(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド、若しくはその立体異性体、又はその医薬として許容される塩。
【請求項２】
病理的インスリン抵抗性の治療のための薬剤の製造におけるＮ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド、その立体異性体、又はその医薬として許容される塩の使用。
【請求項３】
病理的インスリン抵抗性の治療のため及びそれに関連する少なくとも１の他の病理状態の治療のための薬剤の製造におけるＮ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド、その立体異性体、又はその医薬として許容される塩の使用。
【請求項４】
少なくとも１の他の病理状態が末梢神経再生における糖尿病性病理的疾患を含む、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
少なくとも１の他の病理状態が、糖尿病性網膜症、神経障害、及び腎障害から選択される、請求項３に記載の使用。
【請求項６】
少なくとも１の他の病理状態が、末梢神経再生における糖尿病性病理的疾患、及び糖尿病性網膜症、神経障害、又は腎障害の両方を含む、請求項３〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
末梢腎障害を治療するための薬剤の製造におけるＮ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド、その立体異性体、又はその医薬として許容される塩の使用。
【請求項８】
活性成分としてＮ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド、その立体異性体の１つ又はその医薬として許容される塩を、及び少なくとも１の一般に用いられる医薬として許容される補助剤又は担体との混合物において含む医薬組成物。
【請求項９】
病理的インスリン抵抗性を治療するために使用される、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
病理的インスリン抵抗性及びそれに関連する少なくとも１の他の病理状態を治療するために使用される、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
少なくとも１の他の病理的状態が末梢神経再生における糖尿病性病理的疾患を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
少なくとも１の他の病理状態が、糖尿病性網膜症、神経障害、及び腎障害から選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
少なくとも１の他の病理状態が、末梢神経再生における糖尿病性病理的疾患、及び糖尿病性網膜症、神経障害、又は腎障害の両方を含む、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
末梢神経障害を治療するために使用される、請求項９に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
Ｏ−（３−ピペリジノ−２−ヒドロキシ−１−プロピル）ヒドロキシム酸ノーライド誘導体、そのインスリン抵抗性の治療における適用、及び有効な剤としてこの誘導体を含む医薬調製物。
【０００２】
発明の技術分野
本発明は、Ｏ−（３−ピペリジノ−２−ヒドロキシ−１−プロピル）ヒドロキシム酸（ｈｙｄｒｏｘｙｍｉｃ  ａｃｉｄ）ノーライド誘導体、その医薬的使用及び活性成分としてこの誘導体を含む医薬製品に関する。すなわち、本発明は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド、その立体異性体、及びそれらの酸付加塩に関する。更に、本発明は、インスリン抵抗性の治療におけるこれらの化合物の使用、及び活性成分としてこれらの誘導体を含む医薬製品にも関する。
【０００３】
発明の背景
Ｏ−（３−ピペリジノ−２−ヒドロキシ−１−プロピル）ヒドロキシム酸（ｈｙｄｒｏｘｙｍｉｃ  ａｃｉｄ）ハライド誘導体は、欧州特許明細書第０  ４１７  ２１０  Ｂ１から既に知られている。この特許明細書によれば、これらの化合物は選択的ベータブロッキング効果を示し、これにより糖尿病性脈管障害、より詳しくは糖尿病性網膜症及び腎障害の治療に適している。
【０００４】
ＰＣＴ公報ＷＯ９８／０６４００によれば、Ｏ−（３−ピペリジノ−２−ヒドロキシ−１−プロピル）ヒドロキシム酸ハライド誘導体及び他の類似構造の化合物は、脈管内皮細胞を保護し、再生するのに有効であり、これにより内皮の機能不全により引きおこされる疾患の治療のための好適な活性剤である。
【０００５】
Ｏ−（３−ピペリジノ−２−ヒドロキシ−１−プロピル）ヒドロキシム酸ノーライドの誘導体の中でいくつかのヒドロキシルアミン誘導体のシャペロン発現増加効果、及びシャペロン系の機能に関連する疾患の治療におけるこれらの化合物の使用がＷＯ９７／１６４３９から知られている。この特許出願において、（とりわけ）Ｏ−（３−ピペリジノ−２−ヒドロキシ−１−プロピル）−３−ピリジルヒドロキシム酸クロライドＮ−オキシド誘導体が新規化合物として定義され、クレームされるが、その生産手順はピペリジンについて並びにピペリシン及びピリジン環の両方の中にＮ−オキシド基を含む化合物について記載されるだけである。本発明の化合物は、上述の出願においては言及されない。
【０００６】
インスリン抵抗性は、インスリンの効果をブロックする病理状態である。それは、一般に、糖尿病に関連するが、その形成は独立しても可能である。インスリン抵抗性のため、体は炭水化物、脂質及びタンパク質代謝のために次第に高い濃度のインスリンを要求し、それは極めて高濃度のインスリンを導く。長く続く高いインスリン濃度は独立した心臓−脳−脈管危険因子となることが判明している。
【０００７】
インスリン抵抗性の削減は、次の両方の型の糖尿病に本質的である：２型糖尿病の場合、それは主要な病原学的因子として存在し、１型糖尿病の場合、インスリン抵抗性は、グルコース毒性及び治療目的のために外部から適用された過剰量のインスリンにより引きおこされる。
【０００８】
インスリン抵抗性の削減のためにいくつかの活性剤が供されている。これらの中で、最も重大なものはインスリンセンシタイザー産物であり、それから最も知られている剤はチアゾリジン−ジオングループのメンバーであるトログリタゾンである（A.R.Saltiel ら、Diabetes 45/45/1996 pp 1661 〜1669、及びS.Kumar ら、Diaberologia 1996/39/6 pp 701 〜709)。この化合物の主要な効果は、基底状態中及びグルコース刺激後の両方において末梢インスリン濃度を低下させることによるインスリン抵抗性の削減である。結果として、それは炭水化物代謝を改善し高インスリンレベルの２次的効果として生ずるいくつかの病理的誘導疾患、例えば高脂血症及び病理的うっ血を癒す。その最終的なポジティブな効果は心臓血管の危険の削減である。しかしながら、欠点は、それが深刻な主に肝毒性の副作用を引きおこし得、その適用が制限され、相互の慎重さを要求することである。
【０００９】
発明の概要
Ｏ−（３−ピペリジノ−２−ヒドロキシ−１−プロピル）ヒドロキシム酸ノーライドの分野の研究の間、ビモクロモル（ｂｉｍｏｃｌｏｍｏｌ）として知られるＯ−（３−ピペリジノ−２−ヒドロキシ−１−プロピル）−３−ピリジンヒドロキシム酸−クロライドのマレエートの詳細な研究が行われ、その最も大きな効果が慢性神経障害の病的結果へのものであることが見い出された：それは、糖尿病において運動及び感覚神経伝導速度欠乏を有意に改善し、自律神経障害から生ずる病的異常にも有利に作用する。更に、動物実験及びヒトでのフェーズIIテストの両方においてそれは、病的糖尿病性の尿のアルブミン排出を削減し、動物実験においてそれは糖尿病性網膜症から生ずる病理的組織的及び電気生理学的変化を削減する。しかしながら、インスリン抵抗性の削減において、ビモクロモルは有効でなかった。
【００１０】
現在、インスリン抵抗性を削減することができ、同時に全ての３つの慢性糖尿病合併症から生ずる異常を有効に治癒することができる医療品はない。
【００１１】
好適な活性材料の研究において、ビモクロモルのＮ−オキシド誘導体を生物活性についてテストした。予備的テストにおいてＳＴＺ糖尿病Ｗｉｓｔａｒラットにおける運動及び感覚神経障害へのビモクロモルの３つのＮ−オキシド誘導体の有効性を研究した。ストレプトゾトシン誘導化糖尿病により引きおこされる末梢運動及び感覚神経伝導速度欠乏を改善することにおける３つのビモクロモルＮ−オキシド誘導体の有効性を、実験２に詳細に記載される方法を用いて測定した。結果を以下の表に要約する。
【００１２】
【表１】
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【００１３】
上述の結果から、ビモクロモルのピリジンＮ−オキシド誘導体は、ビモクロモルと等価であるが、他の２つのＮ−オキシド誘導体は運動及び感覚神経障害への効果がかなり弱い。この実験に基づいて、ビモクロモルのピリジンＮ−オキシド誘導体、即ちＮ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−１−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライドで研究を続けた。
【００１４】
我々の研究は、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライドが、上述の３つの主要な糖尿病合併症の治療においてｂｉｍｏｃｌｏｍｏｌのものと等しい又は特定の場合、それより大きい効果を示すことに加えて、末梢インスリン抵抗性を削減するという予想しない結果を得た。この特性のため、その化合物は慢性糖尿病性合併症の治療、特に網膜症、神経障害及び腎症の治療のため、並びに末梢インスリン抵抗性の同時の削減のために適しているが、それは、非糖尿病性の病的インスリン抵抗性及びそれに関連するいずれかの病的状態の治療のためにも好適である。
【００１５】
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライドの有利な生物特性は以下の実験により証明された。これらのテストのため、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライドのマレイン酸塩又はその好適な光学活性化合物のマレイン酸塩をテスト化合物として用いた。実験の記載においてラセミ体化合物のマレイン酸塩は化合物Ａと呼び、その光学活性立体異性体のマレイン酸塩は単に特定して示す。
【００１６】
実験１
２ヶ月の処理の後のグルコース耐性障害の肥満したインスリン抵抗性の高インスリン血症のＺｕｃｋｅｒ  ｆａ／ｆａラットにおける炭水化物代謝への化合物Ａ及びＢｉｍｏｃｌｏｍｏｌにより処置の効果
材料及び方法：
本実験において、いわゆるＺｕｃｋｅｒ  ｆａ／ｆａラット（Charles River Laboratories Inc. ）を用いた。一卵性動物において、肥満症、インスリン抵抗性、高血中インスリンレベル、グルコース耐性障害及び高トリグリセリド血症は視床下部レプチンレセプター変異から生ずる。上述の特徴のため、これは早期２型糖尿病の許容されるモデルである。
【００１７】
研究の最初に動物を２４時間、及び尿収集の２４時間の処理の１又は２ヶ月後、個々の代謝カゴに入れた。
【００１８】
動物に、１４〜２２週の間、１日１回、コントロールについて胃管栄養法によりテスト物質又は生理食塩水のいずれかを与えた。
【００１９】
血液及び尿の生化学的パラメータを、Ｋｏｄａｋ  Ｅｃｔａｃｈｅｍ  ７００オートマチックアナライザーにより測定した。尿の全タンパク質レベルを、５９５nmのＢｒａｄｆｏｒｄ染色（Ｈｉｔａｃｈ，Ｕ−３２００）の使用により分光光度測定により決定した。その血清のインスリン濃度をラット抗インスリン抗体を用いてＲＩＡ法により測定した。
【００２０】
収縮期、拡張期血圧及び心拍を、Ｌｅｔｉｃａ  ２０００自動分析機により、ラットの尾で毎週測定した（いわゆるテールカフ法）。２ヶ月の処理の後、グルコース許容性のレベルを、腹腔内グルコース許容性テストにより決定した（２ｇ／kg ip.）。
【００２１】
結果：
２０mg／kg  ｐ．ｏｓの１日の投与量を投与したビモクロモル（Ｂｉｍｏｃｌｏｍｏｌ）は、絶食血中グルコースのレベルを有意に減少させたが、それは絶食インスリン濃度には作用しなかった。
【００２２】
先のデータと比べると、予想されない結果は、２０mg／kg  ｐ．ｏｓの１日の投与量で投与した化合物Ａは、絶食血中グルコース及びインスリン濃度の両方を有意に減少させ、後者は約５０％であったことである。結果を表１及び図１に示す。
【００２３】
【表２】
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【００２４】
腹腔内グルコース許容性テストの経過の間、ビモクロモルも化合物Ａも、血中グルコース曲線下の領域（ＡＵＣ）に作用しなかった。しかしながら、インスリンのＡＵＣの場合、２つの化合物間に差がある、即ちビモクロモルは効果はなかったが、化合物Ａはそれを、やせたコントロールと同じレベルまで有意に減少させた。結果を表２及び図２に示す。
【００２５】
表は、０〜６０分の間の曲線下の領域の値（ＡＵＣ）を含む。
【００２６】
【表３】
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【００２７】
概要：
化合物Ａは末梢インスリン抵抗性を有意に削減したが、ビモクロモルはそうでない。
【００２８】
実験２
１ヶ月の処理の後の、ＳＴＺ−糖尿病Ｗｉｓｔａｒラットにおける末梢神経障害から生ずる病的異常性への化合物Ａおよびビモクロモルによる処理の効果
材料及び方法：
本実験においては雄のＷｉｓｔａｒラットを用いた（Charles River Laboratories Inc. ）。実験の開始時に、それらの体重は３４０〜３７０ｇであった。糖尿病は、生理食塩水に溶かしたストレプトゾトシン（STZ, Sigma, St.Louis, MO）の単一４５mg／kg投与量の静脈内投与により誘導した。糖尿病の発達は、１５mmol／ｌを超える値を許容して、血中グルコーステストにより１日後にチェックした。
【００２９】
そのテスト及び引用物質を１日１回、動物にｐ．ｏｓ投与した。
【００３０】
神経伝達速度（ＮＣＶ）の測定のため、Ｄｅ  Ｋｏｎｉｇ及びＧｉｓｐｅｎにより改良されたＳｔａｎｌｅｙの方法を用いた。動物をＨｙｐｏｎｏｒｍ（１mg／kg ip., Janssen, Tilburg, Denmark ）、フルアニソン（１０mg／ml）、及びフェンタニルシトレート（０．２mg／ml）の同時投与により麻酔した。次に左坐骨及び脛骨神経を標準点で刺激した。過最大の刺激（方形インパルス、０．０３ms）をＮｉｈｏｎ−Ｋｏｈｄｅｎ（モデルＳＥＮ−１１０４，Ｊａｐａｎ）を介して、プラチナ針電極と共に用いた。単一筋肉から伝達され、ミオグラフにより増強された筋電図を、Ｍａｔｌａｂ  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ（Mathwork Inc, UK）プログラムにより更に分析した。糖尿病により引きおこされたＮＣＶ損傷の程度はｍ／ｓで表した。その処理の有効性は、パーセンテージ（％）に関してこれと比較した。統計的計算は、不対ｔ−テスト又は単一基準ＡＮＯＶＡテスト（Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓポストｈｏｃテストも同時）により行った（Graphpad Instat, San Diego, CA）。
【００３１】
結果：
２０mg／kgの投与量で１日１回、投与したビモクロモル及び５mg／kgの投与量で１日１回投与した化合物Ａは、糖尿病動物と同じ有意な程度まで、運動（ＭＮＣＶ）及び感覚（ＳＮＣＶ）神経伝導速度を有意に改善した。１０mg／kgを超える化合物Ａの投与量の増加はその効果も増加させなかった。結果を表３に示す。
【００３２】
【表４】
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【００３３】
実験３
１ヶ月の処理の後の、ＳＴＺ−糖尿病Ｗｉｓｔａｒ  Ｒａｔにおける糖尿病性自律神経障害から生ずる病的異常性への化合物Ａ及びビモクロモルによる処理の効果
材料及び方法：
本実験において、雄のＷｉｓｔａｒラットを用い（Charles River Laboratories Inc. ）を用い、実験の開始時にそれらの体重は３４０〜３７０ｇであった。糖尿病は、生理食塩水に溶かしたストレプトゾトシン（STZ, Sigma, St.Louis, MO）の単一４５mg／kg投与量の静脈内投与により誘導した。糖尿病の発達は、１５mmol／ｌを超える値を許容して血中グルコーステストにより１日後に検査した。
【００３４】
テスト及び引用物質は１日１回、動物にｐ．ｏｓ投与した。
【００３５】
実験は、６０mg／kg ip のペントパルビタールナトリウム（Newbutal, Sanof, Phylaxia ）を投与することにより行った麻酔下で行った。この後、気管内チューブ又はポリエチレンカニューレを大腿動脈及び静脈に挿入した。その動脈カテーテルを、収縮期及び拡張期圧の同時測定のために圧力伝導機につないだ（Ｈａｅｍｏｓｙｓコンピュータープログラムでのオンライン自動測定及び運送システム）。２０分の平衡化期間の後、次の物質を静脈内に投与した：ノラドレナリン、５μｇ／kg iv.−イソプロテレノール０．４μｇ／kg iv.−Ｎ．ｖａｇｕｓ刺激（２Ｖ、時間：５００μsec 、デイレイ：１msec）。それら物質の効果を１０分、モニターした。
【００３６】
自律神経障害は、糖尿病及び他の疾患（例えば肝臓病）の場合の両方で突然の心臓死を導く原因の１つである。それゆえ、自律神経障害から生ずる病的異常を有効に削減することができる全ての産物が極めて重要である。
【００３７】
本実験において、ビモクロモル又は化合物Ａの毎日の２０mg／kg単一投与は自律神経障害から生ずるいくつかの病的異常を有意に削減した。
【００３８】
我々の結果の概要及び比較を表４に示す。
【００３９】
表中の二重の矢印は、テスト物質が他のものより統計的により有効であることを示す。
【００４０】
【表５】
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【００４１】
実験４
１ヶ月の処理後の、ＳＴＺ−糖尿病性Ｗｉｓｔａｒラットにおける早期糖尿病性網膜症により引きおこされる病的組織的変化への化合物Ａ及びビモクロモルによる処理の効果
材料及び方法：
本実験において、雄のＷｉｓｔａｒラットを用い（Charles River Laboratories Inc. ）、実験の開始時に、それらの体重は３４０〜３７０ｇであった。糖尿病は、生理食塩水に溶かしたストレプトゾトシン（STZ, Sigma, St.Louis, MO）の単一４５mg／kg投与量の静脈内投与により誘導した。糖尿病の発達は、１５mmol／ｌを超える値を許容して、血中グルコーステストにより１日後に検査した。
【００４２】
テスト及び引用物質は１日１回、動物にｐ．ｏｓ投与した。
【００４３】
麻酔（Calypsovet, 125mg/kg. Ip, Richter Rt., Hungary）の後、眼を摘出し、リン酸緩衝液（pH７．４）に溶かした４％ホルムアルデヒドに固定した。
【００４４】
次に、それらをパラフィン中に固定した（Medim DDM P800、固定中心：Lignifep L-120-92-014、ステイナー：Shandon Eliott, Microtome: Leica SM 2000 R, Microscope: Ienaval Karl Zeiss Jena）。眼のいくつかの６ミクロン断片を調製し、エマトキシリン／エオシン（Ｆｌｕｋａ）及びＰＡＳ（過ヨウ素酸−Ｓｃｈｉｆｆ，Ｆｌｕｋａ）染色を用いた。光学顕微鏡評価を、４０×及び１００×の倍率で行った。写真及びスライドのポジを代表的サンプルについて調製した。
【００４５】
組織学的評価をコードされたサンプルで行った。ここでそのグループの部門は検査者に知らせていない。その網膜の病的異常を０〜２０のスケールでレンズのそれを０〜３のスケールで分類した。
【００４６】
統計学的計算を、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａ  ４．５（SatSoft, USA）プログラムで行った。陰性のケースについて与えられる値は０．１であった。Ｂｏｘ及びＷｈｉｓｋｅｒプロットグラフも調製した。
【００４７】
本実験の各々のグループについて、平均±ＳＥ（標準誤差）値を計算し、比較を、非パラメータＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ−テストにより行った（Graphpad Instat, San Diego, CA）。
【００４８】
結果：
化合物Ａの毎日の単一５mg／kg投与及びビモクロモルの毎日の単一２０mg／kg投与は、１ヶ月の処理の後、糖尿病性網膜症により誘導された病的組織学的変化を有意に改善した。これら２つの化合物の中で、化合物Ａは糖尿病性の非処理動物と比べて統計的により有効であった。結果を表５に示す。
【００４９】
【表６】
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【００５０】
実験５
１ヶ月の処理後の、ＳＴＺ−糖尿病Ｗｉｓｔａｒラットにおける糖尿病性腎障害により引きおこされる病的尿タンパク損失への化合物Ａ及びビモクロモルによる処理の効果
材料及び方法：
本実験において雄のＷｉｓｔａｒラットを用い（Charles River Laboratories Inc. ）、実験の開始時にそれらの体重は３４０〜３７０ｇであった。糖尿病は、生理食塩水に溶かしたストレプトゾトシン（STZ, Sigma, St.Louis, MO）の単一４５mg／kg投与量の静脈内投与により誘導した。糖尿病の発達は、１５mmol／ｌを超える値を許容して、血中グルコーステストにより１日後に検査した。
【００５１】
テスト及び引用物質は、１日１回、動物にｐ．ｏｓ投与した。
【００５２】
２４時間の尿収集のため、動物を個々の代謝カゴに入れた。この期間の間、それらに水及びＩｉｂｉｔｕｍを与えたが、食物は与えなかった。後者の基準は食物のタンパク質成分による汚染の可能性を防ぐために必要であった。尿は、細菌汚染を防ぐためにＴｈｙｍｏｌ結晶（Ｒｅａｎａｌ  ３１３５−１−０８−３８）を入れた目盛り付きガラス容器内に収集した。
【００５３】
測定の前、尿サンプルを遠心し（２５００rpm ）、紙フィルター（Ｗｈａｔｍａｎｎ  １）を介してろ過した。必要に応じて、それらは測定まで−２０℃で保存した。
【００５４】
尿の全タンパク質含有量をＢｒａｄｆｏｒｄ染色法（Sigma B-6916, St.Louis, MO）により測定し、色の強度を分光光度測定（Ｈｉｔａｃｈｉ−Ｕ−３２００）により検出した。
【００５５】
結果：
２０mg／kgの毎日の単一投与量で投与したビモクロモルは、ＳＴＺ−糖尿病誘導化で上昇した尿タンパク損失を有意に減少させた。１０mg／kgの毎日の単一投与量で投与した化合物Ａは、タンパク質損失を有意に減少させなかった。しかしながら、５mg／kgの毎日の単一投与量で投与した化合物Ａの（＋）エナンチオマーは糖尿病性タンパク質損失を有意に減少させた。結果を表６に示す。
【００５６】
【表７】
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【００５７】
実験６
１ヶ月処理の後の、ＳＴＺ−糖尿病Ｗｉｓｔａｒラットにおける末梢神経障害の病的変化への化合物Ａ並びにその（＋）及び（−）エナンチオマーの効果
材料及び方法：実験動物及び適用した全ての方法は実験２に記載されるのと同じである。
【００５８】
結果：
１０mg／kgの単一の毎日の投与量の化合物Ａ及び５mg／kgの単一の毎日の投与量の化合物Ａ（＋）は等活性であり、糖尿病動物において欠損性運動（ＭＮＣＶ）及び感覚（ＳＮＣＶ）神経伝導速度欠損の両方を有意に改善した。化合物Ａ（−）はいずれのパラメータにも有意な改善を有さなかった。結果を表７に示す。
【００５９】
【表８】
0004689838.tif 000009
【００６０】
実験７
２ヶ月処理の後の、ＳＴＺ−糖尿病ラットにおける早期糖尿病性網膜症の病的組織学的変化への化合物Ａ並びにそのＡ（＋）及びＡ（−）エナンチオマーの効果
材料及び方法：実験動物及び適用した全ての方法は、実験４に記載されるのと同じである。
【００６１】
結果：
５mg／kgの単一の毎日の投与量でのＡ（＋）エナンチオマーは、２ヶ月処理後に、糖尿病性網膜症により引きおこされるレンズの及び網膜の病的組織学的変化の両方を有意に改善したが、１０mg／kgの単一の毎日の投与での化合物Ａの効果は有意でなく、そして５mg／kgの単一の毎日の投与量でのＡ（−）エナンチオマーは有効でなかった。網膜の組織学的変化のみに関して化合物Ａ及びそのＡ（＋）エナンチオマーの両方は有効であったが、Ａ（−）エナンチオマーの効果は有意でなかった。結果を表８に示す。
【００６２】
【表９】
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【００６３】
実験８
食事誘導化インスリン抵抗性動物モデルにおける生体内インスリン依存性グルコース摂取へのＡ（＋）及びＡ（−）エナンチオマーの効果
材料及び方法：
３００〜３５０ｇの最初の体重の雄のＷｉｓｔａｒラット（Charles River Laboratories Inc. ）を本実験に用いた。
【００６４】
インスリン抵抗性は食事操作により誘導した：動物に３週間にわたって高脂肪（ＨＦ）食を与えた。ＨＦ食において、飽和脂肪の割合が支配的であり、１日の全体のカロリー摂取の７０％を与えた。Ａ（＋）及びＡ（−）エナンチオマーは、２０mg／kg／日の投与量で予防的適用において１日１回、与えた。
【００６５】
３週の処理の終りに、以下のパラメータを研究した：１．血清からの炭水化物及び脂質並びに２．グルコース摂取の定量的測定のための現在最も正確な方法であるオイグリセミックグルコースクランプ法による生体内インスリン媒介グルコース摂取（De Fronzo ら、American Journal of Physiology, 1979/237/E214〜233ページ）。要約：異なる動物グループにおける絶食血中グルコース濃度は同一でなければならない。実験は、意識のある自由に動ける長期にカニューレを入れたラットで行った：最初に、インスリン注入（６．４mU／kg／分）を開始し、次に正常血糖域に血中グルコース濃度を維持するように平行して行う連続的グルコース注入を行った。安定化の後、注入したグルコースの量を、インスリン感度の量的パラメータである９０分の期間、測定した（グルコース注入速度＝ＧＩＲ、mg／kg／分）。
【００６６】
結果：
２０mg／kg／分の１日の投与量におけるＡ（＋）及びＡ（−）エナンチオマーは体重及び食物消費並びにラットの絶食血中グルコースレベルに影響を与えなかった。
【００６７】
反対に、両方の化合物は絶食インスリン及びトリグリセリド濃度の上昇を誘導し、更に筋肉トリグリセリド含有量の上昇を有意に減少させた。正常血糖グルコースクランプテストは、ＨＦ食が、生体内インスリン媒介グルコース摂取を有意に抑制することを示した：コントロール：２６．７＋０．６８mg／kg／分、ＨＦ食：１５．０＋０．３９mg／kg／分。この抑制されたインスリン媒介グルコース摂取は両方のエナンチオマーによって増加される：ＨＦ＋Ａ（＋）：２０．５＋０．８９mg／kg／分及びＨＦ＋Ａ（−）：１９．７＋１．３８mg／kg／分（ｐ＜０．０１のレベルで両方の場合に有意な増加）。これらの結果によれば、両方のエナンチオマーは、インスリン媒介グルコース摂取を増加させ、それは、新しい展望から、本発明の化合物のインスリン抵抗性削減機能を証明する。
【００６８】
実験９
慢性的な投与後のＺｕｃｋｅｒ糖尿病脂肪過多ラットにおけるＡ（＋）エナンチオマーの抗糖尿病活性
材料及び方法：
遺伝的な糖尿病動物モデルを選択しＺｕｃｋｅｒ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｆａｔｔｙ（ＺＤＦ）ラットを実験に用いた。このモデルはインスリン抵抗性の糖尿病変異体で肥満体であるが、非糖尿病Ｚｕｃｋｅｒ  ｆａ／ｆａ動物モデルである（実験１を参照のこと）。ＺＤＦラットにおいて、糖尿病はインスリン抵抗期の後６〜８週の年令で発達した。
【００６９】
（Ａ＋）エナンチオマーの効果を、７週令で非糖尿病期で開始した２×２０mg／kg／日の投与量での処理で研究し６週間、続けた。
【００７０】
臨床化学パラメータを標準的方法により測定した。その血清インスリン濃度を現在開発されている方法（ＥＬＩＳＡ法、DRG International Int., U.S.A.）により測定した。
【００７１】
結果：
Ａ（＋）エナンチオマーは糖尿病動物において強力な抗糖尿病活性を有することが新しい結果としてこの実験で検出されている。
【００７２】
３及び５週の処理後に得られた結果を表９に示す。
【００７３】
【表１０】
0004689838.tif 000011
【００７４】
Ａ（＋）エナンチオマーでの処理は血中グルコース濃度を標準化しなかったが、強力な抗糖尿病活性及び慢性糖尿病合併症への先に同定した有意な治癒効能の組合せの効果はこの化合物に特有の特性を与える。
【００７５】
Ａ（＋）エナンチオマーの治療適応範囲はこの新しい組合せの効能に基づいて有意に広げることができる。
【００７６】
更なる実験は、本発明の化合物が、糖尿病の病的合併症へのそれらの効能の他に、糖尿病により引きおこされる末梢神経の他の損傷の治療に有用であるとの結論を導いた。この結論は、以下の神経再生実験の結果により支持される。
【００７７】
実験１０
ＳＴＺ−糖尿病Ｗｉｓｔａｒラットにおける神経再生への化合物Ａ及びＡ（＋）エナンチオマーの治療効果
材料及び方法：
本実験は、３２０〜３５０ｇの体重のＷｉｓｔａｒラットで行った。糖尿病を誘導し、実施例２に記載されるように検査した。３週間、糖尿病であり続けているテスト動物において、左神経坐骨を、凍結により傷つけ、そして右側のものを非傷害コントロールとして用いた。再生は、前方脛骨筋から移した筋電図の曲線下領域（ＡＵＣ）である足裏の刺激により誘発される屈筋反射作用のシグナルをモニターすることにより観察した。刺激及び検出のために、実験２に記載されるシステムを用いた。
【００７８】
化合物Ａの１０mg／kg及びＡ（＋）エナンチオマーの５mg／kgの単日投与量を凍結による損傷の後５週間、投与した。
【００７９】
結果：
３週間の糖尿病の終りに、凍結による損傷の前に、感覚神経障害が発達し、両脚のＡＵＣの２３〜２５％減少を引きおこした。凍結による損傷の後２週間の間、応答は見られなかった。神経再生の程度は５週目で６３％であった。再生は化合物Ａにより７３％まで増強され、Ａ（＋）エナンチオマーは９３％の程度、有効であった。非凍結神経の８３％及び４４％の神経再生が、各々Ａ（＋）エナンチオマー及び化合物Ａでの処理の結果として観察された。結果として、Ａ（＋）エナンチオマーは強力な神経再生効果を有する。
【００８０】
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライドは、先行技術で知られていたい以下の手順によって調製することができる。
【００８１】
ＷＯ９７／１６３４９に記載される酸化法によれば、両方の環の窒素原子上で酸化された誘導体、又はより少い試薬で、脂環式環上で酸化された誘導体は、Ｏ−（３−ピペリジノ−２−ヒドロキシ−１−プロポキシ−１−プロピル）−３−ピリジンヒドロキシム酸クロライドから調製することができる。なぜなら酸化反応においては脂環式窒素原子が好まれるからである。酸化の位置選択性は、本発明の化合物の生産のためにピリジン環に向けられねばならず、それゆえ、その手順を改良した。その改良の主な点は、ピリジン環の選択的酸化を容易にするために、過酸的酸化を強酸、好ましくはメタンスルホン酸の存在下で行って、脂環窒素をプロトン化し、これによりその酸化を防ぎ、ピリジンの酸化を最初にさせることである。酸化剤として、いずれの型の過酸、好ましくは過酢酸も用いることができる。
【００８２】
本発明の化合物の光学的に活性なエナンチオマーは、ラセミ化合物を分割することにより、例えばＥＰ  ０  ４１７  ２１０  Ｂ１に従って、生産することができる出発材料として好適な光学活性Ｏ−（３−ピペリジノ−２−ヒドロキシ−１−プロピル）−３−ピリジンヒドロキシム酸クロライドエナンチオマーを用いることにより調製する。その反応の過程において、分子のキラリティーはダメージを受けず、得られる産物は出発物質と同じ光学純度を有する。
【００８３】
必要に応じて得られたＮ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド又はその光学活性エナンチオマーの１つは既知の方法により、鉱酸又は有機酸との酸付加塩に変換することができる。
【００８４】
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド、その光学活性（＋）又は（−）エナンチオマー、いずれかの比のエナンチオマーの混合物、及びラセミ体化合物、更に鉱酸又は有機酸と共に上述の化合物のいずれかから形成された酸付加塩は本発明を構成する。Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライドの全ての可能性ある幾何異性体型は本発明の範囲を構成する。用語“Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライドの立体異性体”は、その化合物の全ての可能性ある光学及び幾何異性体をいう。
【００８５】
本発明によれば、これらの化合物は、病的インスリン抵抗性の治療のため及びそれに関連する病的状態の治療及び予防のために適用される。
【００８６】
本発明の特定の実施形態は、これらの化合物を慢性糖尿病誘導化合併症、特に網膜症、神経障害及び腎障害、並びに病的インスリン抵抗性及びそれに関連する病的状態の同時の治療又は予防のために用いられる。
【００８７】
本発明の他の特定の実施形態によれば、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド又はその立体異性体又はその酸付加塩は、病的インスリン抵抗性及びそれに関連する病的状態の治療において、及び糖尿病により誘導された病的に減少した末梢神経再生の同時の増加において用いられる。
【００８８】
本発明の化合物は、ヒト及び獣医治療の両方に適用することができる。
【００８９】
それゆえ、本発明の目的は、病的インスリン抵抗性の治療並びにそれに関連する病状の治療及び予防のための方法であって、患者に、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド又はその立体異性体を、その塩基又は酸付加塩の形態で投与する方法も含む。本発明の手順の好ましい実施形態はＮ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド又はその立体異性体、又はその酸付加塩を、糖尿病性網膜症、神経障害、又は腎障害を患う患者に投与する場合である。
【００９０】
本発明の別の特定の実施形態によれば、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド又はその立体異性体の１つ又はその酸付加塩は糖尿病により引きおこされる神経再生の病的減少の場合に患者に投与される。
【００９１】
本化合物の投与量は患者の状態及び病気に依存し１日の投与量は０．１〜４００mg／kg、好ましくは０．１〜１００mg／kgである。ヒトの治療において成人について、経口投与量は好ましくは１０〜３００mg、直腸投与の場合、１〜１５mg、非経口投与の場合１〜１５mgである。これらの投与量は、好ましくは投与量単位形態で投与され、それは、特定の場合、特に経口処理の場合、２〜３のより少い投与量に分けることができる。
【００９２】
好ましくは、ラセミ化合物の立体異性体、最も好ましくは（＋）エナンチオマーが用いられる。この場合、上述の範囲内でより少量の活性成分が治療のために十分である。
【００９３】
治療のために適した医薬調製物も本発明の対象である。これらの医薬組成物は、通常の補助物質及び担体に加えて、Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド又はその立体異性体の１つ、又はそれらの１つの酸付加塩を活性成分として含む。
【００９４】
本発明の医薬組成物は、ヒト又は獣医学的治療に通常用いられる固定又は流体調製物の形態で調製することができる。単純な又はコートされた錠剤、ドラジェー、顆粒、カプセル、溶液又はシロップは、経口投与のため、坐剤は直腸投与のため、凍結乾燥又は非凍結乾燥注入又は注射液は非経口投与のめたに調製することができる。これらは、通常の方法により生産することができる。経口的使用のための製品は、充填材料、例えば微結晶性セルロース、スターチ又はラクトース、滑剤、例えばステアリン酸又はステアリン酸マグネシウム、コーティング材料、例えば糖、フィルム形成材料、例えばヒドロキシメチルセルロース、芳香剤又は甘味剤、例えばメチルパラベン又はサッカリン、又は着色物質を含み得る。坐剤は、補助剤としてココアバター又はポリエチレングリコールを含み得る。非経口製品は、有効物質に加えて、塩類溶液、又は特定の場合、分散及び加湿剤、例えばプロピレングリコールを含み得る。
【００９５】
本発明は、以下の例に更に示される。
【００９６】
実施例１
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド（Ｚ）−２−ブテンジオエート（１：１）の調製
４０．４ｇ（０．１３６mol ）のＮ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジン−カルボキシイミドイルクロライドを２３８mlの氷酢酸及び１３．０ｇ（０．１３６mol ）のメタンスルホン酸の混合物に溶かした。６１．５ml（０．５９１mol ）の３０％過酸化水素溶液を６０℃で加えた。その反応混合物を６０℃で３．５〜４時間、撹拌した。その溶液を１０℃に冷やし次に９１mlの０．５Ｍ  Ｎａ2 Ｓ2 Ｏ5 溶液をそれに加えた。３１５mlの水−酢酸混合物をその溶液から蒸留して除き、２５０mlの４Ｎ  ＮａＯＨ溶液をその残留物に加え（pH＝１０．５５）、クロロホルムと共に振とうした。そのクロロホルム相を水で洗い、乾燥させ、木炭で処理し次にエバポレートした。その残留物に水を加え、イソプロピルエーテルで抽出し、次にクロロホルムで抽出した。そのクロロホルム相を乾燥させ、木炭で処理し、ろ過し、そして蒸発させて除いた。その残留物をアセトンに溶かし、マレイン酸で塩に変換した。その沈殿をろ過し、アセトンで洗って、乾燥させた。その生成物を煮騰エタノールから結晶化した。
【００９７】
収率：２０ｇ（３５％）
Ｍｐ．：１５０．５−１５４．５℃
1Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：ＤＭＳＯ；引用：ＤＭＳＯ；ν＝３００MHz ）［ppm ］：８．５５（ｓ，１Ｈ，２−ピリジン）；８．３５（ｄ，１Ｈ，６−ピリジン）；７．６８（ｄ，１Ｈ，４−ピリジン）；７．５５（ｍ，１Ｈ，５−ピリジン）；６．００（ｓ，２Ｈ，ＣＨ＝ＣＨ）；４．２３−４．４８（ｍ，３Ｈ，ＣＨ−ＯＨ及びＮＯＣＨ2 ）；２．９５−３．５０（ｍ，６Ｈ，３×ＮＣＨ2 ）；１．２０−１．９０（ｍ，６Ｈ，ピぺリジン：３×ＣＨ2 ）。
【００９８】
13Ｃ−ＮＭＲ（溶媒：ＤＭＳＯ；引用：ＤＭＳＯ；ν＝３００MHz ）［ppm ］：１６７．６（２Ｃ，２ＣＯＯＨ）；１４１．０（２−ピリジン）；１３６．８（６−ピリジン）；１３６．４（２Ｃ，ＣＨ＝ＣＨ）；１３３．４（ＣＣｌ）；１３１．９（３−ピリジン）；１２７．２（４−ピリジン）；１２３．６（５−ピリジン）；７７．９（ＮＯＣＨ2 ）；６３．６（ＣＨ2 Ｎ）；５８．３（ＣＨＯＨ）；５２．０−５５．０（２Ｃ，ピぺリジン：２×ＮＣＨ2 ）；２２．６、及び２１．７（３Ｃ，ピぺリジン：３×ＣＨ2 ）。
【００９９】
実施例２
（＋）−｜Ｒ｜−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド（Ｚ）−２−ブテンジオエート（１：１）の調製
実施例１に記載される手順を、ラセミ体Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジン−カルボキシイミドイルクロライドのかわりにそのＲエナンチオマーを用いたことを除いてくり返した。その化合物の純粋な形態は、ヘキサンとの結晶化により粗塩基から単離した。
【０１００】
収率：３１％
Ｍｐ．：９１−９３℃
ＩＲ（ＫＢｒ，cm-1）：３１６７（ｂｒ）；２８４０；２７１０；１５７５；１５６０；１４８０；１４４３（ｂｒ）；１２９３（ｓ）；１２７９（ｓ）；１０９３；１０５３；１０４３；１０２３（ｓ）；８３４（ｓ）；８１０；６８８  必要に応じてマレイン酸塩は、実施例１に記載されるように、アセトン溶液中で粗塩基から調製することもできる。
【０１０１】
収率：３３％
Ｍｐ．：１３２．０−１３３．０℃
エナンチオマー比：９８／２（Ｃｈｉｒａｌ  ＡＧＰ  １００×４mmカラムでのＨＰＬＣ測定）
1Ｈ−ＮＭＲ及び13Ｃ−ＮＭＲ：ラセミ化合物のスペクトルと同じ。
【０１０２】
実施例３
（−）−｜Ｓ｜−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルクロライド（Ｚ）−２−ブテンジオエート（１：１）の調製
ラセミ体Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキシ］−３−ピリジン−カルボキシイミドイルクロライドのかわりに、Ｓ−エナンチオマーを用いたことを除いて実施例１の手順に従った。
【０１０３】
収率：３４％
Ｍｐ：１３２．０−１３３．０℃
エナンチオマー比：９８／２（Ｃｈｉｒａｌ  ＡＧＰ  １００×４mmカラムでのＨＰＬＣ測定）
1Ｈ−ＮＭＲ及び13Ｃ−ＮＭＲ：ラセミ体化合物のスペクトルと同じ。
【０１０４】
実施例４
錠剤
（＋）−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−
プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミ
ドイルクロライド                                              ２０．０mg
コーンスターチ                                              １００．０mg
ラクトース                                                    ９５．０mg
タルク                                                          ４．５mg
ステアリン酸マグネシウム                                        ０．５mg
細かく粉砕した活性成分を補助材料と混合しその混合物をホモジナイズし、粒状化した。その顆粒を次に錠剤に圧縮した。
【０１０５】
実施例５
カプセル
（＋）−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−
プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミ
ドイルクロライドマレエート                                    ２０．０mg
微結晶性セルロース                                            ９９．０mg
アモルファス二酸化ケイ素                                        １．０mg
活性成分を補助材料と混合し、その混合物をホモジナイズし、そしてゼラチンカプセルに充填した。
【０１０６】
実施例６
ドラジェー
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキ
シ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルク
ロライドマレエート                                            ２５．０mg
ラクトース                                                    ８２．５mg
ポテトスターチ                                                ３３．０mg
ポリビニルピロリドン                                            ４．０mg
ステアリン酸マグネシウム                                        ０．５mg
活性成分及びポリビニルピロリドンをエタノールに溶かした。ラクトース及びポテトスターチの混合物を活性成分の粒状化溶液で均一に湿らせた。ろ過した後、その粒子を５０℃で乾燥させてふるいにかけた。ステアリン酸マグネシウムを加え、錠剤形態に圧縮し、次にそれを糖コーティングにより覆い、みつろうでつやを出した。
【０１０７】
実施例７
坐剤
（＋）−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−
プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミ
ドイルクロライド                                                ４．０mg
ココアバター                                                    ３．５ｇ
固体脂肪５０坐剤マス                                          １５．０ｇ
ココアバター及び坐剤マスを４０℃に加熱し、そして活性成分をその融解混合物中に分散させ、次にそのマスを坐剤鋳型に充填した。
【０１０８】
実施例８
溶液
（＋）−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−
プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミ
ドイルクロライド塩酸                                            ５００mg
ソルビトール                                                      １０ｇ
サッカリンナトリウム                                          ０．０５ｇ
２回蒸留水                                        q.s.ad        １００ml
実施例９
注射液
（＋）−Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−
プロポキシ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミ
ドイルクロライドマレエート                                          ２mg
生理食塩水、パイロジェンフリー、滅菌                    q.s.ad  ２．０ml
溶液を２ml容器に注ぎ、密閉した。
【０１０９】
実施例１０
注入液
５００mlの注入液を以下の組成で調製した：
Ｎ−［２−ヒドロキシ−３−（１−ピペリジニル）−プロポキ
シ］−ピリジン−１−オキシド−３−カルボキシイミドイルク
ロライドマレエート                                            ２０．０mg
生理食塩水、パイロジェンフリー、滅菌                    q.s.ad  ５００ml