(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アドレノメデュリンを含有する、膀胱平滑筋の受動的伸展を促進するための組成物。
【請求項２】
排尿障害を改善するために用いられる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記排尿障害が、切迫性尿失禁、反射性尿失禁、および溢流性尿失禁からなる群より選択される尿失禁である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記アドレノメデュリンが、
（ａ）配列表の配列番号２の１３位のＳｅｒから５２位のＴｙｒまでのアミノ酸配列を有するペプチド、または、
（ｂ）アミノ酸配列（ａ）において１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ膀胱平滑筋の伸展促進作用を有するペプチドである、
請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記アドレノメデュリンが、
（ｃ）配列表の配列番号２の１位のＴｙｒから５２位のＴｙｒまでのアミノ酸配列を有するペプチド、または、
（ｄ）アミノ酸配列（ｃ）において１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ膀胱平滑筋の伸展促進作用を有するペプチドである、
請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記アドレノメデュリンが、
（ｅ）配列表の配列番号２の−７３位のＡｌａから５２位のＴｙｒまでのアミノ酸配列を有するペプチド、または、
（ｆ）アミノ酸配列（ｅ）において１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ膀胱平滑筋の伸展促進作用を有するペプチドである、
請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記アドレノメデュリンが、
（ｇ）配列表の配列番号２の−９４位のＭｅｔから９１位のＬｅｕまでのアミノ酸配列を有するペプチド、または、
（ｈ）アミノ酸配列（ｇ）において１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ膀胱平滑筋の伸展促進作用を有するペプチドである、
請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記アドレノメデュリンのＣ末端がアミド化されている、請求項１および４〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
前記アドレノメデュリンのＣ末端にＧｌｙが付加されている、請求項１および４〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
前記アドレノメデュリンにおいて、配列表の配列番号２の１６位のＣｙｓと２１位のＣｙｓとが、架橋されている、請求項１および４〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
前記架橋が、ジスルフィド結合である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記架橋が、−ＣＨ２−ＣＨ２−結合である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
アドレノメデュリンを含有する排尿障害改善薬。
【請求項１４】
排尿障害改善薬を製造するためのアドレノメデュリンの使用。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、アドレノメデュリンを含有する、膀胱平滑筋の伸展促進用組成物に関する。
背景技術
尿失禁はよくある状態であり、極めて重篤なために、患者を当惑させ、困難に陥れ無力にすることが多い。信頼性があり、安全な尿失禁の治療方法が深刻に求められていることは明らかである。現在のところ、その必要性は適切には満たされていない。
尿失禁とは、蓄尿期に不随意に尿が漏れ出す状態で、膀胱と尿道のどちらか、または両方に機能的もしくは器質的な異常があると生じる。尿失禁は、膀胱平滑筋が不随意に収縮して膀胱内圧が上昇した場合、あるいは尿道括約筋と尿道周囲支持組織によって形成される尿道閉鎖圧が正常な膀胱内圧を跳ね返すには弱すぎる場合に起きる。尿失禁は、病態によっていくつかのタイプに分けられる。大別すると、切迫性尿失禁、反射性尿失禁、溢流性尿失禁（低コンプライアンス型膀胱）、腹圧性尿失禁、全尿失禁、および夜間遺尿に分けられる。
切迫性尿失禁は、強い尿意に伴って不随意に尿が漏れる状態で、尿意を感じてトイレに行くまでに我慢ができずに漏らしてしまう症状である。運動性のものと知覚性のものとに分けられる。運動性のものは、排尿反射の抑制経路の障害や、促進経路の亢進によっておこり、代表的なものは脳血管障害や脳腫瘍などの病変による神経因性膀胱である。知覚性のものの代表例は、膀胱炎、尿道炎である。
反射性尿失禁は、通常の尿意を伴わずに膀胱がある程度充満すると反射的に膀胱が収縮し、不随意に尿が漏れてしまう状態である。仙髄の排尿中枢よりも上位の脊髄損傷による神経因性膀胱や、乳幼児の失禁などを含む。
溢流性尿失禁は、十分な尿の排出ができないため、尿が膀胱に過度に充満し、少量ずつ漏出する状態である。末梢神経損傷による神経因性膀胱（低コンプライアンス型膀胱）や、前立腺肥大症やガンなどによる下部尿路通過障害などを含む。
腹圧性尿失禁は、くしゃみや咳などで力んだ時、笑った時、走った時など、急に腹圧が上昇した時、膀胱が収縮していないのに尿が漏れる症状である。腹圧の上昇により膀胱内圧も上昇するが、それが尿道閉鎖圧を超えると尿が漏れる。女性に多く、出産や加齢に伴い尿道周囲支持組織の脆弱化が進み、十分な尿道閉鎖圧を生じることができないために起きることが多い。
全尿失禁は、尿道括約筋機能不全の状態であり、腹圧上昇の有無にかかわらず、常に尿道から尿が漏れてくる状態である。骨盤外傷や前立腺手術などによる尿道括約筋損傷が原因で生じる。
夜間遺尿は、夜尿症ともいい、排尿習慣が確立する４歳以上で、尿路や神経系に器質的な異常がなく、覚醒中には正常な排尿ができて尿失禁がないのに、就寝中に無意識に尿を漏らしてしまう状態である。排尿反射に対する中枢神経系の抑制機構が未熟なために生じる。
現在、（１）膀胱の過活動性を有し、不随意な排尿によって尿失禁をきたす神経因性膀胱の患者、（２）異常な膀胱収縮はないが、蓄尿にともなって、じわじわと膀胱内圧が上昇してしまう低コンプライアンス型の膀胱を持つ神経因性膀胱の患者、および（３）頻尿を主訴とする患者の一部、等のような蓄尿障害を示す疾患の処置においては、一般的に抗コリン剤が用いられている。しかし、臨床的には、実際に抗コリン剤を使用すると、その蓄尿障害に対する有効性とはうらはらに、排尿時の膀胱収縮までも抑えてしまうため、排尿障害が増悪し、残尿の増加や尿閉などの副作用が問題になることが多い。
このように、尿失禁は明らかに今日の主要な疾患の１つであるものの、現在の治療方法は決して満足できるものではなく、新規な尿失禁治療薬が望まれている。本明細書中では、「排尿障害」とは、尿失禁などの正常でない排尿状態のうち、膀胱平滑筋の伸展が不十分であることに起因するものをいう。排尿障害の例としては、尿失禁（例えば、切迫性尿失禁）の他に、頻尿、夜間頻尿が挙げられる。膀胱平滑筋の伸展を促進し得る薬剤があれば、蓄尿期の膀胱平滑筋が伸展して膀胱内圧を低下させるのに役立つため、尿失禁治療薬として、および排尿に関連する他の症状を処置するための薬として有用であると考えられる。
アドレノメデュリンは、血管拡張作用を有することが知られていた。例えば、Ｎａｋａｍｕｒａら，Ｊｐｎ．  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６７，２５９−２６２（１９９５）の図１では、収縮した腸間膜動脈は、アドレノメデュリンの添加によって、濃度依存的に拡張することが報告されている。しかし、血管拡張と膀胱筋の受動的伸展とを同一視することはできない。例えば、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１２０、１９３−２００（１９９７）の図６では、膀胱にアドレノメデュリンを添加しても膀胱が収縮も伸展（能動的伸展）もしないことが記載されている。
本発明は、上記問題点の解決を意図するものであり、膀胱平滑筋の受動的伸展を促進する新規な薬剤を提供することを目的とする。
発明の開示
本発明者らは、もともと血圧降下作用を有するペプチドとして同定されたアドレノメデュリンが、直接、膀胱平滑筋を伸展させないが、蓄尿による膀胱壁の受動的な伸展を促進する作用、すなわち膀胱平滑筋の伸展促進作用を有することを見出し、これに基づいて本発明を完成させた。
アドレノメデュリンは、アセチルコリンによる膀胱の収縮（つまり、排尿時の膀胱収縮）を抑制しないので、排尿時の膀胱収縮を抑制することなく蓄尿障害のみを改善するための、実質的に副作用を伴わない治療薬が提供され得る。
本発明の膀胱平滑筋の伸展促進用組成物は、アドレノメデュリンを含有する。本発明の組成物は、排尿障害を改善するために用いられ得る。排尿障害は、切迫性尿失禁、反射性尿失禁、および溢流性尿失禁からなる群より選択される尿失禁であり得る。
１つの実施態様において、上記アドレノメデュリンは、以下のいずれかのペプチドであり得る：（ａ）配列表の配列番号２の１３位のＳｅｒから５２位のＴｙｒまでのアミノ酸配列を有するペプチド；（ｂ）アミノ酸配列（ａ）において１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ膀胱平滑筋の伸展促進作用を有するペプチド；（ｃ）配列表の配列番号２の１位のＴｙｒから５２位のＴｙｒまでのアミノ酸配列を有するペプチド；（ｄ）アミノ酸配列（ｃ）において１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ膀胱伸展作用を有するペプチド；（ｅ）配列表の配列番号２の−７３位のＡｌａから５２位のＴｙｒまでのアミノ酸配列を有するペプチド；（ｆ）アミノ酸配列（ｅ）において１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ膀胱平滑筋の伸展促進作用を有するペプチド；（ｇ）配列表の配列番号２の−９４位のＭｅｔから９１位のＬｅｕまでのアミノ酸配列を有するペプチド；または、（ｈ）アミノ酸配列（ｇ）において１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ膀胱平滑筋の伸展促進作用を有するペプチド。
他の実施態様では、上記アドレノメデュリンのＣ末端は、アミド化されるか、またはＧｌｙが付加され得る。
他の実施態様では、上記アドレノメデュリンにおいて、配列表の配列番号２の１６位のＣｙｓと２１位のＣｙｓとが架橋され得る。上記架橋は、ジスルフィド結合または−ＣＨ２−ＣＨ２−結合であり得る。
本発明の排尿障害の改善方法は、アドレノメデュリンを含有する組成物を用いる。
本発明はまた、排尿障害改善薬を製造するためのアドレノメデュリンの使用を提供する。
発明を実施するための最良の形態
本発明の実施においては、特に指示されない限り、当該分野で公知であるタンパク質の分離および分析法、組換えＤＮＡ技術、およびアッセイ方法が採用され得る。
Ｉ．定義
以下に、本発明を説明する上で用いられる用語を説明する。
アドレノメデュリンは、当初、血圧降下作用を有するペプチドとしてヒト褐色細胞腫から単離されたペプチドである。本発明において、用語「アドレノメデュリン」は、この特定のペプチドに限定されず、このペプチドに対してアミノ酸配列における実質的な相同性を有するペプチドもまた含んでいう。相同なペプチドの例として、種変異体、および対立遺伝子変異体がある。ヒト由来のアドレノメデュリンは、配列表の配列番号２の１位のＴｙｒから５２位のＴｙｒまでのアミノ酸配列を含む。（配列表の配列番号２の−９４位のＭｅｔから９１位のＬｅｕまでのアミノ酸配列からなるペプチドは、プレプロアドレノメデュリンと考えられる。シグナルペプチドがプロセシングされた配列表の配列番号２の−７３位のＡｌａから９１位のＬｅｕまでのアミノ酸配列からなるペプチドは、プロアドレノメデュリンと考えられる。配列表の配列番号２の１３位のＳｅｒから５２位のＴｙｒまでのアミノ酸配列からなるペプチドは、血圧降下作用が確認されたアドレノメデュリンフラグメントである。これらのいずれの形態も、本発明において使用され得る。）ヒト由来のアドレノメデュリンは、配列表の配列番号１の４４７位のＴから６０２位のＣまでのポリヌクレオチド配列によりコードされ得る。  ブタ由来のアドレノメデュリンの場合、配列表の配列番号４の１位のＴｙｒから５２位のＴｙｒまでのアミノ酸配列を含む。ブタ由来のアドレノメデュリンは、配列表の配列番号３の４３０位のＴから５８５位のＣまでのポリヌクレオチド配列によりコードされ得る。ラット由来のアドレノメデュリンは、配列表の配列番号６の１位のＴｙｒから５０位のＴｙｒまでのアミノ酸配列を含む。ラット由来のアドレノメデュリンは、配列表の配列番号５の４３３位のＴから５８２位のＴまでのポリヌクレオチド配列によりコードされ得る。
ヒトの疾患または治療の目的において、ヒト由来のペプチドが好ましいことは明らかである。しかし、他の哺乳動物由来の相同なペプチドもまた目的に応じて使用可能である。さらに、他の哺乳動物由来のペプチドとの比較は、ヒト由来のペプチドの所望の活性が保持された改変体を得るうえで重要である。
本発明に用いられるアドレノメデュリンは、上記の配列によって必ずしも限定されることはなく、これらの配列に対して、１もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列を有し、かつ所望の活性が保持された相同なペプチドも対象として含まれる。
アミノ酸の保存的置換は、相同なペプチドを得るための好ましい手段のひとつである。保存的置換は、代表的には以下のグループ内での置換を包含する：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グルタミン；セリン、トレオニン；リジン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン。
２つのアミノ酸配列の間の相同性は、必要であればギャップを導入して、残基の適合を最適化することにより決定される。ヒトのアドレノメデュリンに実質的なアミノ酸配列相同性を有するペプチドは、ヒトのアドレノメデュリンのアミノ酸配列と、代表的には少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７０％、そしてより好ましくは少なくとも約８０％の相同性を有し、そして特に好ましい実施態様では、少なくとも約９０％以上の相同性を有する。相同性決定のためのソフトウェアは、容易に入手可能である。
本発明においては、定義上、下記の実施例１と実質的に同一の条件で測定したとき、膀胱の伸長度が実施例１の実験区に示された値の約８０％以上、好ましくは約９０％以上であるとき、「膀胱平滑筋の伸展促進作用を有する」という。
本発明に用いられるペプチドのＣ末端は、アミド化されていても、されていなくてもよい。「Ｃ末端のアミド化」とは、ペプチドの修飾反応の１つをいい、ペプチドのＣ末端アミノ酸のＣＯＯＨ基が、ＣＯＮＨ２の形態になることをいう。生体内で作動する多くの生理活性ペプチドは、はじめ分子量のより大きな前駆体タンパク質として生合成され、これが細胞内移行の過程で、Ｃ末端アミド化のような修飾反応を受けて成熟する。アミド化は、Ｃ末端アミド化酵素が、前駆体タンパク質に作用することによって、行われる。前駆体タンパク質においては、アミド化される残基のＣ末端側には常にＧｌｙ残基が存在し、さらにそのＣ末端側に、例えばＬｙｓ−ＡｒｇあるいはＡｒｇ−Ａｒｇなどの塩基性アミノ酸配列対が続いていることが多い（水野、生化学第６１巻、第１２号、１４３５〜１４６１頁（１９８９））。
ＩＩ．膀胱平滑筋の伸展促進作用を有するアドレノメデュリン
本発明においては、アドレノメデュリンは、膀胱平滑筋の伸展促進用組成物の有効成分として利用される。また、アドレノメデュリンは、排尿障害改善薬を製造するための有効成分として利用される。アドレノメデュリンは、天然の供給源から単離されたもの、組換えＤＮＡ技術を使用して産生したもの、または化学合成したものであり得る。
アドレノメデュリンを天然の供給源から単離する場合、例えば、以下のようにして精製し得る。アドレノメデュリンは、例えばまず、ヒト褐色細胞腫を破壊して得られる粗抽出物を、各種クロマトグラフィーにかけることによって精製され得る。その際、血小板ｃＡＭＰの活性の上昇をモニターすることによって、目的のアドレノメデュリンを含むフラクションを得ることができる。アドレノメデュリンの単離および精製方法については、特開平７−１９６６９３号公報に記載される。
アドレノメデュリンを組換えＤＮＡ技術を使用して産生する場合、目的のペプチドをコードするＤＮＡ配列が、種々の組換え系を用いて発現される。発現ベクターの構築および適切なＤＮＡ配列を有する形質転換体の作製は、当該技術分野で公知の方法によって実施される。発現は、原核生物系または真核生物系で実施され得る。
原核生物宿主としては、Ｅ．ｃｏｌｉ、バチルス属菌、およびその他のバクテリアが用いられる。そのような原核生物には、複製部位と宿主に適合する制御配列とを含むプラスミドベクターが用いられる。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉは、典型的には、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のプラスミドである、ｐＢＲ３２２の誘導体を用いて形質転換される。ここでの制御配列とは、転写開始のためのプロモーター、必要に応じてオペレーター、およびリボソーム結合部位配列を含むと定義される。この制御配列には、β−ラクタマーゼおよびラクトースプロモーター系（Ｃｈａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ  （１９７７）  １９８，  １０５６）、トリプトファンプロモーター系（Ｇｏｅｄｄｅｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  （１９８０）  ８：４０５７）、およびλ由来のＰＬプロモーターおよびＮ遺伝子リボソーム結合部位（Ｓｈｉｍａｔａｋｅ，  Ｎａｔｕｒｅ  （１９８１）  ２９２：１２８）のような一般的に用いられているプロモーターが包含される。
真核生物宿主としては、例えば酵母が用いられる。このような真核生物には、複製部位と宿主に適合する制御配列とを含むプラスミドベクターが用いられる。例えば、酵母は、ｐＹＥＵｒａ３（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を用いて形質転換される。その他に、酵母宿主で有用なプロモーターのクラスには、例えば糖分解酵素を合成するためのプロモーターが包含される。それには、３−ホスホグリセレートキナーゼのためのプロモーター（Ｈｉｔｚｅｍａｎら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  （１９８０）  ２５５：２０７３）が含まれる。他のプロモーターには、エノラーゼ遺伝子由来のもの、またはＹＥｐ１３から得られたＬｅｕ２遺伝子由来のものが包含される。
適切な哺乳類プロモーターには、メタロチオネイン、ＳＶ４０由来の初期または後期プロモーター、またはポリオーマウイルス、アデノウイルスＩＩ、ウシ乳頭腫ウイルスまたはトリ肉腫ウイルス由来のプロモーターのような他のウイルスプロモーターが包含される。
発現ベクターを適当な宿主細胞に導入することによって形質転換体が得られる。この形質転換体を適当な条件で培養することにより、所望のアドレノメデュリンを得ることができる。
アドレノメデュリンの化学合成は、当該技術分野で公知の方法で行われ得る。例えば、ペプチド合成機による固相法で合成され得る。Ｃ末端がアミド化されているペプチドは、ベンズヒドリルアミンレジンを用いて、ペプチド合成機にてＣ末端アミノ酸から順次Ｎ末端アミノ酸まで標準的なＤＣＣ／ＨＯＢｔで縮合させ、得られたペプチドレジンから標準的な開裂法（トリフルオロメタンスルホン酸法）で、目的とするペプチドを切り出して、作製し得る。
Ｃ末端がアミド化されたアドレノメデュリンを得るためには、宿主内で発現させて得られたペプチドのＣ末端のカルボキシル基を、化学的にアミド化するか、または目的とするアミノ酸配列のＣ末端にＧｌｙが付加したペプチドを調製し、これに前述のＣ末端アミド化酵素を作用させてアミド化すればよい。
あるいは、アドレノメデュリンのＣ末端にＧｌｙが付加したペプチドは、前述の通り、生体内のＣ末端アミド化酵素の作用によってＣ末端がアミド化され得る。
ジスルフィド結合は、例えば、空気酸化または適当な酸化剤でペプチドを酸化することにより形成させ得る。ジスルフィド結合の−ＣＨ２−ＣＨ２−結合への置換は、周知の方法（Ｏ．  Ｋｅｌｌｅｒら、Ｈｅｌｖ．  Ｃｈｉｍ．  Ａｃｔａ  （１９７４）  ５７：１２５３）により行い得る。一般に、ジスルフィド結合を−ＣＨ２−ＣＨ２−結合に置換することにより、ジスルフィド結合の開裂がなくなり、タンパク質が安定化する。
以上のようにして得られたアドレノメデュリンが膀胱平滑筋の伸展促進作用を有することは、当該分野で公知の、膀胱平滑筋の伸展促進作用についてのアッセイ方法を用いて行われ得る。アッセイ方法の例としては、任意の動物から摘出された膀胱を用いる方法、麻酔下に膀胱内圧の測定を行う方法などが挙げられる。ラットから摘出された膀胱を用いる場合、例えば、以下の条件で膀胱平滑筋の伸展促進作用をアッセイし得る：ラットから膀胱を摘出し、これをいくつかに切断することにより膀胱切片を得る。得られた膀胱切片を、タイロード液などの緩衝液中に浸漬しながら、アイソメトリックトランスデューサーおよびアイソトニックトランスデューサーなどの測定装置を用いて、膀胱の伸展または収縮を継続的に調べる。被験ペプチドの存在下および非存在下で膀胱を伸展させて、膀胱の伸展を比較することにより、ペプチドの膀胱平滑筋の伸展促進作用が判断される。  ＩＩＩ．膀胱平滑筋の伸展促進用組成物の調製
本発明の組成物は、有効量のアドレノメデュリンに加えて、当業者に公知の任意の賦形剤を含有し得る。賦形剤の例としては、乳糖、コーンスターチ、ステアリン酸マグネシウム、ミョウバンなどが挙げられる。
本発明の組成物は、当該分野で公知の方法に従って調製される。
本発明の組成物は、任意の形状であり得る。本発明の組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤のような固体；または水溶液および懸濁液のような液体であり得る。本発明の組成物を錠剤として経口投与する場合、通常、乳糖、コーンスターチ、およびステアリン酸マグネシウムのような賦形剤が使用され得る。本発明の組成物をカプセル剤として経口投与する場合、通常、乳糖および乾燥コーンスターチのような賦形剤が使用され得る。水性懸濁液として経口投与するためには、アドレノメデュリンを乳濁液または懸濁液と組み合わせて使用し得る。水性懸濁液は、必要に応じて、甘味剤および香料を含有し得る。本発明の組成物を筋肉内、腹腔内、皮下、および静脈内注射する場合は、滅菌した溶液にアドレノメデュリンを溶解させて緩衝液を調製し、ｐＨを適切な値に調節する。本発明の組成物を静脈内投与する場合は、組成物は等張であることが好ましい。
本発明の組成物は、排尿障害改善薬として用いられ得る。
ＩＶ．膀胱平滑筋の伸展促進用組成物の投与
本発明の組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ社、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡに記載されているような従来のペプチドの処方物の形で投与され得る。例えば、本発明の組成物は、経口投与；静脈投与、筋肉注射、腹腔内注射、および皮下注射のような非経口投与により投与され得る。これらのペプチドは、膀胱内注入によっても投与され得る。
本発明の組成物を、ヒトの被験体に投与する場合、１日あたりの用量は、通常、患者の症状、重篤度、感受性に対する個体差、体重、年齢などを考慮して、当業者によって適切に決定され得る。本発明の組成物は、１日１回投与されてもよいし、１日数回に分けて投与されてもよい。
本発明の組成物を投与することにより、排尿障害が改善される。
（実施例）
以下、本発明の膀胱平滑筋の伸展促進薬としてのアドレノメデュリンの作用についてさらに具体的に説明する。本発明は以下の実施例によって限定されるものではない。本実施例で用いたアドレノメデュリンは、配列番号６の１位のＴｙｒから５０位のＴｙｒまでのアミノ酸配列からなる、合成ペプチドである（Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｉｎｃ．より入手）。
（実施例１：雄ラット膀胱の伸展に対するアドレノメデュリンの効果）
８〜１６週齢の雄ラットの頭部を強打することにより、屠殺した。次いでこのラットを断頭し、瀉血し、そして膀胱を摘出した。摘出した膀胱を、４つの部分に切断することにより、膀胱切片を得た（図１）。
アドレノメデュリンのラット膀胱に対する影響を、アイソトニックトランスデューサーＴＤ−１１２Ｓ（日本光電社製）を１ｇ張力で用いて膀胱切片の収縮を測定することにより調べた。
まず、膀胱切片を、１００ｎＭ  アドレノメデュリンを含む（実験区）かまたは含まない（コントロール区）、３０ｍｌのタイロード溶液（Ｔｙｒｏｄｅ’ｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）中に浸したまま、アイソメトリックトランスデューサーに１ｇの張力をかけて取り付け、膀胱の弛緩を継続的に測定した。タイロード溶液の組成は、以下の通りである：１３９ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１１．９ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、２．６ｍＭ  ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．４ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ、１．７ｍＭ  ＣａＣｌ２、および５．５ｍＭグルコース；ｐＨ７．４）。
実験を５回繰り返した。結果を、図２に示す。白丸はコントロール区の平均値を示し、そして黒丸は実験区の結果を示す。それぞれの点の上下の棒線は、二因子分散分析標準偏差を示す。縦軸は弛緩の長さ（ｍｍ）を、横軸は時間（分）を示す。
図２に示されるように、アドレノメデュリンの存在下で張力をかけて膀胱を伸展させると、非存在下の場合と比較して膀胱壁がよく伸展するという結果が得られた。通常、蓄尿期の膀胱は、膀胱内にたまる尿によって受動的に伸展され、この伸展によって膀胱内圧の上昇が防がれ、一定の低い値に保たれる。膀胱が膨張しやすいことを、コンプライアンスが高いという。本実施例の結果から、アドレノメデュリンは、蓄尿期の膀胱を、よりコンプライアンスの高い状態に保ち、膀胱容積を増大させることが示された。
（実施例２：雄ラット膀胱の静止張力およびアセチルコリンによる収縮に対するアドレノメデュリンの効果）
実施例１と同様に膀胱切片を調製し、タイロード溶液中でアイソメトリックトランスデューサーＦＤピックアップ  ＴＢ６１１Ｔ（日本光電社製）にとり付け、膀胱の収縮を継続的に測定した。まず、タイロード溶液中に３０ｎＭ〜１ｍＭのアセチルコリンを添加した。これにより、膀胱の収縮が引き起こされた（図３）。図３の縦軸は張力（単位：ｇ）を、横軸は時間を示す。アセチルコリンにより誘導された収縮を確認後、洗浄によりアセチルコリンを洗い流し、その後、アドレノメデュリンを１００ｎＭ添加した。この結果、膀胱に収縮は起きなかった。次いで、３０ｎＭ〜１ｍＭのアセチルコリンを添加した。これにより、膀胱の再収縮が起きた。アドレノメデュリンの添加前にアセチルコリン単独で誘導された収縮と、アドレノメデュリンの存在下でアセチルコリンにより誘導された収縮とに、有意差はなかった。
従って、試験されたアドレノメデュリンは、膀胱の静止張力には影響せず、また排尿期の膀胱収縮に相当すると考えられる、アセチルコリンによる収縮を抑止する効果は示さなかった。
産業上の利用可能性
本発明により、アドレノメデュリンを含有する、膀胱平滑筋の伸展促進用組成物が提供される。このような組成物は、切迫性尿失禁、反射性尿失禁、および溢流性尿失禁からなる群より選択される排尿障害を改善するために有用である。
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
図１は、膀胱の切断方法を示す模式図である。図１（ａ）の実線部分で膀胱の端を切り落とし、点線にそって膀胱を切り開いた。切り開いた膀胱から、図１（ｂ）に示す３本の実線にそって４枚の膀胱切片を得た。
図２は、１ｇ張力での膀胱の伸展に対するアドレノメデュリンの効果について測定した結果を示すグラフである。白丸はコントロールを、黒丸はアドレノメデュリンを添加した場合を示す。
図３は、アセチルコリンによる膀胱の収縮に対するアドレノメデュリンの効果について測定した結果を示すグラフである。
図４は、ヒト褐色細胞腫由来のアドレノメデュリンのアミノ酸配列を示す図である。ＲＥ１からＲＥ６は、このアミノ酸配列をアルギニルエンドペプチダーゼで切断した場合に生成される断片を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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