(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次に示す式（Ｉ）
【化１】
0004629834.tif 000005
（ただし、Ｒ１およびＲ２は炭素数が１４〜２２で、二重結合の数が０〜６の脂肪酸のアルキル残基またはアルケニル残基である。）で表されるスルホキノボシルジアシルグリセロールを有効成分としてなる脳神経細胞賦活剤。
【請求項２】
上記の式（Ｉ）において、Ｒ１がアラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸からなる群から選ばれる１種または２種以上の多価不飽和脂肪酸を含む脂肪酸のアルキル残基またはアルケニル残基であり、Ｒ２がミリスチン酸および／またはパルミチン酸を含む脂肪酸のアルキル残基またはアルケニル残基である請求項１に記載の賦活剤。
【請求項３】
上記の式（Ｉ）で表されるスルホキノボシルジアシルグリセロールが藍藻類、紅藻類、褐藻類または緑藻類に属する藻類の藻体を原料とし、これから溶剤抽出されるものである請求項１または２に記載の賦活剤。
【請求項４】
脳神経細胞に対する賦活作用が脳神経細胞の外傷性障害、代謝性要因による障害、β−アミロイド蛋白質による障害または脳虚血性障害を予防あるいは治癒する作用である請求項１〜３のいずれか１項に記載の賦活剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の脳神経細胞賦活剤を有効成分として配合してなる医薬用組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、脳神経細胞の賦活剤およびその利用に関する。より詳しくは、神経細胞の分化を促進し、神経細胞の障害に対して保護作用を有する神経細胞賦活剤、該賦活剤を配合してなる医薬用組成物および食用組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、脳神経細胞の細胞死をともなう疾病に対し、直接その細胞を賦活することにより前記疾病を予防あるいは治療する薬剤は広く探索されているが、実用上有効な薬剤は未だ見い出されていない。このため、外傷、代謝性の要因、脳虚血、パーキンソン病またはダウン症等によって生じる脳神経細胞障害の治療薬及び予防効果のある機能性食品の開発が切望されている。
【０００３】
わが国では人口の高齢化スピードが速くなるにつれて痴呆高齢者が増えており、とりわけアルツハイマー型痴呆が急増している。アルツハイマー型老年痴呆においては、大脳基底核神経細胞であるアセチルコリン作動性神経細胞の変性および脱落が、学習・記憶力や知的活動能力の低下の要因として深く関わっていることが示唆されている（Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２１５，１２，ｐ３７，１９８２）。神経成長因子（ＮＧＦ）は、繊維切断によるアセチルコリン作動性神経細胞の変性および脱落を抑制すること（Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｅｔｔ．Ｖｏｌ．６６，ｐ１７５，１９８６）、また、老齢ラットの迷路学習障害を改善すると共にアセチルコリン作動性神経細胞の萎縮を抑制することが報告されている。さらに、ＮＧＦは脳虚血スナネズミの海馬神経細胞の脱落を防ぐことも確かめられており、脳卒中による後遺症の治療薬としても有用であると考えられる。
【０００４】
これに関連して、神経突起の伸展作用やβ−アミロイド蛋白により惹起される神経細胞のアポトーシスを阻害する作用を有するものとしてイリドイド化合物、トリテルペノイドサポニン類、ガングリオシド等が知られている。
【０００５】
一方、高等植物や藻類の組織に存在する糖脂質については、その生理活性面では解明されていない部分が多く、報告類も少ないのが実情である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、脳神経細胞の細胞死をともなうことなく該細胞の増殖能を抑制し、かつ分化誘導を促進させ得る神経細胞賦活剤、およびこれを利用した医薬用組成物ならびに食用組成物を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記課題を解決するために、種々の海苔、藻類や陸生植物に存在する糖脂質についてラット副腎髄質褐色細胞腫由来の神経系樹立細胞であるＰＣ１２細胞の増殖抑制能および分化誘導促進作用に対する影響を検討したところ、スルホキノボシルジアシルグリセロール（以下、ＳＱＤＧと略す）がＮＧＦ機能の増強効果さらにはβ−アミロイドに起因する神経細胞死の抑制効果を奏することを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明によれば、次に示す式（Ｉ）
【０００９】
【化２】
0004629834.tif 000002
（ただし、式（Ｉ）においてＲ１およびＲ２は炭素数が１４〜２２であり、二重結合の数が０〜６の脂肪酸のアルキル残基またはアルケニル残基である。）
で表されるＳＱＤＧを有効成分としてなる脳神経細胞賦活剤によって前記課題を解決できる。
【００１０】
本発明に係るＳＱＤＧにおいて、これを構成する脂肪酸残基としては上記の式（Ｉ）のなかのＲ１がアラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸からなる群から選ばれる１種または２種以上の多価不飽和脂肪酸を含む脂肪酸のアルキル残基またはアルケニル残基であり、Ｒ２がミリスチン酸および／またはパルミチン酸を含む脂肪酸のアルキル残基またはアルケニル残基であることが望ましい。
【００１１】
また、本発明に係るＳＱＤＧは天然物由来のものでも化学合成したものでもさしつかえないが、例えば、藍藻類、紅藻類、褐藻類または緑藻類に属する藻類を原料として、これから有機溶剤を用いて抽出して得られるものを適宜に精製処理を施して用いることが好ましい。
【００１２】
なお、本発明の脳神経細胞賦活剤においては、脳神経細胞に関する賦活作用が脳神経細胞の外傷性要因による障害、代謝性要因による障害、β−アミロイド蛋白質による障害または脳虚血性要因による障害を予防する作用あるいは治癒する作用であるものを対象にするのがよい。
【００１３】
さらに、本発明によれば、前記の脳神経細胞賦活剤を有効成分として配合してなる医薬用組成物または食用組成物によって前記課題を解決できる。
【００１４】
【発明の実施の形態】
本発明に用いられるＳＱＤＧはグリセロール骨格の１位もしくは２位に炭素数１４〜２２の飽和脂肪酸ならびに不飽和脂肪酸を構成脂肪酸として有する。飽和脂肪酸の主なものはミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸等であり、不飽和脂肪酸の主たるものはパルミトオレイン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸（ω３）、オクタデカテトラエン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸等を例示できる。なお、本発明において、ＳＱＤＧはそのナトリウム塩やカリウム塩等の薬学的に許容され得る塩を対象に含むものとする。
【００１５】
グリセロール骨格の１位および２位の構成脂肪酸の種類はとくに限定されるものではないが、前記の式（Ｉ）において、Ｒ１はアラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸からなる群から選ばれる１種または２種以上の多価不飽和脂肪酸を主体に含む脂肪酸のアルキル残基またはアルケニル残基であり、かつＲ２はミリスチン酸および／またはパルミチン酸を主体として含む脂肪酸のアルキル残基またはアルケニル残基であるものが望ましい。
【００１６】
なお、本発明に用いるＳＱＤＧを天然物から採取するには、原料として藍藻類（Ａｎａｂａｅｎａ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ、Ａｎａｃｙｓｔｉｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ：スピルリナ等）、紅藻類（Ｐｏｒｐｈｙｒａ  ｙｅｚｏｅｎｓｉｓ：スサビノリ、Ｇｅｌｉｄｉｕｍ  ａｍａｎｓｉｉ：マクサ、Ｇｉｇａｒｔｉｎａ  ｔｅｎｅｌｌａ：スギノリ、Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ：オゴノリ等）、褐藻類（Ｕｎｄａｒｉａｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ：ワカメ、Ｈｉｚｉｋｉａ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ：ヒジキ、Ｌａｍｉｎａｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ：マコンブ、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ  ｈｏｒｎｅｒｉ：アカモク等）または緑藻類（Ｃｈｌａｍｉｄｏｍｏｎａｓｓｐ．：クラミドモナスの一種、Ｅｎｔｅｒｏｍｏｒｐｈａ  ｓｐ．：アオサの一種、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｓｐ．：クロレラ等）に属する藻の藻体を用いるのが好適である。また、ホウレンソウや大麦の葉等の陸生植物を原料としてもさしつかえない。
【００１７】
これらの藻類から得られるＳＱＤＧの構成脂肪酸は、１位が多価不飽和脂肪酸を主成分とし、２位が飽和脂肪酸を主成分とするものが多い。本発明ではこのようなタイプのものが好ましい。例えば、紅藻類のアマノリ属スサビノリの場合、その構成脂肪酸は１位にエイコサペンタエン酸、２位にパルミチン酸がそれぞれ多く存在する（Ｊａｐ．Ｊ．Ｐｈｙｃｏｌ．，Ｖｏｌ．３４，ｐ９４，１９８６）。紅藻類のオゴノリ属オゴノリの場合は、１位にアラキドン酸、ミリスチン酸およびパルミチン酸が主として存在し、２位にパルミチン酸が多く存在する（Ｈｙｄｒｏｂｉｏｌ．，Ｖｏｌ  ２０４／２０５，ｐ５１３，１９９０）。
紅藻類のツノマタ属ツノマタでは、１位にミリスチン酸、パルミチン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸を、２位にパルミチン酸を主成分として含む。ヒジキ、ワカメなどの褐藻類では、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸が多く、また、エイコサペンタエン酸やアラキドン酸も存在する（Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，Ｖｏｌ．３２，ｐ６２３，１９９１）。
【００１８】
本発明に用いられるＳＱＤＧは、以下のようにして調製することができる。すなわち、前記原料を適宜に細断ないしは粉砕し、ヘキサン、クロロホルム、アセトン、メタノール、エタノール等の脂質成分抽出用有機溶媒を用いて抽出処理し、該抽出液から溶媒を除去して全脂質を得る。ついで、シリカゲル、アルミナ、セファデックス、逆相吸着剤（オクタデシルシリル化シリカゲル等）、イオン交換樹脂等を用いたカラムクロマトグラフィーで分画処理して濃縮画分を採取し、さらに必要に応じて濃縮精製し、最終的には薄層クロマトグラフィーにより精製処理して目的物であるＳＱＤＧを調製することができる。本発明では、かくして得られる適当な純度のＳＱＤＧ含有物をそのまま神経細胞賦活剤として使用できる。あるいは、デンプン、デキストリン、セルロース等の公知の賦形剤を混合、成形して本発明の賦活剤となすことも可能である。
【００１９】
前述のＳＱＤＧを有効成分としてなる本発明の神経細胞賦活剤は、脳神経細胞を賦活し、細胞死を誘発することなくその増殖を抑制して分化を促進する。すなわち、神経細胞賦活因子として代表的なＮＧＦは、ＰＣ１２細胞を刺激して神経細胞様に分化せしめ、神経突起を伸展させる作用を有するが、本発明のＳＱＤＧ含有賦活剤はＮＧＦの共存下においてＰＣ１２細胞を神経細胞様に分化せしめ、神経突起を伸展させる作用が顕著である。
【００２０】
また、ＳＱＤＧを有効成分としてなる本発明の賦活剤は脳神経細胞の外傷性要因、代謝性要因、β−アミロイド蛋白質、脳虚血性要因等の種々の要因による障害に対して予防作用あるいは治癒作用を有する。この一例として、β−アミロイド蛋白質の活性部位を抜き出したモデルペプチドであるβ２５−３５が惹起する神経細胞への細胞毒性を濃度依存的に軽減する。なお、β−アミロイド蛋白質は、アルツハイマー病患者の脳に沈着するアミロイドを構成する蛋白質であり、アルツハイマー病の原因の一つであると考えられている（「医学のあゆみ」、Ｖｏｌ．１７４，ｐ６１４−６１８，１９９５）。このことから、本発明のＳＱＤＧ含有賦形剤は、β−アミロイド蛋白質の毒性に起因する脳神経細胞の障害に対しても保護作用を有することが明らかとなった。
【００２１】
次に、本発明の神経細胞賦活剤を配合してなる医薬用組成物および食用組成物について説明する。ＳＱＤＧを有効成分としてなる本発明の前記賦活剤は、これをそのまま、あるいは慣用の医薬製剤担体とともに医薬用組成物となし、動物およびヒトに投与することができる。医薬用組成物の剤形としては特に制限されるものではなく、必要に応じて適宜に選択すればよいが、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤、注射剤、坐剤等の非経口剤があげられる。投与量は、通常、成人でＳＱＤＧの重量として１日あたり２０〜６００ｍｇを数回に分けて服用するのが適当である。
【００２２】
本発明において錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤としての経口剤は、例えば、デンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等を用いて常法に従って製造される。これらの製剤中のＳＱＤＧの配合量は特に限定されるものではなく適宜設計できる。この種の製剤には本発明の賦活剤の他に、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を適宜に使用することができる。
【００２３】
ここに、結合剤としてデンプン、デキストリン、アラビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等を例示できる。崩壊剤としてはデンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース等を例としてあげることができる。界面活性剤の例としてラウリル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、蔗糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等をあげることができる。滑沢剤では、タルク、ロウ類、水素添加植物油、蔗糖脂肪酸エステル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコール等を例示できる。流動性促進剤では、軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム等を例としてあげることができる。また、ＳＱＤＧは懸濁液、エマルション剤、シロップ剤、エリキシル剤としても投与することができ、これらの各種剤形には、矯味矯臭剤、着色剤を含有させてもよい。
【００２４】
非経口剤として本発明の所望の効果を発現せしめるには、患者の年齢、体重、疾患の程度により異なるが、通常、成人でＳＱＤＧの重量として１日あたり１〜６０ｍｇの静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射が適当である。この非経口投与剤は常法に従って製造され、希釈剤として一般に注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、注射用植物油、ゴマ油、ラッカセイ油、大豆油、トウモロコシ油、プロピレングリコール等を用いることができる。さらに必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、安定剤を加えてもよい。また、この非経口剤は安定性の点から、バイアル等に充填後冷凍し、通常の凍結乾燥処理により水分を除き、使用直前に凍結乾燥物から液剤を再調製することもできる。さらに必要に応じて、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤を加えてもよい。これら製剤中のＳＱＤＧの配合量は特に限定されるものではなく任意に設定できる。その他の非経口剤の例として、外用液剤、軟膏等の塗布剤、直腸内投与のための坐剤等があげられ、これらも常法に従って製造される。
【００２５】
本発明の他の組成物の好適な態様は食用組成物である。すなわち、前述のようにして得られるＳＱＤＧを有効成分としてなる脳神経細胞賦活剤は、これをそのまま液状、ゲル状あるいは固形状の食品、例えばジュース、清涼飲料、茶、スープ、豆乳、サラダ油、ドレッシング、ヨーグルト、ゼリー、プリン、ふりかけ、育児用粉乳、ケーキミックス、粉末状または液状の乳製品、パン、クッキー等に添加したり、必要に応じてデキストリン、乳糖、澱粉等の賦形剤や香料、色素等とともにペレット、錠剤、顆粒等に加工したり、またゼラチン等で被覆してカプセルに成形加工して健康食品や栄養補助食品等として利用できる。
【００２６】
これらの食品類あるいは食用組成物における本発明の神経細胞賦活剤の配合量は、当該食品や組成物の種類や状態等により一律に規定しがたいが、約０．０１〜５０重量％、より好ましくは０．１〜３０重量％である。配合量が０．０１重量％未満では経口摂取による所望の効果が小さく、５０重量％を超えると食品の種類によっては風味を損なったり当該食品を調製できなくなる場合がある。なお、本発明の神経細胞賦活剤は、これをそのまま食用に供してもさしつかえない。
【００２７】
本発明の医薬用組成物および食用組成物は、脳神経細胞の障害を予防あるいは治癒をねらいとして利用するものであれば、それを使用する上で何ら制限を受けることなく適用されるが、とりわけ外傷性脳神経細胞障害、代謝性の要因による脳神経細胞障害、脳虚血性脳神経細胞障害、パーキンソン病またはダウン症による脳神経細胞障害等の治癒に対して有効である。また、これらの疾患の予防措置の手段としても使用することが可能である。
【００２８】
実施例１
スサビノリの乾燥物（約３ｇ）を細断し、クロロホルム／メタノール（１：１，ｖ／ｖ、以下とくに断らないかぎり同様。）１００ｍｌを加え、ホモジナイザー中で室温下１５分間抽出処理を行った。同様の操作をさらに２回繰り返し、抽出液を集め、細かい抽出残渣を濾過して除去した後、分液漏斗に移し、Ｂｌｉｇｈ−Ｄｙｅｒ法に従ってクロロホルム層と水−メタノール層とに分離した。クロロホルム層を採り、減圧下で濃縮、乾固して乾固物を得た（抽出量５４ｍｇ、収率１．８％）。この乾固物を少量のクロロホルム／メタノール（１：４）に溶解させ、これを脂質の粗抽出液とした。
【００２９】
実施例２
実施例１において、クロロホルム／メタノール（１：１）１００ｍｌに代えてヘキサン／エタノール（１：１）６０ｍｌを用い、５０℃にて２時間抽出処理することを除いて同様に処理し、抽出乾固物（抽出量３５ｍｇ、収率１．２％）を得た。この乾固物を少量のクロロホルム／メタノール（１：４）に溶解させ、脂質の粗抽出液とした。
【００３０】
実施例１−１
１Ｍ酢酸ナトリウム水溶液で酢酸型としてメタノールに懸濁させたＤＥＡＥ−Ｔｏｙｏｐｅａｌ（東ソー社製）を内径１０ｍｍのガラスカラムに約５０ｍｍの高さに充填し、クロロホルム／メタノール（１：４）１００ｍｌで前記カラムを洗浄した。これに実施例１に記載の方法で２バッチ処理して得た粗抽出液を添加し、クロロホルム／メタノール（１．４）１００ｍｌで溶出させフラクション１を得た。次に、５Ｍ酢酸アンモニウム水溶液０．５ｍｌを添加したクロロホルム／メタノール（１：４）１００ｍｌで溶出させフラクション２を得た。
【００３１】
実施例１−２
イアトロビーズ（Ｉａｔｒｏｎ  Ｌａｂ．社製）をメタノール懸濁させ内径１０ｍｍのガラスカラムに約５０ｍｍの高さに充填し、５０ｍｌのメタノールと５０ｍｌのクロロホルムで順次カラムを洗浄した。濃縮・乾固した実施例１−１で得たフラクション１の濃縮乾固物をクロロホルムに溶解させ、前記イアトロビーズカラムに添加した。まず、クロロホルム／アセトン（２０：５）５０ｍｌで溶出させフラクション３を得た。ついで、アセトン１００ｍｌさらにメタノール５０ｍｌを流し、順次カラム内に残留する脂質を溶出させ、アセトン溶出画分（フラクション４）およびメタノール溶出画分（フラクション５）を得た。
【００３２】
実施例１−３
実施例１−１および１−２で得たフラクション２〜５の各画分を減圧下で濃縮し、少量のクロロホルム／メタノール（１：１）に溶解させ、これを脂質類の分析用試料とした。各分析用試料を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）に供して同定を行った。なお、ＴＬＣの展開溶媒の組成は、
フラクション２：クロロホルム／アセトン／メタノール／酢酸／水＝５０：２０：１０：１５：５、フラクション３：ヘキサン／ジエチルエーテル／酢酸＝８０：２０：０．５、フラクション４および５：クロロホルム／メタノール／水＝７０：２１：３であった。
各フラクションに含まれる脂質の組成は次のとおりであった。
フラクション２：ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ＳＱＤＧ、微量のホスファチジン酸（ＰＡ）およびホスファチジルイノシトール（ＰＩ）。
フラクション３：トリアシルグリセロール（ＴＧ）、微量の未同定物質。
フラクション４：モノガラクトシルジアシルグリセロール（ＭＧＤＧ）、ジガラクトシルジアシルグリセロール（ＤＧＤＧ）。
フラクション５：ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、微量の未同定物質。
【００３３】
以上の実験を定量化して行い、その結果から、原料（スサビノリ乾燥物）中の脂質成分の組成を求めたところ、ＭＧＤＧ：１０．５％、ＤＧＤＧ：２５．４％、ＰＧ：２１．５％、ＳＱＤＧ：１７．０％、ＰＣ：１５．７％、ＰＥ：微量、ＴＧ：３．０％、その他：６．８％であった。
【００３４】
実施例３
実施例１−３で得たフラクション２のＴＬＣプレートからＳＱＤＧに相当するスポットをかきとり、クロロホルム／メタノール（１：１）に溶解させ、濾過および溶媒除去してほぼ純品のＳＱＤＧを得た。ついで、これを常法により塩酸加水分解処理、またはリゾプス  デレマー（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｄｅｌｅｍａｒ）由来のリパーゼ（シグマ社製試薬）を用いて酵素加水分解処理して、前者からＳＱＤＧの１位および２位の構成脂肪酸、後者から１位の構成脂肪酸を遊離せしめた。各々のメチルエステル化処理を経てガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）分析に供した。この結果、ＳＱＤＧの１位を構成する主な脂肪酸はエイコサペンタエン酸．９１．０％、アラキドン酸：１．８％、パルミチン酸：４．６％であり、２位の主な構成脂肪酸はパルミチン酸：９２．５％、オレイン酸：２．８％であった。
【００３５】
実施例４
神経細胞のモデル細胞であるＰＣ１２細胞は、ラット副腎髄質由来褐色細胞腫より樹立された細胞株（親クロム細胞腫細胞）であり、神経成長因子（ＮＧＦ）に応答して神経突起を伸展し、神経細胞様に分化する。そこで、このＰＣ１２細胞（ドイツ・マックスプランク研究所から分譲）をＴ−２５培養フラスコ中で静置培養し、ＳＱＤＧの神経突起伸展作用、すなわち分化誘導能を検討した。培養液はＲＰＭＩ１６４０培地に１０％（ｖ／ｖ）馬血清と５％（ｖ／ｖ）牛胎児血清を含み、３７℃、５％二酸化炭素混有空気中でｐＨ７．２〜７．４に保った。ＳＱＤＧ（実施例３記載の方法により調製）は、ジメチルスルホキシドに溶解し、ミリポアフィルター（０．２μｍ）にて濾過滅菌後、ＰＣ１２細胞培養液に終濃度１０μＭを添加した。  分化誘導の陽性対照には、ＮＧＦ（シグマ社製試薬）をリン酸緩衝液に溶解させ終濃度１００ｎｇ／ｍｌを添加し、ＳＱＤＧ単独及びＮＧＦとＳＱＤＧ共存下での分化誘導への影響を４日間光学顕微鏡により形態観察を行った。なお、分化誘導は細胞体の長径より長い突起を形成したものを陽性と判断した。この結果を表１に示す。同表中の記号は、培養４日後の神経突起形成状態について−：なし、＋：あり、＋＋および＋＋＋：顕著にありを意味する。
【００３６】
【表１】
0004629834.tif 000003
【００３７】
表１に示したデータから、ＮＧＦで神経突起の伸展が見られたが、ＳＱＤＧ単独では細胞形態の桿状化が観察されたものの神経突起の明確な伸展作用は観察されなかった。しかし、ＮＧＦとＳＱＤＧの共存により、ＮＧＦの神経突起形成は顕著に促進されることが明らかになった。
【００３８】
実施例５
アルツハイマー病における神経細胞死の原因物質の１つにβ−アミロイド蛋白質（４２アミノ酸残基）の関与が明らかになっている。本実施例では、β−アミロイドペプチドの強毒性フラグメント（β−アミロイドの２５残基から３５残基の１１残基ペプチド、以下β２５−３５と略す）を用いて、神経細胞のモデル細胞に対する細胞死誘導とそれに対するＳＱＤＧの防衛効果を検討した。ポリオルニチンで細胞接着面に処理を施した９６ウェルプレートでＰＣ１２細胞（実施例４と同じ）を培養し、β２５−３５（大阪ペプチド研究会より入手）およびＳＱＤＧ（実施例４と同じ）を各単独あるいは同時添加した。２日間培養後培養上清中に細胞内から漏出する乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）活性を測定し、細胞死の指標とした。この結果を表２に示す。
【００３９】
【表２】
0004629834.tif 000004
【００４０】
表２に示したデータから、ＳＱＤＧ単独の添加は対照群（無添加群）と比較して有意な差は認められなかったが、β２５−３５添加群は対照群と比較して著しい細胞死が誘導された。また、β２５−３５とＳＱＤＧの同時添加群では細胞死が防御され、ＳＱＤＧはβ−アミロイドペプチドの強毒性フラグメントであるβ２５−３５のＰＣ１２細胞に対する毒性を軽減させることが判明した。
【００４１】
実施例６
実施例３に記載の方法により調製したほぼ純品のＳＱＤＧ１５０ｍｇ、精製大豆油１２５ｍｇ、ミツロウ１５ｍｇおよびビタミンＥ１０ｍｇを窒素ガス雰囲気下で約４０℃に加温し、十分に混合して均質な液状物とした。これをカプセル充填機に供給して１粒内容量３００ｍｇのゼラチン被覆カプセル製剤を試作した。
この製剤は医薬用組成物または食用組成物として利用できるものである。
【００４２】
実施例７
海苔を原料として食用味付け焼き海苔を製造する方法において、採取したアサクサノリおよびスサビノリを篩付き木製型枠に流し込んですき、乾燥機中で約５０℃にて２時間乾燥し、さらにトンネル型ヒーターで１５０〜１８０℃にて６〜７秒間加熱処理して焼き海苔をつくった。別に、味付け用タレとして塩５．０ｋｇ、調味料２．０ｋｇ、砂糖８．６ｋｇ、唐辛子０．３ｋｇ、醤油２．０リットル、みりん１．８リットル、水６．０リットルの混合液に加えて実施例２に記載の方法により調製した抽出乾固物２５０ｇを配合して均質化したものを作成し、このタレを前記焼き海苔に塗布し乾燥して本発明の味付け焼き海苔を試作した。このものは、市販の味付け焼き海苔と比較して外観、風味および食感のいずれにおいても孫色なく、健康の維持増進を訴求する食品として利用できるものであった。
【００４３】
【発明の効果】
本発明によれば、脳神経細胞に対して賦活作用および保護作用を示し、外傷、代謝性の要因、脳虚血、β−アミロイド蛋白質、パーキンソン病およびダウン症等による脳神経細胞障害に対する予防および治癒に極めて有用なＳＱＤＧを有効成分としてなる神経細胞賦活剤が提供される。該賦活剤は神経成長因子（ＮＧＦ）と併用することにより、神経細胞の分化誘導を顕著に促進し、相乗的な神経突起形成能を発現させる機能を有する。また、本発明によれば、前記機能を有する神経細胞賦活剤を配合してなる医薬用組成物および食用組成物が提供され、これらの組成物は脳神経細胞の障害に対する予防あるいは治療のための手段として活用され得る。