(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
数平均分子量８,０００〜３００，０００のポリエチレングリコールからなるセグメントＢと、セグメントＢの一端にセグメントＡ1が結合し、他端にセグメントＡ2が結合した、数平均分子量１０，０００〜６００，０００のＡ1ＢＡ2型のポリマーであって、Ａ1とＡ2が修飾アミノ酸基および未修飾アミノ酸基を共に含み、修飾アミノ酸基が、β−ベンジル−Ｌ−アスパルテートまたはγ−ベンジル−Ｌ−グルタメートであり、未修飾アミノ酸基がＬ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸塩およびＬ−グルタミン酸塩からなる群より選ばれる１種以上であり、かつセグメントＡ1およびセグメントＡ2とに含まれる修飾アミノ酸基が、セグメントＡ1およびセグメントＡ2とを合計したアミノ酸全量の４０モル％以上８０モル％以下の範囲で含まれることを特徴とするＡ1ＢＡ2型ポリマー。
【請求項２】
セグメントＢのポリエチレングリコールの両端にＡ1'およびＡ2'の修飾ポリアミノ酸基を結合させたＡ1'ＢＡ2'型ポリマーを得た後、これを原料として、修飾基を一部脱離させて請求項１記載のＡ1ＢＡ2型ポリマーを得ることによる、前記Ａ1ＢＡ2型ポリマーの生体中での加水分解性をコントロールする方法。
【請求項３】
請求項１記載のＡ1ＢＡ2型ポリマーを含んでなる生体内吸収性材料。
【請求項４】
請求項１又は２記載のＡ1ＢＡ2型ポリマーからなる組織癒着防止膜。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生体内吸収性のポリマー、生体内吸収性材料および組織癒着防止膜に関する。更に詳しくは、ブロックセグメント（Ｂ）が水溶性のポリエチレングリコールよりなり、両端のポリアミノ酸セグメント（Ａ1、Ａ2）が修飾アミノ酸および未修飾アミノ酸を共に含んでなるポリマー、およびこれを用いて作製された、乾燥状態で良好な力学的強度と柔軟性を有し、生体内に埋入した場合、速やかに水分を吸収して含水ゲルを形成し、かつ体内に大量に埋入した場合でさえ一定期間内に分解吸収が可能なＡ1ＢＡ2型ポリマー、生体内吸収性材料および組織癒着防止膜に関する。
【０００２】
【従来の技術】
生体材料として用いられる高分子材料には、非発熱性，非アレルギー性等の非毒性、力学的特性等の組織あるいは生体への適合性、物質分離性、薬物徐放性等の使用用途に応じた機能性が求められる。
例えば、外科手術後に起こる組織の癒着を防止するために癒着防止膜が用いられる。
このような癒着防止膜には、（１）良好な組織への装着性、（２）組織への非付着性および低刺激性、（３）手術後再摘出を不要とするための速やかな生体内分解性、（４）ハンドリングに影響する乾燥状態における優れた物性（力学的強度および弾性）等が求められている。
しかし、従来開発されている材料は、要求される機能性等のバランスが必ずしも満足しうるものでなく、これらの条件をバランスよく満足する材料の開発が望まれている。
【０００３】
従来、セグメント（Ｂ）としてポリエチレングリコール、両端のポリアミノ酸基セグメント（Ａ1、Ａ2）としてポリ−β−ベンジル−Ｌ−アスパルテート（以下、ＰＢＬＡと略すこともある。）あるいはポリ−β−ベンジル−Ｌ−グルタメート（以下、ＰＢＬＧと略すこともある。）よりなるＡ1ＢＡ2型ブロックコポリマーに関する技術が開示されているが、これらのポリマーは良好な力学的特性が得られるものの、生体内における崩壊速度が比較的遅く、体内に大量に埋入した場合、１週間以内といった短期間に完全に消失しない場合が認められた（国際公開番号ＷＯ００/７７１６０２Ａ１、明細書）。
【０００４】
また、生体内吸収性材料としては、ヒアルロン酸、コラーゲン、カルボキシメチルセルロース、ポリカプロラクトン、再生セルロースやポリ乳酸、ポリグリコール酸およびこれらのコポリマーが知られているが、何れも理想的な生体内吸収速度が得られにくい、あるいは力学的強度や弾性が不足するといった問題があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、体内に大量に埋入した場合でも所定期間内に完全に消失するＡ1ＢＡ2型の生体内分解性のポリマーを提供することである。
本発明の別の目的は、前記ポリマーを含んでなる、乾燥状態で良好な力学的特性を有する材料を用いた生体内吸収性材料、および組織癒着防止膜を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、水溶性のブロックセグメントＢとしてポリエチレングリコール、両端の非水溶性セグメントが修飾アミノ酸基および未修飾アミノ酸基よりなるセグメントＡ1、セグメントＡ2であるポリマーを用いて作製される材料が乾燥状態で良好な強度、弾性、低刺激性および体内に大量に埋入した場合でも一定期間内に完全に消失する生体内吸収性を有することを見出し、本発明を完成した。
本発明によれば、数平均分子量８,０００〜３００，０００のポリエチレングリコールからなるセグメントＢと、セグメントＢの一端にセグメントＡ1が結合し、他端にセグメントＡ2が結合した、数平均分子量１０，０００〜６００，０００のＡ1ＢＡ2型のポリマーであって、Ａ1とＡ2が修飾アミノ酸基および未修飾アミノ酸基を共に含み、修飾アミノ酸基が、β−ベンジル−Ｌ−アスパルテートまたはγ−ベンジル−Ｌ−グルタメートであり、未修飾アミノ酸基がＬ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸塩およびＬ−グルタミン酸塩からなる群より選ばれる１種以上であり、かつセグメントＡ1およびセグメントＡ2とに含まれる修飾アミノ酸基が、セグメントＡ1およびセグメントＡ2とを合計したアミノ酸全量の４０モル％以上８０モル％以下の範囲で含まれることを特徴とするＡ1ＢＡ2型ポリマーが提供される。
また本発明によれば、セグメントＢのポリエチレングリコールの両端にＡ1'およびＡ2'の修飾ポリアミノ酸基を結合させたＡ1'ＢＡ2'型ポリマーを得た後、これを原料として、修飾基を一部脱離させて前記のＡ1ＢＡ2型ポリマーを得ることによる、前記Ａ1ＢＡ2型ポリマーの生体中での加水分解性をコントロールする方法が提供される。
また本発明によれば、前記Ａ1ＢＡ2型ポリマーを用いた生体内吸収性材料が提供される。
更に本発明によれば、前記Ａ1ＢＡ2型ポリマーからなる組織癒着防止膜が提供される。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明のポリマーは、分子の中にセグメントＢを持ち、その両端に、前記のＢのブロックセグメントとは異なる種類の非水溶性セグメント（Ａ1、Ａ2）を持つ、Ａ1ＢＡ2型ポリマーであって、前記のＡ1、Ａ2は、修飾アミノ酸基および未修飾アミノ酸基を共に含んでいる構造のＡ1ＢＡ2型ポリマーである。
本発明のＡ1ＢＡ2型ポリマーは、セグメントＢが数平均分子量８,０００〜３００,０００のポリエチレングリコール（以下、ＰＥＧと略すこともある。）、セグメントＢの一端にセグメントＡ1が結合し、セグメントＢの他端にセグメントＡ2が結合した、全体の数平均分子量１０，０００〜６００，０００のＡ1ＢＡ2型ポリマーである。なお、Ａ1ＢＡ2型のセグメントＡ1とセグメントＡ2部分は修飾アミノ酸基および未修飾アミノ酸基よりなるセグメントであり、分子量および修飾アミノ酸基含量は同一でも異なってもよい。Ａ1＝（ａ11）ｍ1＋（ａ12）ｍ2、Ａ2＝（ａ21）ｎ1＋（ａ22）ｎ2とする。ここで、ａ11、ａ21は修飾アミノ酸基、ａ12、ａ22は未修飾アミノ酸基、ｍ1、ｍ2、ｎ1、ｎ2はそれぞれの基のモル数とする。ｍ1≧０、ｍ2≧０、ｎ1≧０、ｎ2≧０、ｍ1＋ｍ2≧１、ｎ1＋ｎ2≧１である。
【０００８】
本発明のポリマーの数平均分子量が、１０，０００より小さいと、また６００，０００より大きいと、生体に埋入される材料に求められる力学的特性および非刺激性を満足する生体内吸収性材料を容易に得ることができない。
【０００９】
本発明において修飾アミノ酸基は、β−ベンジル−Ｌ−アスパルテートまたはγ−ベンジル−Ｌ−グルタメートであり、これらは疎水化でき、かつ、エステル結合は生体内において容易に脱離することから、生体内吸収性材料として好ましい。
【００１０】
本発明のＡ1ＢＡ2型ポリマーは、セグメントＡ1とセグメントＡ2に相当する非水溶性セグメントの修飾アミノ酸含量が、全アミノ酸含量の４０ｍｏｌ％以上８０ｍｏｌ％以下を含んでなるものである。修飾アミノ酸含量が３０ｍｏｌ％未満および９０ｍｏｌ％を超える場合、理想的な吸収速度を容易に得ることができない。理想的な吸収速度は、使用するポリマーの形状や用途によって異なるが、通常２日〜１週間以内で生体中で吸収される。より好ましくは、３日〜６日、さらに好ましくは４日〜６日である。癒着防止膜に限定して言えば、３〜６日が望ましく、さらには、４日〜６日が望ましい。
【００１１】
本発明のポリマー中、前記のＢに相当するブロックセグメントを構成する水溶性のポリエチレングリコールの原材料としては、末端にアミノ基を有するポリエチレングリコールが使用できる。Ａ1−Ｂ、Ｂ−Ａ2間の結合は特に限定されないが、例えばアミノメチル基、アミノエチル基、アミノプロピル基等の基が両末端についたポリエチレングリコールが挙げられる。ポリエチレングリコールのブロックセグメントの数平均分子量が８，０００〜３００，０００であるものが良好な生体内吸収性速度および力学的特性をバランスしやすいとの理由から好ましい。
【００１２】
前記のセグメントＡ1、セグメントＡ2に相当するポリアミノ酸セグメントは、構成分子中に疎水性修飾アミノ酸ユニットを少なくとも１つ以上有していれば、本発明で言うポリマーを構成することができる。２日〜１週間以内という短期間に生体内吸収性を発揮するためには、前記のセグメントＡ1、セグメントＡ2に相当するセグメントは、修飾アミノ酸および未修飾アミノ酸により構成されたセグメントである必要がある。
【００１３】
本発明のポリマーのポリ修飾アミノ酸を合成するために用いられる修飾アミノ酸とは、ホスゲン法によりアミノ酸−Ｎ−カルボン酸無水物（以下、ＮＣＡと略すこともある。）を合成する際に、官能基であるカルボキシル基、アミノ基、水酸基、チオール基などを予め保護しておくために保護基によって保護したアミノ酸を指す。
【００１５】
本発明で用いる未修飾アミノ酸は、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸塩およびＬ−グルタミン酸塩からなる群より選ばれる１種以上であり、該未修飾アミノ酸塩は、アミノ酸側鎖の官能基が金属等によって塩を形成しているものである。
【００１６】
本発明のポリマー中の、両端のブロックセグメントを構成するアミノ酸のうち、代表的なγ−ベンジルグルタミン酸（以下、ＢＬＧと略すこともある。）を式｛１｝に、グルタミン酸（以下、Ｇｌｕと略すこともある。）を式｛２｝に、グルタミン酸ナトリウム塩（以下、Ｇｌｕ・Ｎａと略すこともある。）を式｛３｝にそれぞれ示す。
【００１７】
【化１】
0004734772.tif 000002
【００１８】
【化２】
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【００１９】
【化３】
0004734772.tif 000004
【００２０】
また、β-ベンジルアスパラギン酸（以下、ＢＬＡと略すこともある。）を式｛４｝に、アスパラギン酸（以下、Ａｓｐと略すこともある。）を式｛５｝に、アスパラギン酸ナトリウム塩（以下、Ａｓｐ・Ｎａと略すこともある。）を式｛６｝にそれぞれ示す。
【００２１】
【化４】
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【００２２】
【化５】
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【００２３】
【化６】
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【００２４】
Ａ1ＢＡ2の重合体の数平均分子量が１０，０００〜６００，０００で、セグメントＢの部分の数平均分子量が８，０００〜３００，０００である。好ましくは、１０，０００〜５０，０００である。
【００２５】
セグメントＡ1またはセグメントＡ2個々の部分の数平均分子量は、１，０００〜１５０，０００で、好ましくは、２，０００〜４０，０００である。
このようなポリマーのうち、特に生体に対して低刺激性が要求される分野に使用する場合、下記式｛７｝で表されるポリマーが特に望ましく用いられる。ただし、式｛７｝中のＲは、−ＣＨ２ＣＯＯＮａ、−ＣＨ２ＣＯＯＨあるいは−ＣＨ２ＣＯＯＣ６Ｈ５のいずれかである。
【００２６】
【化７】
0004734772.tif 000008
【００２７】
式中、ａおよびｄは、それぞれ前記セグメントＡ1、セグメントＡ2部分の繰り返し数で１以上の整数であり、より好ましくは５〜８０の整数である。ｂはＰＥＧとアミノ酸部分結合部のメチレン部の繰り返しで１〜１０の整数であり、ｃはオキシエチレン基の繰り返し数で２００〜１，２００の整数である。本発明のポリマー式｛７｝で示されるポリマーを１種用いてもよいし、２種以上の混合物として用いてもよい。なお、式｛７｝中で用いられている繰り返し数、ａ、ｂ、ｃ、ｄは、先に示した数平均分子量を式｛７｝を基準として考える大まかな数字として示した。
【００２８】
本発明のＡ1’ＢＡ2’型ポリマーの修飾基を一部脱離させる方法としては、一般的に知られている方法が用いられるが、具体的には、アルカリ溶液による加水分解反応、接触水素添加反応あるいは酵素反応により修飾基の一部を脱離させることができる。
【００２９】
本発明のポリマーの製造方法は、公知の合成方法が挙げられる。例えば、本発明のポリマーは両末端に１級アミノ基を両末端に有する市販のＰＥＧを開始剤として、修飾アミノ酸―Ｎ―カルボン酸無水物を開環付加重合させてＡ1ＢＡ2型ポリマーを得た後にアルカリ加水分解、接触水素添加反応あるいは酵素分解によって側鎖の修飾部分の一部を分解することにより本発明のＡ1ＢＡ2型ポリマーを容易に得ることができる。
【００３０】
このようにして合成したポリマーの内、本発明に用いられるポリマーは、１０，０００〜６００，０００の数平均分子量を有するものである。
また、ポリマーの各セグメントの数平均分子量は、原材料ＰＥＧの分子量、ＮＣＡおよびアルカリの添加量により、容易に制御することができるが、力学的強度および弾性率を考慮した場合、ＢセグメントであるＰＥＧセグメントの数平均分子量は、８，０００〜３００，０００が望ましく、更に望ましくは１０，０００〜５０，０００であり、最も望ましくは１２，０００〜３０，０００である。ＰＥＧセグメントの数平均分子量が８，０００未満の場合、十分な物性が得られにくい。
ＰＥＧセグメントの数平均分子量が３００，０００を超える場合は、その原料のＰＥＧ製品の粘度が高くなり、取り扱い難くなるので製造上好ましくない。
【００３１】
また、ポリアミノ酸セグメントであるセグメントＡ1およびセグメントＡ2の個々の数平均分子量は、１，０００〜１５０，０００であり、更に望ましくは２，０００〜４０，０００であり、もっとも望ましくは５，０００〜１０，０００である。ポリアミノ酸セグメントのセグメントＡ1とセグメントＡ2の合計の数平均分子量は、数平均分子量が２，０００〜３００，０００である。より好ましくは４，０００〜８０，０００であり、さらに望ましくは１０，０００〜２０，０００である。セグメントＡ1とセグメントＡ2の合計の数平均分子量が２，０００未満あるいは３００，０００を超える場合、十分な力学的特性が得られないので好ましくない。
【００３２】
また、本発明のポリマーは、生体に埋入される材料に求められる力学的特性および非刺激性を満足する生体内分解性材料である。
本発明のポリマーを生体内吸収性材料として用いる場合は、例えばキャスト法あるいは加熱溶融プレス法により容易にシート状に成型することができる。
このようにして得られた生体内分解性材料は、乾燥状態において良好な力学的強度とゴム弾性の特徴を有する。
本発明のポリマーよりなる生体内吸収性材料および、そのシートの生体内分解速度は、Ｂ成分のブロックセグメント、Ａ1、Ａ2の両端のセグメントの数平均分子量および分子量比、シートの厚み、未修飾アミノ酸／修飾アミノ酸のｍｏｌ比などを適宜コントロールすることによって容易に制御することができる。
【００３３】
また、本発明のポリマーは、他の公知のポリマー類と混合して用い、生体内分解性材料とすることもできる。このような場合、用いることができるポリマー類としては、例えばＰＥＧ−ＰＢＬＡトリブロックコポリマー、ＰＥＧ−ＰＢＬＧトリブロックコポリマー、ヒアルロン酸、コラーゲン、カルボキシメチルセルロース、ポリカプロラクトン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびこれらのコポリマー等がある。ここで、ＰＢＬＡ、ＰＢＬＧは、それぞれポリβ−ベンジルアスパラギン酸、ポリγ−ベンジルグルタミン酸を示す。
【００３４】
また本発明のポリマーを組織癒着防止膜として用いる場合、前記に示した方法によりシート状に成型することによって組織癒着防止膜として好適に用いることができる。
【００３５】
この他、本発明のポリマーは、保水性、ハイドロゲル形成能、生体内吸収性等の固有の特徴を生かして、トイレタリー製品や化粧品など、種々の製品に応用展開することもできる。
【００３６】
【発明の効果】
本発明によれば、ブロックセグメントＢが親水性のポリエチレングリコールよりなり、両端のセグメントＡ1およびＡ2が疎水性の修飾アミノ酸基および未修飾アミノ酸基を含んでなる数平均分子量が１０，０００〜６００，０００のＡ1ＢＡ2型ポリマーを用いることにより、組織癒着防止膜等の生体に埋入される材料に求められる力学的特性および非刺激性を満足する材料が提供される。
【００３７】
本材料は、水中でハイドロゲルを形成するが、このハイドロゲルは十分な柔軟性を有しており、水中で膨潤した状態のまま室温において長期静置しても膨潤直後の形態が失われることはないという優れた特徴を示す。
本発明の生体内分解性材料の、このような物性は、特に組織癒着防止膜としての用途を考える場合、組織に装着する際のハンドリング、ゲル化後の軟組織に対する追従性に優れるため、特に好ましい。
以上のような特性を有する本発明のポリマーは、生体内分解性材料および生体内分解性シートとしての使用に好適である。
【００３８】
【実施例】
以下、実施例に基づき本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されない。
分析方法および条件等を以下に示す。
［1Ｈ−ＮＭＲの測定方法（１）］
機種：日本電子（株）社製、ＪＮＭ  ＥＸ２７０、
溶媒：Ｄ2Ｏ（０．５Ｎ  ＮａＯＨ含有）、
内部標準：Ｈ2Ｏ（４．７０ｐｐｍ）。
［1Ｈ−ＮＭＲの測定方法（２）］
機種：日本電子（株）社製、ＪＮＭ  ＥＸ２７０、
溶媒：ＤＭＳＯ−ｄ6、
測定温度：８０℃、
内部標準：ＤＭＳＯ（２．６２ｐｐｍ）。
【００３９】
［生体内分解性シートの作製方法（１）］
ポリマー５００ｍｇを１００℃に加熱した金属板に挟み、３分間軟化させた後、１０ＭＰａの荷重を３分間かける。冷却後フィルムを剥離させて、無色半透明のシートを得る。このシートを水中に投入すると徐々に膨潤し、無色透明のハイドロゲルを形成する。
［生体内分解性シートの作製方法（２）］
ポリマー５００ｍｇを５ｍＬの塩化メチレンに完全に溶解させる。このポリマー溶液をポリテトラフルオロエチレン樹脂製のシャーレ上にキャストし、室温で１時間溶媒を蒸散させる。次に、このシャーレを６０℃に設定した高温相中で、更に１時間乾燥させ、無色半透明のシートを得る。
【００４０】
［生体内分解性の試験方法］
生体内分解性試験は、まず、一辺２ｃｍの正方形に裁断した試料ポリマーシートを、開腹した８週齢の雄性ｄｄｙマウスの腹腔内へ埋入する。ついで、このシートが組織表面の体液を吸収し組織に接着し、迅速に柔軟化して周囲軟組織に対して追従性を示すことを確認した後、腹膜を縫合する。このようなシートが埋入されたマウスを、翌日から３日間飼育し毎日３匹ずつ屠殺して開腹後、埋入したシートを取り出し、乾燥重量を測定する。この測定結果と、埋入前のシート重量との差を求め生体内分解性の試験結果とする。
【００４１】
［癒着防止試験方法］
癒着防止試験は、まず、７週齢の雌性Ｗｉｓｔａｒラットの腸骨静脈基部を３−０絹糸で結紮し止血後、約１ｍｍ下流を切断する。処置全域に試料のポリマーシートを貼付し、腹膜および皮膚を縫合する。１週間後に開腹し、癒着の有無を判定する。癒着防止率は以下の式に従って算出する。
癒着防止率（％）＝｛癒着無し／全数（＝癒着有り＋癒着無し）｝×１００
【００４２】
［引張試験方法］
フィルムの厚みを測定した後、約２ｍｍ幅の短冊状に裁断する。各サンプル１０回ずつ測定を行い、８点の平均値を求めて結果とする。また、最大荷重は８点の平均値を断面積で除して求める。
【００４３】
実施例１：ＰＥＧの数平均分子量が２０，０００、ＢＬＡ含量が全アミノ酸含量の約７０ｍｏｌ％のＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーの評価
[ポリマーの合成]
乾燥不活性ガス雰囲気下、両末端アミノポリエチレングリコール（２０，０００ｇ／ｍｏｌ）１．０ｇを４０℃の油浴中でＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦと略すこともある。）７ｍＬに溶解し、β−ベンジル−Ｌ−アスパルテート−Ｎ−カルボン酸無水物（以下、ＢＬＡ−ＮＣＡと略すこともある。）８００ｍｇ（ポリエチレングリコールに対して６４当量）を加えた。１晩反応を行った後に、氷冷したジイソプロピルエーテルに滴下し、白色の固形物を沈析させた。固形分を吸引ろ過した後に、塩化メチレンに溶解し、晶析操作を繰り返した。減圧乾燥の後に得たＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡ構造のＡ1'ＢＡ2'型ブロックコポリマー１.０ｇをクロロホルム１０ｍＬに再溶解させ、０.４３規定の水酸化ナトリウム溶液０．７８ｍＬを添加した。室温で１０分間反応した後に、ジイソプロピルエーテル中に滴下し、白色の固形分を沈析させた。固形分を吸引ろ過した後に、減圧乾燥し、ＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーを得た。
【００４４】
［1Ｈ−ＮＭＲの測定］
前記[1Ｈ−ＮＭＲの測定方法（１）]に従い、Ａ1'ＢＡ2'型ブロックコポリマーおよび得られたＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーの1Ｈ−ＮＭＲを測定した。両者のＢＬＡ結合量より、以下の式に従って結合ＢＬＡ含量を算出した。なお、算出にあたっては1Ｈ−ＮＭＲの３．６ｐｐｍおよび７．３ｐｐｍのピーク面積を用いて結合ＢＬＡ含量を求めた。
ＢＬＡ含量（％）＝[ＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーの結合ＢＬＡ含量／Ａ1'ＢＡ2'型ブロックコポリマーのＢＬＡ結合量]×１００
得られたポリマーのＢＬＡ含量は、全アミノ酸含量の約７０ｍｏｌ％であった。参考のため、ＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーの1Ｈ−ＮＭＲスペクトラムを図１に示した。
【００４５】
［生体内分解性シートの作製］
このように合成したＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーを用いて前記［生体内分解性シートの作製方法（１）］に従い生体内分解性シートを作製した。
【００４６】
［生体内分解性の試験］
前記［生体内分解性の試験方法］に従い、生体内分解性の試験を行った。開腹した８週齢の雄性ｄｄｙマウスの腹腔内へＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーシートを埋入し、手術経過後の残存重量を測定した。この結果を図２に示した。これより、３日後には完全に消失しておらず、６日後には完全に消失しており、開腹部の生体組織の修復に要する時間からみて、３日ではまだ不十分であり、１週間くらいには十分傷口が修復していると考えられるので、理想的であると言える。
【００４７】
［癒着防止試験］
前記［癒着防止試験方法］に従い、癒着防止試験を行った。２０匹のラットを用いてＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーシートについて癒着防止試験を行った。結果を表１に示した。
【００４８】
【表１】
0004734772.tif 000009
【００４９】
［引張強度試験］
ＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーシートを用いて、前記［引張試験方法］に従い、引張強度試験を行った。この結果を図３に示した。また、代表的な応力−歪曲線を参考として図４に示した。図３より、引張強度は劣るが歪みが大きくしなやかな材料であることがわかる。また、図４より、本ポリマーは降伏点以後破断せず、塑性変形が認められるため、ハンドリングがよいといえる。
【００５０】
実施例２：ＰＥＧの数平均分子量が１１，０００、ＢＬＡ含量が全アミノ酸含量の約５０ｍｏｌ％のＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーの評価
[ポリマーの合成]
両末端アミノポリエチレングリコール（１１,０００ｇ／ｍｏｌ）とし水酸化ナトリウム溶液を１．８６ｍＬとすること以外は実施例１と同様の操作を行い、ＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーを得た。
【００５１】
［1Ｈ−ＮＭＲの測定］
実施例１の［1Ｈ−ＮＭＲの測定（１）］と同様にして、得られたＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーの1Ｈ−ＮＭＲを測定し、結合ＢＬＡ含量を算出した。得られたポリマーのＢＬＡ含量は、全アミノ酸含量の約５０ｍｏｌ％であった。
【００５２】
［生体内分解性シートの作製］
このように合成したＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーを用いて前記［生体内分解性シートの作製方法（１）］に従い生体内分解性シートを作製した。
【００５３】
［生体内分解性の試験］
前記［生体内分解性の試験方法］に従い、生体内分解性の試験を行った。開腹した８週齢の雄性ｄｄｙマウスの腹腔内へＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーシートを埋入し、手術経過後の残存重量を測定した。この結果を図２に示した。
【００５４】
［癒着防止試験］
前記［癒着防止試験方法］に従い、癒着防止試験を行った。２０匹のラットを用いてＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーシートについて癒着防止試験を行った。結果を表１に示した。
【００５５】
実施例３：ＰＥＧの数平均分子量が２０，０００、ＢＬＡ含量が全アミノ酸含量の約５０ｍｏｌ％のＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーの評価
[ポリマーの合成]
ＢＬＡ−ＮＣＡ量をポリエチレングリコールに対して１００当量、水酸化ナトリウム溶液１．８０ｍＬとすること以外は実施例１と同様の操作を行い、ＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーシートを得た。
【００５６】
［1Ｈ−ＮＭＲの測定］
実施例１の［1Ｈ−ＮＭＲの測定（１）］と同様にして、得られたＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーの1Ｈ−ＮＭＲを測定し、結合ＢＬＡ含量を算出した。得られたポリマーのＢＬＡ含量は、全アミノ酸含量の約５０ｍｏｌ％であった。
【００５７】
［生体内分解性シートの作製］
このように合成したＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーを用いて前記［生体内分解性シートの作製方法（１）］に従い生体内分解性シートを作製した。
【００５８】
［生体内分解性の試験］
前記［生体内分解性の試験方法］に従い、生体内分解性の試験を行った。開腹した８週齢の雄性ｄｄｙマウスの腹腔内へＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーシートを埋入し、手術経過後の残存重量を測定した。この結果を図２に示した。
【００５９】
［癒着防止試験］
前記［癒着防止試験方法］に従い、癒着防止試験を行った。１９匹のラットを用いてＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーシートについて癒着防止試験を行った。結果を表１に示した。
【００６０】
実施例４：ＰＥＧの数平均分子量が２０，０００、ＢＬＧ含量が全アミノ酸含量の約３０ｍｏｌ％のＰＥＧ−P（ＢＬＧ，Ｇｌｕ・Ｎａ，Ｇｌｕ）ポリマーの評価ＢＬＡ−ＮＣＡの代わりにγ−ベンジル−Ｌ−グルタメート−Ｎ−カルボン酸無水物（以下、ＢＬＧ−ＮＣＡと略すこともある。）を用いること以外は実施例１と同様の操作を行い、ＰＥＧ−P（ＢＬＧ，Ｇｌｕ・Ｎａ，Ｇｌｕ）ポリマーシートを得た。
［1Ｈ−ＮＭＲの測定］
実施例１の［1Ｈ−ＮＭＲの測定（１）］と同様にして、得られたＰＥＧ−PＰＥＧ−P（ＢＬＧ，Ｇｌｕ・Ｎａ，Ｇｌｕ）ポリマーの1Ｈ−ＮＭＲを測定し、結合ＢＬＧ含量を算出した。得られたポリマーのＢＬＧ含量は、全アミノ酸含量の約３０ｍｏｌ％であった。
【００６１】
比較例１：ＰＥＧの数平均分子量が２０，０００、ＢＬＡユニット数が５０のＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡブロックコポリマーの評価
乾燥不活性ガス雰囲気下、両末端ＰＥＧ（２０，０００ｇ／ｍｏｌ）１．０ｇを４０℃の油浴中でＤＭＦ７ｍＬに溶解し、ＢＬＡ−ＮＣＡ８００ｍｇ（ＰＥＧに対して６４当量）を加えた。１晩反応を行なった後に、氷冷したジイソプロピルエーテルに滴下し、白色の固形物を沈析させた。固形分を吸引ろ過した後に、塩化メチレンに溶解し、晶析操作を繰り返し、ＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡブロックコポリマーを得た。
［1Ｈ−ＮＭＲの測定］
前記[1Ｈ−ＮＭＲの測定方法（２）]に従い、得られたＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡブロックコポリマーの1Ｈ−ＮＭＲを測定し、結合ＢＬＡ含量を算出した。得られたポリマーのＢＬＡ含量はポリマー１分子あたり約５０ユニットであった。
【００６２】
［生体内分解性シートの作製］
このように合成したＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡブロックコポリマーを用いて前記［生体内分解性シートの作製方法（２）］に従い生体内分解性シートを作製した。
【００６３】
［生体内分解性の試験］
前記［生体内分解性の試験方法］に従い、生体内分解性の試験を行った。開腹した８週齢の雄性ｄｄｙマウスの腹腔内へＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡブロックコポリマーシートを埋入し、手術経過後の残存重量を測定した。この結果を図２に示した。
【００６４】
［癒着防止試験］
前記［癒着防止試験方法］に従い、癒着防止試験を行った。１８匹のラットを用いてＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡブロックコポリマーシートについて癒着防止試験を行った。結果を表１に示した。
【００６５】
比較例２：ＰＥＧの数平均分子量が４，０００、ＢＬＡユニット数が２０のＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡブロックコポリマーの評価
両末端アミノポリエチレングリコール（４,０００ｇ／ｍｏｌ）としＢＬＡ−ＮＣＡを１.７４ｇ（ＰＥＧに対して２８当量）とすること以外は比較例１と同様の操作を行い、ＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡブロックコポリマーを得た。
［1Ｈ−ＮＭＲの測定］
前記[1Ｈ−ＮＭＲの測定方法（２）]に従い、得られたＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡブロックコポリマーの1Ｈ−ＮＭＲを測定し、結合ＢＬＡ含量を算出した。得られたポリマーのＢＬＡ含量は１分子あたり約２０ユニットであった。
【００６６】
［生体内分解性シートの作製］
このように合成したＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡブロックコポリマーを用いて前記［生体内分解性シートの作製方法（２）］に従い生体内分解性シートを作製した。
【００６７】
［生体内分解性の試験］
前記［生体内分解性の試験方法］に従い、生体内分解性の試験を行った。開腹した８週齢の雄性ｄｄｙマウスの腹腔内へＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡブロックコポリマーシートを埋入し、手術経過後の残存重量を測定した。この結果を図２に示した。
【００６８】
［癒着防止試験］
前記［癒着防止試験方法］に従い、癒着防止試験を行った。１８匹のラットを用いてＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡブロックコポリマーシートについて癒着防止試験を行った。結果を表１に示した。
【００６９】
比較例３：ＰＥＧの数平均分子量が１１，０００、ＢＬＡ含量が全アミノ酸含量の約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーの評価
[ポリマーの合成]
両末端アミノポリエチレングリコール（１１,０００ｇ／ｍｏｌ）とし水酸化ナトリウム溶液を３．３４ｍＬとすること以外は実施例１と同様の操作を行い、ＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーを得た。
【００７０】
［1Ｈ−ＮＭＲの測定］
実施例１の［1Ｈ−ＮＭＲの測定（１）］と同様にして、得られたＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーの1Ｈ−ＮＭＲを測定し、結合ＢＬＡ含量を算出した。得られたポリマーのＢＬＡ含量は、全アミノ酸含量の約1０ｍｏｌ％であった。
【００７１】
［生体内分解性シートの作製］
このように合成したＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーを用いて前記［生体内分解性シートの作製方法（１）］に従い生体内分解性シートを作製した。
【００７２】
［癒着防止試験］
前記［癒着防止試験方法］に従い、癒着防止試験を行った。１８匹のラットを用いてＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーシートについて癒着防止試験を行った。結果を表１に示した。
【００７３】
比較例４：ＰＥＧの数平均分子量が２０，０００、ＢＬＡ含量が全アミノ酸含量の約９０ｍｏｌ％のＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーの評価
[ポリマーの合成]
水酸化ナトリウム溶液を０．２６ｍＬとすること以外は実施例１と同様の操作を行い、ＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーを得た。
［1Ｈ−ＮＭＲの測定］
実施例１の［1Ｈ−ＮＭＲの測定（１）］と同様にして、得られたＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーの1Ｈ−ＮＭＲを測定し、結合ＢＬＡ含量を算出した。得られたポリマーのＢＬＡ含量は、全アミノ酸含量の約９０ｍｏｌ％であった。
【００７４】
［生体内分解性シートの作製］
このように合成したＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーを用いて前記［生体内分解性シートの作製方法（１）］に従い生体内分解性シートを作製した。
【００７５】
［癒着防止試験］
前記［癒着防止試験方法］に従い、癒着防止試験を行った。１８匹のラットを用いてＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーシートについて癒着防止試験を行った。結果を表１に示した。
【００７６】
比較例５：市販の癒着防止シートの評価
［癒着防止試験］
前記［癒着防止試験方法］に従い、癒着防止試験を行った。ヒアルロン酸ナトリウムとカルボキシメチルセルロースを２：１で含有する市販の合成吸収性癒着防止シート（以下、ヒアルロン酸Ｎａ・ＣＭＣと略すこともある。Ｇｅｎｚｙｍｅ社製）を用い、１８匹のラットを用いて癒着防止試験を行った。その結果を表１に示した。
【００７７】
［引張強度試験］
ヒアルロン酸Ｎａ・ＣＭＣポリマーシートを用いて、前記［引張試験方法］に従い、引張強度試験を行った。この結果を図３に示した。また、代表的な応力−歪曲線を参考として図４に示した。
また、本発明のポリマーを用いた実施例においては、生体内分解性材料としてシート状でラットの腹腔内に大量に埋入した場合においても、ラットに異常は全く認められなかった。
【００７８】
以上の結果から、本発明のポリマーは、生体内で良好な分解性を有する材料であることがわかる。
また、本発明のポリマーは生体内分解性材料としてシート状でラットの腹腔内に大量に埋入した場合においても、ラットに異常は全く認められず、かつ、１週間後に開腹するとシートは完全に分解されて消失し、術部の癒着が起こらないという優れた効果を示した。ＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡブロックコポリマーシートをラットの腹腔内に大量に埋入した場合、シートが完全に消失せず、長期にわたって体内に残存する場合があることが確認されている。実際の手術では、癒着防止シートを一度に複数枚使用するケースが頻繁にあることから、このような良好な分解性は非常な利点である。
【００７９】
また、本発明のポリマーを用いて作製されたシートは良好な力学的特性を示し、ヒアルロン酸Ｎａ・ＣＭＣが硬くて脆い材料であり使用時に破損する危険性が高いのに対し、乾燥状態で５００％以上伸張させた場合でも破断しないといった優れた力学的特性を示した。実際に、本発明のポリマーを用いて作製されたシートは腹腔内に挿入した場合、シートによる軟組織の損傷やシート自身の破損は全くなく、かつ、腹腔内の水分を吸収し軟組織に接着した。従って、本発明のポリマーは、生体内分解性材料または組織癒着防止膜等に好適であることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、実施例１において合成されたＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーの1Ｈ−ＮＭＲスペクトラムを示す図である。
【図２】図２は、実施例１、実施例２において作製されたＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーシートおよび比較例１、比較例２において作製されたＰＢＬＡ−ＰＥＧ−ＰＢＬＡブロックポリマーシートのマウス腹腔内における生分解性を示す図である。
【図３】図３は、実施例１において合成されたＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーおよびヒアルロン酸Ｎａ・ＣＭＣ癒着防止シートの引張強度試験結果を示す図である。
【図４】図４は、実施例１において合成されたＰＥＧ−P（ＢＬＡ，Ａｓｐ・Ｎａ，Ａｓｐ）ポリマーおよびヒアルロン酸Ｎａ・ＣＭＣ癒着防止シートの引張強度試験の応力−歪曲線を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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