全血中にて、ＬＰＳ−誘発ＴＮＦ−αアッセイで、６μＭ未満のＩＣ５０を示した。
【０２２０】
本発明の化合物１０は、全血中にて、ＬＰＳ−誘発ＴＮＦ−αアッセイで、６μＭ（５０４４ｎＭ）未満のＩＣ５０を示した。
【０２２１】
本発明者は、本発明の多数の実施形態を記述しているものの、本発明者の基本的な例は、他の実施形態（これらは、本発明の化合物および方法を利用する）を提供するように変更できることが明らかである。従って、本発明の範囲は、特定の実施形態（これらは、一例として、表わされている）よりもむしろ、添付の請求の範囲で規定され得ることが理解できるはずである。