(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記のいずれか一つの式で表される化合物、あるいはそれらの医薬として許容可能な、塩、水和物、溶媒和物、結晶形態、またはジアステレオマー。
【化１】
0004777065.tif 000057
【化２】
0004777065.tif 000058
【化３】
0004777065.tif 000059
【化４】
0004777065.tif 000060
【化５】
0004777065.tif 000061
【請求項２】
下記式で表される請求項１記載の化合物、あるいはそれらの医薬として許容可能な、塩、水和物、溶媒和物、結晶形態、またはジアステレオマー。
【化６】
0004777065.tif 000062
【請求項３】
下記式で表される請求項１記載の化合物、あるいはそれらの医薬として許容可能な、塩、水和物、溶媒和物、結晶形態、またはジアステレオマー。
【化７】
0004777065.tif 000063
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、本明細書の下記に式(I)で表されている化合物、かかる化合物を含む医薬組成物、ならびにかかる化合物を用いて癌および他の増殖性疾患の増殖を抑制する方法を含む。
【背景技術】
【０００２】
無制限細胞増殖または異常細胞増殖のプロセスから発生するヒト疾患および動物疾患が多数ある。これらの疾患のうち最も重要なのは癌である。癌は、無制御増殖および分化の欠如を特徴とする、広範囲の細胞悪性腫瘍に付与された属名である。乾癬は、無制限細胞増殖または異常細胞増殖を特徴とする別の疾患である。乾癬は、乾燥鱗屑およびプラークの存在を特徴とする一般的な慢性皮膚病である。この疾患は、表皮の過剰増殖およびケラチン細胞の不完全な分化によって生じる。乾癬は、多くの場合、頭皮、肘、膝、背中、臀部、爪、眉および生殖の各領域を含み、その程度は軽症から極めて重症の範囲に及び、乾癬性関節炎、膿胞性乾癬、および剥離性乾癬皮膚炎が生じ得る。現在、乾癬に対する一般的な治療法はない。軽症は外用副腎皮質ホルモン剤で治療することが多いが、重症の場合には、抗増殖性薬剤、例えば、代謝拮抗物質メトトレキサート、DNA合成阻害剤ヒドロキシ尿素、および微小管破壊剤コルヒチン等を用いて治療することができる。
【０００３】
高異常レベルの細胞増殖が関連している他の疾患としては、再狭窄(血管平滑筋細胞が関与している場合)、炎症性疾患(内皮細胞、炎症細胞および糸球体細胞が関与している場合)、心筋梗塞(心筋細胞が関与している場合)、糸球体腎炎(腎臓細胞が関与している場合)、移植片拒絶反応(内皮細胞が関与している場合)、ならびにHIV感染症およびマラリア等の感染症(特定の免疫細胞および/または他の感染細胞が関与している場合)が挙げられる。
【０００４】
細胞増殖の阻害は、とりわけ、アルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ヌクレオチド類似体、抗生物質、抗ホルモン、および核酸損傷剤をはじめとする、いくつかの機序により誘導することができる。細胞増殖を阻害する薬理学的に重要な機序の1つは、チューブリンの結合によるものである。チューブリンはαサブユニットとβサブユニットから構成されている非対称の二量体であり、これらは重合して、微小管と呼ばれる細胞骨格の構造部材を形成する。微小管は、その多くの機能を果たすために高度に動的でなければならない。細胞周期の特定の段階では、あるいは特定の細胞の種類または細胞器官では、例えば軸索内輸送に、または繊毛運動および鞭毛運動に安定した微小管が必要とされている。微小管は細胞周期のG2期に構築され、細胞分裂のプロセスの間に姉妹染色分体の分離を促進する有糸分裂紡錘体の形成に関与する。細胞分裂における微小管の本質的な役割とチューブリンと相互に作用して細胞周期を阻害する薬剤の機能により、チューブリンは、抗癌剤、防カビ剤および除草剤をはじめとする用途における良好なターゲットとされた。コルヒチン等の典型的なチューブリンリガンド、パクリタキセル、ビンブラスチン等のビンカアルカロイド、エポチロン、ハリコンドリン、ベノミルおよびメベンダゾールは、チューブリンに結合することによって直接的に細胞分裂を阻害する。これにより、有糸分裂のG2/M境界での細胞周期が停止される。この機序は、コルヒチンによる痛風の治療、パクリタキセルによる再狭窄の治療、パクリタキセル、ビンブラスチン、エポチロンおよびハリコンドリンによる癌治療、ベノミルによる真菌感染の治療、ならびにメベンダゾールによるマラリアおよび蠕虫の治療等におけるこの種類の化合物の薬効の原理である。
【０００５】
いくつかの方法では、微小管の動態または安定性を阻害して細胞分裂を阻害することができる。微小管を安定化させるか、あるいは微小管の重合を阻害すると、細胞周期のいくつかのポイントで必要とされている細胞骨格の再構築が阻害され、細胞周期の1つの段階から次の段階への細胞の進行が停止される。チューブリン結合薬剤について3つの主なクラス、すなわち、コルヒチン類似体、ビンカアルカロイド、およびタキサンが同定されている。これらの各薬剤は、β-チューブリン分子上に特定の結合部位を有する。パクリタキセル(タキソール(商標))および関連のタキサンは、微小管を安定させる1つのクラスの薬剤を表し、最終的に微小管構造を「フリージング」させ、それにより再構築を不可能とするプロセスを示す(Jordan M A.およびWilson L., 1998)。続いて有糸分裂の停止によってアポトーシスの機序が誘導され、細胞死に至る。数多くのコルヒチン類似体、ならびにβ-チューブリン上のコルヒチンと同一部位に結合する他のいくつかの化合物は、β-チューブリン重合を不活性化し、かつ微小管の形成を不活性化する。ビンブラスチンといくつかの他のビンカ(Vinca)関連薬剤は、コルヒチン部位とは異なる部位へ結合する。ビンカ部位で結合する化合物は微小管形成を阻害し、微小管を不安定化させる(Jordanら、1986;RaiおよびWolff(1996))。従って、本発明は、チューブリンに結合することにより微小管動態を調節し得る化合物を対象とする。
【非特許文献１】Miyaura, N.およびSuzuki、Chem. Rev. 1995,95 2457
【非特許文献２】Stille, J. K., Angew. Chem., Int. Ed. Engl., 1986, 25, 508
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従って、本発明は、活発に分裂している細胞に対して直接的または間接的に有毒であって、癌、ウィルス感染および細菌感染、血管再狭窄、炎症性疾患、自己免疫性疾患、または乾癬の治療に有用な化合物を提供することを目的とする。また本発明は、前記症状を治療するための治療用組成物を対象とする。本発明のさらなる態様は、癌細胞、細菌細胞または上皮細胞等の活発に増殖している細胞を死滅させる方法、ならびにすべての種類の癌症状、感染症状、炎症症状、および一般的な増殖症状を治療する方法を提供することである。さらなる態様は、乾癬および他の皮膚病等の急速に増殖している細胞の存在を特徴とする他の病態を治療する方法を提供することに関する。
【０００７】
一実施形態では、本発明の方法は肉腫、上皮性腫瘍および/または白血病の治療で用いられる。対象の方法を単独で、または治療投薬計画の一部として使用することができる具体的な障害としては、繊維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮細胞肉腫とリンパ管肉腫、リンパ管内皮細胞肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原生癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛膜癌、精上皮腫、胎児性癌、ヴィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮の癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫が挙げられる。
【０００８】
特定の実施形態では、本発明の方法は、乳房、前立腺、腎臓、膀胱、または結腸の組織から形成されている上皮性腫瘍等の障害を治療するために用いられるものである。
【０００９】
他の実施形態では、本発明の方法は、脂肪細胞腫瘍等の脂肪組織で発生する過形成性疾患または増殖性疾患、例えば、脂肪腫、線維脂肪腫、脂肪芽細胞腫、脂肪腫症、冬眠腺腫、血管腫、および/または脂肪肉腫を治療するために用いられる。
【００１０】
さらに別の実施形態では、感染体および寄生体(例えば、細菌、トリパノソーマ、カビ等)もまた対象の組成物および化合物を用いてコントロールすることができる。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、二置換ピラジン骨格をベースとした一連の化合物が癌細胞の増殖および増殖の阻害剤であることを見出した。さらに本発明者らは、これらの化合物がチューブリンに結合し得ることを見出した。またかかる化合物は、他の過剰増殖関連障害の治療に有用であり、さらにはチロシンキナーゼ系障害の治療に有用であり得る。
【００１２】
従って、第1の態様では、本発明は、一般式:
【００１３】
【化１】
0004777065.tif 000002
【００１４】
〔式中、
R1は、H、C1-6アルキル、C1-6アルキルNR5R6、C1-6アルキルNR5COR6、C1-6アルキルNR5SO2R6、C1-6アルキルCO2R5、C1-6アルキルCONR5R6(式中、R5およびR6は、互いに独立して、H、C1-4アルキル、アリール、ヘタリール(hetaryl)、C1-4アルキルアリール、C1-4アルキルヘタリールであるか、あるいは一緒になって、O、S、NR7から選択される原子を任意に含有する、任意に置換された3〜8員環を形成してもよく、R7は、H、C1-4アルキルから選択される)であり;
R2、R3およびR4は、互いに独立して、H、ハロゲン、C1-4アルキル、OH、OC1-4アルキル、CF3、OCF3、CN、C1-4アルキルNR8R9、OC1-4アルキルNR8R9、OCONR8R9、NR8R9、NR8COR9、NR10CONR8R9、NR8SO2R9、COOR8、CONR8R9であり;R8、R9は、互いに独立して、H、C1-4アルキル、C1-4アルキルシクロアルキルであるか、あるいは一緒になって、O、S、NR11から選択される原子を任意に含有する、任意に置換された3〜8員環を形成してもよく;R10およびR11は、独立して、H、C1-4アルキル、CF3から選択され;
あるいは、R2、R3およびR4のうちの2個の基は、隣接炭素原子に位置する場合、一緒になって、
【００１５】
【化２】
0004777065.tif 000003
【００１６】
(式中、R12は、H、C1-4アルキル、CF3から選択され、R13は、H、C1-4アルキル、CF3、COR14、SO2R14から選択され、R14は、H、C1-4アルキルから選択される)
から選択される環構造を形成してもよく;
Qは、結合またはC1-4アルキルであり;
Wは、H、C1-4アルキル、C2-6アルケニルから選択され;ここで、C1-4アルキルまたはC2-6アルケニルは、C1-4アルキル、OH、OC1-4アルキル、NR15R16で任意に置換されていてもよく;R15およびR16は、互いに独立して、H、C1-4アルキル、C1-4アルキルシクロアルキル、C1-4アルキルシクロヘタルキル(alkyl cyclohetalkyl)、アリール、ヘタリールであるか、あるいは一緒になって、O、S、NR17から選択される原子を任意に含有する、任意に置換された3〜8員環を形成してもよく;R17はH、C1-4アルキルから選択され;
Aは、ハロゲン、C1-4アルキル、CF3、アリール、ヘタリール、OCF3、OC1-4アルキル、OC2-5アルキルNR18R19、Oアリール、Oヘタリール、CO2R18、CONR18R19、NR18R19、C1-4アルキルNR18R19、NR20C1-4アルキルNR18R19、NR18COR19、NR20CONR18R19、NR18SO2R19から独立して選択される0〜3個の置換基で任意に置換されていてもよいアリール、ヘタリールであり;R18、R19は、互いに独立して、H、C1-4アルキル、C1-4アルキルシクロヘタルキル、アリール、ヘタリール、C1-4アルキルアリール、C1-4アルキルヘタリールであるか、あるいは一緒になって、O、S、NR21から選択される原子を任意に含有する、任意に置換された3〜8員環を形成してもよく;R20はH、C1-4アルキルから選択され;R21はH、C1-4アルキルから選択され;
YはH、C1-4アルキル、OH、NR22R23から選択され、R22およびR23は、互いに独立して、H、C1-4アルキルである〕
の化合物、あるいはその医薬として許容可能なプロドラッグ、塩、水和物、溶媒和物、結晶形態、またはジアステレオマーを提供する。
【００１７】
第2の態様では、本発明は、担体と、本発明の第1の態様の少なくとも1種の化合物とを含む組成物を提供する。
【００１８】
第3の態様では、本発明は、対象の過剰増殖関連病態または障害を治療する方法であって、治療上有効な量の少なくとも1種の第1の態様の化合物、または治療上有効な量の第2の態様の組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００１９】
第4の態様では、本発明は、対象とするチロシンキナーゼ関連病態または障害を治療する方法であって、治療上有効な量の少なくとも1種の第1の態様の化合物、または治療上有効な量の第2の態様の組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００２０】
第5の態様では、本発明は、第1の態様による化合物を投与することにより細胞の微小管重合を調節する方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
第1の態様では、本発明は、一般式:
【００２２】
【化３】
0004777065.tif 000004
【００２３】
〔式中、
R1は、H、C1-6アルキル、C1-6アルキルNR5R6、C1-6アルキルNR5COR6、C1-6アルキルNR5SO2R6、C1-6アルキルCO2R5、C1-6アルキルCONR5R6(式中、R5およびR6は、互いに独立して、H、C1-4アルキル、アリール、ヘタリール、C1-4アルキルアリール、C1-4アルキルヘタリールであるか、あるいは一緒になって、O、S、NR7から選択される原子を任意に含有する、任意に置換された3〜8員環を形成してもよく、R7は、H、C1-4アルキルから選択される)であり;
R2、R3およびR4は、互いに独立して、H、ハロゲン、C1-4アルキル、OH、OC1-4アルキル、CF3、OCF3、CN、C1-4アルキルNR8R9、OC1-4アルキルNR8R9、OCONR8R9、NR8R9、NR8COR9、NR10CONR8R9、NR8SO2R9、COOR8、CONR8R9であり;R8、R9は、互いに独立して、H、C1-4アルキル、C1-4アルキルシクロアルキルであるか、あるいは一緒になって、O、S、NR11から選択される原子を任意に含有する、任意に置換された3〜8員環を形成してもよく;R10およびR11は、独立して、H、C1-4アルキル、CF3から選択され;
あるいは、R2、R3およびR4のうちの2個の基は、隣接炭素原子に位置する場合、一緒になって、
【００２４】
【化４】
0004777065.tif 000005
【００２５】
(式中、R12は、H、C1-4アルキル、CF3から選択され、R13は、H、C1-4アルキル、CF3、COR14、SO2R14から選択され、R14は、H、C1-4アルキルから選択される)
から選択される環構造を形成してもよく;
Qは、結合またはC1-4アルキルであり;
Wは、H、C1-4アルキル、C2-6アルケニルから選択され;ここで、C1-4アルキルまたはC2-6アルケニルは、C1-4アルキル、OH、OC1-4アルキル、NR15R16で任意に置換されていてもよく;R15およびR16は、互いに独立して、H、C1-4アルキル、C1-4アルキルシクロアルキル、C1-4アルキルシクロヘタルキル、アリール、ヘタリールであるか、あるいは一緒になって、O、S、NR17から選択される原子を任意に含有する、任意に置換された3〜8員環を形成してもよく;R17はH、C1-4アルキルから選択され;
Aは、ハロゲン、C1-4アルキル、CF3、アリール、ヘタリール、OCF3、OC1-4アルキル、OC2-5アルキルNR18R19、Oアリール、Oヘタリール、CO2R18、CONR18R19、NR18R19、C1-4アルキルNR18R19、NR20C1-4アルキルNR18R19、NR18COR19、NR20CONR18R19、NR18SO2R19から独立して選択される0〜3個の置換基で任意に置換されていてもよいアリール、ヘタリールであり;R18、R19は、互いに独立して、H、C1-4アルキル、C1-4アルキルシクロヘタルキル、アリール、ヘタリール、C1-4アルキルアリール、C1-4アルキルヘタリールであるか、あるいは一緒になって、O、S、NR21から選択される原子を任意に含有する、任意に置換された3〜8員環を形成してもよく;R20はH、C1-4アルキルから選択され;R21はH、C1-4アルキルから選択され;
YはH、C1-4アルキル、OH、NR22R23から選択され、R22およびR23は、互いに独立して、H、C1-4アルキルである〕
の化合物、あるいはその医薬として許容可能なプロドラッグ、塩、水和物、溶媒和物、結晶形態、またはジアステレオマーを提供する。
【００２６】
上記の記載において、以下のことは理解されよう:
C1-4アルキルは、置換されていないかまたは任意に置換された直鎖状または分枝状アルキル鎖を意味し、
アリールは、置換されていないかまたは任意に置換されたフェニルまたはナフチルを意味し、
ヘタリールは、O、N、Sから選択される1種または複数のヘテロ原子を含有する置換されていないかまたは任意に置換された5員または6員複素環式芳香族環を意味し、
シクロアルキルは、3〜8員飽和環を意味し、
シクロヘタルキルは、O、S、NR18(式中、R18は、H、C1-4アルキル、アリール、ヘタリールである)から選択される1〜3個のヘテロ原子を含有する3〜8員飽和環を意味する。
【００２７】
好ましい実施形態では、本化合物は、表1に列記した化合物から選択される。
【００２８】
さらなる好ましい実施形態では、本化合物は、一般式II:
【００２９】
【化５】
0004777065.tif 000006
【００３０】
(式中、
R1は、H、C1-6アルキル、C1-6アルキルNR3R4(式中、R3およびR4は、互いに独立して、H、C1-4アルキルである)であるか、あるいは一緒になって、O、S、NR5から選択される原子を任意に含有する、任意に置換された3〜8員環を形成してもよく、R5は、H、C1-4アルキルから選択され;
Aは、ハロゲン、C1-4アルキル、CF3、アリール、ヘタリール、OCF3、OC1-4アルキル、OC2-5アルキルNR6R7、Oアリール、Oヘタリール、CO2R6、CONR6R7、NR6R7、C1-4アルキルNR6R7、NR8C1-4アルキルNR6R7、NR6COR7、NR8CONR6R7、NR6SO2R7から独立して選択される0〜3個の置換基で任意に置換されていてもよいアリール、ヘタリールであり;R6、R7は、互いに独立して、H、C1-4アルキル、C1-4アルキルシクロヘタルキル、アリール、ヘタリール、C1-4アルキルアリール、C1-4アルキルヘタリールであるか、あるいは一緒になって、O、S、NR9から選択される原子を任意に含有する、任意に置換された3〜8員環を形成してもよく;R8はH、C1-4アルキルから選択され;R9はH、C1-4アルキルから選択され;
R2は、ハロゲン、C1-4アルキル、OH、OC1-4アルキル、CF3、OCF3、CN、C1-4アルキルNR10R11、OC1-4アルキルNR10R11、CO2R10、CONR10R11、NR10R11、NR10COR11、NR12CONR10R11、NR10SO2R11から独立して選択される0〜2個の置換基であり;R10、R11は、互いに独立して、H、C1-4アルキルであり;R12は、H、C1-4アルキルから選択され;
Yは、H、OH、NR12R13であり;R12およびR13は、互いに独立して、H、C1-4アルキルであるか、あるいは一緒になって、O、S、NR14から選択される原子を任意に含有する、任意に置換された3〜6員環を形成してもよく;R14はH、C1-4アルキルから選択され;
nは0〜4であり;
Wは、H、C1-4アルキル、C2-6アルケニルから選択され;ここで、C1-4アルキルまたはC2-6アルケニルは、C1-4アルキル、OH、OC1-4アルキル、NR15R16で任意に置換されていてもよく;R15およびR16は、互いに独立して、H、C1-4アルキル、C1-4アルキルシクロヘタルキルであるか、あるいは一緒になって、O、S、NR17から選択される原子を任意に含有する、任意に置換された3〜8員環を形成してもよく;R17はH、C1-4アルキルから選択される)
の化合物、あるいはその医薬として許容可能なプロドラッグ、塩、水和物、溶媒和物、結晶形態、またはジアステレオマーから選択される。
【００３１】
上記の記載において、以下のことは理解されよう:
C1-4アルキルは、置換されていないかまたは任意に置換された直鎖状または分枝状アルキル鎖を意味し、
アリールは、置換されていないかまたは任意に置換されたフェニルまたはナフチルを意味し、
ヘタリールは、O、N、Sから選択される1種または複数のヘテロ原子を含有する置換されていないかまたは任意に置換された5員または6員の複素環式芳香族環を意味し、
シクロアルキルは、3〜8員飽和環を意味し、
シクロヘタルキルは、O、S、NR18(式中、R18は、H、C1-4アルキル、アリール、ヘタリールである)から選択される1〜3個のヘテロ原子を含有する3〜8員飽和環を意味する。
【００３２】
好ましい実施形態では、R1はHである。
【００３３】
さらなる好ましい実施形態では、本化合物は、
【００３４】
【化６】
0004777065.tif 000007
【００３５】
からなる群から選択される。
【００３６】
本発明の化合物は、すべての配座異性体(例えば、シス異性体およびトランス異性体)を含む。本発明の化合物は不斉中心を有し、従って、異なる鏡像（エナンチオマー）形態およびジアステレオマー形態で存在する。本発明は、本発明の化合物のすべての光学異性体および立体異性体ならびにその混合物の使用と、それらを使用または含み得るすべての医薬組成物および治療方法に関する。また式Iの化合物は、互変異性体として存在し得る。本発明は、かかるすべての互変異性体およびその混合物の使用に関する。
【００３７】
遊離のアミノ基、アミド基、ヒドロキシ基、またはカルボキシル基を有する式Iの化合物は、プロドラッグに変換することができる。プロドラッグには、アミノ酸残基、または2個以上(例えば、2、3または4個)のアミノ酸残基のポリペプチド鎖が、式Iの化合物の遊離アミノ基、ヒドロキシ基、およびカルボン酸基にペプチド結合を介して共有結合で結合されている化合物が含まれる。このアミノ酸残基には3文字からなる記号によって一般に表される20種類の天然アミノ酸が含まれ、さらには、4-ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリシン、デモシン(demosine)、イソデモシン(isodemosine)、3-メチルヒスチジン、ノルバリン、β‐アラニン、γ-アミノ酪酸、シトルリン、ホモシステイン、ホモセリン、オルニチン、およびメチオニンスルフォンも含まれる。またプロドラッグには、カルボニル炭素プロドラッグ側鎖を介して式Iの上記置換基に共有結合で結合されているカーボネート、カルバメート、アミド、およびアルキルエステルが含まれる。さらにプロドラッグには、リン‐酸素結合を介して式Iの化合物の遊離ヒドロキシルに結合されている式Iの化合物のリン酸塩誘導体(酸、酸の塩、またはエステル等)が含まれる。さらにプロドラッグには、アシルオキシアルキル残基またはホスホノオキシアルキル残基が、遊離ヒドロキシル基を有する式Iの化合物に共有結合で結合されている化合物が含まれる。アシルオキシアルキル成分またはホスホノオキシアルキル成分は、N-(アシルオキシアルキル)-ピリジニウム塩またはN-(ホスホノオキシアルキル)-ピリジニウム塩の形成を介して、ピリジル環を有する式Iの化合物に共有結合で結合されていてもよい。また本発明は、式Iの化合物のプロドラッグを含有する医薬組成物を包含する。
【００３８】
さらになお好ましい実施形態では、本化合物は、W(ここで、WはC1-4アルキルまたはC1-4アルキルアルコキシである)を有するキラル炭素においてSキラリティーを有する。本化合物は、精製した異性体として、または任意の比の異性体の混合物として用いることができる。しかし、本混合物は、上記の好ましい異性体を少なくとも70%、80%、90%、95%、または99%含むことが好ましい。
【００３９】
第2の態様では、本発明は、担体と、本発明の第1の態様の少なくとも1種の化合物とを含む組成物を提供する。
【００４０】
第3の態様では、本発明は、対象とする過剰増殖関連病態または障害を治療する方法であって、治療上有効な量の第1の態様の少なくとも1種の化合物、または治療上有効な量の第2の態様の組成物を投与することを含む前記方法を提供する。
【００４１】
本明細書では、過剰増殖関連病態または障害という用語は、異常細胞増殖に起因するそれらの病態または障害を意味する。
【００４２】
過剰増殖関連病態または障害は、微小管重合の調節によって治療可能であるのが好ましい。式Iの化合物がチューブリンに結合可能であり、従って、微小管重合の調節に用いられ得ることが本発明者らによって見出されている。
【００４３】
本発明の好ましい実施形態では、病態は、アトピー、例えば、アレルギー喘息、アトピー性皮膚炎(湿疹)、およびアレルギー性鼻炎等;細胞介在過敏症、例えば、アレルギー性接触皮膚炎および過敏性肺炎等;リューマチ性疾患、例えば、全身性紅斑性狼瘡(SLE)、慢性関節リウマチ、若年性関節炎、シェーグレン症候群、硬皮症、多発性筋炎、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎等;他の自己免疫性疾患、例えば、I型糖尿病、自己免疫性甲状腺障害、およびアルツハイマー病等;ウィルス疾患、例えば、エプスタインバールウィルス(EBV)、B型肝炎、C型肝炎、HIV、HTLV 1、水痘帯状ヘルペスウィルス(VZV)、ヒト乳頭腫ウィルス(HPV)等;癌、例えば、繊維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮細胞肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮細胞肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原生癌、腎細胞癌、肝臓癌、胆管癌、絨毛膜癌、精上皮腫、胎児性癌、ヴィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫、ならびに乳房、前立腺、腎臓、膀胱または結腸の組織から形成されている上皮性腫瘍、ならびに脂肪組織で発生する腫瘍性疾患、例えば、脂肪細胞腫瘍(脂肪腫、線維脂肪腫、脂肪芽細胞腫、脂肪腫症、冬眠腺腫、血管腫、および/または脂肪肉腫);感染症、例えば、ウィルス感染、マラリア感染、および細菌感染等;血管性再狭窄;炎症性疾患、例えば、自己免疫性疾患、糸球体腎炎心筋梗塞、および乾癬等からなる群から選択される。
【００４４】
第4の態様では、本発明は、対象とするチロシンキナーゼ関連病態または障害を治療する方法であって、治療上有効な量の第1の態様の少なくとも1種の化合物、または治療上有効な量の第2の態様の組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００４５】
本明細書では、「チロシンキナーゼ関連病態」という用語は、異常チロシンキナーゼ活性に起因するこれらの障害、または1種もしくは複数のこれらの酵素を阻害することにより緩和されるこれらの障害を意味する。
【００４６】
従って、本発明は、過剰増殖関連病態または障害を治療可能な有効量の式Iまたは式IIの少なくとも1種の化合物と、医薬として許容可能なビヒクルまたは希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。本発明の組成物は下に記載した他の治療薬を含有していてもよく、また例えば、医薬用製剤の当技術分野で周知の技術に従って、慣用の固体もしくは液体ビヒクルまたは希釈剤、ならびに所望の投与方法に好適なタイプの医薬品添加物(例えば、賦形剤、結合剤、防腐剤、安定剤、着香料等)を使用することにより製剤化することができる。
【００４７】
式Iまたは式IIの化合物は、無毒で医薬として許容可能なビヒクルまたは希釈剤を含有する投与単位製剤で、任意の好適な手段、例えば、錠剤、カプセル、果粒または粉末の形態等による経口投与;舌下投与;口腔内投与;例えば、皮下、静脈、筋肉もしくは嚢内での注射もしくは注入技術による非経口投与(例えば、滅菌注射用水溶液もしくは非水溶液または懸濁液として);吸入噴霧等による経鼻投与;クリームまたは軟膏の剤形等による局所投与;坐剤の剤形等による直腸投与によって投与することができる。本化合物は、例えば、即時放出または持続放出に好適な剤形で投与することができる。即時放出または持続放出は、本化合物を含む好適な医薬組成物の使用によって、特に持続放出の場合には、皮下埋め込みまたは浸透ポンプ等の器具の使用によって達成することができる。
【００４８】
ヒトなどの霊長類以外に、他の各種哺乳動物を本発明の方法により治療することができる。例えば、これらに限定されるものではないが、雌ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、モルモット、ラット、またはその他のウシ類、ヒツジ類、ウマ類、イヌ類、ネコ類、齧歯類、もしくはマウス類をはじめとする哺乳動物を治療することができる。しかし本方法は、鳥類(例えば、ニワトリ)等の他の動物種でも実施することができる。
【００４９】
本発明の方法を用いて、炎症および感染に関連する疾患および症状を治療することができる。好ましい実施形態では、前記疾患または症状は、好酸球および/またはリンパ球の作用を阻害または促進することで炎症反応が調節されるものである。
【００５０】
細胞増殖阻害が望まれる上記方法で治療される対象は、これらに限定されるものではないが、雌ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、モルモット、ラット、またはその他のウシ類、ヒツジ類、ウマ類、イヌ類、ネコ類、齧歯類、もしくはマウス類をはじめとする哺乳動物であり、好ましくはヒト(男性または女性)である。
【００５１】
「治療上有効な量」という用語は、研究者、獣医、医師または他の臨床関係者により要求されている、組織、系、動物またはヒトの生物学的応答または医学的応答を誘導する対象組成物の量を意味する。
【００５２】
本明細書で用いられている「組成物」という用語は、特定の量で特定の成分を含む生成物、ならびに特定の量の特定の成分の組み合わせから直接的もしくは間接的に得られるすべての生成物を包含するものである。「医薬として許容可能な」とは、担体、希釈剤または添加剤が、製剤の他の成分と適合性であり、被投与者に対して無害でなければならないことを意味するものである。
【００５３】
化合物「の投与」および/または「を投与する」という用語は、治療を必要とする個体に対して本発明の化合物を与えることを意味するものと理解すべきである。
【００５４】
本発明の化合物の投与用医薬組成物は、簡便には単位製剤で提供することができ、製薬業界で周知の任意の方法によって製造することができる。全ての方法は、1種または複数の副成分を構成する担体と有効成分を組み合わせるステップを含む。一般に、医薬組成物は、有効成分を液体担体もしくは微粉砕固体担体またはその両方と均一かつ十分に混合し、必要に応じて生成物を所望の製剤に成形することで製造される。医薬組成物においては、活性な対象化合物は、疾患のプロセスまたは症状に対する所望の効果を生じるのに十分な量で含まれる。本明細書では、「組成物」という用語は、特定の量で特定の成分を含む生成物、ならびに特定の量の特定の成分の組み合わせから直接的もしくは間接的に得られる生成物を包含するものとする。
【００５５】
有効成分を含む医薬組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、水系もしくは油系の懸濁液剤、分散性粉剤もしくは粒剤、乳濁液剤、硬カプセル剤もしくは軟カプセル剤、またはシロップ剤もしくはエリキシル剤等の経口使用に好適な剤形とすることができる。経口使用を目的とする組成物は、医薬組成物製造分野で周知の方法に従って製造することができ、かかる組成物には甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤からなる群から選択される1種または複数の物質を含有させることで、医薬として見た目が良く風味の良い製剤を提供することができる。錠剤は、錠剤の製造に好適な無毒性の医薬として許容可能な添加剤と混合された状態で有効成分を含む。このような添加剤には、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウム、またはリン酸ナトリウム等の不活性希釈剤;例えば、コーンスターチまたはアルギン酸等の造粒剤および崩壊剤;例えば、デンプン、ゼラチン、またはアカシア等の結合剤;ならびにステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルク等の滑沢剤などがある。錠剤はコーティングを施さなくてもよいし、あるいは周知の方法によってコーティングを施し、消化管での崩壊および吸収を遅延させることで、長時間にわたって持続性作用を提供することができる。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延原料を用いることができる。それらにコーティングを施して、制御放出用の浸透性治療錠剤を形成することもできる。
【００５６】
また経口用製剤は、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリン等の不活性固体希釈剤と有効成分を混合した硬ゼラチンカプセル剤として、あるいは水または油系媒体(例えば、落花生油、液体パラフィンもしくはオリーブ油等)と有効成分を混合した軟ゼラチンカプセル剤として提供することもできる。
【００５７】
水系懸濁液剤は、水系懸濁液剤の製造に好適な添加剤と混合された状態で活性原料を含む。かかる添加剤は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、およびアカシアゴム等の懸濁剤である。分散剤または湿潤剤は、例えば、レシチン等の天然ホスファチド、または、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン等の脂肪酸とアルキレンオキサイドの縮合生成物、または、例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール等の長鎖脂肪族アルコールとエチレンオキサイドの縮合生成物、または、例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール等の脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとエチレンオキサイドの縮合生成物、または、例えば、モノオレイン酸ポリエチレンソルビタン等の脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導される部分エステルとエチレンオキサイドの縮合生成物であってよい。また水系懸濁液剤は、1種または複数の保存剤(例えば、エチル、またはn-プロピル、p-ヒドロキシ安息香酸エステル)、1種または複数の着色剤、1種または複数の香味剤、1種または複数の甘味剤(例えば、ショ糖またはサッカリン等)を含有していてもよい。
【００５８】
油系懸濁液剤は、例えば落花生油、オリーブ油、ゴマ油またはヤシ油などの植物油、あるいは液体パラフィンなどの鉱油中に有効成分を懸濁させることで製剤化することができる。油系懸濁液剤は、例えば蜜ロウ、硬パラフィンまたはセチルアルコールなどの増粘剤を含んでいてもよい。上記のような甘味剤および香味剤を添加して、風味の良い経口製剤を提供することができる。これらの組成物は、アスコルビン酸等の酸化防止剤を添加することにより防腐することができる。
【００５９】
水の添加による水系懸濁液剤の調製に好適な分散性粉剤および粒剤は、分散剤もしくは湿潤剤、懸濁剤および1種または複数の保存剤と混合された状態で有効成分を提供する。好適な分散剤もしくは湿潤剤および懸濁剤の例としては、すでに前述したものが挙げられる。また、例えば甘味剤、香味剤および着色剤等の別の添加剤を存在させることもできる。
【００６０】
本発明の医薬組成物は、水中油型乳濁液の形態とすることもできる。油相は、例えば、オリーブ油もしくは落花生油等の植物油、あるいは例えば、液体パラフィン等の鉱油、あるいはこれらの混合物であってよい。好適な乳化剤は、例えば、アカシアゴムまたはトラガカントゴム等の天然ゴム、例えば、大豆レシチン等の天然ホスファチド、ならびに例えば、モノオレイン酸ソルビタン等の脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導されるエステルもしくは部分エステル、ならびに例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン等の前記部分エステルとエチレンオキサイドの縮合生成物であってよい。乳濁液は、甘味剤および香味剤を含んでいてもよい。
【００６１】
シロップおよびエリキシル剤は、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトールまたはショ糖等の甘味剤とともに製剤化することができる。かかる製剤は、粘滑剤、保存剤ならびに香味剤および着色剤を含んでいてもよい。
【００６２】
医薬組成物は、滅菌注射用水系懸濁液剤または油系懸濁液剤の形態であってよい。この懸濁液剤は、上述の好適な分散剤もしくは湿潤剤および懸濁剤を用いて、周知の技術に従って製剤化することができる。また滅菌注射製剤は、例えば、1,3-ブタンジオール等の無毒性で非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液もしくは懸濁液であってよい。使用可能な許容されるビヒクルおよび溶媒には、水、リンゲル液および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、従来のように滅菌固定油も、溶媒または懸濁媒体として用いられる。この目的においては、合成モノグリセリドまたはジグリセリド等のあらゆる商品の固定油を使用することができる。さらに、オレイン酸等の脂肪酸を注射剤の調製に用いることができる。
【００６３】
本発明の化合物は、薬剤の直腸投与用の坐剤の形態で投与することもできる。これらの組成物は、常温では固体であるが、直腸温度では液体であることから直腸で溶融して薬剤を放出する、好適な非刺激性の添加剤と薬剤とを混合することで製造することができる。かかる原料は、カカオバターおよびポリエチレングリコールである。
【００６４】
局所用途には、本発明の化合物を含むクリーム、軟膏、ゼリー、溶液または懸濁液を用いる(この適用の目的において、局所適用には口内洗浄剤およびうがい剤が含まれるものとする)。
【００６５】
また本発明の化合物は、リポソームの形態で投与することができる。当技術分野で公知のとおり、リポソームは一般にリン脂質または他の脂質物質から誘導される。リポソームは、水性媒体中に分散された単層または多重層（マルチラメラ）の水和した液晶によって形成される。リポソームを形成することができる、無毒性で、生理学的に許容可能かつ代謝可能な脂質を用いることができる。リポソーム形態の本組成物は、本発明の化合物の他に、安定剤、保存剤、添加剤等を含有することができる。好ましい脂質は、天然および合成のリン脂質およびフォスファチジルコリンである。リポソームの形成方法は、当技術分野で公知である。
【００６６】
さらに本発明の医薬組成物および方法は、通常、上記の病的症状の治療に用いられている本明細書に記載の他の治療上活性のある化合物を含んでいてもよい。併用療法で使用される適当な薬剤は、慣用の製薬上の指針に従い、当業者により選択され得る。治療薬剤を組み合わせた場合、相乗的に作用して上述した様々な障害を治療または予防することができる。この手法を用いると、より低用量の各薬剤で治療効力を達成し、結果として、副作用の可能性を低減することができる。
【００６７】
他の治療薬剤の例としては、シクロスポリン類(例えば、シクロスポリンA)、CTLA4-Ig、ICAM-3、抗IL-2受容体(抗Tac)、抗CD45RB、抗CD2、抗CD3(OKT-3)、抗CD4、抗CD80、抗CD86等の抗体、CD40とgp39の間の相互作用を遮断する薬剤、例えば、CD40および/またはgp39に特異的な抗体(すなわちCD154)、CD40とgp39から構築される融合タンパク質(CD401gおよびCD8gp39)、デオキシスペルグアリン(DSG)等のNF-κB機能の阻害剤(例えば、核転座阻害剤等)、HMG CoAレダクターゼ阻害剤(ロバスタチンおよびシンバスタチン(simvastatin))等のコレステロール生合成阻害剤、イブプロフェン、アスピリン、アセトアミノフェン等の非ステロイド系抗炎症薬(NSAID)およびロフェコキシブ(rofecoxib)等のシクロオキシゲナーゼ阻害剤、プレドニゾンまたはデクサメタゾン等のステロイド、金化合物、メトトレキセート、FK506(タクロリムス(tacrolimus)、プログラフ(Prograf))、ミコフェノレートモフェチル(mycophenolate mofetil)等の抗増殖剤、アザチオプリン、VP-16、エトポシド、フルダラビン、シスプラチン、ドキソルビシン、アドリアマイシン、アムサクリン、カンプトテシン、シタラビン、ゲムシタビン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、フルオロデオキシウリジン、メルファランおよびシクロホスファミド等の抗腫瘍剤、テニダップ(tenidap)等のTNF-α阻害剤、抗TNF抗体または可溶性TNF受容体、ならびにラパマイシン(シロリムス(sirolimus)もしくはラパムン(Rapamune))またはそれらの誘導体などが挙げられる。
【００６８】
他の治療剤を本発明の化合物と組み合わせて使用する場合、それら薬剤は、例えば、米医薬品便覧(PDR)に記載の量、あるいは別途に当業者が決定する量で用いることができる。
【００６９】
さらに本発明の医薬組成物および方法は、薬剤流出系または薬剤解毒系および排出系の周知の阻害剤または基質である、本明細書に記載の他の治療上活性な化合物を含んでいてもよい。かかる系としては、P-糖タンパク質、多剤耐性関連タンパク質、肺耐性タンパク質およびグルタチオンS転移酵素イソ酵素α、μ、π、σ、θ、ζおよびκが挙げられる。これらの系の活性を阻害または低減することが知られている薬剤を同時投与すると、細胞中の治療薬剤の量を増加させることによって本発明に記載の化合物の効果を高めることができる。この手法を用いた場合、低用量で治療効果を達成することが可能となり、その結果、副作用の可能性を低減させることができる。これらの系に対する阻害剤または基質の例としては、ベラパミル、プロベネシッド、ジピリダモール、エタクリン酸、インドメタシン、スルファサラジン、ブチオニンスルホキシミン、サイクロスポリンA、およびタモキシフェンが挙げられる。
【００７０】
過剰増殖関連障害または病態の治療または予防において、適切な用量レベルは通常約0.01〜500mg/kg/日（１日当り、患者の体重1kg当り、0.01〜500mg）とし、それは一回または複数回で投与することができる。好ましくは、用量レベルは、約0.1〜約250mg/kg/日、より好ましくは約0.5〜約100mg/kg/日である。好適な用量レベルは、約0.01〜250mg/kg/日、約0.05〜100mg/kg/日、または約0.1〜50mg/kg/日とすることができる。この範囲内では、前記用量は0.05〜0.5、0.5〜5、または5〜50mg/kg/日とすることができる。経口投与の場合、本組成物は、好ましくは有効成分1.0〜1000mgを含む錠剤の形態で提供し、特には治療を受ける患者の症状に合わせた用量の調節を行うために、有効成分を1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0および1000.0mg含有させる。この化合物は、1日1〜4回、好ましくは1日1回もしくは2回の用法で投与することができる。
【００７１】
しかしながら、特定の患者における具体的な用量レベルおよび投与回数は変動し得るものであり、使用される具体的な化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用期間、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与の形態および時刻、排泄速度、併用薬剤、特定の症状の重度、ならびに治療を受けている宿主等の種々の要因によって決まることは理解されよう。
【００７２】
本明細書を通じて、「含む」、または「包含する」もしくは「含有する」などの変形表現は、記述されている1つの要素、整数もしくはステップ、または複数の要素、整数もしくはステップの群を包含することを示唆するものであるが、他のいかなる要素、整数もしくはステップ、または要素、整数もしくはステップの群も排除するものではないことは明らかであろう。
【００７３】
本明細書で言及されている刊行物はいずれも、本明細書に援用するものとする。
【００７４】
本明細書に含まれている文献、操作、原料、装置、商品等に関する記載はすべて、専ら本発明の内容を提供することを目的としたものである。それは、それらの事項のいずれかまたは全てが、先行技術の基礎の一部を構成するもの、あるいは本出願の各請求項の優先日以前にオーストラリアにおいて存在したとして本発明に係わる分野での一般的な知識であったことを認めるものと解釈すべきではない。
【００７５】
本発明の性質をより明瞭に理解することを目的として、本発明の好ましい形態について、下記の実施例(これらに限定されるものではない)を参照しながらここに説明する。
【００７６】
〔実施例〕
物質および方法:
化合物合成
化合物は、一般に2,6-ジクロロピラジンから2ステップの工程で調製される。
【００７７】
第1のステップは、求核性芳香族置換によるモノアミノ-モノハロ中間体の生成である(スキーム1)。
【００７８】
【化７】
0004777065.tif 000008
【００７９】
この求核芳香族置換は、典型的には、エタノール、イソプロパノール、tert-ブタノール、ジオキサン、THF、DMF、エトキシエタノール、トルエン、またはキシレン等の溶媒中、ジハロゲン化ヘテロ環に第1級アミンを添加することにより行う。その反応は、典型的には、過剰アミンまたは非求核性塩基(例えば、トリエチルアミンもしくはジイソプロピルエチルアミン)、あるいは無機塩基(例えば、炭酸カリウムもしくは炭酸ナトリウム)のの存在下で高温で行う。
【００８０】
あるいは、遷移金属の触媒作用を利用したアミノ化反応を介してアミノ置換基を導入してもよい。かかる変換用の代表的な触媒としては、Pd(OAc)2/P(t-Bu)3、Pd2(dba)3/BINAP、およびPd(OAc)2/BINAPが挙げられる。これらの反応は、典型的には、トルエンまたはジオキサン等の溶媒中、セシウムカーボネートまたはナトリウムもしくはカリウムtert-ブトキシド等の塩基の存在下、室温から還流までの温度範囲で実施される。
【００８１】
これらの化合物の合成の第1ステップで用いられるアミンは、購入により入手するか、あるいは当業者に周知の方法を用いて調製される。特定に関心がもたれるのは、オキシムの還元により調製可能なα-アルキルベンジルアミンである(スキーム2)。典型的な還元剤としては、水素化アルミニウムリチウム、活性炭触媒上のパラジウムの存在下における水素ガス、塩酸の存在下におけるZn、TiCl3、ZrCl4、NiCl2およびMoO3等のルイス酸の存在下における水素化ホウ素ナトリウム、あるいはAmberlyst H15イオン交換樹脂およびLiClと併用する水素化ホウ素ナトリウムが挙げられる。
【００８２】
【化８】
0004777065.tif 000009
【００８３】
またα-アルキルベンジルアミンは、対応するケトンの還元的アミノ化により調製することができる。かかる変換のための古典的方法はロイカルト‐ワラッハ反応であるが、触媒条件または代替方法(例えば、NH40Ac、Na(CN)BH3))を用いることもできる。
【００８４】
またα-アルキルベンジルアミンは、対応するα-アルキルベンジルアルコールから調製することもできる。かかる方法は、メシレートまたはトシレートなどのヒドロキシルの誘導体化および窒素求核剤(例えば、慣用の合成法を用いて第1級アミンに変換されるフタルイミドまたはアジド)による置換、あるいはMitsunobu法類似の条件下での好適な窒素求核剤によるヒドロキシルの置換が挙げられる。α-アルキルベンジルアルコールは、メタノール等の溶媒中、水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤を用いて対応するケトンを還元することにより調製することができる。あるいはα-アルキルベンジルアルコールは、ベンズアルデヒド誘導体にアルキル金属種(グリニャール試薬等)を添加することにより得ることができるが、それは、典型的には、テトラヒドロフラン等の溶媒中、室温またはそれ以下で実施される。
【００８５】
高光学純度のα-アルキルベンジルアミンは、上に概説した方法を用いて、キラルなα-アルキルベンジルアルコールから調製することができる。キラルなα-アルキルベンジルアルコールは、対応するケトンの不斉（キラル）還元により得ることができる。不斉還元方法は現在有機化学では周知であり、酵素法、不斉水素化方法、およびキラルオキサボロリジン(oxazaborolidine)が挙げられる。
【００８６】
この合成の第2のステップは、代表的には、モノアミノ-モノハロ中間体と好適に官能化されたカップリング相手とのパラジウム介在交差カップリングを含む。代表的なカップリング相手は、ボロン酸(スズキカップリング:例えば、Miyaura, N.およびSuzuki、Chem. Rev. 1995、95 2457を参照)またはスタンナン類(スティルカップリング:例えば、Stille, J. K., Angew. Chem., Int. Ed. Engl.,1986, 25, 508を参照)である(スキーム3)。
【００８７】
【化９】
0004777065.tif 000010
【００８８】
スズキカップリングは好ましいカップリング法であり、典型的には、DME、THF、DMF、エタノール、プロパノール、トルエンまたは1,4-ジオキサン等の溶媒中、炭酸カリウム、水酸化リチウム、炭酸セシウム、水酸化ナトリウム、フッ化カリウムまたはリン酸カリウム等の塩基存在下で行う。この反応は高温で行うことができ、使用されるパラジウム触媒は、Pd(PPh3)4、Pd(OAc)2、[PdCl2(dppf)]、Pd2(dba)3/P(t-Bu)3、Pd/Cから選択することができる。
【００８９】
この反応方法から形成された生成物は、当業者に周知の技術を用いてさらに誘導体化することができる。あるいは、6-クロロ置換基を置換する前に、モノアミノモノクロロピラジンの誘導体化を試みてもよい。この誘導体化は、典型的にはアミン種に元来存在する官能性を含み、当業者に周知の方法を用いる。
【００９０】
代表的な合成を下に報告する。
【００９１】
(実施例1)
【００９２】
【化１０】
0004777065.tif 000011
【００９３】
エーテル(4ml、8mmol)に溶解した塩化プロピルマグネシウムの2M溶液を、N2下で0℃まで冷却したアルデヒド(1.14g、6.6mmol)の無水THF(10ml)溶液に添加した。この混合物を室温で16時間撹拌し、その後、飽和塩化アンモニウム溶液を添加した。酢酸エチルへこの生成物を抽出し、その酢酸エチル層を乾燥かつ濃縮し、純粋な生成物(1.4g、98%)を得た。
1H-n.m.r. (CDCl3)δ0.94 (t, J=7.2Hz, 3H CH3)、1.41 (m, 2H, CH2)、1.75 (m, CH2, 2H)、4.77 (br s, 1H, CH)、7.44〜7.62(m, 4H, ArH)
【００９４】
同様の方法を用いて、以下の化合物を調製した。
【００９５】
【表１Ａ】
0004777065.tif 000012
【表１Ｂ】
0004777065.tif 000013
【００９６】
(実施例2)
【００９７】
【化１１】
0004777065.tif 000014
【００９８】
N2下で-10℃まで冷却した1-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ブタン-1-オール(1.4g、6.4mmol)およびジフェニルホスホリルアジド(2.8ml、12.8mmol)のTHF(6mL)の溶液をDBU(1.9mL、12.8mmol)で処理した。得られた溶液を室温で20時間撹拌し、次いで、エーテルとH2Oの混合物で希釈した。有機相を乾燥かつ濃縮し、溶離液としてヘキサン:ジエチル酢酸エチル(10:1)を用いてカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製し、純粋なアジ化物(0.85g、54%)を得た。
1H-n.m.r. (CDCl3)δ0.94 (t, J=7.2Hz, 3H CH3)、1.37 (m, 2H, CH2)、1.75 (m, 2H, CH2)、4.50 (t, 1H, CH)、7.42 (d, J=7.8Hz, 2H, ArH)、7.64 (d, J=7.8Hz, 2H, ArH)
【００９９】
同様の方法を用いて、以下の化合物を調製した。
【０１００】
【表２Ａ】
0004777065.tif 000015
【表２Ｂ】
0004777065.tif 000016
【０１０１】
(実施例3)
【０１０２】
【化１２】
0004777065.tif 000017
【０１０３】
1-(1-アジドブチル)-4-(トリフルオロメチル)ベンゼン(0.84g、3.5mmol)およびトリフェニルホスフィン(1.8g、6.9mmol)の酢酸エチル(6mL)および10% HCl(6ml)中の混合物を室温で64時間撹拌した。水相を回収し、有機相を10% HCl(3×5mL)で抽出した。水層を合わせ、5MのNaOHで塩基性化し、次いで、酢酸エチル(5×15mL)で抽出した。有機相を乾燥かつ濃縮して純粋なアミン(0.4g、54%)を得た。
1H-n.m.r. (CDCl3)δ0.91 (t, J=7.4Hz, 3H CH3)、1.31 (m, 2H, CH2)、1.62 (m, 2H, CH2)、3.97 (m, 1H, CH)、7.43 (dd, 2H, Ar-H)、7.58 (dd, 2H, Ar-H)
【０１０４】
同様の方法を用いて、以下の化合物を調製した。
【０１０５】
【表３Ａ】
0004777065.tif 000018
【表３Ｂ】
0004777065.tif 000019
【０１０６】
(実施例4)
【０１０７】
【化１３】
0004777065.tif 000020
【０１０８】
3-フルオロ安息香酸(140mg、1mmol)およびN,O-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(107mg、1.1mmol)のジクロロメタン(2.5mL)中の懸濁液に、1-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-3-エチルカルボジイミド塩酸塩(EDC)(211mg、1.1mmol)を添加し、この混合物を75時間室温で撹拌した。減圧下で溶媒を除去し、残渣を酢酸エチル-ヘキサン(4:6)を用いてクロマトグラフィーにかけ、純粋な生成物(130mg、71%)を単離した。
1H-n.m.r. (CDCl3)δ3.36 (s, 3H, N-Me)、3.55 (s, 3H, N-OMe)、7.1〜7.2 (m, 1H, Ar)、7.3〜7.5 (m, 3H, Ar)
【０１０９】
同様の方法を用いて、以下の化合物を調製した。
【０１１０】
【表４Ａ】
0004777065.tif 000021
【表４Ｂ】
0004777065.tif 000022
【０１１１】
(実施例5)
【０１１２】
【化１４】
0004777065.tif 000023
【０１１３】
-10℃まで冷却した3-フルオロ-N-メトキシ-N-メチルベンズアミド(130mg、0.71mmol)の無水THF(2mL)溶液に、窒素下で塩化プロピルマグネシウム(532μl、エーテル中の2M溶液、1.1mmol)を添加した。この溶液を-10℃で1時間、さらに室温で75分間撹拌した。溶液を飽和塩化アンモニウム溶液中に注ぎ入れ、生成物を酢酸エチル(3×25mL)で抽出した。有機層を合わせ、食塩水で洗浄し、乾燥(MgSO4)し、さらに濃縮し、浅黄色油状物を得た。これを酢酸エチル-ヘキサン(1:9)を用いてクロマトグラフィーにより精製し、純粋な生成物(78mg、66%)を単離した。
1H-n.m.r. (CDCl3)δ1.01 (t, J=7.4Hz, 3H, Me)、1.77 (sep, 2H, CH2CH3)、2.93 (t, J=7.2Hz, 2H, COCH2)、7.15〜7.30 (m, 1H, Ar)、7.35〜7.50 (m, 1H, Ar)、7.60〜7.70 (m, 1H, Ar)、7.70〜7.80 (m, 1H, Ar)
【０１１４】
同様の方法を用いて、以下の化合物を調製した。
【０１１５】
【表５Ａ】
0004777065.tif 000024
【表５Ｂ】
0004777065.tif 000025
【０１１６】
(実施例6)
【０１１７】
【化１５】
0004777065.tif 000026
【０１１８】
窒素下の1-(3-フルオロフェニル)ブタン-1-オン(430mg、2.4mmol)および酢酸アンモニウム(1.09g、14.1mmol)のメタノール(10mL)中溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム(2.35ml、THF中の1M溶液、2.35mmol)を添加した。この溶液を室温で38時間撹拌し、その後、濃塩酸を加えてpHを約2にした。泡立ちが消失した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を酢酸エチルおよび水に溶かした。有機相を回収し、酢酸エチル(20mL)で水相を洗浄した。この水相を固体KOHを用いてpHを約10に塩基性化し、生成物を酢酸エチル(3×20mL)へ抽出した。有機層を合わせ、食塩水で洗浄し、乾燥(MgSO4)し、さらに濃縮し、純粋な生成物(120mg、28%)を得た。
1H-n.m.r. (CDCl3)δ0.90 (t,J=7.2Hz, 3H, CH2 CH2 CH3)、1.17〜1.44 (m, 2H, CH2 CH2 CH3)、1.58〜1.69 (m, 2H, CH2 CH2 CH3)、1.81 (brs, 2H, NH2)、3.88 (t, J=6.8Hz, CHNH2)、7.20〜7.32 (m, 4H, Ar)
【０１１９】
同様の方法を用いて、以下の化合物を調製した。
【０１２０】
【表６Ａ】
0004777065.tif 000027
【表６Ｂ】
0004777065.tif 000028
【０１２１】
(実施例7)
【０１２２】
【化１６】
0004777065.tif 000029
【０１２３】
N2下で0℃まで冷却した3-アミノ-3-フェニルプロパン酸(2.0g、12.1mmol)の無水THF(45mL)中の懸濁液に、20分かけて固体LiAlH4(920mg、24.2mmol)を分けて添加した。室温で24時間撹拌を継続し、その後、重い白色沈殿物のみが存在するようになるまで、固体Na2SO4・10H2Oを撹拌しながら添加した。エーテルで有機層を希釈し、セライト(商標)を通して濾過し、減圧濃縮した。酢酸エチル(50mL)に残渣を溶かし、1NのHCl(3×40mL)で抽出した。水層を合わせて、5MのNaOHによりpHを約12に塩基性化した。酢酸エチル(3×50mL)で水相を抽出し、合わせた有機相を乾燥し(Na2SO4)、減圧濃縮して生成物を単離した。生成物はそれ以上精製することなく用いた(0.9g、49%)。
1H-n.m.r. (CDCl3)δ1.84〜1.94 (m, 2H, CH2CH2OH)、2.68 (br s, 1H, NH2)、3.79 (t, J=5.8Hz, 2H, CH2CH2OH)、4.08〜4.15 (m, 1H, CHNH2)、4.77 (q, 1H, CH)、7.21〜7.38 (m, 5H, Ar-H)
【０１２４】
(実施例8)
【０１２５】
【化１７】
0004777065.tif 000030
【０１２６】
1-[4-(トリフルオロメチル)フェニル]ブタン-1-アミン(0.40g、1.9mmol)および2,6-ジクロロピラジン(0.55g、3.7mmol)の1,4-ジオキサン(6mL)中の溶液に、無水炭酸カリウム(0.39g、2.8mmol)を添加した。得られた混合物を18時間加熱還流した。室温まで冷却後、酢酸エチルおよびH2Oで混合物を希釈した。有機相を回収し、乾燥かつ濃縮した。酢酸エチル-ヘキサン(1:1)で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製し、純粋な生成物(0.03g、5%)を得た。
1H-n.m.r. (CDCl3)δ0.95 (t, J=7.4Hz, 3H CH3)、1.39 (m, 2H, CH2)、1.81 (m, 2H, CH2)、4.77 (q, 1H, CH)、5.09 (br d, 1H, NH)、7.42〜7.62 (m, 5H, Ar-H)、7.80 (s, 1H, ピラジン-H)
【０１２７】
同様の方法を用いて、以下の化合物を調製した。
【０１２８】
【表７Ａ】
0004777065.tif 000031
【表７Ｂ】
0004777065.tif 000032
【表７Ｃ】
0004777065.tif 000033
【表７Ｄ】
0004777065.tif 000034
【０１２９】
(実施例9)
【０１３０】
【化１８】
0004777065.tif 000035
【０１３１】
0℃まで冷却したN-[1-(3-アミノフェニル)ブチル]-6-クロロピラジン-2-アミン(0.10g、0.36mmol)およびトリエチルアミン(100μl、0.72mmol)のジクロロメタン(3mL)中の撹拌溶液に、塩化アセチル(31μL、0.43mmol)を添加した。得られた混合物を室温で18時間撹拌し、次いで、ジクロロメタン(10mL)で希釈し、H2O(10mL)および食塩水(10mL)で洗浄した。有機相を回収し、乾燥かつ濃縮し、酢酸エチル-ヘキサン(1:1)で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製し、純粋な生成物(94mg、82%)を得た。
1H-n.m.r. (CDCl3)δ0.93 (t, J=7.4Hz, 3H, Me)、1.28〜1.43 (m, 2H, CH2)、1.76〜1.85 (m, 2H, CH2)、2.16 (s, 3H, COCH3)、4.48〜4.59 (m, 1H, CHCH2CH2CH3)、5.15 (br d, J=6.8Hz, 1H, NH)、7.06 (d, J=7.4Hz, 1H, Ar)、7.23〜7.33 (m, 3H, Ar)、7.54 (s, 1H, CONH)、7.60 (s, 1H, ピラジン-H)、7.77 (s, 1H, ピラジン-H)。
【０１３２】
(実施例10)
【０１３３】
【化１９】
0004777065.tif 000036
【０１３４】
窒素雰囲気下、6-クロロ-N-[1-(3-メチルフェニル)ブチル]ピラジン-2-アミン(0.21g、0.76mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)フェノール(0.23g、91mmol)、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(90mg、0.08mmol)のトルエン-n-プロパノール(4mL、3:1)中の混合物を2Mの炭酸ナトリウム水溶液(0.4mL、0.84mmol)で処理した。得られた混合物を、22時間加熱還流下、激しく撹拌した。一度、冷却酢酸エチルを添加し、混合物を乾燥(MgSO4)し、さらに濾過した。次いで、溶媒を減圧内で除去し、粗生成物を得た。これを、溶離液としてジクロロメタン:ジエチルエーテル(90:10)を用いてカラムクロマトグラフィーにより精製し、生成物を得た(0.165g、60%)。
1H-n.m.r. (CDCl3)δ0.95 (t, 3H, CH3)、1.42 (m, 2H, CH2)、1.82 (m, 2H, CH2)、2.33 (s, 3H, CH3-Ar)、3.94 (s, 3H, CH3-0)、4.75 (m, 1H, CH)、5.09 (d, 1H, NH)、6.25 (br s, 1H, 0H)、6.94〜7.50 (m, 7H, Ar-H)、7.66 (s, 1H, ピラジン-H)、8.20 (s, 1H, ピラジン-H)。
【０１３５】
同様の方法を用いて、以下の化合物を調製した。
【０１３６】
【表８Ａ】
0004777065.tif 000037
【表８Ｂ】
0004777065.tif 000038
【表８Ｃ】
0004777065.tif 000039
【表８Ｄ】
0004777065.tif 000040
【表８Ｅ】
0004777065.tif 000041
【表８Ｆ】
0004777065.tif 000042
【０１３７】
(実施例11)
【０１３８】
【化２０】
0004777065.tif 000043
【０１３９】
窒素下で-30℃まで冷却したn-ブチルリチウム(3.8mL、ヘキサン中2.5M、9.4mmol)のTHF(40mL)中の溶液に、2,2,6,6-テトラメチルピペリジン(1.7mL、10.1mmol)を添加した。この溶液を20分かけて0℃まで加温し、次いで-70℃まで冷却した。2,6-ジクロロピラジン(1g、6.7mmol)のTHF(40mL)溶液を滴下して添加し、得られた褐色溶液を-70℃で30分間撹拌した。次いで、ヨードメタン(4.1mL、67mmol)を添加し、この溶液を-70℃でさらに45分間撹拌し、その後、エタノール(5mL)、THF(5mL)および1N HCl(1mL)の混合物を添加した。溶液を室温まで加温し、減圧下で濃縮した。H2O(50mL)中に残渣を溶解し、ジクロロメタン(3×30mL)へ生成物を抽出した。合わせた有機層をH2O(50mL)および食塩水(50mL)で洗浄し、乾燥させた(Na2SO4)。有機層を減圧下で濃縮し、ジクロロメタン-ヘキサン(1:1)を用いて溶出するカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製し、透明な流動性油状物として生成物を単離した(820mg)。
1H-n.m.r. (CDCl3)δ2.65 (s, 3H, CH3)、8.41 (s, 1H, ピラジン-H)。
【０１４０】
(実施例12)
【０１４１】
【化２１】
0004777065.tif 000044
【０１４２】
無水CH3CN(30ml)に溶解したフェノール(0.25g;0.72mmol)の脱気溶液を-10℃まで冷却し、CBr4(1.19g;3.60mmol)を添加し、この混合物を10分間撹拌した後、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.20g;1.51mmol)および4-ピロリジニルピリジン(0.011g;0.072mmol)を添加した。1分後、ジベンジルホスホネート(0.27g;1.04mmol)を滴下しながら添加した。発熱反応は、ホスホネートの添加の速度および冷却することによって、内部温度を-10℃またはそれ以下に維持することによって制御した。反応混合物は淡黄色になり、TLCによって完了したと判断するまで-10℃で撹拌した(約45分)。KH2PO4水溶液(0.5M、32ml/100ml CH3CN)を添加し、混合物をEtOAc(3×100ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を水(1×50mL)、食塩水(1×75mL)で続けて洗浄し、乾燥し(Na2CO3/Na2SO4)、さらに減圧下で濃縮した。石油エーテル/酢酸エチルの勾配混合物で溶出する中性アルミナで残渣をクロマトグラフィーにかけることより混合物から74%の収率でジベンジルホスホネートエステルを得た。
1H NMR (200MHz, DMSO-d6)δ0.96 (t, J=7.4Hz, 3H, CH2CH2CH3)、1.52〜1.23 (m, 2H, CH2CH2CH3)、1.93〜1.75 (m, 2H, CH2CH2CH3)、3.84 (s, 3H, OCH3)、4.87〜4.83 (m, 1H, NHCHCH2)、5.16 (s, 2H, PhCH2)、5.17 (d, J=7.8Hz, 1H, NH)、5.20 (s, 2H, CH2)、6.97〜6.87 (m, 1H, ArH)、7.48〜7.06 (m, 16H, ArH)、7.77 (s, 1H, ピラジン-H)、8.20 (s, 1H, ピラジン-H)。
【０１４３】
メタノール(100ml)に溶解したジベンジルホスホネート(0.95g;1.51mmol)の窒素でパージした溶液に10%のPd/C(250mg)を添加し、混合物を一晩Parr Hydrogenatorで水素化した。室温まで冷却後、セライト(商標)を通して反応混合物を濾過した。固形物をMeOH(3×50ml)で洗浄し、減圧下でMeOHおよび合わせた濾過液を除去したところ黄色固形物が残り、これをMeOH/Et2Oから再結晶化して所望の生成物0.48g;71%を得た。m/z(ES)448.22;(M+1)。
【０１４４】
スクリーニング
（化合物の希釈）
スクリーニング用に、化合物を20μMの濃度で96ウェルプレート中で希釈した。プレートを37℃で30分間加温した後、アッセイに供した。
【０１４５】
（TEL:JAK細胞系の樹立）
TELのヌクレオチド1〜487を包含しているコード領域は、オリゴヌクレオチド5TEL(5'-GGA GGA TCC TGA TCT CTC TCG CTG TGA GAC-3')および3TEL(5'-AGGC GTC GAC TTC TTC TTC ATG GTT CTG-3')、およびテンプレートとしてのU937 mRNAを用いて、PCRによって増幅した。BamH I部位は5TELプライマー中に存在させ、Sal I部位は3TELプライマーへ組み込んだ。JAK2(ヌクレオチド2994〜3914;JAK2F 5'-ACGC GTC GAC GGT GCC TTT GAA GAC CGG GAT-3';JAK2R 5'-ATA GTT TAG CGG CCG CTC AGA ATG AAG GTC ATT T-3')、およびJAK3(ヌクレオチド2520〜3469;JAK3F 5'-GAA GTC GAC TAT GCC TGC CAA GAC CCC ACG ATC TT-3';JAK3R 5'-GGA TCT AGA CTA TGA AAA GGA CAG GGA GTG GTG TTT-3')のキナーゼドメインを包含している領域は、Taq DNAポリメラーゼ(Gibco/BRL)およびテンプレートとしてのU937 mRNAを用いて、PCRによって作製した。Sal I部位はJAK2とJAK3のフォワードプライマーへ組み込み、Not I部位はJAK2のリバースプライマーへ組み込み、Xba I部位はJAK3のリバースプライマーに加えた。
【０１４６】
BamH I/Sal IによりTELのPCR産物を消化し、Sal I/Not IによりJAK2のPCR産物を消化した後、ライゲーションし、BamH I-Not Iで消化した哺乳動物発現ベクターpTRE 2(Clontech)中へサブクローニングすることによりTEL/Jak2融合物を得た(pTELJAK2)。JAK3については、Sal I/Not I切断キナーゼドメインPCR産物をBamH I/Sal I切断TEL産物とライゲートさせた後、BamH I/Not I切断pTRE2へライゲートさせた(pTELJAK3)。
【０１４７】
pTET-オフプラスミド(Clontech)を有する増殖因子依存性骨髄単球性細胞系BaF3をpTELJAK2またはpTELJAK3でトランスフェクトし、細胞を増殖非依存性因子について選択した。BaF 3野生型細胞は、DMEM 10%FCS、10%WEHI 3B調整培地中で培養した。BaF3 TEL/JAK細胞は、DMEM 10%のTet-System Approved FBS(WEHI 3B調整培地非含有)中で培養した。
【０１４８】
（癌細胞系の増殖および維持）
K562(慢性骨髄白血病)、PC3(前立腺癌)およびDU145(前立腺癌)はAmerican Type Culture Collection(ATCC)から入手した。K562は、Glutamxを添加した10%FBS含有RPMIで増殖させた。DU145細胞は、GlutamxおよびMEM非必須アミノ酸を添加した10%FBS含有DMED中で培養した。PC3細胞は、GlutamxおよびMEM非必須アミノ酸を添加した10%FBS含有F12K培地で培養した。すべての細胞は、5%CO2中、37℃で増殖させた。
【０１４９】
細胞アッセイは以下のようにして行なった:
細胞懸濁液は培養物から細胞を回収することにより調製した(この試験に使用する細胞は、後期対数期増殖および高生存活性のものでなければならない)。細胞を適正な増殖培地で希釈して1.1倍の最終濃度とした(細胞系に応じて、細胞50000個/mL〜200,000個/mL)。
【０１５０】
試験する化合物を平底96ウェルプレートに加えた(10μL、10倍最終濃度)。細胞懸濁液(1ウェル当たり90μL)を添加し、プレートを40時間、37℃、5%CO2でインキュベートした。MTT(1ウェル当たり20μL、PBS中5mg/mL)を添加し、プレートをインキュベーターに戻してさらに6時間経過させた。溶菌緩衝液(100μL/ウェル、10%SDS、0.01N HCl)を加え、プレートをインキュベーターに戻して一晩経過させた。次に、プレートの読み取りを590nmで行った。
【０１５１】
（チューブリンアッセイ）
微小管集合体(assembly)のタービドメーターによるアッセイは、サーモスタットで調節されている分光光度計内で37℃でキュベット中の微小管タンパク質をインキュベートし、経時的に340nmにおける吸光度の変化を測定することにより実施した。微小管タンパク質は0℃で各試験化合物と一緒にインキュベートし、1mM GTPの添加で重合を開始した後、37℃まで加温した。
【０１５２】
（結果）
一連の化合物の活性を表1(Table1)に示す。20μM以下の濃度で細胞増殖の50%を阻害する能力を示した化合物は「+」として表している。同様に、50μMで50%以上チューブリン重合を阻害した化合物は「+」として表し、50μMで50%までチューブリン重合を阻害しなかった化合物は「-」として表している。試験しなかった化合物は「NT」として表している。
【０１５３】
【表９Ａ】
0004777065.tif 000045
【表９Ｂ】
0004777065.tif 000046
【表９Ｃ】
0004777065.tif 000047
【表９Ｄ】
0004777065.tif 000048
【表９Ｅ】
0004777065.tif 000049
【表９Ｆ】
0004777065.tif 000050
【表９Ｇ】
0004777065.tif 000051
【表９Ｈ】
0004777065.tif 000052
【表９Ｉ】
0004777065.tif 000053
【表９Ｊ】
0004777065.tif 000054
【表９Ｋ】
0004777065.tif 000055
【表９Ｌ】
0004777065.tif 000056
【０１５４】
広く記載された本発明の趣旨または範囲を逸脱しない限りにおいて、具体的な実施形態で示した本発明に対して、多くの変更および/または修正を行うことが可能であることは当業者に理解されよう。従って、上記実施形態は、あらゆる面で例示的なものであって、本発明を限定するものではないと考えるべきものである。