(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
カマメロサイドからなることを特徴とする、核内転写因子ＡＰ−１の発現抑制用医薬。
【請求項２】
前記ＡＰ−１の発現抑制が、遺伝子レベルでの発現抑制およびタンパク質レベルでの発現抑制の少なくとも一方である、請求項１記載のＡＰ−１の発現抑制用医薬。
【請求項３】
前記カマメロサイドが、ローマカミツレ由来カマメロサイドおよびジャーマンカモミール由来カマメロサイドの少なくとも一方である、請求項１または２記載の核内転写因子ＡＰ−１の発現抑制用医薬。
【請求項４】
核内転写因子ＡＰ−１が関与する疾患の予防もしくは治療のための医薬品であって、請求項１から３のいずれか一項に記載の核内転写因子ＡＰ−１の発現抑制用医薬を含み、前記疾患が、再狭窄症、非悪性過剰増殖性疾患、肺繊維症、ドライアイ症候群またはパーキンソン病である、医薬品。
【請求項５】
前記非悪性過剰増殖性疾患が、子宮内膜過形成、良性前立腺肥大または増殖性硝子体網膜症である、請求項４記載の医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、核内転写因子ＡＰ−１の発現抑制剤、それを用いた医薬品および製品に関する。
【背景技術】
【０００２】  癌、動脈硬化、高血圧ないし糖尿病等の多くの疾患の発症には、インターロイキンやＴＮＦ（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ）等のサイトカインが関与している。サイトカインは、外界からの刺激によって分泌され、生体防御のための様々な反応を引き起こす役割を果たしている。【０００３】  一例として、インターロイキン−１（ＩＬ−１）が関与する反応について、図４に基づいて説明する。図示のように、ＩＬ−１がＩＬ−１レセプター（ＩＬ−１Ｒ）と結合すると、４つのタンパク質、すなわち、ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−１Ｒ−ＡｃＰ（ＩＬ−ＲＡｃＰ）、ＭｙＤ８８およびＩＲＡＫから成るレセプター複合体が形成される。その後、ＩＲＡＫは、数分以内に前記レセプター複合体から外れ、ＴＲＡＦ６と呼ばれるアダプタータンパク質と結合する。続いて、ＴＲＡＦ６は、ＴＡＫ１およびＴＡＢ１と結合して、ＴＡＢ１／ＴＡＫ１複合体となって活性化する。ＴＡＫ１は、ＭＡＰキナーゼキナーゼ（ＭＡＰＫＫＫ）に属するキナーゼの１つであり、ＴＡＢ１は、ＴＡＫ１の活性化因子である。ＴＡＢ１／ＴＡＫ１複合体は、ＭＡＰキナーゼ（ＭＡＰＫＫ）とＮＩＫ（ＮＦ−κＢ  ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ｋｉｎａｓｅ）との両方をリン酸化して活性化するため、これにより、下流にある２つのキナーゼカスケード系が活性化する。一つのキナーゼカスケード系は、核内転写因子ＡＰ−１（以下、「ＡＰ−１」という）を活性化するカスケードである。ＡＰ−１は、ロイシンジッパー型に属する転写制御因子であり、常にＤＮＡに結合しており、リン酸化されることによって活性化される。このリン酸化反応は、ＭＡＰＫＫの仲間であるＪＮＫ（ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｋｉｎａｓｅ）とｐ３８とによってなされる。もう一方のキナーゼカスケード系は、ＮＦ−κＢ（ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｋａｐｐａ  Ｂ）を活性化するカスケードである。ＮＦ−κＢは、ＤＮＡに結合せず、通常、ＩκＢ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−κＢ）タンパク質と複合体を作って細胞質に存在し、ＩκＢがリン酸化されて分解（分離）されることで活性化される。このリン酸化反応は、ＩＫＫとＮＩＫによってなされる。そして、核内転写因子ＡＰ−１やＮＦ−κＢが活性化することにより、炎症反応が引き起こされ、例えば、癌、動脈硬化、高血圧ないし糖尿病等の疾患が発症する。【０００４】  ＡＰ−１は、前述のように、ＤＮＡに結合するが、ＡＰ−１が結合するＤＮＡの領域として、例えば、特定のＴＲＥ配列（ＴＧＡＣＴＣＡ）あるいはＣＲＥ配列（ＴＧＡＣＧＴＣＡ）が知られている。そして、例えば、関節炎症における重要な役割を持つ、インターロイキン−６（ＩＬ−６）やＴＮＦ等のサイトカイン遺伝子、ならびに、関節破壊を引き起こすコラゲナーゼおよびストロメライシン等のメタロプロテアーゼ遺伝子は、それぞれのプロモーター領域に、前述の特定の配列を有している。このため、ＡＰ−１は、これらのＤＮＡに結合し、前述の遺伝子の転写を促進することとなる。したがって、ＡＰ−１は、関節リウマチ等の結合組織の炎症性疾患に関して、創薬ターゲットとして注目されている。具体例として、ＡＰ−１のＤＮＡへの結合を阻害することによって、ＡＰ−１の活性を抑制する物質とし���、例えば、天然物中のテアニン（特許文献１）、レチノイド化合物（特許文献２）、オリゴヌクレオチド（特許文献３）および放線菌分泌物質（特許文献４）が報告されている。
【特許文献１】特開２００３−５５２１３号公報
【特許文献２】特表平１１−５０４３２８号公報
【特許文献３】特開平１０−３６２７２号公報
【特許文献４】特開平１０−１３０２０１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】  しかしながら、ＡＰ−１の活性を抑制する従来の物質において、化学的に合成された物質は安全性に問題がある。また、天然物に由来するものは、安全であっても、その効果が十分ではない。【０００６】  そこで、本発明は、安全性に優れ、ＡＰ−１を抑制する活性に優れる、ＡＰ−１の抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】  前記目的を達成するために、本発明の核内転写因子ＡＰ−１の発現抑制剤は、カマメロサイドを含む。【０００８】  本発明の医薬品は、核内転写因子ＡＰ−１が関与する疾患の予防もしくは治療または創傷の治癒のための医薬品であって、本発明の核内転写因子ＡＰ−１の発現抑制剤を含む。【０００９】  本発明の製品は、核内転写因子ＡＰ−１が関与する疾患の予防または改善または創傷の治癒促進のための製品であって、本発明の核内転写因子ＡＰ−１の発現抑制剤を含む。【００１０】  本発明の発現抑制方法は、核内転写因子ＡＰ−１の発現を抑制する方法であって、カマメロサイドを投与する工程を含む。【００１１】  本発明の方法は、核内転写因子ＡＰ−１が関与する疾患を予防もしくは治療または創傷を治癒するための方法であって、カマメロサイドを投与する工程を含む。【００１２】  本発明のカマメロサイドの使用は、核内転写因子ＡＰ−１の発現を抑制するための、または、核内転写因子ＡＰ−１が関与する疾患を予防もしくは治療または創傷を治癒するための使用である。
【発明の効果】
【００１３】  本発明者等は、前記目的を達成するために、天然物を中心に、ＡＰ−１の活性を抑制する物質について、一連の研究を重ねた。その結果、キク科植物の一種であるローマカミツレまたはジャーマンカモミールに含まれるカマメロサイドが、ＡＰ−１の発現を抑制することを見出し、本発明に至った。ローマカミツレまたはジャーマンカモミールは、例えば、ハーブティー等の食品や化粧品原料として使用されており、その安全性に問題はない。また、カマメロサイドは、ＡＰ−１の発現を抑制するため、従来のように、発現したＡＰ−１のＤＮＡへの結合を阻害することで、ＡＰ−１の活性を抑制するよりも、より効果的に、ＡＰ−１の活性を抑制できる。さらに、カマメロサイドは、ＡＰ−１の発現抑制活性だけでなく、ＮＦ−κＢを抑制する活性およびメーラード反応を抑制する活性を有する。このため、これらがＡＰ−１の発現抑制活性と相乗的に働き、炎症性疾患等の様々な疾患に対して顕著な効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、本発明の一実施例において、ローマカミツレ抽出液のＨＰＬＣのクロマトグラムを示す図である。
【図２】図２は、前記実施例において、カマメロサイドの核内転写因子ＡＰ−１の発現抑制効果を示すグラフである。
【図３】図３は、参考例において、ローマカミツレ抽出物およびカマメロサイドのＮＦ−κＢの発現抑制効果を示すグラフである。
【図４】図４は、インターロイキン−１と、核内転写因子ＡＰ−１およびＮＦ−κＢとの関係を示す図である。
【図５】図５は、本発明の一実施例におけるＨＰＬＣのクロマトグラムを示す図であり、（ａ）は、ジャーマンカモミール抽出液のＨＰＬＣのクロマトグラムであり、（ｂ）は、ローマカミツレ由来カマメロサイドのＨＰＬＣのクロマトグラムである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】  本発明において、前記ＡＰ−１の発現抑制は、遺伝子レベルでの発現抑制およびタンパク質レベルでの発現抑制の少なくとも一方である。前記遺伝子レベルでの発現抑制は、ｍＲＮＡへの転写抑制を含む。また、前記タンパク質レベルでの発現抑制とは、翻訳における抑制を含み、翻訳後に修飾される場合は、前記修飾の抑制を含む。【００１６】  本発明のＡＰ−１の発現抑制剤を、例えば、投与または摂取することによって、例えば、遺伝子レベルまたはタンパク質レベルで、ＡＰ−１の発現を抑制できる。本発明のＡＰ−１の発現抑制剤は、制限されないが、例えば、ヒト、ヒトを除く哺乳類動物に投与または摂取させることが好ましい。【００１７】  本発明において、カマメロサイドとしては、例えば、ローマカミツレ（Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ）由来のカマメロサイド、ジャーマンカモミール（Ｍａｔｒｉｃａｉａ ｒｅｃｕｔｉｔａ）由来のカマメロサイド等があげられる。ローマカミツレ由来のカマメロサイドとしては、前記ローマカミツレのいずれの部分に由来してもよい。例えば、ローマカミツレ全体（全草）、花、茎、葉、枝、枝葉、根茎、根皮、根、種子等があげられるが、これらの中でも、全草および花由来のカマメロサイドが好ましい。ジャーマンカモミール由来のカマメロサイドとしては、前記ジャーマンカモミールのいずれの部分に由来してもよい。例えば、ジャーマンカモミール全体（全草）、花、茎、葉、枝、枝葉、根茎、根皮、根、種子等があげられるが、これらの中でも、全草および花由来のカマメロサイドが好ましい。【００１８】  本発明の発現抑制剤は、前述のように、カマメロサイドを含んでいればよく、例えば、カマメロサイドの含有形態は、制限されない。すなわち、本発明の発現抑制剤は、例えば、精製したカマメロサイドを含有してもよいし、例えば、ローマカミツレまたはジャーマンカモミールの全部または一部を含むことによって、カマメロサイドを含有してもよい。前者としては、例えば、ローマカミツレまたはジャーマンカモミールから抽出して、さらに精製したカマメロサイドがあげられる。なお、抽出物を精製する場合、カマメロサイドは、単一精製品でもよいし、部分精製品であってもよい。また、後者としては、例えば、ローマカミツレまたはジャーマンカモミールの全部または一部からの抽出物（例えば、精製していないクルードな状態）や、ローマカミツレまたはジャーマンカモミールの全部または一部の粉砕物等があげられる。ローマカミツレとジャーマンカモミールとは、いずれか一方でもよいし、両方を含んでもよい。さらに、前記カマメロサイドは、例えば、合成物でもよいし、市販品を使用してもよい。【００１９】  前記カマメロサイド（ｃｈａｍａｅｍｅｌｏｓｉｄｅ）は、化学名が、ａｐｉｇｅｎｉｎ  ７−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ−６’’−（３’’’−ｈｙｄｒｏｘｙ−３’’’−ｍｅｔｈｙｌ−ｇｌｕｔａｒａｔｅ）であり、下記化学式で表される。なお、本発明におけるカマメロサイドは、カマメロサイドの塩（例えば、Ｎａ塩、Ｋ塩等）であってもよい。【００２０】
【化１】
0004836961.tif 000002
【００２１】  本発明のＡＰ−１の発現抑制剤は、前述のように、カマメロサイドを含んでいればよく、その構成や形態は制限されない。すなわち、本発明のＡＰ−１の発現抑制剤は、前述のような、カマメロサイド単独、ローマカミツレまたはジャーマンカモミールの抽出物単独、ローマカミツレ抽出物とジャーマンカモミール抽出物の混合物、ローマカミツレまたはジャーマンカモミールの粉砕物単独、ローマカミツレ粉砕物とジャーマンカモミール粉砕物との混合物、または、これらの混合物から構成されてもよいし、さらに他の成分を含んでもよい。前記その他の成分は、制限されず、本発明の用途等により適宜決定でき、例えば、後述する各種の成分や各種添加剤があげられる。【００２２】  本発明において、前記ローマカミツレまたはジャーマンカモミールの抽出物は、制限されず、例えば、後述するように、水抽出物、溶剤抽出物等があげられる。前記溶剤抽出物としては、例えば、アルコール抽出物が好ましい。前記アルコール抽出物としては、例えば、イソプロピルアルコール抽出物、エタノール抽出物、メタノール抽出物等があげられる。これらの中でも、エタノール抽出物が好ましい。【００２３】  本発明の発現抑制剤におけるカマメロサイドの含有量は、制限されず、例えば、本発明の用途によっても適宜決定できる。具体例としては、前記発現抑制剤において、カマメロサイドの含有量が、乾燥重量に換算して、例えば、０．００１〜９０重量％であり、特に０．１〜９０重量％となるように配合することが好ましい。本発明の発現抑制剤を、例えば、錠剤やカプセル形状にする場合、１錠または１カプセルあたり、例えば、０．１〜９０重量％配合することができる。このような形態の本発明の発現抑制剤は、例えば、後述する医薬品やサプリメント等として製品化できる。また、本発明の発現抑制剤を、例えば、液体状にする場合、有効成分であるカマメロサイドの含有量が、例えば、濃度０．０１〜１重量％となるように液体に溶解し、適宜、添加剤を加えて、瓶容器（例えば、１００ｍＬ容量）に詰めることができる。前記液体としては、例えば、水やアルコール等があげられ、前記添加剤としては、例えば、香料、甘味料、保存料等があげられる。また、容器は、内容物の変性防止のため、例えば、褐色瓶であることが好ましい。このような形態の本発明の発現抑制剤は、例えば、健康飲食品、特定保健用食品、栄養補助食品等として製品化できる。カマメロサイドの摂取量や投与量は、制限されないが、例えば、成人１日あたり、０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇが好ましく、１日あたり０．１〜１００ｍｇ／ｋｇがより好ましい。また、前記カマメロサイドの投与または摂取は、例えば、１日１回でもよいし、１日に数回に分けて行ってもよい。【００２４】  また、本発明の発現抑制剤を、例えば、塗り薬等の皮膚外用剤として使用する場合は、例えば、クリーム、ジェル、軟膏、パップ等に、カマメロサイドを、０．００１〜１０重量％となるように配合することが好ましく、０．１〜１重量％がより好ましい。また、本発明の発現抑制剤を、例えば、化粧品等の皮膚外用剤として使用する場合は、化粧水、乳液、クリーム、パウダー等に、カマメロサイドを０．００１〜１０重量％と���るように配合することが好ましく、０．１〜１重量％がより好ましい。【００２５】  本発明において、前記ローマカミツレまたはジャーマンカモミールの抽出物を調製するための原料、すなわち、ローマカミツレまたはジャーマンカモミールの各種部位は、制限されない。前記原料としては、例えば、ローマカミツレおよびジャーマンカモミールの少なくとも一方の、全体（全草）、花、茎、葉、枝、枝葉、根茎、根皮、根、種子等があげられる。これらの中でも、全草および花が好ましい。また、乾燥ハーブまたは生薬として入手可能な場合、それを利用しても良い。【００２６】  前記ローマカミツレまたはジャーマンカモミールの抽出物は、例えば、前述の原料（ローマカミツレまたはジャーマンカモミールの各種部位）に溶媒を加えて、直接抽出することで得られる。また、この他にも、例えば、例えば、前記原料に圧搾処理を施すことにより得られる圧搾液もあげられる。さらに、前記圧搾処理によって得られる圧搾液または残渣に、溶媒を加えて抽出することにより得られるもの等も利用できる。【００２７】  前記カマメロサイドの抽出に使用する抽出溶媒としては、制限されず、例えば、供する製品の使用目的、種類、あるいは、後に行う加工処理等を考慮した上で適宜選択できる。前記抽出溶媒としては、例えば、水性溶媒や有機溶媒、これらの混合液等が使用できる。具体例としては、例えば、水；メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブタノール等の低級アルコール若しくは含水低級アルコール；プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，２−ブチレングリコール、１，４−ブチレングリコール、１，５−ペンタンジオール、１，２−ペンタンジオール、１，３−ペンタンジオール、１，４−ペンタンジオール、１，３，５−ペンタントリオール、グリセリン、ポリエチレングリコール（分子量１００〜１０万）等の多価アルコールあるいは含水多価アルコール；アセトン、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジメチルエーテル、エチルメチルエーテル、ジオキサン、アセトニトリル、キシレン、ベンゼン、クロロホルム、四塩化炭素、フェノール、トルエン等の各種有機溶媒があげられる。この他にも、例えば、適宜規定度を調製した酸やアルカリがあげられる。前記酸としては、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、酢酸等が使用でき、前記アルカリとしては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、アンモニア等が使用できる。これらの溶媒は、例えば、いずれか一種類を使用してもよいし、二種類以上を混合して使用してもよい。また、本発明の発現抑制剤の用途に応じて、例えば、水等の水性溶媒のみを使用してもよい。また、抽出処理後に除去し易い溶媒（例えば、揮発性の高い溶媒等）を用いて抽出を行い、溶媒を除去した後、前記水性溶媒に溶解させるという方法でもよい。また、適宜、搾取抽出を行ってもよい。【００２８】  前記抽出方法は、制限されず、例えば、使用する溶媒の温度、原料に対する溶媒の重量比率等に応じて、適宜決定できる。また、抽出時間も、制限されず、例えば、使用する原料の種類や使用する溶媒の種類、それらの組合せ等に応じて、任意に設定できる��溶媒の温度は、例えば、−４℃から１００℃の範囲で任意に設定できるが、原料中に含まれる成分の抽出率と安定性の点から、１０〜８０℃付近が好ましい。また、原料（Ａ）に対する溶媒（Ｂ）の重量比率（Ａ：Ｂ）も、例えば、４：１〜１：５０の範囲内で任意に設定でき、特に、１：１〜１：２０の範囲が好ましい。【００２９】  本発明において、前記ローマカミツレ抽出物またはジャーマンカモミール抽出物は、例えば、前述のようにして抽出を行った後、さらに、適宜、精製処理を施してもよい。精製処理としては、例えば、酸（例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、有機酸）やアルカリ（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、アンモニア等）の添加による分解；微生物による発酵または代謝変換；イオン交換樹脂や活性炭、ケイ藻土等による成分吸着；種々の分離モード（例えば、イオン交換、親水性吸着、疎水性吸着、サイズ排除、配位子交換、アフィニティー等）を有するクロマトグラフィーを用いた分画；濾紙やメンブランフィルター、限外濾過膜等を用いた濾過；加圧または減圧；加温または冷却；乾燥；ｐＨ調整；脱臭、脱色；長時間の静置保管等が例示できる。これらの処理は、いずれか一つでもよいし、二種類以上を任意に組み合わせて処理することも可能である。【００３０】  本発明において、前記ローマカミツレ抽出物またはジャーマンカモミール抽出物の形態は、制限されず、例えば、液状、固形状、粉末状、ペースト状、ゲル状等があげられる。【００３１】  本発明のＡＰ−１の発現抑制剤の剤型は、制限されず、例えば、使用目的に応じて、任意に設定できる。具体例として、例えば、アンプル状、カプセル状、粉末状、顆粒状、丸剤、錠剤状、固形状、液状、ゲル状、気泡状、乳液状、クリーム状、軟膏状、シート状、ムース状、粉末分散状、多層状、エアゾール状等があげられる。【００３２】  つぎに、本発明のＡＰ−１の発現抑制剤は、例えば、医薬品、医薬部外品、その他の製品に適用できる。前記製品は、特に限定されず、例えば、サプリメント、食品、飲料、食品添加剤、化粧品原料および化粧品等がある。【００３３】  本発明の医薬品は、核内転写因子ＡＰ−１が関与する疾患の予防もしくは治療または創傷の治癒のための医薬品であって、前記本発明のＡＰ−１の発現抑制剤を含む。前記疾患としては、例えば、癌、癌転移、動脈硬化、高血圧、糖尿病、皮膚病、悪性過剰増殖性疾患、新内膜過剰増殖性疾患、非悪性過剰増殖性疾患、自己免疫疾患、免疫性疾患、関節炎、喘息、アレルギー、慢性炎症疾患、脂質代謝輸送関連疾患、ドライアイ症候群、神経変性疾患、アルツハイマー性疾患およびパーキンソン病からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記皮膚病は、例えば、アクネ、ダリエー病、乾癬、魚鱗癬、湿疹、日光皮膚炎（Ｓｕｎｂｕｒｎ）およびアトピー性皮膚炎からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記悪性過剰増殖性疾患は、例えば、上皮癌、乳癌、前立腺癌、頭頚部癌および骨髄性白血病からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記新内膜過剰増殖性疾患は、例えば、アテローム性動脈硬化症および再狭窄症の少なくとも一つの疾患を含む。前記非悪性過剰増殖性疾患は、例えば、���宮内膜過形成、良性前立腺肥大および増殖性硝子体網膜症からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記自己免疫疾患は、例えば、慢性関節リウマチを含む。前記免疫疾患は、例えば、紅斑性狼瘡を含む。前記慢性炎症疾患は、例えば、肺繊維症を含む。前記脂質代謝輸送関連疾患は、例えば、高脂血症を含む。本発明の医薬品を投与することによって、これらの疾患の予防もしくは治療、創傷の治癒が可能である。本発明の医薬品を投与する対象は、制限されないが、例えば、ヒト、ヒトを除く哺乳類動物があげられる。【００３４】  本発明の医薬品は、前記本発明の発現抑制剤以外に、例えば、その他のＡＰ−１発現の抑制成分、薬学的に許容可能な添加物等を含んでいても良い。本発明の医薬品において、具体的な剤形は、例えば、錠剤、細粒剤（散剤を含む）、カプセル、液剤（シロップ剤を含む）等があげられる。これらの各剤形に応じて、それぞれ適した添加剤や基材等を適宜使用し、日本薬局方等に記載された通常の方法に従って製造できる。また、投与経路は、制限されず、例えば、経口投与や非経口投与が挙げられる。前記非経口投与としては、例えば、口腔内投与、気道内投与、直腸内投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与等が挙げられる。前記非経口投与には、例えば、皮膚への塗布（経皮投与）も含まれる。【００３５】  本発明のサプリメントは、ＡＰ−１が関与する疾患の予防もしくは改善または創傷の治癒促進のためのサプリメントであって、前記本発明のＡＰ−１の発現抑制剤を含む。前記疾患としては、例えば、癌、癌転移、動脈硬化、高血圧、糖尿病、皮膚病、悪性過剰増殖性疾患、新内膜過剰増殖性疾患、非悪性過剰増殖性疾患、自己免疫疾患、免疫性疾患、関節炎、喘息、アレルギー、慢性炎症疾患、脂質代謝輸送関連疾患、ドライアイ症候群、神経変性疾患、アルツハイマー性疾患およびパーキンソン病からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記皮膚病は、例えば、アクネ、ダリエー病、乾癬、魚鱗癬、湿疹、日光皮膚炎（Ｓｕｎｂｕｒｎ）およびアトピー性皮膚炎からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記悪性過剰増殖性疾患は、例えば、上皮癌、乳癌、前立腺癌、頭頚部癌および骨髄性白血病からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記新内膜過剰増殖性疾患は、例えば、アテローム性動脈硬化症および再狭窄症の少なくとも一つの疾患を含む。前記非悪性過剰増殖性疾患は、例えば、子宮内膜過形成、良性前立腺肥大および増殖性硝子体網膜症からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記自己免疫疾患は、例えば、慢性関節リウマチを含む。前記免疫疾患は、例えば、紅斑性狼瘡を含む。前記慢性炎症疾患は、例えば、肺繊維症を含む。前記脂質代謝輸送関連疾患は、例えば、高脂血症を含む。本発明のサプリメントを投与することによって、これらの疾患の予防もしくは改善、創傷の治癒促進が可能である。本発明のサプリメントを投与する対象は、制限されないが、例えば、ヒト、ヒトを除く哺乳類動物があげられる。【００３６】  本発明のサプリメントは、前記本発明の発現抑制剤以外に、各種添加剤、その他のサプリメント等を含んでいても良い。前記その他の成分として���、例えば、その他のＡＰ−１発現抑制成分、ビタミンＣ等の各種ビタミン類、アミノ酸、オリゴ糖等があげられる。本発明のサプリメントの形態は、特に制限されず、例えば、錠剤、細粒剤（散剤を含む）、カプセル、液剤（シロップ剤を含む）等が挙げられる。【００３７】  本発明の食品は、ＡＰ−１が関与する疾患の予防もしくは改善または創傷の治癒促進のための食品であって、前記本発明のＡＰ−１の発現抑制剤を含む。前記疾患は、例えば、癌、癌転移、動脈硬化、高血圧、糖尿病、皮膚病、悪性過剰増殖性疾患、新内膜過剰増殖性疾患、非悪性過剰増殖性疾患、自己免疫疾患、免疫性疾患、関節炎、喘息、アレルギー、慢性炎症疾患、脂質代謝輸送関連疾患、ドライアイ症候群、神経変性疾患、アルツハイマー性疾患およびパーキンソン病からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記皮膚病は、例えば、アクネ、ダリエー病、乾癬、魚鱗癬、湿疹、日光皮膚炎（Ｓｕｎｂｕｒｎ）およびアトピー性皮膚炎からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記悪性過剰増殖性疾患は、例えば、上皮癌、乳癌、前立腺癌、頭頚部癌および骨髄性白血病からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記新内膜過剰増殖性疾患は、例えば、アテローム性動脈硬化症および再狭窄症の少なくとも一つの疾患を含む。前記非悪性過剰増殖性疾患は、例えば、子宮内膜過形成、良性前立腺肥大および増殖性硝子体網膜症からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記自己免疫疾患は、例えば、慢性関節リウマチを含む。前記免疫疾患は、例えば、紅斑性狼瘡を含む。前記慢性炎症疾患は、例えば、肺繊維症を含む。前記脂質代謝輸送関連疾患は、例えば、高脂血症を含む。本発明の食品を摂取することによって、これらの疾患の予防もしくは改善、創傷の治癒促進が可能である。本発明の食品は、制限されないが、例えば、ヒト、ヒトを除く哺乳類動物が摂取することが好ましい。【００３８】  本発明の食品は、前記本発明の発現抑制剤以外に、他の各種成分を含んでいてもよい。前記他の成分としては、例えば、その他のＡＰ−１発現抑制成分、各種添加剤、サプリメント等があげられる。本発明において、前記食品は、例えば、一般食品および機能性食品の双方を含む。本発明において、食品の形態は、制限されず、例えば、穀類、麺類、菓子類、スープ、肉、魚介類、海草、野菜、果物、豆類、各種加工品、乾燥食品、冷凍食品、燻製品、缶詰、瓶詰、レトルト食品等がある。【００３９】  本発明の飲料は、ＡＰ−１が関与する疾患の予防もしくは改善または創傷の治癒促進のための飲料であって、前記本発明のＡＰ−１の発現抑制剤を含む。前記疾患は、例えば、癌、癌転移、動脈硬化、高血圧、糖尿病、皮膚病、悪性過剰増殖性疾患、新内膜過剰増殖性疾患、非悪性過剰増殖性疾患、自己免疫疾患、免疫性疾患、関節炎、喘息、アレルギー、慢性炎症疾患、脂質代謝輸送関連疾患、ドライアイ症候群、神経変性疾患、アルツハイマー性疾患およびパーキンソン病からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記皮膚病は、例えば、アクネ、ダリエー病、乾癬、魚鱗癬、湿疹、日光皮膚炎（Ｓｕｎｂｕｒｎ）およびアトピー性皮膚炎からなる群から選択���れる少なくとも一つの疾患を含む。前記悪性過剰増殖性疾患は、例えば、上皮癌、乳癌、前立腺癌、頭頚部癌および骨髄性白血病からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記新内膜過剰増殖性疾患は、例えば、アテローム性動脈硬化症および再狭窄症の少なくとも一つの疾患を含む。前記非悪性過剰増殖性疾患は、例えば、子宮内膜過形成、良性前立腺肥大および増殖性硝子体網膜症からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記自己免疫疾患は、例えば、慢性関節リウマチを含む。前記免疫疾患は、例えば、紅斑性狼瘡を含む。前記慢性炎症疾患は、例えば、肺繊維症を含む。前記脂質代謝輸送関連疾患は、例えば、高脂血症を含む。本発明の飲料を摂取することによって、これらの疾患の予防もしくは改善、創傷の治癒促進が可能である。本発明の飲料は、制限されないが、例えば、ヒト、ヒトを除く哺乳類動物が摂取することが好ましい。【００４０】  本発明の飲料は、例えば、本発明の発現抑制剤以外に、他の各種成分を含んでいてもよい。前記他の成分としては、例えば、その他のＡＰ−１発現抑制成分、各種添加剤、サプリメント等があげられる。本発明において、前記飲料は、例えば、一般飲料および機能性飲料の双方を含む。本発明において、飲料の形態は、制限されず、例えば、ジュース等の清涼飲料水、炭酸飲料、コーヒー、紅茶、緑茶、ミネラルウオーター等がある。【００４１】  本発明の食品添加剤は、ＡＰ−１が関与する疾患の予防もしくは改善または創傷の治癒促進のための食品添加剤であって、前記本発明のＡＰ−１の発現抑制剤を含む。前記疾患は、例えば、癌、癌転移、動脈硬化、高血圧、糖尿病、皮膚病、悪性過剰増殖性疾患、新内膜過剰増殖性疾患、非悪性過剰増殖性疾患、自己免疫疾患、免疫性疾患、関節炎、喘息、アレルギー、慢性炎症疾患、脂質代謝輸送関連疾患、ドライアイ症候群、神経変性疾患、アルツハイマー性疾患およびパーキンソン病からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記皮膚病は、例えば、アクネ、ダリエー病、乾癬、魚鱗癬、湿疹、日光皮膚炎（Ｓｕｎｂｕｒｎ）およびアトピー性皮膚炎からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記悪性過剰増殖性疾患は、例えば、上皮癌、乳癌、前立腺癌、頭頚部癌および骨髄性白血病からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記新内膜過剰増殖性疾患は、例えば、アテローム性動脈硬化症および再狭窄症の少なくとも一つの疾患を含む。前記非悪性過剰増殖性疾患は、例えば、子宮内膜過形成、良性前立腺肥大および増殖性硝子体網膜症からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。前記自己免疫疾患は、例えば、慢性関節リウマチを含む。前記免疫疾患は、例えば、紅斑性狼瘡を含む。前記慢性炎症疾患は、例えば、肺繊維症を含む。前記脂質代謝輸送関連疾患は、例えば、高脂血症を含む。本発明の食品添加物を摂取することによって、これらの疾患の予防もしくは改善、創傷の治癒促進が可能である。本発明の食品添加物は、制限されないが、例えば、ヒト、ヒトを除く哺乳類動物が摂取することが好ましい。【００４２】  本発明の食品添加剤は、本発明の発現抑制剤以外に、例えば、その他の各種成分を含んでい���もよい。前記他の成分としては、例えば、その他のＡＰ−１発現抑制成分、各種添加剤、サプリメント等があげられる。本発明の食品添加剤の形態は、制限されず、例えば、液状、粉末状、フレーク状、顆粒状等があげられる。なお、本発明の食品添加剤は、食品以外に、飲料用の食品添加剤も含む。【００４３】  本発明の化粧品原料は、ＡＰ−１が関与する疾患の予防もしくは改善または創傷の治癒促進のための化粧品原料であって、前記本発明のＡＰ−１の発現抑制剤を含む。前記疾患としては、皮膚病があげられる。具体的には、例えば、アクネ、ダリエー病、乾癬、魚鱗癬、湿疹、日光皮膚炎（Ｓｕｎｂｕｒｎ）およびアトピー性皮膚炎からなる群から選択される少なくとも一つの疾患を含む。本発明の化粧品原料を適用することによって、前記疾患の予防または改善が可能となる。本発明の化粧品原料は、制限されないが、例えば、ヒト、ヒトを除く哺乳類動物に適用することが好ましい。【００４４】  本発明の化粧品原料は、本発明の発現抑制剤以外に、例えば、その他の各種成分を含んでいてもよい。前記他の成分としては、例えば、その他のＡＰ−１発現抑制成分、各種添加剤等があげられる。前記各種添加剤としては、例えば、各種油脂類、ロウ類、鉱物油、脂肪酸類、アルコール類、多価アルコール類、エステル類、金属セッケン類、ガム質、糖類、水溶性高分子類、界面活性剤、各種ビタミン類、各種アミノ酸類、植物若しくは動物由来添加剤、生薬、海洋成分、微生物培養代謝物、α−ヒドロキシ酸類、無機顔料、紫外線吸収剤、紫外線遮断剤、美白剤、チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン色素還元剤、メラニン色素分解剤、細胞賦活剤、収斂剤、活性酸素除去剤、抗酸化剤、過酸化脂質抑制剤、抗炎症剤、抗菌剤、殺菌剤、消毒薬、保湿剤、エラスターゼ活性阻害剤、頭髪用剤、抗アンドロゲン剤、抹消血管血流促進剤、刺激剤、代謝活性剤、抗脂漏剤、角質溶解剤、酸化剤、除毛剤、毛髪膨潤剤、染料、香料、色素、着色剤、甘味料、栄養強化剤、乳製品、ホルモン類、金属イオン封鎖剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、防腐剤、防カビ剤、清涼剤、安定化剤、乳化剤、血流促進剤、抗炎症剤、消炎剤、抗アレルギー剤、創傷治療剤、増泡剤、増粘剤、酵素、精製水、口腔用剤、消臭剤、脱臭剤、苦味料、調味料等があげられる。【００４５】  本発明の化粧品は、前記本発明の化粧品原料を含む。本発明の化粧品を適用すれば、前記皮膚病の予防若しくは改善または創傷の治癒促進が可能となる。本発明の化粧品は、例えば、ヒト、ヒトを除く哺乳類動物に適用することが好ましい。本発明の化粧品は、本発明の化粧品原料以外に、例えば、その他の添加剤を含んでいてもよい。前記添加剤としては、例えば、前述の化粧品原料であげたものが使用できる。本発明の化粧品の形態は、特に制限されず、例えば、化粧水，乳液，クリーム，軟膏，ローション，オイル，パック等の基礎化粧料；石鹸，クレンジングクリーム，クレンジングローション，洗顔料等の皮膚洗浄料；シャンプー，リンス，トリートメント等の洗髪用化粧料；ヘアクリーム，ヘアスプレー，ヘアトニック，ヘアジェル，ヘアローション，ヘアオイル，ヘアエッセンス，ヘアウォーター，ヘアワックス，ヘアフォーム等の整髪料；育��・養毛料；１剤式染毛剤や２剤式染毛剤，ヘアカラー等の染毛料；パーマネントウェーブ剤や縮毛矯正剤等のパーマ剤やウエーブ保持剤等の頭髪化粧料；ファンデーション，白粉，おしろい，口紅，頬紅，アイシャドウ，アイライナー，マスカラ，眉墨，まつ毛等のメークアップ化粧料；美爪料等の仕上げ用化粧料；香水類等の化粧料組成物があげられる。この他に、例えば、歯磨き類；含嗽剤等の口腔用組成物；外用薬用製剤；軟膏；パップ剤；浴用剤；薬用歯磨き，口中清涼剤等の薬用口腔用組成物；薬用化粧品；パーマネントウェーブ溶剤，染毛剤，育毛剤，脱毛防止剤，除毛剤等の毛髪溶剤；腋臭・体臭防止剤；衛生用品、衛生綿類、ウエットティシュ等の外用医薬部外品等があげられる。【００４６】  つぎに、本発明は、ＡＰ−１の発現を抑制する方法であって、前記カマメロサイドを投与する工程を含む。カマメロサイドの投与によって、細胞におけるＡＰ−１の発現を抑制することができる。カマメロサイドを投与する対象としては、制限されず、例えば、生体であってもよいし、生体から単離した細胞や培養細胞であってもよい。前記生体としては、制限されないが、例えば、ヒトまたはヒトを含む哺乳類動物等があげられる。投与する前記カマメロサイドの形態は、制限されず、例えば、前述のように、精製されたカマメロサイドでもよいし、ローマカミツレまたはジャーマンカモミールの全体または一部の抽出物や粉砕物等があげられる。本発明におけるカマメロサイドの形態の具体例としては、前述の本発明のＡＰ−１の発現抑制剤、医薬品、各種製品等と同様の形態があげられる。【００４７】  前記投与方法は、制限されず、例えば、生体の場合は、経口投与や非経口投与があげられる。前記非経口投与としては、例えば、口腔内投与、気道内投与、直腸内投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、皮膚への塗布（経皮投与）等があげられる。また、生体から単離した細胞の場合は、例えば、培地にカマメロサイドを添加して培養する方法があげられる。【００４８】  つぎに、本発明は、ＡＰ−１が関与する疾患を予防もしくは治療または創傷を治癒するための方法であって、カマメロサイドを投与する工程を含む。前記本発明のＡＰ−１の発現抑制剤の形態は、制限されず、前述と同様である。また、前記ＡＰ−１の発現抑制剤は、例えば、前述のような、炎症性改善剤、医薬品、サプリメント、食品、飲料、食品添加剤として、投与してもよい。【００４９】  前記投与方法は、制限されず、例えば、経口投与や非経口投与があげられる。前記非経口投与としては、例えば、口腔内投与、気道内投与、直腸内投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、皮膚への塗布（経皮投与）等があげられる。前記カマメロサイドを投与する対象は、制限されないが、例えば、ヒトまたはヒトを含む哺乳類動物があげられる。【００５０】  つぎに、本発明の実施例について説明する。なお、本発明は、下記の実施例に制限されない。
【実施例１】
【００５１】  本実施例は、カマメロサイドによる、遺伝子レベルでの核内転写因子ＡＰ−１の発現抑制を確認した例である。【００５２】（１）ローマカミツレ抽出液の調製
ローマカミツレ（Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ  Ｌｉｎｎ．）の乾燥ハーブ頭状花１ｋｇを、５０％（ｖ／ｖ）エタノール２０ｋｇに浸漬し、１週間抽出処理を行った。抽出処理後、吸引ろ過を行い、１２．６３ｋｇのローマカミツレ抽出液を得た。【００５３】（２）カマメロサイドの精製
カマメロサイドは以下の手順で精製した。前記ローマカミツレ抽出液を凍結乾燥した。この乾燥物（エキス固形分）１０．３１ｇを、ｐＨ４に調整した水（Ｈ２Ｏ）７５０ｍＬに懸濁した後、クロロホルムを用いて分配を行った。そして、クロロホルム層を除去した後、さらに、水層に酢酸エチルを添加して分配を行い、２．８０ｇの酢酸エチル層（酢酸エチル分配エキス）を得た。ｐＨ４の酢酸エチル分配エキスを、メタノール５０ｍＬで溶解し、その中にシリカゲルを添加した。これによって、前記シリカゲルに、酢酸エチル層に含まれる前記ローマカミツレエキスを吸着させた。そして、これを、加温槽上において、スパーテルにより撹拌した後、減圧濃縮することにより、完全に有機溶媒を除去した。得られた濃縮物を、シリカゲル含有濃縮画分という。【００５４】  このシリカゲル含有濃縮画分を、以下のカラムクロマトグラフィーによって１回目の精製を行った。前記シリカゲル含有濃縮画分を、クロロホルム／メタノール（体積比８／１）に懸濁し、ｐＨを４に調整した。そして、直径５ｃｍ、高さ２０ｃｍのクロマト管に、クロロホルム／メタノール（体積比７／１）で平衡化したシリカゲル約４００ｃｍ３を充填し、その上から、続いて、その上から、前述のシリカゲル含有濃縮画分の懸濁液を充填した。次いで、クロロホルム／メタノール（体積比７／１、５／１、３／１、１／１）およびメタノールを、この順序で、それぞれ約１２００ｍＬを用いて、溶出を行った。そして、クロロホルム／メタノール（体積比１／１）で溶出した画分を回収し、含まれる溶媒を減圧下で除去した。【００５５】  続いて、１回目のカラムクロマトグラフィーで回収した画分を、さらに、以下のカラムクロマトグラフィーによって２回目の精製を行った。濃縮した前記回収画分を、アセトニトリル／水／ＴＦＡ（体積比１０／９０／０．１）に溶解した。他方、直径３ｃｍのクロマト管に、メタノールで懸濁した担体（商品名Ｃｏｓｍｏｓｉｌ１４０  Ｃ１８−ＯＰＮ）約６０ｃｍ３を充填し、６００ｍＬのアセトニトリル／水／ＴＦＡ（体積比１０／９０／０．１）で平衡化した。このクロマト管に、前述のアセトニトリル／水／ＴＦＡで溶解した回収画分をアプライした。次いで、アセトニトリル／水／ＴＦＡ（体積比１０／９０／０．１、１８／８２／０．１、２５／７５／０．１）およびアセトニトリルを、この順序で、それぞれ１８０ｍＬを用いて、溶出を行った、そして、アセトニトリル／水／ＴＦＡ（体積比２５／７５／０．１）で溶出した画分を回収した。【００５６】  得られた回収画分を減圧濃縮した後、凍結乾燥した。前記凍結乾燥物をメタノールで再溶解した後、このメタノール溶液を、下記条件で分取ＨＰＬＣに供することによって、カマメロサイドを単離した。下記条件において、ＴＦＡは、トリフルオロ酢酸である。試料は、ローマカミツレエキス固形物１００ｍｇ／ｍＬ相当を含有するメタノール溶液とした。【００５７】 ＨＰＬＣ条件
カラム：商品名ＣＯＳＭＯＳＩＬ  ５Ｃ１８−ＭＳ
２５０×１０ｍｍ  Ｉ．Ｄ．
溶離液：アセトニトリル／水／ＴＦＡ（体積比２０／８０／０．１）
流速：４．７ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ  ａｔ  ２２０ｎｍ
カラム温度：４０℃
試料注入量：５０μＬ
分取時間：１４〜１６ｍｉｎ【００５８】  ＨＰＬＣのクロマトグラムを図１に示す。図１において、矢印で示すピークが、カマメロサイドのピークである。カマメロサイドの同定は、ＨＰＬＣにより単離した物質について核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）測定を行い、文献（Ｇａｂｒｉｅｌａ等、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４１：６４３−６４６，１９９６）の分析値との一致を確認することによって行った。前記ＮＭＲのデータを、前記文献のデータと併せて下記表１に示す。この結果、得られた精製カマメロサイドは、ローマカミツレ抽出液３００ｍｇに対し、３２ｍｇであった。【００５９】
【表１】
0004836961.tif 000003
【００６０】  （３）核内転写因子ＡＰ−１活性測定
ＨｅＬａ細胞をトリプシン処理して、４℃、１０００ｒｐｍ、３分間遠心分離を行った。回収したＨｅｌａ細胞を、２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度となるように３０ｍｍシャーレにまき、検定プレートとした。前記検定プレートを、１２時間、３７℃、５％ＣＯ２存在下におき、細胞を培養した後、形質転換を行った。前記形質転換は、形質転換用試薬（商品名Ｅｆｆｅｃｔｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ、ＱＩＡＧＥＮ社）を用いて、２種類のベクターを前記細胞に導入した。前記ベクターは、商品名ｐＡＰ−１（ＰＭＡ）−ＳＥＡＰ（ＣＬＯＮＴＥＣＨ社）（０．４μｇ）、および、商品名ｐＬｕｃ−ｃｏｎｔｒｏｌ（ＣＬＯＮＴＥＣＨ社）（０．０２μｇ）を使用した。そして、前記両ベクターを導入した細胞を、１６時間、３７℃、５％ＣＯ２存在下で培養した後、培養細胞を前記検定プレートからトリプシンを用いて剥離した。剥離した細胞を、９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに、０．２×１０４ｃｅｌｌずつ分注した。分注した細胞を２時間培養した後、終濃度（エキス固形分重量）が１０μｇ／ｍＬ、５．０μｇ／ｍＬ、２．５μｇ／ｍＬ、１．０μｇ／ｍＬとなるように、前記カマメロサイド溶液を添加し、さらに、ＴＰＡ（１２−Ｏ−ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ）を、最終濃度４μｇ／ｍＬとなるよう添加した。前記添加から２４時間後、培地を２５μＬずつ回収した。そして、回収した培地について、含まれる核内転写因子ＡＰ−１活性に基づくｓｅｃｒｅａｔｅｄ  ａｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＳＥＡＰ）活性を、キット（商品名Ｇｒｅａｔ  ＥｓｃＡＰｅ  ＳＥＡＰ  ｋｉｔ、ＣＬＯＮＴＥＣＫ社）を用いて評価した。また。遺伝子発現の補正は、Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性測定キット（Ｐｒｏｍｅｇａ社）により測定したＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性測定値を用いて行った。この結果を、図２のグラフに示す。なお、核内転写因子ＡＰ−１発現の抑制評価は、カマメロサイド添加濃度ごとのＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性を１００％とした場合のｓｅｃｒｅａｔｅｄ  ａｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＳＥＡＰ）活性の相対値％（阻害率％）で表した。【００６１】  図２のグラフに示すように、カマメロサイドを添加することにより、濃度依存的に核内転写因子ＡＰ−１の発現を抑制（阻害）することができた。また、カマメロサイドのＩＣ５０は、５μｇ／ｍＬであった。【００６２】  （４）ジャーマンカモミールにおけるカマメロサイド
ジャーマンカモミールの抽出液を調製し、この抽出液について、前述の条件でＨＰＬＣ分析を行い、カマメロサイドの存在を確認した。【００６３】  ジャーマンカモミール（Ｍａｔｒｉｃａｉａ ｒｅｃｕｔｉｔａ）の乾燥ハーブ頭状花２ｇを、８０℃の蒸留水２００ｍｌに浸漬し、１０分間抽出処理を行った。抽出処理後、吸引ろ過を行い、２００ｍｌのジャーマンカモミール抽出液を得た。この抽出液を下記条件でＨＰＬＣに供した。また、前述した、ローマカミツレからＨＰＬＣにより精製したカマメロサイド（３２μｇ／ｍｌ）についても、同条件でＨＰＬＣに供した。【００６４】 ＨＰＬＣ条件
カラム：商品名ＣＯＳＭＯＳＩＬ  ５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ
２５０×４．６ｍｍ  Ｉ．Ｄ．
溶離液：アセトニトリル／水／ＴＦＡ（体積比２０／７０／０．１）
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ  ａｔ  ３４０ｎｍ
カラム温度：４０℃
試料注入量：２０μＬ【００６５】  これらのＨＰＬＣのクロマトグラムを図５に示す。図５において、（ａ）がジャーマンカモミール抽出液のクロマトグラムであり、（ｂ）がローマカミツレ由来カマメロサイドのクロマトグラムである。同図（ａ）に示すように、ジャーマンカモミール抽出物は、同図（ｂ）に示すローマカミツレ由来カマメロサイドと同じリテンションタイムにピークの存在が確認できた。この結果から、ジャーマンカモミール抽出物には、カマメロサイドが含まれることが同定できた。このようにジャーマンカミツレにもカマメロサイドが含まれることから、ローマカミツレと同様に、ジャーマンカモミールを原料としても、本発明におけるカマメロサイドを調製でき、ＡＰ−１発現抑制効果が得られることは明らかである。【００６６】（参考例）
本参考例は、実施例１で得られたローマカミツレ抽出液およびカマメロサイドを用いて、ＮＦ−κＢの活性抑制を評価した例である。【００６７】  ＨｅＬａ細胞をトリプシン処理して、４℃、１０００ｒｐｍ、３分間遠心分離を行った。回収したＨｅｌａ細胞を、２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度となるように後、３０ｍｍシャーレにまき、検定プレートとした。前記検定プレートを、１２時間、３７℃、５％ＣＯ２存在下におき、細胞を培養した後、形質転換を行った。前記形質転換は、形質転換用試薬（商品名Ｅｆｆｅｃｔｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ、ＱＩＡＧＥＮ社）を用いて、２種類のベクターを前記細胞に導入した。前記ベクターは、商品名ｐＮＦ−κＢ−ＳＥＡＰ（ＣＬＯＮＴＥＣＨ社）（０．４μｇ）、および、商品名ｐＬｕｃ−ｃｏｎｔｒｏｌ（ＣＬＯＮＴＥＣＨ社）（０．０２μｇ）を使用した。そして、前記両ベクターを導入した細胞を、１６時間、３７℃、５％ＣＯ２存在下で培養した後、培養細胞を前記検定プレートからトリプシンを用いて剥離した。剥離した細胞を、９６ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅに、０．２×１０４ｃｅｌｌずつ分注した。分注した細胞を２時間培養した後、前記ローマカミツレ抽出液を、終濃度（エキス固形分重量）が１００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬとなるように添加し、、または、前記カマメロサイド溶液を、終濃度が１００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬとなるように添加し、さらに、ＴＮＦ（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ）−ａｌｐｈａを、最終濃度４０ｎｇ／ｍＬとなるよう添加した。前記添加から２４時間後、培地を２５μＬずつ回収した。そして、回収した培地について、含まれるＮＦ−κＢ活性に基づくｓｅｃｒｅａｔｅｄ  ａｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＳＥＡＰ）活性を、キット（商品名Ｇｒｅａｔ  ＥｓｃＡＰｅ  ＳＥＡＰ  ｋｉｔ、ＣＬＯＮＴＥＣＫ社）を用いて評価した。また、遺伝子発現の補正は、Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性測定キット（Ｐｒｏｍｅｇａ社）により測定したＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性測定値を用いて行った。この結果を、図３のグラフに示す。なお、ＮＦ−κＢ発現の抑制評価は、被験物質（ローマカミツレ抽出物またはカマメロサイド溶液）の添加濃度ごとのＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ活性を１００％とした場合のｓｅｃｒｅａｔｅｄ  ａｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＳＥＡＰ）活性の相対値％（阻害率％）で表した。【００６８】  図３のグラフに示すように、ローマカミツレ抽出液およびカマメロサイドの双方は、濃度依存的にＮＦ−κＢの発現を阻害した。また、ローマカミツレ抽出液のＩＣ５０は５０μｇ／ｍＬであり、カマメロサイドのＩＣ５０は、８０μｇ／ｍＬであった。
【産業上の利用可能性】
【００６９】  以上のように、本発明の核内転写因子ＡＰ−１の発現抑制剤は、カマメロサイドを含むことを特徴とし、安全性に優れ、長期間摂取しても問題がない。また、本発明の前記発現抑制剤は、核内転写因子ＡＰ−１の発現に対する優れた抑制活性を奏するものである。したがって、本発明の核内転写因子ＡＰ−１の発現抑制剤は、例えば、医薬品、医薬部外品、サプリメント、食品、飲料、食品添加剤等の様々なものに適用でき、その用途は制限されず広い。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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