(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アラキドン酸と、L-カルニチンを含有して成る、表皮セラミド生成促進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、表皮セラミドの生成を促進し得る表皮セラミド生成促進剤、及びこれを含有して成る、表皮セラミドの充実を図り、表皮保湿機能を正常化し得る、表皮保湿機能改善剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
セラミドが、表皮細胞間脂質の構成成分として表皮の保護機能及び保湿機能に関与し、加齢や紫外線曝露，有機溶媒や界面活性剤との接触といった物理的及び化学的ストレスによりセラミドの減少や構造の乱れが生じることにより、表皮の前記機能が損なわれることが明らかになるにつれ、これを外用により補う試みがなされ（特開昭６１−２６０００８，同６３−１９２７０３）、さらには保湿機能，安定性，安全性等に優れ、コスト的にも安価なセラミド類似のアミド誘導体の使用も多く開示されるに至っている（特開昭６３−２１６８１２，同６３−２１８６０９，同６３−２２２１０７等）。
【０００３】
しかしながら、セラミド或いはその類似化合物を外用しても、これらが効率よく経皮吸収され、表皮内で細胞間脂質の再構築に利用されるとはいい難い状況であった。また本来であれば、表皮内のセラミドの生成自体を活性化することが好ましいのであるが、これまで有効なセラミド生成促進剤はあまり報告されていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
そこで本発明においては、表皮のセラミドの生成を有効に促進して表皮の保湿機能自体を改善することのできる、表皮セラミド生成促進剤及び表皮保湿機能改善剤を得ることを目的とした。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
上記課題を解決するべく、表皮セラミドの生成を促進し得る物質を検索したところ、脂肪酸及びその塩並びに誘導体より成る群から選択した１種又は２種以上と、L-カルニチン及びDL-カルニチン、並びにこれらの塩及び誘導体より成る群から選択した１種又は２種以上を併用して担体や基剤に含有させることにより、良好な結果が得られることを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明において用い得る脂肪酸としては、炭素数６〜３２程度の直鎖もしくは分岐鎖を有する飽和又は不飽和脂肪酸が好ましいものとして挙げられる。直鎖飽和脂肪酸としては、ヘキサン酸（カプロン酸），オクタン酸（カプリル酸），デカン酸（カプリン酸），ウンデカン酸，ドデカン酸（ラウリン酸），テトラデカン酸（ミリスチン酸），ペンタデカン酸，ヘキサデカン酸（パルミチン酸），オクタデカン酸（ステアリン酸），エイコサン酸（アラキン酸），ドコサン酸（ベヘン酸）等が、直鎖モノエン酸としては、9-デセン酸（カプロレイン酸），9-ウンデセン酸（9-ウンデシレン酸），10-ウンデセン酸（10-ウンデシレン酸），2-ドデセン酸（2-ラウロレイン酸），5-ドデセン酸（5-ラウロレイン酸），11-ドデセン酸（11-ラウロレイン酸），5-テトラデセン酸（5-ミリストレイン酸），9-テトラデセン酸（9-ミリストレイン酸），2-ヘキサデセン酸（2-パルミトレイン酸），7-ヘキサデセン酸（7-パルミトレイン酸），cis-6-オクタデセン酸（ペトロセリン酸），trans-6-オクタデセン酸（ペトロセエライジン酸），cis-9-オクタデセン酸（オレイン酸），trans-9-オクタデセン酸（エライジン酸），cis-11-エイコセン酸（ゴンドイン酸），cis-13-ドコセン酸（エルカ酸）等が、ジエン酸としては、2,4-ヘキサジエン酸（ソルビン酸），cis-9,cis-12-オクタデカジエン酸（リノール酸），cis-9,trans-12-オクタデカジエン酸（リノエライジン酸）等が、トリエン酸としては、cis-9,trans-11,trans-13-オクタデカトリエン酸（α-エレオステアリン酸），trans-9,trans-11,trans-13-オクタデカトリエン酸（β-エレオステアリン酸），cis-9,cis-12,cis-15-オクタデカトリエン酸（リノレン酸），trans-9,trans-12,trans-15-オクタデカトリエン酸（リノエライジン酸）等が、テトラエン酸としては、5,8,11,14-エイコサテトラエン酸（アラキドン酸）等が例示される。また、分岐鎖を有する飽和脂肪酸としては、2-エチルブタン酸，2-メチルペンタン酸，2-エチルヘキサン酸，2,2-ジメチルオクタン酸，14-メチルペンタデカン酸（イソパルミチン酸），16-メチルヘプタデカン酸（イソステアリン酸）等が例示される。さらに、12-ヒドロキシステアリン酸等のヒドロキシ脂肪酸や、ヤシ油脂肪酸，ラノリン脂肪酸等の天然混合脂肪酸も使用できる。
【０００７】
上記脂肪酸の塩としては、ナトリウム塩，カリウム塩等のアルカリ金属塩、トリエタノールアミン塩等のアミン塩等が、また誘導体としては、上記脂肪酸のアルキルエステル，アルケニルエステル，グリセリルエステル等各種エステル、及びアミドが挙げられる。本発明においては、これら脂肪酸及びその塩並びに誘導体より１種又は２種以上を選択して用いる。本発明に係る表皮セラミド生成促進剤においては、０．０００１〜５．０重量％程度担体等に含有させるのが適切である。
【０００８】
次いで、本発明において上記脂肪酸類の１種又は２種以上と併用するカルニチンは、4-トリメチルアミノ-3-ヒドロキシ酪酸のことであり、公知の物質である。カルニチン及びその塩並びに誘導体の皮膚化粧料への配合についてもすでに開示されており（特開昭５１−１４８０２）、また塩化カルニチンが表皮の透過バリア強度を強化させることも知られている（特開平１１−３０２１４３）が、本発明におけるように、脂肪酸類の１種又は２種以上と併用することにより、表皮のセラミドの生成を促進することはこれまで全く示されていない。
【０００９】
本発明においては、L-カルニチン及びDL-カルニチン及びこれらの塩並びに誘導体より１種又は２種以上を選択して用いる。これらの塩としては、塩酸塩，酢酸塩，硫酸塩等が挙げられ、誘導体としては、アルキルエステル，アルケニルエステル，グリセリルエステル等の各種エステル、及びアミド等が挙げられる。本発明に係る表皮セラミド生成促進剤においては、担体等に０．０００１〜５．０重量％程度含有させるのが適切である。
【００１０】
本発明に係る表皮セラミド生成促進剤は、上記脂肪酸及びその塩並びに誘導体より選択した１種又は２種以上と、L-カルニチン及びDL-カルニチン及びこれらの塩並びに誘導体より選択した１種又は２種以上とを、水，生理食塩水，リン酸緩衝生理食塩水といった水性担体や、ローション基剤，乳剤，ゲル剤，クリーム基剤，軟膏基剤等の皮膚外用剤用基剤に可溶化もしくは分散させて調製することができる。また、マイクロカプセルやリポソーム等に内包させてもよい。なお本発明に係る表皮セラミド生成促進剤には、製剤の安定化を図るため、界面活性剤，抗酸化剤，防菌防黴剤等を添加することができる。
【００１１】
さらに本発明においては、上記表皮セラミド生成促進剤の１種又は２種以上をそのまま、もしくは各種基剤に含有させて、表皮保湿機能改善剤とすることができる。かかる表皮保湿機能改善剤には、さらに保湿剤，皮膚細胞賦活剤，抗酸化剤，防菌防黴剤，香料等を添加することができる。
【００１２】
【実施例】
さらに本発明の特徴について、実施例により詳細に説明する。
【００１３】
［実施例１］  表皮セラミド生成促進剤１
（１）アラキドン酸                                ０．１５２ｇ
（２）L-カルニチン                                １．６２２ｇ
（３）大豆レシチン                                １．０００ｇ
（４）精製水                              全量を１．０リットルとする量
製法：(1)〜(3)を順次(4)に添加して混合，可溶化し、(4)で全体を１．０リットルとする。本実施例中のアラキドン酸濃度は５．０×１０-4Ｍ，L-カルニチン濃度は０．０１Ｍである。
【００１４】
上記の実施例１について、表皮のセラミド生成促進作用を評価した。その際、実施例１においてアラキドン酸を添加しないで同様に調製したものを比較例１、L-カルニチンを添加しないでアラキドン酸を倍量添加して同様に調製したものを比較例２として、同時に評価を行った。
【００１５】
表皮のセラミド生成促進作用は、正常ヒト表皮ケラチノサイトを用いて次のようにして評価した。まず、３５ｍｍ径のディッシュに正常ヒト表皮ケラチノサイトを５，０００個／ディッシュとなるように播種し、正常ヒト表皮角化細胞増殖用無血清液体培地（クラボウ社製）にて３７℃で９０％コンフルエントに達するまで培養する。次いで培地を上記実施例及び比較例のそれぞれを１．０ｍｌ添加し、全量を１００ｍｌとして調製した細胞分化用培地（１０容量％ウシ胎仔血清，１０μｇ／ｍｌインシュリン，０．４μｇ／ｍｌハイドロコルチゾンを添加したダルベッコ修正基礎培地（日研生物医学研究所製）と、Ｈａｍ’ｓ  Ｆ-12培地（極東製薬工業製）の３：１混合培地）に交換し、２日ごとに培地を交換しながら培養して、１０日目にディッシュより回収したケラチノサイトよりクロロホルム・メタノール混合溶媒（容量比＝２：１）で脂質を抽出した。抽出した脂質は乾固した後前記混合溶媒２００μｌに溶解し、薄層クロマトグラフィーによりセラミドの定量を行った。なお、実施例及び比較例を添加せず、細胞分化用培地にて同様に培地交換した系を対照とした。実験はそれぞれの系について２回ずつ行い、平均値を算出して表１に示した。
【００１６】
【表１】
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【００１７】
表１より明らかなように、本発明の実施例１を添加した系では、対照に比べて有意にセラミド含有量が上昇しており、セラミド生成の促進が認められていた。これに対し、L-カルニチンのみを含有する比較例１を添加した系では、対照に比べてセラミド含有量の上昇は認められず、アラキドン酸のみを倍量含有する比較例２を添加した系では、わずかなセラミド含有量の上昇が見られたのみであり、脂肪酸又はL-カルニチンのみでは、有効なセラミド生成の促進効果が得られないことが示された。
【００１８】
続いて、本発明に係る表皮セラミド生成促進剤についての他の実施例を示す。
【００１９】
［実施例２］  表皮セラミド生成促進剤２（ローション剤型）
（１）エタノール                                １０．００ｇ
（２）ポリオキシエチレン(60E.O.)硬化ヒマシ油      ０．５０ｇ
（３）イソステアリン酸                            ０．０５ｇ
（４）L-カルニチン塩酸塩                          ０．２０ｇ
（５）パラオキシ安息香酸メチル                    ０．１０ｇ
（６）精製水                          全量を１００ｍｌとする量
製法：(1)〜(5)を順次(6)に添加し、均一に溶解した後、全量を１００ｍｌとする。
【００２０】
［実施例３］  表皮セラミド生成促進剤３（乳剤型）
（１）ステアリン酸                                ０．２０（重量％）
（２）セタノール                                  １．５０
（３）ワセリン                                    ３．００
（４）流動パラフィン                              ７．００
（５）ポリオキシエチレン(10E.O.)モノオレイン酸    １．５０
エステル
（６）酢酸トコフェロール                          ０．５０
（７）グリセリン                                  ５．００
（８）パラオキシ安息香酸メチル                    ０．１０
（９）水酸化カリウム                              ０．０２
（10）DL-カルニチン                               ０．５０
（11）精製水                                    ８０．６８
製法：(1)〜(6)の油相成分を混合，加熱して均一に溶解し、７０℃とする。一方、(7)〜(11)の水相成分を混合，加熱して均一とし、７０℃とする。この水相成分に前記油相成分を撹拌しながら徐々に添加して乳化し、冷却する。
【００２１】
［実施例４］  表皮セラミド生成促進剤４（ゲル剤型）
（１）モノステアリン酸プロピレングリコール        ０．０２（重量％）
（２）ジプロピレングリコール                    １０．００
（３）カルボキシビニルポリマー                    ０．５０
（４）水酸化カリウム                              ０．１０
（５）パラオキシ安息香酸メチル                    ０．１０
（６）精製水                                    ８８．９３
（７）L-カルニチン塩酸塩                          ０．３５
製法：(6)に(3)を均一に溶解した後、(2)に(1)，(5)を溶解して添加し、次いで(4)を加えて増粘させ、(7)を添加，溶解する。
【００２２】
［実施例５］  表皮セラミド生成促進剤５（クリーム剤型）
（１）ミツロウ                                    ６．０（重量％）
（２）セタノール                                  ５．０
（３）還元ラノリン                                ８．０
（４）スクワラン                                ２７．５
（５）9-ウンデシレン酸，10-ウンデシレン酸混合物   ０．１
（６）グリセリルモノステアリン酸エステル          ２．５
（７）ポリオキシエチレン(20E.O.)ソルビタン        ５．０
モノラウリン酸エステル
（８）プロピレングリコール                        ５．０
（９）パラオキシ安息香酸メチル                    ０．１
（10）L-カルニチン酢酸塩                          ０．５
（11）精製水                                    ４０．３
製法：(1)〜(7)の油相成分を混合，溶解して７５℃とする。一方、(8)〜(11)の水相成分を混合，溶解して７５℃に加熱する。次いで、この水相成分に前記油相成分を添加して予備乳化した後ホモミキサーにて均一に乳化し、冷却する。
【００２３】
［実施例６］  表皮セラミド生成促進剤６（軟膏剤型）
（１）白色ワセリン                              ２５．００（重量％）
（２）ステアリルアルコール                      ２５．００
（３）パルミチン酸                                ０．０１
（４）ベヘン酸                                    ０．０１
（５）グリセリン                                １２．００
（６）ラウリル硫酸ナトリウム                      １．００
（７）パラオキシ安息香酸メチル                    ０．１０
（８）精製水                                    ３６．５８
（９）L-カルニチン                                ０．１５
（10）DL-カルニチン塩酸塩                         ０．１５
製法：(1)〜(6)の油相成分を混合，加熱して均一に溶解し、７５℃とする。一方、(7)，(8)の水相成分を混合，加熱して均一とし、７５℃とする。この水相成分に前記油相成分を撹拌しながら徐々に添加して乳化し、冷却した後４０℃にて(9)，(10)を添加，溶解する。
【００２４】
［実施例７］  表皮セラミド生成促進剤７（リポソーム）
（１）大豆レシチン                              ８０．００（ｇ）
（２）イソパルミチン酸                            ０．０５
（３）リノレン酸                                  ０．０２
（４）酢酸トコフェロール                          ０．５０
（５）L-カルニチン                                ０．５０
（６）精製水                                  １００．００
製法：(5)を(6)に添加して溶解する。これに、(1)に(2)〜(4)を添加，混合して添加し、６５℃で懸濁した後超音波処理してリポソームを調製し、遠心分離により回収する。
【００２５】
［実施例８］  表皮セラミド生成促進剤８（マイクロカプセル）
（１）オリーブ油                                １０．０（重量％）
（２）ミリスチン酸オクチルドデシル                ０．２
（３）アルギン酸ナトリウム                        ０．６
（４）ポリビニルアルコール                      １２．０
（５）グリセリン                                １２．０
（６）L-カルニチン                                ０．２
（７）精製水                                    ６５．０
製法：(1)に(2)を混合，溶解し、(3)〜(6)を(7)に加えて溶解した水溶液に撹拌しながら添加，分散する。この分散液を撹拌しながら２０重量％の塩化カルシウム水溶液中に滴下し、生じたマイクロカプセルを遠心分離にて回収する。
【００２６】
次に、本発明に係る表皮保湿機能改善剤についての実施例を示す。
【００２７】
［実施例９］  表皮保湿機能改善剤１
（１）流動パラフィン                            １０．０（重量％）
（２）白色ワセリン                                ５．０
（３）セタノール                                  ６．０
（４）ポリオキシエチレン(30E.O.)セチルエーテル    ２．０
（５）自己乳化型グリセリルモノステアリン酸      １０．０
エステル
（６）プロピレングリコール                      １０．０
（７）パラオキシ安息香酸メチル                    ０．１
（８）表皮セラミド生成促進剤１                    ２．０
（９）精製水                                    ５４．９
製法：(1)〜(5)の油相成分を混合，加熱溶解し、７５℃とする。一方(6)〜(9)の水相成分を混合，加熱溶解して７５℃とし、これに前記油相を撹拌しながら徐々に添加した後、ホモミキサーにて乳化し、冷却する。
【００２８】
［実施例１０］  表皮保湿機能改善剤２
（１）流動パラフィン                              ３０．０（重量％）
（２）マイクロクリスタリンワックス                  ２．０
（３）ワセリン                                      ５．０
（４）ジグリセリルジオレイン酸エステル              ５．０
（５）L-グルタミン酸ナトリウム                      １．６
（６）L-セリン                                      ０．４
（７）プロピレングリコール                          ３．０
（８）表皮セラミド生成促進剤２                      １．０
（９）パラオキシ安息香酸メチル                      ０．１
（10）精製水                                      ５１．８
（11）香料                                          ０．１
製法：(5)，(6)を(10)の一部に溶解して５０℃とし、あらかじめ５０℃に加温した(4)に撹拌しながら徐々に添加する。これをあらかじめ混合し、７０℃に加熱溶解した(1)〜(3)に均一に分散し、次いで(7)〜(9)を(10)の残部に溶解して７０℃に加熱したものを撹拌しながら添加し、ホモミキサーにて乳化する。冷却後、５０℃にて(11)を添加，混合する。
【００２９】
［実施例１１］  表皮保湿機能改善剤３
（１）グリセリン                                    ２．０（重量％）
（２）1,3-ブチレングリコール                        ３．０
（３）ポリオキシエチレン(25E.O.)オレイルエーテル    ０．２
（４）エタノール                                  １０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル                      ０．１
（６）香料                                          ０．１
（７）精製水                                      ７４．６
（８）表皮セラミド生成促進剤７                    １０．０
製法：(5)，(6)を(4)に溶解し、(1)〜(3)とともに(7)に添加して均一に混合し、これに(8)を加えて分散する。
【００３０】
［実施例１２］  表皮保湿機能改善剤４
（１）ジプロピレングリコール                      １０．０（重量％）
（２）カルボキシビニルポリマー                      ０．５
（３）水酸化カリウム                                ０．１
（４）パラオキシ安息香酸メチル                      ０．１
（５）精製水                                      ８６．８
（６）表皮セラミド生成促進剤８                      ２．５
製法：(5)に(2)を均一に溶解した後、(1)に(4)を溶解して添加し、次いで(3)を加えて増粘させ、(6)を添加，分散する。
【００３１】
上記本発明の実施例９〜実施例１２について使用試験を行い、表皮保湿機能の改善状況を評価した。その際、実施例９，実施例１１において、表皮セラミド生成促進剤１及び表皮セラミド生成促進剤７について脂肪酸を添加せずに同様に調製したものを添加して比較例３，比較例５とし、実施例１０，実施例１２において、表皮セラミド生成促進剤２及び表皮セラミド生成促進剤８についてL-カルニチン又はその塩を添加せずに同様に調製したものを添加して比較例４，比較例６とし、同時に使用試験に供した。
【００３２】
使用試験は、顕著な肌荒れ症状を呈する１０才代〜６０才代の男女パネラー２０名を１群とし、各群に実施例９〜実施例１２及び比較例３〜比較例６のそれぞれをブラインドにて１日２回、２週間使用させ、使用試験開始前と使用試験終了後の各パネラーの皮膚の状態を観察し、同時に皮膚表面のコンダクタンスを測定して行った。皮膚の状態は、表２に示す評価基準に従って評価して点数化した。皮膚の状態及び皮膚表面コンダクタンスの測定値について２０名の平均値を求め、使用試験開始前と使用試験終了後を比較して表３に示した。
【００３３】
【表２】
0004780817.tif 000003
【００３４】
【表３】
0004780817.tif 000004
【００３５】
表３より明らかなように、本発明の実施例９〜実施例１２使用群では皮膚の状態はほぼ良好な状態まで改善しており、表皮水分量を示す皮膚表面のコンダクタンス値は有意に上昇していた。これに対し比較例３〜比較例６使用群では、皮膚の状態の改善は不十分で、皮膚表面のコンダクタンス値の上昇も、使用試験開始前に比べて認められるものの、その程度は各対応する実施例使用群に比べてはるかに小さいものであった。
【００３６】
【発明の効果】
以上詳述したように本発明により、表皮のセラミドの生成を有効に促進して表皮の保湿機能を改善することのできる、表皮セラミド生成促進剤及び表皮保湿機能改善剤を得ることができた。