(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式(I)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化１】
0004753120.tif 000009
（式(I)中、Ｒ１は水素原子、アミド基、Boc基、Cbz基、Fmoc基、BocNH(CH2)5CO-基、BocNHCH(CH2C6H5)CO-基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ２はベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ３は水素原子、-ＯＲ５基（Ｒ５は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ４は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ１及びＸ２はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。）
【請求項２】
下式(1)〜(5)のいずれかに表される化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化２】
0004753120.tif 000010
【請求項３】
下式(6)〜(8)のいずれかに表される化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化３】
0004753120.tif 000011
【請求項４】
下記の一般式(II)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化４】
0004753120.tif 000012
（式(II)中、Ｒ６は水素原子、Boc基、または、Cbz基であり、Ｒ７は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ３及びＸ４はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。）
【請求項５】
下式(9)〜(11)のいずれかに表される化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化５】
0004753120.tif 000013
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、環状イソジチロシン誘導体又はその薬理学的に許容される塩、並びに、それらを有効成分として含有する、イミペネム活性増強剤、環状イソジチロシン誘導体活性増強剤、細菌の増殖を阻害する薬剤、コレステロール産生抑制剤、コレステリルエステル生成阻害剤、及び医薬組成物、並びに、それらの誘導体又はその薬理学的に許容される塩を用いた、イミペネムの活性増強方法、環状イソジチロシン誘導体活性増強方法、細菌の増殖を阻害する方法、コレステロール産生抑制方法、及びコレステリルエステル生成阻害方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
環状イソジチロシン誘導体のいくつかは生理学的作用を有することが知られている。例えば、バイコマイシンは抗MRSA活性を有し、OF-4949は抗がん作用やアミノペプチダーゼＢを阻害する作用を有し、K-13は高血圧アンジオテンシンＩ変換酵素を阻害する作用を有することが知られている（Glycopeptide Antibiotics; Marcel Dekker, Inc.; New York, 1994. pp309-409、J. Antibiot. 40 (1987) 450-454、及び特開昭６３−２０３６７１号公報参照）。環状イソジチロシン誘導体として、それら以外に、ユーリパミドＡ〜Ｄなどが知られている（Tetrahedron Letters 44 (2003) 7949-7952及びTetrahedron Letters 60 (2004) 5623-5634参照）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、生理学的作用を有する新たな環状イソジチロシン誘導体又はその薬理学的に許容される塩、並びに、それらを有効成分として含有する薬剤や医薬組成物、及びそれらの使用方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
イミペネムは、抗生物質として作用するが、MRSA（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）には効果がないことが知られていた。しかし、本発明者らは、下式(1)〜(5)及び下式(9)〜(12)で表される化合物（以下、それぞれを「化合物(1)」、「化合物(2)」、「化合物(3)」、「化合物(4)」、「化合物(5)」、「化合物(9)」、「化合物(10)」、「化合物(11)」、及び「化合物(12)」と称する。）が、イミペネムの抗MRSA（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）活性を増強させることを見出した。
【化１】
0004753120.tif 000002
【０００５】
これに対して、下式(6)〜(8)で表される化合物（以下、それぞれを「化合物(6)」、「化合物(7)」、及び「化合物(8)」と称する。）は、イミペネムの抗MRSA（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）活性を増強できないことを見出した。
【化２】
0004753120.tif 000003
【０００６】
これらのことから、下記の一般式(III)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、あるいは、下記の一般式(II)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩は、イミペネム活性増強作用を有すると考えられる。
【化３】
0004753120.tif 000004
【０００７】
なお、式(III)中、Ｒ８は水素原子、アミド基、Boc基、Cbz基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ９は水素原子、ベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１０は水素原子、-ＯＲ１２基（Ｒ１２は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１１は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ５及びＸ６はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。但し、Ｒ９が水素原子であるときはＲ８は水素原子又はBoc基である。また、式(II)中、Ｒ６は水素原子、Boc基、または、Cbz基であり、Ｒ７は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ３及びＸ４はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【０００８】
さらに、本発明者らは、上述の化合物(3)〜(5)及び化合物(9)〜(12)はマクロファージにおけるコレステリルエステル合成を阻害する作用を有さないが、上述の化合物(1)、化合物(2)、化合物(6)、化合物(7)、及び化合物(8)はマクロファージにおけるコレステリルエステル合成を阻害する作用を有することを見出した。このことから、下記の一般式(IV)において、Ｒ１３がアミド基、Boc基、Cbz基、Fmoc基、BocNH(CH2)5CO-基、BocNHCH(CH2C6H5)CO-基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１４がベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１５が-ＯＲ１７基（Ｒ１７は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１６が水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基である化合物（Ｘ７及びＸ８はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。）又はその薬理学的に許容される塩は、マクロファージにおけるコレステリルエステル生成を阻害すること、及びマクロファージにおけるコレステロールの産生を抑制することができると考えられる。
【化４】
0004753120.tif 000005
【０００９】
以上のことから、本発明者らは、下記の一般式(I)若しくは上述の一般式(II)で表される新規環状イソジチロシン誘導体、上述の化合物(3)若しくは化合物(4)、又はそれらの薬理学的に許容される塩が、イミペネムの活性を増強する作用、コレステリルエステルの生成を阻害する作用、コレステロールの産生を抑制する作用等の生理学的作用を有することを見出した。
【化５】
0004753120.tif 000006
【００１０】
なお、式(I)中、Ｒ１は水素原子、アミド基、Boc基、Cbz基、Fmoc基、BocNH(CH2)5CO-基、BocNHCH(CH2C6H5)CO-基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ２はベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ３は水素原子、-ＯＲ５基（Ｒ５は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ４は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ１及びＸ２はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００１１】
このようにして、本発明者らは本発明を完成するに至った。【００１２】
すなわち、本発明に係る化合物又はその薬理学的に許容される塩は、上述の一般式(I)で表されることを特徴とする。なお、式(I)中、Ｒ１は水素原子、アミド基、Boc基、Cbz基、Fmoc基、BocNH(CH2)5CO-基、BocNHCH(CH2C6H5)CO-基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ２はベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ３は水素原子、-ＯＲ５基（Ｒ５は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ４は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ１及びＸ２はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００１３】
また、本発明に係る化合物又はその薬理学的に許容される塩は、上述の化合物(1)〜(5)のいずれかであることを特徴とする。さらに、本発明に係る化合物又はその薬理学的に許容される塩は、上述の化合物(6)〜(8)であることを特徴とする。【００１４】
本発明に係る化合物又はその薬理学的に許容される塩は、上述の一般式(II)で表されることを特徴とする。なお、式(II)中、Ｒ６は水素原子、Boc基、または、Cbz基であり、Ｒ７は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ３及びＸ４はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。また、本発明に係る化合物又はその薬理学的に許容される塩は、上述の化合物(9)〜(11)のいずれかであることを特徴とする。【００１５】
本発明に係るイミペネムの活性を増強するイミペネム活性増強剤は、上述の一般式(III)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。なお、式(III)中、Ｒ８は水素原子、アミド基、Boc基、Cbz基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ９は水素原子、ベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１０は水素原子、-ＯＲ１２基（Ｒ１２は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１１は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ５及びＸ６はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。但し、Ｒ９が水素原子であるときはＲ８は水素原子又はBoc基である。【００１６】
また、本発明に係るイミペネム活性増強剤は、上述の化合物(1)〜(5)及び(12)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。【００１７】
さらに、本発明に係るイミペネム活性増強剤は、上述の一般式(II)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。なお、式(II)中、Ｒ６は水素原子、Boc基、または、Cbz基であり、Ｒ７は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ３及びＸ４はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００１８】
また、本発明に係るイミペネム活性増強剤は、上述の化合物(9)〜(11)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。【００１９】
前記イミペネムの活性は、例えば、細菌に対する抗菌活性などである。前記細菌としては、例えば、MRSA、グラム陰性菌、グラム陽性菌などである。【００２０】
本発明に係るコレステロール産生抑制剤は、上述の一般式(IV)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。なお、式(IV)中、Ｒ１３はアミド基、Boc基、Cbz基、Fmoc基、BocNH(CH2)5CO-基、BocNHCH(CH2C6H5)CO-基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１４はベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１５は-ＯＲ１７基（Ｒ１７は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１６は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ７及びＸ８はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。また、本発明に係るコレステロール産生抑制剤は、上述の化合物(1)若しくは化合物(2)又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。さらに、本発明に係るコレステロール産生抑制剤は、上述の化合物(6)〜(8)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。【００２１】
本発明に係るコレステリルエステル生成阻害剤は、上述の一般式(IV)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。なお、式(IV)中、Ｒ１３はアミド基、Boc基、Cbz基、Fmoc基、BocNH(CH2)5CO-基、BocNHCH(CH2C6H5)CO-基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１４はベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１５は-ＯＲ１７基（Ｒ１７は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１６は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ７及びＸ８はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。また、本発明に係るコレステリルエステル生成阻害剤は、上述の化合物(1)若しくは化合物(2)又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。さらに、本発明に係るコレステリルエステル生成阻害剤は、上述の化合物(6)〜(8)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。【００２２】
本発明に係る薬剤は、細菌の増殖を阻害する薬剤であって、上述の一般式(III)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、及びイミペネムを有効成分として含有する。なお、式(III)中、Ｒ８は水素原子、アミド基、Boc基、Cbz基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ９は水素原子、ベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１０は水素原子、-ＯＲ１２基（Ｒ１２は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１１は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ５及びＸ６はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。但し、Ｒ９が水素原子であるときはＲ８は水素原子又はBoc基である。【００２３】
また、本発明に係る薬剤は、細菌の増殖を阻害する薬剤であって、上述の化合物(1)〜(5)及び(12)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩、並びにイミペネムを有効成分として含有する。【００２４】
さらに、本発明に係る薬剤は、細菌の増殖を阻害する薬剤であって、上述の一般式(II)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、及びイミペネムを有効成分として含有する。なお、式(II)中、Ｒ６は水素原子、Boc基、または、Cbz基であり、Ｒ７は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ３及びＸ４はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００２５】
また、本発明に係る薬剤は、細菌の増殖を阻害する薬剤であって、上述の化合物(9)〜(11)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩、及びイミペネムを有効成分として含有する。【００２６】
なお、前記細菌としては、例えば、MRSA、グラム陰性菌、グラム陽性菌などである。【００２７】
また、本発明に係る医薬組成物は、細菌の感染または増殖に起因する疾患を改善する医薬組成物であって、上述の一般式(III)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、及びイミペネムを有効成分として含有する。なお、式(III)中、Ｒ８は水素原子、アミド基、Boc基、Cbz基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ９は水素原子、ベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１０は水素原子、-ＯＲ１２基（Ｒ１２は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１１は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ５及びＸ６はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。但し、Ｒ９が水素原子であるときはＲ８は水素原子又はBoc基である。【００２８】
また、本発明に係る医薬組成物は、細菌の感染または増殖に起因する疾患を改善する医薬組成物であって、上述の化合物(1)〜(5)及び(12)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩、並びにイミペネムを有効成分として含有する。【００２９】
さらに、本発明に係る医薬組成物は、細菌の感染または増殖に起因する疾患を改善する医薬組成物であって、上述の一般式(II)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、及びイミペネムを有効成分として含有する。なお、式(II)中、Ｒ６は水素原子、Boc基、または、Cbz基であり、Ｒ７は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ３及びＸ４はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００３０】
また、本発明に係る医薬組成物は、細菌の感染または増殖に起因する疾患を改善する医薬組成物であって、上述の化合物(9)〜(11)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩、及びイミペネムを有効成分として含有する。【００３１】
なお、前記細菌は、例えば、MRSA、グラム陰性菌、グラム陽性菌などである。前記MRSAの感染または増殖に起因する疾患（以下、「MRSA感染症」と称する場合がある。）には、例えば、脳炎、肺炎、敗血症、腹膜炎、腸炎、骨髄炎、胆管炎、皮膚化膿症、褥瘡感染、MRSAが産生する毒素（例えば、エンテロトキシン、TSST-1など）による食中毒、トキシックショック症候群等が含まれる。また、前記グラム陽性菌またはグラム陰性菌の感染または増殖に起因する疾患（以下、「グラム陽性菌またはグラム陰性菌の感染症」と称する場合がある。）には、例えば、中毒症、歯周病、炎症性疾患、血管炎、IV型アレルギー性疾患、ブドウ球菌性熱傷様皮膚症候群、リッター病、新生児における水疱性インペチゴ、腫瘍、肺炎、関節炎、髄膜炎、各種化膿性疾患、腸炎、髄膜炎、菌血症、眼感染、食中毒、呼吸器感染症、中耳炎、副鼻腔炎、咽頭炎、猩紅熱、急性糸状体腎炎、リウマチ熱、膿痂疹、激症型感染、齲歯、尿路感染症、創感染、胆道感染症、細菌感染によるアトピー性疾患（アトピー性皮膚炎など）の重症化などが含まれる。【００３２】
本発明に係る医薬組成物は、コレステロールの増加に起因する疾患を改善する医薬組成物であって、上述の一般式(IV)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。なお、式(IV)中、Ｒ１３はアミド基、Boc基、Cbz基、Fmoc基、BocNH(CH2)5CO-基、BocNHCH(CH2C6H5)CO-基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１４はベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１５は-ＯＲ１７基（Ｒ１７は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１６は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ７及びＸ８はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００３３】
また、本発明に係る医薬組成物は、コレステロールの増加に起因する疾患を改善する医薬組成物であって、上述の化合物(1)若しくは化合物(2)又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。さらに、本発明に係る医薬組成物は、コレステロールの増加に起因する疾患を改善する医薬組成物であって、上述の化合物(6)〜(8)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。【００３４】
なお、前記コレステロールの増加に起因する疾患は、例えば、動脈硬化、高脂血症、冠動脈疾患などである。【００３５】
本発明に係る医薬組成物は、コレステリルエステルの細胞内蓄積に起因する疾患を改善する医薬組成物であって、上述の一般式(IV)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。なお、式(IV)中、Ｒ１３はアミド基、Boc基、Cbz基、Fmoc基、BocNH(CH2)5CO-基、BocNHCH(CH2C6H5)CO-基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１４はベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１５は-ＯＲ１７基（Ｒ１７は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１６は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ７及びＸ８はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００３６】
また、本発明に係る医薬組成物は、コレステリルエステルの細胞内蓄積に起因する疾患を改善する医薬組成物であって、上述の化合物(1)若しくは化合物(2)又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。さらに、本発明に係る医薬組成物は、コレステリルエステルの細胞内蓄積に起因する疾患を改善する医薬組成物であって、上述の化合物(6)〜(8)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する。【００３７】
なお、前記コレステリルエステルの細胞内蓄積に起因する疾患は、例えば、wolman病、コレステリルエステル蓄積症などである。【００３８】
本発明に係る環状イソジチロシン誘導体活性増強剤は、上述の一般式(III)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩の活性を増強する薬剤であって、イミペネムを有効成分として含有する。なお、式(III)中、Ｒ８は水素原子、アミド基、Boc基、Cbz基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ９は水素原子、ベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１０は水素原子、-ＯＲ１２基（Ｒ１２は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１１は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ５及びＸ６はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。但し、Ｒ９が水素原子であるときはＲ８は水素原子又はBoc基である。【００３９】
また、本発明に係る環状イソジチロシン誘導体活性増強剤は、上述の化合物(1)〜(5)及び(12)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩の活性を増強する薬剤であって、イミペネムを有効成分として含有する。【００４０】
さらに、本発明に係る環状イソジチロシン誘導体活性増強剤は、上述の一般式(II)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩の活性を増強する薬剤であって、イミペネムを有効成分として含有する。なお、式(II)中、Ｒ６は水素原子、Boc基、または、Cbz基であり、Ｒ７は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ３及びＸ４はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００４１】
また、本発明に係る環状イソジチロシン誘導体活性増強剤は、上述の化合物(9)〜(11)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩の活性を増強する薬剤であって、イミペネムを有効成分として含有する。【００４２】
なお、前記活性は、例えば、細菌に対する抗菌活性などである。前記細菌としては、例えば、MRSA、グラム陰性菌、グラム陽性菌などである。【００４３】
本発明に係るイミペネムの活性を増強するイミペネム活性増強方法は、前記イミペネムと協同させて、上述の一般式(III)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を作用させることを含む。なお、式(III)中、Ｒ８は水素原子、アミド基、Boc基、Cbz基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ９は水素原子、ベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１０は水素原子、-ＯＲ１２基（Ｒ１２は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１１は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ５及びＸ６はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。但し、Ｒ９が水素原子であるときはＲ８は水素原子又はBoc基である。【００４４】
また、本発明に係るイミペネム活性増強方法は、前記イミペネムと協同させて、上述の化合物(1)〜(5)及び(12)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩を作用させることを含む。【００４５】
さらに、本発明に係るイミペネム活性増強方法は、前記イミペネムと協同させて、上述の一般式(II)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を作用させることを含む。なお、式(II)中、Ｒ６は水素原子、Boc基、または、Cbz基であり、Ｒ７は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ３及びＸ４はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００４６】
また、本発明に係るイミペネム活性増強方法は、前記イミペネムと協同させて、上述の化合物(9)〜(11)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩を作用させることを含む。【００４７】
なお、前記活性は、例えば、細菌に対する抗菌活性などである。前記細菌は、例えば、MRSA、グラム陰性菌、グラム陽性菌などである。【００４８】
本発明に係る環状イソジチロシン誘導体活性増強方法は、上述の一般式(III)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩の活性を増強する方法であって、上述の一般式(III)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩と協同させて、イミペネムを作用させることを含む。なお、式(III)中、Ｒ８は水素原子、アミド基、Boc基、Cbz基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ９は水素原子、ベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１０は水素原子、-ＯＲ１２基（Ｒ１２は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１１は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ５及びＸ６はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。但し、Ｒ９が水素原子であるときはＲ８は水素原子又はBoc基である。【００４９】
また、本発明に係る環状イソジチロシン誘導体活性増強方法は、上述の化合物(1)〜(5)及び(12)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩の活性を増強する方法であって、上述の化合物(1)〜(5)及び(12)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩と協同させて、イミペネムを作用させることを含む。【００５０】
さらに、本発明に係る環状イソジチロシン誘導体活性増強方法は、上述の一般式(II)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩の活性を増強する方法であって、上述の一般式(II)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩と協同させて、イミペネムを作用させることを含む。なお、式(II)中、Ｒ６は水素原子、Boc基、または、Cbz基であり、Ｒ７は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ３及びＸ４はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００５１】
また、本発明に係る環状イソジチロシン誘導体活性増強方法は、上述の化合物(9)〜(11)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩の活性を増強する方法であって、上述の化合物(9)〜(11)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩と協同させて、イミペネムを作用させることを含む。【００５２】
なお、前記活性は、例えば、細菌に対する抗菌活性などである。前記細菌は、例えば、MRSA、グラム陰性菌、グラム陽性菌などである。【００５３】
本発明に係る細菌の増殖阻害方法は、上述の一般式(III)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、及びイミペネムを協同して作用させることを含む。なお、式(III)中、Ｒ８は水素原子、アミド基、Boc基、Cbz基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ９は水素原子、ベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１０は水素原子、-ＯＲ１２基（Ｒ１２は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１１は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ５及びＸ６はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。但し、Ｒ９が水素原子であるときはＲ８は水素原子又はBoc基である。【００５４】
また、本発明に係る細菌の増殖阻害方法は、上述の化合物(1)〜(5)及び(12)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩、及びイミペネムを協同して作用させることを含む。【００５５】
さらに、本発明に係る細菌の増殖阻害方法は、上述の一般式(II)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、及びイミペネムを協同して作用させることを含む。なお、式(II)中、Ｒ６は水素原子、Boc基、または、Cbz基であり、Ｒ７は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ３及びＸ４はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００５６】
また、本発明に係る細菌の増殖阻害方法は、上述の化合物(9)〜(11)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩、及びイミペネムを協同して作用させることを含む。【００５７】
なお、作用させる細菌としては、例えば、MRSA、グラム陰性菌、グラム陽性菌などが挙げられる。【００５８】
また、本発明に係るコレステロールの産生を抑制する方法は、上述の一般式(IV)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を用いて、例えば、マクロファージ等のコレステロール産生細胞に投与することを含む。なお、式(IV)中、Ｒ１３はアミド基、Boc基、Cbz基、Fmoc基、BocNH(CH2)5CO-基、BocNHCH(CH2C6H5)CO-基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１４はベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１５は-ＯＲ１７基（Ｒ１７は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１６は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ７及びＸ８はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００５９】
また、本発明に係るコレステロールの産生を抑制する方法は、上述の化合物(1)若しくは化合物(2)又はその薬理学的に許容される塩を用いて、例えば、マクロファージ等のコレステロール産生細胞に投与することを含む。さらに、本発明に係るコレステロールの産生を抑制する方法は、上述の化合物(6)〜(8)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩を用いて、例えば、マクロファージ等のコレステロール産生細胞に投与することを含む。【００６０】
また、本発明に係るコレステリルエステル生成阻害方法は、上述の一般式(IV)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を用いて、例えば、マクロファージ等のコレステリルエステル生成（蓄積）細胞に投与することを含む。なお、式(IV)中、Ｒ１３はアミド基、Boc基、Cbz基、Fmoc基、BocNH(CH2)5CO-基、BocNHCH(CH2C6H5)CO-基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１４はベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１５は-ＯＲ１７基（Ｒ１７は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１６は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ７及びＸ８はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００６１】
また、本発明に係るコレステリルエステル生成阻害方法は、上述の化合物(1)若しくは化合物(2)又はその薬理学的に許容される塩を用いて、例えば、マクロファージ等のコレステリルエステル生成（蓄積）細胞に投与することを含む。さらに、本発明に係るコレステリルエステル生成阻害方法は、上述の化合物(6)〜(8)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩を用いて、例えば、マクロファージ等のコレステリルエステル生成（蓄積）細胞に投与することを含む。【００６２】
本発明に係る細菌の感染または増殖に起因する疾患を改善する方法は、上述の一般式(III)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、及びイミペネムを協同して作用させるように、ヒト又はヒト以外の脊椎動物（例えば、マウス、ラットなど）に投与することを含む。なお、式(III)中、Ｒ８は水素原子、アミド基、Boc基、Cbz基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ９は水素原子、ベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１０は水素原子、-ＯＲ１２基（Ｒ１２は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１１は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ５及びＸ６はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。但し、Ｒ９が水素原子であるときはＲ８は水素原子又はBoc基である。【００６３】
また、本発明に係る細菌の感染または増殖に起因する疾患を改善する方法は、上述の化合物(1)〜(5)及び(12)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩、並びにイミペネムを協同して作用させるように、ヒト又はヒト以外の脊椎動物（例えば、マウス、ラットなど）に投与することを含む。【００６４】
さらに、本発明に係る細菌の感染または増殖に起因する疾患を改善する方法は、上述の一般式(II)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩、及びイミペネムを協同して作用させるように、ヒト又はヒト以外の脊椎動物（例えば、マウス、ラットなど）に投与することを含む。なお、式(II)中、Ｒ６は水素原子、Boc基、または、Cbz基であり、Ｒ７は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ３及びＸ４はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００６５】
また、本発明に係る細菌の感染または増殖に起因する疾患を改善する方法は、上述の化合物(9)〜(11)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩、及びイミペネムを協同して作用させるように、ヒト又はヒト以外の脊椎動物（例えば、マウス、ラットなど）に投与することを含む。【００６６】
なお、前記細菌は、例えば、MRSA、グラム陰性菌、グラム陽性菌などである。前記MRSAの感染または増殖に起因する疾患には、例えば、脳炎、肺炎、敗血症、腹膜炎、腸炎、骨髄炎、胆管炎、皮膚化膿症、褥瘡感染、MRSAが産生する毒素（例えば、エンテロトキシン、TSST-1など）による食中毒、トキシックショック症候群等が含まれる。また、前記グラム陽性菌またはグラム陰性菌の感染または増殖に起因する疾患には、例えば、中毒症、歯周病、炎症性疾患、血管炎、IV型アレルギー性疾患、ブドウ球菌性熱傷様皮膚症候群、リッター病、新生児における水疱性インペチゴ、腫瘍、肺炎、関節炎、髄膜炎、各種化膿性疾患、腸炎、髄膜炎、菌血症、眼感染、食中毒、呼吸器感染症、中耳炎、副鼻腔炎、咽頭炎、猩紅熱、急性糸状体腎炎、リウマチ熱、膿痂疹、激症型感染、齲歯、尿路感染症、創感染、胆道感染症、細菌感染によるアトピー性疾患（アトピー性皮膚炎など）の重症化などが含まれる。【００６７】
本発明に係る、コレステロールの増加に起因する疾患を改善する方法は、上述の一般式(IV)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を、ヒト又はヒト以外の脊椎動物（例えば、マウス、ラットなど）に投与することを含む。なお、式(IV)中、Ｒ１３はアミド基、Boc基、Cbz基、Fmoc基、BocNH(CH2)5CO-基、BocNHCH(CH2C6H5)CO-基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１４はベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１５は-ＯＲ１７基（Ｒ１７は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１６は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ７及びＸ８はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００６８】
また、本発明に係る、コレステロールの増加に起因する疾患を改善する方法は、上述の化合物(1)若しくは化合物(2)又はその薬理学的に許容される塩を、ヒト又はヒト以外の脊椎動物（例えば、マウス、ラットなど）に投与することを含む。さらに、本発明に係る、コレステロールの増加に起因する疾患を改善する方法は、上述の化合物(6)〜(8)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩を、ヒト又はヒト以外の脊椎動物（例えば、マウス、ラットなど）に投与することを含む。【００６９】
なお、前記コレステロールの増加に起因する疾患は、例えば、動脈硬化、高脂血症、冠動脈疾患などである。【００７０】
本発明に係る、コレステリルエステルの細胞内蓄積に起因する疾患を改善する方法は、上述の一般式(IV)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩を、ヒト又はヒト以外の脊椎動物（例えば、マウス、ラットなど）に投与することを含む。なお、式(IV)中、Ｒ１３はアミド基、Boc基、Cbz基、Fmoc基、BocNH(CH2)5CO-基、BocNHCH(CH2C6H5)CO-基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１４はベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ１５は-ＯＲ１７基（Ｒ１７は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１６は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｘ７及びＸ８はハロゲン原子であって、互いに同一であっても異なっていてもよい。【００７１】
また、本発明に係る、コレステリルエステルの細胞内蓄積に起因する疾患を改善する方法は、上述の化合物(1)若しくは化合物(2)又はその薬理学的に許容される塩を、ヒト又はヒト以外の脊椎動物（例えば、マウス、ラットなど）に投与することを含む。さらに、本発明に係る、コレステリルエステルの細胞内蓄積に起因する疾患を改善する方法は、上述の化合物(6)〜(8)のいずれか又はその薬理学的に許容される塩を、ヒト又はヒト以外の脊椎動物（例えば、マウス、ラットなど）に投与することを含む。【００７２】
なお、前記コレステリルエステルの細胞内蓄積に起因する疾患は、例えば、wolman病、コレステリルエステル蓄積症などである。【００７３】
関連文献とのクロスリファレンス
本願は、2004年11月19日付けで出願した日本国特願2004-336698号に基づく優先権を主張する。この文献を本明細書に援用する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００７４】
以下、上記知見に基づき完成した本発明の実施の形態を、実施例を挙げながら詳細に説明する。実施の形態及び実施例に特に説明がない場合には、J. Sambrook, E. F. Fritsch & T. Maniatis (Ed.), Molecular cloning, a laboratory manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2001); F. M. Ausubel, R. Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J.G. Seidman, J. A. Smith, K. Struhl (Ed.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Ltd.などの標準的なプロトコール集に記載の方法、あるいはそれを修飾したり、改変した方法を用いる。また、市販の試薬キットや測定装置を用いている場合には、特に説明が無い場合、それらに添付のプロトコールを用いる。【００７５】
なお、本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的に実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。【００７６】
＝＝本発明に係る環状イソジチロシン誘導体の薬理作用＝＝
上述の一般式(II)若しくは(III)で表される化合物、上述の化合物(3)、又はそれらの薬理学的に許容される塩は、以下の実施例で示すようにイミペネム活性増強作用を有することから、イミペネムと共に投与された時、MRSA、グラム陰性菌、グラム陽性菌等の細菌感染症の改善（予防、抑制、及び治療を含む。）に有用であり、特に、イミペネムはMRSAに効果がないことが知られているので、MRSA感染症、例えば、脳炎、肺炎、敗血症、腹膜炎、腸炎、骨髄炎、胆管炎、皮膚化膿症、褥瘡感染、MRSAが産生する毒素（例えば、エンテロトキシン、TSST-1など）による食中毒、トキシックショック症候群等のMRSA感染症の改善（予防、抑制、及び治療を含む。）に有用である。また、同様に、グラム陽性菌またはグラム陰性菌の感染症、例えば、中毒症、歯周病、炎症性疾患、血管炎、IV型アレルギー性疾患、ブドウ球菌性熱傷様皮膚症候群、リッター病、新生児における水疱性インペチゴ、腫瘍、肺炎、関節炎、髄膜炎、各種化膿性疾患、腸炎、髄膜炎、菌血症、眼感染、食中毒、呼吸器感染症、中耳炎、副鼻腔炎、咽頭炎、猩紅熱、急性糸状体腎炎、リウマチ熱、膿痂疹、激症型感染、齲歯、尿路感染症、創感染、胆道感染症、細菌感染によるアトピー性疾患（アトピー性皮膚炎など）の重症化等にも有用であると考えられる。【００７７】
従って、上述の一般式(II)若しくは(III)で表される化合物、上述の化合物(3)、又はそれらの薬理学的に許容される塩は、イミペネム活性増強のための薬剤または医薬組成物として使用できる。また、両者を含有する薬剤または医薬組成物は、抗菌剤または抗生物質として利用でき、特にMRSAに対して有効である。この際、協同して作用させるように、添加または投与されるのであれば、薬剤又は医薬組成物の剤形は、両者が別々に剤形化されていても、両者が単剤になっていてもよい。ここで、「協同して作用させる」とは、両者を添加又は投与することにより両者の相乗効果を発現させることであり、例えば、実施例のように両者単独では活性のないMRSA増殖阻害活性を発現させることである。従って、時間的には両者は同時に添加又は投与されても、前後して添加又は投与されてもよい。【００７８】
また、上述の一般式(IV)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩は、以下の実施例で示すようにマクロファージにおけるコレステリルエステル生成を阻害する作用を有することが明らかになった。マクロファージは、コレステリルエステルを多量に蓄積すると泡沫細胞となり、動脈硬化の初期病変である脂肪斑や脂肪線条を形成するようになる。また、コレステリルエステルの細胞内蓄積によりwolman病やコレステリルエステル蓄積症などが発症する。従って、上述の一般式(IV)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩は、コレステリルエステルの細胞内蓄積に起因する疾患、例えば、wolman病、コレステリルエステル蓄積症（例えば、動脈硬化（特に粥状動脈硬化症）など）などの改善（予防、抑制、及び治療を含む。）に有用であり、そのための薬剤または医薬組成物として使用できる。【００７９】
さらに、コレステリルエステルは、酸性リパーゼの作用により一旦遊離コレステロールとなり、細胞内でプールされるため、オレイン酸からコレステリルエステルの合成が抑制されると、コレステロール産生も抑制されると考えられる。従って、上述の一般式(IV)で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩は、マクロファージにおけるコレステロールの産生を抑制する作用を有し、コレステロールの増加に起因する疾患、例えば、動脈硬化、高脂血症、冠動脈疾患（例えば、狭心症、心筋梗塞等の虚血性心疾患、脳卒中等の脳血管疾患など）などの改善（予防、抑制、及び治療を含む。）に有用であり、そのための薬剤または医薬組成物として使用できる。【００８０】
＝＝本発明に係る環状イソジチロシン誘導体の製造方法＝＝
本発明に係る環状イソジチロシン誘導体は、例えば、文献（Tetrahedron Letters 44 (2003) 7949-7952やTetrahedron Letters 60 (2004) 5623-5634など）に記載の方法に準じて製造したり、後述する実施例に記載の方法に準じて製造したりすることができる。本発明に係る環状イソジチロシン誘導体の製造方法の一例を以下の反応工程式を用いて説明する。なお、反応工程式中のＲ１８は水素原子、ヒドロキシル基、-ＯＲ２２基（Ｒ２２は直鎖状あるいは分岐状のアルキル基、または芳香環）、または、アミド基であり、Ｒ１９は水素原子、ベンゾイル基、ベンジルあるいは修飾されたベンジル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基であり、Ｒ２０は水素原子、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基である。また、反応工程式中のＲ２１はアミノ基の保護基（例えば、Boc（t-ブトキシカルボニル）基、Cbz（ベンジルオキシカルボニル）基、Fmoc基、BocNH(CH2)5CO-基、BocNHCH(CH2C6H5)CO-基など）を意味し、Ｘ９及びＸ１０はハロゲン原子を意味し、互いに同一であっても異なっていてもよい。
【化６】
0004753120.tif 000007
【００８１】
＜工程ａ：一般式(VII)で表される化合物の製造＞
ジメチルホルムアミド（DMF）に一般式(Ｖ)で表される化合物、一般式(VI)で表される化合物、BOP（Benzotriazole-1-yl-oxy-tris(dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate）試薬、及びトリエチルアミン（Et3N）を溶解して撹拌する。次に、硫酸水素カリウム水溶液を加えた後、酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水にて洗浄する。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧濃縮して得られる粗生成物を、シリカゲルなどを用いたクロマトグラフィーにて精製することにより一般式(VII)で表される化合物を得ることができる。【００８２】
＜工程ｂ：一般式(IX)で表される化合物の製造＞
一般式(VII)で表される化合物をトリフルオロ酢酸−ジクロロメタン（TFA-CH2Cl2）に溶解して撹拌する。撹拌後、減圧濃縮し、一般式(VIII)で表される化合物、BOP試薬、及びEt3Nを溶解したDMFに溶解する。撹拌後、硫酸水素カリウム水溶液を加え、酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水にて洗浄する。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルなどを用いたクロマトグラフィーにて精製することにより一般式(IX)で表される化合物を得ることができる。【００８３】
＜工程ｃ：一般式(Ｘ)で表される化合物の製造＞
硝酸タリウム(III)（TTN）を含む溶媒（無水テトラヒドロフラン（THF）及びメタノール（MeOH）の混合溶液）（TTN/MeOH-THF(1:4)）に一般式(IX)で表される化合物を加える。撹拌後、亜硫酸ナトリウム及び水（1滴）を加える。続いて、セライトろ過などにより分離し、減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルなどを用いたクロマトグラフィーにて精製することにより一般式(Ｘ)で表される化合物を得ることができる。【００８４】
なお、上述においては、本発明に係るいくつかの環状イソジチロシン誘導体の製造方法について記述したが、一般式(Ｘ)で表される化合物のＲ２１のBoc基、Cbz基、Fmoc基などを除去したり、その後、Boc基、Cbz基、Fmoc基などを除去したアミノ基の一方の水素原子をアミド基、アシル基、または、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基に置換したりしてもよく、なお、これらの反応は当業者には明らかであり、常法に従って行うことができる。また、本発明に係る環状イソジチロシン誘導体の薬理学的に許容される塩、例えば、アルカリ金属塩（ナトリウム塩など）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩など）、その他の金属塩（アルミニウム塩など）、アンモニウム塩等の無機塩、グルコサミン塩等の有機塩などは、当業者には明らかであり、常法に従って製造することができる。【００８５】
＝＝本発明に係る環状イソジチロシン誘導体を用いた薬剤・医薬品＝＝
本発明に係る環状イソジチロシン誘導体又はその薬理学的に許容される塩及び／又はイミペネムを有効成分として含有する物質は、医薬品として、ヒト、ヒト以外の脊椎動物に投与してもよいし、試薬として実験用に用いてもよい。本発明に係る環状イソジチロシン誘導体又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬品は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤などの製剤にして、経口投与してもよいし、注射剤、坐剤などの製剤にして、腹腔内や静脈内への注射により非経口投与してもよい。本発明に係る環状イソジチロシン誘導体又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬品の製剤化は、従来使用されている製剤添加物（例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、矯味矯臭剤、溶剤、安定剤など）を用いて、常法で行うことができる。
【実施例】
【００８６】
以下に本発明を実施例によって具体的に説明する。なお、実施例において、旋光性はナトリウム（D line）ランプを用いたJasco DIR-360 digital polarimeterを、赤外吸収（IR）スペクトルはJasco Model A-202 spectrophotometerを、核磁気共鳴スペクトル（1H-NMRおよび13C-NMR；テトラメチルシランを用いたCDCl3を使用）はJNM-EX270 spectrometer及びJNM-GX400 spectrometerを、マススペクトルはJEOL JMS-700(FAB) spectrometerを、それぞれ用いて測定した。【００８７】
シリカゲル薄層クロマトグラフィーはkieselgel 60 PF254シリカゲル（Merck製）を使用し、リンモリブデン酸で呈色した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーはシリカゲル60N（関東化学製）を用いた。なお、各反応は特に記載のない限り、アルゴン中で反応を行った。【００８８】
［実施例１］N-Cbz-Thr(O-ベンジル)-ジブロモヨウ素ユーリパミドBメチルエステル（化合物(1)）の製造
文献（Tetrahedron Letters 2004, 35, 8397-8400）に記載の方法と同様に、L-チロシン（純正化学株式会社製）をメタノール中臭素でハロゲン化して、ジブロモ-L-チロシンメチルエステルを得た。また、同様に、N-Cbz-L-チロシンメチルエステル（国産株式会社製）をN-iodosuccinimideでハロゲン化した後、水酸化ナトリウムを用いて加水分解することにより、N-Cbz-ジヨード-L-チロシンを得た。【００８９】
次に、ジメチルホルムアミド（DMF）17 mlに、ジブロモ-L-チロシンメチルエステル（8.4 mmol）、Boc-Thr(Bzl)-OH（8.4 mmol；渡辺化学工業株式会社）、BOP試薬（8.35 mmol）、及びEt3N（15 mmol）を溶解し、一晩撹拌した。撹拌後、5％ 硫酸水素カリウム水溶液を加え、混合溶液を酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水にて洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）にて精製し、ジペプチドを得た。【００９０】
次に、上述のジペプチド（0.94 mmol）をトリフルオロ酢酸−ジクロロメタン（TFA(2 ml)-CH2Cl2(6 ml)）に溶解して0℃で3時間撹拌した。撹拌後、減圧濃縮し、沈殿物を上述のN-Cbz-ジヨード-L-チロシン（0.94 mmol）、BOP試薬（0.94 mmol）、及びEt3N（1.9 mmol）を含むDMF（0.6 ml）に0℃で加えて溶解した。一晩攪拌した後、5％ 硫酸水素カリウム水溶液を加え、酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水にて洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：３）にて精製し、トリペプチドを得た。【００９１】
上述のトリペプチド（0.34 mmol）を、TTN（1.0 mmol）を含む溶媒（THF；140 ml、及びメタノール；35 ml）に0℃で溶解した。1時間撹拌した後、亜硫酸ナトリウム及び水（1滴）を加え、セライトろ過により分離し、減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）にて精製し、化合物(1)を得た。  
1HNMR (270 MHz, CDCl3) δ 1.02(3H, d, J=6.3Hz), 2.31(1H, t, J=12.5Hz), 2.76(1H, d, J=11.9Hz), 3.13(1H, dd, J=4.3, 14.2Hz), 3.30(1H, dd, J=4.1, 13.0Hz), 3.37(1H, m), 3.80(3H, s), 4.42(1H, dd, J=3.6, 6.6Hz), 4.58(1H, m), 4.68(1H, d, J=12.4Hz), 4.83(1H, d, J=12.2Hz), 4.92(1H, m), 5.11(1H, d, J=12.5Hz), 5.23(1H, d, J=12.2Hz), 5.69(1H, d, J=7.6Hz), 5.75(1H, d, J=1.6Hz), 6.24(1H, s), 6.66(1H, d, J=6.9Hz), 6.88(1H, d, J=2.0Hz), 7.07(1H, d, J=1.6Hz), 7.26-7.47(10H, m), 7.52(1H, d, J=9.9Hz), 7.63(1H, d, J=1.6Hz).【００９２】
［実施例２］N-Boc-Thr(O-ベンジル)-ジブロモヨウ素ユーリパミドBメチルエステル（化合物(2)）の製造
N-Cbz-ジヨード-L-チロシンをN-Boc-ジヨード-L-チロシンに変える他は、実施例１に記載の方法と同様に、化合物(2)を製造した。なお、N-Boc-ジヨード-L-チロシンも、文献（Tetrahedron Letters 2004, 35, 8397-8400）に記載の方法と同様に、N-Boc-L-チロシンメチルエステル（国産株式会社製）をN-iodosuccinimideでハロゲン化した後、水酸化ナトリウムを用いて加水分解することにより製造した。  
1HNMR (270 MHz, CDCl3) δ 1.01(3H, d, J=6.3Hz), 1.50(9H, s), 2.35(1H, t, J=12.5Hz), 2.71(1H, d, J=12.7Hz), 3.21(1H, dd, J=4.6, 14.3Hz), 3.33(1H, dd, J=4.0, 13.0Hz), 3.79(1H, m), 3.80(3H, s), 4.45(1H, dd, J=3.5, 6.8Hz), 4.54(1H, m), 4.64(1H, d, J=14.2Hz), 4.75(1H, d, J=14.3Hz), 4.94(1H, m), 5.42(1H, d, J=7.3Hz), 5.72(1H, s), 6.53(1H, s), 6.79(1H, d, J=6.9Hz), 6.92(1H, s), 7.07(1H, s), 7.14-7.47(5H, m), 7.52(1H, d, J=9.7Hz), 7.72(1H, s).【００９３】
［実施例３］N-Boc-ジブロモヨウ素ユーリパミドB（化合物(3)）の製造
N-Cbz-ジヨード-L-チロシンをN-Boc-ジヨード-L-チロシンに変え、Boc-Thy(Bzl)-OHをN-Boc-L-Thr（渡辺化学工業株式会社）に変える他は、実施例１に記載の方法と同様に、N-Boc-ジブロモヨウ素ユーリパミドBメチルエステル（化合物(12)）を製造した。  
1HNMR (270 MHz, CD3OD) δ 1.07(3H, d, J=6.3Hz), 1.50(9H, s), 2.56(1H, t, J=12.7Hz), 2.73(1H, d, J=14.7Hz), 3.23(1H, dd, J=13.9, 5.1Hz), 3.38(1H, dd, J=13.2, 4.4Hz), 3.86(3H, s), 4.10(1H, m), 4.3.5(1H, m), 4.42(1H, m), 4.99(1H, m), 5.39(1H, d, J=7.1Hz), 5.79(1H, d, J=1.5Hz), 6.11(1H, s), 7.09(1H, d, J=2.0Hz) 7.30(1H, d, J=1.5Hz), 7.47(1H, d, J=9.8Hz), 7.63(1H, d, J=2.0Hz)【００９４】
次に、N-Boc-ジブロモヨウ素ユーリパミドBメチルエステル（0.03 mmol）をMeOH(0.5 ml)-1M NaOH(0.5 ml)にO℃で溶解し、30分間撹拌した。その後、Amberlite IR 120B(H+)で処理し、減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５：１）にて精製し、化合物(3)を得た。  
1HNMR (270 MHz, CD3OD) δ 1.09(3H, d, J=6.6Hz), 1.49(9H, s), 2.56(1H, m), 2.88(1H, m), 3.05(1H, m), 3.38(1H, m), 4.16(1H, m), 4.40(1H, m), 4.63(2H, m), 5.77(1H, d, J=1.8Hz), 6.77(1H, d, J=8.7Hz), 7.00(1H, s), 7.42(1H, d, J=1.7Hz), 7.64(1H, d, J=8.9Hz), 7.70(1H, d, J=1.8Hz), 7.92(1H, d, J=8.7Hz), 7.98(1H, d, J=3.1Hz), 8.04(1H, d, J=8.7Hz).【００９５】
［実施例４］ジブロモヨウ素ユーリパミドBメチルエステル（化合物(4)）の製造
N-Boc-ジブロモヨウ素ユーリパミドBメチルエステル（0.03 mmol）をCH2Cl2(1 ml)-TFA(1 ml)に溶解し、0℃で2時間撹拌した。撹拌後、減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５：１）にて精製し、化合物(4)を得た。  
1HNMR (270 MHz, CD3OD) δ 1.13(3H, d, J=6.3Hz), 2.65(1H, t, J=12.7Hz), 2.92(1H, dd, J=5.3, 15.1Hz), 3.20(1H, d, J=15.0Hz), 3.40(1H, dd, J=3.8, 13.1Hz), 3.81(3H, s), 4.12(2H, m), 4.41(1H, d, J=2.8Hz), 4.94(1H, d, J=3.8Hz), 5.78(1H, d, J=1.8Hz), 7.26(1H, d, J=1.8Hz), 7.46(1H, d, J=1.8Hz), 7.73(1H, d, J=1.6Hz).【００９６】
［実施例５］Thr(O-ベンジル)-ジブロモヨウ素ユーリパミドBメチルエステル（化合物(5)）の製造
実施例２により得られた化合物(2)（0.03 mmol）をCH2Cl2(1 ml)-TFA(1 ml)に溶解し、0℃で2時間撹拌した。撹拌後、減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５：１）にて精製し、化合物(5)を得た。  
1HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.15(3H, d, J=5.9Hz), 2.61(1H, t, J=12.7Hz), 2.81(1H, dd, J=5.4, 14.6Hz), 3.06(1H, dd, J=2.4, 14.6Hz), 3.40(1H, dd, J=3.9, 13.2Hz), 3.73(3H, s), 3.89(1H, dd, J=2.6, 5.1Hz), 4.03(1H, dd, J=2.6, 6.1Hz), 4.51(1H, d, J=11.7Hz), 4.53(1H, d, J=2.4Hz), 4.62(1H, d, J=11.2Hz), 4.95(1H, m), 5.74(1H, d, J=2.0Hz), 7.25(1H, d, J=2.0Hz), 7.27-7.31(5H, m), 7.38(1H, d, J=2.0Hz), 7.72(1H, d, J=2.0Hz).【００９７】
［実施例６］化合物(6)の製造
実施例１で得られたジペプチド（1 mmol）をトリフルオロ酢酸−ジクロロメタン（TFA(2 ml)-CH2Cl2(4 ml)）に溶解して0℃で3時間撹拌した。撹拌後、減圧濃縮し、沈殿物をFmoc-Tyr(3,5-I2)-OH（1 mmol）（M00280；渡辺化学）、BOP試薬（1 mmol）、及びEt3N（0.5 ml）を含むアセトニトリル（50 ml）に0℃で加えて溶解した。一晩攪拌した後、溶媒を減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロフォルム：メタノール＝100：3）にて精製し、トリペプチドを得た。【００９８】
上述のトリペプチド（0.05 mmol）を、TTN（0.1 mmol）を含む溶媒（THF；20 ml、及びメタノール；5 ml）に0℃で溶解した。1時間撹拌した後、亜硫酸ナトリウムを加え、セライトろ過により分離し、減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：酢酸エチル＝５：１）にて精製し、化合物(6)を得た。  
1HNMR (270 MHz, CD3OD) δ1.09(3H, d, J=6.3Hz), 2.33(1H, t, J=12.4Hz), 2.81(1H, d, J=13.7Hz), 3.15(1H, dd, J=14.6, 5.9Hz), 3.31(1H, dd, J=13.2, 4.4Hz), 3.83(3H, s), 4.27(3H, m), 4.42(1H, m), 4.50(1H, dd, J=8.5, 6.1Hz), 4.58(1H, m), 4.71(1H, d, J=12.2Hz), 4.86(1H, d, J=12.2Hz), 4.93(1H, m), 5.75(1H, d, J=7.3Hz), 5.84(1H, s), 6.19(1H, brs), 6.46(1H, d, J=6.8Hz), 6.90(1H, s), 7.18(1H, s), 7.29-7.69(13H, m), 7.77(2H, m)【００９９】
［実施例７］化合物(7)の製造
実施例５により得られた化合物(5)（153 mg, 0.18 mmol）のアセトニトリル（2 ml）溶液に、N-Boc-6-aminohexanoic acid（46 mg, 0.20 mmol, ナカライ、05126-62）、BOP 試薬（88 mg, 0.20 mmol）、及びEt3N（100 μl）を加え、０℃〜室温にて１６時間撹拌した。撹拌後混合溶液を酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水にて洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）にて精製し、148.3 mgの化合物(7)を得た。  
1HNMR (270 MHz, CD3OD) δ1.14(3H, d, J=6.3Hz), 1.37(2H, m), 1.42(9H, s), 1.53(2H, m), 1.66(2H, m), 2.22(2H, m), 2.60(1H, t, J=12.7Hz), 2.87(1H, d, J=15.6Hz), 3.01(3H, m), 3.39(1H, dd, J=12.9, 3.7Hz), 3.74(3H, s), 3.98(1H, dd, J=6.3, 2.9Hz), 4.51(1H, d, J=13.2Hz), 4.52(1H, s), 4.62(1H, d, J=11.7Hz), 4.68(1H, d, J=2.9Hz) 4.70(1H, m), 5.73(1H, d, J=1.5Hz), 7.00(1H, s), 7.26-7.31(5H, m), 7.38(1H, s), 7.72(1H, d, J=2.0Hz) 【０１００】
［実施例８］化合物(8)の製造
実施例５により得られた化合物(5)（0.069 mmol）のアセトニトリル（１ ml）溶液に、Boc-Phe-OH（19 mg, 0.072 mmol, Sigma、B-5394）、BOP 試薬（0.072mmol）、及びEt3N（0.1 ml）を加え、0℃で16時間撹拌した。撹拌後、溶媒を減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝20：1）にて精製し、化合物(7)を得た。  
1HNMR (270 MHz, CDCl3) δ 1.07(3H, d, J=6.4Hz), 1.38(9H, s), 2.35(1H, t, J=12.4Hz), 2.75(1H, d, J=14.7Hz), 3.01(1H, m), 3.22(2H, m), 3.32(1H, dd, J=13.0, 4.1Hz), 3.78(1H, m), 3.83(3H, s), 4.36(2H, m), 4.60(1H, brs), 4.69(1H, d, J=12.2Hz), 4.83(1H, d, J=12.0Hz), 4.93(1H, m), 5.78(1H, d, J=1.6Hz), 6.13(1H, s) 6.43(1H, d, J=6.9Hz), 6.83(1H, d, J=6.6Hz), 6.91(1H, d, J=1.6Hz), 6.95(1H, s), 7.17-7.52(6H, m), 7.44(1H, s), 7.63(1H, d, J=1.8Hz)【０１０１】
［実施例９］化合物(9)の製造
実施例２により得られた化合物(2)（0.03 mmol）をMeOH(0.5 ml)-1M NaOH(0.5 ml)にO℃で溶解し、30分間撹拌した。その後、Amberlite IR 120B(H+)で処理し、減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５：１）にて精製し、化合物(9)を得た。  
1HNMR (270 MHz, CD3OD) δ 1.13(3H, d, J=5.9Hz), 1.49(9H, s), 2.59(1H, t, J=12.5Hz), 2.84(1H, d, J=12.7Hz), 3.03(1H, dd, J=13.7, 6.1Hz), 3.40(1H, dd, J=10.3, 3.9Hz), 4.01(1H, m), 4.36(1H, m), 4.51(1H, m), 4.53(1H, d, J=11.2Hz), 4.62(1H, d, J=12.2Hz), 4.81(1H, m), 5.74(1H, s), 7.01(1H, s), 7.24-7.35(6H, m), 7.72(1H, s) 8.08(1H, d, J=9.3Hz), 8.26(1H, d, J=9.8Hz)【０１０２】
［実施例１０］化合物(10)の製造
実施例１により得られた化合物(1)（0.07 mmol）をMeOH(1 ml)-1M NaOH(0.4 ml)にO℃で溶解し、３時間撹拌した。1N-HClを加えて中和した反応溶液を酢酸エチルで希釈し、飽和食塩水にて洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノール＝５：１）にて精製し、化合物(10)を得た。  
1HNMR (270 MHz, CD3OD) δ1.11(3H, d, J=6.3Hz), 2.58(1H, t, J=12.7Hz), 2.87(1H, d, J=11.7Hz), 2.96(1H, dd, J=13.4, 5.6Hz), 3.39(1H, dd, J=12.9, 3.7Hz), 3.96(1H, m), 4.52(3H, m), 4.61(1H, d, J=11.7Hz), 4.84(1H, m), 5.04(1H, d, J=12.7Hz), 5.19(1H, d, J=12.7Hz), 5.75(1H, s), 7.02(1H, s), 7.25(1H, d, J=2.0Hz), 7.23-7.38(10H, m), 7.70(1H, s) 8.08(1H, d, J=9.3Hz), 8.24(1H, d, J=9.3Hz)【０１０３】
［実施例１１］化合物(11)の製造
実施例９により得られた化合物(9)（0.2 mmol）をCH2Cl2(2 ml)-TFA(0.5 ml)に溶解し、0℃で2時間撹拌した。撹拌後、減圧濃縮して得られる粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：メタノール＝５：１）にて精製し、化合物(11)を得た。  
1HNMR (270 MHz, CD3OD) δ1.06(3H, d, J=6.3Hz), 2.52(1H, t, J=12.7Hz), 2.84(1H, dd, J=14.9, 4.9Hz), 3.08(1H, d, J=14.0Hz), 3.33(1H, dd, J=12.8, 3.7Hz), 3.98(1H, dd, J=6.3, 2.5Hz), 4.05(3H, m), 4.42(1H, d, J=11.3Hz), 4.47(1H, m), 4.51(1H, d, J=11.6Hz), 4.76(1H, m), 5.70(1H, d, J=1.6Hz), 7.17(1H, s), 7.16-7.25(5H, m), 7.28(1H, d, J=1.6Hz), 7.63(1H, d, J=1.5Hz) 8.15(1H, d, J=9.4Hz), 8.25(1H, d, J=9.7Hz)【０１０４】
［実施例１２］イミペネム活性増強作用の測定
本実施例では、検定菌として、臨床分離されたMRSA K24株を用いた。検定プレートは、Mueller-Hinton Broth（DIFCO社）に１．５％のAgar（清水食品株式会社）を添加して作製した対照用プレート、及び上記組成にイミペネム（萬有製薬株式会社、商品名：チエナム筋注用力価０．５）を最終濃度１０μｇ／ｍＬとなるように添加して作製した検定用プレートを用いた。接種菌液はMueller-Hinton Brothで一晩培養した検定菌培養液を、同培地で、0.5Mc Farand（約１０８ｃｆｕ／ｍＬ）になるように調製したものを用いた。この接種菌液をNCCLS法に従い、滅菌綿棒で各プレートに塗沫した。検定菌に対する各プレートでの抗菌活性は、ペーパーディスク法により、１０μｇの検定薬剤（ユーリパミドＡ、Ａ′、Ｂ、及びＤ、並びに化合物(1)〜(12)）を染み込ませた６ｍｍのペーパーディスクを各プレートにのせて、３７℃で２０時間培養した。【０１０５】
対照用プレートでは、ペーパーディスク下にも検定菌は増殖するため、表１の化合物(1)〜(12)は、それ単独では抗MRSA作用を有しないことがわかった。また、検定用プレート上で、検定菌は増殖しうるので、１０μｇ／ｍＬの濃度では、イミペネムには抗MRSA作用は認められない。そこで、ペーパーディスクに染み込ませた各化合物がイミペネムと協同して抗MRSA作用を有するようになれば、ペーパーディスク下及び周囲には、検定菌の増殖が観察されなくなるため、本実施例では、MRSAに対するイミペネム活性増強作用は、検定用プレートにおける阻止円径（ペーパーディスクの中心を通る直径）で表すこととした。【０１０６】
0004753120.tif 000008
【０１０７】
結果として、表１に示したように、ユーリパミド（eurypamide）Ａ〜Ｄはイミペネム活性増強作用を示さなかったが、化合物(1)〜(5)及び化合物(9)〜(12)は全て、本検定によって８〜２３ｍｍのイミペネム活性増強作用を示した。即ち、化合物(1)〜(5)及び化合物(9)〜(12)は、イミペネムと協同して、抗MRSA活性を得たことになる。【０１０８】
［実施例１３］マウス腹腔マクロファージ内でのコレステリルエステル合成に対する阻害作用
マウス腹腔マクロファージ内でのコレステリルエステル形成は西川らの方法（Nishikawa et al., JBC 265, p5226-5231, 1990）を一部改変して行った。マウス腹腔マクロファージは、ＩＣＲ雌マウスより、以下のようにして調製した。まず、マウス腹腔よりＨＢＳＳを用いて細胞を単離し、ＧＩＴ培地に２×１０６個／ｍＬになるように懸濁した。０．２５ｍＬずつ、４８ウェルのプラスティック培養プレートに入れ、５％ＣＯ２の存在下、３７℃で２時間培養した後、非接着細胞を除去するため、各ウェルを０．２５ｍＬのＨＢＳＳで３回洗った。最後に、０．２５ｍＬの培地Ａ（１００ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、８％リポプロテイン除去血清を含有したＤＭＥＭ）を添加した。【０１０９】
このようにして得られたマクロファージにおける、各薬剤（ユーリパミドＡ、Ａ′、Ｂ、及びＤ、並びに化合物(1)〜(12)）のコレステリルエステル合成阻害作用は、以下のように[１４Ｃ] オレイン酸から、[１４Ｃ]コレステリルエステル及び[１４Ｃ]トリアシルグリセロールへの合成量を測定し、その合成が５０％阻害される薬剤の濃度（ＩＣ５０；μｇ／ｍＬ）を求めた。【０１１０】
まず、４８ウェルのプラスティック培養プレートでマクロファージ（５×１０５個／０．２５ｍＬ／ウェル）を培養し、[１４Ｃ] オレイン酸（１ｎｍｏｌ、０．０５μＣｉ、１０％エタノール含有ＰＢＳに溶解したもの）５μｌ、リポソーム（１０μＬの０．３Ｍグルコース中にホスファチジルコリン／ホスファチジルセリン／ジアセチルホスフェート／コレステロール＝１０／１０／２／５(nmol)の組成から構成されている。）、及び、メタノールに溶解した各薬剤２．５μｌを各ウェルに添加した。１４時間培養後、培地を除去し、各ウェルをＰＢＳで３回洗浄した。その後、０．１％（w/v）ＳＤＳを含むＰＢＳ ０．２５ｍＬを加えて、細胞を溶解し、Bligh & Dyerの方法（Bligh & Dyer, Can. J. Biochem. Physiol., 37, p911-917, 1959）により、細胞内の脂質を抽出した。有機溶媒は、真空下で遠心することにより減容し、ＴＬＣプレート（シリカゲルＦ２４５，０．５ｍｍ厚、メルク社）にスポットし、ヘキサン／ジエチルエーテル／酢酸（70/30/1, v/v）で展開し、分離した［１４Ｃ］コレステリルオレートと［１４Ｃ］トリアシルグリセロールの量をバイオイメージアナライザー（ＢＡＳ２０００、Ｆｕｊｉ社）で解析した。以上の結果を表１に示す。なお、表１中のマクロファージの列の「−」は、10μg/mlの化合物で阻害を示さなかったことを意味する。【０１１１】
表１に示したように、化合物(1)、(2)、及び(6)〜(8)の場合のみ、コレステリルオレート形成に対する阻害活性が検出され、ＩＣ５０はそれぞれ３μｇ／ｍＬ、３μｇ／ｍＬ、０．３２μｇ／ｍＬ、４．２μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬであった。このように、これらの化合物(1)、(2)、及び(6)〜(8)が、マウス腹腔マクロファージ内でのコレステリルエステル合成に対して阻害作用を有することが明らかになった。
【産業上の利用の可能性】
【０１１２】
本発明によれば、生理学的作用を有する新たな環状イソジチロシン誘導体又はその薬理学的に許容される塩、並びに、それらを有効成分として含有する薬剤や医薬組成物、及びそれらの使用方法を提供することができる。