(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
生マイタケ、乾燥マイタケ若しくは/及び乾燥マイタケ粉末を水乃至熱水で抽出して得られる抽出液に、アルコールをアルコール濃度が３０〜６０容量％になるように加え、放置後液面若しくは液中に浮遊又は容器の壁面に付着する物質を取除いた画分からなる、リステリア菌を対象とする感染防御・治療剤。
【請求項２】
生マイタケ、乾燥マイタケ若しくは/及び乾燥マイタケ粉末を水乃至熱水で抽出して得られる抽出液に、アルコールをアルコール濃度が３０〜６０容量％になるように加え、放置後液面若しくは液中に浮遊又は容器の壁面に付着する物質を取り除いた後、更にアルコールをアルコール濃度７０容量％以上になるように加えて、沈殿物として生じる高分子多糖体画分からなる、リステリア菌を対象とする感染防御・治療剤。
【請求項３】
生マイタケ、乾燥マイタケ若しくは/及び乾燥マイタケ粉末を水乃至熱水で抽出して得られる抽出液に、アルコールをアルコール濃度が３０〜６０容量％になるように加え、放置後液面若しくは液中に浮遊又は容器の壁面に付着する物質を取り除いた後、更にアルコールをアルコール濃度７０容量％以上になるように加えて、沈殿物として生じる高分子多糖体画分を採取し、ついで該画分をＤＥＡＥ−Cellulofine若しくはＤＥＡＥ−Sepharoseで処理して得られる精製高分子多糖体画分からなる、リステリア菌を対象とする感染防御・治療剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の感染防御・治療剤と抗生物質とを含有する感染防御・治療剤。
【請求項５】
抗生物質がペプチド系抗生物質であることを特徴とする、請求項４記載の感染防御・治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は生体にとって有害な病原微生物に対する感染防御・治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
人類は今世紀半ばまで病原微生物による感染症に悩まされてきた。しかしサルファ剤や抗生物質等化学療法剤が開発され、病原微生物、特に細菌類による感染症は一応征服されたかのごとく見えた。しかし抗生物質、化学療法剤に対する耐性菌の出現、それに加え自然環境の破壊、都市の過密、航空機などの発達等生活環境の変化により、新興・再興感染症の発生が見られるようになり再び感染症に対する対策が大きな課題となってきている。
【０００３】
病原微生物は、強力で新しい作用機序の抗生物質が出現してもやがて耐性を獲得してしまう。例えばMRSA（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）出現後すでにVRE（バンコマイシン耐性腸球菌）など出現し、老人や癌患者などの日和見感染、院内感染等深刻な問題を投げかけている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、生体防御力を高め、感染症に対する防御あるいは治療に有効な感染防御・治療剤の開発を課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意努力し、日常食品として摂取されている物、すなわち生体適合性に優れた材料の中に感染防御作用のあるものはないか広範囲に検索した結果、担子菌、ヒダナシタケ目、タコウキン科のキノコであるマイタケに、病原微生物に対する優れた感染防御作用があることを見出し本発明を完成した。
【０００６】
即ち本発明は、
（1）マイタケ抽出物若しくは/及び乾燥マイタケ粉末を含有することを特徴とする感染防御・治療剤、
（2）マイタケ抽出物が、生マイタケ、乾燥マイタケ若しくは/及び乾燥マイタケ粉末を水乃至熱水で抽出したものであることを特徴とする（1）記載の感染防御・治療剤、
（3）マイタケ抽出物が、生マイタケ、乾燥マイタケ若しくは/及び乾燥マイタケ粉末を水乃至熱水で抽出して得られる抽出液にアルコールを加え、放置後液面若しくは液中に浮遊又は容器の壁面に付着する物質を取除いた画分であることを特徴とする（1）記載の感染防御・治療剤、
【０００７】
（4）マイタケ抽出物が、生マイタケ、乾燥マイタケ若しくは/及び乾燥マイタケ粉末を水乃至熱水で抽出して得られる抽出液にアルコールを加え、放置後液面若しくは液中に浮遊又は容器の壁面に付着する物質を取り除いた後、更にアルコールを加えて沈殿物として生じる高分子多糖体画分であることを特徴とする（1）記載の感染防御・治療剤、
（5）マイタケ抽出物が、生マイタケ、乾燥マイタケ若しくは/及び乾燥マイタケ粉末を水乃至熱水で抽出して得られる抽出液にアルコールを加え、放置後液面若しくは液中に浮遊又は容器の壁面に付着する物質を取り除いた後、更にアルコールを加えて沈殿物として生じる高分子多糖体画分を採取し、ついで該画分をＤＥＡＥ−Cellulofine若しくはＤＥＡＥ−Sepharoseで処理して得られる精製高分子多糖体画分であることを特徴とする（1）記載の感染防御・治療剤、
（6）グラム陽性菌を対象とすることを特徴とする（1）乃至（5）記載の感染防御・治療剤、
【０００８】
（7）グラム陽性菌がリステリア菌であることを特徴とする請求項６記載の感染防御・治療剤、
（8）（1）乃至（5）記載のいずれかの感染防御・治療剤と抗生物質とを含有することを特徴とする感染防御・治療剤、
（9）抗生物質がペプチド系抗生物質であることを特徴とするグラム陽性菌対象の（8）記載の感染防御・治療剤
に関する。
【０００９】
以下本発明について詳述する。
本発明における感染防御・治療とは各種生体にとって有害な微生物の感染（病原微生物の生体内侵入）の予防、感染後の発症の阻止（増殖阻止）並びに発症（病的状態）の治療を意味する。
本発明における生体にとって有害な病原微生物としては、リステリア菌、ブドウ球菌、連鎖球菌、肺炎球菌、腸球菌、クロストリジウム属菌等のグラム陽性菌の他、結核菌、サルモネラ属菌等細胞内寄生性細菌を含む。
又本発明に言う生体とは人間以外に家畜、ペット動物等も包含する。
【００１０】
本発明における抗生物質としては、バンコマイシン、タゴシット、バラマイシン等ペプチド系の他に、ペニシリン系・セフェム系・前記以外のβラクタム系・アミノグルコシド系・マクロライド系・テトラサイクリン系・クロラムフェニコール系・リンコマイシン系・ホスホマイシン系抗生物質、キノロン系・ニューキノロン系薬剤等が含まれる。
【００１１】
本発明において、マイタケは（Grifola  frondosa)、白マイタケ（Grifola  albicans）、チョレイマイタケ（Grifola  umbellata）、トンビマイタケ（Grifola  gigantea)等いづれも用いることが出来る。又これらマイタケ類の子実体、菌糸体いずれも用いることが出来るが、最近ではマイタケの子実体の人工栽培が可能となり、安定した原料確保の面から該マイタケの子実体を使用するのが好ましい。
【００１２】
生マイタケは収穫後、出来るだけ新鮮なものを使用するのが好ましいが、食に供する状態であれば用いることができる。使用部位は特に特定される事なく茎部以上すべて使用しうる。乾燥マイタケとしては天日、熱風乾燥或いは凍結乾燥したもの等いずれも用いることが出来る。乾燥マイタケ粉末は粒子の粗いものから微細なものまで使用することが出来る。
【００１３】
抽出の方法は常温〜135℃で15分〜数時間行う。短時間で行うには圧力下、100℃以上、例えば圧力を用いて1〜2気圧下120℃前後で30分〜1時間前後抽出を行う。
水としては蒸留水、イオン交換水、水道水、天然水いずれも使用しうる。乾燥マイタケ若しくは乾燥マイタケ粉1重量に対して水を4倍容量以上適宜使用する。生マイタケを使用する場合は1重量に対して2倍容量以上適宜使用する。
以上の様に水乃至熱水抽出液はそのまま、更に濃縮して濃縮エキス若しくは濃縮エキスを乾燥して使用することが出来る。
【００１４】
水乃至熱水抽出液はアルコール沈殿法により精製することが可能である。例えばアルコールを抽出液に加え沈殿する物質を採取する。沈殿物はマイタケ中に含まれる高分子多糖体β-グルカンを主体にした画分であり、例えばアルコールを比較的低濃度（20〜70容量％更に好ましくは30〜60容量％）加えた段階で一定時間静置し生ずる液面、液中に浮遊する物質或いは容器の壁に付着する物資を除去し、更にアルコールを70容量％以上になるよう加え、沈殿する物質を採取する様な手段をとることにより精製が可能となる。
【００１５】
以上のように得られた沈殿物は水に可溶で水溶液とし上述の様にアルコール沈殿法を繰り返す事により更に精製することも出来る。
こうして得られた高分子多糖体画分は、次のような性質を有する。
外観：        褐色色調の吸湿性の粉末
溶解性：      水、アルカリ溶液に可溶
呈色反応：    アンスロン反応及びニンヒドリン反応陽性
水溶液の液性：中性〜弱酸性
【００１６】
又高分子多糖体画分は、更にクロマトグラフイー、ゲル濾過等により、精製することも可能である。例えば DEAE-Cellulofine、DEAE-Sepharose等使用することが出来る。
【００１７】
本発明のマイタケ抽出物は、リステリア菌感染マウスに単独、若しくはバンコマイシン（ＶＣＭ）との併用投与を行い、ＶＣＭ単独に比べ該菌に対する殺傷効果の増強が認められたが、これは、マイタケ抽出物が、各種免疫細胞そのものを賦活化させるためと見られ、特に免疫力の低下した高齢者、癌患者、糖尿病患者の感染症予防・治療に有効である。
又、マイタケ抽出物とＶＣＭとの併用では、リステリア菌によって起こる髄膜脳炎、敗血症等リステリア症、ＶＣＭの適応であるＭＲＳＡ（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）による感染症あるいは骨髄移植時の消化管内殺菌にもより有効性が期待できる。
【００１８】
以上の様に本発明のマイタケ由来の感染防御・治療剤は、現在の臨床現場において、要求度の高い感染症の予防や治療に効果があり、例えばカプセル剤、錠剤、散剤、シロップ剤等種々の形態の剤形で、単独で或いは抗生物質との併用で使用することが出来る。
又マイタケ由来の感染防御・治療剤と抗生物質との併用の一形態として、合剤による投与形態もある。例えばカプセル、錠剤、散剤、シロップ剤、液剤とすることが出来、合剤とする抗生物質の性質に合わせ適宜剤形を選択することが出来る。
【００１９】
【発明の実施の形態】
［実施例１］
製造方法
（１）乾燥マイタケ粉末
人工栽培で作った生マイタケ子実体の枝部、傘部を乾燥室の棚に並べ最初は約６０℃から段階的に温度を上げて８０℃でほぼ１日かけて乾燥した。ついで乾燥マイタケを製粉機で粉砕し微粉末を得た。
【００２０】
（２）マイタケ抽出分画
乾燥マイタケ子実体の粉末300ｇをイオン交換水2700mlで加圧下115〜120℃で約1時間処理し、その後濾過して黒褐色液約1600mlを得る。該溶液を減圧下約500ml程度まで濃縮し室温で、エタノール500mlを加え、10℃以下で3〜10時間放置すると液面、液中に浮遊及び容器の壁面に付着する茶褐色の物質が生成した。これら物質を除去し、褐色の溶液を得る。
【００２１】
ｉ    上記褐色の液約400mlを減圧下アルコールを除去し、更に濃縮してBrix値50の濃縮液を得た。該濃縮液を回転円盤式スプレードライ装置を用いて噴霧乾燥して褐色乾燥粉末25gを得た。
ii    上記褐色の溶液約400ｍｌに更にアルコール600ml加え沈殿析出する褐色の物質、高分子多糖体画分20gを得た。
iii   上記iiで得られた高分子多糖体画分0.5ｇをDEAE-Cellulofineで処理して褐色の精製高分子多糖体画分（分子量100万〜120万）0.3ｇを得た。
【００２２】
［実施例２］
感染実験
（１）試験方法
ICR雄性マウス（6週齢）10匹を1群として、上記方法で製造した精製高分子多糖体画分単独投与群、精製高分子多糖体画分とバンコマイシン（VCM）との併用投与群、VCM単独投与群及び対照群（非投与群）の4群による感染投与試験を行った。
精製高分子多糖体画分とVCMの併用群では、精製高分子多糖体画分（10mg/kg）を隔日3回腹腔内投与し、投与開始後10日目にリステリア菌（Listeria  monocytogenes）を感染させ、24時間後にVCM(10mg/kg)を投与した。他の群については、被験物以外は同様方法で行った。
10日間の感染マウスの生存率の変動と、感染開始後3日目のマウス腹腔内及びマクロファージ内でのリステリア菌の生存率、その時採取したマクロファージのIL-1量を測定し、精製高分子多糖体画分単独投与群及びVCM単独投与群と比較した。更に感染開始6日目のマウスから全脾臓細胞とT細胞を調整し、各々のリステリア菌殺傷活性能を調べた。
【００２３】
（２）試験結果
対照群で感染3日目で全マウスが死亡したのに対して、精製高分子多糖体画分単独投与や、精製高分子多糖体画分とVCM併用群では10日後でも半数のマウスに生存が認められた。マウス腹腔内でのリステリア菌の生存率は精製高分子多糖体画分とVCM併用群において最も減少した。更にマクロファージのIL-1の産生能は精製高分子多糖体画分によって対照群に比べ2.8倍に増加した。しかしこの産生能はVCMでは妨害されなかった。全脾臓細胞ではリステリア菌の生存菌数はVCM単独投与群が対照群の46％であったのに対し、精製高分子多糖体画分単独又はVCM併用によって34〜19％まで減少した。一方、高分子多糖体画分単独投与ではＴ細胞はこの精製高分子多糖体画分によって活性化され、対照群の1.3倍程度の殺傷効果を示した。これはT細胞が精製高分子多糖体画分によって活性化され、リステリア菌抗原特異的な傷害作用を獲得した結果と考えられた。なおVCMとの併用によってその効果は2.6倍まで増加した。
以上は精製高分子多糖体画分の試験結果であるが、上記〔実施例1〕（１）i の抽出物、ii  で製造した高分子多糖体画分についても効果の差異はあるものの、同様の効果が認められた。
【００２４】
【発明の効果】
本発明により、生体にとって有害な病原微生物に対する感染防御能を高め、病原微生物の感染を予防し、感染してもその発症を阻止、発症しても治療を容易にすることができる。又耐性を生じやすい抗生物質・化学療法剤の使用を極力減少させ、耐性菌の出現を防止することができる。