(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍の治療用の薬剤の製造における、式ＶIIまたはＸIIのいずれかで表される化合物からなるプロドラッグの使用方法であって、プロドラッグが酵素による芳香族ヒドロキシル化によって活性化されるものであることを特徴とする方法。
（ＶII ）：
【化１】
0004642226.tif 000015
（ＸII ）：
【化２】
0004642226.tif 000016
【請求項２】
前記薬剤がさらに薬学的に許容しうるキャリア、希釈剤または賦形剤を含有する、請求項１に記載のプロドラッグの使用方法。
【請求項３】
プロドラッグがＣＹＰ１Ｂ１によってヒドロキシル化される請求項１または２に記載のプロドラッグの使用方法。
【請求項４】
プロドラッグが式VII及びXIIで表される化合物からなる群のいずれか一方から選択され、かつ、ヒドロキシル化された状態が有糸分裂阻害剤である、請求項１から３のいずれか１項に記載のプロドラッグの使用方法。
【請求項５】
（ｉ）式ＶIIまたはＸIIのいずれか一方で表される化合物を細胞試料に投与する工程と、
（ＶII ）：
【化３】
0004642226.tif 000017
（ＸII ）：
【化４】
0004642226.tif 000018
（ｉｉ）前記細胞中に、前記化合物のヒドロキシル化された代謝物が存在するか、存在しないかを測定する工程と、
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）の結果を腫瘍状の細胞試料の存在又は不在と相互に関連させる工程と、
からなる腫瘍の状態の細胞試料の診断方法。
【請求項６】
式ＶII又はＸIIのいずれかで表される化合物からなるプロドラッグの使用による人体を除く動物の体の腫瘍の治療法であって、プロドラッグが酵素による芳香族ヒドロキシル化によって活性化されるものであることを特徴とする方法。
（ＶII ）：
【化５】
0004642226.tif 000019
（ＸII ）：
【化６】
0004642226.tif 000020
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、酵素による芳香族ヒドロキシル化によって活性化されたプロドラッグ、特には、抗腫瘍プロドラッグ、及び酵素ＣＹＰ１Ｂ１のヒドロキシル化活性によって特に活性化されるプロドラッグに関するものである。
【０００２】
（背景技術）
化学療法の目的で使用され得る多くの従来の細胞毒性薬が知られている。しかしながら、それらは一般的に細胞毒性であるという問題を欠点として有しているのが典型的であり、それ故に破壊することが望まれている細胞以外の細胞にも影響を与え得る。これは、例えば腫瘍組織の部位に直接注入する、狙いを定めた薬剤送達系を使用することによって、又は、例えばガン細胞によって示される抗原を特に認識する抗体に、細胞毒性剤を結合させることによって、ある程度は解決され得る。その代わりに、薬剤が細胞毒性になるように、体内の所望の部位で薬剤に化学的変化を生じさせるために、電磁放射を使用してもよい。しかしながら、これらの技術の全ては、多かれ少なかれ、ある制限及び欠点を有している。
【０００３】
酵素ＣＹＰ１Ｂ１、すなわち生体異物を新陳代謝させる酵素のシトクロムＰ４５０ファミリーの一員が、乳房、大腸、肺、食道、皮膚、リンパ節、脳、及び精巣のガン等の人間のガンの範囲に非常に頻繁に発現され、かつ、正常な組織では検出され得ないことが報告されている（Ｍｕｒｒａｙ，Ｇ．Ｉ．等による１９９７年７月１５日発行の「ガンの研究（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）」、第５７巻：３０２６〜３０３１頁）。「腫瘍細胞中のＣＹＰ１Ｂ１の発現…により、腫瘍細胞中のＣＹＰ１Ｂ１の存在によって選択的に活性化され得る、新規な抗ガン剤の開発のために、分子の目標が与えられる」という結果がこれにより導かれた。特定の抗ガン剤は提案されていない。
【０００４】
本発明者等は、それらが正常な状態の際には細胞毒性効果を殆ど持たないか又は無視できるほどしか持たないが、ＣＹＰ１Ｂ１によってヒドロキシル化されると、非常に細胞毒性である（すなわち、実質的に高い細胞毒性を有する）、プロドラッグの範囲を生じさせるのにここで成功した。これは、細胞毒性のない（又は少なくとも無視できるほどの細胞毒性の）化合物を例えば全身系の方法で患者に投与し、次いでその化合物が腫瘍細胞の部位でヒドロキシル化されて（腫瘍内のヒドロキシル化）、腫瘍細胞を殺すように作用する非常に細胞毒性の高い化合物を形成し得る自己−目標薬剤送達系で提供される。ＣＹＰ１Ｂ１が正常な細胞によっては発現されないという事実は、化合物のヒドロキシル化は腫瘍細胞の部位でのみ生じ、それ故に腫瘍細胞のみ影響を受け、従って自己目標薬剤送達系を与えることを意味する。
【０００５】
本発明のプロドラッグは、体内のいかなる部位の腫瘍の治療にも有用であるという顕著な利点を有するものであり、それは転位した腫瘍さえも（部位−特定治療を通常は受け難い）、もちろん一次腫瘍及び二次腫瘍も治療され得ることを意味する。
【０００６】
本発明によると、酵素による芳香族ヒドロキシル化によって活性化され、かつ、下記一般式（I）を有するプロドラッグが提供される。
（I）
【０００７】
【化１３】
0004642226.tif 000002
（式中、Ｘ＝Ｈ、ＯＨ又はＯＭｅ；
Ｒ１＝Ｈ、Ｃ１〜４低級アルキル、ＣＮ又はＡｒ；
Ｒ２＝Ｈ、ＣＮ、ＣＯＮＨ２、ＣＳＮＨ２、ＣＯＡｒ又はＡｒ；及び、
Ａｒ＝フェニル、ピリジル又は置換されたアリール；
及び、
Ｒ３＝Ｈ又はＣ１〜４低級アルキル；及び
Ｒ４＝Ｈ、ＯＨ又はＯＭｅ；
又は、
Ｒ３、Ｒ４＝（ＣＨ２）ｎ、ｎ＝２、３又は４）
【０００８】
プロドラッグは抗腫瘍プロドラッグであってもよい。腫瘍の例としては、ガン（悪性新生物）ならびに例えば「悪性ではない」腫瘍等の他の新生物等が挙げられる。プロドラッグはＣＹＰ１Ｂ１によってヒドロキシル化されて活性化され得る。
【０００９】
これらのプロドラッグは、スチレン誘導体又はカルコン（ｃａｌｃｈｏｎｅ）誘導体であり、それらの特定の抗腫瘍使用は、Ｍｕｒｒａｙ，Ｇ．Ｉ．等（上記に記載）によって示唆されるものでも、開示されるものでもないし、またそれらが、実際に「活性化された」ヒドロキシル化された形体を有するプロドラッグであるという事実でもない。一般式（I）の化合物が、これまでに同定され製造されている場合、それらは、細胞毒性が劣る（又は無視できるほどである）ために、抗ガン剤としては見なされていなかった。従って、本発明のプロドラッグの腫瘍内ヒドロキシル化により、驚くほどのまた予期せぬほどの効力を有するプロドラッグが提供される。
【００１０】
一般式（I）の化合物のスチレン基本構造は、それらの効力を与えるのに必須のものである。Ａｒ基は、例えば、４−メトキシフェニル、４−ニトロフェニル、３，５−ジヒドロキシフェニル、又は、３，４，５−トリメトキシフェニルからなる、置換されたアリールであってもよいが、他の置換されたアリールももちろん可能である。
【００１１】
Ｘは、ヒドロキシ又はメトキシ基であり得る。
【００１２】
一般式（I）に特定される通り、Ｒ３及びＲ４は、炭素原子を２〜４つ有するアルキル鎖を共に形成してもよく、従って炭素原子を５、６又は７つ有するシクロアルキル基の一部を形成してもよい。
【００１３】
プロドラッグは、下記一般式（II）〜（Ｖ）のいずれか１つの一般式を有していてもよい。
（II）：
【００１４】
【化１４】
0004642226.tif 000003
【００１５】
（III）：
【００１６】
【化１５】
0004642226.tif 000004
【００１７】
（IＶ）：
【００１８】
【化１６】
0004642226.tif 000005
【００１９】
（Ｖ）：
【００２０】
【化１７】
0004642226.tif 000006
（式中、Ｘ＝ＯＭｅ又はＯＨ、及び、Ｙ＝ＮＯ２又はＯＭｅ）
【００２１】
代わりに、プロドラッグは、下記一般式（ＶI）又は（ＶII）のいずれか一方の一般式を有していてもよい。
（ＶI）：
【００２２】
【化１８】
0004642226.tif 000007
【００２３】
（ＶII）：
【００２４】
【化１９】
0004642226.tif 000008
【００２５】
代わりに、プロドラッグは、下記一般式（ＶIII）〜（ＸII）のいずれか一方の一般式を有していてもよい。
（ＶIII）：
【００２６】
【化２０】
0004642226.tif 000009
【００２７】
（IＸ）：
【００２８】
【化２１】
0004642226.tif 000010
【００２９】
（Ｘ）：
【００３０】
【化２２】
0004642226.tif 000011
【００３１】
（ＸI）：
【００３２】
【化２３】
0004642226.tif 000012
【００３３】
（ＸII）：
【００３４】
【化２４】
0004642226.tif 000013
【００３５】
化合物（II）〜（Ｖ）のヒドロキシル化された形体は、よく効くチロシンキナーゼ抑制剤であり、化合物（ＶI）及び（ＶII）のヒドロキシル化された形体は、よく効く有糸分裂阻害剤である。チロシンキナーゼ酵素は、正常な細胞及び腫瘍細胞の両方のいたるところにあり、従ってそれら自身で腫瘍に特異的ではないため、これまで、チロシンキナーゼ抑制剤は化学療法の利点は殆どなかった。しかしながら、腫瘍細胞中のチロシンキナーゼ抑制剤の狙いを定めた生成は、抑制作用が腫瘍細胞に特異的であるであろうことを意味する。更には、抑制活性は腫瘍細胞中に見出されるだけであるので、チロシンキナーゼ抑制剤自身は、特定のチロシンキナーゼ抑制剤に特異的なアイソフォームである必要はない。それは、チロシンキナーゼ活性のいかなる抑制も、腫瘍の抑制及び細胞の崩壊に寄与するであろうからである。
【００３６】
同様に、一般式（ＶI）及び（ＶII）並びに（ＶIII）〜（ＸII）の有糸分裂阻害プロドラッグは特に有用であるが、これは現在の有糸分裂阻害剤は、正常な細胞及び腫瘍細胞の両方を殺してしまう深刻な副作用のために、限定的にしか使用されていないからである。しかしながら、本発明は、腫瘍細胞で有糸分裂阻害剤を特異的にその場で生成させるのを可能にし、その結果それらは特異的に狙いを定めることとなる。
【００３７】
本発明のプロドラッグの合成方法は、例えば下記に例示される通り当業者には容易に明らかであろう。本発明の化合物は、例えばアルドール縮合（実用有機化学のボーゲルズの教本（Ｖｏｇｅｌｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｙ）、第４版、１４６頁）によって、ＭｃＭｕｒｒｙカップリング（ＭｃＭｕｒｒｙ及びＦｌｅｍｉｎｇ、１９７４年、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、第９６巻：４７０８〜４７０９頁）によって、又は、ウィッティッヒ反応（１９７３年、Ｏｒｇ．Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｌｌ．、第５巻：７５１頁）による等の様々な異なる方法で調製され得る。
【００３８】
また、本発明によると、人体又は動物の体の治療方法又は診断方法、特には腫瘍の治療方法又は診断方法に使用するための本発明によるプロドラッグが提供される。
【００３９】
また、本発明によると、腫瘍の治療用の薬剤の製造における本発明によるプロドラックの使用が提供される。
【００４０】
また、本発明によると、本発明によるプロドラックを使用することからなる薬剤の製造方法が提供される。薬剤は腫瘍の治療用であり得る。
【００４１】
また、本発明によると、本発明によるプロドラックを患者に投与することからなる患者の腫瘍の治療方法又は診断方法が提供される。
【００４２】
薬剤の製造方法はよく知られている。例えば薬剤は、製薬的に許容可能な担体、希釈剤、または、賦形剤から更になり得る（レミントンの製薬科学及び米国薬局方（Ｒｅｍｉｎｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  ＵＳ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ）、１９８４年、Ｍａｃｋ出版社、米国ペンシルバニア州イーストン）。
【００４３】
患者に投与されるべきプロドラッグの正確な投与量（すなわち、製薬的に許容可能な投与量）は、例えば単純な用量−反応実験を使用することによって当業者には容易に決定され得る。
【００４４】
本発明のプロドラッグは腫瘍細胞に特異的であるので、それらは腫瘍を治療をするために使用されるだけでなく、患者（又は患者から採取された試料）が腫瘍細胞を有するか否かを決定するためにも使用され得る。例えば、ヒドロキシル化されたプロドラッグの存在及び量をアッセイし得るのと同様に、試料中の細胞数をアッセイでき、従って腫瘍細胞の存在を診断するために提供する。
【００４５】
また、本発明によると、本発明によるプロドラックのヒドロキシル化された形体が提供される。
【００４６】
本発明は、更に下記の説明から明らかであるであろう。尚、説明は例のみによって、プロドラッグの形体を示すものである。
【００４７】
実験
本発明によるプロドラッグは、下記に記載される通り合成され、それらのヒドロキシル化された代謝物の生成物は、所望のヒドロキシル化生成物の存在のために、アッセイされた。対照細胞系及び試験細胞系に対するそれらの生体外の細胞毒性もまた、測定した。
【００４８】
一部を切除した人間の腫瘍組織のミクロソーム調製液
ＣＹＰ１Ｂ酵素を発現する人間の腫瘍組織のミクロソーム調製液を、Ｂａｒｒｉｅ等の方法に記載される通り（１９８９年、Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第６巻：１１９１〜１１９５頁）、本質的に調製した。
【００４９】
代謝の研究
実験を黄色灯の下で３７℃で行なった。
【００５０】
１．５ｍｌの遠心機の管のアレーを有気性条件下で水浴シェーカー中に置いた。次いで、それぞれの管に、ｐＨ７．６の緩衝液（０．１ＭのＮａＫ２ＰＯ４）５００μｌを添加し、続いてＮＡＤＰＨ（２５ｍＭの原液５μｌ）を添加した。次いで、ミクロソーム調製液（８０μｌ）を添加し、管を３７℃で５分間予備培養した。次いで、プロドラッグ基質を添加し（５ｍＭの原液１０μｌ）、３７℃で１時間培養した。１時間後、管を氷／水冷却浴（０℃）に移した。次いで、管を３０分間１５０００ｒｐｍで遠心分離した。次いで、上清の試料（１００μｌ）を取り出しＨＰＬＣで分析した。
【００５１】
ＨＰＬＣ条件：ガードカラムを用いずに使用した、Ｓｐｈｅｒｉｓｏｒｂ  Ｃ１８（２５ｃｍ×４．６ｍｍ  ｉｄ）、流速１ｍｌ／分、溶離剤０．１ＭのＫＨ２ＰＯ４７５％及びアセトニトリル２５％
【００５２】
プロドラッグを、上記に記載される通りにアッセイし、芳香族ヒドロキシル化を行なっていることを見出した。ヒドロキシル化された代謝物を、ＨＰＬＣで検出して、確実なヒドロキシル化された代謝物の合成によって確認した。
【００５３】
化合物IIａ（下記）、（Ｚ）−１−シアノ−１−（３−ピリジル）−２−（４−メトキシフェニル）エテンを、ヒドロキシル化された代謝物である（Ｚ）−１−シアノ−１−（３−ピリジル）−２−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）エテンに転化させた。
【００５４】
化合物IIIｃ、（Ｅ）−（３，４’，５）−トリヒドロキシスチルベンを、ヒドロキシル化された代謝物である（Ｅ）−（３，３’，４，５’）−テトラヒドロキシスチルベンに転化させた。
【００５５】
化合物ＶII（Ｅ）−１−（４−メトキシフェニル）−３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロプ−１−エン−３−オンを、ヒドロキシル化された代謝物である（Ｅ）−１−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロプ−１−エン−３−オンに転化させた。
【００５６】
生体外での細胞毒性の研究
使用した細胞毒性アッセイ法は、ＭＴＴ細胞毒性アッセイを修正したものであった（Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ等による１９８７年、「ガンの研究（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）」、第４７巻：９３６頁）。化合物の活性は、酵素ＣＹＰ１Ｂ１（Ｖ７９ｍｚｈｕｌＢ１）を発現する細胞系、及び、ＣＹＰ１Ｂ１（Ｖ７９ｍｚ）を発現しない対応する親の細胞系で評価した（Ｌｕｃｈ等、１９８８年、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．、第１１巻：６８６頁）。１０３の細胞を、付着及び代謝回復を可能にするために、２４時間、９６の窪みの（Ｎｕｎｃ）マイクロ滴定濃度板の１つの窪み当り、１００μｌのＤＭＥＭ（高グルコース）（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅｓ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社製）と、１０％の熱で不活性化されたＦＢＳ（胎児の牛の血清、Ｈｙｂｒｉｍａｘ、Ｓｉｇｍａ社製）との中で培養し、続いて１００μｌの同じ媒体中に２倍の濃度で４倍の化合物を添加し、０．２％のＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）の最終の最高の濃度を与えた。化合物原料は、ＤＭＳＯ中１００ｍＭとして造られ、４℃で１ヶ月未満貯蔵した。次いで、板を、３７℃、５％のＣＯ２、１００％の湿度で更に４８時間培養し、続いてＤｕｌｂｅｃｃｏのＰＢＳ（ホスフェートで緩衝された生理食塩水）Ａ中に３回浸漬させることによって洗浄した。次いで、２ｍｇ／ｍｌのＭＴＴを有する、ＲＰＭＩ  １６４０ｗ／ｏフェノールレッド（Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｍｅｄｉｕｍ  １６４０、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社製）５０μｌを、上記の通りに４時間添加して、過剰のＭＴＴを吸引によって除去し、ＤＭＳＯ１２５μｌを３０分間で渦上に添加して、生成物を溶解させた。Ａ４５０での吸収度を記録して、その結果を担体のみで処理された対照の生存％として表わした。このデーターから、ＩＣ５０値が計算されたが、これは５０％の細胞毒性が観察された濃度である。ＣＹＰ１Ｂ１の発現の確認は、化合物が添加された時点でのアッセイで使用された細胞の免疫細胞学、ウエスタンブロット及びＥＲＯＤアッセイ（エトキシレゾルフィン−Ｏ−デアルキラーゼアッセイ；Ｂｕｒｋｅ，Ｍ．Ｄ．等、１９８５年、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、第３４巻：３３３７頁）によって、決定され、−２０℃でメタノール中で固定されるか、又は、複製板から取り入れられ、アッセイまで−８０℃で貯蔵された。
【００５７】
上記アッセイ系を使用して、プロドラッグを評価し、その結果を表１に示す。これらの結果は、本発明の化合物が、ＣＹＰ１Ｂ１が発現する細胞系に対して特異な毒性を示すことを示している。
【００５８】
表１：ＣＹＰ１Ｂを示さない及び示す細胞の成長抑制（ＩＣ５０／ｕＭ±２％）
【００５９】
【表１】
0004642226.tif 000014
【００６０】
化合物ＶIIは、ＣＹＰ１Ｂ１を表わさない親の細胞系よりも、ＣＹＰ１Ｂ１を表わす細胞系に対して約２００倍以上の毒性があるという発見に特に注目される。それ故に化合物ＶIIは、腫瘍に選択的な抗ガン剤として特に有用である。化合物ＶII（ＤＭＵ−１０２）の濃度に対する細胞の生存％のプロットを図１に示す。
【００６１】
合成方法
化合物IIａ
（Ｚ）−１−シアノ−１−（３−ピリジル）−２−（４−メトキシフェニル）エテン（ＤＭＵ−２０１）
【００６２】
メタノール（３０ｍｌ）中の４−メトキシベンズアルデヒド（２ｇ、１４．６９ｍｍｏｌ）及び３−ピリジルアセトニトリル（１．５８ｍｌ、１４．８４ｍｍｏｌ）からなる攪拌された混合物に、５０％ｗ／ｖの水酸化ナトリウム（１ｍｌ）を添加した。反応を３時間攪拌した。反応混合物を水（２０ｍｌ）を用いて急冷して、２ＮのＨＣｌを用いて酸性化させ、次いで希ＮａＯＨ（水性）を用いて再度塩基性にして、反応生成物をジクロロメタン（３×２０ｍｌ）中で連続的に抽出した。有機溶液を無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を除去した。カラムクロマトグラフィーによる精製（ＳｉＯ２、ヘキサン／酢酸エチル８：２；１：１）により、わら製の色がついた固体状の表題の化合物２．０１ｇ（収率５８％）が得られた。：１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）８．８０（ｄ，１Ｈ）、８．５０（ｍ，１Ｈ）、７．８０（ｍ，３Ｈ）、７．４５（ｓ，１Ｈ）、７．２５（ｍ，１Ｈ）、６．９０（ｍ，２Ｈ）、３．８０（ｓ，３Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）１６１．９、１５７．６、１５７．５、１４９．５、１４６．９、１４３．３、１３３．１、１３１．４、１３０．９、１２６、１２３．５、１１７．７、１１４．５、１０５．２、５５．４。マススペクトルｍ／ｅ（Ｍ＋１）２３７。
【００６３】
化合物IIａのヒドロキシル化された代謝物
（Ｚ）−１−シアノ−１−（３−ピリジル）−２−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）エテン（ＤＭＵ−２０２）
【００６４】
メタノール（１０ｍｌ）中の４−メトキシ−３−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．５ｇ、３．３ｍｍｏｌ）、３−ピリジルアセトニトリル（０．３５ｍｌ、３．３ｍｍｏｌ）及び５０％ｗ／ｖの水性ＮａＯＨ（３ｍｌ）からなる混合物を、室温で３０分間攪拌した。沈殿した黄色の固体を濾過し、冷却したメタノール（１ｍｌ）、冷却したＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）を使用して洗浄し、Ｐ２Ｏ５上で真空下で乾燥させたところ、黄色固体状の表題の化合物０．５ｇ（６０％）が得られた。：１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）８．８（ｍ，１Ｈ）、８．５（ｍ，１Ｈ）、８．１（ｍ，１Ｈ）、７．７（ｓ，１Ｈ）、７．５（ｍ，１Ｈ）、７．３（ｄ，１Ｈ）、７．２（ｄ，１Ｈ）、６．８（ｄ，１Ｈ）。マススペクトルｍ／ｅ（Ｍ＋１）２５３。
【００６５】
化合物IIｂ
（Ｚ）−１−シアノ−１−（３−ピリジル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）エテン（ＤＭＵ−２０８）
【００６６】
メタノール（１０ｍｌ）中の４−ヒドロキシベンズアルデヒド（０．５ｇ、４．１ｍｍｏｌ）、３−ピリジルアセトニトリル（０．５４ｍｌ、４．１ｍｍｏｌ）及び５０％ｗ／ｖの水性ＮａＯＨ（３．３ｍｌ）からなる混合物を、室温で３０分間攪拌した。形成された黄色の沈殿物を濾過し、冷却したメタノール（１ｍｌ）、冷却したＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）を使用して洗浄し、Ｐ２Ｏ５上で真空下で乾燥させたところ、表題の化合物０．６ｇ（６６％）が得られた。：１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）８．８（ｄ，１Ｈ）、８．４（ｍ，１Ｈ）、８．０５（ｍ，１Ｈ）、７．８（ｍ，２Ｈ）、７．６（ｓ，１Ｈ）、７．４（ｍ，１Ｈ）、６．６（ｍ，２Ｈ）。１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）１７７．５２、１７５．５７、１４６．５９、１４５．０６、１４４．７８、１３３．１５、１３２．７３、１３０．９７、１２３．８、１２０．８、１２０．３、１１４．３、８８．５。；マススペクトルｍ／ｅ（Ｍ＋１）２２３。
【００６７】
化合物IIIｂ（ＭｃＭｕｒｒｙカップリングによる）
（Ｅ）−（４，４’）−ジメトキシスチルベン（ＤＭＵ−２０５）
【００６８】
ＬｉＡｌＨ４（０．５ｇ、１３．１８ｍｍｏｌ）を、乾燥ＴＨＦ（２０ｍｌ）中、ＴＩＣｌ３（３．１３ｇ、２６．３５ｍｍｏｌ）からなる攪拌されたスラリーに、Ｎ２下で添加した。熱及びガスの放出、及び濃い黒色に色が素早く変化するのが伴った反応が即時に生じた。次いで、４−メトキシベンズアルデヒド（１．７９、１３．１８ｍｍｏｌ）からなるＴＨＦ溶液を添加した。混合物を４時間還流させた。反応を冷却したＨ２Ｏ（２ｍｌ）を用いて急冷し、酢酸エチル（５×２０ｍｌ）中で抽出し、カラムクロマトグラフィーによって精製した。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．２（４Ｈ，ｍ）、６．８（４Ｈ，ｍ）、６．５（２Ｈ，ｓ）、３．７（６Ｈ，ｓ）；マススペクトル（ＦＡＢ）ｍ／ｅ（Ｍ＋１）２４１。
【００６９】
化合物IIIｂのヒドロキシル化された代謝物（ウィッティッヒ反応による）
（Ｅ）−３−ヒドロキシ−４，４’−ジメトキシスチルベン
【００７０】
ＣＨ２Ｃｌ２中の塩化４−メトキシベンジルトリフェニルホスホニウム（５．５１ｇ、１３ｍｍｏｌ）及び４−メトキシ−３−ヒドロキシベンズアルデヒド（２ｇ、１３ｍｍｏｌ）からなる攪拌された混合物に、Ｈ２Ｏ中のＮａＯＨ（６２．５当量）の冷却した水溶液を添加した。混合物を室温で４８時間攪拌した。次いで、水相をｐＨ５まで酸性化させて、沈殿した固体を濾過し、乾燥させた。ヘキサン／酢酸エチル（１：１）を使用する、シリカゲルクロマトグラフィーによる精製によって、無色の固体状の表題のＥ−トランス生成物０．１１ｇ（３％）を得た。：１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ９．３（１Ｈ，ｂｓ）、７．６（２Ｈ，ｄ）、７．２（７Ｈ，ｍ）、３．５（６Ｈ，ｓ）；マススペクトル（ＦＡＢ）２５７（Ｍ＋１）。
【００７１】
化合物ＶII
（Ｅ）−１−（４−メトキシフェニル）−３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロプ−１−エン−３−オン（ＤＭＵ−１０２）
【００７２】
メタノール（３０ｍｌ）中の４−メトキシベンズアルデヒド（１．０ｇ、７．３ｍｍｏｌ）及び３，４，５−トリメトキシアセトフェノン（１．５４ｇ、７．３ｍｍｏｌ）からなる攪拌された溶液に、水性ＮａＯＨの５０％ｗ／ｖ溶液（１ｍｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間攪拌し、２ＮのＨＣｌを用いて酸性化させ、酢酸エチル（３×３０ｍｌ）を用いて抽出した。混合された有機相を、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、溶媒を真空下で蒸発させた。生成物をカラムクロマトグラフィーによって精製して、続いてメタノールから再結晶させたところ、うす黄色の固体状の表題の化合物１．２２ｇ（５１％）が得られた。：１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．８（１Ｈ，ｄ）、７．６（２Ｈ，ｍ）、７．４（１Ｈ，ｄ）、７．３（２Ｈ，ｄ）、７．０（２Ｈ，ｄ）、３．９（９Ｈ，ｓ）、３．８（３Ｈ，ｓ）；マススペクトル（ＦＡＢ）ｍ／ｅ３２９（Ｍ＋１）。
【００７３】
化合物ＶIIのヒドロキシル化された代謝物
（Ｅ）−１−（３−ヒドロキシ−４−メトキシフェニル）−３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロプ−１−エン−３−オン
【００７４】
メタノール（３０ｍｌ）中の３−ヒドロキシ−４−メトキシベンズアルデヒド（１．０ｇ、６．５７ｍｍｏｌ）及び３，４，５−トリメトキシアセトフェノン（１．３８ｇ、６．５７ｍｍｏｌ）からなる攪拌された溶液に、水性ＮａＯＨの５０％ｗ／ｖ溶液（１ｍｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間攪拌し、２ＮのＨＣｌを用いて酸性化させ、酢酸エチル（３×３０ｍｌ）を用いて抽出した。混合された有機相を、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、溶媒を真空下で蒸発させた。生成物を、メタノールから結晶化させることによって精製した（０．６３ｇ、収率２８％）。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．８（１Ｈ，ｄ）、７．３（４Ｈ，ｍ）、７．２（１Ｈ，ｍ）、６．９（１Ｈ，ｄ）、５．７（１Ｈ，ｓ）、３．９（１２Ｈ，ｓ）。マススペクトル（ＦＡＢ）ｍ／ｅ３４５（Ｍ＋１）。
【００７５】
化合物ＸII（ウィッティッヒ反応による）
（Ｅ）−３，４，５−トリメトキシ−４’−メトキシスチルベン（ＤＭＵ−２１２）
【００７６】
ＣＨ２Ｃｌ２中の塩化４−メトキシベンジルトリフェニルホスホニウム（６．４ｇ、１５．３ｍｍｏｌ）及び３，４，５−トリメトキシベンズアルデヒド（３ｇ、１５．３ｍｍｏｌ）からなる攪拌された混合物に、Ｈ２Ｏ中のＮａＯＨ（６２．５当量）の冷却した水溶液を添加した。混合物を室温で４８時間攪拌した。有機相を分離させて、水相をＣＨ２Ｃｌ２を用いて洗浄した。有機相を濃縮し、残さをエタノールから再結晶させたところ、表題のＥ−トランス異性体を得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．７（１Ｈ，ｄ：）、８．２（４Ｈ，ｍ）、８．０（２Ｈ，ｓ）、５．２（６Ｈ，ｓ）、５．０（６Ｈ，ｓ）。マススペクトル（ＦＡＢ）３０１（Ｍ＋１）。
【００７７】
化合物ＶI
（Ｚ）−３，４，５−トリメトキシ−４’−メトキシスチルベン（ＤＭＵ−２１３）
【００７８】
上記化合物ＸIIの調製に従って、再結晶工程からの濾過物を濃縮し、溶離剤としてヘキサン／酢酸エチル（８：２）を使用して、カラムクロマトグラフィーによって精製したところ、無色の固体状の表題のＺ−シス異性体０．１ｇ（収率７％）が得られた。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．２（２Ｈ，ｍ）、６．８（２Ｈ，ｍ）、６．５（４Ｈ，ｍ）、３．９（３Ｈ，ｓ）、３．８（３Ｈ，ｓ）、３．７（６Ｈ，ｓ）。マススペクトル（ＦＡＢ）３０１（Ｍ＋１）。
【００７９】
化合物ＶIII
（Ｅ）−１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロプ−１−エン−３−オン（ＤＭＵ−１１６）
【００８０】
メタノール（３０ｍｌ）中の４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．０ｇ、８．１９ｍｍｏｌ）及び３，４，５−トリメトキシアセトフェノン（１．７２ｇ、８．１９ｍｍｏｌ）からなる攪拌された溶液に、水性ＮａＯＨの５０％ｗ／ｖ溶液（１ｍｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間攪拌し、２ＮのＨＣｌを用いて酸性化させ、酢酸エチル（３×３０ｍｌ）を用いて抽出した。混合された有機相を、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、溶媒を真空下で蒸発させた。生成物を、溶離剤としてヘキサン／酢酸エチル（７：３）を使用して、カラムクロマトグラフィーによって精製したところ、うす黄色の固体状の表題の化合物（０．１２５ｇ、５％）が得られた。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．８（１Ｈ，ｄ）、７．６（２Ｈ，ｍ）、７．４（１Ｈ，ｓ）、７．２５（２Ｈ，ｍ）、６．９（２Ｈ，ｄ）、５．６（１Ｈ，ｂｓ）、３．９５（９Ｈ，ｓ）。マススペクトル（ＦＡＢ）ｍ／ｅ３１５（Ｍ＋１）。
【００８１】
化合物IＸ
（Ｅ）−１−（２，４−ジメトキシフェニル）−３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロプ−１−エン−３−オン（ＤＭＵ−１３２）
【００８２】
メタノール（３０ｍｌ）中の２，４−ジメトキシベンズアルデヒド（１ｇ、６．００ｍｍｏｌ）及び３，４，５−トリメトキシアセトフェノン（１．２７ｇ、６．００ｍｍｏｌ）からなる攪拌された溶液に、水性ＮａＯＨの５０％ｗ／ｖ溶液（１ｍｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間攪拌し、２ＮのＨＣｌを用いて酸性化させ、酢酸エチル（３×３０ｍｌ）を用いて抽出した。混合された有機相を、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、溶媒を真空下で蒸発させた。生成物を、エタノールから再結晶させることによって精製したところ、うす黄色の固体状の表題の化合物、１．６７ｇ（７８％）が得られた。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．０（１Ｈ，ｄ）、７．５（１Ｈ，ｄ）、７．４（１Ｈ，ｄ）、７．２（２Ｈ，ｓ）、６．６（１Ｈ，ｄｄ）、６．５（１Ｈ，ｄ）、３．９（９Ｈ，ｄ）、３．８５（３Ｈ，ｓ）、３．８３（３Ｈ，ｓ）。マススペクトル（ＦＡＢ）ｍ／ｅ３５９（Ｍ＋１）。
【００８３】
化合物Ｘ（ＤＭＵ−１２９）
メタノール（３０ｍｌ）中の６−メトキシ−１−テトラロン（１．２８ｇ、７．３ｍｍｏｌ）及び３，４，５−トリメトキシアセトフェノン（１．５４ｇ、７．３ｍｍｏｌ）からなる攪拌された溶液に、水性ＮａＯＨの５０％ｗ／ｖ溶液（１ｍｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間攪拌し、２ＮのＨＣｌを用いて酸性化させ、酢酸エチル（３×３０ｍｌ）を用いて抽出した。混合された有機相を、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、溶媒を真空下で蒸発させた。生成物を、カラムクロマトグラフィーによって精製し、続いてエタノールから再結晶させたところ、表題の化合物０．２５ｇ（９％）が得られた。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．４（１Ｈ，ｓ）、７．１〜７．３（５Ｈ，ｍ）、３．９（９Ｈ，ｓ）、３．８（３Ｈ，ｓ）、１．６〜２．３（６Ｈ，錯体ｍ）。マススペクトル（ＦＡＢ）ｍ／ｅ３６９（Ｍ＋１）。
【００８４】
化合物ＸI（ＤＭＵ−１２２）
（Ｅ）−１−（４−メトキシフェニル）−２−メチル−３−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロプ−１−エン−３−オン
【００８５】
メタノール（３０ｍｌ）中の４−メトキシベンズアルデヒド（１．０ｇ、７．３ｍｍｏｌ）及び１−（３，４，５−トリメトキシフェニル）プロパン−１オン（１．６４ｇ、７．３ｍｍｏｌ）からなる攪拌された溶液に、水性ＮａＯＨの５０％ｗ／ｖ溶液（１ｍｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間攪拌し、２ＮのＨＣｌを用いて酸性化させ、酢酸エチル（３×３０ｍｌ）を用いて抽出した。混合された有機相を、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、濾過して、溶媒を真空下で濃縮させた。生成物を、溶離剤としてヘキサン／酢酸エチル（４：１）を使用して、カラムクロマトグラフィーによって精製し、続いてエタノールから再結晶させたところ、うす黄色の固体状の表題の化合物、０．３６ｇ（１４％）が得られた。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．８（１Ｈ，ｓ）、７．６（２Ｈ，ｍ）、７．３（２Ｈ，ｄ）、７．０（２Ｈ，ｄ）、３．９（９Ｈ，ｓ）、３．８（３Ｈ，ｓ）、２．３（３Ｈ，ｓ）。マススペクトル（ＦＡＢ）ｍ／ｅ３４３（Ｍ＋１）。
【図面の簡単な説明】
【図１】  化合物（ＶII）（ＤＭＵ  １０２とも呼ばれる）に細胞を４０時間露出させた結果を示すものである。Ｘ軸は、ＤＭＵ１０２の濃度を単位μＭで示す。Ｙ軸は、対照実験で生存している細胞の割合として、細胞の生存率を示す。エラーバーは、結果±１ＳＥ（標準エラー）を示す。円形の印は、細胞系Ｖ７９ｍｚ用である。三角の印は、細胞系Ｖ７９ｈ１Ｂ１用である。
【図１】
0004642226.tif 000021