(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記から選ばれる、一本鎖免疫刺激性ポリマー
A-A-A-C-G-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G     （配列番号３）;
A-A-A-C-G-C-U-C-A-C-C-C-A-A-A-G-C-A-G     （配列番号１７）;
A-A-A-C-A-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G     (配列番号２２);
A-A-A-C-C-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G       （配列番号２３）;
[ここで、“−”はホスホジエステル骨格を示す]
と、
リポソーム、ノイソーム、リポプレックス、ポリプレックス、リポポリプレックス、油中水型エマルジョン、水中油型エマルジョン、水-油-水型複合エマルジョン、マイクロエマルジョン、ナノエマルジョン、ミセル、デンドリマー、ビロソーム、ウイルス様粒子、ポリマーナノ粒子、またはポリマーマイクロ粒子である送達媒体とを含み、リポフェクチン（登録商標）を含まない組成物。
【請求項２】
一本鎖免疫刺激性ポリマーに結合していても良い抗原を含む、請求項1に記載の組成物。
【請求項３】
一本鎖免疫刺激性ポリマーが、ヒポキサンチン、イノシン、8−オキソアデニン、ジヒドロウラシル、偽ウラシル、2−チオウラシル、4−チオウラシル、5−アミノウラシル、5−（C1〜C6）−アルキルウラシル、5−メチルウラシル、5−（C2〜C6）−アルケニルウラシル、5−（C2〜C6）アルキニルウラシル、5−（ヒドロキシメチル）ウラシル、5−クロロウラシル、5−フルオロウラシル、5−ブロモウラシル、5−ヒドロキシシトシン、5−（C1〜C6）−アルキルシトシン、5−メチルシトシン、5−（C2〜C6）アルケニルシトシン、5−（C2〜C6）−アルキニルシトシン、5−クロロシトシン、5−フルオロシトシン、5−ブロモシトシン、2−アミノプリン、2−アミノ−6−クロロプリン、2，4−ジアミノプリン、2，6−ジアミノプリン、8−アザプリン、置換7−デアザプリン、7−デアザ−7−置換プリン、7−デアザ−8−置換プリン、水素（脱塩基残基）、およびそのあらゆる組み合わせからなる群から選択される修飾核酸塩基を含む、請求項1に記載の組成物。
【請求項４】
一本鎖免疫刺激性ポリマーが、当該ポリマー中に存在する-C-U-C-A-モチーフの外側に少なくとも1つの修飾核酸塩基をさらに含み、前記修飾核酸塩基が、ヒポキサンチン、イノシン、8−オキソアデニン、ジヒドロウラシル、偽ウラシル、2−チオウラシル、4−チオウラシル、5−アミノウラシル、5−（C1〜C6）−アルキルウラシル、5−メチルウラシル、5−（C2〜C6）アルケニルウラシル、5−（C2〜C6）−アルキニルウラシル、5−（ヒドロキシメチル）ウラシル、5−クロロウラシル、5−フルオロウラシル、5−ブロモウラシル、5−ヒドロキシシトシン、5−（C1〜C6）−アルキルシトシン、5−メチルシトシン、5−（C2〜C6）−アルケニルシトシン、5−（C2〜C6）−アルキニルシトシン、5−クロロシトシン、5−フルオロシトシン、5−ブロモシトシン、2−アミノプリン、2−アミノ−6−クロロプリン、2，4−ジアミノプリン、2，6−ジアミノプリン、8−アザプリン、置換7−デアザプリン、7−デアザ−7−置換プリン、7−デアザ−8−置換プリン、水素（脱塩基残基）、およびそのあらゆる組合せからなる群から選択される、請求項1に記載の組成物。
【請求項５】
一本鎖免疫刺激性ポリマーに共有結合している親油性部分をさらに含み、前記親油性部分が、コレステリル、パルミチル、および脂肪酸からなる群から選択されてもよい、請求項1に記載の組成物。
【請求項６】
一本鎖免疫刺激性ポリマーが、TLR7、TLR8およびTLR9アゴニストの少なくとも一つと結合している、請求項1に記載の組成物。
【請求項７】
インターフェロンα（IFN-α）を産生することができる免疫細胞を、下記から選ばれる一本鎖免疫刺激性ポリマー
A-A-A-C-G-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G     （配列番号３）;
A-A-A-C-G-C-U-C-A-C-C-C-A-A-A-G-C-A-G     （配列番号１７）;
A-A-A-C-A-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G     (配列番号２２);
A-A-A-C-C-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G       （配列番号２３）;
[ここで、“−”はホスホジエステル骨格を示す]
と接触させることを含む方法であって、前記一本鎖免疫刺激性ポリマーが治療上相当なIFN-αの産生の誘発に効果的な量のリポフェクチン（登録商標）を用いては製造されない方法。
【請求項８】
免疫細胞が一本鎖免疫刺激性ポリマーに応答して相当量の腫瘍壊死因子α（TNF-α）、インターフェロンγ（IFN-γ）およびインターロイキン12（IL-12）のいずれか1つあるいはそれ以上を産生しない、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
下記から選ばれる一本鎖免疫刺激性ポリマー
A-A-A-C-G-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G     （配列番号３）;
A-A-A-C-G-C-U-C-A-C-C-C-A-A-A-G-C-A-G     （配列番号１７）;
A-A-A-C-A-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G     (配列番号２２);
A-A-A-C-C-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G       （配列番号２３）;
[ここで、“−”はホスホジエステル骨格を示す]
であって、前記一本鎖免疫刺激性ポリマーは、癌または感染性疾患の治療のために用いられ、前記治療は抗原を投与することを含んでも良く、前記抗原が前記一本鎖免疫刺激性ポリマーに結合していても良い、一本鎖免疫刺激性ポリマー。
【請求項１０】
下記から選ばれる一本鎖免疫刺激性ポリマー
A-A-A-C-G-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G     （配列番号３）;
A-A-A-C-G-C-U-C-A-C-C-C-A-A-A-G-C-A-G     （配列番号１７）;
A-A-A-C-A-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G     (配列番号２２);
A-A-A-C-C-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G       （配列番号２３）;
[ここで、“−”はホスホジエステル骨格を示す]
であって、対象におけるTh1様免疫応答を誘発するために用いられる、一本鎖免疫刺激性ポリマー。
【請求項１１】
下記から選ばれる一本鎖免疫刺激性ポリマー
A-A-A-C-G-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G     （配列番号３）;
A-A-A-C-G-C-U-C-A-C-C-C-A-A-A-G-C-A-G     （配列番号１７）;
A-A-A-C-A-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G     (配列番号２２);
A-A-A-C-C-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G       （配列番号２３）;
[ここで、“−”はホスホジエステル骨格を示す]
の、アレルギー症状、癌または感染性疾患の治療用医薬の製造における使用。
【請求項１２】
下記から選ばれる一本鎖免疫刺激性ポリマー
A-A-A-C-G-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G     （配列番号３）;
A-A-A-C-G-C-U-C-A-C-C-C-A-A-A-G-C-A-G     （配列番号１７）;
A-A-A-C-A-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G     (配列番号２２);
A-A-A-C-C-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G       （配列番号２３）;
[ここで、“−”はホスホジエステル骨格を示す]
の、対象におけるTh1様免疫応答を誘発するための医薬の製造における使用。
【請求項１３】
下記から選ばれる一本鎖免疫刺激性ポリマー
A-A-A-C-G-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G     （配列番号３）;
A-A-A-C-G-C-U-C-A-C-C-C-A-A-A-G-C-A-G     （配列番号１７）;
A-A-A-C-A-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G     (配列番号２２);
A-A-A-C-C-C-U-C-A-G-C-C-A-A-A-G-C-A-G       （配列番号２３）;
[ここで、“−”はホスホジエステル骨格を示す]
であって、アレルギー症状の治療のために用いられ、前記治療は抗原を投与することを含んでも良く、前記抗原が前記一本鎖免疫刺激性ポリマーに結合していても良い、一本鎖免疫刺激性ポリマー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、米国特許法第１１９条（ｅ）項に基づき、２００７年８月１３日に出願された、「特異的な免疫調節プロフィールを誘発する規定されたヌクレオチド間結合との関連における配列モチーフ」という発明の名称の米国仮特許出願第６０／９６４，４４８号に対する優先権を主張するものであり、この出願は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれるものである。
【背景技術】
【０００２】
トール様受容体（ＴＬＲ）は、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識し、哺乳動物における自然免疫において重要な役割を有する、高度に保存されたパターン認識受容体（ＰＲＲ）ポリペプチドのファミリーである。現在、ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０と呼ばれる、少なくとも１０個のファミリーメンバーが同定されている。様々なＴＬＲの細胞質ドメインは、トールインターロイキン１受容体（ＴＩＲ）ドメインに特徴を有する。Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ  Ｒら（１９９８年）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  ２：２５３〜８頁を参照されたい。ＴＬＲによる微生物の侵入の認識により、ショウジョウバエ属（ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）および哺乳動物において進化的に保存されているシグナル伝達カスケードの活性化が引き起こされる。ＴＩＲドメイン含有アダプタータンパク質であるＭｙＤ８８は、ＴＬＲと関連すること、ならびにインターロイキン１受容体関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）をＴＬＲに動員することが報告されている。ＭｙＤ８８依存性のシグナル伝達経路は、免疫活性化および炎症性サイトカインの産生における重要なステップである、ＮＦ−κＢ転写因子およびｃ−Ｊｕｎ  ＮＨ２末端キナーゼ（Ｊｎｋ）マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）の活性化をもたらすと考えられている。概説については、Ａｄｅｒｅｍ  Ａら（２０００年）Ｎａｔｕｒｅ  ４０６：７８２〜８７頁、およびＡｋｉｒａ  Ｓら（２００４年）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４：４９９〜５１１頁を参照されたい。
【０００３】
多くの特異的なＴＬＲリガンドが同定されている。ＴＬＲ２のリガンドには、ペプチドグリカンおよびリポペプチドが含まれる。Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ  Ａら（１９９９年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６３：１〜５頁、Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ  Ａら（１９９９年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６３：１〜５頁、Ａｌｉｐｒａｎｔｉｓ  ＡＯら（１９９９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：７３６〜９頁を参照されたい。リポポリ多糖（ＬＰＳ）はＴＬＲ４のリガンドである。Ｐｏｌｔｏｒａｋ  Ａ（１９９８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８２：２０８５〜８頁、Ｈｏｓｈｉｎｏ  Ｋら（１９９９年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６２：３７４９〜５２頁を参照されたい。細菌フラジェリンはＴＬＲ５のリガンドである。Ｈａｙａｓｈｉ  Ｆら（２００１年）Ｎａｔｕｒｅ  ４１０：１０９９〜１１０３頁を参照されたい。ペプチドグリカンは、ＴＬＲ２だけではなくＴＬＲ６のリガンドでもあることが報告されている。Ｏｚｉｎｓｋｙ  Ａら（２０００年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７：１３７６６〜７１頁、Ｔａｋｅｕｃｈｉ  Ｏら（２００１年）Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３：９３３〜４０頁を参照されたい。最近、特定の低分子量の合成化合物である、イミダゾキノリンのイミキモド（Ｒ−８３７）およびレシキモド（Ｒ−８４８）が、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８のリガンドであることが報告された。Ｈｅｍｍｉ  Ｈら（２００２年）Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３：１９６〜２００頁、Ｊｕｒｋ  Ｍら（２００２年）Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３：４９９頁を参照されたい。
【０００４】
メチル化していない細菌ＤＮＡおよびその合成類似体（ＣｐＧ  ＤＮＡ）がＴＬＲ９のリガンドであることの発見に始まって（Ｈｅｍｍｉ  Ｈら（２０００年）Ｎａｔｕｒｅ  ４０８：７４０〜５頁、Ｂａｕｅｒ  Ｓら（２００１年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８、９２３７〜４２頁）、特定のＴＬＲのリガンドが特定の核酸分子を含むことが報告されている。最近は、特定のタイプのＲＮＡが、配列非依存性の様式または配列依存性の様式で免疫刺激性であることが報告されている。さらに、これらの様々な免疫刺激性ＲＮＡが、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、およびＴＬＲ８を刺激することが報告されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は全体として、特定の免疫刺激性配列モチーフを含む免疫刺激性ポリマー、および、このような免疫刺激性ポリマーを含む関連する免疫刺激性組成物、ならびにこのような免疫刺激性ポリマーおよび組成物を使用するための方法に関するものである。本発明のいくつかの態様において、免疫刺激性ポリマーは、免疫刺激性オリゴリボヌクレオチド（ＯＲＮ）である。本発明の免疫刺激性ポリマーは、免疫応答の刺激または増強を必要とするあらゆる状況または用途において有用であり得る。以下に開示されるように、本発明の免疫刺激性ポリマーは、感染、癌、アレルギー、および喘息を含む様々な症状の治療において用いるための、アジュバント、ワクチン、および他の薬剤を含む医薬組成物の調製において特に有用である。したがって、特定の態様における本発明は、本発明の免疫刺激性ポリマーを含む組成物、およびそれらの使用方法に関するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
以下にさらに詳細に開示されるように、本発明の免疫刺激性ポリマーは、少なくとも１つの配列依存性の免疫刺激性モチーフ配列を含むことに特徴を有する。配列依存性の免疫刺激性モチーフ配列およびこのようなモチーフを包含しているポリマーは、ＴＬＲ７関連サイトカインインターフェロンα（ＩＦＮ−α）の強力な誘導因子であることが開示される。
【０００７】
本発明の１つの態様は、ｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２を含む４から１００単位長の一本鎖ポリマーを含む組成物であり、このポリマーはモチーフｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡの外側にＵを有せず、このポリマーはホスホジエステル骨格を含み、Ｎ１およびＮ２の少なくとも１つはＡ７ではなく、ｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２はＧＣＵＣＡＡではない。１つの実施形態における組成物は、送達媒体をさらに含み、この送達媒体は、リポソーム、ノイソーム、リポプレックス、ポリプレックス、リポポリプレックス、油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルジョン、水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョン、水−油−水型（Ｗ／Ｏ／Ｗ）複合エマルジョン、マイクロエマルジョン、ナノエマルジョン、ミセル、デンドリマー、ビロソーム、ウイルス様粒子、ポリマーナノ粒子（ナノスフェアもしくはナノカプセルなど）、またはポリマーマイクロ粒子（マイクロスフェアもしくはマイクロカプセルなど）であり、この組成物はリポフェクチンを含まない。１つの実施形態において、Ｎ１は少なくとも１つのＡを含む。別の実施形態において、Ｎ１は少なくとも１つのＣを含む。さらに別の実施形態において、Ｎ１は少なくとも１つのＧを含む。さらに別の実施形態において、Ｎ１は少なくとも１つのＴを含む。１つの実施形態において、Ｎ２は少なくとも１つのＡを含む。別の実施形態において、Ｎ２は少なくとも１つのＣを含む。さらに別の実施形態において、Ｎ２は少なくとも１つのＧを含む。さらに別の実施形態において、Ｎ２は少なくとも１つのＴを含む。
【０００８】
本発明の別の態様は、免疫刺激性ＲＮＡモチーフｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４（Ｘ２およびＸ３は互いに独立に、存在しないか、またはＣ、Ｇ、およびＡからなるヌクレオチド群から選択されるヌクレオチドならびにそのヌクレオチド類似体であり、Ｎ３およびＮ４は互いに独立に、存在しないか、または１つもしくは複数のヌクレオチドである）を含む４から１００単位長の一本鎖ポリマーを含む組成物であり、このポリマーは、ホスホジエステル骨格を含み、２つのＡ７モチーフを含まず、ｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもない。１つの実施形態における組成物は、送達媒体をさらに含み、この送達媒体は、リポソーム、ノイソーム、リポプレックス、ポリプレックス、リポポリプレックス、油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルジョン、水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョン、水−油−水型（Ｗ／Ｏ／Ｗ）複合エマルジョン、マイクロエマルジョン、ナノエマルジョン、ミセル、デンドリマー、ビロソーム、ウイルス様粒子、ポリマーナノ粒子（ナノスフェアもしくはナノカプセルなど）、またはポリマーマイクロ粒子（マイクロスフェアもしくはマイクロカプセルなど）であり、この組成物はリポフェクチンを含まない。１つの実施形態において、Ｘ２はＡである。１つの実施形態において、Ｘ２はＣである。別の実施形態において、Ｘ２はＧである。１つの実施形態において、Ｘ３はＡである。別の実施形態において、Ｘ３はＣである。別の実施形態において、Ｘ３はＧである。１つの実施形態において、Ｎ３は少なくとも１つのＡを含む。別の実施形態において、Ｎ３は少なくとも１つのＣを含む。さらに別の実施形態において、Ｎ３は少なくとも１つのＧを含む。さらに別の実施形態において、Ｎ３は少なくとも１つのＵを含む。１つの実施形態において、Ｎ４は少なくとも１つのＡを含む。別の実施形態において、Ｎ４は少なくとも１つのＣを含む。別の実施形態において、Ｎ４は少なくとも１つのＧを含む。別の実施形態において、Ｎ４は少なくとも１つのＵを含む。
【０００９】
前述した組成物は、ポリマーに対してさらなる要素または修飾を含み得る。例えば、１つの実施形態において、組成物はさらに抗原を含む。１つの実施形態において、抗原はポリマーに結合している。１つの実施形態において、ｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２モチーフまたはｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４モチーフは、ヒポキサンチン、イノシン、８−オキソアデニン、その７−置換誘導体、ジヒドロウラシル、偽ウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−アミノウラシル、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルウラシル、５−メチルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヒドロキシシトシン、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルシトシン、５−メチルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルシトシン、５−クロロシトシン、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、２，４−ジアミノプリン、２，６−ジアミノプリン、８−アザプリン、置換７−デアザプリン、７−デアザ−７−置換プリン、７−デアザ−８−置換プリン、水素（脱塩基残基）、およびそのあらゆる組合せからなる群から選択される修飾核酸塩基を含む。別の実施形態において、ポリマーは、ｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２モチーフまたはｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４モチーフの外側に、少なくとも１つの修飾核酸塩基を含み、この修飾核酸塩基は、ヒポキサンチン、イノシン、８−オキソアデニン、その７−置換誘導体、ジヒドロウラシル、偽ウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−アミノウラシル、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルウラシル、５−メチルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヒドロキシシトシン、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルシトシン、５−メチルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルシトシン、５−クロロシトシン、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、Ｎ２−ジメチルグアニン、７−デアザグアニン、８−アザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン、７−デアザ−７−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルグアニン、７−デアザ−８−置換グアニン、８−ヒドロキシグアニン、６−チオグアニン、８−オキソグアニン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、２，４−ジアミノプリン、２，６−ジアミノプリン、８−アザプリン、置換７−デアザプリン、７−デアザ−７−置換プリン、７−デアザ−８−置換プリン、水素（脱塩基残基）、およびそのあらゆる組合せからなる群から選択される。別の実施形態において、ポリマーは、ポリマーに共有結合している親油性部分をさらに含む。１つの実施形態において、親油性部分は、コレステリル、パルミチル、および脂肪酸アシルからなる群から選択される。別の実施形態において、ポリマーはＣｐＧモチーフを含まない。さらに別の実施形態において、ポリマーはＣＣＧＡＧＣＣＧＡＧＣＵＣＡＣＣ（配列番号３５）を含まない。１つの実施形態において、ポリマーは４から２０単位長である。別の実施形態において、ポリマーは１０から２５単位長である。別の実施形態において、ポリマーは１５から１９単位長である。１つの実施形態において、ポリマーのそれぞれの単位はリボヌクレオチドである。別の実施形態において、ポリマーの単位はリボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチドの混合物である。別の実施形態において、デオキシリボヌクレオチドは、ポリマーの５’末端にＴＣＧモチーフを含む。さらに別の実施形態において、ポリマーの少なくとも１つの単位はアミノ酸である。１つの実施形態において、ポリマーはＴＬＲ９アゴニストに結合している。１つの実施形態において、ＴＬＲ９アゴニストは小分子である。別の実施形態において、ポリマーはＴＬＲ７アゴニストに結合している。さらに別の実施形態において、ポリマーはＴＬＲ８アゴニストに結合している。
【００１０】
本発明の別の態様は、ＩＦＮ−αを産生することができる免疫細胞を、免疫刺激性ＲＮＡモチーフｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２を含む４から１００単位長の一本鎖ポリマーと接触させることを含む方法であり、このポリマーは、モチーフｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡの外側にＵを有せず、このポリマーはホスホジエステル骨格を含み、Ｎ１およびＮ２の少なくとも１つはＡ７ではなく、ｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもなく、このポリマーは、治療上相当なＩＦＮ−αの産生の誘発に効果的な量のリポフェクチンを用いては製剤されない。１つの実施形態において、ポリマーは、免疫刺激性モチーフの外側に少なくとも１つの安定化結合を含む。別の実施形態において、ポリマーは、免疫刺激性モチーフの外側に１〜５個の安定化結合を含む。１つの実施形態において、１つまたは複数の安定化結合は、５’末端および／または３’末端にある。
【００１１】
本発明の別の態様は、ＩＦＮ−αを産生することができる免疫細胞を、免疫刺激性ＲＮＡモチーフｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４（Ｘ２およびＸ３は互いに独立に、存在しないか、またはＣ、Ｇ、およびＡからなるヌクレオチド群から選択されるヌクレオチドならびにそのヌクレオチド類似体であり、Ｎ３およびＮ４は互いに独立に、存在しないか、または１つもしくは複数のヌクレオチドである）を含む４から１００単位長の一本鎖ポリマーと接触させることを含む方法であり、このポリマーは、ホスホジエステル骨格を含み、２つのＡ７モチーフを含まず、ｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもなく、このポリマーは、治療上相当なＩＦＮ−αの産生の誘発に効果的な量のリポフェクチンを用いては製剤されない。
【００１２】
１つの実施形態において、前述した方法によっては、ポリマーに応答して相当量の腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、またはインターロイキン１２（ＩＬ−１２）を産生する免疫細胞は得られない。いくつかの実施形態において、ポリマーは上記のあらゆる組成物の形態で投与される。
【００１３】
本発明の別の態様は、喘息の治療に効果的な量の、免疫刺激性ＲＮＡモチーフｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２を含む４から１００単位長の一本鎖ポリマーを、喘息を有する対象に投与することを含む、喘息を治療するための方法であり、このポリマーは、モチーフｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡの外側にＵを有せず、このポリマーはホスホジエステル骨格を含み、Ｎ１およびＮ２の少なくとも１つはＡ７ではなく、ｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもない。
【００１４】
本発明の別の態様は、喘息の治療に効果的な量の、免疫刺激性ＲＮＡモチーフｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４（Ｘ２およびＸ３は互いに独立に、存在しないか、またはＣ、Ｇ、およびＡからなるヌクレオチド群から選択されるヌクレオチドならびにそのヌクレオチド類似体であり、Ｎ３およびＮ４は互いに独立に、存在しないか、または１つもしくは複数のヌクレオチドである）を含む４から１００単位長の一本鎖ポリマーを、喘息を有する対象に投与することを含む、喘息を治療するための方法であり、このポリマーは、ホスホジエステル骨格を含み、２つのＡ７モチーフを含まず、ｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもない。
【００１５】
１つの実施形態において、喘息を治療するための上記の方法のいずれかは、アレルゲンを対象に投与することをさらに含み得る。１つの実施形態において、ポリマーはアレルゲンに結合している。いくつかの実施形態において、ポリマーは、上記のあらゆる組成物の形態で投与される。
【００１６】
本発明の別の態様は、アレルギー症状の治療に効果的な量の、免疫刺激性ＲＮＡモチーフｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２を含む４から１００単位長の一本鎖ポリマーを、アレルギー症状を有する対象に投与することを含む、アレルギー症状を治療するための方法であり、このポリマーはモチーフｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡの外側にＵを有せず、このポリマーはホスホジエステル骨格を含み、Ｎ１およびＮ２の少なくとも１つはＡ７ではなく、ｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもない。
【００１７】
本発明の別の態様は、アレルギー症状の治療に効果的な量の、免疫刺激性ＲＮＡモチーフｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４（Ｘ２およびＸ３は互いに独立に、存在しないか、またはＣ、Ｇ、およびＡからなるヌクレオチド群から選択されるヌクレオチドならびにそのヌクレオチド類似体であり、Ｎ３およびＮ４は互いに独立に、存在しないか、または１つもしくは複数のヌクレオチドである）を含む４から１００単位長の一本鎖ポリマーを、アレルギー症状を有する対象に投与することを含む、アレルギー症状を治療するための方法であり、このポリマーは、ホスホジエステル骨格を含み、２つのＡ７モチーフを含まず、ｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもない。
【００１８】
１つの実施形態において、上記のアレルギー症状を治療するための方法のいずれかは、アレルゲンを対象に投与することをさらに含み得る。１つの実施形態において、ポリマーはアレルゲンに結合している。いくつかの実施形態において、ポリマーは、上記のあらゆる組成物の形態で投与される。
【００１９】
本発明の別の態様は、癌の治療に効果的な量の、免疫刺激性ＲＮＡモチーフｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２を含む４から１００単位長の一本鎖ポリマーを、癌を有する対象に投与することを含む、癌を治療するための方法であり、このポリマーは、モチーフｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡの外側にＵを有せず、このポリマーはホスホジエステル骨格を含み、Ｎ１およびＮ２の少なくとも１つはＡ７ではなく、ｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもない。
【００２０】
本発明の別の態様は、癌の治療に効果的な量の、免疫刺激性ＲＮＡモチーフｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４（Ｘ２およびＸ３は互いに独立に、存在しないか、またはＣ、Ｇ、およびＡからなるヌクレオチド群から選択されるヌクレオチドならびにそのヌクレオチド類似体であり、Ｎ３およびＮ４は互いに独立に、存在しないか、または１つもしくは複数のヌクレオチドである）を含む４から１００単位長の一本鎖ポリマーを、癌を有する対象に投与することを含む、癌を治療するための方法であり、このポリマーは、ホスホジエステル骨格を含み、２つのＡ７モチーフを含まず、ｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもない。
【００２１】
１つの実施形態において、上記の癌を治療するための方法のいずれかは、癌抗原を対象に投与することをさらに含み得る。１つの実施形態において、ポリマーは抗原に結合している。他の実施形態において、この方法は、第２の癌治療薬を対象に投与することをさらに含む。１つの実施形態において、癌治療薬は、カルボプラチン、パクリタキセル、シスプラチン、５−フルオロウラシル、ドキソルビシン、タキソール、およびゲムシタビンの１つまたは複数である。いくつかの実施形態において、ポリマーは、上記のあらゆる組成物の形態で投与される。
【００２２】
本発明の別の態様は、感染性疾患の治療に効果的な量の、免疫刺激性ＲＮＡモチーフｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２を含む４から１００単位長の一本鎖ポリマーを、感染性疾患を有する対象に投与することを含む、感染性疾患を治療するための方法であり、このポリマーは、モチーフｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡの外側にＵを有せず、このポリマーはホスホジエステル骨格を含み、Ｎ１およびＮ２の少なくとも１つはＡ７ではなく、ｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもない。
【００２３】
本発明の別の態様は、感染性疾患の治療に効果的な量の、免疫刺激性ＲＮＡモチーフｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４（Ｘ２およびＸ３は互いに独立に、存在しないか、またはＣ、Ｇ、およびＡからなるヌクレオチド群から選択されるヌクレオチドならびにそのヌクレオチド類似体であり、Ｎ３およびＮ４は互いに独立に、存在しないか、または１つもしくは複数のヌクレオチドである）を含む４から１００単位長の一本鎖ポリマーを、感染性疾患を有する対象に投与することを含む、感染性疾患を治療するための方法であり、このポリマーは、ホスホジエステル骨格を含み、２つのＡ７モチーフを含まず、ｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもない。
【００２４】
１つの実施形態において、上記の感染性疾患を治療するための方法のいずれかは、微生物抗原を対象に投与することをさらに含み得る。１つの実施形態において、ポリマーは抗原に結合している。いくつかの実施形態において、ポリマーは、上記のあらゆる組成物の形態で投与される。
【００２５】
本発明の別の態様は、効果的な量の、免疫刺激性ＲＮＡモチーフｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２を含む４から１００単位長の一本鎖ポリマーを対象に投与することを含む、対象における１型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１）様免疫応答を誘発するための方法であり、このポリマーはモチーフｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡの外側にＵを有せず、このポリマーはホスホジエステル骨格を含み、Ｎ１およびＮ２の少なくとも１つはＡ７ではなく、ｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもない。
【００２６】
本発明の別の態様は、効果的な量の、免疫刺激性ＲＮＡモチーフｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４（Ｘ２およびＸ３は互いに独立に、存在しないか、またはＣ、Ｇ、およびＡからなるヌクレオチド群から選択されるヌクレオチドならびにそのヌクレオチド類似体であり、Ｎ３およびＮ４は互いに独立に、存在しないか、または１つもしくは複数のヌクレオチドである）を含む４から１００単位長の一本鎖ポリマーを対象に投与することを含む、対象における１型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１）様免疫応答を誘発するための方法であり、このポリマーは、ホスホジエステル骨格を含み、２つのＡ７モチーフを含まず、ｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもない。
【００２７】
１つの実施形態において、上記のＴｈ１様免疫応答を誘発するための方法のいずれかは、抗原を対象に投与することをさらに含み得る。１つの実施形態において、ポリマーは抗原に結合している。いくつかの実施形態において、ポリマーは、上記のあらゆる組成物の形態で投与される。
【００２８】
本発明の用途は、以下の記載において説明されているかまたは図面において説明されている構築物の詳細および構成要素の配置に限定されるものではない。本発明は、他の実施形態であり得、様々な方途で実施され得る。また、本明細書において用いられる表現および用語は、説明を目的としたものであり、限定するものであると考えられるべきではない。本明細書における「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、または「有する」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「伴う（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」、およびその変形の使用は、その後に列挙される事項およびその同等物、ならびにさらなる事項を包含することを意味する。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】細胞をオリゴリボヌクレオチド（ＯＲＮ）と接触させた後の、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＩＦＮ−αの産生の誘発を示すグラフである。ＯＲＮ（開始濃度：２μＭ＋５０μｇ／ｍｌのＤＯＴＡＰ（Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルスルファート））を、ヒトＰＢＭＣと共にインキュベートし、上清を、ＩＦＮ−αについて、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって２４時間後にアッセイした。陽性対照（ＣＣＧＵＣＵＧＵＵＧＵＧＵＧＡＣＵＣ、配列番号１）および４つの試験配列（配列番号２〜５、表１を参照されたい）を示す。３人のドナーの平均±ＳＥＭを示す。ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌ単位のＩＦＮ−αの濃度を示し、ｘ軸は、μＭ単位のｌｏｇ  ＯＲＮ濃度を示す。
【図２】ＯＲＮによるＩＦＮ−α（図２Ａ）およびＩＬ−１２ｐ４０（図２Ｂ）の誘発を示す２つのグラフである。ＴＬＲ７／８関連サイトカインの両方を誘発することが知られているＯＲＮ（配列番号１）、およびＴＬＲ８関連サイトカインよりもＴＬＲ７関連サイトカインを誘発したＯＲＮ（配列番号３）を示す。ヒトＰＢＭＣをＤＯＴＡＰの存在下でＯＲＮと共にインキュベートし（２μＭのＯＲＮおよび５０μｇ／ｍｌのＤＯＴＡＰ）、上清を、ＩＦＮ−αおよびＩＬ−１２ｐ４０について、ＥＬＩＳＡによって２４時間後にアッセイした。３人のドナーの平均±ＳＥＭを示す。ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌ単位のＩＦＮ−α（図２Ａ）およびＩＬ−１２ｐ４０（図２Ｂ）の濃度であり、ｘ軸は、μＭ単位のｌｏｇ  ＯＲＮ濃度を示す。
【図３】細胞をオリゴリボヌクレオチド（ＯＲＮ）と接触させた後の、ヒトＰＢＭＣにおけるＩＦＮ−αの産生の誘発を示すグラフである。ＯＲＮ（開始濃度：２μＭ＋２５μｇ／ｍｌのＤＯＴＡＰ）をヒトＰＢＭＣと共にインキュベートし、上清を、ＩＦＮ−αについて、２４時間後にＥＬＩＳＡによってアッセイした。配列番号３ならびにわずかな配列変異を有する４つのＯＲＮ（配列番号６、７、１１、および１２、表２を参照されたい）を示す。３人のドナーの平均±ＳＥＭを示す。ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌ単位のＩＦＮ−αの濃度を示し、ｘ軸は、μＭ単位のｌｏｇ  ＯＲＮ濃度を示す。
【図４】ＯＲＮによるＩＦＮ−α（図４Ａ）およびＩＬ−１２ｐ４０（図４Ｂ）の誘発を示す２つのグラフである。配列番号３およびわずかな配列変異を有する３つの他のＯＲＮ（配列番号８〜１０、表３を参照されたい）を示す。ヒトＰＢＭＣをＤＯＴＡＰの存在下でＯＲＮと共にインキュベートし（２μＭのＯＲＮおよび２５μｇ／ｍｌのＤＯＴＡＰ）、上清を、ＩＦＮ−αおよびＩＬ−１２ｐ４０について、２４時間後にＥＬＩＳＡによってアッセイした。３人のドナーの平均±ＳＥＭを示す。ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌ単位のＩＦＮ−α（図４Ａ）およびＩＬ−１２ｐ４０（図４Ｂ）の濃度であり、ｘ軸は、μＭ単位のｌｏｇ  ＯＲＮ濃度を示す。
【図５】ＯＲＮによるＩＦＮ−α（図５Ａ）およびＩＬ−１２ｐ４０（図５Ｂ）の誘発を示す２つのグラフである。配列番号３およびわずかな配列変異を有する３つの他のＯＲＮ（配列番号１３〜１５、表４を参照されたい）を示す。ヒトＰＢＭＣをＤＯＴＡＰの存在下でＯＲＮと共にインキュベートし（２μＭのＯＲＮおよび２５μｇ／ｍｌのＤＯＴＡＰ）、上清を、ＩＦＮ−αおよびＩＬ−１２ｐ４０について、２４時間後にＥＬＩＳＡによってアッセイした。３人のドナーの平均±ＳＥＭを示す。ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌ単位のＩＦＮ−α（図５Ａ）およびＩＬ−１２ｐ４０（図５Ｂ）の濃度であり、ｘ軸は、μＭ単位のｌｏｇ  ＯＲＮ濃度を示す。
【図６】ＯＲＮによるＩＦＮ−α（図６Ａ）およびＩＬ−１２ｐ４０（図６Ｂ）の誘発を示す２つのグラフである。配列番号３およびわずかな配列変異を有する３つの他のＯＲＮ（配列番号１９〜２１、表５を参照されたい）を示す。ヒトＰＢＭＣをＤＯＴＡＰの存在下でＯＲＮと共にインキュベートし（２μＭのＯＲＮおよび２５μｇ／ｍｌのＤＯＴＡＰ）、上清を、ＩＦＮ−αおよびＩＬ−１２ｐ４０について、２４時間後にＥＬＩＳＡによってアッセイした。３人のドナーの平均±ＳＥＭを示す。ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌ単位のＩＦＮ−α（図６Ａ）およびＩＬ−１２ｐ４０（図６Ｂ）の濃度であり、ｘ軸は、μＭ単位のｌｏｇ  ＯＲＮ濃度を示す。
【図７】ＯＲＮによるＩＦＮ−α（図７Ａおよび７Ｂ）ならびにＩＬ−１２ｐ４０（図７Ｃおよび７Ｄ）の誘発を示す４つのグラフである。配列番号３およびわずかな配列変異を有する６つの他のＯＲＮ（配列番号１６〜１８および２２〜２４、表３を参照されたい）を示す。ヒトＰＢＭＣをＤＯＴＡＰの存在下でＯＲＮと共にインキュベートし（２μＭのＯＲＮおよび２５μｇ／ｍｌのＤＯＴＡＰ）、上清を、ＩＦＮ−αおよびＩＬ−１２ｐ４０について、２４時間後にＥＬＩＳＡによってアッセイした。３人のドナーの平均±ＳＥＭを示す。ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌ単位のＩＦＮ−α（図７Ａおよび７Ｂ）ならびにＩＬ−１２ｐ４０（図７Ｃおよび７Ｄ）の濃度であり、ｘ軸は、μＭ単位のｌｏｇ  ＯＲＮ濃度を示す。
【図８】免疫刺激性のＵＣＡモチーフを有するＯＲＮ（ＧＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＵＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡ、配列番号２７）によるインビトロでのサイトカインの誘発を比較する４つのグラフである。配列番号２７は、十分なＩＬ−１２（図８Ａ）、ＩＬ−６（図８Ｂ）、ＩＬ−２Ｒ（図８Ｃ）、またはＩＬ−７（図８Ｄ）を誘発しない。結果を、陰性対照（ＧＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡ、配列番号２５）、Ｕに富んだ３’末端を有する、ＵＣＡを有さないＯＲＮ（ＧＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＵＵＵ、配列番号２６）、および陽性対照（ＵＵＧＵＵＧＵＵＧＵＵＧＵＵＧＵＵＧＵＵ（全ホスホロチオエート）、配列番号２８）と比較する。３人の健康な血液ドナーのヒトＰＢＭＣを、ＤＯＴＡＰの存在下で、最大２μＭのＯＲＮと共に２４時間インキュベートした。上清を回収し、サイトカインまたはケモカインの濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌ単位のサイトカインまたはケモカインの濃度であり、ｘ軸は、μＭ単位のｌｏｇ  ＯＲＮ濃度を示す。
【図９】免疫刺激性のＵＣＡモチーフを有するＯＲＮ（配列番号２７）によるインビトロでのサイトカインの誘発を比較する４つのグラフである。配列番号２７は、十分なＩＬ−１０（図９Ａ）、ＩＬ−１５（図９Ｂ）、ＩＬ−１２ｐ４０（図９Ｃ）、またはＴＮＦ−α（図９Ｄ）を誘発しない。結果を、陰性対照（配列番号２５）、Ｕに富んだ３’末端を有する、ＵＣＡを有さないＯＲＮ（配列番号２６）、および陽性対照（配列番号２８）と比較する。３人の健康な血液ドナーのヒトＰＢＭＣを、ＤＯＴＡＰの存在下で、最大２μＭのＯＲＮと共に２４時間インキュベートした。上清を回収し、サイトカインまたはケモカインの濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌ単位のサイトカインまたはケモカインの濃度であり、ｘ軸は、μＭ単位のｌｏｇ  ＯＲＮ濃度を示す。
【図１０】免疫刺激性のＵＣＡモチーフを有するＯＲＮ（配列番号２７）によるインビトロでのサイトカインの誘発を比較する４つのグラフである。配列番号２７は、十分なＭＩＰ−１α（図１０Ｂ）、ＩＦＮ−γ（図１０Ｃ）、またはＭＩＰ−１β（図１０Ｄ）を誘発しないが、ＩＦＮ−α（図１０Ａ）を誘発する。結果を、陰性対照（配列番号２５）、Ｕに富んだ３’末端を有する、ＵＣＡを有さないＯＲＮ（配列番号２６）、および陽性対照（配列番号２８）と比較する。３人の健康な血液ドナーのヒトＰＢＭＣを、ＤＯＴＡＰの存在下で、最大２μＭのＯＲＮと共に２４時間インキュベートした。上清を回収し、サイトカインまたはケモカインの濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌ単位のサイトカインまたはケモカインの濃度であり、ｘ軸は、μＭ単位のｌｏｇ  ＯＲＮ濃度を示す。
【図１１】免疫刺激性のＵＣＡモチーフを有するＯＲＮ（配列番号２７）によるインビトロでのサイトカインの誘発を比較する３つのグラフである。配列番号２７は、十分なＭＩＧ（図１１Ｃ）を誘発しないが、ＩＰ−１０（図１１Ａ）およびＭＣＰ−１（図１１Ｂ）を誘発する。結果を、陰性対照（配列番号２５）、Ｕに富んだ３’末端を有する、ＵＣＡを有さないＯＲＮ（配列番号２６）、および陽性対照（配列番号２８）と比較する。３人の健康な血液ドナーのヒトＰＢＭＣを、ＤＯＴＡＰの存在下で、最大２μＭのＯＲＮと共に２４時間インキュベートした。上清を回収し、サイトカインまたはケモカインの濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌ単位のサイトカインまたはケモカインの濃度であり、ｘ軸は、μＭ単位のｌｏｇ  ＯＲＮ濃度を示す。
【図１２】免疫刺激性のＵＣＡモチーフを有するＯＲＮ（配列番号３）によるインビボでのサイトカインの誘発を比較する４つのグラフである。配列番号３は、３時間および２４時間の時点の両方で、ＩＦＮ−α（図１２ＡおよびＣ）ならびにＩＰ−１０（図１２ＢおよびＤ）を誘発した。配列番号３の活性を、ＴＬＲ７関連サイトカインおよびＴＬＲ８関連サイトカインの両方を誘発する２つのＯＲＮ（ＧＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＵＵ、配列番号３０、およびＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵ（ホスホロチオエート骨格）、配列番号３３）、ならびに主にＴＬＲ８関連サイトカインを誘発する２つのＯＲＮ（ＵＵＧＵＵＧＵＵＧＵＵＧＵＵＧＵＵＧＵＵ、配列番号３１、およびＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵ（ホスホジエステル骨格）、配列番号３２）の活性と比較した。ｘ軸は、用いたＯＲＮ（陰性対照としての生理食塩水およびＤＯＴＡＰを含む）を示し、ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌ単位のサイトカイン濃度を示す。ＨＢＳ、緩衝溶液。
【図１３】免疫刺激性のＵＣＡモチーフを有するＯＲＮ（配列番号３）によるインビボでのサイトカインの誘発を比較する５つのグラフである。配列番号３は、３時間の時点で、相当量のＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−６、またはＩＬ−１０（それぞれ図１３Ａ〜Ｅ）を誘発しなかった。配列番号３の活性を、ＴＬＲ７関連サイトカインおよびＴＬＲ８関連サイトカインの両方を誘発する２つのＯＲＮ（配列番号３０および配列番号３３）、ならびに主にＴＬＲ８関連サイトカインを誘発する２つのＯＲＮ（配列番号３１および配列番号３２）の活性と比較した。ｘ軸は、用いたＯＲＮ（陰性対照としての生理食塩水およびＤＯＴＡＰを含む）を示し、ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌ単位のサイトカイン濃度を示す。ＨＢＳ、緩衝溶液。
【図１４】免疫刺激性のＵＣＡモチーフを有するＯＲＮ（配列番号３）によるインビボでの脾臓細胞の活性化を示す４つの棒グラフである。配列番号３は、脾臓のＣＤ３＋Ｔ細胞（図１４ＡおよびＢ）ならびにＤＸ５＋Ｂ細胞（図１４ＣおよびＤ）を活性化した。細胞を脾臓から単離し、ＦＡＣＳ分析によって分離した。ｘ軸は、用いたＯＲＮ（陰性対照としての生理食塩水およびＤＯＴＡＰを含む）を示し、ｙ軸は、ＣＤ６９＋細胞（ＡおよびＣ）またはＩＬ−１２Ｒ＋細胞（ＢおよびＤ）のパーセンテージを示す。ＨＢＳ、緩衝溶液。
【図１５】最大３つのＵを有するがＵＣＡモチーフは有さない他のＯＲＮと比較した、ＵＣＡモチーフ内に１つのＵを有する、配列番号２７を含む指定したＯＲＮによるＩＦＮ−αの誘発を示すグラフである。ｙ軸は、ｐｇ／ｍｌ単位のＩＦＮ−αの濃度であり、ｘ軸は、μＭ単位のｌｏｇ  ＯＲＮ濃度を示す。
【図１６】ＴＬＲ９ノックアウトマウス（ＴＬＲ９ＫＯ）、ＴＬＲ７ノックアウトマウス（ＴＬＲ７ＫＯ）、および対照Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける、指定したＯＲＮまたはＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６（配列番号３４）に応答した、ＩＦＮ−α、ＩＰ−１０、ＩＬ−１２、およびＩＬ−６の誘発を示す４つの棒グラフである。ＨＢＳ、緩衝溶液。
【図１７】ＭｙＤ８８ノックアウトマウス（ＭｙＤ８８ＫＯ）および対照Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける、ＩＦＮ−αおよびＩＰ−１０の誘発を示す１対の棒グラフである。ＨＢＳ、緩衝溶液。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８依存性の様式でヒトの免疫系を刺激すると考えられる免疫刺激性オリゴリボヌクレオチド（ＯＲＮ）が記載されてきている。例えば、ポリＧ末端を有しない、ＧＵに富んだモチーフおよびＣＵに富んだモチーフを含むＯＲＮは、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８に対して作用すると考えられる。ポリＧ末端を有しない、ＡＵに富んだモチーフを有するＯＲＮは、ＴＬＲ８のみに対して作用すると考えられる。１つまたは複数のポリＧモチーフが隣接する免疫刺激性ＲＮＡモチーフを含むＯＲＮは、ＴＬＲ７を介して免疫応答を刺激するがＴＬＲ８を介しては刺激しないと考えられる。これらは、例えばＤＯＴＡＰなどの、陽イオン性リポソーム製剤の存在下で、大量のＩＦＮ−αを産生する。ＩＦＮ−α産生形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）はＴＬＲ７を発現し、ＴＬＲ８は発現しないため、この効果はＴＬＲ７介在性であると考えられる。他のサイトカイン、例えばＴＮＦ−α、ＩＬ−１２、およびＩＦＮ−γの、観察された刺激は、ＴＬＲ８介在性であると考えられる。例えば、単球はＴＬＲ８を発現するがＴＬＲ７は発現しないこと、およびｓｓＲＮＡの刺激に応じてＴＮＦαを分泌することが示されているため、単球の活性化は、直接的なＴＬＲ８介在性の効果である可能性が最も高い。最近では、異なる免疫プロフィールを有し、ＲＮＡ介在性の応答の活性化についての規定されたモチーフを有するＯＲＮが同定されている。これらのＯＲＮのいくつかは、ヒトＰＢＭＣによるＩＦＮ−αの産生を誘発しないが、かなりの量のＴＮＦ−α、ＩＬ−１２、およびＩＦＮ−γを誘発し、これは、ＴＬＲ８が刺激されるがＴＬＲ７はされないことを示す。
【００３１】
本発明は、相当量のＴＬＲ８介在性の（すなわち、単球からのＴＮＦ−αなどの、ＴＬＲ８発現細胞により産生されるサイトカインの産生）免疫活性化を誘発することなく、ＴＬＲ７介在性と呼ばれるＲＮＡ介在性の免疫応答（ｐＤＣからのＩＦＮ−αの産生など）を誘発し得る、特定のＲＮＡモチーフを含むポリマーのクラスを明らかにすることを伴う。本明細書において用いる場合、「相当量」は、他の免疫刺激性のＯＲＮにより産生される量とは異なる量を意味する。「相当量のＴＬＲ８介在性の免疫活性化を誘発することなく」とは、誘発されるＴＬＲ活性化に関連する因子のレベルが、上述の、ポリＧ末端を有さない、ＧＵに富んだモチーフおよびＣＵに富んだモチーフを含むものなどのＯＲＮ、またはＴＬＲ８を刺激すると考えられる他のＯＲＮによって誘発されるレベルと比較して、最小となるような免疫活性化を言う。したがって、本発明のＯＲＮは、ＲＮＡのＴＬＲ８リガンドまたはＴＬＲ７／８リガンドに典型的なサイトカイン、例えば炎症性サイトカインであるＴＮＦ−α、ＩＬ−６をあまり誘発しない。いくつかの実施形態において、相当量は「かなりの量」である。本明細書において記載されるポリマーのクラスは、一本鎖であり、ホスホジエステル骨格を有し、かつＣＵＣＡ配列を含む免疫刺激性ＲＮＡモチーフを有する。
【００３２】
このクラスは、ＴＬＲ７様免疫応答のほぼ排他的な活性化の特徴である免疫プロフィールに関連する。例えば、図４に示されるように、本発明のポリマーである配列番号３は、ＤＯＴＡＰと共に製剤されると非常に多くの量のＩＦＮ−αを誘発し、ＩＬ−１２ｐ４０は顕著には誘発しない。逆に、類似の配列を有するが免疫刺激性のＣＵＣＡモチーフを有さないポリマーである配列番号８〜１０は、大量のＩＬ−１２ｐ４０を誘発した。
【００３３】
新たな免疫刺激性モチーフは、ホスホジエステル骨格のみとの関係における場合に免疫刺激性であることが発見されている。興味深いことに、このモチーフを含む本発明の免疫刺激性ポリマーは、強力なＩＦＮ−αの応答を生じさせるが、他の典型的なサイトカイン、例えばＴＬＲ８の刺激に応答して誘発されるサイトカインは刺激しないことが明らかになっている。したがって、本発明の１つの態様は、ＴＬＲ７に関連するサイトカインを主に誘発し、ホスホジエステル骨格を有する、免疫刺激性モチーフを含む免疫刺激性ポリマーである。
【００３４】
本発明の１つの態様において、免疫刺激性ＲＮＡモチーフはｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２であり、このポリマーはモチーフｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡの外側にＵを有せず、このポリマーはホスホジエステル骨格を含み、Ｎ１およびＮ２の少なくとも１つはＡ７（ｒＡ−ｒＡ−ｒＡ−ｒＡ−ｒＡ−ｒＡ−ｒＡ）ではなく、ｒＮ１−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮ２はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもない。いくつかの実施形態において、Ｎ１は少なくとも１つのＡ、１つのＣ、または１つのＧを含む。他の実施形態において、Ｎ１は、例えばＲＮＡ：ＤＮＡキメラにおいて、少なくとも１つのＴを含む。いくつかの実施形態において、Ｎ２は少なくとも１つのＡ、１つのＣ、１つのＧ、または１つのＴを含む。
【００３５】
本発明の別の態様において、免疫刺激性ＲＮＡモチーフはｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４（Ｘ２およびＸ３は、存在しないか、またはＣ、Ｇ、およびＡからなるヌクレオシドおよびヌクレオシド類似体の群から選択されるヌクレオチドであり、Ｎ３およびＮ４は、存在しないか、または１つもしくは複数のヌクレオチドである）であり、このポリマーは、ホスホジエステル骨格を含み、２つのＡ７モチーフを含まず、ｒＮ３−ｒＸ２−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＸ３−ｒＮ４はＧＣＵＣＡＡでもＵＵＡＵＣＧＵＡＸ１ＣＵＣＡＣ（配列番号３４）（Ｘ１はＡまたはＣである）でもない。本発明のいくつかの実施形態において、Ｎ３およびＮ４はそれぞれ独立に、少なくとも１つのＡ、Ｃ、Ｇ、またはＵを含む。
【００３６】
いくつかの実施形態において、免疫刺激性ポリマーは４から１００単位長である。他の実施形態において、免疫刺激性ポリマーは４から２０単位長である。他の実施形態において、免疫刺激性ポリマーは１０から２５単位長である。さらに他の実施形態において、免疫刺激性ポリマーは１５から１９単位長である。
【００３７】
以下の実施例においてより詳細に論じられるように、免疫刺激性モチーフのＣＵＣＡは、ＴＬＲ７様免疫応答に重要であることが明らかになった。驚くべきことに、免疫刺激性の効果は、ホスホロチオエート骨格よりもホスホジエステル骨格に対して特異的であった。いくつかの実施形態において、本発明の免疫刺激性ポリマーは、２つ以上の免疫刺激性モチーフを有する。
【００３８】
本発明の免疫刺激性ポリマーは一本鎖である。本発明の方法に従うと、ポリマーは、ヒト細胞におけるコード配列に相補的な配列を含むように設計されてはおらず、したがって、アンチセンスＯＲＮまたはサイレンシングＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）であるとは考えられない。「相補的ではない」ポリマーは、標的細胞における１つの特定のコード領域と強力にハイブリダイズし得る配列を含まないものであり、例えば、このポリマーは、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズしない。したがって、特に、本発明において記載されるポリマーは、遺伝子サイレンシングに用いられる二本鎖分子と対照的に一本鎖であるため、相補的ではないポリマーの投与によって遺伝子サイレンシングは生じない。
【００３９】
本発明のポリマーは、バックグラウンドと比較して、かなりの量のＩＦＮ−αまたはＩＦＮ−α関連分子を誘発する免疫応答を誘発する能力を有する。ＩＦＮ−α関連分子は、サイトカイン、またはＩＦＮ−αの発現に関連する因子である。これらの分子には、限定はしないが、ＭＩＰ１−β、ＩＰ−１０、およびＭＩＰ１−αが含まれる。
【００４０】
本発明は全体として、免疫刺激性ＲＮＡモチーフを含む免疫刺激性ポリマー、本発明の１つまたは複数の免疫刺激性ポリマーを含む免疫刺激性組成物、ならびに本発明の免疫刺激性ポリマーおよび免疫刺激性組成物を使用するための方法に関するものである。本明細書において用いる場合、「ＲＮＡ」という用語は、１つまたは複数の３’−５’ホスホジエステル結合によって共に共有結合している２つ以上のリボヌクレオチド（すなわち、リン酸基およびプリンまたはピリミジン核酸塩基（例えば、グアニン、アデニン、シトシン、またはウラシル）に結合しているリボース糖をそれぞれ含む分子）を言う。
【００４１】
上述したように、ＲＮＡは、３’−５’ホスホジエステル結合を介して結合しているリボヌクレオチドのポリマーである。特定の実施形態において、本発明の免疫刺激性ポリマーはＲＮＡである。他の実施形態において、本発明は、本発明の免疫刺激性ＲＮＡモチーフを含むキメラＤＮＡ：ＲＮＡ分子を含む免疫刺激性組成物を提供する。本発明の１つの実施形態において、ＤＮＡ：ＲＮＡ分子のデオキシリボヌクレオチド残基は、ポリマーの５’末端にＴＣＧモチーフを含む。１つの実施形態において、キメラＤＮＡ：ＲＮＡ分子のＤＮＡ構成要素は、ＣｐＧ核酸、すなわちＴＬＲ９アゴニストを含む。１つの実施形態において、キメラＤＮＡ：ＲＮＡ分子のＤＮＡ部分およびＲＮＡ部分は、ヌクレオチド間のリン酸結合を介して共有結合している。別の実施形態において、キメラＤＮＡ：ＲＮＡ分子のＤＮＡ部分およびＲＮＡ部分は、例えば非ヌクレオチドリンカーであるリンカーを介して共有結合している。
【００４２】
別の実施形態において、ポリマーの少なくとも１つの単位はアミノ酸である。
【００４３】
いくつかの実施形態において、本発明の免疫刺激性ポリマーは、ＣｐＧ核酸ではないＴＬＲ９アゴニストに結合している。いくつかの実施形態において、本発明の免疫刺激性ポリマーは、ＴＬＲ７アゴニストまたはＴＬＲ８アゴニストに結合している。アゴニストは、デオキシヌクレオチドもしくはリボヌクレオチドであり得るか、または、アゴニストは、ペプチドもしくは小分子であり得る。免疫刺激性ポリマーは、アゴニストに直接的に結合し得るか、またはリンカーを介して結合し得る。
【００４４】
本発明の免疫刺激性ポリマーは、天然のＲＮＡおよびＤＮＡと比較して、ヌクレオチド間ホスホジエステル結合、β−Ｄ−リボース単位、および／または天然のヌクレオチド塩基（アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル）を伴う、様々な化学的修飾および置換を包含し得る。化学的修飾の例は当業者に知られており、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅら（１９９０年）Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  ９０：５４３頁、「Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ」Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ＆  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＵＳＡ  １９９３年、Ｃｒｏｏｋｅ  ＳＴら（１９９６年）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ３６：１０７〜１２９頁、およびＨｕｎｚｉｋｅｒ  Ｊら（１９９５年）Ｍｏｄ  Ｓｙｎｔｈ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ７：３３１〜４１７頁に記載されている。本発明に従ったオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾を有し得、このそれぞれの修飾は、天然のＤＮＡまたはＲＮＡで構成される同一の配列のオリゴヌクレオチドと比較して、特定のヌクレオチド間ホスホジエステル結合に、および／または特定のβ−Ｄ−リボース単位に、および／または特定の天然のヌクレオチド塩基の位置にある。
【００４５】
例えば、本発明は、１つまたは複数の修飾を含み得るオリゴヌクレオチドに関するものであり、このそれぞれの修飾は、
ａ）修飾されたヌクレオチド間結合による、ヌクレオチドの３’末端および／または５’末端に位置するヌクレオチド間ホスホジエステル結合の置換、
ｂ）脱リン酸結合による、ヌクレオチドの３’末端および／または５’末端に位置するホスホジエステル結合の置換、
ｃ）別の単位による、糖リン酸骨格からの糖リン酸単位の置換、
ｄ）修飾糖単位による、β−Ｄ−リボース単位の置換、ならびに
ｅ）修飾ヌクレオチド塩基による、天然のヌクレオチド塩基の置換
から独立して選択される。
【００４６】
オリゴヌクレオチドの化学的修飾のさらに詳細な例は以下の通りである。
【００４７】
１つの実施形態において、ＯＲＮは少なくとも１つの安定化したヌクレオチド間結合を有し得る。典型的には、この結合は、５’末端または３’末端のいずれかにあるか、またはその付近にあり、免疫刺激性モチーフ内には存在しない。ヌクレオチドの３’末端および／または５’末端に位置しているヌクレオチド間ホスホジエステル結合は、少なくとも１つの修飾されたヌクレオチド間結合によって置換することができ、この修飾されたヌクレオチド間結合は、例えば、ホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合、ＮＲ１Ｒ２−ホスホロアミデート結合、ボラノホスフェート結合、α−ヒドロキシベンジルホスホネート結合、リン酸−（Ｃ１〜Ｃ２１）−Ｏ−アルキルエステル結合、リン酸−［（Ｃ６〜Ｃ１２）アリール−（Ｃ１〜Ｃ２１）−Ｏ−アルキル］エステル結合、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルホスホネート結合、および／または（Ｃ６〜Ｃ１２）アリールホスホネート結合、（Ｃ７〜Ｃ１２）−α−ヒドロキシメチルアリール（例えば、ＷＯ９５／０１３６３において開示されている）から選択され、（Ｃ６〜Ｃ１２）アリール、（Ｃ６〜Ｃ２０）アリール、および（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールは、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、シアノにより置換されていてもよく、Ｒ１およびＲ２は互いに独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ１８）−アルキル、（Ｃ６〜Ｃ２０）−アリール、（Ｃ６〜Ｃ１４）−アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、好ましくは水素、（Ｃ１〜Ｃ８）−アルキル、好ましくは（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキルおよび／もしくはメトキシエチルによって置換されているか、または、Ｒ１およびＲ２は、それらを担持している窒素原子と共に、５〜６員のヘテロ環を形成し、これは、Ｏ、Ｓ、およびＮの群からのさらなるヘテロ原子をさらに含み得る。１つの実施形態において、ＯＲＮは１〜５個の安定化結合を有する。
【００４８】
脱リン酸結合によるホスホジエステル結合の置換は、ヌクレオチドの３’末端および／または５’末端に位置しており（脱リン酸結合は、例えば、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」第２０巻、「Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ」、Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ  １９９３年、第１６章、３５５ｆｆ頁においてＵｈｌｍａｎｎ  ＥおよびＰｅｙｍａｎ  Ａによって記載されている）、この脱リン酸結合は、例えば、ホルムアセタール基、３’−チオホルムアセタール基、メチルヒドロキシルアミン基、オキシム基、メチレンジメチルヒドラゾ基、ジメチレンスルホン基、および／またはシリル基の脱リン酸結合から選択される。
【００４９】
糖リン酸骨格からの糖リン酸単位（すなわち、糖リン酸単位を共に形成するβ−Ｄ−リボースおよびヌクレオチド間ホスホジエステル結合）（すなわち、糖リン酸骨格は、糖リン酸単位から構成される）は、別の単位によって置換することができ、この他の単位は、例えば、「モルホリノ誘導体」オリゴマー（例えばＳｔｉｒｃｈａｋ  ＥＰら（１９８９年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １７：６１２９〜４１頁において記載されているような）の形成、すなわち、例えばモルホリノ誘導体単位による置換に適しているか、または、ポリアミド核酸（「ＰＮＡ」、例えばＮｉｅｌｓｅｎ  ＰＥら（１９９４年）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  ５：３〜７頁において記載されているような）の形成、すなわち、例えばＰＮＡ骨格単位、例えば２−アミノエチルグリシンによる置換に適している。
【００５０】
β−リボース単位またはβ−Ｄ−２’−デオキシリボース単位は、修飾糖単位によって置換することができ、この修飾糖単位は、例えば、β−Ｄ−リボース、α−Ｄ−２’−デオキシリボース、Ｌ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−アラビノース、２’−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルリボースであり、好ましくは２’−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルリボースは、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−Ｏ−（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニルリボース、２’−［Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル］リボース、２’−ＮＨ２−２’−デオキシリボース、β−Ｄ−キシロフラノース、α−アラビノフラノース、２，４−ジデオキシ−β−Ｄ−エリスロヘキソピラノース、ならびに、炭素環式（例えば、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  Ｊ（１９９２年）Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １１４：８３２０頁に記載されている）および／もしくは開鎖状の類似体（例えば、Ｖａｎｄｅｎｄｒｉｅｓｓｃｈｅら（１９９３年）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４９：７２２３頁に記載されている）、ならびに／または二環状糖類似体（例えば、Ｔａｒｋｏｖ  Ｍら（１９９３年）Ｈｅｌｖ  Ｃｈｉｍ  Ａｃｔａ  ７６：４８１頁に記載されている）である。
【００５１】
核酸はまた、Ｃ−５プロピンピリミジンおよび７−デアザ−７−置換プリンの修飾塩基などの、置換されたプリンおよびピリミジンを含む。Ｗａｇｎｅｒ  ＲＷら（１９９６年）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １４：８４０〜４頁を参照されたい。プリンおよびピリミジンは、限定はしないが、アデン、シトシン、グアニン、およびチミン、ならびに他の天然のおよび非天然の核酸塩基、置換されているおよび置換されていない芳香部分を含む。
【００５２】
１つの実施形態において、本発明の免疫刺激性ポリマーは、免疫刺激性モチーフの外側に１つまたは複数の修飾核酸塩基、すなわちＡ、Ｃ、Ｇ、Ｔ、およびＵの誘導体を含み得る。これらの修飾核酸塩基の特定の実施形態には、限定はしないが、５−置換シトシン（例えば、５−メチルシトシン、５−フルオロシトシン、５−クロロシトシン、５−ブロモシトシン、５−ヨードシトシン、５−ヒドロキシシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン、５−ジフルオロメチルシトシン、および置換されていないかもしくは置換されている５−アルキニルシトシン）、６−置換シトシン、Ｎ４−置換シトシン（例えば、Ｎ４−エチルシトシン）、５−アザシトシン、２−メルカプトシトシン、イソシトシン、偽イソシトシン、縮合環系を有するシトシン類似体（例えば、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシンもしくはフェノキサジン）、ならびにウラシルおよびその誘導体（例えば、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−ブロモビニルウラシル、４−チオウラシル、５−ヒドロキシウラシル、５−プロピニルウラシル）、チミン誘導体（例えば、２−チオチミン、４−チオチミン、６−置換チミン）、グアノシン誘導体（７−デアザグアニン、７−デアザ−７−置換グアニン（７−デアザ−７−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルグアニンなど）、７−デアザ−８−置換グアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２−置換グアニン（例えばＮ２−メチルグアニン）、８−置換グアニン（例えば、８−ヒドロキシグアニンおよび８−ブロモグアニン）、ならびに６−チオグアニン）、または、アデノシン誘導体（５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、アデニン、置換アデニン（例えば、Ｎ６−メチルアデニン、８−オキソアデニン））が含まれる。塩基はまた、一般的な塩基（例えば、４−メチルインドール、５−ニトロインドール、３−ニトロピロール、Ｐ塩基、およびＫ塩基）、芳香環系（例えば、ベンズイミダゾールもしくはジクロロベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド）、芳香環系（例えば、フルオロベンゼンもしくはジフルオロベンゼン）、または水素原子（ｄＳｐａｃｅｒ）によって置換することができる。修飾Ｕ核酸塩基は、ジヒドロウラシル、偽ウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−アミノウラシル、５−（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキルウラシル、５−メチルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）−アルキニルウラシル、５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、または５−ブロモウラシルなどのウラシル誘導体である。前述の修飾核酸塩基およびその対応するヌクレオシドは市販されている。この列挙は例示的なものであり、限定するものと解釈されるものではない。
【００５３】
本発明の組成物は、二次構造または高次構造を有するポリマーおよび有さないポリマーを包含する。例えば、１つの実施形態におけるポリマーは、ヌクレオシド、ヌクレオシド類似体、または、水素結合した少なくとも２つの隣接する塩基対によりもたらされる二次構造の形成が可能なヌクレオシドおよびヌクレオシド類似体の組合せの配列を含む。１つの実施形態において、水素結合した少なくとも２つの隣接する塩基対は、少なくとも３つの連続した塩基を２組伴う。伴う塩基の連続性は、いわゆるクランプを形成するために熱力学的に有利である。しかし、連続した塩基は、特に、ＧＣ含有量が高く、かつ／または配列が伸長している場合には、必要でない場合がある。典型的には、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、または１６個の塩基対が存在する。１つの実施形態において、水素結合した塩基対は、標準的なワトソン・クリック塩基対、すなわちＧ−Ｃ、Ａ−Ｕ、またはＡ−Ｔであり得る。他の実施形態において、水素結合した塩基対は、Ｇ−Ｕ、Ｇ−Ｇ、Ｇ−Ａ、またはＵ−Ｕなどの標準的ではない塩基対であり得る。さらに他の実施形態において、水素結合した塩基対は、フーグスティーンまたは他の塩基対であり得る。
【００５４】
１つの実施形態において、二次構造はステムループ二次構造である。ステムループまたはヘアピン二次構造は、相補的なまたは少なくとも部分的に相補的な配列の間の、分子内の水素結合した塩基の対合を介して生じ得る。相補的なまたは少なくとも部分的に相補的な配列は、それぞれ、完全なまたは中断された逆方向反復配列である。例えば、Ｘ１およびＸ１’、Ｘ２およびＸ２’、ならびにＸ３およびＸ３’のそれぞれが、水素結合した塩基対を形成し得る、５’−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３・・・Ｘ３’−Ｘ２’−Ｘ１’−３’により示される塩基配列を有するポリマーは、完全なまたは中断された逆方向反復を含み得、それ自体でフォールディングしてステムループ二次構造を形成する潜在能力を有する。Ｘ１およびＸ１’、Ｘ２およびＸ２’、ならびにＸ３およびＸ３’のそれぞれが、水素結合した塩基対を形成し得る、５’−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３・・・Ｘ３’−Ｘ２’−Ｘ１’−３’により示される塩基配列を有するポリマーはまた、分子間の水素結合した塩基対を介して分子間複合体を形成する能力も有することを理解されたい。２つ以上の中断された反復が存在する場合、個別のポリマーはまた、相互作用して、二量体の分子間複合体だけではなく高次の分子間複合体または分子間構造を形成し得る。当業者には、１つのタイプの二次構造を別のものよりも形成しやすくするように条件および／または配列を選択し得ることが理解されよう。
【００５５】
１つの態様において、本発明は、本発明の免疫刺激性ポリマーと親油性部分とのコンジュゲートを提供する。特定の実施形態において、免疫刺激性ポリマーは、親油性部分に共有結合している。親油性部分は通常、遊離末端を有する免疫刺激性ＯＲＮの１つまたは複数の末端で生じるが、特定の実施形態においては、親油性の部分は免疫刺激性ポリマーのどこでも生じ得、したがって、免疫刺激性ＯＲＮが遊離末端を有している必要はない。１つの実施形態において、免疫刺激性ポリマーは３’末端を有し、親油性の部分はこの３’末端に共有結合している。親油基は通常、コレステロール、修飾コレステロール、コレステロール誘導体、還元コレステロール、置換コレステロール、コレスタン、Ｃ１６アルキル鎖、胆汁酸、コール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸塩、オレイルリトコール酸、オレオイルコレン酸、糖脂質、リン脂質、スフィンゴ脂質、イソプレノイド、例えば、ステロイド、ビタミンＥなどのビタミン、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、トリグリセリドなどの脂肪酸エステル、ピレン、ポルフィリン、テキサフィリン、アダマンタン、アクリジン、ビオチン、クマリン、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド、ジゴキシゲニン、ジメトキシトリチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、シアニン染料（例えば、Ｃｙ３またはＣｙ５）、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染料、ソラレン、またはイブプロフェンであり得る。特定の実施形態において、親油性部分は、コレステリル、パルミチル、および脂肪酸アシルから選択される。１つまたは複数のこのような親油性部分を本発明の免疫刺激性ＯＲＮに含めると、ＯＲＮがヌクレアーゼによる分解に対してさらに安定となると考えられている。本発明の単一の免疫刺激性ポリマー内に２つ以上の親油性部分が存在する場合、それぞれの親油性部分は、あらゆる他のものとは独立して選択され得る。
【００５６】
１つの実施形態において、親油性基は、免疫刺激性ポリマーのヌクレオチドの２’位に付着している。親油性基は、免疫刺激性ポリマーのヌクレオチドのヘテロ環核酸塩基に、代替的にまたは追加で結合し得る。親油性部分は、あらゆる適切な直接的または間接的な結合を介して、免疫刺激性ポリマーに共有結合し得る。１つの実施形態において、結合は直接的であり、エステルまたはアミドである。１つの実施形態において、結合は間接的であり、スペーサー部分、例えば１つまたは複数の脱塩基ヌクレオチド残基、トリエチレングリコール（スペーサー９）もしくはヘキサエチレングリコール（スペーサー１８）などのオリゴエチレングリコール、またはブタンジオールなどのアルカンジオールを含む。
【００５７】
１つの実施形態において、本発明の免疫刺激性ポリマーは、陽イオン性脂質と組み合わされる。１つの実施形態において、陽イオン性脂質は、ＤＯＴＡＰ（Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルスルファート）である。ＤＯＴＡＰは、細胞内にポリマーを輸送し、エンドソーム区画に特異的に運搬すると考えられており、この区画において、ＤＯＴＡＰはｐＨ依存性の様式でポリマーを放出し得る。エンドソーム区画に行くと、ポリマーは特定の細胞内ＴＬＲと相互作用し得、免疫応答の発生に関与するＴＬＲ介在性のシグナル伝達経路を引き起こす。エンドソーム区画への運搬を含む類似の特性を有する他の作用物質を、ＤＯＴＡＰの代わりに、またはそれに加えて用いることができる。他の脂質製剤には、例えば、ＥＦＦＥＣＴＥＮＥ（登録商標）（特殊なＤＮＡ凝縮エンハンサーを有する非リポソーム性の脂質）およびＳＵＰＥＲＦＥＣＴ（登録商標）（新規な作用性デンドリマー技術）、ＳＭＡＲＴＩＣＬＥＳ（登録商標）（細胞膜を通過すると正に荷電される荷電可逆性の粒子）、ならびに、脂質二重層を有する安定核酸脂質粒子（ＳＮＡＬＰ）が含まれる。リポソームは、例えばＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）およびＬＩＰＯＦＥＣＴＡＣＥ（商標）としてＧｉｂｃｏ  ＢＲＬから市販されており、これらは、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルクロリド（ＤＯＴＭＡ）およびジメチルジオクタデシルアンモニウムスルファート（ＤＤＡＢ）などの陽イオン性脂質で形成されている。リポソームを作製するための方法は、当技術分野において周知であり、多くの刊行物において記載されている。リポソームはまた、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ  Ｇ（１９８５年）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ３：２３５〜２４１頁によって概説されている。他の実施形態において、本発明の免疫刺激性ポリマーは、マイクロ粒子、シクロデキストリン、ナノ粒子、ノイソーム、デンドリマー、陽イオン性ポリペプチド、ビロソームおよびウイルス様粒子、またはＩＳＣＯＭ（登録商標）と組み合わされる。
【００５８】
１つの実施形態において、本発明の免疫刺激性ポリマーは、一次構造および二次構造の両方を有する、共有結合で閉環されている亜鈴形状分子の形態である。以下に記載するように、１つの実施形態において、このような環状オリゴリボヌクレオチドは、介在する二本鎖セグメントにより連結されている２つの一本鎖ループを含む。１つの実施形態において、少なくとも１つの一本鎖ループは、本発明の免疫刺激性ＲＮＡモチーフを含む。他の、共有結合により閉環された本発明の亜鈴形状分子は、キメラＤＮＡ：ＲＮＡ分子を含み、この分子において、例えば、二本鎖セグメントは少なくとも部分的にＤＮＡ（例えば、ホモ二量体ｄｓＤＮＡまたはヘテロ二量体ＤＮＡ：ＲＮＡのいずれか）であり、少なくとも１つの一本鎖ループは、本発明の免疫刺激性ＲＮＡモチーフを含む。あるいは、キメラ分子の二本鎖セグメントはＲＮＡである。
【００５９】
特定の実施形態において、免疫刺激性ポリマーは単離されている。単離された分子は、十分に純粋な分子であり、かつ、天然でまたはその意図された使用にとってある程度実用的かつ適切なインビボ系において通常この分子と共に存在する他の物質を有さない分子である。とりわけ、免疫刺激性ポリマーは、十分に純粋であり、細胞の他の生物学的成分をほとんど有さず、それにより、例えば医薬調製物の産生において有用である。本発明の単離された免疫刺激性ポリマーは、医薬調製物において薬学的に許容できる担体と混合することができるため、免疫刺激性ポリマーは、調製物のわずかな重量パーセントのみを含み得る。それでもなお、免疫刺激性ポリマーは、生物系においてこのポリマーが関連している可能性がある物質から十分に分離されているという点で、十分に純粋である。
【００６０】
本発明において用いるために、本発明の免疫刺激性ポリマーは、当技術分野において周知のあらゆる多くの手順を用いてデノボ合成することができるか、またはこれらの手順から派生したデノボ合成を行うことができる。例えば、β−シアノエチルホスホラミダイト法（Ｂｅａｕｃａｇｅ  ＳＬら（１９８１年）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２２：１８５９頁）、ヌクレオシドＨ−ホスホネート法（Ｇａｒｅｇｇ  Ｐら（１９８６年）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２７：４０５１〜４頁、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  ＢＣら（１９８６年）Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １４：５３９９〜４０７頁、Ｇａｒｅｇｇ  Ｐら（１９８６年）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２７：４０５５〜８頁、Ｇａｆｆｎｅｙ  ＢＬら（１９８８年）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２９：２６１９〜２２頁）である。これらの化学は、市販されている様々な自動核酸合成装置によって行うことができる。本発明に従って有用なさらなる合成方法は、Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅら（１９９０年）Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  ９０：５４４〜８４頁およびＧｏｏｄｃｈｉｌｄ  Ｊ（１９９０年）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  １：１６５頁に記載されている。
【００６１】
オリゴリボヌクレオチドの合成は、溶液内で、または固相担体上で行うことができる。溶液内では、ブロック結合反応（二量体、三量体、四量体など）が好ましく、一方、固相合成は、好ましくは、単量体形成ブロックを用いた段階的なプロセスで行われる。ホスホトリエステル法、Ｈ−ホスホネート法、およびホスホラミダイト法などの異なる化学が記載されている（Ｅｃｋｓｔｅｉｎ  Ｆ（１９９１年）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ、Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄを参照されたい）。ホスホトリエステル法において、反応性リン基は酸化状態＋Ｖであるが、より反応性のリン＋ＩＩＩ誘導体が、ホスホラミダイトアプローチおよびＨ−ホスホネートアプローチに従った結合反応において用いられる。後者の２つのアプローチにおいて、リンは結合ステップの後に酸化され、安定なＰ（Ｖ）誘導体となる。酸化剤がヨウ素／水／塩基である場合、ホスホジエステルが脱保護の後に得られる。逆に、酸化剤がＢｅａｕｃａｇｅ試薬などの硫化剤である場合、ホスホロチオエートが脱保護の後に得られる。
【００６２】
オリゴリボヌクレオチド合成のための効率的な方法は、ＭａｔｔｅｕｃｃｉおよびＣａｒｕｔｈｅｒｓ．Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ  ＭＤら（１９８１年）Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １０３：３１８５頁によってオリゴデオキシヌクレオチドについて最初に記載されたようなホスホラミダイト化学を用いた固体担体合成の組合せである。
【００６３】
オリゴリボヌクレオチドの合成はオリゴデオキシヌクレオチドに類似しており、オリゴリボヌクレオチド内に存在する２’−ヒドロキシ基が適切なヒドロキシ保護基によって保護されなくてはならないことが異なる。単量体は、例えば、ＲＮＡ単量体形成ブロック内の２’−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）基によって保護され得る。しかし、２’−Ｏ−トリイソプロピルシリルオキシメチル（ＴＯＭ）基（ＴＯＭ−Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ−Ｇｒｏｕｐ（商標））を含む単量体を用いたＲＮＡ合成は、ＴＯＭ−Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ−ＧｒｏｕｐがＴＢＤＭＳ基よりも低い立体障害を示すため、高い結合効率をもたらすことが報告されている。ＴＢＤＭＳ保護基はフッ化物を用いて除去されるが、ＴＯＭ基については、エタノール／水におけるメチルアミンを室温で用いて、速い脱保護が達成される。オリゴ（リボ）ヌクレオチド合成において、３’末端から５’末端への鎖の伸長が好ましく、これは、３’−リン（ＩＩＩ）基またはその活性化誘導体を有するリボヌクレオチド単位を、別のヌクレオチド単位の遊離５’−ヒドロキシ基に結合させることにより達成される。
【００６４】
合成は、自動ＤＮＡ／ＲＮＡ合成装置を用いて都合良く実施することができる。これにより、合成装置の供給者により推奨される合成サイクルを用いることができる。リボヌクレオシドホスホラミダイト単量体では、結合時間は、デオキシヌクレオシド単量体と比較して長い（例えば４００秒）。固体担体としては、プライマー担体ＰＳ２００（Ａｍｅｒｓｈａｍ）などの、５００から１０００Åの制御多孔性ガラス（ＣＰＧ）担体または有機ポリマー担体を用いることができる。固体担体は通常、その３’末端を介して付着している５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ−６−ベンゾイルアデノシンなどの最初のヌクレオシドを含む。トリクロロ酢酸を用いて５’−Ｏ−ジメトキシトリチル基を切断した後、例えば５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ−保護−２’−Ｏ−ｔｅｒｔブチルジメチルシリルヌクレオシド−３’−Ｏ−ホスホラミダイトを用いて鎖の伸長を行う。連続的な反復サイクルの後、完成したオリゴリボヌクレオチドを担体から切断し、縮合アンモニア／エタノール（３：１、ｖ：ｖ）を用いて３０℃で２４時間処理することにより、脱保護する。ＴＢＤＭＳ遮断基を、最後に、トリエチルアミン／ＨＦを用いて切断する。粗オリゴリボヌクレオチドは、イオン交換高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イオン対逆相ＨＰＬＣ、またはポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）によって精製することができ、質量分析によって特徴付けされる。
【００６５】
５’−コンジュゲートの合成は、ライゲーションされる分子のホスホラミダイトを、固相合成における末端のヌクレオチドの５’−ヒドロキシ基に結合させることによって容易である。コレステロール、アクリジン、ビオチン、ソラレン、エチレングリコール、またはアミノアルキル残基などの、このようなリガンドの様々なホスホラミダイト誘導体は、市販されている。あるいは、アミノアルキル機能を固相合成の際に導入することができ、それにより、活性エステル、イソチオシアネート、またはヨードアセトアミドなどの活性化コンジュゲート分子による合成後の誘導体化が可能になる。
【００６６】
３’末端のコンジュゲートの合成は、通常、例えば市販されているコレステロール誘導体化固体担体などの、相応して修飾された固体担体を用いることによって達成される。しかし、コンジュゲーションはまた、ヌクレオチド間結合、核酸塩基、またはリボース残基、例えばリボースの２’位でも行うことができる。
【００６７】
環状オリゴリボヌクレオチドでは、オリゴヌクレオチド鎖の伸長は、標準的なホスホラミダイト化学を用いて、ヌクレオチドＰＳ固体担体（Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）上で行うことができる。次に、環化反応を、ホスホトリエステル結合手順（Ａｌａｚｚｏｕｚｉら（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  １６：１５１３〜１４頁）を用いて、固体担体上で行う。水酸化アンモニウムを用いる最後の脱保護では、実質的には、溶液内に入る生成物のみが所望の環状オリゴヌクレオチドである。
【００６８】
本発明の環状オリゴリボヌクレオチドには、ＲＮＡの閉環形態が含まれ、二本鎖ＲＮＡを有するかまたは有さない一本鎖ＲＮＡが含まれ得る。例えば、１つの実施形態において、環状オリゴリボヌクレオチドは二本鎖ＲＮＡを含み、介在する二本鎖セグメントにより接続される２つの一本鎖ループを有する亜鈴立体構造となる。共有結合により閉環された亜鈴形状のＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドは、米国特許第６，８４９，７２５号に記載されている。別の実施形態において、環状オリゴリボヌクレオチドは二本鎖ＲＮＡを含み、介在する二本鎖セグメントによって接続される３つ以上の一本鎖ループを有する立体構造となる。１つの実施形態において、免疫刺激性ＲＮＡモチーフは、１つまたは複数の一本鎖セグメント内に位置する。
【００６９】
本発明の免疫刺激性ポリマーは、単独で、またはアジュバントなどの他の作用物質と組み合わせて有用である。本明細書において用いられるアジュバントとは、抗原に応答しての免疫細胞の活性化、例えば液性および／または細胞性免疫応答を増強する、抗原以外の物質を言う。アジュバントは、アクセサリー細胞の蓄積および／活性化を促進して、抗原特異的な免疫応答を増強する。アジュバントは、ワクチン、すなわち抗原に対する防御免疫を誘発するために用いられる抗原含有組成物の有効性を増強するために用いられる。
【００７０】
アジュバントは、２つの一般的なメカニズムを介して作用し得、所与のアジュバントまたはアジュバント製剤は、１つまたは両方のメカニズムによって作用し得る。第１のメカニズムは、抗原特異的な免疫応答が生じる細胞または部位への抗原の分布に物理的に影響することであり、これは、特定の領域もしくは細胞型を標的化するなど、抗原の生体内分布を変化させるか、または、抗原が体内で緩やかに放出されるように蓄積効果を生じさせ、それにより抗原への免疫細胞の曝露を長くする、送達媒体であり得る。
【００７１】
このクラスのアジュバントには、限定はしないが、ミョウバン（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム）、鉱油または有機油から作製される油中水型または水中油型のエマルジョンを含むエマルジョンベースの製剤が含まれる。これらは、モンタニドＩＳＡ７２０（Ｓｅｐｐｉｃ、ＡｉｒＬｉｑｕｉｄｅ、Ｐａｒｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）、ＭＦ−５９（Ｓｐａｎ８５およびＴｗｅｅｎ８０で安定化した水中スクアレン型エマルジョン、Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、Ｃａｌｉｆ．）、ならびにＰＲＯＶＡＸ（安定化性洗剤およびミセル形成剤、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）などの水中油型エマルジョンであり得る。これらはまた、モンタニドＩＳＡ５０（オレイン酸マンニドおよび鉱油の油性組成物、Ｓｅｐｐｉｃ）またはモンタニドＩＳＡ２０６（オレイン酸マンニドおよび鉱油の油性組成物、Ｓｅｐｐｉｃ）などの油中水型エマルジョンであり得る。
【００７２】
第２のアジュバントメカニズムは、免疫応答修飾物質または免疫刺激剤である。これらにより、良好な提示、認識、または抗原に対する応答に対して免疫細胞が活性化し、それにより抗原特異的な応答が、反応速度、強さ、表現型、または記憶について増強される。免疫応答修飾物質は、典型的には、トール様受容体またはいくつかの他の非ＴＬＲ経路の１つ（例えばＲＩＧ−Ｉ）などの特異的な受容体を介して作用するが、いくつかについての経路は依然として不明である。このクラスのアジュバントには、限定はしないが、キラヤ・サポナリア（Ｑ．ｓａｐｏｎａｒｉａ）という木の樹皮から精製されるサポニン、例えばＱＳ２１（ＨＰＬＣ分画において２１番目のピークで溶出される糖脂質、Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ、Ｍａｓｓ．）、ポリ［ジ（カルボキシラトフェノキシ）ホスファゼン（ＰＣＰＰポリマー、Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＵＳＡ）、Ｆｌｔ３リガンド、およびリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）の伸長因子（精製されたリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）タンパク質、Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓｅａｔｔｌｅ、Ｗａｓｈ．）が含まれる。
【００７３】
ＴＬＲを介して作用する多くのアジュバントが存在する。ＴＬＲ４を介して作用するアジュバントには、リポポリ多糖の誘導体、例えば、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ、Ｒｉｂｉ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、Ｍｏｎｔ．）およびムラミルジペプチド（ＭＤＰ、Ｒｉｂｉ）およびスレオニルムラミルジペプチド（ｔ−ＭＤＰ、Ｒｉｂｉ）、ＯＭ−１７４（脂質Ａに関連するグルコサミン二糖、ＯＭ  Ｐｈａｒｍａ  ＳＡ、Ｍｅｙｒｉｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）が含まれる。フラジェリンは、ＴＬＲ５を介して作用するアジュバントである。二本鎖ＲＮＡはＴＬＲ３を介して作用する。ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８を介して作用するアジュバントには、一本鎖ＲＮＡまたはオリゴリボヌクレオチド（ＯＲＮ）、ならびにイミダゾキノリンアミン（例えば、イミキモド、レシキモド、３Ｍ）を含む、ＴＬＲを認識および活性化する合成低分子量化合物が含まれる。ＴＬＲ９を介して作用するアジュバントには、ウイルスもしくは細菌由来のＤＮＡ、またはＣｐＧ  ＯＤＮなどの合成オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）が含まれる。
【００７４】
物理的効果および免疫刺激効果の両方を有するアジュバントは、上記に同定した機能の両方を有する化合物である。このクラスのアジュバントには、限定はしないが、ＩＳＣＯＭＳ（混合されたサポニン、脂質を含み、抗原を保持し得る孔を有するウイルスサイズの粒子を形成する免疫刺激性複合体、ＣＳＬ、Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、ＳＢ−ＡＳ２（ＭＰＬおよびＱＳ２１を含む水中油型エマルジョンであるＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍアジュバントシステム＃２、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ［ＳＢＢ］、Ｒｉｘｅｎｓａｒｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）、ＳＢ−ＡＳ４（ミョウバンおよびＭＰＬを含むＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍアジュバントシステム＃４、ＳＢＢ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）、ＣＲＬ１００５（これらはポリオキシエチレンの鎖が隣接する疎水性ポリオキシプロピレンの直鎖を含む、Ｖａｘｃｅｌ，Ｉｎｃ．、Ｎｏｒｃｒｏｓｓ、Ｇａ．）などのミセルを形成する非イオン性ブロックコポリマー、ならびにＳｙｎｔｅｘアジュバント製剤（ＳＡＦ、Ｔｗｅｅｎ８０および非イオン性ブロックコポリマーを含む水中油型エマルジョン、Ｓｙｎｔｅｘ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ｂｏｕｌｄｅｒ  Ｃｏｌｏ．）、モンタニドＩＭＳ（例えば、ＩＭＳ１３１２、可溶性免疫刺激剤と組み合わされた水性ベースのナノ粒子、Ｓｐｐｉｃ）、ならびに以下に記載される多くの送達媒体が含まれる。
【００７５】
また、本発明の免疫刺激性ポリマーと別のアジュバントとを含む組成物であって、この他のアジュバントが、キトサンなどの陽イオン性多糖、またはプロタミン、ポリエステル、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）などの陽イオン性ペプチド、または上記の１つもしくは複数からなるコポリマーである組成物も提供される。
【００７６】
また、本発明の免疫刺激性ポリマーと別のアジュバントとを含む組成物であって、この他のアジュバントがサイトカインである組成物も提供される。１つの実施形態において、組成物は、本発明の免疫刺激性ポリマーとサイトカインとのコンジュゲートである。
【００７７】
サイトカインは、炎症性反応および免疫反応を仲介する、多くのタイプの細胞により産生される可溶性タンパク質および糖タンパク質である。サイトカインは、免疫系の細胞間の連絡を仲介し、局所的におよび全身的に作用して、細胞を動員し、その細胞の機能および増殖を調節する。サイトカインのカテゴリーには、自然免疫のメディエーターおよび調節因子、適応免疫のメディエーターおよび調節因子、ならびに造血の刺激因子が含まれる。サイトカインには、インターロイキン（例えば、とりわけ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、およびインターロイキン１９〜３２（ＩＬ−１９〜ＩＬ−３２））、ケモカイン（例えば、とりわけ、ＩＰ−１０、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＰ−３α、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４、エオタキシン、Ｉ−ＴＡＣ、およびＢＣＡ−１）、ならびに、１型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−β）、２型インターフェロン（例えばＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）、およびＧＭ−ＣＳＦやＧ−ＣＳＦやＭ−ＣＳＦを含む様々なコロニー刺激因子（ＣＳＦ）を含む他のサイトカインが含まれる。
【００７８】
また、本発明の免疫刺激性ポリマーと免疫刺激性ＣｐＧ核酸とを含む組成物も提供される。１つの実施形態において、組成物は、本発明の免疫刺激性ポリマーとＣｐＧ核酸とのコンジュゲート、例えばＲＮＡ：ＤＮＡコンジュゲートである。
【００７９】
本明細書において用いられる免疫刺激性ＣｐＧ核酸とは、ＣｐＧモチーフを含み、免疫系の細胞の活性化または増殖を刺激する、天然または合成のＤＮＡ配列を言う。免疫刺激性ＣｐＧ核酸は、米国特許第６．１９４，３８８号、米国特許第６，２０７，６４６号、米国特許第６，２１４，８０６号、米国特許第６，２１８，３７１号、米国特許第６，２３９，１１６号、および米国特許第６，３３９，０６８号を含む、多くの特許、公開された特許出願、および他の刊行物において記載されている。１つの実施形態において、免疫刺激性ＣｐＧ核酸は、６〜１００ヌクレオチド長のＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）である。１つの実施形態において、免疫刺激性ＣｐＧ核酸は、８〜４０ヌクレオチド長のＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）である。
【００８０】
いくつかの実施形態において、ポリマーはＣＧジヌクレオチドを含む。他の実施形態において、ポリマーはＣＧジヌクレオチドを含まない。
【００８１】
免疫刺激性ＣｐＧ核酸は、異なるクラスのＣｐＧ核酸を含む。１つのクラスは、Ｂ細胞の活性化について強力であるが、ＩＦＮ−αおよびＮＫ細胞の活性化を誘発する力は比較的弱く、このクラスはＢクラスと呼ばれている。ＢクラスのＣｐＧ核酸は、典型的には完全に安定化されており、特定の好ましい塩基との関連においては、メチル化されていないＣｐＧジヌクレオチドを含む。例えば、米国特許第６，１９４，３８８号、米国特許第６，２０７，６４６号、米国特許第６，２１４，８０６号、米国特許第６，２１８，３７１号、米国特許第６，２３９，１１６号、および米国特許第６，３３９，０６８号を参照されたい。別のクラスは、ＩＦＮ−αおよびＮＫ細胞の活性化の誘発について強力であるが、Ｂ細胞を刺激する力は比較的弱く、このクラスはＡクラスと呼ばれている。ＡクラスのＣｐＧ核酸は、典型的には、少なくとも６個のヌクレオチドからなる回文ホスホジエステルＣｐＧジヌクレオチド含有配列を有し、５’末端および３’末端のいずれかまたは両方に安定化ポリ−Ｇ配列を有する。例えば、公開された国際特許出願ＷＯ０１／２２９９０を参照されたい。さらに別のクラスのＣｐＧ核酸はＢ細胞およびＮＫ細胞を活性化し、ＩＦＮ−αを誘導し、このクラスはＣクラスと呼ばれている。ＣクラスのＣｐＧ核酸は、最初の特徴として、典型的には完全に安定化されており、Ｂクラス型の配列およびＧＣに富んだ回文配列またはほぼ回文配列を含む。このクラスは公開された米国特許出願第２００３／０１４８９７６号において記載されており、その全内容は参照することにより本明細書に組み込まれる。
【００８２】
免疫刺激性ＣｐＧ核酸はまた、公開された米国特許出願第２００３／０１４８９７６号において開示されているような、いわゆる軟性のおよび半軟性のＣｐＧ核酸を含み、前記出願の全内容は、参照することにより本明細書に組み込まれる。このような軟性のおよび半軟性の免疫刺激性ＣｐＧ核酸は、ヌクレアーゼ耐性のおよびヌクレアーゼ感受性のヌクレオチド間結合の組合せを包含し、この組合せにおいて、異なるタイプの結合が特定のルールに従って位置している。
【００８３】
１つの態様における本発明は、本発明の免疫刺激性ポリマーおよび抗原を含むワクチンを提供する。本明細書において用いられる「抗原」は、Ｔ細胞抗原受容体またはＢ細胞抗原受容体によって認識され得るあらゆる分子を言う。この用語は、宿主の免疫系によって異物と認識されるあらゆるタイプの分子を広く含む。抗原には通常、限定はしないが、細胞、細胞抽出物、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ポリ多糖、ポリ多糖コンジュゲート、ポリ多糖および他の分子のペプチド模倣体および非ペプチド模倣体、小分子、脂質、糖脂質、ポリ多糖、炭水化物、ウイルスおよびウイルス抽出物、ならびに寄生体などの多細胞生物、ならびにアレルゲンが含まれる。タンパク質、ポリペプチド、またはペプチドである抗原に関しては、このような抗原には、このような抗原をコードする核酸分子が含まれ得る。抗原には、より具体的には、限定はしないが、癌細胞および癌細胞内または癌細胞上で発現する分子を含む癌抗原、微生物および微生物内または微生物上で発現する分子を含む微生物抗原、アレルゲン、および、自己反応性Ｔ細胞などの他の疾患関連分子が含まれる。したがって、特定の実施形態における本発明は、癌、感染性疾患、アレルギー、中毒、異常にフォールディングしたタンパク質により生じる疾患、自己免疫疾患、およびコレステロール管理のためのワクチンを提供する。
【００８４】
感染性疾患に対するワクチンは、予防的または治療的なものであり得る。ワクチンにおける抗原は、完全な生の（弱毒化された）もの、完全な死滅した／不活性化されたもの、組換えられた生の弱毒化されたもの、サブユニット精製されたもの、サブユニット組換えされたもの、またはペプチドであり得る。ワクチンはさらに、さらなるアジュバントまたはアジュバントの組合せを含み得る。さらなるアジュバントは、蓄積効果を有するもの（例えばミョウバン）を有するもの、および免疫修飾物質（例えば、別のＴＬＲアゴニスト、もしくは非ＴＬＲ経路を介して作用するもの）、または免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ（登録商標））などの、これらの効果の両方を有するアジュバントであり得る。アジュバントは、以下にさらに詳細に記載される。
【００８５】
癌に対するワクチンもまた、予防的または治療的であり得る。癌抗原は、全細胞（個別のＤＣワクチン）、または１つもしくは複数のポリペプチドもしくはペプチドであり得る。これらは典型的には、キャリアー分子に付着している。ワクチンはさらに、上記のようなさらなるアジュバントまたはアジュバントの組合せを含み得る。癌抗原は、以下にさらに詳細に記載される。
【００８６】
アレルギーを治療するためのワクチンでは、抗原はアレルゲンまたはアレルゲンの一部である。アレルゲンは、送達媒体内に含まれ得るか、または送達媒体に付着し得る。アレルゲンは、免疫刺激性ポリマーに結合し得る。アレルゲンは、以下にさらに詳細に記載される。
【００８７】
中毒を治療するためのワクチンは、例えばニコチン中毒、コカイン中毒、メタンフェタミン、またはヘロイン中毒の治療に有用であり得る。これらのケースにおける中毒性分子は、天然の分子またはハプテンである。中毒に対するワクチンに包含されるための「抗原」は、典型的には小分子であり、キャリアータンパク質もしくは他のキャリアー粒子に結合し得るか、または、ウイルス様粒子内に包含され得る。
【００８８】
異常にフォールディングしたタンパク質により生じる疾患を治療するためのワクチンは、感染性海綿状脳症（クロイツフェルト・ヤコブ病の変異型）などの疾患の治療に有用であり得る。このケースにおける「抗原」は、キャリアータンパク質または生の弱毒化されたベクターに付着し得るスクレイピープリオンである。アルツハイマー病に対するワクチンの１つの例は、例えば、β−アミロイドペプチドまたはタンパク質に標的化されたワクチンである。
【００８９】
自己免疫疾患を治療するためのワクチンもまた提供される。これらのワクチンは、自己免疫細胞が認識する分子が同定されている自己免疫疾患の治療に有用であり得る。例えば、ミエリンに応答する自己反応性Ｔ細胞に対するワクチンは、多発性硬化症の治療に用いられる。
【００９０】
心血管の疾患および症状の治療に有用なワクチンもまた提供される。ワクチンは、リポタンパク質、コレステロール、およびコレステロール代謝に関与する分子などの、疾患の病因に関与することが知られている分子を標的化し得る。コレステロールを管理するためのワクチンは、例えば、抗原としてコレステリルエステル転送タンパク質（ＣＥＴＰ）を含む。ＣＥＴＰにより、抗アテローム生成性のアポＡ−Ｉ含有ＨＤＬ粒子からアテローム生成性のアポＢ含有ＶＬＤＬおよびＬＤＬへのコレステロールの交換が容易になる。このようなワクチンは、高コレステロールを治療するため、またはアテローム性動脈硬化症の進行を遅らせるために用いることができる。ワクチンは、標的分子が知られている他の心血管の疾患および症状の治療に用いることができる。
【００９１】
１つの態様における本発明は、対象にワクチン接種するための薬剤を調製するための、本発明の免疫刺激性ポリマーの使用を提供する。
【００９２】
１つの態様における本発明は、ワクチンを調製するための方法を提供する。本方法は、抗原に深く関連する本発明の免疫刺激性ポリマーと、場合により、薬学的に許容できる担体とを置くステップを含む。
【００９３】
いくつかの実施形態において、免疫刺激性ポリマーおよび抗原またはアレルゲンは結合している。抗原および免疫刺激性ポリマーは、直接的に結合し得るか、またはそれらは、リンカーによって間接的に結合し得る。
【００９４】
本明細書において用いられる「微生物抗原」とは、微生物の抗原であり、限定はしないが、ウイルス、細菌、寄生体、および真菌を含む。このような抗原には、インタクトな微生物ならびにその天然の単離物および断片または誘導体と、さらに、天然の微生物抗原と同一または類似であり、その微生物に特異的な免疫応答を誘発する合成化合物とが含まれる。化合物は、天然の微生物抗原に対する免疫応答（液性および／または細胞性）を誘発する場合、天然の微生物抗原に類似である。このような抗原は、当技術分野において通常用いられており、当業者に周知である。
【００９５】
ウイルスは、核酸からなる中心部およびタンパク質被膜を通常含む、小さな感染性作用物質であるが、独立して生存している生物ではない。ウイルスはまた、タンパク質を有さない感染性核酸の形態を取ることもできる。ウイルスは、ウイルスが複製し得る場所である生存細胞の不存在下では生存することができない。ウイルスは、エンドサイトーシスまたはＤＮＡの直接的な注入（ファージ）を介して特定の生存細胞内に入り、増殖し、疾患を生じさせる。増殖したウイルスはその後放出され得、さらに別の細胞に感染し得る。いくつかのウイルスはＤＮＡ含有ウイルスであり、他のものはＲＮＡ含有ウイルスである。いくつかの態様において、本発明はまた、例えばウシ海綿状脳症（すなわち、狂牛病、ＢＳＥ）もしくは動物におけるスクレイピー感染、またはヒトにおけるクロイツフェルト・ヤコブ病などの、プリオンが疾患の進行に関連している疾患を治療することを目的としている。
【００９６】
ウイルスには、限定はしないが、エンテロウイルス（限定はしないが、ポリオウイルス、コクサッキーウイルス、エコーウイルスなどのピコルナウイルス（ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）科のウイルスを含む）、ロタウイルス、アデノウイルス、ならびにＡ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、およびＥ型肝炎ウイルスなどの肝炎ウイルスが含まれる。ヒトにおいて見出されているウイルスの具体的な例には、限定はしないが、レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶ、もしくはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩとも呼ばれる）などのヒト免疫不全ウイルス、および、ＨＩＶ−ＬＰなどの他の単離物）、ピコルナウイルス科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）、カルシウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、胃腸炎を生じさせる株）、トガウイルス科（Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）、フラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、デングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）、コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、コロナウイルス）、ラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）、フィロウイルス科（Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、エボラウイルス）、パラミクソウイルス科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、パラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）、オルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、インフルエンザウイルス）、ブニヤウイルス科（Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ハンターンウイルス、ブニヤウイルス、フレボウイルス、およびナイロウイルス）、アレナウイルス科（Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ）（出血熱ウイルス）、レオウイルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、レオウイルス、オルビウイルス、およびロタウイルス）、ビルナウイルス科（Ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）、ヘパドナウイルス科（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）（Ｂ型肝炎ウイルス）、パルボウイルス科（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）（パルボウイルス）、パポバウイルス科（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ）（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）、アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）（ほとんどのアデノウイルス）、ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１型および２型、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ））、ポックスウイルス科（Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）（天然痘ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）、イリドウイルス科（Ｉｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、アフリカブタコレラウイルス）、ならびに、他のウイルスの急性咽頭気管気管支炎ウイルス、アルファウイルス、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ニパウイルス、ノーウォークウイルス、パピローマウイルス、パラインフルエンザウイルス、トリインフルエンザウイルス、ＳＡＲｓウイルス、ウエストナイルウイルスが含まれる。
【００９７】
細菌は、二分裂により無性的に増殖する単細胞生物である。それらは分類され、それらの形態、染色反応、栄養要求および代謝要求、抗原構造、化学組成、ならびに遺伝子相同性に基づいて名付けられる。細菌は、それらの形態学的形状、すなわち球状（球菌）、まっすぐな棒状（桿菌）、および湾曲したまたはねじれた棒状（ビブリオ、カンピロバクター、らせん菌、およびスピロヘータ）に基づいて、３つの群に分類することができる。細菌はまた、より一般的には、それらの染色反応に基づいて、２つの生物クラス、すなわちグラム陽性およびグラム陰性に特徴付けされる。グラムとは、微生物学研究所において一般に実施される染色方法を言う。グラム陽性生物は、染色手順の後に染色を保持し、深い紫色を呈する。グラム陰性生物は染色を保持しないが、対比染色され、ピンク色を呈する。
【００９８】
感染性細菌には、限定はしないが、グラム陰性細菌およびグラム陽性細菌が含まれる。グラム陽性細菌には、限定はしないが、パスツレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）種、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）種、および連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種が含まれる。グラム陰性細菌には、限定はしないが、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、およびサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種が含まれる。感染性細菌の具体的な例には、限定はしないが、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉｓ）、ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ・ニューモフィリア（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、マイコバクテリア属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐｓ）（例えば、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム・イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、マイコバクテリウム・カンサシ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、マイコバクテリウム・ゴルドナエ（Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ））、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、ナイセリア・ゴノレア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（緑色群）、ストレプトコッカス・フェカリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・ボビス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ）、連鎖球菌（嫌気性種）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、バチルス・アンスラシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｓｐ．）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、モニリホルム連鎖桿菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）、フランベジア・トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトスピラ（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、およびアクチノマイセス・イスラエリ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｉｉ）が含まれる。
【００９９】
寄生体は、生存するために他の生物に依存する生物であり、したがって、自らの生活環を継続するために別の生物に入らなくてはならないか、または感染しなくてはならない。感染された生物、すなわち宿主は、栄養および生息環境の両方を寄生体に提供する。寄生体という用語は、その最も広い意味において、全ての感染性作用物質（すなわち、細菌、ウイルス、真菌、原虫、および蠕虫）を含み得、一般的に言えば、この用語は原虫、蠕虫、および外部寄生性の節足動物（例えば、マダニ、ダニなど）のみを言うために用いられる。原虫は、細胞内および細胞外の両方で、とりわけ、血液、腸管、または組織の細胞外マトリクスにおいて複製し得る単細胞生物である。蠕虫は、ほとんどの場合に細胞外にいる多細胞生物である（例外は旋毛虫属（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．））。蠕虫は通常、複製するために、一次宿主から出て、二次宿主内に伝染する必要がある。これらの前述のクラスとは異なり、外部寄生性の節足動物は、宿主の体の外部表面と寄生関係を形成する。
【０１００】
寄生体には、細胞内寄生体および偏性細胞内寄生体が含まれる。寄生体の例には、限定はしないが、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、卵形マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ）、四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ）、三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、二日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｋｎｏｗｌｅｓｉ）、ネズミバベシア（Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ）、バベシア・ディバーゲンス（Ｂａｂｅｓｉａ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ）、クルーズトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、トキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、旋毛虫（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ）、大形リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍａｊｏｒ）、ドノバンリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ）、ブラジルリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ）、熱帯リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ）、ガンビアトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅ）、ローデシアトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ）、およびマンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ）が含まれる。真菌は真核生物であり、そのうち脊椎哺乳動物における感染を生じさせるものはわずかである。真菌は真核生物であるため、それらは、サイズ、構造的構成、生活環、および増幅のメカニズムにおいて原核性細菌と著しく異なる。真菌は通常、形態上の特徴、生殖の様式、および培養上の特徴に基づいて分類される。真菌は、異なるタイプの疾患、例えば、真菌抗原の吸入による呼吸アレルギー、タマゴテングダケ（Ａｍａｎｉｔａ  ｐｈａｌｌｏｉｄｅｓ）の毒ならびに毒キノコにより産生されるファロトキシンおよびアスペルギルス種により産生されるアフラトキシンなどの毒性物質の摂取による真菌中毒を対象において生じさせ得るが、全ての真菌が感染性疾患を生じさせるわけではない。
【０１０１】
感染性真菌は、全身性または表在性感染を生じさせ得る。全身性の一次感染は、正常な健康な対象において生じ得、日和見感染は免疫不全の対象において最も頻繁に見られる。全身性の一次感染を生じさせる最も一般的な真菌作用物質には、ブラストミセス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）、コクシジオイデス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ）、およびヒストプラズマ（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）が含まれる。免疫不全のまたは免疫抑制された対象において日和見感染を生じさせる一般的な真菌には、限定はしないが、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、および様々なアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種が含まれる。全身性の真菌感染は、内部器官の侵襲性感染である。この生物は通常、肺、消化管、または静脈内カテーテルを介して身体に入る。これらのタイプの感染は、一次病原性の真菌または日和見性の真菌によって生じ得る。
【０１０２】
表在性真菌感染は、外部表面上での真菌の成長を伴い、内部組織の侵襲は伴わない。典型的な表在性真菌感染には、皮膚、頭髪、または爪を伴う皮膚の真菌感染が含まれる。
【０１０３】
真菌感染に関連する疾患には、アスペルギルス症、ブラストミセス症、カンジダ症、クロモブラストミコーシス、コクシジオイデス症、クリプトコッカス症、眼の真菌感染、頭髪、爪、および皮膚の真菌感染、ヒストプラズマ症、ロボミコーシス、菌腫、耳真菌症、パラコクシジオイデス症、播種性ペニシリウム・マルネフェイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）、フェオフィホ真菌症、リノスポリジウム症、スポロトリクム症、および接合菌症が含まれる。
【０１０４】
他の医学的に関連する微生物は、文献において広範囲にわたって記載されており、例えば、参照することによりその全内容が本明細書に組み込まれる、Ｃ．Ｇ．Ａ．Ｔｈｏｍａｓ、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ  Ｔｉｎｄａｌｌ、Ｇｒｅａｔ  Ｂｒｉｔａｉｎ  １９８３年を参照されたい。前述の列挙のそれぞれは例示的なものであり、限定することを意図したものではない。
【０１０５】
本明細書において用いる場合、「癌抗原」および「腫瘍抗原」という用語は、腫瘍または癌細胞に関連し、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子との関連において抗原提示細胞の表面上に発現すると免疫応答を引き起こし得る、ペプチド、タンパク質、または糖タンパク質などの化合物を言うために、ほぼ同義で用いられる。癌抗原は、癌細胞によって差次的に発現され、それにより癌細胞の標的化に利用され得る。癌抗原は、腫瘍特異的であると考えられる免疫応答を刺激する可能性を有し得る抗原である。これらの抗原のいくつかは正常な細胞によってコードされているが、発現している必要はない。これらの抗原は、正常な細胞において通常はサイレントである（すなわち発現していない）もの、分化の特定の段階においてのみ発現するもの、ならびに胚抗原および胎児性抗原など、一時的に発現するものとして特徴付けされ得る。他の癌抗原は、癌遺伝子（例えば、活性化したｒａｓ癌遺伝子）、抑制遺伝子（例えば、突然変異ｐ５３）、内部欠失または染色体転座により生じる融合タンパク質などの、突然変異細胞遺伝子によってコードされている。さらに他の癌抗原は、ＲＮＡおよびＤＮＡ腫瘍ウイルス上に担持されているもののようなウイルス遺伝子によってコードされ得る。
【０１０６】
癌抗原は、例えばＣｏｈｅｎ  ＰＡら（１９９４年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、５４：１０５５〜８頁において記載されているように癌細胞の粗抽出物を調製することにより、抗原を部分的に精製することにより、組換え技術により、または既知の抗原のデノボ合成により、癌細胞から調製することができる。癌抗原には、限定はしないが、組換えにより発現している抗原、腫瘍もしくは癌またはその細胞の免疫原性部分または全体が含まれる。このような抗原は、組換えにより、または当技術分野において知られているあらゆる他の手段によって、単離または調製することができる。
【０１０７】
腫瘍抗原の例には、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）であるＣ０１７−１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）およびその免疫原性エピトープＣＡＰ−１およびＣＡＰ−２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異的抗原（ＳＰＡ）およびその免疫原性エピトープＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２、およびＰＳＡ−３、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ゼータ鎖、腫瘍抗原のＭＡＧＥファミリー（例えば、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｃ４、ＭＡＧＥ−Ｃ５）、腫瘍抗原のＧＡＧＥファミリー（例えば、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＭＵＭ−１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α−フェトプロテイン、Ｅ−カドヘリン、α−カテニン、β−カテニン、およびγ−カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫様ポリポーシスタンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇイディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産生物、腫瘍抗原のＳｍａｄファミリー、ｌｍｐ−１、Ｐ１Ａ、ＥＢＶコード核抗原（ＥＢＮＡ）−１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１、およびＣＴ−７、ならびにｃ−ｅｒｂＢ−２が含まれる。この列挙は限定を意味するものではない。
【０１０８】
本明細書において用いられる「アレルゲン」は、ＩｇＥの産生を特徴とする免疫応答を引き起こし得る分子である。アレルゲンはまた、感受性を有する対象におけるアレルギー応答または喘息性の応答を誘発し得る物質である。したがって、本発明との関連において、アレルゲンという用語は、ＩｇＥ抗体により仲介されるアレルギー応答を引き起こし得る、特定のタイプの抗原を意味する。
【０１０９】
アレルゲンの列挙は膨大であり、花粉、昆虫の毒、動物の鱗屑、真菌の胞子、および薬剤（例えばペニシリン）を含み得る。天然の動物アレルゲンおよび植物アレルゲンの例には、イヌ属（イヌ（Ｃａｎｉｓ  ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ））、ヒョウダニ属（例えば、コナヒョウダニ（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ））、ネコ属（イエネコ（Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ））、ブタクサ属（ブタクサ（Ａｍｂｒｏｓｉａ  ａｒｔｅｍｉｓｉｉｆｏｌｉａ））、ドクムギ属（例えば、ペレニアルライグラス（Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅ）およびイタリアンライグラス（Ｌｏｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ））、スギ属（スギ（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ））、アルテルナリア属（アルテルナリア・アルテルナータ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａ））、ハンノキ属、アルヌス属（ハンノキ（Ａｌｎｕｓ  ｇｕｌｔｉｎｏｓａ））、カバノキ属（ヨーロッパシラカンバ（Ｂｅｔｕｌａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ））、コナラ属（ホワイトオーク（Ｑｕｅｒｃｕｓ  ａｌｂａ））、オリーブ属（オリーブ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａ））、ヨモギ属（オオヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ））、オオバコ属（例えばヘラオオバコ（Ｐｌａｎｔａｇｏ  ｌａｎｃｅｏｌａｔａ））、ヒカゲミズ属（例えば、ヒカゲミズ（Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）およびカベイラクサ（Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｊｕｄａｉｃａ））、チャバネゴキブリ属（例えばチャバネゴキブリ（Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ））、ミツバチ属（例えばアピス・ムルティフロルム（Ａｐｉｓ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ））、イトスギ属（例えば、ホソイトスギ（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ）、アリゾナイトスギ（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ａｒｉｚｏｎｉｃａ）、およびモントレーイトスギ（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｍａｃｒｏｃａｒｐａ））、ビャクシン属（例えば、ジュニペルス・サビノイデス（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｓａｂｉｎｏｉｄｅｓ）、エンピツビャクシン（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ）、セイヨウネズ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ）、およびジュニペルス・アシェイ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ａｓｈｅｉ））、クロベ属（例えばコノテガシワ（Ｔｈｕｙａ  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ））、ヒノキ属（例えばヒノキ（Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ  ｏｂｔｕｓａ））、ゴキブリ属（例えばワモンゴキブリ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ））、カモジグサ属（例えばシバムギ（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ  ｒｅｐｅｎｓ））、ライムギ属（例えばライムギ（Ｓｅｃａｌｅ  ｃｅｒｅａｌｅ））、コムギ属（例えばコムギ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ））、カモガヤ属（例えばオーチャードグラス（Ｄａｃｔｙｌｉｓ  ｇｌｏｍｅｒａｔａ））、ウシノケグサ属（例えばヒロハノウシノケグサ（Ｆｅｓｔｕｃａ  ｅｌａｔｉｏｒ））、イチゴツナギ属（例えば、ナガハグサ（Ｐｏａ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓ）およびコイチゴツナギ（Ｐｏａ  ｃｏｍｐｒｅｓｓａ））、カラスムギ属（例えばエンバク（Ａｖｅｎａ  ｓａｔｉｖａ））、シラゲガヤ属（例えばシラゲガヤ（Ｈｏｌｃｕｓ  ｌａｎａｔｕｓ））、ハルガヤ属���例えばハルガヤ（Ａｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ  ｏｄｏｒａｔｕｍ））、オオカニツリ属（例えばリボンガヤ（Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ  ｅｌａｔｉｕｓ））、コヌカグサ属（例えばコヌカグサ（Ａｇｒｏｓｔｉｓ  ａｌｂａ））、アワガエリ属（例えばチモシー（Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ））、クサヨシ属（例えばクサヨシ（Ｐｈａｌａｒｉｓ  ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ））、スズメノヒエ属（例えばアメリカスズメノヒエ（Ｐａｓｐａｌｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍ））、モロコシ属（例えばセイバンモロコシ（Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｈａｌｅｐｅｎｓｉｓ））、ならびにスズメノチャヒキ属（例えばコスズメノチャヒキ（Ｂｒｏｍｕｓ  ｉｎｅｒｍｉｓ））に特異的なタンパク質が含まれる。
【０１１０】
１つの態様における本発明は、本発明の免疫刺激性ポリマーと抗原とのコンジュゲートを提供する。１つの実施形態において、本発明の免疫刺激性ポリマーは、抗原に共有結合している。免疫刺激性ポリマーと抗原との間の共有結合は、免疫刺激性ポリマーおよび抗原がそのようにして結合している場合に各々の構成要素の測定可能な機能的活性を保持しているならば、あらゆる適切なタイプの共有結合であり得る。１つの実施形態において、共有結合は直接的なものである。別の実施形態において、共有結合は間接的なもの、例えばリンカー部分を介したものである。共有結合した免疫刺激性ポリマーおよび抗原は、細胞内で処理されて、一方の細胞からもう一方の細胞へ放出され得る。この方途において、細胞へのいずれの構成要素の送達も、個別の調製物または個別の構成要素として投与された場合のその送達と比較して増強され得る。１つの実施形態において、抗原は抗原自体であり、すなわち、抗原は既に形成された抗原である。
【０１１１】
１つの態様において、本発明は、本発明の組成物を送達媒体と組み合わせて含む医薬組成物を提供する。様々な実施形態において、送達媒体は、陽イオン性脂質、リポソーム、渦巻状物、ビロソーム、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ（登録商標））、マイクロ粒子、ミクロスフェア、ナノスフェア、単層ベシクル（ＬＵＶ）、多層ベシクル、エマルソーム、陽イオン性ポリペプチド、リポプレックス、ポリプレックス、リポポリプレックス、油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルジョン、水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョン、水−油−水型（Ｗ／Ｏ／Ｗ）複合エマルジョン、マイクロエマルジョン、ナノエマルジョン、ミセル、デンドリマー、ビロソーム、ウイルス様粒子、ポリマーナノ粒子（ナノスフェアもしくはナノカプセルなど）、ポリマーマイクロ粒子（マイクロスフェアもしくはマイクロカプセルなど）、キトサン、シクロデキストリン、ニオソーム、またはＩＳＣＯＭ（登録商標）から選択され得、薬学的に許容できる担体から選択されてもよい。
【０１１２】
薬学的に許容できる担体を以下に論じる。本発明の医薬組成物は、抗原をさらに含んでいてもよい。もし存在する場合には抗原と共にある、本発明の組成物には、あらゆる適切な方法を用いて送達媒体との物理的関連が付与される。免疫刺激性組成物は、送達媒体内に含まれ得るか、または、溶媒に晒された送達媒体表面上に存在し得るかもしくはその表面と関連し得る。１つの実施形態において、免疫刺激性ポリマーは、溶媒に晒された送達媒体表面上に存在するか、またはその表面と関連し、抗原は、もし存在する場合は、送達媒体内に含まれる。別の実施形態において、免疫刺激性ポリマーおよび抗原の両方が、溶媒に晒された送達媒体表面上に存在するか、またはその表面と関連する。さらに別の実施形態において、抗原は、溶媒に晒された送達媒体表面上に存在するか、またはその表面と関連し、免疫刺激性ポリマーは送達媒体内に含まれる。さらに別の実施形態において、免疫刺激性ポリマーと、もし抗原が含まれる場合には抗原との両方が、送達媒体内に含まれる。
【０１１３】
本発明はまた、本発明の免疫刺激性組成物を使用するための方法を提供する。１つの態様において、本発明は、免疫細胞を活性化する方法を提供する。本発明のこの態様に従った方法は、免疫細胞を効果的な量の本発明の組成物とインビトロまたはインビボで接触させて、免疫細胞を活性化するステップを含む。本発明の組成物は、抗原を含んでいてもよい。本明細書において用いられる「免疫細胞」とは、自然免疫応答または適応免疫応答に関与し得るあらゆる骨髄由来細胞を言う。免疫系の細胞には、限定はしないが、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、顆粒球、Ｂリンパ球、形質細胞、Ｔリンパ球、およびその前駆細胞が含まれる。１つの実施形態において、免疫細胞は、ＩＦＮ−αを産生することができる免疫細胞、例えば形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）である。いくつかの実施形態において、免疫細胞はＴＬＲ７発現細胞である。この発明との関連において、本方法は、治療上相当なＩＦＮ−αの産生を誘発するために効果的な量のリポフェクチンを用いた製剤は含まない。１つの実施形態において、免疫細胞は、ポリマーに応答して治療上相当な量のＴＮＦ−αを産生しない。
【０１１４】
本明細書において用いる場合、「効果的な量」という用語は、所望の生物学的効果をもたらすのに必要なまたは十分な物質の量を言う。効果的な量は、単回投与で投与される量であり得るが、それに限定はされない。１つの実施形態において、本発明の組成物は、免疫細胞を活性化するために用いることができ、この活性化は、免疫細胞が、免疫応答と関連している活性化状態になることを誘発することによるものである。免疫細胞の活性化とは、免疫応答の誘発および増強の両方を言う。本明細書において用いる場合、「免疫応答」という用語は、免疫細胞が増殖するか、エフェクター免疫機能を実行するか、または免疫応答に関与する遺伝子産物を産生するための活性化を反映する、自然免疫応答または適応免疫応答のあらゆる態様を言う。免疫応答に関与する遺伝子産物には、分泌生成物（例えば、抗体、サイトカイン、およびケモカイン）、ならびに、免疫機能の特徴である細胞内分子および細胞表面分子（例えば、分化（ＣＤ）抗原の特定の集団、転写因子、および遺伝子転写産物）が含まれる。「免疫応答」という用語は、単一の細胞または細胞集団に対して用いることができる。
【０１１５】
サイトカインの産生は、生物学的応答アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、細胞内蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析、および逆転写酵素／ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を含む、当技術分野において周知のいくつかの方法のいずれかによって評価することができる。１つの実施形態において、免疫応答はＩＦＮ−αの産生を伴う。
【０１１６】
１つの実施形態において、免疫応答は、ＣＤ２５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＣＤ１５４などの免疫細胞活性化の細胞表面マーカーの上方調節を伴う。このようなマーカーの細胞表面発現を測定するための方法は、当技術分野において周知であり、ＦＡＣＳ分析を含む。
【０１１７】
１つの実施形態において、細胞または細胞集団における免疫応答の測定では、細胞または細胞集団はＴＬＲ７を発現する。細胞はＴＬＲを天然に発現し得るか、またはＴＬＲについての適切な発現ベクターを細胞内に導入することにより、ＴＬＲを発現するように操作され得る。１つの実施形態において、細胞または細胞集団は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）として得られる。１つの実施形態において、細胞または細胞集団は、ＴＬＲを発現する細胞系として得られる。１つの実施形態において、細胞または細胞集団は、ＴＬＲを発現する一時的な形質転換体として得られる。１つの実施形態において、細胞または細胞集団は、ＴＬＲを発現する安定な形質転換体として得られる。
【０１１８】
また、細胞または細胞集団における免疫応答の測定において用いるために、ＴＬＲによる細胞内シグナル伝達に応答性のレポーター構築物を細胞または細胞集団内に導入すると都合が良い場合がある。１つの実施形態において、このようなレポーターは、ＮＦ−κＢプロモーターの制御下に置かれた遺伝子である。１つの実施形態において、プロモーターの制御下に置かれた遺伝子はルシフェラーゼである。活性化の適切な条件下において、ルシフェラーゼレポーター構築物は発現しており、ルミノメーターを用いて定量的に測定することができる検出可能な光シグナルを発する。このようなレポーター構築物および他の適切なレポーター構築物は市販されている。
【０１１９】
本発明はまた、ＴＬＲの活性化を検出する、細胞を用いない方法の使用を包含する。
【０１２０】
特定の態様における本発明は、治療において用いるための組成物および方法に関するものである。本発明の免疫刺激性組成物は、単独で、または他の治療用作用物質と組み合わせて用いることができる。免疫刺激性組成物および他の治療用作用物質は、同時にまたは連続的に投与することができる。本発明の免疫刺激性組成物および他の治療用作用物質が同時に投与される場合、それらは同一のまたは別の製剤において投与され得るが、それらは同時に投与される。さらに、本発明の免疫刺激性組成物および他の治療用作用物質が同時に投与される場合、それらは同一のまたは別の投与経路を介して投与され得るが、それらは同時に投与される。本発明の免疫刺激性組成物の投与が他の治療用作用物質の投与と時間的に分かれている場合、本発明の免疫刺激性組成物および他の治療用作用物質は連続的に投与される。これらの化合物の投与の間の時間差は数分間であり得るか、またはさらに長い場合もある。１つの実施形態において、本発明の免疫刺激性組成物は、他の治療用作用物質の投与の前に投与される。１つの実施形態において、本発明の免疫刺激性組成物は、他の治療用作用物質の投与の後に投与される。さらに、本発明の免疫刺激性組成物および他の治療用作用物質が連続的に投与される場合、それらは同一のまたは別の投与経路を介して投与され得る。他の治療用作用物質には、限定はしないが、アジュバント、抗原、ワクチン、ならびに、感染、癌、アレルギー、および喘息の治療に有用な薬剤が含まれる。
【０１２１】
１つの態様において、本発明は、対象にワクチン接種する方法を提供する。本発明のこの態様に従った方法は、対象に抗原および本発明の組成物を投与するステップを含む。１つの実施形態において、抗原の投与には、抗原をコードする核酸の投与が含まれる。
【０１２２】
本明細書において用いられる「対象」とは、脊椎動物を言う。様々な実施形態において、対象は、ヒト、ヒト以外の霊長類動物、または他の哺乳動物である。特定の実施形態において、対象は、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、またはウマである。
【０１２３】
対象へのワクチン接種のための使用では、１つの実施形態における本発明の組成物は抗原を含む。抗原は本発明のポリマーから分離し得るか、またはこのポリマーに共有結合し得る。１つの実施形態において、本発明の組成物はそれ自体、抗原を含まない。この実施形態において、抗原は、本発明の組成物とは分離して、または本発明の組成物と共に、対象に投与され得る。分離した投与には、時間的な分離、位置もしくは投与経路における分離、または時間と位置もしくは投与経路との両方における分離が含まれる。本発明の組成物および抗原が時間的に分離して投与される場合、抗原は本発明の組成物の前または後に投与され得る。１つの実施形態において、抗原は、本発明の組成物の投与の４８時間から４週間後に投与される。本方法はまた、抗原および組成物の初回投与の後に、抗原のみ、組成物のみ、または抗原および組成物を１回または複数回追加投与することを包含する。
【０１２４】
また、本発明の組成物を対象に投与することにより、対象が未知の抗原に今後遭遇するための準備をすることができるということも、本発明に包含されるものであり、この組成物は抗原を含まない。この実施形態に従って、対象の免疫系は、例えば環境的なまたは職業上の曝露により対象が後に遭遇する抗原に対するさらに強力な応答を備えるように準備される。このような方法は、例えば、微生物の作用物質に晒されると考えられる旅行者、医療従事者、および兵士に用いることができる。
【０１２５】
１つの態様において、本発明は、感染を有する対象を治療する方法を提供する。本発明のこの態様に従った方法は、感染を有する対象に、効果的な量の本発明の組成物および感染治療薬を投与して、対象を治療するステップを含む。
【０１２６】
１つの態様において、本発明は、対象における感染を治療するための薬剤を調製するための、本発明の免疫刺激性ポリマーの使用を提供する。１つの態様において、本発明は、感染の治療に有用な組成物を提供する。この態様に従った組成物は、本発明の免疫刺激性ポリマーおよび感染治療薬を含む。
【０１２７】
本明細書において用いる場合、疾患または症状を有する対象に関して用いられる「治療する」という用語は、対象における疾患または症状の少なくとも１つの兆候または症候を予防するか、改善するか、または除去することを意味する。
【０１２８】
感染性疾患を有する対象は、感染性微生物による表面的な、局所的な、または全身性の、対象への侵入により生じる障害を有する対象である。感染性微生物は、上記のようなウイルス、細菌、真菌、または寄生体であり得る。
【０１２９】
感染治療薬には、限定はしないが、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および抗寄生体剤が含まれる。「抗感染剤」、「抗生物質」、「抗細菌剤」、「抗ウイルス剤」、「抗真菌剤」、「抗寄生体剤」、および「寄生体駆除剤」という用語は、当業者に意味が良く知られているものであり、標準的な医学書において定義されている。簡潔に述べると、抗細菌剤は細菌を殺すかまたは阻害し、抗生物質および類似の機能を有する他の合成または天然の化合物を含む。抗ウイルス剤は、天然源から単離され得るかまたは合成され得、ウイルスを殺すかまたは阻害するために有用である。抗真菌剤は、表在性の真菌感染ならびに真菌の日和見感染および全身性の一次感染を治療するために有用である。抗寄生体剤は、寄生体を殺すかまたは阻害する。多くの抗生物質は、微生物などの細胞によって二次代謝物として産生される低分子量の分子である。通常は、抗生物質は、微生物に特異的で宿主細胞内には存在しない１つまたは複数の機能または構造に干渉する。
【０１３０】
抗感染療法の問題の１つは、抗感染性作用物質で治療された宿主において生じる副作用である。例えば、多くの抗感染性作用物質は、広範囲の微生物を殺すかまたは阻害し得、特定のタイプの種に特異的ではない。これらのタイプの抗感染性作用物質で治療すると、宿主内に生存している正常な微生物叢が感染性微生物と共に死滅する。微生物叢は感染性病原体と競合し、この病原体に対する防壁として機能するため、微生物叢の損失により疾患の合併症が生じ得、宿主が他の病原体に感染しやすくなり得る。他の副作用が、宿主の非微生物細胞または組織に対するこれらの化学物質の特異的なまたは非特異的な効果の結果生じ得る。
【０１３１】
抗感染物質の広範な使用の別の問題は、微生物の抗生物質耐性株の出現である。既に、バンコマイシン耐性のエンテロコッカス（ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）株、ペニシリン耐性の肺炎球菌（ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｉ）株、多剤耐性のスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）株、および多剤耐性のツベルクローシス（ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）株が出現しており、主要な臨床上の問題となっている。抗感染物質の広範な使用は、細菌の多くの抗生物質耐性株を生じさせると考えられる。その結果、これらの微生物に対抗するための新たな抗感染戦略が必要となる。
【０１３２】
広範囲の細菌を殺すかまたは阻害するために効果的な抗細菌抗生物質は、広域抗生物質と呼ばれる。他のタイプの抗細菌抗生物質は、グラム陽性またはグラム陰性のクラスの細菌に対して主に効果的である。これらのタイプの抗生物質は、狭域抗生物質と呼ばれる。単一の生物または疾患に対して効果的であり、他のタイプの細菌に対しては効果的ではない他の抗生物質は、限定域抗生物質と呼ばれる。
【０１３３】
抗細菌剤は、それらの作用の主な様式に基づいて分類されることがある。通常は、抗細菌剤は、細胞壁合成阻害剤、細胞膜阻害剤、タンパク質合成阻害剤、核酸合成または核酸機能阻害剤、および競合的阻害剤である。細胞壁合成阻害剤は、細胞壁の合成のプロセスにおけるステップを阻害し、通常は、細菌のペプチドグリカンの合成におけるステップを阻害する。細胞壁合成阻害剤には、β−ラクタム抗生物質、天然ペニシリン、半合成ペニシリン、アンピシリン、クラブラン酸、セファロルスポリン、およびバシトラシンが含まれる。
【０１３４】
β−ラクタムは、ペプチドグリカン合成の最後のステップを阻害する４員のβ−ラクタム環を含む抗生物質である。β−ラクタム抗生物質は、合成することができるかまたは天然であり得る。ペニシリウム（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）により産生されるβ−ラクタム抗生物質は、ペニシリンＧまたはペニシリンＶなどの天然ペニシリンである。これらは、ペニシリウム・クリソゲナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ）の発酵によって産生される。天然のペニシリンは狭い範囲の活性を有し、通常は、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、淋菌（Ｇｏｎｏｃｏｃｃｕｓ）、およびブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）に対して効果的である。グラム陽性細菌に対しても効果的である他のタイプの天然ペニシリンには、ペニシリンＦ、Ｘ、Ｋ、およびＯが含まれる。
【０１３５】
半合成ペニシリンは、通常、カビにより産生される６−アミノペニシラン酸分子の修飾型である。６−アミノペニシラン酸は、側鎖の付加により修飾され得、それにより天然のペニシリンよりも広域な活性または様々な他の有利な特性を有するペニシリンが産生される。いくつかのタイプの半合成ペニシリンは、グラム陽性細菌およびグラム陰性細菌に対して広域であるが、ペニシリナーゼによって不活性化される。これらの半合成ペニシリンには、アンピシリン、カルベニシリン、オキサシリン、アズロシリン、メズロシリン、およびピペラシリンが含まれる。他のタイプの半合成ペニシリンはグラム陽性細菌に対して狭い活性を有するが、ペニシリナーゼにより不活性化されないという特性を獲得している。これらには、例えば、メチシリン、ジクロキサシリン、およびナフシリンが含まれる。広域な半合成ペニシリンのいくつかを、クラブラン酸およびスルバクタムなどのβ−ラクタマーゼ阻害剤と組み合わせて用いることができる。β−ラクタマーゼ阻害剤は抗微生物作用を有さないが、それらはペニシリナーゼを阻害するように機能し、したがって半合成ペニシリンを分解から保護する。
【０１３６】
別のタイプのβ−ラクタム抗生物質はセファロスポリンである。それらは、細菌のβ−ラクタマーゼによる分解に対して感受性を有し、したがって、単独では常に効果的であるわけではない。しかし、セファロスポリンはペニシリナーゼに対して耐性である。それらは様々なグラム陽性細菌およびグラム陰性細菌に対して効果的である。セファロスポリンには、限定はしないが、セファロチン、セファピリン、セファレキシン、セファマンドール、セファクロル、セファゾリン、セフロキシン、セフォキシチン、セフォタキシム、セフスロジン、セフェタメト、セフィキシム、セフトリアキソン、セフォペラゾン、セフタジジン、およびモキサラクタムが含まれる。
【０１３７】
バシトラシンは、膜の外側にムロペプチドサブユニットを送達する分子からのムロペプチドサブユニットまたはペプチドグリカンの放出を阻害することにより細胞壁の合成を阻害する、別のクラスの抗生物質である。バシトラシンはグラム陽性細菌に対して効果的であるが、それは毒性が強いため、その使用は通常、局部投与に限られる。
【０１３８】
カルバペネムは、細胞壁の合成を阻害することが可能な、別の広域β−ラクタム抗生物質である。カルバペネムの例には、限定はしないが、イミペネムが含まれる。モノバクタムもまた、広域β−ラクタム抗生物質であり、エズトレオナムを含む。ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）により産生される抗生物質であるバンコマイシンもまた、細胞膜の合成を阻害することにより、グラム陽性細菌に対して効果的である。
【０１３９】
別のクラスの抗細菌剤は、細胞膜阻害剤である抗細菌剤である。これらの化合物は、細菌膜の構造を破壊するかまたは機能を阻害する。細胞膜阻害剤である抗細菌剤の１つの問題は、細菌および真核細胞の膜におけるリン脂質が類似しているため、この抗細菌剤が細菌と同様に真核細胞においても効果を発揮し得ることである。したがって、これらの化合物は、全身的に用いることを可能にするために十分に特異的であることは稀であり、局所投与での高用量の使用を妨げるものである。
【０１４０】
１つの臨床的に有用な細胞膜阻害剤はポリミキシンである。ポリミシンは、膜のリン脂質に結合することにより、膜の機能に干渉する。ポリミキシンは主にグラム陰性細菌に対して効果的であり、通常、重度のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）感染、または毒性の低い抗生物質に対して耐性であるシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）感染において用いられる。この化合物の全身投与に関連する重度の副作用には、腎臓および他の器官に対するダメージが含まれる。
【０１４１】
他の細胞膜阻害剤には、全身性の真菌感染およびカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）酵母の感染の治療において主に用いられる抗真菌剤であるアムホテリシンＢおよびナイスタチンが含まれる。イミダゾールは、細胞膜阻害剤である別のクラスの抗生物質である。イミダゾールは、抗細菌剤および抗真菌剤として用いられ、例えば、酵母感染、皮膚糸状菌感染、および全身性の真菌感染の治療に用いられる。イミダゾールには、限定はしないが、クロトリマゾール、ミコナゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾール、およびフルコナゾールが含まれる。
【０１４２】
多くの抗細菌剤はタンパク質合成阻害剤である。これらの化合物は、細菌が構造タンパク質および酵素を合成することを妨げ、それにより細菌細胞の成長もしくは機能の阻害、または細胞死をもたらす。通常は、これらの化合物は、転写または翻訳のプロセスに干渉する。転写を遮断する抗細菌剤には、限定はしないが、リファンピシンおよびエタンブトールが含まれる。ＲＮＡポリメラーゼ酵素を阻害するリファンピシンは、広域な活性を有し、グラム陽性細菌およびグラム陰性細菌ならびにマイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に対して効果的である。エタンブトールは、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に対して効果的である。
【０１４３】
翻訳を遮断する抗細菌剤は、細菌のリボソームに干渉して、ｍＲＮＡがタンパク質に翻訳されるのを妨げる。通常は、このクラスの化合物には、限定はしないが、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、マクロライド（例えばエリスロマイシン）、およびアミノグリコシド（例えばストレプトマイシン）が含まれる。
【０１４４】
アミノグリコシドは、例えばストレプトマイシン、カナマイシン、トブラマイシン、アミカシン、およびゲンタマイシンなどの、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）細菌によって産生される、あるクラスの抗生物質である。アミノグリコシドは、グラム陽性細菌およびグラム陰性細菌によって生じる多種多様の細菌感染に対して用いられている。ストレプトマイシンは、ツベルクローシス（ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）の治療において第一次薬として広く用いられている。ゲンタマイシンは、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）感染を含むグラム陽性細菌およびグラム陰性細菌の多くの株に対して、とりわけトブラマイシンと組み合わせて用いられる。カナマイシンは、ペニシリン耐性のブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）を含む多くのグラム陽性細菌に対して用いられる。アミノグリコシドの、それらの臨床的な使用を制限している１つの副作用は、有効性に必須の用量では、長期の使用により腎臓の機能が損なわれ、聴神経へのダメージが生じて難聴となることが示されていることである。
【０１４５】
別のタイプの翻訳阻害剤である抗細菌剤はテトラサイクリンである。テトラサイクリンは、広域であり様々なグラム陽性細菌およびグラム陰性細菌に対して効果的である、あるクラスの抗生物質である。テトラサイクリンの例には、テトラサイクリン、ミノサイクリン、ドキシサイクリン、およびクロルテトラサイクリンが含まれる。それらは、多くのタイプの細菌の治療に重要であるが、ライム病の治療においてとりわけ重要である。テトラサイクリンは毒性が低く、直接的な副作用が最小であるため、それは医学界によって過剰使用および誤使用されており、問題が生じている。例えば、その過剰使用により、耐性が広く発生している。
【０１４６】
マクロライドなどの抗細菌剤は５０Ｓリボソームサブユニットに可逆的に結合し、ペプチジルトランスフェラーゼによりタンパク質の伸長を阻害するか、もしくは細菌のリボソームからの、チャージしていないｔＲＮＡの放出を妨げるか、またはその両方である。これらの化合物には、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、クラリスロマイシン、オレアンドマイシン、およびアジスロマイシンが含まれる。エリスロマイシンは、ほとんどのグラム陽性細菌、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、およびヘモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）に対して活性であるが、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）に対しては活性ではない。タンパク質合成の際のペプチド結合の形成を遮断するリンコマイシンおよびクリンダマイシンは、グラム陽性細菌に対して用いられる。
【０１４７】
別のタイプの翻訳阻害剤はクロラムフェニコールである。クロラムフェニコールは、７０Ｓリボソームを結合して細菌酵素のペプチジルトランスフェラーゼを阻害し、それによりタンパク質合成の際のポリペプチド鎖の成長を妨げる。クロラムフェニコールに関連する１つの深刻な副作用は、不良性貧血である。不良性貧血は、少ない割合（１／５００００）の患者における細菌の治療に効果的なクロラムフェニコールの用量で生じる。一時は多く処方された抗生物質であるクロラムフェニコールは、貧血による死亡の結果、現在では滅多に使用されない。その有効性のため、クロラムフェニコールは生命に関わる状況（例えば腸チフス）において依然として用いられている。
【０１４８】
いくつかの抗細菌剤は核酸の合成または機能を混乱させ、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡに結合してそれらの情報が読み取られ得ないようにする。これらには、限定はしないが、共に合成化学物質であるキノロンおよびコトリモキサゾール、ならびに天然または半合成の化学物質であるリファマイシンが含まれる。キノロンは、細菌がそれらの環状ＤＮＡを産生するために必要な酵素であるＤＮＡジャイレースを阻害することにより、細菌ＤＮＡの複製を遮断する。それらは広域であり、例には、ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、ナリジクス酸、およびテマフロキサシンが含まれる。ナリジクス酸は、ＤＮＡ複製に必須のＤＮＡジャイレース酵素（トポイソメラーゼ）に結合し、超らせんを解いて再形成し、ＤＮＡジャイレースの活性を阻害する、殺菌剤である。ナリジクス酸の主な使用は、下部尿路感染症（ＵＴＩ）の治療におけるものであり、それは、ナリジクス酸が、ＵＴＩの一般的な原因である大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、エンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎桿菌（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、およびプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）種などのいくつかのタイプのグラム陰性細菌に対して効果的であるためである。コトリモキサゾールは、ＤＮＡヌクレオチドを作るために必要な葉酸の細菌による合成を遮断する、スルファメトキサゾールおよびトリメトプリムの組合せである。リファンピシンは、グラム陽性細菌（マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、およびナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）により生じる髄膜炎を含む）ならびにいくつかのグラム陰性細菌に対して活性なリファマイシンの誘導体である。リファンピシンはポリメラーゼのβ−サブユニットに結合し、ポリメラーゼの活性化に必要な最初のヌクレオチドの付加を遮断し、それによりｍＲＮＡの合成を遮断する。
【０１４９】
別のクラスの抗細菌剤は、細菌酵素の競合的阻害剤として機能する化合物である。競合的阻害剤は、ほとんど全ての構造が細菌の成長因子に類似しており、結合について競合するが、細胞において代謝機能は示さない。これらの化合物には、スルホンアミド、およびさらに強く広範な抗細菌活性を有する、化学的に修飾された形態のスルファニルアミドが含まれる。スルホンアミド（例えば、ガントリシンおよびトリメトプリム）は、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、β溶血連鎖球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）、および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の治療に有用であり、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）により生じる単純性尿路感染症（ＵＴＩ）の治療および髄膜炎菌性髄膜炎の治療において用いられている。
【０１５０】
抗ウイルス剤は、ウイルスによる細胞の感染または細胞内のウイルスの複製を妨げる化合物である。ウイルス複製のプロセスが宿主細胞内でのＤＮＡ複製に緊密に関連しているために、非特異的な抗ウイルス剤は宿主に対して有毒であることが多いため、抗細菌薬よりも少ない抗ウイルス薬が多く存在する。ウイルス感染のプロセスにはいくつかの段階が存在し、これは抗ウイルス剤によって遮断または阻害することができる。これらの段階には、宿主細胞へのウイルスの付着（免疫グロブリンまたは結合ペプチド）、ウイルスの脱殻（例えばアマンタジン）、ウイルスｍＲＮＡの合成または翻訳（例えばインターフェロン）、ウイルスＲＮＡまたはＤＮＡの複製（例えばヌクレオシド類似体）、新たなウイルスタンパク質の成熟（例えばプロテアーゼ阻害剤）、ならびにウイルスの出芽および放出が含まれる。
【０１５１】
抗ウイルス剤の別のカテゴリーは、ヌクレオシド類似体である。ヌクレオシド類似体は、ヌクレオシドに類似の合成化合物であるが、それは不完全なまたは異常なデオキシリボース基またはリボース基を有する。ヌクレオシド類似体が細胞内にあると、それらはリン酸化して三リン酸形態を生じさせ、この三リン酸形態は、ウイルスＤＮＡまたはＲＮＡ内への正常なヌクレオチドの組み込みに競合する。ヌクレオシド類似体の三リン酸形態が、成長している核酸鎖内に組み込まれると、ウイルスポリメラーゼとの不可逆的な関連が生じ、それにより連鎖が停止する。ヌクレオシド類似体には、限定はしないが、アシクロビル（単純ヘルペスウイルスおよび水痘帯状疱疹ウイルスの治療に用いられる）、ガンシクロビル（サイトメガロウイルスの治療に有用である）、イドクスウリジン、リバビリン（呼吸器合胞体ウイルスの治療に有用である）、ジデオキシイノシン、ジデオキシシチジン、ならびにジドブジン（アジドチミジン）が含まれる。
【０１５２】
別のクラスの抗ウイルス剤には、インターフェロンなどのサイトカインが含まれる。インターフェロンは、ウイルス感染した細胞および免疫細胞により分泌されるサイトカインである。インターフェロンは、感染細胞に隣接した細胞上の特異的受容体に結合することにより機能し、細胞を変化させて、その変化により、ウイルスによる感染から細胞を保護する。α−インターフェロンおよびβ−インターフェロンもまた、感染細胞の表面上でのクラスＩおよびクラスＩＩ  ＭＨＣ分子の発現を誘発し、それにより、宿主の免疫細胞認識のための抗原提示を増大させる。α−インターフェロンおよびβ−インターフェロンは、組換え形態として利用可能であり、慢性Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎の感染の治療に用いられている。抗ウイルス療法に効果的な用量で、インターフェロンは、熱、倦怠感、および体重減少などの重度の副作用を有する。
【０１５３】
免疫グロブリン療法は、ウイルス感染の予防に用いられる。ウイルス感染に対する免疫グロブリン療法は細菌感染とは異なり、それは、免疫グロブリン療法が、抗原特異的であるというよりもむしろ、細胞外ビリオンに結合して、ウイルス感染に感受性を有する細胞へのそのビリオンの付着およびその細胞内への進入を妨げることにより機能するためである。この治療法は、抗体が宿主内に存在している期間にわたりウイルス感染を予防するために有用である。通常、通常の免疫グロブリン療法および高力価免疫グロブリン療法という２つのタイプの免疫グロブリン療法が存在する。通常の免疫グロブリン療法は、正常な血液ドナーの血清から調製されプールされている抗体生成物を用いる。このプールされた生成物は、Ａ型肝炎、パルボウイルス、エンテロウイルス（とりわけ新生児における）などの広範なヒトウイルスに対する低力価の抗体を含む。高力価免疫グロブリン療法は、特定のウイルスに対する高力価の抗体を有する個体の血清から調製される抗体を用いる。これらの抗体はその後、特定のウイルスに対して用いられる。高力価免疫グロブリンの例には、帯状疱疹免疫グロブリン（免疫不全の子供および新生児における水痘の予防に有用である）、ヒト狂犬病免疫グロブリン（狂犬病の動物に噛まれた対象の曝露後の予防において有用である）、Ｂ型肝炎免疫グロブリン（Ｂ型肝炎ウイルス、とりわけウイルスに晒された対象におけるＢ型肝炎ウイルスの予防において有用である）、ならびにＲＳＶ免疫グロブリン（呼吸器合胞体ウイルス感染の治療において有用である）が含まれる。
【０１５４】
抗真菌剤は、感染性真菌の治療および予防に有用である。抗真菌剤は、それらの作用メカニズムによって分離されることがある。いくつかの抗真菌剤は、グルコース合成酵素を阻害することにより、細胞壁阻害剤として機能する。これらには、限定はしないが、バシウンギン／ＥＣＢが含まれる。他の抗真菌剤は、膜の完全性を不安定化させることにより機能する。これらには、限定はしないが、クロトリマゾール、セルタコンゾール、フルコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、およびボリコナゾールなどのイミダゾール、ならびにＦＫ４６３、アムホテリシンＢ、ＢＡＹ３８−９５０２、ＭＫ９９１、プラジマイシン、ＵＫ２９２、ブテナフィン、およびテルビナフィンが含まれる。他の抗真菌剤は、キチンの破壊（例えばキチナーゼ）または免疫抑制（５０１クリーム）によって機能する。
【０１５５】
寄生体駆除剤は、直接的に寄生体を死滅させる作用物質である。このような化合物は、当技術分野において知られており、一般に市販されている。ヒトへの投与に有用な寄生体駆除剤の例には、限定はしないが、アルベンダゾール、アムホテリシンＢ、ベンズニダゾール、ビチオノール、クロロキンＨＣｌ、リン酸クロロキン、クリンダマイシン、デヒドロエメチン、ジエチルカルバマジン、フロ酸ジロキサニド、エフロルニチン、フラゾリダオン、糖質コルチコイド、ハロファントリン、ヨードキノール、イベルメクチン、メベンダゾール、メフロキン、アンチモン酸メグルミン、メラルソプロール、メトリフォネート、メトロニダゾール、ニクロサミド、ニフルチモックス、オキサムニキン、パロモマイシン、イセチオン酸ペンタミジン、ピペラジン、プラジカンテル、リン酸プリマキン、プログアニル、パモ酸ピランテル、ピリメタンミンスルホンアミド、ピリメタンミンスルファドキシン、キナクリンＨＣｌ、硫酸キニーネ、グルコン酸キニジン、スピラマイシン、スチボグルコン酸ナトリウム（アンチモニル酒石酸ナトリウム）、スラミン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、チアベンダゾール、チニダゾール、トリメトロプリム・スルファメトキサゾール、およびトリパルサミドが含まれる。
【０１５６】
ポリマーもまた、対象におけるＴｈ２様免疫応答を抑制するために有用である。Ｔｈ２型の免疫応答は、Ｔｈ２サイトカインであるＩＬ−４およびＩＬ−５、ならびにＩｇＥへの抗体アイソタイプスイッチを少なくとも部分的に特徴とする。したがって、Ｔｈ２様応答の抑制とは、Ｔｈ２サイトカインの産生と他のＴｈ２効果との低減を言う。ポリマーはまた、Ｔｈ１様免疫応答を誘発するためにも用いることができる。Ｔｈ１およびＴｈ２免疫応答は相互に逆調節性であり、そのため、免疫応答がＴｈ１型の免疫応答に偏ることにより、Ｔｈ２型の免疫応答を予防または改善することができる。
【０１５７】
ポリマーは、自己免疫疾患の治療および予防に用いることができる。自己免疫疾患は、対象自身の抗体が宿主組織と反応し、またはその組織において免疫エフェクターＴ細胞が内因性の自己ペプチドに対して自己免疫性であり組織を破壊する、あるクラスの疾患である。したがって、免疫応答は、自己抗原と呼ばれる対象自身の抗原に対して備わる。自己免疫疾患には、限定はしないが、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、全身性エリトマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性脳脊髄炎、重症筋無力症（ＭＧ）、橋本甲状腺炎、グッドパスチャー症候群、天庖瘡（例えば、尋常性天庖瘡）、バセドウ病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、抗コラーゲン抗体での強皮症、混合性結合組織疾患、多発性筋炎、悪性貧血、突発性アジソン病、自己免疫が関連する不妊、糸球体腎炎（例えば、半月体形成性糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎）、水疱性類天疱瘡、シェーグレン症候群、インスリン耐性、および自己免疫性糖尿病が含まれる。
【０１５８】
自己抗原とは、正常な宿主組織の抗原を言う。正常な宿主組織は癌細胞を含まない。したがって、自己免疫疾患との関連における、自己抗原に対して備わる免疫応答は、望ましくない免疫応答であり、正常な組織の破壊およびダメージの原因となるが、癌抗原に対して備わる免疫応答は望ましい免疫応答であり、腫瘍または癌の破壊に寄与する。したがって、自己免疫障害の治療を目的とする本発明のいくつかの態様において、ポリマーを自己抗原、特に自己免疫障害の標的である自己抗原と共に投与することは推奨されない。
【０１５９】
他の場合において、ポリマーは、低用量の自己抗原と共に送達され得る。多くの動物研究により、低用量の抗原を粘膜投与すると免疫低応答性または「免疫寛容」の状態となり得ることが示されている。活性なメカニズムは、Ｔｈ１から離れて主にＴｈ２およびＴｈ３（すなわち、ＴＧＦ−β支配型の）応答に偏ったサイトカイン介在性免疫であると考えられる。低用量の抗原送達を用いた活性な抑制はまた、自己免疫疾患、例えばリウマチ性関節炎およびＳＬＥの治療において非常に興味深い、関連のない免疫応答を抑制し得る（バイスタンダー抑制）。バイスタンダー抑制は、局所的な環境におけるＴｈ１逆調節性の抑制サイトカインの分泌を伴い、この環境において、炎症性サイトカインおよびＴｈ１サイトカインが抗原特異的または抗原非特異的な様式で放出される。本明細書において用いられる「免疫寛容」は、この現象を言うために用いられる。実際、経口免疫寛容は、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、実験的自己免疫性重症筋無力症、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）、およびインスリン依存性糖尿病を含む、動物における多くの自己免疫疾患の治療において効果的である。これらのモデルにおいて、自己免疫疾患の予防および抑制は、抗原特異的な液性応答および細胞性応答の、Ｔｈ１応答からＴｈ２／Ｔｈ３応答への変換と関連している。
【０１６０】
本発明の組成物および方法は、単独で、または癌の治療に有用な他の作用物質および方法と組み合わせて用いることができる。１つの態様において、本発明は、癌を有する対象を治療する方法を提供する。本発明のこの態様に従った方法は、癌を有する対象に、効果的な量の本発明の組成物を投与して、対象を治療するステップを含む。
【０１６１】
１つの態様において、本発明は、癌を有する対象を治療する方法を提供する。本発明のこの態様に従った方法は、癌を有する対象に、効果的な量の本発明の組成物を投与し、かつ抗癌療法を施して、対象を治療するステップを含む。
【０１６２】
１つの態様において、本発明は、対象における癌を治療するための薬剤を調製するための、本発明の免疫刺激性ポリマーの使用を提供する。
【０１６３】
１つの態様において、本発明は、癌の治療に有用な組成物を提供する。この態様に従った組成物は、本発明の免疫刺激性ポリマーおよび癌治療薬を含む。
【０１６４】
癌を有する対象は、検出可能な癌細胞を有する対象である。癌は、悪性または非悪性の癌であり得る。本明細書において用いる「癌」とは、身体の器官および系統の正常な機能に干渉する、細胞の制御されていない成長を言う。それらの元の位置から移動し重要な器官に播種する癌は、最終的には、罹患した器官の機能低下を介して対象の死をもたらし得る。白血病などの造血性の癌は、対象における正常な造血区画を崩壊させ得、それにより、造血不全（貧血、血小板減少症、および好中球減少症の形で）をもたらし、最終的には死をもたらす。
【０１６５】
転移は、原発性腫瘍から身体の他の部分へ癌細胞が播種されることにより生じる、原発性腫瘍の位置とは異なる癌細胞の領域である。原発性腫瘍塊の診断の際、対象は転移の存在について監視され得る。転移は、ほとんどの場合、特定の症候の監視に加え、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、血液および血小板の計数、肝機能の研究、胸部Ｘ線スキャン、ならびに骨のスキャンを単独でまたは組み合わせて用いて検出される。
【０１６６】
癌には、限定はしないが、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系（ＣＮＳ）の癌、乳癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸および直腸の癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭部および頸部の癌、上皮内新生物、腎臓癌、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞性および非小細胞性）、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、口腔癌（例えば、唇、舌、口、および咽頭）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、泌尿器系の癌、ならびに他の癌腫、腺癌、および肉腫が含まれる。
【０１６７】
本発明の免疫刺激性組成物はまた、抗癌療法と組み合わせて投与することができる。抗癌療法には、癌治療薬、放射線、および外科手術が含まれる。本明細書において用いる場合、「癌治療薬」とは、癌を治療することを目的として対象に投与される作用物質を言う。本明細書において用いる場合、「癌を治療する」とは、癌の発生の予防、癌の症候の低減、および／または認められた癌の成長の阻害を含む。他の態様において、癌治療薬は、癌が発生する危険性を低減させることを目的として、癌が発生する危険性を有する対象に投与される。癌を治療するための様々なタイプの薬剤が本明細書において記載される。この特定を目的として、癌治療薬は、化学療法剤、免疫療法剤、癌ワクチン、ホルモン療法、および生物応答修飾物質として分類される。
【０１６８】
化学療法剤は、メトトレキサート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、糖を含んでいないクロロエチルニトロソウレア、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、フラジリン、メグラミンＧＬＡ、バルルビシン、カルムスタインおよびポリフェルポサン、ＭＭＩ２７０、ＢＡＹ１２−９５６６、ＲＡＳファメシルトランスフェラーゼ阻害剤、ファメシルトランスフェラーゼ阻害剤、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、ＬＹ２６４６１８／ロメテキソール、グラモレク、ＣＩ−９９４、ＴＮＰ−４７０、ハイカムチン／トポテカン、ＰＫＣ４１２、バルスポダール／ＰＳＣ８３３、ノバントロン／ミトロキサントロン、メタレット／スラミン、バチマスタット、Ｅ７０７０、ＢＣＨ−４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ、ＡＧ３３４０、ＡＧ３４３３、インセル／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＺＤ０１０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ６９８、ＴＡ２５１６／マルミスタット、ＢＢ２５１６／マルミスタット、ＣＤＰ８４５、Ｄ２１６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８９５１ｆ、レモナールＤＰ２２０２、ＦＫ３１７、ピシバニール／ＯＫ−４３２、ＡＤ３２／バルルビシン、メタストロン／ストロンチウム誘導体、テモダール／テモゾロミド、エバセット／リポソームドキソルビシン、ヨータキサン／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、キセロード／カペシタビン、フルツロン／ドキシフルリジン、シクロパックス／経口パクリタキセル、経口タキソイド、ＳＰＵ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ１２７５／フラボピリドール、ＣＰ−３５８（７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４）ＲＡＳ癌遺伝子阻害剤、ＢＭＳ−１８２７５１／経口プラチナ、ＵＦＴ（テガフール／ウラシル）、エルガミソール／レバミソール、エニルラシル／７７６Ｃ８５／５ＦＵエンハンサー、カンプト／レバミソール、カンプトサール／イリノテカン、ツモデックス／ラリトレキセド、ロイスタチン／クラドリビン、パクセクス／パクリタキセル、ドキシル／リポソームドキソルビシン、カエリクス／リポソームドキソルビシン、フルダラ／フルダラビン、ファーマルビシン／エピルビシン、ＤｅｐｏＣｙｔ、ＺＤ１８３９、ＬＵ７９５５３／ビスナフタルイミド、ＬＵ１０３７９３／ドラスタイン、カエチクス／リポソームドキソルビシン、ジェムザール／ゲムシタビン、ＺＤ０４７３／アノルメド、ＹＭ１１６、ヨードシード、ＣＤＫ４およびＣＤＫ２阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、Ｄ４８０９／デキシフォサミド、イフェス／メスネクス／イフォサミド、ブモン／テニポシド、パラプラチン／カルボプラチン、プランチノール／シスプラチン、ベペシド／エトポシド、ＺＤ９３３１、タキソテール／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、タキサン類似体、ニトロソウレア、メルフェランおよびシクロホスファミドなどのアルキル化剤、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロロムブシル、シタラビンＨＣＩ、ダクチノマイシン、ダウノルビシンＨＣｌ、リン酸エストラムスチンナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、フロクスウリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルタミド、ヒドロキシウレア（ヒドロキシカルバミド）、イフォスファミド、インターフェロンα−２ａ、α−２ｂ、酢酸ロイプロリド（ＬＨＲＨ放出因子類似体）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミンＨＣｌ（ナイトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メスナ、ミトタン（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、ミトキサントロンＨＣｌ、オクトレオチド、プリカマイシン、プロカルバジンＨＣｌ、ストレプトゾシン、クエン酸タモキシフェン、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザシチジン、エルスロポエチン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロイキン２、ミトグアゾン（メチル−ＧＡＧ、メチルグリオキサルビスグアニルヒドラゾン、ＭＧＢＧ）、ペントスタチン（２’デオキシコホルマイシン）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、テニポシド（ＶＭ−２６）、ならびに硫酸ビンデシンからなる群から選択することができるが、これに限定はされない。
【０１６９】
免疫療法剤は、３６２２Ｗ９４、４Ｂ５、ＡＮＡ  Ａｂ、抗ＦＬＫ−２、抗ＶＥＧＦ、ＡＴＲＡＧＥＮ、ＡＶＡＳＴＩＮ（ベバシズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＢＡＢＳ、ＢＥＣ２、ＢＥＸＸＡＲ（トシツモマブ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、Ｃ２２５、ＣＡＭＰＡＴＨ（アレムツズマブ、Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｒｐ．）、ＣＥＡＣＩＤＥ、ＣＭＡ６７６、ＥＭＤ−７２０００、ＥＲＢＩＴＵＸ（セツキシマブ、ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）、グリオマブ−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（トラスツズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡ、ｉｏｒ  ｃ５、ｉｏｒ  ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ  ｔ６、ＬＤＰ−０３、ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−２６０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、モノファームＣ、ＮｏｖｏＭａｂ−Ｇ２、オンコリム、ＯＶ１０３、オバレックス、パノレックス、プレターゲット、クアドラメット、リブタキシン、ＲＩＴＵＸＡＮ（リツキシマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＳＭＡＲＴ  １Ｄ１０Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ３６４Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５、ＴＮＴ、およびＺＥＮＡＰＡＸ（ダクリズマブ、Ｒｏｃｈｅ）からなる群から選択することができるが、これに限定はされない。
【０１７０】
癌ワクチンは、ＥＧＦ、抗イディオタイプ癌ワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭＫ黒色腫ワクチン、ＭＧＶガングリオシド結合ワクチン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、オバレックス、Ｍ−Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬセラトープ、ＢＬＰ２５（ＭＵＣ−１）、リポソームイディオタイプワクチン、メラシン、ペプチド抗原ワクチン、毒素／抗原ワクチン、ＭＶＡに基づいたワクチン、ＰＡＣＩＳ、ＢＣＧワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ、ＤＩＳＣウイルス、およびＩｍｍｕＣｙｓｔ／ＴｈｅｒａＣｙｓからなる群から選択することができるが、これに限定はされない。
【０１７１】
本発明の組成物および方法は、単独で、またはアレルギーの治療に有用な他の抗原および方法と組み合わせて用いることができる。１つの態様において、本発明は、アレルギー症状を有する対象を治療する方法を提供する。本発明のこの態様に従った方法は、アレルギー症状を有する対象に、効果的な量の本発明の組成物を投与して、対象を治療するステップを含む。
【０１７２】
１つの態様において、本発明は、アレルギー症状を有する対象を治療する方法を提供する。本発明のこの態様に従った方法は、アレルギー症状を有する対象に、効果的な量の本発明の組成物を投与し、かつ抗アレルギー療法を施して、対象を治療するステップを含む。
【０１７３】
１つの態様において、本発明は、対象におけるアレルギー症状を治療するための薬剤を調製するための、本発明の免疫刺激性ポリマーの使用を提供する。
【０１７４】
１つの態様において、本発明は、アレルギー症状の治療に有用な組成物を提供する。この態様に従った組成物は、本発明の免疫刺激性ポリマーおよびアレルギー治療薬を含む。
【０１７５】
「アレルギー症状を有する対象」とは、アレルゲンに応答したアレルギー反応を現在有しているかまたは以前に有していた対象を言う。「アレルギー症状」または「アレルギー」とは、物質（アレルゲン）に対する後天的な過敏性を言う。アレルギー症状には、限定はしないが、湿疹、アレルギー性鼻炎またはコリーザ、花粉症、アレルギー性結膜炎、気管支喘息、じんましん、および食物アレルギー、アトピー性皮膚炎を含む他のアトピー性症状、アナフィラキシー、薬物アレルギー、ならびに血管性浮腫が含まれる。
【０１７６】
アレルギーは典型的には、アレルゲンに対する、特定のクラスの免疫グロブリンであるＩｇＥからの抗体の産生と関連する、一過性の症状である。一般的な空気アレルゲンに対するＩｇＥ介在性の応答の発生はまた、喘息の発生に対する傾向を示す因子である。アレルゲンが、好塩基球（血液内を循環している）または肥満細胞（固形組織全体に分散している）の表面上のＩｇＥ  Ｆｃ受容体（ＦｃεＲ）に結合している特定のＩｇＥに出会うと、細胞は活性化し、その結果、ヒスタミン、セロトニン、および脂質メディエーターなどのメディエーターが産生および放出される。
【０１７７】
アレルギー反応は、ＩｇＥ型の組織感作免疫グロブリンが異物のアレルゲンと反応すると生じる。ＩｇＥ抗体は、肥満細胞および／または好塩基球に結合し、これらの特殊化した細胞は、抗体分子の末端を架橋するアレルゲンによって、アレルギー反応の化学メディエーター（血管作動性アミン）を放出するように刺激されると、そのような放出を行う。ヒスタミン、血小板活性化因子、アラキドン酸代謝物、およびセロトニンは、人間におけるアレルギー反応の最も知られているメディエーターの一部である。ヒスタミンおよび他の血管作動性アミンは、通常は肥満細胞および好塩基性リンパ球の中に貯蔵されている。肥満細胞は動物組織の全体にわたり分散しており、好塩基球は血管系の内部を循環する。これらの細胞は、ＩｇＥの結合を伴う一連の特殊化した事象が生じてヒスタミンの放出を引き起こさない限り、細胞内でヒスタミンを製造および貯蔵する。
【０１７８】
アレルギー反応の症候は、ＩｇＥが抗原と反応する身体内の位置に応じて変化する。反応が気道上皮に沿って生じる場合、症候は通常、くしゃみ、咳、および喘息反応である。食物アレルギーのケースなどのように消化管において相互作用が生じる場合、腹部の痛みおよび下痢が一般的である。例えばアレルギー性の対象がハチに刺された後またはペニシリンを投与された後に生じる、全身性アレルギー反応は、重度であり得、生命に関わることが多い。
【０１７９】
アレルギーは、Ｔｈ２型の免疫応答と関連しており、この応答は、Ｔｈ２サイトカインであるＩＬ−４およびＩＬ−５、ならびにＩｇＥへの抗体アイソタイプスイッチを少なくとも部分的に特徴とする。本発明の免疫刺激性ポリマーは、免疫応答をＴｈ１型の免疫応答に偏らせることが可能であるため、それ自体、アレルギー症状を有する対象を治療するために有用である。それに代わって、またはそれに加えて、本発明の免疫刺激性ポリマーは、アレルギー症状を有する対象を治療するためにアレルゲンと組み合わせて用いることができる。
【０１８０】
本発明の免疫刺激性組成物はまた、抗アレルギー療法と組み合わせて投与することができる。アレルギーを治療または予防するための従来の方法は、アレルギー治療薬または脱感作療法の使用を伴うものである。アレルギーを治療または予防するためのいくつかの開発中の治療法は、抗ＩｇＥ抗体の中和の使用を含む。アレルギー反応の化学メディエーターの効果を遮断する抗ヒスタミンおよび他の薬剤は、アレルギー症候の重症度を調節するのに役立つが、アレルギー反応の予防はせず、その後のアレルギー応答に対する効果を有さない。脱感作療法は、低用量のアレルゲンを、通常は皮下注射によって投与することにより行い、それによりアレルゲンに対するＩｇＧ型の応答を誘発するものである。ＩｇＧ抗体が存在すると、ＩｇＥ抗体の誘発により生じるメディエーターの産生の中和が促進されると考えられている。最初は、対象は、重度の反応の誘発を避けるために非常に低用量のアレルゲンを用いて治療され、用量は徐々に増大する。このタイプの治療法は、アレルギー反応を生じさせる化合物を対象が実際に投与され、重度のアレルギー反応が生じ得るため、危険である。
【０１８１】
アレルギー治療薬には、限定はしないが、抗ヒスタミン、コルチコステロイド、およびプロスタグランジン誘発剤が含まれる。抗ヒスタミンは、肥満細胞または好塩基球により放出されるヒスタミンに拮抗する化合物である。これらの化合物は、当技術分野において周知であり、アレルギーの治療に一般に用いられている。抗ヒスタミンには、限定はしないが、アクリバスチン、アステミゾール、アザタジン、アゼラスチン、ベータタスチン、ブロムフェニラミン、ブクリジン、セチリジン、セチリジン類似体、クロルフェニラミン、クレマスチン、ＣＳ５６０、シプロヘプタジン、デスロラタジン、デクスクロルフェニラミン、エバスチン、エピナスチン、フェキソフェナジン、ＨＳＲ６０９、ヒドロキシジン、レボカバスチン、ロラチジン、メトスコポラミン、ミゾラスチン、ノルアステミゾール、フェニンダミン、プロメタジン、ピリラミン、テルフェナジン、およびトラニラストが含まれる。
【０１８２】
コルチコステロイドには、限定はしないが、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ベクロメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、フルニソリド、フルチカゾンプロピオネート、およびトリアムシノロンが含まれる。デキサメタゾンは抗炎症性作用を有するコルチコステロイドであるが、これは高度に吸収され、効果的な用量で長期にわたる抑制性の副作用を有するため、吸入形態ではアレルギーまたは喘息の治療には通常は用いられない。しかし、デキサメタゾンは、本発明の組成物と組み合わせて投与すると低用量で投与でき、副作用を低減することができるため、アレルギーまたは喘息を治療するために本発明に従って用いることができる。コルチコステロイドの使用に関連する副作用の一部には、咳、発声困難、口腔がこう瘡（カンジダ症）が含まれ、高用量では、副腎抑制、耐糖能異常、骨粗しょう症、無腐性骨壊死、白内障形成、成長抑制、高血圧、筋力低下、皮膚のひ薄化、およびあざのできやすさなどの、全身性の影響が含まれる。ＢａｒｎｅｓおよびＰｅｔｅｒｓｏｎ（１９９３年）Ａｍ  Ｒｅｖ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｄｉｓ  １４８：Ｓ１〜Ｓ２６頁、ならびにＫａｍａｄａ  ＡＫら（１９９６年）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １５３：１７３９〜４８頁を参照されたい。
【０１８３】
本発明の組成物および方法は、単独で、または喘息の治療に有用な他の作用物質および方法と組み合わせて用いることができる。１つの態様において、本発明は、喘息を有する対象を治療する方法を提供する。本発明のこの態様に従った方法は、喘息を有する対象に、効果的な量の本発明の組成物を投与して、対象を治療するステップを含む。１つの態様において、本発明は、喘息を有する対象を治療する方法を提供する。この態様に従った方法は、喘息を有する対象に、効果的な量の本発明の組成物を投与し、かつ抗喘息療法を施して、対象を治療するステップを含む。
【０１８４】
１つの態様において、本発明は、対象における喘息を治療するための薬剤を調製するための、本発明の免疫刺激性ポリマーの使用を提供する。１つの態様において、本発明は、喘息の治療に有用な組成物を提供する。この態様に従った組成物は、本発明の免疫刺激性ポリマーおよび喘息治療薬を含む。
【０１８５】
本明細書において用いる「喘息」とは、気道の炎症および狭窄、ならびに吸入された作用物質に対する気道の反応性の増大を特徴とする、呼吸器系の障害を言う。喘息はしばしば、非排他的ではあるが、アトピー性症状またはアレルギー症状と関連する。喘息の症候には、気流閉塞により生じる、喘鳴、息切れ、胸部圧迫感、および咳の再発性の発作が含まれる。喘息に関連する気道の炎症は、気道上皮の露出、基底膜下でのコラーゲン蓄積、浮腫、肥満細胞の活性化、好中球、好酸球、およびリンパ球を含む炎症性細胞の浸潤などの、多くの生理学的変化の観察によって検出することができる。気道の炎症の結果、喘息の患者は、気道の高応答性、気流の制限、呼吸器の症候、および疾患の慢性化を有することが多い。気流の制限には、気管支閉塞をもたらすことが多い特徴である、急性気管支収縮、気道浮腫、粘液栓の形成、および気道の再構成が含まれる。喘息のいくつかのケースにおいて、副基底膜線維症が生じ得、それにより肺の機能において持続性の異常が生じる。
【０１８６】
過去数年間にわたる調査により、喘息は、炎症性細胞、メディエーター、ならびに気道に固有の他の細胞および組織の間の複雑な相互作用により生じると考えられることが明らかになっている。肥満細胞、好酸球、上皮細胞、マクロファージ、および活性化Ｔ細胞は全て、喘息に関連する炎症プロセスにおいて重要な役割を有する。Ｄｊｕｋａｎｏｖｉｃ  Ｒら（１９９０年）Ａｍ  Ｒｅｖ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｄｉｓ  １４２：４３４〜４５７頁を参照されたい。これらの細胞は、局所的な組織に直接的または間接的に作用し得る、事前に形成されたおよび新たに合成されたメディエーターの分泌を介して、気道の機能に影響し得ると考えられる。Ｔリンパ球の亜集団（Ｔｈ２）が、選択的サイトカインの放出および疾患の慢性化の確立によって、気道におけるアレルギー性炎症の調節において重要な役割を有することも認められている。Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＤＳら（１９９２年）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３２６：２９８〜３０４頁を参照されたい。
【０１８７】
喘息は、発生における異なる段階で生じる複雑な障害であり、症候の程度に基づいて、急性、亜急性、または慢性として分類することができる。急性の炎症性応答は、気道への細胞の初期の動員に関連する。亜急性の炎症性応答は、細胞の動員、およびさらに持続性の炎症パターンを生じさせる固有の細胞の活性化を伴う。慢性の炎症性応答は、永続的な気道の異常をもたらし得る、持続性レベルの細胞ダメージおよび進行中の修復プロセスを特徴とする。「喘息を有する対象」は、気道の炎症および狭窄、ならびに吸入された作用物質に対する気道の反応性の増大を特徴とする、呼吸器系の障害を有する対象である。喘息の開始に関連する因子には、限定はしないが、アレルゲン、低温、運動、ウイルス感染、およびＳＯ２が含まれる。
【０１８８】
上述したように、喘息は、Ｔｈ２サイトカインであるＩＬ−４およびＩＬ−５、ならびにＩｇＥへの抗体アイソタイプスイッチを少なくとも部分的に特徴とする、Ｔｈ２型の免疫応答に関連し得る。Ｔｈ１およびＴｈ２免疫応答は相互に逆調節性であり、そのため、免疫応答がＴｈ１型の免疫応答に偏ることにより、アレルギーを含むＴｈ２型の免疫応答を予防または改善することができる。したがって、本発明の修飾オリゴリボヌクレオチド類似体は、免疫応答をＴｈ１型の免疫応答に偏らせることが可能であるため、それ自体、喘息を有する対象を治療するために有用である。それに代わって、またはそれに加えて、本発明の修飾オリゴリボヌクレオチド類似体は、喘息を有する対象を治療するためにアレルゲンと組み合わせて用いることができる。
【０１８９】
本発明の免疫刺激性組成物はまた、喘息療法と組み合わせて投与することができる。喘息を治療または予防するための従来の方法は、抗アレルギー療法（上述した）、および吸入性作用物質を含む多くの他の作用物質の使用を伴うものである。
【０１９０】
喘息の治療のための薬剤は、通常、急速緩和薬および長期管理薬の２つのカテゴリーに分けられる。喘息の患者は持続性喘息の管理を達成および維持するために、毎日、長期管理薬を接種する。長期管理薬には、コルチコステロイド、クロモグリク酸ナトリウム、およびネドクロミルなどの抗炎症性作用物質、長時間作用性β２−アゴニストおよびメチルキサンチンなどの長期作用性気管支拡張剤、ならびにロイコトリエン修飾物質が含まれる。急速緩和薬には、短期作用性β２アゴニスト、抗コリン作動薬、および全身性コルチコステロイドが含まれる。これらの薬剤のそれぞれに関連する多くの副作用が存在し、単独のまたは組み合わせた薬剤のいずれも、喘息を予防するかまたは完全に治療することができない。
【０１９１】
喘息治療薬には、限定はしないが、ＰＤＥ−４阻害剤、気管支拡張剤／β−２アゴニスト、Ｋ＋チャネルオープナー、ＶＬＡ−４アンタゴニスト、ニューロキンアンタゴニスト、トロンボキサンＡ２（ＴＸＡ２）合成阻害剤、キサンチン、アラキドン酸アンタゴニスト、５リポキシゲナーゼ阻害剤、ＴＸＡ２受容体アンタゴニスト、ＴＸＡ２アンタゴニスト、５−リポックス活性化タンパク質の阻害剤、およびプロテアーゼ阻害剤が含まれる。
【０１９２】
気管支拡張剤／β２アゴニストは、気管支拡張または平滑筋の弛緩を生じさせる、あるクラスの化合物である。気管支拡張剤／β２アゴニストには、限定はしないが、サルメテロール、サルブタモール、アルブテロール、テルブタリン、Ｄ２５２２／ホルモテロール、フェノテロール、ビトルテロール、ピルブエロールメチルキサンチン、およびオルシプレナリンが含まれる。長期作用性β２アゴニストおよび気管支拡張剤は、抗炎症療法に加えて症候の長期の予防のために用いられる化合物である。長期作用性β２アゴニストには、限定はしないが、サルメテロールおよびアルブテロールが含まれる。これらの化合物は、通常はコルチコステロイドと組み合わせて用いられ、通常は、何らかの炎症療法を伴わずに用いられることはない。これらの化合物は、頻脈、骨格筋の震え、低カリウム症、および過剰投与におけるＱＴｃ間隔の延長などの副作用に関連するものである。
【０１９３】
例えばテオフィリンを含む、メチルキサンチンは、症候の長期の管理および予防のために用いられている。これらの化合物は、ホスホジエステラーゼの阻害およびおそらくはアデノシン拮抗作用により生じる気管支拡張を生じさせる。用量依存性の急性毒性は、これらのタイプの化合物で特に問題である。その結果、毒性、および個体ごとの代謝クリアランスの違いにより生じる狭い治療範囲を明らかにするために、通常の血清濃度を監視しなくてはならない。副作用には、頻脈、頻脈性不整脈、吐き気および嘔吐、中枢神経系の刺激、頭痛、発作、吐血、高血糖、ならびに低カリウム症が含まれる。短期作用性β２アゴニストには、限定はしないが、アルブテロール、ビトルテロール、ピルブテロール、およびテルブタリンが含まれる。短期作用性β２アゴニストの投与に関連する副作用の一部には、頻脈、骨格筋の震え、低カリウム症、乳酸の増加、頭痛、および高血糖が含まれる。
【０１９４】
クロモグリク酸ナトリウムおよびネドクロミルは、運動により生じる喘息症候またはアレルゲンにより生じるアレルギー症候を主に予防するための長期管理薬として用いられる。これらの化合物は、塩化物チャネルの機能に干渉することによりアレルゲンに対する初期および後期の反応を遮断すると考えられている。これらはまた、肥満細胞膜を安定化させ、メディエーターの活性化ならびに好イノシン細胞および上皮細胞からのメディエーターの放出を阻害する。通常、４から６週間の投与が、最大の効果を得るために必要である。
【０１９５】
抗コリン作動薬は、通常、急性気管支けいれんを緩和するために用いられる。これらの化合物は、ムスカリン性コリン作動性受容体の競合的阻害により機能すると考えられる。抗コリン作動薬には、限定はしないが、臭化イプラトロピウムが含まれる。これらの化合物は、コリン作動的介在性の気管支けいれんのみを食い止め、抗原に対するいずれの反応も修飾しない。副作用には、口および呼吸器分泌物の渇き、いくつかの個体における喘鳴の増大、ならびに眼に吹きかけられた場合の視界のぼやけが含まれる。
【０１９６】
本発明の免疫刺激性ポリマーはまた、気道の再構成を治療するためにも有用であり得る。気道の再構成は、平滑筋細胞の増殖および／または気道における粘膜下層の肥厚により生じ、最終的には、気流の制限をもたらす気道の狭窄を生じさせる。本発明の免疫刺激性ポリマーは、さらなる再構成を予防し得、場合により、再構成のプロセスにより生じる組織の形成をさらに低減させる。
【０１９７】
本発明の免疫刺激性ポリマーはまた、樹状細胞の生存、分化、活性化、および成熟を改善するために有用である。免疫刺激性オリゴリボヌクレオチドは、樹状細胞の生存、分化、活性化、および成熟を促進する固有の能力を有する。
【０１９８】
本発明の免疫刺激性ポリマーはまた、ナチュラルキラー細胞の溶解活性および抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を増大させる。ＡＤＣＣは、免疫刺激性ポリマーを、癌細胞などの細胞標的に特異的な抗体と組み合わせて用いて行うことができる。免疫刺激性ポリマーが抗体と組み合わされて対象に投与されると、対象の免疫系は、腫瘍細胞を殺すように誘発される。ＡＤＣＣ手順において有用な抗体には、体内の細胞と相互作用する抗体が含まれる。細胞標的に特異的なこのような抗体の多くは、当技術分野において記載されており、多くは市販されている。１つの実施形態において、抗体はＩｇＧ抗体である。
【０１９９】
特定の態様において、本発明は、エピトープの拡大を増強するための方法を提供する。本明細書において用いられる「エピトープの拡大」とは、最初の焦点である、自己タンパク質または異種タンパク質に対するドミナントエピトープ特異的な免疫応答から、そのタンパク質（分子内拡大）または他のタンパク質（分子間拡大）に対するサブドミナントエピトープおよび／または潜在性エピトープへの、エピトープの特異性の多様化を言う。エピトープの拡大により、複数のエピトープ特異的な免疫応答が生じる。
【０２００】
免疫応答は、自己免疫疾患におけるように有害な、またはワクチン接種におけるように有益な、最初の拡大段階と、免疫系をホメオスタシスに戻し、記憶を生じさせる、その後の下方調節段階とからなる。エピトープの拡大は、両方の段階の重要な構成要素であり得る。腫瘍の形成におけるエピトープの拡大の増強は、対象の免疫系による、元の治療プロトコルに応答して免疫系によって最初は認識されなかった、さらなる標的エピトープの決定を可能にし、一方で、腫瘍集団におけるエスケープ変異体の可能性を低減させ、それにより疾患の進行に作用する。
【０２０１】
本発明のオリゴリボヌクレオチドは、癌、ウイルス感染および細菌感染、ならびにアレルギーなどの治療上有利な適応症において、エピトープの拡大を促進するために有用であり得る。１つの実施形態における方法は、抗原を含むワクチンとアジュバントとを対象に投与し、その後、複数のエピトープ特異的な免疫応答を誘発するのに効果的な量の本発明の免疫刺激性ポリマーを対象に少なくとも２回投与するステップを含む。１つの実施形態における方法は、腫瘍抗原を含むワクチンとアジュバントとを対象に投与し、その後、複数のエピトープ特異的な免疫応答を誘発するのに効果的な量の本発明の免疫刺激性ポリマーを対象に少なくとも２回投与するステップを含む。１つの実施形態における方法は、対象における免疫系の抗原への曝露をもたらす治療プロトコルを適用し、その後、本発明の免疫刺激性オリゴリボヌクレオチドを少なくとも２回投与して、複数のエピトープ特異的な免疫応答を誘発すること、すなわちエピトープの拡大を促進することを伴う。様々な実施形態において、治療プロトコルは、手術、放射線、化学療法、他の癌治療薬、ワクチン、または癌ワクチンである。
【０２０２】
治療プロトコルは、その後の免疫刺激性療法に加えて、免疫刺激剤と組み合わせて実施することができる。例えば、治療プロトコルがワクチンである場合、それはアジュバントと組み合わせて投与することができる。ワクチンとアジュバントとの組合せは混合物であり得るか、または別個の投与、すなわち注射（すなわち同一のドレナージ領域）であり得る。投与は同時である必要はない。同時でない注射が用いられる場合、タイミングは、アジュバントの事前の注射と、その後のワクチン製剤の注射を伴い得る。
【０２０３】
治療プロトコルが実施された後、免疫刺激性の単独療法が開始される。投与の、最適化された頻度、期間、および部位は、標的および他の因子に依存するが、例えば、６カ月間から２年間にわたる、１カ月に１回から２カ月に１回の投与であり得る。あるいは、投与は、毎日、１週間に１回、もしくは２週間に１回を基本としたものであり得るか、または投与は、１日、１週間、もしくは１カ月の間に複数回行ってもよい。いくつかの場合において、投与期間は治療の長さに依存し得、例えば、投与期間は１週間後、１カ月後、１年後、または数年後に終わるものであり得る。他の場合には、単独療法は、点滴を用いる場合のように連続的であり得る。免疫刺激剤は、標的に一般的なドレナージ領域に投与することができる。
【０２０４】
治療における使用では、化合物の活性、投与の様式、免疫化の目的（すなわち、予防的か治療的か）、障害の性質および重症度、対象の年齢および体重に応じて、対象の治療に異なる用量が必要であり得る。所与の用量の投与は、個別の投与単位の形態での単回投与、またはより少ない用量のいくつかの単位の両方によって行うことができる。数週間または数カ月間の特定の期間をあけての複数回の投与は、抗原特異的免疫応答を高めるために一般的なものである。
【０２０５】
本明細書において提供される教示と組み合わせて、様々な活性化合物、ならびに有効性、相対的な生物学的利用能、患者の体重、副作用の重症度、および好ましい投与様式などの計量因子の間で選択することにより、大きな毒性を生じさせず、さらに特定の対象を治療するために完全に効果的である、効果的な予防的または治療的な処理のレジメンを計画することができる。あらゆる特定の適用のための効果的な量は、治療する疾患もしくは症状、投与する特定の治療用作用物質、対象のサイズ、または疾患もしくは症状の重症度などの因子に応じて変化し得る。当業者は、不必要な実験を必要とすることなく、効果的な量の特定の核酸および／または他の治療用作用物質を経験的に決定することができる。
【０２０６】
本明細書において記載される化合物の対象用量は、典型的には約０．１μｇから１００００ｍｇ、より典型的には約１μｇ／日から８０００ｍｇ、最も典型的には約１０μｇから１００μｇの範囲である。対象の体重に関して言うと、典型的な用量は、約０．１μｇから２０ｍｇ／ｋｇ／日、より典型的には約１から１０ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も典型的には約１から５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。
【０２０７】
核酸および／または他の化合物を含む医薬組成物は、薬剤を投与するためのあらゆる適切な経路によって投与することができる。様々な投与経路が利用可能である。選択される特定の様式は、当然のことながら、選択される特定の１つまたは複数の作用物質、治療する特定の症状、および治療上の有効性に必要な用量に依存する。本発明の方法は、一般的に言えば、医学的に許容できるあらゆる投与様式、すなわち臨床上許容できない副作用を生じさせることなく効果的なレベルの免疫応答を生じさせるあらゆる様式を用いて実施することができる。好ましい投与様式は本明細書において論じられる。治療における使用では、効果的な量の核酸および／または他の治療用作用物質を、作用物質を所望の表面、例えば粘膜表面、全身の表面に送達するあらゆる様式によって、対象に投与することができる。
【０２０８】
本発明の医薬組成物の投与は、当業者に知られているあらゆる手段によって行うことができる。投与の経路には、限定はしないが、経口、非経口、静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、舌下、気管内、吸入、皮下、眼、膣、および直腸が含まれる。喘息またはアレルギーの治療または予防では、このような化合物は好ましくは、吸入されるか、摂取されるか、または全身的な経路により投与される。全身的な経路には、経口および非経口が含まれる。吸入性薬剤は、主に喘息患者における炎症部位である肺に直接的に送達するため、いくつかの実施形態において好ましい。いくつかのタイプの装置が、吸入による投与のために通常用いられる。これらのタイプの装置には、定量吸入器（ＭＤＩ）、呼吸作動型ＭＤＩ、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、ＭＤＩと組み合わせたスペーサー／ホールディングチャンバー、および噴霧器が含まれる。
【０２０９】
本発明の治療用作用物質は、ベクターを用いて、特定の組織、細胞型に送達され得るか、もしくは免疫系に送達され得るか、またはその両方である。「ベクター」は、その最も広い意味において、標的細胞への組成物の運搬を容易にし得るあらゆる媒体である。ベクターは通常、免疫刺激性の核酸、抗体、抗原、および／または障害特異的な薬剤を、ベクターの不存在下において生じる分解の程度よりも分解を少なくして、標的細胞に運搬する。
【０２１０】
通常は、本発明において有用なベクターは、生物学的ベクターおよび化学的／物理学的ベクターの２つのクラスに分けられる。生物学的ベクターおよび化学的／物理学的ベクターは、本発明の治療用作用物質の送達および／または取り込みにおいて有用である。
【０２１１】
ほとんどの生物学的ベクターは、核酸の送達に用いられ、これは、免疫刺激性核酸であるかまたはその核酸を含む治療用作用物質の送達において最も適している。
【０２１２】
本明細書において論じられる生物学的ベクターに加え、化学的／物理学的ベクターを、免疫刺激性の核酸、抗体、抗原、および障害特異的な薬剤を含む治療用作用物質の送達に用いることができる。本明細書において用いる場合、「化学的／物理学的ベクター」とは、核酸および／または他の薬剤を送達し得る、細菌源またはウイルス源に由来するもの以外の天然または合成の分子を言う。
【０２１３】
本発明の好ましい化学的／物理学的ベクターは、コロイド分散系である。コロイド分散系には、水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、およびリポソームを含む、脂質に基づいた系が含まれる。本発明の好ましいコロイド系はリポソームである。リポソームは、インビボまたはインビトロで送達ベクターとして有用な、人工の膜の管である。０．２〜４．０μｍのサイズ範囲である大きな単層ベシクル（ＬＵＶ）が大きな巨大分子をカプセル化し得ることが示されている。ＲＮＡ、ＤＮＡ、およびインタクトなビリオンは水性の内部にカプセル化され得、生物学的に活性な形態で細胞に送達され得る。Ｆｒａｌｅｙら（１９８１年）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ  ６：７７頁を参照されたい。
【０２１４】
リポソームは、モノクローナル抗体、糖、糖脂質、またはタンパク質などの特異的なリガンドにリポソームを結合することによって、特定の組織に標的化され得る。リポソームを免疫細胞に標的化させるために有用であり得るリガンドには、限定はしないが、免疫細胞に特異的な受容体および分子と相互作用する、インタクトなまたは断片状の分子、例えば、免疫細胞の細胞表面マーカーと相互作用する抗体が含まれる。このようなリガンドは、当業者に周知の結合アッセイによって容易に同定することができる。さらに他の実施形態において、リポソームは、これまでに論じられている免疫療法抗体の１つにリポソームを結合させることによって、癌に標的化することができる。さらに、ベクターは、宿主細胞の核にベクターを方向付ける、核を標的化するペプチドに結合することができる。
【０２１５】
トランスフェクションのための脂質製剤は、例えばＥＦＦＥＣＴＥＮＥ（商標）（特殊なＤＮＡ凝縮エンハンサーを有する非リポソーム性の脂質）およびＳＵＰＥＲＦＥＣＴ（商標）（新規な作用性デンドリマー技術）として、ＱＩＡＧＥＮにより市販されている。リポソームは、例えばＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）およびＬＩＰＯＦＥＣＴＡＣＥ（商標）としてＧｉｂｃｏ  ＢＲＬから市販されており、これらは、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム塩酸塩（ＤＯＴＭＡ）およびジメチルジオクタデシルアンモニウム硫酸塩（ＤＤＡＢ）などの陽イオン性脂質で形成されるものである。リポソームを作製するための方法は、当技術分野において周知であり、多くの刊行物において記載されている。リポソームはまた、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ  Ｇ（１９８５年）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ３：２３５〜２４１頁によって概説されている。
【０２１６】
とりわけＮ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチル硫酸塩（ＤＯＴＡＰ）を含む、特定の陽イオン性脂質は、本発明の修飾オリゴリボヌクレオチド類似体と組み合わせると特に有利であると考えられる。
【０２１７】
１つの実施形態において、媒体は、哺乳動物レシピエントへの移植または投与に適した、生体適合性のマイクロ粒子または移植片である。本方法に従って有用な、例示的な生体内分解性の移植片は、ＰＣＴ国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ／０３３０７（「Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ」という名称の、公開番号ＷＯ９５／２４９２９に記載されている。ＰＣＴ／ＵＳ／０３０７は、適切なプロモーターの制御下で外来遺伝子を含ませるための、生体適合性の、好ましくは生物分解性のポリマーマトリクスを記載している。ポリマーマトリクスは、対象において治療用作用物質の持続放出を達成するために用いることができる。
【０２１８】
ポリマーマトリクスは、好ましくは、ミクロスフェア（この中で、核酸および／または他の治療用作用物質が固体ポリマーマトリクスの全体に分散している）またはマイクロカプセル（この中で、核酸および／または他の治療用作用物質が、ポリマー殻の中心に貯蔵されている）などのマイクロ粒子の形態である。治療用作用物質を含ませるための、他の形態のポリマーマトリクスには、フィルム、被覆、ゲル、移植片、およびステントが含まれる。ポリマーマトリクス装置のサイズおよび組成は、マトリクスが導入される組織における好ましい放出動態が得られるように選択される。ポリマーマトリクスのサイズはさらに、用いられる送達方法、典型的には組織内への注射、または鼻および／もしくは肺の領域内への噴霧による懸濁液の投与に従って選択される。好ましくは、噴霧経路が用いられる場合、ポリマーマトリクスならびに核酸および／または他の治療用作用物質は、界面活性剤の媒体に包含される。ポリマーマトリクス組成物は、好ましい分解速度を有するように、かつさらに生体接着性である材料で作製されるように選択して、損傷を受けている鼻および／または肺の表面にマトリクスが投与された場合の運搬の有効性をさらに増大させることができる。マトリクス組成物はまた、分解しないように、しかしそれ以上に、長時間にわたる拡散によって放出するように、選択することができる。いくつかの好ましい実施形態において、核酸は移植片を介して対象に投与されるが、他の治療用作用物質は急性的に投与される。経口送達または粘膜送達などの送達に適した生体適合性のミクロスフェアは、Ｃｈｉｃｋｅｒｉｎｇら（１９９６年）Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｂｉｏｅｎｇ  ５２：９６〜１０１頁、およびＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ  Ｅら（１９９７年）Ｎａｔｕｒｅ  ３８６：４１０〜４１４頁、およびＰＣＴ特許出願ＷＯ９７／０３７０２において記載されている。
【０２１９】
非生物分解性および生物分解性のポリマーマトリクスの両方を、核酸および／または他の治療用作用物質を対象に送達するために用いることができる。生物分解性のマトリクスが好ましい。このようなポリマーは、天然または合成のポリマーであり得る。ポリマーは、放出させたい期間に基づいて選択され、この期間は通常、数時間から１年程度、またはそれ以上である。典型的には、特に核酸作用物質では、数時間から３〜１２カ月の範囲の期間にわたる放出が最も望ましい。ポリマーは、水中でその重量の最大約９０％を吸収し得るヒドロゲルの形態であってもよく、さらに、多価イオンまたは他のポリマーと架橋していてもよい。
【０２２０】
特別に興味深い生体接着性ポリマーには、その教示が本明細書に組み込まれるＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（１９９３年）２６：５８１〜５８７頁においてＨ．Ｓ．Ｓａｗｈｎｅｙ、Ｃ．Ｐ．Ｐａｔｈａｋ、およびＪ．Ａ．Ｈｕｂｅｌｌによって記載されている、生体内分解性のヒドロゲルが含まれる。これらには、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリ酸無水物、ポリアクリル酸、アルギン酸塩、キトサン、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸エチル）、ポリ（メタクリル酸ブチル）、ポリ（メタクリル酸イソブチル）、ポリ（メタクリル酸ヘキシル）、ポリ（メタクリル酸イソデシル）、ポリ（メタクリル酸ラウリル）、ポリ（メタクリル酸フェニル）、ポリ（アクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸イソプロピル）、ポリ（アクリル酸イソブチル）、およびポリ（アクリル酸オクタデシル）が含まれる。
【０２２１】
治療用作用物質が核酸である場合、圧縮剤の使用もまた望ましい場合がある。圧縮剤はまた、単独で、または生物学的ベクターもしくは化学的／物理学的ベクターと組み合わせて用いることができる。「圧縮剤」は、本明細書において用いる場合、核酸上の負の荷電を中和し、それにより核酸が細かい粒子に圧縮することを可能にする、ヒストンなどの作用物質を言う。核酸の圧縮により、標的細胞による核酸の取り込みが促進される。圧縮剤は、単独で用いる、すなわち、細胞によりさらに効果的に取り込まれる形態で核酸を送達することができるか、または、より好ましくは、１つもしくは複数の上記のベクターと組み合わせて用いることができる。
【０２２２】
核酸の取り込みを促進するために用いることができる他の例示的な組成物には、リン酸カルシウム、ならびに細胞内輸送の他の化学的メディエーター、マイクロインジェクション組成物、エレクトロポレーション組成物、および相同組換え組成物（例えば、標的細胞の染色体内の事前に選択した位置に核酸を組み込むための）が含まれる。
【０２２３】
上述したように、本発明のポリマーは送達媒体と共に製剤される。例えば、渦巻状物、Ｅｍｕｌｓｏｍｅｓ（登録商標）、ＩＳＣＯＭ（登録商標）、生の細菌ベクター（例えば、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、カルメット・ゲラン桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ））、生のウイルスベクター（例えば、ワクシニア、アデノウリウス、単純ヘルペス）、ミクロスフェア、核酸ワクチン、ポリマー（例えば、カルボキシメチルセルロース、キトサン）、ポリマー環、プロテオソーム、フッ化ナトリウム、トランスジェニック植物という送達媒体が記載されている。本発明のいくつかの実施形態において、送達媒体は、リポソーム、ニオソーム、リポプレックス、ポリプレックス、リポポリプレックス、油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルジョン、水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョン、水−油−水型（Ｗ／Ｏ／Ｗ）複合エマルジョン、マイクロエマルジョン、ナノエマルジョン、ミセル、デンドリマー、ビロソーム、ウイルス様粒子、ナノスフェアもしくはナノカプセルなどのポリマーナノ粒子、マイクロスフェアもしくはマイクロカプセルなどのポリマーマイクロ粒子である。
【０２２４】
本発明の製剤は、薬学的に許容できる濃度の塩、緩衝剤、保存料、適合性担体、アジュバント、および場合によっては他の治療用成分を通常含み得る、薬学的に許容できる溶液において投与される。いくつかの実施形態において、組成物は無菌である。
【０２２５】
「薬学的に許容できる担体」という用語は、ヒトまたは他の脊椎動物への投与に適している、１つまたは複数の適合性の固体または溶液の充填剤、希釈剤、またはカプセル化物質を意味する。担体という用語は、天然または合成の有機または無機の成分を言い、利用を容易にするために活性成分がこれと組み合わされる。医薬組成物の構成要素はまた、所望の薬学的有効性を実質的に損なう相互作用が生じないような様式で、本発明の化合物と、および互いに、混合することができる。
【０２２６】
経口投与では、化合物（すなわち、核酸、抗原、抗体、および他の治療用作用物質）は、１つまたは複数の活性化合物を、当技術分野において周知の薬学的に許容できる担体と組み合わせることにより、容易に製剤することができる。このような担体により、本発明の化合物を、治療する対象による経口摂取のための、錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして製剤することが可能となる。経口使用のための医薬調製物は固体賦形剤として得ることができ、得られた混合物をすりつぶし、所望により、適切な助剤を添加した後に、顆粒の混合物を処理して、錠剤または糖衣錠の核を得てもよい。適切な賦形剤は、とりわけ、乳糖、ショ糖、マンニトール、またはソルビトールを含む糖などの充填剤、例えばトウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などのセルロース調製物である。所望であれば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、または、アルギン酸もしくはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムなどの、崩壊剤を加えることができる。経口製剤はまた、内部の酸性状態を中和するために生理食塩水もしくは緩衝液内に製剤してもよいか、または、いずれの担体も伴わずに投与してもよい。
【０２２７】
糖衣錠の核には、適切な被覆が施される。この目的のために、濃縮した糖溶液を用いることができ、この糖溶液は、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適切な有機溶媒または溶媒混合物を含んでいてもよい。異なる組合せの活性化合物用量を同定するかまたは特徴付けるために、染料または顔料を錠剤または糖衣錠の被覆に加えることができる。
【０２２８】
経口的に用いることができる医薬調製物には、ゼラチンで作られた押し込み型のカプセル、ならびにゼラチンおよび可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトールで作られた、軟らかい、封止されたカプセルが含まれる。押し込み型のカプセルは、乳糖などの充填剤、デンプンなどの結合剤、および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤と混合した活性成分を含み得、この活性成分は、場合によっては安定剤と混合されていてもよい。軟らかいカプセルにおいて、活性化合物は、脂肪油、液体パラフィン、または液体ポリエチレングリコールなどの適切な液体内に溶解または懸濁することができる。さらに、安定剤を加えることができる。経口投与のために製剤されたミクロスフェアも用いることができる。このようなミクロスフェアは、当技術分野において良く規定されている。経口投与のための全ての製剤は、このような投与に適した用量である。
【０２２９】
口腔投与では、組成物は、従来の様式で製剤された錠剤またはトローチの形態を取り得る。
【０２３０】
吸入による投与では、本発明に従って用いるための化合物は、適切な推進剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切な気体を用いた、加圧されたパックまたは噴霧器からの噴霧スプレーの提示の形で都合良く送達され得る。加圧された噴霧のケースにおいて、用量単位は、定量を送達するためのバルブを備えることにより決定することができる。吸入器または送気器において用いるための、例えばゼラチンのカプセルおよび薬包は、化合物の粉末混合物と乳糖またはデンプンなどの適切な粉末基剤とを含ませて製剤することができる。
【０２３１】
化合物は、それを全身的に送達することが望ましい場合には、注射による、例えばボーラス注射または持続注入による非経口投与のために製剤することができる。注射のための製剤は、単回投与の形態で、例えばアンプルまたは複数回投与の容器内に、追加の保存料と共に存在し得る。組成物は、懸濁液、溶液、または油性媒質もしくは水性媒質内のエマルジョンなどの形態を取り得、懸濁剤、安定剤、および／または分散剤などの製剤用作用物質を含み得る。
【０２３２】
非経口投与のための医薬製剤には、水溶性形態の活性化合物の水性溶液が含まれる。さらに、活性化合物の懸濁液は、適切な油性注射用懸濁液として調製することができる。適切な親油性の溶媒または媒体には、ゴマ油などの脂肪油、またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームが含まれる。水性注射用懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなどの、懸濁液の粘度を増大させる物質を含み得る。懸濁液はまた、適切な安定剤、または、高度に濃縮された溶液の調製を可能にするための、化合物の溶解度を増大させる作用物質を含んでいてもよい。
【０２３３】
あるいは、活性化合物は、使用する前に、適切な媒体、例えば発熱物質を有さない滅菌水で構成するために、粉末形態であり得る。
【０２３４】
化合物はまた、例えばココアバターまたは他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を含む、坐剤または停留浣腸などの直腸または膣用の組成物に製剤することができる。
【０２３５】
これまでに記載した製剤に加え、化合物はまた、蓄積調製物として製剤することができる。このような長時間作用性の製剤は、適切なポリマー物質もしくは疎水性物質（例えば、許容できる油におけるエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂と共に製剤することができるか、あるいは、難溶性の誘導体、例えば難溶性の塩として製剤することができる。
【０２３６】
医薬組成物はまた、適切な固体またはゲル相の担体または賦形剤を含み得る。このような担体または賦形剤の例には、限定はしないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールなどのポリマーが含まれる。
【０２３７】
適切な液体または固体の医薬調製物形態は、例えば、吸入のための水性もしくは生理食塩水、マイクロカプセル化されたもの、渦巻状にされたもの、微細な金粒子上に被覆されたもの、リポソーム内に含まれるもの、噴霧状にされたもの、エアロゾル、皮膚内への移植のためのペレット、または皮膚内に引っ掻くための鋭い物体上に乾燥させたものである。医薬組成物にはまた、顆粒、粉末、錠剤、被覆錠剤、（マイクロ）カプセル、坐剤、シロップ、エマルジョン、懸濁液、クリーム、ドロップ、または活性化合物を持続放出する調製物が含まれ、これらの調製物において、賦形剤、ならびに崩壊剤、結合剤、被覆剤、膨張剤、潤滑剤、香料、甘味料、または可溶化剤などの添加剤および／または助剤が、上述したように通常用いられる。医薬組成物は、様々な薬剤送達系における使用に適している。薬剤送達のための方法の簡単な概説については、Ｌａｎｇｅｒ  Ｒ（１９９０年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７〜１５３３頁を参照されたい。
【０２３８】
核酸ならびに場合によっては他の治療物質および／または抗原は、それ自体で（そのままで）または薬学的に許容できる塩の形態で投与することができる。薬剤において用いる場合、塩は薬学的に許容できるべきであるが、薬学的に許容できない塩を、その薬学的に許容できる塩を調製するために都合良く用いることができる。このような塩には、限定はしないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸から調製される塩が含まれる。また、このような塩は、カルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩などのアルカリ金属またはアルカリ土類金属として調製することができる。
【０２３９】
適切な緩衝剤には、酢酸および塩（１〜２％ｗ／ｖ）、クエン酸および塩（１〜３％ｗ／ｖ）、ホウ酸および塩（０．５〜２．５％ｗ／ｖ）、ならびにリン酸および塩（０．８〜２％ｗ／ｖ）が含まれる。適切な保存料には、塩化ベンザルコニウム（０．００３〜０．０３％ｗ／ｖ）、クロロブタノール（０．３〜０．９％ｗ／ｖ）、パラベン（０．０１〜０．２５％ｗ／ｖ）、およびチメロサール（０．００４〜０．０２％ｗ／ｖ）が含まれる。
【０２４０】
組成物は、都合良く単位投与形態を有し得、薬学の分野において周知のあらゆる方法によって調製することができる。全ての方法は、化合物を１つまたは複数の副成分を構成する担体と組み合わせるステップを含む。通常、組成物は、化合物を、液体担体、微粉化した固体担体、またはその両方と均一におよび密接に組み合わせて、その後必要であれば生成物を成型することにより調製される。液体の投与単位は、バイアルまたはアンプルである。固体の投与単位は、錠剤、カプセル、および坐剤である。
【０２４１】
他の送達系には、徐放性放出、遅延放出、または持続放出の送達系が含まれ得る。このような系は、化合物の繰り返しの投与を避けることができ、対象および医師にとっての利便性が増す。多くのタイプの放出送達系が利用可能であり、当業者に知られている。それらには、ポリ（ラクチド−グリコリド）、コポリオキサレート、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリヒドロキシブチル酸、およびポリ酸無水物などのポリマーに基づいた系が含まれる。薬剤を含む、前述のポリマーのマイクロカプセルは、例えば米国特許第５，０７５，１０９号に記載されている。送達系はまた、コレステロール、コレステロールエステル、および脂肪酸などのステロールを含むか、またはモノグリセリド、ジグリセリド、およびトリグリセリドなどの中性脂肪を含む脂質、ヒドロゲル放出系、シラスティック系、ペプチドに基づいた系、ワックス被覆、従来の結合剤および賦形剤を用いた圧縮錠剤、部分的に融合した移植片などである、非ポリマー系を含む。特定の例には、限定はしないが、（ａ）米国特許第４，４５２，７７５号、米国特許第４，６７５，１８９号、および米国特許第５，７３６，１５２号に記載されているものなどの、本発明の作用物質がマトリクス内の形態で含まれている浸食系、ならびに（ｂ）米国特許第３，８５４，４８０号、米国特許第５，１３３，９７４号、および米国特許第５，４０７，６８６号に記載されているような、活性構成要素が制御された速度でポリマーから浸透する拡散系が含まれる。さらに、ポンプに基づくハードウェア送達系を用いることができ、そのいくつかは移植に適している。
【０２４２】
本発明は、以下の実施例によってさらに説明されるが、この実施例はさらなる限定であると解釈されるものではない。本願の全体にわたり引用される全参考文献（論文の参考文献、特許、公開された特許出願、および同時継続特許出願を含む）の全内容は、参照することにより、本明細書に明確に組み込まれる。
【実施例】
【０２４３】
ＴＬＲ７およびＴＬＲ８は、一本鎖ＲＮＡまたは短鎖オリゴリボヌクレオチド（ＯＲＮ）を認識する。ＴＬＲの一方または両方を発現する免疫細胞をインキュベートすると、サイトカインの産生が誘発される。２つの受容体の発現パターンが異なるため、ＴＬＲ７介在性のシグナル伝達はヒトｐＤＣによるＩＦＮ−αの産生を刺激すると考えられるが、一方、ＴＬＲ８の活性化は、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γを産生するｍＤＣおよび単球を主に活性化する。ＴＬＲ８およびＴＬＲ７／８の活性を特異的に誘発するＲＮＡモチーフの存在が明らかにされている。以下の実施例は、骨格特異的なさらなるモチーフの同定を示す。このＲＮＡモチーフを含むポリマーが主にＩＦＮ−αを誘発するということは重要な発見であり、これは、十分なレベルの炎症性サイトカインを刺激しない強力な免疫刺激性モチーフを主張するものである。
【０２４４】
方法：
ＥＬＩＳＡアッセイ：
ヒトＰＢＭＣを、ＤＯＴＡＰの存在下で連続希釈したＯＲＮ（２μＭのＯＲＮおよび２５μｇ／ｍｌのＤＯＴＡＰで開始）と共にインキュベートし、上清を、ＩＦＮ−αおよびＩＬ−１２ｐ４０について２４時間後にＥＬＩＳＡによってアッセイした。３人のドナーの平均±ＳＥＭを示す。
【０２４５】
サイトカインの検出：
ヒトＰＢＭＣを５×１０６個細胞／ｍｌの濃度で再懸濁し、丸底の９６ウェルプレートに加えた（２５０μｌ／ウェル）。ＰＢＭＣを、ＤＯＴＡＰの存在下で連続希釈したＯＲＮ（２μＭのＯＲＮおよび２５μｇ／ｍｌのＤＯＴＡＰで開始）と共にインキュベートし、培養上清（ＳＮ）を２４時間後に回収した。ＳＮは、すぐに用いない場合には、必要となるまで−２０℃で保管した。
【０２４６】
ＳＮにおけるサイトカインの量を、ＩＬ−１２ｐ４０についての市販されているＥＬＩＳＡキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙから入手）を用いて、または市販されている抗体（ＰＢＬ、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ、ＵＳＡ）を用いて開発したＩＦＮ−αについての社内のＥＬＩＳＡを用いて評価した。
【０２４７】
サイトカインおよびケモカインの広範な組合せの分析のために、Ｂｉｏ−Ｒａｄ（Ｍｕｎｉｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手したルミネックスシステムおよびＢｉｏｓｏｕｒｃｅ（Ｓｏｌｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手したマルチプレックスキットを用いる多重分析を行った。
【０２４８】
（実施例１）
ＴＬＲ７介在性サイトカインを誘発するがＴＬＲ８介在性サイトカインは誘発しない免疫刺激性ポリマーの同定
４つのＯＲＮおよび１つの陽性対照を、ＩＦＮ−αを誘発する能力について試験した（配列については表１を参照されたい）。ＯＲＮをヒトＰＢＭＣと共にインキュベートし、上清をＩＦＮ−αについてＥＬＩＳＡによってアッセイした。配列番号３および配列番号５のＯＲＮは同一の塩基配列を有しているが、配列番号５はホスホロチオエート（ＰＳ）骨格を有する一方で、配列番号３はホスホジエステル（ＰＯ）骨格を有する。驚くべきことに、配列番号５はバックグラウンドレベルのＩＦＮ−αのみを誘発し、一方で配列番号３は、ホスホロチオエート骨格内にＧＵに富んだ最適化されたモチーフを有する、陽性対照のＯＤＮである配列番号１と同程度の、最大のＩＦＮ−αレベルを誘発した（図１）。これらのデータは、配列番号３および配列番号５のＯＲＮ配列では、ＰＯ骨格がＩＦＮ−αの顕著な誘発を生じさせることを示唆するものであった。
【０２４９】
ＰＯ骨格を有する２つの他のＯＲＮである配列番号２および配列番号４もまた、ＩＦＮ−αを誘発する能力について試験し、それらが非常に低いレベルのＩＦＮ−αのみを誘発することが示された。配列番号２および配列番号３の配列の比較により示されるように、１つのウリジン（Ｕ）の存在によりＩＦＮ−αの誘発が劇的に増強された。ウリジンヌクレオチドは、特定の配列モチーフ内に組み込まれていた。配列番号３および配列番号４の比較により示されるように、このモチーフ内以外における１つのＵの存在により、ＩＦＮ−αの産生が顕著に低減した。
【０２５０】
配列番号３のＯＲＮはＩＦＮ−αの産生を主に誘発し（図２Ａも参照されたい）、ＴＬＲ７介在性である可能性が最も高いが、ＩＬ−１２（図２Ｂ）、ＴＮＦ−α（図示せず）、またはＩＦＮ−γ（図示せず）などの他の（ＴＬＲ８介在性の）サイトカインはほとんど誘発しなかった。
【０２５１】
【表１】
0004847609.tif 000002
【０２５２】
（実施例２）
新たな免疫刺激性ＲＮＡモチーフであるＣＵＣＡの同定
最適な骨格特異的免疫刺激性モチーフを決定するために、ＯＲＮを設計し、ＩＦＮ−αを誘発する能力について試験した。これまでに同定されたＲＮＡモチーフとは異なり、新たなモチーフは、ホスホジエステル骨格を有するＯＲＮに固有および特異的であると規定された（図３）。ヒトＰＢＭＣをＯＲＮと共にインキュベートし、上清をＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−αについてアッセイした。驚くほど短いモチーフであるＵＣＡが規定された。この配列内におけるアデニン塩基の存在の重要性が明らかにされた。配列番号７および配列番号６の比較（表２を参照されたい）により、最適なモチーフがＵＣの３’側に１つの塩基を含むことが明らかにされた。配列番号１１および配列番号１２の比較により、ウリジンの３’側でのシチジンの重要性が確認された。
【０２５３】
【表２】
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【０２５４】
提案された最小モチーフの中央のＣを交換すると、これらのＯＲＮとの関連において、ＵＧＡ（配列番号８）およびＵＡＡ（配列番号９）のケースではＩＦＮ−α誘発活性が喪失し、ＵＵＡ（配列番号１０）のケースではＩＦＮ−αの応答が低減した（図４を参照されたい）。配列番号１０の低いＩＦＮ−α誘発は、２つのＵを含むモチーフＧＣＵＵの存在によるものである可能性が最も高い。
【０２５５】
モチーフ内にＣを有さない３つのＰＯ  ＯＲＮ（配列番号８、配列番号９、配列番号１０）の全てが、その元となる、ＵＣＡモチーフを含む配列番号３よりもかなり高いレベルのＩＬ−１２を誘発したため、これらのＯＲＮによりまた、新たに規定された最小モチーフが、ＩＦＮ−αに偏った免疫応答の誘発に非常に特異的であることが明らかになった（表３を参照されたい）。
【０２５６】
【表３】
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【０２５７】
配列変異のさらなる試験により、ＵＣＡモチーフのアデノシン部分がＩＦＮ−α活性に重要であることを示すデータが得られた（図５、表４における配列）。ヒトＰＢＭＣをＯＲＮと共にインキュベートし、上清をＥＬＩＳＡによってＩＦＮ−αおよびＩＬ−１２ｐ４０についてアッセイした。ＵＣＡモチーフ内のアデノシンをＣまたはＧで置換すると（配列番号１３、配列番号１４）、バックグラウンドレベルのＩＦＮ−αのみを誘発するＯＲＮが得られた。配列番号１５（ＵＣＵ）は中程度の量のＩＦＮ−αを誘発したが、配列番号３よりも少なかった。誘発は、さらなる配列ＵＣＵＧの生成によるものである可能性が最も高い。ここでも、配列番号３によるＩＬ−１２の誘発は、配列番号１４および配列番号１５と比較して非常に低かった。
【０２５８】
【表４】
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【０２５９】
最小モチーフを囲むさらなるヌクレオチドの必要性をさらに評価するため、ＵＣＡモチーフの３’および５’のヌクレオチド修飾を、ＩＬ−１２の誘発活性に対するＩＦＮ−αの誘発活性について試験した（表５に配列を示す）。図６において示すように、最小モチーフＵＣＡの５’領域において、シチジンヌクレオチド（ＣＵＣＡ、配列番号３）またはウリジンヌクレオチド（ＵＵＣＡ、配列番号２１）の存在のみによって、高いＩＦＮ−α誘発特性を有するＯＲＮが得られた。しかし、ＵＵＣＡモチーフは高いＩＦＮ−αの産生および高いＩＬ−１２の産生の両方をもたらしたため、記載される、大量のＩＬ−１２ｐ４０を誘発することなく大量のＩＦＮ−αを誘発するというＯＲＮの予想外の能力は、ウリジンがこの位置に存在しない場合にのみ見られた。
【０２６０】
【表５】
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【０２６１】
さらなる配列分析により、４ｍｅｒのモチーフＣＵＣＡに隣接するヌクレオチド位置は重要ではないと考えられ、ＩＦＮ−αの産生を誘発するＯＲＮの能力に影響しないことが示された（表６）。しかし、図７において示すように、これらのヌクレオチドはＩＬ−１２の産生に影響した。ＣＵＣＡモチーフの５’側（図７Ａ、配列番号２２、２３、および２４）のヌクレオチドも、３’側（図７Ｂ、配列番号１６、１７、および１８）のヌクレオチドも、ＩＦＮ−α誘発活性に影響しないと考えられた。これらのヌクレオチドは、ＩＬ−１２の誘発のみに影響すると考えられた。したがって、最適なＴＬＲ７特異的な誘発プロフィールのためには、これらの位置は、好ましくは、配列番号２４および配列番号１８におけるようなウリジンではなく、それはこれらのＯＲＮが比較的強いＩＬ−１２誘発能力を示したからである（図７Ｃおよび図７Ｄ）。
【０２６２】
【表６】
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【０２６３】
（実施例３）
ＣＵＣＡモチーフを有するＯＲＮのサイトカインプロフィール
配列番号２７（ＧＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＵＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡ）の、ＣＵＣＡモチーフを有する免疫刺激性ＯＲＮを、広範なサイトカインを誘発する能力について試験した。配列番号２７のＯＲＮのサイトカイン誘発を、陰性対照（ＧＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡ、配列番号２５）、Ｕに富んだ３’末端を有する、ＵＣＡを有さないＯＲＮ（ＧＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＵＵＵ、配列番号２６）、および陽性対照（ＧＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＵＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡ、配列番号２８）と比較した。３人の健康な血液ドナーのヒトＰＢＭＣを、ＤＯＴＡＰの存在下で連続希釈したＯＲＮ（２μＭのＯＲＮおよび２５μｇ／ｍｌのＤＯＴＡＰで開始）と共に２４時間インキュベートした。ＳＮを回収し、様々なサイトカインおよびケモカインのサイトカイン濃度またはケモカイン濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。結果を図８〜１１に示す。配列番号２７はＩＦＮ−αを誘発し、また、それほどではないが、ＩＦＮ−α関連分子であるＩＰ−１０およびＭＣＰ−１を誘発した。
【０２６４】
サイトカインおよびケモカインの多くの組合せを分析するために、ルミネックスシステムのマルチプレックスキットを用いる多重分析を行った。２人のドナーを、ルミネックスデータのこの最初の非定量的評価において用いた。結果を以下の表７にまとめる。ここでも、配列番号２７はＩＦＮ−αおよびＩＰ−１０のみを誘発し、それほどではないがＭＩＰ−１を誘発した。
【０２６５】
【表７】
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【０２６６】
（実施例４）
ＵＣＡモチーフを有するＯＲＮによるＴｈ１サイトカインおよびケモカインの十分な誘発
ＵＣＡモチーフを有するＯＲＮを、サイトカインおよびケモカインの誘発についてインビボで試験した。ＢＡＬＢ／ｃマウスを、それぞれ５頭からなる２つの群に分け、ＯＲＮ、ＤＯＴＡＰ、または緩衝溶液（ＨＢＳ）を静脈内投与した。第１群の動物を注射の３時間後に採血し、適切なサイトカイン特異的ＥＬＩＳＡを用いて、ＩＰ−１０、ＩＦＮ−α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０の血清レベルを決定した。第２群の動物を注射の２４時間後に採血し、ＩＦＮ−αおよびＩＰ−１０の血清レベルを決定した。サイトカインおよびケモカインを誘発する、配列番号３のＵＣＡを有するＯＲＮの能力を、ＴＬＲ７関連サイトカインおよびＴＬＲ８関連サイトカインの両方を誘発する２つのＯＲＮ（ＧＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＵＵ、配列番号３０、およびＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵ（ホスホロチオエート骨格）、配列番号３３）、ならびに主にＴＬＲ８関連サイトカインを誘発する２つのＯＲＮ（ＵＵＧＵＵＧＵＵＧＵＵＧＵＵＧＵＵＧＵＵ、配列番号３１、およびＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵＡＵＵ（ホスホジエステル骨格）、配列番号３２）の能力と比較した。ＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６（ＴＣＣＡＴＧＡＣＧＴＴＣＣＴＧＡＣＧＴＴ、配列番号３６）もまた、対照として用いた。配列番号３はＩＦＮ−α（図１２ＡおよびＣ）ならびにＩＰ−１０（図１２ＢおよびＤ）を３時間および２４時間の両方の時点で誘発したが、相当量のＴＮＦ−α、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−６、またはＩＬ−１０（それぞれ図１３Ａ〜Ｅ）は３時間の時点で誘発しなかった。したがって、配列番号３は、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−α関連サイトカインのみを誘発した。
【０２６７】
さらに、ＵＣＡを有するＯＲＮは、脾臓からのＢ細胞およびＴ細胞の両方を活性化することが示された。配列番号３は、脾臓のＣＤ３＋Ｔ細胞（図１４ＡおよびＢ）ならびにＤＸ５＋Ｂ細胞（図１４ＣおよびＤ）を活性化した。
【０２６８】
（実施例５）
ＵだけではなくＵＣＡモチーフの存在がＩＦＮ−αの誘発に重要である
この実施例において、１から３個のウリジンの存在がＩＦＮ−αの誘発には十分ではないことが示された。３人の健康なドナーから得たヒトＰＢＭＣを、ＤＯＴＡＰの存在下で様々な量のＯＲＮ（配列番号２６〜３０、表８）（開始濃度：２μＭのＯＲＮおよび２５μｇ／ｍｌのＤＯＴＡＰ、ＰＢＳ内での１：３の連続希釈）と共に２４時間インキュベートした。ＩＦＮ−αを適切なＥＬＩＳＡを用いて上清において測定した。
【０２６９】
【表８】
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【０２７０】
結果を図１５に示す。ＵＣＡモチーフを有さない配列番号２６、２９、および３０は、これらのＯＲＮにおいて最大３個のウリジンが存在したにもかかわらず、ＩＦＮ−αを誘発しなかった。逆に、ＵＣＡモチーフ内に組み込まれたただ１つのＵを含む配列番号２７は、顕著な量のＩＦＮ−αを誘発した。
【０２７１】
（実施例６）
インビボでのサイトカインの誘発は非常にＴＬＲ７依存性である
この実験において、ＴＬＲ７欠損マウスは本発明のＯＲＮに対して反応しないことが示された。Ｃ５７ＢＬ／６のバックグラウンドに戻し交配したＴＬＲ９ノックアウト（ＴＬＲ９ＫＯ）マウスおよびＴＬＲ７ノックアウト（ＴＬＲ７ＫＯ）マウス、ならびにＣ５７ＢＬ／６対照マウス（各群当たりｎ＝４）に、ＤＯＴＡＰ（Ｓｉｇｍａ）内において１：２の、１００μｇの選択したＯＲＮ（配列番号３、２８、もしくは３１）または陽性対照のＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６（配列番号３６）、あるいは陰性対照としての緩衝溶液（ＨＢＳ）を静脈内注射した。注射の３時間後に、血漿を回収し、適切なルミネックスおよびＥＬＩＳＡを用いて、ＩＦＮ−α、ＩＰ−１０、ＩＬ−１２、およびＩＬ−６について分析した。
【０２７２】
結果を図１６に示す。ＴＬＲ７ＫＯマウスは、配列番号３、２８、または３１に応答してＩＦＮ−α、ＩＰ−１０、ＩＬ−１２、またはＩＬ−６の誘発を基本的に示さなかったが、ＣｐＧ  ＯＤＮに応答してこれらの同一のサイトカインの強力な誘発を示した。逆に、ＴＬＲ９ＫＯマウスは、配列番号３、２８、または３１に応答してＩＦＮ−α、ＩＰ−１０、ＩＬ−１２、およびＩＬ−６の様々な程度の誘発を示したが、ＣｐＧ  ＯＤＮに応答してこれらの同一のサイトカインの誘発は示さなかった。対照Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、配列番号３、２８、または３１に応答してＩＦＮ−α、ＩＰ−１０、ＩＬ−１２、およびＩＬ−６の様々な程度の誘発を示し、ＣｐＧ  ＯＤＮに応答してこれらの同一のサイトカインの強力な誘発を示した。
【０２７３】
（実施例７）
インビボでのサイトカインの誘発は非常にＭｙＤ８８依存性である
この実験において、ＭｙＤ８８欠損マウスは本発明のＯＲＮに対して反応しないことが示された。Ｃ５７ＢＬ／６のバックグラウンドに戻し交配したＭｙＤ８８ノックアウト（ＭｙＤ８８ＫＯ）マウスおよびＣ５７ＢＬ／６対照マウス（各群当たりｎ＝４）に、ＤＯＴＡＰ（Ｓｉｇｍａ）内において１：２の、１００μｇの選択したＯＲＮ（配列番号３、２８、もしくは３１）または陽性対照のＣｐＧ  ＯＤＮ１８２６（配列番号３６）、あるいは陰性対照としての緩衝溶液（ＨＢＳ）を静脈内注射した。注射の３時間後に、血漿を回収し、適切なルミネックスおよびＥＬＩＳＡを用いて、ＩＦＮ−αおよびＩＰ−１０について分析した。
【０２７４】
結果を図１７に示す。ＭｙＤ８８ＫＯマウスは、配列番号３、２８、または３１に応答してＩＦＮ−αまたはＩＰ−１０の誘発を基本的に示さず、ＣｐＧ  ＯＤＮに応答しても同様であった。逆に、対照Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、配列番号３、２８、または３１、およびＣｐＧ  ＯＤＮに応答してＩＦＮ−αおよびＩＰ−１０の強力な誘発を示した。
【０２７５】
総括すると、新たな骨格特異的モチーフは、ＩＦＮ−α（ＴＬＲ７介在性である可能性が最も高い）の誘発に関与しており、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ、またはＴＮＦ−αなどの他の（ＴＬＲ８介在性である可能性が最も高い）サイトカインの活性化にはほとんど関与していないと規定された。これらの特性を決定する最小モチーフはｒＵ−ｒＣ−ｒＡである。骨格はホスホジエステルである。データに従った最適なモチーフは、ＮがＣ、Ａ、ＧであるがＵではない、ｒＮ−ｒＣ−ｒＵ−ｒＣ−ｒＡ−ｒＮである（最小のＴＬＲ８介在性のサイトカイン応答について）。
【０２７６】
本発明の少なくとも１つの実施形態のいくつかの態様をこうして記載してきたが、様々な変更、修飾、および改良を当業者が行うことは容易であると理解されたい。このような変更、修飾、および改良は、本開示の一部となるものであり、本発明の趣旨および範囲内にあるものである。したがって、上記の記載および図面は例示的なものにすぎない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１３−３】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１５】
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【図１６−１】
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【図１６−２】
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【図１７】
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【配列表】
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