(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
プラットホームを備え、
前記プラットホームは基板と１つまたは複数のウェルをもち、
各ウェルが、ひとつ以上の周囲の疎水性壁面領域、および、親水性中央基底領域、を有する容器であり、
各ウェルの容積が０．５μＬから１００μＬであって、水性試料を前記親水性中央領域上で濃縮するように構成される
ことを特徴とする、質量分析用試料プレート。
【請求項２】
プラットホームを備え、
前記プラットホームは基板と１つまたは複数のウェルをもち、
各ウェルが、ひとつ以上の周囲の疎水性壁面領域、および、親水性中央基底領域、を有する容器であり、
各ウェルの容積が１００μＬであって、水性試料を前記親水性中央基底領域上で濃縮するように構成される
ことを特徴とする、質量分析用試料プレート。
【請求項３】
前記周囲の疎水性壁面領域が、Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）、ポリ（ジメチルシロキサン）、および類似物からなる群から選択される材料からなる請求項１もしくは２に記載の試料プレート。
【請求項４】
前記親水性中央基底領域が、ポリスチレン、および類似物からなる群から選択される材料からなる請求項１もしくは２に記載の試料プレート。
【請求項５】
前記基板が、プラスチック、ＰＴＦＥ、Ｔｅｆｌｏｎ、ポリプロピレン、プラスチック、ステンレス鋼、アルミニウム、ガラス、シリコン、および類似物から選択される材料からなる請求項１もしくは２に記載の試料プレート。
【請求項６】
（ａ）プラットホームを備え、前記プラットホームは基板と１つまたは複数のウェルをもち、各ウェルはひとつ以上の周囲の疎水性壁面領域と親水性中央基底領域とをもつ容器であり、各ウェルの容積が０．５μＬから１００μＬであって、水性試料を前記親水性中央基底領域上で濃縮するように構成される、質量分析用試料プレートを供用すること；
（ｂ）前記試料プレート内のウェルに液体試料物質を付けること；および
（ｃ）前記ウェル内で試料物質が濃縮されて残されるように前記試料を乾燥させること；
を含む質量分析用試料調製方法。
【請求項７】
（ａ）プラットホームを備え、前記プラットホームは基板と１つまたは複数のウェルをもち、各ウェルはひとつ以上の周囲の疎水性壁面領域と親水性中央基底領域とをもつ容器であり、各ウェルの容積が１００μＬであって、水性試料を前記親水性中央基底領域上で濃縮するように構成される、質量分析用試料プレートを供用すること；
（ｂ）前記試料プレート内のウェルに液体試料物質を付けること；および
（ｃ）前記ウェル内で試料物質が濃縮されて残されるように前記試料を乾燥させること；
を含む質量分析用試料調製方法。
【請求項８】
前記周囲の疎水性壁面領域が、Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）、ポリ（ジメチルシロキサン）、および類似物からなる群から選択される材料からなる請求項６もしくは７に記載の方法。
【請求項９】
前記親水性中央基底領域が、ポリスチレン、および類似物からなる群から選択される材料からなる請求項６もしくは７に記載の方法。
【請求項１０】
前記基板が、プラスチック、ポリプロピレン、Ｔｅｆｌｏｎ、ステンレス鋼、アルミニウム、ガラス、シリコンなどから選択される材料からなる請求項６もしくは７に記載の方法。
【請求項１１】
（ｄ）前記試料に溶剤の液滴を付けること；および
（ｅ）（ｄ）の前記試料を、スタティックナノスプレＭＳ分析のために、導電性被覆された、引き伸ばされた先端部をもつホウ珪酸ガラスキャピラリ、または、微細加工されたノズルへ移すこと；
をさらに含む請求項６もしくは７に記載の方法。
【請求項１２】
前記溶剤が有機成分と酸成分を含み、前記有機成分が前記溶剤の約４０％以上を占め、前記酸が前記溶剤の約０．１％から１０％の間であり、残りの成分が水である請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
（ｄ）前記試料に溶剤の液滴を付けること；
（ｅ）（ｄ）の前記試料をＭＡＬＤＩターゲットプレート上に移すこと；および
（ｆ）ＭＡＬＤＩ  ＭＳ分析のために、ＭＡＬＤＩマトリックスと（ｅ）の混合物を作ること；
をさらに含む請求項６もしくは７に記載の方法。
【請求項１４】
前記溶剤が有機成分と酸成分を含み、前記有機成分が前記溶剤の約４０％以上を占め、前記酸が前記溶剤の約０．１％から１０％の間であり、残りの成分が水である請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
（ｄ）前記試料に溶剤の液滴を付けること；および
（ｅ）前記液滴を試料バイアルに移すこと；
をさらに含む請求項６もしくは７に記載の方法。
【請求項１６】
前記溶剤が有機成分と酸成分を含み、前記有機成分が前記溶剤の約４０％以上を占め、前記酸が前記溶剤の約０．１％から１０％の間であり、残りの成分が水である請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００３年２月１０日に出願された米国特許仮出願第４４６２３６号の優先権と特典を主張する。
【０００２】
本発明は、質量分析法用の試料を調製するために使用される試料調製プレートに関する。特に、本発明は、試料を濃縮し、また、試料から汚染物質を除去するために使用され、表面での小さな液滴の操作が容易であり、試料の損失が最少化された試料プレートに関する。
【背景技術】
【０００３】
小さな分子ならびに、タンパク質およびオリゴヌクレオチドのような大きな生体分子などの検体の質量分析には、試料の調製を伴うことが多い。分析の前に試料が清浄であるほど、よりよい分析結果が得られることが多いということは自明である。
【０００４】
ＭＡＬＤＩまたはスタティックナノスプレのようなイオン化法を用いる質量分析計に試料を導入する前の、小さい容積、すなわち、＜１００μＬで質量分析せざるをえない試料の試料精製は、現在、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのＺｉｐＴｉｐｓ（登録商標）ピペッカラムを用いて実施されることが多い。別法として、クロマトグラフィの固定相が詰め込まれた、ゲルローダーチップ（ｔｉｐ）あるいは溶融シリカの短い切片から調製されたミクロカラムが試料を精製するために用いられている。スタティックナノスプレでは、目標は、小さな初期容積（約１〜５μＬ）の試料から、ＭＳ分析の時間が長くなるように、小さな流量（２０〜４０ナノリットル／分）で、エレクトロスプレオン化法により試料を導入することである。このことは、導電性皮膜で被覆された、引き伸ばされたホウ珪酸ガラスの先端部（ｔｉｐ）であり得るナノスプレエミッタに試料を入れることにより、あるいは、微細加工ノズルアレイの「ノズル」により、実施されている。質量分析の前に汚染物質を除去するために、ＺｉｐＴｉｐｓカラムまたは他の調製されたミクロカラムが、現在、使用されている。
【０００５】
ＺｉｐＴｉｐｓカラムまたはミクロカラムを試料調製に用いる分野における使用者が経験する１つの問題は、回収の悪さである（特に、バッファ、界面活性剤、塩、および、カオトロープ（例えば、トリス、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、尿素など）の存在する場合）。例えば、分離されたタンパク質のゲル内消化の後の１次元または２次元ゲル（ほぼ０．１パーセントのＳＤＳを含む）から抽出されたペプチドは、ＺｉｐＴｉｐｓカラムまたはミクロカラムのいずれを用いても回収が少ない傾向にある。さらに、ＺｉｐＴｉｐｓカラムの充填床を通しての試料の吸引では、しばしば試料の損失が生じる。
【０００６】
さらに、試料の濃縮（＞１．５μＬ）にＺｉｐＴｉｐｓピペットカラムを使用することには、大幅な制限がある。ＺｉｐＴｉｐｓカラムについて明らかにされた制限は、ミクロカラムでの調製に対しても同様に当てはまる。ＺｉｐＴｉｐｓカラムまたはミクロカラムを用いる試料の濃縮を実施するためには、これらの器具の１つに試料を通す複数のステップが実施されなければならない。この繰返しが行われるので、累積により、より多くの試料が失われ、回収が少ない結果となり得る。さらに、ＺｉｐＴｉｐｓカラムまたはミクロカラムを通して試料を吸引すると充填床に空気が入り込むことが多く、関心のある検体の保持／回収が劣る結果となる。
【０００７】
この分野における使用者が直面するさらなる問題は、試料の損失を伴いながら、ＺｉｐＴｉｐｓカラムまたはミクロカラムを通してマイクロリットルの容積を操作する際の困難さである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
現在、試料から汚染物質を効果的に除去し、試料を濃縮し、また、小さい容積の液体を容易に操作できる試料調製器具が求められている。本発明は、前記の問題を対象とし、従来技術に存在する問題を効果的に解消する解決法を提供する。
【０００９】
本発明は、質量分析用の試料調製に用いられる試料調製プレートに関する。特に、本発明は、試料を濃縮し、また試料から汚染物質を除去するために使用され、表面での小さな液滴の操作が容易であり、試料の損失が最少化された試料プレートに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
一実施形態において、プラットホーム（ｐｌａｔｆｏｒｍ）を備える、質量分析用試料プレートが開示される。この実施形態においては、プラットホームは、平坦な基板からなる。基板は、疎水性領域と親水性領域を備える。親水性領域は、液体試料の液滴を受け取るターゲット領域である。
【００１１】
一実施形態において、プラットホームを備える、質量分析用試料プレートが開示される。この実施形態において、プラットホームは１つまたは複数のウェルがそこに配置されている基板からなる。これらのウェルの各々は疎水性壁面領域と親水性基底領域をもつことが開示される。これらのウェルは試料を受け入れるためにある。
【００１２】
別の実施形態において、質量分析用の試料の調製方法が開示される。この方法は、本発明の試料プレートを供用することを含む。次に、液体試料が、疎水性および親水性領域を備える平坦な基板にある親水性の場所に付けられる。別法として、液体試料が、複数のウェルを備える試料プレート内のウェルに付けられる。次に、試料物質が疎水性ウェル内で濃縮されて残されるように、試料は乾燥される。
【００１３】
この実施形態の特定の態様において、溶剤の液滴が試料プレートに添加され（溶剤は乾燥試料に添加される）、次に、スタティックナノスプレ分析のために、導電性被覆された、引き伸ばされた先端部をもつホウ珪酸ガラスキャピラリに移される。
【００１４】
この実施形態の別の特定の態様において、溶剤の液滴が試料プレート上にある乾燥試料に加えられる。次に、この液体試料はＭＡＬＤＩターゲットプレート上に移される。一旦ターゲットプレート上に移されると、次に、ＭＡＬＤＩマトリックスがＭＡＬＤＩ  ＭＳ分析のための準備として添加される。これは、ＵＶ吸収分子が表面に共有結合していて、基板に一体化された部分である場合にも適用される。別法として、多孔性または非多孔性シリコン基板がマトリックスである場合には、ＤＩＯＳ（Ｄｉｒｅｃｔ  Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｎ  Ｓｉｌｉｃｏｎ、シリコン上の直接イオン化）の手順を用いることができる。
【００１５】
この実施形態のさらに別の態様において、溶剤の液滴が、乾燥試料に付けられる。次に、この液体試料は、さらなる分析のために試料バイアルに移される。さらなる分析には、これに限定されないが、試料にＬＣ／ＭＳを行うことが含まれ得る。さらに、試料を、ナノスプレ、自動ナノスプレ、ＭＡＬＤＩなどに回してもよい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
（図面の簡単な説明）
図１は、（ａ）本発明の一実施形態を示す図であり、（ｂ）個々のウェルを示す図である。
図２は、基板が平坦な構造である別の実施形態を示す図であり（ａ）、この実施形態の側面を示す図である（ｂ）。
図３は、本発明の一実施形態を示すフローチャートである。
図４は、ロボット装置を用いる、本発明の一実施形態を示すフローチャートである。
図５は、本発明の試料プレートを用いて実施された、ＢＳＡのｉｎ  ｓｉｔｕトリプシン消化のナノスプレによる質量スペクトルを示す図である。
【００１７】
（詳細な説明）
本発明は、質量分析用の検体試料の調製に使用される試料調製プレートに関する。特に、本発明は、表面での小さな液滴の操作が容易であり、試料の損失が最少化されていながら、１種または複数の検体を含む試料を濃縮し、また、汚染物質を除去することにより試料を精製するために使用される試料プレーに関する。
【００１８】
本発明の試料は、タンパク質、ペプチド、核酸、ならびに、ウェルの親水性領域に含まれる材料にやはり結合する、他の生物学的に興味のある小さな分子（薬剤、薬剤代謝物など）を含み得る。試料は、試料調製の間に除かれる汚染物質（塩、尿素など）を含んでいてもよい。
【００１９】
図１は、本発明の一実施形態を示している。従来技術における試料プレートと異なり、本発明の試料プレート１０は、複数のウェル１２がそこに画定されているプラットホーム１４をもつ。この実施形態の一態様において、プラットホーム１０は、９６ウェルのマイクロタイタープレートであり得る。別の態様において、プラットホーム１０は３８４マイクロタイタープレートであり得る。本発明は、マイクロタイタープレートのどのような配置構成も包含する。各ウェルは、約０．５μＬから約１００μＬの容積容量をもつことが望ましい。一実施形態におけるウェルは、疎水性の基底（基底領域）と疎水性壁面をもつ円錐形である。ウェルの形状は円錐である必要はなく、それは、丸い形であってもよく、どのような幾何学的形状でも許容され、この実施形態において重要であるのは、配置構成が何であれ、プラットホームが、疎水性壁面領域と親水性基底領域をもつウェルを画定する必要があるということである。
【００２０】
プラットホーム１４を形作る基板は、これらに限定されないが、プラスチック、ポリプロピレン、ＰＴＦＥ、Ｔｅｆｌｏｎ、ステンレス鋼、アルミニウム、ガラス、シリコンなどであり得る。図１ｂは、液滴２２がそれに置かれた孤立したウェル１２を描いたものである。ウェル１２には、ウェル内に置かれた液滴２２がうまく収まっている。ウェル１２は周囲に疎水性壁面領域１６をもつ。疎水性により、濡れることがなく、事実上有機物である液体を含めて、液体をはじく表面を意味する。この壁面領域１６は、疎水性材料（例えば、Ｔｅｆｌｏｎ、ＰＤＭＦ、および／または、当技術分野において知られている他の疎水性材料）からなる。液滴２２が、この疎水性壁面領域１６をもつウェル１２に添加された時に、ウェル１２のウェル領域１６と液滴表面との間に熱力学的反発力がある。この反発は水性液滴の形態の一体性を強化する。液滴２２は、ウェル１２にしっかりと固定される必要がある。これは、親水性物質（例えば、ポリスチレン、および／または、当技術分野において知られている他の親水性物質）からなる親水性領域１８により行われる。基底領域１８の親水性表面は、液滴２２の表面に位置する極性基と極性相互作用をする。これらの非共有結合性相互作用は、ウェル１２内のその場に液滴２２を保持するのに十分である。親水性により、水性液体以外の液体を用いる場合を含めて、濡れる表面を意味する。
【００２１】
一実施形態において、基板の表面は、例えばＴｅｆｌｏｎを用いて被覆されている。皮膜は、噴霧されるか、あるいは、加熱収縮で付けられる。付け方の詳細は当業者によく知られている方法であり得る。被覆後の構造は極微細化または織目構造を有する外観をもち得る。
【００２２】
図２は、本発明の別の実施形態を示している、この実施形態において、試料調製プレートは平坦な表面である。この実施形態の一態様において、プレート１０’の１つの表面は、親水性ゾーン２４と疎水性ゾーン２６を備える。図２ａ参照。疎水性ゾーン（または領域）２６は、Ｔｅｆｌｏｎのような疎水性物質からなり得る。他の疎水性物質もまたこの実施形態の範囲内にある。ポリスチレン、ならびに、他の親水性物質が、プレート１０’の表面にある親水性ゾーン２４を作り上げることができる。図２ｂは、試料プレート１０’の側面図を示している。図２ｂにおいて、基板２８は、プレート１０’の基底としての役目をしている。基板２８の１つの表面上に疎水性ゾーン２６と親水性ゾーン２４がある。親水性領域２４は、１種または複数の検体試料を含む水性液滴をしっかりと固定する役目をし、一方、疎水性領域２６は液滴の形態の一体性の保持を強化する。基板２８は、プラスチック、ポリマー、ステンレス鋼、アルミニウム、ガラス、シリコンなどからなり得る。場合によっては、壁面（示されていない）を試料プレート１０’の周囲に設けてもよい。壁面が存在する場合には、通常、Ｔｅｆｌｏｎのような疎水性物質からなる。表面での２つの領域は、正確に整列している必要はなく、親水性材料は、回りより僅かに高く突き出していてもよく、疎水性領域または親水性材料の表面は僅かに低くなっていてもよい。
【００２３】
本発明により、試料が濃縮され、汚染物質が除去され、また、試料の損失を伴うことなく少量の液体が容易に操作される。試料は試料液滴の表面張力により濃縮される。溶剤が蒸発すると、検体はウェルの親水性領域に引き付けられる。検体には、これらに限定されないが、タンパク質、ペプチド、生物学的に興味深く親水性材料に結合し得る小さな分子が含まれる。検体はウェルの親水性部分に結合する。試料プレートを洗う時に、検体はそのまま残るが、汚染物質は除去される。試料プレートに配置された試料を、例えばピペットを用いて、容易に操作することができる。本発明においては、充填床をもつ器具に関連するステップは全くないので、試料の損失は最少化されている。
【００２４】
一実施形態において、質量分析用の試料調製方法が開示される。関心のある試料を含むと考えられている液滴２２が、本発明の試料プレート１０上に置かれる。図１参照。試料プレート１０は、１つまたは複数のウェル１２を備える。各ウェル１２には、疎水性壁面領域１６と親水性基底領域１８とが画定されている。図１ｂ参照。液滴２２は、１つまたは複数のウェル１２内に置かれる。次に、試料はウェル構造１２内で乾燥する。雰囲気温度と圧力で試料を乾燥させてもよく、あるいは、試料を乾燥させるために、高温（約３０℃から約６０℃の範囲であり得る）を用いてもよい。乾燥過程を助けるために、試料を含む試料プレート１０を、真空装置を用いて負の圧力の下に置いてもよい。減圧になっている間に、試料プレートを加熱してもよい。例えば、調製試料がかなりの塩を含んでいる場合、試料液滴の乾燥を容易にするために減圧にすると有利であろう。検体が高温で分解する場合には、減圧にすると汚染物質の除去を助けることができる。減圧の利用により、乾燥に用いる温度をより下げることができる。
【００２５】
別法として、本発明の試料プレート１０’は１つの表面であり、親水性ゾーン２４と疎水性ゾーン２６がその上にある基板２８を備える。図２参照。関心のある検体試料を含む液滴は、試料プレート１０’上に、好ましくは、１つまたは複数の親水性ゾーン２４上に置かれる。
【００２６】
操作においては、最初に、作業表面（すなわち、試料がその上に置かれる表面）をきれいにするために、試料プレート（ウェルを含むもの、または含まないもののいずれか）が、溶剤で前処理される。通常、０．１〜１．０％のギ酸（あるいは、約０．１〜１．０％のトリフルオロ酢酸（「ＴＦＡ」、または、約０．１〜２．０％の酢酸）を含むメタノールまたはアセトニトリルが、表面の前処理に使用される。次に、プレートの作業表面は乾燥される。次に、プレートの作業表面上で、ウェル内に、あるいは親水性の箇所の上に、関心のある検体を含む試料が置かれる。試料は、４．０未満のｐＨをもち、揮発性有機酸を添加することにより処理全体を通して維持されなければならない。試料が含まれるデリバリ溶剤には、例えば、約０．１〜１．０％のギ酸、または、約０．１〜１．０％のＴＦＡ、または約０．１〜２．０％の酢酸（これらには、溶剤の約３０％までの有機成分が含まれる）が含まれる。メタノールまたはアセトニトリルは、デリバリ溶剤として用いられる適切な溶剤の２つの例にすぎない。ポリスチレンまたは他の親水性結合材料の場合には、界面活性剤（例えば０．１％ＳＤＳ）または変性剤（例えば尿素）またはカオトロープ剤のような修飾剤をデリバリ溶剤に加えて、表面への望みの検体の結合を促進することができる。この修飾剤は洗浄ステップにおいて除去されるので、ＭＳスペクトルの良否には影響しないであろう。試料は乾燥させることができる。
【００２７】
次に、洗浄溶剤が使用される。この洗浄溶剤は、約０．１〜１．０％のギ酸、または、約０．１〜１．０％のＴＦＡ、または、約０．１〜２．０％の酢酸を含む。洗浄ステップに続いて、試料は抽出溶剤を用いて抽出される。抽出溶剤の例はアセトニトリルまたはメタノール（約５〜１００％）である。抽出溶剤の特定の例は、約７０％のアセトニトリルと約０．１〜１０％のギ酸を含む溶液である。
【００２８】
例として、図３は、試料がタンパク質である場合に本発明を用いるフローチャートを示している。一旦結合すると、タンパク質は固定されるので、溶液からのタンパク質の選択的精製が可能になり、タンパク質インサイチュー消化が可能になる。従来のタンパク質消化法（例えば溶液内消化）を凌ぐ、本発明の１つの利点は、全ての消化ステップ（精製、濃縮、還元、アルキル化および消化を含む）が１つの表面上で実施されることである。さらに、酵素を不活性化させ得る還元およびアルキル化剤が、消化の前に疎水性表面から容易に除去される。従来の消化法を凌ぐさらなる利点には、試料の損失の最少化；タンパク質の透析が必要でないこと；消化の後のペプチドの選択的除去；および試薬の濃度の増加による反応速度の増加；が含まれる。
【００２９】
図３において、タンパク質溶液を含む試料が、本発明の試料調製プレートの表面上に置かれる。いくつかのタンパク質試料では還元またはアルキル化が必要である。これは、試料を試料プレート上に置いた後で進められるであろう。有機溶剤の添加により、プレート上へのタンパク質の固定を助けることができる。適切な有機溶剤には、これらに限定されないが、アセトニトリル、メタノール、イソプロピルアルコールまたはこれらの組合せが含まれる。これらの溶剤の濃度は、約０．１％から１００％の範囲である。有機溶剤は、最終的には揮発するであろう。次に、固定されたタンパク質は、例えば、０．１％のギ酸（またはその等価物）を用いて洗浄される。洗浄に続いて、タンパク質分解酵素が、タンパク質分解に適する条件の下で、固定された試料に添加される。このタンパク質分解ステップにより、親のタンパク質から、より小さいペプチド試料が生成するであろう。次に、標本を再び有機溶剤の下に置くことにより、これらのペプチド試料をプレート上に固定することができる。次に、例えば、０．１％ギ酸を用いて、プレート標本は再び洗浄される。次に、有機溶剤が高濃度のものを用いてペプチド試料を抽出し、さらなる分析（例えば質量分析）を行うことができる。当業者は、本発明の範囲から逸脱することなく、上の形態に変更を加え得ることを理解するであろう。
【００３０】
本発明の一態様において、ウェル構造内に、あるいは別法では、平坦なプレートの親水性ゾーン内に置かれた試料に、一滴の抽出溶剤が添加される。抽出溶剤は、全溶剤組成物の約５〜１００％を占める有機成分を含む。さらに、溶剤の約０．１〜１０％は、ギ酸などのような酸からなる。溶剤が加えられると、次に、試料は、スタティックナノスプレ分析のために、導電性被覆された、引き伸ばされた先端部をもつホウケイ酸ガラスキャピラリに移される。
【００３１】
別の態様において、溶剤の液滴が、試料プレートのウェル構造に存在する試料に添加される。溶剤の添加に続いて、試料はＭＡＬＤＩターゲットプレート上に移される。一旦ＭＡＬＤＩターゲットプレート上に置かれると、α−シアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸のようなＭＡＬＤＩマトリックスを用いて、移された試料との混合物が作られる。これで、試料はＭＡＬＤＩ分析の準備が整う。
【００３２】
さらに別の態様において、溶剤の液滴が、試料プレートのウェル内に置かれた試料に添加される。次に、試料はさらなる分析のために、試料バイアルに移される。例えば、試料は、ＬＣ／ＭＣ、ＭＡＬＤＩ、ナノスプレなどのために使用され得る。
【００３３】
本明細書に記載された方法は、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  ＳｃｉｅｎｃｅｓのＰａｃｋａｒｄ  Ｍｕｌｔｉｐｒｏｂｅ  ＩＩのような適切なロボット装置を用いて実施され得る。図４は、本発明においてロボット装置を用いる一例を示している。図４に示されているように、手順を任意に３つのステップに分割することができる。第１ステップは、試料プレートの準備である。このステップは、有機溶剤を用いるプレートの前調整とそれに続くプレートからの溶剤の除去を含む。試料の添加は次のステップである。試料がプレートに付加される。一態様において、試料は、プレートの親水性領域に付加される。次に、例えば高温を用いて、試料を乾燥させる。次に、試料を洗浄する。このステップにおいて、洗浄液（例えばギ酸）がプレートに含まれている試料に添加される。洗浄液は、約１分間保たれるが、当業者は、むやみに実験をしないで最適の時間がどれぐらいであるかを決めることができる。次に、例えば吸引により、洗浄液はプレート表面から除去される。この洗浄手順を繰り返す、また／または、この洗浄手順を修正し、本発明の範囲内に留まることができる。この時点で、さらなる処理と分析のために、プレートをロボット装置から取り外すことができる。
【実施例】
【００３４】
ＢＳＡのトリプシン消化
３ｐｍｏｌｅのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のｉｎ  ｓｉｔｕトリプシン消化と、それに続く消化ペプチドのナノスプレ質量分析の例が図５に示されている。ＢＳＡのトリプシン分解ペプチドが矢印で示されている。
【００３５】
ＢＳＡ（３ｐｍｏｌｅ）の試料を、本発明の試料プレート上に置いた。ＢＳＡを置いた後、ＤＴＴ（３０ｍＭ）とＩＡＡ（５０ｍＭ）をそれぞれ用いて、このタンパク質を還元しアルキル化し、次に、トリプシン（２５０ｎｇ）を用いて５時間で消化した。消化ペプチドを０．１％のギ酸で洗浄し、分析の前に有機溶剤を用いて抽出した。次に、抽出された試料を質量分析した。ナノスプレ源を装備した、Ｑ  Ｔｏｆ質量分析計を用いて、試料を分析した。用いられたキャピラリおよびコーン電圧は、それぞれ、９００と４０ボルトであった。コーンガス流量は５０Ｌ／ｈｒであった。
【００３６】
本発明が具体的な実施形態を参照して、詳細に示され説明されたが、添付の請求範囲により定められる、本発明の精神と範囲から逸脱することなく、形態および細部における様々な変更がそれらになされ得ることを当業者は理解するであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１Ａ】（ａ）本発明の一実施形態を示す図であり、（ｂ）個々のウェルを示す図である。
【図１Ｂ】（ａ）本発明の一実施形態を示す図であり、（ｂ）個々のウェルを示す図である。
【図２Ａ】基板が平坦な構造である別の実施形態を示す図であり（ａ）、この実施形態の側面を示す図である（ｂ）。
【図２Ｂ】基板が平坦な構造である別の実施形態を示す図であり（ａ）、この実施形態の側面を示す図である（ｂ）。
【図３】本発明の一実施形態を示すフローチャートである。
【図４】ロボット装置を用いる、本発明の一実施形態を示すフローチャートである。
【図５】本発明の試料プレートを用いて実施された、ＢＳＡのｉｎ  ｓｉｔｕトリプシン消化のナノスプレによる質量スペクトルを示す図である。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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