(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
0004698027.tif 000177
[式中、Ｒ１は
（ａ）Ｃ(ＣＯ)；
（ｂ）Ｃ(Ｏ)‐Ｃ１−１４アルキル−Ｃ(Ｏ)（但し、該Ｃ１−１４アルキルはヒドロキシ、Ｃ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキレンジオキシ、Ｃ１−５アルキルアミノまたはＣ１−５アルキル−アリールで任意に置換されており、該Ｃ１−５アルキル−アリールの該アリール残基はＣ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキルアミノ、Ｃ１−５アルコキシ−アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、−Ｏ−Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、−Ｏ−Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ１−５アルキルＣ(Ｏ)ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ１−５アルキル−Ｃ(Ｏ)−Ｃ１−５アルキルで任意に置換されている）；
（ｃ）ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２−Ｃ１５の直鎖または分岐鎖アルキル；および
（ｄ）−Ｃ(Ｏ)−Ｃ６−１２アリーレン−Ｃ(Ｏ)−（該アリーレンはヒドロキシ、ハロゲン、ニトロまたはアミノで任意に置換されている）
からなる群から選ばれ、
ａおよびｂは独立して０、１、２、３または４であり、
ｄ、ｄ'、ｄ”、ｅ、ｅ’およびｅ”は独立して１〜４の整数であり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２は独立して、単結合、酸素原子、ＮＨおよびＮ(Ｃ(Ｏ)Ｃ１−４アルキル） からなる群から選ばれ、
Ｗ１およびＷ２は独立して、カルボニル、メチレン、スルホンおよびスルホキシドからなる群から選ばれ、
Ｒ２およびＲ５は独立して、
(ａ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル、
（ｂ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルケニルまたはジアルケニル、
（ｃ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルコキシ、
（ｄ）−ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル（式中、該アルキル基はオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されている）；および
（ｅ）
【化２】
0004698027.tif 000178
（式中、ＺはＯおよびＮＨからなる群から選択され、ＭおよびＮは独立して、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルアミノおよびアシルアミノからなる群から選択される）
からなる群から選択され、
Ｒ３およびＲ６は独立して、オキソまたはフルオロで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ７は独立して、Ｃ(Ｏ)Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキルまたはアルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルコキシ、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルケニル（該アルキル、アルケニルまたはアルコキシ基は独立して、ヒドロキシ、フルオロまたはＣ１〜Ｃ５アルコキシで任意に置換されている）からなる群から選択され、
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は独立して、酸素原子、メチレン、アミノ、および−Ｎ(Ｃ(Ｏ)Ｃ１−４アルキル)−からなる群から選択され、
あるいはＧ２Ｒ４またはＧ４Ｒ７は一緒になり水素原子またはヒドロキシルであってよい]
で示される化合物、または薬学的に許容されるその塩、
但し、該化合物は
【化３】
0004698027.tif 000179
または
【化４】
0004698027.tif 000180
ではない。
【請求項２】
Ｒ１がＣ(Ｏ)およびＣ(Ｏ)−Ｃ１−１４アルキル−Ｃ(Ｏ)からなる群から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がＣ(Ｏ)−Ｃ１−１４アルキル−Ｃ(Ｏ)である請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
ａおよびｂがそれぞれ２である請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘ１およびＹ１がともにＮＨである請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
ｄおよびｅが１である請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｇ２Ｒ４およびＧ４Ｒ７がともにヒドロキシである請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
式Ｉ：
【化５】
0004698027.tif 000181
[式中、Ｒ１は
（ａ）Ｃ(ＣＯ)；
（ｂ）Ｃ(Ｏ)‐Ｃ１−１４アルキル−Ｃ(Ｏ)（但し、該Ｃ１−１４アルキルはヒドロキシ、Ｃ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキレンジオキシ、Ｃ１−５アルキルアミノまたはＣ１−５アルキル−アリールで任意に置換されており、該Ｃ１−５アルキル−アリールの該アリール残基はＣ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキルアミノ、Ｃ１−５アルコキシ−アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、−Ｏ−Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、−Ｏ−Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ１−５アルキルＣ(Ｏ)ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ１−５アルキル−Ｃ(Ｏ)−Ｃ１−５アルキルで任意に置換されている）；
（ｃ）ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２−Ｃ１５の直鎖または分岐鎖アルキル；および
（ｄ）−Ｃ(Ｏ)−Ｃ６−１２アリーレン−Ｃ(Ｏ)−（該アリーレンはヒドロキシ、ハロゲン、ニトロまたはアミノで任意に置換されている）
からなる群から選ばれ、
ａおよびｂは独立して０、１、２、３または４であり、
ｄ、ｄ'、ｄ”、ｅ、ｅ’およびｅ”は独立して１〜４の整数であり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２は独立して、単結合、酸素原子、ＮＨおよびＮ(Ｃ(Ｏ)Ｃ１−４アルキル） からなる群から選ばれ、
Ｗ１およびＷ２は独立して、カルボニル、メチレン、スルホンおよびスルホキシドからなる群から選ばれ、
Ｒ２およびＲ５は独立して、
(ａ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル、
（ｂ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルケニルまたはジアルケニル、
（ｃ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルコキシ、
（ｄ）−ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル（式中、該アルキル基はオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されている）；および
（ｅ）
【化６】
0004698027.tif 000182
（式中、ＺはＯおよびＮＨからなる群から選択され、ＭおよびＮは独立して、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルアミノおよびアシルアミノからなる群から選択される）
からなる群から選択され、
Ｒ３およびＲ６は独立して、オキソまたはフルオロで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ７は独立して、Ｃ(Ｏ)Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキルまたはアルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルコキシ、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルケニル（該アルキル、アルケニルまたはアルコキシ基は独立して、ヒドロキシ、フルオロまたはＣ１〜Ｃ５アルコキシで任意に置換されている）からなる群から選択され、
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は独立して、酸素原子、メチレン、アミノ、および−Ｎ(Ｃ(Ｏ)Ｃ１−４アルキル)−からなる群から選択され、
あるいはＧ２Ｒ４またはＧ４Ｒ７は一緒になり水素原子またはヒドロキシルであってよい]
で示される化合物、または薬学的に許容されるその塩を含有する免疫学的アジュバント製剤。
【請求項９】
抗原および式Ｉ：
【化７】
0004698027.tif 000183
[式中、Ｒ１は
（ａ）Ｃ(ＣＯ)；
（ｂ）Ｃ(Ｏ)‐Ｃ１−１４アルキル−Ｃ(Ｏ)（但し、該Ｃ１−１４アルキルはヒドロキシ、Ｃ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキレンジオキシ、Ｃ１−５アルキルアミノまたはＣ１−５アルキル−アリールで任意に置換されており、該Ｃ１−５アルキル−アリールの該アリール残基はＣ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキルアミノ、Ｃ１−５アルコキシ−アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、−Ｏ−Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、−Ｏ−Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ１−５アルキルＣ(Ｏ)ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ１−５アルキル−Ｃ(Ｏ)−Ｃ１−５アルキルで任意に置換されている）；
（ｃ）ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２−Ｃ１５の直鎖または分岐鎖アルキル；および
（ｄ）−Ｃ(Ｏ)−Ｃ６−１２アリーレン−Ｃ(Ｏ)−（該アリーレンはヒドロキシ、ハロゲン、ニトロまたはアミノで任意に置換されている）
からなる群から選ばれ、
ａおよびｂは独立して０、１、２、３または４であり、
ｄ、ｄ'、ｄ”、ｅ、ｅ’およびｅ”は独立して１〜４の整数であり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２は独立して、単結合、酸素原子、ＮＨおよびＮ(Ｃ(Ｏ)Ｃ１−４アルキル） からなる群から選ばれ、
Ｗ１およびＷ２は独立して、カルボニル、メチレン、スルホンおよびスルホキシドからなる群から選ばれ、
Ｒ２およびＲ５は独立して、
(ａ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル、
（ｂ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルケニルまたはジアルケニル、
（ｃ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルコキシ、
（ｄ）−ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル（式中、該アルキル基はオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されている）；および
（ｅ）
【化８】
0004698027.tif 000184
（式中、ＺはＯおよびＮＨからなる群から選択され、ＭおよびＮは独立して、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルアミノおよびアシルアミノからなる群から選択される）
からなる群から選択され、
Ｒ３およびＲ６は独立して、オキソまたはフルオロで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ７は独立して、Ｃ(Ｏ)Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキルまたはアルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルコキシ、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルケニル（該アルキル、アルケニルまたはアルコキシ基は独立して、ヒドロキシ、フルオロまたはＣ１〜Ｃ５アルコキシで任意に置換されている）からなる群から選択され、
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は独立して、酸素原子、メチレン、アミノ、および−Ｎ(Ｃ(Ｏ)Ｃ１−４アルキル)−からなる群から選択され、
あるいはＧ２Ｒ４またはＧ４Ｒ７は一緒になり水素原子またはヒドロキシルであってよい]
で示される化合物、または薬学的に許容されるその塩を含有するワクチン製剤。
【請求項１０】
該アジュバントと抗原とが該アジュバントのアミノ、カルボニル、ヒドロキシル、またはリン酸残基により共有結合している請求項９に記載の製剤。
【請求項１１】
Ｒ１がＣ(Ｏ)またはＣ(Ｏ)−Ｃ３−１４アルキル−Ｃ(Ｏ)であり、該アジュバントと抗原とが該Ｃ(Ｏ)またはＣ(Ｏ)−Ｃ３−１４アルキル−Ｃ(Ｏ)のカルボニル残基に共有結合している請求項９に記載の製剤。
【請求項１２】
免疫学的アジュバント製剤またはワクチン製剤の製造のための、式Ｉ：
【化９】
0004698027.tif 000185
[式中、Ｒ１は
（ａ）Ｃ(ＣＯ)；
（ｂ）Ｃ(Ｏ)‐Ｃ１−１４アルキル−Ｃ(Ｏ)（但し、該Ｃ１−１４アルキルはヒドロキシ、Ｃ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキレンジオキシ、Ｃ１−５アルキルアミノまたはＣ１−５アルキル−アリールで任意に置換されており、該Ｃ１−５アルキル−アリールの該アリール残基はＣ１−５アルコキシ、Ｃ１−５アルキルアミノ、Ｃ１−５アルコキシ−アミノ、Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、−Ｏ−Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ１−５アルコキシ、−Ｏ−Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ１−５アルキルＣ(Ｏ)ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１−５アルキルアミノ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ１−５アルキル−Ｃ(Ｏ)−Ｃ１−５アルキルで任意に置換されている）；
（ｃ）ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２−Ｃ１５の直鎖または分岐鎖アルキル；および
（ｄ）−Ｃ(Ｏ)−Ｃ６−１２アリーレン−Ｃ(Ｏ)−（該アリーレンはヒドロキシ、ハロゲン、ニトロまたはアミノで任意に置換されている）
からなる群から選ばれ、
ａおよびｂは独立して０、１、２、３または４であり、
ｄ、ｄ'、ｄ”、ｅ、ｅ’およびｅ”は独立して１〜４の整数であり、
Ｘ１、Ｘ２、Ｙ１およびＹ２は独立して、単結合、酸素原子、ＮＨおよびＮ(Ｃ(Ｏ)Ｃ１−４アルキル） からなる群から選ばれ、
Ｗ１およびＷ２は独立して、カルボニル、メチレン、スルホンおよびスルホキシドからなる群から選ばれ、
Ｒ２およびＲ５は独立して、
(ａ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル、
（ｂ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルケニルまたはジアルケニル、
（ｃ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルコキシ、
（ｄ）−ＮＨ−Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル（式中、該アルキル基はオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されている）；および
（ｅ）
【化１０】
0004698027.tif 000186
（式中、ＺはＯおよびＮＨからなる群から選択され、ＭおよびＮは独立して、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルアミノおよびアシルアミノからなる群から選択される）
からなる群から選択され、
Ｒ３およびＲ６は独立して、オキソまたはフルオロで任意に置換されたＣ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され、
Ｒ４およびＲ７は独立して、Ｃ(Ｏ)Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキルまたはアルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルコキシ、Ｃ２〜Ｃ２０の直鎖または分岐鎖アルケニル（該アルキル、アルケニルまたはアルコキシ基は独立して、ヒドロキシ、フルオロまたはＣ１〜Ｃ５アルコキシで任意に置換されている）からなる群から選択され、
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３およびＧ４は独立して、酸素原子、メチレン、アミノ、および−Ｎ(Ｃ(Ｏ)Ｃ１−４アルキル)−からなる群から選択され、
あるいはＧ２Ｒ４またはＧ４Ｒ７は一緒になり水素原子またはヒドロキシルであってよい]
で示される化合物、または薬学的に許容されるその塩
の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、細菌やウイルス感染疾患のためのワクチンのような、抗原とともに投与したときに免疫アジュバントとして機能する新規化合物に関する。本発明はまた、本発明のアジュバント化合物の少なくとも１つを含有する新規アジュバント製剤に関する。本発明はさらに、抗原と、本発明のアジュバント化合物の少なくとも１つを含有する新規な免疫刺激組成物に関する。さらに、本発明は、本発明の化合物を、それに対して動物を免疫しようとする抗原とともに該動物に投与することによる動物の免疫方法に関する。
【０００２】
（背景技術）
ワクチンは、感染疾患の予防法として好結果をもたらす極めて受け入れられた方法であることがわかっている。ワクチンは費用効果が高く、標的病原に対する抗生物質耐性を引き起こさず、ホストに存在する正常な菌叢に影響を与えない。抗ウイルス免疫を誘発するときなどの多くの場合、ワクチンは実行しうる治療法や改善法がないような疾患を阻止することができる。
【０００３】
ワクチンは、免疫系を誘起して、体内に非感染性または非病原性の形態で導入された因子、すなわち抗原、典型的には感染生物またはその部分に対する応答を開始することによって機能する。一旦、免疫系が「初回抗原刺激」または生物に対して感作されたら、免疫系が感染性病原としての該生物に後に暴露されたときに迅速かつ強力な免疫応答という結果となり、該生物が宿主生物内で増殖および感染して疾患徴候を起こす前に該病原を破壊してしまう。
免疫系を初回抗原刺激するのに用いる因子または抗原は、弱毒化生物として知られる感染状態でない全体の生物であってよいし、または幾つかの場合には、生物の種々の構造的成分を表す炭水化物、タンパク質またはペプチドなどの生物の成分であってよい。
【０００４】
多くの場合、ワクチンを有効にするのに充分な程度に、すなわち免疫を付与するのに充分な程度に免疫系を刺激するため、ワクチン中に存在する抗原に対する免疫応答を高める必要がある。多くのタンパク質および大抵のペプチドおよび炭水化物抗原は、単独で投与したときに免疫を付与するに充分な抗体応答を引き起こさない。そのような抗原は、外来物として認識され免疫応答を引き起こすような仕方で免疫系に提示される必要がある。この目的で、抗原を固定し免疫応答を刺激する添加剤（アジュバント）が工夫されている。
【０００５】
最もよく知られたアジュバントであるフロイントの完全アジュバントは、油／水エマルジョン中のマイコバクテリウムからなる。フロイントのアジュバントは２つの仕方で機能する：第一に、細胞および体液媒体免疫を促進することによって、第二に、抗原攻撃の迅速な分散をブロッキングすることによって（貯留効果（depot effect））。しかしながら、この物質に対する毒性の生理反応および免疫反応が頻繁に起るため、フロイントのアジュバントはヒトには用いることはできない。
【０００６】
（発明の開示）
（発明が解決しようとする技術的課題）
免疫刺激またはアジュバント活性を有することが示されている他の分子は、リポ多糖（ＬＰＳ）としても知られる内毒素である。ＬＰＳは、「先天性の」免疫応答、すなわち生物が以前に暴露される必要なしに内毒素（および該内毒素を成分とする侵入細菌）を認識することができるように進化した応答を誘起することによって免疫系を刺激する。ＬＰＳは毒性が強すぎるので実行できるアジュバントではないが、モノホスホリルリピッドＡ（monophosphoryl lipid A）（「ＭＰＬ」）などのような構造が内毒素に関連した分子がアジュバントとして臨床場面で試験されつつある。しかしながら、現在のところヒトに使用することがＦＤＡによって承認された唯一のアジュバントはアルミニウム塩（ミョウバン）であり、これは抗原を沈降させることによって抗原を「貯留する」（depot）のに用いられる。
それゆえ、免疫系を刺激して、抗原を単独でまたはミョウバンとともに投与したときに比べて抗原に対する一層強力な抗体応答を生成させるために抗原とともに投与することのできる化合物に対する当該技術分野で認められた必要性が存在する。
【０００７】
（その解決方法）
一つの側面において、本発明は、細菌やウイルス感染疾患のためのワクチンのような、抗原とともに投与したときに免疫アジュバントとして機能する新規化合物に関する。
第二の側面において、本発明は、本発明のアジュバント化合物の少なくとも１つを含有する新規アジュバント製剤に関する。
第三の側面において、本発明は、抗原と、本発明のアジュバント化合物の少なくとも１つを含有する新規な免疫刺激組成物に関する。
他の側面において、本発明は、本発明の化合物を、それに対して動物を免疫しようとする抗原とともに該動物に投与することによる動物の免疫方法に関する。
【０００８】
本発明は、一部、式Ｉ：
【化１１】
0004698027.tif 000002
[式中、Ｒ1は
（ａ）Ｃ(ＣＯ)；
（ｂ）Ｃ(Ｏ)‐Ｃ1-14アルキル−Ｃ(Ｏ)（但し、該Ｃ1-14アルキルはヒドロキシ、Ｃ1-5アルコキシ、Ｃ1-5アルキレンジオキシ、Ｃ1-5アルキルアミノまたはＣ1-5アルキル−アリールで任意に置換されており、該Ｃ1-5アルキル−アリールの該アリール残基はＣ1-5アルコキシ、Ｃ1-5アルキルアミノ、Ｃ1-5アルコキシ−アミノ、Ｃ1-5アルキルアミノ−Ｃ1-5アルコキシ、−Ｏ−Ｃ1-5アルキルアミノ−Ｃ1-5アルコキシ、−Ｏ−Ｃ1-5アルキルアミノ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ1-5アルキルＣ(Ｏ)ＯＨ、−Ｏ−Ｃ1-5アルキルアミノ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ1-5アルキル−Ｃ(Ｏ)−Ｃ1-5アルキルで任意に置換されている）；
（ｃ）ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ2−Ｃ15の直鎖または分岐鎖アルキル；および
（ｄ）−Ｃ(Ｏ)−Ｃ6-12アリーレン−Ｃ(Ｏ)−（該アリーレンはヒドロキシ、ハロゲン、ニトロまたはアミノで任意に置換されている）
からなる群から選ばれ、
ａおよびｂは独立して０、１、２、３または４であり、
ｄ、ｄ'、ｄ”、ｅ、ｅ’およびｅ”は独立して１〜４の整数であり、
Ｘ1、Ｘ2、Ｙ1およびＹ2は独立して、単結合、酸素原子、ＮＨ、Ｎ(Ｃ(Ｏ)Ｃ1-4アルキル）およびＮ(Ｃ1-4アルキル)2からなる群から選ばれ、
Ｗ1およびＷ2は独立して、カルボニル、メチレン、スルホンおよびスルホキシドからなる群から選ばれ、
Ｒ2およびＲ5は独立して、
(ａ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルキル、
（ｂ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルケニルまたはジアルケニル、
（ｃ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルコキシ、
（ｄ）−ＮＨ−Ｃ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルキル（式中、該アルキル基はオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されている）；および
（ｅ）
【化１２】
0004698027.tif 000003
（式中、ＺはＯおよびＮＨからなる群から選択され、ＭおよびＮは独立して、Ｃ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルアミノおよびアシルアミノからなる群から選択される）
からなる群から選択され、
Ｒ3およびＲ6は独立して、オキソまたはフルオロで任意に置換されたＣ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され、
Ｒ4およびＲ7は独立して、Ｃ(Ｏ)Ｃ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルキルまたはアルケニル、Ｃ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルキル、Ｃ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルコキシ、Ｃ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルケニル（該アルキル、アルケニルまたはアルコキシ基は独立して、ヒドロキシ、フルオロまたはＣ1〜Ｃ5アルコキシで任意に置換されている）からなる群から選択され、
Ｇ1、Ｇ2、Ｇ3およびＧ4は独立して、酸素原子、メチレン、アミノ、チオール、−ＮＨＣ(Ｏ)−、および−Ｎ(Ｃ(Ｏ)Ｃ1-4アルキル)−からなる群から選択され、
あるいはＧ2Ｒ4またはＧ4Ｒ7は一緒になり水素原子またはヒドロキシルであってよい]
で示される新規化合物、または薬学的に許容されるその塩に関し、
但し、該化合物は
【化１３】
0004698027.tif 000004
または
【化１４】
0004698027.tif 000005
ではない。
【０００９】
本発明はまた、式Ｉ：
【化１５】
0004698027.tif 000006
[式中、Ｒ1は
（ａ）Ｃ(ＣＯ)；
（ｂ）Ｃ(Ｏ)‐Ｃ1-14アルキル−Ｃ(Ｏ)（但し、該Ｃ1-14アルキルはヒドロキシ、Ｃ1-5アルコキシ、Ｃ1-5アルキレンジオキシ、Ｃ1-5アルキルアミノまたはＣ1-5アルキル−アリールで任意に置換されており、該Ｃ1-5アルキル−アリールの該アリール残基はＣ1-5アルコキシ、Ｃ1-5アルキルアミノ、Ｃ1-5アルコキシ−アミノ、Ｃ1-5アルキルアミノ−Ｃ1-5アルコキシ、−Ｏ−Ｃ1-5アルキルアミノ−Ｃ1-5アルコキシ、−Ｏ−Ｃ1-5アルキルアミノ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ1-5アルキルＣ(Ｏ)ＯＨ、−Ｏ−Ｃ1-5アルキルアミノ−Ｃ(Ｏ)−Ｃ1-5アルキル−Ｃ(Ｏ)−Ｃ1-5アルキルで任意に置換されている）；
（ｃ）ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ2−Ｃ15の直鎖または分岐鎖アルキル；および
（ｄ）−Ｃ(Ｏ)−Ｃ6-12アリーレン−Ｃ(Ｏ)−（該アリーレンはヒドロキシ、ハロゲン、ニトロまたはアミノで任意に置換されている）
からなる群から選ばれ、
ａおよびｂは独立して０、１、２、３または４であり、
ｄ、ｄ'、ｄ”、ｅ、ｅ’およびｅ”は独立して１〜４の整数であり、
Ｘ1、Ｘ2、Ｙ1およびＹ2は独立して、単結合、酸素原子、ＮＨ、Ｎ(Ｃ(Ｏ)Ｃ1-4アルキル）およびＮ(Ｃ1-4アルキル)2からなる群から選ばれ、
Ｗ1およびＷ2は独立して、カルボニル、メチレン、スルホンおよびスルホキシドからなる群から選ばれ、
Ｒ2およびＲ5は独立して、
(ａ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルキル、
（ｂ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルケニルまたはジアルケニル、
（ｃ）オキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されたＣ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルコキシ、
（ｄ）−ＮＨ−Ｃ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルキル（式中、該アルキル基はオキソ、ヒドロキシまたはアルコキシで任意に置換されている）；および
（ｅ）
【化１６】
0004698027.tif 000007
（式中、ＺはＯおよびＮＨからなる群から選択され、ＭおよびＮは独立して、Ｃ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルコキシ、アシルオキシ、アルキルアミノおよびアシルアミノからなる群から選択される）
からなる群から選択され、
Ｒ3およびＲ6は独立して、オキソまたはフルオロで任意に置換されたＣ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルキルまたはアルケニルからなる群から選択され、
Ｒ4およびＲ7は独立して、Ｃ(Ｏ)Ｃ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルキルまたはアルケニル、Ｃ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルキル、Ｃ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルコキシ、Ｃ2〜Ｃ20の直鎖または分岐鎖アルケニル（該アルキル、アルケニルまたはアルコキシ基は独立して、ヒドロキシ、フルオロまたはＣ1〜Ｃ5アルコキシで任意に置換されている）からなる群から選択され、
Ｇ1、Ｇ2、Ｇ3およびＧ4は独立して、酸素原子、メチレン、アミノ、チオール、−ＮＨＣ(Ｏ)−、および−Ｎ(Ｃ(Ｏ)Ｃ1-4アルキル)−からなる群から選択され、
あるいはＧ2Ｒ4またはＧ4Ｒ7は一緒になり水素原子またはヒドロキシルであってよい]
で示される化合物、または薬学的に許容されるその塩；
および少なくとも１の添加成分を含有する免疫アジュバント製剤をも包含する。
【００１０】
本発明の好ましい化合物において、以下の１またはそれ以上が存在する：ａおよびｂがそれぞれ２である；Ｘ1およびＹ1がそれぞれＮＨである；Ｒ1がＣ(Ｏ)またはＣ(Ｏ)−Ｃ1-14アルキル−Ｃ(Ｏ)である；ｄ'およびｅ'がそれぞれ１である；ｄ”およびｅ”がそれぞれ１である；ＸがＯまたはＮＨ、より好ましくはＮＨである；ＷがＣ(Ｏ)である；またはｄ'およびｅ'がそれぞれ２である。
さらに好ましい態様において、Ｒ1はＣ(Ｏ)Ｃ1-14アルキル−Ｃ(Ｏ)であり、該Ｃ1-14アルキルがたとえばＣ1-5アルコキシ基で置換されている。
最も好ましい態様において、本発明は、化合物ＥＲ８０３０２２、ＥＲ８０３０５８、ＥＲ８０３７３２、ＥＲ８０４０５３、ＥＲ８０４０５７、ＥＲ８０４０５８、ＥＲ８０４０５９、ＥＲ８０４４４２、ＥＲ８０４６８０およびＥＲ８０４７６４、およびこれら化合物を含有する組成物に関する。
本発明はまた、抗原および本発明の上記免疫アジュバント製剤を含有する新規免疫刺激組成物にも関する。
さらに、本発明の化合物を、それに対して動物を免疫しようとする抗原とともに該動物に投与することによる動物の免疫方法もまた提供される。
【００１１】
定義
本明細書におけるカルボニルは、（Ｃ＝Ｏ）残基である。
本明細書におけるジカルボニルは、構造(Ｃ＝Ｏ)−アルキル−(Ｃ＝Ｏ)または(Ｃ＝Ｏ)−アリール−(Ｃ＝Ｏ)を有する残基であり、該残基は末端の両カルボニル残基の炭素原子により分子に結合する。
本明細書におけるオキソは、＝Ｏ基である。
本明細書におけるアルキルエステルは、構造Ｏ−(Ｃ＝Ｏ)−アルキルを有する残基であり、該残基は該エステル基の非二重結合酸素原子により分子に結合する。
本明細書におけるアルケニルエステルは、構造Ｏ−(Ｃ＝Ｏ)−炭素鎖（ここで、該炭素鎖は炭素−炭素二重結合を含む）を有する残基であり、該残基は該エステル基の非二重結合酸素原子により分子に結合する。
【００１２】
「アルキレン」とは、２価の直鎖または分枝鎖アルキル炭化水素基を意味する。
「アルケニレン」とは、単一の炭素−炭素二重結合を有する２価の直鎖または分枝鎖アルキル炭化水素基を意味する。
「ジアルケニレン」とは、２つの炭素−炭素二重結合を有する２価の直鎖または分枝鎖アルキル炭化水素基を意味する。
「アリーレン」とは、２価の芳香族基を意味する。
本明細書における略語の「Ｂｏｃ」は、ｔ−ブチルオキシカルボニルを意味する。
【００１３】
本発明の化合物および組成物に関連して使用した「１型」なる語は、上記式Ｉにおいて、ａとｂの値が同じであり、ｄとｅの値が同じであり、ｄ'とｅ'の値が同じであり、ｄ”とｅ”の値が同じであり、Ｘ1とＹ1が同じであり、Ｘ2とＹ2が同じであり、Ｗ1とＷ2が同じであり、Ｒ2とＲ5が同じであり、Ｇ1とＧ3が同じであり、Ｒ3とＲ6が同じであり、Ｇ2とＧ4が同じであり、Ｒ4とＲ7が同じであるものに対応する化合物をいう。本明細書において「２型」とは、上記式Ｉにおいて、以下の１またはそれ以上が当てはまるものに対応する化合物または組成物をいう：ａとｂの値が異なる；ｄとｅの値が異なる；ｄ'とｅ'の値が異なる；ｄ”とｅ”の値が異なる；Ｘ1とＹ1が異なる；Ｘ2とＹ2が異なる；Ｗ1とＷ2が異なる；Ｒ2とＲ5が異なる；Ｇ1とＧ3が異なる；Ｒ3とＲ6が異なる；Ｇ2とＧ4が異なる；またはＲ4とＲ7が異なる。
本明細書において言及する全ての特許、特許出願および刊行物を、参照のためのその全体において引用する。用語において矛盾があるときは、本明細書が優先される。
【００１４】
一般的な合成法
１．ジアミド化合物の合成
一般に、２−アミノ−１,３−ジヒドロキシプロパンまたは（±）セリノールは、トリフルオロメタンスルホニルアジドと反応させて２−アジド化合物に変換し、ついで操作を容易にするために過酢酸エステルとして保護する。得られた化合物を脱アセチル化し、ついでジオール残基の適当な活性化第一級アルコールと反応させる。ついで、この反応の生成物の第一級アルコール残基をたとえばＴＢＤＰＳＣＩで保護し、ついでホスゲン、次にアリルアルコールと反応させて完全に保護したジオールを得る。ついで保護したジオールを処理して第一級アルコールから保護基を開裂する。この保護していないアルコールを実施例に示す式（ＩＩ）の適当に官能化したリン酸化試薬と反応させてリン酸エステル化合物を生成する。生成物のアジド残基を還元し、ついで活性化アシル酸と反応させてアミドを生成する。官能化リン酸エステル上の保護した末端アミンを脱保護し、ついでＥＤＣなどの脱水剤の存在下、ホスゲンまたはジカルボン酸と反応させる。ついで、得られた化合物のリン酸エステル基を脱保護してラセミアミドを得る。
【００１５】
２．１型のキラルなジアミド化合物の合成
一般に、所望の構造を有するキラルなアミノ酸エステルはベンズイミデートエステルで保護する。保護した化合物をたとえばＤＩＢＡＬなどの還元剤と反応させてアミノ酸の酸残基をアルコールに還元する。得られたアルコール化合物をジオール残基の適当に活性化した第一級アルコールと反応させ、ついでベンズイミデート保護基を開裂してアミノジオールを得る。ついで、このジオールを適当な酸クロライドと反応させてジオール−アミドを生成する。
ついで、上記ジオール−アミドを適当に官能化したリン酸化試薬と遊離の第一級ヒドロキシル基にて反応させる。得られた化合物を、第二級アルコール基にて適当なアシル残基でエステル化する。ついで、Ｎ−ＢＯＣ基をリン酸化試薬（１１）により導入したアミノ基から開裂して、遊離の第一級アミンを有するリン酸エステルを得る。ついで、この生成物を脱水剤の存在下、ホスゲンまたはジカルボン酸と反応させてジアミド生成物を得る。ついで、典型的にパラジウム（０）およびフェニルシランを用い、ジアミド生成物の保護したリン酸基を脱保護する。
【００１６】
３．２型のキラルなジアミド化合物の合成
２型のキラルなジアミド化合物の合成は、リン酸エステル化合物の第一級アミン基から保護基を開裂した直後までは１型のキラルなジアミド化合物について記載したのと本質的に同様にして行う。この時点で、酸残基の一方を保護したジカルボン酸を第一級アミン基と反応させてモノアミドを得る。ついで、他方のカルボン酸の保護基を開裂して遊離のカルボン酸を生成させ、ついで該遊離のカルボン酸を別の適当に置換したリン酸エステル系からの第一級アミンと脱水剤の存在下で反応させて２型のジアミドを得、ついで、これをリン酸エステル基を脱保護すべく処理して本発明の所望の化合物を得ることができる。
本発明の２型のキラルな尿素化合物の特別な場合は、リン酸エステルのＮ−ＢＯＣアミノ基の第一級アミノ基を脱保護し、ついでイソシアナート化合物を生成するためにクロロギ酸トリクロロメチルなどと反応させる。ついで、別の適当に置換したリン酸エステル系からの第一級アミンと反応させて２型の尿素生成物を得る。ついで、この生成物をリン酸エステル基を脱保護すべく処理する。
【００１７】
４．グリセリンジアミドアナログ
本発明のこれら化合物は、アミド残基の代わりにリン酸エステル基のベータ位にある炭素原子に結合したエステル残基を有する。
一般に、これら化合物は、保護したキラルなグリセリンをジオール残基の活性化第一級アルコールでエステル化し、ついで第二級アルコール残基をエステル化しグリセリン残基を脱保護して新たなジオールを得ることによって調製する。ついで、該ジオールの第一級ヒドロキシル基を保護し、第二級ヒドロキシル基をアシル残基と縮合してジエステルを得る。第一級ヒドロキシルを脱保護し、ついでリン酸化試薬でエステル化する（該化合物（１１）については以下に例示）。リン酸化試薬により導入したアミン基の脱保護の後、生成物をＥＤＣなどの脱水剤を用いてホスゲンまたはジカルボン酸と反応させる。その後、リン酸基を脱保護して本発明の化合物を得る。
【００１８】
上記に一般的に記載した合成において、本発明の化合物のＲ１における置換基は異なるジカルボン酸化合物を用いることにより容易に変化させることができる。そのような酸は、ＥＤＣなどの脱水剤を用いるか、または、たとえば対応二酸クロライドを合成してジカルボン酸を活性化することにより、上記反応スキームのリン酸エステル中間体のアミン基にカップリングすることができる。
上記式Ｉ中の変数Ｒ２およびＲ５により示される置換基は、式Ｉ中のＸまたはＹによって示されるへテロ原子のアミド化またはエステル化反応において適当な活性化酸または酸クロライドを利用することによって容易に変化させることができる。
式Ｉの変数Ｒ３およびＲ６により示される置換基は、所望の数の炭素原子を含有し、活性化炭素官能基、たとえばハロゲンまたはスルホネート（ＯＳＯ２ＣＨ３、ＯＳＯ２ＣＦ３、ＯＳＯ２ＣＨ２Ｃ６Ｈ４−ｐ−ＣＨ３）（アジドジオール、アミノアルコール、またはグリセリン出発物質と反応することができる）をも含有する中間体を用いて変化させることができる。
【００１９】
式Ｉ中の変数Ｒ４およびＲ７により示される置換基は、上記反応スキームにおいて用いた第二級ヒドロキシル基のエステル化において適当な活性化酸または酸クロライドを用いることにより容易に変化させることができる。
式Ｉの化合物中のａおよびｂの値は、下記化合物（１１）によって例示されるようにリン酸化試薬を合成するときに適当なＮ−ＢＯＣ保護アミノアルコールを用いることによって変化させることができる。式Ｉの化合物中の変数ｄおよびｅの値は、適当な２−アミノジオールまたは２−ヒドロキシジオール出発物質を用いることにより変更することができる。
【００２０】
アジュバントおよびワクチン製剤および投与
本発明はまた、本発明のアジュバント化合物を含むアジュバント製剤、並びに本発明のアジュバント化合物を含むワクチンおよび他の免疫刺激製剤にも関する。特定の抗原に対する免疫応答を刺激する方法も本発明の範囲に包含される。
本発明のアジュバントおよびアジュバント含有ワクチン製剤が有用に投与される宿主動物としては、ヒト並びに非ヒトの哺乳動物、魚類、爬虫類などが挙げられる。
典型的に、抗原は本発明のアジュバント化合物との混合物として用いられる。本発明のアジュバントの他の製剤においては、本発明のアジュバント化合物のアミノ、カルボキシル、ヒドロキシルおよび／またはリン酸残基に共有結合した抗原を用いるのが、ある種の応用において有用である。かくして、本発明の治療学的に有効な組成物の特別な製剤は、該製剤を投与した被験者において該アジュバントが生物学的に利用でき、安全で、かつ有効な適切な仕方で行うことができる。
【００２１】
本発明は、広く、治療学的アジュバント製剤を包含するものであり、該製剤は、たとえば、（i）少なくとも１の治療学的に有効な抗原またはワクチン、および（ii）少なくともの１の本発明によるアジュバント化合物を含む。
そのような治療学的組成物は、たとえば、下記よりなる群から選ばれる少なくとも１の抗原性物質を含む：
（Ａ）生きた、熱で殺した、または化学的に弱毒化したウイルス、細菌、マイコプラズマ、真菌、および原生動物；
（Ｂ）（Ａ）の断片、抽出物、サブユニット、代謝産物および組換え構築物；
（Ｃ）哺乳動物タンパク質および糖タンパク質の断片、サブユニット、代謝産物および組換え構築物；
（Ｄ）腫瘍特異的な抗原；および
（Ｅ）核酸ワクチン。
【００２２】
それゆえ、治療学的組成物は、本発明のアジュバント化合物と組み合せてあらゆる適当な抗原またはワクチン成分を利用することができ、たとえば、本発明のアジュバント化合物と組み合せて病原性および非病原性の生物、ウイルス、および真菌よりなる群から選ばれる抗原性の物質を利用することができる。
さらなる例として、そのような治療学的組成物は、疾患状態および条件、たとえば、天然痘、黄熱、ジステンパー、コレラ、鶏痘、猩紅熱、ジフテリア、破傷風、百日咳、インフルエンザ、狂犬病、おたふくかぜ、麻疹、手足口病、および小児麻痺に対して薬理学的に活性なタンパク質、ペプチド、抗原およびワクチンを適当に含んでいてよい。その結果得られる、（i）抗原、および（ii）本発明の少なくとも１のアジュバント化合物を含むワクチン製剤において、抗原およびアジュバント化合物は、該製剤をワクチン接種した宿主動物、胚または卵子に投与したときに免疫応答を引き起こすのに有効な量で互いに存在する。
【００２３】
他の態様において、本発明の化合物はワクチン抗原に、たとえばアミノ、カルボニル、ヒドロキシルまたはリン酸残基により共通結合してよい。本発明の化合物は結合させることができ、本発明の組成物をワクチン抗原に連結させる方法は本明細書の開示を参照した当業者により理解される。アジュバント化合物のワクチンへの連結は、P, Hoffmanら、Biol. Chem. Hoppe-Sayler, 1989, 370: 575-582; K.-H. Wiesmullerら、Vaccine, 1989, 7: 29-33; K.-H. Wiesmullerら、Int. J. Peptide Protein Res., 1992, 40: 255-260; J.-P. Defourtら、Proc. Natl. Acad. Sci. 1992, 89: 3879-3883; T. Tohokuniら、J. Am. Chem. Soc., 1994, 116: 395-396; F. Reichel, Chem. Commun., 1997, 2087-2088; H. Kamitakahara, Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 37: 1524-1528; W. Dullenkopfら、Chem. Eur. J., 1999, 5: 2432-2438（これら全てを参照のため引用する）に記載の方法のいずれによっても行うことができる。
【００２４】
かくして得られた（i）抗原、および（ii）アジュバント化合物を含むワクチン製剤は、該ワクチン製剤を動物において抗体応答を産生するのに充分な量で該動物に投与することによって、該動物において免疫応答を誘発させるために有用に用いられる。
投与方法としては、アジュバント、アジュバント含有ワクチン、またはアジュバントおよび／または抗原を、アジュバントおよび関連する抗原が免疫刺激として有効である宿主動物の１またはそれ以上の体腔部位に送達するのに適した手段および／または方法の使用が挙げられる。送達方法としては、これらに限られるものではないが、非経口投与法、たとえば、皮下（ＳＣ）注射、経皮（transcutaneous）、鼻内（ＩＮ）、眼内、経皮（transdermal）、筋肉内（ＩＭ）、皮内（ＩＤ）、腹腔内（ＩＰ）、膣内、肺内、および直腸投与、並びに非非経口投与、たとえば経口投与が挙げられる。
【００２５】
本発明のアジュバントおよびワクチン組成物の投与量および適当な剤型は、通常の抗体力価決定法および通常の生物学的有効性（bioefficacy）／生物学的適合性（biocompatibility）プロトコールの使用により、またアジュバントとともに用いた特定の抗原または治療剤、所望の治療効果、および生物学的活性の所望の期間の長さに依存して、当業者が不当な実験を行うことなく容易に決定できる。
本発明のアジュバントは、他の適当な薬理学的または生理学的に活性な薬剤、たとえば抗原性の物質および／または他の生物学的に活性な薬剤とともに宿主動物に有用に投与できる。
本発明の製剤は、さらなる成分、たとえば、生理食塩水、オイル、スクアレン、油−水分散剤、リポソームなど、および他のアジュバント、たとえば、ＱＳ−２１、ムラミルペプチド、フロイントの不完全アジュバントなどを含んでいてよい。
【００２６】
合成の実施例
以下に記載する合成法における全ての反応生成物は、満足のいくＮＭＲスペクトルおよびシリカゲル上での薄層クロマトグラフィープロフィルを与えた。クロマトグラフィーはすべてシリカゲル上で行い、溶出を薄層クロマトグラフィーによりモニターした。完了した反応は全て薄層クロマトグラフィー分析により決定した。反応は全て、特に断らない限り、窒素下、室温で行った。反応の溶媒は全て、特に断らない限り、無水であった。以下に記載する化学反応のための典型的な処理は、水洗、無水硫酸ナトリウムでの乾燥および減圧下での溶媒除去を含んでいた。
【００２７】
実施例１：コハク酸エステル−１
【化１７】
0004698027.tif 000008
２５０ｍＬの水中のアジ化ナトリウム（１０７.６７ｇ）の溶液に３００ｍＬのメチレンクロライドを加えた。混合物を０℃に冷却し、無水トリフルオロメタンスルホン酸（５７ｍＬ）を０.３２ｍＬ／分の速度にて滴下して加えた。混合物を０℃にてさらに６時間攪拌し、−２０℃で７２時間貯蔵した。混合物を１０℃に温め、ついでTeflon分別漏斗でメチレンクロライドで抽出した。コンバインした有機層を乾燥させた（硫酸マグネシウム）。上記懸濁液を、メタノール（２００ｍＬ）中の(±)−２−アミノ−１,３−ジヒドロキシプロパン（１）（９.８９ｇ）とジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、５４ｇ）との攪拌溶液中に１０℃にてゆっくりと濾過した。得られた反応混合物を室温で１７時間攪拌した。
溶媒を減圧下で除去し、残渣をピリジン（２００ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。無水酢酸（５０ｍＬ）を滴下して加え、混合物を室温で２０時間攪拌した。さらに無水酢酸（２０ｍＬ）を加え、４時間後、混合物を氷上に注ぎ、常法により処理した。クロマトグラフィーは１６ｇのジアセテート（２）を油状物として与えた。
【００２８】
【化１８】
0004698027.tif 000009
ジアセテート（２）（１６ｇ）をメタノール（１５０ｍＬ）に溶解し、ナトリウム金属（２.０ｇ）をゆっくりと加えた。混合物を９０分間攪拌し、ｐＨが７またはそれ以下になるまでDowex50-8樹脂を加えた。混合物を濾過し、ついで濾液を濃縮し、クロマトグラフィーにかけて６.７３ｇのジオール（３）を得た。
【００２９】
【化１９】
0004698027.tif 000010
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、２００ｍＬ）中の水素化ナトリウム（１.２４ｇの６０％油状分散液をヘキサンで３回洗浄し、窒素下で乾燥させたもの）の懸濁液にＴＨＦ（１００ｍＬ）中のアジド−ジオール（３）（６.７３ｇ）を滴下して加え、ついでＴＨＦ（１００ｍＬ）中の３−Ｒ−ヒドロキシ−１−Ｏ−トシル−１−デカノール（トシレート、９.４４ｇ）を滴下して加えた。混合物を１６時間攪拌し、メタノール（２００ｍＬ）で希釈し、Amberlite 125H+とともに２５分間攪拌し、濃縮乾固した。クロマトグラフィーは４.３７ｇの（５）を与えた。
【００３０】
【化２０】
0004698027.tif 000011
メチレンクロライド（３０ｍＬ）中のジオール（５）（５.３２ｇ）の溶液にトリエチルアミン（ＴＥＡ、６ｍＬ）およびＤＭＡＰ（痕跡量）を加え、ついでｔ−ブチルジフェニルシリルクロライド（ＴＢＤＰＳＣｌ、５ｍＬ）を加え、混合物を一夜攪拌した。混合物を常法により処理した。クロマトグラフィーは３.６ｇの第二級アルコール（６）を油状物として与えた。
【００３１】
【化２１】
0004698027.tif 000012
トルエン（３０ｍＬ）中の第二級アルコール（６）（２.９５ｇ）の溶液にピリジン（１.８ｍＬ）を加え、ついでホスゲン（トルエン中の１.９３Ｍ溶液を４.５ｍＬ）を０℃にてゆっくりと加えた。０℃で２０分間攪拌した後、アリルアルコール（３.１ｍＬ）を滴下して加えた。さらに室温で６０分間攪拌した後、反応液を常法により処理した。クロマトグラフィーは３.２４ｇの保護アルコール（７）を油状物として与えた。
【００３２】
【化２２】
0004698027.tif 000013
メチレンクロライド（３ｍＬ）中の保護アルコール（７）（１.２９ｇ）の溶液にアセトニトリル（１２ｍＬ）中のフッ化水素酸（ＨＦ、４ｍＬ）を加えた。混合物を一夜攪拌し、常法により処理した。クロマトグラフィーは１５０ｍｇのアルコール（８）を油状物として与えた。
【００３３】
【化２３】
0004698027.tif 000014
メチレンクロライド（０.６ｍＬ）中のアルコール（８）（１５０ｍｇ）の溶液にテトラゾール（７４ｍｇ）およびリン酸化試薬（１１）（１７５ｍｇ）を加えた。３０分後、冷ＴＨＦ（０.５ｍＬ）−水（０.５ｍＬ）溶液中のオキソン（３２３ｍｇ）を冷反応混合物に加えた。３時間後、反応液を常法により処理した。クロマトグラフィーは２４２ｍｇの（９）を油状物として与えた。
【００３４】
【化２４】
0004698027.tif 000015
リン酸化試薬１１を調製するため、メチレンクロライド中の蒸留ジイソプロピルアミン（９.０ｍＬ）の溶液にテトラゾール（４.５１ｇ）を室温にて加え、ついで１.５時間攪拌した。アリルホスホロジアミダイト（１０）（２０.５ｍＬ）を６５ｍＬ／時の速度で滴下して加え、ついでさらに３時間攪拌した。上記反応混合物にメチレンクロライド（５０ｍＬ）中のＮ−ＢＯＣ−２−アミノエタノール（１０.３６ｇ）を８.４ｍＬ／時の速度で滴下して加え、ついでさらに１８時間攪拌した。白色の懸濁液をセライト５４５で濾過し、２０ｍＬのメチレンクロライドで洗浄した。濾液を濃縮し、ついで懸濁し、残渣をヘキサン（２００ｍＬ）を用いて濾過した。得られたヘキサン濾液を濃縮乾固し、２,１０ｍＬ部分のトルエンと共沸して粗製の生成物（１１）（２１.５４ｇ）を油状物として得た。
【００３５】
【化２５】
0004698027.tif 000016
メチレンクロライド（７.８ｍＬ）中のジチオフェニルスズ（１.３ｇ）の懸濁液にチオフェノール（４００μＬ）を加え、ついでＴＥＡ（５４３μＬ）を加えた。反応混合物を室温で１５分間攪拌し、ついで攪拌を停止して残渣をフラスコの底に沈殿させた。１.０ｍＬの上記溶液をメチレンクロライド（０.５ｍＬ）中のアジド（９）（２４２ｍｇ）の溶液に加え、３０分間攪拌させた。０.１ＮのＮａＯＨで反応停止させ、ついで常法により処理して１９３.１ｍｇのアミン（１２）を油状物として得た。
【００３６】
【化２６】
0004698027.tif 000017
メチレンクロライド中のアミン（１２）（１９３ｍｇ）およびアシル酸（Christらの米国特許第５,５３０,１１３号に従って調製できる）（１３２ｍｇ）の乾燥溶液に１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ、９３ｍｇ）を加えた。室温で９０分間攪拌した後、反応を停止させ、常法により処理して２３２ｍｇの保護リン酸エステル（１３）を油状物として得た。
【００３７】
【化２７】
0004698027.tif 000018
メチレンクロライド（１ｍＬ）中の保護リン酸エステル（１３）（２３２ｍｇ）の溶液にトリエチルシラン（ＴＥＳ、１２０μＬ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、１.２ｍＬ）を加え、ついで３０分間攪拌した。ＴＦＡを減圧下で除去し、ついで３,５ｍＬの部分のトルエンと共沸した。２０ｍＬのメチレンクロライドを加え、混合物を常法により処理して１７４ｍｇの遊離のアミン（１４）を油状物として得た。
【００３８】
【化２８】
0004698027.tif 000019
メチレンクロライド（０.５ｍＬ）中の遊離のアミン（１４）（１７４ｍｇ）の乾燥溶液にコハク酸（１２.１ｍｇ）およびＥＤＣ（５９ｍｇ）を加えた。１時間後、反応液を常法により処理した。クロマトグラフィーは１４３.１ｍｇのブロッキングジホスフェート（１５）を油状物として与えた。
【００３９】
【化２９】
0004698027.tif 000020
乾燥ボックス中の脱気クロロホルム（１.７ｍＬ）中のブロッキングジホスフェート（１５）（１７７.９ｍｇ）の溶液に、まずフェニルシラン（ＰｈＳｉＨ３、５０μＬ）を加え、ついでテトラキス−トリフェニルホスフィンパラジウム（０）（Ｐｄ(ＰＰＨ３)４、７０ｍｇ）を加えた。１時間後、反応液をボックスから取り出し、クロロホルム：メタノール：水（２：３：１）を加え、混合物を１時間攪拌した。これをジエチルアミノ−エチルセルロース（ＤＥＡＥ）クロマトグラフィーカラムに注いだ。カラムをクロロホルム：メタノール：水（２：３：１）中の０.０Ｍ〜０.１Ｍ酢酸アンモニウムの直線勾配で溶出し、所望のフラクションを等容量のクロロホルムで抽出し、濃縮乾固し、０.１ＮのＮａＯＨ（１７５μＬ）を加え、ついで凍結乾燥して１３６.２ｍｇの（１６）を白色固体として得た。
【００４０】
実施例２：キラルなマロン酸エステル−１型
【化３０】
0004698027.tif 000021
水（５７５ｍＬ）中の炭酸カリウム（１６５ｇ）の冷溶液にメチレンクロライド（２００ｍＬ）を加え、ついでエチルベンズイミデート塩酸塩（１７）（１００ｇ）を加え、その後、混合物を８分間攪拌した。層を分離し、水性層をメチレンクロライドで抽出した。有機層をコンバインし、乾燥し、ついで溶媒を減圧除去して８３ｇの（１８）を得た。
【００４１】
【化３１】
0004698027.tif 000022
１,２−ジクロロエタン（４５０ｍＬ）中のＬ−セリンメチルエステル塩酸塩（１９）（４１.６ｇ）の溶液にエチルベンズイミデート（１８）（３６ｇ）を加えた。混合物を２０時間加熱還流し、冷却し、珪藻土で濾過し、濃縮乾固して５６ｇのエチルエステル（２１）を白色固体として得た。
【００４２】
【化３２】
0004698027.tif 000023
ＴＨＦ（５００ｍＬ）中のエチルエステル（２１）（５６ｇ）の氷冷溶液に水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ、ヘキサン中の１Ｍ溶液を５４５ｍＬ）を滴下して加えた。室温を一夜かけて室温に温め、ついでロシェル塩の水溶液（１.０Ｌの水中に５００ｇ）に注意深く注いだ。混合物を１時間攪拌し、常法により処理した。クロマトグラフィーは２５.５ｇのアルコール（２２）を白色固体として与えた。
【００４３】
【化３３】
0004698027.tif 000024
ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の水素化ナトリウム（６０％の油状分散物を５.３ｇ）の懸濁液に、２５０ｍＬのＴＨＦ中のアルコール（２２）（２４ｇ）を加えた。３０分後、トシレート（４）を２５０ｍＬのＴＨＦ中にて２.５時間かけて加え、一夜攪拌した。混合物を氷冷し、メタノールを加え、溶媒を減圧下に除去し、クロマトグラフィーにかけて４.３２ｇのアルコール（２４）を油状物として得た。
【００４４】
【化３４】
0004698027.tif 000025
アルコール（２４）（４.３ｇ）を４Ｎの塩酸水溶液に溶解し、２０時間加熱還流した。混合物を冷却し、濾過し、エーテルで抽出し、水酸化ナトリウムで塩基性にし、クロロホルムで２回抽出した。コンバインしたクロロホルム層を乾燥し、溶媒を除去して２.８８ｇのジオール（２５）を油状物として得た。
【００４５】
【化３５】
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ジオール（２５）（２.８８ｇ）を重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（４５ｍＬ）およびＴＨＦ（２５ｍＬ）に溶解し、５分間攪拌した。ミリストイルクロライド（３.４ｍＬ）を２５分間かけて滴下して加え、その後、反応混合物をさらに１時間攪拌した。反応液を常法により処理し、クロマトグラフィーにかけて３.０７ｇのアルコール（２６）を油状物として得た。
【００４６】
【化３６】
0004698027.tif 000027
メチレンクロライド（１４０ｍＬ）中のアルコール（２６）（１.７８ｇ）の溶液にテトラゾール（６８３ｍｇ）を加え、ついでリン酸化試薬（１１）（１.６ｍＬ）を加えた。３０分後、混合物を氷冷し、ＴＨＦ（１０５ｍＬ）を加え、ついでオキソン溶液（９０ｍＬの水中に３ｇ）を加えた。５分後、氷浴を除去し、混合物を３０分間攪拌した。反応液を常法により処理し、クロマトグラフィーにかけて２.９９ｇのアルコール（２７）を油状物として得た。
【００４７】
【化３７】
0004698027.tif 000028
メチレンクロライド（１２６ｍＬ）中のアルコール（２７）（３.９ｇ）の溶液にＥＤＣ（１０.８ｇ）、ＤＭＡＰ（６６ｍｇ）およびドデシル酸（１.６２ｇ）を加え、一夜攪拌した。さらに酸（１.６ｇ）、ＥＤＣ（１ｇ）およびＤＭＡＰ（０.５ｇ）を加えた。３時間後、反応液を常法により処理し、クロマトグラフィーにかけて２.０７ｇのＮ−ＢＯＣ−保護アミン（２８）を得た。
【００４８】
【化３８】
0004698027.tif 000029
メチレンクロライド（１.５ｍＬ）中のＮ−ＢＯＣ−保護アミン（２８）（１８７.３ｍｇ）の溶液にＴＥＳ（２４０μＬ）およびＴＦＡ（３００μＬ）を加え、混合物を４５分間攪拌した。トルエンを加え、溶媒を減圧下に除去した。残渣をメチレンクロライドに溶解し、常法により処理して１５４ｍｇのアミン（２９）を油状物として得た。
【００４９】
【化３９】
0004698027.tif 000030
メチレンクロライド（０.５ｍＬ）中のアミン（２９）（７５.６ｍｇ）およびマロン酸（４.８ｍｇ）の氷冷溶液にＥＤＣ（２７ｍｇ）を加え、ついで冷浴を除去した。１時間後、痕跡量のＤＭＡＰを加えた。２.５時間後、混合物を直接クロマトグラフィーにかけて５４.１ｍｇの二量体生成物（３０）を得た。
【００５０】
【化４０】
0004698027.tif 000031
脱気クロロホルム（２ｍＬ）中の二量体（３０）（５４ｍｇ）の溶液にＰｈＳｉＨ３（１４μＬ）およびＰｄ(ＰＰｈ３)４（１８ｍｇ）を加え、冷浴を除去した。１時間後、反応をクロロホルム：メタノール：水（２；３；１）で停止させ、ＤＥＡＥセルロースクロマトグラフィーカラムに注ぎ、クロマトグラフィーにかけて半固体を得た。この固体を滅菌水に溶解し、０.１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（３０６μＬ）を加え、混合物を凍結乾燥して白色固体（３１）（２５ｍｇ）を得た。
【００５１】
実施例３：キラルなマロン酸エステル−２型
【化４１】
0004698027.tif 000032
ジクロロエタン（２７０ｍＬ）中のＤ−セリンメチルエステル塩酸塩（３２）（２５ｇ）の溶液にエチルベンズイミデート（２０）（２４ｇ）を加えた。２０時間還流した後、混合物を室温に冷却し、珪藻土で濾過し、溶媒を減圧下で除去して３４ｇのメチルエステル（３３）を白色固体として得た。
【００５２】
【化４２】
0004698027.tif 000033
ＴＨＦ（３００ｍＬ）中のメチルエステル（３３）（３４ｇ）の氷冷溶液にヘキサン中のＤＩＢＡＬの溶液（１.０Ｍ、３２２ｍＬ）を滴下して加えた。混合物を一夜かけて室温に温め、ついでロシェル塩の水溶液に注意深く注いだ。ついで、混合物を１時間攪拌し、処理した。クロマトグラフィーは１８.６ｇのアルコール（３６）を白色固体として与えた。
【００５３】
【化４３】
0004698027.tif 000034
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の洗浄した水素化ナトリウム（６０％の油状分散液を４ｇ）の懸濁液にＴＨＦ（４０ｍＬ）中のアルコール（３６）（８.６ｇ）の溶液を加えた。混合物を１時間攪拌し、ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のトシレート（２３）（１７.５ｇ）の溶液を加えた。混合物を一夜攪拌し、ついでトシレート（２３）をさらに加え（５ｇ）、さらに４時間攪拌した。冷反応混合物にメタノールを加え、溶媒を減圧除去し、残渣をクロマトグラフィーにかけて１.０３ｇのアルコール（３７）を固体として得た。
【００５４】
【化４４】
0004698027.tif 000035
アルコール（３７）（１.０３ｇ）を４Ｎ塩酸水溶液（２５ｍＬ）に溶解し、混合物を１００℃に２０時間加熱した。さらに塩酸（５ｍＬ）を加え、還流を６時間続けた。混合物を冷却し、エーテルで洗浄し、１Ｎ水酸化ナトリウムで塩基性にし、クロロホルムで抽出した（３×）。コンバインしたクロロホルム層を乾燥し、溶媒を減圧除去して５５３ｍｇのアミノ−ジオール（３９）を得た。
【００５５】
【化４５】
0004698027.tif 000036
ＴＨＦ（３ｍＬ）中のアミノ−ジオール（３９）（５５３ｍｇ）の溶液に重炭酸ナトリウムの飽和水溶液（６ｍＬ）を加え、ついでミリストイルクロライド（６２８μＬ）を加えた。５０分後、反応液を常法により処理した。クロマトグラフィーは３８９ｍｇのアミド−ジオール（４１）を油状物として与えた。
【００５６】
【化４６】
0004698027.tif 000037
メチレンクロライド（４０ｍＬ）中のアミド−ジオール（４１）（５３１ｍｇ）の溶液にテトラゾール（２０３ｍｇ）を加え、混合物を５分間攪拌した。ついで、リン酸化試薬（１１）（４８２ｍｇ）を加えた。２０分後、さらにリン酸化試薬（１１）（１００ｍｇ）を加え、さらに２０分後、さらに１００ｍｇを加えた。さらに２０分後、さらに５０ｍｇを加えた。２０分後、混合物をＴＨＦ（３０ｍＬ）／オキソン（１.０７ｇ）／水（３０ｍＬ）の冷溶液に注いだ。混合物を０℃で５分間、ついで室温で２０分間攪拌し、その後、反応液を常法により処理した。クロマトグラフィーは８５２ｍｇのリン酸アルコール（４２）を油状物として与えた。
【００５７】
【化４７】
0004698027.tif 000038
メチレンクロライド（１２６ｍＬ）中のリン酸アルコール（４２）（３.９ｇ）の溶液に、ＥＤＣ（１０.８ｇ）、ＤＭＡＰ（６６ｍｇ）およびドデシル酸（１.６２ｇ）を加えた。反応混合物を一夜攪拌した。さらに酸（１.６ｇ）、ＥＤＣ（１ｇ）およびＤＭＡＰ（０.５ｇ）を加えた。３時間後、反応液を常法により処理し、クロマトグラフィーにかけて２.０７ｇの保護アミン（４３）を得た。
【００５８】
【化４８】
0004698027.tif 000039
メチレンクロライド（１.５ｍＬ）中の保護アミン（４３）（１９４ｍｇ）の溶液にＴＥＳ（２４０μＬ）およびＴＦＡ（３００μＬ）を加えた。混合物を２０分間攪拌し、さらにＴＥＳ（５０μＬ）およびＴＦＡ（５０μＬ）を加えた。１時間後、トルエンを加え、溶媒を減圧下で除去し、ついで混合物を常法により処理した。粗製の遊離アミン生成物（４４）を直ちに次の反応に用いた。
【００５９】
【化４９】
0004698027.tif 000040
メチレンクロライド（２５０μＬ）中の遊離アミン（２９）（４３.５ｍｇ）の氷冷溶液に、マロン酸モノｔ−ブチル（８.３μＬ）、ＥＤＣ（１２.４ｍｇ）および痕跡量のＤＭＡＰを加えた。氷浴を除去し、２時間後、反応液を常法により処理した。クロマトグラフィーは４４ｍｇのアミド（４５）を与えた。
【００６０】
【化５０】
0004698027.tif 000041
メチレンクロライド（０.５ｍＬ）中のアミド（４５）（４４ｍｇ）の溶液にＴＥＳ（９０μＬ）およびＴＦＡ（１００μＬ）を加えた。２時間後、トルエンを加え、溶媒を減圧除去した。混合物を常法により処理して４４.２ｍｇの遊離酸（４６）を得た。
【００６１】
【化５１】
0004698027.tif 000042
メチレンクロライド（５００μＬ）中の遊離酸（４６）（４１ｍｇ）および遊離アミン（４４）（２６.３ｍｇ）の氷冷溶液にＥＤＣ（１３ｍｇ）を加え、混合物を３０分間攪拌した。さらにＥＤＣ（５ｍｇ）およびＤＭＡＰ（２ｍｇ）を加え、１時間後、反応液を常法により処理した。クロマトグラフィーは３２.７ｍｇのカップリング化合物４７を油状物として与えた。
【００６２】
【化５２】
0004698027.tif 000043
乾燥ボックスに入れた脱気クロロホルム（１.５ｍＬ）中のカップリング化合物（４７）（３２.７ｍｇ）の溶液にＰｈＳｉＨ３（８.５μＬ）およびＰｄ(ＰＰＨ３)４（１１ｍｇ）を加えた。混合物をボックスから取り出し、氷冷した。５分後、氷浴を除去し、１時間後、クロロホルム：メタノール：水（２：３：１）を加え、混合物を１５分間攪拌し、冷凍庫で一夜貯蔵した。ついで、混合物をＤＥＡＥクロマトグラフィーカラムに注いだ。クロマトグラフィーは、０.１Ｎ ＮａＯＨで処理し、凍結乾燥した後に１３.９ｍｇの化合物（４８）を白色粉末として与えた。
【００６３】
実施例４：キラルな尿素−１型
【化５３】
0004698027.tif 000044
トルエン中のアミン（４４）（４６.１ｍｇ）の溶液に飽和重炭酸ナトリウム（０.５ｍＬ）を加え、ついでホスゲン（トルエン中の１.９３Ｍ溶液を１５μＬ）を加えた。３０分後、さらにホスゲン（１０μＬ）を加えた。２時間後、さらにホスゲン（５μＬ）を加えた。反応を重炭酸ナトリウムの水溶液で停止させ、常法により処理して２９.６ｍｇの保護リン酸基を有する尿素（４９）を得た。
【００６４】
【化５４】
0004698027.tif 000045
乾燥ボックスに入れた脱気クロロホルム（１.５ｍＬ）中の保護リン酸基を有する尿素（４９）（２９.６ｍｇ）の溶液にＰｈＳｉＨ３（８μＬ）を加えた。反応容器をボックスから取り出し、氷上に置いた。Ｐｄ(ＰＰｈ３)４（１０ｍｇ）を加え、５分後に氷浴を除去した。１時間後、クロロホルム：メタノール：水を加えて反応を停止させた。混合物を１５分間攪拌し、冷凍庫で一夜貯蔵した。これをＤＥＡＥでクロマトグラフィーにかけ、０.１Ｎ ＮａＯＨで処理し、ついで凍結乾燥した後に２４.１ｍｇの（５０）を白色粉末として得た。
【００６５】
実施例５：キラルな尿素−２型
【化５５】
0004698027.tif 000046
メチレンクロライド（２００μＬ）中のクロロギ酸トリクロロメチル（２.６μＬ）の氷冷溶液に、メチレンクロライド（２００μＬ）中の遊離アミン（２９）（３５ｍｇ）および１,８−ビス−(ジメチルアミノ)ナフタレンの溶液を加えた。５分後、氷浴を除去した。１５分後、さらにメチレンクロライドを加え、混合物を常法により処理した。クロマトグラフィーは９.４ｍｇのイソシアン酸エステル（５１）を油状物として与えた。
【００６６】
【化５６】
0004698027.tif 000047
メチレンクロライド（０.２ｍＬ）中のイソシアン酸エステル（５１）（９.４ｍｇ）の溶液に、メチレンクロライド中のアミン（４４）（１０.３ｍｇ）の溶液を加えた。１５分後、反応液を常法により処理した。クロマトグラフィーは５,５ｍｇのカップリング化合物（６１）を油状物として与えた。
【００６７】
【化５７】
0004698027.tif 000048
乾燥ボックスに入れた脱気クロロホルム（１.５ｍＬ）中のカップリング化合物（６１）（２５.２ｍｇ）の溶液にＰｈＳｉＨ３（６.６μＬ）およびＰｄ(ＰＰｈ３)４（８.８ｍｇ）を加えた。混合物をボックスから取り出し、氷冷した。５分後、氷浴を除去し、１時間後、クロロホルム：メタノール：水（２：３：１）を加え、混合物を１５分間攪拌し、冷凍庫で一夜貯蔵した。ついで、混合物をＤＥＡＥクロマトグラフィーカラムに注いだ。クロマトグラフィーは、０.１Ｎ ＮａＯＨで処理し、ついで凍結乾燥した後に７.５ｍｇの（６２）を白色粉末として得た。
【００６８】
実施例６：キラルな１型のグリセリンアナログ
【化５８】
0004698027.tif 000049
ＤＭＦ（１２ｍＬ）中の水素化ナトリウム（ヘキサンで洗浄した６０％油状分散物を１４５.５ｍｇ）の攪拌懸濁液に、８ｍＬのＴＨＦ中の(Ｓ)−(＋)−アルコール（６３）（０.４１ｍＬ）を１時間かけて滴下して加えた。混合物をさらに３０分間攪拌し、ついで１０ｍＬのＴＨＦ中のトシレート（４）（０.７８９ｇ）の溶液を１０分間かけて滴下して加えた。得られた反応混合物を一夜攪拌した。通常の処理をして０.５６ｍｇの所望の付加物（６５）を得た。
【００６９】
【化５９】
0004698027.tif 000050
４ｍＬのメチレンクロライド中のラウリン酸（１.４０ｇ）、ＥＤＣ（１.３５ｇ）、ＤＭＡＰ（０.０４ｇ）およびアルコール付加物（６５）（０.５６４ｇ）の溶液を室温で１５時間攪拌した。食塩水および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（１：１）を加え、混合物をメチレンクロライドで抽出した。混合物を常法により処理し、クロマトグラフィーにかけた。所望のフラクションを２０ｍＬの４：１酢酸：水に溶解し、１５時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をクロマトグラフィーにかけて０.７７ｇの半固体ジオール（６６）を得た。
【００７０】
【化６０】
0004698027.tif 000051
ジオール（６６）（０.２２ｇ）、ＤＭＡＰ（６.３ｍｇ）、ＴＥＡ（１００μＬ）およびＴＢＤＰＳＣｌ（１６４μＬ）の溶液を室温で２４時間攪拌した。メタノール（２ｍＬ）および痕跡量の塩酸水溶液を加え、ついでメチレンクロライドで抽出した。混合物を常法により処理した。残渣をクロマトグラフィーにかけて０.３ｇのアルコール（６７）を油状物として得た。
【００７１】
【化６１】
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メチレンクロライド（４ｍＬ）中のアルコール（６７）（０.３ｇ）、ＤＭＡＰ（５.５ｍｇ）、ＥＤＣ（２５８ｍｇ）、ミリスチン酸（３０８ｍｇ）の溶液を室温で１８時間攪拌し、ついで食塩水および飽和重炭酸ナトリウムを加えた。混合物を常法により処理し、クロマトグラフィーにかけて０.４ｇのシリル保護エーテル生成物（６８）を得た。
【００７２】
【化６２】
0004698027.tif 000053
アセトニトリル（２.７ｍＬ）中のシリル保護エーテル（６８）（１９５ｍｇ）の溶液に４８％フッ化水素酸（０.７５６ｍｌ）を加えた。３０時間後、飽和重炭酸ナトリウムを加え、混合物を常法により処理した。クロマトグラフィーは９４.７ｍｇの遊離アルコール（６９）を与えた。
【００７３】
【化６３】
0004698027.tif 000054
メチレンクロライド（０.５ｍＬ）中の遊離アルコール（６９）（５７ｍｇ）の溶液に、テトラゾール（１５.６ｍｇ）およびリン酸化試薬（１１）（４０ｍｇ）を室温にて加えた。４時間後、混合物を０℃に冷却し、ついでＴＨＦ（０.５ｍＬ）：水（０.６ｍＬ）を加えた。混合物を室温に温め、８０分間攪拌した。最終反応混合物を常法により処理した。クロマトグラフィーは７２ｍｇの保護リン酸エステル（７０）を与えた。
【００７４】
【化６４】
0004698027.tif 000055
メチレンクロライド（１ｍＬ）中の保護リン酸エステル（７０）（７２ｍｇ）の溶液にＴＥＳ（１２０μＬ）およびトリフルオロ酢酸（０.６ｍＬ）を加え、ついで１時間攪拌した。ＴＦＡを減圧下で除去し、ついで１０ｍＬのトルエンとともに共沸した。２０ｍＬのメチレンクロライドを加え、混合物を常法により処理して０.５２ｇの油状物を得た。
粗製のアミンをメチレンクロライド（０.７ｍＬ）に溶解し、ついでマロン酸（４.５ｍｇ）およびＥＤＣ（２５.６ｍｇ）を加えた。混合物を一夜攪拌し、常法により処理して３２.５ｍｇの二量体生成物（７１）を得た。
【００７５】
【化６５】
0004698027.tif 000056
上記反応からの保護二量体（７１）（３２.５ｍｇ）を脱気クロロホルム（２ｍＬ）に溶解し、乾燥ボックス中でＰｈＳｉＨ３（８.６μＬ）を加えた。混合物を乾燥ボックスから取り出し、前以て乾燥ボックス中で重量を測定したＰｄ(ＰＰｈ３)４（２２.６ｍｇ）を加えた。２時間後、混合物をＤＥＡＥ上のクロマトグラフィーにかけ、１Ｎ水酸化ナトリウム（３４.２μＬ）を加え、ついで凍結乾燥した後に２７.９ｍｇの白色固体（７２）を得た。
【００７６】
ＥＲ−８０４２５３の調製
【化６６】
0004698027.tif 000057
０℃に冷却したメチレンクロライド（５ｍＬ）にアルコール（５５８ｍｇ）を溶解し、トリエチルアミン（０.４６６ｍＬ）を窒素雰囲気下で加えた。５分間攪拌した後、メタンスルホニルクロライド（０.１４２ｍＬ）を滴下して加えた。混合物をさらに０℃で５分間攪拌し、ついで室温に温めた。さらに１時間攪拌した後、混合物を飽和重炭酸ナトリウムで処理し、酢酸エチルで抽出し、抽出物を水、希塩酸、水、食塩水で洗浄し、乾燥し、溶媒を除去して６３０ｍｇを得た。
【００７７】
【化６７】
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メシレート（６３０ｍｇ）およびアジ化ナトリウム（２９９ｍｇ）をＤＭＳＯ（６ｍＬ）に溶解し、６０℃に９０分間加熱した。室温に冷却した後、反応混合物をメチレンクロライドで希釈し、水および食塩水で洗浄した。水性の洗浄液を抽出した後、コンバインした有機相を乾燥し、濃縮し、４：１の比のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカ上で精製し、乾燥生成物のフラクションが４２０ｍｇを与えた。
【００７８】
【化６８】
0004698027.tif 000059
アジド（２９５ｍｇ）をエタノール（５ｍＬ）に溶解し、リンドラー触媒（２００ｍｇ）を加えた。大気圧の水素ガス雰囲気下で攪拌した後、濾過した溶液を乾燥して２７４ｍｇを得た。
【００７９】
【化６９】
0004698027.tif 000060
アミン（９３０ｍｇ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）および飽和重炭酸ナトリウム（２２ｍＬ）に溶解した。５分間攪拌した後、ラウロイルクロライド（０.７１２ｍＬ）を２０分間かけて滴下して加えた。最終混合物をクロロホルムで抽出し、乾燥して１.４５ｇを得た。
【００８０】
【化７０】
0004698027.tif 000061
アミド（１.１１ｇ）をメタノール（１４ｍＬ）に溶解し、４Ｎ塩酸（８ｍＬ）を加えた。混合物を５０℃で１時間攪拌し、ついで濃縮した。メタノール（１６ｍＬ）および４０％水酸化ナトリウム（８ｍＬ）を加え、混合物を１時間還流した。これを冷却し、メチレンクロライドで抽出し、抽出物を水洗し、乾燥し、溶媒を除去して９３０ｍｇを得た。
【００８１】
【化７１】
0004698027.tif 000062
上記アミノアルコールをＴＨＦ（６ｍＬ）に溶解し、飽和重炭酸ナトリウム（１３ｍＬ）を加えた。５分後、混合物を０℃に冷却し、ミリストイルクロライド（３００μＬ）を加えた。３０分後、混合物を常法により処理して４３０ｍｇを得た。
【００８２】
【化７２】
0004698027.tif 000063
上記アルコール（１０１.７ｍｇ）を氷冷メチレンクロライドに溶解し、リン酸化試薬１１（９０μＬ）を加え、混合物を３０分間攪拌した。氷冷オキソン（１６６.３ｍｇ）を加え、混合物を３０分間攪拌した。反応をチオ硫酸エステルで停止させた。混合物を常法により処理し、クロマトグラフィーにかけて１７４ｍｇ（精製していない）を得た。
【００８３】
【化７３】
0004698027.tif 000064
上記反応からの保護アミンを氷冷メチレンクロライド（１ｍＬ）に溶解し、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を加え、混合物を１時間攪拌した。ＴＦＡを除去し、混合物を精製して１０６.７ｍｇを得た。
【００８４】
【化７４】
0004698027.tif 000065
上記アミンをメチレンクロライド（３ｍＬ）に溶解し、飽和重炭酸ナトリウム溶液（３ｍＬ）を加えた。混合物を氷冷し、トルエン中のホスゲン（０.５５当量）を滴下して加えた。混合物を２０分間攪拌し、処理して１１２.３ｍｇを得た。
【００８５】
【化７５】
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氷冷クロロホルム（２.６ｍＬ）中のブロッキングリン酸エステル（４０.５ｍｇ）の溶液にフェニルシラン（１０.７ｍｇ）およびテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム［０］（２８.７ｍｇ）を加え、混合物を１時間攪拌した。混合物をＤＥＡＥ上のクロマトグラフィーにかけて２７.７ｍｇのＥＲ−８０４２５３を得た。
【００８６】
ＥＲ−８０４１３０の調製
【化７６】
0004698027.tif 000067
−７８℃のＴＨＦ（６５ｍＬ）中のアミド（３ｇ）の溶液に当量のブチルリチウムを加え、ついでＴＨＦ（６ｍＬ）中のノナノイルクロライドの溶液を加えた。塩化アンモニウム水溶液を加え、混合物を常法により処理して５.３５ｇを得た。
【００８７】
【化７７】
0004698027.tif 000068
冷メチレンクロライド（１００ｍＬ）中のアルコール（５ｇ）の溶液にトリエチルアミン（４.１ｍＬ）およびメシルクロライド（２.１ｍＬ）を加えた。混合物を４時間攪拌し、常法により処理して６.９９ｇを得た。
【００８８】
【化７８】
0004698027.tif 000069
氷冷ＤＭＦ（１００ｍＬ）中のメシレート（６.９９ｇ）の溶液に臭化カリウムを加えた。混合物を室温に温め、５時間攪拌した。常法により処理して４.６３ｇの透明な油状物を得た。
【００８９】
【化７９】
0004698027.tif 000070
ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のアミド（２.８ｇ）の溶液を、ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のビストリメチルシリルアミドナトリウムの−７８℃溶液に加えた。１時間後、臭化物を加え、混合物を室温に温め、常法により処理して１.０２ｇを得た。
【００９０】
【化８０】
0004698027.tif 000071
ＥｔＯＡｃ中のオレフィン（１.０２ｇ）の溶液にパラジウム／炭素（１２６ｍｇ）を加え、混合物を水素下に置いた。４時間後、混合物を常法により処理して１.０ｇを得た。
【００９１】
【化８１】
0004698027.tif 000072
氷冷ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のアミド（１.０ｇ）の溶液に、水、過酸化水素および水素化リチウムを加えた。翌日、混合物を常法により処理して５９０ｍｇの酸を得た。
【００９２】
【化８２】
0004698027.tif 000073
氷冷ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の酸の溶液にジボレート：ＴＨＦ錯体を加え、混合物をゆっくりと温めた。７時間後、希塩酸を注意深く加え、混合物を常法により処理した。粗製の物質を氷冷エーテルに溶解し、ＬＡＨ溶液（１Ｍを２ｍＬ）を加えた。５分後、混合物を常法により処理して５５６ｍｇのアルコールを得た。
【００９３】
【化８３】
0004698027.tif 000074
メチレンクロライド（１０ｍＬ）中のオキザリルクロライド（２.２ｍＬ）の−７８℃溶液にＤＭＳＯ（１.１ｍＬ）を加え、２分後、アルコール（５５６ｍｇ）をメチレンクロライド（５ｍＬ）中にて加えた。２０分後、トリエチルアミン（１ｍＬ）を加え、混合物を０℃に温めた。混合物をエーテルで希釈し、常法により処理して５６７ｍｇを得た。
【００９４】
【化８４】
0004698027.tif 000075
ウィッティッヒ試薬（６７９ｍｇ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解し、ＫＨＭＤＳ溶液（０.５Ｍを４ｍＬ）を加えた。２０分後、混合物を−７８℃に冷却し、ＴＨＦ（５ｍＬ）中のアルデヒド（５６７ｍｇ）を加えた。１５分後、混合物を常法により処理して３４２ｍｇを得た。
【００９５】
【化８５】
0004698027.tif 000076
アセトニトリル（３.５ｍＬ）および水（０.１５ｍＬ）中のエノールエーテル（３４２ｍｇ）の溶液にヨウ化水素酸を加えた。４時間後、混合物を常法により処理して３２５ｍｇを得た。
【００９６】
【化８６】
0004698027.tif 000077
メタノール（１０ｍＬ）中のアルデヒド（３２５ｍｇ）の溶液に水素化ホウ素ナトリウム（３８ｍｇ）を加えた。３時間後、反応液を常法により処理して３０３ｍｇのアルコールを得た。
【００９７】
【化８７】
0004698027.tif 000078
メチレンクロライド（１０ｍＬ）中のアルコール（３０３ｍｇ）の氷冷溶液にトリエチルアミン（１５０μＬ）およびメシルクロライド（７６μＬ）を加えた。４時間後、反応液を常法により処理して３５２ｍｇを得た。
【００９８】
【化８８】
0004698027.tif 000079
氷冷ＴＨＦ（５ｍＬ）中のオキサゾリン（１ｍＬ）の溶液にカリウムｔ−ブトキシド溶液（１Ｍを２.２ｍＬ）を加えた。３０分後、メシレートをＴＨＦ（５ｍＬ）中にて加え、混合物を８時間攪拌した。通常の処理により３１８.５ｍｇを得た。
【００９９】
【化８９】
0004698027.tif 000080
メタノール（８ｍＬ）および塩酸（４Ｍを４ｍＬ）中のオキサゾリンの溶液を９０分間かけて５０℃に温めた。さらにメタノールを加え、溶媒を除去した。残渣をメタノール（８ｍＬ）および水酸化ナトリウム溶液（４ｍＬ）に溶解し、しばらく５０℃に温めた。混合物を冷却し、クロロホルムで抽出した。通常の処理により１１４ｍｇを得た。
【０１００】
【化９０】
0004698027.tif 000081
ＴＨＦ（２ｍＬ）および飽和重炭酸ナトリウム水溶液（２ｍＬ）中のアミン（１１４ｍｇ）の溶液に酸クロライドを加えた。３０分後、さらに酸クロライドを加えた。３０分後、反応液を常法により処理して１４６ｍｇを得た。
【０１０１】
【化９１】
0004698027.tif 000082
氷冷メチレンクロライド（２ｍＬ）中のテトラゾール（４８ｍｇ）、リン酸化試薬（１２２ｍｇ）の溶液にアルコール（１４６ｍｇ）を加えた。水（１ｍＬ）およびＴＨＦ（２ｍＬ）中のオキソン（２３０ｍｇ）を加えた。９０分後、チオ硫酸エステルを用いて反応を停止させた。標準処理により１４０ｍｇを得た。
【０１０２】
【化９２】
0004698027.tif 000083
氷冷メチレンクロライド中の基質の溶液にトリエチルシラン（３７０μＬ）およびトリフルオロ酢酸（１１０μＬ）を加えた。５分後、揮発成分を除去して１４８ｍｇを得た。
【０１０３】
【化９３】
0004698027.tif 000084
氷冷メチレンクロライド（０.８ｍＬ）中のアミン（６６.９ｍｇ）の溶液に、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（０.８ｍＬ）およびホスゲン溶液（１.９３Ｍを２０μＬ）を加えた。１時間後、さらにホスゲン（１０μＬ）を加えた。３０分後、通常の処理により４７.７ｍｇを得た。
【０１０４】
【化９４】
0004698027.tif 000085
氷冷クロロホルム中のフェニルシラン（１５μＬ）、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム［０］（２４.８ｍｇ）の溶液に不活性雰囲気下で基質を加えた。５分後、混合物をＤＥＡＥカラムに適用し、クロマトグラフィーにかけて３１ｍｇのＥＲ−８０４１３０を得た。
【０１０５】
ＥＲ-８０４５５８の調製
【化９５】
0004698027.tif 000086
アミン（３２５ｍｇ）の塩化メチレン溶液にトリエチルアミン（３２１μL)および１−ドデカンスルホニルクロライドを加えた。３時間後、常法にしたがって処理して目的物３８４ｍｇを得た。
【０１０６】
【化９６】
0004698027.tif 000087
保護したアルコール（３８４ｍｇ）のTHF（４ｍL）溶液にテトラブチルアンモニウムフルオライド（１２３ｍｇ）および酢酸（２９μL）を加えた。２時間後、常法にしたがって処理して目的物１８０ｍｇを得た。
合成法のうちのその他の処理、すなわち、燐酸化、脱ブロック化、ホスゲンとのカップリングおよびフェニルシランおよびパラジウムによる脱保護については、本発明の他の化合物について既述したと同様にして行なった。
【０１０７】
ＥＲ-８０４４４２の調製
ジオールアミンを前述したようにしてそのｔ−ブチル−ジフェニルシリルエーテルとしてモノ保護した。
【化９７】
0004698027.tif 000088
アミン（２.６ｇ）およびベンゾフェノンイミン（１.１ｍL）を混合し、４０℃にて４日間加熱し、クロマトグラフィに付し、目的物３.３ｇを得た。
【０１０８】
【化９８】
0004698027.tif 000089
イミン（３.３ｇ）の氷冷塩化メチレン溶液にラウリン酸（１.５ｇ）、EDC（１.７ｇ）およびＤＭＡＰ（１５５ｍｇ）を加えた。翌日、反応液を常法にしたがって処理して目的物３.１５ｇを得た。
【０１０９】
【化９９】
0004698027.tif 000090
イミン（３.１４ｇ）のエーテル溶液に１Ｎ塩酸水溶液を加えた。翌日、反応液を常法にしたがって処理して目的物２.８１ｇを得た。
【０１１０】
【化１００】
0004698027.tif 000091
トリクロロメチルクロロホルメート（１２μL）の氷冷塩化メチレン（２５０μL）中溶液にドデシルアミン（１８μL）およびジイソプロピルエチルアミン（２７μL）を加えた。３０分後、溶媒を除去した。その残渣を氷冷塩化メチレンに溶解し、その溶液にアミン（５５.６ｍｇ)および追加のジイソプロピルエチルアミン（１３μL）を加えた。２時間後、常法にしたがって処理し、クロマトグラフィに付し目的物６０.９ｍｇを得た。
この生成物を、前記と同様に、フルオライドによる脱保護、燐酸化、ＴＦＡによる脱保護、ホスゲンによる二量化、およびフェニルシランおよびパラジウムによる脱ブロック化に付してER-８０４４４２を得た。
【０１１１】
ＥＲ-８０４２２１の調製
【化１０１】
0004698027.tif 000092
グリシン（８.２６ｇ）の水酸化ナトリウム水溶液（６０ｍL中４.４ｇ）中氷冷溶液にラウロイルクロライド（２１.８ｇ）を加えた。１時間後、酸を加え、その混合物を常法にしたがって処理した。酢酸エチルから再結晶して目的物９.７ｇを得た。
【０１１２】
【化１０２】
0004698027.tif 000093
アミン（１.４ｇ）のメタノール中氷冷溶液にトリフルオロメタンスルホン酸アジド（２０ｍｇ）を加えた。翌日、追加のアジドを加えた。２時間後、反応液を常法にしたがって処理し、クロマトグラフィに付して目的物１.１４ｇを得た。
【０１１３】
【化１０３】
0004698027.tif 000094
アルコール（１.１４ｇ）の塩化メチレン溶液にｔ−ブチルジフェニルシリルクロライド（１.０９ｍL）、トリエチルアミン（１.８ｍL）およびＤＭＡＰ（５０ｍｇ）を加えた。３時間後、常法にしたがって処理し目的物１.４ｇを得た。
【０１１４】
【化１０４】
0004698027.tif 000095
アルコール（１.４ｇ）の氷冷塩化メチレン溶液にラウリン酸（８２６ｍｇ）、ＥＤＣ（１.０５ｇ）およびＤＭＡＰ（３３ｍｇ）を加えた。翌日、反応液を常法にしたがって処理し、クロマトグラフィに付して目的物７７８ｍｇを得た。
【０１１５】
【化１０５】
0004698027.tif 000096
アジド（７７８ｍｇ）のＴＨＦ溶液に酢酸（７７μL）およびＴＢＡＦ（３２３ｍｇ）を加えた。翌日、反応液を常法にしたがって処理し、クロマトグラフィに付して目的物４２８ｍｇを得た。
【０１１６】
【化１０６】
0004698027.tif 000097
アジド（４６０ｍｇ）の塩化メチレン溶液にテトラゾール（１６５ｍｇ)と燐酸化剤（３９０ｍｇ）を加え、３０分後、オキソン水溶液（３ｍL中７２２ｍｇ）を加えた。チオ硫酸塩にて反応を停止した。常法にしたがって処理し、クロマトグラフィに付して目的物３９２ｍｇを得た。
【０１１７】
【化１０７】
0004698027.tif 000098
保護したアミン（４６０ｍｇ）を塩化メチレン、トリフルオロ酢酸（３９４μL）およびトリエチルシラン（３０８μL）に溶解した。１.５時間後、常法にしたがって処理して目的物３９２ｍｇを得た。
【０１１８】
【化１０８】
0004698027.tif 000099
アミンの塩化メチレン（５.５ｍL）中氷冷溶液に飽和重炭酸ナトリウム（５.５ｍL）およびホスゲン（１.９３Ｍトルエン溶液１６４μL）を加えた。１５分後、反応液を常法にしたがって処理し、クロマトグラフィに付して目的物３４２ｍｇを得た。
【０１１９】
【化１０９】
0004698027.tif 000100
アジド（１８７ｍｇ）の塩化メチレン中氷冷溶液にスズ試薬（１.５ｍL）（米国特許第５,７５６,７１８号（参照のため本明細書に引用する）に記載の方法で調製）を加えた。３０分後、混合物をクロマトグラフィに付して目的物１８７ｍｇを得た。
【０１２０】
【化１１０】
0004698027.tif 000101
尿素（５５ｍｇ）の塩化メチレン中氷冷溶液に酸（５９ｍｇ）（上記の方法で調製）およびＥＤＣ（４４ｍｇ）を加えた。翌日、追加のＥＤＣ（５ｍｇ）および酸（５ｍｇ）を加えた。２時間後、常法にしたがって処理して目的物４５.７ｍｇを得た。
フェニルシランおよびパラジウムを用いて常法により保護基を除いてＥＲ-８０４２２１を得た。
ラウリルクロライドとグリシンとの縮合物、１５−メチルミリスチン酸を用いた以外は同様にしてＥＲ−８０４２２２を調製した。
【０１２１】
ＥＲ−８０４２８１の調製
【化１１１】
0004698027.tif 000102
保護したアルコール（８.３ｇ）のアセトニトリル：水中氷冷溶液にＣＡＮ（４１.４ｇ）を加えた。１時間後、常法にしたがって処理して目的物５.７ｇを得た。
【０１２２】
【化１１２】
0004698027.tif 000103
アルコール（５.６３ｇ）の４Ｎ ＨＣｌ中溶液を１時間加熱還流させ、冷却し、水酸化ナトリウムにて中和したのち、常法にしたがって処理して目的物２.１ｇを得た。
【０１２３】
【化１１３】
0004698027.tif 000104
アルコール（２.２ｇ）の塩化メチレン中氷冷溶液にイミダゾール（０.７ｇ）とｔ−ブチルジフェニルシリルクロライドの塩化メチレン（１５ｍL)中溶液を加えた。翌日、常法にしたがって処理し目的物１.５４ｇを得た。
【０１２４】
【化１１４】
0004698027.tif 000105
アルコール（１.９３ｇ）の塩化メチレン（４０ｍL）溶液にベンゾフェノンイミン（０.８ｍL）を加えた。１日後、混合物を1晩加熱還流した。常法にしたがって処理して目的物１.６７ｇを得た。
【０１２５】
【化１１５】
0004698027.tif 000106
アルコール（１.６７ｇ）の塩化メチレン中氷冷溶液にＤＭＡＰ（１５９ｍｇ）、ＥＤＣ（０.９９ｇ）およびラウリン酸（１.０４ｇ）を加えた。１日後、常法にしたがって処理して７４％の収率を得た。
【０１２６】
【化１１６】
0004698027.tif 000107
イミン（２.９ｇ）のエーテル（５０ｍL）中氷冷溶液に１Ｎ ＨＣｌ（５０ｍL）を加えた。翌日、常法にしたがって処理して目的物２.０９ｇを得た。
【０１２７】
【化１１７】
0004698027.tif 000108
アミン（１.２４ｇ）のジクロロエタン溶液にナトリウムシアノボロハイドライド（１７８ｍｇ）およびテトラデカナール（４１１ｍｇ）を加えた。翌日、常法にしたがって処理し目的物１.５ｇを得た。
【０１２８】
【化１１８】
0004698027.tif 000109
アミン（２２１ｍｇ）のジオキサン中氷冷溶液にクロロ蟻酸アリル（４０ｍｇ）および１Ｎ ＮａＯＨ溶液（３０８μL）を加えた。２時間後、常法にしたがって処理して目的物２００ｍｇを得た。
【０１２９】
【化１１９】
0004698027.tif 000110
保護したアルコール（３６５ｍｇ）のＴＨＦ中氷冷溶液にＴＢＡＦ（１９２４μL）および酢酸（１２２μL）を加えた。翌日、常法にしたがって処理して目的物２７１ｍｇを得た。
この生成物を、前記と同様に、燐酸化、ＴＦＡによる脱ブロック化、ホスゲンによる二量化、およびフェニルシランおよびパラジウムによるアリル保護基の除去に付してＥＲ−８０４２８１を得た。
【０１３０】
ＥＲ−８０４３３９の調製
ＥＲ−８０４２８１  →  ＥＲ−８０４３３９
ＥＲ−８０４２８１（７ｍｇ）の塩化メチレン中氷冷溶液にトリエチルアミン（５μL）、ＤＭＡＰ（０.６ｍｇ）およびアセチルクロライド（１.８μL）を加えた。４日後、常法にしたがって処理して目的物１.１ｍｇを得た。
【０１３１】
ＥＲ−８０４６７４の調製
ＥＲ−８０４２８１  →  ＥＲ−８０４６７４
ＥＲ−８０４２８１（１２.７ｍｇ）のＴＨＦ（１.０ｍL）溶液にヨウ化メチル（９.２ｍｇ）および重炭酸ナトリウム（６.８ｍｇ）を加えた。その混合物を５日間攪拌し、重炭酸ナトリウム（１４ｍｇ）および追加のヨウ化メチル（８ｍL）を加えた。さらに３日後、追加の重炭酸ナトリウム（２８ｍｇ）およびＭｅＩ（１６μL）を加えた。さらに６日後、その混合物を処理して生成物９.１ｍｇを得た。
【０１３２】
ＥＲ−８０４５９６の調製
【化１２０】
0004698027.tif 000111
メチレンクロライド（２ｍＬ）中のアルコール（３９３ｍｇ）の溶液に、ジイソプロピルアミン（２１０μＬ）、テトラゾール（１０５ｍｇ）およびリン酸化試薬（上記）（４８８ｍｇ）を加えた。２時間半後、常法により処理して所望の生成物を得た。
【０１３３】
【化１２１】
0004698027.tif 000112
アセトニトリル中のジオール（７３ｍｇ）の溶液にテトラゾール（１７５ｍｇ）およびアジド（１当量）を加えた。３時間後、混合物を冷却し、オゾン（１２２９ｍｇ）を加えた。翌日、常法により処理して所望の生成物を得た。
【０１３４】
【化１２２】
0004698027.tif 000113
アセトニトリル：水（６ｍＬ：１.５ｍＬ）中の保護アルコール（９２.９ｍｇ）の氷冷溶液にＣＡＮ（３５８ｍｇ）を加えた。１時間後、常法により処理して６８.５ｍｇを得た。
【０１３５】
【化１２３】
0004698027.tif 000114
メチレンクロライド中のジオール（６８.５ｍｇ）の氷冷溶液に、ラウリン酸（７６.５ｍｇ）、ＤＭＡＰ（４.７ｍｇ）およびＥＤＣ（７３ｍｇ）を加えた。翌日、常法により処理して７６.５ｍｇを得た。
このアジドを上記スズ試薬を用いて還元した。ジアミンをドデカノイルクロライドでアシル化し、保護基を上記のようにフェニルシランおよびパラジウムで除去してＥＲ−８０４５９６を得た。
【０１３６】
ＥＲ−８０４７２３の調製
【化１２４】
0004698027.tif 000115
アルコール（７.０４ｇ）をトリエチルアミン（１１.１３ｍＬ）とともにメチレンクロライド（３００ｍＬ）に溶解し、ついで窒素雰囲気下で０℃に冷却した。メタンスルホニルクロライド（３.６９ｍＬ）を滴下して加え、その後、反応液を室温で１時間攪拌した。常法により処理して５.５５１ｇを得た。
【０１３７】
【化１２５】
0004698027.tif 000116
メシレート（１.１１４ｇ）をＤＭＦ（３０ｍＬ）に溶解し、ついでアジ化ナトリウム（０.９３３７ｇ）を加えた。反応混合物を５７℃に温め、１６時間攪拌し、ついで１０４℃でさらに３時間攪拌した。室温に冷却後、混合物を常法により処理して０.４６６ｇを得た。
【０１３８】
【化１２６】
0004698027.tif 000117
保護アミノアルコール（０.４６６ｇ）を４Ｎ ＨＣｌ（１５ｍＬ）を用いて１０７℃で３時間加水分解した。室温に冷却後、混合物を濾過し、エチルエーテルで抽出し、乾燥し、濃縮し、次の反応に用いた。
【０１３９】
【化１２７】
0004698027.tif 000118
粗製のアミノアルコールを飽和重炭酸ナトリウム（６ｍＬ）とともにＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。ミリストイルクロライド（０.７９ｍＬ）を滴下して加え、その後、反応液を室温に温め、２時間攪拌した。反応混合物を常法を用いて処理して０.７５１ｇを得た。
【０１４０】
【化１２８】
0004698027.tif 000119
アルコール（０.１８５ｇ）をイミダゾール（０.０７７ｇ）およびtert−ブチルジフェニルシリルクロライド（０.１９７ｍＬ）とともにＤＭＦ（３.０ｍＬ）に溶解した。反応混合物を室温にて１６時間攪拌し、その後、常法により処理して０.３２０ｇを得た。
【０１４１】
【化１２９】
0004698027.tif 000120
アジド（０.９７５ｇ）を１０％パラジウム／炭素（０.１８０ｇ）とともにメタノール（２０ｍＬ）に溶解した。混合物を大気圧下の水素ガス雰囲気下で２時間攪拌し、その後、ガスを排気し、混合物をセライト５４５で濾過し、濃縮した。常法により精製して０.８７３ｇを得た。
【０１４２】
【化１】
0004698027.tif 000121
ＤＭＳＯ（１.５ｍＬ）をメチレンクロライド（３０ｍＬ）中のオキザリルクロライド（０.９２ｍＬ）に−７８℃にて滴下して加えた。１５分間攪拌した後、メチレンクロライド（３０ｍＬ）中のアルコール（１.７２７ｇ）を滴下して加え、さらに３０分間攪拌した。トリエチルアミン（４.９０ｍＬ）を滴下して加え、反応液を０℃に温め、飽和塩化アンモニウムを用いて反応停止させた。粗製の生成物をヘキサン中の２０％酢酸エチルを用いたシリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製して１.６５３ｇを得た。
【０１４３】
【化１３１】
0004698027.tif 000122
第一級アミン（０.１３５ｇ）およびアルデヒド（０.０７７ｇ）を１,２−ジクロロエタン（５ｍＬ）に溶解し、ついで水素化シアノホウ素ナトリウム（０.０３２ｇ）を加えた。反応液を２０時間攪拌し、その後、酢酸（０.０２ｍＬ）を加え、反応液を常法により処理して０.１０３ｇを得た。
【０１４４】
【化１３２】
0004698027.tif 000123
第二級アミンを１,４−ジオキサン（１５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、ついで１Ｍ水酸化ナトリウム（３.０ｍＬ）をゆっくりと加えた。１０分間攪拌した後にクロロギ酸アリル（０.２３６ｍＬ）を滴下して加え、その後、反応液を室温に温め、１６時間攪拌した。常法で処理して０.６１３ｇを得た。
【０１４５】
【化１３３】
0004698027.tif 000124
パラ−メトキシベンジルエーテル（０.６１３ｇ）を４／１比のアセトニトリル／水（１５ｍＬ）に溶解し、０℃に溶解し、ついでＣＡＮ（１.５２５ｇ）を加えた。反応混合物を０℃で２時間攪拌し、ついで常法で処理して０.３５７ｇを得た。
【０１４６】
【化１３４】
0004698027.tif 000125
アルコール（０.３５７ｇ）をラウリン酸（０.１８４ｇ）、ＥＤＣ（０.１７５ｇ）とともにメチレンクロライド（５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。４−ジメチルアミノピリジン（０.０１２ｇ）を加え、得られた混合物を室温で２時間攪拌した。常法で処理して０.４３６ｇを得た。
【０１４７】
【化１３５】
0004698027.tif 000126
シリル保護アルコール（０.２１１ｇ）を酢酸（０.０３ｍＬ）とともにＴＨＦ（５ｍＬ）に溶解した。テトラブチルアンモニウムフルオライド（０.１１５ｇ）を一度に加え、反応混合物を室温で１６時間攪拌した。常法により処理して０.１５０ｇを得た。
この物質を上記のようにリン酸化、ＴＦＡによる脱ブロッキング、ホスゲンによる二量体化、およびフェニルシランおよびパラジウムによるアリル保護基の除去を行ってＥＲ−８０４７３２を得た。
【０１４８】
ＥＲ−８０４６８０の調製
【化１３６】
0004698027.tif 000127
アルデヒド（１.５４ｇ）をＴＨＦ（２８ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、その後、２−メチル−２−ブテン（１４ｍＬ）およびtert−ブチルアルコール（２８ｍＬ）を加えた。上記混合物に水（４２.７ｍＬ）中の塩素酸ナトリウム（３.７０ｇ）およびリン酸三水素ナトリウム（４.０９ｇ）の攪拌懸濁液を加え、０℃にて１.５時間攪拌した。完了した反応液を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、１０％重亜硫酸ナトリウム、食塩水で洗浄し、乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーにかけて１.５５ｇを得た。
【０１４９】
【化１３７】
0004698027.tif 000128
アミン（０.５５３ｇ）および酸（０.３８１ｇ）をメチレンクロライド（８ｍＬ）中で混合し、０℃に冷却し、その後、ＥＤＣ（０.２３０ｇ）を加え、反応混合物を室温で７２時間攪拌した。常法により処理して０.５６７ｇを得た。
【化１３８】
0004698027.tif 000129
メトキシベンジルエーテル（０.５６７ｇ）をメチレンクロライド（８ｍＬ）とともにアセトニトリル／水の１：１混合物（１６ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。ＣＡＮ（１.５３ｇ）を加え、反応混合物を１時間攪拌し、その後、常法により処理して粗製のアルコールを得た。
【０１５０】
【化１３９】
0004698027.tif 000130
上記の粗製のアルコールをラウリン酸（０.２８０ｇ）および４ジメチルアミノピリジン（０.０１７ｇ）とともにメチレンクロライド（１５ｍＬ）に溶解した。反応混合物を０℃に冷却し、ＥＤＣ（０.２６７ｇ）を一度に加え、その後、反応混合物を室温に冷却し、１６時間攪拌した。常法により処理して０.６２２ｇを得た。
【０１５１】
【化１４０】
0004698027.tif 000131
シリルエーテル（０.５６３ｇ）を酢酸（０.０８７ｍＬ）とともにＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解した。tert−ブチルアンモニウムフルオライド（０.３３０ｇ）を加え、反応液を室温で１６時間攪拌した。常法により処理して０.３８４ｇを得た。
この物質を上記のようにリン酸化、ＴＦＡによる脱ブロッキング、ホスゲンによる二量体化、およびフェニルシランおよびパラジウムによるアリル保護基の除去を行ってＥＲ−８０４７８０を得た。
【０１５２】
ＥＲ−８０４６７９の調製
【化１４１】
0004698027.tif 000132
保護第二級アミン（０.０７１ｇ）をフェニルシラン（０.０１７ｍＬ）および無水酢酸（０.０１４ｍＬ）とともに脱気クロロホルム（３ｍＬ）に溶解した。反応混合物を０℃に冷却し、ついでテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）（０.００２ｇ）を加えた。反応混合物を室温に温め、３０分間攪拌した。完了した反応液をメチレンクロライドで希釈し、水洗し、乾燥し、濃縮し、クロマトグラフィーにかけて０.０６８ｇを得た。
【０１５３】
【化１４２】
0004698027.tif 000133
シリルエーテルを、酢酸（０.０２５ｍＬ）を加えたＴＨＦ（５ｍＬ）中、tert−ブチルアンモニウムフルオライド（０.０９２ｇ）を加えて脱保護した。室温で１６時間攪拌した後、反応液を常法により処理して０.１２０ｇを得た。
この物質を上記のようにリン酸化、ＴＦＡによる脱ブロッキング、ホスゲンによる二量体化、およびフェニルシランおよびパラジウムによるアリル保護基の除去を行ってＥＲ−８０４６７９を得た。
【０１５４】
ＥＲ−８０４７６４の調製
【化１４３】
0004698027.tif 000134
ＤＭＳＯ（０.３３ｍＬ）をメチレンクロライド（１０ｍＬ）中のオキザリルクロライド（０.２０３ｍＬ）に−７８℃にて滴下して加えた。１５分間攪拌した後、メチレンクロライド（３ｍＬ）中のアルコール（０.９９３ｇ）を滴下して加え、さらに３０分間攪拌した。トリエチルアミン（１.０８ｍＬ）を滴下して加え、反応液を０℃に温め、飽和塩化アンモニウムを用いて反応停止させた。粗製の生成物をヘキサン中の２０％酢酸エチルを用いたシリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製して０.７４３ｇを得た。
【０１５５】
【化１４４】
0004698027.tif 000135
ヘキサン（１.５ｍＬ）中の１.６Ｍ ｎ−ブチルリチウムをＴＨＦ（１０ｍＬ）中のホスホニウム塩（０.７９７ｇ）に滴下して加えた。３０分間攪拌した後、ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のアルデヒド（０.７３４ｇ）を滴下して加えた。室温で１時間攪拌した後、反応液を常法により処理して０.１９３ｇを得た。
【０１５６】
【化１４５】
0004698027.tif 000136
エノールエーテル（０.１９３ｇ）アセトニトリル（２ｍＬ）中の５７％ヨウ化水素（０.１１４Ｌ）を用いて加水分解した。室温で２時間攪拌した後、飽和重炭酸ナトリウムで反応を停止させ、メチレンクロライドで抽出し、乾燥して粗製のアルデヒド（０.２１１ｇ）を得た。
【０１５７】
【化１４６】
0004698027.tif 000137
粗製のアルデヒド（０.２１１ｇ）をメタノール（３ｍＬ）に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（０.０３３ｇ）を０℃で加えた。３０分間攪拌した後、反応液を水で希釈し、メチレンクロライドで抽出し、乾燥し、濃縮し、ついでシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して０.１４８ｇを得た。
この物質を上記のようにリン酸化、ＴＦＡによる脱ブロッキング、ホスゲンによる二量体化、およびフェニルシランおよびパラジウムによるアリル保護基の除去を行ってＥＲ−８０４７６４を得た。
【０１５８】
ＥＲ−８０４７７２の調製
【化１４７】
0004698027.tif 000138
市販のジオール（１.４８６ｇ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）中のアセタール（１.８６４ｇ）およびパラ−トルエンスルホン酸（０.１９５ｇ）と混合した。窒素雰囲気下、室温で２０時間攪拌した後、飽和重炭酸ナトリウムで反応を停止させ、メチレンクロライドで抽出し、乾燥し、ついで高圧にて濃縮した。得られた粗製の生成物をヘキサン中の１０％酢酸エチルを用いたシリカゲルクロマトグラフィーにかけて２.０８４ｇを得た。
【０１５９】
【化１４８】
0004698027.tif 000139
アセタール（２.０８４ｇ）をメチレンクロライド（３０ｍＬ）中、窒素雰囲気下、−７８℃に冷却し、ついでヘキサン中の１.０Ｍ ＤＩＢＡＬ（１４.３ｍＬ）を滴下して加えた。さらにＤＩＢＡＬ（１４ｍＬ）を加え、反応混合物を１時間攪拌し、室温に温め、ナトリウム、酒石酸カリウムで反応を停止させた。常法により処理して２.１ｇを得た。
【０１６０】
【化１４９】
0004698027.tif 000140
アルコール（１.２８６ｇ）をメチレンクロライド（１５ｍＬ）中のトリエチルアミン（０.８８３ｇ）と混合し、０℃に冷却した。メタンスルホニルクロライド（０.５７５ｇ）を滴下して加え、ついで０℃で２０分間、および室温で２時間攪拌した。常法により処理して１.４９６ｇを得た。
【０１６１】
【化１５０】
0004698027.tif 000141
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の洗浄６０％水素化ナトリウム（０.２５７ｇ）の攪拌懸濁液にＤＭＦ（１０ｍＬ）中のアルコール（１.４９５ｇ）を０℃にて滴下して加えた。３時間攪拌した後、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のメシレート（０.９２５ｇ）を滴下して加えた。さらに３日間攪拌した後、反応を停止させ、常法により処理して０.９０５ｇを得た。
【０１６２】
上記で示した実施例と同様、パラ−メトキシベンジル保護基ＣＡＮで加水分解し、保護アミノアルコールをＨＣｌ水溶液ついでＫＯＨを用いて加水分解し、第一級アルコールをＴＢＤＰＳでシリル化し、第二級アルコールをドデカノイルクロライドでアシル化し、ついでシリル保護基をＴＢＡＦを用いて加水分解して第一級アルコールを得た。この物質を上記のようにリン酸化、ＴＦＡによる脱ブロッキング、ホスゲンによる二量体化、およびフェニルシランおよびパラジウムによるアリル保護基の除去を行ってＥＲ−８０４７７２を得た。
【０１６３】
ＥＲ−８０４９４７の調製
【化１５１】
0004698027.tif 000142
ＤＭＦ（２.０ｍＬ）中の洗浄６０％水素化ナトリウム（０.２１６ｇ）にＴＨＦ（５ｍＬ）中のアルコール（０.２６３ｇ）を窒素雰囲気下、室温にて滴下して加えた。反応混合物を３０分間攪拌し、その後、ベンジルブロマイド（０.２７２ｍＬ）を触媒量（０.０５ｇ）のテトラブチルアンモニウムヨーダイドとともに加えた。最終反応混合物をさらに１時間攪拌し、その後、混合物を反応停止させ、常法により処理して０.３６５ｇを得た。
【０１６４】
【化１５２】
0004698027.tif 000143
保護アミノアルコール（０.１８９ｇ）を上記のように４Ｎ塩酸（２.５ｍＬ）ついで４０％水酸化ナトリウム（２.５ｍＬ）を用いて加水分解して０.１２１ｇを得た。
【０１６５】
【化１５３】
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アミノアルコール（０.１２１ｇ）を飽和重炭酸ナトリウム（２ｍＬ）とともにメチレンクロライド（２ｍＬ）に溶解した。０℃に溶解した後、ミリストイルクロライド（０.１９９ｍＬ）を滴下して加えた。攪拌を２時間続けた後、混合物を常法により処理して０.１８１ｇを得た。
アルコール（０.１８１ｇ）を酸（０.１８０ｇ）および１−[３−(ジメチルアミノ)プロピル]−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ、０.１３３ｇ）とともにメチレンクロライド（５ｍＬ）に溶解した。混合物を０℃に冷却し、４−ジメチルアミノピリジンを加え、ついで室温で１６時間攪拌した。常法により処理して０.３１０ｇを得た。
【０１６６】
【化１５４】
0004698027.tif 000145
パラ−メトキシベンジルエーテル（０.３０５ｇ）を水（２ｍＬ）を加えたアセトニトリル（８ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。セリウムアンモニウムナイトレート（１.１１０ｇ）を加え、反応混合物を２時間攪拌し、その後、常法を用いて粗製のアルコールを得た。
【０１６７】
【化１５５】
0004698027.tif 000146
粗製のアルコールをラウリン酸（０.１２６ｇ）および４−ジメチルアミノピリジン（０.０１１ｇ）とともにメチレンクロライド（８ｍＬ）に溶解した。０℃に冷却した後、ＥＤＣ（０.１１９ｇ）を加え、混合物を室温にて１６時間攪拌した。常法により処理して０.３５５ｇを得た。
【０１６８】
【化１５６】
0004698027.tif 000147
ベンジルエーテル（０.３５５ｇ）をパラジウムヒドロキシド（０.０４８ｇ）および酢酸（０２５ｍＬ）とともに酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解した。反応混合物を５０ｐｓｉの水素雰囲気下に置き、１０時間振盪させた。常法により処理して０.２５５ｇを得た。この物質を上記のようにリン酸化、ＴＦＡによる脱ブロッキング、ホスゲンによる二量体化、およびフェニルシランおよびパラジウムによるアリル保護基の除去を行ってＥＲ−８０４９４７を得た。
【０１６９】
生物学的実施例
実施例７：サイトカインの誘導（インビトロ）
アジュバント活性の指標として用いることができる有効なインビトロアッセイは存在しない。しかしながら、ある分子がマクロファージで刺激応答を誘起できないことは、該分子が免疫アジュバントでありそうもないことの強い指標である。この理由から、化合物がＴＮＦ−αや他のサイトカインを免疫細胞から放出させる能力は、該化合物が免疫応答を刺激する能力（アジュバント活性という結果となる）の指標となる。
【０１７０】
Ａ．ヒト全血におけるアッセイ
単球／マクロファージに対する化合物の活性を試験するのに最も利用しやすいヒトの系は全血のものである。種々の濃度の本発明の化合物を、５０μｌのＣａ++、Ｍｇ++不含ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）中の１０×ストックとして、ついで５０μｌのＨＢＳＳを正常なボランティア（年齢１８〜５１；１１０〜２３０ｌｂ）から得た４００μｌのヘパリン処理全血中に、プラスチックアッセイプレートのウエルに全量５００μｌ／ウエル（全血の最終濃度は８０％であった）にて加えた。３７℃、５％ＣＯ2雰囲気で穏やかに振盪しながら３時間インキュベートした後、アッセイプレートを１０００×ｇで４℃にて１０分間遠心分離にかけ、血漿を抜き取り、−８０℃に凍結した。血漿試料をＥＬＩＳＡ（Genzyme Corp.、ケンブリッジ、マサチューセッツ）によりＴＮＦ−αについて分析した。各アッセイポイントを３回試験した。
図１に示すように、１００、１８４および１８６などの化合物は血液由来の（blood-borne）細胞を刺激してＴＮＦ−αを放出させる。この刺激活性は、同じアッセイで同様のインキュベーションに存在する１０ｎｇ／ｍｌの内毒素（またはＬＰＳ）に匹敵しうる。化合物の活性（１０μＭで試験したもの）は、表１に示すように、不活性（化合物１１０など）なものからＬＰＳ標準を超える活性を呈するものまでに及んでいる。
【０１７１】
Ｂ．培養したヒト細胞株
同様の結果は、本発明の化合物を細胞培養モデルで試験したときにも得ることができる。このアッセイでは、Gotoら、Molecular Pharmacology 49: 860-873 (1996)に詳細に記載されているように、ＴＮＦ−αプロモーターの制御下で分泌したアルカリホスファターゼの遺伝子でトランスフェクションしておいたＴＨＰ−１細胞からのアルカリホスファターゼの分泌を刺激する能力について本発明の化合物を試験する。しかしながら、このアッセイでは、血清を除去する効果１（皮下の環境をより一層模倣しやすい条件）を評価することができる。図２に示し表１に記載するように、これらアッセイの結果は、本発明の化合物が血清の不在下および存在下で細胞に加えたときにＴＮＦ−αプロモーターの制御下で遺伝子の誘発を刺激することを示している。
【０１７２】
表１．化合物によるインビボでのサイトカイン放出の刺激
【表１】
0004698027.tif 000148
１：これは、リポ多糖結合タンパク質などの血清成分が薬剤の活性に必要か否かを決定するのに重要である。
【０１７３】
【表２】
0004698027.tif 000149
【０１７４】
【表３】
0004698027.tif 000150
【０１７５】
【表４】
0004698027.tif 000151
【０１７６】
【表５】
0004698027.tif 000152
【０１７７】
【表６】
0004698027.tif 000153
【０１７８】
【表７】
0004698027.tif 000154
【０１７９】
【表８】
0004698027.tif 000155
（１）各アッセイでの応答は１００μＭの化合物１００内部標準と比較したが、該内部標準は典型的に基本に対してＴＮＦ−αＰＬＡＰ発現を２〜３倍増大させた。
（２）＠５.８μＭにて試験した。
【０１８０】
Ｃ．マウス脾細胞
化合物が脾細胞からのサイトカイン放出を刺激する能力はマウスモデルで評価することができる。Ｃ５７ＢＬ／６マウスから回収した脾臓細胞を、５％ＦＢＳ、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシンおよび５０μＭのベータ−メルカプトエタノールを含有するＲＰＭＩ１６４０細胞培地で２４時間培養し、種々の濃度の被験化合物と２０〜２４時間培養し、その後、サイトカインの存在について細胞培養の上澄み液を試験する。
【０１８１】
マウスから回収した脾臓細胞を被験化合物とともに２４時間培養し、サイトカインの放出について上澄み液を試験した。図３および図４に示すように、脾細胞からのＩＬ−１０やインターフェロンγなどのサイトカインの放出が、１０４、１０６、１２４、１２６、１６０および１６２などの化合物によって刺激される。
これらアッセイは、脾臓に由来する不均質な細胞集団を利用するものであった。このことは、サイトカインの誘発を細胞に対する被験化合物の直接的な作用およびサイトカイン「カスケード」のより間接的な刺激の両者により引き起こすことを可能とする。サイトカイン「カスケード」では、ある一つのタイプの細胞によるサイトカインの放出が、同じ培地に存在する他の細胞における他のサイトカインの放出を誘発しうる。この強い免疫応答の一部は、このようなサイトカインの「環境」によるものであるかもしれない。
【０１８２】
実施例８：抗体応答のインビボ誘発
アジュバント活性の最も重要な試験は、ある化合物を抗原調製物に添加することが、該抗原を生きている動物に投与したときに該抗原に対して産生される抗体レベルを上昇させることによって免疫応答を増大させるか否かを決定することである。
最初の実験は、マウス（Ｂａｌｂ／ｃ）に本発明の化合物とキーホールリンペットヘモシアニンなどの担体に結合させたペプチドとを注射することを含んでいた。これら試験のために選択したペプチドは、ＨＩＶ ＩＩＩＢ ｇｐ１２０タンパク質のＶ３ループのアミノ酸３０８〜３２２に対応するペプチド（Ｐ１８）である。ＨＩＶ ＩＩＩＢ ｇｐ１２０タンパク質のＶ３ループのアミノ酸３０８〜３２２に対応するＰ１８ ２１アミノ酸ペプチドは免疫原性であることが報告されている。グリシン／アラニン／グリシンスペーサー残基とアミノ末端システイン残基とを有するこのペプチドを、Genosys（Woodlands テキサス）により合成した。
【０１８３】
このペプチドの配列は以下の通りである：ＣＧＡＧＩＲＩＱＲＧＰＧＲＡＦＶＴＩＧＫＧ（下線を引いたアミノ酸は天然の配列を示す）。このペプチドを供給者によるＨＰＬＣを用いて＞８０％の純度まで単離した。このペプチドを、マレイミド活性化結合法（Pierce Immunochemical；カタログ＃７７１０７）を用い、システイン残基によりウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）およびキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）にカップリングした。ＫＬＨコンジュゲートペプチドは免疫原として用い、ＢＳＡコンジュゲートはＰ１８特異的抗体のためのスクリーニング標的抗原として用いた。指示された量のＫＬＨ−Ｐ１８コンジュゲートを３００μｇの被験化合物、ミョウバンまたはＰＢＳとともに常法により用い、約６〜８週齢の（１８〜２５ｇ）オスＢａｌｂ／ｃマウス（Charles River Laboratories）に２または３週間の間隔で（指示に従って）注射した。注射はすべて頚の背部の皮下に行い、ＰＢＳ中の抗原とアジュバントとの混合物（２００μｌ）を各２週毎に（多糖またはインフルエンザについては３週毎に）全部で３回注射した。
【０１８４】
２回目または３回目の注射の１週間または２週間後にマウスから採血した。試料の血液に何時採取したかを表示した（すなわち、二次血液は第二のタンパク質注射の１週間後または第二の多糖注射の２週間後であり、三次血液は抗原／アジュバントの第三の注射の後のものである）。血液の採取は、尾静脈に傷をつけ、血液滴をBecton Dickinsonブランドのマイクロコンテイナー（microtainer）血清分別管に回収した後に行った。マイクロ遠心分離により血清を赤血球から分離し、ＥＬＩＳＡにより抗原特異的なＩｇＧレベルを試験した。
ペプチドに対する免疫応答は、酵素結合抗体免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により試験することができる。ＥＬＩＳＡは、ウシ血清アルブミンなどの他の非交差反応性のタンパク質にコンジュゲートし（Ｐ１８−ＢＳＡ）ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングしたＰ１８ペプチドに結合する血清抗体のレベルを定量することができる。
図５、表２および表３に示すように、ＫＬＨ−Ｐ１８抗原とともに種々の化合物を注射したマウスは、Ｐ１８−ＫＬＨペプチドコンジュゲートを単独で注射したマウスに比べてより高い応答（高い抗体レベル）を呈した。
【０１８５】
表２．化合物によるＰ１８ペプチドに対する抗体産生の刺激
【表９】
0004698027.tif 000156
１：三次血液でアッセイしたＩｇＧの濃度。
方法セクションに記載したように、３００μｇの化合物および５μｇのＫＬＨ−Ｐ１８コンジュゲート抗原を注射した５匹のマウスからの血清についての平均ＩｇＧ。方法セクションに記載したように、ＰＢＳ中の５μｇ／ｍｌのＢＳＡ−Ｐ１８（５０μｌ）をコーティングしたCostar EIA/RIAプレートを用いて抗原特異的なＥＬＩＳＡを行った。
【０１８６】
表３．化合物によるＰ１８ペプチドに対する抗体産生の刺激
【表１０】
0004698027.tif 000157
１：三次血液でアッセイしたＩｇＧの濃度。方法セクションに記載したように、３００μｇの化合物および抗原（下記）を注射した５匹のマウスからの血清についての平均ＩｇＧ。方法セクションに記載したように、ＰＢＳ中の５μｇ／ｍｌのＢＳＡ−Ｐ１８（５０μｌ）をコーティングしたCostar EIA/RIAプレートを用いて抗原特異的なＥＬＩＳＡを行った。比較として、ミョウバンの添加はＰＢＳ／抗原単独に比べてＩｇＧレベルを７.４倍増大させた。使用した抗原：一次：１μｇのＫＬＨ−コンジュゲートＰ１８ペプチド。二次および三次ブースター：０.５μｇのＫＬＨ−コンジュゲートＰ１８ペプチド。＊ｐ＜０.０５ ＰＢＳ＋抗原群と比べたスチューデントの両側ｔ検定（非等価（unequal）変数）による。
【０１８７】
アジュバント活性はまた、本発明の化合物を他の抗原で試験したときにも得られた。１００、１１６、１２６、１６０、１８４、および１８６などの化合物は、インフルエンザＸ−３１抗原に対して抗原特異的な抗体の産生を２６.８倍まで（表４）刺激することができる。応答の増大はまた、破傷風毒素（図６）および髄膜炎菌Ｃ多糖（表５）を攻撃抗原として用いた場合にも認められる。これらアッセイにおいて、１μｇの髄膜炎菌Ｃ ＰＳまたは１.５μｇの破傷風毒素または５μｇのインフルエンザＸ３１（SPAFAS laboratories）を用いた。Accurate Chemicalからの破傷風毒素（カタログ＃sstettox）を攻撃抗原として用い、一方、List Biologicalsからの精製毒素（カタログ＃191）をＥＬＩＳＡアッセイのための標的抗原として用いた。
【０１８８】
表４．化合物によるインフルエンザＸ３１に対する抗体産生の刺激
【表１１】
0004698027.tif 000158
【表１２】
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１：三次血液でアッセイしたＩｇＧの濃度。
方法セクションに記載したように、３００μｇの化合物および５μｇの抗原を注射した５匹のマウスからの血清についての平均ＩｇＧ。方法セクションに記載したように、０.５Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ９.６中の１０μｇ／ｍｌのインフルエンザＸ−３１抗原（５０μｌ）をコーティングしたCostar EIA/RIAプレートを用いて抗原特異的なＥＬＩＳＡを行った。比較として、ミョウバンの添加はＰＢＳ／抗原単独に比べてＩｇＧレベルを３.５倍増大させた。
【０１８９】
表５．化合物による髄膜炎菌多糖に対する抗体産生の刺激
【表１３】
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【表１４】
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１：二次血液でアッセイしたＩｇＧの濃度。
方法セクションに記載したように、３００μｇの化合物および１μｇの抗原を注射した５匹のマウスからの血清についての平均ＩｇＧ。方法セクションに記載したように、ＰＢＳプラスメチル化ヒト血清アルブミン（Gheeslingら、J. Clin. Microbiol., 32: 1475-82 (1994)に記載）中の５μｇ／ｍｌの髄膜炎菌ＰＳ抗原（５０μｌ）をコーティングしたCostar EIA/RIAプレートを用いて抗原特異的なＥＬＩＳＡを行った。比較として、ミョウバンの添加はＰＢＳ／抗原単独に比べてＩｇＧレベルを２.３倍増大させた。
【０１９０】
インフルエンザウイルスＸ−３１をSPFAS（ストーズ、コネチカット）から購入し、不活化し、供給者により不活化されていることを確認した［Payneら、Vaccine 16: 92-98 (1998)］。
髄膜炎菌Ｃ多糖（ＰＳ）は、Pasteur Merrieur Connaught（スウィフトウォーター、ペンシルベニア）から提供された。メチル化ヒトアルブミンは、Gheeslingら、J. Clin. Microbiol., 32: 1475-82 (1994)に記載の方法により得ることができる。
【０１９１】
抗原／アジュバント混合物の調製のため、凍結乾燥した被験化合物をリン酸緩衝液食塩水（ＰＢＳ；カタログ＃P-3813；Sigma Chemical Co.、セントルイス、ミズーリ）で２ｍｇ／ｍｌに再構成し、冷水浴中で２分間超音波処理した。モノホスホリル脂質Ａ、ＭＰＬ（Ribi Immunochemical）を注射用滅菌水で２ｍｇ／ｍｌに再構成し、５０℃にて１５分間インキュベートし、ついで上記のようにして超音波処理した。Pierce Immunochemicalから購入したInjectR Alumを創造業者のガイドラインに従って用い、注射容量の約２０〜３０％を構成していた。ＰＢＳ中に希釈した指示された量の抗原を、２００μｌの容積に化合物またはＭＰＬが３００μｇとなるように（特に断らない限り）、化合物、ＭＰＬ、またはミョウバンと混合した。この混合物を注射する前に絶えず振盪しながら室温で４０分間インキュベートした。
【０１９２】
抗原特異的なＩｇＧのレベルを、抗原を９６ウエルCostar EIA/RIAプレートに受動的にコーティングした直接ＥＬＩＳＡによりモニターした。プレートを５０μｇ／ウエルの指示された抗原でコーティングし、４℃で一夜（ＯＮ）インキュベートし、自動プレート洗浄機でＰＢＳ＋０.０５％tween20（ＰＢＳ−ｔ）で３回洗浄した。ついで、プレートをＰＢＳ中の０.５％ゼラチン（２００μｌ／ウエル）で室温（ＲＴ）にて１時間ブロッキングし、ＰＢＳ−ｔで３回洗浄した。マウス血清をＰＢＳ−ｔプラス０.３％ＢＳＡ中に希釈し、１００μｌの種々の希釈液を２回ずつ抗原コーティングウエル（または対照としてＢＳＡコーティングウエル）に加え、ＲＴで１時間インキュベートし、再びＰＢＳ−ｔで３回洗浄した。
【０１９３】
ビオチン化ヤギ抗マウスＩｇＧ（Southern Biotechnology Associates Inc.、バーミンガム、アラバマ、カタログ＃1031-08）をＰＢＳ−ｔ中に１：５０００に希釈し、１００μｌ／ウエルを適用し、ＲＴで１時間インキュベートし、ＰＢＳ−ｔで３回洗浄し、ついでＰＢＳ−ｔ中の１：１０,０００ストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲート（Southern Biotechnology Associates Inc.）をＲＴにて３０分間かけて加え、再びＰＢＳ−ｔで３回洗浄した。ついで、ウエルを１００μＬのＴＭＢ基質（Kirkegaard and Perry Labs）中で５分間インキュベートした。等量の１Ｍリン酸を加えて発色を停止させ、４５０ｎｍの吸光度をDeltasoftソフトウエア分析パッケージを有するTitertek Multiscanプレートで読み取った。
【０１９４】
抗原特異的なＩｇＧレベルの相対的な定量のため、所定量の抗体を産生した色を得るにの必要な希釈を決定することにより曲線を互いに比較した。幾つかの場合には、既知の量の精製ＩｇＧ（Southern Biotech.から購入）を捕捉する抗ＦＡｂ特異的試薬を用いた全ＩｇＧアッセイをＩｇＧ標準曲線として、ＢＳＡ−Ｐ１８コンジュゲートに対する直接ＥＬＩＳＡとともに行った。抗ＦＡｂ試薬は、抗体がＦＡｂ領域により抗原に結合するのと同様の仕方で精製ＩｇＧを配向させる。これにより、抗体の抗原特異的捕捉を測定するのに用いたのと同じ試薬により結合抗体を検出することが可能となる。ＢＳＡ−Ｐ１８コンジュゲートに結合した抗体の検出に用いたのと同じ試薬溶液、すなわち、ビオチン化抗ＩｇＧ（Ｆｃ特異的）ついでＨＲＰ−ストレプトアビジンを、抗ＦＡｂ全ＩｇＧ定量アッセイおよび抗原特異的アッセイに同時に適用した。それゆえ、精製ＩｇＧ標準曲線の結合からのシグナルは、抗標的抗原アッセイで結合した等量のＩｇＧに対して生成されたものと等しい。ついで、４パラメータ曲線適合（fit）（DeltaSoft 3ソフトウエアパッケージ）を用い、血清中の抗体の量を精製ＩｇＧ標準から外挿した。
【０１９５】
表６．ＷＢ ＥＤ５０vs. ＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ）の％
【表１５】
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【０１９６】
【表１６】
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【０１９７】
【表１７】
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【０１９８】
【表１８】
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【０１９９】
【表１９】
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【０２００】
【表２０】
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【０２０１】
【表２１】
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【０２０２】
【表２２】
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【０２０３】
【表２３】
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【０２０４】
【表２４】
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【０２０５】
【表２５】
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【０２０６】
【表２６】
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【０２０７】
【表２７】
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【０２０８】
下記表７は、対応するＥＲ番号と関連させた本明細書において参照した化合物番号を含む。
表７．ＥＲ番号に対する化合物番号の対応
【表２８】
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【表２９】
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【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明の化合物１００、１８４または１８６によるサイトカイン放出の誘発のインビトロアッセイの結果を示すグラフである。
【図２】  １０％血清の不在下および存在下での化合物１０６および１２６によるＴＨＰ−１細胞でのＴＮＦプロモーターを有する誘導性リポーター構築物（ＴＮＦ−ＰＬＡＰ）からのアルカリホスファターゼ発現の刺激を示すグラフである。
【図３】  本発明の化合物１０４、１０６、１２４、１２６、１６０および１６２による正常マウス脾細胞からのＩＬ−１０放出の刺激を示すグラフである。
【図４】  本発明の化合物１０４、１０６、１２４、１２６、１６０および１６２による正常マウス脾細胞からのインターフェロンγ放出の刺激を示すグラフである。
【図５】  本発明の化合物１００、１２４および１２６の不在下および存在下でのキーホールリンペットヘモシアニンに応答して産生された抗体の量を決定するための血清滴定分析の結果を示すグラフである。
【図６】  本発明の化合物１００、１２４および１２６の不在下および存在下での破傷風毒素に応答して産生された抗体の量を決定するための血清滴定分析の結果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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