(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化合物１〜２の少なくとも１種であることを特徴とするチロシナーゼ活性抑制剤。
【化１】
0004762477.tif 000033
【化２】
0004762477.tif 000034
【請求項２】
請求項１記載の化合物１〜２の少なくとも１種であることを特徴とする美白剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、チロシナーゼ活性抑制剤及び美白剤、特にその有効成分に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹、乾癬等の皮膚疾患による肌荒れ症や健常人の肌あれ、荒れ性に対して改善・予防効果を有する皮膚外用剤の有効成分としては、抗炎症効果のあるステロイド剤や保湿作用のあるワセリン、尿素、ヘパリン、各種アミノ酸、脂質類が用いられてきた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、ステロイド剤は副作用が強く、また、保湿剤はその効果が必ずしも十分ではなく、より安全性の高い優れた有効成分の開発が望まれていた。
近年、種々の炎症性・アレルギー性皮膚疾患や肌荒れの発症に血小板活性化因子（platelet activating factor, 以下、ＰＡＦと称する。）が関与していることが明らかにされつつある。例えば炎症性異常角化性疾患である乾癬では、その患部表皮において高いＰＡＦの存在が認められている。また、アレルギー性皮膚疾患であるアトピー性皮膚炎や接触性皮膚炎、湿疹にもＰＡＦの関与が示唆されている。
またＰＡＦは、角質形成など表皮の正常な角化過程においても重要な役割を果たしていると考えられており、肌荒れの改善薬あるいは皮膚疾患の治療薬として、ＰＡＦ拮抗剤を用いる試みがなされるようになってきている。
【０００４】
一方、皮膚外用剤においては、肌荒れ改善の以外の機能も求められており、メラニン色素の異常沈着によるしみやそばかす、肝斑等などの色素沈着に対する美白を目的として、美白剤が配合されている。美白剤としては、ビタミンＣ及びその誘導体、コウジ酸やアルブチン等が知られており、これらはメラニン生成に不可欠なチロシナーゼの活性を抑制することにより、メラニン生成を抑制する。しかしなから、これらによっても未だ十分な効果は得られていない。
本発明は前記従来技術の課題に鑑みなされたものであり、その目的は、優れたチロシナーゼ活性抑制作用を有し、メラニン生成を抑制して美白効果を発揮する物質を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
前記目的を達成するために本発明者らが鋭意検討を行った結果、ある種のメトキシベンゼン誘導体がチロシナーゼ活性抑制作用を有し、メラニン生成を抑制することも見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明のチロシナーゼ活性抑制剤は、前記化合物１〜２の少なくとも１種であることを特徴とする。
【０００６】
【化４】
0004762477.tif 000002
【化５】
0004762477.tif 000003
【０００８】
また、本発明にかかる美白剤は、前記化合物１〜２の少なくとも１種であることを特徴とする。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明にかかる化合物１〜２は公知の方法を用いて植物から単離することができる。例えば、化合物１及び２はPhytochemistry, vol.32, No.2, p357-363, 1993(著者：Akiko Jitoe, Toshiya Masuda, and Nobuji Nakatani)に記載された方法等を用いることができる。
植物としては、ショウガ科(Zingiberaceae)ショウガ属(Zingiber)植物が挙げられる。ショウガ科ショウガ属植物としては、ぽんつくしょうが等が例示される。ぽんつくしょうがは、沖縄、東南アジアなどの熱帯地方に自生し、学名はZingiber purpureum Roxb.あるいはZingiber cassumunarである。Zingiber purpureum Roxb.とZingiber cassumunarとはシノニム(Synonym)の関係であることが判明している。
【００１０】
用いる部位としては、化合物１〜２が得られる限り特に限定されず、例えば、根、根茎、茎、葉、花、果実、全草等が挙げられるが、好ましくは根又は根茎である。
具体例を挙げると、ぽんつくしょうがの根又は根茎の粉砕物を抽出溶媒に室温〜加温下で浸漬して抽出し、この抽出物をカラム分離精製、再結晶等により精製して化合物１〜２を得ることができる。
【００１１】
抽出溶媒としては特に限定されず、例えば、水、メタノール、エタノール等の一級アルコール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等の多価アルコール、酢酸エチル等の低級アルキルエステル、ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素、エチルエーテル、アセトン等が挙げられ、これらを２種以上組み合わせて用いることもできる。好ましい抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコール又はこれらの混合溶媒が挙げられる。
【００１２】
本発明においては、化合物１〜２の他、これらを有効成分として含む抽出物を用いることもできる。このような抽出物としては、上記抽出溶媒で抽出された一次抽出物、及びこの一次抽出物をシリカゲルクロマトグラフィー等で粗精製して得られる粗画分が挙げられる。
なお、本発明の化合物１〜２として、天然物から抽出されたものの他、化学的合成等により製造された合成品を用いることも可能である。
化合物１〜２及びこれらを有効成分とする粗画分の製造方法の一例を以下に示す。
【００１３】
製造例１  化合物１の単離
Zingiber purpureum Roxb.の根茎500ｇを粉砕し、室温で1週間、2.5Lのメタノールに浸漬し、抽出を行った。抽出液を濾過し濃縮した後、濃縮液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：n-ヘキサンと酢酸エチルの混合系）にかけ、粗画分を得た。さらに逆相系HPLC分取（移動相：６０％アセトニトリル、カラム：株式会社資生堂製CAPSELLPAK C18 UG120Å、カラムサイズ：１０ｍｍφ×２５０ｍｍ、検出：UV２１０ｎｍ）により化合物１を単離した。収量410mg、収率0.082％。表１に化合物１の１３Ｃ−ＮＭＲのケミカルシフト値を文献値とともに示す。また、化７には、表１の炭素位置Ｎｏ．に対応した化学構造式を示す。
【００１４】
【化７】
0004762477.tif 000004
【００１５】
【表１】
0004762477.tif 000005
【００１６】
製造例２ 化合物２の単離
Zingiber purpureum Roxb.の根茎500ｇを粉砕し、室温で1週間、2.5Lのメタノールに浸漬し、抽出を行った。抽出液を濾過し濃縮した後、濃縮液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：n-ヘキサンと酢酸エチルの混合系）にかけ、粗画分を得た。さらに逆相系HPLC分取（移動相：６０％アセトニトリル、カラム：株式会社資生堂製CAPSELLPAK C18 UG120Å、カラムサイズ：１０ｍｍφ×２５０ｍｍ、検出：UV２１０ｎｍ）により化合物２を単離した。収量430mg、収率0.086％。表２に化合物２の１３Ｃ−ＮＭＲのケミカルシフト値を文献値とともに示す。なお、表２の炭素位置番号は前記化７に準じる。
【００１７】
【表２】
0004762477.tif 000006
【００２２】
製造例４  化合物１〜２を有効成分として含有する粗画分
Zingiber purpureum Roxb.の根茎500ｇを粉砕し、室温で1週間、エタノールに浸漬し、抽出を行った。抽出液を濾過し濃縮した後、濃縮液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：n-ヘキサンと酢酸エチルの混合系）にかけ、化合物１〜２を含有する粗画分1.3ｇを得た。
【００２４】
本発明にかかる化合物はチロシナーゼ活性抑制作用を有し、メラニン生成抑制効果にも優れることが判明した。よって、これらは美白剤として有用であり、皮膚に塗布して皮膚のメラニン色素の異常沈着によるしみ、そばかす、肝斑、雀卵斑などの色素異常の改善・予防に適用することができる。
なお、化合物１〜２は公知物質であるが、チロシナーゼ活性抑制作用やメラニン生成抑制作用については報告されていない。
本発明において、化合物１〜２の配合量は、外用剤全量中０．００１〜２０．０質量％、好ましくは０．０１〜１０．０質量％である。０．００１質量％未満であると、本発明でいう効果が十分に発揮されず、２０．０質量％を超えて配合しても効果の増加は実質上望めないし、皮膚外用剤への配合も難しくなる傾向にある。
【００２５】
本発明の皮膚外用剤には、上記必須成分以外に、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、美白剤、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色材、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００２６】
その他、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、クエン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、亜硫酸ナトリウム、カフェイン、タンニン、パントテン酸およびその誘導体、ニコチン酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、マロニエ、エスシン等の各種植物抽出物、ビタミンＥおよび酢酸トコフェロール等のビタミンＥ誘導体、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、胎盤抽出液、アスコルビン酸およびアスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド等のアスコルビン酸誘導体、アルブチン、トラネキサム酸、コウジ酸、エラグ酸、カミツレ油、４−ｎ−ブチルレゾルシノール等の美白剤、ビタミンＡおよびレチノール等のビタミンＡ誘導体、グルコース、フルクトース、キシリトール、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類、ワセリン、グリセリン、尿素、ヘパリン等の保湿剤、セリン、アルギニン等の各種アミノ酸、セラミド、コレステロール等の脂質なども適宜配合することができる。
【００２７】
本発明の皮膚外用剤とは、医薬品、医薬部外品、化粧品を指し、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤、メーキャップ化粧料等、従来皮膚外用剤に用いるものであれば剤型は特に問わない。
以下、具体例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。配合量は質量％である。
【００４４】
試験例４  チロシナーゼ活性抑制効果及びメラニン生成抑制効果
９６ウェルのマイクロプレートに播種したＢ１６メラノーマを、各濃度の化合物１又は化合物２を含む培養液（ＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋テオフィリン）で３日間培養した。培養液を除き、１０ｍＭ  Ｌ−ＤＯＰＡと、１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘとを含むＰＢＳ（ｐＨ７．４）を１００μＬ加えて、３７℃で２０分間反応させた。反応前後にマイクロプレートリーダーで４７５ｎｍの吸光度を測定した。反応前後の吸光度変化から、各被験化合物の細胞系におけるチロシナーゼ活性抑制率を算出した。
また、メラニン生成抑制効果として、プレートを偏光フィルター越しに顕微鏡で観察し、３段階の評価（効果あり＋＋、やや効果あり＋、効果なし−）で評価した。結果を表８に示す。
表８からわかるように、化合物１、２は０．００５ｍＭ、０．０１ｍＭという低濃度でも細胞系におけるチロシナーゼ活性に対して抑制効果を示した。また、メラニン生成抑制効果にも優れていた。よって、これらは美白剤として非常に有用であることが理解される。
【００４５】
【表８】
0004762477.tif 000007
【００４６】
【実施例】
実施例１  クリーム
0004762477.tif 000008
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールと苛性カリを加え溶解し、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を徐々に加え、全部加え終わってからしばらくその温度に保ち反応を起こさせる。その後、ホモミキサーで均一に乳化し、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００４７】
実施例２  クリーム
0004762477.tif 000009
（製法）
イオン交換水をプロピレングリコールおよびエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム塩を加えて溶解し、７０℃に保った（水相）。その他の成分を混合して過熱溶解して７０℃に保ち（油相）、水相に油相を除々に加えて７０℃で予備乳化を行い、ホモミキサーにて均一に乳化した後、よくかき混ぜながら３０℃まで冷却した。
【００４８】
実施例３  クリーム
0004762477.tif 000010
（製法）
イオン交換水に石けん粉末と硼砂を加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相をかきまぜながら徐々に加え反応を行う。反応終了後、ホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００４９】
実施例４  乳液
0004762477.tif 000011
（製法）
少量のイオン交換水にカルボキシビニルポリマーを溶解する（Ａ相）。残りのイオン交換水にポリエチレングリコール１５００とトリエタノールアミンを加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、Ａ相を加えホモミキサーで均一乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００５０】
実施例５  乳液
0004762477.tif 000012
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し、加熱融解して７０℃に保つ（油相）。油相をかきまぜながらこれに水相を徐々に加え、ホモミキサーで均一に乳化する。乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００５１】
実施例６  ゼリー
0004762477.tif 000013
（製法）
イオン交換水にカーボポール９４０を均一に溶解し、一方、９５％エタノールに化合物１、ポリオキシエチレン（５０モル）オレイルアルコールエーテルを溶解し、水相に添加する。次いで、その他の成分を加えたのち苛性ソーダ、Ｌ−アルギニンで中和させ増粘する。
【００５２】
実施例７  美容液
0004762477.tif 000014
（製法）
Ａ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ｃ相にＡ相を加えて可溶化する。次いでＢ相を加えたのち充填を行う。
【００５４】
実施例９  固形ファンデーション
0004762477.tif 000015
（製法）
タルク〜黒色酸化鉄の粉末成分をブレンダーで十分混合し、これにスクワラン〜オクタン酸イソセチルの油性成分、化合物２、防腐剤、香料を加え良く混練した後、容器に充填、成型する。
【００５５】
実施例１０  乳化型ファンデーション（クリームタイプ）
0004762477.tif 000016
（製法）
水相を加熱撹拌後、十分に混合粉砕した粉体部を添加してホモミキサー処理する。更に加熱混合した油相を加えてホモミキサー処理した後、撹拌しながら香料を添加して室温まで冷却する。
【００５６】
実施例１１  クリーム
（処方）
ステアリン酸                        ５．０  質量％
ステアリルアルコール                ４．０
イソプロピルミリステート          １８．０
グリセリンモノステアリン酸エステル  ３．０
プロピレングリコール              １０．０
化合物２                            ０．０１
苛性カリ                            ０．２
亜硫酸水素ナトリウム                ０．０１
防腐剤                                適量
香料                                  適量
イオン交換水                          残余
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールと苛性カリを加え溶解し、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を徐々に加え、全部加え終わってからしばらくその温度に保ち反応を起こさせる。その後、ホモミキサーで均一に乳化し、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００５７】
実施例１２  クリーム
下記の処方により、実施例２と同様の方法でクリームを調整した。
0004762477.tif 000017
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールおよびエチレンジアミン四酢酸三ナトリウム塩を加えて溶解し、７０℃に保った（水相）。その他の成分を混合して加熱溶解して７０℃に保ち（油相）、水相に油相を除々に加えて７０℃で予備乳化を行い、ホモミキサーにて均一に乳化した後、よくかき混ぜながら３０℃まで冷却した。
【００５８】
実施例１３  クリーム
0004762477.tif 000018
（製法）
イオン交換水に石けん粉末と硼砂を加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相をかきまぜながら徐々に加え反応を行う。反応終了後、ホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００５９】
実施例１４  乳液
0004762477.tif 000019
（製法）
常法により、乳液を得た。
【００６０】
実施例１５  乳液
0004762477.tif 000020
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し、加熱融解して７０℃に保つ（油相）。油相をかきまぜながらこれに水相を徐々に加え、ホモミキサーで均一に乳化する。乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００６２】
実施例１７  美容液
(1)化合物１                                  ２．０  質量％
(2)濃グリセリン                            ３０．０
(3)１，３−ブチレングリコール              ２０．０
(4)プロピレングリコール                    ２０．０
(5)ポリエチレングリコール４００            １５．０
(6)ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油    ５．０
(7)スクワラン                                ２．０
(8)流動パラフィン                            ３．０
(9)香料                                      ０．１
(10)精製水                                    残  余
（製法）
（１）〜（５）及び（１０）を混合し、加熱溶解した（６）、（７）、（８）及び（９）を撹拌混合し、美容液を得た。
【００６３】
実施例１８  パック
(1)ポリビニルアルコール                    １０．０質量％
(2)ポリエチレングリコール（分子量４００）    ０．４
(3)グリセリン                                ３．０
(4)エタノール（９５％）                      ８．０
(5)化合物１                                  ３．０
(6)化合物２                                  ３．０
(7)防腐剤                                    ０．１
(8)香料                                      ０．１
(9)精製水                                    残  余
（製法）
室温にて、（４）、（５）、（６）、（７）、（８）を混合溶解し、（１）、（２）、（３）及び（９）を８０℃で混合溶解した中に撹拌添加した後、室温まで放冷してパックを得た。
【００６５】
実施例２０  乳化型ファンデーション（クリームタイプ）
0004762477.tif 000021
（製法）
水相を加熱撹拌後、十分に混合粉砕した粉体部を添加してホモミキサー処理する。更に加熱混合した油相を加えてホモミキサー処理した後、撹拌しながら香料を添加して室温まで冷却する。
【００６６】
実施例２１  クリーム
0004762477.tif 000022
（製法）
Ａの油相部とＢの水相部をそれぞれ７０℃に加熱し完全溶解する。Ａ相をＢ相に加えて、乳化機で乳化する。乳化物を熱交換機を用いて冷却してクリームを得た。
【００６７】
実施例２２  乳液
0004762477.tif 000023
（製法）
少量のイオン交換水にカルボキシビニルポリマーを溶解する（Ａ相）。残りのイオン交換水にポリエチレングリコール１５００とトリエタノールアミンを加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、Ａ相を加えホモミキサーで均一乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００６８】
実施例２３  美容液
0004762477.tif 000024
（製法）
Ａ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ｃ相にＡ相を加えて可溶化する。次いでＢ相を加えたのち充填を行う。
【００６９】
実施例２４  パック
0004762477.tif 000025
（製法）
Ａ相、Ｂ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ａ相にＢ相を加えて可溶化する。
次いでこれをＣ相に加えたのち充填を行う。
【００７０】
実施例２５  固形ファンデーション
（処方）
タルク                            ４３．１  質量％
カオリン                          １５．０
セリサイト                        １０．０
亜鉛華                              ７．０
二酸化チタン                        ３．８
黄色酸化鉄                          ２．９
黒色酸化鉄                          ０．２
スクワラン                          ８．０
イソステアリン酸                    ４．０
モノオレイン酸ＰＯＥソルビタン      ３．０
オクタン酸イソセチル                ２．０
粗画分                              １．０
防腐剤                              適量
香料                                適量
（製法）
タルク〜黒色酸化鉄の粉末成分をブレンダーで十分混合し、これにスクワラン〜オクタン酸イソセチルの油性成分、粗画分、防腐剤、香料を加え良く混練した後、容器に充填、成型する。
【００７１】
実施例２６  乳化型ファンデーション（クリームタイプ）
0004762477.tif 000026
（製法）
水相を加熱撹拌後、十分に混合粉砕した粉体部を添加してホモミキサー処理する。更に加熱混合した油相を加えてホモミキサー処理した後、撹拌しながら香料を添加して室温まで冷却する。
【００７２】
実施例２７  ゼリー
0004762477.tif 000027
（製法）
イオン交換水にカーボポール９４０を均一に溶解し、一方、９５％エタノールに粗画分、ポリオキシエチレン（５０モル）オレイルアルコールエーテルを溶解し、水相に添加する。次いで、その他の成分を加えたのち苛性ソーダ、Ｌ−アルギニンで中和させ増粘する。
【００７３】
実施例２８  美容液
0004762477.tif 000028
（製法）
Ａ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ｃ相にＡ相を加えて可溶化する。次いでＢ相を加えたのち充填を行う。
【００７４】
実施例２９  パック
0004762477.tif 000029
（製法）
Ａ相、Ｂ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ａ相にＢ相を加えて可溶化する。
次いでこれをＣ相に加えたのち充填を行う。
【００７５】
実施例３０  化粧水
0004762477.tif 000030
（製法）
（１２）に（２）、（４）、（５）、（９）及び（１０）を溶解して精製水溶液とした。別に、（６）に（１）、（３）、（７）、（８）、及び（１１）を溶解し、これを前述の精製水溶液に加えて可溶化し、濾過して化粧水を得た。
【００７６】
実施例３１  化粧水
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（製法）
Ａのアルコール相をＢの水相に添加し、可溶化して化粧水を得た。
【００７７】
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（製法）
Ａのアルコール相をＢの水相に添加し、可溶化して化粧水を得た。
【００７８】
実施例３３  乳化ファンデーション
Ａ：油相
化合物１                            ０．１質量％
化合物２                            ０．１
セタノール                          ３．５
脱臭ラノリン                        ４．０
ホホバ油                            ５．０
ワセリン                            ２．０
スクワラン                          ６．０
ステアリン酸モノグリセリンエステル  ２．５
ＰＯＥ（６０）硬化ヒマシ油          １．５
ＰＯＥ（２０）セチルエーテル        １．０
ピリドキシントリパルミテート        ０．１
防腐剤                              適  量
香料                                ０．３
Ｂ：水相
プロピレングリコール              １０．０
乳清                                ０．１
調合粉末                          １２．０
ヒスチジン                          ５．０
精製水                              残  余
（製法）Ａの油相部とＢの水相部をそれぞれ７０℃に加熱し完全溶解する。Ａ相をＢ相に加えて、乳化機で乳化する。乳化物を熱交換機を用いて冷却して乳化ファンデーションを得た。
【００７９】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明の化合物１〜２はチロシナーゼ活性抑制作用、メラニン生成抑制作用を有するので、美白効果を発揮することができる。