(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ．ロンガム(Bifidobacterium
longum)、Ｂ．ビフィダム(Bifidobacterium bifidum）、Ｂ．アドレセンティス（Bifidobacterium
adolescentis）、Ｌ．アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus）、Ｌ．ブレビス(Lactobacillus
brevis)、Ｌ．ジェンセニイ（Lactobacillus jensenii）、Ｌ．パラカゼイ(Lactobacillus
paracasei subsp. paracasei)、Ｌ．ガセリー（Lactobacillus
gasseri）、Ｌ．ブルガリクス（Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus）、Ｌ．ヘルベティカス（Lactobacillus
helveticus）、Ｌ．カゼイ（Lactobacillus casei subsp. casei）、Ｌ．ラモナウサス（Lactobacillus
rhamnosus）、Ｌ．デルブリッキィ（Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii）、Ｌ．ラクチス（Lactococcus
lactis）、Ｅ．フェシウム(Enterococcus faecium)、Ｓ．サーモフィラス（Streptococcus thermophilus）からなる１６種の乳酸菌を用いるとともに、これらのうち、Ｅ．フェシウムおよびＬ．ヘルベティカスを第１グループ、Ｅ．フェシウムおよびＬ．アシドフィラスを第２グループ、Ｅ．フェシウムおよびＬ．ガセリーを第３グループ、Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラスおよびＬ．ブレビスを第４グループ、Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラスおよびＬ．ブレビスを第５グループ、Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラス、Ｌ．ブレビス、Ｌ．パラカゼイを第６グループ、Ｂ．アドレセンティス単体を第７グループ、Ｌ．デルブリッキィおよびＬ．ガセリーを第８グループ、Ｌ．デルブリッキィ単体を第９グループ、Ｅ．フェシウム、Ｌ．ジェンセニイ、Ｌ．パラカゼイおよびＬ．ブレビスを第１０グループ、Ｌ．アシドフィラス単体を第１１グループ、Ｅ．フェシウムおよびＬ．ガセリーを第１２グループ、Ｌ．パラカゼイ単体を第１３グループ、Ｌ．ガセリー、Ｅ．フェシウムおよびＢ．ビフィダムを第１４グループ、Ｂ．ロンガム、Ｓ．サーモフィラスおよびＥ．フェシウムを第１５グループ、Ｌ．ガセリーを単体で第１６グループ、Ｌ．ブルガリクスおよびＳ．サーモフィラスを第１７グループ、Ｌ．ガセリー、Ｌ．ラクチス、Ｌ．ガセリーおよびＥ．フェシウムを第１８グループ、Ｌ．ガセリー、Ｓ．サーモフィラスおよびＬ．ブルガリクスを第１９グループ、Ｌ．ラクチスを単体で第２０グループ、Ｌ．ガセリーおよびＥ．フェシウムを第２１グループ、Ｌ．ラモナウサスを単体で第２２グループ、Ｌ．カゼイを単体で第２３グループ、Ｂ．ロンガムを単体で第２４グループとし、それぞれのグループ毎に継代培養して共生状態を維持するとともに、それら培養液のうち、第１，２グループ同士、第３，４グループ同士、第５，６グループ同士、第７，８グループ同士、第９，１０グループ同士、第１１，１２グループ同士、第１３，１４グループ同士、第１５，１６グループ同士、第１７，１８グループ同士、第１９，２０グループ同士、第２１，２２グループ同士、第２３，２４グループ同士で１次培養し、さらに、第１，２グループと第３，４グループ、第５，６グループと第７，８グループ、第９，１０グループと第１１，１２グループ、第１３，１４グループと第１５，１６グループ、第１７，１８グループと第１９，２０グループ、第２１，２２グループと第２３，２４グループ同士とで２次培養し、さらに、これら各２次培養液を混合して３次培養して得た乳酸菌培養液を、加熱滅菌した後にろ過して得たろ液と、このろ液をろ過したときの残渣を粉末化した粉末とを混合してなる抗腫瘍活性剤。
【請求項２】
上記３次培養液を、加熱して乳酸菌を滅菌し、冷却して脂肪分を凝固させてから自然ろ過して上記ろ液を得た請求項１記載の抗腫瘍活性剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、乳酸菌の代謝産物を用いた抗腫瘍活性剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
乳酸菌の発ガン予防効果は、マウスなどを用いていろいろ検証されているが、いずれも発ガン予防作用としての機能に着目されているもので、特に乳酸菌代謝産物についてのガンの増殖抑制作用に関しては、必ずしも顕著な効果を得ているものとは言い得ないのが現状である。
なお、乳酸菌を用いた増殖抑制作用に関しては、乳酸菌研究集談会編「乳酸菌の科学と技術」３２７ページ表８．４に明らかにされているが、これは、Ｌ．カゼイをマウスに経口投与したものである。しかしながら、乳酸菌を直接投与しても、それが生菌として機能をすることはほとんどないことが、明らかにされている。したがって、この従来の投与方法の場合には、Ｌ．カゼイを生菌として機能させるために、その投与方法等を工夫しなければならないという問題があるが、その投与方法に関しては何ら言及されていない。
【０００３】
【非特許文献１】乳酸菌研究集談会編，「乳酸菌の科学と技術」，株式会社学会出版センター，１９９６年２月２８日，ｐ．３２７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
この発明の目的は、投与方法も簡単で、しかもガンの増殖抑制作用が顕著な乳酸菌代謝産物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
第１の発明は、Ｂ．ロンガム（Bifidobacterium
longum）、Ｂ．ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）、Ｂ．アドレセンティス（Bifidobacterium
adolescentis）、Ｌ．アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus）、Ｌ．ブレビス(Lactobacillus
brevis)、Ｌ．ジェンセニイ（Lactobacillus jensenii）、Ｌ．パラカゼイ(Lactobacillus
paracasei subsp. paracasei)、Ｌ．ガセリー（Lactobacillus
gasseri）、Ｌ．ブルガリクス（Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus）、Ｌ．ヘルベティカス（Lactobacillus
helveticus）、Ｌ．カゼイ（Lactobacillus casei subsp. casei）、Ｌ．ラモナウサス（Lactobacillus
rhamnosus）、Ｌ．デルブリッキィ（Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii）、Ｌ．ラクチス（Lactococcus
lactis）、Ｅ．フェシウム(Enterococcus faecium)、Ｓ．サーモフィラス（Streptococcus thermophilus）からなる１６種の乳酸菌を用いるとともに、それら３属の乳酸菌から選択した１種または２種以上の乳酸菌を用いて複数のグループを形成し、それらグループ毎に継代培養して共棲状態を維持し、この継代培養されたグループ単位の乳酸菌同士をさらに共棲培養して得た乳酸菌培養液を、加熱滅菌した後にろ過して得たろ液と、このろ液をろ過したときの残渣を粉末化した粉末とを混合してなることを前提とする。
【００１０】
そして、その培養時には、上記１６種の乳酸菌のうち、Ｅ．フェシウムおよびＬ．ヘルベティカスを第１グループ、Ｅ．フェシウムおよびＬ．アシドフィラスを第２グループ、Ｅ．フェシウムおよびＬ．ガセリーを第３グループ、Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラスおよびＬ．ブレビスを第４グループ、Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラスおよびＬ．ブレビスを第５グループ、Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラス、Ｌ．ブレビス、Ｌ．パラカゼイを第６グループ、Ｂ．アドレセンティス単体を第７グループ、Ｌ．デルブリッキィおよびＬ．ガセリーを第８グループ、Ｌ．デルブリッキィ単体を第９グループ、Ｅ．フェシウム、Ｌ．ジェンセニイ、Ｌ．パラカゼイおよびＬ．ブレビスを第１０グループ、Ｌ．アシドフィラス単体を第１１グループ、Ｅ．フェシウムおよびＬ．ガセリーを第１２グループ、Ｌ．パラカゼイ単体を第１３グループ、Ｌ．ガセリー、Ｅ．フェシウムおよびＢ．ビフィダムを第１４グループ、Ｂ．ロンガム、Ｓ．サーモフィラスおよびＥ．フェシウムを第１５グループ、Ｌ．ガセリーを単体で第１６グループ、Ｌ．ブルガリクスおよびＳ．サーモフィラスを第１７グループ、Ｌ．ガセリー、Ｌ．ラクチス、Ｌ．ガセリーおよびＥ．フェシウムを第１８グループ、Ｌ．ガセリー、Ｓ．サーモフィラスおよびＬ．ブルガリクスを第１９グループ、Ｌ．ラクチスを単体で第２０グループ、Ｌ．ガセリーおよびＥ．フェシウムを第２１グループ、Ｌ．ラモナウサスを単体で第２２グループ、Ｌ．カゼイを単体で第２３グループ、Ｂ．ロンガムを単体で第２４グループとする。そして、それぞれのグループ毎に継代培養した培養液を生成するとともに、それら培養液のうち、第１，２グループ同士、第３，４グループ同士、第５，６グループ同士、第７，８グループ同士、第９，１０グループ同士、第１１，１２グループ同士、第１３，１４グループ同士、第１５，１６グループ同士、第１７，１８グループ同士、第１９，２０グループ同士、第２１，２２グループ同士、第２３，２４グループ同士で１次培養し、さらに、第１，２グループと第３，４グループ、第５，６グループと第７，８グループ、第９，１０グループと第１１，１２グループ、第１３，１４グループと第１５，１６グループ、第１７，１８グループと第１９，２０グループ、第２１，２２グループと第２３，２４グループ同士とで２次培養し、さらに、これら各２次培養液を混合して３次培養する点に特徴を有する。
【００１１】
第２発明は、３次培養液を、加熱して乳酸菌を滅菌し、冷却して脂肪分を凝固させてからそれを自然ろ過して上記ろ液を得た点に特徴を有する。
【発明の効果】
【００１３】
この発明によれば、腫瘍抑制効果が大きく、しかも、乳酸菌の代謝産物からなるので、人体に対して副作用が少ないという効果を発揮することができる。また、乳酸菌を生菌として用いるのではなく、その代謝産物を利用しているので、生菌を体内に導く場合よりも、その投与方法が簡単になる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
この実施形態における抗腫瘍活性剤を生成するために、ラクトバチルス(Lactobacillus)菌属に属する乳酸菌、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）菌属に属する乳酸菌、ストレプトコッカス（Streptococcus）菌属に属する乳酸菌のいずれかに属する複数の乳酸菌を用いた。
【００１５】
そして、上記ラクトバチルス(Lactobacillus)菌属に属する乳酸菌として、Ｌ．アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus）、Ｌ．ブレビス(Lactobacillus brevis)、Ｌ．ジェンセニイ（Lactobacillus jensenii）、Ｌ．パラカゼイ(Lactobacillus paracasei subsp. paracasei)、Ｌ．ガセリー（Lactobacillus gasseri）、Ｌ．ブルガリクス（Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus）、Ｌ．ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）、Ｌ．カゼイ（Lactobacillus casei subsp. casei）、Ｌ．ラモナウサス（Lactobacillus rhamnosus）、Ｌ．デルブリッキィ（Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii）、Ｌ．ラクチス（Lactococcus lactis）を１種または２種以上用いた。
【００１６】
上記ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）菌属に属する乳酸菌として、Ｂ．ロンガム（Bifidobacterium longum）、Ｂ．ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）、Ｂ．アドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis）を１種または２種以上用いた。
【００１７】
また、ストレプトコッカス（Streptococcus）菌属に属する乳酸菌として、Ｓ．サーモフィラス（Streptococcus thermophilus）、Ｅ．フェシウム(Enterococcus faecium)、Ｌ．ラクチス（Lactococcus lactis）の１種または２種以上を用いた。
【００１８】
そして、以上の乳酸菌を次のようにして培養した。
先ず、複数の乳酸菌を、２４のグループに分け、それらをグループ毎に継代培養したが、そのグループ分けは次の通りである。すなわち、図１に示すように、第１グループはＥ．フェシウムおよびＬ．ヘルベティカスで構成し、第２グループは、Ｅ．フェシウムおよびＬ．アシドフィラスで構成している。第３グループはＥ．フェシウムおよびＬ．ガセリーで構成し、第４グループは、Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラスおよびＬ．ブレビスで構成している。
【００１９】
第５グループは、Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラスおよびＬ．ブレビスで構成し、第６グループは、Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラス、Ｌ．ブレビス、Ｌ．パラカゼイで構成し、第７グループは、Ｂ．アドレセンティス単体で構成している。
【００２０】
第８グループは、Ｌ．デルブリッキィおよびＬ．ガセリーで構成し、第９グループはＬ．デルブリッキィ単体で構成し、第１０グループは、Ｅ．フェシウム、Ｌ．ジェンセニイ、Ｌ．パラカゼイおよびＬ．ブレビスで構成し、第１１グループは、Ｌ．アシドフィラス単体で構成している。
【００２１】
第１２グループは、Ｅ．フェシウムおよびＬ．ガセリーで構成し、第１３グループは、Ｌ．パラカゼイ単体で構成し、第１４グループは、Ｌ．ガセリー、Ｅ．フェシウムおよびＢ．ビフィダムで構成し、第１５グループは、Ｂ．ロンガム、Ｓ．サーモフィラスおよびＥ．フェシウムで構成している。第１６グループ、Ｌ．ガセリー単体で構成し、第１７グループは、Ｌ．ブルガリクスおよびＳ．サーモフィラスで構成している。
【００２２】
第１８グループは、Ｌ．ガセリー、Ｌ．ラクチス、Ｌ．ガセリーおよびＥ．フェシウムで構成し、第１９グループは、Ｌ．ガセリー、Ｓ．サーモフィラスおよびＬ．ブルガリクスで構成し、第２０グループは、Ｌ．ラクチス単体で構成し、第２１グループは、Ｌ．ガセリーおよびＥ．フェシウムで構成し、第２２グループ、Ｌ．ラモナウサス単体で構成し、第２３グループは、Ｌ．カゼイ単体で構成し、第２４グループは、Ｂ．ロンガム単体で構成している。
【００２３】
上記のようにした各グループを、それらのグループ毎に継代培養するとともに、それら培養液のうち、第１，２グループ同士、第３，４グループ同士、第５，６グループ同士、第７，８グループ同士、第９，１０グループ同士、第１１，１２グループ同士、第１３，１４グループ同士、第１５，１６グループ同士、第１７，１８グループ同士、第１９，２０グループ同士、第２１，２２グループ同士、第２３，２４グループ同士で１次培養した。
【００２４】
さらに、上記第１，２グループと第３，４グループ、第５，６グループと第７，８グループ、第９，１０グループと第１１，１２グループ、第１３，１４グループと第１５，１６グループ、第１７，１８グループと第１９，２０グループ、第２１，２２グループと第２３，２４グループ同士とで２次培養し、さらに、これら各２次培養液を混合して３次培養した。
そして、上記のようにして得た３次培養液を、加熱して乳酸菌を滅菌し、それをろ過してろ液を得るとともに、そのろ液をろ過したときの残渣を粉末化して目的の粉末を得た。
【００２５】
上記のようにして得たろ液を４倍に濃縮した濃縮液と、上記ろ液の残渣から得た粉末ととを混合して、その混合物質をMeth-A sarcomaを移植したマウスに経口投与したところ、十分な抗腫瘍活性が認められた。すなわち、８週齢のBALB/c系雄性マウスにMeth-A
sarcomaを移植するとともに、その移植後一定量の上記ろ液および粉末を、移植１４日前から１日１回２８日間連日経口投与した。その結果、腫瘍の増殖率が４７．２％という抗腫瘍活性が認められた。
【実施例】
【００２６】
各グループの乳酸菌は次のようにして継代培養したものである。すなわち、各グループのそれぞれの乳酸菌は、それらを継代培養した場合にも、共生状態を維持できるであろうことを予測しながら集合させたものである。
【００２７】
そして、各乳酸菌グループの培養培地は、日水製薬株式会社製のＧＡＭ半流動高層培地、ＢＬ寒天培地あるいは変法ＧＡＭ寒天培地からなる３種類の培地を、乳酸菌に応じて使い分けるとともに、これらの培地において、３２℃で１２時間培養した。その後、３７℃で１２時間培養し、さらに４０℃で２４時間培養した。グループ化した乳酸菌を上記のようにして継代培養するとともに、その培養液を５℃で冷蔵保存しておいた。
なお、第２４グループのＢ．ロンガムは、森永乳業株式会社製の菌株である森永ＢＢ５３６を用いた。
【００２８】
このようにして継代培養をするとともに、それらグループ毎に同定をしたが、その同定試験は社団法人日本食品分析センターに依頼した。そして、その同定試験の概要は、各グループの検体を寒天平板培地に直接接種・培養し、優勢に生育した形状の異なる集落を釣菌してグループ毎に乳酸菌を分離し、この分離菌について形態観察、生理的性状試験および菌体内DNAのGC含有量の測定を行い、次の文献を参考に同定したものである。
【００２９】
１．Sneath,P.H.A.,Mair,N.S.,Sharpe,M.E. and Holt,J.G. : “Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology” Vol.2, (1986) Williams & Wilkins.
２．Holt,J.G., Krieg,N.R., Sneath,P.H.A., Staley,J.T. and Williams,S.T. : “Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology”Ninth Edition(1994)Williams & Wilkins.
３．光岡知足：“腸内菌の世界”,(1984)叢文社．
４．辨野義巳：微生物6,3-14(1990)．
５．厚生省生活衛生局監修：“食品衛生検査指針-微生物編-”(1990)日本食品衛生協会．
６．Schleifer,K.H. and Kilpper-Balz,R. : Int.J.Syst.Bacteriol.,34,31-34(1984).
上記同定の結果、図１に示すように、３４の菌株が特定されるとともに、それらが共生状態を維持していることが確認された。
【００３０】
上記のようにして継代培養した培養液を１次共棲培養したが、図１においては、(1)〜(12)までが、１次共棲培養に当たる。そして、この１次共棲培養では、日水製薬株式会社製のＧＡＭ半流動高層培地、ＢＬ寒天培地あるいは変法ＧＡＭ寒天培地からなる３種類の培地を、１次共棲培養用培地として使用するとともに、これら１次共棲培養用培地を、乳酸菌に応じて使い分けた。
【００３１】
そして、上記３種類のいずれかの１次共棲培養用培地に対して、グループ化した乳酸菌を添加して１次培養を行ったが、例えば、上記のようにグループ化した乳酸菌の培地が、流動性の高い培地で、しかも、乳酸菌にビフィズス菌を含んでいる場合には、１次共棲培養用培地に対して１０％の乳酸菌を添加した。ビフィズス菌を含んでいないグループの場合には、同じく１次共棲培養用培地に対して３％の乳酸菌を添加した。
【００３２】
また、グループ化した乳酸菌の培地が、固形性の高い培地の場合には、白金耳でつり上げた１回の量を１次共棲培養用培地に添加した。
そして、これら培地において、３７℃でpH４．６になるまで約６〜１２時間培養した。
【００３３】
２次共棲培養では、培地として豆乳と脱脂乳とを４：１の割合で混合し、この混合液に、ブドウ糖0.5％（w/w）、酵母エキス0.4％（w/w）および既生成分である３次共棲培養液を１％（w/w）添加した。そして、この培地を３７℃でpH４．５５になるまで約６〜１０時間培養を行った。なお、この２次培養において、その培地や添加要素は、どの菌に対しても全て同じにした。
【００３４】
３次培養は、豆乳：脱脂乳を８：１の割合で混合し、この混合液にブドウ糖0.5％（w/w）、酵母エキス0.4％（w/w）および既生成分である３次共棲培養液を１％（w/w）添加した。このようにした培地を用いて、最初に３２℃で２４時間培養し、次に４０℃で４８時間培養し、さらに３７℃で２４時間培養した。
【００３５】
上記のようにして３次培養した混合培養液を、高圧蒸気滅菌法を用いて乳酸菌を滅菌した。つまり、１２０℃程度に加熱した滅菌装置内で、上記３次培養液を６５℃に保って４０分間加熱し、３次培養液中の乳酸菌を滅菌した。そして、この滅菌した最終培養液を１５℃まで冷却して、脂肪分等の不要物を凝固させた。このように脂肪分を凝固させたのは、その脂肪分をろ過によって除去しやすくするためである。このように脂肪分を除去すれば、ろ過したときのろ液が懸濁するのを防ぐことができる。また、脂肪分が酸化することによって、ろ液の中に酸化物が増加することも防止できる。
【００３６】
上記のように冷却した培養液は、それに１２％の無水エタノールを添加して、高速ホモジナイザーで破砕したが、このように培養液を破砕することによって、この後で実行するろ過が短時間にできることになる。
【００３７】
そして、上記滅菌した培養液を、３μｍのろ紙を用いて自然ろ過した後、それに１０ｋｇのウエイトをかけてさらに搾るとともに、この搾った液を0.1〜0.2μｍの中空糸膜でろ過して不純物を取り除き、乳酸菌の代謝産物からなるろ液を得た。
なお、上記ろ液は、その生成プロセスで、上記したように滅菌のために加熱されるが、このように加熱処理をすることによって、乳酸菌中に含まれている成分を熱抽出させることができる。
【００３８】
さらに、上記のようにしてろ過した残渣を、１．２トンの圧力を作用させて圧搾して固形化するとともに、この固形化した残渣を、さらにスライスした後、乾燥し、それを粉末精製機にかけて粒子が６０メッシュの粉末を得た。
そして、ろ液１０ｍｌに対して粉末２０００ｍｇの割合で混合して抗腫瘍活性剤を生成した。
【００３９】
なお、上記のようにして得られたろ液には、表１および表２に示したような物質が含まれていた。表２はアミノ酸の分析試験の結果であり、このアミノ酸の分析方法は、アミノ酸自動分析法を用いた。ただし、表２中、トリプトファンは高速クロマトグラフ法を用いて分析した。
【００４０】
【表１】
0004683881.tif 000002
【００４１】
【表２】
0004683881.tif 000003
【００４２】
また、乳酸菌の生成物である上記粉末の成分を調べたところ、表３に示すように、非水溶性物質としてのアミノ酸や、γ−アミノ酪酸等いろいろな生理活性物質が存在していることが判明した。
【００４３】
【表３】
0004683881.tif 000004
【００４４】
このアミノ酸の含有量は驚異的であり、抗腫瘍活性にも好影響を及ぼすものと推測できる。なぜなら、上記アミノ酸は、免疫細胞の原料として非常に重要であるとともに、これら免疫細胞がガン細胞や細菌を攻撃するために産生する一酸化炭素や免疫グロブリンにも非常に重要となるからである。
【００４５】
なお、この実施例では、前記した１次培養〜３次培養の各プロセスで、上記のようにして生成したろ液を培養培地に添加したところ、目的乳酸菌の増殖が促進されることが判明したが、その理由として、次のことが考えられる。
すなわち、上記表２に示したように、当該ろ液には、微生物の栄養因子が多く含まれていることが分かる。したがって、上記ろ液を目的乳酸菌の培養培地にさらに添加することによって、この目的乳酸菌の増殖が促進されることが考えられる。
【００４６】
さらに、表２に示したように、このろ液には、多量のアミノ酸が含まれている。したがって、目的乳酸菌の培養培地にこのろ液を添加することによって、アミノ酸を代謝して目的の乳酸菌が育成されると考えられる。
【００４７】
また、上記分析結果には表れないが、１６種類もの乳酸菌を共棲培養することによって、このろ液には、各種の菌が作用し合って生成された特有の代謝産物も多く含まれていると思われる。これら代謝産物の豊富な種類も上記目的乳酸菌の増殖促進に影響を与えている可能性がある。
いずれにしても、上記の成果は、１６種類もの乳酸菌を共棲培養した結果と考えられる。言い換えると、４種類程度の乳酸菌を共棲培養した程度では、このような成果は得られないであろうことが推測できる。
【００４８】
（実験例）
そして、上記ろ液および粉末を混合した抗腫瘍活性剤を、マウスに経口投与したが、このマウスは、BALB/c系雄性マウス（８週齢：日本エスエルシー(株)）を用い、バリアーシステムの環境下で、６日間訓化飼育した後に、Meth-A sarcoma細胞を、鼠蹊部皮下に移植して実験に供したもので、その実験の経緯は次の通りである。
【００４９】
上記マウスを、非投与群、ろ液５ｍｌ／ｋｇの投与群、ろ液１０ｍｌ／ｋｇの投与群、粉末２０００ｍｇ／ｋｇの投与群、実施例の抗腫瘍活性剤であるろ液１０ｍｌ／ｋｇおよび粉末２０００ｍｇ／ｋｇの混合投与群に分け、それら各群に１０匹のマウスを用いた。
【００５０】
そして、上記各マウスには、上記したそれぞれの被験物質を、体重１０ｇ当たり０．１ｍｌの割合で、ガン細胞移植１４日前から１日１回２８日間連日経口投与した。
投与１５日目（day０）にBALB/c系雄性マウスの腹腔内で継代中のマウスMeth-A sarcoma細胞を注射器にて無菌的に採取し、生理食塩液を用いて１．０×１０７個／ｍｌの細胞浮遊液に調製した。この細胞浮遊液０．２ｍｌ（２．０×１０６個／マウス）をBALB/c系雄性マウスの鼠蹊部皮下に移植した。
【００５１】
移植１５日目（ｄａｙ１４）の各被験物質投与群および非投与群の平均腫瘍重量を求め、以下の式を用いて増殖率Ｔ／Ｃ（％）を求めた。
Ｔ／Ｃ（％）＝（各投与群の平均腫瘍重量／非投与群の平均腫瘍重量）×１００
上記の計算式の基で、増殖率を求めたところ、表４に示したように実施例の抗腫瘍活性剤であるろ液１０ｍｌ／ｋｇおよび粉末２０００ｍｇ／ｋｇの混合投与群では、その増殖率が４７．２％という増殖抑制効果が認められた。
【００５２】
これに対して、非投与群の増殖率は１００％であり、ろ液５ｍｌ／ｋｇの投与群の増殖率は８４．７％であり、ろ液１０ｍｌ／ｋｇの投与群の増殖率は９３．０％であり、粉末２０００ｍｇ／ｋｇの投与群の増殖率は８９．０％であった。
上記の結果からも明らかなように、実施例の抗腫瘍活性剤であるろ液１０ｍｌ／ｋｇおよび粉末２０００ｍｇ／ｋｇの混合投与群に大きな有意差が認められた。
【００５３】
【表４】
0004683881.tif 000005
【００５４】
上記のように有意差が認められたのは、上記実施例のろ液が、１６種類もの乳酸菌を培養した結果の代謝産物であることが、大きく寄与しているものと思われる。また、人体の腸内には、１種類の菌ではなく、１００種類以上もの菌と発酵物質が生息しているので、上記のように１６種類もの乳酸菌を共棲培養させた後に代謝産物は、それらが体内の免疫力を強化するのに役立つことは、容易に推測される。
【００５５】
また、この実施例のように、１６種類もの乳酸菌を共棲培養することによって、各種の菌が作用し合って生成された特有の代謝産物には、その種類も豊富に含まれ、これら種々の代謝産物が腸内の乳酸菌の活性化に影響することも推測できる。
【産業上の利用可能性】
【００５６】
この発明は、抗ガン剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】１次培養から３次培養のプロセスを示した図である。
【図１】
0004683881.tif 000006