(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（Ｉ）
0004759756.tif 000027
〔式中、ＲはカプラザマイシンＤでは10−メチル−ウンデシル基−(CH2)9CH(CH3)2であり、カプラザマイシンＧではＲは9−メチル−ウンデシル基−(CH2)8CH(CH3)CH2CH3である〕で示される化合物である、抗生物質カプラザマイシンＤ又はカプラザマイシンＧ、あるいはそれらの製薬学的に許容できる塩。
【請求項２】
次式（Ia）
0004759756.tif 000028
で示されるカプラザマイシンＤ〔請求項１に示される一般式（Ｉ）の化合物でＲが10−メチル−ウンデシル基である場合の化合物〕である、請求項１に記載の抗生物質。
【請求項３】
次式（Ib）
0004759756.tif 000029
で示されるカプラザマイシンＧ〔請求項１に示される一般式（Ｉ）の化合物でＲが9−メチル−ウンデシル基である場合の化合物〕である、請求項１に記載の抗生物質。
【請求項４】
次の一般式（II）
0004759756.tif 000030
〔式中、ＲはカプラザマイシンＤ1では10−メチル−ウンデシル基−(CH2)9CH(CH3)2であり、カプラザマイシンＧ1ではＲは9−メチル−ウンデシル基−(CH2)8CH(CH3)CH2CH3である〕で示される化合物である、カプラザマイシンＤ1又はカプラザマイシンＧ1、あるいはそれらの製薬学的に許容できる塩。
【請求項５】
次式（IIa）
0004759756.tif 000031
で示されるカプラザマイシンＤ1〔請求項４に示される一般式(II)の化合物でＲが10−メチル−ウンデシル基である場合の化合物〕である、請求項４に記載の抗生物質。
【請求項６】
次式（IIb）
0004759756.tif 000032
で示されるカプラザマイシンＧ1〔請求項４に示される一般式(II)の化合物でＲが9−メチル−ウンデシル基である場合の化合物〕である、請求項４に記載の抗生物質。
【請求項７】
ストレプトミセス属に属して、請求項１に記載の一般式（Ｉ）で示される抗生物質カプラザマイシンＤおよびカプラザマイシンＧならびに請求項４に記載の一般式（II）で示される抗生物質カプラザマイシンＤ1およびカプラザマイシンＧ1の少くとも一つを生産する生産菌を培養し、その培養物から、カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1の少くとも一つを採取することを特徴とする、抗生物質カプラザマイシンＤ、カプラザマイシンＧ、カプラザマイシンＤ1および（または）カプラザマイシンＧ1の製造方法であって、カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1の少くとも一つを生産する生産菌として、独立行政法人  産業技術総合研究所  特許生物寄託センターにブダペスト条約の規約下にFERM BP-7218の受託番号で寄託されてあるストレプトミセス・エスピーMK730-62F2を使用する、前記製造方法。
【請求項８】
既知の抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦならびに請求項１に記載の一般式（Ｉ）で示される抗生物質カプラザマイシンＤおよびカプラザマイシンＧならびに請求項４に記載の一般式（II）で示される抗生物質カプラザマイシンＤ1およびカプラザマイシンＧ1を生産する特性を持つストレプトミセス・エスピーMK730-62F2（独立行政法人  産業技術総合研究所  特許生物寄託センターにブダペスト条約の規約下にFERM BP-7218の受託番号で寄託された菌株）を、好気的条件下で培養し、その培養物から、抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦならびに抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1をそれぞれ別々に採取することから成ることを特徴とする、抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧならびにカプラザマイシンＤ1およびＧ1の製造方法。
【請求項９】
請求項１に記載の一般式（Ｉ）で示される抗生物質カプラザマイシンＤおよびカプラザマイシンＧならびに請求項４に記載の一般式（II）で示される抗生物質カプラザマイシンＤ1およびカプラザマイシンＧ1の少なくとも一つ、あるいはその製薬学的に許容できる塩を有効成分として含有し、また製薬学的に許容される担体を、有効成分と混和して含有する医薬組成物。
【請求項１０】
抗細菌性組成物である請求項９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、すぐれた抗菌活性を有する新規な抗生物質であるカプラザマイシン（caprazamycin）Ｄ、カプラザマイシンＧ、カプラザマイシンＤ1およびカプラザマイシンＧ1、またはそれらの製薬学的に許容される塩に関する。また本発明は、カプラザマイシンＤ、カプラザマイシンＧ、カプラザマイシンＤ1およびカプラザマイシンＧ1の製造法に関する。さらに本発明は、カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1、あるいはそれらの塩の少なくとも一つを有効成分とする医薬組成物、特に抗菌性組成物に関する。さらにまた、本発明は新規抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1ならびに既知の抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆを生産できる特性を持つストレプトミセス・エスピーMK730-62F2を培養することから成る、カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1の製造方法を包含する。
【０００２】
【従来の技術】
細菌感染症の化学療法、特に抗酸性菌の感染症の化学療法において、リファンピシン、カナマイシン、ストレプトマイシン、バイオマイシン、カプレオマイシン、サイクロセリン等の抗生物質が抗菌剤として使用されている。
【０００３】
細菌感染症の化学療法において、感染症の原因となる細菌が薬剤耐性になることは重大な問題である。特に抗酸性菌の感染症の化学療法において、リファンピシン、カナマイシン、ストレプトマイシン、バイオマイシン、カプレオマイシン、サイクロセリン等に耐性を有する抗酸性菌が出現して社会的問題となっている。薬剤耐性抗酸性菌の感染症の治療に有効な新しい化学療法剤が強く望まれている。また、化学療法が確立していない非定型抗酸性菌の感染症の治療に有効な新しい化学療法剤も強く望まれている。そのため、従来使用されている既知の抗生物質とは異なり、新規な化学構造を有し且つ高い抗菌作用などの優れた性質を示す新規な合成化合物および新規抗生物質の発見または創製をすることが強く望まれている。本発明者らは、上記の要望に応え得る優れた抗菌活性を持つ新規な抗生物質を提供することを目的として種々の研究を行ってきた。
【０００４】
先に、本発明者らは、ストレプトミセス・エスピーMK730-62F2株（FERM BP-7218の受託番号で寄託）により生産されるところの、抗酸性菌に対し強い抗菌力を示すカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦを提供している（PCT出願PCT/JP00/05415号の国際公開WO 01/12643A1号公報、参照、2001年２月22日発行）。
【０００５】
カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦは、次の一般式（Ａ）
0004759756.tif 000002
〔式中、ＲはカプラザマイシンＡではトリデシル基であり、カプラザマイシンＢでは11−メチル−ドデシル基であり、カプラザマイシンＣではドデシル基であり、カプラザマイシンＥではウンデシル基であり、そしてカプラザマイシンＦでは9−メチル−デシル基である〕で示される化合物である。
【０００６】
なお、前記のカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆの化学構造と関連した構造骨格を持つ物質として、ストレプトミセス・sp SN-1061M株(FERM BP-5800)の発酵生産物である公知の抗生物質リポシドマイシンＡ、Ｂ、Ｃ（特開昭61-282088号）およびリポシドマイシンＧ、Ｈ（特開平2-306992号）、ならびにその他のリポシドマイシン類〔The Journal of Antibiotics 51巻7号647〜654頁(1998);   The Journal of Antibiotics, 52巻3号281〜287頁(1999); Journal of the     American Chemical Society, 110巻13号4416〜4417頁(1988); The Journal of  Organic Chemistry, 57巻24号6392〜6403頁(1992); PCT国際公開WO 97/41248号参照〕が知られている。
【０００７】
前記PCT国際公開WO 97/41248号明細書には、実際に単離されて収得された具体的な新規化合物として、リポシドマイシンＺ、Ｌ、Ｍ、Ｋ、Ｎ、A-(III) 、    C-(III)、X-(III)、Y-(III)、Z-(III)、C-(III)、V-(III)、A-(III)、G-(III)、M-(III)、K-(III)、N-(III)、A-(IV)およびC-(IV)の計17個の化合物があげられている（該WO 97/41248号明細書の第１表、参照）。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
細菌感染症、特に耐性菌の感染症の治療に有効である優れた抗菌活性を有する新規な抗生物質を求める要望は、依然として強く、その要望に応えるための研究は多くの研究者により続けられている。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは前記のカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆの発見に続いて、新規で有用な抗生物質を発見すべく研究を行った。その結果、今回、前記のストレプトミセス・エスピーMK730-62F2株が新しい４種の抗生物質を前記のカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆとは別個に生産していることを、見い出した。これらの４種の新しい抗生物質を単離して収得することに本発明者らは成功した。これら４種の新しい抗生物質は抗酸性菌並びにその薬剤耐性菌に対して優れた抗菌活性を持つことを今回知見した。本発明者らはさらにこれら４種の新しい抗生物質を分析することにより、それらの化学構造を決定することに成功した。そしてそれら４種の新しい抗生物質が前記のカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆと共通な骨格を有する新規な化合物であることを確認しそれぞれカプラザマイシンＤ、カプラザマイシンＧ、カプラザマイシンＤ1、カプラザマイシンＧ1と命名した。これら新化合物がそれぞれ後記の式（Ia）、式（Ib）、式（IIa）および式    （IIb）により表せることを知見した。
【００１０】
しかも、今回、本発明者らによって発見および単離された新規抗生物質、カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1は、既知にリポシドマイシン類の何れの一つとも、化学構造の点ですべて異なることを知見した。さらに、化学的に合成された既知の化合物には、カプラザマイシン類に類似する化合物は無いことも確かめた。従って、本発明者らによって今回得られたカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1が新規化合物であることを確認できた。
【００１１】
従って、第１の本発明においては、次の一般式（Ｉ）
0004759756.tif 000003
〔式中、ＲはカプラザマイシンＤでは10−メチル−ウンデシル基              −(CH2)9CH(CH3)2であり、カプラザマイシンＧではＲは9−メチル−ウンデシル基−(CH2)8CH(CH3)CH2CH3である〕で示される化合物である、抗生物質カプラザマイシンＤおよびカプラザマイシンＧ、あるいはそれらの製薬学的に許容できる塩が提供される。
【００１２】
第１の本発明による一般式（Ｉ）で示されるカプラザマイシンＤおよびＧは、下記の式（Ia）のカプラザマイシンＤおよび下記の式（Ib）のカプラザマイシンＧを包含する。
（１）次式（Ia）
0004759756.tif 000004
で示されるカプラザマイシンＤ［一般式（Ｉ）でＲが10−メチル−ウンデシル基である場合の化合物］。
（２）次式（Ib）
0004759756.tif 000005
で示されるカプラザマイシンＧ［一般式（Ｉ）でＲが9−メチル−ウンデシル基である場合の化合物］。
【００１３】
さらに、第２の本発明においては、次の一般式（II）
0004759756.tif 000006
〔式中、ＲはカプラザマイシンＤ1では10−メチル−ウンデシル基             −(CH2)9CH(CH3)2であり、カプラザマイシンＧ1ではＲは9−メチル−ウンデシル基−(CH2)8CH(CH3)CH2CH3である〕で示される化合物である、カプラザマイシンＤ1およびカプラザマイシンＧ1、あるいはそれらの製薬学的に許容できる塩が提供される。
【００１４】
第２の本発明による一般式（II）で示されるカプラザマイシンＤ1およびＧ1は、下記の式(IIa)のカプラザマイシンＤ1および下記の式（IIb）のカプラザマイシンＧ1を包含する。
（１）次式（IIa）
0004759756.tif 000007
で示されるカプラザマイシンＤ1［一般式（II）でＲが10−メチル−ウンデシル基である場合の化合物］。
（２）次式（IIb）
0004759756.tif 000008
で示されるカプラザマイシンＧ1［一般式（II）でＲが9−メチル−ウンデシル基である場合の化合物］。
【００１５】
第１の本発明による式（Ia）のカプラザマイシンＤは下記の理化学的性状を示す。
（1）外観：無色粉末
（2）分子式：C52H85N5O22
（3）高分解能質量分析（HRFABMS：陽イオンモード）
実験値：1132.5776(M+H)＋
計算値：1132.5764
（4）比旋光度：[α] D23  -3.0゜(ｃ  1、メタノール)
（5）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λmax  nm (ε)：262 (9,200)
添付図面の図１に示す。
（6）赤外線吸収スペクトル：添付図面の図２に示す。
（7）プロトン核磁気共鳴スペクトル
500MHzにおいて重メタノール中で室温にて測定したプロンＮＭＲスペクトルは添付図面の図３に示す。
（8）炭素13核磁気共鳴スペクトル
125MHzにおいて重メタノール中で室温にて測定した炭素13NMRスペクトルは添付図面の図４に示す。
【００１６】
（9）溶解性
メタノール、ジメチルスルホキシド(DMSO)、水に可溶であり、アセトン、酢酸エチルに不溶である。
（10）ＴＬＣ
シリカゲル６０Ｆ254（メルク社製）の薄層クロマトグラフィー上でブタノール−メタノール−水(4：１：2)の溶媒で展開したときのRf値は0.41である。
【００１７】
第１の本発明のカプラザマイシンＤは両性物質であり、その製薬学的に許容できる塩としては、第４級アンモニウム塩などの有機塩基との塩、あるいは各種金属との塩、例えばナトリウム塩のようなアルカリ金属との塩、あるいは酢酸などの有機酸との付加塩、あるいは塩酸のような無機酸との付加塩があげられる。
【００１８】
本発明による式（Ib）のカプラザマイシンＧは、下記の理化学的性状を示す。
【００１９】
（1）外観：無色粉末
（2）分子式：C52H85N5O22
（3）高分解能質量分析（HRFABMS：陽イオンモード）
実験値  1132.5769(M+H)+
計算値  1132.5764
（4）比旋光度：[α] D23 -4.2゜(ｃ  0.61、メタノール)
（5）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λmax  nm (ε)：262 (9,000)
添付図面の図９に示す。
（6）赤外線吸収スペクトル：添付図面の図１０に示す。
（7）プロトン核磁気共鳴スペクトル
500MHzにおいて重メタノール中で室温にて測定したプロトンＮＭＲスペクトルは添付図面の図１１に示す。
（8）炭素13核磁気共鳴スペクトル
125MHzにおいて重メタノール中で室温にて測定した炭素13NMRスペクトルは添付図面の図12に示す。
【００２０】
（9）溶解性
メタノール、DMSO、水に可溶であり、アセトン、酢酸エチルに不溶である。
（10）ＴＬＣ
シリカゲル６０Ｆ254（メルク社製）の薄層クロマトグラフィー上でブタノール−メタノール−水(4：１：2)の溶媒で展開したときのRf値は0.41である。
【００２１】
第１の本発明のカプラザマイシンＧは両性物質であり、その製薬学的に許容できる塩としては、第４級アンモニウム塩などの有機塩基との塩、あるいは各種金属との塩、例えばナトリウム塩のようなアルカリ金属との塩、あるいは酢酸などの有機酸との付加塩、あるいは塩酸のような各種無機酸との付加塩があげられる。
【００２２】
第２の本発明による式（IIa）のカプラザマイシンＤ1は下記の理化学的性状を示す。
（1）外観：無色粉末
（2）分子式：C43H69N5O18
（3）高分解能質量分析（HRFABMS：陽イオンモード）
実験値：944.4686 (M+H)＋
計算値：944.4716
（4）比旋光度：[α] D25  +13.9゜(ｃ  0.91、メタノール)
（5）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λmax  nm (ε)：262 (8,300)
添付図面の図５に示す。
（6）赤外線吸収スペクトル：添付図面の図６に示す。
（7）プロトン核磁気共鳴スペクトル
500MHzにおいて重メタノール中で室温にて測定したプロトンＮＭＲスペクトルは添付図面の図７に示す。
（8）炭素13核磁気共鳴スペクトル
125MHzにおいて重メタノール−重水(=10：1)の混合溶媒中で室温にて測定した炭素13NMRスペクトルは添付図面の図８に示す。
【００２３】
（9）溶解性
メタノール、DMSO、水に可溶であり、アセトン、酢酸エチルに不溶である。
（10）ＴＬＣ
シリカゲル６０Ｆ254（メルク社製）の薄層クロマトグラフィー上でブタノール−メタノール−水(4：１：2)の溶媒で展開したときのRf値は0.41である。
【００２４】
第２の本発明のカプラザマイシンＤ1は両性物質であり、その製薬学的に許容できる塩としては、第４級アンモニウム塩などの有機塩基との塩、あるいは各種金属との塩、例えばナトリウム塩のようなアルカリ金属との塩、あるいは酢酸などの有機酸との付加塩、あるいは塩酸のような各種無機酸との付加塩があげられる。
【００２５】
第２の本発明による式（IIb）のカプラザマイシンＧ1は、下記の理化学的性状を示す。
（1）外観：無色粉末
（2）分子式：C43H69N5O18
（3）高分解能質量分析（HRFABMS：陽イオンモード）
実験値  944.4720 (M+H)+
計算値  944.4716
（4）比旋光度：[α] D25  +14.6゜(ｃ  0.91、メタノール)
（5）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）
λmax  nm (ε)：262 (8,300)
添付図面の図13に示す。
（6）赤外線吸収スペクトル：添付図面の図14に示す。
（7）プロトン核磁気共鳴スペクトル
500MHzにおいて重メタノール中で室温にて測定したプロトンＮＭＲスペクトルは添付図面の図15に示す。
（8）炭素13核磁気共鳴スペクトル
125MHzにおいて重メタノール中で室温にて測定した炭素13NMRスペクトルは添付図面の図16に示す。
【００２６】
（9）溶解性
メタノール、DMSO、水に可溶であり、アセトン、酢酸エチルに不溶である。
（10）ＴＬＣ
シリカゲル６０Ｆ254（メルク社製）の薄層クロマトグラフィー上でブタノール−メタノール−水(4：１：2)の溶媒で展開したときのRf値は0.41である。
【００２７】
第２の本発明のカプラザマイシンＧ1は両性物質であり、その製薬学的に許容できる塩としては、第４級アンモニウム塩などの有機塩基との塩、あるいは各種金属との塩、例えばナトリウム塩のようなアルカリ金属との塩、あるいは酢酸などの有機酸との付加塩、あるいは塩酸のような各種無機酸との付加塩があげられる。
【００２８】
なお、前記WO 97/41248号明細書に示されるリポシドマイシンＺ、Ｌ、Ｍ、Ｋ、Ｎは、次の一般式（Ｂ）
0004759756.tif 000009
〔式中、Ｒ1は、WO 97/41248号明細書の第１表によれば、下記の表１に示される意味をもつ〕で表される化合物であり、表１に示される分子式と分子量をもつ化合物である。
0004759756.tif 000010
【００２９】
また、WO 97/41248号明細書に示されるリポシドマイシンA-(II)およびC-(II)は、次の一般式（Ｃ）
0004759756.tif 000011
〔式中、Ｒ1はWO 97/41248号明細書の第１表によれば、下記の表２に示される意味をもつ〕で表される化合物であり、表２に示される分子式と分子量をもつ化合物である。
0004759756.tif 000012
【００３０】
さらに、リポシドマイシンX-(III)、Y-(III)、Z-(III)、C-(III)、V-(III)、
A-(III)、G-(III)、M-(III)、K-(III)、N-(III)は、次の一般式（Ｄ）
0004759756.tif 000013
〔式中、Ｒ1はWO 97/41248号明細書の第１表によれば、下記の表３に示される意味をもつ〕で表される化合物であり、表３に示される分子式と分子量をもつ化合物である。
0004759756.tif 000014
【００３１】
さらにまた、リポシドマイシンA-(IV)およびC-(IV)は、次の一般式（Ｅ）
0004759756.tif 000015
〔式中、Ｒ1はWO 97/41248号明細書の第１表によれば、下記の表４に示される意味をもつ〕で表される化合物であり、表４に示される分子式と分子量をもつ化合物である。
【００３２】
0004759756.tif 000016
【００３３】
本発明によるカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1は、前記に示された既知のリポシドマイシン類の何れにも合致しないことが明らかに認められる。
【００３４】
第１の本発明による前記の一般式（Ｉ）で示されたカプラザマイシンＤおよびＧならびに第２の本発明による一般式(II)で示されるカプラザマイシンＤ1およびＧ1は、後記の生物学的性質を有する。すなわち、カプラザマイシンＤ、カプラザマイシンＧ、カプラザマイシンＤ1およびカプラザマイシンＧ1は、薬剤耐性菌を含めて、抗酸性菌、ならびに薬剤耐性菌を含めてグラム陽性の細菌に対して抗菌活性を示す。これらの細菌に対するカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1の抗菌活性を次のとおり試験した。
【００３５】
試験例１
各種の微生物に対するカプラザマイシンＤの抗菌スペクトルは日本化学療法学会標準法に基づき、１％グリセリン加普通寒天培地上で倍数希釈法により測定した。その結果を次の表５に示す。
0004759756.tif 000017
【００３６】
試験例２
表５に示されたもの以外の各種の微生物に対するカプラザマイシンＤの抗菌スペクトルを、日本化学療法学会標準法に基づき、ミュラ・ヒントン寒天培地上で倍数希釈法により測定した。その結果を表６に示す。
0004759756.tif 000018
【００３７】
試験例３
各種の微生物に対するカプラザマイシンＧの抗菌スペクトルは日本化学療法学会標準法に基づき、１％グリセリン加普通寒天培地上で倍数希釈法により測定した。その結果を表７に示す。
0004759756.tif 000019
【００３８】
試験例４
表７に示されたもの以外の各種の微生物に対するカプラザマイシンＧの抗菌スペクトルを、日本化学療法学会標準法に基づき、ミュラ・ヒントン寒天培地上で倍数希釈法により測定した。その結果を表８に示す。
0004759756.tif 000020
【００３９】
試験例５
各種の微生物に対するカプラザマイシンＤ1の抗菌スペクトルは日本化学療法学会標準法に基づき、１％グリセリン加普通寒天培地上で倍数希釈法により測定した。その結果を表９に示す。
0004759756.tif 000021
【００４０】
試験例６
表９に示されたもの以外の各種の微生物に対するカプラザマイシンＤ1の抗菌スペクトルを、日本化学療法学会標準法に基づき、ミュラ・ヒントン寒天培地上で倍数希釈法により測定した。その結果を表10に示す。
0004759756.tif 000022
【００４１】
試験例７
各種の微生物に対するカプラザマイシンＧ1の抗菌スペクトルは日本化学療法学会標準法に基づき、１％グリセリン加普通寒天培地上で倍数希釈法により測定した。その結果を表11に示す。
0004759756.tif 000023
【００４２】
試験例８
表11に示されたもの以外の各種の微生物に対するカプラザマイシンＤ1の抗菌スペクトルを、日本化学療法学会標準法に基づき、ミュラ・ヒントン寒天培地上で倍数希釈法により測定した。その結果を表12に示す。
0004759756.tif 000024
【００４３】
さらに、第３の本発明によると、ストレプトミセス属に属して、前記の一般式（I）で表されるカプラザマイシンＤおよびカプラザマイシンＧ、ならびに一般式(II)で表されるカプラザマイシンＤ1およびカプラザマイシンＧ1の少くとも一つを生産する生産菌を培養し、その培養物から、カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1の少くとも一つを採取することを特徴とする、抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1および（または）Ｇ1の製造方法が提供される。
【００４４】
第３の本発明の方法で使用する抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1類の生産菌は、前述した理化学的性質および生物学的性質を有するカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1を生産する能力を有するものであれば、その種を問わず使用できて、広範な微生物から選ぶことができる。かかる微生物のうち、抗生物質カプラザマイシン類の生産菌の具体的な好適の一例には、本発明者らにより平成９年３月、微生物化学研究所において、ハワイ、オアフ島の土壌より分離された放線菌で、MK730-62F2の菌株番号が付された菌株がある。
【００４５】
以下にMK730-62F2株の菌学的諸性質について記載する。
1．形態
MK730-62F2株は、分枝した基生菌糸より、比較的長い気菌糸を伸長し、その先端に5〜10回転のらせんを形成する。成熟した胞子鎖は10〜50個の卵円形の胞子を連鎖し、胞子の大きさは約0.5〜0.6×0.8〜1.0ミクロンである。なお、胞子の表面は平滑である。輪生枝、菌束糸、胞子のう、および運動性胞子は認められない。
【００４６】
2．各種培地における生育状態
色の記載について[ ]内に示す色の標準は、コンティナー・コーポレーション・オブ・アメリカのカラー・ハーモニー・マニュアル(Container Corporation  of America のcolor harmony manual）を用いた。
（1）シュクロース・硝酸塩寒天培地（27℃培養）
うす黄［2ea, Lt Wheat］の発育上に、白の気菌糸をうっすらと着生し、溶解性色素は認められない。
（2）グリセリン・アスパラギン寒天培地（ISP-培地5、27℃培養）
うす黄［2ea, Lt Wheat］〜うす黄茶［2ng, Dull Gold］の発育上に、灰白［3dc, Natural］〜明るい灰[d]の気菌糸を着生する。溶解性色素は認められない。
【００４７】
（3）スターチ・無機塩寒天培地（ISP-培地4、27℃培養）
うす黄[2ea, Lt Wheat]〜うす黄茶［2lg, Mustard Tan］の発育上に、白〜明るい灰［d］の気菌糸を着生する。溶解性色素は認められない。
（4）チロシン寒天培地（ISP-培地7、27℃培養）
うす黄茶［2le, Mustard〜2ng, Dull Gold］の発育上に、灰白［b, Oyster White〜3dc, Natural］の気菌糸を着生し、暗い茶の溶解性色素を産生する。
（5）イースト・麦芽寒天培地（ISP-培地2、27℃培養）
うす黄茶[2ie, Lt Mustard Tan〜3ic, Lt Amber]の発育上に、灰白［b, Oyster White］〜明るい灰［d］の気菌糸を着生する。溶解性色素は認められない。
（6）オートミール寒天培地（ISP-培地3、27℃培養）
うす黄［2ea, Lt Wheat］の発育上に、灰白［3dc, Natural］〜明るい灰［d］の気菌糸を着生し、溶解性色素は認められない。
【００４８】
3．生理学的性質
（1）生育温度範囲
グルコース・アスパラギン寒天培地（グルコース1.0％、アスパラギン0.05％、リン酸二カリウム0.05%、ひも寒天2.5％、pH7.0)を用い、10℃、20℃、24℃、27℃、30℃、37℃、45℃および50℃の各温度で試験した結果、本菌株は10℃、45℃および50℃を除き、20℃から37℃の範囲で生育した。生育至適温度は、30〜37℃付近である。
【００４９】
（2）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地、ISP-培地4、27℃培養）培養後３日目頃よりスターチの加水分解を認め、その作用は中等度である。
（3）メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・ブロス、ISP-培地1；ペプトン・イースト・鉄寒天培地、ISP-培地6；チロシン寒天培地、ISP-培地7；いずれも27℃培養）
いずれの培地でも陽性である。
（4）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培地、ISP-培地9、27℃培養）
Ｄ−グルコース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−フルクトース、シュクロース、イノシトール、ラムノース、ラフィノースおよびＤ−マンニトールを利用して発育し、Ｄ−キシロースもおそらく利用する。
【００５０】
（5）硝酸塩の還元反応（0.1％硝酸カリウム含有ペプトン水、ISP-培地8、27℃培養）
陰性である。
（6）ゼラチンの液化（単純ゼラチン、20℃培養；グルコース・ペプトン・ゼラチン、27℃培養）
単純ゼラチンは、培養後40日間の観察で液化を認めなかった。グルコース・ペプトン・ゼラチンの場合、培養後40日頃に弱い液化を示した。
（7）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（10％スキムミルク、37℃培養）
凝固することなく、培養後7日目頃よりペプトン化が始まり、14日目には完了した。
【００５１】
以上の性状を要約すると、MK730-62F2株は、分枝した基生菌糸より、らせん形成を有する気菌糸を伸長する。胞子の表面は平滑である。種々の培地で、うす黄〜うす黄茶の発育上に、灰白〜明るい灰の気菌糸を着生する。溶解性色素は、メラニン様色素以外は認められない。生育至適温度は30〜37℃付近である。メラニン様色素の生成は陽性、スターチの水解性は中等度である。なお、細胞壁に含まれる2,6−ジアミノピメリン酸はLL−型であり、菌体中の主要なメナキノンはMK-9(H8)およびMK-9(H6)であった。
【００５２】
これらの性状よりMK730-62F2株は、ストレプトミセス（Streptomyces）属に属すると考えられる。そこで、近縁の既知菌種を検索した結果、ストレプトミセス・ディアスタトクロモゲネス(Streptomyces diastatochromogenes、文献、     International Journal of Systematic Bacteriology、22巻、290頁、1972年)、ストレプトミセス・レジストマイシフィクス(Streptomyces resistomycificus、文献、International Journal of Systematic Bacteriology、18巻、165頁、1968年)、ストレプトミセス・コリヌス(Streptomyces collinus、文献、International Journal of Systematic Bacteriology、18巻、100頁、1968年)およびストレプトミセス・アウランティオグリセウス(Streptomyces aurantiogriseus、文献、International Journal of Systematic Bacterio logy、18巻、297頁、1968年)があげられた。次に上記４種の本研究所保存菌株とMK730-62F2株を実地に比較検討した。その成績を次の表13に示す。
【００５３】
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【００５４】
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【００５５】
以上の表13から明らかなように、MK730-62F2株は表13で比較されたいずれの種とも類似した性状を示した。しかし、ストレプトミセス・レジストマイシフィクスは発育の色調がうす黄茶〜茶黒を呈し、溶解性色素が茶を帯び、脱脂牛乳をペプトン化しない点で、MK730-62F2株と相違していた。また、ストレプトミセス・コリヌスは気菌糸の形態が直状〜ループ状を示し、脱脂牛乳をペプトン化しない点で、またストレプトミセス・アウランティオグリセウスは溶解性色素が茶を帯び、単純ゼラチンを液化し、硝酸塩を還元する点で、MK730-62F2株と区別された。一方、ストレプトミセス・ディアスタトクロモゲネスは単純ゼラチンの液化が陽性を示すほかは、MK730-62F2株とよく類似していた。しかし、現時点ではMK730-62F2株をストレプトミセス・ディアスタトクロモゲネスの一菌株であると同定できない。そこで、MK730-62F2株をストレプトミセス・エスピー（Streptomyces sp.）MK730-62F2と命名した。
【００５６】
なお、MK730-62F2株を日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１、中央第６に在る産業技術総合研究所生命工学工業技術研究所(2001年４月１日に、独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターと改称)に寄託申請し、1998年11月27日、FERM P-17067として受託された。また、2000年７月12日の移管受託日でブダペスト条約の規約下にMK730-62F2株はFERM BP-7218の受託番号で前記の寄託所に寄託された。
【００５７】
第３の本発明の方法においては、抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1の製造は次の通り行われる。すなわち、抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1の製造は、カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1の少なくとも一つを生産する生産菌（単にカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1生産菌という）を栄養培地中に接種し、抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1の生産に良好な温度で培養することによって行われる。カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1生産菌の培養により、抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1を含む培養物が得られる。
【００５８】
このような目的に用いる栄養培地としては、放線菌の培養に利用しうるものが使用される。栄養源として、例えば市販されている大豆粉、ペプトン、酵母エキス、肉エキス、コーン・スティープ・リカー、硫酸アンモニウム等の窒素源が使用できる。また、トマトぺースト、グリセリン、でん粉、グルコース、ガラクトース、デキストリン等の炭水化物あるいは脂肪などの炭素源が使用できる。さらに食塩、炭酸カルシウム等の無機塩を添加して使用できる。その他必要に応じて微量の金属塩を添加することができる。これらのものは、カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1生産菌が利用し、抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1の生産に役に立つものであればよく、公知の放線菌の培養材料はすべて用いることができる。
【００５９】
抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1の生産は、ストレプトミセス属に属して抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1の生産能を有する微生物が使用される。具体的には、本発明者らの分離したストレプトミセス・エスピーMK730-62F2(FERM BP-7218)が抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1を生産することは、本発明者らによって明らかにされているが、カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1の生産できるその他の菌株は、抗生物質生産菌の単離の常法によって自然界より分離することが可能である。また、ストレプトミセス・エスピーMK730-62F2を含めて、カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1生産菌を放射線照射その他、変異処理にかけることより、抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1の生産能を高める余地も残っている。さらに遺伝子工学的手法によって抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1の生産も可能である。
【００６０】
カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1の生産のための種母を得るためにとしては、寒天培地上、MK730-62F2株の斜面培養から得た生育物を使用する。抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1の製造に当たっては、ストレプトミセス属に属するカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1生産菌を適当な培地で好気的に培養するのが好ましい。その培養液から目的のカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1を採取するのには常用の手段を用いることができる。培養温度は、カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1生産菌の発育が実質的に阻害されずにこれらの抗生物質を生産しうる範囲であれば、特に制約されるものでない。培養温度は、使用するカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1生産菌に応じて適当に選択できるが、好ましくは、25〜30℃の範囲内の温度を挙げることができる。
【００６１】
このMK730-62F2株によるカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1の生産は、通常は３ないし９日間で最高に達するが、一般に充分な抗菌活性が培地に付与されるまで続ける。この培養液中のカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1の力価の経時変化は、HPLC法によって、またはマイコバクテリウム・スメグマティスあるいはマイコバクテリウム・バケを被検菌とする円筒平板法により測定できる。
【００６２】
第３の本発明の方法においては、上記のようにして得られた培養物からカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1の少くとも一つを採取する。カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1の採取法としては、微生物の生産する代謝物を採取するのに用いられる手段を適宜利用することができる。例えば、水と混ざらない有機溶媒による抽出の手段、各種吸着剤に対する吸着親和性の差を利用する手段、ゲルろ過法、向流分配を利用したクロマトグラフィー等を、単独または組み合わせて利用することによって、培養物からカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1をそれぞれ単独に、またはそれらの何れか２つまたはそれ以上の混合物として採取できる。
【００６３】
また、分離した菌体からは、適当な有機溶媒を用いた溶媒抽出法や菌体破砕による溶出法によりカプラザマイシン類を抽出し、得られたカプラザマイシン類の混合物から、前記と同様にカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1を単離して採取することができる。かくして、前記した抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1が別々にまたは２つまたはそれ以上の混合物として得られる。なお、同時に産生されたカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、ＦからのカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1の分離とカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1の相互の分離とは、後記の実施例で例示されるように、適当な展開溶媒を用いる高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって行うことができる。
【００６４】
なお、前記したストレプトミセス sp. MK730-62F2株(FERM BP-7218)は、これを培養すると、本発明によるカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1を生産するばかりでなく、既知のカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦも生産することができる。
【００６５】
従って、第４の本発明においては、既知の抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦならびに前記の一般式（Ｉ）で示される抗生物質カプラザマイシンＤおよびカプラザマイシンＧならびに請求項４に記載の一般式（II）で示される抗生物質カプラザマイシンＤ1およびカプラザマイシンＧ1を生産する特性を持つストレプトミセス・エスピーMK730-62F2（独立行政法人  産業技術総合研究所特許生物寄託センターにブダペスト条約の規約下にFERM BP-7218の受託番号で寄託された菌株）を、好気的条件下で培養し、その培養物から、抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦならびに抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1をそれぞれ別々に採取することから成ることを特徴とする、抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧならびにカプラザマイシンＤ1およびＧ1の製造方法が提供される。
第４の本発明方法は、第３の本発明方法と同じ要領で実施できる。
【００６６】
さらに、第５の本発明では、一般式（Ｉ）で示されるカプラザマイシンＤおよびＧならびに一般式(II)で示されるカプラザマイシンＤ1およびＧ1の少なくとも一つ、またはそれの製薬学的に許容できる塩を有効成分として含有し、また製薬学的に許容される担体を、有効成分と混和して含有する医薬組成物が提供される。
第５の本発明による医薬組成物においては、有効成分としての一般式（I）のカプラザマイシンＤ、Ｇあるいは一般式(II)のカプラザマイシンＤ1、Ｇ1の化合物を、製薬学的に許容できる常用の液状担体、例えばエタノール、含水エタノール、水、生理食塩水、もしくは固体担体、例えば結晶セルロース、でん粉等と混和して含有する組成物の形であることができる。
【００６７】
第５の本発明の医薬組成物で用いる有効成分である一般式（I）のカプラザマイシンＤまたはＧ、あるいは一般式(II)のカプラザマイシンＤ1またはＧ1あるいはその塩は、経口的に投与できる。あるいはそれらは点鼻、静脈内または筋肉内または皮下内注射、もしくは腹腔内投与などにより非経口的にも投与することができる。
経口投与用の場合には、第５の本発明の医薬組成物では、有効成分としての一般式（I）のカプラザマイシンＤまたはＧ、あるいは一般式(II)のカプラザマイシンＤ1またはＧ1、あるいはその塩を、薬学的に許容できる慣用の固体または液体状の担体と混和して、その得られた混合物を散剤、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、シロップ剤等の形で製剤とすることができる。
【００６８】
第５の本発明の医薬組成物に配合される有効成分としてのカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1またはＧ1の割合は、剤形によって異なるが、例えば、好都合なカプラザマイシン含量割合は、投与単位物の重量の約２〜90％の範囲にあるのがよい。
第５の本発明の組成物を注射用に製剤する場合には、望ましい製剤の形態には、有効成分としての前記のカプラザマイシンを含む無菌の含水溶液あるいは無菌の凍結乾燥剤がある。ここに用いる液体担体は例えば水、生理食塩水、エタノール、含水エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、植物油などであるのが好ましい。
【００６９】
本発明の医薬組成物において有効成分として用いられるカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1またはＧ1、あるいはその塩の投与量は、治療すべき細菌感染症の種類、治療の目的および症状の程度などによって異なる。カプラザマイシンＤ、Ｇ、  Ｄ1またはＧ1の最適な投与量は専門家による適当な予備試験で決定できる。
【００７０】
【発明の実施の形態】
以下に実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１
抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1の製造
寒天斜面培地に培養したストレプトミセス・エスピーMK730-62F2（受託番号FERM BP-7218で寄託）を、ガラクトース2％、デキストリン2％、グリセリン1%、バクトソイトン（ディフコ社製）1％、コーン・スティープ・リカー0.5％、硫酸アンモニウム0.2％、炭酸カルシウム0.2％を含む液体培地（ｐＨ7.4に調整）を三角フラスコ（500ml容）に110mlずつ分注して常法により120℃で20分滅菌した培地に接種した。接種後、これを30℃で2日間にわたり回転振とう培養し、種母培養液を得た。
【００７１】
トマトペースト（カゴメ社製）2.4％、デキストリン2.4％、酵母エキス（オリエンタル社製）1.2%、塩化コバルト0.0006％（ｐＨ7.4に調整）の組成の培地15リットルをタンク培養槽（30リットル容）中に調製し、滅菌後に生産培地として用いた。この生産培地に、上記の種母培養液の２％量を接種し、27℃、１分間あたり通気量15リットル、200rpmの撹拌速度を用いる培養条件で6日間タンク培養した。
【００７２】
このようにして得られた培養液を遠心分離して培養ろ液12リットルと菌体を分離した。つづいて、菌体に6リットルのメタノールを加えてよく撹拌し、菌体から既知の抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、ＥおよびＦならびに新規抗生物質カプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1をメタノールで抽出した（なお、以後、これら抗生物質カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｄ1およびＧ1の総称をカプラザマイシン類と記述することがある）。この培養ろ液と菌体抽出液（メタノール抽出液）を合わせて、この合併で得られた混合液18リットルを芳香族系合成吸着剤ダイヤイオンHP-20（日本、三菱化学株式会社製）のカラム750mlに通過させ、カプラザマイシン類を吸着させた。
【００７３】
このダイヤイオンHP-20に脱イオン水、50%メタノール水、80%メタノール水、80%アセトン水、アセトンを各2.25リットル順次通過させた。カプラザマイシン類は、80%アセトン水での溶出画分中に多く溶出された。また、50%メタノール水溶出画分および80%メタノール水溶出画分にもカプラザマイシン類が含まれていたので、両者を合わせて再度、ダイヤイオンHP-20カラム（750ml）に通過させ、これによりカプラザマイシン類をカラムの吸着剤に吸着させ、次いでカラムに80%メタノール水2.25リットルを通過させた。その後、カラムから80%アセトン水2.25リットルで溶出させた。この80%アセトン水での溶出液を先の80%アセトン水溶出画分に合わせ、減圧下で濃縮乾固してカプラザマイシン類を含む粗精製物10.1gを得た。
【００７４】
このカプラザマイシン類を含む粗精製物の10.1gをクロロホルム−メタノール（=1：2）の混合溶媒の50mlに溶解して、その溶液にキーゼルグール（メルク社製、Art.10601）50mlを加え溶媒を減圧下で濃縮乾固した。このようにカプラザマイシン類をキーゼルグールに吸着させて得られた固体残渣を、シリカゲルカラム（内径54mm×長さ200mm）の上にのせ、クロマトグラフィーを行った。この際には、展開溶媒としてクロロホルム−メタノール−水（＝4:1:0.1）、クロロホルム−メタノール−水（＝2:1:0.2）、クロロホルム−メタノール−水（＝1:1:0.2）の各混合液の各1.35リットルを用い、順次に展開を行った。
【００７５】
フラクションコレクターによって、シリカゲルカラムからの溶出液を、フラクションNo.１〜53では20gずつ分画し、フラクションNo.54〜117では19gづつ分画して集めると、フラクションNo.66〜83にカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧを含む活性画分が溶出され、フラクションNo.84〜144にカプラザマイシンＤ1およびＧ1を含む活性画分が溶出された。このカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧを含むフラクションNo.66〜83を集めて減圧下で濃縮乾固し、カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧを含む粗精製物625.3mgを得た。また、フラクションNo.54〜117を集めて減圧下で濃縮乾固し、カプラザマイシンＤ1およびＧ1を含む粗精製物1.28gを得た。
【００７６】
次にまず、カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧを含む粗精製物について各成分の単離と精製を行った。前記の粗精生物625.3mgにメタノール5mlを加えて溶解して、得られた溶液を5℃の冷暗下に静置すると、カプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇを含む析出沈殿画分の537.3mgを得た。つづいて、このカプラザマイシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇを含む析出沈殿画分をHPLC（CAPCELLPAK C18、φ20×250mm、資生堂製)を用い精製した。このHPLCでは、展開溶媒として50%アセトニトリル水−0.05%ぎ酸（流速:12.0ml/min）により展開すると、61〜68分後にカプラザマイシンＡが溶出され、52〜60分後にカプラザマイシンＢが溶出され、39〜41分後にカプラザマイシンＣが溶出され、30〜38分後にカプラザマイシンＤおよびカプラザマイシンＧを含む混合物、また25〜28分後にカプラザマイシンＥが溶出され、また22〜25分後にカプラザマイシンＦが溶出された。それぞれの活性分画を集めて、減圧下で濃縮乾固することにより、カプラザマイシンＡ（56.9mg）、カプラザマイシンＢ（90.3mg）、カプラザマイシンＣ（19.7mg）、カプラザマイシンＤおよびカプラザマイシンＧを含む混合物    （162.9mg）、カプラザマイシンＥ（30.3mg）およびカプラザマイシンＦ（25.5mg）を得た。
【００７７】
さらに、上記で得られたカプラザマイシンＤおよびカプラザマイシンＧを含む混合物を162.9mgをHPLC（CAPCELLPAK C18, φ20×250mm、資生堂製)を用いて精製した。このHPLCでは、展開溶媒として50%アセトニトリル水−0.025%トリフルオロ酢酸（流速:9.0ml/min）により展開すると、55〜69分後にはカプラザマイシンＤ、48〜53分後にカプラザマイシンＧが溶出された。それぞれの活性分画を集めて、減圧下で濃縮乾固することにより、カプラザマイシンＤ（69.7mg）およびカプラザマイシンＧ（39.0mg）を得た。
【００７８】
さらに、上記で得られたカプラザマイシンＤ1およびＧ1を含む粗精製物1.28gについてHPLC（CAPCELLPAK C18, φ20×250mm、資生堂製)を用いて各成分の単離と精製を行った。このHPLCで展開溶媒として45%アセトニトリル水−0.05%トリフルオロ酢酸（流速:12.0ml/min）により展開すると、36〜49分後にカプラザマイシンＧ1およびＤ1が溶出され、これらを集めて減圧下で濃縮乾固することにより、カプラザマイシンＤ1およびカプラザマイシンＧ1の混合物を187mg得た。さらに、HPLC（CAPCELLPAK C18, φ20×250mm、資生堂製)を用い、展開溶媒として44%アセトニトリル水−0.025%トリフルオロ酢酸（流速:9.0ml/min）により展開すると、46〜52分後にカプラザマイシンＤ1が溶出され、また41〜44分後にカプラザマイシンＧ1が溶出された。これら溶出画分を集めて、別々に減圧下で濃縮乾固することにより、カプラザマイシンＤ1（54.1mg）およびカプラザマイシンＧ1（ 57.6mg）を得た。
【００７９】
【発明の効果】
以上に説明したとおり、本発明により、新規な抗生物質として得られた一般式一般式（Ｉ）のカプラザマイシンＤ、Ｇならびに一般式(II)のカプラザマイシンＤ1およびＧ1は、それぞれに、各種の抗酸性菌、細菌およびそれらの薬剤耐性菌株に対してすぐれた抗菌活性を有する。従って、本発明のカプラザマイシンＤ、Ｇ、Ｄ1、Ｇ1は抗酸性菌および細菌の感染症を治療するのに有効であって有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】カプラザマイシンＤのメタノール溶液中の紫外線吸収スペクトルである。
【図２】カプラザマイシンＤのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
【図３】カプラザマイシンＤの重メタノール溶液中にて室温で測定した500MHzにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
【図４】カプラザマイシンＤの重メタノール溶液中にて室温で測定した125MHzにおける炭素13核磁気共鳴スペクトルである。
【図５】カプラザマイシンＧのメタノール溶液中の紫外線吸収スペクトルである。
【図６】カプラザマイシンＧのＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
【図７】カプラザマイシンＧの重メタノール溶液中にて室温で測定した500MHzにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
【図８】カプラザマイシンＧの重メタノール溶液中にて室温で測定した125MHzにおける炭素13核磁気共鳴スペクトルである。
【図９】カプラザマイシンＤ1のメタノール溶液中の紫外線吸収スペクトルである。
【図１０】カプラザマイシンＤ1のＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
【図１１】カプラザマイシＤ1の重メタノール溶液中にて室温で測定した500MHzにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
【図１２】カプラザマイシンＤ1の重メタノール溶液中にて室温で測定した125MHzにおける炭素13核磁気共鳴スペクトルである。
【図１３】カプラザマイシンＧ1のメタノール溶液中の紫外線吸収スペクトルである。
【図１４】カプラザマイシンＧ1のＫＢｒ錠剤法で測定した赤外線吸収スペクトルである。
【図１５】カプラザマイシンＧ1の重メタノール溶液中にて室温で測定した500MHzにおけるプロトン核磁気共鳴スペクトルである。
【図１６】カプラザマイシンＧ1の重メタノール溶液中にて室温で測定した125MHzにおける炭素13核磁気共鳴スペクトルである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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