(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0004733836.tif 000006
（式中、
Ｒ１は非置換の、または、Ｃ１−４アルキル、ＯＲ’、Ｎ（Ｒ’）２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣＦ３により置換されるベンズイミダゾリルもしくはピリジニルであり、ここでＲ’はＨまたはＣ１−６アルキルである；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−６アルキルまたはＡｒ−Ｃ０−６アルキルであり；
ＸはＨ、Ｃ１−４アルキル、ＯＲ’、ＳＲ’、Ｃ１−４アルキルスルホニル、Ｃ１−４アルキルスルホキシル、ＣＮ、Ｎ（Ｒ’）２、ＣＨ２Ｎ（Ｒ’）２、ＮＯ２、ＣＦ３、ＣＯ２Ｒ’、ＣＯＮ（Ｒ’）２、ＣＯＲ’、ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣＦ３Ｓ（Ｏ）ｒ−であり；
Ｒ’はＨ、Ｃ１−６アルキルまたはＡｒ−Ｃ０−６アルキルであり；および
ｒは０、１または２である）
の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項２】
Ｒ２がＨ、Ｃ１−６アルキルまたはフェニル−Ｃ０−６アルキルであり、ここでフェニルは非置換であるか、または、メチレンジオキシにより、もしくはＣ１−４アルキル、ＯＲ’’、ＣＯ２Ｒ’、Ｎ（Ｒ’）２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩおよびＣＦ３から成る群から選択される１ないし３個の置換基により置換され、Ｒ’はＨまたはＣ１−６アルキルであり、Ｒ’’はＨ、Ｃ１−６アルキルまたはベンジルである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
ＸがＨ、Ｃ１−４アルキル、ＯＲ’、ＣＮ、Ｎ（Ｒ’）２、ＮＯ２、ＣＦ３、ＣＯ２Ｒ’、ＣＯＮ（Ｒ’）２、ＣＯＲ’、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩであり、ここでＲ’はＨまたはＣ１−６アルキルである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
２−ベンゾイル−９−メチル−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−ベンゾイル−９−［（４−ベンジルオキシフェニル）メチル］−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−ベンゾイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（３，４−メチレンジオキシ）ベンゾイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（２−ヒドロキシ）ベンゾイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（３−イミダゾ）ベンゾイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（６−ヒドロキシ）ニコチノイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（６−アミノ）ニコチノイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（３−アミノ）ベンゾイル−９−メチル−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（４−ヒドロキシ）ベンゾイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（４−メチルアミノ）ベンゾイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（４−アミノ）ベンゾイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（４−クロロ）ベンゾイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（４−ヒドロキシ）ベンゾイル−９−［（４−トリフルオロメチルフェニル）メチル］−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（３，５−ジクロロ−４−ヒドロキシ）ベンゾイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（３−クロロ−４−ヒドロキシ）ベンゾイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
メチル４−（｛２−［（４−ヒドロキシフェニル）カルボニル］−１，２，３，４−テトラヒドロベータ−カルボリン−９−イル｝メチル）ベンゾエート；
２−（４−クロロ−２−ヒドロキシ）ベンゾイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（５−クロロ−２−ヒドロキシ）ベンゾイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（４−ヒドロキシ）ベンゾイル−９−［（４−フルオロフェニル）メチル］１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（３−クロロ−４−ヒドロキシ）ベンゾイル−９−［（４−フルオロフェニル）メチル］１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（３，５−ジクロロ−４−ヒドロキシ）ベンゾイル−９−［（４−フルオロフェニル）メチル］１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
２−（３−クロロ−４−ヒドロキシ）ベンゾイル−９−［（４−トリフルオロメチルフェニル）メチル］１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；または
２−（２−ヒドロキシ−４−メチル）ベンゾイル−９−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］１，３，４，９−テトラヒドロ−２Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール；
の化合物または医薬上許容されるその塩。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
(技術分野)
本発明はＦａｂＩを阻害し、細菌感染の治療に有用な医薬上活性な化合物に関する。
【０００２】
(従来技術)
飽和脂肪酸の生合成の全体の経路はすべての生物で類似しているが、脂肪酸シンターゼ(ＦＡＳ)系はその構造組成に関して大いに異なっている。脊椎動物および酵母は、すべての酵素活性が１または２本のポリペプチド鎖上に各々コードされており、アシル担体蛋白(ＡＣＰ)がその複合体に欠くことのできない部分であるＦＡＳを有する。これに対し、細菌のＦＡＳでは、各反応は異なる一機能性酵素により触媒作用が引き起こされ、ＡＣＰは別個の蛋白である。従って、細菌系では抗菌剤による選択的阻害の可能性が大きい。
【０００３】
ＦａｂＩ(以前はＥｎｖＭと言われていた)は、細菌の脂肪酸生合成の各サイクルで関与する４つの反応の最後の工程で、エノイル−ＡＣＰレダクターゼ(Berglerら、(1994)、J.Biol.Chem.269、5493-5496)として機能する。この経路に関し、その第１工程は、マロニル-ＡＣＰをアセチル-ＣｏＡ(ＦａｂＨ、シンターゼＩＩＩ)と縮合させるβ-ケトアシル-ＡＣＰシンターゼにより触媒作用を受ける。次の段階で、マロニル-ＡＣＰは成長鎖アシル-ＡＣＰ(各々、ＦａｂＢおよびＦａｂＦ、シンターゼＩおよびＩＩ)と縮合する。伸長サイクルにおけるこの第２工程は、ＮＡＤＰＨ-依存性β-ケトアシル-ＡＣＰレダクターゼ(ＦａｂＧ)によるケトエステル還元である。次のβ-ヒドロキシアシル-ＡＣＰデヒドラーゼ(ＦａｂＡまたはＦａｂＺのいずれか)による脱水によりトランス-２-エノイル-ＡＣＰが得られ、これが順次、ＮＡＤＨ-依存性エノイル-ＡＣＰレダクターゼ(ＦａｂＩ)によりアシル-ＡＣＰに変換される。サイクル当たり２個の炭素原子を付加する、このサイクルのさらなる繰り返しで最終的にパルミトイル-ＡＣＰ(１６Ｃ)が得られ、そしてこのサイクルは主にパルミトイル-ＡＣＰ(Ｈeathら、(1996)、J.Biol.Chem. 271、1833-1836)によるＦａｂＩのフィードバック阻害を介して停止される。すなわち、ＦａｂＩは主たる生合成酵素であり、細菌の脂肪酸生合成の全合成経路における重要な調整点である。したがって、ＦａｂＩは抗菌処置のための理想的な標的である。
【０００４】
ジアザボリン抗生物質が脂肪酸、リン脂質およびリポ多糖類(ＬＰＳ)生合成を阻害し、これらの化合物の抗菌標的がＦａｂＩであることが研究により示されている。例えば、Grassbergerら、(1984)J. Med Chem 27 947-953に記載される誘導体２ｂ１８は、ＦａｂＩの非競合性阻害剤であると報告されている(Berglerら、(1994) J.Biol.Chem. 269、5493−5496)。また、ジアザボリン耐性エス・タイプヒムリウム(S. typhimurium)由来のＦａｂＩ遺伝子を含有するプラスミドはイー・コリ(E.coli)にジアザボリン耐性を付与した(Turnowskyら、(1989)J.Bacteriol.、171、6555−6565)。その上、ジアザボリンによるか、またはＦａｂＩ温度感受性変異体にて温度を上げることのいずれかによるＦａｂＩの阻害は致命的である。これらの結果はＦａｂＩが生物体の生存に不可欠であることを示している(Berglerら、(1994)J.Biol.Chem. 269、5493−5496)。
【０００５】
最近の研究により、ＦａｂＩが広域スペクトルの抗生物質トリクロザンの標的であることも明らかにされた(McMurryら、(1998) Nature 394、531-532)。ＮＡＤおよびトリクロザンと複合体形成したイー・コリＦａｂＩの結晶構造により、その天然基質を模倣することで、トリクロザンが部位方向性の非常に強力なＦａｂＩの阻害剤として作用することが示される(Levyら、(1999)Nature 398、383−384)。Wardら((1999)Biochem. 38、12514−12525)により、ジアザボリンと同様に、ＦａｂＩとトリクロザンの間の共有結合複合体の形成については何の証拠もないが、トリクロザンはＦａｂＩの可逆的阻害剤であるという点でこれらの化合物と異なることが明らかにされている。ＦａｂＩとＮＡＤおよびトリクロザンの複合体に関する構造データにより、治療標的としてのＦａｂＩについて重要な情報が提供される。
重要なことには、ある特定の化合物がＦａｂＩ阻害剤であり、抗菌活性を有し、従って、哺乳動物、特にヒトの細菌感染の治療に有用である可能性があることが今回見出された。
【０００６】
(発明の開示)
本発明は、以下に記載する、ＦａｂＩを阻害し、細菌感染の治療に有用な式(Ｉ)の化合物を含む。
本発明は、式(Ｉ)の化合物と医薬上許容される担体を含む医薬組成物も含む。
本発明は、ＦａｂＩを阻害することにより細菌感染を治療する方法も含む。個々の態様において、本発明の化合物は抗菌剤として有用である。
【０００７】
(発明を実施するための最良の形態)
本発明は、式(Ｉ)：
【０００８】
【化３】
0004733836.tif 000002
【０００９】
(式中、
Ｒ１はＡｒまたはＨｅｔ;
Ｒ２はＨ、Ｃ１-６アルキルまたはＡｒ-Ｃ０-６アルキル;
ＸはＨ、Ｃ１-４アルキル、ＯＲ'、ＳＲ'、Ｃ１-４アルキルスルホニル、Ｃ１-４アルキルスルホキシル、ＣＮ、Ｎ(Ｒ')２、ＣＨ２Ｎ(Ｒ')２、ＮＯ２、ＣＦ３、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮ(Ｒ')２、ＣＯＲ'、ＮＲ'Ｃ(Ｏ)Ｒ'、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣＦ３Ｓ(Ｏ)ｒ-;
Ｒ'はＨ、Ｃ１-６アルキルまたはＡｒ-Ｃ０-６アルキル;および、
ｒは０、１または２;)
の化合物またはその医薬上許容される塩を含む。
【００１０】
本発明の化合物の医薬上許容される酸付加塩および複合体もまた本発明に含まれる。本発明の化合物が１またはそれ以上のキラル中心を有する場合には、特記する場合を除き、本発明は、各独特なラセミ化合物、ならびに各独特な非ラセミ化合物を含む。
【００１１】
化合物が不飽和の炭素−炭素二重結合を有する場合には、シス(Ｚ)およびトランス(Ｅ)異性体は共に本発明の範囲内にある。化合物が互変異性体の形態、例えば、
【化４】
0004733836.tif 000003
のように、ケト−エノール互変異性体として存在する場合には、各互変異性体の形態は、平衡状態にて、またはＲ'で適当に置換された一の形態にて固定されて存在してもしなくても、本発明の範囲内に含まれるものとする。いずれか一の場合の置換基の意義は、他の場合のその意義または別の置換基の意義とは独立している。
【００１２】
本発明の化合物のプロドラッグも本発明の範囲内に含まれる。プロドラッグは、インビボにて式(Ｉ)による活性な親薬物を放出する、いずれかの共有結合した担体であると考えられる。
式(Ｉ)の化合物はＦａｂＩを阻害する。この酵素の阻害は細菌感染の治療に有用である。本発明の化合物は抗真菌剤としても有用である。別法として、該化合物を既知の抗生物質と組み合わせることも有用である。
【００１３】
式(Ｉ)に関して：
好ましくは、Ｒ１は非置換のフェニルまたは、メチレンジオキシもしくはＣ１-４アルキル、ＯＲ'、Ｎ(Ｒ')２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩおよびＣＦ３(ここで、Ｒ'はＨまたはＣ１-６アルキルである)から成る群から選択される１ないし３個の置換基により置換されるフェニルである。
別に、Ｒ１は非置換のベンズイミダゾルイルもしくはピリジニルまたは、Ｃ１-４アルキル、ＯＲ'、Ｎ(Ｒ')２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣＦ３(ここで、Ｒ'はＨまたはＣ１-６アルキルである)により置換されるベンズイミダゾルイルもしくはピリジニルである。
【００１４】
好ましくは、Ｒ２はＨ、Ｃ１-６アルキルまたはフェニル-Ｃ０-６アルキルであり、ここで、フェニルは非置換であるか、またはメチレンジオキシにより、もしくはＣ１-４アルキル、ＯＲ"、ＣＯ２Ｒ'、Ｎ(Ｒ')２、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩおよびＣＦ３(ここで、Ｒ'はＨまたはＣ１-６アルキルであり、Ｒ"はＨ、Ｃ１-６アルキルまたはベンジルである)から成る群から選択される１ないし３個の置換基により置換される。
好ましくは、ＸはＨ、Ｃ１-４アルキル、ＯＲ'、ＣＮ、Ｎ(Ｒ')２、ＮＯ２、ＣＦ３、ＣＯ２Ｒ'、ＣＯＮ(Ｒ')２、ＣＯＲ'、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり、ここで、Ｒ'はＨまたはＣ１-６アルキルである。
本発明の新規化合物の代表例は、以下の実施例１-２４に示す化合物である。
【００１５】
ペプチドおよび化学の分野にて共通して使用される略号および符号を本明細書にて利用し、本発明の化合物を記載する。一般に、アミノ酸の略号は、Eur. J. Biochem. 158、9(1984)に記載されるように、IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclatureに従う。
本明細書中で利用するＣ１-４アルキルは、炭素原子数１〜４の置換されていてもよいアルキル基を意味し、メチル、エチル、ｎ-プロピル、イソプロピル、ｎ-ブチル、イソブチルおよびｔ-ブチルを包含する。Ｃ１-６アルキルはさらに、ペンチル、ｎ-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチルおよびヘキシルならびにその簡単な脂肪族異性体を包含する。Ｃ０-４アルキルおよびＣ０-６アルキルはさらに、アルキル基が存在する必要のないことを意味する(例えば、共有結合のあることを意味する)。
【００１６】
いずれのＣ１-４アルキルまたはＣ１-６アルキルもＲｘ、ここで、Ｒｘは安定構造をもたらすいずれの炭素原子上にあってもよく、かつ慣用されている合成方法により入手できる、で置換されていてもよい。Ｒｘについての適当な基は、Ｃ１-４アルキル、ＯＲ'、ＳＲ'、Ｃ１-４アルキルスルホニル、Ｃ１-４アルキルスルホキシル、アリールスルホニル、アリールスルホキシル、Ｃ１-４アルキルスルホンアミド、アリールスルホンアミド、-ＣＮ、Ｎ(Ｒ')２、ＣＨ２Ｎ(Ｒ')２、-ＮＯ２、-ＣＦ３、-ＣＯ２Ｒ'-ＣＯＮ(Ｒ')２、-ＣＯＲ'、-ＮＲ'Ｃ(Ｏ)Ｒ'、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、またはＣＦ３Ｓ(Ｏ)ｒ-であり、ここでＲ’およびｒは式（Ｉ）の化合物に関して定義するものである。
【００１７】
ハロゲンまたはハロはＦ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩを意味する。
本明細書にて用いるＡｒまたはアリールは、フェニルもしくはナフチルまたは、１-３個の置換基、アルキルに関して前で定義したものなどで置換されているフェニルもしくはナフチル、またはメチレンジオキシにより置換されているフェニルもしくはナフチルを意味する。
Ｈｅｔまたはヘテロサイクルは、窒素、酸素または硫黄の群より選択される、安定であり、かつ、慣用されている化学合成により入手できる１〜３個のヘテロ原子を含有する、置換されていてもよい５もしくは６員の単環式環、または９もしくは１０員の二環式環を意味する。代表的なヘテロサイクルは、ベンゾフリル、ベンズイミダゾルイル、ベンゾピラニル、ベンゾチエニル、フリル、イミダゾルイル、インドリニル、モルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピロールイル、ピロリジニル、テトラヒドロピリジニル、ピリジニル、チアゾールイル、チエニル、キノリニル、イソキノリニルならびにテトラ-およびペルヒドロ-キノリニルおよびイソキノリニルである。化学合成により入手できかつ安定なＨｅｔ環上の３個までの置換基、アルキルに関して前で定義した基など、の許容される組み合わせはいずれも本発明の範囲内である。
【００１８】
本明細書においては特定の基を省略形で表す。ｔ-Ｂｕはターシャルブチル基をいい、Ｂｏｃはｔ-ブチルオキシカルボニル基をいい、Ｆｍｏｃはフルオレニルメトキシカルボニル基をいい、Ｐｈはフェニル基をいい、Ｃｂｚはベンジルオキシカルボニル基をいい、Ｂｎはベンジル基をいい、Ｍｅはメチルをいい、Ｅｔはエチルをいい、Ａｃはアセチルをいい、ＡｌｋはＣ１-４アルキルをいい、Ｎｐｈは１-または２-ナフチルをいい、ｃＨｅｘはシクロへキシルをいう。Ｔｅｔは５-テトラゾリルをいう。
【００１９】
本明細書においては特定の試薬を省略形で表す。ＤＣＣはジシクロヘキシルカルボジイミドをいい、ＤＭＡＰはジメチルアミノピリジンをいい、ＥＤＣは１-(３-ジメチルアミノプロピル)-３-エチルカルボジイミド塩酸塩をいい、ＨＯＢｔは１-ヒドロキシベンゾトリアゾールをいい、ＴＨＦはテトラヒドロフランをいい、ＤＩＥＡはジイソプロピルエチルアミンをいい、ＤＥＡＤはジエチルアゾジカルボキシレートをいい、ＰＰｈ３はトリフェニルホスフィンをいい、ＤＩＡＤはジイソプロピルアゾジカルボキシレートをいい、ＤＭＥはジメトキシエタンをいい、ＤＭＦはジメチルホルムアミドをいい、ＮＢＳはＮ-ブロモスクシンイミドをいい、Ｐｄ/Ｃは炭素上パラジウム触媒をいい、ＰＰＡはポリリン酸をいい、ＤＰＰＡはジフェニルホスホリルアジドをいい、ＢＯＰはベンゾトリアゾール-１-イルオキシ-トリス(ジメチル-アミノ)ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩をいい、ＨＦはフッ化水素酸をいい、ＴＥＡはトリエチルアミンをいい、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸をいい、ＰＣＣはクロロギ酸ピリジニウムをいう。
【００２０】
式(Ｉ)の化合物は、通常、式(ＩＩ)の化合物と式(ＩＩＩ)の化合物：
【化５】
0004733836.tif 000004
(式中、Ｒ１、Ｒ２およびＸは式(Ｉ)に定義するものであり、全反応基はＥＤＣおよびＨＯＢＴの存在下で保護される)
を反応させてその後全保護基を除去し、そして医薬上許容される塩を形成することにより調製される。
特に、式(Ｉ)の化合物はスキームＩに記載する一般法により調製される。
【００２１】
【化６】
0004733836.tif 000005
【００２２】
試薬および条件：(ａ)Ｎ-(ベンジルオキシカルボニル)オキシスクシンイミド、Ｅｔ３Ｎ、ＤＭＦ;(ｂ)４-ベンジルオキシベンジルクロライド、ＮａＨ、ＤＭＦ;(ｃ)Ｈ２、１０％Ｐｄ/Ｃ、ＨＣｌ、ＭｅＯＨ、ジオキサン;(ｄ)４-ヒドロキシ安息香酸、ＥＤＣ、ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ、(ｉ-Ｐｒ)２ＮＥｔ、ＤＭＦ。
【００２３】
市場入手可能な１,２,３,４-テトラヒドロ-９Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール(Ｉ-１)をピペリジン窒素下、適当な保護基、例えばベンジルオキシカルボニル(Ｃｂｚ)基で保護してＩ-２を得る。反応基を覆う保護基の使用は当業者によく知られており、他の保護基はGreene,「有機合成における保護基」(Wiley-Interscienceにより出版)のような標準的な引用文献に記載されている。インドール窒素を適当に、例えばアルキル基、アリールアルキル基、アシル基またはスルホニル基を用いて官能基化し、Ｎ-置換誘導体を得る。例えば、インドール窒素を適当なハロゲン化ベンジル誘導体、例えば４-ベンジルオキシベンジルクロライドを用いてアルキル化して、ベンジル化誘導体Ｉ-３を得ることができる。アルキル化反応には一般に、強塩基、例えば水素化ナトリウム、ＬＤＡまたはＬｉＮ(ＴＭＳ)２を用いるインドールの脱プロトン化が必要であり、典型的には極性、非プロトン性溶媒、通常ＴＨＦ、ＤＭＦまたはその混合液中で行う。Ｃｂｚ保護基を酸性条件下、触媒量の活性炭素上金属パラジウム(Ｐｄ/Ｃ)の存在下での水素化により除去し、塩化水素アミンＩ-４が提供される。Ｃｂｚ保護基の除去のための他の常套法は、Greene(前記)により開示されている。アミン誘導体を次いで、適当なカルボン酸の活性誘導体を用いる反応によりアミドＩ-５に変換する。例えば、４-ヒドロキシ安息香酸をＥＤＣおよびＨＯＢｔを用いる反応により活性形態に変換し、活性形態をＤＭＦ、ＣＨ２Ｃｌ２またはＣＨ３ＣＮのような適当な溶媒中でアミンＩ-４と次いで反応させる。いずれの酸の中和が必要とされているかにより、塩基、例えばトリエチルアミン(Ｅｔ３Ｎ)、ジイソプロピルエチルアミン((ｉ-Ｐｒ)２ＮＥｔ)またはピリジンなどを用いることができる。
【００２４】
カルボン酸をアミドに変換する多くの追加的方法は公知であり、また、常套の引用文献、例えば本明細書中、引用により組み込む「有機合成法の概論」、Vol.I-VI(Wiley-Interscienceにより出版)またはBodansky、「ペプチド合成の実施」(Springer-Verlagにより出版)に見ることができる。
本明細書で用いるアミドカップリング試薬は、ペプチド結合を形成するのに用いることができる試薬を意味する。典型的なカップリング方法は、カルボジイミド、活性化無水物およびエステル、ならびにハロゲン化アシルを用いる。典型的な試薬はＥＤＣ、ＤＣＣ、ＤＰＰＡ、ＰＰＡ、ＢＯＰ試薬、ＨＯＢt、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミドおよび塩化オキサリルなどの試薬である。
【００２５】
典型的には、１-ヒドロキシベンゾトリアゾール(ＨＯＢt)およびジメチルアミノピリジン(ＤＭＡＰ)などの触媒の任意存在下で、Ｎ,Ｎ'-ジシクロヘキシルカルボジイミド(ＤＣＣ)などの適当なカルボジイミドカップリング剤を用いて、アミンを、その遊離アミノ基を介して適当なカルボン酸基質にカップリングさせる。適宜保護された酸基質の遊離カルボキシルの活性化エステル、無水物または酸ハロゲン化物を形成し、その後、任意に塩基の存在下で遊離アミンと反応させるような他の方法も適している。例えば、Ｎ-メチルモルホリン、ＤＭＡＰまたはトリアルキルアミンなどの塩基の存在下、塩化メチレンまたはテトラヒドロフラン(ＴＨＦ)などの無水溶媒中、安息香酸をクロロギ酸イソブチルと反応させて「活性化無水物」を形成し、その後にこれを遊離アミンと反応させる。
【００２６】
化合物の酸付加塩は、適当な溶媒中、標準的な方法にて、親化合物と過剰量の酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、コハク酸またはメタンスルホン酸から調製される。特定の化合物は内部塩または両性イオン物を形成し、それらも許容することができる。カチオン性塩は、親化合物を、適当なカチオンを含有する、過剰量のアルカリ性試薬、例えば、水酸化物、炭酸化物またはアルコキシドと、あるいは適当な有機アミンと反応させることにより調製される。Ｌi＋、Ｎa＋、Ｋ＋、Ｃa＋＋、Ｍg＋＋およびＮＨ４＋などのカチオンが、医薬上許容される塩中に存在するカチオンの適当な例である。
【００２７】
本発明は、式(Ｉ)の化合物と医薬上許容される担体を含む医薬組成物も提供する。従って、式(Ｉ)の化合物は医薬の製造において用いることができる。前記に従って調製した式(Ｉ)の化合物の医薬組成物は、非経口投与用の液剤または凍結乾燥散剤として処方することができる。散剤は使用前に適当な希釈剤または他の医薬上許容される担体を添加することにより復元されてもよい。液体処方は緩衝化等張水溶液であってもよい。適当な希釈剤の例としては、通常の等張生理食塩水、標準５％デキストロース水溶液または緩衝化酢酸ナトリウムまたは酢酸アンモニウム溶液が挙げられる。かかる処方は特に非経口投与に適しているが、経口投与に用いてもよく、あるいは吸入用の計量吸引器または吸入器に含めることもできる。ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ヒドロキシセルロース、アカシア、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムなどの賦形剤を添加することが望ましい。
【００２８】
別法として、これらの化合物をカプセル化または錠剤化してもよく、あるいは経口投与用のエマルジョンまたはシロップにて調製してもよい。組成物を強化または安定化するのに、あるいは組成物の調製を容易にするのに医薬上許容される固体または液体担体を添加してもよい。固体担体として、澱粉、ラクトース、硫酸カルシウム二水和物、白土、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸、タルク、ペクチン、アカシア、寒天またはゼラチンが挙げられる。液体担体として、シロップ、落花生油、オリーブ油、塩水および水が挙げられる。担体は、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの徐放性物質を単独で、またはワックスと共に含んでもよい。固体担体の量は変化するが、好ましくは単位用量当たり約２０ｍｇ〜約１ｇである。医薬調製物は、錠剤形態の場合、粉砕し、混合し、造粒し、要すれば圧縮するか;あるいはハードゼラチンカプセル形態の場合、粉砕し、混合し、そして充填することを含む、製薬における慣用的技法に従って調製される。液体担体を用いる場合、調製物はシロップ、エリキシル、エマルジョンあるいは水性または非水性懸濁液の形態であろう。そのような液体処方は直接経口投与してもよく、あるいはソフトゼラチンカプセルに充填してもよい。
【００２９】
直腸投与の場合、本発明の組成物は、カカオバター、グリセリン、ゼラチンまたはポリエチレングリコールなどの賦形剤と組み合わせ、坐剤に成型してもよい。
局所投与の場合、本発明の化合物を希釈剤と組み合わせ、軟膏、ゲル、ペースト、クリーム、散剤またはスプレーの形態にしてもよい。軟膏、ゲル、ペーストまたはクリームである組成物は、希釈剤、例えば、動物または植物油、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、珪酸、タルクおよび酸化亜鉛またはこれら物質の混合物を含有する。散剤またはスプレーである組成物は、希釈剤、例えば、ラクトース、タルク、珪酸、水酸化アルミニウム、珪酸カルシウムおよびポリアミド粉末またはそれら物質の混合物を含有する。加えて、局所的眼科的投与の場合、典型的な担体は水、水と水混和性溶媒、例えば、低級アルカノールの混合液、または植物油、および水溶性非毒性ポリマー、例えば、メチルセルロースなどのセルロース誘導体である。
【００３０】
本明細書に記載の化合物はＦａｂＩの阻害剤であり、細菌感染の治療に有用である。例えば、これらの化合物は細菌感染、例えば、上気道(例えば、中耳炎、細菌性気管炎、急性咽頭蓋炎、甲状腺炎)、下気道(例えば、蓄膿症、肺膿瘍)、心臓(例えば、感染性心内膜炎)、胃腸(例えば、分泌性下痢、脾臓膿瘍、腹膜後膿瘍)、ＣＮＳ(例えば、大脳膿瘍)、眼(例えば、眼瞼炎、結膜炎、角膜炎、眼内炎、前中隔および眼窩蜂巣炎、涙嚢炎)、腎および尿管(例えば、副睾丸炎、腎内および腎周囲膿瘍、毒ショック症候群)、皮膚(例えば、膿痂疹、毛嚢炎、皮膚膿瘍、蜂巣炎、創傷感染、細菌性筋炎)、ならびに骨および関節(例えば、敗血症性関節炎、骨髄炎)の感染の治療に有用である。また、本発明の化合物は抗真菌剤としても有用である。加えて、該化合物は既知の構成物質と組み合わせて用いてもよい。
【００３１】
本発明の化合物は、薬物濃度が細菌感染の治療に十分であるように、患者に投与される。該化合物を含有する医薬組成物は、約１０ｍｇと約１０００ｍｇの間の一回経口用量で、一日に１回または数回、患者の症状に合わせて投与される。好ましくは、経口用量は約５０ｍｇ〜約５００ｍｇであるが、その用量は患者の年齢、体重および徴候に応じて変えることができる。急性治療の場合、非経口投与が好ましい。５％デキストロース水溶液または生理食塩水中の式(Ｉ)の化合物の静脈内注入あるいは適当な賦形剤との同様の処方が最も好ましいが、筋肉内ボーラス注射もまた有用である。化合物を投与する正確なレベルおよび方法は当業者により容易に決定される。
本発明の化合物をいくつかの生物学的アッセイの一つで試験し、所定の薬理学的効果を得るのに必要とされる化合物の濃度を決定することができる。
【００３２】
エス・アウレウスＦａｂＩのクローニング
ｆａｂＩ遺伝子をポリメラーゼ連鎖反応を用いてエス・アウレウス株ＷＣＵＨ２９の染色体ＤＮＡよりクローン化した。ＴａｑＤＮＡポリメラーゼ(ＢＲＬ)および以下のプライマー：
５'−ＣＧＣＣＴＣＧＡＧＡＴＧＴＴＡＡＡＴＣＴＴＧＡＡＡＡＣＡＡＡＡＣＡＴＡＴＧＴＣ−３'および５'−ＣＧＣＧＧＡＴＣＣＡＡＴＣＡＡＧＴＣＡＧＧＴＴＧＡＡＡＴＡＴＣＣＡ−３'(ＸｈｏＩおよびＢａｍＨＩ部位に下線を付す)を用いて増幅を行った。ついで、得られたフラグメントをＸｈｏＩおよびＢａｍＨＩで消化し、ＸｈｏＩ-およびＢａｍＨＩ-消化の発現ベクターｐＥＴ-１６ｂ(Novagen)にライゲートし、ｐＥＴ-Ｈｉｓ１０-ｆａｂＩを得た。ｆａｂＩの遺伝子配列をApplied Biosystemsのモデル３７７装置を用いて自動サイクルの配列決定により確認した。ｐＥＴ-Ｈｉｓ１０-ｆａｂＩをＮｃｏＩおよびＮｄｅＩで消化し、Ｈｉｓ１０タグをコードする９７ｂｐフラグメント、ファクターＸａ切断部位およびＦａｂＩの最初の８個のアミノ酸を除去し、そしてそれをＦａｂＩの最初の８個のアミノ酸と、初発因子のメチオニンおよび２位のリジンの間にあるグリシン残基をコードするリンカーと置き換えることでｐＥＴ-ｆａｂＩのタグのないバージョンを構築した。このプラスミドをｐＥＴ-ｆａｂＩと称する。以下の２種のオリゴヌクレオチド：
５'−ＣＡＴＧＧＧＣＴＴＡＡＡＴＣＴＴＧＡＡＡＡＣＡＡＡＡＣＡ−３'および５'−ＴＡＴＧＴＴＴＴＧＴＴＴＴＣＡＡＧＡＴＴＴＡＡＧＣＣ−３'
をアニーリングすることでリンカーを調製した。ｐＥＴ-ｆａｂＩのリンカー配列をジデオキシ配列決定により確認した。化合物の評価には未変性ＦａｂＩだけを使用した。未変性ＦａｂＩを過剰に産生するために、プラスミドｐＥＴ-ｆａｂＩをＢＬ２１(ＤＥ３)(Novagen)細胞にトランスフォームし、株ＢＬ２１(ＤＥ３)：ｐＥＴ-ｆａｂＩを形成した。
【００３３】
エス・アウレウスＦａｂＩの精製
細胞蛋白全体の１０％まで、可溶性蛋白としてエス・アウレウスＦａｂＩを発現させ、トリプトンホスフェート培地の１５Ｌの発酵槽より４００ｇの細胞を回収した。その細胞を溶菌させ、試料を遠心分離に付した。得られた上清を、３つの連続したクロマトグラフィーカラム：イオン交換(Sourse15Q)、ダイ−アフィニティー(Blue sepharose)およびサイズ排除クロマトグラフィーカラム(Superose12)を用いて濾過および精製した。各カラムに付した後、ＦａｂＩ含有フラクションをプールし、濃縮し、純度および生物活性をチェックした。
【００３４】
イー・コリＦａｂＩのクローニング
イー・コリＦａｂＩについて正確な大きさを有するＰＣＲフラグメントをイー・コリ染色体ＤＮＡよりＰＣＲ増幅に付し、ＴＯＰＯ・ＴＡクローニングベクターにサブクローニングし、コロニーＰＣＲ＋制限エンドヌクレアーゼ分析により確認した。推定イー・コリＦａｂＩ・ＰＣＲフラグメントを発現ベクターｐＢｌｕｅＰｅｔにサブクローンした。ＦａｂＩクローンをイー・コリ株ＢＬ２１(ＤＥ３)にトランスフォームした。小規模の発現実験により、イー・コリＦａｂＩの正確な分子量(〜２８Ｋｄａ)の過剰発現した蛋白バンド、これは、ＳＤＳ・ＰＡＧＥゲルのクマシー染色後に肉眼で明瞭に観察できる、が示される。イー・コリＦａｂＩ発現構築物のＤＮＡ配列決定により、エラーのないことが明らかにされた。Ｎ'末端アミノ酸配列決定により、過剰発現した蛋白バンドがイー・コリＦａｂＩであることが確認された。
【００３５】
イー・コリＦａｂＩの精製
細胞蛋白全体の１５％まで可溶性蛋白としてイー・コリＦａｂＩを発現させ、振とうフラスコ中、修飾ブロスの３Ｌの発酵槽より１２０ｇの細胞を回収した。その細胞を溶菌させ、試料を遠心分離に付した。得られた上清を濾過し、３つの連続したクロマトグラフィーカラム：イオン交換(Sourse15Q)、ダイ-アフィニティー(blue sepharose)およびサイズ排除クロマトグラフィー(superose12)を用いて精製した。各カラムに付した後、ＦａｂＩ含有フラクションをプールし、濃縮し、純度および生物活性をチェックした。
【００３６】
エス・アウレウスＦａｂＩ酵素阻害アッセイ(ＮＡＤＨ)：
アッセイは９６-ウェルマイクロタイタープレートの半分の領域で行った。１００ｍＭのＮaＡＤＡ、pＨ６.５(ＡＤＡ＝Ｎ−[２−アセトアミド]−２−イミノ二酢酸)、４％グリセロール、０.２５ｍＭクロトノイルＣｏＡ、１ｍＭ・ＮＡＤＨおよびエス・アウレウスＦａｂＩの適当な希釈体を含有する５０μＬのアッセイ混合物中で化合物を評価した。典型的には、阻害剤を０.０１-１０μＭの範囲にわたって変化させた。ＮＡＤＨの消費を３０℃２０分間にわたってモニター観察し、つづいて３４０ｎｍでの吸光度の変化をモニター観察した。ｔ＝０分の正弦勾配よって示される非線形進行曲線の指数適合から初速度を評価した。ＩＣ５０を初速度の標準４−変数モデルへの適合より評価し、それは典型的には二重反復試験の測定値の平均±Ｓ.Ｄ.として示す。市販の抗菌剤であり、ＦａｂＩの阻害剤であるトリクロザン(triclosan)を正のコントロールとして全てのアッセイに用いる。本発明の化合物は、約３０.０マイクロモル〜約０.０１０マイクロモルのＩＣ５０を有する。
【００３７】
エス・アウレウスＦａｂＩ酵素阻害アッセイ(ＮＡＤＰＨ)：
アッセイは、９６-ウェルマイクロタイタープレートの半分の領域で行った。１００ｍＭのＮaＡＤＡ、pＨ６.５(ＡＤＡ＝Ｎ−[２−アセトアミド]−２−イミノ二酢酸)、４％グリセロール、０.２５ｍＭのクロトノイルＣｏＡ、５０μＭのＮＡＤＰＨおよびエス・アウレウスＦａｂＩの適当な希釈体を含有する１５０μＬのアッセイ混合物中で化合物を評価した。典型的には、阻害剤は０.０１-１０μＭの範囲にわたって変化させた。ＮＡＤＨの消費を３０℃２０分間にわたってモニター観察し、つづいて３４０ｎｍでの吸光度の変化をモニター観察した。ｔ＝０分の正弦勾配よって示される非線形進行曲線の指数適合から初速度を評価した。ＩＣ50を初速度の標準４−変数モデルへの適合より評価し、それは典型的には二重反復試験の測定値の平均±Ｓ.Ｄ.として示す。市販の抗菌剤であり、ＦａｂＩの阻害剤であるトリクロザン(triclosan)を正のコントロールとして全てのアッセイに一般に用いる。
【００３８】
イー・コリＦａｂＩ酵素阻害アッセイ：
アッセイは、９６-ウェルマイクロタイタープレートの半分の領域で行った。１００ｍＭのＮaＡＤＡ、pＨ６.５(ＡＤＡ＝Ｎ−[２−アセトアミド]−２−イミノ二酢酸)、４％グリセロール、０.２５ｍＭのクロトノイルＣｏＡ、５０μＭのＮＡＤＰＨおよびイー・コリＦａｂＩの適当な希釈体を含有する１５０μＬのアッセイ混合物中で化合物を評価した。典型的には、阻害剤は０.０１-１０μＭの範囲にわたって変化させた。ＮＡＤＨの消費を３０℃２０分間にわたってモニター観察し、つづいて３４０ｎｍでの吸光度の変化をモニター観察した。ｔ＝０分の正弦勾配よって示される非線形進行曲線の指数適合から初速度を評価した。ＩＣ50を初速度の標準４−変数モデルへの適合より評価し、それは典型的には二重反復試験の測定値の平均±Ｓ.Ｄ.として示す。市販の抗菌剤であり、ＦａｂＩの阻害剤であるトリクロザン(triclosan)を正のコントロールとして全てのアッセイに一般に用いる。本発明の化合物は約４５.０マイクロモル〜約２.０マイクロモルのＩＣ50を有する。
【００３９】
抗微生物活性アッセイ
全細胞抗微生物活性を、National Committee for Clinical Laboratory Standards(ＮＣＣＬＳ)推奨方法、Document M7-A4、「Methods for Dilution Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically」を用いてブロスマイクロダイリューションにより測定した。化合物を０.０６〜６４ｍｃｇ/ｍＬの範囲にある連続した２倍希釈にて試験した。抗菌活性は、以下から選択される代表的な細菌に対して化合物をスクリーニングすることにより評価した。：Staphylococcus aureus Oxford、Staphylococcus aureus WCUH29、Streptococcus pneumoniae R6、Streptococcus pneumoniae ERY2、Streptococcus pneumoniae 1629、Streptococcus pneumoniae N 1387、Streptococcus pyogenes CN10、Enterococcus faecalis I、Enterococcus faecalis 7、Haemophilus influenzae Q１、Haemophilus influenzae NEMC1、Moraxella Catarrhalis 1502、Escherichia coli DC0、Escherichia coli ESS、Escherichia coli 7623 AcrAB+、Escherichia coli 120 AcrAB-、Escherichia coli MG1655、Escherichia coli MG1658、Klebsiella pneumoniae E70、Pseudomonas aeruginosa K799wt。最小阻害濃度(ＭＩＣ)を、肉眼で観察される増殖を阻害する化合物の最小濃度として決定した。ミラー読取器をＭＩＣ終点の測定の補助に使用した。
【００４０】
当業者であれば、ＭＩＣが２５６μｇ/ｍＬよりも小さい化合物はいずれもリード化合物となる可能性があると考えるであろう。好ましくは、本発明の抗微生物アッセイに使用される化合物は、１２８μｇ/ｍＬよりも小さなＭＩＣ値を有する。最も好ましくは、本発明の化合物は６４μｇ/ｍＬよりも小さなＭＩＣ値を有する。
以下に示す実施例は何ら本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の化合物の製造方法および使用方法を説明するにすぎない。多くの他の態様が当業者に容易に明らかとなるであろう。
【００４１】
総論
プロトン核磁気共鳴(１Ｈ・ＮＭＲ)スペクトルを３００ＭＨｚで記録し、化学シフトは内標テトラメチルシラン(ＴＭＳ)から下方へ１００万分の１の割合(ｄ)で報告する。ＮＭＲデータに関する略号は以下の通りである：ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｍ＝多重項、ｄｄ＝二重項の二重項、ｄｔ＝三重項の二重項、ａｐｐ＝見かけ、ｂｒ＝ブロード。Ｊはヘルツで測定したＮＭＲのカップリング定数を表す。ＣＤＣｌ３は重クロロホルムであり、ＤＭＳＯ-ｄ６はヘキサ重ジメチルスルホキシドであり、ＣＤ３ＯＤはテトラ重メタノールである。質量スペクトルは電子噴射(ＥＳ)イオン化技法を用いて得た。元素分析はQuantitative Technologies Inc.、Whitehouse、NJが行った。融点はThomas−Hoover融点測定装置を用いて得、未修正のままである。温度はすべて摂氏度で示す。Analtech Silica Gel GFおよびE.Merck Silica Gel 60 F-254薄層プレートを薄層クロマトグラフィー用に使用した。フラッシュクロマトグラフィーをE.Merck Kieselgel 60(230-400メッシュ)シリカゲル上で行った。分析用ＨＰＬＣをベックマンクトマログラフィーシステムを用いて行った。予備ＨＰＬＣをギルソンクロマトグラフィーシステムを用いて行った。ＯＤＳはオクタデシルシリル誘導のシリカゲルクロマトグラフィー支持体をいう。ＹＭＣ・ＯＤＳ-ＡＱ(登録商標)はＯＤＳクロマトグラフィー支持体であり、日本国、京都にある、ＹＭＣ社の登録商標である。ＰＲＰ-１(登録商標)はポリマー(スチレン-ジビニルベンゼン)クロマトグラフィー支持体であり、ネバダ州、レノにあるハミルトン社の登録商標である。セライト(登録商標)は酸洗浄した珪藻土シリカからなる濾過助剤であり、コロラド州、デンバーにあるManville社の登録商標である。
【００４２】
調製例１
９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールモノヒドロクロライドの調製
a)２-ベンジルオキシカルボニル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
１,２,３,４-テトラヒドロ-９Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール(20.0 g, 116.2 mmole)の乾燥ＤＭＦ(150 mL)攪拌溶液に、室温でＮ-(ベンジルオキシカルボニルオキシ)スクシンイミド(31.84 g, 127.76 mmole)およびトリエチルアミン(13.0 g, 127.76 mmole)を添加した。１２時間後、反応内容物を水(150 mL)に注ぎ、EtOAc(2 × 200 mL)で抽出した。合わせた有機相を水および塩水で連続洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥した。減圧下で濃縮して黄色オイルを得た。シリカ(ヘキサン/EtOAc, ４:１)上で精製して、標題化合物(34.48 g, 97 %)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 307 (M + H)+.
【００４３】
ｂ)２-ベンジルオキシカルボニル-９-[(４-ベンジルオキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
２-ベンジルオキシカルボニル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール(17.75 g, 58.0 mmole)の乾燥ＤＭＦ(150 mL)攪拌溶液に、４-ベンジルオキシベンジルクロライド(14.85 g, 63.8 mmole)を添加した。１０分後、６０％のＮaＨ(2.78 g, 69.6 mmole)を添加し、反応スラリーを室温まで温め、１２時間攪拌した。反応濃縮物を水(200 mL)に注ぎ、EtOAc(2 × 200 mL)で抽出した。合わせた有機相を水および塩水で連続洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥した。減圧下で濃縮し、ワックス状の固体を得た。シリカ(ヘキサン/EtOAc, ４:１)上で精製し、標題化合物(27.13 g, 93 %)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 503 (M + H)+.
【００４４】
c)９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールモノヒドロクロライド
２-ベンジルオキシカルボニル-９-[(４-ベンジルオキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール(5.0 g, 9.96 mmole)のメタノール(25 mL)およびジオキサン(50 mL)のＨＣｌ(10 mL, ジオキサン中1M)含有溶液に、室温にてぺル水素化フラスコ中で、１0% Pd/C(0.5 g)を添加した。反応混合液を４５ｐｓｉのＨ２下で５時間振とうした。懸濁液をセライト(登録商標)を通して濾過し、濾過パッドをメタノールで洗浄した。濾液をローターベイパー上で濃縮し、残存物を高真空下で乾燥し、標題化合物(2.79 g, 89%)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 279 (M + H - HCl)+.
【００４５】
調製２
９-メチル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]-インドールモノヒドロクロライドの調製
a)２-ベンジルオキシカルボニル-９-メチル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
２-ベンジルオキシカルボニル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール(5.0 g, 16.3 mmole)の乾燥ＤＭＦ(75 mL)溶液に、５℃にて60%ＮaＨ(0.7 g, 17.5 mmole)を添加した。１０分後、メチルヨーダイド(11.57 g, 81.5 mmole)を添加し、反応液を室温まで温め、１２時間攪拌した。反応濃縮液を水(100 mL)に注ぎ、EtOAc(2 × 100 mL)で抽出した。合わせた有機相を水および塩水で連続洗浄し、次いで、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。減圧下で濃縮し、シリカ(ヘキサン/EtOAc, １:１)上で精製して、標題化合物(5.17 g, 99 %)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 321 (M + H)+.
【００４６】
ｂ)９-メチル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]-インドールモノヒドロクロライド
２-ベンジルオキシカルボニル-９-メチル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール(5.17 g, １6.2 mmole)のメタノール(100 mL)、EtOAc(25 mL)およびＨＣｌ(17 mL, ジオキサン中1M)中の溶液に、室温にて、ぺル水素化フラスコ中で１0% Pd/C(0.5 g)を添加した。反応混合液を４５ｐｓiのＨ２下で６時間振とうした。懸濁液を、セライト(登録商標)を通して濾過し、濾過パッドをメタノールで洗浄した。濾液をローターベイパー上で濃縮し、残存物を高真空下で乾燥させ、標題化合物(3.19 g, 92%)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 187 (M + H - HCl)+.
【００４７】
調製３
９-{[４-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]-インドールモノヒドロクロライドの調製
a)２-ベンジルオキシカルボニル-９-{[４-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
２-ベンジルオキシカルボニル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール(5.82 g, 19.0 mmole)の乾燥ＤＭＦ(75 mL)攪拌溶液に、５℃にて60%ＮaＨ(1.10 g, 28.5 mmole)を添加した。１０分後、４-トリフルオロメチルベンジルブロマイド(5.0 g, 20.9 mmole)を添加し、反応液を室温まで温め、１２時間攪拌した。反応内容物を水(100 mL)に注ぎ、EtOAc(2 × 100 mL)で抽出した。合わせた有機相を水および塩水で連続洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４にて乾燥させた。減圧下で濃縮し、シリカ(ヘキサン/EtOAc, ４:１)上で精製して、標題化合物(8.73 g,99 %)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 465 (M + H)+.
【００４８】
ｂ)９-{[４-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]-インドールモノヒドロクロライド
２-ベンジルオキシカルボニル-９-{[４-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール(8.73 g, 18.81 mmole)のメタノール(50 mL)、ジオキサン(50 mL)およびＨＣｌ(19 mL,ジオキサン中1M)中の溶液に、室温にてぺル水素化フラスコ中で、１０% Pd/C(0.5 g)を添加した。反応混合液を４５ｐｓｉのＨ２下で６時間振とうした。懸濁液をセライト(登録商標)を通して濾過し、濾過パッドをメタノールで洗浄した。濾液をローターベイパー上で濃縮し、残存物を高真空下で乾燥させて、標題化合物(6.33 g, 92%)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 331 (M + H - HCl)+.
【００４９】
調製４
２-ベンゾイル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-ベンゾイル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
１,２,３,４-テトラヒドロ-９Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール(2.0 g, 11.6 mmole)の乾燥ＤＭＦ(20 mL)攪拌溶液に、室温で、安息香酸(1.56 g, 12.77 mmole)、１-ヒドロキシベンゾトリアゾールヒドレート(1.72 g, 12.77 mmole)およびジイソプロピルエチルアミン(1.65 g, 12.77 mmole)を添加した。１０分後、ＥＤＣ(2.44 g, 12.77 mmole)を添加し、反応液を１２時間攪拌した。反応内容物を水(100 mL)に注ぎ、EtOAc(2 × 100 mL)で抽出した。合わせた有機相を水および塩水で連続洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４にて乾燥した。減圧下で濃縮し、シリカ(ヘキサン/EtOAc, １:１)上で精製して、標題化合物(3.0 g, 94 %)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 277 (M + H)+.
【００５０】
調製５
９-{[４-(フルオロ)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]-インドールモノヒドロクロライドの調製
a)２-ベンジルオキシカルボニル-９-{[４-(フルオロ)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
２-ベンジルオキシカルボニル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール(5.0 g, 16.33 mmole)の乾燥ＤＭＦ(75 mL)攪拌溶液に、５℃で60% ＮaＨ(0.98 g, 24.5 mmole)を添加した。１０分後、４-フルオロベンジルブロマイド(3.40 g, 18.0 mmole)を添加し、反応液を室温まで温め、１２時間攪拌した。反応内容物を水(100 mL)に注ぎ、EtOAc(2 × 100 mL)で抽出した。合わせた有機相を水と塩水で連続洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥した。減圧下で濃縮し、シリカ(ヘキサン/EtOAc, ４:１)上で精製して、標題化合物(6.42 g, 95 %)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 415 (M + H)+.
【００５１】
ｂ)９-{[４-(フルオロ)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]-インドールモノヒドロクロライド
２-ベンジルオキシカルボニル-９-{[４-(フルオロ)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール(5.28 g, 12.7 mmole)のメタノール(50 mL)、ジオキサン(50 mL)およびＨＣｌ(19 mL,ジオキサン中1M)中の溶液に、室温にてぺル水素化フラスコ中で、１0% Pd/C(0.5 g)を添加した。反応混合液を４５ｐｓｉのＨ２下で６時間振とうした。懸濁液を、セライト(登録商標)を通して濾過し、濾過パッドをメタノールで洗浄した。濾液をローターベイパー上で濃縮し、残存物を高真空下で乾燥して、標題化合物(3.61 g, 90%)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 281 (M + H - HCl)+.
【００５２】
調製６
メチル４-(１,２,３,４-テトラヒドロベータ-カルボリン-９-イル}メチル)ベンゾエートモノヒドロクロライドの調製
a)２-ベンジルオキシカルボニル-９-{[４-(カルボキシメチル)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
２-ベンジルオキシカルボニル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール(5.0 g, 16.33 mmole)の乾燥ＤＭＦ(75 mL)溶液に、５℃にて60%ＮaＨ(0.98 g, 24.5 mmole)を添加した。１０分後、メチル４-(ブロモメチル)ベンゾエート(4.12 g, 18.0 mmole)を添加し、反応液を室温まで温め、１２時間攪拌した。反応内容物を水(100 mL)に注ぎ、EtOAc(2 x 100 mL)で抽出した。合わせた有機相を水および塩水で連続洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４にて乾燥した。減圧下で濃縮し、シリカ(ヘキサン/EtOAc, ４:１)上で精製して、標題化合物(6.91 g, 93 %)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 455 (M + H)+.
【００５３】
ｂ)９-{[４-(カルボキシメチル)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]-インドールモノヒドロクロライド
２-ベンジルオキシカルボニル-９-{[４-(カルボキシメチル)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール(6.91 g, 15.22 mmole)のメタノール(50 mL)、ジオキサン(50 mL)およびＨＣｌ(１９ mL,ジオキサン中1M)中の溶液に、室温にてぺル水素化フラスコ中で、１0%Pd/C(0.5 g)を添加した。反応混合液を４５ｐｓｉのＨ２下で６時間振とうした。懸濁液を、セライト(登録商標)を通して濾過し、濾過パッドをメタノールで洗浄した。濾液をローターベイパー上で濃縮し、残存物を高真空下で乾燥させて、標題化合物(5.22 g, 90%)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 345 (M + H - HCl)+.
【００５４】
以下の実施例により、前の調製例で記載する中間体から本発明の生物学的に活性な化合物を調製するための方法を説明する。
実施例１
２-ベンゾイル-９-メチル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-ベンゾイル-９-メチル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
２-ベンゾイル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール (3.0 g, 10.９ mmole)の乾燥ＤＭＦ(75 mL)溶液に、５℃で60%ＮaＨ(0.52 g,13.1 mmole)を添加した。１０分後、メチルヨーダイド(7.80 g, 55 mmole)を添加し、反応液を室温まで温め、１２時間攪拌した。反応内容物を水(50 mL)に注ぎ、EtOAc(2 × 100 mL)で抽出した。合わせた有機相を水および塩水で連続洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥した。減圧下で濃縮し、シリカ(ヘキサン/EtOAc, １:１)上で精製して、標題化合物(3.14 g, 99 %)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 291 (M + H)+.
【００５５】
実施例２
２-ベンゾイル-９-[(４-ベンジルオキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-ベンゾイル-９-[(４-ベンジルオキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
２-ベンゾイル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール(17.75 g, 58.0 mmole)の乾燥ＤＭＦ(75 mL)溶液に、５℃で60%ＮaＨ(2.78 g, 69.6 mmole)を添加した。１０分後、４-ベンジルオキシベンジルクロライド(14.85 g, 63.8 mmole)を添加し、反応液を室温まで温め、１２時間攪拌した。反応内容物を(150 mL)に注ぎ、EtOAc(2 × 150 mL)で抽出した。合わせた有機相を水および塩水で連続洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥した。減圧下で濃縮し、シリカ(ヘキサン/EtOAc, １:１)上で精製して、標題化合物(26.61 g, 97 %)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 473 (M + H)+.
【００５６】
実施例３
２-(３-アミノ)ベンゾイル-９-メチル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]-インドールの調製
a)２-[３-(アミノ)ベンゾイル]-９-メチル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]-インドール(385820)
９-メチル-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]-インドールモノヒドロクロライド(0.35 g, 1.59 mmole)の乾燥ＤＭＦ(２0 mL)攪拌溶液に、室温で３-アミノ安息香酸(0.24 g, 1.75 mmole)、１-ヒドロキシベンゾトリアゾールヒドレート(0.24 g, 1.75 mmole)およびジイソプロピルエチルアミン(0.45 g, 3.50 mmole)を添加した。１０分後、ＥＤＣ(0.33 g, 1.75 mmole)を添加し、反応液を１２時間攪拌した。反応内容物を(100 mL)に注ぎ、EtOAc(2 × 100 mL)で抽出した。合わせた有機相を水および塩水で連続洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥した。減圧下で濃縮し、黄色オイルを得た。シリカ(ＣＨＣｌ３/ＣＨ３ＯＨ, ９５:５)上で精製し、標題化合物(0.45 g, 92 %)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e 306 (M + H)+.
【００５７】
実施例４
２-(４-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-(４-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]-インドールモノヒドロクロライド(0.50 g, １.59 mmole)の乾燥ＤＭＦ(25 mL)攪拌溶液に、室温で４-ヒドロキシ安息香酸(0.24 g, 1.75 mmole)、１-ヒドロキシベンゾトリアゾールヒドレート(0.24 g, 1.75 mmole)およびジイソプロピルエチルアミン(0.45 g, 3.50 mmole)を添加した。１０分後、ＥＤＣ(0.33 g, 1.75 mmole)を添加し、反応液を１２時間攪拌した。反応内容物を水(100 mL)に注ぎ、EtOAc(2 x 150 mL)で抽出した。合わせた有機相を水および塩水で連続洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥した。減圧下で濃縮し、シリカ(ヘキサン/EtOAc, １:２)上で精製して、標題化合物(0.55 g, ９１ %)を白色固体として得た。:  MS (ES) m/e ３8３ (M + Ｈ)+.
【００５８】
実施例５
２-ベンゾイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-ベンゾイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
安息香酸(0.2１ g, 1.75 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.60 g, 90 %)をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)により白色固体として調製した。:  MS (ES) m/e 383 (M + H)+.
【００５９】
実施例６
２-(３,４-メチレンジオキシ)ベンゾイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-(３,４-メチレンジオキシ)ベンゾイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
ピペロニル酸(0.29 g, 1.75 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.69 g, 93 %)をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)により白色固体として調製した。:  MS (ES) m/e 427 (M + H)+.
【００６０】
実施例７
２-(２-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-(２-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
２-ヒドロキシ安息香酸(0.24g, 1.75 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.62 g, 89 %)をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)により白色固体として調製した。:  MS (ES) m/e 399 (M + H)+.
【００６１】
実施例８
２-(３-イミダゾ)ベンゾイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-(３-イミダゾ)ベンゾイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
５-ベンズイミダゾールカルボン酸(0.28 g, 1.75 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.63 g, 85 %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)によりオフホワイトの固体として調製した。:MS (ES) m/e 423 (M + H)+.
【００６２】
実施例９
２-(６-ヒドロキシ)ニコチノイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-(６-ヒドロキシ)ニコチノイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
６-ヒドロキシニコチン酸(0.24 g, 1.75 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.58 g, 83 %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)によりオフホワイトの固体として調製した。:MS (ES) m/e 400 (M + H)+.
【００６３】
実施例１０
２-(６-アミノ)ニコチノイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-(６-アミノ)ニコチノイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
６-アミノニコチン酸(0.24 g, 1.75 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.60 g, 87 %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)によりオフホワイトの固体として調製した。:  MS (ES) m/e 399 (M + H)+.
【００６４】
実施例１１
２-(４-メチルアミノ)ベンゾイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-(４-メチルアミノ)ベンゾイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
４-メチルアミノ安息香酸(0.26 g, 1.75 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.61 g, 85 %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)によりオフホワイトの固体として調製した。:  MS (ES) m/e 412 (M + H)+.
【００６５】
実施例１２
２-(４-アミノ)ベンゾイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-(４-アミノ)ベンゾイル-９-[４-(ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
４-アミノ安息香酸(0.24 g, 1.75 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.56 g, 80 %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)によりオフホワイトの固体として調製した。:  MS (ES) m/e 398 (M + H)+.
【００６６】
実施例１３
２-(４-クロロ)ベンゾイル-９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-(４-クロロ)ベンゾイル-９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
４-クロロ安息香酸(0.27 g, 1.75 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.63 g, 96 %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)により、白色固体として調製した。:  MS (ES) m/e 417 (M + H)+.
【００６７】
実施例１４
２-(３,５-ジクロロ-４-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-(３,５-ジクロロ-４-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
３,５-ジクロロ-４-ヒドロキシ安息香酸(0.36 g, 1.75 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.70 g, 94 %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)により白色固体として調製した。:  MS (ES) m/e 468 (M + H)+.
【００６８】
実施例１５
２-(３-クロロ-４-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-(３-クロロ-４-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
３-クロロ-４-ヒドロキシ安息香酸ヘミヒドレート(0.32 g, 1.75 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.62 g, 91 %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)により白色固体として調製した。:  MS (ES) m/e 434(M + H)+.
【００６９】
実施例１６
２-(４-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-{[４-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
a)２-(４-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-{[４-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドール
９-{[４-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]-インドールモノヒドロクロライド(0.50 g, 1.37 mmole)を９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]-インドールモノヒドロクロライドの代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.55 g, 90%)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)により白色固体として調製した。:  MS (ES) m/e 451 (M + H)+.
【００７０】
実施例１７
メチル４-({２-[(４-ヒドロキシフェニル)カルボニル]-１,２,３,４-テトラヒドロベータ-カルボリン-９-イル}メチル)ベンゾエートの調製
９-{[４-(カルボキシメチル)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]-インドールモノヒドロクロライド(0.76 g, 2.0 mmole)を９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド-[３,４-ｂ]インドールモノヒドロクロライドの代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.87 g, ９４ %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)により白色固体として調製した。:  MS (ES) m/e 466 (M + H)+.
【００７１】
実施例１８
２-(４-クロロ-２-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
４-クロロ-２-ヒドロキシ安息香酸(0.19 g, 1.10 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.44 g, 95 %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)により白色固体として調製した。: MS (ES) m/e 469 (M + H)+.
【００７２】
実施例１９
２-(５-クロロ-２-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
５-クロロ-２-ヒドロキシ安息香酸(0.19 g, 1.10 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.44g, 94 %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)により白色固体として調製した。:  MS (ES) m/e 469 (M + H)+.
【００７３】
実施例２０
２-(４-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-[(４-フルオロフェニル)メチル]１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
９-[(４-フルオロフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド-[３,４-ｂ]インドールモノヒドロクロライド(0.50 g, 1.58 mmole)を９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド-[３,４-ｂ]インドールモノヒドロクロライドの代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.58 g, 92 %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:１)により白色固体として調製した。:  MS (ES) m/e 401 (M + H)+.
【００７４】
実施例２１
２-(３-クロロ-４-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-[(４-フルオロフェニル)メチル]１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
９-[(４-フルオロフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド-[３,４-ｂ]インドールモノヒドロクロライド(0.50 g, 1.58 mmole)を９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド-[３,４-ｂ]インドールモノヒドロクロライドの代わりに、および、３-クロロ-４-ヒドロキシ安息香酸へミヒドレート(0.32 g, 1.75 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.60 g, 95 %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:１)により白色固体として調製した。:  MS (ES) m/e 436 (M + H)+.
【００７５】
実施例２２
２-(３,５-ジクロロ-４-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-[(４-フルオロフェニル)メチル]１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
９-[(４-フルオロフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド-[３,４-ｂ]インドールモノヒドロクロライド(0.50 g, １.58 mmole)を９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド-[３,４-ｂ]インドールモノヒドロクロライドの代わりに、および３,５-ジクロロ-４-ヒドロキシ安息香酸(0.36 g, 1.75 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.68 g, 92%)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:１)により白色固体として調製した。:  MS (ES) m/e 470 (M + H)+.
【００７６】
実施例２３
２-(３-クロロ-４-ヒドロキシ)ベンゾイル-９-{[４-(トリフルオロメチル)フェニル]-メチル}１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
９-{[４-(トリフルオロメチル)フェニル]メチル}-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド-[３,４-ｂ]インドールモノヒドロクロライド(0.50 g, 1.37 mmole)を９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]-１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド-[３,４-ｂ]インドールモノヒドロクロライドの代わりに、および、３-クロロ-４-ヒドロキシ安息香酸ヘミヒドレート(0.27 g, 1.51 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.56 g, ９0 %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:１)により白色固体として調製した。:  MS (ES) m/e 453 (M + H)+.
【００７７】
実施例２４
２-(２-ヒドロキシ-４-メチル)ベンゾイル-９-[(４-ヒドロキシフェニル)メチル]１,３,４,９-テトラヒドロ-２Ｈ-ピリド[３,４-ｂ]インドールの調製
２-ヒドロキシ-４-メチル安息香酸(0.27 g, 1.75 mmole)を４-ヒドロキシ安息香酸の代わりに用いる以外は実施例４の方法に従い、標題化合物(0.62 g, 95 %)をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン/EtOAc, １:２)により白色固体として調製した。:  MS (ES) m/e 413 (M + H)+.
【００７８】
実施例２５
非経口投与単位組成物
２０ｍｇの実施例１の化合物を含む製剤を、滅菌乾燥粉末として以下のように調製する。:２０ｍｇの化合物を１５ｍＬの蒸留水に溶解する。溶液を滅菌条件下で２５ｍＬの多投与アンプルに濾過し、凍結乾燥する。粉末を、静脈内または筋肉内注射のために２０ｍＬの５％ブドウ糖水溶液(Ｄ５Ｗ)の添加により復元する。これに関し、投与量は注射体積により決定する。注射のためのＤ５Ｗの別体積にこの投与製剤の測定体積を添加することにより二次希釈を行ってもよく、または、測定投与量は１Ｖの点滴または他の注射-注射システムのために、ボトルまたはバッグなど、薬物を調剤するための他の機構に加えてもよい。
【００７９】
実施例２６
経口投与単位組成物
経口投与のためのカプセルは、５０ｍｇの実施例１の化合物を７５ｍｇのラクト-スおよび５ｍｇのステアリン酸マグネシウムと混合および製粉することにより調製する。生じる粉末はふるいにかけ、硬質ゼラチンカプセル中に充填する。
【００８０】
実施例２７
経口投与単位組成物
経口投与のための錠剤は、２０ｍｇのスクロース、１５０ｍｇの硫酸カルシウム二水和物および５０ｍｇの実施例１の化合物を１０％のゼラチン溶液とを混合および製粉することにより調製する。湿った顆粒はふるいにかけ、乾燥し、１０ｍｇの澱粉、５ｍｇのタルクおよび３ｍｇのステアリン酸と混合し、そして錠剤に圧縮する。
前の記載により、本発明の製造法および使用法を完全に開示する。しかし、本発明は前に開示した特定の態様には制限されないが、前の請求項の範囲内にその全変更が含まれる。本明細書中に記載する、ジャーナル、特許および他の公開文献への言及には当該分野の現状が含まれ、あたかも完全に記載されているかのように、引用により本明細書中に組み込まれる。