(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒハツ（Piper longum Linn.）抽出物を有効成分として含有することを特徴とする血管内皮型一酸化窒素合成酵素活性促進剤（血小板凝集に起因する疾患、高血圧症又は炎症性疾患の治療又は予防の用途を除く。）。
【請求項２】
前記抽出物が、抽出溶媒として極性溶媒を用いて得られる抽出物であることを特徴とする請求項１に記載の血管内皮型一酸化窒素合成酵素活性促進剤（血小板凝集に起因する疾患、高血圧症又は炎症性疾患の治療又は予防の用途を除く。）。
【請求項３】
前記極性溶媒が、水、エタノール又はこれらの混合溶媒であることを特徴とする請求項２に記載の血管内皮型一酸化窒素合成酵素活性促進剤（血小板凝集に起因する疾患、高血圧症又は炎症性疾患の治療又は予防の用途を除く。）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、安全性の高い植物抽出物を含有する血管内皮型一酸化窒素合成酵素活性促進剤及び飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
一酸化窒素については、その生理学的作用又は薬理学的作用が注目されており、様々な研究が行われてきている。一酸化窒素は、生体内において、Ｌ−アルギニンと分子状酸素とを基質とし、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、フラビンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）、テトラヒドロビオプテリンを補酵素として、一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）により生成される。ＮＯＳには、酵素学的にもタンパク質分子としても異なる３種のアイソフォームが存在し、それぞれ誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）、血管内皮型一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）、神経型一酸化窒素合成酵素（ｎＮＯＳ）が知られている。
【０００３】
これらＮＯＳのうちｅＮＯＳは、血管内皮細胞に局在しており細胞膜に結合している。このｅＮＯＳが活性化されると、一酸化窒素が継続的に産生され、その一酸化窒素は直ちに血管平滑筋に取り込まれ、グアニル酸シクラーゼを活性化する。これによりサイクリックグアノシン３’，５’−一リン酸（ｃＧＭＰ）が産生され、ｃＧＭＰ依存性タンパク質リン酸化酵素の活性化を介して、血管平滑筋が弛緩されることにより、血圧が低く保たれる。また、ｅＮＯＳにより産生された一酸化窒素は、血液中の血小板に作用することにより、血小板の凝集を阻害するとともに、凝固した血液の血管壁への接着を阻害する（非特許文献１参照）。
【０００４】
一方、従来、ヒハツ抽出物には、冷え性改善作用（特許文献１）、脂肪分解促進作用（特許文献２）及び抗ヘリコバクターピロリ作用（特許文献３）等が存在することが知られ、さまざまな食品等に利用されてきたが、ｅＮＯＳ活性促進作用については全く知られていなかった。
【非特許文献１】中根正樹，「ＮＯ研究の新しい展開」，実験医学，１９９９年，第１７巻，第８号，ｐ．９１４−９１７
【特許文献１】特開２００３−４０７８８号公報
【特許文献２】特開平８−２４５４１０号公報
【特許文献３】特開２０００−１５４１４６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、安全性の高い天然物の中からｅＮＯＳ活性促進作用を有するものを見出し、それを有効成分とするｅＮＯＳ活性促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決するために、本発明の血管内皮型一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）活性促進剤は、ヒハツ抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
【０００７】
上記発明において、前記抽出物は、極性溶媒を抽出溶媒として用いて得られる抽出物であることが好ましく、前記極性溶媒としては、水、エタノール又はこれらの混合溶媒を用いることが好ましい。
【０００８】
また、本発明の飲食品は、前記血管内皮型一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）活性促進剤を配合したことを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、天然物であるヒハツからの抽出物を有効成分とする、安全性の高いｅＮＯＳ活性促進剤及び飲食品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明について詳細に説明する。
〔ｅＮＯＳ活性促進剤〕
本発明のｅＮＯＳ活性促進剤は、ヒハツ抽出物を有効成分として含有するものである。
ここで、本発明において、「ヒハツ抽出物」には、ヒハツを抽出原料として得られる抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１１】
抽出原料として用いる植物は、ヒハツ（Piper longum Linn.）である。
ヒハツは、コショウ科コショウ属に属する常緑のつる性植物であり、東南アジアに広く分布し、これらの地域から容易に入手することができる。また、ヒハツの果穂は、多肉質の太い円筒状であり、香辛料として利用されている。
【００１２】
抽出原料として使用することのできるヒハツの構成部位としては、例えば果穂、根、葉、茎、花等が挙げられ、これらのうち１種又は２種以上を抽出原料として使用することができるが、特に果穂を使用することが好ましい。
【００１３】
抽出原料として使用するヒハツは、採取後直ちに乾燥し粉砕したものが適当である。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、ヒハツの極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１４】
ヒハツ抽出物に含有されるｅＮＯＳ活性促進物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に使用される抽出方法によって、ヒハツからｅＮＯＳ活性促進作用を有する抽出物を得ることができる。
【００１５】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用することが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００１６】
抽出溶媒として使用することのできる水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１７】
抽出溶媒として使用することのできる親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００１８】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０質量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０質量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して多価アルコール１０〜９０質量部を混合することが好ましい。
【００１９】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の１〜２０倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００２０】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでもｅＮＯＳ活性促進剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００２１】
以上のようにして得られるヒハツ抽出物は、ｅＮＯＳ活性促進作用を有しており、その作用を利用してｅＮＯＳ活性促進剤として使用することができる。
【００２２】
ｅＮＯＳ活性促進剤は、上記ヒハツ抽出物のみからなるものでもよいし、上記ヒハツ抽出物を製剤化したものでもよい。
上記ヒハツ抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、トローチ剤等、任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を用いることができる。
【００２３】
上記ｅＮＯＳ活性促進剤は、ｅＮＯＳの活性を促進することにより一酸化窒素の生成量を増加させることができる。これにより、血圧の低下、血小板の凝集阻害、凝固した血液の血管壁への接着阻害等の効果が増大し、高血圧症、動脈硬化等を予防又は治療することができる。
【００２４】
〔飲食品〕
上記ｅＮＯＳ活性促進剤に含まれるヒハツ抽出物は、ｅＮＯＳ活性促進作用を有しており、消化管で消化されるようなものではないことが確認されており、また安全性に優れているため、一般食品、健康食品、保健機能食品又は栄養補助食品等、任意の飲食品に配合するのに好適である。
【００２５】
上記ｅＮＯＳ活性促進剤（ヒハツ抽出物からなるものを含む。）を飲食品に配合する場合、それらにおけるｅＮＯＳ活性促進剤の配合量は、使用目的、性別、症状等を考慮して適宜調整することができるが、添加対象飲食品の一般的な摂取量を考慮して成人１日あたりのヒハツ抽出物摂取量が約１〜１００ｍｇ、特に約１０〜５０ｍｇになるようにするのが好ましい。
【００２６】
上記ｅＮＯＳ活性促進剤を配合し得る飲食品は、ｅＮＯＳ活性促進作用を妨げない限り、特に限定されるものではない。
【００２７】
具体例としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物；その他種々の形態の健康・栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤等に上記ｅＮＯＳ活性促進剤を配合して製造することができ、このとき、通常用いられる補助的な原料や添加物を併用することができる。
【００２８】
なお、本発明のｅＮＯＳ活性促進剤及び飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものではあるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００２９】
以下、製造例、試験例及び配合例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は、下記の各例に何ら限定されるものではない。
【００３０】
〔製造例１〕ヒハツ抽出組成物の製造
インドネシア産ヒハツの果穂部１０００ｇに水４０００ｍＬを加え、還流下で１時間、９０℃の温度条件下で加熱抽出し、熱時濾過した。残渣についてさらに同様の抽出処理を行った。得られた各抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、その濃縮物にデキストリンを加えて全量が１０００ｇになるように調整した後、乾燥して、ヒハツ抽出組成物１００ｇを得た。
【００３１】
〔試験例１〕ｅＮＯＳ活性促進作用試験
製造例１で得られたヒハツ抽出組成物について、下記の試験法によりｅＮＯＳ活性促進作用を試験した。
【００３２】
ヒト正常皮膚微小血管内皮細胞を、微小血管内皮細胞増殖培地を用いて培養した後、トリプシン処理によりこのヒト正常皮膚微小血管内皮細胞を回収した。回収した細胞を１．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度に希釈し、６ｗｅｌｌプレートに２．０ｍＬ播種し一晩培養した。培養終了後、ヒハツ抽出組成物を各濃度に溶解した溶解液２．０ｍＬを培地に添加し、さらに２４時間培養した後、細胞を回収し電気泳動用の試料を調製した。
【００３３】
調製した試料のタンパク質量をそろえてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った後、抗ｅＮＯＳ抗体を用いてウエスタンブロッティングを行った。ｅＮＯＳ活性促進作用は、得られたｅＮＯＳタンパク質のバンド強度値を、画像解析装置（コダック社製，商品名：ＥＤＡＳ１２０）を用いて求めることで評価した。
【００３４】
ｅＮＯＳ活性促進率は、ヒハツ抽出組成物無添加試料のｅＮＯＳタンパク質のバンド強度値を１００％として下式により求めた。
ｅＮＯＳ活性促進率（％）＝（Ａ／Ｂ）×１００
なお、上記式中、「Ａ」は「ヒハツ抽出組成物添加試料のｅＮＯＳタンパク質のバンド強度値」を、「Ｂ」は「ヒハツ抽出組成物無添加試料のｅＮＯＳタンパク質のバンド強度値」を表す。
この試験の結果を表１に示す。
【００３５】
［表１］
試料濃度（μｇ／ｍＬ）   ｅＮＯＳ活性促進率（％）
５０                        １３２．９
１００                        １５２．６
【００３６】
表１の結果から、製造例１のヒハツ抽出組成物には、優れたｅＮＯＳ活性促進効果が認められた。
【００３７】
〔配合例１〕
下記の原料を均一に混合し、常法に従って顆粒状にした後に打錠機により打錠して、錠剤状健康食品を製造した。
ヒハツ抽出組成物（製造例１）                        ２０質量部
イチョウ葉抽出物                                    １０質量部
生姜抽出物                                          １０質量部
マルチトール                                        ７２質量部
乳糖                                                ８０質量部
グリセリン脂肪酸エステル                              ８質量部
原料の混合作業及び打錠機による打錠作業は容易に行うことができ、得られた錠剤状健康食品は、呈味が良好であった。
【００３８】
〔配合例２〕
下記の原料を均一に混合し、流動層造粒機によりインスタントティー顆粒を製造した。
ヒハツ抽出組成物（製造例１）                        ２０質量部
高麗ニンジン抽出物                                    ５質量部
ヨモギ抽出物                                        ２０質量部
エリスリトール                                      ４０質量部
クエン酸                                            ５０質量部
ラクチュロース                                      ５０質量部
デキストリン                                      ８１０質量部
原料の混合作業及び流動層造粒機による顆粒化作業は容易に行うことができ、得られたインスタントティー顆粒は、呈味が良好であった。
【００３９】
〔配合例３〕
下記の原料を用いてドウを作製し、延展後これを成形してばい焼し、ビスケットを製造した。
ヒハツ抽出組成物（製造例１）                          ２ｇ
小麦粉                                          １０００ｇ
コーンスターチ                                    １００ｇ
グルコース                                        ２５０ｇ
マーガリン                                        １２５ｇ
食塩                                                  ５ｇ
炭酸ソーダ                                          ２５ｇ
炭酸アンモニウム                                      ９ｇ
レシチン                                              ６ｇ
全卵                                                ７５ｇ
乳酸カルシウム                                      ５０ｇ
ゴマ                                                  ５ｇ
水                                                ３５０ｇ
得られたビスケットは、呈味が良好であった。
【００４０】
〔配合例４〕
パラチノース３３０ｇとソルビトール１４０ｇと精製水２７０ｇとを混合して加熱した。その加熱した混合物に、ヒハツ抽出組成物（製造例１）１０ｇを精製水１５０ｇに溶解したヒハツ抽出組成物水溶液１６０ｇ、紅花抽出物１ｇ、ゼラチン８０ｇ及び５０質量％リン酸水溶液８ｇを混合し、その混合物を型に流し込んで冷却することにより、グミキャンディーを製造した。得られたグミキャンディーは、呈味が良好であった。
【００４１】
〔配合例５〕
チューインガム試作用ミキサーに、ガムベース２５質量部とパラチニットシロップ１４質量部とを投入し混合した。続いて、その混合物に、粉末キシリトール３５質量部、粉末マルチトール２５質量部、イチョウ葉抽出物５質量部、ヒハツ抽出組成物（製造例１）１４質量部及びステビア甘味料（丸善製薬株式会社製，商品名：マルミロン５０）０．４質量部をあらかじめ混合しておいたものを、数回に分けて加え、よく練り合わせた。さらに、グリセリンを１質量部加えて十分混合した後、ミキサーから混合物を取り出し、ローラーで圧延することにより、チューインガムを製造した。得られたチューインガムは、呈味が良好であった。
【００４２】
〔配合例６〕
下記の原料を用いて、常法に従いマウスウォッシュを製造した。
ヒハツ抽出組成物（製造例１）                          ０．４質量部
エタノール                                          １５質量部
ソルビット                                          １０質量部
クエン酸                                              ０．０５質量部
クエン酸ナトリウム                                    ０．２質量部
安息香酸ナトリウム                                    ０．２質量部
ラウリル硫酸ナトリウム                                ０．２質量部
サッカリンナトリウム                                  ０．０５質量部
Ｌ−メントール                                        ０．０５質量部
精製水                                残部（全量を１００質量部とする）
得られたマウスウォッシュは、使用感に問題のない良好な味を呈した。
【産業上の利用可能性】
【００４３】
本発明のｅＮＯＳ活性促進剤及び飲食品は、一酸化窒素産生量の減少に伴う高血圧症、動脈硬化、炎症性疾患等の予防又は改善に大きく貢献できる。