(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0004717210.tif 000031
［式中、
Ｒ1及びＲ2はそれぞれ独立して水素又はＣ1−Ｃ6アルキルから選ばれ；
Ｒ3は
【化２】
0004717210.tif 000032
から選ばれ、
【化３】
0004717210.tif 000033
は炭素原子及びＮ、Ｏ又はＳから選ばれる１〜３個のヘテロ原子から成る５員複素芳香環であり；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7はそれぞれ独立して水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、フッ素化Ｃ1−Ｃ6アルキル、シアノ、（ヒドロキシ）Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、フッ素化Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6アルカノイル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキル−ＮＲ8Ｒ9、ＮＲ8Ｒ9、ＣＯＮＲ8Ｒ9又はＳＯ2ＮＲ8Ｒ9から選ばれ；
Ｒ8は水素又はＣ1−Ｃ6アルキルから選ばれ、
Ｒ9は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル又はＣ1−Ｃ6アルキル−ＮＲ13Ｒ14から選ばれるか、あるいは
Ｒ8及びＲ9はそれらが結合している窒素と一緒になって非置換もしくは置換ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル又は４−Ｎ（Ｒ10）−ピペラジニル基を形成し、ここで置換基はＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、ＮＲ11Ｒ12又はＣＯＮＲ11Ｒ12から選ばれ；
Ｒ10は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ6シクロアルキル、（ヒドロキシ）Ｃ1−Ｃ6アルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、アラルケニル又はＣ（Ｏ）ＮＨ2から選ばれ；
Ｒ11及びＲ12はそれぞれ独立して水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、（ヒドロキシ）Ｃ1−Ｃ6アルキル又は（Ｃ1−Ｃ6アルコキシ）Ｃ1−Ｃ6アルキルから選ばれ；
Ｒ13及びＲ14はそれぞれ独立して水素又はＣ1−Ｃ6アルキルから選ばれるか、あるいは
Ｒ13及びＲ14はそれらが結合している窒素と一緒になって非置換もしくは置換ピロリジニル、ピペリジニル又はモルホリニル基を形成し、ここで置換されている場合の置換基はＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、ＮＲ11Ｒ12及びＣＯＮＲ11Ｒ12から選ばれ；
但し、Ｒ3が
【化４】
0004717210.tif 000034
であり、Ｒ5及びＲ6が両方とも水素である場合、Ｒ4は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、フッ素化Ｃ1−Ｃ6アルキル、シアノ、（ヒドロキシ）Ｃ2−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、フッ素化Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6アルカノイル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキル−ＮＲ8Ｒ9、ＮＲ8Ｒ9、ＣＯＮＲ8Ｒ9又はＳＯ2ＮＲ8Ｒ9から選ばれる］
の化合物又はその製薬学的に許容され得る塩。
【請求項２】
Ｒ1及びＲ2がそれぞれ独立して水素及びＣ1−Ｃ4アルキルから選ばれ；
Ｒ3が
【化５】
0004717210.tif 000035
から選ばれ、
【化６】
0004717210.tif 000036
がピロリル、フラニル、チエニル又はイミダゾリルから選ばれる５員複素芳香環であり；
Ｒ4及びＲ6がそれぞれ独立して水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、フッ素化Ｃ1−Ｃ4アルキル、シアノ、（ヒドロキシ）Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、フッ素化Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、Ｃ1−Ｃ4アルカノイル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルキル−ＮＲ8Ｒ9、ＮＲ8Ｒ9、ＣＯＮＲ8Ｒ9又はＳＯ2ＮＲ8Ｒ9から選ばれ；
Ｒ5が水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル又はＣ1−Ｃ4アルコキシから選ばれ；
Ｒ8が水素又はＣ1−Ｃ4アルキルから選ばれ、
Ｒ9が水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル又はＣ1−Ｃ4アルキル−ＮＲ13Ｒ14から選ばれるか、あるいは
Ｒ8及びＲ9がそれらが結合している窒素と一緒になって非置換もしくは置換ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル又は４−Ｎ（Ｒ10）−ピペラジニル基を形成し、ここで置換基はＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、ＮＲ11Ｒ12又はＣＯＮＲ11Ｒ12から選ばれ；
Ｒ10が水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、（ヒドロキシ）Ｃ1−Ｃ4アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール（Ｃ1−Ｃ4）アルキル、アリール（Ｃ1−Ｃ4）アルケニル又はＣ（Ｏ）ＮＨ2から選ばれ；
但し、Ｒ3が
【化７】
0004717210.tif 000037
であり、Ｒ5が水素である場合、Ｒ4は水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、フッ素化Ｃ1−Ｃ4アルキル、シアノ、（ヒドロキシ）Ｃ2−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、フッ素化Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、Ｃ1−Ｃ4アルカノイル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルキル−ＮＲ8Ｒ9、ＮＲ8Ｒ9、ＣＯＮＲ8Ｒ9又はＳＯ2ＮＲ8Ｒ9から選ばれる請求項１記載の化合物又はその製薬学的に許容され得る塩。
【請求項３】
【化８】
0004717210.tif 000038
［式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮ−Ｒ15から選ばれ、ここでＲ15は水素及びＣ1−Ｃ4アルキルから選ばれる］
から選ばれる請求項２記載の化合物又はその製薬学的に許容され得る塩。
【請求項４】
Ｒ10が水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、（ヒドロキシ）Ｃ1−Ｃ6アルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、アラルケニル又はＣ（Ｏ）ＮＨ2から選ばれる
請求項１記載の化合物又はその製薬学的に許容され得る塩。
【請求項５】
製薬学的に許容され得る担体及び請求項１記載の化合物を含む製薬学的組成物。
【請求項６】
インポテンスの処置を必要としている男性の患者におけるインポテンスの処置用の製薬学的組成物を製造するための請求項１記載の化合物の使用。
【請求項７】
陰茎組織中のｃＧＭＰの濃度を増加させる必要がある男性の患者において陰茎組織中のｃＧＭＰの濃度を増加させるための製薬学的組成物の製造における請求項１記載の化合物の使用。
【請求項８】
心不全、肺高血圧及び狭心症から成る群より選ばれる状態の処置を必要としている患者において心不全、肺高血圧及び狭心症から成る群より選ばれる状態の処置用の医薬製剤を製造するための請求項１記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【関連出願との関係】
本出願は１９９８年９月４日に出願された合衆国仮出願出願番号６０／０９９，２６８からの優先権を主張し、該出願の内容は引用することにより本明細書の内容となる。
【０００２】
【発明の分野】
本発明は、ある一定の新規な化合物、それらの合成及び男性の勃起機能障害の処置のためのそれらの使用に関する。さらに具体的には、本発明の化合物は男性の勃起機能障害の処置のために有用な置換５−ヘテロシクリルピラゾロピリミジノンである。
【０００３】
【発明の背景】
勃起機能障害（ＥＤ）は、満足な性交のために十分に硬い勃起を達成、又は維持できないこととして定義される。現在、男性人口の約７〜８％がある程度のＥＤに苦しんでいると見積もられ、それは合衆国のみにおいて少なくとも２千万人の男性に等しい。ＥＤの起こり易さ（ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ）は年令と共に増加するので、この状態の出現率は人口の平均年令が上昇すると共に将来上昇するであろうと思われる。
【０００４】
男性の勃起機能障害は心因性及び／又は器官性要因の結果であり得る。ＥＤは多−要因性（ｍｕｌｔｉ−ｆａｃｔｏｒｉａｌ）であるが、男性人口内のあるサブグループが該障害の症状をより呈し易い。特に糖尿病、高血圧、心疾患及び多発性硬化症の患者は特に高いＥＤの有病率を有している。さらに血圧降下薬、抗うつ薬、鎮静薬及び抗不安薬のようなある種の薬剤を摂取する患者は、よりＥＤに苦しむ傾向がある。
【０００５】
ＥＤのための処置は多様な薬理学的薬剤（ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ  ａｇｅｎｔｓ）、真空装置及び人工陰茎（ｐｅｎｉｌｅ  ｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓ）を含む。薬理学的薬剤の中で、パパベリン、フェントラミン及びアルプロスタジルが現在実際に用いられている。これらの薬剤は直接の海綿体内もしくは尿道内注入の後のみに有効であり、プリアピスム、線維症、陰茎痛及び注入部位における血腫のような副作用を伴う。真空装置はＥＤのための非侵襲性の代わりの処置である。これらの装置は、陰茎の軸の回りに負圧を生ぜしめ、受動的動脈拡大を介して海綿体中への血流を増加させることにより勃起を起こさせる。この形態の治療は器官に由来するＥＤにおいて多くの場合に成功するが、不平不満は自然さ（ｓｐｏｎｔａｎｅｉｔｙ）の欠如及び機械装置の使用に含まれる時間、ならびに射精の困難及び不快を含んでいる。多様な半−硬又は膨張可能な人工陰茎が、特に糖尿病の男性において、いくらかの成功を以て用いられてきた。これらの装置は一般に、他の処置の選択肢が失敗した時に考慮され、感染及び虚血の危険の増加を伴う。
【０００６】
最近、ホスホジエステラーゼＶ（ＰＤＥＶ）阻害剤であるシルデナフィル（ＶｉａｇｒａR）がＥＤの処置のための経口的に有効な薬物（ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）としてＦＤＡにより認可された。シルデナフィル、５−［２−エトキシ−５−（４−メチルピペラジン−１−イルスルホニル）フェニル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン及び複数の関連類似体ならびに抗狭心症薬としてのそれらの使用は米国特許第５，２５０，５３４及び５，３４６，９０１号に記載されている。男性の勃起機能障害の処置のためのシルデナフィル及び関連類似体の使用は、１９９４年１２月２２日に公開されたＰＣＴ国際出願公開番号ＷＯ  ９４／２８９０２に記載されている。臨床研究において、該薬剤は心因性もしくは器官性の病因のＥＤに苦しむ男性の約７０％において性的機能を向上させた。しかしながら、該薬剤は根治的前立腺切除術を受けた患者においてはあまり劇的な有効性を示さず、プラシーボにおける１５％に対してシルデナフィルを摂取した患者の４３％における勃起の向上であった。さらにシルデナフィルの使用は、頭痛、潮紅及び色覚の分裂（ｄｉｓｒｕｐｔｅｄ  ｃｏｌｏｒ  ｖｉｓｉｏｎ）を含むいくつかの望ましくない副作用を伴い、それは多様な組織への非−選択的影響から生ずる。これらの欠点にかかわらず、該薬剤は注入を介する陰茎内への直接の薬物の導入、外部装置の使用又は外科手術的方法を含む他の処置より好ましいと患者によってみなされている。
【０００７】
Ｄｉｎｈ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９７５，４０，２８２５）はホルマイシンＢ（ｆｏｒｍｙｃｉｎ  Ｂ）の類似体の製造における副産物及び中間体としての５−ヒドロキシメチル−２−フラニル及び５−ベンジルオキシ−２−フラニルピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンの製造を記載している。
【０００８】
Ｂａｃｏｎ  ｅｔ  ａｌ．は米国特許第５，２９４，６１２号において、１系列の６−ヘテロシクリルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン  ホスホジエステラーゼ阻害剤及び心臓血管病の処置におけるそれらの使用を記載している。
【０００９】
性的に刺激された陰茎の勃起は、中枢神経系、末梢神経系及び平滑筋を含む生理学的プロセスの複雑な相互作用から生ずる。特に、非−アドレナリン作用性、非−コリン作用性神経及び内皮からの酸化窒素の放出はグアニリルシクラーゼを活性化し、海綿体内の細胞内ｃＧＭＰレベルを増加させる。細胞内ｃＧＭＰの増加は細胞内カルシウム量を減少させ、小柱平滑筋弛緩を生じ、それが今度は海綿体（ｃｏｒｐｏｒａｌ）体積膨張及び膜下小静脈（ｓｕｂ−ｔｕｎｉｃａｌ  ｖｅｎｕｌｅｓ）の圧縮を生じ、陰茎の勃起に導く。
【００１０】
陰茎組織内のｃＧＭＰの濃度を増加させる薬剤は、ｃＧＭＰの放出の促進又は分解の減少のいずれかを介し、ＥＤのための有効な処置であると期待される。ｃＧＭＰの細胞内レベルは、その生成及び分解に含まれる酵素、すなわちグアニル酸シクラーゼ及びサイクリックヌクレオチドホスホジエステラーゼ（ＰＤＥｓ）により調節される。今日までに、哺乳類ＰＤＥｓの少なくとも９つの群が記載されており、その５つは生理学的条件下で活性なｃＧＭＰを不活性なＧＭＰに加水分解することができる（ＰＤＥｓ  Ｉ、ＩＩ、Ｖ、ＶＩ及びＩＸ）。ＰＤＥ  Ｖはヒト海綿体における主なイソ型である。従ってＰＤＥＶの阻害剤は海綿体内のｃＧＭＰの濃度を増加させ、陰茎勃起の持続時間及び頻度を増すことが期待される。
【００１１】
ＰＤＥＶはヒト血小板及び血管平滑筋においても見いだされ、心臓血管組織内のｃＧＭＰの細胞内濃度の調節におけるこの酵素に関する役割を示唆している。事実、ＰＤＥＶの阻害剤は酸化窒素により誘導される細胞内ｃＧＭＰの増加を助長することにより、内皮−依存性血管緊張低下を生ぜしめることが示された。さらにＰＤＥＶ阻害剤は、うっ血性心不全及び肺高血圧の動物モデルにおいて肺動脈圧を選択的に下げる。従ってＥＤにおけるそれらの有用性に加え、ＰＤＥＶ阻害剤は心不全、肺高血圧及び狭心症のような状態において、おそらく治療的に有益であろう。
【００１２】
従って本発明の目的は、ホスホジエステラーゼ、特にＰＤＥＶを阻害する化合物を同定することである。本発明の他の目的は、性機能障害、特に雄の動物における勃起機能障害の処置に有用な化合物を同定することである。本発明のさらに別の目的は、本発明の化合物を用いて性機能障害、特に勃起機能障害を処置するための方法を同定することである。
【００１３】
今回我々は、酵素アッセイにおいてホスホジエステラーゼ５型を阻害する能力を有する１系列の５−ヘテロシクリル−ピラゾリル［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンを記載する。
【００１４】
【発明の概略】
本発明は式（Ｉ）
【００１５】
【化９】
0004717210.tif 000002
【００１６】
［式中、
Ｒ1及びＲ2はそれぞれ独立して水素又はＣ1−Ｃ6アルキルから選ばれ；
Ｒ3は
【００１７】
【化１０】
0004717210.tif 000003
【００１８】
から選ばれ、
【００１９】
【化１１】
0004717210.tif 000004
【００２０】
は炭素原子及びＮ、Ｏ又はＳから選ばれる１〜３個のヘテロ原子から成る５員複素芳香環であり；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7はそれぞれ独立して水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、フッ素化Ｃ1−Ｃ6アルキル、シアノ、（ヒドロキシ）Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、フッ素化Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6アルカノイル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキル−ＮＲ8Ｒ9、ＮＲ8Ｒ9、ＣＯＮＲ8Ｒ9又はＳＯ2ＮＲ8Ｒ9から選ばれ；
Ｒ8は水素又はＣ1−Ｃ6アルキルから選ばれ、
Ｒ9は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル又はＣ1−Ｃ6アルキル−ＮＲ13Ｒ14から選ばれるか、あるいは
Ｒ8及びＲ9はそれらが結合している窒素と一緒になって非置換もしくは置換ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル又は４−Ｎ（Ｒ10）−ピペラジニル基を形成し、ここで置換基はＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、ＮＲ11Ｒ12又はＣＯＮＲ11Ｒ12から選ばれ；
Ｒ10は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ6シクロアルキル、（ヒドロキシ）Ｃ1−Ｃ6アルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、アラルケニル又はＣ（Ｏ）ＮＨ2から選ばれ；好ましくはＲ10は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、（ヒドロキシ）Ｃ1−Ｃ6アルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、アラルケニル又はＣ（Ｏ）ＮＨ2から選ばれ；
Ｒ11及びＲ12はそれぞれ独立して水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、（ヒドロキシ）Ｃ1−Ｃ6アルキル又は（Ｃ1−Ｃ6アルコキシ）Ｃ1−Ｃ6アルキルから選ばれ；
Ｒ13及びＲ14はそれぞれ独立して水素又はＣ1−Ｃ6アルキルから選ばれるか、あるいは
Ｒ13及びＲ14はそれらが結合している窒素と一緒になって非置換もしくは置換ピロリジニル、ピペリジニル又はモルホリニル基を形成し、ここで置換基はＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、ＮＲ11Ｒ12又はＣＯＮＲ11Ｒ12から選ばれ；
但し、Ｒ3が
【００２１】
【化１２】
0004717210.tif 000005
【００２２】
であり、Ｒ5及びＲ6が両方とも水素である場合、Ｒ4は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、フッ素化Ｃ1−Ｃ6アルキル、シアノ、（ヒドロキシ）Ｃ2−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、フッ素化Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6アルカノイル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキル−ＮＲ8Ｒ9、ＮＲ8Ｒ9、ＣＯＮＲ8Ｒ9又はＳＯ2ＮＲ8Ｒ9から選ばれる］
の化合物及び製薬学的に許容され得るそれらの塩を目的とする。
【００２３】
本発明の１つの実施態様には、
Ｒ1及びＲ2がそれぞれ独立して水素及びＣ1−Ｃ4アルキルから選ばれ；
Ｒ3が
【００２４】
【化１３】
0004717210.tif 000006
【００２５】
から選ばれ、
【００２６】
【化１４】
0004717210.tif 000007
【００２７】
がピロリル、フラニル、チエニル又はイミダゾリルから選ばれる５員複素芳香環であり；
Ｒ4及びＲ6がそれぞれ独立して水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、フッ素化Ｃ1−Ｃ4アルキル、シアノ、（ヒドロキシ）Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、フッ素化Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、Ｃ1−Ｃ4アルカノイル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルキル−ＮＲ8Ｒ9、ＮＲ8Ｒ9、ＣＯＮＲ8Ｒ9又はＳＯ2ＮＲ8Ｒ9から選ばれ；
Ｒ5が水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル又はＣ1−Ｃ4アルコキシから選ばれ；
Ｒ8が水素又はＣ1−Ｃ4アルキルから選ばれ、
Ｒ9が水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル又はＣ1−Ｃ4アルキル−ＮＲ13Ｒ14から選ばれるか、あるいは
Ｒ8及びＲ9がそれらが結合している窒素と一緒になって非置換もしくは置換ピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニル又は４−Ｎ（Ｒ10）−ピペラジニル基を形成し、ここで置換基はＣ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、ＮＲ11Ｒ12又はＣＯＮＲ11Ｒ12から選ばれ；
Ｒ10が水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、（ヒドロキシ）Ｃ1−Ｃ4アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール（Ｃ1−Ｃ4）アルキル、アリール（Ｃ1−Ｃ4）アルケニル又はＣ（Ｏ）ＮＨ2から選ばれ；
但し、Ｒ3が
【００２８】
【化１５】
0004717210.tif 000008
【００２９】
であり、Ｒ5が水素である場合、Ｒ4は水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、フッ素化Ｃ1−Ｃ4アルキル、シアノ、（ヒドロキシ）Ｃ2−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、フッ素化Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、Ｃ1−Ｃ4アルカノイル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ4アルキル−ＮＲ8Ｒ9、ＮＲ8Ｒ9、ＣＯＮＲ8Ｒ9又はＳＯ2ＮＲ8Ｒ9から選ばれ；
そしてすべての他の変数は上記で定義した通りである
式（Ｉ）の化合物及び製薬学的に許容され得るそれらの塩がある。
【００３０】
本発明の１つの種類には、
【００３１】
【化１６】
0004717210.tif 000009
【００３２】
［式中、ＹはＯ、Ｓ又はＮ−Ｒ15から選ばれ、ここでＲ15は水素及びＣ1−Ｃ4アルキルから選ばれ；
そして他のすべての変数は上記で定義した通りである］
から選ばれる式（Ｉ）の化合物及び製薬学的に許容され得るそれらの塩がある。
【００３３】
本発明の実用例は、製薬学的に許容され得る担体及び上記の化合物のいずれかを含む製薬学的組成物である。本発明の１つの実例は、上記の化合物のいずれか及び製薬学的に許容され得る担体を混合することにより調製される製薬学的組成物である。上記の化合物のいずれか及び製薬学的に許容され得る担体を混合することを含む、製薬学的組成物の調製法は本発明を例証している。
【００３４】
治療的に有効な量の上記の化合物のいずれか又は製薬学的組成物を患者に投与することを含む、性機能障害、特に男性の勃起機能障害及び／又はインポテンスの処置を必要としている患者において性機能障害、特に男性の勃起機能障害及び／又はインポテンスを処置する方法は、本発明を例証している。
【００３５】
本発明の例は、有効な量の上記の化合物のいずれか又は製薬学的組成物を患者に投与することを含む、陰茎組織中のｃＧＭＰ濃度を増加させる必要のある男性の患者において、ホスホジエステラーゼ、特にＰＤＥＶの阻害を介して陰茎組織中のｃＧＭＰの濃度を増加させる方法である。
【００３６】
治療的に有効な量の上記の化合物のいずれか又は製薬学的組成物を患者に投与することを含む、心不全、肺高血圧及び狭心症より成る群から選ばれる状態の処置を必要としている患者において、心不全、肺高血圧及び狭心症より成る群から選ばれる状態を処置する方法は、本発明をさらに例証している。
【００３７】
有効な量の上記の化合物のいずれか又は製薬学的組成物を患者に投与することを含む、内皮−依存性血管緊張低下を生ずることが必要な患者において、酸化窒素により誘導される細胞内ｃＧＭＰの増加を助長することにより、内皮−依存性血管緊張低下を生ぜしめる方法は、本発明をさらに例証している。
【００３８】
本発明の他の例は：（ａ）性機能障害、特に男性の勃起機能障害の処置、（ｂ）インポテンスの処置、（ｃ）ホスホジエステラーゼ、特にＰＤＥＶの阻害を介する陰茎組織中のｃＧＭＰの濃度の増加、ならびに／あるいは（ｄ）心不全、肺高血圧及び狭心症より成る群から選ばれる状態の処置を必要としている患者において、該処置を行うか、又は該増加を生ぜしめるための薬剤の製造における上記の化合物のいずれかの使用である。
【００３９】
【発明の詳細な記述】
本発明は性機能障害、特にＥＤの処置のために有用な置換５−ヘテロシクリルピラゾロピリミジノンを提供する。本発明の化合物は主に男性の性機能障害又は勃起機能障害の処置に有用であるが、それらは陰核障害に関連する女性の性機能障害ならびに早産及び月経困難症の処置にも有用であり得る。
【００４０】
さらに特定的には、本発明の化合物は式Ｉ
【００４１】
【化１７】
0004717210.tif 000010
【００４２】
［式中、すべての変数は上記で定義した通りである］
のものである。
【００４３】
式Ｉの化合物は式（ＶＩＩ）：
【００４４】
【化１８】
0004717210.tif 000011
【００４５】
の化合物としての対応するエノール形態との互変異性平衡で存在し得る。該化合物は式（Ｉ）の化合物としてケト形態で主に存在すると思われ、本明細書全体を通じてそのように示すが、本発明は両方の互変異性体及びそれらの混合物を包含すること、ならびにすべてのそのような形態及びそれらの混合物が本発明の範囲内に含まれることが理解されるべきである。
【００４６】
医療（ｍｅｄｉｃｉｎｅ）において用いるために、本発明の化合物の塩は無−毒性の「製薬学的に許容され得る塩」を指す。しかしながら他の塩が本発明に従う化合物又は製薬学的に許容され得る塩の製造において有用であり得る。適した該化合物の製薬学的に許容され得る塩には酸付加塩が含まれ、それは例えば該化合物の溶液を製薬学的に許容され得る酸、例えば塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸又はリン酸の溶液と混合することにより生成し得る。さらに、本発明の化合物が酸性部分を有している場合、その適した製薬学的に許容され得る塩はアルカリ金属塩、例えばナトリウムもしくはカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムもしくはマグネシウム塩；ならびに適した有機リガンドと形成される塩、例えば第４級アンモニウム塩を含むことができる。かくして代表的な製薬学的に許容され得る塩には以下：
酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、硼酸塩、臭化物、カルシウムエデテート（ｃａｌｃｉｕｍ  ｅｄｅｔａｔｅ）、カムシレート（ｃａｍｓｙｌａｔｅ）、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデテート、エジシレート（ｅｄｉｓｙｌａｔｅ）、エストレート（ｅｓｔｏｌａｔｅ）、エシレート（ｅｓｙｌａｔｅ）、フマル酸塩、グルセプテート（ｇｌｕｃｅｐｔａｔｅ）、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸、ヘキシルレゾルシネート、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオネート（ｌａｃｔｏｂｉｏｎａｔｅ）、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシレート、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、ムコン酸塩（ｍｕｃａｔｅ）、ナプシレート（ｎａｐｓｙｌａｔｅ）、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、パモ酸塩（エンボネート（ｅｍｂｏｎａｔｅ））、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、スバセテート（ｓｕｂａｃｅｔａｔｅ）、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクレート（ｔｅｏｃｌａｔｅ）、トシレート、トリエチオダイド（ｔｒｉｅｈｔｉｏｄｉｄｅ）及び吉草酸塩
が含まれる。
【００４７】
本発明は、本発明の化合物のプロドラッグをその範囲内に含む。一般にそのようなプロドラッグは、該化合物の官能基誘導体であり、それは生体内で容易に必要な化合物に変換可能である。かくして本発明の処置の方法において「投与」という用語は、記載した種々の障害を特定的に開示した化合物を用いて、又は特定的に開示されてはいないかも知れないが患者への投与の後に生体内で特定した化合物に変換される化合物を用いて処置することを包含するべきである。適したプロドラッグ誘導体の選択及び製造のための通常の方法は、例えば“Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ”，ｅｄ．Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載されている。
【００４８】
本発明に従う化合物が少なくとも１つのキラル中心を有する場合、それらは従ってエナンチオマーとして存在し得る。該化合物が２つもしくはそれより多いキラル中心を有する場合、それらはさらにジアステレオマーとして存在し得る。すべてのそのような異性体及びそれらの混合物は本発明の範囲内に包含されると理解されるべきである。さらに該化合物に関する結晶形のいくつかは多形として存在し得、そのままで本発明に含まれることが意図されている。さらに、該化合物のいくつかは水（すなわち水和物）又は通常の有機溶媒と溶媒和物を形成することができ、そのような溶媒和物も本発明の範囲内に包含されることが意図されている。
【００４９】
本明細書で用いられる場合、「患者」という用語は、処置、観察もしくは実験の目的であった動物、好ましくは哺乳類、最も好ましくは人間を指す。
【００５０】
本明細書で用いられる場合、「治療的に有効な量」という用語は、研究者、獣医、医師又は他の臨床医により求められており、処置されている病気又は障害の症状の軽減を含む生物学的もしくは医学的応答を、組織系、動物又は人間において引き出す活性化合物もしくは薬剤の量を意味する。
【００５１】
「アルキル」という用語は１〜６個の炭素原子又はこの範囲内のいずれかの数の直鎖状もしくは分枝鎖状アルカンを意味する。例えばアルキル基にはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、３−（２−メチル）ブチル、２−ペンチル、２−メチルブチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、２−ヘキシル及び２−メチルペンチルが含まれる。同様に、アルケニル及びアルキニル基は１〜８個の炭素原子、又はこの範囲内のいずれかの数の炭素原子を有する直鎖状及び分枝鎖状アルケン及びアルキンを含む。
【００５２】
「アリール」という用語はフェニル及びナフチルのような芳香族基を示す。
【００５３】
「アラルキル」という用語は、アリール基で置換されたＣ1−Ｃ6アルキル基（例えばベンジル、フェニルエチル）を意味する。同様に、「アラルケニル」という用語は、アリール基で置換されたＣ1−Ｃ6アルケニル基を意味する。
【００５４】
「ハロゲン」という用語はヨウ素、臭素、塩素及びフッ素を含む。
【００５５】
本明細書で用いられる場合、記号
【００５６】
【化１９】
0004717210.tif 000012
【００５７】
及び「５員複素芳香環」という用語は、炭素原子及びＮ、ＯもしくはＳから選ばれる１〜３個のヘテロ原子から成る安定な５員単環式芳香環系を示す。複素芳香環は、安定な構造の形成を生ずるいずれのヘテロ原子又は炭素原子において結合していることもできる。さらに複素芳香環が例えばＲ4、Ｒ5又はＲ6置換基により置換されている場合、単数もしくは複数の置換基は、安定な構造の形成を生ずる環内のいずれの炭素原子又はヘテロ原子において結合していることもできる。５員複素芳香環の例にはフラニル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、ピロリル、チエニル、チアゾリル、チアジアゾリル及びトリアゾリルが含まれるが、これらに限られるわけではない。
【００５８】
記号
【００５９】
【化２０】
0004717210.tif 000013
【００６０】
は、炭素原子及びＮ、ＯもしくはＳから選ばれる１〜３個のヘテロ原子から成る９員ベンゾ−縮合複素芳香環系を示す。ベンゾ−縮合複素芳香環は、安定な構造の形成を生ずるいずれのヘテロ原子又は炭素原子において結合していることもできる。さらにベンゾ−縮合複素芳香環が例えばＲ4、Ｒ5、Ｒ6又はＲ7置換基により置換されている場合、単数もしくは複数の置換基は、安定な構造の形成を生ずる環内のいずれの炭素原子又はヘテロ原子において結合していることもできる。９員ベンゾ−縮合複素芳香環の例にはベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズオキサゾリル、インダゾリル、インドリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル及びベンゾトリアゾリルが含まれるが、これらに限られるわけではない。
【００６１】
本明細書で用いられる場合、「ヘテロアリール」という用語は、炭素原子及びＮ、ＯもしくはＳから選ばれる１〜３個のヘテロ原子から成る安定な５もしくは６員単環式芳香環系又は９もしくは１０員ベンゾ−縮合複素芳香環系を示す。ヘテロアリール基は、安定な構造の形成を生ずるいずれのヘテロ原子又は炭素原子において結合していることもできる。ヘテロアリール基の例にはピリジル、ピリミジニル、チエニル、フラニル、イミダゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、ピロリル、チアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンズイソオキサゾリル、ベンズオキサゾリル、インダゾリル、インドリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾトリアゾリル、キノリニル又はイソキノリニルが含まれるが、これらに限られるわけではない。好ましいヘテロアリール基にはピリジル、ピリミジニル、チアゾリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、キノリニル及びイソキノリニルが含まれる。
【００６２】
本開示全体を通じて用いられる標準的命名法の下に、明示されている側鎖の末端部分を最初に記載し、隣接する官能基を結合の点に向かって続ける。かくして例えば「フェニルＣ1−Ｃ6アルキルアミドＣ1−Ｃ6アルキル」置換基は式：
【００６３】
【化２１】
0004717210.tif 000014
【００６４】
の基を指す。
【００６５】
本明細書で用いられる場合、「組成物」という用語は、特定の成分を特定の量で含む生成物（ｐｒｏｄｕｃｔ）ならびに特定の量における特定の成分の組合わせから直接、又は間接的に生ずる生成物を包含することが意図されている。
【００６６】
分子中の特定の位置におけるいずれの置換基又は変数（例えば請求項３におけるＲ10）の定義も、その分子内の他の位置におけるその定義と無関係であることが意図されている。化学的に安定であり、当該技術分野において既知の方法ならびに本明細書に示す方法により容易に合成され得る化合物を与えるために、本発明の化合物の上の置換基及び置換パターンを当該技術分野における通常の熟練者が選び得ることが理解される。
【００６７】
ＥＤの処置のための化合物の有用性を本明細書の実施例４に記載する方法に従って決定することができる。さらに、ＥＤの処置のための化合物の有用性の指標である、化合物のｃＧＭＰ  ＰＤＥ及びｃＡＭＰ  ＰＤＥ阻害活性の決定のための方法はＷＯ  ９３／０６１０４、ＷＯ  ９３／０７１４９、ＷＯ  ９３／１２０９５、ＷＯ  ９４／００４５３、ＷＯ  ９４／０５６６１及びＷＯ  ９６／１６６５７に記載されている。
【００６８】
従って本発明は、本明細書に定義する化合物のいずれかをＥＤの処置に有効な量で投与することを含む、勃起機能障害の処置の必要な患者において勃起機能障害を処置する方法を提供する。静脈内、経口的、皮下、筋肉内、皮内及び非経口的経路を含むがこれらに限られないいずれの便利な投与経路によっても化合物を患者に投与することができる。ＥＤの処置に有効な化合物の量は患者の体重のｋｇ当たり０．１ｍｇ〜２０ｍｇである。
【００６９】
本発明は、製薬学的に許容され得る担体と一緒に１種もしくはそれより多い本発明の化合物を含む製薬学的組成物も提供する。好ましくはこれらの組成物は、経口的、非経口的、鼻内、舌下もしくは直腸的投与のため、あるいは吸入もしくは吹入による投与のための錠剤、丸薬、カプセル、散剤、顆粒剤、無菌非経口用溶液もしくは懸濁剤、計量型（ｍｅｔｅｒｅｄ）エアゾールもしくは液体スプレー、ドロップス、アンプル、自動注入装置又は座薬のような単位投薬形態にある。あるいは又、組成物は週に１度又は１カ月に１度の投与に適した形態で存在することができ；例えばデカン酸塩のような活性化合物の不溶性塩を筋肉内注入のためのデポ剤を与えるように適合させることができる。錠剤のような固体組成物の調製のためには、主活性成分を製薬学的担体、例えばコーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルウム又はゴムのような通常の錠剤形成成分ならびに他の製薬学的希釈剤、例えば水と混合し、本発明の化合物もしくは製薬学的に許容され得るそれらの塩の均一な混合物を含有する固体の予備調製組成物（ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ）を形成する。これらの予備調製組成物を均一と言う場合、活性成分が組成物全体に平均に分散され、組成物を錠剤、丸薬及びカプセルのような等しく有効な投薬形態に容易に細分できることを意味する。次いでこの固体予備調製組成物を５〜約１０００ｍｇの本発明の活性成分を含有する上記の型の単位投薬形態に細分する。新規な組成物の錠剤又は丸薬をコーティングするか、又は他の方法で配合し、長期間の作用の利点を与える投薬形態を得ることができる。例えば錠剤又は丸薬が内部投薬成分及び外部投薬成分を含み、後者が前者を覆う外被の形態にあることができる。２つの成分を、胃内での崩壊に抵抗して内部成分がそのまま十二指腸内に通過するか、又は放出が遅れるのを可能にするように働く腸溶層により分離することができる。多様な材料をそのような腸溶層又はコーティングのために用いることができ、そのような材料はシェラック、セチルアルコール及び酢酸セルロースのような材料と一緒に複数の高分子酸を含む。
【００７０】
経口的、又は注入による投与のために本発明の新規な組成物を導入することができる液体形態には水溶液、適切に風味付けされたシロップ、水性もしくは油性懸濁液及び綿実油、ゴマ油、ココナツ油もしくは落花生油のような食用油を用いる風味付けされたエマルション、ならびにエリキサー及び類似の製薬学的ビヒクルが含まれる。水性懸濁液のための適した分散剤又は懸濁剤には合成及び天然ゴム、例えばトラガント、アラビアゴム、アルギネート、デキストラン、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニル−ピロリドン又はゼラチンが含まれる。
【００７１】
本発明に従う化合物の製造法が立体異性体の混合物を生ずる場合、これらの異性体は分取クロマトグラフィーのような通常の方法により分離され得る。化合物をラセミ体として製造することができ、あるいはエナンチオ特異的合成により、又は分割により個々のエナンチオマーを製造することができる。例えば、（−）−ジ−ｐ−トルオイル−ｄ−酒石酸及び／又は（＋）−ジ−ｐ−トルオイル−ｌ−酒石酸のような光学的に活性な酸との塩生成、ならびに続く分別結晶化及び遊離の塩基の再生によるジアステレオマー対の生成のような標準的方法により、化合物をそれらの成分エナンチオマーに分割することができる。ジアステレオマーエステル又はアミドの生成、ならびに続くクロマトグラフィー分離及びキラル助剤の除去により化合物を分割することもできる。あるいは又、キラルＨＰＬＣカラムを用いて化合物を分割することができる。
【００７２】
本発明の化合物の製造のためのいずれかのプロセスの間に、関連するいずれかの分子上の敏感な、又は反応性の基を保護することが必要であり、及び／又は望ましいかも知れない。これは通常の保護基、例えばＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｅｄ．Ｊ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，１９７３；及びＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ＆  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９１に記載されているものを用いて行われ得る。当該技術分野から既知の方法を用い、その後の都合の良い段階に保護基を除去することができる。
【００７３】
本発明において記載するＥＤの処置法は、本明細書で定義する化合物のいずれか及び製薬学的に許容され得る担体を含む製薬学的組成物を用いても行われ得る。製薬学的組成物は約５ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは約１０〜５００ｍｇの化合物を含有することができ、選ばれる投与様式に適したいずれの形態に構成されることもできる。担体は必要且つ不活性な製薬学的賦形剤を含み、それは結合剤、懸濁剤、滑沢剤、風味料、甘味料、防腐剤、染料及びコーティングを含むが、これらに限られるわけではない。経口的投与に適した組成物には固体形態、例えば丸薬、錠剤、カプレット（ｃａｐｌｅｔｓ）、カプセル（それぞれ即時放出、タイミング放出（ｔｉｍｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ）及び徐放性調剤を含む）、顆粒剤及び散剤、ならびに液体形態、例えば溶液、シロップ、エリキサー、乳剤及び懸濁剤が含まれる。非経口的投与に有用な形態には無菌溶液、乳剤及び懸濁剤が含まれる。
【００７４】
有利なことに、本発明の化合物を毎日１回の投薬で投与できるか、あるいは毎日の投薬量の合計を毎日２、３もしくは４回の個別の投薬において投与することができる。さらに本発明の化合物を当該技術分野における通常の熟練者に周知の適した鼻内ビヒクルの局所的使用を介して鼻内形態で、あるいは経皮的皮膚パッチを介して投与することができる。経皮的送達系の形態で投与するためには、投薬量の投与はもちろん、投薬管理の間を通じて断続的ではなくて継続的であろう。
【００７５】
例えば錠剤又はカプセルの形態での経口的投与のために、活性薬剤成分を経口用、無毒性の製薬学的に許容され得る不活性担体、例えばエタノール、グリセロール、水などと合わせることができる。さらに、望ましいか、又は必要な場合、適した結合剤、滑沢剤、崩壊剤及び着色剤を混合物中に導入することもできる。適した結合剤には澱粉、ゼラチン、天然の糖類、例えばゴルコースもしくはベータ−ラクトース、コーン甘味料、天然及び合成ゴム、例えばアラビアゴム、トラガント又はオレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれるが、制限ではない。崩壊剤には澱粉、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンゴムなどが含まれるが、制限ではない。
【００７６】
液体形態は適切に風味付けされた懸濁剤又は分散剤、例えば合成及び天然ゴム、例えばトラガント、アラビアゴム、メチル−セルロースなどを含むことができる。非経口的投与のためには無菌の懸濁剤及び溶液が望ましい。静脈内投与が望まれている場合、一般に適した防腐剤を含有する等張調剤が用いられる。
【００７７】
本発明の化合物をリポソーム送達系、例えば小さい単膜液胞（ｓｍａｌｌ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）、大きい単膜液胞及び多膜液胞（ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）の形態で投与することもできる。リポソームは多様なリン脂質、例えばコレステロール、ステアリルアミン又はホスファチジルコリンから形成され得る。
【００７８】
化合物分子が結合した個別の担体としてモノクローナル抗体を用いることにより、本発明の化合物を送達することもできる。本発明の化合物を標的設定可能な（ｔａｒｇｅｔａｂｌｅ）薬剤担体としての可溶性ポリマーと結合させることもできる。そのようなポリマーにはポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノール又はパルミトイル残基で置換されたポリエチル−エンオキシドポリリシンが含まれ得る。さらに、本発明の化合物を、薬剤の放出の制御の達成において有用なある種の生体内分解性高分子、例えばポリ乳酸、ポリエプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート及びヒドロゲルの架橋された、又は両親媒性ブロックコポリマーに結合させることができる。
【００７９】
ＥＤの処置が必要な場合はいつでも本発明の化合物を、前記の組成物のいずれかにおいて、且つ当該技術分野において確立されている投薬管理に従って投与することができる。
【００８０】
生成物の毎日の投薬量は、１日当たり成人の人間につき５〜１，０００ｍｇの広い範囲に及んで変化し得る。経口的投与の場合、処置されるべき患者への投薬量の対症的調節のために、組成物は好ましくは５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、２５０及び５００ミリグラムの活性成分を含有する錠剤の形態で与えられる。薬剤の有効量は通常１日当たり体重のｋｇにつき約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇの投薬量レベルで供給される。好ましくは、該範囲は１日当たり体重のｋｇにつき約０．２ｍｇ〜約１０ｍｇ、そして特に１日当たり体重のｋｇにつき約０．５ｍｇ〜約１０ｍｇである。化合物を１日当たり１〜４回の管理で投与することができる。
【００８１】
投与されるべき最適投薬量は、当該技術分野における熟練者により容易に決定され得、用いられる特定の化合物、投与の様式、調剤の濃度及び病気の状態の進行度と共に変わるであろう。さらに、患者の年令、体重、食事及び投与の時間を含む、処置されている特定の患者と関連する因子が投薬量を調節する必要を生ずるであろう。
【００８２】
明細書、特にスキーム及び実施例において用いる略字は以下の通りである：
ＤＭＡＰ＝ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
Ｅｔ3Ｎ＝トリエチルアミン
ＥｔＯＨ＝エタノール
ＭｅＯＨ＝メタノール
ｒ．ｔ．＝室温
ＴＥＡ＝トリエチルアミン
本発明の化合物は一般式（ＩＩ）：
【００８３】
【化２２】
0004717210.tif 000015
【００８４】
［式中、Ｒ1及びＲ2は前に定義した通りであり、
【００８５】
【化２３】
0004717210.tif 000016
【００８６】
は、上記でＲ3に関して定義した適切に置換された５員複素芳香環又は適切に置換された９員ベンゾ−縮合複素芳香環である］
の化合物の、上記でＲ8及びＲ9に関して定義した適切に置換されたアミンとの反応により製造され得る。反応は一般に室温で、好ましくは溶媒、例えば１〜３個の炭素原子を含有するアルカノールの存在下に、酸副産物であるＨＣｌを掃去するために過剰のアミンを用いて行われる。
【００８７】
一般式（ＩＩ）の化合物は一般式（ＩＩＩ）：
【００８８】
【化２４】
0004717210.tif 000017
【００８９】
の化合物から、複素環式部分、
【００９０】
【化２５】
0004717210.tif 000018
【００９１】
の反応性に依存して−２０℃〜５０℃の範囲の温度でクロロスルホン酸と反応させることにより製造され得る。
【００９２】
一般式（ＩＩＩ）の化合物は一般式（ＩＶ）：
【００９３】
【化２６】
0004717210.tif 000019
【００９４】
の化合物から、ピリミジノン環形成のための既知の環化法の適用により製造され得る。かくして例えばエタノール−水媒体中で還流温度において、水酸化ナトリウム又は炭酸カリウムのような塩基を用いて（ＩＶ）を２〜６５時間処理することにより環化を行うことができる。あるいは又、１４０℃か又はその近くでポリリン酸を用いて（ＩＶ）を６〜１８時間処理することによっても一般式（ＩＩＩ）の化合物を得ることができる。
【００９５】
一般式（ＩＶ）の化合物は一般式（Ｖ）：
【００９６】
【化２７】
0004717210.tif 000020
【００９７】
の化合物から、一般式（ＶＩ）：
【００９８】
【化２８】
0004717210.tif 000021
【００９９】
［式中、
【０１００】
【化２９】
0004717210.tif 000022
【０１０１】
は前に定義した通りである］
の化合物との反応により製造され得る。反応は一般に過剰の（ＶＩ）を用い、酸副産物（ＨＣｌ）のための掃去剤として働くための過剰の脂肪族第３級アミン、例えばトリエチルアミンの存在下に、場合により４−ジメチルアミノピリジンのような触媒の存在下で、ジクロロメタンのような不活性溶媒中において、０℃〜室温で２〜２４時間行われる。
【０１０２】
本発明の化合物の形成のための（ＩＩ）との反応で用いられるアミン、式（Ｖ）のアミノピラゾール及び式（ＶＩ）の塩化アシルは、商業的に入手可能でない場合、通常の合成法により、先行文献に従って、容易に得られ得る出発材料から標準的試薬及び反応条件を用いて、当該技術分野における通常の熟練者が容易に得ることができる。
【０１０３】
本発明の化合物の合成のさらなる例示として、５−［３−エトキシ−５−（４−メチルピペラジニルスルホニル）チオフェン−２−イル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン及び５−［３−ヒドロキシ−５−（４−メチルピペラジニルスルホニル）チオフェン−２−イル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンの製造をスキーム１に詳述する。かくして出発材料であるピラゾール１を塩化チオフェンカルボニル２と反応させて中間体３を得た。エタノール中で水酸化ナトリウムを用い、３の環化を行って４を得た。クロロスルホニル化及び続くＮ−メチルピペラジンとの反応は化合物５及び化合物６を与えた。
【０１０４】
【化３０】
0004717210.tif 000023
【０１０５】
以下の実施例は本発明の理解を助けるために示され、前記の特許請求の範囲に示した本発明をいかようにも制限することは意図されておらず、そのように理解されてはならない。
【０１０６】
他にことわらない限り、1Ｈ  ＮＭＲｓは３００ＭＨｚ  Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＣ  ３００装置上で実験された。
【０１０７】
【実施例】
実施例１
５−［３−エトキシ−５−（４−メチルピペラジニルスルホニル）チオフェン−２−イル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（５）及び５−［３−ヒドロキシ−５−（４−メチルピペラジニルスルホニル）チオフェン−２−イル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（６）
ａ．４−（３−エトキシチオフェン−２−カルボキシアミド）−１−メチル−３−ｎ−プロピルピラゾール−５−カルボキシアミド（３）
３−エトキシチオフェン−２−カルボン酸（２．７９ｇ、１６．２ミリモル）と塩化オキサリルの反応から製造された塩化３−エトキシチオフェン−２−カルボニル２を無水ＣＨ2Ｃｌ2（３０ｍＬ）中の４−アミノ−１−メチル−３−ｎ−プロピルピラゾール−５−カルボキシアミド１（２．０８ｇ、１１．４ミリモル）、ＤＭＡＰ（２８ｍｇ、０．２３ミリモル）及びＥｔ3Ｎ（１．６４ｇ、１６．２ミリモル）の溶液に０℃において加え、室温で２４時間撹拌した。混合物を１Ｎ  ＨＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ4を用いて乾燥した。クロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）は白色の固体を与えた；融点：１０３〜１０４℃；1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ０．８７（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），０．３９（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．５６（ｓｘｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），２．４３（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），４．３２（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｓ，ｂｒ．１Ｈ），７．７５（ｓ，ｂｒ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），８．８７（ｓ，１Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３７（ＭＨ+）。
ｂ）５−（３−エトキシチオフェン−２−イル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（４）
エタノール（１１ｍＬ）及び水（３４ｍＬ）中の３（１．１５ｇ、３．４２ミリモル）、ＮａＯＨ（２８４ｍｇ、７．１ミリモル）の混合物を８０℃において６５時間加熱した。室温に冷却した後、白色の沈殿が生成した。濾過及び真空下における乾燥は０．６２５ｇの生成物を与えた。濾液をＣＨ2Ｃｌ2で抽出し、有機相を１Ｎ  ＨＣｌ及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4を用いて乾燥した。溶媒の蒸発は追加の生成物を与えた；融点：１５１〜１５２℃；
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１．００（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．５４（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．８２（ｓｘｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），２．８６（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），４．２３（ｓ，３Ｈ），４．３４（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１９（ＭＨ+）。
ｃ．５−［３−エトキシ−５−（４−メチルピペラジニルスルホニル）−チオフェン−２−イル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（５）及び５−［３−ヒドロキシ−５−（４−メチルピペラジニルスルホニル）−チオフェン−２−イル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（６）
化合物４（１６５ｍｇ、０．５１７ミリモル）を０℃においてクロロスルホン酸（０．３５ｍＬ、５．２ミリモル）に加えた。混合物を窒素下に、５０℃において２４時間撹拌した。氷を加え、混合物をＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ（９：１）の混合物で抽出し、Ｎａ2ＳＯ4を用いて乾燥した。溶媒を蒸発させた後、白色の固体が得られ、それはＮＭＲ分析によると５−（５−クロロスルホニル−３−エトキシチオフェン−２−イル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンを主に、及び少量の５−（５−クロロスルホニル−３−ヒドロキシチオフェン−２−イル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンを含有していた。この白色の固体（９０ｍｇ、０．４５６ミリモル）をメタノール（無水、１５ｍＬ）中のメチルピペラジン（１３７ｍｇ、１．３７ミリモル）の溶液に加え、室温で４日間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残留物をＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ（９：１）中に溶解し、飽和Ｎａ2ＣＯ3で洗浄した。水層をＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ（９：１）で抽出した。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ4を用いて乾燥した。溶媒の蒸発後に得られる残留物は２種の化合物を含有していた。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により分離及び精製を行った。酢酸エチルを用いる溶離により化合物５が白色の固体として得られた；融点２１９〜２２０℃；1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ０．９４（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．４２（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．７４（ｓｘｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），２．１８（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｍ，４Ｈ），２．７６（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），３．３５（ｍ，４Ｈ），４．１４（ｓ，３Ｈ），４．４４（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），７．７２（ｓ，１Ｈ），１０．７９（ｂｒ  ｓ．１Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）：４８１（ＭＨ+）。ジオキサン中のＨＣｌの溶液（４．０Ｍ、０．２ｍＬ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）中の遊離の塩基（６．０ｍｇ）の懸濁液に加え、１時間撹拌することにより、塩酸塩を製造した。真空下における溶媒の除去に続き、白色の固体が得られた；融点：２２５℃（分解）。
【０１０８】
酢酸エチル中の１０％メタノールを用いる溶離により、化合物６が白色の固体として得られた。ジオキサン中のＨＣｌの溶液（４．０Ｍ、０．２ｍＬ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）中の遊離の塩基（６．０ｍｇ）の懸濁液に加え、１時間撹拌することにより、塩酸塩を製造した。真空下における溶媒の除去に続き、白色の固体が得られた；融点：２５７℃（分解）；1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ０．９５（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．７５（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），２．４９（ｓ，３Ｈ），２．７０（ｍ，６Ｈ），３．１５（ｍ，４Ｈ），４．１５（ｓ，３Ｈ），７．６１（ｓ，１Ｈ），８．４５（ｓ，１Ｈ），１０．８５（ｓ，１Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）４５３（ＭＨ+），４５１（ＭＨ-）。
【０１０９】
実施例２
５−（７−エトキシベンゾフラン−２−イル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（７）
ａ．４−（７−エトキシベンゾフラン−２−カルボキシアミド）−１−メチル−３−ｎ−プロピルピラゾール−５−カルボキシアミド
３の場合と同じ手順を用い、無水ＣＨ2Ｃｌ2（６５ｍＬ）中の塩化７−エトキシベンゾフラン−２−カルボニル（４．１２４ｇ、２０ミリモル）、１（１．８２ｇ、１０ミリモル）、ＤＭＡＰ（３２．５ｍｇ、０．２７ミリモル）及びＥｔ3Ｎ（２．０２ｇ、２０ミリモル）から、表題化合物を白色の固体として得た；融点：２１９〜２２１℃；
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ０．８６（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．４３（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．５６（ｓｘｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），２．４２（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），４．２８（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｓ，ｂｒ．１Ｈ），７．７１（ｓ，１Ｈ），７．７６（ｓ．ｂｒ．１Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７１（ＭＨ+）。
ｂ．５−（７−エトキシベンゾフラン−２−イル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（７）
ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ（１０ｍＬ／６．５ｍＬ）中の４−（７−エトキシベンゾフラン−２−カルボキシアミド）−１−メチル−３−ｎ−プロピルピラゾール−５−カルボキシアミド（２８１．５ｍｇ、０．７６ミリモル）及びＮａＯＨ（６３ｍｇ、１．５７３ミリモル）から、４の場合の手順を用い、表題化合物７を白色の固体として得た；融点：２２７〜２２９℃；1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ０．９８（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．４６（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），１．７８（ｓｘｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），２．８４（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），４．１７（ｓ，３Ｈ），４．２９（ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），７．９２（ｓ，１Ｈ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５３（ＭＨ+）。
【０１１０】
実施例３
化合物８、９、１１及び３２への塩化スルホニル前駆体は、本質的に実施例１ｃに記載した通りに製造され得、但し：
１）５−（４−クロロスルホニル−７−エトキシベンゾフラン−２−イル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンは、−７〜０℃における５−（７−エトキシベンゾフラン−２−イル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（７）と１２当量のクロロスルホン酸との３時間の反応により得；
２）５−［４，６−ビス−（クロロスルホニル）−７−エトキシベンゾフラン−２−イル］−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンは、２０℃における５−（７−エトキシベンゾフラン−２−イル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（７）と１２当量のクロロスルホン酸との１８時間の反応により得；そして
３）５−（４−クロロスルホニル−１−メチルピロ−ル−２−イル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オンは、２０℃における５−（１−メチルピロール−２−イル）−１−メチル−３−ｎ−プロピル−６，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピラゾロ−［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（７）と１００当量のクロロスルホン酸との４日間の反応により得た。
【０１１１】
実施例４
経口用組成物の特定の実施態様として、１００ｍｇの実施例１の化合物５を、５８０〜５９０ｍｇの合計量を得るのに十分な微粉砕ラクトースと一緒に調製し、サイズ○硬質ジェルカプセルを満たした。
【０１１２】
本明細書に記載した手順に従い、以下の表１の化合物を製造した。
【０１１３】
【表１】
0004717210.tif 000024
【０１１４】
【表２】
0004717210.tif 000025
【０１１５】
【表３】
0004717210.tif 000026
【０１１６】
【表４】
0004717210.tif 000027
【０１１７】
【表５】
0004717210.tif 000028
【０１１８】
【表６】
0004717210.tif 000029
【０１１９】
実施例５
前記の通り、海綿体組織からのｃＧＭＰの放出を促進するか、又はその分解を阻害する化合物は陰茎の勃起を助長するであろうことが当該技術分野における熟練者には理解される。従って陰茎組織内の酸化窒素（ＮＯ）−刺激ｃＧＭＰレベルを増加させる化合物の能力を測定する方法を記載する。
生物学的方法
海綿体組織環（ｃｏｒｐｕｓ  Ｃａｖｅｒｎｏｓｕｍ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｉｎｇｓ）におけるｃＧＭＰレベルの測定
組織の調製
雄のニュージーランドホワイトラビット（２．５ｋｇ）を過剰投薬量のペントバルビトンを用いて殺し、それらの陰茎を迅速に切除する。表皮及び結合組織を除去し、陰茎を２つの等しい片に縦に、及び次いで横に切断して約２０個の切片を得る。尿道を注意深く切り出し、捨てる。すべての動物からの海綿体のこれらの切片をプールし、Ｄｕｌｂｅｃｃｏの最小必須培地（ＭＥＭ）中で３７℃において１時間、培地を規則的に変えながらインキュベーションし、組織が調製の取り扱いから回復するのを許す。
ｃＧＭＰ生成への試験化合物の効果
組織を上記の通りに調製し；それぞれの薬剤の投薬量に関して２つの陰茎の円板を、種々の濃度の試験化合物を含む２００μＬのＭＥＭ中でインキュベーションし、ナトリウムニトロプルシド（ＳＮＰ）（最終的濃度１０μモル／Ｌ）を加える。ＳＮＰは水溶液中で自然に分解してＮＯを生ずる。化合物と一緒に３７℃で１０分間組織を予備インキュベーションした後、種々の濃度のＳＮＰを用いてｃＧＭＰ生成を刺激する。次いで管を３７℃でさらに３０分間インキュベーションし、１モル／Ｌの過塩素酸を２００μＬ加えることにより反応を停止させる。組織を超音波処理し（３ｘ２０秒バースト；ＭＳＥ  Ｓｏｎｉｐｒｅｐ）、遠心により残留組織をペレット化する。遠心の後、上澄み液のアリコートを採取し、０．５モル／ＬのＫ3ＰＯ4を用いて中和する。アッセイ緩衝液中における適した希釈の後、ラジオイムノアッセイ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｄｕａｌ−ｒａｎｇｅ  125Ｉ  キット）により、製造者の指示に従ってｃＧＭＰ濃度を測定する。検出の下限はｃＧＭＰアッセイに関して１ｆモル（ｆｍｏｌ）である。
サイクリックヌクレオチドホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）アッセイ
ＰＤＥ単離
Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｐｏｔｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９９６，８，４７−５２にＢｏｏｌｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．により記載されている案に従い、小さい修正を行ってウサギ組織からＰＤＥｓを単離した。基本的には、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．２）、０．２５Ｍのスクロース、１ｍＭのＥＤＴＡ及び１ｍＭのフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）を含有する氷−冷緩衝液中で組織を均質化した。ホモジネートを４℃において１００，０００ｇで６０分間遠心した。上澄み液を０．２μＭのフィルターを介して濾過し、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ｍＭのＥＤＴＡ及び０．５ｍＭのＰＭＳＦで平衡化されたＰｈａｒｍａｃｉａ  Ｍｏｎｏ  Ｑアニオン交換カラム（１ｍｌの床容量）上に負荷した。非結合タンパク質を洗い流した後、同じ緩衝液中の１００〜５００ｍＭ  ＮａＣｌの直線状勾配を用いて酵素を溶離させた（組織に依存して合計で３５〜６０ｍｌ）。カラムに１ｍｌ／分の流量で流し、１ｍｌの画分を集めた。種々のＰＤＥ活性を含む画分を別々にプールし、後の研究に用いた。
ＰＤＥ  Ｖの阻害の測定
小さい修正を行って本質的にＴｈｏｍｐｓｏｎ  ａｎｄ  ＡｐｐｌｅｍａｎによりＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９７１，１０，３１１−３１６に記載されている通りにＰＤＥアッセイを行った。簡単に言うと、５ｍＭ  ＭｇＣｌ2、１５ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、０．５ｍｇ／ｍｌ  ウシ血清アルブミン、１μＭ  ｃＧＭＰもしくはｃＡＭＰ、０．１μＣｉ  ［3Ｈ］−ｃＧＭＰもしくは［3Ｈ］−ｃＡＭＰ中で、且つ２〜１０μｌのカラム溶離において酵素をアッセイした。アッセイの合計容量は１００μｌであった。反応混合物を３０℃において３０分間インキュベーションした。１分間煮沸し、次いで氷上で冷却することにより反応を停止させた。得られる［3Ｈ］５’−モノヌクレオチドを、１ｍｇ／ｍｌのヘビ毒（オフィオファグス・ハンナ（Ｏｐｈｉｏｐｈａｇｕｓ  ｈａｎｎａｈ））を２５μｌ加え、３０℃で１０分間インキュベーションすることにより、非帯電［3Ｈ］−ヌクレオチドにさらに変換した。１ｍｌのＢｉｏ−Ｒａｄ  ＡＧ１−Ｘ２樹脂スラリ（１：３）の添加により反応を停止させた。すべての帯電ヌクレオチドは樹脂によって結合され、遠心の後、［3Ｈ］−ヌクレオチドのみが上澄み液中に残った。３５０μｌのアリコートを採取し、液体シンチレーションによりカウントした。酵素調剤のｍｌについて１分当たりに加水分解されたサイクリックヌクレオチドのピコモルとしてＰＤＥ活性を表した。１０％ＤＭＳＯの最終的濃度を有するアッセイ緩衝液中で阻害剤研究を行った。これらの条件下で、基質の加水分解は１５％を越えなかった。生成物の生成は時間及び酵素濃度と共に直線的に増加した。
【０１２０】
本発明の代表的化合物に関するＰＤＥＶ阻害活性を表２に記載する。データをＩＣ50（μＭ）又は示す試験化合物濃度におけるパーセント阻害として示す。
【０１２１】
【表７】
0004717210.tif 000030
【０１２２】
前記の明細書は、例示の目的で実施例を示しながら本発明の原理を記載しているが、本発明の実施は、前記の特許請求の範囲及びそれらの同等事項の範囲内に含まれる通常の変形、適合化及び／又は修正のすべてを包含することが理解されるであろう。