(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
結晶性形態としての(R)−3−[1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−5−(1−ピペリジン−4−イル−1H−ピラゾール−4−イル)−ピリジン−2−イルアミンの遊離塩基。
【請求項２】
結晶性形態が遊離塩基の多形体形態１である、請求項１に記載の遊離塩基。 
【請求項３】
結晶性形態が回折角(２θ)19.7±0.1でピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項１又は２に記載の遊離塩基。
【請求項４】
結晶性形態が回折角(２θ)17.3±0.1及び19.7±0.1でピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項１又は２に記載の遊離塩基。
【請求項５】
結晶性形態が回折角(２θ)15.7±0.1、17.3±0.1及び19.7±0.1でピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項１又は２に記載の遊離塩基。
【請求項６】
結晶性形態が回折角(２θ)15.7±0.1、17.3±0.1、19.7±0.1及び26.8±0.1でピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項１又は２に記載の遊離塩基。
【請求項７】
結晶性形態が図１に示すものと本質的に同じ回折角(２θ)でピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する請求項１又は２に記載の遊離塩基。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書は、2005年12月５日に出願された米国仮出願第60/742,676号の優先権を主張し、その内容は全体として参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、哺乳動物における癌のような異常な細胞増殖の治療に有用である(R)−3−[1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロフェニル)−エトキシ]−5−(1−ピペリジン−4−イル−1H−ピラゾール−4−イル)−ピリジン−2−イルアミン多形体に関する。また、本発明は、このような塩及び多形体を含んでなる組成物、及び哺乳動物、特にヒトの異常な細胞増殖の治療におけるこのような組成物の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
式１
【化１】
0004663619.tif 000002
によって表される化合物(R)−3−[1−(2,6−ジクロロ−3フルオロフェニル)−エトキシ]−5−(1−ピペリジン−4−イル−1H−ピラゾール−4−イル)−ピリジン−2−イルアミン(また、本明細書中で「化合物１」と称する)は、c−Met／HGFR(肝細胞増殖因子受容体)キナーゼ及びALK(未分化リンパ腫キナーゼ)活性の強力な小分子阻害剤である。化合物１は、様々な腫瘍タイプの成長及び転移進行の調節に含まれるc−Met／HGFR、並びにALCL(未分化大細胞リンパ腫)の病因に関与するALKの阻害を通して薬理学的に介在する抗腫瘍性を有する。化合物１は、国際特許出願第PCT/IB2005/002837号及び米国特許出願第11/212,331号に開示されており、それらはいずれも、その全体として参照により本明細書に組み込まれている。さらに、化合物１のラセミ体は、国際特許出願第PCT/IB05/002695号及び米国特許出願第11/213,039号に開示されており、それらはいずれも、その全体として参照により本明細書に組み込まれている。
【０００４】
ヒト癌には、多様な種類の疾患が含まれ、ひとまとめにすると世界中の先進国における主要死因の１つとなる(American Cancer Society, Cancer Facts and Figures 2005. Atlanta: American Cancer Society; 2005)。癌の進行は、遺伝子突然変異、染色体転座及び核型異常を含む複数の遺伝的及び分子的現象の複合的な系によって生じる(Hanahan D, Weinberg RA. The hallmarks of cancer. Cell 2000; 100: 57-70)。癌の根底にある遺伝的原因は多様で複雑であるが、それぞれの癌タイプは、共通の特徴及びその進行を促進する獲得された能力を示すことが観察されている。これらの獲得された能力としては、調節不全の細胞増殖、血管補充を持続する能力(すなわち血管新生)、及び腫瘍細胞の局所的に広がる能力に加えて二次的な器官部位に転移する能力がある(Hanahan D, Weinberg RA. The hallmarks of cancer. Cell 2000; 100: 57-70)。従って、１）癌進行中に変化する分子標的を阻害する又は２）種々の腫瘍における癌進行に共通の複数のプロセスを標的とする新規な治療剤を同定する能力は、十分ではなく大いに必要とされている。
【０００５】
米国特許出願第11/212,331号の実施例19は、化合物１の製造を記載しており、これは非晶性であることがわかった。化学的安定性及び鏡像異性安定性を維持しながら改善された結晶性、溶解性及び／又は低下した吸湿性といった改善された性質を有する多形性形態があることは好都合である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
一実施態様において、本発明は、(R)−3−[1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−5−(1−ピペリジン−4−イル−1H−ピラゾール−4−イル)−ピリジン−2−イルアミンの遊離塩基の結晶性形態を提供する。特定の実施態様において、(R)−3−[1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−5−(1−ピペリジン−4−イル−1H−ピラゾール−4−イル)−ピリジン−2−イルアミンの遊離塩基の結晶性形態は、無水である。別の実施態様において、(R)−3−[1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−5−(1−ピペリジン−4−イル−1H−ピラゾール−4−イル)−ピリジン−2−イルアミンの遊離塩基の結晶性形態は、水和物である。
【０００７】
さらなる態様において、結晶性形態は、遊離塩基の多形体の形態１である。さらなる態様において、結晶性形態は、回折角(２θ)19.7±0.1でピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する。さらなる態様において、結晶性形態は、回折角(２θ)17.3±0.1及び19.7±0.1でピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する。さらなる態様において、結晶性形態は、回折角(２θ)15.7±0.1、17.3±0.1及び19.7±0.1でピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する。さらなる態様において、結晶性形態は、回折角(２θ)15.7±0.1、17.3±0.1、19.7±0.1及び26.8±0.1でピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する。さらなる態様において、結晶性形態は、回折角(２θ)15.7±0.1、17.3±0.1、19.7±0.1、21.0±0.1及び26.8±0.1でピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する。さらなる態様において結晶性形態は、回折角(２θ)15.7±0.1、17.3±0.1、19.7±0.1、21.0±0.1、21.7±0.1及び26.8±0.1でピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する。さらなる態様において、結晶性形態は、回折角(２θ)12.8±0.1、15.7±0.1、17.3±0.1、19.7±0.1、21.0±0.1、21.7±0.1及び26.8±0.1でピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する。さらなる態様において結晶性形態は、図１に示したのと本質的に同じ回折角(２θ)でピークを含む粉末Ｘ線回折パターンを有する。
【０００８】
さらに、本発明は、化合物１の遊離塩基の多形体形態１を含んでなる医薬組成物を提供する。さらに、本発明は、前記医薬組成物を含んでなるカプセルを提供する。この実施態様の特定の態様において、カプセルは、化合物１の遊離塩基の多形体形態１を0.1〜200mg含む。さらなる態様において、カプセルは、化合物１の遊離塩基の多形体形態１を25〜150mg含む。さらなる実施態様において、カプセルは、化合物１の遊離塩基の多形体形態１を50〜100mg含む。
【０００９】
別の実施態様において、本発明は、ヒトを含む哺乳動物における癌の治療方法を提供し、その方法は哺乳動物に本発明の医薬組成物の治療上有効量を投与することからなる。
【００１０】
別の実施態様において、本発明は、哺乳動物における癌の治療方法を提供し、その方法はヒトを含む哺乳動物に本発明のカプセルを投与することかなる。
【００１１】
一実施態様において、本発明は、哺乳動物に化合物１の遊離塩基の多形体形態１の治療上有効量を投与することからなる、治療の必要なヒトを含む哺乳動物における異常な細胞増殖の治療方法を提供する。
【００１２】
別の実施態様において、異常な細胞増殖は、少なくとも１つの遺伝子改変チロシンキナーゼが介在する。別の実施態様において、異常な細胞増殖は、肝細胞増殖因子受容体(c−Met／HGFR)キナーゼ又は未分化リンパ腫キナーゼ(ALK)が介在する。別の実施態様において、異常な細胞増殖は、肝細胞増殖因子受容体(c−Met／HGFR)キナーゼが介在する。別の実施態様において、異常な細胞増殖は、未分化リンパ腫キナーゼ(ALK)が介在する。
【００１３】
別の実施態様において、異常な細胞増殖は癌である。別の実施態様において、癌は、肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部又は頚部の癌、皮膚又は眼内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、大腸癌、乳癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、上皮小体癌、副腎癌、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、慢性又は急性の白血病、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓又は尿管の癌、腎細胞癌、腎盂癌、中枢神経系(CNS)の新生物、原発性CNSリンパ腫、脊髄軸の腫瘍、脳幹部神経膠腫、下垂体腺腫、及びそれらの組み合わせから選ばれる。
【００１４】
さらに別の実施態様において、癌は、肺非小細胞癌(NSCLC)、扁平上皮癌、ホルモン難治性の前立腺癌、乳頭状の腎細胞癌、結腸直腸腺癌、神経芽腫、未分化大細胞リンパ腫(ALCL)及び胃癌からなる群より選ばれる。
【００１５】
定義
本明細書に使用するように、特に明記しない限り「異常な細胞増殖」なる用語は、正常な調節機構とは異なる細胞増殖(例えば接触阻止の喪失)のことである。
【００１６】
本明細書に使用するように、特に明記しない限り「治療すること」なる用語は、このような用語が適用される障害若しくは状態、又はこのような障害若しくは状態の１つ若しくはそれ以上の症状の進行を後退、緩和、抑制又は予防することを意味する。「治療」なる用語は、本明細書に使用するように、特に明記しない限り、すぐ上で定義したような「治療すること」のような治療行為のことである。
【００１７】
本明細書に使用するように、Ｘ線回折ピーク位置に関して「本質的に同じ」なる用語は、典型的なピークの位置及び強度の変動性が考慮されることを意味する。例えば、ピークの位置(２θ)は、典型的には0.1°と同程度の装置間変動性をいくらか示すことが当業者に認められている。さらに、相対的なピークの強度は、装置間変動性の他に結晶性、好ましい配向性、製造された試料表面、及び当業者に知られている他の因子による変動性を示し、質的な基準としてのみ扱うべきであることは、当業者に認められている。
【００１８】
添付図面において、
図１は、遊離塩基(R)−3−[1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−5−(1−ピペリジン−4−イル−1H−ピラゾール−4−イル)−ピリジン−2−イルアミン、多形体形態１の結晶性形態の粉末Ｘ線回折パターンを示す。
図２は、遊離塩基(R)−3−[1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−5−(1−ピペリジン−4−イル−1H−ピラゾール−4−イル)−ピリジン−2−イルアミン、多形体形態１の結晶性形態の示差走査熱量測定法(DSC)の温度記録を示す。
【００１９】
次に、遊離塩基(R)−3−[1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−5−(1−ピペリジン−4−イル−1H−ピラゾール−4−イル)−ピリジン−2−イルアミンの独特な物理的形態を製造した。遊離塩基の多形体形態１の粉末Ｘ線回折(PXRD)パターンを図１に示し、対応するデータを表にして表１に示す。
【表１】
0004663619.tif 000003
【００２０】
結晶性遊離塩基形態１についてのDSC温度記録を図２に示す。
【００２１】
また、本発明は、本明細書に記載された化合物１の遊離塩基の多形体形態１を含んでなる医薬組成物に関する。本発明の医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル、丸剤、散剤、徐放製剤、液剤、懸濁剤として経口投与に適した形態、無菌液、懸濁液若しくは乳濁液として非経口注射に適した形態、軟膏若しくはクリームとして局所投与に適した形態又は、坐剤として直腸投与に適した形態をとることができる。医薬組成物は、正確な用量で単独投与するために適切な単位剤形であることができる。医薬組成物は、慣用の医薬担体又は賦形剤及び活性成分として本発明の化合物を含む。さらに、医薬組成物は、他の薬剤又は医薬、担体、補助剤、等を含むことができる。
【００２２】
典型的な非経口投与形態としては、滅菌水溶液中の活性化合物の溶液又は懸濁液、例えば、水性プロピレングリコール又はデキストロース溶液が含まれる。所望により、このような剤形は、適切に緩衝化することができる。
【００２３】
適切な医薬担体としては、不活性希釈剤又は充填剤、水及び種々の有機溶媒が含まれる。医薬組成物は、所望により、香味料、結合剤、賦形剤等のようなさらなる成分を含むことができる。従って、経口投与では、クエン酸のような種々の賦形剤を含む錠剤は、種々の崩壊剤、例えばデンプン、アルギン酸及びある種の複合体シリケート並びに結合剤、例えばショ糖、ゼラチン及びアカシアと共に使用することができる。さらに、潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム及びタルクは、しばしば錠剤化に有用である。また、類似タイプの固形組成物は、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセルに使用することができる。好ましい物質としては、ラクトース又は乳糖及び高分子量ポリエチレングリコールが含まれる。水性懸濁液又はエリキシル剤が経口投与に望ましい場合、その中の活性化合物を、種々の甘味料若しくは着香剤、着色剤又は色素及び必要に応じて、乳化剤又は懸濁化剤を、希釈剤、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン又はそれらの組み合わせと共に組み合わせることができる。
【００２４】
特定の量の活性化合物を用いた種々の医薬組成物の製造方法は、知られているか又は当業者に明らかである。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa., 15th Edition (1975)参照。
【００２５】
実施例
以下に提供する実施例及び製造により、さらに本発明の実施態様の具体的な態様を説明し、例示する。本発明の範囲は、以下の実施例の範囲によってなんら制限されないことを理解すべきである。
【００２６】
方法及び物質
粉末Ｘ線回折(PXRD)：図１に示したPXRDデータを、以下のプロトコールにより集めた。試料(２mg)を、バックグラウンドゼロで顕微鏡のスライドガラスに置いた。次いで、GADDS検出器を備えたDiscover D8(Bruker AXS機器)中に試料を置いた。銅Ｘ線源を用いたシステムを40kV及び40maに維持して1.5406オングストロームでCuα1を照射した。ステップ時間60.1秒で0.02°のステップスキャンを用いて４〜40°２θのデータを集めた。回折ピークは、典型的に±0.1°(２θ)の誤差で測定した。
【００２７】
示差走査熱量測定法(DSC)：図２に示したDSC測定は、Q1000，Thermal Analysis Instrumentsを用いて実施した。試料重量1.6mgを、ピンホールを有する密閉されたアルミニウムパン中に置いた。試料を25℃に平衡化し、次いで10℃／分のスキャン速度で250℃まで傾斜をつけた。乾燥窒素をパージガスとして用いた。
【００２８】
化合物１の合成
PLEは、ブタ肝臓からの粗エステラーゼ製剤としてRocheによって製造され、Biocatalytics Inc.を通して販売された酵素であり、一般にPLE−ASとして知られている(硫酸アンモニウム懸濁液として販売され、ICR−123としてBiocatalyticsから購入した)。酵素は、「カルボン酸エステルヒドロラーゼ、CAS no. 9016-18-6」としてCAS登録に分類されている。対応する酵素の分類番号は、EC 3.1.1.1である。酵素は、広範囲にわたるエステルの加水分解に対して広い基質特異性を有することが知られている。リパーゼ活性は、pH滴定装置中で酪酸エチルの加水分解に基づく方法を用いて測定した。１LU(リパーゼ単位)は、22℃、pH 8.2で滴定可能な酪酸１μmol／分を遊離する酵素の量である。本明細書に報告された製剤(PLE−AS、懸濁液として)は、通常、公示活性＞45LU／mg(タンパク質含量約40mg／ml)を有する不透明な緑茶色の液体として出荷される。
【００２９】
(1S)−1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロフェニル)エタノール
以下のスキームに化合物(S−1)として示した(1S)−1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロフェニル)エタノールは、スキームＢに従ってラセミ体1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロフェニル)酢酸エチルの酵素加水分解、エステル化及び転位を伴う化学的加水分解を組み合わせて製造した。ラセミ体の1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロフェニル)酢酸エチル(化合物A2)は、スキームＡに従って製造した。
【化２】
0004663619.tif 000004
【００３０】
1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロフェニル)エタノール(A1)：水素化ホウ素ナトリウム(90mg，2.4mmol)を無水CH3OH ２mL中の2',6'−ジクロロ−3'−フルオロアセトフェノン(Aldrich, catalog # 52,294-5)(207mg，１mmol)の溶液に加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌してから蒸発させて無色の油の残留物を得た。残留物をフラッシュクロマトグラフィ(ヘキサン中０→10％EtOAcで溶出した)によって精製し、無色の油として化合物A1を得た(180mg；0.88mmol；収率86.5％)；MS(APCI)(M-H)-208；1H NMR (400 MHz, クロロホルム−D) δ ppm 1.64 (d, J=6.82 Hz, 3 H) 3.02 (d, J=9.85 Hz, 1 H) 6.97−7.07 (m, 1 H) 7.19−7.33 (m, 1 H)。
【００３１】
1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロフェニル)酢酸エチル(A2)：無水酢酸(1.42mL，15mmol)及びピリジン(1.7mL，21mmol)をCH2Cl2 20mL中の化合物A1(2.2ｇ，10.5mmol)の溶液に順に加えた。反応混合物を室温で12時間撹拌し、次いで、蒸発させて黄色がかった油の残留物を得た。残留物をフラッシュクロマトグラフィ(ヘキサン中の７→９％EtOAcで溶出した)によって精製し、無色の油として化合物A2を得た(2.26ｇ；9.0mmol；収率85.6％)；1H NMR (400 MHz, クロロホルム−D) δ ppm 1.88 (d, J=6.82 Hz, 3 H) 2.31 (s, 3 H) 6.62 (q, J=6.82 Hz, 1 H) 7.25 (t, J=8.46 Hz, 1 H) 7.49 (dd, J=8.84, 5.05 Hz, 1 H)。
【００３２】
【化３】
0004663619.tif 000005
【００３３】
pH電極、オーバーヘッドスターラー及び塩基添加ライン(１M NaOH)を備えた50mLジャケット付きフラスコに、懸濁液としてpH 7.0の100mMリン酸カリウム緩衝液1.2mL及びPLE 0.13mLを加えた。次いで、化合物A2(0.13ｇ，0.5mmol，1.00当量)を滴加し、１M NaOHを用いて反応液のpHを7.0で一定に維持しながら、生成した混合物を室温で20時間撹拌した。反応液の転化率及びeeの両方をRP−HPLCによってモニターし、出発物質50％が消費されたら停止した(これらの条件下で約17時間)。次いで、混合物を酢酸エチル10mLで３回抽出し、R−1及びS−2の混合物としてエステル及びアルコールの両方を回収した。
【００３４】
メタンスルホニルクロリド(0.06mL，0.6mmol)を窒素雰囲気下でピリジン４mL中のR−1及びS−2(0.48mmol)の混合物の溶液に加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次いで蒸発させて油を得た。水(20mL)を混合物に加えてからEtOAc(20mL×２)を加え、水溶液を抽出した。有機層を合わせ、乾燥、濾過して蒸発させ、R−3及びS−2の混合物を得た。この混合物を、さらに精製することなく次の工程の反応に用いた。1H NMR (400 MHz, クロ
ロホルム−D) δ ppm 1.66 (d, J=7.1 Hz, 3 H) 1.84 (d, J=7.1 Hz, 3 H) 2.09 (s, 3 H) 2.92 (s, 3 H) 6.39 (q, J=7.0 Hz, 1 H) 6.46 (q, J=6.8 Hz, 1 H) 6.98−7.07 (m, 1 H) 7.07−7.17 (m, 1 H) 7.23−7.30 (m, 1 H) 7.34 (dd, J=8.8, 4.80 Hz, 1 H)。
【００３５】
酢酸カリウム(0.027ｇ，0.26mmol)を窒素雰囲気下でDMF４mLの中のR−3及びS−2(0.48mmol)の混合物に加えた。反応混合物を100℃に12時間加熱した。水(20mL)を反応混合物に加え、そしてEtOAc(20mL×２)を加えて水溶液を抽出した。合わせた有機層を乾燥、濾過して蒸発させ、S−2の油を得た(72mg，２工程の収率61％)。キラリティーee：97.6％。1H NMR (400 MHz, クロロホルム−D) δppm 1.66 (d, J=7.1 Hz, 3 H) 2.09 (s, 3 H) 6.39 (q, J=6.8 Hz, 1 H) 7.02 (t, J=8.5 Hz, 1 H) 7.22−7.30 (m, 1 H)。
【００３６】
窒素雰囲気下、０℃でナトリウムメトキシド(19mmol；メタノール中0.5Ｍ)を化合物S−2(4.64ｇ，18.8mmol)にゆっくりと加えた。生成した混合物を、室温で４時間撹拌した。溶媒を蒸発させてH2O(100mL)を加えた。さました反応混合物を酢酸ナトリウム−酢酸緩衝溶液で中和してpH ７にした。酢酸エチル(100mL×２)を加えて水溶液を抽出した。合わせた有機層をNa2SO4で乾燥、濾過して蒸発させ白色固形物としてS−1を得た(4.36ｇ，収率94.9％)；SFC−MS：97％ee 1H NMR (400 MHz, クロロホルム−D) δppm 1.65 (d, J=6.8 Hz, 3 H) 5.58 (q, J=6.9 Hz, 1 H) 6.96−7.10 (m, 1 H) 7.22−7.36 (m, 1 H)。
【００３７】
5−ブロモ−3−[1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−ピリジン−2−イルアミン(ラセミ体)：
【化４】
0004663619.tif 000006
【００３８】
1. 2,6−ジクロロ−3−フルオロアセトフェノン(15ｇ，0.072mol)を、氷浴を用いて０℃で、THF(150mL，0.5M)中で10分間撹拌した。水素化アルミニウムリチウム(2.75ｇ，0.072mol)をゆっくりと加えた。反応液を周囲温度で３時間撹拌した。反応液を氷浴中で冷却し、水(３mL)を滴加し、続いて15％NaOH(３mL)をゆっくりと加えた。混合物を周囲温度で30分間撹拌した。15％NaOH(９mL)、MgSO4を加え、混合物を濾過して固形物を除去した。固形物をTHF(50mL)で洗浄し、濾液を濃縮し、黄色油として1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エタノール(14.8グラム，収率95％)を得た。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ1.45 (d, 3H), 5.42 (m, 2H), 7.32 (m, 1H), 7.42 (m, 1H)。
【００３９】
2. ０℃のTHF(200mL)中のトリフェニルホスフィン(8.2ｇ，0.03mol)及びDEAD(トルエン中の40％溶液13.65mL)の撹拌溶液に、THF(200mL)中の1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エタノール(4.55ｇ，0.021mol)及び3−ヒドロキシ−ニトロピリジン(3.35ｇ，0.023mol)の溶液を加えた。生成した明るい橙色溶液を、窒素雰囲気下、周囲温度で４時間撹拌し、この時点で全ての出発物質が消費された。溶媒を除去し、そして粗物質をシリカゲル上に乾燥装填し、酢酸エチル−ヘキサン(20：80)で溶出し、桃色の固形物として3−(2,6−ジクロロ−3−フルオロベンジルオキシ)−2−ニトロ−ピリジン(6.21ｇ，0.021mol，98％)を得た。1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ1.8−1.85 (d, 3H), 6.0−6.15 (q, 1H), 7.0−7.1 (t, 1H), 7.2−7.21 (d, 1H), 7.25−7.5 (m, 2H), 8.0−8.05 (d, 1H)。
【００４０】
3. AcOH(650mL)及びEtOH(500mL)の撹拌混合物に3−(2,6−ジクロロ−3−フルオロベンジルオキシ)−2−ニトロ−ピリジン(9.43ｇ，0.028mol)及び鉄片(15.7ｇ，0.28mol)を懸濁した。反応液をゆっくりと加熱還流させ、そして１時間撹拌した。反応液を室温にさまし、次いでジエチルエーテル(500mL)及び水(500mL)を加えた。炭酸ナトリウムを添加することによって溶液を注意深く中和した。合わせた有機抽出物を飽和NaHCO3(２×100mL)、H2O(２×100mL)及びブライン(１×100mL)で洗浄し、次いで乾燥(Na2SO4)、濾過し、そして真空下で濃縮して乾燥状態にし、薄桃色の固形物として3−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−ベンジルオキシ)−ピリジン−2−イルアミン(9.04ｇ，0.027mol，99％)を得た。1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 1.8−1.85 (d, 3H), 4.9−5.2 (brs, 2H), 6.7−6.84 (q, 1H), 7.0−7.1 (m, 1H), 7.2−7.3 (m, 1H), 7.6−7.7 (m, 1H)。
【００４１】
4. アセトニトリル中の3−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−ベンジルオキシ)−ピリジン−2−イルアミン(9.07ｇ，0.03mol)の撹拌溶液を、氷浴を用いて０℃に冷却した。この溶液にN−ブロモスクシンイミド(NBS)(5.33ｇ，0.03mol)を少しずつ加えた。反応液を０℃で15分間撹拌した。反応液を真空下で濃縮して乾燥状態にした。生成した黒ずんだ油をEtOAc(500mL)に溶解し、シリカゲルクロマトグラフィにより精製した。次いで、溶媒を真空下で除去し、白色結晶性固形物として5−ブロモ−3−(2,6−ジクロロ−3−フルオロベンジルオキシ)−ピリジン−2−イルアミン(5.8ｇ，0.015mol，51％)を得た。1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ1.85−1.95 (d, 3H), 4.7−5.0 (brs, 2H), 5.9−6.01 (q, 1H), 6.8−6.95 (d, 1H), 7.01−7.2 (t, 1H), 7.4−7.45 (m, 1H), 7.8−7.85 (d, 1H)。
【００４２】
5−ブロモ−3−[1(R)−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−ピリジン−2−イルアミン：
【化５】
0004663619.tif 000007
鏡像異性的に純粋なR異性体は、ラセミ体について上記したようにして、しかし上記の鏡像異性的に純粋な出発物質を用いて製造した。1H NMR (400 MHz, DMSO−d6) δ 1.74 (d, 3H), 6.40 (m, 1H), 6.52 (br s, 2H), 7.30 (m, 1H), 7.48 (m, 1H), 7.56 (s, 1H); MS m/z 382 (M+1)。
【００４３】
4−メタンスルホニルオキシ−ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル(2)
【化６】
0004663619.tif 000008
０℃に冷却したCH2Cl2(100mL)中の4−ヒドロキシ−ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル(7.94ｇ，39.45mmol)の撹拌溶液に、NEt3(5.54mL，39.45mmol)、続いてメタンスルホニルクロリド(3.06mL，39.45mmol)及びDMAP(48mg，0.39mmol)をゆっくりと加えた。混合物を室温で一夜撹拌した。混合物に水(30mL)を加えた。CH2Cl2(３×30mL)で抽出した後、乾燥(Na2SO4)し、そして真空下で溶媒を除去し、白色固形物として4−メタン
スルホニルオキシ−ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステルを得た(11.00ｇ，＞収率99％)。1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 4.89 (m, 1H), 3.69 (m, 2H), 3.31 (m, 2H), 3.04 (s, 3H), 1.95 (m, 2H), 1.83 (m, 2H), 1.46 (s, 9H)。
【００４４】
tert−ブチル−4−[4−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル]ピペリジン−1−カルボキシレート
【化７】
0004663619.tif 000009
【００４５】
tert−ブチル4−(4−ヨード−1H−ピラゾール−1−イル)ピペリジン−1−カルボキシレート(3)
NaH(1.2当量，0.68mmol)を４℃でDMF(２Ｌ)中の4−ヨードピラゾール(0.57mmol)の撹拌溶液に少しずつ加えた。生成した混合物を４℃で１時間撹拌し、次いで4−メタンスルホニルオキシ−ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル、化合物２(1.1当量，0.63mmol)を加えた。生成した混合物を100℃に12時間加熱した。反応液をH2Oでクエンチし、EtOAcで数回抽出した。合わせた有機層を乾燥、濾過して濃縮し、橙色の油を得た。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ(ペンタン中の５％EtOAcで溶出した)によって精製し、白色固形物(140ｇ，66％)として化合物３を得た。
【００４６】
tert−ブチル−4−[4−(4,4,5,5−テトラメチル−1,3,2−ジオキサボロラン−2−イル)−1H−ピラゾール−1−イル]ピペリジン−1−カルボキシレート(4)
ビス(ピナコラト)ジホウ素(1.4当量，134ｇ，0.52mol)及び酢酸カリウム(４当量，145ｇ，1.48mol)をDMSO 1.5Ｌ中の化合物３(140ｇ，0.37mol)の溶液に順に加えた。混合物を窒素で数回パージし、次いでジクロロビス(トリフェニルホスフィノ)パラジウム(II)(0.05当量，12.9ｇ，0.018mol)を加えた。生成した混合物を80℃で２時間加熱した。反応混合物を室温にさまし、セライト床を通して濾過してEtOAcで洗浄した。濾液を飽和NaCl(500mL×２)で洗浄し、Na2SO4で乾燥、濾過して濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィ(ヘキサン中の５％EtOAcで溶出した)によって精製し、白色固形物として化合物４を得た(55ｇ，40％)。
【００４７】
3−[(R)−1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−5−(1−ピペリジン−4−イル−1H−ピラゾール−4−イル)−ピリジン−2−イルアミン(1)
【化８】
0004663619.tif 000010
DME(143mL)中の3−[(R)−1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−5(4,4,5,5−テトラメチル−[1,3,2]ジオキサボロラン−2−イル)−ピリジン−2−イルアミン(15.22ｇ，35.64mmol)及び4−(4−ブロモ−ピラゾール−1−イル)−ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル(14.12ｇ，42.77mmol)の撹拌溶液に水(36mL)中のNa2CO3(11.33ｇ，10692mmol)の溶液を加えた。溶液の脱気及び窒素充填を３回行った。溶液にPd(PPh3)2Cl2(1.25ｇ，1.782mmol)を加えた。反応溶液の脱気及び窒素充填を再び３回行った。反応溶液を87℃の油浴で約16時間(又はボランピナコールエステルが消費されるまで)撹拌し、周囲温度にさましてEtOAc(600mL)で希釈した。セライトパッドを通して反応混合物を濾過し、EtOAcで洗浄した。EtOAc溶液をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥、そして濃縮した。粗生成物を、シリカゲルカラム上でEtOAc／ヘキサン系(Biotage 90＋カラム：平衡、100％ヘキサン600mL、区分１：50％EtOAc／ヘキサン2250mL 直線的に、区分２：75％EtOAc／ヘキサン4500mL 直線的に、区分３：100％EtOAc 4500mL)により溶出して精製し、Rf 0.15(50％EtOAc／ヘキサン)を有する4−(4−｛6−アミノ−5−[(R)−1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−ピリジン−3−イル｝−ピラゾール−1−イル)−ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル(11.8ｇ，収率60％，純度〜95％)を得た。MS m/e 550(M+1)+
【００４８】
CH2Cl2(59mL，0.2M)中の4−(4−｛6−アミノ−5−[(R)−1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−ピリジン−3−イル｝−ピラゾール−1−イル)−ピペリジン−1−カルボン酸tert−ブチルエステル(11.8ｇ，21.45mmol)の溶液に４Ｎ HCl／ジオキサン(21mL)を加えた。溶液を一夜撹拌すると固形物が形成された。固形物をガラス棒で完全に圧砕し、超音波処理して固形物中に捕捉された出発物質を放出した。さらなる４Ｎ HCl／ジオキサン(21mL)を加え、室温でさらに２時間撹拌したところ、LCMSは出発物質を示さなかった。ろ紙を敷いたブフナー漏斗中で懸濁液を濾過した。母液が生成物５％＜を含んでいたので、母液を保存した。固形物を500mLビーカーへ移し、固形物が完全に溶解するまでHPLC水を加えた。固形Na2CO3を添加してpHを10に調整した。CH2Cl2(５×200mL)を用いて又はLCMSが水層中の生成物を示さなくなるまで水溶液を抽出した。CH2Cl2溶液をNa2SO4で乾燥し、そして濃縮した。CH2Cl2(10mL)及びMeOH(１mL)中に再溶解した粗生成物をシリカゲルカラム上でCH2Cl2／MeOH／NEt3系(Biotage 40＋カラム：平衡100％ CH2Cl2 600mL 副生物を得た、区分１：10％MeOH／CH2Cl2 1200mL直線的に、区分２：10％MeOH／CH2Cl2 2400mL、工程，区分３：９％MeOH／１％NEt3／CH2Cl2 2400mL)により溶出して精製した。所望の画分を集めて3−[(R)−1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−5−(1−ピペリジン−4−イル−1H−ピラゾール−4−イル)−ピリジン−2−イルアミンを得た(7.19ｇ，合わせた収率75％，白色固形物)。MS m/e 450(M+1)+。1H NMR (DMSO−d6, 400 MHz) δ 7.92 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.58 (m, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.45 (m, 1H), 6.90 (s, 1H), 6.10 (m, 1H), 5.55 (bs, 2H), 4.14 (m, 1H), 3.05 (m, 2H), 2.58 (m, 2H), 1.94 (m, 2H), 1.80 (d, 3H), 1.76 (m, 2H)。
【００４９】
固形物生成物3−[(R)−1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−5−(1−ピペリジン−4−イル−1H−ピラゾール−4−イル)−ピリジン−2−イルアミンをジクロロメタンに溶解し、溶媒をゆっくりと蒸発させて細かい結晶性固形物を生成した。高真空乾燥した後、試料が融点194℃を有する単一の結晶性多形体形態１であることを確認した。
【００５０】
以下の溶媒を固形物の再結晶に用いた：イソプロパノール、イソブタノール、エタノール、酢酸エチル、トルエン、テトラヒドロフラン及びジオキサン。７つの溶媒の全てで、ジクロロメタンからの最初の結晶性固形物と同じ多形体形態１の結晶性固形物を生成した。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】遊離塩基(R)−3−[1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−5−(1−ピペリジン−4−イル−1H−ピラゾール−4−イル)−ピリジン−2−イルアミン、多形体形態１の結晶性形態の粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【図２】遊離塩基(R)−3−[1−(2,6−ジクロロ−3−フルオロ−フェニル)−エトキシ]−5−(1−ピペリジン−4−イル−1H−ピラゾール−4−イル)−ピリジン−2−イルアミン、多形体形態１の結晶性形態の示差走査熱量測定法(DSC)の温度記録を示す。
【図１】
0004663619.tif 000011
【図２】
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