(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
分析用キレート剤を含有するアルミニウム測定用キレート試薬であって、
該アルミニウム測定用キレート試薬が、
反応液中での該分析用キレート剤の当量濃度が、従来濃度の６倍以上である条件下で、
試料中のアルミニウムと前記分析用キレート剤との錯体を形成させ、
この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、
試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いられ、
該従来濃度が、
該分析用キレート剤が８−キノリノールである場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の３０倍当量濃度であり、
該分析用キレート剤がルモガリオンである場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の４０倍当量濃度であり、
該分析用キレート剤が２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンである場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１５倍当量濃度であり、
該分析用キレート剤が、８−キノリノール、ルモガリオン及び２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼン以外である場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１５倍当量であるアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項２】
反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、従来濃度の１０倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項１記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項３】
該分析用キレート剤が８−キノリノールであり；また、該キレート試薬中の分析用キレート剤濃度が、試料中での推定含有アルミニウム濃度の５４０倍当量濃度以上である、請求項１又は２記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項４】
該キレート試薬中の分析用キレート剤濃度が、試料中での推定含有アルミニウム濃度の９００倍当量濃度以上である、請求項３記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項５】
該分析用キレート剤がルモガリオンであり；また、該キレート試薬中の分析用キレート剤濃度が、試料中での推定含有アルミニウム濃度の４８６倍当量濃度以上である、請求項１又は２記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項６】
該キレート試薬中の分析用キレート剤濃度が、試料中での推定含有アルミニウム濃度の８１０倍当量濃度以上である、請求項５記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項７】
該分析用キレート剤が２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンであり；また、該キレート試薬中の分析用キレート剤濃度が、試料中での推定含有アルミニウム濃度の８１倍当量濃度以上である、請求項１又は２記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項８】
該キレート試薬中の分析用キレート剤濃度が、試料中での推定含有アルミニウム濃度の１３５倍当量濃度以上である、請求項７記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項９】
該クロマトグラフィーが、クロマトグラフィーの移動相に分析用キレート剤を含有させないプレカラム誘導体化法によるものである、請求項１〜８のいずれか１項記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項記載のキレート試薬、バッファ及びクロマト用溶離液（移動相）からなる、アルミニウム測定用キット。
【請求項１１】
反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の２４３倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤を含有するアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項１２】
反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の４００倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項１１記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項１３】
反応液中での８−キノリノールの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１８０倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと８−キノリノールとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤として８−キノリノールを含有するアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項１４】
反応液中での８−キノリノールの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の３００倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項１３記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項１５】
反応液中でのルモガリオンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の２４３倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムとルモガリオンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤としてルモガリオンを含有するアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項１６】
反応液中でのルモガリオンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の４００倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項１５記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項１７】
反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の８８倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤として２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンを含有するアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項１８】
反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１５０倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項１７記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項１９】
反応液中での分析用キレート剤の濃度が６．６７ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤を含有するアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項２０】
反応液中での分析用キレート剤の濃度が１２ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項１９記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項２１】
反応液中での８−キノリノールの濃度が６．６７ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと８−キノリノールとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤として８−キノリノールを含有するアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項２２】
反応液中での８−キノリノールの濃度が１２ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項２１記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項２３】
反応液中でのルモガリオンの濃度が０．９ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムとルモガリオンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤としてルモガリオンを含有するアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項２４】
反応液中でのルモガリオンの濃度が１．５ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項２３記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項２５】
反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの濃度が０．６ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤として２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンを含有するアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項２６】
反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの濃度が１ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項２５記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項２７】
クロマトグラフィーが、クロマトグラフィーの移動相に分析用キレート剤を含有させないプレカラム誘導体化法によるものである、請求項１１〜２６のいずれか１項記載のアルミニウム測定用キレート試薬。
【請求項２８】
反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、従来濃度の６倍以上である条件下で、
試料中のアルミニウムと該分析用キレート剤との錯体を形成させ、
この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、
試料中のアルミニウム含量の測定方法であって、
該従来濃度が、
該分析用キレート剤が８−キノリノールである場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の３０倍当量濃度であり、
該分析用キレート剤がルモガリオンである場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の４０倍当量濃度であり、
該分析用キレート剤が２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンである場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１５倍当量濃度であり、
該分析用キレート剤が、８−キノリノール、ルモガリオン及び２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼン以外である場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１５倍当量である試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項２９】
反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、従来濃度の１０倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項２８記載の試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項３０】
反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の２４３倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項３１】
反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の４００倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項３０記載の試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項３２】
反応液中での８−キノリノールの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１８０倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと８−キノリノールとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、分析用キレート剤として８−キノリノールを用いる試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項３３】
反応液中での８−キノリノールの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の３００倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項３２記載の試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項３４】
反応液中でのルモガリオンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の２４３倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムとルモガリオンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、分析用キレート剤としてルモガリオンを用いる試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項３５】
反応液中でのルモガリオンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の４００倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項３４記載の試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項３６】
反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の８８倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、分析用キレート剤として２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンを用いる試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項３７】
反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１５０倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項３６記載の試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項３８】
反応液中での分析用キレート剤の濃度が６．６７ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項３９】
反応液中での分析用キレート剤の濃度が１２ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項３８記載の試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項４０】
反応液中での８−キノリノールの濃度が６．６７ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと８−キノリノールとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、分析用キレート剤として８−キノリノールを用いる試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項４１】
反応液中での８−キノリノールの濃度が１２ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項４０記載の試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項４２】
反応液中でのルモガリオンの濃度が０．９ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムとルモガリオンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、分析用キレート剤としてルモガリオンを用いる試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項４３】
反応液中でのルモガリオンの濃度が１．５ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項４２記載の試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項４４】
反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの濃度が０．６ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、分析用キレート剤として２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンを用いる試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項４５】
反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの濃度が１ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、請求項４４記載の試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【請求項４６】
クロマトグラフィーが、クロマトグラフィーの移動相に分析用キレート剤を含有させないプレカラム誘導体化法によるものである、請求項２８〜４５のいずれか１項記載の試料中のアルミニウム含量の測定方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、試料中のアルミニウム含量を、妨害物質の影響を受けることなく、クロマトグラフィーにより簡便かつ高精度に測定できるキレート試薬及び測定方法に関する。本発明のキレート試薬及び測定方法は、例えば、生体試料、食物、飲料、飲料水、試薬、薬剤、河川水、湖沼水、海水、土壌等に含まれるアルミニウムの測定に好適であり、特に、臨床検査分野の血液透析患者の血液中アルミニウム濃度の測定や薬剤中のアルミニウム濃度の測定に好適である。
背景技術
従来のアルミニウム測定用試薬は、試料中に存在する可能性のあるアルミニウムの上限濃度に基づき、約１５〜４０倍当量の分析用キレート剤を含有することが一般的である（８−キノリノール：佐藤ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ，Ｖｏｌ．７８９，３６１−３６７，１９９７、ルモガリオン：Ｗｕ  ｅｔ．ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，Ｖｏｌ．Ｂ６６３，２４７−２５３，１９９５、ＤＨＡＢ（２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼン）：金子ら、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．６３，２２１９−２２２２，１９９１）。
しかしながら、最近、本発明者らは、同一試料について、従来の試薬を用いたＨＰＬＣ測定法とフレームレス原子吸光法の両方で測定したところ、従来の試薬を用いたＨＰＬＣ測定法では、試料中に存在する妨害物質の影響により測定値が低くなることに気付いた。例えば、原発性ヘモクロマトーシス又は続発性ヘモクロマトーシス等の疾患患者において、尿中への鉄排泄増加のための薬剤として投与されるデフェロキサミンやその他のアルミニウムと結合能のある薬剤（例えば、血液製剤に使用されるクエン酸、フッ素や、アスコルビン酸、グルタチオン等）の妨害物質が、その患者の血清等の試料中に存在する場合、本来の値よりも低いアルミニウム測定値となることを確認した。また、鉄イオン、銅イオンや亜鉛イオンが試料中に存在する場合も同様である。かかる事態は、本来疾患状態にある被検査者が、非疾患者と認定される可能性があり大きな問題である。しかし、フレームレス原子吸光法は、それを実施するためのフレームレス原子吸光装置が高価である等の欠点がある。
本発明は、試料の種類に係わらず、試料中の実質的にすべてのアルミニウムを捕捉することが可能な、アルミニウム測定用キレート試薬を提供することを目的とする。
発明の開示
本発明（１）は、反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、従来濃度の６倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤を含有するアルミニウム測定用キレート試薬である。
また、本発明（２）は、反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、従来濃度の１０倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（１）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
更に、本発明（３）は、分析用キレート剤が８−キノリノールであり；該従来濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の３０倍当量濃度であり；また、該キレート試薬中の分析用キレート剤濃度が、試料中での推定含有アルミニウム濃度の５４０倍当量濃度以上である、前記発明（１）又は（２）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
また、本発明（４）は、該キレート試薬中の分析用キレート剤濃度が、試料中での推定含有アルミニウム濃度の９００倍当量濃度以上である、前記発明（３）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
更に、本発明（５）は、分析用キレート剤がルモガリオンであり；該従来濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の４０倍当量濃度であり；また、該キレート試薬中の分析用キレート剤濃度が、試料中での推定含有アルミニウム濃度の４８６倍当量濃度以上である、前記発明（１）又は（２）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
また、本発明（６）は、該キレート試薬中の分析用キレート剤濃度が、試料中での推定含有アルミニウム濃度の８１０倍当量濃度以上である、前記発明（５）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
更に、本発明（７）は、分析用キレート剤が２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンであり；該従来濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１５倍当量濃度であり；また、該キレート試薬中の分析用キレート剤濃度が、試料中での推定含有アルミニウム濃度の８１倍当量濃度以上である、前記発明（１）又は（２）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
また、本発明（８）は、該キレート試薬中の分析用キレート剤濃度が、試料中での推定含有アルミニウム濃度の１３５倍当量濃度以上である、前記発明（７）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
更に、本発明（９）は、クロマトグラフィーが、クロマトグラフィーの移動相に分析用キレート剤を含有させないプレカラム誘導体化法によるものである、前記発明（１）〜（８）のいずれかのアルミニウム測定用キレート試薬である。
また、本発明（１０）は、前記発明（１）〜（９）のいずれかのキレート試薬、バッファ及びクロマト用溶離液（移動相）からなる、アルミニウム測定用キットである。
更に、本発明（１１）は、反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の２４３倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤を含有するアルミニウム測定用キレート試薬である。
また、本発明（１２）は、反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の４００倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（１１）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
更に、本発明（１３）は、反応液中での８−キノリノールの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１８０倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと８−キノリノールとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤として８−キノリノールを含有するアルミニウム測定用キレート試薬である。
また、本発明（１４）は、反応液中での８−キノリノールの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の３００倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（１３）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
更に、本発明（１５）は、反応液中でのルモガリオンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の２４３倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムとルモガリオンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤としてルモガリオンを含有するアルミニウム測定用キレート試薬である。
また、本発明（１６）は、反応液中でのルモガリオンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の４００倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（１５）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
更に、本発明（１７）は、反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の８８倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤として２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンを含有するアルミニウム測定用キレート試薬である。
また、本発明（１８）は、反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１５０倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（１７）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
更に、本発明（１９）は、反応液中での分析用キレート剤の濃度が６．６７ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤を含有するアルミニウム測定用キレート試薬である。
また、本発明（２０）は、反応液中での分析用キレート剤の濃度が１２ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（１９）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
更に、本発明（２１）は、反応液中での８−キノリノールの濃度が６．６７ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと８−キノリノールとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤として８−キノリノールを含有するアルミニウム測定用キレート試薬である。
また、本発明（２２）は、反応液中での８−キノリノールの濃度が１２ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（２１）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
更に、本発明（２３）は、反応液中でのルモガリオンの濃度が０．９ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムとルモガリオンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤としてルモガリオンを含有するアルミニウム測定用キレート試薬である。
また、本発明（２４）は、反応液中でのルモガリオンの濃度が１．５ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（２３）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
更に、本発明（２５）は、反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの濃度が０．６ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法で用いる、分析用キレート剤として２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンを含有するアルミニウム測定用キレート試薬である。
また、本発明（２６）は、反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの濃度が１ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（２５）のアルミニウム測定用キレート試薬である。
更に、本発明（２７）は、クロマトグラフィーが、クロマトグラフィーの移動相に分析用キレート剤を含有させないプレカラム誘導体化法によるものである、前記発明（１１）〜（２６）のいずれかのアルミニウム測定用キレート試薬である。
また、本発明（２８）は、反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、従来濃度の６倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
更に、本発明（２９）は、反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、従来濃度の１０倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（２８）の試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
また、本発明（３０）は、反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の２４３倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
更に、本発明（３１）は、反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の４００倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（３０）の試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
また、本発明（３２）は、反応液中での８−キノリノールの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１８０倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと８−キノリノールとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、分析用キレート剤として８−キノリノールを用いる試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
更に、本発明（３３）は、反応液中での８−キノリノールの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の３００倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（３２）の試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
また、本発明（３４）は、反応液中でのルモガリオンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の２４３倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムとルモガリオンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、分析用キレート剤としてルモガリオンを用いる試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
更に、本発明（３５）は、反応液中でのルモガリオンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の４００倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（３４）の試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
また、本発明（３６）は、反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の８８倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、分析用キレート剤として２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンを用いる試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
更に、本発明（３７）は、反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの当量濃度が、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１５０倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（３６）の試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
また、本発明（３８）は、反応液中での分析用キレート剤の濃度が６．６７ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
更に、本発明（３９）は、反応液中での分析用キレート剤の濃度が１２ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（３８）の試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
また、本発明（４０）は、反応液中での８−キノリノールの濃度が６．６７ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと８−キノリノールとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、分析用キレート剤として８−キノリノールを用いる試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
更に、本発明（４１）は、反応液中での８−キノリノールの濃度が１２ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（４０）の試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
また、本発明（４２）は、反応液中でのルモガリオンの濃度が０．９ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムとルモガリオンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、分析用キレート剤としてルモガリオンを用いる試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
更に、本発明（４３）は、反応液中でのルモガリオンの濃度が１．５ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（４２）の試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
また、本発明（４４）は、反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの濃度が０．６ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンとの錯体を形成させ、この錯体をクロマトグラフィーにより検出する、分析用キレート剤として２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンを用いる試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
更に、本発明（４５）は、反応液中での２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンの濃度が１ｍＭ以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる、前記発明（４４）の試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
また、本発明（４６）は、クロマトグラフィーが、クロマトグラフィーの移動相に分析用キレート剤を含有させないプレカラム誘導体化法によるものである、前記発明（２８）〜（４５）のいずれかの試料中のアルミニウム含量の測定方法である。
発明を実施するための最良の形態
まず、本明細書で用いられる用語につき説明する。「反応液」とは、試料と試薬とを合わせた液をいう。「従来濃度」とは、分析用キレート剤が８−キノリノールである場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の３０倍当量濃度であり；分析用キレート剤がルモガリオンである場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の４０倍当量濃度であり；分析用キレート剤が２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンである場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１５倍当量濃度であり；また、分析用キレート剤がこれら以外の場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１５倍当量とする。「試料中の推定含有アルミニウム濃度」とは、生体試料の場合は３７．０６μＭ、食物の場合は２６０ｍｇ／Ｋｇ、飲料の場合は１７７．９μＭ、飲料水の場合は９．１９μＭ、薬剤等をはじめこれら以外の場合は３７．０６μＭとする。「反応液中での推定含有アルミニウム濃度」とは、試料中の推定アルミニウム濃度に基づいて計算されたアルミニウム量を、試料と試薬とを合わせた結果の全液量（Ｌ）で除した値をいう。
以下、本発明を具体的に説明する。まず、反応液中での分析用キレート剤の濃度は、従来濃度の６倍以上、より好ましくは１０倍以上、更に好ましくは２０倍以上とする。例えば、分析用キレート剤が８−キノリノールである場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の１８０倍当量濃度（６．６７ｍＭ）以上、より好ましくは３００倍当量濃度（１２ｍＭ）以上、分析用キレート剤がルモガリオンである場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の２４３倍当量濃度（０．９ｍＭ）以上、より好ましくは４００倍当量濃度（１．５ｍＭ）以上であり、分析用キレート剤が２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼンである場合には、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の８８倍当量濃度（０．６ｍＭ）以上、より好ましくは１５０倍当量濃度（１ｍＭ）以上とする。なお、上限値は特に限定されないが、反応液中における分析用キレート剤の溶解度である。
次に、キレート試薬中の分析用キレート剤濃度に関して説明する。その下限値は、特に限定されないが、試薬と試料とを合わせたときに、反応液中の分析用キレート剤の濃度が従来濃度の６倍以上、より好ましくは１０倍以上となる程度の濃度は必要である。また、その上限値はそれの溶解度である。
分析用キレート剤は、アルミニウムと錯体を形成することにより、吸光度若しくは蛍光強度などの光学的シグナル、電気的シグナル又は放射化学的シグナル等のシグナル（信号）の生成、又は変化を生じさせるものであれば、特に限定されず、既存のものが使用されうる。例えば、８−キノリノール（８−ヒドロキシキノン、オキシン）、ルモガリオン、２，２′−ジヒドロキシ−アゾベンゼン（ＤＨＡＢ）等が挙げられる。
キレート試薬の溶媒は、特に限定されないが、典型的には水である。また、その他の添加物、例えば、ｐＨを調整するための緩衝剤や除タンパク剤等を含有してもよい。
なお、液体クロマトグラフィーで測定する場合、キレート試薬は、バッファ試薬と溶離液と別々の状態で存在していてもよく、バッファ試薬及び／又は溶離液と組み合わせた状態で存在していてもよい。
次に、本発明に係るキレート試薬を用いた、試料中のアルミニウム測定方法について説明する。まず、測定対象となる試料は、特に限定されず、生体試料、食物、飲料、飲料水、薬剤、試薬、河川水、湖沼水、海水、土壌等が挙げられる。特に、微量のアルミニウムが含まれる疑いのある試料中のアルミニウムの測定に有効である（特に生体試料、薬剤等）。
生体試料は特に限定されず、例えば、ヒト又は動物の血液、血清、血漿、尿、大便、精液、髄液、唾液、汗、涙、腹水、羊水、脳等の臓器、毛髪や皮膚や爪や筋肉若しくは神経等の組織及び細胞等が挙げられる。
食物は特に限定されず、例えば、食肉、野菜、穀物、果物、水産物、加工食品等が挙げられる。
飲料は特に限定されず、例えば、ジュース、お茶、コーヒー、アルコール等が挙げられる。
薬剤は特に限定されず、例えば、輸液、注射液、散剤、錠剤等が挙げられる。
なお、試料の形態は、液体であることが好ましいが、液体でない場合には、抽出処理又は可溶化処理などの前処理を既知の方法に従って行ない、液体試料とすることが好ましい。また、必要により、試料の除タンパク処理操作を行ってもよい。
このような試料と本発明のキレート試薬とを混合する。試料とキレート試薬とをどのような比で混合するかに関しては特に限定されないが、混合後の反応液中の分析用キレート剤の濃度が従来濃度の６倍以上となるように混合する。例えば、ヒト血清又は輸液中のアルミニウム濃度を測定する場合、ヒト血清は生体試料であり、また輸液は薬剤であるから、前記定義に従い、推定含有アルミニウム濃度を３７．０６μＭとして見積もる。次に、使用する試薬として６０ｍＭ８−キノリノールを選択する。この場合、アルミニウムと８−キノリノールは、１：３の比率で結合するので、キレート試薬中の８−キノリノールの当量濃度は、６０ｍＭ×１０００÷３÷３７．０６μＭ≒６５４０倍当量である。次に、６０ｍＭ８−キノリノール試薬を５０μＬ、試料１５０μＬ、３ＭＢＥＳ緩衝液２５０μＬを混合して錯形成反応させる。この場合、反応液中における８−キノリノール濃度は、（６０ｍＭ×５０μＬ）÷（５０μＬ＋１５０μＬ＋２５０μＬ）＝６．６７ｍＭである。また、反応液中のアルミニウム濃度は、（３７．０６μＭ×１５０μＬ）÷（５０μＬ＋１５０μＬ＋２５０μＬ）＝１２．３５μＭとなる。したがって、反応液中の８−キノリノール濃度は、６．６７ｍＭ×１０００÷３÷１２．３５μＭ＝１８０倍当量となる。
なお、アルミニウムと分析用キレート剤との錯体形成は、該試料と本発明のキレート試薬を混合し、錯体が充分に形成する時間及び温度を適宜設定する。
なお、試料とキレート試薬を混合する前、試料とキレート試薬の混合時、又は試料とキレート試薬を混合した後に、必要に応じて、他の試薬（例えば、ｐＨを調整するための緩衝剤や除タンパク剤等）を試料及び／又はキレート試薬と混合させてもよい。
次に、錯体形成後、分析化学において一般に用いられるクロマトグラフィー、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、オープンカラムによる液体クロマトグラフィー、電気泳動法及びキャピラリー電気泳動法などを用いて、通常の方法及び操作により、該錯体の測定を行なう。具体的には、本発明の分析用キレート剤とアルミニウムから形成された錯体、試料に含まれる成分、試薬に含まれている成分等を、移動相（展開剤）により固定相中を移動させ、各成分の移動速度の差により、これらを相互に分離し、該錯体に由来する吸光度若しくは蛍光強度などの光学的シグナル、電気的シグナル又は放射化学的シグナル等のシグナル（信号）を検出装置により又は目視により検出することにより、試料中のアルミニウムを定性的又は定量的に測定する。
クロマトグラフィーとしては、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、オープンカラムによる液体クロマトグラフィー、電気泳動法及びキャピラリー電気泳動法等が挙げられ、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）が好ましい。
例えば、液体クロマトグラフィーを用いる場合、液体クロマトグラフィーカラムは、オクタデシルシラン（ＯＤＳ）カラムなどの既知の逆相クロマトグラフィーカラム、バイオプティックＡＶ−１カラム〔ＧＬサイエンス社〕などのタンパク質被覆化ＯＤＳカラム、カプセルパックＭＦ  ｐｈ−１カラム〔資生堂社〕及びＡｌ分析専用カラム〔シノテスト社〕などの親水性基とフェニル基等の疎水性基を併せ持つ担体よりなるカラム、フェニル基等の疎水性基を有する担体よりなるカラムなどを固定相として用いることができる。特に、親水性基と疎水性基を併せ持つ担体よりなるカラム又はフェニル基等の疎水性基を有する担体よりなるカラムを用いた場合には、試料中に含まれるタンパク質とアルミニウムをより鮮明に分離することができるので好ましい。
また、電気泳動法及びキャピラリー電気泳動法の場合、ポリアクリルアミドゲル及びアガロースゲルなどの既知の電気泳動用担体を固定相として用いることができる。
移動相の組成及びその移動速度は、固定相の種類、固定相の容量、及び分離したアルミニウムと分析用キレート剤の錯体の検出方法に応じて、適当な組成及び移動速度を適宜選択する。
例えば、本発明のキレート試薬を用いる測定を逆相系のカラムを用いた液体クロマトグラフィーにより実施する場合には、アセトニトリル、酢酸等の有機溶媒を０〜５０％の範囲で、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）若しくはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン等の既知の緩衝剤を０．００１〜０．５ＭかつｐＨ４．０〜９．０の範囲で、水を０〜９５％の範囲で、ＥＤＴＡ等のキレート剤を０．０１〜５００ｍＭの範囲で、そしてアジ化ナトリウム等の防腐剤、他のアルミニウムの検出のための試薬、又は対イオンなどを移動相中に含有させてもよい。
また、移動相に界面活性剤を含ませてもよい。界面活性剤としては、陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤、両性界面活性剤、及び非イオン界面活性剤のいずれをも用いることができる。陰イオン界面活性剤としては、例えば、カルボン酸塩、アミノ酸塩、スルホン酸塩、硫酸エステル塩、又はリン酸エステル塩などを挙げることができる。陽イオン界面活性剤としては、例えば、アミン塩、又は第４級アンモニウム塩などを挙げることができる。両性界面活性剤としては、例えば、アミノカルボン酸、カルボキシベタイン型界面活性剤、又はスルホベタイン型界面活性剤などを挙げることができる。更に、非イオン界面活性剤としては、例えば、ポリオキシエチレン系界面活性剤、又は多価アルコール型界面活性剤などを挙げることができる。
これらの界面活性剤として、相当する市販の界面活性剤を用いることができるが、市販品の例としては、陰イオン界面活性剤のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）〔和光純薬工業社〕、非イオン界面活性剤のトライトン  Ｘ−１００（ポリエチレングリコール−モノ−ｐ−オクチルフェニルエーテル（ｎ＝１０））〔東京化成社〕、ＰＯＮＰＥ−２０〔東京化成社〕、及び陽イオン界面活性剤のＣＡ−２３３０〔日光ケミカル社〕などが挙げられる。
これらの界面活性剤を移動相中に含有させる濃度は、分離能や感度などの条件に応じて適宜設定すればよい。
また、移動相の組成を時間的に変化させてもよい。
高速液体クロマトグラフィーによる場合は、例えば０．１〜１０．０ｍＬ／分の範囲内で、またオープンカラムによる液体クロマトグラフィーの場合は、例えば０．０１〜５．０ｍＬ／分の範囲内で、移動相の移動速度を適宜設定する。
本発明のキレート試薬を用いる試料中のアルミニウムの測定においては、前述のように、前記のクロマトグラフィーにより遊離の分析用キレート剤等と分離した、アルミニウムと分析用キレート剤の錯体を、この錯体に由来する吸光度若しくは蛍光強度などの光学的シグナル、電気的シグナル又は放射化学的シグナル等のシグナル（信号）を検出装置により又は目視により検出することにより、定性的又は定量的にアルミニウムの測定を行うことができる。
この分離したアルミニウムと分析用キレート剤の錯体に由来するシグナルの検出は、クロマトグラフィーの移動相の流路中にこのアルミニウムと分析用キレート剤の錯体が存在する間に、この流路中に配置した検出装置により又は目視により行うことができる。
また、クロマトグラフィーから移動相を分別して収集し、このフラクションを検出装置にかけることにより又は目視により検出を行うこともできる。
なお、アルミニウムを含む試料と分析用キレート剤を含有するキレート試薬を混合し、反応させ、アルミニウムと分析用キレート剤の錯体を形成させる時期であるが、これはクロマトグラフィーにかける前、又はクロマトグラフィーにかけている間等のいずれをも選択することができる。
つまり、本発明のキレート試薬及び測定方法による試料中のアルミニウムの測定は、クロマトグラフィーの移動相（溶離液、展開剤）に分析用キレート剤を含有させないプレカラム誘導体化法、クロマトグラフィーの移動相（溶離液、展開剤）に分析用キレート剤を含有させるプレカラム誘導体化法、オンカラム誘導体化法、ポストカラム誘導体化法等のいずれによっても実施することができる〔壹岐ら，ドージンニュース，４８巻，３頁，１９８９年〕。
なお、プレカラム誘導体化法とは、試料とキレート試薬とを混合し、試料中のアルミニウムとアルミニウム測定用キレート試薬中の分析用キレート剤とを接触させ、アルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させた後に、クロマトグラフィーを用いて該錯体の測定を行う方法である。
このプレカラム誘導体化法には、クロマトグラフィーの移動相（溶離液、展開剤）に分析用キレート剤を含有させない方法と含有させる方法の２種類の手法がある。
また、オンカラム誘導体化法とは、クロマトグラフィーの移動相（溶離液、展開剤）にのみ分析用キレート剤を含有させておき（すなわち、溶離液、展開剤がキレート試薬となる）、そして、クロマトグラフィーを行いながらアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させ、更に該錯体の測定を行う方法である。
更に、ポストカラム誘導体化法とは、分析用キレート剤を含有しない移動相（溶離液、展開剤）を用いて、試料をキレート試薬と混合することなくクロマトグラフィーにかけ、アルミニウムを他の成分と分離した後に、これをアルミニウム測定用キレート試薬と混合し分析用キレート剤と接触させ、アルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させ、該錯体の測定を行う方法である。
本発明のキレート試薬及び測定方法による試料中のアルミニウムの測定においては、クロマトグラフィーの移動相（溶離液、展開剤）に分析用キレート剤を含有させないプレカラム誘導体化法により測定を行う場合に特に好適である。
本発明による試料中のアルミニウムの測定では、反応液中において分析用キレート剤の濃度が非常に高濃度となるので、アルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる方向に平衡が大きく移動し、この錯体の形成が促進される。また、アルミニウム以外の元素（金属）と分析用キレート剤との錯体の形成もキレート安定度定数に従って同様に促進される。
ここで、クロマトグラフィーの移動相に分析用キレート剤を含有させないプレカラム誘導体化法においては、このアルミニウムと分析用キレート剤との錯体形成〔アルミニウム以外の元素（金属）と分析用キレート剤との錯体の形成も同様〕がクロマトグラフィーにかけられる前に行われ、移動相には分析用キレート剤が存在しない。
よって、クロマトグラフィーにおいては、平衡論的には前記形成された錯体がすべて解離する方向に推進力が働き、解離速度の速い（速度論的に活性な）アルミニウム以外の元素（金属）と分析用キレート剤との錯体が解離してゆき減少してしまうのに対して、速度論的に不活性なアルミニウムと分析用キレート剤との錯体は解離速度が遅いためその減少が僅かであるので、シグナル（信号）を検出する時に、アルミニウムと分析用キレート剤との錯体に由来するシグナル（信号）のみを強く検出、測定することができる。
これに対して、クロマトグラフィーの移動相に分析用キレート剤を含有させるプレカラム誘導体化法、オンカラム誘導体化法、及びポストカラム誘導体化法においては、分析用キレート剤が移動相等に含有されるので、本発明によるアルミニウムの測定のように錯体形成性妨害物質の影響を受けない測定系では、移動相等に高濃度の分析用キレート剤を含有させる必要があり、アルミニウムと分析用キレート剤との錯体に由来するシグナル（信号）の検出が行われる際にも高い濃度の分析用キレート剤が存在するので、キレート安定度定数の小さいアルミニウム以外の元素（金属）でさえ分析用キレート剤と錯体を形成し、これが大きなシグナル（信号）を生じ、アルミニウムの測定に妨害を与える恐れがある。
特に、微量のアルミニウムを高感度に測定する場合は不利である。
よって、本発明による試料中のアルミニウムの測定においては、クロマトグラフィーの移動相に分析用キレート剤を含有させないプレカラム誘導体化法での実施が特に好適であり、これにより高感度な測定を行うことができる。
なお、このクロマトグラフィーの移動相に分析用キレート剤を含有させないプレカラム誘導体化法には、実質的にアルミニウムの測定を行うには不充分な濃度の分析用キレート剤がクロマトグラフィーの移動相に含有されている場合も含まれるものとする。この場合、移動相に含有される分析用キレート剤の濃度は低いものであるので、移動相に分析用キレート剤が含有されない場合と同様の効果が生じる。
試料中のアルミニウムの定性的測定は、まず前記のようにして検出したシグナルをアルミニウムを含む標準試料のシグナルのリテンションタイム又は移動度等と対比することにより、分離したアルミニウム（錯体）に由来するシグナルを同定することができる。
また、定量的測定を行う場合には、更に、得られたクロマトグラム上のこの分離したアルミニウム（錯体）に由来するシグナル（ピーク）の高さ又は面積等を濃度既知のアルミニウムを含む標準試料のものと比較し計算することにより、定量値を求めればよい。また、検出装置よりの電気信号（シグナル）を基に定量値を算出してもよい。
なお、試料中のアルミニウムの測定の際には、試料に含まれているアルミニウムの測定に誤差を与える、試料以外からのアルミニウムの混入（コンタミネーション）を防ぐように十分に注意して実施をすることが望ましい。例えば、試薬等は不純物としてのアルミニウムが含まれていない高純度試薬を用いること、水は２回蒸留を行なった純度の高いものを用いること、容器及び器具は酸で洗浄してアルミニウムを除いた合成樹脂製のものを用いること、環境中からのアルミニウムの混入を防ぐように注意して実施すること、等が挙げられる。
実施例
以下、実施例により本発明をより具体的に詳述するが、本発明は、実施例によって何ら限定されるものではない。
実施例１：試料中のアルミニウム測定用のキレート試薬、及びこれを用いたヒト血清試料中のアルミニウム含量の測定
試薬の調製
▲１▼１０Ｍ硝酸
硝酸（超高純度規格品）〔関東化学社〕を蒸留水で希釈して、１０Ｍ硝酸を調製した。
▲２▼キレート試薬
８−キノリノール（分析用キレート剤）（試薬特級）〔関東化学社〕、及び３０％塩酸（超高純度規格品）〔多摩化学社〕から３種のキレート試薬を調製した。
試薬Ａ：
１０ｍＭの８−キノリノール／１Ｍの塩酸
試薬Ｂ：
２００ｍＭの８−キノリノール／１Ｍの塩酸
試薬Ｃ：
４００ｍＭの８−キノリノール／１Ｍの塩酸
▲３▼バッファ試薬
１０ｍＭのドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）（生化学用）〔和光純薬工業社〕、及び０．０５％（ｗ／ｖ）のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（研究用）（ナカライテスク社）を含有する２．５ＭのＮ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）〔同仁化学研究所社〕（試薬特級を再精製したもの）を含有する緩衝液（ｐＨ７．５）を調製した。
▲４▼移動相溶液
２０％のアセトニトリル（超高純度規格品）〔国産化学社〕、及び１％（ｗ／ｖ）のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）（生化学用）〔和光純薬工業社〕、並びに０．１ＭのＮ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）〔同仁化学研究所社〕（試薬特級を再精製したもの）を含有する緩衝液（ｐＨ７．０）を調製した。
試験試料の調製
▲１▼１ｇ／Ｌ（１，０００ｐｐｍ；３７．０６ｍＭ）のアルミニウム標準液（ＡｌＣｌ３：原子吸光分析用）〔和光純薬工業社〕を、０．０１Ｎ塩酸（超高純度規格品）〔関東化学社〕で希釈して、アルミニウム濃度：２５０μｇ／Ｌ（９．２６５μＭ）の標準アルミニウム溶液を調製した。
▲２▼デフェロキサミンを１バイアル中５００ｍｇ含む「デスフェラールバイアル」（商品名）〔ノバルティスファーマ社販売〕と蒸留水から以下の濃度のデフェロキサミン水溶液を調製した。
１００ｇ／Ｌ、１０．０ｇ／Ｌ、５．０ｇ／Ｌ及び１．０ｇ／Ｌ
▲３▼クエン酸と蒸留水から以下の濃度のクエン酸水溶液を調製した。
１００ｇ／Ｌ、１０．０ｇ／Ｌ、５．０ｇ／Ｌ及び１．０ｇ／Ｌ
ヒト血清０．８ｍＬと上記アルミニウム溶液０．１ｍＬの混合溶液に、更に上記の各種濃度のデフェロキサミン溶液又はクエン酸溶液の０．１ｍＬを加え、以下の濃度のデフェロキサミンまたはクエン酸を含む血清よりなる１ｍＬの試験試料を調製した。なお、デフェロキサミン又はクエン酸を含まない試験試料の場合には、蒸留水を加えた。
デフェロキサミン：１０．０ｇ／Ｌ、１．０ｇ／Ｌ、０．５ｇ／Ｌ、０．１ｇ                    ／Ｌ
クエン酸        ：１０．０ｇ／Ｌ、１．０ｇ／Ｌ、０．５ｇ／Ｌ、０．１ｇ                    ／Ｌ
アルミニウム濃度の測定
試験溶液：上記に調製した各種濃度のデフェロキサミン及びクエン酸を含む血清試料４００μＬに、１０Ｍ硝酸を２０μＬ加え混合し、これらを２５℃において、１０，０００×ｇで５分間遠心分離を行い、それぞれ上清と沈殿を分離した。次いで、上清の１５０μＬに、上記に調製したキレート試薬５０μＬをそれぞれ加え、更に上記に調製したバッファ試薬４００μＬを、それぞれ添加混合した。
これにより、試験試料中のアルミニウムと８−キノリノールを反応させ、錯体を形成させた。
測定装置：固定相として、シリカゲル基材上に親水性基と疎水性基を有する担体カラムである「Ａｌ分析専用カラム」（１．５ｍＭφ×７５ｍＭ）〔シノテスト社〕を用い、移動相として上記に調製した移動相溶液を流速１２０μＬ／分で用い、そしてナノスペース  ＳＩ−１／２００１型ポンプ〔資生堂社〕、ナノスペース  ＳＴ−１／２０１４型カラムオーブン〔資生堂社〕、ナノスペース  ＳＩ−１／２００９型脱気装置〔資生堂社〕、ナノスペース  ＡＬ３０２３型オートサンプラー〔資生堂社〕、ナノスペース  システムコントローラー・データプロセッサー〔資生堂社〕、及びＦＰ−１５２０Ｓ型分光蛍光検出器（５μＬセル装着）〔日本分光社〕を使用する高速液体クロマトグラフィーを用いた。
上記で得た試験溶液１０μＬを注入し、それぞれ測定を行った。蛍光強度の検出は、励起波長３７０ｎｍ、輻射波長５０４ｎｍで行った。
なお、測定において、蒸留水は蒸留操作を２回行った蒸留水を使用した。
また、本測定において使用した器具及び容器は、テフロン製等の合成樹脂製のものを用い、その使用前に０．１Ｍ硝酸にて十分洗浄した後、蒸留操作を２回行った蒸留水にて洗浄したものを使用した。
上記測定条件において、アルミニウムと８−キノリノールの錯体のピークのリテンションタイムが約６．５分であり、遊離の８−キノリノールのピークが、約３分であることが、標準物質より確かめられているので、リテンションタイムが約６．５分であるピーク面積を各測定における測定値とした。
測定結果
デフェロキサミン及びクエン酸含有血清試料の測定結果を、表１及び２にそれぞれ示した。結果は、デフェロキサミン又はクエン酸を含まない場合の測定値（ピーク面積）を１００％としたときの各血清試料の測定値（ピーク面積）の相対比率（パーセント）で示した。
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考察
試験試料はヒト血清を含有するので生体試料である。よって、試料中での推定含有アルミニウム濃度は３７．０６μＭとする。これに基づき反応液中での推定含有アルミニウム濃度を算出すると、３７．０６μＭ×４００÷（４００＋２０）×１５０÷（１５０＋５０＋４００）＝８．８２μＭである。したがって、反応液中での８−キノリノールの当量濃度は、キレート試薬Ａ、Ｂ及びＣでの反応液中における８−キノリノール濃度がそれぞれ０．８３３ｍＭ、１６．７ｍＭ及び３３．４ｍＭであるので、反応液中での推定含有アルミニウム濃度に対し、それぞれ３１倍当量、６３１倍当量及び１２６２倍当量である。
表１及び２から明らかなように、血清試料中の妨害物質（ここではデフェロキサミン又はクエン酸）が存在する場合には、反応液中での８−キノリノールの当量濃度が、３１倍当量では正確な測定が行えないが、６３１倍当量及び１２６２倍当量では正確な測定が行えることが明らかである。また、妨害物質が大量に存在している場合でも、キレート試薬中に分析用キレート剤が大量に存在していれば、その測定誤差が小さくなることが明らかである。
実施例２：総合アミノ酸・キシリトール製剤及び高カロリー輸液中のアルミニウム含量の測定
試薬の調製
▲１▼キレート試薬
８−キノリノール（分析用キレート剤）（試薬特級）〔関東化学社〕、及び３０％塩酸（超高純度規格品）〔多摩化学社〕から７種類のキレート試薬を調製した。
試薬ａ：
１０ｍＭの８−キノリノール／１Ｍの塩酸
試薬ｂ：
２０ｍＭの８−キノリノール／１Ｍの塩酸
試薬ｃ：
４０ｍＭの８−キノリノール／１Ｍの塩酸
試薬ｄ：
６０ｍＭの８−キノリノール／１Ｍの塩酸
試薬ｅ：
８０ｍＭの８−キノリノール／１Ｍの塩酸
試薬ｆ：
１００ｍＭの８−キノリノール／１Ｍの塩酸
試薬ｇ：
２００ｍＭの８−キノリノール／１Ｍの塩酸
▲２▼バッファ試薬
１０ｍＭのドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）（生化学用）〔和光純薬工業社〕、及び０．０５％（Ｗ／Ｖ）のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（研究用）（ナカライテスク社）を含有する２．５ＭのＮ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）〔同仁化学研究所社〕（試薬特級を再精製したもの）を含有する緩衝液（ｐＨ７．５）を調製した。
▲３▼移動相溶液
２０％のアセトニトリル（超高純度規格品）〔国産化学社〕、及び１％（Ｗ／Ｖ）のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）（生化学用）〔和光純薬工業社〕、並びに０．１ＭのＮ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）〔同仁化学研究所社〕（試薬特級を再精製したもの）を含有する緩衝液（ｐＨ７．０）を調製した。
試験試料
▲１▼  総合アミノ酸・キシリトール製剤：  数種類の必須アミノ酸、数種類の非必須アミノ酸、及びキシリトール等よりなる総合アミノ酸・キシリトール製剤（輸液）を、そのまま試験試料とした。
▲２▼  高カロリー輸液用  糖・アミノ酸・ビタミンＢ２・電解質液：  数種類の必須アミノ酸、数種類の非必須アミノ酸、ブドウ糖、ビタミンＢ２、及び十数種類の電解質等よりなる高カロリー輸液用  糖・アミノ酸・ビタミンＢ２・電解質液（輸液）を、そのまま試験試料とした。
アルミニウム濃度の測定
試験溶液：上記の各試験試料（▲１▼及び▲２▼）の各々の１５０μＬに、上記に調製したキレート試薬（試薬ａ、試薬ｂ、試薬ｃ、試薬ｄ、試薬ｅ、試薬ｆ、又は試薬ｇ）の５０μＬを加え、室温に１０分間置いた。
その後、これに上記に調製したバッファ試薬４００μＬを、それぞれ添加混合し、室温に１０分間置いた。
これにより、試験試料中のアルミニウムと８−キノリノールを反応させ、錯体を形成させた。
なお、この反応液中における８−キノリノール濃度は、上記の各キレート試薬の場合に、次の通りとなる。
試薬ａの場合：０．８３３ｍＭ
試薬ｂの場合：１．６７ｍＭ
試薬ｃの場合：３．３３ｍＭ
試薬ｄの場合：５．００ｍＭ
試薬ｅの場合：６．６７ｍＭ
試薬ｆの場合：８．３３ｍＭ
試薬ｇの場合：１６．７０ｍＭ
測定装置：固定相として、シリカゲル基材上に親水性基と疎水性基を有する担体カラムである「Ａｌ分析専用カラム」（４．６ｍｍφ×５０ｍｍ）〔シノテスト社〕を用い、移動相として上記に調製した移動相溶液を流速１，０００μＬ／分で用い、そしてＤＵ−９８０型ポンプ〔日本分光社〕、ＣＯ−１５６０型カラムオーブン（２５℃に設定し使用）〔日本分光社〕、Ｄ９−９８０−５０型脱気装置〔日本分光社〕、ＡＳ−９５０型オートインジェクター〔日本分光社〕、ＦＰ−１５２０Ｓ型分光蛍光検出器（１６μＬセル装着）〔日本分光社〕、及びインテグレーター〔日本分光社〕を使用する高速液体クロマトグラフィーを用いた。  上記で得た試験溶液２００μＬを注入し、それぞれ測定を行った。
蛍光強度の検出は、励起波長３７０ｎｍ、輻射波長５０４ｎｍで行った。
なお、上記の測定は同一の測定を２回繰り返して行い、２重測定を行った。
また、本測定において、水は、超純水〔多摩化学社〕を使用した。
そして、本測定において使用した器具及び容器は、テフロン製等の合成樹脂製のものを用い、その使用前に０．１Ｍ硝酸にて十分洗浄した後、超純水にて洗浄したものを使用した。
上記測定条件において、アルミニウムと８−キノリノールの錯体のピークのリテンションタイムが約４．６分であり、遊離の８−キノリノールのピークが、約２．２分であることが、標準物質より確かめられているので、リテンションタイムが約４．６分であるピーク面積を各測定における測定値とした。
測定結果
上記の各試験試料（▲１▼及び▲２▼）の測定結果を、表３に示した。結果は、キレート試薬として試薬ｇ（８−キノリノール濃度：２００ｍＭ）を用いた場合の測定値（ピーク面積）を１００％としたときの各キレート試薬（試薬ａ〜試薬ｆ）での測定値（ピーク面積）の相対比率（パーセント）で示した。そして、２重測定における２つの測定値を平均した値（平均値）を示した。
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考察
試験試料は、輸液、すなわち薬剤である。よって、試料中での推定含有アルミニウム濃度は３７．０６μＭとする。これに基づき反応液中での推定含有アルミニウム濃度を算出すると、３７．０６μＭ×１５０÷（１５０＋５０＋４００）＝９．２６５μＭである。
また、反応液中における８−キノリノール濃度は、各キレート試薬の場合に各々上記の通りである。
したがって、反応液中での８−キノリノールの当量濃度は、反応液中での推定含有アルミニウム濃度に対し、各々のキレート試薬を用いた場合以下の通りとなる。
試薬ａの場合：３０倍当量
試薬ｂの場合：６０倍当量
試薬ｃの場合：１２０倍当量
試薬ｄの場合：１８０倍当量
試薬ｅの場合：２４０倍当量
試薬ｆの場合：３００倍当量
試薬ｇの場合：６０１倍当量
表３から明らかなように、試験試料▲１▼（総合アミノ酸・キシリトール製剤）及び試験試料▲２▼（高カロリー輸液用  糖・アミノ酸・ビタミンＢ２・電解質液）においては、反応液中での８−キノリノールの当量濃度が１２０倍当量以下の場合（試薬ａ〜試薬ｃ）は、１８０倍当量以上の場合（試薬ｄ〜試薬ｇ）に比べてアルミニウム濃度の測定値が低くなっており、負の誤差が生じていることが分かる。
すなわち、上記の試験試料▲１▼及び試験試料▲２▼には、アルミニウム濃度の測定に誤差を生じさせる、分析用キレート剤を消費するような妨害物質、又はアルミニウムとキレートを形成するような錯体形成性妨害物質が、多量に含有されることが推察される。
しかしながら、このようなアルミニウム濃度の測定に妨害を及ぼすような物質が含有される試料においても、反応液中での８−キノリノールの当量濃度が１８０倍当量以上の場合（試薬ｄ〜試薬ｇ）は、誤差が生じずに正確な測定が行えることが分かる。
すなわち、反応液中での８−キノリノールの当量濃度が１８０倍当量以上の場合には、試料が測定に妨害を及ぼす物質を含有する輸液等の薬剤であっても、この薬剤中に含まれるアルミニウムの濃度を正しく測定できることが明らかである。
なお、分析用キレート剤が８−キノリノールの場合、反応液中での分析用キレート剤の従来濃度は、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の３０倍当量である。よって、この当量濃度が１８０倍当量である場合は、従来濃度に対して６倍となる。
したがって、反応液中での分析用キレート剤の当量濃度が、従来濃度の６倍以上である条件下で、試料中のアルミニウムと分析用キレート剤との錯体を形成させる場合には、分析用キレート剤を消費するような妨害物質、又はアルミニウムとキレートを形成するような錯体形成性妨害物質が試料中に存在したとしても、試料中のアルミニウム濃度を、誤差なく正確に測定できることが確かめられた。実施例３：試料中のアルミニウム測定用のキレート試薬、及びこれを用いた輸液中のアルミニウム含量の測定
試薬の調製
▲１▼キレート試薬
８−キノリノール（分析用キレート剤）（試薬特級）〔関東化学社〕、及び３０％塩酸（超高純度規格品）〔多摩化学社〕から３種類のキレート試薬を調製した。
試薬イ：
１０ｍＭの８−キノリノール／１Ｍの塩酸
試薬ロ：
１００ｍＭの８−キノリノール／１Ｍの塩酸
試薬ハ：
２００ｍＭの８−キノリノール／１Ｍの塩酸
▲２▼バッファ試薬
１０ｍＭのドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）（生化学用）〔和光純薬工業社〕、及び０．０５％（Ｗ／Ｖ）のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（研究用）（ナカライテスク社）を含有する２．５ＭのＮ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）〔同仁化学研究所社〕（試薬特級を再精製したもの）を含有する緩衝液（ｐＨ７．５）を調製した。
▲３▼移動相溶液
２０％のアセトニトリル（超高純度規格品）〔国産化学社〕、及び１％（Ｗ／Ｖ）のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）（生化学用）〔和光純薬工業社〕、並びに０．１ＭのＮ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）〔同仁化学研究所社〕（試薬特級を再精製したもの）を含有する緩衝液（ｐＨ７．０）を調製した。
希釈液及びアルミニウム溶液
▲１▼  希釈液：  １２Ｍ硝酸（超高純度規格品）〔多摩化学社〕を超純水〔多摩化学社〕にて希釈し、１００ｍＭ硝酸を調製した。
▲２▼  １０ｍｇ／Ｌアルミニウム溶液：  １００ｍＬのテフロン製メスフラスコを用い、１ｇ／Ｌ（１，０００ｐｐｍ；３７．０６ｍＭ）のアルミニウム標準液（ＡｌＣｌ３：原子吸光分析用）〔関東化学社〕を、上記希釈液で１００倍希釈して、アルミニウム濃度：１０．００ｍｇ／Ｌ（３７０．６μＭ）のアルミニウム溶液を調製した。
▲３▼  ５ｍｇ／Ｌアルミニウム溶液：  １５ｍＬのスミロンチューブ（住友ベークライト社）を用い、上記１０ｍｇ／Ｌアルミニウム溶液を上記希釈液で２倍希釈して、アルミニウム濃度：５．０００ｍｇ／Ｌ（１８５．３μＭ）のアルミニウム溶液を調製した。
▲４▼  １ｍｇ／Ｌアルミニウム溶液：  １５ｍＬのスミロンチューブ（住友ベークライト社）を用い、上記５ｍｇ／Ｌアルミニウム溶液を上記希釈液で５倍希釈して、アルミニウム濃度：１．０００ｍｇ／Ｌ（３７．０６μＭ）のアルミニウム溶液を調製した。
試験試料
▲１▼  総合アミノ酸・キシリトール製剤：  数種類の必須アミノ酸、数種類の非必須アミノ酸、及びキシリトール等よりなる総合アミノ酸・キシリトール製剤（輸液）の１，９８０μＬに、上記の希釈液、５ｍｇ／Ｌアルミニウム溶液、又は１ｍｇ／Ｌアルミニウム溶液の２０μＬを加え、下記の濃度のアルミニウムが添加されている（又は添加されていない）３種類の試験試料を調製した。
総合アミノ酸・キシリトール製剤（アルミニウム添加濃度：０μｇ／Ｌ）
総合アミノ酸・キシリトール製剤（アルミニウム添加濃度：１０μｇ／Ｌ）
総合アミノ酸・キシリトール製剤（アルミニウム添加濃度：５０μｇ／Ｌ）
▲２▼  高カロリー輸液用  糖・アミノ酸・ビタミンＢ２・電解質液：  数種類の必須アミノ酸、数種類の非必須アミノ酸、ブドウ糖、ビタミンＢ２、及び十数種類の電解質等よりなる高カロリー輸液用  糖・アミノ酸・ビタミンＢ２・電解質液（輸液）の１，９８０μＬに、上記の希釈液、５ｍｇ／Ｌアルミニウム溶液、又は１ｍｇ／Ｌアルミニウム溶液の２０μＬを加え、下記の濃度のアルミニウムが添加されている（又は添加されていない）３種類の試験試料を調製した。
高カロリー輸液用  糖・アミノ酸・ビタミンＢ２・電解質液（アルミニウム添加濃度：０μｇ／Ｌ）
高カロリー輸液用  糖・アミノ酸・ビタミンＢ２・電解質液（アルミニウム添加濃度：１０μｇ／Ｌ）
高カロリー輸液用  糖・アミノ酸・ビタミンＢ２・電解質液（アルミニウム添加濃度：５０μｇ／Ｌ）
▲３▼  硝酸水溶液：  対照として、上記の希釈液（１００ｍＭ硝酸）の１，９８０μＬに、更にこの希釈液、５ｍｇ／Ｌアルミニウム溶液、又は１ｍｇ／Ｌアルミニウム溶液の２０μＬを加え、下記の濃度のアルミニウムが添加されている（又は添加されていない）３種類の試験試料を調製した。
硝酸水溶液（アルミニウム添加濃度：０μｇ／Ｌ）
硝酸水溶液（アルミニウム添加濃度：１０μｇ／Ｌ）
硝酸水溶液（アルミニウム添加濃度：５０μｇ／Ｌ）
アルミニウム濃度の測定
試験溶液：上記の計９種類の各試験試料の各々の１５０μＬに、上記に調製したキレート試薬（試薬イ、試薬ロ、又は試薬ハ）の５０μＬを加え、室温に１０分間置いた。
その後、これに上記に調製したバッファ試薬４００μＬを、それぞれ添加混合し、室温に１０分間置いた。
これにより、試験試料中のアルミニウムと８−キノリノールを反応させ、錯体を形成させた。
なお、この反応液中における８−キノリノール濃度は、上記の各キレート試薬の場合に、次の通りとなる。
試薬イの場合：０．８３３ｍＭ
試薬ロの場合：８．３３ｍＭ
試薬ハの場合：１６．７０ｍＭ
測定装置：固定相として、シリカゲル基材上に親水性基と疎水性基を有する担体カラムである「Ａｌ分析専用カラム」（４．６ｍｍφ×５０ｍｍ）〔シノテスト社〕を用い、移動相として上記に調製した移動相溶液を流速１，０００μＬ／分で用い、そしてＬＣ：１０Ａｉ型ポンプ〔島津製作所社〕、ＣＴＯ−１０Ａｃｖｐ型カラムオーブン（２５℃に設定し使用）〔島津製作所社〕、ＤＧＵ−１２Ａ型脱気装置〔島津製作所社〕、ＳＩＬ−１０Ａｄｖｐ型オートインジェクター〔島津製作所社〕、ＲＦ−１０ＡＸＬ型分光蛍光検出器（１２μＬセル装着）〔島津製作所社〕、及びＣＬＡＳＳ−ＶＰ型インテグレーター〔島津製作所社〕を使用する高速液体クロマトグラフィーを用いた。
上記で得た試験溶液２００μＬを注入し、それぞれ測定を行った。
蛍光強度の検出は、励起波長３７０ｎｍ、輻射波長５０４ｎｍで行った。
なお、上記の測定は同一の測定を３回繰り返して行い、３重測定を行った。
また、本測定において、水は、超純水〔多摩化学社〕を使用した。
そして、本測定において使用した器具及び容器は、テフロン製等の合成樹脂製のものを用い、その使用前に０．１Ｍ硝酸にて十分洗浄した後、超純水にて洗浄したものを使用した。
上記測定条件において、アルミニウムと８−キノリノールの錯体のピークのリテンションタイムが約４．６分であり、遊離の８−キノリノールのピークが、約２．４分であることが、標準物質より確かめられているので、リテンションタイムが約４．６分であるピーク面積を各測定における測定値とした。
測定結果
上記の各試験試料を各キレート試薬を用いて測定を行った結果を、図１〜図３に示した。
まず、試験試料が総合アミノ酸・キシリトール製剤（アルミニウム添加濃度：０μｇ／Ｌ、１０μｇ／Ｌ、又は５０μｇ／Ｌ）である場合の測定結果を、図１に示した。
次に、試験試料が高カロリー輸液用  糖・アミノ酸・ビタミンＢ２・電解質液（アルミニウム添加濃度：０μｇ／Ｌ、１０μｇ／Ｌ、又は５０μｇ／Ｌ）である場合の測定結果を、図２に示した。
そして、試験試料が硝酸水溶液（アルミニウム添加濃度：０μｇ／Ｌ、１０μｇ／Ｌ、又は５０μｇ／Ｌ）である場合の測定結果を、図３に示した。
なお、これらの図において、横軸は各試験試料に添加されているアルミニウム濃度（μｇ／Ｌ）を表し、縦軸は測定値（ピーク面積）を表す。
これらの図中、“×”の点は試薬イ（８−キノリノール濃度：１０ｍＭ）を用いた場合の測定値（ピーク面積）であり、“■”の点は試薬ロ（８−キノリノール濃度：１００ｍＭ）を用いた場合の測定値（ピーク面積）であり、そして“○”の点は試薬ハ（８−キノリノール濃度：２００ｍＭ）を用いた場合の測定値（ピーク面積）である。
なお、これらの図においては、３重測定における３つの測定値をそれぞれ示した。
考察
試験試料は、輸液、すなわち薬剤である。よって、試料中での推定含有アルミニウム濃度は３７．０６μＭとする。これに基づき反応液中での推定含有アルミニウム濃度を算出すると、３７．０６μＭ×１５０÷（１５０＋５０＋４００）＝９．２６５μＭである。
また、反応液中における８−キノリノール濃度は、各キレート試薬の場合に各々上記の通りである。
したがって、反応液中での８−キノリノールの当量濃度は、反応液中での推定含有アルミニウム濃度に対し、各々のキレート試薬を用いた場合以下の通りとなる。
試薬イの場合：３０倍当量
試薬ロの場合：３００倍当量
試薬ハの場合：６０１倍当量
まず、図３より、試験試料が硝酸水溶液である場合には、試薬イ（３０倍当量）、試薬ロ（３００倍当量）、及び試薬ハ（６０１倍当量）のいずれを用いた場合においても、それぞれのアルミニウム添加濃度における測定値（ピーク面積）が同じであることが分かる。そして、各測定値が直線上にあり、正確かつ精密に試料中のアルミニウムを測定できていることが分かる。
これに対して、図１及び図２より、試験試料がアミノ酸・キシリトール製剤、又は高カロリー輸液用  糖・アミノ酸・ビタミンＢ２・電解質液であって、試薬ロ（３００倍当量）又は試薬ハ（６０１倍当量）を用いた場合には、それぞれのアルミニウム添加濃度における測定値（ピーク面積）が同じであり、そして、各測定値が直線上にあり、正確かつ精密に試料中のアルミニウムを測定できていることが分かる。
しかしながら、試薬イ（３０倍当量）を用いた場合には、その測定値（ピーク面積）が試薬ロ又は試薬ハでの測定値に比べて著しく低くなっており、負の誤差が生じていることが分かる。
すなわち、このことからも、アミノ酸・キシリトール製剤、及び高カロリー輸液用  糖・アミノ酸・ビタミンＢ２・電解質液には、アルミニウム濃度の測定に誤差を生じさせる、分析用キレート剤を消費するような妨害物質、又はアルミニウムとキレートを形成するような錯体形成性妨害物質が、多量に含有されることが推察される。
そして、このようなアルミニウム濃度の測定に妨害を及ぼすような物質が含有される試料においても、反応液中での８−キノリノールの当量濃度が３００倍当量（試薬ロ）又は６０１倍当量（試薬ハ）の場合には、誤差が生じずに正確な測定が行えていることが分かる。
なお、分析用キレート剤が８−キノリノールの場合、反応液中での分析用キレート剤の従来濃度は、反応液中での推定含有アルミニウム濃度の３０倍当量であるので、反応液中での８−キノリノールの当量濃度が３００倍当量及び６０１倍当量である上記の場合は、従来濃度に対してはそれぞれ１０倍及び２０倍である。
発明の効果
本発明のキレート試薬及び測定方法を用いることにより、例えば、分析用キレート剤を消費する、鉄イオン、銅イオンや亜鉛イオンが試料中に存在する場合のみならず、アルミニウムとキレートを形成する、デフェロキサミン、クエン酸やフッ素などのような錯体形成性妨害物質が試料中に存在する場合にも、試料中のアルミニウム濃度を正確に測定できる。
【図面の簡単な説明】
図１は、実施例３における、試験試料が総合アミノ酸・キシリトール製剤（アルミニウム添加濃度：０μｇ／Ｌ、１０μｇ／Ｌ、又は５０μｇ／Ｌ）である場合の測定結果を示したものである。
図２は、実施例３における、試験試料が高カロリー輸液用  糖・アミノ酸・ビタミンＢ２・電解質液（アルミニウム添加濃度：０μｇ／Ｌ、１０μｇ／Ｌ、又は５０μｇ／Ｌ）である場合の測定結果を示したものである。
図３は、実施例３における、試験試料が硝酸水溶液（アルミニウム添加濃度：０μｇ／Ｌ、１０μｇ／Ｌ、又は５０μｇ／Ｌ）である場合の測定結果を示したものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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