(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニガリを有効成分とする、健康な肌に常在する表皮ブドウ球菌と皮膚疾患を持つ皮膚上に存在する有害な黄色ブドウ球菌を区別し、常在する有益な表皮ブドウ球菌の生育には影響を与えず、有害な黄色ブドウ球菌のみに抗菌作用を有することによる皮膚常在菌の生態系バランス調整剤。
【請求項２】
ローズマリー抽出物，カンゾウ抽出物から選択される１種又は２種の植物抽出物を併用した、請求項１に記載の皮膚常在菌の生態系バランス調整剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、皮膚常在菌の生態系バランス調整剤、すなわち、有益菌である表皮ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）に対しては殺菌作用を示さず、有害菌である黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）に対しては殺菌若しくは増殖抑制作用を有する、皮膚常在菌の生態系バランス調整剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
健全な皮膚が有益な常在菌からなる生態系により保護されている。それら有益菌による作用は以下の通りである。（１）保湿成分を守り、乾燥肌を防ぐ。（２）紫外線吸収作用を有し、有害な紫外線から皮膚を守る。（３）活性酸素を分解し、老化を防ぐ。（４）有害菌の侵入を防ぎ、炎症を防ぐ。（５）線維芽細胞増殖作用を示し、シワを防ぐ。（６）表皮のｐＨを調整し、抵抗力を高める。
【０００３】
しかしながら、何らかの原因で有益な菌が減少，死滅してしまったり、バランスが崩れ有害菌の割合が多くなると、上記作用が発揮されなくなり、皮膚疾患を惹き起こすこともあった。そのためかかる有害菌を除去する目的で、抗菌剤や殺菌剤が皮膚に適用されてきた。
【０００４】
特に黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）は、嘔吐を伴う食中毒や各種膿瘍の原因となるグラム陽性菌である。これにより産生されるエンテロトキシン（腸管毒）は食中毒の原因となる他、エンテロトキシンＢや毒性ショック症候群毒素（toxic shock syndrome toxin-1，ＴＳＳＴ-1）のようにスーパー抗原として、アトピー性皮膚炎の増悪などアレルギー性疾患に関与するものが知られている。エンテロトキシンＢはスーパー抗原として、抗原提示細胞によるプロセッシングを受けることなく、抗原提示細胞上の主要組織適合遺伝子複合体のクラスII分子と、Ｔ細胞受容体のＶβ領域とに直接結合する特性を有し、そのスーパー抗原と結合する特定のＶβを表現するＴ細胞群を一気に活性化して大量のサイトカインの産生を促し、生体の免疫反応に顕著な影響を与えるものと考えられている。黄色ブドウ球菌のスーパー抗原であるエンテロトキシンＢやＴＳＳＴ-1は、皮膚のランゲルハンス細胞やマクロファージを刺激して、インターロイキン-1，腫瘍壊死因子，インターロイキン-12を産生させ、インターロイキン-12は活性化されたＴ細胞に皮膚ホーミングレセプター（homing receptor）の皮膚リンパ球結合抗原（ＣＬＡ）の発現を誘導する。
【０００５】
上記のように、黄色ブドウ球菌により産生されたエンテロトキシンが食中毒の他にアレルギー性疾患にも関与することが明らかになるにつれ、黄色ブドウ球菌に対し抗菌もしくは殺菌作用を有する薬剤のスクリーニングが活発に行われてきた。かかる薬剤として、最近ではマンネンタケ子実体傘部抽出物（特許文献１参照）、クローブ，オールスパイス，オレガノ等の抗菌性香辛料（特許文献２参照）、クジン抽出物（特許文献３参照）、ジャックフルーツ抽出物（特許文献４参照）、アルトカルピン及びソフォラフラバノンＧ（特許文献５参照）、キサントン誘導体（特許文献６参照）、カバノタケ抽出物（特許文献７参照）、キトサン誘導体（特許文献８参照）、光触媒活性を有する微粒子酸化チタン（特許文献９参照）、ステビア抽出物（特許文献１０参照）、アルケニルイソチオシアナート化合物（特許文献１１参照）、ホップ，レンギョウ，シナレンギョウ，チョウセンレンギョウ，トウキンセンカ，キンセンカ，スイカズラ，ウグイスカグラ，サルビア及びその変種，クチナシ及びその同属植物，クマザサ，イラクサ，ミヤマイラクサ，ヒキオコシ，クロバナヒキオコシより選択した１種又は２種以上の植物の抽出物（特許文献１２参照）などが開示されている。
【０００６】
また、黄色ブドウ球菌の除去を目的とするN-アシルグルタミン酸塩を含有する洗浄剤（特許文献１３参照）や、鉄結合型ラクトフェリンを含有する細菌性エンテロトキシン中和剤（特許文献１４参照）も知られている。
【０００７】
しかしながら上記した技術は、ほとんどが黄色ブドウ球菌の静菌又は殺菌もしくは除去を図るもので、表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis），バクテイオイズ属（Bacteroides属），エウバクテリウム属（Eubacterium属），連鎖状球菌（Streptococcus）属，ビフィズス属（Bifidobacterium属）といった皮膚や腸内における常在菌にも静菌，殺菌作用を及ぼしたり、これらを除去してしまうため、常在菌叢の変化をきたして、皮膚や腸のホメオスタシスに影響を及ぼし、日和見感染を招く危険性の生じることがあった。また、ラクトフェリンを主成分とするエンテロトキシン中和剤はタンパク質製剤であるため、安定な製剤を得る上で制約も多く、感作性の発現も危惧される。
【０００８】
そこで、健康な皮膚の常在細菌叢の代表菌である、表皮ブドウ球菌の生育よりも、病害菌として注目されている黄色ブドウ球菌の生育を選択的に阻害する物質のスクリーニングも行われており、例えば皮膚由来バクテリア、プロピオニバクテリウム・グラニュローサム菌から得られた抗菌性組成物（特許文献１５参照）、ボタンピ、カンゾウ、ウーロン茶、ローズマリー、クララ、オオレン、オオバク、タイム、アロエ、ナンキンハゼ、マングーシ、冬虫夏草、センソウ、ミツガシワ、リョウブ、エンレイソウ、トウガラシから選ばれる植物抽出エキスの１種又は２種以上を配合することを特徴とする選択的抗菌組成物（特許文献１６参照）などが開示されている。しかしながら、これらは天然物由来の成分であり、品質のばらつきが大きく商品化が困難であったり、有効量を得るには多量の適用が必要であるといった問題があった。
【０００９】
またニガリは、海水から食塩を製造するにあたり食塩を晶出させた後の液若しくはその乾燥物である。ニガリの組成は、製塩法（イオン交換膜法、天日法、塩田法若しくは蒸発法）の相違、食塩晶出時の温度、食塩晶出時の食塩濃度及び圧力その他の条件によって変わってくる。表１に製塩法が相違するニガリの組成の一例を示す（非特許文献１参照）。なお、表１の数値の単位はｇ／１００ｇである。また、イオン交換膜法によるニガリについてみれば、イオン交換膜の特性等によっても変わってくる。
【００１０】
【表１】
0004608198.tif 000002
【００１１】
なお、ニガリを皮膚外用剤などに配合する試みは古くからなされており、最近では、ニガリを有効成分として含有する養毛剤（特許文献１７参照）、マグネシウムイオンとカルシウムイオンを特定の比率で含有する化粧料の皮膚の保護能，バリヤ機能回復効果（特許文献１８参照）といった特定の効果に関する発明や、尿素，グリセリン，ミョウバンと併用した皮膚用保湿，保護剤（特許文献１９参照）、魚皮エラスチンと併用した保湿及び皮膚保護効果に優れた皮膚外用剤（特許文献２０参照）、フィトンチッド，キトサンと併用した皮膚状態改善作用を有する組成物（特許文献２１参照）等が開示されている。
【００１２】
【特許文献１】特開平６−１１６１６２号公報
【特許文献２】特開平７−２６７８７３号公報
【特許文献３】特開平８−７３３６４号公報
【特許文献４】特開平８−７３３６８号公報
【特許文献５】特開平８−７３３７２号公報
【特許文献６】特開平９−１１０６８８号公報
【特許文献７】特開平１０−１２０５８９号公報
【特許文献８】特開平１０−１５８３０５号公報
【特許文献９】特開平１１−５７２９号公報
【特許文献１０】特開平１１−４３４４３号公報
【特許文献１１】特開平１１−１３７９４９号公報
【特許文献１２】特開２００１−２２６２８０
【特許文献１３】特開平１１−８０７８１号公報
【特許文献１４】特開平１１−２７９０７６号公報
【特許文献１５】特開平９−２０６３８号公報
【特許文献１６】特開２００１−２２６２１３号公報
【特許文献１７】特開平１１−１４１４号公報
【特許文献１８】特開２００２−４７１１９号公報
【特許文献１９】特開２０００−１０９４２１号公報
【特許文献２０】特開２００１−３９８２６号公報
【特許文献２１】特開２００１−１３１０１８号公報
【非特許文献１】「無機工業概論」（株）培風館、１９９５発行、ｐ３８〜３９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は，健康な肌に常在する表皮ブドウ球菌と皮膚疾患を持つ皮膚常に存在する有害な黄色ブドウ球菌を区別し、常在する有益な表皮ブドウ球菌の生育には影響を与えず、有害な黄色ブドウ球菌のみに抗菌作用を有することによって，アトピー性皮膚炎等のひづ疾患の治療及び予防に充分な効果を発揮する皮膚常在菌の生態系バランス調整剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明で挙げられる有害菌の黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）と、有益菌の表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis）は、分類学上かなり類似した菌であり、一般的にこの両者を区別して殺菌又は発育抑制することは、極めて難しい。しかしながら、本発明者は、鋭意検討の結果、２０００種以上の外用剤有効成分からニガリに、有害菌の黄色ブドウ球菌の生育だけを抑制して、有益な表皮ブドウ球菌の生育には影響を与えないことを見いだし、本発明を完成するに至った。
【００１５】
すなわち、本発明における皮膚常在菌の生態系バランス調整剤は、ニガリを有効成分として配合することを特徴とする。また、本発明の皮膚常在菌の生態系バランス調整剤においてはさらに、ローズマリー抽出物，カンゾウ抽出物から選択される１種又は２種の植物抽出物を併用することにより、その効果が相乗的に向上する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の皮膚常在菌の生態系バランス調整剤は、健康な肌に常在する表皮ブドウ球菌と皮膚疾患を有する肌に存在する黄色ブドウ球菌を区別し、有益な表皮ブドウ球菌の生育には影響を与えず、有害な黄色ブドウ球菌にのみ抗菌効果を有する。また本発明の皮膚常在菌の生態系バランス調整剤は、上記選択的な抗菌効果をもつもので、アトピー性皮膚炎等の皮膚疾患の治療及び予防に充分な効果を発揮することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明において用いるニガリは、海水から食塩を製造するにあたり食塩を晶出させた後の液若しくはその乾燥物、若しくは人為的にミネラル分を混合したものを用いる。ニガリの組成は、産地、製塩法（イオン交換膜法、天日法、塩田法若しくは蒸発法）の相違、食塩晶出時の温度、食塩晶出時の食塩濃度及び圧力その他の条件によって変わってくるが、トカラ列島周辺海域、若しくは南大東島周辺海域で採取した海水を原料として調製したニガリは、海水中に含まれる有機リン酸化合物等の汚染物質の混入が無く、高い効果が得られる。
【００１８】
本発明において、ニガリと併用して用いるローズマリー抽出物及びカンゾウ抽出物について述べる。
【００１９】
ローズマリー（Rosmarinus officinalis L.）はシソ科（Labiatae）に属する常緑低木で、葉，枝，樹皮，花等の各部位及び全木を用いることができるが、葉を用いることが好ましい。カンゾウ（Glycyrrhiza uralensis Fisher，Glycyrrhiza glabra L.，Glycyrrhiza echinata L.，Glycyrrhiza glandulifera Reg. et Herd.，Glycyrrhiza glabra var. typica Regel et Herder，Glycyrrhiza glabra var. violacea Boiss.，Glycyrrhiza glabra var. pallida Boiss）は、マメ科（Leguminosae）に属する多年草で、生薬「カンゾウ」（Glycyrrhizae Radix）の基原植物である。抽出には、葉，茎，花，根等の各部位及び全草を用いることができるが、根を用いることが好ましい。
【００２０】
本発明において、ローズマリー抽出物又はカンゾウ抽出物を得るには，各植物を生のまま抽出に供してもよいが、抽出効率を考えると、細切，乾燥，粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶媒に浸漬して行う。抽出効率を上げるため撹拌を行ったり、抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、４時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００２１】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール，エタノール，プロパノール，イソプロパノール等の低級アルコール、1,3-ブチレングリコール，プロピレングリコール，ジプロピレングリコール，グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル，プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸エチル，酢酸ブチル等のエステル類、アセトン，エチルメチルケトン等のケトン類などの極性有機溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水，リン酸緩衝液，リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。
【００２２】
本発明において、ローズマリー又はカンゾウの上記溶媒による抽出物は、そのままでも本発明に係る皮膚外用剤に含有させることができるが、濃縮，乾固したものを水や極性溶媒に再度溶解したり、或いはそれらの皮膚生理機能向上作用を損なわない範囲で脱色，脱臭，脱塩等の精製処理を行ったり、カラムクロマトグラフィーによる分画処理を行った後に用いてもよい。また保存のため、精製処理の後凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００２３】
本発明において、ニガリとローズマリー抽出物，カンゾウ抽出物から選択される１種又は２種の抽出物を併用する場合の配合比は特に限定されず１：１００〜１００：１程度の範囲で適宜することができる。
【００２４】
本発明における皮膚常在菌の生態系バランス調整剤は、そのまま皮膚に適用することができる。また必要に応じてデンプン，乳糖，微結晶セルロース，メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等の賦形剤、ステアリン酸マグネシウム，タルク等の滑沢剤、ゼラチン，セラック，ポリビニルピロリドン，メチルセルロース，ヒドロキシエチルセルロース等の結合剤、カルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤、ソルビトール，グリセリン等の保湿剤、ジブチルヒドロキシトルエン，ブチルヒドロキシアニソール，トコフェロール等の抗酸化剤、吸収促進剤、界面活性剤、等張化剤等とともに公知の方法によって、軟カプセル剤，硬カプセル剤，錠剤，丸剤，顆粒剤，散剤，懸濁剤，液剤，シロップ剤，乳濁剤，エリキシル剤等の経口剤、注射剤、坐剤、ペッサリー又は外用剤として提供され得る。
【００２５】
本発明に係る皮膚常在菌の生態系バランス調整剤は、低刺激性で毒性及び感作性を示さないため、特に経口的に服用したり、又は皮膚において局所的に外用するのに適しており、アトピー性皮膚炎の増悪など、スーパー抗原の関与するアレルギー性疾患の増悪防止又は症状緩和や、食中毒の予防を目的とした経口剤又は食品添加物として有用で、さらに安定性にも優れるものである。
【実施例】
【００２６】
［実施例１］  トカラニガリ
トカラ列島周辺海域で採取した海水を、ポリアミド系複合逆浸透膜を用いてかん水を調製した。得られたかん水を、１１０℃で加熱しニガリと塩に分離することにより、トカラニガリを得た。
【００２７】
［実施例２］  南大東島ニガリ
南大東島周辺海域で採取した海水を、ポリアミド系複合逆浸透膜を用いてかん水を調製した。得られたかん水を、１１３℃で加熱しニガリと塩に分離することにより、南大東島ニガリを得た。
【００２８】
［実施例３］  ドーバー海峡ニガリ
ドーバー海峡周辺海域で採取した海水を、ポリアミド系複合逆浸透膜を用いてかん水を調製した。得られたかん水を、１１２℃で加熱しニガリと塩に分離することにより、ドーバー海峡ニガリを得た。
【００２９】
［実施例４］  合成ニガリ
塩化ナトリウム（試薬特級）５．０ｇ、塩化カリウム（試薬特級）３．０ｇ、塩化マグネシウム６水和塩（試薬特級）１５．０ｇ、塩化カルシウム（試薬特級）５．０ｇを混合し、合成ニガリを得た。
【００３０】
上記の実施例１〜実施例４について、表皮ブドウ球菌及び黄色ブドウ球菌に対する抗菌作用を評価した。評価は、実施例を水で希釈した試料液１ｍＬと、表皮ブドウ球菌分散液０．５ｍＬ、黄色ブドウ球菌分散液０．ｍＬを混合し，３７℃にて７時間培養する。栄養培地に移植し３７℃にて４８時間培養した後、生菌数をカウントすることにより行った。なお、ニガリ水溶液を精製水に代替して同様の評価を行い、コントロールとした。結果を接種菌数を１とした場合の相対値にて表２に示す。
【００３１】
【表２】
0004608198.tif 000003
【００３２】
表２に示したとおり、本願発明のニガリは、有益菌である表皮ブドウ球菌に対しては、殺菌効果を示さず、植菌した状態での生菌数が維持もしくは微増傾向にあった。これに対し黄色ブドウ球菌に対しては殺菌作用を示し、植菌した数より生菌数が減少していた。これに対しコントロールでは、表皮ブドウ球菌，黄色ブドウ球菌ともに大幅な生菌数の増加が認められた。
【００３３】
続いて本発明の他の実施例を示す。
【００３４】
表３に示した処方にて本発明の実施例５〜実施例７に係るゲル剤を調製した。ローション剤は全成分を混合，溶解，均一化することにより調製した。
【００３５】
【表３】
0004608198.tif 000004
【００３６】
［実施例８］  内服液剤
実施例１、１５０ｍｇに単シロップ２００ｍＬを加え、次いで精製水を加えて１．０Ｌとし、内服液剤を得た。
【００３７】
本発明の上記実施例５〜実施例８について臨床試験を行った。掻痒感及び皮疹等の皮膚症状を呈するアトピー性皮膚炎患者２０名を１群とし、各群に実施例及び比較例をブラインドにて、実施例５及び実施例７については１日２回、３日間患部に塗布させ、実施例８については１日３回、３日間内服させて、掻痒感及び皮膚症状の改善状況を評価した。比較例としては、実施例５及び実施例８において、本発明に係るニガリ，ローズマリー抽出物，カンゾウ抽出物をグルコン酸クロルヘキシジン液に代替したものを比較例１、実施例８において、本発明に係るニガリをブドウ糖液に代替したものを比較例２とした。掻痒感及び皮膚症状の改善状況は、使用開始前の状態に比べて、それぞれ「改善」，「やや改善」，「変化なし」，「悪化」の４段階にて評価し、各評価を得たパネラー数にて表３に示した。
【００３８】
さらに上記臨床試験に際し、皮膚及び腸内の細菌叢の調査を行い、その変動の程度について、「○；ほとんど変動を認めない」，「△；若干の変動を認める」，「×；顕著な変動を認める」として、表４に併せて示した。
【００３９】
【表４】
0004608198.tif 000005
【００４０】
表４より明らかなように、本発明の実施例５〜実施例７使用群においては、全群で掻痒感及び皮膚症状の悪化を示したパネラーは存在せず、これら症状の改善傾向も見られていた。また、皮膚細菌叢において変化は認められていなかった。さらに、経口製剤である実施例８服用群においても、掻痒感及び皮膚症状の悪化を示したパネラーは存在せず、掻痒感，皮膚症状ともに両群で６５％以上のパネラーにおいて改善傾向が認められていた。腸内細菌叢の変化も認められていなかった。
【００４１】
これに対し、比較例１使用群では、掻痒感及び皮膚症状の改善傾向を示すパネラーも相当数認められたが、症状の悪化したパネラーも少数存在していた。さらに、皮膚細菌叢の変化は顕著に認められていた。また、比較例２服用群では、皮膚細菌叢の変化は認められないものの、掻痒感及び皮膚症状の改善傾向はほとんど認められず、６０％以上のパネラーにおいて症状の悪化を認めていた。
【００４２】
なお、上記実施例５〜実施例７については、皮膚一次刺激性及び皮膚感作性は全く認められず、実施例８についても、経口毒性，感作性及び催奇形性は認められなかった。また、本発明の実施例１〜実施例８は、２５℃で６カ月間保存した場合においても製剤の状態変化は認められず、抗菌作用の低下も認められなかった。