(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
組織試料の中にコンジュゲート分子を電気泳動的に導入するための装置であって、
組織試料が付着した透明な電導性表面を有する顕微鏡スライド、
顕微鏡スライドを保持し、透明な電導性表面を電気的につなぐ導電性のクランプ固定具、
透明な電導性表面と近接して配置された曲がった電極、および
該クランプ固定具と曲がった電極の間の電位源
を含んでなる、上記装置。
【請求項２】
請求項１記載の装置であって、該曲がった電極が非電導性ブロックの曲がった下部表面に取り付けられており、該非電導性ブロックが透明な電導性表面と一定間隔を保った関係にある曲がった電極を保持する２つリムをさらに備えている、上記装置。
【請求項３】
請求項２記載の装置であって、該非電導性ブロックが可動型であり、該非電導性の基板が該透明な電導性表面を渡ってリム上を滑る、上記装置。
【請求項４】
請求項３記載の装置であって、該可動型ブロックが、リム上の透明な電導性表面を渡って非電導性ブロックを移動させるエアシリンダーに付着している、上記装置。
【請求項５】
請求項１記載の装置であって、該透明な電導性表面がインジュウムすず酸化物または金を含む、上記装置。
【請求項６】
請求項１記載の装置であって、該電位源が定電流回路を備えている、上記装置。
【請求項７】
請求項３記載の装置であって、電極をリンスするためのリンスブロックをさらに備えている、上記装置。
【請求項８】
請求項３記載の装置であって、該可動型ブロックが顕微鏡のスライドに沿って軸方向に移動するように構成されている、上記装置。
【請求項９】
組織試料の中にコンジュゲート分子を電気泳動的に導入するための装置であって、
該組織試料が付着する顕微鏡スライド、
可動型の電気的に絶縁されたブロックであって、その上に位置決めされた反対極性の少なくとも２種の電極を有し、かつ、該ブロック上の可動型であることにより前記組織試料の中に電場の方向を決める可動型２つのリムにより顕微鏡スライドと一定間隔を保ったブロック、および
少なくとも２種の電極間の電位源
を含んでなる、上記装置。
【請求項１０】
請求項９記載の装置であって、該可動型ブロックが曲がった下部表面を有する、上記装置。
【請求項１１】
請求項９記載の装置であって、該可動型ブロックが該ブロックを移動させるエアシリンダーに付着している、上記装置。
【請求項１２】
請求項９記載の装置であって、電位源が定電流回路を備えている、上記装置。
【請求項１３】
請求項９記載の装置であって、電極をリンスするためのリンスブロックをさらに備えている、上記装置。
【請求項１４】
請求項９記載の装置であって、該可動型ブロックが顕微鏡のスライドに沿って軸方向に移動するように構成されている、上記装置。
【請求項１５】
請求項９記載の装置であって、少なくとも２つの電極が該ブロックの対向端に配置されている、上記装置。
【請求項１６】
請求項９記載の装置であって、少なくとも２つの電極が電導性ロッドを備えている、上記装置。
【請求項１７】
請求項１４記載の装置であって、少なくとも２つの電極が、電導性ロッドを備えており、該ロッドの軸が顕微鏡スライドの狭い幅の間を通る可動型ブロック上に据え付けられている、上記装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概括的には自動化された組織染色装置の分野に関し、特に電気泳動を用いて組織の中に染色物を導入する新規方法である。
【背景技術】
【０００２】
組織染色は最近の標準による１００年にわたってさかのぼる古い技術である。最近、組織切片に異なるタイプの化学的および生化学的染色を施す手順を自動化する努力が行われている。この目的で発明された装置は、Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓの３２０、ＥＳ（登録商標）、ＮｅｘＥＳ（登録商標）、ＢＥＮＣＨＭＡＲＫ（登録商標）、およびＢＥＮＣＨＭＡＲＫ（登録商標）ＸＴなどの一連の二重回転台をベースとする装置を含む。これらのシステムを記述する特許は、引用により全体で本明細書に組み込まれる、（特許文献１）、（特許文献２）、（特許文献３）、および（特許文献４）を含む。別なタイプの自動化された染色装置は、引用により全体で本明細書に組み込まれている、（特許文献５）および（特許文献６）に記述されている一連の染色装置のＴｅｃｈＭａｔｅ（登録商標）系列である。
【０００３】
ガラススライド上のミクロトームで切片化された組織の免疫組織化学的およびインサイチュー（ｉｎ  ｓｉｔｕｅ）ハイブリダイゼーション染色の速度は、対象の生体分子が組織切片と接触状態に置かれた水溶液から組織の中に拡散することができる速度により制限される。原型のままの組織は、個別の細胞とオルガネラを取り囲む脂質二重層膜および固定法により生じる架橋の効果などの拡散に対する多数のバリアを提供する。対象のタンパク質抗体またはＤＮＡプローブ分子は比較的大きく、キロダルトンから数百キロダルトンまでの大きさの範囲にあり、固体組織の中に緩慢に拡散し、充分に拡散するための通常の時間は数分から数時間の範囲にある。通常のインキュベーション時間は摂氏３７度で３０分である。
【０００４】
この拡散速度は濃度勾配により駆動され、試薬中のコンジュゲートの濃度を増加させることにより増大する。しかしながら、これは２つの不利な効果を有する。第１に、コンジュゲートはしばしば極めて高価であり、そのためにこの濃度を増加させることは無駄であり、経済的に実行できない。第２に、高濃度を使用する場合には、組織の中に導入される過剰量のコンジュゲートは組織中に捕捉され、洗い出すことができず、高レベルのバックグラウンド染色を生じる。このバックグラウンド染色は非特異的染色と呼ばれ、情報の意味ではただのノイズである。このノイズを低下させ、特異的染色の信号を増大させるためには、低濃度のコンジュゲートを使用し、長くインキュベーションすることによって、コンジュゲートが特異的部位のみを見出し、結合するようにする。
【０００５】
電気泳動は、電荷−質量比を基準として生体分子を分離するのに普通適用される電気化学的な分離技術である。一般に、半固体のゲル状スラブを生じるのに充分な量の水を添加することにより、ポリアクリルアミドなどの適当なポリマー材料からゲルスラブを作製する。これは、分離対象の試料を含有せしめ、そして種々の荷電分子を電動力により移動させるのに使用される電流を伝達せしめることの両方に使用されるマトリックスである。このゲルのｐＨを操作して、元来非荷電型の生体分子を荷電させ、それによって必要な正味電荷を与え、電場を印加したとき移動させることができる。このゲルに電場を印加する場合、荷電した分子はゲル中を反対極に向かって泳動する。すなわち、負に荷電した生体分子は正極に向かって動き、逆もまた同様に起こる。この方法は、複雑な混合物を分離するのに生物学研究分野で極めて普通に使用され、「ＰＡＧＥ」（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）と称される。関連技術は毛細管電気泳動（「ＣＥ」）であり、これは電解液により充填された細いガラス毛細管内腔中で行われる同一の基本的な電気化学的分離である。
【特許文献１】米国特許第５，５９５，７０７号
【特許文献２】米国特許第５，６５４，１９９号
【特許文献３】米国特許第６，０９３，５７４号
【特許文献４】米国特許第６，２９６，８０９号
【特許文献５】米国特許第５，３５５，４３９号
【特許文献６】米国特許第５，７３７，４９９号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
組織切片の中に生体分子を迅速に導入すること、および非特異的バックグラウンド染色の量を少なくすることへの必要性がなお存在している。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、組織染色の目的で生体分子コンジュゲートを組織の中に、それゆえその標的に向けて加速させる根本的に異なる方法を提供する。本発明は、組織染色に使用される先行技術の拡散法に比して一桁大きい改善をもたらす。本発明は、電解質と電解質中に懸濁した対象のコンジュゲート分子の存在下で組織試料に電場を印加することによる組織染色の方法を含んでなる。従来技術では、通常、３０−１２０分であるのに反して、典型的な染色時間は数秒まで低減される。
【０００８】
本発明の目的は、水溶液から固体組織へのコンジュゲート分子の移動を加速することである。もう一つの目的は、特異的部位に結合しないコンジュゲートによるバックグラウンド染色を低減させることである。更なる目的は試薬中で必要とされるコンジュゲートの濃度を低減させることである。
＜好ましい形態の記述＞
本発明は、電解質と、電解質中に懸濁した対象のコンジュゲート分子の存在下で組織に電場を印加することを含んでなる組織の中にコンジュゲート分子を導入する方法に関する。コンジュゲート分子は、相補的結合部位の近傍に運ばれてきた場合にこの部位に結合する相補的結合部分を有するいかなる分子であってもよい。相補性決定領域を有する抗体と標的ＤＮＡへのマッチング配列を有するＤＮＡオリゴマーがコンジュゲート分子の２つの例である。対象のコンジュゲート分子は、適正なｐＨの電解質の水溶液に溶解した場合すべて荷電している。この正味電荷は電場による電解質溶液中でのこれらの移動を促進する。組織は、サイトスピン（ｃｙｔｏｓｐｉｎ）またはＴｈｉｎ  Ｐｒｅｐｓなどの慣用の方法により作製された組織切片と無傷の細胞の両方を含む。
【０００９】
電気泳動として一般に知られている技術が異なる大きさと荷電の分子を分離するのに研究と工業の両方において永年使用されてきた。電気泳動の使用に対する説明は、なかんずく米国特許第２，９９２，９７９号；第３，３８４，５６４号；第３，４９４，８４６号；第３，６７７，９３０号；第３，８４４，９２６号；第５，３８２，５２２号および第５，５３６，３８２号明細書に記されている。この従来技術は、対象の分子を含有する溶液を一方の末端に置いて、アガロースなどの液体あるいはゲル状の物質に電場を印加することを記述している。対象の分子は正味電荷と分子量に依存する速度で物質中を泳動する。この従来技術の一部は、電気泳動を使用して、医療用途にヒト生体分子を分離することを開示している。米国特許第５，５３６，３８２号においては、毛細管電気泳動を用いてヒトの生物学的流体の構成成分を分析するための方法が提供されている。医療用試料を対象の被検体に特異的に結合する標識試薬と混合した。次に、毛細管電気泳動を使用して、非結合試薬から結合試薬を分割し、そして結合試薬の量を直接あるいは間接に測定することにより構成成分を定量する。米国特許第５，３８２，５２２号においては、血清または血漿試料を検定して、クレアチンキナーゼ−ＭＢ種とクレアチンキナーゼ−ＢＢ種からなる群から選択される２つの異なる被検体の濃度を定量した。しかしながら、この従来技術のいずれもヒト組織の中に分子を移動させるのに電場を使用していない。
【００１０】
本発明の最も概括的な説明は、それが電気泳動力を使用して、組織の中にコンジュゲート分子を導入するために、コンジュゲート分子と一部の対象の組織を含有する水溶液に電場を印加するいかなるの方法であってもよいということである。好ましい態様においては、この組織はなんらかの病気を持っていることが疑われ、そしてミクロトームにより薄い切片に切断されたヒト組織である。しかしながら、更に処理するために平らな表面に付着した無傷の細胞を含んでなる細胞調製物もこの一般的な方法により包含される。薄い切片は一般に２および３０ミクロンの間の厚さである。電場を薄い切断組織に印加するいくつかの異なる方法があり、これらのうちの３つを下記に述べる。
【００１１】
第１の好ましい方法は、多孔質膜上に薄い切断組織を載せ、両側に電導性の水性流体を施し、少なくとも片側の流体の中にコンジュゲートを含有する試薬を添加し、反対側に電極を置き、そして電極の間に電場を印加することである。直流が電場を発生する好ましい方式であるが、交流も使用し得る。図１はこの方法を用いる装置の断面図を示す。これは分子が組織の薄い切断片を通過するように電気泳動を使用する。
【００１２】
組織１１を多孔質膜３に取り付ける。この組織は身体のいかなる領域のものであることも可能であるが、扁桃（ｔｏｎｓｉｌ）を用いてこの試験を行った。膜はいかなる親水性の多孔質材料からも作製可能である。試みた一つの方法は「配管用テープ」（“ｐｌｕｍｂｅｒ’ｓ  ｔａｐｅ”と普通呼ばれるＰＴＦＥフィルムを使用することである。組織を膜に結合させる前にその表面にポリビニルアルコールを重合させることにより、このＰＴＦＥフィルムを親水性としなければならない。下部電極５は、金属、好ましくは３１６ＳＳの固体円板からできていて、下部環１中の５ミリメートル深さの底に入れられる。この凹部は膜３の下に盆部を形成する。電気的リード線（図示せず）を下部電極に取り付け、封止された穴（図示せず）を通して下部環から取り出し、そして電気泳動用電源（図示せず）の１つの脚に連結する。下部環の最上部にかぶせ、そして下側では外部のテーパー付きの直径にかぶせてこの膜を延展する。下部環１の上に中間の環８を押し付け、この２つのテーパー付きの直径表面の間に膜３を囲い込むことにより、この膜を保持する。上部環２を中間の環８上に押し付け、膜３の上にある５ミリメートル深さのもう一つの盆部を形成する。２つのフィッティング９と配管７の区分片によりこの上部の盆部を下部の盆部に水力学的に連結する。フィッティング９は熱可塑性樹脂でできている標準のバーブフィッティングであり、そして配管７は標準のタイゴン（Ｔｙｇｏｎ）である。上部電極６はステンレススチールのワイヤメッシュでできていて、試薬を上部の盆部の中に注ぎ入れ、膜３の上面と組織１１を見える状態に保つことができる。上部電極６を電気泳動用電源（図示せず）に電線４により連結する。タイゴン配管１０のもう１つの区分片を第３のバーブフィッティング９に連結し、流体を上部盆部の中に注ぎ入れるときに下部の盆部から空気を抜く。操作においては、上部の盆部をトリス−アセテートＥＤＴＡ緩衝液などの電導性試薬により１０％濃度で充填する。この試薬は下部盆部にも流入し、配管１０に至る通路から空気を置換する。この盆部を充填した後、コンジュゲートを上部の盆部の中に入れる。扁桃組織中の毛細管組織に付着する抗ＣＤ３４抗体を用いて試験を行った。トリス緩衝液から組織の最上部と膜に沈み込ませるように、この抗ＣＤ３４を最初にグリセロールと１：１で混合する。電極の１０ミリメートルの距離の間に１０ボルトの電位を印加し、１メートル当り１００ボルトの強度の電場を設ける。抗ＣＤ３４抗体は５ミクロン厚の組織を１０秒未満で移動する。この装置を解体し、そして組織の領域を膜から切り出す。次に、これを標準のクロマジン検出キットにより処理する。組織中の毛細管はバックグラウンドに対して浮き出す。
【００１３】
電気泳動時に膜を使用して、この組織を支持する場合には、この組織を含む膜をその支持構造体から取り外して、ガラススライドに貼り付け、そしてカバースリップを載せなければならない。好ましい態様においては、カバースリップを載せた後、この膜は透明でなければならない。カバースリップを載せた後にこの膜が透明であるためには、膜はカバースリップ媒体の屈折率と極めて近い屈折率を有しなければならない。Ｓｕｐｅｒ−Ｍｏｕｎｔ（登録商標）などの標準のキシレン可溶のカバースリップ媒体は、ヒト組織中の典型的なタンパク質の屈折率に極めて近い１．５４の屈折率を有する。これに近い屈折率を有する膜はＰＥＴとナイロン６である。
【００１４】
第２の好ましい方法は、この水溶液と対象の薄い切断組織に電場を印加し、このガラススライドを電導性層により被覆し、この電導性層の最上部に直接にこの組織を貼り付け、対象のコンジュゲート分子を含む適正なｐＨの電導性試薬をこの組織の最上部にかぶせるようにして添加し、この電導性試薬を第２の電極により被覆し、次にこのスライド上の電導性層とこの上部電導性電極の間に電位を印加することである。コンジュゲートを組織の中に導入し、そしてコンジュゲートがこれらの特異的部位を見出すのに充分な時間（たかだか数秒）が経過した後、電位を逆転して、いかなる非結合コンジュゲートも追い出し、非特異的結合のバックグラウンドノイズを低減させることができる。
【００１５】
染色の完了後、病理学者が組織を下から照明しながら顕微鏡により組織を見ることができるように、この電導性層は透明である必要がある。電導性で透明なフィルムの２つの可能な候補は金とＩＴＯ（インジウムすず酸化物）である。両方とも真空チャンバー中で極めて薄い層として塗布される。透明で、電導性かつ耐酸化性であるいかなる材料も使用することができる。
【００１６】
図２は、コンジュゲート分子を含有する試薬の毛細管ギャップの間に、そしてＩＴＯ被覆したガラススライド２２に付着した組織の薄い切断層に電場を印加するための装置を示す。すべての部品はＵｌｔｅｍ（登録商標）１０００から作製した非電導性の底板２１に取り付けられている。顕微鏡スライド２２は蝶ねじ２４により及ぼされる力により固定クランプ固定具２３中に保持される。クランプ固定具２３はすべてステンレススチールなどの電導性材料からできている。組織２５はスライド２２のＩＴＯ表面の最上部に付着している。上部電極２６はステンレススチールでできている滑りクランプ固定具２７にクランプされ、裏打ち板２８の溝中でスライドする。スライド２２と上部電極２６の間の毛細管ギャップのサイズは、滑りクランプ２７の中にねじ切りされ、底板２１の上面に押し付けられているねじ２９により調整される。リ−ド線３０、３１は電気泳動用電源（図示せず）に接続されている。
【００１７】
ＩＴＯ被覆した表面の抵抗は１平方インチ当り約１５オームである。このスライドは２５ｍｍ幅であり、５０ｍｍの長さを有し、固定クランプ２から延びている。このことは５０ｍｍの延びたスライドの長さに沿ったフィルムの抵抗が３０オームであることを意味する。この毛細管ギャップの抵抗はずっと低く、試薬の２００μｍ厚のギャップに対して約０．３３オームである。このギャップの間の電場が一定であるためには、この上部電極の線形抵抗はＩＴＯ被膜の抵抗に釣り合わなければならない。もう一つのＩＴＯ被覆したスライドを最上部電極として使用することにより、あるいはスライド被膜と同一の抵抗を有する白金または金を被覆したスライドを使用することにより、このことが行われ得る。印加する必要のある電位は、この被膜と流体の抵抗、重なり合いの長さ、および毛細管ギャップの抵抗に依存する。電源に電線を接続することにより、毛細管ギャップに電位が印加される。２００μｍギャップにわたって１ミリメートル当り１ボルトを均一の電場（０．２０ボルト）を生じさせるには、２４ボルトの電位が電極の間に必要とされる。
【００１８】
試薬と組織に必要とされる電位を印加する第３の好ましい方法は、図３および４に示すような曲がった可動型上部電極をＩＴＯ被覆した顕微鏡スライド２２と一緒に使用することである。スライド２２は前の態様におけるように固定クランプ２３にクランプされる。しかしながら、固定された上部電極２６の代わりに、それをスライドに沿って長さ方向に動かすエアシリンダー４５に移動する上部電極４０を取り付ける。移動する上部電極４０は２５ｍｍ幅であり、ステップ付きの曲がった下部表面を有する。可動型電極４０の外部リム４１は両端で１ミリメートル幅であり、２つのリム４１の間に存在する曲がった下部表面４２の２００μｍ下で半径方向に延びる（図４を参照のこと）。
【００１９】
立ち上がった（ｒａｉｓｅｄ）表面４２がスライドのほぼ２００μｍ上にある間に、２つのリム４１はこのスライドの表面上をスライドする。可動型電極４０はＵｌｔｅｍ（登録商標）１０００などの非電導体でできている。曲がった下部表面４２はリム４１の間に存在し、白金によりメッキされ、そしてリードワイヤ４３に電気的に接続され、次にはねじ４４によりＵｌｔｅｍ電極４０に固定される。組織２５はスライド２２のＩＴＯ表面に付着し、そして対象のコンジュゲートを含有する小容量の約１５μｌの試薬をピペット（図示せず）からスライド上にたらす。エアシリンダー４５は可動型電極４０をスライド上まで押し、ここで１５μｌの試薬と接触する。試薬は可動型電極４０の下部の白金メッキした表面４２まで引き付けられ、メニスカス４６を形成する。試薬の表面張力は、白金メッキした表面４２とスライド２２の最上部まで試薬を強く引き付け、エアシリンダー４５により電極４０をスライド２２に沿って軸方向に移動する間試薬を保持する。この試薬はこれらの間をスライドするにしたがって、スライドの上面と組織を濡らし、そして電位が電気泳動力をもたらし、組織の中にこの分子を導入する。電極が移動するにしたがって、試薬は剪断力により試薬中で強く混合される。この装置によれば、電位を反転して、特異的部位に結合していないコンジュゲートを追い出すことができる。
【００２０】
電極とクランプされたスライド端の間のスライド上のＩＴＯの抵抗は著しく変わるが、２つの電線に電力を供給する定電流回路により白金被覆した表面とスライドのＩＴＯ表面の間で一定電位が維持される。定電流回路はトランジスター回路技術者にはよく知られた装置である。
【００２１】
次の段階に対する試薬を適用する前に、いかなる段階においても使用された試薬を除去する必要がある。この態様においては、可動型電極４０をスライド２２から外して、リンスブロック４７の上にもってくることにより、このことが行われる。リンスブロック４７は上部表面に穴を有し、配管４８によりフィードされる。リンスブロック４７へのリンス流体は弁（図示せず）により制御される。電極４０はリンスブロック４７でリンスされ、次にリンス溶液によりより覆われている間にスライド２２に戻される。このスライド上でそれは更なる試薬を取り上げ、リンスブロック４７に再び戻される。一連のこれらの動きにより、スライド上の試薬は、次の試薬といかなる妨害を生じない程度に希薄となるまで連続的に希釈される。
【００２２】
組織に電位を印加する第４の好ましい方法（図５に図示）は、方法３に類似であるが、スライド上の電導性被膜を使用しない。絶縁された可動型ブロック上の電導性下部表面の代わりに、２つの電導性ロッド５１、５２を使用した。このロッドは、これらの軸がスライドの狭い幅の間を通る可動型ブロック５０の反対端に位置する。電圧はこの２つのロッドの間に印加され、一方のロッドを正電位リード５３に接続し、そして他方を負電位リード５４に接続する。電流がスライド５５上の試薬を通って一方のロッドから他方のロッドに流れるのにしたがって、この荷電した分子は組織の中に導入される。方法３におけるように、電流を印加する間ブロックをこのスライドの長さの上下に動かした。スライドのリンスは方法３について上述したのと同一の方法で行い得る。
【実施例１】
【００２３】
扁桃（ｔｏｎｓｉｌ）中の抗ＣＤ３４抗体を用いる電気泳動的組織染色
次の実験を行って、抗体を組織の中に電気泳動で導入することができるかどうかを決定した。組織を親水性ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）膜（ＴＥＦＬＯＮ（登録商標）、配管用テープ）に付着させて、ゲル中での組織の操作と位置付けが可能なようにし、次に以降の電気泳動のためにアガロースゲル中に埋め込んだ。
【００２４】
手順：５μｍ厚のヒト扁桃の４つの切片をＰＶＡ処理の親水性ＰＴＦＥ膜に載せ、４８時間風乾し、６０℃で一夜乾燥し、手により脱パラフィン化および再水和した（キシレン、次に１００％ＥｔＯＨ、９０％ＥｔＯＨ、８０％ＥｔＯＨ、７０％ＥｔＯＨ、および最終的には１００％Ｈ２Ｏ中に切片を順次漬ける標準工程）。最初にイソプロピルアルコール中で濡らし、次にリン酸緩衝液中の０．１％ポリビニルアルコールの溶液、ｐＨ２．２と５％グルタルアルデヒド中に数時間浸漬することにより、このＰＴＦＥ膜を親水性とし、そしてＤＩ水中でリンスした。しかしながら、抗体を通すいかなる親水性膜も機能する。
【００２５】
図６に関しては、１−１０と番号を付けた１０個のウエルを示す。組織２−４と示した３つの組織／膜切片を１％アガロース（１ＸＴＡ１３緩衝液、Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｔ９６５０中のＧｉｂｃｏＢＲＬ、カタログ番号１５５１０−０１９）に載せ、切り出した。ゲルを注ぎ込む前には組織１をアガロースに載せず、ウエル２および３に隣接して電気泳動装置（ＯｗｌモデルＢ１Ａ、フラットベッド）中で位置決めした。最初に、図６に示すように組織２−４を垂直に位置決めするよりもアガロースに埋め込んだ。この垂直の位置決めによって、組織切片はウエルからの抗体の直接経路中に配置され、抗体は電場の作用の下で、そして図６の左側の大きな矢印の方向に組織中を泳動しなければならない。この装置を１％アガロースにより充填し、固化させた。２５μｌの抗ＣＤ３４抗体（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）、カタログ番号７９０−２９２７）をグリセロール（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｇ６２７９）とブロモフェノールブルー（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｂ３２６９）により５０％に希釈し、ウエル２、３、５、６、８および９に添加した。この電気泳動装置を４５Ｖで９０分間運転した。追加の抗体が染色の増大を生じるかどうかを見るために、更なる２５μｌの抗ＣＤ３４をウエル２および９に添加し、そしてこれらの試験条件下でこの抗体が適切な方向に泳動していることを確かめるために、２５μｌのＦＩＴＣ標識のヒトＩｇＧをウエル１および１０に添加した。この装置を４５Ｖで更に１２０分間運転した。このアガロースを剥離除去することにより、この膜上の組織をアガロースから除去し、そしてストレプタビジン／ＤＡＢ検出キット（Ｖｅｎｔａｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）、カタログ番号７６０−１２４）を手により施した。
【００２６】
結果：ウエル２−３、５−６、および８−９からの抗体に対応する染色された組織切片の顕微鏡写真を図７−１０に示す。図７はウエル２−３の前にあった組織切片１を示す。図８はウエル５−６の直前にあった組織切片２を示す。図９は組織切片２の前にあった組織切片３を示す。図１０はウエル８−９の前にあった組織切片４を示す。組織切片１（図７）および４（図１０）は同等に、そして切片２および３よりも濃く染色された。切片３は切片２よりも著しく薄く染色された。
結論：
１．電気泳動は、扁桃組織の中に、そしてＰＴＦＥ膜上に載せた扁桃組織の中に抗ＣＤ３４抗体を導入する能力がある。
２．この抗体はこれらの条件下でその抗原に結合する。
３．組織を通り抜けた抗体が多いほど、染色は濃い。
４．バックグラウンド着色は許容できる。
【００２７】
若干の本発明の好ましい態様を本明細書において述べたが、本発明の精神と範囲から逸脱することなく述べられた態様の変更および改変が行われ得るということは本発明が関係する当業者には明白であろう。例えば、電気泳動には直流が通常使用されるが、交流も使用可能であると考えられる。したがって、本発明は添付の特許請求の範囲と適用可能な法の原則により要求される程度でのみ限定されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１はこの方法を用いる装置の断面図を示す。これは分子が組織の薄い切断片を通過するように電気泳動を使用する。
【図２】図２は毛細管ギャップ付きのＩＴＯ被覆したスライドを示す。
【図３】図３はこのスライドにかぶさって示される移動上部電極付きのＩＴＯ被覆したスライドを示す。
【図４】図４は可動型上部電極の断面である。
【図５】図５は組み込まれた電導性ロッドを有する態様４の可動型の二重電極のもう一つの断面である。
【図６】図６はアガロースゲル中のウエルと組織位置の概略図である。
【図７】図７は組織切片１の顕微鏡写真である。
【図８】図８は組織切片２の顕微鏡写真である。
【図９】図９は組織切片３の顕微鏡写真である。
【図１０】図１０は組織切片４の顕微鏡写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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