(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
３Ｓ,４ａＲ,６Ｓ,８ａＲ−６−(((２Ｓ)−２−(エトキシカルボニル)−４,４−ジフルオロピロリジニル)メチル)−１,２,３,４,４ａ,５,６,７,８,８ａ−デカヒドロイソキノリン−３−カルボン酸エチル、またはその医薬的に許容し得る塩。
【請求項２】
３Ｓ,４ａＲ,６Ｓ,８ａＲ−６−(((２Ｓ)−２−(カルボン酸)−４,４−ジフルオロピロリジニル)メチル)−１,２,３,４,４ａ,５,６,７,８,８ａ−デカヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、またはその医薬的に許容し得る塩。
【請求項３】
偏頭痛の処置のための医薬の製造における、請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容し得る塩の使用。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容し得る塩を、１つ以上の医薬的に許容し得る担体、希釈物または賦形剤と組み合わせて含む、偏頭痛の処置のための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（背景技術）
哺乳動物の中枢神経系（ＣＮＳ）において、神経インパルスの伝達は、ニューロトランスミッター（これは、発信（ｓｅｎｄｉｎｇ）ニューロンによって放出される）と、受信（ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ）ニューロン上にある表面受容体（これは、この受信ニューロンの興奮を引き起こす）との間の相互作用によって制御される。Ｌ−グルタミン酸（これは、ＣＮＳ中に最も豊富に存在するニューロトランスミッターである）は、哺乳動物の主要な興奮経路を媒介しており、興奮性アミノ酸（ＥＡＡ）と呼ばれる。グルタミン酸に対して反応する該受容体は、興奮性アミノ酸受容体（ＥＡＡ受容体）と呼ばれる。Ｗａｔｋｉｎｓ  &  Ｅｖａｎｓによる、Ａｎｎ、Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，２１．１６５（１９８１）；Ｍｏｎａｇｈａｎ，Ｂｒｉｇｄｅｓ．およびＣｏｔｍａｎによる、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，２９．３６５（１９８９）；Ｗａｔｋｉｎｓ、Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−ＬａｒｓｅｎおよびＨｏｎｏｒｅによる、Ｔｒａｎｓ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１１、２５（１９９０）を参照のこと。該興奮性アミノ酸は生理学的に非常に重要であり、多数の生理学的なプロセス（例えば、長期間にわたる増強（学習および記憶））、シナプス可塑性の発達、運動制御、呼吸、心臓血管の調節および知覚認知において役割を果たしている。
【０００２】
興奮性アミノ酸受容体は２つの一般的なタイプに分類される。ニューロンの細胞膜におけるカチオンチャンネルの開放部に直接に結合している受容体は、「イオンチャンネル型」と呼ばれる。このタイプの受容体は少なくとも３つのサブタイプに分類され、それらは選択的な作動薬であるＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）、α−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチルイソオキサゾール−４−プロピオン酸（ＡＭＰＡ）およびカイニン酸（ＫＡ）の脱分極作用によって定義される。分子生物学的な研究により、ＡＭＰＡ受容体はサブユニット（ＧｌｕＲ１〜ＧｌｕＲ４）を含み、これらは集合して機能性イオンチャンネルを形成することができることが確立されている。５つのカイン酸受容体は同定されており、それらは高アフィニティーのもの（ＫＡ１およびＫＡ２）または低アフィニティーのもの（ＧｌｕＲ５、ＧｌｕＲ６およびＧｌｕＲ７）に分類される。ＢｌｅａｋｍａｎらによるＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，４９，Ｎｏ．４、５８１（１９９６）を参照。
【０００３】
第２の一般的なタイプの受容体は、Ｇ−プロテインまたは二次メッセンジャーが結合した「代謝調節型」の興奮性アミノ酸受容体である。この第２のタイプは、多数の二次メッセンジャーシステムと結合しており、ホスホイノシチドの加水分解の増大、ホスホリパーゼＤの活性化、ｃ−ＡＭＰ生成の増減およびイオンチャンネル機能の変化を引き起こす。ＳｃｈｏｅｐｐおよびＣｏｎｎによる、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，１４，１３（１９９３）を参照。両方のタイプの受容体は、興奮性経路に沿って正常なシナプス伝達を媒介するだけではなく、発達の間および一生を通じてシナプス結合の改変にも関与するようである。Ｓｃｈｏｅｐｐ、ＢｏｃｋａｅｒｔおよびＳｌａｄｅｃｚｅｋによる、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，１１，５０８（１９９０）；ＭｃＤｏｎａｌｄおよびＪｏｈｎｓｏｎによるＢｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，１５，４１（１９９０）を参照。
【０００４】
興奮性アミノ酸受容体の過剰なまたは不適当な刺激により、興奮性毒性として知られる機構を介してニューロン細胞の損傷または欠失を生じる。このプロセスは、多数の神経学的な障害および病気におけるニューロン変性を媒介すると提案されている。それらニューロン変性についての医学的な結果は、これら変性の神経学的なプロセスの寛解を重要な治療学的な目標とする。
【０００５】
興奮性アミノ酸の興奮毒性は、多数の神経学的な障害の病態生理学に関係する。例えば、興奮性毒性は心臓バイパス手術および移植後の大脳の欠失、発作、大脳の虚血、外傷または炎症が原因の脊髄損傷、出生時の低酸素症、心臓の停止および低血糖性のニューロンの損傷に関係している。加えて、興奮性毒性は、慢性的な神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、遺伝性の失調、ＡＩＤＳ誘発性の痴呆、筋萎縮性側索硬化症、特発性で薬物誘発性のパーキンソン病を含む）、並びに眼球の損傷および網膜症に関係する。興奮毒性および／またはグルタミン酸の機能不全に関係する他の神経学的な障害としては、筋肉の痙攣（これは、振戦を含む）、薬物耐性および退薬、脳浮腫、痙攣性障害（これは、癲癇を含む）、うつ病、不安および不安関連障害（例えば、脳外傷後症候群）、遅発性異常症候群、および鬱病、精神分裂病、双極性異常、躁病に関連する精神病）、並びに薬物の中毒および習慣性を含む。加えて、興奮性アミノ酸の興奮毒性は急性および慢性の痛み（これは、激しい痛み、難治性の痛み、神経障害性の痛みおよび外傷後の痛みを含む）状態の病因に関与することも報告されている。
【０００６】
神経保護薬（例えば、興奮性アミノ酸受容体拮抗薬）の使用は、これらの障害を治療したりもしくは予防するのに、および／またはこれらの障害に関連する神経学的な損傷の量を減少させるのに有用であると考えられている。興奮性アミノ酸受容体拮抗薬は鎮痛薬としても有用となり得る。
【０００７】
偏頭痛の病態生理学に関する早期の理論は、ＧｒａｈａｍおよびＷｏｌｌｆによる研究（Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｐｈｙｃｈｉｔａｒｙ，３９，７３７−６３（１９３８））によって１９３８年以来、支配されている。彼等は、偏頭痛の原因は頭蓋外脈菅の血管拡張であると提案している。この見方は、麦角アルカロイドおよびスマトリプタンが頭部の血管の平滑筋を収縮させ、偏頭痛の処置において有用であるとの知識によって支持される。スマトリプタンは、セロトニン５−ＨＴ−１様受容体での親水性作動薬であって、血液脳関門を横切らない（ＨｕｍｐｈｅｒｙらによるＡｎｎ． ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．， ６００， ５８７−６００ （１９９０））。その結果として、いくつかの系列の化合物は偏頭痛の処置において有用であると言われており、そして５−ＨＴ１様媒介スマトリプタンの血管収縮性活性を最適化するように開発されてきている。しかしながら、スマトリプタンの禁避（これは、冠血管の痙攣、高血圧症およびアンギナを含む）もまた、その血管収縮性活性の産物である（ＭａｃＩｎｔｙｐｅ，Ｐ．Ｄ．らによるＢｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，３４，５４１−５４６ （１９９２）；Ｃｈｅｓｔｅｒ，Ａ．Ｈ．らによるＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１６１，９１−９４（１９９０））。
【０００８】
偏頭痛についての血管の機構は広く認知されているが、その有用性については完全に一致しているわけではない。例えば、Ｍｏｓｋｏｗｉｔｚらは、偏頭痛の出現が血管の直径の変化とは独立していることを示している（Ｃｅｐｈａｌａｌｇｉａ，１２，５−７（１９９２））。三叉神経節およびそれに関連する神経経路は頭痛など（特に、偏頭痛）の面からの痛みの知覚と関連していることが知られている。Ｍｏｓｋｏｗｉｔｚは、未知のトリガーが三叉神経節を刺激し、このことにより、頭部組織内の脈菅構造が神経支配され、そして脈菅構造を神経支配する軸索からの血管作動性の神経ペプチドの放出が上昇すると提案している。これらの神経ペプチドは、髄膜の神経原性の炎症を引き起こす一連の事象を開始し、その結果は痛みとなる。この神経原性の炎症は、ヒトの急性偏頭痛を処置するのに必要とされる用量と同様の用量のスマトリプタンによって遮断される。しかしながら、上記の通り、スマトリプタンの該用量は、スマトリプタンに付随する血管収縮性の結果として禁避に関係する（上記を参照）。
【０００９】
５−ＨＴ１Ｄ受容体は、神経原性プロテインの溢出の遮断を媒介すると考えられている（Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，４３ （補遺３），Ｓ１６−Ｓ２０（１９９３））。加えて、α２、Ｈ３、ｍ−オピオイドおよびスマトスタチン受容体が、三叉血管繊維上にも位置し得て、そして神経原性血漿の溢出を遮断し得ることが、報告されている（Ｍａｔｓｕｂａｒａらによる、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２２４，１４５−１５０（１９９２））。Ｗｅｉｎｓｈａｎｋらは、スマトリプタンおよびいくつかの麦角アルカノイドがセロトニン５−ＨＴ１Ｆ受容体と高いアフィニティーを有しており、このことは偏頭痛における該５−ＨＴ１Ｆ受容体の役割を示唆するものであると報告している（ＷＯ９３／１４２０１）。
【００１０】
欧州特許公報５９０７８９Ａ１および米国特許第５，４４６，０５１号および５，６７０，５１６号は、あるデカヒドロイソキノリン誘導化合物がＡＭＰＡ受容体拮抗薬であって、例えば多数の異なる疾患（例えば、痛みおよび偏頭痛を含む）の処置において有用であると開示している。
【００１１】
最近、イオンチャンネル型グルタミン酸受容体中の５つのカイン酸サブタイプ要素のすべてがラットの三叉神経節ニューロンで発現すると報告された。特に、高レベルのＧｌｕＲ５およびＫＡ２が観察されている（Ｓａｒａｈａらによる、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１７（１７），６６１１（１９９７））。Ｓｉｍｍｏｎｓらは、カイン酸ＧｌｕＲ５受容体サブタイプが持続性痛みのラットモデルにおいて、ホルマリンに対する侵害受容性の反応を媒介することを報告した。更に、ＷＯ９８／４５２７０は以前に、ｉＧｌｕＲ５受容体に対して選択的な拮抗薬が痛み（これは、激しい痛み、慢性の痛み、難治性の痛みおよび神経障害性を含む）の処置において有用であると開示している。これまでカイン酸受容体は偏頭痛の病因に関与していないと観察されていたことは、注目すべきである。特に、選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬は偏頭痛の処置に有用であるとはこれまで報告されていない。
【００１２】
驚くべきことに、本発明に関連して、出願人はｉＧｌｕＲ５受容体サブタイプの選択的な拮抗薬が神経原性炎症の動物モデルにおいて効果的であって、従って偏頭痛の処置において有効であり得ることを発見した。それらの拮抗薬は、副作用を留意することなく、偏頭痛の安全で且つ有効な処置に対する長年の切実な要求にこたえるものである。神経学的な障害の処置は、本研究によって促進される。
【００１３】
（本発明の概要）
本発明は、偏頭痛を治療したりまたは予防する方法であって、該方法は該処置が必要な患者に有効な量の選択的なｉＧｌｕＲ５拮抗薬またはその医薬的に許容し得る塩を投与することを含む。
【００１４】
より具体的には、本発明は硬膜プロテインの溢出を治療したりまたは予防する方法であって、該方法は該処置が必要な患者に、有効な量の選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬を投与することを含む。
【００１５】
加えて、本発明は、偏頭痛を治療したりまたは予防する方法であって、該方法は該処置が必要な患者に選択的なｉＧｌｕＲ５拮抗薬の活性を有する化合物または該化合物の組合せの有効な量を投与することを含む。
【００１６】
別の実施態様において、本発明は神経学的な障害または神経変性的な病気を治療したりまたは予防する方法であって、該方法は該処置が必要な患者に有効な量の選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬またはその医薬的に許容し得る塩を投与することを含む。それら神経学的な障害または神経変性的な病気の例としては、心臓バイパス手術および移植後の大脳の欠失；発作；大脳の虚血；外傷または炎症が原因の脊髄損傷；出生時の低酸素症；心臓の停止；低血糖性のニューロンの損傷；アルツハイマー病；ハンチントン舞踏病；遺伝性の失調；ＡＩＤＳ誘発性の痴呆；筋萎縮性側索硬化症；特発性で薬物誘発性のパーキンソン病；眼球の損傷および網膜症；筋肉の痙攣（これは、振戦を含む）；薬物耐性および退薬；脳浮腫；痙攣性障害（これは、癲癇を含む）；うつ病；不安および不安関連障害（例えば、脳外傷後症候群）；遅発性異常症候群；鬱病、精神分裂病、双極性異常、躁病に関連する精神病、および薬物の中毒または習慣性；並びに、急性および慢性の痛み（これは、激しい痛み、難治性の痛み、神経障害性の痛みおよび外傷後の痛みを含む）状態を含む。
【００１７】
更なる態様において、本発明は、式Ｉ：
【化６】
0004619595.tif 000002
［式中、Ｒ１およびＲ２は各々独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリール、Ｃ１〜Ｃ６アルキル（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ，Ｎ−Ｃ１〜Ｃ６ジアルキルアミン、Ｃ１〜Ｃ６アルキルピロリジン、Ｃ１〜Ｃ６アルキルピペリジンまたはＣ１〜Ｃ６アルキルモルホリンである］
の化合物、またはその医薬的に許容し得る塩を提供する。
【００１８】
更なる別の態様において、本発明は偏頭痛を治療したりまたは予防する方法を提供するものであって、該方法は該処置が必要な患者に有効な量の式Ｉの化合物を投与することを含む。
【００１９】
加えて、本発明は偏頭痛を治療したりまたは予防するのに有用な医薬組成物を提供するものであって、該医薬組成物は選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬と１つ以上の医薬的に許容し得る担体、希釈剤または賦形剤とを一緒に含む。
【００２０】
本発明は、偏頭痛を治療しまたは予防するための薬物の製造における選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬の使用をも提供する。
【００２１】
（本発明の詳細な記載）
本発明は偏頭痛の処置方法を提供するものであって、該方法は神経原性硬膜プロテインの溢出（extravasation）についての特定の作用機構、阻害機構によって示すことができる。他の興奮性アミノ酸受容体と比較してｉＧｌｕＲ５受容体に選択的な拮抗薬である化合物または組成物を用いて偏頭痛患者を処置することによって、５−ＨＴ１様媒介スマトリプタンの血管収縮活性を最適化するように設計された薬物の副作用を気にせずに、偏頭痛を媒介する該神経原性溢出を阻害する。加えて、本発明は選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗体として機能する化合物、並びにその医薬的に許容し得る塩、プロドラッグおよびその組成物を提供する。
【００２２】
本明細書で使用する用語「医薬的に許容し得る塩」とは、生体にとって実質的に無毒である、本発明によって得られるか、または使用する化合物の塩を意味する。典型的な医薬的に許容し得る塩とは、本発明の化合物と、医薬的に許容し得る鉱酸もしくは有機酸、または有機塩基もしくは無機塩基とを反応させることによって製造される塩を含む。該塩は酸付加塩および塩基付加塩として知られている。
【００２３】
本発明で使用するほとんどまたは全ての化合物が塩を形成することができ、そして遊離塩基よりもより容易に結晶化して精製されることが多いという理由で、医薬品の塩形態が通常使用されることを、当業者は理解するであろう。全ての場合において、本明細書に記載の医薬品を塩として使用することは本明細書の記載において企図するものであり、また好ましいことが多く、そしてその全ての化合物の医薬的に許容し得る塩をそれら化合物名に含める。
【００２４】
酸付加塩を形成するのに通常使用される酸としては、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸など）および有機酸（例えば、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、ｐ−ブロモフェニルスルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、酢酸など）を挙げられる。それら医薬的に許容し得る塩の例としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、臭化物塩、ヨウ化物塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、塩酸塩、二塩酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−二酸塩、ヘキシン−１，６−二酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、α−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、マンデル酸塩などを挙げられる。好ましい医薬的に許容し得る酸付加塩としては、鉱酸（例えば、塩酸および臭化水素酸塩）と形成する塩、および有機酸（例えば、マレイン酸およびメタンスルホン酸）と形成する塩を挙げられる。
【００２５】
塩基付加塩としては、無機塩基由来の塩（例えば、アンモニウム塩、アルカリ金属もしくはアルカリ土類金属の水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩など）を含む。従って、本発明の塩を製造するのに有用なそれらの塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウムなどを含む。カリウム塩およびナトリウム塩の形態が特に好ましい。
【００２６】
本発明のいずれかの塩の一部を形成する特定の対イオンは、塩全体が薬理学的に許容され、且つ該対イオンがその塩全体へ望ましくない性質を与えない限り、通常は重要な問題ではないと認識すべきである。
【００２７】
本明細書で使用する用語「立体異性体」とは、同一の原子によって結合されている同一の原子から構成されているが、相互に変換することができない異なる三次元構造を有する化合物を意味する。それら三次元構造は立体配置と呼ばれる。本明細書で使用する用語「エナンチオマ−」とは、分子が互いに重ね合わすことができない鏡像である、２つの立体異性体を意味する。用語「キラル中心」とは、４つの異なる基が結合している炭素原子を意味する。本明細書で使用する用語「ジアステレオマー」とは、エナンチオマーでない立体異性体を意味する。加えて、１つだけのキラル中心上での異なる立体配置を有する２つのジアステレオマーは、本明細書では「エピマー」と呼ぶ。用語「ラセミ化合物」、「ラセミ混合物」または「ラセミ体」とは、等成分のエナンチオマー混合物を意味する。
【００２８】
本明細書で使用する用語「エナンチオ的な優位さ」とは、一方のエナンチオマーの量と比べて他方のエナンチオマーの量が多いことを意味する。達成されたエナンチオ的な優位さを表わす便利な方法は、エナンチオ過剰率または「ｅｅ」の概念であり、これは式：
【数１】
0004619595.tif 000003
（ここで、Ｅ１は第１番目のエナンチオマーの量であり、Ｅ２は第２番目のエナンチオマーの量である）
を用いて示される。従って、２つのエナンチオマーの最初の比率が５０：５０（例えば、ラセミ混合物として存在する）であって、最終的な比率が５０：３０となるのに十分なエナンチオ的な優位さをが得られる場合には、第１番目のエナンチオマーのｅｅは２５％である。しかしながら、最終的な比率が９０:１０である場合には、第１番目のエナンチオマーのｅｅは８０％である。９０％より大きいｅｅが好ましく、９５％より大きいｅｅが最も好ましく、９９％より大きいｅｅが特に最も好ましい。エナンチオ的な優位さは、標準的な技術または方法（例えば、キラルカラムを用いたガスクロマトグラフィーまたは高速液体クロマトグラフィー）を用いて当業者によって容易に測定することができる。エナンチオマー対の効果的な分離に必要な適当なキラルカラム、溶出液および条件の選択は、十分に当該分野の当業者の知識の範囲内である。加えて、式Ｉの化合物のエナンチマーを、当該分野でよく知られている標準的な技術（例えば、Ｊ．Ｊａｃｑｕｅｓらによる「Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ、Ｒａｃｅｍａｔｅｓ、ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．，１９８１に記載されている）を用いて、当該分野の当業者によって容易に分離することができる。
【００２９】
本発明の化合物は１つ以上のキラル中心を有しており、多数の立体異性的な立体配置で存在し得る。これらキラル中心の結果として、本発明の化合物はラセミ化合物、エナンチマー混合物およびそれら個々のエナンチマー、並びにジアステレオマーおよびジアステレオマー混合物として生成する。それら全てのラセミ化合物、エナンチマーおよびジアステレオマーは、本発明の範囲内である。
【００３０】
用語「Ｒ」および「Ｓ」は、キラル中心の特定の立体配置を示すのに有機化学において通常使用する通りに、本明細書で使用する。用語「Ｒ」（右旋性）とは、優先順位の最も低い基への方を向いた結合に沿ってみた場合に、基の優先順位（最も高い基から、２番目に低い基まで）が時計周りの関係を有する、キラル中心の立体配置を意味する。用語「Ｓ」（左旋性）とは、優先順位の最も低い基への方を向いた結合に沿って見た場合に、基の優先順位（最も高い基から２番目に低い基まで）が反時計周りの関係を有する、キラル中心の立体配置を意味する。基の優先順位は、原子番号（原子番号が減少する順番で）に基づく。優先順位に関する部分的な表および立体化学に関する議論については、「Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ」（Ｊ．Ｈ．Ｆｌｅｔｃｈｅｒらによる編、１９７４、１０３−１２０頁）に含まれている。
【００３１】
式（Ｉ）の化合物の特定の立体異性体およびエナンチオマーを、よく知られている技術および方法（例えば、ＥｌｉｅｌおよびＷｉｌｅｎによる「Ｓｔｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ  &  Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．，１９９４，７章，Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｔｒｅｏｉｓｏｍｅｒｓ．  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｒａｃｅｍｉｚａｔｉｏｎ、並びにＣｏｌｌｅｔおよびＷｉｌｅｎによる「Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ，ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，１９８１に開示されている）を用いて、当該分野の当業者によって容易に製造することができる。例えば、特定の立体異性体およびエナンチオマーを、エナンチオ的または幾何学的に純粋であるか、或いはエナンチオ的または幾何学的に優位である出発物質を用いた立体特異的な合成によって製造することができる。加えて、特定の立体異性体およびエナンチオマーを、例えばキラル固定相上でのクロマトグラフィー、酵素による分離またはその目的のために用いた試薬によって形成する酸付加塩についての分別再結晶などの技術によって分離し、回収することができる。
【００３２】
本発明の方法において有用な化合物の全てがプロドラッグ製剤化に利用可能であることも当業者によって理解されるべきである。本明細書で使用する用語「プロドラッグ」とは、本発明によって得られるかまたは本発明の方法によって使用される機能性の酸化合物（薬物）の代謝活性なエステルまたはジエステル誘導体を意味する。患者に投与されると、親のカルボン酸（薬物）（または、時には親の二カルボン酸であり得る）が放出される方法で、酵素的および／または化学的な加水分解による切断が起こる。全ての場合において、本明細書において記載する化合物のプロドラッグとしての使用を企図するものであり、また多くの場合好ましく、従って使用する全ての化合物のプロドラッグを本明細書の化合物名に含む。
【００３３】
本明細書で使用する用語「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」とは、炭素数が１〜４個の直鎖または分枝で一価の飽和の脂肪族鎖を意味し、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチルなどを含むが、これらに限定しない。
【００３４】
本明細書で使用する用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」とは、炭素数が１〜６個の直鎖または分枝で一価の飽和の脂肪族鎖を意味し、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどを含むが、これらに限定しない。
【００３５】
本明細書で使用する用語「Ｃ１〜１０アルキル」とは、炭素数が１〜１０個の直鎖または分枝で一価の飽和の脂肪族鎖を意味し、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、２，３−ジメチル−２−ブチル、ヘプチル、２，２−ジメチル−３−ペンチル、２−メチル−２−ヘキシル、オクチル、４−メチル−３−ヘプチルなどを含むが、これらに限定しない。
【００３６】
本明細書で使用する用語「Ｃ１〜Ｃ２０アルキル」とは、炭素数が１〜２０個の直鎖または分枝で一価の飽和の脂肪族鎖を意味し、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、３−メチルペンチル、２−エチルブチル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル、ｎ−ウンデシル、ｎ−ドデシル、ｎ−トリデシル、ｎ−テトラデシル、ｎ−ペンタデシル、ｎ−ヘキサデシル、ｎ−ヘプタデシル、ｎ−ノナデシル、ｎ−エイコシルなどを含むが、これらに限定しない。
【００３７】
本明細書で使用する用語「Ｍｅ」、「Ｅｔ」、「Ｐｒ」、「ｉＰｒ」、「Ｂｕ」および「ｔ−Ｂｕ」はそれぞれ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルおよびｔ−ブチルを意味する。
【００３８】
本明細書で使用する用語「Ｃ２〜Ｃ６アルケニル」とは、炭素数が２〜６個の直鎖または分枝で一価の不飽和の脂肪族鎖を意味する。典型的なＣ２〜Ｃ６アルケニル基は、例えばエテニル（これは、ビニルとしても知られている）、１−メチルエテニル、１−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、１−ヘキセニル、２−メチル−２−プロペニル、１−プロペニル、２−プロペニル、２−ブテニル、２−ペンテニルなどを含む。
【００３９】
本明細書で使用する用語「アリール」とは、１つ以上の縮合または非縮合のフェニル環を含有する一価の炭素環を意味し、例えばフェニル、１−もしくは２−ナフチル、１，２−ジヒドロナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチルなどを含む。
【００４０】
本明細書で使用する用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリール」とは、炭素数が１〜６個の直鎖または分枝で一価の飽和の脂肪族鎖であって、該脂肪族鎖に結合したアリール基を有する基を意味する。該用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリール」とは、式：
【化７】
0004619595.tif 000004
などの基を含む。
【００４１】
本明細書で使用する用語「（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル」とは、炭素数が３〜１０個の飽和の炭化水素環構造を意味する。典型的なＣ３〜Ｃ１０−シクロアルキル基は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチルなどを含む。「（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル」および「（Ｃ４〜Ｃ６）シクロアルキル」は、用語「（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル」に含まれると理解される。
【００４２】
本明細書で使用する用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキル（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル」とは、炭素数が１〜６個で直鎖または分枝で一価の飽和の脂肪族鎖であって、該脂肪族鎖に結合した（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキルを有する基を意味する。該用語「（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｃ３〜Ｃ１０）シクロアルキル」は、式：
【化８】
0004619595.tif 000005
などを含む。
【００４３】
本明細書で使用する用語「Ｎ，Ｎ−Ｃ１〜Ｃ６ジアルキルアミン」とは、炭素数が１〜６個の直鎖または分枝で一価の飽和の脂肪族鎖の２つで置換された窒素原子を意味する。該用語「Ｎ，Ｎ−Ｃ１〜Ｃ６ジアルキルアミン」とは、−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）２などを含む。
【００４４】
本明細書で使用する用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ，Ｎ−Ｃ１〜Ｃ６ジアルキルアミン」とは、炭素数が１〜６個の直鎖または分枝で一価の飽和の脂肪族鎖であって、該脂肪族鎖に結合したＮ，Ｎ−Ｃ１〜Ｃ６ジアルキルアミンを有する基を意味する。該用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｎ，Ｎ−Ｃ１〜Ｃ６ジアルキルアミン 」は、式：
【化９】
0004619595.tif 000006
などを含む。
【００４５】
本明細書で使用する用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ピロリジン」とは、炭素数が１〜６個の直鎖または分枝で一価の飽和の脂肪族鎖であって、該脂肪族鎖に結合したピロリジンを有する基を意味する。該用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ピロリジン」の範囲内には、式：
【化１０】
0004619595.tif 000007
などを含む。
【００４６】
本明細書で使用する用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ピペリジン」とは、炭素数が１〜６個の直鎖または分枝で一価の飽和の脂肪族鎖であって、該脂肪族鎖に結合したピペリジンを有する基を意味する。該用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキル−ピペリジン」の範囲内には、式：
【化１１】
0004619595.tif 000008
などを含む。
【００４７】
本明細書で使用する用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキル−モルホリン」とは、炭素数が１〜６個の直鎖または分枝で一価の飽和の脂肪族鎖であって、該脂肪族鎖に結合したモルホリンを有する基を意味する。該用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキル−モルホリン」の範囲内には、式：
【化１２】
0004619595.tif 000009
などを含む。
【００４８】
0004619595.tif 000010
【００４９】
0004619595.tif 000011
【００５０】
本明細書で使用する用語「ｉＧｌｕＲ５」は、大きなクラスの興奮性アミノ酸受容体中の、カイン酸イオンチャンネル型のグルタミン酸受容体のサブタイプ５を意味する。
【００５１】
本明細書で使用する用語「偏頭痛」とは、頭痛の再発性の発作（これは、例えば腫瘍または卒中が原因の異常などの構造的な脳の異常によっては引き起こされない）、胃腸障害およびあり得る神経学的な症状（例えば、視覚の歪み）を特徴とする神経系の障害を意味する。偏頭痛に特有の頭痛は、通常１日続き、そして通常、悪心、嘔吐および羞明を併発する。
【００５２】
偏頭痛は「慢性の」病気である。本明細書で使用する用語「慢性」とは、進行が遅く且つ持続が長い病気を意味する。例えば、慢性疾患は診断時に処置し、且つ該疾患の経過中ずっと、処置を続ける。逆に、用語「急性」とは短期間の悪化事象または発作、続く寛解期間を意味する。従って、偏頭痛の処置とは急性事象および慢性疾患の両方を企図する。急性事象の場合には、化合物を症状の開始時に投与し、該症状が消えると中断する。上記の通り、慢性疾患を疾患の経過中ずっと処置する。
【００５３】
本明細書において使用する用語「患者」とは、哺乳動物（例えば、マウス、スナネズミ、モルモット、ラット、イヌまたはヒト）を意味する。しかしながら、好ましい患者はヒトであると理解される。
【００５４】
本明細書で使用する用語「選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬」とは、ｉＧｌｕＲ５ＡＭＰＡ受容体サブタイプと比較してｉＧｌｕＲ５カイン酸受容体サブタイプに選択的に結合する興奮性のアミノ酸受容体拮抗薬を含む。本発明の方法に従った使用における選択的なｉＧｌｕＲ５拮抗薬は、ｉＧｌｕＲ２よりもｉＧｌｕＲ５に対して少なくとも１０倍より大きい結合アフィニティーを有することが好ましく、少なくとも１００倍より大きいことがより好ましい。当該分野の当業者によって認められている通り、いずれかの選択的なｉＧｌｕＲ５拮抗薬は本発明の方法の範囲内に含まれると、更に理解される。それら選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬は当業者にとって容易に入手することができたり、または認知されている方法に従って当業者によって容易に製造される。選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬の例としては、ＷＯ９８／４５２７０（これは、本明細書の一部を構成する）に記載された化合物を含むが、これに限定されない。
【００５５】
選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬は医薬的に許容し得る塩として存在することができ、従って塩は本発明の範囲内に含まれると更に理解される。
【００５６】
本明細書で使用する用語「処置する」または「処置する」とは各々、症状を緩和して、一時的なもしくは永久的な根拠のどちらかで生じた症状の原因を除くこと、および指定の障害の生じた症状の出現を防止し、遅らせるか、または該症状の進行もしくは激しさを逆転させることを意味する。例えば、本発明の方法は治療学的な投与および予防学的な投与の両方を含む。
【００５７】
本明細書で使用する用語「有効な量」とは、患者に１回または複数回投与する場合に、診断または処置中の患者に望む効果を与えるような、化合物の量または用量を意味する。
【００５８】
有効な量は、公知の技術を用いることによったり、同じ環境下で得られる結果を観察することによって、当業者と同様に診断医によって容易に決定することができる。投与する化合物の有効な量または用量を決定する際に、診断医によって多数の因子が考慮される。該因子としては、例えば哺乳動物の種類、そのサイズ、年齢および通常の健康状態；関与する偏頭痛の関与の程度または激しさ；個々の患者の反応；投与する化合物；投与方法；投与される製剤のバイオアベイラビリティ特性；選んだ投与レジメ；併用する薬物の使用；および他の関連する環境を含むが、これに限定されない。
【００５９】
典型的な１日用量は、本発明の処置方法において使用する各化合物の約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇを含む。１日用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇであることが好ましく、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇであることがより好ましい。
【００６０】
本発明の方法による使用のための選択的なｉＧｌｕＲ５拮抗薬は、選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬として機能することができる化合物の単一または組み合わせであり得る。例えば、それはｉＧｌｕＲ５受容体および１つ以上の他のグルタミン酸受容体上で拮抗薬として機能することができる化合物と、ｉＧｌｕＲ２受容体上でその作用を遮断することができる１つ以上の化合物との組み合わせであり得る。しかしながら、本発明の方法の使用における使用のためのｉＧｌｕＲ５拮抗薬は単一の化合物であることが好ましい。
【００６１】
選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬として作用することができる化合物を単独でまたはその組み合わせとして投与するどちらの場合においても、経口投与は本発明で使用する化合物の好ましい投与経路である。しかしながら、経口投与が唯一の経路でなく、また唯一の好ましい経路でもない。他の好ましい投与経路としては、例えば経皮塗布的な（transdermal）、経皮注射的な（percutaneously）、静脈内の、筋肉内の、鼻腔内の、頬側のまたは直腸内の経路を含む。選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬を化合物の組み合わせとして投与する場合に、化合物の１つをある経路（例えば、経口）によって投与し、それ以外を、環境の要求に応じて経皮塗布的な、経皮注射的な、静脈内の、筋肉内の、鼻腔内の、頬側のまたは直腸内の経路によって投与することができる。投与経路は様々な形に変えることができ、化合物の物理的な性質、並びに患者および介護人の都合によって制限され得る。
【００６２】
本発明において使用する化合物を医薬組成物として投与することができ、従って該化合物を包含する医薬組成物は本発明の重要な実施態様である。それら組成物は、医薬的に許容し得るいずれかの物理的形態をとることができるが、経口投与用された医薬組成物が特に好ましい。それら医薬組成物は有効な量の選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬を含み、該有効な量は投与する化合物の１日用量に関連する。各投与単位は与える化合物の１日用量を含んでいても、またはその１日用量の一部（例えば、１日用量の２分の１または３分の１）を含んでいてもよい。各用量単位に含まれる各化合物の量は、療法のために選んだ化合物の個性、および他の因子（例えば、得られる指標）に依存する。本発明の医薬組成物を、よく知られている方法を用いることによって患者に投与後に速く、持続してまたは遅延して放出されるように製剤化することができる。
【００６３】
該組成物は、単位用量形態で製剤化することが好ましく、各用量は別々にであるか、または１回の単位用量形態で活性化合物の約１ｍｇ〜約５００ｍｇを含有し、約５ｍｇ〜約３００ｍｇ（例えば２５ｍｇ）を含有することがより好ましい。用語「単位用量形態」とは、患者にとって単位用量として適当な物理学的に別個な単位を意味し、各単位は適当な医薬的な担体、希釈剤または賦形剤と組合せて所望の治療学的な効果が得られるように算出された予め決めた量の活性物質を含む。
【００６４】
不活性成分および医薬組成物の製剤化の方法が便利である。医薬化学において使用される通常の製剤化の方法を本明細書において使用することができる。通常の種類の組成物の全てを使用することができ、例えば錠剤、そしゃく錠剤、カプセル剤、液剤、非経口用液剤、鼻腔内用のスプレーもしくは散剤、トローチ剤、カプセル剤、坐剤、経皮パッチおよび懸濁剤を含む。通常、組成物は、目的の用量および使用する組成物の種類に応じて、化合物の総量の約０．５％〜約５０％を含む。しかしながら、化合物の量は、「有効な量」、すなわち処置が必要な患者に目的の用量を与えるような各化合物の量として定義するのが最善である。本発明で使用する化合物の活性は組成物の性質にはよらず、従って組成物は単に便利さと経済性の理由だけで選んで、製剤化する。
【００６５】
該化合物と適当な希釈剤とを混合し、次いで適当な量の該混合物をカプセルに充填することによって、カプセル剤を製造する。通常の希釈剤としては、例えば不活性な粉末状の物質（例えば、デンプン）、粉末状のセルロース（特に、結晶および微結晶のセルロース）、糖類（例えば、フルクトース、マンニトールおよびスクロース）、粒状の香料および同様な食用粉末を含む。
【００６６】
直接的な圧縮によるか、湿式顆粒化によるかまたは乾式顆粒化によって、錠剤を製造する。それらの製剤は化合物と合わせて、通常、希釈剤、結合剤、滑沢剤および崩壊剤を包含する。典型的な希釈剤としては、例えば様々な種類のデンプン、ラクトース、マンニトール、カオリン、リン酸カルシウムもしくは硫酸カルシウム、無機塩（例えば、塩化ナトリウム）および粉末状の糖類を含む。粉末状のセルロース誘導体もまた有用である。典型的な錠剤結合剤としては、デンプン、ゼラチンなどの物質および糖類（例えば、ラクトース、フルクトース、グルコースなど）などを挙げられる。天然ガムおよび合成ガムも便利であり、例えばアカシアガム、アルギン酸塩、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどを含む。ポリエチレングリコール、エチルセルロースおよびワックスもまた結合剤として機能し得る。
【００６７】
芳香剤および封水剤として糖類を用いて、錠剤はコーティングされることが多い。現在十分に確立されている実施と同じように、製剤化において大量の楽しい味覚物質（pleasant-tasting substances）（例えば、マンニトール）を用いることによって、該化合物をそしゃく錠剤として製剤化することもできる。患者が剤型の消費を確認するため、且つ固体物を嚥下する困難（これは、何人かの患者を悩ませる）を避けるために、すぐに溶解する錠剤に似た製剤も現在では使用されることが多い。
【００６８】
滑沢剤は、錠剤およびパンチがダイ中で粘着することを防止するのに、錠剤の製剤化において必要なことが多い。該滑沢剤としては、滑らかな固体（例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよびカルシウム、ステアリン酸および硬化植物油）から選ばれる。
【００６９】
錠剤崩壊剤とは、湿ると膨潤して錠剤を破壊し、化合物を放出する物質のことである。それらは、デンプン、粘土、セルロース、アルギン酸およびガムを含む。より具体的には、例えばコーンおよびポテトのデンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、木質セルロース、粉末状の天然スポンジ、カチオン交換樹脂、アルギン酸、グアーガム、かんきつ類のパルプおよびカルボキシメチルセルロースを、ラウリル硫酸ナトリウムと一緒に使用することができる。
【００７０】
腸溶製剤は、活性成分を胃の強酸内容物から保護するのに使用されることが多い。それら製剤は、固体剤型を酸性状況下では不溶であるが、塩基性状況下では可溶であるポリマーフィルムを用いてコーティングすることによって、製造することができる。典型的なフィルムとしては、例えば酢酸フタル酸セルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよび酢酸コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含む。
【００７１】
該化合物を坐剤として投与することを望む場合には、通常の基材を使用することができる。ココアバターは典型的な坐剤の基材であって、これはワックスを添加することによってわずかに融点を上昇することができる。特に、様々な分子量のポリエチレングリコールを含有する水に混和性の坐剤基材も広く使用される。
【００７２】
経皮パッチは最近一般的である。典型的に、それらは薬物が溶解したりまたは一部が溶解している樹脂状の組成物を含んでおり、そのものはフィルムによって皮膚との接触を保持しており、このことにより組成物を保護している。最近、多数の特許が当該分野で見られる。他方、より複雑なパッチ組成物、特に無数の細孔があけられた膜を有しており、このために薬物が浸透作用によってポンピングされる組成物も使用される。
【００７３】
以下の表は、本発明で使用する化合物を用いる使用に適当な製剤の例示的な表を提供するものである。以下の表は、本発明を単に例示するために提供するものであって、本発明をいかなる形で限定することも意図するものではない。
【００７４】
製剤例１
硬カプセル剤を、以下の成分を用いて製造する。
【表１】
0004619595.tif 000012
【００７５】
上記成分を混合し、４６０ｍｇ量の硬カプセル剤に充填する。
【００７６】
製剤例２
錠剤を以下の成分を用いて製造する。
【表２】
0004619595.tif 000013
【００７７】
成分を混和し、圧縮して各々６６５ｍｇ重量である錠剤を得る。
【００７８】
製剤例３
以下の成分を含有するエアロゾル製剤を製造する。
【表３】
0004619595.tif 000014
【００７９】
活性化合物をエタノールと混合し、その混合物をプロペラント２２の一部に加え、−３０℃まで冷却し、充填装置に移す。次いで、必要な量をステンレスのスチール容器に入れ、該プロペラントの残りを用いて希釈する。次いで、バルブユニットを該容器に装着する。
【００８０】
製剤例４
各々、活性成分の６０ｍｇを含有する錠剤を以下の通り製造する。
【表４】
0004619595.tif 000015
【００８１】
活性成分、デンプンおよびセルロースを４５番メッシュのＵ．Ｓ．ふるいを通してふるいにかけ、十分に混合する。得られた粉末をピリビニルピロリドン溶液と混合し、次いでこれを１４番メッシュのＵ．Ｓ，ふるいを通してふるいにかける。得られた顆粒を５０℃で乾燥し、１８番メッシュのＵ．Ｓ．ふるいを通してふるいにかける。予め６０番メッシュのふるいを通してふるいにかけたカルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクを該顆粒に加え、次いでこれを混合後、錠剤機を用いて圧縮して各１５０ｍｇ重量の錠剤を得る。
【００８２】
製剤例５
各々、８０ｍｇ重量の薬物を含有するカプセル剤を以下の通り製造する。
【表５】
0004619595.tif 000016
【００８３】
活性成分、セルロース、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムを混和し、４５番メッシュのふるいを通してふるいにかけ、２００ｍｇ量の硬カプセル剤に充填する。
【００８４】
製剤例６
【表６】
各々、活性成分の２２５ｍｇを含有する坐剤を以下の通り製造することができる。
0004619595.tif 000017
【００８５】
活性成分を６０番メッシュのふるいを通してふるいにかけ、必要最低限度の加熱を用いて予め融解させた飽和脂肪酸グリセリドに懸濁する。次いで、該混合物を名目上２ｇ用量の坐剤型に注ぎ、冷却する。
【００８６】
製剤例７
５ｍＬ用量当り各々５０ｍｇの薬物を含有する懸濁剤を以下の通り製造する。
【表７】
0004619595.tif 000018
【００８７】
薬物を４５番メッシュのふるいを通してふるいにかけ、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよびシロップと混合して、平滑なペーストを得る。安息香酸溶液、香料および着色料を少量の水で希釈し、撹拌しながら加える。次いで、十分な量の水を加えて、必要な量を得る。
【００８８】
製剤例８
静脈内様製剤を以下の通り製造する。
【表８】
0004619595.tif 000019
【００８９】
上記の方法が偏頭痛の処置方法に適用することができ、該方法は患者に、選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬の活性を有する化合物の有効な量を投与することを含むことを、当業者は理解する。
【００９０】
ニューロン硬膜プロテインの溢出の抑制は、本発明の方法の典型的な作用機構である。更にそれらの抑制を示す化合物を必要とする該方法は、ｉＧｌｕＲ５受容体の選択的な結合および抑制をも示す。本発明の原理を例示するのに使用する化合物のパネル、および本発明の機構的な有効性を示すのに用いる薬理学的なアッセイを以下に記載する。本明細書に記載の化合物ＩＩＩ、ＩＶ（ａ）およびＩＶ（ｂ）は新規な化合物であって、それらはこれまで、選択的なｉＧｌｕＲ５拮抗薬として記載されておらず、また偏頭痛を処置する場合に有効であるとも報告されていない。従って、化合物ＩＩＩ、ＩＶ（ａ）およびＩＶ（ｂ）は本発明の別の実施態様を提供する。
【００９１】
以下の例は本発明の方法を例示する。試薬および出発物質は当業者にとって容易に入手することができる。これらの例は単に例示することを意図するものではなく、いかなる形でも本発明の範囲を限定するように解釈すべきでない。本明細書で使用する以下の用語は以下の意味を有する。「ｉ．ｖ．」は静脈内を意味する。「ｐ．ｏ．」は経口を意味する。「ｉ．ｐ．」は腹膜内を意味する。「ｅｑ」または「ｅｑｕｉｖ」は当量を意味する。「ｇ」はグラムを意味する。「ｍｇ」はミリグラムを意味する。「Ｌ」はリットルを意味する。「ｍＬ」はミリリットルを意味する。「μＬ」はマイクロリットルを意味する。「ｍｏｌ」はモルを意味する。「ｍｍｏｌ」はミリモルを意味する。「ｐｓｉ」は平方インチ当りのポンド（プサイ）を意味する。「ｍｍＨｇ」は水銀のミリメートルを意味する。「ｈ」または「ｈｒ」は時間を意味する。「℃」は摂氏温度を意味する。「ＴＬＣ」は薄相クロマトグラフィーを意味する。「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを意味する。「Ｒｆ」は保持因子を意味する。「Ｒｔ」は保持時間を意味する。「δ」はテトラメチルシランからの低磁場（ｐｐｍ）を意味する。「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを意味する。「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを意味する。「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを意味する。「ａｑ」は水溶液を意味する。「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを意味する。「ｉＰｒＯＡｃ」は酢酸イソプロピルを意味する。「ＭｅＯＨ」はメタノールを意味する。「ＭＴＢＥ」はｔ−ブチルメチルエーテルを意味する。「ＲＴ」は室温を意味する。「Ｋｉ」は酵素−拮抗薬複合体の会合定数を意味し、これはリガンド結合の指標として役立つ。そして、「ＩＤ５０」および「ＩＤ１００」は、それぞれ生理学的な応答の５０％および１００％の低下を示すような、投与された治療学的な薬物の用量を意味する。
【００９２】
実施例１
化合物Ｉ
３Ｓ，４ａＲ，６Ｓ，８ａＲ−６−（（（４−カルボキシ）フェニル）メチル）−１，２，３，４，４ａ，５，６，７，８，８ａ−デカヒドロイソキノリン−３−カルボン酸の製造
【化１３】
0004619595.tif 000020
当業者は、化合物ＩがｉＧｌｕＲ５受容体サブタイプに対して選択的である興奮性アミノ酸受容体拮抗薬であることを認識するであろう。化合物Ｉは、米国特許第５，４４６，０５１号、より具体的には、国際特許出願ＷＯ９８／４５２７０号（１９９８年１０月１５日に公開）に記載されている認知された一般的な方法に従って、当業者によって容易に製造することができる。
【００９３】
化合物ＩＩ
３Ｓ，４ａＲ，６Ｓ，８ａＲ−６−（（（（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）メチル）オキシ）メチル）−１，２，３，４，４ａ，５，６，７，８，８ａ−デカヒドロイソキノリン−３−カルボン酸の製造
【化１４】
0004619595.tif 000021
当業者は、化合物ＩＩがｉＧｌｕＲ５受容体サブタイプに対して選択的である興奮性アミノ酸受容体拮抗薬であることを認識するであろう。化合物ＩＩは、米国特許５，６７０，５１６号（実施例ＩＩ、化合物７を参照）、より具体的には国際特許出願ＷＯ９８／４５２７０（１９９８年１０月１５日に公開）に記載されている以下の認知された通常の方法によって容易に製造し、分離することができる。
【００９４】
化合物ＩＩＩ
【化１５】
0004619595.tif 000022
化合物ＩＩＩは、選択的なｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬として機能する新規な化合物である。化合物ＩＩＩは容易に製造することができ；場合により、目的のエナンチオマーを分離することができ；化合物ＩＩＩを含有する医薬組成物を、米国特許第５，６７０，５１６号（これは、本明細書の一部を構成する）の実施例８の化合物８で本質的に記載されている以下の通常の方法によって容易に製剤化することができる。
【００９５】
化合物ＩＶ（ｂ）
３Ｓ，４ａＲ，６Ｓ，８ａＲ−６−（（（２Ｓ）−２−（エトキシカルボニル）−４，４−ジフルオロピロリジニル）メチル）−１，２，３，４，４ａ，５，６，７，８，８ａ−デカヒドロイソキノリン−３−カルボン酸エチルの製造
【化１６】
0004619595.tif 000023
Ａ．３Ｓ，４ａＲ，６Ｓ，８ａＲ−６−（（４−メチルフェニル）スルホニルオキシ）メチル）−２−メトキシカルボニル−１，２，３，４，４ａ，５，６，７，８，８ａ−デカヒドロイソキノリン−３−カルボン酸エチルの製造
ジクロロメタン（１００ｍＬ）中、０℃まで冷却したヒドロキシメチル中間体（米国特許第５，３５６，９０２号（これは本明細書の一部を構成する）の反応式ＩＩの１１〜１２を参照）溶液に、トリエチルアミン（２０．９ｍＬ、１５０．３ｍｍｏｌ）を加え、続いてＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）に溶解したトルエンスルホニルクロリド（１９．１ｇ、１００．２ｍｍｏｌ）を加えた。該反応液を室温まで昇温させ、１６時間撹拌し、次いでジクロロメタンと１０％硫酸水素ナトリウム水溶液とで分配した。水相をジクロロメタンを用いて抽出し、その有機抽出液を合わせて硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（１０〜５０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）精製を行なうことにより、無色の油状物である目的の中間体の標題化合物（２０．１ｇ、８９％）を得た。
ＭＳ（ｍ／ｅ）４５１．５（Ｍ＋）。
元素分析（Ｃ２２Ｈ３１ＮＯ７Ｓ・０．１ＣＨ２Ｃｌ２として計算）理論値：Ｃ  ５７．４５、Ｈ  ６．８１、Ｎ  ３．０３；実測値：Ｃ  ５７．７６、Ｈ  ６．９３、Ｎ  ３．３５。
【数２】
0004619595.tif 000024
【００９６】
Ｂ．３Ｓ，４ａＲ，６Ｓ，８ａＲ−６−（（（３Ｓ，５Ｓ）−５−（エトキシカルボニル）−３−ヒドロキシピロリジニル）メチル）−２−メトキシカルボニル−１，２，３，４，４ａ，５，６，７，８，８ａ−デカヒドロイソキノリン−３−カルボン酸エチルの製造
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエチルエステル（６．５ｇ、３３．１ｍｍｏｌ）、上記工程Ａの化合物（１０．０ｇ、２２．０ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（４．６ｇ、３３．１ｍｍｏｌ）の混合物を、アセトニトリル（２２ｍｌ）中で６０時間加熱還流した。反応混合物を室温まで冷却し、ジクロロメタンおよび水を用いて分配した。水溶液をジクロロメタンを用いて２回抽出し、その有機抽出液を合わせて硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（５０％の酢酸エチル／ヘキサン、続いて５％のメタノール／ジクロロメタン）精製を行なうことにより、無色油状物の目的の中間体である標題化合物（９．２ｇ、９５％）を得た。
ＭＳ（ｍ／ｅ）４４１．３（Ｍ＋）。
元素分析（Ｃ２２Ｈ３６Ｎ２Ｏ７Ｓとして計算）理論値：Ｃ  ５９．９８、Ｈ  ８．２４、Ｎ  ６．３６；実測値：Ｃ  ６０．１７、Ｈ  ８．２３、Ｎ  ６．４２。
【００９７】
Ｃ．３Ｓ，４ａＲ，６Ｓ，８ａＲ−６−（（（５Ｓ）−５−（エトキシカルボニル）−３−オキソピロリジニル）メチル）−２−メトキシカルボニル−１，２，３，４，４ａ，５，６，７，８，８ａ−デカヒドロイソキノリン−３−カルボン酸エチルの製造
ジクロロメタン（２５ｍＬ）中、−７８℃まで冷却したＤＭＳＯ（２．３ｍＬ、３２．５ｍｍｏｌ）溶液に、塩化オキサリル（１．４ｍＬ、１６．３ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を５分間撹拌し、次いでジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解させた上記工程Ｂの化合物（６．０ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）を加えた。−７８℃で４５分間撹拌後、トリエチルアミン（９．５ｍＬ、３２．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温まで約２時間かけて昇温させ、１０％ＮａＨＳＯ４水溶液を添加することによってクエンチした。該水相をジクロロメタンを用いて抽出し、その有機抽出液を合わせてＭｇＳＯ４を用いて乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（２５〜５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）精製を行なうことにより、無色油状物の目的の中間体である標題化合物（４．６ｇ、７８％）を得た。
ＭＳ（ｍ／ｅ）４３９．１（Ｍ＋）。
【００９８】
Ｄ．３Ｓ，４ａＲ，６Ｓ，８ａＲ−６−（（（２Ｓ）−２−（エトキシカルボニル）−４，４−ジフルオロピロリジニル）メチル）−２−メトキシカルボニル−１，２，３，４，４ａ，５，６，７，８，８ａ−デカヒドロイソキノリン−３−カルボン酸エチルの製造
ジクロロメタン（５０ｍｌ）中、−７８℃まで冷却した上記工程Ｃの化合物（４．６２ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）の混合物に、ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（３．５ｍＬ、２６．３ｍｍｏｌ）を加えた。該反応液を室温まで昇温させ、更に４８時間撹拌し、次いでＭｅＯＨを加えることによってクエンチした。真空下で濃縮後、残渣をジクロロメタンと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を用いて分配した。その水相をジクロロメタンを用いて抽出し、その有機抽出液を合わせてＭｇＳＯ４を用いて乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（２５〜５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）精製を行なうことにより、無色油状物の目的の中間体の標題化合物（３．３ｇ、６８％）を得た。
ＭＳ（ｍ／ｅ）４６１．２（Ｍ＋）。
元素分析（Ｃ２２Ｈ３４Ｆ２Ｎ２Ｏ６として計算）理論値：Ｃ  ５７．３８、Ｈ  ７．４４、Ｎ  ６．０８；実測値：Ｃ  ５７．２８、Ｈ  ７．５２、Ｎ  ６．１３。
【００９９】
Ｅ．  ３Ｓ，４ａＲ，６Ｓ，８ａＲ−６−（（（２Ｓ）−２−（エトキシカルボニル）−４，４−ジフルオロピロリジニル）メチル）−１，２，３，４，４ａ，５，６，７，８，８ａ−デカヒドロイソキノリン−３−カルボン酸エチル（化合物ＩＶ（ｂ））の製造
ジクロロメタン（４０ｍＬ）に溶解させた上記工程Ｄの化合物（３．３ｇ、７．１０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃まで冷却させ、ヨウ化トリメチルシリル（３．０ｍＬ、２１．３ｍｍｏｌ）を充填した。反応液を室温まで昇温させ、更に４時間撹拌し、次いで飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を加えることによってクエンチした。水相をジクロロメタンを用いて抽出させ、その有機物を合わせて１Ｎ  チオ硫酸ナトリウム溶液を用いて洗浄し、硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮した。該物質をクロマトグラフィー（２％のＭｅＯＨ／ジクロロメタン）精製を行ない、Ｅｔ２Ｏ（２０ｍＬ）に溶解し、それにＨＣｌ／Ｅｔ２Ｏ溶液（５０ｍＬ）を加えた。溶媒を真空下で除去して、白色固体の最終的な標題化合物（２．６ｇ、７６％）を得た。
ＭＳ（ｍ／ｅ）４０３．４（Ｍ＋）。
元素分析（Ｃ２０Ｈ３２Ｃｌ２Ｆ２Ｎ２Ｏ４として計算）理論値：Ｃ  ５０．５３、Ｈ  ７．２１、Ｎ  ５．８９；実測値：Ｃ  ５０．９０、Ｈ  ７．４１、Ｎ  ５．８４。
【数３】
0004619595.tif 000025
【０１００】
化合物ＩＶ（ａ）
３Ｓ，４ａＲ，６Ｓ，８ａＲ−６−（（（２Ｓ）−２−（カルボン酸）−４，４−ジフルオロピロリジニル）メチル）−１，２，３，４，４ａ，５，６，７，８，８ａ−デカヒドロイソキノリン−３−カルボン酸
【化１７】
0004619595.tif 000026
５Ｎ  塩酸（１５ｍＬ）に溶解させた、上記工程Ｄの化合物である３Ｓ，４ａＲ，６Ｓ，８ａＲ−６−（（（２Ｓ）−２−（エトキシカルボニル）−４，４−ジフルオロピロリジニル）メチル）−２−メトキシカルボニル−１，２，３，４，４ａ，５，６，７，８，８ａ−デカヒドロイソキノリン−３−カルボン酸エチル（３．３ｇ、７．１０ｍｍｏｌ）溶液を９０℃で１８時間加熱した。該反応混合物を室温まで冷却し、真空下で濃縮した。得られた粗発泡体を水（７５ｍＬ）に溶解し、Ｄｏｗｅｘ  ５０Ｘ−８（１００−２００）イオン交換樹脂（１０ｇ）の存在下で２時間撹拌した。その樹脂をろ過し、ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１：１）および水を用いて連続して洗浄し、次いで１０％ピリジン／Ｈ２Ｏの存在下で２時間撹拌した。ろ過後、該樹脂を水洗し、そのろ液を真空下で濃縮して白色発泡体の標題化合物（０．６ｇ、９７％）を得た。
ＭＳ（ｍ／ｅ）３４７．２（Ｍ＋）。
元素分析（Ｃ１６Ｈ２４Ｆ２Ｎ２Ｏ４・０．１Ｈ２Ｏとして計算）理論値：Ｃ  ５５．１９、Ｈ  ７．０１、Ｎ  ８．０５；実測値：Ｃ  ５４．８１、Ｈ  ６．８２、Ｎ  ８．１３。
【数４】
0004619595.tif 000027
【０１０１】
実施例２
ｉＧｌｕＲ５受容体サブタイプが神経原性プロテインの溢出を媒介することを確認するために、まず、偏頭痛の機能的な特徴である、パネル化合物とｉＧｌｕＲ５受容体との結合アフィニティーを標準的な方法を用いて測定する。例えば、ｉＧｌｕＲ５受容体拮抗薬上で作用する化合物の活性を、クローン化し、発現させたヒトｉＧｌｕＲ５受容体上での放射線標識化したリガンドとの結合研究（Ｋｏｒｃｚａｋらによる１９９４，Ｒｅｃｅｐｔ．Ｃｈａｎｎｅｌｓ  ３；４１−４９）によるか、および急性的に単離したラットの後根神経節ニューロンにおける電流のホールセル電位固定電気生理学的な記録（Ｂｌｅａｋｍａｎらによる１９９６、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４９；５８１−５８５）によって測定することができる。ｉＧｌｕＲ５受容体上サブタイプで作用する化合物の選択性は、ｉＧｌｕＲ５受容体上での拮抗活性と、ＡＭＰＡおよびカイン酸受容体上での拮抗活性を比較することによって測定することができる。それら比較研究に有用な方法としては、受容体とリガンドとの結合研究、およびヒトのＧｌｕＲ１、ＧｌｕＲ２、ＧｌｕＲ３およびＧｌｕＲ４受容体での機能活性のホールセル電位固定電気生理学的な記録（Ｆｌｅｔｃｈｅｒらによる１９９５、Ｒｅｃｅｐｔ．Ｃｈａｎｎｅｌｓ  ３；２１−３１）；受容体とリガンドとの結合研究および、ヒトのＧｌｕＲ６受容体での機能活性のホールセル電位固定電気生理学的な記録（Ｈｏｏらによる、Ｒｅｃｅｐｔ．Ｃｈａｎｎｅｌｓ  ２；３２７−３３８）；並びに、急性的に単離した小脳のプルキシエニューロン中のＡＭＰＡ受容体での（Ｂｌｅａｋｍａｎらによる、１９９６、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４９；５８１−５８５）、および他の組織を発現するＡＭＰＡ受容体での（ＦｌｅｔｃｈｅｒおよびＬｏｄｇｅによる１９９６、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．７０；６５−８９）機能活性のホールセル電位固定電気生理学的な記録を含む。
【０１０２】
ｉＧｌｕＲ５拮抗薬結合アフィニティーのプロフィール
ヒトｉＧｌｕＲ受容体を用いて安定にトランスフェクトさせたセルライン（ＨＥＫ２９３細胞）を使用した。拮抗薬の濃度を増大させることによる３［Ｈ］ＡＭＰＡの置換反応を、ｉＧｌｕＲ１、ｉＧｌｕＲ２、ｉＧｌｕＲ３およびｉＧｌｕＲ４を発現する細胞について測定し、一方で３［Ｈ］カイン酸（ＫＡ）の置換反応をｉＧｌｕＲ５、ｉＧｌｕＲ６およびｉＧｌｕＲ７およびＫＡ２を発現する細胞について測定した。拮抗薬の結合活性（Ｋｉ）（単位はμＭである）の概算を、化合物Ｉ〜ＩＶについて決定した。選択性の指標として、ｉＧｌｕＲ５カイン酸受容体サブタイプとの結合アフィニティーに対する、ｉＧｌｕＲ２ＡＭＰＡ受容体サブタイプとの結合アフィニティーの比率をも決定した。本発明によって得られる化合物は、ｉＧｌｕＲ２の場合よりもｉＧｌｕＲ５の場合に少なくとも１０倍、より好ましくは少なくとも１００倍の結合アフィニティーを示した。
【０１０３】
実施例３
各パネルの化合物がプロテインの溢出を阻害する能力、および偏頭痛のニューロン機構の典型的な機能アッセイを測定するために、以下の動物モデルを使用した。本モデルにおいて該パネルの化合物について得られる結果を表Ｉ（下記）にまとめる。
【０１０４】
硬膜プロテインの溢出の動物モデル
ハーラン・スプレーグラット（２２５〜３２５ｇ）またはモルモット（２２５〜３２５ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製）を、ペントバルビダールナトリウム（それぞれに、６５ｍｇ／ｋｇまたは４５ｍｇ／ｋｇ）を用いて腹腔内的に麻酔をかけ、定位固定のフレーム（Ｄａｖｉｄ  Ｋｏｐｆ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）（これは、切断用のバーをラットの場合には−３．５ｍｍに、またはモルモットの場合には−４．０ｍｍに備える）中に置いた。正中矢状（midline sagital）の頭皮切開の後、２組の両側の穴を頭蓋骨にドリルで開けた（ここで、ラットの場合には後部（posterially）から６ｍｍであって、側面から２．０および４．０ｍｍであり；モルモットの場合には後部から４．０ｍｍであって、側面から３．２および５．２ｍｍである。そして、十字縫合の全座標である）。ステンレススチールの刺激電極の組（これは、先端部以外は絶縁である）を両方の半球の穴を通して、硬膜から深さが９ｍｍ（ラットの場合）または１０．５ｍｍ（モルモットの場合）にまで下ろした。
【０１０５】
大腿静脈を露出させ、試験化合物の投与を１ｍＬ／Ｋｇの投与用量で静脈内（ｉ．ｖ．）注射するか、あるいは試験化合物を容量が２．０ｍＬ／ｋｇの胃管栄養法で経口（ｐ．ｏ．）投与した。静脈内注射の７分後、蛍光色素であるエバンスブルー（５０ｍｇ／ｋｇの用量）をも静脈内注射した。エバンスブルーは血液中でプロテインと複合化して、プロテイン溢出のマーカーとして機能する。試験化合物の注入から正確に１０分後、左の三叉神経節をモデル２７３ポテンショスタット／ガルバノスタット（ＥＧ  ＆  Ｇ  Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を用いて１．０ｍＡ（５Ｈｚ、４ミリ秒の持続時間）の電流強度で３分間刺激した。
【０１０６】
刺激の５分後、動物を殺し、サリン（２０ｍＬ）を用いて失血させた。頭蓋骨の頂上部を除いて、硬膜の収集を容易とした。該膜試料を両方の半球から取り出し、水で注ぎ、顕微鏡スライド状に平らに広げた。乾燥後、組織を７０％のグリセロール／水溶液を用いてカバーガラスした。
【０１０７】
格子モノクロメーターおよび分光光度計を備えた蛍光顕微鏡（ツァイス）を、各試料中のエバンスブルーの量を定量化するのに使用した。約５３５ｎｍの励起波長を用いて、６００ｎｍの発光強度で測定した。該顕微鏡は電動ステージを備えており、そしてパーソナルコンピューターにインターフェイスさせた。このことにより、各硬膜試料について２５点（５００ｍｍ毎）の蛍光測定時での、コンピューター制御による該ステージの動きが容易となる。測定値の平均偏差および標準偏差をコンピューターによって決定した。
【０１０８】
三叉神経節の電気的な刺激によって誘発される溢出は同側性の効果（すなわち、刺激を受けた三叉神経節の硬膜の側においてだけ起こる）であった。このことにより、残り（刺激を受けていない）半分の硬膜をコントロールとして使用することができる。刺激を受けていない側の溢出の量に対する、刺激を受けた側の硬膜の溢出の量の比率を算出した。サリンだけを投与されたコントロール動物は、ラットの場合に約２．０倍の比率を、およびモルモットの場合に約１．８倍の比率を示した。それに対して、刺激を受けた側の硬膜の溢出を有効に防止する化合物は、約１．０の比率を示すであろう。
【０１０９】
パネル化合物の各々についての用量−応答曲線を生成し、溢出を５０％（ＩＤ５０）または１００％（ＩＤ１００）だけ阻害する用量を概算した。本発明で用いたパネル化合物の各々についての、それぞれのＩＤ５０値および／またはＩＤ１００値を、以下の表Ｉにまとめる。
表１
硬膜プロテインの溢出の抑制（ｎｇ／Ｋｇ）
【表９】
0004619595.tif 000028