(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
４＋１ラジカル体環形成／環化を経て、次式(1)
【化１】
0004638987.tif 000039
を有する化合物又はその医薬上許容できる塩を合成する方法であって、次式(2)で示される前駆物質、
【化２】
0004638987.tif 000040
を、次式(3)、
【化３】
0004638987.tif 000041
を有するアリールイソニトリルと反応することを特徴とする、方法。
（式中、R1及びR2は独立に同一であるか又は異なり、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アシルオキシ基、-OC(O)ORd（Rdはアルキル基）、カルバモイルオキシ基、ハロゲン、ヒドロキシ基、ニトロ基、シアノ基、アジド基、ホルミル基、ヒドラジノ基、-C(O)Rf（Rf は、アルキル基、アルコキシ基、アミノ基又はヒドロキシ基である）、アミノ基、-SRc（Rcは、水素、-C(O)Rf、アルキル基又はアリール基）であるか、又はR1及びR2は一緒になって式-O(CH2)nO-（式中、ｎは整数１又は２を表す）の基を形成し、
R3は、Ｈ、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、又はシアノ基であり、また、R2及びR3は一緒になって式-O(CH2)nO-（式中、ｎは整数１又は２を表す）の基を形成し、
R4は、Ｈ、Ｆ、C1-3アルキル基、C2-3アルケニル基、C2-3アルキニル基、トリアルキルシリル基又はC1-3アルコキシ基であり、
R5はC1-10アルキル基、アリル基、ベンジル基及びプロパルギル基であり、
R6、R7及びR8は、独立に、C1-10アルキル基、C2-10アルケニル基、C2-10アルキニル基、アリール基又は-(CH2)nR9（式中、ｎは１〜１０の範囲内の整数であり、かつR9は、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、ハロゲン原子、シアノ基又はニトロ基である）であり、
R11は、アルキレン基、アルケニレン基又はアルキニレン基であり、
R12は、-CH=CH-CH2-又は-C≡C-CH2-であり、Xは、Cl、Br又はIである。）
【請求項２】
前記R4が、Ｈである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記R1及びR2が、独立に同一であるか又は異なり、Ｈ、ヒドロキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、C1-3アルキル基、C2-3アルケニル基、C2-3アルキニル基又はC1-3アルコキシ基である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記R1及びR2が、独立に同一であるか又は異なり、Ｈ、C1-3ペルハロアルキル基、C1-3アミノアルキル基、C1-3アルキルアミノ基又はC1-3ジアルキルアミノ基である、請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記R1及びR2が、独立に同一であるか又は異なり、Ｈ、メチル基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、又はヒドロキシル基である、請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記R1及びR2が、独立に同一であるか又は異なり、Ｈ、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、エチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ヒドロキシメチル基、アミノメチル基、メチルアミノメチル基、又はジメチルアミノメチル基である、請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記R3が、Ｆ、アミノ基、又はヒドロキシ基である、請求項１記載の方法。
【請求項８】
前記R5が、エチル基である、請求項１記載の方法。
【請求項９】
前記R6、R7及びR8が、独立に同一であるか又は異なり、C1-6アルキル基、フェニル基又は-(CH2)nR9基（式中、ｎは１〜６の範囲内の整数であり、かつR9はヒドロキシ基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、ハロゲン原子、シアノ基又はニトロ基である）である、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
前記R6、R7及びR8が、メチル基である、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記R2及びR3が、メチレンジオキシ基、又は1,2-エチレンジオキシ基を形成する、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記R2が、OHである、請求項１記載の方法。
【請求項１３】
前記R2が、NH2である、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
前記R11が、C1-C10アルキレン基、C2-C10アルケニレン基又はC2-C10アルキニレン基である、請求項１記載の方法。
【請求項１５】
前記R11が、C1-C6アルキレン基、C2-C6アルケニレン基又はC2-C6アルキニレン基である、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記R11が、(CH2)mであり、ここで、ｍは、整数１〜６である、請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
前記Xが、Br又はIである、請求項１記載の方法。
【請求項１８】
次式、
【化４】
0004638987.tif 000042
を有することを特徴とする、化合物又はその医薬上許容できる塩。
（式中、R1及びR2は独立に同一であるか又は異なり、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アシルオキシ基、-OC(O)ORd（Rdはアルキル基）、カルバモイルオキシ基、ハロゲン、ヒドロキシ基、ニトロ基、シアノ基、アジド基、ホルミル基、ヒドラジノ基、-C(O)Rf（Rf は、アルキル基、アルコキシ基、アミノ基又はヒドロキシ基である）、アミノ基、-SRc（Rcは、水素、-C(O)Rf、アルキル基又はアリール基）であるか、又はR1及びR2は一緒になって式-O(CH2)nO-（式中、ｎは整数１又は２を表す）の基を形成し、
R3は、Ｈ、ハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、又はシアノ基であり、また、R2及びR3は一緒になって式-O(CH2)nO-（式中、ｎは整数１又は２を表す）の基を形成し、
R1、R2、R3及びR4の少なくとも一つが、H、ハロゲン、アルキル基、アミノ基又はニトロ基ではなく、
R4は、Ｈ、Ｆ、C1-3アルキル基、C2-3アルケニル基、C2-3アルキニル基、トリアルキルシリル基又はC1-3アルコキシ基であり、
R5はC1-10アルキル基、アリル基、ベンジル基及びプロパルギル基であり、
R6、R7及びR8は、独立に、C1-10アルキル基、C2-10アルケニル基、C2-10アルキニル基、アリール基又は-(CH2)nR9（式中、ｎは１〜１０の範囲内の整数であり、かつR9は、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、ハロゲン原子、シアノ基又はニトロ基である）であり、
R11は、アルキレン基又はアルケニレン基である。）
【請求項１９】
前記R4が、Ｈである、請求項１８記載の化合物。
【請求項２０】
前記R1及びR2が、独立に同一であるか又は異なり、Ｈ、ヒドロキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、C1-3アルキル基、C2-3アルケニル基、C2-3アルキニル基又はC1-3アルコキシ基である、請求項１８記載の化合物。
【請求項２１】
前記R1及びR2が、独立に同一であるか又は異なり、Ｈ、C1-3ペルハロアルキル基、C1-3アミノアルキル基、C1-3アルキルアミノ基又はC1-3ジアルキルアミノ基である、請求項１８記載の化合物。
【請求項２２】
前記R1及びR2が、独立に同一であるか又は異なり、Ｈ、メチル基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、又はヒドロキシ基である、請求項１８記載の化合物。
【請求項２３】
前記R1及びR2が、独立に同一であるか又は異なり、Ｈ、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、エチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ヒドロキシメチル基、アミノメチル基、メチルアミノメチル基、又はジメチルアミノメチル基である、請求項１８記載の化合物。
【請求項２４】
前記R3が、Ｆ、アミノ基又はヒドロキシ基である、請求項１８記載の化合物。
【請求項２５】
前記R5が、エチル基である、請求項１８記載の化合物。
【請求項２６】
前記R6、R7及びR8が、独立に同一であるか又は異なり、C1-6アルキル基、フェニル基又は-(CH2)nR9基（式中、ｎは１〜６の範囲内の整数であり、かつR9はヒドロキシ基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、ハロゲン原子、シアノ基又はニトロ基である）である、請求項１８記載の化合物。
【請求項２７】
前記R6、R7及びR8が、メチル基である、請求項１８記載の化合物。
【請求項２８】
前記R2及びR3が、メチレンジオキシ基、又は1,2-エチレンジオキシ基を形成する、請求項１８記載の化合物。
【請求項２９】
前記R2が、OHである、請求項１８記載の化合物。
【請求項３０】
前記R2が、NH2である、請求項１８記載の化合物。
【請求項３１】
前記R11が、C2-C10アルキレン基、C2-C10アルケニレン基又はC2-C10アルキニレン基である、請求項１８記載の化合物。
【請求項３２】
前記R11が、C2-C6アルキレン基、C2-C6アルケニレン基又はC2-C6アルキニレン基である、請求項３１記載の化合物。
【請求項３３】
前記R11が、(CH2)mであり、ここで、ｍは、整数１〜６である、請求項３１記載の化合物。
【請求項３４】
前記R1、R2、R3及びR4の少なくとも１つが、Ｈではない、請求項１８記載の化合物。
【請求項３５】
前記R5が、メチル基、C3-10アルキル基、アリル基、ベンジル基又はプロパルギル基である、請求項１８記載の化合物。
【請求項３６】
次式、
【化５】
0004638987.tif 000043
を有することを特徴とする、化合物。
（式中、R5は、C1-10アルキル基、アリル基、ベンジル基又はプロパルギル基であり、
R6、R7及びR8は、独立に、C1-10アルキル基、C2-10アルケニル基、C2-10アルキニル基、アリール基又は-(CH2)nR9（式中、ｎは１〜１０の範囲内の整数であり、かつR9は、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、ハロゲン原子、シアノ基又はニトロ基であり、
R11は、アルキレン基又はアルケニレン基であり、
R12は、-CH=CH-CH2-又は-C≡C-CH2-であり、Xは、Cl、Br又はIである。）
【請求項３７】
前記R6、R7及びR8は、独立に同一であるか又は異なり、C1-6アルキル基、フェニル基又は-(CH2)nR9（式中、ｎは１〜６の範囲内の整数であり、かつR9は、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、ハロゲン原子、シアノ基又はニトロ基である、請求項３６記載の化合物。
【請求項３８】
前記R6、R7及びR8が、メチル基である、請求項３６記載の化合物。
【請求項３９】
前記Xは、Br又はIである、請求項３６記載の化合物。
【請求項４０】
次式、
【化６】
0004638987.tif 000044
を有することを特徴とする、化合物又はその医薬上許容できる塩。
（式中、R1及びR2は独立に同一であるか又は異なり、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アシルオキシ基、-OC(O)ORd（Rdはアルキル基）、カルバモイルオキシ基、ハロゲン、ヒドロキシ基、ニトロ基、シアノ基、アジド基、ホルミル基、ヒドラジノ基、-C(O)Rf（Rf は、アルキル基、アルコキシ基、アミノ基又はヒドロキシ基である）、アミノ基、-SRc（Rcは、水素、-C(O)Rf、アルキル基又はアリール基）であるか、又はR1及びR2は一緒になって式-O(CH2)nO-（式中、ｎは整数１又は２を表す）の基を形成し、
R3は、Ｈ、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、又はシアノ基であり、また、R2及びR3は一緒になって式-O(CH2)nO-（式中、ｎは整数１又は２を表す）の基を形成し、
R4は、Ｈ、Ｆ、C1-3アルキル基、C2-3アルケニル基、C2-3アルキニル基、トリアルキルシリル基又はC1-3アルコキシ基であり、
R5はC1-10アルキル基、アリル基、ベンジル基及びプロパルギル基であり、
R6、R7及びR8は、独立に、C1-10アルキル基、C2-10アルケニル基、C2-10アルキニル基、アリール基又は-(CH2)NR9（式中、Nは１〜１０の範囲内の整数であり、かつR9は、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、ハロゲン原子、シアノ基又はニトロ基である）であり、
R11は、アルキレン基、アルケニレン基及びアルキニレン基であり、
R13は、Ｈ、-C(O)Rf又は-C(O)ORdである。）
【請求項４１】
前記R4が、Ｈである、請求項４０記載の化合物。
【請求項４２】
前記R1及びR2が、独立に同一であるか又は異なり、Ｈ、ヒドロキシ基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、C1-3アルキル基、C2-3アルケニル基、C2-3アルキニル基又はC1-3アルコキシ基である、請求項４０記載の化合物。
【請求項４３】
前記R1及びR2が、独立に同一であるか又は異なり、Ｈ、C1-3ペルハロアルキル基、C1-3アミノアルキル基、C1-3アルキルアミノ基又はC1-3ジアルキルアミノ基である、請求項４０記載の化合物。
【請求項４４】
前記R1及びR2が、独立に同一であるか又は異なり、Ｈ、メチル基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、又はヒドロキシ基である、請求項４０記載の化合物。
【請求項４５】
前記R1及びR2が、独立に同一であるか又は異なり、Ｈ、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、エチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ヒドロキシメチル基、アミノメチル基、メチルアミノメチル基、又はジメチルアミノメチル基である、請求項４０記載の化合物。
【請求項４６】
前記R3が、Ｆ、アミノ基又はヒドロキシ基である、請求項４０記載の化合物。
【請求項４７】
前記R5が、エチル基である、請求項４０記載の方法。
【請求項４８】
前記R6、R7及びR8が、独立に同一であるか又は異なり、C1-6アルキル基、フェニル基又は-(CH2)nR9基（式中、ｎは１〜６の範囲内の整数であり、かつR9はヒドロキシ基、アルコキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、ハロゲン原子、シアノ基又はニトロ基である）である、請求項４０記載の化合物。
【請求項４９】
前記R6、R7及びR8が、メチル基である、請求項４０記載の化合物。
【請求項５０】
前記R2及びR3が、メチレンジオキシ基、又は1,2-エチレンジオキシ基を形成する、請求項４０記載の化合物。
【請求項５１】
前記R2が、OHである、請求項４０記載の化合物。
【請求項５２】
前記R2が、NH2である、請求項４０記載の化合物。
【請求項５３】
前記R11が、C1-C10アルキレン基、C2-C10アルケニレン基又はC2-C10アルキニレン基である、請求項４０記載の化合物。
【請求項５４】
前記R11が、C1-C6アルキレン基、C2-C6アルケニレン基又はC2-C6アルキニレン基である、請求項５３記載の化合物。
【請求項５５】
前記R11が、(CH2)mであり、ここで、ｍは、整数１〜６である、請求項５３記載の化合物。
【請求項５６】
ガン又は白血病患者を治療するための医薬組成物であって、請求項１８記載の化合物又はその医薬上許容できる塩の医薬上有効な量を含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項５７】
脳のガン、乳ガン又は白血病を治療するための、請求項５６記載の医薬組成物。
【請求項５８】
ガン又は白血病の患者を治療するための医薬組成物であって、請求項４０記載の化合物又はその医薬上許容できる塩の医薬上有効な量を含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項５９】
脳のガン、乳ガン又は白血病を治療するための、請求項５８記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】
この出願は米国特許出願第08/921102号の一部継続出願であり、この米国特許出願第08/921102号は、米国特許出願第08/436799号の一部継続出願であり、この米国特許出願第08/436799号は、米国特許出願第08/085190号の一部継続出願であり、これらの開示が参考として本明細書に含まれる。
本発明は新規化合物及びこれらの調製方法、特にシリルカンプトテシン誘導体又は類似体及びこのようなシリルカンプトテシン類似体の調製方法に関する。
【０００２】
【背景技術】
(20S)-カンプトテシン（CPT、以下を参照されたい）及びその誘導体は化学療法による充実性腫瘍の治療に最も有望な薬剤の幾つかである。例えば、Wall, M. E.ら, J. Ethnopharmacol., 51, 239 (1996); Camptothecin: New Anticancer Agents; Potmesil, M.及びPinedo, H.編集; CRC, Boca Raton, FL (1995); Bonneterre, J., Bull. Canc., 82, 623 (1995); Sinha, D. K., Drugs, 49, 11 (1995)を参照されたい。この天然アルカロイドは1966年にWallにより中国の植物であるカンプトテカ・アキュニナータ（Camptotheca accuminata）のエキスから最初に単離された(Wall, M. E.ら, J. Am. Chem. Soc., 88, 3888 (1966))。以下に示されるように、カンプトテシンは一般に2-ピリドン環（環Ｄ）（これは次いでラクトン環（環Ｅ）に縮合されている）に縮合されているピロロ〔3,4-b〕キノリン系（環ABC）を含む縮合環系を有する。
【０００３】
0004638987.tif 000002
【０００４】
カンプトテシンはトポイソメラーゼＩ毒物のファミリーに属する。例えば、Froelich-Ammon, S. J.ら, J. Biol. Chem., 270, 21429 (1995)を参照されたい。現在までの研究はこの分子が細胞酵素トポイソメラーゼＩにより超らせんDNAの巻戻しに干渉することにより作用することを強く示唆し、その酵素は通常悪性細胞中で過剰発現される。高度に複製する癌細胞中で、これがアポトーシス及びプログラムされた死滅をもたらすイベントのカスケードを誘発する。Slichenmyer, W. J.ら, J. Natl. Cancer Inst., 85, 271 (1993)を参照されたい。分子薬理学レベルにおける最近の進歩がPommier, Y.ら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92, 8861 (1995)に総説されている。
カンプトテシンの初期の臨床試験は生理学的適合性媒体中のその不充分な溶解性により制限された。更に、ラクトン環を水酸化ナトリウムで開環することによりカンプトテシンの水溶性ナトリウム塩を生成しようとする早期の試みは不充分な抗腫瘍活性を有する化合物をもたらした。その後に、閉環されたラクトン形態が抗腫瘍活性の絶対必要条件であることが報告された。Wani, M. C.ら, J. Med. Chem., 23, 554 (1980)を参照されたい。更に最近、構造−活性研究が更に良好な溶解性及び更に良好な抗腫瘍活性を有する類似化合物を同定していた。例えば、トポテカン(TPT)及びイリノテカン(IRT)が最近米国において販売について認可されており、一方、GI-147211Cが後期臨床試験中である。これらの類似体は種々の治療し難い充実性腫瘍、例えば、悪性メラノーマ、胃癌、乳癌、卵巣癌、肺癌及び結腸直腸癌に対し有効であり、徐々に分裂する癌系の治療に特に有望と思われる。例えば、Kingsbury, W. D.ら, J. Med. Chem., 34, 98 (1991); Sawada, S.ら, Chem. Pharm. Bull., 39, 1446 (1991); Luzzio, M. J.ら, J. Med. Chem., 38, 395 (1995); Abigerges, D.ら, J. Clin. Oncol., 13, 210 (1995)を参照されたい。更に、相乗効果又は累積的効果がシスプラチン、放射線、又は温熱療法との組み合わせ療法で観察されていた。Fukuda, M.ら, Canc. Res., 56, 789 (1996); Goldwasser, F.ら, Clin. Canc. Res., 2, 687 (1996); Wang, D. S.ら, Biol. Pharm. Bull., 19, 354 (1996)を参照されたい。
【０００５】
殆どの研究がカンプトテシンの水溶性誘導体の開発に集中していたが、新規製剤化、例えば、脂質−複合体形成、リポソーム封入、及び湿式混錬技術が最近開発されていた。このような製剤化は不充分に水溶性のカンプトテシンに新しい治療機会をもたらす。Daoud, S. S.ら, Anti-Cancer Drugs, 6, 83 (1995); Merisko-Liversidge, E.ら, Pharm. Res., 13, 272 (1996); 及びPantazis, P., Leukemia Res., 19, 775 (1995)を参照されたい。これらの製剤化の魅力的な特徴は薬物生体分布に関するそれらの影響である。Sugarman及び共同研究者らは遊離カンプトテシンが肺の柔組織中で最大濃度に達するが、脂質−複合体形成されたカンプトテシンが胃腸道中で最高濃度を有することを最近報告していた。これらの結果は結腸癌の治療に新しくかつ重要な見通しを開く。Sugarman, S. M.ら, Canc. Chemother. Pharmacol., 37, 531 (1996)を参照されたい。不溶性カンプトテシン類似体を使用することの別の重要な局面はそれらがそれらの水溶性同種物よりも通常活性であり、薬物誘発耐性を生じそうにないことである。何とならば、おそらくそれらがp-糖タンパク質多薬物トランスポーターの基質ではないからである。Pantazis, P., Clin. Canc. Res., 1, 1235 (1995)を参照されたい。
この状況下で、良好乃至優れた抗腫瘍活性と異なる溶解性及び生体分布プロフィールとを併有する新規カンプトテシン類似体が種々の型の癌の治療の治療集積に重要な役割を果たし得る。
カンプトテシン及びその類似体の判明した有益な生物活性を考えると、付加的なカンプトテシン類似体及びカンプトテシン類似体の調製方法を開発することが望ましい。
【０００６】
【発明の概要】
本発明は、一般に下記の式(4)：
【０００７】
【化７】
0004638987.tif 000003
【０００８】
を有する化合物を提供する。
また、本発明は、４＋１ラジカル体環形成／環化を経て、下記の式(1)
【０００９】
【化８】
0004638987.tif 000004
【００１０】
を有する化合物を合成する方法であって、
次式(2)で示される前駆物質、
【００１１】
【化９】
0004638987.tif 000005
【００１２】
を、以下の式(3)、
【００１３】
【化１０】
0004638987.tif 000006
【００１４】
を有するアリールイソニトリルと反応する方法を提供する。
ここで、R1及びR2は独立に同一であるか又は異なり、好ましくは水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アシルオキシ基、-OC(O)ORd（ここでRdはアルキル基）、カルバモイルオキシ基、ハロゲン、ヒドロキシ基、ニトロ基、シアノ基、アジド基、ホルミル基、ヒドラジノ基、アシル基（-C(O)Rf）（Rf は、好ましくは、アルキル基、アルコキシ基、アミノ基又はヒドロキシ基である）、アミノ基、-SRc（Rcは、水素、アシル基、アルキル基又はアリール基）、又はR1及びR2は一緒になって式-O(CH2)nO-（式中、ｎは整数１又は２を表す）の基を形成する。
R3は好ましくはＨ、ハロゲン、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシ基、又はシアノ基である。また、R2及びR3は一緒になって式-O(CH2)nO-（式中、ｎは整数１又は２を表す）の基を形成することができる。
R4は好ましくはＨ、Ｆ、トリアルキルシリル基、C1-3アルキル基、C2-3アルケニル基、C2-3アルキニル基、又はC1-3アルコキシ基である。
R5はC1-10アルキル基であることが好ましい。好ましいアルキル基はエチル基である。R5に好ましい置換アルキル基として、アリル基、プロパルギル基及びベンジル基が挙げられる。
R6、R7及びR8は好ましくは独立に（同一であるか又は異なり）C1-10アルキル基、C2-10アルケニル基、C2-10アルキニル基又はアリール基である。R6、R7及びR8に好ましい置換アルキル基は-(CH2)nR9基（式中、ｎは１〜10の範囲内の整数であり、かつR9はヒドロキシ基、アルコキシ基、アミノ基、ハロゲン原子、シアノ基又はニトロ基である）である。R9に好ましいアミノ基として、アルキルアミノ基及びジアルキルアミノ基が挙げられる。
R11は、好ましくはアルキレン基、アルケニレン又はアルキニレン基である。R12は、好ましくは-CH=CH-CH2-又は-C≡C-CH2-である。Xは、好ましくはCl、Br又はIである。より好ましくは、Xは、Br又はIである。最も好ましくは、Xは、Brである。
【００１５】
また、本発明は下記の式(1)、
【００１６】
【化１１】
0004638987.tif 000007
【００１７】
を有する化合物を提供する。式中、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8及びR11は、このパラグラフの前に定義されたのと同様である。更に、本発明は、上記式において、R1、R2、R3、及びR4の１つが、Hでない化合物を提供する。更にまた、本発明は、上記式中、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8及びR11が、このパラグラフの前に定義されたのと同様であり、式中、R5は、メチル基、C3-C10アルキル基、アリル基、ベンジル基又はプロパラギル基である化合物を提供する。
【００１８】
更に、本発明は、下記の式(2)、
【００１９】
【化１２】
0004638987.tif 000008
【００２０】
を有する化合物を提供する。
更に、本発明は、下記の式(5)、
【００２１】
【化１３】
0004638987.tif 000009
【００２２】
を有する化合物を提供する。
“アルキル”、“アリール”という用語及びその他の基は特にことわらない限り未置換基及び置換基の両方を一般に表す。特にことわらない限り、アルキル基は、炭化水素基であり、C1-C15（即ち、１〜15個の炭素原子を有する）アルキル基であることが好ましく、C1-C10アルキル基であることが更に好ましく、分岐又は非分岐の非環式又は環式であってもよい。アルキル基の上記定義及びその他の定義はまたその基が別の基の置換基（例えば、アルキルアミノ基又はジアルキルアミノ基の置換基としてのアルキル基）である場合にも適用される。“アリール”という用語はフェニル又はナフチルを表す。本明細書に使用される“ハロゲン”又は“ハロ”という用語はフルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを表す。
“アルコキシ”という用語は-ORd（式中、Rdはアルキル基である）を表す。“アリールオキシ”という用語は-ORe（式中、Reはアリール基である）を表す。アシルという用語は-C(O)Rfを表す。“アルケニル”という用語は、少なくとも１つの二重結合を持つ直鎖又は分岐鎖の炭化水素基を表し、好ましくは2-15個の炭素原子、更に好ましくは3-10個の炭素原子を有する基(例えば、-C=CHRg)を表す。“アルキニル”という用語は、少なくとも１つの三重結合を持つ直鎖又は分岐鎖の炭化水素基を表し、好ましくは2-15個の炭素原子、更に好ましくは3-10個の炭素原子を有する基（例えば、-C≡CRh）を表す。“アルキレン”、“アルケニレン”及び“アルキニレン”という用語は、各々、アルキル基、アルケニル基及びアルキニル基の２価の形態を表す。
【００２３】
先に示された基は、活性を保持するカンプトテシン類似体を合成するための種々の置換基で置換し得る。例えば、アルキル基はベンジル基、フェニル基、アルコキシ基、ヒドロキシ基、アミノ基（例えば、遊離アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基及びアリールアミノ基を含む）、アルケニル基、アルキニル基及びアシルオキシ基を含むが、これらに限定されない一つ以上の基で置換されることが好ましいかもしれない。アミノ基(-NRaRb)の場合、Ra及びRbは独立に水素、アシル基、アルキル基、又はアリール基であることが好ましい。アシル基は、アルキル基、ハロアルキル基（例えば、ペルフルオロアルキル基）、アルコキシ基、アミノ基及びヒドロキシ基で置換されることが好ましく、即ち、Rfがこれらの置換基であることが好ましい。アルキニル基及びアルケニル基はアルキル基、アルコキシアルキル基、アミノアルキル基及びベンジル基を含むが、これらに限定されない一つ以上の基で置換されることが好ましく、即ち、Rg及びRhがこれらの置換基であることが好ましい。
【００２４】
本明細書に使用される“アシルオキシ”という用語は基−OC(O)Rdを表す。
本明細書に使用される“アルコキシカルボニルオキシ”という用語は基−OC(O)ORdを表す。
本明細書に使用される“カルバモイルオキシ”という用語は基−OC(O)NRaRbを表す。
アミノ基及びヒドロキシ基は当業界で知られているような保護基を含んでいてもよい。アミノ基に好ましい保護基として、tert-ブチルオキシカルボニル、ホルミル、アセチル、ベンジル、p-メトキシベンジルオキシカルボニル、トリチルが挙げられる。当業者に知られているようなその他の好適な保護基がGreen, T., Wuts, P.G.M., Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley (1991)に開示されており、その開示が参考として本明細書に含まれる。
一般に、R1、R2、R3、R6、R7及びR8は得られるカンプトテシン類似体の活性を維持するために過度に嵩高ではないことが好ましい。それ故、R1、R2、R3、R6、R7及びR8は独立に約250未満の分子量を有することが好ましい。R1、R2、R3、R6、R7及びR8は約200未満の分子量を有することが更に好ましい。
本発明のカンプトテシン類似体の幾つかは無機酸との塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、及び硝酸塩（これらに限定されない）として医薬上の使用のために調製し得る。また、カンプトテシン類似体は有機酸との塩、例えば、酢酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、及びステアリン酸塩（これらに限定されない）として調製し得る。その他の酸は本発明の化合物及びそれらの医薬上許される塩の調製において中間体として使用し得る。
【００２５】
精製、適用又はその他の目的のために、Ｅ環（ラクトン環）はアルカリ金属、例えば、水酸化ナトリウム又は水酸化カルシウム（これらに限定されない）で開環されて、式（５）の化合物中に先に示された式(４)の化合物の開環されたＥ環類似体を生成してもよい。こうして得られた中間体は水中で更に可溶性であり、精製されて、酸による処理後に、本発明のカンプトテシン類似体の精製形態を生成してもよい。
また、Ｅ環は修飾されて水又はその他の溶媒中の異なる溶解性プロフィールを有する式(４)の化合物の類似体を生成してもよい。この目標を達成するための方法として、水酸化物又は水溶性アミノ基によるＥ環の開環又は水溶性基、例えば、ポリエチレングリコール基によるＥ環の位置20におけるヒドロキシ基の官能化が挙げられるが、これらに限定されない。こうして調製された類似体はプロドラッグとして作用する。換言すれば、これらの類似体は生きている生物に投与された時に式(1)の化合物（閉環されたＥ環構造を有する）を再生する。Greenwald, R.B.ら, J. Med. Chem., 39, 1938 (1996)を参照されたい。
本発明の類似体は、親油性が高く、インビボ又はインビトロの両方で活性を高めることが示される。その上、これらのＡ環の置換は、血液安定性を高めることが示される。
【００２６】
また、本発明は医薬有効量の式(４)及び／又は(１)の化合物又はその医薬上許される塩を投与することを特徴とする患者の治療方法を提供する。化合物は、例えば、静脈内、筋肉内、経口、皮下、腫瘍内、皮内、及び非経口を含むが、これらに限定されない投与のあらゆる通常の経路により癌及び／又は白血病で冒された患者に投与されてもよい。医薬有効量又は投与量は体重1kg当り式(４)及び(１)の化合物の１つ0.01〜60mgであることが好ましい。医薬有効量又は投与量は体重1kg当り式(４)及び(１)の化合物の１つ0.1〜40mgであることが更に好ましい。一般に、医薬有効量又は投与量は抗白血病挙動及び／または抗腫瘍（抗癌）挙動を示すのに有効な式(４)及び(１)の化合物の１つの量を含む。医薬上許される担体又は希釈剤と混在して活性成分として式(４)及び(１)の化合物の１つ又はその医薬上許される塩を含む医薬組成物がまた本発明の範囲内にある。
また、本発明は式(４)及び(１)の化合物のいずれかと医薬上許される担体とを含む医薬組成物を提供する。組成物は、例えば、式(４)、(１)及び／又は(５)の化合物１mg〜３ｇを含んでもよく、好ましくは約0.1mg〜500mgを含んでもよく、また投与の様式に適したあらゆる形態に構成されてもよい。
【００２７】
化合物
式(４)及び(１)の化合物の中で、Ｅ環の位置20に(S)配置を有する化合物が医薬上の使用に好ましい。
R1及びR2が独立に（同じであり、又は異なり）Ｈ、ヒドロキシ基、ハロ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、C1-3アルキル基、C1-3ペルハロアルキル基、C1-3アルケニル基、C1-3アルキニル基、C1-3アルコキシ基、C1-3アミノアルキル基、C1-3アルキルアミノ基、C1-3ジアルキルアミノ基であることが好ましく、又はR1及びR2が一緒になって式-O(CH2)nO-（式中、ｎは整数１又は２を表す）の基を形成する。R1及びR2が独立に（同じであり、又は異なり）Ｈ、メチル基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、ヒドロキシメチル基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、エチルアミノ基、ジエチルアミノ基、アミノメチル基、メチルアミノメチル基、ジメチルアミノメチル基、等であることが更に好ましい。
R3がＦ、アミノ基、又はヒドロキシ基であることが好ましい。R4がＨ又はＦであることが好ましい。R5がエチル基であることが好ましい。R6、R7及びR8が独立に（同じであり、又は異なり）C1-6アルキル基、フェニル基又は-(CH2)NR10基（式中、Ｎは１〜６の範囲内の整数であり、かつR10はハロゲン又はシアノ基である）であることが好ましい。
【００２８】
調製の方法
本発明の式(４)の化合物は図１に示された一般の合成スキームに従って調製し得る。図１の合成スキームにおいて、ヨードピリドン（２）が最初にプロパルギル誘導体（３）でN-アルキル化されて遊離基前駆体（４）を生じる。次いで遊離基前駆体（４）がアリールイソニトリル（５）で遊離基カスケードを受けて生成物（１）を生じる。N-アルキル化は最適化条件に従って円滑に進行する。Curran, D.P.ら, Tetrahedron Lett., 36, 8917 (1995)（その開示が参考として本明細書に含まれる）を参照されたい。ヨードピリドン（２）の合成及び遊離基カスケードの条件は既に報告されている。プロパルギル化剤（３）は好適なシリル化剤R6R7R8SiXによるプロパルギルアルコールのジアニオンの通常のシリル化、続いて脱離基、例えば、ブロミド、ヨージド又はスルホネートへのプロパルギルアルコールの変換により容易に調製される。Curran, D.P.ら, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 34, 2683 (1995) （その開示が参考として本明細書に含まれる）、及び1995年５月８日に出願された米国特許出願第08,436,799号（その開示が参考として本明細書に含まれる）を参照されたい。
【００２９】
一般に、ヘキサメチルスズ、ヘキサメチルジシラン、又はテトラキス（トリメチルシリル）シランを含むが、これらに限定されない種々の試薬が遊離基カスケードに使用し得る。この反応のエネルギーの源は太陽灯又は紫外線灯であってもよい。温度は約25℃〜150℃にセットされることが好ましい。温度は約70℃にセットされることが更に好ましい。一般に遊離基カスケードに不活性であること以外に、使用される溶媒の選択に制限はない。好ましい溶媒として、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、THF及びtert-ブタノールが挙げられる。また、反応条件の温和なことのためにアルキン及びイソニトリルの置換基の選択に非常に広い許容範囲がある。
図２は(20S)-11-フルオロ-7-トリメチルシリルカンプトテシン（12）の合成に関する一般合成スキームの実施態様を示す。この合成スキームの問題は、アリールイソニトリルの両方のオルト位が環化に利用できる（即ち、R4が式（４）の最終化合物中でＨである）場合に遊離基カスケードの部位選択性を調節することである。この問題の一つの解決策はアリールイソニトリルへのトリメチルシリル基の導入（例えば、3-フルオロ-2-トリメチルシリルフェニルイソニトリル（９））に頼る。トリメチルシリル置換基は環化に対しイソニトリルのオルト位の一つをブロックし、ヒドロデシリレーションによりカスケード反応後に除去し得る。この例において、選択性はトリメチルシリル基の一つのみが最後の工程で除去されるという意味で更に進行する。
【００３０】
式(４)の幾つかの新規カンプトテシン誘導体の調製に関する一般合成スキームのその他の実施態様が図３〜６、及び実施例に示される。
式(１)の化合物の調製が図７〜１１に示される。そのことに関して、３つの代表例、新規Ａ、Ｂ環置換シリルカンプトテシン化合物(36a)、(36b)及び(36c)が図７に示される。
これらのアナログ合成の最初の工程は、図8で示したように、臭化プロパルギル（41）を調製することである。市販で入手可能なトリメチルシリルプロパノール（37）のSwern酸化は、85%の収率でトリメチルシリルプロパナール（38）を供給した。Sakar,T.Kら、Tetrahedron  46、1885（1990）を参照されたい。Corey,E.J.  及び  Fuchs,P.L.,Tetrahedron  Lett.,36、3769（1972）の手順Ａに続いて、アルデヒド（38）は、55%の収率でジブロモオレフィン（39）に変えられた。Piers,E.及びGaval,A.V.,J.Org.Chem.,55,2374（1990）を参照されたい。-78℃でTHFに２当量のn-Buliの添加に続いて、22℃に加温し、84%の収率で供給するために還流してパラホルムアルデヒドで急冷した。最後に、無水CH2Cl2中のトリフェニルホスフィン及びBr2の溶液は、87%の収率で臭化プロパルギル（41）を供給した。
臭化プロパルギル（41）の調製を完了して、遊離基前駆体（43）は、図9に示したように調製された。N-アルキル化の手順に続いて、(42)は、(41)でアルキル化され、74%の収率で所望の遊離基前駆体を供給した。各イソニトリル（44a）又は（44b）と(43)との反応は、図10にて図示したように、55%及び56%の収率で、各保護シリルカンプトテシン誘導体（45a）及び（45b）を供給した。最後に、MeOH/H20溶液の２当量のK2CO3での（45a）の脱保護は、47%収率の10-ヒドロキシ誘導体（36a）を供給した。最後に、CH2Cl2中のトリフルオロ酢酸での処理により、（45b）が、65%の収率で10-アミノ誘導体（36b）に変わった。
【００３１】
また、本発明の方法は、（20s）-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシン（36c、図7）の迅速な合成を提供する。ヨードピリドン（43）とフェニルイソニトリルとの反応は、52%の収率でこの誘導体を供給した（図10）。（20s）-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシン（36c）及び（20s）-7-(2-トリメチルシリル)カンプトテシン（米国特許出願第08/436799号明細書に開示）の構造は、国際特許出願第WO98/07727号明細書にHausheerらによって最近記述された。先に示された国際特許出願第WO98/07727号明細書のこれらの化合物に関する特徴づけの報告は、正しくないと思われる。詳細には、これらの化合物の両方において提供された分光学的データは、割り当てられた構造と一致せず、この出願の実施例で報告する分光学的データのいかなる点においても合わない。加えて、国際特許出願第WO98/07727号明細書のシリル含有カンプトテシンの全ての分光学的のデータは、割り当てられた構造と一致していないと思われる。
本発明はカンプトテシンファミリーにおける既知の構造−活性関係に良く適した短く、かつ有効な合成スキームを提供する。実際に、カンプトテシン骨格の生物活性は７位及び／又は9-11位以外の置換基に対し不耐性であるか、又は非常にわずかな寛容性しか有さない。合成に従って、これらの置換基は、各アルキニル誘導体(3)及びアリールイソニトリル(5)を介して導入される。
【００３２】
抗腫瘍活性及びヒト血液安定性の特徴
式(４)の幾つかの化合物の抗腫瘍活性を表１に示し、更に以下に記述される幾つかの公知のアッセイを用いて幾つかの公知のカンプトテシン類似体の抗腫瘍活性と比較する。表１に示された本発明の種々の例示化合物の合成がこの節の後の実施例の節に更に詳しく説明される。
【００３３】
【表１】
0004638987.tif 000010
【００３４】
表１に示されるように、本発明の化合物はカンプトテシン(CPT)及びイリノテカン(IRT)と較べて良好乃至優れた抗腫瘍活性を示す。
【００３５】
細胞毒性アッセイ
カンプトテシン誘導体をin vitroでHL-60（ヒト前骨髄細胞白血病）細胞、833K（ヒト奇形癌）細胞及びDC-3F（ハムスター肺）細胞の増殖に関するそれらの細胞毒性効果について評価した。細胞を5 x 10-4細胞/mlの初期密度で培養した。それらを５％CO2保湿雰囲気中で37℃でペニシリン(100u/ml)／ストレプトマイシン(100μg/ml) (GIBCO-BRL)及び10％熱不活化ウシ胎児血清を含むRPMI-1640培地(GIBCO-BRL グランドアイランド、ニューヨーク)中で管理した。そのアッセイを96ウェルミクロプレート中で２回反復で行った。72時間のインキュベーション後のHL-60細胞に対する化合物の細胞毒性をXTT微量培養テトラゾリウムアッセイにより測定した。Scudiero, D.A.ら, Cancer Res., 48, 4827 (1988)（その開示が参考として本明細書に含まれる）を参照されたい。2',3'-ビス-（メトキシ-4-ニトロ-5-スルフェニル）-5-〔（フェニルアミノ）カルボニル〕-2H-テトラゾリウムヒドロキシド(XTT)を血清を含まない前もって温めた（37℃）媒体中で1mg/mlで調製した。フェナジンメソスルフェート(PMS)及び新しいXTTを一緒に混合して0.075 mM PMS-XTT溶液を得た（5 mM PMS原液25μlを1 mg/ml XTT 5 ml当りに添加した）。この混合物50μlを72時間のインキュベーションの終了時に細胞培養液の夫々のウェルに添加した。37℃で４時間のインキュベーション後に、450nm及び630nmにおける吸光度をミクロプレートリーダー（EL340、バイオ−テク（Bio-Tek）・インストルメンツ社、ウィノースキイ（Winooski）、バーモント）で測定した。
833K奇形癌充実性腫瘍細胞及びDC-3Fハムスター肺細胞に対するカンプトテシン化合物の細胞毒性を細胞タンパク質濃度を測定するためのSkehanらにより記載された方法により96ウェルミクロプレート中で測定した。Skehanら,“New Colorometric Cytotoxicity Assay for Anticancer Drug Screening", J. Nat'l Cancer Inst., 82, 1107 (1990)（その開示が参考として本明細書に含まれる）を参照されたい。培養液をトリクロロ酢酸で定着し、次いで１％酢酸に溶解した0.4％スルフォーローダミンＢで30分間にわたって染色した。未結合色素を酢酸洗浄液により除去し、タンパク質結合色素を96ウェルミクロプレートリーダー中で570nmにおける吸光度の測定のために未緩衝トリス塩基〔トリス（ヒドロキシ−メチル）アミノメタン〕で抽出した。５〜６種の濃度の試験薬物を使用して、実験を２回反復で行った。データをコンピュータ・ソフトウェアにより分析した。Chou, J.及びChou, T.C., Dose-Effect Analysis With Microcomputers: Quantitation of ED50, LD50, Synergism, Antagonism, Low-Dose Risk, Receptor-Ligand Binding and Enzyme Kinetics,第２編, Biosoft, Cambridge (1987);及びChou, T.C.,“The Median-Effect Principle and the Combination Index for Quantitation of Synergism and Antagonism", Synergism and Antagonism in Chemotherapy, Academic Press, San Diego, 61-102 (1991)（これらの開示が参考として本明細書に含まれる）を参照されたい。
【００３６】
トポＩ媒介DNA開裂アッセイ
DNA開裂アッセイについて、その反応混合物は既に記載されたように20μlの最終容積で精製DNAトポイソメラーゼＩの存在下でTris-HCl緩衝液10 mM、pH7.5; PBR322超らせん二本鎖環状DNA（ベーリンガー・マンハイム・バイオケミカルズからの4363塩基対）0.125μg/ml、１、10及び100μMの濃度の薬物（カンプトテシン又はその誘導体）を含んでいた。Hsiang, Y.H.ら,“Camptothecin Induces Protein-linked DNA Breaks Via Mammalian DNA Topoisomerase I", J. Biol. Chem., 260, 14873 (1985)（その開示が参考として本明細書に含まれる）を参照されたい。インキュベーションを37℃で60分間にわたって行った。ローディング緩衝剤色素（２％ドデシル硫酸ナトリウム、0.05％ブロモフェノール・ブルー及び６％グリセロール）を添加することにより反応を停止した。電気泳動をTBE緩衝液（Tris-塩基-ホウ酸-EDTA）中で１％アガロースゲル＋臭化エチジウム（１μg/ml）で行い、25Vで18時間にわたって実験した。ポラロイドフィルム型55/Nを使用して写真を紫外線の下で撮影し、製造業者により示されたようにして現像した。
【００３７】
超らせんDNAのトポＩ媒介弛緩（relaxation）の抑制
DNAのDNAトポイソメラーゼＩ媒介弛緩に関する抑制効果を研究するために、Liu及びMillerにより記載された方法を使用した。Liu, H.F.ら,“Cleavage of DNA by Mammalian DNA Topoisomerase II", J. Biol. Chem., 258, 15365 (1980)（その開示が参考として本明細書に含まれる）を参照されたい。このアッセイのために、50 mM Tris-HCl, pH 7.5、120 mM KCl、10 mM MgCl2、0.5 mM DTT、0.5 mM EDTA、30μg/mlのBSA、20μg/mlのPBR322 DNA及び種々の量の酵素を含む反応混合物（20μl）中のPBR322 DNA 0.18μg、トポＩ (GIBCO-BRL) 0.5 U、種々の濃度（1-100μM）のカンプトテシン又は類似体を37℃で30分間にわたってインキュベートし、５％SBS及び150μg/mlのプロテイナーゼＫで停止した。サンプルをTAE運転緩衝液中１％アガロースに装填し、39Vで一夜電気泳動し、EtBrで染色し、紫外線の下で写真撮影した。
【００３８】
in vivoの抗腫瘍活性
カンプトテシン誘導体の抗腫瘍活性を肉腫-180又はルイス肺マウス充実性腫瘍を有するB6D2F1マウスで試験した。S-180について、3 x 106細胞を３日目に皮下に接種した。抗腫瘍治療が５日間にわたって毎日２回の腹腔内で１日目に開始した。７日目及び14日目に腫瘍体積を測定した。平均腫瘍体積を治療したもの対未治療対照の比(T/C)として記載した。７日目及び14日目に関する対照（DMSOビヒクルのみで措置した）腫瘍体積は夫々0.11cm3及び0.61cm3であった。T/Cカンプトテシンを“+++”で表示する。2mg/kgの投与量で14日目のカンプトテシンT/Cと較べて10％の増分又は減分を夫々一つの“+”単位の増加又は減少で表示する。
ルイス肺癌について、腫瘍細胞（1 x 106）を０日目に皮下接種し、治療を５日間にわたって毎日２回の腹腔内で１日目に開始した。効果の等級付けは上記のとおりであった。
表１に示されたように、in vitroの抗腫瘍細胞毒性について試験したカンプトテシン誘導体の多くが１種〜３種の細胞系でカンプトテシンよりも高い効力を示した。また、高い抗腫瘍細胞毒性を示すこれらの化合物の殆どがPBR322DNAのDNAトポイソメラーゼＩ媒介開裂を増進し、又はPBR322DNAのDNAトポイソメラーゼＩ媒介弛緩を抑制するのに高い効力を示した。これらの結果はDNAトポイソメラーゼＩの機能を抑制するそれらの能力とカンプトテシン化合物の抗腫瘍細胞毒性の間の優れた相関関係を示唆する。
腫瘍を有するマウスにおけるin vivo化学療法効果について、例えば、7-トリメチルシリルカンプトテシンは腫瘍体積減少に関して投与量依存様式で幾つかの均等投与量でB6D2F1マウスで肉腫180に対しカンプトテシンよりも良好な活性を示した。同様に、ルイス肺癌腫について、7-トリメチルシリル-11-フルオロカンプトテシンはカンプトテシンよりも４倍少ない投与量で腫瘍体積減少に関してカンプトテシンと同様の抗腫瘍効果を示した。こうして、7-トリメチルシリル-11-フルオロカンプトテシンはin vivoのその抗腫瘍効果でカンプトテシンよりも効力がある。
【００３９】
ヒト血液の安定性
最近、カンプトテシンのラクトン及びカルボキシレートの形態からの内因性の蛍光発光が研究され、ヒト血液成分で蛍光発光の著しく異なる相互作用が解明された。Burke,T. G.及びMi.Z.,“Ethyl  Substitution  at  the  ７  position  extendes  the  half-life  of  10-hydroxycamptothecin  in  the  presence  of  human  serum  albumin”J.Med.Chem.36：2580-2582（1993）；  Burke,T. G.,Mishra,A. K.,Wani,M. C.及びWall,M. E.,“Lipid  bilayer  partitioning  and  stability  of  comptothecin  drugs,"Biochemistry.32：5352-5364（1993）；Burke,T.G.  及び  Mi,Z.："Preferential  Binding  of  the  Carboxylate  Form  of  Camptothecin  by  Human  Serum  Albumin,”（1993）Anal.Biochem．212、285-287；Burke,T.G.及びMi,Z.，“The  Structural  Basis  of  Camptothecin  Interactions  with  Human  Serum  Alubumin：Impact  on  Drug  Stability,”（1994）J. med.chem.37、40-46；Burke,T.G. Munshi,C.B.,Mi,Z.及びJiang,Y.,“The  Important  Role  of  Albumin  in  Determining  the  Relative  Human  Blood  Stabilities  of  the  Camptothecin  Anticancer  Drugs,”（1995）J. Pharma.  Sci.84,518-519；Mi,Z.及びBurke,T.G.,“Differential  Interactions  of  Camptothecin  Lactone  and  Carboxylate  Forms  with  Human  Blood  Components,”（1994）Biochemistry,33,10325-10336；Mi,Z.及びBurke,T.G.,“Marked  Interspecies  Variations  Concerning  the  Interactions  of  Camptothecin  with  Serum  Alubumins：A  Frequency-Domain  Fluorescence  Spectroscopic  Study,”（1994）Biochemistry  33、12540-12545；Mi,Z.,Malak,H.及びBurke  T.G.,“Reduced  Alubumin  Binding  Promotes  the  Stability  and  Activity  of  Topotecan  in  Human  Blood,"（1995）Biochemistry,34,13722-13728、（これらの開示が参考として本明細書に含まれる）を参照されたい。
【００４０】
pH 7.4のリン酸緩衝生理食塩水（PBS）での頻度領域蛍光寿命分光法（frequency-domain  Fluorescence  lifetime  spectroscopy）は、ヒト血清アルブミン（HSA）はラクトン形態よりも200倍高い親和性でカンプトテシンのカルボキシレート形態と優先して結合することを明らかにする。これらの相互作用は、蛋白質の不存在下よりもHSAの存在下で、より速く完全に開環するカンプトテシンを生ずる。ヒト血漿において、pH 7.4及び37℃で、カンプトテシンラクトンは、ｔ1/2値が１１分でほとんど無視してよい平衡値での％ラクトンが０．２％で、カルボキシレートの形態に、速く完全に開環する。血漿に対して全血において、カンプトテシンは、高まった安定性（ｔ1/2値が２２分、及び平衡値での％ラクトンが５．３％）を示した。ヒト全血におけるカンプトテシンラクトンの高まった安定性は、赤血球の脂質二重層に関連する薬物によることが見出された。カンプトテシンは赤血球膜に結合し、薬物はアシル鎖領域に局在して、その結果、加水分解から保護されたままである。
【００４１】
臨床的に興味のあるいくつかのカンプトテシン類似体のヒト血液安定性が比較された。カンプトテシンの場合に認められたように、9-アミノカンプトテシンは、HSAを含むPBS溶液で、ほとんど完全に加水分解される（>97 %）ことが認められた。カンプトテシンに関して有意に減少した蛍光量子収率による、９−アミノ同属種のラクトン及びカルボキシレート形態の相対的結合親和性を分光学的に計量する試みはなされなかったが、HPLCデータは、この薬品のラクトン形態よりも、カルボキシレート形態に優先的に結合するHSAと一致した。血漿では、＞９９．５％の９−アミノ類似体が、カルボキシレートに転換されることが確認され、この知見は、カンプトテシンを使用して得られ、安定性データとも密接に一致していた。全血では、＜０．５％及び５．３％は、それぞれ、９−アミノカンプトテシン及びカンプトテシンの画分であり、これらの画分は、平衡でラクトン形態のままであった。９−アミノカンプトテシンに対して、カンプトテシンの平衡で残っている約１０倍高いラクトンレベルは、一部、向上した親油性、及び水溶性環境から全血に存在する赤血球膜中への移動のためのカンプトテシンのより大きな能力によって、説明できる。
【００４２】
カンプトテシン及び９−アミノカンプトテシン（各＜０．５％及び５．３％）、トポテカン（１１．９％）、ＣＰＴ−１１（２１．０％）及びＳＮ−３８（１９．５％）における、全ヒト血液中に平衡で残っている低レベルのラクトンとの明確な対比で、すべて、改善された血液安定性が示される。トポテカンにおける平衡でのラクトンレベルは、９−アミノカンプトテシンよりも２０倍高いが、一方、ＩＲＴ（ＣＰＴ−１１）及び１０−ヒドロキシ−７−エチルカンプトテシン（ＳＮ−３８）における対応するラクトンレベルは、９−アミノカンプトテシンの場合よりも約４０倍高い。トポテカン、ＣＰＴ−１１及びＳＮ−３８の相対的安定性の有意な増加は、ＨＳＡとの有利な相互作用に相関させることができる。これらの薬剤は、ＨＳＡによるカルボキシレート薬剤形態の優先的な結合を妨げて防ぐ、構造的置換基を７−及び９−位に含む。時間分解される蛍光異方性の技術が、カンプトテシンカルボキシレートがＨＳＡと結合して、溶液中でくずれてタンパク質としっかりと結合する実験条件下では、トポテカン及びＣＰＴ−１１のカルボキシレート形態は、ＨＳＡと結合しないことを立証するのに使用された。ＳＮ−３８の場合、ＨＳＡがこの薬物のラクトン形態と優先的に結合し、それによって、ラクトン−カルボキシレート平衡がラクトンにシフトすることを示す、直接の分光学的証拠が得られている。
【００４３】
したがって、ＨＳＡが、カンプトテシンの相対的ヒト血液安定性を決定するのに重要な役割を果たしていることは、これらの知見から明白である。カンプトテシン及び9-アミノカンプトテシンの場合、蛋白質は、カルボキシレート薬剤形態のシンク(sink)として作用し、開環種を結合して、それによって、ラクトン−カルボキシレートの平衡をカルボキシレートにシフトする。しかしながら、トポテカン、ＣＰＴ−１１及びＳＮ−３８の場合、このような、ＨＳＡによるカルボキシレート薬剤形態の優先的な結合は、認められない。カンプトテシン及びその９−アミノ類似体の状態とは反対に、ＨＳＡは、ＳＮ−３８のラクトン形態と優先的に結合し、それによって、この生物学的活性種のより高い循環レベルを促進する。
現在臨床上関連するカンプトテシンで起こる活性薬物の速い大量の損失は、減少したタンパク質結合相互作用及び改善されたヒト血液安定性を有するカンプトテシンを特定するのに非常に有利なことを示す。その観点から、本発明のカンプトテシン類似体は、高い抗ガン性活性を維持する一方、改善されたヒト血液安定性を示す薬剤を生じる、固有の特性を示す。
【００４４】
脂質二重層分配（即ち、親油性）及びラクトン環安定性の決定のための実験方法薬品
全てのカンプトテシン類似体は、20(S)構成でり、蛍光検出のHPLC分析によって決定されるように高純度（>98%）のものであった。全ての他の薬剤は、試薬等級であり、更なる精製なしで使用した。Milli-Q UV  PLUS精製システム（Bedford,（MA）によって提供される高純度水を、全ての実験において使用した。
薬物原液の調製
薬物の原液を、2×10-3M濃度のジメチルスルホキシド（A.C.S．spectrophotometric  grade、Aldrich、Milwaukee、WI）で調製して、4℃で暗所に保存した。L-α-ジミルストイルフォスファチジルコリン（DMPC）及びL-α-ジミルストイルフォスファチジルグリセロール（DMPG）を、Avanti  Polar  Lipids、Alabaster、ALから得て、更なる精製なしで使用した。全ての他の薬剤は、試薬等級であって、更なる精製なしで使用した。
【００４５】
小胞の調製
小さい単層小胞（SUV）懸濁液を、Burke及びTrittonの方法によって、実験日に調製した。“The  Structure  Basis  of  Anthracycline  Selectivity  for  Unilamellar  Phophatidylcholine  Vesicles：  An  Equilibrium Binoinl Study，”Biochem 24：1768-1776（1985）を参照されたい。簡単に言うと、リン酸緩衝生理食塩水（PBS（pH 7.4））中に200mg/mL脂質を含む貯蔵脂質懸濁液を、脂質のTMより上に5〜10分、ボルテックス(Vortex)混合によって調製した。次に、脂質分散液を、バスタイプのソニケーター（Laboratory  Supplies  Co.,  Hicksville,N.Y.）を使用して、３〜４時間、脂質分散液が光学的に清澄になるまで超音波処理した。ｐH7.4から6.8への減少が、DMPGのSUV調製において認められた。したがって、これらのSUV懸濁液のpHを、少量のPBSの2.5M NaOHを使用して7.4に調製した。小胞懸濁液の各タイプを、37℃30分でアニールして、それから実験で使用した。
【００４６】
蛍光計測
定常状態の蛍光測定値を、恒温キュベットコンパートメントを有する、SLM  Model  ９８５０  分光蛍光計で得た。この計測器を、IBM PS/2  Model  55  SXコンピュータと連結した。励起及び発光スペクトルを、8ナノメートルの励起分解及び4ナノメートルの発光分解で記録した。すべての場合、スペクトルについて、ブランクのスペクトルの減算によって、非標識脂質から又は溶剤からのバックグラウンド蛍光及び散乱に対する補正を行なった。定常状態の蛍光強度の測定値を、偏光子の不存在下で、行なった。定常状態の異方性(a)測定値を、2つの極性強度の同時測定のための“T-フォーマット”で計測器で決定した。偏光子の整合を、水中の０．２５μｍポリスチレンマイクロスフェア（Polysciences、Inc、Warrington、PA）の希釈懸濁液を使用してルーチンでチェックして、＞０．９９の異方性値が得られた。それとは別に、偏光子配向を、水のグリコーゲン希釈液を使用してチェックした。異方性を、a=（IVV−GIVH）/（IVV+GIVH）から計算した。ここで、G = IVH/IHH及び添え字は、各々、励起及び発光偏光子の垂直及び水平配向に関する。
【００４７】
カンプトテシンの異方性測定値を、３７０ｎｍの励起光及び各発光チャンネル上のロングパスフィルターを使用して処理し、バックグラウンド散乱及び/又は残留蛍光から薬物蛍光シグナルを単離した。すべての発光フィルターを、Ｏｒｉｅｌ社（Ｓｔａｍｆｏｒｄ，（ＣＴ））から得た。励起光及び発光フィルターの組合せで、バックグラウンドシグナルから蛍光の十分な分離ができた。分散光とともにバックグラウンド蛍光の寄与は、典型的には、総強度の1%未満だった。カンプトテシンのラクトン環及び関連同属種は、半減期約２０分の水溶性培養液中で加水分解を受けるので、すべての測定値は、熱的に平衡前の溶液で薬物原液を混合した後、最短可能時間（約０．５〜１分）以内で完了したので、実験は加水分解生成しなかった。
【００４８】
平衡結合定数の決定
Burke,T. G.、Mishra,A. K.、Wani,M. C.及びWall,M. E.“Lipid  bilayer  partitioning  and  stability  of  camptothecin  drugs”Biochemistry.  32：5352-5364（1993）に報告されている蛍光異方性滴定の方法は、1×10-6Mの全薬物濃度及び多様な脂質濃度を含むリポソーム懸濁液中の薬物の遊離及び結合種の濃度を決定するために使用した。全ての実験は、ガラスチューブで行なった。全体的な会合定数は、K=[AB]/[AF][L]で定義され、ここで、[ AB ]は、結合薬物濃度を表し、[ AF ] は、遊離薬物を表し、[ L ]は、サンプルの全脂質濃度を表す。結合等温式の二重逆数プロット｛1/(薬物の結合画分)対1/[脂質]｝は、直線的であり、K値は、直線最小平方分析方法によってそれらの傾斜から決定された。K=[AB]/[AF][L]関係に基づくコンピュータープログラムを、詳細に述べられたK値及び全薬物における結合薬物レベルを予測するために書き込んだ。
【００４９】
ラクトン環開環の速度論
異なる血液成分の存在下でのカンプトテシンの加水分解速度論は、文献で説明したように、定量C18逆転相高性能液体クロマトグラフィ（HPLC）分析によって決定された。上記Mi及びBurke（1994）を参照されたい。全血及び分画した血液サンプルの調製を、上述したように実行した。Sigma  Chemical  (St.Louis,MO)からの高純度（> 97%）結晶化HSAを使用した。HSA原液を、最終ｐH7.40±0.05のPBS緩衝液で調製した。HSA濃度を、39,800M-1cm-1（Porter,1992）の吸光係数を使用して、278ナノメートルのUV吸光度によって決定した。全ての他の薬物は、試薬等級であって更なる精製なしで使用された。Milli-Q UV  PLUS精製システム（Bedford,MA）によって提供される高純度水を、全ての実験で使用した。
【００５０】
In vitro  細胞培養実験で決定された本発明の高親油性カンプトテシンの抗ガン性活性
細胞
細胞毒性測定を、MDA-MB-435腫瘍形成性ヒト乳ガン細胞を使用して実施した。細胞を、72時間の暴露期間に渡って薬物濃度の範囲に暴露し、次に、スルホルローダミン（sulphorrhodamine） B（SRB）分析を使用して評価した。SRB分析を、スタンダードアッセイを使用して行なった。
【００５１】
蛍光異方性滴定は、本発明のカンプトテシン類似体が脂肪小胞に対し例外的に高い平衡会合定数を示すことを証明する
図12〜15は、いくつかの新しいカンプトテシン類似体の蛍光励起及び発光スペクトルを表す。図12は、リン酸緩衝生理食塩水溶液中の1mM DB-172の励起及び発光スペクトルを要約する。この図は、このサンプルへの脂質二重層の導入があると、薬物と膜との間の相互作用を表す、化合物の蛍光発光の増加があることを示す。溶媒をエタノールに変えると、蛍光も変化する。図13〜15は、膜の存在及び不存在下での、各DB-173、DB-174及びDB-67の発光スペクトルを要約する。各場合において、脂質二重層への薬物分配として蛍光強度で示される増加がある。また、各場合において、膜との薬物相互作用上、顕著な青色変化又は低い波長への発光スペクトルの変化がある。図１２〜１５に示されたスペクトルデータは、新しい薬剤が蛍光性であって、薬物のスペクトルパラメータが、サンプルへの脂質二重膜の添加で変化することをはっきりと示す。表２は、すでに製造されている同属種と、新しいカンプトテシン類似体の最大励起及び発光波長を比較する。カンプトテシンの内因性蛍光性質は、脂質二重層を有する様々な類似体の結合相互作用の強さを決定するために使用される、定常状態の蛍光異方性滴定の感度のよい方法を可能にする。
【００５２】
【表２】
0004638987.tif 000011
【００５３】
以下の名称を、ここで使用する：
DB-172：（20S）-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシン（36c）
DB-173：（20S）-10-アミノ-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシン（36b）
DB-174：（20S）-10-ヒドロキシ-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシン（36a）
DB-67：（20S）-10-ヒドロキシ-7(tert-ブチルジメチルシリル)カンプトテシンDB-148：（20S）-7-(3-クロロプロピルジメチルシリル)カンプトテシン
DB-158：（20S）-10-ヒドロキシ-7-(3-クロロプロピルジメチルシリル)カンプトテシン
DB-202：（20S）-7(tert-ブチルジメチルシリル)カンプトテシン；CHJ-792（10-アミノ-7-トリメチルシリルカンプトテシン（20）
DB-124：10-ヒドロキシ-7-(3-ジメチルアミノプロピルジメチルシリル)カンプトテシンハイドロクロライド塩）
及びDB-104：7-(3-ジメチルアミノプロピルジメチルシリル)カンプトテシンハイドロクロライド塩。
【００５４】
定常状態の蛍光異方性(a)測定値は、Perrinの式による蛍光分子の回転率に関係する：
ao/a= 1+（τ/Φ）
ここで、aoは、脱偏光回転（depolarzing  rotation）不存在下での制限蛍光異方性であり、τは、励起状態の存続期間であり、Φは、フルオロフォール（fluorophore）の回転性相関時間（rotational  correlation  time）である。上記式は、蛍光性化合物のτ又はΦ値のどちらの変化でも、その定常状態の異方性を調整できることを示す。
【００５５】
PBS、グリセロール及びメタノール中のカンプトテシンの励起状態の存続期間の値を、37℃で試験した。存続期間の値を、それぞれ、4.7ns、3.8ns及び3.5nsと決定した。同様に、DMPC二重層と結合した場合のカンプトテシンの存続期間の値を37℃で測定して、膜−結合薬物の平均値は、3.7nsであることが分った。
したがって、上述した存続期間の測定値は、カンプトテシンの励起状態の存続期間が微環境の変化（例えば、水溶性環境からリン脂質膜への、溶媒での変化又はフルオロフォール再移動）に対し、相対的に感度が悪いことを示す。フルオロフォールのτ値は、その回転運動に強い影響を与える変化（例えば、溶媒の粘性の変化や大きい高分子の集合、例えばリポソーム粒子とのフルオロフォールの結合）の間、相対的に一定のままであるため、Perrinの式は、a  及びΦ値間に直接の関係が存在することを示す（すなわち、蛍光性化合物のΦ値が増加すると、次に、その定常状態の異方性値も増加する）。
【００５６】
カンプトテシン類似体の定常状態の蛍光異方性値は、溶媒粘性及び小さい単層脂質小胞の群集に高い感受性がある。例えば、トポテカンは、PBSで0.008のa値を有するが、そのa値は、粘性のある溶媒のオクタノール及びグリセロールでは、それぞれ、９倍と４０倍に増加する。カンプトテシンのa値を２１倍に高めると、DMPC又はDMPGのいずれかを含む小胞に薬物が結合すること観察される。膜結合に対するカンプトテシン薬物のaの感度が高いため、蛍光異方性滴定の方法を、脂質二重層を有するカンプトテシン類似体の平衡結合を研究するのに使用した。上述のように、実験は、各薬物濃度が一定に保たれた（典型的には１又は２μM）、サンプルの一組のa値を決定することを含むが、一組の膜の中の脂質濃度は、０〜０．２９Mの範囲で多様にした。
【００５７】
新しく合成されたカンプトテシンからのあざやかな蛍光発光の結果（スペクトルパラメータの概要を表２に見出すことができる）により、図１６〜１８に概略された吸着等温線は、相対的にバックグラウンドシグナルの影響を受けない。１μMの薬物濃度及びバックグラウンドシグナルから発せられた光（即ち、存在し得る不純物による、拡散された励起光及び外来の蛍光シグナル）を分離するロングパスフィルターを使用すると、PBS緩衝液に溶解された薬物からのシグナルレベルは、典型的に、膜の不存在下では９９．７％であり、膜の存在下では９８％よりも大きかった。吸着等温式を、カンプトテシン薬物のための全体的な会合定数を決定するために使用した。全体的な会合定数を、以下のように定義する：
K=[ AB ]/[ AF ] [ L ]
ここで、[ AB ]は、結合した薬物の濃度を表し、[ AF ]は、遊離薬物の濃度を表し、[ L ]は、小胞懸濁液の全脂質濃度を表す。この式は、遊離脂質濃度が全脂質の濃度にほぼ等しい場合（即ち、遊離脂質の濃度は、結合した薬物の濃度よりも有意な超過にある）に有効である。この条件が満たされるならば、Kは、二重逆数プロットの傾きの逆数から決定できる。このような二重逆数プロット（代表的なデータを、図19及び20に示す）において、1/全薬物結合の画分を、１のｙ切片値（結合部位均一性を示す系のため）で、1/脂質濃度に対してプロットした。このような、DMPC及びDMPGの小さい単層小胞(SUV)の調製の新しいカンプトテシン類似体の結合における二重逆数プロットは、良い相関係数を有する直線であった。これらのプロット線は、膜調製の他のタイプとの薬物結合に対する対応するプロットと同様、これらの脂質濃度でのフルオロフォールの結合は、上記式によって適切に記述されることを示す。
【００５８】
表3で要約される研究は、脂質二重層に対するカンプトテシン結合の構造基準を調べる。pH及び温度の生理的に近い条件下で実施したこれらの研究に、2種類の膜が含まれる；これらの膜は、液体相及び電気的中性のL-α-ジミリストイルフォスファチジルコリン（DMPC）；及び液体相及び負荷電されたL-α-ジミリストイルフォスファチジルグリセロール（DMPG）を含む。DMPC及びDMPGは、同一の鎖長さを有するが、それらの頭基の電荷は異なる。
【００５９】
【表３】
0004638987.tif 000012
【００６０】
表3の研究において、結合等温線を、蛍光異方性滴定の方法を使用して作図して、K値を二重逆数プロットの傾きから決定した。K値は、10%の不確実性の問題がある。全体的に、表3に含まれるデータの最も著しい特徴は、7位での唯一の置換又は7位又は10位の二重置換のいずれかによって達成できる強い変調である。表3に含められるのは、すでに公知のカンプトテシン化合物である。これらの薬剤のデータを、先の化合物に関する新しいカンプトテシンの高い親油性性質を示すために含めた。トポテカンは、カンプトテシンのK値よりも約１０倍少ないDPCリポソームのK値を有することが見いだされた。表3から、本発明の化合物は、カンプトテシン又はトポテカンのいずれかよりも、より一層、親油性であることが明白である。例えば、DMPC又はDMPGを含む膜に対するDB67の親和性は、カンプトテシンの対応する値の27倍及び28倍大きい。カンプトテシンと比較して、DB172及びDB174は、約100倍及び90倍もDMPC膜を結合しやすい。DB173はまた、非常に親油性であり、カンプトテシンで測定されるK値よりも約５８倍も大きいDMPCのK値を示す。概略すると、表３に挙げた本発明の新規化合物は、同じα-ヒドロキシ-δ-ラクトン環系を含む、他の、以前のカンプトテシン類似体に対して比較すると、はるかに高い膜親和性を示すことが見出された。
【００６１】
水溶性溶液中の高親油性カンプトテシンの挙動の比較
図21は、生理的温度でのリン酸緩衝生理食塩水（PBS）緩衝液（pH 7.4）中のDB172の安定性を要約する。図に示されるのは、異なる濃度でのDB172における時間の相関としてのラクトン画分のプロットである。薬物を、DMSOの量が水の量に対して非常に小さく（0.5%未満）なるように、濃縮されたDMSO原液から水溶液に添加した。薬物安定性は、添加された薬物濃度に著しく依存することが分った。より希釈した薬物濃度では、その薬物は、α−ヒドロキシ−δ−ラクトン部分を含む他のカンプトテシンを、以前に観測されたのと同様に、加水分解する。高い薬物濃度で、DB-172のラクトン環の特徴づけられる安定化が認められたが、典型的には、他のカンプトテシンに対しては認められない知見があった。
【００６２】
図22は、時間及びpHの相関としてのDB172の蛍光強度の依存を調査する。これらの実験において、DB172を、ラクトン形態として水溶液に添加する。薬物がラクトン形態のままである低ｐHでは、時間とともに強度の変化が低くなる。ｐH１０では、ラクトンはより速く加水分解され、カルボキシレートを形成する状態であり、蛍光強度の有意な変化が認められる。ラクトンを含むｐH10の非蛍光ミセル凝集物は、分解されて、モノマーの蛍光種として水溶液中に存在する傾向がある開環カルボキシレート形態を形成する。
図２３は、濃度の相関としてのDB172の蛍光強度を調査する。ラクトン水溶液をラクトン薬物の低い濃度で添加すると、蛍光シグナルの変化が最も大きくなり、一方、高い薬物濃度（１０μM）では蛍光強度の変化は最小となる。低い濃度では、減少した蛍光を示すDB172のミセル凝集物は分解でき、蛍光性のカルボキシレート種に形成できるが、高い薬物濃度では、薬剤が、凝集したままか減少した蛍光状態のままで存在するという平衡状態が裏付けられると信じられる。図２４は、ｐH10の水溶液にDB172のカルボキシレート形態を加えると、ｐH10で蛍光シグナルの変化は認められないが、ラクトンが形成できるより低いｐH値では、時間とともに蛍光強度が減少する。減少したｐHで生ずる蛍光の再度のこの減少は、減少した蛍光量子収率のラクトン凝集物の構造によることが明白である。
【００６３】
図２１〜２４は、自己で結合し、ミクロモルの薬物濃度でのミセルを形成するDB172ラクトンの普通ではない能力と合致する。ミセルのDB172の凝集物は、減少した蛍光を示す。このようなカルボキシレート形態を生ずる加水分解が許される条件ならば、サンプルの蛍光強度の増加がある。図２５は、水溶液へのラクトン薬物形態の添加に続く、サンプルの蛍光発光での相対的な変化を比較する。これらの実験において、各薬物の値を、時間がゼロの時に１の値に標準化し、薬物が＝０のときに凝集する場合における、様々な類似体が分離する能力を、経時的にモニターした。幾つかの薬剤において、カルボキシレートを形成する加水分解は、水溶液中で生じる。カルボキシレート形態は、自己で結合して減少した蛍光を示すことが少なそうなので、薬物の加水分解による凝集物の崩壊は、蛍光強度の増加とともに進行する。DB172は、＝０のときの異常に高い程度で自己結合し、一方、他の薬剤は、ずっと少ない程度で自己結合し、ゆえにこれらの薬剤のシグナルは、時間とともにより一定になり、加水分解反応に高感度でなくなる。DB173及びDB67は、DB172に関するモノマー薬物として水溶液中でより一層見つかりそうであることが明白である。このことは、患者に投薬するための水溶液が、凝集したDB172粒子の懸濁液よりもより均質であるということにおいて、有利な特徴であろう。
【００６４】
ヒト血液中の高親油性カンプトテシンの著しく強化された安定性
また、本発明の高親油性カンプトテシンの活性ラクトン形態も、水溶解性類似体と比較して、血液のようなヒト組織でより長い時間持続することが示された。図２６では、PBS緩衝液（パネルA）対全血（パネルB）での遊離形態における幾つかの新しいカンプトテシン類似体の安定性を比較した。これらの化合物には、以下のものを含む。：7-t-ブチルジメチルシリルカンプトテシン（DB202）、7-t-ブチルジメチルシリル-10-ヒドロキシカンプトテシン（DB67）、7-(3-クロロプロピル)ジメチルシリルカンプトテシン（DB148）及び7-(3-クロロプロピル)-ジメチルシリル-10-ヒドロキシカンプトテシン（DB158）
図27は、PBS緩衝液（パネルA）のみ、生理的に関連した30mg/mlのHSAを含むPBS緩衝液（パネルB）、及びヒト血液（パネルC）中のDB172、DB173及びD174の安定性データを要約する。全ての実験は、生理的温度で実行された。
【００６５】
高い生物学的活性及び親油性の化合物、7-t-ブチルジメチルシリル-10-ヒドロキシカンプトテシン（DB-67）は、ｔ1/2が１３０分及び平衡値での％ラクトンが３０（ヒト全血における平衡値での％ラクトンと比較すると、9-アミノカンプトテシン（<0.3 %）、カンプトテシン（5.3%）、トポテカン（8.6%）、CPT-11（21.0%）及びSN-38（19.5%））で、ヒト血液での優れた安定性を示すことが分った。安定性データを、表4で要約する。新しいDB67薬剤は、カンプトテシンよりも25倍を超えて親油性であることが分り、その10-ヒドロキシの機能性は、HSAの存在下で安定性の促進を顕著に助けることが分った。DB67は、脳のガンの治療に対する理想的な候補であろう。カンプトテシンよりも数倍高い内因性活性により、DB67は、ヒト血液で非常に高い平衡ラクトンレベルを示し、カンプトテシン及び9-アミノカンプトテシンのようにヒトアルブミンにしっかりと結合せず、脳血液関門をより直ちに渡る薬剤を可能にする高親油性である。
【００６６】
【表４】
0004638987.tif 000013
【表５】
（表４の続き）
0004638987.tif 000014
【表６】
（表４の続き）
0004638987.tif 000015
【００６７】
また、注目すべきは、DB-173（平衡で36%ラクトン）及びDB174（平衡で33%ラクトン）の非常に高いヒト血液安定性である。これらの値は、臨床上関連した水溶解性のカンプトテシンよりも有意に大きく、それらは、非置換のA環を含むDB-172のような親油性カンプトテシンと有利に競争する。
【００６８】
高親油性カンプトテシンは、経口生体利用性を示す
図２８は、DB-67が、胃腸内の管から吸収されることを証明するデータを含む。5mg/kgの投薬に続いて行なわれた血液レベルを評価するために、4匹の動物に、DMSOで溶解したDB-67の0.1ml胃内注射を与えた。そのストックは、1.6mg/mlの濃度でDB67を含んだ。３０分、1時間、2時間及び4時間の時点で、1mlの血液サンプルを心臓穿刺によって、抜いて集めた。分析するまで、サンプルを３分遠心分離し、冷凍保存した。DB67のレベルは、40ng/mlレベルよりも上がって、薬物の多くが活性ラクトン薬物として持続することに注目すべきである。従って、ここで記述された新規の高親油性類似体は、経口で投薬してもよく、投与後血流に表れる。
【００６９】
高親油性カンプトテシンは、ヒト血清アルブミンの存在下において高い抗ガン有効性さえ示す
上述したように、水性溶液中のカンプトテシンの自然に生ずる加水分解は、閉環したラクトン形態よりもはるかに活性のない開環カルボキシレート形態を生ずる。従って、ラクトンとカルボキシレート形態との間の平衡は、薬物活性の最も重要な決定要素である。以前の研究では、ヒト血清アルブミン（HSA）は、カルボキシレート形態に優先的に相互作用することによって、カンプトテシンのカルボキシレートのほうの平衡に大きく作用することが示された。このHSA効果のため、カンプトテシンの生物学的に活性なラクトン形態のレベルは、腫瘍部位で弱めることができる。薬物-HSA相互作用を、薬物構造変更によって操ることができる。A  10-OHの置換は、HSAに対する薬物親和性を約２０倍減少させ、追加の7-エチルの置換は、更に、ラクトン形態のほうの結合を変化させる。本発明の血液-安定カンプトテシン類似体の細胞毒性上のHSAの影響を決定するために、カンプトテシン類似体の細胞傷害効果が研究された。
【００７０】
スルフォローダミン B（SRB）分析を使用した。このアッセイは、生きている細胞の全タンパク質レベルを測定する。死細胞からのタンパク質を、溶解して、TCA固定の前に洗浄工程で除去する。しかしながら、まだ死の段階の初期の細胞は、それらの膜の完全性を有し、したがって、内部にタンパク質内容物が残っていることがありうる。その結果、490ナノメートルでの光学密度は、時々過大評価されることがあり、細胞毒性を低く評価した。SRBアッセイを検査するために、化学治療剤の多様な範囲を腫瘍細胞株の多重パネルに渡ってテストし、近い相関を、標準のテトラゾリウム（ＭＩＴ）アッセイ及びクローン原性アッセイで見つけた。SRBアッセイは、現在かなり注目されるアッセイであり、抗ガン性薬物スクリーニングの標準アッセイとして、最近NCIに承認された。
1mg/ml HSAの存在又は不存在下でのMDA-MB-435腫瘍形成性の転移ヒト乳ガン細胞に対する多様なカンプトテシンの細胞毒性を、表5において要約する。72時間間薬物に暴露した細胞に対する細胞毒性値を、表5において要約する。全体的に、HSAは、カンプトテシンのIC50値を強く弱めることができるが、HSAが新しい抗親油性類似対の細胞毒性を調整する範囲は、有意に減少する。実際、1mg/ml HSAは、DB173の細胞毒活性に影響を及ぼさなかった。HSAの存在下で、DB173は、ヒト乳ガン細胞に対する低いnm力価を示す。体の血液及び組織を通じて非常に多量なアルブミンタンパク質のため、アルブミン存在下でよく効くのを維持する薬剤の能力は、潜在的に有意である。
【００７１】
0004638987.tif 000016
【００７２】
したがって、本発明の発明者は、カンプトテシンの構造の7位にシリル基又はシリルアルキル基（例えば、トリメチルシリル基又はトリメチルシリルエチル基）の導入によって、典型的に、カンプトテシン（例えば、（20S）-CPTと比較した実施例１の化合物を参照のこと）及びその他の以前のカンプトテシン類似体よりも、よりよい抗腫瘍活性及びヒト血液安定性を有する化合物を生じることを発見した。7及び10位での二重置換は、より有利でさえある（例えば、化合物DB-173及びDB-174を参照のこと）。シリル基又はシリルアルキル基は、また、イリノテカンシリーズ（例えば、イリノテカンと比較した実施例6の化合物を参照のこと）において有益である。
【００７３】
ヒドロキシ基が、実施例5の化合物を生成するために実施例1の化合物の10位で導入される場合、抗腫瘍の活性は、本質的に不変のままである。実施例6の化合物は、SN-38の同じ系統であり、イリノテカンの活発な代謝産物である。また、トリメチルシリル基が、11位のフルオロ原子（例えば、実施例7の化合物を参照のこと）、又は10又は11位の主要なアミン基（それぞれ、実施例8及び9を参照のこと）とともに導入される場合に、高活性が本研究で認められた。また、12位のフルオロ原子の導入は、カンプトテシンよりも約２倍少ない効き目しかない類似体を生じる（（20s）-CPTと比較した実施例11を参照のこと）。この結果は、意外にも、以前に文献において報告された12-置換カンプトテシンの貧しい活性が考えられる。
【００７４】
本発明の新規カンプトテシン類似体は、固有の生物物理学及び生理的特性を有する。B環の変更、及びA環とB環の変更を有するこれらの高親油性カンプトテシン類似体は、著しく改善されたヒト血液中のα-ヒドロキシ-δ-ラクトン環安定性を示す。また、本発明のカンプトテシン類似体は、ヒト血清アルブミンの存在下でさえ、経口の生体利用性及びよく効く抗ガン性活性を示す。
従って、哺乳類（人間の又は動物）を、式（4）の化合物又はその薬学的に許容可能な塩の薬学的に効果的な量の、哺乳類への投与を含む方法によって、治療してもよい。哺乳類の状態を、これによって改善できる。
例えば、本発明の化合物を、種々の投薬形態で投与できる：非経口的に（例えば、静脈内、皮内、筋肉内又は皮下に）；経口的に（例えば、タブレット、ロゼンジ、カプセル、懸濁液又は液体溶液の形で）；直腸又は膣に、座薬の形で；又は典型的に（例えば、ペースト、クリーム、ゲル又はローションとして）。
投与される最適の投薬量は、当業者によって決定されてもよく、使用される式（４）の特定の化合物、調製の濃度、投与の方法、投与の時間及び回数、及び患者の状態の向上で様々に変わるであろう。特定の患者に依存する追加の要因は、投与量を調節する必要を生じるであろう。かかる要因は、患者の年齢、体重、性別及び食事制限を含む。投与量は、一度に投与してもよく、又は時間間隔を変更することによってより少ない投与量に数回に分けてもよい。
【００７５】
【実施例】
以下の実施例は、本発明の説明のために示され、本発明を限定することを目的とするのではない。
【００７６】
【実施例１】
(20S)-7-トリメチルシリルカンプトテシンの製造
【００７７】
【化１４】
0004638987.tif 000017
【００７８】
(1) (S)-4-エチル-4-ヒドロキシ-6-ヨード-3-オキソ-7-(3-トリメチルシリル-2-プロピニル)-1H-ピラノ[3,4-c]-8-ピリドン
DME(2.5 mL)及びDMF(0.60 mL)中の(S)-4-エチル-4-ヒドロキシ-6-ヨード-3-オキソ-1H-ピラノ[3,4-c]-8-ピリドン [ヨードピリドン (2), 250 mg, 0.746 mmol]溶液に、0℃、アルゴン下、鉱油中の60% NaH(31.3 mg, 0.783 mmol)を添加した。LiBr (150 mg, 1.75 mmol)を10分後に添加した。室温で15分後、3-トリメチルシリル-2-プロピニルブロミド(430 mg, 2.24 mmol)を注入し、反応混合物を暗中、65℃で20時間加熱した。最終の溶液をブライン(20 mL)へ注ぎ、AcOEt(6 x 15 mL)で抽出し、乾燥(Na2SO4)した。溶媒の除去後に得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー(CHCl3/AcOEt 95:5)に付し、283mg(85%)のフォームを得た:[α]20D +36.7 (c 1, CHCl3);  IR (ニート（neat）, cm1) 3384, 2940, 2166, 1730, 1634, 1518, 1406, 1130, 841, 752;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.14 (s, 9 H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3 H), 1.77 (m, 2 H), 3.66 (s, 1 H), 5.00 (d, J = 17.2 Hz, 1 H), 5.10 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 5.15 (d, J = 17.2 Hz, 1 H), 5.49 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 7.16 (s, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 0.40, 7.7, 31.5, 44.5, 66.3, 71.8, 90.9, 97.9, 116.5, 118.1, 148.6, 157.9, 173.3;  C16H20INO4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 445.0206,実測値445.0203;  LRMS (EI) m/z 445 (M+), 430, 416, 386.
【００７９】
(2) (20S)-7-トリメチルシリルカンプトテシン
(1)で製造した化合物(36.6 mg, 0.082 mmol)、フェニル イソニトリル(0.25 mmol)及びヘキサメチルジチン(42 mg, 0.123 mmol)のベンゼン(1.3 mL)溶液に、アルゴン下、70℃で、275W GE サンランプ（sunlamp）を10時間照射した。最終の反応混合物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー(CHCl3/MeOH 96:4)に付し18.8mg(54%)のわずかに黄色の固体を得た:[α]20D +39.0 (c 0.2, CHCl3/MeOH 4:1);  1H NMR (300 MHz, CDCl3/CD3OD 3:1) δ 0.50 (s, 9 H), 0.83 (t, J = 7.4 Hz, 3 H), 1.74 (m, 2 H), 3.72 (br s, 1 H), 5.12 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 5.16 (br s, 2 H), 5.47 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 7.49 (t, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.54 (s, 1 H), 7.62 (t, J = 8.1 Hz, 1 H), 8.02 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 8.07 (d, J = 8.1 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3/CD3OD 3:1) δ 0.9, 7.2, 29.3, 31.0, 51.7, 65.5, 98.3, 118.4, 127.3, 128.0, 129.7, 130.0, 131.8, 134.3, 144.7, 145.6, 147.3, 151.1, 173.5;  C23H24N2O4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 420.1505,実測値420.1501;  LRMS (EI) m/z 420 (M+), 391, 376, 361, 347, 320, 291.
【００８０】
【実施例２】
(20S)-7-tert-ブチルジメチルシリルカンプトテシンの製造
【００８１】
【化１５】
0004638987.tif 000018
【００８２】
(1) (S)-4-エチル-4-ヒドロキシ-6-ヨード-3-オキソ-7-(3-tert-ブチルジメチルシリル-2-プロピニル)-1H-ピラノ[3,4-c]-8-ピリドン
実施例1-(1)に記載の手順に従い, ヨードピリドン (2) (200 mg, 0.60 mmol) 及び3-tert-ブチルジメチルシリル-2-プロピニルブロミド (280 mg, 1.20 mmol)を提供し、フラッシュクロマトグラフィー (CH2Cl2/AcOEt 9:1)後に、173mg(59%)の白色のフォームを得た:[α]20D +58 (c 0.2, CHCl3);  IR (CHCl3, cm-1) 3548, 2950, 2927, 2859, 1745, 1648, 1526;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.08 (s, 6 H), 0.92 (m, 12 H), 1.79 (m, 2 H), 3.77 (br s, 1 H), 5.00-5.25 (m, 3 H), 5.50 (d, J = 16.4 Hz, 1 H) 7.19 (s, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ −4.9, 7.63, 16.6, 26.0, 31.6, 44.5, 66.3, 71.8, 89.4, 98.6, 100.0, 116.5, 118.1, 148.6, 158.0, 173.2;  C19H26INO4Si (M+)について計算したHRMS (EI) m/z 487.0679,実測値487.0676;  LRMS (EI) m/z 487 (M+), 430, 386, 96, 81, 57.
【００８３】
(2) (20S)-7-tert-ブチルジメチルシリルカンプトテシン
実施例1-(2)に記載した手順に従い、 (1)で製造した化合物(48.7 mg, 0.10 mmol)を提供し、フラッシュクロマトグラフィー (CH2Cl2/MeOH 96:4; CH2Cl2/アセトン 9:1)後に、24.8 mg(54%)のオフイエロー色の固体を得た:  [α]20D +35.5 (c 0.2, CHCl3);  IR (CHCl3, cm-1) 3028, 2980, 2960, 2932, 2859, 1741, 1658, 1600, 1555, 1257, 1198, 1158, 1045;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.69 (s, 6 H), 0.98 (s, 9 H), 1.03 (t, J = 7.3 Hz, 3 H), 1.86 (m, 2 H), 3.86 (s, 1 H), 5.29 (d, J = 16.3 Hz, 1 H), 5.31 (s, 2 H), 5.73 (d, J = 16.3 Hz, 1 H), 7.60 (t, J = 6.3 Hz, 1 H), 7.60 (t, J = 7.0 Hz, 1 H), 7.66 (s, 1 H), 7.74 (t, J = 7.3 Hz, 1 H) 8.20 (t, J = 8.1 Hz, 2 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ -0.56, 7.80, 19.2, 27.1, 31.6, 52.4, 66.3, 72.8, 97.7, 118.2, 127.0, 129.5, 129.6, 130.8, 132.7, 136.0, 143.0, 146.4, 148.0, 150.1, 150.6, 157.4, 173.9;  C26H30N2O4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 462.1974,実測値462.1975;  LRMS (EI) m/z 462 (M+), 450, 361, 331, 304, 245, 223, 57.
【００８４】
【実施例３】
(20S)-7-tert-ブチルジフェニルシリルカンプトテシンの製造
【００８５】
【化１６】
0004638987.tif 000019
【００８６】
(1) (S)-4-エチル-4-ヒドロキシ-6-ヨード-3-オキソ-7-(3-tert-ブチルジフェニルシリル-2-プロピニル)-1H-ピラノ[3,4-c]-8-ピリドン
実施例1-(1)に記載の手順に従い、ヨードピリドン (2) (200 mg, 0.60 mmol) 及び3-tert-ブチルジフェニルシリル-2-プロピニルブロミド (428 mg, 1.20 mmol)を提供し、フラッシュクロマトグラフィー (CH2Cl2/AcOEt 9:1)後に、258 mg (70%)の白色のフォームを得た:  [α]20D +45.1 (c 0.2, CHCl3);  IR (CHCl3, cm-1) 3546, 2928, 2855, 1741, 1658, 1526;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.97 (t, J = 7.3 Hz, 3 H), 1.08 (s, 9 H), 1.80 (m, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.76 (br s, 1 H), 5.13 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 5.29 (d, J = 2.5 Hz, 2 H), 5.52 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 7.22 (s, 1 H), 7.32-7.40 (m, 6 H), 7.76-7.78 (m, 4 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 7.6, 18.6, 27.0, 31.6, 44.6, 60.4, 66.3, 71.8, 86.5, 99.9, 102.2, 116.6, 127.7, 129.6, 132.6, 135.6, 148.7, 157.8, 173.2;  C25H21INO4Si (M-C4H9+) について計算したHRMS (EI) m/z 554.0279,実測値554.0285;  LRMS (EI) m/z 554 (M-C4H9+), 587, 510, 220, 143, 105.
【００８７】
(2) (20S)-7-tert -ブチルジフェニルシリルカンプトテシン
実施例1-(2)に記載の手順に従い、(1)で製造した化合物(61.1 mg, 0.10 mmol)を提供し、フラッシュクロマトグラフィー (CH2Cl2/MeOH 96:4; CH2Cl2/アセトン 9:1)後に、26.5 mg (45%)の明るい黄色の固体を得た:  [α]20D +35.2 (c 0.2, CHCl3);  IR (CHCl3, cm-1) 3003, 2984, 2969, 2958, 2935, 1741, 1658, 1599, 1555, 1428, 1226, 1216, 1158, 1102;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.00 (t, J = 7.3 Hz, 3 H), 1.44 (s, 9 H), 1.84 (m, 2 H), 3.75 (s, 1 H), 4.21 (d, J = 5.7 Hz, 2 H), 5.19 (d, J = 16.3 Hz, 1 H), 5.64 (d, J = 16.3 Hz, 1 H), 7.43 (m, 5 H), 7.51 (t, J = 7.3 Hz, 2 H), 7.62 (s, 1 H), 7.69 (m, 5 H), 8.10 (d, J = 8.5 Hz, 1 H), 8.22 (d, J = 8.2 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 7.9, 20.4, 30.2, 31.6, 52.2, 66.4, 72.8, 97.5, 118.2, 126.3, 128.6, 129.8, 130.3, 130.7, 131.9, 132.2, 134.6, 134.64, 136.4, 136.5, 138.1, 140.9, 146.2, 148.4, 149.9, 151.3, 157.1, 174.1;  C36H34N2O4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 586.2281,実測値586.2288;  LRMS (EI) m/z 586 (M+), 542, 529, 485, 428, 407, 321, 181, 131, 69.
【００８８】
【実施例４】
(20S)-10-アセトキシ-7-トリメチルシリルカンプトテシンの製造 (図3参照)
【００８９】
【化１７】
0004638987.tif 000020
【００９０】
(1) 4-アセトキシフェニル イソニトリル (14)
4-アセトキシホルムアミド (13) (358 mg, 1.0 mmol)のCH2Cl2 (10 mL)溶液に、 0℃下、テトラブロモメタン (0.70 g, 2.1 mmol)、トリフェニルホスフィン (525 mg, 2.1 mmol)及びトリエチルアミン (320 mL, 2.1 mmol)を連続的に添加し、得られた混合物を暗中で3時間還流した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を氷冷Et2O (20 mL)中で摩砕し、ろ過した。溶媒を蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー (ヘキサン/AcOEt 8:2)により精製し、243 mg (76%)のわずかに褐色の固体を得た:  IR (ニート, cm-1) 2127, 1768, 1501, 1370, 1201, 1180, 909;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 2.29 (s, 3 H), 7.11 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.38 (d, J = 8.8 Hz, 2 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 21.0, 122.8, 127.6, 150.8, 164.3, 168.8;  C9H7NO2 (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 161.0477,実測値161.0474;  LRMS (EI) m/z 161 (M+), 133, 119, 91.
【００９１】
(2) (20S)-10-アセトキシ-7-トリメチルシリルカンプトテシン (15)
実施例1-(2)に記載の手順に従い、実施例1-(1)で製造した化合物(44.5 mg, 0.10 mmol)及び (1)で製造した化合物(48.3 mg, 0.30 mmol)を提供し、フラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/アセトン 10:1)後に、29.9 mg(63%)のわずかに黄色の油を得た:  [α]20D +29.9 (c 0.5, CHCl3);  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.61 (s, 9 H), 0.98 (t, J  = 7.4 Hz, 3 H), 1.86 (m, 2 H), 2.38 (s, 3 H), 4.13 (br s, 1 H), 5.24 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 5.27 (s, 2 H), 5.68 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 7.46 (dd, J = 9.2, 2.5 Hz, 1 H), 7.60 (s, 1 H), 7.96 (d, J  = 2.5 Hz, 1 H), 8.13 (d, J = 9.2 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 1.4, 7.8, 21.4, 31.5, 51.7, 66.2, 97.6, 118.3, 118.9, 124.6, 132.1, 135.0, 145.7, 146.1, 148.9, 150.1, 150.7, 157.3, 169.1, 173.7;  C25H26N2O6Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 478.1560,実測値478.1582;  LRMS (EI) m/z 478 (M+), 436, 392, 377, 336, 277.
【００９２】
【実施例５】
(20S)-10-ヒドロキシ-7-トリメチルシリルカンプトテシン(16) の製造
【００９３】
【化１８】
0004638987.tif 000021
【００９４】
MeOH (100 mL)及びH2O (100 mL)中の実施例5-(2)で製造した化合物(15)(16.8 mg, 0.035 mmol)及びK2CO3 (9.6 mg, 0.070 mmol)の溶液を、室温下で1時間30分攪拌した。反応混合物をAcOH (2滴)で酸性化し、ブライン(10 mL)で希釈し、AcOEt (10 x 10 mL)で抽出した。組み合わせた有機層を乾燥し(Na2SO4)、蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/MeOH/AcOH 90:10:2; CHCl3/アセトン 2:1)により精製し、15.1 mg (99%)の白色固体を得た:  [α]20D +18.9 (c 0.2, CHCl3/MeOH 4:1);  1H NMR (300 MHz, CDCl3/CD3OD 4:1) δ 0.45 (s, 9 H), 0.84 (t, J  = 7.3 Hz, 3 H), 1.75 (m, 2 H), 5.12 (br s, 2 H), 5.12 (d, J = 16.3 Hz, 1 H), 5.48 (d, J = 16.3 Hz, 1 H), 7.24 (dd, J = 9.1, 2.5 Hz, 1 H), 7.39 (d, J = 2.5 Hz, 1 H), 7.87 (d, J = 9.1 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3/CD3OD 4:1) δ 0.8, 7.4, 31.1, 51.8, 65.7, 97.5, 109.8, 117.5, 122.3, 131.3, 133.7, 134.6, 141.7, 142.6, 146.3, 147.5, 151.1, 156.3, 157.6;  C23H24N2O5Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 436.1454,実測値436.1450;  LRMS (EI) m/z 436 (M+), 392, 377, 336, 323.
この化合物とNH2CH2CH2NMe2 との反応、続いてEtCOClとの反応により、生物学的試験用の開環E−環類似体を得た。
【００９５】
【実施例６】
(20S)7-トリメチルシリル-イリノテカン(図6参照)の製造
【００９６】
【化１９】
0004638987.tif 000022
【００９７】
(1) [1,4'] ビピペリジニル-1'-カルボン酸 4-ニトロ-フェニルエステル (32)
4-ニトロフェニル クロロホルマート (31) (5.15 g, 25.6 mmol)の150 mL乾燥THF溶液に、-78℃下、トリエチルアミン (10.7 mL, 76.2 mmol)を添加し、続いて4-ピペリジノピペリジン(30)(4.51 g, 25.6 mmol)の40mL THF溶液を添加した。この溶液を2時間攪拌し、その後溶媒を除去し、残渣をAcOEt中に集め、ろ過し、蒸発させた。粗い黄色の固体を、溶離剤としてAcOEtを使用し、中性アルミナのパッドを通過させ、蒸発後に6.73 g (79%)の白色固体を得た:  IR (CHCl3, cm-1) 3046, 2937, 2859, 1704, 1620, 1513, 1466, 1242, 1197;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.20-1.80 (m, 8 H), 1.90 (d, J = 12.7 Hz, 2 H), 2.20-2.70 (m, 5 H), 2.87 (t, J = 12 Hz, 1 H), 3.01 (t, J = 12 Hz, 1 H), 4.30 (br s, 2 H), 7.29 (d, J = 9 Hz, 2 H), 8.26 (d, J = 9 Hz, 2 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 24.6, 26.3, 27.5, 28.2, 40.1, 44.4, 50.1, 62.0, 122.2, 124.9, 144.8, 151.9, 156.3;  C17H23N3O4 (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 333.1676,実測値333.1688;  LRMS (EI) m/z 333 (M+), 195, 167, 124, 110, 96, 55.
【００９８】
(2) [1,4'] ビピペリジニル-1'-カルボン酸 4-アミノ-フェニルエステル
(1)で製造した化合物(1.012 g, 3.03 mmol)のAcOEt (125 ml)溶液に、10% Pd/C (0.15 g)を添加した。系をアルゴンで数回パージし、H2の1 L バルーンを添加した。得られた混合物を室温下で12時間攪拌した後、触媒をセライト（celite）を通したろ過により除去し、溶媒を蒸発させ、835 mg (91%)の白色固体を得た:  IR (CHCl3, cm-1) 3453, 3400, 3028, 2936, 2859, 1703, 1513, 1429, 1242, 1226, 1210, 1197;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.30-1.70 (m, 8 H), 1.86 (d, J = 12.6 Hz, 2 H), 2.33-2.62 (m, 5 H), 2.68-3.04 (m, 2 H), 3.58 (br s, 2 H), 4.30 (br s, 2 H), 6.64 (d, J = 6.0 Hz, 2 H), 6.87 (d, J = 6.0 Hz, 2 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 24.6, 26.3, 27.5, 28.1, 43.8, 43.9, 50.1, 62.3, 115.4, 122.3, 143.4, 143.7, 154.1;  C17H25N3O2 (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 303.1944 ,実測値303.1947;  LRMS (EI) m/z 303 (M+), 195, 167, 124, 108, 96, 80, 65, 55.
【００９９】
(3) [1,4'] ビピペリジニル-1'-カルボン酸 4-ホルミルアミノ-フェニルエステル (33)
ジシクロヘキシルカルボジイミド (272 mg, 1.32 mmol)のCH2Cl2 (5 mL)溶液に攪拌しながら、0℃下、98% ギ酸 (60.7 mg, 1.32 mmol)を滴下した。10 分後、得られた混合物を、実施例 (2)で製造した化合物(200 mg, 0.66 mmol)の in ピリジン (5 mL)溶液に、シリンジを介して0℃下で添加した。次いで反応混合物を室温まで暖め、3時間攪拌した。ピリジン溶媒を蒸発させ、残渣をCH2Cl2中に集め、ろ過し、蒸発させ、塩基性アルミナカラム(CH2Cl2/MeOH 95:5)に直接付し、118 mg (83%)の白色固体を得た。これは、室温下で、ホルムアミドの炭素−窒素結合周囲の回転障害に由来するシス及びトランス回転異性体の混合物から構成されていた:  IR (CHCl3, cm-1) 3025, 3013, 2937, 2888, 2861, 1703, 1517, 1466, 1275, 1226, 1210;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.38-1.80 (m, 8 H), 1.90 (d, J = 12 Hz, 2 H), 2.40-2.70 (m, 5 H), 2.83 (t, J = 12 Hz, 1 H), 2.97 (t, J = 12 Hz, 1 H), 4.32 (m, 2 H), 7.03-7.11 (m, 3 H), 7.37 (br s, .5 H) (シス), 7.46 (d, J = 10 Hz, 1 H), 7.53 (d, J = 11 Hz, .5 H) (トランス), 8.32 (d, J = 2 Hz, .5 H) (シス), 8.59 (d, J = 11 Hz, .5 H) (トランス);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 24.6, 26.3, 27.6, 28.1, 44.2, 44.0, 50.1, 82.2, 120.0, 121.0, 122.1, 123.0, 133.9, 134.3, 147.5, 148.9, 153.9, 153.4, 159.1, 162.5;  C18H25N3O3 (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 331.1884,実測値331.1896;  LRMS (EI) m/z 331 (M+), 244, 202, 167, 124, 80, 55.
【０１００】
(4) [1,4'] ビピペリジニル-1'-カルボン酸 4-イソニトリロ-フェニルエステル (34)
実施例 (3)で製造した化合物 (90.1 mg, 0.272 mmol)のCH2Cl2 (10 mL)溶液に、連続的にトリエチルアミン (69.5 mg, 0.688 mmol)を滴下し、0℃下、トリホスゲン(68 mg, 0.229 mmol)の乾燥CH2Cl2 (10 mL)溶液を添加した。混合物を室温下で2時間攪拌し、7% NaHCO3 (5 mL)で洗浄し、乾燥(MgSO4)した。溶媒の蒸発後に得られた粗い褐色の残渣をフラッシュクロマトグラフィー (Et2O/Et2NH 95:5)に付し、67.2 mg (79%)の白色固体を得た:  IR (CHCl3, cm-1) 3034, 2937, 2131, 1718, 1504, 1429, 1233, 1224, 1213, 1198, 1184;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.32-1.75 (m, 8 H), 1.90 (br d, J = 12.4 Hz, 2 H), 2.32-2.65 (m, 5 H), 2.84 (t, J = 12.3 Hz, 1 H), 2.98 (t, J = 12.1 Hz, 1 H), 4.20-4.40 (m, 2 H), 7.14 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.37 (d, J = 8.8 Hz, 2 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 25.0, 26.5, 27.8, 28.5, 44.4, 50.6, 62.7, 123.3, 127.8, 152.1, 153.1, 164.4;  C18H23N3O2 (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 313.1779,実測値313.1790;  LRMS (EI) m/z 313 (M+), 195, 167, 124 ,110, 84, 55.
【０１０１】
(5) (20S)-7-トリメチルシリル-イリノテカン (35)
実施例1-(2)に記載の手順に従い、実施例1-(1)で製造した化合物(44.5 mg, 0.10 mmol)、(4)で製造した化合物(93.9 mg,0.3 mmol)及びヘキサメチルジチン(50 mg, 0.15 mmol)を乾燥ベンゼン(1.5 mL)中、275W GEサンランプを用いて、70℃で9時間照射した。反応物を蒸発させ、溶解性を補助するために数滴のDMSOを用いてMeOH中に溶解し、ウォーターズ逆相HPLCへ注入した。分離を行うために使用した条件は以下の通りであった。ウォーターズ490Eプログラマブル多波長検出器を備えたウォーターズ600Eシステムコントローラー 、サージェント  ウェルチ（Sargent Welch）プロッター及びウォーターズC-18 25x10カートリッジカラムを使用した。勾配溶離 [ 5:95 MeCN/H2O (0.1% TFA)〜30:70 MeCN/H2O (0.1% TFA)]を20 mL/分で40 分間行い、凍結乾燥後に半精製された灰色の固体を得た。灰色の固体を、1 mm を使用したクロマトトロン（chromatotron）中で更に精製(CH2Cl2/EtOH 70:30)し、12 mg (19%)の黄色の固体を得た: [α]20D +14.8 (c 0.2, CHCl3); IR (CHCl3, cm-1) 3023, 2957, 2933, 1720, 1659, 1601, 1216, 1191, 1175, 1158;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.64 (s, 9 H), 1.03 (t, J = 7.3 Hz, 3 H), 1.50-1.51 (br m, 2 H), 1.51-1.52 (br m, 6 H), 1.84 (m, J = 7.3 Hz, 2 H), 2.01- 2.10 (br m, 2 H), 2.60-2.75 (br s, 5 H), 2.75-3.12 (br m, 2 H), 4.30-4.50 (br m, 2 H), 5.30 (d, J = 16.3 Hz, 1 H), 5.31 (s, 2 H), 5.74 (d, J = 16.3 Hz, 1 H), 7.55 (dd, J = 9.0, 2.4 Hz, 1 H), 7.63 (s, 1 H), 8.01 (d, J = 2.3 Hz, 1 H), 8.19 (d, J = 9 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 1.5, 7.8, 25.4, 29.7, 31.5, 43.8, 50.1, 51.8, 62.5, 66.3, 72.8, 97.5, 118.1, 119.0, 125.1, 132.0, 132.3, 134.9, 143.4, 145.6, 146.4, 150.1, 150.5, 152.8, 157.4, 174.0;  C34H42N4O6Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 630.2898,実測値630.2874;  LRMS (EI) m/z 630 (M+), 586, 501, 457, 195, 167, 153, 124, 111, 96, 84.
【０１０２】
【実施例７】
(20S)-11-フルオロ-7-トリメチルシリルカンプトテシンの製造(図2参照)
【０１０３】
【化２０】
0004638987.tif 000023
【０１０４】
(1) 3-フルオロ-2-トリメチルシリルベンズアルデヒド (7)
3-フルオロ-2-トリメチルシリルベンズアルデヒドの製造を、選択的オルトメタル化により進めた。Comins, D. L. et al., J. Org. Chem., 49, 1078 (1984)を参照されたい。更にSnieckus, V., Chem. Rev., 90, 879 (1990)も参照されたい。N,N,N'-トリメチルエチレンジアミン (2.70 mL, 20 mmol)のTHF (50 mL)溶液に、1.6 N n-BuLiのヘキサン (13 mL, 21 mmol)溶液を-20℃下でゆっくりと添加し、続いて15分後に3-フルオロベンズアルデヒド (2.10 mL, 20 mmol)を添加した。この温度で15 分後、1.6 N n-BuLiのヘキサン (38 mL, 60 mmol)溶液を注入し、溶液を-35℃で1時間30分攪拌した。クロロトリメチルシラン (15 mL, 120 mmol)を添加し、反応混合物を室温下で一晩攪拌した。最終の溶液を氷冷1 N HCl (150 mL)へ注ぎ、Et2O (3 x 100)で迅速に抽出し、ブラインで洗浄し、乾燥 (Na2SO4)した。溶媒を蒸発させた後、残渣をフラッシュクロマトグラフィー (ヘキサン/AcOEt 95:5)により精製し、3.25 g (83%)の油を得た:  IR (ニート, cm-1) 1701, 1440, 1252, 1233, 1109, 848, 764;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.40 (d, J = 2.6 Hz, 9 H), 7.18 (br t, J = 9.0 Hz, 1 H), 7.47 (ddd, J1 = J2 = 8.1 Hz, J3 = 5.4 Hz, 1 H), 7.70 (br d, J = 7.5 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 1.8, 120.8 (d, JCF = 29 Hz), 126.8, 128.2, 131.2, 143.3, 167.6 (d, JCF = 244 Hz), 192.4;  C9H10FOSi (M-CH3+) について計算したHRMS (EI) m/z 181.0485,実測値181.0482;  LRMS (EI) m/z 181 (M-CH3+), 151, 125, 103, 91.
【０１０５】
(2) 3-フルオロ-2-トリメチルシリル安息香酸
次いで遊離酸の古典的酸化を行った。Hill, L. R. et al., J. Org. Chem., 50, 470 (1985)を参照されたい。(1)で製造した化合物 (3.41 g, 17.3 mmol)のtert-ブタノール (20 mL)溶液に、2N 2-メチル-2-ブテンのTHF (55 mL, 110 mmol)溶液を添加し、次いでゆっくりと10 分間かけて、80% NaClO2 (2.55 g, 22.5 mmol) 及びNaH2PO4.H2O (3.10 g, 22.5 mmol)の水溶液(18 mL)を連続的に添加した。得られた混合物を室温下で16時間攪拌し、tert-ブタノールを蒸発させ、残渣を1 N NaOH (50 mL)中に集め、ヘキサン (3 x 20 mL)で洗浄した。水性層 を1N HClでpH 2まで酸性化し、NaClで飽和し、Et2O (3 x 50 mL)で抽出した。組み合わせた有機層を乾燥(Na2SO4)し、蒸発し、3.13 g (85%)の白色固体を得た:  IR (NaCl, cm-1) 2982, 1700, 1434, 1294, 1271, 1253, 1230, 849, 763;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.39 (d, J = 2.6 Hz, 9 H), 7.16 (br t, J = 9.1 Hz, 1 H), 7.41 (ddd, J1 = J2 = 7.9 Hz, J3 = 5.6 Hz, 1 H), 7.73 (br d, J = 7.7 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 1.3, 119.5 (d, JCF = 27 Hz), 126.0, 127.3, 130.9, 138.0, 167.5 (d, JCF = 243 Hz), 174.5;  C9H10FO2Si (M-CH3+) について計算したHRMS (EI) m/z 197.0434,実測値197.0433;  LRMS (EI) m/z 197 (M-CH3+), 179, 133, 115, 105.
【０１０６】
(3) 3-フルオロ-2-トリメチルシリルフェニル イソシアネート (8)
中間体イソシアネートの製造を、クルティウス転移により行った。Capson, T. L. et al., Tetrahedron Lett., 25, 3515 (1984)及びこれの参考文献を参照されたい。(2)で製造した化合物 (3.03 g, 14.3 mmol)のCH2Cl2 (20 mL)溶液に、塩化オキサリル (1.30 mL, 15.0 mmol)を添加し、得られた混合物を室温下で3時間攪拌した。溶媒の蒸発後に得られた残渣をTHF (10 mL)で希釈し、激しく攪拌しながらH2O (20 mL) 及びアセトン (50 mL)の氷冷溶液へ注入した。0℃で15分及び室温で1分後、溶液をEt2O (4 x 50 mL)で抽出し、乾燥 (Na2SO4)した。溶媒の蒸発後に得られた残渣をトルエン中で1時間30分還流し、溶媒を除去したときに、2.85 g (79%)のわずかに黄色の油を得た:  IR (ニート, cm-1) 2269, 1598, 1433, 1252, 1228, 846, 788;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.38 (d, J = 1.9 Hz, 9 H), 6.82 (br t, J = 8.3 Hz, 1 H), 6.90 (br d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.25 (ddd, J1 = J2 = 8.1 Hz, J3 = 6.6 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 0.4, 112.6 (d, JCF = 26 Hz), 120.5, 122.5, 131.5, 139.2, 167.4 (d, JCF = 241 Hz).
【０１０７】
(4) 3-フルオロ-2-トリメチルシリルフェニル イソニトリル (9)
次いで脱酸素化により、予想されるイソニトリルを得た。Baldwin, J. E. et al., Tetrahedron , 39, 2989 (1983)を参照されたい。トリエチルアミン (4.10 mL, 29.3 mmol)を、0℃下、2 NトリクロロシランのCH2Cl2 (8.40 mL, 16.8 mmol)溶液をゆっくりと添加し、5分後、実施例 (3)で製造した化合物 (2.35 g. 11.2 mmol)を添加した。0℃で1時間30分及び室温で30分後、溶液をNH3で飽和し、セライトでろ過し、5% NaH2PO4 で洗浄し、乾燥 (Na2SO4)した。次いで溶媒の蒸発後に得られた粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー (ヘキサン/AcOEt 95:5)に付し、1.42 g (66%)のわずかに紫色の液体を得た:  IR (ニート, cm-1) 2114, 1598, 1440, 1254, 1237, 1110, 943, 848, 793;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.45 (d, J = 1.8 Hz, 9 H), 7.01 (br t, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.17 (br d, J = 7.7 Hz, 1 H), 7.32 (ddd, J1 = J2 = 8.0 Hz, J3 = 6.1 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 0.1, 116.5 (d, JCF = 26 Hz), 124.3, 131.6, 166.8 (d, JCF = 243 Hz), 166.9;  C10H12FNSi (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 193.0723,実測値193.0715;  LRMS (EI) m/z 193 (M+), 178, 150, 116, 105.
【０１０８】
(5) (20S)-11-フルオロ-7,12-ビス(トリメチルシリル)カンプトテシン(11)
実施例1-(2) に記載の手順に従い、実施例1-(1)で製造した化合物 (43.5 mg, 0.098 mmol)及び実施例 (4)で製造した化合物 (76 mg, 0.39 mmol)を提供し、フラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/アセトン 20:1)後に, 33.4 mg (67%)のわずかに黄色の油を得た:  [α]20D +23.6 (c 0.2, CHCl3) ;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.53 (d, J = 1.7 Hz, 9 H), 0.60 (s, 9 H), 1.02 (t, J = 7.4 Hz, 3 H), 1.88 (m, 2 H), 3.82 (br s, 1 H), 5.28 (d, J = 16.3 Hz, 1 H), 5.29 (br s, 2 H), 5.72 (d, J = 16.3 Hz, 1 H), 7.31 (t, J = 8.7 Hz, 1 H), 7.46 (s, 1 H), 8.18 (dd, J = 9.2, 5.9 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 1.6, 1.7, 7.7, 31.4, 51.8, 66.3, 72.7, 97.2, 117.8 (d, JCF = 33 Hz), 124.3 (d, JCF = 28 Hz), 128.9, 131.1, 133.1, 144.4, 146.7, 150.1, 153.4, 157.4, 167.6 (d, JCF = 245 Hz), 173.9;  C26H31FN2O4Si2 (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 510.1806,実測値510.1806;  LRMS (EI) m/z 510 (M+), 495, 466, 451, 395, 319.
【０１０９】
(6) (20S)-11-フルオロ-7-トリメチルシリルカンプトテシン (12)
実施例 (5)で製造した化合物(19.5 mg, 0.038 mmol)の48% HBr (1 mL)溶液を50℃で20時間加熱した。反応混合物を激しく攪拌しながらゆっくりと飽和NaHCO3 (10 mL)へ注ぎ、AcOEt (6 x 20 mL)で抽出し、乾燥 (Na2SO4)した。溶媒の蒸発後、残渣をフラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/アセトン 8:1)により精製し、12.5 mg (83%)のわずかに黄色の固体を得た:  [α]20D +39.6 (c 0.2, CHCl3);  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.62 (s, 9 H), 1.01 (t, J = 7.4 Hz, 3 H), 1.87 (m, 2 H), 3.81 (br s, 1 H), 5.28 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 5.28 (br s, 2 H), 5.72 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 7.31 (ddd, J = 9.6, 7.8, 2.8 Hz, 1 H), 7.61 (s, 1 H), 7.78 (dd, J = 9.7, 2.7 Hz, 1 H), 8.19 (dd, J = 9.4, 5.8 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 1.6, 7.8, 31.5, 51.7, 66.3, 72.7, 97.8, 114.3 (d, JCF = 20 Hz), 117.7 (d, JCF = 26 Hz), 118.5, 128.9, 130.0, 133.9, 144.4, 146.1, 149.3, 150.1, 151.7, 157.4, 162.6 (d, JCF = 250 Hz), 173.9;  C23H23FN2O4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 438.1411,実測値438.1412;  LRMS (EI) m/z 438 (M+), 409, 394, 379, 365, 338, 309.
【０１１０】
【実施例８】
(20S)-10-アミノ-7-トリメチルシリルカンプトテシンの製造(図4参照)（CHJ-792）
【０１１１】
【化２１】
0004638987.tif 000024
【０１１２】
(1) 4-tert-ブチルオキシカルボニルアミノフェニル イソニトリル (18)
イソニトリルを、古典的Boc-保護、続く脱水による2工程により製造した。Einhorn, J. et al., Synlett, 37 (1991)を参照されたい。4-アミノホルムアミド (1.71 g, 12.6 mmol)、ジ-tert-ブチルジカーボネート(2.87 g, 13.2 mmol)及びNaHCO3 (1.11 g, 13.2 mmol)の無水EtOH (50 mL)中の混合物を、洗浄浴中4時間超音波処理した。最終の溶液をセライトのパッドでろ過し、乾燥物まで濃縮した。残渣を半ブライン(50 mL)中に集め、AcOEt (6 x 30 mL)で抽出し、乾燥(Na2SO4)した。溶媒の蒸発後、残った油をフラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/MeOH 95:5)に付し、2.85 g (96%)の4-tert-ブチルオキシカルボニルアミノホルムアミドを白色固体として得た。この中間体(945 mg, 4.0 mmol)を実施例5-(1)に記載の条件に付し、フラッシュクロマトグラフィー (ヘキサン/AcOEt 9:1)後に、502 mg (58%)のわずかに褐色の固体を得た:  IR (NaCl, cm-1) 3370, 2121, 1691, 1524, 1412, 1364, 1239, 1158, 832;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.48 (s, 9 H), 6.75 (br s, 1 H), 7.26 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.37 (d, J = 8.8 Hz, 2 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 28.2, 81.3, 118.5, 127.1, 139.4, 152.3, 162.7;  C12H14N2O2 (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 218.1055,実測値218.1044;  LRMS (EI) m/z 218 (M+), 162, 144.
【０１１３】
(2)(20S)-10-tert-ブチルオキシカルボニルアミノ-7-トリメチルシリル カンプトテシン (19)
実施例1-(2)に記載の手順に従い、実施例1-(1)で製造した化合物(44.5 mg, 0.10 mmol)及び実施例 (1)で製造した化合物(65 mg, 0.30 mmol)を供給し、フラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/アセトン 6:1)の後に、32.5 mg (60%)のわずかに黄色の固体を得た:  [α]20D +28.0 (c 0.2, CHCl3);  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.63 (s, 9 H), 0.99 (t, J  = 7.4 Hz, 3 H), 1.53 (s, 9 H), 1.86 (m, 2 H), 4.03 (br s, 1 H), 5.24 (d, J = 16.2 Hz, 1 H), 5.26 (s, 2 H), 5.70 (d, J = 16.2 Hz, 1 H), 7.00 (br s, 1 H), 7.47 (dd, J = 9.2, 2.3 Hz, 1 H), 7.55 (s, 1 H), 8.02 (d, J = 9.2 Hz, 1 H), 8.56 (br s, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 1.3, 7.8, 28.2, 31.5, 51.8, 66.3, 72.8, 97.1, 114.4, 117.8, 122.6, 131.3, 132.8, 135.0, 137.2, 142.9, 144.3, 146.6, 149.2, 150.1, 157.4, 173.9;  C23H25N3O4Si (M-Boc+) について計算したHRMS (EI) m/z 435.1614,実測値435.1612;  LRMS (EI) m/z 535 (M+), 479, 435, 391, 362, 335.
【０１１４】
(3) (20S)-10-アミノ-7-トリメチルシリルカンプトテシン (20)
実施例 (2)で製造した化合物 (75.5 mg, 0.141 mmol)及びTFA (500 mL)のCH2Cl2 (2 mL)溶液を、室温下で3時間攪拌した。次いで反応混合物を飽和NaHCO3 (50 mL)へ注ぎ、AcOEt (10 x 15 mL)で抽出し、乾燥(Na2SO4)した。溶媒を蒸発させた後に得られた残渣を、フラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/MeOH 95:5)により精製し、55.4 mg (90%)の黄色の固体を得た:  [α]20D +18.7 (c 0.15, CHCl3/MeOH 4:1);  1H NMR (300 MHz, CDCl3/CD3OD 4:1) δ 0.40 (s, 9 H), 0.80 (t, J  = 7.4 Hz, 3 H), 1.70 (m, 2 H), 5.05 (s, 2 H), 5.08 (d, J = 16.3 Hz, 1 H), 5.43 (d, J = 16.3 Hz, 1 H), 7.05 (br s, 1 H), 7.07 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 7.38 (s, 1 H), 7.74 (d, J = 8.0 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3/CD3OD 4:1) δ 0.6, 7.2, 30.8, 51.8, 65.5, 72.7, 97.0, 107.2, 116.8, 122.0, 130.7, 134.0, 134.7, 139.9, 141.7, 145.8, 146.9, 151.2, 157.5, 173.7;  C23H25N3O4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 435.1614,実測値435.1613;  LRMS (EI) m/z 435 (M+), 391, 376, 335, 290.
【０１１５】
【実施例９】
(20S)-11-アミノ-7-トリメチルシリルカンプトテシンの製造
【０１１６】
【化２２】
0004638987.tif 000025
【０１１７】
(1) 3-tert-ブチルオキシカルボニルアミノフェニル イソニトリル
イソニトリルを、実施例9-(1)記載の手順と同一の手順に従い2工程で製造した。第一工程においては、3-アミノホルムアミド (1.80 g, 13.2 mmol)のBoc-保護を提供し、フラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/MeOH 95:5)後、2.65 g (85%)の3-tert-ブチルオキシカルボニルアミノホルムアミドを白色固体として得た。次いでこの中間体(412 mg, 1.74 mmol)を実施例5-(1)に記載の条件に付し、フラッシュクロマトグラフィー (ヘキサン/AcOEt 9:1)後、190 mg (50%)の褐色の固体を得た:  IR (NaCl, cm-1) 3318, 2126, 1715, 1603, 1547, 1433, 1236, 1162, 782;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.49 (s, 9 H), 6.67 (br s, 1 H), 7.00 (m, 1 H), 7.20-7.30 (m, 2 H), 7.60 (br s, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 28.2, 81.3, 116.0, 118.9, 120.6, 129.8, 139.5, 152.3, 163.6;  C12H14N2O2 (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 218.1055,実測値218.1047;  LRMS (EI) m/z 218 (M+), 196, 162, 152, 118.
【０１１８】
(2) (20S)-11-アミノ-7-トリメチルシリルカンプトテシン
実施例1-(2) に記載の手順に従い、実施例1-(1)で製造した化合物 (44.5 mg, 0.10 mmol)及び実施例 (1)で製造した化合物(65.5 mg, 0.3 mmol)を得、フラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/MeOH 95:5; CHCl3/アセトン 5:1)の後、23.1 mg (43%)のわずかに黄色の油を得た。この中間体(14.7 mg, 0.027 mmol)を、実施例9-(3)に記載の条件に従い脱保護し、フラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/MeOH 9:1)の後、その他の異性体を除いて、11.8 mg (99%)の(20S)-11-アミノ-7-トリメチルシリルカンプトテシンを黄色の固体として得た:  [α]20D +15.0 (c 0.1, CHCl3/MeOH 4:1);  1H NMR (300 MHz, CDCl3/CD3OD 4:1) δ 0.44 (s, 9 H), 0.86 (t, J  = 7.4 Hz, 3 H), 1.76 (m, 2 H), 5.08 (s, 2 H), 5.14 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 5.50 (d, J = 16.3 Hz, 1 H), 6.97 (dd, J = 9.2, 2.5 Hz, 1 H), 7.07 (d, J = 2.5 Hz, 1 H), 7.50 (s, 1 H), 7.84 (d, J = 9.2 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3/CD3OD 4:1) δ 1.1, 7.4, 31.0, 51.7, 65.6, 97.9, 107.9, 117.8, 119.7, 125.9, 127.1, 129.0, 130.4, 135.4, 144.3, 149.5, 149.9, 151.1, 157.6, 175.3;  C23H25N3O4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 435.1614,実測値435.1626;  LRMS (EI) m/z 435 (M+), 406, 391, 376, 335.
【０１１９】
【実施例１０】
(20S)-11-フルオロ-10-アミノ-7-トリメチルシリルカンプトテシンの製造(図5参照)
【０１２０】
【化２３】
0004638987.tif 000026
【０１２１】
(1) 4-tert-ブチルオキシカルボニルアミノ-3-フルオロ-1-ニトロベンゼン(22)  2-フルオロ-4-ニトロアニリン(21) [Katritsky, A. R. et al., J. Org. Chem., 51, 5039 (1986)に従い製造] (2.16 g, 13.9 mmol)のCH2Cl2 (25 mL)溶液に、ジ-tert-ブチルジカーボネート(3.19 g, 14.6 mmol)、トリエチルアミン (2.95 mL, 20.8 mmol)及び4-ジメチルアミノピリジン (210 mg, 1.67 mmol)を連続的に添加し、反応混合物を室温下で16時間攪拌した。最終の溶液をCH2Cl2 (75 mL)で希釈し、氷冷5% クエン酸 (4 x 50 mL)で洗浄し、乾燥(Na2SO4)した。溶媒を除去後、残渣をフラッシュクロマトグラフィー (ヘキサン/AcOEt 9:5)に付し、溶離順に最初に1.95 g (55%)のモノ−保護誘導体である4-tert-ブチルオキシカルボニルアミノ-3-フルオロ-1-ニトロベンゼンを、第二に1.13 g (23%)のビス−保護誘導体である4-ジ-tert-ブチルオキシカルボニルアミノ-3-フルオロ-1-ニトロベンゼンを得た。モノ−保護誘導体の特徴は以下の通りであった:  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.52 (s, 9 H), 6.99 (br s, 1 H), 7.95 (m, 1 H), 8.03 (br d, J = 9.2 Hz, 1 H), 8.34 (br t, J = 8.5 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 28.1, 82.5, 110.9 (d, JCF = 23 Hz), 118.3, 120.8, 133.5, 141.7, 150.1 (d, JCF = 243 Hz), 151.4;  C11H13FN2O4 (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 256.0859,実測値258.0854;  LRMS (EI) m/z 256 (M+), 200, 182, 57.
【０１２２】
(2) 4-tert-ブチルオキシカルボニルアミノ-3-フルオロアニリン (24)
ニトロ基のアミン基への還元を、古典的手順に従い行った。Ram, S. et al., Tetrahedron Lett., 25, 3415 (1984)を参照されたい。実施例 (1)で製造した化合物 (1.62 g, 6.32 mmol)及びギ酸アンモニウム(1.70 g, 27 mmol)の無水MeOH (12 mL)溶液に、10% Pd-C (400 mg)を一度に添加した。室温で2時間後、最終の溶液をセライトでろ過し、濃縮し、残渣を直接フラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/MeOH 9:1)に付し、1.40 g (98%)のわずかに黄色の油を得た:  1H NMR (300 MHz, CD3SOCD3) δ 1.40 (s, 9 H), 5.22 (s, 2 H), 6.25-6.35 (m, 2 H), 6.93 (br t, J = 8.0 Hz, 1 H), 8.29 (br s, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 28.5, 80.4, 102.1 (d, JCF = 24 Hz), 110.7, 117.2, 122.8, 143.4, 153.1, 154.1 (d, JCF = 244 Hz);  C11H15FN2O2 (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 226.1118,実測値226.1116;  LRMS (EI) m/z 226 (M+), 170, 126, 83, 57.
【０１２３】
(3) 4-tert-ブチルオキシカルボニルアミノ-3-フルオロフェニル イソニトリル(25)
ジシクロヘキシルカルボジイミド (1.51 g, 7.31 mmol)のCH2Cl2 (15 mL)攪拌溶液に、0℃下、ギ酸 (275 mL, 7.31 mmol)を滴下した。10 分後、得られた混合物を、CH2Cl2 (10 mL)及びピリジン (0.61 mL, 7.50 mmol)中の実施例 (2)で製造した化合物 (1.28 g, 5.66 mmol)の溶液へ5分かけて添加した。次いで反応混合物を室温まで暖め、16時間攪拌した。セライトでろ過した後、最終の溶液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/AcOEt 85:15)に付し、1.44 g (100%)の4-tert-ブチルオキシカルボニルアミノ-3-フルオロホルムアミドを白色固体として得た。この中間体(1.38 g, 5.43 mmol)をCH2Cl2 (20 mL)に0℃下で溶解し、テトラブロモメタン (1.93 g, 5.80 mmol)、トリフェニルホスフィン (1.52 g, 5.80 mmol)及び1.4-ジアザビシクロ[2.2.2]オクタン (DABCO, 650 mg, 5.80 mmol)を連続的に添加した。反応混合物を室温まで暖め、2時間攪拌した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物を氷冷Et2O (20 mL)で摩砕し、セライトでろ過した。溶媒の蒸発後に得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー (ヘキサン/AcOEt 95:5〜9:1)により精製し、660 mg (51%)のわずかに褐色の固体を得た:  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.51 (s, 9 H), 6.76 (br s, 1 H), 7.05-7.20 (m, 2 H), 8.17 (br t, J = 8.6 Hz, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 28.1, 81.8, 113.3 (d, JCF = 25 Hz), 119.7, 123.0, 128.6, 150.6 (d, JCF = 242 Hz), 151.8, 164.2;  C12H13FN2O2 (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 236.0961,実測値236.0952;  LRMS (EI) m/z 236 (M+), 180, 163, 136, 08, 57.
【０１２４】
(4) (20S)-10-tert-ブチルオキシカルボニルアミノ-11-フルオロ-7-トリメチルシリル-カンプトテシン(26)及び(20S)-10-tert-ブチルオキシカルボニルアミノ-9-フルオロ-7-トリメチルシリルカンプトテシン(27) (それぞれが1.9:1の混合物)
【０１２５】
【化２４】
0004638987.tif 000027
【０１２６】
実施例1-(2)に記載の手順に従い、実施例1-(1)で製造した化合物(66.8 mg, 0.15 mmol)及び実施例 (3)で製造した化合物(110 mg, 0.50 mmol)を提供し、フラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/MeOH 96:4; CHCl3/アセトン 10:1)の後、前記位置異性体を含む47.6 mg (57%)のわずかに黄色の油を得た:  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.54 (d, J = 4.9 Hz, 9 Hマイナー), 0.65 (s, 9 Hメジャー), 0.99 (t, J = 7.3 Hz, 3 H), 1.86 (m, 2 H), 3.93 (br s, 1 H), 5.24 (d, J = 16.3 Hz, 1 Hマイナー), 5.25 (br s, 2 Hメジャー), 5.25 (d, J = 16.3 Hz, 1 Hメジャー), 5.30 (br s, 2 Hマイナー), 5.68 (d, J = 16.3 Hz, 1 Hマイナー), 5.69 (d, J = 16.3 Hz, 1 Hメジャー), 6.98 (d, J = 3.6 Hz, 1 Hマイナー), 7.02 (d, J = 3.6 Hz, 1 Hメジャー), 7.52 (s, 1 Hマイナー), 7.53 (s, 1 Hメジャー), 7.74 (d, J = 12.1 Hz, 1 Hメジャー), 7.92 (br d, J = 9.3 Hz, 1 Hマイナー), 8.60 (br t, J = 8.4 Hz, 1 Hマイナー), 9.08 (d, J = 8.7 Hz, 1 Hメジャー);  C28H32FN3O6Siについて計算したHRMS (EI) m/z 553.2044,実測値553.2022;  LRMS (EI) m/z 553 (M+), 493, 479, 453, 435, 424, 409, 394, 380, 353.
【０１２７】
(5) (20S)-10-アミノ-11-フルオロ-7-トリメチルシリルカンプトテシン(28)
実施例 (4)で製造した化合物 (41.3 mg, 0.0746 mmol)を、実施例9-(3)に記載の条件に従い脱保護した。ワークアップ（workup）後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/アセトン/MeOH 70:10:1.5)に付し、溶離順に最初に14.1 mg (42%)の純粋な(20S)-10-アミノ-11-フルオロ-7-トリメチルシリル-カンプトテシン、次いで (20S)-10-アミノ-11-フルオロ-7-トリメチルシリルカンプトテシン及び(20S)-10-アミノ-9-フルオロ-7-トリメチルシリルカンプトテシンの約1:1混合物15.2 mgを得た。(20S)-10-アミノ-11-フルオロ-7-トリメチルシリルカンプトテシンの特徴は以下の通りであった:  [α]20D +20.0 (c 0.2, CHCl3/MeOH 4:1);  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.59 (s, 9 H), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3 H), 1.86 (m, 2 H), 3.86 (br s, 1 H), 4.31 (br s, 2 H), 5.21 (br s, 2 H), 5.26 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 5.69 (d, J = 16.4 Hz, 1 H), 7.30 (d, J = 9.3 Hz, 1 H), 7.50 (s, 1 H), 7.69 (d, J = 11.8 Hz, 1 H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3/CD3OD 10:1) δ 1.4, 7.7, 31.4, 51.9, 66.1, 72.7, 97.1, 109.4, 113.6 (d, JCF = 20 Hz), 117.3, 130.8, 134.4, 136.4, 140.2, 142., 146.5, 147.6, 150.6, 153.9, 154.0 (d, JCF = 251 Hz), 157.6, 173.9;  C23H24FN3O4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 453.1520,実測値453.1500;  LRMS (EI) m/z 453 (M+), 424, 409, 394, 352, 181, 131, 119.
【０１２８】
【実施例１１】
(20S)-11,12-ジフルオロ7-トリメチルシリルカンプトテシン及び(20S)-9,10-ジフルオロ7-トリメチルシリルカンプトテシン(それぞれ3:1の混合物)の製造
【０１２９】
【化２５】
0004638987.tif 000028
【０１３０】
実施例1-(2)に記載の手順に従い、実施例1-(1)で製造した化合物(44.5 mg, 0.10 mmol)及び2,3-ジフルオロフェニル イソニトリル [Weber, W. P. et al., Tetrahedron Lett., 13, 1637 (1972)の手順に従い、収率20%で製造し、ワークアップ前に室温で2日間攪拌した] (42 mg, 0.30 mmol)を得、フラッシュクロマトグラフィー (CHCl3/MeOH 95:5; CHCl3/アセトン 10:1〜4:1)の後、前記の位置異性体を含む22.6 mg (50%)のわずかに黄色の油を得た:  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.56 (d, J = 4.8 Hz, 1 Hマイナー), 0.65 (s, 9 Hメジャー), 1.00 (t, J = 7.4 Hz, 3 H), 1.86 (m, 2 H), 3.87 (br s, 1 Hマイナー), 3.97 (br s, 1 Hメジャー), 5.0-5.47 (m, 3 H), 5.68 (d, J = 16.5 Hz, 1 H), 5.70 (d, J = 16.4 Hz, 1 Hマイナー), 7.31 (m, 1 Hマイナー), 7.44 (dt, J = 9.4, 7.4 Hz, 1 Hメジャー), 7.59 (s, 1 Hマイナー), 7.60 (s, 1 Hメジャー), 7.68 (m, 1 Hマイナー), 7.93 (m, 1 Hメジャー);  C23H22F2N2O4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 456.1317,実測値456.1321;  LRMS (EI) m/z 456 (M+), 438, 428, 412, 383, 356, 327.
【０１３１】
【実施例１２】
20S-7-トリイソプロピルシリルカンプトテシンの製造
【０１３２】
【化２６】
0004638987.tif 000029
【０１３３】
(1) (S)-4-エチル-4-ヒドロキシ-6-ヨード-3-オキソ-7-(トリイソプロピルシリル-2-プロピニル)-1H-ピラノ[3,4-c]-8-ピリドン
実施例1-(1)に記載の手順に従い、ヨードピリドン 2, (200 mg, 0.598 mmol) とトリイソプロピルシリル-2-プロピニルブロミド (329 mg, 1.196 mmol)とを組み合わせた。クロマトグラフィー (CH2Cl2/AcOEt 9:1)により、41.1 mg (13%)の白色のフォームを得た:  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.91 (t, J = 7 Hz, 6 H), 0.99 (s, 18 H), 1.71 (m, J = 7 Hz, 2 H), 3.65 (s, 1 H), 5.0-5.2 (m, 3 H), 5.45 (d, J = 16 Hz, 1 H), 7.13 (s, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 7.7, 11.2, 18.7, 31.7, 44.6, 66.5, 71.9, 87.7, 100.1, 116.6, 118.2, 148.6, 158.0, 173.4; について計算したHRMS (EI) m/z C22H32INO4Si (M+) 529.1162,実測値529.1145;  LRMS (EI) m/z  529 (M+), 486, 442, 82, 59.
【０１３４】
(2) (20S)-7-トリイソプロピルシリルカンプトテシン
実施例1-(2)に記載の方法に従い、前記のピリドン(41 mg, 0.077 mmol)から23.3 mg (60%)の明るい黄色の固体を得た: [α]20D +31.7 (c 0.2, CH2Cl2); IR (CHCl3, cm-1) 3026, 3008, 2996, 2962, 2950, 2932, 2892, 2869, 1742, 1658, 1598, 1555, 1466, 1230, 1220, 1158;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.02 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.18 (d, J = 7 Hz, 18 H), 1.60-2.0 (m, 5 H), 2.17 (s, 1 H), 5.31 (d, J = 16 Hz, 1 H), 5.41 (s, 2 H), 5.76 (d, J = 16, 1 H), 7.61 (t, J = 7 Hz, 1 H), 7.69 (s, 1 H), 7.78 (t, J = 7 Hz 1 H), 8.20 (t, J = 7 Hz, 2 H);  13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ  7.9, 13.5, 19.2, 31.7, 52.6, 66.5, 72.9, 98.4, 118.6, 127.1, 129.7, 130.2, 130.4, 133.6, 136.3, 145.0, 146.0, 150.3, 150.6, 157.4, 174.1;  C29H36N2O4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 504.2444,実測値504.2436;  LRMS (EI) m/z  504 (M+), 461, 433, 419, 405, 391, 375, 361, 347, 311, 275, 174, 93, 69, 59.
【０１３５】
【実施例１３】
20S-7-トリイソプロピルシリルカンプトテシンの製造
【０１３６】
【化２７】
0004638987.tif 000030
【０１３７】
(1) (S)-4-エチル-4-ヒドロキシ-6-ヨード-3-オキソ-7-(トリエチルシリル-2-プロピニル)-1H-ピラノ[3,4-c]-8-ピリドン
実施例1-(1)に記載の手順に従い、ヨードピリドン2(150 mg, 0.450 mmol)とトリエチルシリル-2-プロピニルブロミド (210 mg, 0.90 mmol)とを組み合わせた。クロマトグラフィー (CH2Cl2/AcOEt 9:1)により、97.0 mg (45%)の白色のフォームを得た:  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ  0.54 (q, J = 8 Hz, 6 H), 0.92 (t, J = 8 Hz, 12 H), 1.74 (m, J = 7 Hz, 2 H), 3.57 (s, 1 H), 4.9-5.1 (m, 3 H), 5.46 (d, J = 16 Hz, 1 H), 7.13 (s, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ  4.1, 7.4, 7.6, 31.5, 44.5, 66.3, 71.8, 88.7, 99.2, 100.0, 116.5, 118.1, 148.5, 158.0, 173.2; C19H26INO4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 487.0676,実測値487.0688;  LRMS (EI) m/z  487 (M+), 458, 430, 420, 402, 360, 332, 153, 141, 125, 96, 83, 68, 57.
【０１３８】
(2) (20S)-7-トリエチルシリルカンプトテシン
実施例1-(2)に記載の手順に従い、前記ピリドン(48.7 mg, 0.1 mmol)より29.8 mg (65%)の明るい黄色の固体を得た: [α]20D +35.9 (c 0.2, CH2Cl2); IR (CHCl3, cm-1) 3015, 3002, 2960, 2935, 1741, 1658, 1599, 1219, 1199, 1158;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ  0.80-1.00 (m, 12 H), 1.0-1.18 (m, 6 H), 1.70-1.90 (m, 2 H), 5.22-5.27 (m, 3 H), 5.69 (d, J = 16 Hz, 1 H), 7.58 (t, J = 7 Hz, 1 H), 7.63 (s, 1 H), 7.72 (t, J = 7 Hz 1 H), 8.18 (m, 2 H);  13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ  5.0, 7.6, 7.9, 31.7, 52.1, 66.5, 72.9, 97.7, 118.3, 127.4, 127.9, 129.7, 131.2, 132.6, 136.1, 142.6, 146.6, 147.9, 150.2, 150.9, 157.6, 174.1;  C26H30N2O4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 462.1975,実測値462.1982;  LRMS (EI) m/z  462 (M+), 433, 418, 405, 389, 361, 256, 220, 205, 189, 178, 149, 137, 123, 109, 95, 81, 69, 57.
【０１３９】
【実施例１４】
(20S)-7-(ジメチル-(1′S,2′S,5′S) 7,7 ジメチルノルピニルシリル)カンプトテシンの製造
【０１４０】
【化２８】
0004638987.tif 000031
【０１４１】
(1) (S)-4-エチル-4-ヒドロキシ-6-ヨード-3-オキソ-7-(ジメチル-(1S,2S,5S) 7,7 ジメチルノルピニルシリル-2-プロピニル)-1H-ピラノ[3,4-c]-8-ピリドン
実施例1-(1)に記載の手順に従い、ヨードピリドン2(150 mg, 0.450 mmol)を、ジメチル-(1S, 2S, 5S)7,7 ジメチルノルピニルシリル-2-プロピニルブロミド (281 mg, 0.90 mmol)と組み合わせた。クロマトグラフィー (CH2Cl2/AcOEt 9:1)により、100.8 mg (39%)の白色のフォームを得た:  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ  0.10 (d, J = 2 Hz, 6 H), 0.48-0.70 (m, 2 H), 0.72 (s, 3 H), 0.93 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.10 (s, 3 H), 1.15-1.40 (m, 3 H), 1.60-1.85 (m, 6 H), 1.88-2.00 (m, 1 H), 2.05-2.20 (m, 1 H), 3.58 (s, 1 H), 4.95 (m, 3 H), 5.46 (d, J = 16 Hz, 1 H), 7.13 (s, 1 H);  13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ  0.78, 7.8, 20.2, 23.1, 24.0, 24.8, 25.3, 27.0, 31.3, 31.7, 39.7, 40.7, 44.7, 49.1, 66.5, 71.9, 91.0, 98.5, 100.3, 116.6, 118.3, 148.7, 158.0, 173.4.
【０１４２】
(2) (20S)-7-(ジメチル-(1′S,2′S,5′S) 7,7 ジメチルノルピニルシリル)カンプトテシン
実施例1-(2)に記載の手順に従い、前記ピリドン(57.0 mg, 0.1 mmol)より、29.4 mg (54%)の明るい黄色の固体を得た: [α]20D +29.2 (c 0.2, CH2Cl2); IR (CHCl3, cm-1) 3020, 3000, 2980, 2972, 2939, 2914, 2824, 2867, 1741, 1658, 1599, 1556, 1264, 1231, 1201, 1157, 843;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ  0.50-0.70 (m, 8 H), 0.90-1.10 (m, 9 H), 1.10-1.35 (m, 4 H), 1.40-1.60 (m, 3 H), 1.72 (m, 1 H), 1.80-1.95 (m, 2 H), 2.05-2.11 (m, 2 H), 5.25 (d, J = 16 Hz 1 H), 5.27 (s, 2 H), 5.69 (d, J= 16 Hz, 1 H), 7.58 (t, J= 8 Hz, 1 H), 7.62 (s, 1 H), 7.72 (t, J= 8 Hz, 1 H), 8.10-8.2 (m, 2 H);  13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ  1.4, 7.9, 19.9, 23.0, 24.6, 25.3, 26.8, 31.6, 31.7, 39.6, 40.5, 49.3, 52.0, 66.5, 72.9, 97.7, 118.3, 127.3, 128.3, 129.7, 131.2, 132.1, 134.6, 144.6, 146.6, 148.0, 150.2, 150.9, 157.6, 174.0;  C32H38N2O4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 542.2601,実測値542.2588;  LRMS (EI) m/z  542 (M+), 498, 487, 460, 443, 431, 406, 387, 377, 362, 333, 318, 304, 289, 275, 219, 178, 166, 141, 115, 95, 67.
【０１４３】
【実施例１５】
(20S)-7-(3-シアノプロピルジメチルシリル)カンプトテシン
【０１４４】
【化２９】
0004638987.tif 000032
【０１４５】
(1) (S)-4-エチル-4-ヒドロキシ-6-ヨード-3-オキソ-7-(3-シアノプロピルジメチルシリル-2-プロピニル)-1H-ピラノ[3,4-c]-8-ピリドン
Ricoら(J. Org. Chem. 1994, 59, 415)により引用される手順に従い、ヨードピリドン2(150 mg, 0.450 mmol)を、3-シアノプロピルジメチルシリル-2-プロピニルブロミド (165 mg, 0.678 mmol)、K2CO3 (124 mg, 0.90 mmol)、Bu4N+Br- (14.5 mg, 0.045 mmol)、H2O (0.02 mL)及びトルエン (3.6 mL)と組み合わせた。この混合物を1時間還流した。ろ過及びクロマトグラフィー (CH2Cl2/AcOEt 9:1)の後、34.0 mg (15%)の白色の油を得た:  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ  0.17 (s, 6 H), 0.70-0.80 (m, 2 H), 0.98 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.70-1.90 (m, 4 H), 2.39 (t, J = 7, 2 H), 3.66 (s, 1 H), 4.9-5.22 (m, 3 H), 5.51 (d, J = 16 Hz, 1 H), 7.19 (s, 1 H);  13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ  -2.1, 7.8, 15.4, 20.5, 20.6, 31.6, 44.6, 66.4, 71.9, 89.1, 99.6, 100.0, 116.7, 118.3, 119.7, 148.8, 158.0, 173.3; C19H23IN2O4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 498.0472,実測値498.0480;  LRMS (EI) m/z  498 (M+), 483, 470, 445, 430, 416, 402, 392, 371, 348, 335, 306, 290, 266, 223, 202, 185, 163, 136, 126, 109, 98, 81, 69, 57.
【０１４６】
(2) (20S)-7-(3-シアノプロピルジメチルシリル)カンプトテシン
実施例1-(2)に記載の手順に従い、前記のピリドン(25.0 mg, 0.05 mmol)より、9.8 mg (41%)の明るい黄色の固体を得た: [α]20D +34.3 (c 0.2, CH2Cl2); IR (CHCl3, cm-1) 3025, 3016, 1741, 1659, 1600, 1264, 1222;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ  0.71 (s, 6 H), 1.05 (t, J = 7 Hz,3 H), 1.26 (m, 2 H),1.66 (m, 2H), 1.90 (m, 2 H), 2.35 (t, J = 7 Hz, 2 H), 3.76 (s, 1 H), 5.31 (d, J = 16 Hz, 1 H), 5.31 (s, 2 H), 5.75 (d, J = 16 Hz, 1 H), 7.67 (m, 2 H), 7.82 (t, J = 8 Hz, 1 H), 8.17 (d, J = 8 Hz 1 H), 8.24 (d, J = 8 Hz, 1 H);  13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ  0.2, 7.9, 16.8, 20.7, 20.73, 31.7, 50.9, 66.5, 72.8, 97.9, 118.5, 119.2, 127.7, 127.8, 130.0, 131.4, 131.9, 135.2, 141.9, 146.3, 148.1, 150.3, 151.1, 157.5, 174.0;  C26H27N3O4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 473.1771,実測値473.1755;  LRMS (EI) m/z  473 (M+), 444, 429, 414, 400, 389, 373 362, 344, 331, 303, 289, 2.75, 245, 219, 166, 152, 130, 98, 71.
【０１４７】
【実施例１６】
(20S)-7-(3-ハロプロピルジメチルシリル)カンプトテシンの製造
【０１４８】
【化３０】
0004638987.tif 000033
【０１４９】
(1) (S)-4-エチル-4-ヒドロキシ-6-ヨード(及び6-ブロモ)-3-オキソ-7-(3-クロロプロピルジメチルシリル-2-プロピニル)-1H-ピラノ[3,4-c]-8-ピリドン
実施例1-(1)に記載の手順に従い、[ヨードピリドン 2 (150 mg, 0.450 mmol) と3-クロロプロピルジメチルシリル-2-プロピニルブロミド (228 mg, 0.90 mmol)とを組み合わせた。クロマトグラフィー (CH2Cl2/AcOEt 9:1)により、75.4 mg (33%)の透明な油を得た。NMR分析は、アルキルブロミド、更には所望のクロロ誘導体の存在を前者有利に1．6：1の割合で示した:  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ  0.09 (s, 6 H), 0.60-0.70 (m, 2 H), 0.85-0.89 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.60-1.95 (m, 4 H), 3.33 (t, J= 7 Hz, 2 H,ヨードに割り当てられる), 3.44 (t, J = 7 Hz, 2 H,ブロモに割り当てられる), 3.75 (s, 1 H), 4.91-5.18 (m, 3 H), 5.42 (d, J= 16 Hz, 1 H), 7.12 (s, 1 H).
【０１５０】
(2) (20S)-7-(3-ハロプロピルジメチルシリル)カンプトテシン
実施例1-(2)に記載の手順に従い、前記のピリドン(51 mg, 0.1 mmol)により、23 mg (49%)の明るい黄色の固体を得た。スペクトルデータの分析により、この固体を、クロロ、ブロモ及びヨード誘導体（1．6：1：1．3）の3成分混合物として同定した: [α]20D +30.8 (c 0.2, CH2Cl2); IR (CHCl3, cm-1) 3029, 3012, 2980, 2963, 2933, 1742, 1658, 1600, 1556, 1258, 1233, 1218, 1200, 1158, 1045, 843, 822, 794;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ  0.69 (s, 6 H), 1.04 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.18-1.30 (m, 2 H), 1.60-2.0 (m, 4 H), 3.15 (t, J= 7 Hz, 2 H,ヨードに割り当てられる), 3.36 (t, J= 7 Hz, 2 H,ブロモに割り当てられる), 3.48 (t, J = 7 Hz, 2 H, クロロに割り当てられる), 3.88 (s, 1 H), 5.30 (d, J = 16 Hz, 1 H), 5.31 (s, 2 H), 5.74 (d, J = 16 Hz, 1 H), 7.62-7.66 (m, 2 H), 7.87 (t, J = 8 Hz, 1 H), 8.18 (d, J = 8 Hz, 1 H), 8.22 (d, J = 8 Hz, 1 H);  13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ  0.2, 7.9, 14.7, 27.5, 31.7, 47.4, 51.9, 66.4, 72.8, 98.2, 118.6, 127.7, 127.9, 130.0, 131.0, 132.0, 135.2, 146.1, 147.6, 150.2, 157.5, 174.0;  C25H27ClN2O4Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 482.1429,実測値482.1413;  LRMS (EI) m/z  482 (M+), 453, 438, 361, 305, 275.
【０１５１】
【実施例１７】
(20S)10-アセトキシ-7-tert-ブチルジメチルシリルカンプトテシンの製造
【０１５２】
【化３１】
0004638987.tif 000034
【０１５３】
実施例1-(2)に記載の手順に従い、前記ピリドン(34.5 mg, 0.071 mmol)及びp-アセトキシイソニトリルより、21.3 mg (58%)の明るい黄色の固体を得た: [α]20D +36.2 (c 0.2, CH2Cl2); IR (CHCl3, cm-1) 3029, 3000, 2958, 2931, 2902, 2885, 2859, 1742, 1659, 1600, 1557, 1504, 1464, 1371, 1256, 1232, 1195, 1166, 1045;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ  0.69 (s, 6 H), 0.90 (s, 9 H), 1.04 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.80-2.00 (m, J = 7 Hz, 2 H), 2.40 (s, 3 H), 3.81 (s, 1 H), 5.30 (d, J = 16 Hz 1 H), 5.31.(s, 2 H), 5.75 (d, J = 16 Hz, 1 H), 7.53 (dd, J 1= 9 Hz, J 2= 2 Hz, 1 H), 7.65 (s, 1 H), 8.08 (d, J = 2 Hz, 1 H), 8.21 (d, J = 9 Hz, 1 H);  13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 0.6, 7.9, 19.3, 21.5, 27.2, 31.7, 52.5, 66.5, 72.9, 97.7, 118.4, 120.4, 124.8, 132.1, 133.2, 136.7, 142.8, 146.2, 146.4, 149.0, 150.2, 150.8, 157.5, 169.1, 174.1;  LRMS (EI) m/z  520 (M+), 478, 463, 421, 377, 347, 320, 291, 57.
【０１５４】
【実施例１８】
(2) (20S)10-アセトキシ-7-tert-ブチルジメチルシリルカンプトテシン
実施例2-(2)に記載の手順に従い、前記ピリドン(34.5 mg, 0.071 mmol)より、同一のクロマトグラフィー条件を使用して、21.3 mg (58%)の明るい黄色の固体を得た: [α]20D +36.2 (c 0.2, CH2Cl2); IR (CHCl3, cm-1) 3029, 3000, 2958, 2931, 2902, 2885, 2859, 1742, 1659, 1600, 1557, 1504, 1464, 1371, 1256, 1232, 1195, 1166, 1045;  1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.69 (s, 6 H), 0.90 (s, 9 H), 1.04 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.80- 2.00 (m, J = 7 Hz, 2 H), 2.40 (s, 3 H), 3.81 (s, 1 H), 5.30 (d, J = 16 Hz 1 H), 5.31.(s, 2 H), 5.75 (d, J = 16 Hz, 1 H), 7.53 (dd, J 1= 9 Hz, J 2= 2 Hz, 1 H), 7.65 (s, 1 H), 8.08 (d, J = 2 Hz, 1 H), 8.21 (d, J = 9 Hz, 1 H);  13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 0.6, 7.9, 19.3, 21.5, 27.2, 31.7, 52.5, 66.5, 72.9, 97.7, 118.4, 120.4, 124.8, 132.1, 133.2, 136.7, 142.8, 146.2, 146.4, 149.0, 150.2, 150.8, 157.5, 169.1, 174.1;  C28H32N2O6Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 520.2030,実測値520.2014 LRMS (EI) m/z  520 (M+), 478, 463, 421, 377, 347, 320, 291, 57.
【０１５５】
【実施例１９】
【化３２】
0004638987.tif 000035
【０１５６】
(20S)10-ヒドロキシ-7-tert-ブチルジメチルシリルカンプトテシン
実施例5に記載の手順に従い、実施例18に記載の化合物(13.4 mg, 0.026 mmol)をヒドロキシ誘導体に変換した。分離用TLCプレート上における精製(2:1 CH2Cl2:アセトン)により、10.6 mg (85%)の黄色の固体を得た: [α]20D +17.4 (c 0.2, 3:1 CH2Cl2/MeOH);  1H NMR (300 MHz, 3:1 CDCl3/CD3OD) δ 0.66 (s, 6 H), 0.88-1.05 (m, 12 H), 1.80- 2.00 (m, 2 H), 5.25-5.30 (m, 3 H), 5.70 (d, J = 16 Hz, 1 H), 7.37 (dd, J 1= 9 Hz, J 2= 2 Hz, 1 H), 7.54 (d, J = 2 Hz, 1 H), 7.60 (s, 1 H), 8.05 (d, J = 9 Hz, 1 H);  13C NMR (125 MHz, (3:1) CDCl3:CD3OD) δ 8.1, 20.6, 27.6, 30.4, 31.9, 53.6, 66.5, 73.9, 98.6, 112.1, 118.8, 123.3, 132.1, 135.6, 137.4, 141.6, 143.8, 147.3, 148.4, 152.6, 157.5, 158.7, 174.7;  C26H30N2O5Si (M+) について計算したHRMS (EI) m/z 478.1924,実測値478.1947 LRMS (EI) m/z  478 (M+), 434, 421, 377, 304, 284, 227, 178, 149, 137, 109, 97, 83, 69, 57.
【０１５７】
【実施例２０】
（20S）-7-(トリメチルシリルメチル)カンプトテシンの製造
【０１５８】
【化３３】
0004638987.tif 000036
【０１５９】
(1) （S）-4-エチル-4-ヒドロキシ-6-ヨード-3-オキソ-7-(4-トリメチルシリル-2-ブチニル)-1H-ピラノ[3,4-c]-8-ピリドン
実施例１−（１）記載の手順に従い、ヨードピリドン（2）（200mg，0.60mmol）及び4-トリメチルシリル-2-ブチニル臭化物（245mg ，1.20mmol）を与え、フラッシュ-クロマトグラフィ（CH2Cl2/AcOEt 9:1）後、77.7mg（28%）の白いフォームを得た。：[α ]20D +62.7（c 0.2，CHCl3）；IR（CHCl3，cm-1）3540、3026、2955、1742、1649、1607、1529、1250、1219、1208、1158、1140；
1H NMR（300MHz，CDCl3）δ0.06（s， 9H）、0.92（t，J =7.4Hz，3H）、1.44（t，J =2.4Hz，2H）、1.76（m，J =7.4Hz，2H）、3.74（s ，1H）、4.98（br， 2Hs）、5.07（d，J =15Hz，1H）、5.48（d，J =16.4Hz，1H）、7.15（s， 1H）；13C NMR（75MHz，CDCl3）δ-1.96、7.5、7.6、31.5、44.8、66.3、71.7、84.3、100.3、116.3、118.1、148.3、157.9、173.3；C17H22INO4Si（M+）について計算したHRMS（EI）m/z  459.0352、実測値459.0363；LRMS（EI）m/z 459（M+）、444、386、348、73、57．
【０１６０】
(2) （20S）-7-(トリメチルシリルメチル)カンプトテシン
実施例1-(2)に記載した手順に従い、（１）で製造した化合物を調製し（46mg 、0.10mmol）、フラッシュクロマトグラフィ（CH2Cl2/MeOH 96：4；CH2Cl2/アセトン  9:1）後に、16.2mg（38%）の明るい黄色の固体を得た。：[α] 20D +37.6（c 0.2，CHCl3）；IR（CHCl3，cm-1）3002、2984、2962、1741、1659、1601、1572、1559、1253、1219、1197、1157、849；1H NMR（500MHz，CDCl3）δ-0.34（s， 9H）、0.62（t，J =7.3Hz，3H）、1.48（m，2H）、2.31（d，J =3.0Hz，2H）、3.53（s ，1 H）、4.74（s，2H）、4.89（d，J =16.2Hz，1H）、5.34（d，J =16.2Hz，1H）、6.85（s ，1H）、7.20（t，J =7.8Hz，1H）、7.36（t，J =7.4Hz，1H）、7.57（d，J =8.4Hz，1H）、7.78（d，J =8.4Hz，1H）；13C NMR（75MHz，CDCl3）δ-0.32、1.1、7.9、31.6、50.3、66.4、72.9、98.1、112.3、124.4、125.84、126.91、127.2、130.1、130.5、144.6、147.4、149.2、150.3、151.5、157.7、174.1；C24H26N2O4Si（M+）について計算したHRMS（EI）m/z  434.1676、実測値434.1662；LRMS（EI）m/z 434（M+）、390、362、316、290、242、223、185、147、93、73．
【０１６１】
【実施例２１】
(20S) -10-ヒドロキシ-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシン（36a）（DB-174）
【０１６２】
【化３４】
0004638987.tif 000037
【０１６３】
(1) （4,4-ジブロモ-ブト-3-エニル）トリメチルシラン
この公知の化合物を、Piers，E. ；Gavai,A. V. J.Org.Chem.1990，55,2374の手順を変更して調製した。フレームドライドフラスコに、ドライCH2Cl2（150mL）及びトリフェニルホスフィン（16g 、61.2mmol）を加えた。温度を0℃まで下げ、CBr4（10.15g ，30.6mmol）をポーションワイズ（portionwise）に添加した。30分後、ドライCH2Cl2（20ml）の3-トリメチルシリルプロパナール（2.0g，15.3mmol）の溶液を添加した。０℃で1時間後、反応物をエーテルで希釈してセライトで濾過した。セライトをエーテル（4x50mL）でリンスし、化合したエーテル溶液を、H2O（100mL）、飽和NaHCO3（100mL）、飽和NH4Cl（100mL）及びブライン（100mL）で抽出した。有機層を、乾燥（MgSO4）して、濾過して、蒸発して粗製の白い固体を得た。固体の残渣は、ペンタンで洗浄した。ペンタン溶液を濃縮して、油性残渣をシリカゲル（ペンタン100%）でクロマトグラフし、質量３．７ｇの清澄な油として（4,4-ジブロモ-ブト-3-エニル）トリメチルシランを得た。1H NMRは、６２％補正収率を与えるペンタンを残すことによって２７％のコンタミネーションを示した。：IR（ニート、cm-1）2953、2922、2898、1620、1443、1413、1249、1176、1034、986、859、837；1H NMR（300MHz、CDCl3）δ0.03（s、 9H）、0.62-0.67（m 、2H）、2.06-2.14（m、 2H）、6.41（t、J =7Hz 1H）；13C NMR（75MHz、CDCl3）δ-1.9、15.1、27.7、87.5、141.2．
【０１６４】
(2) 5-トリメチルシラニルペント-2-イン-1-オール（40）
フレームドライドフラスコに、（4,4-ジブロモ-ブト-3-エニル）トリメチルシラン（3.43g ，12mmol）を添加した。ドライTHF（150mL）を添加し、混合物を-78℃に冷却した。ヘキサン（24mmol、15mL）中のBuLi  1.6Nを添加し、混合物を-78℃で1時間撹拌し、22℃まで加温して更に1時間攪拌した。最後に、パラホルムアルデヒド（1.4g）を添加し、混合物を還流した。3.5時間後、反応物を２２℃まで冷却し、飽和NH4Cl（50mL）を添加した。フラスコの内容物を、分液漏斗に移し、エーテル（3x200mL）で抽出した。有機層を、乾燥して（Na2SO4）、濾過して、蒸発させて粗製の黄色の油を得た。シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィ（ペンタン/エーテル5:1）で、1.57g（84%）の5-トリメチルシラニルペント-2-イン-1-オールを供給した：IR（ニート，cm-1）3350、2953、2219、1436、1412、1318、1249、1178、1124、1015、905、853；1H NMR（300MHz，CDCl3）δ-0.003（s ，9H）、0.76（t，J =8Hz 2H）、1.75（s ，1H）、2.20-2.24（m，2H）、4.21（br s 、2H）；13C NMR（75MHz、CDCl3）δ-1.3、13.8、16.4、51.7、78.2、88.9；C7H13OSi（M-CH3）について計算したHRMS（EI）m/z  141.0736、実測値141.0733  LRMS（EI）m/z 141（M  -  CH3）、123、113、103、97、91、85、75、66、59．
(3) （5-ブロモペント-3-イニル）トリメチルシラン（41）
フレームドライドフラスコにPPh3（1.76g ，6.73mmol）を添加し、続いてドライCH2Cl2（60mL）を添加した。混合物を、氷浴に配置し、臭素（0.34mL，6.41mmol）を滴状に添加した。反応物が黄色から色がクリアになるまで、少量のPPh3を添加した。０℃で0.5時間後、5-トリメチルシラニルペント-2-イン-1-オール（1.0g 、6.41mmol）をCH2Cl2（5mL）に溶解し、滴状に加えた。0℃で4時間後、反応混合物を、分液漏斗に注ぎ、ペンタン（250mL）で希釈し、H2O（100mL）及び飽和NaHCO3（100mL）で抽出した。有機層を乾燥し（MgSO4）、濾過して、容積で50mLまで減少させた。粗製の溶液を、ペンタン（500mL）で、シリカゲルのパッドにクロマトグラフィーした。ペンタンの蒸発後、（5-ブロモペント-3-イニル）トリメチルシラン（1.2g 87%）を、クリアな油として得た。：IR（ニート，cm-1）2953、2922、2899、2230、1431、1317、1248、1208、852；1H NMR（300MHz，CDCl3）δ 0.03（s， 9H）、0.79（t，J =8Hz、2H）、2.28（tt，J 1=8Hz，J 2=2Hz，2H）、3.92（t，J =2Hz，2H）；13C NMR（75MHz，CDCl3）δ 1.7、13.6、15.7、15.8、74.6、90.2；C7H12BrSi（M  -  CH3）について計算したHRMS（EI）m/z  202.9892、実測値202.9889  LRMS（EI）m/z 203（M  CH3）、137、73、66．
【０１６５】
(4) （20S）-4-エチル-4-ヒドロキシ-6-ヨード-3-オキソ-7-(5-トリメチルシラニルペント-2-イニル)-1H-ピラノ[3,4-c]-8-ピリドン（43）
実施例1-(1)記載の手順に従って、ヨードピリドン（2）、（0.2g ，0.6mmol）及び（5-ブロモペント-3-イニル）トリメチルシラン（260mg，1.19mmol）を、フラッシュクロマトグラフィ（CH2Cl2/EtOAc 95：5）後、白いフォームとして、0.21g（74%）の（20S）-4-エチル-4-ヒドロキシ-6-ヨード-3-オキソ-7-(5-トリメチルシラニル-ペント-2-イニル)-1H-ピラノ[3,4-c]-8-ピリドンを供給した。：[α ]20D +54.4（c 0.2，CH2Cl2）；IR（CHCl3，cm-1）2952、1746、1648、1528、1427、1138、856、755；1H NMR（300MHz，CDCl3）δ-0.03（s，9H）、0.76（t，J =8Hz，2H）、0.96（t，J =7Hz，3H）、1.70-2.00（m，J =7Hz，2H）、2.16（t，J =8Hz，2H）、3.77（s， 1H）、5.04（s，2H）、5.10.(d，J =16Hz，1H)、5.49（d，J =16Hz，1H）、7.16（s，1H）；13C NMR（75MHz，CDCl3）δ-1.6、7.8、13.6、15.7、31.7、44.8、66.5、71.9、72.4、88.1、100.5、116.6、118.3、148.6、158.2、173.5；C18H24INO4Si（M+）について計算したHRMS（EI）m/z  473.0519、実測値473.0507  LRMS（EI）m/z 473（M+）、458、386、360、346、139、73、57．
【０１６６】
(5) （20S）-10-アセトキシ-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシン（45）
実施例1-(2)に記載されている手順に従って、上記（４）で調製したヨードピリドン（56.8mg ，0.12mmol）及びp-アセトキシフェニルイソニトリル（48mg ，0.3mmol）の混合物を、フラッシュクロマトグラフィ（CH2Cl2/アセトン10:1）の後、黄褐色の固体として、33.2mg（55%）の（20S）-10-アセトキシ-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシンを提供した：[α ]20D +21.0（c 0.2，CH2Cl2）；IR（CHCl3，cm-1）3039、2996、2954、1744、1660、1602、1509、1371、1229、1177；1H NMR（300MHz，CDCl3）δ 0.17（s，9H）、0.88-0.95（m ，2H）、1.03（t，J =7Hz，3H）、1.80-2.00（m，J =7Hz，2H）、2.42（s，3H）、3.00（m， 2H）、4.01（br s，1H）、5.22.(s，2H)、5.30（d，J =16Hz，1H）、5.74（ｄ，J =16Hz，1H）、7.54（dd，J1 =9Hz，J2 = 2Hz 1H）、7.66（s， 1H）、7.72（d，J =2Hz，1H）、8.22（d，J =2Hz，1H）；13C NMR（125MHz，CDCl3）δ-1.8、7.9、17.7、21.4、24.3、31.7、49.3、66.4、72.9、98.1、114.5、118.6、125.4、126.6、127.2、132.2、146.8、147.0、147.5、149.6、150.3、151.9、157.7、169.4、174.0；C27H30N2O6Si（M+）について計算したHRMS（EI）m/z  506.1873、実測値506.1869  LRMS（EI）m/z 506（M+）、464、436、420、347、336、277、193、151、109、73．
【０１６７】
(6) （20S）-10-ヒドロキシ-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシン（36a）
上記（５）で調製された化合物（17.7mg ，0.035mmol）及びMeOH（0.2mL）及びH2O（0.2mL）中のK2CO3（0.07mmol，9.7mg）の混合物を、室温で１．５時間攪拌した。混合物を、AcOH（8滴）で酸性化して、ブライン（10mL）で希釈してEtOAc（10x20mL）で抽出した。結合した有機層を、乾燥して（Na2SO4）、蒸発させた。粗製の残渣を2つのクロマトグラフィ（CH2Cl2/MeOH/ AcOH 96：3:1続いて  CH2Cl2/アセトン  5:1）に付し、黄色の固体として7.6mg（47%）の（20S）-10-ヒドロキシ-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシンを得た。：[α ]20D +31.3（c 0.2，CH2Cl2/MeOH  3:1）；1H NMR（300MHz，CDCl3）δ 0.15（s， 9H）、0.84-0.95（m ，2H）、0.99（t，J =7Hz，3H）、1.80-2.00（m，J =7Hz，2H）、2.99-3.05（m ，2H）、5.20（s，2H）、5.29（d，J =16Hz 1H）、5.62.(d，J =16Hz 1H)、7.33（d，J =2Hz，1H）、7.40（dd，J1 =9Hz，J2 =2Hz，1H）、7.63（s ，1H）、8.01（d，J =9Hz，1H）；13C NMR（125MHz，CDCl3）δ-1.8、8.3、17.9、25.1、32.2、66.9、74.4、99.1、106.0、116.1、119.7、124.0、128.4、129.8、132.3、145.5、146.8、148.3、150.1、153.0、158.6、159.4、175.1；C25H28N2O5Si（M+）について計算したHRMS（EI）m/z  464.1767、実測値464.1788  LRMS（EI）m/z 464（M+）、420、405、391、364、347、167、149、104、91、73．
この化合物は、10-100ng/mlの半有効濃度を有するグリオーマ細胞（U87、A172、SG388、T98G、LN-Z308）の幾つかの系統で細胞増殖を阻害する活性を示した。
【０１６８】
【実施例２２】
(20S) -10-アミノ-7-[2-トリメチルシリル]エチル]カンプトテシン（36b）（DB-173）
【０１６９】
【化３５】
0004638987.tif 000038
【０１７０】
(1) （20S）-10-tert-ブチルオキシカルボニルアミノ-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシン（45b）
実施例1-(2)に記載の手順に従って、上記実施例21-(4)で調製したヨードピリドン溶液（56.8mg， 0.12mmol）を、4-tert-ブチルオキシカルボニルアミノフェニルイソニトリル（65.4mg，0.3mmol）と反応させた。カラムクロマトグラフィ（CH2Cl2/アセトン  10:1）で、黄褐色の固体として、38mg（56%）（20S）-10-tert-ブチルオキシカルボニルアミノ-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシンを得た：[α ]20D + 18.5（c 0.2，CH2Cl2）；IR（CHCl3，cm-1）3019、1738、1658、1600、1531、1215、1155、761；1H NMR（300MHz，CDCl3）δ 0.19（s， 3H）、0.90-0.96（m，2H）、1.03（t，J =7Hz，3H）、1.58（s，9H）、1.8-2.0（m ，2H）、3.02-3.08（m ，2H）、3.89（s，1H）、5.21.(s，2H)、5.30（d，J =16Hz，1H）、5.75（d，J =16Hz，1H）、6.85（br s， 1H）、7.57（dd，J 1=9Hz，J 2=2Hz，1H）、7.61（s， 1H）、8.11（d，J =9Hz，1H）、8.31（br s ，1H）；13C NMR（75MHz，CDCl3）δ-1.7、8.0、17.5、24.4、28.5、31.8、49.5、66.5、73.0、77.4、81.4、97.7、110.1、118.2、123.3、126.7、127.6、131.4、137.8、146.2、147.4、150.37、150.4、152.6、157.8、174.1；C30H37N3O6Si（M+）について計算したHRMS（EI）m/z  563.2452、実測値563.2426  LRMS（EI）m/z 463（M-  C5H8O2）、419、404、363、363、346、332、289、246、149、131、73、57．
【０１７１】
(2) （20S）-10-アミノ-7-[2-トリメチルシリル]エチル]カンプトテシン（36b）上記（２）で調製したカンプトテシン誘導体（17.5mg ，0.031mmol）を、CH2Cl2（1mL）で溶解し、トリフルオロ酢酸（0.25mL）を添加した。２２℃３時間後、混合物を、飽和NaHCO3（20mL）へ注いで、EtOAc（10×15mL）で抽出した。有機相を、乾燥して（Na2SO4）、濃縮して、クロマトグラフ（CH2Cl2/アセトン85：15）し、9.4mg（65%）の黄色の固体を得た：[α ]20D +17.0（c 0.2，CH2Cl2/MeOH  3:1）；1H NMR（300MHz，CDCl3）δ 0.15（s，9H）、0.85-0.91（m，2H）、0.99（t，J =7Hz，3H）、1.87-2.05（m ，2H）、2.85-2.98（m，2H）、5.04（d，J =19Hz，1H）、5.09（d，J =19Hz 1H）、5.29.(d，J =16Hz，1H)、5.58（d，J =16Hz，1H）、7.01（d，J =2Hz，1H）、7.25（dd，J1 =9Hz，J s2 =2Hz，1H）、7.54（s，1H）、7.84（d，J =9Hz，1H）；13C NMR（75MHz，CDCl3）δ1.8、8.1、17.4、24.5、31.8、50.0、66.4、73.8、98.4、102.3、118.2、123.4、127.2、129.6、131.3、144.1、145.2、147.6、147.9、148.5、152.4、158.7、174.6；C25H29N3O4Si（M+）について計算したHRMS（EI）m/z  463.1927、実測値463.1941  LRMS（EI）m/z 463（M+）、434、419、404、390、362、346、332、167、131、104、91、73、57．
【０１７２】
【実施例２３】
(20S) -7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシン（36c）（DB-172）
実施例１−（２）に記載される手順に従って、上記実施例２１−（４）で調製されたヨードピリドン（56.8mg ，0.12mmol）及びフェニルイソニトリル（30.9mg ，0.3mmol）の混合物を、フラッシュクロマトグラフィ（CH2Cl2/アセトン10:1）の後、黄褐色の固体として、28mg（52%）の（20S）-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシンを提供した：[α ]20D + 29.8（c 0.2，CH2Cl2）；IR（CHCl3，cm-1）2996、2954、1742、1659、1601、1557、1250、1158、856；1H NMR（300MHz，CDCl3）δ 0.18（s ，9H）、0.90-0.96（m， 2H）、1.04（t，J =7.3Hz，3H）、1.86-1.95（m， 2H）、3.07-3.13（m， 2H）、3.87（s，1H）、5.23.(s，2H)、5.31（d，J =16.3Hz，1H）、5.76（d，J =16.3Hz，1H）、7.64-7.69（m ，2H）、7.80（td，J1=8Hz，J2=0.87Hz，1H）、8.03（d，J =8.3Hz，1H）、8.23（d，J =8.3Hz，1H）；13C NMR（75MHz，CDCl3）δ-1.75、7.95、17.9、24.2、31.7、49.4、66.5、72.9、98.1、118.5、123.4、126.1、126.7、127.7、130.3、130.8、147.1、147.2、149.6、150.2、152.0、157.8、174.1；C25H28N2O4Si（M+）について計算したHRMS（EI）m/z  448.1818、実測値448.1819  LRMS（EI）m/z 448（M+）、431、374、358、311、301、208、195、165、149、131、118、105、93、73．
本発明を、前記の実施例と結びつけて詳細に記載したけれども、このような詳細な記載は単にその目的のためだけであり、添付の請求の範囲により限定されることを除いて本発明の精神から離れることなく当業者は改変を行うことができることを理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【図１】  式（４）の化合物の調製に関する一般合成スキームの図である。
【図２】  (20S)-11-フルオロ-7-トリメチルシリルカンプトテシンの合成の図である。
【図３】  (20S)-10-アセトキシ-7-トリメチルシリルカンプトテシン及び(20S)-10-ヒドロキシ-7-トリメチルシリルカンプトテシンの合成の図である。
【図４】  (20S)-10-アミノ-7-トリメチルシリルカンプトテシンの合成の図である。
【図５】  (20S)-10-アミノ-11-フルオロ-7-トリメチルシリルカンプトテシンの合成の図である。
【図６】  イリノテカンの新規類似体の合成の図である。
【図７】  式（１）の３つの代表的なシリルカンプトテシン類似体の図である。
【図８】  臭化プロパルギル前駆体の合成の図である。
【図９】式（２）の遊離基前駆体の合成の図である。
【図１０】3つのイソニトリルを有する図9の遊離基前駆体の反応の図である。
【図１１】図7の代表的なシリルカンプトテシン類似体の合成の最終工程の図である。
【図１２】1μM（20S）-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシン、7-TMSEt CPT、（36c）（DB-172）の励起及び発光蛍光スペクトルの図である。
【図１３】1μM（20S）-10-アミノ-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシン、10-NH2-7-TMSEt CPT（DB-173）の励起及び発光蛍光スペクトルの図である。
【図１４】1μM（20S）-10-ヒドロキシ-7-[(2-トリメチルシリル)エチル]カンプトテシン、10-OH-7-TMSEt CPT（DB-174）の励起及び発光蛍光スペクトルの図である。
【図１５】エタノール、0.29M DMPG及びPBS 中の1μM（20S）-10-ヒドロキシ-7(tert-ブチルジメチルシリル)カンプトテシンの蛍光スペクトルの図である。
【図１６】DMPCに対するカンプトテシン類似体の平衡結合の図である。
【図１７】DMPCに対する本発明の高親油性カンプトテシン類似体の平衡結合の図である。
【図１８】DMPGに対する本発明の高親油性カンプトテシン類似体の平衡結合の図である。
【図１９】３７℃でのDMPCの小さい単層小胞（SUV）に対する、本発明の高親油性カンプトテシン類似体の結合の二重逆数プロットの図である。
【図２０】３７℃でのDMPG SUVに対する、本発明の高親油性カンプトテシン類似体の結合の二重逆数プロットの図である。
【図２１】３７℃、pH 7.4のPBS緩衝液中のDB-172の安定性の図である。
【図２２】  時間及び薬物濃度におけるDB-172の蛍光強度の依存関係の図である。。
【図２３】時間及び濃度依存のDB-172の蛍光強度の図である。
【図２４】DB-172のカルボキシレート形態に対する時間及びｐHにおける全蛍光強度の依存関係の図である。
【図２５】本発明のいくつかのカンプトテシン類似体に対する時間における全蛍光強度の依存関係の図である。
【図２６】リン酸緩衝生理食塩水（PBS）及びヒト血液中の本発明のいくつかのカンプトテシン類似体の薬物安定性の図である。
【図２７】PBS、全血及びPBS/ヒト血清アルブミン（HSA）中の本発明のいくつかのカンプトテシン類似体の薬物安定性の図である。
【図２８】経口投薬後のDB-67の血漿濃度の図である。
【図１】
0004638987.tif 000045
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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