(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
止血のための有効量の血液凝固第ＶＩＩＩ因子(以下、ＶＩＩＩ因子またはＦＶＩＩＩと称することがある)を薬効成分とする組成物であって、血液凝固因子欠陥またはフォンヴィルブランド因子欠陥を主因とせず、循環血小板数の低下または血小板機能異常により惹起される出血疾患の予防・治療用医薬組成物。
【請求項２】
前記循環血小板数の低下または血小板機能異常に係る疾病が、再生不良性貧血、抗癌剤投与後の骨髄造血抑制状態、急性白血病、特発性血小板減少性紫斑病、薬剤アレルギーによる血小板減少症、新生児血小板減少症、播種性血管内凝固症候群、血栓性血小板減少性紫斑病、血小板分布の異常、血小板無力症及びBernard-Soulier症より選択されることを特徴とする、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
第ＶＩＩＩ因子を少なくとも凝固活性で５単位／ｍＬの濃度で含んでなる請求項１もしくは請求項２記載の医薬組成物。
【請求項４】
止血に必要な投与量として、凝固活性単位で５単位〜４００単位／ｋｇ体重に相当する第ＶＩＩＩ因子を含んでなる請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本願発明は、血液に由来する成分を主たる有効成分とする医薬組成物に関する。詳細には、血小板障害、例えば血小板減少或いは血小板機能異常を原因とする出血症状に対する医薬組成物に関する。さらに詳細には、血液凝固第ＶＩＩＩ因子(以下、ＶＩＩＩ因子またはＦＶＩＩＩと称することがある)を有効成分として含有する血小板障害に伴う出血症状の予防・治療用医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
止血は血管、血小板及び血液凝固因子が正常に機能して初めて達成される。よって、これらの機能の低下は出血傾向を惹起し、著しい低下は過度の出血を起こし生命を危うくする。
血小板は、血中に１３〜３６万／μＬ存在し、傷害を受けた血管損傷部位にいち早く集まり、止血を司る重要な役割を担っている。しかしながら、この血小板の止血機能において異常が生じていたり、又は種々の原因で循環血小板数が５万／μＬ以下に減少したりすると、出血傾向が惹起される。１万／μＬ以下の重症の血小板減少になると自然出血を起こすようになり、出血量が増大して生命に影響を与えることも起こりうる。特に、近年増え続けている抗癌化学療法に伴い発症する血小板減少症は深刻な副作用であり、その止血管理は癌治療上の重要な課題になっている(西村純二. 医学の歩み 184: 448-452, 1998)。
【０００３】
血小板減少を機序別に分類すると、４つに大別することができる。１)骨髄での血小板産生の低下が原因となるもので、再生不良性貧血や抗癌剤投与後の骨髄造血抑制状態、急性白血病などにより正常造血組織が腫瘍に置き換えられている場合などがある。２)血小板の破壊の亢進によるもので、代表的な疾患としては特発性血小板減少性紫斑病(idiopathic thrombocytopenic purpura, ＩＴＰ)がある。そのほか薬剤アレルギーによる血小板減少症や血小板の血液型不適合妊娠による新生児血小板減少症などがある。３)血小板の消費の亢進によるものがある。播種性血管内凝固症候群(disseminated intravascular coagulation, ＤＩＣ)や血栓性血小板減少性紫斑病(thrombotic thrombocytopenic purpura, ＴＴＰ)の場合には末梢の血栓形成部位に大量の血小板が消費されるために血小板減少をきたす。４)血小板の分布の異常によるものがある。正常人において骨髄で新生された血小板が末梢に放出されると約１／３は末梢を循環されることなく脾臓で捕捉される。一方、肝硬変や巨大脾腫がある場合には新生された血小板の大半が脾臓で捕捉されてしまう。その結果、骨髄で血小板を産生しても末梢に十分血小板を供給することができないため血小板減少をきたす(倉田義之. 総合臨床47: 2742-2748, 1998)。なお、血小板の機能異常症としては血小板膜蛋白のＩＩｂ／ＩＩＩａ欠損によって引き起こされる血小板無力症やＩｂ欠損のBernard-Soulier症などが知られている。
【０００４】
血小板障害に伴う止血障害は、鼻・口腔領域或いは胃腸経路からの粘膜出血並びに傷、潰瘍及び注射部位からの浸出において示される増大した出血傾向を生ずる。血小板減少による出血は広範であり、特に外科手術に際し、術中術後において血小板減少症は深刻な問題となる。血小板数が５万／μＬ以下に低下すると、抜歯などの小さな手術でさえも深刻な出血を引き起こすことがある。１万／μＬ以下の更に著しく低い血小板数においては、手術や外傷等の特別なイベントがなくても自然出血を起こすようになり、例えば、頭蓋内に出血が起こると致死的でさえある。
【０００５】
ところで、現在、血小板減少或いは血小板機能異常を原因とする出血症状に対しては、臨床上、血小板濃縮物の輸血が唯一有効な治療法とされている。実際の治療態様としては、外科手術時または活動性出血を認める場合には５万／μＬ以上になるように、それ以外の場合には２万／μＬ以上になるように投与することが基本となっている(厚生省薬務局・日本赤十字社：血小板製剤の適正使用について)。しかし、そのような濃縮物を大量及び頻回に投与する場合には、複数の供血者から集められた血小板が使用される。その結果、血小板輸血を繰り返し受ける患者の多くは、混入した白血球のＨＬＡ抗原や血小板の血液型に対する同種抗体を発生し、血小板輸血の効果が弱くなる血小板輸血不応状態に陥る。さらに、血小板濃縮物の中には、輸血後ＧＶＨＤの原因であるリンパ球や、肝炎やＡＩＤＳの原因となるウイルスの混入が完全には否定できない。従って、現在、血小板減少或いは血小板機能異常を原因とする出血症状には、血小板輸血が唯一の有効な治療法ではあるが、血小板輸血に代わるより安全に止血管理が可能な薬剤が切望されている。
【０００６】
【発明の構成】
【課題を解決するための手段】
上記課題を鑑み、本願発明者らは血小板障害に伴う出血症状に対する予防・治療剤を開発するべく鋭意研究した結果、驚くべきことに、従来試みられることのなかった精製したＶＩＩＩ因子を、血小板がほとんど存在しない動物に生体内投与することによって低下した止血能を改善するという知見を得、血小板減少あるいは機能異常に伴う止血障害の予防・治療用医薬組成物として充分に適応できることを見出し、本願発明を完成するに至った。
【０００７】
本願発明の医薬組成物の主たる成分であるＶＩＩＩ因子は、主に肝臓で合成され、その血漿中の濃度は０.１μｇ／ｍＬと凝固因子の中では最も低い。血流中ではｖＷＦと複合体を形成し循環しており、複合体を形成することにより活性化プロテインＣ等のプロテアーゼによる分解から保護されている（Fay,P.J. et al. J Biol Chem 266: 2172-2176,1991）。ＶＩＩＩ因子の先天性欠乏症は血友病Ａとして知られ凝固障害による重篤な出血症状を呈するため、血液由来および組換えＶＩＩＩ因子濃縮製剤が血友病Ａ患者の止血管理に用いられている。ＶＩＩＩ因子はプロテアーゼとしてではなく凝固系コファクターとして機能しており、活性化血液凝固第ＩＸ因子による血液凝固第Ｘ因子の限定分解(活性化)反応の触媒効率を著しく高める作用を有する。ＶＩＩＩ因子のドメイン構造は、血液凝固第Ｖ因子やセルロプラスミンと相同性を有するＡ１(アミノ酸残基１−３２８）、Ａ２(３８０−７１１）、Ａ３(１６９４−２０１９）、ディスコイディンレクチンと相同性を有するＣ１(アミノ酸残基２０２０−２１７２)、Ｃ２(２１７３−２３３２)及びＢドメインから成る。さらにＶＩＩＩ因子は２箇所の酸性配列が存在し、各々ａ１(３３１−３７２）、ａ２(１６４９−１６８９)と呼ばれ、ａ２はｖＷＦの結合部位として機能している。ＶＩＩＩ因子のコファクター活性は、トロンビンによる限定分解でｖＷＦからＶＩＩＩ因子が解離することにより発揮され、ＶＩＩＩ因子分子内のＡｒｇ３７２−Ｓｅｒ３７３結合が限定分解されることで高まる（Eaton,D. et al.  Biochemistry 25: 505-512, 1986）。
【０００８】
本願発明の医薬組成物の主成分であるＶＩＩＩ因子を製造する方法は特に限定されることなく、例えばヒト血液より分離する方法、あるいは遺伝子組換え技術により作製する方法などによって製造することができる。
【０００９】
血液由来のＶＩＩＩ因子の製法としては以下の方法が挙げられる。例えば、新鮮凍結ヒト血漿を冷融解することによって得られたクリオプレシピテートから抗ｖＷＦモノクローナル抗体あるいは抗ＶＩＩＩ因子モノクローナル抗体を用いてのアフィニティークロマトグラフィーによってＶＩＩＩ因子を精製する方法がある。(Rotblat, F., et al., Biochemistry 24:4294-4300,1985)。
【００１０】
上述の方法で調製されたＶＩＩＩ因子の活性を最大限に維持するために、好適な安定化剤と共に凍結乾燥して保存することができるし、さらには、ＶＩＩＩ因子溶液を凍結し保存することも可能である。本発明では、かかる有効成分としてのＶＩＩＩ因子と公知の適当な賦形剤を組み合わせ、公知の方法で本発明の血小板減少に伴う止血障害に対する予防・治療用製剤とすることができる。
【００１１】
本発明のＶＩＩＩ因子含有製剤の投与対象は、血小板減少あるいは機能低下に伴う止血障害のある患者であれば特に限定されることはない。ＶＩＩＩ因子の有効投与量は、例えば投与対象者の年齢、症状及び重症度などにより変動するが、ＶＩＩＩ因子活性で５０単位／ｋｇ〜１００単位／ｋｇの範囲で止血効果が期待出来る。投与方法は単回投与(Ｂｏｌｕｓ)あるいは点滴の静脈内投与が最適である。
血小板減少に伴う止血障害の予防・治療法としてＶＩＩＩ因子を使用する場合、ＶＩＩＩ因子を単独で投与することもできるし、ｖＷＦとの併用投与あるいはｖＷＦ／ＦＶＩＩＩ複合体のままでも効果を増大させるための有効な手段として期待できる。
【００１２】
今回の実施例に使用した血液由来のＦＶＩＩＩは、ｖＷＦを分離除去したＦＶＩＩＩ、もしくは、ｖＷＦを含有するｖＷＦ／ＦＶＩＩＩ複合体であり、そのマルチマーパターンは血漿のそれと同様である。ｖＷＦ／ＦＶＩＩＩ複合体については臨床現場において血友病あるいはフォンビルブランド病患者に投与されており安全性が確認されている。
【００１３】
以下、実施例に沿って本発明をさらに詳細に説明するが、これら実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【００１４】
以下、実施例に沿って本発明をさらに詳細に説明するが、これら実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【００１５】
調製例
新鮮凍結ヒト血漿を冷融解することによって得られたクリオプレシピテートを溶解後、陽イオン交換クロマトグラフィーおよび沈殿分画によりｖＷＦ／ＦＶＩＩＩ複合体として精製後、３５０ｍＭ塩化カルシウム存在下でのSephacryl S-500を用いるゲル濾過によりｖＷＦとＦＶＩＩＩとを解離した。
【００１６】
実施例１
（血小板減少動物モデルを用いた本願医薬組成物の効果）
ＦＶＩＩＩ投与による血小板減少に起因する出血傾向に対する止血効果が以下の実施例により確認できた。
本実験は、主として、抗癌剤投与に伴う血小板減少を反映するモデルとして確立されている方法(Kuter,D.J. et al. Blood 85: .2720-2730, 1995)に準じて実施されたものであり、実際的な血小板減少出血モデルとして適した評価系と考えられる。ラット(Wistar系、雄性、体重180〜230g)の背部皮下に抗癌剤である「Busulfan 」(商品名)を１２.５ｍｇ／ｋｇの量で投与し、血小板減少状態を誘導した。血小板数の低下が最も著しい１４日目に、ペントバルビタールで麻酔下、背位に固定し、尻尾直径３ｍｍ部をカッター刃にて切断し出血させた。出血血液はフィルターに吸わせ、ヘモグロビン定量により出血量を求め、評価した。血小板数約６０万／μＬの正常ラットの出血量は１１２.２±６１.０μＬであるのに対し、被検動物は血小板数が低下するにつれて出血量は増大し、血小板数が０.１±０.１万／μＬのとき１２０２.８±１８８.３μＬと著しく増大した。
対照動物と同様にラットを血小板減少症にし、次いでヒトＦＶＩＩＩを投与した。ヒトＦＶＩＩＩは、遺伝子組換えＦＶＩＩＩ(BAYER薬品製，「KOGENATE」(商品名))を使用し、投与用量は凝固活性で１０, ２０Ｕ／ｋｇとしてラット外頚静脈より評価開始の１０分前に投与した。同様に、ヒトＦＶＩＩａを５００Ｕ／ｋｇで投与して評価した。結果を表１及び図１にまとめる。血小板減少ラットの出血量は、対照動物群と比べ、投与したＦＶＩＩＩの用量に依存して著しく減少した。ＦＶＩＩＩを２０Ｕ／ｋｇで投与した動物のうち１例においては、３０分の観察時間内に完全に止血し、その出血量は正常ラットのそれと同程度に少なかった。特公平７−８０７８３に止血効果が示されている５００Ｕ／ｋｇの高用量のＦＶＩＩａを投与した群についても出血量の低減が観られたが、ＦＶＩＩＩの投与はその効果を凌駕していた。
【００１７】
【表１】
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【図面の簡単な説明】
【図１】血小板減少動物モデルを用いた本願医薬組成物の効果を示す図である。
【図１】
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