(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式立体構造式（Ａ）で示されるＮ−（２−ピコリノイル）スピロ［４，４］ノナン−１，６−ジアミンを配位子として有する金錯体。
【化１】
0004838394.tif 000018
【請求項２】
請求項１において、下式立体構造式（Ｂ）で示される（Ｒ，Ｒ，Ｒ）−Ｎ−（２−ピコリノイル）スピロ［４，４］ノナン−１，６−ジアミンを配位子として有する金錯体。
【化２】
0004838394.tif 000019
【請求項３】
請求項１において、下式立体構造式（Ｃ）で示される（Ｓ，Ｓ，Ｓ）−Ｎ−（２−ピコリノイル）スピロ［４，４］ノナン−１，６−ジアミンを配位子として有する金錯体。
【化３】
0004838394.tif 000020
【請求項４】
請求項２において、前記金錯体は式（Ｄ）で示される金錯体であることを特徴とする金錯体。
【化４】
0004838394.tif 000021
（ここでＸはハロゲン、または１価の陰イオンを表す。）
【請求項５】
請求項３において、前記金錯体は式（Ｅ）で示される金錯体であることを特徴とする金錯体。
【化５】
0004838394.tif 000022
（ここでＸはハロゲン、または１価の陰イオンを表す。）
【請求項６】
請求項４または５において、前記金錯体は、Ｘが塩素である金錯体。
【請求項７】
請求項１乃至請求項６に記載の金錯体を有効成分として含有する医薬組成物。
【請求項８】
請求項１乃至請求項６に記載の金錯体を有効成分として含有する悪性腫瘍治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規金錯体及びそれを有効成分とする医薬組成物、特に悪性腫瘍治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から金錯体は下式オーラノフィン[I]が抗リューマチ薬として用いられている。またこの化合物[I]は抗腫瘍作用が認められている（非特許文献１参照）。
【０００３】
【化１】
0004838394.tif 000002
【０００４】
その後、多くの金錯体が合成され、その抗腫瘍作用が調べられてきた。その中に下記式のN-(2-ピコリノイル)-2-アミノキノリンを配位子として有する金錯体[II]に抗腫瘍作用があることが報告されている（非特許文献２参照）。
【０００５】
【化２】
0004838394.tif 000003
【０００６】
また、白金錯体としてはシスプラチン[III]、カルボプラチン[IV]、オキザリプラチン[V]などが従来は抗がん剤として開発され、治療に用いられてきた（例えば、非特許文献３−非特許文献５参照）。本願出願人は、抗腫瘍効果の認められる金錯体として特許第４６２１２８５号（特許文献１）の登録を得ている。しかしながら金錯体は抗がん剤としてはいまだ使用されていない。
【０００７】
【化３】
0004838394.tif 000004
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許第４６２１２８５号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】J. Med. Chem. 1986 29, 218-223
【非特許文献２】Dalton Trans 2003, 3419-3424
【非特許文献３】Nature, 1969 222 385-386
【非特許文献４】Cancer Treat Reviews 1985 12 21-33
【非特許文献５】Cancer Letters 1985 27 135-143
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
抗がん剤として開発された白金錯体は甚大な副作用を有するという欠点がある。
【００１１】
本発明の目的は非特許文献２で開示されている報告をもとに、(R,R,R)-N-(2-ピコリノイル)スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミンおよび(S,S,S)-N-(2-ピコリノイル)スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミンを配位子として有する金錯体で、強い抗腫瘍活性があり、投与量がより少量で効果があり、そのため副作用が軽減された新規金錯体を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
このような目的を達成するために、本発明は、下記一般式で表わされる光学活性な(R,R,R)-N-(2-ピコリノイル）スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミンおよび(S,S,S)-N-(2-ピコリノイル)スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミンを配位子として有する新規金錯体（Ｄ）、（Ｅ）および該錯体を有効成分とするものである。
【００１３】
【化４】
0004838394.tif 000005
【００１４】
ここで式中のＸはClなどのハロゲンイオン、またはNO3、HSO4、PF6、AuCl4などの陰イオンを示す。
【００１５】
本発明は、下式立体構造式（Ａ）で示されるN-(2-ピコリノイル)スピロ［4,4］ノナン-1,6-ジアミンを配位子として有する金錯体である。
【００１６】
【化５】
0004838394.tif 000006
【００１７】
本発明は、下式立体構造式（Ｂ）で示される(R,R,R)-N-(2-ピコリノイル)スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミンを配位子として有する金錯体である。
【００１８】
【化６】
0004838394.tif 000007
【００１９】
本発明は、下式立体構造式（Ｃ）で示される(S,S,S)-N-(2-ピコリノイル)スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミンを配位子として有する金錯体である。
【００２０】
【化７】
0004838394.tif 000008
【００２１】
本発明は、式（Ｄ）で示される金錯体であることを特徴とする上述の金錯体である。
【００２２】
【化８】
0004838394.tif 000009
【００２３】
ここで式中のＸはClなどのハロゲンイオン、またはNO3、HSO4、PF6、AuCl4などの陰イオンを示す。
【００２４】
本発明は、式（Ｅ）で示される金錯体であることを特徴とする上述の金錯体である。
【００２５】
【化９】
0004838394.tif 000010
【００２６】
ここで式中のＸはClなどのハロゲンイオン、またはNO3、HSO4、PF6、AuCl4などの陰イオンを示す。
【００２７】
本発明は、Xが塩素である上述の金錯体である。
【００２８】
本発明は、上述の金錯体を有効成分として含有する医薬組成物である。
【００２９】
本発明は、上述の金錯体を有効成分として含有する悪性腫瘍治療剤である。
【発明の効果】
【００３０】
本発明の新規金錯体（Ｄ）、（Ｅ）は悪性腫瘍、特にヒト肺がん細胞、ヒト胃がん細胞、ヒト肝臓がん細胞、ヒト膵臓がん細胞、ヒト大腸がん細胞、ヒト直腸がん細胞、ヒト悪性黒色腫細胞、ヒト膀胱がん細胞、ヒトリンパ腫細胞等の多種の悪性腫瘍に対して強い抗腫瘍活性があり、従来の白金錯体悪性腫瘍治療剤と比較し、投与量がより少量で効果があり、そのため、相対的に副作用が軽減される。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】本発明の化合物（Ｄ）とオキザリプラチンを正常肝細胞（THLE-2）へ作用させた場合の毒性（細胞増殖阻害率（％））を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
以下に本発明の金錯体及びそれを含む悪性腫瘍治療剤を、その実施の形態について説明する。
【００３３】
本発明にかかわる原料のスピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミンは立体化学上シス、シス−、シス、トランス−、トランス、トランス−の３つの立体異性体が存在する。しかしながら、トランス、トランス体は立体的に分子内での金との錯体形成は不可能であり、好ましくはシス、シス体、シス、トランス体である。特に好ましくはシス、シス体である。この化合物には(R,R,R)体と(S,S,S)体の二つの鏡像体が存在する。
【００３４】
ここで両鏡像体すなわち(R,R,R)-cis,cis-スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン、(S,S,S)-cis,cis-スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミンを合成し、これを2-ピコリン酸のアミド体（Ｂ）、（Ｃ）とし、次いでこの化合物を配位子とする金錯体（Ｄ）、（Ｅ）を提供する本発明を完成するに到った。
【００３５】
以下両鏡像体の合成は同じ方法によるので(R,R,R)-N-(ピコリノイル)スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（Ｂ）を配位子とする金錯体（Ｄ）についてその実施形態を説明する。
【００３６】
本化合物（Ｄ）は非特許文献１（J. Med. Chem. 1986 29, 218-223）を参考にして下記反応式( i )で示される方法により容易に合成される。
【００３７】
【化１０】
0004838394.tif 000011
【００３８】
新規化合物（Ｂ）は(R,R,R)-cis,cis-スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（Ｆ）から下記反応式( ii )の方法に従って合成した。
【００３９】
【化１１】
0004838394.tif 000012
【００４０】
(R,R,R)-cis,cis-スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（Ｆ）は公知の方法（A.C.C. ChanらTetrahedoron. Lett., 2004, 45, 7379）、例えば反応式(iii)で示した方法で合成できる。すなわち、対応する(S,R,S)-trans,trans-スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジオール（Ｊ）から３段階で合成できる。
【００４１】
【化１２】
0004838394.tif 000013
【００４２】
ここでMsClはメタンスルホニルクロライド（CH3SO2Cl）を表す。
【００４３】
(S,R,S)-trans,trans -スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジオール（Ｊ）は公知の方法（A.C.C. ChanらTetrahedoron. Lett., 2004, 45,  7379 ）、すなわちスピロ[4,4]-ノナン-1,6-ジオン（Ｒ）を既知の光学活性な(R)-CBS（Ｍ）を触媒として用いてボランで還元することにより合成できる（反応式(iv)）。
【００４４】
【化１３】
0004838394.tif 000014
【００４５】
(R)-CBS触媒（Ｍ）は次反応式(v)による公知の方法（E. J. Corey, R. K. Bakshi, S. Shibata J. Am. Chem. Soc., 1987, 109, 5551）で合成できる。
【００４６】
【化１４】
0004838394.tif 000015
【００４７】
原料であるスピロ[4,4]ノナン-1,6-ジオン（Ｎ）は市販の化合物（Ｓ）から次反応式(vi)による公知の方法（J.A. Nieman, B.A. Keay, Synthetic Comm., 1999, 29, 3929）で合成できる。
【００４８】
【化１５】
0004838394.tif 000016
【００４９】
本発明の金錯体の有効量を含む医薬組成物を臨床において投与する場合、経口または非経口により投与される。その剤形は、錠剤、糖衣錠、丸剤、カプセル剤、散剤、トローチ剤、液剤、坐剤、注射剤などを包含し、これらは医薬上許容される賦形剤を配合して製造される。本発明の医薬組成物は非経口用製剤として調製されることが望ましい。賦形剤としては、次のようなものを例示することができる。乳糖、ショ糖、ブドウ糖、ソルビトール、マンニトール、ばれいしょでんぷん、アミロペクチン、その他各種でんぷん、セルローズ誘導体（例えば、カルボキシメチルセルローズ、ヒドロキシエチルセルローズ、など）、ゼラチン、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコールワックス、アラビアゴム、タルク、二酸化チタン、オリーブ油、ピーナッツ油、ゴマ油などの植物油、パラフィン油、中性脂肪基剤、エタノール、プロピレングリコール、生理食塩水、滅菌水、グリセリン、着色剤、調味剤、濃厚剤、安定剤、等張剤、緩衝剤など、およびその他医薬上許容される賦形剤。
【００５０】
本発明の治療剤は、本発明の金錯体を0.001〜85重量％、好ましくは0.005〜60重量％含有することができる。
【００５１】
本発明の治療剤の投与量は、主として症状により左右されるが、１日成人体重あたり0.005〜200mg、好ましくは0.01〜50mgである。
【００５２】
以下に実施例を挙げ、本発明を更に具体的に説明する。
［実施例１］化合物（Ｂ）の合成
(R,R,R)-cis,cis-スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（Ｆ）2.00gを10％トリエチルアミンのメタノール溶液60mlに溶かし、１５分攪拌する。この溶液にジ-t-ブチルジカーボネート（(Boc)2O 1.03g、0.36eq.）を無水メタノール60mlに溶かした溶液を約１．５時間かけて滴下する。滴下後２日間攪拌する。溶媒を留去し、水40mlを加えて、塩化メチレン50mlで５回抽出する。無水硫酸ナトリウムで乾燥する。溶媒を留去後、残留物をシリカゲル（60g）クロマトで分離する。溶出剤はクロロホルム−メタノール−アンモニア水（92：8：1）を使用する。(R,R,R)-N-(t-ブトキシカルボニル)スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（Ｇ）1.2g（収率36％）が得られた。
赤外吸収分析の結果
IR（cm-1）：3294, 2960, 2890, 1699, 1506, 1475, 1446, 1390, 1367, 1250, 1172, 1089, 1043
2-ピコリン酸0.625gをDMF 12mlに溶かし、これに1-ヒドロキシ-1H-ベンゾトリアゾール（HOBt）0.686gとジカルボジイミド（DCC）0.972gを加え、１時間氷冷下で攪拌する。次いで先に合成した(R,R,R)-N-(t-ブトキシカルボニル)スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（Ｇ）1.175gをDMF 15mlに溶かし、この溶液を滴下する。滴下後、１夜攪拌する。溶液をセライトでろ過し、酢酸エチル150mlで洗い、ろ液を水30mlで3回、ブラインで1回洗う。無水硫酸ナトリウムで乾燥する。
【００５３】
溶媒を留去後、残留物をシリカゲル（36g）クロマトで分離する。溶出剤はヘキサン−酢酸エチル（1.5：1）を使用する。(R,R,R)-N-(t-ブトキシカルボニル)-N`-(2-ピコリノイル)-スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（Ｈ）1.19g（収率72％）が得られた。
IR（cm-1）：3322, 2964, 2874, 1709, 1670, 1591, 1560, 1522, 1466, 1435, 1366, 1246, 1171, 1090, 1043
N-(t-ブトキシカルボニル)-N`-(2-ピコリノイル)ジアミン（Ｈ）0.55gを塩化メチレン15mlに溶かし、氷冷下でトリフルオロ酢酸（TFA）3mlをゆっくり滴下する。その後室温で約６時間攪拌する。ベンゼン12mlを加えて約半量程度溶媒を留去する。この操作を３回行った後、全量を留去する。残留物を少量の水に溶かし、イオン交換樹脂で脱塩処理を行い、得られた水溶液を濃縮し、ろ過後塩化メチレンで洗浄し、次いで水溶液を抽出する。無水硫酸ナトリウムで乾燥する。溶媒を留去し、(R,R,R)-N-(ピコリノイル）スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（Ｂ）0.20ｇ（収率49％）を得た。
IR（cm-1）：3361, 2959, 2874, 1664, 1591, 1568, 1529, 1466, 1435, 1202, 1174, 1130
［実施例２］化合物（Ｃ）の合成
実施例１と同様に(S,S,S)-cis,cis-スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（(S)-Ｆ）、以下Ｓ体化合物を(S)-と表わす。）1.00gからN-(t-ブトキシカルボニル)ジアミン（(S)-Ｆ）0.58g（収率35％）が得られた。(S,S,S)-N-(t-ブトキシカルボニル)スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（(S)-Ｇ）0.58ｇから実施例１と同様にして(S,S,S)-N-(t-ブトキシカルボニル)-N`-(2-ピコリノイル)スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（(S)-Ｈ）0.60g（収率73％）が得られた。
【００５４】
(S,S,S)-(N-(t-ブトキシカルボニル)-N`-(2-ピコリノイル)スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（(S)-Ｈ）0.20gから実施例１と同様にして（S,S,S）-N-(2-ピコリノイル)スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（Ｃ）0.14ｇ（収率97％）を得た。
IR（cm-1）：3364, 2957, 2870, 1666, 1591, 1568, 1520, 1467, 1435, 1199, 1171, 1128
［実施例３］化合物（Ｄ）(R,R,R)体(X=Cl)の合成
テトラクロロ金（III）酸カリウム（KAuCl4）0.61g（1.63mmol）を入れ水15mlに溶かす。次いで(R,R,R)-N-(2-ピコリノイル)スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（Ｂ）0.45g（1.74mmol）をメタノール60mlに溶かした溶液を加え５時間加熱還流する。セライトでろ過し、濃縮し、アセトトリル15mlを加えて放置すると結晶が析出する。冷却し、析出してきた結晶をろ過する。ろ過物をアセトにトリルで洗い、乾燥する。金錯体が0.43g得られた。機器分析の結果は以下である。
【００５５】
IR(KBr) cm-1：1685, 1605, 1505, 1466, 1387, 1348, 829, 756, 663
1H-NMR：7.2-9.2ppm(4H), 7.40ppm(1H), 8.25ppm(1H), 1.3-4.0ppm(10H)
13C-NMR：170.4ppm (C=O), 127.5-149.5ppm(芳香族4C), 57.2ppm, 57.3ppm(2C-N), 57.6ppm(t-C), 20.1-38.4ppm(脂肪族6C)
ESI-MS：m/z 490  前後の数値からCl原子が１つあることが示された。
[ C15H20N3ClOAu]+ に一致する。
【００５６】
以上の結果から実施例３の化合物は化合物（Ｄ）（X=Cl）で示される化学構造を持っていることが確かめられた。
［実施例４］化合物（Ｅ）(S,S,S)体(X=Cl)の合成
実施例３と同様にして、(S,S,S)-N-(2-ピコリノイル)スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミン（Ｃ）0.38g（1.46mmol）から金錯体（Ｅ）が0.40g得られた。
IR(KBr) cm-1：1654, 1607, 1487, 1447, , 1370, 1339, 797, 758, 667
IR測定の結果、錯体（Ｄ）と一致することから実施例４の化合物は化合物（Ｅ）（X=Cl）で示される化学構造を持っていることが確かめられた。
［実施例５］薬剤効果試験
試験溶液は、化合物（Ｄ）をDMSO(ジメチルスルホキシド)に8mg/mlの濃度で溶解することにより調製した。
【００５７】
試験は、がん細胞として、ヒト肺がん細胞５種（LU65A, LU99, A549, RERF-LC-MA, H460）、ヒト胃がん細胞３種（LKATO III, MKN-1, MKN-45）、ヒト肝臓がん細胞２種（HuH-7, HepG2）、ヒト膵臓がん細胞２種（KP-1N, AsPC-1）、ヒト大腸がん１種（DLD-1
）、ヒト結腸がん細胞２種（HCT116, HT-29）、ヒト直腸がん細胞１種（CaR-1）、ヒト前立腺がん細胞３種（PC-3, DU145, LNCap.FGC）、ヒト皮膚がん細胞１種（A431）、ヒト悪性黒色腫細胞１種（G-361）、ヒト中皮腫細胞１種（H2452）、ヒト食道がん細胞２種（T.T, TE-6）、ヒト膀胱がん細胞１種（T24）、ヒト子宮頸がん細胞１種（ME-180）、ヒトリンパ腫細胞２種（U937, Jurkat E6.1）、ヒト白血病細胞１種（HL60）を用いて行った。
【００５８】
これらの細胞は１０％血清添加の各培養培地に懸濁し、９６ウェルプレートに分注した。その後３７℃、５％CO2の中で一晩培養した。試験溶液を培養培地にて種々の濃度に調製し、あらかじめ細胞を播いておいたプレートに分注した。さらに３日間、３７℃、５％CO2の中で培養した。
【００５９】
薬剤添加後の細胞の増殖は、薬剤添加後１〜３日目にMTS法（Promega社製細胞増殖試験用キットCell Titer 96  Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay）により測定した。
【００６０】
測定したMTS値より、細胞増殖の阻害率(%)を以下の式で求めた。
【００６１】
阻害率(%)=(1-薬剤添加群のMTS値／薬剤未添加群MTS値)×100
上記式で求められた値は、細胞増殖阻害率を表すため、数値が高いほど薬剤効果が高いことになる。その値が５０(%)以上のものを薬剤効果があるものとした。結果を以下に示す。
【００６２】
【表１】
0004838394.tif 000017
【００６３】
上記の表１より、ヒト肺がん細胞（LU65A, LU99, A549, RERF-LC-MA）、ヒト胃がん細胞（MKN-1）、ヒト肝臓がん細胞（HuH-7）、ヒト大腸がん細胞（DLD-1）、ヒト直腸がん細胞（CaR-1）、ヒト悪性黒色腫細胞（G-361）、ヒト膀胱がん細胞（T24）において、従来からの抗がん剤であるオキザリプラチンに比較して強い薬効が認められた。
【００６４】
また図１に示すグラフのX軸は式より求めた細胞増殖阻害率(%)を表し、Y軸は薬剤濃度(μg/ml)を表す。図１より、正常肝細胞（THLE-2）では、オキザリプラチンに比較して低濃度（10μg/ml以下）の添加量における毒性は低いと判断された。
【産業上の利用可能性】
【００６５】
以上のように本発明の金錯体は強い抗腫瘍活性を有し、かつ毒性が低く、悪性腫瘍治療剤として有用である。
【要約】
【課題】強い抗腫瘍活性があり、投与量がより少量で効果がある新規金錯体及びそれを含む医薬組成物を提供する。
【解決手段】
下記一般式【化１】
0004838394.tif 000023
で表わされる光学活性なN-(2-ピコリノイル）スピロ[4,4]ノナン-1,6-ジアミンを配位子として有する新規金錯体および該錯体を有効成分とする悪性腫瘍治療剤を提供する。
【選択図】なし【図１】
0004838394.tif 000024