(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物であって、
【化１】
0004689826.tif 000062
上式で、
Ｘが、ＣＯＯＨ、ＮＨＺ、ＳＨ、またはＯＨから選択され、Ｚが、ＨあるいはＦｍｏｃ（９−フルオレニルメトキシカルボニル）、Ｎｖｏｃ（６−ニトロベラトリルオキシカルボニル）、Ｔｅｏｃ（２−トリメチルシリルエチルオキシカルボニル）、Ｔｒｏｃ（２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニル）、Ｂｏｃ（ｔ−ブチルオキシカルボニル）、ＣＢＺ（ベンジルオキシカルボニル）、Ａｌｌｏｃ（アリルオキシカルボニル）、およびＰｓｅｃ（２（−フェニルスルホニル）エチルオキシカルボニル）から選択されるアミノ保護基のいずれかであり、
Ａが、Ｏ、Ｓ、ＮＨまたは単結合であり、
Ｒ２およびＲ３が独立に、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、＝Ｏ、＝ＣＨ−Ｒ、＝ＣＨ２、ＣＨ２−ＣＯ２Ｒ、ＣＨ２−ＣＯ２Ｈ、ＣＨ２−ＳＯ２Ｒ、Ｏ−ＳＯ２Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲおよびＣＮから選択され、Ｃ１とＣ２の間またはＣ２とＣ３の間には任意選択で二重結合があり、
Ｒ６、Ｒ７およびＲ９が独立に、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロ、ニトロ、アミノ、Ｍｅ３Ｓｎから選択され、
Ｒ１１が、ＨあるいはＲのいずれかであり、
Ｑが、Ｓ、ＯまたはＮＨであり、
Ｒ１０が、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメトキシカルボニル）、Ｎｖｏｃ（６−ニトロベラトリルオキシカルボニル）、Ｔｅｏｃ（２−トリメチルシリルエチルオキシカルボニル）、Ｔｒｏｃ（２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニル）、Ｂｏｃ（ｔ−ブチルオキシカルボニル）、ＣＢＺ（ベンジルオキシカルボニル）、Ａｌｌｏｃ（アリルオキシカルボニル）、およびＰｓｅｃ（２（−フェニルスルホニル）エチルオキシカルボニル）から選択される窒素保護基であり、
Ｒが、１から１０個の炭素原子を有する低級アルキル基、または炭素数が１２個までのアラルキル基であって、アルキル基が任意選択で共役系の一部を形成していてもよい１つまたは複数の炭素−炭素二重結合または三重結合を含んでよく、または、Ｒは炭素数が１２個までのアリール基であり、ここで、Ｒは、任意選択で１つまたは複数のハロ、ヒドロキシ、アミノ、またはニトロ基で置換され、
Ｙが、上記ＲからＨを除いた２価の基、である化合物。
【請求項２】
ＲおよびＨＹが独立に、任意選択で１つまたは複数のハロ、ヒドロキシ、アミノ、またはニトロ基で置換されている１から１０個の炭素原子を有する低級アルキル基から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＲおよびＨＹが独立に、１から１０個の炭素原子を有する無置換の直鎖または分枝鎖アルキル基から選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１０が、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）環構造の１０位の窒素原子と結合するカーバメート官能基を有する、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ７が、アルキル、アミン、ヒドロキシル、アルコキシから選択される電子供与基である、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
ＱがＯ、および／またはＲ１１がＨである、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ６およびＲ９がＨである、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ７がアルコキシ基である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２およびＲ３がＨである、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｃ２とＣ３の間に二重結合が存在しない、請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
−Ｙ−Ａ−がアルコキシ鎖である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ピロロベンゾジアゼピンの収集、これらの化合物を固体支持体上で合成する方法、およびその中の有用性のある化合物に関する。本発明はさらに、このような収集から有用で様々な活性を有するピロロベンゾジアゼピン化合物を識別し分離する方法に関する。
【０００２】
発明の背景
生物活性を有する化合物は、合成化学技法によって製造される化合物の収集（すなわち、化合物のライブラリー）をスクリーニングすることによって識別することができる。このようなスクリーニング方法には、ライブラリーが固体支持体表面上の特定の位置で合成された複数の化合物を含み、ここで受容体を、例えば、蛍光または放射能標識によって適当に標識して化合物と結合するのを識別する方法が含まれる。支持体に結合した標識受容体と支持体上のその位置との相関関係は、結合する化合物を識別する（米国５，１４３，８５４）。
【０００３】
これらの方法の中心となるのは、ライブラリー中の様々な化合物をスクリーニングすること、および必要な生物活性を有する化合物の構造を識別する能力である。合成および識別を容易にするため、ライブラリー中の化合物は通常、固体支持体上に生成する。このようなそれぞれの化合物は通常、開裂可能または開裂不可能な結合手を介して支持体に共有結合させる。化合物のライブラリーは、固体支持体上、あるいは開裂した生成物としてスクリーニングし、良好な生物学的活性を有する化合物を識別する。
【０００４】
発明の背景
合成および天然に存在する多くの低分子量リガンドは、副溝（groove）または主溝中の共有結合または非共有結合相互作用、塩基対間のインターカレーションもしくはその他のタイプの非特異的相互作用を含む多くの異なる機構によりＤＮＡと相互作用することが知られている。
【０００５】
副溝と相互作用する化合物の具体例は、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）である。ＰＢＤは、ＤＮＡの特異的配列を認識し結合する能力を有しおり、最も好ましい配列は、ＰｕＧＰｕ（プリン−グアニン−プリン）である。初めてのＰＢＤ抗腫瘍性抗生物質であるアントラマイシン（ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）は、１９６５年に発見された（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ他、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、８７巻、５７９３〜５７９５ページ、１９６５年；Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ他、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、８７巻、５７９１〜５７９３ページ、１９６５年）。それ以来、多くの天然に存在するＰＢＤが報告され、様々な類似体に対して１０種を超える合成経路が開発された（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ他、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．、４３３〜４６５ページ、１９９４年）。ファミリーメンバーには、アベイマイシン（ａｂｂｅｙｍｙｃｉｎ）（Ｈｏｃｈｌｏｗｓｋｉ他、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、４０巻、１４５〜１４８ページ、１９８７年）、キカマイシン（ｃｈｉｃａｍｙｃｉｎ）（Ｋｏｎｉｓｈｉ他、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、３７巻、２００〜２０６ページ、１９８４年）、ＤＣ−８１（日本特許５８−１８０４８７；Ｔｈｕｒｓｔｏｎ他、Ｃｈｅｍ．Ｂｒｉｔ．、２６巻、７６７〜７７２ページ、１９９０年；Ｂｏｓｅ他、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、４８巻、７５１〜７５８、１９９２年）、マゼトラマイシン（ｍａｚｅｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（Ｋｕｍｉｎｏｔｏ他、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、３３巻、６６５〜６６７ページ、１９８０年）、ネオトラマイシン（ｎｅｏｔｈｒａｍｙｃｉｎｓ）ＡおよびＢ（Ｔａｋｅｕｃｈｉ他、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、２９巻、９３〜９６ページ、１９７６年）、ポロトラマイシン（ｐｏｒｏｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（Ｔｓｕｎａｋａｗａ他、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、４１巻、１３６６〜１３７３ページ、１９８８年）、プロトラカルシン（ｐｒｏｔｈｒａｃａｒｃｉｎ）（Ｓｈｉｍｉｚｕ他、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、２９巻、２４９２〜２５０３ページ、１９８２年；ＬａｎｇｌｅｙおよびＴｈｕｒｓｔｏｎ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、５２巻、９１〜９７ページ、１９８７年）、シバノミシン（ｓｉｂａｎｏｍｉｃｉｎ）（ＤＣ−１０２）（Ｈａｒａ他、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、４１巻、７０２〜７０４ページ、１９８８年；Ｉｔｏｈ他、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、４１巻、１２８１〜１２８４ページ、１９８８年）、シビロマイシン（ｓｉｂｉｒｏｍｙｃｉｎ）（Ｌｅｂｅｒ他、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１１０巻、２９９２〜２９９３ページ、１９８８年、およびトママイシン（ｔｏｍａｍｙｃｉｎ）（Ａｒｉｍａ他、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、２５巻、４３７〜４４４ページ、１９７２年）が含まれる。
【０００６】
ＰＢＤの一般構造は下式である。
【０００７】
【化１９】
0004689826.tif 000002
【０００８】
これらのＰＢＤは、芳香族Ａ環とピロロＣ環の置換基数、タイプおよび位置、ならびにＣ環の飽和度が異なる。
【０００９】
Ｎ１０−Ｃ１１位にはイミン（Ｎ＝Ｃ）、カルビノールアミン（ＮＨ−ＣＨ（ＯＨ））あるいはカルビノールアミンメチルエーテル（ＮＨ−ＣＨ（ＯＭｅ））のいずれかが存在し、ＤＮＡのアルキル化に関与する求電子中心である。知られているすべての天然型生成物は、キラルなＣ１１ａ位で（Ｓ）配置を有し、Ｃ環からＡ環に向かって見たときに右手系のねじれをもたらしている。このことは、Ｂ形ＤＮＡの副溝とのイソヘリシティー（ｉｓｏｈｅｌｉｃｉｔｙ）にとって適当な三次元形状をもたらし、結合部位にぴったり合うものにしている（Ｋｏｈｎ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ＩＩＩ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、３〜１１ページ、１９７５年；ＨｕｒｌｅｙおよびＮｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ、Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．、１９巻、２３０〜２３７ページ、１９８６年）。副溝中で付加体を生成するそれらの能力は、ＰＢＤがＤＮＡプロセッシングを妨害し、抗腫瘍剤として使用することを可能にする。
【００１０】
発明の開示
本発明の第１の態様は、式（Ｉ）の化合物に関し、
【００１１】
【化２０】
0004689826.tif 000003
上式で、
Ｘは、ＣＯＯＨ、ＮＨＺ、ＳＨ、またはＯＨであり、Ｚは、Ｈあるいはアミノ保護基のいずれかであり、
Ａは、Ｏ、Ｓ、ＮＨまたは単結合であり、
Ｒ２およびＲ３は独立に、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、＝Ｏ、＝ＣＨ−Ｒ、＝ＣＨ２、ＣＨ２−ＣＯ２Ｒ、ＣＨ２−ＣＯ２Ｈ、ＣＨ２−ＳＯ２Ｒ、Ｏ−ＳＯ２Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲおよびＣＮから選択され、Ｃ１とＣ２の間またはＣ２とＣ３の間には任意選択で二重結合があり、
Ｒ６、Ｒ７およびＲ９は独立に、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロ、ニトロ、アミノ、Ｍｅ３Ｓｎから選択され、
Ｒ１１は、ＨあるいはＲのいずれかであり、
Ｑは、Ｓ、ＯまたはＮＨであり、
Ｒ１０は、窒素保護基であり、
Ｒは、１から１０個の炭素原子を有する低級アルキル基、またはアラルキル基（すなわち、１つまたは複数のアリール置換基を有するアルキル基）であって、好ましくは炭素数が１２個までであり、前記アルキル基は任意選択で共役系の一部を形成していることもある１つまたは複数の炭素−炭素二重結合または三重結合を含み得、または、Ｒはアリール基であって好ましくは炭素数が１２個までであり、ここで、Ｒは任意選択で１つまたは複数のハロ、ヒドロキシ、アミノ、またはニトロ基で置換され、任意選択で官能基の一部を形成するか官能基であってもよい１つまたは複数のヘテロ原子を含んでもよく、
Ｙは、ＨＹ＝Ｒのような二価の基である。
【００１２】
これらの化合物は、ピロロベンゾジアゼピンの収集の合成に有用である。式Ｉの化合物は、例えば、コンビナトリアルユニットの鎖を含む連結リンクを介し、固体支持体に接続することができる。Ｎ１０保護がないと、カップリング段階におけるイミン結合との望ましからぬ副反応の危険が増大すると思われる。
【００１３】
Ｒがアリール基で、ヘテロ原子を含む場合、Ｒは複素環式基である。Ｒがアルキル鎖で、ヘテロ原子を含む場合、例えば、−Ｏ−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ３のようにヘテロ原子はアルキル鎖のどこに位置してもよいし、あるいは、例えば、カルボニル、ヒドロキシなどの官能基の一部を形成するかまたは官能基であってもよい。
【００１４】
ＲおよびＨＹ基は独立に、１から１０個の炭素原子を有する低級アルキル基、または好ましくは１２個までの炭素原子のアラルキル基、または、好ましくは１２個までの炭素原子のアリール基から選択され、任意選択で１つまたは複数のハロ、ヒドロキシ、アミノ、またはニトロ基で置換されていることが好ましい。ＲおよびＨＹ基は独立に、１から１０個の炭素原子を有し、任意選択で１つまたは複数のハロ、ヒドロキシ、アミノ、またはニトロ基で置換される低級アルキル基から選択されることがより好ましい。ＲまたはＨＹ基は、１から１０個、好ましくは１から６個、より好ましくは１から４個の炭素原子を有する無置換の直鎖または分枝鎖のアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチルであることが特に好ましい。
【００１５】
あるいは、Ｒ６、Ｒ７およびＲ９は独立に、下記の構造的特徴を有するＲ基から選択されることが好ましい。
【００１６】
（ｉ）任意選択で置換されたフェニル基、
（ｉｉ）任意選択で置換されたエテニル基、
（ｉｉｉ）エレクトロンシンク（electron sink）と共役するエテニル基。
【００１７】
「エレクトロンシンク」という用語は、化合物の他の部分における電子密度を減らすことができる、化合物に共有結合した部分を意味する。エレクトロンシンクの例には、シアノ、カルボニルおよびエステル基が含まれる。
【００１８】
「窒素保護基」（または「アミン保護基」）という用語は、合成化学、特に合成ペプチド化学における通常の意味を有する。この用語は、ピロロベンゾジアゼピン（またはアミン）基の窒素原子と共有結合し、この基を含む分子に対してその基が除去されることなく反応を行うことを可能にするいかなる基も意味する。しかしながら、分子の残りに影響を与えることなく窒素原子から除去することが可能である。本発明に適当な窒素保護基には、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメトキシカルボニル）、Ｎｖｏｃ（６−ニトロベラトリルオキシカルボニル）、Ｔｅｏｃ（２−トリメチルシリルエチルオキシカルボニル）、Ｔｒｏｃ（２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニル）、Ｂｏｃ（ｔ−ブチルオキシカルボニル）、ＣＢＺ（ベンジルオキシカルボニル）、Ａｌｌｏｃ（アリルオキシカルボニル）、およびＰｓｅｃ（２（−フェニルスルホニル）エチルオキシカルボニル）が含まれる。その他の適当な基は、１９９１年にＷｉｌｅｙから出版されたＴ  ＧｒｅｅｎおよびＰ  ＷｕｔｓによるＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓに述べられており、これを参照により本明細書に組み込む。窒素保護基は、ＰＢＤ環構造の１０位の窒素原子に結合するカーバーメート官能基を有することが好ましい。
【００１９】
Ｒ７は、電子供与基であることが好ましい。「電子供与基」は、分子の他の部分における電子密度を増やすことができる化合物に共有結合した部分を意味する。本発明で有用な電子供与基の例には、アルキル、アミン、ヒドロキシル、アルコキシなどが含まれる。
【００２０】
式Ｉの化合物では、Ｑは、Ｏであることが好ましく、Ｒ１１は、Ｈであることが好ましい。Ｒ６およびＲ９は独立に、Ｈであることが好ましく、Ｒ７は、アルコキシ基であることが好ましく、メトキシまたはエトキシであることがより好ましい。さらに、Ｃ環に二重結合がある場合には、Ｃ２とＣ３の間であることが好ましい。この場合、Ｒ２およびＲ３は、Ｈであることが好ましい。
【００２１】
−Ｙ−Ａ−は、アルコキシ鎖であることが好ましく、エトキシ鎖であることが好ましい。
【００２２】
本発明の第２の態様は、式ＩＩの化合物に関し、
【００２３】
【化２１】
0004689826.tif 000004
上式で、Ｙ、Ａ、Ｒ７、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、およびＲ９は、本発明の第１の態様に記載の通りであり、
Ｘ’は、ＣＯ、ＮＨ、ＳまたはＯであり、
Ｔは、コンビナトリアルユニットであり、
ｎは、正の整数で、ｎが２以上の場合、それぞれのＴは異なっていてもよい。
【００２４】
Ｘ’は、ＣＯあるいはＮＨのどちらかであることが好ましい。ｎは、１から１６であることが好ましく、３から１４であることがより好ましい。
【００２５】
本発明の第３の態様は、式ＩＩＩの化合物に関し、
【００２６】
【化２２】
0004689826.tif 000005
上式で、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ７、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ９およびＴは、本発明の第２の態様に記載の通りであり、
ｎは、ゼロまたは正の整数であり、
Ｌは、結合基であり、単結合であることは好ましくなく、
〇は、固体支持体であり、ｎが２以上の場合、それぞれのＴは異なっていてもよい。
【００２７】
本発明の第４の態様は、式ＩＶの化合物に関し、
【００２８】
【化２３】
0004689826.tif 000006
上式で、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ７、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ９、Ｔ、ｎ、Ｌおよび〇は、本発明の第３の態様に記載の通りであり、Ｒ１０、Ｒ１１、およびＱは、本発明の第１の態様に記載の通りである。
【００２９】
本発明の第５の態様は、式Ｉの化合物を式Ｖの化合物と反応させることによる本発明の第４の態様に記載した式ＩＶの化合物の製造方法に関し、
【００３０】
【化２４】
0004689826.tif 000007
上式で、〇、Ｌ、Ｔおよびｎは、本発明の第４の態様に記載の通りであり、Ｂは、Ｈであるか、または、Ｘとの反応を可能にする官能基を提供する原子または基である。
【００３１】
本発明の第６の態様は、式ＶＩの化合物に関し、
【００３２】
【化２５】
0004689826.tif 000008
上式で、〇、Ｌ、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９およびＴは、本発明の第２の態様に記載の通りであり、
ｎおよびｍは、正の整数であるか、それらのうち１つはゼロであってもよく、
Ｔ’は、コンビナトリアルユニットであり、ｍが２以上の場合、それぞれのＴ’は異なっていてもよく、
Ｔ”は、Ｘ’の結合のための部位を提供するコンビナトリアルユニットであり、
ｐは、正の整数であり、ｐが２以上の場合、それぞれの繰り返し単位について、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”の意味ならびにｎおよびｍの値は独立に選択される。
【００３３】
例えば、Ｘ’がＣＯの場合、Ｔ”上の部位はＮＨであってもよく、Ｘ’がＮＨ、ＳまたはＯの場合、Ｔ”上の部位はＣＯであってもよい。
【００３４】
本発明の第６の態様の好ましい態様では、化合物は式（ＶＩａ）であり、
【００３５】
【化２６】
0004689826.tif 000009
上式で、〇、Ｌ、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｔ、Ｔ”は、前に定義した通りである。
【００３６】
本発明の第７の態様は、式ＶＩＩの化合物に関し、
【００３７】
【化２７】
0004689826.tif 000010
上式で、〇、Ｌ、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、ｎ、ｍ、およびｐは、本発明の第６の態様に記載の通りであり、Ｑ、Ｒ１０、およびＲ１１は、本発明の第１の態様に記載の通りであり、ｐが２以上の場合、それぞれの繰り返し単位について、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、Ｑ、Ｒ１０、およびＲ１１の意味ならびにｎおよびｍの値は独立に選択される。
【００３８】
本発明の第８の態様は、式ＶＩＩＩの化合物に関し、
【００３９】
【化２８】
0004689826.tif 000011
上式で、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、ｎ、ｍ、およびｐは、本発明の第６の態様に記載の通りであり、ｐが２以上の場合、それぞれの繰り返し単位について、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”の意味ならびにｎおよびｍの値は独立に選択される。
【００４０】
本発明の第９の態様は、式ＩＸの化合物に関し、
【００４１】
【化２９】
0004689826.tif 000012
上式で、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｑ、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、ｎ、ｍ、およびｐは、本発明の第７の態様に記載の通りであり、ｐが２以上の場合、それぞれの繰り返し単位について、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ７、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、Ｑ、Ｒ１０、およびＲ１１の意味ならびにｎおよびｍの値は独立に選択される。
【００４２】
本発明の第１０の態様は、式Ｘの化合物に関し、
【００４３】
【化３０】
0004689826.tif 000013
上式で、〇、Ｌ、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、ｎ、ｍ、およびｐは、本発明の第６の態様に記載の通りであり、Ｘ”、Ｙ’、Ａ’、Ｒ’２、Ｒ’３、Ｒ’６、Ｒ’７およびＲ’９はそれぞれ、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７およびＲ９と同一の可能性から選択され、ｐが２以上の場合、それぞれの繰り返し単位について、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”の意味ならびにｎおよびｍの値は独立に選択することができる。
【００４４】
本発明の第１１の態様は、式ＸＩの化合物に関し、
【００４５】
【化３１】
0004689826.tif 000014
上式で、〇、Ｌ、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｘ”、Ｙ’、Ａ’、Ｒ’２、Ｒ’３、Ｒ’６、Ｒ’７、Ｒ’９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、ｎ、ｍ、およびｐは、本発明の第１０の態様に記載の通りであり、Ｑ、Ｒ１０、およびＲ１１は、本発明の第１の態様に記載の通りであり、Ｑ’、Ｒ’１０、および’Ｒ１１はそれぞれ、Ｑ、Ｒ１０、Ｒ１１と同一の定義を有し、ｐが２以上の場合、それぞれの繰り返し単位について、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、Ｑ、Ｒ１０、Ｒ１１の意味ならびにｎおよびｍの値は独立に選択される。
【００４６】
本発明の第１２の態様は、式ＸＩＩの化合物に関し、
【００４７】
【化３２】
0004689826.tif 000015
上式で、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ７、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ９、Ｘ”、Ｙ’、Ａ’、Ｒ’７、Ｒ’２、Ｒ’３、Ｒ’６、Ｒ’９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、ｎ、ｍ、およびｐは、本発明の第１０の態様に記載の通りであり、ｐが２以上の場合、それぞれの繰り返し単位について、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”の意味ならびにｎおよびｍの値は独立に選択することができる。
【００４８】
本発明の第１３の態様は、式ＸＩＩＩの化合物に関し、
【００４９】
【化３３】
0004689826.tif 000016
上式で、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｑ、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｘ”、Ｙ’、Ａ’、Ｒ’２、Ｒ’３、Ｒ’６、Ｒ’７、Ｒ’９、Ｑ’、Ｒ’１０、Ｒ’１１、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、ｎ、ｍ、およびｐは、本発明の第１１の態様に記載の通りであり、ｐが２以上の場合、それぞれの繰り返し単位について、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、Ｑ、Ｒ１０、Ｒ１１の意味ならびにｎおよびｍの値は独立に選択することができる。
【００５０】
本発明の第１４の態様は、式ＸＩＶの化合物に関し、
【００５１】
【化３４】
0004689826.tif 000017
上式で、〇、Ｌ、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、ｎ、ｍ、およびｐは、本発明の第６の態様に記載の通りであり、Ｔ'''およびｑはそれぞれ、Ｔおよびｎと同一の可能性から選択され、ｐが２以上の場合、それぞれの繰り返し単位について、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、Ｔ'''の意味ならびにｎ、ｍおよびｑの値は独立に選択することができる。
【００５２】
本発明の第１５の態様は、式ＸＶの化合物に関し、
【００５３】
【化３５】
0004689826.tif 000018
上式で、〇、Ｌ、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、Ｔ'''、ｎ、ｍ、ｐおよびｑは、本発明の第１４の態様に記載の通りであり、Ｑ、Ｒ１０、およびＲ１１は、本発明の第１の態様に記載の通りであり、ｐが２以上の場合、それぞれの繰り返し単位について、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、Ｔ'''の意味ならびにｎ、ｍおよびｑの値は独立に選択することができる。
【００５４】
本発明の第１６の態様は、式ＸＶＩの化合物に関し、
【００５５】
【化３６】
0004689826.tif 000019
上式で、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ７、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ９、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、Ｔ'''、ｎ、ｍ、ｐおよびｑは、本発明の第１４の態様に記載の通りであり、ｐが２以上の場合、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、Ｔ'''の意味ならびにｎ、ｍおよびｑの値は独立に選択することができる。
【００５６】
本発明の第１７の態様は、式ＸＶＩＩの化合物に関し、
【００５７】
【化３７】
0004689826.tif 000020
上式で、Ｘ’、Ｙ、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｑ、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、Ｔ'''、ｎ、ｍ、ｐおよびｑは、本発明の第１４の態様に記載の通りであり、ｐが２以上の場合、それぞれの繰り返し単位について、Ｔ、Ｔ’、Ｔ”、Ｔ'''の意味ならびにｎ、ｍおよびｑの値は独立に選択することができる。
【００５８】
固体支持体
「固体支持体」という用語は、硬質または半硬質の表面を有する材料であって、その表面に化合物を共有結合させるのに役立つことができる反応性の官能基を含むか、含むように誘導化することができる材料を意味する。このような材料は当技術分野では知られており、例えば、反応性Ｓｉ−ＯＨ基を含む二酸化ケイ素支持体、ポリアクリルアミド支持体、ポリスチレン支持体、ポリエチレングリコール支持体などが含まれる。このような支持体は、小ビーズ、ピン型クラウン（ｐｉｎｓ／ｃｒｏｗｎｓ）、層状表面、ペレット、ディスクの形をとることが好ましい。従来からの他の形も使用することができる。
【００５９】
リンカー基
本出願に適当な結合基の一種は、その構造中に、
【００６０】
【化３８】
0004689826.tif 000021
を有し、特異的化学反応により（または光またはｐＨの変化により）容易に切断され、それによって固体支持体を含まない化合物を遊離することができる少なくとも一個の共有結合を提供する基である。共有結合を切断するのに用いる方法は、所望の結合切断に特異的であることにより、複合体のどこかで目的外の反応が起こるのを防ぐように選択する。結合基は、固体支持体上で生成される化合物の合成に関し、化合物が固体支持体から早期に開裂するのを防ぐばかりでなく、支持体上の化合物合成中に用いるどのような手順による妨害も抑えるように選択する。
【００６１】
結合基を導入する樹脂の例を下表に示すが、この表はまた、樹脂上に固定化することができる基を、その結合基に推奨される開裂方法と共に示している。このような樹脂は、市販されている（例えば、ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍより）。この表はまた、どの結合基がＮ１０位が保護されていない化合物にとって適当であるか、すなわち開裂方法がＮ１０−Ｃ１１イミン結合に影響を与えないと思われるのはどのような結合基であるかを示している。
【００６２】
【表１】
0004689826.tif 000022
【００６３】
【化３９】
0004689826.tif 000023
【００６４】
保護ＰＢＤの場合、最も好ましい結合基はＲｉｎｋリンカーであり、ＴＦＡによって開裂可能である。次いで、Ｎ−保護ＰＢＤを光分解で脱保護することができる。非保護ＰＢＤの場合、選択すべき結合基は、光に不安定な基である。
【００６５】
結合基が固体支持体上に提供される単純な官能基、例えばアミンであることも可能であり、この場合、結合基を容易に開裂することはできない。このタイプの結合基は、開裂を必要としないオンビーズスクリーニング（下記参照）に供される大きなスプリットアンドミックス（ｓｐｌｉｔ  ａｎｄ  ｍｉｘ）ライブラリーの合成に有用である。このような樹脂は、ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈおよびＲａｐｐ  Ｐｏｌｙｍｅｒｅを含む多くの会社から市販されている。これらの樹脂には、アミノ−Ｔｅｎｔａｇｅｌ、およびアミノメチル化ポリスチレン樹脂が含まれる。
【００６６】
コンビナトリアルユニット
「コンビナトリアルユニット」という用語は、通常結合基によって固体支持体に接続される鎖を構築するのに用いることができるいかなるモノマーユニットも意味する。このような鎖構築に適当な分子の例は、参照により本明細書に組み込むＳｃｈｒｅｉｂｅｒ他（ＪＡＣＳ、１２０巻、２３〜２９ページ、１９９８年）に見いだされる。ユニットの重要な例はアミノ酸残基である。鎖は、アミン保護のアミノ酸により合成することができる。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸は、ＳｉｇｍａおよびＮｏｖａ  Ｂｉｏｃｈｅｍなどの多くの供給元から市販されている。天然型および非天然型アミノ酸、例えば、Ｄ−およびＬ−アミノ酸および複素環式アミノ酸を使用することができる。特に、ネトロプシン（ｎｅｔｒｏｐｓｉｎ）およびディスタマイシン（ｄｉｓｔａｍｙｃｉｎ）の構築に見いだされるタイプの複素環式アミノ酸は、それらのＤＮＡ認識特性から興味が持たれる。
【００６７】
アミンユニットを用い、ペプトイドを作成することができる。Ｓｏｔｈ、Ｍ．Ｊ．およびＮｏｗｉｃｋ、Ｊ．Ｓ．、Ｕｎｎａｔｕｒａｌ  ｏｌｉｇｏｍｅｒ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ、Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．、１巻（１号）、１２０〜１２９ページ、１９９７年；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ他、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｎａｎｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｌｉｇａｎｄｓ  ｆｏｒ  ７−Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｇ−Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｆｒｏｍ  ａ  Ｄｉｖｅｒｓｅ  Ｎ−（Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ）ｇｌｙｃｉｎｅ  Ｐｅｐｔｏｉｄ  Ｌｉｂｒａｒｙ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３７巻、２６７８〜８５ページ、１９９４年；Ｆｉｇｌｉｏｚｚｉ、ＧＭＲ他、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｎ−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  Ｇｌｙｃｉｎｅ  Ｐｅｐｔｏｉｄ  Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２６７巻、４３７〜４７ページ、１９９６年；Ｓｉｍｏｎ、ＲＪ他、Ｐｅｐｔｏｉｄｓ：Ａ  Ｍｏｄｕｌａｒ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳＡ、８９巻、９３６７〜７１ページ、１９９２年を参照されたい。これらすべてを参照により本明細書に組み込む。
【００６８】
他のコンビナトリアルユニットには、ＰＮＡ（ペプチド核酸）：Ｐ  Ｅ  Ｎｉｅｌｓｅｎ、他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５４巻、１４９７ページ、１９９１年；Ｍ  Ｅｇｈｏｌｍ、他、Ｎａｔｕｒｅ、３６５巻、５６６ページ、１９９３年；Ｍ  Ｅｇｈｏｌｍ、他、ＪＡＣＳ、１１４巻、１８９５ページ、１９９２年；Ｓ  Ｃ  Ｂｒｏｗｎ、他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６５巻、７７７ページ、１９９４年；５．Ｋ  Ｓａｈａ、他、ＪＯＣ、５８巻、７８２７ページ、１９９３年；オリゴウレア：Ｂｕｒｇｅｓｓ  Ｋ、他、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｕｎｎａｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｒｅｐｅａｔｉｎｇ  Ｕｒｅａ  Ｕｎｉｔｓ。Ａｇｎｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｘａｍｉｎｉｎｇ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ．Ｅｎｇｌ。３４巻（８号）、９０７ページ、１９９５年；Ｂｕｒｇｅｓｓ  Ｋ、他、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｏｌｉｇｏｕｒｅａｓ；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、１１９巻、１５５６〜６４ページ、１９９７年；およびオリゴカーバメート：Ｍｏｒａｎ  Ｅ  Ｊ他、Ｎｏｖｅｌ  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ。Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、３７巻、２１３〜１９ページ、１９９５年；Ｃｈｏ  Ｃ  Ｙ他、Ａｎ  Ｕｎｎａｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒ。Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６１巻、１３０３〜５ページ、１９９３年；Ｐａｉｋｏｆｆ  Ｓ  Ｆ他、Ｔｈｅ  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｎ−Ａｌｋｙｌｃａｒｂａｍａｔｅ  Ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ。Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、３７巻（３２号）、５６５３〜５６ページ、１９９６年が含まれる。これらの文献すべてを、参照により本明細書に組み込む。
【００６９】
本発明と特に関連するタイプのコンビナトリアルユニットは、ピロロベンゾジアゼピン構造に基づくユニットであり、一般式ＸＶＩＩＩａおよびＸＶＩＩＩｂであり、
【００７０】
【化４０】
0004689826.tif 000024
上式で、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｑ、ＡおよびＹは、本発明の第１の態様に記載の通りであり、Ａ’およびＹ’は独立にそれぞれ、ＡおよびＹとして可能な基から選択される。
【００７１】
特に関連する他のタイプのコンビナトリアルユニットは、シクロプロピルインドール（「ＣＰＩユニット」）に基づくユニットである。このようなユニットは、ＤＮＡの副溝と共有結合で相互作用し、ＡＴに特異的であることが知られている。これらのユニットは、一般式ＸＩＸａおよびＸＩＸｂであり、
【００７２】
【化４１】
0004689826.tif 000025
上式で、Ｐｘ（存在する場合）は、求電子性脱離基であり、Ｐｙ（存在する場合）は、ＮＨ−Ｐｒｏｔ、Ｏ−Ｐｒｏｔ、Ｓ−Ｐｒｏｔ、ＮＯ２、ＮＨＯＨ、Ｎ３、ＮＨＲ、ＮＲＲ、Ｎ＝ＮＲ、Ｎ（Ｏ）ＲＲ、ＮＨＳＯ２Ｒ、Ｎ＝ＮＰｈＲ、ＳＲまたはＳＳＲであり、
Ｐｒｏｔは、保護基を表し、
Ｐ’ｙ（存在する場合）は、ＮＨ、ＯおよびＳから選択され、
ＤおよびＥは、一緒になって縮合ベンゼンまたはピロール環（どちらかの配向性で）を表し、これらの環は任意選択でそれぞれ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロ、ニトロ、アミノ、Ｍｅ３Ｓｎ、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２Ｒから独立に選択される３個または１個までの追加の基によって置換されており、
Ｐ２およびＰ７は独立に、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロ、ニトロ、アミノ、Ｍｅ３Ｓｎから選択される。
【００７３】
Ｒとして好ましいのは前記の通りである。Ｐｙは、ＮＨ−Ｐｒｏｔ、Ｏ−Ｐｒｏｔ、Ｓ−Ｐｒｏｔであることが好ましく、Ｐｘは、ハロゲンまたはＯＳＯ２Ｒであることが好ましい。さらに、−ＣＯ２−置換基は、ベンゼン環の２もしくは３位またはピロール環の２位にあることが好ましい。Ｐ２およびＰ７は、Ｈであることが好ましい。
【００７４】
これらの化合物は、Ｂｏｇｅｒ他、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．、９７巻、７８７〜８２８ページ、１９９７年；Ｃａｖａ他、Ｄｒｏｓｔ、Ｋ．Ｊ．；Ｃａｖａ、Ｍ．Ｐ．、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、５６巻、２２４０〜２２４４ページ、１９９１年；Ｒａｗａｌ、Ｖ．Ｈ．；Ｊｏｎｅｓ、Ｒ．Ｊ．；Ｃａｖａ、Ｍ．Ｐ．、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、５２巻、１９〜２８ページ、１９８７年；およびＡｒｉｓｔｏｆｆ、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、５７巻、６２３４〜６２３９ページ、１９９３年、１９９２年に記載の技法を用いて合成することができる。
【００７５】
下記の合成は、Ｂｏｇｅｒ法の応用例として示す。
【００７６】
ＣＰＩコンビナトリアルユニットの合成
合成は、３−ブロモ−ベンズアルデヒドとＳａｒｇｅｎｔホスホネートとのＷａｄｓｗｏｒｔｈ−Ｈｏｒｎｅｒ−Ｅｍｍｏｎｓ縮合で開始すると主にＥ異性体が得られ、これはさらに、酸触媒脱保護およびフリーデルクラフツアシル化を受ける。これによって官能基付きの前駆体が生成し、続いて５−エキソ−トリグ（５−ｅｘｏ−ｔｒｉｇ）アリールラジカル−アルケン環化を行う。
【００７７】
【化４２】
0004689826.tif 000026
【００７８】
芳香族求電子置換、エステル加水分解およびＤＰＰＡで処理することによって行われるクルチウス転位に続いて、位置選択的Ｃ４ヨウ素化および臭化アリルによるＮ−アルキル化を行う。ＣＢＩのＢｏｇｅｒ合成で述べたように、ラジカルトラップとしてのＴＥＭＰＯによるアリールラジカル−アルケン環化は、三環系を与え、一級塩化物への変換およびシアノ基の塩基触媒加水分解後に所望のコンビナトリアルユニットが得られる。本発明は、式ＩからＩＶ、およびＶＩからＸＶＩＩの１つによって表されるすべての化合物のライブラリーまたは収集に関する。ライブラリー中の化合物の多様性は、１つまたは複数の置換基の同一性および／またはコンビナトリアルユニットＴ（存在する場合）の同一性が異なる化合物の存在を反映することができる。ライブラリー中の構成要素数は、変形例の数、およびそれぞれの変形例についての可能性の数によって異なる。例えば、様々に変わるコンビナトリアルユニットであって、それぞれ３種類の可能性を持つ３種類のコンビナトリアルユニットがある場合には、ライブラリーは２７個の化合物を有することになる。４種類のコンビナトリアルユニットおよびそれぞれのユニットについて５種類の可能性があれば、６２５個の化合物のライブラリーとなる。例えば、それぞれのユニットについて１７種類の可能性を持つ５種類のコンビナトリアルユニットの鎖の場合、ライブラリー中の構成要素の合計数は１４０万個になるであろう。したがって、ライブラリーは、１０００、５０００、１００００、１０００００または１００万個を超え、以下に述べるように配置された化合物を含むことができる。
【００７９】
遊離の化合物（式Ｉ、ＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、ＸＩＩ、ＸＩＩＩ、ＸＶＩ、およびＸＶＩＩ）の場合には、個々の化合物は、個々の体積の溶媒中、例えば、管またはウエル中にあることが好ましい。結合化合物（式ＩＩＩ、ＩＶ、ＶＩ、ＶＩＩ、Ｘ、ＸＩ、ＸＩＶおよびＸＶ）の場合には、個々の化合物は、個々の位置で、例えば、それぞれピン型クラウンまたはビーズ上に結合していることが好ましい。化合物のライブラリーは、ライブラリーにとって適当なサイズのプレート上、または多くの標準サイズのプレート、例えば、９６ウエルプレート上に提供することができる。ライブラリーの構成要素数が大きい場合には、プレート上のそれぞれのウエルは、ライブラリーからの多くの、例えば１０から１００個の関連化合物を含むことが好ましい。このタイプの化合物の分類についての可能性の１つは、コンビナトリアルユニットのサブセットまたは置換基のみが知られており、残りは無作為化されているもので、この配列は、反復スクリーニング手順に有用である（下記参照）。ライブラリーは、よく知られている他の形で存在してもよい。
【００８０】
本発明の他の態様は、前述のような化合物の多様な収集またはライブラリーを調製する方法である。ライブラリーの多様性がコンビナトリアルユニットにある場合は、それぞれの段階に脱保護ステップがはさまれている保護されたコンビナトリアルユニットのＰＢＤ核への段階的付加によってライブラリーを合成することができる。このような方法は後で例示する。このタイプのライブラリーは、参照により本明細書に組み込む、Ｆｕｒｋａ、Ａ；Ｓｅｂｅｓｔｙｅｎ、Ｆ；Ａｓｇｅｄｏｍ、ＭおよびＤｉｂｏ、Ｇ；Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｒａｐｉｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｍｉｘｔｕｒｅｓ；Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；３７巻、４８７〜１９３ページ、１９９１年に記載の「スプリットアンドミックス」として知られている方法によって調製することができる。ライブラリーの多様性が置換基にある場合は、すでに必要な置換パターンを有している様々な出発材料または重要中間体に同一の合成方法を行うことによりライブラリーを合成することができる。
【００８１】
本発明はまた、式ＩＩ、ＩＩＩ、ＶＩ、ＶＩＩＩ、Ｘ、ＸＩＩ、ＸＩＶおよびＸＶＩの化合物をスクリーニングし、生物学的に活性な化合物を発見するための方法に関する。スクリーニングは、核酸、例えばＤＮＡまたはＲＮＡ、またはタンパク質との結合相互作用を評価すること、あるいはタンパク質−タンパク質または核酸−タンパク質相互作用、例えば転写因子ＤＰ−１とＥ２Ｆ−１、またはエストロゲン応答部位（ＥＲＥ）とヒトエストロゲン受容体（ホルモン活性化転写因子として機能する６６ｋｄのタンパク質で、その配列は当技術分野で公表され一般的に入手可能である）との相互作用に対する化合物の影響を評価することであってもよい。スクリーニングは、標的巨大分子を個々の化合物もしくは前述のアレイまたはライブラリーと接触させ、最も強い効果を示す化合物または化合物の混合物を含むウエルを選択することにより行うことができる。この効果は、単に細胞に対する問題の化合物の細胞毒性または核酸と化合物との結合であってもよい。タンパク質−タンパク質または核酸−タンパク質相互作用の場合には、この効果は被験相互作用の破壊であってもよい。
【００８２】
核酸への化合物の結合は、標的配列を含むオリゴマーを標識し、被験化合物に結合する標識オリゴマーの量を測定することにより評価することができる。標識は、放射能標識、あるいは可視光または紫外光の下で検出可能な標識であってもよい。後者の形のスクリーニングを離れた位置にある固体支持体に結合する化合物に対して行う場合には、結果のためのスクリーニングは顕微鏡下で視覚的に行うことができる。同様の技法は、「ＤＮＡ−Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｌｉｇａｎｄｓ  ｆｒｏｍ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｕｎｎａｔｕｒａｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ」、Ｌｅｓｃｒｉｎｉｅｒ他、Ｃｈｅｍ  Ｅｕｒ  Ｊ、４２５〜４３３ページ、１９９８年に詳細に述べられている。これらの技法は、化合物の完全ライブラリー、特に前述の「スプリットアンドミックス」法によって作成された大きなライブラリーの一段階スクリーニングには特に適している。
【００８３】
タンパク質−タンパク質相互作用は、多くの方法、例えば、一方のタンパク質を蛍光ドナー部分で標識し、他方を、ドナーからの発光を吸収することができる受容体で標識するＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー転移）で測定することができる。ドナーの蛍光シグナルは、２つのタンパク質間の相互作用に応じて変化する。タンパク質−タンパク質相互作用を測定する別の方法は、例えば、西洋わさびペルオキシダーゼを用いた酵素標識によるものである。
【００８４】
スクリーニング工程は、それぞれの反復で試験される最も活性な化合物、または化合物の群を選択することにより、何回かの反復を受けることができ、これは、関連化合物の混合物を含むウエルのアレイを試験する場合に特に有用である。さらに、ウエルが、コンビナトリアルユニットのサブセットまたは置換基だけが知られており、残りは無作為化されている化合物を含む場合には、以後の反復は、選択された知られている（および成功した）コンビナトリアルユニット、または置換基、パターンを有するが、別の指定されたコンビナトリアルユニットを有する化合物を合成し、すでに知られているパターンに隣接し、すでに無作為化されたコンビナトリアルユニット、または置換基を置き換えることによって行うことができる。残りのコンビナトリアルユニット、または置換基は、前の反復と同様に無作為化される。この反復法は、ライブラリーのあらゆる構成要素を単離する必要もなく大きなライブラリーの活性構成要素の識別を可能にする。
【００８５】
この態様の他の特徴は、選択された化合物または化合物を薬剤として許容される坦体または希釈剤と製剤化することである。
【００８６】
さらに別の態様において、本発明は、式ＩＩ、ＶＩＩＩ、ＸＩＩまたはＸＶＩの化合物および薬剤として許容される坦体または希釈剤を含む医薬品組成物、および遺伝子疾患、または細菌、寄生虫またはウイルス感染を治療するための薬剤を製造する際の式ＩＩ、ＶＩＩＩ、ＸＩＩまたはＸＶＩの化合物の使用法を提供する。遺伝子疾患には、新生物疾患、およびアルツハイマー病が含まれ、遺伝子発現の調節に感受性のいかなる疾患も含まれる。
【００８７】
式ＩＩ、ＶＩＩＩ、ＸＩＩまたはＸＶＩの化合物は、癌またはアルツハイマー病などの遺伝子疾患、もしくはウイルス、寄生虫または細菌感染に対する治療方法に用いることができる。
【００８８】
本発明の別の態様は、診断法における式ＩＩＩ、ＶＩ、ＸまたはＸＩＶの化合物の使用法に関する。式ＩＩＩ、ＶＩ、ＸまたはＸＩＶの化合物は、健康状態の指示薬であることが知られている特定の配列のＤＮＡまたはタンパク質と結合し、診断方法で使用することができる。この方法は、例えば、適当に処理した血液または組織抽出物のサンプルを、例えば、カラム中に固定化された式ＩＩＩ、ＶＩ  Ｘ、ＸＩＶの化合物上を通過させ、続いて、標的ＤＮＡの式ＩＩＩ、ＶＩまたはＸの化合物との結合が生じたかどうかを測定するものである。このような測定は、式ＩＩＩ、ＶＩまたはＸの化合物と結合することが知られている既知量の標識標的ＤＮＡをカラムに通し、結合せずに残った式ＩＩＩ、ＶＩ、ＸまたはＸＩＶの化合物の量を算出することにより行うことができるであろう。
【００８９】
本発明の他の態様は、ターゲットバリデーションにおける式ＩＩ、ＶＩＩＩ、ＸＩＩまたはＸＶＩの化合物の使用法に関する。ターゲットバリデーションは、配列の機能を明らかにするために識別されたＤＮＡ配列を破壊するものであり、式ＩＩ、ＶＩＩＩ、ＸＩＩまたはＸＶＩの化合物を用い、識別された配列を選択的に包み込むことにより、その機能、すなわち機能性ゲノム分析を破壊することができる。
【００９０】
好ましい合成戦略
式Ｉの化合物への好ましい経路における重要なステップは、Ｂ環を生成する環化工程であり、１１位となるアルデヒド（またはその官能等価体）の生成、およびプロ−１０−窒素によるアルデヒドへの攻撃を含む工程である。
【００９１】
【化４３】
0004689826.tif 000027
【００９２】
この構造では、ＤはＸＹ、またはそのマスクされた形を表す。「マスクされたアルデヒド」−ＣＰＱは、アセタールまたはチオアセタールであってもよく、その場合には、環化に脱マスキングが含まれる。あるいは、マスクされたアルデヒドは、アルコール−ＣＨＯＨなどのアルデヒド前駆体であってもよく、その場合には、反応にＴＰＡＰまたはＤＭＳＯ（スワーン酸化）による酸化が含まれる。
【００９３】
マスクされたアルデヒド化合物は、対応する２−置換ピロリジンを２−ニトロ安息香酸と縮合することによって製造することができる。
【００９４】
【化４４】
0004689826.tif 000028
【００９５】
次いで、ニトロ基を−ＮＨ２に還元し、適当な試薬、例えば、クロロホルメートと反応させることによって保護し、式Ｉの化合物中に除去可能な窒素保護基を得ることができる。
【００９６】
酸化−環化手順を含む工程をスキーム１に図示する（代替タイプの環化は、後にスキーム２を参照しながら説明する）。
【００９７】
【化４５】
0004689826.tif 000029
【００９８】
Ｒ１１が水素以外である場合には、式Ｉの化合物は、アルコールＩａの直接エーテル化によって調製することができる。Ｑ＝Ｓの化合物は、対応するアルコールＩａをＲ１１ＳＨ、および触媒（通常はＨＣＩの酸性溶液で、時にはＡｌ２Ｏ３などのルイス酸）で処理することによって調製することができる。Ｑ＝ＮＨの場合には、ＩａをＲ１１ＮＨ、および触媒（通常は水性の酸またはルイス酸）と反応させることによって調製することができる。
【００９９】
アルコールＢ（１０−窒素は一般にカーバメートとして保護されている）をＡ４シーブ上で過ルテニウム酸テトラプロピルアンモニウム（ＴＰＡＰ）／Ｎ−メチルモルホリンＮ−オキシド（ＮＭＯ）に曝露すると、自発的Ｂ閉環を伴う酸化が起こり、所望の生成物が得られる。ＴＰＡＰ／ＮＭＯ酸化手順は、小規模反応に特に好都合であることが分かっており、大規模実験（例えば、１ｇを超える）にはＤＭＳＯベースの酸化法、特にスワーン酸化を使用する方が良いことが分かっている。
【０１００】
非環化アルコールＢは、式Ｄの窒素保護試薬、好ましくはクロロホルメートまたは酸塩化物を、普通の温度（例えば、０℃）でピリジンなどの塩基（好ましくは２等量）の存在下、アミノアルコールＣの溶液に、通常は溶液で添加することによって調製することができる。これらの条件では、Ｏ−アシル化は通常、ほとんどあるいは全く観察されない。
【０１０１】
重要なアミノアルコールＣは、分子の残りの部分をそのままにしておく方法を選択することにより、対応するニトロ化合物Ｅの還元によって調製することができる。Ｅを適当な溶媒、例えば還流メタノール中で塩化スズ（ＩＩ）で処理すると、スズ塩を除去した後に所望の生成物が一般的に高収率で得られる。
【０１０２】
Ｅをヒドラジン／ラネーニッケルに曝露するとスズ塩の生成が回避され、Ｃが高収率で得られるが、この方法は、可能なＣおよびＡ環の置換基の範囲に余り適合していない。例えば、Ｃ環に不飽和がある場合には（環自体、もしくはＲ２またはＲ３中に）、この技法は不適当と思われる。
【０１０３】
式Ｅのニトロ化合物は、適当な塩化ｏ−ニトロベンゾイルを式Ｆの化合物と、例えば窒素気流中−２５℃でＫ２ＣＯ３の存在下カップリングさせることによって調製することができる。式Ｆの化合物は、例えばＬ−トランス−４−ヒドロキシプロリンから誘導されるケトンのオレフィン化によって容易に調製することができる。ケトン中間体はまた、パラジウムを介するカップリング反応に用いるためのエノールトリフレートへの変換によって利用することができる。
【０１０４】
塩化ｏ−ニトロベンゾイルは、バニリン酸（またはアルキルエステル）誘導体Ｈから調製される式Ｇのｏ−ニトロ安息香酸（または、加水分解後のアルキルエステル）から合成する。これらの多くは市販されており、一部はＡｌｔｈｕｉｓ、Ｔ．Ｈ．およびＨｅｓｓ、Ｈ．Ｊ．、Ｊ．Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍ．、２０巻（１号）、１４６〜２６６ページ、１９７７年に開示されている。
【０１０５】
【化４６】
0004689826.tif 000030
【０１０６】
スキーム１では、最終または最後から２番目のステップは、酸化的環化であった。チオアセタールカップリングを用いる代替手法をスキーム２に示す。水銀を介する脱マスキングが所望の化合物（Ｉａ）への環化を引き起こす。
【０１０７】
チオアセタール中間体は、スキーム２に示すように調製することができる。チオアセタールで保護したＣ環（Ｌａｎｇｌｅｙ、Ｄ．Ｒ．およびＴｈｕｒｓｔｏｎ、Ｄ．Ｅ．、Ｊ．Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、５２巻、９１〜９７ページ、１９８７年の文献法により調製）を、文献の手順を用いてｏ−ニトロ安息香酸（または、加水分解後のアルキルエステル）Ｇとカップリングさせる。得られるニトロ化合物は、チオアセタール基のために水素添加によって還元できないので、塩化スズ（ＩＩ）法を用いアミンを得る。次いで、これを、例えば、クロロギ酸ｐ−ニトロベンジルなどのクロロホルメートまたは酸塩化物と反応させることによりＮ保護する。
【０１０８】
アセタール含有Ｃ環は、ルイス酸条件の使用を含む他の方法を含む脱保護を伴うこのタイプの経路の代替法として用いることができる。
【０１０９】
前記の合成スキームでは、Ａ環の誘導体化は、化合物を固体支持体に接続する前に完結するように示している。置換基がアルコキシまたはニトロなどの基の場合にはそれが好ましい。一方、アルキルまたはアルケニルなどの置換基を、化合物の固体支持体とのカップリング後にＡ環に付加できると考えられる。これは、Ｒ６、Ｒ７、またはＲ９をハロゲン原子などの容易に置換できる基にすることによって行うことができる。
【０１１０】
上記で詳しく述べた化合物への代替合成手法は、Ａ環を形成することになる構成要素上のプロＮ１０位を、Ｃ環を形成することになる構成要素と結合する前に保護することである。
【０１１１】
次に、本発明の実施形態を添付の図面を参照しながら実施例によって説明する。
【０１１２】
一般方法
融点（ｍｐ）は、Ｅｌｅｃｔｒｏｔｈｅｒｍａｌ  ９１００デジタル融点装置で測定し、無補正である。赤外（ＩＲ）スペクトルは、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ１０００分光光度計を用いて記録した。１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、２０℃＋／−１℃で操作するＪｅｏｌ  ＧＳＸ２７０ＭＨｚ  ＦＴ−ＮＭＲ分光計で記録した。化学シフトは、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）より低磁場に１００万分の１（δ）で報告する。スピン多重度は、ｓ（一重線）、ｂｓ（幅広い一重線）、ｄ（二重線）、ｄｄ（二重線の二重線）、ｔ（三重線）、ｑ（四重線）、ｐ（七重線）またはｍ（多重線）と記載する。質量スペクトル（ＭＳ）は、Ｊｅｏｌ  ＪＭＳ−ＤＸ３０３  ＧＣ質量分析計（ＥＩモード：７０ｅＶ、ソース１１７〜１４７℃）を用いて記録した。正確な分子質量（ＨＲＭＳ）は、内部質量マーカーとしてペルフルオロケロセン（ＰＦＫ）を用いるピークマッチングにより測定し、ＦＡＢ質量スペクトルは、ソース温度１８０℃のグリセロール／チオグリセロール／トリフルオロ酢酸（１：１：０．１）マトリックスから得た。Ｎａ−Ｄ線での旋光性は、ＡＤＰ２２０自動旋光計（Ｂｅｌｌｉｎｇｈａｍ  ＆  Ｓｔａｎｌｅｙ）を用い周囲温度で得た。フラッシュクロマトグラフィは、Ａｌｄｒｉｃｈフラッシュクロマトグラフィ「シリカゲル−６０」（Ｅ．Ｍｅｒｃｋ、２３０〜４００メッシュ）を用いて行った。薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）は、ガラス板上のＧＦ２５４シリカゲル（蛍光指示薬付き）を用いて行った。特に明記しない限り、すべての溶媒および試薬はＡｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙより提供され、さらに精製することなく提供されたままで使用した。無水溶媒は、適当な乾燥剤の存在下に乾燥窒素気流中の蒸留によって調製し、４Åモレキュラーシーブまたはナトリウム線で保存した。石油エーテルは、４０〜６０℃で沸騰する留分を指す。
【０１１３】
実施例１：式１（図１）のＰＢＤの合成
総合成
酸末端側鎖を有する化合物である７ａ−ｃ（Ｒ１０＝Ｎｖｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｔｅｏｃ）を、適当なアリルエステル類のパラジウム介在の脱エステル化により調製した。このエステル類は、Ｎｖｏｃ、ＦｍｏｃおよびＴｅｏｃ保護のアミノアルコールのスワーン酸化（１級アルコールを、Ｂ環閉環を同時に引き起こすアルデヒドに酸化）により順次調製した。カルバメート保護のアミノアルコールは、共通のアミノアルコール中間体４をピリジン存在下、適当なクロロギ酸エステルで処理することにより調製した。該アミノアルコールは、順次ピロリジンメタノールをｏ−ニトロ安息香酸２とカップリングすることにより構築したニトロ化合物３の還元により得られた。化合物２は、脂肪酸の二酸１の選択的エステル化により調製した。最後に、該二酸は、既知のヒドロキシプロピロキシバニリン酸誘導体０の同時ニトロ化並びに酸化により得られた。
【０１１４】
Ｔｒｏｃ保護の化合物７ｄは、アセタールの使用を含む別の合成法により調製した。閉環アリルエステル６ｄは、Ｔｒｏｃ保護のアミンの存在下、アセタール保護のアルデヒドを脱保護により調製した。Ｔｒｏｃ保護のアミンは、ピリジン存在下、遊離アミン９のＴｒｏｃ−Ｃｌへの暴露により得られた。順次２を適当なアセタール保護のプロリナールにカップリングすることにより得られたニトロアセタール８の塩化スズによる還元により、アミン９が得られた。
【０１１５】
アリルアミノアルコール中間体（４）
３−（４−カルボキシ−２−メトキシ−５−ニトロフェノキシ）プロパン酸（１）
アルコール０（５０ｇ、０．２２ｍｏｌ）を０℃に冷却した硝酸（７０％、４００ｍｌ）に１時間かけて少量づつ加えた。添加が完了したら、溶液を０℃で１時間攪拌し、次いで室温に温めた。形成した半固体をろ取し、最小量の氷水で洗浄した。得られた淡黄色固体をＥｔＯＡｃに再度溶解し、溶液を蒸発させ（ＭｇＳＯ４）、次いで濃縮して二酸１（３１ｇ、４９％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ）：δ２．８３−２．７９（ｔ，Ｊ＝６，１２．５Ｈｚ，２Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），４．３７−４．３３（ｔ，Ｊ＝６，１２．５Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），７．４６（ｓ，１Ｈ），１０．３８（ｂｒ．ｓ，２Ｈ）。
【０１１６】
３−（４−カルボキシ−２−メトキシ−５−ニトロフェノキシ）プロパン酸２−プロぺン（２）
３−（４−カルボキシ−２−メトキシ−５−ニトロフェノキシ）プロパン酸１（２０ｇ、７４．３ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸１水和物（２．３ｇ、７．４ｍｍｏｌ）のアリルアルコール（２４０ｍＬ、３．５ｍｏｌ）混合液を７時間還流後、冷却した。アリルアルコールを減圧留去し、残渣を希塩酸（３×７５ｍｌ）で粉砕し、ろ取した。この固体をＥｔＯＡｃに溶かし、生じた溶液を水（３×５０ｍｌ）と食塩水（３×５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ソ−ダで乾燥した。減圧蒸発により白色固体２（１９．２７ｇ、８４％）を得た：ｍｐ１２８−１３０℃；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ２．９２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．３５Ｈｚ），３．９４（ｓ，３Ｈ），４．３８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４１Ｈｚ），４．６５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．６１Ｈｚ），５．２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ１＝１．２８Ｈｚ，Ｊ２＝１７．０４Ｈｚ），５．９２（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ３４．１，５６．５，６５．０，６５．４，１０８．５，１１１．３，１１８．３，１２２．９，１３１．８，１４１．１，１４９．１，１５２．６，１６７．１，１７０．０，；ＩＲ（ヌジョール）：ν１７３０，１６３０，１５５０，１４３０，１３９０，１２９０，１２３０，１１９０，１１７０，１０７０，１０３０，１０１０ｃｍ−１；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ（相対強度）：３２５（Ｍ＋・，１９），２５１（３），２１３（２），１９６（３），２１１（３），１１３（１９），９１（４），７１（９），５５（６）；ＨＲＭＳ：Ｃ１４Ｈ１５ＮＯ８として、計算値３２５．０７９８、実測値２３２．０７７３。
【０１１７】
３−（４−［２’−ヒドロキシメチルピロリジンカルボキシ］−２−メトキシ−５−ニトロフェノキシ）プロパン酸２−プロぺン（３）
塩化オキサリル（２．７ｍｌ、３１．０ｍｍｏｌ）を、ニトロ酸２（９ｇ、２８．０ｍｍｏｌ）とＤＭＦ（０．０５ｍｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍｌ）の懸濁液に滴下し、室温で１６時間攪拌した。該溶液を、ＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍｌ）中ピロリジンメタノール（３ｍｌ、３１．０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（８．５ｍｌ、６１．０ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、−２０℃（液体窒素／アセトン）で滴下により加え、室温で窒素下１６時間攪拌した。塩酸（１．０Ｎ、５０ｍｌ）でクエンチ後、分離した有機相を水（３×２５ｍｌ）と食塩水（３×１０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥して減圧蒸発し、粗製の橙色油状物を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィ（５％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）の精製により、淡黄色の油状物３（７．９ｇ、７０％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ２．２２−１．７１（ｍ，６Ｈ），２．９４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．１５（ｄ×ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．９２−３．７６（ｍ，１Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），４．４（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），４．６７−４．６４（ｍ，２Ｈ），５．３９−５．２３（ｍ，２Ｈ），６．０−５．８６（ｍ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），７．７５（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ２４．４，２８．５，３４．１，４９．５，５６．７，６１．６，６４．９，６５．６，１０８．９，１０９．３，１１８．６，１２８．２，１３１．８，１４８．２，１５４．９，１７０．１；ＩＲ（フィルム）：ν３３９４，２９４７，２８８２，１７３５，１６８９，１６１８，１５７７，１５２１，１４５４，１４３１，１３８６，１３３４，１２７６，１２２１，１１７８，１０５９，１００２ｃｍ−１；ＭＳ（ＥＩ）Ｍ／Ｚ（相対強度）：４０８（Ｍ＋，１），３９０（４），３７７（２０），３０８（８６），２９６（３），２７８（９），２６５（３５），２５２（３），１１８（７４），１１１（３），１０８（８），９８（４），８３（１４）；ＨＲＭＳ：Ｃ１９Ｈ２５Ｏ６Ｎ２として、計算値３７７．４１６、実測値３７７．１７１１。
【０１１８】
３−（５−アミノ−４−［２’−ヒドロキシメチルピロリジンカルボキシ］−２−メトキシフェノキシ）プロパン酸２−プロぺン（４）
固形ＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（２１．３ｇ、０．０９５ｍｏｌ）を、ニトロアルコール３（７．７ｇ、０．０２ｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１００ｍｌ）の攪拌溶液に加えて、この混合液を４５分間加熱還流した。次いで溶媒を減圧蒸発し、残渣の油状物をＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）および飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍｌ）水溶液とに分配し、分離目的のために１６時間激しく攪拌した。合わせた層をセライトを介してろ過し、ＥｔＯＡｃ（２５ｍｌ）で洗浄した。この層を分離し、生じた有機相を水（３×２５ｍｌ）と食塩水（３×１０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧蒸発により、暗橙色の油状物アミン４（５．６ｇ、７８％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ２．１７−１．６５（ｍ，６Ｈ），２．９（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．７２−３．４６（ｍ，３Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），４．２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），４．４（ｂｒ．ｄ×ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，２Ｈ），４．６５−４．６２（ｍ，２Ｈ），５．３７−５．２２（ｍ，２Ｈ），６．０−５．８５（ｍ，１Ｈ），６．３（ｓ，１Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ２４．９，２８．７，３４．３，５７．３，６１．２，６４．２，６５．５，６７．４，１０２．６，１１３．５，１１８．５，１３１．９，１４１．１，１５０．９，１７０．５；ＩＲ（フィルム）：ν３３５４，２９４０，２８８０，１７３４，１６２１，１５８９，１５１４，１４５３，１４２９，１４０７，１２６５，１２３０，１１７３，１１１０，１０２３。ＭＳ（ＥＩ）Ｍ／Ｚ（相対強度）：３７８（Ｍ＋，６０），２７８（１００），２６６（５），２５２（９），２３８（３），２２０（４），２０６（６），１９４（４），１７８（３），１６６（４０），１５０（５），１３７（２０），１２３（４），１１３（４），１０７（４），１００（８），９４（１２），８４（９）。ＨＲＭＳ：Ｃ１９Ｈ２６Ｏ６Ｎ２として、計算値３７８．４２４、実測値３７８．１７６０。
【０１１９】
実施例１（ａ）：Ｎｖｏｃ−ＰＢＤ酸（７ａ）
Ｎｖｏｃクロロギ酸エステル
４，５−ジメトキシニトロベンジルアルコール（２ｇ、９．４ｍｍｏｌ）およびトリホスゲン（０．９３ｇ、３．１３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）に溶解し、生じた赤色懸濁液を激しく攪拌して０℃に冷却した。ピリジン（２６０μｌ、３．１３ｍｍｏｌ）を滴下し、生じた緑色溶液を室温で１６時間攪拌して、クロロギ酸エステルの溶液を得て、これを次の段階で直ちに使用した。
【０１２０】
アリルＮｖｏｃアルコール（５ａ）
調製したばかりの（上記参照）Ｎｖｏｃクロロギ酸エステル（９．４ｍｍｏｌ）とピリジン（１．３ｍｌ、９．５ｍｍｏｌ）の溶液を、アミノアルコール４（３ｇ、７．９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍｌ）攪拌溶液に０℃で滴下した。この混合液を室温に戻し、３時間攪拌を続けた。減圧蒸発により得られた油状物を、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）に再度溶解した。生じた溶液をＨＣｌ（１．０Ｎ、３×２５ｍｌ）、Ｈ２Ｏ（３×２５ｍｌ）および食塩水（３×１０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧蒸発して暗黄色泡状物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィ（ＥｔＯＡｃ）により精製し、淡黄色泡状物のカルバメート５ａ（３．７ｇ、７６％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１．６−２．２（ｍ，６Ｈ），２．９（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），３．４−３．９（ｍ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．９７および４．０１（２×ｓ，６Ｈ），４．３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），４．６３（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），５．２２−５．３６（ｍ，２Ｈ），５．５−５．６７（ｍ，２Ｈ），５．８５−６．０（ｍ，１Ｈ），６．８４（ｓ，１Ｈ），７．０９（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），８．９３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ２５．１，２８．３，３４．３，５１．５，５６．４，５６．６，５６．８，６１．０，６３．８，６４．４，６５．４，６６．４，１０６．３，１０８．２，１１０．０，１１１．９，１１８．５，１２７．８，１３１．５，１３１．９，１３９．６，１４４．４，１４８．１，１５０．３，１５３．２，１５３．７，１７０．３，１７０．７。ＩＲ（反射率）：ν３３２９，３１１０，２９３７，１７２８，１５８１，１５２３，１４５３，１３２３，１２７０，１１７５，１１２９，１０７０，１０３１，１０１１。ＭＳ（ＦＡＢ）Ｍ／Ｚ（相対強度）：６１８（Ｍ＋＋１（３）），４７３（２），４３９（１），４０５（１），３７８（３０），３０４（７），２７８（１６），１９６（１００），１６６（２８），１５１（１５），１０２（２７），７０（９）。
【０１２１】
アリルＮｖｏｃＰＢＤ（６ａ）
ＤＭＳＯ（１．４５ｍｌ、０．０２ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍｌ）溶液を、−４０℃（液体Ｎ２／クロロベンゼン）に冷却した塩化オキサリル（５．１ｍｌ、０．０１ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）攪拌溶液に４５分間かけて加えた。さらに−４０℃で１５分間攪拌を続け、次いでＮＶＯＣアルコール５ａ（３．５ｇ、５．７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４５ｍｌ）溶液を１時間かけて滴下した。さらに−４０℃で４５分間攪拌を続け、次いでＥｔ３Ｎ（３．４ｍｌ、０．０２４ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）溶液を３０分かけて滴下し、１時間攪拌を続けた。この混合液を室温まで温めてから、ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）で希釈した。有機相をＨＣｌ（１．０Ｎ）（３×５０ｍｌ）、水（３×５０ｍｌ）と食塩水（３×２５ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥して減圧蒸発して黄色泡状物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィ（１％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）により精製し、淡黄色の泡状物の６ａ（３．２ｇ、９１％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１．９−２．２（ｍ，６Ｈ），２．８６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），３．４５−３．６（ｍ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．８８および３．９１（２×ｓ，６Ｈ），４．２−４．４（ｍ，３Ｈ），４．６１（ｍ，２Ｈ），５．１９−５．３５（ｍ，２Ｈ），５．４９（ｓ，２Ｈ），５．７（ｂｒｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ），５．８２−５．９７（ｍ，１Ｈ），６．５１（ｓ，１Ｈ），６．８６（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），７．６６（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ２３．１，２８．７，３０．６，３４．１，４６．５，５６．２，６０．１，６４．６，６５．３，６５．５，８６．１，１０７．９，１０９．２，１１０．８，１１４．３，１１８．４，１２６．７，１２７．０，１２８．１，１３１．８，１３８．９，１４７．９，１４８．９，１４９．９，１５３．８，１５５．４，１６６．８，１７０．３。ＩＲ（反射率）：ν３３２９，３０８４，２９４０，１７１３，１６３３，１５１９，１４５４，１２７６，１１０５，１０６７。ＭＳ（ＥＩ）Ｍ／Ｚ（相対強度）：６１５（Ｍ＋，１２），５０３（１００），３５８（４），２６１（３），２４６（３７），２３１（４），１９６（３２），１８０（２４），１６６（４），１５０（４），１３６（６），７０（３１）。
【０１２２】
酸ＮｖｏｃＰＢＤ（７ａ）
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．５８３ｇ、０．５０４ｍｍｏｌ）およびモルホリン（４．４ｍｌ、５０．４ｍｍｏｌ）を、アリルカルビノールアミン６ａ（３．１ｇ、５．０４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍｌ）溶液に加え、この混合液を１６時間攪拌した。減圧蒸発後、生じた油状物をＣＨ２Ｃｌ２に再度溶解し、この溶液をＨＣｌ（１．０Ｎ）（３×２５ｍｌ）、Ｈ２Ｏ（３×２５ｍｌ）と食塩水（３×１０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧蒸発して橙色泡状物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィ（１％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）により精製し、淡黄色の泡状物の７ａ（２．２５ｇ、７８％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１．９−２．３（ｍ，４Ｈ），２．８５（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），３．４−３．６（ｍ，３Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．８７および３．９（２×ｓ，６Ｈ），４．２−４．４（ｍ，３Ｈ），５．４−５．４８（ｍ，２Ｈ），５．７（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ），６．５（ｓ，１Ｈ），６．８９（ｓ，１Ｈ），７．２６（ｓ，１Ｈ），７．６４（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ２３．０，２８．５，３３．９，４６．６，５６．２，６０．４，６４．６，６５．４，８６．１，１０７．９，１０９．３，１１０．８，１１４．７，１２６．５，１２６．９，１２８．２，１３８．９，１４７．９，１４８．９，１４９．９，１５３．８，１５５．５，１６７．１，１７４．５。ＩＲ（反射率）：ν２９３９，２２５２，１７１２，１５９９，１５２２，１４５９，１２７７，１２２１，１１３７，１１０５，１０６６。ＭＳ（ＦＡＢ）Ｍ／Ｚ（相対強度）：５７６（Ｍ＋＋１，１５），５１４（３），３８１（３），３６３（３），３３６（３），３１９（９），３０３（２），２９３（３），２８９（２），２７９（４），２６６（６），２６４（１４），２５３（３），２４５（４），２３８（１０），２１５（４），２０６（４），１９６（１００），１９２（１６），１８０（２３），１６６（３２），１５１（１８），１３６（１０），１２３（７），１１７（１４），９３（２８），７３（１５），７０（２０）。
【０１２３】
実施例１（ｂ）：Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ酸（７ｂ）
アリルＦｍｏｃアルコール（５ｂ）
クロロギ酸９−フルオレニルメチル（５．６５ｇ、０．０２２ｍｏｌ）を、アミノアルコール４（７．５ｇ、０．０２ｍｏｌ）とＮａ２ＣＯ３（５．２６ｇ、０．０５ｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍｌ）およびＨ２Ｏ（１５０ｍｌ）混合液中の攪拌溶液に０℃で少量づつ加えた。この混合液を室温に戻し、さらに２時間攪拌を続けてから、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相をＨ２Ｏ（３×５０ｍｌ）および食塩水（３×２５ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥して減圧蒸発し、暗赤色油状物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィ（石油エーテル４０−６０／ＥｔＯＡｃ、１：１）により精製し、淡黄色油状物の５ｂ（８．１１ｇ、６８％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１．７２−２．１８（ｍ，６Ｈ），２．９（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．４３−３．９１（ｍ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），４．２５−４．５４（ｍ，５Ｈ），４．６１−４．６５（ｍ，２Ｈ），５．２１−５．３７（ｍ，２Ｈ），５．８５−６．０（ｍ，１Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），７．３１−７．７９（ｍ，９Ｈ），８．７７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ２５．１，２８．４，３５．３，４７．０，５６．７，６０．９，６４．３，６５．４，６６．３，６７．１，１０６．４，１１１．７，１１８．３，１２０．０，１２５．２，１２７．１，１２７．２，１２７．８，１３１．５，１３１．９，１４１．３，１４３．７，１４４．４，１５０．２，１５３．８，１７０．３；ＭＳ（ＦＡＢ）：６０１（Ｍ＋・＋１）；ＨＲＭＳ：Ｃ３４Ｈ３６Ｎ２Ｏ８として、計算値６００．６６７、実測値６００．２１７５。ＩＲ（フィルム）：ν３３１５、２９５２、１７２７、１５９７、１５２２、１４５２、１３９２、１３２２、１１７４、１１１７、１０１７。
【０１２４】
Ｆｍｏｃアリルカルビノールアミンの閉環（６ｂ）
ＤＭＳＯ（３．４ｍｌ、０．０４８ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍｌ）溶液を、−４０℃（液体Ｎ２／クロロベンゼン）で塩化オキサリル（１２ｍｌ、０．０２４ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）の攪拌溶液に４５分間かけて滴下した。さらに−４０℃で１５分間攪拌を続け、次いでＦＭＯＣアルコール５ｂ（８ｇ、０．０１３ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１３５ｍｌ）溶液を１時間かけて滴下した。さらに−４０℃で４５分間攪拌後、ＤＩＰＥＡ（１０ｍｌ、０．０５７ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５５ｍｌ）溶液を３０分かけて加え、１時間攪拌を続けた。この混合液を室温まで温めてから、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍｌ）で希釈し、有機相をＨＣｌ（１．０Ｎ）（３×５０ｍｌ）、水（３×５０ｍｌ）と食塩水（３×２５ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥して減圧蒸発して淡クリーム色の泡状物６ｂ（６．４ｇ、８０％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１．９９−２．１（ｍ，４Ｈ），２．８３−２．８７（ｍ，２Ｈ），３．５１−３．６（ｍ，２Ｈ），３．６−３．８（ｍ，１Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），４．０−４．５８（ｍ，７Ｈ），５．１７−５．３１（ｍ，２Ｈ），５．６８（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．８４−５．８７（ｍ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），７．０２−７．７５（ｍ，９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ２３．０，２８．７，３４．２，４６．５，５３．５，５６．２，５９．５，６０．１，６４．４，６５．４，６８．４，８６．０，１１１．２，１１４．７，１１８．４，１１９．９，１２４．９，１２５．４，１２６．８，１２７．１，１２７．８，１２８．３，１３１．８，１３１．９，１４１．１，１４１．２，１４３．１，１４３．５，１４８．９，１４９．９，１５６．１，１６６．９，１７０．３；ＭＳ（ＦＡＢ）：５９９（Ｍ＋・＋１）。ＩＲ（反射率）：ν３３１８、２９５０、１７１３、１６０３、１５１７、１３８６、１２９０、１１７７、１０３７。
【０１２５】
Ｆｍｏｃ酸カルビノールアミン（７ｂ）
フェニルシラン（２．５ｍｌ、０．０２ｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．２３２ｇ、０．２ｍｍｏｌ）を、ＦＭＯＣカルビノールアミン６ｂ（６ｇ、０．０１ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍｌ）溶液に加え、室温で１６時間攪拌した。反応をＨ２Ｏ（５０ｍｌ）でクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２（３×３０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機相を水（３×３０ｍｌ）と食塩水（３×２５ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧蒸発して暗褐色の泡状物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィ（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３、１：９９）により精製し、淡いベージュ色の泡状物の７ｂ（４．３ｇ、７７％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１．９−２．２（ｍ，４Ｈ），２．６５−２．８５（ｍ，２Ｈ），３．４−３．６（ｍ，２Ｈ），３．６−３．８（ｍ，１Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），４．０−４．２５（ｍ，４Ｈ），４．４５−４．５（ｍ，１Ｈ），５．６８（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），６．９−７．７（ｍ，９Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ２３．０，２８．６，３３．９，４６．５，５６．２，６０．３，６４．６，６８．５，８６．０，１１１．２，１１５．２，１１９．８，１２４．９，１２６．８，１２７．１，１２７．７，１２８．２，１４０．９，１４１．１，１４２．９，１４３．４，１４９．１，１４９．９，１５６．３，１６７．０，１７４．６。ＩＲ（反射率）：ν３３１６，２９５５，２６０９，２２４９，１７１３，１６０１，１５１４，１４５３，１２７９，１０３６。ＭＳ（ＦＡＢ）Ｍ／Ｚ（相対強度）：５６０（Ｍ＋＋１）。
【０１２６】
実施例１（ｃ）：Ｔｅｏｃ−ＰＢＤ酸（７ｃ）
アリルＴｅｏｃアルコール（５ｃ）
ピリジン（０．１６５ｍｌ、２．０４ｍｍｏｌ）を、トリホスゲン（０．６０５ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）および２−トリメチルシリルエタノール（１．０８２ｇ、９．１５ｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍｌ）に滴下し、この混合液を室温で１６時間攪拌した。この溶液を、アミノアルコール４（２．３０ｇ、６．１０ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．９８７ｍｌ、０．０１２２ｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）の攪拌溶液に、窒素雰囲気下０℃（氷浴）で滴下した。ＴＬＣ（石油エーテル／酢酸エチル、１：１）により反応が完結したことが示されたら、この混合物を硫酸銅（ＩＩ）（２×１００ｍｌ）および食塩水（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、減圧蒸発して褐色油状物を得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィ（クロロホルム／メタノール、９９：１）により精製し、褐色固体５ｃ（２．５ｇ、７８％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ−０．０６（ｓ，９Ｈ），１．０１（ｍ，２Ｈ），１．８２−２．３０（ｍ，４Ｈ），２．８６（ｍ，２Ｈ），３．４０−３．７５（ｍ，７Ｈ），４．１５−４．３１（ｍ，４Ｈ），４．６（ｍ，２Ｈ），５．１５−５．３１（ｍ，２Ｈ），５．８０−５．９４（ｍ，１Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｓ，１Ｈ），８．５２（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ−１．４７，１７．７，２５．１，２８．４，３４．３，５１．６，，５６．８，６１．２，６３．５，６４．３，６５．４，６６．８，１０６．２，１１２．１，１１３．８，１１８．３，１３２．０，１３２．２，１４４．０，１５４．１，１７０．３；ＭＳ（ＥＩ）：５２２（Ｍ＋，１２．８），４３５（７），３５０（１３），３１９（７７），２６２（２７），２０６（１３），１４９（８８），８３（３２），７０（１００）；ＨＲＭＳ：計算値５２２．２３９７、実測値５２２．２３５１。
【０１２７】
アリルＴｅｏｃカルビノールアミンＰＢＤ（６ｃ）
ＤＭＳＯ（１．０２ｍＬ、０．０１４ｍｏｌ）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）溶液を、塩化オキサリル（３．５９ｍｌ、７．１８５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）の攪拌溶液に−４３℃（クロロベンゼン／液体Ｎ２）で窒素雰囲気下加えた。−４３℃で４５分間攪拌後、Ｔｅｏｃアルコール５ｃ（２．５０ｇ、４．７９ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）溶液を反応混合物に滴下して、−４３℃でさらに４５分間攪拌を続けた。次いでトリエチルアミン（３．３４ｍＬ、０．０２４ｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ（２５ｍＬ）溶液を滴下し、容器を０℃まで温めた。この反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）で希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ（１００ｍＬ）、水（１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）してから、減圧蒸発して粗製の６ｃを得た。これをフラッシュカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、クロロホルム）により精製し、黄色油状物６ｃ（１．７２ｇ、６９％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ−０．０８（ｓ，９Ｈ），０．９２（ｍ，２Ｈ），２．０４−２．３３（ｍ，４Ｈ），３．１４（ｍ，２Ｈ），３．５０−３．７５（ｍ，４Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），４．００−４．４０（ｍ，４Ｈ），４．６７（ｍ，２Ｈ），５．２６−５．４０（ｍ，２Ｈ），５．６５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．５２Ｈｚ），５．８９−５．９９（ｍ，１Ｈ），６．７２（ｂｓ，１Ｈ），７．２３（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ−１．４７，１７．６，２３．０，２８．７，３４．２，４６．４，５６．２，５９．９，６４．３，６５．４，６５．５，８５．９，１１１．０，１１４．７，１１８．３，１２６．４，１３１．８，１３２．０，１４８．７，１４９．７，１５４．２，１７０．０，１７０．４；ＭＳ（ＦＡＢ）：６２９（０．８），５９３（０．９１），５３６（１．５），４９３（４．６），４６５（１．０），４４９（１．７），４３１（６．８），３９４（８．１），３６８（１．３），３３８（１．５），３０４（５．８），２６４（３．６），２３８（２．２），２０４（１．６），１９２（９．１），１６６（２．５），１４９（６．８），９８（４．３），７３（１００）。
【０１２８】
酸ＴｅｏｃＰＢＤカルビノールアミン（７ｃ）
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１９０ｍｇ、０．１６５ｍｍｏｌ）を、Ｔｅｏｃ−保護カルビノールアミン６ｃ（１．７２ｇ、３．３０ｍｍｏｌ）のエタノール（５０ｍｌ）溶液に加え、この混合物を、ＴＬＣ（ＡｃＯＨ／ＭｅＯＨ／クロロホルム、１：１０：１００）が反応完了を示す時間である６０分間加熱還流した。反応混合物を冷却し、次いでセライトによりろ過した。溶媒の減圧蒸発により黄色固体の７ｃ（１．０８ｇ、６８％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ−０．０６（ｓ，９Ｈ），０．８６（ｍ，２Ｈ），１．９８−２．２０（ｍ，４Ｈ），２．８−３．０（ｍ，２Ｈ），３．４０−３．７０（ｍ，３Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），４．００−４．４０（ｍ，２Ｈ），５．６５（ｄ，Ｊ＝８．６３Ｈｚ，１Ｈ），６．７８（ｂｓ，１Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ、−１．５，１８．３，２３．１，２８．７，３４．５，４６．４，５６．１，５８．４，６４．８，６４．９，８５．９，１１０．８，１１５．０，１２６．３，１２８．７，１４８．６，１４９．６，１６７．２。
【０１２９】
実施例１（ｄ）：Ｔｒｏｃ−ＰＢＤ酸７ｄの合成
４−（Ｎ−２Ｓ−ジエチルチオメチルピロリジンカルボキシ）−２−メトキシ−５−ニトロフェニル）プロピオン酸プロプ−２−エニル（８）
３−（４−カルボキシ−２−メトキシ−５−ニトロフェニロキシ）プロピオン酸２−プロペン  ２（５ｇ、１５．３４ｍｍｏｌ）、塩化オキサリル（２ｍｌ、２３ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ５滴を、乾燥ＴＨＦ（１００ｍｌ）中にて１８時間攪拌した。溶媒を減圧除去し、残渣を乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶かした。これを（２Ｓ）−ピロリジン−２−カルボキサルデヒドジエチルチオアセタール（３．１５ｇ、１５．３４ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１．８６ｇ、１８．４１ｍｍｏｌ）の激しく攪拌された混合物に滴下した。１８時間攪拌を続けた。溶媒を減圧除去し、生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィ（酢酸エチル）により精製し、黄色油状物８（７．４８ｇ、９５％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．７４（ｓ，１Ｈ，ＯＣＣＨＣ），６．８３（ｓ，１Ｈ，ＭｅＯＣＣＨＣ），５．９８−５．８６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．３３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２６．５６Ｈｚ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．２８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２０．２４Ｈｚ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），４．８８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．８５Ｈｚ，ＮＣＨＣＨ），４．７４−４．６５（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），４．４２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６９Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２ＯＣ），３．９４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．２９−３．２１（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ２），２．９６（ｐ，２Ｈ，Ｊ＝３．１２Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），２．８７−２．６７（ｍ，４Ｈ，ＳＣＨ２ＣＨ３）２．３２−１．７８（ｍ，４Ｈ，ＮＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２），１．３８−１．３１（ｍ，６Ｈ，ＳＣＨ２ＣＨ３）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１５．００，１５．１３（ＳＣＨ２ＣＨ３），２４．６３（ＮＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２），２６．２８，２６．５９，２７．２２（ＮＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２），３４．１３（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），５０．１９（ＮＣＨ２），５２．８０（ＮＣＨＣＨ），５６．６０（ＯＣＨ３），６１．０８（ＮＣＨ），６５．１３（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），６５．６４（ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），１０８．７０（芳香環ＣＨ），１０９．４７（芳香環ＣＨ），１１８．５５（ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），１２８．５８（ＣＣＯＮ），１３１．７３（ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），１３７．１７（ＣＮＯ２），１４７．９８（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣ），１５４．５７（ＣＯＣＨ３），１６６．６１（ＣＯＮ），１７０．１４（ＣＯＯ）；ＩＲ（ヌジョール）：ν３３５０−２７２０，３０００，２６３０，２２００，１７４０，１６４０，１５８０，１５３０，１３４０，１２８０，１２２０，１１８０，１０５０ｃｍ−１。ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ（相対強度）：５２７（Ｍ＋・，１），３７７（１０），３１０（１２），３０９（７２），３０８（９４），２６８（２０），１４２（４）。ＨＲＭＳ：Ｃ２４Ｈ３５Ｏ７Ｎ２Ｓ２としての計算値＝５２７．１８７５、実測値＝５２７．１８８５。
【０１３０】
５−アミノ−３−（４−（２−ジエチルチオメチル−（２Ｓ）−パーヒドロ−１−ピロロイルカルボニル）−２−メトキシフェニロキシ）プロピオン酸２−プロペニル（９）
溶液８（７．２１ｇ、１４．０５ｍｍｏｌ）および塩化スズ（ＩＩ）（１５．８５ｇ、７６ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル（１００ｍＬ）中４０分間還流し、冷却した。溶媒を減圧除去し、残渣を０℃で飽和重曹水により粉砕した。ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を加えて反応物を一晩攪拌した。反応混合物をセライトによりろ過し、ろ取された固形物を酢酸エチルで洗浄した。合わせた有機相を水と食塩水で洗浄し、硫酸ソーダで乾燥して溶媒を減圧除去した。生成物は、フラッシュカラムクロマトグラフィ（５％ＭｅＯＨ／ジクロロメタン）を用いて精製し、黄色油状物（５．８７ｇ、８６％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ６．８２（ｓ，１Ｈ，芳香環ＣＨ），６．２８（ｓ，１Ｈ，芳香環ＣＨ），５．９９−５．８５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２８Ｈｚ，２７．６６Ｈｚ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．２６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２８Ｈｚ，２０．７０Ｈｚ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），４．７１−４．６２（ｍ，５Ｈ，４．６２のダブレットを含む，２Ｈ，Ｊ＝５．４９Ｈｚ，ＮＨ２＋ＮＣＨＣＨ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），４．２７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．５９Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），３．９２（ｍ，１Ｈ，ＮＣＨ），３．７４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．６６−３．５７（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ２），２．８９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），２．８３−２．６４（ｍ，４Ｈ，ＳＣＨ２ＣＨ３），２．２８−１．８０（ｍ，４Ｈ，ＮＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２），１．２５（ｍ，６Ｈ，ＳＣＨ２ＣＨ３）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１４．２０（ＳＣＨ２ＣＨ３），２６．５５，２７．２３（ＮＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２），３４．２７（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），５３．２０（ＮＣＨＣＨ），５６．０８（ＯＣＨ３），６０．１０（ＮＣＨ），６０．３９（ＮＣＨ２），６４．２０（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），６４．４１（ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），１０２．２６（芳香環ＣＨ），１１３．７１（芳香環ＣＨ），１１８．４０（ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），１３１．９３（ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），１４１．０３（ＣＮＨ２），１４７．７４（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣ），１５４．５６（ＣＯＣＨ３），１６９．６９（ＣＯＮ），１７０．５３（ＣＯＯ）。ＩＲ（ニート液体フィルム）３５００−３０００，３４６０，３４００，２９７０，１７４０，１６５０，１５３５，１４７０，１３４５，１２９０，１２２５，１１９０ｃｍ−１；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ（相対強度）：４８２（Ｍ＋・，４），３４７（２），２７８（３１），１３７（１），７０（３）。ＨＲＭＳ：Ｃ２３Ｈ３４Ｏ５Ｎ２Ｓ２としての計算値＝４８２．１９０９、実測値＝４８２．１９２５。
【０１３１】
３−（４−（２−ジエチルチオメチル−（２Ｓ）−パーヒドロ−１−ピロリルカルボニル）−２−メトキシ−５−（２，２，２−トリクロロエチロキシカルボニルアミノ）フェニロキシ）プロピオン酸２−プロペニル（１０）
９（５．６７ｇ、１１．７４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２００ｍＬ）溶液に、ピリジン（２．０２ｍＬ、２３．４８ｍｍｏｌ）を加えた。これに、クロロギ酸トリクロロエチル（１．６１６ｍＬ、１１．７４ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で滴下した。この溶液を０℃でさらに１時間攪拌した。この有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（３×１００ｍＬ）、水（３×１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧除去して褐色油状物（６．８ｇ、８８％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ９．１４（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８８（ｂｓ，１Ｈ，ＣＨＣＮＨ），６．９３（ｓ，１Ｈ，ＭｅＯＣＣＨＣ），５．９９−５．８６（ｍ，１Ｈ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．３１（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１．４７Ｈｚ，２７．８４Ｈｚ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．２５（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝１．２９Ｈｚ，２１．６１Ｈｚ、ＣＨ２ＣＨＣＨ２）４．８９−４．７７（ｍ，４Ｈ、ダブレット１Ｈを含む、Ｊ＝１．２８Ｈｚ，ＣＨＣＨＳＥｔ，ＮＨ，ＣＨ２−ＴｒＯＣ），４．６２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．２８Ｈｚ，ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），３．８１（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．６０（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ２），２．９１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．４２Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），２．８４−２．６１（ｍ，４Ｈ，ＳＣＨ２ＣＨ３），１．３７−１．２３（ｍ，６Ｈ，ＳＣＨ２ＣＨ３）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１７０．３３（エステルＣＯ），１６８．５０（ＣＯＮ），１５１．９４（ＯＣＯ），１５０．２９（ＣＯＣＨ３），１４４．５２（ＣＯＣＨ２ＣＨ２），１３１．９３（ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），１３１．３５（ＣＮＨ），１１８．２９（ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），１１２．２１（芳香環ＣＨ），１０５．５１（芳香環ＣＨ），９５．２７（ＣＣｌ３），７６．２４（ＣＨ２ＴｒＯＣ），７４．３９（ＣＨ２ＴｒＯＣ），６５．４２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），６１．１４（ＮＣＨ），５６．３０（ＯＣＨ３），５３．００（ＮＣＨＣＨＳＥｔ），３４．２７（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），２７．３０，２６．７１，２６．４３，２５．２４（ＮＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２），１５．２７，１４．８７，１４．１８（ＳＣＨ２ＣＨ３）。ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ（相対強度）：６５８，６５６（Ｍ＋・，１），５０８（１），３７３（６），３０５（５），３０４（２７），１９２（５），７０（１２）。
【０１３２】
３−（１１−ヒドロキシ−５−オキソ−１０−（２，２，２−トリクロロエチルオキソカルボニルアミノ）−（１１ａＳ）−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［２，１−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシ−２−プロペニルプロパノエート（６ｄ）
１０（６．８ｇ、１０．３４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル／水（４：１、２００ｍＬ）の溶液を、炭酸カルシウム（２．５８５ｇ、２５．８５ｍｍｏｌ）および塩化水銀（ＩＩ）（７．００ｇ、２５．８５ｍｍｏｌ）で処理し、この溶液を１８時間攪拌した。次いでこの反応物をセライトでろ過し、ろ取パッドを酢酸エチルで洗浄した。有機相を集め、水（３×５０ｍＬ）、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧除去し、生成物は、フラッシュカラムクロマトグラフィ（酢酸エチル）により精製し、黄色油状生成物（３．６７ｇ、６４％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．２５（芳香環ＣＨ），６．８６（ｓ，１Ｈ，芳香環ＣＨ），６．００−５．８５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ２ＣＨＣＨ２），５．６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．７１Ｈｚ，ＴｒＯＣ−ＣＨ２），５．３７−５．２０（ｍ，３Ｈ，ＴｒＯＣ−ＣＨ２＋ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），４．６５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝５．６７Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨＣＨ２Ｏ），４．３６−４．２２（ｍ，３Ｈ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ＋ＮＣＨＯＨ），３．９０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．７２−３．４７（ｍ，３Ｈ，ＮＣＨ＋ＮＣＨ２），２．９１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４１Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），２．２９−２．００（ｍ，４Ｈ，ＮＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）；１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１７０．３３（エステルカルボニルＣＯ），１６６．１７（ＣＯＮ），１５４．４（ＯＣＯ），１４９．８８（ＣＯＣＨ３），１４８．９３（ＣＯＣＨ２ＣＨ２），１３１．８６（ＣＨ２ＣＨＣＨ２），１２７．４８（芳香環ＣＮ），１２６．２４（ＣＣＯＮ），１１８．４２（ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），１１４．４８（芳香環ＣＨ），１１０．８２（芳香環ＣＨ），９５．０９（ＣＣｌ３），８６．４２（ＮＣＨＯＨ），７４．９６（ＴｒＯＣ−ＣＨ２），６５．４７（ＯＣＨ２ＣＨＣＨ２），６４．４３（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），６０．１３（ＮＣＨ），５６．１４（ＯＣＨ３），４６．４４（ＮＣＨ２），３４．２６（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），２８．６４（ＮＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ（相対強度）：５５２（Ｍ＋１０），５５０（１０），３７４（２），３６８（５），３０４（１５），１９２（８），７０（２４），５５（２４）。ＨＲＭＳ：Ｃ２２Ｈ２５Ｎ２Ｏ８Ｃｌ３としての計算値；５５２．０６５１、塩素に基づく３本のピークの実測値；５５２．０６４６、５５０．６７６、５５４．０６１７。
【０１３３】
３−（１１−ヒドロキシ−５−オキソ−７−メトキシ−１０−（２，２，２−トリクロロエチルオキソカルボニルアミノ）−（１１ａＳ）−２，３，５，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［２，１−ａ］［１，４］ジアゼピン−８−イルオキシプロパン酸（７ｄ）
６ｄ（３．５ｇ、６．３５ｍｍｏｌ）をエタノール（１００ｍＬ）に溶解した。これに、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３５０ｍｇ、０．３０３ｍｍｏｌ）を加え、反応がＴＬＣモニターにより完了するまでこの溶液を３０分間還流した。反応混合物を冷却し、次いでセライトによりろ過した。エタノールを減圧除去し、黄色固体の粗製物を得て次の段階に直接用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（２２０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．２２（ｓ，１Ｈ，ＯＣＣＨＣＮ），７．０１（ｓ，１Ｈ，ＭｅＯＣＣＨＣ），６．２７（ｂｓ，ＣＯＯＨ），５．６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，ＴｒＯＣ−ＣＨ２），５．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．０９Ｈｚ，ＴｒＯＣ−ＣＨ２），４．２９−４．１１（ｍ，２Ｈ，ＣＨＯＨ），３．８５（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．７１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９７Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），３．５１（ｍ，１Ｈ，ＮＣＨ），２．８０（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ２），２．１２−１．９９（ｍ，４Ｈ，ＮＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２），１．２１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９６Ｈｚ，ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１７４．２７（酸ＣＨ），１６７．３４（ＣＯＮ），１５４．２０（ＯＣＯ），１４９．７８（ＣＯＣＨ３），１４８．７４（ＣＯＣＨ２ＣＨ２），１３３．７９（芳香環ＣＨ），１３２．１６（芳香環ＣＨ），１２８．６６（芳香環ＣＮ），１２５．８７（ＣＣＯＮ），９５．０６（ＣＣｌ３），８６．５３（ＮＣＨＣＨＯＨ），７４．９５（ＣＨ２−ＴｒＯＣ），６０．６７（ＮＣＨ），５８．２４（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ），５６．０４（ＯＣＨ３），４６．４４（ＮＣＨ２），３５．２４（ＮＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２），２８．５９（ＮＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２），２３．０８（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）。
【０１３４】
実施例１（ｅ）：樹脂結合保護ＰＢＤ（ＪＧＢ−２８５）の合成
【０１３５】
【化４７】
0004689826.tif 000031
ＤＭＦ（５００μｌ）を、オールテック（Ａｌｌｔｅｃｈ）チューブ（８ｍｌ）中のアミノテンタゲル樹脂（０．０５６ｇ、０．２６ｍｍｏｌ／ｇ充填）に加え、この懸濁液を３０分間振とうした。Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ酸７ｂ（６６．６ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ（０．０３８ｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２１μｌ、０．０１２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍｌ）溶液を加え１６時間振とうを続けた。樹脂をろ過し、ＤＭＦ（５ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）およびＭｅＯＨ（５ｍｌ）で濯いだ。この反応を完全にするため、この手法が２度繰返され、次いでこの樹脂を減圧乾燥してＪＧＢ−２８５を得た。
【０１３６】
実施例１（ｆ）：樹脂結合の脱保護ＰＢＤ（ＪＧＢ−２８６）の合成
【０１３７】
【化４８】
0004689826.tif 000032
ピペリジンのＤＭＦ（２０％、５００μｌ）溶液を樹脂ＪＧＢ−２８５に加え、この懸濁液を１６時間振とうした。樹脂をろ過し、ＤＭＦ（５ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）およびＭｅＯＨ（５ｍｌ）で濯いだ。この反応を完全にするため、この手法が２度繰返され、次いでこの樹脂を減圧乾燥してＪＧＢ−２８６を得た。
【０１３８】
実施例２：式Ｉの８−アミノプロピルＰＢＤの合成（図２参照）
総合成
化合物１９を、標準条件下（ピペリジン／ＤＭＦ）、１８からＦｍｏｃの除去により調製した。Ｆｍｏｃカルバメートは、アルコール１７のスワーン酸化を経て得られ、ピロロベンゾジアゼピンのＢ環の同時閉環により生じた。多くの他の酸化法、例えば、デスマーチン試薬、ＴＰＡＰ／ＮＭＯ系、またはＤＭＳＯ中のピリジンサルファートリオキシドが、酸化／閉環反応を促進するのに当然効果的であることも判る。アルコール１７は、アミノアルコール１６をピリジン存在下、Ｎｖｏｃ−Ｃｌで処理することにより得られた。前記のように、これは任意のクロロギ酸エステルに適用できる一般法であり、この選択は、ＰＢＤおよびＦｍｏｃの開裂条件との適合によってのみ限定される。アミン基は、多くの他のカルバメート保護基で保護もできるが、この場合最も有用なものは、Ｆｍｏｃ開裂条件との適合のためにＡｌｌｏｃ、ＴｅｏｃおよびＮｏｃである。Ｆｍｏｃ自身は、Ｎ−１０保護に使用され、その場合、脂肪族窒素には、別の保護基を使用することが明らかに必要となることを注意すべきである（下記参照）。アミノアルコールは、順次標準条件下、ピロリジンメタノールをｏ−ニトロ安息香酸１４に対するカップリングにより調製されたニトロアルコールの塩化スズ還元によって調製された。このｏ−ニトロ安息香酸は、アミノ酸１３のＦｍｏｃ保護により調製された。再び、Ｆｍｏｃを、Ｎ１０Ｎｖｏｃ基に適合させるために他の多くの保護基、例えばＢｏｃ、Ａｌｌｏｃ、Ｎｏｃなどと置き換えることも可能と考えられる。Ｆｍｏｃが芳香族Ｎ１０基を保護するのに用いた場合、Ｂｏｃ、Ａｌｌｏｃ、ＴｅｏｃおよびＮｖｏｃは、脂肪族窒素を保護するのに用いることに注意すべきである。アミノ酸１３は、順次、バニリン酸メチルをＢｏｃアミノプロパノールとの光延エーテル化反応により得られるＢｏｃ保護アミン１１の同時ニトロ化および脱保護により得られるエステル１２の加水分解により調製した。
【０１３９】
Ｂｏｃアミノエステル（１１）
アチドジカルボン酸ジエチル（３．３８ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍｌ）溶液を、バニリン酸メチル（３．５３ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）、Ｎ−Ｂｏｃ−プロパノールアミン（３．４ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（５．０９ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍｌ）溶液に０℃で滴下した。この反応混合物を室温に加温し、一晩攪拌した。過剰の溶媒を減圧下回転蒸発により除去し、残渣をトルエンで粉砕した。沈殿したトリフェニルホスフィンオキシドを減圧ろ過により除去し、濾液を減圧濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、石油エーテル４０−６０／酢酸エチル、８０／２０）に供し、過剰の溶出液の除去により純粋生成物１１（４．８ｇ、収率７３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．６５（ｄｄ，Ｊ＝８．４３，２．０２Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝２．０２Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．４３Ｈｚ，１Ｈ），５．５５（ｂｓ，１Ｈ），４．１５（ｔ，Ｊ＝５．８７Ｈｚ，２Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），３．４１−３．３５（ｍ，２Ｈ），２．０９−２．００（ｍ，２Ｈ）および１．４６（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（６８．７ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６６．９，１５６．１，１５２．１，１４８．８，１２３．５，１２２．８，１１２．０，１１１．２，７９．０，６８．２，５５．９，５２．０，３８．９，２９．２，２８．５。
【０１４０】
アミノニトロエステル（１２）
Ｂｏｃ保護アミン１１（１０ｇ）を、冷硝酸（３０ｍｌ、７０％、氷浴）に少量づつ加え、反応混合物を室温まで温めて一晩攪拌した。この反応混合物を破砕した氷（１００ｇ）にあけて、生じた水溶液を減圧下、回転蒸発により原容量の半分まで減じた。生じた沈殿物を減圧ろ過により集め、無水エタノールから再結晶して黄色の結晶性固体１２（８．９ｇ、８７％）の生成物を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．４７（ｓ，１Ｈ），７．０８（ｓ，１Ｈ），４．２４（ｔ，Ｊ＝５．８６Ｈｚ，２Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．２４（ｔ，Ｊ＝６．７８Ｈｚ，２Ｈ），２．３２−２．２３（ｍ，２Ｈ）。
【０１４１】
アミノニトロ酸（１３）
水酸化カリウム（０．５ｇ、８．７ｍｍｏｌ）およびニトロ安息香酸１２（１ｇ、２．９ｍｍｏｌ）の含水メタノール（Ｈ２Ｏ、１０ｍｌ；メタノール、２０ｍｌ）溶液を、室温で１時間攪拌し、ＴＬＣ（ＡｃＯＥＴ、ＭｅＯＨ、ＴＥＡ、１：１０：１００）が、出発原料の完全消費を示すまで加熱還流を行った。過剰のメタノールを回転蒸発により除去し、残渣を水で希釈して１Ｎ  ＨＣｌで中和した。中和された水溶液は、さらに精製しないで次の合成段階で直ちに使用した。
【０１４２】
Ｆｍｏｃニトロ酸（１４）
クロロギ酸フルオレニルメチル（０．７８ｇ、３ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（５０ｍｌ）および炭酸ソーダ水（２．１５ｇ、水５０ｍｌ）で希釈した前の反応からの水溶液に少量づつ加えた。次に反応混合物を一晩攪拌した。過剰の有機溶媒を減圧下、回転蒸発により除去し、残渣の水溶液を酢酸エチル（３×２０ｍｌ）で洗浄した（過剰のＦｍｏｃ−Ｃｌを除くため）。水相を濃塩酸で酸性にし、酢酸エチル（２×５０ｍｌ）で抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧蒸発して生成物１４（１ｇ、収率７０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ（回転異性体）８．２１（ｂｓ，２Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝７．１４Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，２Ｈ），７．４０−７．１３（ｍ，５Ｈ），６．４７および５．７０（２ｘｂｓ，１Ｈ），４．５４−３．８８（ｍ，５Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．４４−３．４２（ｍ，２Ｈ），２．０４−１．９０（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（６８．７ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６８．７，１５６．９，１５２．１，１４９．８，１４３．７，１４１．９，１４１．３，１２７．７，１２７．０，１２４．９，１２０．６，１２０．０，１１１．１，１０７．８，６８．５，６６．４，５６．４，４７．３，３９．１，２８．４。
【０１４３】
Ｆｍｏｃニトロアルコール（１５）
触媒量のＤＭＦ（２滴）を酸１４（１．１６ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）および塩化オキサリル（０．３３ｇ、２．６ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン（２０ｍｌ）溶液に加え、反応混合物を一晩攪拌した。生じた酸クロリド溶液を０℃に冷却し、ピロリジンメタノール（０．２６ｇ、２．５７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．５２ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン（１５ｍｌ）溶液を滴下し処理した。アミンの添加終了後、短時間に実施できる薄層クロマトグラフィにより、反応の完了が明らかとなった。反応混合物をＨＣｌ（１Ｎ、１×５０ｍｌ）および水（２×２０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。過剰の溶媒の除去により粗製物を与え、それをフラッシュカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、勾配溶出、クロロホルム中１％メタノールからクロロホルム中２％メタノール）にかけて、必要なアミド１５（１．１ｇ、８１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．７５（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，２Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝６．９６Ｈｚ，２Ｈ），７．４１−７．２６（ｍ，４Ｈ），６．７８（ｓ，１Ｈ），５．６６（ｂｓ，１Ｈ），４．４８−４．３９（ｍ，３Ｈ），４．２３−４．１３（ｍ，３Ｈ），３．９１−３．７９（ｍ，５Ｈ），３．４５−３．４２（ｍ，２Ｈ），３．１８−３．１３（ｍ，２Ｈ），２．０８−１．７０（ｍ，６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６８．５，１５６．５，１５４．７，１４８．２，１４３．９，１４１．３，１３７．０，１２８．０，１２７．７，１２７．０，１２４．９，１２０，１０８．９，１０８．０，６８．４，６６．２，６６．０，６１．５，５６．６，５３．５，４７．３，３９．０，２８．９，２８．４，２４．４。
【０１４４】
Ｆｍｏｃアミノアルコール（１６）
ニトロアミド１５（３ｇ、５．２２ｍｍｏｌ）およびＳｎＣｌ２２Ｈ２Ｏ（６．１５ｇ、２７．１５ｍｍｏｌ）のメタノール（６０ｍｌ）溶液を２時間加熱還流した。反応混合物を原容量の１／３まで濃縮し、飽和重曹水（激しく発泡）で注意深く処理してｐＨ８とした。混合物を酢酸エチル（１００ｍｌ）とともに一晩激しく攪拌し、セライトによりろ過して沈殿スズ塩を除いた。水相は、酢酸エチル（５０ｍｌ）で抽出して、合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥した。過剰の溶媒除去により、暗黄色油状物１６（１．９３ｇ、６８％）の所望のアミンを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．７５（ｄ，Ｊ＝７．５１Ｈｚ，２Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，２Ｈ），７．４０−７．２６（ｍ，４Ｈ），６．７２（ｓ，１Ｈ），６．２５（ｓ，１Ｈ），５．９５（ｂｓ，１Ｈ），４．４３−４．０４（ｍ，６Ｈ），３．６７−３．４２（ｍ，９Ｈ），２．１１−１．７（ｍ，６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１７１．７，１５６．６，１５０．８，１４４．０，１４１．３，１４０．６，１２７．６，１２７．０，１２５．０，１１９．９，１１２．０，１０２．２，６８．０，６６．６，６６．４，６１．０，５６．６，５１．０，４７．３，３９．５，２９．１，２８．５，２４．９。
【０１４５】
ＦｍｏｃＮｖｏｃアルコール（１７）
クロロギ酸４，５−ジメトキシ−２−ニトロベンジル（１．４４ｇ、５．２３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４０ｍｌ）溶液を、アミン１６（２．５９ｇ、４．７５ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．４１ｇ、５．２３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６０ｍｌ）溶液に０℃で滴下した。３時間後、この反応混合物をＨＣｌ（１Ｎ、２×１００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）および食塩水（１×１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、過剰の溶媒除去により、粗製物が得られ、これをフラッシュカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、酢酸エチルに続いて酢酸エチル中１％メタノール）にかけて純粋カルバメート１７（３．２ｇ、８６％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ８．９４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝７．５１Ｈｚ，２Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，２Ｈ），７．４０−７．２５（ｍ，４Ｈ），７．０８（ｓ，１Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），５．６２（ｄ，Ｊ＝１５．０２Ｈｚ，１Ｈ），５．５０（ｄ，Ｊ＝１５．０２，１Ｈ），４．４４−４．４１（ｍ，３Ｈ），４．２４−４．１３（ｍ，３Ｈ），３．９９（ｓ，３Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．７０−３．４４（ｍ，９Ｈ），２．１７−１．７２（ｍ，６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（６８．７ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１７１．７，１６４．０，１５６．６，１５３．７，１５３．３，１５０．１，１４８．１，１４４．３，１４４．０，１４１．３，１３９．６，１３１．３，１２７．６，１２７．０，１２５．０，１１９．９，１１０．７，１１０．１，１０８．２，１０５．５，６８．１，６６．４，６６．１，６３．９，６０．９，５６．６，５６．４，５６．２，４７．３，３９．５，２８．９，２８．３，２５．１。
【０１４６】
ＦｍｏｃＮｖｏｃカルビノールアミン（１８）
ＤＭＳＯ（０．８ｍｌ、１１．４ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン（１５ｍｌ）溶液を、窒素雰囲気下−４５℃（液体Ｎ２／クロロベンゼン）で塩化オキサリル（０．７２ｇ、５．７１ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン（１５ｍｌ）溶液に３０分かけて滴下した。反応混合物を３０分間攪拌後、−４５℃の反応温度を維持しながら、基質１７（３．２ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン（３５ｍｌ）溶液を５０分かけて添加した。次いで、この反応混合物を−４５℃でさらに４５分間攪拌した。トリエチルアミン（２．１５ｍｌ、１６．２ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン（１０ｍｌ）溶液を−４５℃で２５分かけて加え、反応混合物を―４５℃でさらに３０分間攪拌後、室温に温めた。この反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌ（１×７５ｍｌ）、水（１×７５ｍｌ）と食塩水（１×７５ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。過剰の溶媒を除去して粗製物を与え、これをフラッシュカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、酢酸エチル）にかけて、閉環生成物１８（１．９２ｇ、収率６０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．７４（ｄ，Ｊ＝７．５１Ｈｚ，２Ｈ），７．６０−７．５９（ｍ，３Ｈ），７．４０−７．２３（ｍ，４Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），６．５０（ｓ，１Ｈ），５．８８（ｂｓ，１Ｈ），５．７２（ｄ，Ｊ＝９．３４Ｈｚ，１Ｈ），５．４５−５．３８（ｍ，２Ｈ），４．５９（ｂｓ，１Ｈ），４．４２（ｄ，Ｊ＝７．１４Ｈｚ，２Ｈ），４．２２−４．０８（ｍ，３Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．５９−３．４４（ｍ，４Ｈ），２．１２−２．０２（ｍ，６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６６．９，１５６．６，１５５．４，１５３．８，１５０．１，１４８．８，１４８．１，１４４．０，１４１．３，１３９，１２８．２，１２７．７，１２７．０，１２６．７，１２６．５，１２５．０，１２０．０，１１３．７，１１０．５，１０９．７，１０８．１，８６．２，６８．４，６６．３，６５．４，６０．３，５６．３，５６．２，５６．０，４７．３，４６．５，３９．４，２９．７，２８．７，２３．１。
【０１４７】
アミノＮｖｏｃカルビノールアミン（１９）
Ｆｍｏｃ保護アミン１８（０．５ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）をピペリジン（１ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍｌ）溶液に加えた。２時間後、ＴＬＣにより、出発物質の存在を示していたので、ＤＭＦを混合溶媒として加えることにより、この反応がさらに３０分で終了した。反応混合物を酢酸エチル（５０ｍｌ）で希釈し、水（２５ｍｌ）、食塩水（２５ｍｌ）で洗浄して硫酸マグネシウムで乾燥した。過剰の溶媒を除去し、酢酸エチルと石油エーテル４０−６０から再結晶により黄色結晶性生成物（０．１２３ｇ、収率３４％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．６１（ｓ，１Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），６．５０（ｓ，１Ｈ），５．７０（ｄ，Ｊ＝９．７０Ｈｚ，１Ｈ），５．４４（ｂｓ，２Ｈ），４．１３−４．１１（ｍ，１Ｈ），３．９６−３．４０（ｍ，１３Ｈ），２．１８−１．９０（ｍ，６Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（６８．７ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６７．１，１５５．１，１５３．８，１５０．０，１４８．７，１４７．９，１３８．８，１２８．５，１２７．３，１２６．５，１１４．３，１１０．４，１０９．５，１０７．９，８６．０，６７．１，６５．１，６０．７，５６．３，５６．１，５３．３，３８．７，２８．７，２８．０，２３．１。
【０１４８】
実施例３ａ：ＰＢＤ−トリグリシン３０の合成（図３ａおよび３ｂ）
この実施例は、合成の一般法を証明するために実施された。
【０１４９】
樹脂の脱保護
Ｆｍｏｃ−アミノエチルフォトリンカーのノバシン（ＮｏｖａＳｙｎ）ＴＧ樹脂２０（０．３５ｇ、０．２３ｍｍｏｌ／ｇ充填）をシンタに接続したペプチド合成容器に入れた。ＤＭＦ（３ｍｌ）中２０％ピペリジンの添加後、容器を３時間振とうした。次に脱保護樹脂２１をろ過により分離し、ＮＭＰ（３ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３ｍｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（３ｍｌ）で濯いだ。この全手法を２度繰り返した後、この樹脂を減圧乾燥した。
【０１５０】
カップリング条件
ＤＭＦ（２ｍｌ）を樹脂２１に加え、この懸濁液を３０分間振とうした。Ｆｍｏｃ−グリシン（０．２４ｇ、０．８０５ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ（０．２６ｇ、０．８０５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１４０μｌ、０．８０５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍｌ）溶液を加えて振とうを２０時間続けた。結合した樹脂２２をろ過し、ＮＭＰ（５ｍｌ）、ＭｅＯＨ（５ｍｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）で濯いだ。この全手法を２度繰り返した後、この樹脂を減圧乾燥した。カップリング効率は、ＤＭＦ（０．２ｍｌ）中ブロモフェノールブルーの添加によりモニターした。
【０１５１】
アセチル化（エンドキャッピング）条件
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）中のＡｃ２Ｏ（２０％）およびピリジン（３０％）を樹脂２２に加えて、この懸濁液を２時間振とうした。アセチル化された樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）、ＥｔＯＨ（５ｍｌ）およびさらに一定分割量のＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）で洗浄した。この全手法は、もう１度繰返してから該樹脂を減圧乾燥した。アセチル化の有効性は、ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中のブロモフェノールブルーの添加によりモニターされた。
【０１５２】
脱保護条件
ＤＭＦ（２ｍｌ）中のピペリジン（２０％）をアセチル化樹脂２２に加え、この懸濁液を１２時間振とうした。脱保護樹脂２３は、ろ過により集められ、ＮＭＰ（５ｍｌ）、ＭｅＯＨ（５ｍｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）で濯いだ。この全手法を２度繰り返した後、該樹脂を減圧乾燥した。
【０１５３】
２個のさらなるグリシン単位の付加
前記カップリング（２１〜２２）、アセチル化および脱保護（２２〜２３）段階を、樹脂結合のトリペプチド２７が得られるまで、２回（２３〜２７）繰り返された。
【０１５４】
ＰＢＤ単位へのカップリング（Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ）
トリグリシン樹脂２７（０．１２ｇ、０．２３５ｍｍｏｌ／ｇ充填）を、シンタに接続されたペプチド合成容器に入れた。ＤＭＦ（３ｍｌ）を加えて、この容器を３０分間振とうした。Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ酸７ｂ（０．１５ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ（０．０９ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（５０μｌ、０．２８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍｌ）溶液を加えて振とうを２０時間続けた。反応の進行をモニターするためにブロモフェノールブルー指示薬（３０μｌ）を加えた。結合した樹脂２８ｂをろ過により集められ、ＤＭＦ（５ｍｌ）、ＮＭＰ（５ｍｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）で濯いだ。この全手法が２度繰り返された後、この樹脂を減圧乾燥した。
【０１５５】
アセチル化（エンドキャッピング）条件
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）中のＡｃ２Ｏ（２０％）およびピリジン（３０％）を樹脂２８ｂに加えて、この容器を２時間振とうした。アセチル化された樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）、ＥｔＯＨ（５ｍｌ）およびさらにＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）で洗浄した。この全手法をもう１度繰り返してから、樹脂２９を減圧乾燥した。アセチル化の有効性は、ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中のブロモフェノールブルーの添加によりモニターされた。
【０１５６】
遊離ＰＢＤへの脱保護
ＤＭＦ（２ｍｌ）中のピペリジン（２０％）をアセチル化樹脂２８ａに加え、この容器を１２時間振とうした。脱保護樹脂２９は、ろ過により集められ、ＮＭＰ（５ｍｌ）、ＭｅＯＨ（５ｍｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）で濯いだ。この全手法が２度繰り返されてから該樹脂を減圧乾燥した。
【０１５７】
Ｎｖｏｃ−ＰＢＤトリグリシン２８ａの合成（図３ｂ）
トリグリシン樹脂２７（０．１６ｇ、０．２３５ｍｍｏｌ／ｇ充填）を、シンタに接続されたペプチド合成容器に入れた。ＤＭＦ（３ｍｌ）を加えて、この容器を３０分間振とうした。Ｎｖｏｃ−ＰＢＤ酸７ａ（０．２２ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ（０．１２ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（６５μｌ、０．３８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（３ｍｌ）を加えて２０時間振とうを続けた。反応の進行をモニターするためにブロモフェノールブルー指示薬（３０μｌ）を加えた。樹脂２８ａをろ過により集められ、ＤＭＦ（５ｍｌ）、ＮＭＰ（５ｍｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）で濯いだ。この全手法が２度繰り返された後、この樹脂を減圧乾燥した。
【０１５８】
アセチル化（エンドキャッピング）条件
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）中のＡｃ２Ｏ（２０％）およびピリジン（３０％）を樹脂２８ａに加えて、この容器を２時間振とうした。アセチル化された樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）、ＥｔＯＨ（５ｍｌ）およびさらにＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）で洗浄した。この全手法を、もう１度繰り返してから樹脂２９を減圧乾燥した。アセチル化の有効性は、ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中のブロモフェノールブルーの添加によりモニターされた。
【０１５９】
光分解
ＤＭＦ中Ｎｖｏｃ−ＰＢＤを担持するビーズの懸濁液を、３６５ｎｍで２時間照射（スペクトロリンカーＸＬ１０００ＵＶクロスリンカー、スペクトロニクス社）することにより樹脂から同時にＮ１０脱保護および切断され、ＭＴＴアッセイ（実施例３ｂ）に直ちに使用される１ｍｍｏｌ保存溶液３０を得た。
【０１６０】
実施例３（ｂ）：一般ＭＴＴアッセイ法
培養において、Ｕ９３７ヒト慢性組織球増多白血病細胞の増殖またはＫ５６２ヒト慢性骨髄性白血病細胞の増殖を阻害する薬剤能力は、ＭＴＴアッセイを用いて測定された（モスマン、１９８３年）。これは、黄色溶解性テトラゾリウム塩である３−（４，５−ジメチルチアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ；シグマ化学社）を不溶性の紫色のホルマザン沈殿に還元する生細胞能力に基づく。薬剤処理後、細胞は、１ウェル当たり１０４個の細胞および１サンプルにつき８ウェルを有する９６ウェルのマイクロタイタープレートに移した。該プレートを、５％ＣＯ２を含む湿気中３７℃で培養した。該プレートを４日間（対照細胞が１０倍の数まで増殖できる）培養後、ＭＴＴのリン酸緩衝生理食塩水の５ｍｇ／ｍＬ溶液２０μＬを各ウェルに加え、該プレートをさらに５時間培養した。該プレートを３００ｇで５分間遠心分離し、大部分の培地を細胞ペレットから除いて１ウェル当たり１０〜２０μＬが残った。ＤＭＳＯ（２００μＬ）を各ウェルに加え、サンプルの完全な混合を確実にするために振とうした。光学密度を５５０ｎｍの波長で、チッターテックマルチスキャンＥＬＩＳＡプレートリーダで読み取られ、用量反応曲線を作成した。ＩＣ５０値は、最終光学密度を５０％対照値に換算するのに必要な用量として読みとられた。
【０１６１】
ＰＢＤ−トリグリシンのＭＴＴアッセイ
ＭＴＴアッセイは、実施例３ａで前に調製したＰＢＤ−トリグリシン（化合物３０）の細胞毒性を評価するために用いられた。該アッセイにおいて、ＩＣ５０が０．５９μＭであることが判った。
0004689826.tif 000033
【０１６２】
実施例４（ａ）：樹脂結合トリペプチドライブラリの合成（図４ａおよび４ｂ）
実施例３に続いて、この方法は、トリペプチドライブラリを合成するのに使用された。
【０１６３】
樹脂の脱保護
Ｆｍｏｃ−アミノエチルフォトリンカーのノバシン（ＮｏｖａＳｙｎ）ＴＧ樹脂２０（１．３５ｇ、０．２３ｍｍｏｌ／ｇ充填）が、５０ｍｇづつ２７本のオールテックチューブに量られた。ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中のピペリジン（２０％）を各チューブに加え、次いで該チューブを軌道シェーカ上に３時間置いた。脱保護樹脂２１を、スペルコバキュームマニホールド（Ｓｕｐｅｌｃｏ  Ｖａｃｕｕｍ  Ｍａｎｉｆｏｌｄ）を用いてろ過により集め、ＤＭＦ（２ｍｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）で濯いだ。この全手法が２度繰り返された後、この樹脂を減圧乾燥した。
【０１６４】
カップリング条件
ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中の樹脂２１を含有する各オールテックチューブに加えて、このチューブを３０分間振とうした。ＤＭＦ（３．４ｍｌ）中のＦｍｏｃ−グリシン（０．３０６ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を最初の９本のチューブに、ＤＭＦ（３．５４ｍｌ）中のＦｍｏｃ−バリン（０．３６ｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を次の９本のチューブに、およびＤＭＦ（３．４ｍｌ）中のＦｍｏｃ−フェニルアラニン（０．３９６ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を最後の９本のチューブに加えた。ＤＭＦ（１０ｍｌ）中のＴＢＴＵ（０．９７２ｇ、３．０３ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（５４０μｌ、３．１ｍｍｏｌ）を、全２７本のチューブに加えて振とうを２０時間続けた。結合した樹脂３１をろ過により集め、ＤＭＦ（５ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）およびＥｔＯＨ（５ｍｌ）で濯いだ。この全手法が２度繰り返された後、この樹脂を減圧乾燥した。このカップリング効率は、２、３滴の１０％ＤＩＰＥＡ／ＤＭＦと１％ＴＮＢＳ／ＤＭＦの添加によりモニターされた。樹脂は、カップリングが完全であると無色のままであった。
【０１６５】
アセチル化（エンドキャッピング）条件
ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中のＡｃ２Ｏ（２０％）およびピリジン（３０％）を、樹脂３１を含む各オールテックチューブに加えて、これらのチューブを２時間振とうした。アセチル化された樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）、ＥｔＯＨ（５ｍｌ）およびさらにＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）で洗浄した。この全手法が、もう１度繰り返されて、樹脂を減圧乾燥した。
【０１６６】
脱保護条件
ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中のピペリジン（２０％）をアセチル化樹脂３１の各チューブに加え、これらのチューブを１２時間振とうした。脱保護樹脂３２のバッチをろ過により集められ、ＤＭＦ（５ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）およびＭｅＯＨ（５ｍｌ）で濯いだ。この全手法が２度繰り返されてから該樹脂を減圧乾燥して樹脂３８のバッチを得た。
【０１６７】
さらに２種類のアミノ酸単位のカップリング
前のカップリング（２１→３１）、アセチル化および脱保護（３１→３２）段階は、各オールテックチューブ（３２→３６）に適当なＦｍｏｃ保護アミノ酸類を用いて２度繰り返され、全ての可能な組合せを達成した。この結果、樹脂結合トリペプチドライブラリ３６が得られた。
【０１６８】
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ単位に対するカップリング（４ｂ）
ＤＭＦ（０．５ｍｌ）を、樹脂３６を含む各オールテックチューブに加えて、このチューブを３０分間振とうした。ＤＭＦ（５．２ｍｌ）中のＦｍｏｃ−ＰＢＤ酸７ｂ（０．８６６ｇ、１．５５ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（５ｍｌ）中のＴＢＴＵ（０．４８６ｇ、１．５５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２７０μｌ、１．５５ｍｍｏｌ）を加えて、振とうを２０時間続けた。結合した樹脂３７をろ過により各チューブから集め、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）、ＥｔＯＨ（５ｍｌ）、およびさらにＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）で濯いだ。この全手法は２度繰り返された後、この樹脂のバッチを減圧乾燥した。
【０１６９】
アセチル化（エンドキャッピング）条件
ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中のＡｃ２Ｏ（２０％）およびピリジン（３０％）を、樹脂３７の各オールテックチューブに加えて、これらのチューブを２時間振とうした。各オールテックチューブからアセチル化樹脂をろ過により集められ、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）、ＥｔＯＨ（５ｍｌ）およびさらにＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）で洗浄した。この全手法は、もう１度繰り返されてから、樹脂を減圧乾燥した。アセチル化の有効性は、２、３滴の１０％ＤＩＰＥＡ／ＤＭＦおよび１％ＴＮＢＳ／ＤＭＦを加えてモニターされた。
【０１７０】
脱保護条件
ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中のピペリジン（２０％）をアセチル化樹脂３７の各チューブに加え、これらのチューブを１２時間振とうした。脱保護樹脂３８のバッチをろ過により集められ、ＤＭＦ（５ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）およびＭｅＯＨ（５ｍｌ）で濯いだ。この全手法が２度繰り返されてから、該樹脂を減圧乾燥して樹脂３８のバッチを得た。
【０１７１】
光分解
脱保護化樹脂３８を担持するビーズの懸濁液を３６５ｎｍで２時間照射（スペクトロリンカーＸＬ１，０００ＵＶクロスリンカー、スペクトロニクス社）することにより樹脂から切断し、ＭＴＴアッセイ（実施例４ｂ）に直ちに使用される１ｍｍｏｌの保存溶液を得た。
【０１７２】
実施例４（ｂ）：ビーズ上に調製された２７種の組合せライブラリのスクリーニング
実施例４（ａ）で合成された組合せライブラリ（コンビナトリアルライブラリ）は、前記のようにＭＴＴアッセイを用いてスクリーンされた。
【０１７３】
【表２】
0004689826.tif 000034
【０１７４】
これらの結果は、アミノ酸配列を変えることにより、ＰＢＤ類の細胞毒性に影響を与えることを示す。
【０１７５】
実施例５（ａ）：液相試験用のクラウン上における２７種のトリペプチド−ＰＢＤライブラリの調製
【０１７６】
【化４９】
0004689826.tif 000035
２７種のライブラリを、Ｆｍｏｃ保護のグリシン、ロイシンおよびフェニルアラニンのビルディングブロック、およびマルチピン（ＭｕｌｔｉｐｉｎＴＭ）合成キットおよび実施例４（ａ）に例示されたのと同じ一般反応式を用いてＮＶＯＣ保護ＰＢＤ単位からキロン技術（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）のクラウン上に調製した。
【０１７７】
クラウンの脱保護
２７種のＦｍｏｃ−リンクアミドのＯ−シリーズクラウン（充填：１クラウン当たり２．２μＭ）を、９８ピンブロックのうち最初の２７ピンに付着させた。ブロックを、反転してシェーカ（ハイドルフ、チトラマックス１００）上のピペリジン（２０％）のＤＭＦ（５０ｍＬ、無水）溶液を含む容器に入れた。３０分後、該ブロックを容器から除去し、過剰のピペリジン／ＤＭＦを排出した。次にブロックを反転し、新鮮なＤＭＦ（５０ｍＬ）を含む容器に入れ、全組立て部品を５分間振とうした。最後に、該クラウンをメタノールで２分間、２度洗浄してから２０分間風乾した。
【０１７８】
活性化アミノ酸エステルの調製
Ｎ−Ｆｍｏｃグリシン（１２８．４ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（５５ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（７０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２１６０μＬ）溶液を２０分間かき混ぜ、一定分割量（２００μＬ）を、９８ウェルのマイクロタイタープレートのうち、最初の９つのディープウェル（Ｈ１−Ｈ９）に加えた。活性エステルの同様の溶液を、Ｎ−Ｆｍｏｃロイシン（１５２．７ｍｇ）およびＮ−Ｆｍｏｃ−フェニルアラニン（１６７．４ｍｇ）から調製し、一定分割量（２００μＬ）をＨ１０〜Ｇ６ウェルおよびＧ７〜Ｆ３ウェルにそれぞれ配分した（下記表１参照）。
【０１７９】
【表３】
0004689826.tif 000036
【０１８０】
カップリング反応
各ウェルに、少量のブロモフェノールブルー指示薬（６．６ｍｇのＤＭＦ１０ｍＬ中の２５μＬ）を加え、これらのウェルにクラウン配列を浸した。該クラウン（前は無色）は、遊離アミンの存在を示す青色を直ちに呈した。ブロック／ディープウェルプレート組立て部品をシェーカ上で１８時間振とうした後、全てのクラウンは実質的に無色となり、カップリング反応が完全に進行したことを示した。次にクラウンアレイをマイクロタイタープレートから除き、過剰のカップリング試薬を排出させ、該クラウンアレイをＤＭＦ（５０ｍｌ、５分）で１回洗浄し、メタノール（１００ｍＬ、２分）で２度洗浄した。最後に、該クラウンアレイを２０分間風乾した。
【０１８１】
脱保護
クラウンアレイを、反転してシェーカ（ハイドルフ、チトラマックス１００）上のピペリジン（２０％）のＤＭＦ（５０ｍＬ、無水）溶液を含む容器に入れた。３０分後、該ブロックを容器から除去し、過剰のピペリジン／ＤＭＦを排出した。次にブロックを反転し、新鮮なＤＭＦ（５０ｍＬ）を含む容器に入れ、全組立て部品を５分間振とうした。最後に、該クラウンをメタノールで２分間、２度洗浄してから２０分間風乾した。
【０１８２】
第２のアミノ酸に対するカップリング
脱保護クラウンアレイを、下記の表２に示されたパターンに従って、Ｎ−Ｆｍｏｃ−グリシン、Ｎ−Ｆｍｏｃ−ロイシンおよびＦｍｏｃ−フェニルアラニンの活性エステルの新たに調製された溶液で充填されたディープウェルのマイクロタイタープレートに浸した。このブロック／ディープウェルプレート組立て部品を、軌道シェーカ上で１８時間振とう後、全てのクラウンは実質的に無色となり、カップリング反応が完全に進行したことを示した。次にクラウンアレイをマイクロタイタープレートから除き、過剰のカップリング試薬を排出させ、該クラウンアレイをＤＭＦ（５０ｍｌ、５分）で１回洗浄し、メタノール（１００ｍＬ、２分）で２回洗浄した。最後に、該クラウンアレイを２０分間風乾した。
【０１８３】
【表４】
0004689826.tif 000037
【０１８４】
脱保護
クラウンアレイを、反転してシェーカ（ハイドルフ、チトラマックス１００）上のピペリジン（２０％）のＤＭＦ（５０ｍＬ、無水）溶液を含む容器に入れた。３０分後、該ブロックを容器から除去し、過剰のピペリジン／ＤＭＦを排出した。次にブロックを反転し、新鮮なＤＭＦ（５０ｍＬ）を含む容器に入れ、全組立て部品を５分間振とうした。最後に、該クラウンをメタノールで２分間、２回洗浄してから２０分間風乾した。
【０１８５】
第３のアミノ酸単位のカップリング
脱保護クラウンアレイを、下記の表３に示されたパターンに従って、Ｎ−Ｆｍｏｃ−グリシン、Ｎ−Ｆｍｏｃ−ロイシンおよびＦｍｏｃ−フェニルアラニンの活性エステルの新たに調製された溶液で充填されたディープウェルのマイクロタイタープレートに浸した。このブロック／ディープウェルプレート組立て部品を、軌道シェーカ上で１８時間振とう後、全てのクラウンは実質的に無色となり、カップリング反応が完全に進行したことを示した。次にクラウンアレイをマイクロタイタープレートから除き、過剰のカップリング試薬を排出し、該クラウンアレイをＤＭＦ（５０ｍｌ、５分）で１回洗浄し、メタノール（１００ｍＬ、２分）で２回洗浄した。最後に、該クラウンアレイを２０分間風乾した。
【０１８６】
【表５】
0004689826.tif 000038
【０１８７】
脱保護
クラウンアレイを、反転してシェーカ（ハイドルフ、チトラマックス１００）上のピペリジン（２０％）のＤＭＦ（５０ｍＬ、無水）溶液を含む容器に入れた。３０分後、該ブロックを容器から除去し、過剰のピペリジン／ＤＭＦを排出した。次にブロックを反転し、新鮮なＤＭＦ（５０ｍＬ）を含む容器に入れ、全組立て部品を５分間振とうした。最後に、該クラウンをメタノールで２分間、２度洗浄してから２０分間風乾した。
【０１８８】
ＰＢＤキャッピング単位の付加
Ｎｖｏｃ−ＰＢＤ酸（７４５ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）、ＤＩＣ（１６ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（２０９ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６．４８ｍｌ）溶液を２０分間振とうし、次いで全２７つのウェルに分配した。このブロック／ディープウェルプレート組立て部品を、シェーカ上で４８時間振とうした。次にクラウンアレイをマイクロタイタープレートから除き、過剰のカップリング試薬を排出し、該クラウンアレイをＤＭＦ（５０ｍｌ、５分）で１度洗浄し、メタノール（１００ｍＬ、２分）で２度洗浄した。最後に、該クラウンアレイを２０分間風乾した。
【０１８９】
開裂
開裂に先立って、該クラウンを連続的にＤＭＦ、トルエン、メタノールおよびジクロロメタンにて洗浄してあらゆる非結合の不要物質を除いた。次に該クラウンアレイを、ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（３００μＬ、９５：５、ｖ／ｖ）を含む２７本のラックされた（だが個々の）１ｍＬのポリプロピレンチューブのそれぞれに浸され、該ブロック／ラック組立て部品は、室温で２時間軌道シェーカ上で振とうした。過剰のＴＦＡを、窒素下（８つの出口をもつガラス多岐管により供給）平行蒸発により除去し、次いで４８時間かけて減圧乾燥して遊離のＮ１０−Ｎｖｏｃ保護のＰＢＤ−トリペプチドを得た。
【０１９０】
実施例５（ｂ）：光分解開裂およびＭＴＴアッセイ法
実施例３（ｂ）と同じアッセイ法が用いられた。５×１０４個の細胞／ｍＬ密度の細胞を、最終濃度が０．３μＭ（６．６μモル／チューブ／ｍｌ）で２７種のライブラリの各構成要素と連続的に培養した。２７種の構成要素ライブラリにおける各化合物の一定分割量は、細胞懸濁液への添加前に、ＵＶＡ（３６５ｎｍ）の暴露なしで放置するか、またはＵＶＡ（３６５ｎｍ）に２時間暴露された。化合物の添加後、細胞は、１ウェル当たり１０４個の細胞で１サンプルにつき８ウェルの９６ウェルのマイクロタイタープレートに移した。プレートを、５％ＣＯ２を含む湿気中３７℃で培養した。４日間（対照細胞が１０倍の数まで増殖できる）該プレートを培養後、ＭＴＴのリン酸緩衝生理食塩水の５ｍｇ／ｍＬ溶液２０μＬを各ウェルに加え、該プレートをさらに５時間培養した。該プレートを３００ｇで５分間遠心分離し、大部分の培地を細胞ペレットから除いて１ウェル当たり１０〜２０μＬが残った。ＤＭＳＯ（２００μＬ）を各ウェルに加え、サンプルの完全な混合を確実にするために振とうした。光学密度を５５０ｎｍの波長で、チッターテックマルチスキャンＥＬＩＳＡプレートリーダで読み取られ、用量反応曲線を作成した。
【０１９１】
「クラウン」上で合成された２７種のＰＢＤライブラリのインビトロ細胞毒性の評価
【０１９２】
【表６】
0004689826.tif 000039
【０１９３】
前記のように、アミノ酸配列を変えることによりＰＢＤ類の細胞毒性に影響を与えることを、これらの結果は示す。
【０１９４】
実施例６：ＤＮＡ結合アッセイ
２本鎖オリゴヌクレオチドの標識
２本鎖オリゴヌクレオチド（１０ｐｍｏｌ／μＬ）は、Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて［３２Ｐ］−ＡＴＰで５’−末端を標識し、３０分、３７℃にて培養した。該標識オリゴヌクレオチドは、Ｐ６バイオゲル（Ｂｉｏ−ｇｅｌＴＭ）（４０−９０μｍ）を含有するミニプレップバイオラド（ｍｉｎｉ−ｐｒｅｐ  ＢｉｏｒａｄＴＭ）スピンカラムにより精製した。
【０１９５】
ビーズ上のスクリーニングアッセイ
結合実験に先立って、ビーズをＤＭＦ中で約１時間膨張させた。標識２本鎖オリゴヌクレオチドは、化合物を付着させるビーズと３７℃２４時間培養した。２４時間培養後、サンプルをＴＥ緩衝液（１０ｍＭトリス、１ｍＭ  ＥＤＴＡ）で再度懸濁し、回転させて上澄液を３〜４回除いた。最終洗浄でペレットをエコシント（ＥｃｏＳｃｉｎｔ）（国立ダイアグノスチックス（Ｎａｔ．Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、英国）シンチレーション液の１ｍＬで再度懸濁し、ワラック（Ｗａｌｌａｃ）１４００シンチレーションカウンターでカウントした。
【０１９６】
【化５０】
0004689826.tif 000040
【０１９７】
オリゴヌクレオチド１は、ＰＢＤに関して最も好ましい結合部位であるＡＧＡ配列（太字で強調）を含む。オリゴヌクレオチド２は、ＰＢＤに関して最も好ましくない結合部位であるＴＧＴ配列を含む。オリゴヌクレオチド３は、ＰＢＤが、イノシン部のＮＨ２基の欠如により結合できないＡＩＡ配列を含む。
【０１９８】
化合物ＪＧＢ−２８５は、Ｎ１０が保護されており、ＤＮＡと共有結合できない：
【化５１】
0004689826.tif 000041
【０１９９】
化合物ＪＧＢ−２８６は、自由Ｃ１０−Ｎ１１イミン部があり、ＤＮＡと相互作用できる：
【化５２】
0004689826.tif 000042
【０２００】
【表７】
0004689826.tif 000043
【０２０１】
【表８】
0004689826.tif 000044
【０２０２】
これらの試験はまた、［３２Ｐ］−ＡＴＰの替わりにローダミンまたはフルオレセインで標識されたオリゴヌクレオチド１を用いて実施された（標識オリゴヌクレオチドは、ジェネシスから入手できる、ケンブリッジ）。蛍光は、テキャンスペクトラフルオルプラス（Ｔｅｃａｎ  Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒ  Ｐｌｕｓ）を用いて測定された。
【０２０３】
【表９】
0004689826.tif 000045
【０２０４】
【表１０】
0004689826.tif 000046
【０２０５】
これらの結果は、ビーズ上のＰＢＤ化合物が、ＤＮＡに対し共有結合する能力を維持し−保護ＰＢＤ（ＪＧＢ−２８５）は、全く結合しなかったが、脱保護ＰＢｄ（ＪＧＢ−２８６）は、強い結合が示されたことを示す。さらに重要なことに、脱保護ＰＢＤは、ＰｕＧＰｕ配列に関する選択性を維持し、最も好ましくないものに対して殆ど結合活性が無いこと、および非結合性部位を示した。
【０２０６】
実施例７：アイロリ（ＩｒｏｒｉＴＭ）グリシンＰＢＤサブライブラリの合成とスクリーニング（図５）
合成
アミノメチル化ポリスチレン樹脂３９（５ｇ、１．１ｍｍｏｌ／ｇ充填）は、ＤＣＥ：ＣＨ２Ｃｌ２（２：１、１０２ｍｌ）に懸濁して２８９アイロリ（ＩｒｏｒｉＴＭ）ミクロカンズに等しく分配された。樹脂をろ過し、カンズをＤＭＦ（７０ｍｌ）を有するフラスコに入れて３０分間振とうした。
【０２０７】
Ｆｍｏｃ−グリシン（４．９１ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ（５．３ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２．９ｍｌ、１６．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍｌ）溶液を合わせたカンズに加え、２０時間振とうを続けた。樹脂４０をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（３×１０ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２０８】
２０％Ａｃ２Ｏ、３０％ピリジンのＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍｌ）溶液をカンズに加えて、それを１６時間振とうした。アセチル化樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（３×１０ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２０９】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（２００ｍｌ）溶液をアセチル化樹脂４０に加えて、反応フラスコを１６時間振とうした。樹脂４１をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（３×１０ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２１０】
カンズを合わせ、アイロリ（ＩｒｏｒｉＴＭ）ソフトウェアを用いて１７個のフラスコに分類した。各フラスコには、Ｆｍｏｃ−アミノ酸（０．９７ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ（３１２ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１７０ｍｌ、０．９７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液を含んだ。［Ｆｍｏｃ−アラニン（３０６ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−アスパラギン（３４０ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−アスパラギン（ＯｔＢｕ）酸（３９１ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−グルタミン（３５７ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−グルタミン（ＯｔＢｕ）酸（４０８ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−グリシン（２８９ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−イソロイシン（３４０ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−ロイシン（３４０ｍｇ）；Ｆｍｏｃ（Ｂｏｃ）−リジン（３５７ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−メチオニン（４５９ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−フェニルアラニン（３７４ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−プロリン（３２３ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−セリン（ｔＢｕ）（３７４ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−スレオニン（ｔＢｕ）（３９１ｍｇ）；Ｆｍｏｃ（Ｂｏｃ）−トリプトファン（５１０ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−チロシン（ｔＢｕ）（４４２ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−バリン（３２３ｍｇ）］。
【０２１１】
フラスコを１６時間振とうし、１７カンズの各バッチをろ過し、ＤＭＦ（３×１０ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（３×１０ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥すると、樹脂４２が得られた。
【０２１２】
２０％Ａｃ２Ｏ、３０％ピリジンのＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍｌ）溶液を全２８９カンズに加えて、反応フラスコを１６時間振とうした。アセチル化樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（３×１０ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２１３】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（２００ｍｌ）溶液をアセチル化樹脂４０に加えて、反応フラスコを１６時間振とうした。樹脂４３をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（３×１０ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２１４】
この工程は、ライブラリのトリマー４５を生成するために再び繰り返され、最終段階は、全ての２８９カンズ上、同時に実施された。
【０２１５】
カンズは、ＤＭＦ（７０ｍｌ）の入ったフラスコに入れ３０分間振とうした。Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ酸７ｂ（実施例１／ｂ）（９．２ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ（５．３ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２．９ｍｌ、１６．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００ｍｌ）溶液をカンズに加え、２０時間振とうを続けた。樹脂４６をろ過し、ＤＭＦ（３×１０ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（３×１０ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２１６】
２％トリイソプロピルシランのＴＦＡ（１００ｍｌ）溶液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍｌ）に懸濁されたカンズに加えて該カンズを１６時間振とうした。カンズをろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（３×１０ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２１７】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（２００ｍｌ）溶液を該カンズに加えて、反応フラスコを１６時間振とうした。樹脂４７を含むカンズをろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（３×１０ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２１８】
スクリーニング
得られたライブラリを、２本鎖ＤＮＡ配列に対してスクリーンして、ＤＮＡ試験配列に最も強く結合するライブラリの構成要素を決定した。
【０２１９】
使用されたＤＮＡ配列は、アニールされたフルオレセインで標識された
標識−５’−ＡＣＡＣＣＴＡＩＡＧＡＴＩＡＡＩＴＣＴＩ−３’
であった。
【０２２０】
各ライブラリ構成要素の約１０ｍｇを、９６ウェルプレートのウェルに入れ、５ｐｍｏｌ／μｌのアニールされたフルオレセイン標識の２本鎖ＤＮＡと共に３７℃２４時間培養した。２４時間培養後、各ウェルをＴＥ緩衝液で４回洗浄し、ビーズをＴＥまたはＰＢＳ５０ｍＬに再度懸濁した。
【０２２１】
各ウェルの蛍光は、テキャンスペクトラフルオル（Ｔｅｃａｎ  Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒ）を用いて測定され、最もよく標識されたＤＮＡを含むウェルを決定し、したがって、試験ＤＮＡ配列に最も強く結合する化合物を決定した。
【０２２２】
アイロリ（ＩｒｏｒｉＴＭ）ソフトウェアを用いて同定されたライブラリから最も活性な化合物群は、以下の組合せ鎖を有するものであることが判明した：Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−ＰＢＤ；Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｓｏ−ＰＢＤ；Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−ＰＢＤ；Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−ＰＢＤ；Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−ＰＢＤ；Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｐｈｅｎ−ＰＢＤ；Ｇｌｙ−Ｔｒｙ−Ａｓｐ−ＰＢＤ；Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＰＢＤ；Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−ＰＢＤ；Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ＰＢＤ。
【０２２３】
実施例８：ＰＢＤ−グリシンサブライブラリの合成（図６ａ、６ｂ、６ｃ）
リジン−グリシンダイマー５４の合成（図６ａ）
テンタゲルＭ  ＮＨ２樹脂４８（５８ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ／ｇ充填）を１７本のオールテックチューブ（４ｍｌ容量）に量り、ＤＭＦ（２５０μｌ）が各チューブに加えられて、それらを３０分間振とうした。Ｂｏｃ（Ｆｍｏｃ）リジン（４１６ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．７μｌ）溶液およびＴＢＴＵ（２８５ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１５５μｌ、０．８８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．４ｍｌ）溶液をチューブに等しく分配し、２０時間振とうを続けた。樹脂４９をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２２４】
２０％Ａｃ２Ｏ、３０％ピリジンのＣＨ２Ｃｌ２（５００μｌ）溶液を各チューブに加えて、該チューブを２時間振とうした。アセチル化樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）、さらにＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２２５】
２％トリイソプロピルシランのＴＦＡ（２５０μｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（２５０μｌ）溶液を各チューブに加えて、チューブを２時間振とうした。樹脂５０をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）、さらにＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２２６】
樹脂５０をＣＨ２Ｃｌ２（２５０μｌ）に懸濁し、３０分間振とうした。クロロギ酸アリル（１００μｌ、０．８８ｍｍｏｌ）および４−メチルモルホリン（９０ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１．７ｍｌ）氷冷溶液を各チューブに等しく分配し、１６時間振とうした。樹脂５１をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）、さらにＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２２７】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（５００μｌ）溶液を樹脂５１に加えて、チューブを１２時間振とうした。樹脂５２をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
樹脂５２をＤＭＦ（２５０ｍｌ）に懸濁し、３０分間振とうした。
【０２２８】
Ｆｍｏｃ―グリシン（２６４ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．７ｍｌ）溶液およびＴＢＴＵ（２８５ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１５５μｌ、０．８８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．４ｍｌ）溶液をチューブに等しく分配し、２０時間振とうを続けた。樹脂５３をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２２９】
２０％Ａｃ２Ｏ、３０％ピリジンのＣＨ２Ｃｌ２（５００μｌ）溶液を樹脂５３に加えて、チューブを２時間振とうした。アセチル化樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）、さらにＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２３０】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（５００μｌ）溶液をアセチル化樹脂に加えて、チューブを１２時間振とうした。樹脂５４をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２３１】
グリシンサブライブラリ６１の合成（図６ｂ）
カップリング条件
Ｆｍｏｃアミノ酸（０．０５２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１００μｌ）溶液を、樹脂５４を含む各チューブに加えた。［Ｆｍｏｃ−アラニン（１６ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−アスパラギン（１８ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−アスパラギン（ＯｔＢｕ）酸（２１ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−グルタミン（１９ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−グルタミン（ＯｔＢｕ）酸（２２ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−グリシン（１６ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−イソロイシン（１８ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−ロイシン（１８ｍｇ）；Ｆｍｏｃ（Ｂｏｃ）−リジン（２４ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−メチオニン（１９ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−フェニルアラニン（２０ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−プロリン（１８ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−セリン（ｔＢｕ）（２０ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−スレオニン（ｔＢｕ）（２１ｍｇ）；Ｆｍｏｃ（Ｂｏｃ）−トリプトファン（２７ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−チロシン（ｔＢｕ）（２４ｍｇ）；Ｆｍｏｃ−バリン（１８ｍｇ）］。
【０２３２】
ＴＢＴＵ（２８５ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１５５μｌ、０．８８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．４ｍｌ）溶液を１７本のチューブに等しく分配し、２０時間振とうを続けた。樹脂５５をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２３３】
アセチル化条件
２０％Ａｃ２Ｏ、３０％ピリジンのＣＨ２Ｃｌ２（５００μｌ）溶液を樹脂５５に加えて、該チューブを２時間振とうした。アセチル化樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）、さらにＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２３４】
脱保護条件
２０％ピペリジンのＤＭＦ（５００μｌ）溶液をアセチル化樹脂に加えて、チューブを２時間振とうした。樹脂５６をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２３５】
プールおよびスプリット法
合わせた樹脂５６を、シンタに接続した丸底フラスコのＤＣＥ：ＣＨ２Ｃｌ２（２：１、６８ｍｌ）中に懸濁し、完全な混合を確実にするために窒素ガスで吸引した。樹脂を１７本のオールテックチューブに再度懸濁し、ろ過し、ＤＭＦ（２５０μｌ）を各チューブに加えて３０分間振とうした。
【０２３６】
カップリング、アセチル化、脱保護およびプーリング／スプリッティングのこのサイクルは、６種のペプチド６１のライブラリが合成されるまで、さらに３回繰り返した。
【０２３７】
ＰＢＤ−グリシンサブライブラリ６４の合成（図６ｃ）
樹脂６１をＣＨ２Ｃｌ２（２５０μｌ）中に懸濁し、チューブを３０分間振とうした。フェニルシラン（８７６μｌ、７．１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１．７ｍｌ）溶液を各チューブに等しく分配し、チューブを１０分間振とうした。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（３４ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１．７ｍｌ）溶液を各チューブに等しく分配し、チューブをさらに１０分間振とうした。樹脂６５をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）、さらにＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。この手法をもう１度繰り返した。
【０２３８】
Ｆｍｏｃ―ＰＢＤ酸７ｂ（実施例１ｂ）（４９５ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．４ｍｌ）溶液およびＴＢＴＵ（２８５ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１５５μｌ、０．８８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．４ｍｌ）溶液を６種ペプチド樹脂６２のＤＭＦ（２５０μｌ）溶液に等しく分配し、チューブを２０時間振とうした。樹脂６３をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２３９】
２％トリイソプロピルシランのＴＦＡ（２５０μｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（２５０μｌ）溶液を樹脂６３に加えて、チューブを２時間振とうした。樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）、さらにＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２４０】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（５００μｌ）溶液を樹脂に加えて、チューブを２時間振とうした。樹脂６４をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２４１】
生じたサブライブラリは、配列：標識−５’−ＡＣＡＣＣＴＡＩＡＧＡＴＩＡＡＩＴＣＴＩ−３’を有するローダミン標識アニール２本鎖ＤＮＡに対してスクリーンされた。
【０２４２】
該サブライブラリをＤＮＡ配列（５ｐｍｏｌ／ｍＬ）と混合し、時々混ぜて３７℃２４時間培養した。２４時間後、該サブライブラリをＴＥ緩衝液のｐＨ７．６またはＰＢＳで４回洗浄した。最も標識されたＤＮＡが結合したビーズを同定するために、アガロースゲルスライドが、次のように調製された。０．２５％海産プラークアガロ−スの約５００ｍＬを清浄な透明スライド上に層を作製し、冷却してセットした。次いで培養したビーズを別の０．２５％海産プラークアガロ−ス溶液の約５００ｍＬと混合し、予め被覆されたスライド上に層を作り、冷却してセットした。
【０２４３】
最も赤いビーズは、解剖用顕微鏡下、肉眼により確認され、次いで先端が細いｐ１０ギルソンピペットを用いて取り去ることができるように乾燥アガローススライドに約１ｍＬの水を添加して回収された。取り去られたビーズを、同定のために準備した１ｍＬのエッペンドルフＰＣＲチューブに入れた。
【０２４４】
同定
最も活性な化合物の配列の同定は、自動エドマン分解および逆相ＨＰＬＣを用いて実施された。
【０２４５】
パルス液相Ｎ−末端配列化は、アプライドバイオシステムス（ＡＢＩ）４７７Ａ自動蛋白シークエンサを用いて実施された。選択された標識ビーズを、以前に前もって１度サイクルしたグラスファイバーデスク上に載せた。このデスクをシークエンサに入れて予め１度サイクルし、次いでエドマン分解の６サイクルが実施された（Ｅｄｍａｎ、ＰおよびＢｅｇｇ、Ｇ（１９６７年）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１、８０）。遊離したフェニルチオヒダントイン（ＰＴＨ−）アミノ酸誘導体を逆相ＨＰＬＣ分析により同定した。
【０２４６】
最も活性な８つの化合物は、以下の配列を有するものであった。
【０２４７】
ＰＢＤ−ＫＧＮＮＮＮ；ＰＢＤ−ＫＧＴＥＳＦ；ＰＢＤ−ＫＧＭＰＭＡ；ＰＢＤ−ＫＧＧＧＭＭ；ＰＢＤ−ＫＧＫＧＡＳ；ＰＢＤ−ＫＧＡＮＩＡ；ＰＢＤ−ＫＧＭＭＧＧ；ＰＢＤ−ＫＧＷＹＳＰ
【０２４８】
実施例９：スプリットおよびミックスＰＢＤペプチドライブラリ８０の合成（図７）
アミノエチル化ポリスチレン樹脂ＶＨＬ６５（３ｇ、１．３ｍｍｏｌ／ｇ充填）を、ＤＣＥ：ＣＨ２Ｃｌ２（２：１、１０２ｍｌ）に懸濁し、１７本のオールテックチューブ（８ｍｌ容量）に等しく分配した。樹脂をろ過し、ＤＭＦ（１．５ｍｌ）を各チューブに加えて３０分間振とうした。
【０２４９】
カップリング条件：（→６６）−実施例８と同じだが、各チューブにＦｍｏｃアミノ酸（０．６９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２５０μｌ）溶液を用いた。（実施例８のＦｍｏｃ−アミノ酸）。ＴＢＴＵおよびＤＩＰＥＡの量は、３４ｍｌのＤＭＦ中にＦｍｏｃ−アミノ酸の量に比例して増量した。
【０２５０】
アセチル化条件：実施例８と同じだが、Ａｃ２Ｏ、ピリジンを含む１．５ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２を用いた。
【０２５１】
脱保護条件：（→６７）実施例８と同じだが、２０％ピペリジンにＤＭＦの１．５ｍｌ溶液を用いた。
【０２５２】
プールおよびスプリット法：実施例８と同じだが、１０２ｍｌのＤＣＥ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いた。
【０２５３】
このサイクルは、５種ペプチドのライブラリが合成されるまで、さらに４回繰り返された。
【０２５４】
Ｂｏｃ（Ｆｍｏｃ）リジン（５．５ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３４ｍｌ）溶液およびＴＢＴＵ（３．７６ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２．０４ｍｌ、１１．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３４ｍｌ）溶液を５種ペプチド樹脂７５のＤＭＦ（１７ｍｌ）懸濁液に加え、容器を２０時間振とうを続けた。樹脂７６をろ過し、ＤＭＦ（３×５ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×５ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２５５】
２０％Ａｃ２Ｏ、３０％ピリジンのＣＨ２Ｃｌ２（１７ｍｌ）溶液を樹脂に加えて、容器を２時間振とうした。アセチル化樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×５ｍｌ）、さらにＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２５６】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（１７ｍｌ）溶液をアセチル化樹脂７６に加えて、容器を１２時間振とうした。樹脂７７をろ過し、ＤＭＦ（３×５ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×５ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２５７】
ＦｍｏｃＰＢＤ酸７ｂ（実施例１ｂ）（６．５５ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３４ｍｌ）溶液およびＴＢＴＵ（３．７６ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２．０４ｍｌ、１１．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３４ｍｌ）溶液を６種ペプチド樹脂７７のＤＭＦ（１７ｍｌ）懸濁液に加え、容器を２０時間振とうを続けた。樹脂７８をろ過し、ＤＭＦ（３×５ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×５ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２５８】
２％トリイソプロピルシランのＴＦＡ（１７ｍｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（１７ｍｌ）溶液を樹脂に加えて、容器を２時間振とうした。樹脂７９をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×５ｍｌ）、さらにＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２５９】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（１７ｍｌ）溶液をアセチル化樹脂７９に加えて、容器を１２時間振とうした。樹脂８０をろ過し、ＤＭＦ（３×５ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×５ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２６０】
実施例１０：グリシンサブライブラリ８７の合成（図８）
Ｆｍｏｃ−アミノエチルフォトリンカーノバシンＴＧ樹脂２０（３０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ／ｇ充填）を、１７本のオールテックチューブ（４ｍｌ容量）に量り、２０％ピペリジンのＤＭＦ（２５０ｍｌ）溶液を各チューブに加えて、１６時間振とうした。樹脂２１をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。ＤＭＦ（２５０μｌ）を各チューブに加えて、チューブを３０分間振とうした。
【０２６１】
カップリング条件：−実施例８と同じだが、各チューブにＦｍｏｃアミノ酸（０．０２１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５０μｌ）溶液を用いた。ＴＢＴＵおよびＤＩＰＥＡの量は、１．７ｍｌのＤＭＦ中にＦｍｏｃ−アミノ酸の量に比例して増量した。
【０２６２】
アセチル化条件：実施例８と同じ。
脱保護条件：実施例８と同じ。
プールおよびスプリット法：実施例８と同じ。
【０２６３】
このカップリング、アセチル化、脱保護およびプーリング／スプリッティングのサイクルは、トリマーペプチド８３のライブラリが合成されるまで、さらに２度繰り返したが、しかし第２の繰り返し後、樹脂をプールしないで、１７種に分離したサブライブラリとして維持して、最終アミノ酸が判るようにした。
【０２６４】
Ｆｍｏｃ−グリシンに対するカップリング
樹脂８３をＤＭＦ（２５０μｌ）に懸濁し、３０分間振とうした。
【０２６５】
Ｆｍｏｃグリシン（１０５ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．７ｍｌ）溶液およびＴＢＴＵ（１１２ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（６８μｌ、０．３５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．７ｍｌ）溶液を等しくチューブに分配し、２０時間振とうを続けた。樹脂をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２６６】
２０％Ａｃ２Ｏ、３０％ピリジンのＣＨ２Ｃｌ２（５００μｌ）溶液をチューブに加えて、２時間振とうした。アセチル化樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）、さらにＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２６７】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（５００μｌ）溶液をアセチル化樹脂に加えて、チューブを２時間振とうした。樹脂８４をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２６８】
Ｂｏｃ（Ｆｍｏｃ）−リジンに対するカップリング
Ｂｏｃ（Ｆｍｏｃ）−リジン（１６５ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．７ｍｌ）溶液およびＴＢＴＵ（１１２ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（６８μｌ、０．３５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．７ｍｌ）溶液を等しくチューブに分配し、２０時間振とうを続けた。樹脂をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２６９】
２０％Ａｃ２Ｏ、３０％ピリジンのＣＨ２Ｃｌ２（５００μｌ）溶液をチューブに加えて、２時間振とうした。アセチル化樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）、さらにＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２７０】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（５００μｌ）溶液をアセチル化樹脂に加えて、チューブを２時間振とうした。樹脂８５をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２７１】
ＰＢＤキャッピング単位に対するカップリング
樹脂８５をＤＭＦ（２５０μｌ）に懸濁し、３０分間振とうした。ＦｍｏｃＰＢＤ酸７ｂ（１９６ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．７ｍｌ）溶液およびＴＢＴＵ（１１２ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（６８μｌ、０．３５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．７ｍｌ）溶液を等しくチューブに分配し、２０時間振とうを続けた。樹脂８６をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２７２】
２％トリイソプロピルシランのＴＦＡ（２５０μｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍｌ）溶液をチューブに加えて、２時間振とうした。樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）、さらにＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２７３】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（５００μｌ）溶液をチューブに加えて、これを２時間振とうした。樹脂８７をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２７４】
実施例１１：グリシンサブライブラリ１０３の合成（図９）
アミノエチル化樹脂８８（３０ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ／ｇ充填）を、１７本のオールテックチューブ（４ｍｌ容量）に量り、ＤＭＦ（２５０μｌ）を各チューブに加えて、チューブを３０分間振とうした。
【０２７５】
カップリングプロトコール：−実施例８と同じだが、各チューブにＦｍｏｃアミノ酸（０．０８７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２５０μｌ）溶液を用いた。ＴＢＴＵおよびＤＩＰＥＡの量は、Ｆｍｏｃ−アミノ酸の量に比例して増量した。
【０２７６】
アセチル化条件：実施例８と同じ。
脱保護条件：実施例８と同じ。
プールおよびスプリット法：実施例８と同じ。
【０２７７】
このカップリング、アセチル化、脱保護およびプーリング／スプリッティングのサイクルは、テトラマーペプチド９６のライブラリが合成されるまで、さらに３度繰り返したが、しかし第３の繰り返し後、樹脂をプールしないで、１７種に分離したサブライブラリとして維持して、最終アミノ酸が判るようにした。
【０２７８】
Ｆｍｏｃ−グリシンに対するカップリング：（９６→９８）−実施例１０と同じだが、３．４ｍｌのＤＭＦ中、比例して増量した他の化合物の量と共に４４１ｍｇのＦｍｏｃ−グリシンを用いた。
【０２７９】
Ｂｏｃ（Ｆｍｏｃ）−リジンに対するカップリング：（９８→１００）−実施例１０と同じだが、３．４ｍｌのＤＭＦ中、Ｂｏｃ（Ｆｍｏｃ）の量と共に６９５ｍｇのＴＢＴＵおよびＤＩＰＥＡを用いた。
【０２８０】
ＰＢＤキャッピング単位に対するカップリング：（１００→１０３）−実施例１０と同じだが、８２８ｍｇのＦｍｏｃＰＢＤ酸７ｂの３．４ｍｌＤＭＦ溶液を用いた。
【０２８１】
実施例１２：ビス−ＰＢＤペンタペプチドライブラリの合成
リジン−グリシン２量体１０９の合成（図１０ａ）
アミノメチル化樹脂８８（５１０ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ／ｇ充填）をシンタと接続した丸底フラスコに量った。ＤＭＦ（２０ｍｌ）を加えて、容器を３０分間振とうした。
【０２８２】
Ｂｏｃ（Ｆｍｏｃ）−リジン（６９５ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液、およびＴＢＴＵ（４８０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２６０μｌ、１．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液を容器に加え、２０時間振とうを続けた。樹脂１０４をろ過し、ＤＭＦ（３×１０ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（２×１０ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２８３】
２０％Ａｃ２Ｏ、３０％ピリジンのＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）溶液を樹脂１０４に加えて、２時間振とうした。アセチル化樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（２×１０ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２８４】
２％トリイソプロピルシランのＴＦＡ（１０ｍｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）溶液を容器に加えて、２時間振とうした。
【０２８５】
樹脂１０５をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（２×１０ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２８６】
樹脂１０５をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）に懸濁し、３０分間振とうした。クロロギ酸アリル（１５７μｌ、１．４８ｍｍｏｌ）および４−メチルモルホリン（１５０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）氷冷溶液を加えて、容器を１６時間振とうした。樹脂１０６をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（２×１０ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２８７】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（２０ｍｌ）溶液を樹脂１０６に加えて、チューブを２時間振とうした。樹脂１０７をろ過し、ＤＭＦ（３×１０ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（２×１０ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２８８】
樹脂１０７をＤＭＦ（２０ｍｌ）に懸濁して３０分間振とうした。Ｆｍｏｃ−グリシン（４４１ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液、およびＴＢＴＵ（４８０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２６０μｌ、１．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液を容器に加え、２０時間振とうを続けた。樹脂１０８をろ過し、ＤＭＦ（３×１０ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（２×１０ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２８９】
２０％Ａｃ２Ｏ、３０％ピリジンのＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）溶液を樹脂１０８に加えて、容器を２時間振とうした。アセチル化樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（２×１０ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２９０】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（２０ｍｌ）溶液をアセチル化樹脂に加えて、容器を２時間振とうした。樹脂１０９をろ過し、ＤＭＦ（３×１０ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×１０ｍｌ）、Ｅｔ２Ｏ（２×１０ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２９１】
グリシンサブライブラリ１１７の合成（図１０ｂ）
プールおよびスプリット法：−樹脂１０９を出発して実施例８と同じ。
【０２９２】
カップリング条件：−実施例８と同じだが、各チューブにＦｍｏｃアミノ酸（０．０８７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２５０μｌ）溶液を用いた。
【０２９３】
ＴＢＴＵおよびＤＩＰＥＡの替わりに、ジイソプロピルカルボジイミド（２３２μｌ、１．４８ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（２００ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．４ｍｌ）溶液を１７本のチューブに等しく分配されて、２０時間振とうした。
【０２９４】
アセチル化プロトコール：−実施例８と同じ。
脱保護プロトコール：−実施例８と同じ。
【０２９５】
このプーリング／スプリッティング、カップリング、アセチル化および脱保護のサイクルは、６種のペプチド１１７のライブラリが合成されるまで、さらに３回繰り返したが、しかし第３の繰り返し後、樹脂をプールしないで、１７種に分離したサブライブラリとして維持して、最終アミノ酸が判るようにした。
【０２９６】
ビスＰＢＤ−グリシンサブライブラリ１２３の合成（図１０Ｃ）
Ｂｏｃ（Ｆｍｏｃ）−リジン（６９５ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．４ｍｌ）溶液およびＴＢＴＵ（４８０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２６０μｌ、１．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．４ｍｌ）溶液を等しく樹脂１１７に分配し、２０時間振とうを続けた。樹脂１１８をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０２９７】
２０％Ａｃ２Ｏ、３０％ピリジンのＣＨ２Ｃｌ２（５００μｌ）溶液を樹脂１１８に加えて、チューブを２時間振とうした。アセチル化樹脂をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）、さらにＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０２９８】
樹脂１１８をＣＨ２Ｃｌ２（２５０μｌ）に懸濁し、チューブを３０分間振とうした。フェニルシラン（１．５ｍｌ、１１．９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３．４ｍｌ）溶液を各チューブに等しく分配し、１０分間振とうした。
【０２９９】
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（５７ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３．４ｍｌ）溶液を各チューブに等しく分配し、さらに１０分間振とうした。樹脂１１９をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。この手法は、１度だけ繰り返された。
【０３００】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（５００μｌ）溶液を樹脂１１９に加えて、チューブを２時間振とうした。樹脂１２０をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０３０１】
樹脂１２０をＤＭＦ（２５０μｌ）に懸濁し、３０分間振とうした。Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ酸７ｂ（１．６６ｇ、２×１．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．４ｍｌ）溶液およびＴＢＴＵ（９６０ｍｇ、２×１．４８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（５２０μｌ、２×１．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．４ｍｌ）溶液を等しくチューブに分配し、２０時間振とうを続けた。樹脂１２１をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で濯ぎ、減圧乾燥した。
【０３０２】
２％トリイソプロピルシランのＴＦＡ（２５０μｌ）およびＣＨ２Ｃｌ２（２５０μｌ）溶液を樹脂１２２に加えて、チューブを２時間振とうした。樹脂１２２をろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）、さらにＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０３０３】
２０％ピペリジンのＤＭＦ（５００ｍｌ）溶液を樹脂１２２に加えて、チューブを２時間振とうした。樹脂１２３をろ過し、ＤＭＦ（３×２ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（３×２ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍｌ）で洗浄し、減圧乾燥した。
【０３０４】
実施例１３：Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯＡｌｌ−Ａｍｉｎｏ樹脂の合成（１７１）（図１１）
ビーズ形体のテンタゲルアミン樹脂１６９（３．０ｇ、０．８ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＦ（１２ｍＬ）に２時間膨張させ、焼結ガラスフィルタチューブを備えたシリコン化無作為化丸底フラスコ中で緩やかに振とうした。この懸濁液を下から吸引ろ過した。ビーズは、乾燥ＤＭＦで以下のとおり２回洗浄した：ＤＭＦ（２０ｍＬ）を容器の上から（容器の側面に付着している如何なる樹脂も洗い落とすために）加え、窒素ガスを焼結ガラスの下から通して２分間緩やかに発泡させ、過剰のＤＭＦを吸引により除いた。３倍モル過剰のＨＯＢｔ（７．７ｍＬ、ＤＭＦ中０．３Ｍ、２．３２ｍｍｏｌ）（カップリング剤）を、３倍モル過剰のＦｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯＡｌｌ（０．９５ｇ、２．３２ｍｍｏｌ）に加え、生じた溶液を樹脂に加えた。最少容量のＤＭＦ（１．２ｍＬ）中、３倍モル過剰のＰｙＢＯＰ（１．２ｇ、２．３２ｍｍｏｌ）および３倍モル過剰のＤＩＰＥＡ（０．４ｍＬ、０．３ｇ、２．３２ｍｍｏｌ）を、カップリング反応を開始させる反応フラスコに加えた。該反応フラスコを密栓し、室温で１時間緩やかに振とうさせ、過剰のカップリング試薬を吸引除去した。このカップリング手法を、カップリング剤の添加からもう１度繰り返し、完全な反応を確実にした。生じた樹脂１７１をＤＭＦ（４×２０ｍｌ）、ＤＣＭ（１×２０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１×２０ｍＬ）で６回洗浄し、各操作ごとに樹脂を２分間振とうし、ろ過した。洗浄サイクルを繰り返して樹脂を減圧乾燥した。
【０３０５】
ペンタペプチドライブラリ（１７２）の合成
如何なる残存する自由アミノ基をキャップするために、樹脂（無作為化フラスコにおいて）をＡｃ２Ｏ／ピリジン／ＤＭＦ（０．２：０．３：０．５、１０ｍＬ）の混合液に懸濁し、２時間振とうさせた。上澄液を吸引除去し、ビーズをＤＣＭ（１×１０ｍＬ）、ＭｅＯＨ（１×１０ｍＬ）および再びＤＣＭ（１×１０ｍＬ）で洗浄した。洗浄サイクルを繰り返して樹脂を減圧乾燥した。
【０３０６】
Ｆｍｏｃ保護基は、振とうしながらＤＭＦ（１０．７ｍＬ）中５０％ピペリジンで樹脂を処理することにより外された。１０分後、上澄液は、吸引により除去され、新鮮なＤＭＦ（１０．７ｍＬ）中５０％ピペリジンを加えて振とうを続けた。さらに１０分後、ビーズをＤＭＦ（４×２０ｍｌ）、ＤＣＭ（１×２０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１×２０ｍＬ）で６回洗浄し、各操作ごとに樹脂を２分間振とうし、ろ過した。洗浄サイクルを繰り返して樹脂を減圧乾燥した。
【０３０７】
ビーズをＤＣＥ／ＤＭＦ（２：１、３２ｍＬ）の等密度混合液に懸濁し、窒素ガスを下から緩やかに発泡させた。等分割量（４７０μＬ）の懸濁液を、特定のアミノ酸に対応する文字で以前に印した１７本のオールテックチューブのそれぞれに順番に加えた。これを４回繰り返した。無作為化フラスコに残っているビーズを等密度混合液（３２ｍＬ）に予め懸濁し、次にこの分配工程を２度繰り返した。
【０３０８】
各オールテックチューブ中のＧｌｕ−ＯＡｌｌ−樹脂Ｍ１（４５．６ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＦ（７１０μＬ）中、緩やかに２時間振とうすることに伴い膨張させた。過剰のＤＭＦを真空多岐管上の吸引により除いた。
【０３０９】
オールテックチューブの側面に付着する如何なる樹脂をも洗い落とすために、上部から加える乾燥ＤＭＦ（１．１８ｍＬ）で、樹脂を洗浄した。このチューブを２分間振とうして、過剰のＤＭＦを真空多岐管吸引により除いた。
【０３１０】
３倍モル過剰のＨＯＢｔ（４６０μＬ、ＤＭＦ中０．３Ｍ、０．１３７ｍｍｏｌ）を３倍モル過剰の各Ｆｍｏｃ−アミノ酸（０．１３７ｍｍｏｌ）に加え、この混合物を１０分間振とうして適当なオールテックチューブに加えた。
【０３１１】
【表１１】
0004689826.tif 000047
【０３１２】
最少容量のＤＭＦ（７０μＬ）中、３倍モル過剰のＰｙＢＯＰ（７１ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）および３倍モル過剰のＤＩＰＥＡ（２４μＬ、１８ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）を、カップリング反応を開始させるために各オールテックチューブに加えた。
【０３１３】
該オールテックチューブを密栓し、室温で１時間緩やかに振とうさせた。その後、過剰のカップリング試薬を真空多岐管吸引により除いた。このカップリング手法を、もう１度繰り返し、完全な反応を確実にした。
【０３１４】
この樹脂をＤＭＦ（４×２ｍｌ）、ＤＣＭ（１×２ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１×２ｍＬ）で６回洗浄し、各操作ごとに樹脂を２分間振とうし、真空多岐管上でろ過した。洗浄サイクルを繰り返して樹脂を減圧乾燥した。
【０３１５】
ペプチド樹脂中に如何なる残存する自由アミノ基をキャップするために、各オールテックチューブの樹脂をＡｃ２Ｏ／ピリジン／ＤＭＦ（０．２：０．３：０．５、４６０μＬ）の混合液に懸濁し、２時間振とうさせた。上澄液を真空多岐管上で吸引除去し、ビーズをＤＣＭ（１×２ｍＬ）、ＭｅＯＨ（１×２ｍＬ）および再びＤＣＭ（１×２ｍＬ）で３回洗浄し、各操作ごとに樹脂を２分間振とうし、真空多岐管上でろ過した。洗浄サイクルを繰り返して樹脂を減圧乾燥した。
【０３１６】
Ｆｍｏｃ保護基は、ＤＭＦ（０．６２ｍＬ）中５０％ピペリジンでシェーカ上１０分以上樹脂を処理することにより外された。上澄液は、吸引により除去され、新鮮なＤＭＦ（６２０μＬ）中５０％ピペリジンを加えた。さらに１０分後、ビーズをＤＭＦ（４×２ｍｌ）、ＤＣＭ（１×２ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１×２ｍＬ）で３回洗浄し、各操作ごとに樹脂を２分間振とうし、真空多岐管上でろ過した。洗浄サイクルを繰り返して樹脂を減圧乾燥した。
【０３１７】
各１７本のオールテックチューブのビーズを、ＤＣＥ／ＤＭＦ（２：１、１．９ｍＬ）の等密度混合液に懸濁し、ピペットによりシリコン化無作為化フラスコに移し、過剰の等密度液を吸引除去した。全ての樹脂が無作為化フラスコに戻されることを確実にするために、この工程を２度繰り返した。
【０３１８】
樹脂は無作為化容器に戻された後、上記のように１７本のオールテック反応チューブに再配分された。
【０３１９】
このカップリングプロトコールは、ペンタペプチドライブラリ１７２を生成するために４回以上繰り返された。最後のカップリングサイクルの終了時、Ｎ−末端アミノ酸の正体が知られている１７個のサブライブラリが得られるように、この樹脂を再び合わせることはしなかった。
【０３２０】
ライブラリ構成要素のＰＢＤ−キャッピング単位に対するカップリング（１７２→１７４）
各オールテックチューブのペプチド樹脂１７２（４５．６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２×２ｍＬ）で洗浄し、各操作ごとに樹脂を２分間振とうし、次いで真空多岐管上でろ過した。次に樹脂を減圧乾燥した。
【０３２１】
ＣＨＣｌ３／ＨＯＡｃ／ＮＭＭ（３７：２：１、６５０μＬ）の混合液を反応チューブに加え、３０分間振とうした。脱保護ペプチド樹脂は、ＤＣＭ（４×２ｍＬ）で洗浄し、各操作ごとに樹脂を２分間振とうし、次いで真空多岐管上でろ過した。次に樹脂を減圧乾燥した。
【０３２２】
各オールテックチューブ中のペプチド樹脂（４５．６μｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＦ（０．８ｍＬ）中、緩やかに２時間振とうして膨張させ、真空多岐管を用いてろ過した。
【０３２３】
ビーズを乾燥ＤＭＦで以下のように２回洗浄した：ＤＭＦ（１．１８ｍＬ）を上部から加えて緩やかに２分間振とうして、過剰のＤＭＦを真空多岐管上のろ過により除いた。
【０３２４】
最少容量のＤＭＦ（０．３モル、７００μＬ）中、３倍モル過剰のＨＯＢｔ（１８ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）および実施例２と類似の方法で合成した３倍モル過剰のＡｌｌｏｃ−ＰＢＤ１７３（５５ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）を樹脂に加えた。
【０３２５】
最少容量のＤＭＦ（１５０μＬ）中、３倍モル過剰のＰｙＢＯＰ（７１ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）および３倍モル過剰のＤＩＰＥＡ（２４μＬ、１８ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）を、カップリング反応を開始する反応チューブに加えた。
【０３２６】
反応チューブは密栓し、室温１６時間緩やかに振とうした。過剰の試薬を真空多岐管上のろ過により除いた。
【０３２７】
ビーズをＤＭＦ（４×２ｍｌ）、ＤＣＭ（１×２ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１×２ｍＬ）で４回洗浄し、各操作ごとに樹脂１７４を２分間振とうし、真空多岐管上でろ過した。洗浄サイクルを繰り返して樹脂を減圧乾燥した。
【０３２８】
側鎖のＦｍｏｃおよびＡｌｌｏｃ保護基の除去（１７４→１７５）
ＢｏｃおよびｔＢｕの保護基は、各オールテックチューブのＰＢＤ−ペプチド樹脂１７４（４５．６μｍｏｌ）をＴＦＡ／トリイソプロピルシラン／ＤＣＭ（４８：２：５０、８００μＬ）の溶液で処理することにより除去された。反応チューブは、３０分間振とうし、過剰の試薬を真空多岐管上のろ過により除いた。この手法は、もう１度繰り返され、ビーズをＤＣＭ（１×２ｍＬ）、ＭｅＯＨ（１×２ｍＬ）および再度ＤＣＭ（１×２ｍＬ）で３回洗浄し、各操作ごとに樹脂を２分間振とうし、真空多岐管上でろ過した。洗浄サイクルを繰り返して樹脂を減圧乾燥した。
【０３２９】
樹脂をＤＣＭ（５×２ｍＬ）で洗浄し、各操作ごとに樹脂を３０秒間振とうし、真空多岐管でろ過した。
【０３３０】
Ａｌｌｏｃ保護基は、樹脂（４５．６μｍｏｌ）をフェニルシラン（ＰｈＳｉＨ３、１３０μＬ、０．１１８ｇ、１．０９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３００μＬ）溶液で処理することにより除去され、樹脂は手動で攪拌された。Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（５．３ｍｇ、４．５６μｍｏｌ）のＤＣＭ（５００μＬ）溶液を加えて、オールテックチューブを機械的に１０分間振とうした。過剰の試薬を真空多岐管でのろ過により除き、この工程をもう１度繰り返した。
【０３３１】
ペプチド樹脂をＤＣＭ（８×２ｍＬ）で洗浄し、各操作ごとに樹脂を３０秒間振とうし、真空多岐管でろ過された。洗浄サイクルを繰り返して樹脂を減圧乾燥した。
【０３３２】
Ｆｍｏｃ基は、樹脂（４５．６μｍｏｌ）を５０％ピペリジン／ＤＭＦ（８００μＬ）でシェーカー上２時間処理することにより除去された。上澄液は真空多岐管ろ過により除かれた。
【０３３３】
ビーズ１７５を、ＤＭＦ（４×２ｍＬ）、ＤＣＭ（１×２ｍＬ）、ＭｅＯＨ（１×２ｍＬ）で６回洗浄し、各操作ごとに樹脂を２分間振とうし、真空多岐管上でろ過した。洗浄サイクルを２回繰り返して樹脂を減圧乾燥し保存した。
【０３３４】
実施例１４−積層支持体Ａとしてのセルロース紙
Ａ．Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ（７ｂ）のセルロース紙への付着
【０３３５】
【化５３】
0004689826.tif 000048
セルロース紙の修飾−（ー般法）
乾燥紙が、活性化β−アラニン溶液（１２ｍＬ、［０．２４Ｍ  ＤＩＣおよび０．４Ｍ  Ｎ−メチルイミダゾールで活性化された０．２Ｍ  Ｆｍｏｃ−β−アラニン］）で密封容器で３時間培養される前に、必要なポイント数を、黒鉛鉛筆を用いて正方形のセルロース紙上に印された。この膜をＤＭＦ（３分間３×５０ｍＬ）で洗浄し、次いでピペリジン溶液で２０分間処理した（ＤＭＦ中２０％ピペリジン、５０ｍＬ）。
【０３３６】
この膜をＤＭＦ（５×５０ｍＬ、３分間）およびＭｅＯＨ（２×５０ｍＬ、３分間）で洗浄し、乾燥した。
【０３３７】
Ｆｍｏｃ−β−アラニンーＯＰｆｐ溶液（ＤＭＳＯ中０．３Ｍ  Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−ＯＰｆｐ、１ｍＬ）を膜上の予め定められた位置にカップルされた。１５分後、このカップリングをもう１度繰り返した。
【０３３８】
次にこの膜を、振りながらアセチル化した（２分、無水酢酸溶液Ａ中、面を下に、２０ｍＬ［ＤＭＦ中２％無水酢酸］、引き続き、３０分、無水酢酸溶液Ｂ中、面を上に、５０ｍＬ［ＤＭＦ中２％無水酢酸および１％ＤＩＰＥＡ］）。ＤＭＦ（３×５０ｍＬ、３分間）で洗浄後、この膜をピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％ピペリジン、５０ｍＬ）で２０分間処理し、ＤＭＦ（５×５０ｍＬ、３分間）およびＭｅＯＨ（２×５０ｍＬ、３分間）で洗浄した。
【０３３９】
この膜をブロモフェノールブルー溶液（メタノール中０．０１％ｗ／ｖブロモフェノールブルー、５０ｍＬ）で着色し、メタノールで３分間洗浄し乾燥した。
【０３４０】
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤのカップリング
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ７ｂ、ＨＯＢｔおよびＤＩＣ（０．３Ｍ、１．５ｍＬ）のＮＭＰ溶液を膜上の印された点にスポットした。これを１時間カップルのために放置し、スポットの青色が消失するまで繰り返した（６ｘ）。この膜をＤＭＦ（５０ｍＬ）で１回洗浄して、無水酢酸溶液Ｂ［ＤＭＦ中２％無水酢酸および１％ＤＩＰＥＡ］、５０ｍＬで３０分間温置した。
【０３４１】
この膜をＤＭＦ（５×５０ｍＬ）で３分間、次いでメタノール（２×５０ｍＬ）で洗浄し乾燥した。
【０３４２】
Ｎ−Ｆｍｏｃの脱保護
Ｆｍｏｃ保護基は、膜をピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、２０ｍＬ）で２０分間処理することにより開裂された。
【０３４３】
この膜を、ＤＭＦ（５×５０ｍＬ）で３分間、次いでＭｅＯＨ（２×５０ｍＬ）で３分間洗浄し、ブロモフェノールブルー溶液（５０ｍＬ）で着色し、ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）で３分間洗浄し乾燥した。［このブロモフェノールブルーの発色は、ピペリジン溶液で脱色することにより除かれ、ＤＭＦとＭｅＯＨで洗浄し乾燥した。］
Ｂ．Ｎｖｏｃ−ＰＢＤのセルロース紙への付着
Ｎｖｏｃ−ＰＢＤ（７ａ）のカップリング（実施例１ａ）
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ７ｂの修飾と付着のために一般法が使用された。Ｎｖｏｃ−ＰＢＤ（７ａ）を０．３Ｍ溶液として３０分間カップルされ、ブロモフェノールブルー着色が脱色されるまで、繰り返された（４ｘ）。前記のように、この膜を洗浄し乾燥した。
【０３４４】
Ｎｖｏｃ−保護基の脱保護
この膜を、３６５ｎｍの波長で、１％エタノールアミンを含むＤＭＳＯ溶液で数時間温置した。ＤＭＦ（３×５０ｍＬ）で３分間、およびＭｅＯＨ（２×５０ｍＬ）で３分間洗浄後、この膜を乾燥した。
【０３４５】
実施例１５−固形支持体としてのシンフェーズ（Ｓｙｎｐｈａｓｅ）クラウン
Ａ．Ｆｍｏｃ−ＰＢＤのシンフェーズクラウンへの付加
【０３４６】
【化５４】
0004689826.tif 000049
Ｆｍｏｃ保護基の脱保護
２種類のＦｍｏｃ保護リンクアミドクラウン（７．７ｍＭ／ｇ充填）をシンチレーションバイアルに入れ、２０分間振とうしながらピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、２ｍＬ）に浸漬した。ＤＭＦ（３×２ｍＬ）およびＤＣＭ（３×２ｍＬ）で濯いだ後、等しい発色となるまで該クラウンをブロモフェノールブルー溶液（ＭｅＯＨ中０．０１％ｗ／ｖ、５ｍＬ）に浸し、次いで該クラウンをＭｅＯＨで濯ぎ乾燥した。
【０３４７】
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤのカップリング
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ７ｂ（１７．１８ｍｇ、３．０８×１０−５ｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（８．３２ｍｇ、６．１６×１０−５ｍｏｌ）およびジイソプロピルカルボジイミド（１０．６２ｍＬ、６．１６×１０−５ｍｏｌ）のＮＭＰ（５００ｍＬ）溶液を、クラウンと共にシンチレーションバイアルに加えた。
【０３４８】
カップリングは、クラウン上ブロモフェノールブルー発色の消失によりモニターされた。この反応は一晩進行させて、完全に色が消失するまで繰り返された。該クラウンをＤＭＦ（３×２ｍＬ）、ＤＣＭ（３×２ｍＬ）、ＭｅＯＨ（１×２ｍＬ）で洗浄し風乾した。
【０３４９】
Ｎ−Ｆｍｏｃの脱保護
単一クラウンをピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、１ｍＬ）に２０分間振とうしながら浸漬した。ＤＭＦ（３×１ｍＬ）およびＤＣＭ（３×１ｍＬ）で濯いだ後、該クラウンをＭｅＯＨ（１×１ｍＬ）で濯ぎ風乾した。
【０３５０】
Ｂ．Ｎｖｏｃ−ＰＢＤ（７ａ）のシンフェーズ（Ｓｙｎｐｈａｓｅ）クラウンへの付加
Ｎｖｏｃ−ＰＢＤ（７ａ）のカップリング
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ７ｂの修飾および付加の一般法を使用した。Ｎｖｏｃ−ＰＢＤ（７ａ）は、０．６２Ｍ溶液として一晩カップリングした。
【０３５１】
Ｎｖｏｃ保護基の脱保護
単一のクラウンを１％エタノールアミン（２ｍＬ）を含むＤＭＳＯに浸漬し、振とうしながら２時間、λ＝３６５ｎｍで照射した。ＤＭＦ（３×１ｍＬ）およびＤＣＭ（３×１ｍＬ）での濯いだ後、該クラウンをＭｅＯＨ（１×１ｍＬ）で濯ぎ風乾した。
【０３５２】
実施例１６：固形支持体としてシンフェーズクラウンを利用して１７５の構成要素ライブラリの合成（図１２）
クラウン−Ｎ−Ｆｍｏｃ脱保護体の調製
１７５のリンクアミドハンドルのＯ−シリーズポリスチレンクラウン１２４を、２つのマルチピンブロックに入れ、８×１２フォーマットに整列した。
【０３５３】
該クラウンをピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、５０ｍＬ）に２０分間振とうしながら浸漬した。ＤＭＦ（３×５０ｍＬ）およびＤＣＭ（３×５０ｍＬ）での濯ぎ後、等しい発色となるまで該クラウンをブロモフェノールブルー溶液（メタノール中０．０１％ｗ／ｖ、５０ｍＬ）に浸し、次いで脱保護クラウン１２５をＭｅＯＨで濯ぎ乾燥した。
【０３５４】
【表１２】
0004689826.tif 000050
【０３５５】
【表１３】
0004689826.tif 000051
【０３５６】
上記に詳述したアミノ酸およびカップリング試薬のＮＭＰ（２００ｍＬ）溶液を、ディープウェルのマイクロタイタープレートに分配した。カップリングは、クラウン上のブロモフェノールブルー着色の消失によりモニターされ、一般に一晩進行させた。次に該クラウン１２６をＤＭＦ（３×５０ｍＬ）、ＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で洗浄し風乾した。
【０３５７】
Ｆｍｏｃの脱保護
該クラウン１２６をピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、５０ｍＬ）に２０分間振とうしながら浸漬した。ＤＭＦ（３×５０ｍＬ）およびＤＣＭ（３×５０ｍＬ）での濯いだ後、脱保護クラウン１２７を、等しい発色となるまでブロモフェノールブルー溶液（メタノール中０．０１％ｗ／ｖ、５０ｍＬ）に浸し、ＭｅＯＨで濯ぎ乾燥した。
【０３５８】
【表１４】
0004689826.tif 000052
【０３５９】
上記に詳述したアミノ酸およびカップリング試薬の溶液（ＮＭＰ中、２００ｍＬ）を、ディープウェルのマイクロタイタープレートに分配した。カップリングは、クラウン１２７上のブロモフェノールブルー着色の消失によりモニターされ、一般に一晩進行させた。次に該クラウン１２８をＤＭＦ（３×５０ｍＬ）、ＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で洗浄し風乾した。
【０３６０】
Ｎ−Ｆｍｏｃ脱保護は、上記のように実施し、クラウン１２９を得た。
【０３６１】
【表１５】
0004689826.tif 000053
【０３６２】
上記に詳述したアミノ酸およびカップリング試薬の溶液（ＮＭＰ中、２００ｍＬ）を、ディープウェルのマイクロタイタープレートに分配した。カップリングは、クラウン上のブロモフェノールブルー着色の消失によりモニターされ、一般に一晩進行させた。次にカプリングしたクラウン１３０をＤＭＦ（３×５０ｍＬ）、ＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で洗浄し、一晩風乾した。
【０３６３】
Ｎ−Ｆｍｏｃ脱保護は、上記のように実施し、クラウン１３１を得た。
【０３６４】
【表１６】
0004689826.tif 000054
【０３６５】
上記に詳述したＦｍｏｃ−ＰＢＤ７ｂ（４２ｍｌのＮＨＰ中２．３４６ｇ）およびカップリング試薬（ＮＭＰ中、２００ｍＬ）を、ディープウェルのマイクロタイタープレートに分配した。カップリングは、クラウン１３２上のブロモフェノールブルー着色の消失によりモニターされ、完全に色が無くなるまで繰り返した。次に該クラウンをＤＭＦ（３×５０ｍＬ）、ＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で洗浄し風乾した。
【０３６６】
Ｎ−Ｆｍｏｃ脱保護
クラウン１３２をピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、５０ｍＬ）に２０分間振とうしながら浸漬した。ＤＭＦ（３×５０ｍＬ）およびＤＣＭ（３×５０ｍＬ）での濯ぎ後、クラウン１３３を風乾した。
【０３６７】
実施例１７：固形支持体としてリンクアミド樹脂の利用
Ａ．Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ（７ｂ）のリンクアミド樹脂への付加
樹脂−Ｎ−Ｆｍｏｃ脱保護体の調製
【０３６８】
【化５５】
0004689826.tif 000055
Ｆｍｏｃリンクアミド樹脂２００（５０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ／ｇ充填）をＤＣＭ：ＤＭＦ（１：１、１ｍＬ）に懸濁し、２分間振とうした。生じた溶液を減圧除去し、樹脂をＤＭＦ（１ｍＬ）に再度懸濁し、５分間振とうした。
【０３６９】
ＤＭＦを樹脂から排出し、Ｆｍｏｃ基をピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、１ｍＬ）で２０分間処理することにより除去した。過剰のピペリジン溶液を吸引除去し、脱保護樹脂２０１をＤＭＦおよびＤＣＭで洗浄し乾燥した。
【０３７０】
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤのカップリング
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤプロパン酸７ｂ（７０．３ｍｇ、１．２６×１０−４ｍｏｌ）、ジイソプロピルカルボジイミド（２０．１ｍＬ、１．２６×１０−４ｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（１７．０２ｍｇ、１．２６×１０−４ｍｏｌ）のＤＭＦ（０．５ｍＬ）溶液を、樹脂２０１に加え、生じたスラリを一晩振とうした。
【０３７１】
溶液を排出して、カップリング樹脂２０２をＤＭＦとＤＣＭで洗浄した。該樹脂をＤＭＦ／ＤＣＭ（ＤＣＭ）（１ｍＬ）に再度懸濁し、２つの部分に分割した。溶液を両方のチューブから除き、第１のチューブの樹脂をＤＣＭ、メタノールで洗浄し、減圧下一晩乾燥した。
【０３７２】
Ｎ−Ｆｍｏｃの脱保護
第２のチューブの樹脂２０２をピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、０．５ｍＬ）に懸濁し、２０分間振とうした。過剰のピペリジン溶液を排出し、脱保護樹脂２０３をＤＭＦ、ＤＣＭおよびメタノールで洗浄し、減圧下一晩乾燥した。
【０３７３】
Ｂ．Ｎｖｏｃ−ＰＢＤ（７ａ）の付加
樹脂−Ｎ−Ｆｍｏｃ脱保護体の調製
Ｎｖｏｃ−ＰＢＤ（７ａ）のカップリング
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ７ｂの修飾および付加の一般法を使用した。Ｎｖｏｃ−ＰＢＤ７ａは、ＤＭＦの０．２５Ｍ溶液としてカップリングした。
【０３７４】
実施例１８：Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ（７ｂ）のアミノエチルフォトリンカーＡＭ樹脂（２１０）への付加
樹脂−Ｎ−Ｆｍｏｃ脱保護体の調製
アミノエチルフォトリンカーＡＭ樹脂２１０（５０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ／ｇ）を２本のオールテックチューブに入れた。樹脂は、ＮＭＰ（２ｍＬ）に懸濁し２時間膨張させた。
【０３７５】
過剰の溶媒を排出した後、脱保護樹脂２１１をピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、０．５ｍＬ）に懸濁し、２０分間振とうした。過剰の溶媒を排出して、樹脂をＤＭＦ、ＤＣＭ、およびＮＭＰで洗浄した。
【０３７６】
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ（７ｂ）のカップリングプロトコール
【０３７７】
【化５６】
0004689826.tif 000056
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤプロパン酸７ｂ（３２．２２ｍｇ、５．７８×１０−５ｍｏｌ、５．５当量）、ＰｙＢｏｐ（１１．４ｍｇ、２．２×１０−５ｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．０５ｍＬ）のＮＭＰ（０．５ｍＬ）溶液を、樹脂２１１に加えて１時間振とうした。
【０３７８】
排出後、カップリング樹脂２１２をＤＣＭ（５×１ｍＬ）、メタノール（５×１ｍＬ）、およびＮＭＰ（５×１ｍＬ）で洗浄した。このカップリング反応は３回繰り返した。次に第１のチューブのカップリング樹脂をＤＣＭ（３×１ｍＬ）、メタノール（３×１ｍＬ）、および水（３×１ｍＬ）で洗浄し、一晩減圧乾燥した。
【０３７９】
Ｎ−Ｆｍｏｃの脱保護
第２のオールテックチューブのＦｍｏｃ−ＰＢＤ樹脂２１２をピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、１ｍＬ）に再度懸濁し、２０分間振とうした。排出後、脱保護樹脂２１３をＮＭＰ（３×１ｍＬ）、ＤＣＭ（３×１ｍＬ）、メタノール（３×１ｍＬ）、および最後に水（３×１ｍＬ）で洗浄し、一晩減圧乾燥した。
【０３８０】
実施例１９：テンタゲルアミノ樹脂
Ａ．Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ（７ｂ）のノバシンテンタゲルアミノ樹脂（２２０）への付加
【０３８１】
【化５７】
0004689826.tif 000057
樹脂の調製
ノバシンテンタゲルアミノ樹脂２２０（５０ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ／ｇ充填）を２本のオールテックチューブに入れ、ＤＣＭ：ＤＭＦ（１：１、１ｍＬ）に懸濁し、２分間振とうした。過剰の溶媒を吸引により除き、樹脂をＤＭＦ（１ｍＬ）に再度懸濁し、５分間振とうして排出した。
【０３８２】
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ（７ｂ）のカップリング
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤプロパン酸７ｂ（２３．４４ｍｇ、４．２×１０−５ｍｏｌ、３倍過剰）、ＴＢＴＵ（１３．４ｍｇ、４．２×１０−５ｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（７．３ｍＬ、４．２×１０−５ｍｏｌ）のＤＭＦ（５００ｍＬ）溶液を、樹脂２２０に加えて、生じたスラリを一晩振とうした。
【０３８３】
溶液を排出し、樹脂をＤＭＦおよびＤＣＭで洗浄した。このカップリング反応は２回繰り返し、カップリング樹脂２２１を前記のとおり洗浄した。第１のチューブの樹脂をさらにメタノールで洗浄し、一晩減圧乾燥した。
【０３８４】
Ｆｍｏｃの脱保護
第２のチューブの樹脂２２１をピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、０．５ｍＬ）に懸濁し、２０分間振とうした。この溶液を排出し、脱保護樹脂２２２をＤＭＦ、ＤＣＭおよびメタノールで洗浄し、減圧下一晩乾燥した。
【０３８５】
Ｂ．Ｎｖｏｃ−ＰＢＤ（７ａ）のテンタゲル樹脂への付加
Ｎｖｏｃ−ＰＢＤ（７ａ）のカップリング
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ７ｂの修飾および付加の一般法を使用した。Ｎｖｏｃ−ＰＢＤ（７ａ）は、０．０８５Ｍ溶液としてカップリングした。
【０３８６】
Ｎｖｏｃ保護基の脱保護
樹脂を、１％エタノールアミンを含むＤＭＳＯ溶液に、３６５ｎｍの波長で数時間温置した。ＤＭＦ（３×５０ｍＬ）で３分間およびＭｅＯＨ（２×５０ｍＬ）で３分間洗浄後、この膜を乾燥した。
【０３８７】
実施例２０：ＰＢＤ−オリゴカーバメート配列の合成（図１３）
樹脂（Ｎ−Ｆｍｏｃ脱保護）の調製
Ｆｍｏｃ−リンクアミド樹脂１３４（５３．４３ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ／ｇ充填、３．３７×１０−５ｍｏｌ）をＤＣＭ：ＤＭＦ（１：１、１ｍＬ）に懸濁し、２分間振とうした。過剰の溶媒を吸引により除き、樹脂をＤＭＦ（１ｍＬ）に再度懸濁し、５分間振とうして排出した。
【０３８８】
過剰のＤＭＦを吸引により除き、Ｆｍｏｃ基をピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、１ｍＬ）で２０分間処理することにより除去した。樹脂１３５を次にＤＭＦとＤＣＭで洗浄した。
【０３８９】
【表１７】
0004689826.tif 000058
【０３９０】
所望の４−ニトロフェニルＦｍｏｃ−アミノアルキルカーボネート、ＨＯＢｔ（３６．３ｍｇ）およびＤＩＰＥＡ（１１ｍＬ）のＮＭＰ（２００ｍＬ）溶液を遊離アミノ樹脂１３５に加え、４時間カップリングした。排出後、樹脂１３６をＮＭＰとＤＣＭで洗浄し、減圧下乾燥した。
【０３９１】
脱保護およびカップリングサイクルは、アミノアルキル配列が完了（１３７〜１４８）するまで繰り返された。
【０３９２】
Ｆｍｏｃ−保護ＰＢＤ（７ｂ）（７５．３ｍｇ）、ＨＯＢｔ（３６．３ｍｇ）およびジイソプロピルカルボジイミド（２１．５ｍＬ）をＮＭＰ（３００ｍＬ）に溶解し、遊離アミノ樹脂１４８に加えた。生じたスラリを２４時間振とうし、排出し、ＮＭＰ、ＤＣＭで洗浄し、一晩減圧乾燥してＰＢＤ樹脂１４９を得た。これを上記のように脱保護して無保護のＰＢＤ樹脂１５０を得た。
【０３９３】
樹脂からの開裂
樹脂（１４９および１５０）を、９５％ＴＦＡ：２．５％水：２．５％トリイソプロピルシラン（１ｍＬ）溶液で室温２時間処理した。樹脂をろ過により除き、少量のＴＦＡとＤＣＭで洗浄した。溶媒は、減圧除去し、残渣をアセトニトリル：水の１：２に溶かし、２度凍結乾燥を行った。
【０３９４】
実施例２１：４−ニトロフェニルＮ−Ｆｍｏｃ−アミノアルキルカーボネートを用いる２８９の構成要素ライブラリの合成（図１４）
Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）アミノアルコールの形成
（Ｃｈｏらの一般法：直鎖状および環状オリゴカーバメートライブラリの合成とスクリーニング。ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに関する高アフィニティリガンドの発見、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、（１９９８年）、１２０、７７０６〜７７１８．、Ｃ．Ｙ．Ｃｈｏ、Ｒ．Ｓ．Ｙｏｕｎｇｇｕｉｓｔ、Ｓ．Ｊ．Ｐａｉｋｏｆｆ、Ｍ．Ｈ．Ｂｅｒｅｓｉｎｉ、Ａ．Ｒ．Ｈｅｒｂｅｒｔ、Ｌ．Ｔ．Ｂｅｒｌｅａｕ、Ｃ．Ｗ．Ｌｉｕ、Ｄ．Ｅ．Ｗｅｍｍｅｒ、Ｔ．ＫｅｏｕｇｈおよびＰ．Ｇ．Ｓｃｈｕｌｔｚ．）
【０３９５】
適当なＮ−Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（１０ｍｍｏｌ）およびジメトキシエタンを窒素下、氷／食塩浴中攪拌した。Ｎ−メチルモルホリン（１．１１ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸イソブチル（１．３６ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）をこの溶液に加えた。
【０３９６】
窒素下１分間攪拌後、固体をろ過により除き、水（２０ｍＬ）中の水素化ホウ素ナトリウム（５７０ｍｇ、１５ｍｍｏｌ）を濾液に加えた。２０分後さらに水（１５０ｍＬ）を加えて、この溶液を室温１時間攪拌した。
【０３９７】
沈殿生成物をろ過し、少量の水、次いでヘキサンで洗浄した。固体を再度酢酸エチルに溶解し、ＭｇＳＯ４を用いて乾燥して溶媒を減圧留去した。
【０３９８】
溶液から沈殿しなかったこれらのアミノアルコール誘導体については、溶液を酢酸エチル（５×３００ｍＬ）で抽出した。有機抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を減圧留去した。
【０３９９】
Ｆｍｏｃ−アミノアルコールをさらに生成することなく用いた−アミノアルコールのデータは、添付資料１に示す。
【０４００】
４−ニトロフェニルＮ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）−アミノアルキルカーボネートの形成（Ｃｈｏらの一般法）
適当なＮ−Ｆｍｏｃ−アミノアルコール（１０ｍｍｏｌ）に、ピリジン（１１ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（５０ｍＬ）を加えた。クロロギ酸４−ニトロフェニル（１１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液をこの反応混合物に滴下した。この混合物を少なくとも２４時間攪拌した。
【０４０１】
混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、１．０Ｍ重硫酸ソーダ（３×７５ｍＬ）および１．０Ｍ重曹水（１０×１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を、ＭｇＳＯ４を用いて乾燥し、溶媒を減圧留去した。
【０４０２】
粗製生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（９：１のＤＣＭ：ヘキサンＤＣＭ）を用いて精製した。アミノアルキルニトロフェニルカーボネートのデータは、添付資料２に示す。
【０４０３】
ライブラリの合成
樹脂の調製
リンクアミドＭＢＨＡ樹脂１５１（８．６７ｇ、０．５４ｍＭｏｌ／ｇ充填）をＤＣＭ／ＤＭＦ（３：１）の溶液に懸濁し、ＲＦタグを含む２８９のアイロリミクロカン（Ｉｒｏｒｉ  Ｍｉｃｒｏｋａｎ）の反応器に配分した。
【０４０４】
カンを、ＤＣＭ／ＤＭＦ（１：１、３００ｍＬ）の溶液に浸漬し、１分間激しく振とうした、溶媒を減圧留去し、カンを再度ＤＭＦに浸漬して１０分間激しく振とうした。
【０４０５】
ＤＭＦを排出し、Ｆｍｏｃ基を、ピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、３００ｍＬ）をカンに加えて５分間振とうし、排出することにより除去した。追加のピペリジン溶液を加え（ＤＭＦ中２０％）、カンを１時間振とうした。脱保護樹脂１５２を有するカンを排出し、ＤＭＦ（６×３００ｍＬ）とＤＣＭ（６×３００ｍＬ）で洗浄した。
【０４０６】
第１の４−ニトロフェニルフルオレニルメトキシカルボニルアミノアルキルカーボネートのカップリング
Ｆｍｏｃ−バリン（６．８８ｇ、４．８６×１０−５ｍｏｌ、３倍過剰）、ＨＯＢｔ（３．７９５ｇ、９．７２×１０−５ｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１．２２ｍＬ、２．４３×１０−５ｍｏｌ）のＮＭＰ（３００ｍＬ）溶液をカンに加えて４時間カップリングさせた。
【０４０７】
排出後、カップリング樹脂１５３を有するカンをＮＭＰ（３×３００ｍＬ）およびＤＣＭ（３×３００ｍＬ）で洗浄した。
【０４０８】
Ｆｍｏｃの脱保護
Ｆｍｏｃ保護基は、ピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、３００ｍＬ）をカンに加えて１時間振とうすることにより除去された。脱保護樹脂１５４を有するカンを排出し、ＤＭＦ（３×３００ｍＬ）およびＤＣＭ（３×３００ｍＬ）で洗浄した。
【０４０９】
【表１８】
0004689826.tif 000059
【０４１０】
樹脂１５４を有するカンを、適当な４−ニトロフェニルＦｍｏｃ−アミノアルキルカーボネート（８．２６２×１０−４ｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２２３ｍｇ、１．６５２４×１０−３ｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（７１．４ｍＬ、４．１３１×１０−４ｍｏｌ）のＮＭＰ（１５ｍＬ）溶液を含む１７個のフラスコに、Ｒｆタグを用いて区分けした。カンを４時間攪拌して排出し、ＮＭＰ（３×１００ｍＬ）およびＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で洗浄し、カップリング樹脂１５５を含んだ。
【０４１１】
Ｎ−Ｆｍｏｃの脱保護
カップリング樹脂１５５を有する２８９のカンを１個のフラスコに集めて、Ｆｍｏｃ保護基を、ピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、３００ｍＬ）で１時間処理することにより除去した。脱保護樹脂１５６を有するカンを排出し、ＤＭＦ（３×３００ｍＬ）およびＤＣＭ（３×３００ｍＬ）で洗浄した。
【０４１２】
【表１９】
0004689826.tif 000060
【０４１３】
樹脂１５６を有するカンを、適当な４−ニトロフェニルＦｍｏｃ−アミノアルキルカーボネート（８．２６２×１０−４ｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２２３ｍｇ、１．６５２４×１０−３ｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（７１．４ｍＬ、４．１３１×１０−４ｍｏｌ）のＮＭＰ（１５ｍＬ）溶液を含む１７個のフラスコに、Ｒｆタグを経て区分けした。カンの樹脂を、４時間カップリングさせてカップリング樹脂１５７を形成した。排出後、カンをＮＭＰ（３×１００ｍＬ）およびＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で洗浄した。
Ｎ−Ｆｍｏｃ脱保護を、上記のように実施してカンに樹脂１５８を得た。
【０４１４】
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ（７ｂ）のカップリング
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ（７ｂ）（７．８４ｇ、１．４０×１０−２ｍｏｌ、３倍過剰）、ＨＯＢｔ（１．８９６ｇ、１．４０×１０−２ｍｏｌ）およびジイソプロピルカーボジイミド（２．１８ｍＬ、１．４０×１０−２ｍｏｌ）のＮＭＰ（３００ｍＬ）溶液を、樹脂１５８を有する２８９のカンに加えた。カンを、２４時間激しく攪拌して排出した。カップリングした樹脂１５９を含むカンを、ＮＭＰ（３×３００ｍＬ）およびＤＣＭ（３×３００ｍＬ）で洗浄した。
Ｎ−Ｆｍｏｃ脱保護を、前記のように実施してカンに樹脂１６０を得た。
【０４１５】
実施例２２：ペプトイドを用いる２７構成要素ライブラリの合成
（アイロリ（Ｉｒｏｒｉ）法）（図１５）
樹脂の調製
リンクアミドＭＢＨＡ樹脂１５１（８１０ｍｇ、０．５４ｍＭｏｌ／ｇ充填）をＤＣＭ／ＤＭＦ（３：１）の溶液に懸濁し、ＲＦタグを含む２７個のアイロリミクロカン（Ｉｒｏｒｉ  Ｍｉｃｒｏｋａｎ）の反応器に配分した。
【０４１６】
カンを、ＤＣＭ／ＤＭＦ（１：１、５０ｍＬ）の溶液に浸漬し、１分間激しく振とうした、この溶液を減圧留去し、カンを再度ＤＭＦに浸漬して１０分間激しく振とうした。
【０４１７】
ＤＭＦを排出し、樹脂１５１のＦｍｏｃ基を、ピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、５０ｍＬ）をカンに加えることにより除去した。これを５分間振とうし、排出した。さらにピペリジン溶液を加えて（ＤＭＦ中２０％）、カンを１時間振とうした。脱保護樹脂１５２を有するカンを排出し、ＤＭＦ（６×５０ｍＬ）で洗浄した。
【０４１８】
アシル化段階
ブロモ酢酸溶液（ＤＭＦ中０．６Ｍ、６０ｍＬ）を、樹脂１５２を有するカンに加え、次いでジイソプロピルカーボジイミド溶液（ＤＭＦ中３．２Ｍ、１４．１ｍＬ）を加えた。これを室温で２時間振とうし、排出して繰り返した。次にブロモアセトアミド樹脂１６１を有するカンをＤＭＦ（２×５０ｍＬ）とＤＭＳＯ（１×５０ｍＬ）で洗浄した。
【０４１９】
置換段階
２７個のカンを、ＲＦタグを経て３個のフラスコに区分けした。第１のセットをメチルアミン水溶液（４０％ｗ／ｖ、２０ｍＬ）に、第２のセットをピペロニルアミン溶液（ＤＭＳＯ中２Ｍ、２０ｍＬ）に、第３のセットを２−メトキシエチルアミン溶液（ＤＭＳＯ中２Ｍ、２０ｍＬ）に懸濁した。これらを４時間激しく振とうして排出した。アミノカップリング樹脂１６２を有するカンを、ＤＭＳＯ（２×２０ｍＬ）およびＤＭＦ（１×２０ｍＬ）で洗浄した。
【０４２０】
アシル化および置換段階を２回繰り返して、樹脂１６６（Ｒ１、Ｒ２およびＲ３に関し３つの値における全ての組合せを有する２７種の樹脂）を得た。
【０４２１】
Ｆｍｏｃ−ＰＢＤ（７ｂ）のカップリング
樹脂１６６を担持するペプトイドを有する２７のカンを再結合して、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中のＦｍｏｃ−ＰＢＤ（７ｂ）（９７６．３ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ、４倍過剰）、ＨＯＢｔ（２３６．４ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルカーボジイミド（２２．０８ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）溶液を加えた。これを２４時間激しく攪拌して排出した。ＦｍｏｃＰＢＤカップリング樹脂１６７を有するカンを、ＤＭＦ（３×５０ｍＬ）およびＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で洗浄した。
【０４２２】
Ｎ−Ｆｍｏｃ脱保護
ピペリジン溶液（ＤＭＦ中２０％、５０ｍＬ）をカンに加えることにより、ＰＢＤ樹脂１６７からＮ−Ｆｍｏｃ保護基を除去した。これを５分間振とうし、排出した。さらにピペリジン溶液を加えて（ＤＭＦ中２０％、５０ｍＬ）、カンを１時間振とうした。脱保護樹脂１６８を有するカンを排出し、ＤＭＦ（３×５０ｍＬ）、ＤＣＭ（３×５０ｍＬ）およびメタノール（２×５０ｍＬ）で洗浄し、減圧下一晩乾燥した。
【０４２３】
ライブラリに用いられるアミン類
【０４２４】
【化５８】
0004689826.tif 000061
ＡＰＰＥＮＤＩＸ  １
アミノアルコールの収率（％）およびＮＭＲを含むデータ
Ａｌａ：−７４％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ  ７．８８（ｄ，２，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．７１（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．３１＝７．４２（ｄｔ，４），７．０９（ｄ，１，Ｊ＝８．１Ｈｚ），４．２８（ｍ，４），３．５４（ｍ，１），３．３６（ｍ，１），３．２６（ｍ，１），１．０４（ｄ，３，Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
【０４２５】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ  １５５．５，１４３．９  １４０．７  １２７．５，１２７．０，１，１２０．０，６５．１  ６４．４，４８．４  ４６．７  １７．３。
【０４２６】
Ａｒｑ（ｐｂｆ）：
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．８１（ｄ，２，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．６６（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．２９−７．３８（ｄｔ，４），６．５４（ｓ，ｂｒ，１），４．３１（ｍ，２），４．１８（ｔ，１，Ｊ＝６．９５Ｈｚ），４．０６（ｑ，２，Ｊ＝６．９５Ｈｚ），３．６３（ｍ，１），３．５３（ｍ，２），３．２１（ｍ，２），２．９４（ｍ，２），２．６０（ｓ，４），２．５１（ｓ，３），１．９６（ｓ，２），１．３８（ｍ，１０），１．１９（ｔ，２，Ｊ＝７Ｈｚ），０．８９（ｍ，１）。
【０４２７】
１３ＣＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１５８．９，１５７．３，１４５．１  １４５．０，１３８．７，１３５．３，１３２．８，１２８．４，１２７．９，１２６．１，１２５．３，１２０．７，１１７．５，８６．９，６６．８，６２．３，６０．５，５３．７，４８．１，４３．６，４１．６，２０．８，１９．５，１８．２，１４．５，１２．５。
【０４２８】
Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）：−８４％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．８８（ｄ，２，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．６９（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．３０−７．４５（ｄｔ，４），７．１６（ｄ，１，Ｊ＝８．８Ｈｚ），４．８４（ｍ，１），４．３１（ｍ，３），３．８７（ｍ，１），３．３９（ｍ，２），２．２６（ｍ，１），１．３７（ｓ，９）。
【０４２９】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，，１７０．４，１５５．５，１４３．８，１４０．７，１２７．５，１２７．０，１２５．１，１２０．０，７９．６，６５．２，６２．９，５０．２，４６．７，２７．６。
【０４３０】
Ａｓｎ：−５６％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．９６，７．８８（ｓ，ｄ，２，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．７０，（ｍ，２），７．３１−７．４３（ｄｔ，４），４．３４（ｍ，４），３．７４（ｍ，３），３．６２（ｔ，１，Ｊ＝４．６Ｈｚ），３．４４（ｍ，１），２．５２（ｍ，２）。
【０４３１】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１６２．３，１５５．６，１４３．７，１４０．６，１２７．６，１２５．５，１２５．０，１２０．０，６５．２，５４．１，４６．６，４６．５。
【０４３２】
Ｇｌｎ：−８６％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．９６，７．８７（ｓ，ｄ，３，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．７０（ｄ，２，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．３０−７．４２（ｄｔ，４），７．１３（ｄ，１，Ｊ＝８．６Ｈａ），４．７４（ｓ，ｂｒ，１），４．２４（ｍ，３），３．４３（ｍ，５），２．８９（ｓ，２），２．７３（ｓ，２），２．４５（ｍ，３），２．０３（ｓ，３），１．８０（ｍ，１），１．５９（ｍ，１）。
【０４３３】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１６２．２，１５５．９，１４３．９，１４３．８，１４０．７，１２７．５，１２６．９，１２５．１，１２４．７，１２０．０，６５．１，６３．２，５２．０，４６．７，３５．７，３０．５，２９．９，１４．６。
【０４３４】
Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）：−７１％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．８８（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．７１（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．３１−７．４５（ｄｔ，４），７．０５（ｄ，１，Ｊ＝８．６Ｈｚ），４．２４（ｍ，３），４．０２（ｑ，１，Ｊ＝７．１Ｈｚ），３．３７（ｍ，２），２．２０（ｍ，２），１．４０（ｓ，９）。
【０４３５】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１７２．１，１５５．９，１４３．９，１４３．８，１４０．７，１２７．５，１２６．７，１２５．２，１２０．０，７９．３，６５．１，６３．３，５２．１，４６．８，３１．５，２７．７，２６．３。
【０４３６】
Ｇｌｙ：−７９％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．８８（ｄ，２，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．６９（ｄ，２，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．２４−７．４２（ｍ，５），４．６６（ｔ，１，Ｊ＝５．５Ｈｚ），４．２９（ｍ，３），３．３８（ｍ，２），３．０９（ｑ，２，Ｊ＝６Ｈｚ）。
【０４３７】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１５６．２，１４３．９，１４０．７，１２７．５，１２７．０，１２５．１，１２０．０，６５．２，５９．８，４６．７，４３．０。
【０４３８】
Ｉｌｅ：−７２％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．８８（ｄ，２，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．７３（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．２９−７．４２（ｍ，４），７．０３（ｄ１，Ｊ＝８．４Ｈｚ），４．５１（ｍ，１），４．２３（ｍ，３），３．４２（ｍ，３），０．８４（ｍ，６）。
【０４３９】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１５６．１，１４４．０，１４３．８，１４０．７，１２７．５，１２６．９，１２５．２，１２０．０，６５．１，６１．１，５７．０，４６．８，３５．３，２４．６，１５．４，１１．３。
【０４４０】
Ｌｅｕ：−８８％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．８８（ｄ，２，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．７１（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．３０−７．４４（ｄｔ，４），６．９９（ｄ，１，Ｊ＝８．８Ｈｚ），４．２４（ｍ，３），３．５４（ｍ，１），３，３５（ｍ，２），１．６２（ｍ，１），１．３０（ｍ，２），０．８７（ｍ，６）。
【０４４１】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１５５．９，１４４．０，１４３．８，１４０．７，１２７．５，１２６．９，１２５．２，１２５．２，１２０．０，６５．０，６４．１，５０．９，４６．８，２４．２，２３．４，２１．７。
【０４４２】
Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）：−９５％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．８８（ｄ，２，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．７２（ｄ，２，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．３０−７．４２（ｄｔ，４），４．２３（ｍ，３），４．０１（ｑ，１，Ｊ＝７．０Ｈｚ），２．８９（ｍ，２），１．３７（ｍ，１２），１．１７（ｔ，２，Ｊ＝７．１Ｈｚ），０．８９（ｄ，１，Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
【０４４３】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１５５．９，１５５．５，１４３．９，１４３．９，１４３．３，１４０．７，１２７．７，１２７．５，１２７．０，１２５．１，１２０．０，７７．２，６５．１，６３．５，５９．７，５２．８，４６．７，４６．６，２９．５，２８．２，２２．８，２０．７，１８．７，１４．０。
【０４４４】
Ｍｅｔ：−５２％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．９１，７．７２（ｍ，ｄ，４，Ｊ＝６．６Ｈｚ），７．３４（ｍ，４），７．０８（ｄ，１，Ｊ＝８，１Ｈｚ），６．７５（ｍ，１），４．２８（ｍ，３），３．４２（ｍ，３），２．８９（ｓ，２），２．７４（ｓ，２），２．１１（ｍ，２），１．８１（ｍ，１），１．５６（ｍ，１）。
【０４４５】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１６２．２，１５５．９，１４３．９，１４０．７，１２７．６，１２７．０，１２５．２，１２０．０，１１９．９，６５．２，６３．３，５２．６，４６．７，２６．８。
【０４４６】
Ｐｈｅ：−９４％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．８７（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．６５（ｍ，２），７．２４−７．４１（ｍ，１０），４．８１（ｔ，１，Ｊ＝５．５Ｈｚ），４．１６（ｍ，３），３．６７（ｍ，１），３．３９（ｍ，２），２．８７（ｄｄ，１，Ｊ＝４．９，８．６Ｈｚ），２．６７（ｍ，１）。
【０４４７】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１５５．６，１４３．８，１４０．６，１３９．２，１２９．１，１２８．０，１２７．５，１２７．０，１２５．８，１２５．２，１２５．１，１２０．０，６５．１，６２．９，５４．６，４６．６。
【０４４８】
Ｐｒｏ：−７３％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．８８（ｄ，２，Ｊ＝６．７Ｈｚ），７．６５（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．３１−７．４３（ｄｔ，４），４．７４（ｍ，１），４．３０（ｍ，３），３．７３（ｍ，１），３．２７（ｍ，３），１．８６（ｍ，４），１．１７（ｔ，１，Ｊ＝７．１）。
【０４４９】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１５４．１，１４３．９，１４０．８，１２７．６，１２７．０，１２５．０，１２０．０，６６．４，６６．２，６１．８，６１．１，５９．７，５８．９，５８．３，４６．８，４６．３，２７．７，２６．９，２３．２，２２．４，２０．７，１４．０。
【０４５０】
Ｓｅｒ（ｔＢｕ）：−７６％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．８８（ｄ，２，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．１１（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．３０−７．４５（ｄｔ，４），６．９９（ｄ，１，Ｊ＝８．１Ｈｚ），４．２４，３．７４，３．３０−３．５６（ｍ，ｍ，ｍ，１１），１．１２（ｓ，９）。
【０４５１】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１５５．９，１４４．０，１４３．９，１４０．８，１２７．６，１２７．１，１２５．３，１２５．３，１２０．１，７２．４，６５．３，６０．７，５３．６，４６．８，２７．４，１８．９。
【０４５２】
Ｔｈｒ（ｔＢｕ）：
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．９０（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．７０（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．２８−７．４４（ｄｔ，４），６．８９（ｄ，１，Ｊ＝８．１Ｈｚ），４．２３（ｍ，３），３．６８（ｍ，１），３．２９（ｍ，１），２．７３（ｍ，１），１．１５（ｍ，１２）。
【０４５３】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１５５．６，１４３．９，１４３．７，１４０．８，１２７．５，１２７．１，１２５．２，１２５．２，１２０．２，７２．３，６５．３，６０．７，５３．６，４６．８，２７．３，１８．６，１７．９。
【０４５４】
Ｔｒｐ：−８９％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１０．８１（ｓ，１），７．８６（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．６７（ｍ，３），７．３４（ｍ，５），６．９６−７．１４（ｍ，４），４．７６（ｔ，１，Ｊ＝５．３Ｈｚ），４．２４（ｍ，３），３．７７（ｍ，１），３．４１（ｍ，２），２．９４，２．５（ｍ，２）。
【０４５５】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１５５．８，１４３．９，１４０．６，１３６．１，１２７．５，１２７．５，１２７．０，１２５．２，１２５．２，１２３．１，１２０．７，１１２．０，１１８．４，１１８．１，１１１．４，１１１．２，６５．２，６２．８，５３．８，４６．７，２６．７。
【０４５６】
Ｔｙｒ（ｔＢｕ）：−８８％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．８７（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．６６（ｄ，２，Ｊ〜７．３Ｈｚ），７．３１−７．４１（ｍ，４），７．１１（ｍ，３），６．８２（ｄ，２，Ｊ＝８．２Ｈｚ），４．７９，（ｔ，１，Ｊ＝５．５Ｈｚ），４．１３（ｍ，３），３．６４（ｍ，１），３．３８（ｍ，１），２．８２（ｄｄ，１，Ｊ＝４．８，９．０Ｈｚ），１．１９（ｓ，９）。
【０４５７】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１５５．６，１５３．０，１４３．９，１４３．８，１４０．６，１３３．８，１２９．５，１２７．５，１２６．９，１２５．２，１２５．１，１２３．３，１１２．０，７７．４，６５．２，６３．０，５４．６，４６．６，２８．４。
【０４５８】
Ｖａｌ：−９６％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，７．８８（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．７３（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．３２−７．４１（ｄｔ，４），４．２４（ｍ，３），３．８９９ｄ，１，Ｊ＝６．２Ｈｚ），３．３９（ｍ，２），０．８６（ｍ，６），０．５４（ｔ，１，Ｊ＝７．１Ｈｚ）。
【０４５９】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，１５６．３，１５２．７，１４３．９，１４３．９，１４０．７，１２７．５，１２６．９，１２５．２，１２０．０，６５．２，６１．４，５７．９，４６．８，４６．２，２８．４，１９．５，１８．６，１７．９。
【０４６０】
ＡＰＰＥＮＤＩＸ  ２
アミノアルキルニトロフェニルカーボネートの収率（％）およびＮＭＲ（ｄ／ｐｐｍ，ｄ６−アセトン）を含むデータ
Ａｌａ：，
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．３２（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．８５（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．７１（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．５６（ｄ，２，Ｊ＝９．３Ｈｚ），７．３０−７．４１（ｍ，７），４．０７−４．４４（ｍ，６），１．２４（ｄ，３，Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
【０４６１】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０６．４，１５６．７，１５６．５，１５３．１，１４６．１，１４５．０，１４４．９，１４１．９，１２８．３，１２７．８，１２６．０，１２５．９，１２３．１，１２０．７，７２．１，６６．５，４７．７，４６．３，１７．１。
【０４６２】
Ａｒｑ（Ｐｂｆ）：
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．１３（ｄ，２，Ｊ＝４．９Ｈｚ），７．６８（ｄ，４，７．７Ｈｚ），７．５２（ｄ，４，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．２４−７．３７（ｄ，１０，Ｊ＝９．３Ｈｚ），４．０７−４．２２（ｍ，６），３．８７（ｍ，９，１），３．３７（ｍ，２），２．４７（ｄ，６，Ｊ＝３．１Ｈａ），１．２６（ｍ，１２）。
【０４６３】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０７．３，１６０，１５８．３，１５７．７，１５４．３，１４７．４，１４６．２，１４６．１，１４５．９，１４３．１，１３９．８，１３６．５，１３３．９，１２９．５，１２９．５，１２８．９，１２７．０，１２４．１，１２１．８，１２１．８，８８．０，８０．２，７２．５，６７．９，６７．８，６６．１，４９．２，４９．１，４４．６，２９．７，２７．８，２０．５，１９．３，１９．２，１３．６。
【０４６４】
Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）：−７４％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．３１（ｄ，２，Ｊ＝９．５Ｈｚ），７．８６（ｄ，２，７．７Ｈｚ），７．５４（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．３９（ｍ，６），４．３７（ｍ，４），４．２４（ｍ，１），４．０６（ｑ，１，Ｊ＝６．９Ｈｚ），２．６６（ｍ，１），１．４６（ｓ，９）。
【０４６５】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０６．１，１７０．３，１５６．７，１５３．２，１４６．４，１４５．０，１４２．１，１２８．５，１２６．８，１２６．０，１２３．１，１２０．８，８１．３，７０．７，６７．１，４８．２，３７．９，２８．２。
【０４６６】
Ａｓｎ：１０％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．３１（ｄ，１，Ｊ＝９．５Ｈｚ），８．１４（ｍ，２），７．９８（ｍ，１），７．８３（ｄ，１，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．６７（ｔ，１，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．５３（ｄ，１，Ｊ＝９．２Ｈｚ），７．３０−７．３９（ｄｔ，３），６．９９（ｍ，２），４．４１（ｍ，２），４．２４（ｍ，１），２．９４（ｍ，２），２．７９（ｓ，２）。
【０４６７】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０６．３，１６４．４，１６３．１，１５６．８，１５６．６，１５３．１，１４４．９，１４２．１，１４１．６，１２８．５，１２７．９，１２７．８，１２６．１，１２３．１，１２０．８，１１６．５，７９．２，７３．８，６９．６，６７．３，４８．０，３６．３，２０．６。
【０４６８】
Ｇｌｎ：−１７％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．３１（ｄｄ，２，Ｊ＝２．７Ｈｚ，５．５Ｈｚ），８．１６  ９ｄｄ，１，Ｊ＝２．２Ｈｚ，４．８Ｈｚ），７．８３（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．６８（ｍ，２），７．２７−７．５４（ｄｔ，ｍ，６），７．０３（ｄｄ，１，Ｊ＝２．２Ｈｚ，４．８Ｈｚ），６．６５（ｄ，１，Ｊ＝８．４Ｈｚ），４．２１−４．４６（ｍ，５），２．５９（ｍ，２），１．９２（ｍ，２）。
【０４６９】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０６．２，１５７．１，１５６．７，１５３．３，１４５．１，１４４．９，１４２．１，１２８．５，１２７．９，１２６．８，１２６．３，１２３．１，１２０．８，１１６．６，７１．３，６６．９，５０．２，４８．１，１５．３。
【０４７０】
Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）：−７６％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．３０（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．８３（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．６９（ｍ，２），７．５０（ｄ，１，Ｊ＝６．９Ｈｚ），７．３９（ｍ，４），４．３９（ｍ，２），４．２６（ｍ，２），４．０６（ｍ，１），２．３８（ｍ，１），１．４４（ｓ，９）。
【０４７１】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０６．２，１７２．６，１５７．１，１５６．７，１５３．２，１４６．３，１４５．１，１４４．９，１４２．１，１２８．５，１２７．９，１２６．０，１２３．１，１２０．８，８０．５，７１．４，６６．９，５０．４，４９．０，３２．３，２７．０。
【０４７２】
Ｇｌｙ：−３０％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．２９（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．８４（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．６８（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．５４（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．３１−７．４（ｄｔ，４），４．３９（ｍ，４），４．２４（ｔ，１，Ｊ＝６．９Ｈｚ），３．５６，（ｑ，２，Ｊ＝５．１Ｈｚ）。
【０４７３】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０６．１，１５７．４，１５６．７，１５３．３，１４６．４，１４５．１，１４２．１，１２８．５，１２７．９，１２６．３，１２６．０，１２３．１，１２０．８，６８．８，６７．１，４８．１，４０．４。
【０４７４】
Ｉｌｅ：−９１％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．２６（ｄ，２，Ｊ＝９．２Ｈｚ），７．８２（ｄ，２，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．６８（ｍ，２），７．５０（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．２６−７．４７（ｄｔ，３），４．２０−４．５１（ｍ，３），３．９２（ｍ，１），１．６０（ｍ，１），１．１９（ｍ，１），１．０１，０．９２（ｄ，ｔ，３，Ｊ＝６．８Ｈｚ，７．３Ｈｚ）。
【０４７５】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０６．３，１５６．７，１５３．３，１４５．４，１４４．１，１４２．１，１２８．５，１２７．９，１２７．８，１２６．１，１２６．０，１２３．１，１２０．８，７０．２，６６．９，５４．９，５４．８，４８．１，３６．７，１５．７，１１．４。
【０４７６】
Ｌｅｕ：−８８％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．２７（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．８３（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．６７（ｔ，２，Ｊ＝５．８Ｈｚ），７．５１（ｍ，２），７．２９−７．４９（ｄｔ，４），４．３８（ｍ，３），４．２２（ｍ，３），１．７７（ｍ，１），１．５５（ｍ，１），１．３７（ｍ，１），０．９４（ｍ，６）。
【０４７７】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０５．４，１５６．４，１５５．９，１５２．５，１４５．６，１４４．４，１４４．２，１４１．３，１２７．７，１２７．１，１２７．１，１２５．２，１２２．３，１１２．０，７１．３，６６．１，４８．２，４７．３，２４．５，２２．７，２１．３。
【０４７８】
Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）：−６４％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．３０（ｍ，１），７．８６（ｍ，２），７．５２（ｍ，２），７．３１−７．４０（ｍ，５），４．２３−４．３７（ｍ，３），３．０８（ｍ，２），１．３９（ｍ，１４）。
【０４７９】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０６．２，１５７．２，１５６．７，１４６．４，１４５．１，１４５．０，１４２．１，１２８．５，１２７．９，１２６．８，１２６．０，１２３．７，１２３．１，１２０．８，１１６．５，７８．４，７１．６，６７．３，６６．９，５０．９，４８．１，４８．０，４０．８，４０．７，２３．８。
【０４８０】
Ｍｅｔ：−１３％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．２９（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．８３（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．６９（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．３９（ｍ，４），４．１７−４．４２（ｍ，３），３．６０−３．７１（ｍ，２）。
【０４８１】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０５．５，１５６．４，１４４．４，１４４．２，１４１．３，１２７．７，１２７．７，１２５．３，１２５．３，１２２．３，１２０．０，７０．６，６６．０，５０．８，４７．４，２９．３，２９．１，１３．５。
【０４８２】
Ｐｈｅ：−３６％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．２８（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．８２（ｄ，２，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．６２（ｍ，２），７．５１，７．３８−７．１８（ｄ，ｍ，ｍ，１０，Ｊ＝９．１Ｈｚ），６．７５（ｄ，１，Ｊ＝７．９Ｈｚ），４．４６（ｄ，１，Ｊ＝６．５９），４．３１（ｍ，３），４．１８（ｍ，１），２．９７（ｍ，２）。
【０４８３】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０６．２，１５６．９，１５６．７，１５３．２，１４６．４，１４５．０，１４２．０，１３８．８，１３０．１，１２９．２，１２８．４，１２７．９，１２７．３，１２６．８，１２６．０，１２３．１，１２０．７，７０．９，６６．９，５２．４，４８．０，３７．７。
【０４８４】
Ｐｒｏ：−５０．％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．３０（ｄ，２，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．８４（ｄ，２，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．６７（ｄ，２，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．５４（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．３１−７．４０（ｍ，４），４．３７，４．２９，４．０４（ｍ，６），３．４５（ｍ，２），２．０５（ｍ，１），１．９６（ｍ，３）。
【０４８５】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０５．４，１５５．９，１５４．８，１５２．５，１４５．６，１４４．４，１４１．４，１２７．７，１２７．２，１２５．２，１２５．０，１２２．４，１２０．０，６９．０，６６．８，５５．９，４７．４，２７．４，２３．７，２０．０。
【０４８６】
Ｓｅｒ（ｔＢｕ）：−５３％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．３１（ｍ，１），７．８４（ｄ，２，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．６９（ｄ，２，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．５３（ｄ，１，Ｊ＝９．４Ｈｚ），７．４２−７．３１（ｍ，５），４．３５（ｍ，４），３．６５（ｍ，４），２．９３（ｄ，１，Ｊ＝３．３Ｈｚ），１．１７（ｍ，１１），０．９２（ｄ，１，Ｊ＝６．６Ｈｚ）。
【０４８７】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０６．１，１５６．９，１５６．７，１５３．２，１４５．１，１４２．１，１２８．５，１２８．４，１２７．９，１２６．１，１２６．０，１２０．７，１１６．５，７９．２，７３．７，７３．４，６９．２，６７．０，６６．９，６２．４，６１．７，５４．２，５１．３，４８．１，４８．０，４７．９，２７．２，１９．２。
【０４８８】
Ｔｈｒ（ｔＢｕ）：−４５％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．３０（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．８４（ｄ，２，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．６８（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．５１（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．２８−７．４９（ｄｔ，４），６．４（ｄ，１，Ｊ＝９．２Ｈｚ），４．４６，４．３９，４．２４（ｄｄ，ｄ，ｍ，５，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．９Ｈｚ，７．３Ｈｚ），３．９６−４．０３（ｍ，２），１．２１（ｍ，１２）。
【０４８９】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０５．４，１５６．６，１５５．９，１５２．５，１４５．６，１４４．４，１４４．２，１４１．３，１２７．７，１２７．１，１２５．２，１２２．３，１２０．０，７３．７，６８．３，６６．３，６５．９，６０．６，５５．４，５４．９，５４．１，４７．３，１８．７。
【０４９０】
Ｔｒｐ：−６４％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．３０（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．８５（ｄ，２，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．６９（ｍ，３），７．５２（ｄ，２，Ｊ＝８．８Ｈｚ），７．２４−７．４２（ｍ，２），４．３５  ９ｍ，６），３．０８（ｄ，２，Ｊ＝４．０Ｈｚ）。
【０４９１】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０６．４，１５６．９，１５６．４，１５３．０，１４６．１，１４４．１，１４４．８，１４１．８，１３７．４，１２８．３，１２７．７，１２６．０，１２５．７，１２４．２，１２３．１，１２１．７，１２０．６，１１９．２，１１９．０，１１２．２，７０．８，６６．５，５１．５，４７．８，２７．５。
【０４９２】
Ｔｙｒ（ｔＢｕ）：−５０％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．３０（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．８４（ｄ，２，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．６４（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．５２（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．２９−７．３８  ９ｍ，６），６．９０（ｄ，２，Ｊ＝８．４２Ｈｚ），４．１４−４．４５（ｍ，７），２．８９（ｍ，４），１．２４（ｓ，１０）。
【０４９３】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，２０６．２，１５６．９，１５６．７，１５５．１，１５３．２，１４６．３，１４５．０，１４２．０，１３３．３，１３０．８，１３０．５，１２８．４，１２７．９，１２６．０，１２４．７，１２３．１，１２０．７，７８．４，７０．９，６６．９，５２．５，５２．４，４８．０，３７．０。
【０４９４】
Ｖａｌ：−６２％
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ，８．３０（ｄ，２，Ｊ＝９．１Ｈｚ），７．８３（ｄ，２，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．７０（ｄ，２，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．５４（ｄ，２，Ｊ＝９．２Ｈｚ），７．３０−７．４４（ｍ，４），４．１０−４．４４（ｍ，６），３．８９（ｄ，１，Ｊ＝６．２Ｈｚ），０．８６（ｍ，６）。
【０４９５】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６７．８ＭＨｚ，ｄ６−アセトン）：δ  ＮＭＲ（６７．８，ｄ６−アセトン）：ｄ，２０６．２，１５６．４，１５５．８，１５２．３，１４６．１，１４５．３，１４１．９，１２８．５，１２７．９，１２７．１，１２５．９，１２３．１，１１９．９，７１．２，６６．２，４８．１，４７．５，２４．３，２２．７。
【図面の簡単な説明】
【図１】  式Ｉの化合物を合成するための反応スキームである。
【図２】  式Ｉの代替化合物を合成するための反応スキームである。
【図３ａ】  式Ｖ、ＩＶ、ＩＩＩ、およびＩＩの化合物を合成するための反応スキームである。
【図３ｂ】  式Ｖ、ＩＶ、ＩＩＩ、およびＩＩの化合物を合成するための反応スキームである。
【図４ａ】  式Ｖ、ＩＶ、ＩＩＩ、およびＩＩの別の化合物を合成するための反応スキームである。
【図４ｂ】  式Ｖ、ＩＶ、ＩＩＩ、およびＩＩの別の化合物を合成するための反応スキームである。
【図５】  式ＩＩＩおよびＩＶの化合物を合成するための反応スキームである。
【図６ａ】  式ＶＩおよびＶＩＩの化合物を合成するための反応スキームである。
【図６ｂ】  式ＶＩおよびＶＩＩの化合物を合成するための反応スキームである。
【図６ｃ】  式ＶＩおよびＶＩＩの化合物を合成するための反応スキームである。
【図７】  式ＩＩＩおよびＩＶの化合物を合成するための反応スキームである。
【図８】  式ＩＩＩおよびＩＶの化合物を合成するための反応スキームである。
【図９】  式ＩＩＩおよびＩＶの化合物を合成するための反応スキームである。
【図１０ａ】  式ＸおよびＸＩの化合物を合成するための反応スキームである。
【図１０ｂ】  式ＸおよびＸＩの化合物を合成するための反応スキームである。
【図１０ｃ】  式ＸおよびＸＩの化合物を合成するための反応スキームである。
【図１１】  式ＸＩＩＩおよびＸＩＶの化合物を合成するための反応スキームである。
【図１２】  式ＩＩＩおよびＩＶの化合物を合成するための反応スキームである。
【図１３】  式ＩＩＩおよびＩＶの化合物を合成するための反応スキームである。
【図１４】  式ＩＩＩおよびＩＶの化合物を合成するための反応スキームである。
【図１５】  式ＩＩＩおよびＩＶの化合物を合成するための反応スキームである。
【図１】
0004689826.tif 000063
【図２】
0004689826.tif 000064
【図３ａ】
0004689826.tif 000065
【図３ｂ】
0004689826.tif 000066
【図４ａ】
0004689826.tif 000067
【図４ｂ】
0004689826.tif 000068
【図５】
0004689826.tif 000069
【図６ａ】
0004689826.tif 000070
【図６ｂ】
0004689826.tif 000071
【図６ｃ】
0004689826.tif 000072
【図７】
0004689826.tif 000073
【図８】
0004689826.tif 000074
【図９】
0004689826.tif 000075
【図１０ａ】
0004689826.tif 000076
【図１０ｂ】
0004689826.tif 000077
【図１０ｃ】
0004689826.tif 000078
【図１１】
0004689826.tif 000079
【図１２】
0004689826.tif 000080
【図１３ａ】
0004689826.tif 000081
【図１３ｂ】
0004689826.tif 000082
【図１３ｃ】
0004689826.tif 000083
【図１３ｄ】
0004689826.tif 000084
【図１４】
0004689826.tif 000085
【図１５】
0004689826.tif 000086