(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0004639032.tif 000061
［式中、
Ｒ１は、水素またはＬ−バリニルであり；
Ｒ２は、Ｌ−バリニルであり；
Ｘは、Ｏであり；および
ＢＡＳＥは、ピリミジン塩基である］の３’−置換−β−Ｌヌクレオシド、またはその薬剤として許容される塩。
【請求項２】
Ｒ１が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がＬ−バリニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
下記式：
【化２】
0004639032.tif 000062
［式中、
Ｒ１は、水素またはＬ−バリニルであり；
Ｒ２は、Ｌ−バリニルであり；および
Ｒ３およびＲ４は、独立に、Ｈ、直鎖、分枝鎖もしくは環式アルキル、ジアルキルアミノアルキレン、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、またはＬ−バリニルである］の化合物、またはその薬剤として許容される塩。
【請求項５】
Ｒ１が水素である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１がＬ−バリニルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が水素であり、Ｒ２がＬ−バリニルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ３およびＲ４が水素である、請求項４に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ３が水素であり、Ｒ４がジメチルアミノメチレンである、請求項４に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ３が水素であり、Ｒ４がＣＯ−アルキルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ３が水素であり、Ｒ４がＣＯ−メチルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ３が水素であり、Ｒ４がＬ−バリニルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項１３】
下記式：
【化３】
0004639032.tif 000063
［式中、
Ｒ１は、水素またはＬ−バリニルであり；および
Ｒ２は、Ｌ−バリニルである］の化合物、またはその薬剤として許容される塩。
【請求項１４】
Ｒ１が水素である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１がＬ−バリニルである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１が水素であり、Ｒ２がＬ−バリニルである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１７】
下記式：
【化４】
0004639032.tif 000064
［式中、
Ｒ１は、水素、またはＬ−バリニルであり；および
Ｒ２は、Ｌ−バリニルである］の化合物、またはその薬剤として許容される塩。
【請求項１８】
Ｒ１が水素である、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ１がＬ−バリニルである、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ１が水素であり、Ｒ２がＬ−バリニルである、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２１】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩を、薬剤として許容される担体または希釈剤と共に含む、宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項２２】
請求項４〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩を、薬剤として許容される担体または希釈剤と共に含む、宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項２３】
請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩を、薬剤として許容される担体または希釈剤と共に含む、宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項２４】
請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩を、薬剤として許容される担体または希釈剤と共に含む、宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項２５】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩を、１種以上の他の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬と組合せて含む、宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項２６】
１種以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬がβ−Ｌ−デオキシリボヌクレオシドである、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
β−Ｌ−デオキシリボヌクレオシドが、β−Ｌ−デオキシリボチミジン（β−Ｌ−ｄＴ）、β−Ｌ−デオキシリボシトシン（β−Ｌ−ｄＣ）、およびβ−Ｌ−デオキシリボウリジン（β−Ｌ−ｄＵ）からなる群から選択される、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
β−Ｌ−デオキシリボヌクレオシドがβ−Ｌ−デオキシリボチミジン（β−Ｌ−ｄＴ）である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
化合物が２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの３’−バリニルエステルであり、１種以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬がβ−Ｌ−ｄＴである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
化合物が２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの３’，５’−ジバリニルエステルであり、１種以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬がβ−Ｌ−ｄＴである、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３１】
請求項４〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩を、１種以上の他の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬と組合せて含む、宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項３２】
１種以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬がβ−Ｌ−デオキシリボヌクレオシドである、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
β−Ｌ−デオキシリボヌクレオシドが、β−Ｌ−デオキシリボチミジン（β−Ｌ−ｄＴ）、β−Ｌ−デオキシリボシトシン（β−Ｌ−ｄＣ）、およびβ−Ｌ−デオキシリボウリジン（β−Ｌ−ｄＵ）からなる群から選択される、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
β−Ｌ−デオキシリボヌクレオシドがβ−Ｌ−デオキシリボチミジン（β−Ｌ−ｄＴ）である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
化合物が２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの３’−バリニルエステルであり、１種以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬がβ−Ｌ−ｄＴである、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
化合物が２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの３’，５’−ジバリニルエステルであり、１種以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬がβ−Ｌ−ｄＴである、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３７】
請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩を、１種以上の他の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬と組合せて含む、宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項３８】
１種以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬がβ−Ｌ−デオキシリボヌクレオシドである、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
β−Ｌ−デオキシリボヌクレオシドが、β−Ｌ−デオキシリボチミジン（β−Ｌ−ｄＴ）、β−Ｌ−デオキシリボシトシン（β−Ｌ−ｄＣ）、およびβ−Ｌ−デオキシリボウリジン（β−Ｌ−ｄＵ）からなる群から選択される、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
β−Ｌ−デオキシリボヌクレオシドがβ−Ｌ−デオキシリボチミジン（β−Ｌ−ｄＴ）である、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩を、１種以上の他の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬と組合せて含む、宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項４２】
１種以上の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬がβ−Ｌ−デオキシリボヌクレオシドである、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
β−Ｌ−デオキシリボヌクレオシドが、β−Ｌ−デオキシリボチミジン（β−Ｌ−ｄＴ）、β−Ｌ−デオキシリボシトシン（β−Ｌ−ｄＣ）、およびβ−Ｌ−デオキシリボウリジン（β−Ｌ−ｄＵ）からなる群から選択される、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
β−Ｌ−デオキシリボヌクレオシドがβ−Ｌ−デオキシリボチミジン（β−Ｌ−ｄＴ）である、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬の製造における、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩の使用。
【請求項４６】
宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬の製造における、請求項４〜１２のいずれか一項に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩の使用。
【請求項４７】
宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬の製造における、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩の使用。
【請求項４８】
宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬の製造における、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩の使用。
【請求項４９】
次式の化合物、またはその薬剤として許容される塩。
【化５】
0004639032.tif 000065
【請求項５０】
次式の化合物、またはその薬剤として許容される塩。
【化６】
0004639032.tif 000066
【請求項５１】
次式の化合物またはその薬剤として許容される塩を、β−Ｌ−デオキシリボチミジンと組合せて含む医薬組成物。
【化７】
0004639032.tif 000067
【請求項５２】
次式の化合物またはその薬剤として許容される塩を、β−Ｌ−デオキシリボチミジンと組合せて含む医薬組成物。
【化８】
0004639032.tif 000068
【請求項５３】
宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬の製造における、次式の化合物またはその薬剤として許容される塩の使用。
【化９】
0004639032.tif 000069
【請求項５４】
宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬の製造における、次式の化合物またはその薬剤として許容される塩の使用。
【化１０】
0004639032.tif 000070
【請求項５５】
宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬の製造における、治療量のβ−Ｌ−デオキシリボチミジンと併用または交代で用いる、次式の化合物またはその薬剤として許容される塩の使用。
【化１１】
0004639032.tif 000071
【請求項５６】
宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するための医薬の製造における、治療量のβ−Ｌ−デオキシリボチミジンと併用または交代で用いる、次式の化合物またはその薬剤として許容される塩の使用。
【化１２】
0004639032.tif 000072
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、Ｂ型肝炎ウイルスを治療するための２’−デオキシ−β−Ｌ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグに関する。
【０００２】
この出願は、２０００年６月１５日に出願された米国仮出願第６０／２１２１００号による優先権を主張する。
【０００３】
発明の背景
Ｂ型肝炎ウイルス（「ＨＢＶ」）は、タバコに次ぐ、ヒトのガンの原因の１つである。ＨＢＶがガンを惹起するメカニズムは知られていないが、ＨＢＶが直接的に腫瘍の発生を誘発するか、感染に伴う慢性炎、硬変および細胞再生により、腫瘍の発生を間接的に誘発するということが仮定されている。
【０００４】
Ｂ型肝炎ウイルスは、世界的に流行レベルに達している。宿主が感染に気づかずに２から６カ月の潜伏期を過ぎた後に、ＨＢＶ感染は、急性肝炎および肝損傷をもたらすことがあり、これにより、腹痛、黄疸および一定の酵素の高い血液レベルが生じる。ＨＢＶは、迅速に進行する、往々にして疾患の致命的な形態である劇症肝炎を惹起することがあり、その際、肝臓の大部分が破壊される。患者は一般には、急性ウイルス肝炎から回復する。しかし、患者によっては、高レベルのウイルス抗原が、長期または不定期間にわたり持続し、慢性感染が生じる。慢性感染は、慢性持続性肝炎をもたらすことがある。慢性持続性ＨＢＶに感染している患者は、開発途上国でよく見受けられる。慢性持続性肝炎は、肝臓の疲労、硬変および肝細胞ガン、原発性肝ガンをもたらしうる。西洋の先進工業国では、ＨＢＶ感染のハイリスク群には、ＨＢＶキャリアーまたはその血液サンプルと接触する群が含まれる。ＨＢＶの疫学は実際に、後天性免疫不全症候群の疫学と非常に似ていて、このことが、ＨＢＶ感染がなぜ、ＡＩＤＳまたはＨＩＶ関連感染を伴う患者でよく見受けられるかを説明している。しかし、ＨＢＶは、ＨＩＶよりも伝染性が高い。
【０００５】
遺伝子的改変タンパク質であるα−インターフェロンによる毎日の治療が有望である。ヒト血清由来ワクチンも、ＨＢＶに対して患者を免疫するために開発されている。ワクチンは、遺伝子工学により生産されている。ワクチンが有効であることは判明しているが、慢性キャリアーからのヒト血清の提供が限られているうえに、精製手順が長期にわたり、高くつくので、ワクチンの生産は困難である。さらに、様々な血清から調製されたワクチンの各バッチを、安全性を確認するためにチンパンジーで試験しなければならない。加えて、ワクチンは、既にウイルスに感染している患者の助けとはならない。
【０００６】
ウイルス疾患、特にＨＢＶおよびＨＩＶに対するプリンおよびピリミジンヌクレオシドの作用機序における基本的なステップは、モノ、ジおよびトリホスフェート誘導体をもたらす細胞およびウイルスキナーゼによる、その代謝活性化である。多くのヌクレオシドの生物活性種は、三リン酸塩形であり、これは、ＤＮＡポリメラーゼまたは逆転写酵素を阻害するか、連鎖停止反応をもたらす。
【０００７】
いくつかの合成ヌクレオシドが、ＨＢＶに対して活性を示すと同定されている。Ｌｉｏｔｔａらに付与された米国特許第５５３９１１６号で請求されていて、３ＴＣとして知られているＢＣＨ−１８９（２’，３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン）の（−）−エナンチオマーが現在、Ｂ型肝炎を治療するために臨床実験されている。ＢｉｏＣｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．によって出願されたＥＰＡ０４９４１１９Ａ１号も参照。
【０００８】
Ｌｉｏｔｔａらに付与された米国特許第５８１４６３９号および第５９１４３３１号で請求されているβ−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（「ＦＴＣ」）は、ＨＢＶに対して活性を示す。Ｆｕｒｍａｎらの「Ｔｈｅ  Ａｎｔｉ−Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  Ｖｉｒｕｓ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ，Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓ，ａｎｄ  Ａｎａｂｏｌｉｃ  Ｐｒｏｆｉｌｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ（−）ａｎｄ（＋）Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ｃｉｓ−５−Ｆｌｕｏｒｏ−１−｛２−（Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）−１，３−ｏｘａｔｈｉｏｌａｎｅ−５−ｙｌ｝−Ｃｙｔｏｓｉｎｅ」、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、１９９２年１２月、２６８６〜２６９２ページおよびＣｈｅｎｇらのＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌｕｍｅ  ２６７（２０）、１３９３８〜１３９４２ページ（１９９２年）参照。
【０００９】
米国特許第５５６５４３８号、第５５６７６８８号および第５５８７３６２号（Ｃｈｕら）は、Ｂ型肝炎およびエプスタイン−バーウイルスを治療するために２’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−アラビノフラノリルウリジン（Ｌ−ＦＭＡＵ）を使用することを開示している。
【００１０】
ペンシクロビル（ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ、ＰＣＶ；２−アミノ−１，９−ジヒドロ−９−｛４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル｝−（６Ｈ−プリン−６−オン）は、Ｂ型肝炎に対して活性を示す。米国特許第５０７５４４５号および第５６８４１５３号参照。
【００１１】
ＰＭＥＡまたは｛｛２−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）エトキシ｝メチルホスホン酸｝とも称されるアデフォビル（ａｄｅｆｏｖｉｒ）（９−｛２−（ホスホノメトキシ）エチル｝アデニンも、Ｂ型肝炎に対して活性を示す。例えば、米国特許第５６４１７６３号および第５１４２０５１号参照。
【００１２】
イェール大学およびＴｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｇｅｏｒｇｉａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．は、ＷＯ９２／１８５１７号においてＢ型肝炎ウイルスを処置するためにＬ−ＦＤＤＣ（５−フルオロ−３’−チア−２’，３’−ジデオキシシチジン）を使用することを開示している。
【００１３】
ＨＢＶを治療するために調査されている他の薬剤には、アデノシンアラビノシド（ａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ）、チモシン、アシクロビル、ホスホノホルメート、ジドブジン、（＋）−シアニダノール（ｃｙａｎｉｄａｎｏｌ）、キナクリンおよび２’−フルオロアラビノシル−５−ヨードウラシルが含まれる。
【００１４】
エモリー（Ｅｍｏｒｙ）大学に付与された米国特許第５４４４０６３号および第５６８４０１０号は、Ｂ型肝炎を治療するために鏡像異性体的に純粋なβ−Ｄ−１，３−ジオキソランプリンヌクレオシドを使用することを開示している。
【００１５】
エモリー大学、ＵＡＢ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎおよびＣｅｎｔｒｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  ｄｅ  ｌａ  Ｒｅｃｈｅｒｃｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｑｕｅ（ＣＮＲＳ）により出願されたＷＯ９６／４０１６４号は、Ｂ型肝炎を治療するためのいくつかのβ−Ｌ−２’，３’−ジデオキシヌクレオシドを開示している。
【００１６】
エモリー大学、ＵＡＢ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎおよびＣｅｎｔｒｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  ｄｅ  ｌａ  Ｒｅｃｈｅｒｃｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｑｕｅ（ＣＮＲＳ）により出願されたＷＯ９５／０７２８７号は、ＨＩＶ感染を治療するための２’または３’デオキシおよび２’，３’−ジデオキシ−β−Ｌ−ペントフラノシルヌクレオシドを開示している。
【００１７】
Ｇｅｎｅｎｃｏｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．およびＬｉｐｉｔｅｋ，Ｉｎｃ．により出願されたＷＯ９６／１３５１２号は、抗腫瘍薬および殺ウイルス薬としてのＬ−リボフラノシルヌクレオシドの調製を開示している。
【００１８】
ＷＯ９５／３２９８４号は、免疫抑制剤としてのヌクレオシド一リン酸塩の脂質エステルを開示している。
【００１９】
ＤＥ４２２４７３７号は、シトシンヌクレオシドおよびその薬剤としての使用を開示している。
【００２０】
Ｔｓａｉら（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９４、４８（７）、１４７７〜８１）は、ミトコンドリアＤＮＡの細胞内容物および乳酸産生に対する、抗ＨＩＶ薬である２’−β−Ｄ−Ｆ−２’，３’−ジデオキシヌクレオシド類似体の効果を開示している。
【００２１】
Ｇａｌｖｅｚ（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｆ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ｓｃｉ．１９９４、３５（５）、１１９８〜２０３）は、β−Ｄ−３’−アジド−２’，３’−ジデオキシ−５−フルオロシチジンの分子計算を記載している。
【００２２】
Ｍａｈｍｏｕｄｉａｎ（Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９９１、８（１）、４３〜６）は、β−Ｄ−３’−アジド−２’，３’−ジデオキシ−５−フルオロシチジンなどのＨＩＶ薬の定量的構造活性相関分析を開示している。
【００２３】
米国特許第５７０３０５８号は、ＨＩＶまたはＨＢＶを治療するための（５−カルボキシミドまたは５−フルオロ）−（２’，３’−不飽和または３’−変性）ピリミジンヌクレオシドを開示している。
【００２４】
Ｌｉｎらは、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（３１（２）、３３６〜３４０、１９８８）に、β−Ｄ−ヌクレオシドの様々な３’−アジド類似体の合成および抗ウイルス活性を開示している。
【００２５】
Ｎｏｖｉｒｉｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｌｔｄ．により出願されたＷＯ００／３９９８は、置換された６−ベンジル−４−オキソピリミジンを調製する方法およびＨＩＶを治療するためのこのようなピリミジンの使用を開示している。
【００２６】
Ｎｏｖｉｒｉｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｌｔｄ．はまた初めて、ＷＯ００／０９５３１号において、２’−デオキシ−β−Ｌ−エリスロペントフラノヌクレオシドおよびＨＢＶの治療でのその使用を開示した。ヒトおよび他の宿主動物のＢ型肝炎感染を治療する方法が開示されており、この方法は、β−Ｌ−デオキシリボチミジン（β−Ｌ−ｄＴ）、β−Ｌ−デオキシリボシチジン（β−Ｌ−ｄＣ）、β−Ｌ−デオキシリボウリジン（β−Ｌ−ｄＵ）、β−Ｌ−デオキシリボグアノシン（β−Ｌ−ｄＧ）、β−Ｌ−デオキシリボアデノシン（β−Ｌ−ｄＡ）およびβ−Ｌ−デオキシリボイノシン（β−Ｌ−ｄＩ）を含む、有効量の生体活性な２’−デオキシ−β−Ｌ−エリスロ−ペントフラノヌクレオシド（もしくは、β−Ｌ−ｄＮまたはβ−Ｌ−２’−ｄＮと称される）またはその薬剤として許容される塩またはプロドラッグを単独で投与するか、場合によって薬剤として許容される担体と組み合わせて投与することを含む。活性化合物の５’およびＮ４（シチジン）またはＮ６（アデノシン）アシル化またはアルキル化誘導体、あるいは５’−ホスホリピドまたは５’−エーテルリピドも開示されていた。
【００２７】
抗ウイルス薬の様々なプロドラッグが、試みられている。殊に、Ｂｅａｕｃｈａｍｐに付与された米国特許第４９５７９２４号は、アシクロビルの様々な治療用エステルを開示している。
【００２８】
Ｂ型肝炎ウイルスが、世界的流行レベルに達していて、感染した患者に重大で、往々にして悲劇的な作用を示すという事実を考慮すると、宿主に対して低い毒性を有する、ウイルスに感染したヒトを治療するための新規の効果的な薬剤を提供する高い必要性が残っている。
【００２９】
したがって、本発明の目的は、ＨＢＶに感染したヒト患者または他の宿主を治療するための化合物、組成物および方法を提供することである。
【００３０】
発明の概要
２’−デオキシ−β−Ｌ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグまたはその薬剤として許容される塩または、これらの化合物を含有する薬剤として許容される処方物は、Ｂ型肝炎感染または他の関連する症状、例えば抗ＨＢＶ抗体陽性およびＨＢＶ陽性症状、ＨＢＶにより惹起された慢性肝炎、硬変、急性肝炎、劇症肝炎、慢性持続性肝炎および疲労を予防および治療する際に使用することができる。これらの化合物または処方物は、抗ＨＢＶ抗体またはＨＢＶ抗原陽性であるか、ＨＢＶに曝された個々人での臨床的疾患の進行を予防するか遅延させるために予防的に使用することもできる。
【００３１】
有効量の生物学的に活性な２’−デオキシ−β−Ｌ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグまたはその薬剤として許容される塩を単独で投与するか、他の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬と組み合わせて、またはそれと交代に、場合によって薬剤として許容される担体と共に投与することを含む、ヒトを含む宿主のＢ型肝炎ウイルス感染を治療するための方法も開示する。本明細書中で使用する場合、２’−デオキシという用語は、２’−位に置換基を有さないヌクレオシドのことである。ここで使用する場合、３’−プロドラッグとの用語は、これらに限らないがアシルおよび一実施形態ではＬ−アミノ酸を含む生物学的に脱離可能な成分を３’−位に有する２’−デオキシ−β−Ｌ−ヌクレオシドのことである。
【００３２】
一実施形態では、２’−デオキシ−β−Ｌ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグは、生物学的に脱離可能な成分を３’および／または５’位に含む。好ましい成分は、バリルを含むアミノ酸エステルおよびアセチルを含むアルキルエステルである。したがって、本発明は特に、親である薬剤が、２．２．１５細胞において１５マイクロモル未満、好ましくは１０マイクロモル未満のＥＣ５０を有する、所望のプリンまたはピリミジン塩基を有する２’−β−Ｌ−デオキシヌクレオシドの３’−Ｌ−アミノ酸エステルおよび３’，５’−Ｌ−ジアミノ酸エステル；親である薬剤が、２．２．１５細胞において１０または１５マイクロモル未満のＥＣ５０を有する、所望のプリンまたはピリミジン塩基を有する３’−（アルキルまたはアリールエステル）−または３’，５’−Ｌ−ジ（アルキルまたはアリールエステル）−２’−β−Ｌ−デオキシヌクレオシド；および（ｉ）３’エステルがアミノ酸エステルであり、５’−エステルがアルキルまたはアリールエステルであるか；（ｉｉ）両エステルがアミノ酸エステルであるか；（ｉｉｉ）両エステルが独立に、アルキルまたはアリールエステルであるか；（ｉｖ）３’エステルが独立にアルキルまたはアリールエステルであり、５’−エステルがアミノ酸エステルであり、親である薬剤が２．２．１５細胞において１０または１５マイクロモル未満のＥＣ５０を有する、２’−デオキシ−β−Ｌ−ヌクレオシドの３’，５’−ジエステルのプロドラッグを含む。
【００３３】
本発明に該当するプロドラッグの例は、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの３’−Ｌ−バリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−チミンの３’−Ｌ−バリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−アデノシンの３’−Ｌ−バリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−グアノシンの３’−Ｌ−バリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−５−フルオロ−シチジンの３’−Ｌ−バリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−ウリジンの３’−Ｌ−バリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの３’−アセチルエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−チミンの３’−アセチルエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−アデノシンの３’−アセチルエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−グアノシンの３’−アセチルエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−５−フルオロ−シチジンの３’−アセチルエステル；および２’−デオキシ−β−Ｌ−（シチジン、５−フルオロシチジン、グアノシン、ウリジン、アデノシンまたはチミン）の３’−エステル（前記において（ｉ）３’エステルはアミノ酸エステルであるか；（ｉｉ）３’エステルはアルキルまたはアリールエステルである）である。
【００３４】
本発明に該当するプロドラッグの付加的な例は、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの３’，５’−Ｌ−ジバリンエステル（ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣ）；２’−デオキシ−β−Ｌ−チミンの３’，５’−Ｌ−ジバリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−アデノシンの３’，５’−Ｌ−ジバリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−グアノシンの３’，５’−Ｌ−ジバリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−５−フルオロ−シチジンの３’，５’−Ｌ−ジバリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−ウリジンの３’，５’−Ｌ−ジバリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの３’，５’−ジアセチルエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−チミンの３’，５’−ジアセチルエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−アデノシンの３’，５’−ジアセチルエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−グアノシンの３’，５’−ジアセチルエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−５−フルオロ−シチジンの３’，５’−ジアセチルエステル；および２’−デオキシ−β−Ｌ−（シチジン、５−フルオロシチジン、グアノシン、ウリジン、アデノシンまたはチミン）の３’，５’−ジエステル（前記において（ｉ）３’エステルはアミノ酸エステルであり、５’−エステルはアルキルまたはアリールエステルであるか；（ｉｉ）両エステルはアミノ酸エステルであるか；（ｉｉｉ）両エステルは独立に、アルキルまたはアリールエステルであるか；（ｉｖ）３’エステルはアルキルまたはアリールエステルであり、５’−エステルはアミノ酸エステルである）である。
【００３５】
第２の実施形態では、本発明は、式（Ｉ）で定義するβ−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグまたはその薬剤として許容される塩
【００３６】
【化２６】
0004639032.tif 000002
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択され；
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ２またはＣＨ２であり；
ＢＡＳＥは、場合によって置換されていてもよいプリンまたはピリミジン塩基である］を提供する。
【００３７】
好ましい実施形態では、ＸはＯである。
【００３８】
一実施形態では、Ｒ１および／またはＲ２は、アミノ酸残基である。
【００３９】
一実施形態では、アミノ酸残基は、式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【００４０】
本発明の別の実施形態では、β−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−２’−デオキシプリンまたはその薬剤として許容される塩である。
【００４１】
【化２７】
0004639032.tif 000003
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択され；
Ｙは、ＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４またはＳＲ３であり；
Ｘ１およびＸ２は、独立に、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ハロゲン、ＯＲ５、ＮＲ５Ｒ６またはＳＲ５からなる群から選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立に、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル（特にシクロプロピル）、ジアルキルアミノアルキレン（特に、ジメチルアミノメチレン）、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体である］。
【００４２】
一実施形態では、アミノ酸残基が式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【００４３】
特定の実施形態では、β−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−２’−デオキシアデノシンまたはその薬剤として許容される塩である。
【００４４】
【化２８】
0004639032.tif 000004
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、独立に、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル（特にシクロプロピル）、ジアルキルアミノアルキレン（特に、ジメチルアミノメチレン）、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体である］。
【００４５】
好ましい実施形態では、Ｒ１はＨである。
【００４６】
一実施形態では、アミノ酸残基が式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【００４７】
別の好ましい実施形態では、Ｒ２がアミノ酸残基、特にＬ−バリニルである。
一実施形態では、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がジメチルアミノメチレンである。
別の実施形態では、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がアセチルである。
別の実施形態では、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がＬ−バリニルである。
【００４８】
別の特定の実施形態では、β−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−２’−デオキシグアノシンまたはその薬剤として許容される塩である。
【００４９】
【化２９】
0004639032.tif 000005
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択され；
Ｒ５およびＲ６は、独立に、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル（特にシクロプロピル）、ジアルキルアミノアルキレン（特に、ジメチルアミノメチレン）、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体である］。
【００５０】
好ましい実施形態では、Ｒ１はＨである。
【００５１】
一実施形態では、アミノ酸残基が式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【００５２】
別の好ましい実施形態では、Ｒ２がアミノ酸残基、特にＬ−バリニルである。
【００５３】
一実施形態では、Ｒ５が水素であり、Ｒ６がジメチルアミノメチレンである。
【００５４】
別の実施形態では、Ｒ５が水素であり、Ｒ６がアセチルである。
【００５５】
別の実施形態では、Ｒ５が水素であり、Ｒ６がＬ−バリニルである。
【００５６】
別の特定の実施形態では、β−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−２’−デオキシイノシンまたはその薬剤として許容される塩もしくはプロドラッグである化合物である
【００５７】
【化３０】
0004639032.tif 000006
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択される］。
【００５８】
好ましい実施形態では、Ｒ１がＨである。
【００５９】
一実施形態では、アミノ酸残基が式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【００６０】
別の好ましい実施形態では、Ｒ２がアミノ酸残基、特にＬ−バリニルである。
【００６１】
本発明の別の実施形態では、β−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−２’−デオキシピリミジンまたはその薬剤として許容される塩である
【００６２】
【化３１】
0004639032.tif 000007
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択され；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択され；
Ｙは、ＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４またはＳＲ３であり；
Ｘ１は、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ハロゲン、ＯＲ５、ＮＲ５Ｒ６またはＳＲ５からなる群から選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立に、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル（特にシクロプロピル）、ジアルキルアミノアルキレン（特に、ジメチルアミノメチレン）、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体である］。
【００６３】
一実施形態では、アミノ酸残基が、式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【００６４】
特定の一実施形態では、β−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−２’−デオキシシチジンまたはその薬剤として許容される塩である
【００６５】
【化３２】
0004639032.tif 000008
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択され；
Ｘ１は、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ハロゲン、ＯＲ５、ＮＲ５Ｒ６またはＳＲ５からなる群から選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立に、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル（特に、シクロプロピル）、ジアルキルアミノアルキレン（特に、ジメチルアミノメチレン）、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換されたアリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体である］。
【００６６】
一実施形態では、Ｘ１は、水素である。
【００６７】
別の実施形態では、Ｘ１は、ハロゲン、即ち、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素である。
【００６８】
好ましい実施形態では、Ｒ１は、Ｈである。
【００６９】
一実施形態では、アミノ酸残基が、式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【００７０】
別の好ましい実施形態では、Ｒ２がアミノ酸残基、特にＬ−バリニルである。
【００７１】
一実施形態では、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がジメチルアミノメチレンである。
【００７２】
別の実施形態では、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がアセチルである。
【００７３】
別の実施形態では、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がＬ−バリニルである。
【００７４】
別の実施形態では、β−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−２’−デオキシウリジンまたはその薬剤として許容される塩である
【００７５】
【化３３】
0004639032.tif 000009
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択される］。
【００７６】
好ましい実施形態では、Ｒ１がＨである。
【００７７】
一実施形態では、アミノ酸残基が式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【００７８】
別の好ましい実施形態では、Ｒ２がアミノ酸残基、特にＬ−バリニルである。
【００７９】
別の実施形態では、β−Ｌ−ヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−チミジンまたはその薬剤として許容される塩である
【００８０】
【化３４】
0004639032.tif 000010
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択される］。
【００８１】
好ましい実施形態では、Ｒ１がＨである。
【００８２】
一実施形態では、アミノ酸残基が式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【００８３】
別の好ましい実施形態では、Ｒ２は、アミノ酸残基、特にＬ−バリニルである。
【００８４】
本発明はさらに、少なくとも２種の、ここに記載されているプロドラッグからなる組合せを提供する。
【００８５】
本発明はさらに、これらに限らないが、ここに定義されているプロドラッグのいずれかの親である薬剤、即ち、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジン；２’−デオキシ−β−Ｌ−チミン；２’−デオキシ−β−Ｌ−アデノシン；２’−デオキシ−β−Ｌ−グアニン；２’−デオキシ−β−Ｌ−５−フルオロシチジンを含む２’−デオキシ−β−Ｌ−ヌクレオシドを含む、Ｂ型肝炎に対して活性を示す第２のヌクレオシドと併用するか、または交代で用いる、少なくとも１種の前記の３’−プロドラッグを提供する。あるいは、３’−プロドラッグは、（−）−シス−２’，３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン；シス−２’，３’−ジデオキシ−３’−チア−５−フルオロシチジン；Ｌ−ＦＭＡＵ；アデフォビル；ファムシクロビル（ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒ）およびエンテシビル（ｅｎｔｅｃｉｖｉｒ）などの他の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬または２．２．１５細胞において１０または１５マイクロモル未満のＥＣ５０を示す他の化合物あるいはそれらのプロドラッグまたは薬剤として許容される塩と併用するか、または交代で投与することができる。
【００８６】
本発明はさらに、これらに限らないが、インターフェロン、インターロイキンまたはＢ型肝炎複製を発現するかまたは調節する遺伝子に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、タンパク質、ペプチド、オリゴヌクレオチドまたはγ−グロブリンなどの生体物質を含む免疫変調成分または他の薬剤として活性なウイルス複製の変更因子と組み合わせて、またはそれらと交代に、プロドラッグを投与することを含む。
【００８７】
抗ＨＢＶ化合物の親の効力は、ここで特に記載される方法により、インビトロでウイルスの複製速度を５０％ほど遅くするために必要な化合物の濃度により（即ち、化合物のＥＣ５０）、測定することができる。好ましい実施形態では、プロドラッグ化合物の親は、肝炎ビリオンにトランスフェクションされた２．２．１５細胞で試験する場合にインビトロで１５マイクロモル未満、好ましくは１０マイクロモル未満のＥＣ５０を示す。
図面の簡単な説明
図１ａおよび１ｂは、それぞれ本発明による、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからの２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジン（β−Ｌ−ｄＣ）の３’−および５’−バリニルエステルの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
図２は、本発明による、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからのＮ４−アセチル−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
図３は、本発明による、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからのＮ４−［（ジメチルアミノ）メチレン］−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
図４は、本発明による、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからの３’，５’−ジ−Ｏ−アセチル−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
図５は、本発明による、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからの２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの３’，５’−ジ−Ｏ−バリニルエステルの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
図６は、本発明による、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからの２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンのＮ４−（Ｂｏｃ−バリニル）エステルの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
図７は、本発明による、３’，５’，Ｎ４−トリ−（Ｂｏｃ−Ｌ−バリニル）−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからの３’，５’，Ｎ４−トリ−（Ｌ−バリニル）−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
図８は、様々なヌクレオシドの可溶性を決定するために使用することができる標準校正法を示す線グラフである。図８ａは、天然のβ−Ｄ−デオキシリボシトシンで決定された校正曲線を示す図である。図８ｂは、β−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルで決定された校正曲線を示す図である。
図９ａは、ｐＨ７．４２でのβ−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルの安定性を評価するために使用されるＨＰＬＣプロファイルの非限定的実施例を示す図である。このＨＰＬＣプロファイルは、３種の活性な代謝物であるβ−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’−バリニルエステル、β−Ｌ−デオキシリボシトシンの５’−バリニルエステルおよびＬ−ｄＣと共に、β−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルの存在を示している。図９ｂは、β−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルとその代謝物との時間に応じた相対濃度を示す線グラフである。
同様に、図１０ａおよび１１ａは、ｐＨ７．２０でのβ−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルの安定性を評価するために使用されるＨＰＬＣプロファイルの非限定的実施例を示す図である。このｐＨで、ＨＰＬＣプロファイルは、３種の活性な代謝物であるβ−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’−バリニルエステル、β−Ｌ−デオキシリボシトシンの５’−バリニルエステルおよびＬ−ｄＣと共に、β−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルの存在を示している。図１０ｂおよび図１１ａは、β−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルとその代謝物との時間に応じた相対濃度を示す線グラフである。
図１２は、ｐＨ１．２３でのβ−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルの安定性を評価するために使用されるＨＰＬＣプロファイルの非限定的実施例を示す図である。このｐＨで、ＨＰＬＣプロファイルは、β−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルの存在のみを示しており、その際、その３種の活性な代謝物のいずれの分解も示されていない。
図１３は、ヒト血漿中でのβ−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルのインビトロ代謝を示す線グラフである。
図１４は、ＨｅｐＧ２細胞でのβ−Ｌ−デオキシリボシトシン（Ｌ−ｄＣ）の細胞内代謝を示す線グラフである。
図１５は、一次ヒト肝細胞でのＬ−ｄＣの細胞内蓄積を示す線グラフである。
図１６は、慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染しているウッドチャックモデルでの２８日間の慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染治療での、Ｌ−ｄＣの抗ウイルス用量応答を示す棒グラフである。
図１７は、慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染しているウッドチャックモデルでのＬ−ｄＣの抗ウイルス活性を示す線グラフである。
図１８は、経口によりＬ−ｄＣ（０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日）で２８日間治療された個々のウッドチャックの体重を示す線グラフである。
図１９は、経口によりＬ−ｄＣ（１ｍｇ／ｋｇ／日）で１２週間治療された個々のウッドチャックの体重を示す線グラフである。
【００８８】
発明の詳細な説明
ここで開示する発明は、ヒトおよび他の宿主動物のＢ型肝炎ウイルスを治療するための化合物、方法、および組成物である。その方法には、ＨＢＶを治療する有効量の、本明細書に記載のβ−Ｌ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグ、その薬剤として許容される塩を、場合によっては薬剤として許容される担体に含ませて投与することが含まれる。本発明の化合物は、抗ウイルス（すなわち、抗ＨＢＶ）活性を有する、または代謝されるとそのような活性を示す化合物になる。
【００８９】
要約すると、本発明には以下の特徴、すなわち、
（ａ）本明細書に記載のβ−Ｌ−２’−デオキシ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグ、その薬剤として許容される塩、エステル、および組成物、
（ｂ）特に、Ｂ型肝炎に感染している、あるいはＢ型肝炎に感染する恐れがあると診断された個体において、Ｂ型肝炎感染の治療または予防に使用するための本明細書に記載のβ−Ｌ−２’−デオキシ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグ、その薬剤として許容される塩、エステル、および組成物、
（ｃ）Ｂ型肝炎感染を治療するための医薬品の製造での、このようなβ−Ｌ−２’−デオキシ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグ、その薬剤として許容される塩、エステル、および組成物の使用、
（ｄ）β−Ｌ−２’−デオキシ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグ、その薬剤として許容される塩、ならびに薬剤として許容される担体または希釈剤を含む製剤、
（ｅ）実質上その両方の鏡像異性体が存在しない、または実質上他の化学的存在から単離された本明細書に記載のβ−Ｌ−２’−デオキシ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグ、その薬剤として許容される塩、エステル、および組成物、
（ｆ）以下でより詳細に記述する、β−Ｌ−２’−デオキシ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグの調製方法、
（ｇ）実質上そのヌクレオシドの鏡像異性体が存在しない、または実質上他の化学的存在から単離されたβ−Ｌ−２’−デオキシ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグの調製方法、
（ｈ）有効量のβ−Ｌ−２’−デオキシ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグ、その薬剤として許容される塩、エステルまたは第２の抗Ｂ型肝炎薬との組成物を投与することを含む、Ｂ型肝炎に感染した宿主の治療、
（ｉ）有効量のβ−Ｌ−２’−デオキシ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグ、その薬剤として許容される塩、エステルまたは別のβ−Ｌ−２’−デオキシヌクレオシドの親との組成物を投与することを含む、Ｂ型肝炎に感染した宿主の治療、
（ｊ）有効量のβ−Ｌ−２’−デオキシ−シチジンの３’−プロドラッグ、その薬剤として許容される塩またはエステルを第２の抗Ｂ型肝炎薬の親と共に投与することを含む、Ｂ型肝炎に感染した宿主の治療、
（ｋ）有効量のβ−Ｌ−２’−デオキシ−シチジンの３’，５’−ジバリルまたはジアセチルエステル、その薬剤として許容される塩、エステルを第２の抗Ｂ型肝炎薬と共に投与することを含む、Ｂ型肝炎に感染した宿主の治療、
（ｌ）有効量のβ−Ｌ−２’−デオキシ−シチジンの３’，５’−ジバリルまたはジアセチルエステル、その薬剤として許容される塩、エステルをβ−Ｌ−２’−デオキシ−チミジンまたはその薬剤として許容される塩と共に投与することを含む、Ｂ型肝炎に感染した宿主の治療が含まれる。
【００９０】
特に好ましい組合せは、β−Ｌ−ｄＣ（Ｌ−ｄＣとも称される）の３’，５’−プロドラッグと親のβ−Ｌ−ｄＴ（Ｌ−ｄＴとも称される）との、特に、β−Ｌ−ｄＣの３’，５’−ジバリルまたは３’，５’−ジアセチルエステルとβ−Ｌ−ｄＴとの組合せである。中性塩基としてのＬ−ｄＣおよびＨＣｌ塩の経口による生物学的利用率は、げっ歯類および非ヒト霊長類では低い。Ｌ−ｄＣは、他のヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体と、胃腸管からの吸収または輸送に関して著しく競合し、他のヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体は、吸収に関してＬ−ｄＣと競合することが判明している。経口による生物学的利用率を改善し、薬剤−薬剤相互作用のポテンシャルを低減するために、サルでの薬物動態スクリーニングが確立された。このスクリーニングにより、Ｌ−ｄＣの３’−プロドラッグは、親分子よりも高い経口生物学的利用率を有し、組み合わせて使用される他のヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体の生物学的利用率に対して低い効果を有することが確認された。Ｌ−ｄＣのプロドラッグと組み合わせて使用されるこのようなヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体の例は、Ｌ−ｄＴ、Ｌ−ｄＡ、ラミブジン（ｌａｍｉｂｕｄｉｎｅ）またはＦＴＣである。
【００９１】
このアプローチを使用して、Ｌ−ｄＣの３’，５’−ジバリンエステルは、親のＬ−ｄＣよりも高い経口生物学的利用率を有し、Ｌ−ｄＣに比較して、組み合わせて使用した場合に、他のヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体と低い相互作用を示すことが判明した。薬物動態研究によってさらに、Ｌ−ｄＣの３’，５’−ジバリンエステルは、胃腸粘膜、血液または肝臓での脱エステル化により、親のＬ−ｄＣに転化することが示された。
【００９２】
Ｌ−ｄＣの３’，５’−ジバリンエステルは、経口輸送された後に、胃腸管内腔から、胃腸管内膜中のアミノ酸輸送機能により血流へとかなり活性に輸送される。このことが、主としてヌクレオシド輸送機能により輸送される親のＬ−ｄＣに比較して、経口生物学的利用率が高まることの説明となる。これにより、Ｌ−ｄＣの３’，５’−ジバリンエステルを、アミノ酸輸送機能によってではなくヌクレオシド輸送機能により輸送される他のヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体と共に摂取する際の低い競合も説明がつく。完全な吸収の前に、Ｌ−ｄＣのジバリンエステルの部分的な脱エステル化が生じるので、モノバリンエステルは、アミノ酸輸送機能により吸収され続ける。したがって、望ましい結果として、より良好な吸収または生物学的利用率ならびに血流に摂取するための他のヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体との低い競合が維持される。
【００９３】
Ｉ．本発明により定義される化合物
第１の実施形態では、２’−デオキシ−β−Ｌ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグは、生物学的に脱離可能な成分を３’および５’位の両方に含む。好ましい成分は、Ｌ−バリルなどのＬ−アミノ酸エステルおよびアセチルなどのアルキルエステルである。本発明は特に、親である薬剤が、２．２．１５細胞において１５マイクロモル未満、好ましくは１０マイクロモル未満のＥＣ５０を有する、所望のプリンまたはピリミジン塩基を有する３’，５’−Ｌ−アミノ酸−β−Ｌ−２’−デオキシヌクレオシド；親である薬剤が、２．２．１５細胞において１５マイクロモル未満、好ましくは１０マイクロモル未満のＥＣ５０を有する、所望のプリンまたはピリミジン塩基を有する３’，５’−（アルキルまたはアリール）−β−Ｌ−２’−デオキシヌクレオシド；および（ｉ）３’エステルがアミノ酸エステルであり、５’−エステルがアルキルまたはアリールエステルであるか；（ｉｉ）両エステルがアミノ酸エステルであるか；（ｉｉｉ）両エステルが独立に、アルキルまたはアリールエステルであるか；（ｉｖ）３’エステルが独立にアルキルまたはアリールエステルであり、５’−エステルがアミノ酸エステルであり、親である薬剤が２．２．１５細胞において１５マイクロモル未満の用量でＥＣ５０を有する、２’−デオキシ−β−Ｌ−ヌクレオシドの３’，５’−ジエステルのプロドラッグを含む。
【００９４】
本発明に該当する３’−プロドラッグの例は、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの３’，５’−Ｌ−バリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−チミンの３’，５’−Ｌ−バリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−アデノシンの３’，５’−Ｌ−バリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−グアノシンの３’，５’−Ｌ−バリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−５−フルオロ−シチジンの３’，５’−Ｌ−バリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−ウリジンの３’，５’−Ｌ−バリンエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの３’，５’−アセチルエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−チミンの３’，５’−アセチルエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−アデノシンの３’，５’−アセチルエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−グアノシンの３’，５’−アセチルエステル；２’−デオキシ−β−Ｌ−５−フルオロ−シチジンの３’，５’−アセチルエステル；および２’−デオキシ−β−Ｌ−（シチジン、５−フルオロシチジン、グアノシン、ウリジン、アデノシンまたはチミン）の３’，５’−エステル（前記において（ｉ）３’エステルはアミノ酸エステルであり、５’−エステルはアルキルまたはアリールエステルであるか；（ｉｉ）両エステルはアミノ酸エステルであるか；（ｉｉｉ）両エステルは独立に、アルキルまたはアリールエステルであるか、（ｉｖ）３’エステルはアルキルまたはアリールエステルであり、５’−エステルはアミノ酸エステルである）である。
【００９５】
一実施形態では、本発明は、式（Ｉ）で定義されるβ−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグまたはその薬剤として許容される塩
【００９６】
【化３５】
0004639032.tif 000011
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択され；
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ２またはＣＨ２であり；
ＢＡＳＥは、場合によって置換されていてもよいプリンまたはピリミジン塩基である］を提供する。
【００９７】
好ましい実施形態では、ＸがＯである。
【００９８】
一実施形態では、アミノ酸残基が式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【００９９】
第１の下位実施形態では、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１００】
第２の下位実施形態では、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−低級アルキルであり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１０１】
第３の下位実施形態では、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１０２】
第４の下位実施形態では、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１０３】
第５の下位実施形態では、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、Ｒ１０およびＲ１１の少なくとも１個は水素であり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１０４】
第６の下位実施形態では、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、Ｒ８は、アミノ酸側鎖であり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１０５】
第７の下位実施形態では、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、Ｒ８は、非極性アミノ酸側鎖であり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１０６】
下位実施形態の非限定的例は、
（１）Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、アデニンであるか、
（２）Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、保護されているアデニンであるか、
（３）Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、シトシンであるか、
（４）Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、保護されているシトシンであるか、
（５）Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、チミンであるか、
（６）Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、アデニンであるか、
（７）Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、保護されているアデニンであるか、
（８）Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、シトシンであるか、
（９）Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、保護されているシトシンであるか、
（１０）Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、チミンである、式（Ｉ）により定義することができる。
【０１０７】
第８の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１０８】
第９の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−低級アルキルであり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１０９】
第１０の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１１０】
第１１の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１１１】
第１２の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、Ｒ１０およびＲ１１の少なくとも１個は水素であり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１１２】
第１３の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、Ｒ８は、アミノ酸側鎖であり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１１３】
第１４の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、Ｒ８は、非極性アミノ酸側鎖であり、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１個は、水素であり、Ｂはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１１４】
下位実施形態の非限定的例は、
（１）Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、アデニンであるか、
（２）Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、保護されているアデニンであるか、
（３）Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、シトシンであるか、
（４）Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、保護されているシトシンであるか、
（５）Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、チミンであるか、
（６）Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、アデニンであるか、
（７）Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、保護されているアデニンであるか、
（８）Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、シトシンであるか、
（９）Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、保護されているシトシンであるか、
（１０）Ｘは、Ｏであり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、チミンである、式（Ｉ）により定義することができる。
【０１１５】
第１５の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１１６】
第１６の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−低級アルキルであり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１１７】
第１７の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１１８】
第１８の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１１９】
第１９の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、Ｒ１０およびＲ１１の少なくとも１個は水素であり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１２０】
第２０の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、Ｒ８は、アミノ酸側鎖であり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１２１】
第２１の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、Ｒ８は、非極性アミノ酸側鎖であり、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１個は、水素であり、Ｂはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１２２】
下位実施形態の非限定的例は、
（１）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、アデニンであるか、
（２）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、保護されているアデニンであるか、
（３）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、シトシンであるか、
（４）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、保護されているシトシンであるか、
（５）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、チミンであるか、
（６）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、アデニンであるか、
（７）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、保護されているアデニンであるか、
（８）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、シトシンであるか、
（９）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、保護されているシトシンであるか、
（１０）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１は、水素であり、Ｒ２は、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、チミンであるである、式（Ｉ）により定義することができる。
【０１２３】
第２２の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）−アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１２４】
第２３の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）−低級アルキルであり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１２５】
第２４の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１２６】
第２５の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１２７】
第２６の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、Ｒ１０およびＲ１１の少なくとも１個は水素であり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１２８】
第２７の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、Ｒ８は、アミノ酸側鎖であり、ＢＡＳＥはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１２９】
第２８の下位実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＲ１０Ｒ１１）であり、Ｒ８は、非極性アミノ酸側鎖であり、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１個は、水素であり、Ｂはアデニン、保護されているアデニン、シトシン、保護されているシトシンまたはチミンである。
【０１３０】
下位実施形態の非限定的例は、
（１）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、アデニンであるか、
（２）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、保護されているアデニンであるか、
（３）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、シトシンであるか、
（４）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、保護されているシトシンであるか、
（５）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）−メチルであり、ＢＡＳＥは、チミンであるか、
（６）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、アデニンであるか、
（７）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、保護されているアデニンであるか、
（８）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、シトシンであるか、
（９）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、保護されているシトシンであるか、
（１０）Ｘは、Ｏであり、Ｒ１およびＲ２は、独立に、Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｈ）（ＮＨ２）であり、Ｒ８は、イソプロピルであり、ＢＡＳＥは、チミンである、式（Ｉ）により定義することができる。
【０１３１】
本発明の別の実施形態では、β−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−２’−デオキシプリンまたはその薬剤として許容される塩である
【０１３２】
【化３６】
0004639032.tif 000012
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択され；
Ｙは、ＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４またはＳＲ３であり；
Ｘ１およびＸ２は、独立に、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ハロゲン、ＯＲ５、ＮＲ５Ｒ６またはＳＲ５からなる群から選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立に、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル（特にシクロプロピル）、ジアルキルアミノアルキレン（特に、ジメチルアミノメチレン）、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体である］。
【０１３３】
一実施形態では、アミノ酸残基が式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【０１３４】
特定の実施形態では、β−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−２’−デオキシアデノシンまたはその薬剤として許容される塩である
【０１３５】
【化３７】
0004639032.tif 000013
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、独立に、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル（特にシクロプロピル）、ジアルキルアミノアルキレン（特に、ジメチルアミノメチレン）、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体である］。
【０１３６】
好ましい実施形態では、Ｒ１がＨである。
【０１３７】
一実施形態では、アミノ酸残基が式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【０１３８】
別の好ましい実施形態では、Ｒ２がアミノ酸残基、特にＬ−バリニルである。
【０１３９】
一実施形態では、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がジメチルアミノメチレンである。
別の実施形態では、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がアセチルである。
別の実施形態では、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がＬ−バリニルである。
【０１４０】
別の特定の実施形態では、β−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−２’−デオキシグアノシンまたはその薬剤として許容される塩である
【０１４１】
【化３８】
0004639032.tif 000014
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択され；
Ｒ５およびＲ６は、独立に、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル（特にシクロプロピル）、ジアルキルアミノアルキレン（特に、ジメチルアミノメチレン）、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体である］。
【０１４２】
好ましい実施形態では、Ｒ１がＨである。
【０１４３】
一実施形態では、アミノ酸残基が式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【０１４４】
別の好ましい実施形態では、Ｒ２がアミノ酸残基、特にＬ−バリニルである。
一実施形態では、Ｒ５が水素であり、Ｒ６がジメチルアミノメチレンである。
別の実施形態では、Ｒ５が水素であり、Ｒ６がアセチルである。
別の実施形態では、Ｒ５が水素であり、Ｒ６がＬ−バリニルである。
【０１４５】
別の特定の実施形態では、β−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−２’−デオキシイノシンまたはその薬剤として許容される塩もしくはプロドラッグである
【０１４６】
【化３９】
0004639032.tif 000015
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択される］。
【０１４７】
好ましい実施形態では、Ｒ１がＨである。
【０１４８】
一実施形態では、アミノ酸残基が式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【０１４９】
別の好ましい実施形態では、Ｒ２がアミノ酸残基、特にＬ−バリニルである。
【０１５０】
本発明の別の実施形態では、β−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−２’−デオキシピリミジンまたはその薬剤として許容される塩である
【０１５１】
【化４０】
0004639032.tif 000016
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択され；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択され；
Ｙは、ＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４またはＳＲ３であり；
Ｘ１は、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ハロゲン、ＯＲ５、ＮＲ５Ｒ６またはＳＲ５からなる群から選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、独立に、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル（特にシクロプロピル）、ジアルキルアミノアルキレン（特に、ジメチルアミノメチレン）、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体である］。
【０１５２】
一実施形態では、アミノ酸残基が、式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）のアミノ酸残基であり、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【０１５３】
特定の一実施形態では、β−Ｌヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−２’−デオキシシチジンまたはその薬剤として許容される塩である
【０１５４】
【化４１】
0004639032.tif 000017
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、独立に、Ｈ、直鎖、分枝鎖または環式アルキル（特にシクロプロピル）、ジアルキルアミノアルキレン（特に、ジメチルアミノメチレン）、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体である］。
【０１５５】
好ましい実施形態では、Ｒ１がＨである。
【０１５６】
一実施形態では、アミノ酸残基が式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【０１５７】
別の好ましい実施形態では、Ｒ２がアミノ酸残基、特にＬ−バリニルである。
一実施形態では、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がジメチルアミノメチレンである。
別の実施形態では、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がアセチルである。
別の実施形態では、Ｒ３が水素であり、Ｒ４がＬ−バリニルである。
【０１５８】
別の実施形態では、β−Ｌ−ヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−２’−デオキシウリジンまたはその薬剤として許容される塩である
【０１５９】
【化４２】
0004639032.tif 000018
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択される］。
【０１６０】
好ましい実施形態では、Ｒ１がＨである。
【０１６１】
一実施形態では、アミノ酸残基が式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【０１６２】
別の好ましい実施形態では、Ｒ２がアミノ酸残基、特にＬ−バリニルである。
【０１６３】
別の実施形態では、β−Ｌ−ヌクレオシド３’−プロドラッグが、次式のβ−Ｌ−チミジンまたはその薬剤として許容される塩である
【０１６４】
【化４３】
0004639032.tif 000019
［上式中、
Ｒ１は、水素、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体であり；
Ｒ２は、直鎖、分枝鎖または環式アルキル、ＣＯ−アルキル、ＣＯ−アリール、ＣＯ−アルコキシアルキル、ＣＯ−アリールオキシアルキル、ＣＯ−置換アリール、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アラルキルスルホニル、アミノ酸残基、モノ、ジまたはトリホスフェート、あるいはホスフェート誘導体からなる群から選択される］。
【０１６５】
好ましい実施形態では、Ｒ１はＨである。
【０１６６】
一実施形態では、アミノ酸残基が式：Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）（ＮＲ１０Ｒ１１）を有し、前記において、
Ｒ８は、アミノ酸の側鎖であり、その際、プロリンの場合のようにＲ８は、場合によってＲ１０と結合して環構造を形成してもよいか；あるいはＲ８は、アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環成分であり；
Ｒ９は、水素、アルキル（低級アルキルを含む）またはアリールであり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、水素、アシル（Ｒ８に結合しているアシル誘導体を含む）またはアルキル（これらに限らないが、メチル、エチル、プロピルおよびシクロプロピルを含む）である。
【０１６７】
別の好ましい実施形態では、Ｒ２がアミノ酸残基、特にＬ−バリニルである。
【０１６８】
ＩＩ．用語の定義および使用
本明細書では、用語アルキルは、別段の指定がない限り、飽和の直鎖、分枝、または環状の第１級、第２級、または第３級の、Ｃ１〜Ｃ１０の炭化水素を指し、具体的には、メチル、トリフルオロメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、シクロペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、シクロヘキシル、シクロヘキシルメチル、３−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチル、および２，３−ジメチルブチルが含まれる。この用語には、置換アルキル基も非置換アルキル基も含まれる。アルキル基を置換してよい部分は、保護していない、または当分野の技術者に知られているとおりに、たとえばＧｒｅｅｎｅ等の「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ社刊、第２版、１９９１年（これを参照により本明細書に組み込む）で教示されているとおりに、必要に応じて保護したヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、サルファート、ホスホン酸、ホスファート、またはホスホナートからなる群から選択される。
【０１６９】
本明細書では、用語低級アルキルは、別段の指定がない限り、飽和の直鎖、分枝、または該当すれば環状（たとえば、シクロプロピル）のＣ１〜Ｃ４アルキル基を指し、置換された形も非置換の形も含まれる。この出願で別段特記しない限り、アルキルが適切な部分である場合は、低級アルキルが好ましい。同様に、アルキルまたは低級アルキルが適切な部分である場合は、非置換のアルキルまたは低級アルキルが好ましい。
【０１７０】
本明細書では、用語「保護した」は、別段の定義がない限り、その基がさらに反応しないように、または他の目的のために、酸素、窒素、またはリン原子を付加させた基を指す。有機合成分野の技術者には、幅広い種類の酸素および窒素保護基が知られている。非限定的な保護基の例は、Ｇｒｅｅｎｅ等の「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ社刊、第２版、１９９１年に教示されている。
【０１７１】
本明細書では、用語アリールは、別段の指定がない限り、フェニル、ビフェニル、またはナフチルを指し、フェニルが好ましい。この用語には、置換された部分も非置換の部分も含まれる。アリール基は、保護していない、または当分野の技術者に知られているとおりに、たとえばＧｒｅｅｎｅ等の「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ社刊、第２版、１９９１年で教示されているとおりに、必要に応じて保護したヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、サルファート、ホスホン酸、ホスファート、またはホスホナートからなる群から選択された１種または複数の部分で置換されていてよい。
【０１７２】
用語プリン塩基またはピリミジン塩基には、限定するものではないが、アデニン、Ｎ６−アルキルプリン類、Ｎ６−アシルプリン類（アシルは、（Ｏ）（アルキル、アリール、アルキルアリール、またはアリールアルキルである）、Ｎ６−ベンジルプリン、Ｎ６−ハロプリン、Ｎ６−ビニルプリン、Ｎ６−アセチレンプリン、Ｎ６−アシルプリン、Ｎ６−ヒドロキシアルキルプリン、Ｎ６−チオアルキルプリン、Ｎ２−アルキルプリン類、Ｎ２−アルキル−６−チオプリン類、チミン、シトシン、５−フルオロシトシン、５−メチルシトシン、６−アザシトシンを含む６−アザピリミジン、２−および／または４−メルカプトピリミジン、ウラシル、５−フルオロウラシルを含む５−ハロウラシル、Ｃ５−アルキルピリミジン類、Ｃ５−ベンジルピリミジン類、Ｃ５−ハロピリミジン類、Ｃ５−ビニルピリミジン、Ｃ５−アセチレンピリミジン、Ｃ５−アシルピリミジン、Ｃ５−ヒドロキシアルキルプリン、Ｃ５−アミドピリミジン、Ｃ５−シアノピリミジン、Ｃ５−ニトロピリミジン、Ｃ５−アミノピリミジン、Ｎ２−アルキルプリン類、Ｎ２−アルキル−６−チオプリン類、５−アザシチジニル、５−アザウラシリニル、トリアゾロピリジニル、イミダゾロピリジニル、ピロロピリミジニル、およびピラゾロ−ピリミジニルが含まれる。プリン塩基には、限定するものではないが、グアニン、アデニン、ヒポキサンチン、２，６−ジアミノプリン、および６−クロロプリンが含まれる。塩基上の官能性酸素基および窒素基は、必要に応じてまたは望むとおりに保護してよい。適切な保護基は、当分野の技術者によく知られており、トリメチルシリル、ジメチルヘキシルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリチル、アルキル基、アセチルやプロピオニルなどのアシル基、メタンスルホニル、およびｐ−トルエンスルホニルが含まれる。
【０１７３】
用語アシルは、エステル基の非カルボニル部分が、直鎖、分枝、もしくは環状のアルキルもしくは低級アルキル、メトキシメチルを含むアルコキシアルキル、ベンジルを含むアラルキル、フェノキシメチルなどのアリールオキシアルキル；ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、またはＣ１〜Ｃ４アルコキシで場合によって置換されたフェニルを含むアリール；メタンスルホニルを含むアルキルスルホニルやアラルキルスルホニルなどのスルホン酸エステル、一、二、もしくは三リン酸エステル、トリチルもしくはモノメトキシトリチル、置換ベンジル、トリアルキルシリル（たとえば、ジメチルｔ−ブチルシリル）、またはジフェニルメチルシリルから選択されたカルボン酸エステルを指す。エステルのアリール基は、フェニル基を含むことが最適である。用語「低級アシル」は、非カルボニル部分が低級アルキルであるアシルを指す。
【０１７４】
アミノ酸との用語には、天然に生じるか、合成のα、β、γまたはδアミノ酸が含まれ、これらに限らないが、タンパク質中に存在するアミノ酸、すなわちグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、プロリン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパルテート、グルタメート、リシン、アルギニンおよびヒスチジンが含まれる。好ましい実施形態では、アミノ酸は、Ｌ−配置である。あるいは、アミノ酸は、アラニル、バリニル、ロイシニル、イソロイシニル、プロリニル、フェニルアラニニル、トリプトファニル、メチオニニル、グリシニル、セリニル、スレオニニル、システイニル、チロシニル、アスパラギニル、グルタミニル、アスパルトイル、グルタロイル、リシニル、アルギニニル、ヒスチジニル、β−アラニル、β−バリニル、β−ロイシニル、β−イソロイシニル、β−プロリニル、β−フェニルアラニニル、β−トリプトファニル、β−メチオニニル、β−グリシニル、β−セリニル、β−スレオニニル、β−システイニル、β−チロシニル、β−アスパラギニル、β−グルタミニル、β−アスパルトイル、β−グルタロイル、β−リシニル、β−アルギニニルまたはβ−ヒスチジニルの誘導体であってもよい。
【０１７５】
ここで使用する場合、ヘテロアリールまたはへテロ芳香族との用語は、芳香環中に少なくとも１個のイオウ、酸素、窒素またはリンを含有する芳香族成分のことである。複素環との用語は、環中に、酸素、イオウ、窒素、リンなどの少なくとも１個のヘテロ原子が存在する非芳香族環式基のことである。ヘテロアリールおよび複素環式基の非限定的例には、フリル、フラニル、ピリジル、ピリミジル、チエニル、イソチアゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、キノリル、イソキノリル、ベンゾチエニル、イソベンゾフリル、ピラゾリル、インドリル、イソインドリル、ベンゾイミダゾリル、プリニル、カルバゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、イソオキサゾリル、ピロリル、キナゾリニル、シンノリニル、フタラジニル、キサンチニル、ヒポキサンチニル、チオフェン、フラン、ピロール、イソピロール、ピラゾール、イミダゾール、１，２，３−トリアゾール、１，２，４−トリアゾール、オキサゾール、イソキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、ピリミジンまたはピリダジンおよびプテリジニル、アジリジン、チアゾール、イソチアゾール、１，２，３−オキサジアゾール、チアジン、ピリジン、ピラジン、ピペラジン、ピロリジン、オキサジラン、フェナジン、フェノチアジン、モルホリニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピラジニル、キノキサリニル、キサンチニル、ヒポキサンチニル、プテリジニル、５−アザシチジニル、５−アザウラシリル、トリアゾロピリジニル、イミダゾロピリジニル、ピロロピリミジニル、ピラゾロピリミジニル、アデニン、Ｎ６−アルキルプリン、Ｎ６−ベンジルプリン、Ｎ６−ハロプリン、Ｎ６−ビニプリン、Ｎ６−アセチレン系プリン、Ｎ６−アシルプリン、Ｎ６−ヒドロキシアルキルプリン、Ｎ６−チオアルキルプリン、チミン、シトシン、６−アザピリミジン、２−メルカプトピルミジン（２−ｍｅｒｃａｐｔｏｐｙｒｍｉｄｉｎｅ）、ウラシル、Ｎ５−アルキルピリミジン、Ｎ５−ベンジルピリミジン、Ｎ５−ハロピリミジン、Ｎ５−ビニルピリミジン、Ｎ５−アセチレン系ピリミジン、Ｎ５−アシルピリミジン、Ｎ５−ヒドロキシアルキルプリンおよびＮ６−チオアルキルプリンおよびイソキサゾリルが含まれる。複素芳香族および複素環成分は、アリールに関して前記したように場合によって置換されていてもよく、ハロゲン、ハロアルキル、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、カルボキシル誘導体、アミド、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノから選択される１個または複数の置換基で置換されていることを含む。複素芳香族は、所望のように部分的に、または全部、水素化されていてもよい。非限定的例としては、ジヒドロピリジンを、ピリジンの代わりに使用することができる。ヘテロアリール基上の官能性酸素および窒素基を、必要に応じて、または所望の場合には保護することもできる。適切な保護基は、当技術分野の専門家にはよく知られていて、トリメチルシリル、ジメチルヘキシルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリルおよびｔ−ブチルジフェニルシリル、トリチルまたは置換されているトリチル、アルキル基、アシル基、例えばアセチルおよびプロピオニル、メタンスルホニルおよびｐ−トルエンスルホニルが含まれる。
【０１７６】
本明細書では、用語「鏡像異性体をほとんど含まない」または「鏡像異性体がほとんど存在しない」は、そのヌクレオシドの指定の鏡像異性体を少なくとも９５〜９８重量％、より好ましくは９９〜１００重量％含むヌクレオシド組成物を指す。好ましい実施形態において、本発明の方法および化合物では、化合物は互いの鏡像異性体をほとんど含まない。
【０１７７】
同様に、用語「単離された」は、そのヌクレオシドを少なくとも８５または９０重量％、好ましくは９５〜９８重量％、より好ましくは９９〜１００重量％含み、残りが他の化学種または鏡像異性体を含むヌクレオシド組成を指す。
【０１７８】
本明細書では、用語「それぞれ独立に」は、それぞれ独立に適用した変動要素が適用毎に無関係に変わることを示す。したがって、Ｒ”ＸＹＲ”（Ｒ”は「それぞれ独立に炭素または窒素」である）のような化合物では、「両方のＲ”を炭素としても、両方のＲ”を窒素としても、一方のＲ”を炭素とし、他方のＲ”を窒素としてもよい。
【０１７９】
本明細書では、用語宿主は、ウイルス複製が可能な単細胞生物または多細胞生物を指し、細胞系および動物、好ましくはヒトが含まれる。あるいは宿主は、本発明の化合物によってその複製または機能が変更されるＢ型肝炎ウイルスのゲノムの一部を保有していてもよい。用語宿主は、具体的には、感染細胞、ＨＢＶのゲノムの全体または部分をトランスフェクトした細胞、および動物、特に（チンパンジーを含む）霊長類およびヒトを指す。本発明の大部分の動物適用例では、宿主はヒトの患者である。しかし、ある適応症では、本発明は、明らかに動物への適用を見込んでいる（チンパンジーなど）。
【０１８０】
患者に投与すると、ヌクレオシド化合物をもたらし、あるにしても最小限の不所望の毒性効果しか示さない任意の薬剤として許容される形のヌクレオシド化合物を記載するために、「薬剤として許容される塩」および「薬剤として許容される錯体」との用語を明細書を通して使用している。薬剤として許容される塩には、薬剤として許容される無機または有機塩基および酸から誘導されるものが含まれる。このような塩の非限定的例は、（ａ）無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）で生じる酸付加塩ならびに酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルモ酸（ｐａｌｍｏｉｃ  ａｃｉｄ）、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸およびポリガラクツロン酸などの有機酸で生じる塩；（ｂ）アルカリ金属から誘導されるか、アルカリ土類金属、ナトリウム、カリウム、亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム、ナトリウム、カリウムなどから誘導されるようなカチオン、またはＮ，Ｎ−ジベンジルエチレン−ジアミン、アンモニウムもしくはエチレンジアミンから生じる有機カチオンで生じる塩基付加塩；あるいは（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せ；例えばタンニン酸亜鉛塩などである。
【０１８１】
この明細書中では、用語「薬剤として許容される塩またはプロドラッグ」は、患者に投与されるとヌクレオシド化合物をもたらす何らかの薬剤として許容される形（エステル、リン酸エステル、エステルまたは関連した基の塩）のヌクレオシド化合物を述べるものである。薬剤として許容される塩には、薬剤として許容される無機または有機の塩基および酸から誘導されたものが含まれる。適切な塩には、製薬業界でよく知られている数多い他の酸の中でも、カリウムやナトリウムなどのアルカリ金属、カルシウムやマグネシウムなどのアルカリ土類金属から誘導されたものが含まれる。薬剤として許容されるプロドラッグは、宿主の中で代謝、たとえば加水分解または酸化されて、本発明の化合物を生成する化合物を指す。プロドラッグの典型的な例には、活性化合物の官能性部分に生物学的に不安定な保護基を有する化合物が含まれる。プロドラッグには、酸化、還元、アミノ化、脱アミノ化、ヒドロキシル化、脱ヒドロキシル化、加水分解、脱水、アルキル化、脱アルキル化、アシル化、脱アシル化、リン酸化、脱リン酸化されて、活性化合物を生成することのできる化合物が含まれる。本発明の化合物は、ＨＢＶに対して抗ウイルス活性を有する、または代謝されるとそのような活性を示す化合物になる。
【０１８２】
ＩＩＩ．ヌクレオチドの塩またはプロドラッグ製剤
化合物が十分に塩基性または酸性であって、安定な非毒性の酸または塩基の塩を形成する場合、化合物を薬剤として許容される塩として投与することが適切である。薬剤として許容される塩の例は、生理学的に許容されるアニオンを生成する有機酸の付加塩、たとえば、トシラート、メタンスルホン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、α−ケトグルタル酸塩、およびα−グリセロリン酸塩である。硫酸塩、硝酸塩、炭酸水素塩、および炭酸塩を含む、適切な無機塩を生成してもよい。
【０１８３】
薬剤として許容される塩は、当技術分野でよく知られている標準の手順を利用して、たとえば、アミンなどの十分に塩基性の化合物と生理学的に許容されるアニオンをもたらす適切な酸を反応させることによって得られる。カルボン酸のアルカリ金属（たとえば、ナトリウム、カリウム、またはリチウム）塩またはアルカリ土類金属（たとえば、カルシウム）塩を作製してもよい。
【０１８４】
本明細書に記載のどんなヌクレオシドも、ヌクレオシドプロドラッグとして投与して、活性、生物学的利用能、安定性を高め、あるいは他の点でヌクレオシドの特性を変更することができる。数種のヌクレオシドプロドラッグリガンドが知られている。一般に、ヌクレオシドの一、二、または三リン酸のアルキル化、アシル化、または他の親油性化修飾により、ヌクレオチドの安定性が向上する。リン酸部分の１個または複数の水素を置換できる置換基の例は、アルキル、アリール、ステロイド、糖を含む炭水化物、１，２−ジアシルグリセロール、およびアルコールである。Ｒ．ＪｏｎｅｓおよびＮ．ＢｉｓｃｈｏｆｂｅｒｇｅｒのＡｎｔｉｖｉｒａｌＲｅｓｅａｒｃｈ、第２７巻（１９９５年）、１〜１７ページに多くが記載されている。それらのうちのどれでも、開示するヌクレオシドと組み合わせて使用して、所望の効果を実現することができる。
【０１８５】
活性β−Ｌ−３’−プロドラッグヌクレオシドは、以下の参照文献で開示されているように、５’−ホスホエーテルリピドまたは５’−エーテルリピドとして提供することもできる。これらの文献を参照として本明細書に組み込む。Ｋｕｃｅｒａ，Ｌ．Ｓ．、Ｎ．Ｉｙｅｒ、Ｅ．Ｌｅａｋｅ、Ａ．Ｒａｂｅｎ、Ｍｏｄｅｓｔ  Ｅ．Ｋ．、Ｄ．Ｌ．Ｗ．、およびＣ．Ｐｉａｎｔａｄｏｓｉの１９９０年、「Ｎｏｖｅｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｖｅ  ｅｔｈｅｒ  ｌｉｐｉｄ  ａｎａｌｏｇｓ  ｔｈａｔ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ＨＩＶ−１  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅ  ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  ｖｉｒｕｓ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ」、ＡＩＤＳ  Ｒｅｓ．Ｈｕｍ．Ｒｅｔｒｏ  Ｖｉｒｕｓｅｓ、第６巻、４９１〜５０１ページ；Ｐｉａｎｔａｄｏｓｉ，Ｃ．、Ｊ．Ｍａｒａｓｃｏ  Ｃ．Ｊ．、Ｓ．Ｌ．Ｍｏｒｒｉｓ−Ｎａｔｓｃｈｋｅ、Ｋ．Ｌ．Ｍｅｙｅｒ、Ｆ．Ｇｕｍｕｓ、Ｊ．Ｒ．Ｓｕｒｌｅｓ、Ｋ．Ｓ．Ｉｓｈａｑ、Ｌ．Ｓ．Ｋｕｃｅｒａ、Ｎ．Ｉｙｅｒ、Ｃ．Ａ．Ｗａｌｌｅｎ、Ｓ．Ｐｉａｎｔａｄｏｓｉ、およびＥ．Ｊ．Ｍｏｄｅｓｔの１９９１年、「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｅｔｈｅｒ  ｌｉｐｉｄ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｉ−ＨＩＶ  ａｃｔｉｖｉｔｙ」、Ｍｅｄ．Ｃｈｅｌｅｍ．、第３４巻、１４０８〜１４１４ページ；Ｈｏｓｔｅｌｌｅｒ，Ｋ．Ｙ．、Ｄ．Ｄ．Ｒｉｃｈｍａｎ、Ｄ．Ａ．Ｃａｒｓｏｎ、Ｌ．Ｍ．Ｓｔｕｈｍｉｌｌｅｒ、Ｇ．Ｍ．Ｔ．ｖａｎ  Ｗｉｊｋ、およびＨ．ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｏｓｃｈの１９９２年、「Ｇｒｅａｔｌｙ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ｔｙｐｅ  １  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ＣＥＭ  ａｎｄ  ＨＴ４−６Ｃ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ３’−ｄｅｏｘｙｔｈｙｍｉｄｉｎｅ  ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ，ａ  ｌｉｐｉｄ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ｏｆ  ３’−ｄｅｏｘｙｔｈｙｍｉｄｉｎｅ」、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．、第３６巻、２０２５〜２０２９ページ；Ｈｏｓｅｔｌｅｒ，Ｋ．Ｙ．、Ｌ．Ｍ．Ｓｔｕｈｍｉｌｌｅｒ、Ｈ．Ｂ．Ｌｅｎｔｉｎｇ、Ｈ．ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｏｓｃｈ、およびＤ．Ｄ．Ｒｉｃｈｍａｎの１９９０年、「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ａｎａｌｏｇｓ  ｏｆ  ａｚｉｄｏｔｈｙｍｉｄｉｎｅ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ」、Ｊ  ＢｉｏＬ  Ｃｈｅｎｉ．、第２６５巻、６１１２７ページ。
【０１８６】
好ましくはその５’−ＯＨ位において、ヌクレオシドに共有結合によって組み込むことのできる適切な親油性置換基、または親油性製剤を開示している米国特許の非限定的な例には、米国特許第５，１４９，７９４号（１９９２年９月２２日、Ｙａｔｖｉｎ等）、第５，１９４，６５４号（１９９３年３月１６日、Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒ等）、第５，２２３，２６３号（１９９３年６月２９日、Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒ等）、第５，２５６，６４１号（１９９３年１０月２６日、Ｙａｔｖｉｎ等）、第５，４１１，９４７号（１９９５年５月２日、Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒ等）、第５，４６３，０９２号（１９９５年１０月３１日、Ｈｏｓｔｅｔｌｅｒ等）、第５，５４３，３８９号（１９９６年８月６日、Ｙａｔｖｉｎ等）、第５，５４３，３９０号（１９９６年８月６日、Ｙａｔｖｉｎ等）、第５，５４３，３９１号（１９９６年８月６日、Ｙａｔｖｉｎ等）、および第５，５５４，７２８号（１９９６年９月１０日、Ｂａｓａｖａ等）が含まれ、これらをすべて参照により本明細書に組み込む。本発明のヌクレオシドに結合させることのできる親油性置換基、または親油性製剤を開示している外国特許出願には、ＷＯ８９／０２７３３、ＷＯ９０／００５５５、ＷＯ９１／１６９２０、ＷＯ９１／１８９１４、ＷＯ９３／００９１０、ＷＯ９４／２６２７３、ＷＯ９６／１５１３２、ＥＰ０  ３５０  ２８７、ＥＰ９３９１７０５４．４、およびＷＯ９１／１９７２１が含まれる。
【０１８７】
３’−プロドラッグは、受容者に投与すると、直接的または間接的に親化合物の３’−プロドラッグをもたらしうるか、その活性を示す誘導体として投与することもできる。非限定的例は、薬剤として許容される塩（もしくは、「生理学的に許容される塩」とも称される）および活性化合物のＮ４ピリミジンまたはＮ２および／またはＮ６−プリンアルキル化（特に、ジメチルアミノメチレンにより）またはアシル化（特に、アセチルまたはアミノアセチルにより）誘導体である。非限定的な一実施形態では、アシル基は、カルボン酸エステルであり、前記においてエステル基の非カルボニル成分は、直鎖、分枝鎖または環式アルキルまたは低級アルキル、メトキシメチルを含むアルコキシアルキル、ベンジルを含むアラルキル、フェノキシメチルなどのアリールオキシアルキル、ハロゲンで場合によって置換されているフェニルを含むアリール、Ｃ１からＣ４アルキルまたはＣ１からＣ４アルコキシ、メタンスルホニルを含むアルキルまたはアラルキルスルホニルなどのスルホン酸エステル、これらに限らないが一、二または三リン酸エステルを含むリン酸エステル、トリチルまたはモノメトキシトリチル、置換されているベンジル、トリアルキルシリル（例えば、ジメチル−５−ブチルシリル）またはジフェニルメチルシリルである。エステル中のアリール基は、フェニル基を場合によって含む。
【０１８８】
特に、Ｎ４ピリミジニル；またはＮ２および／またはＮ６プリン位で３’−プロドラッグまたは親化合物を変性することにより、生物学的利用率および活性種の代謝速度に影響を及ぼすことができ、したがって、活性種の輸送を制御することができる。さらに、変性により、化合物の抗ウイルス活性に影響を及ぼすことができ、いくつかの場合では、親化合物を上回るように活性を高めることができる。このことは、誘導体を調製し、ここに記載されている方法または当技術分野の専門家に知られている他の方法により、その抗ウイルス活性を試験することにより、容易に評価することができる。
【０１８９】
ＩＶ．立体化学
ヌクレオシドの糖（ここでは、通常は、糖成分と称する）の１’および４’炭素は、キラルであるので、その非水素置換基（ＣＨ２ＯＲおよび、それぞれピリミジンまたはプリン塩基）は、糖環系に対してシス（同じ側）またはトランス（反対側）でありうる。したがって、４種の光学異性体が、次の配置で示される（Ｃ１’およびＣ４’−原子の間の「一次（ｐｒｉｍａｒｙ）」酸素が後方にあるように、糖成分を水平面に位置させる場合）：「β」または「シス」（基は両方とも「アップ（ｕｐ）」にあり、天然に生じるヌクレオシドの配置、即ちＤ配置に対応する）、「β」またはシス（基は両方とも「ダウン（ｄｏｗｎ）」にあり、天然には生じない配置、即ちＬ配置である）、「α」または「トランス」（Ｃ２置換基は「アップ」で、Ｃ５置換基は「ダウン」）、および「α」またはトランス（Ｃ２置換基は「ダウン」で、Ｃ５置換基は「アップ」）。
【０１９０】
本発明のヌクレオシドは、β−Ｌ−配置である。好ましい実施形態では、２’−デオキシ−β−Ｌ−ヌクレオシドを実質的に、単一異性体の形で、即ち少なくとも約９５％は所定の立体配置で投与する。
【０１９１】
Ｖ．併用療法および交代療法
併用療法では、有効用量の２種またはそれ以上の薬剤を一緒に投与するが、交代療法では、有効用量の各薬剤を連続して投与する。用量は、薬剤の吸収、不活性化および排泄速度、さらに当技術分野の専門家に知られている他のファクターに左右される。用量値は、緩和すべき症状の重度に応じて変動することも、特記すべきである。さらに、患者ごとに、個々の必要性により、また組成物を投与するか、組成物の投与を管理する人の専門的判断により、特定の用量摂生およびスケジュールを、時間に応じて調節すべきであることは理解されるであろう。
【０１９２】
例えば、ここに記載されている実施形態では、本発明のβ−Ｌ−２’−デオキシヌクレオシドの３’−プロドラッグを、リン酸化されて活性形となる第２のヌクレオシドまたは非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤と組み合わせて、またはそれと交代に投与する場合、一実施形態では、第２の化合物は、本発明の選択されたβ−Ｌ−２’−ヌクレオシドをインビボでリン酸化する酵素とは異なる酵素によりリン酸化されうるものである。キナーゼ酵素の例は、チミジンキナーゼ、シトシンキナーゼ、グアノシンキナーゼ、アデノシンキナーゼ、デオキシシチジンキナーゼ、５’−ヌクレオチダーゼおよびデオキシ−グアノシンキナーゼである。
【０１９３】
したがって、一実施形態では、本発明は、本発明の２種またはそれ以上のヌクレオシドプロドラッグ、好ましくは、異なる酵素によってリン酸化されるか、異なる生物学的経路を介して作用するヌクレオシドからなる組合せを提供する。別の実施形態では、本発明は、少なくとも１種のプロドラッグを、これらに限らないが、ここで定義されるプロドラッグのいずれかの親薬剤、即ち、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジン；２’−デオキシ−β−Ｌ−チミン；２’−デオキシ−β−Ｌ−アデノシン；２’−デオキシ−β−Ｌ−グアニン；２’−デオキシ−β−Ｌ−５−フルオロシチジン；２’，３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン；２’，３’−ジデオキシ−３’−チア−５−フルオロシチジンを含む２’−デオキシ−β−Ｌ−ヌクレオシドを含むＢ型肝炎に対して活性を示すヌクレオシドと組み合わせて、またはそれと交代に提供する。あるいは、本発明の化合物を、エンテシビル、好ましくは実質的に（−）−光学異性体の形のシス−２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（「ＦＴＣ」、ＷＯ９２／１４７４３号参照）；シス−２−ヒドロキシメチル−５−（シトシン−１−イル）−１，３−オキサチオランの（−）−エナンチオマー（３ＴＣ）；米国特許第５４４４０６３号および第５６８４０１０号に記載されているβ−Ｄ−１，３−ジオキソランプリンヌクレオシド；β−Ｄ−ジオキソラニル−グアニン（ＤＸＧ）、β−Ｄ−ジオキソラニル−２，６−ジアミノプリン（ＤＡＰＤ）、β−Ｄ−ジオキソラニル−６−クロロプリン（ＡＣＰ）などのβ−Ｄ−ジオキソランヌクレオシド、Ｌ−ＦＤＤＣ（５−フルオロ−３’−チア−２’，３’−ジデオキシシチジン）、３’−フルオロ変性されたβ−２’−デオキシリボヌクレオシド５’−トリホスフェートのＬ−エナンチオマー、カルボビル、インターフェロン、ペンシクロビルおよびファムシクロビル、Ｌ−ＦＭＡＵ、ファムシクロビル、ペンシクロビル、ＢＭＳ−２００４７５、ｂｉｓ  ｐｏｍ  ＰＭＥＡ（アデフォビル、ジピボキシル（ｄｉｐｉｖｏｘｉｌ）；ロブカビル（ｌｏｂｕｃａｖｉｒ）、ガンシクロビル（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ）またはリババリン（ｒｉｂａｖａｒｉｎ）；または２．２．１５細胞で１５マイクロモル未満のＥＣ５０を示す他の化合物；またはこれらのプロドラッグまたは薬剤として許容される塩などの知られている他の抗Ｂ型肝炎ウイルス薬と組み合わせて、またはそれと交代に投与することもできる。
【０１９４】
併用および交代療法を、薬剤耐性に対抗するために行うこともできる。ウイルスの薬剤耐性変異体は、抗ウイルス薬での長期治療の後に生じうることが認められている。薬剤耐性は多くの場合に一般に、ウイルス複製で使用される酵素をコードする遺伝子の突然変異により生じる。化合物を、基本の薬剤により生じた突然変異とは異なる突然変異をもたらす第２および、ことによると第３の抗ウイルス化合物と組み合わせて、またはそれと交代に投与することにより、Ｂ型肝炎感染に対する薬剤の効力を延長するか、増大するか、復活させることができる。もしくは、薬剤の薬物動態、生体内分布または他のパラメーターを、このような併用または交代療法により変えることができる。通常は、併用療法が、交代療法よりも一般的に好ましい。それというのも、これは、ウイルスに対して多重的な同時ストレスをもたらすためである。
【０１９５】
別の実施形態では、プロドラッグを、これらに限らないが、インターフェロン、インターロイキンまたはＢ型肝炎複製を発現するか調節する遺伝子に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを含むタンパク質、ペプチド、オリゴヌクレオチド、γ−グロブリンなどの生体物質を含む、免疫変調成分または他の薬剤として活性なウイルス複製の変更因子と組み合わせて、またはそれと交代に投与する。
【０１９６】
患者を治療する交代方法は、いずれも使用することができる。交代パターンの非限定的例には、有効量の１種の薬剤を１〜６週間投与し、それに続いて有効量の第２の抗ＨＢＶ薬を１〜６週間投与することが含まれる。交代スケジュールには、治療しない期間が含まれてもよい。併用療法には通常、２種またはそれ以上の抗ＨＢＶ薬からなる用量の有効比を同時に投与することが含まれる。
【０１９７】
ＨＢＶが往々にして、抗ＨＩＶ抗体またはＨＩＶ抗原陽性であるか、ＨＩＶに曝された患者で発見されるという事実を考慮すると、ここで開示されている活性な抗ＨＢＶ化合物またはその誘導体またはプロドラッグを、適切な環境で、抗ＨＩＶ投薬と組み合わせて、またはそれと交代に投与することもできる。
【０１９８】
一実施形態では、ＨＩＶを治療するための第２の抗ウイルス薬は、合成ヌクレオシド（「ＮＲＴＩ」）または非ヌクレオシド化合物（「ＮＮＲＴＩ」）であってよい逆転写酵素阻害剤（「ＲＴＩ」）であってもよい。別の実施形態では、ＨＩＶの場合、第２（または第３）の抗ウイルス薬は、プロテアーゼ阻害剤であってもよい。他の実施形態では、第２（または第３）の化合物は、ピロホスフェート類似体または融合結合阻害剤（ｆｕｓｉｏｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）であってもよい。いくつかの抗ウイルス化合物に関してインビトロおよびインビボで集められた、耐性データ列記リストを、ＳｃｈｉｎａｚｉらのＭｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  ｇｅｎｅｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｎｅｗｓ、Ｖｏｌｕｍｅ１（４）、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  １９９６）に見ることができる。
【０１９９】
活性な抗ＨＢＶ薬を、二次感染を治療するために投与される抗生物質、他の抗ウイルス化合物、抗真菌薬または他の薬剤と組み合わせて、投与することもできる。
【０２００】
ＶＩ．薬剤組成物
Ｂ型肝炎を含むここに記載の疾患のいずれかを患っているヒトを、有効量の本発明のβ−Ｌ−２’−デオキシ−ヌクレオシドの３’−プロドラッグまたはその薬剤として許容される塩を薬剤として許容される担体または希釈剤の存在下に患者に投与することにより治療することができる。適切な経路、例えば経口、非経口、静脈内、真皮内、皮下または局所で、液体または固体形により、活性物質を投与することができる。
【０２０１】
活性化合物は、治療される患者に重大な毒性効果をもたらすことなく、インビボでウイルス複製を阻害するために、治療的に有効な量の化合物を患者に送達するのに十分な量の薬剤として許容される担体または希釈剤中に含まれる。「阻害量」とは、例えばここに記載されるいずれかのアッセイなどにより測定される、阻害効果を及ぼすに十分な活性成分量を意味する。
【０２０２】
前記の症状のいずれにも好ましい化合物用量は、１日当たり体重当たり約１から５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１から２０ｍｇ／ｋｇ、より一般的には１日当たり受容者の体重１キログラム当たり０．１から約１００ｍｇの範囲である。薬剤として許容されるプロドラッグの有効用量範囲は、輸送すべき親ヌクレオシドの重量をもとに算出することができる。プロドラッグがそれ自体活性を示す場合には、有効用量は、プロドラッグの重量を使用して前記のように、または当技術分野の専門家に知られている他の方法によって推定することができる。
【０２０３】
化合物を簡便には、これらに限らないが、１単位剤形当たり活性成分７から３０００ｍｇ、好ましくは７０から１４００ｍｇを含有する単位剤形を含む適切な単位剤形で投与する。５０〜１０００ｍｇの経口用量が通常は、簡便である。
【０２０４】
理想的には、活性成分を、約０．２から７０μＭ、好ましくは約１．０から１０μＭの活性化合物の最大血漿濃度が達成されるように投与する。これは例えば、場合によって生理的食塩水中の活性成分の０．１から５％溶液または活性成分のボーラスとして投与される静脈内注射により、達成することができる。
【０２０５】
薬剤組成物中の活性化合物の濃度は、薬剤の吸収、不活性化および排出速度、さらに当技術分野の専門家に知られている他のファクターに左右される。用量値は、緩和すべき症状の重度に応じて変化することを特記する。さらに、患者ごとに、個々の必要性により、また組成物を投与するか、組成物の投与を管理する人の専門的判断により、特定の用量摂生を時間に応じて調節すべきであり、ここに記載の濃度範囲は例であるにすぎず、請求している組成物の範囲または実行を制限する意図はないことは理解されるであろう。活性成分は、一度に投与することもできるが、変動する時間間隔で投与される複数の少量の用量に分けることもできる。
【０２０６】
活性化合物の投与の好ましい様式は、経口である。経口用組成物は通常、不活性希釈剤または食用担体を含む。これらは、ゼラチンカプセルに封入されているか、錠剤に圧縮されていてもよい。経口による治療投与の目的では、活性化合物を賦形剤と一緒にして、錠剤、トローチ錠またはカプセルの形で使用することもできる。薬剤として相容性の結合剤および／または補助剤材料が、組成物の一部として含まれていてもよい。
【０２０７】
錠剤、丸剤、カプセル、トローチ錠などは、次の成分または同様の性質の化合物のいずれかを含有してよい：微結晶性セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンなどの結合剤；デンプンまたはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌまたはトウモロコシデンプンなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓなどの滑剤；コロイド二酸化ケイ素などの潤滑剤（ｇｌｉｄａｎｔ）；スクロースまたはサッカリンなどの甘味剤；またはペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジ香料などの着香料。単位剤形がカプセルである場合には、これは、前記のタイプの材料に加えて、脂肪油などの液体担体を含有することもできる。加えて、単位剤形は、単位剤の物理的形態を変更する様々な他の材料、例えば糖のコーティング、シェラックまたは他の腸溶剤を含有してもよい。
【０２０８】
化合物を、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハース、チューインガムなどの成分として投与することもできる。シロップは、活性化合物に加えて、甘味剤としてスクロースおよび一定の防腐剤、染料および着色剤、香料を含有してよい。
【０２０９】
化合物またはその薬剤として許容される誘導体または塩を、所望の作用を損なうことのない他の活性物質と、または抗生物質、抗真菌薬、抗炎症薬、プロテアーゼ阻害剤、他のヌクレオシドまたは非ヌクレオシド抗ウイルス薬などの所望の作用を補足する物質と混合することもできる。非経口、真皮内、皮下または局所投与で使用される溶液または懸濁液は、次の成分を含有してよい：注射用の水、食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、他の合成溶剤などの無菌希釈剤；ベンジルアルコール、メチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸、亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート化剤；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩などの緩衝液および塩化ナトリウム、デキストロースなどの張度を調節するための薬剤。非経口薬剤を、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは多人数用バイアルに封入することもできる。
【０２１０】
静脈内投与の場合には、好ましい担体は、生理的食塩水またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である。
【０２１１】
好ましい実施形態では、活性化合物を、インプラントおよびマイクロカプセル封入された輸送系を含む制御放出処方物などの、体内からの迅速な排出に対して化合物を保護する担体と共に調製する。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸（ｐｏｌｙｌａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）などの生分解性の生体親和性ポリマーを使用することもできる。このような処方物を調製するための方法は、当技術分野の専門家には明らかであろう。材料を、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手することもできる。
【０２１２】
リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を用いて、感染した細胞を標的としたリポソームを含む）も、薬剤として許容される担体として好ましい。これらは、当技術分野の専門家に知られている方法により、例えば、米国特許第４５２２８１１号に記載されているように調製することができる。例えば、適切なリピド（ステアロイルフォスファチジルエタノールアミン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカドイル（ａｒａｃｈａｄｏｙｌ）フォスファチジルコリンおよびコレステロールなど）を無機溶剤に溶かし、次いでこれを蒸発させ、容器の表面上に乾燥リピドの薄膜を残すことにより、リポソーム処方物を調製することができる。活性化合物またはそのモノホスフェート、ジホスフェートおよび／またはトリホスフェート誘導体の水溶液を次いで、容器に入れる。次いで、容器を手動で旋回させて、リピド物質を容器の側面から離し、リピド凝集体を分散させると、リポソーム懸濁液が生じる。
【０２１３】
ＶＩＩ．活性化合物の調製方法
Ａ．β−Ｌ−ヌクレオシドのβ−Ｌ−３’−誘導体の調製方法
２’−デオキシ−ヌクレオシドのβ−Ｌ−３’−誘導体は、当技術分野で知られている方法により、特に、アシル成分で二級アルコールを保護する、即ち、無水物を介するか、カップリング剤を用いる、知られている方法により調製することができる。非限定的例として、３’−誘導体を、次の反応順序に従い調製することができる：
【０２１４】
【化４４】
0004639032.tif 000020
【０２１５】
あるいは、３’−誘導体は、アミノアシル成分から誘導される。この方法の鍵となる出発原料はさらに、適切に置換されているβ−Ｌヌクレオシドである。β−Ｌヌクレオシドは、購入することもできるが、Ｌ−糖成分との通常のカップリング反応を含む知られている方法により調製することもできる。
【０２１６】
これらのアミノアシル誘導体は、初めに、５’−ヒドロキシルを、アシルやシリル保護基などの適切な酸素保護基で選択的に保護し、場合によって、複素環式またはへテロ芳香族塩基中の遊離アミンを保護することにより、調製することができる。続いて、遊離の３’−ヒドロキシルを、Ｎ−保護されているαまたはβアミノ酸にカップリングさせることができる。
【０２１７】
続いて、β−Ｌ−ヌクレオシドを、カップリングを促進する標準的なカップリング試薬を使用して、アミノアシルにカップリングさせる。カップリング試薬のいくつかの非限定的例は、トリフェニルホスフィンを伴うＭｉｔｓｕｎｏｂｕタイプの試薬（例えば、アゾジカルボン酸ジイソプロピル、アゾジカルボン酸ジエチルなどのアゾジカルボン酸ジアルキル）または様々なタイプのカルボジイミドである。
【０２１８】
所望の結果が得られる、即ち、分解の促進または過剰な副生成物を伴わない許容される速度で、反応を進行させるために適切な温度で、カップリング反応を実施することができる。
【０２１９】
必要な温度を得ることができ、反応成分を可溶化しうる反応溶剤を選択することができる。非限定的例は、これらに限らないが、ヘキサン、シクロヘキサン、ジクロロメタンまたはジクロロエタン、トルエン、アセトン、酢酸エチル、ジチアン、ＴＨＦ、ジオキサン、アセトニトリル、ジエチルエーテル、ピリジン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルアセトアミド、あるいはこれらの組合せなどのアルキルまたはハロアルキル溶剤を含む非プロトン性溶剤である。
【０２２０】
スキーム１は、Ｌ−デオキシリボヌクレオシドから誘導して、β−Ｌ−３’−アミノアシルヌクレオシドを調製するための非限定的例である。
【０２２１】
【化４５】
0004639032.tif 000021
【０２２２】
Ｂ．β−Ｌ−ヌクレオシドのβ−Ｌ−５’−誘導体を調製するための方法
β−Ｌ−ヌクレオシドのβ−Ｌ−５’−誘導体は、当技術分野で知られている方法、特に、アシル部分で一級アルコールを保護する、すなわち無水物を介するか、カップリング剤を用いる知られている方法により調製することができる。非限定的実施例であるが、β−Ｌ−５’−誘導体は、次の反応順序に従い調製することができる：
【０２２３】
【化４６】
0004639032.tif 000022
【０２２４】
好ましい実施形態では、５’−誘導体は、アミノアシル成分から誘導される。この方法の鍵となる出発物質は、適切に置換されたβ−Ｌ−ヌクレオシドである。β−Ｌ−ヌクレオシドは、購入することもできるが、デオキシリボースなどのＬ−糖成分との通常のカップリング反応を含む知られている方法により調製することもできる。アミノアシル誘導体は、好ましくは、ヌクレオシドを付加的に保護することなく、アミノ酸とβ−Ｌ−ヌクレオシドとを選択的にカップリングすることにより調製することができる。カップリング反応は、カップリングを促進する適切なカップリング試薬を使用して達成することができる。カップリング試薬のいくつかの非限定的例は、トリフェニルホスフィンを伴うＭｉｔｓｕｎｏｂｕタイプの試薬（例えば、アゾジカルボン酸ジイソプロピル、アゾジカルボン酸ジエチルなどのアゾジカルボン酸ジアルキル）または様々なタイプのカルボジイミドである。
【０２２５】
所望の結果が得られる、即ち、分解の促進または過剰な副生成物を伴わない許容される速度で、反応を進行させるために適切な温度で、カップリング反応を実施することができる。
【０２２６】
必要な温度を得ることができ、反応成分を可溶化しうる反応溶剤を選択することができる。非限定的例は、これらに限らないが、ヘキサン、シクロヘキサン、ジクロロメタンまたはジクロロエタン、トルエン、アセトン、酢酸エチル、ジチアン、ＴＨＦ、ジオキサン、アセトニトリル、ジエチルエーテル、ピリジン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルアセトアミド、あるいはこれらの組合せなどのアルキルまたはハロアルキル溶剤を含む非プロトン性溶剤である。
【０２２７】
スキーム２は、Ｌ−デオキシリボヌクレオシドから誘導して、β−Ｌ−５’−アミノアシルヌクレオシドを調製するための非限定的例である。
【０２２８】
【化４７】
0004639032.tif 000023
【０２２９】
Ｃ．β−Ｌ−ヌクレオシドのβ−Ｌ−３’，５’−ビス−Ｏ−誘導体を調製するための方法
β−Ｌ−ヌクレオシドのβ−Ｌ−３’，５’−ビス−Ｏ−誘導体は、当技術分野で知られている方法、特に、アシル成分で１級および２級アルコールを保護する、すなわち無水物を介するか、カップリング剤を用いる知られている方法により調製することができる。非限定的実施例であるが、３’，５’−ビス−Ｏ−誘導体は、次の反応シークエンスに従い調製することができる：
【０２３０】
【化４８】
0004639032.tif 000024
【０２３１】
好ましい実施形態では、３’，５’−ビス−Ｏ−誘導体は、アミノアシル成分から誘導される。この方法の鍵となる出発物質も、適切に置換されたβ−Ｌ−ヌクレオシドである。β−Ｌ−ヌクレオシドの３’，５’−ビス−Ｏ−誘導体は、購入することもできるが、デオキシリボースなどのＬ−糖成分との通常のカップリング反応を含む知られている方法により調製することもできる。続いて、遊離の３’−および５’−ヒドロキシルを、Ｎ−保護されているαまたはβアミノ酸とカップリングさせることができる。カップリング反応は、カップリングを促進する適切なカップリング試薬を使用して達成することができる。カップリング試薬のいくつかの非限定的例は、トリフェニルホスフィンを伴うＭｉｔｓｕｎｏｂｕタイプの試薬（例えば、アゾジカルボン酸ジイソプロピル、アゾジカルボン酸ジエチルなどのアゾジカルボン酸ジアルキル）または様々なタイプのカルボジイミドである。
【０２３２】
所望の結果が得られる、即ち、分解の促進または過剰な副生成物を伴わない許容される速度で、反応を進行させるために適切な温度で、カップリング反応を実施することができる。
【０２３３】
必要な温度を得ることができ、反応成分を可溶化しうる反応溶剤を選択することができる。非限定的例は、これらに限らないが、ヘキサン、シクロヘキサン、ジクロロメタンまたはジクロロエタン、トルエン、アセトン、酢酸エチル、ジチアン、ＴＨＦ、ジオキサン、アセトニトリル、ジエチルエーテル、ピリジン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルアセトアミド、あるいはこれらの組合せなどのアルキルまたはハロアルキル溶剤を含む非プロトン性溶剤である。
【０２３４】
スキーム３は、Ｌ−デオキシリボヌクレオシドから誘導して、β−Ｌ−３’，５’−ジ−アミノアシルヌクレオシドを調製するための非限定的例である。
【０２３５】
【化４９】
0004639032.tif 000025
【０２３６】
Ｄ．アミノアシル成分を延長するための付加的方法
３’および５’−ヒドロキシルと、アシル、特にアミノアシル基などの適切な誘導体とを反応させることにより、表題化合物を調製することができる。ヌクレオシドをアミノアシル成分で誘導体化する場合には、遊離アミンをＮ−保護されているαまたはβアミノ酸とカップリングさせることが望ましい。カップリング反応は、カップリングを促進する適切なカップリング試薬を使用して達成することができる。カップリング試薬のいくつかの非限定的例は、トリフェニルホスフィンを伴うＭｉｔｓｕｎｏｂｕタイプの試薬（例えば、アゾジカルボン酸ジイソプロピル、アゾジカルボン酸ジエチルなどのアゾジカルボン酸ジアルキル）または様々なタイプのカルボジイミドである。
【０２３７】
所望の結果が得られる、即ち、分解の促進または過剰な副生成物を伴わない許容される速度で、反応を進行させるために適切な温度で、カップリング反応を実施することができる。
【０２３８】
必要な温度を得ることができ、反応成分を可溶化しうる反応溶剤を選択することができる。非限定的例は、これらに限らないが、ヘキサン、シクロヘキサン、ジクロロメタンまたはジクロロエタン、トルエン、アセトン、酢酸エチル、ジチアン、ＴＨＦ、ジオキサン、アセトニトリル、ジエチルエーテル、ピリジン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルアセトアミド、あるいはこれらの組合せなどのアルキルまたはハロアルキル溶剤を含む非プロトン性溶剤である。
【０２３９】
Ｅ．複素芳香族または複素環式塩基を誘導体化するための付加的方法
表題化合物は、複素環式または複素芳香族塩基、例えばＮ４−シトシン、Ｎ６−アデニンまたはＮ２−グアニン中の遊離のアミノを付加的に保護することにより調製することができる。例えば、アミンを、次の一般的プロトコルにより、アシル成分またはジアルキルアミノメチレン成分により保護することができる。
【０２４０】
【化５０】
0004639032.tif 000026
所望の結果が得られる、即ち、分解の促進または過剰な副生成物を伴わない許容される速度で、反応を進行させるために適切な温度で、保護を実施することができる。
【０２４１】
必要な温度を得ることができ、反応成分を可溶化しうる反応溶剤を選択することができる。非限定的例は、これらに限らないが、ヘキサン、シクロヘキサン、ジクロロメタンまたはジクロロエタン、トルエン、アセトン、酢酸エチル、ジチアン、ＴＨＦ、ジオキサン、アセトニトリル、ジエチルエーテル、ピリジン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルアセトアミド、あるいはこれらの組合せなどのアルキルまたはハロアルキル溶剤を含む非プロトン性溶剤である。
【０２４２】
続いて、遊離の３’−ヒドロキシルを、Ｎ−保護されているαまたはβアミノ酸とカップリングさせることができる。カップリング反応は、カップリングを促進する適切なカップリング試薬を使用して達成することができる。カップリング試薬のいくつかの非限定的例は、トリフェニルホスフィンを伴うＭｉｔｓｕｎｏｂｕタイプの試薬（例えば、アゾジカルボン酸ジイソプロピル、アゾジカルボン酸ジエチルなどのアゾジカルボン酸ジアルキル）または様々なタイプのカルボジイミドである。
【０２４３】
所望の結果が得られる、即ち、分解の促進または過剰な副生成物を伴わない、許容される速度で、反応を進行させるために適切な温度で、カップリング反応を実施することができる。
【０２４４】
必要な温度を得ることができ、反応成分を可溶化しうる反応溶剤を選択することができる。非限定的例は、これらに限らないが、ヘキサン、シクロヘキサン、ジクロロメタンまたはジクロロエタン、トルエン、アセトン、酢酸エチル、ジチアン、ＴＨＦ、ジオキサン、アセトニトリル、ジエチルエーテル、ピリジン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルアセトアミド、あるいはこれらの組合せなどのアルキルまたはハロアルキル溶剤を含む非プロトン性溶剤である。
【０２４５】
他の実施形態では、Ｎ４−またはＮ６−アシル誘導体を、アミノアシル部分から誘導し、次の反応順序に従い、遊離のヒドロキシルを場合により保護し、続いて適切に保護されているアミノエステルと縮合反応させ、必要な場合には、ヒドロキシル保護基を除去することにより、調製することができる。
【０２４６】
【化５１】
0004639032.tif 000027
【０２４７】
実施例
実施例１：４Ｎ−ｍＭＴｒ−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジン（１、図１）
β−Ｌ−ｄＣ（１ｇ；４．４０ｍｍｏｌ）を、無水ピリジン（４４ｍｌ）に入れた。トリメチルシリル基（ＴＭＳＣｌ、３．３４ｍｌ、２６．４ｍｍｏｌ）で一時的に保護し、続いてｍＭＴｒＣｌ（３．３８ｍｇ、１１ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、５４０ｍｇ、４．４０ｍｍｏｌ）を加えた後に、反応混合物を室温で３日間攪拌した｛Ａ．Ｎｙｉｌａｓ；Ｃ．Ｇｌｅｍａｒｅｃ；Ｊ．Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａ；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９０、４６、２１４９−２１６４｝。重炭酸ナトリウム抽出の後に、有機層を水で洗浄し、蒸発させ、ジオキサン（４０ｍＬ）に入れた。水性アンモニア（８．５ｍｌ）を滴加し、反応混合物を一夜攪拌した。揮発性物質を全て蒸発させた後に、固体残留物をシリカゲルカラム（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２中でのＭｅＯＨ（０〜１０％）の段階的勾配）で精製すると、所望の化合物１（１．０２ｇ、４６．５％）がフォームの形で得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ８．３９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨ，Ｄ２Ｏ  交換可能）、７．７０（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６，Ｊ＝７．３Ｈｚ）、７．４〜６．８（ｍ，１４Ｈ，（Ｃ６Ｈ５）２Ｃ（Ｃ６Ｈ４）ＯＣＨ３）、６．２３（ｄ，１Ｈ，Ｈ−５，Ｊ＝７．３Ｈｚ）、６．０２（ｔ，１Ｈ，Ｈ−１’，Ｊ＝６．５Ｈｚ）、５．１６（ｄ，１Ｈ，ＯＨ−３’，Ｊ＝３．８Ｈｚ，Ｄ２Ｏ  交換可能）、４．９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＯＨ−５’，Ｄ２Ｏ  交換可能）、４．１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．７（ｍ，４Ｈ，Ｈ−４’，ＯＣＨ３）、３．５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−５”）、２．１〜１．８（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−２”）；ＦＡＢ＜０，（ＧＴ）ｍ／ｅ  ４９８（Ｍ−Ｈ）−、３８２（Ｂ）−；２２６（Ｍ−ｍＭＴｒ）−；ＦＡＢ＞０（ＧＴ）５００（Ｍ＋Ｈ）＋、２７３（ｍＭＴｒ）＋；ＵＶ（ＥｔＯＨ  ９５）λｍａｘ＝２７９ｎｍ；）λｍｉｎ＝２５０ｎｍ。
【０２４８】
実施例２：４Ｎ−ｍＭＴｒ−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの５’−Ｌ−Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）バリンエステル（２、図１）
化合物１（１ｇ、２．００ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３４ｍｌ）溶液に連続的に、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、３７ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、Ｎ−（ｔ−ブトキシ−カルボニル）−Ｌ−バリン（Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、５８７ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、６６０ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ）を加えた｛Ｌ．Ｍ．Ｂｅａｕｃｈａｍｐ；Ｇ．Ｆ．Ｏｒｒ；Ｐ．Ｄｅ  Ｍｉｒａｎｄａ；Ｔ．Ｂｕｒｎｅｔｔｅ；Ｔ．Ａ．Ｋｒｅｎｉｔｓｋｙ；Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｃｈｅｍ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．１９９２、３、１５７−１６４｝。溶液を室温で攪拌した。４０時間後、反応混合物に、付加的なＤＭＡＰ（３７ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（５８７ｍｇ、２．７ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（６６０ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ）を再び加え、室温で４０時間攪拌した。混合物を濾過し、ＤＭＦを濾液から減圧除去し、残留物をシリカゲルカラムでクロマトグラフィー処理すると（溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２中でのＭｅＯＨ（０〜１０％）の段階的勾配）、所望の化合物２（５１５ｍｇ、３７％）がフォームとして得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ８．４４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＮＨ，Ｄ２Ｏ  交換可能）、７．７〜６．８（ｍ，１５Ｈ，，Ｈ−６および（Ｃ６Ｈ５）２Ｃ（Ｃ６Ｈ４）ＯＣＨ３）、．６．２６（ｄ，１Ｈ，Ｈ−５，Ｊ＝７．３Ｈｚ）、６．０６（ｔ，１Ｈ，Ｈ−１’，Ｊ＝６．６Ｈｚ）、５．７（ｂｓ，１Ｈ，ＯＨ−３’，Ｄ２Ｏ  交換可能）、４．２〜４．０（ｍ，３Ｈ，Ｈ−３’，Ｈ−４’およびＣＨ）、３．８〜３．９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−５”）、３．７（ｓ，３Ｈ，，ＯＣＨ３）、２．０〜１．９（ｍ，３Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−２”，ＣＨ）、１．３６（ｓ，９Ｈ，（ＣＨ３）３Ｃ）、０．８６（ｍ，６Ｈ，（ＣＨ３）２ＣＨ）；ＦＡＢ＜０，（ＧＴ）ｍ／ｅ  １３９５（２Ｍ−Ｈ）−、６９７（Ｍ−Ｈ）−、４２５（Ｍ−ｍＭＴｒ）−、３８２（Ｂ）−；２１６（ＢｏｃＶａｌ−Ｈ）−；ＦＡＢ＞０（ＧＴ）３８４（Ｂ＋２Ｈ）＋、２７３（ｍＭＴｒ）＋；５７（ＣＨ３）３Ｃ）＋；ＵＶ（ＥｔＯＨ  ９５）λｍａｘ＝２７９ｎｍ；λｍｉｎ＝２４９ｎｍ。
【０２４９】
実施例３：２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジン塩酸塩の５’−Ｌ−バリンエステル（３、図１）
化合物２（５００ｍｇ、０．７１５ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍｌ）中のトリフルオロ酢酸の２０％溶液に溶かし、トリイソプロピルシラン（１．４７ｍｌ、７１．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌し、バリンエステルを、Ｅｔ２Ｏ中でトリフルオロ酢酸塩として沈殿させた。数回、水と同時蒸発させた後に、沈殿物を水（２ｍｌ）に入れ、ＨＣｌのジオキサン（２０ｍｌ）飽和溶液で処理し、減圧蒸発させた。この処理を、３回繰り返して、最終的に所望の化合物３を、エーテル（２０７ｍｇ、７３％）中で塩酸塩として沈殿させた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ９．７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，１／２  ＮＨ２，Ｄ２Ｏ  交換可能）、８．６（ｂｒ  ｓ，４Ｈ，１／２  ＮＨ２，ＮＨ３，Ｄ２Ｏ  交換可能）、７．９８（ｄ，１Ｈ，，Ｈ−６  Ｊ＝７．８Ｈｚ）、．６．１７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−５，Ｊ＝７．８Ｈｚ）、６．１１（ｐｔ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．５（ｂｓ，＜１Ｈ，ＯＨ−３’，Ｄ２Ｏ  交換可能）、４．４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−５”）、４．３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．２〜４．０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４’，ＣＨ）、３．８〜３．９、３．７（ｓ，３Ｈ，，ＯＣＨ３）、２．３〜２．１（ｍ，３Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−２”，ＣＨ）、０．９４（ｄｄ，６Ｈ，（ＣＨ３）２ＣＨ，Ｊ＝３．７および６．６Ｈｚ）；ＦＡＢ＜０，（ＧＴ）ｍ／ｅ  ３６１（Ｍ＋Ｃｌ）−、３２５（Ｍ−Ｈ）−、１１６（Ｖａｌ−Ｈ）−、１１０（Ｂ）−；２１６（ＢｏｃＶａｌ−Ｈ）−；ＦＡＢ＞０（ＧＴ）６５３（２Ｍ＋Ｈ）＋、３２７（Ｍ＋Ｈ）＋；１１２（Ｂ＋２Ｈ）＋；）＋；｛ａ｝Ｄ２０−２８．５７（ｃ＝０．４９  ＤＭＳＯ中）；ＵＶ（ＥｔＯＨ  ９５）λｍａｘ＝２７２ｎｍ（ε  ８７００）；λｍｉｎ＝２５５ｎｍ（ε  ７６００）；ＨＰＬＣ  ｒｔ＝８．３７分（流速１ｍｌ／分で、３０分間にプログラムされている、２０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液中でのＣＨ３Ｎの０から５０％の勾配）。
【０２５０】
実施例４：Ｎ４−アセチル−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジン（４、図２）
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（９．２ｍｌ）中のヌクレオシド、β−Ｌ−ｄＣ（４１５ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）の懸濁液に、無水酢酸（２０７μｌ、２．２０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２４時間攪拌した［Ｖ．Ｂｈａｔ；Ｂ．Ｇ．Ｕｇａｒｋａｒ；Ｖ．Ａ．Ｓａｙｅｅｄ，Ｋ．Ｇｒｉｍｍ；Ｎ．Ｋｏｓｏｒａ；Ｐ．Ａ．Ｄｏｍｅｎｉｃｏ；Ｅ．Ｓｔｏｃｋｅｒ、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、１９８９、８（２）、１７９−１８３］。ＤＭＦを減圧除去した後に、生じた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製すると［溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２中の１５％ＭｅＯＨ］、所望の化合物（３１０ｍｇ、６３％）が得られ、これをエタノールから結晶させた；ｒａｐ１２８〜１７０℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １０．８６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ，Ｄ２Ｏ  交換可能）、８．３１（ｄ，１Ｈ，，Ｈ−６，Ｊ＝７．５Ｈｚ）、７．１８（ｄ，１Ｈ，Ｈ−５，Ｊ＝７．５Ｈｚ）、６．０９（ｔ，１Ｈ，Ｈ−１’，Ｊ＝６．３Ｈｚ）、５．２５（ｄ，１Ｈ，ＯＨ−３’，Ｄ２Ｏ  交換可能，Ｊ＝４．２Ｈｚ）、５．０３（ｔ，１Ｈ，ＯＨ−５’，Ｄ２Ｏ  交換可能，Ｊ＝５．０Ｈｚ）、４．１〜４．２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．８（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．４〜３．６（ｍ，２Ｈ，２Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−５”）、２．２〜２．３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２’）、２．０８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、２．０〜１．９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２”）；ＦＡＢ＜０、（ＧＴ）ｍ／ｅ  ８０６（３Ｍ−Ｈ）−、５３７（２Ｍ−Ｈ）−、３６０（Ｍ＋Ｇ−Ｈ）−、２６８（Ｍ−Ｈ）−、１５２（Ｂ）−；ＦＡＢ＞０（ＧＴ）８０８（３Ｍ＋Ｈ）＋、５３９（２Ｍ＋Ｈ）＋、３６２（Ｍ＋Ｇ＋Ｈ）＋、２７０（Ｍ＋Ｈ）＋、１５４（Ｂ＋２Ｈ）＋、１１７（Ｓ）＋；ＵＶ（Ｈ２Ｏ）λｍａｘ＝２９７ｎｍ（ε  ８３００）；λｍｉｎ＝２７０ｎｍ（ε  ３５００）；。λｍａｘ＝２４５ｎｍ（ε  １４４００）；λｍｉｎ＝２２６ｎｍ（ε  ５８００）；［α］Ｄ２０−８１．３１（ｃ＝１．０７  ＤＭＳＯ中）。
【０２５１】
実施例５：Ｎ４−［（ジメチルアミノ）メチレン］−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジン（５、図３）
表題化合物を、対応するＤ−エナンチオマーを調製するために開発された、公表されている手順に従って調製した［Ｓ．Ｇ．Ｋｅｒｒ，ａｎｄ  Ｔ．Ｉ．Ｋａｌｍａｎ、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９９４、８３、５８２−５８６］。Ｌ−ｄＣ（５００ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４．８ｍｌ）溶液を、ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（２．８ｍｌ、２１．０８ｍｍｏｌ）で処理し、室温で一夜攪拌した。溶液を減圧蒸発させ、エタノールと同時蒸発させた。エタノール／エーテルから結晶化させると、表題化合物（５０１．２ｍｇ、８１％）が淡黄色の結晶（融点１７４〜１７６℃（文献：Ｄ−エナンチオマーでは１８８〜１９０℃））として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ８．６０（ｓ，１Ｈ，Ｎ＝ＣＨ）、８．００（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．１５（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．９６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５）、５．２２（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ−３’）、５．０１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ−５’）、４．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．８０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、３．５６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’およびＨ−５”）、３．１５および３．０２（２ｓ，３Ｈおよび３Ｈ，Ｎ（ＣＨ３）２）、２．２２〜１．９０（２ｍ，１Ｈおよび１Ｈ，Ｈ−２’およびＨ−２”）；ＦＡＢ＞０（ＧＴ）８４７（３Ｍ＋Ｈ）＋、５６５（２Ｍ＋Ｈ）＋、２８３（Ｍ＋Ｈ）；ＦＡＢ＜０、（ＧＴ）ｍ／ｚ  ５９９（２Ｍ＋Ｃｌ）−’３１７（Ｍ＋Ｃｌ）−、１６５（Ｂ）−。
【０２５２】
実施例６：３’，５’−ジ−Ｏ−アセチル−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジン（６、図４）
表題化合物を、Ｌ−ｄＣから出発して、Ｄ−エナンチオマーを調製するための、Ｂｒｅｉｎｅｒら［Ｒ．Ｇ．Ｂｒｅｉｎｅｒ；Ｗ．Ｒｏｓｅ；Ｊ．Ａ．Ｄｕｎｎ；Ｊ．Ｅ．Ｍａｅ  Ｄｉａｒｍｉｄ  ａｎｄ  Ｊ．Ｂａｒｄｏｓ；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９０、３３、２５９６−２６０３］により開発された手順に従い、１ステップで合成した。Ｌ−ｄＣ（７６５ｍｇ、３．３７ｍｍｏｌ）および塩化アセチル（９６０μｌ、１３．４８ｍｍｏｌ）の氷酢酸（４．８ｍｌ）溶液を室温で１０分間攪拌し、次いで、無水クロロホルム（３．５ｍｌ）を加え、攪拌を２４時間継続した。溶液を減圧蒸発させ、エタノールと同時蒸発させた。エタノールから結晶化させると、所望の化合物７８％、（融点１９２．１９３℃）が得られた（文献：Ｄ−エナンチオマーでは１８７〜１８９℃［Ｂｒｅｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９０、３３、２５９６−２６０３］）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ９．８および８．７（２  ｂｒ  ｓ，＜３Ｈ，ＮＨ３＋，Ｄ２Ｏ  交換可能）、８．０（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６  Ｊ＝７．８Ｈｚ）、６．１８（ｄ，１Ｈ，Ｈ−５，Ｊ＝７．８Ｈｚ）、６．０８（ｔ，１Ｈ，Ｈ−１’，Ｊ＝６．７Ｈｚ）、５．２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．３〜４．１（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，Ｈ−５’，Ｈ−５”）、２，４〜２，５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−２”）、２．０６および２．０３（２  ｓ，６Ｈ，２  ＣＨ３）；ＦＡＢ＜０、（ＧＴ）ｍ／ｅ  ９６８（３Ｍ＋Ｃｌ）−、６５７（２Ｍ＋Ｃｌ）−、４３８（Ｍ＋Ｇ＋Ｃｌ）−、３４６（Ｍ＋Ｃｌ）−、３１０（Ｍ−Ｈ）−、１１０（Ｂ）−；５９（ＣＨ３ＣＯＯ）−；ＦＡＢ＞０（ＧＴ）６２３（２Ｍ＋Ｈ）＋、３１２（Ｍ＋Ｈ）＋、２０１（Ｓ）＋、１１２（Ｂ＋２Ｈ）＋、４３（ＣＨ３ＣＯ）＋；［α］Ｄ２０  ３６．２７（ｃ＝１．０２  ＤＭＳＯ中）；ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ＝２７７ｎｍ（ε  ９９００）；λｍｉｎ＝２４６ｎｍ（ε  ５０００）。
【０２５３】
実施例７：２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの３’，５’−Ｌ−Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）バリンジエステル（９、図５）
Ｎ４−［（ジメチルアミノ）メチレン］−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジン（７、５００ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３５ｍｌ）溶液を、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（１．３１ｇ、６．０３ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（８６．５ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）、塩酸１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）（１．３６ｇ、７．０９ｍｍｏｌ）で処理し、室温で４０時間攪拌した。付加的な量のＢｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（６５５ｍｇ、３．０１ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４３．２ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（６８０ｍｇ、３．５５ｍｍｏｌ）を加え、溶液を、さらに２０時間攪拌した。減圧蒸発させた後に、残留物をＣＨ２Ｃｌ２に入れ、水で数回抽出した。有機層をブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧蒸発させると、８が、粗製物質として得られ、これを、さらに精製することなく、次のステップで使用した。残留物をジオキサン（１８ｍｌ）に入れ、２６％ＮＨ４ＯＨ２６％水溶液で処理し、室温で１時間攪拌した。溶液を減圧蒸発させ、残留物を、ＣＨ２Ｃｌ２中でのＭｅＯＨ（０〜５％）の段階的勾配を用いるシリカゲルでのクロマトグラフィーにより精製すると、表題化合物（６９８．７ｍｇ、９から、５８％）が得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ７．５８（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２９〜７．１８（ｍ，４Ｈ，ＮＨ−ＢｏｃおよびＮＨ２）、６．２０（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．７５（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５）、５．２０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．２９（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’およびＨ−５”）、４．１４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．８６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ−ＮＨ−Ｂｏｃ）、２．３１〜２．２１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’およびＨ−２”）、２．１３〜１．９８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ（ｉＰｒ））、１．３８および１．３６（２ｓ，１８Ｈ，ｔＢｕ）、０．８８および０．８５（２  ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１２Ｈ，ＣＨ（ＣＨ３）２）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １７２．６７および１７２．４６、１６６．４１、１５６．６４および１５５．７０、１４１．３９、９５．４３、８５．７８、８２．０３、７９．１４、７５．５７、６４．９０、６０．３７および６０．１１、３７．４０、３０．３３、２９．００、１９．８３〜１９．１２；ＦＡＢ＞０（ＧＴ）６２６（Ｍ＋Ｈ）＋、１１２（Ｂ＋２Ｈ）＋、２５５（Ｍ−Ｂｏｃ）＋；ＦＡＢ＜０、（ＧＴ）ｍ／ｚ  １２４９（２Ｍ−Ｈ）−、６２４（Ｍ−Ｈ）−。
【０２５４】
実施例８：塩酸２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの３，５’−Ｌ−バリンエステル（１０、図５）
９（６７５ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）のジオキサン（３０ｍｌ）溶液を、ジオキサン（３０ｍｌ）中の２６％ＨＣｌ溶液で処理し、室温で１時間５５分攪拌した。生じた白色懸濁液を、減圧蒸発させた。白色の固体残留物を、少量のＭｅＯＨに入れ、エーテル中で沈殿させると、表題化合物１０が白色の固体（融点１８７℃、分解）として得られた；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  ９．７９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，１／２ＮＨ２）、８．７２（ｂｒ  ｓ，７Ｈ，１／２ＮＨ２およびＮＨ３＋）、８．０４（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６）、６．２１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５）、６．１６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．３９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．５０〜４．４０（ｍ，３Ｈ，Ｈ−４’，Ｈ−５’およびＨ−５”）、３．９０（２  ｂｒ．ｄ，２Ｈ，ＣＨ−ＮＨ３＋）、２．６３〜２．５０（２ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’およびＨ−２”）、２．２１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ（ｉＰｒ））、１．０２〜０．９４（ｍ，１２Ｈ，ＣＨ（ＣＨ３）２）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １６９．５０および１６８．９４、１６１．０２、１４８．５０、１４５．２６、９５．１８、８７．１９、８２．１５、７６．１４、６５．７７および６５．５９、５８．１２および５８．０７、３７．００、３０．１６、１９．２６〜１８．５１；ＦＡＢ＞０（ＧＴ）４２６（Ｍ＋Ｈ）＋、１１２（Ｂ＋２Ｈ）＋；ＦＡＢ＜０、（ＧＴ）ｍ／ｚ  ８８５（２Ｍ＋Ｃｌ）−、４６０（Ｍ＋Ｃｌ）；ＵＶ（Ｈ２Ｏ）λｍａｘ＝２７０ｎｍ（ε  ７６００）。
【０２５５】
実施例９：２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンのＮ４−Ｂｏｃ−バリニルエステル（１３、図６）
無水ＴＨＦ（８０ｍｌ）中のＬ−ｄＣ（１．８０ｇ、７．９２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（８．８ｍｌ、６３．１４ｍｍｏｌ）の混合物をクロロトリメチルシラン（６ｍｌ、４７．２８ｍｍｏｌ）で処理し、室温で一夜攪拌した。反応を、ＮＨ４Ｃｌ（２６ｍｌ）の飽和水溶液および水（１０ｍＬ）を加えることによりクエンチした。水性層をＥｔＯＡｃで３回抽出した。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧蒸発させると、１１を含有する粗製の淡黄色のフォーム−オイルが得られ、これを、さらに精製することなく次のステップで使用した。この残留物を、ＣＨ２Ｃｌ２（１０４ｍｌ）に入れ、Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−バリン（Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、１．７２ｇ、７．９０ｍｍｏｌ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ、４．２０ｇ、９．５０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（２．２ｍｌ、１５．７８ｍｍｏｌ）で処理し、室温で２日間攪拌した。溶液を、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３で２回抽出した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧蒸発させると、粗製物質として１２が得られ、これを、さらに精製することなく次のステップで使用した。残留物をジオキサン（８０ｍｌ）に入れ、２６％ＮＨ４ＯＨ水溶液で処理し、室温で６時間４５分攪拌した。溶液を減圧蒸発させ、無水ＥｔＯＨと共に同時蒸発させ、残留物を、ＣＨ２Ｃｌ２中でのＭｅＯＨ（５〜１０％）の段階的勾配を用いるシリカゲルでのクロマトグラフィーにより精製すると、表題化合物１３がフォーム（１．６４ｇ、全体収率４８．５％）として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １０．８８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ−４）、８．４０（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６）、７．２６（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５）、７．０６（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ−ＮＨ−Ｂｏｃ）、６．１５（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’）、５．３２（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ−３’）、５．０９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ−５’）、４．２７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）、４．０６（ｐｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ−ＮＨ−Ｂｏｃ）、３．９１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）、３．６３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’およびＨ−５”）、２３５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−２”）、２．０６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’およびＣＨ（ＣＨ３）２）、１．４３（ｓ，９Ｈ，ｔＢｕ）、０．９２（ｐｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ（ＣＨ３）２）；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δｐｐｍ  １７４．４１、１６２．９４、１５６．４７、１５５．２４、１４６．１０、９６．０６、８８．７９、８７．１０、７９．０９、７０．７５、６１．７８、６１．５５、４１．７４、３０．６３、２９．０２、１９．９１および１９．１０；ＦＡＢ＞０（ＧＴ）８５３（２Ｍ＋Ｈ）＋、４２７（Ｍ＋Ｈ）＋  ３１１（Ｂ＋２Ｈ）＋、２５５（Ｍ−Ｂｏｃ）＋；ＦＡＢ＜０、（ＧＴ）ｍ／ｚ  ８５１（２Ｍ−Ｈ）−、４２５（Ｍ−Ｈ）−、３０９（Ｂ）−。
【０２５６】
実施例１０：３’，５’−Ｎ４−トリバリル−２’−デオキシシチジン（１４、図７）
出発物質である３’，５’−Ｎ４−トリ（Ｂｏｃ−バリル）−２’−デオキシシチジンをＣＨ２Ｃｌ２に溶かしたが、試料をＰｅｒｌｉｔａで濾過すると、不溶性物質が存在した。これにより、使用するＣＨ２Ｃｌ２の容量を増やした。次いで、ＨＣｌ／ジオキサン試薬を攪拌しながら加えた。数秒の内に、発泡を溶液中に観察することができ、その後、混合物は濁った。混合物を室温で約１時間攪拌した。この間に、沈殿物はさらに、結晶となった。混合物を迅速に濾過し、濾過ケークをＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、次いで、ポンプ上で乾燥させると、乳白色の結晶０．１６ｇ（６９％）が得られた。試薬および条件を、より明確に下記の表１に記載する。
【０２５７】
【表１】
0004639032.tif 000028
【０２５８】
実施例１１：ＤｉＢｏｃバリル−２’−ｄＣおよびＤｉＢｏｃバリル−２’−ｄＵに対するＨＰＬＣアッセイ法
所望の化合物を無水エタノールに溶かして、１．０ｍｇ／ｍＬ試料を調製した。次いで、０．１６ｍｇ／ｍＬの濃度が得られるまで、この溶液を、ＭｅＯＨ５０％およびＫＨ２ＰＯ４５０％を含有する溶液（０．０１５Ｍ、ｐＨ＝３．３０〜３．５０）で希釈した（注：使用した全ての溶剤を、使用前に脱ガスした）。次いで、この溶液２０μＬを直ちにＷＡＴＥＲＳからのＨＰＬＣカラム（ＮＯＶＡＰＡＫ  Ｃ１８−４ｐｍ−３．９×１５０ｍｍ）に注入した。カラム温度３５℃で、流速を、１ｍＬ／分にセットした。化合物を検出するために、波長検出を、Ｄｉ−Ｂｏｃ２’ｄＣでは２７５ｎｍに、Ｄｉ−Ｂｏｃ２’ｄＵでは２６０ｎｍに、不純物では２０４に１５分後にセットした。カラムを、ポンプＡではＫＨ２ＰＯ４（０．０１５Ｍ，ｐＨ＝３．３０〜３．５０、Ｈ３ＰＯ４１０ｖ／ｖ％で調節）を用いて、ポンプＢではＨＰＬＣ用アセトニトリルを用いて作動させた。勾配パターンを表２に示す。
【０２５９】
【表２】
0004639032.tif 000029
ＶＩＩＩ．活性化合物の抗ＨＢＶ活性
ヒトＤＮＡポリメラーゼおよびミトコンドリア機能は、インビトロでＬ−ｄＣにより影響を受けなかった。Ｌ−ｄＣは、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄前駆細胞ならびにヒトおよび他の非ヒト哺乳動物起源の多くの細胞系に対して非細胞毒性であった。
【０２６０】
Ｌ−ｄＣの抗ウイルス活性および安全性を、慢性Ｂ型肝炎感染のウッドチャックモデルを使用する２つの研究で調べた。最初の研究では、ＷＨＶ（＞１０１１ゲノム当量／血清ＭＬ）に慢性的に感染したウッドチャックを、Ｌ−ｄＣの液体処方物で、２８日間にわたって１日１回、経口により治療した。対照動物には、ラミブジンまたは薬剤を含まない液体処方物を与えた。Ｌ−ｄＣ治療された群では、ウイルス負荷が、用量に応じて低下した。最も高い試験用量（１０ｍｇ／ｋｇ／日）では、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）アッセイにより、ベースラインから６ｌｏｇほど、ウイルス負荷が低下した。処置後ウイルスリバウンドが、第２週までに検出された。全ての動物の体重が増加し、４週間の治療相または８週間の治療後追跡期間の間に、薬剤関連毒性は観察されなかった。
【０２６１】
Ｌ−ｄＣにより細胞外ウイルスデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を低減するためのインビトロ５０％有効濃度（ＥＣ５０）は、ＨＢＶに対しては０．２４μＭであり、ＤＨＢＶに対しては０．８７μＭであった。加えて、Ｌ−ｄＣは、細胞内ＨＢＶ  ＤＮＡ複製中間体（ＲＩ）を、０．５１μＭのＥＣ５０で低下させた。ＨＢＶ複製に対するＬ−ｄＣの９０％有効濃度（ＥＣ９０）は、１．０７μＭであった。構造活性相関（ＳＡＲ）は、３’位のヒドロキシル基（３’−ＯＨ）を置換することにより、その抗ウイルス活性がヘパドナウイルスから、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）および特定のヘルペスウイルスを含む他のウイルスへと広がることを示している。塩基中での置換は、抗ウイルス効力および選択性を低下させた。
【０２６２】
慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染のウッドチャックモデルを使用する第２の研究により、第２の本発明によるヌクレオシド［β−Ｌ−２’−デオキシチミジン（Ｌ−ｄＴ）］と組み合わせた場合のＬ−ｄＣの抗ウイルス効果および安全性を試験した。この研究には、Ｌ−ｄＣが唯一の薬剤（１ｍｇ／ｋｇ／日）として使用される治療群が含まれた。１２週間の治療相または１２週間の治療後追跡期間の間、単独でも、Ｌ−ｄＴと組み合わせても、Ｌ−ｄＣには薬剤関連毒性は観察されなかった。対照動物に対しての体重または血清化学および血液学的パラメーターに変化はなかった。治療後肝生検は、脂肪変化の組織形態学的証拠（微小胞性脂肪変性）を示さなかった。Ｌ−ｄＣ（１ｍｇ／ｋｇ／日）＋Ｌ−ｄＴ（１ｍｇ／ｋｇ／日）の組合せは、相乗作用を有し、ベースラインから８ｌｏｇほどウイルス負荷を低下させた。
【０２６３】
抗ウイルスヌクレオシドおよびヌクレオシド類似体は、その抗ウイルス効果を細胞内三リン酸誘導体として、ウイルス複製の間のウイルスポリメラーゼのレベルで示す。天然ヌクレオシド（Ｄ−デオキシシチジンおよびＤ−チミジン）および抗ウイルスヌクレオシド類似体（例えば、ラミブジンおよびジドブジン（ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ））と同様に、Ｌ−ｄＣはリン酸化により細胞内で活性化された。ヒト肝細胞では、デオキシシチジンキナーゼ（ｄＣＫ）により、Ｌ−ｄＣは５’−一リン酸（ＭＰ）誘導体へと用量依存的に当初変換された。次いで、Ｌ−ｄＣ−ＭＰは、５’−二リン酸（ＤＰ）形に変換され、これは引き続き、主に細胞内５’−三リン酸（ＴＰ）代謝物に変換された。Ｌ−ｄＣ−ＴＰレベルは、Ｌ−ｄＣ１０μＭ（一次ヒト肝細胞中９０．１μＭ）に暴露されたＨｅｐＧ２細胞では２４時間目に７２．４μＭに達し、細胞内半減期１５．５時間を有した。内在ポリメラーゼアッセイでは、Ｌ−ｄＣ−ＴＰは、１．８２μＭの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）でＷＨＶのビリオン関連ＤＮＡポリメラーゼを阻害した。Ｌ−ｄＣによるＨＢＶ  ＤＮＡポリメラーゼの阻害に関する詳細なメカニズムは、調査中である。一次培養中のＨｅｐＧ２細胞またはヒト肝細胞をＬ−ｄＣに暴露すると、第２のＴＰ誘導体であるβ−Ｌ−２’−デオキシウリジン５’−三リン酸（Ｌ−ｄＵ−ＴＰ）が生じた。Ｌ−ｄＣ１０μＭ（一次ヒト肝細胞中４３．５μＭ）に曝されたＨｅｐＧ２細胞では、２４時間目に、Ｌ−ｄＵ−ＴＰレベルは１８．２μＭに達した。内在ポリメラーゼアッセイでは、Ｌ−ｄＵ−ＴＰは、５．２６μＭのＩＣ５０でＷＨＶのビリオン関連ＤＮＡポリメラーゼを阻害した。
【０２６４】
一次ヒト肝細胞培養およびヒト肝ガン細胞系（ＨｅｐＧ２）では、Ｌ−ｄＣの主な代謝物は、Ｌ−ｄＣ−ＴＰであった。これらの細胞をＬ−ｄＣに曝すと、Ｌ−ｄＵ−ＴＰの形成がもたらされた。インビトロ薬理学的アッセイは、Ｌ−ｄＣ−ＴＰが、ビリオン−関連ＤＮＡポリメラーゼに対して、１．８２ｍＭのＩＣ５０でヘパドナウイルスＤＮＡ合成を阻害することを示した。Ｌ−ｄＵ−ＴＰは、５．２６μＭのＩＣ５０でヘパドナウイルスＤＮＡ合成を阻害した。Ｌ−ｄＣ−ＴＰおよびＬ−ｄＵ−ＴＰは、最も高い試験濃度である１００μＭの濃度まで、ヒトＤＮＡポリメラーゼα、βおよびγを阻害しなかった。
【０２６５】
２．２．１５細胞培養（肝炎ビリオンで形質転換させたＨｅｐＧ２細胞）中でのウイルスの成長を阻害する活性化合物の能力は、下記に詳述するように評価することができる。
【０２６６】
この培養系中での抗ウイルス効果に関するアッセイおよびＨＢＶ  ＤＮＡの分析の概要および詳細は、既に記載されている（Ｋｏｒｂａ  ａｎｄ  Ｍｉｌｍａｎ、１９９１、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．、１５：２１７）。抗ウイルス評価を、細胞の２つの別々の継代で行う。全てのプレート中の全てのウェルに、同じ密度で同時に接種する。
【０２６７】
細胞内および細胞外ＨＢＶ  ＤＮＡの両方のレベルにおける固有の変化により、未処置細胞でのこれらのＨＢＶ  ＤＮＡ形での平均レベルよりも３．５倍（ＨＢＶビリオンＤＮＡで）または３．０倍（ＨＢＶ  ＤＮＡ複製中間体で）高い抑制のみを、統計的に有意とみなす（Ｐ＜０．０５）。各細胞ＤＮＡ製剤に組み込まれたＨＢＶ  ＤＮＡレベル（これらの実験での細胞１個当たりでは、一定なまま）を使用して、細胞内ＨＢＶ  ＤＮＡ形のレベルを算出することにより、等量の細胞ＤＮＡを、別々のサンプル間で比較することが保証される。
【０２６８】
未処置細胞での細胞外ＨＢＶビリオンＤＮＡの典型的な値は、５０から１５０ｐｇ／培地ｍｌ（平均約７６ｐｇ／ｍｌ）である。未処置細胞での細胞内ＨＢＶ  ＤＮＡ複製中間体は５０から１００μｇ／細胞ＤＮＡｐｇ（平均約７４ｐｇ／細胞ＤＮＡμｇ）である。通常、抗ウイルス化合物での処置による細胞内ＨＢＶ  ＤＮＡレベルの低下は、ＨＢＶビリオンＤＮＡレベルの低下に比べると、明白さに劣り、よりゆっくりと生じる（Ｋｏｒｂａ  ａｎｄ  Ｍｉｌｍａｎ、１９９１、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．、１５：２１７）。
【０２６９】
ハイブリダイゼーション分析を行う方法では、１細胞当たりの２〜３個のゲノムコピーに対する細胞内ＨＢＶ  ＤＮＡ約１．０ｐｇと、ウイルス粒子３×１０５個／ｍＬに対する細胞外ＨＢＶ  ＤＮＡ１．０ｐｇ／ｍｌとが等量となる。
【０２７０】
実施例
実施例１２：可溶性研究
水中での天然デオキシリボシトシン（Ｄ−ｄＣ）、Ｌ−ｄＣの３’−バリニルエステルおよびＬ−ｄＣの３’，５’−ジバリニルエステルの可溶性を比較した。Ｌ−ｄＣの可溶性を初めに、表３に示すように、様々なよく知られている濃度のβ−Ｌ−ｄＣを連続して注入することによるＨＰＬＣデータ（即ち曲線下面積）を分析することにより評価した。ＨＰＬＣを、１分当たり１ｍＬの流速を伴う１５分間のプログロムで、２０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ＴＥＡＡｃ）中でのＣＨ３ＣＮの０から２５％の勾配を用いてＮｏｖａ−Ｐａｃｋ  Ｃ１８カラム（３．９×１５０ｍｍ）で作動させた。溶液濃度：曲線下面積により、ｙ＝４１５００４９４７７×−４３３４．４６８４５の比例関係が得られた。
【０２７１】
【表３】
0004639032.tif 000030
【０２７２】
これから、天然デオキシリボシトシン（Ｄ−ｄＣ）を用いて飽和溶液を調製した；サンプルを３つ取り、ＨＰＬＣに注入した。この飽和溶液の濃度は、１．０７、１．０８および０．９６モル／Ｌであると決定された；したがって、飽和溶液は、１．０３モル／Ｌまたは２７２ｇ／Ｌの平均飽和濃度を有した。結果を表４に作表する。
【０２７３】
【表４】
0004639032.tif 000031
【０２７４】
同様に、水へのβ−Ｌ−ｄＣの塩酸３’−バリニルエステルの可溶性を評価した。表５に示すように、様々な濃度のβ−Ｌ−ｄＣの塩酸３’−バリニルエステルをＨＰＬＣに連続して注入し、曲線下面積を測定することにより、校正曲線を求めた。ここでも、ＨＰＬＣを、１分当たり１ｍＬの流速を伴う１５分間のプログロムで、２０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ＴＥＡＡｃ）中でのＣＨ３ＣＮの０から２５％の勾配を用いてＮｏｖａ−Ｐａｃｋ  Ｃ１８カラム（３．９×１５０ｍｍ）で作動させた。曲線下面積に対する溶液濃度より、ｙ＝３１７６４２３９６３×−３３０５１．６３の比例関係が得られた。
【０２７５】
【表５】
0004639032.tif 000032
【０２７６】
これから、β−Ｌ−ｄＣの塩酸３’−バリニルエステルの飽和溶液を試みたが、得られなかった。したがって、実験室で容易に得ることができたβ−Ｌ−ｄＣの塩酸３’−バリニルエステルの最大量を、水に溶かした。３つのサンプルを集め、ＨＰＬＣからの曲線下面積から、平均濃度１．０１３、０．９９６および１．０５９モル／Ｌを有することを決定した。結果を表６に作表する。
【０２７７】
【表６】
0004639032.tif 000033
３つの結果は全て、校正曲線から算出された予測範囲内であり、これらの高い濃度での化合物の完全な可溶性を示し、このサンプルの飽和溶液は、３つのサンプルの平均値よりも高い、即ち１．０２３モル／Ｌまたは４０８ｇ／Ｌを上回ることを示している。
【０２７８】
水中でのβ−Ｌ−ｄＣの塩酸３’，５’−バリニルエステルの可溶性を評価した。表７に示すように、様々な濃度のβ−Ｌ−ｄＣの塩酸３’，５’−ジバリニルエステルをＨＰＬＣに連続して注入し、曲線下面積を測定することにより、校正曲線を求めた。ＨＰＬＣを、１分当たり１ｍＬの流速を伴う１５分間のプログロムで、２０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ＴＥＡＡｃ）中でのＣＨ３ＣＮの０から２５％の勾配を用いてＮｏｖａ−Ｐａｃｋ  Ｃ１８カラム（３．９×１５０ｍｍ）で作動させた。溶液濃度：曲線下面積により、ｙ＝３１７６４２３９６３ｘ−３３０５１．６３の比例関係が得られた（図８ｂ）。
【０２７９】
【表７】
0004639032.tif 000034
【０２８０】
これから、β−Ｌ−ｄＣの塩酸３’，５’−ジバリニルエステルの飽和溶液を試みたが、得られなかった。したがって、実験室で容易に得ることができたβ−Ｌ−ｄＣの塩酸３’，５’−ジバリニルエステルの最大量を、水に溶かした。３つのサンプルを集め、ＨＰＬＣからの曲線下面積から、平均濃度２．８、２．４および２．４モル／Ｌを有することを決定した。結果を表８に作表する。
【０２８１】
【表８】
0004639032.tif 000035
３つの結果は全て、校正曲線から算出された予測範囲内であり、これらの高い濃度での化合物の完全な可溶性を示し、この試料の飽和溶液は、３つのサンプルの平均値よりも高い、即ち２．５モル／Ｌまたは１３３７ｇ／Ｌを上回ることを示している。
【０２８２】
同様の可溶性研究を、β−Ｌ−ｄＣの塩酸５’−バリニルエステル（５．１モル／Ｌまたは１６６４ｇ／Ｌを上回る）およびβ−Ｌ−ｄＣの塩酸３’，５’−ジアセチルエステル（３．３モル／Ｌまたは１１４８ｇ／Ｌ）で行った。累積結果を、表９に作表する。
【０２８３】
【表９】
0004639032.tif 000036
【０２８４】
実施例１３：Ｌｏｇ  Ｐ研究−リン酸緩衝液
オクタノール−１（Ｂ）で飽和させた一塩基リン酸カリウム溶液（２８．５ｍＬ）および二塩基リン酸カリウム溶液（７１．５ｍＬ）の混合物から製造された０．０２Ｍリン酸緩衝液（Ａ、１００ｍＬ、ｐＨ７．２）２．２ｍＬに、Ｄ−ｄＣ約１．５ｍｇを溶かした。この溶液１ｍＬに、０．０２Ｍリン酸緩衝液（Ａ）で飽和させたオクタノール−１（Ｂ）１ｍＬを加えた。生じた混合物を攪拌し、遠心分離した；各相から３つのサンプルを集め、表１０に示すように、ＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣを、１分当たり１ｍＬの流速を伴う１５分間のプログロムで、２０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ＴＥＡＡｃ）中でのＣＨ３ＣＮの０から２５％の勾配を用いてＮｏｖａ−Ｐａｃｋ  Ｃ１８カラム（３．９×１５０ｍｍ）で作動させた。Ｄ−ｄＣのｌｏｇ  Ｐは−１．４１であり、したがってＤ−ｄＣはオクタノールよりも水を好むことが判明した。
【０２８５】
【表１０】
0004639032.tif 000037
【０２８６】
同様に、一塩基リン酸カリウム溶液（２８．５ｍＬ）および二塩基リン酸カリウム溶液（７１．５ｍＬ）の混合物から製造された０．０２Ｍリン酸緩衝液（Ａ、１００ｍＬ、ｐＨ７．２）２．５ｍＬに、塩酸Ｌ−ｄＣ−３’−バリンエステル約１．５ｍｇを溶かした。次いで、溶液をオクタノール−１（Ｂ）で飽和させた。この溶液１ｍＬに、０．０２Ｍリン酸緩衝液（Ａ）で飽和させたオクタノール−１（Ｂ）１ｍＬを加えた。生じた混合物を攪拌し、遠心分離した；各相から３つのサンプルを集め、表１１に示すように、ＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣを、１分当たり１ｍＬの流速を伴う１５分間のプログロムで、２０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ＴＥＡＡｃ）中でのＣＨ３ＣＮの０から２５％の勾配を用いてＮｏｖａ−Ｐａｃｋ  Ｃ１８カラム（３．９×１５０ｍｍ）で作動させた。
【０２８７】
【表１１】
0004639032.tif 000038
塩酸Ｌ−ｄＣ−３’−バリンエステルのｌｏｇ  Ｐは−１．５３であり；したがってＬ−ｄＣ−３’−バリンエステルは、Ｄ−ｄＣよりも高い程度で、オクタノールよりも水を好むことが判明した。
【０２８８】
塩酸Ｌ−ｄＣ−５’バリンエステルおよび塩酸Ｌ−ｄＣ−３’，５’−ジバリンエステルに関して、ｌｏｇ  Ｐ値を算出した。結果を表１２に作表する。しかし、塩酸Ｌ−ｄＣ−３’，５’−ジバリンエステルでのｌｏｇ  Ｐ値はおそらく、測定された値（−０．８６）よりも低いことを特記すべきである。実験の間に、３’−もしくは５’−モノバリニルエステルまたはさらにＬ−ｄＣへのジバリンエステルの有意な変換が観察された。塩酸Ｌ−ｄＣ−３’，５’−ジバリンエステルの変換が水性相で５０％、有機相で１４％検出された。この変換は、ｐＨ７のリン酸緩衝液中でのエステルの不安定性による（実施例１５および１６参照）。
【０２８９】
【表１２】
0004639032.tif 000039
【０２９０】
実施例１４：Ｌｏｇ  Ｐ’研究−ＭｉｌｌｉＱ水
ジバリンエステルがモノエステルおよびＬ−ｄＣに変換するのを回避するために、代替ｌｏｇ  Ｐ研究をリン酸緩衝液の代わりにＭｉｌｌｉＱ水（Ａ’）を使用して行った（ｐＨ７．２の代わりに、ｐＨ６．５）。ジバリニルエステルの塩酸塩形のみが、水中で考慮されうることを特記することが重要である。塩酸Ｌ−ｄＣ−３’，５’−ジバリニルエステル約１．５ｍｇを、オクタノール−１（Ｂ）で飽和させたＭｉｌｌｉＱ水（Ａ’、ｐＨ６．５）２．２ｍＬに溶かした。この溶液１ｍＬに、ＭｉｌｌｉＱ水（Ａ’）で飽和させたオクタノール−１（Ｂ）１ｍＬを加えた。生じた混合物を攪拌し、遠心分離した；各相から３つのサンプルを集め、表１３に示すように、ＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣを、１分当たり１ｍＬの流速を伴う１５分間のプログロムで、２０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ＴＥＡＡｃ）中でのＣＨ３ＣＮの０から２５％の勾配を用いてＮｏｖａ−Ｐａｃｋ  Ｃ１８カラム（３．９×１５０ｍｍ）で作動させた。これらの条件下での３’，５’−ジバリンのｌｏｇ  Ｐ’は、−２．７２であり、リン酸緩衝液中の対イオンの強い効果を示していることが判明した。水性相でも有機相でも、モノエステルまたはＬ−ｄＣへのジバリンの変換は観察されなかった。
【０２９１】
【表１３】
0004639032.tif 000040
【０２９２】
同様に、塩酸Ｌ−ｄＣ−５’−バリニルエステル約１．５ｍｇを、オクタノール−１（Ｂ）で飽和させたＭｉｌｌｉＱ水（Ａ’、ｐＨ６．５）２．２ｍＬに溶かした。この溶液１ｍＬに、ＭｉｌｌｉＱ水（Ａ’）で飽和させたオクタノール１（Ｂ）１ｍｌを加えた。生じた混合物を攪拌し、遠心分離した；各相から３つのサンプルを集め、表１４に示すように、ＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣを、１分当たり１ｍＬの流速を伴う１５分間のプログロムで、２０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液（ＴＥＡＡｃ）中でのＣＨ３ＣＮの０から２５％の勾配を用いてＮｏｖａ−Ｐａｃｋ  Ｃ１８カラム（３．９×１５０ｍｍ）で作動させた。これらの条件下での５’−バリンのｌｏｇ  Ｐは−２．７５であり、ここでも、リン酸緩衝液を使用するｌｏｇ  Ｐ研究で測定された値よりも低い値であることが判明した。
【０２９３】
【表１４】
0004639032.tif 000041
【０２９４】
これらの条件下では、塩酸Ｌ−ｄＣ−５’−バリニルエステルおよび塩酸Ｌ−ｄＣ−３’，５’−ジバリニルエステルでのｌｏｇ  Ｐ’値は、非常に似ている（表１５）。
【０２９５】
【表１５】
0004639032.tif 000042
【０２９６】
実施例１５：ｐＨ７．４での安定性研究
塩酸Ｌ−ｄＣ−３’−バリンエステルの各代謝物の分解速度を算出した。ｐＨ７．４０での塩酸Ｌ−ｄＣ−３’−バリンエステルの半減期は、３７℃で、０．２Ｍトリス−ＨＣｌ溶液中では、７時間と求められた。これらの条件で、塩酸Ｌ−ｄＣ−３’−バリンエステルは、単純にＬ−ｄＣに変換される。シトシンは検出されず、したがって検出可能なグリコシド結合切断はなかった。
【０２９７】
同様に、塩酸Ｌ−ｄＣ−３’，５’−ジバリンエステルの各代謝物の分解速度を算出した。ｐＨ７．４２での塩酸Ｌ−ｄＣ−３’，５’−ジバリンエステルの半減期は、３７℃で、０．２Ｍトリス−ＨＣｌ溶液中では、２．４時間と求められた。これらの条件で、塩酸Ｌ−ｄＣ−３’，５’−ジバリンエステルは一部、３’−および５’−バリニル−Ｌ−ｄＣに加水分解され、これらは後で、Ｌ−ｄＣに変換される。シトシンは検出されず、したがって検出可能なグリコシド結合切断はなかった（スキーム４、図９ａおよび９ｂ）。
【０２９８】
【化５２】
0004639032.tif 000043
【０２９９】
実施例１６：ｐＨ７．２０での安定性研究
ｐＨ７．２０での塩酸Ｌ−ｄＣ−３’，５’−ジバリンエステルの半減期は、２０ｍＭリン酸緩衝液中では、２．２時間と求められた。これらの条件で、塩酸Ｌ−ｄＣ−３’，５’−ジバリンエステルは一部、３’−および５’−バリニル−Ｌ−ｄＣに加水分解され、これらは後で、Ｌ−ｄＣに変換される。シトシンは検出されず、したがって検出可能なグリコシド結合切断はなかった（スキーム５、図１０ａおよび１０ｂ）。
【０３００】
【化５３】
0004639032.tif 000044
【０３０１】
実施例１７：ｐＨ４．５での安定性研究
ｐＨ４．５１での塩酸Ｌ−ｄＣ−３’−バリンエステルの半減期は、２０ｍＭ酢酸緩衝液中では、８．６日と決定された。ここでも、塩酸Ｌ−ｄＣ−３’−バリンエステルは単純に、Ｌ−ｄＣに変換される。シトシンは検出されず、したがって検出可能なグリコシド結合切断はなかった。
【０３０２】
同様に、ｐＨ４．５１での塩酸Ｌ−ｄＣ−３’，５’−ジバリンエステルの半減期は、２０ｍＭ酢酸緩衝液中では、４４時間と決定された。これらの条件で、塩酸Ｌ−ｄＣ−３’，５’−ジバリンエステルは一部、３’−および５’−バリニル−Ｌ−ｄＣに加水分解され、これらは後で、Ｌ−ｄＣに変換される。シトシンは検出されず、したがって検出可能なグリコシド結合切断はなかった（図１１ａおよび１１ｂ）。
【０３０３】
実施例１８：ｐＨ１．２での安定性研究
ｐＨ１．２での塩酸Ｌ−ｄＣ−３’−バリンエステルの半減期は、１３５ｍＭ  ＫＣｌ−ＨＣｌ緩衝液中では、４８時間を上回ると決定された。シトシンは検出されず、したがって検出可能なグリコシド結合切断はなかった。
【０３０４】
同様に、塩酸Ｌ−ｄＣ−５’−バリンエステルで、安定性研究を行った。この化合物は、ｐＨ１．２で完全に安定で、他の代謝物または分解生成物は、２３時間目まで検出されなかった。溶液中、２日目までは、グリコシド結合切断は検出されなかった。
【０３０５】
Ｌ−ｄＣの３’，５’−ジアセチルエステルは、ｐＨ１．２で１１．２時間の半減期を有することが判明した。これらの条件下で、化合物は部分的に加水分解されて３’−または５’−誘導体となり、これらは、後でＬ−ｄＣに変換された。溶液中、２日目までは、グリコシド結合切断は検出されなかった。
【０３０６】
Ｌ−ｄＣの３’，５’−ジバリニルエステルは、１．２３のｐＨで完全に安定であることが判明した。それというのも、他の化合物が、これらの条件下に４８時間目まで検出されなかったためである。溶液中、２日目までは、グリコシド結合切断は検出されなかった（図１２）。
【０３０７】
あるいは、Ｌ−ｄＣのＮ４位をジメチルアミノメチレンまたはアセチルでマスクすると、ｐＨ１．２での化合物の半減期は、それぞれ僅か２６分または５０分であった。
【０３０８】
実施例１９：カニクイザルでのＬ−ｄＣの単一用量生物学的利用率
カニクイザルにＬ−ｄＣをＩＶおよび経口投与した後の、Ｌ−ｄＣの薬物動態を求めた。この研究では、トリチウム（［３Ｈ］）放射能標識されたＬ−ｄＣ１０ｍｇ／ｋｇを３匹のカニクイザルに、単一ＩＶ用量として投与した。６週間の洗出し期間の後に、同じ３匹のサルに、Ｌ−ｄＣの同一経口用量を与えた。薬物動態分析のための血液サンプルを、投薬前、および投薬の０．２５、０．５、１、２、３、６、８および２４時間後に集めた。薬物動態分析のための尿サンプルを、パンキャッチ（ｐａｎ  ｃａｔｃｈ）を介して、投薬前および投薬後：０〜２、２〜４、４〜８および８〜１２時間間隔で、次いで、その後は、１２時間間隔で、投薬後３３６時間にわたって集めた。薬剤を検出し、逆相高速液体クロマトグラフィー技術を使用して、濃度を求めた。血液および尿薬剤レベルデータは、非モデリング数学的方法により分析し、ＡＵＣを線形台形公式により導き出した。
【０３０９】
Ｌ−ｄＣの静脈内投与。ＩＶ投与後のＬ−ｄＣの平均Ｃｍａｘは９５．７μＭであり、全ての動物で、最初期のサンプリング時間（投薬の１５分後）に生じた。Ｌ−ｄＣ血漿濃度は、１．５９時間の平均ｔ１／２で、ＩＶボーラスの後に時間を追って低下した。ＩＶ投与後のＬ−ｄＣの全クリアランス（ＣＬ）および腎クリアランス（ＣＬＲ）の平均は、それぞれ０．５３Ｌ／時／ｋｇおよび０．４６Ｌ／時／ｋｇであった。１．２２Ｌ／ｋｇの平均のみかけの分布容積（Ｖｄ）は、Ｌ−ｄＣが、かなりの血管外組織分布を有したことを示していた。
【０３１０】
尿排泄は迅速で、投与用量の７１％が２時間以内に回収された。Ｌ−ｄＣが、尿中で回収された用量の大部分（９４％）を示した。腎クリアランス（０．４６Ｌ／時／ｋｇ）は、全Ｌ−ｄＣクリアランスの８７％を占め、腎排泄が排泄の主要な経路であることを示していた。
【０３１１】
Ｌ−ｄＵが、血漿および尿中で検出されたが、これは、Ｌ−ｄＣの代謝排泄がＩＶ投与の後に生じたことを示していた。低レベルのＬ−ｄＵが、検出限界で血漿中で検出された（検出下限（ＬＬＯＤ）＝０．１μＭ）。Ｌ−ｄＵの腎排泄は、尿中で回収された全用量の４．０％であった。Ｌ−ｄＵの他に、血漿または尿中で他の代謝物は検出されなかった。
【０３１２】
Ｌ−ｄＣの経口投与。Ｃｍａｘは３．３８μＭであり、２．３３時間のＴｍａｘで生じた。Ｌ−ｄＣの血漿濃度は、２．９５時間の平均終点ｔ１／２で、二相的に減退し、全てのカニクイザルで、２４時間で検出限界を下回った。Ｌ−ｄＣは、１６．４％の平均経口生物学的利用率（Ｆ）で、胃腸管から吸収された。
【０３１３】
Ｌ−ｄＵが、血漿および尿中で検出され、このことは、経口投与の後に、Ｌ−ｄＣの代謝排泄が生じたことを示している。低レベルのＬ−ｄＵが、ＬＬＯＤで血漿中で検出された。Ｌ−ｄＵの他に、血漿または尿中で他の代謝物は検出されなかった。
【０３１４】
投与された経口用量の約８．５％が、１２時間以内に尿中で回収された。７２時間後に、１５．５％±８％が回収された。Ｌ−ｄＣは、尿中に排泄された薬剤の大部分（〜６９％）を占めた。Ｌ−ｄＵの腎排泄は、全回収用量の２９％であった。便は集めなかった。
【０３１５】
表１６は、カニクイザルへのＬ−ｄＣのＩＶおよび経口投与での薬物動態結果の概要を示している。
【０３１６】
【表１６】
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【０３１７】
実施例２０：アカゲザルでのＬ−ｄＣの単一用量生物学的利用率
アカゲザルに経口投与した後の、Ｌ−ｄＣの薬物動態を求めた。この研究では、［３Ｈ］放射能標識したＬ−ｄＣ１０ｍｇ／ｋｇを３匹のアカゲザルに、単一経口用量として投与した。薬物動態分析のための血液サンプルを、投薬前、および投薬の０．２５、０．５、１、２、３、６、８および２４時間後に集めた。薬物動態分析のための尿サンプルを、パンキャッチを介して、投薬前および投薬後：０〜２、２〜４、４〜８および８〜１２時間間隔で、次いで、その後は、１２時間間隔で、投薬後３３６時間にわたって集めた。薬剤を検出し、逆相ＨＰＬＣ技術を使用して、濃度を求めた。血液および尿薬剤レベルデータは、非モデリング数学的方法により分析し、ＡＵＣを線形台形公式により導き出した。
【０３１８】
平均ＡＵＣ０．２５→８およびＣｍａｘ値はそれぞれ、１２．２ｍｇＭ．ｈおよび３．２３ｍｇＭであった。Ｃｍａｘは０．８３時間のＴｍａｘで生じた。平均ｔ１／２は、３．３４時間であり、Ｌ−ｄＣ血漿濃度は、全てのサルで２４時間で検出レベルを下回った。Ｌ−ｄＣの平均腎クリアランスは、０．２７３Ｌ／時／ｋｇであった。Ｌ−ｄＣを与えたサルの血漿中で、他の代謝物は観察されなかった。
【０３１９】
投与された経口用量の約８．５％（Ｌ−ｄＣの経口生物学的利用率〜１６％）が、８時間以内に尿中で回収された。４８時間後に、１５％が回収された。Ｌ−ｄＣは、尿中に排泄された薬剤の大部分（〜７７％）を占めた。Ｌ−ｄＵの腎排泄は、全回収用量の２３％であった。Ｌ−ｄＵの他は、他の代謝物は検出されなかった。
【０３２０】
アカゲザルに経口投与した後の、Ｌ−ｄＣでのＡＵＣおよびＣｍａｘは、カニクイザルで観察されたものと同様であった。
【０３２１】
実施例２１：ラットでのＬ−ｄＣの単一用量生物学的利用率
ラットでのＬ−ｄＣの薬物動態および生物学的利用率を求めた。この研究では、［３Ｈ］放射能標識されたＬ−ｄＣ１０ｍｇ／ｋｇを３匹の雌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、単一ＩＶ用量として投与した。３匹の動物からなる第２群に、Ｌ−ｄＣの同一の経口用量を与えた。薬物動態分析のための血液サンプルを、投薬の０．１７、０．３３、０．５、１、２、３、４、６、８および２４時間後に集めた。尿を、投薬の８および２４時間後に集めた。薬剤を検出し、逆相ＨＰＬＣ技術を使用して、血漿および尿中での濃度を求めた。データを、非モデリング数学的方法により分析し、ＡＵＣを線形台形公式により導き出した。
【０３２２】
Ｌ−ｄＣの静脈内投与：平均ＡＵＣ０．２５→８値は、３０．１ｍＭ．ｈであった。Ｌ−ｄＣのＣｍａｘは、９１．１ｍｇＭであり、全ての動物で、最初期のサンプリング時間（投薬の１０分後）に生じた。Ｌ−ｄＣ血漿濃度は、ＩＶボーラスの後に、１．２１時間の平均ｔ１／２で二相的に減退した。Ｌ−ｄＣのＣＬの平均は１．４４Ｌ／時／ｋｇであった。２．５３Ｌ／ｋｇの平均Ｖｄは、Ｌ−ｄＣがかなりの血管外組織分布を有することを示した。他の代謝物は、Ｌ−ｄＣを与えたラットの血漿では観察されなかった。
【０３２３】
Ｌ−ｄＣは、尿中で回収された放射能の大部分を占めた。Ｌ−ｄＵが、尿中で検出され、このことは、Ｌ−ｄＣの代謝排出がＩＶ投与の後に生じたことを示していた。
【０３２４】
Ｌ−ｄＣの経口投与：平均ＡＵＣ０．２５→８値は、４．７７ｍＭ．時であった。平均Ｃｍａｘは、１．５０ｍｇＭであり、１．０時間のＴｍａｘで生じた。Ｌ−ｄＣ血漿濃度は、２．５２時間のｔ１／２で減退した。Ｌ−ｄＣは、１５．４％の平均経口生物学的利用率（Ｆ）で、胃腸管からの摂取に限られた。他の代謝物は、Ｌ−ｄＣの経口投与後のラット血漿では観察されなかった。
【０３２５】
Ｌ−ｄＣは、尿中で回収された放射能の大部分を占めた。Ｌ−ｄＵが、血漿および尿中で検出され、このことは、Ｌ−ｄＣの代謝排泄が、経口投与の後に生じたことを示していた。
【０３２６】
表１７は、ＩＶおよび経口Ｌ−ｄＣ両方の薬物動態結果の概要を示している。
【０３２７】
【表１７】
0004639032.tif 000046
【０３２８】
実施例２２：ウッドチャックでのＬ−ｄＣの単一用量生物学的利用率
ウッドチャックでのＬ−ｄＣの薬物動態および生物学的利用率を求めた。この研究では、［３Ｈ］放射能標識されたＬ−ｄＣ１０ｍｇ／ｋｇを３匹のウッドチャックに、単一ＩＶ用量として投与した。薬物動態分析のための血液サンプルを、投薬の２、５、１５および３０分後および１．０、１．５、２．０、３．０、４．０および２４時間後に集めた。７日間の洗出し期間の後に、同じ動物に、Ｌ−ｄＣ１０ｍｇ／ｋｇを単一経口用量として与えた。薬物動態分析のための血液サンプルを、投薬の１５および３０分後および１．０、１．５、２．０、３．０、４．０、８．０および２４時間後に集めた。尿を、投薬の２４時間後に集めた。血漿薬剤レベル、ＣＬ、ｔ１／２およびＦを求めた。薬剤レベルを、インライン放射能検出およびシンチレーションカウンティングと共にＨＰＬＣ方法を使用して求めた。
【０３２９】
Ｌ−ｄＣの静脈内投与：Ｌ−ｄＣの平均Ｃｍａｘは、１１２μＭであり、全ての動物で最も早いサンプリング時間（投薬の２分後）で生じた。Ｌ−ｄＣ血漿濃度は、ボーラスの静脈内投与（ＩＶ）後、２．８５時間の平均ｔ１／２で二段階で減退した。Ｌ−ｄＣのＣＬの平均は、０．３９Ｌ／時／ｋｇであった。平均Ｖｄは、１．１７Ｌ／ｋｇであった。Ｌ−ｄＣは、尿中で回収された放射能の大部分を占めた。Ｌ−ｄＵが、血漿および尿中で検出されたが、このことは、Ｌ−ｄＣの代謝排出がＩＶ投与の後に生じたことを示していた。血漿中で断続的に検出されるＬ−ｄＵレベルは、０．７５μＭの平均Ｃｍａｘで、アッセイ定量の限界か、それ未満であった。
【０３３０】
Ｌ−ｄＣの経口投与：Ｃｍａｘは、１．３７μＭであり、３時間のＴｍａｘで生じた。Ｌ−ｄＣ血漿濃度は、５．２２時間の平均ｔ１／２で減退した。Ｌ−ｄＣは、平均９．５７％を伴う５．６０から１６．９％の範囲の経口生物学的利用率で、胃腸管から吸収された。Ｌ−ｄＣは、尿中で回収された放射能の大部分を占めた。Ｌ−ｄＵが、血漿および尿中で検出されたが、このことは、Ｌ−ｄＣの代謝排出が、経口投与の後に生じたことを示していた。血漿中のＬ−ｄＵは、０．１９μＭの平均Ｃｍａｘで、定量限界近くであった。
【０３３１】
表１８は、ＩＶおよび経口Ｌ−ｄＣの両方での、薬物動態結果の概要を示している。
【０３３２】
【表１８】
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【０３３３】
実施例２３：Ｌ−ｄＣのプロドラッグの生物学的利用率
Ｌ−ｄＣ、Ｌ−ｄＣの５’−モノエステル、Ｌ−ｄＣのジバリンエステル、およびＬ−ｄＣのジアセチルエステルの生物学的利用率を、Ｌ−ｄＴと共に、またはこれを伴わずに、カニクイザルで評価した。Ｌ−ｄＣのジバリンエステルをサルに経口投与すると、用量の約７３％が吸収された。吸収されたＬ−ｄＣのジバリンエステルのうち、９９％以上が迅速に、Ｌ−ｄＣに変換されて、血漿に高い濃度のＬ−ｄＣをもたらし、Ｌ−ｄＣのジバリンエステルは検出することができなかった。低い血漿濃度のＬ−ｄＣのモノバリンエステルが、Ｌ−ｄＣのジバリンエステルの経口投与のすぐ後に検出された。低い血漿濃度のβ−Ｌ−２’−デオキシウリジン（Ｌ−ｄＵ）が断続的に検出された。他の代謝物は検出されなかった。結果を表１９に示す。ここに示されているように、Ｌ−ｄＣの３’，５’−ジバリルエステルとＬ−ｄＴの組合せにより、Ｌ−ｄＣの最も高い生物学的利用率が得られた。
【０３３４】
【表１９】
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【０３３５】
実施例２４：カニクイザルでのｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの単一用量生物学的利用率
３匹の雄の非ナイーブなカニクイザル（ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）にｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣ１０ｍｇ／ｋｇを、無菌９．０％食塩水に溶かした痕跡量のトリチウム（［３Ｈ］−）標識されたドラブ（ｄｒｕｂ）（２５０μＣｉ）と共に静脈内で与えた。６週間の洗出し期間の後に、同じ３匹の動物に、同じ経口用量のｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣを与えた。血液サンプルを、ヘパリン化管で、投薬前（〜１８時間）および投薬の０．２５、０．５０、１、２、３、４、６、８および２４時間後に集めた。尿を、投薬後３３６時間まで、０〜２、２〜４、４〜８、８〜１２時間間隔、次いで１２時間間隔で集めた。薬剤を、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）技術を用いて血漿および尿中で定量化した。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣを投与した後に、Ｌ−ｄＣの血漿濃度時間経過を、非モデリング数学的方法により分析し、時間−濃度曲線下の面積（ＡＵＣ）を、線状台形公式により導き出した。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣをＩＶおよびＰＯ投与した後のＬ−ｄＣの生物学的利用率（Ｆ）を、Ｌ−ｄＣ  ＡＵＣから算出したが、その際、Ｆ＝ＡＵＣｐｏ／ＡＵＣｉｖ×ｉｖ用量／ｐｏ用量であった。
【０３３６】
静脈内投与されたｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣは静脈内投与の後に迅速に、Ｌ−ｄＣに変換された。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣが血漿中で、１５分目に（１．３９μＭ）および３０分目に（０．３６μＭ、３匹のうちの１匹）検出された［定量の下限（ＬＬＯＱ）＝０．２３μＭまたは１００ｎｇ／ｍＬ］。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣは、投薬の３０分後には血漿中で検出されなかった。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの部分的に脱エステル化された形、β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルが血漿中で１５分目に（３．２３μＭ）検出され、２時間で０．０８μＭまで濃度が低下した（ＬＬＯＱ＝０．０３１μＭまたは１０ｎｇ／ｍｌ）。Ｌ−ｄＣは、静脈内投与後に血漿中に存在する薬剤の大部分を示していた。Ｌ−ｄＣでの平均ＡＵＣ０．２５→８値は１９．８μＭ・時であった。Ｌ−ｄＣの平均最高血漿濃度（Ｃｍａｘ）は、２４．６μＭ（ＬＬＯＱ＝０．０８８μＭまたは２０ｎｇ／ｍＬ）であり、全ての動物で最初期のサンプリング時間（投薬後１５分）で生じた。Ｌ−ｄＣの血漿濃度は、１．７３時間の平均ｔ１／２で、二段階で減少した。Ｌ−ｄＣの全身クリアランス（ＣＬ）およびみかけの分布容積（Ｖｄ）の平均はそれぞれ、１．０１Ｌ／時／ｋｇおよび２．４６Ｌ／ｋｇであり、これは、Ｌ−ｄＣがかなりの血管外組織分布を有することを示している。エクスビボでのｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣおよびＬ−ｄＣのヒト血漿タンパク質への結合はそれぞれ、１３．３％±２．６％および１９．７％±５．９％であった。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣおよびＬ−ｄＣ遊離薬剤レベルに対するヒト血漿タンパク質結合の影響は最小であり、このことは、結合部位置換を伴う薬物相互作用は、予期されないことを示している。
【０３３７】
尿排泄は迅速で、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの投与用量の５８±３％が、静脈内投与後２時間以内に排泄された。Ｌ−ｄＣは、尿中に排泄された薬剤の大部分（〜９３％）を占めた。Ｌ−ｄＵも、血漿および尿で検出された。このことは、Ｌ−ｄＣの代謝排出が、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの投与後にも生じることを示していた。低レベルのＬ−ｄＵが血漿中で、別々の時点に、３匹中２匹で０．２２μＭから０．８８μＭの濃度範囲（ＬＬＯＱ＝０．２２μＭまたは５０ｎｇ／ｍＬ）で検出された。３匹目のサルでは、いずれの時点でもＬ−ｄＵのレベルは検出不可能であった。Ｌ−ｄＵおよびｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの部分的に脱エステル化された形、β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルの腎排泄は少量で、それぞれ、全回収用量の約２．５％および３．７％であった。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣが、３匹の動物のうちの１匹の尿中で、ＩＶ投与の２時間後に検出され、これは、回収用量の約０．１５％を占めた。
【０３３８】
血漿および尿中でのモノバリンエステルおよびＬ−ｄＵの両方の断続的な低い濃度のために、これらの代謝物の薬物動態分析を行うことは実行不可能であった。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣのモノバリンエステルの出現は、それが、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣのＬ−ｄＣへの変換での中間体であるので、予測外ではなかった。加えて、サル、ラットおよびヒト一次肝細胞ならびにＨｅｐＧ２細胞の抽出物でのインビトロ細胞代謝研究により、Ｌ−ｄＣは直接的に脱アミノ化されてＬ−ｄＵにされるのではなく、Ｌ−ｄＣ一リン酸（−ＭＰ）が、Ｌ−ｄＵ−ＭＰに変換され、これが、Ｌ−ｄＵ二リン酸（−ＤＰ）および三リン酸（−ＴＰ）に活性化されるか、Ｌ−ｄＵに代謝され、次いで、細胞外区画（血漿）で検出されることが証明された。Ｌ−ｄＵは、非細胞毒性（ＣＣ５０＞２００μＭ）で、Ｌ−ｄＵ−ＴＰはインビトロで、Ｂ型肝炎ウイルスデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ポリメラーゼに対して５．２６μＭのＩＣ５０を有した（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１０章参照）。
【０３３９】
経口投与されたｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣも経口投与後に迅速に、Ｌ−ｄＣに変換され、血漿サンプル中でいずれの時点でも検出することができなかった（溶液でのｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣのＬＬＯＱ＝０．２３μＭまたは１００ｎｇ／ｍＬ）。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの部分的に脱エステル化された代謝物、β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルが血漿中で、３０分目および１時間目に、０．０３４βから０．１０７βの範囲の濃度で検出された（溶液でのモノエステルのＬＬＯＱ＝０．０３１μＭまたは１０ｎｇ／ｍＬ）。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣは、血漿中で検出されなかった。
【０３４０】
Ｌ−ｄＣは、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの経口投与後の血漿薬剤レベルの大部分（Ｃｍａｘで＞９９％）を示した。Ｌ−ｄＣの平均ＡＵＣ０．２５→８値は１４．０μＭ時であった。Ｌ−ｄＣのＣｍａｘは８．２６μＭ（溶液でのＬ−ｄＣのＬＬＯＱ＝０．０８８μＭまたは２０ｎｇ／ｍＬ）であり、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの投与後０．６７時間目に生じた。Ｌ−ｄＣの血漿濃度は、２．２８時間の平均ｔ１／２で、二相的に減退した。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの投与後のＬ−ｄＣの平均経口生物学的利用率は７２．７％±２２％であった。
【０３４１】
Ｌ−ｄＵは、血漿中でも検出され、このことは、Ｌ−ｄＣの代謝排出はｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの経口投与後に生じることを示している。低レベルのＬ−ｄＵが血漿中で、３匹の動物のうちの２匹で３０分目から４時間目に、０．２４μＭから０．６６μＭの範囲の濃度で（溶液でのＬ−ｄＵのＬＬＯＱ＝０．２２μＭまたは５０ｎｇ／ｍＬ）、かつ１匹の動物で８時間目にのみ、０．３９μＭの濃度で検出することができた。
【０３４２】
経口投与後、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣは迅速に、胃腸管から吸収され、初回通過の腸および／または肝代謝によりＬ−ｄＣに変換された。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣも、Ｌ−ｄＣ代謝も、肝ミクロソーム酵素を伴わなかった。高用量レベルのｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの投与の後に、Ｌ−ｄＣのモノバリンエステルが一時的に、Ｌ−ｄＣに変換される前に検出された。経口投与の後には、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣは検出されなかった。Ｌ−ｄＵの断続的な低い血漿レベルが、アッセイ定量の下限で、またはそれ未満で検出された。Ｌ−ｄＵが、Ｌ−ｄＣの細胞接種後にＬ−ｄＣの脱アミノ化により生じた。
【０３４３】
投与された経口用量の約３１±８％が、４時間以内に尿中で回収された。７２時間後に、３９±８％が回収された。Ｌ−ｄＣは、尿中に排泄された薬剤の大部分（〜９５％）を占めた。Ｌ−ｄＵおよびｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの部分的に脱エステル化された形、β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルの腎排泄は少量で、それぞれ全回収用量の約２．５％および０．２％であった。尿中で、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣは検出されなかった。
【０３４４】
表２０は、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣをＩＶおよび経口で投与した後のＬ−ｄＣの薬物動態結果の概要を示している。
【０３４５】
【表２０】
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【０３４６】
表２１は、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣをＩＶおよび経口投与した後の、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣ、Ｌ−ｄＣのモノバリン誘導体、Ｌ−ｄＣおよびＬ−ｄＵの代謝物形成形態の概要を示している。
【０３４７】
【表２１】
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【０３４８】
実施例２５：カニクイザルでの、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣを介してのＬ−ｄＣの経口生物学的利用率
投薬実験を受けたことのある雄カニクイザル（ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）３匹にｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣ１０ｍｇ／ｋｇを、無菌９．０％食塩水に溶かした痕跡量の［３Ｈ］−標識された薬剤（２５０μＣｉ）と共に経口で与えた。血液サンプルをヘパリン化管で、投薬前（〜１８時間）および投薬の０．２５、０．５０、１、２、３、４、６、８および２４時間後に集めた。尿を、投薬後３３６時間まで、０〜２、２〜４、４〜８、８〜１２時間間隔で、次いで１２時間間隔で集めた。薬剤を、ＨＰＬＣ分析を用いて血漿および尿中で定量化した。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣを投与した後に、Ｌ−ｄＣの血漿濃度時間経過を、非モデリング数学的方法により分析し、時間−濃度曲線下の面積（ＡＵＣ）を、線状台形公式により導き出した。経口投与後に、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣは迅速に吸収され、Ｌ−ｄＣに変換された。血漿サンプルをラジオクロマトグラフィック高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析することにより、回収された放射能の大部分がＬ−ｄＣであったことが確認された。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣが、１匹の動物のみで投薬の１５分後に０．３５μＭの濃度で検出された。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの部分的に脱エステル化された形、β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルは、血漿または尿中では検出されなかった。投与された経口用量の約２６％が８時間以内に尿中で回収された。７２時間後に、３１％が回収された。Ｌ−ｄＣは、尿中に排泄された薬剤の大部分（〜８９％）を占めた。Ｌ−ｄＵの腎排泄は少量で、回収された用量の約１０％であった。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣまたはその部分的に脱エステル化された形および他の代謝物は、尿中で検出されなかった。
【０３４９】
全体的な薬物動態プロファイルは、同様のＣｍａｘ対ＡＵＣ比により証明されるような薬物動態研究で決定されたものに匹敵した。低いレベルのＬ−ｄＵが、３匹の動物のうちの２匹の血漿中で、平均Ｃｍａｘ０．３３μＭで検出された。第３の動物の血漿では、Ｌ−ｄＵは検出されなかった。Ｌ−ｄＵのレベルは、定量の下限か、それ未満で、薬物動態分析は不可能であった。
【０３５０】
実施例２６：ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣのインビトロ代謝
ヒト血漿中でのｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣおよびその脱エステル化代謝物の安定性およびタンパク質結合を求めるための研究を行った。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣをヒト血漿中、３７℃でインキュベーションし、サンプルを、２４時間目までの様々な時点で分析した（図１３）。Ｌ−ｄＣへの完全な変換により、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣは、２４時間後には検出することができなかった。２種の付加的な代謝物（β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルおよびβ−Ｌ−２’−デオキシシチジン−バリンエステル）も認められた。これらの代謝物の過渡的性質は、これらが、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣのＬ−ｄＣへの変換での中間体であることを示していた。ヒト血漿中、３７℃でのｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣのインビトロ半減期は、約３９分と決定された。
【０３５１】
ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣおよびＬ−ｄＣの遊離レベルに対するヒト血漿タンパク質結合の影響力も、限外濾過法を使用して調査した。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの血漿タンパク質結合は、１３．３％±２．６％であった。血漿タンパク質へのＬ−ｄＣの結合は、１９．７％±５．９％であった。この研究により、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣおよびＬ−ｄＣに対するヒト血漿タンパク質結合の影響力は最小であることが判明し、このことは、結合部位置換を伴う薬剤相互作用は予測されないことを示している。
【０３５２】
実施例２７：Ｌ−ｄＣの代謝活性および細胞内プロファイル
Ｌ−ｄＣの細胞代謝を、ＨｅｐＧ２細胞およびヒト一次肝細胞で調べた。高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析により、Ｌ−ｄＣは肝細胞中で大規模にリン酸化されることが証明された。２４時間、Ｌ−ｄＣ１０μＭに曝されたＨｅｐＧ２細胞での主な代謝物は、Ｌ−ｄＣ−Ｔｐであり、これは、７２．４±１．８μＭに達した（表２３参照）。一次ヒト肝細胞では、２４時間目でのＬ−ｄＣ−ＴＰ濃度は９０．１±３７μＭであり、ＨｅｐＧ２細胞でのリン酸化レベルと同様であった。Ｌ−ｄＣに肝細胞を曝すと、第２の５’−三リン酸塩誘導体、Ｌ−ｄＵ−ＴＰの活性化が生じた。Ｌ−ｄＣ１０μＭに曝されたＨｅｐＧ２細胞では、Ｌ−ｄＵ−ＴＰレベルは、２４時間目に１８．２μＭ（一次ヒト肝細胞では４３．５ｐＭ）に達した。一次ラットおよびサル肝細胞では、Ｌ−ｄＣのリン酸化の規模は若干、低かった。
【０３５３】
【表２２】
0004639032.tif 000051
【０３５４】
Ｌ−ｄＣおよびＬ−ｄＵのリン酸化誘導体に加えて、［β−Ｌ−２’−デオキシリポヌクレオチド代謝物の形成が認められた。２４時間、Ｌ−ｄＣ１０μＭに曝されたＨｅｐＧ２細胞および一次肝細胞培養では、［３−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−ジホスホコリン（Ｌ−ｄＣ−ＤＰ−コリン）がそれぞれ、２５．６μＭ（範囲２５．６〜２５．７μＭ）および１２．３μＭ（範囲８．８２〜１５．８μＭ）の濃度で検出された。
【０３５５】
［３Ｈ］−Ｌ−ｄＣ１０μＭにＨｅｐＧ２細胞を２４時間曝した後に得られた代謝プロファイルを図１４に示す。Ｌ−ｄＣ−ＴＰの明らかな細胞内半減期は１５．５±０．３４時間で、これは、ウイルスリバウンド実験での薬剤中止の後も続く抗ウイルス活性と関連があった。一次ヒト肝細胞で検出されたリン酸化パターンは、ＨｅｐＧ２細胞を使用して得られたものと同様に、定性的かつ定量的であった（図１５）。
【０３５６】
実施例２８：代謝活性に伴う細胞キナーゼ
Ｄ−デオキシシチジン（ｄＣｙｄ）は、ｄＣｙｄ−５’−一リン酸塩（ｄＣＭＰ）に変換するための細胞質ｄＣｙｄキナーゼ（ｄＣＫ）およびミトコンドリアチミジンキナーゼ（ＴＫ２）の天然基質である。細胞質チミジンキナーゼ（ＴＫ１）およびＴＫ２は、Ｔｈｄ−５’−一リン酸塩（ＴＭＰ）に変換するための天然基質としてＤ−チミジン（Ｔｈｄ）を利用する。Ｌ−ｄＣの初期リン酸化に関わる細胞キナーゼは、Ｌ−ｄＣおよび天然内在性ＴｈｄおよびｄＣｙｄを用いる競合研究で同定された。Ｌ−ｄＣの細胞内リン酸化は、Ｔｈｄによってではなく、ｄＣｙｄによって用量依存的に減退した。したがって、ｄＣｙｄは、Ｌ−ｄＣリン酸化の阻害剤として作用した。Ｌ−ｄＣの細胞内リン酸化における変化は、ＨｅｐＧ２細胞がＴｈｄおよびｄＣｙｄの両方またはｄＣｙｄ単独に曝された場合と同様であった。天然デオキシピリミジン、ｄＣｙｄのみによるＬ−ｄＣリン酸化の阻害は、ｄＣＫが、Ｌ−ｄＣリン酸化に関わることを示していた。
【０３５７】
Ｌ−ｄＣのリン酸化におけるこれらのピリミジンヌクレオシドキナーゼ活性の役割をさらに、キナーゼ欠損細胞系で調べた。ｄＣＫ欠損細胞では、Ｌ−ｄＣのリン酸化代謝物の量が著しく減少した。しかしながら、ＴＫ１欠損細胞でのＬ−ｄＣリン酸化では、著しい違いは観察されなかった。これらのデータは、前記の競合研究と一致しており、このことは、ｄＣＫが、Ｌ−ｄＣのＬ−ｄＣ−ＭＰへのリン酸化において重要な役割を果たしていることを示している。
【０３５８】
酵素源としてＨｅｐＧ２細胞の細胞質抽出物を使用したところ、Ｌ−ｄＣ、ＴｈｄおよびｄＣｙｄリン酸化の定常状態動態は、みかけのミカエリス−メンテン定数（Ｋｍ）および最大初速度（Ｖｍａｘ）値により示されているように、類似していた（Ｌ−ｄＣ：５．７５ｍＭのＫｍおよび１．１２ｍｍｏｌ／分／タンパク質ｍｇのＶｍａｘ；Ｔｈｄ：４．０６ｍＭのＫｍおよび１．２６ｍｍｏｌ／分／タンパク質ｍｇのＶｍａｘ；ｄＣｙｄ：４．８５ｍＭのＫｍおよび２．１５ｎｍｏｌ／分／タンパク質ｍｇのＶｍａｘ）。加えて、Ｌ−ｄＣ、ＴｈｄおよびｄＣｙｄリン酸化の効率は、その対応するＶｍａｘ／Ｋｍにより定義されるように、それらの値において類似していた（それぞれ、０．１９、０．３１および０．４４）。
【０３５９】
加えて、Ｌ−ｄＣの細胞内リン酸化の規模は、ウッドチャック肝抽出物中の天然内在基質であるＴｈｄおよびｄＣｙｄの規模と同等であった。このことは、慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染のウッドチャックモデルでの抗ウイルス試験を支持していた。Ｌ−ｄＣのリン酸化は、内在基質のリン酸化と同様であった。さらに、Ｌ−ｄＣのリン酸化レベルは、Ｌ−ｄＣのレベルおよびヒト肝抽出物での内在基質のレベルに匹敵した。
【０３６０】
実施例２９：ヘパドナウイルスに対するＬ−ｄＣの抗ウイルス活性
ヒトＢ型肝炎ウイルスに対するＬ−ｄＣの抗ウイルス活性を、ＨＢＶ−発現肝ガン細胞系２．２．１５で、未処置の対照細胞に対しての、細胞外ＨＢＶ  ＤＮＡおよび複製中間体の減少により測定した（表２４参照）。リボ核酸（ＲＮＡ）およびＤＮＡウイルスのパネルを使用するＬ−ｄＣの抗ウイルス活性の確認試験を、ＮＩＨ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｐｒｏｇｒａｍにより行った。
【０３６１】
Ｌ−ｄＣは、ヘパドナウイルス（ＨＢＶ、ＤＨＢＶ）以外のウイルスの複製を阻害しなかった。Ｌ−ｄＣは、インビトロでＨＢＶ複製に対して有効な抗ウイルス活性を有し、０．２４μＭのＥＣ５０（ＥＣ９０  １．０６μＭ）で、細胞外ＨＢＶ  ＤＮＡ産生を減少させた。Ｌ−ｄＣはさらに、０．５μＭのＥＣ５０で、細胞内ＨＢＶ  ＤＮＡ複製中間体（ＲＩ）を減少させた。さらにＬ−ｄＣは、０．８７μＭのＥＣ５０で、一次アヒル肝細胞（ＰＤＨ）培養でのアヒルＢ型肝炎ウイルス（ＤＨＢＶ）ＤＮＡ合成の用量依存的阻害をもたらした。
【０３６２】
【表２３】
0004639032.tif 000052
【０３６３】
様々なＤＮＡおよびＲＮＡウイルスの複製を支持するために使用されたいずれの細胞系または一次細胞型でも、試験されたＬ−ｄＣの最大濃度で、細胞毒性は検出されなかった。ヒトＰＢＭＣ、ＨＦＦまたは哺乳動物由来の他の細胞型で、毒性は見られなかった。
【０３６４】
実施例３０：ウッドチャックでのＬ−ｄＣの抗ウイルス活性  ２８日
ＷＨＶに慢性的に感染しているウッドチャックは、ＨＢＶ感染のモデルとして広く受け入れられていて、抗ＨＢＶ薬の評価で使用することができることが判明している。これは、慢性ＨＢＶ感染の治療に関する抗ウイルス活性のプラスの予測子であることが判明しており、ヌクレオシドおよびその類似体の安全性を評価するための感受系として役立つ。
【０３６５】
Ｌ−ｄＣをウッドチャックに、２８日間にわたって１日１回、０．０１から１０ｍｇ／ｋｇ／日で経口投与した。薬剤治療中の２８日間および治療後追跡中の５６日間のＷＨＶ  ＤＮＡの血清レベルを、ＤＮＡドットブロットハイブリダイゼーション（約１０７ゲノム当量（ｇｅｑ）／血清ｍＬの検出限界）および定量ＰＣＲ（３００ｇｅｑ／血清ｍＬの検出限界）（１）により求めた。治療の初めの数日間の間に、ＷＨＶ  ＤＮＡ複製は著しく阻害され、治療相を通じて維持された。Ｌ−ｄＣを１日１回経口輸送すると、強い抗ウイルス効果が生じ、これは、ＤＮＡドットブロットハイブリダイゼーションアッセイの使用により求めたように、用量に依存した（図１６）。
【０３６６】
図１７は、慢性Ｂ型肝炎感染のウッドチャックモデルで、２８日間、１０ｍｇ／ｋｇ／日で治療された個々の動物でのＬ−ｄＣの抗ウイルス活性を示している。特に、Ｌ−ｄＣ１０ｍｇ／ｋｇ／日治療群では、１４から２８日目にウイルス負荷が、定量ＰＣＲアッセイにより測定されたように、ベースラインから２〜６ｌｏｇ低下した。薬剤中止の後に、ウイルスリバウンドは、１から２週間で治療前レベル付近に達した。
【０３６７】
ラミブジン治療群（１０ｍｇ／ｋｇ／日、経口）では、ＨＢＶウイルス負荷は、約０．５ｌｏｇから１．０ｌｏｇ（ｇｅｑ／ｍＬ；データは示さず）低下したが、これは、シチジンヌクレオシド類似体（３０）であるラミブジンを同じ濃度で使用する予備研究と一致する。
【０３６８】
実施例３１：Ｌ−ｄＣ処置された細胞でのウイルスリバウンド
Ｌ−ｄＣ処置された２．２．１５細胞でのウイルスリバウンドが、薬剤中止の後に生じた。ＨＢＶ複製は、処置後１８日で、処置前レベルの５０％まで回復した。Ｌ−ｄＣ処置後のウイルスリバウンド動態は、著しい抗ウイルス効果が、薬剤中止の後にも継続したことを示しており、このことは、Ｌ−ｄＣ−ＴＰの細胞内半減期（ＨｅｐＧ２細胞で、１５．５時間）に一致した。
【０３６９】
実施例３２：薬剤耐性ＨＢＶに対する、Ｌ−ｄＣの抗ウイルス活性
ＨＢＶ感染患者に投与するラミブジン（１日１回、１００ｍｇ）の対照臨床研究で、ＹＭＤＤ−突然変異ＨＢＶの有病率は、１年の治療の後に１４から３２％であり、２から３年の治療の後には５８％であった（１８〜２０）。突然変異ウイルスは、ＹＭＤＤ突然変異を伴わなかったラミブジン治療患者に比較して、低い治療応答の証拠に関連していた。
【０３７０】
ラミブジン投与の間に復活したＨＢＶ複製の証拠を示した患者から得られたウイルス分離株の遺伝子型分析は、ラミブジンに対するＨＢＶ感度の低下は、突然変異に随伴し、その際、ＨＢＶポリメラーゼの触媒ドメイン（５５２位）のＹＭＤＤモチーフ中で、メチオンからバリンまたはイソロイシンへの置換および５２８位で、ロイシンからメチオニンへの置換が生じたことを示している。
【０３７１】
ＹＭＤＤ突然変異を有するＨＢＶ組換え型は、ラミブジン耐性であり、インビトロでは野生型ＨＢＶよりも複製能力が若干、劣る（２１）。Ｌ−ｄＣの三リン酸塩誘導体を、野生型および突然変異ＨＢＶ  ＤＮＡポリメラーゼに対して試験して、ＩＣ５０値を比較する。加えて、ラミブジン−耐性ＨＢＶ分離株と５５２および５２８位に突然変異を有する組換えウイルスに対して、Ｌ−ｄＣの抗ウイルス試験を行う。
【０３７２】
加えて、ＷＨＶ−感染ウッドチャックの慢性治療の間にインビボで、Ｌ−ｄＣ薬剤耐性ＨＢＶ突然変異体を選択することも、考えられる。ウッドチャックインビボモデルでの薬剤耐性突然変異体の選択の関連性は、不確実である。それというのも、ウッドチャックでのラミブジン−耐性突然変異体のスペクトルは、ＨＢＶ感染患者で同定されたものとは合わないためである（２０〜２２）。この長期研究（１２から２４カ月）のサブセットから、感染した肝細胞からのＨＢＶ共有結合閉環状（ｃｃｃ）ＤＮＡの治療関連排出に関連する情報が得られた。現時点では、薬剤耐性突然変異を選択するためにＤＨＢＶインビトロモデルを使用することは不可能である。それというのも、このモデルで使用される一次アヒル肝細胞は、薬剤耐性ウイルスを選択するために必要とされる長期間にわたっては、細胞培養に耐えられないためである。
【０３７３】
実施例３３：Ｌ−ｄＴ＋Ｌ−ｄＣの組合せ抗ウイルス活性および細胞毒性
ほぼ等モル比でのＬ−ｄＴとＬ−ｄＣとの組合せの抗ＨＢＶ活性および細胞毒性を、２．２．１５細胞で試験したところ、１：１、１：３および３：１の比で相乗作用を有することが判明した（表２５参照）。
【０３７４】
【表２４】
0004639032.tif 000053
【０３７５】
実施例３４：Ｌ−ｄＣでのヒト骨髄前駆細胞毒性アッセイ
一定のヌクレオシド類似体の骨髄抑制効果により、クローン原性アッセイで、ヒト骨髄前駆細胞の成長に対する潜在的な効果に関して試験する必要性が注目されている。特に、貧血および好中球減少症は、抗ＨＩＶ薬剤のジドブジン（ＺＤＶ）に伴う最も一般的な薬剤関連臨床毒性である。この毒性は、健康なボランティアから得た骨髄細胞を使用するインビトロアッセイで、モデリングされている（Ｓｏｍｍａｄｏｓｓｉ  Ｊ−Ｐ、Ｃａｒｌｉｓｌｅ  Ｒ．「Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ３’−ａｚｉｄｏ−３’−ｄｅｏｘｙｔｈｙｍｉｄｉｎｅ  ａｎｄ  ９−（１，３−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−２−ｐｒｏｐｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｇｕａｎｉｎｅ  ｆｏｒ  ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  １９８７、３１（３）、４５２−４５４）。ＺＤＶは、１〜２μＭの臨床関連濃度で、ヒトグラニロサイト（ｇｒａｎｙｌｏｃｙｔｅ）−マクロファージコロニー形成（ＣＦＵ−ＧＭ）および赤血球系バースト形成（ＢＦＵ−Ｅ）活性を直接的に阻害することが判明している。プラス対照としてＺＤＶを、マイナス対照としてラミブジンを用いるヒト骨髄クローン原性アッセイを使用したところ、Ｌ−ｄＣは、ＣＦＵ−ＧＭおよびＢＦＵ−Ｅで、＞１０μＭのＩＣ５０を有した（表２６参照）。
【０３７６】
【表２５】
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【０３７７】
実施例３５：Ｌ−ｄＣでのミトコンドリア毒性アッセイ
ＺＤＶ、スタブジン（ｓｔａｖｕｄｉｎｅ、ｄ４Ｔ）、ジダノシン（ｄｉｄａｎｏｓｉｎｅ、ｄｄＩ）、ザルシタビン（ｚａｌｃｉｔａｂｉｎｅ、ｄｄＣ）などのＨＩＶ治療に認められている抗ウイルスヌクレオシド類似体は、末梢神経障害、ミオパシー、すい臓炎などの臨床性を限定する遅発毒性を伴う（８〜１１）。これらの臨床的に不利な事象は、ミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）含有物の減少およびｍｔＤＮＡへのヌクレオシド類似体の導入による、ミトコンドリア機能の阻害に基づいている。加えて、特定のヌクレオシド類似体、フィアルウリジン（ＦＩＡＵ）は、直接的なミトコンドリア毒性により、肝不全、すい炎、神経障害、ミオパシーおよび乳酸アシドーシスをもたらした。乳酸産生の薬剤関連増加は、ミトコンドリア機能の障害または酸化的リン酸化のマーカーとみなすことができる。
【０３７８】
ミトコンドリア毒性をもたらすＬ−ｄＣの可能性を評価するために、いくつかのインビトロ研究を、ヒト肝ガン細胞系ＨｅｐＧ２を使用して行った。これらの研究には、乳酸産生、ｍｔＤＮＡ含有物の分析およびミトコンドリア超微細構造の形態（例えば、クリスタの損失、マトリックスの溶解および膨潤ならびに脂質滴形成）の変化の測定が含まれた。ミトコンドリアに対するＬ−ｄＣの効果を、表２７に示す。
【０３７９】
Ｌ−ｄＣで長期処置された細胞と未処置の細胞とで、生じた乳酸レベルに差異は観察されなかった。ＺＤＶおよびＦＩＡＵ処置された細胞での乳酸産生は、ビヒクル対照に比較して１００％ほど増加した。１０μＭまでの濃度のＬ−ｄＣに１４日間、ＨｅｐＧ２細胞を曝したところ、ミトコンドリアＤＮＡ含有に関して効果はなかったが、これに対して、ｄｄＣ−処置された細胞では、８７％減少した。Ｌ−ｄＣ１０μＭに１４日間曝した後に、ＨｅｐＧ２細胞、特にミトコンドリアの超微細構造を、透過電子顕微鏡法により調べた。細胞構成またはミトコンドリア形態に、認識可能な変化は検出できなかった。ミトコンドリアクリスタのサイズおよび組織は、正常であった。ＺＤＶ処置された細胞は、クリスタの損失を伴う典型的な膨潤ミトコンドリアを示した。ｄｄＣ−およびＦＩＡＵ処置された細胞では、ミトコンドリア形態も異常であった。
【０３８０】
【表２６】
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【０３８１】
実施例３６：Ｌ−ｄＣでのヒトＤＮＡポリメラーゼα、βおよびγ毒性アッセイ
ヌクレオシドおよびヌクレオシド類似体は通常、細胞内で代謝されて、そのＴＰ誘導体になる。細胞ＤＮＡポリメラーゼにより通常は、正常に核およびミトコンドリアＤＮＡが、合成および修復される。ＴＰ代謝物は、ＤＮＡポリメラーゼのための潜在的な基質なので、Ｌ−ｄＣ−ＴＰがヒトＤＮＡポリメラーゼを阻害するかどうかを決定する研究を行った。
【０３８２】
ヌクレオシド類似体である３’−アミノ−３’−デオキシチミジン（ＡＭＴ）ＴＰは、１０μＭの濃度で、ヒトＤＮＡポリメラーゼαを３０％阻害した。ヒトＤＮＡポリメラーゼβおよびγはそれぞれ、ｄｄＣ−ＴＰにより５０％（５μＭ）および３５％（２．５μＭ）阻害された。Ｌ−ｄＣ−ＴＰおよびＬ−ｄＵ−ＴＰは、１００μＭの濃度まで、ヒトＤＮＡポリメラーゼα、βおよびγに対して阻害性を示さなかった（表２８）。これらの結果は、Ｌ−ｄＣおよびＬ−ｄＵのＴＰは、これらの核およびミトコンドリアヒトＤＮＡポリメラーゼに対して低い親和性を有することを示しており、このことは、インビトロおよびインビボで観察されたＬ−ｄＣの有利な安全性プロファイルと一致している。
【０３８３】
【表２７】
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【０３８４】
実施例３７：ラットでのｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの毒性アッセイ
ラットで、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの単一経口用量に伴う毒性を求めた。全部で４０匹の動物（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット、６から８週齢）で研究した；動物を１０匹（雄５匹および雌５匹）ずつそれぞれランダム化して、単一経口用量のｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣを研究の用量範囲ファインディングポーション（５００、１０００または２０００ｍｇ／ｋｇ）から選択される３種の用量のいずれかで、または対照品を投与した。動物を１５日間観察した。瀕死率（ｍｏｒｉｂｕｎｄｉｔｙ）および死亡率に関するケージサイド観察を、１日に２回記録した。臨床観察および体重を、１、８、１４および１５日目に１日１回記録した。さらに１５日目に、血液学および血清化学のための血液サンプルを集めた。１５日目評価の終了後に、全ての動物を安楽死させ、包括的な全身検死を行ったが、これには、体外表面、全てのオリフィスおよび頭蓋、胸部および腹腔およびその内容物のマクロ組織検査を含んだ。体重および選択された臓器の重量ならびに臓器対体および臓器対脳の重量比も、記録した。
【０３８５】
研究の間、毒性の明白な徴候は観察されず、体重、臓器重量または臨床的病理パラメーターに対する治療関連効果は見られなかった。血液学または血清化学プロファイルにおいて、治療関連異常は認められなかった。さらに、検死で観察された治療関連肉眼的病変はなかった。この研究の結果に基づき、ラットでの単一経口用量によるｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣのＮＯＡＥＬは、２０００ｍｇ／ｋｇであった。
【０３８６】
実施例３８：サルでのｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの毒性アッセイ
カニクイザルで、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの５つの段階的に高まる用量の潜在的な毒性を求めた。動物４匹（雄２匹および雌２匹）ずつにそれぞれ、全部で５種の経口ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣ用量を、各用量レベル（２０、１００、５００、１０００および２０００ｍｇ／ｋｇ）１レベルずつ、それぞれ１、４、７、１０および１４日目に与えた。
【０３８７】
瀕死率および死亡率に関するケージそばでの観察を、１日に２回記録した。臨床観察を、毎日記録した。１、４、７、１０および１４日目の処置前および１７日目の検死前に、血液学および血清化学のための血液サンプルを集め、体重を測定した。１７日目評価の終了後に、全ての動物を安楽死させ、肉眼検査および包括的組織収集を含む完全検死を行った。
【０３８８】
治療関連の臨床異常は観察されなかった。１日目の当初用量の後に、各動物は、約０．６ｋｇの体重減少を示した。４日目から、残る研究の間、全ての動物は、体重を維持した。
【０３８９】
次の観察が、個々の血液学プロファイルで認められた。１７日目に、赤血球数（ＲＢＣ）、ヘモグロビン（ＨＧＢ）およびヘマトクリット（ＨＣＴ）が、１日目に得られた値と比べて、４匹の動物のいずれでも累積的に、約１５％から２７％低かった。Ｎｏ．１００１（雄）の動物を除き、各時点で、これらのパラメーターの変化は、その前に記録された値の＜１０％であった。Ｎｏ．１００１の動物では、４日目に、ＲＢＣ、ＨＧＢおよびＨＣＴ値が、１日目の値から約１８％低下し、その後、この動物での変化は全体で、＜±９％であった。この初期変化の原因は分からず、毒物学的有意性は不確かである。１日目に、白血球数（ＷＢＣ）が、Ｎｏ．１１０１の動物で著しく上昇したが（雌、３６．３×１０３細胞／μｌ）、４日目にはほぼ５５％低下した。絶対多形核白血球（ＡＰＬＹ）および多形核白血球率（ＰＬＹ）も、１日目での高いレベルから４日で低下した（それぞれ７３％および４０％）。変化は、残る研究の間、一定ではなかった。毒物学的関連性は不確かである。
【０３９０】
次の観察が、個々の血清化学プロファイルで認められた。１７日目の血液尿素窒素（ＢＵＮ）値は、１日目の値に比較すると、４匹全てのサルで低下した（累積的に、〜４３％）。これらの累積変化は、−３９％から＋４６％の一時的な変化から生じている。これらの変化は、この研究では全てのサルで一致したが；毒物学的関連性は不確かである。
【０３９１】
この研究の結果に基づき、サルでの、強制栄養による単一経口用量でのｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣのＮＯＡＥＬは、２０００ｍｇ／ｋｇであった。
【０３９２】
実施例３９：ウッドチャックでのＬ−ｄＣの２８日毒性アッセイ
慢性Ｂ型肝炎感染のウッドチャックモデルは、ヌクレオシド類似体の臨床前毒性評価に役立てられている。げっ歯類または霊長類での臨床前評価では見られない、ヒトでＦＩＡＵにより惹起される遅延型の重大な肝細胞毒性をこのモデルは証明した。肝生検で見られる著しい体重減少、痩せおよび肝細胞損傷を含む、ウッドチャックで観察されるＦＩＡＵ惹起毒性は、治療の開始後６から８週間から確認され、ＦＩＡＵ治療されているＨＢＶ感染患者で観察されたものと同様であった。
【０３９３】
ウッドチャック肝炎ウイルス（ＷＨＶ）感染したウッドチャックでのＬ−ｄＣの抗ウイルス活性および安全性、さらに治療後ウイルスリバウンドを求めた。雄および雌のウッドチャックを、新生児の時点で、ＷＨＶ担体の希釈血清を皮下接種することにより感染させて、全て、ＷＨＶの慢性担体にした。動物（１６から１８カ月齢）を、体重、ｇ−グルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）レベル、性別および定量ドットブロット分析により測定された血清ＷＨＶ  ＤＮＡ濃度（＞１０１１ゲノム当量／血清ｍＬ）に基づき比較可能な群にランダム化した。
【０３９４】
動物３匹ずつに、０．０１、０．１、１．０または１０．０ｍｇ／ｋｇ／日の用量でＬ−ｄＣを、経口で２８日間与えた。加えて、３匹の動物にラミブジン１０ｍｇ／ｋｇ／日を、経口で２８日間与えた。４匹の動物に、同じスケジュールで、ビヒクル対照を与えた。全ての動物を、治療の後、付加的に５６日間、ＷＨＶのリバウンドに関して監視した。ＷＨＶ  ＤＮＡレベルのための血液サンプルを、−７、０、１、３、７、１４、２１および２８日目に得て、ＷＨＶ  ＤＮＡレベルをさらに、治療後の１、３、７、１４、２８および５６日目に得た。ＷＨＶ  ＤＮＡレベルを、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術により検出した。同時に、体重を調べ、薬剤用量を、それに応じて調節した。毒性の臨床証拠が観察された場合には、臨床生化学および血液学的試験を行った。組織の組織評価を含む死亡後検査を、研究の間に死亡した１匹の動物で行った。
【０３９５】
４週間の治療期間または８週間の治療後追跡期間の間、毒性は観察されなかった。さらに、対照動物に比較して、Ｌ−ｄＣ治療群で体重減少はなかった（図１８）。動物は全て、８４日プロトコル期間の間に、対照動物と同様に体重が増加した。０．１ｍｇ／ｋｇ／日群の１匹の動物（♯９８０５１）が、治療の終了後８日目に死亡した。死亡後検査により、肝臓の左側葉に大きな肝ガン（８×５×２ｃｍ）が見つかり、死亡は、この悪性病変によった。肝細胞新生物は、このモデルでは、９カ月齢で見られ、１５カ月齢での死亡原因であった。この動物の死亡は、肝細胞ガンによるものであり、ＷＨＶ感染の自然な病歴で予測される部であり、Ｌ−ｄＣ治療に関連するとは考えられなかった。それというのも、薬剤毒性が、この動物の死亡における１ファクターであるという徴候がなかったためである。
【０３９６】
実施例４０：ウッドチャックでの、Ｌ−ｄＣの１２週間毒性アッセイ
ウッドチャックで、Ｌ−ｄＣの抗ウイルス活性および安全性を求めた。この研究では、動物４匹ずつに、Ｌ−ｄＣ１．０ｍｇ／ｋｇ／日またはビヒクル対照を経口で、１２週間与えた。４匹の付加的動物には、Ｌ−ｄＣを他のヌクレオシド類似体であるＬ−ｄＴと共に与えた。動物を比較可能な群にランダム化し、性別、体重および治療前血清ＷＨＶ  ＤＮＡおよびＧＧＴレベルにより階層化した。
【０３９７】
ＷＨＶ  ＤＮＡおよび体重を、０、１、３、７、１４、２１、２８、４２、５６および８４日目に、さらに治療後７、１４、２１、２８、４２、５６、７０および８４日目に測定した。定量的ＰＣＲにより、ＷＨＶ  ＤＮＡレベルを決定した。血液学、血清化学、ＷＨＶ血清学および肝生検のための適切なサンプルを治療前および８４日目に集めた。血漿薬剤レベルを、０、１４および８４日目の投薬の２．５時間後に集めたサンプルから決定した。
【０３９８】
Ｌ−ｄＣ（１ｍｇ／ｋｇ／日、経口）は、よく許容され、治療の１２週間または追跡の１２週間の間、薬剤関連毒性は見られなかった。Ｌ−ｄＣ（１ｍｇ／ｋｇ／日、経口）で１２週間治療された慢性感染ウッドチャックでのＷＨＶウイルス血症は、この用量での２８日研究での応答と同様に、治療の１２週間が終わるまでに０．５から１ｌｏｇ  １０低下した。この研究には、Ｌ−ｄＴ１ｍｇ／ｋｇ／日および組み合わせて投与されるＬ−ｄＣ（１ｍｇ／ｋｇ／日）＋Ｌ−ｄＴ（１ｍｇ／ｋｇ／日）で治療される付加的な群が含まれた。このＬ−ｄＣおよびＬ−ｄＴの組合せは、２８日研究で、Ｌ−ｄＣまたはＬ−ｄＴ１０ｍｇ／ｋｇ／日での治療の間に見られたのと同様に、ウイルス負荷を検出限界まで減らした。Ｌ−ｄＣで治療された群の動物と対照群の動物との間に体重の差異はなかった（図１９参照）。対照群の動物１匹が、８週目に死亡した；検死により、死亡の原因は、大動脈退化および破裂であると判明した。上行大動脈の異常、自然破裂は、未感染およびＷＨＶ感染ウッドチャックの両方で、履歴的に観察されている。全ての動物の体重が、２４週間の研究期間の間に、若干、減少した。この若干の体重減少は、冬眠の接近によることが、以前の経験から確定されている（Ｂ．Ｔｅｎｎａｎｔ、ＤＶＭ；Ｍａｒｍｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）。全ての動物からの血清化学および血液学は、治療の前後１２週間、正常範囲内であった。顕微鏡法により評価される肝組織形態学は、すべての群で正常であった。脂肪変化の証拠はなかった（微小胞性脂肪変性）。
【０３９９】
実施例４１：カニクイザルでのｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの反復用量毒性動態
カニクイザルに２５日間経口投与した後の、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの潜在的な毒性および薬物動態を求めた。８匹の動物（雄４匹および雌４匹）をランダム化して、強制栄養により３種の用量のうちのいずれか（５００、１０００または２０００ｍｇ／ｋｇ）でｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣまたはビヒクル対照を１日１回２５日間与えた（全部でＮ＝３２）。瀕死率および死亡率に関するケージそばでの観察を１日２回記録し、臨床観察を１日１回記録した。１、８、１５および２５日目の治療前および２６日目の検死の前に体重を記録した。摂食量を毎日記録し、１週間隔で１日平均として報告した。理学的検査および眼科検査ならびに尿検査を、治療の前および検死時に行った。２６日評価の終了の後に、全ての動物を安楽死させ、包括的な全身検死を行ったが、これには、体外表面、全てのオリフィスおよび頭蓋、胸部および腹腔およびその内容物のマクロ組織検査を含んだ。体重および選択された臓器の重量および臓器対体および臓器対脳の重量比も、記録した。包括的な全身検死により得られた組織を施設内試験審査委員会の獣病理医が組織形態学的に評価した。
【０４００】
Ａ．体重
２５日目に０．１ｋｇの体重低下（１日目に比較して）を示したＮｏｓ．２００２（５００ｍｇ／ｋｇ群）と４００１および４００３（２０００ｍｇ／ｋｇ群）の動物を除き、全ての動物は、研究経過の間、体重を維持したか、増やした。対照群動物での研究前平均体重は治療群での平均体重よりも０．１３〜０．２５ｋｇ多いので、対照群の雄とｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣ治療群の雄との間の統計的に有意な差は、毒性的に関連があるとはみなされない。
【０４０１】
Ｂ．摂食量
研究経過の間、全ての動物は、予測されるばらつきを伴う適切な摂食量を維持した。平均ビスケット消費は、５００ｍｇ／ｋｇ群の雄で８／９、１５／１６および１６／１７日目に；１０００ｍｇ／ｋｇ群の雄で２４／２５日目に；２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄で８／９、１５／１６、１６／１７、２０／２１および２３／２４日目に対照群の雄よりも少なかった。雌で認められた差異は、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌での７／８日目の摂食量の減少のみである。これらの差異は、毒性的に関連があるとはみなされない。
【０４０２】
Ｃ．臨床病理学
血液学。治療開始前の１日目には、対照群と治療群との間で血液学的パラメーターに差はなかった。２６日目に、いくつかの統計的に有意な差が、赤血球恒数に認められ、これには、赤血球数（ＲＢＣ＿（治療された雌全て）の低下、ヘモグロビン（ＨＧＢ）の低下（治療された雄全て）およびヘマトクリット（ＨＣＴ）の低下（両性別の全ての治療群）が含まれた。雄も、ＲＢＣの低下を示したが、その差は統計的には有意ではなかった。ヘモグロビン濃度も、治療された雌の方が低かったが、統計的には有意ではなかった。１日目に対して、ＲＢＣ、ＨＧＢおよびＨＣＴが、対照およびｄｉｖａｌ−ＬｄＣ治療された雄および雌で２６日目に低下した。しかしながら、対照動物で観察された相対低下は、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣ治療された動物で認められた低下よりも少なかった。これらの結果は、臨床的に関連する非溶血性貧血を示しているが；用量応答現象は最小で、組織病理的評価は、骨髄が応答性を維持していることを示している。したがって、進行性または長期的影響は見込まれないと思われる。
【０４０３】
白血球数では、絶対多形核白血球（ＡＰＬＹ）の低下（５００ＭＧ／ＫＧおよび１０００ｍｇ／ｋｇ群の雌および２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄および雌）、多形核白血球率（ＰＬＹ）の低下（１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌）およびリンパ球率（ＬＹＭ）の増加（２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄と１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌）があった。
【０４０４】
血清化学。全ての治療された雄で、平均アルカリフォスファターゼ（ＡＬＫ）レベルが２６日目に、雄の対照群平均ＡＬＫよりも著しく低かった。さらに、平均グロブリン（ＧＬＯＢ）およびカルシウム（ＣＡＬ）レベルが、２６日目に、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄で高まった。これらの変化は、臨床的に関連があるとはみなされなかった。平均カリウム（Ｋ）値は、１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄で、対照群よりも高く、これらの治療群に存在する観察された非溶血性貧血に関連づけることができた。２６日目に、雌では、血清化学パラメーターに変化はなかった。
【０４０５】
尿検査。平均尿ｐＨが、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄と１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌で若干、低下したが、その差は、統計的には有意ではなかった。高用量の雄および雌の尿に結晶が存在しないことは、注目すべきで、尿の酸性化と一致した。
【０４０６】
Ｄ．臓器重量
１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄の肺（絶対）と２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄の相対胸腺（胸腺：脳）で、統計的に有意な臓器重量の低下が認められた。しかしながら、これらの差は、毒性に関連があるとはみなされなかった。
【０４０７】
Ｅ．病理学
肉眼的。ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの投与に関連すると理解される肉眼的所見は存在しなかった。全ての肉眼的所見は、非ヒト霊長類での付随的所見として通常存在する所見の特徴を示していた。
【０４０８】
顕微鏡的。胸腺萎縮は、治療関連の所見と理解される、顕微鏡でのみの所見であった。胸腺萎縮の発生および重度は、１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄および雌で高まったが、５００ｍｇ／ｋｇ群の動物には影響を及ぼさなかった。しかしながら、胸腺萎縮の臨床的有意性は、あいまいであると理解された。用量反応関係は弱く、１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄の全てが影響を受けたわけではなく、胸腺萎縮は一般に、霊長類の年齢に伴って生じる。この研究で存在した他の顕微鏡的所見は通常、この年齢の霊長類で観察される通常のタイプおよび発生率の軽症の炎症または変性変化であった。
【０４０９】
毒性動態。血液学および血清化学のための血液サンプルを、１日目の治療前および２６日目の検死前に集めた。血液サンプルを薬物動態分析のために、２５日目に、各動物から、用量後の次の各時点：０．５、１、２、４、６、８、１２および２４時間に集めた。血液から血漿を調製し、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣおよび３種の代謝物：Ｌ−ｄＣ、Ｌ−ｄＵおよびｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの部分的にエステル化された形、β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルの濃度に関して分析した。Ｌ−ｄＣおよびβ−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルのみが、定量可能であった。１０００および２０００ｍｇ／ｋｇ群での平均血漿濃度−時間データで、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  １．５（Ｍｏｄｅｌ  ２００）を使用して、非コンパートメント薬物動態分析を行った。５００ｍｇ／ｋｇ群の分析は、進行中である。
【０４１０】
２５日目でのβ−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルの血漿濃度は、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの経口投与後１時間（中央Ｔｍａｘ）で最大値（Ｃｍａｘ）に達したが、これに対して、Ｌ−ｄＣでは、２〜４時間の中央Ｔｍａｘであった。しかしながら、β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルＣｍａｘ値は、Ｌ−ｄＣにおいてよりも約２桁低かった。Ｃｍａｘに達した後に、Ｌ−ｄＣの濃度は、各群で、みかけの２指数的に減退した。推定終末相平均半減期は、両用量群の雄および雌で、約４〜５時間であった。しかし、これらの半減期推定値は、最低値とみなすべきである。それというのも、多くの個々の推定値は、終末相が完全には同定することができない投薬の６から１２時間後からのデータに基づくためである。平均β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステル濃度も、Ｃｍａｘに達した後に減退したが、終末相は、半減期の推定を可能にするほどには適切に定められなかった。２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄の濃度値よりも半分低い１０００ｍｇ／ｋｇ群の雄を除いて、Ｌ−ｄＣおよびβ−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルでの平均Ｃｍａｘ値は、各用量群の雄および雌で同様であった。したがって、Ｃｍａｘは、１０００ｍｇ／ｋｇ群の雄でのみ、用量に伴い増加すると判明した。
【０４１１】
雄および雌でのＬ−ｄＤ  ＡＵＣｌａｓｔの比較により、Ｃｍａｘで認められた傾向と同様の傾向が示され、その際、１０００ｍｇ／ｋｇ群の雄は、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄のＡＵＣｌａｓｔ値よりも約半分低い値を示した。雄および雌でのβ−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルＡＵＣｌａｓｔの比較により、性別関連の差異は存在しないことが示され、ＡＵＣｌａｓｔは、用量の増加に正比例して増加すると判明した。
【０４１２】
データは、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの経口投与後は、ジ−ｖａｌ−Ｌ−ｄＣの脱エステル化された形、β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステル、次いで、Ｌ−ｄＣへの迅速な変換であるが、全体的な暴露は、Ｌ−ｄＣでは、β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルにおいてよりも１００倍高いことを示している。代謝物β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルへの全体的な暴露は、容量の増加に伴い、ほぼ直線状に増加すると判明している。
【０４１３】
毒性動態の概要を、表２９に示す。
【０４１４】
【表２８】
0004639032.tif 000057
【０４１５】
実施例４２：ラットでのｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの反復用量毒性動態
ラットに２８日間経口投与した後のｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの潜在的毒性および薬剤動態を求めた。動物を２０匹（雄１０匹および雌１０匹）ずつランダム化し、３種の用量（５００、１０００または２０００ｍｇ／ｋｇ）のいずれかで強制栄養によりｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣまたはビヒクル対照を１日１回２８日間与えた。瀕死率および死亡率に関するケージサイド観察を１日２回記録した。臨床観察を１日１回記録した。体重を１、８、１５、２２および２８日目の投薬前と、２９日目の検死前に記録した。摂食量を週に１回記録した。血液学および血清化学のための血液サンプルも、２９日目の検死の前に集めた。２９日評価の終了の後に、全ての動物を安楽死させ、包括的な全身検死を行ったが、これには、体外表面、全てのオリフィスおよび頭蓋、胸部および腹腔およびその内容物のマクロ組織検査を含んだ。体重および選択された臓器の重量および臓器対体および臓器対脳の重量比も、記録した。包括的な全身検死により得られた組織をボード公認の獣病理医が、組織形態学的に評価した。
【０４１６】
Ａ．体重
２２および２８日目の２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄の平均体重値は、雄の対照群での平均値よりも著しく低かった。２８日目の２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌の平均体重値も、対照群の雌での平均値よりも著しく低かった。
【０４１７】
Ｂ．摂食量
２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄では、研究期間の間を通して摂食量が減った。さらに、研究の第３週の間、１０００ｍｇ／ｋｇ群の雄の摂食量は、対照群の雄よりも著しく少なかった。研究の第２、３および４週の間、１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇの雌で、摂食量が著しく減った。
【０４１８】
Ｃ．臨床病理学
血液学：２９日目に、いくつかの統計的に有意な差が、赤血球恒数に認められた。赤血球数（ＲＢＣ）が、３種の用量レベル（５００、１０００および２０００ｍｇ／ｋｇ）の全てで、雄および雌の両方で著しく低下した。ヘモグロビン濃度（ＨＧＢ）が、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄、１０００ｍｇ／ｋｇ群の雌および２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌で低下した。ヘマトクリット（ＨＣＴ）の低下が、１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄および雌で認められた。平均赤血球容積（ＭＣＶ）が、５００、１０００および２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄と５００および１０００ｍｇ／ｋｇ群の雌で著しく増加した。平均赤血球ヘモグロビン（ＭＣＨ）が、５００、１０００および２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄および雌で著しく増加した。平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）が、１０００ｍｇ／ｋｇの雌で増加した。有核赤血球数（ＮＲＣ；絶対および相対）が、１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇの雄で低下し、２０００ｍｇ／ｋｇの雌で増加した。これらの変化は、治療に関連した軽い反応貧血を示している。
【０４１９】
白血球数（ＷＢＣ）が、２０００ｍｇ／ｋｇの雄で低下した。２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄で、単球（ＭＮＯ；絶対および相対）の低下があった。血小板（ＰＬＴ）が、２０００ｍｇ／ｋｇの雄で増加した。しかしながら、これらの変化は、定量的に小さく、毒性関連性はあいまいである。
【０４２０】
血清化学：平均グロブリン（ＧＬＯＢ）レベルが、２９日目に２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄および１０００ｍｇ／ｋｇ群の雌で低下した。アルブミン／グロブリン比が、１０００および２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄と１０００ｍｇ／ｋｇ群の雌で増加した。アルカリフォスファターゼ（ＡＬＫ）レベルが、５００ｍｇ／ｋｇ群の雌で上昇した。コレステロール（ＣＨＯＬ）レベルが、１０００ｍｇ／ｋｇの雌で増加した。これらの僅かな変化は、用量−反応相関性のパターンまたは傾向を示さないので、これらの値が毒性学的に適当であることを示した。
【０４２１】
Ｄ．臓器重量
絶対臓器重量の著しい低下が、肺（２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄および雌）および胸腺（２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄、１０００ｍｇ／ｋｇ群の雌および２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌）で認められた。２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄での前立腺および精嚢の平均絶対臓器重量の低下も著しかった。平均絶対心臓重量が、１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌で低下した。唾液腺平均重量が、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌で低下した。平均脾臓重量が、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌で増加した。
【０４２２】
相対（対体重）臓器重量の変化には、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄および雌での脳重量の増加が含まれた。１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄の平均精巣重量の増加が認められた。相対胸腺重量が、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄、１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌で低下した。平均相対脾臓重量が、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌で増加した。
【０４２３】
さらに、相対（対脳重量）臓器重量変化には、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄での相対肺重量の低下が含まれた。相対胸腺重量が、１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄および雌で低下した。相対前立腺および精嚢平均重量も、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄で低下した。平均相対心臓重量が、唾液腺の平均相対重量と同様に、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌で低下した。相対脾臓重量が、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌で増加した。
【０４２４】
臓器重量（胸腺、肺、心臓、唾液腺、前立腺、精嚢および脳）の低下は、１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の動物で示される全身体重低下に従うと理解された。１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の動物で顕微鏡的に観察された胸腺萎縮は、観察された胸腺重量低下と一致した。重量の低下を伴った他の組織は、顕微鏡的関連性を有しなかった。脾臓重量の増加は、顕微鏡的に観察された赤血球産生活性の結果と理解された。
【０４２５】
Ｅ．病理学
顕微鏡的：胸腺萎縮およびリンパ壊死の発生が、１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の動物で増加したが、５００ｍｇ／ｋｇ群の動物には影響がなかった。しかしながら、胸腺萎縮およびリンパ壊死の臨床的有意性は、用量−反応相関が弱かったので、あいまいであると理解された。これらの胸腺変化は、様々なファクターによりストレスをかけられた動物での非特異的変化として存在することが多く、著しい体重低下が、この研究では１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の動物で観察された。
【０４２６】
脾臓での赤血球新生が、１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄および雌で、対照とは明確に区別されるほど増加したが、５００ｍｇ／ｋｇ群の動物からの脾臓は、対照と同等であった。肝臓での血液新生が、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄および雌で、対照とは明確に区別されるほど増加したが、５００ｍｇ／ｋｇおよび１０００ｍｇ／ｋｇ群の動物からの肝臓は、対照においてと同等であった。胸骨骨髄の過形成が、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雄および雌で観察された。脾臓での赤血球新生、肝臓での血液新生の増加および骨髄での過形成は全て、血液学的結果の一部として観察された軽い貧血に対する予測される適切な反応と理解された。これらの結果により、継続治療の間の貧血の応答的特性が確認される。
【０４２７】
この研究では、いくつかの他の顕微鏡的変化が存在した。一般に、げっ歯類強制栄養研究で観察される通常のタイプおよび発生率の軽い炎症性または変性変化が存在した。
【０４２８】
毒性動態：付加的な５４匹の動物（雄２７匹および雌２７匹）から、１日目および２８日目に薬物動態分析のためのサンプルを集めた。いずれの日でも、サンプルを、６つの各時点（時点毎に２匹の動物を交換）：投薬の０．５、１、２、４、８および２４時間後に集めた。血液から血漿を調製し、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣおよび３種の代謝物：Ｌ−ｄＣ、Ｌ−ｄＵおよびｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの部分的に脱エステル化された形、β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルの濃度に関して分析した。Ｌ−ｄＣおよびβ−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルのみが、確認することができた。１０００および２０００ｍｇ／ｋｇの群での平均血漿濃度−時間データで、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  １．５（Ｍｏｄｅｌ  ２００）を使用して非コンパートメント薬物動態分析を行った。５００ｍｇ／ｋｇ群の分析は、進行中である。
【０４２９】
代謝物Ｌ−ｄＣの平均血漿濃度は、最大値（Ｃｍａｘ）に、１０００ｍｇ／ｋｇ用量群では投薬の２時間後（Ｔｍａｘ）に、２０００ｍｇ／ｋｇ用量群では投薬の１〜４時間後に達した。雄および雌での平均Ｃｍａｘ値は、各１０００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇ用量群で同等であり、両方の群で、２８日目と１日目で同様であった。Ｃｍａｘは、多くの場合に用量と共に増加したが、増加の規模は一定ではなかった。Ｃｍａｘに達した後に、Ｌ−ｄＣ濃度は各群で、明白に２指数的に減退した。１０００ｍｇ／ｋｇ用量群に対して推定される終末期半減期（９〜１７時間）は、２０００ｍｇ／ｋｇ用量群（６〜８時間）よりも長い傾向があったが、半減期推定値は、注意して解釈すべきである。半減期の推定は、３つのデータポイントのみを使用することが必要で、データは、あいまいな傾向があった。また、使用される３つのデータポイントのうちの１つは、終末相を立証することができなかった４時間目であった。Ｌ−ｄＣ濃度のＴｌａｓｔは、全てのデータセットで２４時間目に生じた。ＡＵＣｌａｓｔは、各群の雄および雌で同等で、２８日目と１日目とで実質的な差異があるとは思われなかった。Ｌ−ｄＣのＣｍａｘは、前記のように、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣの用量の増加に一致して増加するとは思われなかったが、Ｌ−ｄＣのＡＵＣｌａｓｔは、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣと共に、用量に対してほぼ比例するような関係で増加した。
【０４３０】
β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルの血漿平均濃度は、投薬の１から２時間後に（Ｔｍａｘ）、最大値（Ｃｍａｘ）に達した。雄および雌での平均Ｃｍａｘ値は、各用量群で同様であったが、雌でより高い値を示す傾向があった。Ｃｍａｘ値は、１日目および２８日目にそれぞれ雌の方が、１４％から５０％高かったが、ただし、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌でのβ−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルＣｍａｘ値は、２８日目に、雄よりも約１６４％高かった。それぞれの性の範囲内で値を比較すると、２８日目でのＣｍａｘ値は、１日目と同様であったが、２０００ｍｇ／ｋｇ群の雌では、Ｃｍａｘ値は、１日目よりも２８日目で１３０％高かった。通常、用量に対して線形比例しない係数によってではあるが、Ｃｍａｘは、いずれの場合にも用量に伴って増加した。
【０４３１】
β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルのみかけの終末排出相は、十分には特定できず、したがって半減期は報告しなかった。β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステル濃度のＴｌａｓｔは、１０００ｍｇ／ｋｇ用量群では４〜８時間目に、２０００ｍｇ／ｋｇ用量群では８〜２４時間目で生じた。Ｃｍａｘで認められるように、ＡＵＣｌａｓｔは、雄よりも雌で２５％から５０％ほど高かった。ＡＵＣｌａｓｔは、雄でも雌でも１日目に対して２８日目で一貫して若干、高かった（３０％から６２％）。ＡＵＣｌａｓｔは、用量に対してほぼ線比例と考えられる関係で、用量に伴って増加した。
【０４３２】
これらのデータは、Ｌ−ｄＣおよびβ−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルの両方が相対的に迅速に、体循環に達したことを示している。Ｃｍａｘにより測定される全体的な暴露は、β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルよりもＬ−ｄＣで１０から４０倍高く、ＡＵＣｌａｓｔで測定すると３５から８０倍であった。暴露は、１０００〜２０００ｍｇ／ｋｇ／日の用量範囲内で用量に比例して増加すると考えられた。Ｌ−ｄＣの２９日目での全体的な暴露は、１日目に観察される暴露と同等で、β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステル暴露は通常、２８日目により高く、このことは、β−Ｌ−２’−デオキシシチジン−５’−バリンエステルの蓄積が、反復投薬の間に生じることを示している。
【０４３３】
毒性動態結果の概要を、表３０に示す。
【０４３４】
【表２９】
0004639032.tif 000058
【０４３５】
実施例４３：Ｓ．ＴｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍおよびＥ．Ｃｏｌｉプレート取込み突然変異アッセイ（遺伝毒性）
ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣは、動物に経口投与されると迅速に、Ｌ−ｄＣに変化して、高血漿濃度のＬ−ｄＣおよび検出不可能なｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣをもたらす。そこで、インビトロで行われる変異原性研究を、Ｌ−ｄＣを使用して行った。この研究は、ＦＤＡ  ＧＬＰ規制に従い行った。Ｌ−ｄＣを、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ株ＴＡ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１５３５およびＴＡ１５３７のヒスチジンオペロンおよびＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ株ＷＰ２ｕｖｒＡのトリプトファンオペロンで突然変異を惹起するその可能性に関して試験した。５０、１００、５００、１０００および５０００ｍｇ／プレートの濃度のＬ−ｄＣとプラスおよびマイナス対照を試験した。試験株を、外因活性の不在下および誘発ラット肝臓Ｓ−９抽出物およびｅｏ因子（ｅｏｆａｃｔｏｒ）の存在下に、Ｌ−ｄＣまたは対照にさらした。約６８時間インキュベーションした後に、Ｌ−ｄＣおよび対照を、１プレート当たりの復帰突然変異体の数および背景ミクロコロニーローンの完全性に関して評価した。
【０４３６】
マイナスおよびプラス対照の両方を、試験の必要性に合わせた。固有および確認アッセイの両方の結果は、Ｌ−ｄＣは、誘発ラット肝臓Ｓ−９抽出物の存在または不在下での試験株のいずれでも、復帰突然変異体の数の著しい増加を惹起しなかったことを示していた。研究所見に基づき、５０００ｍｇ／プレートまでのＬ−ｄＣ濃度では、Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍまたはＥ．Ｃｏｌｉプレート取込み突然変異アッセイで変異原性の証拠はないと、結論された。
【０４３７】
実施例４４：染色体異常アッセイ
ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣは、動物に経口投与されると迅速に、Ｌ−ｄＣに変化して、高血漿濃度のＬ−ｄＣおよび検出不可能なｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣをもたらす。したがって、インビトロで行われる変異原性研究を、Ｌ−ｄＣを使用して行った。この研究は、ＦＤＡ  ＧＬＰ規制に従い行った。Ｌ−ｄＣを、培養ＣＨＯ細胞で染色体異常を惹起するその可能性に関して試験した。固有アッセイでは、１００、５００、１０００および５０００ｍｇ／ｍＬの濃度のＬ−ｄＣとプラスおよびマイナス対照を、代謝活性を伴って、または伴わずに試験した。１８時間継続的に処置した後に、相対細胞成長（ＲＣＧ）および相対分裂指数（ＲＭＩ）の減少により、毒性を求めた。ＲＣＧおよびＲＭＩ結果に基づき、染色体異常に３段階の最も高い濃度（５００、１０００および５０００ｍｇ／ｍＬ）から採点した。細胞１００個の分裂中期に、各濃度の重複培養のそれぞれから採点した（プラスおよびマイナス対照を含む）。
【０４３８】
確認アッセイを、活性化を伴わずに、１．０、１０、１００、５００、１０００および５０００ｍｇ／ｍＬの濃度のＬ−ｄＣのみを用いて行った。１８時間の継続治療の後に、ＲＣＧおよびＲＭＩの低下が決定された。ＲＣＧおよびＲＭＩ結果に基づき、染色体異常に３段階の最も高い濃度（５００、１０００および５０００ｍｇ／ｍＬ）から採点した。細胞１００個の分裂中期を、各濃度レベルの重複培養のそれぞれから採点した（プラスおよびマイナス対照を含む）。
【０４３９】
固有および確認アッセイからの結果は、溶媒対照に比較して、Ｌ−ｄＣが、代謝活性を伴っても、伴わなくても、いずれの試験濃度でも、異常を伴う細胞パーセンテージに統計的に有意な増加（カイ２乗検定により求められるｐ−値£０．０５として定義される）を惹起しなかったことを示していた。研究所見に基づき、５０００ｍｇ／ｍＬまでの濃度のＬ−ｄＣに曝した後に、ＣＨＯアッセイに染色体異常の証拠はなく、Ｌ−ｄＣは、染色体異常誘発薬とは考えられないと、結論された。
【０４４０】
実施例４５：マウス小核アッセイ
ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣは、動物に経口投与されると迅速に、Ｌ−ｄＣに変化して、高血漿濃度のＬ−ｄＣおよび検出不可能なｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣをもたらす。したがって、インビトロで行われる変異原性研究を、Ｌ−ｄＣを使用して行った。この研究は、ＦＤＡ  ＧＬＰ規制に従い行った。げっ歯類での経口生物学的利用率を１０〜２０％と仮定すると（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ、Ｓｅｃｔｉｏｎ  ８．１．７．３参照）、Ｌ−ｄＣへの暴露（用量２０００ｍｇ／ｋｇ）は、４００ｍｇ／ｋｇに達するか、これを上回るはずである。このレベルの暴露は、予測されるヒト暴露を２０から５０倍上回る。
【０４４１】
Ｌ−ｄＣを、雄および雌のマウスの骨髄細胞中に微小核多染性赤血球（ＭＰＣＥ）を惹起するその可能性に関して試験した。５００、１０００および２０００ｍｇ／ｋｇの濃度のＬ−ｄＣとプラスおよびマイナス対照を試験した。研究薬剤を、単一用量として経口強制栄養により投与した。Ｌ−ｄＣまたはマイナス対照投与の約２４および４８時間後に２回収穫を行い、プラス対照投与の約２４時間後に単一収穫を行った。１回の収穫時に１用量群当たり５匹の雄および５匹の雌のマウスを使用した。多染性赤血球（ＰＣＥ）およびＭＰＣＥ頻度のパーセンテージを、各時点で決定した。
【０４４２】
研究の結果は、マイナス対照に比較して、いずれのＬ−ｄＣ用量群のいずれの時点でも、ＭＰＣＥの数に統計的に有意な増加（片側スチューデントｔ検定により求められるｐ−値£０．０２５として定義）は存在しなかったことを示している。毒性の指標としての、ビヒクル対照に対して２０％を上回るＰＣＥのパーセンテージの低下が両方の性で、２４時収穫時点での各試験物品用量レベルで観察された（雄では−３０．５％から−４３．１％、雌では−２６．１％から−３２．２％）。この低下は、標的組織への試験物品の適切な暴露を示している。しかしながら、２０％を上回るこの低下は両方の性で、４８時間の収穫時点では、いずれの試験物品用量レベルでも観察されなかった。
【０４４３】
この研究は、試験条件下で、試験結果を評価するための基準セットに従うと、Ｌ−ｄＣは、２０００ｍｇ／ｋｇまでの用量で雄または雌の動物に対して、小核アッセイで陰性であったことを示している。
【０４４４】
実施例４６：毒性所見の総合的概要
慣用の細胞ベースアッセイを、Ｌ−ｄＣおよび細胞代謝物の細胞毒性を評価するために使用した。Ｌ−ｄＣは、潜在的抗ウイルス薬の抗−Ｉ−ＩＢＶ活性を求めるために慣用的に使用されるヒト肝ガン細胞系２．２．１５に対して、非細胞毒性であった（５０％細胞毒性濃度、ＣＣ５０、＞２０００μＭ）。Ｌ−ｄＣは、ヒト末梢血単核細胞に対して（ＰＢＭＣ；ＣＣ５０＞１００μＭ）、ヒト骨髄前駆細胞に対して（５０％阻害濃度、ＩＣ５０、顆粒球マクロファージコロニー形成単位（ＣＦＵ−ＧＭ）および赤芽球バースト形成単位（ＢＦＵ−Ｅ）アッセイで、＞１０μＭ）、細胞毒性ではなかった。
【０４４５】
【表３０】
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【０４４６】
加えて、Ｌ−ｄＣは、ヒトおよび他の哺乳動物由来の数多くの他の細胞系に対して細胞毒性ではなかった。機能、形態学またはミトコンドリアのＤＮＡ含有物に認識できる変化は認められず、Ｌ−ｄＣ処置された肝細胞で乳酸蓄積は存在しなかった（ＩＣ５０＞１０μＭ）。Ｌ−ｄＣの三リン酸形は、１００μＭの濃度までヒトＤＮＡポリメラーゼα、βおよびγに対して阻害性ではなかった。
【０４４７】
ラットおよびサルでの急性単一用量（５００、１０００および２０００ｍｇ／ｋｇ単一経口用量を含む）毒性研究で（２０００ｍｇ／ｋｇまで１、４、７、１０および１４日にわたる用量エスカレーション）、毒性の明白な証拠もなく、体重、摂食量または臨床病理パラメーター（血液学および血清化学）に対するｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣ関連効果もなかった。加えて、検死で観察される肉眼的障害もなく、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣによる組織形態分析での顕微鏡的所見もなかった。これらの研究の結果に基づき、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットおよびカニクイザルでの経口強制栄養による単一用量の後の、逆効果が観察されないレベル（ＮＯＡＥＬ）は、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣでは２０００ｍｇ／ｋｇであった。
【０４４８】
サルでの亜慢性（２５日）毒性研究で、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣでのＮＯＡＥＬは、５００ｍｇ／ｋｇを下回った。胸腺萎縮は、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣに関連するかもしれないが、臨床的有意性は不明と考えられる顕微鏡的所見のみであった。軽い非溶血性貧血（赤血球数の低下、ヘモグロビンおよびヘマトクリット低下）および結果が明らかでない絶対および相対多形核白血球数の低下が、５００ｍｇ／ｋｇ用量レベルで認められた。血液変化の他は、いずれの用量グループでも他の毒性は確認されなかった。
【０４４９】
ラットでの亜慢性（２８日）毒性研究では、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣでのＮＯＡＥＬは、５００ｍｇ／ｋｇを下回った。２０００ｍｇ／ｋｇの用量でラットに２８日間ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣを経口投与すると、治療関連変化が生じ、これには、軽い大球性貧血、胸腺重量低下、脾臓重量増加（雌のみ）、体重低下および脾臓、肝臓および胸骨骨髄での血液新生が含まれた。１０００ｒｏｇ／ｋｇの用量でラットに２８日間ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣを経口投与すると、治療関連変化が生じ、これには、軽い大球性貧血、胸腺萎縮（雌のみ）および脾臓での血液新生が含まれた。肝臓、脾臓および骨髄で見られた組織形態変化は、軽い貧血に対する血液学的反応を反映している。５００ｍｇ／ｋｇの用量でラットに２８日間ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣを経口投与すると、軽い大球性貧血が生じた。認められた血液学的変化および造血反応の他に、いずれの用量群でも他の毒性は確認されなかった。
【０４５０】
正常で健康なウッドチャックまたはＢ型肝炎ウイルスに慢性的に感染しているウッドチャック（ＨＢＶ感染治療のための有効モデル）では、Ｌ−ｄＣを与えられた動物での急性（ＩＶおよびＰＯで、単一用量１０ｍｇ／ｋｇ）および亜慢性（経口で、１０ｍｇ／ｋｇ／日で２８日および経口で、１ｍｇ／ｋｇ／日で１２週）研究の間、毒性は観察されなかった。対照動物に比較して、Ｌ−ｄＣ治療群で重量低下はなく、臨床病理パラメーター（血液学および血清化学）は、正常な範囲内で、１２週研究での治療の終了後に行われた肝生検は、脂肪変化の証拠を示さなかった（微小胞脂肪変性）。
【０４５１】
Ｌ−ｄＣは、Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍまたはＥ．ｃｏｌｉ取込み変異原性アッセイで、５０００μｇ／プレートまでの濃度で突然変異誘発性ではなかった。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）アッセイで、５０００μｇ／ｍＬ（または２２．０ｍＭ）までの濃度のＬ−ｄＣに暴露した後に、染色体異常の証拠はなかった。マウス小核アッセイで、Ｌ−ｄＣは、２０００ｍｇ／ｋｇまでの用量で、雄または雌の動物に対して染色体異常誘発性ではなかった。
【０４５２】
サルで認められた軽い貧血は、最も高い用量（２０００ｍｇ／ｋｇ）でも、ラットでは５００ｍｇ／ｋｇでも、臨床的関連性を伴わなかった。加えて、網状赤血球数は変化しなかった。これらの研究で、規則的な可逆性コンポーネントはなかったが、比較的高い用量でのラットの脾臓および肝臓で見られる髄外血液新生により示されるように、血液学的リバウンドが生じうることが明らかである。
【０４５３】
【表３１】
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【０４５４】
ラミブジン（Ｅｐｉｖｉｒ−ＨＢＶＴ（商標））およびバラシクロビル（ｖａｌａｃｙｃｌｏｖｉｒ、Ｖａｌｔｒｅｘ（商標））の臨床前毒性研究において、同様の血液変化が同等またはより低い用量で観察された。これらの承認されている薬剤はいずれも、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣと同じ十分に同定されている群（ヌクレオシドまたはヌクレオシド類似体）のメンバーである。比較のためにラミブジンを選択することは、これが、ｄｉｖａｌ−Ｌ−ｄＣと同様にシトシン誘導体であるということおよび慢性Ｂ型肝炎感染を治療するためのその承認に基づく。比較のためにバラシクロビルを選択することは、これが、ヌクレオシドアシクロビルのバリンエステルプロドラッグであるということに基づく。
【０４５５】
本発明を、その好ましい実施形態を参照しつつ記載した。先行する本発明の詳細な説明から、本発明の変形形態および修正形態は、当技術分野の当業者には明らかであろう。これらの変形形態および修正形態の全てが、本発明の範囲内であることが意図されている。
【図面の簡単な説明】
【図１ａ】  本発明による、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからの２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジン（β−Ｌ−ｄＣ）の３’−バリニルエステルの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
【図１ｂ】  本発明による、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからの２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジン（β−Ｌ−ｄＣ）の５’−バリニルエステルの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
【図２】  本発明による、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからのＮ４−アセチル−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
【図３】  本発明による、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからのＮ４−［（ジメチルアミノ）メチレン］−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
【図４】  本発明による、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからの３’，５’−ジ−Ｏ−アセチル−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
【図５】  本発明による、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからの２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの３’，５’−ジ−Ｏ−バリニルエステルの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
【図６】  本発明による、２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからの２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンのＮ４−（Ｂｏｃ−バリニル）エステルの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
【図７】  本発明による、３’，５’，Ｎ４−トリ−（Ｂｏｃ−Ｌ−バリニル）−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンからの３’，５’，Ｎ４−トリ−（Ｌ−バリニル）−２’−デオキシ−β−Ｌ−シチジンの合成を例示するための非限定的実施例を示す図である。
【図８ａ】  様々なヌクレオシドの可溶性を決定するために使用することができる標準校正法を示す線グラフであり、天然のβ−Ｄ−デオキシリボシトシンで決定された校正曲線を示す図である。
【図８ｂ】  様々なヌクレオシドの可溶性を決定するために使用することができる標準校正法を示す線グラフであり、β−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルで決定された校正曲線を示す図である。
【図９ａ】  ｐＨ７．４２でのβ−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルの安定性を評価するために使用されるＨＰＬＣプロファイルの非限定的実施例を示す図である。
【図９ｂ】  β−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルとその代謝物との時間に応じた相対濃度を示す線グラフである。
【図１０ａ】  ｐＨ７．２０でのβ−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルの安定性を評価するために使用されるＨＰＬＣプロファイルの非限定的実施例を示す図である。
【図１０ｂ】  β−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルとその代謝物との時間に応じた相対濃度を示す線グラフである。
【図１１ａ】  ｐＨ４．５１でのβ−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルの安定性を評価するために使用されるＨＰＬＣプロファイルの非限定的実施例を示す図である。
【図１１ｂ】  β−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルとその代謝物との時間に応じた相対濃度を示す線グラフである。
【図１２】  ｐＨ１．２３でのβ−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルの安定性を評価するために使用されるＨＰＬＣプロファイルの非限定的実施例を示す図である。
【図１３】  ヒト血漿中でのβ−Ｌ−デオキシリボシトシンの３’，５’−ジバリニルエステルのインビトロ代謝を示す線グラフである。
【図１４】  ＨｅｐＧ２細胞でのβ−Ｌ−デオキシリボシトシン（Ｌ−ｄＣ）の細胞内代謝を示す線グラフである。
【図１５】  一次ヒト肝細胞でのＬ−ｄＣの細胞内蓄積を示す線グラフである。
【図１６】  慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染しているウッドチャックモデルでの２８日間の慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染治療での、Ｌ−ｄＣの抗ウイルス用量応答を示す棒グラフである。
【図１７】  慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染しているウッドチャックモデルでのＬ−ｄＣの抗ウイルス活性を示す線グラフである。
【図１８】  経口によりＬ−ｄＣ（０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日）で２８日間治療された個々のウッドチャックの体重を示す線グラフである。
【図１９】  経口によりＬ−ｄＣ（１ｍｇ／ｋｇ／日）で１２週間治療された個々のウッドチャックの体重を示す線グラフである。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８ａ】
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【図８ｂ】
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【図９ａ】
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【図９ｂ】
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【図１０ａ】
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【図１０ｂ】
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【図１１ａ】
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【図１１ｂ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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