(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の化学式（１）で表されることを特徴とするシアタン誘導体。
【化１】
0004770032.tif 000005
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、シアタン誘導体に関し、詳しくは、例えば、ハリタケ科（Ｈｙｄｎａｃｅａｅ）、サンゴハリタケ科（Ｈｅｒｉｃｉｕｍ）のキノコであるヤマブシタケ（Ｈｅｒｉｃｉｕｍ  ｅｒｉｎａｃｅｕｍ）の培養菌糸体中に含有される新規なシアタン（ｃｙａｔｈａｎｅ）誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、キノコの培養物や子実体中に含まれる化合物およびその薬剤効果については複数の報告例がある。例えば、ハリタケ科のキノコであるヤマブシタケの子実体中には、オクタデセン酸誘導体、イソインドリノン誘導体、フタリド誘導体が含有され、これらには子宮頚癌細胞に対する殺細胞効果があることが報告されている（例えば、特開平３−１５７３４７号公報、特開平３−１５７３６７号公報、特開平３−１５７３７９号公報）。
【０００３】
ヤマブシタケの子実体、培養菌糸体、培養液中には、高い抗腫瘍活性が認められる多糖類が含有されていることも報告されている（例えば、特開平５−１１７３０３号公報、特開平５−１１７３０４号公報）。
【０００４】
また、子実体中のベンジルアルコール誘導体やクマロン誘導体がＰＧＥ（プロスタグランジンＥ２）産生抑制剤やＮＧＦ（神経成長因子）産生誘導剤として利用できることも報告され（特公平７−７２１５７号公報、特公平８−２６０１０号公報）、更に、培養菌糸体中のシアタン誘導体がＮＧＦ産生誘導剤や抗菌剤として利用できることも報告されている（特開平６−２５６３５２号、特開平６−２５６３７８号、特開平７−６９９６１号、特開平７−７０１３３号、特開平７−７０１６８号、特開平８−７３４８６号、特開平９−２４１２９１号、特開平９−２４１１５８号の各公報）。
【０００５】
特に、培養菌糸体中に含有されるＮＧＦ産生を誘導するシアタン誘導体であるエリナシン類に関しては、エリナシンＡ、エリナシンＢ、エリナシンＣ、エリナシンＥ、エリナシンＦ、エリナシンＧの６つの化合物の構造が決定されている（テトラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ）Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１０，１５６９〜１５７２（１９９４）及びＶｏｌ．３７，Ｎｏ．４１，７３９９〜７４０２（１９９６））。また、その他、エリナシンＤ（Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ，Ｃｏｍｍｕｎ．２，５１〜５４（１９９６））、その関連物質（天然物討論会，３９３〜４００（１９９３））、エリナシンＨ及びエリナシンＩ（特開平９−２４１１５８号公報）、Ｒが水素またはアルカリ金属であるシアタン誘導体（特開平９−２４１２９１号公報）についても報告されている。
【０００６】
一方、本発明者らは、先に、特願２０００−１０８８９０号明細書において、次の化学式（２）で表されるシアタン誘導体（以下エリナシンＰと言う）は、ＤＡＢＣＯ−ＬｉＢｒ（１，４−ジアザビシクロオクタン−リチウムブロマイド）試薬系の変換反応により、既にＮＧＦ産生誘導効果などの薬効が証明されているエリナシンＡやエリナシンＢなどに人為的に変換可能であることを明らかにした。従って、エリナシンＰは、老人性痴呆症治療剤などとしての利用可能なエリナシンＡ、エリナシンＢ、エリナシンＣなどの種々のエリナシン類への人為的変換のための前駆物質として利用することが出来る。
【０００７】
【化２】
0004770032.tif 000002
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、従来報告されているシアタン誘導体とは異なる新規なシアタン誘導体を提供することにある。そして、本発明によって提供されるシアタン誘導体は、上記の化学式（２）で表されるシアタン誘導体の前駆物質として利用することが出来る。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、ヤマブシタケの培養菌糸体中に含有される化合物について鋭意検討を重ねた結果、ヤマブシタケの特定培養期間内の培養菌糸体中に、従来まったく報告例のない新規な化学構造を有し且つ既にＮＧＦ産生誘導効果などが立証されている公知のシアタン誘導体（エリナシン−Ａ、Ｂ、Ｃなど）への化学的変換が可能である新規なシアタン誘導体が含有されていることを見出し、本発明の完成に至った。
【００１０】
すなわち、本発明の要旨は、次の化学式（１）で表されることを特徴とするシアタン誘導体に存する。
【００１１】
【化３】
0004770032.tif 000003
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明のシアタン誘導体は、例えば、ヤマブシタケの菌糸体を次の様に処理することにより得ることが出来る。
【００１３】
先ず、ファーマメディア培地（５．０重量％グルコース、０．５重量％ヘプトン、１．０重量％ファーマメディア、０．５重量％ＮａＣｌ及び脱塩水で調製された培地）にてヤマブシタケの菌糸体を２５℃で２０日間振盪培養する。得られた培養菌糸体を吸引濾過し、脱塩水で十分に洗浄後、培養濾液とエリナシン類が多く含有されている培養菌糸体とに分離する。
【００１４】
次いで、水および有機溶媒の混合系で上記の培養菌糸体を抽出する。この場合、水および有機溶媒の混合系としては、８５容量％アセトン（残余は水）、８０〜８５容量％メタノール（又はエタノール）等が使用される。抽出は、通常、室温で約１週間行なう。その後、濾過して得た抽出液から有機溶媒を蒸発除去して残渣の水溶液を回収する。有機溶媒の蒸発除去には例えばエバポレーターが好適に使用される。
【００１５】
次いで、上記の水溶液（抽出工程の水相側）をｐＨ調整剤（例えば５重量％Ｎａ2ＣＯ3水溶液）でｐＨ９に調整した後、水および有機溶媒の混合系で液−液抽出する。この際の有機溶媒としては、酢酸エチル、ブタノール等が使用される。そして、有機相を分取し、有機溶媒を蒸発除去、中性・塩基性区分の乾固物を回収する。
【００１６】
次いで、上記の乾固物をクロマト分画処理して精製し不純物を除去し、更に、再分画処理して目的とするシアタン誘導体を単離する。この際、クロマト分画処理は、例えば、クロロホルム／エタノール、ベンゼン／エタノール等を展開溶媒とするフラッシュクロマトグラフィーや薄層クロマトグラフィーによって行なうことが出来る。また、再分画処理は、ＯＤＳカラムを使用した高速液体クロマトグラフィーによって行なうことが出来る。
【００１７】
上記の様に再分画処理により単離された化合物の物理化学的性質および構造解析結果は次の通りである。
【００１８】
（１）分子量：５１７（Ｃ27Ｈ42Ｏ8）
【００１９】
（２）核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ，δ）：０．７７（３Ｈ，ｓ）、０．９４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８）、０．９５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８）、１．０３（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝〜１３）、１．０６（３Ｈ，ｓ）、１．４０（１Ｈ，ｄｍ，Ｊ＝〜１３）、１．４６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．８，７．８，７．６）、１．４９（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．８，１２．８，４．２）、１．５６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．８，７．８，７．６）、１．９５（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１２．０）、２．１０（３Ｈ，ｓ）、２．１３（１Ｈ，ｂｒ．ｄｄ，Ｊ＝〜１３，〜１３）、２．２６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝〜１２，〜１２，〜１１）、２．２６（２Ｈ，ｔ．ｌｉｋｅ，＜Ｊ＝〜８＞）、２．８８（１Ｈ，ｓｅｐｔｅｔ，Ｊ＝６．８）、３．０３（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝〜１２）、３．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．０，８．０）、３．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，６．２）、３．５７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，７．６）、３．７０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．０，７．８，４．４）、３．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６）、４．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．０，４．４）、４．０８（２Ｈ，ｂｒ．ｓ）、４．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．２）、５．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６）、５．９８（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１０．４）
【００２０】
（３）核磁気共鳴スペクトル（13Ｃ−ＮＭＲ，δ）：１６．５，２１．２，２１．７，２１．８，２４．２，２６．７，２８．６，３３．４，３３．６，３６．６，３７．８，４０．５，４２．２，４９．２，６３．４，６４．６，６９．５，７２．３，７３．９，７４．７，８２．３，１０３．９，１２５．７，１３７．８，１４０．０，１４３．８，１７１．４
【００２１】
（４）溶媒に対する溶解性：メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチルに可溶、クロロホルムにやや可溶、水に不溶
【００２２】
（５）塩基性、中性、酸性の区別：中性物質
【００２３】
（６）色および性状：無色無定形、固体
【００２４】
以上の物理化学的性質および構造解析結果から、前記の単離された化合物は、前述の化学式（１）で表されるシアタン誘導体であると決定された。
【００２５】
前述の化学式（１）で表される本発明のシアタン誘導体は、菌糸体の培養日数別の生産量を調査した結果によれば、培養開始日より６目から１９日目頃（１１日目頃が最大値）の極く限られた期間内に限定的に産生される物質である。
【００２６】
そして、本発明のシアタン誘導体は、後述の実施例２に示す様に、菌糸体の培養日数別のエリナシンＰと本発明のシアタン誘導体（以下エリナシンＱと言う）とのＨＰＬＣによる産生量の経日的変化の調査結果より、エリナシンＰの前駆体であること、すなわち、菌糸体内でエリナシンＱが酸化されてエリナシンＰへ変化することが判明している。更に、実施例３に示す様に、エリナシンＰは、ＮａＢＨ4による還元反応によりエリナシンＱへ人為的に変換可能である。従って、本発明のシアタン誘導体は、エリナシンＰを経由することにより、老人性痴呆治療剤などとしての利用可能なエリナシンＡ、エリナシンＢ、エリナシンＣなどの種々のエリナシン類への人為的変換のための前駆物質として利用することが出来る。
【００２７】
【実施例】
以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明は、その要旨を超えない限り、以下の実施例に限定されるものではない。
【００２８】
実施例１
＜本発明のシアタン誘導体の抽出および単離＞
ファーマメディア培地にてヤマブシタケの菌糸体を２５℃の暗所で２０日間振盪培養して培養菌糸体を得た。この培養菌糸体６３ｇ（湿重量）をアセトン０．３Ｌに加えて室温で１週間放置した後、得られた抽出液をエバポレーターで減圧濃縮してアセトンを蒸発除去し、残渣水溶液１５０ｍｌを回収した。
【００２９】
上記の水溶液に５重量％Ｎａ2ＣＯ3水溶液添を加してｐＨを９に調整した後、ヘキサンを加え、振盪後、放置し、分相した水相を分取した。ヘキサン抽出の水相部に酢酸エチル０．３Ｌを加え、振盪後、放置し、分相した酢酸エチル相を分取した。同様の液−液抽出操作を合計３回行い、分取した酢酸エチル相を合体し、飽和食塩水洗および芒硝による脱水後、エバポレーターで減圧濃縮して酢酸エチルを蒸発除去し、中性区物質として約１．７ｇの乾固物を回収した。
【００３０】
メタノールに上記の乾固物を溶解し、クロロホルム／エタノール＝５：１（容量比）を展開溶媒とする薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）で分析を行なった結果、Ｒｆ＝０．５〜０．８付近にバニリン−硫酸試薬による紫色の呈色を示す、エリナシン類に特有と見られるスポットが検出された。
【００３１】
上記の乾固物（約１．７ｇ）中のエリナン類を分離・精製するため、極性が順次大きくなる様に調整された展開溶媒、クロロホルム／エタノール＝４０：１（容量比）、２０：１、１０：１、５：１を使用し、フラッシュクロマトグラフィーによる段階溶出を行なった。１０ｍｌ毎に分取した各フラクションについてＴＬＣで分析した結果、フラクション６１−６５に約２３０．７ｍｇの単一物質であるエリナシンＢ、フラクション６８−７２に約７５．８ｍｇの単一物質であるエリナシンＡ、フラクション８３−８８に約３４．６ｍｇの単一物質であるエリナシンＣ、フラクション１０９−１１１に約３７３．７ｍｇの単一物質であるエリナシンＰを夫々得ることが出来た。そして、フラクション１３０−１３３について、前記の化学式（１）で表されるシアタン誘導体（エリナシンＱ）約１１８．３ｍｇが単一物質として単離された。
【００３２】
実施例２
＜エリナシンＱからエリナシンＰへの経日変換＞
ファーマメディア培地にてヤマブシタケの菌糸体を２５℃の暗所で振盪培養し、培養日数６、８、１１、１５、１９及び２３日目に培養液のサンプリングを行い、吸引濾過して菌糸体を得た。この菌糸体を２０ｍｌアセトン中でワーリングブレンダーで１分間破砕し、５０℃で３０分間撹拌した後、吸引濾過してアセトン水溶液を得た。
【００３３】
次いで、アセトン水溶液をエバポレーターで減圧濃縮して食塩飽和した後、酢酸エチル３０ｍｌで抽出した。酢酸エチル相を飽和食塩水洗および芒硝による脱水後、エバポレーターで減圧濃縮して酢酸エチルを蒸発除去し、乾固物を回収した。各乾固物を１００μｌのＨＰＬＣ溶出溶媒で溶解し、夫々５μｌを供試してＨＰＬＣ分析を行った結果、表１に示す様に、エリナシンＱの産生ピークは培養日数１１日目であり、エリナシンＰの産生ピークが培養日数１９日目であることから、菌糸体内でエリナシンＱからエリナシンＰへ経日的に変化していることが確認された。
【００３４】
【表１】
0004770032.tif 000004
【００３５】
実施例３
＜エリナシンＰからエリナシンＱへの人為的変換＞
エリナシンＰからエリナシンＱへの化学変換を目的として、本発明のエリナシンＱを使用し、メタノール溶媒中、氷冷・撹拌下、過剰のＮａＢＨ4を加えて２０分間０℃で撹拌を続けた。反応の終了をＴＬＣ（クロロホルム：エタノール＝１０：１）で確認後、混合物をＮＨ4Ｃｌ水溶液で希釈し、酢酸エチルで抽出した。
有機相を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ4で処理後、エバポレーターで減圧濃縮して酢酸エチルを蒸発除去し、乾固物を回収した。得られた乾固物はＳｉＯ2カラム（クロロホルム：エタノール＝８：１）で分離精製することにより、７５％の収率でエリナシンＱとして回収した。
【００３６】
上記の様に、エリナシンＰの反応液からエリナシンＱが単一物質として分離できたこと、菌糸体内でエリナシンＱからエリナシンＰへ経日的に変化することが確認できたことから、本発明のシアタン誘導体であるエリナシンＱはエリナシンＰの前駆体であることが実験的に証明された。
【００３７】
【発明の効果】
以上説明した本発明のシアタン誘導体（エリナシンＱ）は、他の有用なシアタン誘導体、例えば、ＮＧＦ産生誘導剤などとしてのエリナシンＡまたはエリナシンＢへの人為的な変換を容易に行い得る効果を有する。しかも、本発明のシアタン誘導体は、菌糸体内の培養初期の段階で短期間に産生されることから、有用なシアタン誘導体を効率的に合成し得るという効果を有する。