(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0004746319.tif 000016
〔式中、Ｒ1は、コレステリル、ジ−Ｃ12〜Ｃ28−アシルグリセリルおよびジ−Ｃ1〜Ｃ28−アルキルグリセリルから選択された基を表わし、
Ｒ2およびＲ3は、アミノエトキシル、Ｎ−メチルアミノエトキシル、アミノプロパノキシル、コリル、グリセリル、ジグリセリルおよびトリグリセリルから選択された基を表わし、この場合これらの基は、場合によっては保護基を含有していてもよい〕で示される化合物。
【請求項２】
Ｒ1は、コレステリル基を表わす、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1は、１−オクタデシル−２−メチル−ｓｎ−グリセリル基を表わす、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ2およびＲ3は、グリセリル、ジグリセリルおよびトリグリセリルから選択されている、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ2は、グリセリル基を表わす、請求項１から４までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ3は、グリセリル基を表わす、請求項１から５までのいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
コレステリル−ホスホ−ジグリセロール、コレステリル−ホスホ−グリセロール−グリセログリセロール、コレステリル−ホスホ−ジ−グリコグリセロール、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ジグリセロール、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ジグリセロール、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ジグリセロール、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ジグリセロール、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ジ−グリコグリセロールおよび１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ジ−グリセログリセロールから選択された、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
請求項１から７までのいずれか１項に記載の式（Ｉ）による化合物の製造法において、
式（ＩＩ）
【化２】
0004746319.tif 000017
で示される化合物を、式（ＩＩＩ）
ＨＯ−Ｒ3
で示される化合物でエステル化し、
上記式中、Ｒ1、Ｒ2、およびＲ3は請求項１における定義と同じであることを特徴とする、請求項１から７までのいずれか１項に記載の式（Ｉ）による化合物の製造法。
【請求項９】
請求項１から６までのいずれか１項に記載の化合物を含有するリポソーム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、無極脂質構造を有する新規の燐酸トリエステルに関する。
【０００２】
このトリエステルは、殊にリポソーム成分として使用されることができる。
【０００３】
本発明の対象は、式（Ｉ）
【０００４】
【化３】
0004746319.tif 000002
〔式中、Ｒ1は、コレステリル、ジ−Ｃ12〜Ｃ28−アシルグリセリルおよびジ−Ｃ1〜Ｃ28−アルキルグリセリルから選択された基を表わし、
Ｒ2およびＲ3は、アミノエトキシル、Ｎ−メチルアミノエトキシル、アミノプロパノキシル、コリル、グリセリル、ジグリセリルおよびトリグリセリルから選択された基を表わし、この場合これらの基は、場合によっては保護基を含有していてもよい〕で示される化合物である。
【０００５】
本発明による化合物は、脂質類似の燐酸トリエステル、殊に燐原子１個当たり複数のヒドロキシル基、殊に燐原子１個当たり少なくとも２個のヒドロキシル基、好ましくは燐原子１個当たり少なくとも３個のヒドロキシル基、よりいっそう好ましくは燐原子１個当たり少なくとも４個のヒドロキシル基を有する燐酸トリエステルである。
【０００６】
本発明による燐酸トリエステルは、無極脂質構造を有する基Ｒ１を含有する。Ｒ１に適した構造は、殊にコレステリン基であり、したがって好ましい燐酸トリエステルは、コレステリル化合物である。
【０００７】
更に、Ｒ１の好ましい基は、ジアシルグリセリンであり、この場合アシル基は、それぞれ独立に特に１２〜２８個、殊に１３〜２７個、有利に１４〜２６個の炭素原子を含有する。アシル基は、飽和基であることができるかまたは１個または数個、殊に２個または３個の不飽和基であることができる。特の好ましいのは、不飽和脂肪酸基、例えば油酸、リノール酸またはリノレン酸の基を含有するアシルグリセリンである。
【０００８】
更に、基Ｒ１は、本発明によれば、ジアルキルグリセリン基であることができ、この場合その中のアルキル基は、それぞれ互いに独立に特に１〜２８個、殊に１２〜２６個、好ましくは１４〜２４個の炭素原子を有する。ジアルキルグリセリン基中のアルキル基は、飽和であってもよいし、１個または数個、殊に２個または３個の不飽和であってもよい。好ましいのは、基（Ｚ）−９−オクタデセニル−、（Ｚ．Ｚ．）−９．１２−オクタデカンジエニル−、（Ｚ．Ｚ．Ｚ）−９．１２．１５−オクタデカントリエニルならびに製薬学的作用を有する親油性基体、例えば１−オクタデシル−２−メチル−ｓｎ−グリセリンである。
【００１３】
本発明による化合物において、基Ｒ１は、エナンチオマーの形であってもよいし、ラセミ混合物として存在していてもよい。
【００１４】
Ｒ２は、天然のリン脂質およびスフィンゴミエリン中に由来する全ての基を表わすことができる。殊に、Ｒ２は、エタノールアミン基、Ｎ−メチルエタノールアミン基またはプロパノールアミン基を表わし、この場合これらの基には、場合によっては適当な保護基、例えばＢＯＣが設けられていてよい。更に、Ｒ２は、コリン基を表わすことができる。好ましくは、Ｒ２は、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ＋（ＣＨ３）３を表わす。更に、Ｒ２は、グリセリン基（−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２（ＯＨ））を表わし、ならびにオリゴグリセリン、殊にジグリセリン基またはトリグリセリン基を表わす。更に、適当な基Ｒ２は、グリコグリセリン、ならびにセリン基である。また、グリセリン基およびセリン基は、場合によっては適当な保護基を備えていてよい。
【００１５】
Ｒ３がＲ２に関して記載された意味を有する場合には、生物学的に高度に活性の構造を形成することができ、この構造は、新規の陽イオン脂質として重要な意味を有する。このような陽イオン脂質は、例えば遺伝子の形質転換に使用されることができる。
【００１７】
本発明による化合物は、ｐＨ３〜ｐＨ８の間で極めて安定であり、殊にリポソーム成分として使用されることができる。
【００１８】
更に、本発明は、式（Ｉ）による化合物の製造法に関し、この方法は、式（ＩＩ）の化合物を、式（ＩＩＩ）ＨＯ−Ｒ３で示される化合物でエステル化することによって特徴付けられている。
【００１９】
化合物は、リン脂質に由来し、例えば
【００２０】
【化３】
0004746319.tif 000003
から燐酸ジエステルとグリセリン：
【００２１】
【化４】
0004746319.tif 000004
とのエステル化によって生成される。
【００２２】
また、相応してコレステリン誘導体を得ることができる。
【００２３】
【化５】
0004746319.tif 000005
【００２４】
この化合物は、種々の実施態様において製造可能である。また、この化合物は、例えばグリセリンの代わりに、オリゴグリセリン、例えばグリセログリセリン、ジグリセログリセリンまたはトリグリセログリセリンを含有することもできる。図解的には、例えばコレステリンホスホ−モノグリセリントリグリセログリセリンは、次の構造式を有する：
【００２５】
【化６】
0004746319.tif 000006
【００２６】
本発明による化合物は、殊にリポソームの製造に適しているかまたはリポソーム成分として適している。この本発明による化合物は、リポソームに特殊な性質、例えば血中での長い循環時間、肝臓中での意図された含量増加または脾臓中での殆んど例外的な吸収を付与する。また、本発明による燐酸トリエステルにより、新しい性質を有するリポソームを形成させることもでき、この場合このリポソームは、高い血清安定性を有し、長い循環時間を有し、例外的に脾臓中で含量増加が生じる。従って、長い循環時間も特に重要であり、それというのも、この構造は、公知のリポソームのように、肝臓中で含量増加が生じるのではなく、例えば脾臓が遭遇するような別の目的または脾臓にとって特に重要であるような別の目的を腫瘍細胞によって評価されうるからである。従って、本発明による化合物は、癌腫疾患の治療に使用されることもできる。
【００２７】
更に、本発明は、中間段階としての本発明による燐酸トリエステルを使用しながら新規の合成経路に関する。本発明による合成経路の特殊な利点は、早期の合成において利用された反応の実施（ａ）が回避され、（ｂ）により重要な化合物１．２−ジオレイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセリンまたは相応する化合物が中性の条件下で明らかになることである：
【００２８】
【化７】
0004746319.tif 000007
【００２９】
新規の合成の実施の場合の本質的な利点は、無極中間生成物を合成中にできるだけ遙かに先行するようにもたらし、したがって極性構造を方法の終結時に初めて導入する方法にある。これは、以下、実施例に詳説されている。カルジオリピンおよび類似の化合物は、複雑化された構造であり、これは、合成によりｋｇの量で得ることは極めて困難である。しかし、本発明の新規の合成方法によれば、これは、良好に可能である。
【００３０】
カルジオリピン
【００３１】
【化８】
0004746319.tif 000008
【００３２】
合成は、Ｒがパルミチン酸である例について記載されている。出発生成物は、１．２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセリンであり、これは、ＴＨＦ中のオキシ塩化燐および塩基としてのトリエチルアミンを用いて常法で１．２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−燐酸ジクロリドに変換される：
【００３３】
【化９】
0004746319.tif 000009
【００３４】
構成成分Ｉ
カルジオリピンを合成するための簡単な方法、２−ベンジル−グリセリンとの直接の反応は、残念なことに、相応するホスホランの主要な形成を生ぜず、有効ではない：
【００３５】
【化１０】
0004746319.tif 000010
【００３６】
従って、構成成分ＩＩを使用しなければならない。保護されたグリセリン誘導体：
構成成分ＩＩ
【００３７】
【化１１】
0004746319.tif 000011
【００３８】
更に、トリエチルアミンを用いてのＴＨＦ中での構成分Ｉと構成成分ＩＩとの結合は、構成成分ＩＩＩを生じる：
構成成分ＩＩＩ
【００３９】
【化１２】
0004746319.tif 000012
【００４０】
更に、構成成分ＩＩＩは、構成成分Ｉと常法で反応されることができ、カルジオリピンの直接の前生成物に変わり、これは、さらにメタノリシスによってジメチルエステルに変換される。更に、接触水素化分解によって、中程度のグリセリン上でヒドロキシル基が明らかになる。メチル基は、ＬｉＢｒによって中性のｐＨで除去され、この場合最終生成物は、カルジオリピンである。
【００４１】
【化１３】
0004746319.tif 000013
【００４２】
本明細書の記載は、次の実施例によってさらに詳説される。
【００４３】
例１
１）コレステリル−ホスホ−ジグリセリン
Ｃ３３Ｈ５９Ｏ８Ｐ    （分子量６１４．８０１）
２）コレステリル−ホスホ−グリセリン−グリセログリセリン
Ｃ３６Ｈ６５Ｏ１０Ｐ    （分子量６８８．８８０）
３）コレステリル−ホスホ−ジ−グリコグリセリン
Ｃ３７Ｈ６７Ｏ１０Ｐ    （分子量７０２．９０７）
４）１．２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ジグリセリン
Ｃ３７Ｈ７３Ｏ１２Ｐ    （分子量７４０．９５３）
５）１．２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ジグリセリン
Ｃ４１Ｈ８１Ｏ１２Ｐ    （分子量７９７．０６１）
６）１．２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ジグリセリン
Ｃ４５Ｈ８９Ｏ１２Ｐ    （分子量８５３．１６９）
７）１．２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ジグリセリン
Ｃ４５Ｈ８５Ｏ１２Ｐ    （分子量８４９．１３７）
８）１．２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ジ−グリコグリセリン
Ｃ４９Ｈ９３Ｏ１４Ｐ    （分子量９３７．２４３）
９）１．２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ジ−グリセログリセリン
Ｃ５１Ｈ９７Ｏ１６Ｐ    （分子量９９７．２９５）
例２
【００４４】
【化１４】
0004746319.tif 000014
および１．２．ジオレオイルグリセリン。
【００４５】
【化１５】
0004746319.tif 000015
【００４６】
例３
次の組成：
モル比
１．２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン    ４０％
コレステリン                                                ３０％
コレステリン−ホスホ−ジグリセリン                          ２０％
コレステリン−ホスホ−グリセリン、Ｎａ(＋)塩                  １０％
１００％
のリポソームは、主に脾臓ａ中で含量増加が生じ、他方、通常の組成：
１．２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン    ５０％
コレステリン                                                ４０％
１．２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセリン、
Ｎａ(＋)塩                    １０％
１００％
のリポソームは、主に肝臓中で含量増加が生じる。