(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１電極が配置される第１緩衝液槽、第２電極が配置される第２緩衝液槽、および分離媒体が収納されるサンプル分離部を備えているサンプル分離吸着器具であって、
該サンプル分離部は、第１緩衝液槽内に開口する第１開口および第２緩衝液槽内に開口する第２開口を有し、
さらに、第２電極を第２開口に対向して配置するための第２電極固定手段を備えており、
第２開口から排出されたサンプル成分を吸着するための吸着用部材を第２開口と第２電極との間に保持するための吸着用部材保持手段をさらに備えていることを特徴とするサンプル分離吸着器具。
【請求項２】
第１緩衝液槽、第２緩衝液槽およびサンプル分離部を備えているサンプル分離吸着器具であって、
該サンプル分離部は、第１緩衝液槽内に開口した第１開口および第２緩衝液槽内に開口した第２開口を有し、かつ第１開口からアプライされたサンプルを第２開口に向けて各成分に分離するための分離媒体を収納しており、
さらに、
第１緩衝液槽内に配置された第１電極；および
第２緩衝液槽内に配置されるように第２開口に対向して固定された第２電極
を備えており、
第２開口から排出されたサンプル成分を吸着させるための吸着用部材を第２開口と第２電極との間に保持した吸着用部材保持手段をさらに備えていることを特徴とするサンプル分離吸着器具。
【請求項３】
第１緩衝液槽、第２緩衝液槽およびサンプル分離部を備えているサンプル分離吸着器具であって、
該サンプル分離部は、第１緩衝液槽内に開口した第１開口および第２緩衝液槽内に開口した第２開口を有し、かつ第１開口からアプライされたサンプルを第２開口に向けて各成分に分離するための分離媒体を収納しており、
さらに、
第１緩衝液槽内に配置された第１電極；および
第２緩衝液槽内に配置されるように第２開口に対向して固定された第２電極
を備えており、
第１緩衝液槽を、第１開口および第２開口により規定される第１方向に沿って移動させる第１駆動手段をさらに備えていることを特徴とするサンプル分離吸着器具。
【請求項４】
第１緩衝液槽、第２緩衝液槽およびサンプル分離部を備えているサンプル分離吸着器具であって、
該サンプル分離部は、第１緩衝液槽内に開口した第１開口および第２緩衝液槽内に開口した第２開口を有し、かつ第１開口からアプライされたサンプルを第２開口に向けて各成分に分離するための分離媒体を収納しており、
さらに、
第１緩衝液槽内に配置された第１電極；および
第２緩衝液槽内に配置されるように第２開口に対向して固定された第２電極
を備えており、
第２開口と第２電極との相対位置を、第１開口および第２開口により規定される第１方向と略垂直な第２方向に沿って変更する第２駆動手段をさらに備えていることを特徴とするサンプル分離吸着器具。
【請求項５】
第２開口と前記吸着用部材との相対位置を、第１開口および第２開口により規定される第１方向と略垂直な第２方向に沿って変更する第２駆動手段をさらに備えていることを特徴とする請求項２に記載のサンプル分離吸着器具。
【請求項６】
第１緩衝液槽、第２緩衝液槽およびサンプル分離部を備えているサンプル分離吸着器具であって、
該サンプル分離部は、第１緩衝液槽内に開口した第１開口および第２緩衝液槽内に開口した第２開口を有し、かつ第１開口からアプライされたサンプルを第２開口に向けて各成分に分離するための分離媒体を収納しており、
さらに、
第１緩衝液槽内に配置された第１電極；および
第２緩衝液槽内に配置されるように第２開口に対向して固定された第２電極
を備えており、
第２電極がストライプ形状に分割されていることを特徴とするサンプル分離吸着器具。
【請求項７】
前記吸着用部材が膜状であることを特徴とする請求項２に記載のサンプル分離吸着器具。
【請求項８】
第１電極と第２電極との間に印加される印加電圧および第２駆動手段を時間的に制御するための制御部をさらに備えていることを特徴とする請求項４又は５に記載のサンプル分離吸着器具。
【請求項９】
制御部における制御が、第１電極と第２電極との間の電流値に依存して行われることを特徴とする請求項８に記載のサンプル分離吸着器具。
【請求項１０】
前記サンプル分離部が、第２緩衝液槽に充填した第２緩衝液の液面に対して略垂直に配置されていることを特徴とする請求項２〜９の何れか１項に記載のサンプル分離吸着器具。
【請求項１１】
前記サンプル分離部が、第２緩衝液槽に充填した第２緩衝液の液面に対して略水平に配置されていることを特徴とする請求項２〜９の何れか１項に記載のサンプル分離吸着器具。
【請求項１２】
前記サンプル分離部が、２枚の板状絶縁体および該板状絶縁体の間に収納される分離媒体の厚さを規定するスペーサからなることを特徴とする請求項２〜９の何れか１項に記載のサンプル分離吸着器具。
【請求項１３】
前記サンプル分離部の形状が第１開口から第２開口に向かって先細であることを特徴とする請求項２〜９の何れか１項に記載のサンプル分離吸着器具。
【請求項１４】
第２電極は、形状が第２開口と同一であり、大きさが第２開口と同一または第２開口より小さいことを特徴とする請求項２〜９の何れか１項に記載のサンプル分離吸着器具。
【請求項１５】
第２電極が、平坦な面からなりかつ第２緩衝液槽内に固定されていることを特徴とする請求項２〜９の何れか１項に記載のサンプル分離吸着器具。
【請求項１６】
光照射部および蛍光検出部をさらに備えていることを特徴とする請求項２〜９の何れか１項に記載のサンプル分離吸着器具。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生物学的なサンプルを各成分に分離するためのサンプル分離器具に関するものであり、より詳細には、サンプルを分離しかつ分離されたサンプルを引き続き吸着部材へ吸着させるサンプル分離吸着器具に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ヒトゲノムプロジェクトが終了した後、プロテオーム研究が盛んに行われている。「プロテオーム」とは、特定の細胞、器官、臓器の中で翻訳生産されているタンパク質全体が意図され、その研究としてはタンパク質のプロファイリングなどが挙げられる。
【０００３】
タンパク質をプロファイリングする手法の１つとして最も用いられているものが、タンパク質の電気泳動、特に２次元電気泳動である。タンパク質は、電荷および分子量の独特の性質を有しているので、多数のタンパク質の混合物であるプロテオームから電荷のみまたは分子量のみに依存して個々のタンパク質を各成分に分離するよりも、両者を組み合わせることにより、より多くのタンパク質を高分解能にて分離することができる。
【０００４】
電気泳動によってタンパク質は電荷および／または分子量によって分離されるが、このような物理的性質のみで分離したタンパク質についてその分離位置から生物学的性質を特定することは困難である。また、タンパク質は合成された後にリン酸化などの化学的修飾（翻訳後修飾）を受けることによりその機能が制御されることが知られている。電気泳動のみではこのような翻訳後修飾に関する情報を得ることは困難である。
【０００５】
ウエスタンブロッティング法は電気泳動によって分離されたスラブゲル中のタンパク質を膜に転写する方法である（例えば、特許文献１などを参照のこと）。ウエスタンブロッティング法によりタンパク質が転写された膜上に特定の抗体をオーバーレイすれば、抗原抗体反応に基づいてタンパク質をある程度特定することが可能となる。また、翻訳後修飾の１つであるリン酸化について、タンパク質が転写された膜に抗リン酸化タンパク質抗体をオーバーレイすることにより、リン酸化の有無、リン酸化部位の相違を検出することが可能となる。
【０００６】
このように、電気泳動法とウエスタンブロッティング法との組み合わせは、タンパク質の生化学的性質を特定する上で非常に有用な方法である（例えば、非特許文献１を参照のこと）。
【特許文献１】特開平７−６３７６３号公報（平成７年３月１０日公開）
【非特許文献１】タンパク質実験ノート（下）：分離同定から機能解析へ（羊土社、２００５年、第３８〜４７頁）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
電気泳動法については、ゲルの小型化による高速化、自動装置による操作の簡易化などが図られており、特に２次元電気泳動法に関する技術は著しく改善されている。しかし、ウエスタンブロッティング法については、サンプルの電気泳動が終了した後に電気泳動カセットからゲルを取り出し、ゲル、濾紙および転写用膜を、平板状の電極、濾紙、膜、ゲル、濾紙、さらなる電極の順に挟み込み、これを電解液中で長時間電圧を印加する工程が必要であり、自動化は困難であった。
【０００８】
また、ウエスタンブロッティング法において用いられる電極は面積が大きく電極間距離が短いため、高電流（例えば、数１００ｍＡ）を長時間流す必要があった。さらに、電極面積が大きいために電極の部位ごとに流れる電流が不均一となる傾向が強く、ゲルから膜へのタンパク質の転写が十分に行われない領域が生じやすかった。なおさらに、電極全体に同一電圧を同一時間印加するために、サンプル中に含まれる高分子量成分は転写されにくく、低分子量成分は転写後に膜を通り抜けてしまう傾向が強い。もちろん、分離したサンプルを膜上へ転写するためには、分離に必要な電気泳動の時間に加えて、転写のための準備時間および操作時間も必要とされる。
【０００９】
このようにウエスタンブロッティング法は、優れたプロテオーム解析法であるが操作が煩雑でありかつ熟練を要する作業であるので、自動化および簡易化することが困難であった。
【００１０】
本発明は、上記の問題点に鑑みてなされたものであり、その目的は、電気泳動法およびウエスタンブロッティング法の利便性を高めることにあり、具体的には、電気泳動からウエスタンブロッティングまでの一連の操作の自動化を実現することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明に係るサンプル分離吸着器具は、第１電極が配置される第１緩衝液槽、第２電極が配置される第２緩衝液槽、および分離媒体が収納されるサンプル分離部を備えており、該サンプル分離部は、第１緩衝液槽内に開口する第１開口および第２緩衝液槽内に開口する第２開口を有し、
さらに、第２電極を第２開口に対向して配置するための第２電極固定手段を備えていることを特徴としている。
【００１２】
本発明に係るサンプル分離吸着器具は、第２開口から排出されたサンプル成分を吸着するための吸着用部材を第２開口と第２電極との間に保持するための吸着用部材保持手段をさらに備えていてもよい。吸着用部材保持手段が、吸着用部材を第２開口と第２電極との間に保持するために機能する手段であれば、本発明は首尾よく実行され得る。すなわち、吸着用部材は、第２開口と接していても、第２電極と接していてもよく、いずれにも接していない状態であってもよい。また、第２開口、吸着用部材および第２電極の全てが接していてよい。
【００１３】
本発明に係るサンプル分離吸着器具は、第１緩衝液槽、第２緩衝液槽およびサンプル分離部を備えているサンプル分離吸着器具であって、該サンプル分離部は、第１緩衝液槽内に開口した第１開口および第２緩衝液槽内に開口した第２開口を有し、かつ第１開口からアプライされたサンプルを第２開口に向けて各成分に分離するための分離媒体を収納しており、
さらに、第１緩衝液槽内に配置された第１電極；および、第２緩衝液槽内に配置されるように第２開口に対向して固定された第２電極を備えていることを特徴としている。
【００１４】
本発明に係るサンプル分離吸着器具は、第２開口から排出されたサンプル成分を吸着させるための吸着用部材を第２開口と第２電極との間に保持した吸着用部材保持手段をさらに備えていてもよい。
【００１５】
本発明では、第１電極および第２電極に電圧を印加することにより、第１開口にアプライされたサンプルは、サンプル分離部にて各成分に分離され、分離されたサンプル成分は、第２開口から第２電極に向けて排出されるとともに第２電極上に吸着される。また、サンプル成分を吸着するための吸着用部材をさらに設けている場合は、分離されたサンプル成分は、第２開口から第２電極に向けて排出されるとともに吸着用部材上に吸着される。
【００１６】
従来の電気泳動によるサンプル分離は、電気泳動速度差に起因してサンプルを電気泳動媒体内で分離するものであり、電気泳動媒体内でサンプルを移動させ、分離したサンプル成分が電気泳動媒体から排出される前に電圧印加を終了する。従来のウエスタンブロッティング法は、電気泳動媒体に吸着用部材を密着させ電気泳動媒体に対して垂直に電圧を印加して電気泳動媒体内に分布したサンプル成分を吸着用部材に写し取るものである。
【００１７】
本発明が上記構成を有することにより、サンプル分離部の分離媒体において分離されたサンプル成分は、分離媒体内を第１開口から第２開口に向けて移動する。サンプル成分の分離および移動のために設けられた第２電極が、第２緩衝液槽内にて第２開口に対向して固定されているので、分離されたサンプル成分は、サンプル分離部（分離媒体）から第２電極に向けて第２開口を介して排出される。ここで、第２開口と第２電極との間にはサンプル成分を吸着するための吸着用部材が保持されているので、排出されたサンプル成分は首尾よく吸着用部材に吸着する。もちろん、吸着用部材を設けていなくても、排出されたサンプル成分は首尾よく第２電極に吸着する。すなわち、本発明に係るサンプル分離吸着器具は、電気泳動のために印加された電圧を利用して、分離媒体から排出されたサンプル成分を首尾よく回収する器具である。
【００１８】
本発明に係るサンプル分離吸着器具は、第１緩衝液槽を、第１開口および第２開口により規定される第１方向に沿って移動させる第１駆動手段をさらに備えていることが好ましい。
【００１９】
上記構成を有していることにより、サンプル分離部を固定した第１緩衝液槽を第１駆動手段によって移動させて、第２開口と吸着部材（または第２電極）との距離を首尾よく調節することができる。
【００２０】
本発明に係るサンプル分離吸着器具は、第２開口と第２電極（または吸着用部材）との相対位置を、第１開口および第２開口により規定される第１方向と略垂直な第２方向に沿って変更する第２駆動手段をさらに備えていることが好ましい。
【００２１】
上記構成を有していることにより、吸着用部材または分離媒体を移動させて、排出されるサンプル成分を順次吸着用部材の表面に吸着させることができる。
【００２２】
本発明に係るサンプル分離吸着器具は、上記サンプル分離部が、第２緩衝液槽に充填した第２緩衝液の液面に対して略垂直に配置されていても、第２緩衝液槽に充填した第２緩衝液の液面に対して略水平に配置されていてもよい。
【００２３】
第２緩衝液槽に充填した第２緩衝液の液面に対してサンプル分離部を垂直に配置する場合は、第２緩衝液を充填するための第２緩衝液槽となる容器を水平に配置し、当該容器内の底面に第２電極を配置し、第２電極の上に吸着用部材を載せ、当該吸着用部材に対して略垂直にサンプル分離部３を配置する。サンプル分離部３は分離媒体と分離媒体を保持するサンプル分離部からなる。第２緩衝液槽を第２緩衝液で充填するとともに、分離媒体の上端部（すなわち、サンプル分離部の第１開口部）に第１緩衝液を充填するための第１緩衝液槽を配置し、分離媒体の上端面にサンプルを配置する。次いで、第１緩衝液槽に電圧印加のための第１電極を配置し、第２緩衝液槽内の分離媒体の下端部（すなわち、サンプル分離部の第２開口部）に対向する部位に通電のための第２電極を配置する。第１電極および第２電極に電圧を印加することにより、サンプルを下方に移動させつつ分離させる。これと同時に、分離媒体下端部（サンプル分離部の第２開口部）と吸着用部材とが対向している部位を相対的に移動させる。これによって分離媒体下端部（サンプル分離部の第２開口部）から第２電極に向けて排出されたサンプル成分は、吸着用部材（または第２電極）に電気泳動媒体中での速度差に従ったパターンとして吸着される。
【００２４】
第２緩衝液槽に充填した第２緩衝液の液面に対してサンプル分離部を水平に配置する場合は、サンプル分離部の第１開口部に第１緩衝液を充填するための第１緩衝液槽を配置し、サンプル分離部の第２開口部に第２緩衝液を充填するための第２緩衝液槽を配置し、第１緩衝液槽と第２緩衝液槽とを連絡するようにサンプル分離部を配置する。次いで、第１緩衝液槽に電圧印加のための第１電極を配置し、第２緩衝液槽内でありかつサンプル分離部の第２開口部に対向する部位に通電のための第２電極を配置し、分離媒体下端部（サンプル分離部の第２開口部）と第２電極の間に吸着用部材を配置する。第１電極および第２電極に電圧を印加することにより、サンプルを側方（第２緩衝液面に対して水平方向）に移動させつつ分離させる。これと同時に、サンプル分離部の第２開口部と対向している吸着用部材を、第１開口および第２開口により規定される第１方向に対して直角方向に移動させる。これによって分離媒体下端部（サンプル分離部の第２開口部）から第２電極に向けて排出されたサンプル成分は、吸着用部材（または第２電極）に電気泳動媒体中での速度差に従ったパターンとして吸着される。
【００２５】
このように、本発明を用いれば、電気泳動によるサンプル分離と、ウエスタンブロッティング法によるサンプル転写（吸着）とを一連の作業として連続して行うことができる。
【００２６】
本発明に係るサンプル分離吸着器具において、分離媒体を収納するサンプル分離部は、２枚の板状絶縁体および該板状絶縁体の間に収納される分離媒体の厚さを規定するスペーサからなることが好ましい。また、サンプル分離部の形状が第１開口から第２開口に向かって先細であってもよい。
【００２７】
上記構成を有していることにより、本発明におけるサンプル分離部は、従来公知のスラブゲルと同様に取り扱うことができる。
【００２８】
本発明に係るサンプル分離吸着器具において、第２駆動手段によって吸着用部材を移動させて第２開口と第２電極（または吸着用部材）との相対位置を変更する場合、第２電極は、形状が第２開口と同一であり、大きさが第２開口と同一または第２開口より小さいことが好ましい。
【００２９】
サンプル分離部が上記構成を有している場合、第１開口および第２開口は長方形であり得、第２電極の形状もまた長方形であることが好ましい。第２電極の大きさは第２開口と同一またはそれより小さいことが好ましく、例えば、第２電極の形状はいわゆる線状であり得る。線状の第２電極を用いる場合、第２電極は吸着用部材の裏面に押し付けられて、吸着用部材を移動させても第２電極の位置は分離媒体端面（すなわち、第２開口）付近に固定され得る。なお、この場合、第２電極は第２緩衝液槽に固定されている必要はないが、常に分離媒体端面（すなわち、第２開口）に対向している必要がある。よって、第２電極固定手段はサンプル分離部と一体形成されていてもよい。
【００３０】
電圧印加する第２電極が面状でなく線状であるので、サンプル吸着（転写）部位における均一な電圧印加を容易にして不均一な吸着（転写）を回避することができる。
【００３１】
本発明に係るサンプル分離吸着器具において、第２駆動手段によって第２開口と第２電極（または吸着用部材）との相対位置を変更する場合、第２電極は、平坦な面からなることが好ましく、第２緩衝液槽内に固定されていることが好ましい。
【００３２】
面状の第２電極を用いる局面において、吸着用部材を移動させて第２開口と第２電極（または吸着用部材）との相対位置を変更する場合、第２電極は吸着用部材の裏面に配置され、吸着用部材とともに移動する。すなわち、第２駆動手段は、第２電極を移動させる移動手段であっても吸着用部材を移動させる移動手段であってもよい。また、面状の第２電極を用いる局面において、サンプル分離部を移動させて第２開口と第２電極（または吸着用部材）との相対位置を変更する場合、第２緩衝液槽内に配置される第２電極および吸着用部材を移動させる必要がない。
【００３３】
本発明に係るサンプル分離吸着器具において、第２開口の形状が長方形である場合、第２電極がストライプ形状に分割されていることもまた好ましい。この場合、第２開口に対向して配置された絶縁基板上に、ストライプ状の複数の第２電極が平行に配列されていることが好ましい。
【００３４】
上記構成を有するサンプル分離吸着器具において、第２開口近傍において複数のストライプ状第２電極は吸着用部材に対して静止している。第２駆動手段によって第２開口と第２電極（または吸着用部材）との相対位置を変更することにより、第２開口が最も近接する第２電極も変更されることになる。このような構成を用いれば、第２開口に最も近接する第２電極にのみ電圧を印加させればよいので、面状の第２電極全体に電圧を印加するより低電流にてサンプルの分離・吸着を行うことができる。なお、本構成においては、対象となる第２電極にのみ電圧が印加されるようなスイッチを構成すればよい。
【００３５】
なお、本発明に係るサンプル分離吸着器具において、吸着用部材は膜状であることが好ましい。
【００３６】
膜状の吸着用部材を用いる場合、第２駆動手段が、ロール状に巻き上げられた状態の吸着用部材を引き出したり、分離吸着後にロール状に巻き取ったりすることができる構成を有していることにより、器具全体を小型化することができる。
【００３７】
本発明に係るサンプル分離吸着器具は、印加電圧および第２駆動手段を時間的に制御するための制御部をさらに備えていることが好ましい。より好ましくは、制御部における制御が、第１電極と第２電極との間の電流値に依存して行われ得る。
【００３８】
例えば、分離媒体に流れる電流値をモニタリングして、該電流値に応じて吸着用部材の移動速度を制御する。あるいは、蛍光標識されたマーカー分子をサンプルとともに電気泳動し、マーカー分子の移動速度をモニタリングして吸着用部材の移動速度を制御する。この場合、本発明に係るサンプル分離吸着器具は、光照射部および蛍光検出部をさらに備えていることが好ましい。
【００３９】
このように、吸着用部材の移動速度を時間的に制御することにより、吸着したサンプル成分の吸着パターンを変化させることができる。また電圧印加と吸着用部材の移動速度を独立して制御することができるので、分離媒体の端面から排出されるサンプル成分の分子量に応じた電圧印加と吸着用部材の移動速度制御が可能となり、その結果、低分子量のサンプル成分が吸着用部材を突き抜けることや、高分子量のサンプル成分が吸着（転写）不良を生じることを回避し得る。
【００４０】
なお、本発明に係るサンプル分離吸着器具において、吸着用部材と電極との間の電気的接続を良好にするために、これらの間に濾紙を配置してもよい。
【００４１】
本発明に係るサンプル分離吸着法は、第１電極および第２電極に電圧を印加することにより、サンプルを分離しかつ吸着用部材に吸着させる方法であって、第１電極を、サンプル分離部の第１開口が開口する第１緩衝液槽内に配置する工程；第２電極を、サンプル分離部の第２開口に対向して固定する工程；サンプル分離部の第２開口および第２電極を、第２緩衝液槽内に配置する工程；ならびに、該吸着用部材を、サンプル分離部の第２開口と第２電極との間に保持する工程、を包含することを特徴としている。
【００４２】
本発明に係るサンプル分離吸着法において、第２電極（または吸着用部材）と第２開口との相対位置を、第１開口および第２開口により規定される第１方向に対して略垂直な第２方向に沿って変更する工程をさらに包含することが好ましい。
【００４３】
本発明に係るサンプル分離吸着器具は、電気泳動を実行する分離媒体の上端面に第１緩衝液を満たす第１緩衝液槽を配置し、分離媒体の下端面に第２緩衝液を満たす第２緩衝液槽を配置し、第１緩衝液槽内に第１電極を配置し、第２緩衝液槽側に通電のための第２電極を配置し、分離媒体の第２緩衝液槽側端面と第２電極との間に吸着用部材を配置し、通電により分離媒体中を移動した後に第２緩衝液槽側端面から排出されたサンプル成分を吸着用部材に吸着させながら分離媒体に対して吸着用部材を相対的に移動させてサンプル成分の吸着を行うことを特徴としている。
【００４４】
本発明に係るサンプル分離吸着器具は、第２緩衝液を充填するための第２緩衝液槽を水平に配置し、第２緩衝液槽内の底面に第２電極を配置し、第２電極の上に吸着用部材を載せ、当該吸着用部材に対して略垂直に分離媒体を配置し、第２緩衝液槽を第２緩衝液で満たし、分離媒体の上端部に第１緩衝液を充填するための第１緩衝液槽を配置し、分離媒体の第１緩衝液槽側端面にサンプルを配置し、第１緩衝液槽内に電圧印加のための第１電極を配置して電気泳動によりサンプルを下方に分離移動させるとともに、分離媒体と吸着用部材とを相対的に移動させて分離および吸着を行うことが好ましい。
【００４５】
本発明に係るサンプル分離吸着器具において、分離媒体を略水平に配置し、吸着用部材を略垂直方向へ移動させることが好ましい。
【００４６】
本発明に係るサンプル分離吸着器具において、第２電極における吸着用部材に接する部分が線状でありその幅が分離媒体の第２緩衝液槽側端面の厚み幅と略同等またはそれ以下であり、吸着用部材の移動に際して第２電極が分離媒体の第２緩衝液槽側端面に対して静止していることもまた好ましい。
【００４７】
本発明に係るサンプル分離吸着器具において、吸着用部材に接する第２電極は面状であり得、この場合、吸着用部材に対して第２電極が静止した状態で分離媒体が吸着用部材に対して相対的に移動し、第２電極の大きさは、分離サンプルが分離媒体から吸着用部材に転写される際の分離媒体の全移動範囲と同等以上であることが好ましい。
【００４８】
本発明に係るサンプル分離吸着器具において、第２電極はストライプ状に分割され得、この場合、吸着用部材の移動とともに常に分離媒体端面に近いストライプ状第２電極に電圧が印加される様に電気的に切り替わる構成を有していることが好ましい。
【００４９】
本発明に係るサンプル分離吸着器具において、吸着用部材は膜状であり得、この場合、分離媒体と吸着用部材とを相対的に移動させる移動手段が、ロール状に巻き上げられた状態から引き出される、および／または分離転写後にロール状に巻き取られる構成を有していることが好ましい。
【００５０】
本発明に係るサンプル分離吸着器具は、印加電圧および分離媒体−吸着用部材間の相対速度が時間的に制御されていることが好ましい。
【００５１】
本発明に係るサンプル分離吸着器具において、上記制御は、第１電極と第２電極との間の電流値に依存して行われてもよい。
【００５２】
本発明に係るサンプル分離吸着器具において、上記制御は、蛍光標識されたマーカー成分をサンプルと同時に分離媒体の第１緩衝液槽側端面上に配置し、蛍光スポットの移動を蛍光検出部で観測し、その移動速度に依存して行われてもよい。
【００５３】
本発明に係るサンプル分離吸着器具において、分離媒体の厚みは、電気泳動開始側に対して電気泳動終了側で薄くなっていてもよい。
【発明の効果】
【００５４】
本発明を用いれば、電気泳動によるタンパク質分離と吸着部材によるサンプル成分の回収を同一器具内にて一連の操作で行うことができる。特に、第２開口と第２電極（または吸着用部材）との相対位置を変更する駆動手段を備えている本発明を用いた場合は、電気泳動によるタンパク質分離とウエスタンブロッティングによる転写を同一器具にて一連の操作で行うことができるので、総工程に要する時間を短縮し得、自動化を容易にし得、再現性の向上を図ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５５】
〔１：第１の実施形態〕
本発明に関るサンプル分離吸着器具１００の一実施形態を、図１〜７を用いて説明する。
【００５６】
図１は、本実施形態に係るサンプル分離吸着器具１００の、サンプルの分離および吸着を実行する状態における断面図を示す。
【００５７】
サンプル分離吸着器具１００は、第１緩衝液槽１、第２緩衝液槽２およびサンプル分離部３を備えている。サンプル分離部３は、サンプル１０を分離するための分離媒体３３を内部に収納することができる。図１は、２枚の絶縁板３４および絶縁板３４の間に分離媒体３３を収納するための空間を設けるためのスペーサ（示さず）から構成されるサンプル分離部３が、分離媒体３３を収納した状態を示している。
【００５８】
サンプル分離部３は、図１中上方および下方にそれぞれ第１開口３１および第２開口３２を有しており、第１開口３１および第２開口３２はそれぞれ第１緩衝液槽１および第２緩衝液槽２に開口している。サンプル１０の分離を実行する際には、第１緩衝液槽１および第２緩衝液槽２にはそれぞれ第１電極１２および第２電極２２が配置され、それぞれ第１緩衝液１１および第２緩衝液２１が充填され、分離媒体３３の上部に第１開口３１を介してサンプル１０が載せられる。次いで、第１電極１２および第２電極２２に電圧を印加することにより、サンプル１０に含まれる各成分は図１中下方に移動する。ここで、各サンプル成分の間に生じる移動度の差に基づいて、サンプル１０は分離媒体３３中にて分離される。
【００５９】
図１に示すように、本実施形態に係るサンプル分離吸着器具１００は、第２電極２２を第２開口３２に対向して配置するための第２電極固定手段４をさらに備えている。図１は、第２緩衝液槽２の内部に設置された第２電極固定手段４が第２電極２２を固定している状態を示している。本構成を有していることにより、第１電極１２および第２電極２２に電圧を印加することにより図１中下方に移動したサンプル成分は、サンプル分離部３の第２開口３２から第２電極固定手段４上に固定された第２電極２２に向けて排出される。
【００６０】
本実施形態に係るサンプル分離吸着器具１００は、第２開口３２から排出されたサンプル成分を吸着するための吸着用部材６を第２開口３２と第２電極２２との間に保持するための吸着用部材保持手段５をさらに備えている。図１は、第２緩衝液槽２の内部に設置された第２電極固定手段４と連結された吸着用部材保持手段５が、吸着用部材６を第２電極２２上に押し付けて保持している状態を示している。本構成を有していることにより、第２開口３２から第２電極に向けて排出されたサンプル成分は、吸着用部材保持手段５によって保持された吸着用部材６に吸着される。
【００６１】
用語「サンプル」は当該分野において標本、調製物と同義で用いられ、本明細書中で使用される場合、「生物学的サンプル」またはその等価物が意図される。「生物学的サンプル」は、供給源としての生物材料（例えば、個体、体液、細胞株、組織培養物もしくは組織切片）から得られる、任意の調製物が意図される。生物学的サンプルとしては、体液（例えば、血液、唾液、歯垢、血清、血漿、尿、滑液、および随液）および組織供給源が挙げられる。好ましい生物学的サンプルは、被験体サンプルである。好ましい被験体サンプルは、被験体から得た皮膚病変部、喀痰、咽頭粘液、鼻腔粘液、膿、または分泌物である。本明細書中で使用される場合、用語「組織サンプル」は、組織供給源より得られた生物学的サンプルが意図される。哺乳動物から組織生検および体液を得るための方法は当該分野で周知である。本明細書中で使用される場合、用語「サンプル」としては、上記生物学的サンプルおよび上記組織サンプル以外に、上記生物学的サンプルおよび上記組織サンプルより抽出したタンパク質サンプル、ゲノムＤＮＡサンプルおよび／または総ＲＮＡサンプルも挙げられる。また、「サンプル成分」は、「サンプル」を構成する種々の因子（成分）が意図される。
【００６２】
なお、第２電極を吸着用部材として用いて第２電極上に分離サンプルを直接吸着させてもよい。この場合は、サンプル分離吸着器具１００は、第２電極２２が吸着用部材６として機能し得、第２電極固定手段４が吸着用部材保持手段５として機能し得る。
【００６３】
また、本実施形態に係るサンプル分離吸着器具１００においては、分離媒体３３としてアクリルアミドゲルを用いた分子量分離（いわゆる、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）が可能であり、用いられるサンプル１０としては、例えば、等電点電気泳動により分離されたサンプルを内包する１次元ゲルであってもよい。
【００６４】
続いて、複数のサンプル成分の分離パターンを維持したまま吸着用部材６に吸着させる場合に必要とされるサンプル分離吸着器具１００の構成を、斜視図（図２）、断面図（図３）および概念図（図４）を用いて説明する。なお、図２〜４においては、図面を簡略化するために第２電極固定手段４および吸着用部材保持手段５を省略している。
【００６５】
図２はサンプル分離吸着器具１００の斜視図であり、サンプル分離吸着器具１００全体を固定するための基盤９の上に第２緩衝液槽２が固定され、第２緩衝液槽２の内部底面に面状の第２電極２２ａが固定され、第２電極２２ａの上部には吸着用部材６が保持されている。基盤９に対して略垂直に配置されたサンプル分離部３の上端面には第１緩衝液槽１がサンプル分離部３と連結して配置されている。サンプル分離部３はさらに、アーム７１ｂを介して第１駆動手段７１に結合されており、第１駆動手段７１は、基盤９の上に固定された第２駆動手段７２にさらに結合されている。第１駆動手段７１および第２駆動手段７２によって、基盤９に対して略垂直方向（第１方向Ｍ）および略水平方向（第２方向Ｎ）へのサンプル分離部３の移動を制御し得る。
【００６６】
図３は、図２に示したサンプル分離吸着器具１００から第１駆動手段７１および第２駆動手段７２を省略した状態を示す断面図であり、電源１１１より配線１１２を介して第１電極１２と第２電極２２ａとの間に電圧が印加されている状態を示している。図３に示すように、第１緩衝液槽１は第１緩衝液１１で満たされ、第２緩衝液槽２は第２緩衝液２１で満たされており、第１電極１２が第１緩衝液１１に浸されている。また、分離媒体３３の下方端面は第２緩衝液２１に接し、上方端面は第１緩衝液１１に接している状態でサンプル１０が載せられている。
【００６７】
図４は、サンプル分離吸着器具１００におけるサンプル成分の分離吸着の概念図である。サンプル１０は、分離媒体３３上端に配置されている。電源１１１により第１電極１２と第２電極２２ａとの間に電圧が印加されると、サンプル１０は分離媒体３３中を第１方向Ｍに沿って移動し、移動度の差によりサンプル成分１０ａ・１０ｂとして分離される（図４（ａ））。電圧を印加し続けるとサンプル成分１０ａ・１０ｂは分離媒体３３下端から排出され、排出されたサンプル成分１０ａ・１０ｂは、面状の第２電極２２ａへ電気的に引かれることにより吸着用部材６に吸着され、その結果、吸着用部材６上に吸着スポット１０ａ’・１０ｂ’が形成される（図４（ｂ））。ここで、サンプル分離（電気泳動）操作を行いながらサンプル分離部３を第２方向Ｎに沿って移動させると、サンプル成分１０ａ・１０ｂが排出される時間の差に起因して位置が異なる吸着スポット１０ａ’および１０ｂ’が形成される。以上の操作により、分離されたサンプル１０ａ・１０ｂの分離パターンが、吸着パターン１０ａ’・１０ｂ’として吸着用部材６上に反映され、複数のサンプル成分の吸着パターンを得ることができる。
【００６８】
上述したように、サンプルの分離パターンを吸着パターンとして吸着用部材上に反映するためには、サンプル分離部３と吸着用部材６とが相対的に移動する必要があるが、サンプル分離部３が移動して吸着用部材６が静止していてもよく、吸着用部材６が移動してサンプル分離部３が静止していてもよい。
【００６９】
第２電極としては図２〜４で示した平面状の電極２２ａを使用してもよいが、面状の電極２２ａを用いた場合は分離媒体３３端面から第２電極への電気力線が広がる可能性があり、分離媒体３３から排出されたサンプル成分が拡散して吸着パターンの分解能の低下を招く可能性がある。分解能の低下を防ぐためには、第２電極の面積を小さくすることが好ましい。第２電極のバリエーションを、図５および６を用いて説明する。なお、図５および６においてもまた、図面を簡略化するために第２電極固定手段４および吸着用部材保持手段５を省略している。
【００７０】
図５は、第２電極固定手段４でもある絶縁基板４１上にストライプ状の第２電極２２ｂを複数配置させたサンプル分離吸着器具１００の断面図を示す。ストライプ状の第２電極を用いることにより、面状の第２電極より総面積を小さくすることができる。操作については、面状電極を用いた場合と同様に、第２電極２２ｂを吸着用部材６に対して静止させ、サンプル分離部３と第２電極２２ｂとの間の相対位置を変更させればよい。また、スイッチ１１３を用いて電圧印加を電気的に切り替えれば、分離媒体３３の下方端面に最も近い第２電極のみをオンにすることができるので、より好ましい。なお、スイッチ１１３は機械的でもよいし、電子回路を用いてもよい。
【００７１】
あるいは、図６に示すように線状の第２電極２２ｃを用いて分離媒体３３下端面から第２電極への電気力線を集中させることが好ましい。なお、線状の第２電極２２ｃを用いる場合、第２電極２２ｃはサンプル分離部３に対して静止している必要がある。なお、線状の第２電極２２ｃは、サンプル分離部３と連結していて設けられていても、第２緩衝液槽２内に設けられていてもよい。
【００７２】
第１駆動手段７１および第２駆動手段７２は、それぞれ第１方向および第２方向への移動を首尾よく実行し得るものであれば、図２に示したものに限定されない。第２駆動手段のバリエーションの１つを、図７を用いて説明する。なお、図７においてもまた、図面を簡略化するために第２電極固定手段４を省略している。
【００７３】
図７は、サンプル分離部３を垂直に配置し、吸着用部材巻きつけ部であるロール７２ａ、吸着用部材巻取り部であるロール７２ｂを用いて吸着用部材６を搬送する構成を有したサンプル分離吸着器具１００の断面図を示す。ロール７２ａ・７２ｂは、第２電極層２に固定されており、吸着用部材６を所定の位置に配置するための吸着用部材保持手段としても機能している。図に示すように、第２電極２２ｃは、サンプル分離部３の第２開口に対向して設けられている。なお、第２電極２２ｃを固定するための第２電極固定手段（示さず）は、第２緩衝液槽２に固定されていても、サンプル分離部３に固定されていてもよい。ロール７２ａ・７２ｂは、図中に示す矢印の方向に回転することにより分離媒体３３から排出される複数のサンプル成分を吸着用部材６上に吸着して、吸着用部材６に吸着パターンを形成する。
【００７４】
〔２：第２の実施形態〕
上述したように、第１の実施形態に係るサンプル分離吸着器具１００を用いて、第２開口と第２電極（または吸着用部材）との相対位置の変更が、サンプル分離吸着器具１００全体を固定するための基盤（または第２緩衝液２１液面）に対して略水平に行われる態様を説明したが、本発明は、サンプル分離工程を略水平方向にて実行し、吸着工程を略垂直方向にて実行することも可能である。第２開口と第２電極（または吸着用部材）との相対位置の変更が、基盤（または第２緩衝液２１液面）に対して略垂直に行われる態様について、本発明に係る第２の実施形態として、図８を用いて以下に説明する。
【００７５】
図８は、本実施形態に係るサンプル分離吸着器具１００’の、サンプルの分離および吸着を実行する状態における断面図を示す。
【００７６】
サンプル分離吸着器具１００’は、第１緩衝液槽１、第２緩衝液槽２およびサンプル分離部３を備えている。サンプル分離部３は、サンプル１０を分離するための分離媒体３３を内部に収納することができる。図８は、２枚の絶縁板３４および絶縁板３４の間に分離媒体３３を収納するための空間を設けるためのスペーサ（示さず）から構成されるサンプル分離部３が、分離媒体３３を収納した状態を示している。
【００７７】
サンプル分離部３は、図８中左方および右方にそれぞれ第１開口３１および第２開口３２を有しており、第１開口３１および第２開口３２はそれぞれ第１緩衝液槽１および第２緩衝液槽２に開口している。サンプル１０の分離を実行する際には、第１緩衝液槽１および第２緩衝液槽２にはそれぞれ第１電極１２および第２電極２２が配置され、それぞれ第１緩衝液１１および第２緩衝液１２が充填され、第１開口３１を介してサンプル１０が分離媒体３３に供される。次いで、第１電極１２および第２電極２２に電圧を印加することにより、サンプル１０に含まれる各成分は図８中右方に移動する。ここで、各サンプル成分の間に生じる移動度の差に基づいて、サンプル１０は分離媒体３３中にて分離される。図８には第２電極２２を固定するための第２電極固定手段を示していないが、本構成を有していることにより、第１電極１２および第２電極２２に電圧を印加することにより図８中右方に移動したサンプル成分は、サンプル分離部３の第２開口３２から第２電極固定手段４上に固定された第２電極２２に向けて排出される。なお、第２電極固定手段は、第２緩衝液槽２に固定されていても、サンプル分離部３に固定されていてもよい。
【００７８】
本実施形態に係るサンプル分離吸着器具１００’は、第２駆動手段として吸着用部材６を搬送するための吸着用部材巻きつけ部であるロール７２ａおよび吸着用部材巻取り部であるロール７２ｂを備えている（図８）。ロール７２ａは第２電極層２に固定されており、ロール７２ｂは保持部（示さず）を介してサンプル分離吸着器具１００’に固定されている。なお、ロール７２ａ・７２ｂは、第２開口３２から排出されたサンプル成分を吸着させる吸着用部材６を、第２開口３２と第２電極２２との間に保持するための吸着用部材保持手段としても機能している。図８は、第２緩衝液槽２の内部に設置された第２電極固定手段４と連結された吸着用部材保持手段５が、吸着用部材６を第２電極２２上に押し付けて保持している状態を示している。本構成を有していることにより、第２開口３２から第２電極に向けて排出されたサンプル成分は、吸着用部材保持手段５によって保持された吸着用部材６に吸着される。
【００７９】
上記構成を有していることにより、サンプル分離吸着器具１００’は、第２開口と第２電極（または吸着用部材）との相対位置の変更を、第２緩衝液２１液面に対して略垂直に行うことができる。なお、上記変更を首尾よく行うために、図８に示すようなガイド７２ｃを用いることもまた好ましい。
【００８０】
なお、図８において、第１開口３１および第２開口３２により規定される第１方向（図中Ｍ）に沿って移動させる第１駆動手段を示していないが、本実施形態において、第１駆動手段は、サンプル１０を分離媒体３３と首尾よく接するように配置するためのサンプル駆動手段として機能し得る。よって、第１の実施形態と同様に、用いられるサンプル１０としては、例えば、等電点電気泳動により分離されたサンプルを内包する１次元ゲルであってもよい。
【００８１】
図９は、本発明を実施する際のサンプル移動と吸着パターンとの関係を示す。図中、サンプル分離部３および吸着用部材６をそれぞれ１次元で示し、時間軸方向に時間経過による分離スポットの移動を示した。なお、図９では、吸着用部材６が移動する場合を例に挙げて説明している。
【００８２】
電圧印加によって分離媒体３３中をサンプル成分が第１方向Ｍへ移動し、これらの移動度の差により分離した各成分は、分離媒体下端面から排出されて吸着用部材６に吸着される。吸着用部材６は時間経過（ｔ＝１、ｔ＝２、ｔ＝３）とともに第２方向Ｎへ移動しているため、分離開始から排出までの総時間の差が吸着用部材６上にパターンとして形成される。
【００８３】
本発明においては、最も移動度の小さなサンプル成分が分離媒体３３の分離媒体下端から排出され転写されるまで電圧印加を行うが、従来行われている電気泳動後の転写の場合、最も移動度の高いサンプル成分が分離媒体の分離媒体下端に達する前に電気泳動を停止して、吸着パターン（分離パターン）の検出を行う。従来の電気泳動では一定時間における移動距離の相違により分離パターンが形成されるのに対して、本発明では一定距離を進むのに要する時間の差でパターンが形成される。換言すると、従来の電気泳動のみの場合は移動度に比例したパターンが形成されるのに対して、本発明では移動度の逆数に比例したパターンが形成される。
【００８４】
一般に、タンパク質などのサンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥなどで分離した場合、低分子量側のスポット間隔は広がり、高分子量領域のスポット間隔は蜜になるため、高分子側の分解能が不十分であった。かような問題を解決する方法として、密度勾配を有するグラジェントゲルが用いられている。本発明では、移動度の逆数に比例したパターンが形成されるためにこの問題が解決されている。
【００８５】
しかしながら、従来の電気泳動パターンとの比較が必要となり従来と同様のパターンが要求される場合も考慮しなければならない。本発明においては、サンプル分離（電気泳動）の進行とは独立して吸着用部材の移動速度を制御することが可能であり、移動速度調節または印加電圧の調節によって従来と同様のパターンを形成させ得る。図１０は、吸着用部材６の移動速度を電気泳動の経過とともに減速させて、従来の電気泳動パターンと同一のパターンを得る方法を示す。この場合、吸着用部材６の移動速度を一定にして、サンプル分離部３へ印加する電圧を時間とともに増加させてもよい。
【００８６】
吸着用部材６の移動を電気泳動の進捗と独立で駆動している場合、分離媒体３３内のサンプルスポット移動速度が何らかの原因で電圧低下等が起こり変調した場合、吸着パターンにずれが生じる（図１１中における変調Ｐ）。従来の電気泳動の場合は、電気泳動中に電圧等の変動があっても電気泳動媒体全体が変調されるため、最終的に得られたパターンへの影響は少ない。本発明では、かような不具合を避けるために電気泳動の速度をモニタリングして印加電圧または吸着用部材の移動速度を制御し得る（図１２中における変調Ｑ）。具体的には図１３に示すような構成を有するサンプル分離吸着器具１００において、電気泳動中の電流を電流計１１４でモニタリングし、電流値変動から移動速度変動をデータ処理部８３にて算出して第１電極１２および第２電極２２へ印加する電圧を制御するか、または第２駆動手段７２の駆動を制御する駆動手段制御部８３を制御する。あるいは、蛍光標識したマーカーサンプルを分離すべきサンプルと同時に電気泳動し、マーカーサンプルの移動速度を蛍光検出部９２にて検出し、データ処理部８１にて移動速度変調を算出し、第１電極１２および第２電極２２へ印加する電圧を制御するか、または吸着用部材６のロール（吸着用部材巻取り部）７２ｂをローブ制御部８２にて制御する（図１４）。
【００８７】
図１５に示すように、分離媒体３３の厚みが転写された吸着スポット１０ａ’・１０ｂ’の分解能を低下させ、最悪の場合、これらの分離スポット１０ａ’・１０ｂ’が重なってしまう。図１６に示すように、分離媒体３３を十分に薄くすると、吸着スポット１０ａ’・１０ｂ’の分解能低下を回避することができる。しかしながら、分離媒体３３が薄い場合は、サンプルの導入が困難となるため、図１７に示すように分離媒体３３の入り口部分（すなわち、第１開口）を厚くし、出口部分（すなわち、第２開口）を薄くすることによりこの問題を回避し得る。
【００８８】
第１開口３１および第２開口３２においてのみ分離媒体３３が第１緩衝液１１および第２緩衝液２１と接していることが好ましいので、分離媒体３３を収納するサンプル分離部３は、絶縁体から構成されることが好ましく、防水性が高い物質からなることがより好ましい。また、リアルタイムモニタリングなどのように分離媒体３３をサンプル分離部３から取り外すことなくサンプル成分（例えば、１０ａ・１０ｂ）を検出するためには、サンプル分離部３は光透過性の高い物質からなることが好ましい。このような特性を兼ね備えた物質としては、ガラス、樹脂が挙げられ、樹脂材料としてはＰＭＭＡ、ＰＤＭＳ、ＣＯＰ、ポリカーボネート、ポリスチレン、ＰＥＴ、塩ビなどが挙げられ、重量や操作性、生産性の観点からアクリル樹脂（例えば、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）など）が好ましい。
【００８９】
第１緩衝液槽１、第２緩衝液槽２およびサンプル分離部３を構成する材料はそれぞれ同一であっても別であってもよい。第１緩衝液槽１および第２緩衝液槽２は、緩衝液が充填されるという観点から防水性が高い物質からなることが好ましい。
【００９０】
第１緩衝液槽１および第２緩衝液槽２にそれぞれ設けられる第１電極１２および第２電極２２は、固定されていてもされていなくてもよい。固定されている場合は、第１電極１２および第２電極２２は、それぞれ第１緩衝液槽１および第２緩衝液槽２にパターニング形成された導電体であってもよい。
【００９１】
第１及び第２の実施形態、ならびに図面において、本発明における第２開口３２の位置を示しやすくするために、吸着用部材６が第２電極２２と接触している状態を用いて説明したが、本発明を実行するにあたり、吸着用部材６が第２電極２２と密着している必要はない。すなわち、吸着用部材６は、第２開口３２と接していても、第２電極２２と接していてもよく、いずれにも接していない状態であってもよい。また、第２開口３２、吸着用部材６および第２電極２２の全てが接していても、本発明を首尾よく実行し得る。このように、吸着用部材保持手段５が、吸着用部材６を第２開口３２と第２電極２２との間に保持するために機能する手段であればよいことを、本明細書を読んだ当業者は容易に理解する。また、第２開口３２、吸着用部材６、第２電極２２の間隔を調節する必要がある場合は、第１駆動手段７１がその機能を担うということを、本明細書を読んだ当業者は容易に理解する。
【００９２】
また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。
【実施例１】
【００９３】
〔１次元目電気泳動（サンプル媒体１０）〕
イモビラインによる固定化ｐＨ勾配等電点電気泳動用ゲルを１ｍｍ×６０ｍｍに切断して用いた。サンプル導入とゲル膨潤を行い、３５００Ｖで８時間の電気泳動を行った。
【００９４】
〔サンプル分離部３〕
６０ｍｍ×５０ｍｍ×２ｍｍ厚を有する２枚の板状絶縁体３４でテーパー状スペーサを左右端に配して挟み、内部に分離媒体３３としてポリアクリルアミドゲルを充填し、出口端面厚０．２ｍｍ、入り口端面ゲル厚１．０ｍｍとしたものを用いた。分離媒体を保持する板状絶縁体３４は、ガラスまたは樹脂（例えば、ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリレート））からなる。
【００９５】
〔第１緩衝液槽１〕
７０ｍｍ×１０ｍｍ×深さ１０ｍｍの第１緩衝液槽１をサンプル分離部３の上端に取り付ける。１次元目電気泳動を行ったサンプル媒体１０を平衡化処理した後、分離媒体３３の上端面に設置しアガロースにて固定した。第１緩衝液１１で第１緩衝液槽１を満たし、第１電極１２として白金線を用いた。
【００９６】
〔第２緩衝液槽２〕
７０ｍｍ×１００ｍｍ×深さ１０ｍｍの第２緩衝液槽２を基盤９の上に配置し、底面中央に６０ｍｍ×７０ｍｍ×０．５ｍｍ厚の白金鍍金されたチタン板を第２電極２２として配置し、濾紙２枚を載せ、その上に吸着用部材６として６０ｍｍ×６０ｍｍのアクリルセルロースあるいはＰＶＤＦ膜を第２電極２２上に固定した。第２緩衝液槽２を第２緩衝液２１で満たした。
【００９７】
〔サンプル分離部３の搬送手段８〕
サンプル分離部３の移動を行うための搬送手段を、ステッピングモータ駆動のＸ軸ステージ（第１駆動手段７２）およびＺ軸ステージ（第１駆動手段７１）により構成し、全体基盤９の上に配置した。Ｘ軸ステージ７２をストローク８５ｍｍ（分解能１μｍ／パルス）とし、Ｚ軸ステージ７１をストローク１５ｍｍ（分解能１μｍ／パルス）とし、汎用の多軸ステッピングモータコントローラを介してＧＰＩＢ接続したパーソナルコンピュータにて制御した。サンプル分離部３をアーム７１ｂを介してＺ軸ステージ７１に固定し、図２〜３に示すようにサンプル分離部３が吸着用部材６に接するようＺ軸方向（第１方向Ｍ）の移動を行った。
【００９８】
〔電圧印加〕
第１電極１２を高圧電源１１１のマイナス側、第２電極を高圧電源１１１のプラス側に接続し、電源１１１と第２電極２２との間に電流計１１４を配置し、一定電流（１０ｍＡ）となるようにデータ処理部８１を介して電圧を制御した。
【００９９】
〔サンプル分離部３の搬送〕
サンプル分離部３への電圧印加の後、最も移動速度の早いサンプル成分が電気泳動媒体の端面に達する時刻から駆動手段制御部８３により第２駆動手段７２を駆動して、Ｘ軸方向（第２方向Ｎ）へのサンプル分離部３の搬送を開始した。搬送速度は最も移動速度の遅いサンプル成分が排出する時刻に吸着用部材６の端面手前で終了するように、最適な速度を設定し制御した。
【実施例２】
【０１００】
〔１次元目電気泳動（サンプル媒体１０）〕
イモビラインによる固定化ｐＨ勾配等電点電気泳動用ゲルを１ｍｍ×６０ｍｍに切断して用いた。サンプル導入とゲル膨潤を行い、３５００Ｖで８時間の電気泳動を行った。サンプルにはＣｙ５で蛍光標識した分子量マーカーを混入した。
【０１０１】
〔サンプル分離部３〕
６０ｍｍ×５０ｍｍ×２ｍｍ厚を有する２枚の板状絶縁体３４でテーパー状スペイサーを左右端に配して挟み、内部に分離媒体３３としてポリアクリルアミドゲルを充填し、出口端面厚０．２ｍｍ、入り口端面ゲル厚１．０ｍｍとしたものを用いた。板状絶縁体３４は、ガラスまたは樹脂（例えば、ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリレート））からなり、蛍光画像計測のため可視光領域にて透明な材料を選択した。なお、サンプル分離部３は水平に配置される。
【０１０２】
〔第１緩衝液槽１〕
７０ｍｍ×１０ｍｍ×深さ１０ｍｍの第１緩衝液槽１をサンプル分離部３の電気泳動開始端に取り付ける。１次元目電気泳動を行ったサンプル媒体１０を平衡化処理した後、分離媒体３３の上端面に設置し固定した。第１緩衝液１１で第１緩衝液槽１を満たし、第１電極１２として白金線を用いた。
【０１０３】
〔第２緩衝液槽２、ロール（吸着用部材巻きつけ部７２ａおよび吸着用部材巻取り部７２ｂ）〕
７０ｍｍ×３０ｍｍ×深さ１０ｍｍの第２緩衝液槽２をサンプル分離部３の電気泳動終了端に配置した。第２緩衝液槽２を第２緩衝液２１で満たした。吸着用部材６としてのアクリルセルロースまたはＰＶＤＦ膜を、ロール７２ａに巻きつけた状態で設置し、ガイド７２ｃを経由して分離媒体３３の第２緩衝液槽側端に接しながらロール７２ｂにて巻き取る。第２電極２２は線状の白金鍍金電極を用い、吸着用部材６を背面から分離媒体３３の第２緩衝液槽側端面に押し付ける。
【０１０４】
〔電圧印加〕
第１電極１２を高圧電源１１１のマイナス側、第２電極を高圧電源１１１のプラス側に接続し、電源１１１と第２電極２２の間に電流計１１４を配置し、一定電流（１０ｍＡ）となるようにデータ処理装置８１を介して電圧を制御した。
【０１０５】
〔蛍光検出部９２〕
サンプルに混入したＣｙ５蛍光色素標識した分子量マーカーの移動速度をモニタリングするための蛍光検出部９２を配置した。色素の励起にはハロゲンランプを光照射部９１として用い、６２０ｎｍのバンドパスフィルターを用いて分離媒体３３の全面を照射し、蛍光画像は６８０ｎｍのバンドパスフィルターを用いてＣＣＤカメラによりリアルタイムで撮像した。分子量マーカーの移動速度を得られた蛍光画像から算出し、最も移動速度の早いサンプル成分と最も移動速度が遅い成分とを算出し、最も電気泳動が速い成分が電気泳動媒体の端面に達する時刻からロール制御部８２を駆動して吸着用部材６の巻上げを開始した。最高速度成分から最低速度成分までが最適な吸着（転写）プロファイルに収まるように巻き上げ速度を制御した。また、途中に生じた速度変調を検出し、変調に合わせて巻き上げ速度を調整して吸着（転写）パターンのずれを抑制した。
【０１０６】
本発明は上述した各実施形態および実施例に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【産業上の利用可能性】
【０１０７】
本発明は、電気泳動装置およびウエスタンブロッティング装置の不利益を改善し得るので、現在盛んに行われているプロテオーム研究を、より発展させることができる。また、本発明に係るサンプル分離吸着器具および当該器具に用いる種々の部材を、別々に作製および販売することにより市場を活性化することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１０８】
【図１】本発明に係るサンプル分離吸着器具の一実施形態の要部構成を示す模式図である。
【図２】本発明に係るサンプル分離吸着器具の一実施形態の要部構成を示す模式図である。
【図３】本発明に係るサンプル分離吸着器具の一実施形態の要部構成を示す模式図である。
【図４】本発明に係るサンプル分離吸着器具におけるサンプルの分離および吸着の概要を示す概念図である。
【図５】本発明に係るサンプル分離吸着器具の一実施形態の要部構成を示す模式図である。
【図６】本発明に係るサンプル分離吸着器具の一実施形態の要部構成を示す模式図である。
【図７】本発明に係るサンプル分離吸着器具の一実施形態の要部構成を示す模式図である。
【図８】本発明に係るサンプル分離吸着器具の一実施形態の要部構成を示す模式図である。
【図９】本発明に係るサンプル分離吸着器具の時間経過を示す模式図である。
【図１０】本発明に係るサンプル分離吸着器具の時間経過を示す模式図である。
【図１１】本発明に係るサンプル分離吸着器具の時間経過を示す模式図である。
【図１２】本発明に係るサンプル分離吸着器具の時間経過を示す模式図である。
【図１３】本発明の一実施形態に係る電気泳動および吸着器具の要部構成を示す断面図である。
【図１４】本発明の一実施形態に係る電気泳動および吸着器具の要部構成を示す断面図である。
【図１５】本発明に係るサンプル分離吸着器具の一実施形態における分解能を説明する図である。
【図１６】本発明に係るサンプル分離吸着器具の一実施形態における分解能を説明する図である。
【図１７】本発明に係るサンプル分離吸着器具の一実施形態における分解能を説明する図である。
【符号の説明】
【０１０９】
１      第１緩衝液槽
２      第２緩衝液槽
３      サンプル分離部
４      第２電極固定手段
５      吸着用部材保持手段
６      吸着用部材
７      駆動手段
８      制御部
９      基盤
１０      サンプル（サンプル媒体）
１０ａ、１０ｂ      サンプル成分
１１      第１緩衝液
１２      第１電極
２１      第２緩衝液
２２      第２電極
２２ａ    面状第２電極
２２ｂ    ストライプ状第２電極
２２ｃ    線状第２電極
３１      第１開口
３２      第２開口
３３      分離媒体
３４、３４ａ、３４ｂ      板状絶縁体
４１      絶縁基板
７１      第１駆動手段
７１ａ    スタンド
７１ｂ    アーム
７２      第２駆動手段
７２ａ    ロール（吸着用部材巻きつけ部）
７２ｂ    ロール（吸着用部材巻取り部）
７２ｃ    ガイド
８１      演算部（データ処理部）
８２      ロール制御部
８３      駆動手段制御部
９１      光照射部
９２      蛍光検出部
１００      サンプル分離吸着器具
１１１      電源
１１２      配線
１１３      スイッチ
１１４      電流計
Ｍ      第１方向
Ｎ      第２方向
Ｐ      電気泳動の変調
Ｑ      吸着用部材の移動速度の変調
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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