(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療的有効量のＧＬＰ−１分子、医薬的に許容し得る保存剤、及び張度改変剤を含む貯蔵安定性溶液製剤であって、該溶液製剤は８．２〜８．８のｐＨを有し、
該ＧＬＰ−１分子は
【化１】
0004689833.tif 000013
（式中、Ｒ1はＨｉｓであり、ＸはＶａｌであり、ＹはＧｌｕであり、ＺはＧｌｕであり、Ｒ2はＧｌｙ−ＯＨである）であり、
該医薬的に許容し得る保存剤はｍ−クレゾールであり、
該張度改変剤はグリセロールである溶液製剤。
【請求項２】
該溶液製剤が８．３〜８．６のｐＨを有する、請求項１に記載の溶液製剤。
【請求項３】
更に緩衝剤を含む請求項１に記載の溶液製剤。
【請求項４】
更に緩衝剤を含む請求項２に記載の溶液製剤。
【請求項５】
緩衝剤がＴＲＩＳである請求項３に記載の溶液製剤。
【請求項６】
緩衝剤がＴＲＩＳである請求項４に記載の溶液製剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
グルカゴン様ペプチド−１（７−３７）−ＯＨ（ＧＬＰ−１）は、脳、胃、腸、及び膵臓におけるプレグルカゴン遺伝子産物の翻訳後プロセッシングにより産生される３１アミノ酸のホルモンである。ＧＬＰ−１の主な生理学的機能はグルコースに応答してインスリン分泌を調節することであり、従って血液のグルコースレベルを正常化する能力を有する。従って糖尿病の処置のための可能性ある治療薬としてＧＬＰ−１、そのアナログ及び誘導体に興味が存在している。糖尿病の処置における他の薬剤に優るＧＬＰ−１の使用の特別の利点は１−５ｎｍｏｌ範囲の用量でのＧＬＰ−１の投与は低血糖症等の副作用を僅かしか示さないということである。予期しないことに、ＧＬＰ−１はＩＩ型糖尿病の処置のための最も一般的な種類の薬剤であるスルホニル尿素剤に対し２次的不全を有する患者においても作用することが示された。ＧＬＰ−１は胃酸分泌及び胃を空にすること（gastric emptying）の強力な阻害剤でもある。
【０００２】
ペプチドは様々なペプチダーゼにより胃腸管でしばしば分解されるので、一般に、ペプチドの有効な治療的投与には問題がある。更に、あるペプチドによる治療プロトコールは長期間にわたるペプチドの連続的又は繰り返した投与を必要とする。繰り返しの注射は使用者に不便と不愉快を引き起こす。従って糖尿病を患っている患者に必要であるペプチド剤の慢性的な使用は使用者に不便と不愉快をもたらす。
【０００３】
哺乳動物への投与のための医薬組成物の成分としてのペプチド、特にＧＬＰ−１の長期安定性は疑問である。そのような安定性の欠如は生物利用性に悪影響を及ぼす。事実、４℃という低温で貯蔵した場合、ＧＬＰ−１（７−３７）からの副生物が、試料調製後１１月という早い時期に見出されている（Mojsov, Int. J. Peptide Protein Res., Vol. 40, pages 333-343 (1992)参照）。更に、ＧＬＰ−１分子、特にジペプチヂル−ペプチダーゼIV(ＤＰＰＩＶ)の活性により影響されるものの生物学的半減期は全く短い。例えばＧＬＰ−１（７−３７）の生物学的半減期は僅か３〜５分であり（米国特許第5,118,665号を参照）、哺乳動物への投与後のその急速な吸収により更に増大される。
【０００４】
ＧＬＰ−１の生物学的利用性を減少させるもう１つの要素は水溶液になる時のＧＬＰ−１の溶解性である。ＧＬＰ−１の溶解性は、緩衝系の選択及びペプチドが受ける処理等の環境に非常に依存する。例えば、ペプチドをその塩に変換することはその溶解性に役割を果たす。これに関し、合成ＧＬＰ−１は中性のリン酸塩で緩衝化された食塩水に非常に溶解性である。そのペプチドの溶解性がそのような水溶液で高いのでそのペプチドを遅延放出のためのシステムに入れない限りそのペプチドの遅い放出は達成するのが困難である。
【０００５】
治療剤の安定な製剤はこれらの薬剤を高温及び／又は機械的ストレスに曝す運搬装置での使用には特に必要である。例えば、連続注入システム及びペンデリバリー装置での使用に安定なＧＬＰ−１製剤が要求される。現在の製剤はこれらのタイプの運搬装置で限られた安定性を提供するだけである。
【０００６】
連続注入システムにおいて、治療剤を含む液体は貯蔵容器から、通常、皮下、静脈内、又は腹膜内のデポットにポンプで押し出される。周期的に再充填されねばならない貯蔵容器は患者の体につけられるか、患者の体に埋め込まれる。どちらの場合も，患者の体熱及び体の動き、並びにチュービング及びポンプにおける乱流は製剤に比較的大量の熱−機械的エネルギーを与える。貯蔵容器が再充填される頻度を最小にし、貯蔵容器の大きさを最小にするために、比較的高濃度の治療剤を有する製剤が有利である。
【０００７】
インジェクターペンも開発され、患者がインスリントロピック（insulinotropic）剤の調節された用量を正確に測定し、投与することを可能にする。一般にこれらのペンはその中に封入された液体薬物のある量を有するカートリッジに確実に保たれている。カートリッジはプランジャー及びその薬物を分配する方法でプランジャーをカートリッジ中に進める機構を含む。インジェクターペンは再使用可能でもよく、廃棄可能でもよい。再使用可能なペンにおいては、使用者は使用したカートリッジを交換し、ペンの親ねじをその最初の位置にリセットできる。廃棄可能なペンにおいては、カートリッジの内容が使い尽くされた後廃棄されるペン中にカートリッジは永久に捕獲されている。
【０００８】
糖尿病の処置のためのＧＬＰ−1そしてまたそのアナログ及び誘導体の開発と共に、糖尿病患者の慢性的な使用の必要と化学的及び物理的安定性のバランスをとることができる治療レジメを改良する必要が存在する。
【０００９】
発明の概要
ＧＬＰ−１製剤の化学的及び物理的安定性の問題を克服するために、本発明者はＧＬＰ−１の貯蔵安定性の製剤を開発した。特に、本発明者は、ある生理学的に許容される緩衝剤をＧＬＰ−１の製剤に用いた場合、そのような製剤の物理的安定性が、リン酸塩緩衝剤を用いて調製したＧＬＰ−１製剤と比較して、予期しないほど、そして顕著に高いことを発見した。更に、ｐＨを約８．２〜約８．８の範囲に保つことは製剤の化学的安定性を予期しないほど改良する。本発明のＧＬＰ−１の貯蔵安定性製剤は、治療的有効量のＧＬＰ−１分子、医薬的に許容し得る保存剤、及び張度改変剤を含み、該製剤のｐＨは約８．２〜約８．８の範囲に維持される。
【００１０】
ＧＬＰ−１製剤の化学的及び物理的安定性に従って、本発明は貯蔵安定性の医薬製剤を提供し、その製剤は治療的有効量のＧＬＰ−１分子、医薬的に許容し得る保存剤、及び張度改変剤を含み、該製剤は約８．２〜約８．８のｐＨを有する。好ましい態様では製剤はＴＲＩＳ等の緩衝剤を更に含む。他の好ましい態様では製剤はＢｒｉｊ−３５等の界面活性剤を含む。他の好ましい態様では製剤のＧＬＰ−１分子はＧＬＰ−１のアナログであり、以下のアミノ酸配列：
【化７】
0004689833.tif 000002
（式中、Ｒ１はＨｉｓ又はデスアミノヒスチヂンであり、ＸはＡｌａ、Ｇｌｙ、又はＶａｌであり、ＹはＧｌｕ又はＧｌｎであり、ＺはＧｌｕ又はＧｌｎでありＲ２はＧｌｙ−ＯＨである）
を有するペプチド及び医薬的に許容し得るその塩よりなる群から選択される。特に好ましい態様ではＧＬＰ−１分子は配列番号２（式中、Ｒ１はＬ−ヒスチジンであり、ＸはＶａｌであり、ＹはＧｌｕであり、ＺはＧｌｕであり、Ｒ２はＧｌｙ−ＯＨである）に従う。別の好ましい態様では、製剤のＧＬＰ−１分子はＧＬＰ−１の誘導体であり、アミノ酸配列：
【化８】
0004689833.tif 000003
（式中、ＸはＬｙｓ及びＬｙｓ−Ｇｌｙよりなる群から選択される）
を有するペプチド及び医薬的に許容し得るその塩；該ペプチドの医薬的に許容し得る低級アルキルエステル；並びにアミド、低級アルキルアミド及び低級ジアルキルアミドよりなる群から選択される該ペプチドの医薬的に許容し得るアミドよりなる群から選択される。他の好ましい態様では、製剤は長期間作用性のインスリン剤をも含む。
【００１１】
本発明は、その必要のある哺乳動物のβ型ランゲルハンス島細胞におけるインスリンの発現を高める方法を提供し、その方法は有効量の貯蔵安定性の医薬製剤をその細胞に投与することを含み、その製剤は、治療的有効量のＧＬＰ−１分子、医薬的に許容し得る保存剤、及び張度改変剤を含み、該製剤は約８．２〜約８．８のｐＨを有する。。好ましい態様ではその治療方法に用いる製剤はＴＲＩＳ等の緩衝剤を含む。他の好ましい態様ではその治療方法に用いる製剤はＢｒｉｊ−３５等の界面活性剤を含む。更なる他の好ましい態様では、このように投与する製剤のＧＬＰ−１分子はＧＬＰ−１のアナログであり、以下のアミノ酸配列：
【化９】
0004689833.tif 000004
（式中、Ｒ１はＨｉｓ又はデスアミノヒスチヂンであり、ＸはＡｌａ、Ｇｌｙ、又はＶａｌであり、ＹはＧｌｕ又はＧｌｎであり、ＺはＧｌｕ又はＧｌｎでありＲ２はＧｌｙ−ＯＨである）
を有するペプチド及び医薬的に許容し得るその塩よりなる群から選択される。特に好ましい態様では投与されるＧＬＰ−１分子は配列番号２（式中、Ｒ１はＬ−Ｈｉｓであり、ＸはＶａｌであり、ＹはＧｌｕであり、ＺはＧｌｕであり、Ｒ２はＧｌｙ−ＯＨである）に従う。別の好ましい態様では、投与されるＧＬＰ−１分子はＧＬＰ−１の誘導体であり、アミノ酸配列：
【化１０】
0004689833.tif 000005
（式中、ＸはＬｙｓ及びＬｙｓ−Ｇｌｙよりなる群から選択される）
を有するペプチド及び医薬的に許容し得るその塩；該ペプチドの医薬的に許容し得る低級アルキルエステル；並びにアミド、低級アルキルアミド及び低級ジアルキルアミドよりなる群から選択されるそのペプチドの医薬的に許容し得るアミドよりなる群から選択される。
【００１２】
本発明は、糖尿病を処置する方法をも提供し、その方法は有効量の貯蔵安定性の医薬製剤をそのような処置の必要のある患者に投与することを含み、その製剤は、治療的有効量のＧＬＰ−１分子、医薬的に許容し得る保存剤、及び張度改変剤を含み、該製剤は約８．２〜約８．８のｐＨを有する。好ましい態様ではその治療方法に用いる製剤はＴＲＩＳ等の緩衝剤を含む。他の好ましい態様ではその治療方法に用いる製剤はＢｒｉｊ−３５等の界面活性剤を含む。他の好ましい態様ではこのように投与する製剤のＧＬＰ−１分子はＧＬＰ−１のアナログであり、以下のアミノ酸配列：
【化１１】
0004689833.tif 000006
（式中、Ｒ１はＨｉｓ又はデスアミノヒスチヂンであり、ＸはＡｌａ、Ｇｌｙ、又はＶａｌであり、ＹはＧｌｕ又はＧｌｎであり、ＺはＧｌｕ又はＧｌｎでありＲ２はＧｌｙ−ＯＨである）
を有するペプチド及び医薬的に許容し得るその塩よりなる群から選択される。特に好ましい態様では投与されるＧＬＰ−１分子は配列番号２（式中、Ｒ１はＬ−Ｈｉｓであり、ＸはＶａｌであり、ＹはＧｌｕであり、ＺはＧｌｕであり、Ｒ２はＧｌｙ−ＯＨである）に従う。別の好ましい態様では、投与されＧＬＰ−１分子はＧＬＰ−１の誘導体であり、アミノ酸配列：
【化１２】
0004689833.tif 000007
（式中、ＸはＬｙｓ及びＬｙｓ−Ｇｌｙよりなる群から選択される）
を有するペプチド及び医薬的に許容し得るその塩；そのペプチドの医薬的に許容し得る低級アルキルエステル；並びにアミド、低級アルキルアミド及び低級ジアルキルアミドよりなる群から選択されるそのペプチドの医薬的に許容し得るアミドよりなる群から選択される。
【００１３】
更なる態様は単一の注射による食事時（meal-time）血糖調節及び基礎（basal）血糖調節の方法を提供し、その方法はその必要のある患者に有効量の貯蔵安定性医薬製剤を投与することを含み、その製剤は治療的に有効量のＧＬＰ−１分子、長期作用性のインスリン、医薬的に許容し得る保存剤、及び張度改変剤を含み、該製剤は約８．２〜約８．８のｐＨを有する。
【００１４】
好ましい態様の詳細な記述
本発明はＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１アナログ、及びＧＬＰ−１誘導体の貯蔵安定性の製剤を提供する。医薬組成物における成分としてのＧＬＰ−１の長期安定性について問題があることが知られているので、本発明者はＧＬＰ−１、その誘導体及びアナログを安定化させる医薬製剤を開発した。この開発は本発明の貯蔵安定性のＧＬＰ−１製剤をもたらした。
【００１５】
他の態様において本発明は長期間作用性の糖尿病薬をも含むＧＬＰ−１製剤を包含する。正常な個体における内因性のインスリン分泌のパターンを模倣することがインスリン治療の目標であった。インスリンに対する毎日の生理学的な要求は変動し、２つの相に分けることができる：（ａ）食事に関連する血液グルコースの殺到を処理するためにインスリンのパルスを必要とする吸収期；及び（ｂ）最適の絶食血液グルコースを維持するための肝臓のグルコース生産を調節するためのインスリンの持続的運搬を必要とする吸収後期。従って、糖尿病を有する人々の効果的な治療は、2つのタイプの外性のインスリン製剤、ボーラス注射により提供される速効性の食事時インスリン、及び食事の間の血液グルコースレベルを調節するための毎日１度又は２度の注射により投与される長期作用性のいわゆる基礎インスリン、の組み合わせた使用を一般的に含む。商業的な基礎インスリン製品の例はＮＰＨ（Neutral Protamine Hagedorn）インスリン、プロタミン亜鉛インスリン（ＰＺＩ）、及びウルトラレンテ（ＵＬ）を含む。
【００１６】
「安定性」という用語は、化学的及び物理的安定性を意味するのに用いられる。物理的安定性はタンパク質の凝集（試料の光減衰(attenuation)により測定できる）等の性質を言う。その測定は製剤の濁りに関係する。濁りは製剤中でのタンパク質又は複合体の凝集又は沈殿により生じ、溶液製剤の安定性の減少の指標である。タンパク質の製品が濁れば濁るほど、その製品の安定性は小さい。安定性は、安定性減少の指標である高次構造ポリマーを形成するタンパク質の傾向等の製剤の化学的安定性をも言う。
【００１７】
ＧＬＰ−１製剤の安定性に役割を果たす１つの因子は規定されたレベルにｐＨを維持することである。具体的には、約８．２〜約８．８に製剤のｐＨをし、維持することが有利であることを本発明者は見出した。典型的ななペプチド製剤は７〜約７．８の中性のｐＨ及び酸性のｐＨを有する。更に、約６．８〜約７．５の範囲のｐＨを有するＧＬＰ−1分子を含む組成物は、保存剤を含み、約８．２〜約８．８の範囲のｐＨを有するＧＬＰ−1分子の組成物より低い物理的安定性を示す。約８．０より小さいｐＨを有する保存製剤は、濁り、即ちペプチド製剤の物理的安定性の減少の隠された印、を示す傾向がある。逆に、８．８より大きいｐＨを有する製剤は化学的安定性を減少させる傾向がある。
【００１８】
従って、本発明は、ＧＬＰ−1分子の最適の化学的及び物理的安定性を保持する約８．２〜約８．８のｐＨ範囲を有するＧＬＰ−1製剤を意図する。本発明のＧＬＰ−1製剤の特に好ましい範囲は約８．３〜約８．６であり、最も好ましいｐＨ範囲は約８．４〜約８．５である。ｐＨに関して本明細書で用いる場合、「約」という用語はプラス又はマイナス０．１ｐＨを意味する。従って「約８．５」というｐＨは８．４〜８．６のｐＨを示す。
【００１９】
ＧＬＰ−1分子自体が緩衝能力を示す。しかしがら、長期貯蔵及び安定性のために組成物のｐＨを維持するために緩衝剤を加えるのが好ましい。
【００２０】
緩衝剤の選択はそれがｐＨに影響するので製剤の化学的及び物理的安定性に影響する。アルカリ範囲では医薬的に許容し得る緩衝剤は非常に僅かしかない。ペプチドの医薬製剤に典型的には用いられるリン酸塩緩衝剤は８．２〜８．８のｐＨ範囲を維持できない。しかしがら、ある他のアミン含有緩衝剤がＧＬＰ−1分子の製剤に化学的及び物理的安定性を与えることができることを本発明者は発見した。
【００２１】
本発明で用いる緩衝剤は約８．２〜約８．８の範囲で緩衝能力を好ましくは提供する。使用される緩衝剤はトロメタン（ＴＲＩＳ）、及びリシン及びヒドロキシリシン等のアミノ酸をベースにした緩衝剤であり得る。約８．２〜約８．８の範囲で緩衝能力を有するいずれの非リン酸塩緩衝剤も用いうるがＴＲＩＳが本発明の製剤のための好ましい緩衝剤である。「ＴＲＩＳ」という用語は２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−1，３−プロパンジオール（当業者にトロメタン、トリメチロールアミノメタン、又はトリス（ヒドロキシメチル）アミノエタンとしても知られている）及び医薬的に許容し得るいずれかのその塩を指す。遊離塩基及び塩酸塩形はＴＲＩＳの２つの一般的な形である。ＴＲＩＳは所望のアルカリレベルにｐＨを維持し、それによって製剤を安定化させることのできる僅かな緩衝剤の１つである。
【００２２】
ＧＬＰ−１製剤の安定性に役割を果たす第２の要因は本発明の製剤で用いるＧＬＰ−１の濃度である。ＧＬＰ−１分子の約０．３０〜約０．６５ｍｇ／ｍＬの濃度が本発明の製剤において安定であることを本発明者は決定した。しかしがら、１ｍｇ／ｍＬに等しい又はより大きい濃度は不安定であった。この安定性は製剤の濁りの発生により証拠づけられる。特に安定な製剤はＧＬＰ−１分子の約０．５ｍｇ／ｍＬを含む。
【００２３】
本発明のＧＬＰ−１製剤の全体的安定性に寄与する更なる因子は保存剤の選択である。保存剤は製剤の多数回使用を可能にするので製剤中で必須の成分である。たいていの保存剤が医薬製剤を安定化させることができるのが典型であるが、ある医薬的に許容し得る保存剤は製剤の物理的不安定性を促進するよう作用する。本発明者はフェノール性保存剤が好ましいことを見出した。具体的には保存剤はｍ−クレゾール、フェノール、ベンジルアルコール、又はメチルパラベンであり得、約２ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬの量で存在する。究極的には、効果的な保存に必要な保存剤の濃度は用いる保存剤、製剤のｐＨ、及び保存剤に結合し、又は引き離す物質が存在するかどうかにもよる。好ましくはｍ−クレゾールを製剤中で保存剤として用いる。
【００２４】
緩衝剤及び保存剤は製剤中にもっとも好ましく含まれるが張度改変剤、及び／又は界面活性剤、そしてまた注射用の蒸留水等の更なる他の賦形剤も含まれ得る。
【００２５】
投与の様式により製剤を体液とほぼ等張性にするため張度改変剤を含ませ得る。張度改変剤の濃度はペプチド製剤における張度改変剤の公知の濃度に従う。本発明で用いる好ましい張度改変剤はグリセロールである。
【００２６】
本発明の製剤中に含まれ得る界面活性剤はカチオン性、アニオン性、又は非イオン性であり得る。好ましい種類の界面活性剤はポリオキシエチレンエーテルである。本発明で有用な好ましい界面活性剤は、ICI United States, Inc. から入手しうるＢｒｉｊ−３５，ポリオキシエチレン２３ラウリルエーテルである。
【００２７】
本発明は天然のＧＬＰ−１ばかりでなく、ＧＬＰ−１のアナログ、誘導体及び塩の使用をも意図する。本明細書で用いる「ＧＬＰ−１分子」という用語は、（１）ＧＬＰ−１（７−３７）−ＯＨである天然のＧＬＰ−１；（２）ＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ２そしてまた（３）ＧＬＰ−１（７−３７）；（４）天然の又は合成の機能的なＧＬＰ−１アナログ；（５）ＧＬＰ−１の誘導体及び（６）上述の分子のいずれかの塩を言う。
【００２８】
「ＧＬＰ−１アナログ」はＧＬＰ−１（７−３７）の１以上のアミノ酸置換、欠失、逆位、又は付加を有する分子として定義され、Ｄ−アミノ酸形を含み得る。多数のＧＬＰ−１アナログが知られており、以下のものを含むがこれらに限定されない。ＧＬＰ−１（７−３４）、ＧＬＰ−１（７−３５）、ＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ２，Ｇｌｎ９−ＧＬＰ−１（７−３７）、ｄ−Ｇｌｎ９−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｔｈｒ１６−Ｌｙｓ１８−ＧＬＰ−１（７−３７）、及びＬｙｓ１８−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ２，Ｇｌｙ８−ＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨ，Ｖａｌ８−ＧＬＰ−1（７−３７）ＯＨ、Ｍｅｔ８−ＧＬＰ−1（７−３７）ＯＨ、アセチル−Ｌｙｓ９−ＧＬＰ−1（７−３７）、Ｔｈｒ９−ＧＬＰ−1（７−３７）、Ｄ−Ｔｈｒ９−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ａｓｎ９−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｄ−Ａｓｎ９−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ｓｅｒ２２−Ａｒｇ２３−Ａｒｇ２４−Ｇｌｎ２６−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ａｒｇ２３−ＧＬＰ−１（７−３７）、Ａｒｇ２４−ＧＬＰ−１（７−３７）、α−メチル−Ａｌａ８−ＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ２、及びＧｌｙ８−Ｇｌｎ２１−ＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨ等。
【００２９】
本発明に従う他のＧＬＰ−１アナログは式：
【化１３】
0004689833.tif 000008
（式中、Ｒ１は、Ｌ−ヒスチジン、Ｄ−ヒスチジン、デスアミノヒスチジン、２−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、及びα−メチル−ヒスチジンよりなる群から選択され；Ｘは、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、及びα−メチル−Ａｌａよりなる群から選択され、Ｙは、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、及びＧｌｙよりなる群から選択され；ＺはＧｌｕ、Ｇｌｎ、Ａｌａ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、及びＧｌｙよりなる群から選択され、Ｒ２はＮＨ２，及びＧｌｙ−ＯＨよりなる群から選択される）
により記述される。
【００３０】
ＧＬＰ−１アナログはＷＯ９１／１１４５７にも記載されており、ＧＬＰ−1（７−３４）、ＧＬＰ−１（７−３５）、ＧＬＰ−１（７−３６）、若しくはＧＬＰ−１（７−３７）、又はそれらのアミド形、及びそれらの医薬的に許容し得る塩を含み、以下の群よりなる少なくとも１の改変を有する。
（ａ）２６位及び／又は３４位のリシンに対するグリシン、セリン、システイン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、アルギニン、又はＤ−リシンの置換；又は３６位のアルギニンに対するグリシン、セリン、システイン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、リシン、又はＤ−アルギニンの置換；
（ｂ）３１位のトリプトファンに対する酸化抵抗性アミノ酸の置換；
（ｃ）１６位のバリンに対するチロシン；１８位のセリンに対するリシン；２１位のグルタミン酸に対するアスパラギン酸；２２位のグリシンに対するセリン；２３位のグルタミンに対するアルギニン；２４位のアラニンに対するアルギニン；及び２６位のリシンに対するグルタミンの、少なくとも１つの置換；及び
（ｄ）８位のアラニンに対するグリシン、セリン、又はシステイン；９位のグルタミン酸に対するアスパラギン酸、グリシン、セリン、システイン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、又はフェニルアラニン；１０位のグリシンに対するセリン、システイン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、又はフェニルアラニン；１５位のアスパラギン酸に対するグルタミン酸、の少なくとも１つの置換；及び
（ｅ）７位のヒスチジンに対するグリシン、セリン、システイン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、チロシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、若しくはフェニルアラニン、又はヒスチジンのＤ−若しくはＮ−アシル化若しくはアルキル化形；
（（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、及び（ｅ）に記載の置換において、置換アミノ酸はＤ−形であり得、７位で置換されたアミノ酸は場合によりＮ−アシル化又はＮ−アルキル形であり得る）
【００３１】
本発明の製剤で用いる好ましいＧＬＰ−１分子はもとの配列には存在しない１以上のアミノ酸が付加され、又は削除されたＧＬＰ−１（７−３７）ＮＨ２及びＧＬＰ−１（７−３７）のアナログ、並びにそれらの誘導体も含む。具体的には、Ｈｉｓ及びデスアミノヒスチジンがＲ１に好ましい。Ａｌａ，Ｇｌｙ，及びＶａｌが「Ｘ」位に好ましい。Ｇｌｕ及びＧｌｎが「Ｙ」位に好ましい。Ｇｌｕ及びＧｌｎが「Ｚ」位に好ましく、Ｇｌｙ−ＯＨがＲ２に好ましい。
【００３２】
特に好ましいＧＬＰ−１アナログはＶａｌ（８）ＧＬＰ−１（Ｖ８ＧＬＰ−１）として知られ、配列番号２の式（式中、Ｒ１はＬ−ヒスチジンであり、ＸはＶａｌであり、ＹはＧｌｕであり、ＺはＧｌｕであり、Ｒ２はＧｌｙ−ＯＨである）を有する。
【００３３】
「ＧＬＰ−１誘導体」はＧＬＰ−１（７−３７）又はＧＬＰ−１アナログのアミノ酸配列を有する分子として定義されるが、そのアミノ酸側鎖基、α−炭素原子、末端アミノ基、又は末端カルボン酸基の１以上の化学的修飾を更に含む。限定されるものではないが化学的部分を付加すること、新しい結合を作ること、及び化学的部分を削除することを含む。アミノ酸側鎖基における修飾は、限定されるものではないが、リシンε−アミノ基のアシル化、アルギニン、ヒスチジン又はリシンのＮ−アルキル化、グルタミン又はアスパラギンカルボン酸基のアルキル化、グルタミン又はアスパラギンの脱アミド化を含む。末端アミノの修飾は限定されるものではないが、脱アミノ、Ｎ−低級アルキル、Ｎ−ジ低級アルキル、Ｎ−アシル修飾を含む。末端カルボキシ基の修飾は限定されるものではないが、アミド、低級アルキルアミド、ジアルキルアミド、及び低級アルキルエステル修飾を含む。低級アルキルはＣ１−Ｃ４アルキルである。更に、１以上の側鎖基、又は末端基をタンパク質化学の当業者に公知の保護基により保護してもよい。アミノ酸のα−炭素原子はモノ又はジ−メチル化されてもよい。
【００３４】
他のＧＬＰ−１誘導体は以下のアミノ酸配列：
【化１４】
0004689833.tif 000009
（式中、ＸはＬｙｓ及びＬｙｓ−Ｇｌｙよりなる群から選択される）
を有するペプチド及び医薬的に許容し得るその塩、並びにそのペプチドの誘導体を含み、該ペプチドは該ペプチドの医薬的に許容し得る低級アルキルエステル；及びアミド、低級アルキルアミド及び低級ジアルキルアミドよりなる群から選択される該ペプチドの医薬的に許容し得るアミドよりなる群から選択される。
【００３５】
本発明の使用に適する他のＧＬＰ−１誘導体は式：
【化１５】
0004689833.tif 000010
（式中、Ｒ１は４−イミダゾプロピオニル、４−イミダゾアセチル、又は４−イミダゾ−α,αジメチル−アセチルよりなる群から選択され；Ｒ２はＣ６−Ｃ１０の非分枝アシルよりなる群から選択されるか、又は存在せず；Ｒ３はＧｌｙ−ＯＨ又はＮＨ２よりなる群から選択され；ＸａａはＬｙｓ又はＡｒｇである）
によって記載される米国特許第5,512,549号にクレームされた化合物を含み、本発明で使用してもよい。
【００３６】
「ＤＰＰ−ＩＶ保護ＧＬＰ」はＤＰＰ−ＩＶの作用に抵抗性のＧＬＰ−１アナログを言う。これらは８位に改変された又はＤアミノ酸残基を有するアナログを含み、８位にＧｌｙ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｃｙｓ、又はＡｓｐを有する生合成ＧＬＰ−１アナログを含む。他のＤＰＰ−ＩＶ保護ＧＬＰはデスアミノＨｉｓ７誘導体を含む。
【００３７】
「ＧＬＰ−１ペプチドアナログ」はアシル化された形を除くＧＬＰ−１アナログ又は誘導体として定義される。
【００３８】
「生合成ＧＬＰ−１アナログ」は天然に存在するアミノ酸残基のみを含み、従って組換え細胞及び器官を含む生きている細胞により発現されうるいずれかのＧＬＰ−１アナログ又は誘導体として定義される。
【００３９】
本発明の貯蔵安定性製剤に導入するＧＬＰ−１分子の製造方法は当業者に周知である。１つに方法において、ＧＬＰ−１分子はMerrifield (Chem. Soc. Vol. 85, page 2149, 1962)に記載の方法等のペプチド合成の周知の方法により製造される。該分子はＧＬＰ−１の天然のアミノ酸配列を例えばタンパク質分解酵素で断片化することによっても製造できることを意図する。Maniatis et al. (Molecular Biology: A Laboratory Manual, CSH, 1982)に記載の方法等の組換えＤＮＡ技術も該分子の製造に用い得ることを意図する。
【００４０】
投与は当業者によって有効であることが知られているいずれかの経路による。非経口投与が好ましい。非経口投与は胃腸経路以外による投与として一般に理解されている。本発明の製剤を投与するための好ましい非経口経路は、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、動脈内、鼻、肺及び頬経路を含む。本発明に用いる化合物の静脈内、腹腔内、筋肉内、及び皮下投与がより好ましい非経口投与経路である。本発明の製剤の静脈内、腹腔内、及び皮下投与経路がより一層好ましい。最も好ましい投与経路は１．５ｍｌのカートリッジ又は３．０ｍｌのカートリッジを用いるペンインジェクションシステムによる。
【００４１】
ある非経口経路による投与は、本発明の製剤を、滅菌したシリンジ又は連続注入システム等のある他の機械的な装置により進められる針又はカテーテルを介して患者の体に導入することを含む。本発明により提供される製剤は、シリンジ、インジェクター、ポンプ、又は非経口投与について当業者に知られているいずれかの他の装置を用いて投与され得る。本発明の製剤は肺又は鼻腔に吸収するためエーロゾルとして投与してもよい。該製剤は頬側投与等の粘膜を通る吸収のために投与し得る。
【００４２】
糖尿病又は高血糖を処置するために投与する本発明の製剤の量は多くの因子に依存し、その中には限定するものではないが、患者の性、体重及び年齢、処置すべき状態又は病気の原因、投与経路及び生物利用性、投与するＧＬＰ−１、そのアナログ、またはその誘導体の体における持続性、製剤及びＧＬＰ−１分子の力価が含まれる。投与が断続的である場合には、投与あたりの量は投与間の間隔、及び製剤からのＧＬＰ−１分子の生物利用性を考慮すべきである。本発明の製剤の投与は連続的であり得る。望ましい臨床的結果を達成するために本発明の製剤の投与の用量及び注入速度又は頻度を滴定することは当業者の範囲内である。
【００４３】
本発明の製剤はインスリントロピック活性を有する。従って本発明の他の態様はβ型ランゲルハンス島細胞からインスリンの放出を高める方法を提供し、その方法は哺乳動物のβ型ランゲルハンス島細胞に、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１アナログ、ＧＬＰ−１誘導体又はそれらの塩を含む本発明の製剤を提供することを含む。
【００４４】
本発明は従来のペプチド製剤に比べて物理的及び化学的安定性が非常に増加したＧＬＰ−１、そのアナログ、その誘導体の製剤を提供することは以下のデータ及び実施例から明らかである。
【００４５】
以下の実施例及び製造例は本発明の製剤の製造を更に説明するためにのみ提供される。本発明の範囲は以下の実施例に限定されない。
【００４６】
実施例
実施例１−製造及び化学的安定性試験
６６．２ｍｇのＶａｌ（８）ＧＬＰ−１を１．０ｍｇ／ｍｌで水に溶解し、ｐＨ８．５１に調節した。３つの製剤を次のように製造した：
（Ａ）水中のペプチド溶液の２１．５ｍｌのアリコートを、０．６３％ｍ−クレゾール−３．２％グリセロール２１．５ｍｌと混合し、最終ｐＨを８．４８にした。その溶液を０．２ミクロンのフィルターを通した。０．３１５％ｍ−クレゾール−１．６％グリセロール  ｐＨ８．４８中に０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドを含む溶液のアリコートを次に非経口試験管(parenteral vial)にピペットでいれ、栓をした。
（Ｂ）水中のペプチド溶液の２１．５ｍｌアリコートを、０．６３％ｍ−クレゾール−３．２％グリセロール−０．０２モルのＬ−リシンの２１．５ｍｌと混合し、最終ｐＨを８．４８にした。その溶液を０．２ミクロンのフィルターを通した。０．３１５％ｍ−クレゾール−１．６％グリセロール−０．０１モルのＬ−リシン ｐＨ８．４８中に０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドを含む溶液のアリコートを次に非経口試験管にピペットでいれ、栓をした。
（Ｃ）水中のペプチド溶液の２１．５ｍｌアリコートを、０．６３％ｍ−クレゾール−３．２％グリセロール−０．０２モルのＴｒｉｓ緩衝剤  ｐＨ８．５の２１．５ｍｌと混合し、最終ｐＨを８．５０にした。その溶液を０．２ミクロンのフィルターを通した。０．３１５％ｍ−クレゾール−１．６％グリセロール−０．０１モルのＴｒｉｓ  ｐＨ８．５０中に０．５ｍｇ／ｍｌのペプチドを含む溶液のアリコートを次に非経口試験管にピペットでいれ、栓をした。
【００４７】
１セットの試験管を４℃で冷蔵庫に保持した。第２のセットを３０℃（室温）に保った。第３のセットは冷蔵庫に保持したが、１日３回、１週間に５日取り出し、室温まで暖めた。次にそのセットを冷蔵庫に戻した。
【００４８】
様々な時点で３つの温度条件の３つの製剤の試験管を視覚により調べ、ｐＨメーターでチェックし、ＨＰＬＣにより、ペプチドのメインピーク純度及び全ｍｇ／ｍｌを検定した。ＨＰＬＣによる検定の前に試験管を遠心し、上清をカラムに注入した。０．０１モルのＨＣｌ中のＶａｌ（８）ＧＬＰ−１の新しく作った溶液の濃度をＵＶ分光により測定した。既知の濃度の標準をこの溶液を希釈することにより調製し、ＨＰＬＣに注入し、多点標準曲線を得た。メインピーク純度を、全面積に対してメインピーク面積を比較することにより決定した。標準曲線パラメーターを用いて全面積（メインピーク＋関連物質）を全ｍｇ／ｍｌに変換した。
【００４９】
以下の表は力価を定量するためＨＰＬＣを用いる化学的安定性を要約し、溶液からの顕著なペプチド損失がない場合製剤が安定であることを示す。純度％は製剤の安定性の指標である。ペプチドの可溶性の関連物質への化学的分解は低純度値を与える。この表中の結果はＴＲＩＳ緩衝液中のＧＬＰ−１が最高の純度を有し、従って最高の安定性値を有することを示す。
【００５０】
【表１】
0004689833.tif 000011
0004689833.tif 000012
【００５１】
実施例２−製造及び物理的安定性試験
水中のＶａｌ（８）ＧＬＰ−１の溶液をｐＨ８．５０に調節し、ろ過した。ＵＶ分析により濃度は５．２８ｍｇ／ｍｌであると決定された。５．００ｍｇのペプチドを含むアリコートを１０ｍｌ非経口試験管にピペットでいれ、凍結乾燥した。凍結乾燥後、そのプラグを次のいずれか１０．００ｍｌを加えることにより再構成した：
ａ）０．３１５％ｍ−クレゾール−１．６％グリセロール  ｐＨ８．５
ｂ）０．３１５％ｍ−クレゾール−１．６％グリセロール−０．００５モルのＴｒｉｓ緩衝剤  ｐＨ８．５
ｃ）０．３１５％ｍ−クレゾール−１．６％グリセロール−０．０１モルのＴｒｉｓ緩衝剤  ｐＨ８．５
濁度測定を、最初に、及び冷蔵庫中１月後に測定した。試料のすべての濁度（室温における）は１０ＮＴＵ未満であった。最初の測定はＨａｃｈ２１００Ｎ濁度計で行ない、１月読みはＨａｃｈ２１００ＡＮ濁度計で行なった。
緩衝剤              濁度（最初）        濁度（１月）
なし              ０．４ＮＴＵ        ４．０ＮＴＵ
０．００５モルＴｒｉｓ    ０．４ＮＴＵ        ３．６ＮＴＵ
０．０１０モルＴｒｉｓ    ０．４ＮＴＵ        ４．５ＮＴＵ