(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造Ｉを有する化合物。
【化１】
0004669611.tif 000050
［式中、
Ｒ１０は、下記式ＩＩ：
【化２】
0004669611.tif 000051
（式中、ｎは０〜３であり；Ｒ（Ｉ）はＨまたはＲであり；Ｒ（ＩＩ）は、ＮＯ２、ＯＲまたはＲから独立に選択される１以上の存在していても良い置換基であり；Ｒは炭素原子数１〜１０の低級アルキル基であるか、炭素原子数１２以下のアラルキル基（その場合のアルキル基は１以上の炭素−炭素二重もしくは三重結合を有していても良く、その結合は共役系の一部を形成していても良い）、あるいは炭素原子数１２以下のアリール基であって、１以上のハロゲン、水酸基、アミノまたはニトロ基で置換されていても良く、官能基の一部を形成していたり官能基であることができる１以上のヘテロ原子を有していても良く；２個の置換基Ｒ（ＩＩ）が隣接する原子上にある場合、それらは一体となって−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−を形成することができ、ｍは１または２である。）、
下記式ＩＩＩ：
【化３】
0004669611.tif 000052
（式中、ｎは０〜３であり、Ｒ（Ｉ）はＨまたはＲであり、Ｒ（ＩＩＩ）はＮＯ２、ＯＲまたはＲから独立に選択される１以上の存在していても良い置換基であり；Ｒは上記で定義された通りであり；２個の置換基Ｒ（ＩＩＩ）が隣接する原子上にある場合、それらは一体となって−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−を形成することができ、ｍは１または２である。）、および
下記式ＸＩ：
【化４】
0004669611.tif 000053
（式中、Ｒは上記で定義された通りであり、ｎは０〜３である。）
からなる群から選択されるいずれか１つであり；
Ｒ２およびＲ３は独立に、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、＝Ｏ、＝ＣＨ−Ｒ、＝ＣＨ２、ＣＨ２−ＣＯ２Ｒ、ＣＨ２−ＣＯ２Ｈ、ＣＨ２−ＳＯ２Ｒ、Ｏ−ＳＯ２Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲおよびＣＮから選択され；Ｒ６、Ｒ７およびＲ９は独立に、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロゲン、アミノ、ニトロ、Ｍｅ３Ｓｎから選択され；あるいはＲ７とＲ８が一体となって−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−を形成しており、ｐは１または２であり；
ＸはＳ、ＯまたはＮＨであり；
Ｒ１１はＨまたはＲであり；
Ｒは上記で定義の通りであり；
Ｒ８はＨ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロゲン、アミノ、ニトロ、Ｍｅ３Ｓｎから選択され、Ｒは上記で定義した通りであるか、あるいは該化合物は二量体であって、各モノマーは同一でも異なっていても良く式Ｉのものであり、それらモノマーのＲ８基が一体となってそれらモノマーを連結する式−Ｔ−Ｒ’−Ｔ−を有する架橋を形成しており、Ｒ’は炭素原子数３〜１２を有するアルキレン鎖であり、その鎖は１以上のヘテロ原子および／または芳香環によって中断されていても良く、１以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有していても良く、各Ｔは独立にＯ、ＳまたはＮから選択され、
Ｃ１とＣ２の間またはＣ２とＣ３の間に二重結合があっても良い。］
【請求項２】
式ＸＩの基におけるＲが置換もしくは未置換フェニル基である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＸがＯである請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１１がＨである請求項１ないし３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ６およびＲ９がＨである請求項１ないし４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ７およびＲ８が独立に、Ｈ、ＯＨおよびＯＲから選択され、Ｒが請求項１で定義された通りである請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
前記化合物がＣ８二量体であり、Ｒ６およびＲ９がＨであり、Ｒ７が独立に、Ｈ、ＯＨおよびＯＲから選択され、Ｒが請求項１で定義された通りである請求項１ないし６のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物がＣ８二量体であり、Ｒ’が−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−であり、ｐが３〜１２である請求項１ないし７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
下記式Ｉａの化合物から、直接エーテル化、Ｒ１１ＳＨおよび触媒による処理又はＲ１１ＮＨおよび触媒による処理により、ＸＲ１１≠ＯＨである請求項１ないし８のいずれかに定義の式Ｉの化合物を製造する方法。
【化５】
0004669611.tif 000054
［式Ｉａの化合物の置換基は製造される式Ｉの化合物と同様である。］
【請求項１０】
下記式ＩＶａの化合物の酸化による請求項９に定義の式Ｉａの化合物の製造方法。
【化６】
0004669611.tif 000055
［式ＩＶａの化合物の置換基は製造される式Ｉａの化合物と同様である。］
【請求項１１】
前記酸化がスワン酸化である請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
下記式Ｖａの化合物
【化７】
0004669611.tif 000056
と下記式ＶＩの化合物
Ｙ−Ｒ１０                        （ＶＩ）
とを反応させる請求項１０に定義の式ＩＶａの化合物の製造方法［式ＶａおよびＶＩの化合物の置換基は製造される式ＩＶａの化合物の場合と同様であり、Ｙはハロゲン原子である。］。
【請求項１３】
前記式ＶＩの化合物が式Ｙ−Ａのハロホルメートであり、Ａが請求項１で定義の式ＩＩの基である請求項１０に記載の式ＩＶａの化合物の製造方法。
【請求項１４】
下記式ＶＩＩの化合物
【化８】
0004669611.tif 000057
と下記式ＶＩの化合物
Ｙ−Ｒ１０                        （ＶＩ）
とを反応させて下記式ＶＩＩＩの化合物
【化９】
0004669611.tif 000058
を形成し、該式ＶＩＩＩの化合物を酸塩化物の形成を介して下記式ＩＸａの化合物
【化１０】
0004669611.tif 000059
と反応させることによる、請求項１０に定義の式ＩＶａの化合物の製造方法［式ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩおよびＩＸａの化合物の置換基は製造される式Ｖａの化合物の場合と同様であり、Ｙはハロゲン原子である。］。
【請求項１５】
下記式ＩＶｂの化合物の脱保護による請求項９に定義の式Ｉａの化合物の製造方法。
【化１１】
0004669611.tif 000060
［式中、式ＩＶｂの化合物の置換基は製造される式Ｉａの化合物の場合と同様であり；ＱはＯまたはＳであり；Ｒ（ＩＶ）はＭｅまたはＥｔであるか、あるいは一体となって−（ＣＨ２）ｑ−を形成しており；ｑは２または３である。］
【請求項１６】
ＱがＳであり、Ｒ（ＩＶ）がＥｔであり、脱保護が水銀介在の脱保護である請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＱがＯであり、Ｒ（ＩＶ）がＥｔであり、脱保護がパラジウム介在の脱保護である請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
下記式Ｖｂの化合物
【化１２】
0004669611.tif 000061
と下記式ＶＩの化合物
Ｙ−Ｒ１０                        （ＶＩ）
とを反応させる請求項１５に定義の式ＩＶｂの化合物の製造方法［式ＶｂおよびＶＩの化合物の置換基は製造される式ＩＶｂの化合物の場合と同様であり、Ｙはハロゲン原子である。］。
【請求項１９】
前記式ＶＩの化合物が式Ｙ−Ａのハロホルメートであり、Ａが請求項１で定義の式ＩＩの基である請求項１８に記載の式ＩＶｂの化合物の製造方法。
【請求項２０】
下記式ＶＩＩの化合物
【化１３】
0004669611.tif 000062
と下記式ＶＩの化合物
Ｙ−Ｒ１０                        （ＶＩ）
とを反応させて下記式ＶＩＩＩの化合物
【化１４】
0004669611.tif 000063
を形成し、該式ＶＩＩＩの化合物を酸塩化物の形成を介して下記式ＩＸｂの化合物
【化１５】
0004669611.tif 000064
と反応させることによる、請求項１５に定義の式ＩＶｂの化合物の製造方法［式ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩおよびＩＸｂの化合物の置換基は製造される式Ｖｂの化合物の場合と同様であり、Ｙはハロゲン原子である。］。
【請求項２１】
請求項１ないし８のいずれかに定義の式Ｉの化合物のＲ１０の開裂による下記式Ｘの化合物の製造方法。
【化１６】
0004669611.tif 000065
［式Ｘの化合物の置換基は使用される化合物Ｉの置換基と同様である。］
【請求項２２】
抗体指向酵素プロドラッグ療法（ＡＤＥＰＴ）または遺伝子指向酵素プロドラッグ療法（ＧＤＥＰＴ）に使用するための医薬組成物であって、該療法における適切な酵素と組み合わせた請求項１ないし８のいずれかに定義の式Ｉの化合物を含む前記医薬組成物。
【請求項２３】
光感作療法（ＰＤＴ）における波長２５０〜５５０ｎｍの光と組み合わせて使用するための、請求項１に定義の式Ｉの化合物を含む医薬組成物。
【請求項２４】
天然酵素プロドラッグ療法（ＮＰＥＰＴ）において使用するための、請求項１に定義の式Ｉの化合物を含む医薬組成物。
【請求項２５】
請求項１ないし８のいずれかに定義の式Ｉの化合物および医薬的に許容される担体もしくは希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１ないし８のいずれかに定義の式Ｉの化合物を含む腫瘍疾患治療用医薬組成物。
【請求項２７】
請求項１ないし８のいずれかに定義の式Ｉの化合物を含む、細菌感染、ウィルス感染もしくは寄生虫感染の治療のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、ピロロベンゾジアゼピン類（ＰＢＤｓ）に関するものであり、詳細には抗体指向酵素プロドラッグ療法（ＡＤＥＰＴ）、遺伝子指向酵素プロドラッグ療法（ＧＤＥＰＴ）、光感作療法（ＰＤＴ）および天然酵素プロドラッグ療法（ＮＰＥＰＴ）用のプロドラッグとしての該化合物の使用に関するものである。
【０００２】
（背景技術）
ピロロベンゾジアゼピン類（ＰＢＤｓ）は、ＤＮＡの特定配列を識別し、それに結合する能力を有する。最も好ましい配列はＰｕＧＰｕ（プリン−グアニン−プリン）である。最初のＰＢＤ抗腫瘍抗生物質であるアントラマイシンが１９６５年に発見されている（Leimgruber et al., 1965, J. Am. Chem. Soc., 87, 5793-5795; Leimgruber et al., 1965 J. Am. Chem. Soc.., 87, 5791-5793）。それ以降、多くの天然ＰＢＤが報告されており、各種類縁体に対して１０を超える合成経路が開発されている（Thurston et al., 1994 Chem. Rev. 1994, 433-465）。類縁物にはアベイマイシン（abbeymycin; Hochlowski et al., 1987 J. Antibiotics, 40, 145-148）、チカマイシン（Konishi et al., 1984, J. Antibiotics, 37, 200-206）、ＤＣ−８１（日本特許５８−１８０４８７；Thurston et al., 1990, Chem. Brit., 26, 767-772; Bose et al., 1992 Tetrahedron, 48, 751-758）、マゼスラマイシン（mazethramycin、Kuminoto et al., 1980, J. Antibiotics, 33, 665-667）、ネオトラマイシンＡおよびＢ（Takeuchi et al., 1976 J, Antibiotics, 29, 93-96）、ポロトラマイシン（porothramycin、Tsunakawa et al., 1988 J, Antibiotics, 41, 1366-1373）、ポロトラカルシン（porothracarcin、Shimizu et al., J, Antibiotics, 29, 2492-2503; Langley and Thurston, 1987 J. Org. Chem., 52, 91-97）、シバノマイシン（sibanomycin）（ＤＣ−１０２）（Hara et al., 1988 J. Antibiotics, 41, 701-704; Itoh et al., 1988 J. Antibiotics, 41, 1281-1284）、シビロマイシン（Leber et al., 1988 J. Am. Chem. Soc., 110, 2992-2993）およびトママイシン（tomamycin、Arima et al., 1972 J. Antibiotics, 25, 437-444）などがある。ＰＢＤは以下のような一般構造を有する。
【０００３】
【化２１】
0004669611.tif 000002
【０００４】
これらは、芳香Ａ環およびピロロＣ環の両方における置換基の数、種類および位置とＣ環の飽和度において異なっている。Ｂ環には、ＤＮＡをアルキル化する上での親電子性中心であるＮ１０−Ｃ１１位にイミン（Ｎ＝Ｃ）、カルビノールアミン（ＮＨ−ＣＨ（ＯＨ））またはカルビノールアミンメチルエーテル（ＮＨ−ＣＨ（ＯＭｅ））のいずれかがある。公知の天然産物はいずれもキラルＣ１１ａ位に（Ｓ）−配置を有し、それによってＣ環からＡ環の方を見ると右手旋回性となっている。それによってそれら産物は、Ｂ型ＤＮＡの微小溝と同一螺旋性となる上で適切な三次元形状となっており、従って結合部位ですべりばめされる（Kohn, 1975 In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11; Hurley and Needahm-VanDevanter, 1986 Acc. Chem. Res., 19, 230-237）。微小溝で付加物を形成する能力によりそれらは、ＤＮＡプロセシングを妨害することができ、従って抗腫瘍薬として使用される。
【０００５】
プロドラッグの使用は、癌治療における非常に貴重な臨床的概念を代表するものである。例えば、モノクローナル抗体に連結した酵素の影響下でプロドラッグを抗腫瘍剤に変換して、それを腫瘍関連抗原に結合させることができる。そのようなプロドラッグとそのような酵素モノクローナル抗体結合体との組合せは、非常に強力な治療戦略を代表するものである。この癌治療へのアプローチは「抗体指向酵素／プロドラッグ療法」（ＡＤＥＰＴ）と称される場合が多く、ＷＯ８８／０７３７８に開示されている。
【０００６】
「ウィルス指向酵素プロドラッグ療法」（ＶＤＥＰＴ）と称されるさらに別の治療アプローチが、プロドラッグを用いて患者における腫瘍細胞を治療する方法として提案されている。プロドラッグを活性化することができる酵素をコードする遺伝子を有するウィルスベクターで腫瘍細胞を標的とする。その遺伝子は組織特異的プロモーター配列またはプロモーター配列によって転写的に調節することができる。ウィルスベクターは腫瘍細胞に入り、酵素を発現することで、プロドラッグを腫瘍細胞中で活性薬剤に変換する（Huber et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1991) 88, 8039）。別法として、遺伝子搬送のための非ウィルス的方法が用いられている。そのような方法には、リン酸カルシウム同時沈殿、微量注入、リポソーム、直接ＤＮＡ取り込み、受容体介在ＤＮＡ転移などがある。それらについてはモルガンらの報告（Morgan & French, Annu. Rev. Biochem., 1993, 62: 191）に総説がある。「ＧＤＥＰＴ」（遺伝子指向酵素プロドラッグ療法）という用語は、ウィルス搬送系および非ウィルス搬送系の療法を含めるのに使用される。
【０００７】
光感作療法（ＰＤＴ）は、ヒト身体における特定部位に所望の薬剤を搬送するためにプロドラッグを使用する別の方法を提供する。身体の内部領域への光導入分野における進歩により、広範囲の手術を行う必要なく臓器その他の領域に送り込むことができる。レーザー光の方向はかなりの精度で制御することができ、光直径は単一の細胞の径よりかなり小さくして、薬剤の望ましくない活性化による他の隣接組織への損傷が抑制されることから、この活性化プロセスは極めて部位特異的とすることができる。大半の有機分子の結合エネルギースペクトラムが２５０〜４２０ｋＪ／ｍｏｌにあることから、紫外線の高エネルギー（例：３４０ｋＪ／ｍｏｌに相当する３５０ｎｍ）は広範囲の化学結合を切断するには十分である。例えば、３５０ｎｍより長い波長で、ｏ−ニトロベンジルカーバメート、ＣＢＺおよび４，５−ジメトキシ−２−ニトロベンジルカーバメート型からアミノ酸、ペプチドおよび多糖類の光化学的脱保護が広く利用されている。
【０００８】
さらに別の種類のプロドラッグは、所望の作用部位で天然に存在する酵素によって保護基が脱離されるものである。これらの酵素には、ドパ脱炭酸酵素、Ｌ−γ−グルタミルトランスペプチダーゼならびに混合機能オキシダーゼおよびレダクターゼ（例：ＤＴ−ジアフラーゼ（diaphrase））などがある。これは、本願で「天然存在酵素−プロドラッグ療法（ＮＰＥＰＴ）」と称する方法である。特に興味深い一つの酵素は、毒性親電子剤の捕集剤としてのトリペプチド、グルタチオンの使用に基づいて主要な細胞防御機序の一部を構成するグルタチオントランスフェラーゼ（ＧＳＴ）である。ＧＳＴはグルタチオンとそれの標的親電子剤との間の反応で触媒として作用する。この防御機序の結果は、親電子剤治療薬の失活である。多くのヒト腫瘍細胞が、正常細胞と比較して高いＧＳＴレベルを示し、ＤＮＡアルキル化剤への抵抗性を有するＧＳＴの関連が文献によって示されている（Lewis et al., Carcinogenesis 1988, 9, 1283-1287; Kuzmich et al., Journal of Biochemistry 1992, 281, 219-224; and Tew et al., Glutathione-S-transferase and anti-cancer drug resistance, in Mechanism of Drug Resistance in Neoplastic Cells; Wooley, P. V., Tew , K. D., Eds.; Academic Press: Orlando, FL, 1987; pp.141-159）。癌細胞のこの固有の性質を利用する化学療法剤は、難治性癌の治療において非常に有用であることがわかると考えられる。
【０００９】
この高ＧＳＴレベルを利用するプロドラッグが製造されている（Satyam et al., Med. Chem., 1996, 39, 1736-1747）。それらは、２−スルホニルエチルオキシカルボニル連結基を介してホスホロジアミデートマスタードに連結されたグルタチオン分子を有する。別の種類のプロドラッグは、非常に関連性の高い２−フェニルスルホニルエチルオキシカルボニル（Ｐｓｅｃ）基を利用していた（Nicolaou et al., Science, 1992, 256, 1172-1178）。そのようなプロドラッグは、健常ヒト骨髄細胞と前分裂細胞およびＴ細胞白血病腫瘍系との間で選択性を示している。
【００１０】
（発明の開示）
本発明の第１の態様は下記構造Ｉを有する化合物を提供する。
【００１１】
【化２２】
0004669611.tif 000003
式中、
Ｒ１０は治療的に脱離可能な窒素保護基であり；
Ｒ２およびＲ３は独立に、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、＝Ｏ、＝ＣＨ−Ｒ、＝ＣＨ２、ＣＨ２−ＣＯ２Ｒ、ＣＨ２−ＣＯ２Ｈ、ＣＨ２−ＳＯ２Ｒ、Ｏ−ＳＯ２Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲおよびＣＮから選択され；Ｒ６、Ｒ７およびＲ９は独立に、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロゲン、アミノ、ニトロ、Ｍｅ３Ｓｎから選択され；あるいはＲ７とＲ８が一体となって−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−を形成しており、ｐは１または２であり；
ＸはＳ、ＯまたはＮＨであり；
Ｒ１１はＨまたはＲであり；
Ｒは炭素原子数１〜１０の低級アルキル基であるか、好ましくは炭素原子数１２以下のアラルキル基（すなわち、１以上のアリール置換基を有するアルキル基）（その場合のアルキル基は１以上の炭素−炭素二重もしくは三重結合を有していても良く、その結合は共役系の一部を形成していても良い）、あるいは好ましくは炭素原子数１２以下のアリール基であって、１以上のハロゲン、水酸基、アミノまたはニトロ基で置換されていても良く、官能基の一部を形成していたり官能基であることができる１以上のヘテロ原子を有していても良く；Ｃ１とＣ２の間またはＣ２とＣ３の間に二重結合があっても良く；
Ｒ８はＨ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ハロゲン、アミノ、ニトロ、Ｍｅ３Ｓｎから選択され、Ｒは上記で定義した通りであるか、あるいは該化合物は二量体であって、各モノマーは同一でも異なっていても良く式Ｉのものであり、それらモノマーのＲ８基が一体となってそれらモノマーを連結する式−Ｔ−Ｒ’−Ｔ−を有する架橋を形成しており、Ｒ’は炭素原子数３〜１２を有するアルキレン鎖であり、その鎖は１以上のヘテロ原子および／または芳香環（例：ベンゼンまたはピリジン）によって中断されていても良く、１以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有していても良く、各Ｔは独立にＯ、ＳまたはＮから選択される。
【００１２】
Ｒがアリール基であってヘテロ原子を含む場合、Ｒは複素環基である。Ｒがアルキル鎖であってヘテロ原子を含む場合、そのヘテロ原子は、例えば−Ｏ−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ３のようにアルキル鎖のいずれの箇所にあっても良いか、あるいはカルボニル、水酸基のような官能基の一部を形成したり官能基であることができる。
【００１３】
Ｒは好ましくは独立に、１以上のハロゲン、水酸基、アミノまたはニトロ基によって置換されていても良い炭素原子数１〜１０の低級アルキル基または好ましくは炭素原子数１２以下のアラルキル基または好ましくは炭素原子数１２以下のアリール基から選択される。さらに好ましくは、Ｒ基は独立に、１以上のハロゲン、水酸基、アミノまたはニトロ基によって置換されていても良い炭素原子数１〜１０の低級アルキル基から選択される。特に好ましくはＲ基は、炭素原子数１〜１０、好ましくは１〜６、より好ましくは１〜４である未置換の直鎖または分岐アルキル基、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチルである。
【００１４】
別形態としてＲ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は好ましくは独立に、
（ｉ）置換されていても良いフェニル基；
（ｉｉ）置換されていても良いエテニル基；
（ｉｉｉ）電子シンクに結合したエテニル基
という構造的特徴を有するＲ基から選択することができる。
【００１５】
「電子シンク」という用語は、化合物の他方の部分における電子密度を低下させることができる化合物に共有結合的に結合した部分を意味する。電子シンクの例としては、シアノ、カルボニルおよびエステル基などがある。
【００１６】
「治療的に脱離可能な窒素保護基」という用語は、１０−窒素を保護することができるが、in vivoでの治療条件下で脱離可能である、すなわちin vivoで起こるまたは起こるようにされ得る条件下で脱離可能であって、ＤＮＡと相互作用することができるＮ１０−Ｃ１１イミン基またはそれに相当するものを生じるような脱離によって医薬的に許容される基を意味する。保護基の脱離は、ＰＢＤ構造の残りの部分には影響を及ぼさないものでなければならない。
【００１７】
好適な脱離法には、例えば波長２５０〜４００または５５０ｎｍの光照射、環境ｐＨの変化または酵素作用による開裂などがあある。特に好適な酵素はニトロレダクターゼである。ただし他の好適な酵素には、ペニシリンＶ／Ｇアミダーゼ、β−ラクタマーゼ、ホスファターゼ、Ｌ−γ−グルタミルトランスペプチダーゼおよびα−ガラクトシダーゼなどがある。それらの酵素の一部の作用は文献に記載されている（Jungheim, L. N. and Shepherd, T. A., Design of Antitumor Prodrugs: Substrates for Antibody Targeted Enzymes, Am. Chem. Soc. Chem. Rev., 1994, 94: 6, 1553-1566）。別の特に好適な酵素は以下の説明するグルタチオナーレ（glutathionare）トランスフェラーゼである。
【００１８】
一つの可能な基は式ＩＩのＲ１０である。
【００１９】
【化２３】
0004669611.tif 000004
【００２０】
式中、ｎは０〜３であり；Ｒ（Ｉ）はＨまたはＲであり；Ｒ（ＩＩ）は、ＮＯ２、ＯＲまたはＲから独立に選択される１以上の存在していても良い置換基であり；Ｒは上記のいずれかの定義で定義された通りであり；２個の置換基Ｒ（ＩＩ）が隣接する原子上にある場合、それらは一体となって−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−を形成することができ、ｍは１または２である。Ｒ（ＩＩ）は好ましくはＮＯ２である。
【００２１】
治療的に脱離可能な基Ｒ１０がニトロレダクターゼに対して感受性であるものである場合、それは下記式ＩＩＩのものであることができる。
【００２２】
【化２４】
0004669611.tif 000005
【００２３】
式中、ｎは０〜３であり、Ｒ（Ｉ）はＨまたはＲであり、Ｒ（ＩＩＩ）はＮＯ２、ＯＲまたはＲから独立に選択される１以上の存在していても良い置換基であり；Ｒは上記の定義のいずれかで定義された通りであり；２個の置換基Ｒ（ＩＩＩ）が隣接する原子上にある場合、それらは一体となって−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−を形成することができ、ｍは１または２である。
【００２４】
さらに別の可能な治療的に脱離可能な窒素保護基Ｒ１０は下記式ＸＩのものである。
【００２５】
【化２５】
0004669611.tif 000006
【００２６】
式中、Ｒは上記の定義のいずれかで定義した通りであり、ｎは０〜３、好ましくは０である。この式において、Ｒは最も好ましくは置換もしくは未置換のフェニル基である。この保護基は、多くのヒト腫瘍細胞中に高レベルで存在するグルタチオントランスフェラーゼ（ＧＳＴ）（上記参照）の作用によって脱離させることができる。
【００２７】
式Ｉの化合物において好ましくは、ＸがＯであり、独立にＲ１１がＨである。
【００２８】
Ｃ環に二重結合がある場合、それはＣ２とＣ３の間である。
【００２９】
さらに、Ｒ６とＲ９がＨであることが好ましく、さらに好ましくはＲ７およびＲ８がＨ、ＯＨおよびＯＲから独立に選択される。さらに好ましくはＲ２およびＲ３はＨである。
【００３０】
式Ｉの化合物が二量体である場合、その二量体架橋は式−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−であることができ、ｐは１〜１２、好ましくは３〜９である。さらにＲ６とＲ９は好ましくはＨであり、Ｒ７は好ましくは独立にＨ、ＯＨおよびＯＲから選択される。
【００３１】
本発明の第２の態様は、ＸＲ１１＝ＯＨである式Ｉの化合物である相当する化合物Ｉａから、ＸＲ１１≠ＯＨである本発明の第１の態様に記載の式Ｉの化合物を製造する方法を提供する。ＸＲ１１がＯＲである生成物は、化合物Ｉａの直接エーテル化によって製造することができる。ＸがＳである生成物は、化合物ＩａをＲ１１ＳＨおよび触媒（一般的にはＡｌ２Ｏ３などのルイス酸）で処理することで製造することができる。ＸがＮＨである生成物は、化合物ＩａをアミンＲ１１ＮＨおよび触媒（一般的にはＡｌ２Ｏ３などのルイス酸）で処理することで製造することができる。
【００３２】
本発明の第３の態様は、下記式ＩＶａの化合物の酸化によって本発明の第２の態様に記載の式Ｉａの化合物を製造する方法を提供する。
【００３３】
【化２６】
0004669611.tif 000007
【００３４】
式中、式ＩＶａの化合物の置換基は製造される式Ｉａの化合物と同様である（二量体化合物の製造の場合、−Ｔ−Ｒ’−Ｔ−によってＣ８を介して連結されたモノマーは式ＩＶａの両方である。同様のコメントは二量体合成の他の中間体にも当てはまる。）。好ましい酸化方法はスワン（Swern）酸化である。
【００３５】
本発明の第４の態様は、下記式Ｖａの化合物
【００３６】
【化２７】
0004669611.tif 000008
を下記式ＶＩの化合物
【００３７】
【化２８】
0004669611.tif 000009
と反応させることで、本発明の第３の態様に記載の式ＩＶａの化合物を製造する方法を提供する。これらの式中、式ＶａおよびＶＩの化合物の置換基は製造される式ＩＶaの化合物の場合と同様であり、Ｙはハロゲン原子である。
【００３８】
治療的に脱離可能な窒素保護基を式ＩＩのものとする場合、式ＶＩの化合物は下記式ＶＩａのハロホルメートであることが好ましい。
【００３９】
【化２９】
0004669611.tif 000010
式中、置換基は式ＩＩの基について定義した通りであり、Ｙはハロゲン原子である。
【００４０】
治療的に脱離可能な窒素基を式ＸＩのものとする場合、式ＶＩの化合物は下記式ＶＩｂのハロホルメートであることが好ましい。
【００４１】
【化３０】
0004669611.tif 000011
Ｙはハロゲン原子であり、Ｒおよびｎは式ＸＩについて定義した通りである。
【００４２】
本発明の第５の態様は、下記式ＶＩＩの化合物
【００４３】
【化３１】
0004669611.tif 000012
と下記式ＶＩの化合物
【００４４】
【化３２】
0004669611.tif 000013
を反応させて下記式ＶＩＩＩの化合物
【００４５】
【化３３】
0004669611.tif 000014
を形成し、次に式ＶＩＩＩの化合物と下記式ＩＸａの化合物
【００４６】
【化３４】
0004669611.tif 000015
とを反応させることによる（例：（ＣＯＣｌ）２によって）、本発明の第３の態様に記載の式ＩＶａの化合物の別途合成を提供する。これらの式中、式ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩおよびＩＸａにおける置換基は製造する式ＩＶａの化合物の場合と同様であり、Ｙはハロゲン原子である。
【００４７】
本発明の第６の態様は、下記式ＩＶｂの化合物の脱保護による本発明の第２の態様に記載の式Ｉａの化合物の製造方法を提供する。
【００４８】
【化３５】
0004669611.tif 000016
【００４９】
式中、式ＩＶｂの化合物の置換基は製造される式Ｉａの化合物と同様であり；ＱはＳまたはＯであり；Ｒ（ＩＶ）は独立にＭｅまたはＥｔから選択されるか、あるいは一体となって−（ＣＨ２）ｑ−を形成しており、ｑは２または３である（二量体化合物の製造については、−Ｔ−Ｒ’−Ｔ−によってＣ８を介して連結されたモノマーは式ＩＶｂの両方である。同様のコメントは二量体合成の他の中間体にも当てはまる。）。Ｑ＝Ｓの場合の好ましい脱保護法は水銀介在脱保護である。Ｑ＝Ｏの場合の脱保護は好ましくは、酸条件、例えばＴＦＡ、メタノールおよび水またはパラジウム触媒作用を用いることで行う。
【００５０】
本発明の第７の態様は、下記式Ｖｂの化合物
【００５１】
【化３６】
0004669611.tif 000017
と下記式ＶＩの化合物
【００５２】
【化３７】
0004669611.tif 000018
とを反応させることで、本発明の第６の態様に記載の式ＩＶｂの化合物を製造する方法を提供する。これらの式中、式ＶｂおよびＶＩの化合物の置換基は製造される式ＩＶｂの化合物の場合と同様であり、Ｙはハロゲン原子である。
【００５３】
治療的に脱離される窒素保護基を式ＩＩのものとする場合、式ＶＩの化合物は、下記式ＶＩａのハロホルメートであることが好ましい。
【００５４】
【化３８】
0004669611.tif 000019
式中、置換基は式ＩＩの基について定義された通りであり、Ｙはハロゲン原子である。
【００５５】
本発明の第８の態様は、下記式ＶＩＩの化合物
【００５６】
【化３９】
0004669611.tif 000020
と下記式ＶＩの化合物
【００５７】
【化４０】
0004669611.tif 000021
を反応させて下記式ＶＩＩＩの化合物
【００５８】
【化４１】
0004669611.tif 000022
を形成し、次に式ＶＩＩＩの化合物と下記式ＩＸｂの化合物
【００５９】
【化４２】
0004669611.tif 000023
を反応させる（例：（ＣＯＣｌ）２によって）ことによる、本発明の第２の態様に記載の式ＩＶｂの化合物の別途合成を提供する。式中、式ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩおよびＩＸｂの化合物における置換基は製造されるＩＶｂの化合物の場合と同様であり、Ｙはハロゲン原子である。
【００６０】
本発明の第９の態様は、本発明の第１の態様に記載の式Ｉの化合物の治療的に脱離可能な保護基Ｒ１０の開裂による下記式Ｘの化合物の製造方法を提供する。
【００６１】
【化４３】
0004669611.tif 000024
式中、式Ｘの化合物の置換基は使用される式Ｉの化合物の置換基と同様である。
【００６２】
本発明の第１０の態様は、ＡＤＥＰＴまたはＧＤＥＰＴ療法の方法で適切な酵素と併用して、治療的に脱離可能な窒素保護基（Ｒ１０）が酵素感受性である式Ｉの化合物の使用を提供する。酵素感受性基がニトロレダクターゼ感受性である場合、ＡＤＥＰＴおよびＧＤＥＰＴ療法の方法で、式Ｉの化合物をニトロレダクターゼ酵素（例：大腸菌から単離されるもの）と併用することができる。
【００６３】
本発明の第１１の態様は、ＰＤＴの方法で波長２５０〜４００または５５０ｎｍの光との併用での、治療的に脱離可能な窒素保護基（Ｒ１０）が光感受性である式Ｉの化合物の使用を提供する。
【００６４】
本発明の第１２の態様は、治療を受ける患者における特異的局在部位で自然に生じる条件によって治療的に脱離可能な窒素保護基（Ｒ１０）が感受性である式Ｉの化合物の使用を提供する。式Ｉの好適な化合物は、低酸素腫瘍細胞を治療するのに使用する場合にニトロレダクターゼ酵素に対して感受性であるもの、あるいはグルタチオントランスフェラーゼなどの特異的局在部位で自然に生じる酵素に対して感受性のものであることができる。
【００６５】
本発明の第１０または第１１または第１２の態様で治療的に脱離可能な窒素保護基の開裂によって生じる薬剤は、毒性の局所的上昇が患者にとって有益である癌その他の部位特異的疾患の治療に用いることができる。治療可能な癌は、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、乳癌および腸ＣＮＳ、メラノーマなどの固形癌ならびに白血病である。そのような薬剤は、宿主にとって自然ではない感染の部位で産生される独特の酵素を利用することで、あるいは宿主において自然に生じる酵素の量増加を利用することで、細菌感染、ウィルス感染または寄生虫感染の治療に好適なものともなり得る。
【００６６】
本発明の第１３の態様は、本発明の第１の態様に記載の式Ｉの化合物を含む医薬組成物である。本発明によるおよび本発明による使用での医薬組成物は、有効成分すなわち式Ｉの化合物に加えて、医薬的に許容される賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤その他の当業者には公知の材料を含むことができる。担体その他の材料の詳細な性質は投与経路によって決まり、その投与経路には経口あるいは皮膚、皮下もしくは静注などの注射などがあり得る。
【００６７】
経口投与用の医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉剤または液剤の形態であることができる。錠剤は固体担体または補助剤を含むことができる。液体医薬組成物は、水、石油、動物性もしくは植物性油、鉱油もしくは合成油を含む。生理食塩水、デキストロースその他の多糖類溶液あるいはエチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコール類を含むことができる。カプセルにはゼラチンなどの固体担体を含ませることができる。
【００６８】
静脈注射、皮膚注射または皮下注射あるいは患部での注射の場合、有効成分は、発熱物質を含まず好適なｐＨ、等張性および安定性を有する非経口的に許容される水溶液の形とする。当業者であれば、例えば塩化ナトリウム注射液、リンゲル液または乳酸リンゲル注射液などの等張性媒体を用いて好適な溶液を調製することができる。保存剤、安定剤、緩衝剤、酸化防止剤および／またはその他の添加剤も必要に応じて含有させることができる。
【００６９】
本発明の第１４の態様は、本発明の第１の態様に記載の式Ｉの化合物を用いた、毒性の局所的上昇が患者にとって有益である腫瘍疾患その他の部位特異的疾患の治療用の医薬品製造を提供する。式Ｉの化合物は、医薬的に許容される担体または希釈剤とともに提供することができる。医薬品の調製は、本発明の第１３の態様に関して記載されている。
【００７０】
（発明を実施するための最良の形態）
以下、本発明の態様について添付の図面を参照しながらさらに詳細に説明する。
【００７１】
図１は本発明による合成図式である。
【００７２】
図２ａおよび２ｂは本発明による二量体の合成図式である。
【００７３】
図３は、本発明で使用される別途環化を示す合成図式である。
【００７４】
図４は、ＳＷ１１１６細胞およびＬＳ１７４Ｔ細胞におけるニトロレダクターゼ／ＮＡＤＨによる活性化前後での、プロドラッグ化合物７（実施例１参照）における細胞毒性結果を示すグラフである。
【００７５】
図５は、３時間の期間にわたるＵＶＡ（３６５ｎｍ）露光によって開裂した化合物１１（実施例３参照）のパーセントを示すグラフである。
【００７６】
図６は、照射時間を変動させた場合における、当初薬剤濃度１ｍＭでの、ＤＭＦ中のヒト慢性骨髄性白血病Ｋ５６２細胞に対するベンジルＤＣ−８１および化合物１１のin vitro細胞毒性（ＩＣ５０；μＭ）を示すグラフである。
【００７７】
図７は、照射時間を変動させた場合における、当初薬剤濃度１０ｍＭでの、ＤＭＦ中のヒト慢性骨髄性白血病Ｋ５６２細胞に対するベンジルＤＣ−８１および化合物１１のin vitro細胞毒性（ＩＣ５０；μＭ）を示すグラフである。
【００７８】
図８は、照射時間を変動させた場合における、当初薬剤濃度１ｍＭでの、メタノール中のヒト慢性骨髄性白血病Ｋ５６２細胞に対するベンジルＤＣ−８１および化合物１１のin vitro細胞毒性（ＩＣ５０；μＭ）を示すグラフである。
【００７９】
図９は、照射時間を変動させた場合における、当初薬剤濃度１ｍＭでの、メタノール中のヒト慢性骨髄性白血病Ｋ５６２細胞に対するＤＳＢ−１２０および化合物３２のin vitro細胞毒性（ＩＣ５０；μＭ）を示すグラフである。
【００８０】
好ましい合成戦略
式Ｉの化合物に対する好ましい経路における主要な段階は、１１位でのアルデヒド形成と１０位窒素によるそれへの攻撃が関与する、環化によるＢ環の形成である。
【００８１】
【化４４】
0004669611.tif 000025
【００８２】
「保護アルデヒド」−ＣＰＱは、アセタールまたはチオアセタール（例：Ｐ＝Ｑ＝ＳＥｔまたはＯＭｅ）であることができ、それらは環状であって良く、その場合環化には脱保護が関与する。別法として、保護アルデヒドはアルコール、−ＣＨＯＨなどのアルデヒド前駆体であることができ、その場合反応には、例えばＴＰＡＰまたはＤＭＳＯによる酸化（スワン酸化）が関与する。
【００８３】
保護アルデヒド化合物は、相当する２−置換ピロリジンと２−ニトロ安息香酸とを縮合させることで得ることができる。
【００８４】
【化４５】
0004669611.tif 000026
【００８５】
次に、ニトロ基を還元して−ＮＨ２とし、クロロホルメートなどの好適な試薬と反応させて保護することで、式Ｉの化合物において治療的に脱離可能な窒素保護基Ｒ１０を得ることができる。
【００８６】
上記酸化−環化法が関与するプロセスを図１に示してある（別形態の環化については、図３を参照して後述する）。Ｒ１１が水素以外である場合、式Ｉの化合物はアルコールＩａの直接エーテル化によって製造することができる。Ｘ＝ＳであってＯではない場合、アルコールＩａまたはＯＲ誘導体をＨ２ＳおよびＡｌ２Ｏ３などの触媒で処理するか、あるいはＥｔＳＨなどのチオールを加えることで処理することができる。ＸがＮＨの場合、アルコールＩａの適切なアミンによる処理によって、所望の式Ｉの化合物が得られる。
【００８７】
アルコール（ＩＶａ）（プロ−１０−窒素がアミドカーバメートとして保護されている）のＡ４シーブス上での過ルテニウム酸テトラプロピルアンモニウム（ＴＰＡＰ）／Ｎ−メチルモルホリンＮ−オキサイド（ＮＭＯ）への曝露によって、自然Ｂ環閉環を伴う酸化が生じて所望の生成物が得られる。このＴＰＡＰ／ＮＭＯ酸化法は、少量反応において特に簡便であることが認められており、ＤＭＳＯに基づく酸化法、特にスワン酸化の使用は比較的大量の作業に優れていることがわかっている（例：＞１ｇ）。
【００８８】
未環化アルコール（ＩＶａ）は、中等度の温度（例：０℃）でピリジン（好ましくは２当量）などの塩基存在下に、溶液中での好ましくはクロロホルメートまたは酸塩化物である式ＶＩの窒素保護試薬のアミノアルコール（Ｖａ）への添加によって製造することができる。この条件下では、Ｏ−アシル化はほとんど認められないのが普通である。
【００８９】
重要なアミノアルコール（Ｖａ）は、分子の残りの部分に影響しない方法を選択することで、相当するニトロ化合物（ＸＩａ）の還元によって製造することができる。例えば還流メタノールなどの好適な溶媒中ＸＩａを塩化スズ（ＩＩ）で処理することで、スズ塩除去後に所望の生成物が高収率で得られる。
【００９０】
ＸＩａのヒドラジン／ラネーニッケルへの曝露（または触媒を用いた水素化）によってスズ塩の生成が回避され、Ｖａをさらに高収率で得ることができる。ただし、この方法は考えられるＣ環およびＡ環置換基の範囲との適合性が相対的に低い。例えば、Ｃ環に不飽和がある場合（環自体またはＲ２もしくはＲ３で）、この方法は適さない場合がある。
【００９１】
式ＸＩａのニトロ化合物は、例えばＮ２雰囲気下−２５℃でＫ２ＣＯ３存在下に、適切なｏ−ニトロベンゾイルクロライドを式ＩＸａの化合物とカップリングさせることで製造することができる。ｏ−ニトロベンゾイルクロライドは、式ＸＩＩのｏ−ニトロ安息香酸（その多くが市販されている）から合成され、いくつかの例の合成が報告されている（Althuis, T. H. and Hess, H-J, 1977, Synthesis and Identification of the Major Metabolites of Prazosin Formed in Dog and Rat, Journal of Medicinal Chemistry 20, 1: 146-266）。式ＩＸａの化合物は、例えばＬ−トランス−ヒドロキシプロリンから誘導されるケトンのオレフィン化によって容易に製造することができる。ケトン中間体は、ヘック反応、シュティル（Stille）反応およびスズキ反応などのパラジウム介在カップリング反応で使用されるエノールトリフレートへの変換によって利用することもできる。
【００９２】
二量体合成（図２）
ＰＢＤ二量体は、保護ＰＢＤモノマーの合成について開発された戦略を用いて合成することができる（図２ａ）。図２にはさらに、二量体連結が式−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−である合成経路も示してある。二量体形成の段階は通常、ビス（ニトロ酸）ＸＩＩ’を形成するように実施される（図２ｂ）。
【００９３】
ビス（ニトロ酸）ＸＩＩ’は、ビス（カルボン酸）をニトロ化（例：７０％硝酸を使用）することで得ることができる。これは、関係する安息香酸２当量を塩基性条件下で適切なジヨードアルカンでアルキル化することで合成することができる（経路２ａ）。多くの安息香酸が市販されており、他のものは従来法によって合成することができる。
【００９４】
ビス（ニトロ酸）の別途合成には、例えば過マンガン酸カリウムを用いるビス（ニトロアルデヒド）の酸化が関与する。その化合物は、例えば７０％ＨＮＯ３を用いたビス（アルデヒド）の直接ニトロ化によって得ることができる。最終的に、２当量のベンゾイックアルデヒドの適切なアルカンジオールによるミツノブエーテル化によってビス（アルデヒド）を得ることができる（経路２ｂ）。
【００９５】
別途環化（図３）
図１および２では、最終段階または最終前段階が酸化的環化である。チオアセタールカップリング脱保護を用いる別途法を図３に示してある（図では、それを式−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−の二量体連結を有する二量体に適用することが示してある）。水銀介在脱保護によって、所望の化合物（Ｉａ’）への環化が生じる。
【００９６】
このチオアセタール化合物は、図３に示した方法に従って製造することができる。チオアセタール保護Ｃ環［文献法によって製造；Langley, D. R. & Thurston, D. E., J. Organic Chemistry, 52, 91-97 (1987)］を、文献法を用いてビス（ニトロカルボン酸）核にカップリングさせる。得られるニトロ化合物は、チオアセタール基が存在するために水素化によって還元されないことから、塩化スズ（ＩＩ）法を用いてビス（アミン）を得る。次にそれを、例えばｐ−ニトロベンジルクロロホルメートなどのクロロホルメートもしくは酸塩化物との反応によってＮ−保護する。
【００９７】
チオアセタールカップリングに対する別途法は、アセタールカップリングの使用である。この方法は、チオアセタール基をアセタール基（例：−ＣＨ（ＯＭｅ）２）に置き換える以外、図３に示したものと同様である。酸またはパラジウム介在脱保護が、式ＩａまたはＩ’ａの所望の化合物への環化を生じる好ましい脱保護法である。
【００９８】
ＧＤＥＰＴ
ベクター系
一般に、ＧＤＥＰＴ療法で使用されるベクターは好適なＤＮＡまたはＲＮＡベクターとすることができる。
【００９９】
好適な非ウィルスベクターには、カチオン性リポソームおよびポリマーなどがある。好適なウィルスベクターには、レトロウィルスに基づいたものなどがある。そのようなベクターは当業界で広く入手可能である。フーバーらは（Huber et al., ibid）、肝癌細胞、乳房細胞、結腸細胞または皮膚細胞のトランスフォーメーションへの両栄養性レトロウィルスの使用を報告している。カルバーらも（Culver et al., Science (1992) 256; 1550-1552）、ＧＤＥＰＴでのレトロウィルスベクターの使用について記載している。そのようなベクターまたはそれに由来するベクターも使用可能である。他のレトロウィルスも、本発明での使用に好適なベクター製造に用いることができる。そのようなレトロウィルスにはラウス肉腫ウィルス（ＲＳＶ）などがある。
【０１００】
エングルハルトら（Englehardt et al., Nature Genetics (1993) 4; 27-34）は、細胞中への嚢胞性線維症膜横断伝導物（ＣＦＴＲ）の搬送におけるアデノウィルスに基づくベクターの使用について記載しており、そのようなアデノウィルスに基づくベクターも使用可能である。アデノウィルスプロモーターおよび他の制御配列を利用するベクターは、肺において細胞に本発明による系を搬送するのに使用することができ、従って肺腫瘍の治療に有用であると考えられる。
【０１０１】
モロニー（Molony）マウス白血病ウィルスに基づくベクターを含む他のベクター系が知られている（Ram, Z et al., Cancer Research (1993) 53,; 83-88; Dalton & Treisman, Cell (1992) 68; 597-612）。これらのベクターは、β−グロビン最小プロモーターの上流でクローニングされたマウス白血病ウィルス（ＭＬＶ）エンハンサーを含む。開始コドンＡＴＧまでのβ−グロビン５’未翻訳領域を、酵素の直接有効な翻訳に供給する。
【０１０２】
上記ベクターで用いることができる好適なプロモーターには、ＭＬＶ、ＣＭＶ、ＲＳＶおよびアデノウィルスプロモーター類などがある。好ましいアデノウィルスプロモーターは、アデノウィルス初期遺伝子プロモーターである。強力な哺乳動物プロモーターも好適である場合がある。そのようなプロモーターの例としては、ミズシマらの報告（Mizushima and Nagata (1990), Nucl. Acids Res. 18; 5322）を参照することで得ることができるＥＦ−１αプロモーターがある。実質的に同様の転写活性を保持するそのようなプロモーターの変種も使用可能である。
【０１０３】
他の好適なプロモーターには、組織特異的プロモーター類ならびに小分子、低酸素またはＸ線によって活性化したプロモーターなどがある。
【０１０４】
ニトロレダクターゼが式Ｉの化合物の活性化用の選択酵素である場合、好ましくはその酵素は、細菌ニトロレダクターゼなどの非哺乳動物ニトロレダクターゼである。ＷＯ９３／０８２８８に開示の大腸菌ニトロレダクターゼが特に好ましい。その酵素は、例えば酵素をクローニングし、その遺伝子配列を決定し、例えば部位指向性突然変異誘発による配列の切断、置換、欠失もしくは挿入などの方法によって遺伝子配列を変えるなどの標準的な組換えＤＮＡ法によって変えることができる。標準的な組換えＤＮＡ法の説明については、サムブロックらの著作を参照することができる（Sambrook et al., "Molecular Cloning" (1989), Cold Spring Harbor）。行う変更は、やはり式Ｉの好適な化合物におけるニトロ基を還元する能力を有する酵素を与えるが、例えば反応速度もしくは選択性という酵素の他の特性を変えるものであることができる。
【０１０５】
さらに、Ｎ末端および／またはＣ末端配列における小さい切断が、その酵素をコードする核酸配列が各種の他ベクター配列に連結しているベクターを生成する上で必要な操作の結果として生じる場合がある。
【０１０６】
ＧＤＥＰＴにおけるペニシリンＶ／Ｇアミダーゼおよびβ−ラクタマーゼ使用に関するデータについては、ユングハイムらの報告を参照する（Jungheim, L. N. and Shepherd, T. A., Design of Antitumore Prodrugs: Substrates for Antibody Targeted Enzymes, Am. Chem. Soc. Chem. Rev., 1994, Vol94, No.6, 1553-1566）。
【０１０７】
ＡＤＥＰＴ
ＡＤＥＰＴ系での適用では、腫瘍特異的マーカー指向性の抗体を、前記の方法に従って変えることができる関連する酵素に連結する。その抗体はモノクローナルまたはポリクローナルであることができる。本発明に関しては、別の意味で指定されていない限り、「抗体」という用語は腫瘍標的抗原に対する結合活性を保持する全抗体の断片を含むものである。そのような断片にはＦｖ、Ｆ（ａｂ’）およびＦ（ａｂ’）２断片、ならびに一本鎖抗体などがある。さらに、抗体およびそれの断片は、例えばＥＰ−Ａ−２３９４００に記載のようなヒト化抗体であることができる。
【０１０８】
抗体は、従来のハイブリドーマ法によって生成することができるか、あるいは変性抗体もしくは断片の場合には、例えば操作可能な形でプロモーターに連結した変性抗体もしくは断片をコードするＤＮＡ構築物の好適な宿主ベクターでの発現等の組換えＤＮＡ法によって生産することができる。好適な宿主細胞には細菌（例：大腸菌）、酵母、昆虫および哺乳動物細胞などがある。抗体をそのような組換え法によって生産する場合、酵素をコードする核酸配列（上記の方法に従って変性されていても良い）を抗体もしくはそれの断片をコードする構築物の配列の３’もしくは５’末端に連結することで、酵素を生産することができる。
【０１０９】
ＰＤＴ
ＰＤＴにおける活性化プロセスは、非常に部位特異的とすることができる。レーザー光の方向は高精度で制御することができ、光径は単一細胞の径よりはるかに小さい幅まで小さくすることができる。従って、それを非常に限定された領域に作用させて、隣接組織への損傷を低減することができる。
【０１１０】
大半の有機分子において結合開裂のためのエネルギースペクトラムが２５０〜４２０ｋＪ／ｍｏｌにあり、例えば３５０ｎｍは３４０ｋＪ／ｍｏｌに相当することから、紫外線は広範囲の化学結合を切断するのに十分である。例えば、３５０ｎｍより長い波長でのＣＢＺならびにｏ−ニトロベンジルおよび４，５−ジメトキシ−２−ニトロベンジルカーバメート型からのアミノ酸、ペプチドおよび多糖類の光化学的脱保護などの広範囲の光介在脱保護反応が示されている（Pillari, R. V. N., Photoremovable protecting groups in organic chemistry, Synthesis (1980), 1-26）、（Bayley, H., Gasparro, F. and Edelson, R., Photoactivatible drugs, TIPS (1987) 8, 138-143, (Star, W. M. , Light delivery and light dosimetry for photodynamic therapy, Laser in Medical Science (1990) 5, 107-113）。他方、非常に反応性が高く、従って細胞毒性の化学種も比較的低いエネルギー活性化で得られる。例えば分子状酸素の反応性励起状態である一重項状態は、それの基底三重項状態からわずか９０ｋＪ／ｍｏｌしか違わない。しかしながらそれによって、十分な濃度の毒性化学種が６００ｎｍより長い波長で吸収する増感剤によって形成される（Carruth, J. A. S., Clinical applications for photodynamic therapy, J Photochem Photobiol (1991) 9, 396-397）。
【０１１１】
このアプローチの主要な制限は、光自体の物理およびそれのヒト組織との相互作用によって生じる。光の組織貫通能は波長依存性であることが認められている。波長が長くなると貫通能力は高くなるが、光の散乱および反射によって制限される。生物組織では、例えば赤色光の散乱係数は吸収係数よりかなり大きい（Carruth, J. A. S., Clinical applications for photodynamic therapy, J Photochem Photobiol (1991) 9, 396-397）（Kennedy, J. C. and Pottier, R. H., Endogenous protoporphyrin IX, a clinical useful photosensitiser for photodynamic therapy, J. Photochem Photobiol (1992) 14, 275-292）。その結果、組織に進入する光子は吸収もしくは拡散する前に数回散乱される。これによって一定の領域に搬送させるエネルギー増加が期待されると考えられるが、内部反射によって組織−空気界面からの距離増加に伴うエネルギー流束の級数的低下が生じる。これらの制限は、比較的嵩高い腫瘍の治療では、あるいは複数の組織間光ファイバーの使用によってさらに深く貫通させる必要がある場合には部分的に克服されている。
【０１１２】
いくつかの種類の腫瘍がＰＤＴの可能な標的であることが確認されている。それには、頭部および頸部の腫瘍、気管支の癌、悪性脳腫瘍、膀胱の表在性腫瘍および血管疾患などがあり、これらはいずれも診療所において有望な応答を示している（Regula, J., Mac Roberts, A. J., Gorchein, A., Buonaccorsi, Thorpe, S. M., Spencer, G. M., Hartfield, A. R. W. and Bown, S. G., Photosensitisation and photodynamic therapy of oesophageal, duodenal and colorectal tumors using 5-aminoleavulic acid induced protoporphyrin IX-a pilot study, Gut (1995) 36, 67-75）。
【０１１３】
上記のＰＤＴ法は、治療的に脱離可能な窒素保護基が光感受性である場合には、適切な式Ｉの化合物と組み合わせて使用することができる。使用する好ましいＵＶ光波長は２５０〜４００または５５０ｎｍである。
【０１１４】
本発明の利用分野
本発明の化合物は、広範囲の利用分野についてin vitroまたはin vivoで使用することができる。例えば、細胞でのニトロレダクターゼ発現のための多くのベクター系が開発されている。そのような系をさらに開発するには（例：特定の細胞種に好適なプロモーターの開発）、ニトロレダクターゼによって活性化した場合に細胞を殺すことができる好適なプロドラッグ候補剤が必要である。ニトロレダクターゼ感受性である式Ｉのプロドラッグ化合物は、そのようなモデル系で使用可能である。
【０１１５】
そのモデル系は、in vitroモデル系あるいは例えばヌードマウスに移植されたヒト腫瘍細胞を有するin vivoの異種移植片モデル系であることができる。各種酵素に対して感受性である式Ｉの化合物を、適切に変化させた同様の系で使用することができる。
【０１１６】
酵素によって活性化することができない式Ｉの化合物は、各種腫瘍細胞試験群に対する他の好適な形の活性化を行ってin vitroで試験して、そのような腫瘍細胞に対する効力を求めることができる。広範囲の腫瘍細胞型に対する本発明の化合物の効力は、さらなる抗腫瘍化合物の開発における基準点として用いることができる。式Ｉの化合物はまた、別の抗癌化合物と組み合わせて試験して、例えば相乗的な組合せなどの可能な薬剤併用系を確認することもできる。
【０１１７】
式Ｉの化合物は、ヒトもしくは動物の身体の治療方法で用いることもできる。そのような治療には、腫瘍疾患患者における新生物細胞成長の治療方法であって、治療を必要とする患者に対して、ＡＤＥＰＴ、ＧＤＥＰＴもしくはＰＤＴ系の一部として式Ｉの化合物を投与する方法、あるいは式Ｉの化合物単独での治療などがあり、その場合の腫瘍疾患には、白血病ならびに卵巣、結腸、肺、腎臓、乳房、腸、ＣＮＳなどの固形腫瘍およびメラノーマなどがある。その治療はまた、毒性の局所的上昇が患者にとって有益である他の部位特異的疾患の治療であることもできる。
【０１１８】
腫瘍治療が関係する場合に治療には、患者に対する腫瘍の影響を軽減すべく医師が取る手段が含まれることは明らかであろう。そこで、腫瘍の完全寛解が望まれる目標であるが、有効な治療には腫瘍の部分的寛解の達成やそれの転移などの腫瘍成長速度の低下を行うことができる手段も含まれる。そのような手段は、寿命の延長および／または生活の質の向上ならびに疾患症状の軽減において有効であることができる。
【０１１９】
療法
ＡＤＥＰＴおよびＧＤＥＰＴの方法についてニトロレダクターゼに言及しながら説明する。ただし、前述の方法に対して適切な修正を加えて、前述のような他の酵素に切り換えることが可能である。
【０１２０】
ＰＤＴの基礎については前述してあるが、以下の物の投与に関するデータはこの種の療法にも当てはまる。そのデータはさらに、身体内で自然に生じる条件（例：低酸素、ＧＳＴレベル上昇−上記のＮＰＥＰＴの議論参照）によってプロドラッグが活性化される療法に関連するものでもある。
【０１２１】
ＡＤＥＰＴ療法
ＡＤＥＰＴにおける抗体／酵素結合体は同時に投与することができるが、臨床的実務においては、プロドラッグ以前に（例：７２時間まであるいは１週間前であっても）酵素／抗体結合体を投与して、腫瘍標的の領域において局在する機会を酵素／抗体結合体に与えることが好ましいことが認められる場合が多い。このように操作することで、プロドラッグを投与する際に、プロドラッグの細胞毒性薬への変換が、酵素／薬剤結合体が局在する領域、すなわち標的腫瘍の領域に制限される傾向がある。このようにして、本発明のプロドラッグに対するニトロレダクターゼの作用によって生じる化合物の早期放出が低減される。
【０１２２】
ＡＤＥＰＴでは、酵素／薬剤結合体の局在程度（局在結合体の遊離して循環している活性結合体に対する比に関して）は、ＷＯ８９／１０１４０に記載のクリアランス系および／または失活系を用いてさらに高めることができる。それには、通常は結合体投与後でプロドラッグ投与前に、結合体の一部に結合して血液中の酵素を失活させたりないしは血液からの結合体のクリアランスを加速することができる成分（「第２成分」）の投与が関与する。そのような成分は、酵素を失活させることができる系の酵素成分に対する抗体が含まれ得る。
【０１２３】
第２成分は、デキストラン、リポソーム、アルブミン、マクログロブリンまたは血液型Ｏ型赤血球などの巨大分子に連結させて、第２成分が血管コンパートメントから出るのを制限することができる。さらに、あるいは別形態として、第２成分に十分な数の共有結合ガラクトース残基やラクトースもしくはマンノースなどの他の糖の残基を含有させて、それが血漿中の結合体には結合するが、肝臓中のガラクトースその他の糖に対する受容体によって血漿から結合体とともに除去されるようにすることができる。第２成分は、それがいかなる感知可能な程度であっても、それがプロドラッグ投与以前および投与中に局在結合体を失活させるような腫瘍の血管外空間に進入しないように使用および投与するよう設計しなければならない。
【０１２４】
ＡＤＥＰＴ系では、プロドラッグおよび結合体の用量は最終的には、患者の年齢、体重および状態などの因子を考慮する医師の裁量に委ねられる。プロドラッグおよび結合体の好適な用量は、バグショウらの報告（Bagshawe et al., Antibody, Immunoconjugates, and Radiopharmaceuticals (1991), 4, 915-922）に記載されている。結合体の好適な用量は５００〜２０００００酵素単位／ｍ２（例：２００００酵素単位／ｍ２）であり、プロドラッグの好適な用量は患者当たり１日に約０．１〜２００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１０〜約１００ｍｇ／ｋｇである。
【０１２５】
所望の治療部位での結合体濃度が最大となるようにするために通常は、少なくとも４時間だけ２つの成分の投与間に間隔を設けることが望ましい。正確な投与法は、標的となる腫瘍の性質およびプロドラッグの性質などの各種要素によって影響されるが、通常は４８時間以内に所望の治療部位で十分な結合体濃度が得られる。
【０１２６】
ニトロレダクターゼとともに使用する場合のＡＤＥＰＴ系の好ましくは、酵素にとって好適な補助因子を有する。好ましい補助因子には、ニコチン酸またはニコチンアミドのリボシドまたはリボチドなどがあり得る。
【０１２７】
抗体／酵素結合体は、ＡＤＥＰＴ療法で通常用いられる好適な経路によって投与することができる。それには、以下に記載のものと同様の方法および製剤での抗体の非経口投与などがある。
【０１２８】
ＧＤＥＰＴ療法
療法におけるベクターの使用に関しては、ベクターは通常、例えばラムらの報告（Ram et al.,supra）に記載のように、ウィルス粒子および腫瘍部位に搬送される粒子中に取り込まれている。ウィルス粒子には変更を加えて、抗体、それの断片（一本鎖を含む）または腫瘍指向リガンドを含ませて、腫瘍標的性を高めることができる。別法として、ベクターをリポソームに取り込ませることができる。リポソームは特定の腫瘍を標的とすることができる。それは、腫瘍指向性抗体をリポソームに結合させることで行うことができる。ウィルス粒子もリポソームに取り込ませることができる。その粒子は、医師の裁量で好適な手段によって腫瘍に搬送させることができる。好ましくはウィルス粒子は、選択的に腫瘍細胞を感染させることができる。「選択的に感染させる」とは、ウィルス粒子が主として腫瘍細胞を感染させ、感染した非腫瘍細胞の割合が、治療対象の疾患の性質を考慮してプロドラッグの投与による非腫瘍細胞への損傷が許容できる程度となるようなものであるということを意味している。最終的にはそれは医師が決定する。
【０１２９】
好適な投与経路の一つは、無菌溶液中の粒子の注射によるものである。例えば取り込み細胞系から単離されるウィルスも、局所潅流または直接腫瘍内注射または身体腔部への直接注射（腔内投与）、例えば腹腔内注射によって投与することができる。
【０１３０】
ＧＤＥＰＴにおける正確な投与法は当然のことながら個々の患者について個々の臨床医が決定する必要があることから、プロドラッグおよびプロドラッグから放出される細胞毒性剤の詳細な性質によって調節される。しかしながら、ある程度の一般的指針を得ることができる。この種の化学療法には通常、変性ウィルスの非経口投与が関与し、静脈経路による投与が最も実際的であることが認められる場合が非常に多い。
【０１３１】
ＧＤＥＰＴ系では、搬送されるウィルスその他のベクターの量は、上記のＡＤＥＰＴ系での酵素の細胞濃度と同様の濃度を与えるようなものとする。代表的にはベクターを患者に投与し、次に例えば標的組織の生検サンプルの回収・分析によってトランスフェクションもしくは感染（ウィルスベクターの場合）細胞によるベクター取り込みをモニタリングする。それは、患者への広範囲の試験用量の投与および標的細胞もしくは腫瘍の感染もしくはトランスフェクションの程度の測定が関与する臨床試験によって求めることができる。必要なプロドラッグの量は、ＡＤＥＰＴ系の場合と同様であるかそれより大きい。
【０１３２】
ＧＤＥＰＴ系を用いる場合、プロドラッグは通常、酵素をコードするベクターの投与後に投与される。プロドラッグの好適な用量は、患者当たり１日に約０．１〜２００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１０〜約１００ｍｇ／ｋｇである。
【０１３３】
プロドラッグの投与
式Ｉａの化合物を単独で投与することが可能であるが、上記のいずれかの方法で用いるには、それを医薬製剤として提供することが好ましい。その製剤は、１以上の許容される担体および適宜に他の治療成分または希釈剤とともに化合物を含む。担体は、製剤の他の成分と適合性であるという意味において「許容できる」ものでなければならず、リポソームのように被投与者に対して有害であってはならない。好適なリポソームには例えば、正電荷を有する脂質（Ｎ［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ））を含むもの、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）を含むもの、３β［Ｎ−（ｎ’Ｎ’−ジメチルアミノエタン）−カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｌ）を含むものなどがある。
【０１３４】
非経口投与または筋肉投与に適した製剤には、それは酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、殺菌性抗生物質および所期の被投与者の血液と等張性の製剤を与える溶質を含んでいても良い水系および非水系無菌注射液；ならびに懸濁剤および増粘剤ならびに血液成分または１以上の臓器に化合物を指向させるよう設計されたリポソームその他の微粒子系を含むことができる水系および非水系の無菌懸濁液などがある。製剤は、単位用量もしくは多用量容器、例えば封止アンプルおよびバイアルに入れて提供することができ、使用直前に注射用水などの無菌液体担体を加える必要があるだけの冷凍乾燥（凍結乾燥）条件で保存することができる。注射液および注射懸濁液は、前述した種類の無菌粉剤、粒剤および錠剤から準備なしで調製することができる。
【０１３５】
理解しておくべき点として、上記で特に言及した成分以外に製剤には、問題となる製剤の種類に関係する業界で従来からかる他の薬剤を含有させることができる。可能な製剤の中では、無菌の発熱物質を含まない水系および非水系溶液が好ましい。
【０１３６】
薬剤投与は、例えば１時間ごと、１日ごと、１週間ごとまたは１ヶ月ごとのように順番に、あるいは患者の特定のニーズに応じて行うことができる。好ましい投与経路は、経口投与および注射であり、代表的には非経口もしくは筋肉注射または腫瘍内注射である。ＰＤＴ法の場合、皮膚投与または局所投与が好ましい場合があり、例えば皮下注射またはクリームおよび軟膏などがある、そのような投与方法も公知である。
【０１３７】
正確な投与法は当然のことながら、個々の患者について個々の臨床医が決定する必要があることから、式Ｉの化合物の詳細な性質によって調節されが、ある程度の一般的指針を得ることができる。代表的な用量範囲は、単回投与または複数回投与で投与することができる前述のものである。医師の裁量で、患者の状態および他の要素に従って他の用量を用いることが可能である。
【０１３８】
実施例
以下、実施例によって本発明の実施態様を詳細に説明する。
【０１３９】
一般的実験法
融点（ｍｐ）は、ガレンカンプ（Gallenkamp）Ｐ１３８４デジタル融点計を用いて測定し、未補正である。赤外（ＩＲ）スペクトラムは、パーキンエルマー（Perkin-Elmer）２９７分光光度計を用いて記録した。１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトラムは、２０℃±１℃で動作するジェオール（Jeol）ＧＳＸ２７０ＭＨｚＦＴ−ＮＭＲスペクトル計で記録した。化学シフトは、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）から低磁場側へのｐｐｍ（δ）で報告してある。スピン多重度は、ｓ（１重線）、ｂｓ（広い１重線）、ｄ（二重線）、ｄｄ（二重線の二重線）、ｔ（三重線）、ｑ（四重線）、ｐ（五重線）またはｍ（多重線）として記載してある。質量分析スペクトラム（ＭＳ）は、ジェオールＪＭＳ−Ｄ３０３ＧＣ質量分析装置（ＥＩモード；７０ｅＶ、ソース１１７〜１４７℃）を用いて記録した。精密分子量（ＨＲＭＳ）は、内部質量マーカーとパーフルオロケロセン（ＰＥＫ）を用いるピーク合わせによって求め、ソース温度１８０℃でＦＡＢ質量スペクトラムはグリセリン／チオグリセリン／トリフルオロ酢酸（１：１：０．１）基質から得た。Ｎａ−Ｄ線での旋光度は、パーキンエルマー１４１旋光計を用いて室温で得た。フラッシュクロマトグラフィーは、アルドリッチ（Aldrich）フラッシュクロマトグラフィー「シリカゲル−６０」（E. Merck, ２３０〜４００メッシュ）を用いて行った。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、ガラス板上のＧＦ２５４シリカゲル（蛍光指示薬を含む）を用いて行った。溶媒および試薬は別段の断りがない限り、アルドリッチケミカル社（Aldrich Chemical Company Ltd.）が供給したものであり、さらなる精製を行わずに供給された状態で使用した。脱水溶媒は、適切な乾燥剤存在下に乾燥窒素雰囲気下での蒸留によって得て、４Åモレキュラーシーブスまたはナトリウムワイヤを入れて保存した。石油エーテルとは、沸点６０〜８０℃の留分を指す。
【０１４０】
実施例１：ＡＤＥＰＴ用のニトロレダクターゼ活性化ベンジルＤＣ−８１プロドラッグ（７）の合成
【０１４１】
【化４６】
0004669611.tif 000027
４−ベンジルオキシ−３−メトキシ安息香酸（２）の合成。
【０１４２】
塩化ベンジル（２４．６ｍＬ、２０９ｍｍｏｌ、１．１当量）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液を、機械撹拌した４−ヒドロキシ−３−メトキシ安息香酸（バニリン酸、１）（３０ｇ、１７９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（９０ｍＬ）および２．０Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（２２５ｍＬ）溶液に０℃で１５分間かけて滴下した。混合物を昇温させて室温とし、還流下に４８時間加熱した。冷却後、混合物をヘキサンで洗浄し（１００ｍＬで２回）、ＴＨＦを減圧下に除去した。残った水相を濃ＨＣｌでｐＨ１の酸性とした。得られた沈殿を濾取し、水で洗浄し、乾燥して、４−ベンジルオキシ−３−メトキシ安息香酸（２）を淡色非晶質固体として得た。
【０１４３】
収量（ＥｔＯＡｃからの再結晶後）３１ｇ（６７％）；
融点１７１〜１７２℃；
ＩＲ（ｃｍ−１）３７００〜３２００、２８２０〜３０００、２２１０、２１４０、１６７０、１６００、１５８０、１５１０、１４５０、１４３０、１４１０、１３８０、１３４０、１３００、１２６５、１２２０、１１８０、１１３０〜１１１０、１０３０、１０１０；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．６０（ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、１Ｈ）、７．５５（ｄ、Ｊ＝２Ｈｚ、１Ｈ）、７．３０〜７．４４（ｍ、５Ｈ）、６．９０（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、５．１９（ｓ、２Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６８．３、１５１．７、１４８．８、１３６．３、１２８．５、１２８．０、１２７．２、１２３．７、１２３、５、１１２．５、１１２．２．７０．６、５５．９；
ＭＳ（ＥＩ）（ｍ／ｚ、相対強度）２５８．０９４９（Ｃ１５Ｈ１４Ｏ４の計算値：ｍ／ｚ  ２５８．０８９２）。
【０１４４】
４−ベンジルオキシ−５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸（３）の合成。
【０１４５】
方法Ａ：
調製したばかりのＳｎＣｌ４（５ｇ、１９．５ｍｍｏｌ）および発煙硝酸（１．６７ｇ、２６．５ｍｍｏｌ）の混合物を、−２５℃（ドライアイス／四塩化炭素）で機械撹拌している２（４．３５ｇ、１７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液に５分間かけて滴下した。混合物を同温度でさらに１５分間維持し、水（１５０ｍＬ）で反応停止し、昇温させて室温とした。有機層を分液した後、水層をＥｔＯＡｃで抽出した（７５ｍＬで２回）。合わせた有機相を脱水し（ＭｇＳＯ４）、減圧下に溶媒留去して、明褐色ガムを得た。それを再結晶して、３を淡黄色針状物として得た。収量＝４．１６ｇ（８２％）。
【０１４６】
方法Ｂ：
４−ベンジルオキシ−３−メトキシ安息香酸（８．５ｇ、３２．９ｍｍｏｌ）を、７０％硝酸（１００ｍＬ）の撹拌溶液に３０分間かけて少量ずつ加えた。添加完了後、反応混合物を昇温させて１５℃とし、その温度にさらに３０分間維持した。反応混合物を氷に投入し、得られた沈殿物を濾取し、氷冷水で洗浄し、乾燥して、ニトロ化生成物３を黄色粉末として得た。
【０１４７】
収量（ＥｔＯＡｃ／ヘキサンからの再結晶後）７．８ｇ（７８％）；融点１８２〜１８５℃；
ＩＲ（ｃｍ−１）３４００〜３２００、２８２０〜２９３０、１６７０、１６００、１５８０、１５５０、１５１０、１４５０、１４１０、１４００、１３７０、１３５０、１３３０、１２６５、１２１０、１１８０、１１６０、１０５５、１００５；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．３６〜７．４５（ｍ、６Ｈ）、７．１６（ｓ、１Ｈ）、５．１９（ｓ、２Ｈ）、３．９５（ｓ、３Ｈ）；  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１６７．３、１５２．７、１４９．０、１４０．９、１３５、２、１２８．４、１２７．６、１２７．３、１１１．１、７１．２、５６．５；
ＭＳ（ＥＩ）（ｍ／ｚ、相対強度）３０３（Ｍ＋、６４）、２８６（３６）、２７３（５）、２５９（５）、１８１（７）、１２３（８）、１０５（１３）、９１（１００）、７７（８）、６５（６３）、５１（２３）；
ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ３０３．０８２４（Ｃ１５Ｈ１３ＮＯ６の計算値：ｍ／ｚ  ３０３．０７４３）。
【０１４８】
（２Ｓ）−Ｎ−（４−ベンジルオキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−メタノール（４）の合成。
【０１４９】
４−ベンジルオキシ−５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸（３）（３．５ｇ、１１．５５ｍｍｏｌ）およびオキサリルクロライド（１．７５ｇ、１３．５６ｍｍｏｌ、１．２当量）の脱水アセトニトリル（３０ｍＬ）溶液に触媒量のＤＭＦ（３滴）を加えた。溶液を窒素下に終夜撹拌した。得られた酸塩化物溶液を窒素雰囲気下に−２５℃で、ピロリジンメタノール（１．１６８ｇ、１１．５６ｍｍｏｌ、１当量）およびＫ２ＣＯ３（３．６７５ｇ、２６．６３ｍｍｏｌ、２．３当量）のアセトニトリル（８０ｍＬ）懸濁液を撹拌したものに３０分間かけて滴下した。反応混合物をその温度でさらに１時間撹拌し、室温まで戻し、水（２００ｍＬ）で反応停止した。次に、溶液をクロロホルムで抽出し（１００ｍＬで４回）、合わせた有機相を１Ｍ  ＨＣｌ（５０ｍＬで２回）、水（７５ｍＬで２回）、ブライン（５０ｍＬで２回）、水（１００ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧下に留去して明黄色油状物を得た。生成物をさらにフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によって精製して淡黄色油状物として（４）を得たが、それは静置していると徐々に結晶化した。
【０１５０】
収量３．９２ｇ（８８％）；
［α］２０Ｄ：−６２．３（ｃ  ０．４５、ＣＨＣｌ３）；
ＩＲ（ｃｍ−１）３５００〜３２５０、２８６０、２９１０、１６００、１５８０、１５２０、１４５５、１４３０、１３７０、１３３０、１２７５、１２２０、１２１０．１１８５、１１５０、１１１０、１０６０、１０２５、１０００；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．７６（ｓ、１Ｈ）、７．３４〜７．４７（ｍ、５Ｈ）、６．８３（ｓ、１Ｈ）、５．２１（ｓ、２Ｈ）、４．３８〜４．４０（ｂｓ、１Ｈ）、３．９８（ｓ、３Ｈ）、３．８０〜３．９５（ｍ、２Ｈ）、３．１５〜３．２０（ｍ、２Ｈ）、２．１７〜２．２１（ｍ、２Ｈ）、１．６９〜１．８９（ｍ、２Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１５５．０、１４８．１、１３６．９、１３５．２、１２８、８、１２８．５、１２７．９、１２７．６、１０９．２、１０９．１、７１．３、６６．１、６１．５、５６．８、４９．５、２８．４、２４．４；
ＭＳ（ＥＩ）（ｍ／ｚ、相対強度）３８６（Ｍ＋、４）、３６８（６）、３５５（３９）、２８６（９０）、１２１（４）、９１（１００）、６５（４）；
ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ３８６．１５３１（Ｃ２０Ｈ２２Ｎ２Ｏ６の計算値：ｍ／ｚ  ３８６．１４７８）。
【０１５１】
（２Ｓ）−Ｎ−（２−アミノ−４−ベンジルオキシ−５−メトキシベンゾイル）ピロリジン−メタノール（５）の合成。
【０１５２】
方法Ａ：
ニトロ化合物（４）（１．４ｇ、３．６２ｍｍｏｌ）およびＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏ（４．５８ｇ、２０．０８ｇ、５．５当量）のメタノール（７０ｍＬ）溶液を４５分間加熱還流した。溶媒を減圧留去によって除去し、得られた褐色油状物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（１５０ｍＬ）で処理し、Ｎ２下に終夜撹拌した。得られた懸濁液をセライト濾過し、有機相を分液し、ブラインで洗浄し（１００ｍＬで２回）、脱水し（ＭｇＳＯ４）、過剰の溶媒を最終的に減圧下に留去した。残留明褐色油状物をさらにカラムクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によって精製して、アミン（５）を明黄色油状物として得た。収量＝０．８２ｇ（６２％）。
【０１５３】
方法Ｂ：
ニトロ化合物４（７．０ｇ、１８．１３ｍｍｏｌ）の脱水メタノール（２０ｍＬ）溶液にヒドラジン水和物（４．５３ｇ、９０．６７ｍＬ、５当量）を滴下し、緩やかな還流を維持しながら突沸防止顆粒で触媒量のラネーＮｉ（０．５４４ｇ）を加えた。混合物をさらに１５分間加熱還流したところ、ＴＬＣ（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によって反応が完結していることが示された。Ｎｉ触媒をセライト濾過で除去し、溶媒を減圧下に留去した。生成物をフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によってさらに精製して、アミン５を明黄色の不安定な油状物として得た。それは低温で保存する必要があった。
【０１５４】
収量５．２ｇ（８１％）；
［α］２０Ｄ：−１５．４（ｃ  ０．１３、ＣＨＣｌ３）；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．２８〜７．４２（ｍ．５Ｈ）、６．７６（ｓ１Ｈ）、６．２６（ｓ、１Ｈ）、５．０９（ｓ、２Ｈ）、４．３７〜４．４２（ｂｓ、１Ｈ）、３．７８（５、３Ｈ）．３．５８〜３．７７（ｍ、４Ｈ）、２．０４〜２．１０（ｍ、２Ｈ）、１．６９〜１．９２（ｍ、２Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１７１．８、１５１．０．１４１．２、１３６．５、１２８．６、１２７．６、１２７．１、１１２．９、１０２．９、７０．６、６６．８、６０．９、５７．１、５１．０、２８．５、２４．９；
ＩＲ（ｃｍ−１）３５００〜３１００、２９５０、１６８０、１６２０、１５９０、１５１０、１４５０、１４２５、１４００、１３３０、１２６０、１２３０、１１７０、１１６５、１１３０、１１００、１０８０、１０５５、１０３０；
ＭＳ（ＥＩ）（ｍ／ｚ、相対強度）３５６（Ｍ＋、１００）、２５６（６８）、２３７（１４）、２２６（４）、１６４（６）、１３８（１５）、１００（８）、９１（９６）、８４（２２）、６５（８）；
ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ３５６．１７８５（Ｃ２０Ｈ２４Ｎ２Ｏ４の計算値：ｍ／ｚ  ３５６．１７３６）。
【０１５５】
（２Ｓ）−Ｎ−［２−（ｐ−ニトロベンジルオキシ）カルボキサミド−４−ベンジルオキシ−５−メトキシベンゾイル］ピロリジンメタノール（６）の合成。
【０１５６】
アミン（５）（１ｇ、２．８ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．４４ｇ、５．６ｍｍｏｌ、２当量）の脱水ＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液にＮ２下０℃で、クロロギ酸４−ニトロベンジル（０．６ｇ、２．８ｍｍｏｌ、１当量）の脱水ＤＣＭ（１５ｍＬ）溶液を２０分間かけて滴下した。添加完了後、溶液をさらに１．５時間撹拌した。反応混合物を飽和ＣｕＳＯ４水溶液（１００ｍＬ）で２回）、水（１５０ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、過剰の溶媒を減圧下に除去した。得られた油状物についてフラッシュクロマトグラフィー（３％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）を行って、保護アミン（６）を淡黄色油状物として得た。
【０１５７】
収量１．１６ｇ（７７％）；
ＩＲ（ｃｍ−１）３５００〜３１００、２９５０、１６８０、１６２０、１５９０、１５１０、１４５０、１４２５、１４００、１３３０、１２６０、１２３０、１１７０、１１６５、１１３０、１１００、１０８０、１０５５、１０３０；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ９．０４（ｓ、１Ｈ）、８．２０（ｄ、Ｊ＝２２Ｈｚ、２Ｈ）、７．８１（ｓ、１Ｈ）、７．２８〜７．５５（ｍ、５Ｈ）、６．８６（５、１Ｈ）、５．１４〜５．２４（ｂｓ、４Ｈ）、４．３９（ｂｓ、１Ｈ）、３．８２（ｓ、３Ｈ）、３．５５〜３．８９（ｍ、４Ｈ）、２．０４〜２．１４（ｍ、２Ｈ）、１．７０〜１．８７（ｍ、２Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１７０．７、１５３．２、１５０．３、１４７．５、１４３．６、１３６．１、１２８．７〜１２７．７、１２３．７、１１１．５、１０６．０、７０．６、６５．２、６０．９、５６．５、５１．７、１２８．２、２５．１；
ＭＳ（ＦＡＢ）（ｍ／ｚ、相対強度）５３５（ＭＨ＋、４）、４３５（２）、３５６（３）、２５６（９）、１９２（２）、１８５（４）、１６６（３）．１３６（１３）、１２０（５）、１０２（２６）、９１（１００）、８４（５）。
【０１５８】
（１１ａＳ）−８−ベンジルオキシ−７−メトキシ−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１１−ヒドロキシ−１０−（ｐ−ニトロベンジルオキシ）カルボキシ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５−オン（７）の合成
４Åモレキュラーシーブス（０．３７５ｇ）を加えたカーバメート６（０．４ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）、ＮＭＯ（０．１３１ｇ、１．１２ｍｍｏｌ、１．５当量）の脱水ＤＣＭ：ＣＨ３ＣＮ（９：３ｍＬ）混合溶媒溶液を、窒素下に１５分間室温で撹拌した。ＴＰＡＰ（１３ｍｇ）の一部を加え、溶液をさらに２時間撹拌した。ＴＬＣ（２％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）で、反応が未完了でああることが示されたので、追加量のＮＭＯ（６５ｍｇ、０．８４５ｍｍｏｌ、０．７５当量）およびＴＰＡＰ（６．５ｍｇ）を加えた。１５分後にＴＬＣで、原料が完全になくなっていることが示された。モレキュラーシーブスをセライト濾過で除去し、溶媒を減圧下に除去した。黒色残留物をカラムクロマトグラフィー（１％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３からＥｔＯＡｃ：石油エーテル９５：５）によって精製して、環化最終生成物７を得た。
【０１５９】
収量０．１２４（３１％）；
ＩＲ（ｃｍ−１）３６００〜３２００、２８２０〜３０００、１７１０、１６００、１５１０、１４５０、１４３０、１４００、１３７０、１３５０、１３０５、１２７０、１２２０．１１２０〜１１００、１０５０、１０３０、１０１０；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ８．１０（ｄ、Ｊ＝８．４３Ｈｚ、２Ｈ）．７．２７〜７．５３（ｍ、６Ｈ）、７．２０（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、６．７０（ｓ、１Ｈ）、５．６２（ｄ、Ｊ＝１０．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．０７（ｄ、Ｊ＝１０．７Ｈｚ、４Ｈ）、３．９４（ｓ、３Ｈ）、３、５２〜３．７２（ｍ、３Ｈ）、２．０４〜２．１０（ｍ、４Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１６６．８３、１４９．２６、１４２．８５、１３６．０３、１２８．７９〜１２７．１７．１２６．３８、１１４．５８、１１２．５３、１１１．００、１０５．９２、８６．２３、７１．１２、６６．２１、５９．９０、５６．２１、４７．３２、４６．４２、２８．６８、２３．０５；
ＭＳ（ＦＡＢ）（ｍ／ｚ、相対強度）５３５（Ｍ＋＋２、２）、３５３（６）、３３７（１０）、２８６（５）、２５６（３）、２４１（２）、２２８（２）、１９２（３）、１３６（７）、９１（１００）；
ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ５３３．１８１３（Ｃ２８Ｈ２７Ｎ３Ｏ８の計算値：ｍ／ｚ  ５３３．１７９８）。
【０１６０】
実施例２：ＰＧＡ  ＡＤＥＰＴ用のベンジルＤＣ−８１プロドラッグ（９）の合成
【０１６１】
【化４７】
0004669611.tif 000028
（２Ｓ）−Ｎ−［２−フェニルアセトアミド−４−ベンジルオキシ−５−メトキシベンゾイル］ピロリジンメタノール（８）の合成。
【０１６２】
フェニル酢酸（０．４２ｇ、３．３ｍｍｏｌ、１．２当量）およびオキサリルクロライド（０．５１ｇ、３．９６ｍｍｏｌ、１．４当量）の脱水アセトニトリル（１０ｍＬ）溶液に触媒量のＤＭＦ（４滴）を加え、反応混合物を窒素下に終夜撹拌した。得られた酸塩化物溶液を窒素雰囲気下に−２５℃で、アミン（５）（１ｇ、２．８ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（０．９７ｇ、７．０２ｍｍｏｌ、２．５当量）の脱水アセトニトリル（６０ｍＬ）中混合物に２０分間かけて滴下した。反応混合物を−２５℃でさらに２時間撹拌し、室温まで戻した。反応混合物を水（２００ｍＬ）で希釈し、それをＣＨＣｌ３で抽出した（１００ｍＬで４回）、合わせた有機相を１Ｍ  ＨＣｌ（５０ｍＬで２回）、水（７５ｍＬで２回）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水した。溶媒を減圧下に留去し、残留油状物をさらにフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によって精製して淡黄色油状物としてフェニルアセトアミド（８）を得た。
【０１６３】
収量０．９１ｇ（６８％）；
ＩＲ（ｃｍ−１）３４００、２０９３、１６６０、１６１３、１５１９、１４９５、１４５４、１４３５、１４０１、１３４５、１２６２、１２１８、１１７５、１１０１、１０２８、１００３、９６９；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ９．２７（ｓ、１Ｈ）、７．９０（ｓ、１Ｈ）、７．２６〜７．４８（ｍ、１０Ｈ）、６．７７（ｓ、１Ｈ）、５．１１（ｓ、２Ｈ）、４．１９〜４．２９（ｂｓ、１Ｈ）、３．７８（ｓ、３Ｈ）、３．６５（ｓ、２Ｈ）、３．３５〜３．６０（ｍ、４Ｈ）、１．８１〜２．０８（ｍ、２Ｈ）、１．６２〜１．８１（ｍ、２Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１６９．８、１４９．９、１４５．０、１３６．２、１３４．５、１２９．３〜１２７．３、１１０．９、１０７．８、７０．６、６６．２、６１．２、５６．５、５１．２、４４．８、２８．３、２４．９；
ＭＳ（ＥＩ）（ｍ／ｚ、相対強度）４７４（Ｍ＋、７）、３７４（４４）、２８４（７）、２５６（９）、２２８（３）、１６６（９）、１０５（１４）、１０２（２５）、９１（１００）、８４（５）；
ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ４７４．２１４２（Ｃ２８Ｈ３０Ｎ２Ｏ３の計算値：ｍ／ｚ  ４７４．２１５５）。
【０１６４】
（１１ａＳ）−８−ベンジルオキシ−７−メトキシ−１，２，３，１１，１１ａ−ペンタヒドロ−１１−ヒドロキシ−１０−フェニルアセチル−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５−オン（９）の合成
モレキュラーシーブス（０．５２５ｇ）を加えたフェニルアセトアミド（８）（０．５ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）およびＮＭＯ（０．１８４ｇ、１．５７ｍｍｏｌ、１．５当量）の脱水ＤＣＭおよびＣＨ３ＣＮ（９：３ｍＬ）からなる溶媒系の溶液を、窒素下に１５分間室温で撹拌した。ＴＰＡＰ（１９ｍｇ、５モル％）を加え、混合物を１時間撹拌したところ、ＴＬＣ（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）で原料が完全に消費されたことが示された。反応混合物を濾過し、減圧下に溶媒留去した。生成物をフラッシュクロマトグラフィー（２％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によってさらに精製して、保護ＰＢＤ９を不透明油状物として得た。
【０１６５】
収量０．１５ｇ（３０％）；
［α］２０Ｄ：＋１３２５°（ｃ  ０．０４、ＣＨＣｌ３）；
ＩＲ（ｃｍ−１）３４００、２９５６、２９２７、２０９４、１６３１、１５５３、１５１４、１４５４、１４３３、１４０７、１３７９、１３５２、１２７８、１２１９、１２０２、１１８１、１１３６、１０６７、１００９、７５２；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ７．１９〜７．３８（ｍ、１１Ｈ）、６．４７（ｓ、１Ｈ）、５．７６（ｄ、Ｊ＝１０．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．８７（ｄ、Ｊ＝１２．１Ｈｚ、２Ｈ）、３．９５（ｓ、３Ｈ）、３．４２〜３．６７（ｍ、３Ｈ）、２．６２（ｓ、２Ｈ）、１．９８〜２．１１（ｍ、４Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１７３．５６、１６６．５４、１４９．７４、１３５．８１、１３４．８４、１３０．９４〜１２６．５６、１１４．７７、１１１．４５、８４．３８、７０．６０、５９．８７、５６．２８、４６．４１、２８．５４、２２．６７；
ＭＳ（ＥＩ）（ｍ／ｚ、相対強度）４７２（Ｍ＋、４０）、３７４（２５）、３５２（１５）、３２６（６）、２８４（７）、１３６（５）、９１（１００）、７０（１７）；
ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ４７２．１９４４（Ｃ２８Ｈ２０Ｎ２Ｏ５の計算値：ｍ／ｚ  ４７２．１９９８）。
【０１６６】
実施例３：光感受性ベンジルＤＣ−８１プロドラッグ（１１）の合成
【０１６７】
【化４８】
0004669611.tif 000029
（２Ｓ）−Ｎ−［２−（２’−ニトロ−４’，５’−ジメトキシベンジルオキシ）カルボキサミド−４−ベンジルオキシ−５−メトキシベンゾイル］ピロリジンメタノール（１０）の合成
クロロギ酸４，５−ジメトキシ−２−ニトロベンジル（ＮＶＯＣ−Ｃｌ）（０．７７ｇ、２．８ｍｍｏｌ、１当量）の脱水ＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液を１５分間かけて、アミン（５）（１ｇ、２．８ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．４４ｇ、５．６ｍｍｏｌ、２当量）の脱水ＤＣＭ溶液にＮ２下０℃で滴下した。次に反応混合物を０℃でさらに２．５時間撹拌したところ、ＴＬＣ（３％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）で反応完結が示された。溶液を飽和ＣｕＳＯ４水溶液（２×７５ｍＬ）、水（１００ｍＬで２回）、ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水した。過剰の溶媒を減圧下に除去して粗生成物を得た。カラムクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によってさらに精製することで、１０を黄色油状物として得た。
【０１６８】
収量１．４５ｇ（８７％）；
［α］２０Ｄ：−１７５．５°（ｃ  ０．２２５、ＣＨＣｌ３）；
ＩＲ（ｃｍ−１）４３３０、４２５３、３４２８、２９２４、２８５４、１７１１、１６２６、１５１３、１４６３、１３７７、１２６６、１２１６、１１７３、７６１、７２２；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ８．９０（ｓ、１Ｈ）、７．８２（ｓ、１Ｈ）、７．７３（ｓ、１Ｈ）、７．２６〜７．４７（ｍ、６Ｈ）、６．８５（ｓ、１Ｈ）、５．５８（ｄ、Ｊ＝１５Ｈｚ、２Ｈ）、５．１６（ｓ、２Ｈ）、４．２９〜４．３９（ｂｓ、１Ｈ）、３．９５〜３．９９（ｓ、６Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．４９〜３、７２（ｍ、４Ｈ）、１．８６〜２．１７（ｍ、２Ｈ）、１．７２〜１．８６（ｍ、２Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１５３．７、１５３．２、１５０．４、１４８．１、１４４．５、１３９．６、１３６．１、１２８．５、１２８．１、１２７．８、１２７．６、１１１．５、１１０．８、１０９．９、１０８．１、７０．７、６６．４、６３．７、６２．７、６１．０、５６．７〜５６．４、５１．６、２８．３；
ＭＳ（ＦＡＢ）（ｍ／ｚ、相対強度）５９６（Ｍ＋＋１、１６）、３５６（６）、２５６（１９）、１９６（９５）、１８１（２１）、１６６（２０）、１４９（１４）、１０２（３２）、９１（１００）、８７（１０）、７３（４４）、６１（２２）、５７（３１）。
【０１６９】
（１１ａＳ）−８−ベンジルオキシ−７−メトキシ−１，２，３，１０，１１，１１ａ−ヘキサヒドロ−１１−ヒドロキシ−１０−（２’−ニトロ−４’，５’−ジメトキシベンジルオキシ）カルボキシ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５−オン（１１）の合成
モレキュラーシーブス（０．３３５ｇ）を加えたＮＶＯＣ保護アミン１０（０．４ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）およびＮＭＯ（０．２３６ｇ、２０．１７ｍｍｏｌ、３当量）の脱水ＤＣＭ：ＣＨ３ＣＮ（９：３ｍＬ）混合物溶液を、Ｎ２下に１５分間室温で撹拌した。ＴＰＡＰ（２３ｍｇ、１０モル％）を反応混合物に加え、それをさらに２時間撹拌したところ、ＴＬＣ（２％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）で反応が完結していることが示された。モレキュラーシーブスをセライトで濾去し、得られた溶液を減圧下に溶媒留去した。残留暗色油状物についてフラッシュクロマトグラフィー（１％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）を行って、光感受性保護ＰＢＤ（１１）を得た。
【０１７０】
収量０．２１ｇ（４９％）；
［α］２０Ｄ：２１２．５°（ｃ  ０．０８、ＣＨＣｌ３）；
ＩＲ（ｃｍ−１）４３２９、４２５８、３４０５、２９２５、２３６１、１７１３、１６２０、１６０２、１５７９、１５１４、１４６３、１３７７、１３４２、１２７７、１２１９、１１０３、１０６５、１０１２、９６８、８７０、７９１、７２２；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ７．６６〜７．７１（ｓ、１Ｈ）、７．１１〜７．３９（ｍ、６Ｈ）、６．８０〜６．９２（ｓ、１Ｈ）、６．３２（ｓ、１Ｈ）、５．１４〜５．６７（ｍ、５Ｈ）、３．８５〜４．１５（ｍ、９Ｈ）、３．４９〜３〜６７（ｍ、３Ｈ）、２．０１〜２．１５（ｍ、４Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１７０．４１、１６６．７３、１９４．９７、１４９、０３、１３５．９２、１２８．６７、１２６．３０、１２４．５２、１１４．６４、１１２．２４、１１０．８７、１０９．８２、１０８．９２、１０７．９７、８６．０２、７１．５１、６６．３８、６５．０３、６０．４０、５６．４８〜５６．１９．４６．６７、２８．７０、２６．４１、２３．６５、２１．０５；
ＩＲ（ｃｍ−１）３６００〜３１００、３０２０、２４００、２１０５、１７６５、１６４０、１５２５、１４３０、１３８５、１３５０、１３１０、１２８０、１２１５、１１７０、１１１０、１０４５；
ＭＳ（ＦＡＢ）（ｍ／ｚ、相対強度）５９４（ＭＨ＋、９）、３５３（５）、３３７（４）、２８２（６）、２５６（４）、２４１（８）、１９６（１００）、１８０（１５）、１６６（１６）、１５１（１３）、１３６（６）、１２３（５）、１０５（１７）、９１（９８）；
ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ５９３．２０１０（Ｃ３０Ｈ３１Ｎ３Ｏ１０の計算値：ｍ／ｚ  ５９３．２０４２）。
【０１７１】
実施例４：ニトロレダクターゼＡＤＥＰＴ用のベンジルトマイマイシンプロドラッグ（１４７）の合成
【０１７２】
【化４９】
0004669611.tif 000030
（２Ｓ，４Ｓ）−Ｎ−（アリルオキシカルボニル）−４−ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸（１３）の合成
クロロギ酸アリル（３３．１７ｇ、２７５ｍｍｏｌ、１．２当量）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液を、トランス−４−ヒドロキシプロリン（３０ｇ、２２９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）および水（１５０ｍＬ）懸濁液でｐＨ９（４Ｍ  ＮａＯＨで調節）および０℃としたものに３０分間かけて滴下した。反応混合物をさらに１時間０℃およびｐＨ９で撹拌した。水層を分液し、ＮａＣｌで飽和させ、ＥｔＯＡｃで洗浄し（１００ｍＬで４回）、水相のｐＨを濃ＨＣｌで２に調節した。得られた油状物をＥｔＯＡｃで抽出した（１００ｍＬで３回）。合わせた有機相を脱水し（ＭｇＳＯ４）、減圧下に溶媒留去して、Ａｌｌｏｃ保護ヒドロキシプロリン（１４）を粘稠透明油状物として得た。それをそれ以上精製せずに次の段階で用いた。
【０１７３】
収量４１ｇ（８４％）；
［α］２０Ｄ：−２３６°（ｃ  ０．２５、ＣＨＣｌ３）；
ＩＲ（ｃｍ−１）３４２９、２５２２、２３４０、２２５８、２１３０、１６８８、１４３７、１４１５、１３４５、１２７７、１２２２、１１７７、１１３３、１０８５、１０４７、１０２５、９９４、８２７、７６８；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ５．８０〜５．９９（ｍ、１Ｈ）、５．１３〜５．３４（ｍ、２Ｈ）、４．５２〜４．６３（ｍ、２Ｈ）、４．３７〜４．４４（ｍ、２Ｈ）、３．５３〜３．６０（ｍ、２Ｈ）、２．００〜２．３６（ｍ、２Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１７４．７、１７４．５、１５４．８、１５４．５、１３２．８、１３２．７、１１７．１、１１６．７、６９．２、６８．５、６５．７、６５．６、５７．９、５７．６、５４．９、５４．４、３８．９、３８．２；
ＭＳ（ＥＩ）（ｍ／ｚ、相対強度）２１５（Ｍ＋、１４）、１７０（１００）、１３０（９５）、１２６（３４）、１０８（３５）、６８（５１）、５６（２１）；
ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ２１５．０７５９（Ｃ９Ｈ１３ＮＯ５の計算値：ｍ／ｚ  ２１５．０７４３）。
【０１７４】
（２Ｓ）−Ｎ−（アリルオキシカルボニル）−４−オキソピロリジン−２−カルボン酸（１４）の合成
ａｌｌｏｃ保護ヒドロキシプロリン（１３）（１８ｇ、８３．７２ｍｍｏｌ）をアセトン（１２６０ｍＬ）に溶かした。ジョーンズ試薬［ＣｒＯ３：２６．６ｇ／Ｈ２ＳＯ４：２１．３ｍＬで、水で１００ｍＬとして溶液を調製した］（８７ｍＬ）を１０分間かけて加えた。得られた混合物をさらに４５分間撹拌し、その時点で過剰の酸化剤をメタノール（１５ｍＬ）で分解した。緑色クロム塩をセライト濾過で除去し、濾液をＣＨＣｌ３（１０００ｍＬ）で希釈した。合わせた有機相をブラインで数回洗浄し（５００ｍＬで５回）、溶媒を減圧下に留去してケトン１４を得た。それを精製せずに用いた。
【０１７５】
収量１４．６８（６２％）；
ＩＲ（ｃｍ−１）３４７１、３０２０、２９３２、２６１０、２０４１、１７６１、１６９１、１６４９、１５４７、１４１１、１３４３、１２６６．１１９５、１１６４、１１２８、９７２、９３９、８７７、７５９；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ９．２０（ｂｓ、１Ｈ）．５．８６〜６、００（ｍ、３Ｈ）、５、２１〜５．３５（ｍ、２Ｈ）、４．８７〜４．９１（ｍ、２Ｈ）、４．８７〜４．９１（ｍ、１Ｈ）、３．８７〜３．９９（ｓ、２Ｈ）、２．６８〜２．９５（ｍ、２Ｈ）；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ２０７．６、２０７．１、１７５．８、１７５．３、１５５．３、１５４．２、１３１．９、１１８．４、１１８．２、６７．０、６６．８、５５．８、５２．５、５２．３、４１．０、４０．３；
ＭＳ（ＥＩ）（ｍ／ｚ、相対強度）＝２１３（Ｍ＋、１９）、１６８（８１）、１５２（８）、１２８（１００）、１１２（１５）、１００（３７）、９６（３６）、６８（１４）、５８（１３）、５６（３７）；
ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ２１３．０６４１（Ｃ９Ｈ１１ＮＯ５の計算値：ｍ／ｚ  ２１３．０６３７）。
【０１７６】
（２Ｓ）−（Ｅ，Ｚ）−Ｎ−（アリルオキシカルボニル）−４−エチリデンピロリジン−２−カルボン酸（１５）の合成
ＮａＨ（６０％懸濁品）（４ｇ、１００ｍｍｏｌ、４当量）およびエチルトリフェニルホスホニウムブロマイド（３７ｇ、１００ｍｍｏｌ、４当量）の蒸留したばかりのＴＨＦ（２５０ｍＬ）中混合物を窒素下に４時間還流した。ケトン１４（５．３２５ｇ、２５ｍｍｏｌ）の蒸留したばかりのＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を４０分間かけて滴下し、反応混合物を窒素下に終夜還流した。それを冷却し、５重量／体積％ＮａＨＣＯ３水溶液（５００ｍＬ）に投入し、１０分間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで洗浄した（２５０ｍＬで２回）。水層を希ＨＣｌでｐＨ３の酸性とした（激しい発泡が認められた）。乳濁液をＥｔＯＡｃで抽出し（２００ｍＬで４回）、合わせた有機相をブラインで洗浄し（２５０ｍＬ）、脱水した（ＭｇＳＯ４）。次に、溶媒を減圧下に留去して橙赤色油状物を得て、それをそれ以上精製せずに次の段階で用いた。粗収量３．８１ｇ（６８％）。
【０１７７】
（２Ｓ）−（Ｅ，Ｚ）−Ｎ−（アリルオキシカルボニル）−４−エチリデンピロリジン−２−カルボン酸メチル（１６）の合成
ウィティッヒ生成物１５（３．５ｇ、１６ｍｍｏｌ）の脱水トルエン（１５ｍＬ）溶液にオキサリルクロライドおよびＤＭＦ（４滴）を加え、それを室温下およびＮ２下に終夜撹拌した。蒸留したばかりのメタノール（２０ｍＬ）を加え、混合物をさらに４時間撹拌したところ、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：石油エーテル、１：１）で原料が完全に消失していることが認められた。次に溶媒を減圧下に留去させた。得られた油状物をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）に溶かし、溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（４×２５ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧下に除去してエステル化ウィティッヒ生成物（１６）を得た。
【０１７８】
収量３．４８ｇ（９４％）；
［α］２０Ｄ：−３７７．７°（ｃ  ０．０４５、ＣＨＣｌ３）；
ＩＲ（ｃｍ−１）４２１４、３４５２、３０１９、２９５５、２８６２、２４００、１７４６、１７０４、１６４９、１４３７、１４１０、１３４３、１３１０、１２７４、１２１５、１１７９、１１２０、１０７２、１０２９、９９１、９３２、７５５；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ５．８３〜６．００（ｍ、１Ｈ）、５．１６〜５．４８（ｍ、３Ｈ）、４．５６〜４．６８（ｍ、３Ｈ）、４．０５〜４．１４（５、２Ｈ）、３．８７〜３．９９（ｍ、３Ｈ）、２．５３〜２．９７（ｍ、２Ｈ）、１．６０〜１．６３（ｍ、３Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）（Ｅ／Ｚ異性体）δ１７２．９、１５４．８、１３４．１、１３４．０、１３３．１、１３３．０．１３２．８、１３２．７、１１８．２、１１８．１、１１７．８、１１７、７、１１７．５、１１７．４、１１７．１、６６．１、６６．０、６５．９、５８．８、５８．６、５８．４、５２．３、５１．１、５０．６、４８．３、４７．７、３６．６、３５．７、３２．６、３１．７、１４．７、１４．６、１４．４；
ＭＳ（ＥＩ）（ｍ／ｚ、相対強度）２３９（Ｍ＋、４）、１８０（７０）、１５４（１００）、１３６（５５）、９４（３３）、８０（１０）、６７（１９）、５９（８）；
ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ２３９．１０３０（Ｃ１２Ｈ１７ＮＯ４の計算値：ｍ／ｚ  ２３９．１１５８）。
【０１７９】
（２Ｓ）−（Ｅ，Ｚ）−Ｎ−（アリルオキシカルボニル）−４−エチリデンピロリジンメタノール（１７）の合成
Ａｌｌｏｃ保護Ｃ環エステル（１６）（２．５ｇ、１０．４６ｍｍｏｌ）の溶液を蒸留したばかりのＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶かし、窒素下に０℃で撹拌した。水素化ホウ素リチウム（０．４ｇ、１７．９５ｍｍｏｌ、１．７当量）をゆっくり、少量ずつでその溶液に加えた（発泡が認められた）。混合物を昇温させて室温とし、さらに４時間撹拌したところ、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：石油エーテル、１：１）によって反応が完結していることが示された。次にそれを再度０℃まで冷却し、１５分間かけて水（４０ｍＬ）を滴下することで反応を停止した。混合物を２Ｍ  ＨＣｌ（４０ｍＬ）で中和した。そのＨＣｌ液は非常にゆっくり加えたが、激しい発泡が生じた。それをＥｔＯＡｃで抽出し（１００ｍＬで３回）、合わせた有機相を水（１５０ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧下に除去して油状物を得た。それをフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：石油エーテル、６０：４０）によってさらに精製して純粋な生成物１７を得た。
【０１８０】
収量１．５７ｇ（７１％）；
ＩＲ（ｃｍ−１）３４２５、２９４７、２８６４、２０８５、１６７８、１５４７、１５３６、１４１１、１３４９、１３０８、１２３６、１２０３、１１１４、１０４７、９７５、９３１、８８３、８５１、７６９；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ５．８７〜６．０１（ｍ、１Ｈ）、５．１９〜５．４０（ｍ、３Ｈ）、４．５９〜４．６１（ｓ、２Ｈ）、３．６４〜４．１５（ｍ、５Ｈ）、２．３７〜２．８０（ｍ、２Ｈ）、１．６２〜１．６４（ｍ、３Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）（Ｅ／Ｚ異性体）δ１５６．３、１５４．５、１３３．１、１３２．８、１３１．８、１３１．７、１３０．９、１３０．７、１２８．７、１２８．６、１２５．５、１１７．５〜１１５．９、６６．１、６５．９、６５．７、６４．６、６０．４、５９．９、５７．９、５７．３、５１．６．５１．３、４８．３、４８．１、３４．７、３４．４、３４．２、３４．１、３０．６、３０．３、２９．９．２９．５、２５．６、１４．５、１４．４、１４．２。
【０１８１】
（２Ｓ）−（Ｅ，Ｚ）−Ｎ−（アリルオキシカルボニル）−４−エチリデン−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−ピロリジンメタノール（１８）の合成
ヒドロキシ化合物１７（１．３ｇ、６．３６ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（１．０５ｇ、１５．４１ｍｍｏｌ、２．５当量）の脱水ＤＭＦ（３ｍＬ）溶液にｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロライド（１．１１ｇ、７．３７ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、反応混合物をＮ２下に終夜撹拌した。反応混合物を水（２００ｍＬ）で飽和させ、ＥｔＯＡｃで抽出した（１００ｍＬで３回）。有機層を水（１００ｍＬ）、ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、過剰の溶媒を減圧下に留去して明褐色油状物を得た。それについてフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：石油エーテル、５０：５０）を行って、純粋なシリルエーテル（１８）を得た。
【０１８２】
収量１．５４ｇ（７５％）；
ＩＲ（ｃｍ−１）３４１６、２０９３、１６４２、１４０６、１２５３、１１８９、１１０４、７７５；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ５．８９〜５．９５（ｍ、１Ｈ）、５．１８〜５．３４（ｍ、３Ｈ）、４．６２（ｓ、２Ｈ）、３．５３〜４．０８（ｍ、５Ｈ）、２．４９〜２．７０（ｍ、２Ｈ）、１．４３〜１．５９（ｍ、３Ｈ）、０．９１（ｂｓ、９Ｈ）、０．０２〜．００３（ｂｓ、６Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）（Ｅ／Ｚ異性体）δ１６２．５、１５４．４、１３６．２、１３５．１、１３３．１、１３０．９、１２８．８、１１７．４、１１７．１、１１６．７、１１６．１、６５．９、６５．７、６５．５、６３．９、６３．６、６３．１、５８．６、５８．２、５８．１、５１．２、４８．３、４８．１、３６．５、３４．６、３３．９、３１．８、３１．４、３０．４、３０．３、２９．７、２９．２、２９．１、２２．７、１８．１、１８．０、１４．５、１４．４、１４．１、−３．６、−５．４；
ＭＳ（ＥＩ）（ｍ／ｚ、相対強度）３２５（Ｍ＋、６）、３１０（３）、２６８（１００）、２５６（６）、２４０（１８）、２２４（７）、１８２（２２）、１８０（３８）、１６８（１０）、１５４（５）、１３６（２４）、１１５（８）、９４（６）、７５（１３）、７３（２１）、５７（１７）；
ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ３２５．２０７３［（Ｍ−イソブチル）ｍ／ｚ  ２６８．１２３３］（Ｃ１７Ｈ３１ＮＯ３の計算値：ｍ／ｚ  ３２５．２０７３）［（Ｍ−イソブチル）ｍ／ｚ  ２６８．１３６９）。
【０１８３】
（２Ｓ）−（Ｅ，Ｚ）−４−エチリデン−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−ピロリジンメタノール（１９）の合成
１８（１．５ｇ、４．６２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）溶液に、水（０．４８ｇ、２７．１１ｍｍｏｌ、６当量）および触媒量のＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（０．１３２ｇ、０．１８９ｍｍｏｌ、４モル％）存在下に水素化トリブチルスズ（１．４９ｇ、５．１ｍｍｏｌ、１．１当量）を加え、反応混合物を室温で５分間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（４０ｍＬ）で希釈し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、過剰の溶媒を減圧下に除去した。純粋なアミン１９をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：石油エーテル、５０：５０）によって単離して、明褐色油状物を得た。
【０１８４】
収量０．６７ｇ（６０％）；
ＩＲ（ｃｍ−１）４３２９、４２５７、３４２６、２９２３、２７２８、２６７２、２３６０、２３４１、２０３５、１７７７、１７１３、１６４１、１５１２、１４６３、１３７７、１３０２、１２４２、１１６９、１０１９、８９０、７６０、７２１；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ５．３３〜５．３７（ｍ、１Ｈ）、４．０６（ｓ、１Ｈ）、３．２８〜３．７５（ｍ、４Ｈ）、２．１７〜２．４７（ｍ、２Ｈ）、１．５４〜１．６３（ｍ、３Ｈ）、０．８９（ｂｓ、９Ｈ）、０．０６〜．００７（ｂｓ、６Ｈ）。
【０１８５】
（２Ｓ）−（Ｅ，Ｚ）−Ｎ−（４−ベンジルオキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）−２−エチリデン−Ｏ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−ピロリジンメタノール（２０）の合成
４−ベンジルオキシ−５−メトキシ−２−ニトロ安息香酸（３）（２．５ｇ、８．２５ｍｍｏｌ）およびオキサリルクロライド（１．２５ｇ、９．８４ｍｍｏｌ、１．２当量）の脱水ＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に触媒量のＤＭＦ（４滴）を加え、室温で終夜撹拌した。得られたクロライドを脱保護Ｃ環１９（１．９８ｇ、８．２５ｍｍｏｌ、１当量）、ＴＥＡ（１．７５ｇ、１７．３５ｍｍｏｌ、２．１当量）および水（０．６ｍＬ）に窒素下で０℃にて２０分間かけて滴下した。反応混合物をさらに２．５時間撹拌し、その時点でのＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：石油エーテル、４０：６０）で反応が完結していることがわかった。有機溶媒を減圧下に除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）と水（１５０ｍＬ）との間で分配し、分液を行った。水層をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で洗浄し、合わせた有機相を飽和ＮＨ４Ｃｌ（１００ｍＬ）、ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、減圧下に溶媒留去して、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：石油エーテル、７０：３０）後にカップリング生成物２０を得た。
【０１８６】
収量２．８５ｇ（６６％）；
［α］２０Ｄ：−１１．７°（ｃ  ０．３０５、ＣＨＣｌ３）；
ＩＲ（ｃｍ−１）４３２８、３４２４、２９６０、２８５５、２３５９、２３３２、２０８４、１７０９、１６４１、１５４８、１５２６、１４６２、１３７７、１２７８、１２１５、１１０７、１０５８、８３６、７６１、７２２；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．３７〜７．４７（ｍ、６Ｈ）、６．７７（ｓ、１Ｈ）、５．３３〜５．３７（ｍ、１Ｈ）、５．２２（ｓ、２Ｈ）、４．４３〜４．５９（ｂｓ、１Ｈ）、３．９５（ｓ、３Ｈ）、３．５９〜３．８６（ｍ、４Ｈ）、２．４７〜２．７５（ｍ、２Ｈ）、１．６０〜１．６７（ｍ、３Ｈ）、０．８９（ｂｓ、９Ｈ）、０．０８７〜０．０９（ｂｓ、６Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）（Ｅ／Ｚ異性体）δ１５４．８、１３５．３、１２８．９、１２７．６、１０９．２、７１．３、５８．０、５７．６、５６．６、３０．３、２９．７、２５．７、１４．６、１４．４、−５．４、−５．６；
ＭＳ（ＣＩ）（ｍ／ｚ、相対強度）５２７（ＭＨ＋、２５）、４１８（８２）、３８８（６）、３５９（９）、３２８（７）、３０４（２５）、２７９（４５）、２５８（１３）、２４０（３５）、２１９（１１）、１８４（１０）、１６１（５１）、１４７（２１）、１３３（４１）、１１３（２１）、１０７（１００）、９１（２５）、８１（８）、７３（４０）；
ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ５２６．２６４２（Ｃ２０Ｈ３８Ｎ２Ｏ６Ｓｉの計算値：ｍ／ｚ  ５２６．２４９９）。
【０１８７】
（２Ｓ）−（Ｅ，Ｚ）−Ｎ−（４−ベンジルオキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）−２−エチリデンピロリジンメタノール（２１）の合成
ＴＢＡＦ（１Ｍ  ＴＨＦ溶液、１．７５ｍＬ、１．７５ｍｍｏｌ、１．２当量）をＮ２下に０℃で１５分間にわたって、ＴＢＤＭＳ保護中間体２０（０．７５ｇ、１．４２ｍｍｏｌ）の脱水ＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液に滴下した。反応混合物を昇温させて室温とし、さらに３０分間撹拌したところ、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）で原料が完全に消費されていることが示された。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した（１００ｍＬで３回）。有機相をブラインで洗浄し（１５０ｍＬ）、脱水し（ＭｇＳＯ４）、減圧下に溶媒留去して脱保護生成物２１を得た。それをそれ以上精製せずに次の段階で用いた。
【０１８８】
収量０．６４ｇ（１０９％、生成物とともに少量のＴＢＤＭＳＦ；最大収量０．５７ｇ）；
ＩＲ（ｃｍ−１）４２１４、３４０６、３０２０、２９５８、２９２５、２８５４、２４００、２０８５、１６３１、１５８１、１５２３、１４６３、１４５３、１４３３、１３７８、１３３５、１２７８、１２１５、１０５３、８７０、７５４；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．３７〜７．４７（ｍ、６Ｈ）、６．７７（ｓ、１Ｈ）、５．３３〜５．３７（ｍ、１Ｈ）、５．２２（ｓ、２Ｈ）、４．４３〜４．５９（ｂｓ、１Ｈ）、３．９５（ｓ、３Ｈ）、３．５９〜３．８６（ｍ、４Ｈ）、２．４７〜２．７５（ｍ、２Ｈ）、１．６０〜１．６７（ｍ、３Ｈ）、０．８９（ｂｓ、９Ｈ）、０．０８７〜．００９（ｂｓ、６Ｈ）。
【０１８９】
（２Ｓ）−（Ｅ，Ｚ）−Ｎ−（２−アミノ−４−ベンジルオキシ−５−メトキシベンゾイル）−２−エチリデンピロリジンメタノール（２２）の合成
ニトロ化合物２１（０．６４ｇ、１．３８ｍｍｏｌ、前段階で定量的収率であったと仮定）のＭｅＯＨ（３０ｍＬ）およびＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏ（１．５８ｇ、７ｍｍｏｌ、５当量）溶液を４０分間加熱還流したところ、ＴＬＣ（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）で反応が完結したことが示された。過剰の溶媒を減圧下に留去し、残留油状物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）との間で分配し、Ｎ２下に終夜撹拌した。有機層を分液し、ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、減圧下に溶媒留去した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によって精製して、純粋なアミン中間体２２を明黄色油状物として得た。
【０１９０】
収量０．３２ｇ（６１％）；
ＩＲ（ｃｍ−１）４３２９、４２５７、３４２７、２９２３、２７２７、２３６０、２３４１、２０３６、１７１２、１６２４、１５１３、１４６３、１３７７、１２６４、１２１５、１１７２、１１２０、１００２、８７２、７６１、７２２；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．３５〜７．５１（ｍ、５Ｈ）、６．８７（ｓ、１Ｈ）．６．２７（ｓ、１Ｈ）、５．２８〜５．４２（ｍ、１Ｈ）、５．１７（ｓ、２Ｈ）、４．４３〜４．５９（ｂｓ、１Ｈ）、３．８４（ｓ、３Ｈ）、３．５９〜３．７８（ｍ、４Ｈ）、２．２５〜２．７５（ｍ、２Ｈ）、１．６０（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｚ、３Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）（Ｅ／Ｚ異性体）δ１５０．９、１４１．５、１３６．６、１３４．５、１２８．８、１２７．９、１２７．１、１１７．７、１１７．３、１１２．６、１０３．０、７０．６、６６．１、６０．４、５９．８、５７．２、３４．３、３０．０、２９．４、２１．０、１４．６、１４．３、１３．６。
【０１９１】
（２Ｓ）−（Ｅ，Ｚ）−Ｎ−［２−（ｐ−ニトロベンジルオキシ）カルボキサミド−４−ベンジルオキシ−５−メトキシベンゾイル］−２−エチリデンピロリジンメタノール（２３）の合成
得られたばかりのアミン２２（０．５ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）および脱水ピリジン（０．２０７ｇ、２．６２ｍｍｏｌ、２当量）を脱水ＤＣＭ（３０ｍＬ）にＮ２下で０℃にて溶かした。クロロギ酸４−ニトロベンジル（０．２８２ｇ、１．３１ｍｍｏｌ、１当量）の溶液を２０分間かけて前記アミン溶液に滴下した。反応混合物を同じ条件下で２時間撹拌したところ、ＴＬＣ（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）で原料が完全に消費されたことが明らかになった。混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、飽和ＣｕＳＯ４水溶液（７５ｍＬで２回）、水（１００ｍＬで２回）、ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、脱水した（ＭｇＳＯ４）。有機溶媒を減圧下に留去し、フラッシュクロマトグラフィー（３％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）精製後にｐ−ニトロベンジルカーバメートを単離した。
【０１９２】
収量０．５６ｇ（７６．３％）；
［α］２０Ｄ：＋２０４．６°（ｃ  ０．２２、ＣＨＣｌ３）；
ＩＲ（ｃｍ−１）４３２９、４２５７、３４２６、２９２４、２８５３、２０９３、１７１０、１６２８、１５２４、１４６２、１４０６、１３７７、１３４６０、１２６９、１２１９、１１７５、１１１８、７２２；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ８．８１（ｂｓ、１Ｈ）、８．１９（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．８０（ｓ、１Ｈ）、７．３１〜７．６１（ｍ、７Ｈ）、６．８５（ｓ、１Ｈ）、５．２９〜５．３５（ｍ、１Ｈ）、５．２４（ｓ、２Ｈ）、５．１５（ｓ、２Ｈ）、４．０８〜４．１３（ｂｓ、１Ｈ）、３．８３（ｓ、３Ｈ）、３．６６〜３．８６（ｍ、４Ｈ）、２．３９〜２．７５（ｍ、２Ｈ）、１．５１（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、３Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）（Ｅ／Ｚ異性体）δ１５３．２、１５０．３、１４７．６、１４３．６、１３６．１、１３４．１、１２８．７、１２８．４、１２８．１、１２７．７、１２６．９、１２３．７、１１７．８、１１１．２、７０．７、６５．２、６３．８、５６．６、２９．７、１４．６、１４．４；
ＭＳ（ＦＡＢ）（ｍ／ｚ、相対強度）５６２（ＭＨ＋、１５）、２７９（７７）、２５６（１５）、２４０（３５）、２３１（３７）、１３６（１３）、１２８（２５）、１０６（１４）、９１（１００）、７３（１１）、５７（１１）；  ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ５６１．２１５０（Ｃ３０Ｈ３１Ｎ３Ｏ８の計算値：ｍ／ｚ  ５６１．２１１１）。
【０１９３】
（１１ａＳ）−８−ベンジルオキシ−７−メトキシ−１，３，１０，１１，１１ａ−テトラヒドロ−２−エチリデン−１１−ヒドロキシ−１０−（ｐ−ニトロベンジルオキシ）カルボキシ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５−オン（２４）の合成
未環かカーバメート２３（０．３ｇ、０．５３５ｍｍｏｌ）、ＮＭＯ（９４ｍｇ、０．８０３ｍｍｏｌ、１．５当量）およびモレキュラーシーブス（０．２６７ｇ）の脱水（ＤＣＭ：ＣＨ３ＣＮ、９：３ｍＬ）混合液溶液をＮ２下に室温で１５分間撹拌した。ＴＲＡＰ（９．４ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、５モル％）を加え、混合物を同じ条件下でさらに２．５時間撹拌した。反応混合物をセライト濾過し、濾液を減圧下に溶媒留去した。残留物についてフラッシュクロマトグラフィー（１％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）を行って、標的化合物（２４）を得た。
【０１９４】
実施例５：ＰＢＤ二量体プロドラッグの合成
実施例５（ａ）−１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［［２−（４−ニトロベンジルオキシカルボキサミド）］ビス［（１１ａＳ）−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−１１−ヒドロキシ−５Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン（３０）の合成
【０１９５】
【化５０】
0004669611.tif 000031
１’，３’−ビス（４−カルボキシ−２−メトキシフェノキシ）プロパン（２５）の合成
バニリン酸（１）（４−ヒドロキシ−３−メトキシ安息香酸）（５ｇ、２９．８ｍｍｏｌ、２．１当量）および０．５Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（７０ｍＬ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を高撹拌しながら、それにジヨードプロパン（４．２ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液を滴下した。反応混合物を４８時間還流させ、有機溶媒を減圧下に除去した。残った水相を石油エーテル４０〜６０で洗浄し（１００ｍＬで３回）、それを次に新たな沈殿が認められなくなるまで濃ＨＣｌでｐＨ２の酸性とした。沈殿を濾取し、水で洗浄し、脱水して、二量体酸（２５）を白色結晶として得た。
【０１９６】
収量７．６３ｇ（６８％）；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．６４（ｄｄ、Ｊ１＝８．３Ｈｚ、Ｊ２＝８．３Ｈｚ、２Ｈ）、７．５４（ｓ、２Ｈ）、６．９６（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．２９（ｔ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、４Ｈ）、３．８８（ｓ、６Ｈ）、２．３８（ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７３．１、１６８．１、１５１．９、１４８．９、１２３．５、１１２．４、１１１．４５、６５．２１、５５．８、２８．８；
ＩＲ（ｃｍ−１）＝３６００〜３１００、２９２５、２８５５、１７１３、１６８０、１５９７、１５１６、１４５９、１３７７、１３４４、１３０９、１２７５、１２２３、１１７８、１１３３、１０４５、１０２１；
ＭＳ（ＥＩ）（ｍ／ｚ、相対強度）３７６（Ｍ＋、３４）、２０８（３１）、１６８（４３）、１５２（１５）、１０１（１００）、６９（８７）；
ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ３７６．１１３６（Ｃ１９Ｈ２０Ｏ８の計算値：ｍ／ｚ  ３７６．１１５８）。
【０１９７】
１’，３’−ビス（４−カルボキシ−２−メトキシ−５−ニトロフェノキシ）プロパン（２６）の合成
前記二量体酸２５（５ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）を少量ずつ、７０％ＨＮＯ３の撹拌溶液（５０ｍＬ）に０℃で３０分間かけてゆっくり加えた。添加完了後、反応混合物を昇温させて１５℃とし、撹拌をさらに２時間続けた。反応混合物を氷に投入して生成物を沈殿させた。黄色沈殿物を濾取し、冷水で洗浄し、脱水して、ニトロ化二量体酸核（２６）を淡黄色固体として得た。
【０１９８】
収量４．５２ｇ（７３％）；
融点２４１〜２４６℃；
ＩＲ（ｃｍ−１）３５００〜３２００、２９２４、１７１３、１６０４、１５８２、１５２３、１４５９、１３７７、１２８２、１２１８、１１８９、１０５３；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．４４（ｓ、２Ｈ）、７．１６（ｓ、２Ｈ）、４．３２（ｔ、Ｊ＝６．５Ｈｚ、４Ｈ）、３．９４（ｓ、６Ｈ）、２．４４（ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ、２Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１７２．３、１６７、１１、１５２．５、１４９．２、１４１．１、１３２．１、１２８．６、１２２．７、１１１．２、１０８．３、６５．２、５６．４、３３．９；
ＭＳ（ＥＩ）（ｍ／ｚ、相対強度）４６７（ＭＨ＋、１）、４３６（５）、４２３（１０）、３７６（２）、２５６（６）、２１０（４）、１８３（１０）、１６４（１０）、１５３（３）、９１（９）、７７（４）、５１（１３）、４４（１００）；
ＥＩ−ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  ４６６．０８７６（Ｃ１９Ｈ１８Ｎ２Ｏ１２の計算値：ｍ／ｚ  ４６６．０８５８）。
【０１９９】
１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［２−ニトロ−５−メトキシ−１，４−フェニレン）カルボニル］ビス［ピロリジンメタノール］（２７）の合成
前記ニトロ化二量体核２６（１ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）の脱水ＣＨ３ＣＮ／ＴＨＦ（３０：５ｍＬ）混合液溶液をオキサリルクロライド（０．６４ｇ、５．１４ｍｍｏｌ、２．４当量）およびＤＭＦ（５滴）で終夜処理した。得られた酸塩化物を、ピロリジンメタノール（０．４３２ｇ、４．２８ｍｍｏｌ、２当量）およびＫ２ＣＯ３（１．２ｇ、８．５６ｍｍｏｌ、４当量）の脱水アセトニトリル（８０ｍＬ）懸濁液に−２５℃で窒素下に３０分間かけて滴下した。得られた混合物を−２５℃でさらに１．５時間撹拌し、そこで反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈した。溶液をクロロホルムで抽出した（１００ｍＬで４回）。合わせた有機相を１Ｍ  ＨＣｌ水溶液（７５ｍＬで２回）、水（７５ｍＬで２回）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、減圧下に溶媒留去した。得られた橙赤色油状物をカラムクロマトグラフィー（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によって精製して、純粋な生成物２７を黄色粘稠油状物として得た。
【０２００】
収量０．８８ｇ（６５％）；
［α］２０Ｄ：＋２４６．１°（ｃ  ０．０６７、ＣＨＣｌ３）；
ＩＲ（ｃｍ−１）４３２９、４２５７、３３７０、２９１６、２７２８、１７８７、１７１３、１６１４、１５７４、１５１３、１４６２、１３７７、１３３７、１２７４、１２１５、１０５８、８６８、８２３、７４９、７２３；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．７３（ｓ、２Ｈ）、６．８０（ｓ、２Ｈ）、４．３１〜４．３６（ｍ、６Ｈ）、３．９４（ｓ、６Ｈ）、３．７４〜３．８７（ｍ、４Ｈ）、３．１７（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、４Ｈ）、２．４４（ｔ、Ｊ＝５．９Ｈｚ）、２．１２〜２．２２（ｍ、４Ｈ）、１．７０〜１．９２（ｍ、４Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１５４．８、１４８．３、１３７．０、１２８．０、１０９．１、１０８．４、６６．０、６５．６、６１．４、５６．７、４９．５、２８．６、２４．４；
ＭＳ（ＦＡＢ）（ｍ／ｚ、相対強度）６３３（Ｍ＋＋１、５２）、４４９（１２）、２３６（１１）、２１９（１７）、２０６（１２）、１９６（１５）、１９１（２２）、１７８（２０）、１６６（２０）、１５１（３４）、１３５（２３）、１２８（１１）、１２２（３３）、１１５（１１）、１０２（４７）、９１（１００）、８４（４５）。
【０２０１】
１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［２−アミノ−５−メトキシ−１，４−フェニレン）カルボニル］ビス［ピロリジンメタノール］（２８）の合成
ラネーニッケル（０．２５ｇ）を加えたニトロ中間体（２７）（１ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍＬ）をゆるやかに還流させたものに、ヒドラジン水和物（０．８７ｇ、１．７４ｍｍｏｌ、１０当量）を滴下した（沸騰が均等に起こるよう突沸防止用顆粒を使用した）。反応混合物をさらに１５分間加熱還流したところ、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）で反応が完了していることが示された。触媒を濾去し（注意！自燃性のＮｉ）、濾液を減圧下に溶媒留去して暗褐色油状物を得た。それをフラッシュクロマトグラフィー（７．５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によって精製して、カップリングした二量体アミン（２８）を明黄色油状物として得た。
【０２０２】
収量＝０．６３２ｇ（７０％）；
ＩＲ（ｃｍ−１）３１００〜３６００、２９２５、１６１１、１４６０、１３７７、１２７５、１２１６、１１７５；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ６．７４（ｓ、２Ｈ）、６．３３（ｓ、２Ｈ）、４．３１〜４．４２（ｍ、２Ｈ）、４．１９〜４．２３（ｍ、４Ｈ）、３．７６（ｓ、６Ｈ）、３．５０〜３．６６（ｍ、８Ｈ）、２．２７〜２．４０（ｍ、２Ｈ）、２．０２〜２．１５（ｍ、４Ｈ）、１．７１〜１．８７（ｍ、４Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１５１．１、１４１．０、１１２．８、１０２．３、６５．１、６０．８、５７．１、５０．９、２８．７、２８．４；
ＭＳ（ＦＡＢ）（ｍ／ｚ、相対強度）５７４（Ｍ＋＋２、４４）、５０３（３）、４７３（３０）、３８９（１１）、３７１（３１）、２１９（１４）、２０６（５０）、１９８（１３）、１９２（２７）、１８０（３０）、１６６（１８）、１４９（２８）、１３７（２３）、１２８（１７）、１０２（４３）、９３（６８）、８４（５７）、７０（３３）、５７（３５）。
【０２０３】
１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［［２−（４−ニトロベンジルオキシカルボキサミド）−５−メトキシ−１，４−フェニレン］カルボニル］ビスピロリジンメタノール（２９）の合成
調製したばからの二量体アミン２８（０．４ｇ、０．７ｍｍｏｌ）の脱水ＤＣＭ（１５ｍＬ）およびピリジン（０．１９３ｇ、２．４５ｍｍｏｌ、３．５当量）溶液に０℃で、クロロギ酸４−ニトロベンジル（０．３４７ｇ、１．６１ｍｍｏｌ、２．３当量）の脱水ＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液を２０分間かけて滴下した。得られた反応混合物を０℃でさらに１．５時間撹拌したところ、ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）で原料が完全に消費されたことが示された。反応混合物をクロロホルム（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＣｕＳＯ４水溶液（５０ｍＬで２回）、水（５０ｍＬで２回）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、脱水した（ＭｇＳＯ４）。有機溶媒を減圧下に除去し、純粋な二量体カーバメート２９をフラッシュクロマトグラフィー（７％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）後に明黄色泡状物として得た。
【０２０４】
収量０．５３ｇ（８１％）；
ＩＲ（ｃｍ−１）３４２４、２０８８、１６４１、１５０２、１２４７；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ９．０２（ｂｓ、２Ｈ）、８．２１（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、４Ｈ）、７．７２（ｓ、２Ｈ）、７．５６（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、４Ｈ）、６．８２（５、２Ｈ）、５．２６（ｓ、４Ｈ）、４．２８〜４．３８（ｍ、２Ｈ）、４．２６（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、４Ｈ）、３．７９（ｓ、６Ｈ）、３．４２〜３．７９（ｍ、８Ｈ）、２．２７〜２．４２（ｍ、２Ｈ）、２．１１〜２．１８（ｍ、４Ｈ）、１．７１〜１．８８（ｍ、４Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１７０．７、１５３．２、１５０．６、１４７．６、１４３．６、１２８．５、１２６．９、１２３．９、１１１．５、１０５．９、６５．３、６３．８、６１．０、５６．６、５１．６、３０．３、２８．４；
ＭＳ（ＦＡＢ）（ｍ／ｚ、相対強度）９３２（Ｍ＋＋２、３）、７５３（５）、５５１（５）、２４９（７）、２３２（１３）、２２２（８）、２０６（２３）、１９２（３２）、１７９（２７）、１６６（４６）、１４９（２８）、１３６（６６）、１２０（２２）、１０６（４５）、１０２（１００）、９１（８０）、８４（４８）、７３（７１）、５７（４７）。
【０２０５】
１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［［２−（４−ニトロベンジルオキシカルボキサミド）］ビス［（１１ａＳ）−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−１１−ヒドロキシ−５Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン（３０）の合成
ビスカーバメート２９（０．３５ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）およびＮＭＯ（０．１３４ｇ、１．１４ｍｍｏｌ、３．１当量）のモレキュラーシーブス（０．３５０ｇ）を加えてＮ２下に室温で１５分間撹拌しておいた脱水ＤＣＭ／ＣＨ３ＣＮ（９：３ｍＬ）溶液に、ＴＰＡＰ（１３．４ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ、０．３当量）を１回で加えた。反応の進行をＴＬＣ（７％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）で追跡した。２時間後反応はまだ十分に進行しておらず、追加のＮＭＯ（６７ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ、１．５当量）およびＴＰＡＰ（６．７ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、０．１５当量）が必要であった。さらに３０分間撹拌した後、ＴＬＣで原料が完全に消費されたことがわかった。反応混合物をセライト濾過し、濾液を減圧下に溶媒留去した。得られた黒色残留物についてカラムクロマトグラフィー（１．５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）を行って、生成物を不透明淡黄色油状物として得た。
【０２０６】
収量０．１４３（４２％）；
ＩＲ（ｃｍ−１）３５００〜３０００、２９３３、２２５３、１７２８、１５９９、１５２３、１４６５、１４３１、１４０９、１３４８、１２７０、１２０６、１１７４、１１１１、１０６０；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ８．１８（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、４Ｈ）、７．７４（ｓ、２Ｈ）、７．４８（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、４Ｈ）、６．７１（ｓ、２Ｈ）、５．６５（ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、２Ｈ）、５．２６（ｓ、４Ｈ）、４．２９（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、４Ｈ）、４．０７〜４．１６（ｍ、２Ｈ）、３．８３（ｓ、６Ｈ）、３．４２〜３．７５（ｍ、８Ｈ）、２．２５〜２．３２（ｍ、２Ｈ）、２．１０〜２．２２（ｍ、４Ｈ）、１．６８〜１．７５（ｍ、４Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１６６．９、１５３．２、１４７．６、１４３．８、１４２．８、１２８．２、１２３．９、１１３．９、１１０．９、１０８．３、８６．２、６９．１、６６．３、６５．６、６０．０、５６．４、４６．４、２９．７、２８．７、２３．１、１４．８
ＭＳ（ＦＡＢ）（ｍ／ｚ、相対強度）９２５（Ｍ＋−１、１）、８８９（５）、７１１（６）、５０１（３）、２８６（１０）、２５２（７）、２１３（１５）、１９２（３２）、１９７（１１）、１８５（２２）、１８１（４２）、１６５（１５）、１４９（４７）、１３１（１８）、１１９（１６）、１０５（２９）、９１（９６）、７３（１００）、５７（５４）。
【０２０７】
実施例５（ｂ）−１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［［２−（２，３−ジメトキシ−５−ニトロベンジルオキシカルボキサミド）］ビス［（１１ａＳ）−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−１１−ヒドロキシ−５Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン（３２）の合成
【０２０８】
【化５１】
0004669611.tif 000032
１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［［２−（２，３−ジメトキシ−５−ニトロベンジルオキシカルボキサミド）］−５−メトキシ−１，４−フェニレン］カルボニル］ビス−ピロリジンメタノール（３１）の合成
アミノアルコール２８（０．４ｇ、０．７ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．１９３ｇ、２．５４ｍｍｏｌ）の脱水ＤＣＭ（１５ｍＬ）溶液をＮ２下に０℃で撹拌しながら、それにクロロギ酸２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジル（０．４４３ｇ、１．６１ｍｍｏｌ、２．３当量）の脱水ＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液を２０分間かけて滴下した。反応混合物をクロロホルム（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＣｕＳＯ４水溶液（５０ｍＬで２回）、水（５０ｍＬで２回）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、脱水した（ＭｇＳＯ４）。減圧下で溶媒を除去することで暗黄色油状物を得て、それをフラッシュクロマトグラフィー（７％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によってさらに精製して、純粋な生成物を黄色泡状物として得た。
【０２０９】
収量０．５６４（７７％）；
［α］２０Ｄ：−４３．３°（ｃ  ０．４８５、ＣＨＣｌ３）；
ＩＲ（ｃｍ−１）：４２１４、３４１６、３０２０、２９７３、２９４０、２６１３、２４００、２２５４、２０７５、１７２７、１６１８、１５８５、１５２２、１４６５、１４３８、１４０８、１３３１、１２７８、１２１６、１１７４、１１１８、１０７１、１０３０、９８７、９０９、８７４、８５０、７５４；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ８．９３（ｂｓ、２Ｈ）、７．７１（ｓ、２Ｈ）、７．６９（ｓ、２Ｈ）、７．１０（ｓ、２Ｈ）、６．８２（ｓ、２Ｈ）、５．６０（ｍ、４Ｈ）、４．３４（ｍ、２Ｈ）、４．２６（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、４Ｈ）、３．９９（ｓ、１２Ｈ）、３．９４（ｓ、６Ｈ）、３．５１〜３．７９（ｍ、８Ｈ）、２．２６〜２．３６（ｍ、２Ｈ）、２．０５〜２．１７（ｍ、４Ｈ）、１．８０〜１．８８（ｍ、４Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１７０．６、１５３．７．１５０．４５、１４８．１、１３９．５、１３２．９、１２７．８、１１１．２、１１０．４、１０９．９、１０８．１、６５．４、６３．８、６２．４、６０．８、５６、４、５３．５、５１．４、５０．６、２８．２、２５．０、２１．０、１４．２；
ＭＳ（ＦＡＢ）（ｍ／ｚ、相対強度）１０５３（Ｍ＋＋２、７）、８１４（６）、４１６（３）、３０６（１３）、２９２（５）、２８０（２７）、２４６（４６）、１９７（８１）、１８６（３８）、１８０（２５）、１６６（３７）、１５１（１９）、１０２（２３）、９３（１００）、８４（１０）、７５（３７）、５７（４２）。
【０２１０】
１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［［２−（２，３−ジメトキシ−５−ニトロベンジルオキシカルボキサミド）］ビス［（１１ａＳ）−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−１１−ヒドロキシ−５Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン（３２）の合成
ＮＶＯＣ二量体カーバメート３１（０．４ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）の脱水ＤＣＭおよびアセトニトリル（９：３ｍＬ）溶液を窒素下に撹拌しながら、それにＮＭＯ（０．１３８ｇ、１．１６ｍｍｏｌ、３．１当量）およびモレキュラーシーブス（３５０ｍｇ）を加えた。この混合物を１５分間撹拌してから、ＴＰＡＰ（１３．８ｍｇ、０．１１６ｍｍｏｌ、０．３当量）を加えた。反応混合物を室温でさらに２時間撹拌し、次に追加のＴＰＡＰ（６．９ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ、０．１５当量）およびＮＭＯ（６９ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ、１．５当量）を加えて、さらに４５分間高撹拌した後に反応を完結させた［ＴＬＣ（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）］。有機溶媒を減圧下に留去して黒色残留物を得て、それをカラムクロマトグラフィー（１％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によってさらに精製することで、純粋な最終生成物を暗黄色油状物として得た。
【０２１１】
収量０．１６２（３９％）；
［α］２０Ｄ：−１２１．５°（ｃ  １．０７、ＣＨＣｌ３）；
ＩＲ（ｃｍ−１）４３２９、４２５８、３４２６、２９２６、２８５４、２７２８、２３６０、２３４１、２０４６、１７１２、１６２０、１５８３、１５２３、１４６４、１４０８、１３３０、１２７８、１２１９、１１７２、１１４９、１０７１、１０３０、９８７、８７１、７９６、７５９；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ７．７１（ｓ、２Ｈ）、７．６２（ｓ、２Ｈ）、７．１０（ｓ、２Ｈ）、６．４３（ｓ、２Ｈ）、５．４８〜５．５９（ｍ、６Ｈ）、４．２９〜４．３６（ｍ、２Ｈ）、４．２４〜４．２８（ｔ、Ｊ＝６Ｈｚ、４Ｈ）、３．９５（ｓ、１２Ｈ）、３．８８（ｓ、６Ｈ）、３．４７〜３．５３（ｍ、８Ｈ）、２．３２〜２．４３（ｍ、２Ｈ）、２．０７〜２．１７（ｍ、４Ｈ）、１．６７〜１．９２（ｍ、４Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１７０．４、１５３．８、１５０．２、１４８．９、１３９．６、１３０．９、１２８．８、１２７．６、１１１．５、１１０．６、１０８．１、８６．０、６５．４、６５．０、６３．８、６０．９、５６．４、４６．４、３１．９、２８．２、２５．９．２２．７、１４．１。
【０２１２】
実施例５（ｃ）−１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［［２−（フェニルアセトアミド）］ビス［（１１ａＳ）−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−１１−ヒドロキシ−５Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン（３４）の合成
【０２１３】
【化５２】
0004669611.tif 000033
１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［［２−（フェニルアセトアミド）−５−メトキシ−１，４−フェニレン］カルボニル］ビス−ピロリジンメタノール（３３）の合成
フェニル酢酸（０．２ｇ、１．４７ｍｍｏｌ、２．１当量）およびオキサリルクロライド（０．２２４ｇ、１．７６ｍｍｏｌ、２．５当量）の脱水アセトニトリル（１０ｍＬ）溶液に撹拌下で触媒量のＤＭＦ（４滴）を加え、反応混合物をＮ２下に室温で終夜撹拌した。得られた酸塩化物溶液をＮ２雰囲気下に−２５℃で、Ｋ２ＣＯ３（０．４０６ｇ、２．９４ｍｍｏｌ、４．２当量）を加えたアミン２８（０．４ｇ、０．７ｍｍｏｌ）の脱水アセトニトリル（４０ｍＬ）溶液に撹拌下に３０分間かけて滴下し、反応混合物をさらに１．５時間撹拌した。反応混合物をクロロホルム（５０ｍＬ）で希釈し、１Ｍ  ＨＣｌ（５０ｍＬで２回）、水（７５ｍＬで２回）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、脱水した（ＭｇＳＯ４）。過剰の溶媒を減圧下に留去して、暗黄色油状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）後に、純粋なフェニルアセトアミド保護二量体アミノアルコールを淡黄色油状物として得た。
【０２１４】
収量０．３４４（６４％）；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ９．３１（ｂｓ、２Ｈ）、７．５９（ｓ、２Ｈ）、７．３５（ｓ、１０Ｈ）、６．６８（ｓ、２Ｈ）、４．２０〜４．２８（ｍ、６Ｈ）、４．１４〜４．１６（ｍ、４Ｈ）、３．７１（ｓ、６Ｈ）、３．２４〜３．５６（ｍ、８Ｈ）、２．２７〜２．３９（ｍ、２Ｈ）、２．０２〜２．１７（ｍ、４Ｈ）、１．６４〜１．８１（ｍ、４Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１６９．７、１５０．１、１３４．７、１３０．２、１２９．４、１２８．９、１２７．３、１１０．５、１０８．２、６５．３、６１．１、５６．３、５０．８、４４．７、２９．７、２８．３、２４．７。
【０２１５】
１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［［２−（フェニルアセトアミド）］ビス［（１１ａＳ）−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−１１−ヒドロキシ−５Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン（３４）の合成
ＮＭＯ（０．１４１ｇ、１．２ｍｍｏｌ、３．１当量）およびモレキュラーシーブス（３５０ｍｇ）を、撹拌したフェニルアセトアミド保護二量体カーバメート３３（０．３ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）の脱水ＤＣＭおよびアセトニトリル（９：３ｍＬ）溶液に窒素下で加えた。この混合物を２０分間撹拌してから、ＴＰＡＰ（１４．１ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、０．３１当量）を加えた。室温で反応混合物をさらに１．５時間撹拌し、次に追加のＴＰＡＰ（７ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ、０．１５当量）およびＮＭＯ（７０ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ、１．５当量）を加えて、さらに４５分間にわたって高撹拌することで反応を完結させた［ＴＬＣ（１％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）］。有機溶媒を減圧下に留去して黒色残留物を得て、それをさらにカラムクロマトグラフィー（１％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によって精製して、純粋な最終生成物を暗黄色油状物として得た。
【０２１６】
収量０．１３８ｇ（４７．５％）；
［α］２０Ｄ：＋１３２°（ｃ  ０．２６８、ＣＨＣｌ３）；
ＩＲ（ｃｍ−１）３４１２、２９５９、２９２４、２８５４、２０９４、１６４２、１４６２、１３７７；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ７．２８〜７．３９（ｍ、１０Ｈ）、７．１５（ｓ、２Ｈ）、６．４６（ｓ、２Ｈ）、５．７５〜５．７８（ｄ、Ｊ＝１０Ｈｚ、２Ｈ）、４．１０〜４．３５（ｍ、１０Ｈ）、３．８９（ｓ、６Ｈ）、３．３５〜３．７３（ｍ、８Ｈ）、２．２７〜２．３２（ｍ、２Ｈ）、１．６８〜２．０５（ｍ、８Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１６９．９、１５３．２、１４７．６、１４３．８、１４２．８、１２８．２、１２３．９、１１３．９、１１０．９、１０８．３、８６．５、６９．１、６６．３、６５．６、６０．０、５６．４、４６．４、２９．７、２８．７、２３．１、１４．８。
【０２１７】
実施例５（ｄ）−１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［［２−（４−ニトロベンジルオキシカルボキサミド）］ビス［（１１ａＳ）−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−１１−ヒドロキシ−５Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン（３０）の別途合成
【０２１８】
【化５３】
0004669611.tif 000034
１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［［２−ニトロ−５−メトキシ１，４−フェニレン）カルボニル］］ビス［ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルジチオアセタール］（３５）の合成
二量体ニトロ酸２６（０．２５ｇ、１．０１ｍｍｏｌ）およびオキサリルクロライド（０．３ｇ、２．３３ｍｍｏｌ、２．３当量）の脱水ＴＨＦ懸濁液を撹拌しながら、それにＤＭＦ３〜４滴を加え、反応混合物を窒素下に終夜撹拌した。得られた酸塩化物を、（２Ｓ）−ピロリジン−２−カルボアルデヒド・ジエチルチオアセタール（０．４１６ｇ、２．０２ｍｍｏｌ、２当量）およびトリエチルアミン（０．４１ｇ、４．０４ｍｍｏｌ、４当量）の撹拌溶液にＮ２下０℃で２０分間かけて滴下した。反応混合物を昇温させて室温とし、撹拌をさらに１．５時間続けた。過剰のＴＨＦを除去し、残留物を水（５ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）で抽出した。水相のｐＨを濃ＨＣｌ２滴でｐＨ３に調節してから、ＥｔＯＡｃで抽出した（１０ｍＬで３回）。合わせた有機相を水（１０ｍＬで２回）、ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、有機溶媒を減圧下に留去して暗赤色油状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：石油エーテル４０〜６０、１：１）による精製で、純粋な生成物３５を得た。
【０２１９】
収量０．５５８ｇ（６６％）；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．７２（ｓ、２Ｈ）、６．８３（ｓ、２Ｈ）、４．８９（ｄ、Ｊ＝４．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．６４〜４．７０（ｍ、２Ｈ）、４．３０〜４．４０（ｍ、４Ｈ）、３．９１（ｓ、６Ｈ）、３．１５〜３．３０（ｍ、４Ｈ）、２．５９〜２．７６（ｍ、８Ｈ）、１．７０〜２．３８（ｍ、８Ｈ）、１．３０〜１．３８（ｍ、１２Ｈ）。
【０２２０】
１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［［２−アミノ−５−メトキシ１，４−フェニレン）カルボニル］］ビス［ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルジチオアセタール］（３６）の合成
ニトロチオアセタール３５（０．４ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）およびＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏ（１．４ｇ、６．２２ｍｍｏｌ、１３．２当量）のメタノール（７ｍＬ）溶液を４０分間加熱還流したところ、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：石油エーテル４０〜６０、１：１）で反応が完結していることが示された。反応混合物を室温に戻した後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を加えることでｐＨをｐＨ８に調節した。得られた懸濁液をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、それを窒素下に終夜撹拌した。有機相を分液し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧下に除去して暗黄色ガム状物を得た。それをフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：石油エーテル４０〜６０、３：７）によってさらに精製して、純粋な二量体アミノチオアセタールを明黄色油状物として得た。
【０２２１】
収量０．２８１（５６％）；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ６．８２（ｓ、２Ｈ）、６．２９（ｓ、２Ｈ）、５．３０（ｄ、Ｊ＝４．０Ｈｚ、２Ｈ）、４．６９〜４．８７（ｍ、２Ｈ）．４．０８〜４．２１（ｍ、４Ｈ）、３．７６（ｓ、６Ｈ）、３．６０〜３．６６（ｍ、４Ｈ）、２．６５〜２．７３（ｍ、８Ｈ）、１．８０〜２．３５（ｍ、８Ｈ）、１．２２〜１．３１（ｍ、１２Ｈ）。
【０２２２】
１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［［２−（４−ニトロベンジルオキシカルボニルアミノ−５−メトキシ１，４−フェニレン）カルボニル］］ビス［ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルジチオアセタール］（３７）の合成
ビスアミン３６（０．１８ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．１０１ｇ、１．２８ｍｍｏｌ、５．５当量）の脱水ＤＣＭ（１５ｍＬ）溶液をＮ２下に０℃で撹拌しながら、それにクロロギ酸４−ニトロベンジル（０．１００ｇ、０．４６ｍｍｏｌ、２当量）の脱水ＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液を２０分間かけて滴下した。反応混合物を０℃でさらに１．５時間撹拌し、その後昇温させて室温とし、クロロホルム（５０ｍＬ）で希釈した。有機相を飽和ＣｕＳＯ４水溶液（５０ｍＬで２回）、水（７５ｍＬ）、ブライン（７５ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、過剰の溶媒を減圧下で除去することで暗黄色油状物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（７％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によってさらに精製することで、純粋な生成物を暗黄色泡状物として得た。
【０２２３】
収量０．１７９（６８％）；
［α］２０Ｄ：＋１００°（ｃ  ０．２３２、ＣＨＣｌ３）；
ＩＲ（ｃｍ−１）４２１４、３４２６、３０２０、２４００、２０８５、１６５８、１６０９、１５２５、１４６６、１４５２、１４０８、１３４８、１２６８、１２１６、１１７４、１１１２、１０５２、１０１５、９０８、７５３；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、回転異性体）δ９．１８（ｂｓ、２Ｈ）、８．１９〜８．２４（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、４Ｈ）、６．８２（ｓ、２Ｈ）、６．２９（ｓ、２Ｈ）、５．３０（ｄ、Ｊ＝４．０Ｈｚ、２Ｈ）、４、６９〜４．８７（ｍ、２Ｈ）、４．０８〜４．２１（ｍ、４Ｈ）、３．７６（ｓ、６Ｈ）、３．６０〜３．６６（ｍ、４Ｈ）、２．６５〜２．７３（ｍ、８Ｈ）、１．８０〜２、３５（ｍ、８Ｈ）、１．２２〜１．３１（ｍ、１２Ｈ）。
【０２２４】
１，１’−［［（プロパン−１，３−ジイル）ジオキシ］ビス［［２−（４−ニトロベンジルオキシカルボキサミド）］ビス［（１１ａＳ）−７−メトキシ−１，２，３，１１ａ−テトラヒドロ−１１−ヒドロキシ−５Ｈ−ピロロ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン（３０）の合成
Ｎ−保護アミノチオアセタール３７（０．１５ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）およびＣａＣＯ３（６５ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ、５当量）のアセトニトリル／水（４：１、５ｍＬ）溶液をゆっくり撹拌しながら、それに塩化水銀（１．６ｇ、５．８８ｍｍｏｌ、４．５当量）を加え、室温で撹拌を２４時間続けた。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、セライト濾過した。濾液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１５ｍＬで２回）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、減圧下に溶媒留去して黄色油状物を得た。それをカラムクロマトグラフィー（０から２％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によってさらに精製することで、二量体プロドラッグ化合物３０を得た（収量＝６７．３ｍｇ（５６％））。
【０２２５】
実施例５（ｅ）−実施例５（ａ）〜５（ｄ）における中間体（２６）の別途合成
【０２２６】
【化５４】
0004669611.tif 000035
１’，３’−ビス（４−カルボニル−２−メトキシフェノキシ）プロパン（３９）の合成
バニリン（３８）（１０．４ｇ、６８．３ｍｍｏｌ、２．６当量）、１，３−プロパンジオール（２ｇ、２６．３ｍｍｏｌ、１当量）およびトリフェニルホスフィン（６．８７ｇ、２６．３ｍｍｏｌ、１当量）の脱水ＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液に、窒素下でジエチルアゾジカルボキシレート（４．５７ｇ、２６．３ｍｍｏｌ、１当量）の脱水ＴＨＦ（１５ｍｌ）溶液を１５分間かけて滴下した。反応混合物を終夜撹拌し、クロロホルムで希釈し（７０ｍＬ）、１Ｍ  ＮａＯＨで洗浄した（７５ｍＬで２回）。有機溶媒をロータリーエバポレーターで留去し、残留物をトルエン（１５０ｍＬ）で２４時間にわたって磨砕した。トリフェニルホスフィンオキサイドを濾去し、濾液をＮａＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、減圧下に溶媒留去し、残留不透明油状物をフラッシュクロマトグラフィー（１００％ＣＨＣｌ３）によって精製して白色固体を得た。
【０２２７】
収量＝６．２７（７０％）；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．８４（ｓ、２Ｈ）、７．６２〜７．６６（ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、２Ｈ）、７．３８（ｓ、２Ｈ）、７．０２〜７．０５（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、４．２４〜４．２８（ｔ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、４Ｈ）、３．９１（ｓ、６Ｈ）、２．０５〜２．１２（ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１９０．８、１５４．０、１４９．６、１３１．９、１２９．７、１２８．５、１２６．７、１１．５、１０９．１、６６．６、６１．４、５８．８、５５．９、３１．８、１４．５；
ＭＳ（ＦＡＢ）（ｍ／ｚ、相対強度）３４４（Ｍ＋、２）、２１０（５４）、１５２（１００）、１２３（９）、１０９（１４）．８１（１１）、６５（１０）、５１（１１）。
【０２２８】
１’，３’−ビス（４−カルボニル−２−メトキシ−５−ニトロフェノキシ）プロパン（４０）の合成
二量体アルデヒド（３９）（５ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）を少量ずつ、ＨＮＯ３（１００ｍＬ、７０％）に０℃で３０分間かけて少量ずつ加えた。得られた懸濁液を１５℃でさらに３０分間撹拌してから、氷水に投入し、明黄色沈殿を濾取し、冷水で洗浄し、乾燥して、ニトロ化中間体を得た。
【０２２９】
収量４．６３ｇ（７４％）；
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１０．４１（ｓ、２Ｈ）、７．６７（ｓ、２Ｈ）、７．３７（ｓ、２Ｈ）、４．４１〜４．４５（ｔ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、４Ｈ）、３．９９（ｓ、６Ｈ）、２．８７〜２．９２（ｔ、Ｊ＝６．２Ｈｚ、２Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３＋ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１８７．７、１７２．２、１５３．４、１５１．５、１４３．６、１３２．０．１２８．６、１２５．６、１１０．３、１０９．９、１０８．４、６５．８、５６．６、３３．８；
ＭＳ（ＥＩ）（ｍ／ｚ、相対強度）４３４（Ｍ＋、１）、２７７（３３）、２６９（３７）、２１４（１３）、１９７（２１）、１６７（１００）、１５２（２１）、１２２（２０）、１１１（１５）、９６（１０）、７９（１３）、７２（３２）。
【０２３０】
１’，３’−ビス（４−カルボキシ−２−メトキシ−５−ニトロフェノキシ）プロパン（２６）の合成
アルデヒド（４０）（４ｇ、９．２１ｍｍｏｌ）のアセトン（３００ｍＬ）溶液に１５分間かけて熱ＫＭｎＯ４水溶液（１０ｗ／ｖ％、２００ｍＬ）を滴下した。得られた混合物を４０分間撹拌し、不溶物をセライトで濾去した。セライト層を熱水で洗浄し、合わせた濾液を減圧下に濃縮した。残った水相を濃ＨＣｌで酸性とすることで淡黄色沈殿を得た。それを濾取し、水で洗浄し、乾燥して、二量体酸（２６）を得た（収量３．０８ｇ（７１．８％））。
【０２３１】
実施例６：Ｐｓｅｃ−保護ＰＢＤ（５２）および関連Ｐｔｅｃ−保護ＰＢＤ（５５ａ／ｂ）（比較用）の合成
【０２３２】
【化５５】
0004669611.tif 000036
２級アミン４５の合成
Ｎ−カルボベンジルオキシ−Ｌ−プロリンメチルエステル４１（２１ｇ、０．０８ｍｏｌ）のＴＨＦ（５００ｍＬ）溶液に０℃でテトラヒドロホウ酸リチウム（２．６ｇ、０．１２ｍｏｌ）を少量ずつ加えた。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。溶液を冷却して０℃とし、氷水（１５０ｍＬ）を加えて過剰のテトラヒドロホウ酸リチウムを分解した。得られた懸濁液をＨＣｌ水溶液（１．０Ｎ）でｐＨ４．０に調節し、Ｅｔ２Ｏ（２５０ｍＬ）で抽出した。有機相を分液し、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬで３回）、ブライン（１００ｍＬで２回）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮して、アルコール４２を淡黄色油状物として得た（１８．６ｇ、９９％）。
【０２３３】
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）ｄ２．１〜１．７７（ｍ、４Ｈ）、３．７６〜３．３５（ｍ、４Ｈ）、４．１〜３．７７（ｍ、１Ｈ）、５．１４（２×ｓ、２Ｈ）、７．３８〜７．２８（ｍ、５Ｈ）；
ＣＩＭＳ  ２３６（Ｍ＋）。
【０２３４】
アルコール４２（１８ｇ、０．０７７ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍＬ）溶液に窒素雰囲気下で−１０℃にて、トリエチルアミン（３２ｍＬ、０．２３ｍｏｌ）およびＳＯ３・ピリジン錯体（３７ｇ、０．２３ｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２１０ｍＬ）溶液を加えた。反応混合物を昇温させて室温とし、３０分間撹拌し、氷水（２００ｍＬ）に投入し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。有機相をＨＣｌ水溶液（１．０Ｎ、１５０ｍＬで３回）、Ｈ２Ｏ（１５０ｍＬで３回）、ブライン（１５０ｍＬで２回）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮して黄色油状物を得た。粗取得物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ）によって精製して、アルデヒド４３を無色油状物として得た（１２．６ｇ、７１％）。
【０２３５】
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）ｄ２．１６〜１．８（ｍ、４Ｈ）、３．６６〜３．５（ｍ、２Ｈ）、４．３３〜４、１７（ｍ、１Ｈ）、５．２２〜５、１３（ｍ、２Ｈ）、７．３７〜７．３（ｍ、５Ｈ）、９．５９（２×ｓ、１Ｈ）；
ＣＩＭＳ  ２３４（Ｍ＋＋１）。
【０２３６】
アルデヒド４３（１１ｇ、０．０４７ｍｏｌ）およびオルトギ酸トリメチル（３６ｍＬ、０．３３ｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５５ｍＬ）溶液に０℃で塩化チオニル（５．５ｍＬ）を加えた。反応混合物を６０℃で２時間加熱した。溶液を冷却して室温とし、過剰の固体Ｎａ２ＣＯ３で処理し、Ｅｔ２Ｏ（６０ｍＬ）で希釈した。懸濁液を濾過して不溶無機物を除去し、得られた濾液を減圧下に濃縮し、ＥｔＯＡｃに再度溶かした。有機溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５０ｍＬで３回）、ブライン（５０ｍＬで２回）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮して、アセタール４４を黄色液体として得た（１２．５ｇ、９５％）。
【０２３７】
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）ｄ２．１６〜１．７（ｍ、４Ｈ）、３．６４〜３．３３（ｍ、８Ｈ）、４．０２〜３．９１（ｂｒｍ、１Ｈ）、４．４および４．６（２×ｂｒｓ、１Ｈ）、５．１７〜５．１（ｍ、２Ｈ）、７．４７〜７．２８（ｍ、５Ｈ）。
【０２３８】
アセタール４４（５．８ｇ、０．０２ｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）溶液を、ラネーニッケル（０．２ｇ）とともに室温で１６時間撹拌して、水素化に先だって痕跡量の硫黄不純物を除去した。ニッケルをセライト濾過によって除去した。
【０２３９】
１０％パラジウム炭素（５８０ｍｇ）をアルコール溶液に加え、それを加圧下に（約０．３４５ＭＰａ（約５０ｐｓｉ））水素化した。１６時間後、反応混合物をセライト濾過し、セライト層をＥｔＯＡｃで洗浄し、合わせた有機溶液を濃縮して２級アミン４５を淡緑色液体として得た（２．９ｇ、１００％）。
【０２４０】
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１．９３〜１．５９（ｍ、４Ｈ）、３．１〜２．９２（ｍ、２Ｈ）、３．４〜３．３（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．４１（２×ｓ、６Ｈ）、３．５３（ｂｒｓ、１Ｈ）、４．２（ｄ、Ｊ＝６．８Ｈｔ、１Ｈ）。
【０２４１】
アミン４８の合成
アセタール４５（１ｇ、６．９ｍｍｏｌ）、４，５−ジメトキシ−２−ニトロ安息香酸４６（１．６ｇ、６．９ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ（２．２ｇ、６．９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１．２ｍＬ、６．９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）溶液を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、粗取得物をＥｔＯＡｃで抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍＬで３回）、ＨＣｌ（１．０Ｎ、３０ｍＬで３回）、Ｈ２Ｏ（３０ｍＬで３回）、ブライン（３０ｍＬで３回）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮して、黄色半固体を得た。粗取得物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２：１ＥｔＯＡｃ：石油エーテル４０〜６０）によって精製して、ニトロ化合物４７を淡クリーム色固体として得た（１．２８ｇ、５１％）。
【０２４２】
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ２．２６〜１．６７（ｍ、４Ｈ）、３．１９〜３．０６（ｍ、２Ｈ）、３．５９および３．５７（２×ｓ、６Ｈ）、３．９８（ｓ、６Ｈ）、４．４５〜４．４（ｍ、１Ｈ）、４．９５〜４．９４（ｄ、Ｊ＝２．６Ｈｚ、１Ｈ）、６．７６（ｓ、１Ｈ）、７．７１（ｓ、１Ｈ）；
ＣＩＭＳ  ３５５（Ｍ＋＋１）。
【０２４３】
１０％パラジウム炭素（１３０ｍｇ）を、ニトロ化合物４７（１．２８ｇ、３．６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）溶液に加え、それを加圧下に（約０．３４５ＭＰａ（約５０ｐｓｉ））水素化した。２０時間後、反応混合物をセライト濾過し、セライト層をＥｔＯＡｃで洗浄し、合わせた有機溶液を濃縮して２級アミン４８を淡色油状物として得た（１．２６ｇ、９８％）。
【０２４４】
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ２．１８〜１．６５（ｍ、４Ｈ）、３．５７〜３．４７（ｍ、８Ｈ）、３．８５および３．８（２×ｓ、６Ｈ）、４．４２〜４．３８（ｍ、１Ｈ）、４．７４〜４．７（ｍ、１Ｈ）、６．３（ｓ、１Ｈ）、６．７７（ｓ、１Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（６８．７ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ２４．０３、２５．０７、５０．５６、５５．８、５６．２４、５６．８６、５７．６５、５８．８２、１０１．０７、１０５．０１、１１１．７５、１１２．５２、１４１．０７、１５１．８１、１６９．７６；
ＥＩＭＳ  ３２４（Ｍ＋）。
【０２４５】
Ｐｓｅｃ−保護ＰＢＤ５２の合成
２−（フェニルスルホニル）エタノール４９（３７５ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ）およびトリホスゲン（２００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液に０℃でピリジン（５５μＬ、０．６７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。ピリジン（１５０μＬ、１．８５ｍｍｏｌ）および粗クロロホルメート５０を、アミン４８（０．５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）溶液に０℃で加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。溶液を減圧下に濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相を１０％クエン酸（２０ｍＬで２回）、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮して黄色油状物を得た。粗取得物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ）によって精製して、カーバメート５１を無色油状物として得た（７７０ｍｇ、９３％）。
【０２４６】
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ２．１７〜１．７２（ｍ、６Ｈ）、３．５５〜３．３４（ｍ、１０Ｈ）、３．９２および３．８４（２×ｓ、６Ｈ）、４．５〜４．４（ｍ、２Ｈ）、４．７５（ｂｒｓ、１Ｈ）、６．８２（ｓ、１Ｈ）、７．９７〜７．５６（ｍ、６Ｈ）、８．８９（ｂｒｓ、１Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（６８．７ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１４．１９、２１．０４、２３．８８、５５．３１、５６．１２、５６．３１、５６．３９、５７．５２、５８．２５、５８．９４、６０．３８、１０３．９１、１０４．７４、１１１．１５、１２７．９７、１２８．０９、１２９．４３、１３３．９８、１３４．０５、１３９．２９、１４３．７５、１５１．０９、１５２．７２、１６８．８３；
ＦＡＲＭＳ  ５３６（Ｍ＋）。
【０２４７】
カーバメート５１の脱水アセトン（１４ｍＬ）溶液にトランス−ビス（アセトニトリル）パラジウム（ＩＩ）クロライド（１０７ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を加えた、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。溶液を減圧下に濃縮して褐色泡状物を得た。粗取得物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ）によって精製して、メチルエーテル５２を橙赤色油状物として得た（６９０ｍｇ、８５％）。
【０２４８】
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ２．１２〜１．７８（ｍ、６Ｈ）、３．２２〜３．１７（ｍ、１Ｈ）、３．７〜３．４（ｍ、７Ｈ）、３．９８および３．９４（２×ｓ、６Ｈ）、４．６９〜４、６５（ｍ、１Ｈ）、５．４６〜５．４３（ｄ、Ｊ＝９．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．０３（ｓ、１Ｈ）、７．２２（ｓ、１Ｈ）、７．８７〜７．５３（ｍ、５Ｈ）；
１３Ｃ  ＮＭＲ（６８．７ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１４．１９、２１．０６、２３．２１、２８．９８、４６．３３、５４．７４、５６．１５、５６．３９、５６．４５、５８．５８、６０．０９、６０．３９、９３．３３、１１０．１８、１１３．３２、１２６．２４、１２８．０７、１２８．２７、１２９．４９、１３４．１３、１３８．５９、１４８．７７、１５１．１５、１５５．６５、１６７．３６；
ＥＩＭＳ  ５０４（Ｍ＋）。
【０２４９】
Ｐｔｅｃ−ＰＢＤ５５ａ／ｂの合成
【０２５０】
【化５６】
0004669611.tif 000037
２−（フェニルチオ）エタノール５３（３５５ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）およびトリホスゲン（２３０ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液に０℃でピリジン（６５μＬ、０．７７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。ピリジン（１５０μＬ、１．８５ｍｍｏｌ）および粗クロロホルメート５４を、アミン４７（０．５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）溶液に０℃で加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。溶液を減圧下に濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機相をＨＣｌ（１．０Ｎ、２０ｍＬで２回）、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮して褐色油状物を得た。粗取得物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２：１ＥｔＯＡｃ：石油エーテル４０〜６０）によって精製して、カルビノールアミン５５ａとメチルエーテル５５ｂの混合物を黄色ガム状物物として得た（５１０ｍｇ、６６％）。
【０２５１】
１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ２．１〜１．９９（ｍ、４Ｈ）、３．１５〜２．９８（ｍ、２Ｈ）、３．７１〜３．４４（ｍ、４Ｈ）、３．９３および３．８９（２×ｓ、６Ｈ）、４．３８〜４．０７（ｍ、１Ｈ）、５．４５〜５．４１（ｄ、Ｊ＝９．３Ｈｚ、１Ｈ）、５．６５〜５、６１（ｄ、Ｊ＝９．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．７６（ｓ、１Ｈ）、７．２９〜７．１９（ｍ、６Ｈ）；  １３Ｃ  ＮＭＲ（６８．７ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ２３．０５、２３．２１、２８．７、２８．９８、２９．３６、２９．６８、３２．７２、３２．９９、４６．３６、５６．１３、５６．１９、５６．５９、５９．９、６０．１３、６３．９１、６４．１９、８６．０７、９３．３７、１１０．３６、１１２．５５、１１２．８５、１２５．６７、１２６．６９、１２８．３、１２９．１５、１２９．７２、１２９．９７、１３４．８５、１４８．３６、１５０．８３、１５６．０２、１６７．０５；
ＥＩＭＳ  ４５８（Ｍ＋、５５ａ）、４７２（Ｍ＋、５５ｂ）。
【０２５２】
実施例７：ベンジルＤＣ−８１プロドラッグ（化合物７）のニトロレダクターゼ活性化
実施例１に従って合成した化合物７を、２種類の異なる細胞系、すなわちＳＷ１１１６とＬＳ１７４Ｔで評価した。ＳＷ１１１６とＬＳ１７４Ｔのいずれもヒト腺癌結腸細胞系であり、病院（Charing Cross Hospital）で成長させたものである。濃度２５００個／ｍＬで細胞を９６ウェルの微量定量プレートに入れ、大腸菌ニトロレダクターゼ−モノクローナル抗体結合体の存在下または非存在下での各種濃度のプロドラッグのリン酸緩衝生理食塩水（Sigmaから入手可能）溶液およびＮＡＤＨ（酵素機能に必要な補助因子）のＤＭＳＯ溶液とともに３７℃で１時間インキュベートした。細胞を洗浄し、３７℃でさらに３日間インキュベートした。その後、細胞を固定し（ＴＣＡ）、染色した。プレートに付着している残留生存細胞の濃度を、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）染料によって定量した。プロドラッグのみで処理した対照細胞群を用いて、酵素活性化前の化合物の細胞毒性を評価した。
【０２５３】
結果を図４に示してある。プロドラッグ単独は、５００μＭまでの濃度であってもＳＷ１１１６細胞で実質的に無毒性であることが認められた。ＬＳ１７４Ｔ細胞系では、１００μＭを超える濃度で若干の毒性が認められた。この酵素および補助因子存在下では、化合物７のＩＣ５０はいずれの細胞系でも１〜５μＭであることが確認された。
【０２５４】
同一条件下に同一細胞系で親薬剤であるベンジルＤＣ−８１（Thurston et al., 1990, Chem. Brit., 26, 767-772）も評価して、プロドラッグ／酵素系によって得られる活性化の程度を確認した。親薬剤のＩＣ５０値（ＩＣ５０＝０．００８μＭ）とニトロレダクターゼ活性化プロドラッグのＩＣ５０値（ＩＣ５０＝１〜５μＭ）との差は、２０〜１００倍であることが認められた。
【０２５５】
実施例８：ＤＳＢ−１２０プロドラッグ（化合物３０）のニトロレダクターゼ活性化
化合物３０（実施例５（ａ）および５（ｅ）参照）を、実施例６で用いたものと同じ条件下でＬＳ１７４Ｔ細胞系で評価した。ＩＣ５０値は２１５．３μＭ（２つの測定値の平均）であることが認められ、それは酵素および補助因子を加えた後で１３．７μＭまで低下し、１５〜１６倍の活性化係数を表していた。親薬剤ＤＳＢ−１２０のこの細胞系での細胞毒性（ＩＣ５０）は０．０００５μＭであって、化合物７と比較して二量体プロドラッグの活性化があまり有効でないことを示している。
【０２５６】
実施例９：ベンジルトマイマイシンプロドラッグ（化合物２４）のニトロレダクターゼ活性化
化合物２４（実施例４参照）について、実施例６と同じ細胞系および同じ条件下で調べた。それは、８６．２μＭ（２回の実験の平均）というＩＣ５０値を示し、それは酵素結合体およびＮＡＤＨを加えた後に６．４μＭまで低下し、活性化係数が約１３．５であることを示していた。この場合、親のベンジルトマイマイシンは、対照として評価用には入手することができなかった。しかしながら、トマイマイシンのＡ環のＣ８位へのベンジル基付加は化合物の細胞毒性をあまり変化させない（ＤＣ−８１／Ｃ８−ベンジルＤＣ−８１の場合のように）と仮定すると、Ｃ８−ベンジルトマイマイシンの細胞毒性は０．０１〜０．００１μＭのレベルであるはずである。
【０２５７】
実施例１０：ベンジルＤＣ−８１プロドラッグ（化合物１１）の光活性化
この実験では、紫外線架橋装置（Stratagene UVA Crosslinker）（３６５ｎｍ）を用い、濃度１ｍＭの化合物１１（実施例３参照）のＤＭＦ溶液について光照射を行った。少量ずつ（１００μＬ）を３０分後、１時間後、２時間後および３時間後に取り、ウォーターズ（Waters）Ｃ４、３００Å逆相カラムおよび移動相としての５０％メタノール／５０％水を用いるＨＰＬＣによって光感受性ＮＶＯＣ基の開裂をモニタリングした。化合物１１は保持時間が１１．２５分であり、光照射すると保持時間８．５８分に新たなピークを生じた。標品のベンジルＤＣ−８１は８．５８分という同じ保持時間を有している。脱保護プロセスの時間経過を図５に示してある。完全な変換は、用いた条件下で３６５ｎｍでの照射を２時間行うことで得られた。
【０２５８】
ＭＴＴアッセイを用いて、ある時間経過ごとに取った活性化類縁体の少量サンプルが培養液中での慢性ヒト組織球白血病Ｋ５６２細胞の成長を阻害する能力を評価した。広範囲の濃度の薬剤で細胞を処理した後、細胞を９６ウェル微量定量プレートに１０４個／ウェル、８ウェル／サンプルで移した。プレートを５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気下に３７℃でインキュベートした。このアッセイは、生存細胞が不溶性の紫色ホルマザン沈殿に対して黄色の可溶性である３−（４，５−ジメチルチアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ）・テトラゾリウム塩を低減させる能力に基づいたものである。プレートを４日間インキュベートした後（対照細胞数を１０倍に増やすため）、５ｍｇ／ｍＬ  ＭＴＴのリン酸緩衝生理食塩水溶液２０μＬを各ウェルに加え、プレートをさらに５時間インキュベートした。プレートを３００ｇで５分間遠心し、多量の媒体を細胞ペレットから除去した。各ウェルにＤＭＳＯ（２００μＬ）を加え、サンプルを撹拌して完全に混合するようにした。ＥＬＩＳＡプレート読取装置（Titertek Multiscan）で波長５５０ｎｍにて光学密度を測定し、対照光学密度のパーセントとして表した。各曲線について、最終光学密度を対照値の５０％まで低下させるのに必要な用量としてＩＣ５０値を読み取った。
【０２５９】
調べたＰＢＤプロドラッグ化合物１１自体は、無視できる程度の細胞毒性を有することが明らかになった（ＩＣ５０＝４７．５μＭ；図６）。照射後には細胞毒性にかなりの上昇が認められ（図６）、照射１時間後にはＩＣ５０値は０．６μＭとなった。同様の条件下での標品ベンジルＤＣ−８１のＩＣ５０値は０．５μＭであった。
【０２６０】
【表１】
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【０２６１】
ＤＭＦ中のプロドラッグ濃度が１０ｍＭと比較的高いと光誘発開裂の効率が低くなり、２時間の照射でＩＣ５０値は１．７５μＭであった（図７参照）。
【０２６２】
【表２】
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【０２６３】
プロドラッグ濃度が高いとＵＶ光の効果的な吸収が防止される可能性があると考えられる。さらに、溶媒をＤＭＦからメタノールに変更すると変換効率が低くなった（図８）。
【０２６４】
【表３】
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【０２６５】
実施例１１：二量体ＤＳＢ−１２０プロドラッグ（化合物３２）の光活性化
二量体誘導体３２（実施例５（ｂ）参照）は、ＵＶ照射前にはやや細胞毒性であって、ＩＣ５０値が４．５μＭであることが認められた。２時間の照射後の細胞で化合物３２の溶液をインキュベーションすると、ＩＣ５０値は１．２５μＭまで低下した（図９）。これはさらに、５時間の照射後では０．８５μＭまで低下した。親ＰＢＤ二量体ＤＳＢ−１２０は、同じ細胞系で０．５５μＭというＩＣ５０値を与えた（図９参照）。
【０２６６】
【表４】
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【０２６７】
これらの実験ではＨＰＬＣデータ（不図示）から、プロドラッグ３２（保持時＝５．１８分）の保持時間＝３．６４分の生成物へのほぼ完全な変換が２時間の照射によって生じ、５時間で完全に変換されたことが示唆された。標品のＤＳＢ−１２０は保持時間３．６４分で溶出した。
【０２６８】
実施例１２：ＰｓｅｃおよびＰｔｅｃ保護ＰＢＤ（化合物５２および化合物５５）の生理活性の比較
化合物５２（ＵＰ２０７３）および比較化合物５５ｂ（ＵＰ２０９０）について、英国癌研究所（The Institute of Cancer Research, Sutton）のケランド博士（Dr Lloyd R. Kelland）のグループが卵巣細胞系での細胞毒性活性を評価した。調べた５種類の細胞系はＳＫＯＶ−３、Ａ２７８０／Ａ２７８０ｃｉｓＲおよびＣＨ１／ＣＨ１ｃｉｓＲ（ｃｉｓＲは、細胞系がシスプラチンに対して抵抗性であることを示している）であった。
【０２６９】
単一の生存細胞を９６ウェル微量定量プレートにおいて成長培地（１６０μＬ）に接種し、終夜で付着させた。被験化合物をＤＭＳＯに溶かし（２０ｍＭ薬剤濃度を得る）、直ちに四連ウェルで細胞を加えた。ウェルにおける最終薬剤濃度は１００μＭから２．５ｎＭの範囲であり、実際には１００、２５、１０、２．５、１μＭ、２５０、１００、２５、１０、２．５ｎＭであった（薬剤を成長培地で希釈し、既存のウェル容量１６０μＬに４０μＬを加えて上記の最終濃度を得た）。９６時間後、培地を除去し、残った細胞を氷上で１０％トリクロロ酢酸に３０分間曝露することで固定した。次にウェルを水道水で３〜４回洗浄し、終夜風乾し、１％酢酸に溶かしたスルホローダミンＢ（０．４％）１００μＬで処理した。染色を１０〜１５分間継続してから、ウェルを１％酢酸で３〜４回洗浄し、風乾してからＴｒｉｓ塩基（１０ｍＭのもの１００μＬ）に加えた。プレートを振盪し、５４０ｎＭでの吸光度読取値をプレート読取装置を用いて求めた。濃度の吸光度％に対するプロットからＩＣ５０値を計算した（８個の未処理ウェルと比較）。
【０２７０】
化合物５６（ＵＰ２０２５）を用いてもアッセイを行った。
【０２７１】
【化５７】
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これは化合物５２の未保護型のものである。
【０２７２】
結果を以下に示す。
【０２７３】
【表５】
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【０２７４】
ＲＦは抵抗性係数であり、シスプラチン抵抗性細胞における化合物の細胞毒性を正常な細胞系での毒性で割った値である。
【０２７５】
Ｐｔｅｃ保護ＰＢＤ（５５ｂ）であるＵＰ２０９０は、Ｐｔｅｃ保護基がＧＳＴへの曝露時に保護基の断片化を誘発する上で必要と考えられる酸性プロトンを持たないことから予想されるように、卵巣細胞系に対して実質的に不活性である。しかしながら、Ｐｓｅｃ−保護プロドラッグ（５２）であるＵＰ２０７３は、Ｐｔｅｃ対照より５０倍以上の毒性を有することを示した。この化合物は特にＳＫＯＶ３細胞系に対して活性であり、それはこの細胞系が高レベルのグルタチオン／グルタチオントランスフェラーゼが存在するために親電子細胞毒性剤に対して本来抵抗性であることから注目すべきことである。興味深いことに、ＰｓｅｃプロドラッグＵＰ２０７３は実際には、それの基礎となっているＰＢＤであるＵＰ２０２５よりこの細胞系では活性が高かった。理論に拘束されるものではないが、このプロドラッグは、作用部位近くで脱保護されるまでグルタチオンおよび他の生体内求核剤から保護される可能性がある。
【０２７６】
ＵＰ２０７３についてはまた、国立癌研究所（The National Cancer Institute (NCI), Bethesda, Marykand USA）がスクリーニングを行った。ＮＣＩは、それぞれ１０倍で異なる最低５種類の濃度で化合物の試験を行う約６０種類のヒト腫瘍細胞系からなるin vitro細胞毒性スクリーニング材料を使用することができる。細胞の生存性または成長がＳＲＢ蛋白アッセイで推定される場合には、４８時間連続曝露プロトコールを用いる。
【０２７７】
方法
約６０種類のヒト腫瘍細胞系に対して被験化合物を評価した。ＮＣＩスクリーニング手順については、モンクスらの報告に詳細に記載されている（Monks, A et al., Journal of the National Cancer Institute, 1991, 83, 757）。すなわち、細胞懸濁液を特定の細胞型および予想される標的細胞密度（細胞成長特性に基づいて５０００〜４００００個／ウェル）に従って希釈し、ピペット（１００μＬ）によって９６ウェル微量定量プレートに加えた。細胞を３７℃で２４時間にわたって前インキュベーションして安定化させた。所期の試験濃度の２倍の希釈液を時間ゼロで１００μＬずつウェルに加えた。被験化合物は、５種類の１０倍希釈液（１０−４、１０−５、１０−６、１０−７および１０−８μＭ）で評価した。被験化合物を５％ＣＯ２雰囲気および１００％湿度で４８時間インキュベートした。次に、スルホローダミンＢアッセイを用いて細胞のアッセイを行った。プレート読取装置を用いて光学密度を読み取り、マイクロコンピューターで読取値を処理して、半数の細胞を殺すのに必要な用量であるＬＣ５０値とした。細胞の半分の成長を阻害するのに必要な用量も測定した。
【０２７８】
ＵＰ２０７３はスクリーニングで良好な成績を示し、肺、結腸、ＣＮＳ、メラノーマ、腎臓および乳房の腫瘍細胞系パネルで細胞系に対する活性を示した。興味深いことに、５３にわたる細胞系のＬＣ５０データを解析したところ、グルタチオントランスフェラーゼ活性に対する若干の相関性が示唆された。選択した結果を以下に示す。
【０２７９】
【表６】
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【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は本発明による合成図式である。
【図２ａ】  図２ａは本発明による二量体の合成図式である。
【図２ｂ】  図２ｂは本発明による二量体の合成図式である。
【図３】  図３は、本発明で使用される別途環化を示す合成図式である。
【図４】  図４は、ＳＷ１１１６細胞およびＬＳ１７４Ｔ細胞におけるニトロレダクターゼ／ＮＡＤＨによる活性化前後での、プロドラッグ化合物７（実施例１参照）における細胞毒性結果を示すグラフである。
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【図５】  図５は、３時間の期間にわたるＵＶＡ（３６５ｎｍ）露光によって開裂した化合物１１（実施例３参照）のパーセントを示すグラフである。
【図６】  図６は、照射時間を変動させた場合における、当初薬剤濃度１ｍＭでの、ＤＭＦ中のヒト慢性骨髄性白血病Ｋ５６２細胞に対するベンジルＤＣ−８１および化合物１１のin vitro細胞毒性（ＩＣ５０；μＭ）を示すグラフである。
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【図７】  図７は、照射時間を変動させた場合における、当初薬剤濃度１０ｍＭでの、ＤＭＦ中のヒト慢性骨髄性白血病Ｋ５６２細胞に対するベンジルＤＣ−８１および化合物１１のin vitro細胞毒性（ＩＣ５０；μＭ）を示すグラフである。
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【図８】  図８は、照射時間を変動させた場合における、当初薬剤濃度１ｍＭでの、メタノール中のヒト慢性骨髄性白血病Ｋ５６２細胞に対するベンジルＤＣ−８１および化合物１１のin vitro細胞毒性（ＩＣ５０；μＭ）を示すグラフである。
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【図９】  図９は、照射時間を変動させた場合における、当初薬剤濃度１ｍＭでの、メタノール中のヒト慢性骨髄性白血病Ｋ５６２細胞に対するＤＳＢ−１２０および化合物３２のin vitro細胞毒性（ＩＣ５０；μＭ）を示すグラフである。
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【図１】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
0004669611.tif 000073
【図８】
0004669611.tif 000074
【図９】
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