(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
0004813652.tif 000010
［式中、Ｒ１およびＲ３は各々独立して水素原子またはアルキル基を表し、Ｒ２およびＲ４は各々独立して水酸基、アルコキシ基または糖残基を表し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は各々独立して水素原子、水酸基、アルコキシ基または糖残基を表す。］
で表されるフラバノン誘導体および／または一般式（ＩＩ）：
【化２】
0004813652.tif 000011
［式中、Ｒ１およびＲ３は各々独立して水素原子またはアルキル基を表し、Ｒ２およびＲ４は各々独立して水酸基、アルコキシ基または糖残基を表し、Ｒ５は水素原子、水酸基、アルコキシ基または糖残基を表し、Ｒ９は次式（ａ）：
【化３】
0004813652.tif 000012
で表される基、次式（ｂ）：
【化４】
0004813652.tif 000013
で表される基、次式（ｃ）：
【化５】
0004813652.tif 000014
で表される基、または次式（ｄ）：
【化６】
0004813652.tif 000015
で表される基を表す。］
で表されるフラボノリグナン類を有効成分として含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤（慢性関節リウマチ、変形性関節症、腫瘍性浸潤、腫瘍性転移および糖尿病合併症の治療・予防の用途を除く）。
【請求項２】
フラバノン誘導体が、アロマデンドリン、タキシホリン、アンペロプシン、アスチルビン、ピノバンクシン、エンゲリチン、ピノセンブリン、ナリンギン、ナリンゲニン、サリプルピン、プルニン、サクラニン、サクラネチン、ヘスペリジン、ヘスペレチン、エリオジクチオールおよびマットイシノールからなる群より選択される化合物であって、フラボノリグナン類が、シリビン、シリクリスチン、シリジアニンおよびイソシリビンからなる群より選択される化合物であることを特徴とする請求項１記載のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤（慢性関節リウマチ、変形性関節症、腫瘍性浸潤、腫瘍性転移および糖尿病合併症の治療・予防の用途を除く）。
【請求項３】
マトリックスメタロプロテアーゼ活性の上昇に起因する疾患の治療剤および／または予防剤である請求項１または２に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤（慢性関節リウマチ、変形性関節症、腫瘍性浸潤、腫瘍性転移および糖尿病合併症の治療・予防の用途を除く）。
【請求項４】
前記疾患が、動脈硬化、歯周疾患、異所性脈管形成、潰瘍形成、骨疾患、血管再閉塞、血管再狭窄またはＨＩＶ感染症であることを特徴とする請求項３記載のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤（慢性関節リウマチ、変形性関節症、腫瘍性浸潤、腫瘍性転移および糖尿病合併症の治療・予防の用途を除く）。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規なマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤に関する。また、本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼによる細胞外マトリックスの分解によって引き起こされる各種疾患の治療および／または予防に有用なマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
マトリックスメタロプロテアーゼ（matrix metalloproteinases）（以下「ＭＭＰｓ」と称す場合がある。）は、細胞外マトリックス（extracellular matrix）（以下「ＥＣＭ」と称す場合がある。）の構成タンパク質、例えば、関節のライニング(lining)、間質性の結合組織、基底膜、軟骨などに存在するタンパク質（コラーゲン(collagen)、ラミニン(laminin)、エラスチン(elastin)、フィブロネクチン(fibronectin)、プロテオグリカン(proteoglycan)など）の分解および再構築(Remodeling)に関与するタンパク分解酵素群の総称である。
【０００３】
ＭＭＰｓはその一次構造と基質特異性の違いから、
▲１▼コラゲナーゼ群（ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８およびＭＭＰ−１３）
▲２▼ゼラチナーゼ群（ＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９）
▲３▼ストロメライシン群（ＭＭＰ−３およびＭＭＰ−１０）
▲４▼膜結合型マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＴ−ＭＭＰ）群（ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−１６およびＭＭＰ−１７）
▲５▼その他（マトリライシン（ＭＭＰ−７）、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２）
の５つのグループに分類されている。
【０００４】
ＭＭＰｓの共通した性質として、
▲１▼活性中心に二価の亜鉛イオンを有し、酵素活性に二価のカルシウムイオンを必要とすること
▲２▼潜在型酵素として分泌され、細胞外で活性化を受けること
▲３▼アミノ酸配列に高い相同性を有すること
▲４▼共通の生体内阻害因子である組織阻害剤（Tissue Inhibitor of Metalloproteinases; ＴＩＭＰｓ）によって活性が阻害されること
などが挙げられる。
【０００５】
正常組織においては、ＭＭＰｓの活性は、
▲１▼潜在型酵素（ｐｒｏ−ＭＭＰ）の産生
▲２▼その潜在型酵素の活性化
▲３▼活性化酵素のＴＩＭＰｓによる制御
の３つのステップで厳密に調節されており、ＭＭＰｓによる結合組織の分解と、新しいマトリックス組織の合成とは平衡が保たれている。
【０００６】
しかしながら、病的条件下ではＭＭＰｓ活性が上昇し、生体に存在するＴＩＭＰｓでは制御ができなくなり、ＥＣＭの分解が亢進するため、動脈硬化、関節炎（例えば、慢性関節リウマチおよび変形性関節症）、歯周疾患、異所性脈管形成、腫瘍性浸潤、腫瘍性転移、組織の潰瘍形成（例えば、角膜潰瘍、胃潰瘍、表皮性潰瘍）、骨疾患（例えば、骨粗しょう症、人工関節置換術後の弛みなどの骨吸収性疾患）、血管再閉塞、血管再狭窄、ＨＩＶ感染および糖尿病合併症などの難治性疾患の治癒を遅延させる主要な原因の一つとなっている（C.M.Dollery et al., Circ. Res., 77, 863, (1995)）。
【０００７】
したがって、ＭＭＰｓに対して阻害作用を有する物質は，これら難治性疾患の予防および治療剤として有用であると考えられる。とりわけ、がん細胞の組織浸潤・転移の際にＥＣＭの分解に関与するＭＭＰｓの役割は重要（R.P.Beckett et al., D.D.T., 1, 16, (1996)）であり、ＭＭＰｓの作用を阻害する物質は、ガンの浸潤・転移を抑制する薬剤として有望である。
【０００８】
このように病的条件下におけるＭＭＰｓ活性の上昇をＭＭＰｓ阻害剤により制御することは有用であり、各種のＭＭＰｓ阻害剤について総説が報告されている（R.P.Beckett et al., D.D.T., 1, 16, (1996)）。特に、血管新生の阻害やＭＭＰｓの活性化の阻害によるガン転移治療薬として、ヒドロキサム酸骨格をもつマリマスタット（3R-(2,2-ジメチル-1S-メチルカルバモイル−プロピルカルバモイル)−2S-ヒドロキシ−5-メチル−ヘキサノ−ヒドロキサム酸）を始めとして、いくつかの抗転移薬剤が臨床開発中である。
【０００９】
しかしながら、これらの抗腫瘍転移抑制剤は、腫瘍細胞の生物学的特徴を標的にしているので、抗がん剤のように、直接的に病巣の縮小効果が認められないため、抗がん剤の評価基準をそのまま適応して判断するのが難しく、その有用性の臨床評価方法が検討途中である。
【００１０】
その他、ＭＭＰｓ阻害剤としては、フラボン類およびアントシアニジン（特開平８−１０４６２８号公報）、エスクレチン誘導体（特開平８−１８３７８５号公報）、スルフォニルアミノ酸誘導体（特開平９−３０９８７５号公報）、ＴＩＭＰｓ（特開平１０−１７４９２号公報）などが知られているが、活性、体内での吸収、毒性などを考慮すると、新しいＭＭＰｓ阻害剤が望まれる。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明は、新たなマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を提供することを目的とする。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために、本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は、フラバノン誘導体および／またはフラボノリグナン類を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１３】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤（以下「ＭＭＰｓ阻害剤」と称する場合がある。）の有効成分は、フラバノン誘導体および／またはフラボノリグナン類である。すなわち、本発明のＭＭＰｓ阻害剤の有効成分としては、フラバノン誘導体またはフラボノリグナン類を単独で、あるいは両者を組み合わせて使用する。
【００１４】
本発明において、「フラバノン誘導体」とは、２−フェニルクロマノン骨格、すなわち次式：
【化７】
0004813652.tif 000002
で表される骨格を有する化合物を意味する。
【００１５】
本発明のＭＭＰｓ阻害剤の有効成分として使用するフラバノン誘導体は、ＭＭＰｓ活性阻害作用を有する限り特に限定されないが、好ましいものとして、一般式（Ｉ）：
【化８】
0004813652.tif 000003
［式中、Ｒ１およびＲ３は各々独立して水素原子またはアルキル基を表し、Ｒ２およびＲ４は各々独立して水酸基、アルコキシ基または糖残基を表し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８は各々独立して水素原子、水酸基、アルコキシ基または糖残基を表す。］
で表される化合物を例示することができる。
【００１６】
一般式（Ｉ）において、Ｒ１またはＲ３で表されるアルキル基は特に限定されるものではないが、好ましくは炭素数１〜５の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基である。その具体例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ｔ−ペンチル基、ネオペンチル基などが挙げられるが、その中でも特にメチル基が好ましい。
【００１７】
一般式（Ｉ）において、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７またはＲ８で表されるアルコキシ基は特に限定されるものではないが、好ましくは炭素数１〜４の直鎖状または分岐鎖状のアルコキシ基である。その具体例としては、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基などが挙げられるが、その中でも特にメトキシ基が好ましい。
【００１８】
一般式（Ｉ）において、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７またはＲ８で表される糖残基は特に限定されるものではなく、単糖類であってもよいし、二糖類、三糖類、四糖類などの少糖類であってもよい。また、少糖類は、還元性少糖類であってもよいし、非還元性少糖類であってもよい。
【００１９】
単糖類の具体例としては、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、タロース、ソルボース、タガトース、プシコースなどのヘキソース、キシロース、アラビノース、リボース、リキソース、リブロース、キシルロースなどのペントースが挙げられる。これらの単糖類が有する水酸基は、水素原子、アミノ基などで置換されていてもよいし、糖に含まれる酸素原子のいずれかが硫黄原子によって置換されていてもよいし、アルドースの場合にはその炭素鎖末端のヒドロキシメチル基がカルボキシル基に酸化されていてもよい。
【００２０】
水酸基が水素で置換された糖、すなわち、デオキシ糖の具体例としては、マンノースの６位炭素原子上の水酸基が水素に置換されたラムノース（６−デオキシマンノース）、ガラクトースの６位炭素原子上の水酸基が水素に置換されたフコース（６−デオキシガラクトース）が挙げられる。
【００２１】
水酸基がアミノ基に置換された糖、すなわち、アミノ糖の具体例としては、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルノイラミン酸などが挙げられる。
【００２２】
酸素原子のいずれかが硫黄原子によって置換された糖、すなわち、チオ糖の具体例としては、１−チオ−Ｄ−グルコースなどが挙げられる。
【００２３】
アルドースの炭素鎖末端のヒドロキシメチル基がカルボキシル基に酸化された糖、すなわち、ウロン酸の具体例としては、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸、イズロン酸などが挙げられる。
【００２４】
少糖類の具体例としては、１種または２種以上の単糖類分子がグリコシド結合したものが挙げられ、例えば、二糖類の具体例としては、キシロビオース、トレハロース、レバンビオース、キトビオース、２−β−グルクロノシルグルクロン酸などのホモ二糖、スクロース、ラクトース、ビシアノース、サンブビオース、メリビオース、エピセロビオース、ツラノース、ラクツロースなどのヘテロ糖が挙げられ、三糖類の具体例としては、ラフィノース、ウンベリフェロースなどが挙げられ、四糖類の具体例としては、スタキオースなどが挙げられる。
【００２５】
少糖類を構成する単糖類分子はデオキシ糖、メチル糖、アミノ糖、チオ糖、ウロン酸などであってもよく、例えば、デオキシ糖を含む二糖類の具体例としては、ルチノース、ロビノビオースなどが挙げられ、アミノ糖を含む二糖類の具体例としては、トレハロサミンなどが挙げられ、ウロン酸を含む二糖類の具体例としては、セロビオウロン酸などが挙げられる。
【００２６】
一般式（Ｉ）において、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７またはＲ８で表される糖残基と非糖部との結合様式は特に限定されないが、通常、糖残基は非糖部の水酸基を介して非糖部とエーテル結合している。その他の結合様式としては、例えばチオグルコシド結合などが挙げられる。
【００２７】
一般式（Ｉ）で表されるフラバノン誘導体の具体例としては、以下に示すフラバノノール類およびフラバノン類が挙げられる。
【００２８】
［フラバノノール類］
アロマデンドリン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ６およびＲ８が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＲ７が水酸基である化合物）
タキシホリン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３およびＲ８が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が水酸基である化合物）
アンペロプシン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が水酸基である化合物）
アスチルビン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３およびＲ８が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６およびＲ７が水酸基であり、Ｒ５がラムノース残基（−Ｏ−Ｃ６Ｈ１１Ｏ４）である化合物）
ピノバンクシン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５が水酸基である化合物）
エンゲリチン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ６およびＲ８が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ７が水酸基であり、Ｒ５がラムノース残基（−Ｏ−Ｃ６Ｈ１１Ｏ４）である化合物）
【００２９】
［フラバノン類］
ピノセンブリン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が水素原子であり、Ｒ２およびＲ４が水酸基である化合物）
ナリンギン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＲ８が水素原子であり、Ｒ４およびＲ７が水酸基であり、Ｒ２がグルコース−ラムノース残基（−Ｏ−Ｃ１２Ｈ２１Ｏ９）である化合物）
ナリンゲニン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＲ８が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ７が水酸基である化合物）
サリプルピン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＲ８が水素原子であり、Ｒ２およびＲ７が水酸基であり、Ｒ４がグルコース残基（−Ｏ−Ｃ６Ｈ１１Ｏ５）である化合物）
プルニン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＲ８が水素原子であり、Ｒ４およびＲ７が水酸基であり、Ｒ２がグルコース残基（−Ｏ−Ｃ６Ｈ１１Ｏ５）である化合物）
サクラニン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＲ８が水素原子であり、Ｒ７が水酸基であり、Ｒ２がメトキシ基であり、Ｒ４がグルコース残基（−Ｏ−Ｃ６Ｈ１１Ｏ５）である化合物）
サクラネチン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６およびＲ８が水素原子であり、Ｒ４およびＲ７が水酸基であり、Ｒ２がメトキシ基である化合物）
ヘスペリジン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ８が水素原子であり、Ｒ４およびＲ６が水酸基であり、Ｒ２がグルコース−ラムノース残基（−Ｏ−Ｃ１２Ｈ２１Ｏ９）であり、Ｒ７がメトキシ基である化合物）
ヘスペレチン（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ８が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ６が水酸基であり、Ｒ７がメトキシ基である化合物）
エリオジクチオール（一般式（Ｉ）において、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ８が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６およびＲ７が水酸基である化合物）
マットイシノール（一般式（Ｉ）において、Ｒ５、Ｒ６およびＲ８が水素原子であり、Ｒ２およびＲ４が水酸基であり、Ｒ１およびＲ３がメチル基であり、Ｒ７がメトキシ基である化合物）
【００３０】
本発明のＭＭＰｓ阻害剤の有効成分としては、これらのフラバノン誘導体の中から、１種の化合物を選択してもよいし、２種以上の化合物を選択してもよい。
【００３１】
本発明において、「フラボノリグナン類」とは、２−フェニルクロマノン骨格にコニフェリルアルコールが種々の酸化結合したもの（すなわちフラボノリグナン（化学式Ｃ２５Ｈ２２Ｏ１０））またはその誘導体を意味する。
【００３２】
本発明のＭＭＰｓ阻害剤の有効成分として使用するフラボノリグナン類は、ＭＭＰｓ活性阻害作用を有する限り特に限定されないが、好ましいものとして、一般式（ＩＩ）：
【化９】
0004813652.tif 000004
［式中、Ｒ１およびＲ３は各々独立して水素原子またはアルキル基を表し、Ｒ２およびＲ４は各々独立して水酸基、アルコキシ基または糖残基を表し、Ｒ５は水素原子、水酸基、アルコキシ基または糖残基を表し、Ｒ９は次式（ａ）：
【化１０】
0004813652.tif 000005
で表される基、次式（ｂ）：
【化１１】
0004813652.tif 000006
で表される基、次式（ｃ）：
【化１２】
0004813652.tif 000007
で表される基、または次式（ｄ）：
【化１３】
0004813652.tif 000008
で表される基を表す。］
で表される化合物を例示することができる。
【００３３】
一般式（ＩＩ）において、Ｒ１またはＲ３で表されるアルキル基、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７またはＲ８で表されるアルコキシ基または糖残基は、一般式（Ｉ）におけるものと同義であり、その具体例としては前記と同様のものが挙げられる。
【００３４】
一般式（ＩＩ）で表されるフラボノリグナン類の具体例としては、以下に示すフラボノリグナンが挙げられる。
【００３５】
［フラボノリグナン］
シリビン（一般式（ＩＩ）において、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５が水酸基であり、Ｒ９が前記式（ａ）で表される基である化合物）
イソシリビン（一般式（ＩＩ）において、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５が水酸基であり、Ｒ９が前記式（ｂ）で表される基である化合物）
シリクリスチン（一般式（ＩＩ）において、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５が水酸基であり、Ｒ９が前記式（ｃ）で表される基である化合物）
シリジアニン（一般式（ＩＩ）において、Ｒ１およびＲ３が水素原子であり、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５が水酸基であり、Ｒ９が前記式（ｄ）で表される基である化合物）
【００３６】
本発明のＭＭＰｓ阻害剤の有効成分としては、これらのフラボノリグナン類の中から、１種の化合物を選択してもよいし、２種以上の化合物を選択してもよい。
【００３７】
本発明のＭＭＰｓ阻害剤の有効成分して使用するフラバノン誘導体またはフラボノリグナン類は、フラバノン誘導体またはフラボノリグナン類を含有する植物から抽出することができる。
【００３８】
フラバノン誘導体またはフラボノリグナン類を含有する植物の具体例としては、伊豆縮砂（Alpinia japonica）、コノテガシワ（Biota orientalis）、ハゼノキ（Rhus succendanea）、黄柏（Phellodendron amurense）、ヒノキ（Chamaecyparis obtuse）、藤茶（Ampelopsis grossedentata）、黄杞（Engelhardtia chrysolepis）、マリアアザミ（Silybum marianum）などが挙げられる。
【００３９】
例えば、フラバノン誘導体のうち、「アロマデンドリン」は、カツラ（Cercidiphyllum japonicum）、欧州カラマツ（Larix decidua）、モモ（Prunus persica）などの材に含まれ、「タキシホリン」は、ダグラスファー（Pseudotsuga Douglasii）、カラマツ（Larix leptolepis）、イスノキ（Distylum racemosum）、ヒザクラ（Prunus Campanulata）などの材に含まれ、「アンペロプシン」は、Ampelopsis meliaefoliaの葉、Pinus contoriaの樹皮などに含まれ、「アスチルビン」は、トリアシショウマ（Astilbe odontophylla）の根茎などに含まれ、「ピノバンクシン」は、ヒマラヤゴヨウ（Pinus excelsa）、ストローブマツ（Pinus strobus）などのマツ類の心材に含まれ、「エンゲリチン」は、フジバシデ（Engelhardtia formosana）の樹皮などに含まれ、「ピノセンブリン」は、チョウセンゴヨウ（Pinus koraiensis）、ストローブマツ（Pinus strobus）、ヒマラヤゴヨウ（Pinus excelsa）などのマツ類の心材などに含まれ、「ナリンギン」は、Citrus grandisなどのザボン類の花などに含まれ、「ナリンゲニン」は、Citrus decumanaなどのザボン類の花に含まれ、「サリプルピン」は、ヤナギの一種であるpurple willow（Salix purpurea）の樹皮などに含まれ、「プルニン」は、ソメイヨシノ（Prunus yedoensis）などのサクラの材に含まれ、「サクラニン」は、ソメイヨシノ（Prunus yedoensis）やオオシマザクラの樹皮などに含まれ、「サクラネチン」は、ソメイヨシノ（Prunus yedoensis）やオオシマザクラの樹皮などに含まれ、「ヘスペリジン」は、ミカン、ポンカン、ネーブル、オレンジ、レモンなどの外果皮に含まれ、「ヘスペレチン」は、ミカン、ポンカンなどのミカン属Citrusの外果皮に含まれ、「エリオジクチオール」は、ハギ（Lespedeza bicolor）、マルバハギ（Lespedeza cyrtobotrya）の葉などに含まれ、「マットイシノール」は、シダ類イヌガンソウ（Matteuccia orientalis）の葉柄などに含まれる。
【００４０】
また、例えば、フラボノリグナン類のうち、「シリビン」、「イソシリビン」、「シリジアニン」および「シリクリスチン」は、キク科のオオヒレアザミ（Silybum marianum）の種子などに含まれる。
【００４１】
フラバノン誘導体またはフラボノリグナン類を含有する植物からのフラバノン誘導体またはフラボノリグナン類の抽出は、抽出溶媒として、例えば極性溶媒を使用して行なうことができる。好適な極性溶媒の具体例としては、水（好ましくは精製水）、低級脂肪族アルコール、含水の低級脂肪族アルコールなどを例示でき、これらを単独で、又はこれらの２種類以上の混合物として使用することができる。好適な低級脂肪族アルコールの具体例としては、メタノール、エタノール、プロパノール、１,３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールなどを例示することができる。
【００４２】
抽出処理は、植物に含まれるフラバノン誘導体またはフラボノリグナン類を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定されず、常法に従って行なうことができる。この際、抽出温度、抽出時間などの抽出条件は、フラバノン誘導体またはフラボノリグナン類の安定性を考慮して、当業者が適宜設定することができる。
【００４３】
フラバノン誘導体またはフラボノリグナン類を含有する抽出液は、そのまま本発明のＭＭＰｓ阻害剤の有効成分とすることができるが、該抽出液の希釈液もしくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、またはこれらの粗精製物もしくは精製物を本発明のＭＭＰｓ阻害剤の有効成分とすることもできる。本発明のＭＭＰｓ阻害剤の有効成分としては、分画、Kasaiらの方法（Kasai, R.et al.：Chem.Pharm.Bull.36:4167-4170 (1988)）などによって精製したフラバノン誘導体またはフラボノリグナン類を使用することが好ましい。
Kasaiらの方法によれば、植物からフラバノン誘導体またはフラボノリグナン類を抽出した後、脱脂処理（エーテル抽出による脂溶性成分の除去）、多孔性樹脂による処理（主として化合物の極性による分離）、再結晶（溶媒に対する溶解度による分離）、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる処理（分離）、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）による処理（精製）を順次行なうことにより、植物から抽出したフラバノン誘導体またはフラボノリグナン類を精製することができる。
【００４４】
本発明のＭＭＰｓ阻害剤の有効成分としては、常法に従って化学合成したフラバノン誘導体またはフラボノリグナン類を使用してもよいし、これらの化合物を成分として含む生薬エキスを使用してもよい。また、本発明のＭＭＰｓ阻害剤の有効成分としては、フラボノリグナン類としてシリマリンを使用してもよい。なお、シリマリン（「シリマリンエキス」とも呼ばれる。）は、キク科のオオヒレアザミ（Silibum marianum）の種子から抽出されたエキスであり、シリビン、イソシリビン、シリジアニン、シリクリスチンなどのフラボノリグナン類が含まれている。
【００４５】
本発明のＭＭＰｓ阻害剤は、フラバノン誘導体および／またはフラボノリグナン類そのものであってもよいが、薬学的に許容され得る担体または希釈剤と共に製剤化することが好ましい。製剤化の際には、結合剤、吸収促進剤、滑沢剤、乳化剤、界面活性剤、酸化防止剤、防腐剤、着色剤、香料、甘味料などを添加することができる。製剤中の有効成分の割合は、ＭＭＰｓ活性を阻害し得る範囲内で適宜決定し得るが、好ましくは０．１〜１０重量％であり、さらに好ましくは０．５〜１．０重量％である。剤形としては、顆粒剤、細粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、軟膏、ゲル、ペースト、クリーム、噴霧剤、溶液剤、懸濁液剤などが挙げられる。
【００４６】
本発明のＭＭＰｓ阻害剤の投与経路としては、経口投与の他、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、関節・膣などの非経口投与など、種々の投与経路が挙げられる。本発明のＭＭＰｓ阻害剤の投与量は、有効成分であるフラバノン誘導体またはフラボノリグナン類の量に換算して、通常一日あたり０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは０．５〜２００ｍｇ／ｋｇ（体重）である。１日量を１回から数回程度投与することができるが、投与量および投与頻度は、年齢、性別、個人差、病状、投与経路などに応じて適宜変更することができる。
【００４７】
本発明のＭＭＰｓ阻害剤は、経口投与が可能なので、例えば、食品に添加し、それを摂取させてもよい。ここで、「食品」とは、栄養素を１種以上含む天然物および加工品を言い、あらゆる飲食物を含む。本発明のＭＭＰｓ阻害剤を添加し得る食品の具体例としては、チョコレート、ビスケット、飴菓子などの菓子類、ジュースなどの清涼飲料、牛乳、ヨーグルトなどの乳酸飲料などが挙げられる。
【００４８】
本発明のＭＭＰｓ阻害剤は、ＭＭＰｓの活性を阻害することができる。
本発明のＭＭＰｓ阻害剤が活性を阻害し得るマトリックスメタロプロテアーゼの種類は特に限定されないが、本発明のＭＭＰｓ阻害剤は特にＭＭＰ−７に対して優れた阻害作用を有している。
【００４９】
生体内におけるＭＭＰｓ活性の上昇（例えばＭＭＰｓ活性調節不能によるＭＭＰｓ活性の上昇）は種々の疾患に関与しているので、本発明のＭＭＰｓ阻害剤はＭＭＰｓ活性の上昇に起因する種々の疾患の予防剤および／または治療剤として有用であると考えられる。
【００５０】
すなわち、ＭＭＰｓ活性が上昇すると、ＥＣＭの分解が亢進し、これが、動脈硬化、関節炎（例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症）、歯周疾患、異所性脈管形成、組織の潰瘍形成（例えば、角膜潰瘍、胃潰瘍、表皮性潰瘍）、骨疾患（例えば、骨粗鬆症、人工関節置換術後の弛みなどの骨吸収性疾患）、血管再閉塞、血管再狭窄、ＨＩＶ感染、糖尿病合併症などの難治性疾患の治癒を遅延させている主要な原因の一つとなっている。特に、ＭＭＰ−７は、上皮性のがん細胞である大腸がんや胃がんで特異的に発現が亢進していることが報告されており(Mori, M. et al.: Cancer, 75: 1516-1519, 1995; Kataoka, H.: Oncol. Res. 9: 101-109, 1997)、がんの組織浸潤・転移に関与していると考えられる。したがって、本発明のＭＭＰｓ阻害剤によれば、ＭＭＰｓ活性を阻害することにより、ＭＭＰｓ活性の上昇に起因する上記疾患を予防および／または治療することができると考えられる。
【００５１】
特に、本発明のＭＭＰｓ阻害剤はＭＭＰ−７に対して優れた阻害作用を有しているので、ＭＭＰ−７活性を阻害することにより、ＭＭＰ−７が関与するがんの組織浸潤・転移を抑制することが期待され、抗腫瘍転移薬として有用であると考えられる。
【００５２】
【実施例】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００５３】
〔実施例１〕
（１）ＭＭＰ−７の調製
マトリライシン（ＭＭＰ−７）のｃＤＮＡ（Nagase, H.: Biol. Chem., 378：151-160, 1997；Sato, H. et al.: Nature, 370: 61-65, 1994；Crit. Rev. Oral. Biol. Med., 4：197-250, 1993）を、発現ベクターｐＴＨ−７２に導入し、Ｃ末端にヒスチジン６残基を持つ組換え潜在型酵素（ＰｒｏＭＭＰ）を、大腸菌大量発現系を用い発現させた後、活性化した。なお、発現ベクターｐＴＨ−７２は、タンデムリピートのＴ７プロモーターの下流に、リボソーム結合部位、翻訳開始コドン、マルチクローニング部位、ヘキサヒスチジンタグをコードする配列、および翻訳終止コドンを含んでいる。
【００５４】
ヒトＭＭＰ−７は、Ｉｔｏｈらの方法（Itoh, M. et al.: J. Biolchem., 119: 667-673, 1996）に従って発現させた。また、ヒト組換えＭＭＰｓの発現、精製、および巻き戻し（リフォールディング；refolding）は、公知の方法（西村義文、大野茂雄  監修：  タンパク実験プロトコール、細胞工学別冊  実験プロトコールシリーズ２  構造解析編、1997）に準じて行なった。
【００５５】
すなわち、マトリライシン（ＭＭＰ−７）のｃＤＮＡを含む発現ベクター(ｐＴＨ−ＭＭＰ−７)を、大腸菌Ｂｌ３２（ＤＥ３）株にトランスフェクトし、ＩＰＴＧで発現誘導した。
発現タンパクは、Ｎｉ−ＮＴＡ樹脂（QIAGEN INC.,USA）を用いてアフィニティー精製後、リフォールディングを行ない、トリプシンと３７℃、５分間反応後、ＤＩＦＰ（diisopropylphosphofluoridate）とトリプシン阻害剤（Tris-HCl  50mM, NaCl  150mM, CaCl2  10mM, NaN3  0.02%, Brij35  0.05%）を加えることにより活性型へ移行させた。
これを酵素標本とし、蛍光性ペプチド基質（MOCAc/DNP peptide）切断活性反応を行ない、蛍光マイクロプレートリーダー（励起波長：340nm、蛍光波長：400nm）による蛍光強度を測定し、これを酵素活性の指標とした。
【００５６】
（２）フラバノン誘導体またはフラボノリグナン類のＭＭＰｓ阻害活性の測定
フラバノン誘導体としては、タキシホリン（化合物１）、アスチルビン（化合物２）、アンペロプシン（化合物３）を使用し、フラボノリグナン類として、シリクリスチン（化合物４）、シリジアニン（化合物５）、シリビン（化合物６）を使用した。なお、フラバノン誘導体として使用した化合物１〜３の構造を図１に、フラボノリグナンとして使用した化合物４〜６の構造を図２示す。
【００５７】
フラバノン誘導体またはフラボノリグナン類は、0.05％エタノールに溶解させて0.1mg/mLとした後、水で、0.075mg/mL、0.05mg/mL、0.025mg/mL、0.01mg/mLに希釈した。
ＭＭＰ−７阻害活性の測定は、活性型ＭＭＰ−７ 40μL、フラバノン類またはフラボノリグナン類 30μL、アッセイバッファー20μL（Tris-HCl (pH 7.5)、500mM、NaCl  1．5M、CaCl2  100mM、ZnSO4 500μM、NaN3  30mM、Brij35  0.05%）を、３７℃で１５分間プレインキュベーションした後、MOCAc/DNP peptide 120μL(4.16μM)を添加し、３７℃で１５分毎に観察しながら、２時間反応させ、蛍光マイクロプレートリーダー（励起波長：340nm、蛍光波長：400nm）による蛍光強度を測定することにより行なった。
２時間後の５０％酵素阻害濃度（ＩＣ５０）（mg/ml）を表１に示す。
【００５８】
0004813652.tif 000009
【００５９】
表１に示すように、化合物１〜６のフラバノン誘導体またはフラボノリグナン類は濃度依存的にＭＭＰｓ活性阻害作用を示すことが確認された。しかも、いずれも極めて低濃度で優れたＭＭＰｓ活性阻害作用を示すことが確認された。
【００６０】
【発明の効果】
本発明により、フラバノン誘導体および／またはフラボノリグナン類を有効成分として含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤（ＭＭＰｓ阻害剤）が提供される。本発明のＭＭＰｓ阻害剤は、ＭＭＰｓに対して優れた阻害作用を有する。本発明のＭＭＰｓ阻害剤は、ＭＭＰｓ活性が関与する疾患、例えば、動脈硬化症、関節炎（例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症）、歯周疾患、異所性脈管形成、腫瘍性浸潤、腫瘍性転移、組織の腫瘍形成（例えば、角膜腫瘍、胃潰瘍、表皮潰瘍）、骨疾患（例えば、骨粗鬆症、人工関節置換術後の弛みなどの骨吸収性疾患）、血管再閉塞、血管再狭窄、ＨＩＶ感染、糖尿病合併症などの治療剤および／または予防剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例で使用したフラバノン誘導体（タキシホリン（化合物１）、アスチルビン（化合物２）、アンペロプシン（化合物３））の構造を示す図である。
【図２】実施例で使用したフラボノリグナン類（シリクリスチン（化合物４）、シリジアニン（化合物５）、シリビン（化合物６））の構造を示す図である。
【図１】
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【図２】
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