(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アセロラ種子抽出物および／またはその処理物を有効成分として含有する糖化反応最終産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  Ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ；ＡＧＥ）生成阻害剤。
【請求項２】
アセロラ種子抽出物が８０〜１００℃の水により抽出されたものである請求項１に記載の糖化反応最終産物生成阻害剤。
【請求項３】
糖尿病および／または糖尿病合併症の治療または予防に用いるための、請求項１または２に記載の糖化反応最終産物生成阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血糖値上昇抑制剤およびＡＧＥ生成阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の食生活やライフスタイルの変化に伴い、糖尿病患者は増加傾向にある。現在のわが国の糖尿病患者は７４０万人にのぼり、糖尿病の予備軍を含めると、１６２０万人に達するといわれている。
【０００３】
糖尿病とは、インスリンというホルモンの作用不足によって高血糖状態が長く続くという代謝疾患群である。高血糖状態が続くと、神経障害、白内障、腎障害、網膜症、関節硬化症、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性壊疽等の種々の合併症を発症することがある。合併症は主に、患者の血液中のタンパク質が糖と結合する非酵素的糖化が原因とされる血管障害と、糖が代謝されるときに生じるソルビトールの蓄積によって細胞が破壊されることが原因とされる神経障害とに分かれる。タンパク質が糖と結合して形成された糖化蛋白質は、さらに反応が進むと蛋白糖化反応最終産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  Ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ；ＡＧＥ）と呼ばれる化合物を形成する。ＡＧＥは血管内皮細胞にある特異的な受容体（ＲＡＧＥ）に結合して糖尿病血管障害の発症に寄与すると考えられている。
【０００４】
このため、血糖値の上昇を抑制すること、およびＡＧＥの生成を阻害することが、それぞれ糖尿病および糖尿病合併症を治療・予防する方法の一つと考えられる。
【０００５】
これに関して、従来より、糖尿病および糖尿病合併症の治療・予防のための多くの薬剤が開発されている。
【０００６】
例えば、食後に血糖値が上昇して異常値を示す糖尿病患者に投与するための血糖値上昇抑制剤や、血糖値が上昇しないように抑制するために炭水化物の消化吸収阻害をするα-グルコシダーゼ阻害薬が開発されている。代表的なα-グルコシダーゼ阻害剤として、ボグリボースやアカルボースが知られている。また、ＡＧＥ生成阻害剤として、例えば、カルボニル試薬であるアミノグアニジンが知られており、抗糖尿病薬や抗糖尿病合併症薬として注目され様々な臨床実験が行われている。
【０００７】
しかし、これらの薬剤は、効果が強力である一方、服用したときの腹部膨満感、他の血糖降下薬との併用による低血糖状態の誘引、吐き気や頭痛等、患者に対する様々な副作用が問題となる。
【０００８】
これに対して、効果は穏やかであるが、副作用の問題はないとされる天然の成分由来の薬剤も開発されている。天然成分由来のα-グルコシダーゼ阻害剤としては、シソ抽出物（特許文献１）、マテ葉抽出物（特許文献２）、羅布麻葉抽出物（特許文献３）、枇杷葉抽出物（特許文献４）等が知られている。また、天然成分由来のＡＧＥ生成阻害剤として、例えばワイルドライス等の米類からの抽出物を用いた抗糖尿病活性物質および抗糖尿病合併症活性物質とその製造方法（特許文献５）等が知られているが、まだ数は少ない。
【０００９】
一方、アセロラはミカン目キントラノオ科ヒイラギトラノオ属の熱帯果実で、カリブ海諸島を原産としている。アセロラ果肉は、現在では世界各国で飲料や健康食品として用いられている。アセロラ果肉から飲料や健康食品を製造する際に、果肉、果皮または種子を含む残渣が多量に発生する。これまでに、アセロラ種子抽出物にポリフェノールの一種であるクエルセチン３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノシドおよびクエルセチン３−Ｏ−アラビノシルガラクトシドが含まれることが知られており、アセロラ種子抽出物が抗酸化作用並びにコラーゲナーゼ活性阻害作用およびヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有することが知られている（非特許文献１）。しかしながら、アセロラ種子抽出物についてその他の作用は知られておらず、アセロラ種子の大部分は産業廃棄物として廃棄処分されている。これらの未利用資源を有効活用し、工業的価値を見出すことが望まれている。
【００１０】
【特許文献１】特開２０００−１０２３８３号公報
【特許文献２】特開２００３−１４６９００号公報
【特許文献３】特開２００２−０５３４８６号公報
【特許文献４】特開２００３−１２８５７１号公報
【特許文献５】特許第３３３４０１６号公報
【非特許文献１】日本薬学会第１２３年会（長崎）要旨集、一般学術発表２７（Ｐ１）Ｉ−２５５
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、天然物由来の血糖値上昇抑制剤およびＡＧＥ生成阻害剤ならびにそれらを含む食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は以下の発明を包含する。
（１）アセロラ種子抽出物および／またはその処理物を有効成分として含有する血糖値上昇抑制剤。
（２）アセロラ果肉に由来する成分を有効成分として含有する上記（１）に記載の血糖値上昇抑制剤。
（３）アセロラ種子抽出物が８０〜１００℃の水により抽出されたものである上記（１）または（２）に記載の血糖値上昇抑制剤。
（４）アセロラ種子抽出物および／またはその処理物を有効成分として含有するＡＧＥ生成阻害剤。
（５）アセロラ果肉に由来する成分を有効成分として含有する上記（４）に記載のＡＧＥ生成阻害剤。
（６）アセロラ種子抽出物が８０〜１００℃の水により抽出されたものである上記（４）または（５）に記載のＡＧＥ生成阻害剤。
（７）糖尿病および／または糖尿病合併症の治療または予防に用いるための、上記（１）〜（６）のいずれかに記載の血糖値上昇抑制剤またはＡＧＥ生成阻害剤。
（８）８０〜１００℃の水とアセロラ種子とを接触させることを含む、アセロラ種子抽出物を調製する方法。
（９）上記（１）〜（７）のいずれかに記載の血糖値上昇抑制剤またはＡＧＥ生成阻害剤を含有する、血糖値上昇抑制またはＡＧＥ生成阻害のための食品。
【発明の効果】
【００１３】
本発明により、有効成分として天然物を含有する血糖値上昇抑制剤およびＡＧＥ生成阻害剤ならびにそれらを含む食品が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明をより詳細に説明する。
【００１５】
本発明はアセロラ種子抽出物および／またはその処理物を有効成分として含有する血糖値上昇抑制剤ならびにＡＧＥ生成阻害剤に関する。本発明の血糖値上昇抑制剤ならびにＡＧＥ生成阻害剤は、天然物由来であるために人体に悪影響を与える可能性が低い。また、医薬品として使用された場合には副作用を引き起こす可能性が低い。本発明はアセロラ種子の有効利用に資する点でも好ましい。
【００１６】
本発明で用いられるアセロラ種子が採取されるアセロラの生産地や品種は特に制限されないが、生産地としては、例えば沖縄、ブラジルが挙げられる。
【００１７】
本発明においてアセロラ種子とは、アセロラ果実中に含まれる非可食部分を指す。アセロラ種子は、乾燥されたものであっても、半乾燥状態のものであっても、未乾燥のものであってもよい。アセロラ種子は、種子そのものの形態であっても、適宜粉砕されたものであってもよい。例えばアセロラ種子の凍結物を粉砕したものであってよい。粉砕されたものは抽出効率が高く好ましい。
【００１８】
本発明に使用されるアセロラ種子は、典型的には、アセロラ果汁搾汁工程の残渣（副生成物）として提供される。例えばアセロラ果実をパルパーフィニッシャーで加工する際に生じる残渣には、多量の粉砕されていないアセロラ種子が含まれる。また、その残渣には果肉の一部が含まれる。従って本発明は産業廃棄物の有効活用という観点からも好ましい。
【００１９】
アセロラ種子抽出液を得る方法としては、例えば、水で抽出する方法、アルコールを含む水で抽出する方法、有機溶媒を用いて抽出された粗抽出液に、合成吸着剤を作用させて吸着させ、フラボノイドを有する抽出物を得る方法等がある。抽出溶媒として用いられ得る水の種類には特に限定がなく、純水、精製水等であってよい。抽出溶媒として有機溶媒が用いられる場合、親水性有機溶媒、疎水性有機溶媒のいずれでもよい。親水性有機溶媒としては、例えば、メチルアルコール、エチルアルコール、グリセリン、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール等のアルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、1,4-ジオキサン、ピリジン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、酢酸等の公知の有機溶媒が挙げられる。上記の親水性有機溶媒は水との混合物として用いられてもよい。疎水性有機溶媒としては、例えば、ヘキサン、シクロヘキサン、四塩化炭素、クロロホルム、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、ベンゼン、トルエン等の公知の有機溶媒が挙げられる。上記の親水性有機溶媒および疎水性有機溶媒はそれぞれ単独で用いることもでき、２種以上を組み合わせて用いることもできる。抽出溶媒の使用量はアセロラ種子１００重量部（未乾燥品）に対して通常１００〜１０００重量部程度であり、２００〜５００重量部程度がより好ましい。また、抽出温度は効率よく抽出を行う観点から０〜１３０℃程度が好ましく、８０〜１２１℃がより好ましい。なお１００℃を超える温度の水で抽出が行われる場合は加圧下で行われる必要がある。８０〜１００℃の水による抽出は加圧を行う必要がないうえに、抽出物中のポリフェノール回収量が十分に高くなるため好ましい。アセロラ種子に対して５倍量（重量基準）の８０〜１００℃の水を用いて抽出されたアセロラ種子抽出液中のポリフェノール回収量は、抽出時間により変動するものの、典型的には１００〜４００ｍｇ／１００ｇである。なおポリフェノール回収量の定義及び測定方法については実施例１を参照されたい。８０℃以上の水を用いて抽出が行われた場合に抽出物中のポリフェノール回収量が高まるという点は従来知られていない驚くべき知見である。抽出時間は１〜２４時間程度が好ましく、１〜２時間程度がより好ましい。
【００２０】
抽出操作は特に限定的でなく常法に従って行えばよい。抽出効率を向上させるため、振とう抽出や攪拌機等を備えた抽出機を用いて抽出することもできる。例えば、アセロラ種子を抽出溶媒に浸漬するか、または浸漬せずに抽出溶媒とともに攪拌、振とうする抽出処理を行い、処理液をろ過、遠心分離またはデカンテーション等によって抽出液と抽出残渣とに分離することにより抽出処理を行うことができ、抽出残渣は更に同様な抽出処理に付してもよい。得られる抽出液はそのまま用いてもよいが、必要に応じて更に濃縮、固液分離、精製等の処理が施されてもよい。本発明における「アセロラ種子抽出物の処理物」には典型的にはこれらの処理が施されたものが包含される。濃縮処理手段としては、溶媒除去、水および／または有機溶媒に対する溶解性を利用した可溶分回収処理、不溶分回収処理、水−疎水性有機溶媒での液液分配処理、再結晶処理、再沈澱処理、冷却により生じた析出物を回収する処理等が挙げられるがこれらに限定されない。固液分離処理手段としては、ろ過、遠心分離等が挙げられるがこれらに限定されない。精製処理手段としては、順相または逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過等が挙げられるがこれらに限定されない。これらの濃縮、固液分離、精製手段は単独で用いられても適宜組み合わされてもよい。
【００２１】
本発明に使用されるアセロラ種子抽出物には典型的にはポリフェノールが含まれる。本発明のアセロラ種子抽出物に含まれ得るポリフェノールとしては、例えばクエルセチン３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノシド、クエルセチン３−Ｏ−アラビノシルガラクトシドが挙げられるがこれらに限らない。アセロラ種子抽出固形分中のポリフェノール含量は０．１〜１００重量％が好ましく、１０〜１００重量％が特に好ましい。
【００２２】
本発明の血糖値上昇抑制剤またはＡＧＥ生成阻害剤中のアセロラ種子抽出物の含有量は、所望の作用が奏される含有量である限りとくに限定されない。また本発明の血糖値上昇抑制剤またはＡＧＥ生成阻害剤はアセロラ種子抽出物以外の任意の成分、好ましくは、アセロラ果肉に由来する成分を更に含み得る。アセロラ果肉にはビタミンＣが約１５００ｍｇ／１００ｇあるいはそれ以上含まれており、更に、本発明者らが独自に測定したところポリフェノールもまた多量に含まれている。
【００２３】
本発明の血糖値上昇抑制剤またはＡＧＥ生成阻害剤は、常法により、必要に応じて適当な担体等を利用して食品形態または製剤形態に調製され得る。
【００２４】
食品形態としては、飲料、固形食品、半固形食品等が挙げられ、特定保健用食品（例えば、糖尿病・糖尿病合併症予防食品）にもなり得る。飲料としては、具体的には、果汁飲料、清涼飲料、アルコール飲料等が挙げられる。また、摂取時に水等を用いて希釈して摂取される形態であってもよい。固形食品としては、例えば、飴、トローチ等を含む錠剤（タブレット）や糖衣錠の形態、顆粒の形態、粉末飲料、粉末スープ等の粉末の形態、ビスケット等のブロック菓子類の形態、カプセル、ゼリー等の形態等、種々の形態の食品が挙げられる。半固形食品としては、例えばジャムのようなペーストの形態、チューイングガムのようなガムの形態が挙げられる。食品中における本発明の血糖値上昇抑制剤またはＡＧＥ生成阻害剤の含有量は、食品の種類および該食品に含有される他の成分の種類や量、形態等に応じて適宜選択され得るが、通常、食品全量に対してアセロラ種子抽出物の乾燥物換算で０．００１〜２０重量％、好ましくは０．０１〜１０重量％である。本発明の食品には、本発明の所望の効果が損なわれない範囲で、通常、食品原料として用いられる種々の他の成分を配合することができる。他の成分としては例えば水、アルコール類、甘味料、酸味料、着色料、保存剤、香料、賦形剤等が挙げられる。これらの成分は単独で、または組み合わされて使用され得る。
【００２５】
製剤形態としては、例えば、経口投与用製剤または非経口投与用製剤が挙げられる。
【００２６】
経口投与用製剤としては例えば散剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、液剤、カプセル剤、丸剤、トローチ、内用液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤等の形態とすることができる。非経口投与用製剤としては例えば経鼻、経腸、経皮投与用製剤が挙げられ、注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、貼付剤、軟膏剤等の形態とすることができる。またこれらの製剤形態が症状に応じて単独で、または組み合わされて使用され得る。
【００２７】
各種形態への調製は、常法により行われる。その際使用される担体、賦形剤、結合剤、防腐剤、酸化安定剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味剤、希釈剤も、慣用されているものから適宜選択される。
【００２８】
以上のように本発明の血糖値上昇抑制剤またはＡＧＥ生成阻害剤は種々の形態に調製され得るものである。更に必要に応じて、これら食品形態または製剤形態の調製に際して、慣用されている各種添加剤を添加配合することもできる。添加剤としては、例えば、安定化剤、ｐＨ調整剤、糖類、甘味料、香料、各種ビタミン類、ミネラル類、抗酸化剤、賦形剤、可溶化剤、結合剤、滑沢剤、懸濁剤、湿潤剤、皮膜形成物質、矯味剤、矯臭剤、着色料、保存剤、界面活性剤、流動性促進剤等を例示することができる。
【００２９】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００３０】
種子からのポリフェノール抽出方法の検討
アセロラ果実の搾汁時に生じる残渣である種子からポリフェノールの回収方法を検討した。まず、アセロラ果実から種子を回収し、乾燥させることなく本実験に用いた。このアセロラ種子に５倍量（重量基準）の蒸留水を添加し、ポリトロンで１０分間ホモジナイズした後、この懸濁液を用いて以下の抽出処理方法を検討した。
【００３１】
１．１  熱水抽出法による抽出時間の検討
１００℃で１５、４０、６０および１２０分間の抽出処理を行った。
１．２  加熱加圧抽出法による抽出時間の検討
オートクレーブを用い、１２１℃で３０、６０、９０、１２０分間の抽出処理を行った。
１．３  抽出温度の検討
２５、５０、７５、８０、８５、９０、９５および１００℃でそれぞれ６０分間の抽出処理を行った。
【００３２】
抽出結果は、ポリフェノール回収量（ｍｇ／１００ｇ）を測定することにより評価した。ポリフェノール回収量は、出発原料であるアセロラ種子１００ｇから抽出処理により得られたポリフェノール量である。ここでポリフェノールの量はＦｏｌｉｎ−Ｄｅｎｉｓ法により測定した。
【００３３】
熱水抽出法による抽出時間の検討（上記１．１）では、ポリフェノール回収量は抽出時間が６０分間のときに最大に達し、それ以降は回収量が下がる傾向にあった（図１のＡ）。加熱加圧抽出（121℃抽出）法による反応時間の検討（上記１．２）では、抽出時間が増すに従ってポリフェノール回収量が増加する傾向が見られた（図１のＢ）。またその回収量も熱水抽出の場合に比べて高い値であった。一方、抽出温度の検討（上記１．３）では、抽出温度が高くなるに従ってポリフェノール回収量が増加し、特に抽出温度が８０℃以上のときに好ましい結果が得られた（図１のＣ）。これらの結果から、アセロラ種子からのポリフェノールの抽出は、１２１℃の加熱加圧下で抽出するか、あるいは１００℃の熱水で約１時間抽出することが、効率が良いと判明した。そこで以下の検討では、１００℃、６０分間の抽出条件で行った。
【実施例２】
【００３４】
アセロラ種子抽出物の精製方法の検討
次にアセロラ種子抽出物を精製処理し、ポリフェノールの純度を高める方法を検討した。陰イオン交換樹脂３種（ＤＯＷＥＸ  １×２、ＤＯＷＥＸ  ２×８、ＤＯＷＥＸ  ＭＡＲＡＴＨＯＮ  ＷＢＡ）、陽イオン交換樹脂２種（ＤＯＷＥＸ  ５０Ｗ×２、ＤＯＷＥＸ  ＭＡＣ−３）、合成吸着樹脂３種（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡＤ１６ＨＰ、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡＤ７ＨＰ、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡＤ１１８０）の計８種類の樹脂を用いた。各樹脂について５ｍｌ容量のカラムを作製し、残渣抽出液（１００℃６０分間抽出。その他の条件抽出は実施例１の通り）１０ｍｌを各カラムに供した（流速２ｍｌ／ｍｉｎ）。
【００３５】
検討を行った樹脂のうち、合成吸着樹脂のＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡＤ７ＨＰに供した場合が最も効率よくポリフェノールを回収でき、そのポリフェノール純度は、約４０％であった。ここでポリフェノール純度とは、カラム吸着画分中の固形分に占めるポリフェノールの割合（重量％）を意味する。ポリフェノールの量は実施例１と同様にＦｏｌｉｎ−Ｄｅｎｉｓ法により測定した。
【００３６】
以上のことから、検討した樹脂の中では合成吸着樹脂のＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡＤ７ＨＰがアセロラ種子からのポリフェノールの精製に最も適していることがわかった。
【実施例３】
【００３７】
アセロラ種子抽出物の精製
本実施例では実施例１および２の結果を受けて、搾汁時に生じたアセロラ種子残渣から抽出液を調製し、抽出液をさらに、Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ７ＨＰの５００ｍｌ容量のカラムで精製した。
【００３８】
まず、アセロラ種子残渣に、５倍量（重量基準）の蒸留水を添加し、ブレンダーミキサーにて破砕して懸濁液を調製し、この懸濁液を１００℃に昇温して１時間維持して抽出を行った。続いてこの懸濁液を遠心分離し、ろ過してアセロラ種子抽出液を得た。
【００３９】
この抽出液を１０〜１５ｍｌ／分の流速でＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ７ＨＰカラム（５００ｍｌ容量）に供し、カラムの５倍容（２５００ｍｌ）の蒸留水で洗浄した後、３倍容（１５００ｍｌ）のエタノールで溶出させて吸着画分を得た。吸着画分を減圧濃縮し、蒸留水に再溶解後、凍結乾燥した。こうして、アセロラ種子１ｋｇ（未乾燥重量）からポリフェノールを約４０重量％含む、粗精製されたアセロラ種子抽出物（以下、「アセロラ種子抽出物粗精製物」という）を３．０ｇ得た。
【実施例４】
【００４０】
アセロラ種子抽出物粗精製物の抗酸化活性
本実施例では実施例３で調製されたアセロラ種子抽出物粗精製物の抗酸化活性の評価を行った。
［抗酸化活性の評価］
抗酸化活性は、キサンチン−キサンチンオキシダーゼ反応系によるスーパーオキシドアニオンラジカルの消去活性で評価した。ラジカルの検出はＥＳＲ（電子スピン共鳴法）を用いて行った。
【００４１】
ＤＭＰＯ（５，５−ジメチル−1−ピロリン−Ｎ−オキシド）  １５μｌ、５０ｍＭ リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）  ５０μｌ、試料溶液  ５０μｌ、２ｍＭ ヒポキサンチン／リン酸緩衝液溶液  ５０μｌ、０．４ｕｎｉｔ／ｍｌ キサンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）／リン酸緩衝液  ５０μｌを混合し、ＸＯＤ添加後４５秒後にＥＳＲスペクトル測定を行った。こうしてスーパーオキシドアニオンラジカル量を測定した。ここで試料溶液は、実施例３で調製されたアセロラ種子抽出物粗精製物の濃度が０．５または１．０ｍｇ／ｍｌとなるように該精製物を水で希釈することにより調製したものである。また、比較対照として標品の（＋）−カテキンも同様に評価した。
【００４２】
ＥＳＲ装置は日本電子社製 ＥＳＲ装置（ＪＥＳ−ＦＲ３０）を用い、ＥＳＲスペクトル解析は以下の条件で行った。
【００４３】
磁場掃引幅：３３５．９±５ｍＴ、磁場変調：０．１ｍＴ、増幅率：１００、掃引時間２分間、応答時間：０．１秒、測定温度：室温。
【００４４】
また、試料溶液の代わりに同量の蒸留水を用いたものをコントロールとし、同様にスーパーオキシドアニオンラジカルの量を測定した。コントロールの結果をラジカル消去活性０％とした。
【００４５】
結果を図２に示す。実施例３で調製されたアセロラ種子抽出物粗精製物は、カテキンと同様に強い抗酸化活性を示すことが確認された。
【実施例５】
【００４６】
アセロラ種子抽出物粗精製物の糖加水分解酵素阻害作用
実施例３で調製されたアセロラ種子抽出物粗精製物について、以下の方法によりα−グルコシダーゼ阻害作用（マルターゼ阻害およびスクラーゼ阻害）を測定した。また、比較対照として、既にα−グルコシダーゼ阻害作用を有することが知られているグァバ抽出物も同様に評価した。
【００４７】
市販ラット腸管アセトン粉末に９倍量の５６ｍＭマレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）を添加し、ガラスホモジナイザーで均質化した後、遠心分離を行い、上清を回収し、これを粗酵素液とした。マルターゼ反応は粗酵素液を２０倍希釈、スクラーゼ反応には２倍希釈して使用した。
【００４８】
まず、２％マルトース溶液または２％スクロース溶液０．６ｍｌに、２ｍｇ／ｍｌの濃度の試料溶液０．６ｍｌを添加し、３７℃で５分間保温後、粗酵素液を０．６ｍｌ添加し、３７℃で１２０分間反応させた。沸騰水中で１０分間加熱し酵素を失活させた後、遠心分離を行い、上清のグルコース量をＨＰＬＣにより測定した。
ＨＰＬＣ条件は以下の通りである。
カラム：Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋ  ＣＬＣ−ＮＨ２カラム（６．０×１５０ｍｍ）
カラム温度：室温
流速：２ｍｌ／分
移動相：７５％アセトニトリル
検出：ＲＩ
【００４９】
また、試料溶液の代わりに同量の蒸留水を用いたものをコントロールとし、同様にグルコース量を測定した。コントロールの結果をマルターゼまたはスクラーゼの阻害率０％とした。
【００５０】
結果を図３に示す。実施例３で調製されたアセロラ種子抽出物粗精製物はマルターゼに対して強い阻害作用を有することが示された。
【実施例６】
【００５１】
アセロラ種子抽出物粗精製物のＡＧＥ生成阻害作用
実施例３で調製されたアセロラ種子抽出物粗精製物について、以下の方法によりＡＧＥ生成阻害作用を測定した。
【００５２】
１６ｍｇ／ｍｌの牛血清アルブミン１ｍｌ、４Ｍグルコース１ｍｌ、１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）１ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌの試料溶液１ｍｌを混合し、６０℃で貯蔵した。７日後に、タンパク質とグルコースによって生成されたＡＧＥを蛍光分光計により分析した。蛍光の条件は、ＡＧＥ初期産物の分析では励起波長３２５ｎｍ・蛍光波長４０５ｎｍ、ＡＧＥ後期産物の分析では励起波長３７０ｎｍ・蛍光波長４４０ｎｍとした。また、比較のためにアミノグアニジンを用いた実験も同様に行った。また、試料溶液の代わりに同量の蒸留水を用いたものをコントロールとし、同様に蛍光分析を行った。コントロールの結果をＡＧＥ生成阻害率０％とした。
【００５３】
結果を図４に示す。実施例３で調製されたアセロラ種子抽出物粗精製物はアミノグアニジンと同様にＡＧＥ生成阻害作用を有することが示された。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】各抽出処理条件おけるポリフェノール成分の回収量を示す図である（Ａ：１００℃抽出、Ｂ：１２１℃加圧抽出、Ｃ：抽出温度の検討）。
【図２】アセロラ種子抽出物粗精製物のスーパーオキシドアニオンラジカル消去活性を示す図である。
【図３】アセロラ種子抽出物粗精製物のマルターゼ阻害活性およびスクラーゼ阻害活性を示す図である。
【図４】アセロラ種子抽出物粗精製物のＡＧＥ生成阻害作用を示す図である。
【図１】
0004612335.tif 000002
【図２】
0004612335.tif 000003
【図３】
0004612335.tif 000004
【図４】
0004612335.tif 000005