(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0004707393.tif 000073
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ７は、それぞれ独立して、水素原子またはアルキルであり；
Ｒ４およびＲ６は、それぞれ独立して、アルキルであり；
Ｒ５は、水素原子またはＰ（Ｏ）（ＯＲａ）２であり、この際Ｒａは、水素原子またはアルキルであり；
Ｔは、水素原子であり；
Ｘは、ＮＲｂ（この際Ｒｂは水素原子である）であり；かつ、
Ｙは、
【化２】
0004707393.tif 000074
からなる群から選択される５員のヘテロアリールであり、この際Ｚは、ＯまたはＮＨであり；ｍおよびｎは、それぞれ独立して、０または１であり；ｐは、０、１または２であり；ｑは、１、２、３または４であり；かつ、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、−ＯＲｄ、−ＮＲｄＲｄ’、−ＳＲｄ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＳＯ２Ｒｄ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｄＲｄ’、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒｄまたは−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲｄであり、この際ＲｄおよびＲｄ’は、それぞれ独立して、水素原子またはアルキルであり、
上記のアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクリルは、置換体および非置換体の双方を含み、前記置換体は、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシル、アミノ、メルカプト、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクリル、ヘテロシクリル、アルキルオキシ、アリールオキシ、アルクスルファニル、アリールスルファニル、アルキルアミノ、アリールアミノ、ジアルキルアミノ、ジアリールアミノ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、アルキルカルボキシル、アリールカルボキシル、ヘテロアリールカルボキシル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アルキルカルバミド、アリールカルバミド、ヘテロカルバミド、アルキルカルバミル、アリールカルバミル、およびヘテロカルバミルからなる群から選択される置換基により置換され、前記置換基としてのアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、シクリルおよびヘテロシクリルは、それぞれ必要に応じて、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシル、アミノ、メルカプト、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルキルオキシ、アリールオキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルキルカルボキシル、アリールカルボキシル、アルキルオキシカルボニルまたはアリールオキシカルボニルにより置換されていてもよい、
の化合物。
【請求項２】
前記Ｒ１、前記Ｒ２、前記Ｒ３および前記Ｒ７が、それぞれ水素原子である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記Ｒ５が水素原子である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記Ｒ５がＰ（Ｏ）（ＯＨ）２である、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
前記Ｒ４および前記Ｒ６がそれぞれメチルである、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
前記Ｒ５が水素原子である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
前記Ｙが：
【化３】
0004707393.tif 000075
である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
前記Ｙが：
【化４】
0004707393.tif 000076
である、請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
前記Ｙが：
【化５】
0004707393.tif 000077
である、請求項６に記載の化合物。
【請求項１０】
前記Ｙが：
【化６】
0004707393.tif 000078
である、請求項６に記載の化合物。
【請求項１１】
前記ｍが１である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
前記ｎが０である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記ｎが１である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１４】
前記Ｒ９がＣ（Ｏ）ＯＲｄである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
前記ｍが０である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物の有効量、および製薬上許容しうる担体を含む、薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
背景
ポドフィロトキシンは、植物のマンドレークから抽出される、天然に存在する化合物である。ポドフィロトキシンの誘導体（例えば、エトポシドやテニポシド）のいくつかは、癌の化学療法に用いるために研究されている（例えば、Ｊａｒｄｉｎｅ  （１９８０）  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｍｏｄｅｌｓ；  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  ｐ  ３１９；  Ｉｓｓｅｌｌ  （１９８２）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ７：  ７３；および、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９５）  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｎａｌｙｓｉｓ．  ３：２０９を参照）。これらの誘導体は、ＤＮＡが切断されてトポイソメラーゼＩＩに共有結合したままのトポイソメラーゼＩＩ−ＤＮＡ複合体を安定化することによって、トポイソメラーゼＩＩを阻害する。かような阻害により、細胞は死滅する。例えば、Ｏｓｈｅｒｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  ＢｉｏＥｓｓａｙｓ  １３：  ２６９；  Ａｌｔｏｎ  ＆  Ｈａｒｒｉｓ  （１９９３）  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｈａｅｍａｔｏｌ．  ８５：  ２４１−２４５，  Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ３９：  １３８３；  ＭａｃＤｏｎａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  ＤＮＡ  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ；  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照。上述したポドフィロトキシン誘導体には、薬剤耐性の進行、骨髄抑制および低い経口バイオアベイラビリティなどのいくつかの制限が存在することが知られている。よって、同様にトポイソメラーゼＩＩを標的とする新規な化合物をの同定は、癌または癌に関連する症状を治療または予防するための新規な治療法につながる。
【発明の開示】
【０００２】
概要
本発明は、部分的には、抗癌活性を有する新規なポドフィロトキシン誘導体の発見に基づくものである。
【０００３】
一形態において、本発明は、４環状縮合環を含む式（Ｉ）：
【０００４】
【化１】
0004707393.tif 000002
【０００５】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ７は、それぞれ独立して、水素原子またはアルキルであり；Ｒ４およびＲ６は、それぞれ独立して、アルキルであり；Ｒ５は、水素原子またはＰ（Ｏ）（ＯＲａ）２であり、この際Ｒａは、水素原子またはアルキルであり；Ｔは、水素原子であるか、またはＸと一緒になって＝Ｎであり；Ｘは、結合、Ｏ、Ｓ、またはＮＲｂ（この際Ｒｂは水素原子またはアルキルである）であるか；あるいはＴと一緒になって＝Ｎであり；かつ、Ｙは、必要に応じて１以上のハロゲン、アルキル、シクリル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、−ＯＲｃ、−ＮＲｃＲｃ’、−ＳＲｃ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＳＯ２Ｒｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｃ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｃＲｃ’、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒｃ、−（ＣＨ２）ｑＯＰＯ３Ｈ２、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＯＲｃ”および：
【０００６】
【化２】
0004707393.tif 000003
【０００７】
により置換されていてもよい、５員のヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり、この際ＲｃおよびＲｃ’は、それぞれ独立して、水素原子またはアルキルであり；Ｒｃ”は、水素原子、アルキルまたはシリルであり；Ｚは、ＯまたはＮＨであり；ｍおよびｎは、それぞれ独立して、０または１であり；ｐは、０、１または２であり；ｑは、１、２、３または４であり；かつ、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立して、水素原子、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、−ＯＲｄ、−ＮＲｄＲｄ’、−ＳＲｄ、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＳＯ２Ｒｄ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｄ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｄＲｄ’、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒｄまたは−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲｄであり、この際ＲｄおよびＲｄ’は、それぞれ独立して、水素原子またはアルキルである、
を有する化合物を特徴とする。
【０００８】
上述した化合物について、これらの化合物のサブセットでは、ＸがＮＨであり、Ｔが水素原子である。前記化合物の他のサブセットでは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ７がそれぞれ水素原子であり；あるいは、Ｒ４およびＲ６がそれぞれメチルであり；あるいは、Ｒ５が水素原子である。
【０００９】
さらに、前記化合物の他のサブセットでは、Ｙが、：
【００１０】
【化３】
0004707393.tif 000004
【００１１】
で置換されたヘテロアリールである。いくつかの実施形態においては、ｍが１である。これらの化合物では、前記へテロアリールは：
【００１２】
【化４】
0004707393.tif 000005
【００１３】
であってもよく；ＸはＮＨであってもよく；Ｔは水素原子であってもよく；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ７はそれぞれ水素原子であってもよく；Ｒ４およびＲ６はそれぞれメチルであってもよく；そして、Ｒ５は水素原子であってもよい。他の実施形態においては、ｍは０である。これらの化合物では、それぞれ、前記へテロアリールは：
【００１４】
【化５】
0004707393.tif 000006
【００１５】
であってもよく；ＸはＮＨであってもよく；Ｔは水素原子であってもよく；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ７はそれぞれ水素原子であってもよく；Ｒ４およびＲ６はそれぞれメチルであってもよく；そして、Ｒ５は水素原子であってもよい。
【００１６】
特記しない限り、本明細書中に記載されるアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、シクリルおよびヘテロシクリルは、置換体および非置換体の双方を含む。「置換」の語は、それぞれが水素原子に置き換わる１以上の置換基（同一でも異なってもよい）を意味する。置換基の例としては、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシル、アミノ、メルカプト、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、シクリル、ヘテロシクリル、アルキルオキシ、アリールオキシ、アルクスルファニル、アリールスルファニル、アルキルアミノ、アリールアミノ、ジアルキルアミノ、ジアリールアミノ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、アルキルカルボキシル、アリールカルボキシル、ヘテロアリールカルボキシル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アルキルカルバミド、アリールカルバミド、ヘテロカルバミド、アルキルカルバミル、アリールカルバミル、ヘテロカルバミルが挙げられ、アルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、シクリルおよびヘテロシクリルは、それぞれ必要に応じて、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ヒドロキシル、アミノ、メルカプト、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルキルオキシ、アリールオキシ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルキルカルボキシル、アリールカルボキシル、アルキルオキシカルボニルまたはアリールオキシカルボニルにより置換されていてもよい。
【００１７】
本明細書中で用いられる場合、「アルキル」の語は、１〜６個の炭素原子を含有する直鎖状または分枝状のアルキル基を意味する。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルおよびｎ−ペンチルが挙げられる。
【００１８】
「アルケニル」の語は、２〜６個の炭素原子を含有する直鎖状または分枝鎖状のアルケニル基を意味する。アルケニル基の例としては、ビニル、アリル（２−プロペニル）、ジメチルアリルおよびブテニルが挙げられる。
【００１９】
「アリール」の語は、少なくとも１つの芳香族環を有する炭化水素環システム（単環〜３環）を意味する。アリール基の例としては、以下に制限されないが、フェニル、ナフチルおよびアントラセニルが挙げられる。
【００２０】
「ヘテロアリール」の語は、環の一部として炭素原子に代えて少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、Ｏ、ＮまたはＳ）を含有する芳香族環を少なくとも１つ有する炭化水素環システム（単環〜３環）を意味する。ヘテロアリール基の例としては、以下に制限されないが、フリル、ピロリル、ピラゾリル、チオフェニル、チアジアゾリル、テトラゾリル、トリアゾリル、トリアジニル、チエニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ベンズイミダゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、キナゾリニル、インドリル、インジアゾリル、イソインドリル、ベンゾトリアゾリル、プリニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソチアゾリルおよびベンゾチアジアゾリルが挙げられる。
【００２１】
「５員のヘテロアリール」の語は、１以上のヘテロ原子（例えば、Ｏ、ＮまたはＳ）を含む５個の環原子を有する芳香族環を少なくとも１つ含有する環システム（単環〜３環）を意味する。５員のヘテロアリールの例としては、以下に制限されないが、フリル、ピロリル、ピラゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、トリアゾリル、チエニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、プリニル、ベンゾチアゾリルおよびベンゾチアジアゾリルが挙げられる。
【００２２】
「シクリル」の語は、３〜８個の環員炭素を含有する炭化水素環システムを意味する。シクリルには、飽和および不飽和の環が含まれる。シクリル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、メチルシクロヘキシルおよびシクロヘプチルが挙げられる。
【００２３】
「ヘテロシクリル」の語は、環の一部として炭素原子に代えて少なくとも１個のへテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）を含む３〜８個の環員を含有する炭化水素環システムを意味する。ヘテロシクリルには、飽和および不飽和のヘテロ環が含まれる。ヘテロシクリル基の例としては、以下に制限されないが、ピペリジル、モルホリニル、ピラニル、ジオキサニルおよびピペラジニルが挙げられる。
【００２４】
本発明の化合物の例を以下に記載する。
【００２５】
下記式：
【００２６】
【化６】
0004707393.tif 000007
【００２７】
を有する化合物１〜２１０。
【００２８】
【表１−１】
0004707393.tif 000008
【００２９】
【表１−２】
0004707393.tif 000009
【００３０】
【表１−３】
0004707393.tif 000010
【００３１】
【表１−４】
0004707393.tif 000011
【００３２】
【表１−５】
0004707393.tif 000012
【００３３】
【表１−６】
0004707393.tif 000013
【００３４】
【表１−７】
0004707393.tif 000014
【００３５】
【表１−８】
0004707393.tif 000015
【００３６】
【表１−９】
0004707393.tif 000016
【００３７】
【表１−１０】
0004707393.tif 000017
【００３８】
【表１−１１】
0004707393.tif 000018
【００３９】
【表１−１２】
0004707393.tif 000019
【００４０】
【表１−１３】
0004707393.tif 000020
【００４１】
【表１−１４】
0004707393.tif 000021
【００４２】
上記のポドフィロトキシン誘導体には、当該化合物自身のほか、適用可能であれば、その塩およびそのプロドラッグも含まれる。当該塩は、例えば、化合物上の正に荷電した置換基（例えば、アミノ）とアニオンとの間で形成される。適当なアニオンとしては、以下に制限されないが、クロライド、ブロマイド、イオダイド、サルフェート、ニトレート、ホスフェート、シトレート、メタンスルホネート、タートレート、トリフルオロアセテートおよびアセテートが挙げられる。同様に、化合物上の負に荷電した置換基（例えば、カルボキシレート）は、カチオンとともに塩を形成しうる。適当なカチオンとしては、以下に制限されないが、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、および、テトラメチルアンモニウムイオンなどのアンモニウムカチオンが挙げられる。プロドラッグの例としては、患者への投与時に上記のポドフィロトキシン誘導体を提供しうるエステルおよび他の製薬上許容しうる誘導体が挙げられる。
【００４３】
加えて、上述したポドフィロトキシン誘導体は、１以上の二重結合または１以上のさらなる不斉中心を有してもよい。かような化合物は、ラセミ化合物、ラセミ混合物、単一のエナンチオマー、単一のジアステレオマーおよびジアステレオマー混合物として存在しうる。
【００４４】
本発明の他の形態は、製薬上許容しうる担体および、少なくとも１つの上記のポドフィロトキシン化合物の有効量を含有する薬剤組成物に関する。
【００４５】
本発明のさらなる形態は、癌（例えば、上皮性悪性腫瘍または非上皮性悪性腫瘍）の治療方法に関する。当該方法は、１以上の上記のポドフィロトキシン誘導体の有効量を、投与を必要とする患者に対して投与することを含む。
【００４６】
本明細書中で用いられる場合、「癌」の語は、細胞性腫瘍を意味する。癌細胞は、自己増殖能、すなわち、細胞増殖の急激な増進によって特徴付けられる異常な状態または状況、を有する。癌の語は、組織病理学的タイプまたは侵襲の段階に関係なく、全てのタイプの癌性増殖または発癌プロセス、転移性組織または悪性形質転換した細胞、組織もしくは器官を含むものとする。癌の例としては、以下に制限されないが、白血病、肉腫、骨肉腫、リンパ腫、黒色腫、子宮癌、皮膚癌、精巣癌、胃癌、膵臓癌、腎臓癌、乳癌、前立腺癌、結腸直腸癌、頭頸部癌、脳腫瘍、食道癌、膀胱癌、副腎皮質癌、肺癌、気管支癌、子宮内膜癌、鼻咽頭癌、子宮頸部癌もしくは肝臓癌、または原発巣不明の癌のような上皮性悪性腫瘍および非上皮性悪性腫瘍が挙げられる。さらに、癌が薬剤耐性の表現型と関連していてもよい。
【００４７】
上記の１以上のポドフィロトキシン誘導体を含有し、癌の治療に用いるための組成物、および、癌を治療するための医薬の製造のための当該組成物の使用もまた、本発明の技術的範囲に含まれる。
【００４８】
本発明の他の特徴または利点は、以下のいくつかの実施形態の詳細な説明および添付の特許請求の範囲からも明らかであろう。
【００４９】
詳細な説明
上記のポドフィロトキシン誘導体は、本技術分野において周知の方法により、および本明細書に開示の合成経路により、調製されうる。例えば、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２）  Ｙａｏｘｕｅ  Ｘｕｅｂａｏ  ２７：  ６５６；  Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８９）  Ｊ．  Ｎａｔ．  Ｐｒｏｄ．  ５２：  ６０６；および、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２０００）  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １１：  ５０５を参照。例えば、下記のスキームに示すように、出発物質としてポドフィロトキシンを用いてもよい。ポドフィロトキシンを臭素化することにより、中間体である４’−Ｏ−デメチル−４β−ブロモ−４−デスオキシポドフィロトキシンが得られる（Ｋｕｈｎ，  ｅｔ  ａｌ．  （１９６９）  Ｈｅｌｖ．  Ｃｈｉｍ．  Ａｃｔａ  ５２：  ９４４）。当該中間体は、下記のスキームに示すように、弱塩基（例えば、炭酸バリウム）の存在下でアミノ置換ヘテロアリールまたはヘテロシクリル側鎖と反応し、本発明のポドフィロトキシン誘導体を生成する（スキーム中のＹは、概要の欄で定義した通りである）。前記アミノ置換ヘテロアリールまたはヘテロシクリル部分は、環化反応後にその置換基で修飾することにより合成されうる。
【００５０】
【化７】
0004707393.tif 000022
【００５１】
あるいは、本発明の化合物は、上記の中間体をメルカプトまたはヒドロキシルで置換されたヘテロアリールとカップリングさせることにより、合成されうる。
【００５２】
上記の合成経路において用いられる化学物質としては、例えば、溶媒、試薬、触媒、保護基および脱保護基試薬が挙げられうる。上記の方法はまた、適当な保護基を付加または除去して最終的にポドフィロトキシン誘導体の合成を達成する目的で、本明細書中で具体的に説明する段階の前または後に、さらなる段階を含んでもよい。さらに、所望の化合物を得るためには、種々の合成段階が、異なる配列または順序で行われてもよい。適用可能なポドフィロトキシン誘導体の合成に有用な合成化学的変換および保護基の方法論（保護および脱保護）は本技術分野において周知であり、例えば、Ｒ．  Ｌａｒｏｃｋ，  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，  ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  （１９８９）；  Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ３ｒｄ  Ｅｄ．，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  （１９９９）；  Ｌ．  Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．  Ｆｉｅｓｅｒ，  Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  （１９９４）；および、Ｌ．  Ｐａｑｕｅｔｔｅ，  ｅａ．，  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｊｏｈｎ  ２０  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  （１９９５）、並びにこれらの続版に記載のものが挙げられる。
【００５３】
こうして合成されたポドフィロトキシン化合物は、カラムクロマトグラフィ、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）、高速フラッシュクロマトグラフィ（ＨＰＦＣ）または再結晶化などの方法によりさらに精製されうる。
【００５４】
本発明のポドフィロトキシン誘導体のリン酸プロドラッグは、米国特許第４，９０４，７６８号および米国特許第５，６０６，０３９号に記載の方法に従ってさらに調製される。当該プロドラッグは、適当な溶媒（例えば、アセトニトリル）中、有機塩基（例えば、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン）の存在下で、ポドフィロトキシン誘導体をオキシ塩化リンと反応させることにより合成される。
【００５５】
本発明は、癌の治療方法を特徴とする。当該方法は、概要の欄に記載した１以上のポドフィロトキシン誘導体の有効量および製薬上許容しうる担体を、投与を必要とする患者に対して投与することを含む。「治療」の語は、癌、癌の症状、もしくは癌の素因を治療し、治癒し、軽減させ、緩和し、変化させ、修復し、改善し、またはそれに対して影響を及ぼす目的で、癌、癌の症状、もしくは癌の素因を有する患者に対して、前記ポドフィロトキシン誘導体を含む組成物を塗布または投与することとして定義される。「有効量」は、投与を必要とする患者に対する投与時に、当該患者に対して治療効果を与えるのに必要とされるポドフィロトキシン化合物の量として定義される。ポドフィロトキシン誘導体の有効量は、約０．２ｍｇ／Ｋｇ〜約６０ｍｇ／Ｋｇの範囲で変動しうる。有効投与量はまた、当業者によっても理解されるように、投与経路、賦形剤の使用、および、他の抗癌剤の使用または放射線療法などの他の治療法の併用に応じて変動しうる。他の抗癌剤の例としては、パクリタキセル、ドシタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、フルオロウラシル、メルファラン、シスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、マイトマイシンＣ、メトトレキサート、ミトキサントロン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、イフォスファミド、テニポシド、エトポシド、ブレオマイシン、ロイコボリン、シタラビン、ダクチノマイシン、インターフェロンα、ストレプトゾシン、プレドニゾロン、プロカルバジン、イリノテカン、トポテカン、コロニー刺激因子、顆粒球／単球コロニー刺激因子、およびメシル酸イマチニブが挙げられる。
【００５６】
本発明の方法を実施するために、ポドフィロトキシン誘導体は、経口で、非経口で、吸入スプレーによって、または移植リザーバを介して投与されうる。本明細書中で用いられる場合、「非経口」の語は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、クモ膜下内、病巣内および頭蓋内への注射または注入技術を含む。
【００５７】
経口投与用の組成物は、経口投与可能な任意の剤形であればよく、以下に制限されないが、錠剤、カプセル、乳剤および水性懸濁液、分散液および溶液が挙げられる。錠剤用に一般的に用いられる担体としては、乳糖およびトウモロコシデンプンが挙げられる。錠剤には、ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤もまた、一般的に添加される。カプセルとしての経口投与に有用な希釈剤としては、乳糖および乾燥トウモロコシデンプンが挙げられる。水性懸濁液または乳剤を経口投与する場合、活性成分は乳化剤または懸濁化剤と併せて油相中に懸濁または溶解されうる。必要であれば、ある種の甘味料、香料または着色料が添加されうる。
【００５８】
適当な分散剤または湿潤剤（例えば、トゥイーン８０など）および懸濁化剤を用い、本技術分野において周知の技術に従って、滅菌注射用組成物（例えば、水性または油性の懸濁液）も調製されうる。滅菌注射用製剤はまた、非毒性の非経口で適用可能な希釈剤または溶媒中での滅菌注射用の溶液または懸濁液（例えば、１，３−ブタンジオール溶液）であってもよい。用いられうる適当なベヒクルおよび溶媒としては、マンニトール、水、リンゲル溶液および等張食塩水が挙げられる。さらに、溶媒または懸濁化媒体としては、滅菌された不揮発性油（例えば、合成モノ−または全グリセリド）が一般的に用いられる。注射剤の調製においては、オレイン酸およびそのグリセリド誘導体などの脂肪酸が有用であり、オリーブ油またはヒマシ油（特にはこれらのポリオキシエチレン化型）などの製薬上許容しうる天然油についても同様である。これらの油剤または懸濁液はまた、長鎖のアルコール希釈剤もしくは分散剤、またはカルボキシメチルセルロースもしくは同様の分散剤を含みうる。
【００５９】
吸入組成物は、製剤の技術分野において周知の技術に従って調製され、ベンジルアルコールまたは他の適当な保存剤、バイオアベイラビリティを向上させるための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／または本技術分野において周知の他の可溶化剤または分散剤を用いることによって、食塩水溶液として調製されてもよい。
【００６０】
薬剤組成物中の担体は、製剤中の活性成分と適合性で（および好ましくは、当該製剤を安定化しうる）、かつ治療される患者に対して有害ではないという意味で「許容しうる」ものでなくてはならない。例えばシクロデキストリン（ポドフィロトキシン誘導体とともに、特定の、より溶解性の高い複合体を形成する）などの可溶化剤は、ポドフィロトキシン誘導体を輸送するための薬剤添加剤として用いられうる。他の担体の例としては、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、ラウリル硫酸ナトリウムおよびディー  アンド  シー  イエロー（Ｄ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ）＃１０が挙げられる。
【００６１】
本発明のポドフィロトキシン誘導体は、インビトロアッセイにより、その癌治療効果を予備的にスクリーニングすることができる。例えば、ポドフィロトキシン誘導体はＫＢ細胞（鼻咽頭癌）に対してその細胞毒性を試験されてもよい。より詳細には、Ｊ．Ｎ．Ｃ．Ｉ．（１９９０）８２：１１０７に記載されているように、試験化合物をＫＢ細胞の培養物に対して添加し、スルホローダミンＢ（タンパク質結合色素の１種）アッセイを用いてそのＩＣ５０（すなわち、細胞増殖の最大阻害の半分を達成する当該試験化合物の濃度）を決定すればよい。本発明のポドフィロトキシン誘導体はまた、Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ３９：  １３９６）に記載されているように、インビトロでＤＮＡトポイソメラーゼＩＩの阻害能を試験されてもよいし、Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９８６  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ４６：２０２１）に記載されているように、ＫＢ細胞におけるタンパク質結合ＤＮＡ切断（ＰＬＤＢ）の刺激能を試験されてもよい。ＤＮＡトポイソメラーゼＩＩは、よく知られた癌治療薬の標的である。例えば、ＭａｃＤｏｎａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）  ＤＮＡ  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ；  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照。
【００６２】
本発明のポドフィロトキシン誘導体は、インビボアッセイにより、その癌治療効果をさらにスクリーニングされうる。例えば、試験化合物をある動物（例えば、マウスモデル）に注射し、次いでその治療効果を評価すればよい。その結果に基づき、適当な用量範囲および投与経路がまた決定されうる。
【００６３】
さらなる労力を費やすことなく、本発明は上記の記載によって十分に実施可能である。従って、下記の具体的な実施形態は、単に例示のためのものであって、開示された残りの部分をいかようにも制限するものではないと解釈されるべきである。特許を含め、本明細書中に引用された文献は全て、その全体が参照によりここに組み込まれる。
【実施例】
【００６４】
化学合成
本明細書中で用いられる場合の融点は、フィッシャー−ジョン（Ｆｉｓｈｅｒ−Ｊｏｈｎ）融点装置によって決定され、校正されていないものである。プロトン核磁気共鳴（１Ｈ  ＮＭＲ）スペクトルについては、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）を内部標準として、ヴァリアン（Ｖａｒｉａｎ）３００またはブルッカー（Ｂｒｕｋｅｒ）４００（明示の場合）スペクトロメーターによって測定した。化学シフトはδ（ｐｐｍ）として報告される。質量スペクトル（ＭＳ）については、ＡＰＩ３０００  ＬＣ／ＭＳ／ＭＳスペクトロメーターによって得た。フラッシュカラムクロマトグラフィについては、シリカゲル（１００〜２００メッシュ）を用いて行った。ＨＰＦＣは、バイオテージ  ホライズン  システム（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ）を用いて行った。薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）分析には、予め被覆されたシリカゲルプレート（キーセルゲル（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ）６０  Ｆ２５４、０．２５ｍｍ）を用いた。
【００６５】
化合物１〜２、７〜９、１２〜１３、１５〜１８、２０〜２６、２９、２９ａ、３１および３２の合成
これらの化合物については、下記のスキーム１に示すように、ポドフィロトキシンから出発して合成した。ポドフィロトキシンを臭素化することにより、中間体である４’−Ｏ−デメチル−４β−ブロモ−４−デスオキシポドフィロトキシン（以下、「ＤＢＤ」とも称する）を得た。２Ｎ  ＨＣｌのＴＨＦ溶液を用いて化合物７中のメチルエステルを加水分解することにより、化合物９を得た。アニソールの存在下で、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いて化合物２２、２５および２９中のｔｅｒｔ−ブチル基およびＢｏｃ基を除去することにより、化合物２０、２３および２９ａをそれぞれ得た。より詳細には、以下のように、４β−Ｎ−結合−（置換ヘテロアリール）−４’−Ｏ−デメチル−４−エピポドフィロトキシンを合成した。適当な溶媒混合物（例えば、ＴＨＦ、および１，２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）（１：１）／またはアセトニトリル（１：１））中のＤＢＤの溶液に、アミノ置換へテロアリール（１．２当量）およびＢａＣＯ３（１．５当量）を添加した。この混合物を、ＴＬＣまたはＬＣ−ＭＳでモニタリングしながら窒素雰囲気下で加熱して還流させた。この反応混合物を室温まで冷却し、固体を形成させ、濾過した。こうして得られた濾液を濃縮し、粗生成物を得た。ＣＨ２Ｃｌ２：ＥｔＯＡｃ：アセトン、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン：ＭｅＯＨ、またはＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨを溶出液として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィによって、この粗生成物を精製した。２つの化合物についての分析データを以下に示す。
【００６６】
化合物２、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［４”−（エチルＬ−トリプトファン−Ｎ−アセチル）−２”−チアゾリルアミノ］−４−デスオキシポドフィロトキシン。
【００６７】
【化８】
0004707393.tif 000023
【００６８】
化合物３２、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［４”−（エチルＬ−フェニルグリシル−Ｎ−アセチル）−２”−チアゾリルアミノ］−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点１５０〜１５３℃（ｄｅｃ．）；
【００６９】
【化９】
0004707393.tif 000024
【００７０】
【化１０】
0004707393.tif 000025
【００７１】
化合物６、１１、３６〜４２、７７〜８２、９６、１１８、１２６、１２８、１３０、１３１、１４０、１４５、１４６、１６３および１６５の合成
以下のように、化合物３６および３７をそれぞれ合成した。メタノールおよびベンゼンの溶媒中で、アミノ置換へテロアリールを（トリメチルシリル）ジアゾメタン（２．０Ｍヘキサン溶液）と反応させることにより、中間体を得た。ＤＢＤのＣ−４位で当該中間体を置換することにより、所望の生成物を得た。下記のスキーム２を参照。
【００７２】
化合物３６についての分析データを以下に示す。
【００７３】
化合物３６、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［４”−（メチル−Ｏ−アセチル）−２”−チアゾリルアミノ］−４−デスオキシポドフィロトキシン。収率５９％；非晶質、融点１１６〜１２０℃（ｄｅｃ．）；
【００７４】
【化１１】
0004707393.tif 000026
【００７５】
化合物６、１１、３８〜４２、７７〜８２、８４、９６、１１８、１２６、１２８、１３０〜１３１、１４０、１４５、１４６、１６３および１６５については、アミノ置換へテロアリールに適当なアルコールまたはアミンをカップリングさせた後、ＤＢＤと結合させることにより、合成した。
【００７６】
多くの化合物についての分析データを以下に示す。
【００７７】
化合物３９、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［５”−（エトキシカルボニル）−２”−ピリジルアミノ］−４−デスオキシポドフィロトキシン。収率３５％；非晶質、融点１６４〜１６８℃（ｄｅｃ．）；
【００７８】
【化１２】
0004707393.tif 000027
【００７９】
化合物８４、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［４”−（エトキシカルボニル）−３”−ピラゾリルアミノ］−４−デスオキシポドフィロトキシン。収率４０％；白色固体、融点１５２〜１５５℃（ｄｅｃ．）；
【００８０】
【化１３−１】
0004707393.tif 000028
【００８１】
【化１３−２】
0004707393.tif 000029
【００８２】
化合物１４０、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［２”−（３”−（２'''−クロロ−４'''−ピリジニルアミノ−カルボニル））ピリジニルアミノ］−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点＞２４０℃（ｄｅｃ）；
【００８３】
【化１４】
0004707393.tif 000030
【００８４】
【化１５】
0004707393.tif 000031
【００８５】
化合物３〜５、１０、１４、１９および３０の合成
これらの化合物については、以下のスキーム３に示すように合成した。化合物１４についての分析データを以下に示す。
【００８６】
化合物１４、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［４”−（エチルＬ−フェニルグリシル−Ｎ−アセチル）−２”−チアゾリルアミノ］−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点２３３〜２３６℃（ｄｅｃ．）；
【００８７】
【化１６】
0004707393.tif 000032
【００８８】
【化１７】
0004707393.tif 000033
【００８９】
化合物２７、２８および３３〜３５の合成
化合物２７および２８については、スキーム４に示すように合成した。クロロギ酸イソブチルおよびＮ−メチルモルホリンの存在下で、１−（３−アミノプロピル）−イミダゾールまたは４−（３−アミノプロピル）−モルホリンをアミノ置換へテロアリールと反応させることによって、アミド化合物を得た。当該アミド化合物をＤＢＤとさらに反応させて、所望の生成物を得た。
【００９０】
化合物２８についての分析データを以下に示す。
【００９１】
化合物２８：４’−Ｏ−デメチル−４β−［４”−（４'''−（３'''−アミノプロピル）−モルホリン−Ｎ−アセチル）−２”−チアゾリルアミノ］−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点１０５〜１０９℃（ｄｅｃ．）；
【００９２】
【化１８−１】
0004707393.tif 000034
【００９３】
【化１８−２】
0004707393.tif 000035
【００９４】
化合物３３については、スキーム４に示すように、ジペプチドから合成した。塩化アセチルおよびメタノール中で還流しながら当該ジペプチドをメチル化することにより、メチルエステルを得た。当該メチルエステルをアミノ置換へテロアリールと反応させることにより、白色の結晶として、アミン化合物を得た。当該アミン化合物をさらにＤＢＤと反応させることにより、所望の生成物を得た。
【００９５】
化合物３４および３５については、アミノ置換へテロアリールにｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルで保護されたヒドロキシルアミンをカップリングさせた後、ＤＢＤと結合させることにより、合成した（スキーム４）。シリカゲルカラムクロマトグラフィにより、化合物３４および３５を得た。
【００９６】
これらの２つの化合物についての分析データを以下に示す。
【００９７】
化合物３４、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［４”−（Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルヒドロキシル）−Ｎ−アセチル）−２”−チアゾリルアミノ］−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点１５５〜１５８℃（ｄｅｃ．）；
【００９８】
【化１９】
0004707393.tif 000036
【００９９】
化合物３５、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［４”−（Ｏ−ヒドロキシルアミン）−Ｎ−アセチル）−２”−チアゾリルアミノ］−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点１６５〜１６８℃（軟化）、２１０〜２１３（ｄｅｃ．）；
【０１００】
【化２０】
0004707393.tif 000037
【０１０１】
【化２１】
0004707393.tif 000038
【０１０２】
化合物４３〜７６、８５〜９０、９７〜１０１、１０３〜１０６、１０８〜１１７、１１９〜１２５、１２７、１２９、１３２〜１３４、１３６〜１３９、１４３〜１４４、１４７、１４９〜１５８、１６０〜１６２、１６４、１６６〜１７８、１８０〜１８８、１９２〜１９９および２０２〜２０６の合成
これらの化合物については、炭酸バリウムの存在下で、アミノ置換またはヒドロキシル置換されたヘテロアリールをＤＢＤと反応させることにより、合成した。
【０１０３】
多くの化合物についての分析データを以下に示す。
【０１０４】
化合物４５、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−（５”−エトキシカルボニル−４”−メチル−２”−チアゾリルアミノ）−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点２５７〜２５９℃（ｄｅｃ．）；
【０１０５】
【化２２】
0004707393.tif 000039
【０１０６】
化合物４７、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−（５”−エトキシカルボニル−４”−メチル−２”−チアゾリルアミノ）−４−デスオキシポドフィロトキシン。
【０１０７】
【化２３】
0004707393.tif 000040
【０１０８】
化合物４９、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−（５”−ニトロ−２”−チアゾリルアミノ）−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点２０１〜２０３℃（ｄｅｃ．）；
【０１０９】
【化２４】
0004707393.tif 000041
【０１１０】
化合物５０、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−（５”−ニトロ−２”−ピリジルアミノ）−４−デスオキシポドフィロトキシン。黄色の結晶、融点＞２５０℃（ｄｅｃ．）；
【０１１１】
【化２５−１】
0004707393.tif 000042
【０１１２】
【化２５−２】
0004707393.tif 000043
【０１１３】
化合物５７、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［５”−メチルチオ−２”−（１”，３”，４”−チアジアゾリルアミノ）］−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点２１８〜２２０℃（ｄｅｃ．）；
【０１１４】
【化２６】
0004707393.tif 000044
【０１１５】
化合物５９、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［５”−エチル−２”−（１”，３”，４”−チアジアゾリルアミノ））−４−デスオキシポドフィロトキシン。
【０１１６】
【化２７】
0004707393.tif 000045
【０１１７】
化合物６６、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［５”−メチルチオ−１”Ｈ−３”−（１”，２”，４”−チアゾリルアミノ）］−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点１９５〜１９８℃（ｄｅｃ．）；
【０１１８】
【化２８】
0004707393.tif 000046
【０１１９】
化合物７２、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−（３”，５”−ジブロモ−２”−ピリジルアミノ）−４−デスオキシポドフィロトキシン。
【０１２０】
【化２９−１】
0004707393.tif 000047
【０１２１】
【化２９−２】
0004707393.tif 000048
【０１２２】
化合物７３、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−（１”Ｈ−５”−テトラゾリルアミノ）−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点２３７〜２４０℃（ｄｅｃ．）；
【０１２３】
【化３０】
0004707393.tif 000049
【０１２４】
化合物８３、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−（１”−メチル−２”−ベンズイミダゾリルアミノ）−４−デスオキシポドフィロトキシン。白色の針状結晶、融点２２７〜２３０℃（ｄｅｃ．）；
【０１２５】
【化３１】
0004707393.tif 000050
【０１２６】
化合物８５、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［（１”−メチル−４”−エトキシカルボニル）−５”−ピラゾリルアミノ］−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点１４０〜１４３℃（ｄｅｃ．）；
【０１２７】
【化３２】
0004707393.tif 000051
【０１２８】
化合物８８、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−（３”−アミノ−５”−ピラゾリルオキシ）−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点２５０〜２５３℃（ｄｅｃ．）；
【０１２９】
【化３３】
0004707393.tif 000052
【０１３０】
化合物９０、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−（１”−ベンゾトリアゾリルオキシ）−４−デスオキシポドフィロトキシン。
【０１３１】
【化３４】
0004707393.tif 000053
【０１３２】
化合物９１、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［３”−（１”，２”，４”−トリアゾリルアミノ）−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点２４５〜２４８℃（ｄｅｃ．）；
【０１３３】
【化３５】
0004707393.tif 000054
【０１３４】
化合物９４、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−（３”−キノリニルアミノ）−４−デスオキシポドフィロトキシン。
【０１３５】
【化３６】
0004707393.tif 000055
【０１３６】
化合物９８、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［５”−（３”−メチル）−イソキサゾリルアミノ］−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点２２７〜２２９℃（ｄｅｃ．）；
【０１３７】
【化３７】
0004707393.tif 000056
【０１３８】
化合物１０５、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［２”−（５”−メチル）−ベンゾチアゾリルアミノ］−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点２４５〜２４８℃（ｄｅｃ．）；
【０１３９】
【化３８−１】
0004707393.tif 000057
【０１４０】
【化３８−２】
0004707393.tif 000058
【０１４１】
化合物１０６、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［３”−（５”−ニトロ）ベンズイソチアゾリルアミノ］−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点１１４〜１１７℃；
【０１４２】
【化３９】
0004707393.tif 000059
【０１４３】
化合物１１０、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［２”−（５”−トリフルオロメチル−１”，３”，４”−チアジアゾリルアミノ）］−４−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点２２５〜２２７℃（ｄｅｃ．）；
【０１４４】
【化４０】
0004707393.tif 000060
【０１４５】
化合物１４４、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［４”−（２”，１”，３”−ベンゾチアジアゾリルアミノ）］−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点１６８〜１７２℃；
【０１４６】
【化４１】
0004707393.tif 000061
【０１４７】
化合物１５５、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［２”−（５”−クロロベンズオキサゾリルアミノ）］−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点２１５〜２１７℃（ｄｅｃ．）；
【０１４８】
【化４２−１】
0004707393.tif 000062
【０１４９】
【化４２−２】
0004707393.tif 000063
【０１５０】
化合物１６０、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［２”−（５”−クロロピリジニルオキシ）］−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点２０５〜２０８℃（ｄｅｃ．）；
【０１５１】
【化４３】
0004707393.tif 000064
【０１５２】
化合物１８８、４’−Ｏ−デメチル−４β−［６”−（２”−メルカプトベンゾチアゾリルアミノ）］−デスオキシポドフィロトキシン。無色の針状結晶、融点２１９〜２２１℃（ｄｅｃ．）；
【０１５３】
【化４４】
0004707393.tif 000065
【０１５４】
化合物１０２および１３５の合成
以下のように、これらの２つの化合物をそれぞれ合成した。スキーム５に示すように、エーテルおよびテトラヒドロフラン（３：１）の溶媒中で、アミノ置換へテロアリールカルボキシレートを還元剤（例えば、水素化リチウムアルミニウム（１．３〜２．０当量））と反応させることによって、アルコールを得た。次いで、得られたアルコールをＤＢＤと反応させることによって、所望の化合物を得た。
【０１５５】
化合物１０２についての分析データを以下に示す。
【０１５６】
化合物１０２、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［２”−（４”−ヒドロキシルエチル）チアゾリルアミノ］−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点１２８（軟化）、１５５〜８℃（ｄｅｃ）；
【０１５７】
【化４５】
0004707393.tif 000066
【０１５８】
化合物１０７、１４１、１４２および１４８の合成
スキーム６に示すように、化合物１０７および１４８をそれぞれ合成した。四塩化炭素中で、クロロおよびニトロ置換へテロアリールを置換アミン（２当量）で処理した。この反応溶液を２４時間加熱還流させた。黄色の結晶として得られた化合物を、鉄粉末の存在下、１０％氷酢酸を含むメタノールおよび水の混合物中で１〜２時間さらに還流させて、アミノ置換へテロアリール中間体を得た。当該中間体をＤＢＤと反応させることにより、所望の生成物を得た。
【０１５９】
以下のように、化合物１４１および１４２をそれぞれ合成した。クロロ置換およびニトロ置換へテロアリールを、ナトリウムの存在下でアルコールと反応させて、エーテルを得た。得られたエーテルのニトロ基を、鉄粉末を用いて還元させることにより、アミン化合物を得て、これをさらにＤＢＤと反応させて、所望の生成物を得た。
【０１６０】
化合物１０７についての分析データを以下に示す。
【０１６１】
化合物１０７、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［４”−（２”−Ｎ，Ｎ−ジエチル）−ピリジルアミノ］−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点９２℃（収縮）、１４０〜１４２℃（溶融）；
【０１６２】
【化４６】
0004707393.tif 000067
【０１６３】
【化４７】
0004707393.tif 000068
【０１６４】
化合物１５９、１７９、１８９、１９０および１９１の合成
スキーム７に示すように、化合物１５９を合成した。５％氷酢酸のベンゼン溶液（５ｍＬ）中、１０℃にて５−アミノ−３−メチルイソチアゾール塩酸塩（２ミリモル）を臭素（２ミリモル）と反応させることによって、臭化水素酸塩として固体状の生成物を得た。この固体状の生成物を、２Ｎ炭酸ナトリウムとともに撹拌することにより、遊離塩基生成物へと変換した（Ｄ．  Ｂｕｔｔｉｍｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９６３）  ＪＡＣＳ  ２０３２−２０３９）。得られた化合物をＮ２下で還流しながらＤＢＤと反応させることにより、所望の化合物を得た。
【０１６５】
スキーム７に示すように、化合物１７９および１８９を合成した。ピリジン中で５−アミノ−３−メチルイソチアゾール塩酸塩を塩化酢酸と反応させ、次いでニトロ化および還元することによって、中間体である４−アミノ−５−アセトアミド−３−メチルイソチアゾールを得た。この中間体（１．２当量）を、Ｎ２下でＤＢＤと反応させることにより、化合物１７９を得た。４−ニトロ−５−アセトアミド−３−メチルイソチアゾールを４Ｎ  ＨＣｌ水溶液中で還流させ、さらにＮ２下で還流しながらＤＢＤと反応させることによって、化合物１８９を得た。
【０１６６】
スキーム７に示すように、化合物１９０および１９１をそれぞれ合成した。５−アミノ−３−メチルイソチアゾール塩酸塩を、室温にてピリジン中で置換塩化酢酸（２当量）と反応させ、得られた化合物（５−ジクロロアセトアミド−３−メチルイソチアゾール）を発煙硝酸（１．１当量）および濃硫酸中で０℃にてさらにニトロ化することにより、ニトロ化合物を得た。鉄粉末を用いて当該ニトロ化合物を還元することにより、アミノ化合物を得た。得られたアミノ化合物をＤＢＤと反応させることにより、所望の生成物を得た。
【０１６７】
化合物１９０についての分析データを以下に示す。
【０１６８】
化合物１９０、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［４”−（５”−クロロアセトアミド−３”−メチル）−イソチアゾリルアミノ］−デスオキシポドフィロトキシン。非晶質、融点１７８〜１８０℃（ｄｅｃ．）；
【０１６９】
【化４８】
0004707393.tif 000069
【０１７０】
化合物２００および２０１の合成
スキーム８に示すように、化合物２００を合成した。乾燥アセトン（８ｍＬ）中で、α，γ−ジクロロアセトン（１５．９ミリモル）をチオ尿素（１５．９ミリモル）と反応させることにより、白色固体を得た。当該白色固体を回収し、無水エタノール中で撹拌して、不溶性のイソチオ尿素を除去した。このエタノール濾液に、２５〜３０ｍＬのヘキサンを撹拌しながら添加して、白色の結晶固体として２−アミノ−４−クロロメチルチアゾール塩酸塩を得た。得られた化合物を、エタノール中でＮ，Ｎ−ジエチルアミンとさらに反応させ、２０％水酸化ナトリウムを用いて中和して、中間体を得た。当該中間体をＤＢＤと反応させることにより、所望の生成物を得た。
【０１７１】
化合物２０１（すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［２”−（４”−ヒドロキシルメチル）−チアゾリルアミノ］−デスオキシポドフィロトキシン）を以下のように合成した。１６ｍＬの水中の２−アミノ−４−クロロメチルチアゾール塩酸塩（４２．０ミリモル）を、１５分間加熱還流させた。この反応溶液をエバポレーションにより乾燥させ、残渣を水中に再溶解させて、エバポレーションした。この残渣をエタノールから再結晶して、アルコール中間体を得た。当該中間体を還流条件下でＤＢＤとさらに反応させることにより、標記の化合物を３５％の収率で得た。非晶質、融点１８５〜１８９℃；
【０１７２】
【化４９】
0004707393.tif 000070
【０１７３】
【化５０】
0004707393.tif 000071
【０１７４】
化合物２０７〜２１０の合成
以下のように、これらの化合物をそれぞれ合成した。ポドフィロトキシン誘導体の反応を、オキシ塩化リン（化合物２０７〜２０９については２当量、化合物２１０については４当量）を用い、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（それぞれ、５当量および１０当量）の存在下、−２０〜−１５℃にて処理した。得られた生成物を、ピリジンの存在下、水中で−５〜０℃にて加水分解して、所望の生成物を得た。
【０１７５】
化合物２１０についての分析データを以下に示す。
【０１７６】
化合物２１０、すなわち、４’−Ｏ−デメチル−４β−［２”−（４”−ヒドロキシルエチル）−チアゾリルアミノ］−デスオキシポドフィロトキシン−４’−Ｏ，４”−Ｏ−ジホスフェート。非晶質、融点１７６℃（ｄｅｃ）；
【０１７７】
【化５１】
0004707393.tif 000072
【０１７８】
生物学的アッセイ
本発明の多くの化合物について、鼻咽頭癌細胞であるＫＢ細胞に対する細胞毒性を評価した。また、当該化合物については、エトポシドをポジティブコントロールとして用いて、細胞でのタンパク質結合ＤＮＡ切断（ＰＬＤＢ）の刺激をも試験した。エトポシドは、広く用いられている抗癌剤であり、例えば、Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ３７：  ４４６を参照。
【０１７９】
試験した化合物のうち、化合物１、１５、３６、３９、４５および４９がＫＢ細胞に対して予期せぬほど低いＩＣ５０値を示した。従って、これらの化合物は癌細胞に対する強い細胞毒性剤である。実際、化合物１、３６、３９および４９は、５μｇ／ｍＬで試験した場合に、ＫＢ細胞において予期せぬほど高いレベルでＰＬＤＢの誘導を示した。
【０１８０】
また、３つの化合物、すなわち、化合物１、１２および３８については、インビトロでチューブリンの重合の阻害を評価した。この結果によれば、４０μＭもの高濃度まで、チューブリンの重合を阻害した化合物はなく、これにより、これらの化合物の増殖阻害活性はチューブリンの重合の阻害に起因するものではないことが示された。
【０１８１】
他の実施形態
本明細書に開示した全ての特徴は、任意に組み合わせて用いられうる。本明細書に開示したそれぞれの特徴は、同一の、均等な、または類似の目的を達成する他の特徴により置換されうる。よって、そうでないと明確に特記しない限り、開示したそれぞれの特徴は、均等な、または類似の一連の一般的な特徴の単なる例に過ぎない。
【０１８２】
上記の記載から、当業者であれば容易に本発明の本質的な特徴を確定することができ、本発明の思想および範囲から逸脱することなく、本発明を様々に変更および修飾して、種々の用途および条件に適応させうる。例えば、本発明のポドフィロトキシン誘導体に構造が類似した化合物もまた合成され、その抗癌活性をスクリーニングされ、そして本発明の実施に用いられうる。よって、他の実施形態もまた、特許請求の範囲に含まれる。