(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（IV）で表されるアミノアルコール：
【化２】
0004638413.tif 000016
（ここで、ｎは数１、２、３から選択される整数、ｍは数１、２、３から選択される整数、Ｘは水素原子およびアミノ基の２’および／またはそれ以降の位置が水酸化されていてもよいＣ１〜Ｃ４炭素鎖から成る群の中から選択され、Ｒ１は水素および直鎖または分岐鎖を有するおよび／または水酸化された飽和のＣ１〜Ｃ４炭素鎖から成る群の中から選択され、Ｒ２は水素、−ＯＨ、ＮＨ2および直鎖または分岐鎖を有するおよび／または水酸化された飽和のＣ１〜Ｃ４炭素鎖から成る群の中から選択され、Ｒ３は水素、−ＯＨおよび−ＣＨ2ＯＨから成る群の中から選択され、基Ｒ１、Ｒ２またはＲ３の少なくとも一つは−ＯＨ基を含む）
をカンジダアンタルチカリパーゼＢ（lipase B de Candida antartica）型の酵素を用いて無溶媒かつ最低温度を65℃にして、脂肪酸および／またはそのエステルと化学量論比でアミド化反応させて下記の式(II) のアミド：
【化３】
0004638413.tif 000017
（ここで、Ａｍ−Ａｌｃ基はアミノアルコールからくる直鎖または分岐鎖を有する飽和したＣ２〜Ｃ６炭素鎖を表し、
Ｘは水素原子またはアミノ基の２'および／またはそれ以降の位置が水酸化されていてもよいＣ１〜Ｃ４炭素鎖を表し、
ＡＧは脂肪酸または脂肪酸エステルからくる飽和または不飽和のＣ４〜Ｃ３０炭素鎖を表す）
を選択的に製造し、
得られたアミドを触媒の存在下で脂肪酸エステルを用いてエステル化して下記一般式(I)：
【化１】
0004638413.tif 000018
（ここで、
Ａｍ−Ａｌｃ基はアミノアルコールからくる直鎖または分岐鎖を有する飽和したＣ２〜Ｃ６炭素鎖を表し、
Ｘは水素原子またはアミノ基の２'および／またはそれ以降の位置が水酸化されていてもよいＣ１〜Ｃ４炭素鎖を表し、
ＡＧおよびＡＧ'基はそれぞれ脂肪酸または脂肪酸エステルからくる飽和または不飽和のＣ４〜Ｃ３０炭素鎖を表し、互いに同一でも異なっていてもよい）
のセラミド（ceramide）型化合物を合成する方法。
【請求項２】
上記のアミドの製造段階を減圧下で少なくとも16時間行う請求項1に記載の方法。
【請求項３】
エステル化段階の反応を脂肪酸エステル／アミノアルコールの比を１〜２にして行う請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
エステル化段階の反応を無溶媒で温度を少なくとも65℃で行う請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
エステル化段階の反応を1〜500mbarの減圧下で行う請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
各段階で用いる酵素を不活性担体上に固定する請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
エステル化段階をリゾムコルミエイ（Rhizomucor miehei）リパーゼによって行う請求項1〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
カンジダアンタルチカリパーゼＢによるアミド生成段階の反応とリゾムコルミエイ（Rhizomucor miehei）リパーゼによるエステル化反応の両方を最低温度を65℃にし且つ30〜200mbarの減圧下で無溶媒で行う請求項1〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
アミノアルコールが直鎖または分岐鎖を有する飽和したＣ２〜Ｃ６化合物であり、脂肪酸および／またはそのエステルが水酸化されていてもよい飽和または不飽和のＣ４〜Ｃ３０炭素鎖を有する請求項1〜８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は脂肪化学の分野、特にセラミド型化合物の酵素合成方法に関するものである。
本発明は下記一般式(I)のセラミド型化合物の合成方法に関するものである。
【化１】
0004638413.tif 000002
【０００２】
（ここで、
Ａｍ−Ａｌｃ基はアミノアルコールから得られる直鎖または分岐鎖でもよい好ましくは飽和したＣ２〜Ｃ６炭素鎖を表し、
Ｘは水素原子またはアミノ基の２'および／またはそれ以降の位置の炭素が水酸化されていてもよいＣ１〜Ｃ４炭素鎖を表し、
ＡＧおよびＡＧ'基はそれぞれ脂肪酸から得られる飽和または不飽和の水酸化されていてもよいＣ４〜Ｃ３０炭素鎖を表し、ＡＧおよびＡＧ'基は互いに同一でも異なっていてもよい）
本発明の対象は、脂肪酸および／または脂肪酸のエステルおよびアミノアルコールから、少なくともアミド化段階とエステル化段階とを含み、いずれもの段階も酵素反応で行い、いずれの段階を先に行なうかの順序は任意であることを特徴とするセラミド型化合物の新規な酵素合成方法にある。
【背景技術】
【０００３】
セラミド（ceramides）は角質層（stratum corneum）の最も重要なリピド（脂質）成分で、アミド結合を介して脂肪酸に結合された長い炭素鎖で構成される。セラミドは天然では組織の所に棘突起(traces)の状態で存在し、そこで生物学的に重要な作用をしている。
【０００４】
セラミドは組織の透水性の維持に極めて重要な役目を有し、従って、皮膚の老化現象に密接に関連している。事実、皮膚の外見は基本的に各層の含水率に関連するということは知られている。すなわち、界面活性剤を使用すると膜脂質が損なわれ、膜脂質が除去され、その結果、水分の損失量が増加する原因になることが多い。さらに、皮膚のバリヤーが破壊されて皮膚が過敏になり、潜在的炎症が増加する（下記文献参照）。
【非特許文献１】Kersher M. et al., Eur. J. Dermatol. 1991, 139-143,
【非特許文献２】Imokawa G et al., J. Soc. Cosmet. Chem. 1989,40 ; 273-285
【０００５】
セラミドを局所投与することによって、膜脂質の除去やその劣化を補償できるということは下記文献をはじめはする多くの研究で証明されている。
【特許文献１】米国特許第5,470,671号明細書
【特許文献２】国際特許第WO 95/34531号公報
【非特許文献３】R.D. Petersen Cosm. Toil. (1992) 107, 45
【０００６】
従って、セラミド化合物は極めて有用であり、特に、美容学および皮膚科学の分野で有用である。
セラミドはほとんどすべての生物から抽出によって天然成分として得ることができる（下記文献参照）。
【非特許文献４】Lambes H., 2nd ASCS, 1995, 106-125（動物）
【特許文献３】国際特許第WO 92-21321号公報(Rousset G. Inocosm Lab.)（植物）
【特許文献４】国際特許第WO 94-10131号公報(Casey et al.Unilever)（酵母）
【０００７】
しかし、この抽出操作には長時間を要し、天然資源の利用可能性には制限がある。そのため、セラミドの製造コストは高い。
天然セラミドの多くの類似物（疑似セラミドともよばれる）が化学的方法によって合成されている。これらの疑似セラミドまたはセラミド型化合物はセラミドと似ているが、全く同じではない。
下記文献にはグリシジルエーテルとアミノアルコールとの反応によって疑似セラミドを合成し、その後にアミド結合を介して脂肪酸で置換する方法が開示されている。
【特許文献５】欧州特許第028 281 号公報(Ohashi Yukihiro al., Kao Corp., 1988)
【０００８】
しかし、この疑似セラミドを得るには連続した３つの段階が必要である。
下記文献にもグリシジルエーテル、アミノアルコールおよび脂肪酸を２〜６段階で反応させる疑似セラミドの合成方法が開示されている。
【特許文献６】米国特許第5,221,757号明細書(Ohashi Yukihiro, Kao Corm. 1993)
【０００９】
しかし、この合成方法はかなり複雑で、極めてコストがかかり、種々の構造を合成するには満足のいく解決策にはならないように思われる。
下記文献には天然セラミドの構造に近い構造を有する疑似セラミドの合成方法が示されている。
【特許文献７】国際特許第WO 92/03129号公報 (Hannun Yusuf et. al., Univ. Duke 1992)
【００１０】
しかし、この方法は極めて複雑で、工業的規模で実施することはできない。
下記文献には天然セラミドに極めて近い化合物の化学合成方法が記載されている。
【特許文献８】フランス国特許第2757853号公報(Pacific Corporation 1998)
【００１１】
この文献には多数の化合物が記載され、スフィンゴシン（sphingosine）から誘導される天然セラミド、従って、両方の鎖のα位が水酸化された構造が挙げられているが、詳細な説明はない。
下記文献には、マイクロ波下で、脂肪酸と所定構造のアミノアルコールとを反応させてセラミド型誘導体を合成する上記と全く異なる方法が開示されている。
【特許文献９】欧州特許第0884 305号公報(L'OREAL, 1998)
【００１２】
しかし、この合成は高温で行う必要があり、不飽和脂肪酸誘導体のような不安定な化合物には必ずしも適していない。
【００１３】
一般に、化学合成方法はあまり選択性がなく、多くの段階を含むため、いくつかの官能基を保護するための中間反応を必要とすることが多く、コストが高くなり、および／または、有毒な試薬を必要とすることが多い。
下記文献にはアシル化剤とアミノアルコールから始めるセラミド類縁体の化学合成方法が開示されている。
【特許文献１０】欧州特許第0968 998号公報(Elf Atochem S.A)
【００１４】
しかし、この合成方法は選択性が悪く、得られるモル収率が75％以下という欠点がある。合成段階は酵素法、特に従来のエステラーゼ、特にリパーゼおよびプロテアーゼを用いて行うことができると記載されているが、具体的な実施方法や酵素法の利点についての記載はない。
【００１５】
セラミド型化合物の酵素を用いたバイオ合成法も広く行なわれている。
下記文献にはシュードモナスアルカリゲネスのリパーゼを用いてフィトスフィンゴシンとステアリン酸メチルとの間をアミド結合させる合成方法が記載されている。
【特許文献１１】国際特許第WO 94/26919号公報(Gist Brocades 1997)
【００１６】
しかし、この反応には極めて特殊な溶媒、好ましくはテトラヒドロフラン（THF）が必要である。そのためこの合成方法は極めてコストがかかり、工業的用途には適していない。
下記文献には有機溶媒中でのアミド結合の形成にリパーゼを使用することが開示されている。
【非特許文献５】Zalks A. et. al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1985) 82 ; 3192-3196
【非特許文献６】Margolin A.C. et al. J. Am. Chem. Soc. (1987) 109 ; 3802-3804
【００１７】
しかし、これらの研究でセラミド合成に必要なアミノアルコール類のリゾスフィンゴ脂質のアミド化反応はリパーゼの種類にかかわらず効果がないように見える。また、アミノアルコールのような官能基を複数有する反応物でのリパーゼの使用も報告されている。生成物の生成には複数の要因すなわちリパーゼの型、基質の型および用いた溶媒のタイプが大きく影響する。
【００１８】
下記の２つの文献に記載の研究では溶媒の種類がアミド化反応中の酵素の活性および選択性に影響することが示されている。
【非特許文献７】Bisfline R.G. et. al. JAOCS, 1991, 68, 95-98
【非特許文献８】Djeghaba Z. et. al. Tetrahedron Lett. 1991, 32 ; 761-762
【００１９】
下記文献は有機溶媒中のMucor micheiリパーゼによるアミノプロパノールのアシル化反応での選択性は溶媒の種類に強く影響されるを示している。
【非特許文献９】Montet D. et. al. Revue Francaise des Corps Gras (1989) 36; 79-83
【００２０】
このリパーゼを使用してもリゾスフィンゴ脂質のアミド化反応は行えないということに注意されたい。全てのリパーゼがセラミド合成に必要なアミド結合を実現できるわけではない。これに関しては下記文献に記載されている。
【非特許文献１０】Montet D. et. al. Fat Sci. Technol. 1989, 91 ; 14-18
【００２１】
下記文献にも上記と同じ結果が記載されている。この特許はMucor michei酵素によるアミド化方法を開示するものである。
【特許文献１２】欧州特許第0298796号公報(Graille J. et. al)
【００２２】
条件は極めて正確に定義されているにもかかわらず、この変換方法の収率は極めてバラバラである（これは試験結果が証明している）。また、変換率は最大で約80％に過ぎない。この収率はこの酵素反応を有効利用するには不十分である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
上記の従来方法はどれもセラミド型化合物の合成に満足のいく方法ではない。
一方、この化合物に対する需要は両親媒性材料の産業や、その他の種々の分野、例えば界面活性剤、湿潤剤、抗腐食剤等の分野で高い。この分子は医薬品の他、工業、家事、化粧品等でも用途がある。
従って、セラミド型化合物を容易、効果的かつ経済的に、しかも工業的条件下で合成することができる方法が求められている。
【００２４】
驚くべきことに、この技術的課題はカンジダアンタルチカリパーゼＢ酵素によるアミド生成段階とリパーゼ型酵素によるエステル化段階とを少なくとも含む本発明の合成方法によって解決された。
本発明方法は、従来技術とは違って、単純かつ迅速な２つの段階のみを含み、これら２つの段階は溶媒または精製を必要とせず、しかも、各段階での収率が高い。さらに、酵素の使用によって所望生成物を極めて高い選択性で得ることができる。
従って、セラミド型化合物の合成のこれまでの課題は本発明方法によって解決される。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
本発明の対象は、カンジダアンタルチカリパーゼＢ（lipase B de Candida antartica）型の酵素を用いて行うアミド生成段階と、同じくリパーゼ（lipase）型の酵素を用いて行うエステル化段階とを少なくとも含むことを特徴とする下記一般式(I)のセラミド（ceramide）型化合物の合成方法にある：
【００２６】
【化２】
0004638413.tif 000003
【００２７】
（ここで、
Ａｍ−Ａｌｃ基はアミノアルコールからくる直鎖または分岐鎖を有する好ましくは飽和したＣ２〜Ｃ６炭素鎖を表し、
Ｘは水素原子またはアミノ基の２'および／またはそれ以降の位置が水酸化されていてもよいＣ１〜Ｃ４炭素鎖を表し、
ＡＧおよびＡＧ'基はそれぞれ脂肪酸または脂肪酸エステルからくる飽和または不飽和のＣ４〜Ｃ３０炭素鎖を表し、互いに同一でも異なっていてもよい）
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
本発明方法で得られるセラミド型化合物は疑似セラミド（pseudo-ceramides）のカテゴリーから成る。一般に、この疑似セラミドとは一つのアミド官能基と一つの別の結合とを有する化合物を意味する。本発明の式(I)の疑似セラミドは補助結合がエステル型である点で他と区別できる。このエステル結合は分子中で特別な向きをしている。すなわち、本発明のセラミド型化合物は天然セラミドまたは化学合成で得られる疑似セラミドに極めて近い。従って、化学基が類似しているため同じ特性を示すことが多い。
【００２９】
本発明方法の収率は９３％以上である。また、アミド生成段階での収率はほぼ１００％である。
以下で詳細に説明する上記の互いに独立した２つの段階は任意の順序で連続しておよび／または同時に行うことができ、どの順番で行っても合成された生成物の構造に全く影響はない。
【００３０】
本発明のアミド生成段階とはアミノアルコールと脂肪酸および／または脂肪酸エステルとを反応させる段階を意味する。この第１段階は式(I)の中間化合物の生成を得るための下記反応方法（Ａ）で表すことができる。
【００３１】
【化３】
0004638413.tif 000004
【００３２】
ここで、Ｒは水素原子または１〜５個の炭素原子を有する炭素鎖、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル基を表し、必要に応じて置換されていてもよい（例えばグリセリル基（トリヒドロキシプロパン））。
しかし、このＲは、脂肪酸または脂肪酸エステルのカルボキシル官能基へ容易に接近するのを妨げる立体障害がない限り、任意の化学基にすることができる。
さらに、ＲはアルコールＲＯＨが揮発性、例えばエタノールまたはイソプロパノールとなるように選択するのが好ましい。それ以外の場合には精製段階が必要となる。この精製はシリカカラムでＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィ）クロマトグラフィを行うか、結晶化で行うことができる。
【００３３】
このアミド化段階ではアミド結合がリパーゼ型酵素によって脂肪酸または対応するエステルのカルボニル官能基とアミノアルコールまたはアミノアルコールエステルの第一または第二級アミン官能基との間で得られる。本発明では特にトリアシルグリセロール加水分解酵素およびカルボキシルエステラーゼのクラス（酵素分類EC 3.1.1.3）に属するカンジダアンタルチカのリパーゼＢ（lipase B de Candida antartica）を用いる。この酵素はNovozymes社から商品名「Novozym（登録商標）435」で市販のリパーゼにすることができ、これは遺伝子組み換え微生物アスペルギルスオリザエ（Aspergillus oryzae）の培養で製造され、担体上に固定されている。
上記会社から市販の上記酵素の使用に限定されるものではないが、本発明に従って好ましい収率を得るためにはこの型のリパーゼを用いなければならないということは理解できよう。
【００３４】
アミド化段階ではアミド化試薬を化学量論条件で用いることによって、全ての試薬が消費され、その比によって残留物が残るのを避けるのが好ましい。
【００３５】
エステル化段階とは脂肪酸または脂肪酸エステルがアミノアルコールのフリーなアルコール官能基（末端でもあってもなくてもよい）にグラフトされる反応である。このエステル化段階をアミド段階の後に続けて行う場合は下記の反応方法（Ｅ）で表すことができる。
【００３６】
【化４】
0004638413.tif 000005
【００３７】
ここで、Ｒは水素原子または１〜５個の炭素原子を有する炭素鎖、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル基であり、必要に応じて置換されていてもよい（例えばグリセリル基（トリヒドロキシプロパン）またはトリメチルオキシプロピル基である）。
このＲは、脂肪酸または脂肪酸エステルのカルボキシル官能基へ容易に接近するのを妨げる立体障害を誘発しない限り、任意の化学基にすることができる。
さらに、アミド化段階の場合は同様に、このＲは、アルコールＲＯＨが揮発性、例えばエタノールまたはイソプロパノールとなるように選択するのが好ましい。それ以外の場合には精製段階が必要となるであろう。精製は例えば蒸留で行うことができる。
【００３８】
このエステル化段階ではエステル結合が、リパーゼ型酵素、特にトリアシルグリセロール加水分解酵素のクラス（酵素分類EC 3.1.1.3）に属するリパーゼによって、式（II）の化合物（アミド−アルコール）の水酸基と飽和または不飽和の脂肪酸または脂肪酸エステルのカルボキシル基との間で得られる。
【００３９】
一般的にはこの段階の上記エステル−結合反応に触媒作用を示す任意の酵素を用いることができるが、リゾムコルミエイ（Rhizomucor miehei）リパーゼが特に好ましい。この酵素は溶媒を必要とせず、しかも、その特異性のために、極めて良い収率でエステルを生成するという利点がある。さらに、この酵素は本発明の疑似セラミド合成の収率全体を改善させる。
【００４０】
特に、Novozymes社から商品名「Lipozyme（登録商標）RM IM」で市販のリパーゼを用いることができる。この酵素は遺伝子組み換え微生物アスペルギルスオルザエ（Aspergillus oryzae）の培養で製造され、担体上に固定されている。しかし、これに限定されるものではない。
【００４１】
本発明方法の一実施例では、アミド化段階にカンジダアンタルチカからのリパーゼＢが用いられ、エステル化段階にリゾムコルミエイ（Rhizomucor miehei）リパーゼがに用いられる。これらの２つの酵素は極めて選択性に優れている。すなわち、Novozym（登録商標）435はアミド化段階のみを行ない、Lipozyme（登録商標）RM IMはエステル化段階のみを行う。これらの２つの酵素を用いる段階の順序を逆にしても生成物の種類に影響はなく、同じ収率が得られることは注目に値する。
【００４２】
さらに、これらの２つの段階は同時に行うことができる。
1種類の脂肪酸だけを用いた場合には鎖AGと鎖AG'とは同じで、２つの同じAGおよびAG'基を含む式(I)の単一のセラミド型化合物が得られる。一方、２種以上の脂肪酸を用いた場合にはセラミド型化合物の混合物が得られる。これらは全て式(I)を有するが、AG基およびAG'基の種々の可能な組み合わせを含んでいる。
【００４３】
上記の各反応では不活性有機担体に固定したリパーゼを用いるのが有利であり、この不活性有機担体はリパーゼを反応媒体から容易に除去でき、再利用できるものである。リパーゼはマクロ多孔質樹脂、例えばNovozym（登録商標）435およびLipozyme（登録商標）RM IM上に吸着させるのが好ましい。酵素を再利用することによってプロセスコストを下げることができ、極めて有利になる。本発明方法のアミド化反応では活性ロスなしにNovozym（登録商標）435を約10回再利用できるということがわかっている。
【００４４】
本発明の合成方法は以下の方法で行うのが好ましい：
（１）  アミド生成段階は脂肪酸またはその対応エステルとアミノアルコールとをNovozym（登録商標）435の存在下に化学量論条件下で混合して行う。反応は40〜100℃、好ましくは55〜85℃の温度で行う。反応は大気圧または1〜500mbar、好ましくは30〜200mbarの減圧下で行うことができる。これらの条件で少なくとも約93％の収率を達成するためには反応を少なくとも16時間、好ましくは少なくとも20時間に行う。
【００４５】
（２）エステル化段階は第1段階で得られたアミドと脂肪酸またはその対応エステルとをリパーゼ、例えばLipozyme（登録商標）RM IMの存在下で反応させる。脂肪酸エステル/アミノアルコールの比は１〜２、好ましくは1〜1.5である。エステル化反応は40〜100℃、好ましくは50〜70℃の温度で行う。エステル化反応は1〜500mbar、好ましくは30〜200mbarの減圧下で行うことができる。これらの条件で少なくとも約93％の収率を達成するためには反応を少なくとも18時間、好ましくは少なくとも24時間行う。
【００４６】
各段階は30〜200mbarの減圧下で行うのが有利である。すなわち、減圧することによって濃縮中に徐々に生成する水またはアルコールが除去され、従って反応速度が大きく上昇する。さらに、減圧によって多くの被酸化性脂肪酸の劣化が抑制される。
【００４７】
２つの酵素を用いた上記２つの反応の順序は、上記の理由で、単なる例であって、これに限定されるものではないという点は強調しなければならない。この順序は実験者が決めることができる。
一つの変形例では下記反応方法（E'）に示すようにエステル化を第１段階にして合成を行うことができる：
【００４８】
【化５】
0004638413.tif 000006
【００４９】
このエステル化段階はアミノアルコールと脂肪酸または脂肪酸エステルとの間で上記のエステル化に有利な反応条件（E）で行ない、脂肪酸のアミノエステルを得る。
【００５０】
第２段階はアミド生成段階となり、これは下記の反応方法（A'）で示すことができる：
【化６】
0004638413.tif 000007
【００５１】
合成のこの第２段階は先に得られた脂肪酸のアミノエステルと、脂肪酸または脂肪酸エステルとの間で上記反応条件（A)下で行う。
【００５２】
カンジダアンタルチカリパーゼＢとリゾムコルミエイリパーゼとを用いた場合には疑似セラミド合成のどの段階でも溶媒は不必要である。すなわち、約65℃以上の温度では各反応で試薬および生成物は液体であり、従って、溶媒の役目をする。従って、生成した化合物（I）の精製段階が不用になり、有利である。すなわち、式(I)の化合物は脂肪酸または脂肪酸エステルの残留物、例えばパルミチン酸エチルとの混合物の形で得られるが、この残留化合物は化粧用組成物または皮膚用組成物の配合物で問題となるものではない。
しかし、必要な場合には式(I)の化合物を通常の分離法、例えばシリカまたはセルロース上のHPLC、クロマトグラフィまたは結晶化で精製することができる。
【００５３】
本発明方法は少なくとも1段階または２段階の制限された数の段階（同時または連続したアミド化およびエステル化）からなるのが有利であるが、式(I)の化合物は安定しているので、その他の段階、例えばアルキル化、酸化または還元誘導体の生成をアミド化およびエステル化段階の後に追加することもができる。
【００５４】
t-ブチルエーテル（TBEE）またはヘキサンのような溶媒を用いる場合には反応は大気圧で行う。
反応の最高温度は酵素の再循環能力によって決まる。合成条件は一般に複数の要因、主に酵素濃度、pH、温度によって変わるということは当業者には理解できよう。各段階で最適の酵素活性条件が達成できるように努める。例として実施例1〜21に記載のプロセスが挙げられるがこれらに限定されるものではない。
【００５５】
各反応を上記条件で示した時間を超えて続けても害はないが、収率の向上は認められない。
本発明で使用可能な脂肪酸または脂肪酸エステルは飽和または不飽和のC4〜C30炭素鎖AGまたはAG'を有し、この炭素鎖は好ましくは直鎖を有し、必要に応じて水酸化されていてもよい。10〜22個の炭素原子を有する炭素鎖を選択するのが好ましい。さらに、エステル化中に同時にアシル化が起こるのを防ぐために脂肪酸はＣ＝Ｏ基のα位が水酸化されていないのが好ましい。
【００５６】
脂肪酸の例としては下記を挙げることができる：
- カプリン酸（デカン酸）
- ウンデカン酸
- ラウリン酸（ドデカン酸）
- ミリスチン酸（テトラデカン酸）
- パルミチン酸（ヘキサデカン酸）
- ステアリン酸（オクタデカン酸）
- オレイン酸（オクタデカ-9-エン酸）
- リシノール酸（12-ヒドロキシ−オクタデカ-9-エン酸）
- リノール酸（オクタデカ-9,1,2-ジエン酸）
- リノレン酸（α：オクタデカ-9,12,15-トリエン酸またはγ:オクタデカ-6,9,12-トリエン酸）
- エイコサペンタエン酸（エイコサ-5,8,11,14,17-ペンタエン酸）
- ドコサヘキサエン酸（ドコサ-4,7,10,13,16,19ヘキサエン酸）
-ステアリドン酸（オクタデカ-6,9,12,15-テトラエン酸）
- aleuritolic酸（9,10,16-トリヒドロキシヘキサデカン酸）。
【００５７】
使用可能な脂肪酸エステルとしては上記酸のメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、t-ブチル等のエステルを挙げることができる。一方で、いくつかのスフィンゴシン誘導体のようなリン酸化誘導体は除外される。
脂肪酸または脂肪酸エステルは純粋な形の脂肪酸またはその混合物、特にスピルリン（spirulin）のような微細藻類、オオマツヨイグサ油、ルリヂサ油のような植物油または魚油、動物油から抽出された混合物の形で用いることができる。脂肪酸または脂肪酸エステルは油の鹸化で得られる脂肪酸混合物にすることもできる。
【００５８】
本発明で使用可能なアミノアルコールは一つまたは複数の第一級または第二級の水酸基を有している。アミン官能基は第一級または第二級にすることができる。収率を最適化するためには第一級アミン官能基を有するアミノアルコールを用いるのが好ましい。
本発明で使用可能なアミノアルコールは一般式（IV)に対応する:
【００５９】
【化７】
0004638413.tif 000008
【００６０】
（ここで、
ｎは数１、２、３から選択される整数、
ｍは数１、２、３から選択される整数、
Ｘは水素原子およびＣ１〜Ｃ４炭素鎖（アミノ基の２’および／またはそれ以降の位置が水酸化されていてもよい）から選択され、
Ｒ１は水素およびＣ１〜Ｃ４炭素鎖（好ましくは飽和、直鎖で、分岐鎖を有していてもよく、および／または、水酸化されていてもよい）から選択され、
Ｒ２は水素、−ＯＨ、ＮＨ2およびＣ１〜Ｃ４炭素鎖（好ましくは飽和、直鎖で、分岐鎖を有してしてもよく、および／または、水酸化されていてもよい）から選択され、
Ｒ３は水素、−ＯＨおよび−ＣＨ2ＯＨから選択され、
基Ｒ１、Ｒ２またはＲ３の少なくとも一つは−ＯＨ基を含む）
【００６１】
本発明プロセスでは選択的な酵素を用いることによって、アミノアルコールが単一の水酸基しか有しない場合を含めて、式(I)のセラミド型化合物を極めて高い収率で合成することができる、という利点がある。本発明の一つの好ましい実施例では基Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の１つのみが−ＯＨ官能基を含む。
アミノアルコールは直鎖で、分岐鎖を有していてもよく、飽和で、２〜６個の炭素原子を有し、出発材料の脂肪酸または脂肪酸エステルに部分的に可溶であるのが好ましい。
【００６２】
アミノアルコールの例としては下記が挙げられる：
- 1-アミノ-2-プロパノール
- 2-アミノ-1-プロパノール
- 3-アミノ-1-プロパノール
- 2-（メチルアミノ）エタノール
- 1-アミノ-2-ブタノール
- 2-アミノ-1-ブタノール
- 3-アミノ-1-ブタノール
- 4-アミノ-1-ブタノール
- 2-アミノ-2-メチル-1-プロパノール
- 2-（エチルアミノ）エタノール
- 2-アミノ-3-メチル-1-ブタノール
- 1-アミノ-2-ペンタノール
- 2-アミノ-1-ペンタノール
- 5-アミノ-1-ペンタノール
- 2-（プロピルアミノ）エタノール
- 1-アミノ-2-ヘキサノール
- 2-アミノ-1-ヘキサノール
- 6-アミノ-1-ヘキサノール
- ジエタノールアミン
- 3-アミノ-1,2-プロパンジオール
- 2-アミノ-1,3-プロパンジオール
- 2-アミノ-2-メチル-1,3-プロパンジオール
- 2-アミノ-2-エチル-1,3-プロパンジオール
- 2-アミノ-2-ヒドロキシメチル-1,3-プロパンジオール
- N-2,3,4,5,6-ペンタヒドロキシヘキシルアミン
【００６３】
本発明の合成方法で直接得られるセラミド型化合物は一般式(I)を有する：
【化８】
0004638413.tif 000009
【００６４】
（ここで、
Ａｍ−Ａｌｃ基はアミノアルコールからくる直鎖または必要に応じて分岐鎖を有する好ましくは飽和のＣ２〜Ｃ６炭素鎖を表し、
Ｘは水素原子またはアミノ基の２’および／またはそれ以降の位置で水酸化されていてもよいＣ１〜Ｃ４炭素鎖を表し、
ＡＧおよびＡＧ’基はそれぞれ脂肪酸または脂肪酸エステルからくる飽和または不飽和のＣ４〜Ｃ３０炭素鎖を表し、２つのＡＧおよびＡＧ’基は互いに同一でも異なっていてもよい）
【００６５】
従って、式（Ｉ）の化合物は必然的に２つのオキシ基を含む。これらのオキシ基は少なくとも一つのアミド結合と１つのエステル結合および炭素鎖Ａｍ−Ａｌｃによって互いに分離されている。さらに、２つの炭素鎖ＡＧおよびＡＧ’を含む。これらの炭素鎖は互いに同一でも異なっていてもよく、試薬として用いられる脂肪酸および／または脂肪酸エステルによって決まる。
【００６６】
式(I)の化合物は約60〜65℃の融点を有するので、高温で合成でき、製剤中に容易に組み込むことができる。さらに、これらの化合物は保存性が良く、対応する式（II）の単なるアミド化合物よりも保存性がはるかに優れている。
【００６７】
本発明方法は光学活性化合物に対して用いることができる。選択性は最終化合物(I)でも維持される。少なくとも一つの不斉炭素を有する場合、新規化合物をそれらの異性体またはそれらのエリスロまたはスレオジアステレオマーに分解することができる。
【００６８】
本発明の新規なセラミド型化合物の中では特に下記を挙げることができるが、本発明がこれらに限定されるものではない：
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-デカノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミド、
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-ドデカノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミド、
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-テトラデカノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミド、
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-ヘキサデカノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミド、
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-オクタデカノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミド、
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-オクタデカ-9-ジエノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミド、
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミド、
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-オクタデカ-12-ヒドロキシ-9ジエノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミド、
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-エイコサ-5,8,11,14,17-ペンタエノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミド、
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-ドコサ-4,7,10,16,19-ヘキサエノイルオキシ）
【００６９】
アミド化段階が合成の第１段階であるときに得られる中間アミドは下記一般式(II)を有する：
【化９】
0004638413.tif 000010
【００７０】
（ここで、
Ａｍ−Ａｌｃ基はアミノアルコールからくる直鎖または必要に応じて分岐鎖を有する好ましくは飽和の炭素数が２〜６の炭素鎖を表し、
Ｘは水素原子または必要に応じてアミノ基の２’および／またはそれ以降の位置が水酸化された炭素数が１〜４の炭素鎖を表し、
ＡＧ基は脂肪酸からくる飽和または不飽和の炭素数が４〜３０、好ましくは炭素数が１０〜２２の炭素鎖を表す）
【００７１】
この中間化合物は本発明方法の反応プロセス(A)に従って脂肪酸および／または脂肪酸エステルのカルボキシル基をアミノアルコールのアミン官能基でアミド化することにで得られる。この段階は先に述べた条件下でカンジダアンタルチカリパーゼＢによって行われる。
この中間物は上記本発明の単一エステル化段階（E）によって新規なセラミド型化合物にすることができるので特に重要である。
しかし、このアミド中間物は分解が急速である。そのため、直ちにエステル化反応を行って安定化合物である疑似セラミド(I)にするのが望ましい。
【００７２】
式（II）の新規中間化合物の中では下記を例として挙げることができる：
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の(2-ヒドロキシプロピル)アミド、
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の(1-ヒドロキシメチルプロピル)アミド、
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の(2,3-ジヒドロキシプロピル)アミド、
- デカン酸の(2,3-ジヒドロキシプロピル)アミド、
- ドデカン酸の(2,3-ジヒドロキシプロピル)アミド、
- テトラデカン酸の(2,3-ジヒドロキシプロピル)アミド、
- ヘキサデカン酸の(2,3-ジヒドロキシプロピル)アミド、
- オクタデカン酸の(2,3-ジヒドロキシプロピル)アミド、
- オクタデカ-9-シス-エン酸の(2,3-ジヒドロキシプロピル)アミド、
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の(2,3-ジヒドロキシプロピル)アミド、
- 12-ヒドロキシ-オクダデカ-9-エン酸の(2,3-ジヒドロキシプロピル)アミド。
【００７３】
アミド化反応条件は実施例1〜11により正確に記載されている。
上記エステル化段階が合成の第１段階である場合に得られる中間アミドは下記一般式(III)を有する：
【化１０】
0004638413.tif 000011
【００７４】
（ここで、
Ａｍ−Ａｌｃ基はアミノアルコールから得られる直鎖または必要に応じて分岐鎖を有する好ましくは飽和の炭素数が２〜６の炭素鎖を表し、
Ｘは水素原子または必要に応じてアミノ基の２’および／またはそれ以降の位置で水酸化された炭素数が１〜４の炭素鎖を表し、
ＡＧは脂肪酸から得られた飽和または不飽和の炭素数が４〜３０、好ましくは炭素数が１０〜２２の炭素鎖を表す）
【００７５】
この中間化合物は本発明方法の反応プロセス(E)に従って脂肪酸および／または脂肪酸エステルのカルボキシル基とアミノアルコールのヒドロキシ基との間のエステル化で得られる。この段階は先に述べた条件下でリゾムコルミエイ（Rhizomucor miehei）リパーゼによって行われる。
この中間物は本発明の上記アミド化段階（A）のみで新規なセラミド型化合物になるので特に重要である。
【００７６】
式（III）の新規中間化合物の中では下記を例として挙げることができる：
- デカン酸の1-アミノ-2-ヒドロキシプロピルエステル
- ドデカン酸の1-アミノ-2-ヒドロキシプロピルエステル
- テトラデカン酸の1-アミノ-2-ヒドロキシプロピルエステル
- ヘキサデカン酸の1-アミノ-2-ヒドロキシプロピルエステル
- オクタデカン酸の1-アミノ-2-ヒドロキシプロピルエステル
-オクタデカ-9-シス-エン酸の1-アミノ-2-ヒドロキシプロピルエステル
- オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の1-アミノ-2-ヒドロキシプロピルエステル
-12-ヒドロキシ-オクダデカ-9-エン酸の1-アミノ-2-ヒドロキシプロピルエステル
- エイコサ-5,8,11,14,17-ペンタエン酸の1-アミノ-2-ヒドロキシプロピルエステル
- ドコサ-4,7,10,16,19-ペンタエン酸の1-アミノ-2-ヒドロキシプロピルエステル。
【００７７】
式(I)のセラミド型化合物は化粧組成物および／または医薬組成物、より正確には皮膚科学用組成物の活性成分として用いることができる。これらの組成物は上記化合物を組成物全体に対して0.01〜90重量％、好ましくは0.1〜30重量％、さらに好ましくは0.1〜5重量％含むことができる。これら組成物には美容材料で許容される通常のビヒクル、例えば希釈液、分散剤、ゲル化剤、セラミドの担体、固体柔軟剤、ガム質、樹脂、界面活性剤、溶媒、充填材、例えば米デンプン、顔料、防腐剤、精油、酸化防止剤、着色剤、真珠層、香料、臭気吸収剤、ｐＨ調節剤または中和剤、増粘剤、その他の通常添加剤を含むことができる。
【００７８】
上記組成物は皮膚および／または外皮用に適した形、例えばゲル、ローション、特に毛細血管ローション、特にO/WまたはW/O型のワニス、エマルションまたは分散物、クリーム、特にマスカラクリーム、軟膏、乳液、フォーム、棒（スティック）、特にリップバームおよび口紅の形にすることができる。
本発明方法で得られる化合物は従来法と同様な方法で配合できる。上記製剤例が好ましいしが、これらに限定されるものではない。
【００７９】
エマルション形の本発明組成物は当業者が一般に使用する乳化剤および共乳化剤を含む。本発明に適した乳化剤および共乳化剤の例としては脂肪酸とポリオールとのエステル、例えばグリセリルステアレート、脂肪酸とポリエチレングリコールとのエステル、例えばPEG-20ステアレートがある。乳化剤および共乳化剤は0.3〜30％ w/w、好ましくは0.5〜5％の濃度にするのが有利である。
【００８０】
上記組成物はヒトおよび／または動物の表皮および／または形成物（毛、爪・・・）のケアおよび／または治療および／または保護で使用できる。上記組成物は皮膚の脂質バランスを元に戻しながら皮膚層の変質部を回復させ、水の損失をコントロールする。従って、上記組成物は皮膚の諸問題、例えば皮膚の乾燥、皺、ヒダ、鱗状剥離、ヒビ割れ、裂傷等を予防および／または解決に有用であり、特に柔らかくて滑らかな潤いと弾力のある皮膚を維持し、皮膚の老化の徴候を防ぐのに有用である。上記の化粧用組成物または皮膚科学用組成物は全く毒性がなく、局所イントレランスは全くなく、アレルギー性もない。
【実施例】
【００８１】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明が下記実施例に限定されるものではない。以下の実施例において特に記載のない限り濃度は組成物の全重量に対する％で表される。
【００８２】
以下の実施例で、アミド化反応はNovozymes社から商品名「Novozym（登録商標）435」で市販の製品である不活性支持体上に固定されたカンジダアンタルチカリパーゼＢ（lipase B de Candida antartica）を用いて行った。この化合物は耐熱性で、40〜60℃で最適活性を示す。公表されているこの化合物のエステル化活性は1グラム当たり10.000プロピルラウリン酸塩単位（PLU/g）である。
エステル化反応は、Novozymes社から商品名「Lipozyme（登録商標）RM IM」で市販の製品である不活性支持体上に固定されたリゾムコルミエイ（Rhizomucor miehei）リパーゼを用いて行った。この化合物は30〜70℃で最適活性を示し、約150（IUN/g）の活性を有する。
【００８３】
I.  脂肪酸、特にリノール酸の存在下でのアミノアルコール（1-アミノ-2-プロパノール、2-アミノ-1-ブタノールおよび3-アミノ-1,2-プロパンジオール）のアミド化反応の実施例
【００８４】
【表１】
0004638413.tif 000012
【００８５】
実施例1
オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（2-ヒドロキシ-プロピル）アミドの合成
75.11gの1-アミノ-2-プロパノール（1モル）と280.24gのリノール酸（1モル）とを500mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した。その後、5gの「Novozym（登録商標）435」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成する水を除去した。
20時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。リノール酸のアミドへの変換率は95％以上であった。得られた生成物はベージュ色のワックスであった。
得られた生成物を通常の方法および以下の条件下で高速液体クロマトグラフィ（HPLC）で分析した：
-  カラムNucleosil 100 C18 5 μｍ (250 x 2 mm)
-  勾配：
【００８６】
【表２】
0004638413.tif 000013
【００８７】
-  流量：0.22 ml.mn-1
-  検出：紫外線  λ= 210 nm
生成物のHPLC保持時間：11.98 分
【００８８】
実施例２
オクタデカ-9,12-シス-ジエン酸の（1-ヒドロキシメチル-プロピル）アミドの合成
89.11gの2-アミノ-1-ブタノール（1モル）と280.24gのリノール酸（1モル）とを500mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、５gの「Novozym（登録商標）435」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成する水を除去した。
20時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。リノール酸のアミドへの変換率は95％以上であった。得られた生成物はベージュ色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：13.20 分
【００８９】
実施例３
オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミドの合成
91.11gの3-アミノ-1,2-プロパンジオール（1モル）と280.24gのリノール酸（1モル）とを500mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、５gの「Novozym（登録商標）435」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成する水を除去した。
20時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。リノール酸のアミドへの変換率は95％以上であった。得られた生成物はベージュ色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：10.65 分
IR(ν, cm-1, CH2Cl2): 3300, 2900, 2850, 1630,1545,1465
【００９０】
II.  3-アミノ-1,2-プロパンジオールの存在下での各種脂肪酸エステルからのアミド合成の実施例
【００９１】
【表３】
0004638413.tif 000014
【００９２】
実施例４
デカン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミドの合成
91.11gの3-アミノ-1,2-プロパンジオール（1モル）と200.32gのデカン酸エチル（1モル）を500mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、5gの「Novozym（登録商標）435」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。アミドへのエステルの変換率は99％以上であった。得られた生成物はクリーム色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：4.47分
【００９３】
実施例５
ドデカン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミドの合成
91.11gの3-アミノ-1,2-プロパンジオール（1モル）とび228.37gのラウリン酸エチル（1モル）を500mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、５gの「Novozym（登録商標）435」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。アミドへのエステルの変換率は99％以上であった。得られた生成物はクリーム色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：5.65分
【００９４】
実施例６
テトラデカン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミドの合成
91.11gの3-アミノ-1,2-プロパンジオール（1モル）と256.42gのミリスチン酸エチル（1モル）を500mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、５gの「Novozym（登録商標）435」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。アミドへのエステルの変換率は99％以上であった。得られた生成物はクリーム色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：8.06分
【００９５】
実施例７
ヘキサデカン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミドの合成
91.11gの3-アミノ-1,2-プロパンジオール（1モル）と284.48gのパルミチン酸エチル（1モル）を500mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、5gの「Novozym（登録商標）435」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。アミドへのエステルの変換率は99％以上であった。得られた生成物はクリーム色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：12.15分
【００９６】
実施例８
オクタデカン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミドの合成
91.11gの3-アミノ-1,2-プロパンジオール（1モル）と312.53gのステアリン酸エチル（1モル）を500mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、5gの「Novozym（登録商標）435」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。アミドへのエステルの変換率は99％以上であった。得られた生成物はベージュ色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：19.38分
【００９７】
実施例９
オクタデカ-9-シス-エン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミドの合成
91.11gの3-アミノ-1,2-プロパンジオール（1モル）と310.51gのオレイン酸エチル（1モル）を500mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、5gの「Novozym（登録商標）435」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。アミドへのエステルの変換率は99％以上であった。得られた生成物はベージュ色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：13.26分
【００９８】
実施例10
オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミドの合成
91.11gの3-アミノ-1,2-プロパンジオール（1モル）と308.50gのリノール酸エチル（1モル）を500mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、5gの「Novozym（登録商標）435」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。アミドへのエステルの変換率は99％以上であった。得られた生成物はベージュ色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：10.37分
-IR (ν, cm-1, CH2Cl2):3300, 2900, 2850, 1630,1545,1465
【００９９】
実施例11
12-ヒドロキシ-オクタデカ-9-エン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミドの合成
91.11gの3-アミノ-1,2-プロパンジオール（1モル）と326.51gのリシノール酸エチル（1モル）を500mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、5gの「Novozym（登録商標）435」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。アミドへのエステルの変換率は99％以上であった。得られた生成物はベージュ色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：5.34分
【０１００】
III.  3-アミノ-1,2-プロパンジオールのリノール酸との縮合で得られたアミドと脂肪酸との反応によるセラミド型化合物の合成の実施例
【表４】
0004638413.tif 000015
【０１０１】
実施例12
オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-デカノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミドの合成
353.54gのオクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミド（1モル）と300.48gのデカン酸エチル（1.5モル）を1000mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、30gの「Lipozyme（登録商標）RM IM」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。N-デカノイル誘導体へのアミドの変換率は93％以上であった。得られた生成物は白蝋であった。
生成物のHPLC保持時間：25.35分
【０１０２】
実施例13
オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-ドデカノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミドの合成
353.54gのオクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミド（1モル）と342.55gのラウリン酸エチル（1.5モル）を1000mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、30gの「Lipozyme（登録商標）RM IM」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。N-ドデカノイル誘導体へのアミドの変換率は93％以上であった。得られた生成物は白蝋であった。
-生成物のHPLC保持時間：27.28分
【０１０３】
実施例14
オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-テトラデカノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミドの合成
353.54gのオクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミド（1モル）と384.63gのミリスチン酸エチル（1.5モル）を1000mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、30gの「Lipozyme（登録商標）RM IM」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。N-テトラデカノイル誘導体へのアミドの変換率は93％以上であった。得られた生成物は白蝋であった。
生成物のHPLC保持時間：28.93分
【０１０４】
実施例15
オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-ヘキサデカノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミドの合成
353.54gのオクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミド（1モル）と426.72gのパルミチン酸エチル（1.5モル）を1000mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、30gの「Lipozyme（登録商標）RM IM」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。N-ヘキサデカノイル誘導体へのアミドの変換率は93％以上であった。得られた生成物は白蝋であった。
生成物のHPLC保持時間：31.22分
IR (ν, cm-1, CH2Cl2):3300, 2900, 2850, 1695, 1630, 1540, 1460
【０１０５】
実施例16
オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-オクタデカノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミドの合成
353.54gのオクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミド（1モル）と468.79gのステアリン酸エチル（1.5モル）を1000mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、30gの「Lipozyme（登録商標）RM IM」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。N-オクタデカノイル誘導体へのアミドの変換率は93％以上であった。得られた生成物は白蝋であった。
生成物のHPLC保持時間：33.57分
【０１０６】
実施例17
オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-オクタデカ-9-エノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミドの合成
353.54gのオクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミド（1モル）と465.76gのオレイン酸エチル（1.5モル）を1000mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃に加熱した後、30gの「Lipozyme（登録商標）RM IM」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。アミドの変換率は93％以上であった。得られた生成物はクリーム色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：31.73分
【０１０７】
実施例18
オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミドの合成
353.54gのオクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミド（1モル）と462.76gのリノール酸エチル（1.5モル）を1000mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃まで加熱した後、30gの「Lipozyme（登録商標）RM IM」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。アミドの変換率は93％以上であった。得られた生成物はクリーム色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：30.19分
【０１０８】
実施例19
オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-オクタデカ-12-ヒドロキシ-9-ジエノイルオキシ)-2-ヒドロキシプロピルアミドの合成
353.54gのオクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミド（1モル）と489.76gのリシノール酸エチル（1.5モル）を1000mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃まで加熱した後、30gの「Lipozyme（登録商標）RM IM」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。アミドの変換率は93％以上であった。得られた生成物はクリーム色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：26.05分
【０１０９】
実施例20
オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-エイコサ-5,8,11,14,17-ペンタエノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミドの合成
353.54gのオクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミド（1モル）と495.75gの3-エイコサ-5,8,11,14,17-ペンタエン酸エチル（1.5モル）を1000mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃まで加熱した後、30gの「Lipozyme（登録商標）RM IM」を添加した。反応媒体を次いで減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。アミドの変換率は93％以上であった。得られた生成物はクリーム色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：28.60分
【０１１０】
実施例21
オクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（3-ドコサ-4,7,10,16,19-ヘキサエノイルオキシ）-2-ヒドロキシプロピルアミドの合成
353.54gのオクタデカ-9,12-シス-シス-ジエン酸の（2,3-ジヒドロキシ-プロピル）アミド（1モル）と534.90gのドコサ-5,8,11,14,17-ヘキサエン酸エチル（1.5モル）を1000mL容のフラスコへ導入し、混合物を攪拌下に65℃まで加熱した後、30gの「Lipozyme（登録商標）RM IM」を添加した。次いで、反応媒体を減圧下（50mbar）に置き、生成するエタノールを除去した。
24時間反応させた後、固相上の酵素を濾過によって除去した。アミドの変換率は93％以上であった。得られた生成物はクリーム色のワックスであった。
生成物のHPLC保持時間：29.37分
【０１１１】
IV.  式Iの化合物を含む化粧用組成物の実施例
下記の化粧品調製物は下記成分を混合して得た。
実施例および調製物での比率は重量/全重量である。
【０１１２】
水中油エマルション-クリーム
鉱油                                                4.00％
式(I)のセラミド型化合物                             0.10％
Ceteth 10                                           4.00％
セチルアルコール                                    4.00％
トリエタノールアミン                                0.75％
ブタン-1,3-ジオール                                 3.00％
キサンタンガム                                      0.30％
防腐剤                                              0.40％
香料                                                qs
ヒドロキシブチルトルエン                            0.01％
水                                                  qsp 100％
【０１１３】
乾燥毛髪用ローション
式(I)のセラミド型化合物                             1.5％
香料                                                0.10％
ヒドロキシエチル繊維素                              0.40％
無水エタノール                                     25.00％
p-安息香酸メチル-水酸化ナトリウム                   0.20％
無菌の脱塩水                                        qsp 100％
【０１１４】
乾燥皮膚用老化防止保湿ローション
式(I)のセラミド型化合物                             1.5％
香料                                                0.10％
ヒドロキシエチル繊維素                              0.40％
無水エタノール                                     25.00％
p-安息香酸メチル                                    0.20％
無菌の脱塩水                                        qsp 100％
【０１１５】
乾燥皮膚用老化防止保湿ローション
式(I)のセラミド型化合物                             0.25％
エタノール                                         10.00％
香料                                                0.50％
防腐剤                                              0.40
無菌の脱塩水                                        qsp 100％
【０１１６】
ネイルケア用アルコールローション
式(I)のセラミド型化合物                             0.20％
ジメチルスルホキシド                               10.00％
エタノール                                         40.00％
酸化防止剤                                          0.10％
香料                                                qs
無菌の脱塩水                                        qsp 100％