(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
(ｉ)アミノ酸配列が、配列１に記載したアミノ酸配列と１００％同一であるコリンオキシダーゼ；および
(ii)アミノ酸配列が、配列１に記載したアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であり、かつ、アミノ酸配列が配列１に記載したアミノ酸配列と１００％同一であるコリンオキシダーゼから、１つまたは複数の保存性アミノ酸交換によって得られるコリンオキシダーゼ；
からなる群から選択されるコリンオキシダーゼ。
【請求項２】
アミノ酸配列が、配列１に記載したアミノ酸配列と１００％同一であるコリンオキシダーゼ。
【請求項３】
アミノ酸配列が、配列１０〜１５に記載したアミノ酸配列のいずれかと１００％同一であるコリンオキシダーゼ。
【請求項４】
(ｉ)アミノ酸配列が、配列１に記載したアミノ酸配列と１００％同一であるコリンオキシダーゼ；および
(ii)アミノ酸配列が、配列１に記載したアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であり、かつ、アミノ酸配列が配列１に記載したアミノ酸配列と１００％同一であるコリンオキシダーゼから、１つまたは複数の保存性アミノ酸交換によって得られるコリンオキシダーゼ；
からなる群から選択されるコリンオキシダーゼをコードしている核酸。
【請求項５】
アミノ酸配列が、配列１０〜１５に記載したアミノ酸配列のいずれかと１００％同一であるコリンオキシダーゼをコードしている核酸。
【請求項６】
コリンオキシダーゼをコードしている核酸であって、そのヌクレオチド配列が、配列４に記載したヌクレオチド配列と１００％同一である核酸。
【請求項７】
コリンオキシダーゼをコードしている核酸であって、そのヌクレオチド配列が、配列１７〜２２に記載したヌクレオチド配列のいずれかと１００％同一である核酸。
【請求項８】
配列８、配列９または配列２３に記載した配列のいずれかからなるＰＣＲプライマー。
【請求項９】
ヌクレオチド配列が、配列７に記載したヌクレオチド配列と１００％同一である核酸。
【請求項１０】
新規なコリンオキシダーゼを同定および／または単離するための、請求項８に記載のＰＣＲプライマーまたは請求項９に記載の核酸の使用。
【請求項１１】
別のタンパク質との融合または結合のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載のコリンオキシダーゼの使用。
【請求項１２】
別の核酸との融合のための、請求項４〜９のいずれか１項に記載の核酸またはＰＣＲプライマーの使用。
【請求項１３】
請求項４〜７に記載したコリンオキシダーゼをコードしている核酸のいずれかを含有するベクター。
【請求項１４】
請求項１３に記載のクローニングベクター。
【請求項１５】
請求項１３に記載の発現ベクター。
【請求項１６】
請求項１〜３に記載したタンパク質のいずれかを発現するか、または発現するように刺激しうる宿主細胞。
【請求項１７】
細菌である請求項１６に記載の宿主細胞。
【請求項１８】
Escherichia属に属する請求項１７に記載の宿主細胞。
【請求項１９】
Bacillus属に属する請求項１６に記載の宿主細胞。
【請求項２０】
Arthrobacter属に属する請求項１６に記載の宿主細胞。
【請求項２１】
真核細胞である請求項１６に記載の宿主細胞。
【請求項２２】
大気中酸素の助けを借りて、ベタインアルデヒドおよびベタインの生成を伴って、コリンおよびコリン誘導体から過酸化水素を連続的に放出させることができる物質としての、請求項１〜３のいずれか１項に記載のコリンオキシダーゼの使用。
【請求項２３】
漂白のため、染料移行抑制のため、および殺菌のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載のコリンオキシダーゼの使用。
【請求項２４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のコリンオキシダーゼを含有する、身体ケア製品、シャンプー、毛髪ケア製品、口腔ケア、歯ケアもしくは義歯ケア製品、化粧品、洗剤、浄化剤、濯ぎ剤、手洗浄洗剤、手食器洗浄洗剤、機械食器洗浄洗剤、殺菌剤、ならびに、フィルター媒体、織物、毛皮、紙、皮膚または皮革の漂白または殺菌処理のための製剤。
【請求項２５】
製剤の使用条件下で過酸化水素を生成しうる漂白系を含有する洗剤または漂白剤であって、該漂白系が、請求項１〜３のいずれか１項に記載のコリンオキシダーゼおよび該コリンオキシダーゼのための基質からなる洗剤または漂白剤。
【請求項２６】
基質が、コリン、ベタインアルデヒドまたはコリン誘導体である請求項２５に記載の製剤。
【請求項２７】
３〜２０,０００Ｕ／ｇのオキシダーゼ活性を有する請求項２５または請求項２６に記載の製剤。
【請求項２８】
３００〜１２００ｇ／Ｌの嵩密度を有する流動性粉末の形態にある請求項２５〜２７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項２９】
ペースト状または液体洗剤の形態にある請求項２５〜２７のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項３０】
非水性液体洗剤または非水性ペーストの形態にある請求項２５〜２７または２９のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項３１】
水を含有し、空気不透過性の容器中に装填され、該容器から使用直前または洗浄操作中に放出される、水性液体洗剤またはペーストの形態にある請求項２５〜２７、２９または３０のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項３２】
コリンオキシダーゼおよび／またはこの酵素のための基質が、室温でまたは水の不存在下で該酵素および／またはその基質に対して不透過性である物質中に封入され、該物質が、製剤の使用条件下で該酵素および／またはその基質に対して透過性になる請求項２５〜３１のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項３３】
漂白系に加えて、
・５〜７０重量％の界面活性剤、
・１０〜６５重量％の水溶性、水分散性の無機ビルダー物質、
・１〜１０重量％の水溶性の有機ビルダー物質、
・１５重量％以下の固体の無機および／または有機酸または酸性塩、
・５重量％以下の重金属錯化剤、
・５重量％以下の灰色化抑制剤、
・５重量％以下の染料移行抑制剤、および
・５重量％以下の発泡抑制剤、
を含有する請求項２５〜３２のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項３４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のコリンオキシダーゼを含有する、シャンプーまたは毛髪ケア製品。
【請求項３５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のコリンオキシダーゼを含有する、ケラチン繊維を染色するための酸化染料。
【請求項３６】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のコリンオキシダーゼを含有する、義歯ケア剤。
【請求項３７】
請求項１〜３のいずれか１項に記載のコリンオキシダーゼ、コリンオキシダーゼ基質および化学発光試薬を含有する、化学発光アッセイにおいて光放射を生成させるためのシグナル試薬。
【請求項３８】
コリンオキシダーゼ基質が、コリン、コリン誘導体およびベタインアルデヒドの中から選択される請求項３７に記載のシグナル試薬。
【請求項３９】
化学発光試薬がルミノールである請求項３７または３８に記載のシグナル試薬。
【請求項４０】
ベタインの製造のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載のコリンオキシダーゼの使用。
【請求項４１】
食品および／または食品成分の製造のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載のコリンオキシダーゼの使用。
【請求項４２】
動物飼料および／または動物飼料成分の製造のための、請求項１〜３のいずれか１項に記載のコリンオキシダーゼの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なコリンオキシダーゼ、その単離方法、該新規なコリンオキシダーゼを含有する身体ケア製品、毛髪ケア製品、シャンプー、口腔ケア、歯ケアおよび義歯ケア製品、化粧品、洗剤、浄化剤、濯ぎ剤、手洗浄洗剤、手食器洗浄洗剤および機械食器洗浄洗剤、ならびに、該新規なコリンオキシダーゼの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
コリンオキシダーゼは、従来技術から既知である(非特許文献１および２)。また、洗剤において漂白および染料移行抑制のための過酸化水素を生成させるために、あるいは、化粧品調製物において酵素毛髪染色および漂白のために、オキシダーゼ(アルコールオキシダーゼ、アミノ酸オキシダーゼ)をその基質と一緒に使用しうることも知られている。
【０００３】
特許文献１は、オキシダーゼが、大気中酸素の助けを借りて、産業的条件(例えば洗剤マトリックス)下で、その対応する基質から過酸化水素を放出させ、従って、漂白のために使用しうることを記載している。過酸化水素の生成は連続的に進行し、生成物生成の効率は、温度安定性およびｐＨ安定性、ならびに基質および生成物に対する耐性によって決定される。
【０００４】
通常の化学漂白においては、無機のアルカリ性過酸化水素供給源(例えば、過炭酸塩または過ホウ酸塩)が、漂白増強剤(ＴＡＥＤ)と組合せて使用される。漂白成分である過酸化水素は、添加化合物の自然分解によって非常に迅速に生成するが、一時的に高い濃度を生じる。穏やかな漂白は不可能である。
水性液体配合物において使用しうる理想的な漂白系は存在しない。
【０００５】
毛髪染色においては、通常、過酸化水素およびアンモニア溶液による漂白を行って、染色前にむらなく灰色の陰影にする。アルカリ性ｐＨと組合せた一時的に高い過酸化水素濃度は、明らかな毛髪損傷を引き起こす。中性または弱塩基性のｐＨにおける過酸化水素の連続放出と組合せた、臭気不快を引き起こすアンモニアを使用しない、使用可能な前処理は存在しない。
【０００６】
【非特許文献１】Ikuta,S.、Imamura,S.、Misaki,H.、およびHoriuti,Y、1977年、「Arthrobacter globiformis由来のコリンオキシダーゼの精製および特性化」、J Biochem (Tokyo) 82：1741-1749
【非特許文献２】Deshnium,P.、Los,D.A.、Hayashi,H.、Mustardy,L.、およびMurata,N、1995年、「コリンオキシダーゼの遺伝子によるSynechococcusの形質転換は、塩ストレスに対する耐性を高める」、Plant Mol Biol 29：897-907
【特許文献１】国際公開第９７／２１７９６号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、新規なコリンオキシダーゼを提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
驚くべきことに、コリンオキシダーゼを、細菌 Arthrobacter nicotianaeおよびArthrobacter aurescensから単離することができ、これらを、漂白系において、関連の従来技術に伴われる欠点の多くを回避しつつ使用しうることがわかった。
【０００９】
即ち、本発明の対象は、アミノ酸配列が、配列１に記載したアミノ酸配列に、少なくとも６２.５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、特に少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９５％、非常に特に好ましくは１００％対合(マッチ)しているコリンオキシダーゼである。
【００１０】
さらに本発明は、アミノ酸配列が、配列２に記載したアミノ酸配列に、少なくとも７２.４％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、特に少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９５％、非常に特に好ましくは１００％対合しているコリンオキシダーゼを提供する。
【００１１】
さらに本発明は、アミノ酸配列が、配列３に記載したアミノ酸配列に、少なくとも６８.９％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、特に少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９５％、非常に特に好ましくは１００％対合しているコリンオキシダーゼを提供する。
【００１２】
さらに本発明は、本発明のコリンオキシダーゼからの１つまたは複数の保存性アミノ酸交換によって、または、本発明のコリンオキシダーゼの誘導体化、断片化、欠失突然変異または挿入突然変異によって得られるコリンオキシダーゼを提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明のコリンオキシダーゼは、Arthrobacter nicotianaeおよびArthobacter aurescensから出願人により初めて単離された新規なアルカリ性オキシダーゼ(それぞれ、配列１および配列２)、ならびに、上記した２つの酵素の部分を融合させたハイブリッドコリンオキシダーゼ(配列３)に基づく。
【００１４】
本発明のコリンオキシダーゼは、大気中酸素の助けを借りて、ベタインアルデヒドおよびベタインの生成を伴って、コリンおよびコリン誘導体から過酸化水素を連続的に放出させることができる。
【００１５】
本発明のコリンオキシダーゼは、高い特異的速度の水素生成を有利に示す。
【００１６】
本発明の酵素のｐＨプロフィールは、産業上の利用のための必要ｐＨと適合し、また、洗剤および浄化剤ならびに毛髪染色剤などの通常の製品と適合する。
【００１７】
基質コリンおよびその誘導体の使用は、潜在的な仕上げ活性物質としての二次生成物ベタインの生成と一緒になって、少なからぬ二次的な利点を与える。
【００１８】
考慮することができる基質は、例えば、以下の構造式１または２で示されるコリンおよびＮ-置換アミノエタノールの誘導体である：
【化１】
0004652059.tif 000002
以下の定義が構造式１に当てはまる：
Ｒ1＝Ｈ、Ｒ2＝２-ヒドロキシエチル；
Ｒ1＝メチル、Ｒ2＝メチル；
Ｒ1＝２-ヒドロキシエチル、Ｒ2＝２-ヒドロキシエチル。
これらの化合物は、A.globiformis由来のコリンオキシダーゼのための基質として文献から既知である。
以下の定義が構造式２に当てはまる：
Ｒ1＝Ｒ2＝Ｒ3＝メチル。
【００１９】
本発明に従って適する別の基質は、ベタインアルデヒド：(ＯＨＣ-ＣＨ2)Ｎ+(ＣＨ3)3である。
【００２０】
また、生成するベタインの追加の毛髪ケア作用は、少なからず重要である。
【００２１】
以下において、「少なくともＸ％」という形式の表現は、「Ｘ％〜１００％(境界値Ｘおよび１００ならびにその間の全ての整数および非整数％を含む)」を意味する。
【００２２】
本願の目的のために、「タンパク質」は、天然アミノ酸から構成されるほぼ線状のポリマーを意味すると解されるべきであり、通常は、その機能を発揮するために３次元構造をとる。本願において、１９個のタンパク質構成性の天然Ｌ-アミノ酸は、通常の国際的な１文字および３文字コードによって表される。
【００２３】
本願の目的のために、「酵素」とは、特定の生物触媒機能を発揮するタンパク質を意味すると解されるべきである。
【００２４】
多くのタンパク質は、「プレタンパク質」として、即ち、シグナルペプチドと一緒に生成する。これは、タンパク質のＮ末端を意味すると解されるべきであり、その機能は、通常は、生成したタンパク質の産生細胞から細胞周辺腔または周囲培地への移動および／またはその正しい折り畳みを確実にすることである。天然の条件下では、シグナルペプチドは、次にシグナルペプチダーゼによってタンパク質の残りから切断されて、このタンパク質が、最初に存在したＮ末端アミノ酸なしでその実際の触媒活性を発揮する。
【００２５】
産業上の適用においては、酵素活性のゆえに、成熟ペプチド、即ち、その産生後にプロセシングされた酵素が、プレプロタンパク質よりも好ましい。
【００２６】
「プロタンパク質」は不活性なタンパク質前駆体である。シグナル配列を有するこれらの前駆体は、プレプロタンパク質と記載される。
【００２７】
本願の目的のために、「核酸」とは、情報保存媒体として働き、タンパク質または酵素における線状アミノ酸配列をコードする、ヌクレオチドから構成された分子を意味すると解されるべきである。これらは、一本鎖、該一本鎖に相補性の一本鎖または二本鎖の形態で存在することができる。天然のより耐久性の情報保存媒体であるので、核酸ＤＮＡが分子生物学的研究のために好ましい。他方において、天然環境において、例えば発現細胞において本発明を実施するためにＲＮＡが生成される。このため、本発明に必須であるＲＮＡ分子も本発明の態様を構成する。
【００２８】
ＤＮＡの場合には、２つの相補鎖の配列を、それぞれ３つの可能な読み枠(リーディングフレーム)の全てにおいて考慮すべきである。さらに、異なるコドントリプレットが同じアミノ酸をコードすることができるので、特定のアミノ酸配列を、２つまたはそれ以上の異なるヌクレオチド配列(これらは、わずかの同一性しか示さないであろう)から導くことができることも考慮すべきである(遺伝コードの縮重)。さらに、異なる生物は、これらコドンの使用において相違を示す。これらの理由から、アミノ酸配列およびヌクレオチド配列の両方を保護の範囲内に含ませることが必要であり、あらゆる言及したヌクレオチド配列は、それぞれ単に特定のアミノ酸配列をコードする例とみなすべきである。
【００２９】
本願の目的のために、あるタンパク質に対応する情報単位を「遺伝子」と記載する。
【００３０】
本発明は、「組換えタンパク質」の製造を包含する。本発明によれば、これには、当該タンパク質のための遺伝子を、製造に適する宿主生物に導入し、そして該遺伝子を該生物により転写および翻訳させることに基づく、あらゆる遺伝子操作方法または微生物学的方法が包含されると解されるべきである。当該遺伝子を、ベクター、特に発現ベクターによって導入するのが適切であるが、当該遺伝子が宿主生物において既存の遺伝子要素(例えば、染色体または他のベクター)に挿入されることを確実にするものによってもよい。遺伝子、プロモーターおよび可能性ある追加の遺伝子要素を含む機能単位を、本発明によれば発現カセットと記載する。これは、この目的のために物理的単位として存在することを必ずしも必要とする訳ではない。
【００３１】
現在広く知られている方法を用いて、例えば、化学合成またはポリメラーゼ連鎖反応(ＰＣＲ)を分子生物学および／またはタンパク質化学の通常の方法と組合せて用いて、当業者なら、既知のＤＮＡおよび／またはアミノ酸配列を参考にして、対応する核酸または完全遺伝子でさえ得ることができる。このような方法は、例えば、Sambrook,J.、Fritsch,E.F.およびManiatis,T. (2001)「Molecular cloning：a laboratory manual」[第3版、Cold Spring Laboratory Press]から既知である。
【００３２】
ヌクレオチド配列に対する修飾、例えば、自体既知の分子生物学的方法によってもたらすことができる修飾は、「突然変異」として知られる。修飾の種類に依存して、これらを欠失、挿入または置換突然変異と記載することができるか、あるいは、異なる遺伝子または遺伝子部分が互いに融合されたかまたは組み換えられたものと記載することができる。これらは遺伝子突然変異である。関連の生物は「突然変異体」と記載される。突然変異した核酸から導かれるタンパク質は「変異体」と記載される。即ち、例えば、欠失、挿入または置換突然変異あるいは融合は、欠失、挿入または置換突然変異遺伝子あるいは融合遺伝子を与え、タンパク質レベルにおいては、それぞれ対応する欠失、挿入または置換変異体あるいは融合タンパク質を与える。
【００３３】
「フラグメント」とは、天然タンパク質よりも小さいあらゆるタンパク質またはペプチド、あるいは、完全に翻訳された遺伝子に対応し、例えば合成によっても得ることができるあらゆるタンパク質またはペプチドを意味する。そのアミノ酸配列に基づいて、これらは関連の完全タンパク質に割り当てることができる。これらは、例えば、同じ構造をとることができるか、あるいは、タンパク質分解活性または部分活性(例えば基質の複合化)を発揮することができる。出発タンパク質のフラグメントおよび「欠失変異体」は、本質的に同じ性質のものであるが、フラグメントは比較的小さい傾向にあり、欠失突然変異体は短いドメインのみを、従って個々の部分機能のみを欠く傾向にある。
【００３４】
核酸レベルにおいて、「部分配列」はフラグメントに相当する。
【００３５】
本願の目的のために、「キメラタンパク質」または「ハイブリッドタンパク質」とは、異なる生物または同じ生物から天然に得られる核酸鎖によってコードされるものを意味すると解されるべきである。この操作は「組換え突然変異誘発」としても知られる。このような組換えの目的は、例えば、融合させたタンパク質部分によって、特異的な酵素機能をもたらすか、または修飾することであってよい。本発明の目的のためには、このようなキメラタンパク質が個々のポリペプチド鎖からなるか、または２つもしくはそれ以上のサブユニット(これに異なる機能を分布させることができる)からなるかは重要ではない。
【００３６】
「挿入突然変異」によって得られるタンパク質とは、自体既知の方法により、核酸またはタンパク質フラグメントを出発配列に挿入することによって得られる変異体を意味すると解されるべきである。その基本的な同一性のゆえに、これらはキメラタンパク質に分類されるべきである。これらは、完全タンパク質の大きさに対する未修飾タンパク質部分の大きさの点でのみ異なる。このような挿入突然変異したタンパク質においては、外来タンパク質の割合は、キメラタンパク質におけるよりも低い。
【００３７】
「反転突然変異誘発」、即ち、配列の部分的反転は、欠失および挿入の両方の特別の形態とみなすことができる。これは、異なる分子部分の新たな群分け(元のアミノ酸配列とは異なる)にも当てはまる。これは、元のタンパク質の欠失変異体とみなすことができるだけでなく、挿入変異体およびシャッフル変異体とみなすこともできる。
【００３８】
本願の目的のために、「誘導体」とは、純粋なアミノ酸鎖が化学的に修飾されたタンパク質を意味する。このような誘導体化は、例えば、宿主生物によるタンパク質生合成と関連して生物学的に行うことができる。分子生物学的方法を、この目的に使用することができる。しかし、誘導体化を、化学的に、例えば、アミノ酸側鎖の化学的変換によって、またはタンパク質への別の化合物の共有結合によって行うこともできる。このような化合物は、例えば、例えば２官能性化合物によって本発明のタンパク質に結合される他のタンパク質からなっていてもよい。このような修飾は、例えば、基質特異性または基質への結合強さに影響を与えることができるか、あるいは、結合させた物質が阻害剤であるときには酵素活性の一時的ブロックをもたらすことができる。これは、例えば、貯蔵期間にとって適するものになるであろう。同様に、誘導体化は、巨大分子担体への共有結合をも意味すると解されるべきである。
【００３９】
しかし、タンパク質を、抗血清または特異的抗体と反応させることによって、「免疫学的に関連したタンパク質の群」にまとめることもできる。ある群の構成員は、それらが抗体によって認識される同一の抗原決定基を含むことを特徴とする。
【００４０】
本発明の目的のために、全ての酵素、タンパク質、フラグメントおよび誘導体は、これらを明確にそのように言及する必要がない場合には、上位用語である「タンパク質」と言及する。
【００４１】
本発明の目的のために、「ベクター」とは、特徴的な核酸ドメインとして所望の遺伝子を含有する核酸からなる要素を意味すると解される。これらは、種またはセルラインにおいて２またはそれ以上の世代または細胞分裂にわたって、該遺伝子を安定な遺伝子要素として保持することができる。特に細菌を使用するときのベクターは、特定のプラスミド、即ち環状の遺伝要素である。遺伝子工学においては、一方の、貯蔵においておよびある程度までは遺伝子工学研究においても使用されるベクター(これらは「クローニングベクター」として知られる)と、他方の、宿主細胞において当該遺伝子を産生させる機能を発揮するベクター、即ち、関連タンパク質の発現を可能にするベクター(これらは「発現ベクター」として知られる)の間で区別が為されている。
【００４２】
例えば、誰でもアクセスできるデータベースに寄託されている既知の酵素との比較を行うことによって、そのアミノ酸またはヌクレオチド配列に基づいて、考慮下の酵素の酵素活性について結論を導くことができる。この活性を、実際の反応に関与しないタンパク質の他のドメインによって、定性的または定量的に修飾することができる。これは、例えば、酵素安定性、活性、反応条件または基質特異性に関連することができる。
【００４３】
このような比較は、考慮下のタンパク質のヌクレオチドまたはアミノ酸配列における類似配列を互いに割当てすることによって行う。これは、「相同性分析」として知られている。関連位置の表配置は、整列として知られている。ヌクレオチド配列を分析するときには、両相補鎖ならびにそれぞれ３つ全ての可能な読み枠を考慮しなければならない(遺伝コードの縮重および生物特異的なコドン利用についても同様である)。現在、整列は、コンピューターソフトウエアーを用いて、例えばＦＡＳＴＡまたはＢＬＡＳＴアルゴリズムによって作成することができる。この方法は、例えば、D.J.LipmanおよびW.R.Pearson (1985) [Science、Vol.227、pp.1435-1441]が記載している。
【００４４】
比較した配列中の全対合位置を編集したものは、「コンセンサス配列」として知られている。
【００４５】
また、このような比較は、比較した配列の類似性または「相同性」について言及することを可能にする。これは、パーセント同一性、即ち、同一位置における同一のヌクレオチドまたはアミノ酸残基の割合として言及される。より緩やかな相同性の定義には、この数値における保存されたアミノ酸交換が含まれる。これはパーセント類似性として知られている。このような言及は、完全タンパク質もしくは遺伝子について、あるいは、その個々のドメインのみについても行うことができる。
【００４６】
「整列(アラインメント)」の作成が、配列空間を規定するための第１工程である。この仮定空間は、個々の位置における並べ換えによって導くことができる全ての配列を包含する(これらの配列は、整列の関連の個々の位置に現れる全ての変異を考慮することによって得られる)。それぞれの仮定的に可能なタンパク質分子は、この配列空間において点を形成する。例えば、ほとんど同一であるが、２箇所においてのみそれぞれ２つの異なるアミノ酸を含む２つのアミノ酸配列は、４つの異なるアミノ酸配列の配列空間を確立する。追加の相同配列がそれぞれ空間の個々の配列に対して見出されるときには、極めて大きい配列空間が得られる。それぞれ対で生じるこのような高レベルの相同性は、極めて低レベルの相同性を有する配列であっても、ある配列空間に属するとみなされることを意味するであろう。
【００４７】
異なるタンパク質の「相同ドメイン」は、アミノ酸配列における対合によって規定される。また、これらを同一の機能によって特性化することもできる。これは、数個のアミノ酸のみを含み、通常は全体活性にとって必須である機能を発揮する非常に小さいドメインまたは「ボックス」における完全な同一性まで広がる。相同ドメインの機能とは、全タンパク質によって発揮される機能の非常に小さいサブ機能(例えば、基質または遷移複合体を複合化するための個々の水素結合の形成など)を意味すると解されるべきである。
【００４８】
本発明においては、核酸をベクター中に適切にクローニングする。即ち、本発明の分子生物学的側面は、対応するタンパク質の遺伝子を含むベクターを包含する。これらには、例えば、細菌プラスミド、ウイルスまたはバクテリオファージから導かれるベクター、あるいは、多くの異なる起源の要素を含む主として合成のベクターまたはプラスミドが含まれる。それぞれの場合に存在する他の遺伝子要素により、ベクターを、２またはそれ以上の世代にわたって当該宿主細胞において安定な単位として確立することができる。ベクターを、独立した単位として染色体外で確立するか、または染色体中に導入するかは、本発明の目的にとって重要ではない。従来技術から既知である多くの系の中からどの特定の系を選択するかは、ケースバイケースで決定される。決定因子は、例えば、達成可能なコピー数、利用可能な選択系、特に抗生物質耐性、またはベクターを受容しうる宿主細胞の培養性であってよい。
【００４９】
ベクターは、当該遺伝子または関連タンパク質の分子生物学的研究および生化学的研究のため、本発明に係るさらなる開発のため、および最終的に、本発明のタンパク質の増幅および産生のための適当な出発点である。これらは、それぞれの場合に含有される本発明の核酸ドメインの配列が、上で詳しく説明した相同性の範囲内にある限り、本発明の態様を構成する。
【００５０】
本発明の好ましい態様はクローニングベクターである。これらは、関連遺伝子の貯蔵、生物学的増幅または選択のためだけでなく、例えば制限地図の作成または配列決定による当該遺伝子の特性化のためにも適している。また、クローニングベクターは、それらが、特許請求されたＤＮＡの輸送可能および貯蔵可能な形態であるので、本発明の好ましい態様である。また、これらは、細胞に関連しない分子生物学的手法(例えばポリメラーゼ連鎖反応など)のための好ましい出発点である。
【００５１】
発現ベクターは、クローニングベクターに化学的に類似しているが、タンパク質の産生について最適化した宿主細胞において複製すること、および、含有される遺伝子をそこで発現させることを可能にする部分配列において異なっている。好ましい態様は、発現に必要な遺伝子要素を保持する発現ベクターである。発現は、例えば、遺伝子の転写を制御するプロモーターの影響を受ける。即ち、この遺伝子の上流に元から位置する天然プロモーターによってだけでなく、遺伝子工学融合により供される宿主細胞プロモーターによっても、発現ベクター上で供されるプロモーターによっても、ならびに、修飾されたプロモーターまたは別の生物由来の完全に異なるプロモーターによっても、発現を行うことができる。
【００５２】
好ましい態様は、培養条件の変更または特定化合物の添加(例えば、細胞密度または特異的因子など)によって制御しうる発現ベクターである。発現ベクターは、関連タンパク質を異種で、即ち、該タンパク質が天然に単離される生物以外の生物において産生させることを可能にする。また、適当なベクターにより遺伝子を天然に発現する宿主生物からの同種タンパク質産生も、本発明の保護の範囲内である。これは、翻訳に関連する天然の修飾反応が、天然に行われるのと全く同じように、得られたタンパク質に対して行われるという利点を有するであろう。
【００５３】
また、本発明の態様には、タンパク質生合成をインビトロで行う細胞不含の発現系が含まれる。このような発現系も、従来技術において確立されている。
【００５４】
本発明の酵素のインビボ合成、即ち、生細胞による合成は、関連遺伝子を宿主細胞中に移行させることを必要とする(これは形質転換として知られる)。全ての生物、即ち、原核生物または真核生物が、原則的に宿主細胞として適している。好ましい宿主細胞は、遺伝学的に、例えば発現ベクターによる形質転換およびその安定な確立に関して、取扱いが容易である宿主細胞、例えば単細胞の菌類または細菌である。好ましい宿主細胞は、さらに微生物学的および生物工学的な取扱い特性が良好であることを特徴とする。これは、例えば、容易な培養性、高い増殖速度、発酵培地に関する低い要求ならびに外来タンパク質の良好な産生および分泌速度に関係する。個々の場合の最適な発現系は、従来技術から利用可能な広範囲の系から実験によって見い出さなければならないことが多い。このようにして、本発明の各タンパク質を、多くの宿主生物から得ることができる。
【００５５】
好ましい宿主細胞の態様には、その活性を、例えば発現ベクター上に存在するか、あるいは、既に最初からこれら細胞中に存在する遺伝子制御要素により制御することができる宿主細胞が含まれる。例えば、これら細胞からの発現を、活性化剤として働く化学物質の制御された添加によって、培養条件の変更によって、あるいは、特定の細胞密度が達成されたときに刺激することができる。これは、当該タンパク質の非常に経済的な産生を可能にする。
【００５６】
好ましい宿主細胞は原核または細菌細胞である。細菌は、一般に比較的短い世代時間を有することおよび培養条件に関する要求が低いことにより、真核生物とは区別される。この結果、本発明のタンパク質を単離するためのコスト効果の高い方法を供することができる。グラム陰性細菌、例えばEscherichia coli (E.coli；大腸菌)などの場合、多くのタンパク質は、細胞周辺腔に、即ち、細胞を取り囲む２つの膜の間の区画中に分泌される。これは、特定の適用のためには有利になりうる。対照的に、グラム陽性細菌、例えばバシラス類または放線菌類あるいは放線菌目の他の代表例は、外側膜を持たず、このことは、分泌されたタンパク質が、細胞周囲の栄養培地中に直ちに放出されることを意味し、これから、別の好ましい態様に従って、発現された本発明のタンパク質を、直接精製することができる。
【００５７】
この実験原理の１つの変化形態は、追加の遺伝子(例えば、他のベクターにより供される遺伝子)が本発明のタンパク質の産生に影響を与える発現系である。これらには、修飾遺伝子産物あるいは本発明のタンパク質と一緒に精製される産物(例えば、本発明のタンパク質の酵素機能に影響を与えるためのもの)が含まれる。これらは、例えば、他のタンパク質または酵素、阻害剤あるいは異なる基質との相互作用に影響を与える要素であってよい。
【００５８】
大腸菌群を用いて得られた、例えば微生物学的方法および培養性に関する膨大な実験のゆえに、これらの細菌が、本発明の好ましい態様を構成する。特に好ましいのは、Escherichia属からの細菌、特に、生物工学的産生に適する非病原性の菌株である。
【００５９】
この属の代表的な構成員は、Escherichia coliのＫ１２誘導体およびＢ菌株である。自体既知の遺伝学的および／または微生物学的方法を用いてこれらから導くことができ、従ってその誘導体と考えることができる菌株が、遺伝学および微生物学の研究のために最も重要であり、本発明の方法の開発のために使用するのが好ましい。このような誘導体は、例えば欠失または挿入突然変異誘発によって、培養条件に対する要求について修飾することができるか、他のまたは追加の選択マーカーを含むことができるか、あるいは、他のまたは追加のタンパク質を発現することができる。これらには、特に、本発明に従って産生されるタンパク質に加えて、他の経済的に価値のあるタンパク質を発現する誘導体が含まれる。
【００６０】
他の好ましい微生物は、上記ベクターのいずれかによる形質転換の後に得られたことを特徴とする微生物である。これらは、例えば、貯蔵および／または修飾のためにいずれかの所望の細菌株に導入されたクローニングベクターを含むことができる。このような工程は、関連の遺伝子要素の貯蔵およびさらなる開発において広く行われている。関連の遺伝子要素を、これらの微生物から発現に適するグラム陰性細菌に直接移行させることができるので、上記の形質転換産物も本発明の対象の態様を構成する。
【００６１】
また、真核細胞も本発明のタンパク質の産生に適する。これらの例は、菌類、例えば放線菌類または酵母、例えばSaccharomycesまたはKluyveromycesである。これは、例えば、タンパク質が、その合成に関連してこのような系によって可能になる特異的な修飾を受けるべきときに、特に有利になりうる。このような修飾の例には、低分子量化合物(例えば、膜アンカーまたはオリゴ糖)の結合が含まれる。
【００６２】
本発明の方法の宿主細胞を、自体既知の方法で、例えばバッチまたは連続系において培養および発酵させる。前者の場合、適する栄養培地に生物を接種し、ある期間(これは実験的に決定しなければならない)の後に、生成物を培地から収穫する。連続発酵操作は、動的平衡の確立によって区別され、ここでは、比較的長い期間にわたって、一部の細胞は死滅するが、新たな細胞によって置換され、同時に生成物が培地から取り出される。
【００６３】
発酵法は、従来技術から自体周知であり、実際の完全な工業スケール製造工程を構成し、これに適当な精製法が続く。
【００６４】
従って、組換えタンパク質の産生のために上で説明した方法のいずれかに基づく全ての発酵法が、本発明の対象の好ましい態様である。
【００６５】
使用される製造方法のため、宿主細胞および／または製造されるタンパク質のための最適条件は、当業者の知識を用いて当該菌株の以前に最適化された培養条件、例えば発酵容量、培地組成、酸素供給または撹拌速度に関する培養条件を参考にして、それぞれの場合に実験的に決定しなければならない。
【００６６】
また、発酵を供給戦略によって行うことを特徴とする発酵法も考えられる。これには、継続培養によって消費される培地成分を補給することが含まれる(このアプローチの別の名称は補給戦略である)。このようにして、細胞密度だけでなく、生物質固体および／または特に関連タンパク質の活性の大きな増加を達成することができる。
【００６７】
同様に、望ましくない代謝産物が濾去されるように、または緩衝剤または個々に適する対イオンの添加によって中和されるように、発酵を調整することもできる。
【００６８】
次いで、製造されたタンパク質を発酵培地から収穫することができる。この発酵法は、乾燥固体から生成物を後処理するのが好ましいが、適当な分泌マーカーおよび輸送系の提供を必要とする。
【００６９】
分泌がなければ、細胞塊からのタンパク質の精製が、ある種の状況下で必要になることもあり、種々の方法がこの目的に知られている。これらは、例えば硫酸アンモニウムまたはエタノールによる沈殿あるいはクロマトグラフィー精製(所望により、均質になるまで続ける)などである。しかし、記載された工業的方法の多くのためには、豊富化され安定化された調製物が適切であろう。
【００７０】
既に上で説明した要素の全てを、本発明のタンパク質を製造するための方法を構成するために組合せることができる。ここで、多数の可能な工程の組合せが、本発明の各タンパク質のために考えられる。最適の方法は、それぞれの特定の個々の場合について、実験的に決定されなければならない。
【００７１】
本発明のコリンオキシダーゼを、発現またはクローニングにより、産業的に利用するのに必要な量で提供することができる。
【００７２】
従って、本発明はさらに、アミノ酸配列が、配列１〜３に記載したアミノ酸配列のいずれかと、少なくとも６０％、少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、特に少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９５％、非常に特に好ましくは１００％同一である部分を含有するコリンオキシダーゼをコードしている核酸を提供する。
【００７３】
さらに本発明は、コリンオキシダーゼをコードしている核酸であって、該核酸のヌクレオチド配列が、配列４に記載したヌクレオチド配列に、少なくとも７８％、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、特に少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９５％、非常に特に好ましくは１００％対合している核酸を提供する。
【００７４】
さらに本発明は、コリンオキシダーゼをコードしている核酸であって、該核酸のヌクレオチド配列が、配列５に記載したヌクレオチド配列に、少なくとも８３.３％、少なくとも８５％、特に好ましくは少なくとも９０％、非常に特に好ましくは１００％対合している核酸を提供する。
【００７５】
さらに本発明は、コリンオキシダーゼをコードしている核酸であって、該核酸のヌクレオチド配列が、配列６に記載したヌクレオチド配列に、少なくとも８１.５％、少なくとも８５％、特に少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９５％、非常に特に好ましくは１００％対合している核酸を提供する。
【００７６】
本発明のコリンオキシダーゼは、好ましくは約ｐＨ６〜１０、特に好ましくはｐＨ７〜９のほぼ中性〜弱アルカリ性の範囲において最適ｐＨを示す。通常、このような酵素の活性はＵで、即ち、指定したｐＨおよび指定した温度で１分間に１μモルの過酸化水素(Ｈ2Ｏ2)を生成する酵素量に対応する単位で表される。本発明のコリンオキシダーゼについては、これは、実施例６に記載した方法におけるｐＨ９.５および温度３０℃を指す。
本発明のコリンオキシダーゼの最適温度は、例えば２０〜６０℃の範囲内、特に約３０℃である。
【００７７】
本発明のコリンオキシダーゼは、完全な製剤が、３〜２０,０００Ｕ／ｇ、好ましくは５〜２０,０００Ｕ／ｇ、特に１０〜１５,０００Ｕ／ｇ、特に好ましくは１０〜１０００Ｕ／ｇ、非常に特に好ましくは１０〜２００Ｕ／ｇのオキシダーゼ活性を示すような量で使用するのが好ましい。記載した範囲のオキシダーゼ活性を有する製剤は、通常の欧州の機械洗浄サイクルに対して、十分に迅速な過酸化水素放出を示す。一方、存在するオキシダーゼの量を、より高い活性レベルまで増大させても、通常は、それ相応に大きい漂白性能の増大は生じない。
【００７８】
本発明の洗剤中に存在するオキシダーゼ基質の量は、所望の漂白結果を達成するのに必要な過酸化水素の量に基づいて決定される。参考のためには、酵素-基質の系は、１モルの変換された基質あたりに２モルまでの過酸化水素を放出する。洗浄液、漂白液または浄化液における約０.０５〜１重量％の基質の存在が、通常は、良好な漂白結果を達成するのに十分である。
【００７９】
本発明のコリンオキシダーゼの相同性は、公共のドメインデータベース(GenBank、NCBI)におけるＢＬＡＳＴ検索によって決定した。
検索基準：
データベース：全ての非冗長GenBank CDSトランスレーション＋ＰＤＢ＋SwissProt＋ＰＩＲ＋ＰＲＦ
検索照会：
・COD Arthrobacter nicotianae KC2
・COD Arthrobacter aurescens
・COD Hybrid Protein
全ての場合に、最良のヒットは、Arthrobacter globiformis由来のコリンオキシダーゼであった(表８を参照)。
【００８０】
Arthrobacter globiformis由来のコリンオキシダーゼのデータベース参照は、次のように記載されている：pir||S52489 コリンオキシダーゼ(EC 1.1.3.17)−Arthrobacter globiformis pir||S62689 コリンオキシダーゼ(EC 1.1.3.17)−Arthrobacter globiformis emb|CAA59321.1| (X84895) コリンオキシダーゼ。
【００８１】
Arthrobacter globiformis由来の全コリンオキシダーゼタンパク質のアミノ酸同一性の数値は、次のようである：
・ＣＯＤ Arthrobacter nicotianae KC2＝６２.４％
・ＣＯＤ Arthrobacter aurescens＝７２.３％
・ＣＯＤ Hybrid-Protein＝６８.８％
【００８２】
新規なＰＣＲプライマー(配列８および９)を、Arthrobacter globiformis由来のコリンオキシダーゼの既知配列を参考にして作成した。
従って、本発明はさらに、配列８または配列９に記載した配列のいずれかを有するオリゴヌクレオチド、特にＰＣＲプライマーを提供する。
【００８３】
次いで、細菌性コリンオキシダーゼに特異的なＤＮＡプローブを、ＰＣＲによって創製した。
従って、本発明はさらに、ヌクレオチド配列が、配列７に記載したヌクレオチド配列に、少なくとも８５％、特に少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９５％、非常に特に好ましくは１００％対合している核酸、特にＤＮＡプローブを提供する。
本発明のオリゴヌクレオチドまたは核酸を、新規なコリンオキシダーゼを同定および／または単離するために使用することができる。
【００８４】
本発明のハイブリッドコリンオキシダーゼの製造は、本発明のコリンオキシダーゼを、別のタンパク質との融合または結合のために、特に新規な酵素の開発のために用いることによって、あるいは、本発明の核酸を、別の核酸との融合のために、特に新規な酵素の開発のために用いることによって行うことができる。
【００８５】
本発明はさらに以下のものを提供する：
本発明の核酸ドメインを含有し、例えばクローニングベクターまたは発現ベクターであってよいベクター；
さらに、好ましくは本発明の発現ベクターを用いて、本発明のタンパク質または誘導体のいずれかを発現するか、または発現するように刺激しうる宿主細胞。
この宿主細胞は、好ましくは細菌、特に生成したタンパク質または誘導体を周囲培地中に分泌する細菌である。本発明の宿主細胞は、Escherichia属、特にEscherichia coli種、あるいは、Bacillus属、好ましくはBacillus licheniformis種、Bacillus amyloliquefaciens種、Bacillus subtilis種またはBacillus alcalophilus種、あるいは、特に好ましくはArthrobacter属、この属中のoxidans種に属していてよい。しかし、宿主細胞は、真核細胞、特に、生成したタンパク質を翻訳後修飾する細胞であってもよい。
【００８６】
本発明はさらに、本発明のコリンオキシダーゼならびに自体既知であったが本願に係る使用についてはこれまで考慮されていなかったコリンオキシダーゼの両方の使用を提供する。
【００８７】
即ち、本発明により提供されるこのようなさらなる使用は、その場で過酸化水素を生成する物質としての、
・ＧＭＣオキシドレダクターゼのファミリーに属し、
・補助因子としてＦＡＤを結合し、そして
・タンパク質のＮ末端に、好ましくは２０〜２５位に、配列ＧｘＧｘｘＧ(配列中、ｘは任意の所望のアミノ酸である)、好ましくは配列ＧＧＧＳＡＧを有するアミノ酸ドメインを含有する、
コリンオキシダーゼの使用である。
【００８８】
本発明の使用に好ましいコリンオキシダーゼは、本発明のコリンオキシダーゼのいずれかである。
本発明の使用の好ましい態様は、漂白のため、染料移行抑制のため、および殺菌のための使用である。
【００８９】
本発明のコリンオキシダーゼおよび本発明に従って使用しうるコリンオキシダーゼを、身体ケア製品、シャンプー、毛髪ケア製品、毛髪染色剤もしくは漂白剤、口腔ケア、歯ケアもしくは義歯ケア製品、化粧品、洗剤、浄化剤、濯ぎ剤、手洗浄洗剤、手食器洗浄洗剤、機械食器洗浄洗剤、殺菌剤、ならびに、フィルター媒体、織物、毛皮、紙、皮膚または皮革の漂白または殺菌処理のための製剤に導入するのが有利であろう。
【００９０】
製剤の使用条件下で過酸化水素を生成しうる漂白系、ならびに所望により、合成界面活性剤、有機および／または無機ビルダー、および漂白剤または洗剤の他の通常の構成成分を含有する洗剤または漂白剤であって、該漂白系が本発明のコリンオキシダーゼおよび該コリンオキシダーゼのための基質からなる洗剤または漂白剤が本発明に従って好ましい。この基質は、上記したように、コリンまたはコリン誘導体であるのが好ましい。
【００９１】
本発明の洗剤または漂白剤は、好ましくは１〜２０,０００Ｕ／ｇのオキシダーゼ活性を示す。該製剤は、好ましくは、３００〜１２００ｇ／Ｌ、特に５００〜９００ｇ／Ｌの嵩密度を有する自由流動性粉末の形態である。しかし、別法によれば、該製剤は、ペースト状または液体洗剤の形態、特に非水性液体洗剤または非水性ペーストの形態、あるいは、水性液体洗剤または含水ペーストの形態であってもよい。
【００９２】
本発明の洗剤または漂白剤を、空気不透過性の容器に装填することができ、これからそれを使用直前または洗浄操作中に放出させることができる。特に、コリンオキシダーゼおよび／またはこの酵素のための基質を、室温でまたは水の不存在下で該酵素および／またはその基質に対して不透過性であって、製剤の使用条件下で該酵素および／またはその基質に対して透過性になる物質中に封入することができる。
【００９３】
本発明の洗剤または漂白剤は、好ましくは、漂白系に加えて以下の成分を含有する：
・５〜７０重量％、特に１０〜５０重量％の界面活性剤、
・１０〜６５重量％、特に１２〜６０重量％の水溶性、水分散性の無機ビルダー物質、
・１〜１０重量％、特に２〜８重量％の水溶性の有機ビルダー物質、
・１５重量％以下の固体の無機および／または有機酸または酸性塩、
・５重量％以下の重金属錯化剤、
・５重量％以下の灰色化抑制剤、
・５重量％以下の染料移行抑制剤、および
・５重量％以下の発泡抑制剤。
【００９４】
産業上の重要性が大きいので、上記した特に好ましい態様の補足として、ここに、本発明の洗剤および浄化剤(即ち、上記のコリンオキシダーゼを特徴とする洗剤および浄化剤)の種々の側面および他の成分についての詳細な説明を挙げる。
【００９５】
浄化される材料に基づいて、織物と硬表面の間で世界的に区別が為されている。この目的に選択すべき条件、特に、他の成分によって制御されるべき条件(例えば、温度、ｐＨ値、イオン濃度、レドックス挙動または機械的影響など)は、特定の浄化問題に対して最適化されるべきである。即ち、洗剤および浄化剤のための通常の温度は、手による製剤のためには１０〜４０℃、機械製剤のためまたは産業上の適用においては６０〜９５℃の範囲内である。最近の洗濯機および食器洗浄機においては、通常は温度を連続的に変化させることができるので、全ての中間温度も含まれる。当該製剤の成分を、互いに適合させるのが好ましい。浄化性能に関する相乗効果が好ましい。
【００９６】
本発明のコリンオキシダーゼは、大消費者または産業ユーザーのための製剤ならびに個人的消費者のための製品の両方において用途を見い出すことができ、従来技術において確立されたあらゆる種類の浄化剤も本発明の態様を構成する。これらには、例えば、濃厚物および未希釈で使用される製剤が含まれる(産業スケールで使用するためのもの、洗浄機において使用するためのもの、あるいは、手による洗浄または浄化のためのもの)。これらには、例えば、織物、カーペットまたは天然繊維のための洗剤が含まれる(これらを本発明の洗剤と称する)。また、これらには、例えば、食器洗浄機のための食器洗浄洗剤または手による食器洗浄洗剤、あるいは、硬表面、例えば、金属、ガラス、磁器、セラミック、光沢タイル、石、被覆表面、プラスチック、木材または皮革のための浄化剤も含まれる(このような製品を本発明の浄化剤と称する)。
【００９７】
本発明の態様は、全ての確立されたおよび／または全ての好都合な代表例を包含する。これらには、例えば、所望により２つまたはそれ以上の相を含む圧縮または未圧縮の固体、粉末、液体、ゲルまたはペースト製剤が含まれる。さらなる例には、大きな容器にまたは少量ずつ装填された押出物、顆粒、タブレットまたはパウチが含まれる。
【００９８】
本発明のコリンオキシダーゼを、本発明の製剤において、例えば以下に挙げる成分の１つまたはそれ以上と混合する：非イオン性、陰イオン性および／または陽イオン性界面活性剤、(所望によりさらに)、漂白剤、漂白活性化剤、漂白触媒、ビルダーおよび／または補助ビルダー、溶媒、増粘剤、金属イオン封鎖剤、電解質、蛍光増白剤、灰色化抑制剤、腐食抑制剤、特に銀保護剤、汚れ解放活性成分、染料移行抑制剤、発泡抑制剤、研磨剤、染料、芳香剤、抗微生物活性成分、ＵＶ保護剤、酵素(例えば、プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼまたはオキシダーゼなど)、安定剤、特に酵素安定剤、ならびに、当分野で既知の他の成分。
【００９９】
好ましい非イオン性界面活性剤は、アルコキシル化された、有利にはエトキシル化された、特に第一アルコールであり、好ましくは８〜１８個の炭素原子および平均して１モルのアルコールあたりに１〜１２モルのエチレンオキシド(ＥＯ)を有する第一アルコールである。ここで、このアルコール基は、直鎖もしくは好ましくは２位でメチル分岐していてよく、また、オキソアルコール基において普通に存在する混合物の形態で、直鎖基およびメチル分岐基を含んでいてもよい。しかし、特に好ましいのは、１２〜１８個の炭素原子を有する天然起源のアルコール(例えば、ヤシ油、パーム油、獣脂、またはオレイルアルコール)の直鎖基および平均してアルコール１モルあたり２〜８個のＥＯを有する、アルコールエトキシレートである。エトキシル化アルコールの例には、３個のＥＯまたは４個のＥＯを有するＣ12-14アルコール、７個のＥＯを有するＣ9-11アルコール、３個のＥＯ、５個のＥＯ、７個のＥＯまたは８個のＥＯを有するＣ13-15アルコール、３個のＥＯ、５個のＥＯまたは７個のＥＯを有するＣ12-18アルコール、およびこれらの混合物(例えば、３個のＥＯを有するＣ12-14アルコールと、５個のＥＯを有するＣ12-18アルコールとの混合物)が含まれる。記載した炭素鎖長およびアルコキシル化の程度は、統計学的な平均値であり、特定の生成物に対して整数または分数であることができる。好ましいアルコールエトキシレートは、狭い同族体分布を有する(狭範囲エトキシレート、ＮＲＥ)。これらの非イオン性界面活性剤に加えて、１２個より多いＥＯを有する脂肪アルコールを使用することもできる。その例は、１４個のＥＯ、２５個のＥＯ、３０個のＥＯ、または４０個のＥＯを有する獣脂脂肪アルコールである。
【０１００】
唯一の非イオン性界面活性剤として、または他の非イオン性界面活性剤との組合せのいずれかで添加され、好ましく添加される非イオン性界面活性剤のさらなる群は、アルコキシル化、好ましくはエトキシル化またはエトキシル化およびプロポキシル化された、好ましくはアルキル鎖中に１〜４個の炭素原子を有する脂肪酸アルキルエステル、特に脂肪酸メチルエステルである。
【０１０１】
有利に使用することができる非イオン性界面活性剤のさらなる群は、アルキルポリグリコシド(ＡＰＧ)である。適する非イオン性界面活性剤は、一般式：ＲＯ(Ｇ)Zで示されるアルキルグリコシドである(式中、Ｒは、直鎖またはメチル分岐した、特に２-メチル分岐した、８〜２２個、好ましくは１２〜１８個の炭素原子を有する脂肪族基であり、Ｇは、５または６個の炭素原子を有するグリコース単位、好ましくはグルコースである)。グリコシル化の程度であるｚは、１〜４、好ましくは１.０〜２.０、特に１.１〜１.４である。直鎖アルキルポリグルコシド、即ち、ポリグリコシル基がグルコース基であり、アルキル基がｎ-アルキル基であるアルキルポリグリコシドを用いるのが好ましい。
【０１０２】
アミンオキシド型の非イオン性界面活性剤、例えば、Ｎ-ヤシ油アルキル-Ｎ,Ｎ-ジメチルアミンオキシドおよびＮ-獣脂アルキル-Ｎ,Ｎ-ジヒドロキシエチルアミンオキシド、および脂肪酸アルカノールアミド型の非イオン性界面活性剤も適している。これらの非イオン性界面活性剤の使用量は、好ましくはエトキシル化脂肪アルコールの使用量以下であり、より好ましくはその半分以下である。
【０１０３】
他の適する界面活性剤は、以下の式(II)：
【化２】
0004652059.tif 000003
[式中、ＲＣＯは、６〜２２個の炭素原子を有する脂肪族アシル基であり、Ｒ1は、水素、アルキル、またはヒドロキシアルキル基(１〜４個の炭素原子を有する)であり、[Ｚ]は、３〜１０個の炭素原子および３〜１０個のヒドロキシル基を有する直鎖または分岐鎖のポリヒドロキシアルキル基である]
で示されるポリヒドロキシ脂肪酸アミドである。
このポリヒドロキシ脂肪酸アミドは既知の物質であり、通常は、アンモニア、アルキルアミンまたはアルカノールアミンを用いた還元糖の還元的アミノ化、およびその後の、脂肪酸、脂肪酸アルキルエステルまたは脂肪酸塩化物を用いたアシル化によって得ることができる。
【０１０４】
また、ポリヒドロキシ脂肪酸アミドの群は、以下の式(III)：
【化３】
0004652059.tif 000004
[式中、Ｒは、７〜１２個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐鎖のアルキルまたはアルケニル基であり、Ｒ1は、直鎖、分岐鎖もしくは環状のアルキル基またはアリール基(２〜８個の炭素原子を有する)であり、Ｒ2は、直鎖、分岐鎖もしくは環状のアルキル基またはアリール基、またはオキシアルキル基(１〜８個の炭素原子を有する)であり、ここでＣ1-4アルキルまたはフェニル基が好ましく、そして[Ｚ]は、直鎖ポリヒドロキシアルキル基(そのアルキル鎖は、少なくとも２つのヒドロキシル基によって置換されている)であるか、またはアルコキシル化、好ましくはエトキシル化もしくはプロポキシル化されたこの基の誘導体である]
で示される化合物を包含する。
【０１０５】
[Ｚ]は、好ましくは、還元糖(例えば、グルコース、フルクトース、マルトース、ラクトース、ガラクトース、マンノースまたはキシロース)の還元的アミノ化によって得られる。次いで、Ｎ-アルコキシ置換化合物またはＮ-アリールオキシ置換化合物を、触媒としてのアルコキシドの存在下に脂肪酸メチルエステルとの反応によって、所望のポリヒドロキシ脂肪酸アミドに変換することができる。
【０１０６】
適する陰イオン性界面活性剤は、例えば、スルホネートおよびスルフェートである。スルホネート型の界面活性剤には、好ましくは、Ｃ9-13アルキルベンゼンスルホネート、オレフィンスルホネート(即ち、アルケンスルホネートとヒドロキシアルカンスルホネートの混合物)、ならびに、ジスルホネート(これは、例えば、末端または内部の二重結合を有するＣ12-18モノオレフィンから、ガス状三酸化イオウを用いたスルホン化、およびその後の、スルホン化生成物のアルカリ性もしくは酸性の加水分解によって得られる)が含まれる。例えば、Ｃ12-18アルカンのスルホクロロ化またはスルホキシド化とその後の加水分解または中和によって得られるアルカンスルホネートも適している。同様に、α-スルホ脂肪酸のエステル(スルホネートエステル)、例えば、水素化されたヤシ油、パーム油または獣脂脂肪酸のα-スルホン化メチルエステルも適している。
【０１０７】
さらなる適する陰イオン性界面活性剤は、スルホン化した脂肪酸グリセロールエステルであり、１〜３モルの脂肪酸によるモノグリセロールのエステル化によって、または０.３〜２モルのグリセロールによるトリグリセリドのエステル交換によって得られるモノエステル、ジエステルおよびトリエステルならびにこれらの混合物が含まれる。好ましいスルホン化脂肪酸グリセロールエステルは、６〜２２個の炭素原子を有する飽和脂肪酸(例えば、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸またはベヘン酸)のスルホン化生成物である。
【０１０８】
好ましいアルキル(アルケニル)スルフェートは、Ｃ12-18脂肪アルコール(例えば、ヤシ油脂肪アルコール、獣脂脂肪アルコール、ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、セチルアルコールまたはステアリルアルコール)の、またはＣ10-20オキソアルコールの硫酸半エステル、およびこれら鎖長の第二アルコールの半エステルの、アルカリ金属塩(特にナトリウム塩)である。さらなる好ましいアルキル(アルケニル)スルフェートは、石油化学工業により製造された合成の直鎖アルキル基を含み、かつ脂肪化学原料に由来する適当な化合物と類似の分解挙動を有する、記載した鎖長のアルキル(アルケニル)スルフェートである。Ｃ12-Ｃ16アルキルスルフェートおよびＣ12-Ｃ15アルキルスルフェートならびにＣ14-Ｃ15アルキルスルフェートが、洗浄工業において重要であるため好ましい。２,３-アルキルスルフェートも適する陰イオン性界面活性剤である。
【０１０９】
また、１〜６モルのエチレンオキシド(ＥＯ)でエトキシル化された直鎖または分岐鎖のＣ7-21アルコール、例えば、平均して３.５モルのＥＯを有する２-メチル分岐したＣ9-11アルコールまたは１〜４個のＥＯを有するＣ12-18脂肪アルコールの硫酸モノエステルも適する。これらの高い発泡挙動のゆえに、これらは、比較的少量でのみ、例えば、５重量％まで、通常は１〜５重量％の量で洗剤に添加される。
【０１１０】
さらに適する陰イオン性界面活性剤は、アルキルスルホコハク酸の塩(これはスルホスクシネートまたはスルホコハク酸エステルとも呼ばれる)、ならびに、スルホコハク酸とアルコール(好ましくは脂肪アルコール、特にエトキシル化脂肪アルコール)とのモノエステルおよび／またはジエステルである。好ましいスルホスクシネートは、Ｃ6-18脂肪アルコール基またはその混合物を含んでいる。特に好ましいスルホスクシネートは、非イオン性界面活性剤であるエトキシル化脂肪アルコール由来の脂肪アルコール基を含んでいる(上記を参照)。ここで、脂肪アルコール基が、狭い同族体分布を有するエトキシル化脂肪アルコール由来であるスルホスクシネートが特に好ましい。同様に、アルキル(アルケニル)鎖中に好ましくは８〜１８個の炭素原子を有するアルキル(アルケニル)コハク酸またはその塩を使用することもできる。
【０１１１】
さらなる陰イオン性界面活性剤は、特に石鹸である。適する石鹸は、飽和脂肪酸石鹸(例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、水素化エルカ酸およびベヘン酸の塩)、ならびに、特に天然の脂肪酸(例えば、ヤシ油、パーム油、または獣脂脂肪酸)由来の石鹸混合物である。
【０１１２】
石鹸を含む陰イオン性界面活性剤は、そのナトリウム塩、カリウム塩、またはアンモニウム塩の形態で、また、有機塩基(例えば、モノ、ジまたはトリエタノールアミン)の可溶性塩の形態で存在することができる。陰イオン性界面活性剤は、好ましくは、そのナトリウム塩またはカリウム塩の形態、特に、そのナトリウム塩の形態で存在する。
【０１１３】
本発明の浄化剤または洗浄剤は、界面活性剤を、最終製剤を基準に、好ましくは５〜５０重量％、特に８〜３０重量％の量で含有することができる。
【０１１４】
さらに、本発明の製剤は漂白剤を含むことができる。漂白剤として働き、かつ水中でＨ2Ｏ2を生成する化合物の中で、過炭酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム四水和物、および過ホウ酸ナトリウム一水和物が特に重要である。使用しうるさらなる漂白剤の例は、ペルオキシピロリン酸塩、クエン酸塩過水和物およびＨ2Ｏ2生成過酸塩または過酸(例えば、過硫酸塩または過硫酸)である。また、尿素ペルオキシ水和物ペルカルバミド Ｈ2Ｎ-ＣＯ-ＮＨ2・Ｈ2Ｏ2も適している。特に、製剤を用いて硬表面を浄化するときには、例えば、自動食器洗浄機のためには、製剤は、所望により、有機漂白剤の群からの漂白剤を含むこともできる(これらを、原則的には、織物を洗浄するために使用することもできる)。代表的な有機漂白剤は、過酸化ジアシル(例えば過酸化ジベンゾイルなど)である。使用しうるさらなる代表的な有機漂白剤はペルオキシ酸であり、具体的な例は、ペルオキシ安息香酸およびその環置換誘導体(例えばアルキルペルオキシ安息香酸)であるが、さらに以下のものを使用することもできる：ペルオキシ-α-ナフトエ酸およびモノペルフタル酸マグネシウム、脂肪族または置換脂肪族ペルオキシ酸、例えば、ペルオキシラウリン酸、ペルオキシステアリン酸、ε-フタルイミドペルオキシカプロン酸(フタロイミノペルオキシヘキサン酸、ＰＡＰ)、ｏ-カルボキシベンズアミドペルオキシカプロン酸、Ｎ-ノネニルアミドペルアジピン酸、およびＮ-ノネニルアミドペルコハク酸、ならびに脂肪族およびアリール脂肪族ペルオキシジカルボン酸、例えば、１,１２-ジペルオキシカルボン酸、１,９-ジペルオキシアゼライン酸、ジペルオキシセバシン酸、ジペルオキシブラシル酸、ジペルオキシフタル酸、２-デシルジペルオキシブタン-１,４-二酸、Ｎ,Ｎ-テレフタロイル-ジ(６-アミノペルカプロン酸)。
【０１１５】
製剤中の漂白剤の含量は、有利には過ホウ酸塩一水和物または過炭酸塩を用いて、１〜４０重量％、特に１０〜２０重量％の範囲であることができる。アミラーゼと過炭酸塩またはアミラーゼと過カルボン酸の相乗的な使用が、国際特許出願公開ＷＯ９９／６３０３６およびＷＯ９９／６３０３７に開示されている。
【０１１６】
製剤を６０℃以下の温度で使用するとき、特に予備洗浄中に使用するときには、改善された漂白作用を達成するために、本製剤は、漂白活性化剤を含むことができる。使用しうる漂白活性化剤は、過加水分解条件下において、好ましくは１〜１０個の炭素原子、特に２〜４個の炭素原子を有する脂肪族ペルオキシカルボン酸および／または所望により置換された過安息香酸を生成する化合物である。上記数の炭素原子のＯ-アシル基および／またはＮ-アシル基および／または所望により置換されたベンゾイル基を保持する物質が適している。以下のものが好ましい：ポリアシル化アルキレンジアミン、特にテトラアセチルエチレンジアミン(ＴＡＥＤ)、アシル化トリアジン誘導体、特に１,５-ジアセチル-２,４-ジオキソヘキサヒドロ-１,３,５-トリアジン(ＤＡＤＨＴ)、アシル化グリコールウリル類、特に１,３,４,６-テトラアセチルグリコールウリル(ＴＡＧＵ)、Ｎ-アシルイミド類、特にＮ-ノナノイルスクシンイミド(ＮＯＳＩ)、アシル化フェノールスルホネート、特にｎ-ノナノイルオキシベンゼンスルホネートもしくはイソノナノイルオキシベンゼンスルホネート(ｎ-ＮＯＢＳもしくはイソ-ＮＯＢＳ)、アシル化ヒドロキシカルボン酸、例えばトリエチル Ｏ-アセチルシトレート(ＴＥＯＣ)、カルボン酸無水物、特に無水フタル酸、無水イサトイン酸および／または無水コハク酸、カルボン酸アミド、例えばＮ-メチルジアセトアミド、グリコリド、アシル化多価アルコール、特にトリアセチン、エチレングリコールジアセテート、イソプロペニルアセテート、２,５-ジアセトキシ-２,５-ジヒドロフラン、およびエノールエステル(独国特許出願ＤＥ１９６１６６９３およびＤＥ１９６１６７６７に開示される)、ならびにアシル化ソルビトールおよびマンニトールまたはこれらの混合物[欧州特許出願ＥＰ０５２５２３９(SORMAN)に開示される]、アシル化糖誘導体、特にペンタアセチルグルコース(ＰＡＧ)、ペンタアセチルフルクトース、テトラアセチルキシロースおよびオクタアセチルラクトース、ならびに、アセチル化され所望によりＮ-アルキル化されたグルカミンまたはグルコノラクトン、トリアゾールもしくはトリアゾール誘導体、および／または粒状カプロラクタムおよび／またはカプロラクタム誘導体、好ましくはＮ-アシル化ラクタム、例えばＮ-ベンゾイルカプロラクタムおよびＮ-アセチルカプロラクタム(国際特許出願公開ＷＯ９４／２７９７０、ＷＯ９４／２８１０２、ＷＯ９４／２８１０３、ＷＯ９５／００６２６、ＷＯ９５／１４７５９、およびＷＯ９５／１７４９８に開示される)。同様に、独国特許出願ＤＥ１９６１６７６９に開示される親水性置換されたアシルアセタール、ならびに、独国特許出願ＤＥ１９６１６７７０および国際特許出願ＷＯ９５／１４０７５に記載されたアシルラクタムも好ましく使用される。同様に、ニトリル誘導体、例えば、シアノピリジン、ニトリルクワット(nitrile quat)、例えば、Ｎ-アルキルアンモニウムアセトニトリル、および／またはシアノアミド誘導体を使用することもできる。好ましい漂白活性化剤は、４-(オクタノイルオキシ)ベンゼンスルホン酸ナトリウム、ｎ-ノナノイルオキシベンゼンスルホネートまたはイソノナノイルオキシベンゼンスルホネート(ｎ-ＮＯＢＳまたはイソ-ＮＯＢＳ)、ウンデセノイルオキシベンゼンスルホネート(ＵＤＯＢＳ)、ドデカノイルオキシベンゼンスルホン酸ナトリウム(ＤＯＢＳ)、デカノイルオキシ安息香酸(ＤＯＢＡ、ＯＢＣ１０)、および／またはドデカノイルオキシベンゼンスルホネート(ＯＢＳ１２)、ならびに、Ｎ-メチルモルホリニウムアセトニトリル(ＭＭＡ)である。このような種類の漂白活性化剤は、全組成物を基準に、通常は０.０１〜２０重量％、好ましくは０.１〜１５重量％、特に１〜１０重量％の範囲の量で存在することができる。
【０１１７】
従来の漂白活性化剤に加えて、またはそれらの代わりに、いわゆる漂白触媒を、本発明の製剤中に導入することもできる。これらの物質は、漂白増強遷移金属塩または遷移金属錯体、例えば、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、ＲｕまたはＭｏサレン錯体またはカルボニル錯体である。Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｒｕ、Ｍｏ、Ｔｉ、ＶおよびＣｕ錯体(Ｎ含有三脚リガンドを含む)、ならびに、Ｃｏ、Ｆｅ、ＣｕおよびＲｕのアンミン錯体も、漂白触媒として使用することができ、ＤＥ１９７０９２８４Ａ１に記載される化合物を添加するのが好ましい。
【０１１８】
ＷＯ９９／６３０３８に記載のアセトニトリル誘導体およびＷＯ９９／６３０４１に記載の漂白活性化遷移金属錯体化合物が、アミラーゼとの組合せで、漂白活性化作用を現すことができる。
【０１１９】
本発明の製剤は、通常は１つまたはそれ以上のビルダー、特に、ゼオライト、ケイ酸塩、炭酸塩、有機の補助ビルダー、さらに、使用を妨げる環境上の理由がなければ、リン酸塩をも含有する。この最後のものは、特に機械食器洗浄機の洗剤に添加したときに、好ましいビルダーである。
【０１２０】
ここで挙げることができるのは、一般式：ＮａＭＳｉxＯ2x+1・ｙＨ2Ｏ[式中、Ｍは、ナトリウムまたは水素であり、ｘは、１.６〜４、好ましくは１.９〜４.０の数であり、ｙは、０〜２０の数であり、そしてｘの好ましい値は、２、３または４である]で示される結晶性の層状ケイ酸ナトリウムである。このような結晶性層状ケイ酸塩は、例えば、欧州特許出願ＥＰ０１６４５１４に記載されている。示した式の中で好ましい結晶性層状ケイ酸塩は、Ｍがナトリウムであり、ｘが２または３の値をとるケイ酸塩である。βナトリウムおよびδナトリウムの両方の二ケイ酸塩Ｎａ2Ｓｉ2Ｏ5・ｙＨ2Ｏが特に好ましい。これらの化合物は、例えば、ＳＫＳＲ(Clariant)の名称で市販されている。即ち、ＳＫＳ-６Ｒは、主に式：Ｎａ2Ｓｉ2Ｏ5・ｙＨ2Ｏを有する二ケイ酸δナトリウムであり、ＳＫＳ-７Ｒは、主に二ケイ酸βナトリウムである。酸(例えば、クエン酸または炭酸)と反応させたときに、二ケイ酸δナトリウムはカネマイトＮａＨＳｉ2Ｏ5・ｙＨ2Ｏを与える[これは、ＳＫＳ-９ＲおよびＳＫＳ-１０Ｒの名称で市販されている(Clariant)]。これらの層状ケイ酸塩の化学的修飾体を使用するのが有利であることもある。即ち、例えば、層状ケイ酸塩のアルカリ度に、適切に影響を与えることができる。リン酸塩または炭酸塩を用いて修飾した層状ケイ酸塩は、修飾された結晶形態を有し(二ケイ酸δナトリウムと比較して)、さらに迅速に溶解し、増大したカルシウム結合能力を示す(二ケイ酸δナトリウムと比較して)。即ち、一般式：ｘＮａ2Ｏ・ｙＳｉＯ2・ｚＰ2Ｏ5で示される層状ケイ酸塩(式中、ｘ対ｙの比は、０.３５〜０.６の数であり、ｘ対ｚの比は、１.７５〜１２００の数であり、そしてｙ対ｚの比は、４〜２８００の数である)が、独国特許出願ＤＥ１９６０１０６３に記載されている。層状ケイ酸塩の溶解性を、特に微細に分散された層状ケイ酸塩を用いることによって増大させることもできる。結晶性層状ケイ酸塩と他の成分とのコンパウンドを使用することもできる。セルロース誘導体とのコンパウンド(有利な崩壊作用を有し、特に洗浄剤タブレットにおいて使用される)、ならびに、ポリカルボキシレート(例えばクエン酸)またはポリマー性ポリカルボキシレート(例えばアクリル酸コポリマー)とのコンパウンドを、ここで特に挙げることができる。
【０１２１】
他の有用なビルダーは、１：２〜１：３.３、好ましくは１：２〜１：２.８、より好ましくは１：２〜１：２.６のモジュラス(Ｎａ2Ｏ：ＳｉＯ2の比)を有する無定形ケイ酸ナトリウムである(これは、遅延して溶解し、複数洗浄サイクル特性を示す)。通常の無定形ケイ酸ナトリウムと比較したときの溶解の遅延は、種々の方法によって、例えば、表面処理、コンパウンド化、圧密／圧縮によって、または過剰乾燥によって得ることができる。本発明において、「無定形」という用語は、「Ｘ線無定形」を包含すると解される。換言すると、ケイ酸塩は、Ｘ線回折実験において結晶性物質に典型的な鋭いＸ線屈折を生じないが、代わりに、せいぜい散乱Ｘ線の１つまたはそれ以上の最大値を与える(数度の回折角度の幅を有する)を与える。しかし、特に良好なビルダー特性は、ケイ酸塩粒子が、電子回折実験において、不明瞭であるかまたはさらに鋭い回折最大値を与える場合に得られるであろう。これは、この生成物が、１０〜数百ｎｍ(多くとも５０ｎｍまで、特に多くとも２０ｎｍまでの値が好ましい)のサイズを有する微結晶性領域を有することを意味すると解することができる。この種のＸ線無定形ケイ酸塩も同様に、通常の水ガラスと比較して、遅延した溶解を有する。圧縮／圧密された無定形ケイ酸塩、コンパウンド化された無定形ケイ酸塩、および過剰乾燥されたＸ線無定形ケイ酸塩が特に好ましい。
【０１２２】
適する微細結晶性の結合水含有の合成ゼオライトの中で、ゼオライトＡおよび／またはＰが好ましい。特に好ましいゼオライトＰは、ゼオライトＭＡＰＲ(Crosfieldからの市販製品)である。しかし、ゼオライトＸならびにＡ、Ｘおよび／またはＰの混合物も適している。市販されており、かつ本発明において好ましい製品は、例えば、ゼオライトＸおよびゼオライトＡの共結晶化物(約８０重量％のゼオライトＸ)であり、これは、Condea Augusta S.p.A.からVEGOBOND AXＲの名称で市販されており、かつ以下の式で示すことができる：
【化４】
0004652059.tif 000005
【０１２３】
適するゼオライトは、１０μｍ未満の平均粒子サイズ(容積分布、Coulterカウンター法によって測定)を有しており、好ましくは１８〜２２重量％、より好ましくは２０〜２２重量％の結合水を含有する。
【０１２４】
また、広く知られているリン酸塩を、当然にビルダーとして添加することができる(このような使用が環境的な理由から回避されるべきでないとき)。洗浄剤および浄化剤の産業において、多くの市販のリン酸塩の中で、アルカリ金属リン酸塩、特に三リン酸五ナトリウムまたは三リン酸五カリウム(トリポリリン酸ナトリウムまたはカリウム)が特に好ましい。
【０１２５】
「アルカリ金属リン酸塩」は、種々のリン酸のアルカリ金属塩(特に、ナトリウム塩およびカリウム塩)の総称的な用語であり、メタリン酸(ＨＰＯ3)nおよびオルトリン酸Ｈ3ＰＯ4、ならびに、さらに高分子量のものを包含する。これらリン酸塩は、いくつかの利点を兼ね備える。即ち、これらは、アルカリ性の供給源として働き、機械部分への石灰分の沈着および織布における石灰分の付着を妨げ、そしてさらに浄化効果に寄与する。
【０１２６】
リン酸二水素ナトリウムＮａＨ2ＰＯ4は、二水和物(密度１.９１ｇ／ｃｍ3、融点６０℃)および一水和物(密度２.０４ｇ／ｃｍ3)として存在する。両方の塩とも白色の易水溶性の粉末であり、加熱時にその結晶水を失い、２００℃で弱酸性の二リン酸(二リン酸水素二ナトリウムＮａ2Ｈ2Ｐ2Ｏ7)に転化し、さらに高温で三メタリン酸ナトリウム(Ｎａ3Ｐ3Ｏ9)およびMaddrellの塩(以下を参照)に転化する。ＮａＨ2ＰＯ4は酸性反応を示す。これは、リン酸を水酸化ナトリウムを用いてｐＨ４.５に調整し、得られた「マッシュ」を噴霧することにより生成する。リン酸二水素カリウム(第一または一塩基性のリン酸カリウム、二リン酸カリウム、ＫＤＰ)ＫＨ2ＰＯ4は、密度２.３３ｇ／ｃｍ3の白色塩であり、２５３℃の融点を有し[ポリリン酸カリウム(ＫＰＯ3)xの生成を伴って分解]、そして水に容易に溶解する。
【０１２７】
リン酸水素二ナトリウム(第二リン酸ナトリウム)Ｎａ2ＨＰＯ4は、無色の易水溶性の結晶性塩である。これは、無水型で、ならびに、２モルの水(密度２.０６６ｇ／ｃｍ3、９５℃で水を損失)、７モルの水(密度１.６８ｇ／ｃｍ3、融点４８℃、５Ｈ2Ｏの損失を伴う)、および１２モルの水(密度１.５２ｇ／ｃｍ3、融点３５℃、５Ｈ2Ｏの損失を伴う)と共に存在し、１００℃で無水になり、さらに強制的な加熱によって二リン酸塩Ｎａ4Ｐ2Ｏ7に転化する。リン酸水素二ナトリウムは、指示薬としてフェノールフタレインを用いて、ソーダ溶液によってリン酸を中和することによって調製される。リン酸水素二カリウム(第二または二塩基性のリン酸カリウム)Ｋ2ＨＰＯ4は、無定形の白色塩であり、水に容易に溶解する。
【０１２８】
リン酸三ナトリウム、第三リン酸ナトリウム、Ｎａ3ＰＯ4は、無色の結晶であり、１２水和物型では、１.６２ｇ／ｃｍ3の密度および７３〜７６℃の融点(分解)を有し、１０水和物型(１９〜２０％Ｐ2Ｏ5に対応する)では、１００℃の融点を有し、無水型(３９〜４０％Ｐ2Ｏ5に対応する)では、２.５３６ｇ／ｃｍ3の密度を有する。リン酸三ナトリウムは、アルカリ性反応を介して水に容易に溶解し、正確に１モルのリン酸二ナトリウムおよび１モルのＮａＯＨの溶液を蒸発により濃縮することによって調製される。リン酸三カリウム(第三または三塩基性のリン酸カリウム)Ｋ3ＰＯ4は、密度２.５６ｇ／ｃｍ3を有する白色の潮解性の顆粒粉末であり、１３４０℃の融点を有し、アルカリ性反応を介して水に容易に溶解する。これは、例えば、トーマススラグを炭素および硫酸カリウムと共に加熱したときに生成する。価格が高いにもかかわらず、より容易な溶解性であり、従って非常に効果的であるリン酸カリウムは、浄化剤産業においては、対応するナトリウム化合物よりも好ましいことが多い。
【０１２９】
二リン酸四ナトリウム(ピロリン酸ナトリウム)Ｎａ4Ｐ2Ｏ7は、無水型(密度２.５３４ｇ／ｃｍ3、融点９８８℃、また８８０℃とも記載されている)で、および１０水和物(密度１.８１５〜１.８３６ｇ／ｃｍ3、融点９４℃で水を損失)として存在する。両物質とも無色の結晶であり、アルカリ性反応を介して水に溶解する。Ｎａ4Ｐ2Ｏ7は、リン酸二ナトリウムを＞２００℃に加熱したときに生成するか、またはリン酸とソーダを化学量論比で反応させ、この溶液を噴霧乾燥することにより生成する。この１０水和物は、重金属塩および硬度塩を錯化し、これにより水の硬度を低下させる。二リン酸カリウム(ピロリン酸カリウム)Ｋ4Ｐ2Ｏ7は、三水和物型で存在し、密度２.３３ｇ／ｃｍ3を有する無色の吸湿性粉末であり、水に可溶性であり、２５℃での１％溶液のｐＨは１０.４である。
【０１３０】
ＮａＨ2ＰＯ4またはＫＨ2ＰＯ4の縮合によって、比較的高分子量のリン酸ナトリウムおよびリン酸カリウムが生成する。これらを、環状型、即ちメタリン酸ナトリウムおよびメタリン酸カリウム、ならびに、鎖型であるポリリン酸ナトリウムおよびポリリン酸カリウムに分けることができる。特に鎖型は、種々の異なる名称で知られている(即ち、溶融または焼成リン酸塩、グラハム塩、クロール塩、およびマドレール塩)。全ての高級リン酸ナトリウムおよびリン酸カリウムは、縮合リン酸塩として総称して知られている。
【０１３１】
工業的に重要な三リン酸五ナトリウムＮａ5Ｐ3Ｏ10(トリポリリン酸ナトリウム)は、無水または６Ｈ2Ｏを有する結晶であり、非吸湿性の白色の水溶性塩であり、一般式：ＮａＯ-[Ｐ(Ｏ)(ＯＮａ)-Ｏ]n-Ｎａ(ここでｎ＝３)で示される。１００ｇの水中に、室温で約１７ｇの結晶水を含まない塩が溶解し、６０℃で約２０ｇが溶解し、１００℃で約３２ｇが溶解する。この溶液を１００℃で２時間加熱すると、約８％のオルトリン酸塩および１５％の二リン酸塩が加水分解により生成する。三リン酸五ナトリウムの調製の際には、リン酸を、ソーダ溶液または水酸化ナトリウムと化学量論比で反応させ、この溶液を噴霧乾燥する。グラハム塩および二リン酸ナトリウムと同様に、三リン酸五ナトリウムは、多くの不溶性金属化合物(石灰石鹸などを含む)を溶解する。三リン酸五カリウムＫ5Ｐ3Ｏ10(トリポリリン酸カリウム)は、例えば、５０重量％溶液(＞２３％Ｐ2Ｏ5、２５％Ｋ2Ｏ)の形態で市販されている。ポリリン酸カリウムは、洗剤産業において広く使用されている。さらに、トリポリリン酸ナトリウムカリウムも存在し、これを本発明に従って使用することもできる。これらは、例えばトリメタリン酸ナトリウムをＫＯＨで加水分解したときに、以下のように生成する：
【化５】
0004652059.tif 000006
【０１３２】
本発明によれば、これらを、トリポリリン酸ナトリウム、トリポリリン酸カリウム、またはこれらの混合物と全く同様に使用することができる。また、トリポリリン酸ナトリウムおよびトリポリリン酸ナトリウムカリウムの混合物、またはトリポリリン酸カリウムおよびトリポリリン酸ナトリウムカリウムの混合物、またはトリポリリン酸ナトリウムおよびトリポリリン酸カリウムおよびトリポリリン酸ナトリウムカリウムの混合物を、本発明に従って使用することもできる。
【０１３３】
本発明の洗浄剤および浄化剤において使用しうる有機補助ビルダーには、特に、ポリカルボキシレート／ポリカルボン酸、ポリマー性ポリカルボキシレート、ポリアスパラギン酸、ポリアセタール、デキストリン、他の有機補助ビルダー(以下を参照)、およびホスホン酸塩が含まれる。これら群の物質を以下に説明する。
【０１３４】
有用な有機ビルダーは、例えば、ナトリウム塩の形態で使用しうるポリカルボン酸である。このポリカルボン酸という用語は、１を超える酸官能基を保持するカルボン酸であると解される。これらには、例えば、クエン酸、アジピン酸、コハク酸、グルタル酸、リンゴ酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、糖酸、アミノカルボン酸、ニトリロ三酢酸(ＮＴＡ)、およびこれらの混合物が含まれる(その使用が環境上の理由から回避されるべきでないとき)。好ましい塩は、ポリカルボン酸、例えば、クエン酸、アジピン酸、コハク酸、グルタル酸、酒石酸、糖酸、およびこれらの混合物の塩である。
【０１３５】
酸自体を使用することもできる。酸は、そのビルダー作用に加えて、酸性化成分の特性をも有するのが普通であり、これにより洗浄剤または浄化剤における比較的低いｐＨおよび穏やかなｐＨの確立を助ける(他の成分の混合物に起因するｐＨが望ましくないとき)。系に適合し、環境的に適合する酸、例えば、クエン酸、酢酸、酒石酸、リンゴ酸、乳酸、グリコール酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、グルコン酸、およびこれらの混合物が、ここで特に挙げられる。しかし、無機酸、特に硫酸、または塩基、特にアンモニウムまたはアルカリ水酸化物も、ｐＨ調整剤として働くことができる。このような調整剤は、本発明の製剤中に、好ましくは２０重量％以下、特に１.２〜１７重量％の量で含有される。
【０１３６】
他の適当なビルダーはポリマー性ポリカルボキシレートである。これらは、例えば、ポリアクリル酸またはポリメタクリル酸のアルカリ金属塩であり、例えば、５００〜７００００ｇ／モルの相対分子量を有するものである。
【０１３７】
ポリマー性ポリカルボキシレートのために本明細書に挙げた分子量は、特定の酸型の重量平均分子量Ｍｗであり、これは基本的にＵＶ検出器を装着したゲル透過クロマトグラフィー(ＧＰＣ)によって常に測定されたものである。測定は、外的なポリアクリル酸標準に対して行った(これは、調べたポリマーに対する構造的類似性のゆえに、現実的な分子量の値を与える)。これらの値は、標準としてのポリスチレンスルホン酸に対して測定した分子量とは明らかに異なる。ポリスチレンスルホン酸に対して測定した分子量は、本明細書中に挙げた分子量よりも通常は高い。
【０１３８】
特に適するポリマーは、好ましくは２０００〜２００００ｇ／モルの分子量を有するポリアクリレートである。優れた溶解性のゆえに、この群の好ましい代表例は、２０００〜１００００ｇ／モル、特に３０００〜５０００ｇ／モルの分子量を有する短鎖ポリアクリレートである。
【０１３９】
また適するのは、コポリマー性のポリカルボキシレート、特に、アクリル酸とメタクリル酸とのコポリマー、およびアクリル酸またはメタクリル酸とマレイン酸とのコポリマーである。５０〜９０重量％のアクリル酸および５０〜１０重量％のマレイン酸を含むアクリル酸とマレイン酸のコポリマーが特に適することがわかった。これらの相対分子量は、遊離酸に基づいて、通常は２０００〜７００００ｇ／モルの範囲内、好ましくは２００００〜５００００ｇ／モルの範囲内、より好ましくは３００００〜４００００ｇ／モルの範囲内である。(コ)ポリマー性のポリカルボキシレートは、粉末または水溶液の形態で使用することができる。洗剤中の(コ)ポリマー性ポリカルボキシレートの含量は、好ましくは０.５〜２０重量％、より好ましくは１〜１０重量％である。
【０１４０】
また、水溶性を増大させるために、これらポリマーは、モノマーとしてアリルスルホン酸、例えばアリルオキシベンゼンスルホン酸およびメタアリルスルホン酸を含有することもできる。
【０１４１】
他の特に好ましいポリマーは、２を超える異なるモノマー単位の生分解性ポリマー、例えば、モノマーとしてアクリル酸およびマレイン酸の塩ならびにビニルアルコールもしくはビニルアルコール誘導体を含むポリマー、あるいは、モノマーとしてアクリル酸および２-アルキルアリルスルホン酸の塩および糖誘導体を含むポリマーである。
【０１４２】
他の好ましいコポリマーは、好ましくは、モノマーとしてアクロレインおよびアクリル酸／アクリル酸塩またはアクロレインおよび酢酸ビニルを含むコポリマーである。
【０１４３】
他の好ましいビルダーは、ポリマー性アミノジカルボン酸、その塩またはその前駆体である。ポリアスパラギン酸またはその塩および誘導体が特に好ましい。
【０１４４】
他の適するビルダーは、ポリアセタールであり、これは、ジアルデヒドとポリオールカルボン酸(５〜７個の炭素原子および少なくとも３個のヒドロキシル基を有する)との反応によって得ることができる。好ましいポリアセタールは、ジアルデヒド(例えば、グリオキサール、グルタルアルデヒド、テレフタルアルデヒドおよびこれらの混合物)から、およびポリオールカルボン酸(例えば、グルコン酸および／またはグルコヘプトン酸)から得られる。
【０１４５】
他の適する有機ビルダーは、デキストリン、例えば、デンプンの部分的加水分解によって得られる炭水化物のオリゴマーまたはポリマーである。この加水分解は、通常の方法によって、例えば、酸触媒または酵素触媒の方法によって行うことができる。最終の生成物は、好ましくは、４００〜５０００００ｇ／モルの平均分子量を有する加水分解生成物である。デキストロース当量(ＤＥ)が０.５〜４０、特に２〜３０である多糖が好ましい。ここでＤＥとは、１００のＤＥを有するデキストロースと比較したときの、多糖の還元作用の容認された尺度である。３〜２０のＤＥを有するマルトデキストリンおよび２０〜３７のＤＥを有する乾燥グルコースシロップ、ならびに、２０００〜３００００ｇ／モルの比較的高い分子量を有するいわゆる黄色デキストリンおよび白色デキストリンを使用することができる。
【０１４６】
このようなデキストリンの酸化された誘導体は、糖環の少なくとも１つのアルコール官能基をカルボン酸官能基に酸化しうる酸化剤とデキストリンとの反応生成物である。本発明の製剤に特に好ましい有機ビルダーは、ＥＰ４７２０４２、ＷＯ９７／２５３９９およびＥＰ７５５９４４の酸化されたデンプンまたはその誘導体である。
【０１４７】
他の適する補助ビルダーは、オキシジスクシネートおよびジスクシネートの他の誘導体、好ましくはエチレンジアミンジスクシネートである。エチレンジアミン-Ｎ,Ｎ'-ジスクシネート(ＥＤＤＳ)は、好ましくは、そのナトリウム塩またはマグネシウム塩の形態で使用される。これに関連して、グリセロールジスクシネートおよびグリセロールトリスクシネートも好ましい。ゼオライト含有および／またはケイ酸塩含有の配合物において使用される量は、３〜１５重量％である。
【０１４８】
他の有用な有機補助ビルダーは、例えば、アセチル化ヒドロキシカルボン酸またはその塩であり、これらは、所望によりラクトン形態で存在していてもよく、そして、少なくとも４個の炭素原子、少なくとも１つのヒドロキシ基、および多くとも２つの酸基を含んでいる。
【０１４９】
補助ビルダー特性を有する別群の物質は、ホスホン酸塩、特に、ホスホン酸ヒドロキシアルカンおよびホスホン酸アミノアルカンである。ホスホン酸ヒドロキシアルカンの中で、１-ヒドロキシエタン-１,１-ジホスホネート(ＨＥＤＰ)は、補助ビルダーとして特に重要である。これは、好ましくはナトリウム塩の形態で使用され、二ナトリウム塩は中性の反応を示し、四ナトリウム塩はアルカリ性の反応を示す(ｐＨ９)。好ましいホスホン酸アミノアルカンは、エチレンジアミンテトラメチレンホスホネート(ＥＤＴＭＰ)、ジエチレントリアミンペンタメチレンホスホネート(ＤＴＰＭＰ)、およびこれらの高級同族体である。これらは、好ましくは、中性のナトリウム塩の形態で、例えば、ＥＤＴＭＰの６ナトリウム塩として、またはＤＴＰＭＰの７ナトリウム塩および８ナトリウム塩として使用される。これらホスホン酸塩の中で、ＨＥＤＰをビルダーとして使用するのが好ましい。さらに、ホスホン酸アミノアルカンは、顕著な重金属結合能力を有する。従って、特に製剤が漂白剤をも含有する場合には、ホスホン酸アミノアルカン、特にＤＴＰＭＰまたは列挙したホスホン酸塩の混合物を使用するのが有利であることもある。
【０１５０】
さらに、アルカリ土類金属イオンとの錯体を形成しうるあらゆる化合物を、補助ビルダーとして使用することができる。
【０１５１】
本発明の製剤は、所望により、ビルダーを９０重量％までの量で、好ましくは７５重量％までの量で含有することができる。本発明の洗浄剤は、特に、５〜５０重量％のビルダー含量を有する。硬表面を浄化するため、特に、食器を自動浄化するための本発明の製剤において、ビルダー物質の含量は５〜８８重量％の範囲であり、このような製剤に水不溶性ビルダー物質を添加しないのが有利である。好ましい態様において、本発明の製剤、特に自動食器洗浄機のための製剤は、２０〜４０重量％の水溶性有機ビルダー、特にクエン酸アルカリ、５〜１５重量％の炭酸アルカリ、および２０〜４０重量％の二ケイ酸アルカリを含有する。
【０１５２】
洗浄剤および浄化剤の液体ないしゲル様の組成物に添加しうる溶媒は、一価もしくは多価アルコール、アルカノールアミンまたはグリコールエーテルの群からのものである(これらが、所定の濃度で水と混和しうるとき)。好ましくは、これら溶媒は、エタノール、ｎ-またはｉ-プロパノール、ブタノール、エチレングリコールメチルエーテル、エチレングリコールエチルエーテル、エチレングリコールプロピルエーテル、エチレングリコールモノ-ｎ-ブチルエーテル、ジエチレングリコールメチルエーテル、ジエチレングリコールエチルエーテル、プロピレングリコールメチル、エチルまたはプロピルエーテル、ジプロピレングリコールメチルまたはエチルエーテル、ジイソプロピレングリコールメチルまたはエチルエーテル、メトキシ、エトキシまたはブトキシトリグリコール、１-ブトキシエトキシ-２-プロパノール、３-メチル-３-メトキシブタノール、プロピレングリコールｔ-ブチルエーテル、ならびに、これら溶媒の混合物から選択される。
【０１５３】
溶媒は、液体ないしゲル様の洗浄剤および浄化剤に、０.１〜２０重量％、好ましくは１５重量％以下、特に１０重量％以下の量で添加することができる。
【０１５４】
粘度を調節するために、１つまたはそれ以上の増粘剤または増粘剤系を、本発明の組成物に添加することができる。これらの高分子量の物質(膨潤剤とも呼ばれる)は、通常は液体を吸収し、それによって膨潤し、次いで粘稠な真のまたはコロイド性の溶液に変換する。
【０１５５】
適する増粘剤は、無機またはポリマー性の有機化合物である。無機の増粘剤には、例えば、ポリケイ酸、粘土(例えば、モンモリロナイト、ゼオライト、シリカおよびベントナイト)が含まれる。有機の増粘剤は、天然ポリマー、修飾された天然ポリマーおよび合成ポリマーの群から導かれる。このような天然ポリマーは、例えば、寒天、グアールゴム、アラビアゴム、アルギン酸塩、ペクチン、ポリオース、キサンタンゴム、カラヤゴム、イナゴマメ粉末、デンプンおよびセルロースである。その例は、カルボキシメチルセルロースおよび他のセルロースエーテル、ヒドロキシエチルセルロースおよびヒドロキシプロピルセルロースならびに粉末エーテルである。全合成の増粘剤は、ポリマー、例えば、ポリアクリル化合物およびポリメタクリル化合物、ビニルポリマー、ポリカルボン酸、ポリエーテル、ポリイミン、ポリアミドならびにポリウレタンである。
【０１５６】
増粘剤は、最終の調製物を基準に、５重量％まで、好ましくは０.０５〜２重量％、特に好ましくは０.１〜１.５重量％の量で存在することができる。
【０１５７】
本発明の洗浄剤および浄化剤は、所望により、他の成分、例えば金属イオン封鎖剤、電解質、およびさらなる助剤を含有することができる。
【０１５８】
織物のための洗浄剤は、蛍光増白剤として、ジアミノスチルベンジスルホン酸の誘導体またはそのアルカリ金属塩を含むことができる。適する蛍光増白剤は、例えば、４,４'-ビス(２-アニリノ-４-モルホリノ-１,３,５-トリアジニル-６-アミノ)スチルベン-２,２'-ジスルホン酸の塩または同様の構造の化合物(モルホリノ基の代わりに、ジエタノールアミノ基、メチルアミノ基、アニリノ基または２-メトキシエチルアミノ基を含む)である。また、置換されたジフェニルスチリル型の増白剤、例えば、４,４'-ビス(２-スルホスチリル)ジフェニル、４,４'-ビス(４-クロロ-３-スルホスチリル)ジフェニル、または４-(４-クロロスチリル)-４'-(２-スルホスチリル)ジフェニルのアルカリ金属塩が存在することもできる。上記の増白剤の混合物を使用することもできる。
【０１５９】
灰色化抑制剤は、繊維から剥落した汚れを、液中に懸濁したまま維持する機能を有する。この目的に適するのは、通常は有機性の水溶性コロイドであり、その例は、デンプン、にかわ、ゼラチン、デンプンもしくはセルロースのエーテルカルボン酸またはエーテルスルホン酸の塩、あるいは、セルロースもしくはデンプンの酸性硫酸エステルの塩である。酸性の基を含む水溶性ポリアミドもこの目的に適する。さらに、上記したもの以外の可溶性デンプン調製物およびデンプン生成物、例えばアルデヒドデンプンを使用することもできる。しかし好ましくは、セルロースエーテル、例えば、カルボキシメチルセルロース(Ｎａ塩)、メチルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、および混合エーテル、例えば、メチルヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、メチルカルボキシメチルセルロース、およびこれらの混合物を使用する。これらは、例えば、製剤を基準に０.１〜５重量％の量で添加することができる。
【０１６０】
銀腐食保護を実現するために、銀保護剤を、本発明の食器用浄化剤に添加することができる。例えば、ベンゾトリアゾール、塩化鉄(III)またはＣｏＳＯ4が従来技術から既知である。例えば、欧州特許ＥＰ０７３６０８４Ｂ１から既知であるように、酵素と一緒に使用するのに特に適する銀保護剤は、マンガン、チタン、ジルコニウム、ハフニウム、バナジウム、コバルトまたはセリウムの塩および／または錯体(これらの金属が、原子価状態II、III、IV、ＶまたはVIで存在する)である。このような化合物の例は、ＭｎＳＯ4、Ｖ2Ｏ5、Ｖ2Ｏ4、ＶＯ2、ＴｉＯＳＯ4、Ｋ2ＴｉＦ6、Ｋ2ＺｒＦ6、Ｃｏ(ＮＯ3)2、Ｃｏ(ＮＯ3)3、およびこれらの混合物である。
【０１６１】
「汚れ解放」活性物質または「汚れ忌避剤」は、通常はポリマーであり、これは、洗浄剤において使用したときに、洗濯物の繊維に対して汚れ忌避特性を付与し、そして／または通常の洗浄剤成分の汚れ解放力を増強する。また、硬表面用の浄化剤においてこれらを使用することにより、同等の効果を観察することができる。
【０１６２】
特に効果的であり、かつ以前から既知である汚れ解放剤は、ジカルボン酸、アルキレングリコールおよびポリアルキレングリコール単位を有するコポリエステルである。これらの例は、ポリエチレンテレフタレートおよびポリオキシエチレングリコールのコポリマーまたは混合ポリマーである(それぞれ、ＤＴ１６１７１４１およびＤＴ２２００９１１)。独国特許出願公開ＤＴ２２５３０６３は、特に、二塩基酸とアルキレンまたはシクロアルキレンポリグリコールのコポリマーを含有する酸性の製剤を開示している。独国特許出願ＤＥ２８５７２９２およびＤＥ３３２４２５８ならびに欧州特許ＥＰ０２５３５６７は、エチレンテレフタレートおよびポリエチレンオキシドテレフタレートのポリマー、ならびに、洗浄剤におけるそれらの使用を記載している。欧州特許ＥＰ０６６９４４は、特定のモル比の、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、芳香族ジカルボン酸、およびスルホン化芳香族ジカルボン酸のコポリエステルを含有する製剤に関する。欧州特許ＥＰ０１８５４２７は、メチル基またはエチル基で末端キャップしたポリエステルであって、エチレンおよび／またはプロピレンテレフタレート単位およびポリエチレンオキシドテレフタレート単位を有するポリエステル、ならびに、このような汚れ解放ポリマーを含有する洗浄剤を開示している。欧州特許ＥＰ０２４１９８４は、オキシエチレン基およびテレフタル酸単位に加えて、置換されたエチレン単位およびグリセロール単位を含むポリエステルに関する。欧州特許ＥＰ０２４１９８５は、オキシエチレン基およびテレフタル酸単位に加えて、１,２-プロピレン、１,２-ブチレンおよび／または３-メトキシ-１,２-プロピレン基ならびにグリセロールを含み、かつＣ1〜Ｃ4アルキル基で末端キャップされたポリエステルを開示している。欧州特許出願ＥＰ０２７２０３３は、ポリプロピレンテレフタレート単位およびポリオキシエチレンテレフタレート単位を有するポリエステルであって、Ｃ1-4アルキル基またはアシル基によって少なくとも部分的に末端キャップされたポリエステルを開示している。欧州特許ＥＰ０２７４９０７は、スルホエチル基で末端キャップされたテレフタレート含有の汚れ解放ポリエステルを記載している。欧州特許出願ＥＰ０３５７２８０によれば、不飽和末端基のスルホン化によって、テレフタレート単位、アルキレングリコール単位およびポリＣ2-4グリコール単位を有する汚れ解放ポリエステルが製造されている。国際特許出願公開ＷＯ９５／３２２３２は、汚れを忌避する酸性の芳香族ポリエステルに関する。国際特許出願公開ＷＯ９７／３１０８５は、綿材料のための、複数の機能性単位を有する非ポリマー性の汚れ忌避剤を開示している(第１の単位は、陽イオン性であってよく、例えば、静電的な相互作用によって綿の表面に吸着することができ、そして第２の単位は、疎水性であり、水／綿の界面における活性成分の保持の原因となる)。
【０１６３】
本発明の織物用洗浄剤において使用しうる色移行抑制剤には、特に、ポリビニルピロリドン、ポリビニルイミダゾール、ポリマー性Ｎオキシド、例えば、ポリビニルピリジン-Ｎ-オキシドおよびビニルピロリドンとビニルイミダゾールとのコポリマーが含まれる。
【０１６４】
自動浄化プロセスにおいて製剤を使用する際には、発泡抑制剤を添加するのが有利になりうる。適する発泡抑制剤には、例えば、高含量のＣ18-Ｃ24脂肪酸を有する天然または合成起源の石鹸が含まれる。適する非界面活性剤型の発泡抑制剤は、例えば、有機ポリシロキサンおよびこれと微細な所望によりシラン処理されたシリカとの混合物、ならびに、パラフィン、ワックス、微結晶性ワックスおよびこれらとシラン処理されたシリカまたはビス-脂肪酸アルキレンジアミン(例えばビス-ステアリル-エチレンジアミド)との混合物である。異なる発泡抑制剤の混合物、例えば、シリコーン、パラフィンまたはワックスの混合物を使用するのも有利である。これらの発泡抑制剤、特に、シリコーンおよび／またはパラフィンを含有する発泡抑制剤を、好ましくは、顆粒状の水溶性または水分散性の担持物質に付加する。この場合、パラフィンおよびビス-ステアリルエチレンジアミドの混合物が好ましい。
【０１６５】
さらに、本発明の硬表面用の浄化剤は、研磨作用を有する成分(特に、石英粉末、木材粉末、プラスチック粉末、チョークおよびガラスミクロビーズならびにこれらの混合物からなる群からの成分)を含有する。本発明の浄化剤中は、好ましくは２０重量％以下、特に、５〜１５重量％の研磨物質を含有する。
【０１６６】
製品の審美的な印象を改善するため、ならびに、消費者に所望の性能だけでなく、視覚的かつ感覚的に「典型的かつ錯誤のない」製品を提供するために、着色剤および芳香剤を、洗浄剤および浄化剤に添加することができる。適する芳香油または芳香剤には、個々の芳香化合物、例えば、エステル、エーテル、アルデヒド、ケトン、アルコールおよび炭化水素型の合成生成物が含まれる。エステル型の芳香化合物は、例えば、酢酸ベンジル、イソ酪酸フェノキシエチル、酢酸ｐ-tert-ブチルシクロヘキシル、酢酸リナリル、酢酸ジメチルベンジルカルビニル、酢酸フェニルエチル、安息香酸リナリル、ギ酸ベンジル、グリシン酸エチルメチルフェニル、プロピオン酸アリルシクロヘキシル、プロピオン酸スチラリルおよびサリチル酸ベンジルである。エーテルには、例えば、ベンジルエチルエーテルが含まれ；アルデヒドには、例えば、８〜１８個の炭素原子を有する直鎖アルカナール、シトラール、シトロネラール、シトロネリルオキシアセトアルデヒド、シクラメンアルデヒド、ヒドロキシシトロネラール、リリアールおよびボージュナールが含まれ；ケトンには、例えば、イオノン、α-イソメチルイオノンおよびメチルセドリルケトンが含まれ；アルコールには、アネトール、シトロネロール、オイゲノール、ゲラニオール、リナロール、フェニルエチルアルコールおよびテルピネオールが含まれ；炭化水素には、特にテルペン(例えば、リモネンおよびピネン)が含まれる。しかし、一緒になって魅力的な香気を生じる異なる芳香剤の混合物を使用するのが好ましい。また、このような芳香油は、植物供給源から得られる天然の芳香剤混合物、例えば、松根油、柑橘油、ジャスミン油、パチョリ油、バラ油またはイランイラン油を含んでいてもよい。また適するのは、マスカテル油、セージ油、カモミール油、チョウジ油、メリッサ油、ミント油、シナモン葉油、ライム花油、ビャクシン実油、ベチベル油、オリバナム油、ガルバナム油およびラブダナム油、さらに、オレンジ花油、ネロリ油、オレンジ果皮油およびビャクダン油である。通常、染料の含量は、洗浄剤および浄化剤の配合物全体の０.０１重量％未満であり、芳香剤は配合物全体の２重量％までを構成していてよい。
【０１６７】
芳香剤は、製剤中に直接導入することができるが、芳香剤を担体に適用するのが有利になることもある。この後者は、洗浄時の芳香剤の吸着を強化し、従って、芳香剤の解放を減少させることにより織物上の長く持続する芳香を確実にする。適する担体物質は、例えばシクロデキストリンであることがわかった(シクロデキストリン／芳香剤の複合体を所望により他の助剤で被覆する)。芳香剤のための別の好ましい担体は、上記したゼオライトＸであり、これは、界面活性剤の代わりにまたは界面活性剤と混合して、芳香剤を吸収することができる。即ち、好ましい洗浄剤および浄化剤は、上記したゼオライトＸおよび芳香剤(これは、少なくとも部分的にゼオライト上に吸着されているのが好ましい)を含有する。
【０１６８】
好ましい着色剤(その選択は、当業者にとって困難ではない)は、高い貯蔵安定性を有しており、洗剤の他の成分および光によって影響を受けず、そして、織物繊維に対する顕著な染色性を持たずそれを着色することがない。
【０１６９】
微生物を制御するため、洗浄剤および浄化剤は、抗微生物剤を含有することができる。抗微生物スペクトルおよび作用機序に依存して、抗微生物剤は、静菌剤および殺菌剤、静菌類剤および殺菌類剤などと分類される。これらの群の重要な代表例は、塩化ベンズアルコニウム、スルホン酸アルキルアリール、ハロゲンフェノールおよび酢酸フェノール水銀である。本発明の教示の範囲内では、「抗微生物活性」および「抗微生物剤」という用語は、通常の技術的意味を有し、これは、例えば、K.H.Wallhaeusserの「Praxis der Sterilisation, Desinfektion-Konservierung: Keimidentifizierung-Betriebshygiene」[第5版、Stuttgart/New York：Thieme、1995]に規定されており、そこに記載された抗微生物活性を有する全ての物質を使用することができる。適する抗微生物剤は、好ましくは、以下の群から選択される。即ち、アルコール、アミン、アルデヒド、抗微生物性の酸またはその塩、カルボン酸エステル、酸アミド、フェノール、フェノール誘導体、ジフェニル、ジフェニルアルカン、尿素誘導体、酸素および窒素のアセタールおよびホルマール、ベンズアミジン、イソチアゾリン、フタルイミド誘導体、ピリジン誘導体、抗微生物性の界面活性化合物、グアニジン、抗微生物性の両性化合物、キノリン、１,２-ジブロモ-２,４-ジシアノブタン、ヨード-２-プロピルブチルカルバメート、ヨウ素、ヨードフォア、ペルオキシ化合物、ハロゲン化合物、ならびに上記の混合物から選択される。
【０１７０】
抗微生物活性物質は、以下から選択することができる。即ち、エタノール、ｎ-プロパノール、ｉ-プロパノール、１,３-ブタンジオール、フェノキシエタノール、１,２-プロピレングリコール、グリセロール、ウンデシレン酸、安息香酸、サリチル酸、ジヒドロ酢酸、ｏ-フェニルフェノール、Ｎ-メチルモルホリン-アセトニトリル(ＭＭＡ)、２-ベンジル-４-クロロフェノール、２,２'-メチレンビス(６-ブロモ-４-クロロフェノール)、４,４'-ジクロロ-２'-ヒドロキシジフェニルエーテル(ジクロサン)、２,４,４'-トリクロロ-２'-ヒドロキシジフェニルエーテル(トリクロサン)、クロロヘキシジン、Ｎ-(４-クロロフェニル)-Ｎ-(３,４-ジクロロフェニル)尿素、Ｎ,Ｎ'-(１,１０-デカンジイルジ-１-ピリジニル-４-イリデン)-ビス(１-オクタンアミン)ジヒドロクロリド、Ｎ,Ｎ'-ビス(４-クロロフェニル)-３,１２-ジイミノ-２,４,１１,１３-テトラアザテトラデカンジイミドアミド、グルコプロタミン、抗微生物性の界面活性第四級化合物、グアニジン(ビグアニジンおよびポリグアニジンを含む)、例えば、１,６-ビス(２-エチルヘキシルビグアニドヘキサン)ジヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-フェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')ヘキサンテトラヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-フェニル-Ｎ1,Ｎ1-メチルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')ヘキサンジヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-ｏ-クロロフェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')ヘキサンジヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-２,６-ジクロロフェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')ヘキサンジヒドロクロリド、１,６-ジ-[Ｎ1,Ｎ1'-β-(ｐ-メトキシフェニル)ジグアニド-Ｎ5,Ｎ5']ヘキサンジヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-α-メチル-β-フェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')ヘキサンジヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-ｐ-ニトロフェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')ヘキサンジヒドロクロリド、ω：ω-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-フェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')-ジ-ｎ-プロピルエーテルジヒドロクロリド、ω：ω-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-ｐ-クロロフェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')-ジ-ｎ-プロピルエーテルテトラヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-２,４-ジクロロフェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')ヘキサンテトラヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-ｐ-メチルフェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')ヘキサンジヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-２,４,５-トリクロロフェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')ヘキサンテトラヒドロクロリド、１,６-ジ-[Ｎ1,Ｎ1'-α-(ｐ-クロロフェニル)エチルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5']ヘキサンジヒドロクロリド、ω：ω-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-ｐ-クロロフェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')ｍ-キシレンジヒドロクロリド、１,１２-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-ｐ-クロロフェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')ドデカンジヒドロクロリド、１,１０-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-フェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')デカンテトラヒドロクロリド、１,１２-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-フェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')ドデカンテトラヒドロクロリド、１,６-ジ-(Ｎ1,Ｎ1'-ｏ-クロロフェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')ヘキサンジヒドロクロリド、１,６-ジ-[Ｎ1,Ｎ1'-ｏ-クロロフェニルジグアニド-Ｎ5,Ｎ5')ヘキサンテトラヒドロクロリド、エチレン-ビス(１-トリルビグアニド)、エチレン-ビス(ｐ-トリルビグアニド)、エチレン-ビス(３,５-ジメチルフェニルビグアニド)、エチレン-ビス(ｐ-tert-アミルフェニルビグアニド)、エチレン-ビス(ノニルフェニルビグアニド)、エチレン-ビス(フェニルビグアニド)、エチレン-ビス(Ｎ-ブチルフェニルビグアニド)、エチレン-ビス(２,５-ジエトキシフェニルビグアニド)、エチレン-ビス(２,４-ジメチルフェニルビグアニド)、エチレン-ビス(ｏ-ジフェニルビグアニド)、エチレン-ビス(混合アミルナフチルビグアニド)、Ｎ-ブチルエチレン-ビス(フェニルビグアニド)、トリメチレンビス(ｏ-トリルビグアニド)、Ｎ-ブチルトリメチレン-ビス(フェニルビグアニド)、ならびに、対応する塩、例えば、酢酸塩、グルコン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、クエン酸塩、亜硫酸水素塩、フッ化物、ポリマレイン酸塩、Ｎ-ヤシ油アルキルサルコシン酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩、パーフルオロオクタン酸塩、ケイ酸塩、ソルビン酸塩、サリチル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、エチレンジアミン四酢酸塩、イミノ二酢酸塩、桂皮酸塩、チオシアン酸塩、アルギン酸塩、ピロメリト酸塩、テトラカルボキシ酪酸塩、安息香酸塩、グルタル酸塩、モノフルオロリン酸塩、パーフルオロプロピオン酸塩、ならびに、これらの任意の混合物から選択することができる。さらに、ハロゲン化キシレンおよびクレゾール誘導体(例えば、ｐ-クロロメタクレゾールまたはｐ-クロロメタキシレン)、ならびに植物起源(例えば、スパイスまたはハーブ由来)、動物起源および微生物起源の天然の抗微生物活性成分が適している。好ましい抗微生物剤は、抗微生物性の界面活性第四級化合物、植物起源の天然の抗微生物剤および／または動物起源の天然の抗微生物剤であり、最も好ましくは、カフェイン、テオブロミンおよびテオフィリンを含む群からの植物起源の少なくとも１つの天然の抗微生物剤、ならびに、精油(例えば、オイゲノール、チモールおよびゲラニオール)、および／または、酵素(例えば、ミルクタンパク質、リゾチームおよびラクトペルオキシダーゼ)を含む群からの動物起源の少なくとも１つの天然の抗微生物剤、および／または、少なくとも１つの抗微生物性の界面活性第四級化合物(アンモニウム、スルホニウム、ホスホニウム、ヨードニウムまたはアルソニウム基を有する)、ペルオキシ化合物、ならびに塩素化合物である。微生物起源の物質、いわゆるバクテリオジンを使用することもできる。
【０１７１】
抗微生物剤として適する第四アンモニウム化合物(ＱＵＡＴＳ)は、一般式：(Ｒ1)(Ｒ2)(Ｒ3)(Ｒ4)Ｎ+Ｘ-を有する[ここで、Ｒ1〜Ｒ4は、同一または異なっていてよく、Ｃ1-22アルキル基、Ｃ7-28アラルキル基または複素環式基であり、ここで、２つの基またはピリジンなどの芳香族化合物の場合には３つの基は、窒素原子と一緒になって、複素環、例えばピリジニウムまたはイミダゾリニウム化合物を形成し、そしてＸ-は、ハロゲンイオン、硫酸イオン、水酸化物イオンまたは同様の陰イオンである]。最適の抗微生物活性のためには、これら置換基の少なくとも１つは、好ましくは８〜１８個、より好ましくは１２〜１６個の炭素原子の鎖長を有する。
【０１７２】
ＱＵＡＴＳは、第三アミンとアルキル化剤(例えば、塩化メチル、塩化ベンジル、硫酸ジメチル、臭化ドデシル、さらにエチレンオキシドなど)との反応によって得ることができる。１つの長いアルキル鎖および２つのメチル基を有する第三アミンのアルキル化が特に容易である。２つの長い鎖および１つのメチル基を有する第三アミンの四級化も、塩化メチルを用いて温和な条件下で行うことができる。３つの長いアルキル鎖またはヒドロキシ置換アルキル鎖を有するアミンは、反応性が低く、硫酸ジメチルを用いて四級化するのが好ましい。
【０１７３】
適当なＱＵＡＴＳは、例えば、塩化ベンズアルコニウム(Ｎ-アルキル-Ｎ,Ｎ-ジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ＣＡＳ番号８００１-５４-５)、ベンザルコンＢ(ｍ,ｐ-ジクロロベンジルジメチル-Ｃ12-アルキルアンモニウムクロリド、ＣＡＳ番号５８３９０-７８-６)、塩化ベンズオキソニウム[ベンジルドデシル-ビス(２-ヒドロキシエチル)アンモニウムクロリド]、臭化セトリモニウム(Ｎ-ヘキサデシル-Ｎ,Ｎ-トリメチルアンモニウムブロミド、ＣＡＳ番号５７-０９-０)、塩化ベンズエトニウム(Ｎ,Ｎ-ジメチル-Ｎ-[２-[２-[ｐ-(１,１,３,３-テトラメチルブチル)フェノキシ]エトキシ]エチル]ベンジルアンモニウムクロリド、ＣＡＳ番号１２１-５４-０)、塩化ジアルキルジメチルアンモニウム、例えば、ジ-ｎ-デシルジメチルアンモニウムクロリド(ＣＡＳ番号７１７３-５１-５-５)、臭化ジデシルジメチルアンモニウム(ＣＡＳ番号２３９０-６８-３)、塩化ジオクチルジメチルアンモニウム、１-セチルピリジニウムクロリド(ＣＡＳ番号１２３-０３-５)およびヨウ化チアゾリン(ＣＡＳ番号１５７６４-４８-１)、ならびにこれらの混合物である。特に好ましいＱＵＡＴＳは、Ｃ8-18アルキル基を有する塩化ベンズアルコニウム、特に、Ｃ12-14アルキルベンジルジメチルアンモニウムクロリドである。
【０１７４】
ハロゲン化ベンズアルコニウムおよび／またはハロゲン化置換ベンズアルコニウムは、例えば、BarquatＲ(Lonzaより)、MarquatＲ(Masonより)、VariquatＲ(Witco／Sherexより)、HyamineＲ(Lonzaより)、およびBardacＲ(Lonzaより)として市販されている。他の市販の抗微生物剤は、Ｎ-(３-クロロアリル)ヘキサミニウムクロリド、例えばDowicideＲおよびDowicilＲ(Dowより)、塩化ベンズエトニウム、例えばHyamineＲ 1622(Rohm & Haasより)、塩化メチルベンズエトニウム、例えばHyamineＲ 10X(Rohm & Haasより)、塩化セチルピリジニウム、例えば塩化セパコール(Merrell Labsより)である。
【０１７５】
抗微生物剤は、０.０００１〜１重量％、好ましくは０.００１〜０.８重量％、特に好ましくは０.００５〜０.３重量％、最も好ましくは０.０１〜０.２重量％の量で使用される。
【０１７６】
本製剤は、処理された織物に付着し、繊維の光安定性および／または他の配合物成分の光安定性を改善するＵＶ吸収剤を含有することもできる。ＵＶ吸収剤とは、紫外線放射を吸収し、吸収したエネルギーを長波長放射の形態(例えば、熱)で放射しうる有機化合物(光保護フィルター)を意味すると解される。
【０１７７】
これらの所望の特性を有する化合物は、例えば、２位および／または４位に置換基を有するベンゾフェノンの有効な無放射の不活性化誘導体である。また適するのは、置換されたベンゾトリアゾール、３位でフェニル置換されたアクリレート(２位にシアノ基を有するかまたは有さない桂皮酸誘導体)、サリチル酸塩、有機Ｎｉ錯体ならびに天然物質(例えば、ウンベリフェロンおよび内因性ウロカニン酸)である。ビフェニルおよび特にスチルベン誘導体[例えば、ＥＰ０７２８７４９Ａに記載され、CibaよりTinsorbＲ FDまたはTinosorbＲ FRとして市販されている]が特に重要である。挙げることができるＵＶ-Ｂ吸収剤は、以下のものである：３-ベンジリデンカンファーまたは３-ベンジリデンノルカンファーおよびこれらの誘導体、例えば３-(４-メチルベンジリデン)カンファー(ＥＰ０６９３４７１Ｂ１に記載)；４-アミノ安息香酸誘導体、好ましくは、４-(ジメチルアミノ)安息香酸２-エチルヘキシルエステル、４-(ジメチルアミノ)安息香酸２-オクチルエステルおよび４-(ジメチルアミノ)安息香酸アミルエステル；桂皮酸のエステル、好ましくは４-メトキシ桂皮酸２-エチルヘキシルエステル、４-メトキシ桂皮酸プロピルエステル、４-メトキシ桂皮酸イソアミルエステル、２-シアノ-３,３-フェニル桂皮酸２-エチルヘキシルエステル(オクトクリレン)；サリチル酸のエステル、好ましくはサリチル酸２-エチルヘキシルエステル、サリチル酸４-イソプロピルベンジルエステル、サリチル酸ホモメンチルエステル；ベンゾフェノンの誘導体、好ましくは２-ヒドロキシ-４-メトキシベンゾフェノン、２-ヒドロキシ-４-メトキシ-４'-メチルベンゾフェノン、２,２'-ジヒドロキシ-４-メトキシベンゾフェノン；ベンザルマロン酸のエステル、好ましくは４-メトキシベンズマロン酸ジ-２-エチルヘキシルエステル；トリアジン誘導体、例えばＥＰ０８１８４５０Ａ１に記載される２,４,６-トリアニリノ-(ｐ-カルボ-２'-エチル-１'-ヘキシルオキシ)-１,３,５-トリアジンおよびオクチルトリアゾン、またはジオクチルブタアミドトリアゾン[UvasorbＲ HEB]；プロパン-１,３-ジオン、例えば、１-(４-tert-ブチルフェニル)-３-(４'-メトキシフェニル)プロパン-１,３-ジオン；ケトトリシクロ(５.２.１.０)デカン誘導体(ＥＰ０６９４５２１Ｂ１に記載)。さらに適するのは、以下のものである：２-フェニルベンズイミダゾール-５-スルホン酸およびそのアルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、アルキルアンモニウム、アルカノールアンモニウムおよびグルクアンモニウムの塩；ベンゾフェノンのスルホン酸誘導体、好ましくは、２-ヒドロキシ-４-メトキシベンゾフェノン-５-スルホン酸およびその塩；３-ベンジリデンカンファーのスルホン酸誘導体、例えば、４-(２-オキソ-３-ボルニリデンメチル)ベンゼンスルホン酸および２-メチル-５-(２-オキソ-３-ボルニリデン)スルホン酸ならびにこれらの塩。
【０１７８】
代表的なＵＶ-Ａフィルターには、特に、ベンゾイルメタンの誘導体、例えばＤＥ１９７１２０３３Ａ１(BASF)に記載されているような１-(４'-tert-ブチルフェニル)-３-(４'-メトキシフェニル)プロパン-１,３-ジオン、４-tert-ブチル-４'-メトキシジベンゾイルメタン(Parsol 1789)、１-フェニル-３-(４'-イソプロピルフェニル)プロパン-１,３-ジオン、およびエナミン化合物が含まれる。また、ＵＶ-ＡおよびＵＶ-Ｂフィルターは、当然ながら混合物として添加することもできる。このような可溶性物質に加えて、不溶性の光保護顔料、即ち、微細に分散させた好ましくはナノ化された金属酸化物または塩も、この目的に考慮することができる。適する金属酸化物の例は、特に酸化亜鉛および酸化チタンであり、さらに、鉄、ジルコニウム、ケイ素、マンガン、アルミニウムおよびセリウムの酸化物ならびにこれらの混合物である。ケイ酸塩(タルク)、硫酸バリウムまたはステアリン酸亜鉛を、塩として添加することができる。これら酸化物および塩は、皮膚ケアおよび皮膚保護エマルジョンおよび美容化粧品のための顔料として既に使用されている。ここで、粒子は、１００ｎｍ未満、好ましくは５〜５０ｎｍ、特に１５〜３０ｎｍの平均直径を有すべきである。これらは、球形であってよいが、楕円形または他の形状の粒子を使用することもできる。また、顔料を表面処理することもできる(即ち、親水性化または疎水性化することができる)。代表的な例は、被覆された二酸化チタン[例えば、Titandioxid Z 805(Degussa)またはEusolexＲ T2000(Merck)など]である。ここで、疎水性の被覆剤には、好ましくはトリアルコキシオクチルシランまたはシリコーンが含まれる。ミクロ化した酸化亜鉛を使用するのが好ましい。さらに適するＵＶ光保護フィルターは、P.Finkelによる概説[SOEFW-Journal 122 (1996)、p.543]に見い出すことができる。
【０１７９】
ＵＶ吸収剤は、通常は０.０１〜５重量％、好ましくは０.０３〜１重量％の量で使用される。
【０１８０】
本発明の製剤は、その洗浄力または浄化力を増大させるために、本発明の酵素に加えて、追加の酵素(原則的に、この目的に使用しうることが当分野で確立されているあらゆる酵素)を含有することができる。これらには、特に、プロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、ヘミセルラーゼ、セルラーゼまたはオキシドレダクターゼならびに好ましくはこれらの混合物が含まれる。原則的に、これらの酵素は天然起源のものであるが、天然分子に基づく改善された変異体が洗剤において使用するために利用可能であり、これらが好ましい。本発明の洗剤は、酵素を、活性なタンパク質を基準に、１×１０-6〜５重量％の合計量で含有しているのが好ましい。タンパク質濃度は、既知の方法、例えばＢＣＡ法(ビシンコニン酸；２,２'-ビシノリル-４,４'-ジカルボン酸)またはビウレット法[A.G.Gornall、C.S.BardawillおよびM.M.David、J.Biol.Chem.、177 (1948)、p.751-766]を用いて測定することができる。
【０１８１】
好ましいプロテアーゼは、スブチリシン型のものである。これらの例は、スブチリシンＢＰＮ'およびCarlsberg、プロテアーゼＰＢ９２、スブチリシン１４７および３０９、Bacillus lentus由来のアルカリ性プロテアーゼ、スブチリシンＤＹ、ならびに、より厳格な意味においてスブチリシン類とはもはや分類されないスブチラーゼ類の酵素、サーミターゼ、プロテイナーゼＫおよびプロテアーゼＴＷ３およびＴＷ７である。さらに開発した形態にあるスブチリシンCarlsbergが、商標名 AlcalaseＲのもとでNovozymes A/S(Bagsvaerd、デンマーク)から入手可能である。スブチリシン１４７および３０９は、商標名 EsperaseＲおよびSavinaseＲのもとでNovozymes社から市販されている。Bacillus lentus DSM 5483(ＷＯ９１／０２７９２Ａ１)由来のプロテアーゼから導いた変異体は、BLAPＲと称され、特に、ＷＯ９２／２１７６０Ａ１、ＷＯ９５／２３２２１Ａ１、ＷＯ０２／０８８３４０Ａ２およびＷＯ０３／０３８０８２Ａ２に記載されている。種々のBacillus sp.およびB.gibsoniiに由来する別の適するプロテアーゼが、国際特許出願公開ＷＯ０３／０５４１８５Ａ１、ＷＯ０３／０５６０１７Ａ２、ＷＯ０３／０５５９７４Ａ２およびＷＯ０３／０５４１８４Ａ１から明らかである。
【０１８２】
他の使用しうるプロテアーゼは、例えば、商標名 DurazymＲ、RelaseＲ、EverlaseＲ、Nafizym、NatalaseＲ、KannaseＲおよびOvozymesＲのもとでNovozymes社から入手しうる酵素、商標名 PurafectＲ、PurafectＲ OxPおよびProperaseＲのもとでGenencorから入手しうる酵素、商標名 ProtosolＲのもとでAdvanced Biochemicals Ltd.(Thane、インド)から入手しうる酵素、商標名 WuxiＲのもとでWuxi Snyder Bioproducts Ltd.(中国)から入手しうる酵素、商標名 ProleatherＲおよびProteaseＲ PのもとでAmano Pharmaceuticals Ltd.(名古屋、日本)から入手しうる酵素、ならびに、名称 Proteinase K-16のもとでKao Corp.(東京、日本)から入手しうる酵素である。
【０１８３】
本発明に係る別の使用しうるアミラーゼの例は、Bacillus licheniformis由来、B.amyloliquefaciens由来およびB.stearothermophilus由来のα-アミラーゼ、ならびに、洗剤において使用するためにさらに改善されたこれらの開発体である。B.licheniformis由来の酵素は、Novozymes社から名称 TermamylＲのもとで、およびGenencor社から名称 PurastarＲ STのもとで入手可能である。このα-アミラーゼの他の開発生成物が、Novozymes社から商標名 DuramylＲおよびTermamylＲ ultraのもとで、Genencor社から名称 PurastarＲ OxAmのもとで、およびDaiwa Seiko Inc.社(東京、日本)からKeistaseＲとして入手可能である。B.amyloliquefaciens由来のα-アミラーゼは、Novozymes社により名称 BANＲのもとで市販されており、B.stearothermophilus由来のα-アミラーゼから導いた変異体は、名称 BSGＲおよびNovamylＲのもとで、これらもNovozymes社から市販されている。
【０１８４】
さらに、上記目的のために、国際特許出願公開ＷＯ０２／１０３５６Ａ２に開示されているBacillus sp. A7-7 (DSM 12368)由来のα-アミラーゼならびにＷＯ０２／４４３５０Ａ２に開示されているB.agaradherens (DSM 9948)由来のシクロデキストリン-グルカノトランスフェラーゼ(ＣＧＴアーゼ)に注目すべきである。国際特許出願公開ＷＯ０３／００２７１１Ａ２に規定されているα-アミラーゼの配列空間に属するアミロース分解酵素、ならびに、国際特許出願公開ＷＯ０３／０５４１７７Ａ２に記載されているものを使用することもできる。同様に、記載された分子の融合生成物、例えば、独国特許出願公開ＤＥ１０１３８７５３Ａ１に記載された融合生成物を使用することもできる。
【０１８５】
さらに、Novozymes社から商標名 FungamylＲのもとで入手しうるAspergillus nigerおよびA.oryzae由来のα-アミラーゼのさらなる開発体も適している。他の適する市販生成物は、例えばAmylase-LTＲである。
【０１８６】
本発明の製剤は、リパーゼまたはクチナーゼを、特にこれらのトリグリセリド切断活性のゆえに、さらに適当な予備工程から過酸をその場で生成するために、含有することができる。これらには、Humicola lanuginosa (Thermomyces lanuginosus)由来の入手可能かまたはさらに開発されたリパーゼ、特にアミノ酸置換Ｄ９６Ｌを有するものが含まれる。これらは、例えば、Novozymes社から商標名 LipolaseＲ、LipolaseＲ Ultra、LipoPrimeＲ、LipozymeＲおよびLipexＲのもとで市販されている。さらに、適するクチナーゼは、例えばFusarium solani pisiおよびHumicola insolensから初めて単離されたクチナーゼである。同様に使用しうるリパーゼは、Amano社から名称 Lipase CEＲ、Lipase PＲ、Lipase BＲ、およびLipase CESＲ、Lipase AKGＲ、Bacillis sp. LipaseＲ、Lipase APＲ、Lipase M-APＲおよびLipase AMLＲのもとで入手可能である。適するリパーゼまたはクチナーゼ(その出発酵素がPseudomonas mendocinaおよびFusarium solaniiから初めて単離された)は、例えばGenencor社から入手可能である。挙げることができる他の重要な市販生成物は、Gist-Brocades社からの市販調製物 M1 LipaseＲおよびLipomaxＲ、Meito Sangyo株式会社(日本)からの市販酵素 Lipase MY-30Ｒ、Lipase OFＲおよびLipase PLＲ、ならびに、Genencor社からの生成物 LumafastＲである。
【０１８７】
本発明の製剤は、特にそれらを織物処理に使用するときには、それらの目的に応じてセルラーゼを、純粋酵素として、酵素調製物として、または混合物(個々の成分がそれらの種々の効果を有利に補足する)の形態で含有することができる。これらの効果には、特に、生成物の一次洗浄性能、二次洗浄性能への寄与(再付着防止活性または灰色化抑制)、柔軟化または増白化(織物に対する効果)、「石洗い」効果の発揮が含まれる。
【０１８８】
使用しうる菌類エンドグルカナーゼ(ＥＧ)に富むセルラーゼ調製物またはそのさらなる開発体は、Novozymes社から商標名 CelluzymeＲのもとで提供されている。また、生成物 EndolaseＲおよびCarezymeＲ(H.insolens DSM 1800由来の５０ｋＤ-ＥＧ、４３ｋＤ-ＥＧにそれぞれ基づく)も、Novozymes社から入手可能である。この会社からの他の市販生成物は、CellusoftＲおよびRenozymeＲである(国際特許出願公開ＷＯ９８／１２３０７Ａ１に基づく)。改善された性能を有するセルラーゼ変異体が、国際特許出願公開ＷＯ９８／１２３０７Ａ１に記載されている。同様に、国際特許出願公開ＷＯ９７／１４８０４Ａ１に開示されているセルラーゼを使用することもできる。例えば、Melanocarpus由来の２０ｋＤ-ＥＧセルラーゼが、AB Enzymes社(フィンランド)から商標名 EcostoneＲおよびBiotouchＲのもとで入手可能である。AB Enzymes社からの他の市販生成物は、EconaseＲおよびEcopulpＲである。Bacillus sp.由来の他の適するセルラーゼCBS 670.93が、Genencor社から商標名 PuradaxＲのもとで入手可能である。Genencor社からのさらなる市販生成物は、「Genencor 洗剤セルラーゼＬ」およびIndiageＲNeutraである。
【０１８９】
特に、特定の問題ある汚れを除去するために、本発明の製剤は、用語「ヘミセルラーゼ」のもとでまとめられる追加の酵素を含有することができる。これらには、例えば、マンナナーゼ、キサンタンリアーゼ、ペクチンリアーゼ(＝ペクチナーゼ)、ペクチンエステラーゼ、ペクタットリアーゼ(pectatlyase)、キシログルカナーゼ(＝キシラナーゼ)、プルラナーゼおよびβ-グルカナーゼが含まれる。適するマンナナーゼは、例えば、名称 GamanaseＲおよびPektinex ARＲのもとでNovozymes社から、名称 RohapecＲ B1LのもとでAB Enzymesから、および名称 PyrolaseＲのもとでDiversa Corp.社(San Diego、CA、米国)から入手可能である。B.alcalophilus由来の適するβ-グルカナーゼは、例えば国際特許出願公開ＷＯ９９／０６５７３Ａ１に記載されている。B.subtilisから抽出したβ-グルカナーゼは、名称 CerefloＲのもとでNovozymes社から入手可能である。
【０１９０】
漂白作用を増大させるために、洗浄剤または浄化剤は、オキシドレダクターゼ、例えばオキシダーゼ、オキシゲナーゼ、ケタラーゼ、ペルオキシダーゼ、例えばハロゲン-、クロロ-、ブロモ-、リグニン-、グルコース-またはマンガン-ペルオキシダーゼ、ジオキシゲナーゼまたはラッカーゼ(フェノールオキシダーゼ、ポリフェノールオキシダーゼ)を含有することができる。適する市販生成物は、Novozymes社からのDeniliteＲ 1および2である。有利には、酵素と相互作用して、関連のオキシドレダクターゼの活性を増強(エンハンサー)するか、または大きく異なるレドックス電位にわたって酸化性酵素と汚れの間の電子の流れを促進(メディエーター)する、追加の好ましくは有機の、特に好ましくは芳香族の化合物を添加する。
【０１９１】
本発明の製剤において使用される酵素は、微生物、例えばBacillus、Streptomyces、HumicolaまたはPseudomonasの種から初めに得られ、そして／または、既知の生物工学的方法に従い、適する微生物を用いて、例えば糸状菌類またはBacillus種のトランスジェニック発現宿主によって製造される。
【０１９２】
次いで、関連酵素の精製を、確立された方法を用いて、例えば液相の沈殿、沈降、濃縮、濾過、ミクロ濾過、限外濾過、化学物質との混合、脱臭またはこれら工程の適当な組合せを用いて好都合に行う。
【０１９３】
酵素を、従来技術に従ってそれぞれ確立された形態にある本発明の製剤に添加することができる。ここで包含されるのは、例えば、顆粒化、押出または凍結乾燥によって得られる固体調製物、あるいは、特に液体製剤またはゲル形態の製剤、酵素溶液(有利には、高濃縮され、低含水量であり、そして／または、安定剤と混合されている)である。
【０１９４】
別法によれば、固体ならびに液体の両提供形態のための全ての酵素を、例えば、好ましくは天然ポリマーと共に酵素溶液を噴霧乾燥または押出することによって、あるいは、カプセルの形態(例えば、酵素が固化されたゲル中に埋入されている形態)で、またはコア-シェル型の形態(酵素含有コアが水-、空気-および／または化学物質-不浸透性の保護層で被覆されている形態)で封入することができる。他の活性成分、例えば、安定剤、乳化剤、顔料、漂白剤または着色剤を、追加の層で適用することができる。このようなカプセルを、既知の方法を用いて、例えば、振動顆粒化またはロール圧密によって、あるいは、流動床法によって製造する。有利には、これら種類の顆粒(例えば、ポリマー皮膜形成剤が適用された顆粒)は、ほこりのないものであり、被覆の結果として、貯蔵安定性である。
【０１９５】
さらに、単一の顆粒が複数の酵素活性を示すように、２つまたはそれ以上の酵素を一緒に配合することができる。
【０１９６】
含有される酵素、特に含有されるコリンオキシダーゼのタンパク質濃度は、既知の方法、例えばＢＣＡ法(ビシンコニン酸；２,２'-ビキノリル-４,４'-ジカルボン酸)またはビウレット法[A.G.Gornall、C.S.BardawillおよびM.M.David、J.Biol.Chem.、177 (1948)、p.751-766]を用いて測定することができる。
【０１９７】
本発明の製剤中のタンパク質および／または酵素を、特に貯蔵中に、品質低下(例えば不活性化、変性または分解などであり、例えば物理的影響、酸化またはタンパク質分解切断による)から保護することができる。特に製剤がプロテアーゼをも含有しているときには、タンパク質および／または酵素の微生物調製中のタンパク質分解の抑制が特に好ましい。本発明によれば、この目的に安定剤を添加することができる。
【０１９８】
安定剤の１つの群は、可逆的プロテアーゼ阻害剤である。このために、ベンズアミジン塩酸塩、ホウ砂、ホウ酸、ボロン酸またはこれらの塩もしくはエステルが使用されることが多い。特に、芳香族基を有する誘導体、例えばオルト置換、メタ置換またはパラ置換されたフェニルボロン酸、またはこれらの塩もしくはエステルが使用されることが多い。また、ペプチドアルデヒド、即ち、還元されたＣ末端を有するオリゴペプチドも適している。特に、オボムコイドおよびロイペプチンが、ペプチド性の可逆的プロテアーゼ阻害剤に属する。さらなる選択肢は、プロテアーゼおよびペプチド阻害剤からの融合タンパク質の形成である。
【０１９９】
さらなる酵素安定剤は、アミノアルコール(例えば、モノ、ジ、トリエタノールおよびプロパノールアミンならびにこれらの混合物)、Ｃ12までの脂肪族カルボン酸、例えばコハク酸、他のジカルボン酸またはこのような酸の塩である。また、末端キャップした脂肪酸アミドアルコキシレートも適する安定剤である。国際特許出願公開ＷＯ９７／１８２８７に開示されているように、ビルダーとして添加される特定の有機酸は、含有される酵素をさらに安定化することができる。
【０２００】
低級脂肪族アルコール、特にポリオール(例えば、グリセロール、エチレングリコール、プロピレングリコールまたはソルビトールなど)は、さらに使用されることが多い酵素安定剤である。また、リン酸ジグリセロールも、物理的影響による変性から保護する。同様に、カルシウム塩および／またはマグネシウム塩も使用される(例えば、酢酸カルシウムまたはギ酸カルシウムなど)。
【０２０１】
ポリアミドオリゴマーまたはポリマー性化合物、例えばリグニン、水溶性ビニルコポリマーまたはセルロースエーテル、アクリルポリマーおよび／またはポリアミドは、酵素調製物を、物理的影響またはｐＨ変動に対して安定化する。ポリアミンＮ-オキシド含有ポリマーは、酵素安定剤として、および色移行抑制剤として同時に作用する。他のポリマー性安定剤は直鎖Ｃ8-18ポリオキシアルキレンである。また、アルキルポリグリコシドは、本発明の製剤の酵素成分を安定化することができ、さらにそれらの性能を増大させることもできる。架橋した窒素含有化合物は、汚れ解放剤としておよび酵素安定剤として、二重の機能を発揮する。疎水性の非イオン性ポリマーは、特に、所望により含有されるセルラーゼを安定化する。
【０２０２】
還元剤および酸化防止剤は、酸化分解に対する酵素の安定性を増大させる。その例は、イオウ含有還元剤などである。他の例は、亜硫酸ナトリウムおよび還元糖である。
【０２０３】
安定剤の組合せ、例えば、ポリオール、ホウ酸および／またはホウ砂の組合せ、ホウ酸またはホウ酸塩、還元性の塩およびコハク酸または他のジカルボン酸の組合せ、あるいは、ホウ酸またはホウ酸塩と、ポリオールまたはポリアミノ化合物との、および還元性の塩との組合せの使用が特に好ましい。ペプチド-アルデヒド安定剤の効果は、ホウ酸および／またはホウ酸誘導体およびポリオールとの組合せによって好都合に増大し、二価陽イオン(例えばカルシウムイオンなど)の追加効果によってなおさらに増大する。
【０２０４】
好ましい態様において、本発明の製剤は、含有される活性成分を互いに独立して、例えば異なる時間にまたは異なる場所で放出させるために、１を超える相からなることを特徴とする。これは、異なる集合体中の相に関係することができるが、特に同じ集合体中の相に関係する。
【０２０５】
１を超える固体成分を含んでなる本発明の製剤は、大量の種々の固体成分、特に、粉末、顆粒または押出物(種々の成分および／または異なる放出挙動を有する)を一緒に混合することによって、容易に製造することができる。本発明の１つまたはそれ以上の相を有する固体製剤の製造は、既知の方法によって、例えば噴霧乾燥または顆粒化によって行うことができ、この場合、酵素および可能性ある他の熱感受性成分(例えば漂白剤など)は、所望により独立して添加する。高い嵩密度、特に６５０〜９５０ｇ／Ｌの範囲の嵩密度を有する本発明の製剤を製造するための好ましい方法は、欧州特許ＥＰ０４８６５９２から既知である押出工程を含む方法である。顆粒化法を用いる他の好ましい製造は、欧州特許ＥＰ０６４２５７６に記載されている。
【０２０６】
固体のためには、タンパク質を、例えば、乾燥した、顆粒化した、カプセル化した、またはカプセル化してさらに乾燥した形態で使用することができる。これを、独立して、即ち１つの相として添加するか、または、他の成分と一緒に同じ相中で添加することができる(圧密するかまたはしない)。マイクロカプセル化した固体酵素を使用するときには、従来技術から既知の方法(例えば、噴霧乾燥、遠心または再溶解)を用いることによって、処理に起因する水溶液から水を除去することができる。このようにして得られた粒子は、通常は５０〜２００μｍの粒子サイズを有する。
【０２０７】
カプセル化された形態は、上記のように、他の成分(例えば漂白剤)から酵素を保護するように、または制御された放出を可能にするように働く。これらのカプセルは、そのサイズにより、ミリカプセル、マイクロカプセルおよびナノカプセルに分類されるが、マイクロカプセルが酵素には特に好ましい。このようなカプセルは、例えば、国際特許出願公開ＷＯ９７／２４１７７および独国特許出願公開ＤＥ１９９１８２６７Ａ１に開示されている。別の可能性あるカプセル化方法は、酵素溶液とデンプンまたはデンプン誘導体の溶液または懸濁液との混合物から出発して、洗浄剤または浄化剤に適する酵素をデンプンまたはデンプン誘導体中に封入することである。このようなカプセル化法は、ＤＥ１９９５６３８２に記載されている。
【０２０８】
また、少なくとも２つの固体相を、互いに混合することができる。即ち、本発明の固体製剤を、圧縮または圧密によってタブレットに調製することができる。このようなタブレットは、単相または多相タブレットであってよい。即ち、この提供形態は、本発明に従う２つの固体相を有する固体製剤を提供する可能性をも与える。本発明に従うタブレット形態の製剤(これは、単相もしくは多相、単色もしくは多色であることができ、そして／または、１つまたはいくつかの層からなることができる)を製造するために、全ての成分(所望により各層について)を、好ましくはミキサー中で一緒に混合し、この混合物を、通常のタブレット成型機(例えば、外心プレスまたは回転プレス)を用いて、約５０〜１００ｋＮ／ｃｍ2、好ましくは６０〜７０ｋＮ／ｃｍ2の範囲内の圧縮力で圧縮する。特に多層タブレットの場合には、少なくとも１つの層を予備圧縮するのが有利でありうる。これは、５〜２０ｋＮ／ｃｍ2、特に１０〜１５ｋＮ／ｃｍ2の圧縮力を用いて行うのが好ましい。このように調製したタブレットは、好ましくは１０〜５０ｇ、特に１５〜４０ｇの重量を有する。このタブレットは、任意の形状(丸形、卵形または角形)であってよく、中間形状であってもよい。
【０２０９】
多相製剤については、相の少なくとも１つが、アミラーゼ感受性物質(特にデンプン)を含有しているか、あるいは、これによって少なくとも部分的に封入または被覆されているのが特に有利である。このようにして、この相は、外部の影響から機械的に安定化および／または保護され、同時に、洗浄液中に存在する活性アミラーゼによって攻撃されて、成分の放出が促進される。
【０２１０】
同様に、好ましい本発明の製剤は、それらが液体、ゲルまたはペーストの形態にあることを特徴とする。タンパク質、好ましくは本発明のタンパク質を、このような製剤に添加する。このタンパク質は、好ましくは、当分野のタンパク質抽出および調製の事情に由来するものであり、濃縮された水性または非水性溶液で、例えば液体形態(例えば、溶液、懸濁液またはエマルジョン)で得られるが、ゲル形態または封入もしくは乾燥された粉末としても得られる。通常の溶媒中の溶液の形態にある本発明のこの種の洗浄剤または浄化剤は、通常は、自動ミキサー中に溶液としてまたは物質中に添加することができる成分の単純な混合によって調製される。
【０２１１】
本発明の１つの態様は、本発明にとって必須である封入されたタンパク質および／または他の含有されるタンパク質のいずれかおよび／またはミクロカプセルの形態にある他の含有される成分のいずれかを添加した、上記のような液体、ゲルまたはペースト製剤である。これらの中で、アミラーゼ感受性物質を用いて封入された製剤が特に好ましい。洗浄剤または浄化剤においてアミラーゼ感受性物質とアミロース分解酵素の組合せを使用すると、デンプン分解酵素がミクロカプセルの破壊を助け、これにより、封入された成分の放出過程を制御し、その結果として、放出が貯蔵中および／または浄化過程の開始時に起こらず、その代わりに規定された時間において起こるというような相乗効果を示すことができる。この機序により、複雑な洗浄剤および浄化剤の系は、最も多様な成分および最も多様なカプセル型に基づくことができ、これが本発明の特に好ましい態様である。
【０２１２】
洗浄剤および浄化剤の成分を、少なくとも２つの異なる相、例えばタブレット化された洗浄剤または浄化剤の２つまたはそれ以上の固体結合相あるいは同一粉末製剤中の異なる顆粒に分配したときに、同等の効果が得られる。二相または多相の浄化剤は、当分野では自動食器洗浄機ならびに洗浄剤の両方において使用されている。先に活性化される相中のアミロース分解酵素の活性は、後の相の活性化のための前提条件である(後の相が、アミラーゼ感受性のシェルまたは被覆によって囲まれているか、あるいは、このアミラーゼ感受性物質が固体相の構成部分であり、その部分または完全加水分解が関連の相を崩壊させるとき)。
【０２１３】
洗浄剤および浄化剤の各成分は、互いの性能を適切に助けることができる。即ち、補助ビルダーとして添加しうるポリマー(例えばアルキルポリグリコシド)が、含有される酵素の活性および安定性を、同時に安定化および増強しうることが国際特許出願公開ＷＯ９８／４５３９６から既知である。従って、本発明に係るCarlsberg変異体を、上記した通常の成分のいずれかによって修飾するのが、特に安定化するのが、および／または、洗浄剤または浄化剤の性能に対するその寄与を増大させるのが好ましい。
【０２１４】
織物または硬表面を浄化するための方法は、本発明のさらなる対象を構成し、本発明の上記コリンオキシダーゼ変異体が、浄化工程の少なくとも１つにおいて活性であることを特徴とする。
【０２１５】
この態様において、本発明は、本発明の改善された酵素特性が、原則的に各浄化過程における改善の点で利用されることにより実現される。各浄化過程は、それが各浄化工程において存在するときに、関連の活性によって増強される。このような方法は、機械、例えば通常の家庭用自動食器洗浄機または家庭用洗濯機において実現される。他の好ましい方法は、コリンオキシダーゼ変異体を、上記の製剤中に添加する方法である。
【０２１６】
本発明のさらなる対象は、本発明に従って使用しうるコリンオキシダーゼ、特に本発明のコリンオキシダーゼを含有するシャンプーおよび／または毛髪ケア剤である。
【０２１７】
本発明に従って使用しうるコリンオキシダーゼ、特に本発明のコリンオキシダーゼを含有するシャンプーおよび／または毛髪ケア製品ならびに発泡浴剤、シャワー浴剤、クリーム、ゲル、ローション、アルコール溶液および水性アルコール溶液、エマルジョン、ワックス／脂肪コンパウンド、スティック、粉末または軟膏は、穏やかな界面活性剤、油、乳化剤、グリース、真珠色化ワックス、稠度付与剤、増粘剤、ポリマー、シリコーン化合物、油脂、ワックス、安定剤、生物起源の活性成分、脱臭剤、発汗防止剤、ふけ防止剤、皮膜形成剤、膨潤剤、ＵＶ光保護因子、酸化防止剤、ヒドロトロープ剤、保存剤、虫忌避剤、日焼け剤、可溶化剤、芳香油、着色剤などを、助剤および添加剤として含有することができる。
【０２１８】
適する穏やかな界面活性剤、即ち、特に皮膚に適合する界面活性剤の代表例は、脂肪アルコールポリグリコールエーテルスルフェート、モノグリセリドスルフェート、モノおよび／またはジアルキルスルホスクシネート、脂肪酸イセチオネート、脂肪酸サルコシネート、脂肪酸タウリド、脂肪酸グルタメート、α-オレフィンスルホネート、エーテルカルボン酸、アルキルオリゴグルコシド、脂肪酸グルカミド、アルキルアミドベタインおよび／またはタンパク質-脂肪酸縮合物(これはコムギタンパク質に基づくのが好ましい)である。
【０２１９】
例えば、以下のものを油として挙げることができる：６〜１８個、好ましくは８〜１０個の炭素原子を有する脂肪アルコールに基づくゲルベアルコール、直鎖Ｃ6-22脂肪酸と直鎖Ｃ6-22脂肪アルコールとのエステル、分岐鎖Ｃ6-13カルボン酸と直鎖Ｃ6-22脂肪アルコールとのエステル、例えば、ミリスチルミリステート、ミリスチルパルミテート、ミリスチルステアレート、ミリスチルイソステアレート、ミリスチルオレエート、ミリスチルベヘネート、ミリスチルエルケート、セチルミリステート、セチルパルミテート、セチルステアレート、セチルイソステアレート、セチルオレエート、セチルベヘネート、セチルエルケート、ステアリルミリステート、ステアリルパルミテート、ステアリルステアレート、ステアリルイソステアレート、ステアリルオレエート、ステアリルベヘネート、ステアリルエルケート、イソステアリルミリステート、イソステアリルパルミテート、イソステアリルステアレート、イソステアリルイソステアレート、イソステアリルオレエート、イソステアリルベヘネート、イソステアリルエルケート、オレイルミリステート、オレイルパルミテート、オレイルステアレート、オレイルイソステアレート、オレイルオレエート、オレイルベヘネート、オレイルエルケート、ベヘニルミリステート、ベヘニルパルミテート、ベヘニルステアレート、ベヘニルイソステアレート、ベヘニルオレエート、ベヘニルベヘネート、ベヘニルエルケート、エルシルミリステート、エルシルパルミテート、エルシルステアレート、エルシルイソステアレート、エルシルオレエート、エルシルベヘネートおよびエルシルエルケート。さらに、適するエステルは、直鎖Ｃ6-22脂肪酸と分岐鎖アルコール(特に２-エチルヘキサノール)とのエステル、ヒドロキシカルボン酸と直鎖または分岐鎖Ｃ6-22脂肪アルコールとのエステル(特にジオクチルマレエート)、直鎖および／または分岐鎖脂肪酸とポリヒドロキシアルコール(例えば、プロピレングリコール、ダイマージオールまたはトリマートリオール)および／またはゲルベアルコールとのエステル、Ｃ6-10脂肪酸に基づくトリグリセリド、Ｃ6-18脂肪酸に基づく液体のモノ／ジ／トリグリセリド混合物、Ｃ6-18脂肪アルコールおよび／またはゲルベアルコールと芳香族カルボン酸(特に安息香酸)とのエステル、Ｃ2-12ジカルボン酸と１〜２２個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルコールまたは２〜１０個の炭素原子および２〜６個のヒドロキシル基を有するポリオールとのエステル、植物油、分岐鎖の第一アルコール、置換シクロヘキサン、直鎖および分岐鎖のＣ6-22脂肪アルコールカーボネート、ゲルベカーボネート、安息香酸と直鎖および／または分岐鎖Ｃ6-22アルコールとのエステル(例えば、FinsolvＲ TN)、アルキル基あたりに６〜２２個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の対称または非対称のジアルキルエーテル、エポキシ化脂肪酸エステルのポリオールによる開環生成物、シリコーン油および／または脂肪族またはナフテン系炭化水素(例えば、スクアラン、スクアレンまたはジアルキルシクロヘキサン)である。
【０２２０】
乳化剤は、例えば、以下の群の少なくとも１つに由来する非イオン性界面活性剤から選択することができる：
(１)８〜２２個の炭素原子を有する脂肪アルコールへの、１２〜２２個の炭素原子を有する脂肪酸への、アルキル基に８〜１５個の炭素原子を有するアルキルフェノールへの、ならびに、アルキル基に８〜２２個の炭素原子を有するアルキルアミンへの、エチレンオキシド２〜３０モルおよび／またはプロピレンオキシド０〜５モルの付加生成物；
(２)グリセロールへのエチレンオキシド１〜３０モルの付加生成物のＣ12/16脂肪酸モノおよびジエステル；
(３)６〜２２個の炭素原子を有する飽和および不飽和脂肪酸のグリセロールモノおよびジエステルならびにソルビトールモノおよびジエステル、ならびに、そのエチレンオキシド付加生成物；
(４)アルキル(アルケニル)基に８〜２２個の炭素原子を有するアルキルおよび／またはアルケニルモノおよびオリゴグリコシド、ならびに、そのエトキシル化類似体；
(５)ヒマシ油および／または水素化ヒマシ油へのエチレンオキシド１５〜６０モルの付加生成物；
(６)ポリオールエステル、特にポリグリセロールエステル；
(７)ヒマシ油および／または水素化ヒマシ油へのエチレンオキシド２〜１５モルの付加生成物；
(８)直鎖、分岐鎖、飽和または不飽和のＣ6/22脂肪酸、リシノール酸および１２-ヒドロキシステアリン酸ならびにグリセロール、ポリグリセロール、ペンタエリトリトール、ジペンタエリトリトール、糖アルコール(例えばソルビトール)、アルキルグルコシド(例えば、メチルグルコシド、ブチルグルコシド、ラウリルグルコシド)およびポリグルコシド(例えばセルロース)に基づく部分エステル；
(９)モノ、ジおよびトリアルキルホスフェートならびにモノ、ジおよび／またはトリ-ＰＥＧ-アルキルホスフェートおよびその塩；
(１０)羊毛ワックスアルコール；
(１１)ポリシロキサン／ポリアルキル／ポリエーテルコポリマーまたは対応する誘導体；
(１２)ペンタエリトリトール、脂肪酸、クエン酸および脂肪アルコールの混合エステル(ＤＥ１１６５５７４ＰＳ)および／または６〜２２個の炭素原子を有する脂肪酸、メチルグルコースおよびポリオール(好ましくは、グリセロールまたはポリグリセロール)の混合エステル；
(１３)ポリアルキレングリコール；および
(１４)グリセロールカーボネート。
【０２２１】
脂肪アルコール、脂肪酸、アルキルフェノール、脂肪酸のグリセロールモノおよびジエステルならびにソルビトールモノおよびジエステルへの、またはヒマシ油への、エチレンオキシドおよび／またはプロピレンオキシドの付加生成物は、既知の市販生成物である。これらは同族体の混合物であり、その平均のアルコキシル化度は、付加反応に使用したエチレンオキシドおよび／またはプロピレンオキシド量と基質量の比に対応する。グリセロールへのエチレンオキシドの付加生成物のＣ12/18脂肪酸モノおよびジエステルは、化粧品調製物のための脂肪化剤として知られている(ＤＥ２０２４０５１ＰＳ)。
【０２２２】
アルキルおよび／またはアルケニルモノおよびオリゴグリコシド、その製造およびその使用は、従来技術から既知である。これらは、特に、グルコースまたはオリゴ糖と８〜１８個の炭素原子を有する第一アルコールとの反応によって得られる。グリコシド基に関する限り、モノグリコシド(環状の糖基が脂肪アルコールにグリコシド結合している)ならびにオリゴマーグリコシド(好ましくは約８のオリゴマー化度を有する)の両方が適している。ここで、このオリゴマー化度は、このような工業用製品に典型的な同族体分布に基づく統計学的平均値である。
【０２２３】
適するポリグリセロールエステルの代表例は、ポリグリセリル-２ ジポリヒドロキシステアレート(DehymulsＲ PGPH)、ポリグリセリル-３ ジイソステアレート(LameformＲ TGI)、ポリグリセリル-４ イソステアレート(IsolanＲ GI 34)、ポリグリセリル-３ オレエート、ジイソステアロイル ポリグリセリル-３ ジイソステアレート(IsolanＲ PDI)、ポリグリセリル-３ メチルグルコース ジステアレート(Tego CareＲ 450)、ポリグリセリル-３ 蜜蝋(Cera BellinaＲ)、ポリグリセリル-４ カプレート(Polyglycerol Caprate T2010/90)、ポリグリセリル-３ セチルエーテル(ChimexaneＲ NL)、ポリグリセリル-３ ジステアレート(CremophorＲ GS 32)、ポリグリセリル ポリリシノレエート(AdmulＲ WOL 1403)、ポリグリセリル ジメレート イソステアレートおよびこれらの混合物である。
【０２２４】
さらに、双性イオン性界面活性剤を乳化剤として使用することができる。双性イオン性界面活性剤は、分子中に少なくとも１つの第四アンモニウム基および少なくとも１つのカルボキシレート基および１つのスルホネート基を保持する界面活性化合物である。特に適する双性イオン性界面活性剤は、いわゆるベタインであり、例えばＮ-アルキル-Ｎ,Ｎ-ジメチルアンモニウムグリシネート、例えばヤシ油アルキルジメチルアンモニウムグリシネート、Ｎ-アシルアミノプロピル-Ｎ,Ｎ-ジメチルアンモニウムグリシネート、例えばヤシ油アシルアミノプロピルジメチルアンモニウムグリシネート、および２-アルキル-３-カルボキシメチル-３-ヒドロキシエチルイミダゾリン(アルキル基またはアシル基に８〜１８個の炭素原子を有する)、ならびにヤシ油アシルアミノエチルヒドロキシエチルカルボキシメチルグリシネートである。コカミドプロピルベタイン(Cocamidopropyl Betaine)のＣＴＦＡ名称のもとで既知である脂肪酸アミド誘導体が特に好ましい。
両性界面活性剤も乳化剤として適する。両性界面活性剤は、分子中にＣ8/18アルキル基またはアシル基に加えて、少なくとも１つの遊離アミノ基および少なくとも１つのＣＯＯＨ基またはＳＯ3Ｈ基を含有し、内部塩を形成することができる界面活性化合物を包含すると解される。適する両性界面活性剤の例は、Ｎ-アルキルグリシン、Ｎ-アルキルプロピオン酸、Ｎ-アルキルアミノ酪酸、Ｎ-アルキルイミノジプロピオン酸、Ｎ-ヒドロキシエチル-Ｎ-アルキルアミドプロピルグリシン、Ｎ-アルキルタウリン、Ｎ-アルキルサルコシン、２-アルキルアミノプロピオン酸およびアルキルアミノ酢酸(それぞれのアルキル基に約８〜１８個の炭素原子を有する)である。特に好ましい両性界面活性剤は、Ｎ-ヤシ油アルキルアミノプロピオネート、ヤシ油アシルアミノエチルアミノプロピオネートおよびＣ12/18アシルサルコシンである。
両性界面活性剤の他に、第四級乳化剤も適しており、エステルクアット(ester quat)型の乳化剤、好ましくはメチルで第四級化したジ脂肪酸トリエタノールアミンエステル塩が特に好ましい。
【０２２５】
脂肪化剤として、ラノリンおよびレシチン、さらにポリエトキシル化またはアシル化したラノリンおよびレシチン誘導体、ポリオール脂肪酸エステル、モノグリセリドおよび脂肪酸アルカノールアミドなどの物質を使用することができる。脂肪酸アルカノールアミドは、同時に発泡安定剤としても働く。
【０２２６】
真珠色化ワックスには、以下のものが含まれる：アルキレングリコールエステル、特にエチレングリコールジステアレート；脂肪酸アルカノールアミド、特にヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド；部分グリセリド、特にステアリン酸モノグリセリド；多官能性の所望によりヒドロキシ置換されたカルボン酸と、６〜２２個の炭素原子を有する脂肪アルコールとのエステル、特に酒石酸の長鎖エステル；合計して少なくとも２４個の炭素原子を有する脂肪化合物、例えば、脂肪アルコール、脂肪ケトン、脂肪アルデヒド、脂肪エーテルおよび脂肪カーボネート、特にラウロンおよびジステアリルエーテル；脂肪酸、例えばステアリン酸、ヒドロキシステアリン酸またはベヘン酸；１２〜２２個の炭素原子を有するオレフィンエポキシドの、１２〜２２個の炭素原子を有する脂肪アルコールおよび／または２〜１５個の炭素原子および２〜１０個のヒドロキシル基を有するポリオールによる開環生成物；およびこれらの混合物である。
【０２２７】
稠度剤には、主に、１２〜２２個、好ましくは１６〜１８個の炭素原子を有する脂肪アルコールまたはヒドロキシ脂肪アルコール、さらに部分グリセリド、脂肪酸またはヒドロキシ脂肪酸が含まれる。これらの物質と、アルキルオリゴグルコシドおよび／または脂肪酸Ｎ-メチルグルカミド(同じ鎖長)および／またはポリグリセロール ポリ-１２-ヒドロキシステアレートとの組合せが好ましい。
【０２２８】
適する増粘剤は、例えば、エーロジル型(親水性ケイ酸)、多糖、特にキサンタンゴム、グアール、寒天、アルギネートおよびチロース(tylose)、カルボキシメチルセルロースおよびヒドロキシエチルセルロース、さらに比較的高分子量の脂肪酸のポリエチレングリコールモノエステルおよびジエステル、ポリアクリレート(例えば、GoodrichからのCarbopolＲまたはSigmaからのSynthalenＲ)、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコールおよびポリビニルピロリドン、界面活性剤(例えば、エトキシル化脂肪酸グリセリド)、脂肪酸とポリオール(例えば、ペンタエリトリトールまたはトリメチロールプロパン)とのエステル、狭い同族体分布を有する脂肪アルコールエトキシレートまたはアルキルオリゴグルコシド、ならびに、電解質(例えば、塩化ナトリウムおよび塩化アンモニウム)である。
【０２２９】
適する陽イオン性ポリマーは、例えば、陽イオン性セルロース誘導体、例えば第四級化したヒドロキシエチルセルロース(AmercholからPolymer JR 400Ｒの商標名で入手できる)、陽イオン性デンプン、ジアリルアンモニウム塩とアクリルアミドのコポリマー、第四級化したビニルピロリドン／ビニルイミダゾールポリマー、例えばLuviquatＲ(BASF)、ポリグリコールとアミンの縮合生成物、第四級化したコラーゲンポリペプチド、例えばラウリルジモニウムヒドロキシプロピル加水分解コラーゲン(LamequatＲ L、Gruenau)、第四級化したコムギポリペプチド、ポリエチレンイミン、陽イオン性シリコーンポリマー、例えばアミドメチコーン、アジピン酸とジメチルアミノヒドロキシプロピルジエチレントリアミンのコポリマー(CartaretineＲ、Sandoz)、アクリル酸とジメチルジアリルアンモニウムクロリドのコポリマー(MerquatＲ 550、Chemviron)、ポリアミノポリアミド(例えば、フランス特許出願公開ＦＲ２２５２８４０Ａに記載)およびその架橋した水溶性ポリマー、陽イオン性キチン誘導体、例えば第四級化したキトサン(所望により、微結晶分散している)、ジハロゲン化アルキレン(例えばジブロモブタン)とビス-ジアルキルアミン(例えばビス-ジメチルアミノ-１,３-プロパン)との縮合生成物、陽イオン性グアールゴム(例えば、CelaneseからのJaguarＲ CBS、JaguarＲ C-17、JaguarＲ C-16)、第四級化したアンモニウム塩ポリマー(例えば、MiranolからのMirapolＲ A-15、MirapolＲ AD-1、MirapolＲ AZ-1)である。
【０２３０】
陰イオン性、双性イオン性、両性および非イオン性ポリマーには、例えば、酢酸ビニル／クロトン酸コポリマー、ビニルピロリドン／アクリル酸ビニルコポリマー、酢酸ビニル／マレイン酸ブチル／アクリル酸イソボルニルコポリマー、メチルビニルエーテル／無水マレイン酸コポリマーおよびそのエステル、未架橋のポリアクリル酸およびポリオール架橋したポリアクリル酸、アクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウムクロリド／アクリレートコポリマー、オクチルアクリルアミド／メタクリル酸メチル／tert-ブチルアミノエチルメタクリレート／２-ヒドロキシプロピルメタクリレートコポリマー、ポリビニルピロリドン、ビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー、ビニルピロリドン／ジメチルアミノエチルメタクリレート／ビニルカプロラクタムターポリマー、ならびに、所望により誘導体化したセルロースエーテルおよびシリコーンが含まれる。
【０２３１】
適するシリコーン化合物は、例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、環式シリコーン、ならびに、アミノ-、脂肪酸-、アルコール-、ポリエーテル-、エポキシ-、フッ素-、グリコシド-および／またはアルキル-修飾したシリコーン化合物である(これらは、室温で液体または樹脂様のいずれかであることができる)。また、シメチコーン(これは、水素化シリケートおよび２００〜３００のジメチルシロキサン単位の平均鎖長を有するジメチコーンの混合物である)も適している。適する揮発性シリコーンの詳細な概説は、Toddらの文献[Cosm.Toil.、91、27 (1976)]中に見られる。
【０２３２】
油脂の代表例はグリセリドである。ワックスには、特に天然ワックス、例えばカンデリラワックス、カルナバワックス、木蝋、アフリカハネガヤワックス、コルクワックス、グアルマ(guaruma)ワックス、コメ胚油ワックス、サトウキビワックス、オウリキュリー(ouricury)ワックス、モンタンワックス、蜜蝋、セラックワックス、鯨蝋、ラノリン(羊毛ワックス)、尾羽脂、セレシン、オゾケライト(地蝋)、ペトロラタム、パラフィンワックス、ミクロワックス；化学修飾したワックス(硬ワックス)、例えばモンタンエステルワックス、サゾール(sasol)ワックス、水素化ジョジョバワックス、ならびに、合成ワックス、例えばポリアルキレンワックスおよびポリエチレングリコールワックスが含まれる。
【０２３３】
脂肪酸の金属塩、例えばステアリン酸またはリシノール酸のマグネシウム、アルミニウムおよび／または亜鉛塩を、安定剤として使用することができる。
【０２３４】
生物起源の活性物質とは、例えば、トコフェロール、トコフェロールアセテート、トコフェロールパルミテート、アスコルビン酸、デオキシリボ核酸、レチノール、ビサボロール、アラントイン、ピタントリオール、パンテノール、ＡＨＡ酸、アミノ酸、セラミド、偽セラミド、精油、植物抽出物ならびにビタミン複合体を意味すると解される。
【０２３５】
化粧品用脱臭剤は、体臭に対して作用し、それを遮蔽または除去する。体臭は、アポクリン発汗における皮膚細菌の作用によって生じ、これにより不快臭を有する分解生成物が生成することになる。従って、脱臭剤は、殺微生物剤、酵素阻害剤、臭気吸収剤または臭気遮蔽剤として作用する活性成分を含有する。
【０２３６】
本発明の化粧品に所望により添加することができる殺微生物剤として、基本的に、グラム陽性細菌に対して活性であるあらゆる物質が適している。これらは、例えば、４-ヒドロキシ安息香酸およびその塩およびエステル、Ｎ-(４-クロロフェニル)-Ｎ'-(３,４-ジクロロフェニル)尿素、２,４,４'-トリクロロ-２'-ヒドロキシジフェニルエーテル(トリクロサン)、４-クロロ-３,５-ジメチルフェノール、２,２'-メチレン-ビス-(６-ブロモ-４-クロロフェノール)、３-メチル-４-(１-メチルエチル)フェノール、２-ベンジル-４-クロロフェノール、３-(４-クロロフェノキシ)-１,２-プロパンジオール、３-ヨード-２-プロピニルブチルカルバメート、クロロヘキシジン、３,４,４'-トリクロロカルバニリド(ＴＴＣ)、抗細菌芳香物質、メントール、ミント油、フェノキシエタノール、グリセロールモノラウレート(ＧＭＬ)、ジグリセロールモノカプレート(ＤＭＣ)、サリチル酸-Ｎ-アルキルアミド(例えば、サリチル酸ｎ-オクチルアミドまたはサリチル酸ｎ-デシルアミド)などである。
【０２３７】
酵素阻害剤を、本発明の化粧品に添加することもできる。可能な適する酵素阻害剤は、例えば、エステラーゼ阻害剤である。クエン酸トリアルキル、例えばクエン酸トリメチル、クエン酸トリプロピル、クエン酸トリイソプロピル、クエン酸トリブチル、および特に、クエン酸トリエチル(HydagenＲ CAT；Henkel KgaA、デュッセルドルフ／独国)が好ましい。これらの物質は、酵素活性を阻害し、こうして臭気の生成を減少させる。エステラーゼ阻害剤とみなすことができる他の物質は、ステロールスルフェートまたはホスフェート(例えば、ラノステロール、コレステロール、カンペステロール、スチグマステロールおよびシトステロールスルフェートまたはホスフェートなど)、ジカルボン酸およびそのエステル(例えば、グルタル酸、グルタル酸モノエチル、グルタル酸ジエチル、アジピン酸、アジピン酸モノエチル、アジピン酸ジエチル、マロン酸およびマロン酸ジエチルなど)、ヒドロキシカルボン酸およびそのエステル(例えば、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸または酒石酸ジエチルなど)、ならびに亜鉛グリシネートである。
【０２３８】
適する臭気吸収剤は、臭気生成化合物を吸収し、それを強固に保持する物質である。これらは、個々の成分の分圧を低下させ、こうしてその拡散速度を低下させる。これにより芳香物質が悪影響を受けないことが重要である。臭気吸収剤は、細菌に対して活性ではない。これらは、主成分として、例えば、特定のアビエチン酸誘導体またはラブダナムもしくはエゴノキの抽出物などの固定剤として当業者に知られている特定のほぼ中性臭気の芳香物質またはリシノール酸の錯亜鉛塩を含有する。芳香物質または芳香油は、遮蔽剤として働き、その遮蔽剤としての機能に加えて、その特定の芳香を脱臭剤に与える。芳香油には、例えば、天然および合成の芳香物質の混合物が含まれる。天然の芳香物質には、花、茎および葉、果実、果皮、根、枝、ハーブおよび草、針状葉および小枝ならびに樹脂およびバルサムの抽出物が含まれる。さらに、動物原料、例えばジャコウおよびビーバーを使用することもできる。通常の合成芳香化合物は、エステル、エーテル、アルデヒド、ケトン、アルコールおよび炭化水素型の生成物である。
【０２３９】
発汗防止剤は、エクリン汗腺の活性に影響を及ぼすことによって発汗を減少させ、こうして腋下湿気および体臭に対して作用する。通常、水性または無水の発汗防止配合物は、以下の成分を含有する：
(ａ)収斂性の成分；
(ｂ)油成分；
(ｃ)非イオン性乳化剤；
(ｄ)共乳化剤；
(ｅ)構造付与剤；
(ｆ)助剤(例えば、増粘剤または錯化剤など)；および／または
(ｇ)非水性溶媒(例えば、エタノール、プロピレングリコールおよび／またはグリセロールなど)。
【０２４０】
アルミニウム、ジルコニウムまたは亜鉛の塩が、主に適する収斂性の発汗防止剤の活性成分である。このような適する抗ヒドロ(antihydrotic)活性物質は、例えば、アルミニウムクロリド、水和アルミニウムクロリド、水和アルミニウムジクロリド、水和アルミニウムセスキクロリド、および、これらと例えば１,２-プロピレングリコールとの複合体、アルミニウムヒドロキシアラントイネート、アルミニウムクロリドタルトレート、アルミニウムジルコニウムトリクロロヒドレート、アルミニウムジルコニウムテトラクロロヒドレート、アルミニウムジルコニウムペンタクロロヒドレート、および、これらと例えばアミノ酸(例えばグリシン)との複合体である。
【０２４１】
また、発汗防止剤は、通常の油溶性および水溶性の助剤を少量で含有することもできる。このような油溶性の助剤は、例えば、以下のものである：
・抗炎症性、皮膚保護性または芳香性の精油；
・合成の皮膚保護活性物質；および／または
・油溶性の芳香油。
【０２４２】
通常の水溶性の添加剤は、例えば、防腐剤、水溶性芳香物質、ｐＨ調節剤、例えば緩衝混合物、水溶性増粘剤、例えば水溶性の天然または合成ポリマー、例えばキサンタンゴム、ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたは高分子量ポリエチレンオキシドである。
【０２４３】
クリムバゾール(Climbazole)、オクトピロックス(octopirox)および亜鉛ピリチオンを、ふけ防止剤として使用することができる。
【０２４４】
使用しうる皮膜形成剤は、例えば、キトサン、微結晶キトサン、第四級化キトサン、ポリビニルピロリドン、ビニルピロリドン／酢酸ビニルコポリマー、アクリル酸系列のポリマー、第四級化セルロース誘導体、コラーゲン、ヒアルロン酸およびその塩および同様の化合物である。
【０２４５】
水相のための膨潤剤として、モンモリロナイト、粘土無機物、ペムレン(PemulenＲ)およびカルボポール(Carbopol)型(Goodrich)を使用することができる。他の適するポリマーおよび膨潤剤は、R.Lochheadの概説[Cosm.Toil.、108、95 (1993)]中に見ることができる。
【０２４６】
ＵＶ光保護因子とは、例えば、室温で液体または固体であり、かつ、ＵＶ放射を吸収することができ、吸収したエネルギーをより長波長の放射(例えば熱)の形態で放出することができる有機物質(保護性光フィルター)であると解される。ＵＶ-Ｂフィルターは、油溶性または水溶性であることができる。油溶性物質として、以下のものを挙げることができる：
・３-ベンジリデンカンファーまたは３-ベンジリデンノルカンファーおよびその誘導体、例えば３-(４-メチルベンジリデン)カンファー(欧州特許ＥＰ０６９３４７１Ｂ１に記載)；
・４-アミノ安息香酸誘導体、好ましくは４-(ジメチルアミノ)安息香酸２-エチルヘキシルエステル、４-(ジメチルアミノ)安息香酸２-オクチルエステルおよび４-(ジメチルアミノ)安息香酸アミルエステル；
・桂皮酸のエステル、好ましくは４-メトキシ桂皮酸２-エチルヘキシルエステル、４-メトキシ桂皮酸プロピルエステル、４-メトキシ桂皮酸イソアミルエステル、２-シアノ-３,３-フェニル桂皮酸２-エチルヘキシルエステル(Octocrylene)；
・サリチル酸のエステル、好ましくはサリチル酸２-エチルヘキシルエステル、サリチル酸４-イソプロピルベンジルエステル、サリチル酸ホモメンチルエステル；
・ベンゾフェノンの誘導体、好ましくは２-ヒドロキシ-４-メトキシベンゾフェノン、２-ヒドロキシ-４-メトキシ-４'-メチルベンゾフェノン、２,２'-ジヒドロキシ-４-メトキシベンゾフェノン；
・ベンザルマロン酸のエステル、好ましくは４-メトキシベンザルマロン酸ジ-２-エチルヘキシルエステル；
・トリアジンの誘導体、例えば２,４,６-トリアニリノ-(ｐ-カルボ-２'-エチル-１'-ヘキシルオキシ)-１,３,５-トリアジンおよびオクチルトリアゾン(欧州特許出願公開ＥＰ０８１８４５０Ａ１に記載)またはジオクチルブタアミドトリアゾン(UVAsorbＲ HEB)；
・プロパン-１,３-ジオン、例えば１-(４-tert-ブチルフェニル)-３-(４'-メトキシフェニル)プロパン-１,３-ジオン；
・ケトトリシクロ(５.２.１.０)デカン誘導体(欧州特許ＥＰ０６９４５２１Ｂ１に記載)。
【０２４７】
水溶性物質には、以下のものが含まれる：
・２-フェニルベンズイミダゾール-５-スルホン酸、ならびに、そのアルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、アルキルアンモニウム、アルカノールアンモニウムおよびグルクアンモニウム塩；
・ベンゾフェノンのスルホン酸誘導体、好ましくは２-ヒドロキシ-４-メトキシベンゾフェノン-５-スルホン酸およびその塩；
・３-ベンジリデンカンファーのスルホン酸誘導体、例えば４-(２-オキソ-３-ボルニリデンメチル)ベンゼンスルホン酸および２-メチル-５-(２-オキソ-３-ボルニリデン)スルホン酸およびその塩。
【０２４８】
通常のＵＶ-Ａフィルターには、特に、ベンゾイルメタンの誘導体、例えば１-(４'-tert-ブチルフェニル)-３-(４'-メトキシフェニル)プロパン-１,３-ジオン、４-tert-ブチル-４'-メトキシジベンゾイルメタン(ParsolＲ 1789)、１-フェニル-３-(４'-イソプロピルフェニル)プロパン-１,３-ジオン、ならびに、エナミン化合物(独国特許出願公開ＤＥ１９７１２０３３Ａ１に記載)(BASF)などが含まれる。勿論、これらＵＶ-ＡおよびＵＶ-Ｂフィルターを、混合物として添加することもできる。
上記した可溶性物質に加えて、不溶性の光保護顔料(即ち、微細に分散させた、好ましくはナノ金属酸化物または塩)も、この目的に使用することができる。適する金属酸化物の例は、特に、酸化亜鉛および酸化チタン、さらに、鉄、ジルコニウム、ケイ素、マンガン、アルミニウムおよびセリウムの酸化物、ならびにこれらの混合物である。ケイ酸塩(タルク)、硫酸バリウムおよびステアリン酸亜鉛を、塩として添加することができる。これらの酸化物および塩は、皮膚ケアおよび皮膚保護エマルジョンおよび美容化粧品のための顔料の形態で既に使用されている。ここで、これら粒子は、１００ｎｍ未満、好ましくは５〜５０ｎｍ、より好ましくは１５〜３０ｎｍの平均直径を有しているべきである。これらは球形であってよいが、楕円形または他の形状の粒子を使用することもできる。また、顔料を、表面処理すること、即ち親水性化または疎水性化することもできる。その代表例は、被覆した二酸化チタン、例えば、Titandioxid Z 805(Degussa)およびEusolexＲ T2000(Merck)である。疎水性被覆剤には、好ましくはトリアルコキシオクチルシランまたはシメチコーンが含まれる。日光保護剤は、好ましくはミクロ顔料またはナノ顔料を含有する。ミクロ化した酸化亜鉛を使用するのが好ましい。他の適するＵＶ光保護フィルターは、P.Finkelの概説[SOEFW-Journal、第122巻 (1996)、第543頁]中に見ることができる。
【０２４９】
上記した両群の一次光保護物質に加えて、酸化防止剤型の二次光保護物質を使用することもできる。この二次光保護物質は、ＵＶ放射が皮膚に貫通したときに開始される光化学連鎖反応を遮断する。その代表例は、アミノ酸(例えば、グリシン、ヒスチジン、チロシン、トリプトファン)およびその誘導体、イミダゾール(例えば、ウロカニン酸)およびその誘導体、ペプチド、例えばＤ,Ｌ-カルノシン、Ｄ-カルノシン、Ｌ-カルノシンおよびその誘導体(例えば、アンセリン)、カロチノイド、カロテン(例えば、α-カロテン、β-カロテン、リコペン)およびその誘導体、クロロゲニン酸およびその誘導体、リポン酸およびその誘導体(例えば、ジヒドロリポン酸)、オーロチオグルコース、プロピルチオウラシルおよび他のチオール(例えば、チオレドキシン、グルタチオン、システイン、シスチン、シスタミン、ならびに、そのグリコシル-、ｎ-アセチル-、メチル-、エチル-、プロピル-、アミル-、ブチル-、およびラウリル-、パルミトイル-、オレイル-、γ-リノレイル-、コレステリル-およびグリセリル-エステル)およびその塩、ジラウリルチオジプロピオネート、ジステアリルチオジプロピオネート、チオジプロピオン酸およびその誘導体(エステル、エーテル、ペプチド、脂質、ヌクレオチド、ヌクレオシドおよび塩)、ならびに、スルホキシイミン化合物(例えば、ブチオニンスルホキシイミン、ホモシステインスルホキシイミン、ブチオニンスルホン、ペンタ-、ヘキサ-およびヘプタ-チオニンスルホキシイミン)[これらは、極めて少ない許容用量(例えば、ｐモル〜μモル／ｋｇ)で使用される]、さらに、(金属)キレート化剤(例えば、α-ヒドロキシ脂肪酸、パルミチン酸、フィチン酸、ラクトフェリン)、α-ヒドロキシ酸(例えば、クエン酸、乳酸、リンゴ酸)、フミン酸、胆汁酸、胆汁抽出物、ビリルビン、ビリベルジン、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡおよびその誘導体、不飽和脂肪酸およびその誘導体(例えば、γ-リノレン酸、リノール酸、オレイン酸)、葉酸およびその誘導体、ユビキノンおよびユビキノールおよびその誘導体、ビタミンＣおよびその誘導体(例えば、アスコルビルパルミテート、Ｍｇアスコルビルホスフェート、アスコルビルアセテート)、トコフェロールおよび誘導体(例えば、ビタミンＥアセテート)、ビタミンＡおよび誘導体(ビタミンＡパルミテート)およびベンゾイン樹脂のコニフェリルベンゾエート、ルチン酸およびその誘導体、α-グリコシルルチン、フェルラ酸、フルフリリデングルシトール、カルノシン、ブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、ノルジヒドログアヤク樹脂酸、ノルジヒドログアイアレチン酸、トリヒドロキシブチロフェノン、尿酸およびその誘導体、マンノースおよびその誘導体、スーパーオキシド-ジスムターゼ、亜鉛およびその誘導体(例えば、ＺｎＯ、ＺｎＳＯ4)、セレンおよびその誘導体(例えば、セレン-メチオニン)、スチルベンおよびその誘導体(例えば、スチルベンオキシド、トランス-スチルベンオキシド)、ならびに、これら列挙した活性物質の本発明に適する誘導体(塩、エステル、エーテル、糖、ヌクレオチド、ヌクレオシド、ペプチドおよび脂質)である。
【０２５０】
流れ特性を改善するために、ヒドロトロープ剤、例えばエタノール、イソプロピルアルコールまたはポリオールをさらに添加することもできる。考慮されるポリオールは、好ましくは２〜１５個の炭素原子および少なくとも２個のヒドロキシル基を有する。これらポリオールは、他の官能基、特にアミノ基を含有することができ、また、窒素で修飾することもできる。その代表例は、以下の通りである：
・グリセロール；
・アルキレングリコール、例えばエチレングリコール、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ヘキシレングリコール、および、ポリエチレングリコール(１００〜１０００ダルトンの平均分子量を有する)；
・１.５〜１０の自己縮合度を有する工業用オリゴグリセロール混合物、例えば４０〜５０重量％のジグリセロール含量を有する工業用ジグリセロール混合物；
・メチロール化合物、例えば特にトリメチロールエタン、トリメチロールプロパン、トリメチロールブタン、ペンタエリトリトールおよびジペンタエリトリトール；
・低級アルキルグルコシド、特にアルキル基に１〜８個の炭素原子を有するもの、例えばメチルおよびブチルグルコシド；
・５〜１２個の炭素原子を有する糖アルコール、例えばソルビトールまたはマンニトール；
・５〜１２個の炭素原子を有する糖、例えばグルコースまたはスクロース；
・アミノ糖、例えばグルカミン；
・ジアルコールアミン、例えばジエタノールアミンまたは２-アミノ-１,３-プロパンジオール。
【０２５１】
適する防腐剤は、例えば、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド溶液、パラベン、ペンタンジオールまたはソルビン酸およびKosmetikverordnung(化粧品指針)の付属書６のパートＡおよびＢに挙げられている他の群の物質である。
虫忌避剤には、Ｎ,Ｎ-ジエチル-ｍ-トルアミド、１,２-ペンタンジオールまたはブチルアセチルアミノプロピオン酸エチルが含まれる。
適する自己褐変剤には、ジヒドロキシアセトンが含まれる。
【０２５２】
芳香油として、天然および合成の芳香物質の既知混合物を挙げることができる。天然の芳香物質は、花(ユリ、ラベンダー、バラ、ジャスミン、ネロリ、イランイラン)、茎および葉(ゼラニウム、パチョリ、プチグレイン)、果実(アニス、コエンドロ、ヒメウイキョウ、ビャクシン)、果皮(ベルガモット、レモン、オレンジ)、根(ニクズク、アンゼリカ、セロリ、カルダモン、コスタス、アイリス、カルムス)、木(マツ、ビャクダン、ユソウボク、シーダー材、シタン)、ハーブおよび草(タラゴン、レモングラス、セージ、タイム)、針状葉および枝(トウヒ、モミ、マツ、低マツ)、樹脂およびバルサム(ガルバヌム、エレミ、ベンゾイン、ミルラ、乳香、オポパナックス)の抽出物である。さらに、動物原料、例えばジャコウおよびビーバーを使用することもできる。通常の合成芳香化合物は、エステル、エーテル、アルデヒド、ケトン、アルコールおよび炭化水素型の生成物である。
【０２５３】
着色剤として、例えば、刊行物「Kosmetische Faerbemittel」[Farbstoffkommission der Deutschen Forschungsgemeinschaft、Verlag Chemie、Weinheim、1984、p.81-106]に挙げられている、化粧品目的に認められかつ適している物質を使用することができる。通常、これらの着色剤は、混合物全体を基準に、０.００１〜０.１重量％の濃度で使用される。
【０２５４】
助剤および添加剤の合計含量は、製剤を基準に、１〜５０重量％、好ましくは５〜４０重量％であってよい。
製剤の製造は、通常の熱間法または冷間法を用いて行うことができ、好ましくは、相反転温度法によって行う。
【０２５５】
本発明のさらなる対象は、ケラチン繊維を染色するための酸化性着色剤であって、本発明に従って使用されるコリンオキシダーゼ、特に本発明のコリンオキシダーゼを含有する酸化性着色剤である。ケラチン繊維とは、羊毛、羽毛、皮膚、特にヒト毛髪を意味すると解される。
【０２５６】
本発明の酸化剤を製造するために、酸化性着色剤の前駆体を、コリンオキシダーゼと、空気からの酸素の排除下に、適する水性担体中で一緒に混合する。このような担体は、例えば、増粘した水性溶液、クリーム(エマルジョン)、ゲルまたは界面活性剤含有の発泡調製物、例えば、シャンプーまたは発泡エーロゾルまたは毛髪に適用するのに適する他の調製物である。
【０２５７】
基本的に、無水の粉末も担体として適する。この場合には、酸化性着色剤を、使用直前に水に分散または溶解させる。使用される担体の好ましい成分は、以下の通りである：
・湿潤剤および乳化剤、
・増粘剤、
・還元剤(酸化防止剤)、
・毛髪ケア添加剤、
・芳香物質、および
・溶媒(例えば、水、グリコールまたは低級アルコールなど)。
【０２５８】
適する湿潤剤および乳化剤は、例えば、陰イオン性、双性イオン性、両性および非イオン性の界面活性剤である。また、陽イオン性の界面活性剤を、特別の効果を得るために使用することもできる。
【０２５９】
適する増粘剤は、水溶性の高分子多糖誘導体またはポリペプチド、例えば、セルロースエーテルまたはデンプンエーテル、ゼラチン、植物ゴム、バイオポリマー(キサンタンゴム)、または水溶性合成ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、ポリアクリルアミド、ポリウレタン、ポリアクリレートなどである。
【０２６０】
さらに、界面活性剤含有の調製物を、極性脂質の可溶化または乳化によって増粘させることもできる。このような脂質は、例えば、１２〜１８個の炭素原子を有する脂肪アルコール、１２〜１８個の炭素原子を有する(遊離)脂肪酸、脂肪酸の部分グリセリド、脂肪酸のソルビトールエステル、脂肪酸アルカノールアミド、低オキシエチル化した脂肪酸または脂肪アルコール、レシチン、ステリンである。最後に、ゲル形態の担体を、水性石鹸ゲル(例えばオレイン酸アンモニウム)をベースに製造することもできる。
【０２６１】
毛髪に使用する前の着色剤の早すぎる酸化性発色を防止するために担体に添加される還元剤(酸化防止剤)は、例えば、硫酸ナトリウムまたはアスコルビン酸ナトリウムである。
【０２６２】
毛髪ケア成分には、例えば、脂、油またはワックス(乳化された形態にある)、構造付与添加剤、例えば、グルコースまたはピリドキシン、増白成分、例えば、水溶性タンパク質、タンパク質分解生成物、アミノ酸、水溶性の陽イオン性ポリマー、シリコーン、ビタミン、パンテノールまたは植物抽出物が含まれる。
【０２６３】
最後に、芳香物質および溶媒、例えばグリコール、例えば１,２-プロピレングリコール、グリセロール、グリコールエーテル、例えばブチルグリコール、エチルジグリコールまたは低級モノヒドロキシアルコール、例えばエタノールまたはイソプロパノールが、成分であることもできる。
【０２６４】
さらに、酸化性染料の安定性および使用特性を改善するために他の添加剤を存在させることもできる。これらは、例えば錯化剤、例えばＥＤＴＡ、ＮＴＡまたは有機ホスホネート、膨潤剤および浸透剤、例えば尿素、グアニジン、炭酸水素塩、緩衝塩、例えば塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウムまたはアルキルアンモニウム塩および所望により噴射剤である。
【０２６５】
本発明のさらなる対象は、本発明に従って使用しうるコリンオキシダーゼ、特に漂白または殺菌のための本発明のコリンオキシダーゼを含有する、口腔、歯または義歯のケアのための製剤、特に義歯浄化剤である。
【０２６６】
部分的な人工補欠物または義歯の場合には、義歯浄化タブレットまたは口腔洗剤または濯ぎ剤または歯ペーストとしての提供も適している。
【０２６７】
本発明の口腔、歯または義歯ケア製剤は、例えば、口腔洗剤、ゲル、液体歯浄化剤、固い歯ペースト、義歯浄化剤または義歯接着クリームとして利用することができる。
【０２６８】
このために、本発明に従って使用しうるコリンオキシダーゼ、特に本発明のコリンオキシダーゼは、適する担体中に導入することを必要とする。
【０２６９】
例えば、粉末形態の調製物または水-アルコール溶液は、担体として働くことができ、これは、口腔洗剤については０〜１５重量％のエタノール、１〜１.５重量％の香味油および０.０１〜０.５重量％の甘味剤を含有することができるか、あるいは、使用前に水で希釈される口腔洗剤濃厚物については１５〜６０重量％のエタノール、０.０５〜５重量％の香味油、０.１〜３重量％の甘味剤ならびに所望により他の添加剤を含有することができる。これら成分の濃度は、希釈後に使用時濃度が上記範囲の下限以下に低下しないように、十分に高いレベルで選択しなければならない。
【０２７０】
また、柔軟なプラスチック容器またはチューブから絞り出され、歯ブラシの助けを借りて歯に適用されるゲルならびに多かれ少なかれ流動性のペーストも、担体として働くことができる。このような製品は、比較的多量の湿潤剤および結合剤または安定剤および磨き剤を含有する。さらに、芳香油、甘味剤および水も、このような調製物中に含有される。
【０２７１】
湿潤剤には、例えば、グリセロール、ソルビトール、キシリット、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールまたはこれらポリオールの混合物、特に分子量が２００〜８００(４００〜２０００)であるポリエチレングリコールが含まれる。好ましい湿潤剤は、２５〜４０重量％の量のソルビトールである。
【０２７２】
アルカリ塩の形態、好ましくはナトリウムまたはカリウム塩の形態にある縮合リン酸塩を、沈殿防止剤および脱塩抑制剤として含有させることができる。これらリン酸塩の水性溶液は、加水分解作用のゆえにアルカリとして反応する。酸を添加したときに、本発明の口腔、歯および／または義歯ケア製剤のｐＨは、好ましい範囲である７.５〜９に維持される。
【０２７３】
種々の縮合リン酸塩または水和した縮合リン酸塩の混合物を使用することができる。しかし、特定した量である２〜１２重量％は無水の塩を指す。好ましい縮合リン酸塩は、組成物の５〜１０重量％の量のトリポリリン酸ナトリウムまたはカリウムである。
【０２７４】
好ましい活性成分は、虫歯を抑制するフッ素化合物、好ましくはフッ素の量が０.１〜０.５重量％であるフッ化物またはモノフルオロリン酸塩の群からの化合物である。適するフッ素化合物には、例えば、モノフルオロリン酸ナトリウム(Ｎａ2ＰＯ3Ｆ)、モノフルオロリン酸カリウム、フッ化ナトリウムまたはカリウム、フッ化第一スズまたは有機アミノ化合物のフッ化物が含まれる。
【０２７５】
結合剤および安定剤には、例えば天然および合成の水溶性ポリマー、例えばカラゲーナン、トラガント、グアール、デンプンおよびこれらの非イオン性誘導体、例えばヒドロキシプロピルグアール、ヒドロキシエチルデンプン、セルロースエーテル、例えばヒドロキシエチルセルロースまたはメチルヒドロキシプロピルセルロースが含まれる。寒天、キサンタンゴム、ペクチン、水溶性カルボキシビニルポリマー(例えば、CarbopolＲ型)、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、高分子量ポリエチレングリコール(分子量１０3〜１０6Ｄ)を使用することもできる。粘度を制御するのに適する他の物質には、層状ケイ酸塩、例えばモンモリロナイト、コロイド状膨潤性シリカ、例えばエーロゲルシリカまたは熱分解法シリカが含まれる。
【０２７６】
磨き成分には、この目的に知られている全ての磨き剤が含まれるが、好ましくは沈殿およびゲルシリカ、水酸化アルミニウム、ケイ酸アルミニウム、酸化アルミニウム、酸化アルミニウム三水和物、不溶性メタリン酸ナトリウム、ピロリン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、白亜、ヒドロキシアパタイト、ヒドロタルサイト、タルカム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム(VeegumＲ)、硫酸カルシウム、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、ケイ酸アルミニウムナトリウム、例えばゼオライトＡ、または有機ポリマー、例えばポリメタクリレートが含まれる。これら磨き剤は、好ましくは比較的少量で、例えば１〜１０重量％で使用される。
【０２７７】
本発明の歯および／または口腔ケア製品は、香味油および甘味剤の添加によって改善された官能品質を有することができる。香味油には、口腔、歯または義歯のケアのための製品において使用される全ての天然および合成の香味剤が含まれる。天然の香味剤は、薬物から単離したエーテル性油の形態または薬物から単離した個々の成分の形態で使用することができる。好ましくは、ペパーミント油、萎縮ミント油、アニス油、キャラウェイ油、ユーカリ油、ウイキョウ油、シナモン油、ゼラニウム油、セージ油、タイム油、マヨラナ油、バジル油、柑橘油、ヒメコウジ油の群からの少なくとも１つの香味油、あるいは、これらの油から単離され、合成により製造された１つまたはそれ以上の成分が含まれるべきである。上記した油の中で最も重要な成分は、例えば、メントール、カルボン、アネトール、シネオール、オイゲノール、シンナムアルデヒド、ゲラニオール、シトロネロール、リナロール、サルベン、チモール、テルピネン、テルピノール、メチルカビコールおよびサリチル酸メチルである。他の適する香味剤には、例えば、酢酸メンチル、バニリン、イオノン、酢酸リナリル、ロジノールおよびピペリトンが含まれる。天然の糖(例えば、スクロース、マルトース、ラクトースおよびフルクトース)または合成甘味剤(例えば、サッカリンナトリウム、シクラミン酸ナトリウムまたはアスパルターム)を、甘味付与のために使用することができる。
【０２７８】
使用しうる界面活性剤には、特にアルキル-および／またはアルケニル-(オリゴ)グリコシドが含まれる。これらの製造および界面活性剤としての使用は、例えば、米国特許ＵＳ-Ａ-３８３９３１８、ＵＳ-Ａ-３７０７５３５、ＵＳ-Ａ-３５４７８２８、独国特許出願公開ＤＥ-Ａ-１９４３６８９、ＤＥ-Ａ-２０３６４７２およびＤＥ-Ａ-３００１０６４ならびに欧州特許出願公開ＥＰ-Ａ-７７１６７から周知である。グリコシド残基に関しては、モノグリコシド(ｘ＝１)(ペントースまたはヘキソース残基が、４〜１６個の炭素原子を有する第一アルコールにグリコシド結合している)およびオリゴグリコシド(１０までのオリゴマー化度を有する)の両方が適している。この場合、このオリゴマー化度は、統計学的平均であり、上記のような工業製品において、これは同族体分布に基づくのが普通である。
【０２７９】
適するアルキル-および／またはアルケニル-(オリゴ)グリコシドは、好ましくは、式：ＲＯ(Ｃ6Ｈ10Ｏ)x-Ｈ [式中、Ｒは、８〜１４個の炭素原子を有するアルキルおよび／またはアルケニル基であり、ｘは平均値１〜４である]で示される。水素化Ｃ12/14ヤシ油アルコールに基づくアルキル-オリゴ-グルコシド(１〜３のＤＰを有する)が特に適している。アルキル-および／またはアルケニル-グリコシド界面活性剤は、非常に経済的に使用することができ、１重量％までの量で十分である。
【０２８０】
上記のアルキルグルコシド界面活性剤に加えて、他の非イオン性、両性および陽イオン性の界面活性剤を含有させることができる。これらは、例えば、脂肪アルコールポリグリコールエーテルスルフェート、モノグリセリドスルフェート、モノグリセリドエーテルスルフェート、モノアルキルおよび／またはジアルキルスルホスクシネート、脂肪酸イソチオネート、脂肪酸サルコシネート、脂肪酸タウリド、脂肪酸グルタメート、エーテルカルボン酸、脂肪酸グルカミド、アルキルアミドベタインおよび／またはタンパク質／脂肪酸縮合物(この後者はコムギタンパク質に基づくのが好ましい)。特に、主として水不溶性の香味油を溶解するときには、界面活性剤の群からの非イオン性溶媒の使用が必要になることもある。オキシエチル化脂肪酸グリセリド、オキシエチル化脂肪酸ソルビトール部分エステルまたはグリセロールもしくはソルビトールオキシエチレートの脂肪酸部分エステルが、この目的に特に適している。オキシエチル化脂肪酸グリセリドの群からの溶媒には、特に、１２〜１８個の炭素原子を有する直鎖脂肪酸のモノおよびジグリセリドへの、あるいは、ヒドロキシ脂肪酸(例えば、オキシステアリン酸またはリシノール酸)のトリグリセリドへのエチレンオキシド２０〜６０モルの付加生成物の全てが含まれる。他の適する溶媒には、オキシエチル化脂肪酸ソルビトール部分エステル、好ましくは、１２〜１８個の炭素原子を有する脂肪酸のソルビトールモノエステルおよびソルビトールジエステルへのエチレンオキシド２０〜６０モルの付加生成物が含まれる。また、グリセロールおよびソルビトールオキシエチレートの脂肪酸部分エステルも適する溶媒であり、１モルのグリセロールまたは１モルのソルビトールへのエチレンオキシド２０〜６０モルの付加生成物とＣ12-18脂肪酸のモノエステルおよびジエステルが好ましい。
【０２８１】
本発明の口腔、歯および／または義歯ケア製品は、所望により含有される香味油のための可溶化剤として、好ましくは、水素化または非水素化ヒマシ油(即ち、オキシステアリン酸またはリシノール酸のトリグリセリド)への、グリセロールモノおよび／またはジステアレートへの、あるいは、ソルビトールモノおよび／またはジステアレートへのエチレンオキシド２０〜６０モルの付加生成物を含有する。
【０２８２】
口腔、歯および義歯ケア製品への他の通常の添加剤の例には、以下のものが含まれる：
・顔料、例えば二酸化チタン、および／または着色剤；
・ｐＨ調節剤および緩衝剤、例えば、炭酸水素ナトリウム、クエン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、クエン酸、リン酸または酸塩、例えば、ＮａＨ2ＰＯ4；
・傷治癒および抗炎症物質、例えば、アラントイン、尿素、パンテノール、アズレンまたはカミツレ抽出物；
・他の沈殿防止物質、例えば有機ホスホネート、例えばヒドロキシエタンジホスホネートまたはアザシクロヘプタンジホスホネート；
・防腐剤、例えば、ソルビン酸塩、ｐ-ヒドロキシ安息香酸エステル；
・歯苔抑制剤、例えば、ヘキサクロロフェン、クロロヘキシジン、ヘキセチジン、トリクロサン、ブロモクロロフェン、フェニルサリチル酸エステル。
【０２８３】
具体的な態様において、本組成物は、口腔洗剤、濯ぎ剤、義歯浄化剤または歯接着剤である。
【０２８４】
また、本発明の好ましい義歯浄化剤、特に、義歯浄化タブレットおよび粉末のためには、口腔、歯および／または義歯ケア製品のために既に挙げた成分に加えて、過化合物、例えばペルオキシホウ酸塩、ペルオキシモノ硫酸塩または過炭酸塩も適している。これらは、漂白作用に加えて、同時に脱臭および／または殺菌するように働くという利点を有する。このような過化合物は、義歯浄化剤において、０.０１〜１０重量％、特に０.５〜５重量％で使用される。
【０２８５】
酵素、例えばプロテアーゼおよびカルボヒドラーゼも、タンパク質および炭水化物の分解のための適する成分である。ｐＨ値は、ｐＨ４〜１２の範囲内、特にｐＨ５〜１１の範囲内であってよい。
【０２８６】
他のさらなる添加剤が、義歯浄化タブレットのために必要である。これらは、例えば発泡剤、例えばＣＯ2放出物質、例えば炭酸水素ナトリウム、充填剤、例えば硫酸ナトリウムまたはデキストロース、潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、流れ調節剤、例えばコロイド状二酸化ケイ素、ならびに、顆粒化剤、例えば上記した高分子量ポリエチレングリコールまたはポリビニルピロリドンである。
【０２８７】
義歯固定剤を、粉末、クリーム、フィルムまたは液体として供することができ、これらは義歯の接着を助ける。
【０２８８】
天然および合成供給源からの物質が、活性物質として適している。アルギネートに加えて、天然物質には、植物ゴム、例えばアラビアゴム、トラガカントゴムおよびカラヤゴム、ならびに天然ゴムが含まれる。特に、アルギネートおよび合成物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、高分子量エチレンオキシドコポリマー、ビニルエーテル-マレイン酸コポリマーの塩、およびポリアクリルアミドが使用される。
【０２８９】
疎水性の基剤が、ペーストおよび液体製品のための添加剤として特に適している。これらは、特に炭化水素、例えば白色ワセリン(ＤＡＢ；German Pharmacopoeia)または鉱油である。
【０２９０】
本発明のさらなる対象は、本発明のコリンオキシダーゼ、コリンオキシダーゼ基質および化学発光試薬を含有する化学発光アッセイにおける光放射の生成のためのシグナル試薬である。コリンが好ましいコリンオキシダーゼ基質である。ルミノールが好ましい化学発光試薬である。
【０２９１】
化学発光試験は、医薬および生命科学の分野において非常に重要である。イムノアッセイおよびＤＮＡプローブ分析が特に重要である。酸素含有フリーラジカル(例えば、スーパーオキシド陰イオン、ヒドロキシルラジカル)および過酸化物(過酸化水素)を生成する本発明のコリンオキシダーゼの利点は、化学発光試薬(例えば、ルシゲニン、ルミノールおよびこれらの誘導体)との反応において、化学発光によって検出しうる長寿命の生成物を供することである。これらのコリンオキシダーゼ系は、化学発光試薬との反応後に比較的長寿命の光放射体を供する手段として、イムノアッセイ、イムノブロットまたはヌクレオチドプローブ分析による分析物の検出のためのトレーサーとして、特に有用である。
【０２９２】
本発明のさらなる対象は、ベタインの製造のため、食品および／または食品成分の製造のため、さらに、動物飼料および／または動物飼料成分の製造のための、本発明に従って使用されるコリンオキシダーゼ、特に本発明のコリンオキシダーゼの使用である。
【０２９３】
ベタインは、シャンプーおよび毛髪ケア製品ならびに洗剤におけるコンディショニング成分として重要である。また、これは肝臓に対して保護作用を有するので、動物飼料における食品補足物としても使用される。
【実施例】
【０２９４】
以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、これらは本発明を限定するものではない。  実施例１：微生物学的スクリーニング
豊富化培養物を土壌試料から得た。選択基準は、炭素の唯一の供給源としてコリンを含有する寒天プレートにおける増殖であった。Arthrobacter ＫＣ２菌株を候補の中から見い出し、ＤＳＭＺ(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)に寄託した(DSMZ-ID 96-878)。
【０２９５】
実施例２：Arthrobacter nicotianiae菌株(ＫＣ２)からのコリンオキシダーゼの単離
以下の組成を有する酵母培地において培養を行った：１.０ｇ／Ｌ Ｋ2ＨＰＯ4、０.５ｇ／Ｌ ＮＨ4Ｃｌ、０.２ｇ／Ｌ ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ、０.０１ｇ／Ｌ ＣａＣＩ2×２Ｈ2Ｏ、０.８ｍｌ 微量塩溶液、０.５ｇ／Ｌ 酵母エキス、５.０ｇ／Ｌ 塩化コリン、０.６５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ＝８.０に調整。
インキュベートを３０℃および１２０ｒｐｍで約２７時間行った。次いで、細胞を遠心によって収穫し、ガラスビーズ ビーター中でホモジナイズした(３０％細胞懸濁液)。第２の遠心の後、コリンオキシダーゼを含有する粗抽出物を、上清として得た。
【０２９６】
精製：
初めに、粗抽出物を、製造元が推奨するプロトコールに従って、ＰＤ-１０脱塩カラム(Amersham Pharmacia Biotech、Cat No.17-0851-01)により緩衝液Ａ(２０ｍＭ イミダゾール、ｐＨ＝７.０)中に緩衝化した。次いで、コリンオキシダーゼ含有溶液を、１６.５ｍｌのカラム容量を有するイオン交換カラム(Q-Sepharose、Amersham Pharmacia Biotech、Cat No.17-1014-01)により、２ｍｌ／分の流速および０.３ＭＰａの圧力下で分画し、次いで、同じ条件下に２カラム容量の緩衝液Ａを用いてリンスした。溶離を、上記の条件下に５カラム容量の緩衝液Ｂ(２０ｍＭ イミダゾール＋１Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ＝７.０)を用いて、直線ＮａＣｌ勾配(０〜１００％)で行った。
【０２９７】
コリンオキシダーゼ含有分画を、製造元が示唆するプロトコールに従って、ＰＤ-１０カラムにより濃縮し、緩衝液Ｃ(２０ｍＭ トリス-ＨＣｌ、ｐＨ＝７.６)中に緩衝化した。次いで、コリンオキシダーゼ含有溶液を、６ｍｌのカラム容量を有するイオン交換カラム(Resource Q、Amersham Pharmacia Biotech、Cat No.17-1179-01)により、６ｍｌ／分の流速および１.２ＭＰａの圧力下で分画し、同じ条件下に５カラム容量の緩衝液Ｃでリンスした。溶離を、上記の条件下に２０カラム容量の緩衝液Ｄ(２０ｍＭ トリス-ＨＣｌ＋１Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ＝７.６)を用いて、直線ＮａＣｌ勾配(０〜１００％)で行った。
【０２９８】
実施例３：遺伝子の単離
ＤＮＡプローブ(配列６)をＰＣＲにより創製した。プライマー(配列７および８)を、Arthrobacter globiformis由来のコリンオキシダーゼの既知配列に基づいて作成した(これらプライマーは遺伝子内に配置される)。このプローブは９００ｂｐからなり、得られたＤＮＡフラグメントから制限酵素(Ｆｓｐ１およびＳｔｙ１)で切断して得た。
【０２９９】
実施例４：コリンオキシダーゼＫＣ２のクローニング
使用したプライマーの配列：
前進プライマー(配列８)：
【化６】
0004652059.tif 000007
逆進プライマー(配列９)：
【化７】
0004652059.tif 000008
発現系：ベクター：
ベクター：ｐＥＴ２６ｂ＋(Novagenから；Cat No.69862-3)
宿主菌株：ＢＬ２１Ｇｏｌｄ(ＤＥ３)(Stratageneから；Cat No.230132)
【０３００】
実施例５：ハイブリッド酵素の創製
ハイブリッド遺伝子は、ＫＣ２のコリンオキシダーゼ遺伝子およびArthrobacter aurescensのコリンオキシダーゼ遺伝子からなる。Arthrobacter aurescens遺伝子の単離も、ＤＮＡプローブを用いて行った。
遺伝子の組成：
塩基１〜２６９：Arthrobacter aurescens由来
塩基２６７〜１１７１：ＫＣ２由来
塩基１１７〜１６２９：Arthrobacter aurescens由来
【０３０１】
実施例６：生化学的特性化
比活性：コリンオキシダーゼの活性試験(４-アミノアンチピリン／クロモトロプ酸)
１．溶液
以下の溶液が、コリンオキシダーゼ活性の測定に必要であった：
【表１】
0004652059.tif 000009
【０３０２】
２．方法
コリンオキシダーゼ溶液(１５０μｌ)に、２０ｍＭ ＮａＮ3溶液(３０μｌ)、Davis緩衝液ｐＨ＝９.５(４５μｌ)および２５０ｍＭ 塩化コリン(１５０μｌ)を添加し、混合した後に、この調製物を、８００ｒｐｍおよび３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、ペルオキシド試薬(５２５μｌ)およびペルオキシド溶液(７５μｌ)を添加し、混合物を室温で５分間インキュベートした。最後に、溶液の吸収を、波長λ＝６００ｎｍにおいて測定した。
活性は、上記の条件下で２０ｍＭ リン酸緩衝液(ｐＨ６.５)中の過酸化水素の適切な希釈系列を用いて確立しておいた検量線との比較によって決定した。
試料容量あたりのタンパク質の量は、製造元が示唆するプロトコールに従い、BCA Protein Assay Kit (Pierce Biotechnology、Cat.No.23227)を用いて測定し、ｍｇ／μｌで表した。比活性は、活性／ｍｇタンパク質と定義され、Ｕ／ｍｇまたはｍＵ／ｍｇ＝１０-3Ｕ／ｍｇで表される。ここで、ＫＣ２の比活性は、活性試験における試料容量を指し、粗抽出物(機械的分離)については平均で４１ｍＵ／ｍｇであり、精製後には１２３ｍＵ／ｍｇである。
【０３０３】
ｐＨ安定性：
コリンオキシダーゼは、ｐＨ範囲６〜１２、特にｐＨ８〜１０において安定である。
方法：
精製したオキシダーゼを、対応するｐＨのDavis緩衝液で１：３０に希釈し、３０℃および８００ｒｐｍで１時間インキュベートした。最後に、上記のように溶液(１５０μｌ)について活性試験を行った。
【０３０４】
温度プロフィール：
コリンオキシダーゼは、１０〜７０℃の温度範囲、特に２５〜４０℃の温度範囲において活性である。それは、１０〜５０℃の温度範囲、特に１０〜４０℃の温度範囲において安定である。
【０３０５】
方法：
規定の温度における活性を測定するために、精製したコリンオキシダーゼを、アジ化ナトリウム(最終濃度３ｍＭに相当する)を含むDavis緩衝液ｐＨ９.５で希釈した。活性の測定は、３７℃の代わりに対応する温度でインキュベートしたことを除き、上記プロトコールと同様にして、溶液(１５０μｌ)を用いて行った。
温度安定性を測定するために、精製したコリンオキシダーゼを、対応する温度で１時間の予備インキュベートをしておいた、アジ化ナトリウム(最終濃度３ｍＭに相当する)を含むDavis緩衝液ｐＨ９.５で希釈した。最後に、活性試験を、上記プロトコールに記載のように、溶液(１５０μｌ)を用いて行った。
【０３０６】
実施例７：コリンに対する改善された比活性を有する突然変異体の製造
ＫＣ２を、配列１７の構築物を生じさせたE.coli中で発現させた。これは、遺伝子の最初の部分における突然変異Ｃ２Ｔ、Ａ４ＧおよびＧ５Ｃならびにサイレント突然変異Ｃ１１８６Ａのゆえに異なっていた。即ち、配列１および配列１０において、アミノ酸Ｔ１ＭおよびＲ２Ａの相違が存在していた。
この突然変異体は、E.coli中のコリンオキシダーゼＫＣ２の変異体であり(配列１７)、同じ構築物において発現させた。
突然変異Ｃ１１８６Ａはサイレント突然変異であり、Arthrobacter中には見い出されない。しかし、これは、E.coli発現性コリンオキシダーゼ遺伝子(E.coli中ＫＣ２、ＫＣ２ Ｍ８５Ｖ、ＫＣ２ Ａ２７Ｖ、ＫＣ２ Ｍ８５Ｖ２、即ち、配列１７、１８、１９、２０)においては見い出される。
また、突然変異体ＫＣ２ Ｍ８５Ｖ２(配列２０)中の突然変異Ｃ６１２Ｔもサイレント突然変異であるが、これは改善された発現を与える。文献において、このような現象は、発現突然変異と称されている。本願の場合、ＫＣ２ Ｍ８５Ｖ２の改善された発現は、粗抽出物の比較的高い比活性によると認められる。
【０３０７】
ＫＣ２遺伝子(配列１７)の最初の１８塩基を切除することによって、ＫＣ２ｓ遺伝子(配列２１)を、配列１０から得た。配列２２をクローニングのために調製したが、これは配列２１とは塩基１(Ｔ１Ａ)において異なっていた。得られる遺伝子産物を配列１５に示す。
同様にして、「ＫＣ２ｓ変異体」を、記載した突然変異のそれぞれから調製することができる。
突然変異体の要約およびその特徴：
【表２】
0004652059.tif 000010
【０３０８】
実施例８：ＫＣ２ｓの調製(ＫＣ２ｓ)
使用したプライマーの配列
【化８】
0004652059.tif 000011
Arthrobacter nicotianaeのゲノムＤＮＡまたはコリンオキシダーゼＫＣ２遺伝子の増幅を、適切なＰＣＲ法を用いて行った。
クローニングは、ｐＥＴ２６ｂ＋ベクター(Novagenから；Cat No.69862-3)のＮｄｅｌ−ＨｉｎｄIII部位において行った。
形質転換は、E.coli BL21 Gold (DE3)(Stratagene、Cat No.230132)において、常法により行った。
【０３０９】
実施例９：洗浄の検討
洗浄マトリックス：以下の表に示される基本配合物
【表３】
0004652059.tif 000012
用量：４.４ｇ／Ｌ
汚れ：綿上の茶(ティー)、例えば、汚れ020 J Co(wfk Testgewebe GmbHから、Brueggen-Bracht、独国)、E-167(EMPA Testmaterialien AGから、St.Gallen、スイス国)またはHTB(Henkel KgaAから、Duesseldorf、独国)
時間：３０分間
処理中のｐＨ：１０(水酸化ナトリウムで調整)
評価：Ｌ値の測定
【０３１０】
方法：
試験布片(直径１０ｍｍ)を、２４ウェル微量滴定プレートにおいて、洗剤溶液(１ｍｌ)中、３７℃で３０分間、１００ｒｐｍで撹拌しながらインキュベートした。この洗剤は、２６５ｍＵ コリンオキシダーゼＫＣ２あるいは等しいタンパク質量の突然変異体またはＫＣ２ｓ(対応する調製物由来)を含有していた。基質濃度は、１００〜２００ｍＭ 塩化コリンであった。インキュベート中は、０.５〜１ｍｍの内径を有する管から各試料中に空気を導入した。各試料について２回測定を行い、コリンオキシダーゼを含まない対照の２回測定と比較した。
洗浄後に、洗浄した織物の白色度を、白色標準(ｄ/８、φ８ｍｍ、ＳＣＩ/ＳＣＥ；これを１００％に設定した)と比較して測定した。測定は、光設定が１０°／Ｄ６５の比色計(Minolta Cm508d)を用いて行った。得られた結果を、以下の表において、回復率(％)として、即ち、各出発値と共に白色標準と比較したときの割合(％)として示した。漂白効果は、ΔＬとして、即ち、同じ試験条件に付したコリンオキシダーゼを含む基本洗浄配合物とコリンオキシダーゼを含まない対照の間の回復の差として示した。
【０３１１】
【表４】
0004652059.tif 000013
ＴＡＥＤを含まない基本配合物における本発明のコリンオキシダーゼＫＣ２の存在が、試験した汚れに対して漂白効果を有することがわかるであろう。この効果は、ＴＡＥＤの添加によって強化された。
【０３１２】
【表５】
0004652059.tif 000014
本発明のコリンオキシダーゼＫＣ２突然変異体(ＫＣ２ Ｍ８５Ｖ、ＫＣ２ Ａ２７ＶおよびＫＣ２ Ｍ８５Ｖ２)ならびにＫＣ２ｓは、ＴＡＥＤを含む基本配合物において、茶(ティー)汚れに対してＫＣ２よりも顕著な漂白効果を示した。
【０３１３】
実施例１０：コリンオキシダーゼと通常の漂白系の漂白効果の比較
洗浄マトリックス：実施例９のものと同様
用量：４.４ｇ／Ｌ
汚れ：綿上の茶(ティー)、例えば、汚れ020 J Co(wfk Testgewebe GmbHから、Brueggen-Bracht、独国)、E-167(EMPA Testmaterialien AGから、St.Gallen、スイス国)またはHTB(Henkel KgaAから、Duesseldorf、独国)
時間：３０分間
処理中のｐＨ：１０(水酸化ナトリウムで調整)
評価：Ｌ値の測定
【０３１４】
方法：
試験布片(直径１０ｍｍ)を、２４ウェル微量滴定プレートにおいて、洗剤溶液(１ｍｌ)中、２７℃で３０分間、１００ｒｐｍで撹拌しながらインキュベートした。この洗剤は、２６５ｍＵ コリンオキシダーゼＫＣ２および２００ｍＭ 塩化コリンを含有していた。インキュベート中は、０.５〜１ｍｍの内径を有する管から各試料に空気を導入した。化学漂白剤の漂白効果を測定するために、過炭酸塩(９７ｍｇ)を、試験の直前に洗剤に添加した。これにより、漂白剤の早すぎる分解を防止した。各試料について２回測定を行い、コリンオキシダーゼまたは過炭酸塩を含まない対照の２回測定と比較した。
洗浄後に、洗浄した織物の白色度を、白色標準(ｄ/８、φ８ｍｍ、ＳＣＩ/ＳＣＥ；これを１００％に設定した)と比較して測定した。測定は、光設定が１０°／Ｄ６５の比色計(Minolta Cm508d)を用いて行った。得られた結果を、以下の表において、回復率(％)として、即ち、各出発値と共に白色標準と比較したときの割合(％)として示した。漂白効果は、ΔＬとして、即ち、同じ試験条件に付したコリンオキシダーゼを含む基本洗浄配合物とコリンオキシダーゼを含まない対照の間の回復の差として示した。
【０３１５】
【表６】
0004652059.tif 000015
ＴＡＥＤを含む基本配合物における本発明のコリンオキシダーゼＫＣ２の存在は、通常の方法で使用した化学漂白剤よりも、試験した汚れに対して強力な漂白効果を有することがわかるであろう。
【０３１６】
実施例１１：種々の漂白可能な汚れに対するコリンオキシダーゼの漂白効果の比較
洗浄マトリックス：実施例９および１０のものと同様
用量：４.４ｇ／Ｌ
汚れ：
綿上の茶(ティー)、例えば、汚れ020 J Co(wfk Testgewebe GmbHから、Brueggen-Bracht、独国)、E-167(EMPA Testmaterialien AGから、St.Gallen、スイス国)またはHTB(Henkel KGaAから、Duesseldorf、独国)
綿上のクロイチゴ、例えば、汚れ041 BB Co(wfk Testgewebe GmbHから、Brueggen-Bracht、独国)、またはHBBB(Henkel KGaAから、Duesseldorf、独国)
綿上の赤ワイン、例えば、E-114(EMPA Testmaterialien AGから、St.Gallen、スイス国)またはHRB(Henkel KGaAから、Duesseldorf、独国)
時間：３０分間
処理中のｐＨ：１０(水酸化ナトリウムで調整)
評価：Ｌ値の測定
【０３１７】
方法：
試験布片(直径１０ｍｍ)を、２４ウェル微量滴定プレートにおいて、洗剤溶液(１ｍｌ)中、３７℃で３０分間、１００ｒｐｍで撹拌しながらインキュベートした。この洗剤は、２６５ｍＵ コリンオキシダーゼＫＣ２および２００ｍＭ 塩化コリンを含有していた。インキュベート中は、０.５〜１ｍｍの内径を有する管から各試料に空気を導入した。各試料を、各汚れについて２回測定し、コリンオキシダーゼを含まない対照の２回測定と比較した。
洗浄後に、洗浄した織物の白色度を、白色標準(ｄ/８、φ８ｍｍ、ＳＣＩ/ＳＣＥ；これを１００％に設定した)と比較して測定した。測定は、光設定が１０°／Ｄ６５の比色計(Minolta Cm508d)を用いて行った。得られた結果を、以下の表において、回復率(％)として、即ち、各出発値と共に白色標準と比較したときの割合(％)として示した。各汚れに対する漂白効果は、ΔＬとして、即ち、同じ試験条件に付したコリンオキシダーゼを含む基本洗浄配合物とコリンオキシダーゼを含まない対照の間の回復の差として示した。
【０３１８】
【表７】
0004652059.tif 000016
記載した条件下で、本発明のコリンオキシダーゼＫＣ２が、種々の汚れに対して漂白効果を有することがわかるであろう。
【０３１９】
配列：
配列１：Arthrobacter nicotianiae (ＫＣ２、DSMZ-ID 96-878)由来のコリンオキシダーゼ
【化９】
0004652059.tif 000017
【０３２０】
配列２：Arthrobacter aurescens (ATCC 13344)由来のコリンオキシダーゼ
【化１０】
0004652059.tif 000018
【０３２１】
配列３：ハイブリッドのコリンオキシダーゼ
【化１１】
0004652059.tif 000019
【０３２２】
配列４：核酸配列、Arthrobacter nicotianiae (ＫＣ２、DSMZ-ID 96-878)由来のコリンオキシダーゼ
【化１２】
0004652059.tif 000020
【０３２３】
配列５：核酸配列、Arthrobacter aurescens (ATCC 13344)由来のコリンオキシダーゼ
【化１３】
0004652059.tif 000021
【０３２４】
配列６：核酸配列、ハイブリッドのコリンオキシダーゼ
【化１４】
0004652059.tif 000022
【０３２５】
配列７：核酸配列、コリンオキシダーゼの単離のためのプローブ
【化１５】
0004652059.tif 000023
【０３２６】
配列８：核酸配列、コリンオキシダーゼのクローニングのためのプライマー
【化１６】
0004652059.tif 000024
【０３２７】
配列９：核酸配列、コリンオキシダーゼのクローニングのためのプライマー
【化１７】
0004652059.tif 000025
【０３２８】
【表８】
0004652059.tif 000026
【配列表】
0004652059000001.app