(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
放射線標識された化合物を調製する方法であって、
フルオロアルキルスズ部分により置換され、放射線標識された化合物の前駆化合物を、放射線標識送達化合物と反応させて、放射線標識された化合物を含む粗反応生成物を生ずるステップであって、フルオロアルキルスズ部分が放射線標識で置換され、そして前記放射線標識送達化合物が１８Ｆ、１２５Ｉ、１２３Ｉ及び１３１Ｉから選ばれる放射線標識を送達する、ステップ；
前記粗反応生成物を、フルオラスシリカを含むフルオラスカラムに付すステップ；及び
前記フルオラスカラムから前記放射線標識された化合物を溶出するステップ、
を含む、方法。
【請求項２】
前記放射線標識した化合物がアリール部分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記放射線標識した化合物がアリール酸部分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記放射線標識した化合物が安息香酸部分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記放射線標識した化合物がベンズアミド部分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ベンズアミドがＮ−（２−ジエチルアミノエチル）ベンズアミド部分を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記放射線標識した化合物がベンジルアミン部分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記放射線標識した化合物がベンジルグアニジン部分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記放射線標識した化合物がベンジルアミン−Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ部分を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記フルオロアルキルスズ部分がトリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記放射線標識した化合物が安息香酸部分を含み、前記フルオロアルキルスズ部分がトリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズであり、及び前記放射線標識が１８Ｆである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記放射線標識した化合物が安息香酸部分を含み、前記フルオロアルキルスズ部分がトリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズであり、前記放射線標識が１２５Ｉである、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記放射線標識した化合物がＮ−（２−ジエチルアミノエチル）ベンズアミド部分を含み、前記フルオロアルキルスズ部分がトリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズであり、前記放射線標識が１２３Ｉである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記放射線標識した化合物がベンジルアミン部分を含み、前記フルオロアルキルスズ部分がトリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズであり、前記放射線標識が１２３Ｉおよび１３１Ｉからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記放射線標識した化合物がベンジルグアニジン部分を含み、前記フルオロアルキルスズ部分がトリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズであり、前記放射線標識が１２３Ｉおよび１３１Ｉからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記放射線標識した化合物がベンジルアミン−Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ部分を含み、前記フルオロアルキルスズ部分がトリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズであり、前記放射線標識が１２３Ｉおよび１３１Ｉからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
画像診断法での、放射線標識したペプチド、モノクローナル抗体（ＭｏＡｂｓ）、およびオリゴデオキシヌクレオチドの応用は、核医学の新たな時代の到来を告げた１。その特異性ゆえに、これらの化合物は、特異的なレセプター媒介性生化学的プロセスを機能的に画像化することができる。合成オリゴペプチドは、特に魅力的であった。なぜならそれらは容易に合成することができ、それらの薬物動態学的性質は、核医学での適用に理想的であることが多いからである。例えば、インジウム−１１１で標識した、８アミノ酸からなるソマトスタチンアナログは、現在神経内分泌腫瘍の場所を突き止め、画像化するためにルーチンで使用されている２。
【発明の開示】
【０００２】
ある態様において、本発明は、放射線標識した化合物を精製する方法であって、ａ）フルオラスポリマー上に、フルオロアルキルスズ部分を含む、放射線標識した化合物の前駆物質を載せること、ｂ）前記放射線標識した化合物の前駆物質と放射線標識送達化合物とを反応させて、前記フルオロアルキルスズ部分が放射線標識で置換されている放射線標識した化合物を得ること、およびｃ）前記フルオラスポリマーから前記放射線標識した化合物を溶出させることを含む方法に関する。 
【０００３】
更なる態様において、放射線標識した化合物はアリール部分を含む。
【０００４】
更なる態様において、放射線標識した化合物はアリール酸を含む。
【０００５】
更なる態様において、放射線標識した化合物は安息香酸である。
【０００６】
更なる態様において、放射線標識した化合物はベンズアミドである。
【０００７】
更なる態様において、ベンズアミドはＮ−（２−ジエチルアミノエチル）ベンズアミドである。
【０００８】
更なる態様において、放射線標識した化合物はベンジルアミンである。
【０００９】
更なる態様において、放射線標識した化合物はベンジルグアニジンである。
【００１０】
更なる態様において、放射線標識した化合物はベンジルアミン−ＧＦＬＭ（ｆ）である。
【００１１】
更なる態様において、フルオロアルキルスズ部分はトリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズである。
【００１２】
更なる態様において、フルオラスポリマーはフルオラスシリカである。
【００１３】
更なる態様において、放射線標識は、９９ｍＴｃ、９４ｍＴｃ、１８６Ｒｅ、１０５Ｒｈ、１８Ｆ、１１Ｃ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、７６Ｂｒおよび１１１Ａｔからなる群から選択される。
【００１４】
更なる態様において、放射線標識は、１８Ｆ、１２５Ｉ、１２３Ｉおよび１３１Ｉからなる群から選択される。
【００１５】
更なる態様において、放射線標識した化合物は安息香酸であり、フルオロアルキルスズ部分はトリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズであり、フルオラスポリマーはフルオラスシリカであり、放射線標識は１８Ｆである。
【００１６】
更なる態様において、放射線標識した化合物は安息香酸であり、フルオロアルキルスズ部分はトリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズであり、フルオラスポリマーはフルオラスシリカであり、放射線標識は２５Ｉである。
【００１７】
更なる態様において、放射線標識した化合物はＮ−（２−ジエチルアミノエチル）ベンズアミドであり、フルオロアルキルスズ部分はトリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズであり、フルオラスポリマーはフルオラスシリカであり、放射線標識は１２３Ｉである。
【００１８】
更なる態様において、放射線標識した化合物はベンジルアミンであり、フルオロアルキルスズ部分はトリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズであり、フルオラスポリマーはフルオラスシリカであり、放射線標識は１２３Ｉおよび１３１Ｉからなる群から選択される。
【００１９】
更なる態様において、放射線標識した化合物がベンジルグアニジンであり、フルオロアルキルスズ部分がトリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズであり、フルオラスポリマーがフルオラスシリカであり、放射線標識が１２３Ｉおよび１３１Ｉからなる群から選択される。
【００２０】
更なる態様において、放射線標識した化合物はベンジルアミン−ＧＦＬＭ（ｆ）であり、フルオロアルキルスズ部分はトリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズであり、フルオラスポリマーはフルオラスシリカであり、放射線標識が１２３Ｉおよび１３１Ｉからなる群から選択される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
フルオラス化学を用いた安息香酸およびベンズアミドの標識化
放射性ハロゲンをペプチドに組み込むための主なアプローチは２つある。第１のアプローチは、親分子の直接的な標識化である。例えば、チロシン残基を、求電子性ヨウ素化３、ヨードゲン４によって、またはBolton-Hunter試薬５を用いて標識することができる。これらの方法の主な短所は、標識反応の部位選択性およびストイキオメトリーが制御困難である場合が多いことである。
【００２２】
第２のアプローチは、ペプチド上でペンダントアミノ基と反応するであろう活性化されたエステル官能基性をもつ、標識した前駆物質の反応に関する。反応条件に注目すれば、得られたアミド結合は部位選択的に形成され得る。最も一般的な標識試薬のうちの２つは、Ｎ−スクシンイミジル４−［１８Ｆ］フルオロ安息香酸（［１８Ｆ］ＳＦＢ）とＮ−スクシンイミジル３−［１３１Ｉ］ヨード安息香酸（ＳＩＢ）である６、７。１８Ｆ誘導体および１２５Ｉ誘導体は、典型的に求核置換および脱スタンニル化反応によってそれぞれ合成される（スキーム１）。
【００２３】
スキーム１：［１８Ｆ］ＳＦＢおよび［１２５Ｉ］ＳＩＢの合成および結合
【化１】
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【００２４】
放射性医薬品開発のためのフルオラス合成アプローチの実用性を最もよく説明するために、異なる標識アプローチに有用であり、適応可能であるモデル化合物を選択した。こうして標的化合物は、トリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズ−３または４−安息香酸（化合物２．１または２．２）となった。
【化２】
0004846238.tif 000003
【００２５】
２．１および/または２．２は、［１８Ｆ］Ｆ２および［１２５Ｉ］Ｉ２を含む種々のアイソトープでの標識化を容易にし、標識化の前後において、種々の、アミノ末端をもつ化合物と生体分子との結合を可能にすることが望まれていた。
【００２６】
「フルオラスタグ」
この研究全体において用いられている「フルオラスタグ」は、Curranらの方法にしたがって調製された、ブロモ［トリス（２−ペルフルオロヘキシルエチル）スズ］（２．３）であった８。化合物２．３は、フェニルスズトリクロリドと２−ペルフルオロヘキシル−１−ヨードエタンのグリニャール反応を用いて順に調製されたアリールスタンニル２．４を介して合成された（スキーム２）。ホモ結合された不純物を真空蒸留により除去し、続いてカラムクロマトグラフィーによって２．４を７５％の収率で算出した。ＣＤＣｌ３中の２．４の１Ｈ ＮＭＲは、７．３３ｐｐｍ（５Ｈ、芳香族）では一重線、１．２３ｐｐｍ（Ｓｎ付属体２ＪＳｎ、Ｈ＝５１．７Ｈｚ）では三重線、そしてスズに対するメチレンプロトンαおよびβに対応する２．２４ｐｐｍでは多重線を示した。１３Ｃ ＮＭＲは、３つの芳香族シグナルを１２９．０６ｐｐ、１２９．６５ｐｐｍ、１３６．０８ｐｐｍのそれぞれにおいて示した。１３Ｃ ＮＭＲは、−１．４９ｐｐｍで共鳴し、２７．７４ｐｐｍ（３ＪＦ、Ｃ＝２３．５Ｈｚ）での三重線は、スズに対する炭素αおよびβにそれぞれ対応する。化合物２．４の陰イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルは、ｍ／ｚ＝１２９７［Ｍ＋ＯＡｃ−Ｈ］−およびｍ／ｚ＝１２８３．０［Ｍ＋ＯＡｃ−ＣＨ３］−でピークを示した。さらに、ＩＲスペクトルでは、２９６２、２９２８、２８７４および２８６２ｃｍ−１において、芳香環に対応する強い吸光度が現れた。これらの所見は、文献に記載の値に一致する８。
【００２７】
スキーム２：「フルオラスタグ」の合成、化合物２．３
【化３】
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【００２８】
続いて、化合物２．４を余剰の臭素と反応させ、２．３を真空蒸留によって精製し、所望の生成物を収率９７％で得た。２．４から２．３への変換は、１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける芳香族の共鳴の消失によって確認した。さらに、陰性臭素の置換は、核αについての１Ｈおよび１３Ｃシグナルをスズへシフトさせ、磁場を減少させている。その効果はかなり著明であり、１Ｈαケミカルシフトは、Ｓｎ付随体（２ＪＳｎ、Ｈ＝５４．１Ｈｚ）によって１．２３ｐｐｍから１．５７ｐｐｍへ、一方、１３Ｃαシグナルは、−１．４９ｐｐｍから６．１１ｐｐｍに増加する。炭素原子を持つフッ素の１３Ｃ共鳴は、高度に結合した多重線として１０８．８６ｐｐｍ〜１２１．７１ｐｐｍで現れる。２．３の陰イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルは、ｍ／ｚ＝１２７９．５［Ｍ＋ＯＡｃ］−で単一のピークを示した。これらの結果も文献の所見と一致している８。
【００２９】
トリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズ−３または４−安息香酸（２．１、２．２）の合成
２．１を合成するために４つの方法を行った（スキーム３）。それぞれは、有機金属試薬のスズ−ブロミド化合物（２．３）への求核攻撃に関与している。
【００３０】
スキーム３：トリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズ−安息香酸（２．１）への４つのアプローチ
【化４】
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【００３１】
第１のアプローチＡにおいては、Ｎ−スクシンイミジル３−（トリ−ｎ−ブチルスタンニル）ベンゾエートを調製するために使用されたZalutskyらの手順４を採用した。２．３と余剰のジリチエーテッド（dilithiated）種（２．６）とを反応させて、２．１を生成することに成功した。フルオラス物質の精製は、ジクロロメタンと水からＦＣ−７２（登録商標）への三相性抽出によって容易化された。あいにく、安息香酸の最終生成物への組み込みの程度は、一貫して、可能な全部位の３５％未満であった。未処理の開始物質（ブロモ−スタンナン）に対する生成物（アリール−スタンナン）形成の程度は、１Ｈ ＮＭＲを用いて決定した。２つの異なる化学的環境の１Ｈα、βシグナルの、互いへの、および芳香族プロトンへの統合によって、組み込みの合理的な評価が得られる（図１）。
【００３２】
Curranらに記載の方法９にしたがって、カラムクロマトグラフィーによって精製を試みた。２．１と２．３の間のＲｆ値の類似性により、分離レベルの差は認められなかった。
【００３３】
アプローチＢは、Lequanらに記載の、ｐ−（フェニルメチルイソプロピルスタンニル）安息香酸の合成のための手順の修正に関するものであった１０。ｐ−ジブロモベンゼンのモノアニオンを２．３と反応させ、２．８を定量的に算出した。あいにく、２．８をリチエート（lithiate）しようとする繰り返しの試みはうまくいかず、ＣＯ２との連続的な反応を阻害した。
【００３４】
アプローチＣは、４−トリ−ｎ−ブチルスタンニル−安息香酸オキサゾリンの合成のための、Miliusらにより報告された方法１１に基づいて行った。オキサゾリン保護基の魅力は、そのグリニャール反応条件に対する安定性、そして、より重要なことには、それが穏やかな非酸性条件下で脱保護され得ることであった。前駆物質、化合物２．９は、ｐ−ブロモ安息香酸を塩化チオニルで処理して酸塩化物を得ることによって合成した。続いて、酸塩化物を、２−アミノ−２−メチル−プロパノールと反応させ、アミドを得ることができた。溶媒の不存在下で、塩化チオニルを用いてアミドを処理して、環形成オキサゾリン環の環形成を誘導し、収率９５％で２．９を生成した。
【００３５】
化合物２．９の１Ｈ ＮＭＲは、１．４２ｐｐｍ（６Ｈ）で一重線、４．１７ｐｐｍ（２Ｈ）で一重線、そして７．５６（２Ｈ）および７．８７ｐｐｍ（２Ｈ）で二重線を示した。２．９の１３Ｃ ＮＭＲおよびその電子インパクト・マススペクトル（ｍ／ｚ＝２５４）もまた文献１２に反するものではない。
【００３６】
グリニャールの形成は、緩慢であり、反応を促進するためには、１，２−ジブロモエタンの追加が必要であった。最終的に、２．３を定量的に２．１０に変換した。それを三相性抽出により精製し、収率９０％で単離した。
【００３７】
２．１０の１Ｈ ＮＭＲは、Ｈα、βの高い磁場への典型的なシフトを示していた。１Ｈ ＮＭＲはまた、オキサゾリン基からは、１．４０ｐｐｍおよび４．１４ｐｐｍでピークを示し、７．４４ｐｐｍおよび７．９７ｐｐｍで芳香族シグナルを示した。同様に、１３Ｃ ＮＭＲはＣαシグナルのより高い磁場（−１．２５ｐｐｍ）へのシフトを示した。２８．５ｐｐｍでのメチル炭素の出現に加えて、１２８．４ｐｐｍおよび１３６．０ｐｐｍで芳香族が共鳴している。陰イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルは、ｍ／ｚ＝１３９４［Ｍ＋ＯＡｃ］−でピークを示した。
【００３８】
塩基性の条件下でのオキサゾリン基の切断を促進するためには、オキサゾリンをオキサゾリニウムイオンへ変換することが必要であった。あらゆるケースにおいて、穏やかな反応条件下におけるヨウ化メチル（methyiodide）を用いた反応では、所望の４成分の生成物のいずれも産出しなかった。一方、文献に記載の強い反応条件下では、アリール−スタンニル結合の切断が発生した１３。
【００３９】
アプローチＤは、まずチオール保護中間物質、トリプロピル４−ブロモオルトチオベンゾエート２．１１の合成を必要としていた。Ｄ（スキーム４）の反応経路は、もともと類似のシリコンフルオラス化合物に適応されていた９。前駆物質２．１１の合成では、ｐ−ブロモ安息香酸と塩化チオニルとを反応させ、酸塩化物を生成し、次いでそれをＡｌＣｌ３の存在下で余剰のプロパンと反応させた。試薬の質を確実にすることに大いに着目しているという事実にも関わらず（ＡｌＣｌ３を新鮮に洗浄し、プロパンチオールを新鮮に蒸留した）、粗反応生成物は、１もしくは２の濃縮プロパンチオール基から構成されていた。Studerらの論文９に記載されたように、オルトチオベンゾエートは観察されなかった。
【００４０】
成功した方法であるアプローチＥ（スキーム４）は、有機亜鉛試薬を用いたアリール−スタンナンの合成の実行可能性を確立したXizhenらの研究を適用した１４。有機リチウム試薬よりむしろ、頑強な有機試薬を使用することで、エステル、ニトリル、ケトンなどの求電子性の機能を持つ化合物の組み込みが容易となる。
【００４１】
余剰の３−エトキシカルボニルフェニル亜鉛（２．１３）（Rieke Metals Inc.より市販されている）を一晩２．３と反応させた（スキーム４）。生成物を、ＦＣ−７２（登録商標）とメタノールの間の二相性抽出により高収率（９９％）で単離した。
【００４２】
スキーム４：トリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズ−３−安息香酸（２．２）
【化５】
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【００４３】
化合物２．１４の１Ｈ ＮＭＲの分析によって、１．３９ｐｐｍ（ｍ、３Ｈ）、４．３９ｐｐｍ（ｑ、２Ｈ）および７．４７〜８．０７ｐｐｍ（ｍ、４Ｈ）のメタ−ジ置換芳香族におけるピークに加えて、１．３５ｐｐｍ（ｔ、６Ｈ）および２．３３ｐｐｍ（ｍ、６Ｈ）におけるエチレンスペーサーに対応するシグナルが明らかになった。２．１４の１３Ｃ ＮＭＲは、４つのシグナルを、高磁場では−１．１２ｐｐｍ、１４．１５ｐｐｍ、２７．８７ｐｐｍ（２ＪＦ、Ｃ＝２３．３Ｈｚ）および６１．３２ｐｐｍにおいて示した。低磁場では、１３Ｃ ＮＭＲは、フッ素（１０６．４６ｐｐｍ〜１２１．１７ｐｐｍ）が付着した炭素原子に対応する共鳴と、スペクトルを解釈することが困難なために割り当てられた芳香族共鳴を有していた。２．１４の陰イオンマススペクトルは、ｍ／ｚ＝１２７９．４［Ｍ−エチル］およびｍ／ｚ＝１３６９．５［Ｍ＋ＯＡｃ］−においてピークを示した。 
【００４４】
基質は、反応溶媒（メタノール／水、４：１）中で非混和性であるという事実にも関わらず、２．１４のケン化は、余剰の塩基を用いて達成された。場合によっては少量のエステル交換反応生成物が観察された。しかしながら、この生成物は、第２の加水分解反応によって除去された。水で複数回洗浄後、該生成物をＦＣ−７２（登録商標）から単離することによって、２．２をおそらくナトリウム塩として、収率９９％で産出した。ＦＣ−７２（登録商標）、ジクロロメタンおよび１Ｎ ＨＣｌ溶液の間の２．２のナトリウム塩の抽出によって、遊離酸が作製された。
【００４５】
ＣＤＣｌ３の塩と酸の溶解度の違いを決定した。酸をクロロホルム−ｄ３に溶解し、よく分解された１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを得た。一方、ナトリウム塩の溶解度はわずかであった。遊離カルボン酸、２．２は、ナトリウム塩とは異なり、数日間で結晶化し、白色の固体を産出した。
【００４６】
化合物２．２の１Ｈ ＮＭＲ（図２）は、エステル基に対応するシグナルがないことを示していたが、そうでなければ、２．１４から変化していなかった。同様に、１３Ｃ ＮＭＲは、エステル基に関連するピークがなく、対応するカルボニル炭素のより低い磁場（１７２．６１ｐｐｍおよび１７２．０４ｐｐｍ）へのシフトを有していた。１３Ｃピークは全て、カルボニル炭素と類似する小さなショルダーピークを有していた。それはおそらく化合物２．２の少量のナトリウム塩の存在を反映するものである。化合物２．２の陰イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルは、ｍ／ｚ＝１２７９［Ｍ−Ｈ］−においてピークを示している（図３）。２．２のＩＲスペクトルは、重要なことに強いＯ−Ｈの伸びを３４１０ｃｍ−１で、Ｃ＝Ｏの伸びを１６３２ｃｍ−１で、そして芳香族の伸びを２９５０ｃｍ−１で示した。
【００４７】
ペンタンに少量の２．２を溶解し、ゆっくりと蒸発させた後、長い針状の結晶が生成された。それのＸ線結晶構造を得た。それは種々のペルフルオロスタンナン種の最初に報告された結晶構造を表すものであるので、有意義である。単位細胞内（Ｚ＝４）に、２つの独立した分子をもつ三斜晶ρ−１空間基内において化合物２．２が結晶化した。その構造は、１つの特定のペルフルオロオクチル鎖中に高レベルの異常を持つことが主な原因で、溶解することが困難であった。これは、典型的にこれらの化合物の油性の特性を導く、Ｃ−Ｃ結合の周りの回転のバリアが低いことを考えると、合理的である。Ｘ線結晶構造について発表するには、更なる研究がまだ必要とされるが、現在の構造では、化合物２．２の存在が確認されている（図４）。
【００４８】
３−フルオロ安息香酸（２．１５）の合成
トリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズ−３−安息香酸（２．２）のフッ素化は、より一般的に採用されるＨＦまたはＣＦＣｌ３などのフレオンよりむしろペルフルオロヘキサン（ＦＣ−７２（登録商標））中で最初に行われた。ＦＣ−７２（登録商標）の使用は、それが容易に前駆物質を溶解し、好適な凝固点と沸点の範囲を有しており（それぞれ−１００ｏＣおよび６５ｏＣ）、Ｆ２による分解を受けにくいため有利である。条件が、放射線曝露のリスクを処理する必要なしに、［１８Ｆ］Ｆ２反応のそれに類似する場合、その反応条件は、複数のフッ素化反応によって実行され、最適化された。スキーム５および図５は、一般的なフッ素化反応に用いられる反応と装置をそれぞれ示している。
【００４９】
スキーム５：フルオラス基質２．２からの２．１５の合成
【化６】
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【００５０】
一般的に、基質２．２をＦＣ−７２（登録商標）（１ｍＬ）で希釈し、乾燥したフルオロポリマー槽に移した。槽の含有物をＭｅＯＨ／Ｎ２スラッシュ浴中で約−８５ｏＣに冷却し、その後、１８０ｐｓｉの０．５％Ｆ２のＮｅ溶液を、２０〜３０分間かけて溶液を介して泡立てた。その溶媒をメタノールとともにバイアルに移し、反応槽をすすぐために用いた。混合物全体を回転蒸発によって蒸発させ、アセトニトリル：水（１：１）中に溶解し、フルオラスカラムに通した。画分（３×３ｍＬ）を回収し、１９Ｆ ＮＭＲ、ＨＰＬＣおよびＭＳスペクトロスコピーによって特徴を調べた。
【００５１】
反応生成物２．１５の１９Ｆ ＮＭＲは、ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３に通したとき、−１１２．００ｐｐｍ（３ＪＦ，Ｈ＝５．７６Ｈｚ）でほぼ四重線を示した。これは、ｍ−フルオロ安息香酸の標準規格および文献の値に一致していた１５、１６。化合物２．１５の陰イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルは、ｍ／ｚ＝１３９．１［Ｍ−Ｈ］−で必要なピークを示した。精製された反応混合物のＨＰＬＣは、４．２２分で単独ピークを示した。これは、標準規格と一致するものである。
【００５２】
ペルフルオロカーボンと大半の有機溶媒とが非混和性であることから、フルオラス二相系（ＦＢＳ）として知られる合成への新たなアプローチが導かれた。このアプローチにおいて、感知できるフッ素含有量（フルオラス化合物）を含有する分子を非フッ化化合物から選択的に分離することができる。通常の分離技術としては、二相性抽出、三相性抽出またはフルオラス逆相シリカゲルの適用がある。後者の技術は、フルオラス基質がフルオラス固体相と強く相互作用し、それによって非フルオラス物質と比較して、劇的にそれらの滞留時間を増加させる傾向があるので有利である。
【００５３】
フルオラス二相性アプローチは、高い見かけの非放射能で放射線標識した基質を調製する手段として用いることができる。この技法は、選択された放射性核種と反応後、フルオラス成分が放出されるように、基質とフルオラス支持体を結合することを含む。次いで標的放射性化学物質は、該物質をフルオラスシリカのプラグもしくは他の好適な固体物質に通すことによって、または、液体−液体抽出によって、フルオラス支持体（およびあらゆるフルオラス副生成物）から容易に単離することができる。このアプローチは、ヨウ素およびフッ素標識化合物を高い化学的および放射線化学的収率で、短時間で資源効率的に産出することができる。特に、フルオラスアプローチは、タンパク質を標識するために重要なヨードおよびフッ素標識された安息香酸を調製するのに用いることができる。
【００５４】
本研究において最初は、我々の研究室で合成したフルオラスシリカを精製プロセスに用いた。しかしながら、Silicycle（会社名）によって製造されている市販の修正フルオラスシリカと比較して、フルオラス物質の滞留が効率的でないことがわかった。その市販の変種の改善された滞留は、ローディングを改善しており、より迅速な精製を容易にした。「自家製」および市販のフルオラスシリカの双方の場合において、アルコール溶媒を移動相として使用した結果、フルオラス不純物の実質的な貫流が観察された。これを補修するために、アセトニトリル：水（１：１）溶離液系を使用したところ、ペルフルオロスズ不純物のあらゆる移動を防いだようである。しかしながら、生成物２．１５の溶出については、最初の９ｍＬの溶離液において急速に発生した（＞９９％）。
【００５５】
最初の反応混合物において、−１１２ｐｐｍにおける生成物ピークに加えて、２つの外来のピークが１９Ｆ ＮＭＲスペクトル（−７４ｐｐｍおよび−１５３ｐｐｍ）で一貫して認められた。最初に、これらの更なるピークは、ペルフッ化ヘキサンの多数のアイソマーで構成されるＦＣ−７２（登録商標）の結果であると考えられた。しかしながら、ＦＣ−７２（登録商標）を同じフッ素化および精製条件に付したところ、フッ素スペクトルにおいて観察可能なものは産出されなかった。
【００５６】
我々の研究室の蒸留脱イオン水を医学グレードの滅菌水に換えたところ、−７４ｐｐｍでのピークが存在しないことが後にわかった。さらに、−１５３ｐｐｍでのピークは、Silicycle（会社名）ブランドのフルオラスシリカを用いたことに起因することがわかった。このブランドのシリカをFluorous technologies（会社名）のそれに換えたところ、フッ素スペクトルからこのピークが除外されることがわかった。
【００５７】
反応温度も、これらの反応において生成された生成物に影響を及ぼすことわかった。この反応を高温（−６５ｏＣを超える温度）で行った場合、場合によっては、−１０５ｐｐｍ（溶解されていない結合）における小さなピークがスペクトル中に認められ得ることがわかった。これは、オルト置換またはジフッ化環（ともに結果として付着したフッ素の脱遮蔽を行う）の結果であり得た。しかしながら、この小不純物は、低温（−８５ｏＣ〜−７５ｏＣ）で反応を行ったときには、認められなかった。
【００５８】
これらの冷フッ素化の過程において、ｍ−フルオロ安息香酸の収率を最適化した。全てのケースにおいて、Ｆ２に対する基質の比率は、１８Ｆ［Ｆ２］反応で使用される量と類似する、１．１８×１０−４ｍｏｌのＦ２に対応する１８０ｐｓｉ（０．５％Ｆ２）を用いて０．７〜３．０の間で変化させた。Ｆ２に対する２．１５のパーセント収率は、０．６５および２．９等量をそれぞれ使用したとき、１８％〜１６％に減少した。収率の分析は、検量線を用いた比較に基づいて行った。Ｆ２に対する２．１５の収率は、Ｆ２に対する基質の比率が１．２：１のとき最大の約２４％に達した。該反応物は、等量のＦＣ−７２（登録商標）に通したので、収率が減少するのは、より濃縮したサンプルにおいては、視覚可能な粘度の上昇の結果かもしれない。
【００５９】
３−［１８Ｆ］フルオロ安息香酸（２．１６）の合成
前駆物質２．２を用いた２．１５の冷却標識化と精製の成功は、［１８Ｆ］Ｆ２標識化の研究を促進した。反応スキームをスキーム６に示す。
【００６０】
スキーム６：３−［１８Ｆ］フルオロ安息香酸２．１６の合成
【化７】
0004846238.tif 000008
【００６１】
フッ素−１８は、McMaster
University Hospitalにて、「ダブルシュート」法１７によって１１ＭｅＶで作用するSiemens RDS 112プロトンサイクロトロンを用いた１８Ｏ（ｐ、ｎ）１８Ｆ核反応によって作製した。「ダブルシュート」法は、１８Ｏ（ｐ、ｎ）１８ＦとＦ２との反応に続いて、主に標的壁に結合したままである１８Ｆの希釈を含む。照射の結果フッ素変換が起こり、１５〜２０μｍｏｌの、担体が付加された１８Ｆ［Ｆ２］が放出される。ネオン中の１８Ｆ［Ｆ２］は、テフロン（登録商標）チューブを介して運ばれ、１ｍＬの２．２の入ったＦＣ−７２（登録商標）溶液を介して−８５℃で泡立てられた。フッ素化反応は、ＦＥＰ（ペルフルオロエチレンプロピレンコポリマー）チューブ中で行われ、放出ガスは、０．１Ｎ ＮａＯＨ溶液を介して泡立てられた。
【００６２】
反応中に消費された［１８Ｆ］Ｆ２は、ＮａＯＨトラップ中のそれと比較した槽中の全放射能を測定することによって決定した。検査は、槽の含有物を、シリンジによって生成された圧力を用いて他のバイアルに移すことを含む。次いでその槽をＨＰＬＣグレードのメタノールですすぎ、結合した溶媒を、急速な窒素流のもとで、湯浴中で蒸発させた。得られた残留物に３×３ｍＬのアセトニトリル：水（１：１）を添加し、各アリコートを連続的にフルオラスカラムに移した。３ｍＬの画分を回収し、特徴を調べた。
【００６３】
２．２の［１８Ｆ］Ｆ２フッ素化を全部で５回行った。図６は、生成された典型的なＨＰＬＣクロマトグラムを示す。分析は、Ｃ１８分析カラム上で行い、１：１のアセトニトリル：水（０．２％ＴＦＡ）によって、２ｍＬ／分で溶出させた。化合物２．１６のＵＶ量は、４．１８分で溶出する単一のピークを生成した。それは標準規格のそれと一致している。ピーク領域の積分および検量線との比較によって、標識化された生成物（１８Ｆおよび１９Ｆ）の収率が１９．４％であることがわかった。化合物２．１６の放射能のトレースは、４．９９分で単一のピークを示している。後の溶出時間は、ＵＶランプと放射線検出器の間の時間の遅れに一致している。
【００６４】
最後の２回の反応において、２．１６の放射化学的産出および比放射能を評価した。これらの例において、２．１６の減衰補正法放射化学的産出は、３０．２％および１１．２％であった。下の方の収率は、精製前に効率的にすすぎを行わないバイアル壁に起因するものであった。この合成の理論的最大収率は５０％で、トリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズ−［１８Ｆ］フッ素の半分の活性が損失した。これは、６−［１８Ｆ］フルオロ−Ｌ−ＤＯＰＡおよび６−［１８Ｆ］フルオロ−Ｌ−ｍ−チロシンがそれぞれ３３％および２３％の放射化学的収率で生成された場合の［１８Ｆ］Ｆ２脱スタンニル化反応に匹敵するものである１８、１９。
【００６５】
２つの実験において、精製後の２．１６の比放射能は、それぞれ１９６６ｍＣｉ／ｍｍｏｌおよび２８９９ｍＣｉ／ｍｍｏｌであった。この不一致は、一部には、第１の精製時間（４９分）に対して第２の精製時間（２７分）が短いことに起因すると言える。比放射能は、標的ガス中に混合されているＦ２の量に依存する。そのため、他のフルオロ脱スタンニル化反応と直接比較することが難しい。しかしながら、得られた比放射能は、他の求電子性のフッ素化反応と比較して、合理的に高い。例えば、６−［１８Ｆ］フルオロ−Ｌ−ＤＯＰＡを生成するための種々の直接的な求電子性のフッ素化アプローチは、２０００ｍＣｉ／ｍｍｏｌ以下の比放射能を示す２０、２１。類似する比放射能が得られたにもかかわらず、このフルオラスアプローチは、ＨＰＬＣ精製を必要としなかった。
【００６６】
類似の冷却フッ素化および精製反応（２．１６）生成物からの粗反応生成物の１９Ｆ ＮＭＲスペクトルを図７および８にそれぞれ示す。１８Ｆ標識した２．１６の十分な時間の減衰の後、１９Ｆ ＮＭＲを得た。粗反応の１９Ｆ ＮＭＲでは、フッ素核のＮＭＲによる検出に対する感受性は、少数のスキャンの後得られた明確さにおいてのみ証明される。粗スペクトルは、３つの等価的なｎ−オクチル鎖に沿って炭素原子をもつ６つのフッ素に対応する６つのはっきりと解像されたピークを示している。フッ素化反応の前または後に、これらのピークにおける認識できるシフトはなかった。
【００６７】
精製反応の１９Ｆ ＮＭＲスペクトル（図８）は、アセトニトリル：水（１：１）に通したとき、−１１０．１０ｐｐｍ（３ＪＦ、Ｈ＝７．２４Ｈｚ）における単一のピークのみを示している。ピーク部分および結合は、ｍ−フルオロ安息香酸の標準規格に一致しており、そこでは、１９Ｆ−シグナルが−１０９．８ｐｐｍで出現しており、それは、文献の値と一致している１６。さらに、フルオラス精製法の効率の現れである、フルオラス「タグ」に関連するピークの欠如に着目することが重要である。
【００６８】
２．１６の粗フッ素化反応および精製反応の陰イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを図９および１０にそれぞれ示す。精製前の反応混合物のエレクトロスプレイ・マススペクトルは、生成物のピークをｍ／ｚ＝１３９．１［Ｍ−Ｈ］−で示し、フルオラス「タグ」不純物のそれを、ほぼｍ／ｚ＝１３１９．２、１３４５．２で示す。しかしながら、精製反応（図１０）は、ｍ／ｚ＝１３９．０［Ｍ−Ｈ］−での生成物に対応する単一のピークを示し、不純物はない。
【００６９】
前に示したように、得られた最も高い放射化学収率（ＥＯＢ）は、３０．２％であった。しかしながら、約２０ｍＣｉの放射能（または、ほぼ１１％）が、ＦＣ−７２（登録商標）溶媒が蒸発する間に失われた。ＦＣ−７２（登録商標）のＨ原子の、［１８Ｆ］フッ化物による置換は、蒸発後の活性の損失を説明することができる。De Vriesらは、ＣＦＣｌ３からより環境に近いＣＨＣｌ３またはＣＨ３ＣＮに変化させたときの反応溶媒に対する放射能の損失６１〜７３％を観察した１８。フルオロ脱スタンニル化によって得られたこの放射性化学物質６−［１８Ｆ］フルオロ−Ｌ−ＤＯＰＡの減少は、３３％〜５％（ＣＨＣｌ３）および１７％（ＣＨ３ＣＮ）であった。放射能の損失にもかかわらず、ＦＣ−７２（登録商標）は、他の反応溶媒と比較して高い全体的な放射化学的収率を示した。
【００７０】
これらの［１８Ｆ］Ｆ２反応を開発する際、ワークアップ手順は、より「ハンドフリー」または自動化されたアプローチを可能にするように工夫する必要があることがすぐに明らかになった。このワークアップの持つ困難は、フルオロフィーリック（fluorophilic）溶媒（ＦＣ−７２（登録商標）/メタノール）をフルオロフォービック（fluorophobic）溶媒（アセトニトリル/水）と交換することであった。回転蒸発は、あまりに多くの手動操作が必要であった。一方、急速窒素流れのもとでの湯浴中での溶媒蒸発は、あまりに長い時間がかかり、生成物を離散させることが多かった。
【００７１】
これらの手順を向上させようとする試みにおいて、Ｕチューブ様装置を構築した（図１１）。フッ素化反応の後、シリンジ圧によって槽の含有物をＵチューブに移動させることができた。Ｕチューブの頂上に弱い圧力をかけることによって、室温で２〜３分以内に溶媒を除去することが容易になった。３×３ｍＬのアセトニトリル：水（１：１）を添加し、続いて、連続的にシリンジ圧をかけ、含有物をフルオラスSep-Pakおよび回収バイアルに移した。試験冷却反応において、この装置は、より好適な「ハンドフリー」ワークアップを容易にすると思われた。
【００７２】
２．１６の容易な合成と精製によって、フルオラス方法は、１８Ｆ［Ｆ２］標識した放射性医薬品の調製のための便利な経路として有望であることがわかる。１分未満ですむ、迅速かつ単純なカラム精製を介して、完全にフルオラス「タグ」を除去する。したがって、このアプローチは、標準的な方法と比較したとき、時間のかかる精製を避け、曝露を減少し、全体の比放射能を増加させることができるので、特定の適用において魅力的である。
【００７３】
３−ヨード安息香酸（２．１７）の合成
フッ素化反応の成功に伴い、安息香酸のヨウ素による標識化を模索した。１２５Ｉ、１３１Ｉおよび１２３Ｉを導入し得るかどうかを評価するために、フルオラス「タグが付けられた」モデル化合物（２．２）の冷却ヨウ素溶解を行った。簡単な生成物生成に関心を持つことに加えて、反応条件の最適化もまた重要な目標であった。余剰のヨウ素を用いた２．２のヨードスタンニル化反応をスキーム７に示す。
【００７４】
Ｉ２を用いた２．２のヨードスタンニル化
【化８】
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【００７５】
ヨウ素化反応は、メタノールに溶解した余剰のＩ２を用い、それを２．２のかなり大きな（１×１０−４ｍｏｌ）サンプルに添加して行った。該反応を一晩進行させ、その後、メタ重亜硫酸ナトリウムを添加して未処理のヨウ素をクエンチングした。減圧下でメタノールを除去し、その残基を５×５ｍＬ容積のＨＰＬＣグレードのアセトニトリル：水（１：１）に溶解し、各洗浄は、フルオラスカラムを介して溶出して行った。この場合、精製は、３．９グラムの緩いフルオラスシリカ（silicycle（登録商標））のサンプルを用い、４０ｃｍ幅の狭いカラムにパッキングした。５ｍｌのアリコートの純度は、ＨＰＬＣ（図１２）およびエレクトロスプレイ・マススペクトロメトリー（図１３）によって評価した。
【００７６】
ＨＰＬＣクロマトグラムは、塩（溶媒フロント）および２．１７（ｔＲ＝９．９分）に対応する３つのピークを持っていた。９．９分におけるピークは、３−ヨード安息香酸の標準的なサンプルとの比較において、２．１７であることがわかった。
【００７７】
陰イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルは、ｍ／ｚ＝２４６．９［Ｍ−Ｈ］−における背景に対して、単一のピークを示していた。それは、２．１７の形成と一致している。ｍ／ｚ＞１０００では、フルオラス「タグ」を示すものはなかった。
【００７８】
ＮａＩ（２．１８）を用いた２．２のヨード脱スタンニル化
上記ヨウ素溶解反応は、余剰のヨウ素および１０−４モルの基質を使用する、したがって、放射線ヨウ素化反応の代表例ではない。２．１８に対する標識化アプローチを開発するために、ヨウ素放射性核種が用いられるものと類似の濃度で、冷Ｎａ１２７Ｉを用いた反応を行った（スキーム８）。
【００７９】
スキーム８：ＮａＩおよびオキシダントを用いた２．２のヨード脱スタンニル化
【化９】
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【００８０】
冷却ヨウ素化反応を最適化する試みにおいて、多くの反応条件を検討した。まず、放射性ヨード脱スタンニル化反応に通常用いられる広範囲のオキシダントをスクリーニングした。これらには、クロラミン−Ｔ（Ｎ−モノクロロ−ｐ−トルエンスルホンアミド）、Ｎ−クロロスクシイミドおよび過酢酸が含まれていた。過酢酸は、最も高い変換率を示した。それは、文献の報告に一致している２２。
【００８１】
溶媒の選択もまた、放射化学的収率に非常に効果的に影響を与えることができる。たいていの場合、２．２を溶解することができる能力ゆえにメタノールが用いられた。そして他の試薬および反応条件に換え得ることがわかっている。ヨウ素化反応はまた、溶媒のｐＨに高度に依存しており、通常は、酢酸培地において促進され、ｐＨが中性に向かうと、時に阻害される２３。このため、研究者たちは少量のＨＣｌまたは酢酸を反応物に添加することが多いが、オキシダント（酢酸における３２％過酢酸）が、上記反応を促進するための適切な酸性であることがわかった。
【００８２】
反応条件の最適化に加えて生成された非常に少量の生成物（２．１８）を検出することがＨＰＬＣ条件を最適化するために必要であった。長い試行錯誤の末、Ｃ−８分析カラムを用いて２．１８を溶液中の酸から分離することができないことがわかった。この問題は、有意な分離を容易化するＣ−１８分析カラムに換えることによって修正した。
【００８３】
最後に、最適な反応は、化合物２．２（Ｎａ＋塩）（４×１０−６ｍｏｌ）をメタノール（２００μＬ）中に撹拌しながら溶解することを含む。この溶液に、ＮａＩ（４μＬ、１．８×１０−７ｍｏｌ）の入った０．１Ｎ ＮａＯＨを添加し、直後に新鮮に調製した過酢酸溶液（２μＬ）を添加した。２時間後、この反応物を、メタ重亜硫酸ナトリウムを用いてクエンチングし、蒸留脱イオン水で１ｍＬに希釈した。.
【００８４】
化合物２．１８のＨＰＬＣクロマトグラムは、塩（溶媒フロント）および２．１８のそれぞれに対応して、溶出時間４．８〜６．３分および１０．３分で２つの主なピークを示している（図１４）。３−ヨード安息香酸の標準規格は、同じ溶出条件下において１０．２分でピークを示した。ピークのアサイメントを確認した。
【００８５】
冷アイソトープを用いる化学の発展の利点は、フッ素の場合と同様に、反応が曝露のリスク無しに行われ処理され得ることである。しかしながら、代表的な量のＮａ１２７ＩまたはＮａ１２５Ｉを用いた放射化学的放射線標識処理の困難さは、検出が紫外線吸収にのみ基づく点であった。比較として、４００μＣｉ（約１．８×１０−７ｍｏｌ）のＮａ１２５Ｉを使用した場合、非常に強力なピークがガンマ検出器に得られるであろう。もっとも、眼に見えるとしても非常に少量の紫外線吸収であろう。ヨウ素の標的分子への最大取り込みは、全体の５０％以下であることを思えば、したがって、類似の４００μＣｉ反応においては、最大の生成物収率は、≦９×１０−８モル以下である。
【００８６】
３−［１２５Ｉ］ヨード安息香酸（２．１９）の合成
冷ＮａＩを用いた２．２の冷却標識化の成功は、対応するＮａ１２５Ｉを用いた放射線標識ヨード脱スタンニル化を促進する（スキーム９）。
【００８７】
スキーム９：３−［１２５Ｉ］ヨード安息香酸（２．１９）の合成
【化１０】
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【００８８】
該反応は、冷ヨード脱スタンニル化反応と同様の方法で行った。約２００μＬの０．１Ｎ ＮａＯＨ溶液および２μＬの新鮮な過酢酸に、Ｎａ１２５Ｉ（４４μＣｉ）を添加する前に、化合物２．２（Ｎａ＋塩）（９×１０−４ｍｏｌ）を２００μＬのメタノール中に撹拌しながら溶解した。該反応物を２９分間撹拌させ、メタ重亜硫酸ナトリウム（１００μＬ）を用いてクエンチングを行った。
【００８９】
粗反応混合物の２０μＬのアリコートをＨＰＬＣに注入し、ＨＰＬＣで分析した。ＵＶトレースによれば、溶媒フロントに対応する単一のピークのみが明らかになった。一方、放射能クロマトグラムはいくつかのピークを示した（図１５）。５．３分におけるピークは、溶媒フロントと一致し、おそらく遊離１２５Ｉを表すものであろう。１７．１分のピークは、３−ヨード安息香酸を注入することによって２．１９であることが確認された。しかしながら、他の外来性のピーク、特に２４．９分の大きなピークは、反応時間に割り付けることができなかった。
【００９０】
２．１９を含有する粗反応混合物の質は、理想未満のものであったが、溶液中のあらゆる未処理の遊離１２５Ｉを除去する能力を説明するために単純な精製を行った。上記粗反応混合物を５００μＬの水で希釈し、調整されたＣ１８Ｓｅｐ−Ｐａｋに添加した。Ｓｅｐ−Ｐａｋを２ｍＬの蒸留脱イオン水を用いて溶出し、未結合の１２５Ｉを除去し、１ｍＬのメタノールを用いて溶出を行った。メタノール画分の２０μＬアリコートのＨＰＬＣ分析を図１６に示す。クロマトグラムは、２．１９（ｔＲ＝１６．９分）までの必然的に全ての放射性不純物がカラムを水で洗浄することによって除去されることを示している。さらに希釈を考慮に入れることによって、２．１９の大半を１ｍＬのメタノールで溶出した。しかしながら、続いて同定されなかった２４．５分におけるピークは依然として存在していた。
【００９１】
上記の反応で得られた、良好な結果に満たない結果は、新鮮なＮａ１２５Ｉ源を用いて、別の反応を促進した。この反応において、Ｎａ１２５Ｉ（３２μＣｉ）の０．１ｍＭ ＮａＯＨ溶液（約５μＬ）に添加する前に、化合物２．２（Ｎａ＋塩）（１．１×１０−６ｍｏｌ）を２００μＬのメタノールに撹拌しながら溶解した。続いて、２μＬの新鮮に調製した過酢酸溶液に撹拌しながら溶解した。その反応物を４７分撹拌した後、余剰のメタ重亜硫酸ナトリウム（２０μＬ）を用いてクエンチングし、３００μＬ蒸留脱イオン水で希釈した。
【００９２】
粗反応混合物の２０μＬのアリコートを分析するためＨＰＬＣ上に注入した。ＵＶトレースによれば、溶媒フロントを表すピークは１つだけであることが明らかになった。一方、放射能クロマトグラムは、１６．９１分の滞留時間でピークを示した（図１７）。そのピークは、２．１９の形成に一致しており、１５．８６分で溶出する３−ヨード安息香酸の注入によって確認される。滞留時間の違いは、ＵＶと放射線検出器との間の時間の遅れの結果である。
【００９３】
粗反応混合物の放射能クロマトグラムは、未結合／未処理のヨウ素の有意な貢献なしで、２．１９が必然的に定量的な収率で生成されたことを表している。粗２．１９の放射化学的純度は、９０％以上であった。粗ヨード脱スタンニル化反応におけるこのレベルの組み込みおよび純度は、特に反応時間が短い場合はまれである。
【００９４】
未結合のヨウ素または放射線標識した塩が反応混合物に存在することを示す証拠は少ないにもかかわらず、短い精製によって、後にそれらは生成物から除去され得ることが示された。その反応溶液を約１．５ｍＬの水で希釈し、メタノールで調整したＣ１８Ｓｅｐ−Ｐａｋカラムに通した。そのカラムをさらに１．５ｍＬの水で洗浄し、これらの画分を結合させた。その後Ｓｅｐ−Ｐａｋを２ｍＬのアセトニトリルで溶出させ、別個のバイアル中に回収した。アセトニトリル画分（faction）は、７２％の放射能を有していた。そしてさらにアセトニトリルを用いたカラムの溶出によってほんの少量の放射能が放出された。より高度に保有され、放射線標識したフルオラス「タグ」（Ｒ３Ｓｎ１２５Ｉ）と同様、全体で４μＣｉがＳｅｐ−Ｐａｋカラムに結合した。他の放射能は、水（３μＣｉ）、反応槽（１μＣｉ）および更なる１ｍＬのアセトニトリル（１μＣｉ）を用いたＳｅｐ−Ｐａｋの洗浄中に見い出された。多くの放射能を含む画分のＨＰＬＣ分析は、単一のピークを１６．５９分において２．１９に対応する放射性クロマトグラム中に示していた。精製された２．１９の最終的な放射化学的収率は、用いられた全Ｎａ１２５Ｉ活性の７５％であった。最大の理論的放射化学的収率は、５０％と同じ、もしくはそれ未満となるべきであることを考慮すればこの大きさの収率はまれである。Hunterらの結果は、放射性ヨード脱スタンニル化反応のかなり代表的な例である。彼らは、５０．８％の放射化学的収率の［１３１Ｉ］ＭＩＢＧ；４４％の放射能がスズに結合すること、および溶液中の遊離１３１Ｉが５．１％であることを観察した２３。
【００９５】
放射化学的収率が高いとすれば、標識化されたまたは標識化されていないあらゆる前駆物質２．２に対する［１２５Ｉ］−３−ヨード安息香酸の純度を定量化することは重要であった。マススペクトロメトリーと１９Ｆ ＮＭＲは、１２５Ｉ標識化合物に対して実行可能ではないので、ＨＰＬＣ分析のみに頼った。１００％アセトニトリルを用いた前駆物質２．２のＣ１８分析カラム上への溶出は、６．６１分でＵＶピークを生成した。同様に、Ｓｅｐ−Ｐａｋ精製画分（faction）のＨＰＬＣ分析は、３．１９〜４．１７分で溶媒フロントに対応するピークを示し、６．３８〜６．７２分で同様に２．２に対応するピークを示した（図１８）。放射能クロマトグラムは、４．４６分に、２．１９に対応する溶媒フロントでの単一のピークのみを示した。標識したフルオラス「タグ」生成物に対応する放射能ピークは、２．２と同様の位置に溶出することが予測されるが、見られない。このことは、われわれの以前の放射化学的収率である７５％が正確であることを示している。しかしながら、この反応溶液に存在するいくつかの未処理の２．２があると思われる。
【００９６】
フルオラスカラムとアセトニトリル：水（１：１）移動相を用いることで大量の（２００ｍｇを超える）「フルオラスタグ」でさえ容易に除去することができることは既に確立されている。したがって、この系は、これおよび他の典型的な放射性要素化反応に用いられる、より少量（１．４ｍｇ）の基質は容易に除去する。精製アプローチを証明するために、アセトニトリル中の２．１９を等量の蒸留脱イオン水を用いて希釈し、調整フルオラスカラムに通した。更に４ｍＬのアセトニトリル：水（１：１）を用いてカラムの洗浄をすることによって、全ての放射能（１９μＣｉ）を遊離させた。この溶液のアリコートを分析したところ、クロマトグラムの広がり、３．０５５分での溶媒ピークおよび６．５３分での小ピークが示された（図１９）。
【００９７】
フルオラスＳｅｐ−Ｐａｋが大量のフルオラス「タグ」を除去することができることを示したので、６分でのピークは別の原因によって生じたと思われる。１つの可能性は、別の反応物から再利用したフルオラスカラムが適切に洗浄されていなかったかもしれない。あるいは、フルオラス物質は、ＨＰＬＣループに固着する傾向にあるかもしれないので、蓄積された物質がこの注入物に放出された可能性がある。 
【００９８】
要約
トリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズ−３−安息香酸を調製するため、およびこの物質をフッ素およびヨウ素で標識するための方法が開発された。温および冷Ｆ２およびＩ２を用いたフルオラスアプローチは、効率的に所望の生成物を作製した。特に、精製プロトコルに関連して反応を最適化するためには、更なる実験が必要である。
【００９９】
開発されている結合処理−ベンズアミド合成
まず、２．２の合成の背後にある根本原理は、標識した安息香酸への結合を介して容易なペプチド／生体分子の放射線標識を可能とすることである。２．１６と２．１９の合成および標識化の成功によって、より多くの複合化合物を合成することを促した。そのようなアプローチの１つは、化合物２．２からの有益性、および実用性の拡大は、生物学的に活性な誘導体へのその変換である。
【０１００】
放射性ヨードベンズアミド
放射性ヨードベンズアミドまたは、Ｎ−アルキル−ヨードベンズアミドは、新たなクラスの重要な放射性医薬品を構成する２４。σ１およびσ２レセプターに対して高い親和性を示すので、放射性ベンズアミドは、皮膚黒色腫とその転移の診断用として現在最もよく知られた放射性医薬品である２４。このクラスの化合物はまた、ドーパミン受容体に対して強く結合することもわかっており、したがって、パーキンソン病や分裂症の診断のための効率的な造影剤である２５。臨床的に最も関連した化合物は、［１２３Ｉ］−Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−４−ヨードベンズアミド（１２３Ｉ−ＢＺＡ）であり、それは、黒色腫のシンチグラフィーのための理想的な特性を有している２６。
【０１０１】
［１２３Ｉ］−Ｎ−アルキル−ｐ−ヨードベンズアミドおよび１２３Ｉ−ＢＺＡ
【化１１】
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【０１０２】
現在、１２３Ｉ−ＢＺＡへの最も容易な経路は、アイソトープ変換反応（１２３Iを１２７Iに換える）を含む。この方法は、担体の添加された生成物が画像の質を減少させる結果となる。より理想的な方法で、担体を添加しない生成物を導く方法は、トリアルキルスズ前駆物質の放射性ヨード脱スタンニル化である。それは、Moreauら２６によって開発された。このことを考えると、フルオラス合成アプローチは、放射線標識したベンズアミドの合成に好適であると思われる。そして徹底的に精製を行う必要がなくなるであろう。
【０１０３】
このプロジェクトの目的は、対応するフルオラス「タグを付けた」前駆物質（２．２１）のヨード脱スタンニル化反応を介してのヨードベンズアミド２．２０を合成することであった（スキーム１０）。この２．２０の合成には、新たな結合方法の開発が必要である。
【０１０４】
スキーム１０：標的化合物、Ｎ、Ｎ−ジメチル−ｍ−ヨードベンズアミド
【化１２】
0004846238.tif 000013
【０１０５】
トリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズ−３−ベンズアミド（２．２１）の合成
２．２１の合成へのアプローチは、伝統的なペプチド合成手順に集中していた。これらの反応の成功は、１Ｈ−ＮＭＲおよびエレクトロスプレイ・マススペクトロメトリーによって判断した。スズに対するαおよびβの位置にあるプロトンに対するエチレンプロトン（ＮＣＨ２ＣＨ２Ｎ）の積分によって、誘導体化の程度を定量化した。最初に、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）およびＥＤＣなどのカルボジイミド活性化作用物質を採用した。しかしながら、それらは、検出可能な生成物形成が少なかった。反応の欠如が試薬もしくは反応溶媒によるものかどうかを決定することは困難であった。大半の例において、結合試薬にとって良好な溶媒は、２．２にとって不良な溶媒であり、逆もまた然りであることが判明した。アセトニトリルやＤＭＦなどの、極性で非プロトン性の溶媒中で結合反応が促進されるとき、化合物２．２は通常非極性の溶媒によってのみ溶媒和となった。ＴＨＦなどの溶媒は、２．２とＤＩＣの双方と溶媒和となったが、２．２１には変換されなかった。ＥＤＣは、別の欠点を有していた。ＥＤＣは、３０％を超えるスズアリール結合を切断するのに十分な酸性であることがわかっているアンモニウム塩を含有している。
【０１０６】
ＤＭＦ中の結合試薬ＨＢＴＵ（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾル−１イル）−１，１，３，３−テルトラメチルウロニウム（tertramethyluronium）ヘキサフルオロホスフェート）を採用することで２．２１の合成は成功した（スキーム１１）。ＨＢＴＵは、尿素副生成物の形成と同時に起こる、活性化された中間物質を着実に生成することによって、結合を促進する。この活性化された複合体は、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）の連続的な損失により、アミンと反応する（スキーム１２）。
【０１０７】
スキーム１１：ＨＢＴＵが促進するペプチド結合のメカニズム
【化１３】
0004846238.tif 000014
【０１０８】
スキーム１２：ＨＢＴＵを用いたペルフルオロスズ−３−ベンズアミド（２．２１）の合成
【化１４】
0004846238.tif 000015
【０１０９】
アミンを添加する前に、ＨＢＴＵと化合物２．２（Ｎａ＋塩）の反応をＤＭＦ中でＤＩＰＥＡの存在下で５分間行った。このインキュベーションによって、結合率と収率が劇的に向上することを実験は示している２７。余剰のＮ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミンを等量のＤＩＰＥＡに添加した後、反応物を１６時間撹拌させた。
【０１１０】
２．２１がＤＭＦに対して高い溶解度を有していることから、水を添加して、フルオラス化合物のジクロロメタンおよびＦＣ−７２（登録商標）への抽出を容易にした。その後、多くの有機２．２１が選択的にＦＣ−７２（登録商標）からジクロロメタンへ抽出した。ジクロロメタンへのいくつかのより多くの抽出によって純粋な２．２１を産出した。一方、未反応の２．２は依然としてＦＣ−７２（登録商標）中にあった。化合物２．２１が、暗黄色オイルとして、十分な収率（７４％）で得られた。Ｒｆ値の２．２１と２．２の間の十分な相違（０；０．２１）は、将来における方法として、クロマトグラフィーによる精製がより適切であり、より高い収率をもつ精製方法であることを示唆するものである。
【０１１１】
化合物２．２１の１Ｈ ＮＭＲスペクトル（図２０）は、１．３１ｐｐｍで、Ｓｎ付随体（２ＪＳｎ，Ｈ＝５４．８Ｈｚ）を有する三重線、約２．３３ｐｐｍで部分的に遮られた多重線を示している。それは、スズに対するプロトン位置αおよびβにそれぞれ対応するものである。さらに、１Ｈ ＮＭＲは、２．３１ｐｐｍ（６Ｈ）で広い一重線、２．５９ｐｐｍ（２Ｈ）でシュード三重線、３．５５ｐｐｍ（２Ｈ）でシュード四重線、そして７．３９〜８．０１ｐｐｍ（４Ｈ）で予期される芳香族ピークを示した。２．２１の１３Ｃ ＮＭＲは、−１．４３ｐｐｍ、２７．５５ｐｐｍ（２ＪＦ，Ｃ＝２３．４Ｈｚ）、３７．１１ｐｐｍ、４４．８７ｐｐｍおよび５７．７５ｐｐｍで低い磁場のピークを示した。より高い磁場の１３Ｃ ＮＭＲは、まだ割り付けられていないフッ素および芳香族シグナルが付着した炭素原子に対応する１０４．８０ｐｐｍ〜１２０．０３ｐｐｍの共鳴を示していた。化合物２．２１のＩＲは、２９００ｃｍ−１で芳香族の伸び、１６５０ｃｍ−１でＣ＝Ｏ吸収、および３３３８ｃｍ−１でＮ−Ｈの伸びを示した。２．２１のマススペクトル（図２１）は、陽イオンモードにおいて、ｍ／ｚ＝１３５３［Ｍ＋Ｈ］＋で単一のピークを示した。重要なことには、同じ化合物の陰イオンマススペクトルは、ｍ／ｚ＝１２７９［Ｍ−Ｈ］−で前駆物質ピークを示さなかった。
【０１１２】
３−ヨードベンズアミド（２．２０）の合成
化合物２．２１のヨード脱スタンニル化および生成物２．２０の精製は、化合物２．２で用いたものと類似の方法を用いた（スキーム１３）。
【０１１３】
スキーム１３：３−ヨードベンズアミド（２．２０）の合成
【化１５】
0004846238.tif 000016
【０１１４】
余剰のヨウ素を少量（２．３７μｍｏｌ）の２．２１に添加し、その反応物を室温で１時間撹拌した。その反応溶液を、メタ重亜硫酸ナトリウムを用いてクエンチングし、回転蒸発器上におき、メタノールを除去した。バイアルを１ｍＬのアセトニトリル：水（５０：５０）で洗浄し、調整フルオラスカラムに通した。さらに１ｍＬを用いて、バイアルをすすぎ、カラムに添加した。結合した画分をＨＰＬＣ（図２２）およびエレクトロスプレイ・マススペクトロメトリー（図２４）によって分析した。 
【０１１５】
化合物２．２０のＨＰＬＣクロマトグラムは、６．６、１６．６、および１８．９分において溶出した３つの主なピークを示している。最も早いピークを、溶媒フロントとして割り付けた。一方、後の溶出ピークは、それぞれおそらくプロトン化された状態および脱プロトン化された状態の２．２０であろう。化合物２．２０の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルは、ｍ／ｚ＝３１９．０［Ｍ＋Ｈ］＋でピークを示した。２．２０の純度をここでも確認した。存在し、未処理の２．２を除去したであろう陰イオンモードでｍ／ｚ＝２４７［Ｍ−Ｈ］−に対応するピークがなかったためである。
【０１１６】
２．２１の冷却フッ素化を、２．２で用いたものと類似の方法で行った。エレクトロスプレイ・マススペクトルからの予備的な結果は、生成物ピークｍ／ｚ＝２１１［Ｍ＋Ｈ］＋（図２４）が明らかにした。陰イオンモードは、ｍ／ｚ＝１３９（Ｍ−Ｈ）−での可能性のあるあらゆる不純物３−フルオロ安息香酸のいずれも明らかにしなかった。
【０１１７】
要約
これらの最初の冷却実験は、２．２を標識化するのに用いられた方法によって、２．２１を１８Ｆ［Ｆ２］およびＮａ１２５Ｉで標識化する可能性を明らかに示している。成功は、放射線標識したベンズアミドのＳＰＥＣＴおよびＰＥＴのための経路を容易化し、それによって、それらの臨床的な実用性を増加させることである。結合手順を開発することによって、将来の放射線標識化のために多様なアレイのベンズアミドおよび関連化合物を調製することが可能となるであろう。
【０１１８】
ベンジルアミンおよび誘導体の合成
標識した安息香酸および誘導体の作製の成功によって、そのフルオラス合成方法をベンジルアミンおよび関連する誘導体に広げることを模索した。
【０１１９】
トリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズ−３−ベンジルアミン（３．０）
【化１６】
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【０１２０】
これは補足的な求核性の誘導体を、求電子性のハロ安息香酸に与えている。さらに、フルオラス「タグ」に結合し、放射線標識され得る潜在的な種々の化合物を拡大するであろう。
【０１２１】
ベンジルアミンの誘導体を用いて、生体分子２８を標識するために用いられてきたものであり、［１３１Ｉ］と［１２３Ｉ］メタ−ヨードベンジルグアニジン（ＭＩＢＧ）合成のための前駆物質であり、価値があるが、合成が難しい放射性医薬品である。
【０１２２】
フルオラス「タグ付けされた」ベンジルアミン（３．０）の合成
トリアルキルスズ結合ベンジルアミンの合成および/または標識化について説明する文献の中に驚くべき例がある。Vaidyanathan, Gらは、３−（トリ−ｎ−ブチルスタンニル）ベンジルアミンを、ｎ−ＢｕＬｉ、３−ブロモベンジルアミンおよび２倍の余剰のトリブチルスズ−クロリドを用いて３０％の収率で合成した３０。このアプローチは、不良な収率であったことと、大量の余剰のフルオラス副生成物が生成されたことから、３．０の合成には考慮されなかった。３．０の合成にはむしろ、Hunterらの報告しているポリマー結合３−ベンジルアミンの調製のための方法を適用した３１。
【０１２３】
Hunterの方法は、前駆物質３．１である３−ブロモベンジルアミンのアザジシロリジン（azadisilolidine）保護誘導体を使用した。このシリコンベースの保護基は、ｎ−ＢｕＬｉに対して安定しており、対応するモノリチウム塩３．２の合成を可能としている。
【０１２４】
３．１の合成は、１，１，４，４−テトラメチル−１，４−ジクロロシルエチレンをもつトリエチルアミン中での、室温で１５時間の３−ブロモベンジルアミンの合成を伴った（スキーム１４）。粗溶液を水性リン酸２水素ナトリウムに注ぎ、続いて、粗有機抽出物を蒸留し、中等度の収率（６４％）で生成物を生成した。化合物３．１の１Ｈ ＮＭＲで、７．２０〜７．４８ｐｐｍ（４Ｈ）で現れた芳香族ピークに加えて、０．００ｐｐｍ（１２Ｈ）、０．７８ｐｐｍ（４Ｈ）、および４．０６ｐｐｍ（２Ｈ）において３つの一重線が明らかに現れた。３．１の１３Ｃ ＮＭＲは、−０．２６ｐｐｍ、８．０１ｐｐｍ、４５．５９ｐｐｍ、１２２．１５ｐｐｍ、１２６．１０ｐｐｍ、１２９．３５ｐｐｍ、１２９．５３ｐｐｍ、１３０．６９ｐｐｍおよび１４６．０１ｐｐｍで共鳴した。３．１の電子衝撃マススペクトルは、ｍ／ｚ＝３１２でピークを示した。これらのスペクトルは、文献に報告されたデータに一致している４、３２。
【０１２５】
スキーム１４：前駆物質の合成：シリコン保護３−ブロモベンジルアミン（３．１）
【化１７】
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【０１２６】
３．３の合成（スキーム１５）は、３．１とＴＨＦ中のｎ−ＢｕＬｉとを−７８ｏＣで３５分間反応させ、３．２を生成することに関する。次いでＴＨＦ中の化合物２．３を３．２に滴下した。反応物を−７８ｏＣで２時間保ち、そこにＦＣ−７２（登録商標）を添加し、混合物を１０分撹拌した。続いて、該反応物を、メタノール（３０ｍＬ）を添加することによってクエンチングした。メタノール添加後、反応物をＦＣ−７２（登録商標）、水およびジクロロメタンを用いて抽出した。回転蒸発器上でＦＣ−７２（登録商標）を除去し、３．３を収率８９％で得た。
【０１２７】
スキーム１５：アザジシロリジン（azadisilolidine）保護ペルフルオロスズ−３−ベンジルアミン（３．３）の合成
【化１８】
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【０１２８】
３．３の加水分解（スキーム１６）は、化合物を一晩メタノール中で十分な１Ｍ ＨＣｌとともに撹拌し、ｐＨをほぼ３とした。生成物をＦＣ−７２（登録商標）中に抽出し、濃縮し、淡黄色のオイルとして３．０を収率９７％で得た。
【０１２９】
スキーム１６：３．０を作製するためのシリコン保護基の加水分解
【化１９】
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【０１３０】
化合物３．０の１Ｈ ＮＭＲ（図２５）は、１．３１ｐｐｍ（６Ｈ）でＳｎ付随体（２ＪＳｎ，Ｈ＝５４．２Ｈｚ）を有する三重線を示した。２．３１ｐｐｍ（６Ｈ）で多重線、３．８８ｐｐｍで一重線、そして、７．２２〜７．４６ｐｐｍで芳香族ピークを示した。シリコン保護基の量は、ベースラインで、０．１〜０．２ｐｐｍのベースラインで見られた。１３Ｃ ＮＭＲは、−１．３７ｐｐｍ（１ＪＳｎ、Ｃ＝３４７Ｈｚ）、２７．９４ｐｐｍ（ｔ、１ＪＦ，Ｃ＝２３．４Ｈｚ）および４６．６２ｐｐｍでピークを示した。フッ素に結合した炭素原子に対応する多重線は、１０６．１７〜１２１．１７ｐｐｍで見られた。そして、芳香族領域に関連するピークは、さらにまだ明白に割り付けられていなかった。化合物３．０の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトル（図２６）は、ｍ／ｚ＝１２６８．５［Ｍ＋Ｈ］＋で単一のピークを示している。ＩＲは、２８５０および２９５５ｃｍ−１でＣ−Ｈストレッチに、および３３５４ｃｍ−１で第１のアミンに対応する強い吸収を示している。これらの結果は全て所望の生成物の形成に一致している。
【０１３１】
スタンニルブロマイド前駆物質（２．３）の３．３への定量変換は、非常に異なっていることがわかった。早い時期において、アザジシロリジン保護３−ブロモベンジルアミン（３．１）は特に安定していないことが理解できた。３．１の合成と精製の後、すぐにｎ−ＢｕＬｉと反応させ、３．２を生成した。これらの手順を講じなかったら、２．３の変換は不完全なものとなるであろう。
【０１３２】
Hunterと共同研究者らは、３．２とクロロスタンナンポリマーとを−７８ｏＣで７時間反応させた後、室温で２時間撹拌したところ、Ｓｎ−Ｃｌ結合の定量的な官能基化が起こったことを報告している４。これらの結果とは対照的に、類似の反応条件下で、Ｓｎ−Ｂｒ部位５０〜６７％のみを変換して、生成物（３．３）に変換した。集中的なトライアルを経て、反応溶液が室温に温められる場合、生成物は極度に分解されがちであることが理解された。２．３から３．３への完全な変換は、したがって、ＦＣ−７２（登録商標）への抽出およびメタノールでのクエンチングの前に反応が−７８ｏＣに保たれているときのみ容易に行うことができた。 
【０１３３】
ヨードベンジアミン（Iodobenzyamine）の合成
フルオラスタグに結合した生成物の特徴をさらに調べるために、およびその純度を確認するために、３．０のヨードジノリシス（iododinolysis）を行った（スキーム１７）。化合物３．０をアセトニトリル中の余剰のヨウ素と一晩反応させ、次いでメタ重亜硫酸ナトリウムを用いてクエンチングを行った。その溶液を水で希釈し、アセトニトリル：水の溶離液（１：１）によって、調整されたフルオラスカラムに通した。アリコート（３×５ｍＬ）を回収し、ＨＰＬＣおよびマススペクトルを用いてその生成物の特徴を調べた。
【０１３４】
スキーム１７：３．０のヨード脱スタンニル化
【化２０】
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【０１３５】
精製溶液（３．４）のＨＰＬＣクロマトグラム（図２７）には、１．７８および６．４６分において、溶媒フロントと３−ヨードベンジルアミンにそれぞれ対応する２つの主なピークが現れた。類似の溶出条件下での３−ヨードベンジルアミンの標準規格は、６．４７分においてピークを示した。反応溶液の陽イオンエレクトロスプレイ（図２８）マススペクトルは、ｍ／ｚ＝２３３．９［Ｍ＋Ｈ］＋で単一のピークを生成した。ほぼｍ／ｚ＞１２００においては、フルオラス不純物は認められなかった。これらの結果は、３．４の形成と一致している。
【０１３６】
メタヨードベンジルグアニジン
過去２０年の間に、放射性ヨウ化されたＭＩＢＧ（ｍ−ヨードベンジルグアニジン）は、核医学において広く使用されてきた３３。それは主にシンチグラフィー診断、クロム親和性細胞腫や神経芽細胞腫などの腫神経堤腫瘍の治療に用いられている３４。さらに、心筋のアドレナリン作動性神経の状態を評価するために用いられることが増えている。
【０１３７】
［１２３Ｉ］または［１３１Ｉ］ＭＩＢＧの作製のために最も広く用いられている合成方法は、Ｃｕ＋触媒変換プロセスに関する。あいにく、この方法が産出するのは、比放射能に低い生成物であり（［１２３Ｉ］で５０ｍＣｉ／ｍｇ）、用量を増加させる必要があり、したがって、結果として画像の質が悪くなる４。したがって、担体が添加されていない生成物への複数の経路を検討したが、広く適用することはできなかった。
【０１３８】
ＭＩＢＧ合成のためのフルオラス方法は、上記の合成の限定を改良し得る。さらに、便利な標識方法が利用可能であったら、ＭＩＧＢ関連放射性医薬品を放出するポジトロンを生成するのに十分利点がある。例えば、Zalutskyらは、メタ−［１８Ｆ］フルオロベンジルグアニジンおよびパラ−［１８Ｆ］フルオロベンジルグアニジンを、フルオロを用いたニトロ変換反応のための３つのステップにおいて合成した。１０〜１５％の所望の放射化学的収率より低い収率１０〜１５％（［１８Ｆ］ＭＦＢＧ）および５０〜５５％（［１８Ｆ］ＰＦＢＧ）および不純物の除去の困難さが報告されている３６。次のセクションでは、［＊Ｉ］ＭＩＢＧおよび［１８Ｆ］ＭＦＢＧ調製のためのフルオラス方法の開発を記載している。
【０１３９】
トリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズ−３−ベンジルグアニジニウム（３．５）の合成
トリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズ−３−ベンジルグアニジン３．５を作製するために、いくつかの合成経路を試みた。第１のアプローチ、アプローチＡ（スキーム１８に）は、Wielandらによって開発された、３．５の合成方法３７を適用した。Wielandの方法は、ｍ−ヨードベンジルアミンとシアンイミドとを１００℃で４時間反応させることに関する。あいにく、採用された種々の手順による３．５の合成は、エレクトロスプレイ・マススペクトロメトリーが示しているように少量の生成物しか生成しないであろう。
【０１４０】
スキーム１８：シアンイミドを用いた３．５の合成の試み
【化２１】
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【０１４１】
３．５を生成するためのこの反応方法の失敗は、前駆物質３．０がプロトン化されないことが理由のようである。３．０を生成するためのシリコン保護基の加水分解はｐＨ３で行われるにもかかわらず、予測されたベンジルアンモニウムクロリドは認められなかった。ベンジルアンモニウムクロリドは、シアンイミドを活性化して求核攻撃にするために必要である（スキーム１９）。
【０１４２】
スキーム１９：シアンイミドを用いたグアニジンの形成のメカニズム
【化２２】
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【０１４３】
３．０をプロトン化する、さらなるあらゆる試みの結果、プロト脱スタンニル化が生じた。同様に、触媒量のＨＣｌ（０．０５ｅｑ）の添加の結果、反応条件下（５４℃）でプロト脱スタンニル化が生じた。これらの結果は、３−（トリ−ｎ−ブチルスタンニル）ベンジルアミンのグアニジンへの変換を可能としたVaidyanathanらの所見８を反映するものである。むしろ、彼らは、（トリアルキルスタンニル）ベンジルアミンの放射性ヨード脱スタンニル化から［１３１Ｉ］ＭＩＢＧを強制的に合成し、シアンイミドを用いて続く反応を行った。
【０１４４】
アプローチＢは、Ｎ−ホルムアミジニル（amidinyl）アミノ酸の調製のためにJursicらによる研究３８を採用した。ここで、ホルムアミジンスルフィン酸、［ＨＮ＝Ｃ（ＮＨ２）ＳＯ２Ｈ］と、水溶性水酸化ナトリウム中の置換されたアミノ酸（Ｄ，Ｌ−フェニルアミン）とを反応させたところ、Ｄ，Ｌ−Ｎ−ホルムアミジンフェニルアミン（スキーム２０）を導いた。
【０１４５】
スキーム２０：ホルムアミジンスルフィン酸を用いた３．５の合成の試み
【化２３】
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【０１４６】
この３．５へのアプローチは、３．０をメタノール中で２．０等量のホルムアミジンスルフィン酸（foramidinesulfinic acid）を用いて室温で一晩撹拌したときに最もうまくいくことがわかった。メタノールは、三相性抽出の前に回転蒸発器上で除去した。ＦＣ−７２（登録商標）を除去した後に得られた白色の粘性のオイルをクロロホルム中で加熱し、続いてデカントし、未処理の３．０を全て除去した。生成物である粘性の白色のオイルは、高収率（８６％）で得た。化合物３．５の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトル（ホルムアミジンスルフィン酸を用いて合成）は、ｍ／ｚ＝１３２５．１およびｍ／ｚ＝１２９３．１でのピークに加えて、ｍ／ｚ＝１３１０．２［Ｍ＋Ｈ］＋でピークを示した（図２９）。化合物３．５の１Ｈ ＮＭＲおよび１３Ｃ ＮＭＲは、好適な溶媒を見つけることができなかったので、得られなかった。
【０１４７】
化合物３．５を、冷Ｉ２およびＦ２で処理した。切断した生成物に関しては、エレクトロスプレイ・マススペクトルにおいて、類似のピークパターンが認められた。該生成物に関連するピークは、典型的に最も強度が高く、＋／−１５質量単位のピークのいずれかの側に隣接している。得られたピークパターンを合理化することができなかったので、３．５を合成するための他の経路を調べた。
【０１４８】
３．３．２  アプローチＣ
アプローチＣは、いくつかの一級アミンを対応するグアニジンに変換する、Mosherらの研究３９を採用した。その変換は、アミノイミノ−メタンスルホン酸と一級アミンとを室温で２時間反応させることによって達成し、対応するグアニジンを中等度の収率（２２〜８０％）で生成した。遊離アミンを穏やかな条件下（ｐＨ＝３．１）でグアニジンに変換することが可能であったので、この方法は、３．５の合成に適用可能であると思われる。
【０１４９】
アミノイミノメタンスルホン酸（Ｈ２Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）ＳＯ３Ｈ）（３．７）は、Mosher１２の手順に続いて、ホルムアミジンスルフィン酸（３．６）を過酢酸と反応させることによって高収率で合成した（スキーム２１）。化合物３．７の融点は、文献の所見１２の１２５〜１２６℃と一致していた。
【０１５０】
スキーム２１：アミノイミノ−メタンスルホン酸（３．７）の合成
【化２４】
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【０１５１】
形成された生成物を評価するため、およびＭＩＢＧの標準的なサンプルを取得するために、化合物３．７をまず、ｍ−ヨードベンジルアミンと反応させた（スキーム２２）。等モル量の３．７および３．８をメタノール中で結合し、一晩還流させた。得られた生成物（３．９）を更なる精製を行わずに特徴を調べた。１Ｈ ＮＭＲは、４．２２ｐｐｍで一重線を示し、６．９０〜７．５６ｐｐｍで芳香族ピークを示していた。１３Ｃ ＮＭＲは、４８．９ｐｐｍ、９９．３ｐｐｍ、１３１．６ｐｐｍ、１３５．７ｐｐｍ、１４１．０ｐｐｍ、１４１．９ｐｐｍ、１４４．３ｐｐｍおよび１６２．６５ｐｐｍでピークを示した。陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルは、３．９に対応するｍ／ｚ＝２７６．１［Ｍ＋Ｈ］＋でピークを示し、そして、３．８に対応するｍ／ｚ＝２３３．９［Ｍ＋Ｈ］＋で非常に小さなピークを示した。化合物３．９のＨＰＬＣ分析は、ｔＲ＝２４．５４分（ピーク領域全体の８６％）において、主なピークを１つだけ示した。このデータは、文献の報告に一致しており、所望の生成物の作製を確認するものである４０。
【０１５２】
スキーム２２：標準的なｍ−ヨードベンジルグアニジン（３．９）の合成
【化２５】
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【０１５３】
３．７を用いた化合物３．９の合成は、この手順の３．５の合成への適用を促進した（スキーム２３、アプローチＣ）。化合物３．０を１．１等量の３．７とメタノール中で反応させ、一晩還流させた。Mosherら１２により示唆されているように反応を室温で行った場合、変換は不完全なものであった。粗反応混合物をメタノールからＦＣ−７２（登録商標）への抽出することによって、乳白色のオイル状の生成物が許容可能な収率（８８％）で生成された。
【０１５４】
スキーム２３：以下のアプローチＣによる化合物３．５の合成の成功
アプローチＣ
【化２６】
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【０１５５】
陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトロメトリー（図３０）は、ｍ／ｚ＝１３０９．９［Ｍ＋Ｈ］＋で単一のピークを示した。これは、３．５の形成に一致している。エレクトロスプレイ・スペクトルは、前駆物質（３．０）と関連したピークをなんら示さなかった。これは、１２６８のｍ／ｚ値を有していたが、アプローチＢを用いた場合に認められたｍ／ｚ＋／−１５に対応するピークを有していなかった。現時点では、３．５の解像された１Ｈ ＮＭＲおよび１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、まだ得られておらず、化合物の溶解度は良好ではない。
【０１５６】
標識したＭＩＢＧ（３．１０）の合成
最終的なＮａ１２５Ｉの使用のための生成物および反応条件を評価するために、３．５の冷ヨウ素化を行った（スキーム２４）。アプローチＣを経て合成された３．５のサンプル（３．９０μｍｏｌ）をメタノール中に溶解した。撹拌溶液に、ＮａＩ（４．６×１０−７ｍｍｏｌ）を添加し、その後即座に過酢酸オキシダントを添加した。その反応物を２時間撹拌し、次いで、１００μＬの１０％メタ重亜硫酸ナトリウム溶液を用いてクエンチングした。希釈反応溶液の精製は試みなかった。しかしながら、フルオラス物質を切断した生成物から容易に除去できることは確立されていた。
【０１５７】
スキーム２４：ＮａＩ（３．１０）を用いたＭＩＢＧの冷標識
【化２７】
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【０１５８】
化合物３．１０の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルでは、ｍ／ｚ＝２７５．９［Ｍ＋Ｈ］＋においてピークが現れた。それは、生成物に一致している（図３１）。化合物３．１０の１００μＬのアリコートのＨＰＬＣは、滞留時間が７．２、１４．７、および２４．９分の時、ピークを示した（図３２）。７分および２４．９分で溶出するピークは、溶媒フロントおよび生成物３．１０にそれぞれ割り付けられた。ＭＩＢＧの標準的な調製は、類似の滞留時間２４．５分で溶出した。１４．７分でのピークは、全ＭＩＧＢの１％未満を表すものであった。また、ピークをもたらす化合物の性質はいまだ不明である。
【０１５９】
ＭＦＢＧ（３．１１）の合成
３．５のヨウ素標識化の良好な結果を受けて、ｍ−フルオロベンジルグアニジン（ＭＦＢＧ）の合成の可能性を調べた。ＭＦＢＧ（３．１１）の合成のためのフルオロ脱スタンニル化反応をスキーム２５に示している。化合物３．５の冷却フッ素化反応は、これまでの反応（３−フルオロ安息香酸と３−フルオロベンズアミド）と類似の方法で進行した。ＦＣ−７２（登録商標）中に溶解した３．５を含有するＦＥＰチューブに、約０．７等量のＦ２（Ｎｅ中０．６％）を−９３ｏＣで泡立てた。その反応の後、反応物から、ＦＣ−７２（登録商標）、槽をすすぐために用いられるメタノールとともに、回転蒸発器上に除去し、アセトニトリル：水（１：１）で希釈し、調整フルオラスカラムに通した。
【０１６０】
スキーム２５：ＭＦＢＧ（３．１１）の合成
【化２８】
0004846238.tif 000029
【０１６１】
化合物３．１１の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルは、ｍ／ｚ＝１６８．０［Ｍ＋Ｈ］＋で単一のピークを示した（図３３）。マススペクトルは、ｍ／ｚ＞１０００においてフルオラス不純物の証拠を何も示さなかった。または、ｍ／ｚ＝１２６［Ｍ＋Ｈ］＋において３−フルオロベンジルアミンの証拠を何も示さなかった。
【０１６２】
化合物３．１１のＨＰＬＣクロマトグラムは、溶媒フロント（ｔＲ＝２〜６分）におけるピークならびに、２５．３分、３０．３分、および３５．０分において溶出するピークを有している（図３４）。これらの溶出条件下では、滞留時間１５．８分をもつ、３−フルオロベンジルアミンに対応するピークはない。溶出条件は、ＭＩＢＧで用いたものと同じである。したがって驚くべきことに３５分で溶出する主なピーク（６１＋％）はＭＩＢＧより高度に残留している。より長い残留時間は、ジフッ化またはビグアニジニウム種を示唆するかもしれない。しかしながら、これらの生成物に対応するピークは、エレクトロスプレイ・マススペクトルには認められない。あいにく、これらの実験時において、ＭＦＢＧの標準規格は、これらの結果を解釈するために利用することができなかった。
【０１６３】
化合物３．１１の１９Ｆ ＮＭＲは、３つのピークを示している（図３５）。２つの主なピークは、−１０９．５ｐｐｍと−１１０．３ｐｐｍの中心にあり、９．２Ｈｚと８．７Ｈｚとをそれぞれ結合する３ＪＨ、Ｆを有している。これらのピーク位置および結合定数は、メタまたはパラ−フッ化アリール化合物に一致している。結合定数がより小さいということは、まず、１，２もしくは１，４ジフッ化種が存在しないことを示す。変化するピーク位置は、むしろアイソマーに起因しない場合、変化するプロトン化の状態の結果であることができ、フッ素のシフトに著明に影響を及ぼすことがわかった４１。スペクトルの弱い解像度は、溶離液をさらに濃縮することなしに得られた。場合によっては生成物に損失をもたらすと思われたので、凍結乾燥機上でのサンプルの濃縮は避けた。
【０１６４】
トリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズ−３−ベンジルアミンによる結合
項目２で述べたように、短いペプチド配列を用いて、放射性核種を特異的なレセプターに対する標的としていた。このタイプの薬剤に特異的なレセプターとしては、すべての未結合の物質が放射性医薬品から分離されることが重要である。したがって、ペプチドを標識化するためのフルオラスアプローチを開発することが有利であるだろう。本項では、これらの目標に向けての予備的ステップを講じている。特に、モデルオリゴペプチドのカルボン酸の末端のフルオラス「タグ付けされた」ベンジルアミンへの結合が開発された。
【０１６５】
走化性ペプチド、Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、３．１２は、多型核白血球や単核マクロファージに結合する細菌生成物である。Fischmanらは、このペプチドの放射線標識した誘導体が膿瘍や炎症の部位を画像化するのに有効であることを示した４２。用量が高くなると走化性ペプチドの毒性が重篤になり、それらの臨床的応用を妨げていた。その結果、あらゆる非標識の物質が除去されることが必須である。
【０１６６】
Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ＧｌｙまたはＧＦＬＭ（ｆ）（３．１２）
【化２９】
0004846238.tif 000030
【０１６７】
トリス（ペルフルオロヘキシルエチル）−３−ベンジルアミン−ＧＦＬＭ（ｆ）（３．１３）の合成
フルオラス「タグ付けされた」ベンズアミド合成のために開発された結合方法は、現在の目的のために適用できるはずである。しかしながら、この場合、ペプチドカルボン酸の末端は、ベンジルアミン（３．０）による求核攻撃のために活性化されるであろう（ＨＢＴＵ）。
【０１６８】
化合物３．１３（スキーム２６）の合成では、３．０と３．１２とをＤＭＦ中で結合させ、その後アクリル化試薬（ＨＢＴＵ）と塩基を添加した。その反応物を室温で一晩撹拌し、水で希釈し、ＦＣ−７２（登録商標）中に抽出した。ＦＣ−７２（登録商標）層は、ほんの少量の生成物３．１３を、未処理の３．０とともに含有していることがエレクトロスプレイ・マススペクトロメトリーによってわかった。３．１３の大半は、実際は、ＦＣ−７２（登録商標）とＤＭＦ／Ｈ２Ｏとの間に仕切られている。明らかに、ペプチドの極性は、生成物がもはや完全にフルオラス溶媒に溶解可能とはならないようにするのに十分である。一方、フルオラス「タグ」は、ペプチドがＨ２Ｏ相に溶解するのを妨げる。この結果は、界面エマルジョンを回収することによってあらゆる未処理のフルオロフィーリックな前駆物質（３．０）からフルオロフォービックな生成物（３．１３）を容易に精製することができるのでやや好都合である。
【０１６９】
得られた白色のエマルジョンを単離した後、ＦＣ−７２（登録商標）から再抽出し、あらゆる未処理の３．０を除去した。得られた厚い、ゴム状の白色の固体の収率（３３％）は、純粋なサンプルの単離を確実にするために調整した。
【０１７０】
スキーム２６：化合物３．０のＧＦＬＭ（ｆ）への結合.
【化３０】
0004846238.tif 000031
【０１７１】
図３６は、化合物３．１３の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す。ピークパターンは、ｍ／ｚ＝１７４４［Ｍ＋Ｈ］＋、ｍ／ｚ＝１７６１［Ｍ＋ＮＨ４］＋およびｍ／ｚ＝１７６６［Ｍ＋Ｎａ］＋の生成物の特徴を有している。そのスペクトルは、前駆物質３．０に対応するｍ／ｚ＝１２６８においてはピークを示さなかった。
【０１７２】
化合物３．１３のヨウ素標識化
フルオラス「タグを付けた」化合物（３．１３）の特徴を調べるために、さらにそれをヨウ素溶解反応によって切断した（スキーム２７）。３．１３の精製サンプルをメタノール中の余剰のヨウ素およびクロロホルムと一晩反応させた。余剰のヨウ素を、メタ重亜硫酸ナトリウムを用いてクエンチングし、その溶液を回転蒸発器上で濃縮した。得られた残留物をアセトニトリル：水（１：１）で希釈し、エレクトロスプレイ（図３７）およびＨＰＬＣ（図３８）を用いて特徴を調べた。
【０１７３】
スキーム２７：化合物３．１３のヨウ素溶解
【化３１】
0004846238.tif 000032
【０１７４】
化合物３．１４の陽イオンマススペクトルは、ｍ／ｚ＝７１０［Ｍ＋Ｈ］＋、ｍ／ｚ＝７２７［Ｍ＋ＮＨ４］＋、およびｍ／ｚ＝７３２［Ｍ＋Ｎａ］＋において、所望の生成物に対応するピークを明らかに示している。可能な不純物、３−ヨードベンジルアミンに対応する、ｍ／ｚ＝２３４でのピークは存在しない。化合物３．１４のＨＰＬＣクロマトグラムは、滞留時間３．３分および１９．４分において、おそらく溶媒フロントと生成物にそれぞれ対応する、２つのかなり大きなピークを示している。同じ溶出条件でのＧＦＬＭ（ｆ）のＨＰＬＣクロマトグラムは、ｔＲ＝１３．６および１４．８分を有している。一方、３−ヨード安息香酸の標準規格は、ｔＲ＝６．５分である。したがって３．１４のクロマトグラムは、ＧＦＬＭ（ｆ）と比較して滞留時間の長い、かつ、ｔＲ＝６．５分での不純物を示さない生成物の形成を確認している。
【０１７５】
要約
トリス（ペルフルオロヘキシルエチル）スズ−３−ベンジルアミン（３．０）の合成は、より広範囲のアレイの生体分子の合成と標識化を容易にするはずである。最初の結果は、ＭＩＢＧ（３．１０）およびＭＦＢＧ（３．１１）の、対応するフルオラス「標識化された」前駆物質（３．５）の合成の成功を示していると思われる。しかしながら、前駆物質と生成物をさらに詳細に特徴を調べるには、標識化の実験を、［１８Ｆ］Ｆ２およびＮａ１２５Ｉを含むほどに拡大する必要がある。
【０１７６】
化合物３．０を介しての、フルオラス「タグ付けされた」ペプチドの合成はまた、標準的な結合方法を用いて示された。溶解度の差によって、ペプチド結合生成物（３．１３）の、あらゆる未処理のフルオラス基質からの単純な抽出による精製が可能となる。この結合プロトコルは、広範囲のアレイの短いペプチドがフルオラス支持体と後に結合することを可能にする。ヨウ素を用いた３．１３の予備的な標識化は後に、［１８Ｆ］Ｆ２およびＮａ１２５Ｉに拡大しなければならないであろう。
【０１７７】
ここに記載の技法は、放射性医薬品の調製のための新規な手段として用いることができる。それは、広範囲な精製を行わずに、高い放射化学的および化学的収率で、高い比放射能で、標識された化合物を容易に合成することを可能にする。これは、放射性撮像および治療薬の標的とされたレセプターにとって特に重要である。このアプローチはまた、薬学的および放射性医薬品発見の研究に利用することもできる。
【０１７８】
報告された技法は、従来の樹脂ベースの標識化の方法と比較して多くの利点を有している。上記方法は、放射線標識した化合物を、従来の放射線標識法と比較してより効率的、安全に、かつより便利に、調製するために使用することができる。アプローチは、９９ｍＴｃ、９４ｍＴｃ、１８６Ｒｅ、１０５Ｒｈ、１８Ｆ、１１Ｃ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、７６Ｂｒおよび１１１Ａｔを含む広範囲なアイソトープに適用することが可能であり、容易に自動化することが可能である。
【０１７９】
フルオラスタグ付けされた化合物は、容易にペルフッ化溶媒中に溶解されうる。これらの溶媒は特に、標識化反応を行う際に有用である。なぜなら、それらは１８Ｆ−１９Ｆ（すなわちＦ２）のような反応化合物に対して安定だからである。さらに、１１ＣＯ２や１１ＣＯなどのガスは、ペルフッ化溶媒中に高度に溶解性を有しており、それによって従来の溶媒中において行われた反応と比較して生成物の収率を高めることになるであろう。例えば、スキーム２８に示すように、フルオラススズ基質から、炭素−１１標識したベンゾフェノンを調製することが可能である。その反応は、５分未満で完了し、標識されたベンゾフェノンを主生成物として生成する。このアプローチは特に、ＰＥＴを用いて生体分布研究を行っていた薬物開発に適用可能である。
【０１８０】
スキーム２８：標識されたベンゾフェノンの合成
【化３２】
0004846238.tif 000033
【０１８１】
フルオラス支持体を使用することによって、不溶性ポリマー支持体を用いたアプローチに比べて、標識化され得る化合物の数が増加する。従来の合成方法は、強力な反応条件を必要とせずに、化合物をフルオラス支持体に付着させるために用いることができる。不純物は（ポリマーが支持する方法とは異なり）、標準的な化学的技法を用いて、除去することが可能である。さらにフルオラス標識された基質は、医学的に使用することが認められている化合物および/また技法を得る際に重要な伝統的な方法を用いて、容易に特徴を調べることができる。この報告されたアプローチはまた、放射性医薬品のライブラリーを開発するために使用することができる。それは、新たな撮像剤が発見される速度および効率性を促進することができるであろう。
【０１８２】
実施例
本発明を概略的に解説したところで、以下の実施例を参考にすれば、より容易に理解されようが、以下の実施例は単に本発明の特定の局面および態様の描写を目的に含まれたのであり、本発明を限定するものとは、意図していない。
【０１８３】
一般的な手順
分析的ＴＬＣを長波長の紫外光での検出を備えたシリカゲル６０−Ｆ２５４（Merck）上で行った。ＨＰＬＣ実験（冷却）は、ＰＤＡ検出器およびＣ−８もしくはＣ−１８逆相カラム（説明されていれば）を備えたVarian ProSTar HPLCシステムを用いた。フッ素−１８標識された３−フルオロ安息香酸のＨＰＬＣ分析には、Waters 490E プログラム式多波長検出器およびBeckman放射性同位体検出器（Model 170）を用いた。アセトニトリルおよび蒸留脱イオン水を移動相（示されている場合は、緩衝された／酸化された）として用いて示したように、勾配もしくは無勾配溶出を行った。１Ｈ、１３Ｃおよび１９Ｆ ＮＭＲスペクトルをBruker Avance AC-200またはDRX-500スペクトロメーター上に記録した。Ｘ線構造をＭｏ Ｋα放射線を用いて、ＣＣＤ検出器が固定されたSiemens回転アノード機器上に回収した。エレクトロスプレイ・マススペクトロメトリー（ＥＳＭＳ）をFisons Platform四極子機器上で行った。化学的イオン化マススペクトル（ＣＩＭＳ）を７０ｅＶで、ソース温度２００ｏＣで、VG11-250データシステムを備えたVG Instruments分析ZAB-Eマススペクトロメーター上で測定した。ＩＲスペクトルをBio-Rad FTS-40 FT FTIR スペクトロメーターに通した。融点は、Fisher-John融点装置を用いて測定した。フッ素−１８標識されたＦ２は、１８Ｏ（ｐ、ｎ）１８Ｆ核反応によって、１１ＭｅＶで作動するSiemens RDS 112プロトンサイクロトロンを用いて、「ダブルシュート」法１８で作製した。
【０１８４】
材料
以下は例外として、全て市販の試薬を用いた。ＴＨＦは、ナトリウムおよびベンゾフェノンから蒸留した。トルエンは、水酸化カルシウムから蒸留した。Enriched［１８Ｏ］Ｏ２（１８Ｏ、９５．８７％、Eurisotope, St. Aubin,
France）、ネオン（９９．９９９％、Air products）、１％Ｆ２を含むネオン（Canadian Liquid Air）、ＨＰＬＣグレード溶媒（Caledon）、試薬グレードＦＣ−７２（登録商標）（3M corporation）、およびペルフルオロヨウ化オクチル、フェニルスズトリクロリド、３−（エトキシカルボニル）フェニルジン（phenylzin）溶液、およびベンゾトリフルオリドは、全てAldrichから購入した。  
【０１８５】
トリス［（２−ペルフルオロヘキシル）エチル］フェニルスズ（２．４）。Masahideらによって開発された手順を次のように行った４３。削り状マグネシウム２．３０８ｇ（９４．９ｍｍｏｌ）に対して、２２．５０１ｇ（４７．５ｍｍｏｌ）のペルフルオロヨウ化オクチルの入った１０ｍＬの乾燥エーテルを添加した。その反応混合物を、２５分間還流して撹拌し、次いで１．９５ｍＬ（１１．９ｍｍｏｌ）のフェニルスズトリクロリドを２０ｍＬの乾燥トルエンに添加した。反応物を７０ｏＣで４時間、次いで室温で一晩撹拌した。反応混合物を４０ｍＬの塩化アンモニウム溶液、３部の２００ｍＬの５％のナトリウムチオールスルファート溶液を用いてクエンチングした。組み合わせた水溶性層を３部の１００ｍＬのジエチルエーテルを用いてさらに抽出した。次いで、結合した有機画分を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下で濃縮した。真空蒸留によってホモ結合した不純物を８２ｏＣ（ほぼ０．２ｍｍＨｇ）で除去し、残基をフラッシュクロマトグラフィーによって中性アルミナ上で精製した。ヘキサンを用いた溶出によって、無色のオイルとして２．４を得た：収率１１．０３１ｇ（７５％）。ＴＬＣＲｆ０．８９（６：１ヘキサン−ジエチルエーテル）。１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１．２３（ｔ、６Ｈ）、Ｓｎ付随体（２ＪＳｎ、Ｈ＝５１．７Ｈｚ）をもつ、２．２４（ｍ、６Ｈ）、７．３３（ｓ、５Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（５０．３ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ−１．４９、２７．７４（ｔ、３ＪＦ、Ｃ＝２３．５Ｈｚ）、１２９．０６、１２９．６５、１３６．０８。ＭＳ（ＥＳＭＳ）、（ＩＰＡ、２ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ）：ｍ／ｚ１２９７．０［Ｍ＋ＯＡｃ−Ｈ］−、ｍ／ｚ＝１２８３．０［Ｍ＋ＯＡｃ−ＣＨ３］−。ＩＲ（薄膜）：２９６２、２９２８、２８７５、２８６２、１２４１、１１４６、４９７ｃｍ−１。
【０１８６】
ブロモトリス［（２−ペルフルオロヘキシル）エチル］スズ（２．３）。１５．８６０ｇ（１２．８ｍｍｏｌ）の２．４を含有する２０ｍＬのジエチルエーテル溶液に対して、０ｏＣで、６７０μＬ（１３ｍｍｏｌ）の臭素を含有する２０ｍＬのジエチルエーテル溶液をゆっくり添加した。その反応溶液を０ｏＣで２時間、そして室温で一晩撹拌した。その反応溶液を減圧下で濃縮した。１６２ｏＣ（ほぼ０．２ｍｍＨｇ）で真空蒸留を行うことによって、無色のオイルとして２．３を得た：収率１５．４８７ｇ（９７％）。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１．５７（ｔ、６Ｈ）、Ｓｎ付随体（２ＪＳｎ、Ｈ＝５４．１Ｈｚ）をもつ、２．４６（ｍ、６Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ６．１１、Ｓｎ付随体（１ＪＳｎ、Ｃ＝３７４Ｈｚ）をもつ、２７．６０（ｔ、３ＪＦ、Ｃ＝２２．９Ｈｚ）、１０８．８６〜１２０．７１（ｍ、ＣＦ２、ＣＦ３）。ＭＳ（ＥＳＭＳ、ＩＰＡ２ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ）：ｍ／ｚ１２７９．５［Ｍ＋ＯＡｃ］−。ＩＲ（薄膜）：３４７２、３４１７、２９４９、１４４２、１１４６ｃｍ−１。  
【０１８７】
トリス［２−ペルフルオロヘキシルエチル］スズ−４−ブロモベンゼン（２．８）の合成。手順は、Lequan４４らによって用いられたものを採用した。３７ｍｇ（１．５２ｍｍｏｌ）の削り状マグネシウムに対して、３９０ｍｇ（１．６６ｍｍｏｌ）のｐ−ジブロモベンゼンを含有する８ｍＬのＴＨＦ溶液をゆっくり添加した。その反応混合物を２時間、８２０ｍｇ（０．６６２ｍｍｏｌ）の２．３を含有する６ｍＬのＴＨＦ溶液を添加する時間において、還流させた。その反応溶液を一晩撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。残基を３部（３ｍＬ）のＦＣ−７２（登録商標）を用いて、ジクロロメタンおよび水から抽出した。結合したＦＣ−７２（登録商標）層を再び、ジクロロメタンから抽出し、その後減圧下で濃縮し、明るい無色のオイルとして２．８を得た：収率０．５３８ｍｍｏｌ（８１％）。１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１．３０（ｔ、６Ｈ）、２．３０（ｍ、６Ｈ）、７．２４（ｄ、２Ｈ）、７．５６ｐｐｍ（ｄ、２Ｈ）。ＭＳ（ＥＳＭＳ）：ｍ／ｚ１３７５。［Ｍ＋ＯＡｃ］＋および１２９７．１［Ｍ＋ＯＡｃ−Ｂｒ］＋。
【０１８８】
４−ブロモベンジルオキサゾリン（２．９）。手順は、Hughes, Aら４５によって用いられたものを採用した。７．０ｍＬ（９６ｍｍｏｌ）中に４．００ｇ（１９．９ｍｍｏｌ）の塩化チオニルを含む混合物を２時間還流させ、その後、減圧下で濃縮した。１０ｍＬのジクロロメタンに溶解させたその生成物に対して、０℃で、３．８ｍＬ（４０ｍｍｏｌ）の２−アミノ−２−メチル−１−プロパノールの入った１０ｍＬのジクロロメタン溶液をゆっくり添加した。その反応溶液を一晩徐々に加温し、濾過し、２部の１０ｍＬの水から抽出し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。その溶液を減圧下で濃縮した。そして、４．８５０ｇ（１７．８２ｍｍｏｌ）の固体に、６ｍＬ（８０ｍｍｏｌ）の塩化チオニルを添加した。その反応混合物を４５分間撹拌した後、大量のジエチルエーテルを添加し、白色の固体を析出させた。その固体を濾過し、３Ｎ ＮａＯＨからジエチルエーテル中に抽出させ、さらに３部の１０ｍＬの３Ｎ ＮａＯＨで洗浄した。結合した有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、明るい固体として２．９を得た：収率４．８１０ｇ（９５％）。１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１．４２（ｓ、６Ｈ）、４．１７（ｓ、２Ｈ）、７．５６（ｄ、２Ｈ）、７．８７（ｄ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（５０．３ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ２８．２６、６７．５８、７９．３２、１２５．９９、１２６．６８、１２９．８０、１３１．５３、１６１．４８。マススペクトル（ＥＩ）：ｍ／ｚ２５４。
【０１８９】
トリス［２−ペルフルオロヘキシルエチル］スズ−ベンジルオキサゾリン（２．１０）の合成。手順は、Miliusら４６によって用いられたものを採用した。２１５ｍｇ（８．８３ｍｍｏｌ）の削り状マグネシウムに対して、１．１２２ｇ（４．４１５ｍｍｏｌ）の２．９を含有する１８ｍＬのＴＨＦ溶液をゆっくり添加した。その撹拌混合物に、１，２−ジブロモエタン（２０滴）を添加し、１時間還流させた。この溶液を、５４７ｍｇ（４．４１５ｍｍｏｌ）の２．３が入った３ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）と１４ｍＬのベンゾトリフルオリドとを含有する溶液に添加した。その反応溶液を室温で一晩撹拌し、次いで、減圧下で濃縮した。残留物を３部（３ｍＬ）のＦＣ−７２（登録商標）を用いてジクロロメタンおよび水から抽出した。結合したＦＣ−７２（登録商標）層を、ジクロロメタンで再抽出し、減圧下で濃縮し、明るい無色のオイルとして２．１０を得た：収率５２８ｍｇ（９０％）。１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１．３２（ｔ、６Ｈ）、１．４０（ｓ、６Ｈ）、２．３０（ｍ、６Ｈ）、４．１４（ｓ、２Ｈ）、７．４４（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．９７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）．１３Ｃ ＮＭＲ（５０ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ−１．２５、２７．６８（ｔ、３ＪＦ、Ｃ＝２３．４Ｈｚ）、２８．４７、６７．７１、７９．４６、１２８．３６、１３５．９７。ＭＳ（ＥＳＭＳ）：ｍ／ｚ１３９４．２［Ｍ＋ＯＡｃ］＋。
【０１９０】
トリス［２−ペルフルオロヘキシルエチル］スズ−３−エチルベンゾエート（２．１４）。８．５２３ｇ（６．８７９ｍｍｏｌ）の２．３を含有する１０ｍＬのＴＨＦ溶液に、０℃で、４１．２ｍＬ（２０．６ｍｍｏｌ）の０．５Ｍ ３−（エトキシカルボニル）フェニル亜鉛のＴＨＦ溶液をゆっくりと添加した。その溶液を２時間かけて室温に加温し、室温で一晩撹拌した。その反応溶液を減圧下で濃縮し、残留物を４部の５ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）を用いて２０ｍＬのメタノールから抽出した。結合したＦＣ−７２（登録商標）層を、減圧下で濃縮し、高圧化で乾燥させて、２．１４を無色のオイルとして得た。収率８．９０３ｇ（９８．９％）。ＴＬＣＲｆ０．５８（６：１ ヘキサン：ジエチルエーテル）。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１．３５（ｔ、６Ｈ）、１．３９（ｍ、３Ｈ）、２．３３（ｍ、６Ｈ）、４．３９（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝７．１Ｈｚ）、７．４９（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）、７．５７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、８．０５（ｄ、１Ｈ）、８．０７（ｓ、１Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（５０．３ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ−１．１２、１４．２０、２７．８７（ｔ、１ＪＦ、Ｃ＝２３．３Ｈｚ）、６１．１７、１０８．９２〜１１８．８４ｐｐｍ（ｍ、ＣＦ２、ＣＦ３）、１２８．９０、１２９．５４、１３０．７９、１３１．１３、１３１．８４、１３６．０６、１３６．９７、１３７．３４、１４０．３０、１４３．４６、１６６．６７。ＭＳ（ＥＳＭＳ、ＩＰＡ２ｍＭ ＮＨ４ＯＡｃ）：ｍ／ｚ１３６９．５［Ｍ＋ＯＡｃ］−、ｍ／ｚ＝１２７９．４［Ｍ−ＯＥｔ］−。
【０１９１】
トリス［２−ペルフルオロヘキシルエチル］スズ−３−安息香酸（２．２）。８．９０３ｇ（６．８０１ｍｍｏｌ）の２．１４と３４ｍＬの１Ｎ ＮａＯＨの入った３４ｍＬのメタノールとの混合物を２４時間還流させた。メタノールを減圧下で除去し、残留物を４部の５ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）を用いて抽出した。次いで結合したＦＣ−７２（登録商標）層を２０ｍＬのジクロロメタンおよび１０ｍＬの１Ｎ ＨＣｌから２回抽出した。結合したＦＣ−７２（登録商標）層を減圧下で濃縮し、無色のオイルとして２．２を得た：収率８．５８４ｇ（９８％）。数日後、２．２は、白色の固体として結晶化した。１ｍＬのペンタン中に約１００ｍｇの２．２を溶解し、続いて、１週間かけてゆっくりと蒸発させて、無色の針状の２．２を得た。ＴＬＣＲｆ０．２１（６：１ヘキサン−ジエチルエーテル）。１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１．３４ｐｐｍ（ｔ、６Ｈ）、Ｓｎ付随体（２ＪＳｎ、Ｈ＝５３．４Ｈｚ）をもつ、２．３１（ｍ、６Ｈ）、７．５１（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、７．６２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．１Ｈｚ）、８．１１（ｄ、１Ｈ）、８．１２（ｓ、１Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ−１．５３−１．０６、２７．４２（ｔ、１ＪＦ、Ｃ＝２４．４０Ｈｚ）、１０８．４９−１１８．５１（ｍ、ＣＦ２、ＣＦ３）、１２８．６６、１２９．０２、１２９．７３、１３０．０１、１３０．３９、１３１．０８、１３１．３４、１３４．００、１３５．９０６、１３６．１６、１３７．５３、１４１．００、１４１．２３、１７２．６１、１７２．０４。ＭＳ（ＥＳＭＳ、ＩＰＡ）：ｍ／ｚ１２７９．１［Ｍ−Ｈ］−。ＩＲ（薄膜）：３４１０、２９８１、２９５０、１６３１、１６１０、１５９３ｃｍ−１。
【０１９２】
一般的な手順：Ｆ２反応からの３−フルオロ安息香酸（２．１５）。０．１９１ｇ（０．１４９ｍｍｏｌ）の２．２の入った１ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）に、−８５℃で、０．５％Ｆ２（１１８μｍｏｌ）の入ったＮｅをＦＥＰチューブ中で泡立てた。Ｆ２は、３５分かけて容易に溶液中に放出させた。反応溶液を、槽を洗浄するために用いた３部の３ｍＬのメタノールとともに大きなバイアル中で濃縮した。残留物を３部の３ｍＬの１：１アセトニトリル：水で洗浄し、調整されたフルオラス逆相カラム（１ｇ）に溶出し、２．１５を得た。収率２８．２μｍｏｌ（２４％）。ＨＰＬＣ分析は、分析的（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）Ｃ８逆相カラム上で行った。標準と一致している４．２２分の滞留時間は、流速＝１ｍＬ／分、溶離液：５０％水（０．２％ＴＦＡ）：５０％アセトニトリル（０．２％ＴＦＡ）、λ＝２８０ｎｍのとき発生した。１９Ｆ
ＮＭＲ（１８８．１６ＭＨｚ、ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３）。δ−１１２．００（ｄ、３ＪＦ，Ｈ＝５．６５Ｈｚ）。ＭＳ［ＥＳＭＳ、１：１ＩＰＡ：（ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ）］：ｍ／ｚ１３９．１［Ｍ−Ｈ］−。
【０１９３】
一般的な手順：［１８Ｆ］３−フルオロ安息香酸（２．１６）。１ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）の０．１２４ｇ（９７．２μｍｏｌ）の２．２に対して、−８５℃で、［１８Ｆ］Ｆ２（１５〜２０μｍｏｌ）の入ったＮｅをＦＥＰチューブ中で泡立てた。反応溶液、および前記の槽を２ｍＬのメタノールで２回すすいだ液を合わせ、Ｎ２流のもと、湯浴にて蒸発させた。残基を３部の３ｍＬのアセトニトリル：水（１：１）ですすぎ、フルオラス逆相カラム（１ｇ）に溶出した。ＨＰＬＣ分析は、分析的（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）Ｃ８逆相カラム上で行った。標準と一致している４．１８分の滞留時間は、流速＝１ｍＬ／分、溶離液：５０％水（０．２％ＴＦＡ）：５０％アセトニトリル（０．２％ＴＦＡ）、λ＝２８０ｎｍのとき発生した。γ検出器を使用するクロマトグラムは、機器間の時間遅れに一致する４．９９分の滞留時間において、単一のピークを示した。１９Ｆ
ＮＭＲ（１８８．１６ＭＨｚ、ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ）。δ−１１０．１０（ｄ、３ＪＦ、Ｈ＝７．２４Ｈｚ）。ＭＳ［ＥＳＭＳ、１：１
ＰＡ：（ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ）］：ｍ／ｚ１３９．０［Ｍ−Ｈ］−。
【０１９４】
３−ヨード安息香酸（Ｉ２反応）（２．１７）。２ｍＬのアセトニトリル中に０．１２７ｇ（９９．１μｍｏｌ）の２．２を含有する混合物に対して、１ｍＬ（０．１ｍｍｏｌ）のヨウ素メタノール溶液を添加した。その反応混合物を１６時間撹拌し、次いで、メタ重亜硫酸ナトリウムの結晶を用いてクエンチングした。その反応物を２．５ｍＬの蒸留脱イオン水で希釈し、その全量を、アセトニトリル：水（１：１）を用いて前調整したフルオラスカラム（３．９ｇ）に通した。カラムを２５ｍＬのアセトニトリル：水（１：１）を用いて溶出し、２．１７を溶液として得た。ＨＰＬＣ分析は、分析的（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）Ｃ８逆相カラム上で行った。３−ヨード安息香酸の標準と一致している９．９０分の滞留時間は、流速＝１ｍＬ／分、溶離液：８０％水（０．１％ＨＦＢＡ）：２０％アセトニトリル（０．２％ＴＦＡ）、λ＝２５４ｎｍのときに観察された。あるいは、流速＝１ｍＬ／分、溶離液：８０％水（ｐＨ＝７．４）：２０％アセトニトリル、λ＝２５４ｎｍに条件を変化させたとき、２．９分において２．１７が溶出した。これも、標準規格に一致している。ＭＳ（ＥＳＭＳ）、ｍ／ｚ２４６．９［Ｍ−Ｈ］＋。  
【０１９５】
３−ヨード安息香酸（Ｎａ１２７Ｉ反応）（２．１８）。２００μＬのメタノール中に５．４ｍｇ（４．１５μｍｏｌ）の２．２を含有する溶液に対して、４μＬ（０．１８４ｎｍｏｌ）のＮａＩの入った０．１Ｎ ＮａＯＨ、次いで２μＬの過酢酸（酢酸中３２％）を添加した。反応物を１００μＬの１０％メタ重亜硫酸ナトリウム溶液を用いて、２時間クエンチングし、蒸留脱イオン水を用いて１ｍＬに希釈した。ＨＰＬＣ分析は、分析的（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）Ｃ１８ヌクレオシル逆相カラム上で行った。１００μＬのアリコートをＨＰＬＣ分析すると、滞留は１０．２分で、標準規格（流速＝１ｍＬ／分：５０％水（０．２％ギ酸）：５０％アセトニトリル（０．２％ギ酸）、λ＝２５４ｎｍ）に類似していた。
【０１９６】
［１２５Ｉ］３−ヨード安息香酸（Ｎａ１２５Ｉ反応）（２．１９、不純物なし）。２００μＬのメタノール中に１．４ｍｇ（１．０７μｍｏｌ）の２．２を含有する溶液に対して、５μＬ（３２μＣｉ）のＮａ１２５Ｉの入った０．０１Ｎ ＮａＯＨを添加し、その後２μＬの過酢酸（３２％酢酸中）を添加した。反応物を４７分間撹拌し、２０μＬの１０％メタ重亜硫酸ナトリウム溶液でクエンチングし、３００μＬの蒸留脱イオン水で希釈した。ＨＰＬＣ分析は、分析的（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）Ｃ１８逆相カラム上で行った。２０μＬのアリコートをＨＰＬＣ分析すると、滞留時間はγ検出器を用いるクロマトグラム上で、１６．９１分であった。溶媒フロント以外は、可視のＵＶの吸収はなかった。滞留時間は、３−ヨード安息香酸の標準規格（流速＝０．５ｍＬ／分、５０％水（０．２％ギ酸）：５０％アセトニトリル（０．２％ギ酸）、λ＝２５４ｎｍ）に一致している。
【０１９７】
その溶液を１ｍＬの蒸留脱イオン水で希釈し、予め水で調整してあるWaters Ｃ１８  Ｓｅｐ−Ｐａｋで溶出させた。そのカラムをさらに１．５ｍＬの蒸留脱イオン水で溶出させると、結合した画分は、３μＣｉの放射能を示していた。次いで、そのカラムを２ｍＬのＨＰＬＣグレードのアセトニトリルで洗浄したところ、２３μＣｉ放射能を発した。カラムを１ｍＬのアセトニトリルでさらに洗浄したところ、わずか１μＣｉの放射能が放出された。Ｓｅｐ−Ｐａｋ（４μＣｉ）および元の反応槽（１μＣｉ）中に、残りの放射能が認められた。ＨＰＬＣ分析は、分析的（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）Ｃ１８逆相ヌクレオシルカラム上で行った。２０μＬのアリコートをＨＰＬＣ分析すると、γ検出器上での滞留は１６．５８６分であった。滞留時間は、３−ヨード安息香酸の標準規格（流速＝０．５ｍＬ／分、５０％水（０．２％ギ酸）：５０％アセトニトリル（０．２％ギ酸）、λ＝２５４ｎｍ）に一致している。
【０１９８】
溶出条件を、流速＝１ｍＬ／分：１００％アセトニトリル、およびλ＝２５４ｎｍへ変更した結果、γ検出器上では４．４５８分に、ＵＶクロマトグラム上では６．３７９分および６．７２０分に２つのピークが認められた。これらの２つのピークは、類似の溶出条件において、２．２と類似の滞留時間である、６．６１３分を有していた。
【０１９９】
アセトニトリル溶液（約２ｍＬ）を２ｍＬの蒸留脱イオン水で希釈し、Fluorous technologies（登録商標）Sep-Pakを通した。９μＣｉの全量を溶出量中に放出させた。カラムを更に４ｍＬの（１：１）アセトニトリル：水で洗浄したところ、先の画分と結合したときに１９μＣｉの全量を産出した。Fluorous Sep-Pakまたは先のバイアルのいずれにおいてもさらなる放射能は認められなかった。ＨＰＬＣ分析は、分析的（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）Ｃ１８逆相ヌクレオシルカラム上で行った。２０μＬのアリコートをＨＰＬＣ分析すると、ＵＶクロマトグラム（流速＝１．０ｍＬ／分：１００％アセトニトリル、およびλ＝２５４ｎｍ）で６．５３２分に小さなピークが認められた。  
【０２００】
トリス［２−ペルフルオロヘキシルエチル］スズ−３−ベンズアミド（２．２１）。２．５ｍＬのＤＭＦ中に２９４ｍｇ（２２６μｍｏｌ）の２．２を含有する反応溶液に対して、０．１３０ｇ（３４４μｍｏｌ）のＨＢＴＵ、続いて９０μＬ（５１７μｍｏｌ）のジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を添加した。その反応溶液を５分間撹拌した後、２５１μＬ（２．２９ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミンおよび４００μＬ（２．３０ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを添加した。次いで、その反応溶液を１６時間撹拌した。その溶液を２０ｍＬの水で希釈し、５０ｍＬのジクロロメタンおよび１０ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）中に溶出させた。更に１０ｍＬの３部のジクロロメタンを用いてＦＣ−７２（登録商標）層を再抽出した。結合した有機層は、２０ｍＬの水で再抽出させ、その後、減圧下で濃縮し、暗橙色のオイルとして２．２１を得た：収率２２７ｍｇ（７４％）。ＴＬＣＲｆ０．００（６：１ヘキサン−ジエチルエーテル）。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、２００ＭＨｚ）：δ１．３１（ｔ、６Ｈ）、Ｓｎ付随体（２ＪＳｎ、Ｈ＝５４．８Ｈｚ）をもつ、２．３１（６Ｈ）、２．３３（ｍ、６Ｈ）、２．５９（ｄｔ、２Ｈ）、３．５５（ｑ、２Ｈ）、７．１４−７．９０（ｍ、４Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５０．３ＭＨｚ）：δ−１．４３、２７．５５（ｔ、３ＪＦ、Ｃ＝２３．４Ｈｚ）、３７．１１、４４．８７、５７．７５、１０４．８０−１２０．０３（ｍ、ＣＦ２、ＣＦ３）、１２７．０４、１２７．７１、１２８．６６、１３４．７０、１３４．８２、１３６．０１、１３７．５３、１３８．６９、１６７．１６、１６７．４１。ＩＲ（薄膜）：３３３８、２９５０、２８３１、１６５０ｃｍ−１。ＭＳ（ＥＳＭＳ）、ｍ／ｚ１３５３．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０１】
３−ヨードベンズアミド（２．２１のＩ２反応）（２．２０）。２００μＬメタノール中に３．２ｍｇ（２．３７μｍｏｌ）の２．２１を含有する溶液に対して、３０μＬ（３．０μｍｏｌ）の０．１Ｍヨウ素を添加した。その反応溶液を１時間撹拌し、１００μＬの１０％メタ重亜硫酸ナトリウム溶液でクエンチングした。その溶液を７００μＬの蒸留脱イオン水で洗浄し、ヌクレオシルＣ１８逆相カラム上で分析した。１６．６分と１８．９分の滞留時間を観察した（流速＝２ｍＬ／分、８０％Ｈ２Ｏ（０．０１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４）：２０％ＣＨ３ＣＮ、およびλ＝２５４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＭＳ）、ｍ／ｚ３１９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０２】
３−フルオロベンズアミド（２．２１のＦ２反応）。１８０ｍｇ（１３３μｍｏｌ）の２．２１の入った１ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）に、−９０ｏＣで、ＦＥＰチューブ中で、０．５％Ｆ２の入ったＮｅ（１３１μｍｏｌ）を泡立てた。Ｆ２は、２５分かけて着実に溶液中に放出された。その反応溶液を、槽をすすぐために使用される２部の３ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）とともに大きなバイアル中で濃縮した。残留物を３部の３ｍＬのアセトニトリルを用いて洗浄し、調整されたフルオラス逆相カラム（１ｇ）に溶出させた。ＭＳ（ＥＳＭＳ）、ｍ／ｚ２１１．１［Ｍ＋Ｈ］＋、１９３．１［Ｍ−Ｆ＋Ｈ］＋。
【０２０３】
トリス［２−ペルフルオロヘキシルエチル］スズ−３−ベンジルアミン（３．０）。１２５ｍＬの９：１メタノール：水中に３．９９０ｇ（２．８４ｍｍｏｌ）の３．３をｐＨ＝３．０７とするのに十分な０．５Ｎ ＨＣｌとともに含有する混合物を一晩撹拌した。その反応混合物に対して、２０ｍＬの１Ｎ ＮａＯＨ溶液を添加し、その後減圧下でメタノールを除去した。続いてその反応混合物を４部（３ｍＬ）のＦＣ−７２（登録商標）を用いて抽出した。ＦＣ−７２（登録商標）層を結合し、５ｍＬのジクロロメタンから再抽出した。溶媒を減圧下で濃縮して、淡黄色のオイルとして３．０をえた：収率３．４８２ｇ（９７％）。ＴＬＣＲｆ０．２２（６：１ヘキサン−ジエチルエーテル）。１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１．３１（ｔ、６Ｈ）、Ｓｎ付随体（２ＪＳｎ、Ｈ＝５４．２Ｈｚ）をもつ、２．３１（ｍ、６Ｈ）、３．８８（ｓ、２Ｈ）、７．２２−７．４６（ｍ、４Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ−１．３７、Ｓｎ付随体（１ＪＳｎ、Ｃ＝３４７Ｈｚ）をもつ、２７．９４（ｔ、１ＪＦ、Ｃ＝２３．４Ｈｚ）、４６．６２、１０６．１７−１２１．１７（ｍ、ＣＦ２、ＣＦ３）、１２８．６３、１２９．１９、１２９．７２、１３４．６０、１３４．９０、１３５．５６、１３５．６６、１３６．９６、１３８．４２、１４０．０８、１４３．８９、１６２．０９．ＩＲ（薄膜）、３３８６、２９４４、２８７０、１６４７、１２５０ｃｍ−１。ＭＳ（ＥＳＭＳ、ＩＰＡ）：ｍ／ｚ１２６８．５［Ｍ＋Ｈ］＋。 
【０２０４】
１−（３−ブロモベンジル）−２，２，５，５−テトラメチル−１，２，５−アザジシロリジン（azadisilolidine）（３．１）。Magnusらが開発した手順は以下のとおりである５。１０ｍＬのジクロロメタン中に２．２２８ｇ（１１．９８ｍｍｏｌ）の３−ブロモベンジルアミンを含有する溶液に対して、３．４ｍＬ（２４ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを添加した。その溶液を３０分撹拌し、次いで、５ｍＬのジクロロメタン中に２．５７９ｇ（１１．９８ｍｍｏｌ）の１，１，４，４−テトラメチル−１，４−ジクロロシルエチレンを含有する溶液で処理した。反応混合物を３時間撹拌し、次いで１００ｍＬの飽和ナトリウムジヒドロゲンホスフェートに注いだ。反応混合物を３部の５０ｍＬのジクロロメタンを用いて溶出し、次いで、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下で濃縮した。残留物を１６０℃で蒸留し、明るい無色のオイルとして３．１を得た：収率２．５１０ｇ（６４％）。１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、アセトン−ｄ６）：δ０．００（ｓ、１２Ｈ）、０．７８（ｓ、４Ｈ）、４．０６（ｓ、２Ｈ）、７．２０−７．４８（ｍ、４Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（５０．３ＭＨｚ、アセトン−ｄ６）：δ−０．２６、８．０１、４５．５９、１２２．１５、１２６．１０、１２９．３５、１２９．５３、１３０．６９、１４６．０１。ＩＲ（薄膜）：３３８８、２９５３、１６６６、１２５１、および１１３２ｃｍ−１。ＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ＝３１２。
【０２０５】
トリス［２−ペルフルオロヘキシルエチル］スズ−（３−ブロモベンジル）−２，２，５，５−テトラメチル−１，２，５−アザジシロリジン（azadisilolidine）（３．３）
３０ｍＬのＴＨＦに４．３０１ｇ（１３．１ｍｍｏｌ）の３．１を含有する溶液に、−７８℃で、５．２４ｍＬ（１３．１ｍｍｏｌ）の２．５Ｍ ｎ−ＢｕＬｉをゆっくりと添加した。その反応溶液を４０分間撹拌し、続いて、２０ｍＬのＴＨＦ中に４．３６６２ｇ（３．５２１ｍｍｏｌ）の２．３を含有する溶液を添加した。その反応溶液を−７８℃で２時間撹拌し、次いで５ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）および３０ｍＬのメタノールで希釈した。その反応溶液を、４ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）３部を用いて抽出した。結合したフルオラス層を減圧下で濃縮し、淡黄色のオイルとして３．３を得た：収率４．７３２ｇ（９６％）。１Ｈ ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ０．０１〜０．２１（ｓ、１２Ｈ）、０．８０（ｓ、４Ｈ）、１．３４（ｔ、６Ｈ、２ＪＳｎ、Ｃ−Ｈ＝２７．５Ｈｚ）、２．３５（ｍ、６Ｈ）、３．９６〜４．０６（ｓ、２Ｈ）、７．２８〜７．３９（ｍ、４Ｈ）。ＩＲ（薄膜）、３３５４、２９５５、２８４９、１２５６、および４４２ｃｍ−１。ＭＳ（ＥＳＭＳ、ＩＰＡ）：ｍ／ｚ１２６８．３［Ｍ−（２、２、５、５−テトラメチル−１、２、５−アザジシロリジン＋Ｈ］＋。
【０２０６】
３−ヨードベンジルアミン（３．０とのＩ２反応）（３．４）。２ｍＬのアセトニトリル中に０．１６４ｇ（１２９μｍｏｌ）の３．０を含む混合物に対して、１．５ｍＬの０．１Ｍヨウ素のメタノール溶液を添加した。反応混合物を、１６時間撹拌し、チオ硫酸ナトリウムの結晶を用いてクエンチングし、３ｍＬの脱イオン化蒸留水を用いて希釈した。その反応混合物を、silicycle（登録商標）フルオラスシリカ（３．９ｇ）を用いたフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。アセトニトリル−水（１：１）を用いて溶出を行い、４つの５ｍＬ画分を回収して３．４の溶液を得た。ＨＰＬＣ分析は、分析的（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）Ｃ８逆相カラム上で行った。標準と一致している６．４６１分の滞留時間は、カラムを８０％Ｈ２Ｏ（ｐＨはほぼ７．４）で溶出させたときに発生した。流速１．５ｍＬ／分およびλ＝２５４ｎｍで２０％ＣＨ３ＣＮ。ＭＳ（ＥＳＭＳ）、ｍ／ｚ２３３．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０７】
ホルムアミジンスルフィン酸を用いたトリス［２−ペルフルオロヘキシルエチル］スズ−３−ベンジルグアニジン（３．５−アプローチＢ）。メタノール（１５ｍＬ）中に１．９６４ｇ（１．５４９ｍｍｏｌ）の３．０を含有する混合物に対して、０．１８４ｇ（１．７０４ｍｍｏｌ）の３．７を添加した。その反応混合物を１６時間撹拌し、次いでメタノールを、得られた粘性オイルからデカントした。そのオイルを３部の（１０ｍＬ）温クロロホルム、次いで２部の湯で洗浄した。残留物を５ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）中に、ジクロロメタンおよび残りの水から抽出した。溶媒を濃縮して、明橙色のオイルとして３．５を得た：収率１．６５４ｇ（８２％）。マススペクトル（ＥＳＭＳ）、ｍ／ｚ１３１０．２［Ｍ＋Ｈ］＋、１２９３．０［Ｍ＋Ｈ−１５］＋、および１３２５．０［Ｍ＋Ｈ＋１５］＋。
【０２０８】
アミノイミノ−メタンスルフィン酸（３．５、アプローチＣ）を用いたトリス［２−ペルフルオロヘキシルエチル］スズ−３−ベンジルグアニジン。１ｍＬのメタノール中に５１８ｍｇ（４０９μｍｏｌ）の３．０を含有する混合物に対して、５５．８ｍｇ（４５０μｍｏｌ）のアミノイミノメタンスルホン酸を添加した。次いでその反応混合物を１６時間還流させた。その反応混合物を１０ｍＬのメタノールから５ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）に抽出した。溶媒を減圧下で濃縮し、橙色のオイルとして３．５を得た：収率４６８ｍｇ（８８％）。ＴＬＣＲｆ０．２５（６：１ ヘキサン−ジエチルエーテル）。ＩＲ（薄膜）、３３４９、３１９７、２９４６、１６４７、１４４９、１２３９、４４６ｃｍ−１。マススペクトル（ＥＳＭＳ）、ｍ／ｚ１３０９．９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０９】
アミノイミノメタンスルホン酸（３．７）。Mosherらが開発した手順は、以下のとおりである１２。０．６３３ｇ（５．８５ｍｍｏｌ）の３．６を、３．０ｍＬの氷状の酢酸中に含有する混合物に対して、０℃で、１．５６ｍＬの３２％過酢酸をゆっくり添加した。次いでその反応混合物を室温で１６時間撹拌した。析出物を濾過し、５ｍＬの５部の無水エタノールで洗浄し、乾燥させ、白色の結晶状の固体として３．７を得た：収率５９６ｍｇ（８２％）。Ｍｐ：１２５〜１２６℃。 
【０２１０】
３−ヨードベンジルグアニジン（３．９）。１ｍＬのメタノール中に１６８ｍｇ（７２１μｍｏｌ）の３．８を含有する溶液に対して、９０．１ｍｇ（７２６μｍｏｌ）の３．７を添加した。その反応溶液を１６時間還流させ、次いで減圧下で濃縮し、粘性の黄色のガムとして３．９を得た：収率２５８ｍｇ。ＨＰＬＣ分析は、ヌクレオシルＣ１８逆相カラム上で行った。２４．５４分の滞留時間は、カラムを８０％Ｈ２Ｏ（０．０１ＭＮａＨ２ＰＯ４）：２０％ＣＨ３ＣＮを用いて、流速２．０ｍＬ／分およびλ＝２３１ｎｍで行ったときに発生した。１Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＨ、２００ＭＨｚ）：δ４．２２（ｓ、２Ｈ）、６．９９（ｔ、１Ｈ）、７．２２（ｄ、１Ｈ）、７．４９（ｄ、１Ｈ）、７．５６（ｓ、１Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＭｅＯＨ、５０．３ＭＨｚ）：δ４８．９５、９９．３１、１３１．６４、１３５．７２、１４１．０５、１４１．９３、１４４．３０、１６２．６５。ＩＲ（薄膜）：３４０７、３１９２、１６５３、１１１５ｃｍ−１。ＭＳ（ＥＳＭＳ、メタノール）、ｍ／ｚ２７６．１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２１１】
３−ヨードベンジルグアニジン（３．５を用いたＮａＩ反応）（３．１０）。２００μＬのメタノール中に５．１ｍｇ（３．９０μｍｏｌ）の３．５を含有する反応混合物に対して、１０μＬ（０．４６０ｎｍｏｌ）のＮａＩ、続いて２μＬの過酢酸（酢酸中３５％）溶液を添加した。反応混合物を２時間撹拌し、その後、１００μＬのメタ重亜硫酸ナトリウム（１０％）溶液を用いてクエンチングし、その後蒸留脱イオン水で１ｍＬに希釈した。ＨＰＬＣ分析は、ヌクレオシルＣ１８分析カラムを用いて行った。２４．８９分の滞留時間を観察した（８０％Ｈ２Ｏ（０．０１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４）：２０％ＣＨ３ＣＮ、流速２．０ｍＬ／分およびλ＝２３１ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＭＳ）、ｍ／ｚ２７６．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２１２】
［Ｆ２］を用いた３．５のフッ素化（３．１１）。０．３３４ｇ（０．２５５ｍｍｏｌ）の３．５の入った１ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）に、−９５ｏＣで、１７２μｍｏｌの０．６３％Ｆ２の入ったＮｅをＦＥＰチューブ中で泡立てた。Ｆ２は、３５分かけて着実に溶液中に放出させた。その反応溶液は３ｍＬの、槽をすすぐために用いられるＦＣ−７２（登録商標）２部とともにバイアル中で濃縮した。残留物を洗浄し、３部の３ｍＬの１：１のアセトニトリル：水を用いて洗浄し、調整されたフルオラス逆相カラム（１ｇ）上に溶出させて、３．１１溶液を得た。ＨＰＬＣ分析は、ヌクレオシル分析的（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）Ｃ１８逆相カラム上で行った。３４．９８分の滞留時間が観察された（８０％Ｈ２Ｏ（０．０１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４）：２０％ＣＨ３ＣＮ。流速２．０ｍＬ／分およびλ＝２３１ｎｍ）。１９Ｆ ＮＭＲ（ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ、４７０．４９３Ｈｚ）：δ−１１０．３（３ＪＦ，Ｈ＝８．７Ｈｚ）、−１０９．５（３ＪＦ、Ｈ＝９．２Ｈｚ）。ＭＳ（ＥＳＭＳ）、ｍ／ｚ１６８．０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２１３】
トリス［２−ペルフルオロヘキシルエチル］−３−ベンジルアミン−ＧＦＬＭ（ｆ）（３．１３）。５ｍＬのＤＭＦ中に１３７ｍｇ（１０８μｍｏｌ）の３．０および８４ｍｇ（１７０μｍｏｌ）のＧＦＬＭ（ｆ）を含有する反応溶液に、７１ｍｇ（１８７μｍｏｌ）のＨＢＴＵを添加した。反応溶液に対して、９７μＬのＤＩＰＥＡを添加し、１６時間撹拌させた。その溶液を２０ｍＬの水を用いて希釈し、５ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）を用いて抽出した。ＦＣ−７２（登録商標）と水性層とを区画化するエマルジョンを抽出し、３部の３ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）を用いて洗浄した。残りの溶媒を減圧下で除去し、乳白色のオイルとして３．１２を得た：収率６３ｍｇ（３３％）。ＭＳ（ＥＳＭＳ）、ｍ／ｚ１７４４［Ｍ＋Ｈ］＋、１７６１［Ｍ＋ＮＨ４］＋、１７６６［Ｍ＋Ｎａ］＋。
【０２１４】
３−ヨードベンジル−ＧＦＬＭ（ｆ）（３．１３を用いたＩ２反応）（３．１４）。３ｍＬのクロロホルム中に５０ｍｇ（２８．７μｍｏｌ）の３．１３を含有する反応混合物に、１．５ｍＬ（１５０μｍｏｌ）を添加した。反応混合物は、１６時間撹拌し、チオ硫酸ナトリウム溶液を用いてクエンチングした。減圧下でクロロホルムを除去し、混合物を１０ｍＬの５：１アセトニトリル：水で希釈した。反応溶液を３部の１．５ｍＬのＦＣ−７２（登録商標）を用いて洗浄し、水性層を３．１４が存在するかどうかについて調べた。ＨＰＬＣ分析は、ヌクレオシル Ｃ１８逆相カラム（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）上で行った。１９．４分の滞留時間を観察した（８０％Ｈ２Ｏ（０．０１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４）：２０％ＣＨ３ＣＮ、流速２．０ｍＬ／分およびλ＝２５４ｎｍ）。ＭＳ（ＥＳＭＳ）、ｍ／ｚ３１９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２１５】
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル３−ヨード安息香酸の合成および精製。以下のスキームに記載の方法によって調製したＮ−ヒドロキシスクシンイミジルトリ（フルオロアルキル）スタンニルベンゾエートを、クロラミン−Ｔの存在下で、Lindegrenらの方法に従って、１２５Ｉ−と反応させた。Lindegren, S.; Skarnemark, G.; Jacobsson, L.;
Karlsson, B. Nuc. Med. Biol. 1998, 25, 659。
【０２１６】
スキーム
【化３３】
0004846238.tif 000034
【０２１７】
反応を止めて、早めに２つの別個の精製方法の可能性を比較した。最初の方法は、反応混合物を水で希釈した後ペルフルオロ化ヘキサン（ＦＣ−７２）を用いて抽出するものである。水性層のＨＰＬＣトレース（図３９）は、所望の生成物、その加水分解生成物、ｍ−［１２５Ｉ］ヨード安息香酸およびいくつかの未処理の１２５Ｉ−を示した。抽出よりもより便利であり、より自動化されている第２の精製方法は、反応混合物を市販されているフルオラスＳｅｐ−Ｐａｋに通すことを含んでいた。精製プロトコルは、１００％の水で洗浄して、未処理のヨウ化物を除去し、その直後に８０／２０メタノール−水で除去し、所望の生成物を溶出させることを含んでいた。メタノール−水溶離液のＨＰＬＣ（図４０）は、所望の生成物に対応する１つの大きなピークを示している。フルオラス標識化法は、自動化、無菌化が容易であること、前駆物質の全てを従来の方法によって精製し、特徴づけるという事実を含め、従来の標識化法と比較して多くの利点を有している。
【０２１８】
本明細書において引用されている、すべての特許および文献を本明細書に引用によって援用する。
【０２１９】
均等物 
当業者なら、ルーチンの実験法を用いるだけで、ここに記載された本発明の特定の実施形態に対して多くの均等物を認識または確認することになろう。そのような均等物は、以下の請求項に包含されることが意図される。
【０２２０】
引用文献
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【図面の簡単な説明】
【０２２１】
【図１】図１は、２．２の誘導体化の１Ｈ−ＮＭＲ［ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ］スペクトルを示す図である。
【図２】図２は、化合物２．２の１Ｈ−ＮＭＲ［ＣＤＣｌ３、２００ＭＨｚ］スペクトルを示す図である。
【図３】図３は、化合物２．２の陰イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である。
【図４】図４は、化合物２．２のＸ線結晶構造を示す図である。
【図５】図５は、Ｆ２および［１８Ｆ］Ｆ２の反応に用いられるフッ素化装置を示す図である。
【図６】図６は、精製された２．１６のＵＶおよび放射能クロマトグラムを示す図である。
【図７】図７は、粗反応生成物の１９Ｆ ＮＭＲ［ＭｅＯＨ：ＡＣＮ、１８８ＭＨｚ］スペクトルを示す図である。
【図８】図８は、精製された２．１６の１９Ｆ ＮＭＲ［Ｈ２Ｏ：ＡＣＮ、１８８ＭＨｚ］スペクトルを示す図である。
【図９】図９は、精製前にフッ素処理された２．２の陰イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である。
【図１０】図１０は、２．１６（精製後）の陰イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である。
【図１１】図１１は、新規なワークアップ装置を示す図である。
【図１２】図１２は、化合物２．１７のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図１３】図１３は、２．１７の陰イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である。
【図１４】図１４は、２．１８（上図）および標準規格（下図）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図１５】図１５は、２．１９の粗反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図１６】図１６は、Ｓｅｐ−Ｐａｋ精製後の２．１９のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図１７】図１７は、２．１９の粗反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図１８】図１８は、Ｓｅｐ−Ｐａｋ精製後の２．１９のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図１９】図１９は、フルオラスカラムに精製した２．１９のＵＶクロマトグラムを示す図である。
【図２０】図２０は、化合物２．２１の１Ｈ ＮＭＲ［ＣＤＣｌ３、２００ＭＨｚ］を示す図である。
【図２１】図２１は、化合物２．２１の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である。
【図２２】図２２は、化合物２．２０のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図２３】図２３は、化合物２．２０の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である。
【図２４】図２４は、３−フルオロベンズアミドの陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である。
【図２５】図２５は、化合物３．０の１Ｈ ＮＭＲ［ＣＤＣｌ３、２００ＭＨｚ］を示す図である。
【図２６】図２６は、化合物３．０の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である。
【図２７】図２７は、ＨＰＬＣクロマトグラムの標準規格（上図）および３．４（下図）を示す図である。
【図２８】図２８は、精製された３．４の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である。
【図２９】図２９は、化合物３．５の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である（アプローチＢ）。
【図３０】図３０は、アプローチＣによる３．５の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である。
【図３１】図３１は、３．１０の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である。
【図３２】図３２は、３．１０のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図３３】図３３は、化合物３．１１の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である。
【図３４】図３４は、ＭＦＢＧ（３．１１）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図３５】図３５は、化合物３．１１の１９Ｆ ＮＭＲ［ＡＣＮ：Ｈ２Ｏ、１８８ＭＨｚ］スペクトルを示す図である。
【図３６】図３６は、化合物３．１３の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である。
【図３７】図３７は、化合物３．１４の陽イオンエレクトロスプレイ・マススペクトルを示す図である。
【図３８】図３８は、化合物３．１４のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図３９】図３９は、抽出プロトコルを用いて精製されたＮ−ヒドロキシスクシンイミジル３−ヨード安息香酸のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図４０】図４０は、本発明のフルオラスｓｅｐ−ｐａｋプロトコルを用いて精製されたＮ−ヒドロキシスクシンイミジル３−ヨード安息香酸のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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