(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一端に試料を受け入れる入口を有する試験容器と、前記入口から前記試験容器に挿入されて用いられるイムノクロマトグラフィー用試験具とを備え、
前記試験具が、前記試験容器に収容された前記試料に浸漬される試料添加部と、前記試料中の被検出物質と抗原抗体反応を生じる標識物質を保持する標識保持部と、前記被検出物質と抗原抗体反応を生じる固定化用物質が固定された判定部と、前記判定部を通過した試料を吸収する吸収部とを備え、
前記試験具は、前記試験具を前記試験容器に挿入したときに前記吸収部の少なくとも一部が前記試験容器外に位置する長さであり、
前記試験容器の入口側に載置又は連結可能であり、前記試験容器外に位置する試験具の部位を覆うことができ、かつ、側壁に通気孔を有し、かつ、両端が開いている筒状の覆い部材を備えるイムノクロマトグラフィー用キット。
【請求項２】
前記覆い部材は、その端部に、貫通孔を有するキャップ部を備え、
前記キャップ部は、前記試験容器内に挿入され、かつ前記覆い部材が前記試験容器に固定されるのを可能にする突出部を有する請求項１に記載のキット。
【請求項３】
前記キャップ部は、前記突出部が前記試験容器内に挿入されたときに前記試験容器の入口の縁に当接する当接部をさらに備える請求項２に記載のキット。
【請求項４】
前記試験具は、前記覆い部材に固定されている請求項１〜３の何れか１つに記載のキット。
【請求項５】
一端に試料を受け入れる入口を有する試験容器と、前記入口から前記試験容器に挿入されて用いられるイムノクロマトグラフィー用試験具とを備え、
前記試験具が、前記試験容器に収容された前記試料に浸漬される試料添加部と、前記試料中の被検出物質と抗原抗体反応を生じる標識物質を保持する標識保持部と、前記被検出物質と抗原抗体反応を生じる固定化用物質が固定された判定部と、前記判定部を通過した試料を吸収する吸収部とを備え、
前記試験容器は、前記試験具を前記試験容器に挿入したときに前記吸収部が前記試験容器内部に配置される長さであり、
前記試験容器は、前記試験具を前記試験容器に挿入したときの前記吸収部の位置に対応した位置の側壁に通気孔を有するイムノクロマトグラフィー用キット。
【請求項６】
前記通気孔は、網の目状、縦縞状、横縞状又は切り欠き状である請求項１〜５の何れか１つに記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イムノクロマトグラフィー用キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
血液、血清、咽頭拭い液、尿などの体液を検体として用いて、簡易に各種疾患の検査を行う方法としてイムノクロマトグラフィーを用いる方法がある。
【０００３】
イムノクロマトグラフィーは、試料中の被検出物質（病原性ウィルスなど）を検出するためのイムノクロマトグラフィー用試験具と、前記試料を収容できる試験容器とからなるイムノクロマトグラフィー用キットを利用して行なうことができる。前記試験具は、通常、試料に浸漬される試料添加部と、試料中の被検出物質と抗原抗体反応を生じる標識物質を保持する標識保持部と、被検出物質と抗原抗体反応を生じる固定化用物質が固定された判定部と、判定部を通過した試料を吸収する吸収部とを備える。
【０００４】
従来のイムノクロマトグラフィー用キットは、通常、試験容器内に試料を注入し、さらに、試験容器内に試験具を挿入した後、試験容器を机の上に置かれた収容ケースなどの試験容器立てに配置し、２０分程度放置し、その後、試験容器を試験容器立てから取り出して被検出物質の存在を示すラインの存在の有無を確認するという方法で使用される。この検査中に試料は、上記試験具の、試料添加部、標識保持部及び判定部を通って最終的に吸収部に吸収される。
【０００５】
試験具は、試験容器に挿入したり、試験容器から取り出したりしやすいように、その一端が試験容器からはみ出すような長さで作られていることがある。また、吸収部は、通常、試験具の端の方に設けられる。従って、試験具を試験容器に挿入したときに、吸収部が試験容器外に位置することがある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかし、上記の通り、吸収部には病原性ウィルスなどが含まれている可能性のある試料が吸収されているので、吸収部が試験容器からはみ出していると、検査者がうっかりと吸収部に手を触れてしまう可能性がある。
【０００７】
本発明はこのような事情に鑑みてなされたものであり、吸収部を直接手で触れる可能性が低いイムノクロマトグラフィー用キットを提供するものである。
【課題を解決するための手段及び発明の効果】
【０００８】
本発明のイムノクロマトグラフィー用キットは、一端に試料を受け入れる入口を有する試験容器と、前記入口から前記試験容器に挿入されて用いられるイムノクロマトグラフィー用試験具とを備え、前記試験具が、前記試験容器に収容された前記試料に浸漬される試料添加部と、前記試料中の被検出物質と抗原抗体反応を生じる標識物質を保持する標識保持部と、前記被検出物質と抗原抗体反応を生じる固定化用物質が固定された判定部と、前記判定部を通過した試料を吸収する吸収部とを備え、前記試験具は、前記試験具を前記試験容器に挿入したときに前記吸収部の少なくとも一部が前記試験容器外に位置する長さであり、前記試験容器の入口側に載置又は連結可能であり、前記試験容器外に位置する試験具の部位を覆うことができ、かつ側壁に通気孔を有する筒状の覆い部材を備える。
【０００９】
上記筒状の覆い部材は、試験容器外に位置する試験具の部位を覆うことができる。従って、検査者は、吸収部に触れる可能性が小さくなる。
【００１０】
また、単に試験容器からはみ出す部位を覆うと、吸収部からの試料中の展開溶媒の蒸散が抑制され、その分、試験具中の試料の移動が抑制されるという問題が生じることがあるが、本発明の覆い部材は、側壁に通気孔を有しているので、展開溶媒の蒸散の抑制される度合いは小さく、上記問題は、生じ難い。
【００１１】
また、本発明は、一端に試料を受け入れる入口を有する試験容器と、前記入口から前記試験容器に挿入されて用いられるイムノクロマトグラフィー用試験具とを備え、前記試験具が、前記試験容器に収容された前記試料に浸漬される試料添加部と、前記試料中の被検出物質と抗原抗体反応を生じる標識物質を保持する標識保持部と、前記被検出物質と抗原抗体反応を生じる固定化用物質が固定された判定部と、前記判定部を通過した試料を吸収する吸収部とを備え、前記試験容器は、前記試験具を前記試験容器に挿入したときに前記吸収部が前記試験容器内部に配置される長さであり、前記試験容器は、前記試験具を前記試験容器に挿入したときの前記吸収部の位置に対応した位置の側壁に通気孔を有するイムノクロマトグラフィー用キットをも提供する。
【００１２】
このキットの試験容器は、前記試験具を前記試験容器に挿入したときに前記吸収部が前記試験容器内部に配置される長さであるので、上記と同様の理由により、吸収部を手で触れる可能性が小さくなる。
【００１３】
また、このキットの試験容器は、試験具を挿入したときの吸収部の位置に対応した位置の側壁に通気孔を有している。従って、上記と同様の理由により、展開溶媒の蒸散の抑制される度合いが小さく、試験具中の試料の移動が抑制されるという問題が生じ難い。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明の実施形態を図面を用いて説明する。図面は、説明の便宜のために用いられるものであり、本発明の範囲は、図面に示す実施形態に限定されない。
【００１５】
１．第１実施形態
図１は、本発明の第１実施形態のイムノクロマトグラフィー用キットを示す。このキットは、試料中の被検出物質を検出するためのイムノクロマトグラフィー用試験具１と、前記試料を収容できる試験容器３とを備える。試験容器３は、一端に試料を受け入れる入口３ａを有する。試験具１は、入口３ａから試験容器３に挿入されて用いられる。このキットは、試験容器３の入口３ａ側に載置又は連結可能な筒状の覆い部材４も備える。なお、試験容器３及び覆い部材４の図は、図示の便宜上、わずかに上方から見たものを表示している。
【００１６】
図２（ａ）、（ｂ）は、図１の試験具１の側面図、正面図である。図２（ａ）、（ｂ）に示すように、試験具１は、表面に粘着層を有するプラスチック板からなる基材５上に、レーヨンの不織布からなる試料添加用部材７と、グラスファイバーの不織布からなる標識保持部材９と、ニトロセルロースの多孔体からなるクロマト用膜担体１１と、セルロースの不織布からなる吸収部材１３とを備える。試料添加用部材７は、試験容器３に収容された試料に浸漬される試料添加部として機能する。標識保持部材９は、試料添加用部材７に接触して配置され、試料中の被検出物質と抗原抗体反応を生じる標識物質を保持する標識保持部として機能する。クロマト用膜担体１１は、標識保持部材９に接触して配置され、被検出物質と抗原抗体反応を生じる固定化用物質が固定された判定部を有する。吸収部材１３は、クロマト用膜担体１１と接触するように配置されている。吸収部材１３は、判定部を通過した試料を吸収する吸収部として機能する。
【００１７】
クロマト用膜担体１１には、上流側から順に、ライン状の第１判定部１１Ａ、第２判定部１１Ｂ及び対照部１１Ｃが形成されている。標識保持部材９には、第１標識物質、第２標識物質及び対照用標識物質が保持されている。第１判定部１１Ａ、第２判定部１１Ｂ及び対照部１１Ｃには、固定化用物質として、それぞれ、抗インフルエンザＡ抗体、抗インフルエンザＢ抗体（以下、それぞれ「抗ＦｌｕＡ抗体」、「抗ＦｌｕＢ抗体」とする。）、ビオチンが固定されている。また、第１判定部１１Ａ、第２判定部１１Ｂ及び対照部１１Ｃに対応する位置には、それぞれ、その種別を示す表示「Ａ」、「Ｂ」、「！」が印刷されている。第１標識物質及び第２標識物質は、それぞれ、青色ラテックス粒子で標識された抗ＦｌｕＡ抗体及び抗ＦｌｕＢ抗体であり、対照用標識物質は、赤色ラテックス粒子で標識されたアビジンである。抗ＦｌｕＡ抗体及び抗ＦｌｕＢ抗体は、それぞれ、第１被検出物質であるインフルエンザＡ型ウィルス及び第２被検出物質であるインフルエンザＢ型ウィルス（以下、それぞれ「ＦｌｕＡウィルス」、「ＦｌｕＢウィルス」とする。）と抗原抗体反応により結合する。
【００１８】
ＦｌｕＡウィルスを例にとると、試料中にＦｌｕＡウィルスが含まれていると、標識保持部材９にある標識された抗ＦｌｕＡ抗体は、ＦｌｕＡウィルスの所定部位を認識して、抗原抗体反応により結合して複合体を形成する。次に、クロマト用膜担体１１にある抗ＦｌｕＡ抗体は、ＦｌｕＡウィルスの別の部位を認識して複合体を捕捉する。複合体が捕捉されると、第１判定部１１Ａには青色のラインが現れ、ＦｌｕＡウィルスが目視により検出される。
【００１９】
また、アビジンは、クロマト用膜担体１１にある抗ＦｌｕＡ抗体、抗ＦｌｕＢ抗体には捕捉されないが、ビオチンと特異的に結合するので、対照部１１Ｃに固定されたビオチンに捕捉される。アビジンが捕捉されると、対照部１１Ｃには赤色のラインが現れ、アビジンが対照部１１Ｃに到達したことが目視される。対照部１１Ｃは、第１判定部１１Ａ及び第２判定部１１Ｂの下流に設けられるので、赤色のラインを確認することにより、試料が第１判定部１１Ａ及び第２判定部１１Ｂを通過したことが確認される。
【００２０】
試験容器３は、試験具１を試験容器３に挿入したときに吸収部材１３の少なくとも一部が試験容器３外に位置するような長さである。試験容器３の全長は、試験具１よりも短い。筒状の覆い部材４は、試験容器３の入口３ａ側に載置又は連結可能であり、試験容器３からはみ出す部位を覆うことができる。言い換えれば、覆い部材４は、吸収部材１３の、試験容器３からはみ出す部分を覆うことができる。このため、吸収部材１３の全体を、試験容器３と覆い部材４によって覆うことができる。覆い部材４の側壁は、網の目状の通気孔１５を有する。通気孔１５は、複数の貫通孔からなる。覆い部材４の試験容器３に取り付ける端部での内径は、試験容器３の外径と同程度である。このため、覆い部材４は、試験容器３の入口３ａ側（入口３ａの縁）に載置することもできるし、試験容器３を覆い部材４内に嵌め込むことによって、両者を連結することもできる。両者の連結は、他の方法で行なってもよい。試験容器３及び覆い部材４は、樹脂、ガラス、金属などで作製することができる。
【００２１】
次に、本実施形態のキットの使用方法について、図３を用いて説明する。
【００２２】
まず、患者の鼻腔吸引液などの検体を展開溶媒に希釈して調製した試料１７を試験容器３内に所定量注入する。次に、試験具１を試験容器３に挿入する。このとき、試験具１の吸収部材１３のほぼ全体が試験容器３からはみ出す。次に、試験容器３を覆い部材４内に嵌め込むことによって、覆い部材４を試験容器３に連結する。これによって、試験容器３からはみ出した部位が覆い部材４によって覆われる。なお、覆い部材４は、単に試験容器３の入口３ａの縁に載置するだけでもよい。
【００２３】
この状態で、１０〜２０分程度放置すると、試料１７が毛管現象により、試料添加用部材７、標識保持部材９、クロマト用膜担体１１を順次移動する。試料１７が、標識保持部材９を通過する際に、標識保持部材９に保持されている標識物質（第１、第２及び対照用標識物質）が展開溶媒に溶出する。試料中にＦｌｕＡウィルス又はＦｌｕＢウィルスが含まれていると、上述した作用により、第１判定部１１Ａ又は第２判定部１１Ｂには青色のライン１９ａが現れる。また、ウィルスの有無に関わらず、対照部１１Ｃに赤色のライン１９ｂが現れる（図４は、検体中にＦｌｕＡウィルスが含まれていた場合を示している。）。
【００２４】
試料は、最終的に吸収部材１３によって吸収されるので、試験具１が試験容器３から突出していると、検査者が吸収部材１３に触れる可能性があるが、本実施形態では、覆い部材４によって、吸収部材１３は覆われているので、検査者が吸収部材１３に触れることはない。また、覆い部材４の側壁は、通気孔１５を有するので、吸収部材１３からの展開溶媒の蒸散はほとんど抑制されず、展開溶媒の試験具中の移動もほとんど抑制されない。
【００２５】
ここまで、特定の実施形態を例にとって説明してきたが、本発明は、この実施形態に限定されるものではなく、種々の変形が可能である。
【００２６】
被検出物質は抗原抗体反応を生じる物質であれば特に限定されず、細菌、原生生物や真菌などの細胞、ウィルス、タンパク質、多糖類などが挙げられる。例えば、前記インフルエンザウイルスのほか、パラインフルエンザウイルス、ＲＳウイルス、マイコプラズマニューモニエ、ロタウイルス、カルシウイルス、コロナウイルス、アデノウイルス、エンテロウイルス、ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウィルス、肝炎ウィルス、重症急性呼吸器症候群の病原ウィルス、大腸菌、スタフィロコッカスアウレウス、ストレプトコッカスニューモニエ、ストレプトコッカスピヨゲネス、マラリア原虫、その他、消化器系疾患、中枢神経系疾患、出血熱等の様々な疾患の病原体、これらの代謝産物、癌胎児性抗原やシフラなどの腫瘍マーカー、ホルモンなどが例示される。
【００２７】
基材５は、試料添加用部材７や標識保持部材９などの上記部材を適切に配置するためのものであり、プラスチック以外にも紙やガラスなど種々の材質のものを用いることができる。試料添加用部材７は、レーヨン以外にも、グラスファイバー又はセルロースファイバーなどの種々の素材で形成することができる。標識保持部材９は、グラスファイバー以外にも、セルロースファイバーなどの種々の素材で形成することができる。クロマト用膜担体１１は、ニトロセルロース以外にも、ナイロン（例えば、カルボキシル基やアルキル基を置換基として有してもよいアミノ基が導入された修飾ナイロン）、ポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）、セルロースアセテートなどの種々の素材で形成することができる。吸収部材１３は、セルロース以外にも、グラスファイバーなどの種々の素材で形成することができる。試料添加用部材７、標識保持部材９、クロマト用膜担体１１及び吸収部材１３には、不織布又は多孔体以外にも、毛管現象により試料を展開可能な種々の構造のものを用いることができる。
【００２８】
クロマト用膜担体１１は、被検出物質の種類に応じて判定部を１つだけ備えてもよく、２つ以上備えてもよい。また、クロマト用膜担体１１は、対照部を備えなくてもよい。また、判定部・対照部は、ライン状でなくてもよく、例えば円状、方形状などに形成してもよい。標識保持部材９は、標識物質を１種だけ保持してもよく、２種以上保持してもよい。また、標識保持部材９は、対照用標識物質を保持しなくてもよい。標識物質は、青や赤以外のラテックス粒子や、金などの金属コロイド、色素分子などで標識されてもよい。標識物質が２種以上ある場合、各標識物質は、互いに異なる色に標識されても、同じ色に標識されてもよい。さらに標識物質及び対照用標識物質は、互いに異なる色に標識されても、同じ色に標識されてもよい。
【００２９】
上記実施形態では、第１判定部１１Ａ、第２判定部１１Ｂ及び対照部１１Ｃの種別表示をクロマト用膜担体１１に印刷したが、これらの種別表示は、印刷以外の方法で付してもよいし、付さなくてもよい。また、試験具１を試験容器３に挿入したときに第１判定部１１Ａ、第２判定部１１Ｂ及び対照部１１Ｃの位置に対応する試験容器３上の位置に、上記種別表示を付してもよい。また、種別表示は、「Ａ」、「Ｂ」、「！」以外であってもよい。
【００３０】
固定化用物質及び標識物質には、種々の抗体又は抗原を用いることができる。すなわち、被検出物質が抗原である場合、固定化用物質及び標識物質は、この抗原と抗原抗体反応を生じる抗体を用い、被検出物質が抗体である場合、固定化用物質及び標識物質は、この抗体と抗原抗体反応を生じる抗原又は被検出物質である抗体と抗原抗体反応を生じる抗体を用いることができる。
【００３１】
対照部の固定化用物質がアビジンであり、対照用標識物質がビオチンであってもよい。さらに、対照部の固定化用物質と対照用標識物質は、ビオチンとアビジンの組み合わせ以外であってもよい。例えば、抗原抗体反応により結合する組み合わせであってもよい。例えば、対照用標識物質に抗原を用い、対照部の固定化用物質にこの抗原と抗原抗体反応を生じる抗体を用いる。この逆であってもよい。対照用標識物質には、被検出物質や判定部の固定化用物質と抗原抗体反応しないものを用いる。
【００３２】
試験容器３は、円柱状に限られず、多角柱状などであってもよい。覆い部材は、一端が閉じている構造であってもよいし、両端が開いている構造であってもよい。
【００３３】
覆い部材４の通気孔１５は、複数の貫通孔からなってもよく、１つの貫通孔からなってもよい。各貫通孔の形状は、正方形に限られず、縦長、横長、円、楕円などであってもよい。複数の貫通孔は、任意の方法で配置することができる。
【００３４】
また、通気孔１５は、図４（ａ）に示すような、縦縞状（縦長の貫通孔を試験容器３の外周に沿って複数個並べて配置した状態）、図４（ｂ）に示すような、横縞状（横長の貫通孔を試験容器３の長軸方向に沿って複数個並べて配置した状態）であってもよい。通気孔１５は、図４（ｃ）に示すような、切り欠き状であってもよい。
【００３５】
２．第２実施形態
図５は、本発明の第２実施形態のイムノクロマトグラフィー用キットを示す。この実施形態では、覆い部材４は、その端部に、貫通孔を有するキャップ部２１を備える。貫通孔は、試験具１を通すためのものである。キャップ部２１は、ゴムなどで弾性体で作製することができる。キャップ部２１は、試験容器３内に挿入され、かつ覆い部材４が前記試験容器３に固定されるのを可能にする突出部２１ａを有する。突出部２１ａの外径は、試験容器３の内径と実質的に等しい大きさになっている。また、キャップ部２１は、突出部２１ａが試験容器３内に挿入されたときに試験容器３の入口３ａの縁に当接する当接部２１ｂを備える。試験具１は、覆い部材４に固定されている。このため、覆い部材４の側面を握って試験具１を取り扱うことができ、試験具１に直接触れずに、試験具１を試験容器３内に挿入することができる。通気孔１５は、図４（ａ）〜（ｃ）に示すような、縦縞上、横縞状又は切り欠き状であってもよい。また、覆い部材４は、側壁に通気孔を有さず、上端に開口を有するのみであってもよい。
【００３６】
図６に、このキットの使用状態を示す。当接部２１ｂが試験容器３の入口３ａの縁に当接するまで突出部２１ａを試験容器３内に挿入した状態を示している。突出部２１ａの側面と当接部２１ｂの両方が試験容器３に接触することによって、キャップ部２１が安定して試験容器３に固定されている。
【００３７】
３．第３実施形態
図７は、本発明の第３実施形態のイムノクロマトグラフィー用キットを示す。この実施形態では、試験容器３は、試験具１を試験容器３に挿入したときに吸収部材１３が試験容器３内部に配置される長さである。また、試験容器３は、試験具１を試験容器３に挿入したときの吸収部材１３の位置に対応した位置の側壁に通気孔１５を有する。通気孔１５は、切り欠き状である。通気孔１５は、切り欠き状ではなく、一つ又は複数の貫通孔であってもよい。
【００３８】
図８にこのキットの使用状態を示す。試験容器３は、吸収部材１３の位置に対応した位置の側壁に通気孔１５を有していることが分かる。
【００３９】
（試験具１の種々の実施形態）
最後に、試験具１の種々の実施形態を示す。試験具１は、図２に示したもの以外に、図９（ａ）〜（ｃ）に示すものなどであってもよい。図９（ａ）の試験具では、試料添加用部材７が、標識保持部材９を覆ってクロマト用膜担体１１に接触するように構成されている。図９（ｂ）の試験具では、標識保持部材９が、クロマト用膜担体１１と間隔を介して配置され、試料添加用部材７が、標識保持部材９を覆ってクロマト用膜担体１１に接触するように構成されている。図９（ｃ）の試験具では、標識保持部材９が、クロマト用膜担体１１と間隔を介して配置され、展開用部材２３が、標識保持部材９及びクロマト用膜担体１１と接触するように配置されている。展開用部材２３は、試料添加用部材７と同様にレーヨン、グラスファイバー又はセルロースファイバーなどの種々の素材の不織布で構成することができる。図９（ｂ），（ｃ）の構成では、標識保持部材９とクロマト用膜担体１１の間に試料の展開速度が速い部材が挟まれているので、標識保持部材９内の標識物質の溶出が速くなり、迅速な測定が可能になる。
【００４０】
以上の実施形態で示した種々の特徴は、互いに組み合わせることができる。１つの実施形態中に複数の特徴が含まれている場合、そのうちの１又は複数個の特徴を適宜抜き出して、単独で又は組み合わせて、本発明のキットに採用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】本発明の第１実施形態のイムノクロマトグラフィー用キットの構成を示す。
【図２】図１のキットの試験具の（ａ）側面図、（ｂ）正面図である。
【図３】図１のキットの使用状態を示す。
【図４】（ａ）〜（ｃ）は、図１のキットの覆い部材の種々の実施形態を示す。
【図５】本発明の第２実施形態のイムノクロマトグラフィー用キットの構成を示す。
【図６】図５のキットの使用状態を示す。
【図７】本発明の第３実施形態のイムノクロマトグラフィー用キットの構成を示す。
【図８】図７のキットの使用状態を示す。
【図９】（ａ）〜（ｃ）は、第１〜３実施形態のキットの試験具の種々の実施形態を示す。
【符号の説明】
【００４２】
１：イムノクロマトグラフィー用試験具  ３：試験容器  ３ａ：試験容器の入口  ４：覆い部材  ５：基材  ７：試料添加用部材  ９：標識保持部材  １１：クロマト用膜担体  １３：吸収部材  １５：通気孔  １７：試料  １９ａ：青色ライン  １９ｂ：赤色ライン  ２１：キャップ部  ２１ａ：突出部  ２１ｂ：当接部  ２３：展開用部材
【図１】
0004632915.tif 000002
【図２】
0004632915.tif 000003
【図３】
0004632915.tif 000004
【図４】
0004632915.tif 000005
【図５】
0004632915.tif 000006
【図６】
0004632915.tif 000007
【図７】
0004632915.tif 000008
【図８】
0004632915.tif 000009
【図９】
0004632915.tif 000010