(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス・カゼイ及びビフィドバクテリウム・ブレーベより選ばれる１種又は２種以上の乳酸菌の菌体を有効成分とし、抗癌剤起因性消化器障害患者に投与されることを特徴とする消化器障害予防・治療剤。
【請求項２】
前記乳酸菌の菌体が、ラクトバチルス・カゼイ YIT 9018（生命工学工業技術研究所条寄第BP-665号）、ラクトバチルス・カゼイ YIT 9029（生命工学工業技術研究所条寄第BP-1366号）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ YIT 4064（生命工学工業技術研究所条寄第BP-2824号）及びビフィドバクテリウム・ブレーベ YIT 4065（生命工学工業技術研究所条寄第BP-6223号）より選ばれる１種又は２種以上の菌体であることを特徴とする請求項１に記載の消化器障害予防・治療剤。
【請求項３】
前記抗癌剤が塩酸イリノテカンであることを特徴とする請求項１又は２に記載の消化器障害予防・治療剤。
【請求項４】
前記消化器障害が、抗癌剤に起因する下痢であることを特徴とする請求項１〜３の何れか１項に記載の消化器障害予防・治療剤。
【請求項５】
前記消化器障害が、抗癌剤に起因する遅延性下痢であることを特徴とする請求項１〜４の何れか１項に記載の消化器障害予防・治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はインターロイキン１５（ＩＬ−１５）産生促進剤、抗癌剤の副作用による消化器障害を予防・治療する予防・治療剤、及び、飲食品に関する。更に詳しくは、抗癌剤と乳酸菌等の微生物菌体を併用することでＩＬ−１５の産生を促進し、抗癌剤の副作用による下痢を予防、或いは改善する効果を有する薬剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
抗癌剤による治療には、常に使用する抗癌剤の副作用の問題が懸念される。これら抗癌剤の副作用は多岐にわたり、例えばグルカロン、ミトブロニトール、クエン酸タモキシフェン、ソブゾキサン、フルタミド、または５−ＦＵ、フルツロン、メトトレキセート等の代謝拮抗薬などの抗癌剤は、副作用として下痢を誘発し、患者の体力を奪うことが問題となっている。（「今日の治療薬」（2000年版）、2000年5月25日第22版第3刷発行、水島  裕  編集、（株）南江堂）。
【０００３】
これらの抗癌剤の副作用による下痢を軽減する為に、これまで、抗生物質、漢方薬等が検討されている（Jpn. J. Pharmacol. 75, 407-413, 1997.、Jpn. J. Cancer Res., 86, 978-974, 1995.）。このような治療方法の例として、塩酸イリノテカン（ＣＰＴ−１１）の副作用による下痢の阻止には、抗生物質ストレプトマイシンとペニシリンＧの併用、或いはバンコマイシンの使用が効果的であることが報告されている（Cancer Res., 56, 3752, 1996.）。
【０００４】
しかしながら、近年、抗生物質の多用により耐性細菌、特にメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus；ＭＲＳＡ ）、またはバンコマイシン耐性腸球菌（Vancomycin resistant enterococci；ＶＲＥ）が出現するという問題が生じており、抗生物質はその使用の制限が論議されている。
【０００５】
そのため抗生物質以外の治療、或いは予防方法も検討されており、例えばＣＰＴ−１１の副作用で生じる下痢の場合は、ロペラミド、アセトルファン等の止痢薬による処置が効果的であるとされている。しかしながら、この治療法も全ての患者の症状改善には有効ではなかった（J. Natl. Cancer. Inst., 86, 446, 1994.、J. Clin. Oncol., 13, 2144, 1995.、J. Clin. Oncol., 16, 2745, 1998.）。
【０００６】
一方、インターロイキン１５（ＩＬ−１５）は、１９９４年にクローン化された新規な１５−ＫＤａのサイトカインで、インターロイキン２受容体（ＩＬ−２Ｒ）を介してＩＬ−２様の生理作用を発揮することが知られている。また、ＩＬ−１５は、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）やＮＫ細胞やγδＴ細胞やＢ細胞の分化促進、及び細胞障害性Ｔ細胞やＬＡＫの産生に作用する。例えば、腸上皮細胞（ＩＥＣ）のＩＬ−１５産生能が増強されることで、ＩＥＬの分化誘導能を促進し、消化管からの細菌やウイルスの侵入に対する抵抗性を高め、生体防御能が増加すると考えられている（Immunologic Research, 20(3), 219-235, 1999.）。
【０００７】
また、ＮＫ細胞の分化促進にはＩＬ−１５が必須であることが知られており、ＩＬ−１５によってＮＫ細胞の分化が促進されることで、宿主の癌細胞への障害活性増強による癌細胞の増殖阻止又は癌転移阻害効果が得られる。更に、ＩＬ−１５により活性化されたＮＫ細胞の産生するＩＦＮ−γは、Ｔｈ１細胞の分化を促進し、そのＴｈ１細胞が産生するＩＬ−１２は再びＮＫ細胞を活性化させる。こうした経路によってＴｈ１細胞への分化誘導が起こることによって、ひいては抗アレルギー効果が得られることが知られている。一方、動物実験では、ＩＬ−１５をもちいた遺伝子治療方法が知られている。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
ＩＬ−１５は塩酸イリノテカン（ＣＰＴ−１１）によって引き起こされる下痢に対して治療効果を有することが知られているが（CANCER RESEARCH, 58, 3270-3274, 1998）、治療にはＩＬ−１５の多量投与が必要となり、費用などの点で現実的ではなかった。そのため、生体内でのＩＬ−１５の産生を促進し、同様の効果を得る試みも検討されているが、著効な薬剤は見出されていない。
【０００９】
一方、これまでビフィドバクテリウム属を含む乳酸菌がＩＬ−１５の産生を増強することは知られておらず、また抗癌剤の副作用による下痢予防・治療に効果があることも、知られていなかった。
【００１０】
以上のような状況の下、本発明は、ＩＬ−１５の産生を増強し、抗癌剤の副作用による下痢等の消化器障害の予防・治療に有効であり、且つ副作用がきわめて少く、日常的に使用できる安全な素材を得ることを目的とする。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
請求項１に記載された発明に係る消化器障害予防・治療剤は、ラクトバチルス・カゼイ及びビフィドバクテリウム・ブレーベより選ばれる１種又は２種以上の乳酸菌の菌体を有効成分とし、抗癌剤起因性消化器障害患者に投与されることを特徴とするものである。
【００１２】
請求項２に記載された発明に係る消化器障害予防・治療剤は、請求項１に記載された乳酸菌の菌体が、ラクトバチルス・カゼイ YIT 9018、ラクトバチルス・カゼイ YIT 9029、ビフィドバクテリウム・ブレーベ YIT 4064及びビフィドバクテリウム・ブレーベ YIT 4065より選ばれる１種又は２種以上の菌体であることを特徴とするものである。
【００１３】
請求項３に記載された発明に係る消化器障害予防・治療剤は、請求項１又は２に記載の抗癌剤が塩酸イリノテカンであることを特徴とするものである。
【００１４】
請求項４に記載された発明に係る消化器障害予防・治療剤は、請求項１〜３の何れか１項に記載の消化器障害が、抗癌剤に起因する下痢であることを特徴とするものである。
【００１５】
請求項５に記載された発明に係る消化器障害予防・治療剤は、請求項１〜４の何れか１項に記載の消化器障害が、抗癌剤に起因する遅延性下痢であることを特徴とするものである。
【００１６】
【発明の実施の形態】
本発明者らは特定の微生物菌体が腸上皮細胞を刺激することにより、腸上皮細胞よりＩＬ−１５の産生が促進されることを見出し、本発明に至った。即ち、本発明においては、ビフィドバクテリウム属(Biffidobacterium)を含む乳酸菌より選ばれる１種又は２種以上の菌体を有効成分とするものであるため、ＩＬ−１５の産生を増強し、抗癌剤の副作用による下痢等の消化器障害の予防・治療に有効である。
【００１７】
具体的には、本発明で用いるビフィドバクテリウム属を含む乳酸菌としては、ＩＬ−１５産生促進効果を有する菌株であれば特に限定するものでなく、ラクトバチルス属(Lactobacillus )、ラクトコッカス属(Lactococcus )、ペディオコッカス属(Pediococcus )、ロイコノストック属(Leuconostoc )、ビフィドバクテリウム属(Biffidobacterium)、エンテロコッカス属(Enterococcus)、ストレプトコッカス属(Streptococcus )等の菌株から選択される１種又は２種以上の菌体であることを特徴とする。
【００１８】
更に具体的には、このような菌株としては、例えばラクトバチルス・カゼイ YIT 9018 （生命工学工業技術研究所条寄第BP-665号、昭和53年12月18日受託済み（微工研菌寄第4751号より移管））、ラクトバチルス・カゼイ YIT 9029（生命工学工業技術研究所条寄第BP-1366号、昭和56年1月12日受託済み（微工研菌寄第5852号より移管））、ラクトバチルス・ロイテリ YIT 0197 、ビフィドバクテリウム・ブレーベ YIT 4064（生命工学工業技術研究所条寄第BP-2824号、平成8年2月29日受託済み（微工研菌寄第P-15488号より移管））、ビフィドバクテリウム・ブレーベ YIT 4065（生命工学工業技術研究所条寄第BP-6223号、平成元年04月19日受託済み（微工研菌寄第P-10672 号より移管））、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ホルドニエ ATCC29071、ペディオコッカス・アシディラクティシ ATCC33314、ロイコノストック・ラクティス ATCC19256、エンテロコッカス・フェーカリス ATCC19433、ストレプトコッカス・サーモフィラス ATCC19258等があげられる。
【００１９】
これらのビフィドバクテリウム属を含む乳酸菌は、単独で用いてもよく、２種以上を同時に用いてもよい。また、使用に際しては生菌体、死菌体、またはその菌体構成物何れであっても好適に使用できる。
【００２０】
また、本発明では、このインターロイキン１５産生促進剤を有効成分とし、抗癌剤起因性消化器障害患者に投与されることを特徴とする消化器障害予防・治療剤及び飲食品を提供する。これにより、下痢等の消化器障害の予防・治療に有効な消化器障害予防・治療剤及び日常的に使用できる安全な飲食品を得ることができる。
【００２１】
即ち、本発明の消化器障害予防・治療剤は、抗癌剤起因性の消化器障害に対して効果を有する。このような副作用を生じさせる抗癌剤としては、イリノテカン、シスプラチン、アドレアマイシン、ケトティフェン、シスプラチン、グルカロン、ミトブロニトール、クエン酸タモキシフェン、ソブゾキサン、フルタミド、又は５−ＦＵ、フルツロン、メトトレキセート等の代謝拮抗薬等が挙げられる。
【００２２】
ビフィドバクテリウム属を含む乳酸菌の投与時期は特に規定しないが、抗癌剤を投与する前に、ビフィドバクテリウム属を含む乳酸菌の投与を開始するのが好ましく、特に抗癌剤を投与する数日前にビフィドバクテリウム属を含む乳酸菌の投与を開始するのが好ましい。また、これらの乳酸菌は単独で用いてもよいが、２種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２３】
ビフィドバクテリウム属を含む乳酸菌の投与量は、通常用いられる量であれば良く、例えばビフィドバクテリウム属を含む乳酸菌を体重あたり一日０．００３mg／kg〜 １g／kg投与すればよく、好ましくは１．５mg／kg〜２００mg／kg、更に好ましくは２mg／kg〜１００mg／kg、特に好ましくは５mg／kg〜５０mg／kg投与すれば良い。
【００２４】
本発明で開示された乳酸菌は、従来より食品等に使用されており、安全性が高く、従って剤形や投与量は任意に選定でき、食品、医薬品などに添加、配合して用いることができる。本発明素材は単品、あるいは液状または固体状の担体と配合し、かつ必要に応じて溶剤、分散剤、乳化剤、安定剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を配合し、例えば錠剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、カプセル剤等の所望の剤型にすることができる。
【００２５】
【実施例】
次に試験例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２６】
実施例１（ＩＬ−１５産生促進試験）
菌体としてはラクトバチルス・カゼイ  YIT 9029（以後、YIT9029と記載する）、ラクトバチルス・ロイテリ  YIT 0197（以後、YIT0197と記載する）を用いた。各々の菌体はＭＲＳ培地（Difco 社製）で一晩培養後、遠心分離にて回収し、洗浄後１００℃で３０分間加熱した。得られた菌体を凍結乾燥し、試料菌体とした。
【００２７】
得られた試料菌体５０μg／mlをＤＭＥＭ培地（Sigma社製）に懸濁し、ラット腸上皮細胞株ＩＥＣ６（ATCC  CRL-1592；以後ＩＥＣ６と記載する）１×１０６cells／mlに添加して培養した。なお、対照群としては菌株未投与のものを用いた。２４時間後、ＩＥＣ６を回収し、定法に従って抽出したｍＲＮＡからSigma の方法に従ってＲＴ−ＰＣＲを行い、ＰＣＲ産物をアガロースゲルにて電気泳動した。
【００２８】
泳動後のゲルをエチジウムブロマイド染色し、ＵＶ照射像を写真撮影した。この泳動パタンの写真を画像解析装置にてコンピューターに取り込み、解析ソフトにて目的ＰＣＲ産物のバンド強度とβ−アクチンのバンド強度を測定した。得られた測定結果からβ−アクチン量に対するＩＬ−１５量を算出し、発現量とした。結果を図１に示す。
【００２９】
図１はＩＬ−１５産生促進試験の結果を示す線図である。図１に示したように、YIT9029及びYIT0197でＩＬ−１５の発現誘導が確認され、その発現量はYIT9029の方がYIT0197より約４．４倍高い値を示した。一方、その他の菌株ではＩＬ−１５は、ほとんど発現しなかった。
【００３０】
実施例２（ＣＰＴ−１１に起因する下痢改善に関する菌株間の比較試験）
菌体としては、ラクトバチルス・カゼイ YIT 9018（以後、YIT9018と記載する）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ YIT 4065（以後、YIT4065と記載する）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ YIT 4064（以後、YIT4064と記載する）を用い、実施例１と同様の方法で加熱死菌体を調整し、試料菌体とした。また、抗生物質としてはＣＰＴ−１１（カンプト注、ヤクルト本社製）を用いた。
【００３１】
５〜６週齢のSlc:SDラット（雄、日本エス・エル・シー製）を１群各５匹として、各群に、YIT9018 、及びYIT4065 を０．１％、及び１．０％、YIT4064 を０．０５％の濃度で飼料（Ｆ−２、（株）船橋農場製）に混合し、ＣＰＴ−１１投与の２週間前からＣＰＴ−１１投与後３日目までの３週間混餌投与した。対照群にはＦ−２飼料のみを与えた。ＣＰＴ−１１はすべてのラットに６０mg／kgの用量で１日１回、４日間尾静脈内投与した。
【００３２】
糞便性状は水分を多く含んだ形の崩れた軟便ないし水様性の便を下痢と判定した。また、ＣＰＴ−１１投与期間中（図２のDay １〜Day ４）の投与後３時間以内に観察されたものを急性下痢、投与後の休薬期間中３日間（図２のDay ５〜Day ７）に観察されたものを遅延性下痢とした。結果を図２に示す。
【００３３】
図２はＣＰＴ−１１に起因する下痢改善に関する菌株間の比較試験の結果を示すグラフである。図２に示したように、ＣＰＴ−１１投与期間中の急性下痢発現には、各群間の差は無かった。一方、遅延性下痢の発現においては、YIT9018 、YIT4065 及びYIT4064 投与の何れの群においても対照群に比べ発症頻度と程度の低下傾向が認められた。特に、YIT9018 混餌群の効果は顕著であり、１．０％混餌群においては、休薬２日目に水様便が１例認められたのみであった。
【００３４】
実施例３（ＣＰＴ−１１に起因する下痢改善に関する投与濃度の比較試験）
菌株としてはYIT9018 を用いた。５〜６週齢のSlc:SDラット（雄、日本エス・エル・シー製）を１群各５匹として４群を設け、ＣＰＴ−１１投与の３日前から１０日間、０、７５、１５０、３００mg／kg／day でYIT9018 を１日３回に分けて強制経口投与した。ＣＰＴ−１１は実施例２と同様に６０mg／kgの用量で１日１回、４日間尾静脈内投与し、糞便性状は、実施例２と同様に判定した。結果を図３に示す。
【００３５】
図３はＣＰＴ−１１に起因する下痢改善に関する投与濃度の比較試験の結果を示すグラフである。図３に示したように、YIT9018 投与によって、Day １〜Day ４の急性下痢の発症頻度が低下した。また、Day ５〜Day ７の遅延性下痢は明らかな発症頻度と程度の低下が認められた。特に１５０mg／kg／day 投与群では遅延性下痢の発症が全く見られなかった。
【００３６】
実施例４（ＣＰＴ−１１に起因する下痢改善に関する投与時期の比較試験）
菌株としては、YIT9018 を用いた。５〜６週齢のSlc:SDラット（雄、日本エス・エル・シー製）を１群各１０匹として４群を設け、そのうちの３群は１５０mg／kg／day でYIT9018 を１日３回に分けて強制経口投与し、投与時期により、ＣＰＴ−１１投与の３日前から９日間（前処置群）、ＣＰＴ−１１投与開始日から６日間（同時処置群）、及びＣＰＴ−１１最終投与日から３日間（後処置群）の３群とした。他の１群はYIT9018 非投与の対照群とした。
【００３７】
ＣＰＴ−１１は実施例２と同様に６０mg／kgの用量で１日１回、４日間尾静脈内投与し、実施例２と同様に糞便性状を判定した。結果を図４に示す。図４はＣＰＴ−１１に起因する下痢改善に関する投与時期の比較試験の結果を示すグラフである。
【００３８】
図４に示したように、YIT9018 投与群と対照群の間で、Day １〜Day ４の急性下痢の発症頻度と程度に差はなかった。一方、YIT9018 の投与によって遅延性下痢の発症頻度と程度が抑制された。
【００３９】
（実施例５）飲食品の作成
処方例１
脱脂粉乳の２０％（W／V）溶液に１０％（W／V）ブドウ糖液糖を加え、これを基質として実施例３で用いた乳酸菌の培養液を０．５％（V／V）加え、３７℃、１８時間で培養し、発酵乳を作製した。尚、得られた発酵乳は味も良好であり、通常の発酵乳に比べて遜色の無いものであった。
【００４０】
処方例２
実施例１で用いた乳酸桿菌菌体を用いて以下に示す配合でパンを作成した。
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【００４１】
得られたパンは特徴的なサワー臭風味があり、味も良好であり、通常のパンに比べて遜色のないものであった。
【００４２】
以上に詳述したように、ビフィドバクテリウム属を含む乳酸菌より選ばれる１種又は２種以上を投与することによって、ＣＰＴ−１１等の抗癌剤に起因する下痢を予防、治療することが可能である。また、これらの菌体の投与により、抗原提示細胞のみならず、腸上皮細胞（ＩＥＣ）のＩＬ−１５産生能が増強され、結果、腸管上皮細胞間リンパ球（ＩＥＬ）の分化誘導能を促進し、消化管からの細菌やウイルスの侵入に対する抵抗性を高めることが期待できる。
【００４３】
また、ＮＫ細胞の分化を促進し、宿主の癌細胞への障害活性増強による癌細胞の増殖阻止、あるいは転移阻害効果も期待される。更に、活性化されたＮＫ細胞の産生するＩＦＮ−γにより、Ｔｈ１細胞の分化が促進され、抗アレルギー効果を示すことが期待される。
【００４４】
【発明の効果】
本発明は以上説明した通り、ＩＬ−１５の産生を増強し、抗癌剤の副作用によるの下痢予防・治療に有効であり、且つ副作用がきわめて少く、日常的に使用できる安全な素材を得ることができるという効果がある。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＩＬ−１５産生促進試験の結果を示す線図である。
【図２】ＣＰＴ−１１に起因する下痢改善に関する菌株間の比較試験の結果を示すグラフである。
【図３】ＣＰＴ−１１に起因する下痢改善に関する投与濃度の比較試験の結果を示すグラフである。
【図４】ＣＰＴ−１１に起因する下痢改善に関する投与時期の比較試験の結果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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