(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸からなる未知試料、及び、内部標準物質とを同時にキャピラリー電気泳動を行い、検出した最先のピークを前記内部標準物質として、前記内部標準物質由来ピークを基準に、検出した他のピークの同定を行うキャピラリー電気泳動法であって、
前記内部標準物質が２',７'−ビス（２−カルボキシエチル）−５（６）カルボキシフルオロセインであることを特徴とするキャピラリー電気泳動法。
【請求項２】
キャピラリー電気泳動に使用する泳動液のｐHが２５℃において５．０から１０．０である、請求項１に記載のキャピラリー電気泳動法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、内部標準物質を用いたキャピラリー電気泳動方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
キャピラリー電気泳動は、内径１００μｍ程度のキャピラリーの両端に印加された電圧によって、電解液を満たしたキャピラリー中を電気泳動する物質を検出器で検出し、その信号から各ピークの移動時間を検出し、その移動時間から各ピークを同定する。しかしながら、各物質の移動時間は、印加電圧や温度などの泳動条件を同一にしても、泳動毎に変動することが一般的であり、各物質の移動時間のみからその物質の同定を精度よく行うことは困難である。
【０００３】
この問題を解決するために、内部標準物質を試料溶液に加えて、試料成分と共泳動させ、内部標準物質の移動時間を指標として各成分ピークの移動時間の補正を行ったのち同定を行う方法が知られている。試料成分がＤＮＡやＲＮＡであって、これらの鎖長推定を行う場合に、ある定めた分離能をもって分離が行われることのできる、分子量範囲の両端（低分子量側と高分子量側）に検出されるような内部標準物質（以下、それぞれ、「低分子側内部標準物質」、「高分子側内部標準物質」をいう）を試料溶液に加えることで、その低分子側内部標準物質と高分子側標準物質が検出された時間を指標とし、各成分ピークの移動時間をプログラム上で補正することにより、ＲＮＡやＤＮＡの鎖長の推定を行っている。非特許文献１では、低分子側内部標準物質として５０ｂｐの２本鎖ＤＮＡを、高分子側内部標準物質として８００ｂｐの２本鎖ＤＮＡを用いている。また、非特許文献２では低分子側内部標準物質として１５ｂｐの２本鎖ＤＮＡを、高分子側内部標準物質として６００ｂｐの２本鎖ＤＮＡを用いている。
【０００４】
【非特許文献１】日立化成テクニカルレポート  Ｎｏ.40  (２００３−１)
【非特許文献２】アジレント社  Reagent  Kit  Guide  DNA  ５００Assay
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従来用いられている低分子側内部標準物質は、試料溶液に含まれる７から２０ｍｅｒ程度のオリゴＤＮＡよりも遅く検出される場合がある。これらのオリゴＤＮＡは、ＤＮＡ試料の調製で多く用いられているＰＣＲ反応にプライマーとして必ず供されるものであり、試料溶液に含まれているのが一般的である。一方、泳動結果のデータ解析においては、もっとも早く検出されたピークを低分子側内部標準物質であると認識して、各ピークの移動時間の補正を行う場合が多い。従って、最先に検出したオリゴＤＮＡ由来のピークを誤って内部標準物質として同定した結果、ＤＮＡあるいはＲＮＡの鎖長推定に誤りが生じる場合があった。
【０００６】
そこで、本発明の目的は、分析対象物質より速く泳動する内部標準物質を試料成分と共泳動させて、最先に検出したピークを内部標準物質と同定し、精度よく試料成分のピークの同定を行うこと可能とするキャピラリー電気泳動法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は以下の発明を含む。
【０００８】
（１）核酸からなる未知試料、及び、内部標準物質とを同時にキャピラリー電気泳動を行い、検出した最先のピークを前記内部標準物質として、前記内部標準物質由来ピークを基準に、検出した他のピークの同定を行うキャピラリー電気泳動法であって、
前記内部標準物質が２',７'−ビス（２−カルボキシエチル）−５（６）カルボキシフルオロセインであることを特徴とするキャピラリー電気泳動法。
【００１２】
（２） キャピラリー電気泳動に使用する泳動液の２５℃におけるｐＨが５．０から１０．０である、（１）に記載のキャピラリー電気泳動法。
【００１４】
（７）  （１）乃至（６）に記載の内部標準物質を含む、キャピラリー電気泳動用試薬キット。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によると、分析対象の未知試料に含まれる各成分より速く泳動する内部標準物質を未知試料と共泳動させて、最先に検出したピークを内部標準物質とすることにより、精度よく未知ピークの同定を行うこと可能とするキャピラリー電気泳動法を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明を更に詳細に説明する。  
本発明では、キャピラリー電気泳動において、分析対象の未知試料に含まれる各成分より速く泳動する物質を内部標準物質として使用する。本発明における内部標準物質としては、キャピラリー電気泳動に使用する泳動液中で２以上の正又は負の総電荷を有する蛍光物質であれば、特に限定されない。
【００１７】
本発明におけるキャピラリー電気泳動に用いる泳動液としては、分析対象の未知試料や泳動分離の方式に応じて、以下に述べるように当業者が適宜決定することができる。本発明における未知試料としては、タンパク質、核酸及び糖質から選ばれる。本発明におけるタンパク質とは、１００〜２０００個程度のアミノ酸が結合した、平均分子量１万〜２０万のものを言う。本発明における核酸とは、核酸の構成成分であるヌクレオチドやヌクレオシド、２本鎖のＤＮＡ若しくはＲＮＡ、１本鎖のＤＮＡ若しくはＲＮＡなどが含まれる。本発明における糖質としては、ガラクトース,フルクトース、マンノースなどの単糖類、スクロース、ラクトース、マルトース、セロビオース、トレハロースなどの二糖類、デキストラン、セルロース、キチン、キトサンなどの多糖類を含む糖類、タンパク質に糖鎖が結合した糖タンパク質、糖タンパク質から遊離した糖鎖などが挙げられる。
【００１８】
本発明における泳動分離の方式としては、未知試料に応じて当業者が適宜選択することができるが、具体的には、キャピラリーゾーン電気泳動（Capillary Zone Electrophoresis；以下、CZEという）やキャピラリーゲル電気泳動（Capillary Gel Electrophoresis；以下、CGEという） が挙げられる。
【００１９】
CZEは、通常、キャピラリー内に１種類の泳動液を満たして、キャピラリー内壁と泳動液の間に形成された電気二重層によって生じる電気浸透流と、未知試料に含まれる各成分イオンの電荷と分子量に応じた静電的力の違いによって、各成分イオンの分離を行う。通常使用するキャピラリーの材質では、陰極に向かう電気浸透流が静電的力より大きい。従って、内部標準物質としては、２以上、好ましくは２〜１０、更に好ましくは２〜８の正の総電荷をもつ内部標準物質を使用することが好ましい。
【００２０】
更に、電気浸透流の影響を減らすために、キャピラリー内壁を化学的にあるいは物理的に処理することも可能である。具体的には、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール、ポリエチレンイミン、含フッ素芳香族炭化水素、糖類などをキャピラリー内壁に固定する。キャピラリー内壁を修飾し電気浸透流を無くした場合には、単純に、例えば陰イオン性を示す成分は、陽極に向かって移動し、その速度は電荷/分子量比に比例するとされている。使用する泳動液において主に負電荷を有する成分を含む未知試料の分離を行う場合は、内部標準物質としては、２以上、好ましくは２〜１０、更に好ましくは２〜８の負の電荷持つことが好ましい。こうすることにより、負電荷を示す未知試料中の各成分よりも速い速度で移動することができる。逆に、正電荷を有する成分を含む未知試料の分離を行う場合は、内部標準物質の電荷の極性としては正であることが好ましい。
【００２１】
ＣＧＥは、キャピラリー内にポリアクリルアミドやアガロースなどのゲルと泳動液を満たし、ゲルによる分子ふるい効果を利用して未知試料に含まれる各成分イオンの分離を行う。CGEには、キャピラリーに、ゲルではなく非架橋のポリアクリルアミド、デキストラン、セルロース誘導体などの親水性高分子が溶解した電解液を満たして、ＣＧＥと同様に分子ふるい効果を利用して未知試料の各成分イオンの分離を行うキャピラリー電気泳動も含まれる。親水性高分子が溶解した電解液を利用するCGEにおいては、一般に、キャピラリー内壁の化学修飾を行う。化学修飾方法としては、シリカ製のキャピラリーの場合には、S.Hjerten,J.Chromatogr.,347,191(1985)に開示されている非架橋のポリアクリルアミドで化学修飾する方法を使用することができる。
【００２２】
CGEにおける泳動液は、２５℃におけるｐHが５．０〜１０．０、好ましくは６．５〜９．０の緩衝液を使用する。未知試料がタンパク質もしくは糖タンパク質の場合、ＳＤＳミセルの状態にして、タンパク質分子同士の電気的性質をほぼ同じにしてからゲル中でサイズ分離する、ＳＤＳゲル電気泳動を行うことができる。この場合には、タンパク質若しくは糖タンパク質は単位質量当たり等しい負電荷を有することとなる。また、未知試料が核酸の場合も、CGEで使用する泳動液中で負電荷を有する。従って、内部標準物質の電荷の極性としては、負であることが好ましい。未知試料が糖類、糖鎖の場合には、後述するようにイオン性官能基を有する各種蛍光物質で誘導体化し、電荷を有する泳動液のｐHを選択し、そのｐHで誘導体化された糖類、糖鎖と同じ極性を有する内部標準物質を選択することが好ましい。
【００２３】
本発明における内部標準物質は、未知試料の種類と泳動分離方式に応じて当業者が適宜選択した泳動液において、正または負の総電荷が２以上、好ましくは２から１０、更に好ましくは２から８、となる蛍光物質を用いることを特徴とする。
本発明で使用する蛍光物質の骨格構造としては、クマリン系列、ピレン系列、ナフタレン系列、フルオレセイン系列、フルオランテン系列、ポルフィリン系列、キノリン系列、スチルベンゼン化合物が例示され、これらの塩であってもよい。蛍光物質の骨格構造としては、泳動液の組成に係らず蛍光の光量が蛍光物質の濃度に比例するため、金属と錯体を形成せずとも単独で蛍光を発することのできる物質が好ましい。
【００２４】
また、これらの蛍光物質の骨格構造としては、好ましくは、フルオレセイン系列が挙げられる。蛍光物質の塩としては、特に限定されないが、Na塩、Mg塩，K塩などが挙げられる。骨格構造が、電荷を有しない構造である場合には、慣用技術を用いて酸性基若しくは塩基性基といったイオン性官能基を持つ誘導体を調製することができる。当業者であれば、慣用技術を用いてこれら骨格構造を有する化合物から誘導体を調製することができる。
【００２５】
酸性基としては、水酸基（-OH）、カルボキシル基（−COOH）、スルホン酸基（-SO3H）、リン酸基(-OPO3H)、硫酸基(-OSO３H)、ホスホノ基（-PO3H2）等が挙げられる。塩基性基としては、アミノ基（-NH3）、イミノ基（＝NH）などが挙げられる。
本発明における内部標準物質は、側鎖にこれらの酸性基もしくは塩基性基が少なくとも２個以上含み、各々の官能基の酸解離定数に応じて、使用する泳動液中で好ましい総電荷を有するようにその種類と数とを調製する。蛍光物質の塩を用いる場合には、イオン性官能基の解離がおきやすくなるため好ましい。
【００２６】
本発明における内部標準物質は蛍光物質を骨格とするため、未知試料や内部標準物質を蛍光検出法により検出するキャピラリー電気泳動法において、内部標準物質に対して更なる蛍光標識を行うことなく検出することが可能である。
【００２７】
本発明における内部標準物質として、具体的には、５（６）−カルボキシフルオレセイン（5(6)-Carboxyfluorescein；以下、CFという）、２',７'−ビス（２−カルボキシエチル）−５（６）カルボキシフルオロセイン（2',7'-bis-(2-Carboxyethyl)-5(and6)-Carboxyfluorescein；以下、BCECFという）、５−カルボキシ−フルオレセイン−(６)−スルホン酸-３Na(5-Carboxy-(and-6)-Fluoresceinsulfonic acid,trisodium salt；以下、CFS-３Naという)、ビス［N,N−ビス（カルボキシメチル）アミノエチル］フルオレセイン,（Bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein）等が挙げられる。  
【００２８】
CF、BCECF、CFS-３Naは、ｐH５．０〜１０．０（２５℃）の電解液を用いるキャピラリー電気泳動において好適に使用することができる。
また、これらの蛍光物質は、単独で発光することができるため好ましい。さらに、CFやBCECFは、内部標準物質由来のピークが単一のピークとなるため好ましい。
【００２９】
本発明では、キャピラリー電気泳動用試薬キットをも提供する。試薬キットには、少なくとも前記内部標準物質を含むが、これ以上に、緩衝液、高分子溶液を含むことができる。緩衝液は、前述したように、未知試料と泳動モードによって適宜選択することができるが、例えば、CGE用キットとしては例えば、０．０５〜１０（v/v）％の非架橋のポリアクリルアミド又はヒドロキシセルロースを含むｐＨ５．０から１０．０（２５℃）の緩衝液を含むことができる。
【００３０】
本発明において用いるキャピラリー電気泳動装置としては、毛細管を分離流路として用いるキャピラリー電気泳動装置や、マイクロエレクトロメカニカルシステム技術を用いて基板内に微細流路を形成したデバイス（いわゆるマイクロチップ）を用いて、基板内の微細流路を分離流路とするキャピラリー電気泳動装置のいずれも使用することができる。キャピラリー電気泳動装置におけるキャピラリーもしくは基板の材質としては、ガラス、溶融石英、含フッ素炭化水素樹脂製などが挙げられる。分離流路（本明細書においては、単に、キャピラリー、ともいう）の内径としては、１０から１０００μｍ、好ましくは５０から２００μｍである。キャピラリーの内壁は、上述のように、未知試料や泳動分離方式に応じて修飾を行うことが好ましい。
【００３１】
キャピラリーへの未知試料の導入は、毛細管を分離流路として使用するキャピラリー電気泳動装置においては、吸引法、加圧法、落差法、電気的導入法等が挙げられる。これらの方法ではキャピラリーの一端を試料溶液につけて試料の導入を行うが、本発明における内部標準物質は、試料溶液に添加して試料と混合状態としてキャピラリーに導入することができる。また、試料をキャピラリーに導入後、試料溶液と同じ溶媒に内部標準物質を溶解した溶液からキャピラリーに順次導入することもできる。マイクロチップを使用するキャピラリー電気泳動装置においては、分離流路への試料の導入は電気的導入法や、分離流路に対して交差して別の試料導入用流路を形成し、試料導入用流路に試料溶液を満たした後、分離流路の交差部に満たされた試料溶液を分離流路に導入する方法、いわゆるクロスインジェクション法を使用することができる。マイクロチップを使用するキャピラリー電気泳動装置においても、内部標準物質を試料溶液に混合した後に分離流路に導入しても、試料溶液と内部標準物質溶液を分離流路内に順次導入してもよい。  
【００３２】
内部標準物質のキャピラリーへの導入量としては、キャピラリーへの試料導入量と同程度とすることが好ましく、試料導入量は、キャピラリーの内径や流路長、さらに検出される蛍光強度に応じて当業者が適宜決定することができる。
【００３３】
キャピラリー電気泳動装置における未知試料及び内部標準物質の検出は、キャピラリー出口に近い部位に設けた検出手段により、泳動電圧を印加した状態で電気泳動を維持しながら検出するオンキャピラリー検出を行う。本発明において移動時間とは、キャピラリーに未知試料を導入後、「泳動電圧を印加してから、未知試料成分若しくは内部標準物質が検出手段に到達する時間」を指す。検出手段としては蛍光検出器を用いることができる。励起光の光源として、キセノンランプハロゲンランプ、重水素放電管、レーザー光を使用することができる。レーザー光は高感度検出が可能である点から好ましく、具体的には、アルゴンレーザー（波長４５７ｎｍ，４８８ｎｍ、５１４．５ｎｍ）、ヘリウム−カドミウムレーザー（波長４４２ｎｍ）、ヘリウム−ネオンレーザー（波長５４３．５ｎｍ）が挙げられる。光源は、本発明において用いる内部標準物質及び未知試料（後述する蛍光標識した未知試料を含む）の励起波長の光を照射することのできる光源を選択する。例えば、内部標準物質として、CF、BCECF、CFS−３Naを用いた場合には、４５０〜５００nmの励起波長をもつレーザーを選択する。
【００３４】
未知試料成分がそれ自身蛍光を発しない、又は、非常に弱い蛍光しか発しない場合には、蛍光物質で修飾を行うことが好ましい。具体的には、未知試料がＤＮＡやＲＮＡの場合、泳動液中にＤＮＡあるいはＲＮＡの塩基対間にインターカレーションを起こすエチジウムブロミド等の蛍光色素を含ませ、インターカレイトすることによってその蛍光色素の発する蛍光が増幅される性質を利用して、電気泳動中にＤＮＡあるいはＲＮＡにインターカレイトした蛍光物質に対して検出手段において励起光を照射し、そこで発せられた蛍光を検出する。
【００３５】
未知試料が、タンパク質、糖鎖の場合であっても、周知の手法により蛍光物質で修飾することができる。具体的には、タンパク質や糖タンパク質については、それを構成しているアミノ酸の一つであるリジンの側鎖にあるε−アミノ基に、フェニルイソチオシアネートを反応させるなどの方法を行う。また、糖類や糖鎖においては、２−アミノピリジン（以下、APという）によって修飾するピリジルアミノ化法や８−アミノナフタレンー１，３，６−トリスルホン酸（以下、ANTS、という）で誘導体化する方法がある。AP誘導体化された糖類若しくは糖鎖は、イミノ基が導入されるため酸性域で正電荷を有することになる。またANTS誘導体化された糖類若しくは糖鎖は、強酸基であるスルホン酸基が導入されるため負電荷を有することになる。
【００３６】
本発明におけるキャピラリー電気泳動法を用いて検出されたピークの同定には、分子量を推定すること、あるいは、ピーク面積からその濃度を算出することなどを含む。特に未知試料が核酸の場合はその鎖長を推定することを含む。
一般に電気泳動における分析対象物質の移動時間は、分析ごとに多少変動する。したがって移動時間の実測値のみに基づいて分子量もしくは鎖長の推定を行うことは精度が高い推定値が得られない可能性が高い。そこで、分析ごとの変動を補正する仕組みがあることが好ましく、そのために、通常、未知試料と内部標準物質とを共泳動し、内部標準物質由来ピークを基準として、検出した他のピークの同定を行う。
【００３７】
本発明においては、既に上述した蛍光物質を内部標準物質として使用することにより、検出したピークのうち最先のピークを前記内部標準物質として容易に認識することができるため、データ解析プログラムにおいて有用である。ここで、最先のピークには、検出したピークのうちノイズピークを考慮しないことは当然である。また、ピークには、分析結果をエレクトロフェログラムで表示した場合のピークと共に、分析結果をゲルイメージで表示した場合のバンドも含まれる。
より具体的なピークの同定方法を以下に説明するが、これに限定されるものではない。
泳動分離方式がCGEの場合には、成分の分離は分子量の差で分離されるため、内部標準物質の分子量より、分子量と移動時間の関係が得られる。未知ピークの分子量を推定する場合には、この関係から推定することができる。
【００３８】
未知試料が核酸であって、鎖長推定を行う場合は、例えば次の方法を行うことができる。鎖長既知の核酸を２種以上含む溶液（以下、サイズマーカー溶液、という）を分析することにより、鎖長と移動時間との関係が関数化できる。さらに、未知試料あるいは前記サイズマーカー溶液を、それぞれ既に上述した本発明における内部標準物質と同時に共泳動することにより、分析毎の移動時間の補正を行った上で、別途求めた鎖長と移動時間との関数を用いて、検出した他のピークの鎖長の推定を含む同定を行うことができる。
このとき、本発明における内部標準物質と共に、高分子側内部標準物質も共泳動し、検出したピークのうち最後に検出したピークも、基準ピークとして用いることができる。ここで、高分子側内部標準物質とは、ある定めた分離能をもって分離が行われることのできる分子量範囲であって、未知試料内に含まれる物質の分子量よりも大きい分子量を持つ物質である。未知試料が核酸の場合、非特許文献１もしくは非特許文献２に記載のように鎖長既知の核酸を用いることができる。
【実施例】
【００３９】
次に、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
以下、実施例においては、高分子溶液を用いたキャピラリー電気泳動におけるRNAもしくはDNAの鎖長解析を目的とし、この分析に供する試料として鎖長が最小の試料として、以下の２つを用意した。
試料１・・・７merの蛍光標識をしていないオリゴDNA
試料２・・・フルオレセインにて修飾された、デオキシリボヌクレオチド−５'−トリフォスフェイト（deoxynucleotide-5'-triphosphate）
【００４０】
一般に、１本鎖のオリゴDNAで入手可能な最少の長さのものが７ｍｅｒである。これ以上短い１本鎖オリゴＤＮＡは不安定であり取り扱いが困難であることによる。よって、ＤＮＡもしくはＲＮＡを分析対象としたときに、試料１が分析に供する最少のオリゴDNAと考えることができる。一方、１ｍｅｒのＤＮＡは入手可能であるがＤＮＡ自体では蛍光を発せず、泳動バッファ中に混入した蛍光物質もインターカレイトしない。そのため、１merのDNAとして試料２を用意した。
＜実施例１；内部標準物質としてカルボキシフルオレセイン（ＣＦ）を使用＞
【００４１】
５．７μｇの試料１を１０ｍMトリス−１ｍM  EDTA（TEバッファ，ｐH８．０）  １０００μLに溶解した、試料溶液１を用意した。同じく、６．０ｎｇの試料２を１０ｍM  トリス−１ｍ EDTA（TEバッファ，ｐH８．０） １０００μLに溶解した試料溶液２を用意した。内部標準物質として、CF ２０ｎｇを、１ｍLの試料溶液１及び試料溶液２に添加した後、レーザー励起蛍光検出方式（個体レーザー，波長４７３ｎｍ）のキャピラリー電気泳動装置（MCE−２０１０；島津製作所製）に供した。泳動液としては、２．０（ｗ／ｖ）％ヒドロキシエチルセルロース（Hydroxyethylcellurose,平均分子量２５万,Aldrich製）を、180ｍＭトリス−180ｍＭホウ酸−0.05Ｍ  ＥＤＴＡ（ＴＢＥバッファ  ｐＨ８．３）に溶解したものを用いた。泳動液には、インターカレイター色素として、サイバーゴールド（ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ，インビトロジェン製）を、０．０３（ｗ／Ｖ）％含む。クロスインジェクション方式により分離流路に内部標準物質と試料１若しくは試料２を導入してキャピラリー電気泳動を行い、エレクトロフェログラムを得た。
【００４２】
図１に試料１とＣＦの混合液のエレクトロフェログラムを、図２に試料２とＣＦの混合液のエレクトロフェログラムを示す。図１中、ピーク１がＣＦ由来、ピーク２が試料１由来のピークである。また、図２中、ピーク１がＣＦ由来、ピーク２が試料２由来のピークである。これより、CFは試料１及び試料２より早く溶出することを確認しできた。
【００４３】
＜実施例２；内部標準物質として、BCECFを使用＞
試料溶液１と試料溶液２を実施例１と同様に調製し、内部標準物質としてBCECF２０ｎｇを１ｍＬの試料溶液１若しくは試料溶液２に添加後、実施例１と同じ条件にてキャピラリー電気泳動を行った。
【００４４】
図３に試料１とＢＣＥＣＦの混合液のエレクトロフェログラムを、図４に試料２とＢＣＥＣＦの混合液のエレクトロフェログラムを示す。図３中、ピーク１がＢＣＥＣＦ由来、ピーク２が試料１由来のピークである。図４中、ピーク１がＢＣＥＣＦ由来、ピーク２が試料２由来のピークである。
これより、BCECFは本発明に試料１及び試料２より早く溶出することを確認できた。
また、CFS-３Naについても、試料１及び試料２より早く溶出することを確認した。
以上より、本発明における内部標準物質は、検出したピークのうち最先のピークを内部標準物質として、その内部標準物質由来ピークを基準に、他のピークの同定を行うことができる。
【００４５】
実施例で使用した、CF、BCECF、CFS-３Naは、中性からアルカリ性域において２以上の負の総電荷を有することができ、その分子量も小さい。したがって、核酸以外にも、タンパク質や糖質の、特に分子ふるい効果によって分子を分離するキャピラリーゲル電気泳動において好適に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】実施例１において、ＣＦと試料１の混合液のエレクトロフェログラムである。
【図２】実施例１において、ＣＦと試料２の混合液のエレクトロフェログラムである。
【図３】実施例２において、ＢＣＥＣＦと試料１の混合液のエレクトロフェログラムである。
【図４】実施例２において、ＢＣＥＣＦと試料２の混合液のエレクトロフェログラムである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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