(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0004621355.tif 000016
［式中、Ｗは、ＯＲ1、ＮＲ2ＯＲ1、ＮＲAＲB、ＮＲ2ＮＲAＲB、Ｏ(ＣＨ2)2-4ＮＲAＲBまたはＮＲ2(ＣＨ2)2-4ＮＲAＲBであり；
Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1-8アルキル、Ｃ3-8アルケニル、Ｃ3-8アルキニル、Ｃ3-8シクロアルキル、フェニル、（フェニル）Ｃ1-4アルキル、（フェニル）Ｃ3-4アルケニル、（フェニル）Ｃ3-4アルキニル、（Ｃ3-8シクロアルキル）Ｃ1-4アルキル、（Ｃ3-8シクロアルキル）Ｃ3-4アルケニル、（Ｃ3-8シクロアルキル）Ｃ3-4アルキニル、Ｃ3-8複素環式基、（Ｃ3-8複素環式基）Ｃ1-4アルキル、（Ｃ3-8複素環式基）Ｃ3-4アルケニル、（Ｃ3-8複素環式基）Ｃ3-4アルキニルまたは(ＣＨ2)2-4ＮＲCＲDであり；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、フェニル、Ｃ3-6シクロアルキル、Ｃ3-6複素環式基または（Ｃ3-6シクロアルキル）メチルであり；
ＲAは、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-8アルケニル、Ｃ3-8アルキニル、Ｃ3-8シクロアルキル、フェニル、（Ｃ3-8シクロアルキル）Ｃ1-4アルキル、（Ｃ3-8シクロアルキル）Ｃ3-4アルケニル、（Ｃ3-8シクロアルキル）Ｃ3-4アルキニル、Ｃ3-8複素環式基、（Ｃ3-8複素環式基）Ｃ1-4アルキル、（アミノスルホニル）フェニル、［（アミノスルホニル）フェニル］Ｃ1-4アルキル、（アミノスルホニル）Ｃ1-6アルキル、（アミノスルホニル）Ｃ3-6シクロアルキル、［（アミノスルホニル）Ｃ3-6シクロアルキル］Ｃ1-4アルキルまたは(ＣＨ2)2-4ＮＲCＲDであり；
ＲBは、Ｈ、Ｃ1-8アルキル、Ｃ3-8アルケニル、Ｃ3-8アルキニル、Ｃ3-8シクロアルキルまたはフェニルであり；
Ｑは、以下の式（ｉ）〜（iii）
【化２】
0004621355.tif 000017
の一つであり；
Ｒ3は、ＨまたはＦであり；
Ｒ4は、ハロゲン、ＮＯ2、ＳＯ2ＮＲO(ＣＨ2)2-4ＮＲEＲF、ＳＯ2ＮＲEＲFまたは（ＣＯ）Ｔであり；
Ｔは、Ｃ1-8アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、（ＮＲEＲF）Ｃ1-4アルキル、ＯＲF、−ＮＲo(ＣＨ2)2-4ＮＲEＲF、またはＮＲEＲFであり；
Ｚは、以下の式（iv）〜（viii）
【化３】
0004621355.tif 000018
の一つであり；
Ｒ5およびＲ6の一方は、Ｈまたはメチルであり、Ｒ5およびＲ6のもう一方は、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、フェニル、ベンジルまたは−Ｍ−Ｅ−Ｇであり；
Ｍは、Ｏ、ＣＯ、ＳＯ2、ＮＲJ、(ＣＯ)ＮＲH、ＮＲH(ＣＯ)、ＮＲH(ＳＯ2)、(ＳＯ2)ＮＲH、またはＣＨ2であり；
Ｅは、(ＣＨ2)1-4または(ＣＨ2)mＯ(ＣＨ2)P（ここで、１≦（ｍおよびｐの各々）≦３および２≦（ｍ＋ｐ）≦４）（ｍおよびｐはそれぞれ整数である）であるか；またはＥは存在しない；
Ｇは、ＲK、ＯＲIまたはＮＲJＲK（但し、ｐ＝１の場合、ＧはＨである）であり；
Ｒ7は、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ3-6シクロアルキル、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、(ＣＨ2)1-2Ａｒ（ここで、Ａｒは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジルまたは４−ピリジルである）、ＳＯ2ＮＲH(ＣＨ2)2-4ＮＲJＲK、(ＣＯ)(ＣＨ2)2-4ＮＲJＲKまたは(ＣＯ)ＮＲH(ＣＨ2)2-4ＮＲJＲKであり；
Ｘ1は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ8、またはＣＨＲ9であり；Ｘ2は、Ｏ、ＳまたはＣＨＲ9であり；
そしてＸ3はＯまたはＳであり；ここでＸ1またはＸ2がＣＨＲ9である場合、前記化合物は互変異性化されたインドールであってもよい；
Ｒ8は、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、
(ＣＨ2)1-2Ａｒ（ここで、Ａｒは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジルまたは４−ピリジルである）、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ3-6シクロアルキルまたは（Ｃ2-4アルキル）ＮＲLＲMであるが；但し、Ｒ7およびＲ8が一緒になって、ＲL、ＲM、ＲJおよびＲKを除いて１４個を超える炭素原子を有することはなく；
ＲGは、Ｃ1-4アルキル、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、Ｃ3-4アルケニル、Ｃ3-4アルキニル、Ｃ3-6シクロアルキル、(ＣＯ)ＯＲP、(Ｃ2-4アルキル）ＮＲLＲM、（ＣＯ）ＮＲN(ＣＨ2)2-4ＮＲLＲM、（ＣＯ）ＮＲLＲM、(ＣＯ)(ＣＨ2)2-4−ＮＲLＲM、または(ＣＨ2)1-2Ａｒ（ここで、Ａｒはフェニル、２−ピリジル、３−ピリジルまたは４−ピリジルである）であり；
Ｒ9は、Ｃ1-4アルキル、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ3-6シクロアルキル、(ＣＯ)ＯＲP、（Ｃ2-4アルキル）ＮＲLＲM、(ＣＯ)ＮＲN(ＣＨ2)2-4ＮＲLＲM、(ＣＯ)ＮＲLＲM、(ＣＯ)(ＣＨ2)2-4−ＮＲLＲM、または(ＣＨ2)1-2Ａｒ′（ここで、Ａｒ′はフェニル、２−ピリジル、３−ピリジルまたは４−ピリジルである）であり；
ＲPは、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、フェニル、Ｃ3-4アルケニル、Ｃ3-4アルキニル、Ｃ3-6シクロアルキル、または(ＣＨ2)2-4ＮＲLＲMであり；
Ｒ10は、Ｈ、メチル、ハロゲン、またはＮＯ2であり；
Ｒ11は、Ｈ、メチル、ハロゲン、またはＮＯ2であり；
ＲC、ＲD、ＲE、ＲF、ＲI、ＲJ、ＲK、ＲLおよびＲMの各々は、独立してＨ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ3-4アルケニル、Ｃ3-4アルキニル、Ｃ3-6シクロアルキル、およびフェニルから選ばれ；ＮＲCＲD、ＮＲEＲF、ＮＲJＲK、およびＮＲLＲMの各々は、また、独立してモルホリニル、ピペラジニル、ピロリジニル、またはピペラジニルであることができ；
ＲH、ＲNおよびＲOの各々は、独立してＨ、メチルまたはエチルであり；
ここで、上記の各々の炭化水素基または複素環式基は、場合によりハロゲン、Ｃ1-4アルキル、Ｃ3-6シクロアルキル、Ｃ3-4アルケニル、Ｃ3-4アルキニル、フェニル、ヒドロキシ、アミノ、（アミノ）スルホニルおよびＮＯ2から独立して選ばれる１〜３個の置換基で置換されており、ここで各々の置換基アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニルまたはフェニルは、さらに場合によりハロゲン、Ｃ1-2アルキル、ヒドロキシ、アミノおよびＮＯ2から独立して選ばれる１〜３個の置換基で置換されている］の化合物またはその医薬上許容しうる塩。
【請求項２】
Ｑが式（ｉ）である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ3がＨまたはフルオロである請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ4がフルオロ、クロロ、またはブロモである請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ10が水素、メチル、フルオロ、またはクロロである請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ11がメチル、クロロ、フルオロ、ニトロ、または水素である請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ11がＨである請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ11がフルオロである請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ10およびＲ11の各々がフルオロである請求項５に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ1がＨ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ベンジル、フェネチル、アリル、Ｃ3-5アルケニル、Ｃ3-6シクロアルキル、（Ｃ3-5シクロアルキル）Ｃ1-2アルキル、（Ｃ3-5複素環式基）Ｃ1-2アルキル、または(ＣＨ2)2-4ＮＲCＲDである請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ1がＨまたは（Ｃ3-4シクロアルキル）Ｃ1-2アルキルである請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ2がＨまたはメチルである請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
ＲAが少なくとも一つのヒドロキシル置換基を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
ＲAがＨ、メチル、エチル、イソブチル、ヒドロキシエチル、フェニル、２−ピペリジン−１−イル−エチル、２,３−ジヒドロキシ−プロピル、３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−１−イル］−プロピル、２−ピロリジン−１−イル−エチルまたは２−ジエチルアミノ−エチルであり、そしてＲBがＨであるか；またはＲBがメチルである場合はＲAがフェニルである請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
ＷがＮＲAＲBまたはＮＲ2ＮＲAＲBである請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
ＷがＮＲ2(ＣＨ2)2-4ＮＲAＲBまたはＯ(ＣＨ2)2-3ＮＲAＲBである請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
ＷがＮＲ2ＯＲ1である請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
ＷがＯＲ1である請求項１に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｚが式（ｖ）である請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｘ1がＮＲ8であり、Ｒ7がＨである請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
構造７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項２２】
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾチアゾール−５−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−２−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−２−（２−ジメチルアミノ−エチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１−アセチル−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸；８−フルオロ−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸；および７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボン酸；ならびに対応するヒドロキサム酸およびシクロプロピルメチルヒドロキサメートから選ばれる請求項１に記載の化合物。
【請求項２３】
請求項１に記載の化合物および医薬上許容し得る担体からなる医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、薬理学的活性を有するベンゾ複素環化合物例えばベンゾ複素環芳香族化合物に関する。
【０００２】
【発明の背景】
ＭＥＫ酵素は、例えば免疫調節、炎症および増殖性疾患、例えば癌および再狭窄に関係する二重特異性（dual specificity）キナーゼである。
増殖性疾患は、細胞内シグナル伝達系またはある種のタンパク質のシグナル伝達機構の欠陥によって生じる。欠陥には、固有活性、またはシグナル伝達カスケードにおける一つもしくはそれ以上のシグナル伝達タンパク質の細胞濃度のいずれかにおける変化が含まれる。細胞は、それ自体の受容体に結合する増殖因子を産生することができ、その結果、連続的に増殖を刺激する自己分泌ループを生じる。細胞内シグナル伝達タンパク質の突然変異または過剰発現は、細胞内で擬似分裂促進シグナルになることがある。最も一般的な突然変異のいくつかは、ＧＴＰに結合したときに活性化され、ＧＤＰに結合したときに不活化されるＧ−タンパク質であるＲａｓとして知られているタンパク質をコードしている遺伝子において起こる。上述の増殖因子受容体および他の多くの分裂促進性受容体は、活性化されたときに、ＧＤＰ−結合状態からＧＴＰ−結合状態に変換されるＲａｓをもたらす。このシグナルは、ほとんどの細胞タイプの増殖にとって絶対的な必要条件である。このシグナル伝達系における、特にＲａｓ−ＧＴＰ複合体の不活化における欠陥は癌において共通であり、Ｒａｓより下流のシグナル伝達カスケードを慢性的に活性化するようになる。
【０００３】
活性化されたＲａｓは、順にセリン／トレオニンキナーゼのカスケードの活性化をもたらす。それ自体の活性化に活性Ｒａｓ−ＧＴＰを必要とすることが知られているキナーゼの群の一つは、Ｒａｆ系統群である。これらは、順にＭＥＫ（例えばＭＥＫ１およびＭＥＫ２）を活性化し、次いでＭＡＰキナーゼ、ＥＲＫ（ＥＲＫ１およびＥＲＫ２）を活性化する。分裂促進因子によるＭＡＰキナーゼの活性化は、増殖にとって必須であると思われ；このキナーゼの構造的な活性化は、細胞形質転換を誘発するために十分である。例えば優位な負のＲａｆ−１タンパク質を用いて下流のＲａｓシグナル伝達を遮断すると、細胞表面の受容体からまたは発癌性Ｒａｓ突然変異体から誘発される有糸分裂誘発を完全に阻害することができる。Ｒａｓそれ自体はプロテインキナーゼではないが、それはおそらくリン酸化機構によってＲａｆおよび他のキナーゼの活性化に関与している。一度活性化されると、Ｒａｆおよび他のキナーゼは、ＭＥＫ−１の場合、２つの非常に隣接したセリン残基、Ｓ218およびＳ222上でＭＥＫをホスホリル化する。そして、それはキナーゼとしてのＭＥＫを活性化するための必要条件である。ＭＥＫは、単一アミノ酸によって分離されたチロシン、Ｙ185およびトレオニン残基、Ｔ183の両方において順にＭＡＰキナーゼをホスホリル化する。この二重のリン酸化は、ＭＡＰキナーゼを少なくとも１００倍活性化する。次いで活性化されたＭＡＰキナーゼは、いくつかの転写因子および他のキナーゼを含む多数のタンパク質のリン酸化に触媒作用を及ぼすことができる。これらのＭＡＰキナーゼのリン酸化の多くは、標的タンパク質、例えばキナーゼ、転写因子、または別の細胞タンパク質を分裂促進的に活性化する。Ｒａｆ−１およびＭＥＫＫに加えて、他のキナーゼは、ＭＥＫを活性化し、ＭＥＫそれ自体が、シグナルインテグレーティングキナーゼのようである。現在理解されているのは、ＭＥＫがＭＡＰキナーゼのリン酸化にとって非常に特異的であるということである。実際、ＭＡＰキナーゼであるＥＲＫ以外のＭＥＫの基質は、現在まで立証されておらず、ＭＥＫは、ＭＡＰキナーゼのリン酸化の順序に基づいてペプチドをホスホリル化するわけではなく、または変性したＭＡＰキナーゼでもホスホリル化する。また、ＭＥＫは、ＭＡＰキナーゼをホスホリル化する前に強くＭＡＰキナーゼと結合するようであり、ＭＥＫによるＭＡＰキナーゼのリン酸化では、２つの蛋白質間で事前に強い相互作用が必要かもしれないことが示唆されている。ＭＥＫのこの必要条件および異常な特異性の両方は、ＭＥＫが他のプロテインキナーゼに対する作用機構において十分な相違点を有することができるので、おそらくＡＴＰ結合部位の通常の遮断よりもむしろアロステリック機構により作用するＭＥＫの選択的な阻害剤を発見することができることを示唆している。
【０００４】
【発明の概要】
本発明は、式（Ｉ）
【化４】
0004621355.tif 000002
を有する化合物を特徴とする。式（Ｉ）中、Ｗは、ＯＲ1、ＮＲ2ＯＲ1、ＮＲAＲB、ＮＲ2ＮＲAＲB、Ｏ(ＣＨ2)2-4ＮＲAＲBまたはＮＲ2(ＣＨ2)2-4ＮＲAＲBである。Ｒ1は、Ｈ、Ｃ1-8アルキル、Ｃ3-8アルケニル、Ｃ3-8アルキニル、Ｃ3-8シクロアルキル、フェニル、（フェニル）Ｃ1-4アルキル、（フェニル）Ｃ3-4アルケニル、（フェニル）Ｃ3-4アルキニル、（Ｃ3-8シクロアルキル）Ｃ1-4アルキル、（Ｃ3-8シクロアルキル）Ｃ3-4アルケニル、（Ｃ3-8シクロアルキル）Ｃ3-4アルキニル、Ｃ3-8複素環式基、（Ｃ3-8複素環式基）Ｃ1-4アルキル、（Ｃ3-8複素環式基）Ｃ3-4アルケニル、（Ｃ3-8複素環式基）Ｃ3-4アルキニルまたは(ＣＨ2)2-4ＮＲCＲDである。Ｒ2は、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、フェニル、Ｃ3-6シクロアルキル、Ｃ3-6複素環式基または（Ｃ3-6シクロアルキル）メチルである。ＲAは、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-8アルケニル、Ｃ3-8アルキニル、Ｃ3-8シクロアルキル、フェニル、（Ｃ3-8シクロアルキル）Ｃ1-4アルキル、（Ｃ3-8シクロアルキル）Ｃ3-4アルケニル、（Ｃ3-8シクロアルキル）Ｃ3-4アルキニル、Ｃ3-8複素環式基、（Ｃ3-8複素環式基）Ｃ1-4アルキル、（アミノスルホニル）フェニル、［（アミノスルホニル）フェニル］Ｃ1-4アルキル、（アミノスルホニル）Ｃ1-6アルキル、（アミノスルホニル）Ｃ3-6シクロアルキル、［（アミノスルホニル）Ｃ3-6シクロアルキル］Ｃ1-4アルキルまたは(ＣＨ2)2-4ＮＲCＲDである。ＲBは、Ｈ、Ｃ1-8アルキル、Ｃ3-8アルケニル、Ｃ3-8アルキニル、Ｃ3-8シクロアルキルまたはフェニルである。
【０００６】
Ｑは、以下の式（ｉ）−（iii）
【化５】
0004621355.tif 000003
一つである。
【０００７】
Ｒ3は、ＨまたはＦであり；Ｒ4は、ハロゲン、ＮＯ2、ＳＯ2ＮＲo(ＣＨ2)2-4ＮＲEＲF、ＳＯ2ＮＲEＲFまたは（ＣＯ）Ｔである。Ｔは、Ｃ1-8アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、（ＮＲEＲF）Ｃ1-4アルキル、ＯＲF、−ＮＲo(ＣＨ2)2-4ＮＲEＲF、またはＮＲEＲFであり；Ｚは、以下の式（iv）−（viii）
【化６】
0004621355.tif 000004
の一つである。Ｒ5およびＲ6の一方は、Ｈまたはメチルであり、Ｒ5およびＲ6のもう一方は、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、フェニル、ベンジルまたは−Ｍ−Ｅ−Ｇである。Ｍは、Ｏ、ＣＯ、ＳＯ2、ＮＲJ、（ＣＯ）ＮＲH、ＮＲH（ＣＯ）、ＮＲH（ＳＯ2）、（ＳＯ2）ＮＲH、またはＣＨ2である。
【０００８】
Ｅは、(ＣＨ2)1-4または(ＣＨ2)mＯ(ＣＨ2)P（ここで、１≦（ｍおよびｐの各々）≦３および２≦（ｍ＋ｐ）≦４）であるか；またはＥは存在しない。Ｇは、ＲK、ＯＲIまたはＮＲJＲK（但し、ｐ＝１の場合、ＧはＨである）である。Ｒ7は、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ3-6シクロアルキル、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、(ＣＨ2)1-2Ａｒ（ここで、Ａｒは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジルまたは４−ピリジルである）、ＳＯ2ＮＲH(ＣＨ2)2-4ＮＲJＲK、(ＣＯ)(ＣＨ2)2-4ＮＲJＲKまたは(ＣＯ)ＮＲH(ＣＨ2)2-4ＮＲJＲKである。Ｘ1は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ8、またはＣＨＲ9であり；Ｘ2は、Ｏ、ＳまたはＣＨＲ9であり；そしてＸ3はＯまたはＳである。一つの実施態様において、Ｘ1またはＸ2がＣＨＲ9である場合、開示の化合物は互変異性化されたインドールであってもよい。Ｒ8は、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、(ＣＨ2)1-2Ａｒ（ここで、Ａｒは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジルまたは４−ピリジルである）、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ3-6シクロアルキルまたは（Ｃ2-4アルキル）ＮＲLＲMであるが、但しＲ7およびＲ8は一緒になって、ＲL、ＲM、ＲJおよびＲKを除いて１４個を超える炭素原子を有することはない。ＲGは、Ｃ1-4アルキル、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、Ｃ3-4アルケニル、Ｃ3-4アルキニル、Ｃ3-6シクロアルキル、(ＣＯ)ＯＲP、（Ｃ2-4アルキル）ＮＲLＲM、(ＣＯ)ＮＲN(ＣＨ2)2-4ＮＲLＲM、(ＣＯ)ＮＲLＲM、(ＣＯ)(ＣＨ2)2-4−ＮＲLＲM、または(ＣＨ2)1-2Ａｒ（ここで、Ａｒはフェニル、２−ピリジル、３−ピリジルまたは４−ピリジルである）である。Ｒ9は、Ｃ1-4アルキル、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、Ｃ3-6シクロアルキル、(ＣＯ)ＯＲP、（Ｃ2-4アルキル）ＮＲLＲM、(ＣＯ)ＮＲN(ＣＨ2)2-4ＮＲLＲM、(ＣＯ)ＮＲLＮＲM、(ＣＯ)(ＣＨ2)2-4−ＮＲLＲM、または(ＣＨ2)1-2Ａｒ′（ここで、Ａｒ′はフェニル、２−ピリジル、３−ピリジルまたは４−ピリジルである）である。ＲPは、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、フェニル、Ｃ3-4アルケニル、Ｃ3-4アルキニル、Ｃ3-6シクロアルキル、または(ＣＨ2)2-4ＮＲLＲMであり；Ｒ10は、Ｈ、メチル、ハロゲン、またはＮＯ2であり；Ｒ11は、Ｈ、メチル、ハロゲン、またはＮＯ2である。ＲC、ＲD、ＲE、ＲF、ＲI、ＲJ、ＲK、ＲLおよびＲMの各々は、独立してＨ、Ｃ1-4アルキル、Ｃ3-4アルケニル、Ｃ3-4アルキニル、Ｃ3-6シクロアルキル、およびフェニルから選ばれ；ＮＲCＲD、ＮＲEＲF、ＮＲJＲK、およびＮＲLＲMの各々は、また、独立してモルホリニル、ピペラジニル、ピロリジニル、またはピペラジニルであることができる。ＲH、ＲNおよびＲOの各々は、独立してＨ、メチルまたはエチルである。最終的に、上記の各々の炭化水素基または複素環式基は、場合によりハロゲン、Ｃ1-4アルキル、Ｃ3-6シクロアルキル、Ｃ2-4アルケニル、Ｃ2-4アルキニル、フェニル、ヒドロキシ、アミノ、（アミノ）スルホニルおよびＮＯ2から独立して選ばれる１〜３個の置換基で置換されており、ここで各々の置換基アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニルまたはフェニルは、さらに場合によりハロゲン、Ｃ1-2アルキル、ヒドロキシ��アミノおよびＮＯ2から独立して選ばれる１〜３個の置換基で置換されている。上記化合物に加えて、本発明は、その医薬上許容しうる塩またはＣ1-7エステルを提供する。
【０００９】
また、本発明は、（ａ）例えば式（Ｉ）のベンゾ複素環化合物および（ｂ）医薬上許容しうる担体を含む医薬組成物に関する。
さらに、本発明は、増殖性疾患、例えば癌、再狭窄、乾癬、自己免疫性疾患およびアテローム性動脈硬化症を治療するための方法に関する。本発明の別の態様には、ＭＥＫ−関連（ｒａｓ−関連を含む）の固形または造血性の癌を治療するための方法が含まれる。癌の例としては、結腸直腸癌、頸癌、乳癌、卵巣癌、脳癌、急性白血病、胃癌、非小細胞肺癌、膵臓癌および腎臓癌が含まれる。本発明のさらなる態様には、異種移植片（細胞、器官、四肢、皮膚または骨髄移植片）の拒絶反応、変形性関節症、リウマチ様関節炎、嚢胞性線維症、糖尿病の合併症（糖尿病性網膜症および糖尿病性腎障害を含む）、肝腫、心臓肥大、発作（例えば急性局所虚血性発作および脳全体の虚血）、心不全、敗血症性ショック、喘息およびアルツハイマー病の症状を治療または緩和するための方法が含まれる。また、本発明の化合物は、例えばＨＩＶ、Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）、ヒト乳頭腫ウィルス（ＨＰＶ）、サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）およびエプスタイン−バーウィルス（ＥＢＶ）といったようなウィルス感染を治療するための抗ウイルス剤として有用である。これらの方法には、開示された化合物またはその医薬組成物の医薬上有効な量を、このような治療を必要とするかまたはこのような疾患もしくは状態にかかっている患者に投与する工程が含まれる。好ましくは、上記治療法においては、本発明の化合物は、選択的ＭＥＫ阻害剤である。
【００１０】
また、本発明は併用治療法を特徴としており、例えば癌を治療するための方法では、更に放射線療法または化学療法を、例えば分裂抑制剤、例えばタキサンまたはビンカアルカロイドを用いて施すことが含まれる。分裂抑制剤の例には、パクリタキセル、ドセタキセル（docetaxel）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン（vinorelbine）およびビンフルニン（vinflunine）が含まれる。他の治療上の組合せには、本発明のＭＥＫ阻害剤および抗癌剤、例えばシスプラチン、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、フルタミドおよびゲムシタビン（gemcitabine）が含まれる。
【００１１】
本発明の開示された化合物を投与する前に、並行してまたは後に、患者の必要に応じて化学療法または放射線療法を施すことができる。
また、本発明は、本明細書中に開示された合成法および合成中間体を特徴としている。
本発明の他の態様は、以下の説明、実施例および特許請求の範囲に示される通りである。
【００１２】
【発明の詳述】
本発明は、ベンゾ複素環化合物、その医薬組成物ならびにこのような化合物および組成物を使用する方法に関する。
本発明の一態様によれば、化合物はＭＥＫ阻害剤である。ＭＥＫ阻害アッセイには、米国特許第５,５２５,６２５号第６欄第３６行〜第７欄第４行に記載されたＭＡＰキナーゼ経路の阻害剤についてのカスケードアッセイおよび同特許の第７欄、第４〜２７行のインビトロＭＥＫアッセイが含まれ、この開示全体は、参照により本明細書に組み込まれている(以下の実施例２２〜２５も参照のこと)。
【００１３】
Ａ．用語
ある種の用語は、本明細書を通じて以下の通り定義される。
アルキル基には、遊離原子価を有する脂肪族基（すなわち、水素および炭素原子を含有するヒドロカルビルまたは炭化水素基構造の部分集合）が含まれる。アルキル基には、直鎖状および分枝鎖状の構造が含まれることは明らかである。例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、２,３−ジメチルプロピル、ヘキシル、２,３−ジメチルヘキシル、１,１−ジメチルペンチル、ヘプチルおよびオクチルが包まれる。シクロアルキル基には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルが含まれる。
【００１４】
アルキル基は、独立してハロゲン（フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード）、ヒドロキシ、アミノ、アルコキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、シクロアルキル、アリール、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、複素環式基および（複素環式基）オキシから選ばれた１個、２個、３個またはそれ以上の置換基により置換されていてもよい。具体的な例としては、フルオロメチル、ヒドロキシエチル、２，３−ジヒドロキシエチル、（２−または３−フラニル）メチル、シクロプロピルメチル、ベンジルオキシエチル、（３−ピリジニル）メチル、（２−または３−フラニル）メチル、（２−チエニル）エチル、ヒドロキシプロピル、アミノシクロヘキシル、２−ジメチルアミノブチル、メトキシメチル、Ｎ−ピリジニルエチル、ジエチルアミノエチルおよびシクロブチルメチルが含まれる。
【００１５】
アルケニル基は、アルキル基に類似しているが、少なくとも１個の二重結合（２個の隣接ｓｐ2炭素原子）を有する。二重結合および置換基（存在する場合）の配置によって、二重結合の幾何学的形態は、エントゲーゲン（Ｅ）またはツザンメン（Ｚ）、シスまたはトランスであることができる。同様に、アルキニル基は、少なくとも１個の三重結合（２個の隣接ｓｐ炭素原子）を有している。不飽和のアルケニルまたはアルキニル基は、それぞれ一つもしくはそれ以上の二重結合もしくは三重結合またはそれらの混合を有することができる。アルキル基と同様に、不飽和基は、直鎖状または分枝鎖状であることができ、そしてこれらは、アルキルについて上述したようにおよび実施例の開示により記載したように置換されていてもよい。アルケニル、アルキニルおよび置換された形態の例としては、シス−２−ブテニル、トランス−２−ブテニル、３−ブチニル、３−フェニル−２−プロピニル、３−（２′−フルオロフェニル）−２−プロピニル、３−メチル（５−フェニル）−４−ペンチニル、２−ヒドロキシ−２−プロピニル、２−メチル−２−プロピニル、２−プロペニル、４−ヒドロキシ−３−ブチニル、３−（３−フルオロフェニル）−２−プロピニルおよび２−メチル−２−プロペニルが含まれる。式（Ｉ）において、アルケニルおよびアルキニル基は、例えばＣ2-4またはＣ2-8であり、好ましくはＣ3-4またはＣ3-8であることができる。
【００１６】
置換された炭化水素基のより一般的な形態には、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルケニル、ヒドロキシアルキニル、ヒドロキシシクロアルキル、ヒドロキシアリール、および接頭語のアミノ−、ハロ−（例えばフルオロ−、クロロ−またはブロモ−）、ニトロ−、アルキル−、フェニル−、シクロアルキル−などまたは置換基の組み合わせに相当する形態が含まれる。それ故に、式（Ｉ）によれば、置換されたアルキルには、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、ニトロアルキル、ハロアルキル、アルキルアルキル（分枝鎖状のアルキル、例えばメチルペンチル）、（シクロアルキル）アルキル、フェニルアルキル、アルコキシ、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アリールアルキル、アリールオキシアルキル、アリールアルキルオキシアルキル、（複素環式基）アルキル、および（複素環式基）オキシアルキルが含まれる。従って、Ｒ1には、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルケニル、ヒドロキシアルキニル、ヒドロキシシクロアルキル、ヒドロキシアリール、アミノアルキル、アミノアルケニル、アミノアルキニル、アミノシクロアルキル、アミノアリール、アルキルアルケニル、（アルキルアリール）アルキル、（ハロアリール）アルキル、（ヒドロキシアリール）アルキニルなどが含まれる。同様に、ＲAには、ヒドロキシアルキルおよびアミノアリールが含まれ、そしてＲBには、ヒドロキシアルキル、アミノアルキルおよびヒドロキシアルキル（複素環式基）アルキルが含まれる。
【００１７】
複素環式基には、ヘテロアリールが含まれるが、これに限定されるものではなく、フリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チオフェニル、チアゾリル、ピロリル、イミダゾリル、１,３,４−トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリルおよびこれらの非芳香族の同等基が含まれる。複素環式基のさらなる例には、ピペリジル、キノリル、イソチアゾリル、ピペリジニル、モルホリニル、ピペラジニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロピロリル、ピロリジニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロベンゾチオフラニルおよびオクタヒドロベンゾフラニルが含まれる。
【００１８】
選択的ＭＥＫ １またはＭＥＫ２阻害剤は、実質的に他の酵素、例えばＭＫＫ３、ＰＫＣ、Ｃｄｋ２Ａ、ホスホリラーゼキナーゼ、ＥＧＦおよびＰＤＧＦ受容体キナーゼならびにＣ−ｓｒｃを阻害することなく、それぞれＭＥＫ １またはＭＥＫ ２酵素を阻害する化合物である。一般に、選択的ＭＥＫ １またはＭＥＫ ２阻害剤では、先に記載した他の酵素の一つに対してＭＥＫ １またはＭＥＫ ２についてのＩＣ50が、少なくとも５０分の１（１／５０）である。好ましくは、選択的な阻害剤は、先に記載した酵素の一つまたはそれ以上の少なくとも１／１００、さらに好ましくは１／５００、そしてなおさらに好ましくは１／１０００、１／５０００またはそれ未満のＩＣ50を有する。
【００１９】
Ｂ．化合物
本発明の一態様は、本発明の概要の式（Ｉ）に開示された化合物を特徴とする。本発明の実施態様には、
（ａ）Ｑが式（ｉ）であり；（ｂ）Ｒ3がＨまたはフルオロであり；（ｃ）Ｒ4がフルオロ、クロロ、またはブロモであり；（ｄ）Ｒ10がＨ、メチル、フルオロ、またはクロロであり；（ｅ）Ｒ11がメチル、クロロ、フルオロ、ニトロ、または水素であり；（ｆ）Ｒ11がＨであり；（ｇ）Ｒ11がフルオロであり；（ｈ）Ｒ10およびＲ11の各々がフルオロであり；（ｉ）Ｒ1がＨ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ベンジル、フェネチル、アリル、Ｃ3-5アルケニル、Ｃ3-6シクロアルキル、（Ｃ3-5シクロアルキル）Ｃ1-2アルキル、（Ｃ3-5複素環式基）Ｃ1-2アルキル、または(ＣＨ2)2-4ＮＲCＲD；（ｊ）Ｒ1がＨまたは（Ｃ3-4シクロアルキル）Ｃ1-2アルキルであり；（ｋ）Ｒ2がＨまたはメチルであり；（ｌ）ＲAが少なくとも一つのヒドロキシル置換基を有し；（ｍ）ＲAがＨ、メチル、エチル、イソブチル、ヒドロキシエチル、フェニル、２−ピペリジン−１−イル−エチル、２,３−ジヒドロキシ−プロピル、３−（４−（２−ヒドロキシエチル）−ピペラジン−１−イル］−プロピル、２−ピロリジン−１−イル−エチル、または２−ジエチルアミノ−エチルであり；そしてＲBがＨであるか；またはＲ8がメチルである場合、ＲAがフェニルであり；（ｎ）ＷがＮＲAＲBまたはＮＲ2ＮＲAＲBであり；（ｏ）ＷがＮＲ2(ＣＨ2)2-4ＮＲAＲBまたはＯ(ＣＨ2)2-3ＮＲAＲBであり；（ｐ）ＷがＮＲ2ＯＲ1であり；（ｑ）ＷがＯＲ1であり；（ｒ）Ｚが式（ｖ）であり；または（ｓ）Ｘ1がＮＲ8であり、Ｒ7がＨであり；または（ｔ）それらの組合せである式（Ｉ）の化合物が含まれる。式（Ｉ）においては、Ｚの値は、左から右に、またはＱのフェニル環において反時計回りで示した。
【００２０】
本発明の一態様によれば、式（Ｉ）の化合物は、Ｑが式（ｉ）または（ii）であり；Ｒ3がＨまたはフルオロであり；Ｒ４がフルオロ、クロロ、またはブロモであり；Ｒ10がＨ、メチル、またはクロロであり；Ｒ11がクロロ、フルオロ、または水素であり；Ｒ1がＨ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、ベンジル、フェネチル、アリル、Ｃ3-5アルケニル、Ｃ3-6シクロアルキル、（Ｃ3-5シクロアルキル）Ｃ1-2アルキル、（Ｃ3-5複素環式基）Ｃ1-2アルキル、または(ＣＨ2)2-4ＮＲCＲDであり；Ｒ1がＨまたは（Ｃ3-4シクロアルキル）Ｃ1-2アルキル；Ｒ2がＨまたはメチルであり；そしてＺが式（ｖ）または（vi）である構造を有する。この態様の一つの実施態様においては、Ｘ1がＮＲ8である。例としては、７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチルフェニルアミノ）−１［（２′−モルホリニル）−エチル］−２−（フェニル）−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミドである。
【００２１】
また、本発明の実施態様には、Ｒ10がＨであり；Ｒ10がメチルまたはクロロであり；そしてＲ10がクロロである化合物が含まれる。いくつかの実施態様においては、Ｒ7およびＲ8が一緒になって、ＲL、ＲM、ＲJおよびＲKを除いて１４個の炭素原子を超えることがない。この例としては、Ｒ7およびＲ8が一緒になって、１３個を超えない炭素原子；７、８、または１０個を超えない炭素原子；４〜８個の間の炭素原子；１〜１０個の間の炭素原子；１〜８個の間の炭素原子；および６個を超えない炭素原子を有する化合物である。
【００２２】
好ましくは、Ｒ1、Ｒ2、ＲA、ＲB、ＲC、ＲD、ＲE、ＲF、ＲI、ＲJ、ＲK、ＲL、ＲM、ＲG、ＲH、ＲN、ＲO、およびＲPの一つがアルケニルまたはアルキニル基である場合、その二重または三重結合はそれぞれ、付いている位置に隣接していない。例えば、ＷがＮＲ2ＯＲ1である場合、Ｒ2はプロパ−２−イニル、またはブタ−２もしくは３−エニルが好ましく、プロパ−１−イニルまたはブタ−１−エニルはあまり好ましくない。
【００２３】
スキーム１、２、１０および１１を利用して合成できる好ましい構造のいくつかを以下に挙げた。遊離酸、遊離ヒドロキサム酸およびシクロプロピルメチルヒドロキサメートはひとまとめである。例えば、化合物１、１１および２１は、Ｗ（特許請求の範囲に定義した通りである）によってのみ区別され；化合物２、１２および２２は同様の関係がある。また、好ましい化合物には、記載した化合物の２−クロロ（２−メチルと置き換えた）類似物も含まれる。
【００２４】
化合物の例には、７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（ＡＰＫ ＩＣ50＝４７±１７nM）；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾチアゾール−５−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−２−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−２−（２−ジメチルアミノ−エチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１−アセチル−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸；８−フルオロ−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボン酸；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾチアゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−２−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−２−（２−ジメチルアミノ−エチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１−アセチル−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミド；８−フルオロ−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸ヒドロキシアミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾチアゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−２−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−２−（２−ジメチルアミノ−エチル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１−アセチル−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；８−フルオロ−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；および７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミドが含まれる。
【００２５】
以下は、スキーム３〜９に示した例のリストである。上記のように、遊離酸、遊離ヒドロキサム酸、およびシクロプロピルメチルヒドロキサメートは、ひとまとめにされる。例えば、化合物３１、４５および５９はＷ（特許請求の範囲で定義した通りである）によってのみ区別され；化合物３２、４６および６０は同様の関係がある。また、好ましい化合物には、記載した化合物の２−クロロ（２−メチルを置き換えた）類似物も含まれる。
【００２６】
スキーム３〜９の化合物の例には、４−フルオロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾチアゾール−６−カルボン酸；４−フルオロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸；５−（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６,７−ジフルオロ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボン酸；６,７−ジフルオロ−２−（２−ヒドロキシ−エチル）−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボン酸；６,７−ジフルオロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾオキサゾール−４−カルボン酸；６,７−ジフルオロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾチアゾール−４−カルボン酸；７,８−ジフルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−５−カルボン酸；６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−８−ニトロ−キノキサリン−５−カルボン酸；５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−８−ニトロ−キノキサリン−６−カルボン酸；８−クロロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸；３−シクロプロピル−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−４,６−ジカルボン酸４−ジメチルアミド；７−ブロモ−４−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸；７−（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−４−フルオロ−ベンゾチアゾール−６−カルボン酸；７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−４−ニトロ−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸；４−フルオロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾチアゾール−６−カルボン酸ヒドロキシアミド；４−フルオロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸ヒドロキシアミド；５−（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６,７−ジフルオロ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボン酸ヒドロキシアミド；６,７−ジフルオロ−２−（２−ヒドロキシ−エチル）−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボン酸ヒドロキシアミド；６,７−ジフルオロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾオキサゾール−４−カルボン酸ヒドロキシアミド；６,７−ジフルオロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾチアゾール−４−カルボン酸ヒドロキシアミド；７,８−ジフルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−５−カルボン酸ヒドロキシアミド；６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−８−ニトロ−キノキサリン−５−カルボン酸ヒドロキシアミド；５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−８−ニトロ−キノキサリン−６−カルボン酸ヒドロキシアミド；８−クロロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸ヒドロキシアミド；３−シクロプロピル−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−３Ｈ−ベンゾイミダゾー���−４,６−ジカルボン酸４−ジメチルアミド６−ヒドロキシアミド；７−ブロモ−４−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミド；７−（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−４−フルオロ−ベンゾチアゾール−６−カルボン酸ヒドロキシアミド；７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−４−ニトロ−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸ヒドロキシアミド；４−フルオロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾチアゾール−６−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；４−フルオロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；５−（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−６,７−ジフルオロ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボン酸  シクロプロピルメトキシ−アミド；６,７−ジフルオロ−２−（２−ヒドロキシ−エチル）−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；６,７−ジフルオロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾオキサゾール−４−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；６,７−ジフルオロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾチアゾール−４−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；７,８−ジフルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−８−ニトロ−キノキサリン−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−８−ニトロ−キノキサリン−６−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；８−クロロ−５−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；３−シクロプロピル−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−４,６−ジカルボン酸４−ジメチルアミド６−シクロプロピルメトキシ−アミド；７−ブロモ−４−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；７−（２−クロロ−４−ヨード−フェニルアミノ）−４−フルオロ−ベンゾチアゾール−６−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド；および７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−４−ニトロ−ベンゾオキサゾール−６−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミドが含まれる。
【００２７】
Ｃ．合成
開示された化合物は、以下の１１個のスキームまたはそれらの別法に従って合成することができる。これらの合成戦略は、さらに以下の実施例１〜２２で説明する。
【００２８】
【化７】
0004621355.tif 000005
【００２９】
【化８】
0004621355.tif 000006
【００３０】
【化９】
0004621355.tif 000007
【００３１】
【化１０】
0004621355.tif 000008
【００３２】
【化１１】
0004621355.tif 000009
【００３３】
【化１２】
0004621355.tif 000010
【００３４】
【化１３】
0004621355.tif 000011
【００３５】
【化１４】
0004621355.tif 000012
【００３６】
【化１５】
0004621355.tif 000013
【００３７】
【化１６】
0004621355.tif 000014
【００３８】
【化１７】
0004621355.tif 000015
【００３９】
Ｄ．使用
開示した組成物は、発明の概要の項において記載したような疾患または状態、ならびにＭＥＫカスケードによって調節される疾患または状態に対する予防的および治療的処置に有用である。例としては、発作、心不全、変形性関節症、リウマチ様関節炎、器官移植拒絶および卵巣、肺、膵臓、脳、前立腺、腎臓および結腸直腸腫瘍のような種々の腫瘍が含まれる。
【００４０】
１．用量
当業者は、年令、体重、総体的健康状態、治療を必要とする症状および他の薬剤の存在といったような因子を考慮して、知られている方法によって、患者に対する適当な用量を決定することができる。一般に、有効な量は、１日につき体重１kg当たり０.１〜１０００mg、好ましくは体重１kg当たり１〜３００mgの間であり、そして１日当たりの用量は、普通の体重の成人患者に対して１０〜５０００mgの間である。カプセル剤、錠剤または他の処方物（例えば液剤および被膜をコーティングされた錠剤）は５mg〜２００mgの間、例えば１０、１５、２５、３５、５０mg、６０mgおよび１００mgであってよく、開示した方法によって投与することができる。
【００４１】
２．処方物
投与単位形態には、錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、水性および非水性の経口用溶液および懸濁液、ならびに個々の用量に小分けするのに適した容器に充填された非経口用溶液が含まれる。また、投与単位形態には、皮下インプラントのように放出を調節された処方物を含めて種々の投与方法に適応させることもできる。投与方法には、経口的、直腸的、非経口的（静脈内的、筋肉内的、皮下的）、槽内的、膣内的、腹腔内的、膀胱内的、局所的（点滴、パウダー、軟膏、ゲルまたはクリーム）投与および吸入（口腔内または鼻スプレー）が含まれる。
【００４２】
非経口的処方物には、医薬上許容し得る水性またはそ非水性溶液、分散液、懸濁液、乳濁液およびこれらを製造するための滅菌粉末が含まれる。担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、植物油および注射用有機エステル、例えばオレイン酸エチルが含まれる。流動性は、レシチン、界面活性剤のようなコーティングの使用によってまたは適当な粒子の大きさを維持することによって保つことができる。固体の投与形態に対する担体としては、（ａ）充填剤または増量剤、（ｂ）結合剤、（ｃ）保湿剤、（ｄ）崩壊剤、（ｅ）溶液遅延剤、（ｆ）吸収促進剤、（ｇ）吸着剤、（ｈ）滑沢剤、（ｉ）緩衝剤および（ｊ）噴射剤が含まれる。
【００４３】
また、組成物は、補助剤、例えば防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤；抗菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノールおよびソルビン酸；等張剤、例えば糖または塩化ナトリウム；吸収−延長剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン；ならびに吸収−増強剤を含むこともできる。
【００４４】
３．関連化合物
本発明は、開示された化合物および開示された化合物と密接に関連した医薬的に許容し得る形態、例えばその塩、エステル、アミド、水和または溶媒和形態；マスクされたまたは保護された形態；およびラセミ混合物またはエナンチオマー的にまたは光学的に純粋な形態を提供する。
【００４５】
医薬上許容し得る塩、エステルおよびアミドには、合理的な利点／リスク比内にあり、薬理学的に有効でありそして不当な毒性、刺激またはアレルギー応答なしに患者の組織と接触させるのに適当である、カルボキシレート塩（例えば、Ｃ１−８アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、非芳香族複素環式）、アミノ酸付加塩、エステルおよびアミドが含まれる。代表的な塩には、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、酢酸塩、蓚酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、硼酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、燐酸塩、トシレート、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチレート、メシレート、グルコヘプトネート、ラクチオビオネートおよびラウリルスルホン酸塩が含まれる。これらは、アルカリ金属およびアルカリ土類金属陽イオン、例えばナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウム、ならびに非毒性のアンモニウム、第４級アンモニウム、およびアミン陽イオン、例えばテトラメチルアンモニウム、メチルアミン、トリメチルアミンおよびエチルアミンを含むことができる。例えば、参照として本明細書に組み入れるS.M. Berge等、“Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci., 1977, 66：1-19を参照のこと。本発明の代表的な医薬上許容し得るアミドには、アンモニア、第１級Ｃ１−６アルキルアミンおよび第２級ジ（Ｃ1-6アルキル）アミンから誘導されたものが含まれる。第２級アミンには、少なくとも１個の窒素原子および場合により１〜２個の追加のヘテロ原子を含む５−または６−員の複素環式またはヘテロ芳香族環部分が含まれる。好ましいアミドは、アンモニア、Ｃ1-3アルキル第１級アミンおよびジ（Ｃ1-2アルキル）アミンから誘導される。本発明の代表的な医薬上許容し得るエステルには、Ｃ1-7アルキル、Ｃ5-7シクロアルキル、フェニルおよびフェニル（Ｃ1-6）アルキルエステルが含まれる。好ましいエステルには、メチルエステルが含まれる。
【００４６】
また、本発明は、保護基によってマスクされた１個またはそれ以上の官能基（例えばヒドロキシル、アミノまたはカルボキシル）を有する開示された化合物を包含する。これらのマスクされたまたは保護された化合物のいくつかは、医薬上許容することができ、そして他の化合物は、中間体として有用である。本明細書において開示された合成中間体および方法ならびにそれらのわずかの改変もまた本発明の範囲内にある。本発明の合成中間体の例には、PD 202885、PD 203337、PD 218001、PD 254551およびPD 201601が含まれる。
【００４７】
ヒドロキシル保護基
ヒドロキシル保護基には、エーテル、エステルならびに１,２−および１,３−ジオールに対する保護が含まれる。エーテル保護基には、メチル、置換されたメチルエーテル、置換されたエチルエーテル、置換されたベンジルエーテル、シリルエーテルおよび他の官能基へのシリルエーテルの変換が含まれる。
【００４８】
置換されたメチルエーテル
置換されたメチルエーテルには、メトキシメチル、メチルチオメチル、ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル、ベンジルオキシメチル、ｐ−エトキシベンジルオキシメチル、（４−メトキシフェノキシ）メチル、グアイアコールメチル、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンテニルオキシメチル、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル、２,２,２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロ−エトキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル、テトラヒドロピラニル、３−ブロモテトラヒドロ−ピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル、４−メトキシテトラヒドロ−チオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルＳ,Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル、１,４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、および２,３,３ａ,４,５,６,７,７ａ−オクタヒドロ−７,８,８−トリメチル−４,７−エタノベンゾフラン−２−イルが含まれる。
【００４９】
置換されたエチルエーテル
置換されたエチルエーテルには、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２,２,２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２,４−ジニトロフェニル、およびベンジルが含まれる。
【００５０】
置換されたベンジルエーテル
置換されたベンジルエーテルには、ｐ−メトキシベンジル、３,４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２,６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニルベンジル、２−および４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリルＮ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ,ｐ′−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニル−メチル、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ−（ｐ−メトキシフェニル）メチル、４−（４′−ブロモフェナシルオキシ）フェニルジフェニルメチル、４,４′,４″−トリス（４,５−ジクロロフタルイミドフェニル）メチル、４,４′,４″−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４,４′,４″トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イルメチル）ビス（４′,４″−ジメトキシフェニル）−メチル、１,１−ビス（４−メトキシフェニル）−１′−ピレニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１,３−ベンゾジチオラン−２−イル、およびベンズイソチアゾリルＳ,Ｓ−ジオキシドが含まれる。
【００５１】
シリルエーテル
シリルエーテルには、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリイソプロピルシリル、ジメチルイソプロピルシリル、ジエチルイソプロピルシリル、ジメチルテキシルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル、およびｔ−ブチルメトキシ−フェニルシリルが含まれる。
【００５２】
エステル
エステル保護基には、エステル、カーボネート、補助開裂（assisted cleavage）、種々のエステルおよびスルホネートが含まれる。
エステル
保護エステルの例には、ホルメート、ベンゾイルホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、トリフルオロアセテート、メトキシアセテート、トリフェニルメトキシアセテート、フェノキシアセテート、ｐ−クロロフェノキシアセテート、ｐ−Ｐ−フェニルアセテート、３−フェニルプロピオネート、４−オキソペンタノエート（レブリネート）、４,４−（エチレンジチオ）ペンタノエート、ピバロエート、アダマントエート、クロトネート、４−メトキシクロトネート、ベンゾエート、ｐ−フェニルベンゾエート、および２,４,６−トリメチルベンゾエート（メシトエート）が含まれる。
【００５３】
カーボネート
カーボネートには、メチル、９−フルオレニルメチル、エチル、２,２,２−トリクロロエチル、２−（トリメチルシリル）エチル、２−（フェニルスルホニル）エチル、２−（トリフェニルホスホニオ）エチル、イソブチル、ビニル、アリル、ｐ−ニトロフェニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、３,４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、Ｓ−ベンジルチオカーボネート、４−エトキシ−１−ナフチル、およびメチルジチオカーボネートが含まれる。
【００５４】
補助開裂
補助開裂保護基の例には、２−ヨードベンゾエート、４−アジド−ブチレート、４−ニトロ−４−メチルペンタノエート、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾエート、２−ホルミルベンゼン−スルホネート、２−（メチルチオメトキシ）エチルカーボネート、４−（メチルチオメトキシメチル）ベンゾエート、および２−（メチルチオメトキシメチル）ベンゾエートが含まれる。
【００５５】
種々のエステル
上述した種類に加えて、種々のエステルには、２,６−ジクロロ−４−メチルフェノキシアセテート、２,６−ジクロロ−４−（１,１,３,３−テトラメチルブチル）フェノキシアセテート、２,４−ビス（１,１−ジメチルプロピル）フェノキシアセテート、クロロジフェニルアセテート、イソブチレート、モノサクシノエート、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノエート（チグロエート）、ｏ−（メトキシカルボニル）ベンゾエート、ｐ−Ｐ−ベンゾエート、α−ナフトエート、ナイトレート、アルキルＮ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′−テトラメチル−ホスホロジアミデート、Ｎ−フェニルカルバメート、ボレート、ジメチルホスフィノチオイル、および２,４−ジニトロフェニルスルフェネートが含まれる。
【００５６】
スルホネート
保護サルフェートには、サルフェート、メタンスルホネート（メシレート）、ベンジルスルホネートおよびトシレートが含まれる。
【００５７】
１,２−および１,３−ジオールに対する保護
１,２−および１,３−ジオール基に対する保護としては、環状アセタールおよびケタール、環状オルトエステルならびにシリル誘導体が含まれる。
【００５８】
環状アセタールおよびケタール
環状アセタールおよびケタールには、メチレン、エチリデン、１−ｔ−ブチルエチリデン、１−フェニルエチリデン、（４−メトキシフェニル）エチリデン、２,２,２−トリクロロエチリデン、アセトニド（イソプロピリデン）、シクロペンチリデン、シクロヘキシリデン、シクロヘプチリデン、ベンジリデン、ｐ−メトキシベンジリデン、２,４−ジメトキシベンジリデン、３,４−ジメトキシベンジリデン、および２−ニトロベンジリデンが含まれる。
【００５９】
環状オルトエステル
環状オルトエステルには、メトキシメチレン、エトキシメチレン、ジメトキシメチレン、１−メトキシエチリデン、１−エトキシエチリデン、１,２−ジメトキシエチリデン、α−メトキシベンジリデン、１−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）エチリデン誘導体、α−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）ベンジリデン誘導体、および２−オキサシクロペンチリデンが含まれる。
【００６０】
カルボキシル基のための保護
エステル
エステル保護基には、エステル、置換されたメチルエステル、２−置換されたエチルエステル、置換されたベンジルエステル、シリルエステル、活性化されたエステル、種々の誘導体、およびスタニルエステルが含まれる。
【００６１】
置換されたメチルエステル
置換されたメチルエステルには、９−フルオレニルメチル、メトキシメチル、メチルチオメチル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、メトキシエトキシメチル、２−（トリメチルシリル）エトキシ−メチル、ベンジルオキシメチル、フェナシル、ｐ−ブロモフェナシル、α−メチルフェナシル、ｐ−メトキシフェナシル、カルボキサミドメチル、およびＮ−フタルイミドメチルが含まれる。
【００６２】
２−置換されたエチルエステル
２−置換されたエチルエステルには、２,２,２−トリクロロエチル、２−ハロエチル、クロロアルキル、２−（トリメチルシリル）エチル、２−メチルチオエチル、１,３−ジチアニル−２−メチル、２（ｐ−ニトロフェニルスルフェニル）−エチル、２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチル、２−（２′−ピリジル）エチル、２−（ジフェニルホスフィノ）エチル、１−メチル−１−フェニルエチル、ｔ−ブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、アリル、３−ブテン−１−イル、４−（トリメチルシリル）−２−ブテン−１−イル、シンナミル、α−メチルシンナミル、フェニル、ｐ−（メチルメルカプト）−フェニル、およびベンジルが含まれる。
【００６３】
置換されたベンジルエステル
置換されたベンジルエステルには、トリフェニルメチル、ジフェニルメチル、ビス（ｏ−ニトロフェニル）メチル、９−アントリルメチル、２−（９,１０−ジオキソ）アントリルメチル、５−ジベンゾ−スベリル、１−ピレニルメチル、２−（トリフルオロメチル）−６−クロミルメチル、２,４,６−トリメチル−ベンジル、ｐ−ブロモベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−メトキシベンジル、２,６−ジメトキシベンジル、４−（メチルスルフィニル）ベンジル、４−スルホベンジル、ピペロニル、および４−Ｐ−ベンジルが含まれる。
【００６４】
シリルエステル
シリルエステルには、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｉ−プロピルジメチルシリル、フェニルジメチルシリル、およびジ−ｔ−ブチルメチルシリルが含まれる。
【００６５】
種々の誘導体
種々の誘導体には、オキサゾール、２−アルキル−１,３−オキサゾリン、４−アルキル−５−オキソ−１,３−オキサゾリジン、５−アルキル−４−オキソ−１,３−ジオキソラン、オルトエステル、フェニル基、およびペンタアミノコバルト（III）錯体が含まれる。
【００６６】
スタニルエステル
スタニルエステルの例には、トリエチルスタニルおよびトリ−ｎ−ブチルスタニルが含まれる。
【００６７】
アミドおよびヒドラジド
アミドには、Ｎ,Ｎ−ジメチル、ピロリジニル、ピペリジニル、５,６−ジヒドロフェナントリジニル、ｏ−ニトロアニリド、Ｎ−７−ニトロインドリル、Ｎ−８−ニトロ−１,２,３,４−テトラヒドロキノリル、およびｐ−Ｐ−ベンゼンスルホンアミドが含まれる。ヒドラジドには、Ｎ−フェニル、Ｎ,Ｎ′−ジイソプロピルおよび他のジアルキルヒドラジドが含まれる。
【００６８】
アミノ基の保護
カルバメート
カルバメートには、カルバメート、置換されたエチル、補助開裂、光分解開裂、尿素型誘導体、および種々のカルバメートが含まれる。
【００６９】
カルバメート
カルバメートには、メチルおよびエチル、９−フルオレニルメチル、９−（２−スルホ）フルオレニルメチル、９−（２,７−ジブロモ）フルオレニルメチル、２,７−ジ−ｔ−ブチル−［９−（１０,１０−ジオキソ−１０,１０,１０,１０−テトラヒドロ−チオキサンチル）］メチル、および４−メトキシフェナシルが含まれる。
【００７０】
置換されたエチル
置換されたエチル保護基には、２,２,２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−フェニルエチル、１−（１−アダマンチル）−１−メチルエチル、１,１−ジメチル−２−ハロエチル、１,１−ジメチル−２,２−ジブロモエチル、１,１−ジメチル−２,２,２−トリクロロエチル、１−メチル−１−（４−ビフェニリル）エチル、１−（３,５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−１−メチルエチル、２−（２′−および４′−ピリジル）エチル、２−（Ｎ,Ｎ−ジシクロヘキシルカルボキサミド）−エチル、ｔ−ブチル、１−アダマンチル、ビニル、アリル、１−イソプロピルアリル、シンナミル、４−ニトロシンナミル、キノリル、Ｎ−ヒドロキシピペリジニル、アルキルジチオ、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ブロモベンジル、ｐ−クロロベンジル、２,４−ジクロロベンジル、４−メチルスルフィニルベンジル、９−アントリルメチル、およびジフェニルメチルが含まれる。
【００７１】
補助開裂
補助開裂による保護としては、２−メチルチオエチル、２−メチルスルホニルエチル、２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチル、［２−（１,３−ジチアニル）］メチル、４−メチルチオフェニル、２,４−ジメチル−チオフェニル、２−ホスホニオエチル、２−トリフェニルホスホニオイソプロピル、１,１−ジメチル−２−シアノエチル、ｍ−クロロ−ｐ−アシルオキシベンジル、ｐ−（ジヒドロキシボリル）ベンジル、５−ベンズイソキサゾリル−メチル、および２−（トリフルオロメチル）−６−クロモニルメチルが含まれる。
【００７２】
光分解開裂
光分解開裂法は、ｍ−ニトロフェニル、３,５−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、３,４−ジメトキシ−６−ニトロベンジル、およびフェニル（ｏ−ニトロフェニル）メチルのような基を使用する。
【００７３】
尿素型誘導体
尿素型誘導体の例には、フェノチアジニル−（１０）−カルボニル誘導体、Ｎ′−ｐ−トルエンスルホニルアミノカルボニル、およびＮ′−フェニルアミノチオカルボニルが含まれる。
【００７４】
種々のカルバメート
上述したほかに、種々のカルバメートには、ｔ−アミル、Ｓ−ベンジルチオカルバメート、ｐ−シアノベンジル、シクロブチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロプロピルメチル、ｐ−デシルオキシ−ベンジル、ジイソプロピルメチル、２,２−ジメトキシ−カルボニルビニル、ｏ−（Ｎ,Ｎ−ジメチル−カルボキサミド）−ベンジル、１,１−ジメチル−３（Ｎ,Ｎ−ジメチルカルボキサミド）プロピル、１,１−ジメチル−プロピニル、ジ（２−ピリジル）メチル、２−フラニルメチル、２−ヨードエチル、イソボルニル、イソブチル、イソニコチニル、ｐ（ｐ′−メトキシフェニルアゾ）ベンジル、１−メチルシクロブチル、１−メチルシクロヘキシル、１−メチル−１−シクロプロピルメチル、１−メチル−（３,５−ジメトキシフェニル）エチル、１−メチル−１（ｐ−ヘニルアゾフェニル）−エチル、１−メチル−１−フェニルエチル、１−メチル−１−（４−ピリジル）エチル、フェニル、ｐ−（フェニルアゾ）ベンジル、２,４,６−トリ−ｔ−ブチルフェニル、４−（トリメチルアンモニウム）ベンジル、および２,４,６−トリメチルベンジルが含まれる。
【００７５】
アミド
アミド
アミドには、Ｎ−ホルミル、Ｎ−アセチル、Ｎ−クロロアセチル、Ｎ−トリクロロアセチル、Ｎ−トリフルオロアセチル、Ｎ−フェニルアセチル、Ｎ−３−フェニルプロピオニル、Ｎ−ピコリノイル、Ｎ−３−ピリジル−カルボキサミド、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、Ｎ−ベンゾイル、およびＮ−ｐ−フェニルベンゾイルが含まれる。
【００７６】
補助開裂
補助開裂基には、Ｎ−ｏ−ニトロフェニルアセチル、Ｎ−ｏ−ニトロフェノキシアセチル、Ｎ−アセトアセチル、（Ｎ′−ジチオベンジルオキシカルボニルアミノ）アセチル、Ｎ−３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）プロピオニル、Ｎ−３−（ｏ−ニトロフェニル）プロピオニル、Ｎ−２−メチル−２−（ｏ−ニトロフェノキシ）プロピオニル、Ｎ−２−メチル−２−（ｏ−フェニルアゾフェノキシ）プロピオニル、Ｎ−４−クロロブチリル、Ｎ−３−メチル−３−ニトロブチリル、Ｎ−ｏ−ニトロシンナモイル、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、Ｎ−ｏ−ニトロベンゾイル、Ｎ−ｏ−（ベンゾイルオキシメチル）ベンゾイル、および４,５−ジフェニル−３−オキサゾリン−２−オンが含まれる。
【００７７】
環状イミド誘導体
環状イミド誘導体には、Ｎ−フタルイミド、Ｎ−ジチアサクシノイル、Ｎ−２,３−ジフェニル−マレオイル、Ｎ−２,５−ジメチルピロリル、Ｎ−１,１,４,４−テトラメチル−ジシリルアザシクロペンタン付加物、５−置換された１,３−ジメチル−１,３,５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、５−置換された１,３−ジベンジル−１,３,５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、および１−置換された３,５−ジニトロ−４−ピリドニルが含まれる。
【００７８】
特別な−ＮＨ保護基
−ＮＨの保護基には、Ｎ−アルキルおよびＮ−アリールアミン、イミン誘導体、エナミン誘導体、ならびにＮ−ヘテロ原子誘導体（例えばＮ−金属、Ｎ−Ｎ、Ｎ−Ｐ、Ｎ−Ｓｉ、およびＮ−Ｓ）、Ｎ−スルフェニル、およびＮ−スルホニルが含まれる。
【００７９】
Ｎ−アルキルおよびＮ−アリールアミン
Ｎ−アルキルおよびＮ−アリールアミンには、Ｎ−メチル、Ｎ−アリル、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシル］−メチル、Ｎ−３−アセトキシプロピル、Ｎ−（１−イソプロピル−４−ニトロ−２−オキソ−３−ピロリン−３−イル）、第４級アンモニウム塩、Ｎ−ベンジル、Ｎ−ジ（４−メトキシフェニル）メチル、Ｎ−５−ジベンゾスベリル、Ｎ−トリフェニルメチル、Ｎ−（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル、Ｎ−９−フェニルフルオレニル、Ｎ−２,７−ジクロロ−９−フルオレニルメチレン、Ｎ−フェロセニルメチル、およびＮ−２−ピコリルアミンＮ′−オキシドが含まれる。
【００８０】
イミン誘導体
イミン誘導体には、Ｎ−１,１−ジメチルチオメチレン、Ｎ−ベンジリデン、Ｎ−ｐ−メトキシベンジリデン、Ｎ−ジフェニルメチレン、Ｎ−［（２−ピリジル）メシチル］メチレン、Ｎ−（Ｎ′,Ｎ′−ジメチルアミノメチレン）、Ｎ,Ｎ′−イソプロピリデン、Ｎ−ｐ−ニトロベンジリデン、Ｎ−サリチリデン、Ｎ−５−クロロサリチリデン、Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）フェニル−メチレン、およびＮ−シクロヘキシリデンが含まれる。
【００８１】
エナミン誘導体
エナミン誘導体の例は、Ｎ−（５,５−ジメチル−３−オキソ−１−シクロヘキセニル）である。
【００８２】
Ｎ−ヘテロ原子誘導体
Ｎ−金属誘導体には、Ｎ−ボラン誘導体、Ｎ−ジフェニルボリン酸誘導体、Ｎ−［フェニル（ペンタカルボニルクロミウム−または−タングステン）］カルベニル、およびＮ−銅またはＮ−亜鉛キレートが含まれる。Ｎ,Ｎ−誘導体の例には、Ｎ−ニトロ、Ｎ−ニトロソおよびＮ−オキシドが含まれる。Ｎ−Ｐ誘導体の例には、Ｎ−ジフェニルホスフィニル、Ｎ−ジメチルチオホスフィニル、Ｎ−ジフェニルチオホスフィニル、Ｎ−ジアルキルホスホリル、Ｎ−ジベンジルホスホリル、およびＮ−ジフェニルホスホリルが含まれる。Ｎ−スルフェニル誘導体の例には、Ｎ−ベンゼンスルフェニル、Ｎ−ｏ−ニトロベンゼンスルフェニル、Ｎ−２,４−ジニトロベンゼンスルフェニル、Ｎ−ペンタクロロベンゼンスルフェニル、Ｎ−２−ニトロ−４−メトキシ−ベンゼンスルフェニル、Ｎ−トリフェニルメチルスルフェニル、およびＮ−３−ニトロピリジンスルフェニルが含まれる。Ｎ−スルホニル誘導体には、Ｎ−ｐ−トルエンスルホニル、Ｎ−ベンゼンスルホニル、Ｎ−２,３,６−トリメチル−４−メトキシベンゼンスルホニル、Ｎ−２,４,６−トリメトキシベンゼンスルホニル、Ｎ−２,６−ジメチル−４−メトキシ−ベンゼンスルホニル、Ｎ−ペンタメチルベンゼンスルホニル、Ｎ−２,３,５,６−テトラメチル−４−メトキシベンゼン−スルホニル、Ｎ−４−メトキシベンゼンスルホニル、Ｎ−２,４,６−トリメチルベンゼンスルホニル、Ｎ−２,６−ジメトキシ−４−メチルベンゼンスルホニル、Ｎ−２,２,５,７,８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル、Ｎ−メタンスルホニル、Ｎ−β−トリメチル−シリルエタンスルホニル、Ｎ−９−アントラセンスルホニル、Ｎ−４−（４′,８′−ジメトキシナフチルメチル）−ベンゼンスルホニル、Ｎ−ベンジルスルホニル、Ｎ−トリフルオロメチルスルホニル、およびＮ−フェナシルスルホニルが含まれる。
【００８３】
マスクされたまたは保護された開示の化合物は、インビボで代謝またはさもなければ変換されて、例えば代謝中に短期的に開示の化合物を生ずるプロドラッグであることができる。この変換は、血液のような体液または酸の作用または肝臓、胃腸または他の酵素との接触から生ずる加水分解または酸化であることができる。
本発明の特徴を、さらに以下の実施例によって説明する。
【００８４】
Ｅ．実施例
実施例１
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（ＰＤ ２０５２９３）（ＡＰＫ
ＩＣ50＝１４nM；ｃｏｌｏｎ２６細胞、ＩＣ50≧１０マイクロモル）の製造
工程ａ：５−ニトロ−２,３,４−トリフルオロ安息香酸の製造
穏やかに撹拌している濃硫酸（５０ml）に発煙硝酸（３.４ml、０.０７６mol）を加えた。固体２,３,４−トリフルオロ安息香酸（１０.００ｇ、０.０５５６５mol）を直接、少量ずつ加えた。４５分間撹拌した後、反応混合物はオレンジ色の均一な溶液になり、次いでこれを冷水（４００ml）に注いだ。得られた水性懸濁液をジエチルエーテル（３×２００ml）で抽出した。合わせた抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下で濃縮して曇った明るい黄色の固体１２.３０ｇを得た。クロロホルム（５０ml）から再結晶して淡黄色微結晶生成物９.５４ｇを得た；収率７８％；m.p.; 1H-NMR (400MHz; DMSO) δ 14.29(ブロード s, 1H),8.43-8.38(m, 1H); 13C-NMR (100 MHz; DMSO) δ162.41, 154.24(dd, JC-F=270.1, 10.7 Hz), 148.35(dd, JC-F=267.0,9.2 Hz), 141.23(dt, JC-F=253.4 Hz), 133.95, 123.30(d, JC-F=2.2Hz), 116.92(dd, JC-F=18.2, 3.8 Hz); 19F-NMR (376 MHz;DMSO) δ -120.50〜-120.63(m),-131.133〜-131.27(m), -153.63〜-153.74(m)
【００８５】
工程ｂ：４−アミノ−２,３−ジフルオロ−５−ニトロ安息香酸の製造
固体５−ニトロ−２,３,４−トリフルオロ安息香酸（０.７５ｇ、０.００３３９mol）を濃アンモニウムヒドロキシド（２５ml）に溶解すると、直ちに黄色溶液となった。５分以内に沈殿が形成し始め、この後、濃塩酸水溶液を用いて混合物をｐＨ ０に酸性化した。急速に黄色沈殿が形成された。混合物を沸点に加熱し、熱ろ過した。黄色固体を１０％塩酸水溶液で洗浄し、そして吸引乾燥して黄色粉末０.４７ｇを得た；収率６４％；1H-NMR (400 MHz; DMSO) δ 13.32(s, 1H), 8.36(d, 1H, J=7.6 Hz), 7.98(s, 2H); 19F-NMR (376 MHz; DMSO)δ -128.69〜-128.76(m), -153.60(d)
【００８６】
工程ｃ：メチル４−アミノ−２,３−ジフルオロ−５−ニトロベンゾエートの製造
溶液が温まるまで塩化水素ガスを無水メタノール（３０ml）に溶解した。固体４−アミノ−２,３−ジフルオロ−５−ニトロ安息香酸（０.４７ｇ；０.００２１５mol）をこの溶液に溶解し、反応混合物を窒素雰囲気下で激しく撹拌しながら２３時間還流させた。反応混合物を作業台上でゆっくりと冷ました。黄色沈殿が形成され、真空ろ過によって集め、そして吸引乾燥して黄色の微細フィラメント０.３５ｇを得た；収率７０％；m.p. 183.5-184℃; 1H-NMR (400 MHz; DMSO) δ 8.36(dd, 1H, J=7.3, 1.7 Hz), 8.06(s, 2H), 3.78(s, 3H); 19F-NMR (376 MHz; DMSO) δ -128.85〜-128.92(m), -153.29(d); MS (APCl-) 231(M-1, 100); IR (KBr) 3433, 3322, 1700, 1650, 1549, 1343, 1285 cm-1; 元素分析：C8H6F2N2O4としての計算値／実測値 C, 41.39／41.40; H, 2.61／2.50; N, 12.07／11.98; F, 16.37／16.58
【００８７】
工程ｄ：メチル４−アミノ−３−フルオロ−２−（２−メチル−フェニルアミノ）−５−ニトロベンゾエートの製造
固体メチル４−アミノ−２,３−ジフルオロ−５−ニトロベンゾエート（０.０８７ｇ、３.７×１０-4mol）をオルト−トルイジン（３ml、０.０２８mol）に溶解した。反応混合物を窒素雰囲気下２００℃で３５分間撹拌した。次いで混合物をジエチルエーテル（１５０ml）と１０％塩酸水溶液（１５０ml）との間で分配した。エーテル相を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗固体を得た。粗生成物をジクロロメタン（５ml）に溶かし、フラッシュシリカプラグを通してろ過した。ジクロロメタンで溶離して黄色固体０.０９５３ｇを得た；収率８１％; m.p. 164-168℃; 1H-NMR (400 MHz; DMSO) δ 9.20(s, 1H), 8.52(d, 1H, J=1.7 Hz), 7.57(s, 2H), 7.19(d, 1H, J=7.3 Hz), 7.12-7.08(m, 1H), 7.02-6.98(m, 1H), 6.95-6.91(m, 1H), 3.78(s, 3H), 2.21(s, 3H); 19F-NMR (376 MHz; DMSO) δ -141.13(s); MS (APCl+) 320(M+1, 100); (APCl-) 318(M-1, 100); IR (KBr) 3467, 3346, 1690, 1305 cm-1; 元素分析: C15H14FN3O4・0.21H2Oとしての計算値／実測値 C, 55.77／55.97; H, 4.50／4.55; N, 13.01／12.61; F, 5.88／5.95
【００８８】
工程ｅ：メチル４,５−ジアミノ−３−フルオロ−２−（２−メチル−フェニルアミノ）ベンゾエートの製造
メチル４−アミノ−３−フルオロ−２−（２−メチルフェニルアミノ）−５−ニトロベンゾエート（２.５２ｇ、０.００７８９mol）、テトラヒドロフラン（５０ml）、メタノール（５０ml）および洗浄されたラネーニッケル（０.５ｇ）からなる混合物を最初に振盪器中３０.２℃で４８.６psiの水素ガスを４時間４８分施した。混合物をろ過し、ろ液を真空下で濃縮してサーモン色のアモルファス固体２.２０ｇを得た；収率９６％；1H-NMR (400 MHz; DMSO) δ 7.84(s, 1H), 7.04(d, 1H, J=7.1 Hz), 6.98(d, 1H, J=1.2 Hz), 6.95-6.91(m, 1H), 6.68-6.64(m, 1H), 6.40-6.36(m, 1H), 5.39(s, 2H), 4.73(s, 2H), 3.66(s, 36H), 2.21(s, 3H); 19F-NMR (376 MHz; DMSO) δ -139.66(s)
【００８９】
工程ｆ：メチル７−フルオロ−６−（２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボキシレートの製造
ギ酸（Aldrich、９５−９７％、１００ml、２.５mol）中メチル４,５−ジアミノ−３−フルオロ−２−（２−メチルフェニルアミノ）−ベンゾエート（１.７８ｇ、０.００６１５mol）の撹拌溶液を３時間還流させ、次いで真空下で濃縮して茶色の粗固体を得た。粗生成物をクロロホルム（４０ml）で磨砕し、続いて真空ろ過によって集めた。固体を吸引乾燥して明るいラベンダー色の粉末１.０９ｇを得た。ろ液を真空下で粗固体に濃縮して、これをクロロホルム−ジクロロメタン（１０ml）で磨砕した。この固体を真空ろ過によって集め、ジクロロメタンですすぎ、吸引乾燥してさらに０.５５ｇの明るいラベンダー色の粉末（全収量：１.６４ｇ）を得た；収率８７％；m.p. 259-262℃; 1H-NMR (400 MHz; DMSO) δ 8.42(s, 1H), 8.03(s, 1H), 7.93(ブロード s, 1H), 7.12(d, 1H, J=7.0 Hz), 6.99-6.95(m, 1H), 6.75-6.71(m, 1H), 6.48-6.44(m, 1H), 3.81(s, 3H), 2.30(s, 3H); 19F-NMR (376 MHz; DMSO) δ -132.84(s); MS (APCl+) 300(M+1, 100); (APCl-) 298(M-1, 100); IR (KBr) 3322, 1689, 1437, 1326, 1218 cm-1; 元素分析：C16H14FN3O2・0.32H2Oとしての計算値／実測値 C, 62.99／63.01; H, 4.84／4.61; N, 13.77／13.70
【００９０】
工程ｇ：メチル７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボキシレートの製造
氷酢酸（２０ml）中のメチル７−フルオロ−６−（２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボキシレート（０.２４９２ｇ、８.３２６×１０-4mol）、ベンジルトリメチルアンモニウムジクロロヨージネート（Aldrich、９５％、０.３９３４ｇ、０.００１１３mol）、および塩化亜鉛（０.１８９９ｇ、０.００１３９mol）からなる撹拌混合物を１５分間還流した。熱懸濁液をろ過して沈殿を単離し、これを真空乾燥機（９０℃、約１０mmHg）中で一夜乾燥し、緑色の粉末０.２３９２ｇを得た；収率６８％；m.p. 219-220℃ DEC; 1H-NMR (400 MHz; DMSO) δ 8.71(s, 1H), 8.02(s, 1H), 7.85(ブロード s, 1H), 7.43(d, 1H, J=1.7 Hz), 7.24(dd, 1H, J=8.5, 2.2 Hz), 6.24(dd, 1H, J=8.5, 5.4 Hz), 3.76(s, 3H), 2.22(s, 3H); 19F-NMR (376 MHz; DMSO) δ -132.86(s); MS (APCl+) 426(M+1, 48), 169(100); (APCl-) 424(M-1, 100); IR (KBr) 1704, 1508, 1227 cm-1
【００９１】
工程ｈ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸の製造
テトラヒドロフラン（２０ml）中のメチル７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボキシレート（０.２０３５ｇ、４.７８６×１０-4mol）からなる撹拌溶液に固体カリウムトリメチルシラノレート（０.３１５ｇ、０.００２４６mol）を加えた。反応混合物をアルゴン下周囲温度で１６時間撹拌した。さらに０.０８２ｇ（６.３９×１０-4mol）のカリウムトリメチルシラノレートを加え混合物を３０分撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮して１／３の容積にし、ジエチルエーテル（５０ml）で処理した。形成したオフホワイトの沈殿を真空ろ過によって集め、吸湿性固体を得た。湿った固体を４：１（v／v）酢酸エチル−メタノール溶液（５００ml）に溶解した。溶液を０.８４Ｍクエン酸水溶液（５０ml）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、そして真空下で濃縮して黄色液体を得た。その液体を新しい酢酸エチル−メタノールに再溶解した。溶液を塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、そして真空下で濃縮した。残留物をクロロホルムに再溶解し、そして再濃縮して主にクエン酸からなる粘稠な黄色残留物１.５５ｇを得た；ＭＳ（ＡＰＣＩ−）１９１（Ｍ−１,１００）。残留物を水（５０ml）に溶かした。不溶性物質を１：１（v／v）酢酸エチル−ジエチルエーテル（２５０ml）で抽出した。分離して、水性相は、強い酸性のままであった（ｐＨ ０）。有機相を新しい分の水（１５０ml）で洗浄した。分離すると、この洗浄液はわずかに酸性（ｐＨ ４.５）でしかなかった。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、真空下で濃縮し、クロロホルムを用いて追い出し黄褐色の半固体を得た。生成物をヘキサンで磨砕した。真空ろ過および吸引乾燥により黄褐色粉末０.０８３９ｇを得た。生成物の一部（０.０５０ｇ）を沸騰したエタノール（１ml）から再結晶した。冷やしながら穏やかにかき混ぜるとオフホワイトの固体が形成した。この生成物を真空ろ過によって単離し、高真空下（２３℃）で乾燥し、オフホワイト色の粉末０.０１８ｇを得た；収率９％；m.p. 247-248℃ DEC; 19F-NMR (376 MHz; DMSO) δ -132.87(s); MS (APCl+) 412(M+1, 100); (APCl-) 410(M-1, 100); IR (KBr) 3322, 1689, 1437, 1326, 1218 cm-1; 元素分析：C15H11FIN3O2・0.61C2H6O・0.59 H2Oとしての計算値／実測値 (91.4％ parent) C, 43.30／43.30; H, 3.55／3.34; N, 9.34／9.15
【００９２】
実施例２
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミド(ＰＤ ２５４５５２)(ＡＰＫ ＩＣ50＜１０nM（ｎ＝２)；ｃｏｌｏｎ２６細胞、１時間前処理、ＩＣ50＝２０nM）の製造
工程ａ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ペンタフルオロフェニルエステル(ＰＤ ２５４５５１)(ＡＰＫ ＩＣ50＝１２０nM（ｎ＝２））の製造
酢酸エチル（４ml）中の７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（０.８４４ｇ、２.０５×１０-3mol）からなる撹拌懸濁液に、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ml）中のペンタフルオロフェノール（０.３７５ｇ、２.０４×１０-3mol）からなる溶液を加えた。次いで固体ジシクロヘキシルカルボ−ジイミド（０.４１５ｇ、１.９９×１０-3mol）を加え、反応混合物を２２時間撹拌した。反応混合物を真空ろ過して形成した沈殿を除去した。ろ液を酢酸エチル（４００ml）で希釈し、その溶液を水（３×４００ml）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、そして真空下で濃縮して黄色フォーム１.７ｇを得た。粗生成物をフラッシュシリカカラムクロマトグラフィにより精製した。勾配（ＣＨＣｌ3〜ＣＨＣｌ3中０.５％メタノール）をかけて溶離して黄色アモルファス生成物０.６９ｇを得た；収率６０％；1H-NMR (400 MHz; DMSO) δ 8.54(s, 1H), 8.28(s, 1H), 8.04(s, 1H), 7.49(d, 1H, J=1.7 Hz),7.36(dd, 1H, J=8.2, 1.7 Hz), 6.57(dd, 1H, J=8.4, 6.5 Hz), 2.31(s, 3H); 19F-NMR(376 MHz; CDCl3) δ -132.02(s), -152.35(d, J=18.3 Hz), -157.26(t, J=21.4 Hz), -161.96(dd,J=21.3, 18.3 Hz); MS (APCl+) 578(M+1, 57), 394(100); (APCl-) 576(M-1, 44),409(100), 393(95), 392(82), 378(55), 183(97), 165(68), 127(53); IR (KBr) 1731cm-1(C=O stretch)
【００９３】
工程ｂ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミドの製造
無水テトラヒドロフラン（５ml）中の７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ペンタフルオロフェニルエステル（０.６３ｇ、１.０９×１０-3mol）からなる撹拌溶液に固体シクロプロピルメトキシルアミン塩酸塩（０.１４ｇ、１.１３×１０-3mol）およびジイソプロピルエチルアミン（０.６ml、３.４×１０-3mol）を加えた。反応混合物を１週間撹拌した。溶媒を除去し、蒸発物を１０％塩酸水溶液（２００ml）で処理し、ジエチルエーテル（２００ml）で抽出した。二相懸濁液が得られ、沈殿を真空ろ過によって単離した。粗生成物を無水エタノールから再結晶して黄緑色粉末０.１８ｇを得た；収率３５％；m.p. 168-172℃；1H-NMR (400 MHz; DMSO) δ 11.48(s, 1H), 8.37(s, 1H), 7.50(ブロード s, 1H), 7.45(s, 1H), 7.24(s, 1H), 7.07(d, 1H, J=8.4 Hz), 6.03-5.97(m, 1H), 3.38(d, 2H, J=6.5 Hz), 2.04(s, 3H), 0.85-0.75(m, 1H), 0.30-0.22(m, 2H), 0.00(s, 2H); 19F-NMR (376 MHz; DMSO) δ -133.23(s); MS (APCl+) 481(M+1, 77), 409(100); (APCl-) 480(M, 22), 407(100); IR (KBr) 1659, 1632, 1493 cm-1; 元素分析：C19H18FIN4O2・0.50HClとしての（96.3％ parent）C, 45.78／45.74; H, 3.74／3.84; N, 11.24／10.88
【００９４】
実施例３
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミドの製造
工程ａ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−オキシアミドの製造
１：１ v／vテトラヒドロフラン−ジクロロメタン中の７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸、Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−ヒドロキシルアミン（１.２５当量）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（１.２５当量）、およびジイソプロピルエチルアミン（３当量）からなる溶液を３０分間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィにより精製し、ジクロロメタンで溶離して所望の生成物を得た。さらに精製が必要な場合は、生成物をメタノールのような適当な溶媒から再結晶することができる。
【００９５】
工程ｂ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミドの製造
化合物７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−オキシアミドをメタノールまたはエタノールのような適当な塩化水素の飽和した溶媒に溶かした。均一になったら、溶液を真空下で濃縮して所望の生成物を得た。さらに精製が必要な場合は、生成物をクロロホルムまたはジクロロメタンのような適当な溶媒により磨砕することができる。
【００９６】
実施例４
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミドの製造
工程ａ：Ｏ−シクロプロピルメチルヒドロキシルアミン塩酸塩の製造
工程ｉ：２−シクロプロピルメトキシ−イソインドール−１,３−ジオンの製造
窒素雰囲気下で氷−水浴を用いて６℃（混合物内温度）に冷やされたテトラヒドロフラン（１.００Ｌ）中、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド（Aldrich、５７.１５ｇ、３３９.８mmol）、シクロプロパンメタノール（Aldrich、２５.１０ｇ、３４１.１mmol）、およびトリフェニルホスフィン（ＤＥＡＤ、Aldrich、９１.０ｇ、３４４mmol）からなる撹拌している溶液／懸濁液に、ジエチルアゾジカルボキシレート（Aldrich、５６ml、３５６mmol）を滴下ロートにより２０分かけて滴加した。滴下中は、反応混合物の温度を２０℃未満に保った。ＤＥＡＤを加えた後、冷浴をはずし、反応混合物を１５時間撹拌した。混合物を減圧下でペーストに濃縮した。クロロホルム（約３００ml）を加え、すべての固体がなくなるまで、混合物をかき混ぜた。真空ろ過により不溶物を除去した。ろ液を同様にろ過して形成した白色沈殿を除去して透明なろ液を得た。減圧下で濃縮して透明な油状物を得た。シリカゲルを通したフラッシュろ過（１００％クロロホルム）により、分散しない生成物を含むろ液を得た。このろ液を合わせ、減圧下で濃縮して透明な油状物１２７.４ｇを得た。油状物を無水エタノール（４００ml）に溶かし、溶液を２時間冷蔵した。白色の結晶性固体が沈殿し、続いて真空ろ過によって集めた。生成物を真空乾燥器（６０℃）中で乾燥して所望の物質４２.６６ｇ（５８％）を得た；m.p. 71-77℃；1H-NMR (400 MHz; CDCl3 signal offset to δ 6.96) δ 7.54-7.43(m, 4H), 3.74(d, 2H, J=7.6 Hz), 1.02-0.95(m, 1H), 0.34-0.30(m, 1H), 0.04-0.00(m, 1H)
【００９７】
工程ii：Ｏ−シクロプロピルメチルヒドロキシルアミン塩酸塩の製造
周囲条件下、ジクロロメタン（１５０ml）中の２−シクロプロピルメトキシ−イソインドール−１,３−ジオン（４２.６４ｇ、１９６.３mmol）からなる撹拌溶液にメチルヒドラジン（Aldrich、１０.７ml、１９７mmol）を注意深く加えた。ほとんど即座に白色沈殿が形成し始めた。１５分激しく撹拌した後、懸濁液を真空ろ過した。ろ液を同様にろ過して追加の沈殿を除去した。得られた透明なろ液を減圧下で注意深く（揮発性生成物）濃縮して、透明な液体／固体混合物を得た。生成物のエーテル（２００ml）溶液を作り、真空ろ過して白色固体を除去した。ろ液を塩化水素ガスで酸性化すると直ちに白色沈殿が得られた。真空ろ過によって固体を集め、真空乾燥器（５５℃）で乾燥して白色粉末生成物１８.７ｇ（７７％）を得た。m.p. 165-168℃; 1H-NMR (400 MHz; DMSO) δ10.77(ブロード s, 2H), 3.57(d, 2H, J=7.3 Hz), 0.84-0.74(m, 1H), 0.31-0.25(m, 2H), 0.04-0.00(m, 1H); 13C-NMR (100 MHz; DMSO) δ 75.39, 5.52, 0.00
【００９８】
工程ｂ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミドの製造
１：１ v／vテトラヒドロフラン−ジクロロメタン中の７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸、Ｏ−シクロプロピルメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１.２５当量）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（１.２５当量）、およびジイソプロピルエチルアミン（３当量）からなる溶液を３０分間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、残留物をジエチルエーテルに取り出し、エーテル相を希塩酸水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液および塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、真空下で濃縮して所望の生成物を得た。さらに精製が必要な場合は、生成物をメタノールまたはクロロホルムといったような適当な溶媒から再結晶することができる。
【００９９】
実施例５
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸の製造
工程ａ：５−ニトロ−２,３,４−トリフルオロ安息香酸の製造
実施例１の工程ａと同様にした。
【０１００】
工程ｂ：２,３−ジフルオロ−４−ヒドロキシ−５−ニトロ安息香酸の製造
固体５−ニトロ−２,３,４−トリフルオロ安息香酸（１.００ｇ、０.００４５２mol）を１０重量％水酸化ナトリウム水溶液に溶かした。混合物は、透明な深いオレンジ色であった。周囲条件下で数分放置した後、強い酸性（ｐＨ０）になるまで、濃塩酸水溶液で混合物を急冷した。真空ろ過によって単離した白色の固体沈殿を、そして吸引乾燥してオフホワイト色の固体０.４０ｇを得た。この固体をクロロホルム（２０ml）から再結晶してオフホワイト色の結晶粉末０.２２ｇを得た；収率２２％；MS（APCI-）218（M-1、100）
【０１０１】
工程ｃ：メチル２,３−ジフルオロ−４−ヒドロキシ−５−ニトロベンゾエートの製造
溶液が暖かくなるまで無水塩化水素ガスを無水メタノール（５０ml）に溶かした。微結晶固体２,３−ジフルオロ−４−ヒドロキシ−５−ニトロ安息香酸（０.２２ｇ、０.００１００mol）をメタノール性塩化水素溶液に溶かした。撹拌している反応混合物を窒素下で１６時間還流させた。混合物を真空下で濃縮して白色固体を得た。生成物を高真空下で乾燥し、白色粉末０.２１３ｇを得た；収率９１％；m.p. 108-109.5℃；1H-NMR (400 MHz; DMSO) δ 8.25(dd, 1H, J=7.7, 2.2 Hz), 3.83(s, 3H); (CDCl3) δ 10.83(s, 1H), 8.66(dd, 1H, J=7.0, 2.2 Hz), 3.98(s, 3H); 19F-NMR (376 MHz; DMSO) δ -127.85(s), -154.32(d, J=19.8 Hz); (CDCl3) δ -118.31〜-118.37(m), -152.38(d, J=18.3 Hz); MS (APCl-) 232(M-1, 100); IR (KBr) 3264, 1731, 1640, 1546, 1307, 1286, 1160 cm-1
【０１０２】
工程ｄ：１−アダマンチル４−カルボキシメチル−２,３−ジフルオロ−６−ニトロフェニルカーボネートの製造
テトラヒドロフラン中の１−アダマンチルフルオロホルメート（２.０Ｍ）およびピリジン（２.０Ｍ）からなる溶液に、無水テトラヒドロフラン中メチル２,３−ジフルオロ−４−ヒドロキシ−５−ニトロベンゾエート（０.９６当量、０.３８４Ｍ）からなる撹拌溶液を周囲温度で加えた。反応混合物を６時間撹拌し、溶媒を真空下で除去した。残留物をジクロロメタンに溶かした。有機溶液を希塩酸水溶液、希重炭酸ナトリウム水溶液、および水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、そして真空下で濃縮して所望の生成物を得た。
【０１０３】
工程ｅ：１−アダマンチル４−カルボキシメチル−２−フルオロ−３−（２−メチル−フェニルアミノ）−６−ニトロフェニルカーボネートの製造
化合物１−アダマンチル４−カルボキシメチル−２,３−ジフルオロ−６−ニトロフェニルカーボネートを過剰のオルト−トルイジンに溶かした。反応混合物を２００℃で６時間撹拌した。  混合物を冷まし、ジエチルエーテルに溶かした。有機相を希塩酸水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、および塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、そして真空下で濃縮して所望の生成物を得た。生成物を必要に応じてフラッシュクロマトグラフィにより精製した。
【０１０４】
工程ｔ：メチル３−フルオロ−４−ヒドロキシ−２−（２−メチル−フェニルアミノ）−５−ニトロベンゾエートの製造
化合物１−アダマンチル４−カルボキシメチル−２−フルオロ−３−（２−メチル−フェニルアミノ）−６−ニトロフェニルカーボネートを周囲温度で過剰のトリフルオロ酢酸に溶かした。混合物を２０分間撹拌した。ＴＦＡを減圧下で除去した。残留物を真空ポンプにかけてアダマンタン−１−オールを除去して所望の生成物を得た。
【０１０５】
工程ｇ：メチル５−アミノ−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−２−（２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾエートの製造
化合物メチル３−フルオロ−４−ヒドロキシ−２−（２−メチル−フェニルアミノ）−５−ニトロベンゾエートを実施例１の工程ｅのように処理した。
【０１０６】
工程ｈ：メチル７−フルオロ−６−（２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾオキサゾール−５−カルボキシレートの製造
化合物５−アミノ−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−２−（２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾエートを実施例１の工程ｆのように処理した。さらに精製が必要な場合は、生成物をクロロホルムまたはエタノールのような適当な溶媒から再結晶することができる。
【０１０７】
工程ｉ：メチル７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾオキサゾール−５−カルボキシレートの製造
氷酢酸中のメチル７−フルオロ−６−（２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾオキサゾール−５−カルボキシレート（０.０４２Ｍ）、ベンジルトリメチルアンモニウムジクロロヨージネート（Aldrich、９５％、０.０５７Ｍ、１.３６当量）、および塩化亜鉛（０.０７０Ｍ、１.６７当量）からなる撹拌混合物を１５分間還流させた。混合物を真空下で濃縮し、残留物をジエチルエーテルに取り出した。エーテル溶液を希塩酸水溶液、水、および塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、そして真空下で濃縮して所望の生成物を得た。生成物はエタノールのような適当な溶媒からの再結晶によって精製することができる。
【０１０８】
工程ｊ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸の製造
テトラヒドロフラン中のメチル７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾオキサゾール−５−カルボキシレート（０.０２４Ｍ）からなる撹拌溶液に固体カリウムトリメチルシラノレート（５.１４当量）を加えた。反応混合物をアルゴン下、周囲温度で１６時間撹拌した。追加当量のカリウムトリメチルシラノレートを加え、混合物を３０分間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮して残留物を得、次いでこれを１：１（v／v）酢酸エチル−ジエチルエーテルに取り出した。有機相を希塩酸水溶液、水、および塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、真空下で濃縮し、そしてクロロホルムを用いて追い出し、粗生成物を得た。エタノールのような適当な溶媒から再結晶して精製された所望の生成物を得た。
【０１０９】
実施例６
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミドの製造
工程ａ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−オキシアミドの製造
化合物７−フルオロ−６−(４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ)−１Ｈ−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸を実施例２の工程ａのように処理した。
【０１１０】
工程ｂ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ−１Ｈ−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミドの製造
化合物７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−オキシアミドを実施例２の工程ｂのように処理した。
【０１１１】
実施例７
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミドの製造
化合物７−フルオロ−６−(４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ)−１Ｈ−ベンゾオキサゾール−５−カルボン酸を実施例３の工程ｂのように処理した。
【０１１２】
実施例８
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾチアゾール−５−カルボン酸の製造
工程ａ：５−ニトロ−２,３,４−トリフルオロ安息香酸の製造
実施例１の工程ａと同様にした。
【０１１３】
工程ｂ：２,３−ジフルオロ−４−ヒドロキシ−５−ニトロ安息香酸の製造
実施例４の工程ｂと同様にした。
工程ｃ：メチル２,３−ジフルオロ−４−ヒドロキシ−５−ニトロベンゾエートの製造
実施例４の工程ｃと同様にした。
【０１１４】
工程ｄ：４−ジメチルチオカルバモイルオキシ−２,３−ジフルオロ−５−ニトロ−安息香酸メチル  エステルの製造
Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド中のメチル２,３−ジフルオロ−４−ヒドロキシ−５−ニトロベンゾエートの溶液を１モル当量の重炭酸セシウムで処理し、８５℃に３０分間暖めた。次いで、撹拌している混合物を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド中の僅かに過剰のＮ,Ｎ−ジメチルチオカルバモイルクロリドからなる溶液を素早く滴下して処理した。反応混合物を室温で１時間撹拌するか、または蒸気浴上で１時間暖めることができる。次いで、混合物を水中に注ぎ、そして酢酸エチルで抽出した。有機相を５％水酸化ナトリウム水溶液、水および生理食塩水  で洗浄し、次いで硫酸マグネシウムまたは硫酸ナトリウムのような乾燥剤で乾燥した。次いで溶媒を真空下で除去して粗生成物を得た。化合物をクロマトグラフィまたは適当な溶媒からの結晶化のような通常の方法により精製した。
【０１１５】
工程ｅ：４−ジメチルチオカルバモイルオキシ−３−フルオロ−５−ニトロ−２−ｏ−トリルアミノ−安息香酸メチルエステルの製造
化合物４−ジメチルチオカルバモイルオキシ−２,３−ジフルオロ−５−ニトロ−安息香酸メチルエステルを過剰のトルイジンに溶かした。撹拌している混合物を１時間２００℃にした。次いで、混合物を５％塩酸水溶液に注いだ。水性混合物をジエチルエーテルで抽出した。有機相を水および塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、そして真空下で濃縮した。粗生成物をクロマトグラフィまたは適当な溶媒からの結晶化のような通常の方法によって精製した。
【０１１６】
工程ｆ：メチル７−フルオロ−６−（２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾチアゾール−５−カルボキシレートの製造
化合物メチル５−アミノ−３−フルオロ−４−メルカプト−２−（２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾエートを実施例４の工程ｈのように処理した。
【０１１７】
工程ｇ：メチル７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾチアゾール−５−カルボキシレートの製造
化合物メチル７−フルオロ−６−（２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾチアゾール−５−カルボキシレートを実施例４の工程ｉのように処理した。
【０１１８】
工程ｈ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ｌＨ−ベンゾチアゾール−５−カルボン酸の製造
化合物メチル７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾチアゾール−５−カルボキシレートを実施例４の工程ｊのように処理した。
【０１１９】
実施例９
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾチアゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミドの製造
工程ａ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾチアゾール−５−カルボン酸Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシアミドの製造
化合物７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾチアゾール−５−カルボン酸を実施例２の工程ａのように処理した。
【０１２０】
工程ｂ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾチアゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミドの製造
化合物７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−５−ベンゾチアゾール−５−カルボン酸Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−オキシアミドを実施例２の工程ｂのように処理した。
【０１２１】
実施例１０
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾチアゾール−５−カルボン酸  シクロプロピルメトキシ−アミドの製造
化合物７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾチアゾール−５−カルボン酸を実施例３の工程ｂのように処理した。
【０１２２】
実施例１１
８−フルオロ−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸の製造
工程ａ：８−フルオロ−７−（２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸の製造
化合物メチル４,５−ジアミノ−３−フルオロ−２−（２−メチル−フェニルアミノ）ベンゾエート（実施例１、工程ｅから）を２：１：１.２ v／v／vの２.０Ｍ酢酸−４.０Ｍ酢酸ナトリウム−メタノールに溶かした。懸濁液を６５℃に（または均一になるまで）暖め、そして透明な溶液を０.０７８Ｍナトリウムグリオキサールビスルファイト（Aldrich、一水和物、１.０５当量）水溶液中に注ぎ、これを７０℃に暖めた。反応混合物を５５〜７５℃の間で１時間穏やかに撹拌し、次いで、氷−水浴を用いて１２℃に冷却した。粉砕した水酸化ナトリウムペレットを（２７当量）を冷やした溶液に加えた。混合物を３０℃に穏やかに暖め、４５分間撹拌した。温度を１５分間７０℃に上げた。混合物を冷まし、酢酸エチルで処理した。二相混合物を濃塩酸水溶液で処理し、水相中をｐＨ ０にした。有機相を分離し、乾燥(ＭｇＳＯ4）し、そして真空下で濃縮して所望の生成物を得た。さらに精製が必要な場合は、生成物をジクロロメタンのような適当な溶媒で磨砕するかまたはエタノールのような溶媒から再結晶することができる。
【０１２３】
工程ｂ：８−フルオロ−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸の製造
化合物８−フルオロ−７−（２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸を実施例４の工程Ｉのように処理した。
【０１２４】
実施例１２
８−フルオロ−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸ヒドロキシアミドの製造
工程ａ：８−フルオロ−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−オキシアミドの製造
化合物８−フルオロ−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸を実施例２の工程ａのように処理した。
【０１２５】
工程ｂ：８−フルオロ−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸  ヒドロキシアミドの製造
化合物８−フルオロ−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−オキシアミドを実施例２の工程ｂのように処理した。
【０１２６】
実施例１３
８−フルオロ−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミドの製造
化合物８−フルオロ−７−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−キノキサリン−６−カルボン酸を実施例３の工程ｂのように処理した。
【０１２７】
実施例１４
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボン酸の製造
工程ａ：メチル７−フルオロ−６−（２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボキシレートの製造
適当な溶媒、例えばジエチルエーテルまたはトルエン中のメチル４,５−ジアミノ−３−フルオロ−２−（２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾエート（実施例１、工程ｅから）およびジイソプロピルエチルアミン（２当量）からなる撹拌溶液にＮ−チオアニリンまたは塩化チオニル（１.３５当量）のような試薬を加えた。反応混合物を１時間還流させた。混合物を希塩酸水溶液で急冷した。有機相を飽和重炭酸ナトリウム水溶液および塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、そして真空下で濃縮して所望の生成物を得た。さらに精製が必要な場合は、生成物をクロロホルムまたはエタノールのような適当な溶媒から再結晶するか、またはクロマトグラフ処理することができる。
【０１２８】
別法：化合物メチル４,５−ジアミノ−３−フルオロ−２−（２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾエートをＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド中のサルファーモノクロリド（６当量）の撹拌溶液に加え、そして混合物を徐々に７５〜８０℃に加熱した。５時間後、混合物を１０℃に冷やし、ゆっくりと水を加えた。混合物をジエチルエーテルまたはジクロロメタンのような溶媒で抽出した。有機抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、そして真空下で濃縮して所望の生成物を得た。さらに精製が必要な場合は、生成物をクロロホルムまたはエタノールのような適当な溶媒から再結晶するか、またはクロマトグラフ処理することができる。
【０１２９】
工程ｂ：メチル７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボキシレートの製造
化合物メチル７−フルオロ−６−（２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボキシレートを実施例４の工程ｉのように処理した。
【０１３０】
工程ｃ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボン酸の製造
化合物メチル７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボキシレートを実施例４の工程ｊのように処理した。
【０１３１】
実施例１５
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミドの製造
工程ａ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボン酸Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−オキシアミドの製造
化合物７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］  チアジアゾール−５−カルボン酸を実施例２の工程ａのように処理した。
【０１３２】
工程ｂ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミドの製造
化合物７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボン酸Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−オキシアミドを実施例２の工程ｂのように処理した。
【０１３３】
実施例１６
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミドの製造
化合物７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチルフェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］チアジアゾール−５−カルボン酸を実施例３の工程ｂのように処理した。
【０１３４】
実施例１７
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボン酸の製造
工程ａ：メチル７−フルオロ−６−（２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボキシレート２−オキシドの製造
Takakis、I.M.；Hadjimihalakis、P.M.、J. Heterocyclic Chem.、27、177（1990）を参照のこと。
ベンゼン中メチル４−アミノ−３−フルオロ−２−（２−メチル−フェニルアミノ）−５−ニトロベンゾエート（実施例１、工程ｄから）およびヨードソベンゼンジアセテート（１.７６当量）からなる混合物を周囲温度で５時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮し、そして残留物をカラムクロマトグラフィにより精製して所望の生成物を得た。
【０１３５】
別法：テトラヒドロフラン中メチル４−アミノ−３−フルオロ−２−（２−メチル−フェニルアミノ）−５−ニトロベンゾエート（０.８６Ｍ）からなる溶液をジアゾ化し、そしてジアゾニウム塩をSmith、P. A.S.；Boyer、J. H.、Org. Synth.、 31、 14（1951）およびそこに引用されている文献４および８に記載されているようにしてその場でアジ化ナトリウムで処理した。エチレングリコール中、１１０〜１２０℃でこの中間体を１時間熱分解して所望の生成物を得た。
【０１３６】
工程ｂ：メチル７−フルオロ−６−（２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボキシレートの製造
エチレングリコール中のメチル７−フルオロ−６−（２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボキシレート２−オキシドおよびアジ化ナトリウム（１.３８当量）からなる溶液を１４０〜１５０℃に３０分間加熱し、カラムクロマトグラフィにかけた後、所望の生成物を得た。
【０１３７】
工程ｃ：メチル７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボキシレートの製造
化合物メチル７−フルオロ−６−（２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボキシレートを実施例４の工程ｉのように処理した。
【０１３８】
工程ｄ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボン酸製造
化合物メチル７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボキシレートを実施例４の工程ｊのように処理した。
【０１３９】
実施例１８
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミドの製造
工程ａ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボン酸Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−オキシアミドの製造
化合物７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボン酸を実施例２の工程ａのように処理した。
【０１４０】
工程ｂ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミドの製造
化合物７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボン酸Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−オキシアミドを実施例２の工程ｂのように処理した。
【０１４１】
実施例１９
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミドの製造
化合物７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾ［１,２,５］オキサジアゾール−５−カルボン酸を実施例３の工程ｂのように処理した。
【０１４２】
実施例２０
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボン酸の製造
工程ａ：メチル７−フルオロ−６−（２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボキシレートの製造
化合物メチル４，５−ジアミノ−３−フルオロ−２−（２−メチル−フェニルアミノ）−ベンゾエート（実施例１、工程ｅから）を通常の方法によってジアゾ化した。処理して所望の生成物を得た。
【０１４３】
工程ｂ：メチル７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボキシレートの製造
化合物メチル７−フルオロ−６−（２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボキシレートを実施例４の工程ｉのように処理した。
【０１４４】
工程ｃ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボン酸の製造
化合物メチル７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボキシレートを実施例４の工程ｊのように処理した。
【０１４５】
実施例２１
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミドの製造
工程ａ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボン酸Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−オキシアミドの製造
化合物７−フルオロ−６−(４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ)−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボン酸を実施例２の工程ａのように処理した。
【０１４６】
工程ｂ：７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボン酸ヒドロキシアミドの製造
化合物７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボン酸Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）−オキシアミドを実施例２の工程ｂのように処理した。
【０１４７】
実施例２２
７−フルオロ−６−（４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボン酸シクロプロピルメトキシ−アミドの製造
化合物７−フルオロ−６−(４−ヨード−２−メチル−フェニルアミノ)−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−５−カルボン酸を実施例３の工程ｂのように処理した。
【０１４８】
実施例２３
ＭＡＰキナーゼ経路の阻害剤に対するカスケードアッセイ
ミエリン塩基性蛋白質（ＭＢＰ）への３２Ｐの取り込みを、ｐ４４ＭＡＰキナーゼを含有するグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ融合蛋白質（ＧＳＴ−ＭＡＰＫ）およびｐ４５ＭＥＫを含有するグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ融合蛋白質（ＧＳＴ−ＭＥＫ）の存在下においてアッセイした。アッセイ溶液には、１００μLの最終容量中に２０mMのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７.４）、１０mMのＭｇＣｌ2、１mMのＥＧＴＡ、５０μMの［γ−32Ｐ］ＡＴＰ、１０μgのＧＳＴ−ＭＥＫ、０.５μgのＧＳＴ−ＭＡＰＫおよび４０μgのＭＢＰが含まれた。反応は、２０分後に、トリクロロ酢酸の添加によって停止し、そしてＧＦ／Ｃフィルターマットを通してろ過した。フィルターマット上に保持された３２Ｐを、１２０Ｓ Betaplateを使用して測定した。化合物は、１０μMにおいて、３２Ｐの取り込みを阻害する能力について評価した。
【０１４９】
化合物がＧＳＴ−ＭＥＫまたはＧＳＴ−ＭＡＰＫを阻害するかどうかを確かめるために、２つの追加のプロトコールを使用した。第一のプロトコールにおいては、化合物を、ＧＳＴ−ＭＥＫを含有する管に加え、次いでＧＳＴ−ＭＡＰＫ、ＭＢＰおよび［γ−32Ｐ］ＡＴＰを加えた。第二のプロトコールにおいては、化合物を、ＧＳＴ−ＭＥＫおよびＧＳＴ−ＭＡＰＫの両方を含有する管に加え、次いでＭＢＰおよび［γ−32Ｐ］ＡＴＰを加えた。
両方のプロトコールにおいて活性を示す化合物は、ＭＡＰＫ阻害剤として記録し、一方において、第一のプロトコールのみにおいて活性を示す化合物は、ＭＥＫ阻害剤として記録した。
【０１５０】
実施例２４
インビトロＭＡＰキナーゼアッセイ
阻害活性は、直接的なアッセイにおいて確認することができる。ＭＡＰキナーゼについては、５０mMのトリス（ｐＨ７.５）、１０μMのＭｇＣｌ2、２μMのＥＧＴＡおよび１０μMの［γ−32Ｐ］ＡＴＰを含有する５０μLの最終容量中において、ＧＳＴ−ＭＡＰＫ １μgを、ＭＢＰ ４０μgと一緒に、３０℃で１５分インキュベートした。反応をLaemmli ＳＤＳサンプル緩衝液の添加によって停止し、そして燐酸化されたＭＢＰを、１０％ポリアクリルアミドゲル上の電気泳動によって分割した。ＭＢＰ中に取り込まれた放射能を、オートラジオグラフィーおよび取り出したバンドのシンチレーション計数の両方によって測定した。
【０１５１】
実施例２５
インビトロＭＥＫアッセイ
直接的なＭＥＫ活性の評価においては、１０μgのＧＳＴ−ＭＥＫ1を、７１位でリシンのアラニンへの突然変異を有するｐ４４ＭＡＰキナーゼを含有するグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ融合蛋白質（ＧＳＴ−ＭＡＰＫ−ＫＡ）５μgと一緒にインキュベートした。この突然変異は、ＭＡＰＫのキナーゼ活性を除去し、添加したＭＥＫに寄与するキナーゼ活性のみが残る。５０ｍMのトリス（ｐＨ７.５）、１０μMのＭｇＣｌ2、２μMのＥＧＴＡおよび１０μMの［γ−32Ｐ］ＡＴＰを含有する５０μLの最終容量中において、３０℃で１５分インキュベートした。反応は、Laemmli ＳＤＳサンプル緩衝液の添加によって停止した。燐酸化されたＧＳＴ−ＭＡＰＫ−ＫＡを、１０％ポリアクリルアミドゲル上の電気泳動によって分割する。ＧＳＴ−ＭＡＰＫ−ＫＡに取り込まれた放射能を、オートラジオグラフィーおよび取り出したバンドの次のシンチレーション計数によって測定した。さらに、２１８および２２２位におけるグルタメートへのセリンの突然変異を含有する人工的に活性化されたＭＥＫ（ＧＳＴ−ＭＥＫ−２Ｅ）を用いた。これらの２個の部位が燐酸化されたときに、ＭＥＫ活性が増加される。これらの部位の燐酸化は、グルタメートへのセリン残基の突然変異によって擬態される。このアッセイにおいては、ＧＳＴ−ＭＥＫ−２Ｅ ５μgを、上述した反応緩衝液中において、ＧＳＴ−ＭＡＰＫ−ＫＡ ５μgと一緒に、３０℃で１５分インキュベートした。反応は、上述したように終結させ、そして分析した。
【０１５２】
実施例２６
全細胞ＭＡＰキナーゼアッセイ
化合物が全細胞におけるＭＡＰキナーゼの活性化を遮断するかどうかを測定するために、次のプロトコールを使用した。細胞をマルチ−ウエルプレート中で平面培養し、密集増殖させた。細胞を、一夜血清奪取（serum-deprived）した。細胞を、所望の濃度の化合物またはビヒクル（ＤＭＳ０）に３０分さらし、次いで増殖因子、例えばＰＤＧＦ（１００ng／ml）を加えた。増殖因子で５分間処理した後に、細胞をＰＢＳで洗浄し、７０mMのＮａＣｌ、１０mMのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７.４）、５０mMのグリセロールホスフェートおよび１％のトライトンＸ−１００からなる緩衝液中に溶解した。溶解液を、１０分間の１３,０００×ｇにおける遠心分離によって清澄化した。得られた上澄液５ミクログラムを、５０mMのトリス（ｐＨ７.４）、１０mMのＭｇＣｌ2、２mMのＥＧＴＡおよび３０μMの［γ−32Ｐ］ＡＴＰを含有する２５μｌの最終容量中において、微小管結合蛋白質−２（Ｍａｐ２）１０μｇと一緒に３０℃で１５分インキュベートした。反応は、Laemmliサンプル緩衝液の添加によって終結した。燐酸化されたＭａｐ２を、７.５％アクリルアミドゲル上で分割し、そして取り込まれた放射能を取り出されたバンドのシンチレーション計数によって測定した。得られた上澄みから５〜１５マイクログラムの蛋白質をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびホスホリル化されたＭＡＰキナーゼレベルについてはウエスタンブロッティングにかけた。
【０１５３】
実施例２７
単層増殖
細胞を１０〜２０,０００細胞／mlにおいて、マルチ−ウエルプレート中に入れた。接種の４８時間後に、試験化合物を細胞増殖培地に加えインキュベーションをさらに２日間つづけた。それから、細胞をトリプシンとのインキュベーションによってウエルから除去しコールターカウンターにより計数した。
【０１５４】
実施例２８
軟質寒天中における増殖
０.３％の寒天を含有する増殖培地を使用して、細胞を５〜１０,０００細胞／皿において３５mmの皿に接種した。冷却して寒天を固化した後、細胞を３７℃のインキュベーターに移した。７〜１０日の増殖後に、可視コロニーを、解剖顕微鏡を用いて手動で計数した。
【０１５５】
実施例２９
マウスにおけるコラーゲン誘発関節炎
マウスにおけるII型コラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）は、リウマチ様関節炎と共通の多くの病理学的、免疫学的および遺伝学的特徴を有する関節炎の実験モデルである。この疾患は、フロイント完全アジュバントで皮内的に送達される関節軟骨の主な成分であるＩＩ型コラーゲン１００μgによる０ＢＡ／１マウスの免疫化によって誘発される。この疾患の感受性は、クラスII ＭＨＣ遺伝子座によって調節され、これはＨＬＡ−ＤＲ４とリウマチ様関節炎との関係に類似している。
【０１５６】
進行性および炎症性の関節炎が免疫化された大多数のマウスにおいて出現し、これは１００％までの足幅増加を特徴としている。試験化合物は、１日につき体重１kg当たり例えば２０、６０、１００および２００mgの範囲の量でマウスに投与した。試験期間は、例えば４０、６０または８０日といったような数週間〜数ケ月の範囲にすることができる。紅斑および浮腫（段階１）から関節の歪曲（段階２）、関節の強直（段階３）への疾患の進行を評価するために、臨床的スコアリング指数を使用した。疾患は変化しやすく、動物の１本またはすベての足に影響を及ぼし、それぞれのマウスについては全部で１２個のスコアをとることが可能である。関節炎性の関節の組織変化は、滑膜炎、パンヌス形成および軟骨および骨の侵食を示す。ＣＩＡに感受性であるすべてのマウス種は、II型コラーゲンに対する高い抗体応答動物であり、ＣＩＩに対する著しい細胞応答がある。
【０１５７】
実施例３０
ＳＣＷ−誘発単関節の関節炎
若干の変更を伴ってSchwab等［Infection and immunity 59：4436-4442 (1991)］に記載のようにして関節炎を誘発した。０日目に、右の脛骨（tibiotalar)関節に関節内的に注射することによって、超音波処理したＳＣＷ ６μg［Dulbecco's PBS (DPBS)１０μl中の］をラットに与えた。２１日目に、静脈内的に投与されたＳＣＷ １００μg（２５０μl）によってＤＴＨを開始した。経口的な化合物の研究においては、化合物をビヒクル（０.５％のヒドロキシプロピル−メチルセルロース／０.２％のTween ８０）に懸濁し、超音波処理し、ＳＣＷによる再活性化の１時間前に始めて、１日当たり２回投与（１０ml／kg容量）した。化合物は、１０〜５００mg／kg（体重）／日の間の量、例えば２０、３０、６０、１００、２００および３００mg／kg／日で投与された。浮腫測定は、２１日目の再活性化前の感作した後足の基準容量を測定し、これらをその後の時点、例えば２２、２３、２４および２５日目の容量と比較することによって行った。足の容量は、水銀体積変動記録法によって測定した。
【０１５８】
実施例３１
マウス耳−心臓移植モデル
Fey T.A.等［J. Pharm. and Toxic. Meth. 39:9-17 (1998)］は、マウスおよびラットの耳の耳介に、新生児の分断された心臓の移植片を移植する方法を記載している。化合物を、無水エタノール、水中０.２％のヒドロキシプロピルメチルセルロース、プロピレングリコール、クレモフォアおよびデキストロース、または他の溶剤または懸濁ビヒクルの組み合わせを含有する溶液に溶解した。マウスには、移植の日（０日目）から１３日目までまたは移植片が拒絶されるまで、１日当たり１、２または３回経口的にまたは腹腔内的に投与した。ラットには、０日目から１３日目まで１日当たり１、２または３回投与した。それぞれの動物を麻酔し、受容動物の耳のつけ根において切開を行い、背側の表皮および真皮のみを切った。この切開を頭に平行に軟骨の方へ広げ、そしてラットに対する穴あけ器具またはマウスに対する挿入器具を収容するために十分に広げた。生後６０時間未満の新生児のマウスまたはラットの子を麻酔し、頸部脱臼した。心臓を胸部から除去し、生理食塩水ですすぎ、小刀で縦方向に２分し、そして滅菌した生理食塩水ですすいだ。供与動物の心臓のフラグメントを、挿入器具により予め形成したトンネルに入れ、そして空気または残留液体を、軽い加圧によりトンネルから圧出した。縫い合わせ、接着結合、包帯または抗生物質による処理は不要である。
【０１５９】
麻酔することなく、移植片を立体鏡の解剖顕微鏡によって１０〜２０倍の倍率で検査した。移植片が目に見えて拍動していない受容動物は麻酔し、そして耳介または直接移植片におかれたGrass Ｅ２白金皮下ピン微小電極およびタコグラフを使用して電気活性の存在について評価することができる。移植片は、１０日、２０日、３０日またはそれ以上の日数の間１日当たり１〜４回検査することができる。移植拒絶の症状を軽減する試験化合物の能力は、シクロスポリン、タクロリムスまたは経口的に投与されるレフルオノミドのような比較対照化合物と比較することができる。
【０１６０】
実施例３２
ネズミのオボアルブミン誘発好酸球増加
雌のＣ５７ＢＬ／６マウスを、Jackson Laboratory（Bar Harbor, ME）から得た。すべての動物に、食物および水を自由に与えた。マウスを０日目に、みょうばんに吸着させたＯＶＡ(グレードＶ、Sigma Chemical Company, St. Louis, MO）（生理食塩水２００μl中のＯＶＡ １０μg＋みょうばん９mg）またはビヒクル対照（生理食塩水２００μl中のみょうばん９mg）１回の腹腔内注射によって感作させた。１４日目に、噴霧器（小粒子発生機、モデルＳＰＡＧ−２；ICN Pharmaceuticals, Costa Mesa, CA）により製造された生理食塩水中の１.５（重量／容量）％のＯＶＡからなるエアゾルを１２分吸入させてマウスを攻撃した。８匹のマウスの群に経口ビヒクル（０.５％のヒドロキシプロピルメチルセルロース／０.２５％のTween ８０）または経口ビヒクル中の１０、３０または１００mg／kgの試験化合物(１匹のマウス当たり２００μl、経口的)を投与した。投与は、７日目または１３日に始めて１６日目まで延長して１日当たり１回投与した。
【０１６１】
肺の好酸球増加を測定するために、はじめのＯＶＡエアゾル攻撃（１７日目）の３日後に、マウスを麻酔薬（ケタミン／アセプロマジン／キシラジン）の腹腔内注射によって麻酔し、気管を露出し、カニューレを挿入した。肺および上部気道を冷ＰＢＳ ０.５mlで２回洗浄した。気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液体の一部（２００μl）を、コールターカウンターモデルＺＢ１（Coulter Electronics, Hialeah, FL）を使用して計数した。それから、残留するＢＡＬ液体を、３００×ｇで５分間遠心分離し、細胞を０.５％のウシ胎仔血清（HyClone）および１０mM HEPES（Gibco BRL）を含有するＨＢＳＳ（Gibco BRL）１ml中で再懸濁した。この細胞懸濁液を、サイトスピン（Shandon Southern Instruments, Sewickley, PA）中で遠心分離し、Diff Quick（American Scientific Products, McGraw Park, IL）によって染色してＢＡＬ白血球を好中球、好酸球、単球またはリンパ球サブセットに分けた。ＢＡＬ液体中の好酸球の数は、好酸球の％に全細胞数を乗ずることによって測定した。
【０１６２】
実施例３３
Ｃａｃｏ−２細胞の研究
細胞輸送の研究は、接種後２２〜２８日の間のSnapwellで増殖したＣａｃｏ−２細胞で実施した。典型的には、先端側では、５mMのＫＣｌ、１３５mMのＮａＣｌおよび１.８mMのＣａＣｌ2を含む１０mMのＭＥＳ緩衝液（ｐＨ ６.５）を用い、そして基底側では５mMのＫＣｌ、１３２.５mMのＮａＣｌおよび１.８mMのＣａＣｌ2ならびに５mMのＤ−グルコースを含む１０mMのＭＯＰＳ（ｐＨ ７.４）を用いた。単層を洗浄した後に、適当な緩衝液をそれぞれのチャンバーの中へピペットで入れ、細胞を３７℃で少なくとも１５分間予備−平衡化した。実験日に増殖培地を吸引し、細胞単層を３７℃で少なくとも１５分間適当な緩衝液で予備−平衡化した。その後で、単層の完全性を確かめるためＴＥＥＲ測定を実施した。上皮間流量測定は、並んだ拡散チャンバ系（Precision Instrument Design, Tahoe City, CA）に細胞単層を取り付けて実施した。温度を循環水ジャケットを用いて３７℃に維持した。ガス−リフト循環を用いて溶液を９５％酸素−５％二酸化炭素と混合した。ＰＤ化合物、マンニトール［14Ｃ］（漏出標識）およびメトプロロール［3Ｈ］（参照化合物）を有するドナー溶液を先端チャンバーに加えた。ドナーおよびレシーバーの試料を、３時間までの選ばれた時間的間隔で集めた。放射性標識化されたマンニトールおよびメトプロロールをシンチレーション測定法（TopCount, Packard Instruments, Downers Grove, IL）を使用して分析した。ＰＤ化合物は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ方法を使用して分析した。見かけの透過率は、以下の式を用いて計算した：
Ｐapp＝（Ｖ* ｄＣ）／（Ａ.Ｃ0．ｄｔ）
ここで、Ｖ＝レシーバ溶液の容積（ml）、Ａ＝表面積（cm2）、Ｃ0＝初期ドナー濃度（mM）そしてｄＣ／ｄｔ＝時間に対するレシーバチャンバーの薬剤濃度の変化である。
【０１６３】
実施例３４
ヒトおよびラットの肝ミクロソームにおける代謝安定性
１.０mMのＮＡＤＰＨの存在下、３７℃で５０mMのＫＨＰＯ4緩衝液中の、それぞれヒトおよびラット肝ミクロソーム（０.５mg／mL蛋白質）を用いて、化合物をインキューベートした（５μM、ＤＭＳＯに溶解）。０、１０、２０および４０分で、１００μLアリコートを除去し、３００ｐLのアセトニトリルに加えた。標準曲線は、７.５μM、３.７５μM、２.５μM、１.２５μMの濃度でそれぞれの化合物を用いて同様の操作で行った。試料は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって元の濃度について分析した。インビトロ代謝半減期測定は、WinNonlinを用いて濃度対時間プロットから測定した。これらのインビトロデータは、酸性および加水分解の代謝速度を表している。
【０１６４】
Ｆ．他の態様
上記の開示および実施例および特許請求の範囲から、本発明の特徴は容易に理解される。また、本発明の範囲には、当業者の知識内の種々の変形が包含される。実施例には、開示した化合物の保護基の添加または除去によって変形された化合物、エステル、医薬的塩、水和物、酸、またはアミドが包含される。引用された文献は、全体において参照によって本明細書中に組み込まれる。