(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式（１）で表される化合物のナトリウム塩及びカリウム塩を配合することを特徴とするＲＯＲ活性化剤。
0004675801.tif 000006
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚老化の防止や改善に関する技術分野の発明であり、化学式（１）で表される化合物のナトリウム塩及びカリウム塩を有効成分とするレチノイド関連オーファン受容体（ＲＯＲ）活性化剤に関する。
0004675801.tif 000002
【背景技術】
【０００２】
皮膚は紫外線の影響により活性酸素が発生しやすく、絶えずその酸素ストレスに曝されており、皮膚老化の根本原因と考えられている。皮膚老化の一つであるしわは、コラーゲンなどの細胞外マトリックス成分の減少および変性により皮膚弾力の低下が原因となって発生する。このような紫外線に曝された皮膚の真皮では、細胞外マトリックス成分に対して分解能を有するマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の発現が亢進する。一方、皮膚免疫異常や表皮細胞の分化異常にともなう皮膚疾患や皮膚老化にはインターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−６、ＣＯＸ−２、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１が関与する（非特許文献１、２）。
【０００３】
【非特許文献１】Ｗｌａｓｃｈｅｋ  Ｍ等，Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．，１９９４，５９，５５０−５５６
【非特許文献２】Ｎｏｒｒｉｓ  Ｐ等，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１９９１，９６，７６３−７７０
【０００４】
このようなＭＭＰや炎症性サイトカイン、接着分子は転写因子の一つであるＮＦ−κＢによって発現調節されている（非特許文献３−５）。すなわち、通常ＮＦ−κＢは抑制性タンパク質ＩκＢと不活性型の複合体を形成し、細胞質に存在する。ところがＴＮＦ−αなどのサイトカイン刺激によってＩκＢの分解が生じ、ＮＦ−κＢを制御する能力を失うと、活性化されたＮＦ−κＢは核内に移行し、ＤＮＡのプロモーター領域に結合して遺伝子の転写を開始する（非特許文献６、７）。
【０００５】
【非特許文献３】Ｈａｎ  Ｙ−Ｐ等，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０００，１１４，１３１−１３９
【非特許文献４】Ｙｕａｎ  Ｗ等，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００１，２７６，３８５０２−３８５１０
【非特許文献５】Ｆｉｅｂｅｒ  Ｃ等，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００４，１１７，３５９−３６７
【非特許文献６】Ｆｏｒｍａｎ  Ｂ等，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８，２４２，５４０−５４６
【非特許文献７】Ｂａｕｅｒｌｅ  Ｐ．Ａ等，Ｃｅｌｌ，２００４，８７，１３−２０
【０００６】
レチノイド関連オーファン受容体（ＲＯＲ）は核内受容体スーパーファミリーに含まれる転写因子の一つである。ＲＯＲは遺伝子やタンパク質の存在だけは知られているが、実際の生理機能や生体内のリガンドが同定されていないことから、オーファン受容体とみなされており、ＲＯＲはＲＯＲα、ＲＯＲβ、ＲＯＲγの３種類が知られている（非特許文献８）。ＲＯＲαには共通のＤＮＡ結合ドメインおよびリガンド結合ドメインをもち、Ｎ−末端の異なる４種類のアイソフォームが存在し、単量体でＤＮＡに結合して遺伝子を転写制御する（非特許文献９）。
【０００７】
【非特許文献８】Ｊｅｔｔｅｎ  Ａ．Ｍ等，Ｐｒｏｇ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００１，６９，２０５−２４７
【非特許文献９】Ｇｉｇｕｅｒｅ  Ｖ等，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９５，１５，２５１７−２５２６
【０００８】
さらに、アテローム性動脈硬化およびリウマチ性関節炎の抑制因子として作用するＲＯＲの標的遺伝子がＩκＢであることが明らかとなり、ＲＯＲはＮＦ−κＢを抑制的に制御するうえで上流に位置する極めて重要な転写因子であることが示唆されている（非特許文献１０）。
【０００９】
【非特許文献１０】Ｄｅｌｅｒｉｖｅ  Ｐ等，ＥＭＢＯ  ｒｅｐｏｒｔｓ，２００１，２１，４２−４８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
ＲＯＲはＮＦ−κＢ経路を介したＭＭＰや炎症性サイトカインの発現の制御に有用なタンパク質であると考えられ、老化防止用組成物への応用が期待される。しかしながら、ＲＯＲを直接製剤化することは、安定性や安全性、効果の面から考えても不可能であり、なにより不経済である。このため、皮膚内でＲＯＲを活性化する方法が良く、特にＲＯＲ活性化剤の開発が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
このような事情により、本発明者らは鋭意研究検討した結果、化学式（１）で表される化合物のナトリウム塩及びカリウム塩が安定で、優れたＲＯＲ活性化効果を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
本発明の化学式（１）は、天然由来のものを利用することができるほか、トコフェロールから常法により合成でき、下記の文献も参考にできる。
【００１３】
【特許文献１】特公昭６１−２０５８３
【特許文献２】特公平３−３２５５８
【００１４】
また、本発明においては化学式（１）で表される化合物のナトリウム塩及びカリウム塩が用いられる。
【００１５】
本発明のＲＯＲ活性化剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品または食品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、座剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、錠菓、飲料等が挙げられる。また、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常の化粧品、医薬部外品、医薬品等に用いられる各種成分、例えば油性成分、乳化剤、保湿剤、増粘剤、薬効成分、防腐剤、顔料、粉体、ｐＨ調整剤、紫外線吸収剤、抗酸化剤、香料等を適宜配合することができる。
【００１６】
油性成分としては、例えば流動パラフィン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス、スクワラン、ホホバ油、ミツロウ、カルナウバロウ、ラノリン、オリーブ油、ヤシ油、高級アルコール、脂肪酸、高級アルコールと脂肪酸のエステル、シリコーン油等が挙げられる。乳化剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の非イオン界面活性剤、ステアロイル乳酸ナトリウム等のアニオン界面活性剤、大豆リン脂質等の両性界面活性剤、塩化アルキルトリメチルアンモニウム等のカチオン界面活性剤が挙げられる。保湿剤としては、例えばグリセリン、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、１，３−ブチレングリコールなどが挙げられる。増粘剤としては、例えばカルボキシビニルポリマー、キサンタンガム、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ベントナイト等の粘土鉱物等が挙げられる。薬効成分としては、例えば各種ビタミンおよびその誘導体、アラントイン、グリチルリチン酸およびその誘導体、各種動植物抽出物等が挙げられる。
【００１７】
本発明のＲＯＲ活性化剤中に配合される化合物の量は、剤型や期待する効果の程度により異なるが、通常０．００１重量％以上、好ましくは０．１〜５０重量％程度配合するのがよい。０．００１重量％未満では十分な効果は望みにくい場合があり、５０重量％を超えて配合した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。
【発明の効果】
【００１８】
本発明の新規な薬効成分は、ＲＯＲ活性化効果を有し、ＩκＢの発現亢進を介してＮＦ−κＢ経路を制御し、生体組織の老化を防止する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
次に本発明による効果を具体的な実施例を挙げ説明する。これらの実施例は効果を具体的に説明するもので、発明の範囲を限定するものではない。実施例中の配合量は重量％である。
【実施例１】
【００２０】
本発明の薬効成分は、処方例として下記の製剤化を行うことができる。
【００２１】
処方例−１  飲料
処方                                                配合量（％）
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム          ２．０
２．クエン酸                                        ０．７
３．果糖ブドウ糖液糖                              ６０．０
４．香料                                            適量
５．精製水にて全量を１００とする。
［製法］５に1〜４を加え、攪拌溶解してろ過し、加熱殺菌後、５０ｍＬガラス瓶に充填する。
【００２２】
処方例−２  飲料
処方                                                配合量（％）
１．ｄ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム            １．０
２．クエン酸                                        ０．７
３．ショ糖                                        ６０．０
４．香料                                            適量
５．精製水にて全量を１００とする。
［製法］５に1〜４を加え、攪拌溶解してろ過し、加熱殺菌後、５０ｍＬガラス瓶に充填する。
【００２３】
処方例−３  顆粒剤
処方                                                配合量（％）
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ジナトリウム        ３．０
２．還元麦芽糖水あめ                              ３８．０
３．微結晶セルロース                              ５９．０
［製法］成分１〜３に７０％エタノールを適量加えて練和し、押出し造粒した後、乾燥して顆粒剤を得る。
【００２４】
処方例−４  錠剤
処方                                                配合量（％）
１．ｄ−α−トコフェリルリン酸カリウム              ４．０
２．乾燥コーンスターチ                            ２５．０
３．還元麦芽糖水あめ                              ２０．０
４．粉糖                                          ４８．０
５．ショ糖脂肪酸エステル                            ３．０
［製法］成分1〜４に７０％エタノールを適量加えて練和し、押出し造粒した後、乾燥して顆粒を得る。顆粒に成分５を加えて打錠し、１錠０．５２ｇの錠剤を得る。
【００２５】
処方例−５  錠菓
処方                                                配合量（％）
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム          ０．９
２．乾燥コーンスターチ                            ５１．１
３．エリスリトール                                ３９．０
４．クエン酸                                        ５．０
５．ショ糖脂肪酸エステル                            ３．０
６．香料                                            １．０
［製法］成分１〜４に水を適量加えて練和し、押出し造粒した後、乾燥して顆粒を得る。顆粒に成分５及び６を加えて打錠し、１個１．０ｇの錠菓を得る。
【００２６】
処方例−６  カプセル剤
処方                                                配合量（％）
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム        １５．０
２．セルロース                                    ８５．０
［製法］成分１および２を混合し、２号硬カプセルに２５０ｍｇ充填してカプセル剤を得る。
【００２７】
処方例−７  クリーム                                配合量（％）
処方
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム          ２．０
２．スクワラン                                      ５．５
３．オリーブ油                                      ３．０
４．ステアリン酸                                    ２．０
５．ミツロウ                                        ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル                    ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ベヘニルアルコール                              １．５
９．モノステアリン酸グリセリン                      ２．５
１０．香料                                            ０．１
１１．１，３−ブチレングリコール                      ８．５
１２．パラオキシ安息香酸エチル                        ０．０５
１３．パラオキシ安息香酸メチル                        ０．２
１４．精製水にて全量を１００とする
[製法]成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１および１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、さらに３０℃まで冷却して製品とする。
【００２８】
比較例−１  従来のクリーム
処方例−７において、ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウムを精製水に置き換えたものを従来のクリームとした。
【００２９】
処方例−８  化粧水                                  配合量（％）
処方
１．ｄ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム            ０．１
２．１，３−ブチレングリコール                      ８．０
３．グリセリン                                      ２．０
４．キサンタンガム                                  ０．０２
５．クエン酸                                        ０．０１
６．クエン酸ナトリウム                              ０．１
７．エタノール                                      ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル                        ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）  ０．１
１０．香料                                            適量
１１．精製水にて全量を１００とする
[製法]成分１〜６および１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００３０】
処方例−９  乳液                                    配合量（％）
処方
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ジナトリウム        ０．５
２．スクワラン                                      ５．０
３．オリーブ油                                      ５．０
４．ホホバ油                                        ５．０
５．セタノール                                      １．５
６．モノステアリン酸グリセリン                      ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタン
モノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）                  ２．０
９．香料                                            ０．１
１０．プロピレングリコール                            １．０
１１．グリセリン                                      ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル                        ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
[製法]成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１および１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、さらに３０℃まで冷却して製品とする。
【００３１】
処方例−１０  ゲル剤                                配合量（％）
処方
１．ｄ−α−トコフェリルリン酸カリウム              ０．１
２．エタノール                                      ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル                        ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                  ０．１
５．香料                                            適量
６．１，３−ブチレングリコール                      ５．０
７．グリセリン                                      ５．０
８．キサンタンガム                                  ０．１
９．カルボキシビニルポリマー                        ０．２
１０．水酸化カリウム                                  ０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
[製法]成分２〜５と、成分１および６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００３２】
処方例−１１  軟膏                                  配合量（％）
処方
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム          １．０
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）２．０
３．モノステアリン酸グリセリン                    １０．０
４．流動パラフィン                                  ５．０
５．セタノール                                      ６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                        ０．１
７．プロピレングリコール                          １０．０
８．精製水にて全量を１００とする
[製法]成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１および６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化し、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３３】
処方例−１２  パック                                配合量（％）
処方
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸カリウム            ０．１
２．ポリビニルアルコール                          １２．０
３．エタノール                                      ５．０
４．１，３−ブチレングリコール                      ８．０
５．パラオキシ安息香酸メチル                        ０．２
６．パラオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）  ０．５
７．クエン酸                                        ０．１
８．クエン酸ナトリウム                              ０．３
９．香料                                            適量
１０．精製水にて全量を１００とする
[製法]成分１〜１０を均一に溶解し製品とする。
【００３４】
処方例−１３  ファンデーション                      配合量（％）
処方
１．ｄ−α−トコフェリルリン酸ジナトリウム          １．０
２．ステアリン酸                                    ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタン
モノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）                １．０
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）２．０
５．セタノール                                      １．０
６．液状ラノリン                                    ２．０
７．流動パラフィン                                  ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル                        ６．５
９．パラオキシ安息香酸ブチル                        ０．１
１０．カルボキシメチルセルロースナトリウム            ０．１
１１．ベントナイト                                    ０．５
１２．プロピレングリコール                            ４．０
１３．トリエタノールアミン                            １．１
１４．パラオキシ安息香酸メチル                        ０．２
１５．二酸化チタン                                    ８．０
１６．タルク                                          ４．０
１７．ベンガラ                                        １．０
１８．黄酸化鉄                                        ２．０
１９．香料                                            適量
２０．精製水にて全量を１００とする
[製法]成分２〜９を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分２０に成分１０をよく膨潤させ、続いて、成分１および１１〜１４を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１５〜１８を加え、冷却し、４５℃で成分１９を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３５】
処方例−１４  浴用剤                                配合量（％）
処方
１．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム          １．０
２．炭酸水素ナトリウム                            ５０．０
３．黄色２０２号                                    適量
４．香料                                            適量
５．無水硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
[製法]成分１〜５を均一に混合し製品とする。
【００３６】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【実施例２】
【００３７】
実験例−１  ＲＯＲαｍＲＮＡの発現解析
コンフルエントな状態の正常ヒト角化細胞に、試料を５０μＭとなるように添加し、２４時間後に総ＲＮＡの抽出を行った。総ＲＮＡを基にＲＴ−ＰＣＲ法によりＲＯＲαｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ＲＴ−ＰＣＲ法はＴａＫａＲａ  ＲＮＡ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ（ＡＭＶ）Ｖｅｒ．２．１を用いた。また、内部標準としてはＧＡＰＤＨを用いた。その他の操作は定められた方法に従い、ＰＣＲ反応液をアガロースゲル電気泳動に供し、ＲＯＲα、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現をバンドとして確認した。これらのバンドをポラロイドカメラにて撮影してデンシトメーターを用いて定量化し、ＲＯＲαｍＲＮＡの発現量を内部標準であるＧＡＰＤＨｍＲＮＡ発現量に対する割合として求め、対照を１とした場合の発現比で表した。その結果、表１に示すように、化学式（１）で表される化合物のナトリウム塩及びカリウム塩はＲＯＲαｍＲＮＡの発現を亢進した。
【００３８】
【表１】
0004675801.tif 000003
【００３９】
実験例−２  紫外線照射に対するＲＯＲαの防御効果
コンフルエントな状態の正常ヒト角化細胞に、試料を１０μＭとなるように添加した。２４時間後に、培養液をＰＢＳに置換し、ＵＶＢを３０ｍＪ／ｃｍ２照射した。照射３時間後に総ＲＮＡを抽出し、総ＲＮＡを基にＲＴ−ＰＣＲ法によりＲＯＲαｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ＲＴ−ＰＣＲ法はＴａＫａＲａ  ＲＮＡ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ（ＡＭＶ）Ｖｅｒ．２．１を用いた。また、内部標準としてはＧＡＰＤＨを用いた。その他の操作は定められた方法に従い、ＰＣＲ反応液をアガロースゲル電気泳動に供し、ＲＯＲα、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現をバンドとして確認した。これらのバンドをポラロイドカメラにて撮影してデンシトメーターを用いて定量化し、ＲＯＲαｍＲＮＡの発現量を内部標準であるＧＡＰＤＨｍＲＮＡ発現量に対する割合として求め、対照を１とした場合の発現比で表した。その結果、表２に示すように、化学式（１）で表される化合物のナトリウム塩及びカリウム塩は、紫外線によるＲＯＲαｍＲＮＡの発現低下を抑制し、防御効果を示した。
【００４０】
【表２】
0004675801.tif 000004
【００４１】
実験例−３  使用試験
処方例−７のクリームおよび比較例−１のクリームを用いて、各々女性３０人（２５−５１才）を対象に２ヶ月間の使用試験を行った。使用後、皮膚の乾燥状態、小じわ、くすみ、肌のキメの乱れの改善効果についてアンケート調査を行って、老化防止効果を判定した。アンケートの評価基準は、有効なものを「優」、やや有効なものを「良」、わずかに有効なものを「可」、無効なものを「不可」として評価した。
【００４２】
これらの結果を表３に示した。本発明のＲＯＲ活性化剤を含有した組成物は優れた皮膚の老化防止効果を示した。なお、試験期間中皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。
【００４３】
【表３】
0004675801.tif 000005
【００４４】
処方例１〜６、８〜１４についても同様な試験を行ったところ、いずれも安全で優れた皮膚の老化防止効果を示した。
【産業上の利用可能性】
【００４５】
本発明の化学式（１）で表される化合物のナトリウム塩及びカリウム塩は、皮膚細胞における優れたＲＯＲ活性化効果を有し、皮膚の老化に伴う乾燥、小じわ、くすみ、キメの乱れ等の症状の改善を目的とする医薬品、医薬部外品、化粧品または食品に配合することが可能である。