(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
抽出溶媒として極性溶媒を使用して得られるスターフルーツの葉部からの抽出物を有効成分として含有する花粉アレルゲン不活性化剤。
【請求項２】
抽出溶媒として極性溶媒を使用して得られるスターフルーツの葉部からの抽出物又はスターフルーツの葉部及び紫米の玄米からの抽出物を有効成分として含有するダニアレルゲン不活性化剤。
【請求項３】
担体と、
前記担体に保持された、抽出溶媒として極性溶媒を使用して得られるスターフルーツの葉部からの抽出物と
を含む花粉アレルゲン不活性化材。
【請求項４】
担体と、
前記担体に保持された、抽出溶媒として極性溶媒を使用して得られるスターフルーツの葉部からの抽出物又はスターフルーツの葉部及び紫米の玄米からの抽出物と
を含むダニアレルゲン不活性化材。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルゲン不活性化剤及びアレルゲン不活性化材に関し、特にＩ型アレルギー性疾患を引き起こすアレルゲンを不活性化可能な花粉アレルゲン不活性化剤、ダニアレルゲン不活性化剤、花粉アレルゲン不活性化材及びダニアレルゲン不活性化材に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、生活環境の変遷に伴い、アレルギー症状を引き起こす原因物質であるアレルゲンが四季を問わず存在するようになっている。特に、スギ花粉やヒノキ花粉を代表とする花粉による春先の花粉症患者は年々増加の一途を辿り、国民の１０％にも及んでおり、それらのうちの大多数はスギ花粉に対してＩ型アレルギー反応を示している。
【０００３】
花粉症の対策は、花粉との接触を避けることを基本としており、マスクや眼鏡等を使用することにより花粉との接触を避ける方法が主流となっているが、花粉との接触を完全に避けるのは困難である。したがって、花粉アレルゲンを根本的に排除し得る技術が求められている。
【０００４】
花粉アレルゲンを根本的に排除し得る技術として、従来、花粉アレルゲンを不活性化する技術が種々提案されている。例えば、花粉アレルゲン不活性化用スプレー（特許文献１参照）、花粉アレルゲンを吸着し不活性化するフィルター（特許文献２参照）、熱、アルカリ、酸又はプロテアーゼの存在下に花粉アレルゲンを維持することにより花粉アレルゲンを不活性化する方法（特許文献３，４参照）、柿抽出物を含むハウスダスト処理剤（特許文献５参照）等が提案されている。
【０００５】
また、近年、室内環境の快適化と引き換えにダニ類の繁殖が助長されており、屋内でのダニ類の繁殖に伴い、コナヒョウヒダニ（Dermatophagoides farinae）、ヤケヒョウヒダニ（Dermatophagoides pteronyssinus）等のチリダニ科ヒョウヒダニ属に属するダニをアレルゲンとするアレルギー性疾患が問題となっている。これらのダニは、アレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のＩ型アレルギー性疾患の一因と考えられている。
【０００６】
ダニをアレルゲンとするアレルギー性疾患の対策としては、アレルゲンであるダニを駆除して、ダニを生活環境中から排除することが考えられる。しかしながら、ダニを駆除したとしても、ダニの死骸、ダニの糞からも強力なアレルゲン物質が生活環境中に放出されるため、ダニアレルゲンを根本的に排除することができず、ダニによるアレルギー性疾患を解決することは困難である。したがって、ダニアレルゲン（ダニ、ダニの死骸及び糞等）を根本的に排除する技術が求められている。従来、ダニアレルゲンを根本的に排除する技術として、ローズマリー抽出物を含浸させた多孔性吸着剤を屋内に散布し、数時間経過後に電気掃除機により吸引する技術（特許文献６参照）等が提案されている。
【特許文献１】特開２００２−１２８６５９号公報
【特許文献２】特開２０００−５５３１号公報
【特許文献３】特開２００３−１８０８６５号公報
【特許文献４】特開２００４−８９６７３号公報
【特許文献５】特開２００２−１２８６８０号公報
【特許文献６】特開平６−２５６１２８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、安全性の高い天然物から、花粉アレルゲン又はダニアレルゲンを不活性化する物質を見出し、それを利用した花粉アレルゲン不活性化剤、ダニアレルゲン不活性化剤、花粉アレルゲン不活性化材及びダニアレルゲン不活性化材を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するため、第１に本発明は、スターフルーツの葉部からの抽出物を有効成分として含有する花粉アレルゲン不活性化剤を提供する。
第２に本発明は、スターフルーツの葉部及び／又は紫米の玄米からの抽出物を有効成分として含有するダニアレルゲン不活性化剤を提供する。
【０００９】
第３に本発明は、担体と、前記担体に保持されたスターフルーツの葉部からの抽出物とを含む花粉アレルゲン不活性化材を提供する。
第４に本発明は、担体と、前記担体に保持されたスターフルーツの葉部及び／又は紫米の玄米からの抽出物とを含むダニアレルゲン不活性化材を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の花粉アレルゲン不活性化剤及び花粉アレルゲン不活性化材は、花粉アレルゲンを不活性化することができ、これにより、花粉アレルゲンにより引き起こされる花粉症を予防、治療又は改善することができる。また、本発明のダニアレルゲン不活性化剤及びダニアレルゲン不活性化材は、ダニアレルゲンを不活性化することができ、これにより、ダニアレルゲンにより引き起こされるアレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のＩ型アレルギー性疾患を予防、治療又は改善することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明について説明する。
〔花粉アレルゲン不活性化剤，ダニアレルゲン不活性化剤〕
本発明の花粉アレルゲン不活性化剤は、スターフルーツの葉部からの抽出物を有効成分として含有する。また、本発明のダニアレルゲン不活性化剤は、スターフルーツの葉部及び／又は紫米の玄米からの抽出物を有効成分として含有する。
【００１２】
本発明において「抽出物」には、スターフルーツの葉部又は紫米の玄米を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１３】
本発明において使用する抽出原料である植物は、スターフルーツ（学名：Averrhoa carambola L.）又は紫米である。
ここで、「紫米」とは、糠層（搗精する際に糠となって剥落する部分）に色素（例えば、アントシアニン系の紫色の色素等）を有する有色素米の一種である。
【００１４】
スターフルーツ（Averrhoa carambola L.）は、カタバミ科に属し、新鮮な果実は食用にされる。スターフルーツは、中国では紀元前から文献に記載され、その果実は断面が星形である。スターフルーツは、沖縄、中国東南部や雲南その他熱帯各地で栽培されており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出部位として使用する部位は、葉部である。ここで「葉部」には、完全葉の他、葉の一部（例えば、葉身、葉柄、托葉、葉鞘等）も含まれる。
【００１５】
紫米は、古代米、黒米等とも呼ばれ、古来より日本、中国で栽培され食用されており、これらの地域から容易に入手することができる。紫米としては、中国広東産の華南紫、秋田産の赤紫等を例示することができる。抽出原料として使用する紫米は、籾殻が取り除かれた状態の玄米である。
【００１６】
スターフルーツの葉部からの抽出物に含まれる花粉アレルゲン不活性化作用を有する物質、スターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物に含まれるダニアレルゲン不活性化作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、これらの植物から花粉アレルゲン不活性化作用又はダニアレルゲン不活性化作用を有する抽出物を得ることができる。
【００１７】
例えば、抽出原料である植物を乾燥した後、そのまま又は粉砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより、花粉アレルゲン不活性化作用又はダニアレルゲン不活性化作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１８】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００１９】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２０】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００２１】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０質量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０質量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して多価アルコール１〜９０質量部を混合することが好ましい。
【００２２】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００２３】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでも花粉アレルゲン不活性化剤又はダニアレルゲン不活性化剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００２４】
以上のようにして得られるスターフルーツの葉部からの抽出物は、花粉アレルゲン不活性化作用及びダニアレルゲン不活性化作用を有しているため、それらの作用を利用して花粉アレルゲン不活性化剤及びダニアレルゲン不活性化剤の有効成分として用いることができる。また、紫米の玄米からの抽出物は、ダニアレルゲン不活性化作用を有しているため、その作用を利用してダニアレルゲン不活性化剤の有効成分として用いることができる。
【００２５】
本発明の花粉アレルゲン不活性化剤は、スターフルーツの葉部からの抽出物のみからなるものであってもよいし、スターフルーツの葉部からの抽出物を製剤化したものであってもよい。また、本発明のダニアレルゲン不活性化剤は、スターフルーツの葉部からの抽出物及び／又は紫米の玄米からの抽出物からなるものであってもよいし、スターフルーツの葉部からの抽出物及び／又は紫米の玄米からの抽出物を製剤化したものであってもよい。
【００２６】
スターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。スターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物は、他の組成物に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、点眼剤、点鼻剤等として使用することもできる。
【００２７】
本発明のダニアレルゲン不活性化剤は、スターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物を有効成分として含有していてもよいし、これらを組み合わせて有効成分として含有していてもよい。これらの抽出物を組み合わせて有効成分として含有する場合には、その含有比は特に限定されるものではなく、これらの抽出物の生理活性の強さ等に応じて適宜調整することができる。
【００２８】
本発明の花粉アレルゲン不活性化剤は、スターフルーツの葉部からの抽出物が有する花粉アレルゲン不活性化作用を通じて、Ｉ型アレルギー性疾患を引き起こす花粉アレルゲンを不活性化し、花粉アレルゲンにより引き起こされる花粉症を予防、治療又は改善することができる。また、本発明のダニアレルゲン不活性化剤は、スターフルーツの葉部からの抽出物及び／又は紫米の玄米からの抽出物が有するダニアレルゲン不活性化作用を通じて、Ｉ型アレルギー性疾患を引き起こすダニアレルゲンを不活性化し、ダニアレルゲンにより引き起こされるアレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のＩ型アレルギー性疾患を予防、治療又は改善することができる。
【００２９】
花粉アレルゲンは、Ｉ型アレルギー性疾患を引き起こす作用を有する花粉であれば特に限定されるものではなく、例えば、スギ花粉、ヒノキ花粉、ブタクサ花粉、カモガヤ花粉等が挙げられ、本発明の花粉アレルゲン不活性化剤は、特にスギ花粉に対して有効である。また、ダニアレルゲンは、Ｉ型アレルギー性疾患を引き起こす作用を有するダニ等であれば特に限定されるものではなく、例えば、コナヒョウヒダニ（Dermatophagoides farinae）、ヤケヒョウヒダニ（Dermatophagoides pteronyssinus）等のチリダニ科ヒョウヒダニ属に属するダニ、これらのダニの糞及び死骸等が挙げられる。
【００３０】
花粉アレルゲン不活性化とは、花粉アレルゲンからアレルギー症状を引き起こす作用を失わせることを意味する。また、ダニアレルゲン不活性化とは、ダニアレルゲンからアレルギー症状を引き起こす作用を失わせることを意味する。本発明の花粉アレルゲン不活性化剤の適用対象としては、例えば、花粉アレルゲンによりアレルギー症状を引き起こす花粉症であり、また本発明のダニアレルゲン不活性化剤の適用対象としては、例えば、ダニアレルゲンによりアレルギー症状を引き起こすＩ型アレルギー性疾患等であり、当該アレルギー症状としては、例えば、鼻炎、くしゃみ、喘息、結膜炎等が挙げられる。
【００３１】
なお、本発明の花粉アレルゲン不活性化剤及びダニアレルゲン不活性化剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それらの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【００３２】
〔花粉アレルゲン不活性化材，ダニアレルゲン不活性化材〕
本発明の花粉アレルゲン不活性化材は、担体と、担体に保持されたスターフルーツの葉部からの抽出物とを含む。また、本発明のダニアレルゲン不活性化材は、担体と、担体に保持されたスターフルーツの葉部及び／又は紫米の玄米からの抽出物とを含む。なお、本発明の花粉アレルゲン不活性化材において、スターフルーツの葉部からの抽出物を製剤化した花粉アレルゲン不活性化剤が担体に保持されていてもよく、また、本発明のダニアレルゲン不活性化材において、スターフルーツの葉部及び／又は紫米の玄米からの抽出物を製剤化したダニアレルゲン不活性化剤が担体に保持されていてもよい。
【００３３】
担体に保持されるスターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物としては、前述した花粉アレルゲン不活性化剤又はダニアレルゲン不活性化剤に有効成分として含有されるスターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物と同一のものを用いればよい。
【００３４】
担体は、表面にスターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物を保持し得るものであれば特に限定されることはなく、多孔質体であってもよいし、非多孔質体であってもよいが、より多量のスターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物を保持することのできる表面積の大きい多孔質体であることが好ましい。多孔質体としては、例えば、編物、織物、不織布、紙等の繊維集合体、ウレタンフォーム等の多孔性樹脂成形体、活性炭、多孔質セラミックス材等が挙げられる。非多孔質体としては、例えば、非多孔性の樹脂成形体、金属材、セラミックス材、石材等が挙げられる。また、担体の形状は、特に限定されることなく、例えば、シート状であってもよいし、粒状であってもよい。さらには、エアコン用フィルター、空気清浄機用フィルター、換気装置用フィルター等のフィルター類、マスク、被服、家具、壁（壁材）、壁紙、ポスター、シール等を担体とすることもできる。
【００３５】
スターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物は、これらの抽出物と空気中に飛散している花粉アレルゲン又はダニアレルゲンとが接触し得るように、担体の表面に保持されていればよく、これらの抽出物を担体に保持させる方法は、特に限定されない。ここで、担体の表面とは、担体と花粉アレルゲン又はダニアレルゲンとが接触し得る担体の部位を意味し、担体の表面は、担体の外表面に限られず、担体の内部に存在する部位であって花粉アレルゲン又はダニアレルゲンと接触し得る部位をも含む。
【００３６】
スターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物を担体に保持させる方法としては、例えば、（１）スターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物水溶液等を担体に含浸させた後、担体を乾燥させる方法、（２）担体の表面にスターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物が表れるように、担体の製造過程で担体の材料にスターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物を配合する方法、（３）担体の表面にスターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物水溶液等を噴霧する方法、（４）担体の表面にバインダー等を介してスターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物をコーティングする方法等が挙げられる。
【００３７】
スターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物水溶液等を担体に含浸させる場合、その含浸時間は、スターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物を担体に保持させることができる限り特に限定されるものではなく、通常０．１〜３時間、好ましくは０．５〜２時間である。
【００３８】
担体に保持されるスターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物の量は、スターフルーツの葉部からの抽出物又は紫米の玄米からの抽出物と花粉アレルゲン又はダニアレルゲンとが接触し、花粉アレルゲン又はダニアレルゲンを不活性化させることができる量であれば特に限定されるものではないが、通常０．０１〜１０ｇ／ｍ２、好ましくは０．１〜５ｇ／ｍ２である。
【００３９】
以上説明した花粉アレルゲン不活性化材又はダニアレルゲン不活性化材は、例えば、エアコン用フィルター、空気清浄機用フィルター、換気装置用フィルター等のフィルター類、マスク、被服等として用いることができる。花粉アレルゲン不活性化材又はダニアレルゲン不活性化材をフィルター類として用いれば、花粉アレルゲン又はダニアレルゲンがアレルギー活性を持ったまま再飛散するのを防止することができる。また、花粉アレルゲン不活性化材又はダニアレルゲン不活性化材をマスクとして用いれば、マスクを通過する微細な花粉アレルゲン又はダニアレルゲンを不活性化することができる。さらに、花粉アレルゲン不活性化材又はダニアレルゲン不活性化材を被服として用いれば、被服に付着した花粉アレルゲン又はダニアレルゲンがアレルギー活性を持ったまま室内等に侵入するのを防止することができる。
【００４０】
本発明の花粉アレルゲン不活性化材は、空気中に保持されると、空気中に飛散する花粉アレルゲンと担体に保持されたスターフルーツの葉部からの抽出物とが接触し、スターフルーツの葉部からの抽出物が有する花粉アレルゲン不活性化作用により、花粉アレルゲンを不活性化することができる。また、本発明のダニアレルゲン不活性化材は、空気中に保持されると、空気中に飛散するダニアレルゲンと担体に保持されたスターフルーツの葉部からの抽出物及び／又は紫米の玄米からの抽出物とが接触し、スターフルーツの葉部からの抽出物及び／又は紫米の玄米からの抽出物が有するダニアレルゲン不活性化作用により、ダニアレルゲンを不活性化することができる。したがって、本発明の花粉アレルゲン不活性化材によれば、花粉アレルゲンにより引き起こされるＩ型アレルギー性疾患である花粉症を予防、治療又は改善することができ、本発明のダニアレルゲン不活性化材によれば、コナヒョウヒダニ（Dermatophagoides farinae）、ヤケヒョウヒダニ（Dermatophagoides pteronyssinus）等のチリダニ科ヒョウヒダニ属に属するダニ、これらのダニの糞及び死骸等のダニアレルゲンにより引き起こされるアレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のＩ型アレルギー性疾患を予防、治療又は改善することができる。
【実施例】
【００４１】
以下、試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各試験例に何ら制限されるものではない。なお、本試験例においては、スターフルーツの葉部からの抽出物としてはスターフルーツ葉エキスパウダーＭＦ（試料１，丸善製薬社製）を使用し、紫米の玄米からの抽出物としては紫玄米乾燥エキスＦ（試料２，丸善製薬社製）を使用した。
【００４２】
〔試験例１〕スギ花粉アレルゲン不活性化試験
（１）スギ花粉アレルゲン不活性化反応
１％ＤＭＳＯを含むＰＢＳ溶液に、試料１を表１に示す濃度でそれぞれ溶解し、各試料溶液を調製した。各試料溶液をそれぞれ１００μＬずつ９６穴マイクロプレートに添加し、０．１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ溶液にスギ花粉アレルゲン（製品名：精製スギ花粉抗原Cry j 1，生化学工業社製）を溶解した２ｎｇ／ｍＬのスギ花粉アレルゲン溶液を１穴あたり１００μＬずつ添加し、室温で２時間振とうした。また、対照として、試料を添加していない１％ＤＭＳＯを含むＰＢＳ溶液にスギ花粉アレルゲン溶液を添加した溶液についても同様に振とうした。
【００４３】
振とう後、マイクロプレートの各穴からスギ花粉アレルゲン溶液を１００μＬずつ採取し、当該溶液中に存在するスギ花粉アレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）を下記に示すサンドイッチＥＬＩＳＡ法により測定した。
【００４４】
（２）スギ花粉アレルゲン濃度の定量（サンドイッチＥＬＩＳＡ法）
１０μｇ／ｍＬのコーティング溶液（製品名：抗Cry j 1モノクローナル抗体０１３，生化学工業社製）１００μＬをＥＬＩＳＡプレートの各穴に添加し、室温で２時間静置した。その後、コーティング溶液を除去し、０．１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ溶液を２５０μＬ添加し、４℃で一晩静置した。その後、０．１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ溶液を除去し、２時間振とうさせた上記スギ花粉アレルゲン溶液１００μＬを添加して、室温で２時間振とうした。
【００４５】
また、スタンダードとして、スギ花粉アレルゲン（製品名：精製スギ花粉抗原Cry j 1，生化学工業社製）を０．１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ溶液に溶解し、４ｎｇ／ｍＬ、２ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ、０．５ｎｇ／ｍＬ、０．２５ｎｇ／ｍＬの検量線用標準溶液を調製した。各濃度の検量線用標準溶液１００μＬをＥＬＩＳＡプレートに添加して、室温で２時間振とうした。振とう後、ＥＬＩＳＡプレートを、０．０５％ツイーン２０を含むＰＢＳ溶液３００μＬで３度洗浄後、１０００倍に希釈したスギ花粉アレルゲンモノクローナル抗体（製品名：西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗Cry j 1モノクローナル抗体０５３，生化学工業社製）を１００μＬ添加して、室温で２時間振とうした。そして、ＥＬＩＳＡプレートを、０．０５％ツイーン２０を含むＰＢＳ溶液３００μＬで３度洗浄後、０．３ｍｇ／ｍＬのＡＢＴＳ溶液１２０μＬを添加して室温で発色させ、１０〜２０分間反応させた後にミキシングし、マイクロプレートリーダーにより４０５ｎｍの吸光度を測定した。
【００４６】
検量線用標準溶液の吸光度から得られる検量線を用いて、試料添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度及び試料無添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度を定量した。当該定量結果を用いて、下記の式に基づき、スギ花粉アレルゲン不活性化率（％）を算出した。
スギ花粉アレルゲン不活性化率(％)＝(Ｂ−Ａ)／Ｂ×１００
ただし、式中、Ａは「試料添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）」を表し、Ｂは「試料無添加スギ花粉アレルゲン溶液中のスギ花粉アレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）」を表す。
上記試験の結果を表１に示す。
【００４７】
［表１］スギ花粉アレルゲン不活性化率（％）
試料濃度（質量％）   不活性化率（％）
１．０                 ９９．５
２．５               １００．０
【００４８】
表１に示すように、スターフルーツの葉部からの抽出物は、優れたスギ花粉アレルゲン不活性化作用を有することが確認された。
【００４９】
〔試験例２〕ダニアレルゲン不活性化試験
２０００ｎｇ／ｍＬのコーティング溶液（製品名：抗Der fIIモノクローナル抗体15E11，生化学工業社製）５０μＬをＥＬＩＳＡプレートの各穴に添加し、４℃で一晩静置した。ＥＬＩＳＡプレートを、０．０５％ツイーン２０を含むＰＢＳ溶液３００μＬで３度洗浄した後、１％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ溶液２００μＬを添加して室温で１時間静置し、ブロッキングした。ブロッキング終了後、０．０５％ツイーン２０を含むＰＢＳ溶液３００μＬで３度洗浄し、下記に示すようにダニアレルゲン不活性化反応を行った。
【００５０】
（１）ダニアレルゲン不活性化反応
１％ＤＭＳＯを含むＰＢＳ溶液に、試料１，２をそれぞれ表２に示す濃度になるように溶解し、各試料溶液を調製した。ブロッキングが終了し、洗浄した後のＥＬＩＳＡプレートに各試料溶液を１穴あたり２５μＬずつ添加し、ＰＢＳ溶液にダニアレルゲン（製品名：精製ダニ抗原Der fII，生化学工業社製）を溶解した２００ｎｇ／ｍＬのダニアレルゲン溶液を１穴あたり２５μＬずつ添加し、室温で２時間振とうした。また、対照として、ＥＬＩＳＡプレートにＰＢＳ溶液を添加後、ダニアレルゲン溶液を添加して、同様に振とうした。
【００５１】
また、スタンダードとしてダニアレルゲンをＰＢＳ溶液に溶解し、３００ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、７５ｎｇ／ｍＬ、３７．５ｎｇ／ｍＬ、１８．８ｎｇ／ｍＬ、９．４ｎｇ／ｍＬの検量線用標準溶液を調製した。各濃度の検量線用標準溶液５０μＬをＥＬＩＳＡプレートに添加して、同様に室温で２時間振とうした。
【００５２】
（２）ダニアレルゲン濃度の定量（サンドイッチＥＬＩＳＡ法）
振とう後、０．０５％ツイーン２０を含むＰＢＳ溶液３００μＬでＥＬＩＳＡプレートを３度洗浄した後、２０００倍に希釈したダニアレルゲンモノクローナル抗体（製品名：西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗Der fIIモノクローナル抗体13A4PO，生化学工業社製）を５０μＬ添加して、室温で２時間振とうした。そして、ＥＬＩＳＡプレートを、０．０５％ツイーン２０を含むＰＢＳ溶液３００μＬで３度洗浄した後、０．３ｍｇ／ｍＬのＡＢＴＳ溶液１００μＬを添加して室温で発色させ、１０〜２０分反応後にミキシングさせ、マイクロプレートリーダーにより４０５ｎｍの吸光度を測定した。
【００５３】
検量線用標準溶液の吸光度から得られる検量線を用いて、試料添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度及び試料無添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度を定量した。当該定量結果を用いて、下記の式に基づき、ダニアレルゲン不活性化率（％）を算出した。
ダニアレルゲン不活性化率(％)＝(Ｂ−Ａ)／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）」を表し、Ｂは「試料無添加ダニアレルゲン溶液中のダニアレルゲン濃度（ｎｇ／ｍＬ）」を表す。
上記試験の結果を表２に示す。
【００５４】
［表２］ダニアレルゲン不活性化率（％）
試  料     試料濃度（質量％）   不活性化率（％）
試料１          ０．２５              ７２．２
１．０                ９４．７
２．５                ９８．２
試料２          ０．２５              ４７．０
１．０                ５３．８
２．５                ４２．５
【００５５】
表２に示すように、スターフルーツの葉部からの抽出物及び紫米の玄米からの抽出物は、優れたダニアレルゲン不活性化作用を有することが確認された。特に、スターフルーツの葉部からの抽出物は、優れたダニアレルゲン不活性化作用を有することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００５６】
本発明の花粉アレルゲン不活性化剤及び花粉アレルゲン不活性化材は、花粉アレルゲンによる花粉症の予防、治療又は改善に有用であり、本発明のダニアレルゲン不活性化剤及びダニアレルゲン不活性化材は、ダニ、ダニの死骸及び糞等のダニアレルゲンによるアレルギー性喘息、鼻炎、結膜炎、アトピー性皮膚炎等のＩ型アレルギー性疾患の予防、治療又は改善に有用である。