(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）エキセンジン-４［配列番号２］，および
（ｂ）ＧＬＰ−１よりなる群から選択される化合物を含む、個体における毒性血液量増加症に関連する容態または障害を治療、予防または緩和するための医薬組成物であって、
ここに、該化合物は末梢投与に用いられ、
該容態または障害は、腎不全、うっ血性心不全、ネフローゼ症候群、肺水腫、全身性水腫、硬変、高血圧、妊娠前子癇症または子癇症のうちのいずれか１以上である該組成物。
【請求項２】
該医薬が、個体における尿流量を増加させる請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
該医薬が、個体において、ナトリウム排出を増加させる、カリウム排出を減少させるか、または尿中カリウム排出を増加させない請求項１または２記載の医薬組成物。
【請求項４】
該医薬が、個体における心収縮性を増加させる請求項１記載の医薬組成物。
【請求項５】
毒性血液量増加症に関連する該容態または障害の予防が、外科的処置前に該個体を治療することを含む請求項１〜４のいずれか１記載の医薬組成物。
【請求項６】
該外科的処置が、眼科外科的処置または神経外科的処置である請求項５記載の医薬組成物。
【請求項７】
該化合物が、皮下、頬側、鼻腔内、肺内、経口、静脈内、眼内、経腸または経皮投与に用いられる請求項１〜６いずれか１記載の医薬組成物。
【請求項８】
該ＧＬＰ−１が、配列番号３のアミノ酸配列を含む請求項１記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は有効量のグルカゴン様ペプチド−１［７−３６］アミド（「ＧＬＰ−［７−３６］ＮＨ2」または単に「ＧＬＰ−１」と省略される）、エキセンジン、またはエキセンジンもしくはＧＬＰ−１のアゴニストを投与することを含む尿流量を増加させる方法に関する。尿中ナトリウム排出を増加させ、尿中カリウム濃度を減少させる方法も開示する。該方法は、腎不全、うっ血性心不全、ネフローゼ症候群、硬変、肺水腫および高血圧のごとき毒性血液増加症に関連する容態または障害を治療するのに有用である。本発明の方法に使用するための医薬組成物も開示する。
本発明は、有効量のエキセンジン、ＧＬＰ−１、またはエキセンジンもしくはＧＬＰ−１のアゴニストを投与することを含む変力性反応を引起す方法にも関する。これらの方法は、うっ血性心不全のごとき、心収縮性の増加によって緩和し得る容態または障害を治療するのに有用である。
以下の説明は本発明に関連する情報を要約する。それは、本明細書で供されるいかなる情報も現在特許請求されている発明の先行技術であるという承認ではなく、特別にまたは暗に引用されたいずれの刊行物も本発明の先行技術であるという承認でもない。
【０００２】
【従来の技術】
ＧＬＰ−１
グルカゴン様ペプチド−１［７−３６］アミド（ＧＬＰ−１［７−３６］ＮＨ2またはＧＬＰ−１ともいう）はグルカゴン遺伝子の産物である。それは主に内臓から血漿中に分泌され、膵臓および胃腸機能に関連する種々の生物学的効果を生じる。親ペプチド（プログルカゴン（ＰＧ））は、膵臓中のグルカゴン（ＰＧ［３２−６２］）およびＧＬＰ−１［ ７−３６］ＮＨ2（ＰＧ［７２−１０７］）および、ＧＬＰ−１［７―３７］ＮＨ2（７８−１０７ＰＧ）が主要産物である腸のＬ細胞中のＧＬＰ−１［７−３７］（ＰＧ［７８−１０８］）およびＧＬＰ−１［７−３６］ＮＨ2（ＰＧ［７８−１０７］）を含む起源の組織に依存する他のペプチド産物を産生する多数の切断サイトを有する。
【０００３】
ＧＬＰ−１［７８−３６］ＮＨ2（プログルカゴン［７８−１０７］または、本明細書で用いるごとく、普通は、単に「ＧＬＰ−１」としても知れている）は、インスリン変力性効果を有し、膵臓β−細胞からのインスリン分泌を刺激する；ＧＬＰ−１は膵臓α−細胞からのグルカゴン分泌を阻害もする［Orskov, et al., Diabetes, 42:658-61, 1993; D'Alessio, et al., J. Clin. Invest., 97:133-38, 1996］。ＧＬＰ−１は胃を空にすることを阻害し［Williams B, et al., J. Clin Endocrinol Metab 81(1):327-32, 1996; Wettergren A, et al., Dig Dis Sci 38(4):665-73, 1993］、胃酸分泌を阻害する［Schjoldager BT, et al., Dig Dis Sci 34(5):703-8, 1989; O'Halloran DJ, et al., J Endocrinol 126(1):169-73, 1990; Wettergren A, et al., Dig Dis Sci 38(4):665-73, 1993］と報告されている。ＧＬＰ−１の脳室内投与の利尿、抗口渇効果が報告されているが、この報告はＧＬＰ−１の末梢、腹膜組織内注射はこの効果を有しないと主張する［Tand-Christensen et al., Am. J. Physiol., 271:R848-56, 1996］。そのカルボキシ末端にさらなるグリシン残基を有するＧＬＰ−１［７−３７］もヒトにおけるインスリン分泌を刺激する［Orskov, et al., Diabetes, 42:658-61,1993］。ＧＬＰ−１ののインスリン変力性効果の要因であると信じられている輸送膜Ｇタンパク質アデニル酸シクラーゼ結合受容体は、β−細胞株からクローン化されている［Thorens, Proc. Natl. Acad. Sci., USA 89:8641-45, 1992］。
【０００４】
グルカゴンおよびグルカゴン様ペプチドが様々な心血管効果を有することは明らかである。グルカゴンは正の変力性および変時性効果を有し、正常の個体において動脈血圧をわずかに上昇させ、局所的血液循環に影響することが報告されている。ＧＬＰ−１は収縮期および拡張期血圧の両方を適度に上昇させることが分っているが、ＧＬＰ−２はそれらのパラメータに対して何の影響も有しない。頚静脈経由で投与されたＧＬＰ−１は収縮期および拡張期血圧および心拍数の増加をもたらすことが報告されている［Reviewed in Barragan, J.M., et al., Regul. Peptides, 67:63-68, 1996］。
【０００５】
エキセンジン
エキセンジンは、アリゾナに内生するトカゲであるアメリカドクトカゲおよびメキシコドクトカゲの毒中に見出されるペプチドである。エキセンジン−３はヘロデルマ=ホリダム（Heloderama horridum）の毒中に存在し、エキセンジン−４はヘロデルマ=サスペクタム（Heloderma suspectum）の毒中に存在する［Eng, J., et al., J. Biol. Chem., 265:20259-62, 1990; Eng., J., et al., J. Biol. Chem., 267:7402-05, 1992］。該エキセンジンはグルカゴン様ペプチドファミリーのいくつものメンバーに、ＧＬＰ−１に対して最高相同性５３％で類似するいくつかの配列を有する［Goke, et al., J. Biol. Chem., 268:19650-55, 1993］。
【０００６】
エキセンジン−４は、インスリン−分泌βＴＣｌ細胞上のＧＬＰ−１受容体にて、モルモット膵臓からの分散された腺房細胞にて、および胃壁細胞にて効力のあるアゴニストであり；該ペプチドは、単離した胃において、ソマトスタチン放出を刺激し、ガストリン放出を阻害する［Goke, et al., J. Biol. Chem., 268:19650-55, 1993; Schepp, et al., Eur. J. Pharmacol., 69:183-91, 1994; Eissele, et al., Life Sci., 55:629-34, 1994］。エキセンジン−３およびエキセンジン−４は、膵臓腺房細胞におけるｃＡＭＰ産生、およびそれからのアミラーゼ放出を刺激することにおいて、ＧＬＰ−１アゴニストであることが分った［Malhotra, R., et al., Regulatory Peptides, 41:149-56, 1992; Raufman, et al., J. Biol. Chem. 267:21432-37, 1992; Singh, et al., Regul. Pept. 53:47-59, 1994］。糖尿病治療および高脂血症の予防にエキセンジン−３およびエキセンジン−４のインスリン変力性活性を使用することが提案されている［Eng, 米国特許第 ５,４２４,２８６号］。
【０００７】
エキセンジン［９−３９］、カルボキシアミド化された分子、およびフラグメント３−３９ないし９−３９のごとき切り出されたエキセンジンペプチドは、ＧＬＰ−１の効力がある選択性アゴニストであると報告されている［Goke, et al., J. Biol. Chem., 268:19650-55, 1993; Raufman, J.P., et al., J. Biol. Chem. 266:2897-902, 1991; Schepp, W., et al., Eur. J. Pharm. 269:183-91, 1994; Montrose-Rafizadeh, et al., Diabetes, 45(Suppl. 2):152A, 1996］。エキセンジン［９−３９］は、in vivoで内因性ＧＬＰ−１をブロックし、低減されたインスリン分泌をもたらす［Wang et al., J. Clin. Invest., 95:417-21, 1995; D'Alessio, et al., J. Clin. Invest., 97:133-38, 1996］。ＧＬＰ−１のインスリン変力性効果の明らかな要因である受容体はラットの膵島細胞からクローン化されている［Thorens, B., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:8641-8645, 1992］。エキセンジンおよびエキセンジン［９−３９］は該クローン化されたＧＬＰ−１受容体に結合する（ラット膵臓β細胞ＧＬＰ−１受容体：Fehmann HC, et al., Peptides 15(3):453-6, 1994; ヒトＧＬＰ−１受容体：Thorens B, et al., Diabetes 42(11):1678-82, 1993）。該クローン化されたＧＬＰ−１受容体で感染された細胞において、エキセンジン−４はアゴニストであり、すなわち、それはｃＡＭＰを増加させ、一方、エキセンジン［９−３９］はアンタゴニストであり、すなわち、それはエキセンジン−４およびＧＬＰ−１の刺激性作用をブロックする［同上］。
【０００８】
エキセンジン［９−３９］は完全長エキセンジンのアンタゴニストとしても作用し、エキセンジン−３およびエキセンジン−４によって膵臓腺房細胞の刺激を阻害する［Raufman, et al., J. Biol. Chem., 266:2897-902, 1991; Raufman, et al., J. Biol. Chem., 266:21432-37, 1992］。エキセンジン［９−３９］は、エキセンジン−４による血漿中インスリンレベルの刺激を阻害し、エキセンジン−４およびＧＬＰ−１のソマトスタチン放出刺激およびガストリン放出阻害の活性を阻害する［Kolligs, F., et al., Diabetes, 44:16-19, 1995; Eissele, et al., Life Sciences, 55:629-34, 1994］。頚静脈経由で投与されたエキセンジン−４は、収縮期、拡張期および平均動脈血圧および心拍数の増加を引起すことが報告されている［Barrangan, et al., Regul. Pep. 67:63-68, 1996］。
【０００９】
近年、エキセジンが胃を空にすることを阻害することが分った［１９９６年８月８日に出願され、本発明と同一所有権者を享受し、出典明示して本明細書に含まれる米国特許出願第０８/６９４,９５４号］。エキセンジン［９−３９］は食物摂取の制御における中央ＧＬＰ−１の生理学的関連性を調査するのに用いられている［Turton, M. D. et al., Nature, 379:69-72, 1996］。脳室内（ＩＣＶ）注射によって投与されたＧＬＰ−１は、ラットにおいて、食物摂取を阻害した。脳室内注射によって与えられたＧＬＰ−１の飽食誘発効果はエキセンジン［９−３９］のＩＣＶ注射によって阻害されたと報告されている［Turton、 上記］。しかしながら、ＧＬＰ−１は末梢注射によって投与された場合、マウスにおいて食物摂取を阻害しないと報告されている［Turton, M.D., Nature 379:69-72, 1996; Bhavsar, S.P., Soc. Neurosci. Abstr. 21:460(188.8), 1995］。近年、エキセンジンおよびエキセンジンアゴニストの投与も食物摂取を低減させることが明らかとなった［１９９７年１月７日に出願され、本発明と同一所有権者を享受し、出典明示して本明細書に含まれる米国仮出願第６０/０３４,９０５号］。
【００１０】
利尿剤
尿流量を増加させる剤、すなわち利尿剤は毒性血液増加症状態に関連する容態または障害を治療するのに有用である。そのような容態または障害は、腎不全、うっ血性心不全、ネフローゼ症候群、硬変、肺水腫、および高血圧を含む。利尿剤は前子癇症および子癇症のごとき、妊娠における容態を治療するのにも用いられる。利尿剤のさらなる使用は、眼科外科および神経外科のごときいくらかの外科的処置前に体積を減少させるためのそれらの使用を含む。
チアジド、係蹄利尿剤、カルボニックアンヒドラーゼインヒビターおよび浸透圧利尿剤のごとき多くの利尿剤が直面するひとつの困難は、それらはナトリウム排出を増加させるために使用されるであろうが、それらが尿中カリウム損失の増加ももたらすことである。カリウム損失の影響の例は、筋力低下、（呼吸筋の麻痺を含む）麻痺、心電図異常、心不整および心停止を含む。
いくつかの利尿剤が直面するもうひとつの困難はそれらの低速作動であり、緊急事態におけるそれらの使用は役に立たない。
かくして、患者においてカリウム濃度を激減させず、急速モードの作動を有する尿流量を増加させる方法の必要性がある。従って、そのような方法、およびそれに有用な化合物および組成が発明され、記載され、ここに特許請求される。
【００１１】
変力性化合物
変力性効果（例えば、心収縮性の増加）を誘発する化合物は、例えば、うっ血性心不全の治療に有用であると理解されていた。うっ血性心不全は、工業国における死亡および身体障害の最も一般的な要因であり、５年間で約５０％の死亡率を有する［Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Ed. McGraw Hill, New York, pp.809-838］。現在臨床的に使用される変力性剤はジギタリス、交感神経作用アミンおよびアムリノンを含む［Harrison's Principles of Internal Medicine, 12th, Edition, 1991, McGraw Hill, New York, pp.894-899］。
【００１２】
ジゴトキシン（強心配糖体、古いが有効な心不全療法）は、当初、ジギタリス葉（Digitalis purpureaおよびDigitalis lanata）から得られた。強心配糖体は細胞膜を横断するナトリウムおよびカリウムイオンの能動性輸送の効力のある高選択性インヒビターである［Goodman and Gilman, 上記］。強心配糖体は心筋を縮める速度を増加させ、心室機能の向上をもたらすことが報告され；この効果は、筋節収縮の速度および程度の増加のための収縮期中のサイトゾルＣａ2+の収縮性タンパク質と相互作用する可能性における増加のためであると報告されている。［Goodman and Gilman, 上記］。
ジゴトキシンおよび関連する強心配糖体（例えば、ジギトキシン）は、主に腎臓によるそれらの排出が１．５〜５日間の血漿中ｔ１／２をもたらすので、有用な作動継続時間を有する。しかし、これらの薬剤の治療指数は非常に低く、毒性：最小有効用量比が２：１であり、致死量：最小有効用量比が５：１ないし１０：１である。チアジドおよび係蹄利尿剤の使用による尿中カリウム損失は、心不整脈の疑いを含むジギタリス中毒の危険性を深刻に促進し、カリウム節約利尿剤がしばしば必要である。強心配糖体の緩慢な排泄はジギタリス中毒の危険性の期間を延長し得、これらの薬剤に関して病院患者の２０％に起ると報告されている。ウアバインを除く全ての強心配糖体に関する吸収および作動の開始は、幾分長引き、これは緊急な心臓容態において不利であろう。
【００１３】
交換神経作用アミンは、通常、エピネフリン、イソプロテレノール、ドーパミンおよびドブタミンを含み、心筋収縮を刺激する急速事態に有用であり得るが、それらは、普通、定常的血管内注入および該患者の連続的集中的監視を必要とする。それらは、典型的に、明らかに受容体下降調節（downregulation）のため、〜８時間後に効力を失活する。
アムリノン（非カテコールアミン、非配糖体剤）も連続的静脈内投与を必要とする。
可能性のある変力性剤のこの説明は、（１）変力性であり、（２）作動の急速開始、（３）作動の長期持続時間（タキフィラキシーのない持続効果を含む）、（４）低毒性（毒性対治療用量の高い比）、（５）急速かつ深い利尿効果、（６）尿中カリウム損失の抑制、および（７）簡便な（非静脈内）経路の投与を持つ治療の必要性および要望を例示する。本発明者らは、これらの基準を満たすエキセジンおよびＧＬＰ−１を見出した。
【００１４】
発明の要約
本発明は、エキセンジン、ＧＬＰ−１およびそれらの化合物のアゴニストが急速変力性および利尿効果を有するという驚くべき発見に関わる。ＧＬＰ−１は、末梢的に投与された場合には利尿効果はないと報告されていたが、本発明者らは、驚くべきことに、ＧＬＰ−１は、実際は、末梢投与後に利尿効果を有することを見出した。エキセジン、ＧＬＰ−１、およびエキセンジンとＧＬＰ−１とのアゴニストのこの利尿効果は尿中ナトリウム濃度の増加を伴う。この利尿効果は、多くの利尿剤が尿中カリウム濃度の大いなる増加を生じることが分っていることからの予想に反して、尿中カリウム濃度の減少を伴う。
【００１５】
本発明は、例えば、エキセジン−３［配列番号１：His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser G1y Ala Pro Pro Pro Ser-NH2］、またはエキセジン−４［配列番号２：His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser-NH2］、またはそこでエキセジンが尿流量を増加させるその作用を働かせる受容体に効果的に結合する他の化合物（エキセジンアゴニスト）のようなエキセジンの投与を含む尿流量を増加させる新規な方法に向けられる。本発明は、また、ＧＬＰ−１［配列番号３：His Ala Glu G1y Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu G1y Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg-NH2］またはそこでＧＬＰ−１が尿流量を増加させるその作用を働かせる受容体に効果的に結合する他の化合物（ＧＬＰ−１アゴニスト）の投与を含む新規な方法に向けられる。
【００１６】
第１の局面において、本発明は、治療上有効量のエキセジンまたはエキセジンアゴニストを個体に投与することを含む、個体における尿流量を増加させる方法を特徴とする。一つの好ましい局面において、該エキセジンはエキセジン−３である。より好ましくは、該エキセジンはエキセジン−４である。エキセジンアゴニストとは、当該受容体またはエキセジンがこの効果を生じる受容体に結合することによって、エキセジンの効果を模倣して、尿流量を増加させ、ナトリウム排出を増加させ、および／または尿中カリウム濃度、（排出された尿中のカリウム濃度）を減少させる化合物を意味する。ある種の新規エキセジンアゴニスト化合物は１９９７年８月８日に出願され、本発明と同一所有権者を享受し、出典明示して本明細書に含まれる米国仮特許出願第６０/０５５,４０４号に記載される。ある種の他の新規エキセジンアゴニスト化合物は、両方とも１９９７年１１月１４日に出願され、本発明と同一所有権者を享受し、出典明示して本明細書に含まれる米国仮特許出願第６０/０６６,０２９および６０/０６５,４４２号に記載される。好ましいエキセンジンアゴニスト化合物は、米国仮特許出願第６０/０６６,０２９および６０/０６５,４４２号に記載されるものを含む。
【００１７】
一つの好ましい局面において、本発明の方法に用いるエキセジンまたはエキセジンアゴニストはエキセジン−４である。もう一つの好ましい局面において,該エキセジンはエキセジン−３である。他の好ましい局面において、該エキセジンまたはエキセジンアゴニストは式（Ｉ）［配列番号４］：
Xaa1  Xaa2  Xaa3  Gly   Xaa5  Xaa6  Xaa7  Xaa8  Xaa9  Xaa10
Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaal7 Ala   Xaa19 Xaa20
Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28-Z1；
［式中、Xaa1  はHis、ArgまたはTyr；
Xaa2  はSer、Gly、AlaまたはThr；
Xaa3 はAspまたはGlu；
Xaa5 はAlaまたはThr；
Xaa6 はAla、Phe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa7 はThrまたはSer；
Xaa8 はAla、SerまたはThr；
Xaa9 はAspまたはGlu；
Xaa10はAla、Leu、Ile、Val、ペンチルグリシンまたは Met；
Xaa11はAlaまたはSer；
Xaa12はAlaまたはLys;
Xaa13はAlaまたはGln；
Xaa14はAla, Leu、Ile、ペンチルグリシン、ValまたはMet；
Xaa15はAlaまたはGlu；
Xaa16はAlaまたはGlu；
Xaa17はAlaまたはGlu；
Xaa19はAlaまたはVal；
Xaa20はAlaまたはArg；
Xaa21はAla またはLeu；
Xaa22はPhe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa23はIle、Val、Leu、ペンチルグリシン、tert-ブチルグリシンまたはMet；
Xaa24はAla、GluまたはAsp；
Xaa25はAla、Trp、Phe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa26はAlaまたはLeu；
Xaa27はAlaまたはLys；
Xaa28はAlaまたはAsn；
Z1は-OH、
-NH2、
Gly-Z2、
Gly G1y-Z2、
Gly G1y Xaa31-Z2、
Gly G1y Xaa31 Ser-Z2、
Gly G1y Xaa31 Ser Ser-Z2、
Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly-Z2、
Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala-Z2、
Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2、
Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37-Z2、
Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Z2、または
Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38 Xaa39-Z2；
ここに、Xaa31、Xaa36、Xaa37およびXaa38は、独立して、Pro、ホモプロリン、3Hyp、4Hyp、チオプロリン、Ｎ-アルキルグリシン、Ｎ-アルキルペンチルグリシンおよびＮ-アルキルアラニンよりなる群から選択され；
Xaa39はSer、ThrまたはTyr；および
Z2は-OHまたは-NH2；
ただし、Xaa3、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27、およびXaa28のうちの３つを超えてAlaではなく、当該化合物はエキセンジン−３［配列番号１］またはエキセンジン−４［配列番号２］ではない］
で表される化合物である。本発明の他の局面において、尿流量の増加は該個体におけるナトリウム排出の増加を伴う。最も好ましい局面において、尿流量の増加は該個体における尿中カリウム濃度を増加させない。
【００１８】
本発明の他の具体例において、治療上有効量のエキセジンまたはエキセジンアゴニストを個体に投与することを特徴とする、個体における尿中のカリウムの濃度を減少させる方法を提供する。
さらにもう一つの具体例において、治療上有効量のエキセジンまたはエキセジンアゴニストを個体に投与することを特徴とする、個体における毒性血液量増加症に関連する容態または障害を予防するか、または緩和する方法を提供する。
毒性血液量増加症に関連する容態または障害とは、比較的高い細胞外容積によて引起されるか、悪化されるか、または重篤化される対象におけるいずれの容態または障害をも意味する。そのような容態または障害は、限定されないが、腎不全、うっ血性心不全、ネフローゼ症候群、肺水腫、硬変、および高血圧を含む。
【００１９】
本発明は、治療上有効量のエキセジンまたはエキセジンアゴニストを個体に投与することを特徴とする、個体における急速利尿を誘発する方法を提供する。本発明の一つの好ましい使用は、いくらかの眼科外科的処置またはいくらかの神経外科的処置におけるごとく、細胞外体積の低減が所望される外科的処置のための患者の準備である。かくして、本発明は治療上有効量のエキセジンまたはエキセジンアゴニストを個体に投与することを特徴とする、外科的処置のために個体を準備する方法も提供する。好ましくは、該エキセジンまたはエキセジンアゴニストは該外科的処置前に個体に投与する。
もう一つの好ましい局面において、治療上有効量のエキセジンまたはエキセジンアゴニストを個体に投与することを特徴とする、個体における腎血漿流量および糸球体濾過速度を増加させる方法を提供する。
さらにもう一つの好ましい局面において、治療上有効量のエキセジンまたはエキセジンアゴニストを個体に投与することを特徴とする、個体における妊娠前子癇症または子癇症を治療する方法を提供する。
該エキセジンまたはエキセジンアゴニスト投与の好ましい態様は、末梢（皮下または静脈内）投与である。好ましくは、該エキセジンまたはエキセジンアゴニストを皮下投与する。好ましくは、約１μｇ〜３０μｇないし約１０〜２０ｍｇのエキセジンまたはエキセジンアゴニストを用量当たり投与する。より好ましくは、約３０μｇないし約１０ｍｇ、または約３００μｇないし約５ｍｇのエキセジンまたはエキセジンアゴニストを用量当たり投与する。最も好ましくは、約３０μｇないし約１ｍｇのエキセジンまたはエキセジンアゴニストを用量あたり投与する。
他の好ましい局面において、該末梢投与は、頬側、鼻腔内、肺内、経口、眼内、経腸、および経皮投与よりなる群から選択される。
【００２０】
本発明は、医薬上許容される担体と一緒に治療上有効量のエキセジンまたはエキセジンアゴニストを投与することを含む、血液量増加症に関連する容態または障害を治療するのに用いる医薬組成物も提供する。
さらにもう一つの局面において、本発明は、医薬上許容される担体と一緒に治療上有効量のエキセジンまたはエキセジンアゴニストを投与することを含む、個体における尿流量を増加させるのに用いる医薬組成物を提供する。
好ましくは、これらの医薬組成物はエキセジン−３を含む。より好ましくは、これらの医薬組成物はエキセジン−４を含む。
好ましくは、これらの医薬組成物は式Ｉ［配列番号４］のエキセジンアゴニストを含む。
【００２１】
本発明はＧＬＰ−１の投与を含む尿流量を増加させる新規な方法にも向けられる。
一つの具体例において、本発明は治療上有効量のＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを個体に投与することを含む、個体における尿流量を増加させる方法を特徴とする。ＧＬＰ−１アゴニストとは、当該受容体またはＧＬＰ−１がこの効果を生じる受容体に結合することによって、ＧＬＰ−１の効果を模倣して、尿流量を増加させ、ナトリウム排出を増加させ、および／または尿中カリウム濃度を減少させる化合物を意味する。ある種のＧＬＰ−１アゴニストは、１９９６年４月３０日に出願され、Glucagon-Like Insulinotropic Peptide Analogs, Compositions and Methods of Useと題される、Chenらの米国特許第５,５１２,５４９号に記載される。他のＧＬＰ−１アゴニストは１９９６年１１月１２日に出願され、Biologically Active Fragments of Glucagon-Like Insulinotropic Peptideと題される、Johnsonらの米国特許第５,５４７,００８号に記載される。さらに他のＧＬＰ−１アゴニストは１９９６年８月１３日に出願され、GLP-1 Analogs Useful for Diabetes Treatmentと題される、Buckleyらの米国特許第５,５４５,６１８号に記載される。３つの引用された米国特許の全ては、出典明示して本明細書に含まれる。
本発明の他の局面において、尿流量の増加は該個体におけるナトリウム排出の増加を伴う。最も好ましい局面において、尿流量の増加は該個体における尿中カリウム濃度を増加させない。
【００２２】
本発明の他の具体例において、治療上有効量のＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを個体に投与することを特徴とする、個体における尿中のカリウム濃度を減少させる方法を提供する。
本発明のさらにもう一つの局面において、治療上有効量のＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを個体に投与することを特徴とする、個体における毒性血液量増加症に関連する容態または障害を予防するか、または緩和する方法を提供する。
本発明は、治療上有効量のＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを個体に投与することを特徴とする、個体における急速利尿を誘発する方法を提供する。本発明の一つの好ましい使用は、いくつかの眼科外科的処置およびいくつかの神経外科的処置におけるごとく、細胞外体積の低減が所望される外科的処置のための患者の準備におけるものである。かくして、本発明は、治療上有効量のＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを個体に投与することを特徴とする、外科的処置のために個体を準備する方法を提供する。好ましくは、該ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストは該外科的処置前に該個体に投与する。
他の好ましい局面において、治療上有効量のＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを個体に投与することを特徴とする、個体における腎血漿流量および糸球体濾過速度を増加させる方法を提供する。
【００２３】
さらに他の好ましい局面において、治療上有効量のＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを個体に投与することを特徴とする、個体における妊娠前子癇症または子癇症を治療する方法を提供する。該ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニスト投与の好ましい態様は、末梢投与による。好ましくは、該ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを皮下または静脈内投与する。好ましくは、約１μｇ〜３０μｇないし約１０〜２０ｍｇのＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを用量当たり投与する。より好ましくは、約３０μｇないし約１０ｍｇ、または約３００μｇないし約５ｍｇのＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを用量当たり投与する。最も好ましくは、約３０μｇないし約１ｍｇのＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを用量当たり投与する。
他の好ましい局面において、該末梢投与は、頬側、鼻腔内、肺内、経口、経腸、および経皮投与よりなる群から選択される。
【００２４】
本発明は、医薬上許容される担体と一緒に治療上有効量のＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを含む、血液量増加症に関連する容態または障害の治療に用いる医薬組成物も提供する。
さらに他の局面において、医薬上許容される担体と一緒に治療上有効量のＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを含む、個体における尿流量を増加させるのに用いる医薬組成物を提供する。
さらなる局面において、本発明は、医薬上許容される担体と一緒に治療上有効量のＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを含む、個体における妊娠前子癇症または子癇症を治療するのに用いる医薬組成物を提供する。
本発明は、治療上有効量のエキセジンもしくはエキセジンアゴニスト、またはＧＬＰ−１もしくはＧＬＰ−１アゴニストを投与することを含む、個体における変力性効果を誘発する方法も特徴とする。かくして、一つの局面において、治療上有効量のエキセジン、エキセジンアゴニスト、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを投与することを特徴とする、個体における心収縮性を増加させる方法を提供する。
【００２５】
関連する局面において、治療上有効用のエキセジン、エキセジンアゴニスト、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを投与することを特徴とする、個体における心収縮性を増加させることによって緩和し得る容態または障害を治療する方法を提供する。そのような容態または障害は、うっ血性心不全、肺および全身性水腫、および腎不全を含む。好ましくは、該容態または障害はうっ血性心不全である。
好ましくは、それらの方法に用いられるエキセンジンはエキセンジン−３である。より好ましくは、該エキセンジンはエキセンジン−４である。
好ましくは、それらの方法で用いられるエキセンジンアゴニストは式（Ｉ）［配列番号４］のエキセンジンアゴニストである。
【００２６】
好ましい局面において、これらの方法で用いられるべきエキセンジン、エキセンジンアゴニスト、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストは、本明細書に記載された用量を用いて末梢投与する。
好ましくは、該末梢投与は、頬側、鼻腔内、肺内、経口、経腸、および経皮投与よりなる群から選択される。
もう一つの好ましい局面において、該エキセジン、エキセジンアゴニスト、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを皮下または静脈内投与する。本発明において、医薬上許容される担体と一緒に治療上有効量のエキセジン、エキセジンアゴニスト、ＧＬＰ−１またはＧＬＰ−１アゴニストを含む、心収縮性を増加させることによって緩和し得る容態または障害を治療するのに用いる医薬組成物も提供する。好ましくは、該エキセンジンはエキセンジン−３である。より好ましくは、該エキセンジンはエキセンジン−４である。好ましくは、これらの医薬組成物は式Ｉ［配列番号４］のエキセジンアゴニストを含む。
【００２７】
発明の詳細な説明
本発明のエキセンジン、ＧＬＰ−１、ならびにそれらのアナログおよびアゴニストは、それらの医薬特性の観点から有用である。エキセンジンもしくはＧＬＰ−１のアナログまたはアゴニストとしての活性は、以下に示すアッセイにおける活性によって示し得る。エキセンジンもしくはＧＬＰ−１のそれらのアゴニストの食物摂取を低減することへの効果は、以下の実施例に記載された方法または尿流量、またはナトリウムもしくはカリウム排出への効果を測定する当業者に知られた方法を用いて、確認し、評価し、またはスクリーニングし得る。
【００２８】
エキセンジン−４は、血圧を調節する剤と共に投与した場合、高血圧効果を有することが分っているが、利尿効果は依然として明白であり、エキセンジン−４の利尿効果は、完全には、その高血圧効果に帰するものではない。
【００２９】
エキセジンアゴニスト化合物
エキセンジンアゴニスト化合物は、米国仮特許出願第６０/０５５,４０４；６０/０６６,０２９；および６０/０６５,４４２号に記載されたものを含む。好ましいエキセンジンアゴニスト化合物は、式（Ｉ）［配列番号４］：
Xaa1  Xaa2  Xaa3  Gly   Xaa5  Xaa6  Xaa7  Xaa8  Xaa9  Xaa10
Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaal7 Ala   Xaa19 Xaa20
Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28-Z1；
［式中、Xaa1  はHis、ArgまたはTyr；
Xaa2  はSer、Gly、AlaまたはThr；
Xaa3 はAspまたはGlu；
Xaa5 はAlaまたはThr；
Xaa6 はAla、Phe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa7 はThrまたはSer；
Xaa8 はAla、SerまたはThr；
Xaa9 はAspまたはGlu；
Xaa10はAla、Leu、Ile、Val、ペンチルグリシンまたは Met；
Xaa11はAlaまたはSer；
Xaa12はAlaまたはLys;
Xaa13はAlaまたはGln；
Xaa14はAla, Leu、Ile、ペンチルグリシン、ValまたはMet；
Xaa15はAlaまたはGlu；
Xaa16はAlaまたはGlu；
Xaa17はAlaまたはGlu；
Xaa19はAlaまたはVal；
Xaa20はAlaまたはArg；
Xaa21はAla またはLeu；
Xaa22はPhe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa23はIle、Val、Leu、ペンチルグリシン、tert-ブチルグリシンまたはMet；
Xaa24はAla、GluまたはAsp；
Xaa25はAla、Trp、Phe、Tyrまたはナフチルアラニン；
Xaa26はAlaまたはLeu；
Xaa27はAlaまたはLys；
Xaa28はAlaまたはAsn；
Z1は-OH、
-NH2、
Gly-Z2、
Gly G1y-Z2、
Gly G1y Xaa31-Z2、
Gly G1y Xaa31 Ser-Z2、
Gly G1y Xaa31 Ser Ser-Z2、
Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly-Z2、
Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala-Z2、
Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2、
Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37-Z2、
Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Z2、または
Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38 Xaa39-Z2；
ここに、Xaa31、Xaa36、Xaa37およびXaa38は、独立して、Pro、ホモプロリン、3Hyp、4Hyp、チオプロリン、Ｎ-アルキルグリシン、Ｎ-アルキルペンチルグリシンおよびＮ-アルキルアラニンよりなる群から選択され；
Xaa39はSer、ThrまたはTyr；および
Z2は-OHまたは-NH2；
ただし、Xaa3、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27、およびXaa28のうちの３つを超えてAlaではなく、当該化合物はエキセンジン−３［配列番号１］またはエキセンジン−４［配列番号２］ではない］
で表されるペプチド化合物を含む。
【００３０】
Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンおよびＮ−アルキルアラニンの好ましいＮ−アルキル基は、好ましくは１ないし約６個の炭素原子、より好ましくは１ないし４個の炭素原子の低級アルキル基を含む。適当な化合物は、実施例４〜６４［配列番号５ないし６５］で識別されるものならび実施例６５および６６で識別されるそれらの化合物を含む。
好ましいエキセンジンアゴニスト化合物は、Xaa1がHisまたはTyrであるものを含む。より好ましくは、Xaa1はHisである。
Xaa2がGlyであるそれらの化合物が好まれる。
Xaa14がLeu、ペンチルグリシンまたはMetであるそれらの化合物が好まれる。
好ましい化合物は、Xaa25がTrpまたはPheであるものである。
好ましい化合物は、Xaa6がPheまたはナフチルアラニンであり；Xaa22がPheまたはナフチルアラニンであって；Xaa23がIleまたはValであるものである。
Xaa31、Xaa36、Xaa37およびXaa38が、独立して、Pro、ホモプロリン、チオプロリンおよびＮ−アルキルアラニンから選択される化合物が好まれる。
好ましくは、Z1は-NH2である。
好ましくは、Z2は-NH2である。
一つの局面によれば、Xaa1がHisまたはTyr、より好ましくはHisであり；Xaa2がGlyであり；Xaa6がPheまたはナフチルアラニンであり；Xaa14がLeu、ペンチルグリシンまたはMetであり；Xaa22がPheまたはナフチルアラニンであり；Xaa23がIleまたはValであって；Xaa31、Xaa36、Xaa37およびXaa38は、独立して、Pro、ホモプロリン、チオプロリンおよびＮ−アルキルアラニンから選択される式（Ｉ）の化合物が好まれる。より好ましくは、Z1は-NH2である。
【００３１】
特に好まれる局面によれば、特に好まれる化合物は式（Ｉ）のものを含み、ここに、Xaa1はHisまたはArgであり；Xaa2はGlyまたはAlaであり；Xaa3はAspまたはGluであり；Xaa5はAlaまたはThrであり；Xaa6はAla、Pheまたはナフチルアラニンであり；Xaa7はThrまたはSerであり；Xaa8はAla、SerまたはThrであり；Xaa9はAspまたはGluであり；Xaa10はAla、Leuまたはペンチルグリシンであり；Xaa11はAlaまたはSerであり；Xaa12はAlaまたはLysであり；Xaa13はAlaまたはGlnであり；Xaa14はAla、Leuまたはペンチルグリシンであり；Xaa15はAlaまたはGluであり；Xaa16はAlaまたはGluであり；Xaa17はAlaまたはGluであり；Xaa19はAlaまたはValであり；Xaa20はAlaまたはArgであり；Xaa21はAlaまたはLeuであり；Xaa22はPheまたはナフチルアラニンであり；Xaa23はIle、Valまたはter-ブチルグリシンであり；Xaa24はAla、GluまたはAspであり；Xaa25はAla、TrpまたはPheであり；Xaa26はAlaまたはLeuであり；Xaa27はAlaまたはLysであり；Xaa28はAlaまたはAsnであり；Z1は-OH、-NH2、Gly-Z2、Gly G1y-Z2、Gly G1y Xaa31-Z2、Gly G1y Xaa31 Ser-Z2、Gly G1y Xaa31 Ser Ser-Z2、Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly-Z2、Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala-Z2、Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2、Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37-Z2、Gly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Z2、またはGly G1y Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38 Xaa39-Z2であり； Xaa31、Xaa36、Xaa37およびXaa38は、独立して、Pro、ホモプロリン、チオプロリンまたはＮ−メチルアラニンであって；Z2は-OHまたは-NH2であり；ただし、Xaa3、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27およびXaa28のうち３つを超えてAlaではない。特に好まれる化合物は配列番号６〜２７のアミノ酸配列を有するものを含む。
特に好まれる局面によれば、Xaa14がLeu、Ile、Valまたはペンチグリシン、より好ましくはLeuまたはペンチルグリシンであって、Xaa25がPhe、Tyrまたはナフチルアラニン、より好ましくはPheまたはナフチルアラニンである化合物を提供する。これらの化合物は、in vitroおよびin vivoの両方で、ならびに該化合物の合成中において、酸化劣化に対してより影響され難いであろう。
【００３２】
定義
本発明と一致し、かつ本明細書で用いるごとく、特記しない限り、以下の語は以下の意味を有するものと定義される。
「アミノ酸」なる語は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、およびアミノ酸アナログをいい、もしそれらの構造が当該立体異性体を許すならば、ＤおよびＬ立体異性体の全てである。天然アミノ酸は、アラニン（Ala）、アルギニン（Arg）、アスパラギン（Asn）、アスパラギン酸（Asp）、システイン（Cys）、グルタミン（Gln）、グルタミン酸（Glu）、グリシン（Gly）、ヒスチジン（His）、イソロイシン（Ile）、ロイシン（Leu）、リジン（Lys）、メチオニン（Met）、フェニルアラニン（Phe）、プロリン（Pro）、セリン（Ser）、トレオニン（Thr）、トリプトファン（Trp）、チロシン（Tyr）およびバリン（Val）を含む。非天然アミノ酸は、限定されないが、アゼチジンカルボン酸、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、ベータ−アラニン、アミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、第三級ブチルグリシン、２,４−ジアミノイソ酪酸、デスモシン、２,２'−ジアミノピメリン酸、２,３−ジアミノプロピオン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、ホモプロリン、ヒドロキシリジン、アロ−ヒドロキシリジン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロ−イソロイシン、Ｎ−メチルアラニン、Ｎ−メチルグリシン、Ｎ−メチルイソロイシン、Ｎ−メチルペンチルグリシン、Ｎ−メチルバリン、ナフトアラニン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチン、ペンチルグリシン、ピペコリン酸およびチオプロリンを含む。アミノ酸アナログは、可逆的または非可逆的に化学的にブロックされているか、またはそれらのＮ−末端またはそれらの側鎖が修飾されている天然または非天然アミノ酸を含み、例えば、メチオニンスルホキシド、メチオニンスルホン、Ｓ−（カルボキシメチル）−システイン、Ｓ−（カルボキシメチル）−システインスルホキシドおよびＳ−（カルボキシメチル）−システインスルホンである。
【００３３】
「アミノ酸アナログ」なる語は、Ｃ−末端カルボキシ基、Ｎ−末端アミノ基または側鎖官能基のいずれかが化学的に別の官能基に修飾されているアミノ酸をいう。例えば、アスパラギン酸−（ベータ−メチルエステル）はアスパラギン酸のアミノ酸アナログであり；Ｎ−エチルグリシンはグリシンのアミノ酸アナログであり；またはアラニンカルボキサミドはアラニンのアミノ酸アナログである。
【００３４】
「アミノ酸残基」なる語は、（１）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ−ＮＨ−［式中、Ｒは典型的に−ＣＨ（Ｒ’）−、Ｒ’はアミノ酸側鎖であり、典型的に、Ｈまたは置換基を含む炭素］；または（２）
【００３５】
【化１】
0004677095.tif 000002
【００３６】
［式中、ｐは１、２または３であり、それぞれ、アゼチジンカルボン酸、プロリンまたはピペコリン酸を表す］
で表される構造を有する遊離基をいう。
【００３７】
アルキル基のごとき有機遊離基と共に本明細書で言及される「低級」なる語は、約６以下、好ましくは、４以下、および有利には１または２の炭素原子を持つそのような基と定義する。そのような基は、直鎖または分枝鎖であることができる。
「医薬上許容される塩」は、当該化合物および有機または無機酸の組合せから誘導される本明細書に記載される化合物の塩を含む。実際には、塩形態の使用は塩基形態の使用となる。該化合物は遊離塩基形態および塩形態の両方において有用である。
【００３８】
さらに、以下の略は以下を表す：
「ＡＣＮ」または「ＣＨ3ＣＮ」は、アセトニトリルをいう。
「Ｂｏｃ」、「ｔＢｏｃ」または「Ｔｂｏｃ」は、ｔ−ブトキシカルボニルをいう。
「ＤＣＣ」は、Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキサカルボジイミドをいう。
「Ｆｍｏｃ」は、フルオレニルメトキシカルボニルをいう。
「ＨＢＴＵ」は、ヘキサフルオロリン酸２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムをいう。
「ＨＯＢｔ」は、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物をいう。
「ｈｏｍｏＰ」または「ｈＰｒｏ」は、ホモプロリンをいう。
「ＭｅＡｌａ」または「Ｎｍｅ」は、Ｎ−メチルアラニンをいう。
「ｎａｐｈ」は、ナフチルアラニンをいう。
「ｐＧ」または「ｐＧｌｙ」は、ペンチルグリシンをいう。
「ｔＢｕＧ」は、第三級ブチルグリシンをいう。
「ＴｈｉｏＰ」または「ｔＰｒｏ」は、チオプロリンをいう。
「３Ｈｙｐ」は、３−ヒドロキシプロリンをいう。
「４Ｈｙｐ」は、４−ヒドロキシプロリンをいう。
「ＮＡＧ」は、Ｎ−アルキルグリシンをいう。
「ＮＡＰＧ」は、Ｎ−アルキルペンチルグリシンをいう。
「Ｎｏｒｖａｌ」は、ノルバリンをいう。
「Ｎｏｒｌｅｕ」は、ノルロイシンをいう。
【００３９】
化合物の調製
本明細書に記載されたエキセジンおよびエキセジンアゴニストのごとき化合物は、標準固相ペプチド合成技術および好ましくは自動化または半自動化ペプチド合成機を用いて調製することができる。典型的には、そのような技術を用いて、−Ｎ−カルバモイル保護されたアミノ酸と樹脂上の成長ペプチド鎖に結合したアミノ酸とを室温にてジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリジノンまたは塩化メチレンのごとき不活性溶媒中、ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび１−ヒドロキシトリアゾールのごときカップリング剤の存在下、ジイソプロピルエチルアミンのごとき塩基の存在下で連結する。得られたペプチド−樹脂からトリフルオロ酢酸またはピペリジンのごとき試薬を用いて、該Ｎ−カルバモイル保護基を除去し、該ペプチド鎖に付加すべき次なる所望するＮ−保護されたアミノ酸と共にカップリング反応を繰り返す。適当なＮ−保護基は当該分野でよく知られており、ｔ−ブチロキシカルボニル（ｔＢｏｃ）フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が本明細書では好まれる。
【００４０】
ペプチド合成機で用いる溶媒、アミノ酸誘導体および４−メチルベンズヒドリル−アミン樹脂はApplied Biosystems Inc. (Foster City, CA)から購入することができる。以下の側鎖が保護されたアミノ酸はApplied Biosystems, Inc. (Foster City, CA)から購入することができる：Boc-Arg(Mts)、Fmoc-Arg(Pmc)、Boc-Thr(Bzl)、Fmoc-Thr(t-Bu)、Boc-Ser(Bzl)、Fmoc-Ser(t-Bu)、Boc-Tyr(BrZ)、Fmoc-Tyr(t-Bu)、Boc-Lys(Cl-Z)、Fmoc-Lys(Boc)、Boc-Glu(Bzl)、Fmoc-Glu(t-Bu)、Fmoc-His(Trt)、Fmoc-Asn(Trt)およびFmoc-Gln(Trt)。Boc-His(BOM)はApplied Biosystems, Inc.またはBachem Inc.(Torrance, CA)から購入することができる。アニソール、ジメチルスルフィド、フェノール、エタンジチオール、およびチオアニソールはAldrich Chemical Company (Milwaukee, WI)から得ることができる。Air Products and Chemicals (Allentown, PA)がＨＦを供給する。エチルエーテル、酢酸およびメタノールはFischer Scientific (Pittsburgh, PA)から購入することができる。
【００４１】
自動ペプチド合成機（Model 430A, Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA）で、ＮＭＰ/ＨＯＢｔ系（オプション１）およびｔＢｏｃまたはＦｍｏｃ化学を用い、キャップをして、固相ペプチド合成を行なうことができる（［Applied Biosystems User's Manual for the ABI 430A Peptide Synthesizer, Version 1.3B July 1, 1988, section 6, pp.49-70, Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA］を参照）Ｂｏｃ−ペプチド−樹脂をＨＦで切断することができる（−５℃ないし０℃、１時間）。該ペプチドを水および酢酸を交換することで抽出し、濾液を凍結乾燥する。該Ｆｍｏｃ−ペプチド樹脂は標準方法［Introduction to Cleavage Techniques, Applied Biosystems, Inc., 1990, pp.6-12］を用いて切断することができる。Advanced Chem Tech Synthesizer (Model MPS 350, Luisville, Kentucky)を用いて、ペプチドを組立てることもできる。
【００４２】
Waters Delta Prep 3000 systemを用いるＲＰ−ＨＰＬＣ（分取用および分析用）によって、ペプチドを精製することができる。Ｃ４、Ｃ８またはＣ１８分取用カラム（１０μ、２．２×２５ｃｍ；Vydac, Hesperia, CA）を用いてペプチドを単離することができ、Ｃ４、Ｃ８またはＣ１８分析用カラム（５μ、０．４６×２５ｃｍ；Vydac）を用いて純度を測定することができる。溶媒（Ａ＝０．１％ ＴＨＦ/水およびＢ＝０．１％ ＴＦＡ/ＣＨ3ＣＮ）を１．０ｍｌ/分の流速にて分析用カラムに、１５ｍｌ/分の流速にて分取用カラムに送り込むことができる。アミノ酸解析はWater Pico Tag Systemで行ない、Maxima programを用いて処理することができる。ペプチドを気相酸加水分解法によって加水分解することができる（１１５℃、２０〜２４時間）。加水分解物を標準方法によって誘導体化し、分析することができる［Cohen, et al., The Pico Tag Method: A Manual of Advanced Techniques for Amino Acid Analysis, pp.11-52, Millipore Corporation, Milford, MA (1989)］。高速原子衝突分析法をM-Scan, Incorporated (West Chester, PA)によって行なうことができる。質量補正をヨウ化セシウムまたはヨウ化セシウム／グリセロールを用いて実行することができる。飛行時間検出を用いるプラズマ脱離イオン化法をApplied Biosystems Bio-Ion 20 質量分析装置で行なうことができる。エレクトロスプレー質量分析をVG-Trio装置で行なうことができる。
本発明に有用なペプチド化合物は、今や当該分野で知られている方法を用いる組換えＤＮＡ技術を用いて調製することができる（例えば、［Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d Ed., Cold Spring Harbor (1989)］を参照）。本発明に有用な非ペプチド化合物は当該分野で知られている技術によって調製することができる。例えば、ホスフェート含有アミノ酸およびそのようなアミノ酸を含有するペプチドを当該分野で知られている方法を用いて調製することができる（例えば、［Bartlett and Landen, Biorg. Chem. 14:356-377 (1986)］を参照）。
【００４３】
エキセンジンもしくはＧＬＰ−１のアゴニスト、アナログまたは誘導体は本発明の方法に含まれる。アナログまたは誘導体は、同様のアミノ酸配列を有し、尿流量の増加、ナトリウム排出の増加および／またはカリウム排出の減少、関連するエキセンジンまたはＧＬＰ−１またはそれらに対するアゴニストの活性をある程度保持するエキセンジンまたはＧＬＰ−１の機能性変異体である。機能性変異体とは、特定のエキセンジンまたはＧＬＰ−１またはそれらに対するアゴニストの複数の活性の代りとなる活性を有する誘導体を意味する。好まれる機能性変異体は、特定のエキセンジンまたはＧＬＰ−１またはそれらに対するアゴニストの活性全てを保持するが、該機能性変異体は、例えば、本明細書に記載されたもののごとき機能検定で測定されたように、定量測定した場合、より強いかより弱い活性を有するであろう。好まれる機能性変異体は、関連するエキセジン、ＧＬＰ−１またはそれらに対するアゴニストの活性の約１％ないし約１０,０００％以内、より好ましくは約１０％ないし約１０００％の間、より好ましくは約５０％ないし約５００％の間の活性を有する。誘導体は、該関連するエキセジン、ＧＬＰ−１またはそれらに対するアゴニストに対して、少なくとも約５０％の配列類似性、好ましくは約７０％、より好ましくは約９０％、さらにより好ましくは約９５％配列類似性を有する。「配列類似性」とは、ポリペプチド起源に関わらず２つの異なるポリペプチド間で観察された「相同性」をいう。
【００４４】
いくらかの活性を保持する該誘導体の能力は、本明細書に記載された方法を用いて測定し得る。誘導体は、例えば、リン酸化、グリコシル化、架橋、アシル化、タンパク質分解切断、抗体分子、膜分子または他のリガンドへの結合によって変換する間またはその後に生じる修飾を含む（［Ferguson et al., Annu. Rev. Biochem. 57:285-320, 1988］を参照）。
誘導体は標準化学技術および組換え核酸分子技術を用いて生成し得る。特定のポリペプチドへの修飾は、固相合成の間にサイト指向された突然変異誘発およびアミノ酸置換によるように意図されたものか、あるいは、該ポリペプチドを産生する宿主中で突然変異によるごとく偶発的なものでよい。誘導体を含むポリペプチドは、［Sambrook et al., Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)］に記載されたもののごとき標準技術を用いて得られる。
【００４５】
上記の化合物は種々の無機および有機の酸ならびに塩基と共に塩を形成する。そのような塩は、例えば、ＨＣｌ、ＨＢｒ、Ｈ2ＳＯ4、Ｈ3ＰＯ4、トリフルオロ酢酸、酢酸、ギ酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、マレイン酸、フマル酸およびカンフルスルホン酸などの有機および無機酸と共に調製された塩を含む。塩基と共に調製された塩は、アンモニア塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムおよびカリウム塩）、およびアルカリ土類塩（例えば、カルシウムおよびマグネシウム塩）を含む。該塩は、該塩が溶解しない溶媒または媒体中で、あるいは、次いで、真空または凍結乾燥によって、または適当なイオン交換樹脂上で存在する塩のイオンを別のイオンに交換することによって除去される水のごとき溶媒中で該生成物の遊離した酸または塩基の形態を適当な塩基または酸の複数の相同物と反応させることによるような常法手段によって形成することができる。
【００４６】
特許請求された組成物は医薬上許容される塩（例えば、酸付加塩）および／またはそれらの錯体として調剤することも可能である。医薬上許容される塩は、それらが投与される濃度にて非毒性塩である。そのような塩の調製は、該組成物がその生理学的効果を働かせることを妨害することなく該組成物の物理化学的特徴を変化させることによって薬理学的使用を可能にし得る。物理的特性の有用な変化の例は、経粘膜投与を可能にするために融点を低下させることおよびより高い濃度の薬剤の投与を可能にするために溶解性を増加させることを含む。
医薬上許容される塩は、硫酸塩、塩酸塩、リン酸塩、スルファミン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、石炭酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロへキシルスルファミン酸塩およびキニン酸塩を含有するもののごとき酸付加塩を含む。医薬上許容される塩は、塩酸、硫酸、リン酸、スルファミン酸、酢酸、クエン酸、乳酸、石炭酸、マロン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクロヘキシルスルファミン酸、およびキニン酸から得ることが可能である。そのような塩は、例えば、該塩が溶解しない溶媒または媒体中で、あるいは、次いで、真空または凍結乾燥によって、または適当なイオン交換樹脂上で存在する塩のイオンを別のイオンに交換することによって除去される水のごとき溶媒中で該生成物の遊離した酸または塩基の形態を適当な塩基または酸の複数の相同物と反応させることによって調製することができる。
上記の化合物はそれらの薬理学的特性の観点で有用である。特に、本発明の化合物は、尿流量を増加させ、ナトリウム排出を増加させかつカリウム排出を低下させ、および高毒性血液増加症に関連する容態または障害を緩和する剤としての活性を所有する。
【００４７】
本発明に有用な組成は（静脈内、筋肉内および皮下を含む）非経口または鼻腔内または経口投与に適した調剤の形態で簡便に供給することができる。いくらかの場合、エキセンジンまたはエキセンジンアゴニストおよび、アミリン、アミリンアゴニスト、ＣＣＫ、またはレプチンのごとき別の食物摂取低減、血漿中グルコース低減または血漿中脂質低減剤を単一組成物または一緒に投与するための溶液で供給することが簡便である。他の場合、該エキセンジンまたはエキセンジンアゴニストとは別にさらなる剤を投与することがより有利であろう。最も良くは、適当な投与フォーマットは各患者に対して個別に開業医によって決定することができる。適当な医薬上許容される担体およびそれらの調剤は標準調剤専門書に記載される（例えば、［Remington's Pharmaceutical Sciences by E.W. Martin］。［Wang, Y.J. and Hanson, M.A. "Parenteral Formulations of Proteins and Peptides: Stability and Stabilizers", Journal of Parenteral Science and Technology, Technical Report No.10, Supp. 42:2S (1988)］も参照）。
【００４８】
本発明に有用な化合物は注射または注入用非経口組成物として供給することができる。それらは、例えば、不活性油、適当にはゴマ、ピーナッツ、オリーブ油のごとき植物油、または他の許容される担体に懸濁させ得る。好ましくは、それらは、例えば、約３．０ないし８．０のｐＨ、好ましくは約３．５ないし５．０のｐＨにての等張バッファー溶液のごとき水性担体に懸濁させる。これらの組成物は在来の滅菌技術によって滅菌するか、または滅菌濾過することができる。該組成物は、ｐＨ緩衝剤のごとき、生理状態に近付けるのに要求される医薬上許容される補助物質を含有することができる。有用なバッファーは、例えば、酢酸ナトリウム／酢酸バッファーを含む。貯蔵または「デポー」徐放性製剤の形態を用いて、治療上有効量の製剤が経皮注射または運搬に続いて何時間または何日にもわたって血流に運搬されるようにすることができる。
所望する等張性は塩化ナトリウムまたは、デキストロース、ホウ酸、石炭酸ナトリウム、プロピレングリコール、（マンニトールおよびソルビトールのごとき）ポリオールのごとき医薬上許容される剤、または他の無機または有機溶質を用いて達成することができる。
担体または補形剤も該化合物の投与を可能にするのに用い得る。担体または補形剤の例は、炭酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、ラクトース、グルコースまたはスクロースのごとき種々の糖類、またはデンプンのタイプ、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、ポリエチレングリコールおよび生理学上許容される溶媒を含む。
【００４９】
所望すれば、上記組成物の溶液をメチルセルロースのごとき増粘剤で増粘させることができる。それらは、油中水または水中油のいずれかの乳化形態で調製することができる。例えば、アカシアパウダー、（Tweenのごとき）非イオン性表面活性剤、または（アルカリポリエーテルアルコール硫酸エステルまたはスルホン酸エステル（例えば、Triton）のごとき）イオン性表面活性剤を含む広範囲にわたるいずれの医薬上許容される乳化剤も用いることができる。
本発明に有用な組成物は、一般に許容される方法に準じて成分を混合することによって調製する。例えば、選択した成分を単にブレンダーまたは他の標準装置中で混合して濃縮混合物を生成することができ、次いで、それを水または増粘剤およびおそらくｐＨを制御するバッファーまたは等張性を制御するさらなる溶質の添加によって最終濃度および粘度に調整することができる。
【００５０】
医者による使用のため、該組成物は、例えば、エキセジン−３、および／またはエキセジン−４などのエキセジンまたはエキセジンアゴニストのある量を含有する用量単位形態で供給する。尿流量を増加させるのに使用するための治療上有効量のエキセンジンまたはエキセンジンアゴニストは所望する速度およびレベルにて尿流量を増加させるものである。当業者によって理解されるように、治療剤の有効量は、患者の年齢および体重、患者の体調および他の要因を含む多くの要因で変化する。
【００５１】
該化合物の有効用量は、典型的には、１〜３０μｇないし約１０〜２０ｍｇ、好ましくは約３０μｇないし１０ｍｇ、およびより好ましくは約３００μｇないし５ｍｇ、最も好ましくは３０μｇないし約１ｍｇの範囲にあろう。投与されるべき正確な用量は担当する臨床医によって決定され、例えば、上記の範囲内で特定の化合物があるところに依存する。投与は、利尿効果が所望される時はいつでも、例えば、腎不全、うっ血性心不全、ネフローゼ症候群、肺水腫、硬変、高血圧、子癇症または前子癇症の初期徴候が表れたとき、または診断された直後に始めるべきである。投与は注射によって、好ましくは皮下または静脈内によることができる。経口的に活性な化合物は経口摂取することができるが、用量は５〜１０倍増加させるべきである。
【００５２】
本出願の化合物の最適な調剤および患者への投与の態様は、特定の疾病または障害、所望する効果および患者のタイプのごとき当業者に知られた要因に依存する。該化合物は、典型的には、ヒト対象を治療するのに用いるが、他の霊長類、ブタ、ウシおよニワトリのごとき家畜動物、およびウマ、イヌおよびネコのごとき競技動物およびペットのごとき他の脊椎動物における同様のまたは同一の疾病を治療するのに用いることもできる。
【００５３】
【発明の実施の形態】
本発明の理解を助けるために、以下の実施例を含ませる。本発明に関する実験は、もちろん、本発明を特別に限定するものと理解されるべきではないし、今や知られ後で開発される本発明の当該変形は、当業者の理解の範囲にあり、本明細書に記載されおよび以下に特許請求される本発明の範疇にあるとみなされる。
【００５４】
【実施例】
実施例１：ＧＬＰ−１またはエキセンジン投与の利尿効果
物質：ＧＬＰ−１およびエキセンジン−４は、Bachem, Inc., Torrance, CAから購入するか、または本明細に記載するようにAmylin Pharmaceuticals, Inc.にて合成した。血圧トランスデューサー／トランスミッターはData Sciences, Inc.から購入した。
麻酔したラットにおけるin vivo実験：雄のハーラン=スプラグ=ドーリーラット（Harlan Sprague Dawley rats）を２３±１℃にて１２：１２時間明：暗サイクル中で飼育し（実験は明サイクル中に実行した）、自由に餌と水とを与えた（Diet LM-485, Teklad, Madison, WI）。３２５〜３７５グラムの体重の動物を実験に先駆けて〜２０時間絶食させた。
【００５５】
外科準備：ここで用いた準備は、片側尿管カニューレ挿入を加えたことによる修飾以外は、［Young et al., Drug Dev Res. 37:231-248, 1996］に記載されたものであった。麻酔は５％ ハロセンで誘発し、外科手術の間２％ ハロセン、その後０．７ないし１％に維持した。気管切開術ならびに大腿動脈、伏在静脈および単一尿管のカニューレ挿入を行なった。ヘパリン化食塩水（２Ｕ/ｍｌ）で注入した動脈ラインを血液採取および血圧測定に用いた（Spectramed P23XL transducer, Model 13-4615-58 amplifier, Gould, Cleveland, OH）。静脈ラインを薬剤投与に用いた。総食塩水注入速度を４ｍＬ/時間に保った。サーミスタープローブ／コントローラー（Model 73A, YSI, Yellow Springs, OH）および加熱した手術台を用いて、結腸温度を測定し、制御した。平均動脈圧の信号を１２ビットの精度で１Ｈｚにて周期的にサンプリングし（Data Translation DT2801A）、記録した（Labtech Notebook）。
計算方法： 用量−反応曲線を４−変数ロジスティック関数にフィットさせ、Prism（v2.0, GraphPad Software, San Diego, CA）を用いてＥＣ50を導いた。観測値は、ペプチドまたはビヒクルの注入に先駆けて３０分間行なった測定の平均で規定するベースラインのパーセントで表した。データを平均値±ＳＥＭ（ｎ＝５〜６）で表す。
測定：動脈血の試料（１６０μｌ）を周期的に収集し、尿試料を１５分毎に収集した。血漿中および尿中ナトリウムおよびカリウム濃度は、Ciba/Corning 614 Na/K アナライザー（Ciba/Corning, Inc., Medfield, MA）を用いるイオン選択性電極によって測定した。片側尿流量をカニューレ挿入した尿管からの１５分間アウトプットを計量することによって測定した。総尿流量をこの量を２倍して評価した。
【００５６】
処置：用量−反応を得るために、ペプチドを０．１５Ｍ ＮａＣｌに溶解し、０．１ｍｌボーラスとして投与した。ＧＬＰ−１の投与は尿流量を増加させることに対して強い効果を有していた（ＥＤ50＝０．７１μｇ±０．２６ｌｏｇ単位）。用量前尿流量のパーセントとしての最大反応は、１６．５μｇ用量につき１５分間で１７６４±２８１％であった（図３Ａ〜Ｂ）。ＧＬＰ−１の投与はナトリウム排出も増加させた（図４Ａ〜Ｂ）。しかしながら、ＧＬＰ−１は著しくカリウム排出を減少させた（図５Ａ〜Ｂ）（１．６５μｇ用量にて用量前濃度の１３．９±１．７％までの最大降下を伴い、ＥＤ50０．２５μｇ±３４ｌｏｇ単位）。エキセジン−４の投与も尿流量を増加させた（図８Ａ〜Ｂ）。ＥＤ50は０．１２μｇ±０．１８ｌｏｇ単位であり、前用量尿流量のパーセントとしての最大反応は２１μｇ用量につき１５分間にて２１６０±４７０％であった。エキセジンの投与はナトリウム排出も増加させた（図９Ａ〜Ｂ）。しかしながら、カリウムの排出は減少した（図１０Ａ〜Ｂ）。ＥＤ50は、２１μｇの用量にて前用量濃度の９．６±１．４％までの降下を伴い、０．０７μｇ±０．２６ｌｏｇ単位であった。
【００５７】
実施例２：ＧＬＰ−１またはエキセンジン−４の投与後の遠隔計測による意識のあるラットにおける動脈血圧およびｄＰ/ｄｔの測定
トランスデューサーの挿入：雄のハーラン=スプラグ=ドーリーラットをハロセンで麻酔し、開腹術後に腹大動脈を露出させた。Data Sciences Inc.からの"Pressure Telemetry"マニュアルに詳細に記載された手順に準じて、カテーテル先端が分岐部の〜２ｍｍ上部の腹大動脈中で、圧力トランスデューサー／トランスミッターを腹壁上に固定した。閉腹後、次いで、少なくとも７日間の安定した記録できるように、該動物を回復させた。ベースラインデータを外科手術後、７＋日間収集した。
血圧およびｄＰ/ｄｔの測定：安定したベースラインが得られた後、ラットは、ＧＬＰ−１、エキセンジンまたはビヒクル単独（ＮａＣｌ）の腹腔内（ｉｐ）注射を受けた。変換した信号を遠隔計測により記録し、パーソナルコンピュータに記憶した。圧変化速度（ｄＰ/ｄｔ）は、Data Sciencesによって供給されたソフトウェアによって計算した。
【００５８】
ＧＬＰ−１：動物は食塩水またはＧＬＰ−１（１００μｌ）の単一腹腔内（ｉｐ）注射を受けた（ｎ＝７〜８）。図１Ａ〜ＢはＧＬＰ−１投与後の平均動脈圧の増加を示す。図２はＧＬＰ−１投与後の心収縮性の増加を示す。
エキセンジン−４：エキセンジン−４または食塩水（２５０μｌ）を５日間、ｉｐ注射によって１日２回（ｂｉｄ）与えた（食塩水についてｎ＝８、該エキセンジン群についてｎ＝５〜６）。図６Ａ〜Ｂはエキセンジン−４投与後の平均動脈圧の増加を示す。図７はエキセンジン−４投与後の心収縮性の増加を示す。
【００５９】
実施例３
麻酔したラットにおいて遷音速流プローブを用いて測定したエキセンジン−４またはＧＬＰ−１の心血管作用：
物質、動物飼育および麻酔下でのカニューレ挿入：物質、動物飼育および麻酔下でのカニューレ挿入は実施例１に記載したものであった。ハロセンで麻酔した雄のスプラグ=ドーリーラット（３５０ｇ〜４５０ｇ）を（ペプチド注射のため）伏在静脈および（動脈圧測定のため）大腿動脈を通してカニューレ挿入した。
外科手術：通過時間フロープローブ（２ｍｍ、２ＳＢ、Transonic Systems Inc., Ithaca New York）を腎、腸間膜および腸骨動脈枝から隔たった腹大動脈の辺りに固定した。
測定：該フロープローブをTarnsonic TS-206 デュアルチャネルフローメータに接続して腹大動脈血液流量を測定した。心拍数を標準ＥＣＧ電極を用いて記録した。ペプチドまたはビヒクル（食塩水）を１〜２分間かけて１００μＬの総体積を静脈内注射した。平均動脈圧（ＭＡＰ）、心拍数（ＨＲ）および平均大動脈血液流量を実験期間中Labtek Notebook データ収集ソフトウェアも用いて毎秒記録した。次いで、大動脈コンダクタンス（流量/ＭＡＰ；ｍＬ/分/ｍｍＨｇ）および心拍血液量（流量/ＨＲ；ビート/分当たりのｍＬ/分＝ｍＬ）を導いた。
処置：２０分間の制御期間の後、エキセンジン−４を０．０２１．０．２１、２．１および２１μｇの用量にて注射し、ＧＬＰ−１を０．０１６５、０．１６５、１．６５および１６．５μｇの用量にて注射した。
【００６０】
結果：
ＧＬＰ−１：１６．５μｇの用量にてＧＬＰ−１は、投与の５分以内に平均動脈圧を２２ｍｍＨｇ増加させた。ＧＬＰ−１投与から２分以内に、大動脈血液流量は１４から２２ｍＬ/分まで５７％増加し、心拍数は、３６０から４２０ビート/分まで１７％増加し、心拍血液量は３７から５１μＬまで３８％増加し、大動脈コンダクタンスは、０．１２から０．１８ｍＬ/分/ｍｍＨｇまで５０％増加した。効果は約１０分間続いた。
エキセンジン−４：効果が３０〜６０分間持続した以外は、０．２１μｇ用量のエキセンジン−４で同様のパターンの効果が観察された（血圧において〜３０ｍｍＨｇの増加；大動脈血液流量において６０％の増加；心拍数において４０％の増加；心拍血液量において６０％の増加；大動脈コンダクタンスにおいて３５％の増加）。大動脈血液流量に大きな変化があって、血圧に比較的少ない変化があるこれらの反応は、ＧＬＰ−１およびエキセンジン−４が変力性（心増刺激性）および血管拡張特性を有することと一致する。
【００６１】
実施例４
配列番号５を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly-NH2 [配列番号５」
Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立てた。一般に、合成を通して、単一カップリングサイクルを用い、高速Ｍｏｃ（ＨＢＴＵ活性化）化学を利用した。成長ペプチド鎖の脱保護（Ｆｍｏｃ基除去）はピペリジンを用いて達成した。完了したペプチド樹脂の最終脱保護は、標準方法（Introduction to Cleavage Techniques, Applied Biosystems, Inc.）に準じて、トリエチルシラン（０．２ｍＬ）、エタンジチオール（０．２ｍＬ）、アニソール（０．２ｍＬ）、水（０．２ｍＬ）およびトリフルオロ酢酸（１５ｍＬ）の混合物を用いて達成した。該ペプチドをエーテル／水（５０ｍＬ）中で沈殿させ、遠心した。該沈殿物を氷酢酸中で復元し、凍結乾燥した。凍結乾燥したペプチドを水に溶解させた。粗純度は約７５％であった。
精製ステップおよび分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。ペプチドを含有する溶液を分取用Ｃ−８カラムに加え、精製した（４０分間にわたる溶媒Ａ中１０％ないし４０％溶媒Ｂ）。画分の純度はＣ−１８分析用カラムを用いて無勾配で測定した。純粋画分をプールして、上記ペプチドを得た。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし５０％溶媒Ｂの勾配）は、１８．９分の観測測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３４０８．０；
実測値  ３４０８．９。
【００６２】
実施例５
配列番号６を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2 ［配列番号６］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし４０％溶媒Ｂの勾配）は、１７．９分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２９４．７；
実測値  ３２９４．８。
【００６３】
実施例６
配列番号７を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号７］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の２９％ないし３６％溶媒Ｂの勾配）は、２０．７分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２３７．６；
実測値  ３２４０。
【００６４】
実施例７
配列番号８を有するペプチドの調製
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号８］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３６％ないし４６％溶媒Ｂの勾配）は、１５．２分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２５１．６；
実測値  ３２５１．５。
【００６５】
実施例８
配列番号９を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号９］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３６％ないし４６％溶媒Ｂの勾配）は、１３．１分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２０７．６；
実測値  ３２０８．３。
【００６６】
実施例９
配列番号１０を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Ala Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号１０］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３５％ないし４５％溶媒Ｂの勾配）は、１２．８分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１６１．５；
実測値  ３１６３。
【００６７】
実施例１０
配列番号１１を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ala Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号１１］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３６％ないし４６％溶媒Ｂの勾配）は、１５．２分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２２１．６；
実測値  ３２２２．７。
【００６８】
実施例１１
配列番号１２を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号１２］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３４％ないし４４％溶媒Ｂの勾配）は、１４．３分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１９５．５；
実測値  ３１９９．４。
【００６９】
実施例１２
配列番号１３を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ala Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号１３］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３８％ないし４８％溶媒Ｂの勾配）は、１５．７分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２２１．６；
実測値  ３２２１．６。
【００７０】
実施例１３
配列番号１４を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ala Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号１４］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３８％ないし４８％溶媒Ｂの勾配）は、１８．１分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１８０．５；
実測値  ３１８０．９。
【００７１】
実施例１４
配列番号１５を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Ala Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号１５］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３６％ないし４６％溶媒Ｂの勾配）は、１７．０分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１８０．６；
実測値  ３１８２．８。
【００７２】
実施例１５
配列番号１６を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Ala Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号１６］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３２％ないし４２％溶媒Ｂの勾配）は、１４．９分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１９５．５；
実測値  ３１９５．９。
【００７３】
実施例１６
配列番号１７を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Ala Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号１７］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３７％ないし４７％溶媒Ｂの勾配）は、１７．９分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１７９．６；
実測値  ３１７９．０。
【００７４】
実施例１７
配列番号１８を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Ala Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号１８］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３７％ないし４７％溶媒Ｂの勾配）は、１４．３分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１７９．６；
実測値  ３１８０．０。
【００７５】
実施例１８
配列番号１９を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Ala Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号１９］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３７％ないし４７％溶媒Ｂの勾配）は、１３．７分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１７９．６；
実測値  ３１７９．０。
【００７６】
実施例１９
配列番号２０を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Ala Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号２０］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３５％ないし４５％溶媒Ｂの勾配）は、１４．０分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２０９．６；
実測値  ３１２１．８。
【００７７】
実施例２０
配列番号２１を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Ala Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号２１］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３８％ないし４８％溶媒Ｂの勾配）は、１４．３分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１５２．５；
実測値  ３１５３．５。
【００７８】
実施例２１
配列番号２２を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Ala Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号２２］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３５％ないし４５％溶媒Ｂの勾配）は、１２．１分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１９５．５；
実測値  ３１９７．７。
【００７９】
実施例２２
配列番号２３を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Ala Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号２３］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３８％ないし４８％溶媒Ｂの勾配）は、１０．９分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１７９．６；
実測値  ３１８０．５。
【００８０】
実施例２３
配列番号２４を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Ala Leu Lys Asn-NH2［配列番号２４］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３２％ないし４２％溶媒Ｂの勾配）は、１７．５分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１６１．５；
実測値  ３１６３．０。
【００８１】
実施例２４
配列番号２５を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Ala Lys Asn-NH2［配列番号２５］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３２％ないし４２％溶媒Ｂの勾配）は、１９．５分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１９５．５；
実測値  ３１９９。
【００８２】
実施例２５
配列番号２６を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Ala Asn-NH2［配列番号２６］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３８％ないし４８％溶媒Ｂの勾配）は、１４．５分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１８０．５；
実測値  ３１８３．７。
【００８３】
実施例２６
配列番号２７を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Ala-NH2［配列番号２７］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製した。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いた。該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３４％ないし４４％溶媒Ｂの勾配）は、２２．８分の観測保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１９４．６；
実測値  ３１９７．６。
【００８４】
実施例２７
配列番号２８を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro-NH2［配列番号２８］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ４０９９．６。
【００８５】
実施例２８
配列番号２９を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro-NH2［配列番号２９］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ４０４２．５。
【００８６】
実施例２９
配列番号３０を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro-NH2［配列番号３０］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ４００２．４。
【００８７】
実施例３０
配列番号３１を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro-NH2［配列番号３１］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３９４５．４。
【００８８】
実施例３１
配列番号３２を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro-NH2［配列番号３２］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３９０５．３。
【００８９】
実施例３２
配列番号３３を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro-NH2［配列番号３３］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３８４８．２。
【００９０】
実施例３３
配列番号３４を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala-NH2［配列番号３４］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３８０８．２。
【００９１】
実施例３４
配列番号３５を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala-NH2［配列番号３５］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３７５１．１。
【００９２】
実施例３５
配列番号３６を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly-NH2［配列番号３６］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３７３７．１。
【００９３】
実施例３６
配列番号３７を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly-NH2［配列番号３７］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３６８０．１。
【００９４】
実施例３７
配列番号３８を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser-NH2［配列番号３８］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３６８０．１。
【００９５】
実施例３８
配列番号３９を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser-NH2［配列番号３９］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３６２３．０。
【００９６】
実施例３９
配列番号４０を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser-NH2［配列番号４０］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３５９３．０。
【００９７】
実施例４０
配列番号４１を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser-NH2［配列番号４１］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。３５３５．９。
【００９８】
実施例４１
配列番号４２を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro-NH2［配列番号４２］  実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３５０５．９。
【００９９】
実施例４２
配列番号４３を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro-NH2［配列番号４３］  実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３４４８．８。
【０１００】
実施例４３
配列番号４４を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly-NH2［配列番号４４］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３３５１．７。
【０１０１】
実施例４４
配列番号４５を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly-NH2［配列番号４５］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３３５１．８。
【０１０２】
実施例４５
配列番号４６を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly-NH2［配列番号４６］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２９４．７。
【０１０３】
実施例４６
配列番号４７を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly tPro Ser Ser Gly Ala tPro tPro tPro-NH2［配列番号４７］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。残基３７、３６および３１にて、二重カップリングが必要である。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ４１９７．１。
【０１０４】
実施例４７
配列番号４８を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala tPro tPro tPro-NH2［配列番号４７］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。残基３７、３６および３１にて、二重カップリングが必要である。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ４１７９．１。
【０１０５】
実施例４８
配列番号４９を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly NMeala Ser Ser Gly Ala Pro Pro-NH2［配列番号４９］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。残基３６および３１にて、二重カップリングが必要である。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３９４８．３。
【０１０６】
実施例４９
配列番号５０を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly NMeala Ser Ser Gly Ala NMeala Nmeala-NH2［配列番号５０］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。残基３６および３１にて、二重カップリングが必要である。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３８４０．１。
【０１０７】
実施例５０
配列番号５１を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly hPro Ser Ser Gly Ala hPro hPro-NH2［配列番号５１］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。残基３６および３１にて、二重カップリングが必要である。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ４０５０．１。
【０１０８】
実施例５１
配列番号５２を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly hPro Ser Ser Gly Ala hPro-NH2［配列番号５２］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。残基３１にて、二重カップリングが必要である。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３９３７．１。
【０１０９】
実施例５２
配列番号５３を有するペプチドの調製
Arg Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala-NH2［配列番号５３］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３８２７．２。
【０１１０】
実施例５３
配列番号５４を有するペプチドの調製
His Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly-NH2［配列番号５４］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３３９４．８。
【０１１１】
実施例５４
配列番号５５を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Naphthylala Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号５５］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２８９．５。
【０１１２】
実施例５５
配列番号５６を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Ser Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2［配列番号５５］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２８０．７。
【０１１３】
実施例５６
配列番号５７を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Ser Thr Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2［配列番号５７］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２９４．７。
【０１１４】
実施例５７
配列番号５８を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Glu Leu Ser Lys Gln Met Ala Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2［配列番号５８］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２５０．７。
【０１１５】
実施例５８
配列番号５９を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp pentylgly Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号５９］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２５３．５。
【０１１６】
実施例５９
配列番号６０を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Naphthylala Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号６０］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２８９．５。
【０１１７】
実施例６０
配列番号６１を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe tButylgly Glu Trp Leu Lys Asn-NH2［配列番号６１］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３１８３．４。
【０１１８】
実施例６１
配列番号６２を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Asp Phe Leu Lys Asn-NH2［配列番号６２］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３２３７．６。
【０１１９】
実施例６２
配列番号６３を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser-NH2［配列番号６３］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３６３７．９。
【０１２０】
実施例６３
配列番号６４を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly-NH2［配列番号６４］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３３０９．７。
【０１２１】
実施例６４
配列番号６５を有するペプチドの調製
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly hPro Ser Ser Gly Ala hPro hPro-NH2［配列番号６５］
実施例４と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、上記アミド化ペプチドを４−（２'−４'−ジメトキシフェニル）−Ｆｍｏｃアミノメチル=フェノキシ=アセトアミド=ノルロイシンｓＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem、０．５５ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。残基３６および３１にて、二重カップリングが必要である。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。
エレクトロスプレー質量分析（Ｍ）：計算値  ３７１１．１。
【０１２２】
実施例６５
配列番号５〜２７、３４〜４１、４４〜４６および５３〜６４の
上記Ｃ−末端アミド配列に対応するＣ−末端カルボン酸ペプチドの調製
化合物１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、配列番号５〜２７、３４〜４１、４４〜４６および５２〜６４の配列を有するペプチドを、いわゆる、Wang樹脂（ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂（Bachem、０．５４ｍｍｏｌｅ/ｇ））上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。エレクトロスプレー質量分析は実験的測定（Ｍ）を与えた。
【０１２３】
実施例６６
配列番号２８〜３３、４２、４３、４７〜５２および６５の
上記Ｃ−末端アミド配列に対応するＣ−末端カルボン酸ペプチドの調製
化合物１と同様の方法で、Ｆｍｏｃ−保護されたアミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用いて、配列番号２８〜３３、４２、４３、４７〜５２および６５の配列を有するペプチドを塩化２−クロロトリチル樹脂（２００〜４００メッシュ）、２％ＤＶＢ（Novabiochem、０．４〜１．０ｍｍｏｌｅ/ｇ）上で組立て、該樹脂から切離し、脱保護し、精製する。分析には、溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を用いる。次いで、該凍結乾燥したペプチドの分析用ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の３０％ないし６０％溶媒Ｂの勾配）を行なって、該生成物ペプチドの保持時間を測定する。エレクトロスプレー質量分析は実験的測定（Ｍ）を与える。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１（Ａ〜Ｂ）は、ＧＬＰ−１に対する平均動脈圧（ＭＡＰ）の応答を示すグラフ表記である。（Ａ）ＭＡＰは、薬剤投与に先駆けて３０分間かけて測定した前用量値の％で表される；（Ｂ）ＭＡＰへのＧＬＰ−１の効果に関する用量反応曲線。プロットされた応答は、ボーラス用量後０ないし２時間の曲線下の増分面積である。
【図２】  図２は、ＧＬＰ−１に対する変力性応答を示すグラフ表記である。血圧の変化速度（ｄＰ/ｄｔ）は心収縮性を示し、意識のあるラットに与えられたＧＬＰ−１の皮下注射に対する反応において増加した。
【図３】  図３（Ａ〜Ｂ）は、ＧＬＰ−１の静脈内ボーラス用量に対する尿流量の応答を示すグラフ表記である。（Ａ）尿流量は１５分間隔で測定され、薬剤投与に先駆けて３０分間かけて測定した前用量値の％で表される；（Ｂ）尿流量へのＧＬＰ−１の効果に関する用量反応曲線。プロットされた応答は、投与前３０分間の流量と比較したボーラス用量後の０ないし１５分間流量におけるパーセント変化である。
【図４】  図４（Ａ〜Ｂ）は、ＧＬＰ−１の静脈内ボーラス用量に対するナトリウム排出の応答の示すグラフ表記である。（Ａ）ナトリウム排出は１５分間隔で測定され、薬剤投与に先駆けて３０分間かけて測定した前用量値の％で表される；（Ｂ）尿中カリウム濃度へのＧＬＰ−１の効果に関する用量反応曲線。プロットされた応答は、投与前３０分間の排出と比較したボーラス用量後の０ないし１５分間ナトリウム排出におけるパーセント変化である。
【図５】  図５（Ａ〜Ｂ）は、ＧＬＰ−１の静脈内ボーラス用量に対する尿中カリウム濃度の応答を示すグラフ表記である。（Ａ）尿中カリウム濃度は１５分間隔で測定され、薬剤投与に先駆けて３０分間かけて測定した前用量値の％で表される；（Ｂ）尿中カリウム濃度へのＧＬＰ−１の効果に関する用量反応曲線。プロットされた応答は、投与前３０分間の尿中カリウム濃度に対するボーラス用量後の０ないし１５分間の尿中カリウム濃度におけるパーセント変化である。
【図６】  図６（Ａ〜Ｂ）は、エキセジン−４に対する平均動脈圧（ＭＡＰ）の応答を示すグラフ表記である。（Ａ）ＭＡＰは、薬剤投与に先駆けて、３０分間かけて測定した前用量値の％で表される；（Ｂ）ＭＡＰへのエキセンジンの効果に関する用量反応曲線。プロットされた応答はボーラス用量後０ないし２時間の曲線下の増分面積である。
【図７】  図７は、エキセジン−４に対する変力性応答を示すグラフ表記である。血圧の変化速度（ｄＰ/ｄｔ）は心収縮性を示し、意識のあるラットに与えたエキセンジン−４の皮下注射に対する反応において増加した。
【図８】  図８（Ａ〜Ｂ）は、エキセンジン−４の静脈内ボーラス用量に対する尿流量の応答を示すグラフ表記である。（Ａ）尿流量は１５分間隔で測定された；（Ｂ）尿流量に対するエキセンジン−４の効果に関する用量反応曲線。プロットされた応答はボーラス用量後０ないし１５分間の尿流量である。
【図９】  図９（Ａ〜Ｂ）は、エキセンジン−４の静脈内ボーラス用量に対するナトリウム排出の応答を示すグラフ表記である。（Ａ）ナトリウム排出は１５分間隔で測定され、薬剤投与に先駆けて３０分間かけて測定した前用量値の％で表される；（Ｂ）ナトリウム排出に対するエキセンジン−４の効果に関する用量反応曲線。プロットされた応答は、投与前３０分間の排出に対するボーラス用量後０ないし１５分間のナトリウム排出におけるパーセント変化である。
【図１０】  図１０（Ａ〜Ｂ）は、エキセンジン−４の静脈内ボーラス用量に対する尿中カリウム濃度の応答を示すグラフ表記である。（Ａ）尿中カリウム濃度は１５分間隔で測定され、エキセンジン−４投与に先駆け３０分間かけて測定された前用量値の％で表される；（Ｂ）尿中カリウム濃度へのエキセンジンの効果に関する用量反応曲線。プロットされた応答は、ボーラス用量後０ないし２時間の曲線下の増分面積である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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