(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で示されるポリエチレングリコール誘導体。
【化１】
0004723380.tif 000016
（式（１）中、Ａは芳香環であり、Ｒ1およびＲ2は互いに独立に炭素数１０〜２５のアルキル基またはアルケニル基である。ＸおよびＹは互いに独立にＯ、Ｓ、ＣＯＯ、ＯＣＯ、ＣＯＮＨまたはＮＨＣＯであり、ｍは１から６までの自然数を示す。ｎは１０から３００までの自然数を示す。ＬはＯＣＯＮＨ（カルバメート結合）またはＯＣＯ（エステル結合）であり、Ｂは水酸基、アルコキシ基またはベンジルオキシ基である。）
【請求項２】
前記一般式（１）において、Ａはベンゼン環である請求の範囲第１項に記載のポリエチレングリコール誘導体。
【請求項３】
前記一般式（１）において、Ｒ１およびＲ２は互いに独立に炭素数１２〜１８のアルキル基またはアルケニル基である請求の範囲第１項または第２項に記載のポリエチレングリコール誘導体。
【請求項４】
前記一般式（１）において、ＸおよびＹはともにＯである請求の範囲第１項ないし第３項のいずれかに記載のポリエチレングリコール誘導体。
【請求項５】
前記一般式（１）において、Ａはベンゼン環であり、Ｒ１およびＲ２は炭素数１５のアルキル基であり、ＸおよびＹはＯであり、ｍは１である請求の範囲第１項ないし第４項のいずれかに記載のポリエチレングリコール誘導体。
【請求項６】
下記一般式（２）で示されるポリエチレングリコール誘導体。
0004723380.tif 000017
（式（２）中、Ａ’は芳香環であり、Ｒ３およびＲ４は互いに独立に炭素数１０〜２５のアルキル基またはアルケニル基である。ｐは０または１から６までの自然数を示す。ｑは１０から３００までの自然数を示す。Ｌ’はＯＣＯＮＨ（カルバメート結合）またはＯＣＯ（エステル結合）であり、Ｂ’は水酸基、アルコキシ基またはベンジルオキシ基である。）
【請求項７】
前記一般式（２）において、Ａ’はベンゼン環である請求の範囲第６項に記載のポリエチレングリコール誘導体。
【請求項８】
前記一般式（２）において、Ｒ３およびＲ４は互いに独立に炭素数１２〜１８のアルキル基またはアルケニル基である請求の範囲第６項または第７項のポリエチレングリコール誘導体。
【請求項９】
前記一般式（２）において、Ａ’はベンゼン環であり、Ｒ３およびＲ４は炭素数１８のアルキル基であり、ｐは１である請求の範囲第６項ないし第８項のいずれかのポリエチレングリコール誘導体。
【請求項１０】
請求の範囲第１項ないし第９項のいずれかに記載のポリエチレングリコール誘導体を膜構成成分の一つとして含有する薬物担体。
【請求項１１】
前記薬物担体は、リポソーム、リピッドマイクロスフィアおよび高分子マイクロスフィアからなる群から選ばれる少なくとも一つである請求の範囲第１０項に記載の薬物担体。
【請求項１２】
前記薬物担体は、リン脂質およびその誘導体、リン脂質以外の脂質およびその誘導体、コレステロール類および表面修飾剤からなる群から選ばれる少なくとも一つを含有する請求の範囲第１０項または第１１項に記載の薬物担体。
【請求項１３】
さらに安定化剤および酸化防止剤からなる群から選ばれる少なくとも一つを含有する請求の範囲第１０項ないし第１２項のいずれかに記載の薬物担体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なポリエチレングリコール誘導体およびこれを膜構成成分の一つとして含有する薬物担体に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、薬物を効率よく目的臓器へ分布させるドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）の研究が盛んになってきている。例えば、リポソーム、エマルジョン、リピッドマイクロスフェア、ナノパーテイクルなどの閉鎖小胞を薬物運搬体として利用する方法、高分子合成ポリマーミセルや多糖等の高分子運搬体に薬物を包含または結合させる方法、さらに、これら閉鎖小胞や高分子運搬体に抗体、蛋白質等の高分子機能性分子や、特定の糖鎖、ペプチド等の低分子機能性分子で表面を修飾して標的指向性を高める方法などが挙げられる（キャンサー  レターズ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ），米国，１９９７年，第１１８巻，第２号，ｐ．１５３；ブリティッシュ  ジャーナル  オブ  キャンサー（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ），英国，１９９７年，第７６巻，第１号，ｐ．８３参照）。
【０００３】
しかしながら、これら薬物運搬体（以下、「薬物担体」ともいう。）の実用化に際しては、克服すべき様々な問題点があり、中でも生体側の異物認識機構からの回避や、体内動態の制御の困難さが問題となっている。特に閉鎖小胞は、血液中のオプソニン蛋白質や血しょう蛋白質との相互作用による凝集や、肝臓、脾臓等の細網内皮系組織（ＲＥＳ）での捕捉のため、標的とする組織や細胞への選択性の高い送達が困難な状況であった。
上記問題を解決する手段として、これら閉鎖小胞をはじめとする高分子運搬体の表面をポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の親水性高分子で被覆することにより、血しょう蛋白やオプソニン蛋白質などの吸着を防止して血中安定性を高め、ＲＥＳでの捕捉を回避することが可能となっている。
【０００４】
しかしながら、このような目的に用いられ、商業的に入手可能なＰＥＧ脂質は、ポリエチレングリコールとジアシルフォスファチジルエタノールアミンよりなるリン脂質誘導体（ＰＥＧ−ＰＥ）であり、リン酸基部分により負に荷電している。そのため、薬物担体の負の表面電荷は、細胞との相互作用を低下させてしまうことがある（ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）ら，米国，バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）,１９９８年，第３７巻，ｐ．１２８７５）。
また、標的細胞への薬物担体の接着性を向上させるために、ステアリルアミン等のカチオン化脂質を配合することが行われているが、負に荷電したＰＥＧ−ＰＥを配合すると、カチオン化脂質の効果を低下させてしまう。
【０００５】
このような問題を解決するため、上記目的に使用可能な電荷を持たないＰＥＧ脂質が報告されている（特表平１０−５０６６２２号公報、特表２００３−５０５４０１号公報参照）。しかしながら、これらのＰＥＧ脂質は、分子構造に不斉分子を含むなど構造が複雑であるため、製造するのに費用がかかる。そのため、上記目的に使用可能な電荷を持たないＰＥＧ脂質として、より単純な構造を有するＰＥＧ脂質が切望されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、本発明は、標的とする部位に確実に、効率良くかつ安全に薬物のターゲッティングを行うことができ、ＤＤＳ製剤として有効である薬物担体、および該薬物担体の膜構成成分をなす新規の電荷を持たないポリエチレングリコール誘導体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記の課題を解決するため、本発明は下記（１）〜（２２）を提供する。
（１）下記一般式（ａ）で示されるポリエチレングリコール誘導体。
【化１】
0004723380.tif 000002
式（ａ）中、Ａは芳香環であり、Ｒ1およびＲ2は互いに独立に炭素数１０〜２５のアルキル基またはアルケニル基である。ＸおよびＹは互いに独立にＯ、Ｓ、ＣＯＯ、ＯＣＯ、ＣＯＮＨまたはＮＨＣＯであり、ｍは１から６までの自然数を示す。ｎは１０から３００までの自然数を示す。ＬはＯＣＯＮＨ（カルバメート結合）またはＯＣＯ（エステル結合）であり、Ｂは水酸基、アルコキシ基またはベンジルオキシ基である。
（２）上記一般式（ａ）において、Ａはベンゼン環である（１）に記載のポリエチレングリコール誘導体。
（３）上記一般式（ａ）において、Ｒ1およびＲ2は互いに独立に炭素数１２〜１８のアルキル基またはアルケニル基である（１）または（２）のポリエチレングリコール誘導体。
（４）上記一般式（ａ）において、ＸおよびＹはいずれもＯである（１）ないし（３）のいずれかのポリエチレングリコール誘導体。
（５）上記一般式（ａ）において、Ａはベンゼン環であり、Ｒ1およびＲ2は炭素数１５のアルキル基であり、ＸおよびＹはＯであり、ｍは１である（１）ないし（４）のいずれかのポリエチレングリコール誘導体。
【０００８】
（６）下記一般式（ｂ）で示されるポリエチレングリコール誘導体。
【化２】
0004723380.tif 000003
式（ｂ）中、Ａ’は芳香環であり、Ｒ3およびＲ4は互いに独立に炭素数１０〜２５のアルキル基またはアルケニル基である。ｐは０または１から６までの自然数を示す。ｑは１０から３００までの自然数を示す。Ｌ’はＯＣＯＮＨ（カルバメート結合）またはＯＣＯ（エステル結合）であり、Ｂ’は水酸基、アルコキシ基またはベンジルオキシ基である。
（７）上記一般式（ｂ）において、Ａ’はベンゼン環である（６）に記載のポリエチレングリコール誘導体。
（８）上記一般式（ｂ）において、Ｒ3およびＲ4は互いに独立に炭素数１２〜１８のアルキル基またはアルケニル基である（６）または（７）のポリエチレングリコール誘導体。
（９）上記一般式（ｂ）において、Ａ’はベンゼン環であり、Ｒ3およびＲ4は炭素数１８のアルキル基であり、ｐは１である（６）ないし（８）のいずれかのポリエチレングリコール誘導体。
【０００９】
（１０）（１）ないし（９）のいずれかのポリエチレングリコール誘導体を構成成分の一つとして含有する薬物担体。
（１１）前記薬物担体は、リポソーム、リピッドマイクロスフィアおよび高分子マイクロスフィアからなる群から選ばれる少なくとも一つである（１０）の薬物担体。
（１２）前記薬物担体は、リン脂質およびその誘導体、リン脂質以外の脂質およびその誘導体、コレステロール類および表面修飾剤からなる群から選ばれる少なくとも一つを含有する（１０）または（１１）の薬物担体。
（１３）さらに安定化剤および酸化防止剤からなる群から選ばれる少なくとも一つを含有する（１０）ないし（１２）のいずれかの薬物担体。
（１４）担持される薬物が、核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびその類縁体、抗癌剤、抗生物質、酵素剤、酵素阻害剤、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、抗炎症剤、ステロイド剤、血管拡張剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体拮抗剤、平滑筋細胞の増殖および／または遊走阻害剤、血小板凝集阻害剤、抗凝固剤、ケミカルメディエーターの遊離抑制剤、血管内皮細胞の増殖または抑制剤、アルドース還元酵素阻害剤、メサンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤、メイラード反応抑制剤、アミロイドーシス阻害剤、ＮＯＳ阻害剤、ＡＧＥｓ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ）阻害剤、ラジカルスカベンチャー、グリコサミノグリカンおよびその誘導体、オリゴ糖および／または多糖およびそれらの誘導体、タンパク質およびペプチドからなる群から選択される少なくとも一つである（１０）ないし（１３）のいずれかの薬物担体。
（１５）担持される薬物が、Ｘ線造影剤、放射性同位元素標識核医学診断薬および核磁気共鳴診断用診断薬からなる群から選ばれる少なくとも一つの体内診断薬である（１０）ないし（１４）のいずれかの薬物担体。
【００１０】
（１６）（１０）〜（１５）のいずれかの薬物担体を含有する医薬組成物。
（１７）（１０）〜（１５）のいずれかの薬物担体を宿主に投与することを含む、薬物担体に担持された薬物の標的部位への送達方法。
（１８）（１０）〜（１５）のいずれかの薬物担体を宿主に投与することを含む、薬物担体の標的部位への輸送方法。
（１９）予防および／または治療有効量の、（１０）〜（１５）のいずれかの薬物担体を宿主に投与することを含む疾患の予防および／または治療方法。
（２０）有効量の、（１０）〜（１３）または（１５）のいずれかの薬物担体を宿主に投与することを含む疾患の診断方法。
（２１）有効量の、（１０）〜（１５）のいずれかの薬物担体を含有する、薬物担体に担持された薬物を標的部位へ送達させるための組成物。
（２２）有効量の、（１０）〜（１５）のいずれかの薬物担体を含有する、薬物担体を標的部位へ輸送させるための組成物。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、薬物担体の膜構成成分として使用可能な新規の電荷を持たないポリエチレングリコール誘導体が提供される。本発明のポリエチレングリコール誘導体を膜構成成分の一つとして含有する薬物担体は、血中滞留性に優れている。また、本発明のポリエチレングリコール誘導体と、カチオン化脂質とを構成成分として含む薬物担体は、後述する実施例および試験例に示すように、標的細胞に対して良好な結合性を有する。
このような特徴から、本発明のポリエチレングリコール誘導体を膜構成成分の一つとして含有する薬物担体、および該薬物担体を含有する医薬組成物は、疾患の治療および／または診断に優れた効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、試験例１において、実施例２、および参考例１で調製したリポソーム（修飾率（総脂質量に対するＰＥＧ誘導体量の比率）１％）の細胞への結合量を比較したグラフである。
【図２】図２は、試験例２において、実施例４、および参考例２で調製したリポソーム（修飾率（総脂質量に対するＰＥＧ誘導体量の比率）１％）の細胞への結合量を比較したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明のポリエチレングリコール誘導体（以下、「ＰＥＧ誘導体」ともいう。）および該ＰＥＧ誘導体を膜構成成分の一つとして含有する薬物担体について詳細に説明する。
本発明では、下記一般式（１）で示されるポリエチレングリコール誘導体（ＰＥＧ誘導体（Ａ））が提供される。
【化３】
0004723380.tif 000004
【００１４】
式（１）中、Ａは芳香環である。ここで、芳香環としては、ベンゼン環以外に、インデン、ナフタリン、テトラリン、アントラセン、フェナントレンのような縮合環であってもよい。但し、好ましくはベンゼン環である。
Ｒ1およびＲ2は、互いに独立に炭素数１０〜２５のアルキル基またはアルケニル基であり、好ましくは互いに独立に炭素数１２〜１８のアルキル基またはアルケニル基である。
ＸおよびＹは、互いに独立にＯ、Ｓ、ＣＯＯ、ＯＣＯ、ＣＯＮＨまたはＮＨＣＯであり、好ましくはＸおよびＹはともにＯである。
ｍは、１から６までの自然数であり、好ましくは１から３の自然数である。
ｎは、１０から３００までの自然数を示し、好ましくｎは２０から２００までの自然数であり、より好ましくは３０から１５０までの自然数である。
Ｌは、ＯＣＯＮＨ2（カルバメート結合）またはＯＣＯ（エステル結合）であり、好ましくはカルバメート結合である。
Ｂは、水酸基、アルコキシ基またはベンジルオキシ基であり、好ましくはメトキシ基である。
【００１５】
したがって、上記一般式（１）で示されるＰＥＧ誘導体（Ａ）において、Ａがベンゼン環であり、Ｂがメトキシ基であり、ＸおよびＹはともにＯであり、ｍが１であることが好ましい。このようなＰＥＧ誘導体（Ａ）の具体例としては、モノメトキシポリエチレングリコール−ジアルコキシベンジルカルバメートが挙げられる。
【００１６】
さらには、上記一般式（１）で示されるＰＥＧ誘導体（Ａ）は、Ａがベンゼン環であり、Ｒ1およびＲ2がともに炭素数１５のアルキル基であり、ＸおよびＹがともにＯであり、ｍが１であることが好ましい。このようなＰＥＧ誘導体（Ａ）の具体例としては、下記の構造式で示されるモノメトキシポリエチレングリコール−３，５−ジペンタデシロキシベンジルカルバネートが挙げられる。
【化４】
0004723380.tif 000005
【００１７】
上記一般式（１）で示されるＰＥＧ誘導体（Ａ）は、例えば下記一般式（３）で表わされる化合物のアミノ基に、下記一般式（４）で表される化合物（Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１１，１４１）を導入することにより、製造することができる。
【化５】
0004723380.tif 000006
【化６】
0004723380.tif 000007
式（３）中、Ａは芳香環であり、Ｒ1およびＲ2は互いに独立に炭素数１０〜２５のアルキル基またはアルケニル基である。ＸおよびＹは互いに独立にＯ、Ｓ、ＣＯＯ、ＯＣＯ、ＣＯＮＨまたはＮＨＣＯであり、ｌは１から６までの自然数を示す。
式（４）中、ｎは１０から３００までの自然数を示す。Ｂは水酸基、アルコキシ基またはベンジルオキシ基である。
【００１８】
一般式（３）の化合物は、一般的な合成方法により合成することができる。例えば、一例として下記のようにエーテル化合物（Ｘ，Ｙ＝Ｏ）は、ジヒドロキシ芳香環カルボン酸誘導体のカルボン酸部分をエステル化し、次いでアルキル基またはアルケニル基をエーテル結合で導入し、さらにエステル部分を水酸基に還元後、水酸基をアミノ基に変換することにより合成することができる。
【化７】
0004723380.tif 000008
ここで、式（５）中、Ａは芳香環であり、ｍは０または１から５までの自然数を示す。式（６）中、Ａは芳香環であり、Ｒ1およびＲ2は互いに独立に炭素数１０〜２５のアルキル基またはアルケニル基であり、ｍは０または１から５までの自然数を示す。式（７）中、Ａは芳香環であり、Ｒ1およびＲ2は互いに独立に炭素数１０〜２５のアルキル基またはアルケニル基であり、ｌは１から６までの自然数を示す。
【００１９】
一般式（４）の化合物は、一般的な方法により合成することができる。例えば、Ｖｅｒｏｎｅｓｅらの方法（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １１，１４１，１９８５）により合成できる。
一般式（４）の化合物の合成原料に用いるポリエチレングリコールは、商業的に購入が可能であり、式（４）において、ｎが１０から３０までの自然数であることから、ポリエチレングリコールの数平均分子量は、約５００から約１３０００である。以下、平均分子量といった場合、数平均分子量をさす。また、数平均分子量は、各成分分子のモル分率による分子量の平均をさす。
【００２０】
上記手順で合成された一般式（１）のＰＥＧ誘導体（Ａ）は、クロマトグラフィー、再結晶などの通常の精製手段により単離採取することができる。なお、一般式（１）のＰＥＧ誘導体（Ａ）の製造方法および精製方法は、上記に限定されるものではない。
一般式（１）のＰＥＧ誘導体（Ａ）は、荷電を有しないため薬物担体の膜構成成分として好適に使用される。
【００２１】
また、本発明では、下記一般式（２）で示されるポリエチレングリコール誘導体（以下、「ＰＥＧ誘導体（Ｂ）」ともいう）が提供される。
【化８】
0004723380.tif 000009
【００２２】
式（２）中、Ａ’は芳香環である。ここで、芳香環としては、ベンゼン環以外に、インデン、ナフタリン、テトラリン、アントラセン、フェナントレンのような縮合環であってもよい。但し、好ましくはベンゼン環である。
Ｒ3およびＲ4は、互いに独立に炭素数１０〜２５のアルキル基またはアルケニル基であり、好ましくは互いに独立に炭素数１２〜１８のアルキル基またはアルケニル基である。
ｐは、０または１から６までの自然数であり、好ましくは１から３の自然数である。
ｑは、１０から３００までの自然数を示し、好ましくｎは２０から２００までの自然数であり、より好ましくは３０から１５０までの自然数である。
Ｌ’は、ＯＣＯＮＨ2（カルバメート結合）またはＯＣＯ（エステル結合）であり、好ましくはカルバメート結合である。
Ｂ’は、水酸基、アルコキシ基またはベンジルオキシ基であり、好ましくはメトキシ基である。
【００２３】
したがって、上記一般式（２）で示されるＰＥＧ誘導体（Ｂ）において、Ａ’がベンゼン環であり、Ｂ’がメトキシ基であり、Ｒ3およびＲ4は、互いに独立したアルキル基であり、ｐが１であることが好ましい。このようなアミド化合物の具体例としては、４−（Ｎ’−（メトキシポリエチレングリコールカルボニル）２−アミノエチル）Ｎ，Ｎ−ジアルキルベンズアミドが挙げられる。
【００２４】
さらには、上記一般式（２）で示されるアミド化合物は、Ａ’がベンゼン環であり、Ｒ3およびＲ4がともに炭素数１８のアルキル基であり、ｐが１であることが好ましい。このようなアミド化合物の具体例としては、下記の構造式で示される４−（Ｎ’−（メトキシポリエチレングリコールカルボニル）２−アミノエチル）Ｎ，Ｎ−ジステアロイルベンズアミドが挙げられる。
【化９】
0004723380.tif 000010
【００２５】
上記一般式（２）で示されるＰＥＧ誘導体（Ｂ）は、例えば下記一般式（８）で表わされる化合物のアミノ基に、下記一般式（９）で表される化合物を導入することにより、製造することができる。
【化１０】
0004723380.tif 000011
【化１１】
0004723380.tif 000012
式（８）中、Ａ’は芳香環であり、Ｒ3およびＲ4は互いに独立に炭素数１０〜２５のアルキル基またはアルケニル基である。ｐは０または１から６までの自然数を示す。
式（９）中、ｑは１０から３００までの自然数を示す。Ｂ’は水酸基、アルコキシ基またはベンジルオキシ基である。
【００２６】
一般式（８）の化合物は、一般的な合成方法により合成することができる。例えば、一例として下記のようにアミノ化合物は、アミノアルキル芳香環カルボン酸誘導体のアミノ基を適当な保護基（Ｔｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ著「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」３rd  ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ）で保護した後、アミノアルキル芳香環カルボン酸誘導体のカルボン酸部分とアルキルアミン誘導体の縮合反応によりアミド結合を形成し、次いでアミノ基を脱保護することにより合成することができる。
【化１２】
0004723380.tif 000013
ここで、式（１０）中、Ａ’は芳香環であり、ｐは０または１から５までの自然数を示す。式（１１）中、Ａ’は芳香環であり、ｐは０または１から５までの自然数であり、Ｐは、保護基を示す。式（１２）中、Ｒ3およびＲ4は互いに独立に炭素数１０〜２５のアルキル基またはアルケニル基を示す。式（１３）中、Ａ’は芳香環であり、Ｒ3およびＲ4は互いに独立に炭素数１０〜２５のアルキル基またはアルケニル基であり、ｐは０または１から５までの自然数を示す。
【００２７】
カルボン酸誘導体とアミン誘導体の反応において、カルボン酸活性化剤としては、例えば塩化チオニル、五塩化リン、クロロギ酸エステル（クロロギ酸メチル、クロロギ酸エチル）、塩化オキサリル、カルボジイミド類（例えば、Ｎ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＷＳＣ））、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）などがあげられる。このとき、カルボジイミド類とＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、４−ジメチルアミノピリジンまたはヒドロキシコハク酸イミドを併用してもよい。この反応は通常、例えば塩化メチレン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン、ジメチルエーテル、ジエチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ、Ｎ−ジメチルアセトアミドまたはこれらの混合溶媒などの存在下に行われる。反応温度は通常−１０℃〜５０℃である。
【００２８】
一般式（９）の化合物は、一般的な方法により合成することができる。例えば、Ｖｅｒｏｎｅｓｅらの方法（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １１，１４１，１９８５）により合成できる。
一般式（９）の化合物の合成原料に用いるポリエチレングリコールは、商業的に購入が可能であり、式（９）において、ｑが１０から３０までの自然数であることから、ポリエチレングリコールの数平均分子量は、約５００から約１３０００である。以下、平均分子量といった場合、数平均分子量をさす。また、数平均分子量は、各成分分子のモル分率による分子量の平均をさす。
【００２９】
上記手順で合成された一般式（２）のＰＥＧ誘導体（Ｂ）は、クロマトグラフィー、再結晶などの通常の精製手段により単離採取することができる。なお、一般式（２）のＰＥＧ誘導体（Ｂ）の製造方法および精製方法は、上記に限定されるものではない。
一般式（２）のＰＥＧ誘導体（Ｂ）は、荷電を有しないため薬物担体の膜構成成分として好適に使用される。
【００３０】
本発明の薬物担体は、上記一般式（１）で示されるＰＥＧ誘導体（Ａ）または一般式（２）で示されるＰＥＧ誘導体（Ｂ）を膜構成成分の一つとして含有する。本発明において、薬物担体とは、脂質を膜基本構成材料とする小球状の構造であって、疾患の診断用および／または治療用の薬物を担持可能なものを指す。
【００３１】
本発明の薬物担体における式（１）のＰＥＧ誘導体（Ａ）または式（２）のＰＥＧ誘導体（Ｂ）の含有量は、薬物担体を構成する総脂質量に対する比率で、通常０．１〜２０ｍｏｌ％で存在することができ、好ましくは０．１〜５ｍｏｌ％、より好ましくは０．５〜５ｍｏｌ％である。総脂質量とは、薬物担体を構成するすべての脂質の量であり、後述する表面修飾剤の量も総脂質量に含む。総脂質は、式（１）のＰＥＧ誘導体（Ａ）または式（２）のＰＥＧ誘導体（Ｂ）を除いた薬物担体の膜構成成分を意味し、モル濃度（ｍＭ）で表示される。つまり総脂質とは、後述する膜基本構成材料をなすリン脂質、リン脂質以外の脂質、またはコレステロール類を含み、さらにその他に表面修飾剤を含む場合にはこの表面修飾剤をも含み、その量はモル濃度で表される。なお、本発明において、総脂質量に対するＰＥＧ誘導体（Ａ）または（Ｂ）の量の比率を「修飾率」とよぶこともある。
【００３２】
本発明の薬物担体は、上記式（１）のＰＥＧ誘導体（Ａ）または式（２）のＰＥＧ誘導体（Ｂ）を構成成分の一つとして含有し、他の構成成分は制限されない。他の構成成分としては、後述するような膜基本構成材料としての脂質およびその誘導体、その他に表面修飾剤を含んでもよく、さらに安定化剤、酸化防止剤などの他の成分を含むこともできる。一方、本発明の薬物担体は上記式（１）のＰＥＧ誘導体（Ａ）または式（２）のＰＥＧ誘導体（Ｂ）のみを構成成分として含有することもできる。また、ＰＥＧ誘導体（Ａ）または（Ｂ）と膜基本構成材料のみを構成成分として含有することもできる。その場合に、膜基本構成材料としてリン脂質のみ、リン脂質以外の脂質のみ、またはコレステロール類のみを含有することもでき、あるいはそれらの組合わせのみを含有することもできる。
【００３３】
本発明の薬物担体は、薬物を担持することのできる構造を有していればその形態は特に限定されず、様々な形態をとることができる。具体的には、その内部に薬物を高濃度封入することのできる潜在的機能を有する、リポソーム、リピッドマイクロスフェアおよび高分子マイクロスフェアのうちより選ばれる少なくとも一種からなることが望ましい。
これらのうちでも好ましい形態例は、脂質分子の疎水性基と親水性基の極性に基づいて生ずる膜により外界から隔てられた空間を形成する構造を有する閉鎖小胞であり、具体的にリポソームが挙げられる。
【００３４】
リポソームは、リン脂質を基本とする脂質二重層からなる閉鎖小胞である。リピッドマイクロスフェアとは水と油の一方を他方中に乳化させてなる閉鎖小胞である。高分子マイクロスフェアは高分子を乳化させた後、変性、化学的架橋、放射線重合、液中乾燥等の操作によって固化させることよりなる閉鎖小胞である。
本発明では、薬物担体の特に好ましい形態例としてリポソームが挙げられる。
【００３５】
本発明の薬物担体の大きさは特に限定されないが、球状またはそれに近い形態をとる場合には、粒子外径の直径が、０. ０２〜２５０μｍ、好ましくは０. ０３〜０. ４μｍ、より好ましくは０. ０５〜０．２μｍが好ましい。粒子外径の直径とは、光散乱法により測定される薬物担体全粒子の直径の平均値である。
【００３６】
上記式（１）のＰＥＧ誘導体（Ａ）または式（２）のＰＥＧ誘導体（Ｂ）とともに薬物担体を構成する他の成分としては、上記の形態を安定的に形成できるものであれば特に限定されないが、その安全性、生体内における安定性などを考慮すると、薬物担体は、膜構成成分として、脂質、その誘導体および表面修飾剤から選ばれる少なくとも１つを含むことが望ましい。特に膜の基本構成材料として、通常、脂質を含むことが好ましい。脂質としては、リン脂質、リン脂質以外の脂質、またはコレステロール類であり、それらの誘導体であってもよい。
【００３７】
リン脂質としては、フォスファチジルコリン（＝レシチン）、フォスファジルグリセロール、フォスファチジン酸、フォスファチジルコリン、フォスファチジルエタノールアミン、フォスファチジルセリン、フォスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、カルジオリビン等の天然あるいは合成のリン脂質、またはこれらの常法にしたがって水素添加したもの等を挙げることができる。
コレステロール類としては、特に限定されないがコレステロールやコレスタノール等を挙げることができる。
リン脂質以外の脂質としては、リン酸を含まない脂質が挙げられ、特に限定されないがグリセロ糖脂質、スフィンゴ糖脂質等を挙げることができる。
【００３８】
表面修飾剤とは、薬物担体の膜構成成分である脂質の構造や物性を変化させて、薬物担体の膜に所望の特性を付与するために使用される。したがって、表面修飾剤は薬物担体の膜構成成分の一つとして使用することができる。表面修飾剤としては、特に限定されないが、脂質と脂質に結合した化合物とからなる物質などが挙げられる。「脂質に結合する化合物」は、特に限定されないが親水性高分子、水溶性多糖類の誘導体または塩基性官能基を有する化合物などが挙げられる。
【００３９】
「親水性高分子」としては、特に限定されないがポリエチレングリコール、フィコール、ポリビニルアルコール、スチレン−無水マレイン酸交互共重合体、ジビニルエーテル−無水マレイン酸交互共重合体、合成ポリアミノ酸などが挙げられる。「水溶性多糖類の誘導体」としては、特に限定されないがグルクロン酸、シアル酸、デキストラン、プルラン、アミロース、アミロペクチン、キトサン、マンナン、シクロデキストリン、ペクチン、カラギーナンなどが挙げられる。表面修飾剤が親水性高分子または水溶性多糖を含む場合、親水性高分子または水溶性多糖が結合する脂質としては、特に限定されないが疎水性の領域を有する化合物（疎水性化合物）を使用することができる。疎水性の領域を有する化合物としては、特に限定されないが長鎖脂肪族アルコール、ステロール、ポリオキシプロピレンアルキル、またはグリセリン脂肪酸エステル等が挙げられる。例えば、親水性高分子がポリエチレングリコールであり疎水性化合物がジステアロイルフォスファチジルエタノールアミンである場合、表面修飾剤はポリエチレングリコール−ジステアロイルフォスファチジルエタノールアミンである。
【００４０】
たとえば、薬物担体がリポソームである場合を例に説明すると、疎水性化合物を含む表面修飾剤を用いた場合、疎水性化合物の少なくとも疎水性領域が、リポソームの脂質二重層の膜の中に安定化される。その結果、脂質二重層の膜表面上（薬物担体の外表面上および／または内表面上）に、疎水性化合物に結合した親水性高分子または水溶性多糖を存在させることができる。そうすることによって薬物担体の膜を修飾することが可能となり、その結果、薬物担体の血中安定性を高める等の効果がある。
【００４１】
「塩基性官能基」としては、特に限定されないがアミノ基、アミジノ基、グアジニノ基などが挙げられる。塩基性官能基を有する化合物としてはＤＯＴＭＡ（特許第６１１６１２４６号公報）、ＤＯＴＡＰ（特許第５５０８６２６号公報）、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ（特許第２２９２２４６号公報）、ＴＭＡＧ（特許第４１０８３９１号公報）、３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩（国際公開第９７／４２１６６号パンフレット）、ＤＯＳＰＡ、ＴｆｘＴＭ−５０、ＤＤＡＢ、ＤＣ−ＣＨＯＬ、ＤＭＲＩＥ等公知の化合物が挙げられる。
表面修飾剤が塩基性官能基を含む場合、すなわち表面修飾剤が、脂質に塩基性官能基を有する化合物が結合した物質である場合、これをカチオン化脂質と呼ぶ。薬物担体がリポソームである場合を例に説明すると、カチオン化脂質は、その脂質部分がリポソームの脂質二重層の膜の中に安定化され、塩基性官能基部分を該脂質二重層の膜表面上（担体の外表面上および／または内表面上）に存在させることができる。そうすることによって薬物担体の膜を修飾することが可能となり、その結果、標的細胞との接着性等を高めることができる。
【００４２】
本発明の薬物担体は、荷電を有しない本発明のＰＥＧ誘導体（Ａ）または（Ｂ）を構成成分とするため、表面修飾剤としてカチオン化脂質を使用した場合、カチオン化脂質による修飾効果が阻害されない。
本発明の薬物担体は、疾患の診断用および／または治療用の薬物を担持して使用することができる。ここで、「担持」とは、薬物担体の閉鎖空間内に薬物が封入された状態、薬物担体の膜中、例えばリポソームの場合には脂質二重層内、に薬物の一部または全ての部分が含まれている状態、または薬物担体の外表面に薬物が付着した状態であることを意味する。
なお、「担持率」とは薬物担体の膜構成材料と薬物とを混入し、薬物担体を形成する際に、混入した薬物と担持された薬物との割合をいう。
「血中滞留性」とは薬物担体を投与した宿主において、薬物担体に担持された状態の薬物が血液中に存在する性質を意味する。
【００４３】
本発明において、薬物担体に担持可能な治療用の薬物としては、具体的には、核酸、ポリヌクレオチド、遺伝子およびその類縁体、抗癌剤、抗生物質、酵素剤、抗酸化剤、脂質取り込み阻害剤、ホルモン剤、抗炎症剤、ステロイド剤、血管拡張剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、アンジオテンシン受容体拮抗剤、平滑筋細胞の増殖・遊走阻害剤、血小板凝集阻害剤、抗凝固剤、ケミカルメディエーターの遊離阻害剤、血管内皮細胞の増殖促進または抑制剤、アルドース還元酵素阻害剤、メサンギウム細胞増殖阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、抗ウイルス剤、メイラード反応抑制剤、アミロイドーシス阻害剤、一酸化窒素合成阻害剤、ＡＧＥｓ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ）阻害剤、ラジカルスカベンチャー、タンパク質、ペプチド、グリコサミノグリカンおよびその誘導体、オリゴ糖および多糖およびそれらの誘導体等が挙げられる。
【００４４】
抗癌剤としては、特に限定されないがネダプラチン、ドセタキセル、塩酸ゲムシタビン、シクロホスファミド、イホスファミド、塩酸ナイトロジェンマスタード−Ｎ−オキシド、チオテパ、ブルスファン、カルボコン、塩酸ニムスチン、ラニムスチン、メルファラン、トシル酸インプロスルファン、ダカルバジン、塩酸プロカルバジン、シタラビン、シタラビンオクスファート、エノシタビン、メルカプトプリン、チオイノシン、フルオロウラシル、ドキシフルリジン、テガフール、メトトレキサート、カルモフール、ヒドロキシカルバミド、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンデシン、エトポシド、クロモマイシンＡ３ 、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、塩酸アラクルビシン、ピラルビシン、塩酸エピルビシン、ダクチノマイシン、塩酸ミトキサントロン、塩酸ブレオマイシン、硫酸ペプロマイシン、マイトマイシンＣ、ネオカルノスタチン、Ｌ−アスパラギナーゼ、アセグラトンミトプロニトール、デキストラン硫酸ナトリウム、酢酸オクトレオチド、シスプラチン、カルボプラチン、クエン酸タモキシフェン、酢酸メドロキシプロゲステロン、リン酸エストラムスチンナトリウム、酢酸ゴセレリン、酢酸リュープロレリン、塩酸イリノテカン、パクリタキセルなどが挙げられる。これらの抗癌剤のうちでも、特に好ましいのはパクリタキセル、ドセタキセル、塩酸イリノテカン、塩酸ゲムシタビン、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチンなどである。
【００４５】
抗生物質としては、特に限定されないがベンジルペニシリンカリウム、ベンジルペニシリンベンザチン、フェノキシメチルペニシリンカリウム、フェネチシリンカリウム、クロキサシリンナトリウム、フルクロキサシリンナトリウム、アンピシリン、トシル酸スルタミシリン、塩酸バカンピシリン、塩酸タランピシリン、レナンピシリン、ヘタシリンカリウム、シクラシリン、アモキシシリン、塩酸ピブメシリナム、アスポキシシリン、カルベニシリンナトリウム、カリンダシリンナトリウム、スルベニシリンナトリウム、チカルシリンナトリウム、ピペラシリンナトリウム、セファロリジン、セファロチンナトリウム、セファゾリンナトリウム、セファピリンナトリウム、セフラジン、セファレキシン、セファトリジンプロピレングリコール、セフロキサジン、セファクロル、セファドロキシル、塩酸セフォチアム、塩酸セフォチアムヘキセチル、セフロキシムナトリウム、セフロキシムアキセチル、セファマンドールナトリウム、セフジニル、塩酸セフェタメトピポキシル、セフチプテン、セフメタゾールナトリウム、セフォキシチンナトリウム、セフォテタンナトリウム、セフミノクスナトリウム、セフプペラゾンナトリウム、セフピラミドナトリウム、セフスロジンナトリウム、セフォタキシムナトリウム、セフォペラゾンナトリウム、セフチゾキシムナトリウム、塩酸セフメノキシム、セフトリアキソンナトリウム、セフタジジム、セフピミゾールナトリウム、セフィキシム、セフテラムピポキシル、セフゾナムナトリウム、セフポドキシプロキセチル、セフォジジム、硫酸セフピロム、ラタモキセフナトリウム、フロモキセフナトリウム、イミペネム、シラスタチンナトリウム、アズトレオナム、カルモナムナトリウム、硫酸ステレプトマイシン、硫酸カナマイシン、硫酸フラジオマイシン、硫酸アミカシン、硫酸ゲンタマイシン、硫酸パロモマイシン、硫酸ペカナマイシン、硫酸リポスタマイシン、硫酸ジベカシン、トブラマイシン、硫酸シソマイシン、硫酸ミスロノマイシン、硫酸アストロマイシン、硫酸ネチルマイシン、硫酸イセパマイシン、硫酸アルベカシン、エリスロマイシン、キタサマイシン、アセチルキタサマイシン、リン酸オレアンドマイシン、ジョサマイシン、アセチルスピラマイシン、ミデカマイシン、酢酸ミデカマイシン、ロキタマイシン、ロキシスロマイシン、クラリスロマイシン、塩酸テトラサイクリン、塩酸オキシテトラサイクリン、メタリン酸テトラサイクリン、塩酸デメチルクロルテトラサイクリン、ロリテトラサイクリン、塩酸ドキシサイクリン、塩酸ミノサイクリン、クロラムフェニコール、コハク酸クロラムフェニコールナトリウム、パルミチン酸クロラムフェニコール、チアンフェニコール、塩酸アミノ酢酸チアンフェニコール、硫酸コリスチン、コリスチンメタンスルホン酸ナトリウム、硫酸ポリミキシンＢ、バシトラシン、塩酸バンコマイシン、塩酸リンコマイシン、クリンダマイシン、塩酸スペクチノマイシン、ホスホマイシンナトリウム、ホスホマイシンカルシウムなどが挙げられる。
【００４６】
酵素剤としては、特に限定されないがキモトリプシン、結晶トリプシン、ストレプトキナーゼ・ストレプトドルナーゼ、ヒアルロニダーゼ、ウロキナーゼ、ナサルプラーゼ、アルテプラーゼ、塩化リゾチーム、セミアルカリプロティナーゼ、セラペプターゼ、チソキナーゼ、デュテプラーゼ、バトロキソビン、プロナーゼ、プロメラインなどが挙げられる。
抗酸化剤としては、特に限定されないがトコフェロール、アスコルビン酸、尿酸などが挙げられる。
【００４７】
抗炎症剤としては、特に限定されないがサリチル酸コリン、サザピリン、サリチル酸ナトリウム、アスピリン、ジフルニサル、フルフェナム酸、メフェナム酸、フロクタフェニン、トルフェナム酸、ジクロフェナクナトリム、トルメチンナトリウム、スリンダク、フェンブフェン、フェルビナクエチル、インドメタシン、インドメタシンファルネシル、アセメタシン、マレイン酸プログルメタシン、アンフェナクナトリウム、ナブメトン、イブプロフェン、フルルビプロフェン、フルルビプロフェンアキセチル、ケトプロフェン、ナプロキセン、プロチジン酸、プラノプロフェン、フェノプロフェンカルシウム、チアプロフェン酸、オキサプロジン、ロキソプロフェンナトリウム、アルミノプロフェン、ザルトプロフェン、フェニルブタゾン、クロフェゾン、ケトフェニルブタゾン、ピロキシカム、テノキシカム、アンピロキシカム、塩酸チアラミド、塩酸チノリジン、塩酸ベンジダミン、エピリゾール、エルモファゾンなどが挙げられる。
【００４８】
ステロイド剤としては、特に限定されないが酢酸コルチゾン、ヒドロコルチゾン（リン酸エステル、酢酸塩）、酪酸ヒドロコルチゾン、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、プレドニゾロン（アセテート、サクシネート、第三級ブチル酢酸エステル、リン酸エステル）、メチルプレドニゾロン（アセテート）、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド（酢酸トリアムシノロン）、デキサメタゾン（リン酸エステル、酢酸塩、リン酸ナトリウム塩、硫酸エステル）、パルミチン酸デキサメタゾン、ベタメタゾン（リン酸塩、２ナトリウム塩）、酢酸パラメタゾン、酢酸フルドロコルチゾン、酢酸ハロプレドン、プロピオン酸クロベタゾール、ハルシノニド、プロピオン酸ベクロメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、酢酸ベタメタゾン、酢酸コルチゾンなどが挙げられる。
【００４９】
血管拡張剤としては、特に限定されないがテオフィリン、ジプロフィリン、プロキシフィリン、アミノフィリン、コリンテオフィリン、プロスタグランジン、プロスタグランジン誘導体、アルプロスタジルアルファデクス、アルプロスタジル、リマプロストアルファデクス、パパベリン、シクランデラート、シンナリジン、フマル酸ベンシクラン、マレイン酸シネパジド、塩酸ジラゼプ、トラピジル、塩酸ジフェニドール、ニコチン酸、イノシトールヘキサニコチネート、クエン酸ニカメタート、酒石酸ニコチニックアルコール、ニコチン酸トコフェロール、ヘプロニカート、塩酸イソクスプリン、硫酸バメタン、塩酸トラリゾン、メシル酸ジヒドロエルゴトキシン、酒石酸イフェンプロジル、塩酸モキシシリト、ニセルゴリン、塩酸ニカルジピン、ニルバジピン、ニフェジピン、塩酸ベニジピン、塩酸ジルチアゼム、ニソルジピン、ニトレンジピン、塩酸マニジピン、塩酸バルニジピン、塩酸エホニジピン、塩酸ベラパミル、塩酸トリメタジジン、カプトプリル、マレイン酸エナラプリル、アラセプリル、塩酸デラプリル、シラザプリル、リシノプリル、塩酸ベナゼプリル、塩酸ヒドララジン、塩酸トドララジン、ブドララジン、カドララジン、インダパミド、塩酸カルボクロメン、エフロキサート、塩酸エタフェノン塩酸オキシフェドリン、ニコランジル、亜硝酸アミル、硝酸イソソルビドなどが挙げられる。
【００５０】
アンジオテンシン変換酵素阻害剤としては、特に限定されないがアラセプリル、塩酸イミダプリル、塩酸テモカプリル、塩酸デラプリル、塩酸ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、マレイン酸エナラプリル、リシノプリルなどが挙げられる。アンジオテンシン受容体拮抗剤としては、特に限定されないがロサルタンなどが挙げられる。
平滑筋細胞遊走および／または増殖抑制剤としては、特に限定されないがヘパリンナトリウム、ダルテパリンナトリウム（低分子ヘパリン）、ヘパリンカルシウム、デキストラン硫酸などが挙げられる。
血小板凝集阻害剤としては、特に限定されないが塩酸チクロピジン、シロスタゾール、イコサペント酸エチル、ベラプロストナトリウム、塩酸サルプグレラート、バトロキソビン、ジピリダモールなどが挙げられる。
抗凝固剤としては、特に限定されないがヘパリンナトリウム、ダルテパリンナトリウム（低分子ヘパリン）、ヘパリンカルシウム、デキストラン硫酸、ワルファリンカリウム、アルガトロバンなどが挙げられる。
ケミカルメディエーター遊離抑制剤としては、特に限定されないがトラニラスト、フマル酸ケトフェチン、塩酸アゼラスチン、オキサトミド、アンレキサノクス、レピリナストなどが挙げられる。
免疫抑制剤としては、特に限定されないがシクロスポリンなどが挙げられる。
抗ウイルス剤としては、特に限定されないがアシクロビル、ガンシクロビル、ジダノシン、ジドブジン、ソリブジン、ビダラビンなどが挙げられる。
【００５１】
また、薬物担体に担持可能な診断用の薬物の種類としては、薬物担体の形成を損ねない限り特に限定されるものではない。具体的には、Ｘ線造影剤、超音波診断剤、放射性同位元素標識核医学診断薬、核磁気共鳴診断用診断薬などの体内診断薬が挙げられる。Ｘ線造影剤としては、たとえばアミドトリゾ酸メグルミン、イオタラム酸ナトリウム、イオタラム酸メグルミン、ガストログラフィン、ヨーダミドメグルミン、リピオドールウルトラフルイド、アジピオドンメグルミン、イオキサグル酸、イオトロクス酸メグルミン、イオトロラン、イオパノ酸、イオパミドール、イオヘキソール、イオベルソール、イオポダートナトリウム、イオメプロール、イソペーク、ヨードキサム酸などが挙げられる。
【００５２】
超音波診断剤としては、特に限定されないが例えば気体や液体が挙げられる。気体としては、空気、二酸化炭素、酸素、窒素、ヘリウム、アルゴンなどが挙げられる。液体としては、水、生理食塩水、緩衝液、金属粉を含む水性の懸濁液などが挙げられる。
本発明の薬物担体は、投与経路次第で医薬的に許容される安定化剤および／または酸化防止剤をさらに含むものであってもよい。安定化剤としては、特に限定されないが膜流動性を低下させるコレステロールなどのステロール、あるいはグリセロール、シュクロースなどの糖類が挙げられる。酸化防止剤としては、特に限定されないがアスコルビン酸、尿酸あるいはトコフェロール同族体、たとえばビタミンＥなどが挙げられる。トコフェロールには、α、β、γ、δの４個の異性体が存在するが本発明においてはいずれも使用できる。
【００５３】
本発明の薬物担体は、投与経路次第で医薬的に許容される添加物をさらに含むものであってもよい。このような添加物の例として、水、生理食塩水、医薬的に許容される有機溶媒、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、ゼラチン、寒天、ジグリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、ＰＢＳ、生体内分解性ポリマー、無血清培地、医薬添加物として許容される界面活性剤あるいは生体内で許容し得る生理的ｐＨの緩衝液などが挙げられる。
添加物は、剤型に応じて上記の中から適宜選択され、あるいはそれらを組合せて使用されるが、これらに限定されるものではない。
【００５４】
本発明では、薬物担体に上記の薬物を担持し、上記安定化剤、酸化防止剤等の随意の添加物とを含有させたものを医薬組成物として供することができる。例えば、上記例示した治療用の薬物を薬物担体に担持したものを、疾患の治療用の医療組成物として使用することができる。また、上記例示した診断用の薬物を薬物担体に担持したものを、疾患の診断用の医薬組成物として使用することができる。本発明の医薬組成物において、薬物担体に担持させる薬物は、１種類であってもよく、複数種類であってもよい。また、薬物担体に添加物を含有させる場合、添加物は１種類であってもよく、複数種類であってもよい。
本発明の医薬組成物は、通常の方法にしたがって保存することができ、たとえば０〜８℃での冷蔵あるいは１５〜２５℃の室温で保存することができる。
【００５５】
本発明の薬物担体は常法によって得ることができる。薬物担体の一例としてリポソームの製造方法を以下に示すが、これに限定されない。
フラスコ内で、本発明のＰＥＧ誘導体（Ａ）または（Ｂ）と、リン脂質等の他の膜構成成分を、クロロホルム等の有機溶媒と、を混合させ、有機溶媒の留去後に真空乾燥することによりフラスコ内壁に薄膜を形成させる。次に、当該フラスコ内に薬物を加え、激しく撹拌することにより、リポソーム分散液を得る。得られたリポソーム分散液は、ゲルろ過、透析、膜分離および／または遠心分離等の通常用いられる方法で精製することにより、リポソームに担持されなかった薬物を除去することができる。また得られたリポソーム分散液は、フレンチプレス、加圧ろ過器またはエクストルーダー等の通常用いられる方法で、リポソーム粒子の外径を整えることができる。また、本発明のＰＥＧ誘導体（Ａ）または（Ｂ）を含まないリポソーム形成脂質を混合して得られた混合脂質を用いて常法によりリポソームを形成させた後に本発明のＰＥＧ誘導体（Ａ）または（Ｂ）を添加してもよい。
またリポソームは、上記方法以外にも、上記の各構成成分を混合し、高圧吐出型乳化機により高圧吐出させることにより得ることもできる。リポソームの調製方法は、「ライフサイエンスにおけるリポソーム」（寺田、吉村ら；シュプリンガー・フェアラーク東京（１９９２））に具体的に記載されており、この記載を引用して本明細書に記載されているものとする。
薬物を担体に担持させるためにｐＨ勾配法を用いることができる。この方法は、Ｇ．Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ編「Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」２nd  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．Ｉ−III、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓに記載されており、この記載を引用して本明細書に記載されているものとする。
【００５６】
本発明の薬物担体は、薬物を担持した状態で薬物を標的部位まで輸送し、その結果担持する薬物を標的部位へ送達する。薬物の標的部位への輸送性とは、薬物を担持した薬物担体を標的部位まで到達させることを意味する。送達性とは、薬物担体が担持する薬物を標的部位へ取り込ませることを意味する。なお、この場合に、標的部位に取り込まれずとも薬物の影響を標的部位またはその近傍へ及ぼすことも含む。
ここで本明細書において、薬物担体の「標的部位」とは、担持する薬物を送達する特定の部位であり、部位ごとに特定された細胞、組織、器官または臓器およびそれらの内部を意味する。
【００５７】
本発明のＰＥＧ誘導体（Ａ）または（Ｂ）を膜構成成分の一つとする薬物担体は、血中での安定性を保つことができ、標的部位への輸送性を有する。その結果、担持する薬物を標的部位まで送達することができる。細胞、組織、器官または臓器およびそれらの内部などの標的部位は治療および／または診断の対象となる部位であり、特に限定されないが腫瘍、炎症部位などが挙げられる。したがって、標的部位は、腫瘍や炎症部位の細胞、組織、器官または臓器およびそれらの内部などである。
具体的には、荷電を有しない本発明のＰＥＧ誘導体（Ａ）または（Ｂ）を膜構成成分とするため、薬物担体が血中滞留性に優れている。また、標的細胞への接着性を高める目的で、カチオン性脂質を表面修飾剤として含めた場合に、荷電を有しない本発明のＰＥＧ誘導体（Ａ）または（Ｂ）を膜構成成分とするため、カチオン性脂質による効果、すなわち細胞接着性を向上させる効果が阻害されない。
【００５８】
本発明の薬物担体は薬物を所望の標的部位に輸送および／または送達するために使用される。したがって、本発明の薬物担体は、疾患の予防および／または治療のため、疾患の診断のため、薬物担体を標的部位へ輸送するために、または薬物担体に封入した薬物を標的部位に送達するため、宿主（患者）に非経口的に全身あるいは局所的に投与することができる。投与対象の宿主としては、哺乳動物、好ましくはヒト、サル、ネズミ、家畜等が挙げられる。
【００５９】
非経口的投与の経路としては、たとえば点滴などの静脈内注射（静注）、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射を選択することができ、患者の年齢、症状により適宜投与方法を選択することができる。本発明の薬物担体は、病気に既に悩まされる患者に、疾患の症状を治癒するか、あるいは少なくとも部分的に阻止するために十分な量で投与される。たとえば薬物担体に担持された形での薬物の有効投与量は、一日につき体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇから１００ｍｇの範囲で選ばれる。しかしながら、本発明の薬物担体はこれらの投与量に制限されるものではない。投与時期は、疾患が生じてから投与してもよいし、あるいは疾患の発症が予測される時に発症時の症状緩和のために予防的に投与してもよい。また、投与期間は、患者の年齢、症状により適宜選択することができる。
【００６０】
具体的な投与方法としては、医薬組成物をシリンジや点滴によって投与することができる。また、カテーテルを患者または宿主の体内、たとえば管腔内、たとえば血管内に挿入して、その先端を標的部位付近に導き、当該カテーテルを通して、所望の標的部位またはその近傍あるいは標的部位への血流が期待される部位から投与することも可能である。
【実施例】
【００６１】
以下、実施例および試験例に基づいて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例、試験例に限定されるべきものではない。
【００６２】
（実施例１）
ＰＥＧ誘導体（Ａ）の合成
（１）３，５−ジヒドロキシ安息香酸メチルエステル（東京化成工業）１５．９７ｇ、１−ブロモペンタデカン（東京化成工業）５８．２６ｇ、炭酸カリウム（国産化学）２７．６４ｇのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（関東化学）２５０ｍｌ溶液を、一夜，６０℃で攪拌した。反応液を水にあけ、固形物をろ取し、水、メタノール（国産化学）および酢酸エチル（国産化学）で洗浄し、酢酸エチルより再結晶し、３，５−ジペンタデシロキシ安息香酸メチルエステル３２．６ｇを得た。
（２）水素化リチウムアルミニウム（関東化学）２２８ｍｇのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（関東化学）３ｍｌ溶液に、３，５−ジペンタデシロキシ安息香酸メチルエステル１．７７ｇのテトラヒドロフラン２０ｍｌ溶液を氷冷下に滴下し、室温で２時間攪拌した。反応液を水にあけクロロホルム（国産化学）を加え、セライト（関東化学）ろ過を行った後、分離した有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（和光純薬）で乾燥し、減圧下に濃縮し、３，５−ジペンタデシロキシベンジルアルコール１．６６ｇを得た。
（３）３，５−ジペンタデシロキシベンジルアルコール０．５６ｇの塩化メチレン（関東化学）１０ｍｌ溶液に、トリフェニルホスフィン（東京化成工業）０．３８ｇとテトラブロモカーボン（東京化成工業）０．６６ｇを加え室温で、２０分間攪拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え塩化メチレンで抽出し、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下に濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（富士シリシア）に付し、１０％酢酸エチル（国産化学）−ヘキサン（国産化学）溶出画分より３，５−ジペンタデシロキシベンジルブロマイド０．５９ｇを得た。
（４）３，５−ジペンタデシロキシベンジルブロマイド０．６２ｇのＤＭＦ（関東化学）１０ｍｌ溶液にフタルイミドカリウム（東京化成工業）０．２０ｇを加え、６０℃で６時間攪拌した。反応液を水にあけクロロホルム（国産化学）で抽出し、水と飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（和光純薬）で乾燥し、減圧下に濃縮し３，５−ジペンタデシロキシベンジルフタルイミド０．６６ｇを得た。
（５）３，５−ジペンタデシロキシベンジルフタルイミド５．１０ｇのエタノール（国産化学）８０ｍｌ溶液に８０％ヒドラジン（東京化成工業）を加え、５．５時間還流攪拌した。反応溶媒を減圧下留去後、クロロホルム（国産化学）を加え、不溶物をろ過して除き、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（富士シリシア）に付し、５％メタノール（国産化学）−クロロホルム（国産化学）溶出画分より３，５−ジペンタデシロキシベンジルアミン２．１１ｇを得た。
（６）モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９４、日本油脂）５．１９ｇ、ｐ−ニトロフェニルクロロフォルメート（関東化学）４０３ｍｇとトリエチレンアミン（和光純薬）２２２ｍｇの塩化メチレン（関東化学）２５ｍｌ溶液を室温で１５時間撹拌した。反応溶媒を減圧留去し残渣にエーテルを加え、粗生成物を濾取し、酢酸エチル（国産化学）より再結晶し、モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）−ｐ−ニトロフェニルカルボネート５．４３ｇを得た。
（７）３，５−ジペンタデシシロキシベンジルアミン１１２ｍｇ、モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）−ｐ−ニトロフェニルカルボネート１．０７ｇとトリエチルアミン（和光純薬）２２ｍｇの脱水クロロホルム（関東化学）１０ｍｌ溶液を室温で１２時間攪拌した。反応溶媒をクロロホルム（国産化学）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（関東化学）で乾燥し、減圧下に濃縮し、イソプロパノール（関東化学）から再結晶し、モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）−３，５−ジペンタデシロキシベンジルカルバネート９２ｍｇを得た。
このものの機器分析データは下記式の構造を支持する。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）  δ（ｐｐｍ）：６．４０（２Ｈ，ｂｓ），６．３６（１Ｈ，ｂｓ），４．２７（４Ｈ，ｍ），３．９７−３．４０（４７２Ｈ，ｍ），３．３８（３Ｈ，ｓ），１．７８−１．２２（５２Ｈ，ｍ），０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）
【化１３】
0004723380.tif 000014
【００６３】
（実施例２）
実施例１で合成したモノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）−３，５−ジペンタデシロキシベンジルカルバネートを膜構成成分の一つとして含有するリポソームを下記の通りに調製した。
水素化大豆フォスファチジルコリン（ＨＳＰＣ、Ｌｉｐｏｉｄ）０．２２５ｍｍｏｌ、コレステロール（Ｓｏｌｖａｙ）０．１８９ｍｍｏｌ、３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩（国際公開第９７／４２１６６号パンフレットに記載の化合物）０．０３６ｍｍｏｌを２５ｍｌのメスフラスコに秤量し、蛍光色素であるＲｈｏｄａｍｉｎ−ＤＨＰＥ（ＬｉｓｓａｍｉｎｅTM、ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｂ  １，２−ｄｉｈｅｚａｄｅｃａｎｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ、ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ  ｓａｌｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社）／クロロホルム溶液（０．１ｍｇ／ｍｌ）を１２ｍｌ加えて溶解し、クロロホルムでメスアップし、混合脂質溶解液（総脂質濃度  １８ｍＭ）を得た。実施例１で合成したモノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）−３，５−ジペンタデシロキシベンジルカルバネート４．５μｍｏｌをクロロホルム６ｍｌに溶解し、モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）−３，５−ジペンタデシロキシベンジルカルバネート溶液（０．７５ｍＭ）を得た。ナスフラスコへ混合脂質溶解液４ｍｌを移し、そこへモノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）−３，５−ジペンタデシロキシベンジルカルバネート溶液を１ｍｌ（モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）−３，５−ジペンタデシロキシベンジルカルバネート修飾率１ｍｏｌ％）または２ｍｌ（モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）−３，５−ジペンタデシロキシベンジルカルバネート修飾率２ｍｏｌ％）または３ｍｌ（モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）−３，５−ジペンタデシロキシベンジルカルバネート修飾率３ｍｏｌ％）加えた。モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）−３，５−ジペンタデシロキシベンジルカルバネートを加えた混合脂質溶解液からエバポレーションにより溶媒を除去した。得られた薄膜に生理食塩水を７．５ｍｌ加え、６５℃でエクストルーダーに取り付けたフィルター（孔径０．４μｍ１×１回，０．２μｍ×３回，０．１μｍ×１０回）に通し、リポソームを調製した。その結果、モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）−３，５−ジペンタデシロキシベンジルカルバネートを膜構成成分の一つとして含有するリポソームを得た。
【００６４】
（参考例１）
ポリエチレングリコール（分子量５０００）−フォスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を膜構成成分の一つとして含有するリポソームの調製
水素化大豆フォスファチジルコリン（ＨＳＰＣ、Ｌｉｐｏｉｄ）０．２２５ｍｍｏｌ、コレステロール（Ｓｏｌｖａｙ）０．１８９ｍｍｏｌ、３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩  ０．０３６ｍｍｏｌを２５ｍｌのメスフラスコに秤量し、蛍光色素であるＲｈｏｄａｍｉｎ−ＤＨＰＥ（ＬｉｓｓａｍｉｎｅTM、ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｂ  １，２−ｄｉｈｅｚａｄｅｃａｎｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ、ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ  ｓａｌｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社）／クロロホルム溶液（０．１ｍｇ／ｍｌ）を１２ｍｌ加えて溶解し、クロロホルムでメスアップし、混合脂質溶解液（総脂質濃度１８ｍＭ）を得た。ポリエチレングリコール（分子量５０００）−フォスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ、日本油脂）４．５μｍｏｌをクロロホルム６ｍｌに溶解し、ＰＥＧ−ＰＥ溶液（０．７５ｍＭ）を得た。ナスフラスコへ混合脂質溶解液４ｍｌを移し、そこへＰＥＧ−ＰＥ溶液を１ｍｌ（ＰＥＧ−ＰＥ修飾率１ｍｏｌ％）または２ｍｌ（ＰＥＧ−ＰＥ修飾率２ｍｏｌ％）または３ｍｌ（ＰＥＧ−ＰＥ修飾率３ｍｏｌ％）加えた。ＰＥＧ−ＰＥを加えた混合脂質溶解液からエバポレーションにより溶媒を除去した。得られた薄膜に生理食塩水を７．５ｍｌ加え、６５℃でエクストルーダーに取り付けたフィルター（孔径０．４μｍ×１回，０．２μｍ×３回，０．１μｍ×１０回）に通し、リポソームを調製した。その結果、ＰＥＧ−ＰＥを膜構成成分の一つとして含有するリポソームを得た。なお、「ＰＥＧ−ＰＥ修飾率」とは、総脂質量に対するＰＥＧ−ＰＥ量の比率を意味する。
【００６５】
（試験例１）
（１）細胞の調製と細胞との親和性
マウスメラノーマＢ１６Ｆ１（東北大学加齢医学研究所、ＴＫＧ０３４７）を２×１０5ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度に培地で調製し、１２ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅへ１ｍｌ／ｗｅｌｌ（１検体につき３ｗｅｌｌ）播いた。翌日、脂質濃度１０ｍＭの実施例２または参考例１のリポソームを、細胞培地を含むＰｌａｔｅへ２０μｌ／ｗｅｌｌ添加した。２４時間後に培地を取り除き、ＰＢＳで２回洗浄した。ＲＩＰＡ  ｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，０．５％  Ｓｏｄｉｕｍ  Ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ，１％ＩＧＥＰＡＬ  ＣＡ−６３０，０．１％Ｓｏｄｉｕｍ  Ｌａｕｒｙｌ  Ｓｕｌｆａｔｅ）を０．３ｍｌ／ｗｅｌｌ加えて、細胞を溶解した。細胞溶解液は蛍光測定用９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに０．２ｍｌ／ｗｅｌｌ移した。ローダミンラベル化リポソームをＲＩＰＡ  ｂｕｆｆｅｒで希釈した溶液で検量線を作成した。細胞溶解液のローダミンの蛍光強度（Ｅｘ．５４４ｎｍ，Ｅｍ．５９０ｎｍ）を蛍光強度測定マイクロプレートリーダー（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ  Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ II、大日本製薬）で測定し、検量線から溶解液の脂質濃度を求めた。蛍光強度測定後、細胞溶解液のタンパク定量をＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（ＰＩＥＲＣＥ）を用いて行った。溶解液２０μｌを吸光度測定用９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに移し、発色液を２００μｌ／ｗｅｌｌ添加し、３７℃で３０分間発色させた後、吸光度測定マイクロプレートリーダー（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ  ｉＥＭＳ  Ｒｅａｄｅｒ  ＭＦ、大日本製薬）で吸光度（５４０ｎｍ）を測定した。検量線はＢＳＡで作成した。脂質濃度とタンパク量の比をとってリポソームの細胞への結合量（脂質量／タンパク量）を算出した。
【００６６】
実施例２および参考例１で調製したポリエチレングリコール修飾リポソーム（修飾率１％）を用いたときの標的細胞に対するリポソームの細胞への結合量をグラフにして図１に示した。なお、「修飾率」とは、総脂質量に対するＰＥＧ誘導体量の比率を意味する。
図１から明らかなように、ポリエチレングリコール誘導体で修飾したリポソームにおいて、Ｂ１６Ｆ１細胞に対して、荷電を持たない本発明のＰＥＧ誘導体（Ａ）で修飾したリポソームの細胞への結合量は、負に荷電したＰＥＧ−ＰＥ修飾リポソームの細胞への結合量より多かった。なお、修飾率２％および３％の場合における、標的細胞に対するリポソームの結合量は以下の通りであった。
標的細胞に対するリポソームの結合量（μｍｏｌ  ｌｉｐｉｄｓ／ｍｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）
実施例２のリポソーム    参考例１のリポソーム
修飾率      
２％          ０．０１２            ０．００２３
３％          ０．００８２          ０．００１０
すなわち、本発明のＰＥＧ誘導体（Ａ）を膜構成成分として含有するリポソームは、ＰＥＧ−ＰＥ修飾リポソームより腫瘍細胞への薬物の送達効率が高いことが示された。
また、本発明のＰＥＧ誘導体（Ａ）は、カチオン化脂質を配合した場合において、従来のＰＥＧ−ＰＥに比べカチオン化脂質の細胞との相互作用を低下させないことが明らかとなった。すなわち、本発明のＰＥＧ誘導体（Ａ）を膜構成成分として含有するリポソームは、ＰＥＧ−ＰＥ修飾リポソームより腫瘍細胞への薬物の送達効率が高いことが示された。
（２）急性毒性
ＩＣＲ系雄性マウス（５週齢）を用いて経口投与により急性毒性試験を行った結果、実施例２のリポソームのＬＤ５０はいずれも３２０ｍｇ／ｋｇ以上であり、ＰＥＧ誘導体（Ａ）を含有する薬物担体の安全性が確認された。
【００６７】
（実施例３）
ＰＥＧ誘導体（Ｂ）の合成
（１）４−アミノメチル安息香酸（Ａｌｄｒｉｃｈ）７．５６ｇ、ベンジルクロロホルメート（国産化学）９．３８ｇの２N水酸化ナトリウム（関東化学）７５ｍｌとテトラヒドロフラン（Ａｌｄｒｉｃｈ）７５ｍｌの混合溶液を、一夜、室温で攪拌した。反応溶液に６Ｎ塩酸（関東化学）を加え酸性とし、酢酸エチルで抽出し、有機層を順に希酸、水、希アルカリ、水で洗い、無水硫酸マグネウムで乾燥し、減圧下に濃縮し、４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）アミノメチル安息香酸１０．１３ｇを得た。
（２）４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）アミノメチル安息香酸０．５７ｇの塩化メチレン（関東化学）２０ｍｌとＮ．Ｎ−ジメチルホルムアミド（関東化学）２０ｍｌの混合溶液に、ジオクタデシルアミン（Ｆｌｕｋａ）１．０４ｇ、ＢＯＰ試薬（ベンゾトリアゾール-1-イル-オキシ-トリスジメチルアミノフォスフォニウム）（国産化学）０．９７ｇ、トリエチルアミン（和光純薬）０．２５ｇを加え、一夜、室温で攪拌した。反応溶液に水を加え、酢酸エチルで抽出し、有機層を順に希酸、水、希アルカリ、水で洗い、無水硫酸マグネウム（和光純薬）で乾燥し、減圧下に濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ−（富士シリシア）に付し、２０％酢酸エチルーヘキサン溶出画分より４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）アミノメチル安息香酸  Ｎ，Ｎ−ジステアロイルベンズアミド１．５７ｇを得た。
（３）水素気流下、４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）アミノメチル安息香酸  Ｎ，Ｎ−ジステアロイルベンズアミド１．５６ｇ、パラジウム炭素（川研ファインケミカル）０．１６ｇのエタノール（関東化学）２０ｍｌとクロロホルム（関東化学）１０ｍｌの混合溶液を、一夜、室温で攪拌した。反応溶液のパラジウム炭素をろ過により除去し、次いで減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ−（富士シリシア）に付し、５％メタノールークロロホルム溶出画分よりアミノメチル安息香酸  Ｎ，Ｎ−ジステアロイルベンズアミド０．６８ｇを得た。
（４）モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９４、日本油脂）５．１９ｇ、ｐ−ニトロフェニルクロロフォルメート（関東化学）４０３ｍｇとトリエチレンアミン（和光純薬）２２２ｍｇの塩化メチレン（関東化学）２５ｍｌ溶液を室温で１５時間撹拌した。反応溶媒を減圧留去し残渣にエーテルを加え、粗生成物を濾取し、酢酸エチル（国産化学）より再結晶し、モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）−ｐ−ニトロフェニルカルボネート５．４３ｇを得た。
（５）アミノメチル安息香酸  Ｎ，Ｎ−ジステアロイルベンズアミド０．１３ｇ、モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）−ｐ−ニトロフェニルカルボネート１．０７ｇとトリエチルアミン（和光純薬）２２ｍｇの脱水クロロホルム（関東化学）１０ｍｌ溶液を室温で１２時間攪拌した。反応溶媒をクロロホルム（国産化学）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（関東化学）で乾燥し、減圧下に濃縮し、イソプロパノール（関東化学）から再結晶し、４−（Ｎ’−（メトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）カルボニル）２−アミノエチル）  Ｎ，Ｎ−ジステアロイルベンズアミド０．８５ｇを得た。
このものの機器分析データは下記式の構造を支持する。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）  δ（ｐｐｍ）：７．３０（４Ｈ，ｂｓ），３．８８−３．４４（ｍ），３．３８（３Ｈ，ｓ），１．３８−１．１６（６４Ｈ，ｍ），０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）
【化１４】
0004723380.tif 000015
【００６８】
（実施例４）
実施例３で合成した化合物（４−（Ｎ’−（メトキシポリエチレングリコール（ＭＷ＝５１９３）カルボニル）２−アミノエチル）Ｎ，Ｎ−ジステアロイルベンズアミド）を膜構成成分の一つとして含有するリポソームを下記の通りに調製した。
水素化大豆フォスファチジルコリン（ＨＳＰＣ、Ｌｉｐｏｉｄ）０．２２５ｍｍｏｌ、コレステロール（Ｓｏｌｖａｙ）０．１８９ｍｍｏｌ、３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩（国際公開第９７／４２１６６号パンフレットに記載の化合物）０．０３６ｍｍｏｌを２５ｍｌのメスフラスコに秤量し、蛍光色素であるＲｈｏｄａｍｉｎ−ＤＨＰＥ（ＬｉｓｓａｍｉｎｅTM、ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｂ  １，２−ｄｉｈｅｚａｄｅｃａｎｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ、ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ  ｓａｌｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社）／クロロホルム溶液（０．１ｍｇ／ｍｌ）を１２ｍｌ加えて溶解し、クロロホルムでメスアップし、混合脂質溶解液（総脂質濃度  １８ｍＭ）を得た。実施例３で合成した化合物４．５μｍｏｌをクロロホルム６ｍｌに溶解し、化合物の溶液（０．７５ｍＭ）を得た。
ナスフラスコへ混合脂質溶解液４ｍｌを移し、そこへ化合物の溶液を１ｍｌ（アミド化合物修飾率１ｍｏｌ％）または２ｍｌ（アミド化合物修飾率２ｍｏｌ％）または３ｍｌ（アミド化合物修飾率３ｍｏｌ％）加えた。実施例３で合成した化合物を加えた混合脂質溶解液からエバポレーションにより溶媒を除去した。得られた薄膜に生理食塩水を７．５ｍｌ加え、６５℃でエクストルーダーに取り付けたフィルター（孔径０．４μｍ１×１回，０．２μｍ×３回，０．１μｍ×１０回）に通し、リポソームを調製した。その結果、実施例３で合成した化合物を膜構成成分の一つとして含有するリポソームを得た。
【００６９】
（参考例２）
ポリエチレングリコール（分子量５０００）−フォスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を膜構成成分の一つとして含有するリポソームの調製
水素化大豆フォスファチジルコリン（ＨＳＰＣ、Ｌｉｐｏｉｄ）０．２２５ｍｍｏｌ、コレステロール（Ｓｏｌｖａｙ）０．１８９ｍｍｏｌ、３，５−ジペンタデシロキシベンズアミジン塩酸塩  ０．０３６ｍｍｏｌを２５ｍｌのメスフラスコに秤量し、蛍光色素であるＲｈｏｄａｍｉｎ−ＤＨＰＥ（ＬｉｓｓａｍｉｎｅTM、ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｂ  １，２−ｄｉｈｅｚａｄｅｃａｎｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ、ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ  ｓａｌｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ社）／クロロホルム溶液（０．１ｍｇ／ｍｌ）を１２ｍｌ加えて溶解し、クロロホルムでメスアップし、混合脂質溶解液（総脂質濃度１８ｍＭ）を得た。ポリエチレングリコール（分子量５０００）−フォスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ、日本油脂）４．５μｍｏｌをクロロホルム６ｍｌに溶解し、ＰＥＧ−ＰＥ溶液（０．７５ｍＭ）を得た。ナスフラスコへ混合脂質溶解液４ｍｌを移し、そこへＰＥＧ−ＰＥ溶液を１ｍｌ（ＰＥＧ−ＰＥ修飾率１ｍｏｌ％）または２ｍｌ（ＰＥＧ−ＰＥ修飾率２ｍｏｌ％）または３ｍｌ（ＰＥＧ−ＰＥ修飾率３ｍｏｌ％）加えた。ＰＥＧ−ＰＥを加えた混合脂質溶解液からエバポレーションにより溶媒を除去した。得られた薄膜に生理食塩水を７．５ｍｌ加え、６５℃でエクストルーダーに取り付けたフィルター（孔径０．４μｍ×１回，０．２μｍ×３回，０．１μｍ×１０回）に通し、リポソームを調製した。その結果、ＰＥＧ−ＰＥを膜構成成分の一つとして含有するリポソームを得た。なお、「ＰＥＧ−ＰＥ修飾率」とは、総脂質量に対するＰＥＧ−ＰＥ量の比率を意味する。
【００７０】
（試験例２）
（１）細胞の調製と細胞との親和性
マウスメラノーマＢ１６Ｆ１（東北大学加齢医学研究所、ＴＫＧ０３４７）を２×１０5ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度に培地で調製し、１２ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅへ１ｍｌ／ｗｅｌｌ（１検体につき３ｗｅｌｌ）播いた。翌日、脂質濃度１０ｍＭの実施例４または参考例２のリポソームを、細胞培地を含むＰｌａｔｅへ２０μｌ／ｗｅｌｌ添加した。２４時間後に培地を取り除き、ＰＢＳで２回洗浄した。ＲＩＰＡ  ｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，０．５％  Ｓｏｄｉｕｍ  Ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ，１％ＩＧＥＰＡＬ  ＣＡ−６３０，０．１％Ｓｏｄｉｕｍ  Ｌａｕｒｙｌ  Ｓｕｌｆａｔｅ）を０．３ｍｌ／ｗｅｌｌ加えて、細胞を溶解した。細胞溶解液は蛍光測定用９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに０．２ｍｌ／ｗｅｌｌ移した。ローダミンラベル化リポソームをＲＩＰＡ  ｂｕｆｆｅｒで希釈した溶液で検量線を作成した。細胞溶解液のローダミンの蛍光強度（Ｅｘ．５４４ｎｍ，Ｅｍ．５９０ｎｍ）を蛍光強度測定マイクロプレートリーダー（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ  Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ II、大日本製薬）で測定し、検量線から溶解液の脂質濃度を求めた。蛍光強度測定後、細胞溶解液のタンパク定量をＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（ＰＩＥＲＣＥ）を用いて行った。溶解液２０μｌを吸光度測定用９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに移し、発色液を２００μｌ／ｗｅｌｌ添加し、３７℃で３０分間発色させた後、吸光度測定マイクロプレートリーダー（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ  ｉＥＭＳ  Ｒｅａｄｅｒ  ＭＦ、大日本製薬）で吸光度（５４０ｎｍ）を測定した。検量線はＢＳＡで作成した。脂質濃度とタンパク量の比をとってリポソームの細胞への結合量（脂質量／タンパク量）を算出した。
【００７１】
実施例４および参考例２で調製したポリエチレングリコール修飾リポソーム（修飾率１％）を用いたときの標的細胞に対するリポソームの細胞への結合量をグラフにして図２に示した。なお、「修飾率」とは、総脂質量に対するＰＥＧ誘導体量の比率を意味する。
図２から明らかなように、ポリエチレングリコール誘導体で修飾したリポソームにおいて、Ｂ１６Ｆ１細胞に対して、荷電を持たない本発明のＰＥＧ誘導体（Ｂ）で修飾したリポソームの細胞への結合量は、負に荷電したＰＥＧ−ＰＥ修飾リポソームの細胞への結合量より多かった。なお、修飾率２％および３％の場合における、標的細胞に対するリポソームの結合量は以下の通りであった。
標的細胞に対するリポソームの結合量（μｍｏｌ  ｌｉｐｉｄｓ／ｍｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）
実施例４のリポソーム    参考例２のリポソーム
修飾率      
２％            ０．１４２          ０．００４
３％            ０．１３５          ０．０００
すなわち、本発明のＰＥＧ誘導体（Ｂ）を膜構成成分として含有するリポソームは、ＰＥＧ−ＰＥ修飾リポソームより腫瘍細胞への薬物の送達効率が高いことが示された。
また、本発明のＰＥＧ誘導体（Ｂ）は、カチオン化脂質を配合した場合において、従来のＰＥＧ−ＰＥに比べカチオン化脂質の細胞との相互作用を低下させないことが明らかとなった。すなわち、本発明のＰＥＧ誘導体（Ｂ）を膜構成成分として含有するリポソームは、ＰＥＧ−ＰＥ修飾リポソームより腫瘍細胞への薬物の送達効率が高いことが示された。
（２）急性毒性
ＩＣＲ系雄性マウス（５週齢）を用いて経口投与により急性毒性試験を行った結果、実施例４のリポソームのＬＤ５０はいずれも３２０ｍｇ／ｋｇ以上であり、ＰＥＧ誘導体（Ｂ）を含有する薬物担体の安全性が確認された。
【図１】
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【図２】
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