(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）ライオン糞をジエチルエーテルに浸漬し、（２）吸引濾過によって残渣を除去して濾液を得、（３）前記濾液を遠心分離して上澄液を得、（４）前記上澄液からエーテルを除去して抽出物試料とし、（５）前記抽出物試料にエタノールを加えて、ODSカラムを用いた逆相中圧液体クロマトグラフィーに付した際に得られる第１乃至第４画分の内の第２画分に含まれる物質を含有する動物忌避剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シカなどの動物を忌避するための動物忌避剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
トラとかライオンの肉食獣の排泄物、例えば尿とか糞、がシカなどの他の動物に対する忌避効果を有することが知られている。しかし、肉食獣の排泄物は水溶液として散布されると強烈な悪臭を発生し、実際に利用する上で大きな問題となる。そして、散布後１〜２週間で匂いが無くなるとともに忌避効果も無くなってしまうことが報告されている（例えば、特許文献１参照）。このような事情から、忌避剤として上記糞中の悪臭成分を特定する動きもなかった。むしろ、シカが好む臭いを発する化合物を散布することによってシカを誘導する試みがなされている（例えば、特許文献２参照）。
【特許文献１】特開２００４−１８９６８４号公報
【特許文献２】米国特許第６，４６０，４８７号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
したがって、肉食獣の排泄物による忌避効果は永続性がなく期待薄である。しかも、想像を絶する悪臭であるために散布作業や散布地域では拒絶され，実用的ではなかった。そこで、本発明は、試行錯誤の繰り返しを重ねた結果、無臭で、忌避効果を有する動物忌避剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の特徴は、動物忌避剤であって、（１）ライオン糞をジエチルエーテルに浸漬し、（２）吸引濾過によって残渣を除去して濾液を得、（３）前記濾液を遠心分離して上澄液を得、（４）前記上澄液からエーテルを除去して抽出物試料とし、（５）前記抽出物試料にエタノールを加えて、ODSカラムを用いた逆相中圧液体クロマトグラフィーに付した際に得られる第１乃至第４画分の内の第２画分に含まれる物質を含有する、ことにある。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の特徴によれば、悪臭を発生しない忌避剤によって、シカなどの動物を忌避することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下に本発明を実施するための最良の形態を説明する。なお、以下の説明は、単なる例示に過ぎず、本発明の技術的範囲は以下の説明に限定されるものではない。
【００１０】
[忌避成分の抽出]
盛岡市動物公園のライオン飼育場から発生した排出物を採取し、２週間風乾させた後、乾燥排泄物をミキサーで粉砕した。粉砕試料200ｇにジエチルエーテルを試料が浸るまで加え、よく撹拌して低温暗室で一昼夜浸漬した。抽出後、吸引濾過によって大部分の残渣を取り除き、さらに濾液を遠心分離することにより、上澄液をエーテル抽出液として回収した。ロータリーエバポレーターを用いてエーテルを除去することにより1.21gの抽出物試料が得られた。後述するように、盛岡市動物公園における忌避試験において、本抽出物がライオン排泄物同様の忌避作用を保持していることが確認された。
【００１１】
[抽出物の分画]
分画は逆相中圧液体クロマトグラフィーを用いて行った。抽出物試料にエタノールを0.1g/mlになるように加え、分画用サンプルとした。カラムには、ODS（オクタデシルシリル化シリカゲル）−ローバーカラム（LiChroprep RP-18:内径25mm×310mm）を用い、１回あたり0.5gの試料を注入し、エタノール（流速1.0ml/min）で溶出・分画した。
【００１２】
溶出成分は示差屈折計によりモニターし、フラクションNo.1〜4を得た（図１）。図１に示すように、フラクションNo.1〜3のピークは
フラクションNo.1：溶出開始から約18分
フラクションNo.2：溶出開始から約20分
フラクションNo.3：溶出開始から約31分
であった。
【００１３】
溶媒を除去して得られた各フラクションの収量は、No.1が0.07g（収率 5.8%）、No.2が0.38g（収率 31.4%）、No.3が0.32g（収率 26.0%）、No.4が0.10g（収率 8.2%）であり、トータルの回収率は71%であった。各試料に対して排泄物試料と同じ濃度になるようにエタノール200mlをそれぞれ加えて、忌避試験用の試料とした。各サンプルを水で100倍に希釈して散布したところ、後述するように、フラクションNo.2に顕著な忌避作用が認められた。各フラクションの最終濃度は、No.1が3.5mg/l、No.2が19mg/l、No.3が16mg/l、No.4が5.0mg/lであった。
【００１４】
[忌避試験]
図２は、忌避試験を行ったシカ舎施設の概要を示す図である。図２に基づいて、忌避試験の条件を説明する。なお、図中の数値の単位はmmである。動物園において、観客の影響がないように、閉園後16：30から翌朝開園前の 9：00まで、シカの放飼場１０にネット１２を設置し、ネットの両側に通路１１，１３を作る。両通路１１，１３に穴をあけたパイプ（図示せず）を設置する。パイプの長さは1m、パイプの直径は30mm、穴の直径は10mm、穴の数は9個とし、通路１１に２本、通路１３に２本、合計４本設置した。シカは通常、昼間は見晴らしの良い奥（ネット１２を挟んで給餌室１６と反対の位置）にいるが、夜間は給餌室１６へエサを食べに来る。その際、シカは通路１１又は通路１３のいずれかを通らなければならない。
【００１５】
上記の条件下で、パイプに何も入れない状態で、3日間それぞれの通路の通過状況をビデオカメラ１４，１５で記録し、通過回数を計測した。その後、いずれか一方の通路のパイプ内に、試料を溶かした溶液をしみこませた紙をセットした。その状態でそれぞれの通路の通過回数を同様に計測した。試料の入ったパイプは毎日ネット設置時にセットし、ネット除去時パイプごと回収され、開園時間帯は代わりに空のパイプがセットされた。同じ側の通路への試料提示を4日間行った。4日間の試料提示下における、各通路の通過回数の平均値を実測値とした。その後、1週間のインターバルをおいて、何も入れない状態3日間、提示4日間という形で、セットする通路や、試料を交換して各フラクションについて実験を行った。
【００１６】
表１に、実測値、期待値、カイ二乗値を示す。
【表１】
0004817914.tif 000002
【００１７】
期待値は、それぞれの通路に何もおかない状態で計測した通過回数から推定して、実測値の合計回数通過するなら、それぞれの通路を通過するであろうと期待（推定）できる値である。
【００１８】
例えば、パイプに何も入れない状態で、
１日目に左の通路１１を通過した回数をＸ01L、右の通路１３を通過した回数をＸ01Rとし、
２日目に左の通路１１を通過した回数をＸ02L、右の通路１３を通過した回数をＸ02Rとし、
３日目に左の通路１１を通過した回数をＸ03L、右の通路１３を通過した回数をＸ03Rとし、
左の通路１１のパイプ内にのみフラクションNo.1試料を溶かした溶液をしみこませた紙をセットした状態で、
１日目に左の通路１１を通過した回数をＹ11LL（”11LL”は、フラクションNo.1の”1”−１日目の”1”−左(Left)通路パイプに試料をセットの”L”−左(Left)通路通過回数の”L”を示す。以下同様。）、右の通路１３を通過した回数をＹ11LRとし、
２日目に左の通路１１を通過した回数をＹ12LL、右の通路１３を通過した回数をＹ12LRとし、
３日目に左の通路１１を通過した回数をＹ13LL、右の通路１３を通過した回数をＹ13LRとし、
４日目に左の通路１１を通過した回数をＹ14LL、右の通路１３を通過した回数をＹ14LRとすると、
左の通路１１のパイプ内にのみフラクションNo.1試料を溶かした溶液をしみこませた紙をセットした状態における
左の通路１１の実測値は、（Ｙ11LL+Ｙ12LL+Ｙ13LL+Ｙ14LL）／4となり、
右の通路１３の実測値は、（Ｙ11LR+Ｙ12LR+Ｙ13LR+Ｙ14LR）／4となる。
【００１９】
そして、
Ｘ01:3L=Ｘ01L +Ｘ02L+Ｘ03L
Ｘ01:3R=Ｘ01R +Ｘ02R+Ｘ03R
Ｙ11:4LL=Ｙ11LL +Ｙ12LL+Ｙ13LL+Ｙ14LL
Ｙ11:4LR=Ｙ11LR +Ｙ12LR+Ｙ13LR+Ｙ14LRとすると、
左の通路１１のパイプ内にのみフラクションNo.1試料を溶かした溶液をしみこませた紙をセットした状態で、左の通路１１を通過することの期待値をEV1LLとすると、
EV1LL=(Ｙ11:4LL+Ｙ11:4LR)×Ｘ01:3L／(Ｘ01:3L+Ｘ01:3R)／4  となる。
【００２０】
カイ二乗値は、データを項目ごと（ここでは右と左の2項目）に分類し、それが予測通りの割合かどうかを判定する検定の値であって、
カイ二乗値＝((実測値−期待値) 2／期待値)の総和
となる。
【００２１】
「χ2（1,0.05）=3.841」はカイ二乗値が3.841より大きければ、実験結果（実測値）は予測（期待値）から有意にずれていると言え、同じような結果が偶然に起こる確率は5％（0.05）以下であることを表す。「χ2（1,0.01）=6.635」は、6.635より大きければ、（実測値）は予測（期待値）から有意にずれており、同じような結果が偶然に起こる確率は1％（0.01）以下であることを表す。「χ2（1,0.001）=10.828」は、10.828より大きければ、（実測値）は予測（期待値）から有意にずれており、同じような結果が偶然に起こる確率は0.1％（0.001）以下であることを表す。
【００２２】
同様にフラクションNo.2,No.3についても観察すると、上記表１の観測結果から、右側に試料を設置した際に右側の通過回数が減少し、左側に試料を設置した際に左側の通過回数が減少し、かつ実測値と期待値のずれが最も大きい（カイ二乗値の左右平均値が最も大きい）フラクションNo.2に忌避作用を持つ有効成分が含まれていると考えられる。
【００２３】
なお、「エタノール左（右）」は、毎日新しくエタノールをしみ込ませた試料を、シカに提示して試験した。「エタノール気化左（右）」は、エタノールをしみ込ませた試料を２週間放置した後、シカに提示して試験した。
【００２４】
[忌避活性画分No.2の成分組成]
顕著な忌避作用フラクションNo.2に関して、ガスクロマトグラフィー質量分析計(株式会社島津製作所  商品名GCMS-QP2010)により、成分組成の解析を行った。解析条件は以下のとおりである。
【００２５】
カラム：SUPELCO MDS-5S(0.25mm×30m)、キャリアガス：He(1ml/min)、
温度：気化室300℃／検出器300℃／カラム初期温度120℃（10分保持）／カラム最終温度300℃（昇温速度3℃/min；20分保持）、イオン化法：電子イオン化法(70eV)
解析結果を図３、表２及び表３に示す。
【表２】
0004817914.tif 000003
【表３】
0004817914.tif 000004
【００２６】
表２及び表３に示すように、フラクション２は炭素数14〜19の長鎖脂肪酸類を主成分とし、その他の成分として脂肪族アルコール、脂肪族アルデヒド、脂肪酸アミド、ステロイド系化合物等から構成されていることが分かった。脂肪酸アミドとは、具体的には下記式（I）で示されるオクタデセンアミドと、下記の一般式（II）で示される化合物である。
【００２７】
NH2OC−(CH2)7−CH＝CH−(CH2)7−CH3  （I）
NH2OC−(CH2)n−CH3                （II）
（式中、nは10から16の自然数を表す。）。
【００２８】
一般式（II）で示される化合物とは、
ドデカンアミド  NH2OC(CH2)10CH3、トリデカンアミド  NH2OC(CH2)11CH3、
テトラデカンアミド  NH2OC(CH2)12CH3、ペンタデカンアミド  NH2OC(CH2)13CH3、ヘキサデカンアミド  NH2OC(CH2)14CH3、ヘプタデカンアミド  NH2OC(CH2)15CH3、オクタデカンアミド  NH2OC(CH2)16CH3、を意味する。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】エーテル抽出物の中圧液体クロマトグラフィーによる分画を示す図である。
【図２】忌避試験を行ったシカ舎施設の概要を示す図である。
【図３】ライオン排泄物フラクションNo.2のTIM-GCクロマトグラムを示す図である。
【符号の説明】
【００３１】
１０…放飼場
１１，１３…通路
１２…ネット
１４，１５…ビデオカメラ
１６…給餌室
【図１】
0004817914.tif 000005
【図２】
0004817914.tif 000006
【図３】
0004817914.tif 000007