(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
PSCAを過剰発現している前立腺がん診断用の薬学的組成物の調製のための、抗体または該抗体の断片の使用であって、該抗体または該抗体の断片が該PSCAタンパク質の細胞外ドメインに特異的に結合し、該PSCAタンパク質は、以下のアミノ酸配列
0004615007.tif 000055
を有する、
使用。
【請求項２】
ヒト細胞の表面に発現されるようなネイティブPSCAに結合する、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
マウス抗原結合領域残基およびヒト抗体残基を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
ヒト抗体である、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
ポリクローナル抗体である、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
モノクローナル抗体である、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
マウスの抗原結合部位およびエフェクター機能を調節するヒト化された領域を有するキメラ抗体である、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
断片が、Fv断片、F(ab')断片およびF(ab')2断片からなる群より選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
抗体または該抗体の断片が、TARIRAVGLLTVISK（配列番号：７）であるPSCA抗原アミノ酸配列に結合する、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
抗体または該抗体の断片が検出可能なマーカーで標識された、請求項１に記載の使用。
【請求項１１】
前記検出可能なマーカーが放射性同位元素、蛍光化合物、生物発光化合物、化学発光化合物、金属キレート剤または酵素である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記検出可能なマーカーが、放射性同位元素または蛍光化合物である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
再発性の前立腺がんが検出され、および診断される、請求項１に記載の使用。
【請求項１４】
転移性の前立腺がんが検出され、診断される、請求項１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
【数１−２】
0004615007.tif 000002
【背景技術】
【０００２】
【数１−３】
0004615007.tif 000003
【０００３】
【数２】
0004615007.tif 000004
【０００４】
【数３−１】
0004615007.tif 000005
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
【数５５】
0004615007.tif 000006
【０００６】
【数５６】
0004615007.tif 000007
【０００７】
【数５７】
0004615007.tif 000008
【０００８】
【数５８】
0004615007.tif 000009
【０００９】
【数３−２】
0004615007.tif 000010
【００１０】
【数４】
0004615007.tif 000011
【００１１】
【数５−１】
0004615007.tif 000012
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
【数７−２】
0004615007.tif 000013
【００１３】
【数８】
0004615007.tif 000014
【００１４】
【数９】
0004615007.tif 000015
【００１５】
【数１０】
0004615007.tif 000016
【００１６】
【数１１】
0004615007.tif 000017
【００１７】
【数１２】
0004615007.tif 000018
【００１８】
【数１３】
0004615007.tif 000019
【００１９】
【数１４】
0004615007.tif 000020
【００２０】
【数１５】
0004615007.tif 000021
【００２１】
【数１６】
0004615007.tif 000022
【００２２】
【数１７】
0004615007.tif 000023
【００２３】
【数１８】
0004615007.tif 000024
【００２４】
【数１９】
0004615007.tif 000025
【００２５】
【数２０】
0004615007.tif 000026
【００２６】
【数２１】
0004615007.tif 000027
【００２７】
【数２２】
0004615007.tif 000028
【００２８】
【数２３】
0004615007.tif 000029
【００２９】
【数２４】
0004615007.tif 000030
【００３０】
【数２５】
0004615007.tif 000031
【００３１】
【数２６】
0004615007.tif 000032
【００３２】
【数２７】
0004615007.tif 000033
【００３３】
【数２８】
0004615007.tif 000034
【００３４】
【数２９】
0004615007.tif 000035
【００３５】
【数３０】
0004615007.tif 000036
【００３６】
【数３１】
0004615007.tif 000037
【００３７】
【数３２】
0004615007.tif 000038
【００３８】
【数３３】
0004615007.tif 000039
【００３９】
【数３４】
0004615007.tif 000040
【００４０】
【数３５】
0004615007.tif 000041
【００４１】
【数３６】
0004615007.tif 000042
【００４２】
【数３７】
0004615007.tif 000043
【００４３】
【数３８】
0004615007.tif 000044
【００４４】
【数３９】
0004615007.tif 000045
【００４５】
【数４０】
0004615007.tif 000046
【００４６】
【数４１】
0004615007.tif 000047
【００４７】
【数４２】
0004615007.tif 000048
【００４８】
【数４３】
0004615007.tif 000049
【００４９】
【数４４】
0004615007.tif 000050
【００５０】
【数４５】
0004615007.tif 000051
【００５１】
【数４６】
0004615007.tif 000052
【００５２】
【数４７】
0004615007.tif 000053
【００５３】
【数４８】
0004615007.tif 000054
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１Ａ】図１Ａは、ヒトＰＳＣＡ（ＡＴＣＣ寄託番号２０９６１２）をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列（Ａ）（配列番号：１）および翻訳されたアミノ酸配列（Ｂ）（配列番号：２）である。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ヒトＰＳＣＡ（ＡＴＣＣ寄託番号２０９６１２）をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列（Ａ）（配列番号：１）および翻訳されたアミノ酸配列（Ｂ）（配列番号：２）である。
【図２】図２は、マウスのＰＳＣＡ相同体（配列番号：４）をコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列（配列番号：３）である。
【図３】図３は、ヒトＰＳＣＡ（配列番号：２）、マウスＰＳＣＡ（配列番号：６）およびヒト幹細胞抗原−２（ｈＳＣＡ−２）（配列番号：５）のアミノ酸配列を並べたものである。斜線の領域は、保存されたアミノ酸を  強調している。保存されたシステインは、太字で示した。ＰＳＣＡ中の４個の予想されたＮ−グリコシル化部位は、アスタリクスで示した。このタンパク質の最  初および最後の下線を付けたアミノ酸は各々、Ｎ−末端の疎水性シグナル配列およびＣ−末端のＧＰＩ−アンカー配列を表わしている。
【図４】図４は、ヒトＰＳＣＡの疎水性のプロットである。
【図５】図５は、ヒトＰＳＣＡのＣｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ分析である。
【図６】図６は、様々な前立腺癌細胞株および異種移植片におけるＰＳＣＡ発現のＲＴ−ＰＣＲ分析である。
【図７】図７は、正常および癌性の組織におけるＰＳＣＡ  ｍＲＮＡの制限された発現である。Ａ：正常ヒト組織におけるＰＳＣＡ発現のＲＴ−ＰＣＲ分析は、前立腺、胎盤および扁桃腺において高い発現を示している。  示された組織由来の逆転写された第一のｃＤＮＡ鎖（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）１ｎｇを、ＰＳＣＡ遺伝子に特異的なプライマーで増幅した。データは、３０サイクルの増幅を示している。Ｂ：ＰＳＣＡ発現のＲＴ−ＰＣＲ分析は、前立腺癌異種移植片および正常組織において高レベルを示している。示された組織由来の逆  転写ｃＤＮＡ５ｎｇは、ＰＳＣＡ遺伝子に特異的なプライマーで増幅した。β−アクチン遺伝子に特異的なプライマーによる増幅は、様々な試料のｃＤＮＡ第一  鎖が正常であることを示している。データは、２５サイクルの増幅を示している。ＡＤ、アンドロゲン依存型；ＡＩ、アンドロゲン非依存型；ＩＴ、脛骨内異種  移植片；Ｃ．Ｌ．、細胞株。
【図８】図８は、ヒトＰＳＣＡ、マウスのＰＳＣＡおよびヒトＴｈｙ−１／Ｌｙ−６遺伝子構造の概略図である。
【図９】図９は、ＰＳＣＡ発現のノーザンブロット分析である。Ａ：正常な前立腺およびＬＡＰＣ−４アンドロゲン依存型（ＡＤ）および非依存型（ＡＩ）の前立腺癌異  種移植片由来のＲＮＡ全体は、ＰＳＣＡまたはＰＳＡに特異的なプローブを用いて分析した。同等のＲＮＡの負荷およびＲＮＡの完全性を、１８Ｓおよび２８Ｓ  ＲＮＡのエチジウム染色により個別に示した。Ｂ：ヒトの複数の組織のＰＳＣＡノーザンブロット分析。フィルターは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）から入手し、各列はポリＡ  ＲＮＡを２μｇ含有する。
【図１０】図１０は、前立腺癌異種移植片および腫瘍細胞株におけるＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、およびＰＳＡの発現のノーザンブロットでの比較である。ＰＳＣＡおよび  ＰＳＭＡは高レベルの前立腺癌に特異的な遺伝子発現を示した。示された組織由来の総ＲＮＡ  １０μｇを、アガロース／ホルムアルデヒドゲル上でサイズ分画してニトロセルロースに転写し、かつ３２Ｐで標識したプローブと順次ハイブリダイゼーションし、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、およびＰＳＡのｃＤＮＡ断片を示した。４時間および７２時間後の膜のオートラジオグラフィー暴露を示し、かつ臭化エチジウムゲルは、試料が等量負荷されたことを示している。ＢＰＨ、良性前立腺肥大症；ＡＤ、アンドロゲン依存型；ＡＩ、アンドロゲン非依存型；ＩＴ、脛骨内異種移植片；Ｃ．Ｌ．、細胞株。
【図１１】図１１は、正常および悪性前立腺標本上のヒトＰＳＣＡのアンチセンスリボプローブによるインサイチューハイブリダイゼーションである。Ａ：ＰＳＣＡは、基  底細胞上皮内の基底細胞サブセットによって発現される（黒色矢印）が、前立腺管の内壁（ｌｉｎｉｎｇ）の最終分化した分泌細胞によっては発現されない（×  ４００倍）。Ｂ：倍率×４０で、ＰＳＣＡは、高度の前立腺上皮内新生腫瘍（ＰＩＮ）（黒色矢印）および侵襲性前立腺癌腺（黄色矢印）によって強力に発現さ  れるが、正常な上皮においては検出されない（緑色矢印）。Ｃ：高度の癌腫におけるＰＳＣＡの強力な発現（×２００倍）。
【図１２】図１２は、ＰＳＣＡの生化学的分析である。Ａ：ＰＳＣＡは、「材料および方法」に示したよ  うに、ＰＳＣＡ構築物で一過性にトランスフェクションした２９３Ｔ細胞から免疫沈降し、その後Ｎ−グリコシダーゼＦまたはＯ−グリコシダーゼのいずれかに  より消化した。Ｂ：ＰＳＣＡは、トランスフェクションした２９３Ｔ細胞から、更にこれらの細胞の馴化培地（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ  ｍｅｄｉａ）から免疫沈降した。１５％ポリアクリルアミドゲル上で、細胞に結合したＰＳＣＡは、分泌されたＰＳＣＡよりも大きく移動した。Ｃ：親和性精製  したポリクローナル抗ＰＳＣＡ抗体を用いる、模擬（ｍｏｃｋ）トランスフェクションした２９３Ｔ細胞、ＰＳＣＡトランスフェクションした２９３Ｔ細胞およ  びＬＡＰＣ−４前立腺癌異種移植片細胞のＦＡＣＳ分析である。細胞は、表面の発現のみを検出するために透過させ（ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚｅ）なかった。ｙ  軸は、相対的細胞数を表わし、Ｘ軸は対数スケールでの蛍光染色強度を表わしている。
【図１３】図１３は、ビオチン標識したＰＳＣＡプローブの、フィトヘムアグルチニン（ｐｈｙｔｏｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ）で刺激した末梢血リンパ球由来のヒト中  期細胞への、インサイチューハイブリダイゼーションである。第８相同染色体を矢印で示し；特異的標識が８ｑ２４．２に認められた。挿入図は、８ｑ２４．２  に（矢印の先）に特異的標識を示す２個の第８相同染色体の部分的核型を示している。画像は、冷却した電荷結合素子（ＣＣＤ）カメラを装着したＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｐｏｔ顕微鏡を用いて得た。ＤＡＰＩで染色された染色体およびハイブリダイゼーションシグナルの個別の画像は、画像解析ソフト（ＮＵ２００およびＩｍａｇｅ  １．５７）を用いて合体した。
【図１４】図１４は、抗−ＰＳＣＡモノクローナル抗体１Ｇ８（緑）および３Ｅ６（赤）、マウスの抗−ＰＳＣＡポリクローナル血清（青）、または対照の第二抗体（黒）  を用いる、前立腺癌異種移植片（ＬＡＰＣ−９）、前立腺癌細胞株（ＬＡＰＣ−４）および正常な前立腺上皮細胞（ＰＲＥＣ）上の、細胞表面ＰＳＣＡ発現のフ  ローサイトメトリー分析である。詳細は実施例５を参照のこと。
【図１５】図１５は、抗−ＰＳＣＡモノクローナル抗体１Ｇ８および３Ｅ６のエピトープマッピングである。詳細は実施例５を参照のこと。
【図１Ａ】
0004615007.tif 000056
【図１Ｂ】
0004615007.tif 000057
【図２】
0004615007.tif 000058
【図３】
0004615007.tif 000059
【図４】
0004615007.tif 000060
【図５】
0004615007.tif 000061
【図６】
0004615007.tif 000062
【図７】
0004615007.tif 000063
【図８】
0004615007.tif 000064
【図９】
0004615007.tif 000065
【図１０】
0004615007.tif 000066
【図１１】
0004615007.tif 000067
【図１２】
0004615007.tif 000068
【図１３】
0004615007.tif 000069
【図１４】
0004615007.tif 000070
【図１５】
0004615007.tif 000071
【配列表】
0004615007000001.app