(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者からの血液流入口と、ＨＩＶに感染した白血球の吸着性担体である直径１．０ｍｍ〜３．０ｍｍのビーズ状酢酸セルロースを含有するカラムと、患者に血液を戻すための血液流出口とを有する、ＨＩＶ感染患者血液の白血球から単球／マクロファージを含むＨＩＶ感染白血球の除去装置。
【請求項２】
ビーズ状酢酸セルロースの直径が２．０ｍｍである請求項１記載の除去装置。
【請求項３】
白血球中の休止メモリーＴ細胞（ＣＤ４+／ＣＤ４５+ＲＯ）及び潜伏的感染ＣＤ４+リンパ球を減少させるものである請求項１又は２記載の除去装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、血液白血球のアフェレーシスを含めた、病気の処置方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ある時期、治療用アフェレーシスは、障害の管理のための代替の戦略として知られている。その技術は、障害の病因、例えばリウマチ因子、免疫複合体および血漿内のその他の体液媒介物、に関連した細胞又はタンパク質を除くことを含む（１，２）。血液細胞又は血漿成分を代替の流体を用いずに選択的に除去する操作は、最少限の副作用を伴うだけである（１）。外来患者としての方法も可能であり、それは患者に一層便利でありそして費用と操作を軽減する（２）。慢性薬剤治療法の許容できない副作用の多くもまた、上記技術で軽減される。
【０００３】
ＥＰ−Ａ−０−３１９９６１には、リンパ球に対するよりも顆粒球に対して親和性が高い吸着性担体を血液に接触させることにより、該血液から顆粒球を選択的に除去する方法が記載されている。その発明は癌の治療に関する。その方法を実施するための装置もその出願に記載されている。類似の装置が米国特許第５，７２５，７６８号に記載されている。
【０００４】
特許第１９３，４８１号及び米国特許第５，５６７，４４３号には、患者からの血液を、リンパ球に対するよりも炎症性細胞（顆粒球および単球）に対する親和性が高い吸着性担体と接触させることを特徴とする炎症性疾患の処置方法が記載されている。該方法は、急性呼吸困難症候群、リウマチ性関節炎、自己免疫疾患、アレルギー性疾患、および心筋梗塞後の逆流障害の処置に有用であると報告されている。
【０００５】
エイズ（AIDS）は、ＨＩＶ（ヒト免疫欠損ウイルス、human immunodeficiency virus）が引き起こす、生命を脅かす免疫不全症である。ＨＩＶ感染が確認されそして発症した後の死亡率は極めて高い。エイズの有効な治療法はまだ確立されてなく、また、長い潜伏期のために、効果的な感染防止対策を確立することも困難である。
【０００６】
ＨＩＶに感染した後、一般に６〜８週間で抗ＨＩＶ抗体が血液中に出現する。免疫系に不全や障害が進み、最終的にエイズに至る。便宜上、その中間段階はエイズ関連症候群（AIDS related complex）（ＡＲＣ）と分類されている。ＨＩＶに感染したある細胞はウイルスを宿しそしてＨＩＶの貯蔵器として作用する。かかる細胞には単核細胞（単球／マクロファージ）および休止ＣＤ４+リンパ球が含まれる。ウイルスはこれらの細胞の内側にいるが、免疫系によって駆追されずに保護されている。ウイルスはまた投与された薬剤との接触を遮断されているので、その状態の有効な処置は難しい。
【０００７】
エイズの主な症状は、発熱、持続性全身性リンパ節腫、体重減少（カヘキシー）および下痢である。更に日和見感染症や悪性腫瘍が発生しやすく、患者の症状を重篤化する。また、神経症状も大きな問題となっており、患者によっては脳神経系の疾患も現れることがある。
【０００８】
末期のＨＩＶ―誘発疾患（エイズ）の免疫学的考察に基づいて、その症状は免疫反応の重大な欠陥を特徴とし、ＣＤ４+Ｔリンパ球の減少、サイトカイン産生の調節異常、単球（３）を含む末梢血液細胞（３−６）によるそしてまた顆粒球（４）による、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＩＬ−１０のような前（プロ）炎症性又は免疫抑制性サイトカインの産生の増加、および免疫担当細胞のアポトーシス頻度の上昇を含む。免疫複合体に結合されたｇｐ１２０のようなＨＩＶ抗原はＣＤ４+細胞のアポトーシスを引き起こすと思われる（７−１２）。ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６はＨＩＶ複製を促進すると報告されている（３）。同時に、ＨＩＶ感染患者からの単球は、ＩＬ−１２（免疫調節剤サイトカイン）を生成する能力が著しく損なわれている。このように、健康な人においては、単球は主としてＩＬ−１２を産生するのに対して、ＨＩＶ感染患者においては主としてＩＬ−１０を産生する。ＩＬ−１０は、サイトカインの産生における上述の変化において、要となる役割を持つことが示された（５，６）。これに関係して、ＨＩＶ患者のＣＤ４+細胞のアポトーシス頻度を、ＩＬ−２およびＩＬ−１２は減少させるが、ＩＬ−１０は増大させることを示すのも重要である（１３−１７）。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
現在、ＨＩＶ感染の治療法は主として、プロテアーゼ阻害剤を含む高活性の抗レトロウイルス薬剤療法（ＨＡＡＲＴ）から成る。しかし、ある患者においては、ＨＡＡＲＴはＣＤ４+細胞数を増加させそして血漿ＨＩＶウイルス量を検出不可能な量に抑えることが示されたが、例えば単核細胞（単球／マクロファージ）および休止ＣＤ４+リンパ球を含む細胞内のＨＩＶの細胞貯蔵器（リゼルボア−）に作用する薬剤療法はまだ知られていない。これらの細胞はＨＩＶ貯蔵器のための部位として、およびＨＩＶの複製及び伝搬のための部位として働く。このことは、薬剤治療を止めると、前述の貯蔵器細胞からのＨＩＶ増殖および新たな感染に起因して、再発の可能性が非常に強いことを意味する。この見地からそしてＨＩＶの根絶を達成するために、感染した休止細胞（潜伏ＨＩＶ貯蔵器）を除去することが不可欠と思われる。しかしながら現在、細胞性ＨＩＶ貯蔵器、潜伏して感染した単核細胞（単球／マクロファージ）および休止ＣＤ４+リンパ球内のＨＩＶ―１  プロウイルス性ＤＮＡ量に作用することができる薬剤はない。
【００１０】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は細胞、例えば肝臓細胞、に感染し、引き続きこれらの細胞内および白血球内に見かけ潜伏期間中、宿る。現在、これらの潜伏感染細胞内の細胞性ＨＣＶ貯蔵器に作用することができる薬剤はない。
【００１１】
癩菌が感染すると、単核細胞に留まる。現在の薬剤治療は、細胞内の生物に対して殆ど有効でない。
【００１２】
本発明は、ＨＩＶ感染した白血球が血液から選択的に除去されるという驚くべき観察に基づく。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明は、血液から、感染し、活性化されそして／又は欠陥のある白血球を除去する方法を提供し、その方法は、感染し、活性化されそして／又は欠陥のある白血球を含む血液を、未感染の、活性化されないそして／又は欠陥のない白血球に対するよりも、感染し、活性化されそして／又は欠陥のある白血球に対して親和性が高い吸着性担体と接触させることを特徴とする。所望により、処理済み血液を、血液採取した患者に戻してもよい。
【００１４】
本発明の方法は、感染し、活性化されそして／又は欠陥のある白血球（単核細胞、即ち単球／マクロファージ、を含む）、および活性化リンパ球（例えば休止ＣＤ４+リンパ球を含めたＣＤ４+リンパ球）の選択的吸着を行う。正常の、即ち未感染の、活性化されないそして欠陥のない白血球は上記吸着性担体に付着しないようである。これは驚くべきことである。何故なら、アフェレーシスの以前の使用は、顆粒球および単球に分類される顆粒球又は炎症細胞は、リンパ球よりも優先して選択的に吸着されるという事実に基づいていたからである。選択的吸着は細胞の種類（タイプ）に基づくという以前の観察とは対照的に、本発明者等は今、細胞内寄生である白血球のウイルス感染、白血球の活性化および／又は白血球内の欠陥が、白血球の種類に関係なく、アフェレーシスカラムへの吸着をもたらすことを見出した。
【００１５】
本発明者等は現在、感染が白血球のポピュレーション（個体群）の吸着性担体への選択的結合を生じると考える。本発明者等は、これは白血球の性質の変化、例えば細胞表面リセプターの個体数の変化、例えばリセプターの種類（タイプ）又はリセプター数の変化、によると考える。感染により白血球に引き起こされた変化は、白血球の活性化と考えられるか、或いは白血球を欠陥性とみなすことができる。しかしながら、白血球を、感染の場合と同じ又は類似の選択的結合を生じさせる他の方法で活性化するか又は欠陥あるものとしてもよい。感染、活性化および／又は欠陥は同じ又は類似の細胞表面変化を生じ、例えば、変化は同じリセプター型においてでもよい。しかしながら、そうでなくともよく、本発明の方法は、感染し、活性化されそして／又は欠陥のある白血球の選択的吸着の正確なメカニズムに依存しない。
【００１６】
前記は発明の機能についての現在の理論であるが、本出願人はこの理論に束縛されない。
【００１７】
本発明の別の態様においては、病原体に感染した患者における免疫能の回復は、患者からの血液を、水に対して５５゜から９５゜の範囲の接触角度を有する担体と接触させ、そして該血液を上記患者に戻すことにより行われる。吸着性担体は上述のものであることができ、好ましくは酢酸セルロース、特に上述の好ましい形態にあるものである。
【００１８】
本発明の方法を実施する場合、白血球の除去および免疫能の回復に関する上記の両方の効果が生じる。
【００１９】
免疫能の回復は免疫系における一つ又はそれ以上の側面での改良を意味する。免疫能の回復の一つの側面は免疫学的改良である。ＨＩＶは患者の免疫系に特に大きい作用をもつ。
【００２０】
免疫回復の別の側面は、白血球の除去と該白血球の新しい白血球による置換から生じる免疫再構築である。更に別の免疫能の回復の側面は、免疫抑制性サイトカイン（ＴＮＦ−α）産生の減少から生じ得る。
【００２１】
免疫能の回復のある側面は、感染白血球の除去から生じるようであるが、一方他の側面は白血球除去とは完全に又は部分的に無関係のようである。
【００２２】
エイズにおいて、ＣＤ４白血球数は、患者の免疫系の状態の指標と見なされる。ＨＩＶ陽性の人の血液を上記の規定した担体と接触させると、その人のＣＤ４数は増加し、それにより免疫の改良、従って免疫能の回復が示される。本発明はまた、上記の吸着性担体を、上述した免疫回復のいろいろな側面のためにアフェレーシスにおいて使用する薬剤又は吸着剤の製造への使用を提供する。
【００２３】
本発明は更に、感染し、活性化されそして／又は欠陥の白血球を包含する感染を有する患者の治療法を提供し、該方法は、患者からの血液を、未感染の、活性化されないそして／又は欠陥のない白血球に対するよりも感染し、活性化されそして／又は欠陥の白血球に対して高い親和性を有する担体と接触させ、そして処理済みの血液を上記患者に戻すことを特徴とする。
【００２４】
特に、白血球は活性化されたか又は感染した白血球であることができ、そして細胞を、正常な白血球に対するよりも活性化された又は感染した白血球に対してより大きい親和性を有する吸着性担体と接触させることができる。
【００２５】
更に特に、白血球は感染した白血球であることができ、そして細胞を、正常な白血球に対するよりも感染された白血球に対してより大きい親和性を有する吸着性担体と接触させることができる。
【００２６】
白血球はウイルス又は別の細胞内病原体、例えば細胞内寄生生物、に感染されたものであることができる。白血球は、細胞を刺激しそして細胞の表面リセプターの活性化および／又は変化をもたらすようなウイルスに感染されたものであることができる。例えば、ウイルスはＨＩＶ又はＨＣＶ、特にＨＩＶである。ＨＩＶは免疫系の細胞に甚大な影響をもつ。
【００２７】
上に説明したように、ＨＩＶは単球／マクロファージおよびＣＤ４+リンパ球に感染する。いろいろなウイルスが白血球のいろいろなポピュレーションに感染し得る。単球／マクロファージは、それらの食細胞活性により、特に感染され得る。しかしながら、いろいろなウイルスはリンパ球のいろいろなポピュレーションに感染し得る。ＨＩＶはＣＤ４+リンパ球に感染する。何故なら、ウイルスはＣＤ４リセプターを経由して侵入するからである。他のウイルスはリンパ球への侵入を異なるリセプターを経由して行い、それゆえ、特定のリセプターを有するリンパ球のポピュレーションに感染する。
【００２８】
白血球は細胞内寄生生物に感染され得、該生物は細胞の表面リセプターに活性化および／又は変更をもたらす。例えばライ菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）は特に単球に感染する。
【００２９】
本発明は更に、正常な白血球に対するよりも、感染し、活性化されそして／又は欠陥ある白血球に対してより高い親和性を有する吸着性担体を、血液から感染し、活性化されそして／又は欠陥のある白血球を除去するための薬剤の製造へ使用することを提供する。
【００３０】
本発明は更に、患者の休止部位から感染白血球を洗い流す（パージする）のに使用する方法を提供し、該方法は、感染白血球を含む患者からの血液を、正常な白血球に対するよりも感染した白血球に対しての方が親和性が大きい吸着性担体と接触させることを特徴とする。処理済み血液は患者に戻して、感染細胞を休止部位から洗い出すことができる。かかる細胞の洗い出しは当業界で“パージング”として通常知られている。細胞は特に、ウイルス；例えばＨＣＶ又は特にＨＩＶ、が感染した白血球球である。かかる感染細胞には単核細胞（単球／マクロファージ）およびＣＤ４+リンパ球が含まれる。休止部位から感染細胞を洗い出すと、細胞内のウイルスは薬剤治療を受けやすくなる。
【００３１】
本発明は更に、感染し、活性化されそして／又は欠陥のある白血球が変化した表面を有する疾患の処置における使用方法を提供し、該方法は、感染し、活性化されそして／又は欠陥のある白血球を含む血液を、未感染の、活性化されないそして／又は欠陥のない白血球に対するよりも、感染し、活性化されそして／又は欠陥のある白血球に対して一層大きい親和性を有する吸着性担体と接触させることを特徴とする。処置済み血液を患者に戻して、疾患の治療を完了してもよい。
【００３２】
本発明を使用することができる疾患および障害の種類には、宿主細胞の例えばウイルス又は別の細胞内病原体、例えば寄生生物、による感染が、感染細胞の表面の性質を変更させるような疾患および障害が含まれる。例えば、免疫系の細胞の感染はこれらの細胞の活性化を引き起こし、表面リセプターの変化を伴う。
【００３３】
本発明は更に、白血球が感染された疾患又は障害をもつ患者の処置における使用方法を提供し、該方法は、感染白血球を含む血液を、未感染の白血球に対するよりも、感染し、活性化されそして／又は欠陥ある白血球に対して一層大きい親和性を有する吸着性担体と接触させることを特徴とする。処置済み血液を患者に戻して、疾患又は障害の治療を完了してもよい。
【００３４】
本発明は更に、患者の処置方法を提供し、該方法は、患者からの感染白血球を含む血液を、未感染の白血球に対するよりも、感染し、活性化されそして／又は欠陥のある白血球に対して一層大きい親和性を有する吸着性担体と接触させ、そして該血液を患者に戻すことを特徴とする。
【００３５】
本発明に従って処置し得る疾患には、癩病；ＡＲＣ、ＡＩＤＳ（エイズ）および無症状のＨＩＶ感染症を含めたＨＣＶ感染症およびＨＩＶ感染症が含まれる。更にまた本発明は、上記の方法に使用する材料の製造において、吸着性担体の使用を提供する。
【００３６】
本発明は更に、病原体、特にＨＩＶ、に感染した患者における免疫の回復方法を提供し、該方法は、患者からの血液を、水に対する接触角度が５５゜から９５゜の範囲の吸着性担体と接触させることを特徴とする。例えば、患者はＨＩＶ感染症であってもよい。
【００３７】
本発明のいずれの態様においても、吸着性担体は、全血の代わりに血漿と接触させてもよい。血液を、本発明による処置前に、適当な方法で血漿と他の成分に分離してもよい。しかしながら、全血を処理するほうが一般により簡単でかつ安価である。従って一般に、血漿は特別の状況においてのみ使用される。
【００３８】
【発明の実施の最良の形態】
本願で使用される“吸着性担体”の用語は、その表面に細胞を吸着させることができる材料を意味する。
【００３９】
本発明に従って使用される吸着性担体は、未感染の、活性化されないそして／又は欠陥のない白血球に対するよりも、感染し、活性化されそして／又は欠陥のある白血球に対してより高い親和性を有し、該吸着剤と接触する血液に悪影響を及ぼさない。
【００４０】
特定の細胞型が特定の吸着性担体によって吸着される効率は次のように計算される：
【００４１】
【数１】
0004643830.tif 000002
【００４２】
白血球分画（特定の型の白血球の数）は、標準的実験室白血球分画カウンター、例えばＴＨＭＳ  Ｈ−１（Ｔｅｃｈｎｉｃｏｎ）、により測定される。カラム中の担体によって捕獲された特定の白血球型の細胞の数は、カラム入口における血液中の対応する白血球数から、カラム出口での血液中の適当な白血球数を差し引くことにより計算される。担体に晒された細胞の数は、流量（ｍｌ／ｍｉｎ）、流動時間（アフェレーシス時間）および流入時点での適当な白血球の数から計算される。
【００４３】
本発明に従って使用し得る吸着性担体の例は、その水に対する接触角度が５５゜から９５゜の範囲内にある吸着性担体である。
【００４４】
本願で使用される“接触角度”の用語は、静止液体の自由表面と固体表面とが、該自由表面が該固体表面と接触する点において形成する角度を意味する。液体の内側に位置する角度が使用される。主な吸着性担体の水に対する接触角度を表１に要約する。
【００４５】
【表１】
0004643830.tif 000003
【００４６】
接触角度が５５゜から９５゜の範囲内にある吸着性担体、例えば表１に示すもの、が単核細胞（単球／マクロファージ）、好中球およびＣＤ４+リンパ球を含む活性化され、感染した又は欠陥のある白血球の吸着に適当であり、これにより、単核細胞（単球／マクロファージ）、好中球およびＣＤ４+リンパ球を含む活性化された白血球を液体から効果的に除去することが達成される。更に、他の血液細胞成分、血漿成分および血清成分の吸着を最小にすることができる。２種又はそれ以上の吸着性担体を組み合わせて使用してもよい。
【００４７】
ポリスチレン、酢酸セルロース、ナイロン、例えば６−ナイロン又は１１−ナイロン、ポリトリフルオロ−エチレンおよびポリエチレン  テレフタレートが、本発明による吸着性担体として特に適当である。酢酸セルロースは特に好ましい吸着性担体である。
【００４８】
吸着性担体の形状および大きさの選択に特別の限定は課せられない。しかし、吸着性担体は、血液細胞と区別し得る大きさを有し、そして効果的な接触を可能とするために、接触させられる血液と大きい接触面を有するような形状が好ましい。例えば、吸着性担体は、約０．１〜１０ｍｍの直径を有するビーズの形態を取ってもよい。適切には、ビーズは０．２〜５．０ｍｍの範囲の直径を有することができる。好ましくは、ビーズは０．５〜４．０ｍｍの範囲の直径を有することができる。更に好ましくは、ビーズは１．０〜３．０ｍｍの範囲の直径、例えば２．０ｍｍの直径、を有することができる。
【００４９】
吸着性担体による細胞除去の効率は、吸着性担体が粗い表面を有する場合に増大し得る。吸着性担体がその表面に、日本工業規格Ｂ０６０１−１９８２で規定される中心線平均高さＲａが０．２μｍ−１０μｍ、そして凹凸の平均間隔Ｓｍが５μｍから２００μｍの範囲の表面粗さをもつ場合に特にそうである。かかる表面特性を有するアフェレーシス吸着性担体の有効性は米国特許第５，５９３，５８６号に記載され、そしてかかる吸着性担体の製造法は米国特許第５，５２５，２７９号に記載された。
【００５０】
上述したように、酢酸セルロースは吸着性担体に特に好ましい材料である。好ましくは、酢酸セルロース吸着性担体はビーズの形態をとり、例えば約０．１−１０ｍｍの範囲の直径、例えば０．２−５．０ｍｍ、例えば０．５−４．０ｍｍ、例えば１．０−３．０ｍｍ、例えば２．０ｍｍの直径を有するビーズの形態をとる。
【００５１】
酢酸セルロース吸着性担体による細胞除去の有効性は、吸着性担体が粗い表面、特に上述した粗い表面を有する場合に一般に増大する。
【００５２】
本発明の方法に使用するための白血球除去器具は、感染し、活性化されそして／又は欠陥のある白血球を含む血液を吸着性担体に、該血液が該担体で処理されそして次に回収されるように接触させる手段を含む。処置される患者の血液は末梢血液であるのが好ましい。上記器具は血液を患者に戻す輸送手段をも含んでもよい。輸送手段の一方又は両方はポンプ手段を含んでもよい。輸送手段の一方又は両方は輸送手段内の血液の流量および／又は圧力を測定するための手段を含んでもよい。場合によっては、薬剤を血液に添加するための手段が輸送手段の一方又は両方に存在してもよい。
【００５３】
本発明の方法に使用する白血球アフェレーシスカラムは、生理的液体、特に減菌した生理的食塩水、に浸した吸着性担体、特にビーズの形態の吸着性担体、を満たしたカラムである。血液は上記カラムに血液流入口を経て供給され、そして血液は上記カラムから血液流出口を経て出る。場合によっては、血液流入口を患者の適当な血管、例えば腕又は手の血管、に一般に輸送手段、例えばチューブ、を介して連結する。同様に、血管流出口を患者の別の適当な血管、例えば腕又は手の血管、に連結してもよい。
【００５４】
本発明による器具の使用のための正確なプロトコルおよびその使用法は、個々の事例における臨床的判断事項であろう。
【００５５】
本発明による白血球アフェレーシス器具を通過する血液の流量は５から２００ｍＬ／ｍｉｎの範囲にあり得る。好ましくは、それは２０から５０ｍＬ／ｍｉｎである。高流量では、剪断力による溶血は不利であろう。アフェレーシスの継続時間は１０分から１０時間の範囲であることができる。正確な継続時間は個々の事例における臨床的判断の事項であろう。処置の頻度もまた個々の事例における臨床的判断の事項であろう。典型的には、１週間当たり１時間のアフェレーシスを１回、例えば３０ｍＬ／ｍｉｎの流量で使用し得る。
【００５６】
本発明による感染し、活性化されそして／又は欠陥のある白血球の除去は、疾患又は障害の処置の一部であることができる。疾患は、例えばＨＣＶ感染、癩病又はＨＩＶ感染、例えばエイズ、である。上記に示したように、好ましい吸着担体は、例えばビーズの形態の酢酸セルロースである。処置プロトコルの一例は前に挙げられている。
【００５７】
本発明の別の態様において、病原体に感染した患者における免疫能回復は、患者からの血液を、水に対する接触角度が５５゜から９５゜の範囲内の担体と接触させ、その血液を患者に戻すことにより行われる。吸着性担体は上述したものであることができ、そして好ましくは酢酸セルロース、特に上述した好ましい形態のものである。
【００５８】
本発明の方法が実施される場合、白血球除去および免疫能回復に関する上記の効果の両方が生じる。
【００５９】
免疫能回復は、免疫系の一つ又はそれ以上の側面における改良を意味する。免疫能回復の一側面は免疫学的改良である。ＨＩＶは特に感染者の免疫系に甚大な影響をもつ。
【００６０】
免疫能回復の別の側面は、白血球の除去およびそれらを新しい白血球で置換することから生じる免疫系の再構築である。免疫能回復の更に別の側面は、免疫抑制性サイトカイン（ＴＮＦ−α）の産生の減少から生じ得る。
【００６１】
免疫能回復のある側面は、感染した白血球の除去から生じるようであるが、一方他の側面は白血球除去とは完全に又は部分的に独立しているであろう。
【００６２】
エイズにおいて、ＣＤ４白血球数は感染者の免疫系状態の指標とみなされる。ＨＩＶ陽性の人の血液を前に規定した担体と接触させると、その人のＣＤ４数は増加し、これにより免疫の改良、従って免疫能回復が示される。本発明はまた、上記の吸着性担体の、上記の免疫能回復のいろいろな側面用のアフェレーシスに使用するための薬剤又は吸着剤の製造における使用を提供する。
【００６３】
【発明の効果】
本発明はエイズの処置の場合、特に血液を酢酸セルロースと接触させた場合、下記の効果を有する：
ａ）単球／マクロファージを含む感染した白血球が血液から除去され、この作用の結果、リンパ球の産生が増加しそして潜伏的に感染した白血球は患者の休止部位から移動される。
ｂ）（ａ）に記載した作用の結果、血漿ＨＩＶ−１  ＲＮＡの減少、および全ＨＩＶ−１  ＤＮＡ（潜伏的に感染した細胞における全体的ＨＩＶ−１プロウイルスＤＮＡ量を含む）の減少が達成される。
ｃ）感染した白血球の除去および白血球の産生と移動の増大は、休止メモリーＴ細胞（ＣＤ４+／ＣＤ４５+ＲＯ）、潜伏的感染ＣＤ４+リンパ球（それはＨＩＶの貯蔵器であることができる）、の数を減少させ、そして元の（ナイーブ）Ｔ細胞（ＣＤ４+／ＣＤ４５+ＲＡ）の数を増加させる。
ｄ）上記（ａ）（ｂ）および（ｃ）に記載の本願の処置法の作用は、休止部位からＨＩＶ感染白血球を洗い流す（“パージする”）ことができ、その結果、潜伏的感染ＣＤ４+リンパ球貯蔵器中の全体的ＨＩＶ−１プロウイルスＤＮＡ量が薬剤治療を受けやすくなる。
ｅ）ＨＩＶ保有患者において、単球／マクロファージおよび好中球を含む末梢血液白血球は、前（プロ）炎症性又は免疫抑制性サイトカイン、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１０（上記参照）を多量に産生することが知られている。これらのサイトカインの産生は本発明によって抑制される。
ｆ）上記（ａ）および（ｅ）の結果、Ｔ−細胞活性は上昇し、例えばＣＤ４+／ＣＤ２５+は増加する。ＣＤ４+／ＣＤ２５+はＴ−細胞活性を表す；これらは活性化されたＴ−細胞である（ＣＤ２５はＩＬ−２のリセプターである）。ＣＤ４+／ＣＤ２５+の増加はＨＩＶ患者に非常に重要である。何故なら：
それら（ＣＤ４+／ＣＤ２５+）はＩＬ−２を産生する、
２）それらは活性化されることにより、プロウイルスＤＮＡを活性化しそして該ＤＮＡをＨＡＡＲＴ（薬剤）を受け易くする、
からである。
ｇ）上記（ｆ）と類似するがそれと独立して、ＣＤ４+Ｔ細胞およびＣＤ８+Ｔ−細胞は本発明の方法により増加し得る。これは免疫能回復を例証する。
ｈ）ＨＩＶ感染患者は、ｇｐ１２０のような、ＨＩＶ抗原に結合した免疫複合体の量が増大していることが知られている；免疫複合体−ｇｐ１２０はＣＤ４+細胞のアポトーシスを誘発すると思われている。文献（１８）の証拠に基づいて本発明者等は、本発明の方法はＩｇＧ−含有免疫複合体を除去することができると思う。
【００６４】
ＴＮＦαおよびＩＬ−１２産生、並びにＣＤ４数における変化は、引き続く期間（Ｇ−１アフェレーシスの停止後７週間）の間中維持された。
【００６５】
感染細胞の除去は、Ｃ型肝炎および癩病の処置において同様の効果を持つ。
【００６６】
ＨＩＶ、ＨＣＶおよび癩病の薬剤治療の多くは、副作用があることが知られており、しばしば、患者の生活の質を低下させる激しい副作用があることが知られている。アフェレーシスは、患者に物質を投与しないので、最小の副作用しかない。従って、病状は、非常に僅かな不快感又は健康の危険性だけで改良することができる。本発明による白血球の除去を含むアフェレーシス処置を受けた患者は、この処置による不快な効果を報告していない。
【００６７】
本発明の一態様による白血球アフェレーシス装置を、添付の図面の図１および図２のみを参照して例により記載する。
【００６８】
白血球アフェレーシスカラム
アフェレーシスカラムは吸着型体外循環用の白血球アフェレーシス器具である。該器具カラムには、減菌された生理的食塩水中に浸した直径２ｍｍの酢酸セルロースビーズ（吸着性担体）が充填されている。組み上げられたアセンブリーは次に減菌されそして標準的手順により十分にリーク試験される。血液の脱血および返血は左手および右手の適当な静脈血管からである。システムは、単球／マクロファージおよび好中球を含む活性化された又は感染した白血球の、白血球アフェレーシスとして知られる方法による選択的吸着用に開発された。正常な、活性化されていない、未感染のリンパ球はカラム吸着性担体に吸着しない。加えて文献に公表された研究結果は、ＩｇＧ免疫複合体は酢酸セルロース表面に結合することを示唆し（１８）、それは追加の利点を与えるであろう。
【００６９】
Ｇ−１カラム白血球アフェレーシス器具の構成要素
本発明に従って形成された器具のＧ−１カラム（Ａｄａｃｏｌｕｍｎ）の構造を図１に示し、その構成要素の材料は表１に記載する。Ｇ−１カラム白血球アフェレーシス器具の概略は図２に示す
【００７０】
図１に示すように、Ｇ−１カラムは、減菌された生理的食塩水（９）中に浸した酢酸セルロースビーズ（吸着性担体（７））が充填されたポリカーボネートカラム（Ａｄａｃｏｌｕｍｎ（８））を含む。カラムの内容物は内部キャップ（４）、外部キャップ（５）およびＯ−リング（６）で封止されている。血液供給ラインは、血液流入口（１）でノズルキャップ（２）およびパッキング（３）によりカラムに取り付けられる。吸着性担体は２ｍｍの直径と２２０ｇの全重量を有する。ポリカーボネートカラムは長さ２０６ｍｍ、直径６０ｍｍであり、３３５ｍＬの容量を有する。生理的食塩水の全容量は１３０ｍＬである（カラム空隙容積に等しい）。
【００７１】
Ｇ−１カラム（アダカラム、Ａｄａｃｏｌｕｍｎ）の構成成分を表２に示す。
【００７２】
【表２】
0004643830.tif 000004
【００７３】
図２に示すように、Ｇ−１白血球アフェレーシス器具はポリカーボネートカラム（Ａｄａｃｏｌｕｍｎ（２６））、血液回路ライン、およびアダモニター（Ａｄａｍｏｎｉｔｏｒ）（２３）をポンプ（２４）と共に含む。患者（２１）の前腕前部血管からの血液流出物はバブル検出器（２２）を通過してポンプ（２４）およびアダモニター（２３）に行く。次に血液は、Ａｄａｃｏｌｕｍｎ（２６）に入る前に凝固防止剤投与口（２５）を通過する。カラムからの流出後に、血液はドリップチェンバー（２９）に入る。該ドリップチェンバーにはドリップチェンバー空気出口（２７）および静脈圧力ゲージ（２８）が取り付けられている。血液はバブル検出器（３０）の通過後、前腕前部血管（３１）を経て患者に返血される。
【００７４】
【実施例】
下記の非限定的実施例は本発明を例示する。
【００７５】
実施例１−１０：
ＨＡＡＲＴを受けていがＨＡＡＲＴに耐性が生じた又は部分的にＨＡＡＲＴ反応者であるＨＩＶ−１感染患者を、以下の選択基準に従うアフェレーシス治療用に選択した。アフェレーシス治療の結果を以下の実施例１−９および図３−１４に示す。
【００７６】
アフェレーシス時間および研究継続時間
ＨＡＡＲＴ下の患者は、上記のＧ−１カラムを使用したアフェレーシス処置を受けた。各患者は１週間に１回のアフェレーシスを８週間の期間にわたって受けた。各アフェレーシスは流量３０ｍＬ／ｍｉｎで６０分の継続時間である。
【００７７】
選択基準
ａ）証明されたＨＩＶ感染、
ｂ）１８歳以上の、男性又は非妊娠、非授乳期の女性、
ｃ）イタリアガイドライン、ヘルシンキおよび国際的および制度化されたガイドラインの宣言、に従い、そして研究の調査の性質に合致した、書面のインフォームドコンセントを与える能力と意志があること、
ｄ）少なくとも４カ月の安定したＨＡＡＲＴ薬剤治療状態にある。
【００７８】
実施例１：ベースラインで低いＨＩＶ  ＤＮＡ数をもったＨＩＶ感染患者の処置
ベースラインは、アフェレーシス処置開始前のＨＩＶ−１  ＤＮＡレベルであった。ベースライン血液サンプル採取直後に患者はアフェレーシスを受けた；即ち、毎分３０ｍｌの流量、各アフェレーシスの継続時間が６０分のアフェレーシスを１週間に１度であった。Ｇ−１カラムを用いたアフェレーシス後のＨＩＶ−１  ＤＮＡの降下を図３に示す。ＨＩＶ−１  ＤＮＡを、末梢血単核細胞について標準的な定量的ポリメラーゼ連鎖反応アッセイ（Ａｍｐｌｉｃｏｒ  ＨＩＶ  Ｍｏｎｉｔｏｒ（商標）、ロッシェ、バーゼル、スイス）を用いて定量した。結果は、Ｇ−１カラムを用いたアフェレーシスはＨＩＶ感染休止細胞を洗い流せることを示す。ＨＩＶ−ＤＮＡ量のかかる急速な降下を生じることができる薬剤は知られていない。
【００７９】
実施例２：ベースラインで高いＨＩＶ  ＤＮＡ数をもったＨＩＶ感染患者の処置
ベースライン血液サンプル採取の直後、患者はアフェレーシスを受けた；即ち、毎分３０ｍｌの流量、各アフェレーシスの継続時間が６０分のアフェレーシスを１週間に１度であった。Ｇ−１カラムを用いたアフェレーシスによるＨＩＶ−１  ＤＮＡの降下を図４に示す。再び（実施例１の場合のように）、結果は、Ｇ−１カラムを用いたアフェレーシスはＨＩＶ感染休止細胞を洗い出せることを示す。ＨＩＶ−ＤＮＡ量のかかる急速な降下を生じることができる薬剤は知られていない。
【００８０】
実施例３：ＨＩＶ感染患者の処置中のＨＩＶ−１  ＲＮＡの降下
ベースライン血液サンプル採取の直後、患者はアフェレーシスを受けた；即ち、毎分３０ｍｌの流量、各アフェレーシスの継続時間が６０分のアフェレーシスを１週間に１度であった。Ｇ−１カラムを用いたアフェレーシス後のＨＩＶ−１  ＲＮＡの降下を図５に示す。ＨＩＶ−１  ＲＮＡを、標準的定量的逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応競合アッセイを用いて定量した。ＨＩＶ  ＲＮＡのかかる急速なシャープな下方への傾斜を生じる薬剤又は薬剤療法は知られていない。
【００８１】
実施例４：ＨＩＶ感染患者の処置中のＣＤ４+／ＣＤ２５+Ｔ−細胞の百分率（パーセント）の上昇
ベースライン血液サンプル採取の直後、患者はアフェレーシスを受けた；即ち、毎分３０ｍｌの流量、各アフェレーシスの継続時間が６０分のアフェレーシスを１週間に１度であった。Ｇ−１カラムを用いたアフェレーシスの後のＣＤ４+／ＣＤ２５+Ｔ−細胞の百分率の上昇を図６に示す。ＣＤ４+／ＣＤ２５+リンパ球の数を、Ｅｐｉｃｓ  ＸＬフローサイトメーター（コールター  エレクトロニクス社）で、フィコエリトリン蛍光色素で標識した抗ＣＤ２５モノクローナル抗体を用いて４℃で３０分間インキュベートしたＥＤＴＡ末梢血液１００μｌを用いて測定した。
【００８２】
ＣＤ４+／ＣＤ２５+はＴ−細胞活性を示す。ＣＤ４+／ＣＤ２５+Ｔ−細胞は活性化されたＴ−細胞である。ＣＤ２５はＩＬ−２リセプターのα−サブユニットであり、ＩＬ−２の高い親和性結合に必要である。それは活性化Ｔ−細胞により発現されるが、休止Ｔ−細胞によっては発現されない。ＣＤ４+／ＣＤ２５+の増加はＨＩＶ患者に非常に重要である。何故なら、
１）それらはＩＬ−２を産生する、
２）活性化Ｔ−細胞はプロウイルスＤＮＡを活性化しそしてプロウイルスＤＮＡをＨＡＡＲＴ（薬剤）に対して感受性にする。このことは、潜在的に感染したリンパ球（感染した休止細胞）の洗い流しを容易にする。
【００８３】
実施例５：ＨＩＶ感染患者の処置後のＣＤ４+Ｔ−細胞の増加
ベースライン血液サンプル採取の直後、患者はアフェレーシスを受けた；即ち、毎分３０ｍｌの流量、各アフェレーシスの継続時間が６０分のアフェレーシスを１週間に１度であった。Ｇ−１カラムを用いたアフェレーシス後のＣＤ４+Ｔ−細胞の増加を図７に示す。ＣＤ４+リンパ球の数を、Ｅｐｉｃｓ  ＸＬフローサイトメーター（コールター  エレクトロニクス社）を用いて、フィコエリトリンーテキサスーレッド蛍光色素で標識した抗ＣＤ４モノクローナル抗体を用いて４℃で３０分間培養したＥＤＴＡ末梢血液１００μｌを用いて測定した。
【００８４】
ＣＤ４+Ｔ−細胞数はＨＩＶ感染症の重要なマーカーである。ＣＤ４+Ｔ−細胞数の増加はしばしば、ＨＩＶの降下および患者の回復のマーカーとみなされる。
【００８５】
実施例６：ＨＩＶ感染患者の処置後のＣＤ８+Ｔ−細胞の増加
ベースライン血液サンプル採取の直後、患者はアフェレーシスを受けた；即ち、毎分３０ｍｌの流量、各アフェレーシスの継続時間が６０分のアフェレーシスを１週間に１度であった。Ｇ−１カラムを用いたアフェレーシス後のＣＤ８+Ｔ−細胞の増加を図８に示す。ＣＤ８+リンパ球の数を、Ｅｐｉｃｓ  ＸＬフローサイトメーター（コールター  エレクトロニクス社）で、フルオレシンーイソシアネート蛍光色素で標識した抗ＣＤ８モノクローナル抗体を用いて４℃で３０分間培養したＥＤＴＡ末梢血液１００μｌを用いて測定した。
【００８６】
ＣＤ８+Ｔ−細胞は、ＩＬ−２の増加量により増殖される（上記の実施例４に関連して記載したように、ＩＬ−２リセプターを介して作用する）。
【００８７】
実施例７：ＨＩＶ感染患者の処置後の末梢血液単核細胞によるＴＮＦ−α産生の下降
ベースライン血液サンプル採取の直後、患者はアフェレーシスを受けた；即ち、毎分３０ｍｌの流量、各アフェレーシスの継続時間が６０分のアフェレーシスを１週間に１度であった。末梢血液単核細胞によるＴＮＦ−α産生のシャープな下降を図９に示す。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるＴＮＦ−αの産生を、２４ウェル（穴）のリンブロ（ＬＩＮＢＲＯ）プレート（フローラボラトリーズ社、マックリーン、バージニア）で１穴当たり３×１０6個のＰＢＭＣを３７℃で、湿った７％ＣＯ2雰囲気中で培養することにより、測定した。次にＰＢＭＣを刺激せず又はＬＰＳ（シグマ  ダイアグノスティックス、セイント  ルイス、ＭＯ）を１μｇ／ｍｌの濃度で用いて刺激した。上澄液を培養４８時間後に取り出し、次にサイトカイン産生を、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（ゲンツィム、ケンブリッジ、マサチュセッツ）を用いて評価した。
【００８８】
ＴＮＦ−αはＨＩＶ感染疾患の主な病理学的因子である。末梢血単核細胞によるＴＮＦ−α産生のかかる急速な減少を生じる薬剤は知られていない。
【００８９】
実施例８：ＨＩＶ感染患者の処置後の末梢血単核細胞によるＩＬ−１０（インターロイキンー１０）産生のシャープな下降
ベースライン血液サンプル採取の直後、患者はアフェレーシスを受けた；即ち、毎分３０ｍｌの流量、各アフェレーシスの継続時間が６０分のアフェレーシスを１週間に１度であった。Ｇ−１カラムを用いたアフェレーシス後の末梢血単核細胞によるＩＬ−１０（インターロイキンー１０）産生のシャープな下降を図１０に示す。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるＩＬ−１０の産生を、２４ウェル（穴）のリンブロ（ＬＩＮＢＲＯ）プレート（フローラボラトリーズ社）で１穴当たり３×１０6個のＰＢＭＣを３７℃で、湿った７％ＣＯ2雰囲気中で培養することにより、測定した。次にＰＢＭＣを刺激せず又はＰＨＡ（Ｍ型、グランド  アイランド、ニューヨーク）を１：１００の希釈で用いて刺激した。上澄液を４８時間の培養後に採取し、次にサイトカイン産生を、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（ゲンツィム、ケンブリッジ、マサチュセッツ）を用いて評価した。
【００９０】
ＩＬ−１０はＨＩＶ感染症の主な病理学的因子である。ＩＬ−１０は強力な免疫抑制剤である。それはマクロファージによるサイトカインの産生を抑制し、従ってＴ−細胞活性化を間接的に抑制する。これはＩＬ−２およびＩＬ−１２の細胞性免疫能に対する作用を妨げ、従ってＩＬ−１０は免疫系を効果的に遮断する。
【００９１】
実施例９：２人のＨＩＶ感染患者および病状を合わせた対照におけるＨＩＶ−１  ＤＮＡの変化
２対のＨＩＶ患者を、各対内で病状（ＡおよびＢ）について合致させた。対照患者をＨＡＡＲＴのみで処置し、一方Ｇ−１患者をＨＡＡＲＴおよびアフェレーシスで処置した。ベースラインは、アフェレーシス処置開始前の、研究の開始時におけるＨＩＶ−１  ＤＮＡの量（レベル）であった。血液サンプル採取の直後、Ｇ−１患者はアフェレーシスを受けた；即ち、毎分３０ｍＬの流量、各アフェレーシスの継続時間が６０分のアフェレーシスを１週間に１度であった。８週間の処置にわたるＨＩＶ−１  ＤＮＡの変化を図１１に示す。ＨＩＶ−１  ＤＮＡはアフェレーシスを受けた患者でシャープに下降したが、ＨＡＡＲＴ単独の処置の患者においては下降しなかった。ＨＩＶ−１  ＤＮＡは実施例１に記載したように測定した。
【００９２】
下記の追加の非限定的実施例１０は更に本発明を例示する。実施例１０は、本発明の方法および装置の予備的な研究を記載する。実施例１−９はその後のそして更に十分な研究に関する。
【００９３】
実施例１０：アフェレーシス処置を受ける２人のＨＩＶ感染患者におけるウイルス量、ＣＤ４−陽性細胞、ＣＤ３+細胞、ＣＤ４+ＣＤ２８+細胞、ＣＤ４+ＣＤ４５ＲＡ+細胞およびＣＤ４+ＣＤ２５+細胞の変化
ＨＩＶ感染疾患の処置用の血液処置装置として、酢酸セルロースビーズ（２２０ｇ；直径２ｍｍ）を充填した直接血液灌流型カラム（容量：約３３５ｍｌ）と吸着型血液浄化装置（“アダモニターＭＭ６−Ｐ”（商標名）；大塚電子株式会社製造）とを組み合わせた体外循環装置を使用した［「顆粒球除去装置（Ｇ−１）の慢性関節リウマチに対する臨床的検討」、炎症、１７（１）、５７−８０（１９９７）］。
【００９４】
上記体外循環装置に係わる臨床試験の結果は、引き続き本願に記載するが、イタリアにおいて正当な手続きに従って実施されたフェーズＩＩスタディの結果の一部である（Ａ  ＰＨＡＳＥ  ＩＩ  ＳＡＦＥＴＹ  ＡＮＤ  ＥＦＦＩＣＡＣＹ  ＥＶＡＬＵＡＴＩＯＮ  ＯＦ  ＣＯＭＢＩＮＥＤ  ＡＮＴＩ−ＲＥＴＲＯＶＩＲＡＬ  ＤＲＵＧＳ  ＡＮＤ  Ｇ−１  ＣＯＬＵＭＮ：Ａ  ＰＩＬＯＴ  ＳＴＵＤＹ）。
【００９５】
対象としてのＨＩＶ感染患者は、２種のヌクレオシド系逆転写酵素阻害薬と１種のプロテアーゼ阻害薬とを組み合わせた抗レトロウイルス（ＡＲＶ）薬剤の治療を受けている患者から、次の基準に従って選択された：ＡＲＶ薬剤治療にて少なくとも４ケ月以上そして一般に１年の安定化状態にある患者であり、ＣＤ４陽性細胞数が、対応するベースライン（安定化した状態に導くＡＲＶ薬剤療法の開始前の対応する値）から１０％未満の上昇にとどまる患者（ＡＲＶの免疫学的非応答者）で、かつＨＩＶ−ＲＮＡが５０，０００コピーより大きい患者、又は、ＨＩＶ−ＲＮＡの減少が、安定化した状態に導くＡＲＶ薬剤治療によりＨＡＡＲＴの開始以降、０．５ｌｏｇ以下（≦０．５ｌｏｇ）を示す患者（ＡＲＶのウイルス学的非応答患者）。
【００９６】
本発明の体外循環装置によるＨＩＶ感染疾患の処置は、前記に言及した報告に記載された慢性関節リウマチに関する臨床的検討における方法と実質的に同じに実施された。処置は、１回の処置における体外に循環する血液量を血液流量に基づいて３０ml／分、体外循環時間６０分を基準として、１回／週にて実施した。
【００９７】
患者１（４８歳男性）及び患者２（４３歳男性）における当該処置の結果を
表３に示す。
【００９８】
表３における検査項目は、いずれも当業界で普通に用いられる方法により測定されており、白血球細胞（ＷＢＣ）、好中球（neutrophile）の数、単球（monocyte）の数、好酸球（eosinophile）の数、リンパ球（lymphocyte）の数、リンパ球表面マーカーの数、ヘモグロビン（hemoglobin）の数、血小板（platelet）の数及びウイルス量（viralload）を含む。
【００９９】
詳しくは、各リンパ球表面マーカーの数は、各マーカーのモノクローナル抗体を用いたフローサイトメトリー法にて測定した結果として決定した。「ＣＤ３」はＣＤ３陽性細胞数を、「＃ＣＤ４」はＣＤ４陽性細胞数を、「％ＣＤ４」はリンパ球に対するＣＤ４陽性細胞の百分率を、「ＣＤ４／８」はＣＤ８陽性細胞に対するＣＤ４陽性細胞の比を、「ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋」はＣＤ４陽性細胞に対するＣＤ４５ＲＡ陽性細胞の百分率を、「ＣＤ４＿ＣＤ２５＋（ＩＬ−２）」はＣＤ４陽性細胞に対するＣＤ２５陽性細胞の百分率を、そして「ＣＤ４＋ＣＤ２８＋（Ｔｈ−１）」はＣＤ４陽性細胞に対するＣＤ２８陽性細胞の百分率をそれぞれ示す。
【０１００】
また、各ウイルス量は血清中のＨＩＶ−ＲＮＡ量をＲＴ−ＰＣＲ法に従い測定した結果である（ｃｐ：コピー数／ml）。
【０１０１】
表３および表４に示す結果に基づいて、それぞれのベースラインからのＣＤ４陽性細胞数の増加率（％）及びウイルス量（コピー数）の変化を、それぞれ図１２（患者１）及び図１３（患者２）に示す。更に、リンパ球に対するＣＤ３陽性細胞の百分率、及び「ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋」、「ＣＤ４＋ＣＤ２５＋（ＩＬ−２）」並びに「ＣＤ４＋ＣＤ２８＋（Ｔｈ−１）」の百分率の変化を図１４に示す（患者１：黒丸、患者２：白丸）。
【０１０２】
患者１及び患者２に関して、本発明の処置終了後（開始より６０分で）既にＣＤ４陽性リンパ球の数の増加が認められ（５０〜７０％）、その効果は、３〜７日間又はそれ以上でも持続した。更に、第２回の治療（処置）を行うことにより、この効果は、両患者とも７日間以上持続することが認められた。
【０１０３】
【表３】
0004643830.tif 000005
【０１０４】
【表４】
0004643830.tif 000006
【０１０５】
これらのＣＤ４陽性リンパ球数の迅速な増加は、本発明の処置による骨髄機能の回復と亢進、および、図１４に示されるように、新たなＣＤ３陽性細胞、特にＣＤ４５ＲＡ陽性細胞、ＣＤ２５陽性細胞およびＣＤ２８陽性細胞のようなネイテイブ細胞群、の形成によると推定される。このような増加は、ＨＩＶ感染疾患処置の従来の方法では全く観察されなかった結果である。加えて、本発明による処置はウイルス量の減少をもたらし、従ってその効果を上昇させることが認められた。
【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明の一態様による白血球アフェレーシスカラムの構成要素の概略を示す図である。
【図２】  本発明の一態様による白血球アフェレーシス器具の要素を示す図である。
【図３】  アフェレーシス治療前に低いＨＩＶ−１  ＤＮＡ数を有する患者のアフェレーシス処置中の、１０5個の末梢血液リンパ球（ＰＢＬ）当たりのＨＩＶ−１  ＤＮＡのコピー数の時間（週）変化を示すグラフである。
【図４】  アフェレーシス治療前に高いＨＩＶ−１  ＤＮＡ数を有する患者のアフェレーシス処置中の、１０5個の末梢血液リンパ球（ＰＢＬ）当たりのＨＩＶ−１  ＤＮＡのコピー数の時間（週）変化を示すグラフである。
【図５】  ＨＩＶ感染患者のアフェレーシス処置中の、血液１ｍｌ当たりのＨＩＶ−１  ＲＮＡ（×１０3個）のコピー数の時間変化を示すグラフである。
【図６】  ＨＩＶ感染患者のアフェレーシス処置中の、ＣＤ４+／ＣＤ２５+Ｔ−細胞の百分率（パーセント）の時間（週）変化を示すグラフである。
【図７】  ＨＩＶ感染患者のアフェレーシス処置中の、血液１μｌ当たりのＣＤ４+Ｔ−細胞の数の時間（週）変化を示すグラフである。
【図８】  ＨＩＶ感染患者のアフェレーシス処置中の、血液１μｌ当たりのＣＤ８+Ｔ−細胞の数の時間（週）変化を示すグラフである。
【図９】  ＨＩＶ感染患者のアフェレーシス処置中の、末梢血単核細胞によるＳＡＣ−刺激ＴＮＦ−α産生（ｐｇ／ｍｌ）の時間（週）変化を示すグラフである（ＳＡＣは黄色ブドウ状球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｕｃｃｕｓ．ａｕｒｅｕｓ）のスーパー抗原である）。
【図１０】  ＨＩＶ感染患者のアフェレーシス処置中の、末梢血単核細胞によるＳＡＣ−刺激ＩＬ−１０（インターロイキン１０のｐｇ／ｍｌ）の時間（週）変化を示すグラフである。
【図１１】  アフェレーシス処置中の患者ＡおよびＢにおける、１０5個の末梢血液リンパ球（ＰＢＬ）当たりのＨＩＶ−１プロウイルスＤＮＡ量の時間（週）変化を示すグラフである。
【図１２】  アフェレーシス処置を受けている患者１における、ＣＤ４−陽性細胞の量の時間変化（増加％）およびウイルス量の時間変化（１ｍｌ当たりのコピー数）を示すグラフである。
【図１３】  アフェレーシス処置を受けている患者２における、ＣＤ４−陽性細胞の量の時間変化（増加％）およびウイルス負荷量の時間変化（１ｍｌ当たりのコピー数）を示すグラフである。
【図１４】  アフェレーシス処置を受けている患者１および２における処置前および処置後の、ＣＤ３+細胞のレベルの変化（リンパ球のパーセントとして）、ＣＤ４+ＣＤ２８+（ＴＨ−１）細胞のレベルの変化（ＣＤ４+細胞を基準としたＣＤ２８+細胞のパーセント）、ＣＤ５+ＣＤ４５ＲＡ+細胞のレベルの変化（ＣＤ４+細胞を基準としたＣＤ４５ＲＡ+細胞のパーセント）、およびＣＤ４+ＣＤ２５+（ＩＬ−２）細胞の変化（ＣＤ４+細胞を基準としたＣＤ２５+細胞のパーセント）を示すグラフである。
【符号の説明】
１：血液流入口
２：ノズルキャップ
４：内部キャップ
５：外部キャップ
６：Ｏ−リング
７：吸着性担体
８、２６：ポリカーボネートカラム
９：生理的食塩水
２１：患者
２３：アダモニター（Ａｄａｍｏｎｉｔｏｒ）
２４：ポンプ
２５：凝固防止剤投与口
２６：アダカラム（Ａｄａｃｏｌｕｍｎ）
２７：ドリップ室空気出口
２８：静脈圧力ゲージ
２９：ドリップ室
３０：バブル検出器
３１：前腕前部血管
【図１】
0004643830.tif 000007
【図２】
0004643830.tif 000008
【図３】
0004643830.tif 000009
【図４】
0004643830.tif 000010
【図５】
0004643830.tif 000011
【図６】
0004643830.tif 000012
【図７】
0004643830.tif 000013
【図８】
0004643830.tif 000014
【図９】
0004643830.tif 000015
【図１０】
0004643830.tif 000016
【図１１】
0004643830.tif 000017
【図１２】
0004643830.tif 000018
【図１３】
0004643830.tif 000019
【図１４】
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