(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
副腎脳白質ジストロフィーの予防および治療のために有効な医薬の調製のためのリルゾールもしくは医薬として許容できるその塩の１種の使用。
【請求項２】
２５〜２００ｍｇのリルゾールを含有する医薬の調製のための請求項１記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明分野］
本発明は副腎脳白質ジストロフィーの予防および治療のためのリルゾールもしくは医薬として許容できるその塩の１種の使用に関する。
【０００２】
リルゾール（２−アミノ−６−トリフルオロメトキシベンゾチアゾール）は筋萎縮性側索硬化症の治療のために市販されている（Ｒｉｌｕｔｅｋ（Ｒ））．本化合物はまた抗痙攣剤、抗不安薬および催眠剤として（欧州特許第５０５５１号明細書）、精神分裂症の治療に（欧州特許第３０５２７６号明細書）、睡眠障害および鬱病の治療に（欧州特許第３０５２７７号明細書）、脳血管障害の治療にそして麻酔剤として（欧州特許第２８２９７１号明細書）、脊髄、脳および脳脊髄外傷の治療に（国際公開第９４／１３２８８号パンフレット）、放射線回復推進薬として（国際公開第９４／１５６００号パンフレット）、パーキンソン氏病の治療に（国際公開第９４／１５６０１号パンフレット）、神経−ＡＩＤＳの治療に（国際公開第９４／２０１０３号パンフレット）、ミトコンドリアの疾患の治療に（国際公開第９５／１９１７０号パンフレット）有効である。
【０００３】
Ｘ−結合の副腎脳白質ジストロフィー（ＡＤＬ）は、脳および脊髄を含む、中枢神経系の進行性脱髄、副腎不全および大部分の組織中への、非常に長鎖の脂肪酸（ＶＬＣＦＡ）の中程度の蓄積（×３〜５）を特徴とするミエリンの全身的疾患のうちでもっとも頻発する。ＶＬＣＦＡのこの蓄積はペルオキシソーム中のそれらのβ−酸化の欠乏から生じる。
【０００４】
ＡＤＬにおいて脱髄および稀突起神経膠細胞の喪失に導く機序はまだ十分に理解されていない。１つの可能性はＶＬＣＦＡの蓄積が髄膜の不安定化をもたらすかもしくは稀突起神経膠細胞の表面に位置する受容体の機能不全をもたらして、プログラムされた細胞死（アポトーシス）の信号に対して鋭敏にさせる、ことである。稀突起神経膠細胞死はまたＡＤＬの脳の炎症病巣中に存在する活性化マクロファージによるサイトカイン（とりわけＴＮＦ−α）の産生からもたらされることができるかも知れない。
【０００５】
ＤＮＡのフラグメント化の研究において、ＴＵＮＥＬ法およびカスパーゼ−３の発現によりＡＬＤ患者の脳の稀突起神経膠細胞の５０％がアポトーシスによる細胞死の症候を示し、アポトーシス現象の強度は脱髄の強度と相関する。
【０００６】
アポトーシスによる稀突起神経膠細胞死は最近、ミエリンの遺伝疾患の２種の他のネズミモデル、トウィッチャー（ｔｗｉｔｃｈｅｒ）マウス（クラブ氏病（Ｋｒａｂｂｅ’ｓ）モデル）およびプロテオリピドタンパク質欠乏の様々なモデル、ＰＬＰ（ジンピーマウス、ｍｓｄマウス、ｍｄラット）で示された。
【０００７】
このたび、場合によっては医薬として許容できる塩の形態のリルゾールがカイネート（ｋａｉｎａｔｅ）誘導のアポトーシスからの稀突起神経膠細胞死を減少させ、このために副腎脳白質ジストロフィーの予防および治療に使用することができることが発見された。
【０００８】
使用されたプロトコールは以下である。
稀突起神経膠細胞濃厚化培養物
稀突起神経膠細胞はＳａｎｅｔｏ等（Ｎｅｕｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ−Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ，ｐ２７−６３（１９８７））により記載の僅かに変更した方法に従って、脊髄の始原グリア培養物から得る。１日令のウィスターラットからの脊髄を滅菌条件下で切開し、髄膜から分離する。５〜１０片の脊髄を、０．２５％のトリプシンを添加したＰＢＳ（リン酸−バッファー生理食塩水：１３７ｍＭのＮａＣｌ、ＫＣｌ２．６８ｍＭ、Ｎａ２ＨＰＯ４６．４５ｍＭ、ＫＨ２ＰＯ４１．４７ｍＭ）中に移した。酵素処理は１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコの修正イーグル培地（ＤＭＥＭ）の添加により停止した。もう１種の分離段階は１ｍｌピペットにより実施され、細胞県濁液を濾過する。細胞を遠心分離により回収し、１０％ウシ胎児血清を添加したダルベッコの修正イーグル培地（ＤＭＥＭ）中１．５〜２×１０６細胞／２５ｃｍ２  培地の密度で皿に添加した。インビトロで３日間培養物に毎日栄養を添加した。可視の単層を得たら、培養物を２時間３７℃で２５０ｒｐｍで撹拌し、培地を除去し、フラスコを再度２２時間撹拌した。細胞含有培地を小グリア細胞をプラスチックに付けるために１時間ペトリ皿中で３７℃でインキュベートする。稀突起神経膠細胞を遠心分離により回収し、１．６×１０６／ｃｍ２の密度で皿に添加し、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ中で１もしくは２日間維持する。次に培地を重炭酸ナトリウム（２２ｍＭ）、コナルブミン（０．１ｍｇ／ｍｌ）、プトレシン（０．１ｍＭ）、インスリン（５μｇ／ｍｌ）、亜セレン酸ナトリウム（３１ｎＭ）、グルコース（２０ｍＭ）、プロゲステロン（２１ｎＭ）、ペニシリン（１００ＩＵ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）およびウマ血清（２％）を添加したＬ１５培地と交換した。稀突起神経膠細胞は２４〜４８時間以内に成熟および未成熟表現型に急速に分化する。これらの培養物はガラクトセレブロシド−Ｃ（Ｇａｌ−Ｃ）およびグリア原繊維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）に対する免疫反応により決定されて約９５％の純度を示す。
【０００９】
次に、これらの培養物に様々な濃度（０．０１ｍＭ〜１ｍＭ）のＰＢＳ中カイネート溶液、０．９％のＮａＣｌ溶液および０．００１ＮのＨＣｌ中様々な濃度（０．０１ｍＭ〜１０ｍＭ）のリルゾール溶液もしくは溶媒を添加する。治療から出発して４８時間後の生存稀突起神経膠細胞を計数する。
細胞の計数
Ｇａｌ−Ｃに免疫反応性で２細胞の直径より長い分枝過程を示す細胞が全体的に未成熟もしくは成熟稀突起神経膠細胞と考えられる。Ｇａｌ−Ｃ（＋）の稀突起神経膠細胞数は４００×の顕微鏡下で０．６３ｍｍ２の少なくとも１２個の領域における標識細胞の２種の別個の計数に分割される。値は１ｃｍ２当たりの細胞数もしくは対照の百分率として表わす。
【００１０】
統計的分析はスチューデントテスト（ｔ−テスト）を使用して実施する。
【００１１】
得られた結果は以下である。
試験１：  稀突起神経膠細胞の培養物に対するカイネートの効果
４８時間にわたる０．１〜１ｍＭの濃度のカイネートに対する稀突起神経膠細胞培養物の曝露
0004848117.tif 000002
これらの結果は０．１〜１ｍＭの用量のカイネートがアポトーシスによる稀突起神経膠細胞死を強力に誘起することを示す。
試験２：  稀突起神経膠細胞培養物に対するリルゾール単独の毒性効果の研究
0004848117.tif 000003
これらの結果は０．０１ｍＭ〜１０ｍＭの用量のリルゾールが稀突起神経膠細胞の生存に対して毒性効果をもたず、１０ｍＭの用量においては僅かな毒性効果が認められることを示す。
試験３：  カイネートにより誘起された稀突起神経膠細胞死に対するリルゾールの防護効果
１ｍＭの用量のカイネートおよび０．０１ｍＭ〜１０ｍＭの用量のリルゾールに対する稀突起神経膠細胞の曝露
0004848117.tif 000004
これらの結果はリルゾールがカイネートに誘起されたアポトーシスからの稀突起神経膠細胞死を明らかに減少し、これはリルゾール単独の僅かな毒性効果が認められた用量においても認められ、従って副腎脳白質ジストロフィーの予防および治療に使用することができることを示す。
【００１２】
リルゾールの医薬として許容できる塩として、特に塩酸、硫酸、硝酸、リン酸のような無機酸もしくは酢酸、プロピオン酸、コハク酸、蓚酸、安息香酸、フマル酸、マレイン酸、メタン−スルホン酸、イセチオン酸、テオフィリン酢酸、サリチル酸、フェノールフタリン酸、メチレン−ビス−β−オキシ−ナフトエ酸のような有機酸との付加塩、またはこれら誘導体の置換誘導体を挙げることができる。
【００１３】
医薬は純粋な状態のまたは、不活性もしくは生理学的に活性であることができるあらゆる他の医薬として相容性の製品と組み合わせた組成物の形態の、少なくとも遊離形態のもしくは医薬として許容できる酸との付加塩の形態のリルゾールより成る。本発明に従う医薬は経口、非経口もしくは直腸経路で使用することができる。
【００１４】
経口投与用固形組成物としては、錠剤、ピル、末剤（ゼラチンカプセル、カシェー剤）もしくは顆粒剤を使用することができる。これらの組成物において、本発明の有効成分をアルゴン流下で、デンプン、セルロース、蔗糖、ラクトースもしくはシリカのような１種以上の不活性希釈剤と混合される。これらの組成物はまた、希釈剤以外の物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムもしくはタルクのような１種以上の潤滑剤、着色剤、コート剤（糖衣錠）または光沢剤を含んで成ることができる。
【００１５】
経口投与用液体組成物としては、水、エタノール、グリセロール、植物油もしくはパラフィン油のような不活性希釈剤を含有する、医薬として許容できる液剤、県濁物、エマルション、シロップおよびエリキシルを使用することができる。これらの組成物は希釈剤以外の物質、例えば、湿潤剤、甘味剤、増粘剤、香り付け剤もしくは安定化製品を含んで成ることができる。
【００１６】
非経口投与用滅菌組成物は好ましくは、水性もしくは非水性の溶液、県濁液またはエマルションであることができる。溶媒もしくはビヒクルとしては、水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、とりわけオリーブ油、注射用有機エステル、例えば、オレイン酸エチルもしくは他の適当な有機溶媒を使用することができる。これらの組成物はまた、補助剤、とりわけ湿潤剤、等張化剤、乳化剤、分散剤および安定剤を含有することができる。滅菌は幾つかの方法で、例えば、滅菌濾過により、組成物中に殺菌剤を取り込むことにより、放射線照射により、もしくは加熱により実施することができる。それらはまた、滅菌水もしくはあらゆる他の注射用滅菌媒質中に使用時に溶解することができる滅菌固形組成物の形態に調製することができる。
【００１７】
直腸投与用組成物は有効製品の他に、ココアバター、半合成グリセリドもしくはポリエチレングリコールのような賦形剤を含有する座薬もしくは直腸カプセルである。
【００１８】
用量は所望の効果、治療の期間および使用される投与経路に応ずる、すなわち、それらは概括的に、２５〜２００ｍｇの範囲の有効物質の単位投与量を伴なう成人一人につき経口経路で１日５０〜４００ｍｇの間にある。
【００１９】
概して、医師は年齢、体重および治療される被験者に特異的なすべての他の因子に従って適量を決定するであろう。
【００２０】
【実施例】
以下の実施例は本発明に従う医薬を具体的に示す。
（実施例Ａ）
以下の組成を有する有効製品５０ｍｇ用量を含有する錠剤を通常の方法に従って調製する。
−リルゾール                                                ５０ｍｇ
−マニトール                                                ６４ｍｇ
−微細結晶セルロース                                        ５０ｍｇ
−ポリビドン賦形剤                                          １２ｍｇ
−カルボキシメチルデンプンナトリウム                        １６ｍｇ
−タルク                                                      ４ｍｇ
−ステアリン酸マグネシウム                                    ２ｍｇ
−無水コロイド状シリカ                                        ２ｍｇ
−メチルヒドロキシプロピルセルロース、ポリエチレングリコール
６０００、二酸化チタンの混合物（７２−３．５−２４．５）  全２４５ｍ
ｇ重量の完成フィルムコート錠１個
（実施例Ｂ）
以下の組成を有する有効製品５０ｍｇ用量を含有するゼラチンカプセルを通常の方法に従って調製する。
−リルゾール                                                ５０ｍｇ
−セルロース                                                １８ｍｇ
−ラクトース                                                ５５ｍｇ
−コロイド状シリカ                                            １ｍｇ
−カルボキシメチルデンプンナトリウム                        １０ｍｇ
−タルク                                                    １０ｍｇ
−ステアリン酸マグネシウム                                    １ｍｇ
（実施例Ｃ）
以下の組成を有する有効製品１０ｍｇを含有する注射用溶液を調製する。
−リルゾール                                                １０ｍｇ
−安息香酸                                                  ８０ｍｇ
−ベンジルアルコール                                    ０．０６ｃｍ３
−安息香酸ナトリウム                                        ８０ｍｇ
−９５％エタノール                                        ０．４ｃｍ３
−水酸化ナトリウム                                          ２４ｍｇ
−プロピレングリコール                                    １．６ｃｍ３
−水                                                    全    ４ｃｍ３
本発明はまた、副腎脳白質ジストロフィーの予防もしくは治療に有効な医薬の調製のためのリルゾールもしくは医薬として許容できるその塩の１種の使用に関する。
【００２１】
本発明はまた、リルゾールもしくは本化合物の医薬として許容できる塩を１種以上の相容性で医薬として許容できる希釈剤および／もしくは補助剤と混合することから成る、副腎脳白質ジストロフィーの予防もしくは治療に有効な医薬の調製法に関する。
【００２２】
本発明はまた、リルゾールもしくは医薬として許容できるその塩の１種を患者に投与することから成る、ヒトの副腎脳白質ジストロフィーの予防もしくは治療法に関する。