(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（ＩＩＩ）
0004755248.tif 000016
［式中、Ｒ１とＲ２とは各々が水素原子またはメチル基を示し、Ｒ３は水素原子または水酸基を示して、ビスポライドＡ１についてはＲ１とＲ２とが各々、水素原子であってＲ３が水素原子であり；ビスポライドＡ２についてはＲ１が水素原子でＲ２がメチル基であってＲ３が水素原子であり；ビスポライドＡ３についてはＲ１とＲ２とが各々、メチル基であってＲ３が水素原子であり；ビスポライドＢ１についてはＲ１とＲ２とが各々、水素原子であってＲ３が水酸基であり；ビスポライドＢ２ａについてはＲ１が水素原子でＲ２がメチル基であってＲ３が水酸基であり；ビスポライドＢ２ｂについてはＲ１がメチル基でＲ２が水素原子であってＲ３が水酸基であり；ビスポライドＢ３についてはＲ１とＲ２とが各々、メチル基であってＲ３が水酸基である］で表される化合物である、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２、ビスポライドＡ３、ビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂまたはビスポライドＢ３の少くとも一つである抗生物質。
【請求項２】
請求の範囲１に定義された一般式（ＩＩＩ）の抗生物質のうちに包含されて、次の一般式（Ｉ）
0004755248.tif 000017
［式中、Ｒ１とＲ２とは各々が水素原子またはメチル基（−ＣＨ３）を示し、ビスポライドＡ１についてはＲ１とＲ２とが各々、水素原子であり；ビスポライドＡ２についてはＲ１が水素原子でＲ２がメチル基であり；ビスポライドＡ３についてはＲ１とＲ２とが各々、メチル基である］で表される化合物であるビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２またはビスポライドＡ３である、請求の範囲１に記載の抗生物質。
【請求項３】
次の式（Ｉａ）
0004755248.tif 000018
で表されるビスポライドＡ１である、請求の範囲１に記載の抗生物質。
【請求項４】
次の式（Ｉｂ）
0004755248.tif 000019
で表されるビスポライドＡ２である、請求の範囲１に記載の抗生物質。
【請求項５】
次の式（Ｉｃ）
0004755248.tif 000020
で表されるビスポライドＡ３である、請求の範囲１に記載の抗生物質。
【請求項６】
請求の範囲１に定義された一般式（ＩＩＩ）の抗生物質のうちに包含されて、次の一般式（ＩＩ）
0004755248.tif 000021
［式中、Ｒ１とＲ２とは各々が水素原子またはメチル基（−ＣＨ３）を示し、ビスポライドＢ１についてはＲ１とＲ２とが各々、水素原子であり；ビスポライドＢ２ａについてはＲ１が水素原子でＲ２がメチル基であり；ビスポライドＢ２ｂについてはＲ１がメチル基でＲ２が水素原子であり；ビスポライドＢ３についてはＲ１とＲ２とが各々、メチル基である］で表される化合物であるビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂまたはビスポライドＢ３である、請求の範囲１に記載の抗生物質。
【請求項７】
次の式（ＩＩａ）
0004755248.tif 000022
で表されるビスポライドＢ１である、請求の範囲１に記載の抗生物質。
【請求項８】
次の式（ＩＩｂ）
0004755248.tif 000023
で表されるビスポライドＢ２ａである、請求の範囲１に記載の抗生物質。
【請求項９】
次の式（ＩＩｃ）
0004755248.tif 000024
で表されるビスポライドＢ２ｂである、請求の範囲１に記載の抗生物質。
【請求項１０】
次の式（ＩＩｄ）
0004755248.tif 000025
で表されるビスポライドＢ３である、請求の範囲１に記載の抗生物質。
【請求項１１】
ミクロビスポラ属に属して、請求の範囲１に定義された一般式（ＩＩＩ）で表されるビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２、ビスポライドＡ３、ビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３の少なくとも一つを生産する生産菌を培養し、その培養物から、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２、ビスポライドＡ３、ビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３の少なくとも一つを採取することを特徴とする、一般式（ＩＩＩ）で表される抗生物質であるビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２、ビスポライドＡ３、ビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよび（または）ビスポライドＢ３の製造方法。
【請求項１２】
培地中でミクロビスポラ  ｓｐ．Ａ３４０３０株（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０５０５として寄託）を好気的条件下で培養して、得られる培養物中に請求の範囲２に記載の一般式（Ｉ）で表されるビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３、ならびに請求の範囲６に記載の一般式（ＩＩ）で表されるビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３を生成、蓄積させ、次に該培養物からビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３の少なくとも一つ、ならびにビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３の少なくとも一つを採取し、これによって、ビスポライドＡ１ないしＡ３の少なくとも一つとビスポライドＢ１ないしＢ３の少なくとも一つを収得することから成るビスポライドＡ類および（または）ビスポライドＢ類の製造方法。
【請求項１３】
請求の範囲２に定義された一般式（Ｉ）で表されるビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３、ならびに請求の範囲６に定義された一般式（ＩＩ）で表されるビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３のうちの少なくとも一つを有効成分として含有し、しかも製薬学的に許容できる一つまたは複数の担体を有効成分と混合して含んで成る医薬組成物。
【請求項１４】
抗菌性組成物である、請求の範囲１３に記載の組成物。
【請求項１５】
請求の範囲２に定義された一般式（Ｉ）のビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３の少なくとも一つを生産し且つ請求の範囲６に定義された一般式（ＩＩ）のビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３の少なくとも一つを生産する特性をもち、しかもブタペスト条約の規約下に独立行政法人  産業技術総合研究所  特許生物寄託センターにＦＥＲＭ  ＢＰ−１０５０５の受託番号で寄託されたところのミクロビスポラ  ｓｐ．Ａ３４０３０株と命名された菌株の単離されて且つ生物学的に純粋な培養物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はすぐれた抗菌活性を有する新規な抗生物質であるビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３、ならびにビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３に関する。
本明細書では、ビスポライドＡ１、Ａ２およびＡ３は、一括してビスポライドＡ類（ａ  ｂｉｓｐｏｌｉｄｅ  Ａ）と称することもあり、またビスポライドＢ１、Ｂ２ａ、Ｂ２ｂおよびＢ３は、一括してビスポライドＢ類（ａ  ｂｉｓｐｏｌｉｄｅ  Ｂ）と称することもある。
また本発明はそのビスポライドＡ類の製造法ならびにビスポライドＢ類の製造法に関する。
さらに、本発明は、前記のビスポライドＡ類を有効成分として含む医薬組成物、特に抗菌性組成物に関し、また本発明は、前記のビスポライドＢ類を有効成分として含む医薬組成物、特に抗菌性組成物に関する。
そしてまた、本発明は、ビスポライドＡ類とビスポライドＢ類を生産できる特性をもつ新規な微生物としての、ミクロビスポラ（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ）ｓｐ．Ａ３４０３０と命名された菌株の生物学的に純粋な培養物（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ｐｕｒｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ）にも関する。
【背景技術】
【０００２】
微生物の生産する種々多数の抗菌物質が知られているが、臨床の場で使用される既知の抗菌物質はわずかな種類に限られている。細菌感染症の化学療法において、ペニシリンやセファロスポリンなどのβ−ラクタム系抗生物質、カナマイシン類などのアミノグリコシド系抗生物質、エリスロマイシン類などのマクロライド系抗生物質などが使用されている。
しかし、細菌感染症の化学療法において、感染症の原因となる細菌が薬剤耐性になった耐性菌の出現と増加は、重大な保健問題を起している。特に加齢に伴い免疫低下した高齢者や慢性病をもつ人々の細菌感染症は重篤であるので、入院患者の院内感染は社会問題となっている。また、感染症の化学療法においてメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（以下、ＭＲＳＡと略す）、バンコマイシン耐性腸球菌（以下、ＶＲＥと略す）、ペニシリン耐性肺炎球菌（以下、ＰＲＳＰと略す）、β−ラクタマーゼ非生産アンピシリン耐性インフルエンザ菌（以下、ＢＬＮＡＲと略す）などの耐性グラム陽性菌に対しては、従来の抗生物質剤は必ずしも十分な抗菌力を示さない。前記の抗生物質耐性菌は院内感染の起因菌ともなり、病院管理上の大きな問題となっている。ＭＲＳＡの感染症の化学療法には、カナマイシン類の誘導体であるアルベカシン、あるいはバンコマイシンが用いられているが、さらなる新しい且つ効果の高い抗生物質を発見して提供することが望まれているという課題が残っている。
上記の事情から明らかであるように、従来使用されている既知の抗生物質とは異なる、新規で特異な化学構造を有し且つ優れた抗菌効力、高い特異性、低い副作用を示す新規な抗生物質治療剤の発見または創製が強く望まれている。
本発明の一つの目的は、上記の要求条件に答え得て且つ優れた抗菌活性をもつ新規な抗生物質を提供することである。
他方、ちなみに、共役ジエン構造をヘミアセタール部分と共に有する１６員環マクロラクトン（マクロビオライド類、ａ  ｍａｃｒｏｂｉｏｌｉｄｅと称されることがある）は、ある種の微生物により生産されることが従来知られている。そのような既知の１６員環マクロビオライドには、エライオフィリン（ｅｌａｉｏｐｈｙｌｉｎ）［「マイクロビオロジー」７巻２０７頁、１９５９年、アルカモーネ；Ｆ．Ｍ．；ベルタリーツＣ．；ギオンＭ．；スコティＴ．Ｇ．らの論文と、欧州特許出願公開６，２９７，５２３Ａ３号および０３１５，００３Ａ３号、参照］と、アザロマイシンＢ（ａｚａｌｏｍｙｃｉｎ  Ｂ）［「ジャーナル・オブ・アンティビオティクス」シリーズＡ；１３巻、４６頁および５１頁、１９６０年、新井守の論文、参照］と、抗生物質２２５Ｅ（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ  ２２５Ｅ）［「Ｆａｒｍａｔｓｉｙａ（Ｓｏｆｉａ）」、２２巻、３頁、１９７２年、Ｋｈｌｅｂａｒｏｖａ，Ｅ．Ｉ．；Ｇｅｏｒｇｉｅｖａ−Ｂｏｒｉｓｏｖａ，Ｉ．Ｋ．；Ｓｈｅｉｋｏｖａ，Ｇ．Ｎ．；Ｂｌｉｎｏｖ，Ｎ．Ｏ．の論文、参照］とがある。しかも他方で既知の１６員環マクロラクトン類には、サルボマイシン（ｓａｌｂｏｍｙｃｉｎ）［ドイツ特許出願ＤＥ３２４８−２８０−Ａ，１９７２年公開］が知られているけれども、サルボマイシンの化学構造はエライオフィリンのそれと全く同じものである。
【発明の開示】
【０００３】
優れた抗菌活性をもち且つその他の有用な性質をもつ新しい抗生物質を提供することが本発明の課題である。
本発明者らは上記のような有用な新規抗生物質を発見する目的で研究を行った。その結果、本発明者らによって土壌サンプルから分離されたところのミクロビスポラ属に属する新しい菌株は、一つの共通の但し新しい骨格構造を有する３個の抗生物質を生産することを先づ本発明者らが見出した。また、これら抗生物質を各々、採取することに成功した。それらの一群の抗生物質をそれぞれにビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２、ビスポライドＡ３と命名し、そしてそれらを総括してビスポライドＡ類と称することとした。そして本発明者らはビスポライドＡ類が各種のグラム陽性細菌およびそれらの薬剤耐性菌に優れた抗菌活性を示すことを見出した。
すなわち、本発明者らにより前記のように土壌サンプルから分離された菌株であって、ミクロビスポラｓｐ．Ａ３４０３０株と命名された菌株を培養することによると、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２、ビスポライドＡ３とそれぞれ命名された化学構造的に新しくて抗菌活性をもつ３個の抗生物質が生産されることを、今回、本発明者らは見出したのである。しかも、ビスポライドＡ１、Ａ２およびＡ３は各々がグラム陽性細菌とそれらの抗生物質耐性菌株とに対して優れた抗菌活性を示し得ることを本発明者らは確認した。
さらに本発明者らは研究を続けて、それぞれにビスポライドＡ１（ｂｉｓｐｏｌｉｄｅ  Ａ１）、ビスポライドＡ２（ｂｉｓｐｏｌｉｄｅ  Ａ２）およびビスポライドＡ３（ｂｉｓｐｏｌｉｄｅ  Ａ３）と命名された３種の抗菌物質化合物の化学構造を決定した。そして、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３の３種の抗生物質が新規化合物であることを確認し、それらが総括的に下記の一般式（Ｉ）により表せる１つの化学構造をもつことを知見した。
0004755248.tif 000002
［式中、Ｒ１とＲ２とは各々が水素原子またはメチル基（−ＣＨ３）を示し、ビスポライドＡ１についてはＲ１とＲ２とが各々、水素原子であり；ビスポライドＡ２についてはＲ１が水素原子でＲ２がメチル基であり；ビスポライドＡ３についてはＲ１とＲ２とが各々、メチル基である］。
上記の一般式（Ｉ）の化学構造式から明らかなように、ビスポライドＡ１、Ａ２、Ａ３の各々は対称な二つのヒドロキシカルボン酸部分で構成される２０員環マクロラクトン環をその分子中に含むものであり、それのマクロラクトン環の構成ヒドロキシカルボン酸はそのカルボニル基の所から見てα、β−位、γ、δ−位、ε、ζ−位に共役トリエン構造を有するものである。
本発明のビスポライドＡ類の化学構造のまた別の特色は、前記の２０員環マクロラクトン環を作る２つのヒドロキシカルボン酸骨格の各々に結合している分岐部分すなわち側鎖の中に、環状ヘミアセタール構造すなわち環状ヘミアセタール領域が在ることである。
前記した既知の１６員環マクロビオライド類に比べると、本発明者らにより今回見出されたビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２、ビスポライドＡ３の各化合物、すなわちビスポライドＡ類は、そのビスポライドＡの化学構造の中に、共役したトリエン構造部分をもつ今回初めて発見された２０員環マクロラクトン構造または領域が含有されることを特徴とすることである。従って、前記のビスポライドＡ類は、従来知られた微生物代謝生成物の抗生物質と違って、全く新しい化学構造をもつものである。
さらに、本発明者らは、別段の研究を行うことを続けて、そして前記のミクロビスポラｓｐ．Ａ３４０３０菌株の培養によって、ビスポライドＡ類とは別個の新しい４つの抗生物質が産生されることを今回、見出した。
また、本発明者らは、前記のミクロビスポラｓｐ．Ａ３４０３０菌株の培養物から上記した新しい別個の４つの抗生物質を採取する研究と共に、それら新しい別個４つの抗生物質をそれらと同時産生される前記一般式（Ｉ）のビスポライドＡ類から別に分離し、しかもそれら新しい別個４つの抗生物質の各々を互いに単離するための研究を行った。その結果、本発明者らは、前記のビスポライドＡ類に追加して、新しい別個の４つの抗生物質を収得することに成功した。
こうして収得された新しい別個の４つの抗生物質をビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂ、ビスポライドＢ３とそれぞれ本発明者らは命名した。そして、ビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂ、ビスポライドＢ３は各々が優れた抗菌活性を種々なグラム陽性細菌とそれらの抗生物質耐性菌株に対してもち得ることを本発明者らは見出した。
また、本発明のさらなる研究の結果、ビスポライドＢ１、Ｂ２ａ、Ｂ２ｂおよびＢ３という上記の新しい４つの抗生物質化合物は、前記ビスポライドＡ類と同じである一つの共通の骨格構造を含み、そして下記の一般式（ＩＩ）で表される化学構造をもつことを今回、知見した。
0004755248.tif 000003
［式中、Ｒ１とＲ２とは各々が水素原子またはメチル基（−ＣＨ３）を示し、ビスポライドＢ１についてはＲ１とＲ２とが各々、水素原子であり；ビスポライドＢ２ａについてはＲ１が水素原子でＲ２がメチル基であり；ビスポライドＢ２ｂについてはＲ１がメチル基でＲ２が水素原子であり；ビスポライドＢ３についてはＲ１とＲ２とが各々、メチル基である］。
上記の一般式（ＩＩ）の化学構造式から明らかなように、ビスポライドＢ１、Ｂ２ａ、Ｂ２ｂおよびＢ３の各々は、対称な二つのヒドロキシルカルボン酸部分で構成される２０員環マクロラクトン環をその分子中に含むものであり、そして該マクロラクトン環の構成ヒドロキシカルボン酸はそれのカルボニル基の所から見て、ビスポライドＡ類と同じ位置に同じ様式で、共役トリエン構造を有し、しかも該ヒドロキシカルボン酸骨格の各々に結合している分岐部分すなわち側鎖の中に、環状ヘミアセタール構造が在る点で、前記のビスポライドＡ類と同じく、全く新しい化学構造を有するものである。前記したような全く新しい特徴的な化学構造をもつ点でビスポライドＢ１、Ｂ２ａ、Ｂ２ｂおよびＢ３（以下、ビスポライドＢ類と総称することもある）は、ビスポライドＡ類と同じく、従来知られた前記の１６員環マクロビオライド類と明らかに相違する。
本発明者らが今回、新しく収得できたビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３（これらはビスポライドＡ類と総称できる）、ならびにビスポライドＢ１、Ｂ２ａ、Ｂ２ｂおよびＢ３（これらはビスポライドＢ類と総称できる）は、後記される一つの一般式（ＩＩＩ）により一括して表わすことのできる新規な抗生物質化合物である。
従って、本発明の第一の要旨（ａｓｐｅｃｔ）においては、新規で有用な抗生物質として、下記の一般式（ＩＩＩ）：
0004755248.tif 000004
［式中、Ｒ１とＲ２とは各々が水素原子またはメチル基を示し、Ｒ３は水素原子または水酸基を示して、ビスポライドＡ１についてはＲ１とＲ２とが各々、水素原子であって、Ｒ３が水素原子であり；ビスポライドＡ２についてはＲ１が水素原子でＲ２がメチル基であってＲ３が水素原子であり；ビスポライドＡ３についてはＲ１とＲ２とが各々メチル基であってＲ３が水素原子であり；ビスポライドＢ１についてはＲ１とＲ２とが各々、水素原子であってＲ３が水酸基であり；ビスポライドＢ２ａについてはＲ１が水素原子でＲ２がメチル基であってＲ３が水酸基であり；ビスポライドＢ２ｂについてはＲ１がメチル基でＲ２が水素原子であってＲ３が水酸基であり；ビスポライドＢ３についてはＲ１とＲ２とが各々、メチル基であってＲ３が水酸基である］
で表される化合物である、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２、ビスポライドＡ３、ビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂまたはビスポライドＢ３の少くとも一つである抗生物質が提供される。
第一の要旨の本発明における第一の実施態様では、前記の一般式（Ｉ）で表されるビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２またはビスポライドＡ３が提供される。
ビスポライドＡ１は、一般式（Ｉ）でＲ１とＲ２とが各々、水素原子である場合の化合物であり；ビスポライドＡ２は、一般式（Ｉ）でＲ１が水素原子でＲ２がメチル基である場合の化合物であり；またビスポライドＡ３は、一般式（Ｉ）でＲ１とＲ２とが各々、メチル基である場合の化合物である。
第一の要旨の本発明における第二の実施態様では、前記の一般式（ＩＩ）で表されるビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂまたはビスポライドＢ３が提供される。
ビスポライドＢ１は、一般式（ＩＩ）でＲ１とＲ２とが各々、水素原子である場合の化合物であり；ビスポライドＢ２ａは、一般式（ＩＩ）でＲ１が水素原子でＲ２がメチル基である場合の化合物であり；ビスポライドＢ２ｂは、一般式（ＩＩ）でＲ１がメチル基で、Ｒ２が水素原子である場合の化合物であり；またビスポライドＢ３は、一般式（ＩＩ）でＲ１とＲ２とが各々、メチル基である場合の化合物である。
前記のビスポライドＡ１は次式（Ｉａ）
0004755248.tif 000005
で表される化合物であり、ビスポライドＡ１の理化学的性状は、下記の通りである。
（１）外観
無色〜白色粉末
（２）分子式
Ｃ６２Ｈ１００Ｏ１８
（３）質量分析（ｍ／ｚＦＡＢＭＳ：陰イオンモード）
実験値：１１３２．１（Ｍ）−
計算値：１１３２．６９
（４）融点
１３７−１４１℃
（５）比旋光度
［α］Ｄ２３  ８０．０°（ｃ０．８４  メタノール中）
（６）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λｍａｘ  ｎｍ（ε）：２９８（７１，３００）
（７）赤外線吸収スペクトル
添付図面の図１に示す。
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル
５００ＭＨｚにおいて重アセトン中で室温にて測定したビスポライドＡ１のプロトンＮＭＲスペクトルは、添付図面の図２に示す。
（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル
１２５ＭＨｚにおいて重アセトン中で室温にて測定したビスポライドＡ１の炭素１３ＮＭＲスペクトルは、添付図面の図３に示す。
（１０）溶解性
メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトン、酢酸エチルに可溶で、５０％含水エタノール（容量比１：１のエタノール−水の混合物）に僅溶であり、水、ヘキサンに不溶である。
（１１）ＴＬＣ
シリカゲルの薄層板上（メルク社製Ａｒｔ．１．０７７３４．１０００）でクロロホルム−メタノール（容量比１０：１）の溶媒でビスポライドＡ１を展開したときのＲｆ値は０．１５である。
前記のビスポライドＡ２は次式（Ｉｂ）
0004755248.tif 000006
で表される化合物であり、ビスポライドＡ２の理化学的性状は、下記の通りである。
（１）外観
無色〜白色粉末
（２）分子式
Ｃ６３Ｈ１０２Ｏ１８
（３）質量分析（ｍ／ｚＦＡＢＭＳ：陰イオンモード）
実験値：１１４６．１（Ｍ）−
計算値：１１５６．７１
（４）融点
１４０−１４２℃
（５）比旋光度
［α］Ｄ２３  １７６．１°（ｃ０．７２  メタノール中）
（６）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λｍａｘ  ｎｍ（ε）：２９８（９０，９００）
（７）赤外線吸収スペクトル
添付図面の図４に示す。
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル
５００ＭＨｚにおいて重アセトン中で室温にて測定したビスポライドＡ２のプロトンＮＭＲスペクトルは、添付図面の図５に示す。
（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル
１２５ＭＨｚにおいて重アセトン中で室温にて測定したビスポライドＡ２の炭素１３ＮＭＲスペクトルは、添付図面の図６に示す。
（１０）溶解性
メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトン、酢酸エチルに可溶で、５０％含水エタノールに僅溶であり、水、ヘキサンに不溶である。
（１１）ＴＬＣ
シリカゲルの薄層板上（メルク社製Ａｒｔ．１．０７７３４．１０００）でクロロホルムーメタノール（１０：１）の溶媒でビスポライドＡ２を展開したときのＲｆ値は０．２３である。
前記のビスポライドＡ３は次式（Ｉｃ）
0004755248.tif 000007
で表される化合物であり、ビスポライドＡ３の理化学的性状は、下記の通りである。
（１）外観
無色〜白色粉末
（２）分子式
Ｃ６４Ｈ１０４Ｏ１８
（３）質量分析（ｍ／ｚＦＡＢＭＳ：陰イオンモード）
実験値：１１６０．０（Ｍ）−
計算値：１１６０．７２
（４）融点
１４４−１４７℃
（５）比旋光度
［α］Ｄ２５  ＋４１８．７°（ｃ０．７４  メタノール中）
（６）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λｍａｘ  ｎｍ（ε）：２９８（８８，３００）
（７）赤外線吸収スペクトル
添付図面の図７に示す。
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル
５００ＭＨｚにおいて重アセトン中で室温にて測定したビスポライドＡ３のプロトンＮＭＲスペクトルは、添付図面の図８に示す。
（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル
１２５ＭＨｚにおいて重アセトン中で室温にて測定したビスポライドＡ１の炭素１３ＮＭＲスペクトルは、添付図面の図９に示す。
（１０）溶解性
メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトン、酢酸エチルに可溶で、５０％含水エタノールに僅溶であり、水、ヘキサンに不溶である。
（１１）ＴＬＣ
シリカゲルの薄層板上（メルク社製Ａｒｔ．１．０７７３４．１０００）でクロロホルムーメタノール（１０：１）の溶媒でビスポライドＡ３を展開したときのＲｆ値は０．３１である。
なお、本明細書では、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２またはビスポライドＡ３か、あるいはそれら二つまたはそれ以上の混合物、もしくは、すべての混合物を、単にビスポライドＡ類またはビスポライドＡ化合物と称することがある。
また、前記のビスポライドＢ１は次式（ＩＩａ）
0004755248.tif 000008
で表される化合物であり、ビスポライドＢ１の理化学的性状は、下記の通りである。
（１）外観
無色〜白色粉末
（２）分子式
Ｃ６２Ｈ１００Ｏ１９
（３）質量分析（ｍ／ｚＦＡＢＭＳ：陰イオンモード）
実験値：１１４８．９（Ｍ）−
計算値：１１４８．６９
（４）融点
１１９．９−１２１．２℃
（５）比旋光度
［α］Ｄ２３  ＋１１５．０°（ｃ０．１３  メタノール中）
（６）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λｍａｘ  ｎｍ（ε）：２９８（９８，６００）
（７）赤外線吸収スペクトル
添付図面の図１０に示す。
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル
４００ＭＨｚにおいて重アセトン中で室温にて測定したビスポライドＢ１のプロトンＮＭＲスペクトルは、添付図面の図１１に示す。
（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル
１００ＭＨｚにおいて重アセトン中で室温にて測定したビスポライドＢ１の炭素１３ＮＭＲスペクトルは、添付図面の図１２に示す。
（１０）溶解性
メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトン、酢酸エチルに可溶で、５０％含水エタノール（容量比１：１のエタノールー水の混合物）に僅溶であり、水、ヘキサンに不溶である。
（１１）ＴＬＣ
シリカゲルの薄層板上（メルク社製Ａｒｔ．１．０７７３４．１０００）でクロロホルムーメタノール（容量比１０：１）の溶媒でビスポライドＢ１を展開したときのＲｆ値は０．１２である。
前記のビスポライドＢ２ａは次式（ＩＩｂ）
0004755248.tif 000009
で表される化合物であり、ビスポライドＢ２ａの理化学的性状は、下記の通りである。
（１）外観
無色〜白色粉末
（２）分子式
Ｃ６３Ｈ１０２Ｏ１９
（３）質量分析（ｍ／ｚＦＡＢＭＳ：陰イオンモード）
実験値：１１６２．１（Ｍ）−
計算値：１１６２．７０
（４）融点
１５１．５−１５２．５℃
（５）比旋光度
［α］Ｄ２３  ＋１０３．７°（ｃ０．１５  メタノール中）
（６）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λｍａｘ  ｎｍ（ε）：２９８（８０，５００）
（７）赤外線吸収スペクトル
添付図面の図１３に示す。
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル
４００ＭＨｚにおいて重アセトン中で室温にて測定したビスポライドＢ２ａのプロトンＮＭＲスペクトルは、添付図面の図１４に示す。
（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル
１００ＭＨｚにおいて重アセトン中で室温にて測定したビスポライドＢ２ａの炭素１３ＮＭＲスペクトルは、添付図面の図１５に示す。
（１０）溶解性
メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトン、酢酸エチルに可溶で、５０％含水エタノール（容量比１：１のエタノールー水の混合物）、水、ヘキサンに不溶である。
（１１）ＴＬＣ
シリカゲルの薄層板上（メルク社製Ａｒｔ．１．０７７３４．１０００）でクロロホルムーメタノール（容量比１０：１）の溶媒でビスポライドＢ２ａを展開したときのＲｆ値は０．１６である。
前記のビスポライドＢ２ｂは次式（ＩＩｃ）
0004755248.tif 000010
で表される化合物であり、ビスポライドＢ２ｂの理化学的性状は、下記の通りである。
（１）外観
無色〜白色粉末
（２）分子式
Ｃ６３Ｈ１０２Ｏ１９
（３）質量分析（ｍ／ｚＦＡＢＭＳ：陰イオンモード）
実験値：１１６２．１（Ｍ）−
計算値：１１６２．７０
（４）融点
１５６．２−１６０．０℃
（５）比旋光度
［α］Ｄ２６  ＋１２６．３°（ｃ０．１２  メタノール中）
（６）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λｍａｘ  ｎｍ（ε）：２９８（１２１，０００）
（７）赤外線吸収スペクトル
添付図面の図１６に示す。
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル
４００ＭＨｚにおいて重アセトン中で室温にて測定したビスポライドＢ２ｂのプロトンＮＭＲスペクトルは、添付図面の図１７に示す。
（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル
１００ＭＨｚにおいて重アセトン中で室温にて測定したビスポライドＢ２ｂの炭素１３ＮＭＲスペクトルは、添付図面の図１８に示す。
（１０）溶解性
メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトン、酢酸エチルに可溶で、５０％含水エタノール（容量比１：１のエタノールー水の混合物）、水、ヘキサンに不溶である。
（１１）ＴＬＣ
シリカゲルの薄層板上（メルク社製Ａｒｔ．１．０７７３４．１０００）でクロロホルムーメタノール（容量比１０：１）の溶媒でビスポライドＢ２ｂを展開したときのＲｆ値は０．１９である。
前記のビスポライドＢ３は次式（ＩＩｄ）
0004755248.tif 000011
で表される化合物であり、ビスポライドＢ３の理化学的性状は、下記の通りである。
（１）外観
無色〜白色粉末
（２）分子式
Ｃ６４Ｈ１０４Ｏ１９
（３）質量分析（ｍ／ｚＦＡＢＭＳ：陰イオンモード）
実験値：１１７６．１（Ｍ）−
計算値：１１７６．７２
（４）融点
１３１．５−１３４．０℃
（５）比旋光度
［α］Ｄ２３  ＋９１．７°（ｃ０．１３  メタノール中）
（６）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λｍａｘ  ｎｍ（ε）：２９８（８９，４００）
（７）赤外線吸収スペクトル
添付図面の図１９に示す。
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル
４００ＭＨｚにおいて重アセトン中で室温にて測定したビスポライドＢ３のプロトンＮＭＲスペクトルは、添付図面の図２０に示す。
（９）炭素１３核磁気共鳴スペクトル
１００ＭＨｚにおいて重アセトン中で室温にて測定したビスポライドＢ３の炭素１３ＮＭＲスペクトルは、添付図面の図２１に示す。
（１０）溶解性
メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトン、酢酸エチルに可溶で、５０％含水エタノール（容量比１：１のエタノールー水の混合物）、水、ヘキサンに不溶である。
（１１）ＴＬＣ
シリカゲルの薄層板上（メルク社製Ａｒｔ．１．０７７３４．１０００）でクロロホルムーメタノール（容量比１０：１）の溶媒でビスポライドＢ３を展開したときのＲｆ値は０．１９である。
なお、本明細書では、ビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂまたはビスポライドＢ３か、あるいはそれら二つまたはそれ以上の混合物、もしくは、すべての混合物を、単にビスポライドＢ類またはビスポライドＢ化合物と称することがある。また、ビスポライドＡ類とビスポライドＢ類とを総合的にビスポライド類と単に称することもある。
本発明による前記の一般式（Ｉ）で表せるビスポライドＡ化合物と一般式（ＩＩ）で表せるビスポライドＢ化合物とは後記の生物学的性質を有する。
すなわち、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３ならびにビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３は、薬剤耐性菌（メチシリン耐性菌等）を含む各種のグラム陽性の細菌に対して抗菌活性を示す。これらの細菌に対するビスポライドＡ化合物とビスポライドＢ化合物との抗菌活性を次のとおり試験した。
各種の微生物に対するビスポライドＡ類およびビスポライドＢ類の抗菌スペクトルは、Ｂａｃｔｏ  Ｙｅａｓｔ  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｂａｓｅ（Ｄｉｆｃｏ社製）−Ｇｌｕｃｏｓｅ−ＮＺ  Ａｍｉｎｅから成る液体培地中で倍数希釈法により測定した。その試験結果を下記の表１と表２に示す。
【表１】
0004755248.tif 000012
0004755248.tif 000013
【表２】
0004755248.tif 000014
0004755248.tif 000015
さらに、本発明の第二の要旨によると、ミクロビスポラ属に属して、前記の一般式（ＩＩＩ）で表されるビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２、ビスポライドＡ３、ビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３の少なくとも一つを生産する生産菌を培養し、その培養物から、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２、ビスポライドＡ３、ビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３の少なくとも一つを採取することを特徴とする、一般式（ＩＩＩ）で表される抗生物質であるビスポライドＡ１、ビスボライドＡ２、ビスポライドＡ３、ビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよび（または）ビスポライドＢ３の製造方法が提供される。
第２の本発明の方法で使用する抗生物質ビスポライドＡまたはＢ類の生産菌は、前述した理化学的性質および生物学的性質を有する抗生物質を生産する能力を有するものであれば、その種を問わず使用でき、広範な微生物から選ぶことができる。かかる使用できる微生物のうち、抗生物質ビスポライドＡまたはＢ類の生産菌の好適な一具体例としてあげうるものは、２０００年１１月に本発明者らによってマレーシヤ森林研究所（略称：ＦＲＩＭ）のＳａｌｌｅｎ  Ｋｅｒｕｉｎｇ  Ｔｒａｉｌで採取された土壌サンプルより分離したミクロビスポラ（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ）属の菌株でミクロビスポラｓｐ．Ａ３４０３０と命名された菌株がある。
なお、前記したミクロビスポラ属のＡ３４０３０株を日本国際寄託機関である独立行政法人  産業技術総合研究所  特許生物寄託センター（略称：ＩＰＯＤ）に寄託申請し、２００６年２月１４日、ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０５０５の受託番号でブタペスト条約の規約下に寄託された。
このミクロビスポラｓｐ．Ａ３４０３０株の微生物学的性質を次に記載する。
１．形態
スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−４培地）において、２８℃、２週間培養したミクロビスポラｓｐ．Ａ３４０３０株は、分岐した基底菌糸をもち、これから比較的長い直状の気菌糸を形成し、気菌糸の先端上に特徴的な２連のらせん状胞子を着生する。胞子の運動性は認められない。その他の特別な構造は認められない。
２．各種培地における生育状態
（１）２７℃、２週間の培養の場合に、イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−２培地）では、生育をほとんど認められない。
（２）２７℃、２週間の培養の場合に、オートミール寒天培地（ＩＳＰ−３培地）、スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−４培地）およびグリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−５培地）では、白色〜かすかに乳白色の扁平な生育を示し、可溶性色素の生成は認められない。
（３）改変ベネット寒天培地（可溶性でんぷん０．５％、グリコース０．５％、牛肉エキス０．１％、ＮＺ−アミン０．２％、食塩０．２％、炭酸カルシウム０．１％；ｐＨ７．０−７．２）では、上記の培地での生育に比べて旺盛な生育を示すが、気菌糸の形成は生育の外周縁に沿ってのみに限定される。
３．生理的性質
（１）生育温度範囲
改変ベネット寒天培地上で、１０℃、２０℃、２８℃、３０℃、３７℃、４０℃および４５℃の各温度で２週間培養試験した場合、このミクロビスポラｓｐ．Ａ３４０３０株は２０℃−４０℃の範囲で生育する。生育至適温度は２８℃〜３０℃付近である。
（２）スターチの加水分解（無機塩−スターチ−寒天培地、ＩＳＰ−４培地、２７℃培養）
２週間の培養でスターチの加水分解は認められない。
（３）メラニン様色素の生成（ペプトン−イーストエキス−鉄−寒天培地、ＩＳＰ−６培地；チロシン寒天培地、ＩＳＰ−７培地、各培地とも２８℃で培養）
いずれの培地においても２８℃、２週間の培養で陰性である。
（４）炭素源の利用性（プリドハム−ゴットリーブ培地、ＩＳＰ−９培地、２７℃培養）
陽性対照としてＤ−グルコースの添加培地での生育に比べて、Ａ３４０３０株はＬ−アラビノース、シュクロース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フルクトース、またはＤ−マンニトールの添加培地では同様の発育を示したが、ｍｙｏ−イノシトールの添加培地ではＡ３４０３０株の生育が弱く、ラムノースの添加培地では生育が認められない。ラフィノースの添加培地では、Ｄ−グルコースの添加培地よりもＡ３４０３０株は良好な生育を示す。
（５）硝酸塩の還元反応（０．１％硝酸カリウム含有ペプトン水溶液、ＩＳＰ−８培地、２８℃培養）
硝酸塩の還元の結果は判然としないが、おそらく陰性である。
４．菌体成分
（１）細胞壁組成
本菌株の細胞壁の主要成分としてメソ型２，６−ジアミノピメリン酸が同定された。
（２）メナキノン
本菌株の細菌細胞中にある主要なメナキノンとして、ＭＫ９とＭＫ（Ｈ２）を約７０％ないし約３０％の比率で含む。
（３）菌体脂肪酸
主要脂肪酸として、Ｃ１６：０  ＩＳＯ（４２％）、Ｃ１７：１  ｗ８ｃ（９．８％）、Ｃ１７：０  １０−メチル（９．７％）が測定された。
５．１６Ｓ  ｒＤＮＡ解析
Ａ３４０３０菌株から単離された１６Ｓ  ｒＤＮＡの部分塩基配列（１２３９塩基を含む）を決定し、ＤＮＡデータベースに登録されたストレプトミセス属の既知の１６Ｓ  ｒＤＮＡと比較した。その比較からみると、Ａ３４０３０株から単離された１６Ｓ  ｒＤＮＡは、ストレプトミセス属に属するミクロビスポラ（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ）属の菌の１６Ｓ  ｒＤＮＡと高い相同性を示すことが判った。
ミクロビスポラｓｐ．Ａ３４０３０株の前記した性状を要約すると、Ａ３４０３０株は、分岐した基底菌糸と直状の気菌糸を形成し、白色〜仄かな乳白色を有する２個連なったらせん状の胞子を気菌糸上に着生すること、基底菌糸上には胞子を着生しないこと、その他の特別な構造が認められないこと、種々の供試培地での生育に伴う可溶性色素の生成を認められないこと、メラニン様色素を生成しないこと、硝酸塩の還元反応を決定できないがおそらく陰性で、スターチの水解性を認められないことを特徴としている。
Ａ３４０３０株の菌体の化学組成を研究すると、Ａ３４０３０株の細胞壁成分がメソ型２，６−ジアミノピメリン酸を含有し、主要なメナキノンはＭＫ−９とＭＫ−９（Ｈ２）であり、そして主要な脂肪酸はＣ１６：０  ＩＳＯ（４２％）、Ｃ１７：１  ｗ８ｃ（９．８％）およびＣ１７：０  １０−メチル（９．７％）であると認められた。
前記されたＡ３４０３０株の諸性質を考えると、Ａ３４０３０株はミクロビスポラ（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ）属、［文献：”放線菌の分類と同定”、日本放線菌学会編、２００１年、日本学会事務センター刊行、参照］に属すると判断される。そこで、Ａ３４０３０株をミクロビスポラ（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ）ｓｐ．Ａ３４０３０と命名した。
なお、本明細書で前記したとおり、本菌株、Ａ３４０３０株は、前記した日本の国際寄託機関、すなわち茨城県つくば市東１−１−１のつくばセンター中央第６の独立行政法人  産業技術総合研究所  特許生物寄託センター（略称：ＩＰＯＤ）にブタペスト条約の規約下にＦＥＲＭ  ＢＰ−１０５０５の受託番号で寄託された。
さらに、本発明の第二の要旨に係る本発明方法によれば、新規抗生物質ビスポライドＡ１、Ａ２およびＡ３ならびにビスポライドＢ１、Ｂ２ａ、Ｂ２ｂおよびＢ３の製造は下記に説明される要領で実施できる。
すなわち、上記の抗生物質、ビスポライドＡ類とビスポライドＢ類との製造は、まず、ミクロビスポラ属に属するビスポライドＡ類またはＢ類あるいはこれら両方の生産菌株を、公知の炭素源、窒素源、無機塩を含む栄養培地に接種し、その接種された菌株を次いでこの培地中で培養する。その炭素源としては、例えば、ぶどう糖、麦芽糖、糖蜜、デキストリン、グリセリン、澱粉などの炭水化物や、大豆油、落花生油などの油脂のごとき炭素源が利用できる。また、栄養源としては、ペプトン、肉エキス、綿実粉、大豆粉、酵母エキス、カゼイン、コーン・スチープ・リカー、ＮＺ−アミン、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、塩化アンモニウムなどの窒素源が使用できる。
また、上記の培地には、さらに燐酸二カリウム、燐酸ナトリウム、食塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、塩化マンガンなどの無機塩が配合できる。必要により、微量で金属例えばコバルト、鉄などを添加することができる。培地中に含まれる栄養源としては、その他、抗生物質ビスポライドＡ類および（または）ビスポライドＢ類を生産する生産菌（以下、ビスポライド生産菌という）により利用し得るものであって、放線菌科の菌の培養に慣用される培地中で利用できると知られる栄養源物質のいずれでも良い。
上記のビスポライド生産菌の培養に用いられる培地における上記のごとき栄養源の配合割合は特に制約されるものではなく、広範囲に亘って変えることができ、そして使用するビスポライド生産菌によって、最適の栄養源の組成および配合割合は、当事者であれば簡単な小規模実験により容易に決定することができる。また、上記の栄養源から成る栄養培地は、菌の接種と培養に先立ち殺菌することができ、この培地の殺菌の前又は後で、培地のｐＨをｐＨ６−８の範囲、特にｐＨ６．５−７．５の範囲に適当に調節するのがよい。
本発明による新規抗生物質、すなわちビスポライドＡ類またはビスポライドＢ類の製造のためには、放線菌による抗生物質の製造において通常使用されている一般の方法の何れをも使用できる。通常は好気条件下にビスポライド生産菌を培養するのが好適であり、また撹拌しながら且つ通気しながらもしくは通気をしないで行うことができる。また、培養方法としては静置培養、振盪培養、通気撹拌を伴う液体培地中での深部培養の何れも使用可能である。液体培地中の深部培養がビスポライドＡ類またはビスポライドＢ類の大量生産に適している。
ビスポライド生産菌の培養に使用し得る培養温度は、使用、接種されたビスポライド生産菌の発育が実質的に阻害されず、所望とされる抗生物質を生産し得る温度の範囲であれば、特に制限されるものではない。その培養温度は用いるビスポライド生産菌の種類に応じて適宜選択できるが、特に好ましい培養温度は２５℃−３０℃の範囲内の温度を挙げることができる。
使用された菌株の培養はビスポライド類が得られた培養物中に十分に蓄積するまで継続することができる。その培養時間は培地の組成や培養温度や、使用生産菌株などにより異なる。通常は７２−１２０時間の培養により、目的の抗生物質としてビスポライド類、すなわちビスポライドＡ１ないしＡ３ならびにビスポライドＢ１ないしＢ３が十分量で生成、蓄積できる。
用いたビスポライド生産菌の培養で得られる培養物または培養液に含まれたビスポライド類の蓄積量は黄色ブドウ球菌（スタヒロコッカス・アウレウス）ＦＤＡ２０９Ｐを検定菌として使用して、通常の抗生物質の定量に用いられるシリンダー定量法により定量することができる。
ビスポライド生産菌の培養後に、得られた培養物または培養液中に生産、蓄積されたビスポライドＡ類とビスポライドＢ類、すなわち一般的にはビスポライド類は、これを培養物から常法で採取することができる。すなわち培養後、培養物または培養液より、濾過、遠心分離などのそれ自体公知の分離方法によって、まず菌体を分離するのがよい。
ビスポライド生産菌の培養で生成された培養菌体を、濾過または遠心分離により上記の得られた培養液から分離した後には、水性相であり得る培養濾液または上清液が得られる。ビスポライドＡ１ないしＡ３ならびにビスポライドＢ１ないしＢ３を含めて、ビスポライド類は各々が水に実質上不溶性であるから、生成されたビスポライド類の大部分は分離後の菌体中に蓄積されて含有されている。
上記の分離した培養菌体からビスポライド類を採取するためには、上記のように分離された菌体をメタノール、酢酸エチルのような適当な有機溶媒で１回または２回抽出して、ビスポライド類を溶解、含有する１つまたは複数の抽出液を得るようにするのが都合よい。また、上記のように分離した培養菌体をまず、機械的に、例えば超音波照射で破砕し、これにより破砕された菌体細胞の全成分よりなる均一な混合物を収得し、次いで該混合物をメタノールのような適当な有機溶媒で抽出し、ビスポライド類を溶解、含有する有機抽出液を得るようにすることもできる。必要ならば、前記の培養濾液または上清液を水非混和性の有機溶媒、例えば酢酸エチルで抽出して、前記の培養濾液または上清液に含まれていたビスポライド類を第２収穫物（ｓｅｃｏｎｄ  ｃｒｏｐ）として含む有機抽出液を得ることもできる。
上記のようにして得られてビスポライド類を含む複数の有機抽出液を次に合併させ、このようにして合併された有機抽出液溶液を次に減圧下で有機溶媒の蒸発により濃縮してビスポライド類を溶解、含有する小容量の濃縮液を得るようにすることができる。この濃縮液を次に酢酸エチル、酢酸ブチルのような適当な有機溶媒で抽出し、そして得られた有機溶媒抽出液を次に無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、その得られた乾燥抽出液を減圧下に濃縮乾固することができる。こうして生成された固体残渣は、ビスポライド類よりなる粗製物であって、これは同時に産生されたビスポライドＡ１ないしＡ３ならびにビスポライドＢ１ないしＢ３の粗製物の混合物からなり、この中には時には何らかの不純物を含むこともある。
ビスポライドＡ１、Ａ２およびＡ３ならびにビスポライドＢ１、Ｂ２ａ、Ｂ２ｂおよびＢ３を精製および単離するのには、前記の同時に産生されたビスポライドＡ類とビスポライドＢ類との粗製生成物から成る前記の固体残渣を、クロマトグラフィー法、ゲル濾過法、向流分配法を単独でまたは、組み合わせて慣用の手段で処理することができる。常法的なクロマトグラフィー法を行う場合の固定相としては、活性炭、シリカゲル、多孔性ポリスチレン−ジビニルベンゼン樹脂（例えば、商標名”Ｄｉａｉｏｎ  ＨＰ−２０”で市販される樹脂、日本、三菱化学（株）社製の製品）、もしくはクロマトグラフィー用の市販の各種のイオン交換樹脂を用いることができる。
なお、ビスポライドＡまたはビスポライドＢの生産菌、すなわちビスポライド生産菌として前記のミクロビスポラ  ｓｐ．Ａ３４０３０株を用いた場合には、このミクロビスポラ  ｓｐ．Ａ３４０３０株はこれの培養時にビスポライドＡ１、Ａ２およびＡ３ならびにビスポライドＢ１、Ｂ２ａ、Ｂ２ｂおよびＢ３を同時に並行的に産生できるものである。従って、この場合、そのように同時に産生されたビスポライドＡ１、Ａ２およびＡ３ならびにビスポライドＢ１、Ｂ２ａ、Ｂ２ｂおよびＢ３が、得られた培養物または培養液に含まれることになる。
なお、ビスポライドＡ類を製造しようとする主な目的でミクロビスポラ  ｓｐ．Ａ３４０３０株を培養する時にも、またビスポライドＢ類を製造しようとする主な目的で前記Ａ３４０３０株を培養する時にも、このＡ３４０３０株は前記と同じ要領で培養でき、しかも得られた培養物または培養液からのビスポライドＡ類の採取も、ビスポライドＢ類の採取も、前記と同じ要領で実施できる。ビスポライドＡ類とビスポライドＢ類とは互いに良く似ている物理化学的性質を有するからである。同時に産生されたビスポライドＡ類の主要量もビスポライドＢ類の主要量も、ミクロビスポラ  ｓｐ．Ａ３４０３０株の培養で得た培養物または培養液から前記のとおり分離された該Ａ３４０３０株の培養菌体中に主として蓄積することができ、存在しているのである。
ミクロビスポラ  ｓｐ．Ａ３４０３０株の培養された菌体をメタノール、エタノール、酢酸エチルのような適当な有機溶剤で抽出することにより該菌体からビスポライドＡ類を、もしくはビスポライドＢ類を採取しようとする時には、該Ａ３４０３０株の培養された菌体からはビスポライドＡ１、Ａ２およびＡ３ならびにビスポライドＢ１、Ｂ２ａ、Ｂ２ｂおよびＢ３も回収できるので、ビスポライドＡ類とビスポライドＢ類とを共に溶解、含有する有機抽出液の１つまたは複数が得られることになる。次いで、このような１つまたは複数の有機抽出液を前記したことと同じ要領で処理して、ビスポライドＡ１、Ａ２およびＡ３ならびにビスポライドＢ１、Ｂ２ａ、Ｂ２ｂおよびＢ３から成り、且つ何らかの不純物を時には含むこともある粗製のビスポライド類混合物を収得できる。この粗製のビスポライド類混合物を次に前記と同じクロマトグラフィー法にかけて、ビスポライドＡ類、すなわちビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３ならびにビスポライドＢ類、すなわちビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３の各個の化合物を精製しながら単離して収得する目的を達成することができる。
ビスポライドＡ１、Ａ２およびＡ３を相互に別々に単離すると共に、これらをビスポライドＢ類から分離するためには、もしくはビスポライドＢ１、Ｂ２ａ、Ｂ２ｂおよびＢ３を相互に別々に単離すると共にこれらをビスポライドＡ類から分離するためには、ビスポライドＡ１、Ａ２およびＡ３ならびにビスポライドＢ１、Ｂ２ａ、Ｂ２ｂおよびＢ３から成る粗製の、もしくは部分精製した混合物を、適当な固定相剤を用い且つ移動相として適当な展開溶媒を用いる高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にかける。このようにして、前記した物理化学的性質をそれぞれ有するところの、ビスポライドＡ１の単離された純品、ビスポライドＡ２の単離された純品、ビスポライドＡ３の単離された純品、ビスポライドＢ１の単離された純品、ビスポライドＢ２ａの単離された純品、ビスポライドＢ２ｂの単離された純品、ビスポライドＢ３の単離された純品が別々に収得できる。
従って、本発明の第二の要旨による本発明方法の１つの特別な実施態様では、培地中でミクロビスポラ  ｓｐ．Ａ３４０３０株（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０５０５として寄託）を好気的条件下で培養して、得られる培養物中に前記の一般式（Ｉ）で表されるビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３、ならびに前記の一般式（ＩＩ）で表されるビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３を生成、蓄積させ、次に該培養物からビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３の少なくとも一つ、ならびにビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３の少なくとも一つを採取し、これによって、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３の少なくとも一つとビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３の少なくとも一つを収得することから成るビスポライドＡ類および（または）ビスポライドＢ類の製造方法が提供される。
さらにまた、本発明の第三の要旨によると、前記の一般式（ＩＩＩ）のビスポライド類、すなわち一般式（Ｉ）で表されるビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３、ならびに前記の一般式（ＩＩ）で表されるビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３のうちの少なくとも一つを有効成分として含有し、しかも製薬学的に許容できる一つまたは複数の担体を有効成分と混合して成る医薬（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）組成物が提供される。
第三の本発明による医薬組成物は、特定的には、抗菌性組成物であり得るが、この医薬組成物は一般的には、常用される製薬学的に許容できる固体状または液状の担体、例えばエタノール、水、生理食塩水、澱粉、その他の同類物と混和された状態で、有効成分として一般式（Ｉ）のビスポライドＡ化合物、もしくは一般式（ＩＩ）のビスポライドＢ化合物を含む製剤または調合剤の形である。
第三の本発明による医薬組成物に用いられる一般式（Ｉ）のビスポライドＡ化合物、または一般式（ＩＩ）のビスポライドＢ化合物は、静脈内、筋肉内または腸管内投与などにより、経口的または非経口的に投与できる。経口投与用のためには、第三の本発明による医薬組成物は、有効成分である一般式（ＩＩＩ）のビスポライドＡ化合物またはビスポライドＢ化合物を、常用される製薬学的に許容できる固体または液体の担体と配合することにより、散剤、錠剤、カプセル、懸濁液、シロップなどのごとき製剤の形に調合できる。
第三の本発明による医薬組成物に有効成分として配合される一般式（ＩＩＩ）のビスポライドＡ化合物またはビスポライドＢ化合物の配合量は、該組成物の製剤の型態に応じて変え得るが、有効成分としてのビスポライド類の好適な配合量は、該組成物の投与単位体（ｄｏｓａｇｅｕｎｉｔ）の重量について約２％ないし９０％の範囲である。
第三の本発明による医薬組成物を注射剤に製剤する場合には、その注射製剤の好ましい剤型は、有効成分として一般式（Ｉ）のビスポライドＡ化合物または一般式（ＩＩ）のビスポライドＢ化合物を含み、しかも適当な可溶化剤を含有してあるか、または配合してないような無菌の水溶液や、無菌の凍結乾燥製剤であることができる。このような注射剤を作る目的に用い得る液体担体の例としては、水、エタノール、含水エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、植物油などが好ましい。
本発明による医薬組成物に有効成分として用い得る一般式（Ｉ）のビスポライドＡ化合物または一般式（ＩＩ）のビスポライドＢ化合物の投与量は、処置すべき細菌感染症の種類や、治療処置の目的や、患者の病状の程度、などに応じて決定できる。しかし、ビスポライドＡ化合物またはビスポライドＢ化合物の最適投与量は、適当な予備試験で専門家により適宜、決定できる。そして、ビスポライドＡ類を７５ｍｇ／ｋｇの投与量でマイス（ＩＣＲ系、４週令、雄）に静脈内投与した時にはビスポライドＡ類は毒性の兆候を示さないと認められた。また、同様なマイス（ＩＣＲ系、４週令、雄）にビスポライドＢ類を１０ｍｇ／ｋｇの投与量で腹腔内投与した時には、ビスポライドＢ類は毒性の兆候を示さないと認められた。
さらに、本発明の第四の要旨によると、前記の一般式（Ｉ）のビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３の少なくとも一つを生産し且つ前記の一般式（ＩＩ）のビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３の少なくとも一つを生産する特性をもち、しかもブタペスト条約の規約下に、独立行政法人  産業技術総合研究所  特許生物寄託センター（略称：ＩＰＯＤ）にＦＥＲＭ  ＢＰ−１０５０５の受託番号で寄託されたところの、ミクロビスポラ  ｓｐ．Ａ３４０３０株の名称の菌株の単離されて且つ生物学的に純粋な培養物が新規な微生物として提供される。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
図１はビスポライドＡ１のＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
図２はビスポライドＡ１の重アセトン溶液中にて室温で測定した５００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
図３はビスポライドＡ１の重アセトン溶液中にて室温で測定した１２５ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
図４はビスポライドＡ２のＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
図５はビスポライドＡ２の重アセトン溶液中にて室温で測定した５００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
図６はビスポライドＡ２の重アセトン溶液中にて室温で測定した１２５ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
図７はビスポライドＡ３のＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
図８はビスポライドＡ３の重アセトン溶液中にて室温で測定した５００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
図９はビスポライドＡ３の重アセトン溶液中にて室温で測定した１２５ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
図１０はビスポライドＢ１のＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
図１１はビスポライドＢ１の重アセトン溶液中にて室温で測定した４００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
図１２はビスポライドＢ１の重アセトン溶液中にて室温で測定した１００ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
図１３はビスポライドＢ２ａのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
図１４はビスポライドＢ２ａの重アセトン溶液中にて室温で測定した４００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共嗚スペクトルである。
図１５はビスポライドＢ２ａの重アセトン溶液中にて室温で測定した１００ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
図１６はビスポライドＢ２ｂのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
図１７はビスポライドＢ２ｂの重アセトン溶液中にて室温で測定した４００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
図１８はビスポライドＢ２ｂの重アセトン溶液中にて室温で測定した１００ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
図１９はビスポライドＢ３のＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
図２０はビスポライドＢ３の重アセトン溶液中にて室温で測定した４００ＭＨｚにおけるプロトン核磁気共嗚スペクトルである。
図２１はビスポライドＢ３の重アセトン溶液中にて室温で測定した１００ＭＨｚにおける炭素１３核磁気共鳴スペクトルである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
以下に、本発明を下記の実施例につて詳しく具体的に説明する。これら実施例は、単に本発明を具体的に説明するためのものであって、本発明の範囲を何らかに限定するものと解すべきでない。
【実施例１】
【０００６】
抗生物質ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３の製造
寒天斜面培地に培養したミクロビスポラ  ｓｐ．Ａ３４０３０株（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０５０５で寄託）の培養物を、培地に接種した。ここで用いた培地は、可溶性澱粉（米国、メルク社製品）２％、ブドウ糖１％、ＮＺ−アミン（日本、和光純薬社製品）０．５％、粉末状酵母エキス（ディフコ社製品）０．５％、塩化カルシウム０．０５％、総合ビタミンＢ粉末（日本、ファンケルフーズ社製品）０．００５％を含む液体培地（ｐＨ７．０に調整）の１００ｍｌづつをエレンマイヤーフラスコ（各々５００ｍｌ容）の各々に分注し、前記Ａ３４０３０株の接種に先立ち、常法により１２０℃で２０分間滅菌することにより調製されたものである。該菌株を接種した液体培地を、次に、２８℃で９日間、２２５ｒ．ｐ．ｍ．の回転数で回転振盪培養して種毋培養液を得た。
とうもろこし澱粉２％、大豆粉３％、炭酸カルシウム１％、硫酸マグネシウム０．２％、パームヤシ油粕０．１％を含む液体培地（ｐＨ７．０に調整）の合計４リットルを４０本のエレンマイヤーフラスコ（各々５００ｍｌ容）に各１００ｍｌづつ分注し、常法により１２０℃で２０分間滅菌して生産培地を得た。各フラスコ中の該生産培地へ上記の種毋培養液の１ｍｌづつを接種した。次いでＡ３４０３０株の培養は、２８℃の温度で１２日間、２２５ｒ．ｐ．ｍ．の回転数で回転振盪培養を行う条件で実施した。得られた培養液を遠心分離し、菌体と培養液上清液とに分離した。分離した菌体に次いでメタノール（１００ｍｌ）を加え、得られた混合物をよく撹拌して菌体からメタノール中にビスポライドＡ類を抽出した。このメタノール抽出を２回行い、得られたメタノール抽出液を合併し、さらに減圧下に５０ｍｌ容に濃縮した。こうして得た濃縮液（５０ｍｌ）を酢酸エチル（１５０ｍｌ）で抽出し、得られた酢酸エチル抽出液を、無水硫酸ナトリウムにより乾燥した後、減圧下で濃縮乾固した。
上記のようにして得た固体残渣は、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３を含む粗製混合物より成るものである。得られた固体残渣をクロマトグラフィー処理した。すなわち、該固体残渣（約４５０ｍｇ）を酢酸エチルの２ｍｌに溶かした溶液を、シリカゲル（Ａｒｔ．１．０７７３４．１０００、米国、メルク社製）のカラムにかけ、吸着させ、カラムをクロロホルム２８０ｍｌで洗浄した。その後にカラムを、次々にクロロホルム−メタノール（容量比１００：１）、クロロホルム−メタノール（容量比５０：１）、クロロホルム−メタノール（容量比２５：１）、クロロホルム−メタノール（容量比２５：２）、クロロホルム−メタノール（容量比２５：４）およびクロロホルム−メタノール（容量比２５：８）の各２４ｍｌづつの展開溶媒により順次溶出した。得られた溶出液は、５ｍｌづつの分画で集めた。前記シリカゲルカラムをクロロホルム−メタノール（容量比２５：４）の展開溶媒で溶出する時とクロロホルム−メタノール（容量比２５：８）の展開溶媒で溶出する時とに、その溶出によって、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３を含む抗菌活性のある分画を収得できた。
それら抗菌活性のある分画を合併し、合併した溶液を減圧下に濃縮すると、ビスポライドＡ類の粗製物より成る淡茶色シロップ状残渣の９２．４ｍｇを得た。このシロップ状残渣を次のようにしてクロマトグラフィー法により精製した。すなわち、Ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ  Ｃ１８  Ｐｒｅｐ．（Ｖａｒｉａｎ  Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ社の市販品、米国カリフォルニア州）の３ミクロン粒子より成るカラム固定相をもち且つ商品名”Ｖａｒｉａｎ  Ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ”で市販されるカラム（直径２１．４ｍｍ×高さ１００ｍｍ）を用いる分取用液体クロマトグラフィー法で該シロップ状残渣を精製した。このクロマトグラフィー法では、７０：３０から８０：２０（容量比）への濃度勾配をもつクロロホルム−水の各種混液より成る移動相（０．２ｍｌ）を用い、溶出流速を５ｍｌ／分であるとした。
ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３はそれぞれ２５分、４８分および８１分の各溶出時間で溶出された。ビスポライドＡ１を含む活性溶出液と、ビスポライドＡ２を含む活性溶出液と、ビスポライドＡ３を含む活性溶出液とを別々に集め、それぞれを減圧下に濃縮乾固した。これによって、ビスポライドＡ１の白色〜無色の粉末状純品の１２．２ｍｇと、ビスポライドＡ２の白色〜無色の粉末状純品の７．５ｍｇと、ビスポライドＡ３の白色〜無色の粉末状純品の１４．７ｍｇとが得られた。これらのビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３の各物質は、実験するとそれぞれが前記した物理化学的性質と生物学的性質を有することが確認された。
【実施例２】
【０００７】
（ａ）抗生物質、ビスポライドＡ類の製造とビスポライドＢ類の製造、およびその後のビスポライドＡ類とビスポライドＢ類の採取
寒天斜面培地に培養したミクロビスポラ  ｓｐ．Ａ３４０３０株（受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０５０５で寄託）の培養物を、培地に接種した。ここで用いた培地は、可溶性澱粉（米国、メルク社製品）２％、ブドウ糖１％、ＮＺ−アミン（日本、和光純薬社製品）０．５％、粉末状酵母エキス（ディフコ社製品）０．５％、塩化カルシウム０．０５％、総合ビタミンＢ粉末（日本、ファンケルフーズ社製品）０．００５％を含む液体培地（ｐＨ７．０に調整）の１００ｍｌづつをエレンマイヤーフラスコ（各々５００ｍｌ容）の各々に分注し、前記Ａ３４０３０株の接種に先立ち、常法により１２０℃で２０分間滅菌することにより調製されたものである。該菌株を接種した液体培地を、次に、２８℃で９日間に亘り、２２５ｒ．ｐ．ｍ．の回転数で回転振盪培養して種毋培養液を得た。
とうもろこし澱粉２％、大豆粉３％、炭酸カルシウム１％、硫酸マグネシウム０．２％、パームヤシ油粕０．１％を含む液体培地（ｐＨ７．０に調整）の合計４リットルを４０本のエレンマイヤーフラスコ（各々５００ｍｌ容）に各１００ｍｌづつ分注し、常法により１２０℃で２０分間滅菌して生産培地を得た。各フラスコ中の該生産培地へ上記の種毋培養液の１ｍｌづつを接種した。次いでＡ３４０３０株の培養は、２８℃の温度で１２日間、２２５ｒ．ｐ．ｍ．の回転数で回転振盪培養を行う条件で実施した。得られた培養液を遠心分離し、菌体と培養液上清液とに分離した。分離した菌体に次いでメタノール（１００ｍｌ）を加え、得られた混合物をよく撹拌して菌体からメタノール中にビスポライドＡ類とビスポライドＢ類とを抽出した。このメタノール抽出を２回行い、得られたメタノール抽出液を合併し、さらに減圧下に５０ｍｌ容に濃縮した。こうして得た濃縮液（５０ｍｌ）を酢酸エチル（１５０ｍｌ）で抽出し、得られた酢酸エチル抽出液を、無水硫酸ナトリウムにより乾燥した後、減圧下で濃縮乾固した。
上記のようにして得た固体残渣は、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３ならびにビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３とを含む粗製混合物より成るものである。得られた固体残渣をクロマトグラフィー処理した。すなわち、該固体残渣（約４５０ｍｇ）を酢酸エチルの２０ｍｌに溶かした溶液を、シリカゲル（Ａｒｔ．１．０７７３４．１０００、米国、メルク社製）のカラムにかけ、吸着させ、カラムをクロロホルム２００ｍｌで洗浄後、次々にクロロホルム−メタノール（容量比５０：１）の２００ｍｌ、クロロホルム−メタノール（容量比２５：１）の１５６ｍｌおよび、クロロホルム−メタノール（容量比２５：４）の１２０ｍｌの各種展開溶媒より順次溶出した。得られた溶出液は、５ｍｌづつの分画で集めた。前記シリカゲルカラムをクロロホルム−メタノール（容量比２５：４）の展開溶媒で溶出する時に、その溶出によって、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３ならびにビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３を含む抗菌活性のある分画を収得できた。
それら抗菌活性のある分画を合併し、合併した溶液を減圧下に濃縮すると、ビスポライドＡ類とビスポライドＢ類との粗製混合物より成る淡茶色シロップ状残渣の２４３ｍｇを得た。
（ｂ）抗生物質、ビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３の各々の単離と、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３の各々の単離
上記の（ａ）項で得られたシロップ状残渣を次の様にしてクロマトグラフィー法により精製した。すなわち、商品名”Ａｇｉｌｅｎｔ，ＺＯＲＢＡＸ  ＸＤＢ−Ｃ１８  Ｃ１８  Ｐｒｅｐ，ＰｒｅｐＨＴ，５μｍ”で市販されるクロマトグラフィーカラム（直径２１．２ｍｍ×高さ１５０ｍｍ）を用いる分取用液体クロマトグラフィー法で該シロップ状残渣を精製した。このクロマトグラフィー法では、７０：３０から８０：２０（容量比）への濃度勾配をもつクロロホルム−水の各種混液より成る移動相を用い、溶出流速を５ｍｌ／分であるとした。
ビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３は別々に溶出され、またビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３も別々に溶出された。ビスポライドＢ１を含む活性溶出液は４．８分の溶出時間で、ビスポライドＢ２ａを含む活性溶出液は９．７分の溶出時間で、ビスポライドＢ２ｂを含む活性溶出液は１１．２分の溶出時間で、ビスポライドＢ３を含む活性溶出液は２３．６分の溶出時間で、それぞれ溶出された。これら活性溶出液の各々をそれぞれ減圧下に濃縮乾固した。こうして、ビスポライドＢ１の白色〜無色の粉末状純品（ｍｐ．１１９．９−１２１．２℃）の１５．６ｍｇと、ビスポライドＢ２ａの白色〜無色の粉末状純品（ｍｐ．１５１．５−１５２．５℃）の１９．８ｍｇと、ビスポライドＢ２ｂの白色〜無色の粉末状純品（ｍｐ．１５６．２−１６０．０℃）の１０．８ｍｇと、ビスポライドＢ３の白色〜無色の粉末状純品（ｍｐ．１３１．５−１３４．０℃）の２０．６ｍｇとが得られた。これらビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３の各物質は、実験すると、それぞれが前記した物理化学的性質と生物学的性質を有することが確認された。
上記したクロマトグラフィー工程では、ビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３はそれぞれ６．９分、１５．５分および３２．７分の各溶出時間で溶出された。ビスポライドＡ１を含む活性溶出液と、ビスポライドＡ２を含む活性溶出液と、ビスポライドＡ３を含む活性溶出液とを別々にあつめ、それぞれを減圧下に濃縮乾固した。これによって、ビスポライドＡ１の白色〜無色の粉末状純品の２８．８ｍｇと、ビスポライドＡ２の白色〜無色の粉末状純品の４５．８ｍｇと、ビスポライドＡ３の白色〜無色の粉末状純品の５０．０ｍｇとが得られた。
【実施例３】
【０００８】
本例では、本発明のビスポライド類を有効成分として含むエマルジョン型の注射剤の調合を説明する。
（ａ）腹腔内注射できるエマルジョン型液剤の調製
ビスポライドＡ１の結晶性粉末の８００ｍｇを第３級ブタノールの１０ｍｌに溶解して得られたビスポライドＡ１溶液を、無菌のバイエル瓶１０本に１ｍｌづつ分注し、無菌条件下で減圧下に濃縮乾固し、その後に、バイエル瓶の開口部を密封した。これにより、ビスポライドＡ１の微粉末の８０ｍｇを各々、収容する密封された無菌のバイエル瓶１０本を準備した。
他方、１３％含水エタノール（水の１３容量部と無水エタノールの８７容量部との混液）の６ｍｌを各々、収容する密封された無菌のバイエル瓶の１０本を準備した。また、非イオン型界面活性剤の形の水溶性乳化剤または可溶化剤として知られるポリソルベート８０（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ８０）〔この物質は、無水ソルビトールの水酸基の一部を、オレイン酸でエステル化して得られるエステルを、ポリオキシエチレン（２０）とエーテル化反応させることにより生成された液状ポリオキシエチレンエーテル化合物であり、市販品である。日本薬局方、参照〕の１０ｍｇを各々、収容する密封された無菌のバイエル瓶１０本を準備した。
上記のように準備したビスポライドＡ１微粉末を収容するバイエル瓶１本からビスポライドＡ１の８０ｍｇを取り出し、また１６％含水エタノールを収容するバイエル瓶１本から１６％含水エタノールの６ｍｌを取出し、またポリソルベート８０を収容するバイエル瓶１本からポリソルベート８０の１０ｍｌを取出した。そして、取出されたビスポライドＡ１微粉末と、取出された１６％含水エタノールと、取出されたポリソルベート８０とを無菌条件下で撹拌しながら混和した。これによって、ビスポライドＡ１を含む無色のエマルジョン液が調製できた。このエマルジョン液は１回分の投与単位体として、腹腔内に投与できる注射剤として適した。
（ｂ）静脈内投与用の注射剤の調製
前項（ａ）で調製されたビスポライドＡ１含有の無色エマルジョン液の約６ｍｌを、無菌条件下で生理食塩水の５００ｍｌと撹拌しながら混合した。これによって、ビスポライドＡ１を含む水性懸濁液を調製できた。このように調製された水性懸濁液は点滴静脈内投与用の注射剤として適した。
また、上記したと同じ要領でビスポライドＡ２、Ａ３、Ｂ１、Ｂ２ａ、Ｂ２ｂまたはＢ３を注射剤の形に調合することができた。
【産業上の利用可能性】
【０００９】
以上に説明したとおり、本発明により提供された新規な抗生物質として一般式（Ｉ）で表されるビスポライドＡ１、ビスポライドＡ２およびビスポライドＡ３すなわちビスポライドＡ類ならびに一般式（ＩＩ）で表されるビスポライドＢ１、ビスポライドＢ２ａ、ビスポライドＢ２ｂおよびビスポライドＢ３すなわちビスポライドＢ類は、総括的には前記の一般式（ＩＩＩ）で表しうる抗生物質である。本発明により得られたビスポライドＡ類も、ビスポライドＢ類も、それぞれに、各種の細菌、特にグラム陽性菌およびそれらの薬剤耐性菌株に対して優れた抗菌活性を有する。従って、本発明のビスポライドＡ類と、ビスポライドＢ類はヒトあるいは動物のグラム陽性菌の感染症を治療するのに有効であって有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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