(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
腹足類、斧足類、頭足類のいずれかに属する水圏生物の１種以上の軟体部を原料とし、エタノール又は含水エタノールからなる有機溶媒で抽出するセラミドアミノエチルホスホン酸の製造方法。
【請求項２】
腹足類、斧足類、頭足類のいずれかに属する水圏生物の１種以上の軟体部をエタノール又は含水エタノールからなる有機溶媒で抽出し、クロマトグラフィー処理し、有機溶媒によって分画してセラミドアミノエチルホスホン酸画分を採取することを特徴とするセラミドアミノエチルホスホン酸の製造方法。
【請求項３】
腹足類、斧足類、頭足類のいずれかに属する水圏生物の１種以上の軟体部にエタノール又は含水エタノールからなる有機溶媒に浸漬して破砕し、有機溶媒で抽出することを特徴とする請求項１又は２記載のセラミドアミノエチルホスホン酸の製造方法。
【請求項４】
軟体部が、ホタテガイ、アコヤガイ、バカガイ、ムラサキイガイの外套膜、閉殻筋、中腸腺、足、その他内臓、アメリカオオアカイカ、アカイカ、スルメイカ、トビイカ、ヤリイカの肝臓、卵巣、触腕、外套膜よりなる群から選択されるいずれかの軟体動物の廃棄物である請求項１ないし３のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、水圏生物、特に腹足類及び／又は斧足類（以下「貝」又は「貝類」ということがある。）並びに頭足類からスフィンゴ脂質を効率よく製造する方法に関する。本発明で得られるスフィンゴ脂質は、食品素材、化粧品素材、医薬品素材、研究用試薬等に広く用いることができる。
【背景技術】
【０００２】
近年、角質細胞間脂質に含まれるセラミドの供給が皮膚の健常性の維持に強い効果をもたらすことが明らかとなり、化粧品として多量の供給が要望されている。さらに、セラミドはアポトーシスに関与することから研究用試薬としての用途も開かれつつある。このように、セラミドの需要は急速に拡大しているが、セラミドを骨格構造として含むスフィンゴ脂質は、天然にはほとんど存在せず、その供給源が牛脳以外になかったため、その供給がままならず、これらの用途に用いることが実用化できなかった（非特許文献１）。最近になって人工的に化学合成されたスフィンゴ脂質が開発され、現在セラミド代替品として使用されている（非特許文献２）。
また、最近では、低濃度ではあるが、植物由来のセラミドが見出され、利用が拡大してきている（非特許文献３）。
【０００３】
【非特許文献１】株式会社東京化学同人発行「生化学辞典」第２版７０２頁・スフィンゴミエリン（１９９０年）
【非特許文献２】「油化学」４３巻８号６５６〜６５８頁（１９９４年）
【非特許文献３】Ｊ．Ｏｌｅｏ  Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ．５１，Ｎｏ．５，３４７〜３５４（２００２）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
このように、セラミドを基本骨格として有するスフィンゴ脂質は、近年その需要が増しているものの、自然界にはごく微量しか存在せず、その新たな供給源が求められていた。
本発明者は、スフィンゴ脂質を標的に、水圏生物から脂質成分を抽出し、その脂質を分析してみたところ、驚くべきことに腹足類、斧足類、頭足類の軟体部、例えば、アコヤガイ等の二枚貝にスフィンゴ脂質が高い含量で含まれていることを見出した。このスフィンゴ脂質の濃度は、粗製脂質中の１０％以上に達し、従来の小麦等の植物由来のスフィンゴ脂質（グリコシルセラミド）のそれが０．７％程度あるのに対し、飛躍的に高いことを見出し、これを採取する方法について検討し、本発明を完成するに至った。
【０００５】
すなわち、本発明の課題は、特定の水圏生物からスフィンゴ脂質を収率よく製造する方法を提供することにある。
また、本発明の課題は、アコヤガイの軟体部等の従来廃棄されていた水圏生物を再資源化し、環境保全に寄与することにある。
さらに、本発明の課題は、供給が望まれるスフィンゴ脂質を多量に供給できるスフィンゴ脂質の製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】  本発明は、上記知見に基づいてなされたものであって、次のとおりの水圏生物からスフィンゴ脂質を製造する方法に関する。（１）腹足類、斧足類、頭足類のいずれかに属する水圏生物の１種以上の軟体部を原料とし、エタノール又は含水エタノールからなる有機溶媒で抽出するスフィンゴ脂質の製造方法。（２）腹足類、斧足類、頭足類のいずれかに属する水圏生物の１種以上の軟体部をエタノール又は含水エタノールからなる有機溶媒で抽出し、クロマトグラフィー処理し、有機溶媒によって分画してスフィンゴ脂質画分を採取することを特徴とするスフィンゴ脂質の製造方法。（３）腹足類、斧足類、頭足類のいずれかに属する水圏生物の１種以上の軟体部にエタノール、含水エタノール、クロロホルム−メタノール２／１混液等の有機溶媒に浸漬して破砕し、有機溶媒で抽出し、濃縮し、クロマトグラフィー処理し、有機溶媒によって分画してスフィンゴ脂質画分を採取することを特徴とするスフィンゴ脂質の製造方法。（４）斧足類がホタテガイ、アコヤガイ、バカガイ及びムラサキイガイ及び頭足類が、アメリカオオアカイカ、アカイカ、スルメイカ、トビイカ、ヤリイカよりなる群から選択されるいずれかの軟体動物である前記（１）〜（３）のいずれかに記載の方法。
【発明の効果】
【０００７】  本発明の方法によれば、腹足類、斧足類、頭足類等の水圏生物を原料として収率よくスフィンゴ脂質（セラミドアミノエチルホスホネート）を得ることができる。この結果、従来、牛脳、小麦等に微量存在しているとされていたスフィンゴ脂質を多量に収率よく製造することができる。本発明の方法によって得られるスフィンゴ脂質は、たとえ粗製油であっても、機能性リン脂質を含むため、生理活性物質ないし保湿剤として食品素材、化粧品素材、医薬品素材等に広く用いることができるし、また、研究試薬としても用いることができる。さらに、真珠を採取した後のアコヤガイの軟体部を原料に用いると、従来、用途のほとんどなかったアコヤガイ軟体部の資源を再利用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】  本発明における腹足類には、アワビ、サザエ、ツブガイ等の巻き貝が例示され、また、斧足類には、アサリ、ハマグリ、アカガイ、カキ、ホタテガイ、ホッキガイ、ウバガイ、トリガイ、シジミ、イケチョウガイ、アコヤガイ、バカガイ、ムラサキイガイ等を例示することができる。さらに、頭足類には、コウイカ、カミナリイカ、シリヤケイカ、アオリイカ、ヤリイカ、ベイカ、ジンドウイカ、スルメイカ、トビイカ、アカイカ、アメリカオオアカイカ、スジイカ、タコイカ等のイカ類、イイダコ、スナダコ、マダコ、マメダコ、テナガダコ、ヤナギダコ、ミズダコ、ワモンダコ、チヒロダコ、シマダコ等のタコ類を挙げることができる。また、これらの軟体動物のほとんどは食経験がある。【０００９】
これらの水圏生物には、アワビ、ハマグリ、アコヤガイ、バカガイ、ムラサキイガイやイカ・タコ類のように海洋に生棲する生物、シジミ等のように汽水に生息する生物或いはイケチョウガイのように淡水に生息する生物がある。本発明は、これらいずれの水圏生物の軟体部でも用いることができ、その１種だけでなく２種以上を併用することができる。これら水圏生物のうち、タコ類やイカ類は、スフィンゴ脂質の含量が多く、そのほとんどの部位を原料として用いることができる。また、アコヤガイ、バカガイ、ムラサキイガイ等の軟体部も、スフィンゴ脂質の含量が多く、好ましい原料として用いられる。なお、貝類の場合、軟体部としては、足、外套膜、閉穀筋、その他の内蔵のいずれを用いてもよいが、これらを全て用いてもよい。特にアコヤガイの真珠を採取した後の軟体部から本発明の方法によりスフィンゴ脂質を採取すると、従来廃棄されている資源を再資源化することができ、抽出素材として実用化された場合、環境保全に寄与するばかりでなく、前記含量の点からも明らかに優位である。
【００１０】
スフィンゴ脂質は、スフィンゴリピドともいわれ、スフィンゴシン等長鎖塩基を有する脂質の総称である。主としてスフィンゴ糖脂質とスフィンゴリン脂質からなり、下等動物から高等動物に至るまで広く分布する脂質であるが、前記のようにその含量はきわめて低い。脂肪酸はスフィンゴシン等のＣ−２位のアミノ基と酸アミド結合していることが特徴的であり、セラミドと称される。セラミドを部分骨格として有しているのがスフィンゴ脂質である。
【００１１】  本発明では、これらの腹足類、斧足類及び頭足類のいずれか１種以上の軟体部を有機溶媒で抽出し、クロマトグラフィー処理し、有機溶媒によって分画してスフィンゴ脂質画分を採取し、さらに必要に応じて精製することによってスフィンゴ脂質を高収率に得ることができる。抽出溶媒としては、エタノール、含水エタノール、メタノール、ブタノール
、ｔ−ブタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、その他のアルコール類、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、トリクロロエタン、その他のハロゲン系炭化水素、アセトン、酢酸エチル、エーテル等が用いられる。また、超臨界溶媒として二酸化炭素を用いてもよい。これらは単独で用いてもよいし、数種の溶媒を混合して用いてもよい。特に含水エタノールやクロロホルム−メタノール混液がスフィンゴ脂質を高濃度に溶解することができるので好ましい。【００１２】
また、クロマトグラフィー処理は、充填剤としてシリカゲル、アルミナ、フロリジル等を用い、また、ＨＰＬＣ処理は充填剤としてシリカゲル（順相）やＣ１８、フェニル、ＣＮ等の化学結合したシリカゲル（逆相）等を用いて行うことができる。
【００１３】  スフィンゴ脂質の製造は、上記の水圏生物の軟体部を含水エタノール等の有機溶媒に浸漬し、破砕し、有機溶媒を加えてスフィンゴ脂質を抽出し、濃縮して粗製全脂質を得る。次いで、この粗製全脂質をクロマトグラフィー処理し、有機溶媒を用いて分画し、スフィンゴ脂質を得る。この化合物の同定は、薄層クロマトグラフィーを用い、標品のスフィンゴ脂質とＲｆ値が一致すればよい。また、核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）を用いて行うことができる。【００１４】
本発明者は、多数の水圏生物を原料にしてその脂質を分析し、腹足類、斧足類及び頭足類にスフィンゴ脂質が多いことを見出した。この分析例をアコヤガイについて示すと次のとおりである。
【００１５】
本発明の原料として用いたアコヤガイは、１９９８年〜２０００年にわたり、太平洋側の愛媛県宇和島湾、三重県英虞湾、また日本海側の長崎県対馬で養殖されたアコヤガイ２年貝をそれぞれ１０〜１１個採集して用いた。
アコヤガイの体重は、産卵期付近である夏場（宇和島及び対馬）は１８〜２８ｇであったが、成長期である冬場（英虞湾）では４０〜４７ｇを示した。
これらアコヤガイの軟体部を、クロロホルム−メタノール２／１混液に浸漬後、Folch
の方法に準じて、同様の溶媒で粗製脂質を抽出した。
【００１６】
脂質クラスは、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、ＴＬＣ、ＮＭＲによって同定した。脂肪酸組成は、ガスクロマトグラフィー法(Hewlett Packard 5890 Series−II) 、ガスクロマトグラフィーマススペクトロスコピー法(Hewlett Packard G1800C MCD)で測定した。また、粗製脂質は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより各脂質クラスに分画した。分画した精製脂質は、ＴＬＣのＲｆ値を標品と比較したり、リン−モリブデン試薬等の発色により確認した。さらに一部の混合物についてＮＭＲの積分比による比率で定量した。
ＴＡＧやリン脂質等の脂肪酸関連化合物は、常法により触媒量の塩酸−メタノールでメチルエステル化やＤＩＭＯＸ誘導体とした後、ガスクロマトグラフィー分析及びガスクロマトグラフィーマススペクトロスコピーにより決定した。その結果を表１に示す。
【００１７】
【表１】
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【００１８】
表１に示すように脂質含量はいずれも低く、２％以下（０．４〜２．０％）であった。脂質クラスは、中性脂質ではトリアシルグリセロールが主成分であったが、相当量のステロールも含んでいた。
極性脂質ではリン脂質であるホスファチジルエタノールアミンやホスファチジルコリン等と共に、スフィンゴ脂質であるセラミドアミノエチルホスホネート（セラミドアミノエチルホスホン酸：スフィンゴ脂質）を概ね平均１０％程度という高含量で含有していた。したがって、本発明では、水圏生物中に多量に含有されているスフィンゴ脂質を上記の方法を用いて容易かつ高収率で採取することができる。
次に本発明の実施例を示すが、本発明はこれらの実施例に限定して解釈されるものではない。
【実施例１】
【００１９】
愛媛県の宇和島湾で養殖されたアコヤガイ(Pinctada fucata martensii：平均殻長 5.7±0.2cm 、平均殻幅5.8 ±0.12cm、平均体重18.6±0.7g) １０個体の軟体部(6.4〜9.3g)
をそれぞれクロロホルム−メタノール２／１混液、約５０ｍＬに浸漬し、ホモジナイザーにより破砕した。約２００ｍＬの飽和食塩水を加えて、ジクロロメタン５０ｍＬで３回抽出し、減圧下濃縮し、粗製全脂質８４〜２１３ｍｇを得た。この粗製全脂質をそれぞれシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、有機溶媒により分画を行った。ジクロロメタン／メタノール（１／１０）画分に精製セラミドアミノエチルリン酸（スフィンゴ脂質）３．８〜１６．８ｍｇ（平均収率：11.9±2.0%）を得た。得られたセラミドは、標品と薄層クロマトグラフィーで完全に一致した(Rf ＝0.6)。
【実施例２】
【００２０】
千葉県木更津沖で採集したバカガイ（Mactra chinensis：平均殻長6.4 ± 0.9cm、平均殻幅4.7 ±0.3cm 、平均体重31.9±1.8g）７個体の軟体部を足及び外套膜(1.8〜5.1g) 、閉殻筋(4.6〜11.4g)、その他の内蔵(4.6〜7.2g) の３部位に分離し、それぞれクロロホルム−メタノール２／１混液、約５０ｍＬに浸漬し、ホモジナイザーにより破砕した。約２００ｍＬの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン５０ｍＬで３回抽出し、減圧下濃縮し、粗製全脂質７．５〜１０５．３ｍｇを得た。この粗製全脂質をそれぞれシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供して、有機溶媒により分画を行った。ジクロロメタン／メタノール（１／１０）画分に精製セラミドアミノエチルホスホン酸（スフィンゴ脂質）をそれぞれ足及び外套膜で０．７〜６．３ｍｇ（平均収率：15.8±2.9%）、閉殻筋で０．４〜１．１ｍｇ（平均収率：7.7 ±2.1%）、その他の内蔵で３．８〜１３．８ｍｇ（平均収率：9.3±1.8%) を得た。得られたセラミドは、標品と薄層クロマトグラフィーで完全に一致した(Rf ＝0.6)。
【実施例３】
【００２１】
神奈川県の横浜市沿岸で採集されたムラサキイガイ(Mytilus galloprovincialis：平均殻長5.8 ± 0.9cm、平均殻幅3.2 ± 0.8cm、平均体重17.1±1.3g) ８個体の軟体部を、クロロホルム−メタノール２／１混液、約５０ｍＬに浸漬し、ホモジナイザーにより破砕した。約２００ｍＬの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン５０ｍＬで３回抽出し、減圧下濃縮し、粗製全脂質４７．２〜１５８．１ｍｇを得た。この粗製全脂質をそれぞれシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、有機溶媒により分画を行った。ジクロロメタン／メタノール（１／１０）画分に精製セラミドアミノエチルリン酸（スフィンゴ脂質）を４．０〜１５．９ｍｇ（平均収率：9.9 ±1.9%）得た。得られたセラミドは、標品と薄層クロマトグラフィーで完全に一致した(Rf ＝0.6)。
【実施例４】
【００２２】
岩手県の山田湾で養殖及び採集されたマガキ（Crassostrea gigas:平均体重 230.3±8.2g）９個体の軟体部（平均21.6±1.2g）をクロロホルム−メタノール２／１混液、約５０ｍＬに浸漬し、ホモジナイザーにより破砕した。約２００ｍＬの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン５０ｍＬで３回抽出して、減圧下濃縮し、粗製全脂質１５１．４〜４７９．９ｍｇを得た。この粗製全脂質をそれぞれシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、有機溶媒により分画を行った。ジクロロメタン／メタノール（１／１０）画分に精製セラミドアミノエチルリン酸（スフィンゴ脂質）を３．１〜１９．６ｍｇ（平均収率：8.5 ±0.8%）得た。得られたセラミドは、標品と薄層クロマトグラフィーで完全に一致した。
【実施例５】
【００２３】
岩手県浄土ケ浜付近で養殖及び採集されたイワガキ（Crassostrea nippona ：平均体重235.1 ±7.9g）１０個体の軟体部（閉殻筋：平均11.1±0.6g及びその他の軟体部：平均11.5±0.6g）を、クロロホルム−メタノール２／１混液、約５０ｍＬに浸漬し、ホモジナイザーにより破砕した。約２００ｍＬの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン５０ｍＬで３回抽出して、減圧下濃縮し、それぞれ粗製全脂質５６．８〜１９９．６ｍｇ及び１５１．０〜３９６．０ｍｇを得た。この粗製全脂質をそれぞれシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、有機溶媒により分画を行った。ジクロロメタン／メタノール（１／１０）画分に精製セラミドアミノエチルリン酸（スフィンゴ脂質）をそれぞれ２．６〜１２．９ｍｇ（平均収率：7.2 ±3.3%）及び１．１〜３．６ｍｇ（平均収率：1.4 ±0.3%）得た。得られたセラミドは、標品と薄層クロマトグラフィーで完全に一致した。
【実施例６】
【００２４】
沖縄県石垣島桴海で飼育及び採集されたクロチョウガイ（Pinctada margaritifera：体重1.6 ±10.7g ）３個体の軟体部（0.63〜1.59g)を、クロロホルム−メタノール２／１混液、約５０ｍＬに浸漬し、ホモジナイザーにより破砕した。約２００ｍＬの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン５０ｍＬで３回抽出し、減圧下濃縮し、粗製全脂質６．２〜１３．４ｍｇを得た。この粗製全脂質をそれぞれシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、有機溶媒により分画を行った。ジクロロメタン／メタノール（１／１０）画分に精製セラミドアミノエチルリン酸（スフィンゴ脂質）を０．３〜１．３ｍｇ（平均収率：8.3 ±0.5%）得た。得られたセラミドは、標品と薄層クロマトグラフィーで完全に一致した。
【実施例７】
【００２５】
沖縄県の石垣島白保浜で採集されたヒメジャコガイ(Tridacna crocea: 平均体重84.7±1.5g）６個体の軟体部（外套膜 7.34 〜11.97g、閉殻筋2.50± 4.55g、その他の軟体部6.08〜 8.97g）それぞれを、クロロホルム−メタノール２／１混液、約５０ｍＬに浸漬し、ホモジナイザーにより破砕した。約２００ｍＬの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン５０ｍＬで３回抽出し、減圧下濃縮し、粗製全脂質（外套膜33.0〜52.2g 、閉殻筋 8.7〜10.5mg、その他の軟体部40.5〜209.5mg)を得た。この粗製全脂質をそれぞれシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、有機溶媒により分画を行った。ジクロロメタン／メタノール（１／１０）画分に精製セラミドアミノエチルリン酸（スフィンゴ脂質）をそれぞれ０．６〜７．９ｍｇ（外套膜、平均収率：5.7 ±1.8%）、１．４〜４．１ｍｇ（閉殻筋、平均収率：5.0 ±1.4%）及び０．４〜６．３ｍｇ（その他の軟体部、平均収率：2.3 ±1.5%）得た。得られたセラミドは、標品と薄層クロマトグラフィーで完全に一致した。
【実施例８】
【００２６】
北海道渡島支庁奥尻島で採集されたエゾアワビ(Haliotis discus hannai:平均体重40.9±7.8g）５個体の軟体部（筋肉 4.37 〜21.66g、中腸線2.64〜 6.38g、その他の軟体部1.43〜4.85g)それぞれを、クロロホルム−メタノール２／１混液、約５０ｍＬに浸漬し、ホモジナイザーにより破砕した。約２００ｍＬの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン５０ｍＬで３回抽出し、減圧下濃縮し、粗製全脂質（筋肉 34.3 〜176.5mg 、中腸線43.0〜445.7mg 、その他の軟体部12.9〜48.5mg）を得た。この粗製全脂質をそれぞれシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、有機溶媒により分画を行った。ジクロロメタン／メタノール（１／１０）画分に少量のリン脂質を含む精製セラミドアミノエチルリン酸（スフィンゴ脂質）をそれぞれ４．７〜２４．７ｍｇ（筋肉、平均収率：25.9±5.4%）、４．１〜１２．３ｍｇ（中腸線、平均収率：15.0±4.9%）及び５．９〜２８．４ｍｇ（その他の軟体部、平均収率：25.5±5.4%）得た。得られたセラミドは、標品と薄層クロマトグラフィーで完全に一致した。
【実施例９】
【００２７】
岩手県山田湾で養殖及び採集されたマガキ（Crassostrea gigas ：平均体重 226.5±3.6g）２個体の軟体部（平均18.6±2.6g）を含水エタノール液（水５〜１０％を含むエタノール）約５０ｍＬに浸漬し、ホモジナイザーにより破砕した。破砕した混合物を濾過し、濾液を集めた。約１００ｍＬのエタノールを数度に分け、濾紙上の固形物に注ぎかけ、脂質を抽出し、濾液に加えた。減圧下濃縮し、粗製全脂質１８５．５〜３９１．６ｍｇを得た。この粗製全脂質をそれぞれシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、有機溶媒により分画を行った。含水エタノール（水５％を含むエタノール）を用いて抽出し、粗製セラミドアミノエチルリン酸を含む画分を得た。さらに、ジクロロメタン／メタノールを用いて精製することによりジクロロメタン／メタノール（１／１０）画分に精製セラミドアミノエチルリン酸（スフィンゴ脂質）を５．６〜７．８ｍｇ（平均収率：6.7 ±0.9%）確認した。得られたセラミドは、標品と薄層クロマトグラフィーで完全に一致した。
【実施例１０】
【００２８】
岩手県の山田湾で養殖及び採集されたマガキ（Crassostrea gigas ：平均体重 265.3±0.1g）２個体の軟体部（平均18.5±1.0g）を−４０℃で凍結した後、減圧下（5mmTorr 以下）で凍結乾燥を行い、水分を除いた後（平均乾燥重量、3.34±0.11g ）、含水エタノール液（水５〜１０％を含むエタノール）約５０ｍＬに浸漬し、ホモジナイザーにより破砕した。破砕した混合物を濾過し、濾液を集めた。約１００ｍＬのエタノールを数度に分けて、濾紙上の固形物を洗浄し、濾液に加えた。減圧下濃縮し、粗製全脂質２９４．８〜３２９．７ｍｇを得た。この粗製全脂質をそれぞれシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、有機溶媒により分画を行った。ジクロロメタン／メタノール（１／１０）画分に精製セラミドアミノエチルリン酸（スフィンゴ脂質）を９．４〜１６．４ｍｇ（平均収率：5.4 ±1.5%）得た。得られたセラミドは、標品と薄層クロマトグラフィーで完全に一致した。
【実施例１１】
【００２９】
北太平洋宮城県沖で採集されたホンツメイイカ（Onychoteuthis banksii japonica：平均外套長 28.8 ± 0.4cm、平均体重485.3 ±16.6g ）５個体の軟体部（外套膜の一部29.5〜 55.0g、肝臓9.5 〜 28.0g、卵巣8.5 〜13.5g)それぞれを、クロロホルム−メタノール２／１混液、約５０ｍＬに浸漬し、ホモジナイザーにより破砕した。約２００ｍＬの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン５０ｍＬで３回抽出して、減圧下濃縮し、それぞれ粗製全脂質（外套膜326.8 〜430.3mg 、肝臓3.75〜 8.88g、卵巣95.3〜148.7mg)を得た。この粗製全脂質をそれぞれシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、有機溶媒により分画を行った。ジクロロメタン／メタノール（１／１０）画分に精製セラミドアミノエチルリン酸（スフィンゴ脂質）をそれぞれ１２．０〜３６．８ｍｇ（外套膜、平均収率：13.3±0.9%）及び１４．９〜１９．１ｍｇ（卵巣、平均収率：20.6±1.0%）得た。得られたセラミドは、標品と薄層クロマトグラフィーで完全に一致した。
【実施例１２】
【００３０】
北太平洋宮城県沖で採集されたチヒロダコ(Benthoctopus profundorum:平均外套長96.0±10.1mm、平均体重419.9 ±59.8g ）４個体の軟体部（外套膜の一部28.7〜 70.4g、肝臓12.7± 38.9g、触腕の一部12.6〜31.6g)それぞれを、クロロホルム−メタノール２／１混液、約５０ｍＬに浸漬し、ホモジナイザーにより破砕した。約２００ｍＬの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン５０ｍＬで３回抽出し、減圧下濃縮し、それぞれ粗製全脂質（外套膜13.1〜34.3mg、肝臓491.1 〜1247.8mg、触腕51.2〜73.5mg) を得た。この粗製全脂質をそれぞれシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、有機溶媒により分画を行った。ジクロロメタン／メタノール（１／１０）画分に精製セラミドアミノエチルリン酸（スフィンゴ脂質）をそれぞれ０．６〜１．５ｍｇ（外套膜、平均収率：13.2±1.4%）、９．６〜３７．２ｍｇ（肝臓、平均収率：4.9 ±0.7%）及び１０．８〜１３．０ｍｇ（触腕、平均収率：15.2±0.7%）得た。得られたセラミドは、標品と薄層クロマトグラフィーで完全に一致した。
【産業上の利用性】
【００３１】  以上詳細に説明するとおり、本発明によれば、腹足類、斧足類、頭足類等の水圏生物を原料として多量にかつ収率よくスフィンゴ脂質（セラミドアミノエチルホスホネート）を製造できる。また、本発明の方法によって得られるスフィンゴ脂質は、たとえ粗製油であっても、機能性リン脂質を含むため、生理活性物質ないし保湿剤として食品素材、化粧品素材、医薬品素材等に広く用いることができるし、また、研究試薬としても用いることができる。さらに、真珠を採取した後のアコヤガイの軟体部を原料に用いると、従来、用途がほとんどなかったアコヤガイ軟体部を有用資源として再利用できる。  このように、本発明は、食品、化粧品、医薬品などの研究分野や製造の現場において広く活用できる有益な発明である。