(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
焼成栗皮を、水で洗うか又は水に浸漬した後濾別処理することで、予め親水性画分を除去した焼成栗皮の、エタノール水溶液により抽出された抽出物を含有することを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害剤。
【請求項２】
焼成栗皮の抽出物が、栗皮由来のタンニンを含有する請求項１記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤。
【請求項３】
焼成栗皮の抽出物が、栗皮由来のプロアントシアニジンを含有する請求項１又は２記載のアンジオテンシン変換酵素阻害剤。
【請求項４】
下記の工程を備えてなることを特徴とする焼成栗皮の抽出物を含有するアンジオテンシン変換酵素阻害剤の製造方法。
・  栗皮を焼成する工程
・  上記焼成栗皮を、水で洗うか又は水に浸漬した後濾別処理する工程
・  上記濾別処理した焼成栗皮をエタノール水溶液で抽出する工程
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血管を収縮させる作用を持つアンジオテンシン２（正確にはローマ数字、以下同様）の産生に関与するアンジオテンシン変換酵素（以下、ＡＣＥと記す）の働きを阻害する作用を有するＡＣＥ阻害剤及びそれを用いた飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、血圧の上昇を抑制する作用を有する食品が多数開発、上市されている。特に血管を収縮させる作用を持つアンジオテンシン２の産生に関与するＡＣＥの働きを阻害する食品は、長期連用により血圧を低下させることに有効である。
ＡＣＥ阻害剤の主だったところを挙げると、ラクトトリペプチドや鰹節ポリペプチド等のペプチド類がそのほとんどであり、これらは強い苦味・臭味を有し、実際の食品に応用する際には、苦味・臭味をマスキングする為の甘味料や香料付与が必要となるなど、その処方が限られる。
また、ペプチド以外のＡＣＥ阻害剤としては、クロロゲン酸、カフェ酸等が挙げられるが、これらもペプチド特有の苦味はないものの、低分子ポリフェノール特有の刺激的な苦味を有し、嗜好面で満足の行く処方が制限される。
【０００３】
また、上記の他にＡＣＥ阻害剤として、バラ科食用果実（特にリンゴ、ナシ、モモ等）の摘果廃棄される未熟果実から得られる果実ポリフェノール（例えば、特許文献１参照。）や、ビール製造時に廃棄される麦根等のイネ科植物の根部または根部抽出物(例えば、特許文献２参照。)や、大豆、小豆、黒豆等の豆科植物の種子自体、豆科植物種子水抽出物及び粗抽出物（例えば、特許文献３参照。）などに効果があることが知られている。
【０００４】
しかしながら、特許文献１及び２は、いずれも栽培で農薬を多用するので、農薬が植物に残留する危険性があり、人体への影響が懸念される。仮に、低農薬、有機栽培とした場合には、生産規模が小さく、廃棄物利用のメリットが小さい。
また、特許文献３の原料は、通常であれば喫食できる原料や、そのまま栽培すれば食品原料として使用出来る原料である為、ＡＣＥ阻害剤を得るためには、別途専用に栽培する必要が生じる。また、これら食品原料を用いると、不要な部位は廃棄物となり、環境に悪いという問題点がある。
【０００５】
一方で、本発明者らは、甘栗の製造工程中に発生する廃棄物である栗の鬼皮及び渋皮の利用用途について、抗酸化作用及びα−グルコシダーゼ阻害作用を有することを突き止めており、既に出願している（例えば、特許文献４、５参照。）。しかしながら、これら出願時には、栗皮抽出物にＡＣＥを阻害する作用があることは見出されていなかった。
【０００６】
【特許文献１】特開２００２−４７１９６号公報
【特許文献２】特開２００４−５１５１９号公報
【特許文献３】特開平４−２６１１２２号公報
【特許文献４】特開２００４−１８９９５６号公報
【特許文献５】特願２００４−１７９０１０号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、このような事情に鑑みなされたものであって、その目的とするところは、一次利用後の廃棄物からでも得ることができ、低濃度で高い効果を有し、風味良好で、連用摂取しやすく、特に水溶性の場合には様々な剤形に応用可能な新規なアンジオテンシン変
換酵素阻害剤及びそれを用いた飲食品を提供するにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明における上記目的は、栗皮抽出物を含有することを特徴とするアンジオテンシン変換酵素阻害剤で達成される。
【０００９】
好ましくは、栗皮抽出物が、焼成栗皮の抽出物である。更に好ましくは、栗皮抽出物が、親水性溶媒を含有する抽出溶媒により抽出された抽出物である。より好ましくは、栗皮抽出物が、栗皮由来のタンニンを含有してなる。更には、栗皮抽出物が、栗皮由来のプロアントシアニジンを含有することが望ましい。
また、上記アンジオテンシン変換酵素阻害剤は、飲食品に含有させてもよく、その飲食品に、高血圧症を予防、改善する旨を表示してもよい。
【００１０】
すなわち、一般に、高血圧症は、本態性高血圧症と二次性高血圧症に分けられるが、この中でも、本発明者らは、遺伝的素因と日常生活の好ましくない生活習慣（塩分の過度摂取、ストレス、運動不足、アルコール、肥満など）以外に高血圧の原因が見つからない本態性高血圧について着目し、既に判明している症圧機序の中でも、アンジオテンシン２の産生を有意に阻害できれば、血圧を低下させることができるのではないかと考え、鋭意検討した。
そこで、従来、血圧上昇抑制に効果があると知られているプロアントシアニジンに着目し、一次利用後の廃棄物等をリサイクルでき、強力な血圧上昇抑制効果を有すると共に、食品に添加しても食品本来の風味に対する影響の少ない各種飲食品原料について探索した。
その結果、驚くべきことに、各種栗製品の製造の際に廃棄物として大量廃棄されてきた栗皮、特に鬼皮と渋皮を用いた抽出物が、ＡＣＥ阻害作用を有することを今回初めて見出し、本発明に到達した。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、従来のＡＣＥ阻害剤であるペプチド類よりも、風味に癖がなく、継続しての連用摂取がしやすい。
また、強力なＡＣＥ阻害作用が得られるため、他の血圧低下剤を併用する必要がなく、他の血圧低下剤から生じる風味劣化を防止し、バリエーション豊富な風味展開が可能である。
更には、本発明で得られるＡＣＥ阻害剤の形態や、これを用いた飲食品の形態等を限定しない為、食事と共に摂取可能で、汎用性が高い。
また、本発明のＡＣＥ阻害剤は、特に水溶性とした場合には、これを用いた飲食品への混合及び溶解が容易で、飲食品への応用性が高い。
また、甘栗や栗甘露煮、マロングラッセ等の栗菓子を製造する際に大量廃棄されていた栗の鬼皮及び渋皮を有効利用できるので、原料を特段に栽培する必要がなく、安価で、安心、安定した原料供給が可能であり、しかも廃棄物の排出量の低減に役立ち、地球環境への影響を配慮したものである。
更には、栗皮を用いることにより、煩雑な工程を設けることなく、抽出工程のみでもＡＣＥ阻害作用を有する抽出物を得ることができるので、短時間で効率良く簡単にＡＣＥ阻害剤を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明を詳しく説明する。
【００１３】
まず、本発明のＡＣＥ阻害剤とは、腎臓のプロテアーゼ・レニンが血流中の分子量５７，０００の糖たんぱく質であるアンジオテンシンノーゲンに作用して生成するアミノ酸１
０個からなるデカペプチドのアンジオテンシン１（正確にはローマ数字、以下同様）に作用し、昇圧ホルモンであるアンジオテンシン２を生成する反応を触媒する酵素の阻害剤である。
なお、上記アンジオテンシン２は、直接作用として末梢毛細血管を収縮させて交感神経や副腎を刺激し、カテコールアミンの放出を促進させる為、血圧を上昇させる原因となるのである。
【００１４】
本発明のＡＣＥ阻害剤は、栗皮抽出物を含有する。
本発明の原料となる栗の品種や大きさは、特に限定するものではなく、一般に用いられるものから適宜選択して用いればよい。例えば、栗の品種としては、日本栗、欧州栗、中国栗、アメリカ栗等が挙げられる。
【００１５】
また、本発明のＡＣＥ阻害剤に用いる栗皮は、栗のイガを取り除いた種実のうち、果肉部分を除いた栗の渋皮、最外皮の鬼皮を使用し、これらは単独もしくは組合せて適宜選択して用いればよい。
上記栗皮は、一次利用後の廃棄物であっても、果肉付きの栗から専用に剥皮してもよく、特に限定するものではないが、一次利用後の廃棄物を用いる方が、安価で、安心、安定した原料供給が可能であると共に、廃棄物の排出量を低減させることができる点で好適である。
【００１６】
上記栗皮は、生のままでもよく、或いは焼成、加熱、凍結、乾燥、煮る等の各種処理を単独もしくは複数組合せて施したものを用いてもよい。
特に、焼成処理を施した栗皮は、有効量添加しても食品本来の風味を損なわず、好適に効果を発揮し、且つ、大量に添加した際には香ばしく美味な風味を付与することができるため、コーヒー及び麦茶等の焙煎系飲食品に好適に用いられ、更には好ましい琥珀色の色調を付与する点で好ましい。
焼成処理を施した栗皮を使用する際には、栗皮の焼成条件は、例えば、剥き栗用生栗の場合、熱風ロースト等により２５０〜４００℃、５〜１０分程度が挙げられるが、必ずしも、上記条件に限定されるものではない。
【００１７】
本発明の栗皮抽出物は、上記栗皮から適宜の抽出方法により抽出されたものを指す。好ましくは、タンニンが抽出されていることが、ＡＣＥ阻害活性の点で好適である。
【００１８】
上記タンニンとは、フェノール性水酸基を多数持ち、獣皮をなめす性質を示す植物由来の化合物の総称であり、加水分解型タンニンと縮合型タンニンとに大別される。
加水分解型タンニンとは、一般に分子内のポリフェノール部分としてgalloyl基、hexahydroxydiphenoyl基及びその酸化体等があり、これらが分子内の糖または環状ポリアルコールとエステル結合した構造をもつ。
一方、縮合型タンニンは、カテキン等のフラバン類が、互いに分子間でＣ4〜Ｃ8位又はＣ4〜Ｃ6位等でＣ−Ｃ結合により結ばれて、２量体以上の重合体を形成したものであり、モノマーのフラボノイド類とは分類上異なる。縮合型タンニンの中でも、Ｃ−Ｃ結合の開裂によりアントシアニジンを生成するものを、プロアントシアニジンと呼ぶ。
【００１９】
本発明に係る栗皮抽出物には、上述のように、タンニンが含有されていることが好ましいが、該タンニンの中でも、特に縮合型タンニン、更に好ましくはプロアントシアニジンが含まれていることが、ＡＣＥ阻害活性の点で好適である。
【００２０】
本発明におけるＡＣＥ阻害剤は、上記栗皮抽出物を有効成分として含有する。有効成分とは、目的とする機能が発揮される程度に該抽出物を含むことを示す。具体的には、ＡＣＥ阻害剤全体重量中、好ましくは５０重量％以上、更に好ましくは８０重量％以上の栗皮
抽出物を含有することが、より好適にはＡＣＥ阻害剤全体が栗皮抽出物のみから成ることが、ＡＣＥ阻害活性を十分に得ることが出来る点で望ましい。
【００２１】
本発明のＡＣＥ阻害剤は、本発明の目的を損なわない範囲で適宜選択した副原料を含有してもよい。副原料としては、例えば糖質甘味料（果糖、ブドウ糖、タガトース、アラビノース等の単糖類、乳糖、オリゴ糖、麦芽糖、トレハロース等の少糖類、粉末水あめ、デキストリン、糖アルコール等）、高甘味度甘味料（スクラロース、アセスルファムＫ、ステビア等）、でん粉等の多糖類、油脂類、乳製品、安定剤、乳化剤、香料、色素、酸味料、風味原料（卵、コーヒー、茶類、ココア、果汁果肉、ヨーグルト、酒類等）、蛋白質、食物繊維、ビタミン類、ミネラル、γ−アミノ酪酸、カゼインドデカペプチド、桑葉抽出物、グァバ茶抽出物、カテキン、ラズベリーケトン、低分子アルギン酸、イチョウ葉抽出物、松樹皮抽出物、キトサン、ヒアルロン酸、メチルスルフォニルメタン等が挙げられる。
この中でも、血圧低下剤として既知のγ−アミノ酪酸、カゼインドデカペプチドを風味に悪影響のない範囲で用いると、血圧上昇抑制及び血圧低下効果が相乗的に強化され、好ましい。
なお、以上の副原料は、単独でも、複数組合せて使用してもよい。
【００２２】
本発明のＡＣＥ阻害剤の形態は、特に限定するものではなく、例えば液状、粉体、顆粒状、ペースト状等種々の形態が挙げられる。この中でも、粉体もしくは顆粒状は、ＡＣＥ阻害活性効果が長期間安定に保たれる点で好ましい。
【００２３】
次に、一次利用後の廃棄物である栗皮を用いて本発明のＡＣＥ阻害剤は、例えば次のようにして製造される。
すなわち、まず、一次利用後の廃棄物である栗皮を準備する。このとき、栗皮を細かく粉砕すると、効率的に抽出物が抽出できる点で好適である。なお、本発明のＡＣＥ阻害剤を調製する段で、栗皮を焼成する場合は、焼成処理と粉砕処理とをどちらを先に行ってもよいが、焼成処理を施してから粉砕するほうが、効率性の点で好適である。また、栗皮を水で洗う、水に浸漬して濾別するなどの処理を施して、予め親水性画分を除去するようにしてもよい。
【００２４】
他方で、栗皮を抽出する抽出溶媒を準備する。
上記抽出溶媒としては、親水性溶媒、多価アルコール、超臨界二酸化炭素等が挙げられ、単独もしくは複数組合せて用いればよいが、少なくとも親水性溶媒を含むことが抽出効率、飲食品への汎用性及び加工適性に優れた水溶性のＡＣＥ阻害剤を得る点で好適である。
上記親水性溶媒としては、例えば、水、エタノール、メタノール、プロパノール、イソプロパノール、アセトン、ブタノール、アセトニトリル、酢酸エチル、テトラヒドロフラン等が挙げられる。
また、上記多価アルコールとしては、例えば、グリセリン、ポリグリセリン等が挙げられる。
これらは、単独又は複数組合せて混合した水溶液や分散液でもよい。
この中でも、好ましくはエタノールを用いることが、更に好ましくは２０〜８０重量％エタノール水溶液を用いることが、ＡＣＥ阻害活性に優れ、水溶性のＡＣＥ阻害剤を効率良く抽出し得る点で好適である。
【００２５】
次に、上記のように準備した栗皮と抽出溶媒とを用いて、栗皮抽出物を抽出する。
抽出方法は、還流操作、常温浸漬等が挙げられる。この中でも、好ましくは還流操作により抽出することが、短時間でＡＣＥ阻害活性に優れた抽出物を効率良く得る点で好適である。
エタノールを用いて還流操作にて抽出する場合は、上記栗皮と抽出溶媒を接触させ抽出させる際の抽出溶媒の温度を５０℃以上に設定すると、ＡＣＥ阻害活性に更に優れた抽出物を効率良く得る点で好適である。
【００２６】
上記のように得られた抽出物は、必要に応じて更にカラム等を用いて精製処理を適宜組合せてもよい。好ましくは、抽出物固形分換算で、プロアントシアニジンが３０重量％以上抽出されるような組合せとすることが、ＡＣＥ阻害活性に優れた抽出物を得る点で好適である。
【００２７】
次いで、上記抽出物に、必要に応じで副原料等を添加し、凍結乾燥、減圧濃縮、スプレードライなどの定法によって、適宜所望の形態とすることで、本発明のＡＣＥ阻害剤が得られる。なお、粉体もしくは顆粒状に成形する際には、バインダーとしてデキストリン等を用いてもよい。
【００２８】
このようにして得られたＡＣＥ阻害剤は、各種飲食品はもちろん、医薬品や一般工業品にも応用することが可能である。中でも、特に飲食品に用いると、手軽に美味しく喫食でき、効率良く簡単にＡＣＥ阻害作用を得ることができる点で好適である。また、上記ＡＣＥ阻害剤が水溶性である場合には、特に応用する飲食品、医薬品や一般工業品の剤形を問わない。
【００２９】
上記飲食品とは、上述のＡＣＥ阻害剤を含有できるものであれば、特に限定するものではなく、例えば、菓子類（チューインガム、キャンディ、タブレット、チョコレート、ゼリー等）や、冷菓や、麺類を始めとする澱粉系食品や、粉末食品や、飲料（スープ、コーヒー、茶類、ジュース、ココア、アルコール飲料、ゼリー状ドリンク等）や、ベーカリー食品（パン、ビスケット等）や、油脂食品（マーガリン、ショートニング、ファットスプレッド等）や、高塩分含有食品（味噌、醤油、漬物、佃煮、塩辛、ハム等）等が挙げられる。
なお、本発明の飲食品への上記ＡＣＥ阻害剤の添加時期は、各飲食品の特性、目的に応じ、製造工程の段階で適宜選択して添加すればよい。
【００３０】
上記飲食品におけるＡＣＥ阻害剤の含有量は、各飲食品の種類や目的などに応じて異なるが、栗皮抽出物固形分換算で、飲食品全体重量中、好ましくは０.００１重量％以上、更に好ましくは０．０１重量％以上であることが、ＡＣＥ阻害活性の点で望ましい。
【００３１】
本発明の飲食品には、上記ＡＣＥ阻害剤の他に、本来の目的を損なわない範囲で、上記副原料を適宜選択して含有してもよい。
【００３２】
次に、本発明の飲食品の一例として、ハードキャンディは例えば次のようにして製造される。すなわち、まず上述したようにＡＣＥ阻害剤を調製しておく。他方で、キャンディ原料のうち、グラニュー糖、水あめなどのキャンディ主原料を煮詰め、冷却してキャンディ生地を準備しておく。そして、上記キャンディ主原料以外のキャンディ原料（例えば香料、着色料等）を、キャンディ生地に混合する時に、ＡＣＥ阻害剤及び必要に応じて香料等の副原料を添加混合し、更に冷却した後、適宜成型すれば、本発明のＡＣＥ阻害剤含有ハードキャンディが得られる。
【００３３】
このようにして得られたＡＣＥ阻害剤含有ハードキャンディのみならず、本発明のＡＣＥ阻害剤含有飲食品には、高血圧症を改善する旨の表示を設けてもよい。その表示例としては、「高血圧症の方へ」、「安定な血圧のために」、「血圧が高めの方へ」、「血圧が気になり始めた方へ」、「血圧が心配な方に」、「血圧管理をしている方に」等が挙げられる。
【実施例】
【００３４】
以下、本発明を実施例を用いて例示する。
【００３５】
≪ＡＣＥ阻害剤の調製≫
＜実施例１＞ （焼成栗皮未精製又は未分画）
中国河北省産の栗を熱風ローストで３００℃７分焼成し、栗皮（鬼皮及び渋皮）を剥いた後、剥き栗のみを製菓原料として用い、栗皮を回収した。
そして、上記のように回収した栗皮をコーヒーミルで粉砕した。この栗皮粉砕物をフラスコに入れ、引き続き５０重量％エタノール水溶液を注ぎ、湯せんにて７０℃４時間加熱した。この時、エタノールの蒸発を防止するために、フラスコ上部にリービッヒ冷却管を設け、それに冷水を流すことにより還流操作を行った。得られた抽出液を濾過し、濾液と残渣に分けた。上記濾液を濃縮後、凍結乾燥を施し、栗皮抽出物粉末を得た。
このようにして得られた栗皮抽出物粉末の総タンニン含有量は、該粉末全体重量中４７重量％であった。また、総プロアントシアニジン含有量は、該粉末全体重量中４４重量％であった（バニリン塩酸法によって算出）。
上記総タンニン含有量は、バニリン塩酸法、Wilsonらの方法（（１９９０）J.Agric.Food.Chem３８、１６７８-１６８３）、Inoueらの方法（１９８８）Analytical Biochemistry１６９、３６３−３６９）の合算により算出した。
【００３６】
＜実施例２＞ （焼成栗皮ろ液２０％エタノール水溶液溶離画分）
実施例１と同様の方法にて得られた濾液を濃縮した後、カラムに合成吸着剤（三菱化学（株）製、ＨＰ−２０）を充填し、濃縮した濾液を流して吸着させた。その後、合成吸着剤を蒸留水で洗って親水性画分を洗い出し、合成吸着剤から２０重量％エタノール水溶液で高分子画分を溶離させた。この溶離画分を濃縮後、凍結乾燥を施し、栗皮抽出物粉末を得た。
このようにして得られた栗皮抽出物粉末の総タンニン含有量は、該粉末全体重量中５８重量％であった（実施例１と同様に測定）。また総プロアントシアニジン含有量は、該粉末全体重量中５５重量％（実施例１と同様に測定）であった。
【００３７】
＜実施例３＞ （焼成栗皮ろ液４０％エタノール水溶液溶離画分）
合成吸着剤から２０容量％エタノール水溶液で高分子画分を溶離させて実施例２の高分子画分を得た後、引き続き実施例３用に、更に４０重量％エタノール水溶液で同様に高分子画分を溶離させた。そして、この４０重量％エタノール水溶液で得た溶離画分を濃縮後、凍結乾燥を施し、栗皮抽出物粉末を得た。
このようにして得られた総タンニン含有量は、該粉末全体重量中６６重量％であった(実施例１と同様に測定)。また、総プロアントシアニジン含有量は、該粉末全体重量中６３重量％（実施例１と同様に測定）であった。
【００３８】
＜実施例４＞ （焼成栗皮残渣高分子画分）
栗皮粉砕物を５０重量％エタノール水溶液で湯せんする前に、フラスコに栗皮粉砕物及び蒸留水（２０℃）を入れ、一晩常温で静置した後、水を除去する他は、実施例１と同様に栗皮抽出物粉末を得た。
このようにして得られた栗皮抽出物粉末の総タンニン含有量は、該粉末全体重量中５４重量％であった（実施例１と同様に測定）。また、総プロアントシアニジン含有量は、該粉末全体重量中５１重量％であった（実施例１と同様に測定）。
【００３９】
＜実施例５＞（生栗皮未精製又は未分画）
中国河北省産の栗を生のまま栗皮（鬼皮及び渋皮）を剥き、この栗皮をコーヒーミルで粉砕した他は、実施例１と同様の方法にて生栗皮抽出物粉末を得た。
このようにして得られた生栗皮抽出物粉末の総タンニン含有量は、該粉末全体重量中６８重量％であった（実施例１と同様に測定）。また、総プロアントシアニジン含有量は、該粉末全体重量中６５重量％であった（実施例１と同様に測定）。
【００４０】
≪ＡＣＥ阻害率の測定≫
上記のようにして調製した実施例１〜５の栗皮抽出物粉末（水溶性）について、下記の方法でＡＣＥ阻害率を測定した。
ＡＣＥ（酵素）が、N-Hippuryl-His-Leu  tetrahydrate（アンジオテンシン１と同様の結合部分を持つ人工基質、アンジオテンシン１代替物）を分解するに当り、実施例１〜５の栗皮抽出物粉末を加えると、どの程度分解が阻害されるか、吸光度計を用いて測定した。
（１）基質溶液作成
125mM・pH3.8のホウ酸緩衝溶液に、５．８３mMとなるよう、N-Hippuryl-His-Leu  tetrahydrateを溶解し、５ｍｌにメスアップした。
（２）サンプル溶液作成
125mM・pH3.8のホウ酸緩衝溶液に、実施例１〜５の栗皮抽出物粉末各１０ｍｇを溶解し、１０ｍｌにメスアップした。
（３）酵素溶液作成
125mM・pH3.8のホウ酸緩衝溶液で、Angiotensin Converting Enzymeを、５０μｌ当り０．００８Uとなるよう調整した。
（４）測定手順
１．表１に従い、遠沈管に、基質溶液と、実施例１〜５の栗皮抽出物粉末が溶解された各サンプル溶液、又は、ホウ酸緩衝溶液のみを添加混合し、３７℃・５分間予備加熱した。２．上記１に、表１の酵素溶液を添加し、３７℃・３０分間反応させた。
３．上記２に、１規定の塩酸を５０μｌ添加し、酵素反応を停止させた。
４．１５００μｌの酢酸エチルを添加し、試験管ミキサーにて１０秒間混合、反応生成物を抽出した。
５．３５００ｒｐｍで２分間遠心分離し、上澄み１０００μｌを５０ｍｌビーカーに移した。
６．ホットプレート上で加熱し、酢酸エチルを乾固させた。
７．蒸留水１０００μｌで再溶解し、１５分間放置した。
８．上記７で得られた溶液を測定した（２２８ｎｍ）。
【００４１】
【表１】
0004798607.tif 000002
【００４２】
（５）阻害率の算出
以上より求めた各栗皮抽出物粉末の吸光度を以下の式に代入し、阻害率を求めた。
阻害率（％）＝（Ａ−Ｂ）÷Ａ×１００
Ａ＝吸光度（コントロール）−吸光度（ベース）
Ｂ＝吸光度（サンプル）−吸光度（ブランク）
上記Ａ及びＢの吸光度は、基質の分解生成物のみの吸光度を表わしている。
上記阻害率の結果を、表２に示す。
【００４３】
【表２】
0004798607.tif 000003
【００４４】
表２の結果から、実施例１〜５は、ほぼ同様の高いＡＣＥ阻害活性を示すことが分かる。特に、実施例４は、高い阻害率を示し、特に好適であることが分かる。また、実施例４のＡＣＥ阻害剤は、カラム精製を用いない方法で、カラム精製と同等か、それ以上の阻害率を示すので、カラム精製に比べ製造工程が簡略で、安価にＡＣＥ阻害剤を製造できた。
【００４５】
＜比較例１＞
次に、従来ＡＣＥ阻害剤として知られている０．１重量％濃度のクロロゲン酸水溶液（比較例１）の阻害率を測定した。
そして、上記クロロゲン酸水溶液の阻害率と、上記実施例１〜５の栗皮抽出物の０．１重量％濃度水溶液の阻害率との比較を行った。
【００４６】
その結果、クロロゲン酸水溶液の阻害率は３１％であったことから、実施例１及び２より若干阻害率が高く、実施例３及び５とはほぼ同等であり、実施例４と比較すると実施例
４の方が阻害率が高かった。
【００４７】
＜実施例６〜１０＞
≪飲料の調製≫
定法に従い、ＰＥＴ入り麦茶を製造した。この麦茶を分割して、実施例１〜５の各栗皮抽出物粉末を０.０５重量％添加し、各実施例の栗皮抽出物粉末が含有された麦茶を調製した（実施例１の栗皮抽出物粉末含有麦茶を実施例６、実施例２品含有麦茶を実施例７、実施例３品含有麦茶を実施例８、実施例４品含有麦茶を実施例９、実施例５品含有麦茶を実施例１０とする）。また、コントロールとして、栗皮抽出物粉末を添加しないものを調製した。
【００４８】
＜比較例２＞
比較例２として、定法に従い、ＰＥＴ入り麦茶を製造した。これに、クロロゲン酸を０．０５重量％添加した。
【００４９】
上記実施例６〜１０、コントロール及び比較例２の麦茶飲料を、専門パネラー２０名が１週間、毎食後２００ｍｌ飲用した結果、コントロールに対し、実施例６〜９品は、風味的に殆ど遜色が無く、むしろ深い琥珀色の色調となり、香ばしくて薫り高い麦茶飲料で、連用しやすいものであった。実施例１０品は、実施例６〜９に比べると、風味・色調とも劣るものの連用することはできた。また、栗皮抽出物粉末は、麦茶中での溶解性に優れ、均一に分散し、透明のＰＥＴボトルに入れても沈殿がなく、外観的に良好であった。
これに対し、比較例２品は苦味、エグ味が強く、毎日連用するには適さない風味であった。
【００５０】
以上の結果から、本発明の栗皮抽出物は、ＡＣＥ阻害活性が得られると共に、風味及び溶解性が良好で、飲食品に添加しても悪影響を及ぼすものではなかった。それに対し、クロロゲン酸は、ある程度のＡＣＥ阻害活性を有するものの、風味が悪く、連用摂取するのが困難であることが理解できる。