(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下：
【化１】
0004637362.tif 000014
からなる群から選択される化合物。
【請求項２】
以下：
【化２】
0004637362.tif 000015
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
以下：
【化３】
0004637362.tif 000016
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
チラミン、アルギニンバソプレシン、およびインスリンからなる群から選択される物質の細胞吸収を増加するための組成物であって、請求項１に記載の化合物を含む、組成物。
【請求項５】
チラミン、アルギニンバソプレシン、およびインスリンからなる群から選択される物質の、哺乳動物における血液および組織保持を延長するための組成物であって、請求項１に記載の化合物を含む、組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物を形成する方法であって、該方法が、チラミン、アルギニンバソプレシンまたはインスリンを、以下：
【化４】
0004637362.tif 000017
の式を有する化合物と反応させる工程を包含する、方法。
【請求項７】
チラミン、アルギニンバソプレシン、またはインスリンからなる群から選択される物質を、細胞の内部へ送達するための組成物であって、請求項１に記載の化合物を含み、ここで該組成物は、該細胞により吸収され、そして該細胞内でｐＨに暴露される、組成物。
【請求項８】
薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、以下：
（ａ）請求項１に記載の化合物；および
（ｂ）薬学的に受容可能なキャリア、
を含む、薬学的組成物。
【請求項９】
請求項８に記載の薬学的組成物であって、ここで、前記組成物が、前記化合物をアミド結合の加水分解から保護する腸溶性コーティングを含み、これにより該化合物の放出を、該コーティングが除去されるかまたは溶解するまで防止する、薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、一般に、生物学および医学の分野に関する。より詳細には、本発明は、アミノ基を有する親水性分子、特にペプチドおよびタンパク質の、哺乳動物動物における輸送および送達を増加する際に有用な、化合物、方法および組成物に関する。
【０００２】
（関連技術）
生化学における進歩は、治療学的に活性でかつ純粋なタンパク質およびペプチドの大量生産を可能にしてきた。現在、大部分のこれらの薬剤の治療的効果は、注射によるような侵襲性の経路を介して投与される場合にのみ、達成され得る。ほとんどのタンパク質が、非常に短い半減期を有するため、これらの薬剤の有効な濃度は、頻繁な注射により投与される場合にのみ維持され得る。
【０００３】
注射によるタンパク質の投与は、インビボでのそれらの送達の最も有効な手段であるが、多重注射に対する患者の許容度は、非常に低い。さらに、薬物注射は、常に患者に伝達可能ではないかもしれない訓練および技術を必要とする。タンパク質薬物が、救命の役割を有する場合には、注射による投与は、患者に受け入れ可能であり得る。しかし、タンパク質薬物がいくつかの可能な治療法の１つであるだけの場合、タンパク質およびペプチドの注射は、患者に受け入れられそうにない。従って、タンパク質およびペプチドの送達の代替の経路が、開発される必要がある。
【０００４】
このような代替の経路としては、口内、経鼻、経口、肺、直腸および眼の経路が挙げられ得る。例外なしに、これらの経路は非経口経路の投与より有効でないが、非経口経路よりもなお遥かに魅力的である。なぜなら、これらの経路は、患者に簡便さと制御（ｃｏｎｔｒｏｌ）を提供する。口の経路は、最も簡便で、患者が従順である（ｐａｔｉｅｎｔ−ｃｏｍｐｌｉａｎｔ）ため、特に魅力的である。
【０００５】
身体の内側を外側と分離する粘膜のバリア（例えば、胃腸粘膜、眼の粘膜、肺の粘膜、直腸の粘膜および鼻粘膜）は、分子の輸送を厳密に調節する、隙間無く接合した細胞単層の層を含む。バリア中の個々の細胞は、細胞内間隔への進入を調節する、隙間のない接合点により接合される。それ故、粘膜は、第一のレベルでは物理的バリアであり、粘膜を通る輸送は、経細胞（ｔｒａｎｓｃｅｌｌｕｌａｒ）経路または傍細胞（ｐａｒａｃｅｌｌｕｌａｒ）経路のいずれかに依存する（Ｌｅｅ，Ｖ．Ｈ．Ｌ．，Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓ．５：６９−９７（１９８８））。
【０００６】
水で満たされた隙間のない接合点を通る傍細胞輸送は、小分子（分子量＜１ｋＤａ）に制限され、そして本質的に、粘膜を横切る濃度勾配により推進される拡散プロセスである（Ｌｅｅ，Ｖ．Ｈ．Ｌ．，Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓ．５：６９−９７（１９８８）；Ａｒｔｕｒｓｓｏｎ，Ｐ．およびＭａｇｎｕｓｓｏｎ，Ｃ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａ．Ｓｃｉ．７９：５９５−６００（１９９０））。隙間のない接合点は、粘膜の全表面積の０．５％未満を含む（Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｍａｒｉｓｃａｌ，Ｌ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌ．８６：１１３−１２５（１９８５）；Ｖｅｔｖｉｃｋａ，ＶおよびＬｕｂｏｒ，Ｆ．，Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｓｙｓ．５：１４１−１７０（１９８８））；したがって、これらの接合点は、粘膜を横切るタンパク質薬物の輸送において、重要でない役割しか果たさない。
【０００７】
小さい薬物の経細胞輸送は、薬物の物理化学的特性が、疎水性細胞バリアを横切る輸送に適しているという条件で、効率的に起こる。しかし、タンパク質およびペプチドの経細胞輸送は、トランスサイトーシスのプロセスに制限される（Ｓｈｅｎ，Ｗ．Ｃ．ら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．８：９３−１１３（１９９２））。トランスサイトーシスは、複雑なプロセスであり、このプロセスにおいて、タンパク質およびペプチドは、細胞の一方の側から小胞に取り込まれ、続いて細胞を通ってもう一方の側へ輸送され、ここでエンドサイトーシス小胞から放出される（Ｍｏｓｔｏｖ，Ｋ．Ｅ．およびＳｅｍｉｓｔｅｒ，Ｎ．Ｅ．，Ｃｅｌｌ  ４３：３８９−３９０（１９８５））。粘膜バリアの細胞膜は、疎水性の脂質二層であり、この細胞膜は、タンパク質およびペプチドのような親水性で、荷電した高分子には親和性を有していない。さらに、粘膜細胞は、多くの高分子の輸送のバリアとして作用し得るムチンを分泌し得る（Ｅｄｗａｒｄｓ，ｐ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｍｅｄ．Ｂｕｌｌ．３４：５５−５６（１９７８））。したがって、タンパク質およびペプチドのための特異的な輸送機構が存在しない場合、粘膜バリアを横切るそれらに固有の輸送は、ごくわずかである。
【０００８】
タンパク質およびペプチドの輸送に対する隙間のない物理的なバリアを提供することに加えて、粘膜バリアは、タンパク質およびペプチドを、粘膜を横切るそれらの通過の前、後および途中で、分解し得る酵素を有する。このバリアを、酵素バリアという。この酵素バリアは、タンパク質およびペプチドを、それらの末端またはそれらの構造の内部で切断する、エンドペプチダーゼ酵素およびエキソペプチダーゼ酵素からなる。いくつかの粘膜の酵素活性が研究されており、その結果は、アルビノのウサギの、口内の粘膜、鼻粘膜、直腸の粘膜および膣の粘膜のホモジェネートに、実質的なプロテアーゼ活性が存在すること、ならびにこれらの活性が、腸骨に存在する活性に匹敵するということを、実証した（Ｌｅｅ，Ｖ．Ｈ．Ｌ．，Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓ．５：６９−９７（１９８８））。したがって、考慮されている粘膜にかかわらず、この酵素バリアは、タンパク質分子およびペプチド分子の分解において強く重要な役割を演じる。
【０００９】
ペプチドのＮ末端およびＣ末端は荷電し、そして荷電した側鎖の存在が、高度な親水性の特徴をこれらの高分子に与える。さらに、荷電した側鎖の存在は、タンパク質およびペプチドが、強い水素結合能力を有することを意味する；このＨ−結合能力は、細胞膜を横切る、小さなペプチドの輸送でさえ阻害する際に主要な役割を演じるということが実証された（Ｃｏｎｒａｄｉ，Ｒ．Ａ．ら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．８：１４５３−１４６０（１９９１））。したがって、タンパク質およびペプチドのサイズおよび親水性の性質が組み合わさり、粘膜バリアを横切るそれらの輸送を厳しく制限する。
【００１０】
粘膜バリアの物理的性質を変えるために使用されてきた１つのアプローチは、浸透促進剤の使用である。浸透促進剤の使用は、細胞膜を流動化し得る低分子量薬剤（Ｋａｊｉ，Ｈら、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．３７：５２３−５３０（１９８５）），隙間のない接合点を開放し得る低分子量薬剤（Ｉｎａｇａｋｉ，Ｍ．ら、Ｒｈｉｎｏｌｏｇｙ  ２３：２１３−２２１（１９８５））、および細胞膜に孔を創出し得る低分子量薬剤（Ｇｏｒｄｏｎ，Ｓ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：７４１９−７４２３（１９８５）；Ｌｅｅ，Ｖ．Ｈ．Ｌ．ら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ．Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．８：９１−１９２（１９９１））による、細胞バリアの崩壊に基づく。これらの薬剤の使用は、バリアの完全性の非特異的損失をもたらし、そしてインビボで細胞に対して毒性であり得る種々の大きな分子の吸収をもたらし得る。
【００１１】
プロテアーゼインヒビターは、タンパク質およびペプチドと同時投与され、そしてインビボでのこれらの高分子の吸収を促進する際に、いくらか限られた活性を示した（Ｋｉｄｒｏｎ，Ｍら、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．３１：２８３７−２８４１（１９８２）；Ｔａｋａｒｏｉ，Ｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１３７：６８２−６８７（１９８６））。このアプローチの安全性および長期間の効力は、さらに完全に調べられるべきである。
【００１２】
プロドラッグアプローチは、ペプチドを酵素分解および酵素認識から防護する様式での、ペプチドの改変に基づく。これは、アミド化およびアシル化によるペプチド上の攻撃されやすい基の遮断により達成された。従って、このプロドラッグアプローチは、容易に検出可能な、活性のドメインを有する小さいペプチドのためにのみ有用であることがかなり証明されている。
【００１３】
サイズの縮小は、タンパク質の輸送潜在能力を増加することへの、別の可能なアプローチである。しかし、タンパク質の活性部位は、サイズ縮小が試みられ得る前にマッピングされる必要がある。一般に、このアプローチを、大多数のタンパク質に適用するのは困難である。
【００１４】
キャリアリガンドは、それらの特性により、タンパク質およびペプチドの細胞摂取および輸送特性を改変し得る。このアプローチの本質は、細胞−不浸透性のタンパク質または細胞−不浸透性のペプチドが、高度に細胞内に輸送されるキャリアに共有結合で付着されるということである。キャリアリガンドが、エンドサイトーシスによって取りこまれ、そしてトランスサイトーシスされるメカニズムは、タンパク質およびペプチドの輸送を促進するためのキャリアの適性を決定する際に重要である。高分子キャリアは、親水性であり、膜内に分配しない。したがって、大きなポリマーキャリアの細胞内への輸送は、細胞膜へのキャリアの親和性により媒介される。一般に、高分子結合体の取り込みは、細胞膜への結合で開始する。キャリアの細胞への結合は、特異的であり得（例えば、抗体の細胞表面抗原への結合）、非特異的であり得（カチオン性リガンドまたはレクチンの細胞表面糖への結合）、あるいはレセプターに媒介され得る（トランスフェリン（ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎｇ）またはインシュリンのそれらのレセプターへの結合）。一旦、キャリアが細胞表面に結合されると、キャリアは、小胞内に取り込まれる。次いでこれらの小胞は、順次処理され、いくつかの経路へと定められる。１つの経路は、小胞を膜に戻すリサイクルである。別の経路（これは結合体に対して破壊的である）は、リソソームとの融合である。代替の経路および結合体のトランスサイトーシスを導く経路は、小胞が誘導された側と反対の膜との、小胞の融合である。
【００１５】
エンドサイトーシスのプロセスとトランスサイトーシスのプロセスとの間の正確なバランスは、その標的に対するタンパク質結合体の送達を決定する。例えば、エンドサイトーシスは、結合体が標的細胞により取り込まれる程度を決定し得るが、トランスサイトーシスは、結合体がその標的に到達するか否かを決定する（Ｓｈｅｎ，Ｗ．Ｃ．ら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．８：９３−１１３（１９９２））。胃腸管を通る首尾良い吸収のために、結合体は、胃腸粘膜の頂膜に結合し、粘膜細胞内に内在化され、細胞を横切って送達され、そして最後に基底膜から放出される。
【００１６】
現在の文献は、非特異的キャリア（例えば、ポリリジン（Ｓｈｅｎ，Ｗ．Ｃ．およびＲｙｓｅｒ，Ｈ．Ｊ．Ｐ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：７５８９−７５９３（１９８１））およびレクチン（Ｂｒｏａｄｗｅｌｌ，Ｒ．Ｄ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：６３２−６４６（１９８８）））、および特異的キャリア（例えば、トランスフェリン（Ｗａｎ，Ｊ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：１３４４６−１３４５０（１９９２））、アジアログリコプロテイン（Ｓｅｔｈ，Ｒ．ら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓｅａｓｅｓ  １６８：９９４−９９９（１９９３））、および抗体（Ｖｉｔｅｔｔａ，Ｅ．Ｓ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：１５Ｓ−１８Ｓ（１９９０）））が、タンパク質の細胞内へのエンドサイトーシスを増大するということを実証する多くの報告を含む。タンパク質のトランスサイトーシスキャリアを扱う報告は、より少なく、細胞バリアを横切るタンパク質結合体の輸送を定量した研究は、ほとんど無い。コムギ麦芽アグルチニン（Ｂｒｏａｄｗｅｌｌ，Ｒ．Ｄ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：６３２−６４６（１９８８））および抗−トランスフェリン／メトトレキサート結合体（Ｆｒｉｄｅｎ，Ｐ．Ｍ．およびＷａｌｕｓ，Ｌ．Ｒ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３３１：１２９−１３６（１９９３））は、インビボでの血液−脳バリアを横切ってトランスサイトーシスされることが示された。また、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）のポリリジン結合体およびＨＲＰのトランスフェリン結合体は、インビボで細胞単層を横切ってトランスサイトーシスされることが示された（Ｗａｎ，Ｊ．およびＳｈｅｎ，Ｗ．Ｃ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．８：Ｓ−５（１９９１）；Ｔａｕｂ，Ｍ．Ｅ．およびＳｈｅｎ，Ｗ．Ｃ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１５０：２８３−２９０（１９９２）；Ｗａｎ，Ｊ．ら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２６７：１３４４６−１３４５０（１９９２））。
【００１７】
リン脂質の成分としての脂肪酸は、細胞膜の大部分を構成する。それらは市販されており、比較的安価である。それらの脂質的性質に起因して、脂肪酸は、非毒性の様式で、容易に細胞膜に分配し、細胞膜と相互作用する。したがって、脂肪酸は、潜在的に、タンパク質およびペプチドの送達のために最も有用なキャリアリガンドを代表する。タンパク質およびペプチドの送達において脂肪酸を使用し得るストラテジーは、タンパク質およびペプチドの共有結合修飾ならびに脂肪酸エマルジョンの使用を含む。
【００１８】
いくつかの研究は、インビボでペプチドおよびタンパク質を送達するための脂肪酸エマルジョンの首尾良い使用を報告した（Ｙｏｓｈｉｋａｗａ，Ｈ．ら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．２：２４９−２５１（１９８５）；Ｆｉｘ，Ｊ．Ａ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５１：Ｇ３３２−Ｇ３４０（１９８６））。脂肪酸エマルジョンがタンパク質およびペプチドの吸収に影響を及ぼすメカニズムは、まだ知られていない。脂肪酸エマルジョンは、隙間の無い接合点を解放し、膜を可溶化し、タンパク質およびペプチドを胃腸の環境から隠し、そしてタンパク質およびペプチドを、その吸収の一部として胃腸粘膜を横切って運ぶ（Ｓｍｉｔｈ，ｐら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．８：２５３−２９０（１９９２））。後者のメカニズムが提案されたが、これは、脂肪吸収の機構についての現在の知識と矛盾する。
【００１９】
胃腸上皮を横切ってタンパク質およびペプチドを送達するための、より論理的なストラテジーは、脂肪酸を非特異的膜吸収剤として利用することである。いくつかの研究は、タンパク質に結合された非特異的膜結合剤が、インビトロで細胞を横切るタンパク質結合体のトランスサイトーシスを促進し得ることを、示した（Ｗａｎ，Ｊら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１４５：９−１５（１９９０）；Ｔａｕｂ，Ｍ．Ｅ．およびＳｈｅｎ，Ｗ．Ｃ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１５０：２８３−２９０（１９９２））。脂肪酸結合体はまた、細胞膜内への、または細胞膜を横切る高分子の摂取を改善することが実証された（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ，Ｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：６５５３−６５５６（１９８９）；Ｋａｂａｎｏｖ，Ａ．ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．３：３９−４２（１９８９））。それでもなお、脂肪酸をペプチドおよびタンパク質に結合する際に、以下のような困難性が存在していた：（１）脂肪酸の水溶液中での結合反応のための溶解度の不足；（２）脂肪酸アシル化後のペプチドおよびタンパク質の生物学的活性の減失、ならびに（３）脂肪酸結合ペプチドの水溶液における溶解度の不足（例えば、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，Ｍ．ら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．６：１７１−１７６（１９８９）；Ｍａｒｔｉｎｓ，Ｍ．Ｂ．Ｆ．ら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ  ７２：６７１−６７５（１９９０）；Ｍｕｒａｎｉｓｈｉ，Ｓ．ら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．６：１７１−１７６（１９８９）；Ｍａｒｔｉｎｓ，Ｍ．Ｂ．Ｆ．ら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ  ７２：６７１−６７５（１９９０）；Ｍｕｒａｎｉｓｈｉ，Ｓ．ら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．８：６４９−６５２（１９９１）；Ｒｏｂｅｒｔ，Ｓ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９６：４４７−４５４（１９９３）を参照のこと）。
【００２０】
一旦、細胞内に送達されると、ペプチドおよびタンパク質は、それらのキャリアから放出されなければならない。公開されたＰＣＴ出願ＷＯ９６／２２７７３号およびＷＯ９８／１３００７号は、スルヒドリル−含有ペプチドおよびスルヒドリル−含有タンパク質の、経細胞送達および経細胞放出を開示する。スルヒドリル−含有親水性分子の細胞吸収は、ジスルフィド結合を介した脂肪酸との結合により増大され得る。不安定なジスルフィド結合は、容易に還元され、一旦体内に入ると、親水性化合物の脂肪酸部分からの放出のためのメカニズムを提供する。ジスルフィド結合の還元に加え、生物学的に活性な親水性化合物のキャリア系からの放出のための他のメカニズムは、加水分解および光分解結合開裂を含む。（例えば、米国特許第５，５０５，９３１号およびその中に記載されている参考文献を参照のこと）。生物学的に活性なアミンが有機酸に結合される、加水分解ベースの送達システムであって、特定の細胞を標的するためのモノクローナル抗体または他の基質を組み込んでいるシステムが、公知である（米国特許第４，７６４，３６８号、同第４，６１８，４９２号、同第５，５０５，９３１号および同第５，５６３，２５０号を参照のこと）。標的細胞への特異的な結合の後に、これらの結合体は、細胞内に活性アミン（代表的にはアミドの形態）を送達し、細胞内では、（アミドの）加水分解により遊離アミンが放出される。
【００２１】
先行技術の加水分解ベースの送達系の成功は、生物学的に活性なアミノ基を含む化合物を細胞内に送達する能力のある、改善された薬物−キャリア結合体の探索に影響を与えた。改善された合成ストラテジーおよび改善された処置技術が現在開発されつつある。
【００２２】
（発明の要旨）
本発明は、新規の薬物−キャリア結合体、およびそれらの生成のための簡便な合成法に関する。従って、本発明は、合成方法、中間体、および最終的に、生物学的に活性なアミノ基含有化合物の取込みおよび放出に有用な最終生成物に関する。
【００２３】
特に、本発明は、一般式Ｉの化合物に関し：
【００２４】
【化４】
0004637362.tif 000002
ここで、Ｒ2は、水素、ハロ、アルキルまたはアリールからなる群から選択され、ここで、これらのアルキルまたはアリール基は、１つ以上のアルコキシ、アルコキシアルキル、アルカノイル、ニトロ、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルカノイルオキシ、アルキルまたはハロゲン原子で必要に応じて置換され；
Ｒ3は、親油性基であり；
Ｒ4およびＲ5の一方は、アミン含有薬物、天然または非天然アミノ酸、ペプチドおよびタンパク質からなる群から選択される生物学的に活性なアミノ基含有物質であり、そしてＲ4およびＲ5の他方は、ＯＲ6であり、ここでＲ6は、水素、アルカリ金属および陰電荷であり；
Ｘは、酸素または硫黄であり；
Ｙは、天然または非天然架橋アミノ酸であり；
ｎは、０または１であり；そして
ｍは、０〜１０の整数である。
【００２５】
本発明はまた、一般式ＩＩの化合物に関し：
【００２６】
【化５】
0004637362.tif 000003
ここで、Ｒ2は、水素、ハロ、アルキルまたはアリールであり、ここで、これらのアルキルおよびアリール基は、１つ以上のアルコキシ、アルコキシアルキル、アルカノイル、ニトロ、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルカノイルオキシ、アルキルまたはハロゲン原子で必要に応じて置換され；
Ｒ3は、親油性基であり；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｙは、天然または非天然架橋アミノ酸であり；
ｎは、０または１であり；そして
ｍは、０〜１０の整数である。
【００２７】
本発明はまた、一般式ＩＩＩの化合物またはそれらの薬学的に受容可能な塩に関し：
【００２８】
【化６】
0004637362.tif 000004
ここで、Ｒ2は、水素、ハロ、アルキルまたはアリールであり、ここで、これらのアルキルおよびアリール基は、１つ以上のアルコキシ、アルコキシアルキル、アルカノイル、ニトロ、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルカノイルオキシ、アルキルまたはハロゲン原子で必要に応じて置換され；
Ｒ3は、親油性基であり；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｙは、天然または非天然架橋アミノ酸であり；
ｎは、０または１であり；そして
ｍは、０〜１０の整数である。
【００２９】
本発明はまた、一般式ＩＩの化合物および生物学的に活性なアミノ基含有物質から、一般式Ｉの結合体を形成する方法に関する。
【００３０】
本発明はまた、マレイン酸誘導体、および対応するチオールまたはアルコールから、一般式ＩＩの化合物を形成する方法に関する。
【００３１】
本発明はまた、生物学的に活性なアミノ基含有物質の、哺乳動物における吸収の増加または血液および組織保持の延長のための方法に関し、ここで、一般式Ｉの結合体は、薬学的に受容可能な形態で哺乳動物に投与される。
【００３２】
本発明はまた、親水性アミン含有化合物の、粘膜バリアを有する細胞の内部への送達を増加するための方法に関し、ここで、一般式Ｉの結合体はこの細胞と接触され、それによりこの結合体はこの細胞の粘膜バリアを透過し、そして遊離アミンがアミド結合の加水分解によって放出される。
【００３３】
本発明はまた、一般式Ｉの化合物を含む薬学的組成物に関する。
【００３４】
本発明の上記および他の特徴、利点、実施形態、局面および目的は、本明細書中に示される説明、教示およびガイダンスに基づいて、関連分野の当業者に明らかになる。
（発明の詳細な説明）
本発明に従って、生物学的に活性なアミン含有化合物（例えば、アミノ酸、ペプチドまたはタンパク質）は、可逆性アミド結合を介して、親油性誘導体に付着する。このような結合体の親油性基は、細胞膜の先端側に結合し、そして細胞膜を通るその結合体の輸送を容易にする。一旦、細胞膜の内部に入ると、アミド結合の加水分解の結果として、生物学的に活性なアミン含有化合物が間隙液中に放出される。
【００３５】
本発明の１つの局面に従って、一般式Ｉの結合体が提供され、
【００３６】
【化７】
0004637362.tif 000005
ここで、Ｒ2は、水素、ハロ、アルキル、またはアリールであり（ここで、アルキル基およびアリール基は、必要に応じて１つ以上のアルコキシ、アルコキシアルキル、アルカノイル、ニトロ、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルカノイルオキシ、アルキル、またはハロゲン原子で置換される）；
Ｒ3は、親油性基であり；
Ｒ4およびＲ5のうちの一方は、アミノ含有薬物、天然または非天然アミノ酸、ペプチドおよびタンパク質からなる群から選択される、生物学的に活性なアミノ基含有物質を表し、そしてＲ4およびＲ5のうちの他方は、ＯＲ6であり（ここで、Ｒ6はハロゲン、アルカリ金属、または陰電荷を表す）；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｙは、架橋天然アミノ酸、または架橋非天然アミノ酸であり；
ｎは、０または１であり；そして
ｍは、０〜１０の整数である。
【００３７】
本発明の別の局面に従って、一般式ＩＩの化合物が提供され、
【００３８】
【化８】
0004637362.tif 000006
ここで、Ｒ2は、水素、ハロ、アルキル、またはアリールであり（ここで、アルキル基およびアリール基は、必要に応じて１つ以上のアルコキシ、アルコキシアルキル、アルカノイル、ニトロ、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルカノイルオキシ、アルキル、またはハロゲン原子で置換される）；
Ｒ3は、親油性基であり；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｙは、架橋天然アミノ酸、または架橋非天然アミノ酸であり；
ｎは、０または１であり；そして
ｍは、０〜１０の整数である。
【００３９】
本発明の別の局面に従って、一般式ＩＩＩの化合物、またはその非毒性で薬学的に受容可能な塩が提供され、
【００４０】
【化９】
0004637362.tif 000007
ここで、Ｒ2は、水素、ハロ、アルキル、またはアリールであり（ここで、アルキル基およびアリール基は、必要に応じて１つ以上のアルコキシ、アルコキシアルキル、アルカノイル、ニトロ、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルカノイルオキシ、アルキル、またはハロゲン原子で置換される）；
Ｒ3は、親油性基であり；
Ｘは、ＯまたはＳであり；
Ｙは、架橋天然アミノ酸、または架橋非天然アミノ酸であり；
ｎは、０または１であり；そして
ｍは、０〜１０の整数である。
【００４１】
代表的なアルキル基は、Ｃ1-6アルキル基を含み、Ｃ1-6アルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、２−メチル−１−ペンチル、３−メチル−１−ペンチル、４−メチル−１−ペンチルなどが挙げられる。
【００４２】
代表的なアルコキシ基は、上記のアルキル基のいずれかで置換された酸素を含む。
【００４３】
代表的なアルコキシアルキル基は、メトキシメチル、エトキシメチル、プロポキシメチル、ブトキシメチル、ペントキシメチル、ヘキソキシメチル、メトキシエチル、メトキシプロピル、メトキシブチル、メトキシペンチル、メトキシヘキシルなどのようなアルコキシ基により置換された、上記のアルキル基のいずれかを含む。
【００４４】
好ましいアリール基は、Ｃ6-14アリール基であり、そして代表的には、フェニル基、ナフチル基、フルオレニル基、フェナントリル基、およびアントラシル基が挙げられる。
【００４５】
代表的なアルコキシ置換のアリール基は、１つ以上の上記のアルコキシ基により置換された上記のアリール基（例えば、３−メトキシフェニル、２−エトキシフェニルなど）を含む。
【００４６】
代表的なアルキル置換のアリール基は、基Ｐｈ（ＣＨ2）n（ここで、ｎは１〜６であり、例えば、トリル、ｏ−、ｍ−、ｐ−キシリル、エチルフェニル、１−プロピルフェニル、２−プロピルフェニル、１−ブチルフェニル、２−ブチルフェニル、ｔ−ブチルフェニル、１−ペンチルフェニル、２−ペンチルフェニル、３−ペンチルフェニル）を含むＣ1-6アルキル基のいずれかにより置換された、上記のアリール基のいずれかを含む。
【００４７】
代表的なアルケニル基は、Ｃ2-6アルケニル基を含む（例えば、エテニル基、２−プロペニル基、イソプロペニル基、２−ブテニル基、３−ブテニル基、４−ペンテニル基、３−ペンテニル基、２−ペンテニル基、５−へキセニル基、４−へキセニル基、３−へキセニル基、および２−へキセニル基）。
【００４８】
代表的なアルキニル基は、Ｃ2-6アルキニル基を含む（例えば、エチニル基、２−プロペニル基、２−ブチニル基、３−ブチニル基、４−ペンチニル基、３−ペンチニル基、２−ペンチニル基、５−へキシニル基、４−へキシニル基、３−へキシニル基、および２−へキシニル基）。
【００４９】
代表的なアルケニル置換またはアルキニル置換のアリール基は、上記のＣ2-6アルケニル基またはＣ2-6アルキニル基のいずれかにより置換された、上記のＣ6-14アリール基のいずれかを含む（例えば、エテニルフェニル基、１−プロペニルフェニル基、２−プロペニルフェニル基、１−ブテニルフェニル基、２−ブテニルフェニル基、１−ペンテニルフェニル基、２−ペンテニルフェニル基、３−ペンテニルフェニル基、１−へキセニルフェニル基、２−へキセニルフェニル基、３−へキセニルフェニル基、エチニルフェニル基、１−プロピニルフェニル基、２−プロピニルフェニル基、１−ブチニルフェニル基、２−ブチニルフェニル基、１−ペンチニルフェニル基、２−ペンチニルフェニル基、３−ペンチニルフェニル基、１−へキシニルフェニル基、２−へキシニルフェニル基、３−へキシニルフェニル基）。
【００５０】
代表的なハロ基としては、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素が挙げられる。
【００５１】
代表的なハロ置換のアルキル基は、１つ以上のフッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子により置換されたＣ1-6アルキル基を含む（例えば、フルオロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロメチル基、１，１−ジフルオロエチル基、およびトリクロロメチル基）。
【００５２】
代表的なアルカノイル基は、Ｃ1-5Ｃ（Ｏ）アルカノイル基（例えば、アセチル基、プロピオニル基、ブタノイル基、ペンタノイル基、およびヘキサノイル基）または、アリールアルカノイル基（例えば、上記のアリール基のいずれかにより置換されたＣ1-5Ｃ（Ｏ）アルカノイル基）を含む。
【００５３】
代表的なシクロアルキル基は、Ｃ3-8シクロアルキル基を含み、Ｃ3-8シクロアルキル基としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基、およびシクロオクチル基が挙げられる。
【００５４】
本発明のさらに別の局面に従って、一般式ＩＩの化合物およびアミノ基含有物質から、一般式Ｉの結合体を形成する方法が提供される。
【００５５】
本発明のさらに別の局面に従って、マレイン酸誘導体およびチオールおよびアルコールから、一般式ＩＩの化合物を形成する方法が提供される。
【００５６】
本発明のさらに別の局面に従って、生物学的に活性なアミノ基含有物質の、哺乳動物における吸収を増大する方法、または血液および組織の保持を長期化する方法が提供され、それらの方法において、一般式Ｉの結合体は哺乳動物に投与される（例えば、乳剤、超微粒子（例えば、固体脂質超微粒子）、リポソーム、マイクロスフェア、マイクロカプセル、エアロゾルの形態で、吸入を通して、および経皮性投薬形態で）。
【００５７】
本発明のさらに別の局面に従って、親水性アミン含有物質の、粘膜障壁を有する細胞の内側への送達を増加させる方法が提供され、それらの方法において、一般式Ｉの結合体は細胞に接触し、それによりその結合体は細胞の粘膜障壁を通り、そして自由なアミンがアミド結合の加水分解により放出される。
【００５８】
本明細書中で用いられる場合、用語「親油性基」は、天然に存在する脂質それ自体（約４〜約２６の炭素原子、好ましくは約５〜約１９の炭素原子を含む、疎水性の分枝炭化水素または直鎖炭化水素、脂肪酸またはそのエステル）か、あるいは界面活性剤のいずれかをいう。適切な親油性基としては、以下：パルミチル（Ｃ15Ｈ31）、オレイル（Ｃ15Ｈ29）、ステアリル（Ｃ17Ｈ35）、ラウリル（Ｃ11Ｈ23）、コリル、およびミリスチル（Ｃ13Ｈ27）を含む長鎖アルカノイル基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５９】
本明細書中で用いられる場合、用語「天然または非天然アミノ酸」は、２１の天然に存在するアミノ酸、ならびにＤ型アミノ酸、ブロックされたＬ型アミノ酸およびＤ型アミノ酸（例えば、アミド化またはアシル化によりブロックされたもの）、置換されたアミノ酸（例えば、シクロプロピルまたはシクロブチルのような、立体障害となるアルキル基、またはシクロアルキル基で置換されたもの）のいずれかをいい、ここで、置換はアミノ酸中で立体配座の拘束をもたらす。本発明における、アミノ酸、あるいはペプチドまたはタンパク質の成分としての使用のための、好ましい、天然に存在するアミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、シトルリン、システイン、シスチン、γ−グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ノルロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、γ−カルボキシグルタミン酸、またはＯ−ホスホセリンである。本発明における、アミノ酸、あるいはペプチドまたはタンパク質の成分としての使用のための、好ましい、天然に存在しないアミノ酸は、β−アミノ酸（例えば、β−アラニン）、α−アミノ酪酸、γ−アミノ酪酸、γ−（アミノフェニル）酪酸、α−アミノイソ酪酸、ε−アミノカプロン酸、７−アミノヘプタン酸、アミノ安息香酸、アミノフェニル酢酸、アミノフェニル酪酸、システイン（ＡＣＭ）、メチオニンスルホン、フェニルグリシン、ノルバリン、オルニチン、δ−オルニチン、ｐ−ニトロ−フェニルアラニン、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、およびチオプロリンのいずれかである。以下の式のアミノ酸誘導体もまた企図され：
【００６０】
【化１０】
0004637362.tif 000008
ここで、ｐは１〜１０である。
【００６１】
本明細書中で用いられる場合、用語「生物学的に活性なアミノ基含有物質」は、細胞の内側に導入された場合に生物学的活性を有する任意の物質をいい、その構造において、アシル化によってアミド結合を形成し得る第１アミンまたは第２アミンを含む。第１アミンまたは第２アミンを含まない物質は、一般式ＩＩまたはＩＩＩの化合物との結合に敏感に反応するように適切に誘導体化される。例えば、カルボキシル基を有する化合物は、一般式ＩＩまたはＩＩＩの化合物、および水溶性カルボジイミド（ｃａｒｂｏｄｉｍｉｄｅ）（例えば、ＥＤＣ）カップリング試薬の存在下で、適切なジアミン（例えば、エチレンジアミン、プロピレンジアミン、１，４−ジアミノブタン、スペルミン、またはスペルミジンなどのようなＣ2〜Ｃ10ジアミン）と反応され得る。このように、ジアミンは、生物学的に活性な化合物（第１アミンまたは第２アミンを含まない）を、アミド結合形成を介して一般式ＩＩまたはＩＩＩの化合物に結合する手段として役立つ。
【００６２】
好ましいアミン含有薬物としては、チラミン、アルギニンバソプレシン、インスリン（Ｃｚｅｃｈ，Ｍ．Ｐ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４６：３５９（１９７７））、カルシトニン（Ｂｒｏｗｎ，Ｅ．Ｍ．およびＡｕｒｂａｃｈ，Ｇ．Ｄ．，Ｖｉｔａｍ．Ｈｏｒｍ．３８：２３６（１９８０））、デスモプレシン（Ｖａｖｒａら，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．１８８：２４１（１９７４））、インターフェロン−α、インターフェロン−β、およびインターフェロン−γ（Ｓｔｉｅｍ，Ｅ．Ｒ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｎｔｅｒ．Ｍｅｄ．９６：８０−９３（１９８２））、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−６、およびインターロイキン−１１（Ｋｌｕｔｈ，Ｄ．Ｃ．およびＲｅｅｓ，Ａ．Ｊ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１６：５７６−５８２（１９９６））；Ｈｏｌｙｏａｋｅ，Ｔ．Ｌ．，Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ．１０：１６９−２００（１９９６））、Ｇ−ＣＳＦ（Ｓｐｉｅｋｅｒｍａｎｎ，Ｋ．ら，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  １１：４６６−４７８（１９９７））、ＧＭ−ＣＳＦ（Ｊｏｎｕｌｅｉｔ，Ｈ．ら，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．２８９：１−８（１９９６））、ヒト成長ホルモン（Ｓｔｒｏｂｌ，Ｊ．Ｓ．およびＴｈｏｍａｓ，Ｍ．Ｊ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．４６：１−３４（１９９４））、エリスロポイエチン（Ｓｐｉｖａｋ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｅｍｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３０：２−１１（１９９３））、バソプレシン（Ｓｃｈｒｏｄｅｒ，Ｅ．およびＬｕｂｋｅ，Ｋ．，Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ２：３３６−３５０（１９６６））、オクトレオチド（Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｍ．Ｃ．およびＳｔｅｗａｒｔ，Ｐ．Ｍ．，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ４５：６３−６４（１９９６））、アプロチニン（Ｈａｄｅｒｌａｎｄ，Ｇ．およびＭｃＣｏｎｎ，Ｒ．，Ｆｅｄ．Ｐｒｏｃ．３８：２７６０−２７６７（１９７９））、オキシトシン（Ｎａｃｈｔｍａｎｎ，Ｆ．ら，Ａｎａｌ．Ｐｒｏｆ．Ｄｒｕｇ  Ｓｕｂｓｔ．，第１０巻，Ｆｌｏｒｅｙ，Ｋ．（編），Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９８１），５６３−６００頁）、β−ＴＧＦ（Ｍｏｓｅｓ，Ｈ．Ｌ．およびＳｅｒｒａ，Ｒ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．６：５８１−５８６（１９９６））、ＢＤＮＦ（Ａｐｆｅｌ，Ｓ．Ｃ．およびＫｅｓｓｌｅｒ，Ｊ．Ａ．，Ｂａｉｌｌｉｅｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．４：５９３−６０６（１９９５））、ｂ−ＦＧＦ（Ｂｉｋｆａｌｖｉ，Ａ．ら，Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．１８：２６−４５（１９９７））、ＰＤＧＦ（Ｈｕｇｈｅｓ，Ａ．Ｄ．ら，Ｇｅｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２７：１０７９−１０８９（１９９６））、ＴＮＦ（Ｍａｊｎｏ，Ｐ．Ｅ．ら，Ｓｗｉｓｓ．Ｓｕｒｇ．４：１８２−１８５（１９９５））、心房ナトリウム利尿ペプチド（Ｎａｋａｏ，Ｋ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．２：４５−５０（１９９３））、レラキシン（Ｓｃｈｗａｂｅ，Ｃ．ら，Ｒｅｃｅｎｔ  Ｐｒｏｇｒ．Ｈｏｒｍ．Ｒｅｓ．３４：１２３−２１１（１９７８））、アミリン（ａｍｙｒｉｎ）（Ｒｉｎｋ，Ｔ．Ｊ．ら，Ｔｒｅｎｄｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．１４：１１３−１１８（１９９３））、デオキシリボヌクレアーゼ（Ｌａｓｋｏｗｓｋｉ，Ｔｈｅ  Ｅｎｚｙｍｅｓ，第２巻，Ｂｏｙｅｒ，Ｐ．Ｄ．編，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ（１９７１），２８９−３１１頁）、ＥＧＦ（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ，Ｇ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：２６１−２６４（１９９３））、ヒルジン（Ｍａｒｋｗａｒｄｔ，Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９：９２４（１９７０））、ネオカルチノスタチン（Ｄｅｄｏｎ，Ｐ．Ｃ．およびＧｏｌｄｂｅｒｇ，Ｉ．Ｈ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３１１−３３２（１９９２）、血液調節性（ｈｅｍｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ）ペプチド（Ｐａｕｋｏｖｉｔｓ，Ｗ．Ｒ．ら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｖ．１７：３４７−３５４（１９９０））およびソマトスタチン（Ｍｏｓｓ，Ｒ．Ｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．４１：６１７（１９７９））が挙げられるがこれらに限定されない。
【００６３】
本発明の目的に関して、用語「ペプチド」は、２〜１００のアミノ酸を含む、天然アミノ酸鎖または非天然アミノ酸鎖をいい、そして用語「タンパク質」は、１００を超えるアミノ酸を含む、天然アミノ酸鎖または非天然アミノ酸鎖をいう。タンパク質およびペプチドは、天然源から単離され得るか、または、組換えＤＮＡ技術または固相合成のような、当該分野において周知の方法により調製され得る。本発明に従って使用されるペプチドおよびタンパク質は、天然に存在するＬ−アミノ酸、Ｌ−アミノ酸と他のアミノ酸（Ｄ−アミノ酸および修飾されたアミノ酸を含む）との組み合わせのみを含み得るか、あるいは、Ｌ−アミノ酸以外のアミノ酸のみを含み得る。一般式Ｉの結合体を形成するために、ペプチドまたはタンパク質は、少なくとも１つの反応性アミノ基を有さなければならない。反応性アミノ基は、アミノ酸側鎖の一部、またはペプチド骨格もしくはタンパク質骨格の末端アミノ基であり得るか、あるいはペプチド分子またはタンパク質分子における官能基の化学修飾により導入され得る。ペプチドは、ホモペプチドまたはヘテロペプチドであり得、そして天然アミノ酸、合成アミノ酸、またはその任意の組み合わせを含み得る。
【００６４】
本発明の化合物の、非毒性で薬学的に受容可能な塩はまた、本発明の範囲内に含まれる。特に、公知の方法（例えば、ハロゲン化アルカリ金属の、対応するカルボン酸への付加）により形成されたカルボン酸アルカリ金属塩が企図される。このような塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、およびアンモニウム塩が挙げられる。
【００６５】
本明細書中で用いられる場合、用語「陰電荷」は、カルボン酸基（ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ  ｇｒｏｕｐ）にアニオン性を提供し得る、溶媒和されていない孤立電子対、溶媒和された孤立電子対、または錯体化される孤立電子対のいずれかをいう。
【００６６】
本明細書中で用いられる場合、用語「アルカリ金属」は、Ｉ族金属またはＩＩ族金属（例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、およびマグネシウム）のいずれかをいう。
【００６７】
本発明の好ましい動物被験体は、哺乳動物である。用語「哺乳動物」は、哺乳綱に属する個体をいう。本発明は特に、ヒト患者の処置において有用である。
【００６８】
用語「処置（する）」は、疾患または状態の予防、改善、または治癒を含み得る目的のための、脂質化結合体の、被験体への投与をいう。
【００６９】
医薬品が同時に患者へ提供される場合、または各医薬品の投与間の時間が、生物学的活性の重複を可能にするようなものである場合、それらは、互いとの「組み合わせで」提供されると考えられる。
【００７０】
１つの好ましい実施形態において、少なくとも１つの結合体が、薬学的組成物の一部として、存在するか、または投与される。
【００７１】
本発明に従う投与のための薬学的組成物は、薬学的に受容可能なキャリアと必要に応じて合わせられた薬学的に受容可能な形態で本発明に従う少なくとも１つの結合体を含み得る。これらの組成物を、これらの意図される目的を達成する任意の手段により投与し得る。例えば、投与は、経口経路、非経口経路、皮下経路、静脈内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、経皮経路、鞘内経路、頭蓋内経路または鼻腔内経路により得る。投与される投薬量は、患者の年齢、健康状態、および体重、もしあれば同時の処置の種類、処置の頻度、および所望される効果の性質に依存する。本発明に従う投与のための量およびレジメは、臨床処置の当業者により容易に決定し得る。
【００７２】
投与の形態にはまた、乳剤、ナノ微粒子（例えば、固体脂質ナノ粒子）、リポソーム、マイクロスフェア、マイクロカプセル、エアロゾル、還流吸入薬、および経皮的投薬形態が挙げられ得る。
【００７３】
非経口的投与についての適切な処方物は、水溶形態の化合物の水溶液を含む。さらに、適切に油状の注入懸濁液として化合物の懸濁液を投与し得る。適切な親油性溶媒または親油性ビヒクルとしては、例えば、脂肪油、（例えば、ごま油）、または合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリド）が挙げられる。水性注入懸濁液は、懸濁液の粘性を高める物質を含み得、これには例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および／またはデキストランが挙げられる。必要に応じて、水溶液および／または懸濁液はまた、安定化剤および／または緩衝液（例えば、ホウ酸緩衝液など）を含み得る。
【００７４】
本発明の薬学的調製物を、それ自体公知の様式（例えば、従来的な混合プロセス、顆粒化プロセス、糖衣錠作製プロセス、溶解プロセス、または凍結乾燥プロセスによって）で製造する。従って、経口的使用のためのこのような薬学的調製物は、固形賦形剤を活性化合物と合わせる工程、錠剤または糖衣錠コアを得ることが所望または必要の場合、適切な補助剤を添加する工程後、必要に応じて、得られた混合物を粉砕する工程、および顆粒剤の混合物を処理する工程により得られ得る。
【００７５】
適切な賦形剤は、例えば、フィラー（例えば、糖類、乳糖、ショ糖、マンニトールまたはソルビトール）；セルロース調製物および／またはリン酸カルシウム（リン酸三カルシウムまたはリン酸水素カルシウム）；ならびに結合剤（例えば、デンプンのり（例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、タガランス（ｔａｇａｒａｎｔｈ）、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン）を用いる）である。所望の場合、崩壊剤（例えば、上記したデンプン、およびまたカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、寒天もしくはアルギン酸またはアルギン酸ナトリウムのようなその塩）を添加し得る。上記の全ての補助剤は、フロー調節剤および潤滑剤（例えば、シリカ、滑石、ステアリン酸またはその塩（例えば、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム）および／あるいはポリエチレングリコール）である。所望の場合、糖衣錠コアに、胃液に対して耐性である適切なコーティングが提供される。この目的のために、濃縮された糖溶液を使用し得、これは必要に応じて、アラビアゴム、滑石、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタン、ラッカー溶液ならびに適切な有機溶媒もしくは溶媒混合物を含み得る。胃液に耐性であるコーティングを生成するために、適切なセルロース調製物（例えば、フタル酸アセチルセルロースまたはフタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース）の溶液を使用する。コーティングをまた、活性薬物、ペプチドまたはタンパク質とキャリアとの間に形成されたアミド結合を加水分解するのに十分な酸性環境への早期の曝露から本発明の脂質化（ｌｉｐｉｄｉｚａｔｉｏｎ）結合体を保護するために提供し得る。胃酸から保護されるコアを有する投薬単位を調製する方法については、米国特許第４，７８６，５０５号および同第４，８５３，２３０号を参照のこと。好ましくは、このコアは、中性または塩基性である。塩基性コアは、１つ以上のアルカリ反応化合物（例えば、米国特許第４，７８６，５０５号および米国特許第４，８５３，２３０号に記載される化合物）を含む。例えば、染料（ｄｙｓｔｕｆｆ）または色素を、例えば、活性化合物の用量の組み合わせを特徴付けるための同定のために、錠剤または糖衣錠コーティングに添加し得る。
【００７６】
使用され得る他の薬学的調製物としては、ゼラチン製の経口プッシュフィット（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル、直腸坐薬剤、経口投与および／または経鼻投与のための吸入処方物、必要に応じて、薬学的に受容可能なキャリアと合わされた鼻もしくは直腸クリームまたは軟膏、浸透賦活薬、賦活剤、および／またはフィラーが挙げられるが、これらに限定されない。使用のための適切な浸透賦活薬としては、カチオン性浸透賦活薬、アニオン性浸透賦活薬、両性浸透賦活薬、および中性浸透賦活薬（例えば、塩化ベンザルコニウム、クロルブタノール、ＡＺＯＮＥおよび当該分野において公知のその他のもの）が挙げられる。
【００７７】
一般式ＩＩの例示的な化合物の合成を、スキーム１および２に例示する。一般的に、ブロモメチル無水マレイン酸誘導体、またはそのマレイン酸塩は、アルコールまたはチオール保有親油性基と反応することが可能であり、一般式ＩＩＩのエーテルまたはチオールエーテルを形成する。アルコールまたはチオール保有親油性基は、必要に応じて、架橋天然アミノ酸部分および架橋非天然アミノ酸部分を含み、これは酸素原子または硫黄原子と親油性基に結合されたカルボニルとを架橋している。架橋天然アミノ酸部分または架橋非天然アミノ酸部分は、酸素原子もしくは硫黄原子、またはアミノ酸のアミノ末端、カルボキシル末端または側鎖で親油性基に結合されたカルボニル基のいずれかに連結され得る。スキーム１の参照により、Ｐａｌ−システインは、アミノ末端でカルボニルに、かつ側鎖を介して、硫黄原子に結合されたグリシン架橋を効率的に含んでいる。スキーム２の場合のように、ヘキサデカンチオールの使用は、架橋天然アミノ酸または架橋非天然アミノ酸を有さない、式ＩＩＩの化合物の形成を示す。次いで、一般式ＩＩＩの生成物を、無水マレイン酸を再形成するために脱水条件に供し、ここでエーテル結合またはチオエーテル結合を介して親油性基で置換された式ＩＩの化合物を得る。当業者は、所望の化合物に達し得る代替的な種々の合成のスキームを理解する。
【００７８】
【化１１】
0004637362.tif 000009
【化２１】
0004637362.tif 000010
スキーム３〜５は、本発明に従う例示的なｐＨ感受性脂質化結合体の合成の概略を示す。一般的に、アミン含有薬物、アミノ酸、ペプチドまたはタンパク質は、式ＩＩの化合物との反応が可能であり、式Ｉのアミドを形成する。アミド結合を、アルカリ条件下、好ましくは、緩衝化水溶液中で形成する。代表的にインビボで見出るｐＨを含む低いｐＨで、アミド結合を加水分解して、遊離アミンと式ＩＩＩの化合物とを放出する。可逆的なアミド結合形成は、あるｐＨでの脂質化試薬と親水性アミンとの結合および低いｐＨでの脂質化試薬からそのアミンの放出に関する機構を提供する。
【００７９】
【化１２】
0004637362.tif 000011
【化２２】
0004637362.tif 000012
【化２３】
0004637362.tif 000013
（実施例）
（実施例１．３−Ｓ−（Ｎ−パルミチルシステイニル）メチル，２−メチル無水マレイン酸、試薬Ａの合成（スキーム１））
Ｎ−パルミチル−システインのピリジンジスルフィド誘導体（Ｐａｌ−ＣＰＤ）を、公知の方法により得た。Ｐａｌ−ＣＰＤを、Ｅｋｒａｍｉら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３７１：２８３−２８６（１９９５）の手順に従って合成した。Ｐａｌ−ＣＰＤ（０．７ｇ，０．００１５ｍｏｌ）を、１０ｍｌのＮａＯＨ（ｐＨ１１）に溶解した。ジチオトレイトール（ＤＴＴ）（０．９ｇ，０．００６ｍｏｌ）を５ｍｌの水に溶解した。このＰａｌ−ＣＰＤ溶液を、室温で、連続的に撹拌しながら、ＤＴＴ溶液に滴下した。２時間後、反応を停止した。混合物のｐＨを、０．０１Ｎ  ＨＣｌを用いて３に調節して、ここで白色沈殿を生じた（Ｐａｌ−システイン）。この沈殿物を希釈ＨＣｌを用いて５回洗浄して、過剰な量のＤＴＴを除去した。
【００８０】
出発物質の３−ブロモメチル，２−メチル無水マレイン酸（Ｂｒ−ＤＭＭＡ）を、２，３−ジメチル無水マレイン酸（ＤＭＭＡ）への１当量の臭化物ラジカルの添加により得た。従って、ＤＭＭＡ（１．５ｇ，０．０１２ｍｏｌ）、ＮＢＳ（２．３ｇ，０．０１３ｍｏｌ）、ベンゾイルペルオキシド（０．３ｇ，０．００１２ｍｏｌ）および酸化マグネシウム（０．０２ｇ，０．０００５ｍｏｌ）を、還流下において、４０ｍｌのクロロホルム中で４時間加熱した。この混合物を濾過し、そしてクロロホルムを減圧下でエバポレートした。茶色の残渣に４０ｍｌの四塩化炭素を添加して、そして濾過した。濾液を収集して、溶媒を減圧下で除去した。薄緑色の透明のオイルまたは油状物を得、これを４℃で保存後、凝固した。
【００８１】
スキーム１の参照により、Ｂｒ−ＤＭＭＡを、Ｐａｌ−システインと反応させ、式ＩＩＩのＰａｌ−システインチオールエーテルを得る。ここで、Ｒ1は水素であり、Ｒ2はメチルであり、Ｒ3はパルミチル（Ｃ15Ｈ31）であり、Ｘは硫黄であり、Ｙはグリシン基（−ＮＨＣＨ（ＣＯ2Ｈ）−）であり、ｎ＝１およびｍ＝１である。反応を、室温で３０ｍｌの希ＨＣｌ中のＰａｌ−システインの懸濁液に直接Ｂｒ−ＤＭＭＡ（０．３ｇ、０．００１４ｍｏｌ）を添加することにより行う。混合物のｐＨを、１Ｎ  ＮａＯＨを用いて、７、９そして最終的に１１に徐々に調節した。混合物のｐＨは、２時間後、ｐＨ１１で安定した。２５℃で１６時間撹拌後、混合物を濾過し、そして濾液を１Ｎ  ＨＣｌを用いて酸性化した。生じた白色沈殿をエーテルで抽出した。エーテルを減圧下でエバポレートした。残存している緑色のオイルを、高真空下で乾燥した。６０〜６３℃の融点を有する３−Ｓ−（Ｎ−パルミチルシステイニル）メチル，２−メチルマレイン酸（４２０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を得た。モル収率は５６％であった。
【００８２】
３−Ｓ−（Ｎ−パルミチルシステイニル）メチル，２−メチルマレイン酸（４２０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を５ｍｌの乾燥ＴＨＦに溶解した。Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（６９２ｍｇ、３．３６ｍｍｏｌ）を、１ｍｌの乾燥ＴＨＦに溶解し、そして氷浴中で上記の溶液に添加した。この反応物を、５時間氷浴中で撹拌し、次いで、濾過した。濾液を収集して、そして減圧下でＴＨＦを除去した。残渣（茶色い固体）を１．５ｍｌの乾燥ジオキサンに溶解し、そして濾過した。濾液を３０ｍｌの冷乾燥ヘキサンに添加し、そして１６時間、４℃に保持した。得られた沈殿物を冷乾燥ヘキサンを用いて洗浄し、そして高真空を適用し、溶媒を除去した。４６〜４９℃の融点を有する薄茶色の生成物（試薬Ａ）を得た。モル収率は、５４％であった。
【００８３】
（実施例２．３Ｓ−（ヘキサデカニル）メチル２−メチル無水マレイン酸、試薬Ｂの合成（スキーム２））
スキーム２の参照により、Ｂｒ−ＤＭＭＡをヘキサデカンチオールと反応させ、式ＩＩＩのチオールエーテルを得る。ここで、Ｒ2はメチルであり、Ｒ3はヘキサデカン（Ｃ16Ｈ33）であり、ｎ＝０およびｍ＝０である。脱水条件下で、式ＩＩの無水物試薬Ｂを得る。ここで、Ｒ2、Ｒ3、ｎおよびｍは、上記の通りである。
【００８４】
従って、スキーム２に概略を示したように、Ｂｒ−ＤＭＭＡ（０．５ｇ、０．００２５ｍｏｌ）をｐＨ８で、１０ｍｌの水中で加水分解し、そして５０ｍｌのＴＨＦに溶解した０．６３ｇのヘキサデカンチオール（０．００２５ｍｏｌ）に添加した。トリエチルアミン（１ｍｌ）を、混合物に添加し、そして室温で１６時間撹拌した。反応混合物を濾過し、そして濾液を減圧下でエバポレートした。得られた残渣を、希ＮａＯＨ溶液（ｐＨ１１）に溶解し、そしてエーテル（３×２０ｍＬ）で洗浄した。濾液を１Ｎ  ＨＣｌを用いてｐＨ２に調節し、そして白色沈殿物が生じた。この沈殿物を、エーテルに抽出し、そして減圧下でエーテルを除去した。最終生成物である３−（ヘキサデカニルチオ）メチル２−メチルマレイン酸を、高真空下で乾燥した。
【００８５】
試薬Ａについて先に記載したのと同じ手順を用いて、３−（ヘキサデカニルチオ）メチル２−メチルマレイン酸を脱水し、試薬Ｂを得た。試薬Ｂを、熱ＤＭＦに溶解し、そして１６時間、４℃で保持した。得られた白色沈殿物を冷ＤＭＦを用いて洗浄した。溶媒を、高真空下で除去した。白色粉末（７３ｍｇ）を１６％のモル収率で、得た。
【００８６】
（実施例３．試薬Ａを用いる可逆的脂質化チラミン（ＲＥＡＬ−チラミン）の調製（スキーム３））
試薬Ａ（２ｍｇ、０．００４２６ｍｍｏｌ）を、６０μｌの乾燥ＤＭＦに溶解し、そして氷浴中で、２００μｌのホウ酸緩衝液ＵＳＰ（ｐＨ１０、０．１Ｍ）の中の０．２ｍｇ（０．００１４６ｍｍｏｌ）のチラミンに添加した。反応を、氷浴中で４時間、そして４℃で１６時間行った。
【００８７】
（実施例４．ＲＥＡＬ−チラミンのｐＨ感受性の決定）
アミド結合形成のｐＨ依存性を、遊離チラミンの濃度をモニタすることにより決定した。ｐＨ６、７および８の１Ｍのリン酸緩衝液を調製した。ＲＥＡＬ−チラミンをこれらの緩衝液を用いて、１：２に希釈した。チラミンのストック溶液をまた、ＲＥＡＬ−チラミンと同濃度を有するように希釈し、コントロールとして使用した。サンプルを３７℃でインキュベートした。ＲＥＡＬ−チラミンから放出される遊離チラミンの蛍光をフルオレサミン反応を用いて、異なる時点で測定した。
【００８８】
チラミンの脂質化後、遊離チラミンの濃度は、最初の濃度の１５％まで減少する。低いｐＨでのＲＥＡＬ−チラミンのインキュベートは、アミド結合の開裂を示す遊離チラミンの濃度の上昇を生じた。アミド結合の加水分解速度は、ｐＨに依存した（ｐＨ６＞ｐＨ７＞ｐＨ８）。ｐＨ６でのＲＥＡＬ−チラミンの１時間のインキュベート後、アミド結合は、ほとんど完全に加水分解したが、ｐＨ７ではＲＥＡＬ−チラミンのアミド結合の約４５％、そしてｐＨ８では７％のみが、加水分解した（図１）。
【００８９】
（実施例５．試薬Ａを用いる可逆的脂質化ＡＶＰ（ＲＥＡＬ−ＡＶＰ）の調製（スキーム４））
アルギニンバソプレシン（ＡＶＰ）（０．５ｍｇ）を、１ｍｌのホウ酸緩衝液（ｐＨ１０、０．１Ｍ）に溶解した。この溶液の０．５ｍｌ（０．２５ｍｇ、０．２０７μｍｏｌ）のアリコートを、５０μｌの乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解した１ｍｇ（２．１μｍｏｌ）の試薬Ａと氷浴中で反応させた。この混合物を４℃で１６時間撹拌した。ＲＥＡＬ−ＡＶＰの最終濃度は、０．４５５ｍｇ／ｍｌであった。
【００９０】
（実施例６．バソプレシン欠乏ブラートルボロ（Ｂｒａｔｔｌｅｂｏｒｏ）ラットにおけるＲＥＡＬ−ＡＶＰのインビボでの効果）
ＲＥＡＬ−ＡＶＰを動物の皮下に注入し（５μｇ／ｋｇ）、そして尿を異なる時点で収集した。図２は、注入後、最初の８時間の間の尿の累積量を示す。ＡＶＰおよびＰａｌ−ＡＶＰは、４時間の尿の排泄の遅れに対して、同様の効果を有する。６時間までの尿の排泄のより長い遅れが、ＲＥＡＬ−ＡＶＰの注入後、観察された。パルミチン酸へのＡＶＰの直接の脂質化（Ｐａｌ−ＡＶＰ）は、ＲＥＡＬ−ＡＶＰのように効果的ではなかった。尿の排泄の量は、Ｐａｌ−ＡＶＰおよびＡＶＰの注入後、２４時間で元に戻った。しかし、ＲＥＡＬ−ＡＶＰの効果は、３日間持続した（図３）。
【００９１】
ＡＶＰのｐＨ感受性脂質化は、ＡＶＰの生物学的活性を長期化することを結論し得る。
【００９２】
（実施例７．試薬Ａを用いる可逆的脂質化インスリン（ＲＥＡＬ−インスリン）の調製（スキーム５））
インスリン（２ｍｇ）を２ｍｌのホウ酸緩衝液（ｐＨ１０、０．１Ｍ）に溶解した。試薬Ａ（１ｍｇ、２．１μｍｏｌ）を、１００μｌのＤＭＦに溶解し、そして氷浴中で１ｍｌ（１ｍｇ、約０．１４μｍｏｌ）のインスリン溶液と反応させた。反応混合物を、４℃で２４時間撹拌し、次いで、４℃で２４時間、５００ｍｌのホウ酸緩衝液（ｐＨ１０、０．０１Ｍ）に対して透析した。透析したＲＥＡＬ−インスリンの容量を、ホウ酸緩衝液（ｐＨ１０、０．１Ｍ）を用いて、２ｍｌに調節して、０．５ｍｇ／ｍｌの濃度のＲＥＡＬ−インスリンを得た。インスリンストック溶液の容量（１ｍｌ）をまた、２ｍｌに調節して、０．５ｍｇ／ｍｌの濃度を得た。
【００９３】
（実施例８．高血糖性のラットにおけるＲＥＡＬ−インスリンの効果）
糖尿病を、スプラーグダウレイ（Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ）ラットにおいて、６０ｍｇ／ｋｇのストレプトゾトシンの静脈内注入を用いて、誘導した。ホウ酸緩衝液（ｐＨ１０、０．１Ｍ）中、０．５ユニット／ｍｌのインスリンの溶液またはＲＥＡＬ−インスリンの溶液を調製した。ラットは、実験の前に１６時間、絶食し、０．５ユニット／ｋｇのインスリンまたはＲＥＡＬ−インスリンを皮下に注入した。ラットの血糖値を、９時間、異なる時点でモニタした。この時間の後、ラットを給餌させ、給餌の１５時間後、血糖値を測定した。これらのラットを再度、絶食させ、そして１６時間後、血糖値を測定した。絶食および給餌の期間を、３日間続けた。
【００９４】
ラットの血糖値は、糖尿病を誘導後、１週間で、平均１００ｍｇ／ｄｌから４２０ｍｇ／ｄｌ（非絶食ラット）まで上昇した。インスリン処置ラットにおいて、血糖値の有意な低下が、最初の１時間以内に観察された。しかし、ＲＥＡＬ−インスリン処置ラットにおいて、最初の１時間以内で血糖値の変化はなく、そして血糖値の有意な低下は、注入後、最初の２時間で観察された（図４）。これはおそらく、ＲＥＡＬ−インスリンが加水分解され、遊離インスリンを放出するために必要な時間のためである。インスリンの注入後、ラットの絶食時血糖値は、２４時間以内に元に戻った。しかし、ＲＥＡＬ−インスリンを用いて処置したラットの場合、絶食時血糖値に対する薬物効果は、３日間持続した（図５）。絶食した糖尿病のラットにはまた、１０Ｕ／ｋｇのインスリン、ＲＥＡＬ−インスリンおよびプラシーボを経口的手段により投与した。ラットを、経口投与の前１６時間、絶食した。水／オイルミクロエマルジョンを薬物キャリアとして用いた。図６はインスリンまたはプラシーボの経口的投与の後、血糖値の有意な減少が観察されないことを示す。しかし、ＲＥＡＬ−インスリンを用いて処置されたラットにおいて、血糖値レベルの２８％の減少が、９時間以内に観察された。
【００９５】
ＲＥＡＬ−インスリンを用いることにより、インスリンの生物学的活性が長期化され得ることが、結論され得る。適切な処方物を用いて、ＲＥＡＬ−インスリンを、経口的に投与し、血糖値を減少させ得る。
【００９６】
本発明は、ここで十分に記載されてきたが、同じことが、本発明の範囲またはその任意の実施形態に影響することなく、広範かつ同範囲の条件、処方物、およびその他のパラメーターを用いて実行し得ることが当業者に理解される。本明細書中に示された全ての特許および刊行物は、それらの全体が本明細書中で参考として全て援用される。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は、本発明に従った脂質化（ｌｉｐｉｄｉｚａｔｉｏｎ）キャリア薬剤（ＲＥＡＬ−チラミン）由来のチラミンの放出のｐＨ依存性を示す。データは、３つの実験の平均値およびＳＤを示す。
【図２】  図２は、本発明に従った５μｇ／ｋｇのＡＶＰ（アルギニンバソプレシン）、パルミチル−ＡＶＰ、およびＲＥＡＬ−ＡＶＰの皮下注入後の、糖尿病ラットの蓄積尿排出量を示す。データは、３匹のラットからの測定値の平均値およびＳＤを示す。
【図３】  図３は、本発明に従った５μｇ／ｋｇのＡＶＰ、パルミチル−ＡＶＰ、およびＲＥＡＬ−ＡＶＰの皮下注入後２４時間にわたる、糖尿病ラットの蓄積尿排出量を示す。データは３つの実験の平均値およびＳＤを示す。
【図４】  図４は、０．３５Ｕ／ｋｇの本発明のＲＥＡＬ−インスリンの皮下注入と比較した、０．３５Ｕ／ｋｇのインスリンの皮下注入後の、絶食した糖尿病ラットにおける血液グルコースレベルの変化を示す。データは、２匹のラットでの測定値の平均値およびＳＤを示す。
【図５】  図５は、０．５Ｕ／ｋｇの本発明のＲＥＡＬインスリンの皮下注入と比較した、０．５Ｕ／ｋｇのインスリンの皮下注入の、絶食した糖尿病ラットにおける血液グルコースレベルに対する長期の影響を示す。データは、２匹のラットでの測定値の平均値およびＳＤを示す。
【図６】  図６は、１０Ｕ／ｋｇのＲＥＡＬインスリン、インスリン、およびプラシーボの経口投与後の、絶食した糖尿病ラットの血液グルコースレベルに対する短期の影響を示す。データは、４匹のラットでの測定値の平均値およびＳＤを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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