(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（２）又は（３）の化学式で表わされ、植物、真菌、酵母、茸、動物、昆虫の何れかを由来とするセラミドを主成分とし、
上記セラミドが５５重量％以上含有され、
上記セラミドを主成分として含有する組成物が、標的細胞の甲状腺ホルモン受容体βの遺伝子発現量を増加させることによって脂肪分解を促進し、かつ、β酸化の脂質代謝関連酵素であるカルニチンアセチルトランスフェラーゼの遺伝子発現量を増加させることによって体内の脂肪及び糖のエネルギー産生を促進させることを特徴とする、体内脂肪の分解促進作用を有する組成物。
【化１】
0004753089.tif 000007
【化２】
0004753089.tif 000008
ここで、Ｒ２，Ｒ３は長鎖アルキル基又は長鎖アルケニル基であり、Ｇｌｕはグルコースであり、Ｇａｌはガラクトースである。
【請求項２】
前記植物由来のセラミドが、米ぬかからの抽出物であることを特徴とする、請求の範囲１に記載の体内脂肪の分解促進作用を有する組成物。
【請求項３】
前記植物由来のセラミドが、こんにゃく、小麦、とうもろこしの何れかによる抽出物であることを特徴とする、請求の範囲１に記載の体内脂肪の分解促進作用を有する組成物。
【請求項４】
請求項１〜３の何れかに記載の組成物と、カルニチンとを含有していることを特徴とする、食品または食品配合剤。
【請求項５】
一般式（２）又は（３）の化学式で表わされるセラミドを主成分として含有し、体内の脂肪及び糖のエネルギー産生を促進させ、体内脂肪の分解促進作用を有する組成物と、カルニチンと、を含有していることを特徴とする、食品または食品配合剤。
【化３】
0004753089.tif 000009
【化４】
0004753089.tif 000010
ここで、Ｒ２，Ｒ３は長鎖アルキル基又は長鎖アルケニル基であり、Ｇｌｕはグルコースであり、Ｇａｌはガラクトースである。
【請求項６】
一般式（２）又は（３）の化学式で表わされるセラミドを主成分として含有し、上記セラミドが、植物、真菌、酵母、茸、動物、昆虫の何れかの原料による抽出工程によって製造され、
上記抽出工程が、上記原料を有機溶媒で抽出処理し、該抽出液から不要固形分を除去した残留溶液からの析出結晶化工程を含み、
上記セラミドが５５重量％以上含有され、
上記セラミドを主成分として含有する組成物が、標的細胞の甲状腺ホルモン受容体βの遺伝子発現量を増加させることによって脂肪分解を促進し、かつ、β酸化の脂質代謝関連酵素であるカルニチンアセチルトランスフェラーゼの遺伝子発現量を増加させることによって体内の脂肪及び糖のエネルギー産生を促進させることを特徴とする、体内脂肪の分解促進作用を有する組成物。
【化５】
0004753089.tif 000011
【化６】
0004753089.tif 000012
ここで、Ｒ２，Ｒ３は長鎖アルキル基又は長鎖アルケニル基であり、Ｇｌｕはグルコースであり、Ｇａｌはガラクトースである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体内脂肪の分解促進作用を有する組成物及びそれを含有する食品又は食品配合剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトをはじめとしてほ乳類などの動物は、体内に蓄積された脂肪を酸化分解して生命活動のエネルギー源とする。
図４は一般的な細胞中でのエネルギー代謝経路を模式的に説明する図である。図示するように、甲状腺３から分泌される甲状腺ホルモン３Ａは、標的細胞４の表面にある甲状腺ホルモン受容体β５に到達すると、細胞内情報伝達物質６が解糖系７を活性化させて、代謝を促進する。図中の解糖系７における左部の経路は、脂肪や糖などが水と二酸化炭素にまで酸化分解する過程を示したものである。即ち、脂肪や糖などが、アセチルＣｏＡ（コエンザイムＡ）８と呼ばれる物質（補酵素）を経て、標的細胞４内のミトコンドリア９で、ＴＣＡ（トリカルボン酸）サイクル１０及び電子伝達系１１で代謝を受け、水と二酸化炭素にまで酸化分解する。この一連の反応により、生命活動に必要なエネルギーが、ＡＴＰ（アデノシン−５' −三リン酸）１２の形で生産される。
一方、図の解糖系７において右部に示す経路は、脂肪のβ酸化１３の分解経路である。この脂肪のβ酸化１３による分解には、カルニチン１４と呼ばれる物質（ミトコンドリア９内にアセチルＣｏＡ（アシルＣｏＡ８）を導入する輸送物質）が、関与していることが広く知られている。このためカルニチン１４は、脂肪酸化分解促進用、いわゆるダイエット用食品配合剤などとして広く使用されている（例えば、特許文献１参照）。
【０００３】
ところで、近年、セラミドと呼ばれる一連の同族体としての化学物質が広く知られるようになった。これは人体の皮膚中にも含有されていて、皮膚の保護物質である角質の間に存在し、皮膚を通しての体内からの水分の蒸発や体外からの有害物質の侵入を防ぐ機能があり、このため近年、保湿剤などとしての目的で皮膚や毛髪用の化粧品に配合されている（例えば、特許文献２参照）。また、特許文献３には、この成分を内服し、経口摂取することによって皮膚表面に同様の効果をもたらす技術が開示されている。
このように、セラミドは天然の皮膚中に含有されて保護保湿機能を有し、これに着目して皮膚化粧品に配合し、あるいは経口摂取して同様の機能を求める商品が広く開発されている。
【０００４】
セラミドは、一般式（１）に示す化学式及びその誘導体で表される同族体としての化学物質である。さらに、この分子にグルコースなどの糖質が結合した一般式（２）に示す化学式で表される物質はスフィンゴ糖脂質と呼ばれて、これも広義のセラミドと見なされている。
【化１】
0004753089.tif 000002
ここで、Ｒ1 は長鎖アルキル基又は長鎖アルケニル基であり、Ｒ2 は長鎖アルキル基又は長鎖アルケニル基であり、ＺはＨ又はＯＨである。
【化２】
0004753089.tif 000003
ここで、Ｒ3 は長鎖アルキル基又は長鎖アルケニル基であり、Ｇｌｕはグルコースである。
【０００５】
セラミドおよびセラミド類似物質は各種の簡易な構造の前駆物質から種々の反応経路で合成もされるが（例えば、特許文献４参照）、各種天然原料から抽出などの工程によって製造される。この天然原料としては、米ぬか、こんにゃく、とうもろこし、小麦、牛脳などがある。
［０００６］
最近、セラミドは皮膚の保護保湿機能の他に、癌細胞を死亡させる所謂細胞死機能（アポトーシス）を有するという発表がされている（例えば、非特許文献１参照）。
［０００７］
【特許文献１】
特開２０００−１６９１６号公報
【特許文献２】
特開２００３−１８３１４８号公報
【特許文献３】
特開２００４−３５４５６号公報
【特許文献４】
特開平７−１７９４１０号公報
【非特許文献１】
木下  幹郎  他７名、「スフィンゴイド塩基による大腸ガン細胞死の誘導とその機能」、日本農芸化学会大会講演要旨集、３Ａ１７ｐ１３、ｐ．２１２、２００３年
【非特許文献２】
杉田陸海  他、新生化学実験講座  ４、脂質ＩＩＩ−糖脂質、ｐｐ．８１〜９２、ｐｐ．１０９〜１１１、日本生化学会編、（株）東京化学同人発行、１９９０年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
［０００８］
従来、セラミドは專ら皮膚の保護保湿機能に着目されており、他の生理機能に及ぼす効果が殆ど知られていない。
［０００９］
本発明は、上記課題に鑑み、細胞の解糖系における体内脂肪及び糖のエネルギー産生を促進させる効果を有する、体内脂肪の分解促進作用を有する組成物及びそれを含有する食品又は食品配合剤を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
［００１０］
本発明者らは、セラミドをマウスに経口投与してその生体内への作用を詳細に研究した。その結果、セラミドが従来知られていなかった体内の脂肪や糖のエネルギー産生の促進機能を有することを見出し、本発明に想到したものである。
［００１１］
上記目的を達成するため、本発明の体内脂肪の分解促進作用を有する組成物は、下記一般式（２）又は（３）の化学式で表わされ、植物、真菌、酵母、茸、動物、昆虫の何れかを由来とするセラミドを主成分とし、上記セラミドが５５重量％以上含有され、セラミドを主成分として含有する組成物が、標的細胞の甲状腺ホルモン受容体βの遺伝子発現量を増加させることによって脂肪分解を促進し、かつ、β酸化の脂質代謝関連酵素であるカルニチンアセチルトランスフェラーゼの遺伝子発現量を増加させることによって体内の脂肪及び糖のエネルギー産生を促進させることを特徴とする。
【化２】
0004753089.tif 000004
【化３】
0004753089.tif 000005
ここで、Ｒ２，Ｒ３は長鎖アルキル基又は長鎖アルケニル基であり、Ｇｌｕはグルコースであり、Ｇａｌはガラクトースである。
上記構成において、セラミドは、好ましくは、米ぬかからの抽出工程によって製造される。また、セラミドは、こんにゃく、小麦、とうもろこしの何れかによる抽出工程によっても製造され得る。好ましくは、上記セラミドは、本発明の体内脂肪の分解促進作用を有する組成物として、５５重量％以上含有される。
セラミドを主成分として含有する組成物は、好ましくは、標的細胞の甲状腺ホルモン受容体βの遺伝子発現量を増加させることによって脂肪分解を促進し、かつ、β酸化の脂質代謝関連酵素であるカルニチンアセチルトランスフェラーゼの遺伝子発現量を増加させることによって体内の脂肪及び糖のエネルギー産生を促進させる。
【００１２】
上記構成によれば、植物、真菌、酵母、茸、動物、水生生物、昆虫の何れか、例えば、植物のうち、米ぬか、小麦、とうもろこし、こんにゃくなどから抽出などの工程を経て製造されセラミドを主成分として含有する組成物により、標的細胞の甲状腺ホルモン受容体βの遺伝子発現量を増加させることによって脂肪分解を促進し、かつ、β酸化の脂質代謝関連酵素であるカルニチンアセチルトランスフェラーゼの遺伝子発現量を増加させることによって体内の脂肪及び糖のエネルギー産生を促進させることができる。
【００１３】
また、本発明の食品または食品配合剤は、セラミドを主成分とする組成物を含有し、体内脂肪及び糖のエネルギー産生を促進することを特徴とする。上記構成において、好ましくは、さらに、カルニチンを含有している。
本発明によれば、米ぬかや小麦、とうもろこし、こんにゃくなどの植物、或いは真菌、酵母、茸、動物、水生生物、昆虫の何れかに由来するセラミドを主成分とする組成物を、食品または食品配合剤に添加することにより、食品から摂取することができるので摂取が容易となる。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の米ぬかなどに由来するセラミドを主成分とする組成物や、これを含有する食品又は食品配合剤によれば、体内脂肪の分解および糖、エネルギー代謝が促進されるので、体内脂肪、体重の増加を防止することができ、所謂ダイエット効果が得られる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明のセラミドを主成分とする体内脂肪及び糖のエネルギー産生を促進する作用を有する組成物の作用機序を説明する模式的図である。
【図２】実施例及び比較例のマウスの各群の肝臓細胞のマイクロアレイスキャンナーによるｍＲＮＡ発現パターンを示す図であり、それぞれ、（ａ）は実施例１のＲ群、  （ｂ）は実施例２のＫ群、（ｃ）は比較例のＤ群の場合を示している。
【図３】図２の蛍光強度から計算される実施例及び比較例のｍＲＮＡ発現量の相対比を示す表である。
【図４】一般的な細胞中でのエネルギー代謝経路を模式的に説明する図である。
【符号の説明】
【００１６】
１：セラミドを主成分とする組成物
２：セラミド
３：甲状腺
３Ａ：甲状腺ホルモン
４：標的細胞
５：甲状腺ホルモン受容体β
６：細胞内情報伝達物質
７：解糖系
８：アセチルＣｏＡ
９：ミトコンドリア
１０：ＴＣＡサイクル
１１：電子伝達系
１２：ＡＴＰ
１３：β酸化
１４：カルニチン
１５：カルニチンアセチルトランスフェラーゼ
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、図面に基づいて本発明の実施の形態を詳細に説明する。
先ず、本発明のセラミドを主成分とする、体内脂肪及び糖のエネルギー産生を促進する作用を有する組成物について説明する。なお、本発明の組成物は、後述するように体内の脂肪及び糖のエネルギー産生を促進する作用を有する組成物であるが、適宜、体内脂肪の分解促進作用を有する組成物と呼ぶ。
本発明のセラミドを主成分とする、体内脂肪及び糖のエネルギー産生の促進作用を有する組成物は、上記した一般式（２）の化学式で表わされるセラミド中のグルコースを含むスフィンゴ糖脂質、又は下記一般式（３）の化学式で表わされるガラクトースを含むスフィンゴ糖脂質である。
【化３】
0004753089.tif 000006
ここで、Ｒ3 は長鎖アルキル基又は長鎖アルケニル基であり、Ｇａｌはガラクトースである。この化学式（３）で表わされるセラミドは、一般式（２）で表わされるセラミド中のグルコース（Ｇｌｕ）をガラクトース（Ｇａｌ）に置き換えた構造となっている。
【００１８】
上記セラミドは、各種天然原料から抽出工程や発酵工程などの製造工程によって製造される。このような天然原料としては、植物、真菌、酵母、茸、動物、水生生物、昆虫が挙げられる。
植物由来の天然原料としては、陸上及び海洋における植物が挙げられ、とくに、米ぬかや、こんにゃく、小麦、とうもろこしなどが挙げられる。動物由来の天然原料としては、牛脳やブタ脳などの家畜動物の組織が挙げられる。
水生生物由来の天然原料としては、川や海洋に生息する生物であり、例えば、貝類、魚類、ウニやヒトデなどの棘皮動物などが挙げられる（非特許文献２参照）。さらに、昆虫由来の天然原料としては、イナゴなどが挙げられる。
この組成物中のセラミドの純度としては、５０％以上が好ましい。純度が５０％以下では、例えば脂肪酸等を不純物として含むので好ましくない。
【００１９】
上記抽出処理は、原料を低沸点有機溶剤で抽出処理した後、この抽出液から不溶固形分を除去し、適宜ろ過などにより不純分を除く処理を行い、最後に残留溶液からの析出結晶化によって行われる。
ここで、低沸点有機溶剤としては、ベンゼン，ヘプタン，ヘキサン，シクロヘキサンなどの炭化水素、メタノールやエタノールなどのアルコール、アセトンやメチルエチルケトン（ＭＥＫ）などのケトン、酢酸メチルや酢酸エチルなどのエステルなどが挙げられる。これら一部の溶剤の中には、水分を含む方が有効である場合もある。この場合には水分として、例えば、０．５乃至３０％の範囲とすることができる。
【００２０】
原料が米ぬかの場合には、精米工程から副生する米ぬかを用いることができる。上記工程で製造される米由来のセラミドを主成分とする組成物は、その色が淡褐色から褐色を呈し僅かに特異臭があり、そのセラミド純度が６５〜８５％であり、遊離脂肪酸等をほとんど含有しないという特徴がある。なお、上記セラミドの定量分析は、主として糖脂質の定量に供される光散乱検出機能を備えるＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）によっている。
【００２１】
同様の工程で、こんにゃく由来のセラミドは、こんにゃく芋からこんにゃくを製造する工程で副生し、通常は廃棄物となる芋皮から、米ぬか由来の組成物と同様の工程で製造される。同様にして、とうもろこし、小麦のふすま、牛脳やブタ脳からは、それぞれ、とうもろこし、小麦、牛脳、ブタ脳由来のセラミドが得られる。
【００２２】
また、本発明の体内脂肪及び糖のエネルギー産生の促進作用を有する組成物を含有する食品又は食品配合剤は、米ぬか、こんにゃく、とうもろこし、小麦、牛脳、ブタ脳などの植物、真菌、酵母、茸、動物、水生生物、昆虫などからの抽出工程などによって製造されるセラミドを主成分とする組成物を含有している。
この組成物の食品または食品配合剤への含有率は、例えば食味を損なわない程度とすれば、食品から摂取することができるので、摂取が容易となる。この組成物を含有する食品としては、例えば米飯、パン、そば、うどん、菓子などにこの組成物を直接配合したものでよい。この組成物を飲料（ドリンク）に添加したり、錠剤やカプセル剤としてもよい。さらに、この組成物を、例えば、サイクロデキストリン（別名：シクロデキストリン、環状オリゴ糖）、澱粉などの希釈粉体に適切な配合比で配合した食品配合剤として用意し、この粉体を上記食品製造時に配合してもよい。セラミドの摂取量は、成人の場合には、１日につき０．０６ｍｇ〜１０００ｍｇ程度であればよい。
上記食品又は食品配合剤には、カルニチンが含有されていてもよい。カルニチンの添加量は、成人の場合には１日につき３０ｍｇ〜１０００ｍｇ程度であればよい。
【００２３】
次に、本発明のセラミドを主成分とする組成物及びこの組成物を含有する食品又は食品配合剤が体内に摂取された後、体内脂肪の分解及び糖のエネルギー産生を促進させる機能について説明する。
図１は、本発明のセラミドを主成分とする体内脂肪及び糖のエネルギー産生を促進する作用を有する組成物の作用機序を説明する模式的図である。本発明の組成物１は、セラミド２を主成分としている。体内脂肪の分解促進作用を有する組成物１は、セラミド２の摂取によって、標的細胞４の甲状腺ホルモン受容体β５の遺伝子発現を増加させる。このため、細胞内情報伝達物質６によって活性化を受けた解糖系７の代謝を促進する。
上記組成物１は、解糖系７におけるアセチルＣｏＡ８の代謝経路として、標的細胞４内のミトコンドリア９におけるＴＣＡサイクル１０ではなく、カルニチン１４の作用による、所謂β酸化１３を促進させる。β酸化１３は、その脂質代謝関連酵素であるカルニチンアセチルトランスフェラーゼ１５の遺伝子発現量の増加により、体内の脂肪及び糖のエネルギー産生を促進させる。
なお、図において、セラミド２の摂取によってβ酸化１３が進む経路を実線の矢印Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄで示している。一方、脂肪酸合成及びＴＣＡサイクル１０の反応は減少するので、点線矢印で示している。
これにより、本発明の体内脂肪の分解促進作用を有する組成物１は、体内脂肪分解と、糖やエネルギーの代謝促進作用を有している。
【００２４】
本発明のセラミドを主成分とする組成物１を含有する食品又は食品配合剤を経口摂取することで、上記セラミド２の作用によって、標的細胞４の甲状腺ホルモン受容体β５の遺伝子発現は増加し、細胞内情報伝達物質６によって活性化合物を受けた解糖系７の代謝を促進する。そして、カルニチン１４の作用によるβ酸化１３を促進させる。また、本発明のセラミドを主成分とする組成物１を含有する食品又は食品配合剤にカルニチン１４が添加されている場合には、さらに、β酸化１３が促進される。
これにより、セラミドを主成分とする組成物１を含有する食品又は食品配合剤を経口摂取することで、体内の脂肪や糖のエネルギー産生が促進される。これによって、所謂ダイエット効果を発現させることができる。
【実施例】
【００２５】
以下、実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１のセラミドを主成分として含有する組成物１として、米ぬかから製造した。精米工程から副生した米ぬか２００ｇに、ｎ−ヘキサンを５００ｃｍ3 加え、ソックスレー装置によってｎ−ヘキサン可溶成分を抽出した。この抽出液からｎ−ヘキサンを留去し、適宜水を添加して不溶物を得る。不溶物を分取したのち、苛性ソーダによって加水分解した。
次に、酸により中和し、ｎ−ヘキサンとさらに水を添加した。この水からなる水相中にヘキサン不溶分及び塩を溶解させて、ｎ−ヘキサン相からヘキサン不溶分及び塩を取り除いた。限外ろ過膜によるろ過装置を用いて、ｎ−ヘキサン相をろ過した。この工程で、ｎ−ヘキサン相中の脂肪酸及び色素等の大部分を取り除いた。
次に、限外ろ過膜不通過の溶液を回収し、ｎ−ヘキサンを留去し、残分を５０ｃｍ3 の９５％含水エタノールに一旦溶解させた後、析出再結晶化を行った。この析出再結晶化を数回繰り返して行い、乾燥後に米ぬか由来のセラミド２を含有する組成物２２０ｍｇを得た。この得られた組成物１の外観は淡褐色であり、僅かに特異臭のある粉末状結晶であった。
【００２６】
実施例１のセラミド２を主成分として含有する組成物を、光散乱検出器を有するＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）により定量分析を行ったところ、セラミドの純度は８３％であることが分かった。
さらに、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（展開液、クロロホルム：メタノール：水＝６５：１６：２）による分析を行い、上記実施例１の組成物２には、脂肪酸が含有されていないこことが分かった。
【００２７】
実施例２の組成物１として、米ぬかの代わりに、こんにゃく製造工程においてこんにゃく芋から剥ぎ取られ、通常は廃棄される芋皮を裁断して乾燥した材料を用いた以外は、実施例１の組成物１と同じ製造方法を用いて本発明のこんにゃく由来の実施例２の組成物１を製造した。芋皮２００ｇから淡黄色の組成物１６０ｍｇが得られた。
そして、実施例１と同様に、ＨＰＬＣ及びシリカゲル薄層クロマトグラフィーによる分析を行った。その結果、実施例２の組成物１のセラミド純度は６１％であり、この組成物１には若干の脂肪酸成分が含有されていることが分かった。
【００２８】
実施例３のセラミドを主成分として含有する組成物１を、ブタ（豚）脳から製造した。具体的には、ブタ脳１００ｇをクロロホルムとメタノールの混合溶液（クロロホルム：メタノール＝２：１）で均一化し、ろ過した。このろ過液に１ｍｏｌ／１０００ｃｍ3 の水酸化カリウムとエタノール溶液を加えて、リン脂質を分解した。
次に、酢酸を加えて中和し、Ｆｏｌｃｈ分配法の下層を取り出し、ロータリーエバポレータを用いて溶媒を留去し、セラミドを含有する組成物を得た。
最後に、上記組成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ブタ脳由来の実施例３の白色の組成物１５００ｍｇを得た。
そして、実施例１と同様に、ＨＰＬＣ及びシリカゲル薄層クロマトグラフィーによる分析を行った。その結果、実施例３の組成物１のセラミド純度は９８％であり、この組成物１には脂肪酸が含有されていないことが分かった。
【００２９】
実施例４のセラミドを主成分として含有する組成物１を、米ぬかから製造した。具体的には、米ぬか由来のガム油１００ｇに１ｍｏｌ／１０００ｃｍ3 の水酸化カリウムとエタノール溶液を加えて、リン脂質を分解した。
次に、酢酸を加えて中和し、Ｆｏｌｃｈ分配法の下層を取り出し、ロータリーエバポレータを用いて溶媒を留去し、セラミドを含有する組成物を得た。この組成物をアセチル化し、組成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分離した。
上記組成物を脱アセチル化し、透析により塩を取り除き、さらに、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、米ぬか由来のガム油から実施例４の白色の組成物１０００ｍｇを得た。
そして、実施例１と同様に、ＨＰＬＣ及びシリカゲル薄層クロマトグラフィーによる分析を行った。その結果、実施例４の組成物１のセラミド純度は９９％であり、脂肪酸が含有されていないことが分かった。
【００３０】
米ぬか由来のガム油の代わりに、とうもろこし由来のガム油ｇを用いた以外は、実施例４の組成物１と同じ製造方法を用いて、本発明のとうもろこし由来の実施例５の組成物１を製造した。ガム油１００ｇから白色の組成物１１００ｍｇが得られた。
そして、実施例１と同様に、ＨＰＬＣ及びシリカゲル薄層クロマトグラフィーによる分析を行った。その結果、実施例５の組成物１のセラミド純度は９８％であり、この組成物１には脂肪酸が含有されていないことが分かった。
【００３１】
実験動物としてＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（オス６週齢）を使用し、ＡＩＮ−９３Ｇ組成飼料で１週間の予備飼育した後、実施例のマウスには、飼料として、ＡＩＮ−９３Ｇ組成飼料に上記米ぬか由来の実施例１の組成物１を０．５％添加した飼料及びイオン交換水を自由摂取させた（以下、Ｒ群と呼ぶ）。
また、別のマウスには、飼料として、上記実施例２のこんにゃく由来の組成物１を０．５％添加した飼料及びイオン交換水を自由摂取させた（以下、Ｋ群と呼ぶ）。
比較例のマウス（以下、Ｄ群と呼ぶ）には、ＡＩＮ−９３Ｇ組成飼料とイオン交換水を自由摂取させた。予備飼育の後、上記飼料を２週間投与後、屠殺して肝臓を摘出した。
ここで、実施例１及び２の飼料のセラミド濃度を同じにするために、実施例２の飼料には、適量のβサイクロデキストリンを添加した。また、比較例の飼料にも、βサイクロデキストリンを添加した。
【００３２】
次に、本発明の体内脂肪の分解促進作用を有する組成物の体内脂肪の分解促進作用を、遺伝子により測定した結果について説明する。
２週間の実験飼料投与後、各群のマウスから肝臓を摘出してトリゾール試薬（インビトロ社製、商品名ＴＲＩＺＯＬ）で全ＲＮＡを抽出し、その後ターゲットｃＲＮＡを調整し、遺伝子発現用プレアレイスライド（Ｍｏｕｓｅ  Ｂｉｏａｒｒａｙ社、商品名：ＣｏｄｅＬｉｎｋ及びＵｎｉｓｅｔ）にハイブリダイゼーションを行った。この際、蛍光標識となる蛍光体として、Ｓｔｒａｐｔａｖｉｄｉｎ−Ｃｙ５を用い、その蛍光強度をマイクロアレイスキャンナー（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社製、モデルＧｅｎｅ  Ｐｉｘ  ４０００Ｂ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  Ｓｃａｎｎｅｒ）で検出し、ＲＮＡによる発現遺伝子の定量を行なった。
【００３３】
実施例１のＲ群及び実施例２のＫ群のｍＲＮＡ発現パターンを、比較例のＤ群を基準にして、その発現パターンを調べた。
図２は、実施例及び比較例のマウスの各群の肝臓細胞のマイクロアレイスキャンナーによるｍＲＮＡ発現パターンを示す図であり、それぞれ、（ａ）は実施例１のＲ群、（ｂ）は実施例２のＫ群、（ｃ）は比較例のＤ群の場合を示している。図２から明らかなように、Ａ及びＥの発現遺伝子部位のデータから、Ｒ群及びＫ群の遺伝子発現は、Ｄ群のそれよりも多いことが分かる。Ｂの発現遺伝子部位のデータから、Ｒ群の遺伝子発現は、Ｄ群のそれよりも多いが、Ｋ群では発現しないことが分かる。Ｃ及びＧの発現遺伝子部位のデータから、Ｒ及びＫ群の遺伝子発現は、Ｄ群のそれよりも少ないことが分かる。上下に示すＤの発現遺伝子部位のデータから、Ｒ群及びＫ群の遺伝子発現はＤ群のそれよりも多くなったり、低下したりしていることが分かる。Ｆの発現遺伝子部位のデータから、Ｒ群の遺伝子発現はＤ群のそれよりも著しく少なく、Ｋ群の遺伝子発現はＣ群のそれよりも多いことが分かる。
【００３４】
図３は、図２の蛍光強度から計算される実施例及び比較例のｍＲＮＡ発現量の相対比を示す表である。なお、実施例１のＲ群及び実施例２のＫ群の値は、Ｄ群を１としたときの、ｍＲＮＡ発現量である。図から明らかなように、実施例１の組成物１によるＲ群及び実施例２の組成物１によるＫ群の甲状腺ホルモン受容体β５のｍＲＮＡ（メッセンジャーＲＮＡ）発現量が、それぞれ、１．２１７８、１．１１５６であり、比較例のＤ群よりも増加し、そして、実施例１のＲ群のほうが実施例２のＫ群よりも大きいことが分かった。
これにより、実施例の組成物１によるＲ群及びＫ群の主成分であるセラミド２が、標的細胞４の甲状腺ホルモン受容体β５の遺伝子発現を促進し、標的細胞４内の解糖系７の代謝を活性化させ、代謝促進を促すことが明らかとなった。
【００３５】
標的細胞４内の糖代謝関連酵素のうち、実施例のＫ、Ｒ群において、ヘキソキナーゼ、ホスホフルクトキナーゼのｍＲＮＡ発現量はＤ群に比べて増加している。一方、実施例のＫ、Ｒ群において、糖代謝関連酵素であるフルクトースビスホスファターゼのｍＲＮＡ発現量は、Ｄ群に比べて減少している。
このため、解糖系７が亢進している可能性が考えられるが、ＴＣＡサイクル１０の律速酵素のｍＲＮＡ発現量は、Ｋ及びＲ群がＤ群とは顕著な差を示さないので、解糖系７で産生されたアセチルＣｏＡ８の代謝経路はＴＣＡサイクル１０以外にあると推定した。
【００３６】
上記アセチルＣｏＡ８は脂肪酸の合成に必要な成分である。そこで、脂肪酸合成の経路を解析した結果、脂肪酸合成に関与する酵素のｍＲＮＡ量には、実施例１，２及び比較例において大きな変動はなかった。
【００３７】
次に、細胞内のβ酸化１３についての解析を行った。
細胞内のミトコンドリア９内に脂肪酸が取り込まれるためには、アセチルＣｏＡ８に、カルニチン１４が結合する必要がある。カルニチンアセチルトランスフェラーゼ１５は、このカルニチン１４の受け渡しに関与している酵素である。
図３から明らかなように、β酸化１３の代謝関連酵素であるカルニチンアセチルトランスフェラーゼ１５のｍＲＮＡ発現量は、実施例のＲ群、Ｋ群において、それぞれ、１．４６２９、１．３８０６であり、比較例のＤ群よりも増加し、Ｒ群のほうがＫ群よりも大きいことが分かった。
【００３８】
実施例３〜５の組成物１の場合にも、上記実施例１及び２と同様の遺伝子測定の結果が得られた。
【００３９】
これにより、実施例の組成物１によるＲ群及びＫ群の主成分であるセラミド２が、標的細胞４内のβ酸化１３の代謝関連酵素であるカルニチンアセチルトランスフェラーゼ１５の遺伝子発現を促進し、脂肪酸のβ酸化１３を亢進し、エネルギー産生を促進することが明らかとなった。
【００４０】
上記実施例から分かるように、実施例の組成物１の主要成分であるセラミド２を摂取させることで、標的細胞４の甲状腺ホルモン受容体β５の遺伝子発現を促進させ、細胞内の解糖系７及びβ酸化１３を促進し、脂肪や糖のエネルギー産生が亢進することが見出された。
【００４１】
本発明は、上記実施例に限定されることなく、特許請求の範囲に記載した発明の範囲内で種々の変形が可能であり、それらも本発明の範囲内に含まれることはいうまでもない。例えば、本発明のセラミド２の抽出方法などは、上記実施例に限らないことはいうまでもない。
【図１】
0004753089.tif 000013
【図３】
0004753089.tif 000014
【図４】
0004753089.tif 000015
【図２】
0004753089.tif 000016