(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アニオン型が式:
【化１】
0004695756.tif 000010
［式中、
−  Ｒは水素または−ＳＯ3-、（Ｃ1−Ｃ3）アルキルもしくは（Ｃ2−Ｃ3）アシル基を意味し；
−  Ｔは水素またはエチル基を意味し；
−  ｎは１を意味する］
を有する、酸性型およびその医薬的に許容な塩の形態の五糖類。
【請求項２】
ナトリウム塩またはカリウム塩の形態の請求項１の五糖類。
【請求項３】
・メチル  Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−カルボキシ−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシド、ナトリウム塩
・メチル  Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（５−Ｃ−エチル−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−カルボキシ−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシド、ナトリウム塩
・メチル  Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−カルボキシ−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−２−Ｏ−スルホ−３，６−ジ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド、ナトリウム塩
・メチル  Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−カルボキシ−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−２，３−ジ−Ｏ−スルホ−６−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド、ナトリウム塩
・メチル  Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−カルボキシ−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−２，６−ジ−Ｏ−スルホ−３−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド、ナトリウム塩
から選択された請求項１または２のいずれかによる五糖類。
【請求項４】
医薬的に許容な非毒性の不活性な賦形剤と組み合わせて、または混合して、医薬的に許容な塩基との塩の形態または酸性型での、請求項１〜３のいずれか一つの五糖類を、活性成分として含む医薬組成物。
【請求項５】
単位投与量の形態で、活性成分が少なくとも１つの医薬賦形剤と混合されている、請求項４の医薬組成物。
【請求項６】
各単位投与量が０．１〜１００ｍｇの活性成分を含む請求項５の組成物。
【請求項７】
各単位投与量が０．５〜５０ｍｇの活性成分を含む請求項６の組成物。
【請求項８】
凝固機能不全に関連のある病理学の治療に用いる医薬品の製造のための請求項１〜３のいずれか一つに記載の多糖類の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、五糖類、それらの製造法およびそれらを含む医薬組成物に関する。
ヘパリンはグルコサミノグリカン系統の多糖類であり、その抗凝血性が知られている。血液凝固が複雑な生理学的現象であることが知られている(I. Bjork およびU. Lindahl, Molecular and Cell Biochemistry, 1982, Dr. W. Junk Publishers -オランダ)。接触活性化および組織因子のようなある刺激は、血漿中に存在する一連の凝固因子の続く活性化を引き起こす。刺激の性質によらず、最終工程は同一であり、活性化第Ｘ因子（Ｘａ）は、第ＩＩ因子（プロトロンビンとしても知られている）を活性化し、第ＩＩ因子の活性型（第ＩＩａ因子、トロンビンとしても知られている)は、溶解性フィブリノーゲンの部分的なタンパク質分解と、それに伴う不溶性フィブリン［血餅の主な構成成分の一つである］の放出を引き起こす。
【０００２】
正常な生理学的条件下で、凝固因子の活性は、血漿中にも存在する、抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴ  ＩＩＩ）やヘパリン第ＩＩ補助因子（ＨＣＩＩ）のようなタンパク質により調節されている。ＡＴ  ＩＩＩは相当の数の凝固因子、特に、第Ｘａ因子と第ＩＩａ因子に対して阻害活性を働かせる。
【０００３】
第Ｘａ因子または第ＩＩａ因子を阻害することは、従って、抗凝血および抗血栓作用を得るために好ましい手段である。というのは、これらの２つの因子が凝固の最後の２つの工程に関連しており、それらは刺激を引き起こすこととは無関係だからである。
【０００４】
Ｐ．Ｓｉｎａｙら（Carbohydrate Research 1984, 132 C5）が記載したもののような五糖類は、ＡＴ  ＩＩＩへ結合するために必要な最小限のヘパリン配列を意味する。この化合物は、化学的全合成により約１５年前に得られている。
【０００５】
そのとき以来、化学的全合成により得られ、抗血栓症性で抗凝血性活性を有する相当の数の合成オリゴ糖類が、文献に記載されている。
【０００６】
特許ＥＰ第０，０８４，９９９号には、有利な抗血栓症性を有する、ウロン酸（グルクロン酸またはイズロン酸）単糖類単位およびグルコサミンからなる誘導体が記載されている。ヒドロキシル基からなる置換基を除いて、これらの化合物はＮ−スルフェート基、Ｎ−アセチル基を含み、ある場合には、アノマー位のヒドロキシル基はメトキシ基で置き換えられている。
【０００７】
特許出願ＥＰ第０，１６５，１３４号にも、抗血栓症活性を有する合成オリゴ糖類が記載されている。これらの化合物は、ウロン酸単糖類単位とグルコサミンからなり、グルコサミン単位の３位にＯ−スルフェート基を含み、特許出願ＥＰ第０，３０１，６１８号にも記載されている。これらの化合物は、強力な抗血栓症性と抗凝血性を有する。特許ＥＰ第０，４５４，２２０号には、置換基として、Ｏ−アルキルまたはＯ−スルフェート基を含むウロン酸誘導体およびグルコース誘導体が記載されている。これら後者の化合物は、抗血栓症性および抗凝血性も有する。
【０００８】
Ｎ−スルフェート、Ｎ−アセテートまたはヒドロキシル官能基がアルコキシ、アリールオキシ、アラルキルオシまたはＯ−スルフェート基で起きかえられている硫酸化グルコサミノ様誘導体は、特許ＥＰ第０，５２９，１７５号にも記載されている。これらの化合物は、有利な抗血栓症性を有している。後者の化合物は、平滑筋細胞増殖の阻害剤でもある。
【０００９】
オリゴ糖類、特に五糖類は、ＡＴ−ＩＩＩへの結合に必要な最小限ヘパリン配列に類似であり、Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1993, 32, 3, 434-436に記載されている。これらの化合物には、グルクロン酸またはグルコース単位を含んでいる。そのヒドロキシル官能基はＯ−スルフェートまたはＯ−メチル基で置き換えられている。
【００１０】
多くの研究がそのとき以来五糖類に関してなされており、文献には、L-イズロン酸単位Ｇの立体配座が、生成物の活性に重要な役割を果たしていることが示されている。単位Ｇのいくつかの立体配座的状態が記載されており(4Ｃ1、1Ｃ4、2Ｓ0)、この立体配座的柔軟性が、L-イズロン酸を含む生成物(B. Casu, M. Petitou, A. Provasoli およびP. Sinay, Conformational flexibility: a new concept for explaining binding and biological properties of iduronic acid-containing glycosaminoglycans. Trends Biochem. Sci. 1988, 13, 221-225)の生物学的活性に、必須であることが示唆されている。
【００１１】
Ｏ−アルキル基の１つをアルキレン橋かけで置き換え、その結果Ｌ−イズロン酸の立体配座をロックすることにより、立体配座的柔軟性が欠如しているが有利な生物学的物性を有するオリゴ糖類を得ることが、驚いたことに、ここで見出された。この理由は、本発明の化合物が、それらの新規な構造とそれらの強力で予期せぬ生物学的物性のため、文献に記載された他の合成ヘパリン様のものとは異なっていることである。本発明の化合物は、L-イズロン酸単位Ｇがいわゆる「ロックされた」2Ｓ0立体配座であり、Ｄ−グルクロン酸単位Ｅは５位に任意にエチル基を有している五糖類である。これらの化合物は非常に強い抗第Ｘａ因子活性と非常に強いＡＴ  ＩＩＩへの親和性を有している。
【００１２】
本発明の主題は、より詳細には、酸性型および１以上の医薬的に許容なカチオンとのその医薬的に許容な塩の形態の五糖類である。そのアニオン型は、式(I):
【化２】
0004695756.tif 000002
［式中、
−  Ｒは水素または−ＳＯ3-、（Ｃ1−Ｃ3）アルキルもしくは（Ｃ2−Ｃ3）アシル基を意味し；
−  Ｔは水素またはエチル基を意味し；
−  ｎは１または２を意味する］
を有する。
【００１３】
この発明には、酸性型または医薬的に許容な塩の形態の五糖類を含む。酸性型とは、−ＣＯＯ-および−ＳＯ3-官能基が、それぞれ−ＣＯＯＨおよび−ＳＯ3Ｈの形態である。
【００１４】
表現「本発明の五糖類の医薬的に許容な塩」は、１以上の−ＣＯＯ-および／または−ＳＯ3-官能基が医薬的に許容な金属カチオンにイオン的に結合している五糖類を意味することを意図する。
【００１５】
本発明の好ましい塩は、カチオンがアルカリ金属のカチオンから選択されるものであり、より好ましくはカチオンがＮａ+またはＫ+であるものである。
【００１６】
本発明の主題はまた、単位Ｇの前駆体が製造され、それを単位Ｈの前駆体とカップリングさせてＧＨの前駆体を得、最終的に五糖類はＧＨの前駆体とＤＥＦの前駆体とをカップリングさせることか、またはＧＨの前駆体とＥＦの前駆体をカップリングさせ、次いでＤを付加させることのいずれかにより得られることを特徴とする、本発明の五糖類の製造法である。
【００１７】
Ｇ、Ｈ、ＥＦまたはＤＥＦの前駆体のいずれを用いてもよい。これは、これらの方法に従い、ロックされた立体配座の単位Ｇを共通して有する五糖類の全系統を製造することが可能であることを意味する。
【００１８】
上記で記載した方法は、本発明の好ましい方法である。しかし、本発明の五糖類は、糖化学の他の公知の方法に従って製造することができ、特に、もし存在するならば、ヒドロキシル基および任意にカルボキシル基にT.W. Green, in Protective Groups in Organic Synthesis (Wiley, N.Y. 1981)に記載のような保護基を含む単糖類を、他の保護された単糖類と反応させることにより、二糖類を形成し、それを次いで他の保護された単糖類と反応させて保護された三糖類を形成し、そこから、保護された四糖類および次いで保護された五糖類を得ることができる。
【００１９】
保護された五糖類は、次いで脱保護され、任意に硫酸化され、部分的に脱保護され、次いで硫酸化され、次いで脱保護され、本発明の化合物を得る。
【００２０】
そのような方法は、炭水化物の化学において知られており、特にG. Jaurandら（Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 1992, 2, 9, 897-900）、J. Basten ら（Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 1992, 2, 9, 905-910）ならびにM. PetitouおよびC.A.A. van Boeckel（"Chemical synthesis of heparin fragment and analogues" 203-210 - Process in the chemistry of organic natural products, Ed. Springer Verlag Vienna - N.Y. 1992）により記載されている。
【００２１】
上記の方法により、塩の形態の本発明の化合物を得ることができる。相当する酸を得るために、塩の形態の本発明の化合物を酸性型のカチオン-交換樹脂と接触させる。
【００２２】
酸の形態の本発明の化合物は、その後塩基で中和し、所望の塩を得ることができる。
このために、医薬的に許容な塩を与える無機または有機塩基のいずれを用いてもよい。
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウムまたは水酸化マグネシウムを用いるのが好ましい。本発明の五糖類のナトリウム塩およびカルシウム塩が好ましい塩である。
【００２３】
本発明の主題である化合物は、有利な薬理学的および生化学的物性を有する。より詳細には、それらは強力な抗第Ｘａ因子活性およびAT IIIへの強力な親和性を有する。
【００２４】
上記のように、凝固カスケードにおいて、第Ｘａ因子はプロトロンビンを活性化してトロンビンとし、トロンビンは可溶性フィブリノーゲンを加水分解して血餅の主構成成分である不溶性フィブリンの放出を伴う。第Ｘａ因子を阻害することは、従って抗凝血性活性および抗血栓症活性を得るための好ましい手段となる。本発明の生成物の抗第Ｘａ因子活性は、Teien A.N.およびLie M.（Thrombosis Research 1977, 10, 399-410）に記載された方法に従ってｐＨ７で測定し、本発明の生成物が、既に知られている合成ヘパリン様のものと同じかそれ以上の抗Ｘａ活性を有することが示されている。本発明の五糖類［そのアニオンは式（Ｉ）を有する］のＡＴ  ＩＩＩへの親和性は、D. Athaら（Biochemistry 1987, 26, 6454-6461）により記載の条件下で、分子蛍光分析により測定した。試験の結果により、本発明の化合物はＡＴ ＩＩＩに対し、非常に強力な親和性を有することが示された。
【００２５】
さらに、これら化合物の全体の抗血栓症活性を、静脈うっ血のモデルおよびトロンボプラスチンの誘導を用いることにより、ラットで、J. Reyersら（Thrombosis Research 1980, 18, 669-674）に記載の方法に従い、測定した。本発明の化合物のＥＤ50は、既に公知の他の合成ヘパリン様のものと少なくとも同じ次数かまたは少ない。本発明の化合物は従って、作用の有利な特異性および有利な抗凝血性活性および抗血栓症活性の作用を有する。
【００２６】
本発明の化合物は、非経口投与用医薬組成物を製造するのに有用である。
本発明の化合物は、非常に毒性が低い;その毒性は医薬品としての使用と全体として融和性である。
本発明の化合物は、非常に安定で従って医薬品の活性成分に特に適している。
本発明は、活性成分として本発明の化合物またはその医薬的に許容な塩の一つを含み、１以上の不活性で適当な賦形剤と任意に組み合わせた医薬組成物をも含む。
【００２７】
各単位用量において、活性成分は予想される１日の用量に適した量で存在する。各単位用量は０．１〜１００ｍｇ、好ましくは０．５〜５０ｍｇの活性成分を含む。
【００２８】
本発明の化合物は、例えば、ジピリダモール（dipyridamole）、アスピリン、チクロピジン、クロピドグレル（clopidogrel）または糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ錯体の拮抗剤のような、例えば、抗血栓剤、抗凝血剤、抗血小板凝集剤のような、所望の治療に有用である１以上の活性成分との組み合わせで用いてもよい。
【００２９】
医薬組成物は、上記の疾患の治療のために、ヒトを含む哺乳動物に投与するために製剤化される。
【００３０】
そのようにして得られた医薬組成物は、例えば、注射用または飲用溶液、糖衣錠剤、普通の錠剤またはゼラチンカプセル剤のような、様々な形態で有利に存在する。注射用溶液は、好ましい医薬形態である。本発明の医薬組成物は、例えば腫瘍の手術の後、または血液凝固が崩壊した後見られる、細菌、ウイルスまたは酵素活性剤により誘導された、動脈硬化症、過剰凝血性状態のような、血管壁障害の予防的なまたは治療用処置に特に有用である。
【００３１】
より一般的には、本発明の五糖類は凝固機能不全に関する病理学の治療に用いることができる。
【００３２】
用量は患者の年齢、体重および健康状態、病気の性質および苦しさ、ならびに投与経路によって広範囲に変化しうる。この用量は、筋肉内もしくは皮下に、バッチの方法での投与もしくは一定間隔をおいての投与で、1日あたり約０．５ｍｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは１日当たり約１〜約１００ｍｇ、さらに好ましくは１日当たり約０．５〜約５０ｍｇ、例えば１日当たり約２０ｍｇの１以上の用量、または経口で、１日当たり約２００ｍｇ〜約１０００ｍｇの１日用量の、１以上の用量の投与からなる。
【００３３】
本来、これらの用量は、観察された結果や、事前にされた血液分析に依り、各患者に対して調整されうる。皮下投与が好ましいルートである。
【００３４】
本発明の主題は、従って、任意に他の活性成分と組み合わせて、活性成分として上記の化合物の一つを含む医薬組成物でもある。これらの組成物は、消化ルートまたは非経口ルートを経て投与可能なように作られる。
【００３５】
経口投与、舌下投与、皮下投与、筋内投与、静脈内投与、経皮吸収投与、粘膜吸収投与、局所投与または直腸内投与のための本発明の医薬組成物において、有効成分は、標準的な医薬担体と混合して、動物やヒトに投与の単位形態で投与されてもよい。適当な投与単位形態は、経口懸濁剤、水剤、顆粒剤および散剤、ゼラチンカプゼル剤および錠剤のような経口形態、舌下およびバッカル剤の投与形態、皮下、筋内、静脈内、鼻腔内または眼内の投与形態および直腸内の投与形態からなる。
【００３６】
固体組成物が錠剤の形態で調製されたとき、主な有効成分は、ゼラチン、デンプン、乳糖、ステアリンマグネシウム、タルク、アラビアゴム等のような医薬的な賦形剤と混合される。錠剤は、白糖または他の適当な材料でコーティングしてもよい。または、それらが持続性作用または遅効作用を有するような、かつそれらがあらかじめ所定の量の活性成分を連続的に遊離されるように、それらを処理してもよい。
【００３７】
ゼラチンカプセル剤の製剤は、有効成分を賦形剤と混合し、軟または硬ゼラチンカプセル剤の中に得られた混合物を注ぎいれることにより、得られる。
【００３８】
水分散性散剤または顆粒剤は、分散剤もしくは湿潤剤と、またはポリビニルピロリドンのような懸濁化剤と、ならびに甘味料または風味増加剤とを混合した有効成分を含んでもよい。
【００３９】
直腸内投与には、直腸内温度で溶解する、例えばカカオ脂またはポリエチレングリコールのような結合剤と調製された座薬が用いられる。
【００４０】
非経口、鼻腔内または眼内投与には、例えばプロピレングリコールまたはブチレングリコールのような医薬的に適合性な分散剤および／または湿潤剤を含む、水性懸濁剤、等張食塩水または無菌注射用溶液を用いる。
【００４１】
粘膜吸収投与には、活性成分は、胆汁酸塩、親水性ポリマー［例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、デキストリン、ポリビニルピロリドン、ペクチン、デンプン、ゼラチン、カゼイン］、アクリル酸、アクリル酸エステルおよびそれらのコポリマー、ビニルポリマーまたはコポリマー、ビニルアルコール、アルコキシポリマー、ポリエチレンオキシドポリマー、ポリエーテルまたはそれらの混合物のような、プロモーターの存在下に製剤化されてもよい。
【００４２】
活性成分は、任意に１以上の担体または添加剤と共に、マイクロカプセルの形態に製剤化されてもよい。
【００４３】
活性成分は、例えば、α−、β−もしくはγ−シクロデキストリン、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンまたはメチル−β−シクロデキストリンのようなシクロデキストリンとの複合体の形態であってもよい。
【００４４】
活性成分は、それを含むバルーンにより放出されても、血管内に導入された 血管内（endovascular）増量剤により放出されてもよい。活性成分の医薬的な効力は、従って影響を受けない。
皮下投与は好ましいルートである。
【００４５】
以下の方法、製造法および図は、本発明の多糖を得るために有用な様々な中間体の合成を説明するものである。
【００４６】
以下の略語を使用する：
ＴＢＤＭＳ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル；Ｌｅｖ：レブリニル；Ｂｎ：ベンジル；Ｂｚ：ベンゾイル；ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー；Ｏｌｍ：トリクロロアセトイミドイル；ＬＳＩＭＳ：液体二次イオン質量分析；ＥＳＩＭＳ：エレクトロスプレー質量分析；ＴＭＳ：トリメチルシリル；ＴＳＰ：トリメチルシリルテトラ重プロピオン酸ナトリウム塩；Ｔｆ：トリフルオロメタンスルホン酸エステル；ＭＳ：モレキュラーシーブス；Ａｌｌ：アリル；ＰＭＢ：ｐ−メトキシベンジル；ＳＥ: トリメチルシリルエチル。
ダウエックス（登録商標）、セファデックス（登録商標）、キレックス（Chelex）（登録商標）およびトーヨーパール（Toyopearl）（登録商標）は、登録商標である。
【００４７】
以下に記載する方法、製造法および実施例において、イミデートの触媒カップリング、レブリン酸エステルの開裂、チオグリコシドの触媒カップリング、ｐ−メトキシベンジル基のけん化、メチル化および選択的脱保護、ベンジルエステルまたはエーテルの水素添加分解によるオリゴ−および多糖類の脱保護および硫酸化、エステルのけん化または硫酸化に関する通常の方法を、適当な中間体に、通常の方法を適用することにより、行うことができる。
【００４８】
本発明の化合物は、以下の様々な製造に従って合成される。
【００４９】
製造例１
６−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−１，２−Ｏ−イソプロピリデン−３−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコフラノース（２）
ジオール１（１０ｇ，４２．７ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（１００ｍｌ）に溶解させ、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（７．１ｇ，４７．３ｍｍｏｌ）とイミダゾール（５．８ｇ，８５．３ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温で攪拌する。２時間後、混合物をジクロロメタンで希釈し、水で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１／９、ｖ／ｖ、酢酸エチル／シクロヘキサン）で精製し、シロップ状の所望の生成物２（１１．９ｇ，８０％）を得る。
［α］D  −３４℃（ｃ  １．９，ＣＨＣｌ3）．
【００５０】
製造例２
６−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−１，２−Ｏ−イソプロピリデン−３−Ｏ−メチル−５−Ｃ−ビニル−α−Ｄ−グルコフラノース（４）
塩化オキサリル（３．２ｍｌ，３６．８ｍｍｏｌ）およびジメチルスルホキシド（５．２ｍｌ，７３．４ｍｍｏｌ）を−７８℃で無水ジクロロメタン（４０ｍｌ）に加え、その混合物を３０分間攪拌する。次いで、化合物２（６．４ｇ，１８．４ｍｍｏｌ）を加え、その混合物をさらに１時間攪拌する。次いで、トリエチルアミン（１５．３ｍｌ，１１０．０ｍｍｏｌ）を加え、３０分後、反応混合物をジクロロメタンで希釈する。標準的な後処理により五炭糖化合物（３）を得、以下の反応に直接用いる。粗ケトン３を無水テトラヒドロフラン（１００ｍｌ）に溶解し、ビニルマグネシウムブロミドのテトラヒドロフラン（２８ｍｌ，２７．６ｍｍｏｌ）１Ｍ溶液を０℃で加える。１時間後、反応混合物を希釈し、塩化アンモニウムではなく、水で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１／９、ｖ／ｖ、酢酸エチル／シクロヘキサン）で精製してシロップ状の所望の化合物４（７０％，４．８ｇ）を得る。
［α］D  −４０℃（ｃ  １．３，ＣＨＣｌ3）．
元素分析、計算値：Ｃ，５７．７２，Ｈ，９．１５．測定値：Ｃ，５７．７７，Ｈ，９．２３．
【００５１】
製造例３
１，２，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−メチル−５−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−グルコピラノース（６）
化合物４（３．５ｇ，９．４ｍｍｏｌ）を水（５０ｍｌ）に溶解する；ＩＲ−１２０樹脂（１ｇ）をそこへ加え、その混合物を８０℃で６時間加熱する。樹脂をろ去し、ろ液を濃縮する。粗生成物５を無水酢酸（１２ｍｌ）とピリジン（１３ｍｌ）を用いてアセチル化する。過剰の無水酢酸をメタノールで失活させ、溶媒を濃縮する。残渣を水とジクロロメタンで抽出する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（３／２、ｖ／ｖ、酢酸エチル／シクロヘキサン）での精製の後、固体のテトラアセテート６を得る（７５％，２．７ｇ）。
ｍ．ｐ．＝５０℃．
［α］D  −８４℃（ｃ  １．６，ＣＨＣｌ3）．
元素分析、計算値：Ｃ，５２．４７，Ｈ，６．１９．測定値：Ｃ，５２．５１，Ｈ，６．１９．
ＣＩ−ＭＳ：４０６（Ｍ＋ＮＨ4），３８９（Ｍ＋１）．
【００５２】
製造例４
メチル  ２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−（２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−メチル−５−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−グルカノシド（８）
化合物６（１．６ｇ，４．１ｍｍｏｌ）および化合物７（２．１ｇ，４．５ｍｍｏｌ）（P.J.GareggおよびH.Hultberg,Carbohydr.Res. 1981, 93, C10）を無水ジクロロメタン（５０ｍｌ）に溶解し、モレキュラーシーブス（４．０ｇ）を加える。反応混合物を室温で１時間攪拌し、ＴＭＳＯＴｆ（０．９５ｍｌ，５．２ｍｍｏｌ）をその後−７８℃で加える。反応混合物をその後室温までゆっくり温める。２時間後、反応混合物をトリエチルアミンで中和し、セライトでろ過する；ろ液を水で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（４／１、ｖ／ｖ、酢酸エチル／シクロヘキサン）で精製して固体の所望の化合物８（２．７７ｇ，８５％）を得る。
ｍ．ｐ．＝４７℃．
［α］D  −３６℃（ｃ  ０．６，ＣＨＣｌ3）．
元素分析、計算値：Ｃ，６５．１４，Ｈ，６．６１．測定値：Ｃ，６５．０９Ｈ，６．７０．
【００５３】
製造例５
メチル  ２，３，６−Ｏ−トリ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−（４，６−Ｏ−イソプロピリデン−３−Ｏ−メチル−５−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノシド（１０）
化合物８（２．７ｇ，３．４ｍｍｏｌ）をメタノール（４０ｍｌ）に溶解する。ナトリウム（触媒的）を０℃で加え、その混合物を室温で３時間攪拌する。溶媒を濃縮し、残渣９を無水アセトン（４０ｍｌ）に溶解し、２，２−ジメトキシプロパン（２ｍｌ）とｐ−トルエンスルホン酸（触媒的）を加える。反応混合物を室温で一晩攪拌する。溶媒を蒸発させ、残渣をクロロホルムに溶解し、水で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（１／１、ｖ／ｖ、酢酸エチル／シクロヘキサン）で精製し、固体の４’，６’−イソプロピリデン−Ｏ−誘導体１０（１．７ｇ，７０％）を得る。
ｍ．ｐ．＝５５℃．
［α］D  −１３℃（ｃ  ０．８，ＣＨＣｌ3）．
元素分析、計算値：Ｃ，６７．９７，Ｈ，７．１３．測定値：Ｃ，６７．８７，Ｈ，７．１６．
ＣＩ−ＭＳ：７０７（Ｍ＋１），７２４（Ｍ＋ＮＨ4）．
【００５４】
製造例６
メチル  ２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−（４，６−Ｏ−イソプロピリデン−３−Ｏ−メチル−５−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノシド（１２）
塩化オキサリル（０．３５ｍｌ，４．０ｍｍｏｌ）および無水ＤＭＳＯ（０．５７ｍｌ，８．０ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（１０ｍｌ）中−７８℃で３０分間攪拌する。無水ジクロロメタン（１０ｍｌ）中の化合物１０（１．４ｇ，２．０ｍｍｏｌ）をその溶液に加え、攪拌をさらに４５分間続ける。反応混合物を無水トリエチルアミン（１．７ｍｌ，１２．０ｍｍｏｌ）の添加により中和し、次いでジクロロメタンで希釈する。水で洗浄した後、有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮し、残渣１１を精製せずに以下の反応に直接用いる。ケトン１１を無水テトラヒドロフラン（１５ｍｌ）に溶解し、スーパーヒドリドのテトラヒドロフラン１Ｎ溶液（４ｍｌ，４．０ｍｍｏｌ）を−７８℃で加える。反応混合物を室温で１時間攪拌し、５％水酸化ナトリウム（２ｍｌ）と過酸化水素（１ｍｌ）を次いで加える。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチルに溶解させて水で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮し、残渣をクロマトグラフィー（２／１、ｖ／ｖ、酢酸エチル／シクロヘキサン）で精製して化合物１２（１．０ｇ，７０％）を得る。
［α］D  −１１℃（ｃ  ０．５，ＣＨＣｌ3）．
ＣＩ−ＭＳ：７２４（Ｍ＋１８），７０７（Ｍ＋１）．
【００５５】
製造例７
メチル  ２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−（２−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−メチル−５−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノシド（１４）
化合物１２（９４０ｍｇ，１．３ｍｍｏｌ）をピリジン（３ｍｌ）に溶解し、無水酢酸（０．３ｍｌ）を加える。反応混合物を室温で３時間攪拌する。過剰のピリジンと無水酢酸を濃縮し、残渣１３を、８０％酢酸（５ｍｌ）を用い６０℃で２時間のイソプロピリデンの脱保護に直接用いる。過剰の酢酸を蒸発させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（４／１、ｖ／ｖ、酢酸エチル／シクロヘキサン）で精製し、固体のジオール１４（６６０ｍｇ，７０％）を得る。
ｍ．ｐ．＝５３℃．
［α］D  −１０℃（ｃ  ０．８，ＣＨＣｌ3）．
ＣＩ−ＭＳ：７０９（Ｍ＋１），７２６（Ｍ＋１８）．
【００５６】
製造例８
メチル  ２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−（２−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−メチル−６−Ｏ−トシル−５−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノース（１５）
化合物１４（６００ｍｇ，０．９ｍｍｏｌ）をピリジン（３ｍｌ）に溶解し、塩化トシル（２４０ｍｇ，１．３ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温で３時間攪拌する。溶媒を蒸発させ、残渣をクロロホルムで希釈して水で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１／１、ｖ／ｖ、酢酸エチル／シクロヘキサン）で精製し、シロップ状のトシル化合物１５（２９７ｍｇ，８０％）を得る。
［α］D  −２６℃（ｃ  ０．８，ＣＨＣｌ3）．
【００５７】
製造例９
メチル  ２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−３−Ｏ−メチル−５−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノシド（１６）
化合物１５（５５０ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）をエタノール（３ｍｌ）に溶解させ、０．１Ｎエタノール性水酸化ナトリウム溶液（５ｍｌ）を次いで加える。反応混合物を７０℃で３時間加熱し次いでＩＲ−１２０樹脂（Ｈ+型）で中和してセライトでろ過する。濃縮後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１／１、ｖ／ｖ、酢酸エチル／シクロヘキサン）で精製し、シロップ状の化合物１６（２９２ｍｇ，７０％）を与える。
［α］D  ＋１３℃（ｃ  ０．５，ＣＨＣｌ3）．
ＣＩ−ＭＳ：６６６（Ｍ＋１８）．
【００５８】
製造例１０
メチル  ２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−（ベンジル−３−Ｏ−メチル−２−Ｏ−５−Ｃ−メチリデン−α−Ｌ−イドピランウロネート）−α−Ｄ−グルコピラノシド（１７）
化合物１６（２６０ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍｌ）に溶解させ、溶液を−７８℃で攪拌し、オゾンを３０秒間泡立たせる。その溶液は薄黄色に変わる。ジメチルスルフィドをその溶液に加え、反応混合物を次いで水で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して以下の反応をさらなる精製なしに直接行う。粗無水物をｔｅｒｔ−ブタノール（１６ｍｌ）に溶解させ、２−メチル−２−ブテン（５ｍｌ）と水（１６ｍｌ）を加える。ＮａＨ2ＰＯ4（７００ｍｇ）とＮａＣｌＯ2（７００ｍｇ）をその混合物に連続して加える。懸濁液を室温で一晩激しく攪拌し、水で希釈して酢酸エチルで抽出する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して以下の反応を直接行う。粗酸をジメチルホルムアミド（２５ｍｌ）に溶解し、テトラブチルアンモニウムアイオダイド（０．７ｇ，２．０ｍｍｏｌ）、炭酸水素カリウム（０．２５ｇ，２．５ｍｍｏｌ）
および臭化ベンジル（０．２５０ｍｌ，２．１ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温で５時間攪拌する。反応混合物を水とジエチルエーテルで抽出する。エーテル相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２／１、ｖ／ｖ、酢酸エチル／シクロヘキサン）で精製し、シロップ状の誘導体１７（２３６ｍｇ，８０％）を得る。
ＣＩ−ＭＳ：７７４（Ｍ＋１８）．
【００５９】
製造例１１
メチル  Ｏ−（６−Ｏ−アセチル−２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（ベンジル  ２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート）−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−アセチル−２−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−ベンジルオキシカルボニル−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド（１９）．
イミデート１８（Van der Heijdenら、 abstr. 9th Eur. Carbohydr. Symp. Utrecht, July 6-11, 1997; A74, p 154）（８１ｍｇ，７８．２μｍｏｌ）、受容体１７（６５ｍｇ，８６．０μｍｏｌ）および細かいモレキュラーシーブス（７０ｍｇ，４Å）を１／２（ｖ／ｖ）ジクロロメタン／ジエチルエーテル混合物（２．４ｍｌ）中で不活性雰囲気下に攪拌する。
【００６０】
反応混合物を３０分間攪拌し、次いでＮａＨＣＯ3を中和点まで加える。ろ過および濃縮の後、残渣をセファデックス（登録商標）ＬＨ  ２０ゲルのカラム（１／１、ｖ／ｖ、ジクロロメタン／エタノール）で、次いでシリカゲルカラム（１／１（ｖ／ｖ）酢酸エチル／シクロヘキサン）で精製して化合物１９（８６ｍｇ，６７％）を得る。
［α］D  ＋６６℃（ｃ  １．０，ＣＨ2ＣＨ2）
1Ｈ  ＮＭＲは以下の表１に示す。
【００６１】
製造例１２
メチル  Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−カルボキシ−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（２０）．
M. PetitouおよびC.A.A. van Boeckel、Progress in the Chemistry of Organic Natural Products, published by W. Herzら、 Vienna, Springer-Verlag, New York, 1992, 143-210に従う。
【００６２】
化合物１９（４９ｍｇ，３０．０μｍｏｌ）の酢酸（３ｍｌ）溶液を、炭上５％パラジウム（７３ｍｇ，３５  ｂ）の存在下に水素（３．５ＭＰａ）下に１２時間４０℃で攪拌する。その混合物をセライトでろ過し、濃縮し、水（４×５ｍｌ）で共蒸留する。残渣を１Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（３ｍｌ）に溶解し、５５℃で３時間加熱する。溶液を冷却し、水で溶出するセファデックス（登録商標）６２５Ｆカラム（１７０ｍｌ）に通す。化合物２０を含む画分をダウエックスＨ+樹脂のカラムを通す。溶出液を濃縮して化合物２０（２５ｍｇ，８６％）を得る。［α］D  ＋１０５℃（ｃ  １．０，Ｈ2Ｏ）
1Ｈ  ＮＭＲは以下の表１に示す。
【００６３】
【表１】
0004695756.tif 000003
【００６４】
製造例１３
メチル  Ｏ−（４，６−Ｏ−イソプロピリデン−２，３−ジ−Ｏ−メチル−５−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド（２２）．
水素化ナトリウム（０．３１ｇ，１３．０ｍｍｏｌ）を、メチル  Ｏ−（４，６−Ｏ−イソプロピリデン−３−Ｏ−メチル−５−Ｃ−ビニル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド（１０）（６．１１ｇ，８．６５ｍｍｏｌ）およびヨウ化メチル（０．８０ｍｌ，１３．０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９．００ｍｌ）溶液に０℃で加える。その混合物を２時間攪拌し（ＴＬＣ）、メタノールを加え、反応混合物を水に注ぐ。この混合物を酢酸エチルで抽出し、抽出物を水で洗浄し、乾燥して濃縮する。残渣をシリカのカラム（３／２（ｖ／ｖ）シクロヘキサン／ジエチルエーテル）で精製して２２（５．９２ｇ，８８％）を得る。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２８，（３．２（ｖ／ｖ）シクロヘキサン／ジエチルエーテル）．
【００６５】
製造例１４
メチル  Ｏ−（４，６−Ｏ−イソプロピリデン−２，３−ジ−Ｏ−メチル−５−Ｃ−エチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド（２３）．
酸化プラチナ（１６０ｍｇ）を２２（５．８０ｇ，８．０４ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（４００ｍｌ）溶液に加える。水素を導入する。その混合物を４０分間攪拌し（ＴＬＣ）、ろ過し、蒸発させて２３を得る。
ＴＬＣ：Ｒf＝０．６０（４／１（ｖ／ｖ）トルエン／酢酸エチル）．
【００６６】
製造例１５
メチル  Ｏ−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−５−Ｃ−エチル−β−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド（２４）．
粗化合物２３を７０％酢酸（６０ｍｌ）に溶解し、８０℃で２時間攪拌する。その混合物を真空下に濃縮し、トルエンで共蒸発させて２４を得る。
ＴＬＣ：Ｒf＝０．５２（４／１（ｖ／ｖ）ジクロロメタン／メタノール）．
【００６７】
製造例１６
メチル  Ｏ−（ベンジル  ２，３−ジ−Ｏ−メチル−５−Ｃ−エチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド（２５）．
２，２，６，６−テトラメチル−１−ピペリジルオキシ（１７．５ｍｇ）、炭酸水素ナトリウム溶液（１７．５ｍｌ）、臭化カリウム（８７ｍｇ）およびテトラブチルアンモニウムクロリド（１１５．５ｍｇ）を、化合物２４（５．７５ｇ）のテトラヒドロフラン（２８ｍｌ）溶液に加える。その混合物を０℃に冷却し、飽和塩化ナトリウム溶液（１７ｍｌ）、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（８．７０ｍｌ）および次亜塩素酸ナトリウム（１．３Ｍ，２０ｍｌ）の混合物を、１５分にわたって加える。１時間攪拌した後、その混合物を水で希釈し、ジクロロメタンで（３回）抽出する。有機相を塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過して蒸発乾固して粗酸誘導体を得る。
【００６８】
酸誘導体をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０７ｍｌ）に窒素雰囲気下で溶解させる。炭酸水素カリウム（４．１０ｇ）と臭化ベンジル（９．７０ｍｌ）を加え、その混合物を１６時間攪拌する。酢酸エチルと水を加え、抽出後、有機相を濃縮する。シリカゲルクロマトグラフィーでの精製により３．８１ｇの化合物２５（化合物２３から収率６０％）を得る。
［α］D  ＋２４（ｃ＝０．１５，ジクロロメタン）．
【００６９】
製造例１７
メチル  Ｏ−（ベンジル−５−Ｃ−エチル−４−Ｏ−レブリニル−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド（２６）．
化合物２５（３．５１ｇ，４．４６ｍｍｏｌ）を無水ジオキサン（４５ｍｌ）に溶解させる。レブリン酸（１．００ｇ，８．９３ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１．７０ｇ，８．９３ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（０．１１ｇ，８．９３ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を１６時間攪拌し、酢酸エチルで抽出し、抽出物を５％硫酸水素カリウム水溶液、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および水で順次洗浄し、乾燥して濃縮する。残渣をシリカのカラム（２／１および次いで３／２（ｖ／ｖ）シクロヘキサン／酢酸エチル）で精製し、純粋な２６（３．６４ｇ，８５％）を得る。
［α］D  ＋２６（ｃ＝０．９，ジクロロメタン）．
【００７０】
製造例１８
Ｏ−（ベンジル  ５−Ｃ−エチル−４−Ｏ−レブリニル−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート）−（１→４）−１，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノース（２７）．
化合物２６（３．３５ｇ，３．７８ｍｍｏｌ）を無水酢酸（２２ｍｌ）に溶解させる。その溶液を−２０℃に冷却し、２２ｍｌの硫酸の無水酢酸（１０ｍｌの無水酢酸中１ｍｌの硫酸）冷溶液を加える。その混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水で洗浄し、乾燥して濃縮する。残渣をシリカのカラム（１／１（ｖ／ｖ）シクロヘキサン／酢酸エチル）で精製し、２７（２．２０ｇ，６５．５％）を得る。
ＴＬＣ：Ｒf＝０．２４，（１／１（ｖ／ｖ）シクロヘキサン／酢酸エチル）．
【００７１】
製造例１９
Ｏ−（ベンジル  ５−Ｃ−エチル−４−Ｏ−レブリニル−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート）−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−アセチル−２−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノース（２８）．
ベンジルアミン（１１ｍｌ，１０１．４ｍｍｏｌ）を化合物２７（２．１８ｇ，２．６７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５０ｍｌ）溶液に加える。その混合物を４時間攪拌する。酢酸エチルで抽出し、抽出物を１Ｍ塩酸水溶液（１０２ｍｌ）および水で洗浄し、乾燥して濃縮する。残渣をシリカのカラム（１／１（ｖ／ｖ）トルエン／酢酸エチル）で精製して化合物２８の混合物（α／β＝５０／５０）（１．３３ｇ，６５％）を得る。
ＴＬＣ：Ｒf＝０．２２（１／１（ｖ／ｖ）トルエン／酢酸エチル）．
【００７２】
製造例２０
Ｏ−（ベンジル  ５−Ｃ−エチル−４−Ｏ−レブリニル−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート）−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−アセチル−２−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノシル  トリクロロアセトイミデート（２９）．
化合物２８（１．３２ｇ，１．７１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３４ｍｌ）に溶解させ、トリクロロアセトニトリル（０．８７ｍｌ，８．５０ｍｍｏｌ）と炭酸セシウム（０．９０ｇ，２．７３ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で加える。その混合物を２時間攪拌し（ＴＬＣ）ろ過する。残渣をシリカのカラム（３／２（ｖ／ｖ）シクロヘキサン／酢酸エチル）で精製してイミデート２９の混合物（α／β＝８５／１５）（１．２０ｇ，７７％）を得る。
ＴＬＣ：Ｒf＝０．３６（１／２（ｖ／ｖ）シクロヘキサン／酢酸エチル）．
【００７３】
製造例２１
メチル  Ｏ−（ベンジル  ５−Ｃ−エチル−４−Ｏ−レブリニル−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート）−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−アセチル−２−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−ベンジルオキシカルボニル−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド（３０）．
トリフルオロメタンスルホン酸ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエステルのジクロロメタン（１Ｍ，０．１９ｍｌ）溶液を、アルゴン雰囲気下に−２０℃で、４Åモレキュラーシーブス（１．９３ｇ）の存在下に、イミデート２９（１．１９ｇ，１．２９ｍｍｏｌ）およびメチル  ２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−４−（ベンジル  ３−Ｏ−メチル−２−Ｏ−５−Ｃ−メチリデン−α−Ｌ−イドピランウロネート）−α−Ｄ−グルコピラノシド１７（１．０２ｇ，１．３５ｍｍｏｌ）のトルエン（４０ｍｌ）溶液に、加える。３０分後（ＴＬＣ）、トリフルオロメタンスルホン酸ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエステルのジクロロメタン（１Ｍ，０．１９ｍｌ）溶液を再度加える。３０分後（ＴＬＣ）、固体の炭酸水素ナトリウムを加える。その溶液をろ過し、水で洗浄し、乾燥して蒸発乾固する。残渣をセファデックス（登録商標）ＬＨ２０のカラムクロマトグラフィーで、次いでシリカのカラム（２／１（ｖ／ｖ）トルエン／酢酸エチル）で精製して純粋な四糖類３０−α（１．１４ｇ，５８％）を得る。
［α］D  ＋４７（ｃ＝０．２１，ジクロロメタン）．
【００７４】
製造例２２
メチル  Ｏ−（ベンジル  ５−Ｃ−エチル−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート）−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−アセチル−２−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−ベンジルオキシカルボニル−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド（３１）．
化合物３０（１．１３ｇ，０．７５ｍｍｏｌ）を２／１（ｖ／ｖ）エタノール／トルエン混合物（１５０ｍｌ）に溶解させ、ヒドラジン酢酸塩（０．３５ｇ，３．７３ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を１時間攪拌し（ＴＬＣ）、濃縮する。残渣をシリカのカラム（３／２（ｖ／ｖ）トルエン／酢酸エチル）で精製して３１（０．８１６ｇ，８３％）を得る。
［α］D  ＋３５（ｃ＝１．０１，ジクロロメタン）．
【００７５】
製造例２３
メチル  Ｏ−（６−Ｏ−アセチル−２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（ベンジル  ５−Ｃ−エチル−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロネート）−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−アセチル−２−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−ベンジルオキシカルボニル−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピラノシド（３３）.
６−Ｏ−アセチル−２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−Ｄ−グルコピラノース  トリクロロアセトイミデート３２（３４．７ｍｇ，０．０２４５ｍｍｏｌ）(P. Westerduinら、BioOrg. Med. Chem., 1994, 2, 1267)およびグリコシル受容体３１（８０ｍｇ，０．０５６ｍｍｏｌ）を製造例２１に従い処理する。その化合物をセファデックス（登録商標）ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（１／１（ｖ／ｖ）ジクロロメタン／エタノール）で、次いでシリカのカラム（３／２  （ｖ／ｖ）ジイソプロピルエーテル／酢酸エチル）で精製して誘導体３３（５４．６ｍｇ，５８％）を得る。
［α］D＋５５（ｃ＝１，ジクロロメタン）．
【００７６】
製造例２４
メチル  Ｏ−（６−Ｏ−アセチル−２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（５−Ｃ−エチル−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−Ｏ−（３，６−ジ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−カルボキシ−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（３４）．
化合物３３（４０ｍｇ，０．０２４ｍｍｏｌ）の酢酸（２ｍｌ）溶液を水素雰囲気下で炭上１０％パラジウム（８０ｍｇ）存在下に１６時間攪拌し、ろ過する。ろ液を濃縮して化合物３４を得る。
【００７７】
製造例２５
メチル  Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（５−Ｃ−エチル−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−カルボキシ−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシド（３５）．
５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（２１６μｌ）を粗化合物３４のメタノール（８６６μｌ）溶液に加える。２５時間後、水を導入して反応混合物を水で溶出するセファデックス（登録商標）Ｇ−２５ゲル（２×３８ｃｍ）カラムに通す。溶出液を濃縮し、ダウエックス（登録商標）５０Ｈ+カラム（２ｍｌ）に通し、凍結乾燥する。この段階で、1Ｈ  ＮＭＲを用いてすべての保護基が除去されたことを確認する。
【００７８】
実施例１
メチル  Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−カルボキシ−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシド、ナトリウム塩（２１）．
C.A.A. van Boeckelおよび M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32, 1671-1690.に従う。
化合物２０（２０ｍｇ，２０．７μｍｏｌ）とトリエチルアミン／三酸化硫黄錯体（１６４ｍｇ，０．９０μｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（２ｍｌ）溶液を５５℃に加熱し、１８時間３０分間光から保護する。反応混合物を室温に冷却し、次いで０．２ＭＮａＣｌ水溶液で希釈する。その溶液を次いで０．２Ｍ  ＮａＣｌ水溶液で溶出するセファデックス（登録商標）Ｇ２５Ｆ（１７０ｍｌ）のカラムの頂部に置く。
【００７９】
五糖類を含む画分を濃縮し、水で溶出する同じカラムを用いて脱塩(desalified)する。凍結乾燥の後、化合物２１を得る（３０．５ｍｇ，８５％）．
［α］D  ＋４９℃（ｃ＝０．６３，Ｈ2Ｏ）
1Ｈ  ＮＭＲを以下の表２に示す。
【００８０】
【表２】
0004695756.tif 000004
【００８１】
実施例２
メチル  Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（５−Ｃ−エチル−２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−カルボキシ−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシド，ナトリウム塩（３６）．
トリエチルアミン／三酸化硫酸錯体（９１ｍｇ）を粗化合物３５のジメチルホルムアミド（１．３ｍｌ）溶液に加える。２０時間後、５５℃で、その溶液を０．２Ｍ塩化ナトリウムで溶出するセファデックス（登録商標）Ｇ−２５（２×３８ｃｍ）のカラムの頂部に置く。生成物を含む画分を濃縮して、水で溶出する同じカラムを用いて脱塩する。化合物３６を凍結乾燥後に得る（２１．９ｍｇ，化合物３３から５２％）．
1Ｈ  ＮＭＲを以下の表３に示す。
【００８２】
【表３】
0004695756.tif 000005
【００８３】
先の実施例１および２と同様に処理し、以下の実施例３〜６の化合物３７〜４０を製造する。これら化合物の得られた1Ｈ  ＮＭＲスペクトルは以下に示す立体配置と一致する。
【００８４】
実施例３
メチル  Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−カルボキシ−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−２−Ｏ−スルホ−３，６−ジ−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド，ナトリウム塩（３７）．
［α］D  ＋５１℃（ｃ＝０．４８，水）
【００８５】
【化３】
0004695756.tif 000006
【００８６】
実施例４
メチル  Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−カルボキシ−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−２，３−ジ−Ｏ−スルホ−６−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド，ナトリウム塩（３８）．
［α］D  ＋５７℃（ｃ＝０．２８，水）
【００８７】
【化４】
0004695756.tif 000007
【００８８】
実施例５
メチル  Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，６−アンヒドロ−５−Ｃ−カルボキシ−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノピラノシル）−（１→４）−２，６−ジ−Ｏ−スルホ−３−Ｏ−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド，ナトリウム塩（３９）．
［α］D  ＋５３℃（ｃ＝０．３，水）
【００８９】
【化５】
0004695756.tif 000008
【００９０】
実施例６
メチル  Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−メチル−６−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，３−ジ−Ｏ−メチル−β−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸）−（１→４）−Ｏ−（２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−（１→４）−Ｏ−（２，７−アンヒドロ−５−Ｃ−カルボキシ−６−デオキシ−３−Ｏ−メチル−β−Ｄ−マンノヘプトピラノシル）−（１→４）−２，３，６−トリ−Ｏ−スルホ−α−Ｄ−グルコピラノシド  ナトリウム塩（４０）．
［α］D  ４９℃（ｃ＝０．２５，水）
【００９１】
【化６】
0004695756.tif 000009
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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