(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガラクトシルジグリセリドとセラミドとの配合比が１：０．０１〜１：０．５であることを特徴とするフィブロネクチン産生促進剤。  
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は，フィブロネクチン産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
フィブロネクチン（fibronectin 、寒冷不溶性グロブリン）は、１９４８年にフィブリノーゲン画分に混入する寒冷不溶性の蛋白質として単離されたが，その後，血清中の細胞伸展因子であることが分り，強い細胞接着活性を有していることが明らかにされてきた。現在は，細胞外基質として細胞の接着において重要な役割を果たすことが広く知られている。 
フィブロネクチンは、分子量２０万〜２５万の糖蛋白質であり、血漿中に存在する他、線維芽細胞などの間葉細胞の外囲や表皮などの基底膜に存在する。血漿中に存在するものは、通称血漿フィブロネクチンとよばれ分子量２０万〜２２万の単量体が会合した二量体の構造をなしており、血漿中に０．３ｍｇ／ｍｌ程度含有されている。間葉細胞や基底膜に存在するものは２０万〜２５万の分子量を持つ単量体が二量体もしくはそれ以上の多量体をなした構造をしており，通称細胞性フィブロネクチンと呼ばれている。これらのフィブロネクチンはいくつかのドメインから成り立っており、それぞれが例えば、トランスグルタミナーゼ、ヘパリン、フィブリン、細胞接着分子（インテグリン）、コラーゲンなどと結合でき，結合組織の正常なネットワークの構築において極めて重要な役割を演じている。
老若ヒト皮膚バイオプシーについて免疫組織学的に乳頭層のフィブロネクチンは加齢に伴って疎となり，加齢線維芽細胞の産生するフィブロネクチンも減少することが報告されている（Ａｎｎｅ． Ｐａｔｈｏｌ．１９８４;４（３）：１８５−９４：非特許文献１）。
したがって，皮膚や軟骨など結合組織中のフィブロネクチンの加齢に伴う減少が細胞の形態や機能に重大な影響を与えることが十分考えられる。 
【０００３】
フィブロネクチンの生体内での産生量は，トランスフォーミンググロースファクター（ＴＧＦ）、結合組織グロースファクター（ＣＴＧＦ）やインターロイキン（ＩＬ）で亢進されることが知られている（Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１９８８;１０６（６）：２１５９−７０（非特許文献２）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０００;１２（１）：３７６−８０（非特許文献３）、Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．２００３；２９４（１０−１１）：４３３−７（非特許文献４））。
一方，天然のフィブロネクチン産生促進剤として，スフィンゴシルホスホリルコリン（非特許文献４）やあるいはガラクトシルジグリセリド（特表平０９−５１２２８４号公報：特許文献１）が知られるがそれらの促進効果は必ずしも充分ではなかった。
【０００４】
ガラクトシルジグリセリド（ＧＤＧと略すことがある。）は、グリコシルグリセリド（糖脂質）の一種であり、グリセリンの１−および２−位に脂肪酸がエステル結合しており、３−位に糖がエーテル結合している化合物である。
ガラクトシルグリセリドは、例えば小麦粉中に含有されているグリコシルグリセリド類からクロマトグラフィーにより単離する技術が開示されている (Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９９２）６９， ４，３８７−３９１（非特許文献５）)。
【０００５】
一方、セラミドは、スフィンゴシンに、脂肪酸が結合した構造およびさらに糖が結合した構造を有する化合物である。
セラミドは、皮膚角層構成成分の一種として皮膚内外の物質透過を抑制、保湿効果、感染からの保護作用、肌荒れ防止・改善の効果等を有するなど、その恒常性維持における機能が注目されている。
セラミドは、荒れ肌改善効果、角質改善効果、角質層のターンオーバーを速くする効果、美肌効果等の優れた皮膚化粧の観点から、従来は、保湿、美肌、肌荒れ防止、しわ防止等の美容効果を目的として、天然または合成のセラミドを皮膚化粧料、養毛化粧料および入浴剤等に添加して表皮より補給する方法が取られてきた。このセラミドは、公知の方法により得ることができる（特開２００２−３００９３号公報（特許文献２）、特開２００２−２９４２７４号公報（特許文献３））。
しかし、近年はセラミドを経口摂取することにより、経皮投与と同様に保湿、美肌、肌荒れ防止、しわ防止等の美容効果があることも明らかにされ，セラミドを含有した健康食品も開示されている（特開平１１―１１３５３０号公報（特許文献４）、特開平８−２５６７２９号公報（特許文献５））。
セラミド等の糖脂質には，免疫機能活性化剤（特開平３−３１８４６６号公報（特許文献６））、癌細胞増殖抑制剤（特開平７−２５８１００号公報（特許文献７））、ナチュラルキラーＴ細胞活性化作用（国際公開特許ＷＯ０１／９４５５３（特許文献８）、国際公開特許ＷＯ９８／４４９２８（特許文献９））等の用途が知られている。
【０００６】
【非特許文献１】Ａｎｎｅ． Ｐａｔｈｏｌ．１９８４;４（３）：１８５−９４
【非特許文献２】Ｊ．Ｃｅｌｌ、Ｂｉｏｌ．１９８８;１０６（６）：２１５９−７０
【非特許文献３】Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０００;１２（１）：３７６−８０
【非特許文献４】Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．２００３；２９４（１０−１１）
【特許文献１】特表平０９−５１２２８４号公報
【非特許文献５】Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９９２）６９， ４，３８７−３９１
【特許文献２】特開２００２−３００９３号公報
【特許文献３】特開２００２−２９４２７４号公報
【特許文献４】特開平１１―１１３５３０号公報
【特許文献５】特開平８−２５６７２９号公報
【特許文献６】特開平３−３１８４６６号公報
【特許文献７】特開平７−２５８１００号公報
【特許文献８】国際公開特許  ＷＯ０１／９４５５３明細書
【特許文献９】国際公開特許  ＷＯ９８／４４９２８明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、以上のような背景のもとでなされたもので、本発明の目的は、安全かつ容易に入手可能で、優れたフィブロネクチン産生促進剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、ガラクトシルジグリセリドとセラミドを特定比率で用いると、細胞性フィブロネクチンの産生を相乗的に促進することの知見を得て、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、ガラクトシルジグリセリドとセラミドとの配合比が１：０．０１〜１：０．５であることを特徴とするフィブロネクチン産生促進剤である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、安全かつ容易に入手可能で、優れたフィブロネクチン産生促進剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明のフィブロネクチン産生促進作用剤は、ガラクトシルジグリセリドとセラミドとの配合比が１：０．０１〜１：０．５であることを特徴とする。
本発明で用いるガラクトシルジグリセリド（以下、ＧＤＧと略す場合もある。）は、通常、下記の式（１）で示される構造のグリコシルジグリセリド化合物である。
【００１１】
【化１】
0004604556.tif 000002
【００１２】
（式中、Ｒ1（Ｏ＝）Ｃ−、Ｒ2（Ｏ＝）Ｃ−は脂肪酸由来の残基、Ｇ１はガラクトース由来の残基である。ｍは１または２を示す。）
【００１３】
本発明で用いるガラクトシルジグリセリド（ＧＤＧ）は、動物組織、植物組織等の天然物から公知の方法により抽出して得たガラクトシルジグリセリドが挙げられる。
更に詳細には，ＧＤＧは、動物組織として脳又は脊椎骨髄を原料として抽出したもの、植物組織として小麦又は大麦等の穀物や大豆等の種子、コンニャクやさといも等の地下茎、イチョウの葉等を原料として抽出したものが挙げられる。
安全性の点からより好ましくは、植物から抽出したものである。
また、化学的に脂肪酸、グリセリン、糖から合成したガラクトシルジグリセリドも使用できる。
本発明で用いるＧＤＧは、天然物を原料として用い当業者によく知られた前記の特許文献３や４に記載の公知の抽出方法によって得られるが、その際に用いる抽出溶媒は、好ましくは、食品等に使用できるエタノール等のアルコールや水の極性溶媒である。
また、市販品を使用することもできる。市販品としては、例えばシグマ社(ＵＳＡ）の試薬が挙げられる。
【００１４】
また、本発明で用いるセラミドは、スフィンゴシン、脂肪酸が結合した構造およびさらに糖が結合した構造を有し、次式（２）で示される構造の化合物である。
【００１５】
【化２】
0004604556.tif 000003
【００１６】
（式中、Ｒ３はアルキル基である。Ｒ４Ｃ（＝Ｏ）−は脂肪酸由来の残基である。またＧ２は、糖由来の残基または水素原子である。）
前記のセラミドは、天然物から抽出したグリコシルセラミド（セレブロシド）、その加水分解物あるいは、化学的に合成した合成セラミドが挙げられる。本発明で用いるセラミドは、前記の式（２）のＧ２がガラクトース、グルコース由来の残基および水素原子が挙げられる。セラミドとしては、好ましくは、Ｇ２がガラクトース由来の残基であるガラクトシルセラミドである。天然物からの抽出物に用いる原料としては、例えば、動物組織、植物組織、微生物等が挙げられる。更に詳細には，動物組織としては、脳、骨髄、肝臓、脾臓、腎臓、肺が挙げられる。植物組織としては、小麦、大麦、米、大豆、黍等の種子；コンニャクやさといも等の地下茎；ホウレンソウ等の葉；藻類等が挙げられる。
さらに、酵母等の微生物より抽出した微生物グリコシルセラミドも使用することができる。狂牛病などに対する安全性の面から植物性グリコシルセラミドを使用することがより好ましい。
植物とくに小麦、米等の穀物抽出液を精製したものが入手性等の観点からさらに好ましく、例えば、小麦胚芽（グルテン）、米糠及び米胚芽から得られるセラミドを使用することができる。このセラミドは、公知の方法により得ることができる（特許文献２）、（特許文献３））。例えば、小麦または米糠を原料として、加水分解後、エタノール、水等の極性溶媒を用いて抽出する方法である。
また、グリコシルセラミドは、市販品としても入手可能である。例えばシグマ 社(ＵＳＡ)から試薬として入手し使用することができる。
【００１７】
本発明において、ガラクトシルジグリセリドとセラミドを併用する際の比率は重量比で、１：０．０１〜１：０．５である。さらに好ましくは、前記の比が１：０．０２〜１：０．２である。ガラクトシルジグリセリドとセラミドを併用する際の比率が重量比で、１：０．０１よりセラミドの比率が少ないとフィブロネクチン産生促進の相乗効果が期待できず、１：０．５よりセラミドの比率が多いとセラミドの量の増加に見合うフィブロネクチン産生促進の著しい向上効果が期待できない。
本発明において、ガラクトシルジグリセリドとセラミドを併用する際に、合成品を混合して用いてもよく、ガラクトシルジグリセリドとセラミドが上記比率で含有される天然物抽出物の場合は抽出物をそのまま用いてもよい。
ガラクトシルジグリセリドとセラミドの比率は、通常、小麦等の場合には、抽出方法等にもよるが、１：０．０５〜１：０．２程度含まれる。
【００１８】
本発明のフィブロネクチン産生促進剤は、そのまま単独で用いてもよく、本発明の効果を損なわない範囲において、必要に応じて、例えば更にフィブロネクチン産生を促進する前記のＴＧＦ、ＣＴＧＦ、ＩＬあるいは植物抽出物などと併用してもよい。
【００１９】
本発明のフィブロネクチン産生促進剤は、ガラクトシルジグリセリドとセラミドを最終的に前記の比率で使用すればよく、両者を併用するので、相乗効果を発揮して皮膚や軟骨などの結合組織中における細胞性フィブロネクチンネットワークの強化により老化に付随する機能低下抑制やその予防、当該組織の生化学的特性の改善、皮膚老化効果の抑制又は予防に適して使用することが可能になる。
本発明のフィブロネクチン産生促進剤の使用方法は、細胞に摂取させてフィブロネクチン産生を促進させる。特に細胞性フィブロネクチンの産生を促進させる。本発明のフィブロネクチン産生促進剤は、具体的には、健康食品等のサプリメント、食品への添加する、あるいは飲料に配合する等の使用によりフィブロネクチンの産生促進効果が期待できる。
【実施例】
【００２０】
次に実施例を用いてさらに本発明を詳細に説明する。
（Ｉ）ＲＴ−ＰＣＲによるフィブロネクチン発現増強効果
実施例１：
・  細胞培養：１０％牛胎児血清を含有するダルベッコ改変イーグル培地を用い皮膚結合組織由来の線維芽細胞ＮＢ１ＲＧＢ（理化学研究所製：継代数が４以下）を１×１０5（ｃｅｌｌ／ｍｌ）の体積密度で、直径５ｃｍのシャーレに３．５ｍｌづつ播種し、５％炭酸ガス濃度のもと３７℃で培養を行った。８日間培地交換なしに連続して培養しコンフルーエントとした後に、無血清培地に交換し、さらに1日継続的に培養を行った。その後、ガラクトシルジグリセリドとガラクトシルセラミドを試薬を用いて最終濃度をそれぞれ、２５０μｇ／ｍｌ、５μg／ｍｌ（添加比１：０．０２）となるように添加し、５時間培養を行った。 
（２）遺伝子発現の評価：培養液を吸引除去後，ＲＮＡ抽出用試薬（ニッポンジーン（株）  商品名  ＩＳＯＧＥＮ）を１ｍｌ添加し、全ＲＮＡを回収した。得られたＲＮＡをＤＥＰＣ（１重量％ジエチルピロカルボネート）処理水に再溶解後、ＲＥＡＬ Ｔｉｍｅ ＲＴ−ＰＣＲ Ｃｏｒｅ Ｋｉｔ試薬(タカラバイオ（株）製  商品名)を用いて、５’−ＴＣＣＴＴＧＣＴＧＧＴＡＴＣＡＴＧＧＣＡＧ−３’および３’−ＡＧＡＣＣＣＡＧＧＣＴＴＣＴＣＡＴＡＣＴＴＧＡ−５’をフィブロネクチンのプライマー、５’−ＧＡＧＡＣＣＴＴＣＡＡＣＡＣＣＣＣＡＧＣＣ−３’および３’−ＣＴＧＡＡＧＣＴＣＧＴＴＣＴＣＴＡＣＣＧＧ−５’をハウスキーピング遺伝子であるアクチンのプライマーとして目的のｍＲＮＡに相補的なＰＣＲ産物である転写物のｍＲＮＡから相補的なＤＮＡを複製し，さらに対数的に増幅させたＤＮＡ断片の増幅を行った。以上のＲＴ−ＰＣＲにおいて反応系にＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Iを添加してＤＮＡ  Ｅｎｇｉｎｅ  Ｏｐｔｉｃｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．）により目的遺伝子産物の相補的なＰＣＲ産物（ＤＮＡ）の増幅をＨＳＰ７０アニーリング温度（６４℃）、アクチンアニーリング温度（６２℃）で経時的にＤＮＡ断片をつくり蛍光標識し、その蛍光量を測定して追跡した。予め目的のＰＣＲ産物（ＤＮＡ）をアガロース電気泳動により精製し、これを標準ＤＮＡとして検体と同時に増幅反応を行い検量線として用いることでｍＲＮＡの発現量を算出した。
無添加対照群におけるｍＲＮＡ値（フィブロネクチン／アクチン）を１．０として各添加群のｍＲＮＡ値を相対強度として算出し、表１に示した。
【００２１】
実施例２、３
（１）細胞培養：ガラクトシルジグリセリドが２５０μｇ／ｍｌとガラクトシルセラミドを１０μｇ／ｍｌ（実施例２：ガラクトシルジグリセリド：ガラクトシルセラミド添加比＝１：０．０４）あるいはガラクトシルジグリセリドが２５０μｇ／ｍｌと４０μｇ／ｍｌ（実施例３：ガラクトシルジグリセリド：ガラクトシルセラミド添加比＝１：０．１６）を添加した以外は，実施例１と同様に細胞を培養した。
（２）フィブロネクチン遺伝子発現の評価：実施例１と同様にしてフィブロネクチンｍＲＮＡの発現を評価した。その結果、表１に示す。
【００２２】
実施例４
小麦胚芽熱エタノール抽出物：
（１）小麦糖脂質複合体：小麦より熱エタノール抽出したニッサンＮ−セラミド（日本油脂（株）商品名）を糖脂質複合体として用いた。
・  組成分析：試料のガラクトシルジグリセリドとセラミドの定量は以下の条件および方法で行った。
装置：Ａｌｔｅｃｈ  ５００ＨＰＬＣシステム（Ａｌｌｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、ＵＳＡ）
検出器：ＥＬＳＤ（蒸発光散乱検出システム）
カラム：Ｉｎｔｅｒｓｉｌ  Ｓｉｌｉｃｉｕｍ（１５０×４．６ｍｍ：３５℃）
溶媒：クロロホルムと６７％メタノール混合液による二液濃度勾配（９９：１〜１０：９０，流速：１ｍＬ／ｍｉｎ）
以上の機種および条件により試料を分析した。
その結果、ガラクトシルジグリセリドとセラミドの含有率は、それぞれ約５７％、約４％で両者の重量比は１：０．０８であった。
（３）細胞培養：ガラクトシルジグリセリドとガラクトシルセラミドの代りに小麦由来の熱エタノール抽出物を５００μg／ｍｌ添加した以外は、実施例１と同様に細胞を培養した。
なお、培養条件では、ガラクトシルジグリセリドとガラクトシルセラミドの濃度は、ガラクトシルジグリセリドが２３５μｇ／ｍｌとガラクトシルセラミドが１８μｇ／ｍｌであった。
（４）フィブロネクチン遺伝子発現の評価：実施例１と同様にしてフィブロネクチンｍＲＮＡの発現を評価した。その結果を、表１に示す。
【００２３】
比較例１
（１）細胞培養：ガラクトシルジグリセリドとガラクトシルセラミドをともに用いない以外は、実施例１と同様にして培養を行った。
（２）フィブロネクチン遺伝子発現の評価：実施例１と同様にしてフィブロネクチンｍＲＡＮの発現を評価した。その結果を、表１に示す。
【００２４】
比較例２
（１）細胞培養：ガラクトシルジグリセリドを用いない以外は、実施例２と同様にして培養を行った。
（２）フィブロネクチン遺伝子発現の評価：実施例２と同様にしてフィブロネクチンｍＲＡＮの発現を評価した。その結果を、表１に示す。
【００２５】
比較例３
（１）細胞培養：ガラクトシルセラミドを用いない以外は、実施例２と同様にして培養を行った。
（２）フィブロネクチン遺伝子発現の評価：実施例２と同様にしてフィブロネクチンｍＲＡＮの発現を評価した。その結果を、表１に示す。
【００２６】
実施例５
（１）細胞培養：ＮＢ１ＲＧＢ細胞を通常の方法で繰返し２０継代培養し、老化結合組織細胞を得た。この老化結合組織細胞を用いた以外は実施例２と同様にして培養を行い，老化への影響を検討した。
（２）フィブロネクチン遺伝子発現の評価：実施例１と同様にしてフィブロネクチンｍＲＮＡの発現を評価した。その結果を，表１に示す。
【００２７】
比較例４
（１）細胞培養：ガラクトシルジグリセリドを用いない以外は，実施例５と同様に老化結合組織細胞の培養を行った。
（２）フィブロネクチン遺伝子発現の評価：実施例５と同様にしてフィブロネクチンｍＲＡＮの発現を評価した。その結果を、表１に示す。
【００２８】
【表１】
0004604556.tif 000004
【００２９】
以上の結果から、ガラクトシルジグリセリドとガラクトシルセラミドをともに用いない比較例１、どちらか一方のみを用いた比較例２，３に比べて、本発明のガラクトシルジグリセリドとガラクトシルセラミドの特定の２種の配合比率で用いた実施例１〜４では、｛フィブロネクチンｍＲＡＮ／アクチンｍＲＡＮ｝の比の値が大きく、フィブロネクチンの産生を促進することがわかる。また、２０継代した老齢細胞を用いた実施例５が、比較例４に比べて著しく効果があることがわかる。また実施例５の数値では、比較例３の数値程度であり、ガラクトシルジグリセリド単独程度の４継代以下の若齢の細胞と同じ程度でフィブロネクチンの産生が維持できることがわかる。
【００３０】
II)  免疫蛍光染色によるフィブロネクチンの検出
実施例６
（１）細胞培養：１０％牛胎児血清を含有するダルベッコ改変イーグル培地を用い皮膚由来の線維芽細胞ＮＢ１ＲＧＢ（理化学研究所製）を１×１０5（ｃｅｌｌ／ｍｌ）の体積密度で、予め  ３×４ ｍｍ／ｍｍのカバーガラスを挿入した２４穴細胞プレートに０．５ｍｌづつ播種し、５％炭酸ガスのもと３７℃で培養を行った。８日間培地交換なしに連続して培養してコンフルーエントとした後，無血清培地に交換し、さらに１日継続的に培養を行った。その後、ガラクトシルジグリセリドとガラクトシルセラミドをそれぞれ最終濃度が２５０μｇ／ｍ、５０μｇ／ｍｌ（添加比１：０．０２）となるように添加し、２４時間培養を継続した。培地を除去後、ＰＢＳ（−：リン酸緩衝生理食塩水、カルシウム、マグネシウム等なし）で培養液を洗浄した。
（２）免疫染色：４％パラフォルムアルデヒドの０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ ７．２）０．５ｍｌをここに加え、室温で1０分間固定した。１０％トリトンＸ−１００溶液を４０μl添加しさらに５分間静置した。０．５ｍｌブロッキング剤（雪印乳業（株）製  商品名  ブロックエース）を添加後、４℃で一夜静置した上記カバーガラスを一次抗体に抗ヒトフィブロネクチン−ウサギ抗体（カッペル社製  商品名）、二次抗体にＦＩＴＣ−コンジュゲート抗ウサギＩｇＧ抗体（カッペル社製  商品名）を用いて染色した。封入剤にベクターシールド（ベクタボンド社製  商品名）を用いて細胞核のＤＡＰＩ染色を行った。蛍光顕微鏡を用いてＦＩＴＣの蛍光画像によりフィブロネクチンおよびＤＡＰＩの蛍光画像により細胞核を観察した。さらに、露出条件を一定にして蛍光画像を写真撮影し，画像解析により定量化を試みた。得られた蛍光強度の相対値を表２に示す。
【００３１】
実施例７
（１）小麦糖脂質複合体：実施例４と同様にして小麦より熱エタノール抽出したニッサンＮ−セラミド（日本油脂（株）製  商品名）を用いた。
（２）組成分析：実施例４と同様にしてガラクトシルジグリセリドとガラクトシルセラミドの定量を行った。その結果、ガラクトシルジグリセリドとガラクトシルセラミドの含有率はそれぞれ約５７％、約４％で両者の重量比は１：０．０８であった。なお、ガラクトシルジグリセリドとガラクトシルセラミドの濃度は、ガラクトシルジグリセリドが２３５μｇ／ｍｌとガラクトシルセラミドが１８μｇ／ｍｌであった。
（３）細胞培養：ガラクトシルジグリセリドとガラクトシルセラミドの代りに小麦由来の熱エタノール抽出物を５００μg／ｍｌ添加した以外は，実施例６と同様に細胞を培養した。  
（４）免疫染色：実施例６と同様にしてフィブロネクチンを検出し、定量化した。得られた相対蛍光画像を図１に、また蛍光強度の相対値を表２に示す。
【００３２】
比較例５
（１）細胞培養：ガラクトシルジグリセリドとガラクトシルセラミドを用いない以外は、実施例６と同様に培養を行った。
（２）免疫染色：実施例６と同様にしてフィブロネクチンを検出し、定量化した。得られた蛍光画像を図２に、また蛍光強度の相対値を表２に示す。
【００３３】
比較例６
（１）細胞培養：ガラクトシルセラミドを用いない以外は、実施例６と同様に培養を行った。
（２）免疫染色：実施例６と同様にしてフィブロネクチンを検出し、定量化した。得られた蛍光画像を図３に、また蛍光強度の相対値を表２に示す。
【００３４】
【表２】
0004604556.tif 000005
【００３５】
以上の結果から、ガラクトシルジグリセリドとガラクトシルセラミドの両方が添加されていない比較例５およびガラクトシルジグリセリドのみが配合されている比較例６に比べて、両者が特定の範囲にある実施例６および７では、蛍光強度で直接的にフィブロネクチン量を蛍光強度で調べるとその相対量が多いことがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は実施例７の蛍光画像の写真である。
【図２】図２は比較例５の蛍光画像の写真である。
【図３】図３は比較例６の蛍光画像の写真である。
【図１】
0004604556.tif 000006
【図２】
0004604556.tif 000007
【図３】
0004604556.tif 000008