(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
フラボノイド化合物を４〜１０％含み、ヒペリシン及びヒペロフォリンを含まない羅布麻抽出物を有効成分とする抗鬱剤。
【請求項２】
羅布麻抽出物中のフラボノイド化合物であるヒペロシド、イソクエルシトリンをあわせた含量が４％以上含まれる、請求項１の抗鬱剤。
【請求項３】
羅布麻抽出物がApocynum venetum L. の葉を乾燥または焙煎したものから得られる、請求項１または２に記載の抗鬱剤。
【請求項４】
請求項１−３のいずれかに記載の抗鬱剤を含有する抗鬱のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、新規な羅布麻抽出物、および前記羅布麻抽出物を含む抗鬱作用を有する食品、栄養補助食品、医薬品などの組成物、ならびに前記羅布麻抽出物を用いて鬱病を治療する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
鬱病の病因論については、多くの研究が精力的になされつつあるが、まだ充分には解明されていない。病因に関与する要因は様々であり、かつそれらが複雑に絡み合っていると想定される。神経化学的知見および遺伝学的知見などからなる生物学的要因とともに、病前性格やライフストレスなどの関わる状況因ないしは心理社会学的要因が考えられている。
【０００３】
鬱病の症状としては、抑うつ状態、アンヘドニア（快い体験を味わえないこと）、精神運動抑制、思考／認知のゆがみ、不安と焦燥、身体（自律神経）症状などが挙げられる。
【０００４】
鬱病の治療薬（抗鬱薬）として現在使用されているものとしては、イミプラミン、クロミプラミン、トリミプラミンなどの三環系抗鬱薬、マプロチリン、ミアンセリンなどの四環系抗鬱薬、トリアゾロピリジン系のトラゾドン、ベンズケトオキシム系の選択的セロトニン再取り込み阻害薬であるフルボキサミンなどが挙げられる。
【０００５】
しかし、三環系あるいは類似の環状抗鬱薬では、抗コリン作用（口渇、近点がぼやける、便秘、排尿困難）、抗ヒスタミン作用（体重増加、眠気）、抗アドレナリン作用（姿勢性低血圧、めまい、ふらつき）、心毒症などの副作用や、過剰摂取による急性中毒が指摘されている。
【０００６】
また、選択的セロトニン再取り込み阻害薬では、セロトニン症候群の発症の危険が指摘されている。従って、より副作用の少ない抗鬱作用を有する薬剤の提供が求められている。
【０００７】
最近になって、セントジョンズワートが鬱病に有効であるとの報告がなされている（K.Lindle et  al. ,British Medical Journal, 313 , 253 (1996)）。セントジョンズワートは、Hypericum perforatum（和名セイヨウオトギリソウ）の開花期に収穫した地上部分を乾燥させたものであって、欧州では古くから抽出したオイルを創傷や神経痛などの治療薬として使われてきたものである。
【０００８】
また、セントジョンズワートに含まれるフラボノイド化合物であるヒペロシドやイソクエルシトリンが抗鬱作用に関与することが指摘されている（V.Butterweck, et al., Planta Med. 66, 3-6 (2000)）。
【０００９】
しかしながら、セントジョンズワートにはヒペリシンというアントラキノンのダイマー構造を持つ化合物が含まれており、この化合物が重篤な副作用として光過敏症を示すことが知られている（B．Geoffrey、Lancet (North American Edition),352,1121-1122、（1998））。
【００１０】
また、セントジョンズワート中の成分であるヒペルフォリンは薬物代謝酵素を誘導させ、サイクロスポリンのような医薬品の体内動態に影響を及ぼすことが知られている（F.-B.&nbsp; Adriane, Lancet, 355, 9198,134-138,（2000）、L. B. Moore  et al., Proc. Nattl. Acad. USA, 97, 7500-7502,
(2000)）。
【００１１】
羅布麻はその葉を中国ではお茶の葉の代わりとして利用され、解熱、高血圧、心不全、気管支炎、水腫、神経衰弱などに有効であるとされている。
【００１２】
最近、ラフマの葉を焙煎したお茶（羅布麻茶）がコレステロール低下作用（特開平９−２２４６２３）や感染症の予防、治療効果（特開平１０−１６７９７８）を示すことが報告されている。
【００１３】
これらのお茶、すなわち羅布麻の熱水抽出物は通常１〜２％のフラボノイドを含み、４％以上のフラボノイド化合物を含む事はない。
【００１４】
また、羅布麻抽出物として４％以上のフラボノイド化合物を含むものは報告されていない。
【００１５】
さらに、羅布麻、羅布麻茶、羅布麻抽出物が抗鬱作用を示すことは全く知られてはいない。
【００１６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、天然物由来で、ヒペリシンもヒペロフォリンも含まない、長期に服用してもより安全な抗鬱作用を有する食品、栄養補助食品、医薬品などの組成物並びにこれを用いて鬱病を治療する方法を提供することである。
【００１７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、より安全な抗鬱剤を発見するために鋭意検討した結果、ラフマの葉よりフラボノイド化合物を４％以上含む新規な羅布麻抽出物を調製し、この抽出物が抗鬱作用を示すことを見出し本発明を完成するに至った。
【００１８】
従って、本発明は、フラボノイド化合物を４％以上含む羅布麻抽出物を提供する。
【００１９】
本発明はさらに、羅布麻抽出物を含有する抗鬱作用を有する組成物を提供する。組成物は食品、栄養補助食品または医薬品の形でありうる。
【００２０】
本発明はさらに、羅布麻抽出物を用いて鬱病を治療する方法を提供する。
【００２１】
【発明の実施の形態】
（１）羅布麻抽出物
羅布麻は学名Apocynum venetum L.の葉を用いる。また、羅布麻は採取したままの新鮮葉、それを乾燥させたもの、または焙煎させたものいずれでもよいが、乾燥させたもの又は焙煎させたものが望ましい。
【００２２】
本発明における羅布麻抽出物としては、羅布麻を水あるいはエタノールまたは含水エタノールあるいは有機溶剤で抽出、濃縮して得られる抽出物、およびここで得られる抽出物をアクリル系またはスチレン系またはメタクリル系または芳香族系合成吸着剤に吸着させ、１０〜９５％濃度までの含水エタノールで溶出されてくる画分を濃縮して得られる抽出物、およびその抽出物を乾燥して得られる抽出物であって、フラボノイド化合物を４％以上含むものを用いる。抽出物中のフラボノイド化合物の含量は好ましくは４〜５０％であり、より好ましくは４〜１０％である。
【００２３】
本発明でフラボノイド化合物というときには、２つのフェニル基がピラン環あるいはそれに類似の構造の３つの炭素原子を介して結合している物質群をいい、カルコン、フラバノン、フラボン、フラボノール、フラバノノール、フラバノール（カテキン）、イソフラボン、アントシアン類を含む。
【００２４】
本発明の羅布麻抽出物としては、フラボノイド化合物であるヒペロシドとイソクエルシトリンをあわせた含量が４％以上含まれるものが好ましい。また、本発明の羅布麻抽出物としては、フラボノイド化合物であるヒペロシド、イソクエルシトリン、アストラガリンおよびトリフォリンをあわせた含量が４％以上含まれるものが好ましい。これらの化合物はいずれもフラボノールの配糖体である。
【００２５】
羅布麻抽出物中のフラボノイド化合物の含量は、例えば高性能液体クロマトグラフィーで分析し、分光光学的に２８０ｎｍ〜３４０ｎｍの範囲で測定することができる。
【００２６】
また、本発明の羅布麻抽出物はヒペリシン及びヒペロフォリンを含まない。羅布麻抽出物中のヒペロフォリンおよびヒペリシンは高性能液体クロマトグラフを用い（VonJ. Holzl and E. Ostrowski, Deutche Apotecker Zeit. 127, 1227-30 (1987)）、カラムＹＭＣ ＰＡＫ  ＯＤＳ１００Ｘ６ｍｍｉ．ｄ．、移動層：アセトニトリル：メタノール：水：リン酸＝５５：４５：１：０．１、１ｍＬ／ｍｉｎ．、ヒペロフォリンは検出波長２５４ｎｍでモニターすると、８．９分にピークが現れ、ヒペリシンは検出波長５９０ｎｍでモニターすると、１４．３分にピークが現れることにより分析することができる。
【００２７】
本発明の羅布麻抽出物はこの方法で分析するときに、ヒペリシン及びヒペロフォリンに対応するピークを示さない。
【００２８】
（２）組成物
本発明はさらに、羅布麻抽出物を含む抗鬱作用を有する組成物を提供し、組成物は食品、栄養補助食品または医薬品の形でありうる。
【００２９】
組成物に用いる羅布麻抽出物としては、上述したフラボノイド化合物の含量が４％以上であるものが好ましいが、これ以下であってもよい
【００３０】
本発明の組成物が医薬用組成物であるときの投与方法は特に限定されるものではないが、経口投与可能な剤形が好ましい。本発明の医薬用組成物は種々の剤形とすることができる。
【００３１】
例えば、経口投与のためには、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤、乳剤、懸濁剤、溶液剤、酒精剤、シロップ剤、エキス剤、エリキシル剤とすることができるが、これらに限定されない。また、製剤には薬剤的に許容できる種々の担体を加えることができる。
【００３２】
例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着香剤、着色剤、甘味剤、矯味剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、コーティング剤、ビタミンＣ、抗酸化剤を含むことができるが、これらに限定されない。
【００３３】
本発明の医薬用組成物の投与量は、一般的には、羅布麻抽出物に換算して成人１日用量として１ｍｇ〜２０００ｍｇ、好ましくは１ｍｇ〜１０００ｍｇ、または総フラボノイドとして０．０１ｍｇ〜３００ｍｇを使用する。
【００３４】
もちろん個別的に、投与されるヒトの年齢、体重、症状、投与経路、投与期間、治療経過等に応じて変化させることもできる。
【００３５】
１日あたりの量を数回に分けて投与することもできる。また、他の抗鬱剤や治療法と組み合わせて投与することもできる。
【００３６】
本発明の組成物は、食品又は栄養補助食品の形態とすることもできる。例えば、羅布麻抽出物を原材料に配合することにより、麺類、パン、キャンディー、ゼリー、クッキー、スープ、健康飲料の形態とすることができる。
【００３７】
このような食品、栄養補助食品には羅布麻抽出物の他に、鉄、カルシウム等の無機成分、種々のビタミン類、オリゴ糖、キトサン等の食物繊維、大豆抽出物等のタンパク質、レシチンなどの脂質、ショ糖、乳糖等の糖類を加えることができる。
【００３８】
また、本発明羅布麻抽出物に、高麗ニンジン抽出物、イチョウ葉抽出物、ツボクサ抽出物、エゾウコギ抽出物、オウギ抽出物、ガラナ抽出物、マカ抽出物、タンポポ抽出物、アーティチョーク抽出物、ゲンチアナ抽出物、シサンドラ抽出物、などを組み合わせることにより、精神的ストレスから陥る鬱症状の改善効果を有する食品、栄養補助食品、医薬品などの組成物が得られる。
【００３９】
また、本発明羅布麻抽出物に、ブラックコホシュ抽出物、西洋カボチャ抽出物、大豆抽出物、甘草抽出物、当帰抽出物、西洋ニンジンボク抽出物、ザクロ抽出物、ヤムイモ抽出物、などを組み合わせることにより、更年期障害の症状である鬱状態の改善効果を有する食品、栄養補助食品、医薬品などの組成物が得られる。
【００４０】
（３）鬱病
鬱病の種類および分類については様々なものが提案されているが、本発明でいう鬱病とは、例えば、世界保健機構（World Health Organization）が発表している「国際疾病分類・第１０版」（InternationalClassification of Diseases, Injuries and Causes of Death. 10th version; ICD-10）によって「鬱病」関連障害と分類されている疾患、あるいは米国精神医学会（AmericanPsychiatric Association, APA）が発表している「精神障害の診断と統計分類のための手引き」（Diagnostic StatisticManual of Mental Disorders, DSM）のDSM-IVによる多軸診断によって評価される「鬱病」をいうものとする。
【００４１】
従って、本発明にいう「抗鬱作用を有する」とは、これらの鬱病の何らかの症状を軽減、改善もしくは予防することをいう。
【００４２】
「抗鬱作用を有する」効果を示すかどうかは患者本人の改善感、医師の診断による効果などにより判断できる。
【００４３】
（４）効果
本発明の羅布麻抽出物の抗鬱作用を、抗鬱作用を評価する方法として一般的に使われているフォースト・スイミング・テスト（Porsolt ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，２６６，７３０−７３２，（１９７７））に従って試験した。その結果、羅布麻抽出物は公知の三環系抗鬱薬であるイミプラミン-HCLと匹敵しうる抗鬱作用を示した。
【００４４】
本発明を以下の実施例でさらに詳しく説明するが、本発明はこれに限定されない。種々の変更、修飾が当業者には可能であり、これらの変更、修飾も本発明に含まれる。
【００４５】
【実施例】
実施例１：羅布麻抽出物の調製（１）
乾燥羅布麻をラボミキサーにより粉砕し、その粉砕物１ｋｇに６Ｌの７０％エタノールを加え、２時間加熱環流後、ろ過し抽出液を得た。抽出残渣を再度６Ｌの７０％エタノールにて２時間加熱環流した後、ろ過し抽出液を得た。１回目の抽出液と２回目の抽出液をあわせ、６０度にて減圧濃縮し約１／１０容量まで濃縮後、６０度で一晩減圧乾燥を行い、固形物として２９０ｇを得た。この固形物中のヒペロシドとイソクエルシトリンの含量を、ウォーターズ社製高性能液体クロマトグラフィーマルチソルベント送液システム６００E、およびウォーターズ社製２４８７デュアルＵＶ／ＶＩＳ検出器を用いて、分析カラムとしてＳＨＩＳＥＩＤＯ ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８（ＵＧ）４．６ｍｍｉ．ｄ．×１５０ ｍｍ、検出波長３３０ｎｍ、移動層０．１％トリフルオロ酢酸水：０．１％トリフルオロ酢酸と５０％アセトニトリルを含む水＝８５：１５、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎの条件で定量した結果、ヒペロシド含量は０．８％、イソクエルシトリン含量は０．９％であった。
【００４６】
実施例２：羅布麻抽出物の調製（２）
実施例１で得られた抽出液を、約１／２０容量まで濃縮後、２倍量の水を加え懸濁させた後、硫酸によりｐＨを３に調整し、珪藻土を加えボディーフィードした。この液を、珪藻土を敷きつめたろ紙の上に注ぎ、ろ過し不溶物を除去した。得られたろ過液を、合成吸着樹脂ＨＰ２０  １Ｌ（三菱化学社製）に通液させ、有効成分を吸着させた後、水２Ｌで水洗し糖質などを除去した。その後、７０％エタノール２Ｌで脱離し有効成分を含む画分を集め、６０度にて減圧濃縮し、約１／１０容量まで濃縮後、８０度で一晩減圧乾燥を行い、固形物として９５ｇを得た。この固形物中のヒペロシドとイソクエルシトリンの含量を、ウォーターズ社製高性能液体クロマトグラフィーマルチソルベント送液システム６００Ｅ、およびウォーターズ社製２４８７デュアルＵＶ／ＶＩＳ検出器を用いて、分析カラムとしてＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８（ＵＧ）４．６ｍｍ ｉ．ｄ．×１５０ ｍｍ、検出波長３３０ｎｍ、移動層０．１％トリフルオロ酢酸水：０．１％トリフルオロ酢酸と５０％アセトニトリルを含む水＝８５：１５、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎの条件で定量した結果、ヒペロシド含量２．１％、イソクエルシトリン含量２．７％であった。
【００４７】
なお、上記固形物中のヒペルフォリンおよびヒペリシン含量を、高性能液体クロマトグラフを用い（Von J. Holzl and E. Ostrowski,Deutche Apotecker Zeit. 127, 1227-30 (1987)）、カラムＹＭＣ ＰＡＫ  ＯＤＳ １００Ｘ６ｍｍｉ．ｄ．、移動層：アセトニトリル：メタノール：水：リン酸＝５５：４５：１：０．１、１ｍＬ／ｍｉｎ．で試験した。ヒペロフォリンは検出波長２５４ｎｍでモニターすると、８．９分にピークが現れ、ヒペリシンは検出波長５９０ｎｍでモニターすると、１４．３分にピークが現れるが、上記固形物はこの方法で分析するときに、ヒペリシン及びヒペルフォリンに対応するピークを示さなかった。
【００４８】
実施例３：羅布麻抽出物の抗鬱作用（急性投与）
抗鬱作用を評価する方法として一般的に使われているフォースト・スイミング・テスト（Porsolt ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，２６６，７３０−７３２，（１９７７））に従って以下のように行った。雄のＣＤ系ラット（２３０ｇ−２５０ｇ）を試験に用いた。４０匹のラットを８匹ずつに群分けし、イミプラミン３０ｍｇ／ｋｇ投与群、ラフマエキス１２５ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、および５００ｍｇ／ｋｇ各投与群、及び精製水投与群とした。検液はテストの前２４時間、５時間、および１時間前に経口投与した。１７cmの深さに２５度の水を入れたプレキシガラスシリンダー（４０ｘ１８ｃｍｉ．ｄ．）にラットを入れ、１５分間泳がせてラットにシリンダーから逃げられないことを予め学習させた。検液を最終投与した１時間後にシリンダー中で５分間泳がせ、その間の活動をビデオカメラに記録し、活動を停止している累計時間を集計した。全てのテストは午後１時から３時の間に行った。テープの評価は投与群の識別を知らされていない人により行った。
【００４９】
実施例２により調製した羅布麻抽出物を精製水に溶解または懸濁し、イミプラミン-HCL（イミプラミンは公知の三環系抗鬱薬である）は精製水に溶解して被検液を調製した。被検液の投与量は１０ｍｌ/kg体重とした。各群８匹の実験動物の結果を平均±ＳＥで表した。コントロール群に対する統計学的有意差はＡＮＯＶＡ検定を行い、多重比較検定はフィッシャー−ＰＬＳＤ法で行った(ｐ<０．０５:*)。結果は表1に示したように、羅布麻抽出物１２５ｍｇ/ｋｇ投与群とイミプラミン３０ｍｇ/ｋｇ投与群では、コントロール群に比べ活動停止時間が有意に短縮された。
【００５０】
表１
0004629933.tif 000002
【００５１】
実施例４：抗鬱作用（反復投与）
抗鬱作用を評価する方法として一般的に使われているフォースト・スイミング・テスト（Porsolt ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，２６６，７３０−７３２，（１９７７））に従って実施例３と同様に行った。雄のＣＤ系ラット（２３０ｇ−２５０ｇ）を試験に用いた。４０匹のラットを８匹ずつに群分けし、イミプラミン２０ｍｇ／ｋｇ投与群、ラフマエキス３０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、および１２５ｍｇ／ｋｇ各投与群、及び精製水投与群とした。検液は毎日午後３時から４時の間に経口投与した。１７cmの深さに２５度の水を入れたプレキシガラスシリンダー（４０ｘ１８ｃｍｉ．ｄ．）にラットを入れ、１５分間泳がせてラットにシリンダーから逃げられないことを予め学習させた。最終投与の１時間後に５分間泳がせ、その間の活動をビデオカメラに記録し、活動を停止している累計時間を集計した。全てのテストは午後１時から３時の間に行った。テープの評価は投与群の識別を知らされていない人により行った。
【００５２】
実施例２により調製した羅布麻抽出物を精製水に溶解または懸濁し、イミプラミン-HCLは精製水に溶解して被検液を調製し、被検液の投与量は１０ｍｌ/kg体重とした。。各群８匹の実験動物の結果を平均±ＳＥで表した。コントロール群に対する統計学的有意差はＡＮＯＶＡ検定を行い、多重比較検定はフィッシャー−ＰＬＳＤ法で行った(ｐ<０．０５:*)。結果は表２に示したように、羅布麻抽出物３０ｍｇ/ｋｇと１２５ｍｇ／ｋｇ、およびイミプラミン２０ｍｇ/ｋｇ投与群では、コントロール群に比べ活動停止時間が有意に短縮された。
【００５３】
表２
0004629933.tif 000003
【００５４】
実施例５：製剤例
表３に示す量の乳糖と実施例２で調製した本羅布麻抽出物を良く混合した。この混合物をゼラチンカプセルに充填することによりカプセル剤を製造した。
【００５５】
表３
0004629933.tif 000004
【００５６】
実施例６：製剤例
表４に示す量の乳糖と実施例２で調製した本羅布麻抽出物とエゾウコギ抽出物を良く混合した。この混合物を直接打錠機により直径８ｍｍの丸剤を製造した。
【００５７】
表４
0004629933.tif 000005
【００５８】
実施例７：製剤例
表５に示す量の乳糖と実施例２で調製した本羅布麻抽出物とブラックコホシュ抽出物をよく混合し、この混合物を直接打錠機により３角錠剤を製造した。
【００５９】
表５
0004629933.tif 000006
【００６０】
実施例８：製剤例
表６に示す量の乳糖と実施例２で調製した本羅布麻抽出物と大豆抽出物をよく混合し、この混合物をゼラチンカプセルに充填することによりカプセル剤を製造した。
【００６１】
表６
0004629933.tif 000007
【００６２】
【発明の効果】
本発明はフラボノイド化合物を４％以上含むことを特徴とする羅布麻抽出物を提供するものである。本羅布麻抽出物は抗鬱作用を示し、抗鬱剤の成分として有用である。また、本羅布麻抽出物は鬱症状の改善を目的とした食品・栄養補助食品・医薬品などの組成物に利用できる。