(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１種類のタンパクと複数種類の化合物それぞれとの結合量を示す各測定データを得、
前記測定データに基づいて前記複数種類の化合物の中から前記タンパクと結合するヒット化合物を抽出する化合物スクリーニング方法において、
前記測定データを、測定条件が同一のものからなるグループに分けて、各グループ毎に、該グループに属する測定データを用いて前記タンパクと前記化合物とが結合しないときの測定データの代表値を求め、
前記グループ毎に求めた各代表値を一致させるように、各グループ毎に測定データを補正して補正済の測定データを得、
前記補正済の測定データを用いて前記ヒット化合物を抽出するための閾値を定め、
前記閾値と前記補正済の測定データの値とを比較して前記ヒット化合物を抽出することを特徴とする化合物スクリーニング方法。
【請求項２】
１種類のタンパクと複数種類の化合物それぞれとの結合量を示す各測定データを得、
前記測定データに基づいて前記複数種類の化合物の中から前記タンパクと結合するヒット化合物を抽出する化合物スクリーニング方法において、
前記測定データを、測定条件が同一のものからなるグループに分けて、各グループ毎に、該グループに属する測定データを用いて前記ヒット化合物を抽出するための閾値を定め、
各グループ毎の、前記閾値と前記測定データの値との比較により前記ヒット化合物を抽出することを特徴とする化合物スクリーニング方法。
【請求項３】
前記測定条件が、前記化合物とタンパクとの結合量を測定する測定日であることを特徴とする請求項１または２記載の化合物スクリーニング方法。
【請求項４】
前記測定条件が、前記化合物とタンパクとの結合量の測定に用いる測定センサであることを特徴とする請求項１または２記載の化合物スクリーニング方法。
【請求項５】
前記化合物スクリーニング方法が前記化合物とタンパクとの結合量を並列的に測定して各測定に応じた複数種類の前記測定データを得るそれぞれの測定チャンネルを有するものであり、前記測定条件が、前記測定チャンネルであることを特徴とする請求項１または２記載の化合物スクリーニング方法。
【請求項６】
前記化合物スクリーニング方法が前記化合物を緩衝液に溶解して前記化合物とタンパクとの結合量を測定するものであり、前記測定条件が、前記緩衝液の製造ロットであることを特徴とする請求項１または２記載の化合物スクリーニング方法。
【請求項７】
前記化合物スクリーニング方法が複数の測定装置を用いて前記化合物とタンパクとの結合量を測定するものであり、前記測定条件が、前記測定装置であることを特徴とする請求項１または２記載の化合物スクリーニング方法。
【請求項８】
前記測定条件が、前記測定データを得る測定が行なわれるときの環境温度であることを特徴とする請求項１または２記載の化合物スクリーニング方法。
【請求項９】
前記結合量を示す測定データが、表面プラズモン共鳴の原理を用いた測定によって得られたものであり、前記測定条件が、前記測定に用いられる測定容器、前記測定容器中に設けられた測定用流路、前記測定容器の測定用流路毎に個別に設けられた全反射減衰角を測定するための測定用光学系、前記測定に用いられる前記化合物を溶解してなる化合物溶液を調液してからの経過時間、または前記測定の補正に用いられる屈折率基準液の調液ロットであることを特徴とする請求項１または２記載の化合物スクリーニング方法。
【請求項１０】
１種類のタンパクと複数種類の化合物それぞれとの結合量を示す各測定データを得る測定部と、前記測定データに基づいて前記複数種類の化合物の中から前記タンパクと結合するヒット化合物を抽出するスクリーニング部とを備えた化合物スクリーニング装置であって、
前記スクリーニング部が、
前記測定部で取得した測定データを記憶する記憶部と、
該記憶部に記憶された測定データを、前記測定部で前記測定データを得たときの測定条件が同一のものからなる各グループに分けるグループ化部と、
前記グループ毎に、該グループに属する測定データを用いて前記タンパクと前記化合物とが結合しないときの測定データの代表値を求める代表値演算部と、
前記グループ毎に求めた各代表値を一致させるように、各グループ毎に測定データを補正して補正済の測定データを得るデータ補正部と、
前記補正済の測定データを用いて、前記ヒット化合物を抽出するための閾値を定める閾値設定部と、
前記閾値と前記補正済の測定データの値とを比較して前記ヒット化合物を抽出するヒット化合物抽出部とを備えたことを特徴とする化合物スクリーニング装置。
【請求項１１】
１種類のタンパクと複数種類の化合物それぞれとの結合量を示す各測定データを得る測定部と、前記測定データに基づいて前記複数種類の化合物の中から前記タンパクと結合するヒット化合物を抽出するスクリーニング部とを備えた化合物スクリーニング装置であって、
前記スクリーニング部が、
前記測定部で取得した測定データを記憶する記憶部と、
該記憶部に記憶された測定データを、前記測定部で前記測定データを得たときの測定条件が同一のものからなる各グループに分けるグループ化部と、
前記グループ毎に、該グループに属する測定データを用いて前記ヒット化合物を抽出するための閾値を定める閾値設定部と、
各グループ毎の、前記閾値と前記測定データの値との比較によりヒット化合物を抽出するヒット化合物抽出部とを備えたことを特徴とする化合物スクリーニング装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は化合物スクリーニング方法および装置に関し、詳しくは、１種類のタンパクと複数種類の化合物それぞれとの結合量を示す測定データに基づいて上記化合物の中から上記タンパクと結合するヒット化合物を抽出する化合物スクリーニング方法および装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
一般に、医薬品を構成する化合物は、生体内のタンパクと化学的に結合することにより、その機能を果たすものが多い。そのため、医薬品開発において医薬品の候補となる化合物とタンパクとの間の結合の有無を知ることが重要である。特に、医薬品を構成する化合物は、注目するタンパクに対してのみ結合性を持ち、他のタンパクに対しては結合性を持たないことが理想である。すなわち、注目外のタンパクに対して結合性を持つことは、いわゆる副作用が生じることになるからである。このような背景により、医薬品開発においては、医薬品の候補となる化合物の中から、注目するタンパクに対してのみ結合性を持つ化合物を抽出するスクリーニングが行なわれている。
【０００３】
上記医薬品の候補となる化合物のスクリーニングに使用される装置には、種々のものが提案されている。例えば、金属表面で光ビームを全反射させて表面プラズモンを発生させたときに、この全反射した光ビーム中に光強度の急激な減衰（全反射減衰）を生じさせる特定の反射角度、すなわち全反射減衰角が上記金属表面近傍の誘電率に応じて変化することを利用した測定装置が知られている（非特許文献１参照）。また、上記全反射減衰を利用する類似の測定装置として、例えば漏洩モード測定装置も知られている（非特許文献１参照）。
【０００４】
さらに、上記表面プラズモンの原理を用いた装置として、例えばビアコア株式会社製の装置「ＢＩＡＣＯＲＥ３０００」等が知られている（非特許文献２参照）。
【０００５】
上記のような装置を用いて化合物のスクリーニングを行なう手法としては、１種類のタンパクに対して、多数種類の、例えば１万種類の化合物のそれぞれとの結合量を示す測定データを得、上記測定データに基づいて１万種類の化合物の中から上記タンパクと結合する化合物であるヒット化合物を抽出する手法が検討されている。
【０００６】
この手法は、１種類のタンパクと１万種類の化合物のそれぞれとの結合量の測定によって得られた１万種類の測定データの統計処理に基づいてヒット化合物を抽出するものである。すなわち、例えば、１万種類の測定データの値の平均値と標準偏差に基づいて上記ヒット化合物を抽出するための閾値を定め、この閾値を超える値を持つ測定データに対応する化合物をヒット化合物として抽出する手法である。
【０００７】
なお、一般に上記のような化合物のスクリーニングにおいて抽出されるヒット化合物は全体の１％程度、すなわち１万種類のうちの１００種類程度であり、また、このように多くの種類の化合物のスクリーニングには、２〜３日あるいはさらに多くの日数を要することもある。
【非特許文献１】「分光研究」第４７巻 第１号（１９９８）
【非特許文献２】生体物質相互作用のリアルタイム解析実験法、永田和宏、半田宏  共編、  発行所：シュプリンガー・フェアラーク東京株式会社
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ところで、上記のようにして取得した測定データのバラツキが大きいと、タンパクと結合はするが反応が遅い等の理由でそのタンパクとの結合量の少ない化合物がバラツキの中に埋もれてしまい、その化合物がヒット化合物として抽出されないことがある。すなわち、測定データのバラツキが大きくなると、このように反応の遅い化合物によって得られた測定データの値がヒット化合物を判定する閾値以下となってしまうことがあり、そのような場合には多くの時間と費用を費して行なったスクリーニングを十分に生かすことができない。そのため、ヒット化合物をより正確にスクリーニングしたいという要請がある。
【０００９】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、スクリーニングの信頼性をより高めることができる化合物スクリーニング方法および装置を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の第１の化合物スクリーニング方法は、１種類のタンパクと複数種類の化合物それぞれとの結合量を示す各測定データを得、前記測定データに基づいて複数種類の化合物の中からタンパクと結合するヒット化合物を抽出する化合物スクリーニング方法において、前記測定データを、測定条件が同一のものからなるグループに分けて、各グループ毎に、該グループに属する測定データを用いてタンパクと化合物とが結合しないときの測定データの代表値を求め、グループ毎に求めた各代表値を一致させるように、各グループ毎に測定データを補正して補正済の測定データを得、補正済の測定データを用いてヒット化合物を抽出するための閾値を定め、閾値と補正済の測定データの値とを比較してヒット化合物を抽出することを特徴とするものである。
【００１１】
本発明の第２の化合物スクリーニング方法は、１種類のタンパクと複数種類の化合物それぞれとの結合量を示す各測定データを得、前記測定データに基づいて複数種類の化合物の中からタンパクと結合するヒット化合物を抽出する化合物スクリーニング方法において、前記測定データを、測定条件が同一のものからなるグループに分けて、各グループ毎に、該グループに属する測定データを用いてヒット化合物を抽出するための閾値を定め、各グループ毎の、閾値と測定データの値との比較によりヒット化合物を抽出することを特徴とするものである。
【００１２】
前記測定条件は、化合物とタンパクとの結合量を測定する測定日としたり、化合物とタンパクとの結合量の測定に用いる測定センサとすることができる。
【００１３】
前記化合物スクリーニング方法が化合物とタンパクとの結合量を並列的に測定して各測定に応じた複数種類の測定データを得るそれぞれの測定チャンネルを有するものである場合には、前記測定条件を、測定チャンネルとすることができる。
【００１４】
前記化合物スクリーニング方法が化合物を緩衝液に溶解して前記化合物とタンパクとの結合量を測定するものである場合には、前記測定条件を、緩衝液の製造ロットとすることができる。
【００１５】
前記化合物スクリーニング方法が複数の測定装置を用いて前記化合物とタンパクとの結合量を測定するものである場合には、前記測定条件を、前記測定装置とすることができる。
【００１６】
前記代表値は、タンパクと化合物とが結合しないときの測定データの値を示すものであればどのような手法によって得たものであってもよい。例えば、グループに属する測定データを統計的に処理して前記代表値を定めるようにしてもよい。
【００１７】
前記第１の化合物スクリーニング方法における閾値は、例えば、補正済の測定データの統計的な処理に基づいて定めることができる。また、前記第２の化合物スクリーニング方法における閾値も、各グループを構成する測定データの統計的な処理に基づいて定めることができる。
【００１８】
前記測定条件は、測定データを得る測定が行なわれるときの環境温度とすることができる。
【００１９】
前記結合量を示す測定データを、表面プラズモン共鳴の原理を用いた測定によって得られたものとし、前記測定条件を、表面プラズモン共鳴の原理を用いた測定に用いられる測定容器、前記測定容器中に設けられた測定用流路、前記測定容器の測定用流路毎に個別に設けられた全反射減衰角を測定するための測定用光学系、前記表面プラズモン共鳴の原理を用いた測定に用いられる化合物溶液であって前記化合物を溶解してなる化合物溶液を調液してからの経過時間、または前記表面プラズモン共鳴の原理を用いた測定の補正に用いられる屈折率基準液を調液する際の調液ロットとすることもできる。
【００２０】
なお、前記測定条件を、前記測定日、前記測定センサ、前記測定チャンネル、前記緩衝液の製造ロット、前記測定装置、前記測定容器、前記測定用流路、前記測定用光学系、前記化合物溶液を調液してからの経過時間、および前記調液ロットのうちの２つ以上の組み合わせとしてもよい。
【００２１】
なお、各代表値を一致させるようにするとは、各代表値を完全に一致させる場合に限らない。例えば代表値のうちの最大値と最小値との差をより小さくしたり、代表値間の差のいずれをもより小さくしたりするようにしてもよい。また、各代表値を略一致させることがより望ましく、各代表値を完全に一致させることがさらに望ましい。
【００２２】
本発明の第１の化合物スクリーニング装置は、１種類のタンパクと複数種類の化合物それぞれとの結合量を示す各測定データを得る測定部と、前記測定データに基づいて前記複数種類の化合物の中から前記タンパクと結合するヒット化合物を抽出するスクリーニング部とを備えた化合物スクリーニング装置であって、スクリーニング部が、前記測定部で取得した測定データを記憶する記憶部と、この記憶部に記憶された測定データを、測定部で前記測定データを得たときの測定条件が同一のものからなる各グループに分けるグループ化部と、グループ毎に、各グループに属する測定データを用いて前記タンパクと前記化合物とが結合しないときの測定データの代表値を求める代表値演算部と、前記グループ毎に求めた各代表値を一致させるように、各グループ毎に測定データを補正して補正済の測定データを得るデータ補正部と、前記補正済の測定データを用いて、ヒット化合物を抽出するための閾値を定める閾値設定部と、前記閾値と前記補正済の測定データの値とを比較してヒット化合物を抽出するヒット化合物抽出部とを備えたことを特徴とするものである。
【００２３】
本発明の第２の化合物スクリーニング装置は、１種類のタンパクと複数種類の化合物それぞれとの結合量を示す各測定データを得る測定部と、前記測定データに基づいて前記複数種類の化合物の中から前記タンパクと結合するヒット化合物を抽出するスクリーニング部とを備えた化合物スクリーニング装置であって、スクリーニング部が、前記測定部で取得した測定データを記憶する記憶部と、この記憶部に記憶された測定データを、測定部で前記測定データを得たときの測定条件が同一のものからなる各グループに分けるグループ化部と、前記グループ毎に、各グループに属する測定データを用いてヒット化合物を抽出するための閾値を定める閾値設定部と、各グループ毎の、前記閾値と前記測定データの値との比較によりヒット化合物を抽出するヒット化合物抽出部とを備えたことを特徴とするものである。
【発明の効果】
【００２４】
本発明の第１のスクリーニング方法および装置は、複数種類の化合物のうちの大部分はタンパクと結合せずヒット化合物は極僅かであること、および、タンパクと化合物とが結合しないときに得られる各測定データの値は化合物の種類にかかわらず本来一致すべきものであることに着目し本発明に至ったものである。
【００２５】
本発明の第１のスクリーニング方法および装置は、１種類のタンパクと複数種類の化合物それぞれとの結合量を示す測定データを、測定条件が互に同一のものからなるグループに分けて、各グループ毎に、そのグループに属する測定データを用いてタンパクと化合物とが結合しないときの測定データの値を示す代表値を求め、上記グループ毎に求めた各代表値を一致させるように、各グループ毎に測定データを補正して補正済の測定データを得、上記補正済の測定データを用いてヒット化合物を抽出するための閾値を定め、この閾値と補正済の測定データの値とを比較してヒット化合物を抽出するようにしたので、スクリーニングの信頼性をより高めることができる。
【００２６】
すなわち、タンパクと化合物とが結合しないときに得られる測定データの値は、測定が正確に行なわれた場合には化合物の種類にかかわらず互いに一致するはずであるが、種々の要因によりその値にバラツキが生じる。そのため、測定データの値に生じる誤差の傾向が似ているグループ、つまり測定条件が同一のグループに属する測定データのうちのタンパクと化合物とが結合しないときに得られる測定データの値のバラツキは、タンパクと化合物とが結合しないときに得られる全測定データの値のバラツキより小さくすることができる。
【００２７】
したがって、各グループ毎に上記代表値を求め、各代表値をグループ間で互に一致させるようにグループ毎の測定データを補正して上記測定条件の違いによって生じる誤差を除去し、タンパクと化合物とが結合しないときに得られる測定データの値をグループ間でより正確に一致させることにより、タンパクと化合物との結合量をより正確に示す補正済測定データを取得することができる。なお、複数種類の化合物のうちのヒット化合物は極僅かであり、測定条件が同一のものからなる各グループに含まれるヒット化合物も極僅かであるため、各グループに属する測定データを用いてタンパクと化合物とが結合しないときの測定データの代表値を求める際のヒット化合物の測定データによる影響を小さく抑えることができる。
【００２８】
そして、上記補正済の測定データを用いることにより、ヒット化合物のより正確な抽出を可能とする閾値を定めることができ、例えば、反応が遅くタンパクとの結合量の少ない化合物であっても測定データのバラツキの中に埋もれることなくヒット化合物として抽出できるので、スクリーニングの信頼性をより高めることができる。
【００２９】
本発明の第２のスクリーニング方法および装置は、１種類のタンパクと複数種類の化合物それぞれとの結合量を示す測定データを、測定条件が互に同一のものからなるグループに分けて、各グループ毎に、そのグループに属する測定データを用いてヒット化合物を抽出するための閾値を定め、各グループ毎の、閾値と測定データとの比較によりヒット化合物を抽出するようにしたので、スクリーニングの信頼性をより高めることができる。
【００３０】
すなわち、測定データの値に生じる誤差の傾向が似ているグループ、つまり測定条件が同一のグループ毎に定めた閾値は、上記測定条件の違いによって生じる誤差を除去したものとすることができる。したがって、この測定条件の違いによって生じる誤差を除去したグループ毎の閾値を用いて各グループ毎にヒット化合物を抽出することにより、従来に比してヒット化合物をより正確に抽出できる。例えば、反応が遅くタンパクとの結合量の少ない化合物であっても測定データのバラツキの中に埋もれることなくヒット化合物として抽出できるので、スクリーニングの信頼性をより高めることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
以下、本発明の実施の形態について、図面を用いて説明する。図１は本発明の化合物スクリーニング方法を実施する化合物スクリーニング装置の概略構成を示す概念図、図２は測定容器の拡大斜視図、図３（ａ）、（ｂ）、（ｃ）は化合物測定データライブラリを示す図である。
【００３２】
図１に示す本発明の化合物スクリーニング方法を実施する化合物スクリーニング装置１００は、１種類のタンパクＴａと複数種類の化合物Ｋ１、Ｋ２・・・それぞれとの結合量を示す各測定データＤ１、Ｄ２、・・・を得る測定部である測定装置１１０と、それらの測定データＤ１、Ｄ２、・・・に基づいて上記複数種類の化合物Ｋ１、Ｋ２、・・・の中から上記タンパクＴａと結合するヒット化合物を抽出するスクリーニング部であるスクリーニング装置１６０とを備えている。
【００３３】
スクリーニング装置１６０は、測定装置１１０で取得した測定データＤ１、Ｄ２、・・・を記憶する記憶部８２と、この記憶部８２に記憶された測定データＤ１、Ｄ２、・・・を、測定データを得るときの測定条件が同一のものからなるグループＧ１、Ｇ２、・・・に分けるグループ化部６０と、グループ化部６０で分けられた各グループＧ１、Ｇ２、・・・毎に、そのグループに属する測定データを用いてタンパクと化合物とが結合しないときの測定データの値の代表値Ｗ１、Ｗ２、・・・を求める代表値演算部６２と、上記代表値演算部６２によりグループＧ１、Ｇ２、・・・毎に求めた各代表値Ｗ１、Ｗ２、・・・を一致させるように、各グループＧ１、Ｇ２、・・・毎に測定データを補正して補正済測定データＤ１′、Ｄ２′、・・・を得るデータ補正部６４とを有している。
【００３４】
さらに、上記スクリーニング装置１６０は、上記データ補正部６４で取得した補正済測定データＤ１′、Ｄ２′、・・・を用いてヒット化合物を抽出するための閾値Ｑを定める第１の閾値設定部６６と、第１の閾値設定部６６で求めた閾値Ｑと補正済測定データＤ１′、Ｄ２′、・・・の値とを比較してヒット化合物Ｈｋ１を抽出する第１のヒット化合物抽出部６８を有している。
【００３５】
また、上記スクリーニング装置１６０は、グループ化部６０で分けられた各グループＧ１、Ｇ２、・・・毎に、そのグループに属する測定データを用いてヒット化合物を抽出するための閾値Ｐ１、Ｐ２、・・・を定める第２の閾値設定部７０と、各グループＧ１、Ｇ２、・・・毎の、閾値Ｐ１、Ｐ２、・・・と測定データの値との比較によりヒット化合物Ｈｋ２を抽出する第２のヒット化合物抽出部７２とを有している。
【００３６】
ここでは、第１の閾値設定部６６によって定められる閾値Ｑは、補正済測定データＤ１′、Ｄ２′、・・・の値の標準偏差に基づいて定められるものである。
【００３７】
また、第２の閾値設定部７０によって定められる各閾値Ｐ１、Ｐ２、・・・は、各グループＧ１、Ｇ２、・・・毎に求めた標準偏差、すなわち各グループＧ１、Ｇ２、・・・のそれぞれに属する測定データの値の標準偏差のそれぞれに基づいて定められたものである。
【００３８】
以下、上記化合物スクリーニング装置１００で実施する化合物スクリーニング方法について詳しく説明する。ここでは、上記測定条件として測定日を採用した場合について説明する。
【００３９】
図１に示すように、測定装置１１０は、１種類のタンパクＴｐを固定した１２個の測定容器Ｕ１〜Ｕ１２（以後、まとめて測定容器Ｕともいう）と、互に異なる種類の化合物Ｋ１、Ｋ２・・・（以後、まとめて化合物Ｋともいう）を緩衝液中に溶解してなる各化合物溶液Ｋｙ１、Ｋｙ２、・・・を収容するプレートＰＬ１〜ＰＬ３０と、互に異なる４種類の屈折率を有する各屈折率基準液Ｊ１〜Ｊ４を収容した基準液容器Ｎｊ１〜Ｎｊ４とを用いて測定を行なう。
【００４０】
測定容器Ｕ１〜Ｕ１２のそれぞれは１６０回繰り返し使用され、その後廃棄される。
【００４１】
プレートＰＬ１〜ＰＬ３０のそれぞれには、互に異なる３８４種類の化合物溶液が収容されている。したがって、プレートＰＬ１〜ＰＬ３０には合計１１５２０種類の化合物溶液が収容されている。
【００４２】
基準液容器Ｎｊ１〜Ｎｊ４に収容された各屈折率基準液Ｊ１〜Ｊ４それぞれの屈折率は、互に異なっており、上記屈折率基準液Ｊ１〜Ｊ４の屈折率は予め測定等によって求められている。また、屈折率基準液Ｊ１〜Ｊ４の屈折率の分布範囲が化合物溶液Ｋｙ１、Ｋｙ２、・・・の屈折率の分布範囲を含むように、各屈折率基準液Ｊ１〜Ｊ４が調液されている。
【００４３】
上記屈折率基準液Ｊ１〜Ｊ４は、主に、後述する測定用流路毎に配されている金膜Ｍｅの厚さの違い等によって生じる測定用流路毎の全反射減衰角の違いに起因する測定データの誤差を補正するために用いられるものである。各測定容器Ｕを用いた１６０回の繰り返し測定に対して各屈折率基準液Ｊ１〜Ｊ４を用いた測定正が１回行われる。
【００４４】
上記測定容器Ｕ１〜Ｕ４を用い、プレートＰＬ１〜ＰＬ１０に収容された化合物溶液Ｋｙ１〜Ｋｙ３８４０の合計３８４０種類の化合物溶液に対する測定が１日目に行なわれる。
【００４５】
２日目には、測定容器Ｕ５〜Ｕ８を用い、プレートＰＬ１１〜ＰＬ２０に収容された化合物溶液Ｋｙ３８４１〜Ｋｙ７６８０の合計３８４０種類の化合物溶液に対する測定が行なわれる。
【００４６】
３日目には、測定容器Ｕ９〜Ｕ１２を用い、プレートＰＬ２１〜ＰＬ３０に収容された化合物溶液Ｋｙ７６８１〜Ｋｙ１１５２０の合計３８４０種類の化合物溶液に対する測定が行なわれ、上記１種類のタンパクに対する化合物の結合に関する実験を終了する。
【００４７】
上記のように、測定装置１１０により、１種類のタンパクと１１５２０種類の化合物それぞれとの結合量に関する測定が３日間に亘って行なわれる。
【００４８】
図２の測定容器Ｕ１の拡大斜視図に示すように、１方向（図中矢印Ｘ方向）に延びる細長い各測定容器Ｕには、上記化合物Ｋ１、Ｋ２・・・を緩衝液中に溶解させた各化合物溶液Ｋｙ１、Ｋｙ２、・・・を流すための同一形状を成す６つの測定用流路Ｌ１〜Ｌ６（以後、まとめて測定用流路Ｌともいう）が測定容器Ｕ１の長手方向（図中矢印Ｘ方向）に沿って設けられている。上記化合物溶液Ｋｙは測定用流路Ｌ中を上記Ｘ方向に流れる。各測定容器Ｕ中の６つの各測定用流路Ｌの底面である全反射面Ｌｓ上には金膜Ｍｅがスパッタリングによって成膜されている。この全反射面Ｌｓは、上記Ｘ方向に沿って三角形状が延びるように形成された上記測定容器Ｕ１の一部分を成す細長いプリズムＰ２５のプリズム面の１面を構成している。この全反射面Ｌｓが後述するレーザＬｅを全反射させる面である。なお、上記プリズム２５は、上記全反射面Ｌｓに対向する稜線Ｐ２６を含む上記Ｘ方向に延びる３角柱部分Ｐ２７を取り除いたものとしてもよい。
【００４９】
さらに、各測定用流路Ｌの全反射面Ｌｓ上に成膜された金膜Ｍｅ上には、同一のリンカー膜が上記測定用流路Ｌの上流側と下流側の２箇所にそれぞれ配されている。そして、上流側リンカー膜Ｒｊ上には上記１種類のタンパクＴａが固定されている。一方、下流側リンカー膜Ｒｋ上には何も固定されていない。なお、測定容器Ｕ１には、測定用流路Ｌの上流側に上記各化合物溶液Ｋｙが注入される注入口Ｌｉｎが設けられ、下流側に上記注入された化合物溶液Ｋｙが排出される排出口Ｌｏｕｔが設けられている。なお、測定容器Ｕ１〜Ｕ１２のそれぞれは同一構造からなるものである。
【００５０】
各測定容器の各測定用流路Ｌには、１１５２０種類の化合物Ｋ１〜Ｋ１１５２０のそれぞれを溶解した化合物溶液Ｋｙ１〜Ｋｙ１１５２０のうちの１種類が注入され、各化合物Ｋと上流側リンカー膜Ｒｊに固定されたタンパクＴａとの結合量が測定される。なお、上記上流側リンカー膜Ｒｊおよび下流側リンカー膜Ｒｋは、上記化合物Ｋ１〜Ｋ１１５２０のいずれとも結合することはない。
【００５１】
上記結合量は、上流側リンカー膜Ｒｊ上のタンパクＴａへの化合物Ｋの固定化量である。この固定化量は、上記化合物ＫのタンパクＴａへの固定化により上流側リンカー膜Ｒｊ表面で生じる単位面積当たりの質量変化に対応するものである。
【００５２】
上記構成を有する化合物スクリーニング装置１００は、各測定用流路に固定された１種類のタンパクＴａと上記１１５２０種類の化合物Ｋ１〜Ｋ１１５２０それぞれとの結合量を示す測定データＤ１〜Ｄ１１５２０を得、それらの値に基づいて、上記化合物Ｋ１〜Ｋ１１５２０の中からタンパクＴａと結合するヒット化合物を抽出する。なお、１種類のタンパクＴａは、測定容器Ｕ１〜Ｕ１２毎に配された６つの測定用流路Ｌ１〜Ｌ６（合計７２の測定用流路）のそれぞれに固定されている。
【００５３】
つぎに、タンパクと化合物との結合量を測定する上記測定装置１１０の作用について説明する。
【００５４】
測定容器Ｕ１が搬送されて測定位置Ｐｓに配置されると、プリズムＰ２５のプリズム面のうちの上記全反射面Ｌｓとは異なるプリズム面Ｐ２８を通して、全反射面Ｌｓ中の上流側リンカー膜Ｒｊの形成領域、および下流側リンカー膜Ｒｋの形成領域のそれぞれにレーザ光Ｌｅが照射される。上記レーザ光Ｌｅの照射は、上流側リンカー膜Ｒｊ、および下流側リンカー膜Ｒｋの形成領域のそれぞれにレーザ光Ｌｅの光束が集光するように行なわれる。
【００５５】
これらのレーザ光Ｌｅは、上記全反射面Ｌｓの上流側リンカー膜Ｒｊの形成領域（以後、ａｃｔ領域という）、および下流側リンカー膜Ｒｋの形成領域（以後、ｒｅｆ領域という）で全反射され、発散しながら上記プリズムＰ２５のプリズム面Ｐ２９を通って外部に射出される。
【００５６】
上記発散しながら外部に射出された各レーザ光Ｌｅは、２次元ＣＣＤ等からなる各測定センサ３２へ入射する。各レーザ光Ｌｅを受光した各測定センサ３２により、上記レーザ光Ｌｅが全反射せしめられたときに生じた暗線の位置、すなわち表面プラズモン共鳴による全反射減衰角が測定される。これにより、タンパクＴａが固定されている上記ａｃｔ領域、およびタンパクＴａが固定されていない上記ｒｅｆ領域のそれぞれにおける全反射減衰角が得られる。なお、測定用流路Ｌに上記タンパクＴａと反応しない液体を流した場合のａｃｔ領域における全反射減衰角とｒｅｆ領域における全反射減衰角とは略等しくなる。
【００５７】
そして、測定用流路Ｌに化合物溶液Ｋｙを流したときの、ａｃｔ領域における全反射減衰角の変化分からｒｅｆ領域における全反射減衰角の変化分を差し引いた角度差が上記ａｃｔ領域のタンパクＴａと化合物溶液中の化合物との結合量に対応する。
【００５８】
測定センサ３２から上記ａｃｔ領域およびｒｅｆ領域それぞれにおける全反射減衰角を示す信号を連続的に入力している結合量取得部３４が、上記ａｃｔ領域における全反射減衰角の変化分からｒｅｆ領域における全反射減衰角の変化分を差し引いて上記結合量を示す測定データを得る。
【００５９】
上記測定データの値は上記ａｃｔ領域のタンパクＴａと化合物との単位面積当りの結合量を示すものであり、その測定データの値の単位はＲＵ（レゾナンス・ユニット）である。
【００６０】
なお、上記結合量を示す測定データの取得に関しては、｛永田和宏、半田宏  共編、「生体物質相互作用のリアルタイム解析実験法」、発行所：シュプリンガー・フェアラーク東京株式会社｝等を参照することができる。
【００６１】
上記のように、測定位置Ｐｓに測定容器Ｕ１が配置されると、プレートＰＬ１に収容された各化合物溶液Ｋｙ１〜Ｋｙ６が、注入管Ｆｉ１〜Ｆｉ６のそれぞれによって所定量吸引される。各化合物溶液Ｋｙ１〜Ｋｙ６を吸引した注入管Ｆｉ１〜Ｆｉ６は移送され各測定用流路Ｌ１〜Ｌ６の注入口Ｌｉｎに挿入され、注入管Ｆｉ１〜Ｆｉ６から吐出された各化合物溶液Ｋｙ１〜Ｋｙ６が測定用流路Ｌ１〜Ｌ６のそれぞれに流される。そして、化合物Ｋ１〜Ｋ６のそれぞれとタンパクＴａとの結合量を示す測定データＤ１〜Ｄ６を得るための測定が行なわれる。
【００６２】
測定用流路Ｌ１〜Ｌ６に注入された化合物溶液Ｋｙは、排出口Ｌｏｕｔに挿入された排出管Ｆｏ１〜Ｆｏ６による吸引によって上記各測定用流路Ｌ１〜Ｌ６から排出することができる。このように測定用流路Ｌ１〜Ｌ６に流す溶液の入れ替えを可能にする構成により、測定用流路Ｌ１〜Ｌ６のそれぞれへ上記結合量の測定に伴う前処理用の液体や後処理用の液体を流すことができる。
【００６３】
なお、上記測定位置Ｐｓにおいて、測定容器Ｕ１の測定用流路Ｌ１〜Ｌ６それぞれのａｃｔ領域およびｒｅｆ領域に対して個別にレーザ光Ｌｅが照射され、ａｃｔ領域およびｒｅｆ領域毎に個別に設けられた１２個の上記測定センサ３２が個別に上記全反射減衰角を測定する。また、測定用流路Ｌ１〜Ｌ６毎に個別に設けられた６個の結合量取得部３４が個別に上記結合量を示す測定データを得る。
【００６４】
ここでは、測定用流路Ｌ１を使用して化合物とタンパクとの結合量を示す測定データを得る測定部Ｃｈ１を測定チャンネル１、測定用流路Ｌ２を使用して化合物とタンパクとの結合量を示す測定データを得る測定部Ｃｈ２を測定チャンネル２、・・・測定用流路Ｌ６を使用して化合物とタンパクとの結合量を示す測定データを得る測定部Ｃｈ６を測定チャンネル６と定めている。
【００６５】
化合物溶液Ｋｙ１〜Ｋｙ６の測定が終了すると、測定容器Ｕ１の測定用流路Ｌ１〜Ｌ６を測定前の状態に戻す再生処理が行われる。すなわち、ａｃｔ領域のタンパクと結合した化合物については、その結合が外されて化合物が除去される。また、上記ａｃｔ領域、ｒｅｆ領域、あるいは測定用流路Ｌ１〜Ｌ６の壁面に残存している化合物溶液Ｋｙ１〜Ｋｙ６および緩衝液等も洗浄されて除去される。
【００６６】
そして、上記再生された測定容器Ｕ１を用いた化合物溶液Ｋｙ７〜Ｋｙ１２の測定（２回目の測定）が行なわれる。
【００６７】
上記のように１回測定する毎に測定容器Ｕ１に対して再生処理を実施し、測定容器Ｕ１を１６０回繰り返し用いて化合物溶液Ｋｙ１〜Ｋｙ９６０の測定を行なう。これにより、化合物溶液Ｋｙ１〜Ｋｙ９６０の測定のそれぞれに対応する測定データＤ１〜Ｄ９６０を得る。なお、測定容器Ｕ１を用いた測定を行なう前に、上記屈折率基準液Ｊ１〜Ｊ４を測定容器Ｕ１に流して上記化合物溶液Ｋｙ１〜Ｋｙ９６０に対する測定を補正するためのデータ取りが行なわれる。
【００６８】
測定容器Ｕ１を１６０回繰り返し用いた測定を終了した後、測定容器Ｕ１を移送して測定位置Ｐｓから外し、次の測定容器Ｕ２を測定位置Ｐｓに配置する。
【００６９】
上記と同様に測定容器Ｕ２も測定に１６０回繰り返し使用される。測定容器Ｕ２の測定用流路Ｌ１〜Ｌ６に化合物溶液Ｋｙ９６１〜Ｋｙ１９２０を流して、化合物Ｋ９６１〜Ｋ１９２０のそれぞれとタンパクＴａとの結合量を示す測定データＤ９６１〜Ｄ１９２０を得る。
【００７０】
測定容器Ｕ３、Ｕ４についても同様に測定が行なわれる。そして、上記測定容器Ｕ１〜Ｕ４を用いた測定により、化合物Ｋ１〜Ｋ３８４０のそれぞれとタンパクＴａとの結合量を示す測定データＤ１〜Ｄ３８４０を得、１日目の測定を終了する。
【００７１】
２日目の測定では、上記と同様に、測定容器Ｕ５〜Ｕ８を用いた測定により、化合物Ｋ３８４１〜Ｋ７６８０のそれぞれとタンパクＴａとの結合量を示す測定データＤ３８４１〜Ｄ７６８０を得る。
【００７２】
３日目の測定では、上記と同様に、測定容器Ｕ９〜Ｕ１２を用いた測定により、化合物Ｋ７６８１〜Ｋ１１５２０のそれぞれとタンパクＴａとの結合量を示す測定データＤ７６８１〜Ｄ１１５２０を得る。
【００７３】
上記のようにして得られた測定データＤ１〜Ｄ１１５２０は、測定装置１１０からスクリーニング装置１６０へ入力される。
【００７４】
化合物測定データライブラリ中の１日目のデータを示す図３ａ、化合物測定データライブラリ中の２日目のデータを示す図３ｂ、および化合物測定データライブラリ中の３日目のデータを示す図３ｃに示すように、３日間で得られた測定データＤ１〜Ｄ１１５２０は、１日当たり６４０行×６列となる行列を３日分並べて構成した化合物測定データライブラリとして整理することができる。すなわち、１日目に得られた測定データＤ１〜Ｄ３８４０を表す図３（ａ）の６４０行×６列の行列、２日目に得られた測定データＤ３８４１〜Ｄ７６８０を表す図３（ｂ）の６４０行×６列の行列、および３日目に得られた測定データＤ７６８１〜Ｄ１１５２０を表す図３（ｃ）の６４０行×６列の行列からなる化合物測定データライブラリとして整理することができる。
【００７５】
６列から構成される各列は各測定チャンネル１〜６あるいは測定用流路Ｌ１〜Ｌ６に対応する。６４０行から構成される各行は各測定容器Ｕを用いて同時に測定された６つの測定データに対応する。
【００７６】
また、測定容器Ｕ１を１６０回繰り返し用いた測定、すなわち、測定容器Ｕ１を用いた１回目から１６０回目の測定によって、測定データＤ１〜Ｄ９６０が得られる。また、同様に、測定容器Ｕ２を用いた１６０回の測定によって、測定データＤ９６１〜Ｄ１９２０が得られ、測定容器Ｕ３を用いた１６０回の測定によって、測定データＤ１９２１〜Ｄ２８８０が得られる。
【００７７】
そして、３日目の最後に、測定容器Ｕ１２を用いた１６０回の測定によって、測定データＤ１０５６１〜Ｄ１１５２０が得られる。
【００７８】
さらに、プレートＰＬ１に収容された３８４種類の化合物溶液Ｋｙ１〜Ｋｙ３８４の測定によって、測定データＤ１〜Ｄ３８４が得られる。また、プレートＰＬ２に収容された３８４種類の化合物溶液Ｋｙ３８５〜Ｋｙ７６８の測定によって、測定データＤ３８５〜Ｄ７６８が得られ、プレートＰＬ３に収容された３８４種類の化合物溶液Ｋｙ７６９〜Ｋｙ１５３６の測定によって、測定データＤ７６９〜Ｄ１５３６が得られる。
【００７９】
そして、３日目の最後に、プレートＰＬ３０に収容された３８４種類の化合物溶液Ｋｙ１１１３７〜Ｋｙ１１５２０の測定によって、測定データＤ１１１３７〜Ｄ１１５２０が得られる。
【００８０】
上記のように、プレートＰＬ３に収容された３８４種類の化合物溶液Ｋｙ７６９〜Ｋｙ１５３６の測定を行う途中で、使用する測定容器が測定容器Ｕ１から測定容器Ｕ２に変更される。
【００８１】
ここで、１日目に得られた測定データＤ１〜Ｄ３８４０、２日目に得られた測定データＤ３８４１〜Ｄ７６８０、３日目に得られた測定データＤ７６８１〜Ｄ１１５２０のそれぞれのグループは測定条件である測定日が同一である。
【００８２】
なお、これらの測定データＤ１〜Ｄ１１５２０のうちの大部分はタンパクと化合物とが結合しない状態で得られた測定データであることは予め予想されており、タンパクと化合物とが結合した状態で得られる測定データは全体の約１％程度、多くとも２％以下と予め予想されている。
【００８３】
次に、上記タンパクと化合物とが結合しない状態で得られた測定データと、タンパクと化合物とが結合した状態で得られた測定データとの区別をより明確にするスクリーニング装置１６０の作用について説明する。
【００８４】
図４（ａ）は縦軸に度数（Ｅ）、横軸に結合量（ＲＵ）を取った座標上に上記１１５２０の測定データを用いて作成したヒストグラムを示したものであり、図４（ｂ）は上記測定データを測定条件が同一のものからなるグループ毎に分けて示したヒストグラムである。また、図５は縦軸に度数（Ｅ）、横軸に結合量（ＲＵ）を取った座標上に測定日毎に生じた測定の変動分を取り除いた補正済測定データを用いて作成したヒストグラムを示したものである。
【００８５】
上記図４（ａ）に示すように、大多数の測定データはタンパクと化合物とが結合しないことを示すものであり０ＲＵ近傍に存在する。一方、タンパクと化合物とが結合したことを示す測定データは０ＲＵからプラス側に大きく離れた領域に少数存在するはずである。
【００８６】
タンパクと化合物とが結合しない状態で得られた測定データの値は、本来値０ＲＵに一致するはずであるが、測定条件、例えば測定日が異なる等の理由によりそれらの値にバラツキが生じる。そのため、上記タンパクと化合物とが結合しない状態で得られた測定データのうちにはその値がマイナス側にずれたりプラス側にずれたりするものが存在する。
【００８７】
上記測定データＤ１〜Ｄ１１５２０を入力したスクリーニング装置１６０は、グループ化部６０により、上記測定データＤ１〜Ｄ１１５２０を測定日が同一のものからなるグループＧ１、Ｇ２、Ｇ３に分ける。すなわち、図４（ｂ）に示すように、１日目の測定で得られた測定データＤ１〜Ｄ３８４０をグループＧ１、２日目の測定で得られた測定データＤ３８４１〜Ｄ７６８０をグループＧ２、３日目の測定で得られた測定データＤ７６８１〜Ｄ１１５２０をグループＧ３に分ける。
【００８８】
なお、グループ化部６０には予めグループと測定データとの対応を示すルックアップテーブル等を記憶させておき、それらの対応関係に基づいて上記グループ分けを実行する。
【００８９】
上記測定データＤ１〜Ｄ１１５２０を、グループＧ１、Ｇ２、Ｇ３に分けると、グループ１は０ＲＵより小さい値を持つ測定データが多く存在し、グループ２は０ＲＵ近傍の値を持つ測定データが多く存在し、グループ３は０ＲＵより大きい値を持つ測定データが多く存在することがわかる。
【００９０】
次に、代表値演算部６２により、各グループＧ１、Ｇ２、Ｇ３毎に、そのグループに属する測定データを用いてタンパクと化合物とが結合しないときの測定データの代表値Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３を求める。
【００９１】
グループＧ１の代表値Ｗ１を求める場合には、はじめにグループＧ１に属する測定データＤ１〜Ｄ１００の全てを用いて、平均値Ｗ１′と標準偏差σ１′を求める。そして、標準偏差を４倍した値を平均値に加えた範囲内、すなわちＷ１′＋（４×σ１′）以下の値を持つ測定データを抽出し、これらの測定データの平均値を上記代表値Ｗ１として採用する。
【００９２】
なお、上記標準偏差を４倍した値を平均値に加えた値以下の値を持つ測定データが全てタンパクと化合物とが結合しないときの測定データであるとは限らないが、そのような測定データが含まれていたとしても、極僅かでありその影響も微小であることが予め予想できるので、このスクリーニングにおいては実質的にその影響を無視することができる。
【００９３】
以下同様にグループＧ２の代表値Ｗ２、およびグループＧ３の代表値Ｗ３を求める。
【００９４】
次に、データ補正部６４が、上記代表値演算部６２によりグループＧ１、Ｇ２、Ｇ３毎に求めた代表値Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３を互に一致させるように、ここでは例えば代表値Ｗ２（ここでは、Ｗ２＝０ＲＵである）に一致させるように、各グループＧ１、Ｇ２、Ｇ３毎に測定データを補正する。すなわちグループＧ１に属する測定データの各値をプラス側にシフトさせ、グループＧ３に属する測定データの各値をマイナス側にシフトさせる。グループＧ２に属する測定データの各値のシフト量は０となる。そして、各グループＧ１、Ｇ２、Ｇ３毎に、補正済測定データＤ１′〜Ｄ３８４０′、Ｄ３８４１′〜Ｄ７６８０′、Ｄ７６８１′〜Ｄ１１５２０′のそれぞれを得る。
【００９５】
図５に示すように、上記補正が加えられた補正済測定データＤ１′〜Ｄ３８４０′、Ｄ３８４１′〜Ｄ７６８０′、Ｄ７６８１′〜Ｄ１１５２０′で構成される補正済測定データＤ１′〜Ｄ１１５２０′の全体のバラツキは少なくなる。すなわち、測定日毎に生じた測定の変動分が取り除かれて補正済測定データＤ１′〜Ｄ１１５２０′のバラツキが少なくなる。
【００９６】
次に、第１の閾値設定部６６が、データ補正部６４で取得した補正済測定データＤ′１〜Ｄ１１５２０′を用いてヒット化合物を抽出するための閾値Ｑを定める。
【００９７】
ここでは、補正済測定データＤ１′〜Ｄ１１５２０′の値の平均値Ｗ′と標準偏差σ′とから閾値Ｑ（Ｑ＝Ｗ′+（４×σ′））を求める。なお、図５中には平均値Ｗ′＝０ＲＵとして示した。
【００９８】
最後に、第１のヒット化合物抽出部６８が、上記閾値Ｑと補正済測定データＤ１′〜Ｄ１１５２０′の値とを比較して、補正済測定データＤ１′〜Ｄ１１５２０′のうちの閾値Ｑを超える値を持つ補正済測定データに対応する化合物をヒット化合物Ｈｋ１として抽出する。抽出されたヒット化合物Ｈｋ１は表示装置８４に表示される。
【００９９】
ここで、測定日毎に生じた測定の変動分を取り除いたバラツキの少ない、より正確にタンパクと化合物との結合量を示す補正済測定データＤ１′〜Ｄ１１５２０′を用いることにより、補正前の測定データＤ１〜Ｄ１１５２０を用いた場合に比して、より正確にヒット化合物を抽出することができる。
【０１００】
すなわち、従来の方式によれば、図４（ａ）、（ｂ）に示すように、測定データＤ１〜Ｄ１１５２０の平均値はＷ、標準偏差はσであり、上記測定データＤ１〜Ｄ１１５２０を用いてヒット化合物を抽出すると、閾値Ｓ（Ｓ＝Ｗ+４σ）を超える測定データＤ１０１００、Ｄ１０２００、およびＤ５０００等はヒット化合物として抽出され、閾値Ｓ以下の測定データＤ１０００等はヒット化合物として抽出されない。
【０１０１】
なお、図４（ａ）、（ｂ）に示すように上記平均値Ｗの値は０ＲＵ（Ｗ＝０ＲＵ）、閾値Ｓの値は１０ＲＵ（Ｓ＝１０ＲＵ）である。
【０１０２】
一方、本発明の方式によれば、図５に示すように、補正済測定データＤ１′〜Ｄ１１５２０′の標準偏差σ′は、上記測定データＤ１〜Ｄ１１５２０の標準偏差σより小さくなる。そのため、閾値Ｑ（Ｑ＝Ｗ′+４σ′）を用いて上記補正済測定データＤ１′〜Ｄ１１５２０′からヒット化合物を抽出した場合には、上記測定データＤ１０１００、Ｄ１０２００、およびＤ５０００とともに、測定データＤ１０００がヒット化合物として抽出される。なお、図５に示すようにこのときの閾値Ｑの値は８ＲＵ（Ｑ＝８ＲＵ）である。
【０１０３】
なお、上記本発明の方式においては、各グループ毎の代表値を求める際に、タンパクと結合した化合物である可能性の高い測定データを除くようにしたが、このような場合に限らない。例えば、タンパクと結合する化合物は極僅かなので、各グループ毎に各グループに属する測定データの全てを用いて算出した平均値を、上記タンパクと化合物とが結合しないときの測定データの代表値として採用しても、実質的に上記と同様の効果を得ることができる。すなわち、タンパクと化合物とが結合しない状態で得られた測定データと、タンパクと化合物とが結合した状態で得られた測定データとの区別をより明確にする効果を得ることができる。
【０１０４】
なお、上記説明では屈折率基準液Ｊ１〜Ｊ４を用いた測定の補正については触れていないが、例えば、上記補正を結合量取得部３４によって実施することができる。
【０１０５】
具体的には、各測定容器Ｕを用いた１６０回の繰り返し測定を行う前に、化合物溶液の代わりに屈折率基準液Ｊ１〜Ｊ４を各測定用流路に流して補正用測定データを得、その補正用測定データが結合量取得部３４に入力される。上記屈折率基準液Ｊ１〜Ｊ４それぞれの屈折率の値は既知である。それゆえ、結合量取得部３４は、上記補正用測定データに基づいて各測定用流路を流れる各液体の屈折率（既知の値）とそのときに得られたＲＵ値（補正用測定データの値）との関係に基づいて、上記１６０回の繰り返し測定で得られる各測定データを補正することができる。
【０１０６】
以下に、上記測定日毎に生じる測定データの変動について詳しく説明する。
【０１０７】
図６（ａ）は１日目の測定で測定用流路を流れる化合物溶液の温度分布を示す図、図６（ｂ）は２日目の測定で測定用流路を流れる化合物溶液の温度分布を示す図である。
【０１０８】
測定日毎の温度差が大きい場合には、化合物溶液と測定容器との温度差が測定日毎に変化する。図６（ａ）に示すように、1日目の測定では、プレートＰＬ１に収容された化合物溶液Ｋｙ１の温度が２１℃、測定容器Ｕ１の温度が２０℃であり、注入管Ｆｉ１によって測定容器Ｕ１の測定用流路Ｌ１のａｃｔ領域上に流される化合物溶液Ｋｙ１の温度が２１℃である。このような場合に、上記化合物溶液Ｋｙ１が測定用流路Ｌ１を流れるうちに測定容器Ｕ１へ熱が吸収されて温度が低下し、ｒｅｆ領域上では化合物溶液Ｋｙ１の温度が２０.８℃になったとする。
【０１０９】
これに対して、２日目の測定では、図６（ｂ）に示すように、プレートＰＬ１１に収容された化合物溶液Ｋｙ３８４１の温度が２１.５℃、測定容器Ｕ５の温度が２０℃であり、注入管Ｆｉ１によって測定容器Ｕ５の測定用流路Ｌ１のａｃｔ領域上に流される化合物溶液Ｋｙ３８４１の温度が２１.５℃である。このような場合に、上記化合物溶液Ｋｙ３８４１が測定用流路Ｌ１を流れるうちに測定容器Ｕ５へ熱が吸収されて温度が低下し、ｒｅｆ領域では化合物溶液Ｋｙ３８４１の温度が２１.２℃になったとする。すると、１日目に比べて２日目の方が化合物溶液と測定容器との温度差が大きいために、２日目の方が化合物溶液の温度低下量が大きくなる。
【０１１０】
すなわち、１日目の化合物溶液Ｋｙ１のａｃｔ領域とｒｅｆ領域とにおける温度差が０．２度であるのに対し、２日目の化合物溶液Ｋｙ３８４１のａｃｔ領域とｒｅｆ領域とにおける温度差が０．３度となり、この温度差分に応じて化合物溶液の屈折率等が変化し全反射減衰角も変動する。したがって、上記のようなリファレンスを設けて測定誤差を相殺する構成を有する装置であっても、上記変動分を相殺することができず測定データが変動する。
【０１１１】
以下に、スクリーニング装置１６０により上記とは異なる手法でスクリーニングを行う場合について説明する。
【０１１２】
図７は縦軸に度数（Ｅ）、横軸に結合量（ＲＵ）を取った座標上にグループ毎に閾値を定めて個別にヒット化合物を抽出する場合を示す図である。図７（ａ）はグループ１においてヒット化合物を抽出する場合を示す図、図７（ｂ）はグループ２においてヒット化合物を抽出する場合を示す図、図７（ｃ）はグループ３においてヒット化合物を抽出する場合を示す図である。
【０１１３】
上記スクリーニング装置１６０の第２の閾値設定部７０により、上記グループ化部６０で分けられた各グループＧ１、Ｇ２、Ｇ３毎に、そのグループに属する測定データＤ１〜Ｄ３８４０、測定データＤ３８４１〜Ｄ７６８０、測定データＤ７６８１〜Ｄ１１５２０を用いてヒット化合物を抽出するための各閾値Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３を以下のようにして定める。
【０１１４】
図７（ａ）、（ｂ）、（ｃ）に示すように、グループＧ１では、このグループＧ１を構成する測定データＤ１〜Ｄ３８４０の平均値Ｖ１と標準偏差α１から閾値Ｐ１（Ｐ１＝Ｖ１＋（４×α１））を定める。以下同様に、測定データＤ３８４１〜Ｄ７６８０の平均値Ｖ２と標準偏差α２からグループＧ２の閾値Ｐ２（Ｐ２＝Ｖ２＋（４×α２））を、測定データＤ７６８１〜Ｄ１１５２０の平均値Ｖ３と標準偏差α３からグループＧ３の閾値Ｐ３（Ｐ３＝Ｖ３＋（４×α３））を定める。
【０１１５】
次に、第２のヒット化合物抽出部７２が、各グループＧ１、Ｇ２、Ｇ３毎の、閾値Ｐ１と測定データＤ１〜Ｄ３８４０、閾値Ｐ２と測定データＤ３８４１〜Ｄ７６８０、および閾値Ｐ３と測定データＤ７６８１〜Ｄ１１５２０との比較によりヒット化合物Ｈｋ２を抽出する。
【０１１６】
すなわち、図７（ａ）に示すように、グループＧ１では閾値Ｐ１以上となった測定データＤ１０００がヒット化合物Ｈｋ２として抽出される。また、図７（ｂ）に示すように、グループＧ２では閾値Ｐ２以上となった測定データＤ５０００がヒット化合物Ｈｋ２として抽出される。さらに、図７（ｃ）に示すように、グループＧ３では閾値Ｐ３以上となった測定データＤ１０１００、Ｄ１０２００がヒット化合物Ｈｋ２として抽出される。
【０１１７】
なお、上記測定条件には、測定日以外にも、化合物とタンパクとの結合量の測定に用いる測定センサ等を採用することができる。また、化合物スクリーニング方法が化合物とタンパクとの結合量を並列的に測定して複数の測定データを同時に得るそれぞれの測定チャンネルを有するものである場合には、測定条件を、測定チャンネルとしてもよい。また、化合物スクリーニング方法が化合物を緩衝液に溶解させて化合物とタンパクとの結合量を測定するものである場合には、上記測定条件を、緩衝液の製造ロットとしてもよい。さらに、化合物スクリーニング方法が複数の測定装置を用いて化合物とタンパクとの結合量を測定するものである場合には、上記測定条件を測定装置としてもよい。
【０１１８】
さらに、上記以外の測定条件としては、測定容器、測定容器中に複数設けられた測定用流路、測定容器の各測定用流路毎に個別に設けられた全反射減衰角を測定するための測定用光学系、測定が行なわれるときの環境温度、および化合物溶液調液からの経過時間（化合物溶液を収容するプレート）、屈折率基準液の調液ロット等を採用することができる。
【０１１９】
以下に上記各測定条件について説明する。
【０１２０】
・測定容器について
繰り返し測定に用いられる上記測定容器を構成する細長いプリズム２５（図２参照）の全反射面Ｌｓ上に成膜された金膜Ｍｅ上に配された上流側リンカー膜Ｒｊおよび下流側リンカー膜Ｒｋ（以後、まとめてリンカー膜Ｒという）は、金膜Ｍｅ上へＳＡＭ層（Self-Assembled Monolayer）とＣＭＤ層（カルボメチルデキストラン層）とをこの順に積層したものである。上記金膜Ｍｅ上へのＳＡＭ層とＣＭＤ層の積層はプリズムＰ２５を個別に液中浸漬して行なわれる。その後、このようにして形成されたリンカー膜Ｒ上に１種類のタンパクが固定される。そのため、個別に液中浸漬された各測定容器毎にリンカー膜Ｒ上にタンパクを固定する性能に差が生じる。したがって、測定条件である測定容器が同一のものからなるグループに分けることにより、上記スクリーニングの信頼性をより高める効果を得ることができる。
【０１２１】
・測定容器中に複数設けられた測定用流路について
測定容器を構成する細長いプリズムＰ２５の全反射面Ｌｓ上の金膜Ｍｅは、スパッタリングによって成膜される。このスパッタリングによる成膜は、プリズムＰ２５を、このプリズムＰ２５の全反射面Ｌｓをスパッタリングターゲットに対向させるように真空チャンバー内へ配して行なわれる。このスパッタリングターゲットとの間の距離の違い等により上記スパッタリングによって成膜された金膜の厚さは全反射面Ｌｓ中の場所によって僅かに異なる。また、上記全反射面Ｌｓに光を照射して測定される全反射減衰角は金膜の厚さに応じて変化する。そして、測定容器中の各測定用流路毎に、測定で得られる全反射減衰角に特有の誤差、すなわち特有の傾向を示す誤差が生じる。したがって、測定条件である測定用流路が同一のものからなるグループに分けることにより、上記スクリーニングの信頼性をより高める効果を得ることができる。
【０１２２】
・測定用光学系について
全反射減衰角を測定する際に、測定容器中の各測定用流路毎に設けられた個別の測定光学系Ｏｐ（Ｏｐ１〜Ｏｐ６：図１参照）は、互に異なる光路に光を通す。各測定光学系Ｏｐ１〜Ｏｐ６には、各光路を構成する光学部品およびそれらの配置に多少の違いがある。それらの違いにより、測定で得られる全反射減衰角に特有の誤差、すなわち特有の傾向を示す誤差が生じる。したがって、測定条件である測定用光学系が同一のものからなるグループに分けることにより、上記スクリーニングの信頼性をより高める効果を得ることができる。
【０１２３】
・環境温度について
測定を行なうときの環境温度に応じて、プレートに収容された化合物溶液の温度と測定用容器の温度とに差が生じる。化合物溶液と測定用容器との温度差によって、上述したように温度化合物溶液がａｃｔを通過するときの温度とこの化合物溶液がｒｅｆ領域を通過するときの温度との間に差が生じ、かつ、その温度差の値も変動する。この温度の変動によって化合物溶液の屈折率の値が変動する。そのため、環境温度の違いにより、測定で得られる全反射減衰角に特有の誤差、すなわち特有の傾向を示す誤差が生じる。したがって、測定条件である環境温度が同一のものからなるグループに分けることにより、上記スクリーニングの信頼性をより高める効果を得ることができる。
【０１２４】
・化合物溶液調液からの経過時間（化合物溶液を収容するプレート）について
化合物溶液は、化合物をＰＢＳ液（リン酸緩衝液）中に溶解させて調液したものである。上記化合物は、薄められていない１００％ＤＭＳＯ液（Dimethyl Sulfoxide 液）に混ぜた状態で供給されるものであり、この化合物を含むＤＭＳＯ液がＰＢＳ液に溶解されて化合物溶液となる。ここで、時間の経過とともにＰＢＳ液が蒸発し化合物溶液の濃度、すなわち屈折率が変化する。そのため、化合物溶を液調してからの経過時間の違いにより、測定で得られる全反射減衰角に特有の誤差、すなわち特有の傾向を示す誤差が生じる。したがって、測定条件である化合物溶液調からの経過時間が同一のものからなるグループに分けることにより、上記スクリーニングの信頼性をより高める効果を得ることができる。
【０１２５】
また、上記のように３８４種類の化合物溶液を収容するプレートには、３８４個の注入管で吸引されたＰＢＳ液が同時に吐出されて化合物溶液が調液される。したがって同じプレート中の各化合物溶液は、化合物溶液調液からの経過時間が同一となり、測定条件を複数種類の化合物溶液を収容する上記プレートとすることもできる。なお、上記化合物溶液調液からの経過時間は、ＰＢＳ液が蒸発可能な状態での経過時間である。したがって、上記調液後に化合物溶液を封止してＰＢＳ液の蒸発を禁止した場合、その蒸発を禁止している間の時間は上記経過時間に含まない。
【０１２６】
・屈折率基準液の調液ロットについて
屈折率基準液は、上述のように各測定用流路毎の金膜Ｍｅの厚さの違いによって生じる各測定用流路毎の全反射減衰角の違いに起因する測定データの誤差を補正するために用いられるものであり、互に異なる複数種類の屈折率を有する屈折率基準液が用意される。
【０１２７】
上記屈折率基準液は、化合物溶液の屈折率近傍の屈折率となるように調液される。例えば、化合物溶液が、１００％ＤＭＳＯ液に混ぜて供給された化合物とＰＢＳ液との比率を１：９の割合で調液したものである場合には、概略ＤＭＳＯ液１に対しＰＢＳ液９の比率で調液した屈折率基準液を用いる。より具体的には、屈折率基準液としては互に屈折率の異なる４種類のものを用意するので、ＤＭＳＯ液とＰＢＳ液との比率を、9.5:90.5、10.0:90.0、10.5:89.5、11.0:89.0それぞれの比率で調液した４種類のものを用いる。
【０１２８】
しかしながら、ＤＭＳＯ液とＰＢＳ液との比率は、調液する毎に多少の誤差が生じ、これにより屈折率基準液の屈折率も目標値と完全に一致するわけではなく誤差が生じる。そのため、屈折率基準液を調液する際のロットの違いに応じて、補正する際に屈折率の異なる液を使うことになる。その結果、補正時に特有の誤差、すなわち特有の傾向を示す誤差が生じる。
【０１２９】
したがって、測定条件である屈折率基準液の調液ロットが同一のものからなるグループに分けることにより、上記スクリーニングの信頼性をより高める効果を得ることができる。すなわち、調液ロットが同一の屈折率基準液によって補正された測定データからなるグループに分けることにより、測定データに含まれる測定誤差の傾向を揃えることができ、これにより上記スクリーニングの信頼性をより高める効果を得ることができる。
【０１３０】
なお、上記測定条件は、測定日、測定センサ、測定チャンネル、緩衝液の製造ロット、測定装置、測定容器、測定用流路、測定用光学系、環境温度、化合物溶液調液からの経過時間、化合物溶液を収容するプレート、および屈折率基準液の調液ロットのうちの１つ、または２つ以上の組み合わせとすることもできる。
【０１３１】
また、上記代表値は必ずしも測定データの値の平均値を用いる場合に限らず。出現度数の最も多い測定データの値等を採用することもできる。
【０１３２】
また、閾値は測定データの値の標準偏差に基づいて定める場合に限らず、どのような手法を用いて定めてもよい。
【０１３３】
なお、全反射面Ｌｓ上には金膜Ｍｅを成膜する場合に限らず、金以外の金属からなる金属膜を成膜するようにしてもよい。さらに、成膜はスパッタリングで行う場合に限らず真空蒸着等の手法を採用して実施してもよい。
【０１３４】
また、上記実施の形態の化合物スクリーニング方法は、リファレンスを用いて外乱の影響を相殺し、タンパクと化合物との結合量を示す測定データを得る場合について説明したが、本発明の化合物スクリーニング方法は、レファレンスを用いることなく上記測定データを得る場合にも適用することができる。
【０１３５】
なお、上記化合物スクリーニング方法は、例えば漏洩モード測定装置を用いて実施される、複数種類の化合物の中から１種類のタンパクと結合するヒット化合物を抽出する化合物スクリーニングや、その他の測定原理を利用した装置による化合物スクリーニングにも適用することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１３６】
【図１】本発明の化合物スクリーニング方法を実行する装置の概略構成を示す概念図
【図２】測定容器の拡大斜視図
【図３ａ】化合物測定データライブラリ中の１日目のデータを示す図
【図３ｂ】化合物測定データライブラリ中の２日目のデータを示す図
【図３ｃ】化合物測定データライブラリ中の３日目のデータを示す図
【図４】図４（ａ）は測定データを用いて作成したヒストグラムを示す図、図４（ｂ）は上記測定データを測定条件が同一のものからなるグループに分けて示したヒストグラムを示す図
【図５】測定日毎に生じた測定の変動分を取り除いた補正済測定データを用いて作成したヒストグラムを示す図
【図６】測定用流路を流れる化合物溶液の温度差を示す図であり、図６（ａ）は１日目の温度差、図６（ｂ）は２日目の温度差を示す図
【図７】グループ毎に閾値を定めて個別にヒット化合物を抽出する場合を示す図であり、図７（ａ）はグループ１を示す図、図７（ｂ）はグループ２を示す図、図７（ｃ）はグループ３を示す図
【符号の説明】
【０１３７】
１００    化合物スクリーニング装置
１１０    測定装置
１６０    スクリーニング装置
Ｔａ    タンパク
Ｋ１、Ｋ２    化合物
Ｄ１、Ｄ２    測定データ
Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３    グループ
Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３    代表値
Ｄ１′、Ｄ２′    補正済測定データ
Ｑ    閾値
【図１】
0004672560.tif 000002
【図２】
0004672560.tif 000003
【図３ａ】
0004672560.tif 000004
【図３ｂ】
0004672560.tif 000005
【図３ｃ】
0004672560.tif 000006
【図４】
0004672560.tif 000007
【図５】
0004672560.tif 000008
【図６】
0004672560.tif 000009
【図７】
0004672560.tif 000010