(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ムイラプアマ、及び、（ｂ）ジコッピを含有することを特
徴とする組成物。
【請求項２】
ストレス性易感染状態改善剤である請求項１記載の組成物。
【請求項３】
細菌感染症の予防または治療剤である請求項１記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ストレスを起因とした免疫抑制が原因で引き起こされる感染症の主要因である各種ウイルスに対する易感染性の予防または改善に有効な薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、複雑な社会構造のもと、その中で暮らす現代人は多くのストレスに曝されている。人間は、ストレスを受けると血圧の上昇、体温の上昇、血糖値の上昇等の反応が起こる。これは、ストレスによるホメオスタシス（生体の恒常性）の異常を回復するため生体の反応である（ストレス反応）。このストレス反応はグルココルチコイド等のストレスホルモンにより調整されている。
【０００３】
ストレスを長期間受けると血中のグルココルチコイド濃度が高い状態が続く。このような状況下では生体の恒常性維持に弊害が生じる。
【０００４】
特に免疫系においてその影響は大きい。ストレスが原因の血中コルチココイド濃度上昇により、免疫担当細胞の抑制が生じる。中でも細胞性免疫機能の抑制が著しい。この細胞性免疫機能は感冒やインフルエンザ等の感染症の原因であるウイルス感染に対する抵抗性に重要な役割を担うことで知られている。現在、各種ウイルスに対して直接殺滅効果を示す容易に入手可能な薬剤は知られていない。したがって、生体防御機能の改善、特にウイルス排除に重要な役割を担う細胞性免疫の賦活が唯一の有効な治療・予防法であると言える。
【０００５】
ムイラプアマがストレス状態で体内コルチゾール濃度を調節するという技術が開示されている（特許文献1）。
【特許文献１】特開２００３−４０７８９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ストレスを受けることによる免疫担当細胞の抑制、特に細胞免疫機能の抑制を防止、改善する組成物を提供することを目的とする。すなわち、本発明はストレス負荷時の生体防御機能の改善、特にウィルス排除に重要な細胞性免疫を賦活する組成物を提供することを目的とする。  
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究した結果、ストレス負荷時に上昇する血中グルココルチコイド濃度を適正に保つ作用を有するムイラプアマと、グルココルチコイド存在下で脾臓細胞からのインターフェロンγ（以下「INFγ」と略す）産生促進作用を有する生薬群、具体的にはコウジツシキ、ジコッピ、ホオウ、シオン、ギョクベイジュ、ケイサンリョウ、テンナンショウおよびヨウシソウから選ばれる１種又は２種以上を含有することを特徴とする組成物が、ストレス性易感染状態を改善する作用を有することを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
つまり本発明は、ムイラプアマとＩＮＦγ産生促進作用を有する生薬と組み合わせることで、ストレス性易感染状態を著しく改善するものである。上記特許文献1では、ムイラプアマを有効成分とする感冒やインフルエンザ治療剤が開示されているが、本発明はさらにＩＮＦγ産生促進作用を有する生薬を加えて著しく優れた効果を有するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、コルチコステロン過剰分泌抑制あるいは免疫抑制状態における免疫賦活という２つの機序を介して、ストレスにより過剰分泌されるコルチコステロンによる免疫抑制を原因とした感染症の原因となるウイルスに対する易感染性疾患を予防、治療する事が可能となった。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明で用いるムイラプアマは、ブラジル・アマゾン川流域に生育するボロボロノキ科(Olacaceae)植物のPtychopetalum olacoides、Ptychopetalum uncinatumまたはLiriosma ovataの根を基原とする薬用植物で、古来、催淫、強壮、強精薬として、または生殖器系、循環器系に対する作用を期待して経験的に使用され、民間で伝承されてきた。特に、ムイラプアマ酒やその煎液は主に催淫、強壮、強精作用を期待して利用されてきた他、中枢神経系への作用として、麻痺や運動機能失調の改善、消化器への作用として、消化不良、食欲不振、胃弱、下痢、赤痢、十二指腸鉤虫症などの改善効果などが文献などに記載されている。
【００１１】
本発明で用いるジコッピは、ナス科(Solanaceae)植物のクコ Lycium chinense Millerを基原とする薬用植物の根皮を乾燥したもので、解熱、強壮薬として利用されてきた他、血圧降下作用が知られている。
【００１２】
本発明で用いるコウジツシキは、キク科(Compositae)植物のコウジツキHelianthus annuus L.を基原とする薬用植物の種子乾燥したもので、滋養強壮、止瀉薬として民間で用いられてきた。
【００１３】
本発明で用いるホオウは、ガマ科(Typhaceae)植物のヒメガマTypha angustifolia L., ガマT. latifolia L., コガマT. orientalis Presl., その他T. davidiana Hand.-Mazz., T. minima Funk. を基原とする薬用植物の成熟した花粉を乾燥したもので、含有されるフラボノイドによる利尿作用、血管収縮作用による止血効果が期待され利用されてきた。
【００１４】
本発明で用いるシオンは、キク科(Compositae)のシオンAster tataricus L. f. を基原とする薬用植物の根および根茎を良く洗って乾燥したもので、鎮咳、去痰、利尿薬として利用されてきた。
【００１５】
本発明で用いるギョクベイジュは、イネ科(Gramineae)のトウモロコシZea mays L. を基原とする薬用植物の新鮮花の花柱と柱頭を乾燥したもので、利尿、血圧降下、胆汁分泌促進作用が報告されている。
【００１６】
本発明で用いるケイサンリョウは、ミクリ科(Sparganiaceae)のミクリSparganium erectum L. subsp. Stoloniferum Hara、エゾミクリS. simplex Huds.およびヒメミクリS. stenophyllum Maxim.を基原とする薬用植物の塊茎を通常外皮を剥いで乾燥したもので、積聚，経閉不通，産後の悪阻腹痛，乳汁不通などに用いられてきた。
【００１７】
本発明で用いるテンナンショウは、サトイモ科(Araceae)のArisaema consanguineum Shott, A. amurense Maxim., マズルテンナンショウA. heterophyllum Blume, A. ambignum Engler, コウライテンナンショウA. japonicum Blume var. atropureum (Engler) Kitamura, チョウセンテンナンショウA. peninsulae Nakai などArisaema属植物の塊茎をそのまま、また輪切りにして乾燥したもので、鎮痙、去痰、除湿薬として用いられている。また民間では粉末を創傷に外用して鎮痛、消腫の目的で用いられてきた。
【００１８】
本発明で用いるヨウシソウは、キク科(Compositae)植物のセイヨウノコギリソウAchillea millefolium L.を基原とする薬用植物から作られた生薬で、止血、抗炎症、苦味健胃、血圧降下およびわずかな退熱作用が知られている。
【００１９】
ムイラプアマをはじめとする本発明で用いる生薬は、生薬末の他、エキスも使用することができる。ここでエキスとは、生薬抽出物、濃縮エキス、乾燥エキスなどいずれの形態のものも使用できる。エキスは抽出溶媒として水、アルコール（メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールなど）、酢酸エチル、アセトン、それらの混液などを用いて通常の方法で製造することができる。
本発明の組成物中におけるムイラプアマの有効投与量は、年齢、性別などを考慮して適宜増減できるが、通常、原生薬換算量として成人で１日10mg〜5000mg、好ましくは50mg〜1500mgである。
【００２０】
また、ＩＮＦγ産生促進作用を有する生薬群の有効投与量についても、年齢、性別などを考慮して適宜増減できるが、通常、原生薬換算量として成人で、ジコッピの場合は１日  1mg〜10000mg、好ましくは、5mg〜2000mgである。コウジツシキの場合は１日  10mg〜50000mg、好ましくは、50mg〜10000mgである。ホオウの場合は、１日  100mg〜100000mg、好ましくは、500mg〜10000mgである。シオンの場合は１日  100mg〜100000mg、好ましくは、500mg〜10000mgである。ギョクベイジュの場合は１日  10mg〜50000mg、好ましくは、50mg〜10000mgである。ケイサンリョウの場合は１日  10mg〜50000mg、好ましくは、50mg〜10000mgである。テンナンショウの場合は１日  100mg〜100000mg、好ましくは、500mg〜10000mgである。ヨウシソウの場合は１日  10mg〜50000mg、好ましくは、50mg〜10000mgである。
【００２１】
本発明は、発明の効果を損なわない質的および量的範囲で、ビタミン、キサンチン誘導体、生薬、天然物、賦形剤、ｐＨ調製剤、清涼化剤、懸濁化剤、消泡剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤、香料などを混合することができ、常法により液剤、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、ドライシロップ剤、チュアブル錠、経粘膜剤などの経口または非経口製剤とすることができる。
【００２２】
本発明の組成物は、ストレス時に低下する免疫力をもとの状態に戻し、疾患の予防、治療効果を有する。特に、ウィルスや細菌による感染症の予防、治療に有効であり、普通感冒およびインフルエンザの予防、治療に特に有効である。
【００２３】
以下に、試験例をあげ、本発明をさらに詳細に説明する。
（試験例１）
マウスに対する拘束ストレス負荷実験により、血中コルチコステロン濃度が有意に上昇する。従って、試験成分を含む試料を投与したマウスの血中コルチコステロン濃度を測定することで、拘束ストレスに対して改善効果を有する成分の評価が可能である。今回、ストレス負荷時におけるムイラプアマの血中コルチコステロン濃度上昇抑制効果について確認した。
【００２４】
試験動物として8週齢の雄C3B6F1マウスを用いた。マウスの活動時間である夜間14時間(18時30分~翌8時30分)にマウス用拘束ケージを用いてストレス負荷を行なった。ストレス負荷期間は絶食絶水とした。
【００２５】
試験試料として、0.2％Carboxy methyl cellulose(CMC)溶液にムイラプアマエキスを4000mg/10mlの割合で加えて均一に攪拌し調整した。対照試料として0.2%CMC溶液を使用した。ストレス負荷7日前より連日7日間毎日一回を0.25ml/headの量になるよう経口投与用シリンジで経口投与した。血中コルチコステロン濃度測定のため、ストレス負荷直前、負荷開始後2, 6, 14時間に麻酔下で採血を行なった。また、ストレス負荷の無い状態での血中コルチコステロンの経時的変化も同様に測定した。
【００２６】
結果を図１に示した。ストレス負荷後14時間では対照試料投与群の血中コルチコステロン濃度はストレスを負荷していない群に比較して有意に上昇している。一方、試験試料1投与群においては、対照試料１投与群に比較して血中コルチコステロン濃度上昇を有意に抑制した。
（試験例２）
ストレスによる細胞免疫抑制状態に対する賦活効果を有する生薬を評価するため、マウスの脾臓細胞を用いてコルチコステロン存在下での免疫細胞賦活効果を測定した。
試験動物として7週齢の雄C3B6F1マウスを用いた。マウス脾臓を麻酔下にて摘出し、培養液にて脾臓リンパ球懸濁液を作製し、細胞濃度を3×106個/mlに調整した。
試験試料として、コウジツシキ、ジコッピ、ホオウ、シオン、ギョクベイジュ、ケイサンリョウ、テンナンショウおよびヨウシソウについて、それぞれ50%エタノール抽出液をDMSOで100mg/mLに希釈し、さらに細胞培養液にて5mg/mLとした。対照試料として、試験試料で用いた溶媒のDMSOを培養液にて２０倍希釈したものを準備した。
【００２７】
試験試料をそれぞれ100ng/mlとなるように培養液に加え1時間インキュベーターにて培養後、ストレス負荷を再現するためコルチコステロンおよび細胞刺激のためConacanavalin(ConA)をそれぞれ50nM、5mg/mlとなるように加えて更に20時間培養後、上清を採取しELAISAキット（Pharmingen,CA,USA）にてIFN-γ濃度を測定した。対照試料についても同様の実験を行なった。
【００２８】
結果を図２に示した。各生薬を添加した試験試料は対照に比較して上清中のIFN-γ濃度を著しく上昇させた。
【００２９】
（参考例）
リステリア菌は通性細胞内寄生性細菌に分類され、感染治癒には細胞性免疫の誘導が必須である。そのため、ウイルス感染においても重要な役割を担う細胞性免疫の活性程度を検討するにあたって、リステリア菌の感染程度指標に用いる事が可能である。また、リステリア菌はウイルスと比較しても取り扱いが容易であるため、操作の簡便化にも有効である。そこで今回、リステリア菌を用いて、ストレス負荷時の血中コルチコステロン濃度上昇と免疫抑制の関連を確認するために、以下の実験を行った。
【００３０】
マウスの活動時間である夜間14時間(18時30分~翌8時30分)にマウス用拘束ケージを用いてストレス負荷を3日間連続で行なった。1日目のストレス負荷終了後直ちにリステリア菌を腹腔内接種し、感染後３日目の肝臓におけるリステリア菌感染数を測定した。ストレス負荷期間は絶食絶水とした。非ストレス群も同様に試験を行なった。
【００３１】
コルチコステロイド受容体アンタゴニストであるRU486を25mg/10mlの濃度になるようにマクロゴール400に懸濁し、3日間の連続で行なうストレス負荷直前に50ml/headを皮下接種した群も同様に試験を行なった。
【００３２】
図３に参考例の結果を示した。統計処理は、比較対象の平均値についてStudent t-testにより検定し、p＜0.05を有意とした。
【００３３】
ストレス負荷群のリステリア菌感染数は非ストレス群と比較して有意に増加した。一方、RU486接種群のリステリア菌数はストレス負荷群に比較して有意に減少していた。これにより、ストレス負荷による血中コルチコステロン濃度上昇による免疫抑制と密接に関連することを確認した。この結果から、ストレス負荷による細胞性免疫抑制状態での易感染性に対して改善効果を有する薬物の評価が可能である。
【００３４】
（試験例３）
ストレス負荷時の細胞免疫抑制状態での易感染性に対する改善効果を評価した。
試験試料として、0.2％CMC溶液にムイラプアマエキスまたはジコッピをそれぞれ20, 1000mg/10mlの割合で加えて攪拌し均一にした。また、0.2％CMC溶液にムイラプアマエキスおよびジコッピをそれぞれ20, 1000mg/10mlの割合で加えて攪拌し均一にした。
対照試料として、生薬懸濁に用いた0.2％CMC溶液を調整した。
試験動物として7週齢の雄C3B6F1マウスを用いた。ストレス負荷5日前より連日7日間毎日一回上記試料をそれぞれ0.25ml/headの用量で経口投与用シリンジにて経口投与した。
【００３５】
試験試料をそれぞれ投与5日目から3日間マウスの活動時間である夜間14時間(18時30分~翌8時30分)にマウス用拘束ケージを用いてストレス負荷を行なった。1日目のストレス負荷終了後直ちにリステリア菌(5.6x105CFU/head)を腹腔内接種し、感染後３日目の肝臓におけるリステリア菌感染数を測定した。ストレス負荷期間は絶食絶水とした。対照試料投与群も同様に試験を行なった。
【００３６】
結果を図４に示した。統計処理は、比較対象の平均値についてStudent t-testにより検定し、p＜0.05を有意とした。
対照試料投与群に比較して、ムイラプアマ、ジコッピ単独投与群のリステリア菌感染数に変化は見られなかった。一方、ムイラプアマとジコッピの併用群では対照試料投与群に比較して有意な感染菌数の減少を示した。
【００３７】
従って、ストレス負荷時に上昇する血中グルココルチコイド濃度を適正に保つ作用を有するムイラプアマと、グルココルチコイド存在下で脾臓細胞からのインターフェロンγ（以下「INFγ」と略す）産生促進作用を有するジコッピを併用した場合に効果を有することが見出された。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】ストレス負荷による血中コルチコステロン濃度の経時的変化を示した図であり、縦軸に血中コルチコステロン濃度、横軸にストレス負荷開始からの時間を示した。＊は非ストレス群に対するストレス群の有意差を示す。†はストレス群に対するムイラプアマ投与群の有意差を示す。
【図２】コルチコステロン(50nM)存在下でのConA刺激による脾臓リンパ球からの対照試料のIFN-γ産生を100％として、試験試料を加えた時のそれぞれのIFN-γ産生量を％表示した図である。
【図３】リステリア菌感染3日後の肝臓内感染菌数を示した図である。＊は非ストレス群に対するストレス群の有意差を示す。＊＊はストレス群に対するRU486接種群の有意差を示す。
【図４】試験試料投与群および対照試料投与群のリステリア菌感染3日後の肝臓内感染菌数を示した図である。＊はストレスに対するムイラプアマ、ジコッピ併用群の有意差を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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