(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
本質的に塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)錯体の製造方法であって、
a) i) p-ボロノフェニルアラニン、
ii) 水、
iii) 炭水化物およびポリオールからなる群より選択される化合物、
iv) 塩基、および
v) イオン交換媒体
を準備する工程、
b) 上記p-ボロノフェニルアラニンと上記化合物とが実質的に塩基性溶液に溶解するように、上記p-ボロノフェニルアラニン、上記水、上記化合物、および上記塩基を混合して該塩基性溶液を作製する工程、
c) 上記塩基性溶液に上記イオン交換媒体を加え、それにより上記塩基性溶液のpHを7.3から7.5の範囲に調整して、生理学的pHで混合物を作製する工程、ならびに
d) 上記混合物から上記イオン交換媒体を除去して、本質的に塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)錯体溶液を作製する工程
を含んでなる、前記方法。
【請求項２】
請求項１に記載の製造方法であって、
e) 上記の本質的に塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)錯体溶液を凍結乾燥して、本質的に塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)錯体凍結乾燥物を製造する工程
をさらに含んでなる、前記方法。
【請求項３】
前記除去工程が濾過を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記除去工程がデカンテーションを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記イオン交換媒体がイオン交換樹脂を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記イオン交換樹脂がDowex (登録商標) 50WX4-50イオン交換樹脂である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記塩基性溶液が1当量の前記p-ボロノフェニルアラニンと約1.1当量の前記化合物とを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記塩基性溶液が1当量の前記p-ボロノフェニルアラニンと8当量までの過剰な前記化合物とを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記塩基性溶液のpHが8〜10の間である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法であって、前記化合物が、単糖類、二糖類、フルクトース、ソルボース、リボース、ガラクトース、グルコース、マンノース、2-デオキシガラクトース、2-デオキシグルコース、マルツロース、ラクツロース、パラチノース、ロイクロース、ツラノース、ラクトース、マルトース、ソルビトール、マンニトール、ズルシトール、キシリトール、アドニトールおよびスレイトールからなる群より選択される、前記方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の方法であって、前記塩基が、NaOH、KOH、Ca(OH)2、およびMg(OH)2からなる群より選択される、前記方法。
【請求項１２】
請求項１に記載の方法であって、前記p-ボロノフェニルアラニンが、(D,L)-p-ボロノフェニルアラニンおよびL-p-ボロノフェニルアラニンからなる群より選択される、前記方法。
【請求項１３】
以下の工程：
a) i) L-p-ボロノフェニルアラニン、
ii) 水、
iii) 炭水化物からなる群より選択される化合物、
iv) 塩基、および 
v) イオン交換媒体
を準備する工程、
b) 上記L-p-ボロノフェニルアラニンと上記化合物とが実質的に塩基性溶液に溶解するように、上記L-p-ボロノフェニルアラニン、上記水、上記化合物、および上記塩基を混合して該塩基性溶液を作製する工程、
c) 上記塩基性溶液に上記イオン交換媒体を加え、それにより上記塩基性溶液のpHを7.3から7.5の範囲に調整して、生理学的pHで混合物を作製する工程、
d) 上記混合物から上記イオン交換媒体を除去して、本質的に塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物錯体溶液を作製する工程、
e) 上記の本質的に塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物錯体溶液を凍結乾燥して、本質的に塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物錯体凍結乾燥物を製造する工程、および
f) 上記の本質的に塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物錯体凍結乾燥物を水、等張生理食塩水および希釈生理食塩水からなる群より選択される溶媒で実質的に可溶化して、等浸透性溶液を得る工程
を含んでなる、本質的に塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物錯体を含む等浸透性溶液を製造する方法。
【請求項１４】
請求項１３に記載の方法であって、前記の塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物錯体凍結乾燥物が、単糖類、二糖類、フルクトース、ソルボース、リボース、ガラクトース、グルコース、マンノース、2-デオキシガラクトース、2-デオキシグルコース、マルツロース、ラクツロース、パラチノース、ロイクロース、ツラノース、ラクトースおよびマルトースからなる群より選択される炭水化物を含んでなる、前記方法。
【請求項１５】
前記等浸透性溶液が静脈内で使用するのに適している、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
以下の工程：
a) i) L-p-ボロノフェニルアラニン、
ii) 水、
iii) ポリオールからなる群より選択される化合物、
iv) 塩基、および 
v) イオン交換媒体
を準備する工程、
b) 上記L-p-ボロノフェニルアラニンと上記化合物とが実質的に塩基性溶液に溶解するように、上記L-p-ボロノフェニルアラニン、上記水、上記化合物、および上記塩基を混合して該塩基性溶液を作製する工程、
c) 上記塩基性溶液に上記イオン交換媒体を加え、それにより上記塩基性溶液のpHを7.3から7.5の範囲に調整して、生理学的pHで混合物を作製する工程、
d) 上記混合物から上記イオン交換媒体を除去して、本質的に塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-ポリオール錯体溶液を作製する工程、
e) 上記の本質的に塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-ポリオール錯体溶液を凍結乾燥して、本質的に塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-ポリオール錯体凍結乾燥物を製造する工程、および
f) 前記の本質的に塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-ポリオール錯体凍結乾燥物を水、等張生理食塩水および希釈生理食塩水からなる群より選択される溶媒で実質的に可溶化して、等浸透性溶液を得る工程
を含んでなる、本質的に塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-ポリオール錯体を含む等浸透性溶液を製造する方法。
【請求項１７】
前記等浸透性溶液が静脈内で使用するのに適している、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１６に記載の方法であって、前記の凍結乾燥した本質的に塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-ポリオール錯体が、ソルビトール、マンニトール、ズルシトール、キシリトール、アドニトールおよびスレイトールからなる群より選択されるポリオールを含んでなる、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、塩を含まない、または本質的に塩を含まない、溶解度の向上したp-ボロノフェニルアラニン錯体の製法に関する。
【０００２】
発明の背景
中性子捕獲療法(NCT)は、1936年にLocher (Locher, Am.J.Roenten.Rad.Ther. 36: 1-13 [1936])およびSweet (Javidら, J.Clin.Invest. 31: 603 [1952]; Sweetら, N.Engl.J.Med. 245: 875 [1951])によって初めて仮定されたものであるが、これは化学物質および熱中性子または等温中性子が腫瘍を対象とし、それらがよってたかってその細胞に致死量の放射線を放出する、腫瘍治療のためのバイナリー系である。通常、一般に用いられる化学物質は少なくとも1個の10B原子を含むが、その他の化合物(すなわち157Gd)も検討されている(Shiら, Med.Phys. 19: 733 [1992]; MillerおよびHorton, Advances in Neutron Capture Therapy.中、第II巻, Larssonら編, Elsevier Science B.V., 545-546頁 [1997])。中性子供給源は典型的には原子炉、核加速装置または原子力発電機によって作り出すが、その他の供給源(すなわち252Cf) も開発された(例えば、Maruyamaら、Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys. 11: 1475 [1985]; Shpikalovら、Nucl.Sci.Appl. 4: 419 [1991]; Lorvidhayaら、Advances in Neutron Capture Therapy中、第II巻, 540頁, Larssonら編、Elsevier Science B.V. [1997]; Millerら、Advances in Neutron Capture Therapy中、第II巻, 545-546頁, Larssonら編、Elsevier Science B.V. [1997]; Barthら、Cancer Res. 50: 1061-1070 [1990]; Allenら、Advances in Neutron Capture Therapy中、第I巻, 271-274頁, Larssonら編、Elsevier Science B.V. [1997]を参照されたい)。
【０００３】
ホウ素中性子捕捉療法(BNCT)は、悪性神経膠腫、悪性メラノーマ、およびその他の形態の癌の治療にますます重要になってきている放射線化学療法の一形態である。BNCTは、ホウ素化合物(10B)を投与し、その後腫瘍細胞または器官に中性子線照射を行うことを含む。ホウ素は中性子(nth)を捕捉し、その結果、宿主細胞にとって極めて有害で通常は該宿主細胞を死に至らせるイオン化ヘリウムとリチウムイオンを放出する(Kobayashiら、Radiation Res. 91: 77-94 [1982]; Garthら、Radiation Res. 111: 14-25 [1987])。BNCTを成功させるには、多数の10B原子を標的細胞上に、または好ましくは標的細胞内に局在させなければならず、十分な数の熱中性子が到達し、10B原子に吸着されて、致死反応を維持しなければならない。
【０００４】
腫瘍に対して標的化されたホウ素の送達はBNCTを成功させるための重要な必要条件である。従って、腫瘍に局在化するホウ素化合物の開発は、当分野の研究者に注目され続けている(例えば、Sarisら、Cancer Res. 52: 4672-4677 [1992]; MehtaおよびLu, Pharm Res. 13: 344-351 [1996]; Chadhaら、Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys. 40: 829-834 [1998]; Fairchildら、Int.J.Radiation Oncology Biol.Phys. 11: 831-840 [1985]を参照されたい)。
【０００５】
p-ボロノフェニルアラニン(p-BPA)は当初、悪性メラノーマのBNCTのためのホウ素送達用薬剤として提案された。何故なら、このアミノ酸がメラニンのアミノ酸前駆体であるフェニルアラニンを模倣することでメラノーマ細胞に選択的に蓄積するものと仮定されていたからである。p-ボロノフェニルアラニンはメラノーマ細胞に選択的に取り込まれることが示されている(例えば、Packerら, Invest Ophthabnol.Vis.Sci. 33: 395-403 [1992]; Coderreら, Cancer Res. 47: 6377-6383 [1987]を参照されたい)。p-BPAの静脈内注射はp-BPAを腫瘍細胞に送達する１つの考えられる経路であるが、p-BPAは生理学的pH(7.4)での水に対する溶解度が低いので、広くは用いられていない(例えば、LaHaanに付与された米国特許第5,492,900号; LaHaanら、Advances in Neutron Therapy中、513-517頁, Solowayら編、Plenum Press, New York [1993]を参照されたい)。p-ボロノフェニルアラニンの水に対する溶解度は1.6g/Lであり、これは医薬に使用するには不十分である(Moriら, Pig.Cell Res. 2: 273-277 [1989])。
【０００６】
p-BPAの溶解度を高めるために、p-BPAの塩酸塩が用いられてきた(例えば、Ichihashiら、J.Invest.Dermatol. 78: 215 [1982]; Yoshinoら、Proc. 2nd International Sym.on Neutron Capture Theraphy, 291頁 [1986]を参照されたい)。しかしながら、p-BPAの塩酸塩によって付与される酸性度(例えば、0.1M溶液は約1.5というpH値を有することが報告されている)は、この酸性度を有するp-BPA溶液を注射した患者に痛みを引き起こす(Moriら、上掲; Yoshinoら、Strantenthen Onkol. 165: 127-129 [1989])。従って、生理学的pHでp-BPAの溶解度を高める方法を見出すことが望まれている。
【０００７】
p-BPAの溶解度を高める方法の１つは、有機錯体を使用することである。ホウ酸、ホウ素酸塩、および芳香族ボロン酸と種々のポリオールとの錯体の形成がかねてから知られてきた(例えば、Kuivilaら、J.Org.Chem. 19: 780 [1954]; Lorandら, J.Org.Chem. 24: 769 [1959]; Aronoffら、Carbohydrate Res. 40: 299-309 [1975]; van Duinら、Tetrahedron 40: 2901-2911 [1984]; van Duinら、Tetrahedron 41: 3411-3421 [1985]; Shikaiら、J.Chem.Soc., Chem.Commun., 1039-1041 [1991]; Verchereら、Polyhedron 6: 1415-1420 [1987]; Kondoら、Tetrahedron 48: 8239-8252 [1992]; Shiomiら、J.Chem.Soc.Perkin Trans., 2111-2117頁 [1993]; Tsukagoshiら、J.Org.Chem. 56: 4089-4091 [1991]; Jamesら、Angew.Chem.Int.Ed.Engl. 35: 1910-1922 [1996]; Woodら、Carbohydrate Res. 36: 247-256 [1974]; Jamesら、J.Chem.Soc.Chem.Commun., 477-478頁 [1994]; Kinoshitaら、Progress in Neutron Capture Therapy for Cancer中、243-246頁, Allenら編、Plenum Press, New York [1992]を参照されたい)。単糖類およびポリオールが溶解度に及ぼす影響により、p-BPAのより効果的な静脈内使用が可能となる(例えば、Moriら、上掲; 米国特許第5,492,900号、上掲; Hondaら、Progress in Neutron Capture Therapy for Cancer中、Allenら編, Plenum Press, 421頁 [1992]; Mishimaら、Progress in Neutron Capture Therapy for Cancer中、Allenら編、Plenum Press, 577頁 [1992]; Matalkaら、Cancer Res. 53: 3308 [1993]を参照されたい)。例えば、研究により、マウス・メラノーマモデルにおいてp-BPA-フルクトース錯体の全身投与が10Bの取り込みを増大させることが示されている(Coderreら、Int.J.Radiation Oncology Biol.Phys. 30: 643-652 [1994])。
【０００８】
さらに、p-BPAは異なるpH値では異なる形態で存在し、p-BPAと単糖類との錯体形成はpHに依存するプロセスである。最近の研究では、フルクトースを用いて中性pHでp-BPAを可溶化してp-BPA-フルクトース錯体を得る方法が報告されている(Moriら、上掲; 米国特許第5,492,900号、上掲、を参照されたい)。これらの方法は、等モル量のp-BPAとフルクトースとを水中で混合し、pHを約10まで上昇させてすべての固体を溶解し、次に濃い酸(すなわち塩酸)を用いてpHを7.4に調整することを含む。しかしながら、この方法ではほぼ1当量のNaCl(pHがどこまで上昇するかによって異なる)が生じるので、血液との等浸透点を大きく超えてしまい、静脈投与した際に見られる毒性の一因となり得る(LaHaanら、Advances in Neutron Capture Therapy中、Solowayら編、Plenum Press, 513頁 [1933])。さらに、この溶液は調製後2日以内に用いなければならず、治療エリアのすぐ傍にある無菌の研究環境でHClとNaOHの濃縮溶液を取り扱う熟練した技術者を要する。
【０００９】
従って、NaCl塩を含まないp-BPA錯体を製造する方法を見出すことが望まれる。さらに、p-BPAとフルクトースとの錯体の化学的性質を理解することにより、他の新たな錯体が発見できる可能性もある。また、長期間保存でき、かつ、濃い酸および塩基を取り扱う必要のない新たなp-BPA錯体を見出すことが望まれる。
【００１０】
発明の概要
本発明は、塩を含まないおよび本質的に塩を含まないp-ボロノフェニルアラニン-炭水化物錯体およびp-ボロノフェニルアラニン-ポリオール錯体、ならびにかかる化合物を溶液および固体の双方として製造する方法に関する。本発明はまた、p-ボロノフェニルアラニン-炭水化物錯体およびp-ボロノフェニルアラニン-ポリオール錯体の凍結乾燥物を実質的に可溶化する方法に関する。
【００１１】
好ましい実施形態では、本発明はL-p-ボロノフェニルアラニン-炭水化物または-ポリオール錯体に関する。その他の好ましい実施形態では、本発明は、ラセミ体(D,L)-p-ボロノフェニルアラニン-炭水化物または-ポリオール錯体に関する。
【００１２】
本発明は、塩を含まないまたは本質的に塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物錯体の製造方法であって、以下の工程：
a)  i)p-ボロノフェニルアラニン、ii)水、iii)炭水化物、iv)塩基およびv)イオン交換媒体を準備し；
b)p-ボロノフェニルアラニン、水、炭水化物および塩基を混合することにより、p-ボロノフェニルアラニンと炭水化物が可溶化するように塩基性溶液を作製し；
c)p-ボロノフェニルアラニンと炭水化物を含んでなる塩基性溶液にイオン交換媒体を加え、それによりpHを約7.3〜7.5の範囲に調整して生理学的pHで混合物を作製し；さらに
d)該混合物からイオン交換媒体を除去して塩を含まないまたは本質的に塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物錯体溶液を作製すること、
を含む上記方法に関する。
【００１３】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、f塩を含まないまたは)本質的に塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物錯体溶液を凍結乾燥して、塩を含まないまたは本質的に塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物錯体の凍結乾燥物を製造する工程をさらに含んでなる。
【００１４】
１つの実施形態では、イオン交換媒体は濾過によって除去される。他の実施形態では、イオン交換媒体はデカンテーションによって除去される。
【００１５】
好ましい実施形態では、p-ボロノフェニルアラニンは、ラセミ体(D,L)-p-ボロノフェニルアラニンおよびL-p-ボロノフェニルアラニンからなる群より選択されるものである。
【００１６】
１つの実施形態では、イオン交換媒体は濾過によって除去される。他の実施形態では、イオン交換媒体はデカンテーションによって除去される。好ましい実施形態では、イオン交換媒体はイオン交換樹脂である。特定の実施形態では、イオン交換樹脂はDowex 50WX4-50イオン交換樹脂である。
【００１７】
いくつかの実施形態では、p-ボロノフェニルアラニンと炭水化物のモル比は約1:1.1である。別の実施形態では、p-ボロノフェニルアラニンと炭水化物のモル比は1当量に対して8当量までの過剰な炭水化物である。
【００１８】
好ましい実施形態では、p-ボロノフェニルアラニン、水、炭水化物およ塩基を混合して、pHが約8〜10の間の塩基性溶液を調製する。好ましい実施形態では生理学上許容される対イオンを伴う塩基が用いられ、これには限定されるものではないが、NaOH、KOH、Ca(OH)2、およびMg(OH)2が含まれる。
【００１９】
p-ボロノフェニルアラニンと錯体を形成する炭水化物としては、限定されるものではないが、単糖類および二糖類が挙げられる。いくつかの実施形態では、単糖類は、フルクトース、ソルボース、リボース、ガラクトース、グルコース、マンノース、2-デオキシガラクトースおよび2-デオキシグルコースからなる群より選択されるものである。別の実施形態では、二糖類は、マルツロース（maltulose）、ラクツロース、パラチノース、ロイクロース、ツラノース、ラクトースおよびマルトースからなる群より選択されるものである。
【００２０】
本発明は、本質的に塩を含まないまたは塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)-ポリオール錯体の製造方法であって、以下の工程：
a)  i)p-ボロノフェニルアラニン、ii)水、iii)ポリオール、iv)塩基およびv)イオン交換媒体を準備し；
b)p-ボロノフェニルアラニン、水、ポリオールおよび塩基を混合することにより、p-ボロノフェニルアラニンとポリオールが可溶化するように塩基性溶液を作製し；
c)p-ボロノフェニルアラニンとポリオールを含んでなる塩基性溶液にイオン交換媒体を加え、それによりpHを約7.3〜7.5の範囲に調整して生理学的pHで混合物を作製し；さらに
d)混合物からイオン交換媒体を除去して本質的に塩を含まないまたは塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)-ポリオール錯体溶液を作製すること、
を含む上記方法に関する。
【００２１】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、f)本質的に塩を含まないまたは塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)-ポリオール錯体溶液を凍結乾燥して、本質的に塩を含まないまたは塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)-ポリオール錯体の凍結乾燥物を製造する工程をさらに含んでなる。
【００２２】
１つの実施形態では、イオン交換媒体は濾過によって除去される。もう１つの実施形態では、イオン交換媒体はデカンテーションによって除去される。
【００２３】
好ましい実施形態では、p-ボロノフェニルアラニンは、ラセミ体(D,L)-p-ボロノフェニルアラニンおよびL-p-ボロノフェニルアラニンからなる群より選択されるものである。
【００２４】
１つの実施形態では、イオン交換媒体は濾過によって除去される。他の実施形態では、イオン交換媒体はデカンテーションによって除去される。好ましい実施形態では、イオン交換媒体はイオン交換樹脂である。特定の実施形態では、イオン交換樹脂はDowex 50WX4-50イオン交換樹脂である。
【００２５】
いくつかの実施形態では、p-ボロノフェニルアラニンとポリオールのモル比は約1:1.1である。別の実施形態では、p-ボロノフェニルアラニンとポリオールのモル比は1当量に対して8当量までの過剰なポリオールである。
【００２６】
好ましい実施形態では、p-ボロノフェニルアラニン、水、ポリオールおよび塩基を混合して、pHが約8〜10の間の塩基性溶液を調製する。好ましい実施形態では生理学上許容される対イオンを伴う塩基が用いられ、これには限定されるものではないが、NaOH、KOH、Ca(OH)2、およびMg(OH)2が含まれる。
【００２７】
p-ボロノフェニルアラニンと錯体を形成するポリオールとしては、限定されるものではないが、ソルビトール、マンニトール、ズルシトール、キシリトール、アドニトールおよびトレイトールが挙げられる。
【００２８】
本発明は本質的に塩を含まない、または塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物錯体を含んでなる組成物に関する。p-ボロノフェニルアラニンと錯体を形成する炭水化物としては、限定されるものではないが、単糖類、二糖類、フルクトース、ソルボース、リボース、ガラクトース、グルコース、マンノース、2-デオキシガラクトース、2-デオキシグルコース、マルツロース、ラクツロース、パラチノース、ロイクロース、ツラノース、ラクトースおよびマルトースが挙げられる。好ましい実施形態では、塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物錯体は溶液中である。
【００２９】
その他の好ましい実施形態では、本質的に塩を含まない、または塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物錯体は凍結乾燥されている。塩を含まないp-ボロノフェニルアラニン-炭水化物錯体凍結乾燥物としては、限定されるものではないが、L-p-ボロノフェニルアラニン-D-フルクトース錯体、L-p-ボロノフェニルアラニン-D-ソルボース錯体、L-p-ボロノフェニルアラニン-D-マルツロース錯体、L-p-ボロノフェニルアラニン-D-ラクツロース錯体、およびL-p-ボロノフェニルアラニン-D-パラチノース錯体が挙げられる。
【００３０】
本発明はまた、本質的に塩を含まない、または塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)-ポリオール錯体を含んでなる組成物に関する。p-ボロノフェニルアラニンと錯体を形成するポリオールとしては、限定されるものではないが、ソルビトール、マンニトール、ズルシトール、キシリトール、アドニトールおよびトレイトールが挙げられる。好ましい実施形態では、本質的に塩を含まない、または塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)-ポリオール錯体は溶液中である。その他の好ましい実施形態では、本質的に塩を含まない、または塩を含まない(p-ボロノフェニルアラニン)-ポリオール錯体は凍結乾燥されている。本質的に塩を含まない、または塩を含まないp-ボロノフェニルアラニン-ポリオール錯体凍結乾燥物としては、限定されるものではないが、L-p-ボロノフェニルアラニン-D-ソルビトール錯体、L-p-ボロノフェニルアラニン-D-マンニトール錯体、L-p-ボロノフェニルアラニン-ズルシトール錯体、およびL-p-ボロノフェニルアラニン-キシリトール錯体が挙げられる。
【００３１】
さらに本発明は、本質的に塩を含まない、または塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物またはポリオール錯体凍結乾燥物を実質的に可溶化する方法であって、a)  i) 塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物またはポリオール錯体、およびii)水、等張塩水、および希釈塩水からなる群より選択される溶媒をいずれかの順序で準備し；b)塩を含まない(L-p-ボロノフェニルアラニン)-炭水化物またはポリオール錯体凍結乾燥物を溶媒で実質的に可溶化して等浸透性溶液を得る工程を含んでなる方法に関する。
【００３２】
発明の説明
本発明はボロノフェニルアラニンの溶解度を高める組成および方法に関する。特に本発明は、p-ボロノフェニルアラニン(p-BPA)-炭水化物またはポリオール錯体を本質的に塩を含まない、もしくは塩を含まない単離固体として、または本質的に塩を含まない、もしくは塩を含まない溶液中の錯体として製造する組成および方法に関する。好ましい実施形態では、本発明は、L-p-ボロノフェニルアラニン-炭水化物またはポリオール錯体に関する。その他の好ましい実施形態では、本発明は、ラセミ(D,L)- p-ボロノフェニルアラニン-炭水化物またはポリオール錯体に関する。
【００３３】
好ましい実施形態では、p-ボロノフェニルアラニン(p-BPA)-炭水化物またはポリオール錯体は、溶媒に実質的に溶解し、1％未満の固体が懸濁しているだけである。
【００３４】
今回請求した発明は、p-BPA単糖類錯体を用いる療法のコストと危険性を低減するものと考えられる。本発明は単糖類または関連の炭水化物およびポリオールを用いることで、p-BPA溶液を調製する際に強酸および強塩基を取り扱うことに伴う危険性をなくし、また、溶液が適切に中和されているかどうかを考慮せずにすむ。さらに本発明は、塩を含まないか、または本質的に塩を含まず、等張塩水、緩衝塩溶液、または水のいずれかを用いた静脈用溶液として投与できる。
【００３５】
本発明の説明は、I)方法およびII)本発明の錯体の機械的および構造的決定に分かれている。以下、各節を順に示す。
【００３６】
I.  方法
光学的純度＞99％の10Bがリッチなp-ボロノフェニルアラニン(p-BPA)は公知の手法を用いて調製することができ(例えば、Snyderら, J. Am. Chem. Soc. 80: 835 ［1958］; Samselら, Progress in Neutron Capture Therapy for Cancer, Allenら編, Plenum Press, 251頁 ［1992］; Kirihataら, Cancer Neutron Capture Therapy, Mishima編, Plenum Press, 99 頁［1996］; Gianottoら, Progress in Neutron Capture Therapy for Cancer, Allenら編, Plenum Press, 247-250頁 ［1992］を参照)、あるいは商業的に購入することもできる(例えば、RYSCOR ［Raleigh， NC］; Boron Biologicals, Inc. ［Raleigh， NC］; Ash Stevens ［Detroit, MI］; Katchem, ltd. ［Czech Republic］)。
【００３７】
p-ボロノフェニルアラニンおよび炭水化物またはポリオールがそこに実質的に可溶化するように、p-ボロノフェニルアラニン、水、炭水化物またはポリオールと塩基とを一緒に混合して塩基性溶液を生産する（例えば、pH 8から10の間）。p-ボロノフェニルアラニン、水、塩基および炭水化物またはポリオールを特定の順に混合する必要はない。次いでイオン交換媒体を塩基性溶液に加え、それによりpHを生理学的pH（例えば、pH 7.3から7.5の間）に調整する。溶液のpHを生理学的pHに調整した後、イオン交換媒体を濾過またはデカンテーションにより除去して塩を含まないまたは本質的に塩を含まないp-BPA-炭水化物またはp-BPA-ポリオール錯体の溶液を生産する。この溶液を凍結乾燥して白色固体として本質的に塩を含まないまたは塩を含まないp-BPA錯体を得る（凍結乾燥する方法は当技術分野で周知である。例えば、Flosdorf, Freeze-drying; drying by sublimation, Reinhold Pub. Corp., 1949; Mellor, Fundamentals of Freeze-drying, Academic Press, New York, 1978;およびDayら, Cryopreservation and freeze-drying protocols, Methods in Molecular Biology, vol. 38, Humana Press, New Jersey, 1995を参照）。
【００３８】
上手く可溶化するには、イオン交換媒体を最後の試薬としてp-ボロノフェニルアラニン、塩基および炭水化物またはポリオールの混合物に加えることが重要である。またイオン交換媒体をp-BPAおよび炭水化物またはポリオールを含有する塩基性溶液に慎重に加えることも重要である。イオン交換カラムによるp-BPA炭水化物またはポリオール錯体の簡単なランニングアプローチはpH制御が不十分なために失敗する。その結果、溶液のpHが約6.5まで低下してすべてのナトリウム陽イオンが排除され、p-BPAの沈殿が生じる。p-BPAの沈殿を防ぐには、溶液のpHを慎重にモニターしながら少量のイオン交換媒体を溶液に加える。
【００３９】
好ましい実施形態では、本発明のp-ボロノフェニルアラニンはラセミ(D, L)-p-ボロノフェニルアラニンおよびL-p-ボロノフェニルアラニンからなる群から選択される。
【００４０】
好ましい実施形態では、イオン交換媒体はイオン交換樹脂である。特定の実施形態では、イオン交換媒体はDowex50WX4-50イオン交換樹脂である。
【００４１】
使用する塩基は特定の塩基に限定する必要はない。好ましい実施形態では、塩基は生理学上許容される対イオンを含有しており、NaOH、KOH、Ca(OH)2、およびMg(OH)2からなる群から選択される。
【００４２】
１つの実施形態では、まずp-BPAを水に懸濁し、次に実質的に固体が溶解するような条件において種々の量の炭水化物またはポリオールを加え、得られた溶液のpHをイオン交換媒体を用いて生理学的pHに調整する。p-BPAと強く結合する炭水化物およびポリオールについてはp-BPAに対して若干過剰な量（すなわち、約1.1当量）で十分である。若干過剰な量を使用して市販の炭水化物およびポリオール（例えば、炭水化物またはポリオールは通常98％純度で供給される）に見られるわずかな不純物を補填する。また若干過剰な量によりp-BPAと炭水化物またはポリオールとの100％結合に満たないものも補填する。p-BPAと強く結合しない炭水化物およびポリオールについては8当量までまたはそれ以上が必要である。
【００４３】
他の実施形態では、p-BPAと炭水化物またはポリオールとをともに水に懸濁する。1当量の塩基（すなわち、0.5M NaOH）をp-BPAおよび炭水化物またはポリオールの懸濁液に滴下し、すべての固体が実質的に溶解するまでこのスラリーを緩やかに加温する。p-BPAが完全に溶解しない場合にはさらなる量の塩基を滴下してもよい。溶液のpHをモニターし、pHを8から10の間まで上昇させて塩基性溶液中にp-BPA-炭水化物またはp-BPA-ポリオール錯体を生産する。次いでイオン交換媒体をp-BPA-炭水化物またはp-BPA-ポリオール錯体に加えることにより塩基性溶液のpHを7.3から7.5の間の範囲の生理学的pHに調整して、本質的に塩を含まない、または塩を含まないp-BPA-炭水化物またはp-BPA-ポリオール錯体を得る。
【００４４】
p-ボロノフェニルアラニンを氷冷した炭水化物またはポリオールの塩基性溶液に加え、得られた溶液（pHが約8〜10の間にある）はイオン交換媒体により中和することができ、それによって得られたpHを生理学的pHに調整して本質的に塩を含まない、または塩を含まないp-BPA-炭水化物またはp-BPA-ポリオール錯体を得ることも考えられる。
【００４５】
p-BPAの錯体形成に使用する炭水化物としては、単糖類および二糖類が含まれると考えられる。単糖類はピラノースまたはフラノース環形のいずれかをとってよく、限定されるものではないが、フルクトース、ソルボース、リボース、ガラクトース、グルコース、マンノース、2-デオキシガラクトース、および2-デオキシグルコースが挙げられる。二糖類としては、限定されるものではないが、マルツロース、ラクツロース、パラチノース、ロイクロース、ツラノース、ラクトース、およびマルトースが挙げられる。本発明のポリオールとしては、限定されるものではないが、マンニトール、ソルビトール、ズルシトール、およびキシリトールが挙げられる。
【００４６】
フルクトースおよびソルボースに見られるように錯体形成が強い場合、または極めて過剰な量の別の炭水化物またはポリオールを使用する場合は、すべてのp-BPAはpH 7.4で溶液中に維持し、約90％のp-BPAがそのカルボン酸ナトリウムとして、残りはその遊離酸として存在する。遊離p-BPAとp-BPA-炭水化物錯体の比率は、溶媒として生理学的pHに緩衝させたD2Oを用いた1H NMRスペクトルにおける芳香族プロトンの共鳴（p-BPA、7.73および7.33ppm; p-BPA-炭水化物錯体、7.5および7.2ppm）の積分により求めることができる。種々の濃度の各炭水化物とp-BPA-炭水化物の比率については５回の測定の最小値をとり、平衡定数を算出した（表1および表2）。同様に、p-BPAといくつかのポリオールとの錯体形成定数を算出した（表3）。
【００４７】
【表１】
0004643017.tif 000002
【表２】
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【表３】
0004643017.tif 000004
II.  本発明の錯体の機構的研究および構造決定
本発明を使用するためにその機構を理解しておく必要はなく、また本発明がそのように限定されるものではないが、L-p-BPA-フルクトース錯体の13C NMRスペクトルの解析を二糖類（表2）、特にフルクトース部分を含有しているものの錯体形成能力の研究に結びつけることによりL-p-BPA錯体の構造についてのいくつかの情報が得られる。フルクトースは水中で、β-D-フルクトピラノースがβ-D-フルクトフラノースおよびα-D-フルクトフラノースに比べて優位を占めている5種類の異性体の複合混合物として存在している(例えば、van den Bergら, Carbohydr. Res. 253: 1 ［1994］; Pelmoreら, Carbohydr. Res. 155: 206 ［1986］; Schniederら, Liebigs Ann. Chem., 2443頁 ［1985］; Goux, W. J., J. Am. Chem. Soc. 107 : 4320 ［1985］を参照)。また少量のα-D-フルクトピラノースおよびD-フルクトケトースも報告されている(NorrildおよびEggert, J. Chem. Soc. Perkin Trans 2, 2583頁 ［1996］を参照)。αおよびβフルクトフラノース環の双方はそれらのピラノース相対物よりも13C NMRスペクトルにおいて大きな化学シフト値を有する（表4）(van den Bergら, 上記参照)。しかしながら、L-p-BPAを含有するフルクトース錯体のpH 7.4のD2Oにおける1Hおよび13Cスペクトルでは、ただ1つの生成物だけが検出された。本発明を使用するためにその機構を理解しておく必要はなく、また本発明がそのように限定されるものではないが、L-p-BPAの芳香族プロトンはアルカリ性溶液におけるL-p-BPAのスペクトル（pD 11において7.49および7.14ppm）と同様に、高磁場（各々pD 7.4において7.73および7.33ppmから7.49および7.18ppm）にシフトするため、ホウ素原子が負に電荷しており、四面体であると考えられる。
【００４８】
本発明を使用するためにその機構を理解しておく必要はなく、また本発明がそのように限定されるものではないが、L-p-BPAを含有するフルクトース錯体の化学シフト値に基づくと、錯体の炭水化物部分にはβ-D-フルクトフラノース形が割り当てられることが明らかである。この提案されるL-p-BPA-フルクトース錯体のフルクトース部分のβ-D-フルクトフラノース構造は、NorrildおよびEggert(NorrildおよびEggert, 上記)により報告されるpD 11〜12におけるp-トリルボロン酸とフルクトースとの錯体の1つの値（錯体1、図1）と非常に一致する。
【００４９】
図1の錯体1〜3の構造決定は、13Cスペクトルにおける化学シフトならびに1JCCカップリング定数に基づいた。錯体1、2および3の化学シフトはすべてフルクトフラノース環構造によるものである（表4）。さらに、O-C-C-Oフラグメントが5員環に組み込まれる場合、全3種の錯体はビシナルジオールに典型的な低い1JCC値を示す。錯体1および錯体2ならびに3間のシフトおよび1JCCカップリング定数間の唯一の有意差は錯体1の低い1J5,6にある(例えば、NorrildおよびEggert, J. Am. Chem. Soc. 117: 1479 ［1995］; Dukerら, Carbohydr. Res. 249: 281 ［1993］; SnyderおよびSerianni, Carbohydr. Res. 163: 169 ［1987］; ならびにKrvidinおよびKalabin, Progr. NMR Spectroscopy 21: 293 ［1989］を参照)。
【００５０】
本発明を実施するためにその機構を理解しておく必要はなく、また本発明がそのように限定されるものではないが、この低い1JCC値によりB-O-C-6-C-5ねじり角が60°に近づき、一方O-C-6-C-5-O二面角が小さくなるようにC-6をも含む錯体形成が示されると考える。錯体1（図1）に示されるβ-D-フルクトフラノース構造は、錯体1の化学シフト値に基づき、p-トリルボロン酸とフルクトース錯体によるものとした。
【００５１】
【表４】
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【化１】
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生理学的pHにおいてL-p-BPA-フルクトース錯体について得られたNMRデータと（例えば、PD 11〜12においてフルクトースを有するp-トリルボロン酸に見られるような）錯体の1つのものとの強い対応をフルクトース含有二糖類の結合能力の系統的研究によりさらに調べた（表2）。マルツロース、ラクツロースおよびフルクトースの結合定数にほとんど差がないことから、C-4のヒドロキシルはおそらくフルクトースのL-p-BPAとの結合能力に不可欠なものではないことが示唆される。しかしながら、加えられた4-O-グルコシルまたはガラクトシル基の存在によるいずれの結合への明確な作用もなかった。単糖類メチル-α-グルコピラノシドおよびメチル-β-ガラクトピラノシドならびに二糖類スクロースについては結合が全くなされないことからアノマー中心が結合に不可欠なものであることが示される。
【００５２】
本発明を使用するためにその機構を理解しておく必要はなく、また本発明がそのように限定されるものではないが、メチル-α-グルコピラノシド、メチル-β-ガラクトピラノシド、またはスクロースについてはL-p-BPAの1H NMRスペクトルにおける変化が認められなかったため、アノマー中心の存在が錯体形成に重大な役割を果たしていると考えられる。またツラノースおよびロイクロース双方の1.5pKeqによる結合が減少することから分かるように、3位のヒドロキシルが結合において極めて重大な役割を果たしているとも考えられる。ツラノースのC-3のヒドロキシルはグルコシル部分の存在により結合から除外され、一方ロイクロースのC-3ヒドロキシルもまた、グルコシル単位を赤道位に置くコンホメーションから重大な寄与をしていると考えられるので結合には利用できず、結果としてアノマーC-2ヒドロキシルおよびC-3ヒドロキシル軸間に二軸配位をとることになる。またロイクロースの結合能力の喪失は、フルクトース単位がより芳香の少ないピラノース環形に閉じられていることにもよると考えることができる。
【００５３】
さらに、本発明を実施するためにその機構を理解しておく必要はなく、また本発明がそのように限定されるものではないが、ソルボースおよびパラチノース間の結合能力の類似性、およびこれらの錯体のpKeq値における0.5の低下から、C-6ヒドロキシルがグルコシル単位（すなわち、パラチノース）の存在、またはC-5において立体化学を反転させ、幾何学的に結合ができないようにすること、のいずれかにより結合から除外されることが示唆される。よって結合におけるこのpKeqの0.5の低下は、フルクトースの場合、オルトボロネート形成により付与される付加的安定性に対応しているようである。
【００５４】
本発明を使用するためにその機構を理解しておく必要はなく、また本発明がそのように限定されるものではないが、今回請求される発明において使用されるいくつかの炭水化物の提案される結合コンホメーションを図2に示し、生理学的pHにおけるL-p-BPAとフルクトースとの提案される錯体を図3に示している。
【００５５】
定義
「炭水化物」とは、サッカロース単位またはその最初の反応生成物を含有する炭素、水素、および酸素からなる化合物をいい、この水素と酸素の比率は水と同じであり、Cn(H2O)mの分子式で示される。これらには1)単糖類、これはより小さな糖分子を与えるグリコシド結合の加水分解を受けない単糖をいう（例えば、フルクトースおよびグルコース）；2)二糖類、スクロース、マルトース、セロビオース、およびラクトース；ならびに3)多糖類（すなわち、高分子物質）が含まれる。
【００５６】
本明細書において用いられる用語「ポリオール」とは、多価アルコール（すなわち、3個以上のヒドロキシル基を含有するアルコール）をいう。3つのヒドロキシル基を含有するもの（すなわち、３価アルコール）をグリセロール；3つを越えるヒドロキシル基を含有するものを糖アルコールといい、一般式CH2OH(CHOH)nCH2OHを有する。
【００５７】
本明細書において用いられる用語「D」および「L」（すなわち、L-p-BPA）とは、(+)-グリセルアルデヒドの推定立体配置に基づく、糖およびアミノ酸の相対配置をいう。「D」系列は(+)-グリセルアルデヒドと同じ立体配置を有し、「L」系列は(-)-グリセルアルデヒドと同じ立体配置を有する(例えば、Wade, Jr., Organic Chemistry,  383-384頁, Prentice-Hall, Inc. ［1987］参照)。ラセミ混合物（D,L）は「D」および「L」配置の両方を含有している。
【００５８】
本明細書において用いられる用語「溶解度」とは、所定の温度において所定量の溶媒に溶解する物質（すなわち、溶質）の量と定義される。溶解度は所定量の溶媒あたりに溶解する溶質の質量（すなわち、グラム）により、または所定量の溶液に溶解する溶質のモル数により測定することができる。「溶解する」とは、所定量の溶媒に物質を溶解するプロセスをいう。
【００５９】
本明細書において用いられる用語「溶媒」とは、別の物質（すなわち、溶質）を溶解して均質に分散した混合物（すなわち、溶液）を形成し得る物質をいう。
【００６０】
本明細書において用いられる用語「溶質」とは、別の物質（すなわち、溶媒）に溶解される1種以上の物質をいう。
【００６１】
本明細書において用いられる用語「溶液」とは、1種以上の物質（すなわち、溶媒）中に1種以上の物質（すなわち、溶質）が分子またはイオンレベルで均質に分散した混合物をいう。
【００６２】
本明細書において用いられる用語「実質的に溶解した」および「実質的に溶解している」とは、溶解していないおよび溶液に懸濁されている固体が約1％未満であるような、固体物質（すなわち、L-p-ボロノフェニルアラニン炭水化物またはポリオール錯体）が液体（例えば、水、等張生理食塩水または希薄生理食塩水）に溶解されている程度をいう。
【００６３】
本明細書において用いられる用語「凍結乾燥する」および「凍結乾燥」とは、生物学的材料からの脱水または水を分離する方法をいう。まず材料を凍結させた後に、高真空状態におくことにより、水（すなわち、氷）を融解させずに減圧蒸発させ（すなわち、昇華）、不揮発性成分を後に残す。
【００６４】
本明細書において用いられる用語「濾過」および「デカンテーション」とは、固体および液体を含有する混合物の成分を分離するための方法をいう。濾過では、混合物を濾紙のようなメッシュに注ぎ、液体を通過させて固体を後に残す。デカンテーションでは、混合物から慎重に液体を流出させる。
【００６５】
本明細書において用いられる用語「酸」とは、溶液内にヒドロニウムイオン(H3O+)を生じる物質をいう。酸は、イオン化により生じるH+イオンの濃度により強弱が判断される。本発明において使用する強酸の例として、限定されるものではないが、塩酸、硫酸および硝酸が挙げられる。
【００６６】
本明細書において用いられる用語「塩基」とは、水溶液中で水酸化物イオン(OH-)を生じる物質をいう。塩基はイオン化により生じるヒドロキシルイオンの濃度により強弱が判断される。本発明において使用する強塩基の例として、限定されるものではないが、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、および水酸化アンモニウムが挙げられる。
【００６７】
本明細書において用いられる用語「塩基性溶液」とは、pHが約8から14の範囲にある溶液をいう。好ましい実施形態では、請求項に係る発明において使用される塩基性溶液はpHが8から10の範囲にある。
【００６８】
本明細書において用いられる用語「塩を含まない」とは、NaCl、NaBr、Na2SO4、MgSO4、MgCl2、CaCl2などのような酸塩基中和反応の生成物を含有しない溶液または固体をいう。
【００６９】
本明細書において用いられる用語「本質的に塩を含まない」および「本質的に塩を含まない錯体」とは、錯体（すなわち、L-p-ボロノフェニルアラニン錯体）に関して1当量以下の塩（すなわち、NaCl）しか含有してない錯体をいう。「本質的に塩を含まないL-p-ボロノフェニルアラニンフルクトース錯体」とは、NaCl塩を10重量％未満しか含有してない錯体をいう。
【００７０】
本明細書において用いられる用語「錯体」または「錯体化合物」とは、中心イオンとリガンドまたは錯形成剤とよばれる分子との結合により形成される化合物をいう。本発明は、炭水化物またはポリオールと錯体を形成したL-p-ボロノフェニルアラニンに関する。
【００７１】
本明細書において用いられる用語「pH」とは、水溶液の酸性度またはアルカリ性度を示す値をいい、溶液の水素イオン濃度［H+］の逆数の対数と定義される。pH尺度ではpH 7を有する純粋な水を標準として用い、水性酸塩基系の酸性度を定める。酸のpH範囲は約6.9から1であり、塩基のpH範囲は約7.1から14である。酸性でも塩基性でもない溶液は「中性」であり、pH 7を有する。「生理的pH」は血液のpHをいうために使われ、これは7.3から7.5の間のpH値を有する。「pD」とは、重水素化溶液の酸性度またはアルカリ性度を示す値をいう。
【００７２】
本明細書において用いられる用語「平衡定数」または「Keq」は、可逆的化学反応の出発物質と生成物の相互に関する数値である。例えば、式aA+bB→cC+dDにより示された化学反応では平衡定数はK=［CcDd］/［AaBb］である。
【００７３】
本明細書において用いられる用語「イオン交換」とは、固体（すなわち、イオン交換体）と液体溶液（すなわち、水溶液）の間の可逆的化学反応をいい、該反応によりイオンはある物質から別の物質へ相互交換される。「イオン交換媒体」とは、イオン交換が行うことができる手段をいう。好ましいイオン交換媒体はイオン交換樹脂であるが、本発明における使用には他のイオン交換媒体も考えられる。
【００７４】
本明細書において用いられる用語「イオン交換樹脂」とは、樹脂に接触させた種々のイオンと陽イオンまたは陰イオンを交換し得る活性基（例えば、スルホン基、カルボキシル基、フェノール基、または置換アミノ基）を含有する樹脂をいう。本発明において使用するイオン交換樹脂の例はDowex50WX4-50イオン交換樹脂であるが、本発明における使用には同様の機能を果たす他のイオン交換樹脂も考えられる。
【００７５】
本明細書において用いられる用語「等張」とは、血液と同じ濃度の溶質を有するという性質をいう（例えば、「等張溶液」とは、血液と同じ濃度の溶質を有する生理食塩水をいう）。
【００７６】
本明細書において用いられる用語「等浸透圧」とは、同等の浸透圧を有するという性質をいう。「等浸透圧」溶液とは、血液と同じ浸透圧を有する溶液をいう。
【００７７】
本明細書において用いられる用語「静脈内」とは、薬物または栄養溶液のような物質の静脈内または静脈への投与様式をいう。
【００７８】
以下、実施例を挙げて本発明の特定の好ましい実施形態および態様を説明および例示するが、本発明の範囲をこれらに限定するものではない。
【００７９】
以下の実施例の開示においては、下記略号が適用される：NaOH(水酸化ナトリウム)；L-p-BPA(L-p-ボロノフェニルアラニン)；B(ボロン)；H(水素)；eq(当量)；M(モル)；μm(マイクロモル)；N(規定)；mol(モル)；mmol(ミリモル)；μmol(マイクロモル)；nmol(ナノモル)；g(グラム)；mg(ミリグラム)；μg(マイクログラム)；ng(ナノグラム)；lまたはL(リットル)；mL(ミリリットル)；μL(マイクロリットル)；℃(セ氏度)；h(時間)；m.p.(融点)；NMR(核磁気共鳴)；1H NMR(プロトン核磁気共鳴分光測定法)；13C NMR(炭素-13核磁気共鳴分光測定法)；Hz(ヘルツ)；J(結合定数)；d(二重線)；dd（二重の二重線）；s（一重線）；brs（ブロードな一重線）；t(三重線)；m(多重線)；δ(核磁気共鳴化学シフト)；およびD2O(重水)。
【００８０】
実施例1
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニンD-フルクトース錯体の製造
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニン(0.520g)およびD-フルクトース(0.473g)を蒸留水(3mL)に懸濁し、穏やかに加熱しながら0.5M NaOH(5.3mL)を添加することでL-p-ボロノフェニルアラニンを溶かした。この溶液のpHは典型的には8.5から9.0の間である。激しく攪拌しながらDowex 50WX4-50イオン交換(H+)樹脂を加えることで、この溶液のpHを7.3から7.5の間まで直ちに低下させた(2〜3分以内)。溶液を樹脂から取り出し、懸濁しているL-p-ボロノフェニルアラニンは溶液を穏やかに温めると再溶解できる。次に室温の溶液を0.2μフィルターで濾過した後に凍結乾燥して、ナトリウムL-p-ボロノフェニルアラニンD-フルクトース錯体(0.934g)を得た。この固体は温水で水和でき(60℃、溶解度約0.1g/mL)、残りは室温で長時間(すなわち48時間)放置すると完全に溶解する。L-p-ボロノフェニルアラニンD-フルクトース錯体：1H NMR(NaH2PO4/Na2HPO4でpD=7.4に緩衝化)：
0004643017.tif 000007
【００８１】
実施例2
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニンL-ソルボース錯体の製造
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニン(0.520g)およびソルボース(0.473g)を蒸留水(3mL)に懸濁し、穏やかに加熱しながら0.5M NaOH(5.3mL)を添加することでL-p-ボロノフェニルアラニンを溶かした。激しく攪拌しながらDowex 50WX4-50イオン交換(H+)樹脂を加えることで、この溶液のpHを7.3から7.5の間まで低下させた。溶液を樹脂から取り出し、懸濁しているL-p-ボロノフェニルアラニンは溶液を穏やかに温めると再溶解できる。次に室温の溶液を0.2μフィルターで濾過した後に凍結乾燥して、白色固体としてナトリウムL-p-ボロノフェニルアラニンL-ソルボース錯体(0.970g)を得た。L-p-ボロノフェニルアラニンL-ソルボース錯体：(NaH2PO4/Na2HPO4でpD=7.4に緩衝化)：
0004643017.tif 000008
【００８２】
実施例3
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニンD-マルツロース錯体の製造
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニン(0.104g)およびD-マルツロース水和物(0.189g)を蒸留水(1mL)に懸濁し、穏やかに加熱しながら0.5M NaOH(1mL)を添加することでL-p-ボロノフェニルアラニンを溶かした。激しく攪拌しながらDowex 50WX4-50イオン交換(H+)樹脂を加えることで、この溶液のpHを7.3から7.5の間まで低下させた。溶液を樹脂から取り出し、懸濁しているL-p-ボロノフェニルアラニンは溶液を穏やかに温めると再溶解できる。次に室温の溶液を0.2μフィルターで濾過した後に凍結乾燥して、白色固体としてナトリウムL-p-ボロノフェニルアラニンD-マルツロース錯体(0.245g)を得た。L-p-ボロノフェニルアラニンD-マルツロース錯体：(NaH2PO4/Na2HPO4でpD=7.4に緩衝化)：
0004643017.tif 000009
【００８３】
実施例4
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニン-ラクツロースス錯体の製造
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニン(0.208g)およびラクツロース(0.360g)を蒸留水(2mL)に懸濁し、穏やかに加熱しながら0.5M NaOH(2mL)を添加することでL-p-ボロノフェニルアラニンを溶かした。激しく攪拌しながらDowex 50WX4-50イオン交換(H+)樹脂を加えることで、この溶液のpHを7.3から7.5の間まで低下させた。溶液を樹脂から取り出し、懸濁しているL-p-ボロノフェニルアラニンは溶液を穏やかに温めると再溶解できる。次に室温の溶液を0.2μフィルターで濾過した後に凍結乾燥して、白色固体としてナトリウムL-p-ボロノフェニルアラニン-ラクツロース錯体(0.499g)を得た。L-p-ボロノフェニルアラニンラクツロース錯体：(NaH2PO4/Na2HPO4でpD=7.4に緩衝化)：
0004643017.tif 000010
【００８４】
実施例5
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニン-D-パラチノース錯体の製造
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニン(0.104g)およびD-パラチノース水和物(0.189g)を蒸留水(1mL)に懸濁し、穏やかに加熱しながら0.5M NaOH(1mL)を添加することでL-p-ボロノフェニルアラニンを溶かした。激しく攪拌しながらDowex 50WX4-50イオン交換(H+)樹脂を加えることで、この溶液のpHを7.3から7.5の間まで低下させた。溶液を樹脂から取り出し、懸濁しているL-p-ボロノフェニルアラニンは溶液を穏やかに温めると再溶解できる。次に室温の溶液を0.2μフィルターで濾過した後に凍結乾燥して、白色固体としてナトリウムL-p-ボロノフェニルアラニン-D-パラチノース錯体(0.233g)を得た。L-p-ボロノフェニルアラニン-パラチノース錯体：(NaH2PO4/Na2HPO4でpD=7.4に緩衝化)：
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【００８５】
実施例6
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニンD-ソルビトール錯体の製造
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニン(0.104g)およびソルビトール(0.096g)を蒸留水(1mL)に懸濁し、穏やかに加熱しながら0.5M NaOH(1mL)を添加することでL-p-ボロノフェニルアラニンを溶かした。激しく攪拌しながらDowex 50WX4-50イオン交換(H+)樹脂を加えることで、この溶液のpHを7.3から7.5の間まで低下させた。溶液を樹脂から取り出し、懸濁しているL-p-ボロノフェニルアラニンは溶液を穏やかに温めると再溶解できる。次に室温の溶液を0.2μフィルターで濾過した後に凍結乾燥して、白色固体としてナトリウムL-p-ボロノフェニルアラニンD-ソルビトール錯体(0.182g)を得た。L-p-ボロノフェニルアラニンD-ソルビトール錯体：(NaH2PO4/Na2HPO4でpD=7.4に緩衝化)：
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【００８６】
実施例7
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニンD-マンニトール錯体の製造
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニン(0.104g)およびマンニトール(0.096g)を蒸留水(1mL)に懸濁し、穏やかに加熱しながら0.5M NaOH(1mL)を添加することでL-p-ボロノフェニルアラニンを溶かした。激しく攪拌しながらDowex 50WX4-50イオン交換(H+)樹脂を加えることで、この溶液のpHを7.3から7.5の間まで低下させた。溶液を樹脂から取り出し、懸濁しているL-p-ボロノフェニルアラニンは溶液を穏やかに温めると再溶解できる。次に室温の溶液を0.2μフィルターで濾過した後に凍結乾燥して、白色固体としてナトリウムL-p-ボロノフェニルアラニンD-マンニトール錯体(0.186g)を得た。L-p-ボロノフェニルアラニンD-マンニトール錯体：(NaH2PO4/Na2HPO4でpD=7.4に緩衝化)：
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【００８７】
実施例8
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニンズルシトール錯体の製造
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニン(0.104g)およびズルシトール(0.096g)を蒸留水(1mL)に懸濁し、穏やかに加熱しながら0.5M NaOH(1mL)を添加することでL-p-ボロノフェニルアラニンを溶かした。激しく攪拌しながらDowex 50WX4-50イオン交換(H+)樹脂を加えることで、この溶液のpHを7.3から7.5の間まで低下させた。溶液を樹脂から取り出し、懸濁しているL-p-ボロノフェニルアラニンは溶液を穏やかに温めると再溶解できる。次に室温の溶液を0.2μフィルターで濾過した後に凍結乾燥して、白色固体としてナトリウムL-p-ボロノフェニルアラニンズルシトール錯体(0.198g)を得た。L-p-ボロノフェニルアラニンズルシトール錯体：(NaH2PO4/Na2HPO4でpD=7.4に緩衝化)：
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【００８８】
実施例9
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニンキシリトール錯体の製造
10BリッチなL-p-ボロノフェニルアラニン(0.104g)およびキシリトール(0.080g)を蒸留水(1mL)に懸濁し、穏やかに加熱しながら0.5M NaOH(1mL)を添加することでL-p-ボロノフェニルアラニンを溶かした。激しく攪拌しながらDowex 50WX4-50イオン交換(H+)樹脂を加えることで、この溶液のpHを7.3から7.5の間まで低下させた。溶液を樹脂から取り出し、懸濁しているL-p-ボロノフェニルアラニンは溶液を穏やかに温めると再溶解できる。次に室温の溶液を0.2μフィルターで濾過した後に凍結乾燥して、白色固体としてナトリウムL-p-ボロノフェニルアラニンキシリトール錯体(0.168g)を得た。L-p-ボロノフェニルアラニンキシリトール錯体：(NaH2PO4/Na2HPO4でpD=7.4に緩衝化)：
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【００８９】
上記明細書中に挙げた刊行物および特許はすべて参照により本明細書に組み入れられる。本発明の範囲および精神から逸脱することなく、本発明の記載の方法および系の種々の改変および変法は当業者には明らかである。特定の好ましい実施形態に関して本発明を説明したが、請求項に係る発明はこのような特定の実施形態に過度に限定されるものではないことが理解されるべきである。実際、合成化学および／または関連分野の当業者には明らかな、本発明を実施するために記載の様式の種々の改変は、本発明の特許請求の範囲内に包含されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は、アルカリ水溶液(pD = 11〜12)中のp-トリルボロン酸・フルクトース錯体の提案される構造を示す。
【図２】  図２は、今回請求した発明で用いる炭水化物の提案される結合コンホメーションを示す(Glu=α-グルコシル；Gal=α-ガラクトシル)。
【図３】  図３は、生理学的pHの水中でのL-p-ボロノフェニルアラニン-フルクトース(L-p-BPA-フルクトース)錯体の提案される構造を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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