(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）で表される化合物若しくはその薬理学的に許容される塩又はそれらの水和物若しくは溶媒和物。
【化１】
0004847333.tif 000014
（式中、Ｒはハロゲン原子、シアノ基又はアリール基を有していてもよい炭素数１〜６のアルキル基を表す。）
【請求項２】
Ｒが、２，２，２−トリフルオロエチル基であることを特徴とする請求項１記載の化合物若しくはその薬理学的に許容される塩又はそれらの水和物若しくは溶媒和物。
【請求項３】
以下の工程からなることを特徴とする請求項１に記載の一般式（１）で表される化合物の製造方法。
（工程１） 一般式（２）で表されるインドリン化合物と一般式（３）で表されるグルクロン酸誘導体とを反応させて、一般式（４）で表される化合物を得る工程
【化２】
0004847333.tif 000015
（式中、Ｒはハロゲン原子、シアノ基又はアリール基を有していてもよい炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｗはアミノ基の保護基を表し、Ｒ１は置換基を有していてもよい炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ａｃはアシル基を表し、Ｘは脱離基を表す。）
（工程２） 一般式（４）で表される化合物のアミノ基の保護基を除去する工程
（工程３） 工程２で得られる化合物のアルコキシカルボニル基及びアシルオキシ基を、同時に又は別々にカルボキシル基及び水酸基として、請求項１に記載の一般式（１）の化合物を得る工程
【請求項４】
請求項１に記載の一般式（１）で表される化合物若しくはその薬理学的に許容される塩又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を含有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項５】
医薬組成物が、排尿障害の予防又は治療に用いられるものであることを特徴とする請求項４記載の医薬組成物。
【請求項６】
排尿障害が、前立腺肥大に伴うものであることを特徴とする請求項５記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬品として有用なインドリン化合物に関するものである。さらに詳しく述べれば、排尿障害の予防又は治療薬として用いることができるインドリン化合物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
選択的な尿道筋収縮抑制作用を有し、血圧に対する影響の少ない排尿障害治療剤として、インドリン骨格を有する化合物が提案されている。（特許文献１参照）。しかしながら、グルクロン酸が結合したインドリン化合物については知られていない。
【特許文献１】特開平６−２２００１５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、排尿障害の予防又は治療薬として用いることができる化合物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、上記課題に鑑み、鋭意研究を行ったところ、下記一般式（１）【０００５】
【化１】
0004847333.tif 000002
【０００６】
（式中、Ｒはハロゲン原子、シアノ基又はアリール基を有していてもよい低級アルキル基を表す。）
で表される化合物若しくはその薬理学的に許容される塩又はそれらの水和物若しくは溶媒和物が極めて高い選択性で尿道筋に作用することを知り、本発明を完成させた。【０００７】
すなわち、本発明の要旨は、一般式（１）で表される化合物若しくはその薬理学的に許容される塩又はそれらの水和物若しくは溶媒和物、その製造方法、及びそれを含有することを特徴とする医薬組成物、に存する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明に係る一般式（１）で表される化合物若しくはその薬理学的に許容される塩又はそれらの水和物若しくは溶媒和物は、ヒトα１−アドレナリン受容体サブタイプ(α１Ａ-、α１Ｂ-及びα１Ｄ-アドレナリン受容体)のうち、特にヒト前立腺の収縮に関連するα１Ａ−アドレナリン受容体に対して極めて高い選択性を示す。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、ヒトα１−アドレナリン受容体サブタイプにおける[3H]-prazosin結合に対する化合物Ａの阻害作用を示す図である。Ａはヒトα１ａ−アドレナリン受容体、Ｂはヒトα１ｂアドレナリン受容体、Ｃはヒトα１ｄ−アドレナリン受容体における作用を表し、縦軸は[3H]-prazosin結合率（％）を表し、横軸は化合物Ａの濃度(log[compound](mol/L))を表す。
【図２】図２は、ウサギ摘出前立腺のノルアドレナリンに対する２回目の濃度−反応曲線(control)及び3回目の濃度−反応曲線(time control)を示す図である。縦軸は収縮率（％）を表し、横軸はノルアドレナリン濃度(log[noradrenaline](mol/L)を表す。
【図３】図３は、ウサギ摘出前立腺のノルアドレナリン収縮に対する所定量の化合物Ｂの濃度−反応曲線を示す図である。●は化合物Ｂ濃度１０−９mol/Lを、■は化合物Ｂ濃度１０−８mol/Lを表す。
【図４】図４は、ラット摘出脾臓のノルアドレナリンに対する２回目の濃度−反応曲線(control)及び3回目の濃度−反応曲線(time control)を示す図である。縦軸は収縮率（％）を表し、横軸はノルアドレナリン濃度(log[noradrenaline](mol/L)を表す。
【図５】図５は、ラット摘出脾臓のノルアドレナリン収縮に対する所定量の化合物Ｂの濃度−反応曲線を示す図である。○は対照、▲は化合物Ｂ濃度１０−６mol/L、◆は化合物Ｂ濃度１０−５．５mol/L、□は化合物Ｂ濃度１０−５mol/Lを表す。
【図６】図６は、ラット摘出脾臓のノルアドレナリン収縮に対する化合物Ｂのシルドプロットを示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本明細書において、ハロゲン原子とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子を意味する。
低級アルキル基とは分岐していてもよい炭素数１〜６のアルキル基を意味する。
Ｒが有していてもよいアリール基としては、例えば、フェニル基、ナフチル基等が挙げられ、これらのうちフェニル基が好ましい。
一般式（１）の化合物のRとしては、例えば、エチル基、イソプロピル基、ブチル基、ベンジル基及び２，２，２−トリフルオロエチル基等が挙げられ、これらのうちエチル基又は２，２，２−トリフルオロエチル基、特に２，２，２−トリフルオロエチル基が好ましい。【００１１】
一般式（１）の化合物は、以下に示す工程により製造することができる。
すなわち、下記一般式（２）で表されるインドリン化合物と一般式（３）で表されるグルクロン酸誘導体とを反応させて、一般式（４）で表される化合物を得（工程１）、【００１２】
【化２】
0004847333.tif 000003
【００１３】
（式中、Ｒは前記と同義であり、Ｗはアミノ基の保護基を表し、Ｒ１は置換基を有していてもよい低級アルキル基を表し、Ａｃはアシル基を表し、Ｘは脱離基を表す。）
次いで一般式（４）で表される化合物のアミノ基の保護基を除去し（工程２）、さらにアルコキシカルボニル基及びアシルオキシ基を、同時に又は別々にカルボキシル基及び水酸基に変換（工程３）することにより、一般式（１）の化合物を得ることができる。【００１４】
上記製造方法において、アミノ基の保護基は２級アミノ基の保護に用いることができるものであって、エステル基の存在下で脱保護できるものであれば、任意のものを用いることができる。このような保護基としては、例えば、ｔ−ブチルオキシカルボニル基やベンジルオキシカルボニル基等のウレタン型保護基などが挙げられる。【００１５】
Ｒ１の低級アルキル基としては、炭素数１〜４の低級アルキル基が好ましい。低級アルキル基が有していてもよい置換基としては、例えば、ハロゲン原子；環上に置換基を有していてもよいフェニル基等のアリール基などが挙げられる。アリール基が有していてもよい環上の置換基としては、例えば、ハロゲン原子；低級アルキル基；炭素数１〜６の分岐していてもよい低級アルコキシ基などが挙げられる。【００１６】
アシル基としては、置換基を有していてもよい炭素数１〜６のカルボン酸型アシル基、特に炭素数１〜４のカルボン酸型アシル基が好ましい。カルボン酸型アシル基は、分岐状でも直鎖状でもよく、またハロゲン原子や炭素数１〜６の分岐していてもよい低級アルコキシ基等の置換基を有していてもよい。カルボン酸型アシル基としては、例えば、ホルミル基、アセチル基、クロロアセチル基等が挙げられる。【００１７】
脱離基としては、例えば、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子；メタンスルホニルオキシ基等の低級アルキルスルホニルオキシ基又はトルエンスルホニルオキシ基等のアリールスルホニルオキシ基などが挙げられる。【００１８】
一般式（２）で表されるインドリン化合物と一般式（３）で表されるグルクロン酸誘導体との反応は、通常の２級アミンのアルキル化の条件で行えばよい。すなわち、適当な溶媒中、所望により塩基を添加し、ほぼ等モルのインドリン化合物とグルクロン酸誘導体とを混合することにより反応させる。【００１９】
溶媒としては、この反応を阻害しないものであれば任意のものを用いることができる。例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブチルアルコール、ｓｅｃ−ブタノール及びｔｅｒｔ−ブタノール等の低級アルコール；酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類；アセトン等のカルボニル化合物；テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等のエーテル類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の非プロトン性極性溶媒などが挙げられる。【００２０】
塩基としては、炭酸ナトリウムや炭酸水素ナトリウム等の無機塩基、又はトリエチルアミンやＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン等の有機アミンのいずれを用いてもよい。【００２１】
反応は、室温から溶媒の沸点の温度で、好ましくは窒素やアルゴン等の不活性気体の雰囲気中、３０分間〜４８時間行えばよい。
一定時間の経過後、反応混合物を常法に従って処理することにより、一般式（４）で表される化合物を得ることができる。【００２２】
なお、上記反応に供する一般式（２）で表されるインドリン化合物は、特許文献１に記載の方法に準じて製造することができる。また、一般式（３）で表されるグルクロン酸誘導体は、メチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−ブロモ−１−デオキシ−α―Ｄ−グルコピラヌロナート（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９５５，７７，３３１０参照）から、後述する方法により製造することができる。【００２３】
次いで、一般式（４）で表される化合物のアミノ基の保護基であるＷを除去し、さらにアシルオキシ基とアルコキシカルボニル基とを、常法に従って水酸基とカルボキシル基とにそれぞれ変換することにより一般式（１）で表される化合物を得ることができる。【００２４】
アミノ基の保護基は、常法に従って除去することができる。例えば、Ｗがｔ−ブチルオキシカルボニル基のときには酸で処理することにより、またＷがベンジルオキシカルボニル基のときには加水素分解反応に付すことにより、脱保護された化合物を得ることができる。【００２５】
アシルオキシ基又はアルコキシカルボニル基の水酸基又はカルボキシル基への変換も、常法によればよい。すなわち、適当な溶媒中、水酸化ナトリウムや水酸化カリウム等のアルカリ金属水酸化物などの無機塩基；ナトリウムメトキシドやナトリウムエトキシド等のアルカリ金属アルコキシドなどの有機塩基で処理することにより、アシルオキシ基は水酸基へ、アルコキシカルボニル基はカルボキシル基へ変換することができる。【００２６】
上記変換反応は、アシルオキシ基とアルコキシカルボニル基とを同時に変換しても、段階的に変換してもよいが、段階的に変換するのが好ましい。なお、段階的に変換するときには、アシルオキシ基を水酸基に変換した後、アルコキシカルボニル基をカルボキシル基へ変換するのが好ましい。【００２７】
一般式（１）の化合物の薬理学的に許容される塩は、上記変換反応から一般式（１）の化合物を単離せずに得る方法、及び単離した一般式（１）の化合物を常法に従って処理する方法のいずれにより製造してもよい。
なお、一般式（１）の化合物又はその薬理学的に許容される塩の水和物若しくは溶媒和物は、一般式（１）の化合物又はその薬理学的に許容される塩から常法に従って製造することができる。【００２８】
本発明に係る一般式（１）で表される化合物若しくはその薬理学的に許容される塩又はそれらの水和物若しくは溶媒和物は、α１Ａ−アドレナリン受容体に対する選択性が極めて高いので、このものと慣用されている製剤担体とを混合することにより有用な医薬組成物を調製することができる。【００２９】
製剤担体は、後述する投与形態に応じて、適宜、組み合わせて用いればよく、例えば、乳糖等の賦形剤；ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤；カルボキシメチルセルロース等の崩壊剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース等の結合剤；マクロゴール等の界面活性剤；炭酸水素ナトリウム等の発泡剤；シクロデキストリン等の溶解補助剤；クエン酸等の酸味剤；エデト酸ナトリウム等の安定化剤；リン酸塩等のｐＨ調整剤などが挙げられる。【００３０】
本発明に係る医薬組成物の投与形態としては、例えば、散剤、顆粒剤、細粒剤、ドライシロップ剤、錠剤、カプセル剤等の経口投与剤；注射剤、貼付剤、坐剤等の非経口投与剤などが挙げられる。【００３１】
本発明に係る一般式（１）で表される化合物若しくはその薬理学的に許容される塩又はそれらの水和物若しくは溶媒和物が、成人1日当たり、経口投与剤では０．１〜１００ｍｇ、注射剤では０．０１〜１００ｍｇの範囲で投与されるように、上記製剤を製造するのが好ましい。
【実施例】
【００３２】
以下に本発明を実験例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はその内容に限定されるものではない。【００３３】
［製造例１］メチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−Ｏ−（３−ヒドロキシプロピル）−β−Ｄ−グルコピラヌロナート
メチル＝１，２，３，４−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルコピラヌロナート（１３．５ｇ）を、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９５５，７７，３３１０に記載の方法により処理して調製したメチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−ブロモ−１−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラヌロナート、３−ベンジルオキシ−１−プロパノール（８．４３ｍＬ）、炭酸銀（１４．７ｇ）、モレキュラーシーブス  ４Ａ粉末（２６ｇ）及びトルエン（９４ｍＬ）を、遮光下、室温で１９時間激しく攪拌した。反応液をろ過し、不溶物をトルエンで洗浄した後、ろ液と洗浄液とを合せ減圧濃縮した。得られた残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル  ２／１→１／１，ｖ／ｖ）に付して、無色油状物として、反応に供した３−ベンジルオキシ−１−プロパノールと生成したメチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−Ｏ−（３−ベンジルオキシプロピル）−β−Ｄ−グルコピラヌロナートとの混合物（１５．８ｇ）を得た。【００３４】
得られた油状物と１０％Ｐｄ−Ｃ（１．５８ｇ）とをメタノール（８０ｍＬ）−ＴＨＦ（８０ｍＬ）の混合溶媒中で水素雰囲気下に室温で４．５時間攪拌した。反応液をろ過し、不溶物をメタノールで洗浄した後、ろ液と洗浄液とを合せ減圧濃縮した。得られた残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液；塩化メチレン／ジエチルエーテル＝１／１，ｖ／ｖ）に付して、白色粉末として表題化合物６．３ｇ（収率４５％）を得た。
1H-NMR(CDCl3) δ: 5.3〜5.2(2H, m), 5.1〜4.9(1H, m), 4.59(1H, d, J=7.6Hz), 4.1〜4.0(2H, m), 3.8〜3.6(6H, m), 2.06(3H, s), 2.03(3H, s), 2.02(3H, s), 1.9〜1.7(2H, m).【００３５】
【化３】
0004847333.tif 000004
【００３６】
［製造例２］メチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−Ｏ−（３−ブロモプロピル）−β−Ｄ−グルコピラヌロナート
製造例１のメチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−Ｏ−（３−ヒドロキシプロピル）−β−Ｄ−グルコピラヌロナート（１．７６ｇ）及び四臭化炭素（１．９ｇ）の塩化メチレン（４４ｍＬ）溶液を５℃で攪拌しながら、トリフェニルホスフィン（１．７７ｇ）を加え、５℃で１０分間、さらに室温で２０分間攪拌した。得られた反応液をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液；ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１／０→２／１，ｖ／ｖ）に付して、白色粉末として表題化合物１．９ｇ（収率９３％）を得た。
1H-NMR(CDCl3) δ: 5.3〜5.1(2H, m), 5.1〜4.9(1H, m), 4.56(1H, 3H, d, J=7.8Hz), 4.1〜3.9(2H, m), 3.76(3H, s), 3.75〜3.6(1H, m), 3.5〜3.4(2H, m), 2.3〜2.1(1H, m), 2.1〜1.9(10H, m).【００３７】
【化４】
0004847333.tif 000005
【００３８】
［製造例３］メチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−Ｏ−（３−メタンスルホニルオキシプロピル）−β−Ｄ−グルコピラヌロナート
製造例１のメチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−Ｏ−（３−ヒドロキシプロピル）−β−Ｄ−グルコピラヌロナート（６．３ｇ）及びトリエチルアミン（３．３６ｍＬ）の塩化メチレン（１５０ｍＬ）溶液に氷冷下で攪拌しながらメタンスルホニルクロリド（１．６１ｍＬ）を滴下した後、氷冷下で１．５時間、さらに室温で３０分間攪拌した。反応液を飽和重曹水、水及び飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮した。得られた残留物を加温した塩化メチレン（１４．９ｍＬ）に溶解させ、ジイソプロピルエーテル（１４．９ｍＬ）を加えることにより微量の結晶を析出させた後、塩化メチレン−ジイソプロピルエーテル（１／９，ｖ／ｖ）（３３ｍＬ）を加え、室温で１時間、さらに氷冷下で１時間攪拌した。析出した結晶をろ取し、ジイソプロピルエーテルで洗浄することにより、白色粉末として表題化合物  ７．１ｇ（収率９４％）を得た。
1H-NMR(CDCl3) δ: 5.3〜5.1(2H, m), 5.1〜4.9(1H, m), 4.57(1H, d, J=7.7Hz),4.4〜4.2(2H, m), 4.1〜3.9(2H, m), 3.76(3H, s), 3.7〜3.6(1H, m), 3.02(3H, s), 2.1〜1.9(11H, m).【００３９】
【化５】
0004847333.tif 000006
【００４０】
［実施例１］ナトリウム  １−Ｏ−｛３−［７−カルバモイル−５−（（２Ｒ）−２−｛［２−（｛２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）オキシ］フェニル｝オキシ）エチル］アミノ｝プロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］プロピル｝−β−Ｄ−グルコピラヌロナート【００４１】
（工程１）
５−（（２Ｒ）−２−｛Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−［２−（｛２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）オキシ］フェニル｝オキシ）エチル］アミノ｝プロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミド（０．９４ｇ）、製造例２のメチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−Ｏ−（３−ブロモプロピル）−β−Ｄ−グルコピラヌロナート（１．２ｇ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５ｍＬ）及び２−ブタノール（１７．５ｍＬ）の混合物をアルゴン雰囲気下で２４時間加熱還流した後、室温まで冷却した。反応液を酢酸エチルで希釈し、水及び飽和食塩水で順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。反応液を減圧濃縮して得られた残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１／１→１／２→０／１，ｖ／ｖ）に付し、メチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−Ｏ−｛３−［５−（（２Ｒ）−２−｛Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−［２−（｛２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）オキシ］フェニル｝オキシ）エチル］アミノ｝プロピル）−７−カルバモイル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］プロピル｝−β−Ｄ−グルコピラヌロナート（０．７５ｇ，収率４７％）を得た。
1H-NMR(CDCl3) δ: 7.1〜6.8(7H, m), 5.75(1H, br s), 5.3〜5.1(2H, m), 5.1〜4.9(1H, m), 4.56(1H, d, J=7.8Hz), 4.36(2H, q, J=8.4Hz), 4.3〜3.8(6H, m), 3.75(3H, s), 3.7〜2.5(14H, m), 2.04(3H, s), 2.02(6H, s), 1.9〜1.7(2H, m), 1.40(9H, s), 1.3〜1.1(3H, m).【００４２】
（工程１−２）
上記工程１において、５−（（２Ｒ）−２−｛Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−［２−（｛２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）オキシ］フェニル｝オキシ）エチル］アミノ｝プロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミドに代えて５−（（２Ｒ）−２−｛Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−［２−（｛２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）オキシ］フェニル｝オキシ）エチル］アミノ｝プロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−７−カルボキサミドを用い、メチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−Ｏ−（３−ブロモプロピル）−β−Ｄ−グルコピラヌロナートに代えて製造例３で製造したメチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−Ｏ−（３−メタンスルホニルオキシプロピル）−β−Ｄ−グルコピラヌロナートを用いた以外は、工程１と同様に反応を行い、メチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−Ｏ−｛３−［５−（（２Ｒ）−２−｛Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−［２−（｛２−［（２，２，２−トリフルオロ−エチル）オキシ］フェニル｝オキシ）エチル］アミノ｝プロピル）−７−カルバモイル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ  −インドール−１−イル］プロピル｝−β−Ｄ−グルコピラヌロナートを得た。
1H-NMR(CDCl3) δ: 7.4〜6.7(11H, m), 5.9〜5.7(1H, m), 5.3〜4.9(5H, m),4.6〜3.8(8H, m), 3.74(3H, s), 3.7〜2.5(11H, m), 2.1〜2(9H, m), 1.9〜1.7(2H, m), 1.3〜1.2(3H, m).【００４３】
【化６】
0004847333.tif 000007
【００４４】
（工程２）
工程１の化合物の塩化メチレン（７．３ｍＬ）溶液にトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、室温で２時間攪拌した。反応液を減圧濃縮して得られた残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（アミノプロピルシリカゲル，溶離液：塩化メチレン／ジエチルエーテル／メタノール＝１／１／０→３０／３０／１，ｖ／ｖ）に付してメチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−Ｏ−｛３−［７−カルバモイル−５−（（２Ｒ）−２−｛［２−（｛２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）オキシ］フェニル｝オキシ）エチル］アミノ｝プロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］プロピル｝−β−Ｄ−グルコピラヌロナート（０．５８ｇ，収率８７％）を得た。
1H-NMR(CDCl3) δ: 7.31(1H, s), 7.1〜6.8(6H, m), 5.78(1H, br s), 5.3〜5.1(2H, m), 5.0(1H, m), 4.56(1H, d, J=7.6Hz), 4.31(2H, q, J=8.6Hz),4.1〜3.9(4H, m), 3.75(3H, s), 3.6〜3.5(1H, m), 3.5〜3.3(2H, m), 3.2〜2.9(7H, m), 2.71(1H, dd, J=13.6, 6.3Hz), 2.51(1H, dd, J=13.6, 6.7Hz), 2.04(3H, s), 2.02(6H, s), 1.9〜1.8(2H, m), 1.06(3H, d, J=6.2Hz).【００４５】
（工程２−２）
工程１−２の化合物（４．１ｇ）、１０％Ｐｄ−Ｃ（０．４１ｇ）及びメタノール（８５ｍＬ）を混合し、水素雰囲気下、室温で３時間攪拌した。反応液をろ過し、不溶物をメタノールで洗浄し、ろ液と洗浄液とを合せて減圧濃縮した。得られた残留物を塩化メチレン（１４ｍＬ）に溶解し、再度、減圧濃縮した後、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（アミノプロピルシリカゲル，溶離液：塩化メチレン／ジエチルエーテル／ｎ−ヘキサン＝２／２／１→１／１／０，ｖ／ｖ）に付し、メチル＝２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−Ｏ−｛３−［７−カルバモイル−５−（（２Ｒ）−２−｛［２−（｛２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）オキシ］フェニル｝オキシ）エチル］アミノ｝プロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］プロピル｝−β−Ｄ−グルコピラヌロナート２．６３ｇ（収率７５％）を得た。このものは、上記工程２の化合物と機器データが一致した。【００４６】
【化７】
0004847333.tif 000008
【００４７】
（工程３）
工程２の化合物（２．６１ｇ）のＴＨＦ（１１ｍＬ）−メタノール（１１ｍＬ）溶液に氷冷下攪拌しながら、２８％ナトリウムメトキシド（７６μＬ）を加え、室温で３０分間攪拌した。反応液に氷冷下で２Ｎ  塩酸（４８２μＬ）を加えた後、減圧濃縮した。得られた残留物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（アミノプロピルシリカゲル，溶離液：塩化メチレン／メタノール＝１／０→２０／１→１０／１，ｖ／ｖ）に付し、メチル＝１−Ｏ−｛３−［７−カルバモイル−５−（（２Ｒ）−２−｛［２−（｛２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）オキシ］フェニル｝オキシ）エチル］アミノ｝プロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］プロピル｝−β−Ｄ−グルコピラヌロナート１．５７ｇ（収率７１％）を得た。
1H-NMR(CDCl3) δ: 7.18(1H, s), 7.1〜6.9(5H, m), 6.78(1H, br s), 6.66(1H, br s), 4.4〜4.2(3H, m), 4.2〜4.0(2H, m), 4.0〜3.9(1H, m), 3.85(1H, d, J9.9Hz), 3.8〜3.7(4H, m), 3.6〜3.0(8H, m), 3.0〜2.8(4H, m), 2.64(1H, dd, J=13.6, 7.1Hz), 2.52(1H, dd, J=13.6, 6.7Hz), 1.9〜1.5(2H, m), 1.06(3H, d, J=6.5Hz).【００４８】
【化８】
0004847333.tif 000009
【００４９】
上記化合物（０．３４ｇ）のメタノール（２．５ｍＬ）−ＴＨＦ（２．５ｍＬ）溶液に氷冷下２Ｎ  水酸化ナトリウム水溶液（０．２５ｍＬ）を加えた後、室温で一夜攪拌した。反応液を減圧濃縮して表題化合物０．３４ｇ（定量的）を淡黄色アモルファスとして得た。
1H-NMR(CD3OD) δ: 7.1〜6.9(6H, m), 4.45(2H, q, J=8.6Hz), 4.26(1H, d, J=7.8Hz), 4.2〜4(3H, m), 3.7〜3.1(9H, m), 3.1〜2.8(5H, m), 2.70(1H, dd, J=13.5, 6.5Hz), 2.50(1H, dd, J=13.5, 7.2Hz), 2.0〜1.8(2H, m), 1.07(3H, d, J=6.2Hz).【００５０】
［実施例２］カリウム  １−Ｏ−｛３−［７−カルバモイル−５−（（２Ｒ）−２−｛［２−（｛２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）オキシ］フェニル｝オキシ）エチル］アミノ｝プロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］プロピル｝−β−Ｄ−グルコピラヌロナート
メチル＝１−Ｏ−｛３−［７−カルバモイル−５−（（２Ｒ）−２−｛［２−（｛２−［（２，２，２−トリフルオロエチル）オキシ］フェニル｝オキシ）エチル］アミノ｝プロピル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］プロピル｝−β−Ｄ−グルコピラヌロナート（５００ｍｇ）をメタノール（１０ｍＬ）に懸濁し、氷冷下で１Ｎ  水酸化カリウム（０．７４ｍＬ）を加え、室温で１２時間攪拌した。反応液にアセトニトリル（２０ｍＬ）を加え、１時間攪拌した後、ろ過した。析出物をアセトニトリルで洗浄し、５０℃で減圧乾燥することにより白色粉末として表題化合物４５２ｍｇ（収率８７％）を得た。
1H-NMR(CD3OD) δ: 7.1〜6.9(6H, m), 4.45(2H, q, J=8.5Hz), 4.25(1H, d, J=7.7Hz), 4.2〜4.1(1H, m), 4.1〜4.0(2H, m), 3.65〜3.55(1H, m), 3.54(1H, d, J=9.4Hz), 3.5〜3.35(4H, m), 3.3〜3.15(3H, m), 3.1〜2.8(5H, m), 2.70(1H, dd, J=13.6, 6.8Hz), 2.51(1H, dd, J=13.6, 7.2Hz), 1.9〜1.8(2H, m), 1.07(3H, d, J=6.3Hz).【００５１】
【化９】
0004847333.tif 000010
【００５２】
［試験例１］
実施例１の化合物（以下「化合物Ａ」という。）を用いて、以下の実験を行った。
１．実験材料
（１）使用薬物
Ultima Gold XR（液体シンチレーター）（パッカードジャパン社）
Ethyleneimine -polymer- （ポリエチレンイミン、30 %溶液)（ナカライテスク社）
Tris(hydroxymethyl)aminomethane  （Tris：ナカライテスク社）
di-Sodium dihydrogen ethylenediamine tetraacetate dihydrate  （ナカライテスク社）
2 mol/L HCl  （ナカライテスク社）
Dimethylsulfoxide  （DMSO：ナカライテスク社）
（２）使用細胞
細胞名：L-alpha-1c [human α１ａ-AR subtype expressed LM(tk-) cells]
細胞名：L-alpha-1b [human α１ｂ-AR subtype expressed LM(tk-) cells]
細胞名：L-alpha-1a [human α１ｄ-AR subtype expressed LM(tk-) cells]
AD：アドレナリン受容体（以下同じ）
（３）放射性リガンド
薬物名：Prazosin, [7-methoxy-3H]-  (specific activity: 80.0 Ci/mmol)【００５３】
２．実験方法
（１）試験数と例数、薬物処置量
α１ａ-、α１ｂ-及びα１ｄ-アドレナリン受容体に対して表１に示す条件で、飽和実験と置換実験を行った。【００５４】
【表１】
0004847333.tif 000011
【００５５】
（２）膜分画の作製方法
回収したＬＭ（ｔｋ−）細胞(マウス由来)にAssay bufferを加え、超音波細胞破砕機を用いて氷冷下で超音波処理（setting 4 for 15 seconds, two times）をした後、多本架冷却遠心機を用いて遠心分離（3,000 rpm for 10 min，4℃）した。得られた上清をさらに卓上超遠心機を用いて遠心分離し（50,000 rpm for 30 min， 4℃）、得られた沈渣にAssay bufferを加え、超音波細胞破砕機を用いて再懸濁して膜分画を得た。【００５６】
（３）反応条件等
飽和実験： 
添加順序（total volume : 1 mL）。
1) α1a−アドレナリン受容体
リガンド：[3H]-prazosin溶液  30〜300 μL
およその濃度 30、100、300、1000、2000及び3000 p mol/L
Assay buffer：400〜670 μL
レセプター：α1a-AR expressed LM (tk-)細胞膜分画 200 μL
Assay buffer or 10 μ mol/L tamsulosin 溶液 100 μL
（終濃度 1μ mol/L）
インキュベーション条件：30℃、60 min
2) α1b-、α1d−アドレナリン受容体
リガンド：[3H]-prazosin溶液  30〜300 μL
およその濃度 30、100、300、1000及び2000 p mol/L
Assay buffer：500〜770 μL
レセプター：α1b-、α1d-AR expressed LM (tk-)細胞膜分画 100 μL
Assay buffer of 10 μ mol/L tamsulosin 溶液 100 μL
インキュベーション条件：30℃、45 min【００５７】
置換実験：
添加順序（total volume : 1 mL）。
1) α1a−アドレナリン受容体
・リガンド：[3H]-prazosin溶液  50 μL：終濃度 473.89〜569.85 p mol/L
・Assay buffer：650 μL
・レセプター：α1a-AR expressed LM (tk-)細胞膜分画 200 μL
・Competitor：以下の溶液のうち、1種類を100 μL加えた。
Assay buffer、化合物Ａ（終濃度は表１に記載）、10 μ mol/L tamsulosin 溶液 （終濃度 1 μ mol/L）
インキュベーション条件：30℃、60 min
2) α1b−アドレナリン受容体
・リガンド：[3H]-prazosin溶液  200 μL：終濃度 182.27〜255.6 p mol/L
・Assay buffer：600 μL
・レセプター：α1b-AR expressed LM (tk-)細胞膜分画 100 μL
・Competitor：以下の溶液のうち、1種類を100 μL加えた。
Assay buffer、化合物Ａ（終濃度は表１に記載）、10 μ mol/L tamsulosin 溶液 （終濃度 1 μ mol/L）
インキュベーション条件：30℃、45 min
3) α1d−アドレナリン受容体
・リガンド：[3H]-prazosin溶液  300 μL：終濃度 263.59〜337.77 p mol/L
・Assay buffer：500 μL, 化合物Ａ（終濃度は表１に記載）
・レセプター：α1d-AR expressed LM (tk-)細胞膜分画 100 μL
・Competitor：以下の溶液のうち、1種類を100 μL加えた。
Assay buffer、化合物Ａ（終濃度は表1に記載）、10 μM tamsulosin 溶液 （終濃度 1 μ mol/L）
インキュベーション条件：30℃、45 min【００５８】
両実験とも反応停止はあらかじめ０．３％ポリエチレンイミン処理したガラスフィルター（ＧＦ／Ｃ）をセットしたセルハーベスターでＢ／Ｆ分離を行うことにより行った。その際氷冷したWash bufferで洗浄を3回行った。【００５９】
（４）放射能の測定
[3H]-prazosin膜結合放射能は、乾燥（６５℃、１時間）したガラスフィルターに液体シンチレーター２ｍＬを加えた後、液体シンチレーションアナライザーを用いて２分間測定した。【００６０】
３．データ処理方法
放射性リガンド及び各化合物の受容体親和性等の計算方法
液体シンチレーションアナライザーの測定結果をGraphpad Prism version 3.0 (Graphpad Software Inc.) を用いて解析し、[3H]-prazosinのＫｄ、及び化合物ＡのＫｉを算出した。データは平均値で示した。例外として、サブタイプ選択性については計算値で示した。【００６１】
４．結果
（１）飽和実験
α1-アドレナリン受容体サブタイプ(α１ａ−、α１ｂ−及びα１ｄ−アドレナリン受容体)における [3H]-prazosinのｐＫｄは、それぞれ９．７８、１０．５及び１０．０であった。【００６２】
（２）置換実験
各α１−アドレナリン受容体サブタイプ（α１ａ−、α１ｂ−及びα１ｄ−アドレナリン受容体）における化合物Ａの[3H]-prazosin結合に対する阻害曲線を図１に示した。化合物Ａは各α1−アドレナリン受容体サブタイプとも、[3H]-prazosinの結合を濃度依存的に阻害した。【００６３】
化合物Ａの各α１−アドレナリン受容体サブタイプ（α１ａ−、α１ｂ−及びα１ｄ−アドレナリン受容体）に対する親和性（ｐＫｉ）及びα１ａ−アドレナリン受容体サブタイプ選択性を算出したところ、それぞれ、９．５０、６．５３及び７．０９であった。【００６４】
化合物Ａのα１ａ−アドレナリン受容体サブタイプ選択性は、α１ｂ−及びα１ｄ−アドレナリン受容体サブタイプに対してそれぞれ９３３及び２５７倍であった。【００６５】
化合物Ａはヒトα１ａ−アドレナリン受容体サブタイプに高い親和性を示し、そのｐＫｉ値は９．５０であった。【００６６】
［試験例２］
実施例２の化合物（以下「化合物Ｂ」という。）について、体重３〜４ｋｇのJ.W.(Japanese White)系雄性ウサギと１０−１１週齢のSprague-Dawley系雄性ラットを用いて、以下の実験を行った。
１．実験方法
（１）標本作製
・ウサギ前立腺
ウサギをペントバルビタール麻酔下で頸動脈より瀉血し致死させた後、腹部から恥骨結合まで切開し膀胱、前立腺から遠位尿道までを摘出した。クレブス溶液中で結合組織、脂肪組織等を取り除き、膀胱、前立腺及び尿道を分離した。前立腺被膜を取り除き、水平方向に切断して３〜４本の標本（約３X３X１０ｍｍ）を作製した。
・ラット脾臓
ラットをエーテル麻酔下に開腹し、腹部大動脈より瀉血し致死させた後、脾臓を摘出した。脾臓は長軸方向に半切し、さらに縁をトリミングして約２X４X３０ｍｍの標本を作製した。ラット１匹の脾臓より２本の標本を作製した。【００６７】
（２）化合物Ｂのノルアドレナリン誘発収縮に対する拮抗作用
標本を３７℃で９５％Ｏ２及び５％ＣＯ２混合ガスを通気した１０ｍＬのクレブス溶液を満たした器官槽に懸垂し、ウサギ前立腺及びラット脾臓にそれぞれ１ｇ及び０．５ｇの初期負荷をかけた。張力は張力トランスデューサを介して等尺性に検出し、ペン書き記録器に記録した。
ノルアドレナリンの１X１０−５ｍｏｌ／Ｌで単収縮を2回惹起した後、inhibitor cocktail  ２００μＬ（終濃度：塩酸デシプラミン；１X１０−７ｍｏｌ／Ｌ，コルチコステロン；１X１０−５ｍｏｌ／Ｌ，塩酸ヨヒンビン；１X１０−７ｍｏｌ／Ｌ及び塩酸プロプラノロール；１X１０−６ｍｏｌ／Ｌ）の存在下で約１時間処理し、ノルアドレナリンを１X１０−８ｍｏｌ／Ｌから濃度累積的に器官槽内に添加し、濃度−反応曲線を２回作成し、2回目をcontrol curveとした。次に、所定量の化合物Ｂで約1時間処置し、3回目のノルアドレナリンに対する濃度−反応曲線を作成した。【００６８】
２．データ処理方法
（１）ウサギ前立腺
高濃度（１X１０−８ｍｏｌ／Ｌ）の化合物Ｂ処置によるノルアドレナリンの用量反応曲線の最大反応が低下したことから、シルドプロット解析は行わず、処置した最低濃度の用量反応曲線より化合物Ｂの機能的親和性ｐＫｂ値を求めた。【００６９】
（２）ラット脾臓
得られた結果よりシルド解析を行い、化合物Ｂのα１−アドレナリン受容体に対する機能的親和性の絶対値：ｐＡ２値（活性薬単独による濃度反応曲線を2倍だけ高濃度側へ平行移動させるのに必要な競合的拮抗薬のモル濃度のnegative logarithm）を、以下の式により算出した。
ｐＡ２  ＝  ｌｏｇ（ＣＲ−１）  −  ｌｏｇ［Ｂ］
（式中、ＣＲはcontrol curve及び検体処置後のcurveの各ＥＣ５０値（５０％の収縮率を与えるノルアドレナリンの濃度）の比を表し、Ｂは処置した化合物Ｂの濃度を表す。）【００７０】
また、同時にシルドプロットの傾きを求め、その傾きが１と異なるかどうかpaired t-testにより検定した。危険率５％未満をもって有意差ありとした。【００７１】
３．結果
（１）ウサギ摘出前立腺のノルアドレナリン収縮に対する作用
図２及び図３にウサギ摘出前立腺のノルアドレナリンに対する濃度―反応曲線を示した。また、化合物ＢのｐＫｂ値は９．８４であった。Ｃｏｎｔｒｏｌとしての２回目の濃度−反応曲線と３回目のｔｉｍｅ  ｃｏｎｔｒｏｌの曲線とはほぼ一致した。これより、ノルアドレナリンの処置回数による濃度−反応曲線の違いはないものと考えられた。化合物Ｂは濃度依存的にウサギ摘出前立腺のノルアドレナリンに対する濃度−反応曲線を右方へ移動させるとともに、高濃度処置により最大反応も低下させた。【００７２】
（２）ラット摘出脾臓のノルアドレナリン収縮に対する作用
図４及び図５に摘出ラット脾臓標本のノルアドレナリンに対する濃度−反応曲線を、図６に化合物Ｂのシルドプロットを示した。また、シルド解析により求めた化合物ＢのｐＡ２値及びシルドプロットの傾きを表２に示した。Ｃｏｎｔｒｏｌとしての２回目の濃度−反応曲線と、３回目のｔｉｍｅ  ｃｏｎｔｒｏｌの曲線とはほぼ一致した。これより、ノルアドレナリンの処置回数による濃度−反応曲線の違いはないものと考えられた。
化合物Ｂは、ラット摘出脾臓標本のノルアドレナリンに対する濃度−反応曲線を濃度依存的に右方へ平行移動させた。【００７３】
【表２】
0004847333.tif 000012
【００７４】
（３）化合物Ｂのα１Ａ−アドレナリン受容体に対する選択性
化合物Ｂのα１Ａ−アドレナリン受容体に対する選択性を表３に示した。化合物Ｂはα１Ａ−アドレナリン受容体に対して高い選択性を示した。【００７５】
【表３】
0004847333.tif 000013
【００７６】
以上の結果から、化合物Ａはヒトa１−アドレナリン受容体発現細胞を用いた結合試験においてa１Ａ−、a１Ｂ−及びa１Ｄ−アドレナリン受容体サブタイプのうち、a１Ａ−アドレナリン受容体サブタイプに対して特に高い親和性及び選択性を示した。また、ウサギ摘出前立腺及びラット摘出脾臓を用いて、a１Ａ−及びa１Ｂ−アドレナリン受容体サブタイプに対する化合物Ｂの機能的薬理作用を検証したところa１Ａ−アドレナリン受容体サブタイプに対する高い親和性及び選択性が認められた。
【図１】
0004847333.tif 000016
【図２】
0004847333.tif 000017
【図３】
0004847333.tif 000018
【図４】
0004847333.tif 000019
【図５】
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【図６】
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