(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（I）のすべての可能な異性体の形の化合物、又はそれらの製薬上許容できる酸若しくは塩基付加塩。
【化１】
0004750281.tif 000017
｛ここで、Ｘ及びＹは、
・それらが結合している炭素と一緒になってＣ＝Ｏ若しくはＣ＝ＣＨ2基を形成するか、
又は
・Ｘがヒドロキシル、(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキルオキシ若しくは(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキルカルボニルオキシ基を表わし且つＹが水素原子であるか、
のいずれかであり、
Ｒ1はヒドロキシル基を表わし、
Ｒ2は水素又はハロゲン原子を表わし、
Ｚは水素原子、ＮＨＳＯ2Ｒａ、ＮＨＣＯ2Ｒａ、ＮＨＣＯＲａ、ＮＨＳＯ2ＮＨＲａ又はＮＨＣＯＮＨＲａ基を表わし、
Ｇは
・式−ＮＨ−Ｃ(＝ＮＨ)−ＮＨＲｃ基、
又は
・次式：
【化２】
0004750281.tif 000018
から選択されるヘテロ環
のいずれかを表わし、
Ｒａ及びＲｃは同一であっても異なっていてもよく、水素原子、−(ＣＨ2)m−Ａｌｋ、−(ＣＨ2)m−Ａｒ又は−(ＣＨ2)m−Ｈｅｔ基を表わし、
用語Ａｌｋは１〜１２個の炭素原子を有する直鎖状、分枝鎖状又は環状の飽和又は不飽和非芳香族炭化水素基（Ｒ3で置換された又は置換されていないもの）を表わし、
ＡｒはＲ3で置換された又は置換されていない炭素環式アリールを表わし、
ＨｅｔはＲ3で置換された又は置換されていない芳香族又は非芳香族ヘテロ環を表わし、
ｎは１〜６の範囲の整数であり、
ｍは０、１、２又は３を表わし、
置換基Ｒ3は、
・ハロゲン、オキソ、シアノ、ニトロ、ホルミル、カルボキシ、(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキルオキシカルボニル若しくはカルボキサミド、
・１〜６個の炭素原子を有し且つ随意に１個以上のハロゲン原子で置換されたアルキル、アルケニル若しくはアルキニル基、
・３〜１２個の炭素原子を有するシクロアルキル基、
・１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ若しくはアルキルチオ基、
・アミノ、１〜６個の炭素原子を有するアルキルアミノ若しくは２〜１２個の炭素原子を有するジアルキルアミノ基（随意に酸化された形のもの）、
・１〜６個の炭素原子を有するアミノアルキル若しくは３〜８個の炭素原子を有するジアルキルアミノアルキル基、
・３〜１８個の炭素原子を有するジアルキルアミノアルキルオキシ基、
・随意にアシル化されて１〜１２個の炭素原子を有するヒドロキシル基、
・１〜１２個の炭素原子を有し且つ随意に塩素、ヨウ素若しくはフッ素原子で置換されたアシル基、又は
・炭素環式若しくはヘテロ環式アリール、アルアルキル若しくはアリールオキシ基
を表わす。｝
【請求項２】
Ｚが水素原子又は−ＮＨＣＯ2ＣＨ2Ｐｈ、−ＮＨＡｃ若しくは−ＮＨＣＯ2ＣＨ2−アダマンチル基であり且つＧが−ＮＨ−Ｃ(＝ＮＨ)−ＮＨ2、次式：
【化３】
0004750281.tif 000019
の基である、請求項１記載の式（I）の化合物又はそれらの製薬上許容できる付加塩。
【請求項３】
名称が：
・３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−オキソ−α−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸エチル、
・３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−オキソ−α−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸、
・３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−ヒドロキシ−α−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸、
・３−［（アミノイミノメチル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ペンタン酸、
・３−［（１，４，５，６−テトラヒドロ−２−ピリミジニル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸、
・３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸、
・４−クロル−３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸、
・３−［（アミノイミノメチル）ヒドラゾノ］−４−クロル−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸、
・３−［（アミノイミノメチル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸、又は
・６−［３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−メチレンエストラ−４，９−ジエン−１１β−イル］−２−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキサン酸
である、請求項１記載の式（I）の化合物又はそれらの製薬上許容できる付加塩。
【請求項４】
請求項１記載の式（I）の化合物の製造方法であって、次の工程：
（ａ）次式（IIａ）：
【化４】
0004750281.tif 000020
（ここで、ｎは１〜６の範囲の整数であり、
Ｒ2は請求項１記載の通りである）
の化合物に最初にハロゲン化剤又はアルコール活性化剤を作用させ、次いでナトリウムの存在下で次式（Ｆ２）：
【化５】
0004750281.tif 000021
（ここで、Ａｌｋは１〜６個の炭素原子を有するアルキルを表わし、
Ｚは請求項１記載の通りである）
の化合物を作用させて次式（III）：
【化６】
0004750281.tif 000022
の化合物を得る工程；
（ｂ）式（III）の化合物に鹸化剤を作用させ、次いで脱カルボキシル剤を作用させて次式（IV）：
【化７】
0004750281.tif 000023
の化合物を得る工程；
（ｃ）式（IV）の化合物に次式（Ｆ１）：
【化８】
0004750281.tif 000024
（ここで、Ｇは請求項１記載の通りである）
の化合物を作用させて式（I）の化合物を得る工程：
を含み、所望又は必要ならば得られた式（I）の化合物を次の反応：
・Ｒ2が水素原子である場合の４位におけるハロゲン化剤の作用、
・１７位における還元及び適宜に続いてのアルキル化又はアシル化、
・１７位におけるメチレン基の導入、
・鹸化、
・酸官能基のエステル化又はアミド化、並びに
・酸又は塩基による塩形成
の１つ以上に適宜の順序で付すことから成る、前記製造方法。
【請求項５】
４位におけるハロゲン化反応、１７位における還元反応及び適宜に続いてのアルキル化又はアシル化並びに１７位におけるメチレン基の導入を、工程（ａ）又は（ｂ）において、即ち式（IIａ）の化合物に対して又は式（III）若しくは（IV）の中間体化合物に対して実施することを特徴とする、請求項４記載の方法。
【請求項６】
請求項１記載の式（I）においてＺが水素原子を表わす化合物の製造方法であって、次の工程：
（ａ）次式（IIｂ）：
【化９】
0004750281.tif 000025
（ここで、ｎは１〜６の範囲の整数であり、
Ｒ2は水素原子である）
の化合物に
・適宜に４位におけるハロゲン化剤を作用させて式（IIｂ）においてＲ2がハロゲンを表わす化合物を得て、
・次いで次式（Ｆ１）：
【化１０】
0004750281.tif 000026
（ここで、Ｇは請求項１記載の通りである）
の化合物を作用させて式（I）の化合物を得る工程：
を含み、
所望又は必要ならば得られた式（I）の化合物を次の反応：
・１７位における還元及び適宜に続いてのアルキル化又はアシル化、
・１７位におけるメチレン基の導入、
・酸官能基のエステル化又はアミド化、並びに
・酸又は塩基による塩形成
の１つ以上に適宜の順序で付すことから成る、前記製造方法。
【請求項７】
・１７位における還元反応及び適宜に続いてのアルキル化又はアシル化、
・１７位におけるメチレン基の導入、並びに
・酸官能基のエステル化、アミド化又は塩形成反応
を前もって式（IIｂ）の化合物に対して実施することを特徴とする、請求項６記載の方法。
【請求項８】
請求項１記載の式（I）の化合物又はそれらの製薬上許容できる付加塩から成る薬剤。
【請求項９】
請求項２記載の式（I）の化合物又はそれらの製薬上許容できる付加塩から成る薬剤。
【請求項１０】
請求項３記載の式（I）の化合物又はそれらの製薬上許容できる付加塩から成る薬剤。
【請求項１１】
請求項１〜３のいずれかに記載の式（I）の化合物又はそれらの製薬上許容できる付加塩から成る、ビトロネクチン受容体に対する拮抗活性を有する薬剤。
【請求項１２】
請求項１〜３のいずれかに記載の式（I）の化合物又はそれらの製薬上許容できる付加塩から成る、骨吸収に対する阻害活性を有する薬剤又は骨粗鬆症の治療若しくは予防用の薬剤。
【請求項１３】
請求項１〜３のいずれかに記載の式（I）の化合物又はそれらの製薬上許容できる付加塩から成る、腫瘍成長又は癌転移に対する阻害活性を有する薬剤。
【請求項１４】
請求項１〜３のいずれかに記載の式（I）の化合物又はそれらの製薬上許容できる付加塩から成る、抗炎症活性を有する薬剤又は心臓血管障害、狭窄再発、動脈硬化症、腎症若しくは網膜症の治療若しくは予防用の薬剤。
【請求項１５】
請求項８〜１４のいずれかに記載の１種以上の薬剤並びに１種以上の担体、ビヒクル、希釈剤又は補助薬を含有する製薬組成物。
【請求項１６】
請求項４記載の式（III）の化合物。
【請求項１７】
請求項４記載の式（IV）の化合物。
【請求項１８】
請求項４記載の式（IIａ）においてＲ2がハロゲン原子である化合物。
【請求項１９】
請求項６記載の式（IIｂ）においてＲ2がハロゲン原子である化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、新規のステロイド誘導体、それらの製造方法及びこの方法の中間体、それらの薬剤としての使用並びにそれらを含有する製薬組成物に関する。
【０００２】
本発明の主題は、一般式（I）のすべての可能な異性体の形、単離された形若しくは混合物の形の化合物、又はそれらのエステル又はそれらの製薬上許容できる酸若しくは塩基付加塩にある。
【化１２】
0004750281.tif 000002
｛ここで、Ｘ及びＹは、
・それらが結合している炭素と一緒になってＣ＝Ｏ若しくはＣ＝ＣＨ2基を形成するか、
又は
・Ｘがヒドロキシル、(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキルオキシ若しくは(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキルカルボニルオキシ基を表わし且つＹが水素原子であるか、
のいずれかであり、
Ｒ1はヒドロキシル、(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキルオキシ、アミノ、(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキルアミノ又は(Ｃ2〜Ｃ12)−ジアルキルアミノ基を表わし、
Ｒ2は水素又はハロゲン原子を表わし、
Ｚは水素原子、ＮＨＳＯ2Ｒａ、ＮＨＣＯ2Ｒａ、ＮＨＣＯＲａ、ＮＨＳＯ2ＮＨＲａ又はＮＨＣＯＮＨＲａ基を表わし、
Ｇは
・次式：
【化１３】
0004750281.tif 000003
の基（Ｇ１基）（ここで、（Ｈ）は−Ｎ＝Ｃ−ＮＨ−単位と共にヘテロ環の残部を形成する）、
・ＮＲｂＲｃ基（Ｇ２基）、
・ヘテロ環（Ｇ３基）、
・ＮＲｂ−Ｃ(＝Ａ)−ＮＨＲｃ基（Ｇ４基）（ここで、Ａは硫黄原子、酸素原子若しくはＮＨ基である）
又は
・ＮＲｂ−ＳＯ2Ｒｃ基（Ｇ５基）
のいずれかを表わし、
Ｒａ、Ｒｂ及びＲｃは同一であっても異なっていてもよく、水素原子、−(ＣＨ2)m−Ａｌｋ、−(ＣＨ2)m−Ａｒ又は−(ＣＨ2)m−Ｈｅｔ基を表わし、Ｒｂ及びＲｃはまた、それらが結合している窒素原子と一緒になってヘテロ環を形成することもでき、
用語Ａｌｋは１〜１２個の炭素原子を有する直鎖状、分枝鎖状又は環状の飽和又は不飽和非芳香族炭化水素から誘導され且つＲ3で置換された又は置換されていない基を表わし、
ＡｒはＲ3で置換された又は置換されていない炭素環式アリールを表わし、
ＨｅｔはＲ3で置換された又は置換されていない芳香族又は非芳香族ヘテロ環を表わし、
ｎは１〜６の範囲の整数であり、
ｍは０、１、２又は３を表わし、
置換基Ｒ3は、
・ハロゲン、オキソ、シアノ、ニトロ、ホルミル、カルボキシ、(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキルオキシカルボニル若しくはカルボキサミド、
・１〜６個の炭素原子を有し且つ随意に１個以上のハロゲン原子で置換されたアルキル、アルケニル若しくはアルキニル基、
・３〜１２個の炭素原子を有するシクロアルキル基、
・１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ若しくはアルキルチオ基、
・アミノ、１〜６個の炭素原子を有するアルキルアミノ若しくは２〜１２個の炭素原子を有するジアルキルアミノ基（随意に酸化された形のもの）、
・１〜６個の炭素原子を有するアミノアルキル若しくは３〜８個の炭素原子を有するジアルキルアミノアルキル基、
・３〜１８個の炭素原子を有するジアルキルアミノアルキルオキシ基、
・随意にアシル化されて１〜１２個の炭素原子を有するヒドロキシル基、
・１〜１２個の炭素原子を有し且つ随意に例えば塩素、ヨウ素若しくはフッ素原子で置換されたアシル基、又は
・炭素環式若しくはヘテロ環式アリール、アルアルキル若しくはアリールオキシ基（これらの基はそれら自体随意に前記の１個以上の置換基で置換されていてよい）
を表わす。｝
【０００３】
用語１〜１２個の炭素原子を有するＡｌｋ又はアルキルとは、非環状炭化水素の場合にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル、２，３−ジメチルブチル，ｎ−ヘプチル、２−メチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、３，３−ジメチルペンチル、３−エチルペンチル，ｎ−オクチル、２，２−ジメチルヘキシル、３，３−ジメチルヘキシル、３−メチル−３−エチルペンチル、ノニル、２，４−ジメチルヘプチル若しくはｎ−デシルのようなアルキル基、ビニル、プロペニル、イソプロペニル、アリル、２−メチルアリル、ブテニル若しくはイソブテニルのようなアルケニル又はエチニル、プロピニル、プロパルギル、ブチニル若しくはイソブチニルのようなアルキニル基を意味し、そして環状基の場合にはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル又はアダマンチル基のようなシクロアルキル基を意味する。１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、より特定的にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル及びｔ−ブチルを意味するのが好ましい。
【０００４】
アリールとは、６〜１４個の炭素原子を有する炭素環式アリール基を意味し、フェニル、ナフチル、フェナントレニル基のような芳香族環状炭化水素から誘導された基、又はインダニル、インデニル、ジヒドロナフチル、テトラヒドロナフチル若しくはフルオレニルのようなベンゼン環を含む縮合二環若しくは三環式炭化水素から誘導された基を意味する。その結合はベンゼン環上に現れる。アリールは、フェニルであるのが好ましい。アルアルキルとは、ベンジルを意味するのが好ましい。アリールオキシとは、フェニルオキシを意味するのが好ましい。
【０００５】
ヘテロ環とは、１〜９個の炭素原子並びに酸素、窒素及び硫黄原子から選択される１〜５個のヘテロ原子を有する飽和又は不飽和の芳香族ヘテロ環（ヘテロアリール）又は非芳香族ヘテロ環を意味し、特に次のものが意図される：
・ヘテロ環式単環基、例えばチエニル、フリル、ピラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、チアゾリル、オキサゾリル、フラザニル、ピロリニル、イミダゾリニル、ピラゾリニル、チアゾリニル、トリアゾリル、テトラゾリル基、
・ヘテロ環式縮合環、例えばベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ナフト［２，３−ｂ］チエニル、チアントレニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチイニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリル、インダゾリル、プリニル、キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、カルバゾリル、β−カルボリニル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、インドリニル、イソインドリニル、イミダゾピリジル、イミダゾピリミジニル、又は前記のヘテロ環式単環によって構成される縮合多環系、例えばフロ［２，３−ｂ］ピロール若しくはチエノ［２，３−ｂ］フラン、或いは
・ピロリジン、ピペリジン又はモルホリンのような飽和ヘテロ環。
【０００６】
ＧがＧ１基である場合、Ｇ１は特に次のヘテロ環の内の１つを表わす：
【化１４】
0004750281.tif 000004
（ここで、ｐは１〜４の整数、好ましくは２又は３を表わす）。
【０００７】
ＧがＧ２基である場合、Ｇ２は特にアミノ、アルキルアミノ（例えば−ＮＨＭｅ、−ＮＨＥｔ）又はジアルキルアミノ（例えば−ＮＭｅ2、−ＮＥｔ2、−ＮＭｅＥｔ）、−ＮＨＰｈ、−ＮＨＣＨ2Ｐｈ若しくは−ＮＨＣＨ2−ピロール−２−イル基であることができる。
【０００８】
ＧがＧ４又はＧ５基である場合、これは特に−ＮＨ−Ｃ(＝ＮＨ)−ＮＨ2、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨＣＨ2Ｐｈ、−ＮＨＣＯＮＨ2、−ＮＨ−ＣＳ−ＮＨ2、−ＮＨ−Ｃ(＝ＮＨ)−ＮＨＣＨ2Ｐｈ、−ＮＨ−Ｃ(＝ＮＨ)−ＮＨＣＨ3又は−ＮＨＳＯ2Ｐｈ基である。
【０００９】
Ｒ1がアルキルオキシ又はアルキルアミノを表わす場合、これは特に次の基である：−ＯＭｅ、−ＯＥｔ、−Ｏ−(ＣＨ2)2−ＯＨ、−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ(ＣＨ)−ＣＨ2ＯＨ、−Ｏ−(ＣＨ2)2−ＮＨ2、−Ｏ−(ＣＨ2)2−ＮＭｅ2又は−ＯＣＨ2Ｐｈ。
【００１０】
前記のようなアルキル、アリール又はヘテロ環基の随意としての置換基Ｒ3は、次の基から選択される：
・ハロゲン：フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、
・１〜６個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル及びアルキニル、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ビニル又はアレニル（これらの基はトリフルオルメチルのようにそれら自体１個以上のハロゲン原子、例えばフッ素で随意に置換されていてもよい）、
・３〜１２個の炭素原子を有するシクロアルキル、例えばシクロヘキシル又はアダマンチル、
・オキソ、シアノ、ニトロ、ホルミル、カルボキシ、１〜６個の炭素原子を有するカルボキシアルキル、カルボキサミド、
・１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ、例えばメトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、ブチルオキシ、
・１〜６個の炭素原子を有するアルキルチオ、例えばメチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ、
・アミノ、１〜６個の炭素原子を有するアルキルアミノ、例えばメチルアミノ若しくはエチルアミノ又は２〜１２個の炭素原子を有するジアルキルアミノ、例えばジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルエチルアミノ（これらのジアルキルアミノ基はそれぞれ随意に酸化された形にあってもよい）、
・１〜６個の炭素原子を有するアミノアルキル、例えばアミノメチル又はアミノエチル、
・３〜１８個の炭素原子を有するジアルキルアミノアルキル、例えばジメチルアミノメチル又はジメチルアミノエチル、
・３〜１８個の炭素原子を有するジアルキルアミノアルキルオキシ、例えばジメチルアミノエチルオキシ、
・随意にアシル化されて１〜１２個の炭素原子を有するヒドロキシル、例えばアセトキシ、
・１〜１２個の炭素原子を有するアシル、例えばホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、スクシニル、ピバロイル、ベンゾイル｛随意に例えば塩素、ヨウ素又はフッ素原子で置換されたもの（クロルアセチル、ジクロルアセチル、トリクロルアセチル、ブロムアセチル及びトリフルオルアセチル基を挙げることができる）｝、
・炭素環式又はヘテロ環式のアリール（例えばフェニル、フリル、チエニル、ピリジニル）、アルアルキル（例えばベンジル）又はアリールオキシ（例えばフェニルオキシ）（これらの基はそれら自体随意に前記の基で置換されていてよい）。
【００１１】
もちろん、２個以上の同一の又は異なるＲ3置換基を存在させることができる。ヘテロ環の場合、これらの置換基は炭素原子上又は窒素原子上に存在させることができる。
【００１２】
本発明は当然、式（I）の化合物の塩、例えば式（I）の化合物がアミノ若しくはアミノグアニジン官能基を含む場合に塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフルオル酢酸、ギ酸、プロピオン酸、安息香酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、シュウ酸、グリオキシル酸、アスパラギン酸、アルカンスルホン酸（例えばメタンスルホン酸若しくはエタンスルホン酸）、アレーンスルホン酸（例えばベンゼンスルホン酸若しくはパラトルエンスルホン酸）及びアリールカルボン酸と共に形成される塩、又は式（I）の化合物が酸官能基を含む場合にアルカリ金属若しくはアルカリ土類金属又は随意に置換されたアンモニウムと共に形成される塩にも及ぶものである。
【００１３】
第１の好ましい群において、本発明の主題は、前記の通りの式（I）においてＲ1がヒドロキシルを表わし且つＧが前記の通りの−ＮＨ−Ｃ(＝ＮＨ)−ＮＨＲｃ基である化合物にある。
【００１４】
第２の好ましい群において、本発明の主題は、前記の通りの式（I）においてＲ1がヒドロキシルを表わし且つＧが次のヘテロ環：
【化１５】
0004750281.tif 000005
から選択される化合物にある。
【００１５】
本発明はまた、前記の通りの式（I）の化合物のすべての互変異性体の形も含み、例えばＧが次式：
【化１６】
0004750281.tif 000006
のものを表わす式（I）で示された形に対する次式：
【化１７】
0004750281.tif 000007
の互変異性体の形、及びその他の水素原子の位置が異なるすべての形が考えられる。
【００１６】
第３の好ましい群において、本発明の主題は、前記の通りの式（I）においてＺが水素原子又はＮＨＣＯ2ＣＨ2Ｐｈ、ＮＨＣＯＣＨ3若しくはＮＨＣＯ2ＣＨ2−アダマンチル基であり且つＧが−ＮＨ−Ｃ(＝ＮＨ)−ＮＨ2、次式：
【化１８】
0004750281.tif 000008
の基である化合物にある。
【００１７】
第４の好ましい群において、本発明の主題は、次の化合物である：
・３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−オキソ−α−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸エチル、
・３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−オキソ−α−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸、
・３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−ヒドロキシ−α−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸、
・３−［（アミノイミノメチル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ペンタン酸、
・３−［（１，４，５，６−テトラヒドロ−２−ピリミジニル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸、
・３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸、
・４−クロル−３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸、
・３−［（アミノイミノメチル）ヒドラゾノ］−４−クロル−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸、
・３−［（アミノイミノメチル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸、及び
・６−［３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−メチレンエストラ−４，９−ジエン−１１β−イル］−２−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキサン酸。
【００１８】
骨は骨吸収と骨形成とを含む動的プロセスを始終受けている。これらのプロセスは、それを専門とする細胞によって媒介される。骨形成は骨芽細胞によって無機基質が付着することの結果であり、骨吸収はこの骨基質が破骨細胞によって溶解することの結果である。骨粗鬆症は、この骨基質の乾式損失によって特徴付けられる。活性成熟破骨細胞は、骨基質に接着した後に、接着した帯域の内側におけるプロトン及び蛋白質分解酵素の分泌によって骨を吸収し、破骨細胞が骨から取れたときに骨の表面上に現れる凹み又は穴を結果としてもたらす。
【００１９】
式（I）の化合物及びそれらの製薬上許容できる付加塩は、有用な薬理学的特性を有する。これらの化合物は、破骨細胞によって媒介される骨吸収を阻害する。
【００２０】
従って、本発明の化合物は、骨基質の損失によって引き起こされる病気の治療、特に骨粗鬆症、高カルシウム血症、骨転移による骨減少症、歯周炎、上皮小体機能亢進症、慢性関節リウマチにおける関節周囲の腐蝕、パジェット病、及び不動化、グルココルチコイド治療又は男性ホルモン若しくは女性ホルモン欠乏によって引き起こされる骨減少症である。
【００２１】
これらはまた、炎症、癌並びに心臓血管障害（動脈硬化及び狭窄再発を含む）の治療に用いることもできる。最後に、これらは血管新生の阻害剤として用いることができ、従って新血管新生を阻害することによる腫瘍の治療、並びに糖尿病性網膜症及び腎症の治療に用いることができる。
【００２２】
近年の研究から、骨への破骨細胞の固着は受容体であるインテグリンによって媒介されることが示されている。
【００２３】
インテグリンは、細胞／細胞の接着及びより特定的には細胞／基質の接着のプロセスを媒介する受容体の上科であり、特に血小板受容体としてのαIIbβ3（フィブリノゲン）及びビトロネクチン受容体としてのαVβ3、並びにオステオポンチン及びトロンボスポンジンのような骨シアロ蛋白を包含する。
【００２４】
これらの受容体は、α及びβの２つのサブユニットの蛋白質ヘテロダイマー化合物であり、これらのサブユニットは、それらのサブユニットの性状によって予め定められる二価イオン固着部位（特にＣａ2+）及びそれらのリガンドについての認識部位である。
【００２５】
αVβ3受容体は内皮細胞、平滑筋細胞、破骨細胞及び癌細胞を含む数多くの細胞中に発現する膜貫通糖蛋白質であり、かくして本発明に従う化合物の多能性につながる。
【００２６】
破骨細胞膜上に発現するαVβ3受容体は、接着／吸収プロセスの基礎となるものであり、細胞骨格の組織化に寄与し、骨粗鬆症に関与する。（Rossら、J. Biol. Chem.、1987、262、7703）。
【００２７】
大動脈の平滑筋細胞上に発現するαVβ3受容体は、新生内膜に向けてのそれらの移動を刺激し、これが動脈硬化の形成及び血管形成術後の狭窄の再発につながる（Brownら、Cardiovascular Res.、(1994)、28、1815）。
【００２８】
内皮細胞は、内皮についての分裂促進物質である成長因子を分泌し、新たな血管の形成（血管新生）に寄与することがある。血管新生の刺激は、新たな血管の形成を引き起こす。
【００２９】
従って、αVβ3インテグリンの拮抗薬は、血管新生の血管のアポトーシスを引き起こすことによって癌性腫瘍の退縮をもたらすことができる（Brookら、Cell、(1994)、79、1157）。
【００３０】
αVβ3インテグリンの天然リガンドは、すべてのＲＧＤユニット（Arg-Gly-Asp）を含有する。このＲＧＤユニットを含有するペプチド及び抗αVβ3抗体は、象牙質の吸収を阻害して無機物化基質上への破骨細胞の接着を防止することができることが知られている（Hortonら、Exp. Cell. Res.、1991、195、368）。
【００３１】
蛇毒から単離されたペプチドであるエキスタチン（Echistatin）もまたＲＧＤユニットを含有し、骨への破骨細胞の接着の阻害剤として報告されており、従って生体外で培養された組織（Satoら、J. Cell. Biol.、(1990)、111、1713）及びラットの生体内で培養された組織（Fischerら、Endocrinology、(1993)、132、1411）における骨吸収の強力な阻害剤である。
【００３２】
式（I）の化合物並びにそれらの製薬上許容できる付加塩及びそれらのエステルは特に、リガンドとしてビトロネクチンを有するその他のインテグリン（αvβ1、αvβ5、αIIbβ3）に対して親和性を有し、それらの天然リガンドへの結合を阻害ことができる。
【００３３】
かくして、この特性のために本発明の化合物は、ビトロネクチン受容体と相互作用するリガンド又は細胞によって根元的な病状が引き起こされる病気の予防又は治療に用いられる。
【００３４】
これらの化合物はまた、トリペプチド配列ＲＧＤを介してそれらのリガンドと相互作用する別のインテグリンに対する活性をも有することができ、このことのためにこれらの化合物は、これらの受容体に関連した病状を治療するために用いることができる薬理学的特性を与えられる。
【００３５】
従って、このインテグリンに対する活性のために本発明の化合物は、上に挙げたものや文献Dermot Cox DN & P、8(4)、1995年5月、197-205に挙げられたもののような数多くの病気の治療に用いられる。必要ならばこの文献を参照されたい。
【００３６】
従って、本発明の主題は、薬剤としての式（I）の化合物並びにそれらの製薬上許容できる付加塩又はそれらのエステルにある。
【００３７】
本発明のより特定的な主題は、ビトロネクチン受容体に対する拮抗活性を有する薬剤としての、前記の式（I）の化合物並びにそれらの製薬上許容できる付加塩にある。
【００３８】
本発明のより特定的な主題は、骨吸収に対する阻害活性を有する薬剤又は骨粗鬆症の治療若しくは予防用の薬剤としての、前記の式（I）の化合物並びにそれらの製薬上許容できる付加塩にある。
【００３９】
本発明のより特定的な主題は、腫瘍成長（増殖）又は癌転移に対する阻害活性を有する薬剤としての、前記の式（I）の化合物並びにそれらの製薬上許容できる付加塩にある。
【００４０】
本発明の全く特定的な主題は、抗炎症活性を有する薬剤又は心臓血管障害、狭窄再発、動脈硬化症、腎症若しくは網膜症の治療若しくは予防用の薬剤としての、前記の式（I）の化合物並びにそれらの製薬上許容できる付加塩にある。
【００４１】
本発明の薬剤の中では、特に実験の部に記載した化合物を挙げることができる。
【００４２】
薬量は治療されるべき病気及び投与経路に応じて変化し、例えば成人に経口投与する場合には１日当たり１ｍｇ〜１０００ｍｇまでで変えることができる。
【００４３】
本発明は、活性成分としての前記の少なくとも１種の薬剤並びに１種以上の担体、ビヒクル、希釈剤又は補助薬（アジュバント）を含有する製薬組成物にも及ぶものである。
【００４４】
式（I）の化合物は、消化器経路、腸管外経路（非経口）又は局所経路で（例えば経皮的に）用いられる。これらは、無味錠剤、糖衣錠剤、ゼラチンカプセル、顆粒、坐薬、膣坐薬、注射用製剤、軟膏、クリーム、ジェル、マイクロスフェア、ナノスフェア、体内埋植薬、パッチ（当て布）の形であることができ、これらは、通常の方法に従って調製される。
【００４５】
活性成分は、これら製薬組成物に通常用いられる賦形剤、例えばタルク、アラビアゴム、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、カカオ脂、水性又は非水性ビヒクル、動物性又は植物性の脂肪物質、パラフィン誘導体、グリコール類、各種の湿潤剤、分散剤又は乳化剤、及び保存剤と共に配合することができる。
【００４６】
本発明の主題はまた、式（I）の化合物の製造方法にもあり、この方法は、次の工程：
（ａ）次式（IIａ）：
【化１９】
0004750281.tif 000009
（ここで、ｎは１〜６の範囲の整数であり、
Ｒ2は前記の通りである）
の化合物に最初にハロゲン化剤又はアルコール活性化剤を作用させ、次いでナトリウムの存在下で次式（Ｆ２）：
【化２０】
0004750281.tif 000010
（ここで、Ａｌｋは(Ｃ1〜Ｃ6)−アルキルを表わし、
Ｚは前記の通りである）
の化合物を作用させて次式（III）：
【化２１】
0004750281.tif 000011
の化合物を得る工程；
（ｂ）式（III）の化合物に鹸化剤を作用させ、次いで脱カルボキシル剤を作用させて次式（IV）：
【化２２】
0004750281.tif 000012
の化合物を得る工程；
（ｃ）式（IV）の化合物に次式（Ｆ１）：
【化２３】
0004750281.tif 000013
（ここで、Ｇは前記の通りである）
の化合物を作用させて式（I）の化合物を得る工程：
を含み、所望又は必要ならば得られた式（I）の化合物を次の反応：
・Ｒ2が水素原子である場合の４位におけるハロゲン化剤の作用、
・１７位における還元及び適宜に続いてのアルキル化又はアシル化、
・１７位におけるメチレン基の導入、
・鹸化、
・酸官能基のエステル化又はアミド化、並びに
・酸又は塩基による塩形成
の１つ以上に適宜の順序で付すことから成る。
【００４７】
本発明の特定的な主題は、４位におけるハロゲン化反応、１７位における還元反応及び適宜に続いてのアルキル化又はアシル化並びに１７位におけるメチレン基の導入を、工程（ａ）又は（ｂ）において、即ち式（IIａ）の化合物に対して又は式（III）若しくは（IV）の中間体化合物に対して実施する、前記の方法にある。
【００４８】
本発明の主題はまた、式（I）においてＺが水素原子を表わす化合物の製造方法にもあり、この方法は、次の工程：
（ａ）次式（IIｂ）：
【化２４】
0004750281.tif 000014
（ここで、ｎは１〜６の範囲の整数であり、
Ｒ2は水素原子である）
の化合物に
・適宜に４位におけるハロゲン化剤を作用させて式（IIｂ）においてＲ2がハロゲンを表わす化合物を得て、
・次いで次式（Ｆ１）：
【化２５】
0004750281.tif 000015
（ここで、Ｇは前記の通りである）
の化合物を作用させて式（I）の化合物を得る工程：
を含み、
所望又は必要ならば得られた式（I）の化合物を次の反応：
・１７位における還元及び適宜に続いてのアルキル化又はアシル化、
・１７位におけるメチレン基の導入、
・酸官能基のエステル化又はアミド化、並びに
・酸又は塩基による塩形成
の１つ以上に適宜の順序で付すことから成る。
【００４９】
別法として、１７位における還元反応及び適宜に続いてのアルキル化又はアシル化、１７位におけるメチレン基の導入、並びに酸官能基のエステル化、アミド化又は塩形成反応は、前もって式（IIｂ）の化合物に対して実施することができる。
【００５０】
式（IIａ）のアルコールに対するハロゲン化剤の作用は、ジクロルメタン中でトリフェニルホスフィンの存在下において四臭化炭素を作用させることによって実施するのが好ましい。アルコール活性化剤の作用とは、当業者に周知の方法に従うメシレート、トシレート又はトリフレートの調製を意味する。式（Ｆ２）の化合物の作用は、特にエタノール中のナトリウムの存在下で実施される。式（IIａ）又は（IIｂ）の化合物の４−ハロゲン化誘導体の形成は、特にジメチルホルムアミドのような双極性非プロトン性溶媒の存在下でＮ−ブロムスクシンイミドを作用させることによって（Ｒ2＝Ｈ→Ｒ2＝Ｂｒ）又はＮ−クロルスクシンイミドを作用させることによって（Ｒ2＝Ｈ→Ｒ2＝Ｃｌ）実施される。１７−ケトの対応するアルコール（Ｘ＝ＯＨ及びＹ＝Ｈ）への還元は、特にメタノール若しくはエタノール中でホウ水素化ナトリウムのようなホウ水素化アルカリを作用させることによって又は水素化アルミニウムリチウムを作用させることによって実施される。
【００５１】
１７位におけるメチレン基の導入は、例えば対応する１７−ケト化合物に対して３−ケト官能基を保護した後に通常の方法に従ってウィッティヒ試薬（Ｐｈ3Ｐ＝ＣＨ2）を作用させることによって実施される。Ｇ−ＮＨ2（Ｆ１）の作用は、溶媒なしで又はエタノール若しくはブタノールのようなアルコール中で実施される。Ｇ−ＮＨ2アミンは随意に塩酸塩又は臭化水素酸塩のような塩の形で用いられる。脱カルボキシル、鹸化、アルキル化、アシル化、エステル化又はアシル化反応は、当業者に周知の通常の方法に従って実施される。塩形成反応は、通常の条件下で実施することができる。ＣＯ2Ｈ末端基を塩形成させるための方法は、例えば炭酸ナトリウム又は酸性炭酸ナトリウム若しくはカリウムのような塩の存在下で実施される。同様に、Ｇが表わすことがあるアミン又はアミノグアニジンの塩形成は、通常の条件下で実施される。その操作は、例えばエーテル性溶液中で塩酸を用いて実施される。
【００５２】
合成の様々な工程の際に随意に必要となる保護及び脱保護反応は、当業者に周知の標準的な方法である。これについては、T.W. greene、「Protective groups in organic synthesis」、John Wiley & sons(1981)に、かなりの完成度の報告を見出すことができる。
【００５３】
例として、本発明に従って１１位に−(ＣＨ2)n−ＣＨ2ＯＰ基を含有する化合物においてＰがメチル基である場合の脱保護反応は、ジクロルメタン中のトリブロモボラン又はピリジン中の塩酸を作用させることによって実施することができる。Ｐがベンジル基である場合の脱保護反応は、酢酸エチル中で炭素上のパラジウムの存在下で水素を作用させることによって、又はトリフルオル酢酸を作用させることによって実施することができ、Ｐがｔ−ブチルジフェニルシリル基である場合の脱保護反応は、テトラヒドロフラン中の溶液状のフッ化テトラブチルアンモニウムを作用させることによって実施することができる。Ｐがテトラヒドロピラニル基である場合、脱保護はアルコール性溶媒中の水性酸の存在下で、好ましくはメタノール中の塩酸を作用させることによって、実施される。
【００５４】
（IIａ）及び（IIｂ）においてＲ2が水素原子を表わす化合物は周知であり、ヨーロッパ特許公開第０３８４８４２Ａ号公報に記載されている。
【００５５】
式（Ｆ１）及び（Ｆ２）の化合物は商品として入手でき、周知であり、又は当業者には入手可能である。
【００５６】
本発明の主題はまた、前記の式（III）及び（IV）の化合物並びに式（IIａ）及び（IIｂ）においてＲ2がハロゲン原子である化合物にもある。
【００５７】
以下、実施例によって本発明をさらに例示するが、これら実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【００５８】
例１：３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−オキソ−α−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸エチル
【００５９】
工程Ａ：臭素化
１１β−（４−ブロムブチル）エストラ−４，９−ジエン−３，１７−ジオン
ジクロルメタン１０ミリリットル中に１１β−（４−ヒドロキシブチル）エストラ−４，９−ジエン−３，１７−ジオン１．０２７ｇを含有させた溶液に四臭化炭素１．０９４ｇ及びトリフェニルホスフィン０．８６５ｇを数回に分けて添加し、約２６℃において１時間撹拌を実施する。クロマトグラフィーによって精製した後に、所期の化合物０．８１６ｇが得られた。
ＩＲ（ＣＨＣｌ3）
Ｃ＝Ｏ：１７３６ｃｍ-1；ジエノン：１６５７及び１６０４ｃｍ-1
【００６０】
工程Ｂ：Ｆ２＝(ＣＯ2Ｅｔ)2ＣＨ−ＮＨＣＯ2ＣＨ2Ｐｈの導入
［４−［３，１７−ジオキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−イル］ブチル］−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパン二酸ジエチル
５０％水素化ナトリウム７７ｍｇ及び［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパン二酸ジエチル０．５ｇをＴＨＦ４ミリリットル及びＤＭＦ０．５ミリリットル中に含有させた溶液に、アセトニトリル１ミリリットル中の前の工程で得られた生成物４３９ｍｇ及びヨウ化ナトリウム１．５当量を添加し、次いでこの反応媒体を２時間還流する。クロマトグラフィーによって精製した後に、所期の化合物０．３０２ｇが得られた。
ＩＲ（ＣＨＣｌ3）
＝Ｃ−ＮＨ：３４１７ｃｍ-1；Ｃ＝Ｏ：１７５６、１７３６、１７２１、１６５６ｃｍ-1；Ｃ＝Ｃ＋芳香族＋アミドII：１６０４、１４９７ｃｍ-1
【００６１】
工程Ｃ：鹸化／脱カルボキシル
３，１７−ジオキソ−α−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸エチル
前の工程で得られた生成物０．２９ｇをエタノール５ミリリットル中に含有させた溶液に２Ｎ苛性ソーダ０．５ミリリットルを添加し、次いで３時間撹拌し、次いで２Ｎ塩酸０．５ミリリットルで酸性にする。ジオキサン１０ミリリットルを添加し、この反応媒体を２時間１００℃にし、クロマトグラフィーにかけてシクロヘキサン／酢酸エチルの混合物（６／４）で溶出させることによって精製する。純粋な所期の化合物１５５ｍｇが得られた。
ＩＲ（ＣＨＣｌ3）
−ＮＨ：３４３４ｃｍ-1；Ｃ＝Ｏ：１７３５、１７２２ｃｍ-1；ジエノンＣ＝Ｏ：１６５７ｃｍ-1；Ｃ＝Ｃ：１６０３ｃｍ-1；アミドII＋芳香族：１５０９ｃｍ-1
【００６２】
工程Ｄ：Ｇ−ＮＨ2の導入
３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−オキソ−α−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸エチル
前の工程で得られた生成物０．９５６ｇをエタノール１０ミリリットル中に含有させた溶液に、２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン臭化水素酸塩０．３８６ｇを添加し、この反応媒体を３時間還流し、クロマトグラフィーにかけてＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨの混合物（９０／１０）で溶出させることによって精製する。粗製の所期の化合物１．０６ｇが得られた。
ＩＲ（ＣＨＣｌ3）
ＮＨ：３４４６ｃｍ-1；Ｃ＝Ｏ：１７３４ｃｍ-1；Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝Ｃ、アミドII：１６７４、１６２９、１５６５、１５０９、１４８８ｃｍ-1
【００６３】
例２：３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−オキソ−α−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸
【００６４】
方法（ａ）
例１の工程Ｄにおいて得られた生成物０．９０４ｇをエタノール５ミリリットル中に含有させた溶液に２Ｎ苛性ソーダ１．４ミリリットルを添加し、周囲温度において１時間撹拌する。２Ｎ塩酸１．４ミリリットルを添加し、この反応媒体をクロマトグラフィーにかけてＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ／ＮＨ4ＯＨの混合物（８０／２０／２）で溶出させることによって精製して、所期の化合物０．５２０ｇがΔＥ／ΔＺの混合物（７０／３０）の形で得られた。
【００６５】
方法（ｂ）
工程Ａ：鹸化／脱カルボキシル
例１の工程Ｃで得られたエステル３ｇをエタノール６０ミリリットル中に含有させた溶液に２Ｎ苛性ソーダ５ミリリットルを添加し、２０℃において１時間撹拌し、次いで２Ｎ塩酸５ミリリットルで酸性にする。ジオキサン２０ミリリットルを添加し、この反応媒体を３時間１２０℃にし、溶媒を蒸発させ、この反応媒体をエタノール６０ミリリットル中に取り出し、２Ｎ苛性ソーダ５ミリリットルを添加する。溶媒を蒸発させた後に、粗製生成物をクロマトグラフィーにかけてＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ／ＮＨ4ＯＨの混合物（８／２／０．４）で溶出させることによって精製する。所期の化合物１．０６ｇが得られた。
【００６６】
工程Ｂ：Ｇ−ＮＨ2の導入
前の工程で得られた生成物２６６ｍｇ及び２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン臭化水素酸塩１３５ｍｇから出発して例１の工程Ｄと同様に操作を実施する。所期の化合物１０９ｍｇが得られた。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）
０．９１及び１．０４：１８−Ｍｅ；３．７７：ＣＨ2−Ｎ；４．１９：ＣＯ−ＣＨ−ＮＨ；５．０９：ＯＣＨ2Ｐｈ；５．７５及び６．５４：Ｈ４、３５％：６５％の分割（多い方がΔＥ）；７．３４：フェニル；５．７８、６．０７〜６．５４；１１．６５〜１１．９８：移動性Ｈ
【００６７】
例３：１７−ケト官能基の還元
３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−ヒドロキシ−α−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］エストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸
例２の生成物０．２０８ｇ、ホウ水素化ナトリウム１４ｍｇ及びエタノール３．５ミリリットルから成る混合物を周囲温度において１時間撹拌し、１Ｎ塩酸３．５ミリリットルを添加し、１０分間撹拌し、溶媒を蒸発させ、得られた生成物をクロマトグラフィーにかけてＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ／ＮＨ4ＯＨの混合物（８０／２０／２）で溶出させることによって精製する。所期の化合物０．１４５ｇが得られた。
ＭＳ：６１６-＝[Ｍ−Ｈ]-；５０８-＝[Ｍ−ＯＣＨ2Ｐｈ]；６１８+＝ＭＨ+；６４０+＝ＭＮａ+
【００６８】
例４：３−［（アミノイミノメチル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ペンタン酸
【００６９】
工程Ａ：酸化
３，１７−ジオキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ペンタン酸
アセトン１４０ミリリットル中の１１β−５−（ヒドロキシペンチル）エストラ−４，９−ジエン−３，１７−ジオン２．９ｇにハイルブロン−ジョーンズ（Heilbron-Jones）試薬７ミリリットル（ＣｒＯ3１．８９ｇ）を０〜−４℃の範囲の温度において２２分かけて添加し、０℃において５分間撹拌し、次いでメタノール２．５ミリリットル、炭酸バリウム２２ｇ及び水２２０ミリリットルを添加し、次いでこの反応媒体を周囲温度において１時間激しく撹拌する。分離した後に、水性相をジクロルメタンで抽出し、次いで洗浄し、乾燥させ、減圧下で蒸発させて、所期の化合物３．４ｇが得られた。
Ｒｆ：（ジクロルメタン／アセトン、比８０／２０）＝０．１５
ＩＲ（ＣＨＣｌ3）
Ｃ＝Ｏ：１７３６、１７０９、１６５７；Ｃ＝Ｃ：１６０２ｃｍ-1
【００７０】
工程Ｂ：Ｇ−ＮＨ2の導入
３−［（アミノイミノメチル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ペンタン酸
前の工程で得られた酸４８０ｍｇ、アミノグアニジン塩酸塩２８５ｍｇ及びエタノール１０ミリリットルから成る混合物を２時間還流し、次いで粗製生成物が得られるまで減圧下で蒸発させ、これをクロマトグラフィーにかけてＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ／ＮＨ4ＯＨの混合物（４０／１０／２）で溶出させることによって精製し、これを次いで凍結乾燥させる。所期の化合物１７０ｍｇがΔＺ／ΔＥの混合物（４０／６０）の形で得られた。
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ、３００ＭＨｚ）
０．９６：１８Ｍｅ；５．８２（ｓ）：Ｈ４、ΔＥ；６．６５（ｓ）：Ｈ４、ΔＺ；６．８〜７．５：幅広移動性３Ｈ吸収
【００７１】
例５：３−［（アミノイミノメチル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸
エタノール１０ミリリットル中のアミノグアニジン塩酸塩２２０ｍｇ及び３，１７−ジオキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸３８０ｍｇから出発して例４の工程Ｂにおけるように操作を実施する。ΔＥ異性体に相当する白色不溶性生成物５０ｍｇ及びΔＺ異性体に相当するベージュ色の凍結乾燥物１３０ｍｇが得られた。
ＮＭＲ（ΔＺ異性体）（ＤＭＳＯ、３００ＭＨｚ）
１８Ｍｅ：１．００（ｓ）；Ｈ４：６．７３（ｓ）；移動性Ｈ：６．８９、８．１７
ＮＭＲ（ΔＥ異性体）（ＤＭＳＯ、３００ＭＨｚ）
１８−Ｍｅ：０．９７（ｓ）；Ｈ４：５．８２（ｓ）；移動性Ｈ：６．５〜７．６
【００７２】
例６：３−［（１，４，５，６−テトラヒドロ−２−ピリミジニル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸
エタノール１２．５ミリリットル中の２−ヒドラゾノ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン臭化水素酸塩０．４５３ｇ及び３，１７−ジオキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸０．５９７ｇから出発して例４の工程Ｂにおけるように操作を実施する。ΔＥ／ΔＺの割合が異なる３つの画分（ａ）６５ｍｇ、（ｂ）９９ｍｇ及び（ｃ）６５ｍｇが単離された。
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、３００ＭＨｚ）
画分ｂ：ΔＥ／ΔＺの混合物（９０／１０）
１．０４（ｓ）、１．０６（ｓ）：１８−Ｍｅ；３．４２（ｍ）：ＣＨ2−Ｎ；５．７６（ｓ）：Ｈ４、ΔＥ；６．６７（ｓ）：Ｈ４、ΔＺ；６．６４（ｓ）、１２．４０（ｍ）：移動性Ｈ；１．２０〜３．２０（ｍ）：ステロイド骨格
画分ｃ：ΔＥ／ΔＺの混合物（６Ｏ／４０）
１．０４（ｓ）、１．０６（ｓ）：１８−Ｍｅ；３．４２（ｍ）：ＣＨ2Ｎ；５．７７（ｓ）、６．６６（マスク）：Ｈ４；６．６６（ｓ）：移動性Ｈ；１．２４〜３．０５（ｍ）：ステロイド骨格；１１．８（ｍ）：移動性Ｈ
【００７３】
例７：３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸
エタノール１２．５ミリリットル中の２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン臭化水素酸塩０．３５３ｇ及び３，１７−ジオキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸０．５ｇから出発して例４の工程Ｂにおけるように操作を実施する。純粋な所期の化合物（ΔＥ／ΔＺの混合物（８５／１５））２２０ｍｇが得られた。
ＩＲ（ＣＨＣｌ3）
Ｃ＝Ｏ：１７３３ｃｍ-1；Ｃ＝Ｏ及び／又はＣ＝Ｎ：１６６１ｃｍ-1；Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝Ｃ：１６１７、１５９７、１５４６ｃｍ-1
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ、３００ＭＨｚ）
０．９７（ｓ）：１８−Ｍｅ；３．４０（ｂｓ）：ＣＨ2−Ｎ；５．８０（ｓ）：Ｈ４：ΔＥ；６．６０（ｓ）：Ｈ４、ΔＺ；６．５３（ｍ）、６．８６（ｍ）：移動性Ｈ；１．１６〜３．００：ステロイド骨格
【００７４】
例８：４−クロル−３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸
【００７５】
工程Ａ：４−クロル−３，１７−ジオキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸
ジメチルホルムアミド１０ミリリットル中の３，１７−ジオキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸８２９ｍｇに窒素雰囲気下で約５４℃においてＮ−クロルスクシンイミド３８２ｍｇを添加し、約６１℃において１０分間撹拌し、次いで冷ました後に塩化ナトリウムの水溶液を注ぎ、次いで抽出し、洗浄し、減圧下で蒸発させて粗製生成物を得て、これをクロマトグラフィーにかけてジクロルメタン／アセトンの混合物（８／２）で溶出させることによって精製して、所期の化合物３８７ｍｇが得られた。
ＩＲ（ＣＨＣｌ3）
Ｃ＝Ｏ：１７３６、１７１２、１６７３ｃｍ-1；Ｃ＝Ｃ：１５８７、１５５１ｃｍ-1
【００７６】
工程Ｂ：縮合
４−クロル−３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸
前の工程で調製された塩素化生成物１５９ｍｇと２−ヒドラジノ−２−イミダゾリン臭化水素酸塩１３７ｍｇとをエタノール４ミリリットル中で混合する。処理及び精製の後に、所期の化合物１８７ｍｇが得られた。
ＩＲ（ＣＨＣｌ3）
＝Ｃ−ＮＨ：３４４９ｃｍ-1＋一般的吸収；Ｃ＝Ｏ：１７３５ｃｍ-1；Ｃ＝Ｎ＋Ｃ＝Ｃ＋ＣＯ2-：１６７２、１６２０、１６０４、１５４６、１５１３ｃｍ-1
【００７７】
例９：３−［（アミノイミノメチル）ヒドラゾノ］−４−クロル−１７−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−ヘキサン酸
例８の工程Ａで調製された塩素化生成物３８０ｍｇ及びアミノグアニジン塩酸塩２０１ｍｇから出発して例８の工程Ｂにおけるように操作を実施する。所期の化合物７７ｍｇが得られた。
ＩＲ（Nujol）
ＯＨ／ＮＨ吸収；Ｃ＝Ｏ：１７３１ｃｍ−1；共役系＋ＮＨ2：１６７６、１６０４、１５３２ｃｍ-1
【００７８】
例１０：６−［３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−メチレンエストラ−４，９−ジエン−１１β−イル］−２−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキサン酸
【００７９】
工程Ａ：ジヒドロピランによるアルコールの保護
１１β−［４−［（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ］ブチル］エストラ−４，９−ジエン−３，１７−ジオン
１１β−（４−ヒドロキシブチル）エストラ−４，９−ジエン−３，１７−オン３．４２ｇ、エーテル２０ミリリットル、ジヒドロピラン９ミリリットル及びｐ−トルエンスルホン酸触媒量を含有させた溶液を３時間撹拌し、次いでトリエチルアミン１０ｃｍ3を添加し、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をクロマトグラフィーにかけてジクロルメタン／アセトンの混合物（９０／１０）で溶出させることによって精製する。純粋な所期の化合物（Ｒｆ＝０．４２）３．７０ｇが得られた。
ＩＲ（ＣＨＣｌ3）
Ｃ＝Ｏ：１７３６；Ｃ＝Ｃ：１６５７ｃｍ-1；１６０３ｃｍ-1
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）
１．０８（ｓ）：１８Ｍｅ；３．０８（ｐｐ）：Ｈ１１；３．３（ｄｔ）、３．７３（ｍ）：ＣＨ2Ｏ；３．５１（ｍ）〜３．８４（ｍ）：ＴＨＰのＣＨ2Ｏ；４．５５：ＴＨＰの角のＨ；５．７１（ｓ）：Ｈ４
【００８０】
工程Ｂ：３位のケトンのメチルオキシムの形での保護及び第１級ＯＨの脱保護
１１β−（４−ヒドロキシブチル）エストラ−４，９−ジエン−３，１７−オンの３−（Ｏ−メチルオキシム）
前の工程で調製された誘導体０．９８ｇ、メチルヒドロキシルアミン塩酸塩０．２１５ｇ、メタノール１０ミリリットル、酢酸ナトリウム０．１６０ｇ及び水２ミリリットルから成る混合物を周囲温度において１８時間撹拌する。次いでこの反応混合物を水５０ミリリットルで希釈し、次いでジクロルメタンで抽出する。黄色の樹脂０．８７４ｇが回収され、これをクロマトグラフィーにかけてシクロヘキサン／酢酸エチルの混合物（７／３）で溶出させることによって精製する。
Ｒｆ：ΔＥ異性体０．１７及びΔＺ異性体０．１２
【００８１】
次のものが回収された。
（ａ）Ｒｆ＝０．１７の生成物。ｍ＝０．３８２ｇ。
ＩＲ（ＣＨＣｌ3）
ＯＨ：３６２４ｃｍ-1
Ｃ＝Ｏ：１７３４ｃｍ-1、１７ケト
Ｃ＝Ｎ、Ｃ＝Ｃ：１６０５ｃｍ-1
ＮＭＲ：ΔＥ異性体（ＣＤＣｌ3）
１．０６（ｓ）：１８Ｍｅ；３．６４（ｔ）：ＣＨ2Ｏ；２．９９：Ｈ１１；３．８８（ｓ）：ＯＭｅ；５．８０（ｓ）：Ｈ４、ΔＥ
（ｂ）Ｒｆ＝０．１２の生成物。ｍ＝０．２１１ｇ。
ＩＲ（ＣＨＣｌ3）
ＯＨ：３６２４ｃｍ-1
Ｃ＝Ｏ：１７３４ｃｍ-1、１７ケト
Ｃ＝Ｃ、Ｃ＝Ｎ：１６０３ｃｍ-1
ＮＭＲ：ΔＺ異性体（ＣＤＣｌ3）
１．０６（ｓ）：１８Ｍｅ；３．０１（ｂｑ）：Ｈ１１；３．６４（ｔ）：ＣＨ2Ｏ；３．８７（ｓ）：ＯＭｅ；６．３６（ｓ）：Ｈ４、ΔＺ
【００８２】
工程Ｃ：ウィッティヒ反応：１７位におけるメチレン基の導入
１１β−（４−ヒドロキシブチル）−１７−メチレンエストラ−４，９−ジエン−３−オンの３−（Ｏ−メチルオキシム）
臭化トリフェニルメチルホスホニウム０．６３５ｇ及びカリウムｔ−ブチラート０．１９９ｇから成る混合物を減圧下で１００℃において４０分間撹拌する。周囲温度まで冷まして窒素下に置いた後に、テトラヒドロフラン５ミリリットル及び前の工程で調製されたステロイド（ΔＥ）０．１６２ｇを導入する。この溶液を３時間還流し、次いで冷まし、塩化アンモニウム溶液で加水分解し、抽出する。黄色樹脂０．４８０ｇが得られ、これをクロマトグラフィーにかけてシクロヘキサン／酢酸エチルの混合物（７／３）で溶出させることによって精製する（Ｒｆ＝０．１０）。無色のオイル０．１３０ｇが回収された。
ＩＲ（ＣＨＣｌ3）
ＯＨ：３６２４ｃｍ-1
Ｃ＝Ｃ、Ｃ＝Ｎ：１６５４ｃｍ-1
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）
０．９６（ｓ）：１８Ｍｅ；３．６５（ｔ）：ＣＨ2Ｏ；３．８７（ｓ）：ＯＭｅ；〜４．６０：ＣＨ2＝Ｃ；５．７７（ｓ）：Ｈ４
【００８３】
工程Ｄ：３位のケトンの脱保護
１１β−（４−ヒドロキシブチル）−１７−メチレンエストラ−４，９−ジエン−３−オン
前の工程で調製された生成物０．１８８ｇ、アセトン２ミリリットル及び6Ｎ塩酸０．５ミリリットルを含有させた溶液を周囲温度において２４時間撹拌する。この反応媒体を水で希釈し、次いでジクロルメタンで抽出する。得られた樹脂０．１７４ｇをクロマトグラフィーにかけてシクロヘキサン／酢酸エチルの混合物（７／３）で溶出させることによって精製する。純粋な黄色樹脂が回収された。ｍ＝０．０７６ｇ。（Ｒｆ＝０．１０）
ＩＲ（ＣＨＣｌ3）
ＯＨ：３６２５ｃｍ-1
Ｃ＝Ｏ：１６５４ｃｍ-1
Ｃ＝Ｃ：１６０３ｃｍ-1
【００８４】
工程Ｅ：臭素化及び次いで鎖の縮合
［４−（１７−メチレン−３−オキソエストラ−４，９−ジエン−１１β−イル）ブチル］［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパン二酸ジエチル
前の工程で調製されたステロイド０．４７０ｇ、ジクロルメタン５ミリリットル及び四臭化水素０．６８５ｇを含有させた溶液にトリフェニルホスフィン０．５４３ｇを少量ずつ添加し、この溶液を３０分間撹拌し、濃縮乾固させ、次いでシリカ上で濾過することによって精製する。黄色樹脂０．３４０ｇが得られた。これは臭素化誘導体に相当する。
【００８５】
ＤＭＦ０．５ミリリットル及び無水ＴＨＦ２．５ミリリットル中に油中５０％水素化ナトリウム０．１ｇを含有させた懸濁液に、ＴＨＦ１ｃｍ3中に［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］プロパン二酸ジエチル０．６４０ｇを含有させた溶液をゆっくり導入する。３０分後に、上で得られた臭素化誘導体をＴＨＦ１ミリリットル中に含有させた溶液を導入する。次いでヨウ化ナトリウム０．３１０ｇ及びアセトニトリル１ミリリットルを添加し、この反応媒体を３時間還流する。この反応混合物を氷冷したリン酸一ナトリウム溶液で加水分解し、次いでジクロルメタンで抽出する。得られた黄色樹脂１．２ｇをシリカを用いたクロマトグラフィーにかけてジクロルメタン／アセトンの混合物（９７／３）で溶出させることによって精製する。黄色オイル０．１６４ｇが回収された。
ＩＲ（ＣＤＣｌ3）
ＯＨ：殆ど又は全くなし
ＮＨ：３４１８ｃｍ-1
Ｃ＝Ｏ：１７５６（sh）、１７３６（max）、１７２４（sh）、１６５４、共役ケトン、
Ｃ＝Ｃ：１６０３（max）及び１５８９（sh）、
アミドII：１４９８
【００８６】
工程Ｆ：鹸化、脱カルボキシル及び続いてのイミノグアニジンの生成
６−［３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−メチレンエストラ−４，９−ジエン−１１β−イル］−２−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキサン酸エチル
【００８７】
（ａ）鹸化−脱カルボキシル
前の工程で調製された誘導体０．１４８ｇ、エタノール３ミリリットル及び２Ｎ苛性ソーダ０．２３ミリリットルを含有させた溶液を周囲温度において１時間撹拌し、次いで２Ｎ塩酸０．２３ミリリットルで酸性にし、次いで１０分間撹拌し、濃縮乾固させる。
Ｒｆ＝０．５２（溶離剤はジクロルメタン／メタノール／アンモニア（８０／２０／４））
【００８８】
（ｂ）イミノグアニジンの生成：Ｇ−ＮＨ2の導入
上で得られた粗製生成物を２−イミダゾリジノンヒドラゾン０．１ｇ及びｐ−トルエンスルホン酸触媒量の存在下のイソプロパノール３ミリリットル中に取り出す。この反応媒体を１時間還流し、次いで濃縮乾固させ、クロマトグラフィーにかけてジクロルメタン／メタノール／アンモニア（８０／２０／４）で溶出させることによって精製する。所期の化合物０．０８９ｇが回収された。
ＩＲ（ＣＨＣｌ3）
ＮＨ：３４４６ｃｍ-1、ジエノンなし
【００８９】
工程Ｇ：エチルエステルの鹸化
６−［３−［（４，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ヒドラゾノ］−１７−メチレンエストラ−４，９−ジエン−１１β−イル］−２−［［（フェニルメトキシ）カルボニル］アミノ］ヘキサン酸
前の工程で調製されたエチルエステル８６ｍｇ、エタノール２ミリリットル及び２Ｎ苛性ソーダ０．３ミリリットルを含有させた溶液を周囲温度において１時間撹拌する。１Ｎ塩酸０．３ミリリットルを添加することによってこの溶液を中和し、次いで２０分間撹拌し、次いで濃縮乾固させる。得られた粗製生成物をシリカを用いたクロマトグラフィーにかけてジクロルメタン／メタノール／アンモニアの混合物（８０／２０／２）で溶出させることによって精製する。所期の化合物４７ｍｇが得られた。
ＭＳ：分子量構造６１３
６１４+＝[Ｍ＋Ｈ]+、６１２-＝[Ｍ−Ｈ]-、 ６３６+＝[Ｍ＋Ｎａ]+
【００９０】
製薬組成物
次の処方に対応する錠剤：
・例２の生成物：        ５０ｍｇ
・賦形剤：      錠剤が１２０ｍｇになるのに充分な量
（賦形剤＝タルク、澱粉、ステアリン酸マグネシウム）
【００９１】
本発明の化合物の薬理学的研究
【００９２】
１．本発明の化合物によるビトロネクチン／ビトロネクチン受容体（αVβ3）の結合置き換えの研究
【００９３】
プロトコル
９６個のウェル（孔）を有するMaxiSorpプレートを、下記のコーティング用緩衝液中に２μｇ／ミリリットルの濃度に希釈したヒトビトロネクチン（Yatohgoら、Cell Structure and Fraction、13：281-292（1988）を参照されたい）１００マイクロリットルで４℃において一晩コーティングする。次の日に、ウェルを空にし、次いでリガンド（ビトロネクチン）を穏やかな撹拌下で周囲温度において１時間固着させる（固着用緩衝液については下記を参照せよ）。これらのウェルを６回洗浄し（洗浄用緩衝液については下記を参照せよ）、次いで各ウェルに次のものをこの順序で添加する：
・インキュベーション緩衝液４０マイクロリットル
・希釈された試験物質（この物質は、ＤＭＳＯ／Ｈ2Ｏの５０／５０混合物中に希釈した）１０マイクロリットル
・ヒトαVβ3受容体｛Pytelら、Methods Enzymol、（1987）、144：475を参照されたい｝（受容体のバッチに応じて及びリガンドに応じて適合させるためにインキュベーション緩衝液中に希釈）２０マイクロリットル。
このリガンド、ヒトαVβ3受容体及び研究すべき物質を周囲温度において穏やかな撹拌下で３時間インキュベートする。
【００９４】
再びウェルを６回洗浄し、次いでペルオキシダーゼと対にした抗受容体４Ｂ１２−ＨＲＰ抗体１００マイクロリットルの存在下で周囲温度において穏やかな撹拌下で２時間インキュベートする（４Ｂ１２−ＨＲＰ抗体をインキュベーション緩衝液中に希釈する。この希釈は、受容体のバッチに応じて適合するようにする。）。
【００９５】
次いでウェルを６回洗浄し、次いでペルオキシダーゼ可視化（顕色）キット（TMP Microwell Peroxidase Substrate System Kirkegaard：Ref. cat. 50-76-00）を用いてリガンド−受容体結合の測定を実施する。
【００９６】
このキットは、基質のフラスコＡ（０．４ｇ／リットル３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）及びフラスコＢ（クエン酸塩／クエン酸緩衝液中０．０２％のＨ2Ｏ2）を含有する。即時的に１容量のＡを１容量のＢと混合し、次いでこの反応混合物を１００マイクロリットル／ウェルの割合で分配する。ビトロネクチン／αVβ3について酵素反応を１２分間進展させ、次いで１Ｍリン酸１００マイクロリットルを添加することによってその進展を停止させる。４５０ｎｍにおいて光学密度を測定する。
【００９７】
各種緩衝液
・コーティング用緩衝液：０．５Ｍ炭酸塩、ＮａＯＨ、ｐＨ９．６
・固着用緩衝液：０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳ（ｐＨ＝７．４）
・洗浄用緩衝液：０．０５％Tween 20含有ＰＢＳ（ｐＨ７．４）
・インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス、ｐＨ７．４；０．５％のＢＳＡ；０．０５％のTween 20；１ｍＭのＭｎＣｌ2；５０μＭのＣａＣｌ2；５０μＭのＭｇＣｌ2；１００ｍＭのＮａＣｌ。
【００９８】
結果の表示
それぞれの試験物質の濃度の対数の関数としてのヒトビトロネクチンの結合率のカーブをプロットする。
各物質について、式ＩＣ50＝（Ｂ0＋Ｂmin）／２に従ってＩＣ50を決定する。ここで、Ｂ0は物質が何ら存在しない下での最大結合であり、Ｂminは最も高い濃度で物質が存在する下での最少結合である。
【００９９】
結果：
【表１】
0004750281.tif 000016