(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｖ）
0004632545.tif 000024
で表される３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢまたはその製薬学的に許容できる塩。
【請求項２】
式（Ｘ）
0004632545.tif 000025
で表される６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢおよびその製薬学的に許容できる塩。
【請求項３】
次の一般式（II）
0004632545.tif 000026
（式中、Ｒ１は水素原子またはイミノ保護基であり、Ｘ１とＸ２はそれぞれに１価のヒドロキシル保護基であるか、あるいはＸ１とＸ２は両者が共同して２価のヒドロキシル保護基１個を示す）で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢからヒドロキシル保護基（Ｘ１とＸ２）を脱離して、次の一般式（VI）
0004632545.tif 000027
（式中、Ｒ１は前記と同じ意味をもつ）で表されるＮ−保護または非保護−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式（VI）の化合物の３位ヒドロキシメチル基と５位の遊離の水酸基を保護して、次の一般式（VII)
0004632545.tif 000028
（式中、Ｒ１は水素原子またはイミノ保護基であり、
Ｘ３とＸ４はそれぞれヒドロキシル保護基を示す）で表されるＮ−保護または非保護−５−Ｏ−保護−３−保護ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式(VII) の化合物の４位水酸基を酸化して、次の一般式(VIII)
0004632545.tif 000029
（式中、Ｒ１、Ｘ３およびＸ４は前記と同じ意味をもつ）で表されるＮ−保護または非保護−４−ケト−５−Ｏ−保護−３−保護ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式（VIII）の化合物の４位ケト基を還元して、次の一般式（IX）
0004632545.tif 000030
（式中、Ｒ１、Ｘ３およびＸ４は前記と同じ意味をもつ）で表されるＮ−保護または非保護−４−エピ−５−Ｏ−保護−３−保護ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式（IX）の化合物からイミノ保護基（Ｒ１）があれば、これを脱離し、且つヒドロキシル保護基（Ｘ３、Ｘ４）を脱離することから成ることを特徴とする、請求項１に記載の次式（Ｖ）
0004632545.tif 000031
で表される３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢの製造法。
【請求項４】
次の一般式（II）
0004632545.tif 000032
（式中、Ｒ１は水素原子またはイミノ保護基であり、Ｘ１とＸ２はそれぞれに１価のヒドロキシル保護基であるか、あるいはＸ１とＸ２は両者が共同して２価のヒドロキシル保護基１個を示す）で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢからＮ−アセチル基を脱離して次の一般式（III)
0004632545.tif 000033
（式中、Ｒ１、Ｘ１およびＸ２は前記と同じ意味をもつ）で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−３−ヒドロキシメチル−デアセチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式（III)の化合物の遊離のアミノ基をトリフルオロアセチル化して、これにより次の一般式（IV）
0004632545.tif 000034
（式中、Ｒ１、Ｘ１およびＸ２は前記と同じ意味をもつ）で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−６−デアセタミド−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式（IV）の化合物からヒドロキシル保護基（Ｘ１とＸ２）を脱離して、次の一般式（XI）
0004632545.tif 000035
（式中、Ｒ１は前記と同じ意味をもつ）で表されるＮ−保護または非保護−６−デアセタミド−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式(XI)の化合物の３位ヒドロキシメチル基と５位の遊離の水酸基を保護して、次の一般式（XII)
0004632545.tif 000036
（式中、Ｒ１は水素原子またはイミノ保護基であり、Ｘ５とＸ６はそれぞれヒドロキシル保護基を示す）で表されるＮ−保護または非保護−５−Ｏ−保護−６−デアセタミド−３−保護ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式（XII)の化合物の４位水酸基を酸化して、次の一般式（XIII）
0004632545.tif 000037
（式中、Ｒ１、Ｘ５およびＸ６は前記と同じ意味をもつ）で表されるＮ−保護または非保護−５−Ｏ−保護−４−ケト−６−デアセタミド−３−保護ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式（XIII）の化合物の４位ケト基を還元して、次の一般式（XIV)
0004632545.tif 000038
（式中、Ｒ１、Ｘ５およびＸ６は前記と同じ意味をもつ）で表されるＮ−保護または非保護−５−Ｏ−保護−４−エピ−６−デアセタミド−３−保護ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで（XIV)の化合物からイミノ保護基（Ｒ１）があればこれを脱離し、且つヒドロキシル保護基（Ｘ５、Ｘ６）を脱離することから成ることを特徴とする、請求項２に記載の次式（Ｘ）
0004632545.tif 000039
で表される６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢの製造法。
【請求項５】
有効成分として、請求項１又は２にそれぞれ記載の式（Ｖ）の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢまたは式（Ｘ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢ、あるいはその製薬学的に許容される塩を、製薬学上許容し得る担体とともに含んでなる医薬組成物。
【請求項６】
癌の治療剤として、あるいは抗糖尿病剤または抗肥満剤として用いられる請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
請求項１又は２にそれぞれ記載の式（Ｖ）の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢまたは式（Ｘ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢ、あるいはその製薬学的に許容される塩よりなるグリコシダーゼ阻害剤。
【請求項８】
請求項１又は２に記載の式（Ｖ）の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢまたは式（Ｘ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢ、あるいはその製薬学的に許容される塩を、医薬組成物の製造に用いる使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
技術分野
本発明はグリコシダーゼに対する阻害活性を有する新規シアスタチンＢ誘導体およびその製薬学的に許容される塩に関する。詳しくは、本発明は、そのような新規シアスタチンＢ誘導体としての６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢおよびその４−エピ体、ならびに３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢ、あるいはそれらの製薬学的に許容される塩に関する。また本発明はそれら新規なシアスタチンＢ誘導体の製造法に関する。さらに、本発明は前記の新規なシアスタチンＢ誘導体を有効成分とする医薬組成物にも関し、またグリコシダーゼ阻害剤にも関する。
【０００２】
【従来の技術】
背景技術
種々なグリコシダーゼは動物細胞、微生物やウイルスなどに幅広く分布する酵素である。哺乳動物ではグリコシダーゼは糖質代謝を通して、細胞の癌化、癌細胞の転移や、ウイルス感染、細菌感染や免疫機能、ならびに卵子の受精などを含めて、糖蛋白や糖脂質糖鎖が関与する多種多様な生理機序を支配していると考えられている。また、ある種のグリコシダーゼは、デンプンやシュウクロースなどの多糖やオリゴ糖の分解を通して食物の消化機構に関与している。さらに、細胞膜上に結合している糖鎖を切断するグリコシダーゼに対する阻害物質は、免疫調節作用および癌細胞の転移を抑制する作用、ならびにエイズウイルスやインフルエンザウイルスの感染を抑制する作用を有する可能性があることが認められている。また、食物の消化機構に関与する異化作用を有するグリコシダーゼに対する阻害物質は、抗糖尿病薬、抗肥満薬として有用であると重要視されている。
このように、グリコシダーゼは生体で重要な酵素であるから、グリコシダーゼの生理学的性質の研究も重要である。グリコシダーゼの性質を研究する上には、グリコシダーゼの酵素活性を阻害する作用を有する物質が利用できる。また、ある種のグリコシダーゼ阻害物質は癌細胞の転移の抑制剤として利用できると期待できる。
従って、毒性が低く且つ水溶性でしかもグリコシダーゼ阻害活性が強い新しい化合物を提供することが強く要望されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の１つの目的は、グリコシダーゼに強い阻害活性を示す新規なシアスタチンＢ誘導体を提供することであり、また本発明の別の目的はそのような新規シアスタチンＢ誘導体の製造方法を提供することにある。
本発明のさらに別の目的は、グリコシダーゼ阻害活性を有する前記シアスタチンＢ誘導体を有効成分とする医薬組成物、ならびにグリコシダーゼ阻害剤を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
発明の開示
本発明の前記の目的を達成するために、本発明者らは、グリコシダーゼ阻害物質としてのシアスタチンＢ誘導体に注目して多数のシアスタチンＢ誘導体の合成を行い、そしてそれらシアスタチンＢ誘導体の生物学的活性について鋭意研究を行った。その結果、強力なグリコシダーゼ阻害活性を有し、且つ後記の式（Ｉ）、（Ｖ）および（Ｘ）でそれぞれ示される３種の新規シアスタチンＢ誘導体を合成することに成功した。また、式（Ｉ）、（Ｖ）および（Ｘ）のシアスタチンＢ誘導体を効率よく合成できる新規な製造方法を見出した。これらの知見に基づいて、本発明を完成した。
【０００５】
従って、第１の本発明では、式（Ｉ）
0004632545.tif 000002
で表される６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢまたはその製薬学的に許容できる塩が提供される。
【０００６】
第２の本発明では、式（Ｖ）
0004632545.tif 000003
で表される３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢまたはその製薬学的に許容できる塩が提供される。
【０００７】
第３の本発明では、式（Ｘ）
0004632545.tif 000004
で表される６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢまたはその製薬学的に許容できる塩が提供される。
【０００８】
第１、第２および第３の本発明による式（Ｉ）、式（Ｖ）および式（Ｘ）をそれぞれ有するシアスタチンＢ誘導体の塩には、これらの式の化合物のイミノ基における酸付加塩が包含される。このような酸付加塩には、特に製薬学的に許容できる鉱酸、例えば塩酸、硫酸、あるいは有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸等との製薬学的に許容できる酸付加塩がある。
【０００９】
次に、第１、第２および第３の本発明による式（Ｉ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢと式（Ｖ）の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢと式（Ｘ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢの各々の塩酸塩の理化学的性状を示す。
【００１０】
（１）６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢ〔式（Ｉ）の化合物〕
色および形状：無色無定形固体
分子式：Ｃ８Ｈ１３Ｎ２Ｏ４Ｆ３・ＨＣｌ
比旋光度：［α］２７Ｄ＋38.8°（c O.64、メタノール）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル(ＣＤ３ＯＤ，δppm):2.06〜2.15(１Ｈ，ｍ，５−Ｈ)，3.18（１Ｈ，br t，J=12.O Ｈz，６−Ｈax），3.22（１Ｈ，dd，J=12.3， 5.4Ｈz，６−Ｈeq)，3.58（１Ｈ，dd，J=10.7，7.3 Ｈz，−ＣＨ２ＯＨ），3.69（１Ｈ，dd，J=10.7，6.4 Ｈz，−ＣＨ２ＯＨ），3.90（１Ｈ，dd，Ｊ＝10.3，2.9 Ｈz, 3−Ｈ）, 4.08〜4.12（１Ｈ，ｍ，４−Ｈ），5.07（１Ｈ，d, J=10.3Ｈz, 2−Ｈ）
ＩＲスペクトル（ＫＢr)：3300，2890，1720，155O，1430，1220，1180 cm−１
マススペクトル(ＦＡＢ−ＭＳ):m/z 259.2(Ｍ+Ｈ)＋，185.2, 146.2,93.1, 75.1，57.1
【００１１】
（２）３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢ〔式（Ｖ）の化合物〕
色および形状：無色無定形固体
分子式：Ｃ８Ｈ１６Ｎ２Ｏ４・ＨＣｌ
比旋光度：［α］２６Ｄ  ＋45.4°（c O.50、メタノール）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ３ＯＤ，δ ppm）：1.83〜1.97（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），2.06（１Ｈ，ｓ，−ＮＨＣＯＣＨ３  ），3.04（１Ｈ，br t，J=12.7Ｈz， ６−Ｈax)，3.36（１Ｈ，dd，J=13.2，4.4 Ｈz，６−Ｈeq），3.47（１Ｈ，dd，J=10.8，8.8 Ｈz,４−Ｈ），3.60（１Ｈ，dd，J=10.3，8.8 Ｈz, ３−Ｈ）,3.65（１Ｈ，dd，J=11.2，6.8 Ｈz，−ＣＨ２ＯＨ），3.83（１Ｈ，dd，J=11.2，3.4 Ｈz,−ＣＨ２ＯＨ),4.71（１Ｈ，d, J=10.3 Ｈz，２−Ｈ）
ＩＲスペクトル（ＫＢr): 3350，1680，1550，1380，1290，1100，1060，890 cm−１
マススペクトル(ＦＡＢ−ＭＳ):m/z 205.2（Ｍ＋Ｈ)＋，154.1，146.1, 136.1, 107，89，77
【００１２】
（３）６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢ〔式（Ｘ）の化合物〕
色および形状：無色無定形固体
分子式：Ｃ８Ｈ１３Ｎ２Ｏ４Ｆ３・ＨＣｌ
比旋光度：［α］２６Ｄ  ＋35.0°（c O.5O、メタノール）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ３ＯＤ，40℃，δ ppm):1.88〜2.00（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ), 3.11(１Ｈ，br t, J=13.2 Ｈz，６−Ｈax), 3.42（１Ｈ，dd，J=13.2,4.4 Ｈz，６-Ｈeq），3.51（１Ｈ，dd，J=10.3，9.3 Ｈz，４-Ｈ），3.67(１Ｈ, dd，J=11.2，6.4 Ｈz，−ＣＨ２ＯＨ),3.73（１Ｈ，dd，J=10.3，8.8 Ｈz,３−Ｈ），3.84（１Ｈ，dd，J=11.2，3.9 Ｈz，−ＣＨ２ＯＨ），4.84（１Ｈ，d,J=9.8Ｈz，２−Ｈ）
ＩＲスペクトル（ＫＢr): 3350，1740，1570，1420，1230，1180，1100，1060，990, 880 cm−１
マススペクトル(ＦＡＢ−ＭＳ):m/z 259.1（Ｍ＋Ｈ)＋，202.2，154.1，146.1，136.1，128.1，107，77.1，57.1
【００１３】
本発明による式（Ｉ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢと式（Ｖ）の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢと式（Ｘ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢがそれぞれにグリコシダーゼ阻害活性を有することを以下に試験例１〜５により示す。
【００１４】
試験例１
本試験例は、本発明による式（Ｉ）、式（Ｖ）または式（Ｘ）の化合物のＮ−アセチルガラクトサミニダーゼ阻害活性を測定する試験例である。
Ｎ-アセチルガラクトサミニダーゼ阻害活性の評価は「Journal of Biological Chemistry」第252巻、5194〜5200頁(1977）に記載の方法の改良法で行った。
即ち、0.025 Ｍクエン酸−リン酸緩衝液（pH4.0)0.5mLと同緩衝液に溶解させた10mＭパラニトロフェニル−Ｎ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトサミニド0.1mLと、本発明による式(Ｉ)、(Ｖ)および(Ｘ)の化合物の何れか１つを検体として含む水溶液、あるいは水 0.1mLとを96穴タイタープレート中、37℃で10分間プレ−インキュベーションした。プレ−インキュベーション終了後、供試のグリコシダーゼとして、同緩衝液に溶解させたニワトリ肝臓のα−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ(Sigma社製）0.01mLを加えた後、37℃で30分間反応させた。
反応後、反応液に 0.3Ｍグリシン−水酸化ナトリウム緩衝液（pH10.5）1.0mL を加えて酵素反応を停止させた。その後に、その反応液の 405nmにおける吸光度（ａ）を測定した。同時に検体を含まない対照試験での反応液の吸光度（ｂ）を測定し、またそれぞれに対する対照としての酵素反応をしない盲検の吸光度(ａ´)および(ｂ´）を測定した。Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ阻害率は式［１−（ａ−ａ´）／（ｂ−ｂ´）］ｘ100 により計算した。供試酵素の活性を50％阻害させる検体の濃度、すなわち、酵素の50％阻害率を示す検体の濃度をＩＣ５０の値とした。ＩＣ５０値として得られた試験結果は後記の表１に要約して示す。
【００１５】
試験例２
本試験例は、本発明による式（Ｉ）、式（Ｖ）または式（Ｘ）の化合物のＮ−アセチルグルコサミニダーゼ阻害活性を測定する試験例である。
Ｎ-アセチルグルコサミニダーゼ阻害活性の評価は「Methods in Enzymology」第28巻、772頁（1972）に記載の方法の改良法で行った。
即ち、供試のグリコシダーゼ酵素としてウシ精巣上体のβ−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ（Sigma社製）を用い、基質としてパラニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニドを用いて、上記Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ阻害活性の試験と同様の方法で試験を行った。また、上記と同様の方法で吸光度を測定し、またβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼの50％阻害率を与える検体のＩＣ５０値を計算した。そのＩＣ５０値を後記の表１に示す。
【００１６】
試験例３
本試験例は、本発明による式（Ｉ）、式（Ｖ）または（Ｘ）の化合物のα−ガラクトシダーゼおよびβ−ガラクトシダーゼ阻害活性を測定する試験例である。
α-ガラクトシダーゼおよびβ-ガラクトシダーゼ阻害活性の評価は「Journal of Biological Chemistry」第240巻、2468頁（1965）に記載の方法の改良法で行った。
即ち、グリコシダーゼ酵素としてアスペルギラス・ニゲル(Aspergillus niger)のα−ガラクトシダーゼおよびβ−ガラクトシダーゼ（Sigma社製）を用い、基質としてパラニトロフェニル−α−Ｄ−ガラクトシドおよびパラニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシドを用いて、試験例１の阻害活性試験と同様の方法で試験を行った。また、試験例１と同様の方法で吸光度を測定し、酵素の50％阻害率を与える検体のIC５０値を計算した。そのIC５０値を表１に示す。
【００１７】
試験例４
本試験例は、本発明による式（Ｉ）、式（Ｖ）または式（Ｘ）の化合物のα−グルコシダーゼおよびβ−グルコシダーゼ阻害活性を測定する試験例である。
β−グルコシダーゼ阻害活性の評価は「Agricultural and Biological Chemistry」第26巻、203頁（1962）に記載の方法の改良法で行った。
即ち、グリコシダーゼ酵素として酵母のα−グルコシダーゼおよびアーモンドのβ−グルコシダーゼ（Sigma社製）を用い、基質としてパラニトロフェニル−α−Ｄ−グルコシドおよびパラニトロフェニル−β−Ｄ−グルコシドを用いて、試験例１の阻害活性試験と同様の方法で試験を行った。また、試験例１と同様の方法で吸光度を測定し、酵素の50％阻害率を与える検体のＩＣ５０値を計算した。そのＩＣ５０値を表１に示す。
【００１８】
試験例５
本試験例は、本発明化合物のα−マンノシダーゼおよびβ−マンノシダーゼ阻害活性を測定する試験例である。
β−マンノシダーゼ阻害活性の評価は「Journal of Biological Chemistry」 第242巻、5474頁（1967）に記載の方法の改良法で行った。
即ち、グリコシダーゼ酵素としてジャック・ビーンのα−マンノシダーゼおよびかたつむりのβ−マンノシダーゼ（Sigma社製）を用い、緩衝液として、0.O5Ｍの酢酸ナトリウム−酢酸緩衝液（pH4.5)を用い、基質として、パラニトロフェニル−α−Ｄ−マンノシドおよびパラニトロフェニル−β−Ｄ−マンノシドを用いて、試験例１の阻害活性試験と同様の方法で試験を行った。また、試験例１と同様の方法で吸光度を測定し、酵素の50％阻害率を与える検体のＩＣ５０値を計算した。ＩＣ５０値について得られた試験結果を次の表１に示す。
【００１９】
0004632545.tif 000005
【００２０】
表１に示す通り、式（Ｉ）で示される第１の本発明の化合物は、Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ、α−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ−グルコシダーゼおよびβ−Ｄ−マンノシダーゼを強く阻害する。また、式（Ｖ）で示される第２の本発明の化合物は、β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ、β−Ｄ−マンノシダーゼ、β−Ｄ−グルコシダーゼ、α−Ｄ−マンノシダーゼおよびα−Ｄ−グルコシダーゼを強く阻害する。また式（Ｘ）で示される第３の本発明の化合物は、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ−マンノシダーゼ、β−Ｄ−グルコシダーゼ、α−Ｄ−マンノシダーゼおよびα−Ｄ−グルコシダーゼを強く阻害する。従って、これら本発明化合物は上記酵素の阻害剤として極めて有効である。
また、式（Ｉ）、（Ｖ）および（Ｘ）でそれぞれ示される本発明化合物は、哺乳動物における癌細胞の転移の機序、およびエイズウイルスの感染の機序に関与するグリコシダーゼ、さらに、食物の消化機構に関与する異化作用グリコシダーゼも阻害できる活性を有すると推定できるから、癌の治療に利用できる癌細胞の転移抑制剤として、およびエイズウイルスの感染阻害剤として、さらに、抗糖尿病薬、抗肥満薬として有用であると期待される。また、グリコシダーゼの生体内の働きを研究する試薬として有用である。
【００２１】
次に、式（Ｉ）で示される６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢの製造法を説明する。
【００２２】
第１の本発明による式（Ｉ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢを製造するには、最初の原料として次の一般式（II)
0004632545.tif 000006
（式中、Ｒ１は水素原子またはイミノ保護基であり、Ｘ１とＸ２はそれぞれに１価のヒドロキシル保護基であるか、あるいはＸ１とＸ２は両者が共同して２価のヒドロキシル保護基１個を示す）で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを用いる。この式（II）の化合物は放線菌ストレプトミセス・バーチシラス・バリエダス・クインツム（Streptomyces verticillus var. quintum (微工研菌寄第507号）を培養して得られるシアスタチンＢ(特公昭55−46714号公報)から、特開平9-157254 号明細書に記載の方法によるか、あるいは「Carbohydrate Research」第286巻、173〜178頁（1996）に記載の佐藤らの方法によって製造される。
【００２３】
上記の式（II）の化合物におけるイミノ保護基（Ｒ１）は、加水分解法で脱離できるアルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基またはアラルキルオキシカルボニル基であるのが好ましく、特にターシャリーブトキシカルボニル基であるのが便利である。イミノ保護基(Ｒ１)の導入は常法で行うことができる。前記の式（II）の化合物の４位及び５位のヒドロキシル基を同時に保護する２価のヒドロキシル保護基（Ｘ１、Ｘ２）はベンジリデン基であるのが便利である。しかし一般的にはその他の各種の２価のヒドロキシル保護基を保護基Ｘ１、Ｘ２として利用できる。すなわち、次式
0004632545.tif 000007
〔但しＹ及びＺは、互いに同じ又は異なってもよく、それぞれが水素、アルキル基（好ましくは炭素数１〜４の低級アルキル基）又はアリール基（好ましくはフェニル基又は置換フェニル基、例えばパラ−メトキシフェニル基）である〕で表される２価のヒドロキシル保護基を利用できる。例えば、ベンジリデン基に代えて、イソプロピリデン基により、あるいはシクロアルキリデン基、例えばシクロヘキシリデン基またはテトラヒドロピラニリデン基により式（II）の化合物の４位および５位のヒドロキシル基を同時に保護することもできる。
【００２４】
このような２価のヒドロキシル保護基の導入は、糖の化学において、隣接する２個の炭素原子に結合するヒドロキシル基の２個を同時に保護するためのヒドロキシル基保護の慣用技術に従って行われる。また別に、適当な１価のヒドロキシル保護基（Ｘ１、Ｘ２）としてトリアルキルシリル基、特にターシャリーブチルジメチルシリル基を用いることができ、常法で導入できる。  上記のように調製された式（II)の化合物を出発化合物として用いて、これを複数の工程で化学的に変換することにより、式（Ｉ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢを製造できる。
【００２５】
従って、第４の本発明においては、次の一般式(II)
0004632545.tif 000008
（式中、Ｒ１は水素原子またはイミノ保護基であり、Ｘ１とＸ２はそれぞれに１価のヒドロキシル保護基であるか、あるいはＸ１とＸ２は両者が共同して２価のヒドロキシル保護基１個を示す）で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢからアセチル基を脱離して次の一般式（III)
0004632545.tif 000009
（式中、Ｒ１、Ｘ１およびＸ２は前記と同じ意味をもつ）で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−３−ヒドロキシメチル−デアセチル−３−デカルボキシ−６−アミノシアスタチンＢを生成し、次いで式（III)の化合物の遊離のアミノ基をトリフルオロアセチル化して、これにより次の一般式（IV）
0004632545.tif 000010
（式中、Ｒ１、Ｘ１およびＸ２は前記と同じ意味をもつ）で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−６−デアセタミド−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式(IV)の化合物からイミノ保護基(Ｒ１）があれば、これを脱離し、且つヒドロキシル保護基(Ｘ１，Ｘ２）を脱離することから成ることを特徴とする、次式（Ｉ）
0004632545.tif 000011
で表される６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢの製造法が提供される。
【００２６】
第４の本発明の方法を実施するには、先ず、式（II）で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを、メタノールなどの溶媒に溶かすか、または無溶媒でヒドラジンを加えて室温でヒドラジン分解反応させる。これにより、式（II）の化合物のアセチル基が脱離されて遊離のアミノ基が生じ、式（III)で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−６−デアセチル−６−アミノ−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成する。
【００２７】
次いで式（III)の化合物をＮ，Ｎ´−ジメチルホルムアミド等の溶媒中でＮ，Ｎ´−ジイソプロピルエチルアミン等の塩基の存在下にエチルトリフルオロアセテートと反応させるか、塩化メチレン等の溶媒中で、ピリジン等の塩基の存在下に無水トリフルオロ酢酸と反応させる。これにより式（III)の化合物の遊離のアミノ基がトリフルオロアセチル化され、式（IV）で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢを生成する。さらに式（IV）の化合物から常法で保護基（Ｒ１、Ｘ１、Ｘ２）を脱離すると、目的の式（Ｉ）で示される６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢが製造される。
【００２８】
なお、式（IV）の化合物から、イミノ保護基（Ｒ１）ならびにヒドロキシル保護基（Ｘ１、Ｘ２）を脱離するに当って、その場合の脱離反応は保護基の種類に応じて適当な方法、例えば加水分解法又は加水素分解法により常法で行い得る。例えば、イミノ保護基（Ｒ１）がターシャリーブトキシカルボニル基（Ｂoc）である場合には、上記の式（IV）の化合物を、１〜４Ｎ塩酸−ジオキサンなどの、塩化水素を含む有機溶媒に溶解し、その溶液を室温に１〜12時間放置してイミノ基保護基Ｂocを除去することができる。そしてヒドロキシル保護基（Ｘ１、Ｘ２）がベンジリデン基である場合には、10％パラジウム炭素の存在下に水素雰囲気中で加水素分解にかけることにより除去することができる。
【００２９】
次に、第２の本発明による式（V)の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢの製造法を説明する。
【００３０】
第２の本発明による式（Ｖ）の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢを製造するには、最初の原料として、前記の一般式(II)で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを第４の本発明方法と同様に用いる。
式（II) の化合物を出発化合物として用いて、これを複数の工程で化学的に変換することにより、式（Ｖ）の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢが製造できる。
【００３１】
すなわち、第５の本発明においては、次式(II)
0004632545.tif 000012
（式中、Ｒ１は水素原子またはイミノ保護基であり、Ｘ１とＸ２はそれぞれに１価のヒドロキシル保護基であるか、あるいはＸ１とＸ２は両者が共同して２価のヒドロキシル保護基１個を示す）で表されるＮ−保護または非保護−４，５，−Ｏ−保護−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢからヒドロキシル保護基
(Ｘ１とＸ２）を脱離して、次の一般式（VI）
0004632545.tif 000013
（式中、Ｒ１は前記と同じ意味をもつ）で表されるＮ−保護または非保護−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式（VI）の化合物の３位ヒドロキシメチル基と５位の遊離の水酸基を保護して、次の一般式（VII)
0004632545.tif 000014
（式中、Ｒ１は水素原子またはイミノ保護基であり、Ｘ３とＸ４はそれぞれヒドロキシル保護基を示す）で表されるＮ−保護または非保護−５−Ｏ−保護−３−保護ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式（VII)の化合物の４位水酸基を酸化して、次の一般式(VIII)
0004632545.tif 000015
（式中、Ｒ１、Ｘ３およびＸ４は前記と同じ意味をもつ）で表されるＮ−保護または非保護−４−ケト−５−Ｏ−保護−３−保護ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式（VIII）の化合物の４位ケト基を還元して、次の一般式（IX）
0004632545.tif 000016
（式中、Ｒ１、Ｘ３およびＸ４は前記と同じ意味をもつ）で表されるＮ−保護または非保護−４−エピ−５−Ｏ−保護−３−保護ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式（IX）の化合物からイミノ保護基（Ｒ１）があれば、これを脱離し、且つヒドロキシル保護基（Ｘ３，Ｘ４）を脱離することから成ることを特徴とする、次式（Ｖ）
0004632545.tif 000017
で表される３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢの製造法が提供される。
【００３２】
第５の本発明の方法を実施するには、先ず、式（II）で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを、溶媒中で、酢酸や塩酸などの酸または水酸化ナトリウムや炭酸カリウムなどの塩基を作用させて加水分解反応や、あるいはパラジウムおよびラネーニッケル等の触媒下に加水素分解反応させる。これにより、式（II）の化合物のヒドロキシル保護基（Ｘ１およびＸ２）が脱離されて遊離のヒドロキシル基に転化され、式（VI）で表されるＮ−保護または非保護−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成する。
【００３３】
次いで上記の式（VI）の化合物をＮ，Ｎ´−ジメチルホルムアミド、塩化メチレン、クロロホルム、テトラヒドロフラン等の溶媒中で、イミダゾール、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン等の塩基の存在下にターシャリーブチル・ジメチルシリルクロリド、トリメチルシリルクロリド等のハロゲン化アルキルシランや、メトキシエトキシメチルクロリド、メトキシメチルクロリド等のハロゲン化アルコキシアルキルや、ハロゲン化アルキルや、ハロゲン化アラルキルや、アセチルクロリド等の酸塩化物等と反応させる。これにより、式(VI)の化合物の３位ヒドロキシメチル基と５位の遊離の水酸基が保護され、式（VII)で表されるＮ−保護または非保護−５−Ｏ−保護−３−保護ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成する。
【００３４】
次いで式（VII)の化合物の４位水酸基を塩化メチレン、四塩化炭素、テトラヒドロフラン等の溶媒中で、四酸化ルテニウム、ピリジニウムクロロクロメート、ピリジニウムジクロメート、二酸化マンガン、デスーマーチン・バーヨーディナン等の酸化剤で酸化する。これにより一般式(VIII)で表されるＮ−保護または非保護−４−ケト−５−Ｏ−保護−３−保護ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成する。次いで式（VIII) の化合物の４位ケト基を塩化メチレン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン等の溶媒中で、リチウムボロハイドライド、ソデウムボロハイドライド、リチウムアルミニウムハイドライド等の金属ハイドライドとの反応や、パラジウム、ラネーニッケル等の触媒の存在下に水素添加して還元する。これにより、一般式（IX）で表されるＮ−保護または非保護−４−エピ−５−Ｏ−保護−３−保護ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成する。次いで式（IX）の化合物からイミノ保護基（Ｒ１）があれば酸や塩基処理および加水素分解等の通常の方法でこれを脱離し、且つヒドロキシル保護基(Ｘ３、Ｘ４）を酸や塩基処理および加水素分解等の通常の方法で脱離すると、目的の式（Ｖ）の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢが製造される。
【００３５】
次に、第３の本発明による式（Ｘ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢの製造法を説明する。
【００３６】
式（Ｘ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢを製造するには、第５の本発明方法で中間体として得られた前記の一般式（IV）で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−６−デアセタミド−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを最初の原料として用いる。
上記の式（IV）の化合物を出発化合物として、これを複数の工程で化学的に変換することにより、式（Ｘ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢを製造できる。
【００３７】
すなわち、第６の本発明においては、次の一般式（IV）
0004632545.tif 000018
（式中、Ｒ１は水素原子またはイミノ保護基であり、Ｘ１とＸ２はそれぞれ１価のヒドロキシル保護基であるか、あるいはＸ１とＸ２は両者が共同して２価のヒドロキシル保護基１個を示す）で表されるＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−６−デアセタミド−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを用意し、次いで式（IV）の化合物からヒドロキシル保護基（Ｘ１とＸ２）を脱離して、次の一般式（XI）
0004632545.tif 000019
（式中、Ｒ１は前記と同じ意味をもつ）で表わされるＮ−保護または非保護−６−デアセタミド−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式(XI)の化合物の３位ヒドロキシメチル基と５位の遊離の水酸基を保護して、次の一般式（XII)
0004632545.tif 000020
（式中、Ｒ１は水素原子またはイミノ保護基であり、Ｘ５とＸ６はそれぞれヒドロキシル保護基を示す）で表わされるＮ−保護または非保護−５−Ｏ−保護−６−デアセタミド−３−保護ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式（XII)の化合物の４位水酸基を酸化して、次の一般式（XIII）
0004632545.tif 000021
（式中、Ｒ１、Ｘ５およびＸ６は前記と同じ意味をもつ）で表わされるＮ−保護または非保護−５−Ｏ−保護−４−ケト−６−デアセタミド−３−保護ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで式（XIII）の化合物の４位ケト基を還元して、次の一般式（XIV)
0004632545.tif 000022
（式中、Ｒ１、Ｘ５およびＸ６は前記と同じ意味をもつ）で表わされるＮ−保護または非保護−５−Ｏ−保護−４−エピ−６−デアセタミド−３−保護ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成し、次いで（XIV)の化合物からイミノ保護基（Ｒ１）があればこれを脱離し、且つヒドロキシル保護基（Ｘ５，Ｘ６）を脱離することから成ることを特徴とする、次式（Ｘ）
0004632545.tif 000023
で表される６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢの製造法が提供される。
【００３８】
第６の本発明方法を実施するには、式（IV）のＮ−保護または非保護−４，５−Ｏ−保護−６−デアセタミド−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを溶媒中で、酢酸や塩酸等の酸または水酸化ナトリウムや炭酸カリウム等の塩基を作用させて加水分解反応や、またはパラジウムおよびラネーニッケル等の触媒下に加水素分解反応させる。これにより式(IV)の化合物のヒドロキシル保護基(Ｘ１とＸ２）が脱離され、保護されていたヒドロキシル基が遊離のヒドロキシル基に転化される。これにより、一般式（XI）で表されるＮ−保護または非保護−６−デアセタミド−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成する。
【００３９】
式（XI）の化合物をＮ，Ｎ´−ジメチルホルムアミド、塩化メチレン、クロロホルム、テトラヒドロフラン等の溶媒中で、イミダゾール、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン等の塩基の存在下にターシャリーブチル・ジメチルシリルクロリド、トリメチルシリルクロリド等のハロゲン化アルキルシランや、メトキシエトキシメチルクロリド、メトキシメチルクロリド等のハロゲン化アルコキシアルキルやハロゲン化アルキルや、ハロゲン化アラルキルやアセチルクロリド等の酸塩化物と反応させる。これにより、式（XI）の化合物の３位ヒドロキシメチル基と５位の遊離の水酸基が保護され、一般式（XII)で表されるＮ−保護または非保護−５−Ｏ−保護−６−デアセタミド−３−保護ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成する。
【００４０】
次いで式（XII)の化合物の４位水酸基を塩化メチレン、四塩化炭素、テトラヒドロフラン等の溶媒中で、四酸化ルテニウム、ピリジニウムクロロクロメート、ピリジニウムジクロメート、二酸化マンガン、デス−マーチン・パーヨーディナン試薬、等の酸化剤で酸化する。これにより一般式（XIII）で表されるＮ−保護または非保護−５−Ｏ−保護−４−ケト−６−デアセタミド−３−保護ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成する。
【００４１】
次いで式（XIII）の化合物の４位ケト基を塩化メチレン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン等の溶媒中、リチウムボロハイドライド、ソデウムボロハイドライド、リチウムアルミニウムハイドライド等の金属ハイドライドや、パラジウム、ラネーニッケル等の触媒の存在下に水素添加して還元する。これにより、一般式（XIV)で表されるＮ−保護または非保護−５−Ｏ−保護−４−エピ−６−デアセタミド−３−保護ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミド−３−デカルボキシシアスタチンＢを生成する。
【００４２】
次いで（XIV)の化合物から、イミノ保護基（Ｒ１）があれば酸や塩基処理または加水素分解等の通常の方法でこれを脱離し、且つヒドロキシル保護基（Ｘ５、Ｘ６）を酸や塩基処理および加水素分解等の通常の方法で脱離すると、式（Ｘ）で表される６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢが製造される。
【００４３】
第４、第５および第６の本発明の方法でそれぞれに得られた式（Ｉ）、（Ｖ）および（Ｘ）の化合物が塩酸塩などの酸付加塩の形で得られる場合には、その酸付加塩の水溶液を常法により陽イオン交換樹脂、例えばダウエックス50Ｗ（米国ダウケミカル社製）（Ｈ＋  型）で処理することにより、またはアンモニアを含有する溶媒系によるクロマトグラフィーで精製することにより、遊離塩基の形の式（Ｉ）、（Ｖ）および（Ｘ）の化合物が得られる。
【００４４】
さらに、前記した試験例１〜５から明らかなように、本発明による新規化合物である式（Ｉ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢ、または式（Ｖ）の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢ、または式（Ｘ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢは、いずれもグリコシダーゼ阻害活性を示す。従って、これら新規なシアスタチンＢ誘導体の各々はグリコシダーゼ阻害活性を利用して、たとえば癌細胞の転移抑制剤として有用であり、また糖尿病および肥満の治療もしくは予防に有用である。そして、本発明による新規シアスタチンＢ誘導体は慣用される製薬学的に許容できる固体または液体状の担体と混和されて医薬組成物に調合できる。
【００４５】
従って、第７の本発明においては、有効成分として、前記の式（Ｉ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢまたは式（Ｖ）の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢまたは式（Ｘ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢ、あるいはその製薬学的に許容される塩を、製薬学上許容し得る担体とともに含んでなる医薬組成物が提供される。
【００４６】
第７の本発明による医薬組成物はグリコシダーゼ阻害活性を有し、ヒトを含む動物に医薬として投与することができる。具体的には第７の本発明の医薬組成物は癌の治療、あるいは糖尿病および肥満の治療もしくは予防に効果がある。
【００４７】
第７の本発明による医薬組成物において、配合される担体は製薬学技術で慣用される固体または液体状の担体であることができる。固体状担体は例えば、デンプン、乳糖、結晶セルロース、炭酸カルシウムであることができ、また液体状担体は例えば生理食塩水、含水エタノールまたはエタノールであることができる。本組成物における有効成分としての新規シアスタチンＢ誘導体の含量は、疾病を治療するのに充分な量であれば特に限定されないが、例えば組成物全体の重量に基づいて0.01％以上100％未満、好ましくは0.1％以上80％以下の範囲であることができる。
【００４８】
第７の本発明による医薬組成物は、これを投与する場合、種々の使用担体、投与形態あるいは使用形態に合わせて、常法に従い製剤化される。経口投与のための製剤としては、錠剤、丸剤、顆粒剤、カプセル剤、散剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、舌下剤等が挙げられる。また非経口投与のための製剤としては、注射剤、経皮吸収剤、吸入剤、坐剤等が挙げられる。製剤化に際しては、界面活性剤、賦形剤、安定化剤、湿潤剤、崩壊剤、溶解補助剤、等張剤、緩衝剤、着色料、着香料等の医薬用添加剤を適宜使用する。
【００４９】
医薬としての本発明の新規シアスタチンＢ誘導体の投与量は、患者の年齢、体重、疾病の種類や程度、投与経路により異なるが、ヒトに経口投与する場合には成人一人当たり一日に1.0〜1000mg/kgの範囲であり、また静脈投与の場合には同じく1.0〜100 mg/kgの範囲内で投与する。
【００５０】
さらに、第８の本発明においては、前記の式（Ｉ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢまたは式（Ｖ）の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢまたは式（Ｘ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢ、あるいはその製薬学的に許容される塩よりなるグリコシダーゼ阻害剤が提供される。第８の本発明によるグリコシダーゼ阻害剤では、前記したシアスタチンＢ誘導体の各々、あるいはその塩がそのまま単独に使用でき、例えば酵素に対する試薬として利用できる。
【００５１】
さらにまた、第９の本発明は、式（Ｉ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢまたは式（Ｖ）の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢまたは式（Ｘ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢ、あるいはその製薬学的に許容される塩を、医薬組成物の製造に用いる使用を含有する。
【００５２】
【実施例】
発明を実施するための最良の形態
以下に、第４の本発明方法で用いる式（II）の出発化合物の１例であるＮ−（ターシャリーブトキシカルボニル）−４，５−Ｏ−ベンジリデン−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢ（化合物IIa)の製造例を例示する参考例１を示す。また、第１、第２および第３の本発明による式（Ｉ）、（Ｖ）および（Ｘ）の化合物の製造を例示する実施例１，２および３を示して本発明を具体的に説明する。
しかしながら、これら実施例は単に例示であって、本発明を限定するものではない。本発明の範囲内で種々の変形および修正が可能であることは言うまでもない。
【００５３】
参考例１
Ｎ−（ターシャリーブトキシカルボニル）−４，５−Ｏ−ベンジリデン−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢ（化合物IIa)の製造
「Carbohydrate Research」第286巻、173〜178頁
（1996）に記載の佐藤らの方法によって製造されるＮ−（ターシャリーブトキシカルボニル）−４，５−べンジリデンシアスタチンＢ(5.60g，13.8mmol）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ)(10 ml）に溶解し、その溶液にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン (4.80ml，27.6mmol)および塩化２−メトキシエトキシメチル(3.15ml，27.6mmol)を加えた。得られた混合物を室温で12時間攪拌した。
反応溶液を減圧濃縮した後、残留物に酢酸エチルを加え、飽和食塩水にて２回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、残留物を展開溶媒としてクロロホルム−メタノール（19：１）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色泡状のＮ−（ターシャリーブトキシカルボニル）−４，５−Ｏ−ベンジリデンシアスタチンＢメトキシエトキシメチルエステル6.65g(98％)を得た。比旋光度、［α］２８Ｄ  ＋22.1°(c 0.91，メタノール）。
【００５４】
本化合物(6.50g，13.1mmol）をテトラヒドロフラン（100ml)と２，２，２−トリフルオロエタノール（10ml）の混合溶媒に溶解し、これに水素化ホウ素ナトリウム（995mg、26.3mmol）を加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌して還元反応を行った。その後、反応溶液に水（30ml）を加えて反応を停止させ、さらに室温で30分間攪拌した。得られた反応溶液を減圧濃縮した後、残留物に水を加えクロロホルムで２回抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、残留物を展開溶媒としてクロロホルム−メタノール（19：１）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色泡状の表題化合物（化合物IIa) 4.87g（94％）を得た。
比旋光度：［α］２７Ｄ＋87.3°（c 0.93，メタノール）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３  ，δppm)：1.47（９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ３)３），1.99（３Ｈ，ｓ，−ＮＨＣＯＣＨ３ ），2.17（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝5.4Ｈz，−ＣＨ２ＯＨ），2.18〜2.30（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），3.31(１Ｈ，br ｔ,Ｊ＝12.5Ｈz, 6-Ｈax），3.51（1Ｈ，dd，Ｊ＝12.5，4.2Ｈz, 6-Ｈeq），3.72〜3.87（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ２ＯＨ），4.59（１Ｈ，dd，Ｊ＝7.6 ，2.2 Ｈz, 3−Ｈ），4.63〜4.73（１Ｈ，ｍ，４−Ｈ），5.73（１Ｈ，ｓ，＝ＣＨPh），5.89（２Ｈ，brs，２−Ｈ and −ＮＨＣＯＣＨ３），7.34〜7.44（５Ｈ，ｍ，Ph）
ＩＲスペクトル（ＣＨＣｌ３）：3450，3000，1680，1390，1370，1170，1090，1070 cm−１
マススペクトル(ＦＡＢ−ＭＳ):m/z 393.3（Ｍ+Ｈ）＋，337.3, 234.2, 154.1, 136.1, 57.1
【００５５】
次に第４の本発明方法の実施例を示す。
実施例１
（１）Ｎ−（ターシャリーブトキシカルボニル）−４，５−Ｏ−べンジリデン−６−Ｎ−デアセチル−３−ヒドロキシメチル−３−デカルボキシシアスタチンＢ（化合物IIIa) の製造
参考例１の製造法で得られた化合物IIa （3.0g，7.64mmol）をヒドラジン水和物（Ｈ２ＮＮＨ２・ｘＨ２Ｏ，30ml）に溶解し、70℃で７日間攪拌した。反応溶液 を室温まで冷却した後、反応溶液を減圧濃縮した。残留物に水を加えクロロホルムで３回抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、残留物を展開溶媒として酢酸エチル−メタノール（19：１）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色泡状の表題化合物（化合物IIIa）1.07g （40％）を得た。またこのとき、未反応の化合物 IIaを 1.56g（52％）回収した。
比旋光度：［α］２８Ｄ＋25.7°（c 0.81，メタノール）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３，δppm)：1.49（９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ３)３），2.54〜2.64（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），3.36（１Ｈ，br t，Ｊ＝12.5Ｈz,6−Ｈax），3.48（１Ｈ，dd，Ｊ＝12.2，5.4 Ｈz，6−Ｈeq），3.79（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝5.9Ｈz,−ＣＨ２ＯＨ）,4.36（１Ｈ，dd，Ｊ＝8.1, 1.7 Ｈz, ３−Ｈ），4.62（１Ｈ，dd，Ｊ＝8.1, 2.7Ｈz, 4−Ｈ），5.27（１Ｈ，br s，２−Ｈ），5.74（１Ｈ，ｓ，ＣＨPh），7.26〜7.46（５Ｈ，ｍ，Ph）
ＩＲスペクトル（ＣＨＣｌ３ ）：3400，2970，1685，1460，1410，1370，1170，1090，1070 cm−１
マススペクトル(ＦＡＢ−ＭＳ):m/z 35l.2 (Ｍ+Ｈ)＋，334.2, 234.2, 154.1, 136.1，57.1
【００５６】
（２）Ｎ−（ターシャリーブトキシカルボニル）−４，５−Ｏ−ベンジリデン−６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢ（化合物IVa)の製造
実施例１，（１）で得られた化合物IIIa（3.0g，8.56mmol）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（30ml）に溶解し、これにＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（14.8ml，85.6mmol）およびトリフルオロ酢酸エチル（10.2ml,85.6mmol)を加えた。得られた混合物を60℃で15時間攪拌した。
反応溶液を減圧濃縮した後、残留物に酢酸エチルを加え、飽和食塩水で２回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、残留物を展開溶媒としてｎ−ヘキサン−酢酸エチル（１：１）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色泡状の表題化合物（化合物IVa) 2.77g（73％）を得た。
比旋光度：［α］２８Ｄ  ＋67.7°（c O.96，メタノール）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３  ，δ ppm）：1.47（９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ３)３）,1.95（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝5.4Ｈz，−ＣＨ２ＯＨ），2.12〜2.23（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），3.31（１Ｈ，br t, Ｊ＝12.5Ｈz, 6−Ｈax），3.59（１Ｈ，dd，Ｊ＝12.2，3.9 Ｈz, 6−Ｈeq），3.77〜3.90（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ２ＯＨ），4.62〜4.73（２Ｈ，ｍ，３−Ｈ and ４−Ｈ），5.76（１Ｈ，ｓ，＝ＣＨPh），5.94（１Ｈ，brs, ２−Ｈ），6.65（１Ｈ，br s，−ＮＨＣＯＣＦ３），7.36〜7.46（５Ｈ，ｍ，Ph）
ＩＲスペクトル（ＣＨＣｌ３）：3440，2980，1740，1705，1395，1370，1165，1090，1070 cm−１
マススペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）：m/z 447.2 （Ｍ＋Ｈ）＋，391.1, 234.2, 154.1, 128.1, 57.1
【００５７】
（３）式（Ｉ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢの塩酸塩の製造
（ｉ）  実施例１，（２）で得られた化合物IVa (2.5Og，5.60mmol）をメタノール（200ml)に溶解し、これに10％パラジウム炭素（1.25g)を加えて、水素雰囲気下、室温で16時間攪拌してベンジリデン基の脱離反応を行った。10％パラジウム炭素をセライトろ過して除いた後、ろ液を減圧濃縮した。残留物を展開溶媒としてクロロホルム−メタノール（19：１）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色泡状のＮ−（ターシャリーブトキシカルボニル）−６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢ（化合物XIa) 1.85g（92％）を得た。
化合物 XIaの理化学的性状
比旋光度：［α］２８Ｄ＋45.7°（c 0.59，メタノール）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３，δppm)：1.48（９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ３)３），1.87〜1.96（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ）, 2.43（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝5.4Ｈz,−ＣＨ２ＣＨ），3.21（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝3.4Ｈz,４−ＯＨ）,3.29(１Ｈ，ｍ，３−ＯＨ),3.49（１Ｈ，dd，Ｊ＝14.2，8.8 Ｈz，６−Ｈax）,3.60（１Ｈ，dd，Ｊ＝14.2，4.4 Ｈz, 6−Ｈeq), 3.77 〜3.90（３Ｈ，ｍ，−ＣＨ２ＯＨ and 3−Ｈ），4.29（１Ｈ，dd，Ｊ＝6.8, 3.4Ｈz, 4−Ｈ），5.55 （１Ｈ，br t, Ｊ＝8.3Ｈz, 2−Ｈ）
ＩＲスペクトル（ＣＨＣｌ３  ）：3375，2980，1730，1685，1540，1410，1370，1250，1170 cm−１
マススペクトル(ＦＡＢ−ＭＳ):m/z 359.2 (Ｍ+Ｈ)＋，307.2, 303.2, 289.2, 154.1，138.1, 107.1，57.1
（ii） こうして得られた化合物 XIa（70mg，0.195mmol）をジクロロメタン（１ml）に溶解し、これに４Ｎ塩化水素−ジオキサン溶液（0.25ml）を加え室温で30分間攪拌した。Ｎ−ターシャリーブトキシカルボニル基が脱離された。無色固体が析出して懸濁した反応溶液にジエチルエーテルを加えてよく攪拌した後、析出した無色固体を遠心分離によって沈渡させ、上澄みを除いた。得られた沈殿を減圧乾燥させ、無色固体の表題化合物〔式（Ｉ）の化合物〕41mg（80％）を得た。
【００５８】
次に第５の本発明方法の実施例を示す。
実施例２
（１）Ｎ−（ターシャリーブトキシカルボニル）−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢ（化合物VIa)の製造
参考例１の製造法で得られた化合物 IIa（1.20g，3.06mol)をメタノール（120ml)に溶解し、その溶液に10％パラジウム炭素（500mg)を加え水素雰囲気下、室温で６時間攪拌してベンジリデン基の脱離反応を行った。10％パラジウム炭素をセライトろ過して除いた後、ろ液を減圧濃縮した。残留物を展開溶媒としてクロロホルム−メタノール（３：２）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色泡状の表題化合物（化合物VIa) 877mg（94％）を得た。
比旋光度：［α］２５Ｄ＋50.5°（c 0.49，メタノール）エタノール−エチルエーテルから結晶された無色針状晶は201〜 202°Ｃの融点（分解）を示した。
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３，δ ppm）：1.45（９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ３）３），1.91〜1.98（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），1.96（３Ｈ，ｓ，−ＮＨＣＯＣＨ３），3.10（１Ｈ，dd，Ｊ＝14.2, 3.4 Ｈz, ６−Ｈax），3.71（１Ｈ，dd，Ｊ＝5.4, 2.4 Ｈz,３−Ｈ），3.73（１Ｈ，dd，J=11.2，8.1 Ｈz, −ＣＨ２ＯＨ），3.80（１Ｈ，dd，Ｊ＝11.2，3.9 Ｈz ，−ＣＨ２ＯＨ），3.99（１Ｈ，dd，Ｊ＝5.4, 3.2Ｈz, 4−Ｈ），4.14（１Ｈ，ｄ，with a small coupling，Ｊ＝14.2Ｈz,6−Ｈeq），5.99（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝ 2.4Ｈz, 2−Ｈ）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：3290，2980，2920，1710，1670，1650，1540，1430，1270，1160，1100，1010，960 cm−１
マススペクトル(ＦＡＢ−ＭＳ):m/z 305.3(Ｍ＋Ｈ）＋，289.2, 249.2, 154.1, 146.2, 136.1, 107.1，57.1
【００５９】
（２）Ｎ−（ターシャリーブトキシカルボニル）−５−Ｏ−（ターシャリーブチルジメチルシリル）−３−（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）メチル−３−デカルボキシシアスタチンＢ（化合物VIIa）の製造
前項（１）で得られた化合物 VIa（2.20g，7.23mmol）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（30ml）に溶解し、この溶液にイミダゾール（3.44g,50.6mmol）およびターシャリーブチルジメチルシリルクロライド
（3.81g,25.3mmol）を加え、室温にて16時間攪拌した。反応溶液を減圧濃縮した後、残留物に酢酸エチルを加え、飽和食塩水で２回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過した。ろ液を減庄濃縮した後、残留物を展開溶媒としｎ−ヘキサン−酢酸エチルを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色油状の表題化合物（化合物VIIa）1.89g（49％）を得た。
比旋光度：［α］２３Ｄ＋37.3°（c 1.03，メタノール）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３  ，δppm)：0.05，0.10 and 0.14 （6H，3H and 3H ，each s，（ＣＨ３）２of t-butyldimethylsilyl)，0.89 and 0.94 （each 9H, each s,（ＣＨ３）３  of t-butyldimethylsilyl)，1.46（９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ（ＣＨ３）３），1.73〜1.82（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），2.04（１Ｈ，ｓ，ＮＨＣＯＣＨ３），2.76（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝6.8Ｈz, −ＯＨ），3.28〜3.37（１Ｈ,ｍ，６−Ｈax），3.52〜3.63（４Ｈ，ｍ，−ＣＨ２ＯＴＢＤＭＳ，３−Ｈ and ６−Ｈ），4.14（１Ｈ，br t，Ｊ＝2.9Ｈz，４−Ｈ），5.58（１Ｈ，br t, J＝8.1 Ｈz ,２−Ｈ)，7.40(1Ｈ，br s,−ＮＨ）
ＩＲスペクトル（ＣＨＣｌ３）：3400，2950，2930，
2860，1680，1500，1470，1410，1380，1260，1160，1100， 840 cm−１
マススペクトル(ＦＡＢ−ＭＳ):m/z 533.3 (Ｍ+Ｈ)＋，474.3, 374.3, 316.2, 242.2，171.2, 73.1, 57.1
【００６０】
（３）Ｎ−（ターシャリーブトキシカルボニル）−５−Ｏ−（ターシャリーブチルジメチルシリル）−３−（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）メチル−３−デカルボキシ−４−ケトシアスタチンＢ（化合物VIIIa)の製造
前項（２）で得られた化合物VIIa（640mg, 1.20mmol)を無水ジクロロメタン（30ml）に溶解し、その溶液に対して、文献記載の方法（J. Am. Chem. Soc. 1991，113，7277〜7287；J. Org. Chem. 1993，58，2899）に従って調製したデス−マーチン酸化試薬（764mg ，1.80mmol）を加え室温にて２時間攪拌した。反応溶液をクロロホルムで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和後分液した。有機層を水洗後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮後、残留物を展開溶媒としてｎ−ヘキサン−酢酸エチル（３：１）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色泡状の表題化合物（化合物VIIIa) 628mg（98％）を得た。
比旋光度：［α］２８Ｄ  ＋45.0°（c 0.84，メタノール）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３  ，δppm)：0.06，0.07 and 0.10(6H, 3H, and 3H ，each s，（ＣＨ３）２ of t-butyldimethylsilyl), 0.88 and 0.89 （each 9H, each s ，（ＣＨ３）３  of t-butyldimethylsilyl)，1.47（９Ｈ, ｓ,ＣＯＯＣ（ＣＨ３）３），1.98（３Ｈ，ｓ，ＮＨＣＯＣＨ３），2.53〜2.62（１ Ｈ，ｍ，５−Ｈ），3.62（１Ｈ，br t，Ｊ＝ 9.8Ｈz，6−Ｈax），3.97（2H，ｍ,６−Ｈeq and −ＣＨ２ＯＴＢＤＭＳ），4.08（１Ｈ，dd，J=13.7，4.9Ｈz，−ＣＨ２ＯＴＢＤＭＳ），4.73(１Ｈ，br s with a small coupling, 3−Ｈ），5.14（１Ｈ，br s，２-Ｈ），6.31（１Ｈ，br s，−ＮＨ)
ＩＲスペクトル（ＣＤＣｌ３):3430，2950，2930，2860，1740，1680，1480，1410，1260，1160，1100，840 cm −１
マススペクトル(ＦＡＢ−ＭＳ): m/z 531.4(Ｍ+Ｈ)＋，472.3, 416.3, 372.3, 358.2，314.3, 186.2，73.1，57.1
【００６１】
（４）Ｎ−(ターシャリーブトキシカルボニル）−５−Ｏ−(ターシャリーブチルジメチルシリル）−３−（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）メチル−３−デカルボキシ−４−エピシアスタチンＢ（化合物IXa)の製造
前項（３）で得られた化合物 VIIIa（106mg,0.20mmol）を無水アセトニトリル（５ml）に溶解し、その溶液に−50℃にて水素化ホウ素リチウム（8.7mg，0.40mmol）を加え30分間攪拌した。反応溶液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止させた後、クロロホルム20mlで希釈し分液した。有機層を水洗した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、残留物を展開溶媒としてｎ−ヘキサン−酢酸エチル（５：３）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、無色泡状の表題化合物（IXa)79mg（74％）を得た。
比旋光度：［α］２６Ｄ＋24.2°（c 0.73，メタノール）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３，δppm)：0.05，0.06，0.10 and 0.14 (each 3H，each s，（ＣＨ３）２  of t-butyldimethylsilyl),0.89（18Ｈ,ｓ,(ＣＨ３)３  of t-butyldimethylsilyl），1.47（9H，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ３)３），1.78〜1.87（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），1.97（３Ｈ，ｓ，−ＮＨＣＯＣＨ３），2.22（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝2.4Ｈz，−ＯＨ），3.41（１Ｈ，br d，J=13.2Ｈz,６−Ｈ），3.58〜3.69（１Ｈ，ｍ，６−Ｈ），3.61
（１Ｈ，dd，Ｊ＝10.3，5.4 Ｈz，−ＣＨ２ＯＴＢＳ)，3.69（１Ｈ，br t, Ｊ＝4.2Ｈz, 3−H)，3.75（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ２ＯＴＢＳ and ４−Ｈ），5.74(１Ｈ，br s，２−Ｈ），7.07（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝ 8.3Ｈz,−ＮＨ）
ＩＲスペクトル（ＣＨＣｌ３):3400，2960，2940，2860，1680，1510，1470，1370，1260，1100，840cm −１
マススペクトル(ＦＡＢ−ＭＳ): m/z 533.5(Ｍ+Ｈ)＋，477.4, 374.3, 316.3, 186.2，73.1，57.1
【００６２】
（５）式（Ｖ）の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチルシアスタチンＢの塩酸塩の製造
前項（４）で得られた化合物 IXa（20mg，0.0375mmol）を無水ジオキサン(1ml）に溶解し、これに４Ｎ塩化水素−ジオキサン溶液（0.2ml)を加え室温で２時間攪拌した。無色固体が析出して懸濁した反応溶液にジエチルエーテルを加えてよく攪拌した後、析出した無色固体を遠心分離によって沈殿させ上澄みを除いた。得られた沈殿を減圧乾燥させ、無色固体の表題化合物〔式（V)の化合物〕7.2mg （80％）を得た。
【００６３】
次に第６の本発明方法の実施例を示す。
実施例３
（１）Ｎ−（ターシャリーブトキシカルボニル）−５−Ｏ−（ターシャリーブチルジメチルシリル）−３−（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）メチル−６−デアセタミド−３−デカルボキシ−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢ（化合物XIIa）の製造
実施例１、(３)(ｉ)において、中間体化合物として得られた化合物 XIaすなわちＮ−（ターシャリーブトキシカルボニル）−６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢ(1.30g，3.63mmol）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（25ml）に溶解した。その溶液にイミダゾール(1.73g，25.4mmol）およびターシャリーブチルジメチルシリルクロライド(1.91g ，12.7mmol）を加え、室温にて16時間攪拌した(Ｏ−シリル化反応）。反応溶液を減圧濃縮した後、残留物に酢酸エチルを加え飽和食塩水で２回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、残留物を展開溶媒としてｎ−ヘキサン−酢酸エチル（９：１）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色針状結晶の表題化合物（化合物XIIa）1.23g （58％）を得た。
比旋光度：［α］２８Ｄ＋42.5°（c O.96，メタノール）
融点：88〜90℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３，δppm)：0.06，0.11 and O.12（６Ｈ，３Ｈ and ３Ｈ，each s，（ＣＨ３)２  of t-butyldimethylsilyl)，0.89 and 0.90（each 9Ｈ，each s,(ＣＨ３)３  of t-butyldimethylsilyl），1.47（９Ｈ，ｓ,ＣＯＯＣ（ＣＨ３）３），1.83〜1.93（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），2.69（１H, br s，−ＯＨ），3.20（１Ｈ，br t, J=13.7Ｈz，６−Ｈａｘ），3.63（１H, dd，J=10.3，7.8Ｈz，−ＣＨ２ＴＢＤＭＳ），3.69（１Ｈ，dd，Ｊ＝13.7，3.9Ｈz，６−Heq)，3.75〜3.82（２Ｈ，ｍ，-ＣＨ２ＴＢＤＭＳ and 3-Ｈ), 3.98（１Ｈ,br d，J=2.4Ｈz ，４−Ｈ），5.47（１Ｈ，br t，J=8.8Ｈz，２−Ｈ）
ＩＲスペクトル（ＣＨＣｌ３):3560，3350，2950，2930，2860，1730，1680，1530，1460，1410，1370，1250，1160，1090，950, 840 cm−１
マススペクトル(ＦＡＢ−ＭＳ):m/z 587.4 (Ｍ+Ｈ)＋，531.4, 487.4, 473.3, 374.4，316.3, 242.3，186.2,73.1, 57.1
【００６４】
（２）Ｎ−（ターシャリーブトキシカルボニル）−５−Ｏ−（ターシャリーブチルジメチルシリル）−３−（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）メチル−６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−ケトシアスタチンＢ（化合物XIIIa)の製造
前項（１）で得られた化合物 XIIa（190mg,0.324mmol）を無水ジクロロメタン（10ml）に溶解した。この溶液にデス−マーチン酸化試薬（275mg,0.648mmol)を加え室温にて１時間攪拌した（４位水酸基の酸化反応）。反応溶液をクロロホルムで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和後に分液した。有機層を水洗後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮後、残留物を展開溶媒としてｎ−ヘキサン−酢酸エチル（７：１）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色針状結晶の表題化合物（化合物XIIIa) 183mg（97％）を得た。
比旋光度：［α］２７Ｄ＋23.3°（c O.70，メタノール）
融点：165 〜167 ℃
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル(ＣＤＣｌ３，δppm)：0.03，0.06 and 0.12（３Ｈ，６Ｈ and ３Ｈ，each ｓ，(ＣＨ３)２  of t-butyldimemlylsilyl），0.89(18Ｈ，ｓ，(ＣＨ３)３  of t-butyldimemlylsilyl)，1.47(9Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ(ＣＨ３)３）,2.55〜2.63(１Ｈ，ｍ，５−Ｈ)，3.63(１Ｈ，dd，J=10.3， 9.3Ｈz，６-Ｈax)，3.99（２Ｈ，ｍ，−ＣＨ２ＯＴＢＤＭＳ and ６−Ｈeq），4.11（１Ｈ，dd， J=14.2, 4.9Ｈz，−ＣＨ２ＯＴＢＤＭＳ），4.74（１Ｈ，ｄ，J= 7.8Ｈz, ３−Ｈ），5.17（１Ｈ，br t，J=7.1 Ｈz，２−Ｈ），7.30（１Ｈ，br s，−ＮＨ）
ＩＲスペクトル（ＣＨＣｌ３):3420，2950，2930，2860，1730，1700，1470，1390，1260，1170，1000， 840 cm−１
マススペクトル(ＦＡＢ−ＭＳ):m/z 585.5 (Ｍ+Ｈ)＋，529.4, 471.4, 414.4, 372.4，358.3, 314.3，284.3, 226.2，154.2, 73.1, 57.1
【００６５】
（３）Ｎ−（ターシャリーブトキシカルボニル）−５−Ｏ−（ターシャリーブチルジメチルシリル）−３−（ターシャリーブチルジメチルシリルオキシ）メチル−６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢ（化合物XIVa）の製造
前項(２)で得られた化合物 XIIIa（110mg,0.188mmol）を無水アセトニトリル（３ml）に溶解し、その溶液へ−50℃にて水素化ホウ素リチウム（8.2mg，0.376mmol)を加え、１時間攪拌した（４−ケト基の還元反応）。反応溶液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え反応を停止させた後、クロロホルム30mlで希釈し分液した。有機層を水洗した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮した後、残留物を展開溶媒としてｎ−ヘキサン−酢酸エチル（10：１）を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、無色泡状の表題化合物（化合物XIVa）96.9mg（88％）を得た。
比旋光度：［α］２５Ｄ＋20.0°（c 1.02，メタノール）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ３，δppm)：0.04，0.06，0.10 and 0.14（each 3Ｈ，each s，（ＣＨ３）２  of t-butyldimemlylsilyl），0.896 and 0.899（each 9Ｈ，each s，（ＣＨ３）３  of t-butyldimemlylsilyl），1.47(９Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣ（ＣＨ３）３），1.83〜1.93（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），2.25（１Ｈ，ｄ，J=2.9Ｈz，−ＯＨ），3.31（１ｈ，br d，J=11.7Ｈz，６−Ｈ),3.59（１Ｈ，dd，J=10.0，5.1Ｈz，−ＣＨ２ＯＴＢＤＭＳ)，3.70〜3.81（４Ｈ，ｍ，−ＣＨ２ＯＴＢＤＭＳ，３−Ｈ，４−Ｈ and ６−Ｈ），5.88（１Ｈ，br s，２−Ｈ），8.11（１Ｈ，ｄ，J=7.3Ｈz，−ＮＨ）
ＩＲスペクトル（ＣＨＣｌ３):3370，2960，2940，2870，1740，1690，1540，1480，1370，1260，1160，1100，840 cm−１
マススペクトル(ＦＡＢ−ＭＳ):m/z 587.5 (Ｍ+Ｈ)＋，531.5, 487.4, 473.3, 374.4，316.3, 242.3，155.2, 73.1, 57.1
【００６６】
（４）式（Ｘ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢの製造
前項（３）で得られた化合物 XIVa(40mg，0.0682mmol）を無水ジオキサン（２ml）に溶解し、その溶液に４Ｎ塩化水素−ジオキサン溶液（0.4 ml）を加え室温で５時間攪拌した。この反応溶液にさらに４Ｎ塩化水素−ジオキサン溶液(0.6ml）を加え室温で14時間攪拌した（イミノ保護基とヒドロキシル保護基の脱離反応）。無色固体が析出して懸濁した反応溶液にジエチルエーテルを加えてよく攪拌した後、析出した無色固体を遠心分離によって沈殿させ、上澄みを除いた。得られた沈澱を減圧乾燥させ、無色固体の表題化合物、すなわち式（Ｘ）の化合物18.2mg（91％）を得た。
比旋光度：［α］２６Ｄ＋35.0°（c O.50，メタノール）
１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤ３ＯＤ，40℃、δppm)：1.88〜2.00（１Ｈ，ｍ，５−Ｈ），3.11（１Ｈ，br t，J=13.2Ｈz, ６−Ｈax），3.42（１Ｈ，dd，Ｊ＝13.2， 4.4Ｈz ，６−Ｈeq），3.51（１Ｈ，dd，J=10.3，9.3 Ｈz ，４−Ｈ），3.67（１Ｈ，dd，J=11.2，6.4 Ｈz ，−ＣＨ２ＯＨ），3.73（１Ｈ，dd，Ｊ＝10.3，8.8 Ｈz, ３−Ｈ），3.84（１Ｈ，dd，J=11.2，3.9 Ｈz ，−ＣＨ２OH),4.84（１Ｈ，ｄ，J=9.8Ｈz ，２−Ｈ）
ＩＲスペクトル（ＫＢｒ）：3350，1740，1570，1420，1230，1180，1100，1060，990 ，880 cm−１
マススペクトル(ＦＡＢ−ＭＳ):m/z 259.1(Ｍ+Ｈ)＋，202.2, 154.1,146.1, 136.1，128.1, 107，77.1， 57.1
【００６７】
産業上の利用可能性
前記した説明から明らかなように、本発明では、式（Ｉ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢと、式（Ｖ）の３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシシアスタチンＢと、式（Ｘ）の６−デアセタミド−３−デカルボキシ−４−エピ−３−ヒドロキシメチル−６−トリフルオロアセタミドシアスタチンＢが新規な方法により得られた。
これらの本発明の新規化合物は、グリコシダーゼ、特にＮ−アセチルガラクトサミニダーゼ、ガラクトシダーゼ、グルコシダーゼおよびマンノシダーゼに対して強い酵素阻害活性を有するので、各種の用途の医薬として有用である。