(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハスの種子から取り出した胚芽を、水と、エタノール、イソプロパノール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン及びプロピレングリコールから選択される有機溶媒との混合溶媒で抽出して得られたハス胚芽抽出物からなることを特徴とするコラーゲン産生促進剤。
【請求項２】
ハスの種子から取り出した胚芽を、水と、エタノール、イソプロパノール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン及びプロピレングリコールから選択される有機溶媒との混合溶媒で抽出して得られたハス胚芽抽出物からなり、線維芽細胞増殖作用を有することを特徴とする線維芽細胞増殖剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はエストロゲン様作用剤及びコラーゲン産生促進剤、線維芽細胞増殖作用剤、美容用食品並びに皮膚化粧料に関する。具体的には、女性ホルモンの一種であるエストロゲンと同様の作用を有する新規なエストロゲン様作用剤、皮膚を構成するコラーゲンの産生を促進するコラーゲン産生促進剤、人の皮膚にある線維芽細胞を活発化させる線維芽細胞増殖作用剤並びにこれらの薬剤を使用した美容用食品及び皮膚化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
加齢に伴う皮膚老化の一因は、女性ホルモンの一種であるエストロゲンの分泌が減退することである。そこで、エストロゲンの分泌が衰える更年期以後の女性に対して、エストロゲンと同様の作用をする物質を経皮的または経口的に投与することが行われている。そのためのエストロゲン様作用剤として、従来から、ステロイド系エストロゲン、非ステロイド系エストロゲン、フラボン系化合物等が使用されてきた。
【０００３】
ここにおいて、皮膚の表皮及び真皮は、表皮細胞、線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン等の細胞外マトリックスにより構成されている。
【０００４】
若い皮膚においては、線維芽細胞の増殖は活発であり、線維芽細胞やコラーゲン等の皮膚構成組織の相互作用が恒常性を保つことにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
【０００５】
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、線維芽細胞の増殖が遅くなり、コラーゲンの産生量も減少する。その結果、皮膚はその保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始め、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。
【０００６】
このような皮膚の老化を防止・改善するために最も普通に行われているのは、天然保湿因子（ＮＭＦ）である糖、アミノ酸、有機酸、ピロリドンカルボン酸塩、コラーゲン、ヒアルロン酸等のムコ多糖類、グリセリン、１，３−ブチレングリコール等の保湿作用のある物質を塗布して皮膚の保湿性を高めることである。しかしながら、保湿剤は表皮の角質の状態を改善することは期待できない。また、皮膚からの水分蒸発を遅くするものであるから概して使用感が悪く、長期間使用すると皮膚障害を起こすことさえある。
【０００７】
従って、皮膚の老化を効果的に防止し、張りや艶を失わせないためには、従来の保湿剤では不十分であり、線維芽細胞の賦活化作用やコラーゲン等の産生促進作用を有する薬剤を使用するのが好ましい。
【０００８】
一方、ハスは古来よりその実は食されてあるいは漢方薬として使用されており、その安全性は確立されている。このハスを用いたものとして、例えば、特開昭６２−５１６０６号公報に、日焼け後のほてり、カミソリまけや肌荒れ等に作用するとして、スイレン科植物から水や低級アルコールなどの溶媒を用いて抽出された抽出物が開示されている。また、ハスの種子の胚芽を用いたものとしては、特開昭６３−６６１２６号公報に、水や水混和性の有機溶媒などを用いて抽出された抽出物が血圧降下作用を有するとして、さらには、特開昭６４−９０１２９号公報に、同じくハスの胚芽から水や低級アルコールなどの溶媒を用いて抽出された抽出物が、高血圧症などの循環器疾患や気管支喘息などの呼吸器疾患、不眠症などの中枢神経疾患などに作用を有するとして、それぞれ開示されている。
【０００９】
しかしながら、ハス（種子）の胚芽については上記作用・効果が知られているだけであり、皮膚の老化防止作用等については、知られていなかった。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明者らは、皮膚の老化を効果的に防止し、張りや艶を維持するものとして、従来の保湿剤になり変わる新たな薬剤を求めるべく、鋭意努力したところ、ハス胚芽の抽出物中に、エストロゲン作用やコラーゲン産生の促進作用並びに線維芽細胞増殖作用があることを見い出し、本発明を完成させるに至った。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明に係るエストロゲン様作用剤及びコラーゲン産生促進剤並びに線維芽細胞増殖作用剤は、それぞれハス胚芽抽出物からなることを特徴としている。本発明においては、すいれん科ハス属のハス(Nelumbo nucifera Gaertn.)の種子中にある胚（胚芽）が用いられる。胚芽は、通常緑色で棒状をしており、採取した種子から取り出し、直ちに乾燥したものが好適に用いられる。
【００１２】
ハス胚芽抽出物は、この胚芽を、水やメタノール、エタノール、イソプロパノールなどの各種脂肪族低級アルコール、１，３−ブチレングリコール、エチレングリコール、グリセリンなどの親水性有機溶媒、これら親水性有機溶媒の混合物及びこれらの親水性有機溶媒と水との混液などの各種水系溶媒を用いて抽出することにより得られるものである。
【００１３】
抽出に際しては得られた胚芽をそのまま用いることもできるが、抽出効率を高めるため、粉砕して用いるのが好ましい。また、ヘキサンなどの非水系溶媒（非極性溶媒）を用いて予め脱脂処理しておくと、不純物含量が少なくなり、より効果の高い抽出物が得られる。
【００１４】
抽出は、室温ないし加熱下において、抽出溶媒に応じて任意の装置を用いて行うことができる。例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に粉砕したハス胚芽を投入し、ときどき撹拌しながら可溶性成分を溶出させる。その後、ろ過して抽出残渣を除去し、抽出液を得ることができる。このとき用いる溶媒量は、概ねハス胚芽に対して重量比で、１：５〜１：２０となるように用いるのがよい。
【００１５】
こうして得られた抽出物（液）は、そのままエストロゲン様作用剤として、またはコラーゲン産生促進剤として、あるいは線維芽細胞増殖作用剤として用いることも出来るが、抽出液を濃縮した濃縮液やさらに濃縮したエキス状物あるいは、抽出溶媒等を留去した乾燥物として提供することもできる。
【００１６】
また、ハス胚芽の抽出物は特有のにおいと味を有するので、生理活性を低下させない程度に脱臭や脱色等を目的として精製を行うのが好ましい。もちろん、その使用目的等に応じて、例えば本発明に係る美容用食品や皮膚化粧料に含有させる場合には、大量に使用するものではないため、そのまま使用しても実用上差し支えない。
【００１７】
さらに本発明のエストロゲン様作用剤やコラーゲン産生促進剤並びに線維芽細胞増殖作用剤には、必要に応じて上記抽出物に、保存やその取り扱いを容易にすべく、ショ糖や乳糖などの各種糖類、たんぱく質やデンプンなどの賦形剤、その他の任意の助剤を用いることにしてもよい。また、適宜、製剤化して提供することも可能であって、例えば、粉末状、顆粒状、錠剤状など任意の剤形として提供することも可能なものである。
【００１８】
これらのエストロゲン様作用剤やコラーゲン産生促進剤並びに線維芽細胞増殖作用剤は、任意の食品に添加することにより、あるいはこれらを主成分とした栄養補助食品などの美容用食品として、経口的に活用することができる。添加可能な食品には、例えば、各種の清涼飲料水や果汁飲料、和洋菓子、乳製品その他の畜産加工品、果実加工品、野菜加工品、穀物の加工品、水産加工品、調味料、ビタミンなどを主成分としたいわゆる各種の健康食品などの多くの飲食品が挙げられる。また、栄養補助食品としても、例えば、液剤の形態のものや錠剤などの形態のものとして提供することもできる。この場合の添加率は、添加対象である美容用食品の一般的な摂取量を考慮して、液状、固形状など抽出物の形態によっても異なるが、概ね通常成人１日当たりのハス胚芽抽出物摂取量として約１〜１０００ｍｇ、原料であるハス胚芽乾燥物に換算して、概ね４〜１２００ｍｇになるように添加するのが適当である。
【００１９】
また、ハス胚芽抽出物の作用を最も効果的に発揮させるためには、各種の皮膚化粧料に配合することである。配合対象として適当な皮膚化粧料は、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、入浴剤等であり、この場合の配合量として、ハス胚芽抽出物として概ね０．０１〜１０重量％、原料であるハス胚芽乾燥物換算として、概ね０．０４〜４０％になるように添加するのが適当である。
【００２０】
なお、本発明に係る美容用食品や皮膚化粧料には、これらのエストロゲン様作用，コラーゲン産生促進作用あるいは線維芽細胞増殖作用のいずれかを妨げない限り、これらの美容用食品や皮膚化粧料の製造に通常用いられる各種の原材料を用いることができるのは言うまでもない。
【００２１】
【実施例】
次に、本発明の実施例であるエストロゲン様作用剤やコラーゲン産生促進剤並びに線維芽細胞増殖作用剤並びに本発明の製剤例である美容用食品及び皮膚化粧料を示し、さらに本発明について詳細に説明する。
【００２２】
（実施例１）
ハス胚芽の粗砕物３００ｇを表１に示す抽出溶媒２０００ｍｌにそれぞれ投入し、ゆるく撹拌しながら７０℃で３時間抽出した。その後、ろ過して得たろ液を４０℃で減圧下に濃縮した後、さらに減圧乾燥機で乾燥して、粉末状のハス胚芽抽出物であるエストロゲン様作用剤、コラーゲン産生促進作用剤、線維芽細胞増殖作用剤を得た。その収量を表１に示す。
【００２３】
【表１】
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【００２４】
（実施例２）
ハス胚芽の粗砕物３００ｇを、１，３−ブチレングリコールと水の混液（容量比１：１）２０００ｍｌに投入し、撹拌しながら８０℃で３時間抽出した。その後、ろ過して液体状のハス胚芽抽出物であるエストロゲン様作用剤、コラーゲン産生促進作用剤、線維芽細胞増殖作用剤、１４４０ｍｌを得た。このものの固形分濃度は、４．０重量％であった。なお、固形分濃度は、当該抽出物の少量を取り、蒸発乾固させて求めた（以下同様）。
【００２５】
（実施例３）
抽出溶媒をグリセリンと水の混液（容量比１：１）を用いた他は、実施例２と同様にして、液体状のハス胚芽抽出物１５４０ｍｌを得た。このものの固形分濃度は、３．５重量％であった。
【００２６】
（実施例４）
抽出溶媒をプロピレングリコールと水の混液（容量比１：１）２０００ｍｌを用いた他は、実施例２と同様にして、液体状のハス胚芽抽出物１５４０ｍｌを得た。このものの固形分濃度は、３．３重量％であった。
【００２７】
次に、上記実施例１ないし実施例４で得た各種エストロゲン様作用剤、コラーゲン産生促進作用剤、線維芽細胞増殖作用剤を用いて、本発明に係る皮膚化粧料及び美容用食品を各種作製した。
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上記成分分量を取り、常法に従って本発明に係る皮膚化粧料である乳液を作製した。
【００２８】
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上記成分分量を取り、常法に従って本発明に係る皮膚化粧料である乳液を作製した。
【００２９】
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上記成分分量を取り、常法に従って本発明に係る皮膚化粧料である化粧水を作製した。
【００３０】
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上記成分分量を取り、常法に従って本発明に係る皮膚化粧料であるＷ／Ｏ型のクリームを作製した。
【００３１】
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上記成分分量を取り、常法に従って本発明に係る皮膚化粧料であるパックを作製した。
【００３２】
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上記成分分量を取り、常法に従って本発明に係る美容用食品である錠剤状の健康・栄養補助食品を製造した。
【００３３】
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上記成分分量を取り、常法に従って本発明に係る美容用食品である顆粒状の健康・栄養補助食品を製造した。
【００３４】
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上記成分分量を取り、常法に従ってゼラチンカプセル化し、本発明に係る美容用食品であるカプセル状の健康・栄養補助食品を製造した。
【００３５】
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上記成分分量を取り、撹拌溶解して、本発明に係る美容用食品である清涼飲料水状の健康・栄養補助食品を製造した。
【００３６】
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上記成分分量を取り、常法に従って本発明に係る美容用食品であるキャンディ状の健康・栄養補助食品を製造した。
【００３７】
（効果試験）
〔エストロゲン様作用〕
上記実施例１〜４で得た各種ハス胚芽抽出物について、エストロゲン依存性細胞の増殖に対する影響を調べるＴｈｏｍａｓらの方法（In  Vitro  Cell.  Dev.  Biol.  28A，５９５−６０２，１９９２）に従って、エストロゲン様作用を調べた。その結果を表２に示す。なお、水を用いたコントロール値を１００として示す。
【００３８】
【表２】
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【００３９】
〔コラーゲン産生促進作用〕
上記実施例１〜４で得た各抽出物について、Websterらの方法（Anal.Biochem.,Vol96,220,1979）に従って、各抽出物を添加した培地で培養した線維芽細胞によって産生されたコラーゲン量を測定した。一方、各抽出物を添加しない培地で産生された放射活性を測定し、このコラーゲン量を１００とした場合のコラーゲン産生量割合を求めた。以下に具体的な試験方法を示し、その結果を表３に示す。
試験法：ヒトの線維芽細胞をプレートに播種し、３７℃、５％二酸化炭素下、２種類の試料添加培地（試料濃度：２００ｐｐｍ及び５０ｐｐｍ）で数日間培養した後、β−アミノプロピオニトリルと［3Ｈ］−プロリンとを添加し、更に２４時間培養した。当該培養液全体にペプシン／酢酸溶液を加えて４℃下で１６時間消化し、次いでこの消化液にキャリアーを加えて、０．７Ｍ食塩水で沈殿させ、さらに中性条件下で再溶解させて、４．２Ｍ食塩水で再沈殿させた。得られた沈殿物を２０ｖ／ｖ％エタノールで洗浄した後、その沈殿物の放射活性を測定した。
【００４０】
【表３】
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【００４１】
〔線維芽細胞増殖作用〕
上記実施例１〜４で得た各種ハス胚芽抽出物について、多田らによるＭＴＴ法（J.Immunol.Medhods.９３,１５７,１９８６）に従い、ヒト正常新生児皮膚線維芽細胞（ＮＢＩＲＧＢ）を用いて線維芽細胞増殖作用を測定した。その結果を表４に示す。なお、水を用いたコントロール値を１００として示す。
【００４２】
【表４】
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（評価結果）
表２ないし表４に示すように、水やエタノール、イソプロパノールと水の混液、１，３−ブチレングリコールと水の混液など各種水系溶媒を用いたハス胚芽抽出物には、それぞれ良好なエストロゲン様作用、コラーゲン産生促進作用並びに線維芽細胞増殖作用が認められた。
【００４３】
〔肌荒れ改善効果〕
次に上記製剤例１に示す乳液について、下記の評価試験を行った。なお、比較例として、ハス胚芽抽出物を含まない乳液を作製し、これを用いた。
・被験者：２２〜４３歳の健常な多数の女性の中から、下記評価基準に従って評点１又は２に該当する肌荒れと判断された者２０名を被験者として選定した。
・塗布試験：各被験者に、顔の右半分製剤例１に示す乳液を、左半分には比較例である乳液を、朝夕各１回、その適量を３０日間塗布してもらった。
・評価：塗布試験終了後、シルフロ（Flexicl Developments Ltd 製）によるレプリカ法を用いて、顔のレプリカを取り、倍率５０倍の光学顕微鏡で皮紋の状態及び角質剥離状態を観察し、下記の評価基準に従って肌の状態を判定した。その判定結果を表５に示す。
【００４４】
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【００４５】
【表５】
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【００４６】
表５に示すように、本発明の製剤例である乳液を塗布した領域においては、比較例である乳液を塗布した場合に比べ、顕著に肌荒れが改善されたことが分かる。
【００４７】
【発明の効果】
本発明によれば、安全性が高く、エストロゲンと同様の作用を有する新規なエストロゲン様作用剤、皮膚を構成するコラーゲンの産生を促進するコラーゲン産生促進剤、人の皮膚にある線維芽細胞を活発化させる線維芽細胞増殖作用剤を提供できる。これらを美容用食品や皮膚化粧料に適用することにより、皮膚の老化を効果的に防止し、張りや艶の維持に大きく貢献できる。