(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
セルロースバインディングドメイン（ＣＢＤ）を有するエンドグルカナーゼと共に、一般式（Ｉ）：
【化１】
0004648536.tif 000011
（式中、ｎ，ｐは２から１０、ｍは０から１０、ｏは、１から１０の整数を表す。）で示される、テレフタル酸−アルキレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴアルキレングリコールコポリマーの単独又は複数を含有させてなることを特徴とする、セルロース含有繊維の色の澄明化、毛羽の除去、またはストーンウォッシュ様外観や風合の付与用の繊維処理剤。
【請求項２】
コポリマーが、テレフタル酸−ジエチレングリコールコポリマー、テレフタル酸−トリエチレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−テトラエチレングリコールコポリマーである請求項１に記載の繊維処理剤。
【請求項３】
無機塩をさらに添加することを特徴とする、請求項１又は２に記載の繊維処理剤。
【請求項４】
コポリマーの末端が、部分的又は全てスルフォン酸化されていることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の繊維処理剤。
【請求項５】
コポリマーの平均分子量が500から10,000である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の繊維処理剤。
【請求項６】
コポリマーを繊維処理剤に、0.1〜50重量％含有させる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の繊維処理剤。
【請求項７】
飛散性のない顆粒状又は安定化された液体状である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の繊維処理剤。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の繊維処理剤を、洗剤成分に配合してなる、洗剤組成物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の繊維処理剤を、セルロース含有繊維に作用させ、該繊維の色を澄明化させることを特徴とする、繊維の処理方法。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の繊維処理剤を、セルロース含有繊維に作用させ、該繊維の毛羽を除去させることを特徴とする、繊維の処理方法。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の繊維処理剤を、セルロース含有繊維に作用させ、該繊維にストーンウオッシュ様外観や風合いを付与することを特徴とする、繊維の処理方法。
【請求項１２】
テレフタル酸−アルキレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴアルキレングリコールコポリマーの単独あるいは複数を、反応系において1〜1,000 mg／Ｌの濃度で存在させる、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
繊維の浸漬、洗濯、又はすすぎ工程で行うことを特徴とする、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、水可溶性又は水懸濁性ポリマーを含有させることによってエンドグルカナーゼの効果を向上させたセルラーゼ調製物、当該セルラーゼ調製物を含有する洗剤、当該セルラーゼ調製物を用いる繊維の処理方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
セルラーゼには、セルロースの固い結晶領域を非還元末端からエキソ型に加水分解しセロビオースを生成するセロビオヒドロラーゼ活性、セルロースの非結晶領域をエンド型に加水分解しセルロース分子の低分子化と各種のセロオリゴ糖を生成するエンドグルカナーゼ活性、セロビオースやセロオリゴ糖をグルコースに分解するβ−グルコシダーゼ活性、の３種の酵素活性が含まれている。このうち、エンドグルカナーゼが高活性を発揮すると繊維処理に有利である。
【０００３】
従来より、セルロース含有繊維に所望の特性を与えるために、それをセルラーゼで処理することが行われている。例えば、繊維業界においては、セルロース含有繊維の肌触り及び外観を改善するために、あるいは着色されたセルロース含有繊維にその色の局所的な変化を提供する「ストーンウオッシュ」の外観を与えるために、セルラーゼによる処理が行われている（ヨーロッパ特許第307,564号）。
また、着色されたセルロース含有繊維は繰り返し洗濯をすることによって毛羽が生じ、着色生地の色を不鮮明にすることが知られている。そこで、洗剤中にセルラーゼを含ませることによって、毛羽を除去し、着色生地の色を鮮明にする(色の澄明化)ことから（ヨーロッパ特許第220,016号）、セルラーゼを含んだ洗剤が欧米を中心に市販されている。
【０００４】
かかる繊維加工においては、主に木材腐朽菌であるトリコデルマ（Trichoderma）やフミコーラ（Humicola）由来のセルラーゼが使用されている。従来、セルラーゼはセルロース分解能を有する微生物を培養した培養ろ液を加工した複数のセルラーゼ成分を含む状態で利用されていた。最近では経済性を高めるために、これらセルラーゼ成分から繊維処理に高活性を有するエンドグルカナーゼのみを単離し、遺伝子工学的に増強したセルラーゼ調製物が使用されている。例えば、繊維加工用途においては、トリコデルマ・ロンジブラシアトゥム(Trichoderma longibrachiatum)由来のＥＧＩＩＩ（特表平８−５０７６９５号）、トリコデルマ・ビリデ(Trichoderma viride)由来のＳＣＥ３（国際公開第ＷＯ９８／５４３３２）、フミコーラ・インソレンス(Humicola insolens)由来のＥＧIII(特表平５−５０９２２３号)やＮＣＥ４(ＷＯ９８／０３６４０)、リゾプス・オリゼー(Rhizopus oryzae)由来のＲＣＥＩ、ＲＣＥＩＩ、ＲＣＥＩＩＩ、ムコール・サーシネロイデス(Mucor circinelloides)由来のＭＣＥＩ、ＭＣＥＩＩ、ファイコマイセス・ニテンス(Phycomyces nitens)由来のＰＣＥＩ（国際公開第ＷＯ００／２４８７９）などがある。
【０００５】
一方、セルラーゼの効果を向上させるため、添加剤を併用することも今までに行われており、例えば、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアマイドなどの水溶性高分子がフミコーラ・インソレンス由来のセルラーゼの効果を増強し、着色生地の毛羽除去活性を向上させることが示されている（特表平５−５０７６１５号）。また、トリコデルマ・ビリデ（Trichoderma viride）の培養液のＣＭＣアーゼ活性は、Tween20の添加によって向上することが知られている（Ooshima, H. et al., Biotechnology and Bioengineering 28:1727-1734, 1986）。
しかしながら、上記用途に使用されるセルラーゼはいずれもコストが高いため、工業的実用化レベルに見合うには、そのエンドグルカーゼ活性をさらに向上させ、セルラーゼの有する上記効果を効率的に発揮できる手段を提供することが望まれるところである。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明は、エンドグルカナーゼ活性を向上させ、毛羽立ち除去などのセルロース含有繊維改善を目的とした繊維処理を効率よくかつ安価に行うために好適に使用されうるセルラーゼ調製物を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、テレフタロイル基などの芳香環を有する疎水基を分子内に有する水可溶性又は水懸濁性ポリマーが、セルラーゼの効果向上作用を有することが従来から知られていたポリエチレングリコールよりもその効果が優れていることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（３）の発明に関する。
（１）  セルロースバインディングドメイン（ＣＢＤ）を有するエンドグルカナーゼと共に、一般式（Ｉ）：
【０００９】
【化２】
0004648536.tif 000002
【００１０】
（式中、ｎ，ｐは２から１０、ｍは０から１０、ｏは、１から１０の整数を表す。）
で示されるテレフタル酸−アルキレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴアルキレングリコールコポリマーの単独又は複数を含有させてなることを特徴とする、セルラーゼ調製物。
（２）  上記セルラーゼ調製物を、洗剤成分に配合してなる、洗剤組成物。
（３）  上記セルラーゼ調製物を、セルロース含有繊維に作用させ、該繊維の性質を改善させることを特徴とする、繊維の処理方法。
【００１１】
【発明の実施の形態】
[１]  セルラーゼ調製物
本発明のセルラーゼ調製物は、セルロースバインディングドメイン（ＣＢＤ）を有するエンドグルカナーゼと、テレフタル酸−アルキレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴアルキレングリコールコポリマーの単独又は複数を含んでなる。
【００１２】
本発明において、エンドグルカナーゼとしては、セルラーゼ生産微生物により生産されるものであればいずれも用いることが出来るが、これまでに明らかにされているエンドグルカナーゼの一般的分子構造を元に定義すれば、エンドグルカナーゼは反応に当りセルロースと特異的に結合する部位であるセルロースバインディングドメイン（ＣＢＤと略記する）、セルロース分子を加水分解する活性ドメイン（ＣＡＤと略記する）、ＣＢＤとＣＡＤをつなぐリンカー部分より構成される。糸状菌のエンドグルカナーゼはＣＢＤを有するものとＣＢＤの無いものに分類することができる。本発明は、上記ＣＢＤを有するエンドグルカナーゼを対象とし、トリコデルマ・ロンジブラシアトゥム由来のＥＧＩＩＩと称されるエンドグルカナーゼに代表されるＣＢＤの無いセルラーゼには適用できない。本発明が適用されるセルラーゼの例としては、フミコーラ・インソレンス由来のＮＣＥ４、ＥＧＶ、トリコデルマ・レーセイ由来のＥＧＩＩ、トリコデルマ・ビリデ由来のＳＣＥ３を挙げることが出来る。
【００１３】
一方、本発明のセルラーゼ調製物に含有させるテレフタル酸−アルキレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴアルキレングリコールコポリマーとしては、具体的には、テレフタル酸ジエチレングリコールコポリマー、テレフタル酸トリエチレングリコールコポリマー又はテレフタル酸テトラエチレングリコールコポリマーで、平均分子量が500から10,000、好ましくは1,000から5,000のものが挙げられる。かかるコポリマーは、単独で用いてもよいが、複数を混合して用いてもよい。複数のコポリマーを用いる場合、コポリマーの分子量、鎖長は異なってもよい。アルキレンとしては、代表的にはエチレン、プロピレンが挙げられる。また、コポリマーの末端は、部分的又は全てスルフォン酸化されていてもよい。
【００１４】
本発明のセルラーゼ調製物には、さらに無機塩を５〜４０％添加してもよい。無機塩としては、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、硫酸ナトリウムなどが挙げられる。
【００１５】
また、本発明のセルラーゼ調製物には、従来からのセルラーゼ調製物に一般的に含まれている成分、例えば賦形剤、防腐剤等を含有させることができる。また、セルラーゼ調製物の形態は、固形状であっても液状であってもよく、具体的には粉剤、粒剤、顆粒剤、非粉塵化顆粒剤、又は液体製剤が挙げられる。
【００１６】
セルラーゼ調製物のひとつである非粉塵化顆粒は、通常の乾式造粒法を用い製造することが可能である。すなわち、粉末状態のセルラーゼ酵素を、硫酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどの無機塩、ベントナイト、モンモリナイトなどに代表される鉱物、及び澱粉、粒状セルロースなどに代表される中性の有機物から選ばれる１種又は複数に混合した後、上記のエンドグルカナーゼの効果を向上させるテレフタル酸−アルキレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴアルキレングリコールコポリマーの単独又は複数の粉末、あるいは微細に懸濁された懸濁液を加え十分に混合又は混錬する。状況に応じ、固形物を結着させるポリエチレングリコールに代表される合成高分子やスターチなどの天然高分子を適宜添加し更に混錬したのち、ディスクペレッターなどの押し出し成形造粒を行い、成形物をマルメライザーにより球状に成形後、乾燥させることで非粉塵化顆粒を製造することが可能である。もちろん、顆粒表面をポリマーなどでコーティングし酸素透過や水分透過をコントロールすることも可能である。このとき、エンドグルカナーゼの効果を向上させるテレフタル酸−アルキレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴアルキレングリコールコポリマーの単独又は複数は、上記セルラーゼ調製物に0.005〜10重量％、より好ましくは、0.１〜５重量％添加する。
【００１７】
一方、液状製剤は、セルラーゼ酵素溶液に合成高分子や天然高分子などのエンドグルカナーゼ酵素の安定化剤を配合し、必要に応じ無機塩類や合成防腐剤を添加し調製することが可能である。このとき、エンドグルカナーゼの効果を向上させるテレフタル酸−アルキレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴアルキレングリコールコポリマーの単独又は複数を混合し用いることが可能である。非粉塵化顆粒剤同様に、エンドグルカナーゼの効果を向上させるテレフタル酸−アルキレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴアルキレングリコールコポリマーの単独又は複数は上記セルラーゼ調製物に0.005〜10重量％、より好ましくは、0.1〜５重量％を添加する。
【００１８】
[２]  洗剤組成物
上記の本発明によるセルラーゼ調製物は、公知の洗剤成分、例えば、ビルダー、漂白剤、漂白活性剤、腐食防止剤、金属イオン封鎖剤、汚れ解離ポリマー、香料、他の酵素、酵素安定剤、製剤化補助剤、蛍光増白剤、発砲促進剤等に配合して洗剤組成物とすることができる。
本洗剤組成物は、粒質土壌除去、色彩澄明化、脱毛羽立ち、脱ピリング及び手粗さ軽減に関し、それらを改善することができる。
【００１９】
[３]  繊維処理方法
本発明の繊維処理方法は、セルロースバインディングドメイン（ＣＢＤ）を有するエンドグルカナーゼを、上記のテレフタル酸−アルキレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴアルキレングリコールコポリマーの存在下でセルロース含有繊維に作用させることにより行う。
本処理方法により改善されうる、セルロース含有繊維の性質としては、以下のものが含まれる。
（１）毛羽の除去（毛羽立ち始める速度の低減、毛羽立ちの低減）
（２）着色セルロース含有繊維の色の局所的な変化の付与、すなわち、着色セルロース含有繊維、代表的にはジーンズへのストーンウオッシュ様の外観や風合いの付与
（３）着色セルロース含有繊維の色の澄明化
【００２０】
上記の繊維処理方法は、典型的には洗濯中に実施できるが、ソーキング又はすすぎ中に実施することもできる。本発明の繊維処理方法は、具体的には、繊維が浸漬されているか又は浸漬されうる水に、本発明のセルラーゼ調製物を添加することに行うことができる。
【００２１】
接触温度、エンドグルカナーゼ活性を有する酵素の量などの条件は、他の種々の条件を勘案して適宜決定されてよいが、例えばセルロース含有繊維の毛羽立ち始める速度を低減するか又は毛羽立ちを低減する場合、30〜60℃程度の温度で、1〜1,000 mg／Ｌのテレフタル酸−アルキレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴアルキレングリコールコポリマーと0.05〜20mg/Ｌのタンパク濃度のエンドグルカナーゼ酵素を使用することにより処理することができる。
【００２２】
更に、着色セルロース含有繊維の色の局所的な変化をもたらす場合、30〜60℃程度の温度で、1〜1,000 mg／Ｌのテレフタル酸−アルキレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴアルキレングリコールコポリマーと0.1〜20 mg／Ｌのタンパク濃度のエンドグルカナーゼを使用することにより処理することができる。
【００２３】
上記いずれの場合も、テレフタル酸−アルキレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴアルキレングリコールコポリマーの単独あるいは複数は、水に溶解または懸濁した形で反応系に導入される。ポリマーは水に完全に溶解されている必要はなく、部分的に懸濁されていても効果を発揮できる。
また、ポリマーを添加した反応液に１〜100 mMの無機塩を添加することによりさらにセルラーゼ酵素の効果を増強できる。
【００２４】
【実施例】
本発明を以下の実施例により更に詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
以下において、「エンドグルカナーゼ活性」とは、ＣＭＣアーゼ活性を意味する。さらに、「ＣＭＣアーゼ活性」は、セルラーゼ酵素とカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ、東京化成工業株式会社製）溶液を一定時間インキュベーション後、遊離してくる還元糖量を測定し、１分間に１μmolのグルコース相当の還元糖を生成する酵素量を１単位と定義する。
【００２５】
〔実施例１〕  （ポリマーによるセルラーゼのジーンズ脱色活性向上効果）
ＮＣＥ４エンドグルカナーゼを、国際公開第ＷＯ98/03640の記載に従い、フミコーラ・インソレンスＭＮ２００−１に発現プラスミドｐＥＧＤ０１（図1）を導入することによって得られた形質転換体を培養し、その培養上清液を用いて、糊抜きした 12オンスのブルージーンズパンツの脱色処理を下記の条件にて行った。
なお、上記プラスミドｐＥＧＤ０１を導入した大腸菌（Escherichia coli/pEGD01）はＦＥＲＭ ＢＰ−５９７３（原寄託：ＦＥＲＭ Ｐ−１５７２９、原寄託日：１９９６年７月１２日）の受託番号のもと通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託されている。また、上記フミコーラ・インソレンスＭＮ２００−１は、ＦＥＲＭ ＢＰ−５９７７（原寄託：ＦＥＲＭ Ｐ−１５７３６、原寄託日：１９９６年７月１５日）の受託番号のもと通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託されている。
【００２６】
（試験条件）
処理液：水道水を用いて調製した6.7ｍＭリン酸緩衝液(pH6.2)１５Ｌに、フミコーラ・インソレンス培養液（ＮＣＥ４）、各種ポリマー、およびゴムボールを適当量加えた。
試験機械：20kgワッシャー（三洋電機株式会社製 全自動洗濯機 SCW5101）
温度：55℃
時間：60分
pH：6.2
ポリマー添加量：各0.5ｇ
ポリマーの種類：ポリエチレングリコール（分子量4000、市販名：ＰＥＧ４０００、和光純薬製）、ポリエステル（テレフタル酸−テトラエチレングリコール共重合体、市販名：ＦＲ５５０、互応化学社製）、ポリエーテル（アルキルポリエチレングリコールエーテル、市販名：ルテンソール、ＢＡＳＦ社製）
【００２７】
（ジーンズ脱色活性評価方法）
脱色度は分光測色計（ミノルタ社製  ＣＭ−５２５１）を用い、Ｌａｂ表示系のＬ値（明度）で評価した。コントロール（脱色処理をしていない糊抜きブルージーンズパンツ）に対する脱色処理後のブルージーンズパンツのＬ値の増加（白色度の増加）＝ΔＬ値を求め、このΔＬ値により脱色の度合いを評価した。すなわち、各試験区につき10点のΔＬ値を測定し（ｎ＝１０）、その平均値を算出した。そして、ΔＬ値＝７となるのに必要なセルラーゼの溶液量を基準に、セルラーゼ活性の向上率％を次のようにして算出した。まず、ポリマーを添加した場合としない場合について、ΔＬ値＝７となるために要するセルラーゼ溶液量をそれぞれ求めた。次に、ポリマーを添加しない場合にΔＬ値＝７となるために要するセルラーゼ溶液量を、ポリマーを添加した場合にΔＬ値＝７となるために要するセルラーゼ溶液量で割った値に100を乗じた値を、ポリマーによる脱色活性向上率とした。結果を表１に示す。
【００２８】
【表１】
0004648536.tif 000003
【００２９】
表１に示されるように、ＮＣＥ４を用いたジーンズ脱色加工において、従来の知見でセルラーゼの活性向上効果を示すとされているポリエチレングリコール(PEG4000)とポリエーテル（ルテンソール）を添加した試験区では脱色活性向上効果はほとんどみられなかったが、ポリエステル（テレフタル酸−テトラエチレングリコール共重合体）に顕著なセルラーゼの脱色活性向上効果が認められた。
【００３０】
〔実施例２〕（ポリマーと無機塩併用によるセルラーゼのジーンズ脱色活性向上効果）
実施例１のデニム脱色活性測定において、ポリエステル（テレフタル酸−テトラエチレングリコール共重合体、市販名：ＦＲ５５０）を添加した反応液に無機塩として20 mMリン酸ナトリウム(pH 6.2)、又は20 mM硫酸ナトリウムを添加し、ジーンズ脱色活性への活性向上効果を調べた。結果を表２に示す。
【００３１】
【表２】
0004648536.tif 000004
【００３２】
表２に示されるように、ジーンズ脱色加工において、ポリエステル（テレフタル酸−テトラエチレングリコール共重合体）を添加した反応液に無機塩を加えると、さらにセルラーゼの脱色活性が向上することが示された。
【００３３】
〔実施例３〕（ポリマーによるセルラーゼのリヨセル毛羽除去活性効果）
ＮＣＥ４エンドグルカナーゼを、国際公開第ＷＯ98/03640の記載に従ってフミコーラ・インソレンスにて発現させた。その培養上清液を用いて、大型ワッシャー内で毛羽立たせたリヨセルニットの生地（豊島株式会社製  染色生地  ９cm×10cm、重量２ｇ）の毛羽除去処理を下記の条件にて行った。
（試験条件）
試験機械：洗濯堅牢度試験機 L-12（株式会社大栄科学精器製作所製）
温度：55℃
時間：60分
反応液量：40ml
反応pH：６（10mMリン酸緩衝液、脱イオン水を用いて調製）
ポリマーの種類及び添加量：  ポリエチレングリコール（分子量4000、市販名：ＰＥＧ４０００、和光純薬製）、ポリエステル（テレフタル酸−テトラエチレングリコール共重合体、市販名：ＦＲ５５０、互応化学社製）、ポリエーテル（アルキルポリエチレングリコールエーテル、市販名：ルテンソール、ＢＡＳＦ社製）各４mg
処理液には、酵素溶液とともに、ゴムボールを適当量加えた。
【００３４】
ポリマーを添加した場合としない場合について、形成された毛羽が目視で完全に除去されるために要するセルラーゼ溶液量をそれぞれ求めた。次に、ポリマーを添加しない場合に毛羽が完全に除去されるために要するセルラーゼ溶液量を、ポリマーを添加した場合に毛羽が完全に除去されるために要するセルラーゼ溶液量で割った値に１００を乗じた値を、ポリマーによる毛羽除去活性向上率とした。結果を表３に示す。
【００３５】
【表３】
0004648536.tif 000005
【００３６】
表３に示すように、リヨセルの毛羽取り加工において、ポリエステル（テレフタル酸−テトラエチレングリコール共重合体）に顕著な毛羽除去活性向上効果が認められた。
【００３７】
〔実施例４〕  （ポリマーによる各種セルラーゼの活性向上効果）
（１）セルロースバインディングドメイン（ＣＢＤ）がないエンドグルカナーゼＥＧＩＩＩの精製
市販セルラーゼ製剤であるＳｕｐｅｒＧＸ（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ社製）よりＥＧＩＩＩ成分の分画精製を行った。ＳｕｐｅｒＧＸ製剤10ｇを200 mlの脱イオン水に懸濁し30分間攪拌した。懸濁液全量を10,000 r.p.m.、30分間遠心分離し、水不溶物を除去した。得られた水溶液に最終濃度80 ％(V/V)となる様エタノールを添加し、析出した沈殿物を10,000 r.p.m、30分間遠心分離することにより集めた。沈殿全量を10 mlの50mM酢酸緩衝液（pH 4.5）、１Ｍ硫酸アンモニウム溶液に溶解し、このうち0.5 mlを50mM酢酸緩衝液（pH 4.5）、１Ｍ硫酸アンモニウム溶液で平衡化したButyl‐Toyopearl 650M（10 mm×10 cm）に供し、流速4.0 ml/min、50mM酢酸緩衝液（pH 4.5）、脱イオン水、20 ％エタノールの順に溶離した。20 ％エタノール溶離液に溶出した活性画分を集め凍結乾燥し、１mgの蛋白を得た。活性画分は、以下に記載の綿毛羽取り活性によって評価した。Ｎ末端近傍残基分析、リシルエンドフラグメントの配列分析より、得られた蛋白をＥＧＩＩＩと同定した。
【００３８】
（２）セルロースバインディングドメイン（ＣＢＤ）があるエンドグルカナーゼ国際公開第ＷＯ98/54322の方法に従い、トリコデルマ・ビリデＭＣ３００−１〔ＦＥＲＭ ＢＰ−６０４７（原寄託：ＦＥＲＭ Ｐ−１５８４２、原寄託日：１９９６年９月９日の受託番号のもと通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託されている〕にて発現させ、精製したＳＣＥ３、および国際公開第ＷＯ98/03640の記載に従い、フミコーラ・インソレンスＭＮ２００−１に発現プラスミドｐＥＧＤ０１（図１）を導入することによって得られた形質転換体にて発現させ、精製したＮＣＥ４を用いた。
なお、ＳＣＥ３をコードする塩基配列を配列番号１に、またＮＣＥ４をコードする塩基配列を配列番号２にそれぞれ示す。
【００３９】
（３）  綿毛羽除去活性測定
上記の各種精製エンドグルカナーゼ（ＳＣＥ３、ＥＧＩＩＩ、ＮＣＥ４）を用い、ポリエステル（テレフタル酸−テトラエチレングリコール共重合体、市販名：ＦＲ５５０  （互応化学社製））によるセルラーゼ活性向上効果を無染色の綿ニット生地（日東紡績株式会社製  綿スムースニットNo.3900を大型ワッシャー中で毛羽立たせたもの、9cm×10cm）の毛羽除去処理を下記条件で行うことによって評価した。
（試験条件）
試験機械：洗濯堅牢度試験機 L-12（株式会社大栄科学精器製作所製）
温度：55℃
時間：120分
反応液量：40ｍｌ
反応pH：ＮＣＥ４、ＥＧＩＩＩはｐＨ６（５0mM酢酸緩衝液）、
ＳＣＥ３はｐＨ 4.5（５0mM酢酸緩衝液）
緩衝液は、いずれも脱イオン水を用いて調製した。
ポリマーの種類と添加量：ＦＲ５５０（互応化学社製）４ｍｇ
精製エンドグルカナーゼ酵素液とともにゴムボールを適当量加えた。
【００４０】
ＦＲ５５０を添加した場合としない場合について、形成された毛羽が目視で完全に除去されるために要するセルラーゼ溶液量をそれぞれ求めた。次に、ＦＲ５５０を添加しない場合に毛羽が完全に除去されるために要するセルラーゼ溶液量を、ＦＲ５５０を添加した場合に毛羽が完全に除去されるために要するセルラーゼ溶液量で割った値に１００を乗じた値を、ＦＲ５５０による毛羽除去活性向上率とした。結果を表４に示す。
【００４１】
【表４】
0004648536.tif 000006
【００４２】
表４に示されように、ＣＢＤを有するＳＣＥ３、 ＮＣＥ４に関してはポリエステル（テレフタル酸−テトラエチレングリコール共重合体）による活性向上効果を観察できたが、ＣＢＤがないＥＧＩＩＩでは逆効果であることが判明した。
【００４３】
〔実施例５〕  （テレフタル酸−エチレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴエチレングリコールコポリマーを効果量含有する非粉塵性粒剤セルラーゼ調製物の製造）
下記表５に示す原材料を混合後、10 ％の水を添加し混錬する。混錬物をディスクペレッターに送り成形加工した。得られた射出物をマルメライザー（不二パウダル社製）を用い粒状とし、乾燥、篩かけし造粒物を得た。
【００４４】
【表５】
0004648536.tif 000007
【００４５】
【発明の効果】
本発明によれば、テレフタル酸−アルキレングリコールコポリマー又はテレフタル酸−オリゴアルキレングリコールコポリマーを含有させることによって、セルロースバインディングドメイン（ＣＢＤ）を有するエンドグルカナーゼ活性を飛躍的に向上させたセルラーゼ調製物が提供される。当該セルラーゼ調製物をセルロース含有繊維の毛羽立ちの低減、色の澄明化、色の局所的変化などの繊維加工処理に用いることにより、より少ない酵素量で各処理の実施が可能になり、大幅にコストが低減化される。
【００４６】
【配列表】
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【００４７】
【図面の簡単な説明】
【図１】プラスミドｐＥＧＤ０１の構造を示す。
【図１】
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