(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
単一立体異性体またはその混合物としての次式の化合物、あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩または溶媒和物：
【化１】
0004768989.tif 000037
ここで：
１位置の窒素は、水素で置換される；
３、４、６、７、９、１０、１１、および１８位置は、水素で置換される；
１７および１９位置は、ＯＲ８で置換され、Ｒ８は、Ｃ１−１０ヒドロカルビル基である；
５、１３、１５、および１６位置の炭素の各々は、別個に、それぞれＨ、−Ｗまたは−Ｒ７（Ｗ）ｎで置換されており、ここで：
Ｗは、−ＮＨ２、−ＣＮ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＮＨＲ８、−ＮＲ８Ｒ８、−ＯＲ８、および−ＳＲ８から選択される；
各Ｒ７は、別個に、Ｃ１〜Ｃ３０ヒドロカルビル、ハロカルビルまたはヒドロハロカルビル基であり、ここで、Ｒ７のｎ個の水素原子またはハロゲン原子は、各位置で別個に選択される同数のＷ基で置換されており；
各Ｒ８は、別個に、Ｃ１〜Ｃ３０ヒドロカルビル、ハロカルビルまたはヒドロハロカルビル基である；
ｎは、０、１、２、３、４および５から選択される；そして
Ｘは、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆおよび−Ｉから選択される、
１２位置は、Ｃ１−６ヒドロカルビル基で置換される、
化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、
１３位置が、水素または−Ｗで置換される；
１１、１２および１３位置の炭素の正確に２個が、水素で置換されている；
Ｗが、−ＯＲ８である；
Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ１０ヒドロカルビル基であり、ここで、Ｒ７のｎ個の水素原子が、各位置で別個に選択される同数のＷ基で置換されている；
Ｒ８が、Ｃ１〜Ｃ１０ヒドロカルビル基である；
ｎが、０である；
炭素３でＳ立体配置を有する；
炭素３でＲ立体配置を有する；
炭素５でＳ立体配置を有する；
炭素５でＲ立体配置を有する；
１、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１３、１５、１６および１８位置が、水素で置換されており、１２位置が、Ｃ１ヒドロカルビルで置換されており、１７位置が、−Ｏ−シクロペンチルで置換されており、そして１９位置が、−Ｏ−メチルで置換されている；そして／または
３位置および５位置の両方が、Ｓの原子空間配置を有する、
化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物の薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項４】
次式の化合物、あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩または溶媒和物：
【化２】
0004768989.tif 000038
【化３】
0004768989.tif 000039
【化４】
0004768989.tif 000040
【化５】
0004768989.tif 000041
【化６】
0004768989.tif 000042
【化７】
0004768989.tif 000043
【化８】
0004768989.tif 000044
【化９】
0004768989.tif 000045
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物、あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩または溶媒和物と、薬学的に受容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含有する、薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Δ−ラクタム化合物に関し、特に、γ−フェニル−Δ−ラクタムおよびそれらに関連した治療用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
（炎症性応答（炎症））
炎症は侵入した微生物または組織の損傷に対する重要な局所的宿主応答であり、これは免疫系の細胞を伴う。炎症の古典的サインは、損傷部位の赤み（紅斑）、腫脹（浮腫）、疼痛および熱の上昇（発熱（ｐｙｒｅｍａ））を含む。炎症性応答により、身体は侵入した生物を特異的に認識し、排除すること、および／または組織損傷の修復が可能となる。炎症部位の急性の変化の多くは、直接的または間接的に、白血球（例えば、好中球、好酸球、リンパ球、単球）の大量の流入に起因し、これはこの応答に固有である。組織への白血球の浸潤および蓄積はそれらの活性化をもたらし、次に、例えばＬＴＢ４、プロスタグランジン、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−８、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ヒスタミン、プロテアーゼおよび活性酸素種のような炎症メディエイタの放出をもたらす。
【０００３】
通常の炎症は高度に制御されたプロセスであり、応答に関与する細胞型の各々についていくつかのレベルで厳密に制御されている。例えば、プロ炎症性サイトカインであるＴＮＦ−αの発現は、遺伝子発現、翻訳、翻訳後修飾、および細胞膜からの成熟体の放出のレベルで制御される。炎症の際にアップレギュレーションされるタンパク質の多くは転写因子ＮＦ−κＢによって制御される。プロ炎症性応答は通常、ＩＬ−１０またはＩＬ−４の生成などの内因性抗炎症性機構と拮抗する。正常な炎症性応答の特徴は、それが一時的な性質のものであり、その後は組織の状態を以前の状態に戻す消散段階となることである。消散段階はＩＬ−１のような抗炎症性機構のアップレギュレーション、ならびにプロ−炎症性プロセスのダウンレギュレーションを伴うと考えられる。
【０００４】
（炎症性疾患）
炎症性疾患は、不適切および／または正常な様式で消散せず、むしろ持続する炎症性応答が開始し、その結果、慢性の炎症状態となる場合に生じる。炎症性疾患は全身的（例えば狼蒼）あるいは特定の組織または器官に対して局所的であり得、そして莫大な個人的および経済的な負担を社会に与える。最も一般的かつ問題のある炎症性疾患の例のいくつかはリウマチ様関節炎、炎症性腸疾患、乾癬、喘息、気腫、大腸炎、虚血再灌流障害である。
【０００５】
炎症性疾患に共通する根元的なテーマは細胞免疫応答の摂動（ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）であり、その結果宿主タンパク質（抗原）を外来性と認識することになる。従って、炎症性応答は誤って宿主組織に向けられ、効果細胞が特定の器官または組織を標的化し、その結果、しばしば不可逆的損傷がもたらされる。自己免疫性疾患の自己認識の局面はしばしば、疾患状態における特定のＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）サブタイプによって特徴づけられるＴ細胞サブセットのクローン増殖に反映される。炎症性疾患はまた、Ｔヘルパー（Ｔｈ）サブセットのレベルにおける不均衡（すなわちＴｈ１細胞対Ｔｈ２細胞）によってしばしば特徴づけられる。
【０００６】
炎症性疾患の治療を目的とした治療方針は通常、以下の２つのカテゴリーのうちの１つに属する：（ａ）疾患状態においてアップレギュレーションされるプロセスのダウンモジュレーション（ｄｏｗｎ−ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）または（ｂ）影響を受ける細胞または組織における抗炎症経路のアップレギュレーション。臨床で現在使用されている多くの養生法は第１のカテゴリーに属する。そのうちのいくつかの例はコルチコステロイドおよび非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）である。
【０００７】
炎症性疾患において摂動される組織、細胞および生化学的プロセスの多くが解明されており、これにより疾患状態を模倣する実験モデルまたはアッセイの開発が可能となっている。これらのインビトロアッセイは、関連の炎症性疾患において治療効果を有する確率が高い化合物の選択およびスクリーニングを可能とする。従って、急性炎症の発生および慢性炎症状態の維持における活性化白血球の重要性をモデル化するために現在使用されているアッセイは、インビトロでの、白血球の走化性および細胞の脱顆粒をモニタリングするアッセイ、ならびにサイトカイン合成および活性酸素種（ＲＯＳ）産生アッセイである。急性または慢性の好中球の活性化の結果、ＲＯＳが放出され、その結果、組織が損傷するので、ＲＯＳのスカベンジャーについてのアッセイは潜在的な治療効果を有する化合物の検出を可能とする。刺激されたマクロファージまたは単球細胞からのＴＮＦ−αの放出のインヒビターを検出する細胞アッセイは炎症についてのインビトロモデルの重要な成分である。なぜならこのサイトカインはアップレギュレーションされ、多くの炎症性疾患における病理に寄与することが示されているからである。冒された細胞においてｃＡＭＰの上昇が炎症性応答を調節または低下させることが示されているので、細胞の環状ＡＭＰ（ｃＡＭＰ）レベル、およびｃＡＭＰレベルを制御する経路の活性のモニタリングは潜在的な抗炎症化合物の検出を可能とする。アッセイは、ｃＡＭＰ自体のレベル、ホスホジエステラーゼ活性、またはｃＡＭＰ応答要素（ＣＲＥ）−ルシフェラーゼ活性の変化のモニタリングを含み得る。
【０００８】
（リウマチ様関節炎）
リウマチ様関節炎（ＲＡ）は炎症性関節炎の最も一般的な形態であり、これは病因が未知の自己免疫障害である。成人人口の１％がこれに冒されており、対称性、慢性、糜爛性の滑膜炎（関節の滑膜の炎症）によって特徴づけられ、そしてしばしば複数の系（ｍｕｌｔｉｓｙｓｔｅｍ）が関与する。興味深いことに、女性の方が男性よりも３〜６倍流行っている。多くの患者は長期にわたって変動する疾患の過程を示し、処置せずに放置すると、進行性の関節の破壊、変形、障害をもたらし、そして死期が早まる。ＲＡを示す徴候は、関節の疼痛および腫脹（通常対称性）、朝の関節および筋肉の硬直、全般的な虚弱／疲労ならびに発熱および体重減少を包含する。ＲＡによって、合衆国において毎年、９００万人／年より多くが医者に通院し、そして２５０，０００人／年より多くが入院している。働き盛りの患者がＲＡに冒されることが多く、そのため障害により重大な経済的損失がもたらされる。
【０００９】
近年、遺伝的背景、特にクラスＩＩ主要組織適合（ＭＨＣ）遺伝子の構造がこの疾患に対する個人の感受性および重篤度において重要な役割を果たすという病識が確立している。サイトカインネットワーク、ケモカイン、成長因子および接着分子の現在の理解は、Ｔ細胞依存性およびＴ細胞非依存性の経路がリウマチ様関節炎の開始および永続化に寄与するという認識に至っている。さらに、この障害を特徴づける骨および軟骨の破壊の原因となる特異的な細胞性および生化学的事象に関して多くのことが知られている。組織レベルでは、ＲＡは、滑膜の過形成、肥大、新脈管形成および滑膜線維芽細胞の隣接の軟骨および骨への付着と侵入によって特徴づけられる。活性ＲＡでは、冒された関節においてプロ炎症性サイトカインＴＮＦ−α、ＩＬ−１およびＩＬ−６のレベルが抗炎症性サイトカインに対して相対的に上昇している。
【００１０】
（リウマチ様関節炎および他の炎症性疾患に対する現在の処置）
現在のところ、リウマチ様関節炎に利用可能な治療または防止法（予防）はなく、疼痛および硬直のような徴候に対する養生法しかない。この疾患に対する５つの主要な処置様式は、投薬（薬理学）、物理療法（運動）、関節の保護およびライフスタイルの変更ならびに手術を包含する。
【００１１】
リウマチ様関節炎の治療薬は３つのグループに分けられ得る：非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、疾患緩和（ｄｉｓｅａｓｅ  ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ）抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）（セカンドライン薬（ｓｅｃｏｎｄ  ｌｉｎｅ  ａｇｅｎｔ）としても知られる）、およびコルチコステロイドである。
【００１２】
ＮＳＡＩＤはプロスタグランジン合成の阻害によって、低用量で疼痛を低下させ、そして高用量で炎症徴候のうちのいくつか（腫脹および硬直）を軽減する。処方箋なしのＮＳＡＩＤの例は、アセチルサリチル酸（ＡＳＡ（登録商標）、アスピリン（登録商標）、アナシン（登録商標）等）およびイブプロフェン（モトリン（Ｍｏｔｒｉｎ）（登録商標）、アドヴィル（Ａｄｖｉｌ）（登録商標）等）を包含する。処方箋を必要とするＮＳＡＩＤの例は、ナプロシン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ）（登録商標）、レラフェン（Ｒｅｌａｆｅｎ）（登録商標）、インドシド（Ｉｎｄｏｃｉｄ）（登録商標）、ボルタレン（Ｖｏｌｔａｒｅｎ）（登録商標）、フェルデン（登録商標）およびクリノリル（登録商標）を包含する。これらの医薬はリウマチ様関節炎の急性炎症性成分に対して有効に向けられるが、これらは徴候を処置するのみであり、根元的な疾患の進行は変化させない。ＮＳＡＩＤの有害な副作用は長期投与では深刻であり得、それは主として胃腸に関係がある（胸やけ、出血または潰瘍）。
【００１３】
炎症が６週間より長く持続する場合、または関節炎が同時に多くの関節を冒す場、ＤＭＡＲＤがしばしば処方される。これらは通常ＮＳＡＩＤまたはステロイドに加えて投与される。多くのＤＭＡＲＤは炎症性応答に関与する免疫細胞を抑制することによって作用し、これにより疾患の進行を遅延させる。しかし、ＤＭＡＲＤにより永続的な関節の損傷を逆転させることは不可能である。このクラスの最も一般的な薬物は、金塩、メトトレキセート、アザチオプリン、スルファサラジン（ｓｕｌｐｈａｓａｌａｚｉｎｅ）、ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）、ペニシルアミンおよびクロロキンである。ＤＭＡＲＤはしばしば有益な効果を示すまでに数週間かかり、そして多くの場合、リウマチ様関節炎における効力の正確な様式は未知である。副作用も数多く、これには口のただれ、発疹、下痢、および悪心が包含される。より深刻な副作用であり、通常の血液検査及び尿検査を通じて慎重にモニタリングする必要があるものは、肝臓および腎臓の損傷、白血球数の低下（免疫抑制）および血小板数の過度の低下（血液凝固）を包含する。
【００１４】
コルチコステロイドはしばしば、重篤な疼痛、腫脹および関節の硬直を伴う激しい炎症のＲＡ患者に処方される。これらは肺および血管の内層を冒し得る全身性のリウマチ様関節炎の処置にも用いられる。投与経路は通常経口（すなわちプレドニゾン）であるが、この薬物はまた、罹患した関節、静脈、筋肉または他の炎症部位に直接注射され得る。リウマチ様関節炎におけるステロイドの長期使用由来の副作用は深刻であり、白内障、高血圧、筋肉のるいそう、挫傷、皮膚および骨の痩せ、体重増加、糖尿病および感染の感受性が包含される。
【００１５】
リウマチ様関節炎と診断された患者のうち、より重篤な疾患（衰弱および不可逆的な関節の損傷を伴う）を続けて発症するのは５％に過ぎないが、これらはこの疾患を満足に処理および／または治療するために利用可能な治療薬の理想的なセットを明らかに有さない。現在利用できるＮＳＡＩＤ（選択的ＣＯＸ−２阻害薬でさえ）はリウマチ様関節炎の急性症状、例えば腫脹、疼痛および関節の硬直を首尾良く回復し得る。しかし、これらは関節の破壊の進行に影響も与えず、関節または骨の侵食の逆転を達成もしない。ＤＭＡＲＤまたはコルチコステロイドのようなセカンドライン薬は疾患の進行を一時的に遅延し得、症状を低減し得るが、通常は許容できない副作用プロフィールまたは変わりやすい患者の応答に悩まされ、そして存在する関節の損傷を逆転し得る。リウマチ様関節炎の疾患の進行を効果的に阻止または逆転する治療薬に対する大きな必要性がある。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
（発明の要旨）
１局面では、本発明は、次式の化合物、またはその単一立体異性体または混合物としてのそれらの薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する：
【００１７】
【化１５】
0004768989.tif 000002
ここで：
３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、１７、１８および１９位置の炭素の各々は、１位置の窒素と同様に、別個に、各出現例にて、Ｈ、−Ｗまたは−Ｒ７（Ｗ）ｎで置換されており、ここで：
Ｗは、−ＮＨ２、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨＯ、−ＯＣＨＯ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＣＯＸ、−ＮＨＲ８、−ＮＲ８Ｒ８、−ＣＯＮＨＲ８、−ＣＯＮＲ８Ｒ８、−ＣＯＯＲ８、−ＣＯＲ８、−ＯＣＯＲ８、−ＯＲ８、−ＢＨ２、−ＢＨＲ８、−ＢＲ８Ｒ８、−ＢＯ２Ｈ２、−ＢＯ２Ｒ８Ｒ８、−ＰＨ２、−ＰＨＲ８、−ＰＲ８Ｒ８、−ＰＯＲ８、−ＰＯ２Ｒ８、−ＰＯ３Ｒ８、−ＳＲ８；−ＳＯＲ８、−ＳＯ２Ｒ８、−ＳＯＮＨ２、−ＳＯＮＨＲ８、−ＳＯＮＲ８Ｒ８、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨＲ８および−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ８から選択される；
各Ｒ７は、別個に、Ｃ１〜Ｃ３０ヒドロカルビル、ハロカルビルまたはヒドロハロカルビル基であり、ここで、Ｒ７の水素原子またはハロゲン原子のｎは、各位置で別個に選択される同数のＷ基で置換されている；
または２個の隣接−Ｒ７基は、それらが結合する１２および１３位置または１１および１３位置の炭素と一緒になって、ヘテロシクリル基を形成する；
各Ｒ８は、別個に、Ｃ１〜Ｃ３０ヒドロカルビル、ハロカルビルまたはヒドロハロカルビル基である；
ｎは、０、１、２、３、４および５から選択される；そして
Ｘは、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆおよび−Ｉから選択される。
【００１８】
他の局面では、本発明は、上記本発明の化合物と薬学的に受容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含有する薬学的組成物を提供する。
【００１９】
他の局面では、本発明は、患者における炎症状態または疾患を治療または予防する方法を提供し、ここで、該方法は、それが必要な該患者に、上記本発明の化合物の治療有効量を投与する工程を包含する。
【００２０】
他の局面では、本発明は、患者内の細胞内環状アデノシン５’−モノリン酸レベルを変調させる方法を提供し、ここで、該方法は、それが必要な患者に、上記本発明の化合物の治療有効量を投与する工程を包含する。
【００２１】
他の局面では、本発明は、患者の疾患または病気を治療または予防する方法を提供し、ここで、該方法は、それが必要な患者に、上記本発明の化合物の治療有効量を投与する工程を包含し、そして該疾患または病気は、二次細胞メッセンジャー酵素を阻害することにより変調される病理的状態に関連している。
【００２２】
他の局面では、本発明は、患者における制御可能な細胞増殖を治療または予防する方法を提供し、ここで、該方法は、それが必要な該患者に、上記本発明の化合物の治療有効量を投与する工程を包含する。
【００２３】
他の局面では、本発明は、患者における移植片拒絶を治療または予防する方法を提供し、ここで、該方法は、それが必要な該患者に、上記本発明の化合物の治療有効量を投与する工程を包含する。
【００２４】
他の局面では、本発明は、患者における制御可能な細胞増殖を治療または予防する方法を提供し、ここで、該方法は、それが必要な該患者に、上記本発明の化合物の治療有効量を投与する工程を包含する。
【００２５】
本発明のこれらのおよび他の局面および実施態様は、以下の詳細な説明を参照すると、明らかとなる。この目的のために、本明細書中では、種々の参考文献が述べられており、これらは、特定の手順、化合物および／または組成物をさらに詳細に記述しており、その内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【００２６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、種々の疾患状態を治療および／または予防する際に有用な化合物、組成物および方法を提供する。例えば、１局面では、本発明は、炎症疾患を治療および／または予防する方法を提供する。この方法は、それが必要な被験体に、本発明の化合物またはそれらの薬学的に受容可能な塩の治療有効量、または本発明の化合物またはそれらの薬学的に受容可能な塩を含有する組成物の有効量を投与する工程を包含する。
【００２７】
従って、発明の要旨の項で上で示したように、本発明は、次式の化合物、またはその単離した立体異性体または混合物としてのそれらの薬学的に受容可能な塩または溶媒和物：
【００２８】
【化１６】
0004768989.tif 000003
ここで：
３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、１７、１８および１９位置の炭素の各々は、１位置の窒素と同様に、別個に、各出現例にて、Ｈ、−Ｗまたは−Ｒ７（Ｗ）ｎで置換されており、ここで：
Ｗは、−ＮＨ２、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨＯ、−ＯＣＨＯ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＣＯＸ、−ＮＨＲ８、−ＮＲ８Ｒ８、−ＣＯＮＨＲ８、−ＣＯＮＲ８Ｒ８、−ＣＯＯＲ８、−ＣＯＲ８、−ＯＣＯＲ８、−ＯＲ８、−ＢＨ２、−ＢＨＲ８、−ＢＲ８Ｒ８、−ＢＯ２Ｈ２、−ＢＯ２Ｒ８Ｒ８、−ＰＨ２、−ＰＨＲ８、−ＰＲ８Ｒ８、−ＰＯＲ８、−ＰＯ２Ｒ８、−ＰＯ３Ｒ８、−ＳＲ８；−ＳＯＲ８、−ＳＯ２Ｒ８、−ＳＯＮＨ２、−ＳＯＮＨＲ８、−ＳＯＮＲ８Ｒ８、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨＲ８および−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ８から選択される；
各Ｒ７は、別個に、Ｃ１〜Ｃ３０ヒドロカルビル、ハロカルビルまたはヒドロハロカルビル基であり、ここで、Ｒ７の水素原子またはハロゲン原子のｎは、各位置で別個に選択される同数のＷ基で置換されている；
または２個の隣接−Ｒ７基は、それらが結合する１２および１３位置または１１および１３位置の炭素と一緒になって、ヘテロシクリル基を形成する；
各Ｒ８は、別個に、Ｃ１〜Ｃ３０ヒドロカルビル、ハロカルビルまたはヒドロハロカルビル基である；
ｎは、０、１、２、３、４および５から選択される；そして
Ｘは、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆおよび−Ｉから選択される。
【００２９】
他の局面では、本発明の化合物は、炭素３でＳ立体配置を有する。他の局面では、本発明の化合物は、炭素３でＲ立体配置を有する。他の局面では、本発明の化合物は、炭素５でＳ立体配置を有する。他の局面では、本発明の化合物は、炭素５でＲ立体配置を有する。他の局面では、本発明において、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１５、１６、１７、１８または１９位置の炭素のいずれも、複素環部分で置換されていない。
【００３０】
他の局面では、本発明の化合物だけでなく本発明の化合物と薬学的に受容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含有する組成物において：４および６位置の炭素、好ましくは、４および６位置の両方の炭素が、全く水素のみで置換されている；１９位置の炭素が、−Ｗで置換されている；１９位置の炭素が、−ＮＨ２、−ＮＨＲ８または−ＮＲ８Ｒ８で置換されている；１９位置の炭素が、−ＣＮ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨまたは−ＯＲ８で置換されている；１７および１８位置の１個の炭素が、水素で置換されている；１７および１８位置の少なくとも１個の炭素が、−Ｗで置換されている；１７および１８位置の少なくとも１個の炭素が、−ＮＨ２、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨＯ、−ＯＣＨＯ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＣＯＸ、−ＮＨＲ８、−ＮＲ８Ｒ８、−ＣＯＮＨＲ８、−ＣＯＮＲ８Ｒ８、−ＣＯＯＲ８、−ＣＯＲ８、−ＯＣＯＲ８または−ＯＲ８で置換されている；および／または１７および１８位置の少なくとも１個の炭素が、−ＣＮ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨまたは−ＯＲ８で置換されている。他の局面では、１７、１８および１９位置の炭素の１個だけが、水素で置換されている。他の局面では、１７、１８および１９位置の炭素の正確に２個が、水素で置換されている。他の局面では、１７、１８および１９位置の炭素のいずれも、水素で置換されていない。他の局面では、１７、１８および１９位置の炭素の１個以下が、水素で置換されている。
【００３１】
他の局面では、本発明の化合物だけでなく本発明の化合物と薬学的に受容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含有する組成物において：７位置の炭素が、全く水素のみで置換されている；３位置の炭素が、水素で置換されている；３位置の炭素が、−Ｗで置換されている；３位置の炭素が、ハロゲンで置換されている；３位置の炭素が、−Ｒ７（Ｗ）ｎで置換されている；３位置の炭素が、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロカルビルで置換されている；９および１０位置の炭素が、水素で置換されている；１１、１２および１３位置の炭素が、別個に、水素および−Ｗで置換されている；１１および１２位置の炭素の１個だけが、水素で置換されている；１１および／または１２位置の炭素が、−ＮＨ２、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨＯ、−ＯＣＨＯ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＣＯＸ、−ＮＨＲ８、−ＮＲ８Ｒ８、−ＣＯＮＨＲ８、−ＣＯＮＲ８Ｒ８、−ＣＯＯＲ８、−ＣＯＲ８、−ＯＣＯＲ８または−ＯＲ８で置換されている；１１および／または１２位置の炭素が、−ＮＨ２、−ＮＨＲ８または−ＮＲ８Ｒ８で置換されている；１１および／または１２位置の炭素が、−ＣＮ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨまたは−ＯＲ８で置換されている；１３位置の炭素が、−ＮＨ２、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨＯ、−ＯＣＨＯ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＣＯＸ、−ＮＨＲ８、−ＮＲ８Ｒ８、−ＣＯＮＨＲ８、−ＣＯＮＲ８Ｒ８、−ＣＯＯＲ８、−ＣＯＲ８、−ＯＣＯＲ８または−ＯＲ８で置換されている；１３位置の炭素が、−ＮＨ２、−ＮＨＲ８または−ＮＲ８Ｒ８で置換されている；１３位置の炭素が、−ＣＮ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨまたは−ＯＲ８で置換されている；１１、１２および１３位置の少なくとも１個の炭素が、−Ｒ７（Ｗ）ｎで置換されている。
【００３２】
他の局面では、１１、１２および１３位置の炭素の１個だけが、水素で置換されている。他の局面では、１１、１２および１３位置の炭素の正確に２個が、水素で置換されている。他の局面では、１１、１２および１３位置の炭素のいずれも、水素で置換されていない。他の局面では、１１、１２および１３位置の炭素の１個以下が、水素で置換されている。
【００３３】
本発明の化合物、および本発明の１種またはそれ以上の化合物と薬学的に受容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含有する組成物では、６位置の炭素は、好ましくは、＝Ｏまたは＝Ｓのいずれかで置換されていない；４位置の炭素は、好ましくは、＝Ｏで置換されていない；５位置の炭素に結合したフェニル環は、好ましくは、４個以下の水素原子で置換されている；そして５位置の炭素に結合したフェニル環は、好ましくは、４個以下のＲ７（Ｗ）ｎ基で置換されている。
【００３４】
本発明の化合物を提供する本発明の他の局面では、以下の基準は、本発明の化合物をさらに記述する際に、単独で、または任意の組み合わせて、使用され得、この場合、これらの基準は、例示にすぎず、他の基準は、本明細書中の他の箇所で見られ得る：４および６位置が、全く水素のみで置換されている；１９位置が、−Ｗで置換されている；１９位置が、−ＣＮ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨまたは−ＯＲ８で置換されている；１７および１８位置の１個の炭素が、水素で置換されている；１７および１８位置の少なくとも１個の炭素が、−Ｗで置換されている；１７および１８位置の少なくとも１個の炭素が、−ＮＨ２、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨＯ、−ＯＣＨＯ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＣＯＸ、−ＮＨＲ８、−ＮＲ８Ｒ８、−ＣＯＮＨＲ８、−ＣＯＮＲ８Ｒ８、−ＣＯＯＲ８、−ＣＯＲ８、−ＯＣＯＲ８または−ＯＲ８で置換されている；１７および１８位置の少なくとも１個の炭素が、−ＣＮ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨまたは−ＯＲ８で置換されている；１７、１８および１９位置の炭素の１個だけが、水素で置換されている；７位置の炭素が、全く水素のみで置換されている；３位置の炭素が、水素、Ｒ８またはＸで置換されている；９および１０位置の炭素が、水素で置換されている；１１、１２および１３位置の炭素が、別個に、水素および−Ｗで置換されている；１１および１２位置の炭素の１個だけが、水素で置換されている；１１および１２位置から選択される炭素が、−ＣＮ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨまたは−ＯＲ８で置換されている；１１、１２および１３位置の少なくとも１個の炭素が、−Ｒ７（Ｗ）ｎで置換されている；１１、１２および１３位置の少なくとも１個の炭素が、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロカルビル、Ｃ１〜Ｃ６ハロカルビルまたはＣ１〜Ｃ６ヒドロハロカルビルで置換されている；１１、１２および１３位置の炭素の正確に２個が、水素で置換されている；Ｗが、−ＯＣＨＯ、−ＯＨ、−ＯＣＯＲ８および−ＯＲ８から選択される；Ｗが、−ＮＨ２、−ＣＮ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＮＨＲ８、−ＮＲ８Ｒ８、−ＯＲ８および−ＳＲ８から選択される；Ｗが、−ＯＲ８である；Ｒ７が、Ｃ１〜Ｃ１０ヒドロカルビル基であり、ここで、Ｒ７の水素原子またはハロゲン原子のｎが、各位置で別個に選択される同数のＷ基で置換されている；Ｒ７が、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル置換アリール、アリール置換アルケニル、アルキニル置換アリール、アリール置換アルキニル、ビアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ビシクロアルキル、ビシクロアルケニル、アルキルシクロアルキル、アルケニルシクロアルキル、アルキニルシクロアルキル、アリール置換シクロアルキル、シクロアルキル置換アリール、アリール置換シクロアルケニル、シクロアルケニル置換アリール、アリール縮合シクロアルキルおよびポリシクロアルキルからなる群から選択される；Ｒ８が、Ｃ１〜Ｃ１０ヒドロカルビル基である；Ｒ８が、Ｃ１〜Ｃ１０シクロヒドロカルビル基である；Ｒ８が、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル置換アリール、アリール置換アルケニル、アルキニル置換アリール、アリール置換アルキニル、ビアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ビシクロアルキル、ビシクロアルケニル、アルキルシクロアルキル、アルケニルシクロアルキル、アルキニルシクロアルキル、アリール置換シクロアルキル、シクロアルキル置換アリール、アリール置換シクロアルケニル、シクロアルケニル置換アリール、アリール縮合シクロアルキルおよびポリシクロアルキルからなる群から選択される；ｎが、０である；１位置が、水素で置換されている；炭素３は、Ｓ立体配置を有する；炭素３は、Ｒ立体配置を有する；炭素５は、Ｓ立体配置を有する；炭素５は、Ｒ立体配置を有する；ここで、３、４、６、７、９および１０位置が、水素で置換されており、１１および１２位置の１個が、水素で置換されており、そして１７および１８位置の１個が、水素で置換されている；１１、１２および１３位置の少なくとも１個の炭素が、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロカルビル、Ｃ１〜Ｃ６ハロカルビルまたはＣ１〜Ｃ６ヒドロハロカルビルで置換されており、ここで、１１、１２および１３位置の炭素の正確に２個が、水素で置換されている；１９位置が、−ＣＮ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨまたは−ＯＲ８で置換されており、１７および１８位置の１個の炭素が、水素で置換されており、そして１７および１８位置の少なくとも１個の炭素が、−ＣＮ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨまたは−ＯＲ８で置換されている；３、４、６、７、９および１０位置が、水素で置換されており、そして１１、１２および１３位置の正確に２個の炭素が、水素で置換されており、そして１１、１２および１３位置の少なくとも１個の炭素が、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロカルビル、Ｃ１〜Ｃ６ハロカルビルまたはＣ１〜Ｃ６ヒドロハロカルビルで置換されており、そして１７および１８位置の１個が、水素で置換されており、そして１９位置が、−ＣＮ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨまたは−ＯＲ８で置換されており、そして１７および１８位置の１個の炭素が、−ＣＮ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨまたは−ＯＲ８で置換されており、そして１７および１８位置の１個の炭素が、水素で置換されている；１、３、４、６、７、９、１０、１１および１８位置が、水素で置換されており、そして１７および１９位置が、ＯＲ８で置換されており、ここで、Ｒ８が、Ｃ１〜Ｃ１０ヒドロカルビル基であり、そして１２位置が、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロカルビル、Ｃ１〜Ｃ６ハロカルビルまたはＣ１〜Ｃ６ヒドロハロカルビルで置換されている；１、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１３、１５、１６および１８位置が、水素で置換されており、そして１２位置が、Ｃ１ヒドロカルビルで置換されており、そして１７位置が、−Ｏ−シクロペンチルで置換されており、そして１９位置が、−Ｏ−メチルで置換されており、ここで、必要に応じて、３位置および５位置の両方が、Ｓの原子空間配置を有する。これらの化合物のいずれかは、本発明に従った薬学的に受容可能な塩または溶媒物の形態であり得る。
【００３５】
または２個の隣接−Ｒ７基は、それらが結合する１２および１３位置または１１および１３位置の炭素と一緒になって、１，３−ジオキソラニル基を形成する；
本発明の化合物では、Ｎを含有する環は、発明の要旨で示されているように、単環で飽和である。
【００３６】
本発明の化合物の好ましい実施態様では、Ｗは、−ＮＨ２、−ＮＨＲ８および−ＮＲ８Ｒ８から選択される；Ｗは、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨＯ、−ＣＯＸ、−ＣＯＮＨＲ８、−ＣＯＮＲ８Ｒ８、−ＣＯＯＲ８、−ＣＯＲ８から選択される；Ｗは、−ＯＣＨＯ、−ＯＨ、−ＯＣＯＲ８および−ＯＲ８から選択される；Ｗは、−ＢＨ２、−ＢＨＲ８、−ＢＲ８Ｒ８、−ＢＯ２Ｈ２、−ＢＯ２Ｒ８Ｒ８、−ＰＨ２、−ＰＨＲ８、−ＰＲ８Ｒ８、−ＰＯＲ８、−ＰＯ２Ｒ８、−ＰＯ３Ｒ８、−ＳＲ８；−ＳＯＲ８、−ＳＯ２Ｒ８、−ＳＯＮＨ２、−ＳＯＮＨＲ８、−ＳＯＮＲ８Ｒ８、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨＲ８および−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ８から選択される；Ｗは、−ＮＨ２、−ＣＮ、−Ｘ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＮＨＲ８、−ＮＲ８Ｒ８、−ＯＲ８および−ＳＲ８から選択される；またはＷは、−ＯＲ８である。
【００３７】
本発明の化合物の他の好ましい実施態様では、Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ３０ヒドロカルビル基であり、ここで、Ｒ７の水素原子またはハロゲン原子のｎは、各位置で別個に選択される同数のＷ基で置換されている；Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ１０ヒドロカルビル基であり、ここで、Ｒ７の水素原子またはハロゲン原子のｎは、各位置で別個に選択される同数のＷ基で置換されている；またはＲ７が、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル置換アリール、アリール置換アルケニル、アルキニル置換アリール、アリール置換アルキニル、ビアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ビシクロアルキル、ビシクロアルケニル、アルキルシクロアルキル、アルケニルシクロアルキル、アルキニルシクロアルキル、アリール置換シクロアルキル、シクロアルキル置換アリール、アリール置換シクロアルケニル、シクロアルケニル置換アリール、アリール縮合シクロアルキルおよびポリシクロアルキルから選択される。
【００３８】
本発明の化合物の他の好ましい実施態様では、Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ３０ヒドロカルビル基である；Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ１０ヒドロカルビル基である；またはＲ８が、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル置換アリール、アリール置換アルケニル、アルキニル置換アリール、アリール置換アルキニル、ビアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ビシクロアルキル、ビシクロアルケニル、アルキルシクロアルキル、アルケニルシクロアルキル、アルキニルシクロアルキル、アリール置換シクロアルキル、シクロアルキル置換アリール、アリール置換シクロアルケニル、シクロアルケニル置換アリール、アリール縮合シクロアルキルおよびポリシクロアルキルから選択される。
【００３９】
本発明の化合物の他の実施態様では、ｎは、０である；ｎは、１である；ｎは、２である；ｎは、３である；ｎは、４である；ｎは、５である；ｎは、０より大きい；ｎは、１または２である；そしてｎは、１または２または３である。
【００４０】
本発明の好ましい化合物は、次式の化合物、またはその単一立体異性体または混合物としてのそれらの薬学的に受容可能な塩または溶媒和物である：
【００４１】
【化１７】
0004768989.tif 000004
本発明の他の好ましい化合物は、次式の化合物、またはその単一立体異性体または混合物としてのそれらの薬学的に受容可能な塩または溶媒和物である：
【００４２】
【化１８】
0004768989.tif 000005
本発明の他の好ましい化合物は、次式の化合物、またはその単一立体異性体または混合物としてのそれらの薬学的に受容可能な塩または溶媒和物である：
【００４３】
【化１９】
0004768989.tif 000006
本発明の他の好ましい化合物は、次式の化合物、またはその単一立体異性体または混合物としてのそれらの薬学的に受容可能な塩または溶媒和物である：
【００４４】
【化２０】
0004768989.tif 000007
本発明の他の好ましい化合物は、次式の化合物、またはその単一立体異性体または混合物としてのそれらの薬学的に受容可能な塩または溶媒和物である：
【００４５】
【化２１】
0004768989.tif 000008
本発明の他の好ましい化合物は、次式の化合物、またはその単一立体異性体または混合物としてのそれらの薬学的に受容可能な塩または溶媒和物である：
【００４６】
【化２２】
0004768989.tif 000009
上記化合物にて、薬学的に受容可能な塩には、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。
【００４７】
酸付加塩とは、本発明の化合物と、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など）および／または有機酸（例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸など）とから形成されたものを意味する。
【００４８】
塩基付加物とは、本発明の化合物と無機塩基（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、マンガン塩、アルミニウム塩など）とから誘導されたものが挙げられる。適当な塩には、薬学的に受容可能な有機非毒性塩基から誘導されたアンモニウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩が挙げられ、これらには、第一級、第二級および第三級アミン、置換アミン（天然に生じる置換アミンを含めて）、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂（例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ハイドラビアミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジンなど）が挙げられる。
【００４９】
上記化合物および組成物では、ヒドロカルビル基は、全く炭素および水素のみから形成されており、これには、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル置換アリール、アリール置換アルケニル、アルキニル置換アリール、アリール置換アルキニル、ビアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ビシクロアルキル、ビシクロアルケニル、アルキルシクロアルキル、アルケニルシクロアルキル、アルキニルシクロアルキル、アリール置換シクロアルキル、シクロアルキル置換アリール、アリール置換シクロアルケニル、シクロアルケニル置換アリール、アリール縮合シクロアルキルおよびポリシクロアルキルのいずれかが挙げられる。シクロヒドロカルビル基もまた、全く炭素および水素のみから形成されており、そして少なくとも１個の環を含み、ここで、代表的なシクロヒドロカルビル基には、アリール、アラルキル、アルキルアリール、アルケニル置換アリール、アリール置換アルケニル、アルキニル置換アリール、アリール置換アルキニル、ビアリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、ビシクロアルキル、ビシクロアルケニル、アルキルシクロアルキル、アルケニルシクロアルキル、アルキニルシクロアルキル、アリール置換シクロアルキル、シクロアルキル置換アリール、アリール置換シクロアルケニル、シクロアルケニル置換アリール、アリール縮合シクロアルキルおよびポリシクロアルキルのいずれかが挙げられる。他の局面では、このシクロヒドロカルビル基は、シクロペンチルである。
【００５０】
ハロカルビル基は、全く炭素およびハロゲンのみから形成されており、そして各水素をハロゲン（これは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素、好ましくは、フッ素および塩素から選択される）で置換した上記ヒドロカルビル基を含む。ヒドロハロカルビル基（これはまた、ハロヒドロカルビル基とも呼ばれ得る）は、全く炭素、水素およびハロゲンの全てからのみ形成されており、それらの水素原子の一部（全部ではない）をハロゲン原子（これは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素、好ましくは、フッ素および／または塩素から選択される）で置換した上記特定のヒドロカルビル基を含む。これらのヒドロカルビル基（これらは、ハロゲン原子で置換されて、それらのハロカルビルおよびヒドロハロカルビル誘導体を提供し得る）の代表的な定義は、以下で提供する。
【００５１】
「アルキル」とは、分枝または非分枝（直鎖）であり得る炭素原子の非環式鎖を意味する。メチル、エチル、プロピル（ｎ−プロピルおよびｉｓｏ−プロピルを含めて）ブチル（ｎ−ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔ−ブチルを含めて）、ペンチル（多数の異性体を含めて）およびヘキシル（多数の異性体を含めて）は、１個〜６個の炭素原子を有するアルキル基（これは、通例、低級アルキル基と呼ばれている）であり、そして本発明のアルキル基を代表している。
【００５２】
「アルケニル」とは、少なくとも１個の二重結合を有する不飽和脂肪族基を意味する。
【００５３】
「アルキニル」は、直鎖または分枝鎖のいずれかであり得かつ１個またはそれ以上の三重結合を有し得る不飽和炭化水素を意味する。好ましい基は、約１２個以下の炭素原子を有し、そしてエチル、プロピニル、４−メチルペンチニルなど、およびそれらの構造異性体であり得る。
【００５４】
「アラルキル」は、アリールラジカルで置換したアルキル基を意味する。例えば、ベンジル。
【００５５】
「アラルキニル」とは、アリール環で置換したアルキニル基を意味する。例えば、ＡｒＣ≡Ｃ−、ＡｒＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−など。
【００５６】
「シクロアルキル」とは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルが３個〜６個の炭素原子を有する本発明のシクロアルキル基である炭素原子の環状配置を意味する。本明細書中で定義した「シクロアルキル」の範囲内の追加基は、以下で定義するポリシクロアルキル基である。
【００５７】
「シクロアルケニル」とは、環状アルケニル基を意味する。適当なシクロアルケニル基には、例えば、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルが挙げられる。
【００５８】
ポリシクロアルキル基とは、少なくとも１個の炭素原子が少なくとも２個の別々に識別可能な環の一部である炭素原子の配置である。このポリシクロアルキル基は、２個の炭素原子間の架橋を含み得、ここで、ビシクロ［１．１．０］ブチル、ビシクロ［３．２．１］オクチル、ビシクロ［５，２．０］ノニル、トリシクロ［２．２．１．０１］ヘプチル、ノルボルニルおよびピナニルは、代表的な例である。このポリシクロアルキル基は、１個またはそれ以上の縮合環系を含み得、ここで、デカリニル（デカリンから誘導したラジカル）およびペルヒドロアントラセニルは、代表例である。このポリシクロアルキル基は、スピロユニオンを含み得、ここで、単一原子は、２個の環の唯一の共通メンバーである。スピロ［３．４］オクチル、スピロ［３．３］ヘプチルおよびスピロ［４．５］デシルは、代表例である。
【００５９】
「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を意味する。
【００６０】
「ヘテロシクリル」基は、Ｒ７が結合されるフェニル基に縮合した安定な３〜１５員環系を意味し、これは、炭素原子および１個〜５個のヘテロ原子（これらは、窒素、酸素およびイオウからなる群から選択される）からなる。本発明の目的のために、このヘテロシクリル基は、単環式、二環式または三環式の環系であり得、これらは、縮合または架橋環系を含有し得る；このヘテロシクリル基の窒素原子、炭素原子またはイオウ原子は、必要に応じて、酸化され得る；この窒素原子は、必要に応じて、四級化され得る；このヘテロシクリル基は、芳香族または部分不飽和または完全不飽和であり得る。このヘテロシクリル基は、安定な化合物を生じる任意のヘテロ原子または炭素原子にて、Ｒ７が結合したフェニル基に結合され得る。このようなヘテロシクリル基の例には、  ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎｃｌｕｄｅ、ｂｕｔ  ａｒｅ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ、アゼピニル、アクリジニル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、ベンゾキサゾリル、ベンゾピラニル、ベンゾピラニル、ベンゾフラニル、ベンゾフラノニル、ベンゾチエニル、カルバゾリル、シンノリニル、デカヒドロイソキノリル、ジオキソラニル、フラニル、フラノニル、イソチアゾリル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニル、インドリル、イソインドリル、インドリニル、イソインドリニル、インドリジニル、イソキサゾリル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジニル、２−オキソアゼピニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、オキシラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、４−ピペリドニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、フタラジニル、プテリジニル、プリニル、ピロリル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリジニル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、キノリニル、キヌクリジニル、イソキノリニル、チアゾリル、チアゾリジニル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、テトラヒドロフリル、トリアジニル、テトラヒドロピラニル、チエニル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシドおよびチアモルホリニルスルホンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６１】
本明細書中で使用する以下の略語は、指定した意味を有する：
【００６２】
【表１】
0004768989.tif 000010
【００６３】
【表２】
0004768989.tif 000011
【００６４】
【表３】
0004768989.tif 000012
任意の変数は、本発明の任意の成分または化合物で１回より多く現れるとき、各出現例におけるその定義は、あらゆる他の出現例におけるその定義とは無関係である。置換基および／または変数の組合せは、このような組合せが安定な化合物を生じる場合に限り、許容できる。本発明の化合物だけでなく、本発明の方法および組成物で有用な化合物は、不斉中心を有し得、そしてラセミ化合物、ラセミ化合物の混合物および個々のジアステレオマーまたは鏡像異性体として生じ得、全ての異性体形状は、本発明に含まれる。ラセミ化合物またはラセミ化合物の混合物は、立体異性体の５０：５０混合物を暗示するものではない。
【００６５】
他の実施態様では、本発明は、薬学的に受容可能な担体、希釈剤または賦形剤と組み合わせて上で述べた本発明の化合物を含有する薬学的組成物を提供する。これらの組成物は、本明細書中で開示した炎症または他の病気を治療するのに使用され得る。これらの組成物はまた、医薬に形成され、それらは、例えば、炎症の治療で使用され得る。
【００６６】
これらの組成物は、例えば、アッセイ標準、貨物輸送を行うのに便利な手段、または薬学的組成物として、有用である。本発明の化合物のアッセイ可能量は、当業者に周知かつ理解できるような標準的なアッセイ手順および技術により、容易に測定可能である。本発明の化合物のアッセイ可能量は、一般に、その組成物の全重量の約０．００１重量％〜約８０重量％で変わる。不活性担体には、本発明の化合物を分解したりそれと共有結合的に反応しない任意の物質が挙げられる。適当な不活性担体の例には、水；水性緩衝液（例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析で一般に有用であるもの）；有機溶媒（例えば、アセトニトリル、酢酸エチル、ヘキサンなど）；および薬学的に受容可能な担体がある。
【００６７】
治療用の「薬学的に受容可能な担体」は、薬学分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ著、１９８５）で記述されている。例えば、生理学的ｐＨの無菌生理食塩水およびリン酸緩衝生理食塩水が使用され得る。この薬学的組成物には、防腐剤、安定剤、染料および香味料が提供され得る。例えば、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルは、防腐剤として加えられ得る（上記文献１４４９ページ）。それに加えて、酸化防止剤および懸濁剤が使用され得る（上記文献）。
【００６８】
それゆえ、本発明は、薬学的に受容可能な担体と混合して上記本発明の化合物を含有する薬学的組成物または獣医学組成物（以下、単に、薬学的組成物と呼ぶ）を提供する。本発明は、さらに、薬学的に受容可能な担体と会合して上記（１〜４）の化合物の有効量を含有する組成物（好ましくは、薬学的組成物）を提供する。
【００６９】
本発明の薬学的組成物は、その組成物を患者に投与可能にする任意の形態であり得る。例えば、この組成物は、固体、液体または気体（エアロゾル）の形態であり得る。典型的な投与経路には、経口、局所、非経口、舌下、直腸、膣および鼻内が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中で使用する非経口との用語は、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、胸骨内注射または注入技術を含む。本発明の薬学的組成物は、その組成物を患者に投与すると、そこに含有された活性成分を生物利用可能にするように、処方される。患者に投与される組成物は、１個またはそれ以上の投薬単位の形態をとり、この場合、例えば、錠剤は、単一投薬単位であり得、そしてエアロゾル形態の本発明の化合物の容器は、複数投薬単位を収容し得る。
【００７０】
これらの薬学的組成物を調製する際に使用される物質は、薬学的に純粋であり、そして使用する量で非毒性である。この薬学的組成物中の活性成分の最適投薬量が種々の要因に依存していることは、当業者に明らかである。関連した要因には、被験体の種類（例えば、ヒト）、その活性成分の特定の形態、投与様式および使用する組成物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７１】
一般に、この薬学的組成物は、１種またはそれ以上の担体と混合した本明細書中で記述した本発明の活性化合物（この場合、ここでおよび本明細書全体にわたって、「ａ」および「ａｎ」は、１種またはそれ以上とする）を含有する。この担体は、微粒子であり得、その結果、それらの組成物は、錠剤または粉剤形状である。この担体は、液体であり得、それらの組成物は、例えば、経口シロップまたは注射可能液体である。それに加えて、この担体は、例えば、吸入投与で有用なエアロゾル組成物を提供するように、気体状であり得る。
【００７２】
経口投与向けのとき、この組成物は、好ましくは、固体または液体のいずれかの形態であり、この場合、半固形、半液体、懸濁液およびゲルの形態は、固体または液体のいずれかとして本明細書中で考慮される形態に含まれる。
【００７３】
経口投与用の固形組成物として、この組成物は、粉剤、顆粒、圧縮錠剤、丸薬、カプセル剤、チューインガム、ウエハまたは類似の形態であり得る。このような固体組成物は、典型的には、１種またはそれ以上の不活性希釈剤または食用担体を含有する。それに加えて、以下の１種またはそれ以上の補助剤が存在し得る：結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微結晶セルロースまたはゼラチン）；賦形剤（例えば、デンプン、ラクトースまたはデキストリン）、崩壊剤（例えば、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、コーンスターチなど）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｘ）；グライダント（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）；甘味料（例えば、スクロースまたはサッカリン）、香料（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジ香料）、および着色剤。
【００７４】
この組成物がカプセル剤（例えば、ゼラチンカプセル剤）の形態であるとき、それは、上記種類の物質に加えて、液状担体（例えば、ポリエチレングリコール、シクロデキストリンまたは脂肪油）を含有し得る。
【００７５】
この組成物は、液体（例えば、エリキシル剤、シロップ、溶液、乳濁液または懸濁液）の形態であり得る。その液体は、２つの例として、経口投与用または注射による送達用であり得る。経口投与向けのとき、好ましい組成物は、本発明の化合物に加えて、１種またはそれ以上の甘味料、防腐剤、染料／着色剤および香味向上剤を含有する。注射で投与する組成物では、１種またはそれ以上の界面活性剤、防腐剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、緩衝液、安定剤および等張剤が含有され得る。
【００７６】
本発明の液状薬学的組成物は、溶液、懸濁液または他の類似の形態のいずれであれ、以下の１種またはそれ以上の補助剤を含有し得る：無菌希釈剤（例えば、注射用の水、生理食塩水（好ましくは、生理学的な生理食塩水）、リンゲル液、等張性塩化ナトリウム、不揮発性油（例えば、合成モノまたはジグリセリドであって、これらは、溶媒または懸濁媒体として働き得る）、ポリエチレングリコール、グリセリン、シクロデキストリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒）；抗菌剤（例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン）；酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム）；キレート化剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）；緩衝液（例えば、酢酸塩、クエン酸塩およびリン酸塩）および等張性調節剤（例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース）を含有し得る。この非経口製剤は、ガラスまたはプラスチックから作製されたアンプル、使い捨て注射器または複数用量バイアルに封入できる。生理食塩水は、好ましい補助剤である。注射可能薬学的組成物は、好ましくは、生理食塩水である。
【００７７】
非経口投与または経口投与のいずれか向けの液状組成物は、適当な投薬量が得られる量の本発明の化合物を含有すべきである。典型的には、この量は、この組成物中の少なくとも０．０１％の本発明の化合物である。経口投与向けのとき、この量は、この組成物の重量の０．１％と約７０％の間で変わり得る。好ましい経口組成物は、約４％と約５０％の間の本発明の活性化合物を含有する。本発明による好ましい組成物および製剤は、非経口投薬単位が０．０１重量％〜１重量％の間の活性化合物を含有するように、調製される。
【００７８】
この薬学的組成物は、局所投与向けであり得、この場合、その担体は、適当には、溶液、乳濁液、軟膏またはゲル基剤を構成し得る。この基剤は、例えば、１種またはそれ以上の以下を含有し得る：ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、蜜蝋、鉱油、希釈剤（例えば、水およびアルコール）、および乳濁液および安定剤。局所投与用の薬学的組成物には、増粘剤が存在し得る。もし、経皮投与向けであるなら、その組成物は、経皮パッチまたはイオン泳動装置を含み得る。局所処方は、約０．１％〜１０％ｗ／ｖ（単位容量あたりの重量）の濃度の本発明の化合物を含有し得る。
【００７９】
この組成物は、直腸内で融解して薬剤を放出する形態（例えば、座剤）向けであり得る。直腸用の組成物は、油性基剤（例えば、適当な非刺激性賦形剤）を含有し得る。このような基剤には、ラノリン、ココアバターおよびポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８０】
この組成物は、固体または液体投薬単位の物理的形態を変える種々の物質を含有し得る。例えば、この組成物は、その活性成分の周りの被覆シェルを形成する物質を含有し得る。この被覆シェルを形成する物質は、典型的には、不活性であり、例えば、糖、セラック、および他の腸内被覆剤から選択され得る。あるいは、これらの活性成分は、ゼラチンカプセルに入れられ得る。
【００８１】
固形または液状の組成物は、その活性成分に結合して活性成分の送達を助ける試薬を含有し得る。この能力で作用し得る適当な薬剤には、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体、タンパク質またはリポソームが挙げられる。
【００８２】
本発明の薬学的組成物は、気体投薬単位からなり得る（例えば、それは、エアロゾルの形態であり得る）。エアロゾルとの用語は、コロイド的性質のものから加圧パッケージからなるシステムまでの範囲の種々の系を意味するように使用される。送達は、液化または加圧パッケージにより、または適当なポンプ系（これは、活性成分を分配する）により、なされ得る。本発明の化合物のエアロゾルは、その活性成分を送達するために、単相系、二相系または三相系で送達され得る。このエアロゾルの送達は、必要な容器、活性剤、弁、副容器、スペーサなどを含み、これは、一緒になって、キットを形成し得る。好ましいエアロゾルは、過度の実験なしで、当業者により決定され得る。
【００８３】
固体、液体または気体のいずれの形態であれ、本発明の薬学的組成物は、炎症（関節炎を含めて）の治療で使用される１種またはそれ以上の公知の薬物を含有し得る。
【００８４】
これらの薬学的組成物は、医薬分野で周知の方法により、調製され得る。
【００８５】
注射により投与する組成物は、溶液を形成するために本発明の化合物を水と混ぜ合わせこみにより、調製できる。均一溶液または懸濁液の形成を促進するために、界面活性剤が加えられ得る。界面活性剤とは、この水性送達系での活性化合物の溶解または均一懸濁を促進するために、本発明の化合物と非共有結合的に相互作用する化合物である。
【００８６】
本明細書中で開示した本発明の化合物、またはこれらの化合物と薬学的に受容可能な担体、希釈剤または賦形剤との組成物は、患者における炎症状態または疾患を治療または予防する方法で使用され得、ここで、該方法は、それが必要な該患者に、本発明の化合物または組成物の一定量を投与する工程を包含し、ここで、該量は、該患者の該炎症状態または疾患を治療または予防するのに有効である。
【００８７】
炎症性状態または疾患は自己免疫状態または疾患であり得る；炎症性状態または疾患は骨および／または関節の軟骨コンパートメントの急性または慢性炎症を伴い得る；炎症性状態または疾患はリウマチ性関節炎、通風性関節炎または若年性リウマチ性関節炎から選択される関節炎であり得る；炎症性状態または疾患は喘息であり得る；状態または疾患はＴ細胞の調節不全に関連し得る；状態または疾患は炎症性サイトカインのレベルの上昇に関連し得る（例えば、炎症性サイトカインがＩＬ−２の場合、または炎症性サイトカインがＩＦＮ−γの場合、または炎症性サイトカインがＴＮＦ−αの場合）；炎症性状態または疾患は多発性硬化症であり得る；炎症性状態または疾患は肺サルコイドーシス（ｓａｒｃａｄｏｓｉｓ）であり得る；炎症性状態または疾患は眼の炎症またはアレルギーであり得る；炎症性状態または疾患は炎症性腸疾患（例えばクローン病または潰瘍性大腸炎）であり得る；そして炎症性状態または疾患は炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬または皮膚炎）であり得る。
【００８８】
さらに、本発明は患者内の細胞内環状アデノシン５’一リン酸レベルを調節する方法を提供し、これは、それを必要とする患者に所定量の本発明の化合物または組成物を投与する工程を包含し、ここで所定量は患者の細胞内環状アデノシン５’一リン酸レベルの調節に有効な量である。患者は炎症性状態または疾患を有し得る。
【００８９】
さらに、本発明は患者の疾患または状態を処置または防止する方法を提供し、ここで上記疾患または状態は、二次細胞メッセンジャーに関連する酵素を阻害することによって調節される病理的状態に関連し、この方法はそれを必要とする患者に所定量の本発明の化合物または組成物を投与する工程を包含し、ここで所定量は、二次細胞メッセンジャーに関連する酵素を阻害することによって調節される病理的状態に関連する疾患または状態の処置または防止に有効な量である。酵素はＡＭＰホスホジエステラーゼであり得る；または酵素はホスホジエステラーゼ４であり得る；または酵素はホスホジエステラーゼ３であり得る；または酵素はホスホジエステラーゼ４およびホスホジエステラーゼ３の両方であり得る；または酵素は環状ＧＭＰホスホジエステラーゼであり得る。
【００９０】
さらに、本発明は患者における移植拒絶を処置または防止する方法を提供し、これは、それを必要とする患者に所定量の本発明の化合物または組成物を投与する工程を包含し、ここで所定量は患者における移植拒絶の処置または防止に有効な量である。拒絶は移植片対宿主疾患によるものであり得る。
【００９１】
さらに、本発明は患者における制御されない細胞増殖を処置または防止する方法を提供し、これは、それを必要とする患者に所定量の本発明の化合物または組成物を投与する工程を包含し、ここで所定量は患者における制御されない細胞増殖の処置または防止に有効な量である。制御されない細胞増殖は白血病および固形腫瘍から選択される癌によって引き起こされ得る。
【００９２】
さらに、本発明は患者における中枢神経系（ＣＮＳ）に関連する状態の処置または防止の方法を提供し、これは、それを必要とする患者に所定量の本発明の化合物または組成物を投与する工程を包含し、ここで所定量は患者における中枢神経系（ＣＮＳ）に関連する状態の処置または防止に有効な量である。中枢神経系（ＣＮＳ）に関連する状態は抑鬱であり得る。
【００９３】
本発明の方法において、本発明の化合物、あるいは１つ以上の本発明の化合物と薬学的受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤とを含む組成物は、必ずしも必要でないが、上記定義のような本発明の化合物、あるいはこれらの化合物の１つと薬学的受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤とを含む組成物の化合物を投与された被験体において以下の所望の結果の１つ以上を達成する：
１．一次好中球由来の活性酸素種世代の阻害；
２．好中球の走化性の阻害：
３．ＴＮＦ−α産生の阻害；
４．浮腫の阻害；
５．酸素ラジカル除去；
６．環状ＡＭＰホスホジエステラーゼ１、３および／または４、ならびに関連のＰＤＥ（例えばＰＤＥ７）の阻害；
７．ヒト単球細胞におけるＣＲＥ仲介転写活性の誘導の強化；
８．ＰＤＥ、好ましくはＰＤＥ４，ＰＤＥ３，またはＰＤＥ３およびＰＤＥ４の阻害；
９．活性化Ｔ細胞サブセットによるサイトカイン産生の阻害；
１０．好中球ミエロペルオキシダーゼ放出の阻害；
１１．ＩＣ５０ＰＤＥ４（ｃａｔ）：ＩＣ５０ＰＤＥ４（ＨＡＲＢＳ）の比率の低さ；
１２．移植片拒絶の阻害；
１３．炎症性腸疾患における疾患の臨床的および組織病理学的パラメーターの阻害；および
１４．ネズミコラーゲン誘導関節炎モデルにおける関節炎の臨床的および組織病理学的的パラメーターの阻害。
【００９４】
従って、本発明の方法は、炎症（急性および慢性両方の炎症を含む）ならびに特定の増殖性障害（癌）の処置に用いられ得る。本明細書において、炎症は、限定されないが、強直性脊椎炎、関節炎（この用語は１００種を越えるリウマチ性疾患を包含する）、喘息、クローン病、線維筋痛症候群、痛風、脳の炎症（多発性硬化症、ＡＩＤＳ痴呆、ライム脳症、ヘルペス脳炎、クロイツフェルト−ヤコブ病、および大脳トキソプラズマ症を含む）、気腫、炎症性腸疾患、過敏性大腸症候群、虚血再灌流障害、若年性エリテマトーデス、肺サルコイドーシス、川崎病、変形性関節炎、骨盤炎症性疾患、乾癬性関節炎（乾癬）、リウマチ様関節炎、乾癬、組織／器官移植、強皮症、脊椎関節症、全身性紅斑性狼蒼、肺サルコイドーシス、および潰瘍性大腸炎を包含する。本明細書において、増殖性障害は、限定されないが、全ての白血病および固形腫瘍を包含し、これらはその細胞周期が妨害されると分化またはアポトーシスを受けやすい。
【００９５】
本発明の方法は、治療有効量の本発明の化合物（その塩、組成物などを含む）の投与を提供する。本明細書において、用語「治療有効量」に包含される実際の量は投与経路、処置される温血動物の種類、および考慮される特定の温血動物の身体的性質に依存する。この量を決定するためのこれらの因子およびそれらの関係は医療分野の当業者に周知である。この量および投与方法は最適な効力を達成するために調整され得るが、体重、食餌、同時に投薬される薬物のような因子、ならびに医療分野の当業者が認識する他の因子に依存する。
【００９６】
本発明の化合物または組成物の有効量は温血動物、例えばヒトの炎症を処置するに十分である。有効量の抗炎症薬を投与する方法は当該分野で周知であり、吸入、経口または非経口形態の投与を包含する。このような投薬形態は、限定されないが、非経口溶液、錠剤、カプセル剤、徐放性インプラント、および経皮送達系；または乾燥粉末吸入器または加圧された多回投与吸入デバイスを使用する吸入投薬系を包含する。
【００９７】
投薬量および頻度は、有害な影響なしで薬剤の有効なレベルを創出するように選択される。経口または静脈内投与される場合、これは、一般的に、約０．０１から１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲、そして典型的には約０．１から１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の投薬である。また、経鼻または吸入で投与される場合、投薬範囲は典型的には約０．０１から１ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００９８】
本発明の化合物（上記の方法および組成物で用いられる化合物を包含する）は以下の実施例で示すスキームに従って調製され得る。以下の実施例は例示のために提供され、限定のためではない。
【００９９】
他に指示のない限り、フラッシュクロマトグラフィーおよびカラムクロマトグラフィーはＭｅｒｃｋシリカゲル６０（２３０〜４００メッシュ）を用いて達成され得る。フラッシュクロマトグラフィーは「Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ」第３版、Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ−Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ  Ｌｔｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ（１９８８）、Ｄ．Ｄ．ＰｅｒｒｉｎおよびＷ．Ｌ．Ｆ．Ａｒｍａｒｅｇｏ編、第２３頁に記載の手順に従って行われ得る。カラムクロマトグラフィーは充填材を通る溶離液の流速が重力によって決定されるプロセスをいう。全ての場合において、フラッシュクロマトグラフィーおよび円形クロマトグラフィーは交換可能に用いられ得る。円形クロマトグラフィーはシリカゲルを用いてＣｈｒｏｍａｔｏｔｒｏｎ  ＃７９２４Ｔ型（Ｈａｒｒｉｓｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）上で行われる。他に指示のない限り、引用されるＲｆ値はシリカゲル６０Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ、６４２７１、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いた薄層クロマトグラフィーによって得られる。
【０１００】
また、他に指示のない限り、化学反応物および試薬は標準的な化成品供給会社、例えばＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ；ｗｗｗ．ａｌｄｒｉｃｈ．ｓｉａｌ．ｃｏｍ）；ＥＭ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｈａｗｔｈｏｒｎｅ，ＮＹ；ｗｗｗ．ｅｍｓｃｉｅｎｃｅ．ｃｏｍ）；Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏ．（Ｈａｍｐｔｏｎ，ＮＨ；ｗｗｗ．ｆｉｓｃｈｅｒｌ．ｃｏｍ）；およびＬａｎｃａｓｔｅｒ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．（Ｗｉｎｄｈａｍ，ＮＨ；ｗｗｗ．ｌａｎｃａｓｔｅｒ．ｃｏ．ｕｋ）から入手した。気体はＰｒａｘａｉｒ（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，Ｂ．Ｃ．）から入手した。細胞系は他に指示のない限り公的供給源または市販の供給源から入手した（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）。
【実施例】
【０１０１】
（合成実施例）
（本発明の化合物の中間体の合成）
本発明の化合物を調製する際に使用した中間体は、以下の反応スキーム１で開示した方法により、調製され得る。例えば、混合した無水物（これは、市販の（３，４−ジメトキシフェニル）酢酸１６（Ａｌｄｒｉｃｈ）および塩化トリエチルアセチルから得た）は、（Ｓ）−（−）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノンと反応され、化合物１７が得られる。キラルオキサゾリジノン１７をアクリル酸第三級ブチルにエナンチオ選択的にマイケル付加すると、適当な保護基を備えたカルボキシレート官能基を有する化合物１８が得られた。そのキラル補助基を水酸化リチウムおよび過酸化水素で加水分解すると、カルボン酸１９が生じる。化合物１９をＢＨ３−ＴＨＦで選択的に還元すると、第一級アルコールを含む化合物２０が得られる。
【０１０２】
【化２３】
0004768989.tif 000013
この反応スキームにおける化合物１７〜２０の合成は、以下で具体的に記述されている。
【０１０３】
（化合物１７の合成）
溶液１：（３，４−ジメトキシフェニル）酢酸１６（１５．０ｇ、７６．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１２０ｍＬ）溶液に、０℃で、トリエチルアミン（１２．８ｍＬ、９１．７ｍｍｏｌ）に続いて塩化トリメチルアセチル（１０．４ｍＬ、８４．２ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を１時間攪拌した。
【０１０４】
溶液２：第二フラスコにて、（Ｓ）−（−）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン（１４．９ｇ、８４．２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（７５ｍＬ）溶液に、−７８℃で、ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中で２．５Ｍ、３３．７ｍＬ、８４．２ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を１時間攪拌し、次いで、０℃で、カニューレを介して、溶液１に加えた。得られた混合物を０℃から室温まで温め、２４時間攪拌し、次いで、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（３００ｍＬ）で希釈し、そしてＣＨ２Ｃｌ２（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ（２×１５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液を減圧下にて濃縮した。その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、４：１）で精製して、白色固形物として、化合物１７（１９．０４ｇ、７０％）を得た。
【０１０５】
（化合物１８および１９の合成）
四塩化チタン（０．５０ｍＬ、４．５０ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液に、０℃で、チタニウムイソプロポキシド（０．４２ｍＬ、１．４１ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。得られた混合物を、０℃で、５分間攪拌し、次いで、ジイソプロピルエチルアミン（１．０４ｍＬ、５．９１ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、化合物１７（２．０ｇ、５．６３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液を加えた。この混合物を、０℃で、９０分間攪拌し、次いで、アクリル酸第三級ブチル（１．２４ｍＬ、８．４５ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を室温まで温め、そして３６時間攪拌し、次いで、飽和塩化アンモニウム（５０ｍＬ）で希釈した。その水層をジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を１Ｎ  ＨＣｌ（２×７５）、水（２×７５ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（２×７５ｍＬ）で洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥した後、濾過し、その濾液を真空中で蒸発させると、粗化合物１８（２．６９ｇ）が得られ、これを、さらに精製することなく、使用した。
【０１０６】
粗化合物１８（２．６９ｇ）を３：１  ＴＨＦ／水の混合物（８５ｍＬ）に溶解し、そして０℃まで冷却した。水酸化リチウム一水和物（４６６．６ｍｇ、１１．１２ｍｍｏｌ）および３０％過酸化水素（２．５ｍＬ、２２．２５ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を、０℃で、３時間攪拌した。亜硫酸ナトリウム（３．０６ｇ、２４．４６ｍｍｏｌ）の溶液を加え、続いて、０．５Ｎ炭酸水素ナトリウム（４１ｍＬ）を加えた。この混合物を、室温で、２時間攪拌し、次いで、真空中で濃縮した。その水相を５％ＨＣｌでｐＨ＝２まで希釈し、次いで、ＥｔＯＡｃ（３×７５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、２０％酢酸エチル／ヘキサン中の０．２％酢酸を使用する）で精製して、淡黄色オイルとして、化合物１９（１．０９ｇ、２段階で６０％）を得た。
【０１０７】
（化合物２０の合成）
化合物１９（１２．１８ｇ、０．０３７６ｍｏｌｅｓ）の無水ＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液に、−１８℃で、２０分間にわたって、ＢＨ３−ＴＨＦ（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液、３７．６ｍＬ、０．０３７６ｍｏｌｅｓ）を滴下した。次いで、冷却浴を除去し、その反応混合物を、室温で、１６時間攪拌した。ＮａＨＣＯ３飽和溶液（５０ｍＬ）を加え、その水相をＥｔＯＡｃ（３×７５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ（２×７５ｍＬ）で洗浄した。この有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液を真空中で蒸発させた。その残留物をカラムクロマトグラフィー（これは、ヘキサン中の５０％ＥｔＯＡｃで溶出する）で精製して、無色オイルとして、化合物２０（１０．５２ｇ、９１％）を得た。
【０１０８】
あるいは、そのフェニル環に異なるアルコキシ基を有する本発明の化合物の中間体は、反応スキーム２にて以下で描写した方法により、合成され得る。例えば、市販の３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジルアルコール３１は、還流しているトルエン中にて３１を臭化ベンジルおよび炭酸カリウムで処理することにより、ベンジルオキシ誘導体３２として選択的に保護されて、結晶化後、所望生成物の８９％が得られる。次いで、化合物３２は、トリエチルアミンおよびＣＨ２Ｃｌ２の存在下にて、塩化メタンスルホニルと反応されて、化合物３３が得られ、これは、さらに精製することなく、使用される。粗生成物３３は、次いで、ＤＭＦに入れられ、そして１８−クラウン−６の存在下にて、シアン化カリウムで処理される。ワークアップおよび精製後、２段階で、収率８１％で、ニトリル３４が単離される。次いで、ニトリル３４の水酸化カリウムでの加水分解が達成されて、収率９５％で、所望のカルボン酸３５が得られる。化合物３５を塩化トリメチルアセチルで処理すると、混合無水物が得られ、これは、（Ｓ）−（−）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノンのリチウムアニオンと反応されて、収率７５％で、化合物３６が得られる。キラルオキサゾリジノン３６のチタニウムエノラートをアクリル酸第三級ブチルでエナンチオ選択的にマイケル付加すると、適当な保護基を備えたカルボキシレート官能基を有する化合物３７が得られる。化合物３７を水素化すると、定量収率で、そのアルコールが得られ、これは、ＤＭＦ中にて、臭化シクロペンチル、炭酸カリウムおよびヨウ化カリウムで処理することにより、収率６４％で、シクロペンチルオキシ誘導体３８に変換される。従って、そのフェニル環の任意数のアルコキシ誘導体は、対応する臭化アルキルまたは官能化臭化アルキルを使用して、作製できる。そのキラル補助基を水酸化リチウムおよび過酸化水素で加水分解すると、収率９１％で、カルボン酸３９が生じる。化合物３９をＢＨ３−ＴＨＦで選択的に還元すると、第一級アルコールを含む化合物４０（収率８９％）が得られる。
【０１０９】
【化２４】
0004768989.tif 000014
この反応スキームにおける化合物３２〜４０の合成は、以下で具体的に記述されている。
【０１１０】
（化合物３２の合成）
トルエン（３５０ｍＬ）中の３−ヒドロキシ−４−メトキシベンジルアルコール３１（３０．０ｇ、１９５ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（６２．２ｇ、４５０ｍｍｏｌ）および１８−クラウン−６（０．４０ｇ、１ｍｏｌ％）の急速に攪拌したスラリーに、２０分間にわたって、臭化ベンジル（２５．６ｇ、１５０ｍｍｏｌ）のトルエン（１５０ｍＬ）溶液を加えた。その反応混合物を１６時間還流し、その後、この混合物をジエチルエーテル（４００ｍＬ）で希釈し、そしてＮａＯＨ（１Ｎ、２×２５０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（２×２５０ｍＬ）およびブライン（２×３００ｍＬ）で連続的に洗浄した。そのジエチルエーテル層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、溶媒を除去して、淡黄色固形物（４２．１ｇ）を得、これを、ＥｔＯＡｃおよびヘキサンで結晶化して、白色結晶固形物として、化合物３２（３２．７ｇ、８９％）を得た。
【０１１１】
（化合物３３の合成）
化合物３２（３０．０ｇ、１２２．８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３００ｍＬ）に溶解し、そして０℃まで冷却し、次いで、Ｅｔ３Ｎ（２０．４ｍＬ、１４７．３６ｍｍｏｌ）および塩化メタンスルホニル（１１．４０ｍＬ、１４７．３６ｍｍｏｌ）を加えた。氷浴を除去し、その溶液を、室温で、２時間攪拌した。次いで、その混合物をジクロロメタン（７００ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（２×３００ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２×３００ｍＬ）で連続的に洗浄した。その有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液を濃縮して、淡黄色固形物として、化合物３３（３３．０８ｇ）を得、これを、さらに精製することなく、次の工程に使用した。
【０１１２】
（化合物３４の合成）
粗３３（３３．０８ｇ）の無水ＤＭＦ（２００ｍＬ）溶液に、ＫＣＮ（１５．９９ｇ、２４５．６ｍｍｏｌ）および１８−クラウン−６（５．１９ｇ、１９．６５ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を、室温で、１８時間攪拌し、次いで、水（１．５Ｌ）に注いだ。その沈殿物を集め、そしてＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）に溶解し、Ｈ２Ｏ（２×２００ｍＬ）およびブライン（２×２００ｍＬ）で洗浄した。その有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液を濃縮して、灰白色固形物として、化合物３４（２８．５ｇ、２段階で収率９１％）を得た。
【０１１３】
（化合物３５の合成）
Ｈ２Ｏ（１７０ｍＬ）中の化合物３４（２８．０ｇ、１１０．５ｍｍｏｌ）およびＫＯＨ（９４．０ｇ、１６７．５ｍｍｏｌ）の混合物を、還流状態で、１２時間加熱した。この反応混合物を室温まで冷却した後、それをＨ２Ｏ（１．６Ｌ）で希釈し、そして１２Ｎ  ＨＣ１でｐＨ＝２まで酸性化した。得られた沈殿物を集め、そしてＰ２Ｏ５で乾燥して、白色固形物として、化合物３５（２８．８ｇ、９５％）を得た。
【０１１４】
（化合物３６の合成）
溶液１：化合物３５（２８．８ｇ、１０５．７７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５０ｍＬ）溶液に、０℃で、トリエチルアミン（１７．７ｍＬ、１２６．９２ｍｍｏｌ）に続いて塩化トリメチルアセチル（１４．３ｍＬ、１１６．３５ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を１時間攪拌した。
【０１１５】
溶液２：第二フラスコにて、（Ｓ）−（−）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン（２０．６ｇ、１１６．３５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１４５ｍＬ）溶液に、−７８℃で、ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中で２．５Ｍ、４６．５ｍＬ、１１６．３５ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を１時間攪拌し、次いで、０℃で、カニューレを介して、溶液１に加えた。得られた混合物を０℃から室温まで温め、２４時間攪拌し、次いで、ＮａＨＣＯ３飽和溶液（４００ｍＬ）で希釈し、そしてＣＨ２Ｃｌ２（４×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液を減圧下にて濃縮した。その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、４：１）で精製して、白色固形物として、出発物質（１５．９３ｇ）および化合物３６（１５．３０ｇ、出発物質の回収率に基づいて７５％）を得た。
【０１１６】
（化合物３７の合成）
四塩化チタン（３．１ｍＬ、２７．８ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液に、０℃で、チタニウムイソプロポキシド（２．６ｍＬ、８．６９ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。得られた混合物を、０℃で、５分間攪拌し、次いで、ジイソプロピルエチルアミン（６．７ｍＬ、３８．２４ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、化合物３６（１５ｇ、３４．７６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液を加えた。この混合物を、０℃で、９０分間攪拌し、次いで、アクリル酸第三級ブチル（１５．３ｍＬ、１０４．２８ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を、０℃で、３日間攪拌し、次いで、飽和塩化アンモニウム（３００ｍＬ）で希釈した。その水層をジクロロメタン（３×３００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を５％ＨＣｌ（２×４００ｍＬ）、水（２×３００ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（４００ｍＬ）で洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥した後、濾過し、その濾液を真空中で蒸発させると、粗化合物３７（２１．０ｇ）が得られた。粗製物３７の一部（２．１ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：２）で溶出する）で精製して、シロップとして、純粋化合物３７（１．５５ｇ）を得た。
【０１１７】
（化合物３８の合成）
ＥｔＯＡｃ／ＡｃＯＨ（５：１、６０ｍＬ）中の化合物３７（１．５５ｇ、２．７７ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（１５０ｍｇ）の混合物を、Ｈ２（バルーン）下にて、１８時間攪拌した。この混合物をセライトで濾過し、その濾液を乾燥状態まで蒸発させて、中間体フェノール化合物（１．３０ｇ、１００％）を得た。
【０１１８】
フェノール化合物（０．３０ｇ、０．６３９ｍｍｏｌ）、無水Ｋ２ＣＯ３（０．１３２ｇ、０．９５８ｍｍｏｌ）およびＫＩ（５ｍｇ）の無水ＤＭＦ（１．５ｍＬ）を攪拌し、そして６５℃まで加熱し、次いで、臭化シクロペンチル（０．１０ｍＬ、０．９５８ｍｍｏｌ）を滴下した。攪拌した混合物を、６５℃で、さらに２１時間加熱した。室温まで冷却し、その反応混合物をＥｔ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、そしてＨ２Ｏ（２×２５ｍＬ）で洗浄した。その有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、そして溶媒を蒸発させた。その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、溶離液として、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（４：１）を使う）で精製して、無色シロップとして、化合物３８（０．２２ｇ、６４％）を得た。
【０１１９】
（化合物３９の合成）
化合物３８（３．５ｇ、６．５１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（３：１、６０ｍＬ）に溶解し、そして０℃まで冷却した。水酸化リチウム一水和物（０．５４６ｇ、１３．０２ｍｍｏｌ）および３０％過酸化水素（２．９８ｍＬ、２６．０４ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を、０℃で、３時間攪拌した。亜硫酸ナトリウム（３．６１ｇ、２８．６４ｍｍｏｌ）の水（１９ｍＬ）溶液を加え、続いて、０．５Ｎ炭酸水素ナトリウム（３５ｍＬ）を加えた。この混合物を、室温で、２時間攪拌し、次いで、真空中で濃縮した。その水相を５％ＨＣｌでｐＨ＝２まで希釈し、次いで、ＥｔＯＡｃ（３×７５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液を真空中で濃縮した。その粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、溶離液として、酢酸エチル／ヘキサン（１：４）中の０．２％酢酸を使用する）で精製して、白色固形物として、化合物３９（２．２４ｇ、９１％）を得た。
【０１２０】
（化合物４０の合成）
化合物３９（２．２３ｇ、２．６４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液に、−１８℃で、２０分間にわたって、ＢＨ３−ＴＨＦ（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液、２．７０ｍＬ、２．７０ｍｍｏｌ）を滴下した。次いで、冷却浴を除去し、その反応混合物を、室温で、１８時間攪拌した。ＮａＨＣＯ３飽和溶液（１５ｍＬ）を加え、その水相をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ（２×５０ｍＬ）で洗浄した。この有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液を真空中で蒸発させた。その残留物をカラムクロマトグラフィー（これは、ヘキサン中の２５％ＥｔＯＡｃで溶出する）で精製して、無色オイルとして、化合物４０（１．９１ｇ、８９％）を得た。
【０１２１】
本発明の化合物を調製する際に使用される追加中間体は、反応スキーム３にて以下で描写したようにして、調製され得る。一般に、化合物２０の主要中間体４６への変換は、以下のようにして、５段階の手順で達成した。化合物２０を、トルエン中にて、亜鉛アジド／ビス−ピリジン錯体、トリフェニルホスフィンおよびジイソプロピルアゾジカルボキシレートで滑らかに処理すると、収率９１％で、対応するアジド４４が得られる。化合物４４は、次いで、１０％Ｐｄ−Ｃの存在下にて水素化され、得られたアミン４５は、ＤＭＦ中でＮａＯＨで処理するみことにより、化合物４６（２段階で６３％）に変換される。
【０１２２】
【化２５】
0004768989.tif 000015
この反応スキームでの化合物４４〜４６の合成は、以下で具体的に記述する。
【０１２３】
（化合物４４の合成）
ＺｎＮ６．２Ｐｙ錯体の調製：Ｚｎ（ＮＯ３）２．６Ｈ２Ｏ（３．５７ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（６ｍＬ）攪拌溶液に、ＮａＮ３（１．５６ｇ、２４．０ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（１２ｍＬ）溶液を滴下した。その白色沈殿物を、油浴にて、５０℃にし、次いで、ピリジン（２．０ｍＬ、２４．７ｍｍｏｌ）を滴下して、濃白色沈殿物を形成した。その混合物をゆっくりと室温まで冷却している間に、攪拌を継続した。その塩を濾過し、氷冷却水で洗浄し、そして真空中で乾燥して、白色固形物として、ＺｎＮ６．２Ｐｙ（２．９９ｇ、８１％）を得た。
【０１２４】
化合物２０（１．０ｇ、３．３０ｍｍｏｌ）、ＺｎＮ６．２Ｐｙ（０．７６ｇ、２．４７ｍｍｏｌ）およびＰｈ３Ｐ（１．７３ｇ、６．５９ｍｍｏｌ）の無水トルエン（２０ｍＬ）懸濁液に、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（１．３０ｍＬ、６．５９ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を、室温で、１８時間攪拌した。この混合物を濃縮し、その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（９：１）で溶出する）で精製して、無色オイルとして、化合物４４（１．０１ｇ、９１％）を得た。
【０１２５】
（化合物４５の合成）
ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）中の化合物４４（１．００ｇ、２．９８ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）の混合物を、Ｈ２（バルーン）下にて、１８時間攪拌した。この混合物をセライトで濾過し、その濾液を乾燥状態まで蒸発させて、無色シロップとして、化合物４５（０．９２３ｇ、１００％）を得た。
【０１２６】
（化合物４６の合成）
化合物４５（０．２１ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１ｍＬ）溶液に、水酸化ナトリウム（５Ｎ、０．１４ｍＬ、０．７０ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を、室温で、１８時間攪拌した。この混合物を濃縮し、その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（９：１）で溶出した）で精製して、白色固形物として、化合物４６（０．０９１ｇ、６３％）を得た。
【０１２７】
（本発明の化合物の合成）
本発明の化合物は、反応スキーム４にて以下で描写した方法により、調製され得る。このアプローチでは、化合物４６は、ＤＭＦ中にて、ＮａＨおよび臭化ベンジルで処理して、収率８０％で、化合物４７を得た。化合物４７は、次いで、ＴＨＦに入れられ、そして４−（ベンジルオキシ）−３−メトキシ臭化ベンジルでアルキル化されて、収率８６％で、７．２：１の比で、所望のカップリング生成物４８および４９を得る。これらの２種の異性体は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離できる。触媒を１０％Ｐｄ／Ｃを使用する化合物４９の脱−Ｏ−ベンジル化は、容易に進行して、収率９８％で、フェノール５０が単離される。次いで、高圧下にてさらに水素化分解すると、化合物５１が得られる。
【０１２８】
【化２６】
0004768989.tif 000016
以下の反応スキーム５で描写されているように、そのラクタム窒素を保護する代替方法もまた、使用できる。例えば、そのＮ−ｔ−ブトキシカルボニルアミドとしての４６のＮ−保護は、ジクロロメタン中にて、二炭酸ジ−第三級ブチルおよびトリエチルアミンを使用して達成でき、収率９５％で、誘導体５２が得られる。化合物５２を４−（ベンジルオキシ）−３−メトキシ臭化ベンジルでアルキル化すると、収率６７％で、化合物５３が得られる。化合物５３は、ジアステレオマー混合物である。ジクロロメタン中にて、化合物５３中のＮ−ＢＯＣ保護基をトリフルオロ酢酸で除去すると、収率７４％で、生成物５４が得られる。触媒として１０％Ｐｄ／Ｃを使用して化合物５４を水素化分解すると、収率８１％で、ジアステレオマー混合物５５が得られる。
【０１２９】
【化２７】
0004768989.tif 000017
反応スキーム６および７での化合物４７〜５５の合成は、以下で具体的に記述する。
【０１３０】
（化合物４７の合成）
化合物４６（０．１８４ｇ、０．７８２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、そして０℃まで冷却し、ＮａＨ（０．０３４４ｇ、鉱油中で６０％、０．８６０ｍｍｏｌ）を加えた。２時間後、臭化ベンジル（０．１４ｍＬ、１．１７３ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、得られた混合物を、室温で、さらに１８時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、得られた残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、ＥｔＯＡｃで溶出した）で精製して、白色固形物として、化合物４７（０．２０３ｇ、８０％）を得た。
【０１３１】
（化合物４８および４９の合成）
化合物４７（０．２３ｇ、０．７０７ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（４ｍＬ）溶液に、アルゴン下にて、−７８℃で、ＴＨＦ（２ｍＬ）中のＬＤＡ［０．８５ｍｍｏｌ、これは、ｎ−ＢｕＬｉ（０．３４ｍＬ、２．５Ｍヘキサン溶液、０．８５ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアミン（０．１２ｍＬ、０．８５ｍｍｏｌ）から調製した］を加えた。その混合物を、−７８℃で、１時間攪拌し、次いで、上記混合物に、注射器を介して、ＨＭＰＡ（０．１８ｍＬ、１．０６ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、ＴＨＦ（１ｍＬ）中の４−（ベンジルオキシ）−３−メトキシ臭化ベンジル（０．４３４ｇ、１．４１ｍｍｏｌ）を加えた。過剰の塩基を、０℃で、ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（１０ｍＬ）でクエンチし、得られた溶液をＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２×４０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液を乾燥状態まで蒸発させた。その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（３：２）で溶出した）で精製して、白色発泡体として、化合物４９（０．２９５ｇ、７５．６％）および４８（０．０４１ｍｇ、１０．５％）を得た。
【０１３２】
（化合物５０および５１の合成）
ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）中の化合物４９（０．２５ｇ、０．４５３ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（５０ｍｇ）の混合物を、Ｈ２（バルーン）下にて、４８時間攪拌した。この混合物をセライトで濾過し、その濾液を乾燥状態まで蒸発させて、白色発泡体として、化合物５０（０．２０４ｇ、９８％）を得た。高圧下にて化合物５０をさらに水素化分解すると、化合物５１が得られる。
【０１３３】
（化合物５２の合成）
化合物４６（０．３９ｇ、１．６６ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（０．４６ｍＬ、３．２２ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０４０ｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（１２ｍＬ）溶液に、二炭酸ジ第三級ブチル（０．７２４ｇ、３．３２ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を、室温で、４時間攪拌した。この混合物を濃縮し、その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（２：１）で溶出した）で精製して、白色固形物として、化合物５２（０．５４３ｇ、９８％）を得た。
【０１３４】
（化合物５３の合成）
化合物５２（０．５４ｇ、１．６１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（７ｍＬ）溶液に、アルゴン下にて、−７８℃で、ＴＨＦ（４ｍＬ）中のＬＤＡ［１．９３ｍｍｏｌ、これは、ｎ−ＢｕＬｉ（０．７７ｍＬ、２．５Ｍヘキサン溶液、１．９３ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアミン（０．２７ｍＬ、１．９３ｍｍｏｌ）から調製した］を加えた。その混合物を、−７８℃で、１時間攪拌し、次いで、上記混合物に、注射器を介して、ＨＭＰＡ（０．４２ｍＬ、２．４２ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、ＴＨＦ（２ｍＬ）中の４−（ベンジルオキシ）−３−メトキシ臭化ベンジル（０．９８９ｇ、３．２２ｍｏｌｅｓ）を加えた。過剰の塩基を、０℃で、ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（２０ｍＬ）でクエンチし、得られた溶液をＥｔＯＡｃ（４×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液を乾燥状態まで蒸発させた。その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（４：１）で溶出した）で精製して、白色発泡体として、化合物５３（０．６０４ｇ、６７％）を得た。
【０１３５】
（化合物５４の合成）
化合物５３（０．５５７ｇ、０．９９０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）溶液に、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を加えた。その混合物を、室温で、２時間攪拌し、次いで、真空中で濃縮した。その残留物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）に溶解し、そして飽和ＮａＨＣＯ３（３×２０ｍＬ）で洗浄した。その有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液を真空中で濃縮した。その粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、溶離液として、酢酸エチル中の５％ＭｅＯＨを使用する）で精製して、白色発泡体として、化合物５４（０．３４９ｇ、７６％）を得た。
【０１３６】
（化合物５５の合成）
ＥｔＯＡｃ／ＡｃＯＨ（１：１、１０ｍＬ）中の化合物５４（０．３０ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（３０ｍｇ）の混合物を、Ｈ２（バルーン）下にて、５時間攪拌した。この混合物をセライトで濾過し、その濾液を乾燥状態まで蒸発させた。その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９：１）で溶出した）で精製して、白色固形物として、化合物５５（０．１９５ｇ、８１％）を得た。
【０１３７】
あるいは、本発明の化合物は、反応スキーム６で描写した方法により、調製され得る。一般に、トルエン中にて、化合物４０を、亜鉛アジド／ビス−ピリジン錯体、トリフェニルホスフィンおよびアゾジカルボン酸ジイソプロピルで処理すると、対応するアジド５６が得られる。次いで、粗化合物５６は、１０％Ｐｄ−Ｃの存在下にて水素化されて、２段階で収率７６％で、化合物５７が得られる。このラクタム環化工程には、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物での第三級ブチルエステル加溶媒分解、メタノール中でのエステル化、およびトリエチルアミンを加えるラクタム環化を使用する１ポット３工程反応手順が関与しており、３段階にて、収率９６％で、化合物５８が得られる。得られた５８を、ジクロロメタン中にて、二炭酸ジ第三級ブチルおよびトリエチルアミンでＮ−保護すると、収率８４％で、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミド誘導体５９が得られる。化合物５９をＬＤＡおよび４−（ベンジルオキシ）−３−メトキシ臭化ベンジルでアルキル化すると、収率７４％で、化合物６０が得られる。化合物６０は、１：１のＲ／Ｓ比のジアステレオマー混合物である。化合物６０中のＮ−ＢＯＣ保護基を、ジクロロメタン中にて、トリフルオロ酢酸で除去すると、収率７４％で、標的生成物６１が得られる。触媒として１０％Ｐｄ／Ｃを使用して化合物６１を水素化分解すると、収率８１％で、最終生成物６２が得られる。
【０１３８】
【化２８】
0004768989.tif 000018
この反応スキームにおける化合物５６〜６２の合成は、以下で具体的に記述されている。
【０１３９】
（化合物５６の合成）
化合物４０（１．５ｇ、４．１２ｍｍｏｌ）、ＺｎＮ６．２Ｐｙ（０．９５ｇ、３．０９ｍｍｏｌ）およびＰｈ３Ｐ（２．１６ｇ、８．２４ｍｍｏｌ）の無水トルエン（２０ｍＬ）懸濁液に、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（１．６２ｍＬ、８．２４ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を、室温で、１８時間攪拌した。この混合物を濃縮し、その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、ヘキサン中の１５％ＥｔＯＡｃで溶出する）で精製して、無色オイルとして、化合物５６（１．５９ｇ）を得た。
【０１４０】
（化合物５７の合成）
ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）中の化合物５６（１．５９ｇ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（８０ｍｇ）の混合物を、Ｈ２（バルーン）下にて、２０時間攪拌した。この混合物をセライトで濾過し、その濾液を乾燥状態まで蒸発させた。その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／Ｅｔ３Ｎ（８５：１４：１）で溶出した）で精製して、無色オイルとして、化合物５７（１．１４ｇ、２段階で７６％）を得た。
【０１４１】
（化合物５８の合成）
化合物５７（０．３０１ｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）をトルエン（１８ｍＬ）およびＭｅＯＨ（２ｍＬ）に溶解し、そしてｐＴｓＯＨ−Ｈ２Ｏ（０．４７２ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）で処理した。その溶液を、還流状態で、ディーン−スターク装置を使用して、１．５時間加熱した。次いで、このディーン−スターク装置を除去し、その溶液に、Ｅｔ３Ｎ（０．３５ｍＬ、２．４８ｍｍｏｌ）を加え、これを、還流状態で、さらに４時間加熱した。溶媒を蒸発させ、その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、ＥｔＯＡｃ中の２％ＡｃＯＨで溶出した）で精製して、白色固形物として、化合物５８（０．２２８ｇ、９６％）を得た。
【０１４２】
（化合物５９の合成）
化合物５８（０．６２ｇ、２．１４ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（０．６０ｍＬ、４．２８ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．０６０ｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）溶液に、二炭酸ジ第三級ブチル（０．９３５ｇ、４．２８ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を、室温で、４時間攪拌した。この混合物を濃縮し、その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（３：１）で溶出した）で精製して、白色固形物として、化合物５９（０．６９６ｇ、８４％）を得た。
【０１４３】
（化合物６０の合成）
化合物５９（０．６０ｇ、１．５４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に、アルゴン下にて、−７８℃で、ＴＨＦ（２ｍＬ）中のＬＤＡ［１．８５ｍｍｏｌ、これは、ｎ−ＢｕＬｉ（０．７４ｍＬ、２．５Ｍヘキサン溶液、１．８５ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアミン（０．２６ｍＬ、１．８５ｍｍｏｌ）から調製した］を加えた。その混合物を、−７８℃で、１時間攪拌し、次いで、上記混合物に、注射器を介して、ＨＭＰＡ（０．４０ｍＬ、２．３０ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、ＴＨＦ（２ｍＬ）中の４−（ベンジルオキシ）−３−メトキシ臭化ベンジル（０．７１ｇ、２．３０ｍｍｏｌ）を加えた。過剰の塩基を、０℃で、ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（２０ｍＬ）でクエンチし、得られた溶液をＥｔＯＡｃ（３×６０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液を乾燥状態まで蒸発させた。その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（７：３）で溶出した）で精製して、白色発泡体として、化合物６０（０．６９３ｇ、７４％）を得た。
【０１４４】
（化合物６１の合成）
化合物６０（０．６３ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）溶液に、トルエン（２０ｍＬ）で希釈し、次いで、真空中で濃縮した。その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、溶離液として、酢酸エチル中の５％ＭｅＯＨを使用する）で精製して、白色固形物として、化合物６１（０．３９ｇ、７４％）を得た。
【０１４５】
（化合物６２の合成）
ＥｔＯＡｃ／ＡｃＯＨ（１：１、６ｍＬ）中の化合物６１（０．２８ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（２７ｍｇ）の混合物を、Ｈ２（バルーン）下にて、５時間攪拌した。この混合物をセライトで濾過し、その濾液を乾燥状態まで蒸発させた。その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（これは、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９７：３）で溶出した）で精製して、白色発泡体として、化合物６２（０．２０ｇ、８４％）を得た。
【０１４６】
あるいは、本発明の化合物は、反応スキーム７および８で以下で描写した方法と類似の方法により、調製され得る。例えば、反応スキーム８では、化合物４０中の第一級アルコールの保護は、ＤＭＦ中の臭化ベンジル（ＢｎＢｒ）および炭酸セシウムを使用して達成され得、ベンジルオキシ誘導体１８８が得られる。化合物１８８は、次いで、化合物１８８をトリフルオロ酢酸と反応させることにより、その対応する酸１８９に変換され得る。
【０１４７】
【化２９】
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化合物１８９は、反応スキーム８で以下で示すように、本発明の化合物を調製するように使用され得る。
【０１４８】
【化３０】
0004768989.tif 000020
この反応スキームでの化合物２２３〜２２７の合成は、以下で具体的に描写する。
【０１４９】
（化合物２２３の合成）
Ａ．以下の溶液（溶液１および溶液２）を別個に調製した。溶液１：化合物１８９のＴＨＦ溶液に、０℃で、トリエチルアミンを加え、続いて、塩化トリメチルアセチルを加え、その混合物を１時間攪拌した。溶液２：（Ｒ）−（−）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノンの無水ＴＨＦ溶液に、−７８℃で、ｎ−ブチルリチウムを加え、その混合物を１時間攪拌した。
【０１５０】
Ｂ．溶液１に、カニューレを介して、溶液２を加えた。その反応物を、０℃で、室温まで温めた。室温で２４時間攪拌した後、その混合物をＮａＨＣＯ３飽和溶液で希釈し、そしてＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。それらの有機層を合わせ、Ｈ２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液を真空中で濃縮した。その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、所望の（Ｒ）−（−）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン誘導体を得た。
【０１５１】
Ｃ．ジイソプロピルアミンの無水ＴＨＦ溶液に、−７８℃で、ｎ−ブチルリチウムをゆっくりと加えた。その反応混合物を、−７８℃で、アルゴン下にて、１時間攪拌した。ＴＨＦ中の（Ｒ）−（−）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン誘導体を、−７８℃で加え、この反応混合物を１時間攪拌した。次いで、この反応混合物に、臭化３−メチルベンジルのＴＨＦを一度に加えた。得られた混合物を０℃まで温め、さらに２時間攪拌した。過剰の塩基を、０℃で、ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチし、得られた溶液をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を合わせ、飽和ＮａＨＣＯ３およびＨ２Ｏで連続的に洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液を真空中で濃縮した。その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、化合物２２３を得た。
【０１５２】
（化合物２２４の合成）
化合物２２３および１０％Ｐｄ／Ｃを、ＥｔＯＡｃ中で、Ｈ２（バルーン）下にて、２０時間攪拌した。その混合物をセライトで濾過し、その濾液を真空中で濃縮した。その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、化合物２２４を得た。
【０１５３】
（化合物２２５の合成）
ＺｎＮ６．無水トルエン中の２ＰｙおよびＰｈ３Ｐと混合した化合物２２４の懸濁液に、ジイソプロピルアゾジカルボキシレートを加えた。その混合物を、室温で、１８時間攪拌した。この混合物を真空中で濃縮し、その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、化合物２２５を得た。
【０１５４】
（化合物２２６の合成）
化合物２２５のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（３：１）溶液に、０℃で、ＬｉＯＨ・Ｈ２ＯおよびＨ２Ｏ２（Ｈ２Ｏ中で３０％）を加えた。その反応混合物を、０℃で、３時間攪拌した。次いで、Ｎａ２ＳＯ３の水溶液を加え、続いて、０．５Ｎ  ＮａＨＣＯ３の溶液を加えた。この混合物を２時間攪拌し、次いで、真空中でＴＨＦを蒸発させた。この水溶液を２Ｎ  ＨＣｌでｐＨ＝２まで希釈し、次いで、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、その濾液を乾燥状態まで蒸発させた。シリカゲルカラムクロマトグラフィーを使用して、得られたオイルを精製して、化合物２２６を得た。
【０１５５】
（化合物２２７の合成）
化合物２２６および１０％Ｐｄ／Ｃを、ＥｔＯＡｃ中で、Ｈ２（バルーン）下にて、２０時間攪拌した。その混合物をセライトで濾過し、その濾液を乾燥状態まで蒸発させた。その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、所望の酸化合物を得た。
【０１５６】
この酸化合物をトルエンおよびＭｅＯＨに溶解し、そしてｐＴｓＯＨ・Ｈ２Ｏで処理した。その溶液を、還流状態で、ディーン−スターク装置を使用して、１．５時間加熱した。次いで、このディーン−スターク装置を除去し、その溶液に、Ｅｔ３Ｎを加え、これを、還流状態で、さらに４時間加熱した。溶媒を蒸発させ、その残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、所望化合物２２７を得た。
【０１５７】
先のセクションで記述したように、本発明の化合物。またはそれらの薬学的に受容可能な塩は、１個またはそれ以上の不斉中心を含み得、それゆえ、鏡像異性体、ジアステレオマーおよび他の立体異性体（これらは、−（Ｒ）または−（Ｓ）として、またはアミノ酸について（Ｄ）−または（Ｌ）−として、絶対的な原子の空間的配置によって、規定され得る）を生じ得る。本発明は、このような全ての可能な異性体だけでなく、それらのラセミ化合物、光学的に強化した形状および光学的な純粋な形状を含むことを意味する。光学活性（＋）および（−）、（Ｒ）−および（Ｓ）−、または（Ｄ）−および（Ｌ）−異性体は、キラルシントンまたはキラル試薬を使用して調製され得、または通常の技術（例えば、キラル固定相を使用する逆相ＨＰＬＣ）を使用して分割され得る。本明細書中で記述した化合物がオレフィン性二重結合または他の幾何不斉中心を含むとき、特に明記しない限り、これらの化合物は、ＥおよびＺの両方の幾何異性体を含むと解釈される。同様に、全ての互変異性体もまた、含まれると解釈される。
【０１５８】
以下の表は、用途実施例で列挙された本発明の化合物の構造を規定するために提供されている。これらの表の全ての化合物は、本明細書中で記述した方法または本明細書中で提供したようにして類似の化合物について記述した方法を使用して、調製した。表中で使用する略語は、以下のとおりである：Ａｃは、アセチルであり、Ｂｎは、ベンジルであり、Ｍｅは、メチルであり、Ｅｔは、エチルであり、Ｂｕは、ブチルであり、Ｈｅｘは、ヘキシルであり、Ｐｈは、フェニルであり、Ｐｅｎｔは、ペンチルであり、Ｐｒは、プロピルであり、Ｈｅｐｔは、ヘプチルであり、４−ＣｌＰｈは、４−クロロフェニルであり、ＢＯＣは、ベンジルオキシカルボニルであり、ｃＰｅｎｔは、シクロペンチルであり、ｉＢｕは、イソブチルであり、そしてｉＰｒは、イソプロピルである。
【０１５９】
【化３１】
0004768989.tif 000021
【０１６０】
【化３２】
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【０１６１】
【化３３】
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前述の化合物に加えて、本明細書中で記述した方法を使用して、適当な出発物質を使って、以下の化合物２６１を調製した：
【０１６２】
【化３４】
0004768989.tif 000024
（有用性の例）
インビトロおよびインビボでの生物学的試験は、本発明の化合物が、リウマチ性関節炎、以下に記載するような他の炎症性疾患ならびに炎症に関連しない疾患に関する標的に対しておびただしい数の強力な生物学的活性を示すことを示した。
【０１６３】
本明細書中で使用される「炎症を処置する」とは、炎症に関する治療、および炎症応答の進展を防止するための治療の両方を言う。本発明の有効量の化合物または組成物は、温血動物（例えば、ヒト）における炎症を処置するために使用される。有効量の抗炎症剤を投与する方法は当該分野で周知であり、この方法としては吸入、経口または非経口形態の投与が挙げられる。このような投薬形態としては以下が挙げられるが、これらに限定されない：非経口の溶液、錠剤、カプセル、持続放出性インプラントおよび経皮送達システム；あるいは、フライパウダー吸入器または加圧式の複数用量吸入デバイスを使用する吸入投薬システム。一般的に、炎症の処置には経口投与または局所投与が好ましい。有害な作用を伴わない、有効レベルの薬剤を製造するように投薬量および投薬頻度が選択される。経口的に、または静脈内に投与される場合、投薬量は一般に約０．０１〜１０ｍｇ／Ｋｇ／日の投薬量の範囲である。また、鼻腔内に、または吸入によって投与される場合、投薬量範囲は、典型的には約０．０１〜１ｍｇ／Ｋｇ／日である。
【０１６４】
本発明の化合物または組成物の投与は、他の薬剤の投与と組み合せて実施され得る。例えば、関節炎に対するその効果のためにグルココルチコイドを共に投与することが所望され得る。
【０１６５】
（活性化された好中球による反応性酸素種の生成）
好中球は、リウマチ性関節炎（ＲＡ）患者の滑液における９０％を超える白血球浸潤を構成し、そして、リウマチ性関節炎および他の多くの炎症性疾患（炎症促進メディエイタ、マトリックス分解酵素および組織損傷を生じる毒性酸素ラジカルの放出による）の急性および慢性の両方の段階に寄与すると考えられる。ある提案された病原の機構は、細胞が大きな炎症促進物質（例えば、不溶性免疫複合体または関節中に存在する損傷した内皮）を貪食できないということである。結果として、好中球顆粒は、貪食細胞小胞と内部で融合するのではなく活性化の部位で原形質膜と融合し、これによって炎症促進性の反応性酸素種（ＲＯＳ）および他の毒性物質の細胞外放出が可能となる。
【０１６６】
好中球の活性化は、インビトロで生成されるＲＯＳの定量によって測定され得る。ＲＯＳの測定によって炎症促進種の特異的な定量が可能となり、これは好中球の活性化の一般的な尺度でもある。好中球によるＲＯＳ生成を測定するための最も感度の良い方法は、ルミノールで増強された化学発光である。本発明の化合物および組成物は、ＲＯＳ生成を阻害する。化合物が好中球においてＲＯＳ生成を阻害する能力を評価するために使用されるアッセイシステムは、疾患状態（リウマチ性関節炎および炎症性腸疾患が挙げられるが、これらに限定されない）に有効であり得る、抗炎症活性を示す。
【０１６７】
新たに単離した初代ヒト好中球（５×１０６細胞／ｍＬ）を、必要な濃度の化合物またはビヒクルと共に、Ｃａ２＋を含むＨＢＳＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中、３０分間、３７℃でインキュベートした。１００ｎＭのウォルトマンニンを陽性コントロールとして使用した。各サンプルのアリコートを、ルミノール（１μＭ）（Ｓｉｇｍａから入手；Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．Ａ８５１１）が添加されたマイクロタイタープレートに移した。好中球の活性化を、（１μＭ）ｆＭＬＰ（Ｓｉｇｍａから入手；Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．Ｆ３５０６）の添加によって、すぐに開始した。各ウェルからの光の発生量をマイクロプレートルミノメータで３０分間記録した。合計の光の発生量（時間経過の積分）を各ウェルについて決定した。好中球のＲＯＳ生成に対する試験薬物の阻害活性を、０．２５％のＤＭＳＯを含有し、薬物を含まないコントロール（ＲＯＳの１００％の活性化または生成）に対する％活性として表す。ＲＯＳ生成を、コントロール値の５０％まで阻害するに必要な試験化合物の濃度（ＩＣ５０）を、非線形回帰分析によって濃度−応答曲線から決定した。結果を表１に示す。
【０１６８】
表１
ＲＯＳ生成により測定された、試験化合物による好中球脱顆粒の阻害
【０１６９】
【表４】
0004768989.tif 000025
表１に示されるように、本発明の代表的化合物が、１〜１００μＭの範囲のＩＣ５０を示す。この結果は、これらの化合物が、インビトロにおいて、好中球による炎症促進の反応性酸素種の生成を強力にブロックすることを示す。この結果は、ホスホジエステラーゼの阻害および／または化学的捕獲が原因であり得る。この特性は、例えば、リウマチ性関節炎、炎症性腸障害、および乾癬におけるＲＯＳ媒介性組織損傷の確立した役割に起因する、インビボにおける抗炎症活性の前兆である。
【０１７０】
（好中球脱顆粒（ミエロペルオキシダーゼ放出））
好中球顆粒球は、顆粒として公知であるいくつかのタイプの小器官を含む。これらの非細胞体（ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ  ｂｏｄｙ）は多様なおびただしい数の殺菌剤を含み、これらの殺菌剤としては、正常な炎症応答に必須であるが、好中球が、疾患において慢性的および／または不適切に活性化される場合には急性の組織の損傷に寄与する、プロテアーゼおよび他の加水分解酵素が挙げられる。特徴的な顆粒酵素の１つは、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）であり、これは、過酸化水素の亜ハロゲン酸塩（ｈｙｐｏｈａｌｉｄｅ）への変換を触媒する。ＭＰＯは、脱顆粒の刺激時に細胞外環境へと放出され、そして好中球の活性化の信頼性のある指標である。本発明の化合物が、好中球からのＭＰＯ放出を阻害する能力を評価するために使用される以下のアッセイシステムは、抗リウマチ活性ならびに不適切な好中球の活性化が推定される他の疾患を示す。
【０１７１】
２つの管のヒト血液（１２ｍＬ）をＡＣＤ抗血液凝固管（Ｆｉｓｈｅｒ；Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．０２−６８４−２９）中に集めた。血液を、生理食塩水中６％デキストラン（４ｍＬ）と混合した。血液混合物を６０ｃｃシリンジに採取した。このシリンジを３０分間、ベンチトップ上で上向きにして叩いた。上部の血清層を、１５ｍＬの遠心分離管中の４ｍＬのＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ（Ｓｉｇｍａ；Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．１０７７−１）に重層した。この管を２０００ｒｐｍで３０分間、遠心分離した。その上清を廃棄した。ペレットを３ｍＬの冷却した蒸留水と混合し、続いて、３０秒後、１ｍＬ、６ＮのＮａＣｌと混合した。この管を１１００ｒｐｍで５分間遠心分離した。各管内のペレットを合わせ、そして１０ｍＬのＨＢＳＳ（Ｈａｎｋ’ｓ  Ｂａｌａｎｃｅ  ｏｆ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｌｔｄ；Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．ＬＭＣ７５））で２回洗浄した。これらの細胞を計数し、そして２×１０６細胞／ｍＬに希釈した。
【０１７２】
細胞（０．３ｍＬ）を予めラベルした微量遠心分離管にピペットで入れた。これらの細胞を５μｇ／ｍｌのサイトカラシンＢ、１０ｎＭのＰＧＥ２および所望の濃度の試験化合物またはビヒクル（０．５％ＤＭＳＯ）と共に３７℃で５分間インキュベートした。ウォルトマンニンまたはロリプラムを陽性コントロールとして使用した。１００ｎＭのｆＭＬＰを、コントロールを除く各管に添加した。３０分のインキュベート後、細胞を氷上に配置し、そして３分間１３，０００ｒｐｍで遠心分離した。５０μＬの上清を、９６ウェルプレート（３連）の適切なウェルにピペットで入れた。１００μＬの基質を各ウェル（０．５３ｍＭのｏ−ジアニシジン；Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．Ｄ３２５２、リン酸緩衝液（ｐＨ６．０）中０．１４７ｍＭのＨ２Ｏ２）に添加した。このプレートを３７℃で３０分間インキュベートした。反応を、５０μＬの４Ｎ  Ｈ２ＳＯ４を各ウェルに添加することによって停止させた。標準曲線を作成するために、１、０．１、０．０１、および０．００１ｍｇ／ｍＬの西洋ワサビペルオキシダーゼ（２００μＬ）をこのウェル（３連）にピペットで入れた。プレートをＥＬＩＳＡ読み取り機において４０５ｎｍで読みとった。
【０１７３】
（好中球の走化性）
走化性のプロセス（ケモカインの勾配の高い方の指向性の白血球遊走）は、炎症の病理学的な症状発現（例えば、リウマチ様の関節における悪化）関連する多数の好中球の蓄積に必須である。走化性は、好中球が血管腔から炎症部位へと遊走する主要な機構であり、従って、これは多くの炎症性疾患における好中球媒介性組織損傷に関連した共通のプロセスである。炎症した関節への好中球の遊走の特異的阻害は、リウマチ性関節炎および多くの炎症性疾患において有効な治療標的である。以下のインビボアッセイシステムは、本発明の化合物の走化性阻止能力を評価するために使用され得、インビボでの抗リウマチ活性および炎症性疾患（ここで、好中球が、関連の組織損傷に関与する）に対する活性を示す。
【０１７４】
化学誘引物質ｆＭＬＰ（１０μＭ）を含有する走化性緩衝液を走化性プレートの各ウェルに添加し、そしてフィルターを挿入し、フィルターとウェル中の走化性緩衝液との間の接触を保証した。上記の実験で決定した最大未満の濃度の化学誘引物質を使用した。自発性細胞遊走の決定に関して、特定のウェルは化学誘引物質を含まなかったが、その代わりに緩衝液のみを収容していた。新たに単離した好中球（１×１０６）を、ビヒクル（０．１２５％  ＤＭＳＯ）±試験化合物と共に３７℃で１時間インキュベートした。処置細胞およびコントロール細胞の懸濁液を次いで、緩やかに再懸濁し、そして２０μＬの細胞を各ウェルのフィルターの上面に添加した。このプレートを５％ＣＯ２下、３７℃で１．５時間インキュベートした。次いで、細胞を吸引によってフィルターの上面から除去し、そして全てのプレートを遠心分離した。このフィルターを除去し、既知濃度の細胞を未使用のウェルに添加して標準曲線を作成した。緩衝液中に調製した、ＸＴＴ（Ｓｉｇｍａ；Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．Ｘ  ４２５１）／ＰＭＳ（Ｓｉｇｍａ；Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．Ｐ７６２６）の溶液を各ウェルに添加し、そして細胞をさらに１〜２時間インキュベートし、そして４５０ｎｍで吸光度について測定した。吸光度の値を標準曲線を使用して細胞数に変換した。ＩＣ５０値は、３連で測定した、少なくとも３つの別々の実験の平均である。
【０１７５】
（コンカナバリン−Ａによって刺激された初代ヒトＣＤ４＋Ｔリンパ球におけるＴＮＦ−α産生の阻害）
活性化Ｔリンパ球は、ＴＮＦ−αを産生することが公知であり、そして炎症の局在化した領域（例えば、リウマチの滑膜、または乾癬性病巣）における、この重要な炎症メディエイタの有意な源を構成し得る。ｃｏｎＡによって刺激された初代ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞（これは、試験化合物の存在下または非存在下でインキュベートした）からの上清を、ＥＬＩＳＡシステムを使用して、ＴＮＦ−αについて分析した。（Ｐｈａｒｉｎｇｅｎ；推奨される、抗ＴＮＦ抗体セット１８６３１−Ｄおよび１８６４２−Ｄ）。かなりの量のＴＮＦ−αが、ＣｏｎＡで刺激された、ビヒクル処理Ｔ細胞において誘発された。
【０１７６】
表２に示されるように、本発明の代表的化合物は、Ｔ細胞によって誘発されたＴＮＦ−α産生を強力に阻害することができた。この結果は、ヒト全血における、ＬＰＳによって誘発されたＴＮＦ−α放出の阻害におけるこれらの化合物の低い効力とは対照的である。これは、ＴＮＦ−α産生に影響を与える調節経路に関する細胞内ｃＡＭＰの増加に対する、単球／マクロファージの感受性がＴリンパ球と比較して異なることに起因し得る。この結果は、本発明の化合物がＴＮＦ−αの産生に関与する疾患の処置に使用され得ることを示唆する。
【０１７７】
表２
ｃｏｎＡによって刺激されたヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞におけるＴＮＦ−α産生における試験化合物の効果
【０１７８】
【表５】
0004768989.tif 000026
（ヒトＴリンパ球のヘルパー機能の阻害）
（序文および理論）
リウマチ性関節炎および乾癬を含む自己免疫病因論に関する多くの免疫疾患は、炎症促進状態の開始および維持を生じる自己反応性Ｔリンパ球サブセットのＴヘルパー細胞機能における不均衡によって特徴付けられる。この不均衡は、しばしば、Ｔｈ１表現型の過剰発現および／またはＴｈ２表現型の抑制として現れる。ＩＬ−２およびＩＮＦ−γを分泌するＴ細胞は、Ｔｈ１または１型細胞として称される。これらの細胞は、マクロファージの活性化および細胞傷害性細胞経路によって、直接細胞が媒介する免疫を介して関与する。ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１０を産生する細胞は、Ｔｈ２または２型細胞と呼ばれ、体液性免疫応答を調節する。本発明の代表的な化合物は、コンカナバリンＡによって刺激された初代ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞において、インビトロで、Ｔｈ２機能よりも強力にＴｈ１機能を阻害した。従って、これらの化合物は、Ｔｈ２細胞にいずれの重大な程度まで影響を与えることなく、Ｔｈ１細胞を選択的に抑制し得、それ故、上昇したＴｈ１応答によって特徴付けられる自己免疫炎症性疾患における不均衡の補正を生じる点において、治療的価値を有し得る。
【０１７９】
初代ヒトＴ細胞についてのアッセイは、コンカナバリンＡ（ｃｏｎＡ）；（Ｓｉｇｍａ、Ｃａｔａｌｏｇ  Ｎｏ．Ｃ５２７５）によるそれらの活性化、続いて、いずれかのプロフィールについてサイトカインに関するＥＬＩＳＥ検出を含む。Ｔｈ１プロフィールの場合、ＩＬ−２およびＩＮＦ−γが基準値として使用される一方で、ＩＬ−１０はＴｈ２プロフィールについてのインジケーターである。生物学的に、これらのインジケーターは、ＩＬ−２が主要なＴ細胞マイトジェンであり、他方で、ＩＬ−１０が強力であるが選択的な免疫抑制剤を表すという点で有用である。
【０１８０】
（方法）
約６０ｃｃのヒト全血をＡＣＤ抗凝固性バキュテナー（ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ）管中に集めた。１５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ  Ｐａｑｕｅ  １０７７を、６つの滅菌コニカル管（５０ｍＬ）にアリコートした。血液（１０ｍＬ）のアリコートを、チューブを上向きに保持し、そしてピペットの先端部を管の内側縁部に当て、そして血液を管の側面に沿って下向きにゆっくり流すことによって、Ｆｉｃｏｌｌ  Ｐａｑｕｅの上部にゆっくりと積層させた。管を室温で３０分間、１７００ｒｐｍで回転させた。白血球バンド上の血漿層を吸引除去し、そしてパスツールピペットを使用して、白血球バンドを取り上げ、そしてこれを滅菌コニカル管（５０ｍＬ）に移した。各白血球勾配管からの細胞を別個の５０ｍＬコニカル管に移した。滅菌ＰＢＳ  ｐＨ７．４を、白血球バンドからの細胞を含む各コニカル管（５０ｍＬ）に添加し、容量を５０ｍＬとした。管を１０分間１１００ｒｐｍで回転させた。上清を吸引除去し、そして細胞を５０ｍＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に再び懸濁させた。管を１０分間１１００ｒｐｍで再び遠心分離した。上清を吸引除去し、そして細胞を適切な培地中に５×１０７細胞／ｍＬまたは２×１０６細胞／ｍＬで再び懸濁した。
【０１８１】
（粗リンパ球調製：）
白血球調製物からの細胞を、１０％  ＦＢＳ＋２ｍＭグルタミンを含むＢＡＳＡＬ培地（ＡｃｉｔＣｙｔｅＴＭ）またはＲＰＭＩ  １６４０中に１×１０６細胞／ｍＬの密度で再懸濁した。
【０１８２】
（ＣＤ  ４＋  Ｔ細胞調製：）
白血球調製物からの細胞を、２〜６％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充した滅菌ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に、５×１０７細胞／ｍＬの密度で再懸濁した。細胞を次いで、単離のために準備した。
【０１８３】
（ＣＤ４＋  Ｔ細胞の単離（ＳｔｅｍＳｅｐＴＭ）：）
Ｉ）免疫磁気標識：
抗体カクテル（１００μＬ；Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．１４０６２）をそれぞれのｍＬの細胞に添加し、そして十分に混合した。氷上での３０分のインキュベーション後、６０μＬの磁気コロイド（ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｃｏｌｌｏｉｄ）をそれぞれのｍＬの細胞に添加し、そして十分に混合した。氷上での３０分の最終インキュベーション後、細胞を磁気細胞分離のために準備した。
【０１８４】
ＩＩ）分離手順（重力フィード（Ｇｒａｖｉｔｙ  ｆｅｅｄ））：
サンプルをカラムの上部に充填した。ストップコックを回して、培地のフローをカラムを通して降下させ、そして培地を回収管に回収した。２〜６％のＦＢＳを補充したＰＢＳを、３カラム容量（出発サンプルの容量を含まない）が回収されるまで、カラムに添加した。細胞を洗浄し、計数し、そして１０％  ＦＢＳ＋２０ｍＭ  Ｌ−グルタミンを含むＲＰＭＩ１６４０中に１×１０６細胞／ｍＬの密度で再懸濁した。
【０１８５】
（ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＮＦαおよびＩＬ−１０アッセイ手順）
ＣＤ４＋  Ｔ細胞を上記のように単離した。細胞を、１０％  ＦＢＳ＋２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを含むＲＰＭＩ  １６４０培地（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．；Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．３６７５０）中に１×１０６細胞／ｍＬの密度で懸濁した。細胞を、試験化合物を調製している間、氷上で維持した。試験化合物を滅菌９６ウェルアッセイプレート中に、５０×最終の所望試験濃度で調製し、全てのウェルは、等量のジメチルスルホキシドビヒクルを含んでいた。５００μＬのＣＤ４＋  Ｔ細胞を、２４ウェルアッセイプレートの各ウェルに添加した。各試験化合物の作業溶液の単一のアリコート（１０μＬ）を適切なウェルに添加し；２つのウェルを刺激したコントロールおよび刺激しなかったコントロールとして残した。１０μＬのコンカナバリンＡ（５０×最終濃度）を１０μｇ／ｍＬで、刺激していないコントロールのウェルを除く各ウェルに添加した。細胞を３７℃で４８時間インキュベートした。次いで、馴化培地を、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１０が存在する量についてＥＬＩＳＡによって評価した。
【０１８６】
（結果および考察）
表３Ａ、３Ｂおよび３Ｃは、本発明の化合物の、Ｔｈ１応答またはＴｈ２応答を恐らく促進または抑制するサイトカインを阻害する能力における、本発明の化合物の効力に関する全個体のデータの一覧を示す。表３Ａ、３Ｂおよび３Ｃにおいて、１０μｇ／ｍＬのコンカナバリンＡで４８時間時刺激した末梢ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞における、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、およびＩＬ−１０の産生に対する本発明の代表的化合物の影響を示している。ＩＣ５０は、３連で実施した少なくとも３つの別個の実験の平均である。ＣＤ４＋  Ｔ細胞の単離、インキュベーション条件およびリンホカインのＥＬＩＳＡ検出は上記の方法の節で議論される。
【０１８７】
この一連の化合物のいくつかのメンバー（特にＰＤＥ４およびＰＤＥ３の両方を阻害する化合物）は、リウマチ性関節炎および他の炎症性疾患（例えば、乾癬）などに見受けられるＴｈ１細胞とＴｈ２細胞との不均衡を潜在的に直し得る、活性化されたＴ細胞のサイトカインプロフィールを誘発する。表３Ａは、ｃｏｎＡによって刺激されたＣＤ４＋選択細胞Ｔｈ１プロフィールの選択的阻害を示した、この一連の１つのメンバーの例を示す；特に。
【０１８８】
これらの化合物の絶対効力がその使用されるアナログに依存して変化する場合、その効果は、ロリプラム（Ｓｉｇｍａ；Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．Ｒ６５２０）によって示される効果とは明らかに異なる。ロリプラムは、４８時間までに、ＩＬ−２およびＩＬ−１０の両方の合成を阻害することが見出された。対して、ＩＬ−１０のｃｏｎ−Ａによる刺激は本発明のいくつかの化合物によって阻害されない。ところが、同一の上清は、減少したレベルのＩＬ−２を示す。Ｔｈ１サイトカインプロフィールの抑制は、炎症部位におけるＴｈ２細胞の増強を伴う。ＩＬ−２産生を阻害するさらなる利点は、正常な環境下で反応性Ｔ細胞をアネルギー性にし得る（すなわち、ＭＨＣ  ＩＩの情況において、ＴＣＲを介する通常のマイトジェン刺激に応答できないＴ細胞）。あるいは、これはまた、自己反応性Ｔ細胞のアポトーシスを引き起こし得る。従って、本発明の化合物が有する、このＴｈ１阻害、Ｔｈ２持続特性は、他の疾患でも特にＴｈ１媒介性疾患（例えば、リウマチ性関節炎、乾癬および炎症性腸疾患）において治療的改善を達成する可能性を提供する。
【０１８９】
表３Ａ
コンカナバリンＡによって刺激された初代ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞におけるＴｈ１プロフィールに対する試験化合物の効果
【０１９０】
【表６】
0004768989.tif 000027
表３Ｂ
コンカナバリンＡによって刺激された初代ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞における、Ｔｈ−１プロフィールに対する試験化合物の効果
【０１９１】
【表７】
0004768989.tif 000028
表３Ｃ
コンカナバリンＡによって刺激された初代ヒトＣＤ４＋  Ｔ細胞におけるＴｈ２プロフィールに対する試験化合物の効果
【０１９２】
【表８】
0004768989.tif 000029
（酸素ラジカル捕獲）
好中球および他の細胞によって産生される、酸化剤およびフリーラジカルは、リウマチ性関節炎および他の炎症性疾患の病因に寄与すると考えられる。この関与と一致して、フリーラジカルを不活化し得る化合物（抗酸化物質）は、リウマチ性関節炎および他の炎症性疾患において抗炎症活性を有する。
【０１９３】
本発明の代表的化合物は、生物学的物質の抗酸化活性を測定するために使用される標準的なインビトロアッセイにおいて、フリーラジカルの形成を阻害した。アッセイ（ＲＡＮＤＯＸからのアッセイキット：全ての抗酸化物質の状態）の基準は、サンプル中の抗酸化物質が安定なラジカルカチオンであるＡＢＴＳ＊＋に起因する色形成を抑制する能力である。色原体ＡＢＴＳ（２，２’−アジノ−ジ−［３−エチルベンズチアゾリンスルホネート］（Ｓｉｇｍａ；Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．Ａ１８８８））（６１０μＭ）を、ＤＭＳＯ中に溶解した本発明の化合物と一緒に基質溶液（ペルオキシダーゼ（メトミオグロビン）（６．１μＭ）およびＨ２Ｏ２（２５０μＭ））と共に正確に３分間、３７℃でインキュベートする。比較的安定な青緑色を有するラジカルカチオンＡＢＴＳ＊＋の生成を６００ｎｍで測定した。１００μＭの試験化合物の抗酸化活性を上記のように決定した。使用した陽性コントロールは、強力な生物学的抗酸化物質、Ｔｒｏｌｏｘ（登録商標）（６−ヒドロキシ−２．５．７．８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸）であった。試験化合物による色形成の阻害（抗酸化活性）は、陽性コントロールＴｒｏｌｏｘ（登録商標）（１００％阻害）に対して示される。これらの結果を表６に示す。このアッセイにおける色抑制は、ＡＢＳＴ＊＋ラジカルの生成阻害またはクエンチの阻害に起因し得る。
【０１９４】
表４
化合物の抗酸化活性
【０１９５】
【表９】
0004768989.tif 000030
これらの化合物の抗酸化特性はインビボにおける抗炎症活性に起因し得、そして酸素ラジカルが関与する炎症性疾患における治療有効性を有し得る。従って、本発明の化合物の抗酸化活性は、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害に加えて、抗炎症作用のさらなる機構を構成し得る。
【０１９６】
（レジニフェリトキシン（ｒｅｓｉｎｉｆｅｒｉｔｏｘｉｎ）誘導マウス耳浮腫急性炎）
炎症の主な特徴の一つは、流体の管外遊出および収集、間隙を導く血管拡大および浸透の増加により、赤色化および膨張することである。特に、リウマチ性関節炎は、病気に冒された関節の明白な浮腫により特徴付けられ、かなりの痛みおよび硬化を生じる。マウス耳炎モデルは、炎症についての標準的なインビボアッセイであり、このアッセイは、炎症媒介物によって誘導される浮腫に起因する耳の重量の増加に基づく。ＲＴＸ（レジニフェリトキシン；Ｓｉｇｍａ；カタログ番号Ｒ  ８７５６）は、植物Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ  ｐｏｉｓｏｎｉｉから単離されるジテルペンであり、そしてカプサイシンの超強力な（ｕｌｔｒａｐｏｔｅｎｔ）アナログである。ＲＴＸは、選択的に組織中の侵害受容でかつ熱過敏な神経末端を刺激し、神経原性の浮腫を誘発することによって作用する。本発明の代表的な化合物は、経口投与される場合、ＲＴＸの局所適用によって誘導される浮腫の発達を阻害した。このモデルで誘導される浮腫は、ＰＤＥ４インヒビターによって阻害され、従って、インビトロで匹敵する効果を有する試験化合物の効力を差次的にするためのインビボシステムにおいて有用である。
【０１９７】
マウス（ＣＤ１、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、群（ｎ＝５−８）に分けそしてタグ化した。経口（ｐ．ｏ．）投与のために、１００μＬのＰＥＧ−２００中の１０ｍｇ／ｋｇの試験化合物を動物に与え、次いで浮腫を、１．５時間の待機時間後０．１μｇ／耳のＲＴＸを使用して誘導した。浮腫誘導後、マウスを屠殺し、そして耳組織の標準ディスクを取り出した。組織の各ディスクを、即座に１ｇの１／１０近くまで計量した。データを各左耳と右耳との違いを解釈し、そして平均＋／−ＳＥＭを計算することで分析した。統計学的な重要性を、コントロール群対実験群の左耳／右耳の重量の差における２個のサンプルのｔ−検定により試験した。
【０１９８】
表５
試験化合物の経口投与によるレジニフェリトキシン誘導マウス耳浮腫の阻害
【０１９９】
【表１０】
0004768989.tif 000031
（環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼの阻害）
（ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ４の阻害）
好中球、内皮細胞、マクロファージ、好酸球、好塩基球、Ｔ−リンパ球などのような炎症に含まれる細胞中のｃＡＭＰの上昇は、一般的に、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）の発現を阻害するような炎症サイトカインプロフィールのダウンレギュレーションを導く。抗炎症性サイトカインインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）発現は、炎症部位の多くの細胞において、ｃＡＭＰによってポジティブに制御される。細胞中のｃＡＭＰの低下は、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）により影響を受けるので、これらの酵素に対する特定のインヒビターが重要である。このような化合物は、特異的に阻害するＰＤＥイソエンザイムを発現する細胞において、細胞内ｃＡＭＰを上昇させる効力を有する。少なくとも９個の異なる環状ヌクレオチドＰＤＥのファミリーが存在するが、ＰＤＥ４ファミリーが特に重要である。このことは、炎症応答に影響を及ぼす重要な細胞のタイプの多くが、他のＰＤＥに対して優位にＰＤＥ４を発現するからである。ロリプラムのようなＰＤＥ４インヒビターは、好中球および好酸球のような炎症細胞においてｃＡＭＰを特異的に上昇させ、そしてこれらの炎症表現型をクエンチすることが示されている。望ましくは、治療的に有効なＰＤＥ４インヒビターは、胃酸分泌、嘔吐およびＣＮＳ作用の誘発を含む最小の副作用を有する。有害な副作用がないＰＤＥ４インヒビターは、喘息、炎症性腸管疾患、リウマチ性関節炎、乾癬および同種移植、その他を含む疾患のための抗炎症治療薬の新しい世代として大きな期待を保持する。
【０２００】
本発明の化合物を、哺乳動物の環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ（ＰＤＩ  １〜５と呼ばれる）の主なクラスの５に対する活性についてスクリーニングした。ＰＤＥ５は、基質としてｃＧＭＰを使用するが、ＰＤＥ１〜４は、ｃＡＭＰを使用する。幅広く特異的なＰＤＥインヒビター３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ；Ｓｉｇｍａ；カタログ番号１７０１８）を、全てのアッセイにおいてポジティブコントロールとして使用した。様々なアッセイに対してＰＤＥを、部分的に、以下の細胞／組織から精製した：ＰＤＥ１（ウシの心臓）、ＰＤＥ２（ヒトの血小板）、ＰＤＥ３（ヒトの血小板）、ＰＤＥ４（ヒトの前単球Ｕ９３７細胞）およびＰＤＥ５（ヒトの血小板）。
【０２０１】
化合物１２は、それぞれ、８９μＭ、４５μＭおよび５．９μＭのＩＣ５０を有するＰＤＥ１、３および４を阻害することが見出された。ＰＤＥ２および５に対する有意な炎症効果は存在しなかった。従って、化合物１２は、ＰＤＥ４に対して、有意な活性および選択性を示し、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼは、炎症性細胞において優位性を示した。本発明の化合物は、自己免疫疾患、炎症性疾患、または任意の疾患において治療的有用性を提供し得、この障害に関与する炎症性細胞を発現するＰＤＥ４中の細胞内ｃＡＭＰの上昇により、炎症性表現型のダウンレギュレーションを導く。
【０２０２】
Ｕ９３７細胞質抽出物を、溶解緩衝液（２０ｍＭのＴｒｉｓ  Ｃｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、５ｍＭのβ−メルカプトエタノール、１μＭのペプスタチン、１μｇ／ｍＬのロイペプチン、１ｍＭのベンズアミンおよび０．１ｍＭのＰＭＳＦ）中のＵ９３７細胞（ＡＴＣＣ：カタログ番号ＣＲＬ−１５９）を超音波処理することにより調製した。次いで、超音波処理した細胞抽出物を、７０，０００ｇで３０分間遠心分離し、上清を取り除いた。スクロースを０．２５Ｍの最終濃度で添加し、アリコートし、そして−８０℃で保存した。
【０２０３】
ＰＤＥ反応を、１μＭ［３Ｈ］ｃＡＭＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｗｅｂｓｉｓｔｅ  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｐｂｉｏｔｅｃｈ．ｃｏｍ）、０．５Ｕ／ｍＬの５’ヌクレオチダーゼ（Ｓｉｇｍａ）、５０ｍＭのＴｒｉｓ  Ｃｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ  ｐＨ７．５（２０μＬ体積）中で３７℃で３０分間実施した。Ｕ９３７抽出物を、基質の１０％未満が消費されるように添加した。試験化合物またはビヒクルを、所望の濃度まで添加した。典型的に、化合物を１００μＭから１ｎＭの範囲の６個の１０倍希釈溶液で試験した。反応を、二連で実施した。反応を、１樹脂：２メタノール：１Ｈ２Ｏの比である２００μＬのＤｏｗｅｘ  １−８  ４００Ｃｌ−アニオン交換樹脂を添加することにより終了させた。サンプルをインバージョン（ｉｎｖｅｒｓｉｏｎ）により混合し、次いで、２〜３時間静置した。６５μＬのアリコートを取り出し、Ｌｕｍａｐｌａｔｅ（Ｐａｃｋａｒｄ；カタログ番号６００５１６５）上で乾燥させ、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎカウンター（ＴｏｐＣｏｕｎｔＴＭ）で１．５分かけて計数した。
【０２０４】
表６は、ヒト前単球細胞株Ｕ９３７から単離したＰＤＥ４に対する、本発明の化合物の阻害活性を示す。本明細書中で記載されるＰＤＥ４アッセイ条件を利用すると、典型的なＰＤＥ４インヒビター（例えば、ＲｏｌｉｐｒａｍおよびＲｏ−２０−１７２４（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ：カタログ番号５５７５０２）により、文献（Ｓｃｈｕｄｔら（１９９６）によって総説される）に見出される値と同じＩＣ５０値が得られた。さらに、ＰＤＥ１、３および４を阻害するＩＢＭＸ（Ｓｉｇｍａ；カタログ番号１７０１８）を使用しても、Ｕ９３７細胞中で優位なＰＤＥは、ＰＤＥ４であるという発見と一致したが、任意のさらなる阻害（データは示さず）を示さなかった。
【０２０５】
細胞内ｃＡＭＰおよびタンパク質キナーゼＡの活性化を引き続て上昇させるＰＤＥ４（またはより正確には、ＰＤＥ４の特異的イソ型）の阻害が、炎症性疾患または自己免疫性疾患での治療的標的である（ここで、関連する原因細胞または組織が、このＰＤＥイソ型を優位に発現する）。リウマチ性関節炎に関して、このＰＤＥ４インヒビターロリプラムは、ラットにおけるコラーゲン誘発関節炎のような疾患の動物モデルにおいて、活性であることをが示された（Ｎｙｍａｎら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０８（３）、４１５−４１９、１９９７）。
【０２０６】
表６
ヒトＵ９３７細胞由来のｃＡＭＰホスホジエステラーゼ４の阻害
【０２０７】
【表１１】
0004768989.tif 000032
（ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ３の阻害）
本発明の化合物を、ＰＤＥ４阻害およびＰＤＥ３阻害が分離可能であるか、そしてまたファルマコフォアがそれぞれ必要とされるかどうかを確認するために、ヒト血小板ＰＤＥ３に対する阻害活性を評価した。合わせたＰＤＥ４／３インヒビターは、原因細胞／寄与細胞タイプ（例えば、関節炎、炎症性腸管疾患、乾癬および同種移植のような炎症性疾患におけるＴ細胞）がＰＤＥ４およびＰＤＥ３の両方を発現する疾患における治療剤として特に有効であり得る。このような疾患において、合わせたＰＤＥ３／４インヒビターは、ロリプラムのような選択的ＰＤＥ４インヒビターに勝る利点を有し得る。
【０２０８】
血小板細胞抽出物を、Ｕ９３７細胞について上記のように調製した。ＰＤＥ３アッセイを、ＰＤＥ４アッセイについて上記のような血小板抽出物を使用して実施した。血小板は、ＰＤＥ２、３および５を含む。しかしＰＤＥ２および５は、優先的に、ｃＧＭＰを利用するので、基質としてｃＡＭＰを用いるアッセイにおいて、ｃＧＭＰは検出されない。さらに、このアッセイにおいて使用される条件下で、ロリプラムは効果がなく、公知のＰＤＥ３インヒビタートレキンシン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ；カタログ番号３８２４２５）は、強力なインヒビターである（アッセイによりＰＤＥ３に対して特異的であることを確認）。
【０２０９】
表７は、ＰＤＥ３の阻害に対する本発明の化合物のＩＣ５０を示す。ＰＤＥ３およびＰＤＥ４の活性は分離可能であるようであり、そしてこの化合物は、ＰＤＥ４対ＰＤＥ３に対して幅広い範囲の選択性を示す。いくつかの化合物は、ＰＥＤ４に対して特異的であり、いくつかの化合物は、ＰＤＥ４およびＰＤＥ３に対してより効力があり、そしていくつかの化合物は、ＰＤＥ４およびＰＤＥ３に対してほぼ等しい効力である。従って、本発明の化合物は、異なる細胞タイプに対して最大の効力が可能となるようにＰＤＥ４／３の選択性について選択され得る。
【０２１０】
表７
ヒトの血小板由来のｃＡＭＰホスホジエステラーゼ３の阻害
【０２１１】
【表１２】
0004768989.tif 000033
（ＰＤＥイソザイムの特異性）
本発明の化合物は、以下のアッセイによってＰＤＥアイソザイム特姿勢について試験され得る。試験化合物（１００μＭ）を、ＭＤＳ  Ｐａｎｌａｂｓ（Ｂｏｔｈｅｌｌ、ＷＡ、ＵＳＡ）で実施される標準生化学方法を使用して、ＰＤＥ１、２および５に対する活性をスクリーニングした。幅広く特異的なＰＤＥインヒビター３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）を、全てのアッセイにおいてポジティブコントロールとして使用した。様々なアッセイについて、ＰＤＥを、以下の細胞／組織から部分的に精製した：ＰＤＥ１（ウシの心臓）、ＰＤＥ２（ヒトの血小板）およびＰＤＥ５（ヒトの血小板）。
【０２１２】
（ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ４においてロリプラムの高親和性結合部位（ＨＡＲＢＳ）との置換）
吐気および嘔吐を含む所望されない副作用を有さないホスホジエステラーゼ４インヒビターが必要とされている。動物モデルによると、この活性は、［３Ｈ］−ロリプラムを高親和性結合部位（脳および中枢神経系（ＣＮＳ）内の細胞由来）と置換する化合物の能力に高度に関連してることが示された［Ｄｕｐｌａｎｔｉｅｒ  １９９６、Ｂａｒｎｅｔｔｅ  １９９６］。高親和性ロリプラム結合部位（ＨＡＲＢＳ）置換アッセイを使用して本発明の化合物の催吐効力を予想する。本発明の代表的な化合物は、ＰＤＥ４のＨＡＲＢＳ型に対して低い親和性を示し、このことにより、これらの化合物が、ロリプラムのような第１世代のＰＤＥ４インヒビターに関連する、機構に関連した副作用によって悩まされないことが示唆された。
【０２１３】
メスのＣＤ１マウスを、１００μＬのエタノールの腹腔内注射を介して屠殺し、そしてこの脳組織を、１．２ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのベンズアミン（Ｓｉｇｍａ；カタログ番号Ｂ６５０６）および０．１ｍＭのＰＭＳＦ（Ｓｉｇｍａ；カタログ番号Ｐ７６２６）を補充した５ｍＬの氷冷Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．００）中で均質化した。懸濁液を、３０，０００×Ｇ、４℃で２回遠心分離にかけ、そして上清を廃棄した。このペレットを、緩衝液中で再懸濁させ、タンパク質の濃度を０．５ｍｇ／ｍＬに調整した。試験される薬物をＤＭＳＯに溶解し、そして１〜３０，０００ｎＭの濃度範囲で９６ウェルマイクロプレートに３連でピペットで移した。１０ｍＬの膜調製物に、ＤＭＳＯ（１００μＬ）中の０．２３５μＭ［３Ｈ］−ロリプラムを補充し、１００μＬをマイクロプレートの各ウェルに分配した。このプレートを、４℃で１時間インキュベートした。このプレートの内容物を、Ｗｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｃ  フィルタープレートを介して吸引し、そして４×２００μＬの氷冷緩衝液でリンスした。このプレートを、一晩乾燥し、３０μＬのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ２０（Ｐａｃｋａｒｄ；カタログ番号６０１３６２１）を各ウェルに添加し、そしてプレートを、シンチレーションカウンターで、２分／ウェルのサンプリング時間で読んだ。非特異性結合を示す値（２０μＭのロリプラムを使用して得られる数によって規定される）を、全データポイントから減算した。３連での測定を、各濃度で実施した。結果を表８に示す。ＰＤＥ４：ＨＡＲＢＳは、触媒活性を阻害するのに必要とされるＩＣ５０濃度と、５０％のロリプラムを高親和性結合部位の５０％と置換するのに必要とされる濃度の比を示す。
【０２１４】
これらのアッセイ条件の下で、約１０ｎＭのＩＣ５０を有するマウスの脳において、ロリプラムは、３Ｈ−ロリプラムを、高親和性結合部位で置換することが可能である（データは示さず）。従って、ロリプラムは、ＰＤＥ４触媒活性の半分の最大阻害に必要とされる濃度より、高親和性部位に対して２０〜４０倍の高い親和性で結合する。この触媒型に勝るＨＰＲＢＳに対する優先的親和性が、第１世代ＰＤＥ４インヒビターのネガティブ副作用；すなわち嘔吐およびＣＮＳ効果に関連した。
【０２１５】
表８に示したデータは、試験化合物が、ロリプラムよりもこの部位への結合においてより低い効力があることを示す。例えば、ロリプラムおよび化合物２３４は、ＰＤＥ４（それぞれ、２８０および２６０ｎＭ）の触媒活性に対して非常に類似したＩＣ５０を有するが、しかし、それらのＨＡＲＢＡ活性は、それぞれ、１０ｎＭおよび２５０ｎＭである。従って、化合物２３４は、ＰＤＥ４のＨＡＲＢＳ型との相互作用について、ロリプラムよりも約２８倍低い効力がある。ロリプラムおよび化合物２３４について、ＰＤＥ４（触媒）対ＰＨＥ４ＨＡＲＢＳのＩＣ５０比は、それぞれ２８および１．２である。化合物２３４についてのこの比は、ＨＡＲＢＳ活性をＳＡＲ効果を介して減少させる第２世代のＰＤＥ４インヒビターについて報告される値と非常によく匹敵する。例えば、この比は、ＳＢ２０７４９９（Ａｒｉｆｌｏ）およびＲＰ７３４０１（ｐｉｃｌａｍｉｌａｓｔ）に報告されており、喘息についてフェイズＩＩトライアルで試験した２種の特異的ＰＤＥ４インヒビターは、それぞれ１および３である。従って、本発明の化合物は、ロリプラム、Ｒｏ２０−１７２４または他の第１世代ＰＤＥ４インヒビターよりもかなり低いインビボ催嘔吐性効果を示し得る。
【０２１６】
表８
マウスの脳におけるＰＤＥ４の高親和性ロリプラム結合部位についての試験化合物の親和性
【０２１７】
【表１３】
0004768989.tif 000034
（ヒトＵ９３７単球細胞中のフォルスコリン誘導ｃＡＭＰ応答因子ルシフェラーゼ活性の増強）
インタクトな細胞においてｃＡＭＰを上昇させる本発明の化合物の能力を実証するために、ルシフェラーゼレポーター遺伝子（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ；Ｐａｔｈ  ＤｅｔｅｃｔＴＭ：カタログ番号２１９０７６）の発現を駆動するプロモーターにおいて、ｃＡＭＰ応答因子（ＣＲＥ）を含むプラスミド構築物としての細胞のトランスフェクションを使用して、ルミノメーターでの光の出力の検出を介して細胞内ｃＡＭＰレベルの感受性のモニタリングを可能にした。ＰＤＥインヒビターおよびアデニリルシクラーゼアゴニスト（レセプターまたは細胞内活性化因子）の組み合わせを提供する化合物を用いる、トランスフェクトした細胞の薬理学的処理により、上昇した光の出力から検出可能な上昇した細胞内ｃＡＭＰレベルを得た。ｃＡＭＰ  ＰＤＥ４は、Ｕ９３７細胞において優れた環状ヌクレオチドヌクレオチドホスホジエステラーゼ活性であることが示され、それ故、ＣＲＥルシフェラーゼ構築物を用いてトランストランスフェクトされるこの細胞タイプは、ＰＤＥ４抑制活性を有する化合物について、従来の細胞スクリーニングアッセイとして有用であり得る。このことより、本発明の化合物は、アデニルイルシクラーゼ活性因子フォルスコリンで処理されるＵ９３７細胞において、増強ルシフェラーゼ発現を提供することが示された。
【０２１８】
ヒト−プロ単球Ｕ９３７細胞を、１０％のＦＣＳおよび２ｍＭグルタメートを含むＲＰＭＩ培地中に維持した。Ｕ９３７細胞を、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ第１７巻（６）：１０５８、１９９４に記載されるように、過渡的にトランスフェクトした。簡単には、細胞を、血清を含む培地中で、５×１０６細胞／ｍＬの密度まで増殖させ、次いで約１×１０７細胞／ｍＬの密度で血清を含む培地中に再懸濁した。４００μＬの細胞を、４０μＬの容量のＨ２Ｏ中に１０μＬのレポーターベクター（ｐＣＲＥ−ｌｕｃ）を含むエレクトロポレーションキュベットに移した。レポーターベクターＤＮＡを、製造者の指示により、ＤＮＡエンドヌクレアーゼを含まないキットを使用してＤＨ５  α  Ｅ．ｃｏｌｉより調製した。Ｕ９３７細胞を、室温でＢＩＯＲＡＤエレクトロポレーターを使用してエレクトロポレートした。キャパシタンスを１０５０μＦに設定し、そして電圧を２８０Ｖに設定した。この時定数を、各エレクトロポレーション後に記載した。次いで、細胞を４ｍＬの培地および血清中に溶解し、そして２００μＬの細胞をウエルごとにプレートした。細胞を、１６〜１８時間で回収した。次いで、３７℃で４時間、１０μＭのフォルスコリンの存在下または非存在下で、細胞を試験化合物またはビヒクルで処理した。
【０２１９】
ルシフェラーゼアッセイを、製造者の指示により実施した（Ｔｒｏｐｉｘ）。簡単に、細胞を４分間１２００ｒｐｍで遠心分離し、そして培地の上清を取り除いた。細胞ペレットを、１５μＬのＬｙｓｉｓ緩衝液（Ｔｒｏｐｉｘ）中に溶解した。ルシフェラーゼアッセイを、１０μＬの緩衝液Ａおよび２５μＬの緩衝液Ｂとともに１０μＬの細胞溶解物を使用して実施した。ルシフェラーゼ活性をルミノメーターを使用して、五秒の遅延、続いて１０秒の読み込時間で得た。
【０２２０】
表９に示すように、本発明の代表的な化合物は、１０μＭのフォルスコリンで処理したＵ９３７細胞中のルシフェラーゼ活性の誘導を増強する。試験化合物自体は、これらの細胞において低い基底アデニルイルシクラーゼ活性を示す有意なルシフェラーゼ活性を誘導しなかった。この結果は、これらの化合物が、酵素アッセイにおける観察と一致して、ＰＤＥ４を優先的に発現する細胞株において、ｃＡＭＰレベルを上昇させることが可能であることを実証する。
【０２２１】
インビトロＰＤＥ４阻害活性とＣＲＥルシフェラーゼ誘導効力との間に幅広い相関が存在する。
【０２２２】
ＣＲＥルシフェラーゼアッセイまたはその改変物（異なる細胞タイプまたは構築物特性）は、本発明の化合物の効力最適化のためのインビトロＰＤＥ４酵素アッセイに対して、従来の細胞ＳＡＲバックアップ／バリデーションアッセイとして有用である。
【０２２３】
表９
アデニルイルシクラーゼ活性因子フォルスコリンと共に同時インキュベートするＵ９３７細胞中における、試験化合物によるＣＲＥ−ルシフェラーゼ活性の増強
【０２２４】
【表１４】
0004768989.tif 000035
（本発明の化合物の、形質転換した細胞増強抗癌活性の増殖に対する効果）
（導入）
ＢＣＲ−ＡＢＬ形質転換骨髄性白血病由来細胞株Ｋ−５６２（ＡＴＣＣ；カタログ番号２４３）を使用して、本発明の化合物が、形質転換した細胞の増殖にどのように影響を与えるかを決定し得る。細胞内のｃＡＭＰを上昇させることは、特に、特定のクラスの白血病（例えば、ＣＬＬ）において、多数の悪性腫瘍の細胞周期の阻止またはアポトーシスを導く１方法である。このような細胞内機構（すなわち、ｃＡＭＰ）により、非分化の白血病クローンの分化を引き起こすことが報告されている。特に、ｐ２１０ＢＣＲ−ＡＢＬ形質転換骨髄性白血病細胞中の細胞内ｃＡＭＰの上昇（環状ＡＭＰアナログを使用する）は、サイクリン依存性キナーゼ４の阻害、引き続くｃ−ｍｙｃのダウンレギュレーションを介して抗増殖性であることが示されている。従って、培養したＫ−５６２細胞中の本発明の化合物の抗増殖性の能力を、３Ｈチミジン取り込みアッセイを使用して、いくつかの標準ホスホジエステラーゼと比較された。
【０２２５】
（方法）
Ｋ５６２細胞（ヒト慢性骨髄性白血病細胞）（９０μＬ）を、１０％  ＦＢＳ／２ｍＭのＬ−グルタミンを補充したＲＰＭＩ１６４０中で、１×１０５細胞／ｍＬの密度で滅菌９６ウエルアッセイプレートに播種した。試験されるべきサンプルを、所望される最終濃度の１０倍で滅菌９６ウエルアッセイプレートに調製した。全サンプル希釈液は、使用される最も高いサンプル濃度における％ＤＭＳＯを補正するために等しい量のＤＭＳＯを含んだ。試験化合物の９種の濃度を、１００μＭの最大濃度まで増殖の効果について試験した。１０μＬのサンプルおよびコントロール（ＤＭＳＯ／正常な増殖コントロール）をアリコートの細胞に添加した。この細胞を、３７℃／５％のＣＯ２で４８時間インキュベートした。４８時間のインキュベーションに続いて、２０μＬの３Ｈ−チミジンを、１μＣｉ／ｍＬの最終濃度のために各ウエルに添加した。次いで、この細胞を３７℃／５％のＣＯ２で４〜６時間インキュベートした。チミジンを加えた４〜６時間後、プレートをプラスチックでラップし、一晩−２０℃のフロストフリーフリーザで凍結した。細胞を回収し、そして３Ｈ−チミジンの数を測定した。細胞毒性と細胞分裂停止活性とを区別するために、増殖曲線を準備し、細胞の播種密度の平均ＣＰＭ値を、４８時間後に得られる最大増殖に対する平均ＣＰＭと同じ曲線上にプロットする（ＤＭＳＯ増殖コントロール細胞）。この細胞を、７．８×１０３細胞／ｍＬ〜２×１０６細胞／ｍＬの範囲の濃度について１：２で希釈する。各細胞希釈液の９０μＬをプレートした滅菌９６ウエルアッセイに播種し、そして３Ｈ−チミジンを添加する前に約４時間、３７℃／５％のＣＯ２で平衡化する。Ｋ５６２細胞を、１０％  ＦＢＳ／２ｍＭのＬ−グルタミンで充填したＲＰＭＩ１６４０中１×１０５細胞／ｍＬで９６ウエルプレートに播種した。種々の濃度の試験化合物またはビヒクル（ＤＭＳＯ）を添加し、そしてこの細胞を３７℃／５％ＣＯ２で４８時間インキュベートする。次いで、この細胞に３７℃／５％のＣＯ２で４〜６時間かけて１μＣｉ／ｍＬの３Ｈ−チミジンを加える。ＤＮＡに取り込まれた放射能を、ガラスファイバーフィルター上に回収してシンチレーション計数した後に測定する。
【０２２６】
（特定の動物モデルにおける、炎症性疾患および自己免疫の効力）
特定の疾患モデルにおける概念試験の証拠を、本発明のラクトンおよびラクタム化合物の酵素的活性、細胞活性、および一般的な抗炎症活性をさらに実証するために、動物において証明した。文献の試験により、ホスホジエステラーゼインヒビター、アデニリルシクラーゼアクチベーター、またはその両方の投与による細胞内ｃＡＭＰの増加が、炎症性疾患の様々な動物モデルにおいて、確立した疾患を減少させ得、および／または疾患の発生を予防し得ることが示された。本発明の化合物の効力を、クローン病、リウマチ性関節炎、および移植拒絶の動物モデルにおいて、実証し得る。クローン病に関しては、確立された前臨床モデルを使用した；ラットにおけるトリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）誘導大腸炎。リウマチ性関節炎については、マウスにおけるコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）を利用し得る。ヒトの移植拒絶を模倣するために、マウスの尾の皮膚の同種移植片移植モデルを使用し得る。
【０２２７】
（炎症性腸疾患（クローン病））
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）とは、現在は不治の、胃腸管の慢性的な変動する炎症性疾患についての包括的な用語であり、クローン病および潰瘍性大腸炎を含む。これらの障害の症状には、状態が進行するに従って、直腸出血を伴う腹痛（通常、腹の右下部における）および下痢、ならびに体重減少および熱が挙げられる。ＩＢＤの病因は未知であるが、疫学的試験は、疾患と、子宮内または生後間もなくのウイルス感染（特に、麻疹）との間の関連を示唆する。Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ａｎｄ  Ｃｏｌｉｔｉｓ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ（ＣＣＦＡ）は、合衆国の百万〜２百万人の人が、クローン病および関連するＩＢＤに罹患しており、欧州の血統の人の方がより危険な状態であると推定する。罹患率は、それ（クローン病）が最初に記載されて以来６０年間で、顕著に増加した。合衆国のみにおいて、これらの疾患の経済的費用は、年間１．８〜２．６億ドルであると推定されている。
【０２２８】
ＩＢＤの通常の処置は、５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）（これは、開裂してＡＳＡ（活性薬物）となるＮＳＡＩＤ誘導体である）を、下部胃腸管に、経口的にまたは結腸内に投与する工程から構成される。ＩＢＤの他の主要な処置には、コルチコステロイドおよび免疫抑制剤（例えば、６−メルカプトプリンもしくはアザチオプリン）、またはこれらの組合せが挙げられる。最近、抗ＴＮＦ−α治療が、従来の治療に対して抵抗性のいくつかのクローン病の処置のために、認可された。この治療アプローチは、ＩＢＤにおける腫瘍壊死因子の重要性を確認する。抗ＴＮＦαアプローチを用いてさえ、現在の処置の使用法（ｍｏｄａｌｉｔｙ）には、副作用と効力との両方の観点から、改善する余地が大いにある。
【０２２９】
本発明の化合物を、ラットにおけるトリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）誘導大腸炎モデル（Ｍｏｒｒｉｓら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ９６：７９５〜８０３、１９８９；Ｋｉｍ，Ｈ．−Ｓ．およびＢｅｒｓｔａｄ，Ａ．、Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２７：５２９〜５３７、１９９２；Ｗａｒｄ，Ｌａｎｃｅｔ  ｉｉ：９０３〜９０５、１９９７；ならびにＳｈｏｒｔｅｒら、Ａｍ．Ｊ．Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．１７：１０２４〜１０３２、１９７２）で試験し得る。この特定のＩＢＤモデルの利点には、以下が挙げられる：（ａ）そのラットにおける疾患の発生が、ヒトの疾患の場合に考えられるような重要な役割を果たすＴｈ１  Ｔ細胞によって、免疫的に媒介されること、（ｂ）ＴＮＢＳの単一の点滴注入が、一貫した重篤度および存続の疾患を誘導すること、（ｃ）このモデルが安価であること、（ｄ）炎症の長い持続期間（８週間まで）、（ｅ）大腸炎が再活性化された、モデルの改変が、ヒトの疾患の再発性／軽減性特徴を模倣すること、（ｆ）病変が、組織病理学的に、ヒトのものと類似すること、（ｇ）臨床的病理学が、ヒトの疾患（壊死、潰瘍の形成、顆粒球浸潤、腸の水腫、下痢および癒着を含む）を模倣すること、ならびに（ｈ）ヒトＩＢＤの処置に使用される多くの薬物が、ＴＮＢＳモデルにおいて活性であること。胃腸の炎症のＴＮＢＳラットモデルは、受け入れられたヒトＩＢＤ用の前臨床モデルである。疾患の臨床的および組織学的発現は、ヒトの疾患との良好な類似性を示し、そしてヒトにおけるＩＢＤの処置のために現在使用されている多くの薬物は、このモデルにおいて効力を有する。このモデルにおける本発明の化合物の効力は、この化合物が、ヒトの炎症性疾患（とりわけクローン病および潰瘍性大腸炎が挙げられる）の治療において使用され得ることを示唆する。
【０２３０】
（リウマチ性関節炎）
（導入および原理）
マウスにおけるコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）モデルは、ヒトのリウマチ性関節炎において活性の、可能な薬物の活性を推定するために適切なモデルである（Ｔｒｅｎｔｈａｍ，Ｄ．Ｅ．、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．２５：９１１〜９１６、１９８２；Ｂｒａｈｎ，Ｅ．、Ｃｌｉｎ．Ｏｒｔｈｏｐ．２６５：４２〜５３、１９９１；Ｈｏｌｍｄａｈｌ，Ｒ．ら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．２９：１０６、１９８６）。これは、ヒトの疾患の特質（ｈａｌｌｍａｒｋ）と確認された、多くの分子変化、細胞変化および組織学的変化を共有する；これらには、以下が挙げられる：（ａ）関節の滑膜を構成する細胞の、明白な増殖、（ｂ）侵襲性のパンヌス様組織の形成、（ｃ）マクロファージ浸潤、顆粒球浸潤、およびリンパ球浸潤、ならびに（ｄ）骨および軟骨の崩壊。リウマチ性関節炎と同様に、ＣＩＡを患う動物は、免疫グロブリン複合体（例えば、リウマチ因子（ＲＦ）および抗コラーゲン抗体）ならびに活膜における炎症性サイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α））の、上昇した血清レベルを示す。さらに、滑膜におけるＭＨＣクラスＩＩ拘束Ｔヘルパー細胞活性化／クローナル拡大の包含が、実証されている。影響を受けた関節のＸ線写真は、ヒトＲＡにおいて見られる変化に類似のびらん性変化をしばしば示し、そして進行中の関節炎は、ＲＡ様の関節変形および機能不全をしばしばもたらす。さらに、ヒトの疾患の症状を減少させる多くの化合物（例えば、抗ＴＮＦ生物製剤、コルチコステロイドおよびＤＭＡＲＤＳ）は、この動物モデルで効力がある。ＣＩＡモデルにおける疾患の発生／進行は、免疫（初期）相および炎症性相の両方で起こり、従って、様々な薬理学的形態および作用を有する、広範な薬物を評価することが可能となる。
【０２３１】
（移植拒絶）
インビトロ試験：  ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化、分化、および機能：
（方法）
ＡＮＤ−ＴＣＲトランスジェニックマウス（Ｋａｙｅ  Ｊ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：７４６〜７４９、１９８９）を使用して、刺激されていない（ｎａｉｖｅ）抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞の供給源を提供した。ＡＮＤ−Ｔ細胞抗原レセプターは、Ｉ−ＥｋクラスＩＩ  ＭＨＣ分子に関連して、ハトシトクロムＣ（ｐｃｃ）から誘導されるペプチドを認識する。
【０２３２】
刺激されていないＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化および増殖における、試験化合物の役割を試験するために、１×１０５のＡＮＤ−リンパ節Ｔ細胞を、１×１０６の照射Ｂ１０．ＢＲ脾臓細胞と共に、様々な濃度のｐｃｃペプチド（０〜１０μＭ）の存在下で、９６ウェルプレートで培養する。増殖を、３Ｈチミジン取り込みによって、評価した。全てのアッセイ条件で、３回行う。Ｔ細胞の細胞表面活性化の表現型を、フローサイトメトリ分析によって評価する。
【０２３３】
刺激されていないＣＤ４＋Ｔ細胞の、Ｔｈ１およびＴｈ２細胞系列への分化を、以下のように実施する：１×１０５のＡＮＤ−リンパ節Ｔ細胞を、１０７のＢ１０．ＢＲ照射脾臓細胞と共に、以下で補充された２ｍｌの培養培地中で培養する：Ｔｈ１細胞分化については、１００Ｕ／ｍＬのＩＦＮγ、２５Ｕ／ｍＬのＩＬ２および１０μｇ／ｍＬの抗ＩＬ４；Ｔｈ２細胞分化については、１５０Ｕ／ｍＬのＩＬ４、２５Ｕ／ｍＬのＩＬ２および１０μｇ／ｍＬの抗ＩＦＮγ。３〜４日後に、これらのウェルを、同一の増分で１：４に分割する。７日後に、細胞を収穫し、そして３回洗浄して、補充物中のサイトカインを除去する。培養細胞（１×１０５）を、サイトカインを全く添加されていない２５０μｌの培養培地中の５×１０５の照射Ｂ１０ＢＲ脾臓細胞＋５μＭのｐｃｃペプチドで、再刺激する。４０時間後に上澄みを収穫し、そしてＩＬ２、ＩＬ４およびＩＮＦγについて、ＥＬＩＳＡによって評価する。試験化合物を、この培養の分化の間中、添加する。
【０２３４】
試験化合物の非存在下で生成した、培養Ｔｈ１細胞およびＴｈ２細胞を、化合物の存在化での抗原刺激の間に、上述のように、増殖およびサイトカイン活性について、試験する。
【０２３５】
インビトロ試験：  ＣＤ８  Ｔ細胞の活性化、分化および機能
（方法）
２Ｃ−ＴＣＲトランスジェニックマウス（Ｓｈａ  Ｗ．Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３５：２７１〜２７４、１９８８）を使用して、刺激されていない抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の供給源を提供する。２Ｃ−Ｔ細胞抗原レセプターは、ＤｂクラスＩ  ＭＨＣ分子に関連して、ミトコンドリアαケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ酵素から誘導される２Ｃペプチドを、認識する。
【０２３６】
刺激されていないＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化および分化における、試験化合物の効力を試験するために、２Ｃリンパ節（ＬＮ）Ｔ細胞の単一細胞懸濁物を、２Ｃ−ＴＣＲトランスジェニックマウスから単離する。２Ｃ−Ｔ細胞を、様々な濃度（０〜１０μＭ）の２Ｃペプチドの存在下で、照射ＴＡＰ−／−Ｈ−２ｄ脾臓細胞またはＬｄトランスフェクトＴＡＰ−／−Ｔ２細胞株で刺激する。分化を、３Ｈチミジン取り込みによって評価する。Ｔ細胞の細胞表面活性の表現型を、フローサイトメトリ分析によって実施する。
【０２３７】
細胞傷害性Ｔ細胞を、２Ｃ−Ｔ細胞の照射Ｈ−２ｄ脾臓細胞による活性化によって、生成した。細胞を、２５Ｕ／ｍＬのＩＬ２の存在下で、７〜１０日間培養する。培養細胞の細胞傷害性キラー活性を、Ｃｒ５１放出アッセイによって、Ｔ２−Ｌｄ標的細胞を使用して、様々な濃度の２Ｃペプチドの存在下で、試験する。刺激されていないＣＤ８＋Ｔ細胞の、細胞傷害性キラー細胞への分化に対する、試験化合物の効果を、一次活性化および培養期間の間に試験化合物を添加することによって、評価する。これらの試験化合物の、細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化およびエフェクター機能における効果を、Ｃｒ５１放出アッセイおよび３Ｈチミジン取り込みアッセイを使用して、記載した濃度の化合物の存在下で、測定する。
【０２３８】
インビボ試験：  マウスの尾の皮膚の同種移植片移植モデル
化合物５４を、以下のインビボの移植モデルにおいて評価した。
【０２３９】
（方法）
ドナーＨ−２ｂ  Ｃ５７ＢＬ／６マウスの尾の皮膚を、受容者の雌Ｈ−２ｄ  ＢＡＬＢ／ｃマウスに移植した（Ｌａｇｏｄｚｉｎｓｋｉ，Ｚ．ら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７１：１４８〜１５０（１９９０））。５匹のマウスが、１群に含まれた。試験化合物で処置される、４つの試験群、ならびに３つのコントロール群（これには、処置なしの群、ビヒクルのみで処置される群、およびシクロスポリンＡ（ＣｓＡ；Ｓｉｇｍａ；Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．Ｃ３６６２）で処置される群が含まれる）から構成される、７つのマウスの群が、試験に含まれた。試験化合物およびＣｓＡを、１日２回、腹腔内に、１０ｍｇ／ｋｇの用量で、移植の前日から始めて、移植の日を含めて移植の１５日後まで、投与した。移植後１５日間にわたって毎日、マウスをモニタし、そして移植拒絶についてスコア付けした。
【０２４０】
（結果および考察）
皮膚の同種移植片拒絶は、主としてＴリンパ球によって媒介され、これは大部分の状況において、抗体の主要な役割についてはほとんど証拠がない。皮膚の同種移植片拒絶は、ヘルパーおよび細胞傷害性エフェクターＴ細胞集団の活性化を必要とする。移植片拒絶を、同種移植片壊死のモニタによって評価した。尾の皮膚はマウスの周囲の体幹皮膚から目視により区別されるので、拒絶の過程は容易にモニタされ得る。完全にインタクトな移植片を、１００％とスコア付けした。完全な移植片拒絶を、９０％を超える移植片壊死として定義した。急激な移植片拒絶は一般に、その移植片の腫張および紅斑に始まる、目視により観察可能な一連の事象を経て進行する。これらの事象に続いて、大部分または全ての移植片にわたる、移植片の乾燥およびかさぶたの形成が起こり、このことは、生存可能な移植片組織の損失を示す。かさぶたの形成に続いて、収縮および瘢痕形成が起こる。
【０２４１】
本発明の代表的な化合物である化合物５４は、コントロール（キャリアのみ；βシクロデキストリン；Ｓｉｇｍａ；Ｃａｔａｌｏｇｕｅ  Ｎｏ．Ｃ４７６７）群と比較して、移植片生存の有意な増大を実証した（表１０）。
【０２４２】
（表１０）
マウスの尾の皮膚の同種移植片移植モデルにおける、移植片拒絶に対する化合物の効果
【０２４３】
【表１５】
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コントロール群は、平均して８．５日間の皮膚同種移植片の生存を示し、一方で化合物５４で処置した群は、１１．５日の生存を示した。シクロスポリンＡとの比較によって、本発明の化合物（化合物５４が代表的である）はまた、シクロスポリンＡが使用される全ての適応症における使用のために、耐え得る。これらの化合物の区別的な活性ならびに阻害されるサイトカインにおけるそれらの選択性は、免疫抑制性ではなく、免疫調節性である結果となる機構を立証する。化合物５４がこのモデルにおいて同種移植片拒絶を抑制する能力は、これらの化合物が以下のような疾患において治療的に有用であり得ることを示唆する：多発性硬化症、炎症性腸疾患、リウマチ性関節炎、乾癬、器官移植および全ての自己免疫障害。例えば、乾癬の処置のための多くの薬物は、器官移植に使用されるか、またはこの設定における効力が実証されている。従って、器官移植における免疫調節性または免疫抑制性の薬物の効力は、乾癬における効力が予測可能であり、この一連の化合物の、乾癬の治療剤としての良い前兆である。
【０２４４】
本明細書中に記載した全ての刊行物、特許および特許出願を、各個々の刊行物、特許、または特許出願が具体的かつ個々に参考として援用されたと同程度まで、本明細書中に参考として援用する。
【０２４５】
上述のことから、本発明の特定の実施態様が本明細書中に例示の目的で記載されたが、様々な改変が、本発明の精神および範囲から逸脱することなくなされ得ることが、明らかである。従って、本発明は、本明細書中に提供した特定の実施例によっては、限定されない。