(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
藤茶枝葉部抽出物を有効成分として含有することを特徴とする血小板凝集抑制剤（血栓症の予防・治療用途を除く。）。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、日焼けなどの外的刺激による皮膚の荒れ、シワ、タルミ、くすみ、色素の異常沈着、アレルギー等の予防または改善に有効な皮膚化粧料および浴用剤、ならびに、皮膚化粧料構成成分として好適な活性酸素消去剤および血小板凝集抑制剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
籐茶は学名Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ  ｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ（Ｈａｎｄ．−Ｍａｚｚ．）Ｗ．Ｔ．Ｗａｎｇ  ＣＶのぶどう科植物であって、中国の中部から南部にわたる広い地域で自生する多年生の蔓性植物であるが、台湾では栽培もされている。
【０００３】
中国では古来この植物の葉部を飲料として利用する地方があるほか、根部または全草が黄疸性肝炎、風邪、のどの痛み、急性結膜炎等の治療のための民間薬として利用されてきた。しかしながら、これらの用途における有効成分や薬理作用についてはほとんど解明されていない。
【０００４】
籐茶の葉部からアンペロプシンと呼ばれるフラボノイドを単離したという報告（中国薬学雑誌，ｖｏｌ．３１，４５８〜４６１，１９９６年）もあるが、単離されたアンペロプシンの薬理作用については血圧降下作用が報告されているにすぎない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、何らかの有用成分を含有することは予想されていてもその解明がなされないまま低いレベルの利用に止まっていた籐茶について有用成分を探索し、新規な用途を提供することにある。
【０００６】
本発明の他の目的は、籐茶を原料にして安全性の高い活性酸素種消去剤、血小板凝集抑制剤、皮膚化粧料および浴用剤を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、本発明者らにより血小板凝集抑制作用を有することが確認された藤茶枝葉部の抽出物を有効成分とする血小板凝集抑制剤（血栓症の予防・治療用途を除く。）を提供するものである。
【０００８】
籐茶枝葉部に含まれていて活性酸素消去作用を有する物質は、籐茶の枝葉部を親水性有機溶媒（たとえばメタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等）、水、またはこれらの混合物を用いて容易に抽出することができる。
【０００９】
血小板凝集抑制作用を有する籐茶抽出物も同様の抽出溶媒を用いる抽出によって得られるが、親水性有機溶媒による抽出物が強い活性を示し、それに比べると水抽出物の活性は弱い。
【００１０】
したがって、親水性有機溶媒による籐茶枝葉部抽出物が活性酸素消去作用と血小板凝集抑制作用のいずれにおいても強い活性を示し、皮膚化粧料や浴用剤に配合する成分として有利なものである。
【００１１】
活性酸素消去作用と血小板凝集抑制作用が籐茶抽出物中のいかなる化合物によるものなのかは確認されていないが、おそらくは、複数の化合物の作用が複合しているものと推察される。なお、本発明による活性酸素消去剤の有効成分となる籐茶枝葉部抽出物中には前記公知のフラボノイドであるアンペロプシンも含まれていると考えられ、また、フラボノイドは一般に活性酸素消去作用を有することが知られている。このため、籐茶枝葉部抽出物の活性酸素消去作用にはアンペロプシンが関与している可能性も考えられたが、後記試験例１の結果が示すように、籐茶枝葉部抽出物の活性酸素消去作用に比べればアンペロプシンの活性酸素消去作用は微弱である。したがって、アンペロプシンの関与はあり得るとしても、主要活性成分はアンペロプシンではないことが確認された。
【００１２】
活性酸素消去作用や血小板凝集抑制作用を有する籐茶枝葉部抽出物は、皮膚の好ましくない変化を防ぐための皮膚化粧料や浴用剤の構成成分として有用なものである。すなわち、皮膚は紫外線等の環境因子の刺激を直接受けるため活性酸素が発生しやすい器官であるから、何らかの理由により生体の活性酸素消去作用が十分に働かないとスーパーオキサイドアニオン（Ｏ２−）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（ＨＯ・）、一重項酸素（１Ｏ２）等、活性酸素種の濃度が上昇し、それが原因でメラニンが異常生成してシミが生じたり、シワ、タルミ、肌荒れ等を生じたりする。また、なんらかの外部刺激により血小板の凝集反応が生じた場合も皮膚は炎症やアレルギー症状を起こす。
【００１３】
これら皮膚に現れる老化現象や障害は、日常的に使われる皮膚化粧料や浴用剤に活性酸素消去作用および血小板凝集抑制作用を有する籐茶枝葉部抽出物を配合しておくことにより効果的に予防され、あるいは改善されるのである。
【００１４】
活性酸素消去作用等を示す籐茶抽出物は、親水性有機溶媒を用いて得られた抽出物といえども水溶性であり、また多くの化粧料に配合しても安定であり、さらに経皮的に人体内によく吸収される性質のものである。しかも、皮膚に塗布しても皮膚を刺激したり炎症を起こさせたりすることがない。したがって、皮膚化粧料に配合してその有用作用を活用するのにきわめて好都合な性質を備えている。
【００１５】
上記有用作用を示す物質の抽出原料とする藤茶の枝葉部は、生のものでも乾燥物でも差し支えないが、あらかじめヘキサン等の非極性溶媒を用いて脂質を抽出した乾燥物を用いると、活性成分を効率よく抽出することができる。
【００１６】
抽出条件および抽出に用いる装置は特に限定されないが、好適には重量比で５〜１５倍量の前記抽出溶媒に藤茶の枝葉部を浸漬し、常温ないし１００℃程度の加熱下にゆるやかに撹拌しながら可溶性成分を溶出させる。濾過または遠心分離して得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、さらに乾燥すれば、固形の抽出物が得られる。ただし、活性酸素消去剤、血小板凝集抑制剤、あるいは皮膚化粧料構成成分として利用する藤茶枝葉部抽出物は固形の抽出物にしたものである必要はなく、上記抽出液またはその濃縮液の状態のものであってもよい。これらは、本発明の目的達成を妨げない限り、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理、液−液向流分配等の方法により精製してから用いてもよい。
【００１７】
得られた藤茶枝葉部抽出物またはそれを適宜精製したものは、そのまま、あるいは他の活性物質や成形助剤と共に、任意の剤形の活性酸素消去剤または血小板凝集抑制剤とすることができる。
【００１８】
活性酸素消去作用および血小板凝集抑制作用を有する籐茶枝葉部抽出物（上述のようにして活性酸素消去剤または血小板凝集抑制剤として製剤化されたものであってもよい）を皮膚化粧料または浴用剤に配合する場合、好適配合率は皮膚化粧料の種類や籐茶抽出物の種類によっても異なるが、平均的な籐茶抽出物として０．００１〜１０重量％（特に好ましくは０．０５〜２重量％）程度である。
【００１９】
本発明による皮膚化粧料の代表的な形態としては、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック等があるが、これらに限定されるわけではない。
【００２０】
藤茶抽出物を配合することによって他の皮膚化粧料構成成分または浴用剤構成成分の選択が制限されることはなく、たとえばアボガド油、コメヌカ油、コメ胚芽油、ラノリン、スクワラン等の油性物質；グリセリン、１，３−ブチレングリコール、コラーゲン、ヒアルロン酸およびその塩、コンドロイチン硫酸およびその塩、キトサン、キチン等の保湿剤；グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴ糖脂質等の複合脂質；ＳＯＤ、カタラーゼ、β−カロチン、イチョウ葉抽出物、ビタミンＣおよびその誘導体、ビタミンＥおよびその誘導体、オウゴン抽出物、クジン抽出物等の活性酸素消去作用物質；グアイアズレン、カマアズレンおよびその誘導体；グリチルリチン酸、グリチルレチン酸およびその塩、グリチルレチン酸誘導体、酸化亜鉛等の抗炎症剤；その他各種植物抽出物、増粘剤、防腐剤、紫外線吸収剤、香料、酸化防止剤、水、アルコール等、原料として通常使用されるものを任意に配合することができる。
【００２１】
【実施例】
抽出例１
乾燥した藤茶枝葉部の粗砕物５００ｇを水５リットルに投入し、還流加熱下に４時間抽出した。その後、濾過して得られた抽出液を減圧下に濃縮してペースト状物を得、それを凍結乾燥して、粉末状抽出物９７ｇを得た。
【００２２】
抽出例２
乾燥した藤茶枝葉部の粗砕物５００ｇを５０容量％含水エタノール５リットルに投入し、還流加熱下に４時間抽出した。その後、濾過して得られた抽出液を減圧下に濃縮してペースト状物を得、それを凍結乾燥して、粉末状抽出物１３０ｇを得た。
【００２３】
抽出例３
乾燥した藤茶枝葉部の粗砕物５００ｇをエタノール５リットルに投入し、還流加熱下に４時間抽出した。その後、濾過して得られた抽出液を減圧下に濃縮してペースト状物を得、それを凍結乾燥して、粉末状抽出物７９ｇを得た。
【００２４】
抽出例４
乾燥した藤茶枝葉部の粗砕物５００を１，３−ブチレングリコール７リットルに投入し、９５℃で５時間抽出した。冷却後、濾過して得られた濾液を５℃に５日間静置し、生じたオリや沈殿をケイソウ土濾過により除去し、澄明な抽出液（固形分濃度１．０５重量％）６リットルを得た。
【００２５】
抽出例５
乾燥した藤茶の枝葉部粗砕物５００ｇを８０％エタノール５リットルに投入し、還流加熱下に４時間抽出した。得られた抽出液を濾過し、減圧下に濃縮してペースト状物を得、それを凍結乾燥して、粉末状抽出物１００ｇを得た。
【００２６】
抽出例６
乾燥した藤茶の枝葉部粗砕物５００ｇをプロピレングリコール７リットルに投入し、９５℃で５時間抽出した。冷却後、濾過して得られた濾液を５℃に５日間静置し、生じたオリや沈殿をケイソウ土濾過により除去し、澄明な抽出液（固形分濃度０．２６重量％）６リットルを得た。
【００２７】
試験例１
抽出例１〜３の各例で得られた藤茶枝葉部抽出物および対照例としてのアンペロプシンについて、スーパーオキサイド消去作用、過酸化水素消去作用、およびＤＰＰＨ（ジフェニルピクリルヒドロラジカル）に対するラジカル消去作用を試験した。試験法は次のとおりである。
【００２８】
スーパーオキサイド消去作用（ＮＢＴ法）：３ｍＭキサンチン、０．０５Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ１０．２）、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、ＢＳＡ溶液および０．７５ｍＭ  ＮＢＴ  ０．１ｍｌを試験管にとり、これに試料溶液０．１ｍｌを添加し、２５℃で１０分間放置する。次いでキサンチンオキシダーゼ溶液を加えて素早く撹拌し、２５℃で２０分間静置する。その後６ｍＭ塩化銅を加えて反応を停止させ、５６０ｎｍにおける吸光度を測定する。同様の操作と吸光度測定を、酵素溶液を添加せずに行う。さらに、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行い、次式によりスーパーオキサイド消去率を求める。
【００２９】
消去率（％）＝〔１−（Ｓｔ−Ｓｏ）／（Ｂｔ−Ｂｏ）〕×１００
但し
Ｓｔ：試料溶液添加，酵素溶液添加時の吸光度
Ｓｏ：試料溶液添加，酵素溶液無添加時の吸光度
Ｂｔ：試料溶液無添加，酵素溶液添加時の吸光度
Ｂｏ：試料溶液無添加，酵素溶液無添加時の吸光度
【００３０】
試料溶液の試料濃度を段階的に変更して上記抑制率の測定を行い、活性酸素産生の抑制率が５０％になる試料溶液の濃度を内挿法により求める。
【００３１】
過酸化水素消去作用：過酸化水素の標準溶液（濃度１．５ｍＭ）１０μｌに試料溶液１０μｌを加え、３７℃で２０分間インキュベートしたのち発色試薬〔ＤＡ−−６４（和光純薬）を１０ｍＭ、トライトンＸ−１００を０．５％含む０．１Ｍ  ＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）にペルオキシダーゼ溶液（１００ｕｎｉｔ／ｍｌ，和光純薬）１ｍｌを加え、全量を１００ｍｌに調整したもの〕２．９８ｍｌを添加し、３７℃で５分間インキュベートし、その後、７２７ｎｍにおける吸光度を測定する。同様の操作と吸光度測定を、過酸化水素の標準溶液を添加せずに行う。さらに、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行い、次式により過酸化水素の消去率を求める。
【００３２】
消去率（％）＝〔１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）〕×１００
但し
Ａ：過酸化水素標準溶液添加，試料溶液無添加時の吸光度
Ｂ：過酸化水素標準溶液無添加，試料溶液無添加時の吸光度
Ｃ：過酸化水素標準溶液添加，試料溶液添加時の吸光度
Ｄ：過酸化水素標準溶液無添加，試料溶液添加時の吸光度
【００３３】
試料溶液の試料濃度を段階的に変更して上記消去率の測定を行い、過酸化水素の消去率が５０％になる試料溶液の濃度（ｐｐｍ）を内挿法により求める。
【００３４】
ＤＰＰＨに対するラジカル消去作用：１．５×１０−４Ｍ  ＤＰＰＨメタノール溶液３ｍｌに試料溶液３ｍｌを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜ、３０分間静置する。その後、５２０ｎｍの吸光度を測定する。対照試験として、試料溶液の代わりにその溶媒を用いて同様に操作し、５２０ｎｍの吸光度を測定する。また、空試験として、メタノールに試料溶液３ｍｌを加えたのち直ちに５２０ｎｍの吸光度を測定する。測定された各吸光度より、次式によりラジカル消去率を算出する。
【００３５】
消去率（％）＝〔１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ〕×１００
但し
Ａ：対照試験の吸光度
Ｂ：試料溶液を添加した場合の吸光度
Ｃ：空試験の吸光度
【００３６】
試料溶液の試料濃度を段階的に変更して上記消去率の測定を行い、ＤＰＰＨラジカルの消去率が５０％になる試料溶液の濃度を内挿法により求める。
試験結果を表１に示す。
【００３７】
【表１】
0004768097.tif 000002
【００３８】
試験例２
抽出例２および抽出例３で得られた藤茶枝葉部抽出物および対照例としてのアンペロプシンについて、下記の方法で血小板凝集抑制作用を試験した。
【００３９】
血小板凝集抑制作用：日本種白色家兎の血液に７７ｍＭ−ＥＤＴＡを１／１０量添加し、１０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して沈殿物を除く。上清を２１００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、沈殿した血小板を採取する。得られた血小板を血小板洗浄液に浮遊させ、２１００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。沈殿した血小板を採取し、血小板数が３０万個／μｌになるように血小板浮遊液に浮遊させる。上述のようにして調製した洗浄血小板浮遊液２３３μｌに塩化カルシウム溶液１μｌを加え、３７℃に１分間保温する。そこに試料溶液１μｌを加えて更に２分間同温度で保った後、１分間攪拌する。次いでコラーゲン溶液を２５μｌ添加し、３７℃で１０分保持後、可視光線透過率Ａを測定して血小板凝集状態の指標とする。別に、試料溶液を添加しない他は上記と同様に操作して可視光線透過率Ｂを測定し、測定された可視光線透過率より次式により血小板凝集抑制率を算出する。
血小板凝集抑制率（％）＝〔（Ｂ−Ａ）／Ｂ〕×１００
【００４０】
試料溶液の濃度を段階的に変更して上記方法により抑制率を測定し、抑制率が５０％になる試料溶液の濃度ＩＣ５０（ｐｐｍ）を内挿法により求める。
試験結果は表２のとおりであった。
【００４１】
【表２】
0004768097.tif 000003
【００４２】
実施例１
抽出例２で得られた藤茶枝葉部抽出物を配合した下記組成の乳液を乳液製造の常法に従い製造した。
藤茶枝葉部抽出物                              １ｇ
セチルアルコール                              ０．５ｇ
ミツロウ                                      ２ｇ
ＰＯＥ（１０）モノオレイン酸ソルビタン        １ｇ
グリセリンモノステアリン酸エステル            １ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム                        ０．１ｇ
プロピレングリコール                          ５ｇ
エタノール                                    ３ｇ
エチルパラベン                                ０．３ｇ
香料                                          ０．０３ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｍｌとする）
【００４３】
上記乳液、および藤茶枝葉部抽出物を配合しないほかは上記と同じ原料から同様にして製造された比較例乳液について、下記の塗布試験を行なった。
被験者：１８〜４０歳の女性多数の中から、下記判定１の評価基準で評価１または２に当たる肌荒れと判定された者２０名を選抜して被験者とした。
塗布試験：各被験者に、顔の左半分に実施例１の乳液を、右半分には比較例乳液を、朝夕各２回、３０日間塗布させた。
【００４４】
〔判定１・荒れ肌改善効果〕
塗布試験終了後、シルフロ（ＦＬＥＸＩＣＬ  ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴＳ  ＬＴＤ製）によるレプリカ法を用いて顔の肌のレプリカをとり、５０倍のマイクロスコープで皮紋の状態および角質剥離状態を観察し、下記評価基準で肌の状態を判定した。
【００４５】
評点                       評価                                      
１  角層の剥離が非常に多い。皮溝・皮丘が消失している。（肌荒れ状態）
２  角層の剥離が多い。皮溝・皮丘が明瞭でない。（肌荒れ状態）
３  角層が若干剥離している。皮溝・皮丘は認められるが平坦。（普通肌）
４  角層の剥離が僅かに認められる。皮溝・皮丘が鮮明。（比較的美しい肌）
５  角層の剥離が殆ど無い。皮溝・皮丘が鮮明で整っている。（美しい肌）
【００４６】
結果は表３に示したとおりで、実施例乳液を塗布した部分は比較例乳液を塗布した部分に比べて顕著に肌荒れが改善されていた。
【００４７】
【表３】
0004768097.tif 000004
【００４８】
〔判定２・くすみ改善効果〕
乳液塗布開始前と塗布終了後の肌について、くすみの指標となるメラニン量およびエリスマ量をメグリサメーター（日本ユーロテック社製）により測定し、３０日間の塗布によるメラニン量およびエリスマ量の低下率から下記の評価基準でくすみ改善効果を判定した。
【００４９】
0004768097.tif 000005
【００５０】
結果を表４に示す。実施例乳液を塗布した肌は比較例乳液を塗布した肌に比べてくすみの点でも明らかに改善されていた。
【００５１】
【表４】
0004768097.tif 000006
【００５２】
〔判定３・官能評価〕
使用感と肌への効果について、実施例品と比較例品を比較した場合の優劣を被験者全員に質問した。回答の集計結果は表５のとおりで、官能評価によっても前記機器による評価結果と合致する効果と優れた使用感が確認された。
【００５３】
【表５】
0004768097.tif 000007
【００５４】
実施例２
抽出例２による藤茶枝葉部抽出物を配合した下記組成のクリームを、クリーム製造の常法に従い製造した。
藤茶枝葉部抽出物                              ２ｇ
セトステアリルアルコール                      ３．５ｇ
スクワラン                                  ４０ｇ
ミツロウ                                      ３ｇ
還元ラノリン                                  ５ｇ
エチルパラベン                                ０．３ｇ
ＰＯＥ（２０）モノステアリン酸ソルビタン      ２ｇ
グリセリンモノステアリン酸エステル            ２ｇ
１，３−ブチレングリコール                    ５ｇ
香料                                        ０．０３ｇ
グリセリン                                ５ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｍｌとする）
【００５５】
実施例３
抽出例３による藤茶枝葉部抽出物を配合した下記組成の化粧水を、化粧水製造の常法に従い製造した。
藤茶枝葉部抽出物                              ０．５ｇ
グリセリン                                    ４ｇ
１，３−ブチレングリコール                    ４ｇ
エタノール                                    ７ｇ
ＰＯＥ（２０）モノステアリン酸ソルビタン      ０．５ｇ
メチルパラベン                                ０．０５ｇ
クエン酸                                      ０．０１ｇ
クエン酸ソーダ                                ０．１ｇ
香料                                          ０．０５ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｍｌとする）
【００５６】
実施例４
抽出例４による藤茶枝葉部抽出液を配合した下記組成のパックを常法により製造した。
藤茶枝葉部抽出液                    ６ｇ（固形分として０．００６３ｇ）
ポリビニルアルコール              １５ｇ
ポリエチレングリコール              ３ｇ
プロピレングリコール                ７ｇ
エタノール                        １０ｇ
メチルパラベン                      ０．０５ｇ
香料                                ０．０５ｇ
精製水                          残部（全量を１００ｍｌとする）
【００５７】
実施例５
抽出例５による藤茶枝葉部抽出物を配合した下記組成の浴用剤を常法により製造した。
藤茶枝葉部抽出物                              ５ｇ
モノラウリン酸ソルビタン                      １ｇ
ＰＯＥ（２０）モノステアリン酸ソルビタン      １．５ｇ
カルボキシビニルポリマー                      ０．０５ｇ
メチルパラベン                                ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール                  １０ｇ
変性アルコール                              １０ｇ
香料                                        少量
精製水                                  残部（全量を１００ｍｌとする）
【００５８】
実施例６
抽出例６による藤茶枝葉部抽出液を配合した下記組成の乳液を製造した。
藤茶枝葉部抽出液                １０ｇ（固形分として０．０００２６ｇ）
セチルアルコール                  ０．５ｇ
ミツロウ                                  ２ｇ
ＰＯＥ（１０）モノオレイン酸ソルビタン    １ｇ
グリセリンモノステアリン酸エステル        １ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム                    ０．１ｇ
プロピレングリコール                      ５ｇ
エタノール                                ３ｇ
エチルパラベン                            ０．３ｇ
香料                                      ０．０３ｇ
精製水                              残部（全量を１００ｍｌとする）
【００５９】
【発明の効果】
上述のように、籐茶から得られる活性酸素消去性成分および血小板凝集抑制性成分は活性が強いだけでなく皮膚に適用しても安全であり、皮膚化粧料や浴用剤の構成成分としての適性を備えている。したがって、本発明によれば皮膚の炎症や老化を防止する作用に優れた化粧料および浴用剤が提供されると共に、籐茶の新しい高度利用の方法が提供されることになる。