(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
オトギリソウ科（Hypericaceae）に属する植物の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗プラスミン剤。
【請求項２】
オトギリソウ科に属する植物が、オトギリソウ（Hypericium erectum T.）またはセイヨウオトギリソウ（Hypericium perforatium L.）である請求項１記載の抗プラスミン剤。
【請求項３】
オトギリソウ科に属する植物の抽出物の配合量が、０．００５〜２０．０重量％である請求項１または２記載の抗プラスミン剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は抗プラスミン剤に関し、さらに詳しくは、患部においてプラスミンまたはプラスミノーゲンアクチベーター（Plasminogen activator）の活性変化が認められる接触性皮膚炎、乾癬、尋常性天疱瘡、先天性水疱瘡等の種々の皮膚疾患の他、乾燥や洗浄剤等によって惹起される肌荒れ、荒れ性に対して改善、予防効果を有する抗プラスミン剤に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】
従来より、皮膚疾患や肌荒れに対して改善・予防効果を有するものとして種々の治療薬、皮膚外用剤、化粧料等が知られている。これらの薬剤や化粧料等における有効成分としては、抗炎症作用を有する、あるいは保湿効果の高いアミノ酸や多糖、脂質、動植物の抽出エキス等が、皮膚の炎症や角質層の水分の消失を防ぐ能力に優れているために用いられてきた。しかしながらいずれにおいてもその肌荒れ改善・予防効果は必ずしも十分ではなく、より優れた薬効剤の開発が期待されていた。
【０００３】
一方、皮膚の正常な角化過程においては、表皮細胞内のタンパク分解酵素（プロテアーゼ）が重要な役割を果たしていると考えられているが（Ogawa H.,Yoshiike T.:Int.J.Dermatol;23,1984）、近年種々の皮膚疾患の病像形成には、特にプラスミンやプラスミノーゲンアクチベーター（ＰＡ）といったプロテアーゼの活性変化が深く関与していることが明らかにされつつある。例えば炎症性異常角化性疾患の代表である乾癬では、その患部表皮の錯角化部位に強いＰＡ活性が存在すること（Haustein:Arch.Klin.Exp.Dermatol;234,1969）や、乾癬鱗屑から高濃度の塩溶液を用いてＰＡを抽出したという報告（Fraki, Hopsu-Havu:Arch.Dermatol.Res;256,1976）がなされている。ＰＡはプラスミンの前駆体であるプラスミノーゲンに特異的に働いて、それを活性なプラスミンに変換するプロテアーゼである。また、尋常性天疱瘡においては表皮細胞内で多量に産生されたＰＡが、細胞外に存在するプラスミノーゲンをプラスミンに転換し、このプラスミンが細胞間結合物質を消化することにより細胞間に組織液が貯留して表皮内水疱が形成されることが、in vitroの実験系において明らかにされている（Morioka S.:J.Invest.Dermatol;76,1981）。
【０００４】
上述のような現況に鑑み、本発明者らはプラスミンまたはプラスミノーゲンアクチベーターの活性変化に起因する種々の皮膚疾患、肌荒れ、荒れ性等の改善・予防には抗プラスミン剤が有効であると考え、広く種々の物質について抗プラスミン活性を調べた結果、オトギリソウ科に属する植物の抽出物が優れた抗プラスミン活性を有していることを見い出し、これに基づき本発明を完成するに至った。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
すなわち本発明は、オトギリソウ科（Hypericaceae）に属する植物の抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗プラスミン剤である。
【０００６】
本発明者らが知る限りにおいて、当該植物抽出物の抗プラスミン活性についての報告はこれまでにない。
【０００７】
以下、本発明について詳述する。
本発明に用いられるオトギリソウ科に属する植物には、オトギリソウ（Hypericium erectum T.）やセイヨウオトギリソウ（Hypericium perforatium L.）が挙げられ、これらのうちの一種または二種以上が用いられる。
【０００８】
本発明の抗プラスミン剤は、上記オトギリソウ科に属する植物の葉、花部、根のいずれか、または混合物を抽出溶媒と共に浸漬または加熱還流した後、濾過し、濃縮して得ることができる。抽出溶媒としては、通常抽出に用いられる溶媒であれば任意に用いることができ、例えば、メタノール、エタノール等のアルコール類、含水アルコール、アセトン、酢酸エチルエステル等の有機溶媒を、単独あるいは組み合わせて用いることができる。また、抽出物を上記の溶媒を用い、分配あるいはクロマトグラフィーのごとき精製等の処理を加えて得られたものを用いることもできる。
【０００９】
本発明の抗プラスミン剤は主として外用剤として用いられ、その場合のオトギリソウ科植物の抽出物の配合量は、外用剤全量中、乾燥物として０．００５〜２０．０重量％、好ましくは０．０１〜１０．０重量％である。０．００５重量％未満であると、本発明でいう効果が十分に発揮されず、２０．０重量％を越えると製剤化が難しいので好ましくない。また、１０．０重量％以上配合してもさほど大きな効果の向上はみられない。
【００１０】
本発明の抗プラスミン剤には、上記必須成分以外に、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、乳化剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色材、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００１１】
その他、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、火棘の果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の美白剤、グルコース、フルクトース、キシリトール、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類なども適宜配合することができる。
【００１２】
本発明の抗プラスミン剤とは、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤等、従来皮膚外用剤に用いるものであればいずれの形で適用することもでき、剤型は特に問わない。
【００１３】
【実施例】
以下に実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。なお、本発明はこれにより限定されるものではない。配合量は重量％である。
実施例に先立ち、本発明の植物抽出物の抗プラスミン活性及び肌改善作用（実使用試験）に関する試験方法及びその評価基準について説明する。
【００１４】
１．抗プラスミン活性試験
(1) 試料の調製
▲１▼オトギリソウ抽出物
オトギリソウ（Hypericium erectum T.）の地上部５０ｇ（湿重量）を室温で１週間、５倍量のエタノールに浸漬し、抽出液を濃縮乾固した。この固形物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、３％溶液を作製した。これを用いて以下の実験を行った。
【００１５】
▲２▼セイヨウオトギリソウ抽出物
セイヨウオトギリソウ（Hypericium perforatium L.）の地上部５０ｇ（湿重量）を室温で１週間、５倍量のエタノールに浸漬し、抽出液を濃縮乾固した。この固形物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、３％溶液を作製した。これを用いて以下の実験を行った。
【００１６】
(2) 抗プラスミン活性の測定
フィブリン平板法にて阻害率％を求めた。すなわち１．０％のプラスミノーゲン除去フィブリノーゲンを含むベロナール緩衝液（０．１２５ｍｏｌ／ｌ−ＮａＯＨを含む２５ｍｍｏｌ／ｌバルビタール酸ナトリウム水溶液，ｐＨ７．４）６ｍｌを９ｃｍφシャーレに注ぎ、そこに１．０ｍｏｌ／ｌ−ＣａＣｌ2を０．２ｍｌと２５Ｕ／ｍｌのトロンビン０．１ｍｌを加えて静かに混和し、１時間放置した。フィブリノーゲンがフィブリンに変化することによって形成された平板上に、５Ｕ／ｍｌのプラスミンと被験物質を２９：１の割合で混合した混合物を、３７℃で１０分間保温した後２０μｌ添加し、さらに３７℃で１８時間放置した。対照として被験試料の代わりにＤＭＳＯを用いて同様の操作を行い、その後、フィブリンが溶解して形成された溶解円の面積を測定し、下記の数式（１）によりプラスミン阻害率を求めた。結果を表１に示す。
【００１７】
【数１】
阻害率（％）＝｛１−（被験試料の溶解円面積／対照の溶解円面積）｝×100…（１）
【００１８】
また、参考例として、抗炎症、収斂作用を有するとされ、すでに肌荒れに対する適用が知られている植物であるオオバク（Phellodendron amurense Ruprecht）のエタノール抽出物についても上記と同様の試験を行った。その結果を併せて表１に示す。
【００１９】
【表１】
0004717970.tif 000002
【００２０】
表１から、オトギリソウ科植物抽出物は、オオバク抽出物に比べ、格段に優れた抗プラスミン活性を有することが分かる。
【００２１】
２．実使用試験
上記で確認された抗プラスミン効果を実使用で応用する際の例として、カミソリ負けおよび肌荒れの改善への応用例について述べる。
(1) カミソリ負けに対する改善効果試験
本発明に係る外用剤の外皮適用による効果を、カミソリ負けに対する改善率、ならびに皮膚刺激性から評価した。その結果を表２に示す。
なお試料としては、表２に示すように、本発明品としてセイヨウオトギリソウ（Hypericium perforatium L.）の地上部の５０％エタノール抽出物の濃度を変えたローションを２種、比較品として、すでに肌荒れに対する適用が知られているオオバクの５０％エタノール抽出物を配合したローションと、セイヨウオトギリソウ抽出物及びオオバク抽出物を除いたローションを用いた。
【００２２】
▲１▼カミソリ負けに対する改善効果
カミソリ負けする男性パネル４０名を１０名ずつ４群に分け、ひげ剃り直後に表２に示す本発明品もしくは比較品を塗布し、カミソリ負けに対する改善効果を判定した。判定基準及び評価は以下の通りとした。
【００２３】
（カミソリ負けに対する改善効果の判定基準）
著効：カミソリ負けの消失したもの。
有効：カミソリ負けの弱くなったもの。
やや有効：カミソリ負けがやや弱くなったもの。
無効：カミソリ負けに変化を認めないもの。
【００２４】
（カミソリ負けに対する改善効果の評価）
◎：被験者が著効、有効及びやや有効を示す割合（有効率）が８０％以上。
○：被験者が著効、有効及びやや有効を示す割合（有効率）が５０％以上〜８０％未満。
△：被験者が著効、有効及びやや有効を示す割合（有効率）が３０％以上〜５０％未満。
×：被験者が著効、有効及びやや有効を示す割合（有効率）が３０％未満。
【００２５】
▲２▼皮膚刺激性
上記のカミソリ負けに対する改善効果の判定に際し、本発明品と比較品の皮膚刺激性について判定、評価した。評価基準は以下の通りとした。
【００２６】
（皮膚刺激性の評価）
◎：肌にヒリヒリ感を認めた被験者の割合が０％。
○：肌にヒリヒリ感を認めた被験者の割合が５％未満。
△：肌にヒリヒリ感を認めた被験者の割合が１０％未満。
×：肌にヒリヒリ感を認めた被験者の割合が１０％以上。
【００２７】
【表２】
0004717970.tif 000003
【００２８】
表２から明らかなように、セイヨウオトギリソウ抽出物を１重量％以上配合した本発明品のローションは、比較品のローションよりもカミソリ負けに対して優れた改善効果を示し、さらに皮膚刺激性も認められなかった。
【００２９】
(2) レプリカ法による実使用試験
本発明品１，２と比較品１，２のローションを用いて、人体パネルで肌荒れ改善効果試験を行った。即ち、女性健常人（顔面）の肌のレプリカをレプリカ剤を用いて取り、皮膚表面形態を顕微鏡（１７倍）にて観察した。皮紋の状態及び角層の剥離状態から以下に示す判定基準に基づいて肌荒れ評価１、２と判断されたもの（肌荒れパネル）２０名を用い、顔面左右半々に、本発明品１，２と比較品１，２のローションを１日１回、２週間塗布した。２週間後、再び上述のレプリカ法にしたがって肌の状態を観察し、判定基準にしたがって評価した。その結果を表３に示す。
【００３０】
（レプリカ判定基準）
１：皮溝、皮丘の消失、広範囲の角層のめくれが認められる。
２：皮溝、皮丘が不鮮明、角層のめくれが認められる。
３：皮溝、皮丘は認められるが、平坦。
４：皮溝、皮丘が鮮明。
５：皮溝、皮丘が鮮明で整っている。
【００３１】
【表３】
0004717970.tif 000004
【００３２】
表３から分かるように、本発明品のローションは比較品のローションと比較し、顕著な肌荒れ改善効果が認められた。
【００３３】
添加例１  クリーム
（処方）                                    重量％
ステアリン酸                              ５．０
ステアリルアルコール                      ４．０
イソプロピルミリステート                １８．０
グリセリンモノステアリン酸エステル        ３．０
プロピレングリコール                    １０．０
オトギリソウエタノール抽出物              ０．０５
苛性カリ                                  ０．２
亜硫酸水素ナトリウム                      ０．０１
防腐剤                                    適量
香料                                      適量
イオン交換水                              残余
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールとオトギリソウエタノール抽出物と苛性カリを加え溶解し、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を徐々に加え、全部加え終わってからしばらくその温度に保ち反応を起こさせる。その後、ホモミキサーで均一に乳化し、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３４】
添加例２  クリーム
（処方）                                    重量％
ステアリン酸                              ２．０
ステアリルアルコール                      ７．０
水添ラノリン                              ２．０
スクワラン                                ５．０
２−オクチルドデシルアルコール            ６．０
ポリオキシエチレン（２５モル）
セチルアルコールエーテル      ３．０
グリセリンモノステアリン酸エステル        ２．０
プロピレングリコール                      ５．０
オトギリソウメタノール抽出物              ０．０５
トラネキサム酸                            ０．２
亜硫酸水素ナトリウム                      ０．０３
エチルパラベン                            ０．３
香料                                        適量
イオン交換水                                残余
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、ホモミキサーで均一に乳化した後、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３５】
添加例３  クリーム
（処方）                                    重量％
固形パラフィン                            ５．０
ミツロウ                                １０．０
ワセリン                                １５．０
流動パラフィン                          ４１．０
グリセリンモノステアリン酸エステル        ２．０
ポリオキシエチレン（２０モル）
ソルビタンモノラウリル酸エステル    ２．０
石けん粉末                                ０．１
硼砂                                      ０．２
オトギリソウ７０％メタノール抽出物        ０．１
亜硫酸水素ナトリウム                      ０．０３
エチルパラベン                            ０．３
香料                                      適量
イオン交換水                              残余
（製法）
イオン交換水に石けん粉末と硼砂を加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相をかきまぜながら徐々に加え反応を行う。その後、ホモミキサーで均一に乳化し、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３６】
添加例４  乳液
（処方）                                    重量％
ステアリン酸                              ２．５
セチルアルコール                          １．５
ワセリン                                  ５．０
流動パラフィン                          １０．０
ポリオキシエチレン（１０モル）
モノオレイン酸エステル          ２．０
ポリエチレングリコール１５００            ３．０
トリエタノールアミン                      １．０
カルボキシビニルポリマー                  ０．０５
（商品名：カーボポール941,B.F.Goodrich Chemical company）
セイヨウオトギリソウ酢酸エチル抽出物      ０．０２
亜硫酸水素ナトリウム                      ０．０１
エチルパラベン                            ０．３
香料                                      適量
イオン交換水                              残余
（製法）
少量のイオン交換水にカルボキシビニルポリマーを溶解する（Ａ相）。残りのイオン交換水にポリエチレングリコール１５００とトリエタノールアミンを加え、加熱溶解した７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、Ａ相を加えホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３７】
添加例５  乳液
（処方）                                      重量％
マイクロクリスタリンワックス                １．０
ミツロウ                                    ２．０
ラノリン                                  ２０．０
流動パラフィン                            １０．０
スクワラン                                  ５．０
ソルビタンセスキオレイン酸エステル          ４．０
ポリオキシエチレン（２０モル）
ソルビタンモノオレイン酸エステル          １．０
プロピレングリコール                        ７．０
セイヨウオトギリソウ３０％ブタノール抽出物  ２．０
トラネキサム酸                              １．０
亜硫酸水素ナトリウム                        ０．０１
エチルパラベン                              ０．３
香料                                        適量
イオン交換水                                残余
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。油相をかきまぜながら水相を徐々に加え、ホモミキサーで均一に乳化した後、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３８】
添加例６  ゼリー
（処方）                                    重量％
９５％エチルアルコール                  １０．０
ジプロピレングリコール                  １５．０
ポリオキシエチレン（５０モル）
オレイルアルコールエーテル        ２．０
カルボキシビニルポリマー                  ０．０５
（商品名：カーボポール940,B.F.Goodrich Chemical company）
苛性ソーダ                                ０．１５
Ｌ−アルギニン                            ０．１
オトギリソウ３０％エタノール抽出物        １．０
亜硫酸水素ナトリウム                      ０．０１
エチルパラベン                            ０．３
香料                                        適量
イオン交換水                                残余
（製法）
イオン交換水にカーボポール９４０を均一に溶解し、一方、９５％エタノールにオトギリソウ抽出物、ポリオキシエチレン（５０モル）オレイルアルコールエーテルを溶解し、水相に添加する。次いで、その他の成分を加えた後苛性ソーダ、Ｌ−アルギニンで中和させ増粘する。
【００３９】
添加例７  パック
（処方）                                        重量％
（Ａ相）
ジプロピレングリコール                        ５．０
ポリオキシエチレン（６０モル）硬化ヒマシ油    ５．０
（Ｂ相）
オリーブ油                                    ５．０
酢酸トコフェロール                            ０．２
エチルパラベン                                ０．２
香料                                          ０．２
（Ｃ相）
亜硫酸水素ナトリウム                          ０．０３
ポリビニルアルコール                        １３．０
（けん化度９０、重合度２，０００）
エチルアルコール                              ７．０
セイヨウオトギリソウ５０％１，３−ＢＧ抽出物  １．０
精製水                                        残余
（製法）
Ａ相、Ｂ相をそれぞれ均一に溶解し、Ａ相にＢ相を加えて可溶化する。次いでセイヨウオトギリソウ抽出物を分散させたＣ相をこれに加えた後充填を行う。
【００４０】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明によれば、プラスミンまたはプラスミノーゲンアクチベーターの活性変化に起因する種々の皮膚疾患、健常人の肌荒れ、荒れ性等の改善・予防に優れた効果を有する抗プラスミン剤を提供することができる。