(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）の化合物または該化合物の製薬上許容される塩。
【化１】
0004787447.tif 000036
［式中、
Ｘは、
【化２】
0004787447.tif 000037
であり；
式中、Ｒ１は水素であり；Ｒ２は水素であり；
Ｒ４は、ピリジルであり、当該ピリジルは、モノ置換されており、前記置換基がＣ１−４アルコキシであり；
Ｒ３は、水素である。］
【請求項２】
３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−（７−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ［１，８］ナフチリジン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸
である請求項１に記載の化合物または該化合物の製薬上許容される塩。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、イミダゾリジノン誘導体、それの合成ならびにそれのαｖインテグリン受容体拮抗薬としての使用に関するものである。詳細には本発明の化合物は、インテグリン受容体αｖβ３、αｖβ５および他のβ−サブユニットに関連するαｖインテグリン受容体の拮抗薬であり、骨吸収の阻害、骨粗鬆症の治療および／または予防、ならびに血管再狭窄、糖尿病性網膜症、黄斑変性、血管新生、アテローム性動脈硬化、炎症性関節炎、癌および転移性腫瘍成長の阻害に有用である。
【０００２】
（背景技術）
非常に多様な疾患状況および状態にインテグリン受容体での作用が介在しており、インテグリン受容体拮抗薬が有用な種類の医薬品を代表するものであると考えられている。インテグリン受容体は、それを介して細胞が細胞外の基質および他の細胞に付着し、伝達を行うヘテロダイマー膜横断蛋白である（S.B.Rodan and G.A.Rodan, ″Ingegrin Function In Osteoclasts″, Journal of Endocrinology, 154, S47-S56 (1997)（引用によって全体が本明細書に含まれるものとする）。
【０００３】
本発明の１態様において、本発明の化合物は骨吸収の阻害に有用である。骨吸収には、破骨細胞として知られる細胞の作用が介在する。破骨細胞は、脊椎動物における石化組織、主として炭酸カルシウムおよびリン酸カルシウムを吸収する、直径約４００ｍｍ以下の大型多核細胞である。破骨細胞は骨の表面を移動する活発な運動性細胞であり、骨に結合し、必要な酸類およびプロテアーゼ類を分泌し、それによって骨からの石化組織の実際の吸収を起こすことができる。より具体的には、破骨細胞は、少なくとも２つの生理的状態、すなわち分泌状態と移動状態すなわち運動状態とで存在していると考えられる。分泌状態では、破骨細胞は平坦であり、密着領域（密封領域）を介して骨基質に付着し、非常に極性となり、境界を波打たせ、リソソーム酵素類およびプロトン類を分泌して、骨を吸収する。骨の表面への破骨細胞の付着は、骨吸収における重要な初期段階である。移動状態すなわち運動状態では、破骨細胞は骨基質を横切って移動し、再度骨に付着するまで吸収には関与しない。
【０００４】
インテグリン類は、破骨細胞の付着、活性化および移動に関与する。破骨細胞（例えば、ラット、ニワトリ、マウスおよびヒトの破骨細胞）で最も豊富なインテグリンは、αｖβ３と称されるインテグリン受容体であり、ＲＧＤ配列を有する基質蛋白と骨の中で相互作用すると考えられる。αｖβ３に対する抗体は、in vitroで骨吸収を遮断し、このインテグリンが吸収プロセスにおいて重要な役割を果たしていることを示している。αｖβ３リガンドを用いて、哺乳動物においてin vivoで破骨細胞介在骨吸収を効果的に阻害できることを示唆する証拠が多く得られるようになっている。
【０００５】
現在一般的に関心を持たれている主要な骨疾患としては、骨粗鬆症、悪性の高カルシウム血症、骨代謝によるオステオペニア、歯周病、副甲状腺機能亢進症、慢性関節リウマチにおける関節周囲びらん、ページェット病、固定化誘発オステオペニアおよび糖コルチコイド誘発骨粗鬆症である。これらの状態はいずれも、年平均約１４％の速度で一生を通じて続く骨吸収（すなわち骨破壊）と骨形成の間の不均衡によって生じる骨損失を特徴とするものである。しかしながら、骨代謝の速度は部位によって異なり、例えば椎骨の柱骨および顎における歯槽骨の方が、長骨の皮質より高い。骨損失の可能性は代謝に直接関係し、閉経直後の椎骨で年５％を超える量になると考えられ、その状態によって、骨折のリスクが高くなる。
【０００６】
現在米国では、骨粗鬆症による椎骨骨折が認められる患者は２０００万人に及ぶ。さらに、骨粗鬆症が原因とされる臀部骨折は年間で２５万例である。この臨床状態では、最初の２年間で死亡率が１２％であり、患者の３０％が骨折後に家庭での介護を必要とする。
【０００７】
上記の全ての状態を患う患者には、骨吸収を阻害する薬剤を投与するのが有効であると考えられる。
【０００８】
さらに、αｖβ３リガンドは、再狭窄、すなわち心臓弁に対する矯正手術後の狭窄再発、アテローム性動脈硬化、糖尿病性網膜症、黄斑変性および血管新生、すなわち新たな血管の形成の治療および／または阻害ならびにウィルス疾患の阻害に有用であることが認められている。さらに、腫瘍の成長が十分な血液供給に依存していて、腫瘍中への新たな血管の成長に依存していることから、血管新生阻害によって、動物モデルで腫瘍の退行を起こすことが可能であると予想されている（Harrison′s Principles of Internal Medicine, 12th ed., 1991参照；当該文献は、引用によってその全内容が本明細書に含まれるものとする）。従って、血管新生を阻害するαｖβ３拮抗薬は、腫瘍成長を阻害することで癌治療において有用となり得る（例えば、Brooks et al., Cell, 79: 1157-1164 (1994)参照；当該文献は、引用によってその全内容が本明細書に含まれるものとする）。
【０００９】
さらに、血管新生が関節炎疾患の発症および持続における中心的な因子であり。血管インテグリンαｖβ３が炎症性関節炎における好ましい標的となり得ることを示唆する証拠も得られている。従って、血管新生を阻害するαｖβ３拮抗薬は、慢性関節リウマチなどの関節炎疾患治療に対する新たな療法上のアプローチを代表するものとなり得る（C. M. Storgard, et al., ″Decreased angiogenesis and arthritic disease in rabbits treated with an αvβ3 antagonist″, J. Clin. Invest., 103: 47-54 (1999)参照；この文献は、引用によってその全内容が本明細書に含まれるものとする）。
【００１０】
さらに、本発明の化合物は、インテグリン受容体αｖβ５の拮抗薬として作用することで、新血管新生を阻害することもできる。αｖβ５に対するモノクローナル抗体は、ウサギ角膜およびヒヨコ漿尿膜モデルにおいてＶＥＧＦ誘発血管新生を阻害することが明らかになっている（M. C. Friedlander et al., Science 270: 1500-1502, 1995参照；当該文献は、引用によってその全内容が本明細書に含まれるものとする）。従って、αｖβ５に拮抗する化合物は、黄斑変性、糖尿病性網膜症、癌および転移性腫瘍成長を治療および予防する上で有用である。
【００１１】
さらに本発明の化合物は、αｖβ６およびαｖβ８などの他のβサブユニットに関連するαｖインテグリン受容体の拮抗薬として作用することで、血管新生および炎症を阻害することができる（例えば、Melpo Christofidou-Solomidou et al., ″Expression and Function of Endothelial Cell αv Integrin Receptors in Wound-Induced Human Angiogenesis in Human Skin/SCID Mice Chimeras″, American Journal of Pathology, 151, No.4, pp.975-983 (1997)およびXiao-Zhu Huang et al., ″Inactivation of the Integrin β6 Subunit Gene Reveals a Role of Epithelial Integrins in Regulating Inflammation in the Lungs and Skin″, Journal of Cell Biology, 133: 921-28 (1996)参照；これらの文献は、引用によってその全内容が本明細書に含まれるものとする）。
【００１２】
さらに、本発明のある種の化合物は、αｖβ３受容体とαｖβ５受容体の両方に拮抗する。「αｖβ３／αｖβ５二重拮抗薬」と称されるこれら化合物は、骨吸収の阻害、骨粗鬆症の治療および予防、ならびに血管再狭窄、糖尿病性網膜症、黄斑変性、血管新生、アテローム性動脈硬化、炎症性関節炎、癌および転移性腫瘍成長の阻害に有用である。
【００１３】
αｖβ３インテグリン受容体のペプチドおよびペプチド様拮抗薬が、科学文献および特許文献の両方で記載されている。例えば、ヘクストラらの文献（W. J. Hoekstra and B. L. Poulter, Curr. Med. Chem. 5: 195-204 (1998)）およびそれに引用されている参考文献；ＷＯ９５／３２７１０；ＷＯ９５／３７６５５；ＷＯ９７／０１５４０；ＷＯ９７／３７６５５；ＷＯ９８／０８８４０；ＷＯ９８／１８４６０；ＷＯ９８／１８４６１；ＷＯ９８／２５８９２；ＷＯ９８／３１３５９；ＷＯ９８／３０５４２；ＷＯ９９／１５５０６；ＷＯ９９／１５５０７；ＷＯ００／０３９７３；ＥＰ８５３０８４；ＥＰ８５４１４０；ＥＰ８５４１４５；米国特許第５２０４３５０号、５２１７９９４号、５６３９７５４号、５７４１７９６号、５７８０４２６号、５９２９１２０号、５９５２３４１号、６０１７９２５号および６０４８８６１号が挙げられる。αｖβ３インテグリン受容体拮抗薬がin vitroおよびin vivoで骨吸収を防止する能力を有することを示す証拠が示されている（V. W. Engleman et al., ″A Peptidomimetic Antagonist of the αvβ3 Integrin Inhibits Bone Resorption In Vitro and Prevents Osteoporosis In Vivo,″ J. Clin. Invest. 99: 2284-2292 (1997); S. B. Rodan et al., ″A High Affinity Non-Peptide αvβ3 Ligand Inhibits Osteoclast Activity In Vitro and In Vivo,″J. Bone Miner. Res. 11: S289 (1996); J. F. Gourvest et al., ″Prevention of OVX-Induced Bone Loss With a Non-peptidic Ligand of the αｖβ3 Vitronectin Receptor″Bone 23: S612 (1998); M. W. Lark et al., ″An Orally Active Vitronectin Receptor αvβ3 Antagonist Prevents Bone Resorption In Vitro and In Vivo in the Ovariectomized Rat,″Bone 23: S219 (1998)参照）。
【００１４】
αｖβ３インテグリン受容体は、それの同源細胞間質および細胞表面糖蛋白におけるＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）トリペプチド配列を認識する（J. Samanen et al., ″Vascular Indications for Integrin αv Antagonists,″Curr Pharmaceut. Design 3: 545-584 (1997)参照）。特にジーネンテック（Genentech)およびスミスクライン・ビーチャム（SmithKline Beecham）は、ベンゾアゼピン核を立体配置的に制限されたＧｌｙ−Ａｓｐ様体として用いて、Ｎ末端が複素環アルギニン様体で置換された非ペプチド系αｖβ３インテグリン受容体拮抗薬を製造している（R. M. Keenan et al., ″Discovery of Potent Nonpeptide Vitronectin Receptor (αvβ3) Antagonists,″ J. Med. Chem., 40: 2289-2292 (1997); R. M. Keenan et al., ″Benzimidazole Derivatives As Arginine Mimetics in 1,4-Benzodiazepine Nonpeptide Vitronectin Receptor (αvβ3) Antagonists,″ Bioorg. Med. Chem. Lett. 8: 3165-3170 (1998); and R. M. Keenan et al., ″Discovery of an Imidazopyridine-Containing 1,4-Benzodiazepine Nonpeptide Vitronection Receptor (αvβ3) Antagonist With Efficacy in a Restenosis Model,″ Bioorg. Med. Chem. Lett. 8: 3171-3176 (1998)参照）。ベンゾアゼピン系ならびに関連するベンゾジアゼピン系およびベンゾシクロヘプテン系のαｖβ３インテグリン受容体拮抗薬を開示しているスミスクライン・ビーチャムに譲渡された特許には、ＷＯ９６／００５７４、ＷＯ９６／００７３０、ＷＯ９６／０６０８７、ＷＯ９６／２６１９０、ＷＯ９７／２４１１９、ＷＯ９６／２４１２２、ＷＯ９７／２４１２４、ＷＯ９８／１４１９２、ＷＯ９８／１５２７８、ＷＯ９９／０５１０７、ＷＯ９９／０６０４９、ＷＯ９９／１５１７０、ＷＯ９９／１５１７８およびＷＯ９９／１５５０６などがあり、ジーネンテックに譲渡された特許にはＷＯ９７／３４８６５などがある。ジベンゾシクロヘプテン核ならびにジベンゾオキサアゼピン核もＧｌｙ−Ａｓｐ様体として用いられて、αｖβ３拮抗薬が得られている（ＷＯ９７／０１５４０、ＷＯ９８／３０５４２、ＷＯ９９／１１６２６、ＷＯ９９／１５５０８、米国特許第６００８２１３号および６０６９１５８号（これらはいずれもスミスクライン・ビーチャムに譲渡されている）参照）。
【００１５】
骨格における配座的な環への制限を特徴とする他のインテグリン受容体拮抗薬が特許文献に記載されている。フェニル限定を有する拮抗薬を開示している公開特許出願または発行特許には、ＷＯ９８／００３９５、ＷＯ９９／３２４５７、ＷＯ９９／３７６２１、ＷＯ９９／４４９９４、ＷＯ９９／４５９２７、ＷＯ９９／５２８７２、ＷＯ９９／５２８７９、ＷＯ９９／５２８９６、ＷＯ００／０６１６９、ＥＰ０８２０９８８、ＥＰ０８２０９９１、米国特許第５７４１７９６号、同５７７３６４４号、同５７７３６４６号、同５８４３９０６号、同５８５２２１０号、同５９２９１２０号、同５９５２３８１号、同６０２８２２３号および同６０４０３１１号などがある。単環限定を有する拮抗薬を開示している公開特許出願または発行特許には、ＷＯ９９／２６９４５、ＷＯ９９／３０７０９、ＷＯ９９／３０７１３、ＷＯ９９／３１０９９、ＷＯ９９／５９９９２、ＷＯ００／００４８６、ＷＯ００／０９５０３、ＥＰ０７９６８５５、ＥＰ０９２８７９０、ＥＰ０９２８７９３、米国特許第５７１０１５９号、同５７２３４８０号、同５９８１５４６号、同６０１７９２６号および同６０６６６４８号などがある。二環限定を有する拮抗薬を開示している公開特許出願または発行特許には、ＷＯ９８／２３６０８、ＷＯ９８／３５９４９、ＷＯ９９／３３７９８、ＥＰ０８５３０８４、米国特許第５７６００２８号、同５９１９７９２号および同５９２５６５５号などがある。
【００１６】
αｖインテグリン拮抗薬に関するさらに別の科学文献および特許文献についての以下の総覧、すなわちM. E. Duggan, et al.,″Ligands to the integrin receptor αvβ3, Exp. Opin. Ther. Patents, 10 : 1367-1383 (2000)；M. Gowen, et al.,″Emerging therapies for osteoporosis,″ Emerging Drugs, 5 : 1-43 (2000)；J. S. Kerr, et al.,″Small molecule αv integrin antagonists : novel anticancer agents,″Exp. Opin. Invest. Drugs, 9 : 1271-1291 (2000)；およびW. H. Miller, et al.,″Identification and in vivo efficacy of small-molecule antagonists of integrin αvβ3 (the vitronectin receptor),″ Drug Discovery Today, 5 : 397-408 (2000)も参考として挙げられる。
【００１７】
しかしながら現在もなお、既報の化合物と比較して改善された効力、薬力学的特性ならびに経口生物学的利用能および作用期間などの薬物動態特性を示す小分子で非ペプチド系の選択的αｖインテグリン受容体拮抗薬が必要とされている。そのような化合物は、αｖインテグリン受容体結合ならびに細胞接着および活性化が介在する上記で列記した各種病理の治療、予防または抑制を改善する効果を有すると考えられる。
【００１８】
米国特許第６０１７９２６号（２０００年１月２５日）およびＷＯ９９／３１０９９（１９９９年６月２４日公開）において本発明者らは、強力なαｖβ３インテグリン受容体拮抗薬である一連のイミダゾリジノン誘導体を開示した。本発明において本発明者らは、Ｎ末端が新規な置換されていても良い複素環で置換されており、Ｃ−３が置換されていても良いアリール基で置換されている新規なイミダゾリジノン誘導体について説明する。本発明の化合物は、先行技術の化合物と比較して、in vivoでの改善された薬物動態特性および／または薬力学特性を示す。
【００１９】
そこで本発明の目的は、αｖインテグリン受容体拮抗薬として有用な新規なイミダゾリジノン誘導体を提供することにある。
【００２０】
本発明の別の目的は、αｖβ３受容体拮抗薬として有用な新規なイミダゾリジノン誘導体を提供することにある。
【００２１】
本発明のさらに別の目的は、αｖβ５受容体拮抗薬として有用な新規なイミダゾリジノン誘導体を提供することにある。
【００２２】
本発明のさらに別の目的は、αｖβ３／αｖβ５受容体二重拮抗薬として有用な新規なイミダゾリジノン誘導体を提供することにある。
【００２３】
本発明のさらに別の目的は、αｖインテグリン受容体拮抗薬を含む医薬組成物を提供することにある。
【００２４】
本発明のさらに別の目的は、本発明の医薬組成物の製造方法を提供することにある。
【００２５】
本発明のさらに別の目的は、本発明の化合物および医薬組成物を投与することで、処置を必要とする哺乳動物においてαｖインテグリン受容体拮抗効果を誘発する方法を提供することにある。
【００２６】
本発明のさらに別の目的は、骨吸収、再狭窄、アテローム性動脈硬化、炎症性関節炎、糖尿病性網膜症、黄斑変性、血管新生、癌および転移性腫瘍成長の阻害に有用な化合物および医薬組成物を提供することにある。
【００２７】
本発明のさらに別の目的は、骨粗鬆症の治療に有用な化合物および医薬組成物を提供することにある。
【００２８】
本発明のさらに別の目的は、骨吸収、再狭窄、アテローム性動脈硬化、炎症性関節炎、糖尿病性網膜症、黄斑変性、血管新生、癌および転移性腫瘍成長の阻害方法を提供することにある。
【００２９】
本発明のさらに別の目的は、骨粗鬆症の治療方法を提供することにある。
【００３０】
上記およびその他の目的は、以下の詳細な説明から容易に明らかになるであろう。
【００３１】
（発明の開示）
本発明は、αｖインテグリン受容体拮抗薬として有用な下記構造式（Ｉ）によって表される新規なイミダゾリジノン誘導体またはその化合物の製薬上許容される塩に関する。
【００３２】
【化４】
0004787447.tif 000002
【００３３】
本発明はさらに、本発明の化合物および製薬上許容される担体を含む医薬組成物に関するものでもある。
【００３４】
本発明はさらに、本発明の医薬組成物の製造方法に関するものでもある。
【００３５】
本発明はさらに、本発明の化合物および医薬組成物を投与することで、処置を必要とする哺乳動物においてαｖインテグリン受容体拮抗効果を誘発する方法に関するものでもある。
【００３６】
本発明はさらに、本発明の化合物および医薬組成物を投与することで、骨吸収、再狭窄、アテローム性動脈硬化、炎症性関節炎、糖尿病性網膜症、黄斑変性、血管新生、癌および転移性腫瘍成長を阻害する方法に関するものでもある。
【００３７】
本発明はさらに、本発明の化合物および医薬組成物を投与することで骨粗鬆症を治療する方法に関するものでもある。
【００３８】
（発明を実施するための最良の形態）
本発明は、αｖインテグリン受容体拮抗薬として有用なイミダゾリジノン誘導体に関する。本発明の代表的化合物は、下記構造式（Ｉ）によって表される化合物あるいはその化合物の製薬上許容される塩である。
【００３９】
【化５】
0004787447.tif 000003
式中、
Ｘは、
【００４０】
【化６】
0004787447.tif 000004
からなる群から選択され；
各Ｒ１は独立に水素またはＣ１−３アルキルであり；各非芳香環炭素原子は、未置換であるか、あるいは１個もしくは２個のＲ２置換基で独立に置換されており；各芳香環炭素原子は、未置換であるか、あるいはＣ１−８アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ３−８シクロヘテロアルキル、Ｃ３−８シクロアルキル−Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−８シクロヘテロアルキル−Ｃ１−６アルキル、アリール、アリール−Ｃ１−６アルキル、アミノ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−３アシルアミノ、Ｃ１−３アシルアミノ−Ｃ１−６アルキル、アミノ、（Ｃ１−６アルキル）１−２アミノ、Ｃ３−６シクロアルキル−Ｃ０−２アミノ、（Ｃ１−６アルキル）１−２アミノ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−３アルコキシカルボニル、Ｃ１−３アルコキシカルボニル−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、ニトロ、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシ、Ｃ１−８アルキル−Ｓ（Ｏ）０−２、（Ｃ１−８アルキル）０−２アミノカルボニル、Ｃ１−８アルキルオキシカルボニルアミノ、（Ｃ１−８アルキル）１−２アミノカルボニルオキシ、（アリール）１−２アミノ、アリール−Ｃ１−３アルキルスルホニルアミノおよびＣ１−８アルキルスルホニルアミノからなる群から選択される１個のＲ２置換基で独立に選択されており；あるいは同一の非芳香族炭素原子上にある場合に、２個のＲ２置換基が、それらが結合している炭素原子と一体となって、カルボニル基を形成しており；あるいは２個のＲ２置換基が、それらが結合している炭素原子と一体となって、３〜６員の飽和スピロ炭素環を形成しており；
Ｒ４は、アリールであって、そのアリール基が
（１）フェニル、
（２）ナフチル、
（３）ピリジル、
（４）フリル、
（５）チエニル、
（６）ピロリル、
（７）オキサゾリル、
（８）チアゾリル、
（９）イミダゾリル、
（１０）ピラゾリル、
（１１）イソオキサゾリル、
（１２）イソチアゾリル、
（１３）ピリミジニル、
（１４）ピラジニル、
（１５）ピリダジニル、
（１６）キノリル、
（１７）イソキノリル、
（１８）ベンズイミダゾリル、
（１９）ベンゾフリル、
（２０）ベンゾチエニル、
（２１）インドリル、
（２２）ベンゾチアゾリル、
（２３）ベンゾオキサゾリル、
（２４）ジヒドロベンゾフリル、
（２５）ベンゾ（１，３）ジオキソラニル、
（２６）ベンゾ（１，４）ジオキソラニルおよび
からなる群から選択されるもの；ならびにモノ、ジおよびトリ置換アリールであって、前記置換基が独立に、水素、ヒドロキシ、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、Ｃ１−８アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、アリール、アリールＣ１−３アルキル、アミノ、アミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−３アシルアミノ、Ｃ１−３アシルアミノ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−６）アルキルアミノ、Ｃ１−６アルキルアミノ−Ｃ１−６アルキル、ジ（Ｃ１−６）アルキルアミノ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、Ｃ１−４アルキルスルフィニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−５アルコキシカルボニル、Ｃ１−３アルコキシカルボニル−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−５アルキルカルボニルオキシ、シアノ、トリフルオロメチル、１，１，１−トリフルオロエチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシまたはニトロであり、あるいは２個の隣接する置換基が、それらが結合している炭素原子と一体となって、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択される１個もしくは２個のヘテロ原子を有する５員もしくは６員の飽和もしくは不飽和環を形成しており、環炭素原子がオキソまたはＣ１−３アルキルで置換されていてもよいものであり；
Ｒ３は、水素またはＣ１−３アルキルである。
【００４１】
本発明の１実施形態において、Ｘは
【００４２】
【化７】
0004787447.tif 000005
からなる群から選択される。
【００４３】
本発明の第２の実施形態において、Ｒ４はモノもしくはジ置換された
フェニル、
ピリジル、
キノリル、
ピリミジニル、
ピラジニル、
ピラゾリルもしくは
ジヒドロベンゾフリルであり；
前記置換基は独立に、水素、ヒドロキシ、ヒドロキシ−Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、Ｃ１−８アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、アリール、アリールＣ１−３アルキル、アミノ、アミノ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−３アシルアミノ、Ｃ１−３アシルアミノ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−６）アルキルアミノ、Ｃ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル、ジ（Ｃ１−６）アルキルアミノ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、Ｃ１−４アルキルスルフィニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−５アルコキシカルボニル、Ｃ１−３アルコキシカルボニルＣ１−６アルキル、Ｃ１−５アルキルカルボニルオキシ、シアノ、トリフルオロメチル、１，１，１−トリフルオロエチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシまたはニトロであるか；あるいは２個の隣接する置換基が、それらが結合している炭素原子と一体となって、Ｎ、ＯおよびＳからなる群から選択される１個もしくは２個のヘテロ原子を有する５員もしくは６員の飽和もしくは不飽和環を形成しており；環炭素原子はオキソまたはＣ１−３アルキルで置換されていても良い。
【００４４】
本発明のこの第２の実施形態のある群において、Ｒ４は、モノもしくはジ置換された
キノリル、
ピリジルまたは
ピリミジニルであり；
前記置換基は独立に、水素、ハロゲン、フェニル、Ｃ１−４アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、Ｃ１−３アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−３）アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、トリフルオロメチル、１，１，１−トリフルオロエチル、トリフルオロメトキシまたはトリフルオロエトキシである。
【００４５】
本発明の第３の実施形態においてＲ２は、
水素、
Ｃ１−４アルキルアミノ、
Ｃ３−６シクロアルキル−Ｃ０−２アルキルアミノ、
シアノ、
Ｃ１−４アルキル、
シクロプロピル、
アリールＣ１−３アルキル、
Ｃ１−４アシルアミノ、
Ｃ１−４アルコキシ、
Ｃ１−４アルキルチオ、
アミノカルボニル、
（Ｃ１−６アルキル）１−２アミノカルボニル、
Ｃ１−４アルコキシカルボニル、
トリフルオロメチルおよび
トリフルオロメトキシ
からなる群から選択される。
【００４６】
本発明のこの第３の実施形態においてＲ２は、
水素、
Ｃ１−３アルキルアミノ、
Ｃ３−６シクロアルキルメチルアミノ、
Ｃ１−４アルキル、
シクロプロピル、
トリフルオロメチルおよび
トリフルオロメトキシ
からなる群から選択される。
【００４７】
αｖインテグリン受容体拮抗薬として有用な本発明の化合物の具体例を以下に示すが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４８】
３−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３（Ｒ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３−（３−｛３−［６−（シクロプロピルメチル−アミノ）−ピリジン−２−イル］−プロピル｝−２−オキソ−イミダゾリジン−１−イル）−３−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−プロピオン酸；
３−（３−｛３−［６−（シクロプロピルメチル−アミノ）−ピリジン−２−イル］−プロピル｝−２−オキソ−イミダゾリジン−１−イル）−３（Ｒ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−プロピオン酸；
３−（３−｛３−［６−（シクロプロピルメチル−アミノ）−ピリジン−２−イル］−プロピル｝−２−オキソ−イミダゾリジン−１−イル）−３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−プロピオン酸；
３−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］アゼピン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３（Ｒ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］アゼピン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］アゼピン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３−（６−エトキシピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３（Ｒ）−（６−エトキシピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３（Ｓ）−（６−エトキシピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３−（６−エトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（４−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３（Ｒ）−（６−エトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（４−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３（Ｓ）−（６−エトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（４−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３−（ジヒドロベンゾフラン−６−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３（Ｒ）−（ジヒドロベンゾフラン−６−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３（Ｓ）−（ジヒドロベンゾフラン−６−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３−（ジヒドロベンゾフラン−６−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（４−アミノ−２−エチルアミノピリミジン−６−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３（Ｒ）−（ジヒドロベンゾフラン−６−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（４−アミノ−２−エチルアミノピリミジン−６−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３（Ｓ）−（ジヒドロベンゾフラン−６−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（４−アミノ−２−エチルアミノピリミジン−６−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
３−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５−エチレノ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル−プロピオン酸；
３（Ｒ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５−エチレノ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル−プロピオン酸；
３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５−エチレノ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル−プロピオン酸；および
３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−（７−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ［１，８］ナフチリジン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸；
あるいはそれらの製薬上許容される塩。
【００４９】
本発明のある実施形態において当該化合物は、Ｒ４が結合している炭素原子で下記に指定の立体化学を有する式（ＩＩ）に相当するものである。
【００５０】
【化８】
0004787447.tif 000006
式中、置換基Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は上記で記載の通りである。
【００５１】
医薬品で使用する場合、本発明の化合物の塩は、無毒性の「製薬上許容される塩」を指す。しかしながら、本発明による化合物または該化合物の製薬上許容される塩の製造においては、他の塩が有用な場合もある。「製薬上許容される塩」という用語に含まれる塩基性化合物の塩とは、当該遊離塩基を好適な有機もしくは無機酸と反応させることで得られる本発明の化合物の無毒性塩を指す。本発明の塩基性化合物の代表的な塩には、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、２塩酸塩、エデト酸塩、エジシレート（edisylate）、エストレート、エシレート、フマル酸塩、グルセプテート、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニレート（glycollylarsanilate）、ヘキシルレゾルシン塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオチン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチルブロマイド、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、粘液酸塩、ナプシレート（napsylate）、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボネート（embonate））、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクレート（teoclate）、トシル酸塩、トリエチオジド（triethiodide）および吉草酸塩などがあるが、これらに限定されるものではない。さらに、本発明の化合物が酸性部分を有する場合、それの好適な製薬上許容される塩には、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第二鉄、第一鉄、リチウム、マグネシウム、第二マンガン、第一マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛などの無機塩基から誘導される塩などがあるが、これらに限定されるものではない。特に好ましいものとしては、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩およびナトリウム塩である。製薬上許容される有機無毒性塩基から誘導される塩には、１級、２級および３級アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂の塩などがあり、例えばアルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ′−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂類、プロカイン、プリン類、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミン等の塩がある。
【００５２】
本発明の化合物は、キラル中心を有する場合があり、ラセミ体、ラセミ混合物、単独のエナンチオマー、ジアステレオマー混合物として、さらには個々のジアステレオマーとして得られる場合があり、それらの異性体は全て本発明に含まれる。従って、化合物がキラルである場合、実質的に他方のエナンチオマーを含まない個別のエナンチオマーまたはジアステレオマーは本発明の範囲に含まれ、さらには、２個のエナンチオマーの全ての混合物も本発明に含まれる。
【００５３】
本明細書に記載の化合物の一部はオレフィン系二重結合を有し、別段の断りがない限り、Ｅ幾何異性体およびＺ幾何異性体の両方と含むものとする。
【００５４】
本明細書に記載の化合物の一部は、互変異体と称される、水素の結合位置が異なるものとして存在することができる。そのような例には、ケト−エノール互変異体として知られるケトンとそれのエノール型があり得る。個々の互変異体ならびにそれらの混合物は、本発明の化合物の範囲に含まれる。
【００５５】
本発明の化合物は、例えばメタノールもしくは酢酸エチルまたはそれらの混合液などの好適な溶媒からの分別結晶によって、エナンチオマーのジアステレオ異性体対に分離することができる。そうして得られるエナンチオマー対は、従来の方法によって、例えば分割剤としての光学活性酸の使用によって、あるいはキラル固定相を用いるＨＰＬＣによって分離することができる。別法として、本発明の化合物のエナンチオマーは、光学的に純粋な原料または既知の配置を有する試薬を用いる立体特異的合成によって得ることができる。
【００５６】
さらには、本発明の化合物の多形体および水和物も本発明の範囲に含まれる。
【００５７】
本発明の範囲には、本発明の化合物のプロドラッグも含まれる。そのようなプロドラッグは、in vivoで必要な化合物に容易に変換可能な本発明の化合物の官能基誘導体である。従って、本発明の治療方法においては、「投与」という用語は、具体的に開示した化合物または具体的に開示されていないが患者に投与した後にin vivoで指定の化合物に変換する化合物による、記載の各種状態の治療を含むものとする。好適なプロドラッグ誘導体の選択および製造についての従来の方法については、例えばバンガードの編著に記載されている（″Design of Prodrugs″, ed. H.Bundgaard, Elsevier, 1985；当該文献は、引用によってその全体的内容が本明細書に含まれるものとする）。これら化合物の代謝物には、本発明の化合物を生体環境に導入した時に生成する活性化学種が含まれる。
【００５８】
「治療上有効な量」という用語は、研究者または臨床医が求めている組織、系、動物もしくはヒトの生物学的もしくは医学的応答を誘発する薬剤または医薬品の量を意味するものとする。
【００５９】
本明細書で使用される「αｖインテグリン受容体拮抗薬」という用語は、αｖβ３受容体またはαｖβ５受容体のいずれかに結合してそれに拮抗する化合物、あるいはそれら受容体の組み合わせに結合して、それに拮抗する化合物（例：αｖβ３／αｖβ５受容体二重拮抗薬）を指す。
【００６０】
本明細書で使用している「骨吸収」という用語は、破骨細胞が骨を劣化させるプロセスを指す。
【００６１】
「アルキル」という用語は、総炭素数１〜１０またはその範囲内にいずれかの数の直鎖もしくは分岐アルカンを意味するものとする（すなわち、メチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチルなど）。
【００６２】
「アルケニル」という用語は、総炭素数２〜１０またはその範囲内のいずれかの数の直鎖もしくは分岐アルケンを意味するものとする。
【００６３】
「アルキニル」という用語は、総炭素数２〜１０またはその範囲内のいずれかの数の直鎖もしくは分岐アルキンを意味するものとする。
【００６４】
「シクロアルキル」という用語は、総炭素数３〜８またはその範囲内のいずれかの数の環状アルカンを意味するものとする（すなわち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチル）。
【００６５】
本明細書で使用している「シクロヘテロアルキル」という用語は、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１個もしくは２個のヘテロ原子を有する３〜８員の完全に飽和した複素環を意味するものとする。シクロヘテロアルキル基の例としては、ピペリジニル、ピロリジニル、アゼチジニル、モルホリニル、ピペラジニルなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【００６６】
本明細書で使用している「アルコキシ」という用語は、指定された炭素数（例：Ｃ１−５アルコキシ）またはその範囲内のいずれかの数の直鎖もしくは分岐のアルコキシドを指す（すなわち、メトキシ、エトキシなど）。
【００６７】
本明細書で使用している「アリール」という用語は、１以上の芳香環を有する単環式または二環式の系を指し、該単環式または二環式の系はＮ、ＯもしくはＳから選択される０、１、２、３もしくは４個のヘテロ原子を有し、該単環式または二環式の系は未置換であるかまたは、水素、ハロゲン、Ｃ１−８アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、アリール、アリールＣ１−３アルキル、アミノ、アミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−３アシルアミノ、Ｃ１−３アシルアミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル、ジ（Ｃ１−６）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−６）アルキルアミノ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、Ｃ１−４アルキルスルフィニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル、Ｃ１−４アルコキシＣ１−６アルキル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルＣ１−６アルキル、Ｃ１−５アルコキシカルボニル、Ｃ１−３アルコキシカルボニルＣ１−６アルキル、ヒドロキシカルボニルＣ１−６アルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシＣ１−６アルキル、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、オキソまたはＣ１−５アルキルカルボニルオキシから独立に選択される１以上の基で置換されている。アリールの例としては、フェニル、ナフチル、ピリジル、ピロリル、ピラゾリル、ピラジニル、ピリミジニル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、インドリル、チエニル、フリル、ジヒドロベンゾフリル、ベンゾ（１，３）ジオキソラニル、ベンゾ（１，４）ジオキサニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリルおよびイソチアゾリルなどがあるが、これらに限定されるものではなく、それらは未置換であるかまたは水素、ハロゲン、Ｃ１−８アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、アリール、アリールＣ１−３アルキル、アミノ、アミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−３アシルアミノ、Ｃ１−３アシルアミノＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルアミノ、Ｃ１−６アルキルアミノＣ１−６アルキル、ジ（Ｃ１−６）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−６）アルキルアミノ−Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、Ｃ１−４アルキルスルフィニル、Ｃ１−４アルキルスルホニル、Ｃ１−４アルコキシＣ１−６アルキル、ヒドロキシカルボニル、ヒドロキシカルボニルＣ１−６アルキル、Ｃ１−５アルコキシカルボニル、Ｃ１−３アルコキシカルボニルＣ１−６アルキル、ヒドロキシカルボニルＣ１−６アルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシＣ１−６アルキル、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、オキソまたはＣ１−５アルキルカルボニルオキシから独立に選択される１以上の基で置換されている。好ましくはアリール基は、未置換であるか、１〜３個の上記の置換基によってモノ、ジまたはトリ置換されている。より好ましくはアリール基は、未置換であるか、１〜２個の上記の置換基によってモノまたはジ置換されている。
【００６８】
「アルキル」もしくは「アリール」という用語またはそれらの接頭語のいずれかが置換基の名称にある場合は必ず（例：アリールＣ０−８アルキル）、それは「アルキル」および「アリール」についての上記の制限を含むものと解釈するものとする。指定された炭素数（例：Ｃ１−８）は、独立に、アルキル部分もしくは環状アルキル部分における炭素原子数またはアルキルがその接頭語としてある相対的に大きい方の置換基のアルキル部分を指すものとする。
【００６９】
「アリールアルキル」および「アルキルアリール」という用語は、アルキルが上記で定義した通りであるアルキル部分を有し、アリールが上記で定義した通りであるアリール部分を有するものである。アリールアルキルの例としては、ベンジル、フルオロベンジル、クロロベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピル、フルオロフェニルエチル、クロロフェニルエチル、チエニルメチル、チエニルエチルおよびチエニルプロピルなどがあるが、これらに限定されるものではない。アルキルアリールの例としては、トルエン、エチルベンゼン、プロピルベンゼン、メチルピリジン、エチルピリジン、プロピルピリジンおよびブチルピリジンなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【００７０】
本発明の化合物において、同一の炭素原子上にある場合に２個のＲ２置換基が、それらが結合している炭素原子と一体となって、カルボニル基を形成することができる。
【００７１】
「ハロゲン」という用語は、ヨウ素、臭素、塩素およびフッ素を含むものとする。
【００７２】
「オキシ」という用語は、酸素（Ｏ）原子を意味する。「チオ」という用語は、硫黄（Ｓ）原子を意味する。「オキソ」という用語は、「＝Ｏ」を意味するものとする。「カルボニル」という用語は、「Ｃ＝Ｏ」を意味するものとする。
【００７３】
「置換（された）」という用語は、指定の置換基による置換程度が複数含まれると考えるものとする。複数の置換基部分が開示または特許請求されている場合、置換化合物は独立に、１以上の開示もしくは特許請求置換基部分によって、１箇所もしくは複数箇所で置換されていても良い。独立に置換されているという場合、（２個以上の）置換基が同一であっても異なっていても良いことを意味する。
【００７４】
本開示を通じて使用される標準的な命名法では、指定の側鎖の末端部分を最初に記載し、次に隣接する官能基を記載し、そして結合点に向かう。例えば、Ｃ１−５アルキルカルボニルアミノＣ１−６アルキル置換基は、下記式のものに等しい。
【００７５】
【化９】
0004787447.tif 000007
【００７６】
本発明の化合物を選択するに当たり、当業者であれば、化学構造の連結性についての公知の原理に従って、各種置換基、すなわち、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４を選択すべきであることは明らかであろう。
【００７７】
本発明の代表的な化合物は、αｖインテグリン受容体、特にαｖβ３および／またはαｖβ５受容体に対してサブミクロ的親和性を示すのが普通である。従って、本発明の化合物は、骨吸収増加が原因であるかまたはそれが介在する骨状態を患う哺乳動物であって、そのような治療を必要とする哺乳動物の治療に有用である。製薬上許容できる塩を含む薬理的に有効な量の当該化合物を哺乳動物に投与して、哺乳動物の破骨細胞の活性を阻害する。
【００７８】
本発明の化合物は、例えば骨粗鬆症の予防または治療のような処置が必要な場合に、αｖβ３受容体に拮抗する上で有効な用量で投与する。
【００７９】
本発明の例としては、αｖインテグリン受容体拮抗効果がαｖβ３拮抗効果である方法がある。詳細にはαｖβ３拮抗効果は、骨吸収、再狭窄、血管新生、糖尿病性網膜症、黄斑変性、炎症、炎症性関節炎、ウィルス疾患、癌または転移性腫瘍成長の阻害から選択される。その方法の１実施形態では、αｖβ３拮抗効果は骨吸収の阻害である。
【００８０】
本発明の別の例は、αｖインテグリン受容体拮抗効果がαｖβ５拮抗効果である方法である。より具体的には、αｖβ５拮抗効果は、再狭窄、血管新生、糖尿病性網膜症、黄斑変性、炎症、癌または転移性腫瘍成長の阻害から選択される。
【００８１】
本発明のさらに別の例としては、αｖインテグリン受容体拮抗効果がαｖβ３／αｖβ５二重拮抗効果である方法がある。詳細にはαｖβ３／αｖβ５二重拮抗効果は、骨吸収、再狭窄、血管新生、糖尿病性網膜症、黄斑変性、炎症、ウィルス疾患、癌または転移性腫瘍成長の阻害から選択される。
【００８２】
本発明のより詳細な例としては、上記のいずれかの化合物および製薬上許容される担体を含む医薬組成物がある。本発明の別の例としては、上記のいずれかの化合物と製薬上許容される担体とを組み合わせることで製造される医薬組成物がある。本発明のさらに別の例としては、上記のいずれかの化合物と製薬上許容される担体とを組み合わせる段階を有する医薬組成物の製造方法がある。
【００８３】
本発明のさらに別の例としては、処置を必要とする哺乳動物におけるαｖインテグリン受容体の拮抗が介在する状態の治療および／または予防方法であって、該哺乳動物に治療上有効量の上記のいずれかの化合物を投与する段階を有してなる方法である。好ましくは該状態は、骨吸収、骨粗鬆症、再狭窄、糖尿病性網膜症、黄斑変性、血管新生、アテローム性動脈硬化、炎症、炎症性関節炎、ウィルス疾患、癌、腫瘍成長および転移から選択される。より好ましくは、該状態は骨粗鬆症および癌から選択される。最も好ましくは該状態は骨粗鬆症である。
【００８４】
本発明のより具体的な例としては、処置を必要とする哺乳動物においてαｖインテグリン拮抗効果を誘発する方法であって、該哺乳動物に治療上有効量の上記のいずれかの化合物または上記のいずれかの医薬組成物を投与する段階を有してなる方法がある。好ましくはαｖインテグリン拮抗効果は、αｖβ３拮抗効果である。より具体的にはαｖβ３拮抗効果は、骨吸収阻害、再狭窄阻害、アテローム性動脈硬化阻害、血管新生阻害、糖尿病性網膜症阻害、黄斑変性阻害、炎症阻害または癌もしくは転移性腫瘍成長の阻害から選択される。最も好ましくはαｖβ３拮抗効果は、骨吸収阻害である。別の形態としては、インテグリン拮抗効果はαｖβ５拮抗効果またはαｖβ３／αｖβ５二重拮抗効果である。αｖβ５拮抗効果の例としては、再狭窄、アテローム性動脈硬化、血管新生、糖尿病性網膜症、黄斑変性、炎症、癌または転移性腫瘍成長の阻害がある。
【００８５】
本発明の別の例としては、処置を必要とする哺乳動物における骨吸収の阻害方法ならびに骨粗鬆症の治療および／または予防方法であって、該哺乳動物に治療上有効量の上記のいずれかの化合物または上記のいずれかの医薬組成物を投与する段階を有する方法である。
【００８６】
本発明の別の例としては、処置を必要とする哺乳動物における悪性の高カルシウム血症、骨代謝によるオステオペニア、歯周病、副甲状腺機能亢進症、慢性関節リウマチにおける関節周囲びらん、ページェット病、固定化誘発オステオペニアおよび糖コルチコイド投与の治療方法であって、該哺乳動物に治療上有効量の上記のいずれかの化合物または上記のいずれかの医薬組成物を投与する段階を有する方法である。
【００８７】
本発明のより具体的な例としては、処置を必要とする哺乳動物での骨粗鬆症の治療および／または予防用医薬品の製造における、上記のいずれかの化合物の使用がある。本発明のさらに別の例としては、骨吸収、癌、転移性腫瘍成長、再狭窄、アテローム性動脈硬化、糖尿病性網膜症、黄斑変性、炎症性関節炎および／または血管新生の治療および／または予防用の医薬品製造における上記のいずれかの化合物の使用がある。
【００８８】
本発明のさらに別の例は、
ａ）有機ビスホスホン酸化合物または該化合物の製薬上許容される塩もしくはエステル；
ｂ）エストロゲン受容体調節剤；
ｃ）アンドロゲン受容体調節剤；
ｄ）細胞毒剤／抗増殖剤；
ｅ）基質金属プロテイナーゼ阻害剤；
ｆ）表皮由来、線維芽細胞由来または血小板由来の成長因子の阻害剤；
ｇ）ＶＥＧＦ阻害剤；
ｈ）成長因子または成長因子受容体に対する抗体；
ｉ）Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ、Ｆｌｔ−１、Ｔｃｋ／Ｔｉｅ−２またはＴｉｅ−１の阻害剤；
ｊ）カテプシンＫ阻害剤；
ｋ）成長ホルモン分泌促進剤；
ｌ）破骨細胞プロトンＡＴＰａｓｅ阻害薬；
ｍ）ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化物質（ｕ−ＰＡ）阻害薬；
ｎ）腫瘍特異抗体−インターロイキン−２融合蛋白；
ｏ）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬；
ｐ）ファルネシル蛋白トランスフェラーゼ阻害薬もしくはゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害薬またはファルネシル／ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ二重阻害薬などのプレニル化阻害薬；および
ｑ）ヒト副甲状腺ホルモン（ｈＰＴＨ）またはヒト副甲状腺ホルモン断片（１−３４）；
ならびにそれらの混合物
からなる群から選択される有効成分をさらに含む組成物である（B.Millauer et al., ″Dominant-Negative Inhibition of Flk-1 Suppresses the Growth of Many Tumor Types in Vivo″, Cancer Research, 56, 1615-1620 (1996)参照；該文献は引用によって、その全内容が本明細書に含まれるものとする）。
【００８９】
好ましくは上記有効成分は、
ａ）有機ビスホスホン酸化合物または該化合物の製薬上許容される塩もしくはエステル；
ｂ）エストロゲン受容体調節剤；
ｃ）アンドロゲン受容体調節剤；
ｄ）破骨細胞プロトンＡＴＰａｓｅ阻害薬；
ｅ）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬；および
ｆ）カテプシンＫ阻害剤；ならびにそれらの混合物
からなる群から選択される。
【００９０】
そのようなビスホスホン酸化合物の例としては、アレンドロン酸化合物（alendronate）、シマドロン酸化合物（cimadronate）、クロドロン酸化合物（clodronate）、エチドロン酸化合物、イバンドロン酸化合物（ibandronate）、パミドロン酸化合物（pamidronate）、ピロドン酸化合物（piridonate）、リセドロン酸化合物（risedronate）、チルドロン酸化合物（tiludronate）およびゾレンドロン酸化合物（zolendronate）ならびにそれらの製薬上許容される塩およびエステルなどがあるが、これらに限定されるものではない。特に好ましいビスホスホン酸化合物は、アレンドロン酸化合物、特にはアレンドロン酸モノナトリウム・３水和物である。
【００９１】
エストロゲン受容体調節剤の例としては、エストロゲン、プロゲステリン（progesterin）、エストラジオール、ドロロキシフェン（droloxifene）、ラロキシフェン（raloxifene）およびタモキシフェンなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【００９２】
細胞毒剤／抗増殖剤の例としては、タキソール、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびドキソルビシンなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【００９３】
以前はカテプシンＯ２と呼ばれていたカテプシンＫはシステインプロテアーゼであり、１９９６年５月９日公開のＰＣＴ国際出願公開番号ＷＯ ９６／１３５２３号；１９９６年３月３日発行の米国特許第５５０１９６９号；および１９９８年４月７日発行の米国特許第５７３６３５７号（これらはいずれも、引用によってその全内容が本明細書に含まれるものとする）に記載されている。システインプロテアーゼ類、特にカテプシン類は、腫瘍転移、炎症、関節炎および骨再形成などの多くの疾患状態に関連している。酸性ｐＨでカテプシン類は、Ｉ型コラーゲンを分解することができる。カテプシンプロテアーゼ阻害薬は、コラーゲン繊維の分解を阻害することで破骨細胞性骨吸収を阻害できることから、骨粗鬆症などの骨吸収疾患の治療において有用である。
【００９４】
「スタチン類」として知られるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬類のものは、新たな骨の成長を誘発し、骨粗鬆症の結果失われた骨量を元に戻すことが認められている（The Wall Street Journal, Friday, December 3, 1991, page B1参照）。従ってスタチン類は、骨吸収の治療において有望である。スタチン類の例としては、ロバスタチン（lovastatin）、シンバスタチン（simvastatin）、アトロバスタチン（atrovastatin）、プラバスタチン（pravastatin）、フルバスタチン（fluvastatin）、セリバスタチン（cerivastatin）およびロスバスタチン（rosuvastatin）があるが、これらに限定されるものではない。血管新生、腫瘍浸潤、炎症ならびに創傷の治癒および進行時の基質再構築においてウロキナーゼ−ウロキナーゼ受容体（ｕ−ＰＡ−ｕ−ＰＡＲ）が非常に重要な役割を果たすことを示す証拠が示されている［Y. Koshelnick et al., ″Mechanisms of signaling through Urokinase Receptor and the Cellular Response″, Thrombosis and Haemostasis 82: 305-311 (1999)およびF. Blasi, ″Proteolysis, Cell Adhesion, Chemotaxis, and Invasiveness Are Regulated by the u-PA-u-PAR-PAI-1 System,″ Thrombosis and Haemostasis 82: 298-304 (1999)参照］。そのように、ｕ−ＰＡからｕ−ＰＡＲへの結合の特異的拮抗薬は、in vitroおよびin vivoの両方のモデルで、細胞表面プラスミノーゲン活性化、腫瘍成長および血管新生を阻害することが認められている。
【００９５】
ロードら（H. N. Lode and coworkers, PNAS USA 96: 1591-1596 (1999)）は、自然腫瘍転移の根絶において、抗血管新生αｖインテグリン拮抗薬と腫瘍特異的抗体−サイトカイン（インターロイキン−２）融合蛋白との間に相乗効果を認めている。その結果は、この組合せが癌および転移性腫瘍成長の治療において効力を有することを示唆していた。
【００９６】
破骨細胞の頂端膜で認められるプロトンＡＴＰａｓｅは、骨吸収プロセスにおいて重要な役割を果たすと報告されている。従ってそのプロトンポンプは、骨粗鬆症および関連する代謝疾患の治療および予防において有用である可能性のある。骨吸収阻害薬の設計における有望な目標となる（C. Farina et al., ″Selective inhibitors of the osteoclast vacuolar proton ATPase as novel bone antiresportive agents,″ DDT, 4: 163-172 (1999)参照）。
【００９７】
アンドロゲンステロイド類が、男性および女性における骨量形成において生理的役割を果たし、アンドロゲン類が骨に直接作用することを示す証拠が得られている。アンドロゲン受容体は、ヒト破骨細胞様細胞系で示されており、アンドロゲン類は細胞の増殖および分化の両方を直接刺激することが明らかになっている。議論のため、参考文献を参照する（S. R. Davis, ″The therapeutic use of androgens in women″, J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 69: 177-184 (1999)およびK. A. Hansen and S. P. T. Tho, ″Androgens and Bone Health″, Seminars in Reproductive Endocrinology″, 16: 129-134 (1998)）。そのように、アンドロゲン受容体調節剤は、女性における骨損失の治療および予防において有用である可能性がある。
【００９８】
血管新生因子ＶＥＧＦは、破骨細胞での受容体への結合を介して、単離成体ウサギ破骨細胞の骨吸収活性を刺激することが明らかになっている（M. Nakagawa et al.,″Vascular endothelial growth factor (VEGF) directly enhances osteoclastic bone resorption and survival of mature osteoclasts,″ FEBS Letters, 473 : 161-164 (2000)）。従って、ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１およびＦｌｔ−１などの破骨細胞受容体へのＶＥＧＦ結合の拮抗薬を開発することで、骨吸収の治療または予防へのさらなる手法を提供することが可能である。
【００９９】
チアゾリジンジオン類（ＴＺＤ類）などのペルオキシゾーム増殖剤活性化受容体−γ（ＰＰＡＲγ）の活性化剤は、in vitroにおいて破骨細胞様細胞形成および骨吸収を阻害する。オカザキら（R. Okazaki et al., Endocrinology, 140: 5060-5065 (1999)）が報告した結果からは、骨髄細胞についての局所機序ならびにグルコース代謝についての全身機序がわかる。ＰＰＡＲγ活性化剤の例としては、トログリタゾン（troglitazone）、ピオグリタゾン（pioglitazone）、ロシグリタゾン（rosiglitazone）およびＢＲＬ４９６５３などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１００】
副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）は、副甲状腺が分泌する主要な循環ホルモンであって、カルシウム恒常性を維持する機能を有する。ＰＴＨは、骨を形成する細胞である骨芽細胞の活性を高め、骨の大きさおよび密度を高めることが明らかになっている。ＰＴＨ断片ｈＰＴＨ（１−３４）は、骨粗鬆症のヒトにおいて同化効果を有することが示されている。閉経後骨粗鬆症女性に対するｈＰＴＨ（１−３４）の効果に関する大規模な臨床試験で、投与から中位値で２２ヶ月後に、脊椎骨折に≧６５％の低下、非脊椎骨折に５４％の低下が報告されている（J. M. Hock,″Discrimination among osteoblasts ? Parathyroid Hormone Analog May Reveal Site-Specific Differences in Mice,″ Bone, 27 : 467-469 (2000)およびそこに引用の参考文献参照）。従って、ＰＴＨおよびｈＰＴＨ（１−３４）（ＬＹ３３３３３４）などのそれの断片は、骨粗鬆症治療用に可能な他の薬剤である。
【０１０１】
本発明はさらに、本発明の化合物と骨粗鬆症の予防もしくは治療に有用な１以上の薬剤との組み合わせに関するものでもある。例えば、本発明の化合物を有機ビスホスホネート化合物、エストロゲン受容体調節剤、アンドロゲン受容体調節剤、カテプシンＫ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬、ＰＰＡＲγ活性化剤または破骨細胞プロトンＡＴＰａｓｅ阻害薬などの有効量の他薬剤との組み合わせで効果的に投与することができる。
【０１０２】
本発明の別の例としては、処置を必要とする哺乳動物での腫瘍の成長または転移の治療方法であって、治療上有効量の上記の化合物と細胞毒性／抗増殖性であることが知られている１以上の薬剤とを該哺乳動物に投与する段階を有する方法がある。さらに、本発明の化合物は、癌および転移性腫瘍成長の治療のために、放射線療法と組み合わせて投与することもできる。
【０１０３】
さらに、本発明のインテグリンαｖβ３拮抗薬化合物は、カルシウムもしくはリン酸代謝における障害および関連疾患の治療もしくは予防処置において、成長ホルモン分泌促進剤と併用して有効である場合がある。その疾患としては、骨吸収低下が有効となり得る状態などがある。骨吸収低下は、吸収と形成の間の均衡を改善するか、骨損失を低減するか、あるいは骨増加を生じるはずである。骨吸収の低下により、溶骨性病変に関連する疼痛を緩和し、そのような病変の発生率および／または成長を低下させることができる。そのような疾患には、骨粗鬆症（エストロゲン欠乏性、固定化性、糖コルチコイド誘発および老人性など）、骨形成異常、ページェット病、骨化性筋炎、ベヒテレフ病、悪性高カルシウム血症、転移性骨疾患、歯周病、胆石症、腎石症、尿道結石、尿路結石、動脈の硬直化（硬化症）、関節炎、滑液嚢炎、神経炎およびテタニーなどがある。骨吸収の増加には、血漿中での病的に高いカルシウム濃度およびリン酸濃度を伴う場合があり、それらはこの治療によって軽減されると考えられる。同様に本発明は、成長ホルモン欠乏の患者における骨量増加に有用であると考えられる。従って好ましい組み合わせは、本発明のαｖβ３受容体拮抗薬と成長ホルモン分泌促進剤の同時投与または交互投与であり、適宜に有機ビスホスホン酸化合物、好ましくはアレンドロン酸モノナトリウム・３水和物を含む第３の成分を含有させることができる。
【０１０４】
本発明の方法によれば、その組み合わせの個々の成分は、治療の途中の異なった時点で別個に投与することができるか、あるいは分割もしくは単一の併用製剤で同時に投与することができる。従って本発明が、そのような同時投与法もしくは交互投与法を全て含むものであることは明らかであり、「投与」という用語はそれに従って解釈されるべきものである。インテグリン介在状態の治療に有用な他薬剤と本発明の化合物との組み合わせの範囲には、原則的に、骨粗鬆症治療に有用な医薬組成物との組み合わせが含まれることは明らかであろう。
【０１０５】
本明細書で使用する場合、「組成物」という用語は、指定の成分を指定の量で含有するもの、ならびに直接もしくは間接に、指定量の指定成分の組み合わせから得られるものを含むものである。
【０１０６】
本発明の化合物は、錠剤、カプセル（それぞれ、徐放製剤または持続性製剤を含む）、丸薬、粉剤、粒剤、エリキシル剤、チンキ、懸濁液、シロップおよび乳濁液などの経口製剤で投与することができる。同様に本発明の化合物は、静脈投与（ボーラスまたは注入）、腹腔内投与、局所投与（例：点眼剤）、皮下投与、筋肉投与もしくは経皮投与（例：膏薬）用の製剤で投与することもでき、それらはいずれも、製薬分野の当業者には公知の製剤を用いるものである。有効であるが無毒性の量の所望の化合物をαｖβ３阻害薬として用いることができる。
【０１０７】
本発明の化合物を使用する投与法は、患者の種類、動物種、年齢、体重、性別および医学的状態；治療対象状態の重度；投与経路；患者の腎臓および肝臓の機能；ならびに使用する特定の化合物もしくはその塩などの各種要素に従って選択される。通常の技術を有する医師、獣医もしくは臨床医であれば、その状態の予防、処置もしくは進行停止に必要な薬剤の有効量を容易に決定・処方することができる。
【０１０８】
上記で示した効果を得るのに使用される本発明の経口用量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日、最も好ましくは０．１〜５．０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。経口投与の場合、組成物は好ましくは、治療対象患者への用量の対症的調節のために、有効成分を０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００および５００ｍｇ含む錠剤の形で提供する。医薬品は代表的には約０．０１ｍｇ〜約５００ｍｇの有効成分、好ましくは約１ｍｇ〜約１００ｍｇの有効成分を含む。静脈投与では、最も好ましい用量は、定速注入時で約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ／分の範囲である。有利には、本発明の化合物は、１日１回投与で投与することができるか、あるいは総１日用量を１日２回、３回もしくは４回の分割用量で投与することができる。さらに、本発明の好ましい化合物は、好適な経鼻媒体の局所使用を介しての経鼻的形態でまたは当業者には公知の経皮膏薬の形態のものを用いる経皮経路を介して投与することができる。経皮投与系の形で投与するには、当然のことながら投与は、投与法を通じて間歇的ではなく、連続的なものとなる。
【０１０９】
本発明の方法においては、本明細書で詳細に説明した化合物を有効成分とすることができ、それは代表的には、所期の投与形態、すなわち経口錠剤、カプセル、エリキシル剤、シロップなどに関して適切に選択され、従来の医薬実務に適合する好適な医薬用希釈剤、賦形剤もしくは担体（本明細書ではこれらを総称して「担体」材料と称する）と混合して投与する。
【０１１０】
例えば、錠剤もしくはカプセルでの経口投与の場合、活性薬剤成分は、乳糖、デンプン、ショ糖、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マニトール、ソルビトールなどの経口用の無毒性で製薬上許容される不活性担体と組み合わせることができる。液体製剤での経口投与の場合、経口薬剤成分は、エタノール、グリセリン、水などの経口用の無毒性で製薬上許容される不活性な担体と組み合わせることができる。さらに、所望もしくは必要に応じて、好適な結合剤、潤滑剤、崩壊剤および着色剤も、混合物に組み入れることができる。好適な結合剤には、デンプン、ゼラチン、グルコースもしくはβ−乳糖などの天然糖、コーン甘味剤、アカシア、トラガカントもしくはアルギン酸ナトリウムなどの天然および人工のガム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ロウなどがある。これらの製剤で使用される潤滑剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどがある。崩壊剤には、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１１１】
本発明の化合物は、小単ラメラ小胞、大単ラメラ小胞および多ラメラ小胞などのリポソーム投与系の形態で投与することもできる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンもしくはホスファチジルコリン類などの各種リン脂質から形成することができる。
【０１１２】
本発明の化合物はさらに、化合物分子が結合した個々の担体としてのモノクローナル抗体を用いて投与することもできる。本発明の化合物は、標的指向性（targetable）薬剤担体などの可溶性ポリマーと組み合わせることもできる。そのようなポリマーには、ポリビニルピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミド−フェノールまたはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキサイド−ポリリジンなどがあり得る。さらに、本発明の化合物は、例えばポリ酢酸、ポリグリコール酸、ポリ酢酸とポリグリコール酸の共重合体、ポリε−カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル類、ポリアセタール類、ポリジヒドロピラン類、ポリシアノアクリル酸類およびヒドロゲルの架橋もしくは両親媒性ブロック共重合体などの薬剤の徐放を行う上で有用な生体分解性ポリマー類と組み合わせることができる。
【０１１３】
以下の図式および実施例において、各種試薬の記号および略称は以下の意味を有する。
【０１１４】
ＡｃＯＨ：酢酸
ＢＨ３・ＤＭＳ：ボラン・ジメチルスルフィド
ＢＯＣ（Ｂｏｃ）：ｔ−ブチルオキシカルボニル
ＢＯＰ：ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェート
ＣＢＺ（Ｃｂｚ）：カルボベンジルオキシまたはベンジルオキシカルボニル
ＣＤＩ：カルボニルジイミダゾール
ＣＨ２Ｃｌ２：塩化メチレン
ＣＨ３ＣＮ：アセトニトリル
ＣＨＣｌ３：クロロホルム
ＤＥＡＤ：ジエチルアゾジカルボキシレート
ＤＩＡＤ：ジイソプロピルアゾジカルボキシレート
ＤＩＢＡＨまたはＤＩＢＡＬ−Ｈ：水素化ジイソブチルアルミニウム
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥ：１，２−ジメトキシエタン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＰＰＦ：１，１′−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン
ＤＰＦＮ：硝酸３，５−ジメチル−１−ピラゾリルホルムアミジン
ＥＤＣ：１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド・ＨＣｌ
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＥｔＯＨ：エタノール
ＨＯＡｃ：酢酸
ＨＯＡＴ：１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢＴ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＩＢＣＦ：クロロギ酸イソブチル
ＬＤＡ：リチウムジイソプロピルアミド
ＭｅＯＨ：メタノール
ＭＮＮＧ：１，１−メチル−３−ニトロ−１−ニトロソグアニジン
ＭＴＢＥ：メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ＮＥｔ３：トリエチルアミン
ＮＭＭ：Ｎ−メチルモルホリン
ＰＣＡ・ＨＣｌ：ピラゾールカルボキサミジン塩酸塩
Ｐｄ／Ｃ：パラジウム−活性炭触媒
Ｐｈ：フェニル
ＰｙＣＬＵ：ヘキサフルオロリン酸クロロ−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−（テトラメチレン）−ホルムアミジニウム
ＴＢＴＵ：テトラフルオロホウ酸Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウム
ｐＴＳＡ：ｐ−トルエンスルホン酸
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＴＭＥＤＡ：Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルエチレンジアミン
ＴＭＳ：トリメチルシリル。
【０１１５】
本発明の新規化合物は、容易に入手可能な原料、試薬および適宜に従来の合成手順を用いて、以下の反応図式および実施例の手順に従って製造することができる。これらの手順において、有機合成業界の通常の技術を有する者には公知の変法を用いることも可能であるが、それについては詳細には述べない。
【０１１６】
以下の実施例は、本発明のより好ましい化合物を例示したものである。しかしながらこれら化合物は、本発明と見なされる唯一の属を形成するものと解釈すべきではない。さらに以下の実施例は、本発明の化合物の製造についての詳細を示したものである。当業者であれば、以下の製造手順の条件および工程についての公知の変法を用いてこれら化合物を製造できることは容易に理解できよう。別段の断りがない限り、操作はいずれも室温または環境温度で行われ、温度はいずれも摂氏単位である。
【０１１７】
【化１０】
0004787447.tif 000008
0004787447.tif 000009
0004787447.tif 000010
【０１１８】
実施例１
３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸（１−１０）
段階Ａ：３−ブロモ−６−メトキシピリジン（１−２）の製造
２−メトキシピリジン（１−１）（３．９６ｋｇ；３６．３ｍｏｌ）、ＮａＯＡｃ（３．５７ｋｇ；３９．９ｍｏｌ）および塩化メチレン（２２リットル）の懸濁液に、反応温度を７℃以下に維持しながら、２〜３時間かけて臭素（２．０６リットル；３９．９ｍｏｌ）の塩化メチレン（２リットル）溶液を加えた。混合物を０〜７℃で１時間熟成し、室温で終夜撹拌した。反応混合物を濾過し、塩化メチレン（約５リットル）で洗浄した。濾液および洗浄液を合わせ、温度を１０℃以下に維持しながら冷２Ｍ  ＮａＯＨ（２２リットル；ｐＨは８以下としなければならない）で洗浄し、冷水（１１リットル）で洗浄した。有機層を分液し、減圧下に濃縮して粗生成物１−２（６．６５ｋｇ）を得た。粗生成物を減圧蒸留によって精製して、純粋な１−２（５．９０ｋｇ、８６％）を得た。
【０１１９】
公知化合物：G．Butora et al., JACS, 119, 7694-7701 (1997)。
【０１２０】
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ８．１８（ｄ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．６１（ｄｄ、Ｊ＝８．８および２．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．６４（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）および３．８９（ｓ、３Ｈ）。
【０１２１】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６２．９ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１６２．９、１４７．５、１４１．０、１１２．６、１１１．７および５３．７。
【０１２２】
段階Ｂ：ｔｅｒｔ−ブチル３−（６−メトキシピリジン−３−イル）アクリル酸ｔｅｒｔ−ブチル（１−３）の製造
アクリル酸ｔｅｒｔ−ブチル（９８％；１３７ｍＬ；９１６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１００ｍＬ；７２０ｍｍｏｌ）、トリ−Ｏ−トリルホスフィン（９７％；６．３０ｇ；２０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１．８０ｇ；８ｍｍｏｌ）およびＮＭＰ（９０ｍＬ）の混合物を３回脱気した。混合物を９０℃まで加熱し、２−メトキシ−５−ブロモピリジン１−２（５０．０ｇ；２６６ｍｍｏｌ）およびＮＭＰ（１０ｍＬ）の溶液を、反応温度を９０℃に維持しながら１時間かけて漏斗を用いて加えた。添加完了後、反応液を１２時間加熱した。反応完結後、反応混合物を冷却して室温とした。反応混合物にトルエン（４００ｍＬ）を加え、得られた溶液をソルカ・フロク（SolkaFlok）層に通した。濾過ケーキをトルエン（２７０ｍＬ）で洗浄した。トルエン溶液を水で洗浄した（５４０ｍＬで３回）。次亜塩素酸ナトリウム（ＮａＣｌＯ）水溶液（２．５％；２００ｍＬ）を、温度を約３０℃に維持しながら、前記トルエン溶液にゆっくり加えた。反応液を高撹拌しながら５０分間熟成させた。有機層を分液し、水（５４０ｍＬ）で３回洗浄し、次に飽和ＮａＣｌ（２７０ｍＬ）で洗浄した。有機層を濃縮して油状物を得た。油状物をヘキサン２７０ｍＬに溶かし、シリカゲル（９０ｇ）層に負荷した。シリカゲル層をヘキサン（７３ｍＬ）で洗浄した。生成物１−３をＥｔＯＡｃ：ヘキサン（１：８；体積比）約７３０ｍＬで溶離した。得られた黄色溶液を濃縮して油状物を得た（１２６ｇ；４９．２重量％；収率９８．４％）。粗油状物を、それ以上精製せずに次の段階に用いた。得られた油状物をさらに濃縮することで、標準サンプルを得た。
【０１２３】
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ８．２３（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．７３（ｄｄ、Ｊ＝８．７および２．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．５０（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、６．７３（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、１Ｈ）、６．２５（ｄ、Ｊ＝１６．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．９４（ｓ、３Ｈ）および１．５１（ｓ、９Ｈ）。
【０１２４】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６２．９ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ１６６．１、１６５．１、１４８．１、１３９．９、１３６．３、１２４．０、１１９．１、１１１．５、８０．６、５３．７および２８．２。
【０１２５】
段階Ｃ：３（Ｓ）−（（Ｒ）−Ｎ−ベンジル−α−メチルベンジルアミン）−３−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１−４）の製造
Ｒ−（＋）−Ｎ−ベンジル−α−メチルベンジルアミン（８８ｍＬ；０．４２ｍｏｌ）および脱水ＴＨＦ（１リットル）の溶液に、−３０℃で１時間かけてｎ−ＢｕＬｉ（２．５Ｍヘキサン溶液；１６２ｍＬ；０．４１ｍｏｌ）を滴下した。溶液を冷却して−６５℃とした。ｔ−ブチルエステル１−３（６５．９ｇ；０．２８ｍｏｌ）の脱水ＴＨＦ（０．５リットル）溶液を９０分間かけて加えたが、その間に昇温して−５７℃となった。反応完結後、反応溶液を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１１０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１１０ｍＬ）の混合物に投入した。有機層を分液し、ＡｃＯＨ水溶液（１０％；１１０ｍＬ）、水（１１０ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ水溶液（５５ｍＬ）で別個に洗浄した。有機層を減圧下に濃縮して粗油状物を得た。粗油状物を、ＥｔＯＡｃおよびヘキサン（５：９５）混合液を用いてシリカゲル（２８０ｇ）に通すことで精製した。生成物を含む分画を合わせ、減圧下に濃縮して粘稠油状物を得た。得られた油状物をそのまま次の段階で用いた。得られた油状物には、生成物１−４  ９１ｇ（０．２０ｍｏｌ、収率７３％）が含まれていた。
【０１２６】
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：８．１５（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．６５（ｄｄ、Ｊ＝８．６および２．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．４２〜７．１５（ｍ、１０Ｈ）、６．７３（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．３８（ｄｄ、Ｊ＝９．４および５．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．９６（ｑ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．９３（ｓ、３Ｈ）、３．６６（ｓ、２Ｈ）、２．５０（ｍ、２Ｈ）、１．２８（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、３Ｈ）および１．２６（ｓ、９Ｈ）。
【０１２７】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６２．９ＭＨｚ：ＣＤＣｌ３）：δ１７０．８、１６３．３、１４６．４、１４３．８、１４１．３、１３８．６、１３０．０、１２８．３、１２８．２、１２７．９、１２７．８、１２７．０、１２６．７、１１０．４、８０．５、５７．４、５６．６、５３．４、５０．７、３７．５、２７．８および１７．３。
【０１２８】
段階Ｄ：３（Ｓ）−アミノ−３−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピオン酸トシル酸ｔｅｒｔ−ブチル（１−５）の製造
上記粘稠油状物（１−４；８０．３ｇ含有；０．１８ｍｏｌ）を、Ｐｄ（ＯＨ）２（２０重量％／炭素；８．０ｇ）存在下に、ＥｔＯＨ（４００ｍＬ）、ＡｃＯＨ（４０ｍＬ）および水（２ｍＬ）の混合液中、約０．２８ＭＰａ（４０ｐｓｉ）の水素下、３５℃で８時間にわたって水素化した。反応混合物をソルカ・フロク層で濾過し、減圧下に溶媒留去して粘稠油状物を得て、ＭＴＢＥ（各２リットル）で数回洗浄した。冷却後、バッチは固化して粘稠白色固体となった。得られた粘稠スラリーを加熱して５０℃とし、固体を溶解させた。ｐ−トルエンスルホン酸（ｐ−ＴｓＯＨ；４１．７ｇ；０．２２ｍｏｌ）およびＭＴＢＥ（４００ｍＬ）の熱溶液（４０℃）を、前記アミンの温溶液にゆっくり移し入れた。ｐ−ＴｓＯＨ溶液の約３０％を加えた後、溶液にシードを入れたところ、粘稠スラリーが形成された。添加を続け、２時間で完了した。添加完了後、溶液を４５℃で３時間熟成させた。溶液をゆっくり冷却して室温とした。溶液を室温で１２時間熟成させ、冷却して６℃とした。非常に粘稠なスラリーを濾過し、ＭＴＢＥ（１００ｍＬ）で洗浄し、３５℃で減圧下に数日間乾燥させて、生成物１−５（７１．０ｇ；７３％）を得た。融点：１４２〜１４４℃。
【０１２９】
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ８．３２（ｂｓ、３Ｈ）、８．１２（ｄ、Ｊ＝２．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．７７（ｄｄ、Ｊ＝８．７および２．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、２Ｈ）、７．０７（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、２Ｈ）、６．５６（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．５６（ｍ、１Ｈ）、３．８７（ｓ、３Ｈ）、３．０３（ｄｄ、Ｊ＝１６．３および５．７Ｈｚ、１Ｈ）、２．８１（ｄｄ、Ｊ＝１６．３および９．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．３５（ｓ、３Ｈ）および１．２３（ｓ、９Ｈ）。
【０１３０】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６２．９ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ１６８．４、１６３．９、１４６．４、１４１．０、１４０．４、１３８．５、１２８．８、１２５．８、１２４．５、１１０．９、８１．６、５３．７、４９．５、３９．１、２７．８および２１．３。
【０１３１】
段階Ｅ：３（Ｓ）−（２，２−ジメトキシエチルアミノ）−３−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１−６）の製造
ｐ−ＴＳＡ塩１−５（５０ｇ；０．１１８ｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（３００ｍＬ）およびグリオキサール−１，１−ジメチルアセタール（４５重量％ＭＴＢＥ溶液；４０ｇ；０．１６５ｍｏｌ）の混合物に、ＮａＢＨ３ＣＮ（９．３５ｇ；０．１４１ｍｏｌ；９５％）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）溶液をゆっくり加えた。添加速度は、温度が決して３．５℃を超えないようなものとした（５０分間かけて）。反応混合物を昇温させて室温とした。反応完了後（４〜５時間、最終バッチ温度は１６℃であった）、フラスコ周囲に氷を置き、ＮａＨＣＯ３水溶液（１４．８ｇのＨ２Ｏ（２００ｍＬ）溶液）をゆっくり加えた。混合物を濃縮して４２０ｍＬとした。追加のＨ２Ｏ（２００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を加えた。水層を分液し、ＥｔＯＡｃで抽出した（５００ｍＬ）。有機層を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮して約１００ｍＬとした。得られた溶液を小さいシリカゲル層に通してから、さらにＥｔＯＡｃ３００ｍＬで流した。１−６を含む分画を合わせ、減圧下に濃縮して、生成物１−６（４６．２ｇ；９０．４重量％；９２％）４６．２ｇを油状物として得た。この化合物を、それ以上精製せずに次の段階に用いた。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって標準サンプルを得た。
【０１３２】
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ８．０８（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．６０（ｄｄ、Ｊ＝８．５および２．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７３（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．４１（ｔ、Ｊ＝５．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．０１（ｄｄ、Ｊ＝８．２および５．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．９２（ｓ、３Ｈ）、３．８９（ｂｓ、１Ｈ）、３．３５（ｓ、３Ｈ）、３．３１（ｓ、３Ｈ）、２．４５〜２．７３（ｍ、４Ｈ）および１．３９（ｓ、９Ｈ）。
【０１３３】
１３Ｃ  ＮＭＲ（６２．９ＭＨｚ：ＣＤＣｌ３）：δ１７０．５、１６３．７、１４５．８、１３７．４、１３０．４、１１９．５、１１０．９、１０３．５、８０．９、５６．８、５３．６、５３．３、４８．５、４３．８および２７．９。
【０１３４】
段階Ｆ：４−｛３（Ｓ）−［２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−エチル］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−イミダゾール−１−イル｝−酪酸メチルエステル（１−７）の製造
炭酸ビス（トリクロロメチル）（０．６６３ｇ；２．２４ｍｍｏｌ）、アセタール１−６（２．０ｇ、５．８８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２．０ｍＬ）の脱水ＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を０℃で３０分間、室温で３０分間撹拌した。過剰のホスゲンを、アルゴンによって反応混合物からパージした。得られた懸濁液に、４−アミノ酪酸メチル塩酸塩（０．９９４ｇ；６．４７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．１ｍＬ）を５℃で加えた。混合物を４０℃で６時間撹拌し、冷却して室温とした。２Ｍ硫酸水溶液（８ｍＬ）を混合物に加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃに投入し、塩基性となるまで飽和ＮａＨＣＯ３を加えた。ＥｔＯＡｃで抽出後（３回）、有機層をブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、減圧下に濃縮して油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー精製（ＥｔＯＡｃ）によって１−７を得た。
【０１３５】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ８．１２（ｄ、１Ｈ）、７．６０（ｄｄ、１Ｈ）、６．７２（ｄ、１Ｈ）、６．２１（ｄ、１Ｈ）、６．１９（ｄ、１Ｈ）、６．７２（ｄ、１Ｈ）、５．６０（ｔ、１Ｈ）、３．９２（ｓ、３Ｈ）、３．６７（ｓ、３Ｈ）、３．６４（ｄｔ、２Ｈ）、３．１２（ｄｄ、１Ｈ）、２．９８（ｄｄ、１Ｈ）、２．３４（ｔ、２Ｈ）、１．９８（５重線、２Ｈ）および１．３５（ｓ、９Ｈ）。
【０１３６】
段階Ｇ：４−｛３（Ｓ）−［２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−１−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−エチル］−２−オキソ−イミダゾリジン−１−イル｝−酪酸メチルエステル（１−８）の製造
１−７（１．２３ｇ）のメタノール（７０ｍＬ）溶液をアルゴンで脱気し、ＰｔＯ２（２００ｍｇ）を加えた。混合物を、約０．４０ＭＰａ（５８ｐｓｉ）の水素ガスとともにパール振盪器に入れ、２日間振盪した。アルゴンでパージした後、混合物をセライト濾過し、溶媒を減圧下に除去した。シリカゲルクロマトグラフィー精製（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン２：１）によって、１−８を白色固体として得た。
【０１３７】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ８．０８（ｄ、１Ｈ）、７．５７（ｄｄ、１Ｈ）、６．７２（ｄ、１Ｈ）、５．２１（ｔ、１Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．６３（ｓ、３Ｈ）、３．４〜２．８（ｍ、８Ｈ）、２．３２（ｔ、２Ｈ）、１．８１（ｍ、２Ｈ）および１．３７（ｓ、９Ｈ）。
【０１３８】
段階Ｈ：３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１−９）の製造
２−アミノ−３，４，５，６−テトラヒドロピリミジン塩酸塩（３８６ｍｇ；２．８５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液を水素化ナトリウム（６８ｍｇ；２．８５ｍｍｏｌ）で処理し、３０分間撹拌した。イミダゾリジノン１−８（３００ｍｇ；０．７１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１６時間撹拌した。溶液を飽和ＮａＨＣＯ３溶液に投入し、ＥｔＯＡｃで抽出し、ブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を除去して油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー精製（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ１００：２０：５）によって、標題化合物１−９を得た。
【０１３９】
質量分析スペクトラム：Ｍ＋Ｈの実測値は４８９．２であり、Ｃ２４Ｈ３６Ｎ６Ｏ５＋Ｈの計算値は４８９．３である。
【０１４０】
段階Ｉ：３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸（１−１０）の製造
エステル１−９（１１０ｍｇ）の塩化メチレン（１０ｍＬ）およびトリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）溶液を室温で２時間撹拌した。混合物を減圧下に濃縮し、水に溶かし、冷凍し、凍結乾燥して、１−１０を粉末として得た。
【０１４１】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ；ＣＤ３ＯＤ）：δ８．１１（ｄ、１Ｈ）、７．７０（ｄｄ、１Ｈ）、６．８１（ｄ、１Ｈ）、５．３７（ｔ、１Ｈ）、３．９０（ｓ、３Ｈ）、３．４〜３．５（ｍ、５Ｈ）、３．２０（ｍ、２Ｈ）、３．１５（ｍ、１Ｈ）、３．０１（ｄ、２Ｈ）、２．４２（ｔ、２Ｈ）、２．００（５重線、２Ｈ）および１．８５（５重線、２Ｈ）。
【０１４２】
質量分析スペクトラムの正確な質量：Ｍ＋Ｈの実測値は４３３．２１８５であり、Ｃ２０Ｈ２８Ｎ６Ｏ５＋Ｈの計算値は４３３．２１９４である。
【０１４３】
【化１１】
0004787447.tif 000011
0004787447.tif 000012
0004787447.tif 000013
【０１４４】
実施例２
３−（３−｛３−［６−（シクロプロピルメチル−アミノ）−ピリジン−２−イル］−プロピル｝−２−オキソ−イミダゾリジン−１−イル）−３−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−プロピオン酸（２−９）
段階Ａ：（６−ブロモ−ピリジン−２−イル）−シクロプロピルメチル−アミン（２−１）
２，６−ジブロモピリジン（３３．０ｇ、１３９ｍｍｏｌ）およびシクロプロパンメチルアミン（１０．８ｇ、１５３ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡ（２７ｍＬ）溶液を、密封圧力管中で２４時間加熱還流した。反応混合物を冷却し、減圧下に濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ）の間で分配した。有機層を水（２００ｍＬ）と次にブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、脱水した（Ｎａ２ＳＯ４）。有機層を濾過し、減圧下に濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、アミン２−１  ２６ｇを収率８２％で白色固体として得た。
【０１４５】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２２〜７．２６（ｍ、１Ｈ）、６．７０（ｄ、１Ｈ）、６．２６（ｄ、１Ｈ）、４．７８（ｂｒｓ、１Ｈ）、３．０６〜３．０９（ｍ、２Ｈ）、１．０２〜１．１１（ｍ、１Ｈ）、０．５３〜０．５８（ｍ、２Ｈ）、０．２３〜０．２７（ｍ、２Ｈ）。
【０１４６】
段階Ｂ：（ベンジルオキシカルボニル−｛３−［６−（シクロプロピルメチル−アミノ）−ピリジン−２−イル］アリル｝−アミノ）−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２−３）
２−１（３６．４ｇ、１６０ｍｍｏｌ）、２−２（５３．９ｇ、１７６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（３．５９ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）およびトリ−ｏ−トリル−ホスフィン（９．７６ｇ、３２．０ｍｍｏｌ）のＥｔ３Ｎ（２２．２ｍＬ、１６０ｍｍｏｌ）中混合物をアルゴン下に、１００℃で１２時間加熱した。暗褐色溶液を冷却して室温とし、ジエチルエーテル（７５０ｍＬ）で希釈し、水（５００ｍＬ）で洗浄した。エーテル層を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮し、クロマトグラフィーを行って（シリカゲル、３０％酢酸エチル／ヘキサン）、２−３  ４９．４ｇを得た。
【０１４７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．３０〜７．３９（ｍ、６Ｈ）、６．２２〜６．６３（ｍ、４Ｈ）、５．１６〜５．１８（ｄ、２Ｈ）、４．６０（ｓ、１Ｈ）、４．１５〜４．２１（ｍ、２Ｈ）、３．８７〜３．９６（ｄ、２Ｈ）、３．１３（ｔ、２Ｈ）、１．３７〜１．４４（ｍ、９Ｈ）、１．０６〜１．１２（ｍ、１Ｈ）、０．５３〜０．５６（ｍ、２Ｈ）、０．２３〜０．２７（ｍ、２Ｈ）。
【０１４８】
段階Ｃ：｛３−［６−（シクロプロピルメチル−アミノ）−ピリジン−２−イル］−アリル｝−［（メトキシ−メチル−カルバモイル）−メチル］−カルバミン酸ベンジルエステル（２−４）
２−３（４９．０ｇ、１０９ｍｍｏｌ）のトリフルオロ酢酸（５０ｍＬ）溶液を６０℃で１時間撹拌した。溶媒を留去し、残留物の共沸を行った（トルエン７５ｍＬで２回）。残留物をＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＣＮ１：１（４００ｍＬ）に溶かし、ＥＤＣ（２７．２ｇ、１４２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（１９．２ｇ、１４２ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（６０ｍＬ、５４６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン（１６．０ｇ、１６４ｍｍｏｌ）を加えた。スラリーを１５時間撹拌し、減圧下に濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）に溶かし、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、ブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、濃縮した。シリカゲルでの精製によって、２−４  ３０．８ｇを褐色油状物として得た。
【０１４９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．３０〜７．３９（ｍ、６Ｈ）、６．２４〜６．６５（ｍ、４Ｈ）、５．１３〜５．１８（ｍ、２Ｈ）、４．６３（ｓ、１Ｈ）、４．１５〜４．２８（ｍ、３Ｈ）、３．６９〜３．７４（ｍ、２Ｈ）、３．４３〜３．５１（ｍ、１Ｈ）、３．１０〜３．２１（ｍ、６Ｈ）、１．０６〜１．１２（ｍ、１Ｈ）、０．５３〜０．５６（ｍ、２Ｈ）、０．２３〜０．２７（ｍ、２Ｈ）。
【０１５０】
段階Ｄ：｛３−［６−（シクロプロピルメチル−アミノ）−ピリジン−２−イル］−アリル｝−（２−オキソ−エチル）−カルバミン酸ベンジルエステル（２−５）
２−４（３２．０ｇ、７２．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液を−７８℃で撹拌しながら、それにＤＩＢＡＬ−Ｈ（１．０Ｍ／ヘプタン、１０９ｍＬ、１０９ｍｍｏｌ）を３０分間かけて滴下した。１．５時間後、溶液を昇温させて室温とし、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を注意深く加えることで反応停止した。１．０Ｍロシェル塩水溶液（２００ｍＬ）を加え、溶液をさらに１時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏ（６００ｍＬ）を加え、３０分後、有機層を分液し、脱水した（Ｎａ２ＳＯ４）。減圧下に濃縮して、粗アルデヒド２−５  ２５ｇを得た。
【０１５１】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ９．６０（ｄ、１Ｈ）、７．２６〜７．３９（ｍ、６Ｈ）、６．２５〜６．６５（ｍ、４Ｈ）、５．１５〜５．２０（ｍ、２Ｈ）、４．６２（ｓ、１Ｈ）、４．１０〜４．１９（ｍ、２Ｈ）、３．４５〜３．５３（ｍ、２Ｈ）、３．０６〜３．１４（ｍ、２Ｈ）、１．０６〜１．１２（ｍ、１Ｈ）、０．５３〜０．５５（ｍ、２Ｈ）、０．２５〜０．２７（ｍ、２Ｈ）。
【０１５２】
段階Ｅ：３−［２−（ベンジルオキシカルボニル−｛３−［６−（シクロプロピルメチル−アミノ）ピリジン−２−イル］−アリル−アミノ）−エチルアミノ］−３−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２−６）
アルデヒド２−５（２５．０ｇ、６５．８ｍｍｏｌ）のイソプロパノール（４００ｍＬ）溶液に、β−アラニン１−５（２７．９ｇ、６５．８ｍｍｏｌ）、ＮａＯＡｃ（５４．０ｇ、６５８ｍｍｏｌ）および４Åモレキュラーシーブスを加えた。溶液を２０分間撹拌し、冷却して０℃とし、ＮａＣＮＢＨ３（１２．４ｇ、１９７ｍｍｏｌ）を一気に加えた。氷浴を外し、溶液を室温で１４時間撹拌した。１Ｎ  ＨＣｌを加えてｐＨを２とした。１０分間撹拌後、ＥｔＯＡｃ（７００ｍＬ）を加え、１０％Ｋ２ＣＯ３水溶液でｐＨを１１に調節した。有機層を分液し、脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下に濃縮し、シリカゲル（７５：２０：５ＣＨＣｌ３：ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ）で精製して、２−６  ２９．３ｇを得た。
【０１５３】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．１１（ｄ、１Ｈ）、７．２８〜７．３８（ｍ、６Ｈ）、６．２５〜６．７２（ｍ、６Ｈ）、５．１２〜５．１８（ｍ、２Ｈ）、４．６３（ｂｒｓ、１Ｈ）、４．３４〜４．３８（ｍ、１Ｈ）、３．９２（ｓ、３Ｈ）、３．３２〜３．５０（ｍ、２Ｈ）、３．１３（ｔ、２Ｈ）、２．４１〜２．５２（ｍ、７Ｈ）、１．３９（ｄ、９Ｈ）、１．０６〜１．１２（ｍ、１Ｈ）、０．５３〜０．５５（ｍ、２Ｈ）、０．２５〜０．２７（ｍ、２Ｈ）。
【０１５４】
段階Ｆ：３−（２−｛３−［６−（シクロプロピルメチル−アミノ）−ピリジン−２−イル］−プロピルアミノ｝−エチルアミノ）−３−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２−７）
２−６（２９．０ｇ、４７．０ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（７．２５ｇ）のＥｔＯＨ（５００ｍＬ）中混合物を水素風船下に１８時間撹拌した。セライト濾過および溶媒留去と、それに続くシリカゲルでの精製（９０：１０：１ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）によって、２−７  １３ｇを得た。
【０１５５】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．０６〜８．０８（ｍ、１Ｈ）、７．５６〜７．６０（ｍ、１Ｈ）、７．３５（ｔ、１Ｈ）、６．７２〜６．７５（ｍ、１Ｈ）、６．４２〜６．４７（ｍ、１Ｈ）、６．１９（ｄ、１Ｈ）、４．６６（ｂｒｓ、１Ｈ）、３．９７〜４．０３（ｍ、１Ｈ）、３．９３（ｓ、３Ｈ）、３．０７（ｔ、２Ｈ）、２．４６〜２．７８（ｍ、１１Ｈ）、１．８１〜１．９９（ｍ、３Ｈ）、１．３９（ｄ、９Ｈ）、１．０６〜１．１２（ｍ、１Ｈ）、０．５３〜０．５５（ｍ、２Ｈ）、０．２５〜０．２７（ｍ、２Ｈ）。
【０１５６】
段階Ｇ：３−（３−｛３−［６−（シクロプロピルメチル−アミノ）−ピリジン−２−イル］−プロピル｝−２−オキソ−イミダゾリジン−１−イル）−３−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２−８）
ジアミン２−７（１２．５ｇ、２５．８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１３．５ｍＬ、７７．５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（７５０ｍＬ）溶液に０℃で、ｐ−ＮＯ２ＰｈＯＣＯＣｌ（５．４７ｇ、２７．１ｍｍｏｌ）を４回に分けて加えた。得られた混合物を昇温させて室温とし、１，４−ジオキサン（７５０ｍＬ）を加え、６時間還流させた。冷却後、溶液を１０％Ｋ２ＣＯ３（４００ｍＬで３回）と次にブラインで洗浄した。有機層を脱水し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下に濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、環状尿素化合物２−８  ９．０ｇを得た。
【０１５７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．０８（ｄ、１Ｈ）、７．５８（ｄｄ、１Ｈ）、７．３５（ｔ、１Ｈ）、６．７１（ｄ、１Ｈ）、６．４１（ｄ、１Ｈ）、６．１７（ｄ、１Ｈ）、５．３８〜５．４３（ｔ、１Ｈ）、４．６０（ｂｒｓ、１Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．１９〜３．３２（ｍ、５Ｈ）、３．０６（ｔ、２Ｈ）、２．９２〜２．９８（ｍ、１Ｈ）、２．５９（ｔ、２Ｈ）、１．８３〜１．９２（ｍ、２Ｈ）、１．３７（ｓ、９Ｈ）、１．０６〜１．１２（ｍ、１Ｈ）、０．５３〜０．５５（ｍ、２Ｈ）、０．２５〜０．２７（ｍ、２Ｈ）。
【０１５８】
段階Ｈ：３−（３−｛３−［６−（シクロプロピルメチル−アミノ）−ピリジン−２−イル］−プロピル｝−２−オキソ−イミダゾリジン−１−イル）−３−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−プロピオン酸（２−９）
２−８（８．９０ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）のトリフルオロ酢酸（１５ｍＬ）溶液を６０℃で２０分間撹拌した。溶媒を留去し、残留物の共沸を行った（トルエン７５ｍＬで２回）。シリカゲルでの精製によって（９０：１０：１ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）、２−９  ７．９ｇを得た。
【０１５９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．１０（ｄ、１Ｈ）、７．５２〜７．５８（ｍ、２Ｈ）、６．７０（ｄ、１Ｈ）、６．３８〜６．４４（ｍ、２Ｈ）、５．７０（ｄｄ、１Ｈ）、３．９２（ｓ、３Ｈ）、３．４１〜３．６７（ｍ、４Ｈ）、３．０６〜３．２３（ｍ、３Ｈ）、２．８４〜３．００（ｍ、３Ｈ）、２．７１〜２．７９（ｍ、２Ｈ）、２．６４（ｄｄ、１Ｈ）１．８３〜１．９２（ｍ、２Ｈ）、１．３７（ｓ、９Ｈ）、１．１２〜１．１８（ｍ、１Ｈ）、０．５６〜０．６１（ｍ、２Ｈ）、０．２６〜０．３４（ｍ、２Ｈ）。
【０１６０】
【化１２】
0004787447.tif 000014
0004787447.tif 000015
0004787447.tif 000016
【０１６１】
実施例３
３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］アゼピン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸（３−９）
段階Ａ：２−［３−（５−ブロモ−ピリジン−２−イル）−プロピル］−イソインドール−１，３−ジオン（３−２）
２−アリル−イソインドール−１，３−ジオン（３−１）（１８．９ｇ、１０１ｍｍｏｌ）の脱気ＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液を０℃で撹拌しながら、それに９−ＢＢＮ溶液（０．５Ｍ  ＴＨＦ溶液２４３ｍＬ、１２１ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を室温で１８時間撹拌した。Ｋ２ＣＯ３（２４ｇ、１７２ｍｍｏｌ）および２，５−ジブロモピリジン（３０ｇ、１２６ｍｍｏｌ）を加え、次に前混合しおよび熟成（７０℃で３０分間）したＰｄ（ＯＡｃ）２（２．６ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）およびＤＰＰＦ（７ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）の脱気ＤＭＦ（１００ｍＬ）中懸濁液を加えた。得られた混合物を７０℃で１８時間撹拌し、冷却し、酢酸エチルで希釈し、水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。ＴＨＦ（５００ｍＬ）に溶かした撹拌残留物に水（１５０ｍＬ）およびＮａＨＣＯ３（３３ｇ）を加え、１０分後、ＮａＢＯ３・Ｈ２Ｏ（５５ｇ）を加えた。３０分間高撹拌した後、混合物を酢酸エチルで希釈し、水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮して油状物を得た。残留物についてシリカゲルでのクロマトグラフィーを行って（１０％から２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、３−２  １３ｇを無色油状物として得た。
【０１６２】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．２１（シリカ、２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）．
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．５１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２Ｈｚ）、７．８２（ｍ、２Ｈ）、７．７１（ｍ、３Ｈ）、７．０８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、３．７５（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、２．８１（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、２．１７（ｍ、２Ｈ）。
【０１６３】
段階Ｂ：２−ブト−３−エンイル−イソインドール−１，３−ジオン（３−３）
４−ブロモ−１−ブテン（２０ｇ、１４８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５０ｍＬ）溶液を撹拌しながら、それにカリウムフタルイミド（２５ｇ、１３３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を７０℃で１８時間撹拌した。冷却して室温とした後、混合物をエーテルで希釈し、水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮して３−３  ２２．１ｇを白色固体として得た。
【０１６４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）７．８５（ｍ、２Ｈ）、７．７２（ｍ、２Ｈ）、５．８２（ｍ、１Ｈ）、５．０８（ｍ、２Ｈ）、３．７７（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、２．４４（ｍ、２Ｈ）。
【０１６５】
段階Ｃ：２−（３−｛５−［４−（１，３−ジオキソ−イソインドール−２−イル）−ブチル］−ピリジン−２−イル｝−プロピル）−イソインドール−１３−ジオン（３−４）
３−３（９．１ｇ、４５．４ｍｍｏｌ）の脱気ＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を０℃で撹拌しながら、それに９−ＢＢＮ溶液（０．５Ｍ  ＴＨＦ溶液１１０ｍＬ、５５ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を室温で１８時間撹拌した。Ｋ２ＣＯ３（１０．８ｇ、７７．４ｍｍｏｌ）および３−２（５．０ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）を加え、次に前混合しおよび熟成した（７０℃で３０分間）Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１．２ｇ、５．２ｍｍｏｌ）およびＤＰＰＦ（３．２ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の脱気ＤＭＦ（５０ｍＬ）中懸濁液を加えた。得られた混合物を７０℃で１８時間撹拌し、冷却し、酢酸エチルで希釈し、水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物についてシリカゲルでのクロマトグラフィーを行って（４０％から５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、３−４  ６．２ｇを白色固体として得た。
【０１６６】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．１９（シリカ、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）。
【０１６７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．３１（ｓ、１Ｈ）、７．８４（ｍ、４Ｈ）、７．７３（ｍ、４Ｈ）、７．３８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．０８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、３．７３（ｍ、４Ｈ）、２．７２（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、２．５９（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、２．１３（ｍ、２Ｈ）、１．６６（ｍ、２Ｈ）、１．６１（ｍ、２Ｈ）。
【０１６８】
段階Ｄ：４−［６−（３−アミノ−プロピル）−ピリジン−３−イル］−ブチルアミン（３−５）
３−４（１４ｇ、３０．７ｍｍｏｌ）およびヒドラジン（５ｍＬ）のエタノール（５００ｍＬ）中混合物を５時間加熱還流した。混合物を冷却し、濃縮して容量を１／３とし、ＭＴＢＥ  ３００ｍＬで希釈し、濾過した。濾液を濃縮して、３−５  ７．１ｇを、少量のフタルヒドラジドを不純物として含む褐色油状物として得た。
【０１６９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．２６（ｓ、１Ｈ）、７．４６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．０６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、２．７７（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、２．６７（ｍ、４Ｈ）、２．６０（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、２．２２（ｂｒｓ、４Ｈ）、１．８４（ｍ、２Ｈ）、１．６３（ｍ、２Ｈ）、１．４８（ｍ、２Ｈ）。
【０１７０】
段階Ｅ：３−（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］アゼピン−２−イル）−プロピルアミン（３−６）
３−５（３．０ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）およびＮａＨ（鉱油中６０重量％分散品１．７ｇ、４７ｍｍｏｌ）のキシレン（１００ｍＬ）中混合物をアルゴンで３０分間パージし、７２時間加熱還流した。混合物を冷却し、エタノールで反応停止し、１０％炭酸カリウム水溶液で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮して油状物を得た。残留物についてシリカゲルでのクロマトグラフィーを行って（１５：１０：１：１ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）、３−６  ８００ｍｇを黄色油状物として得た。
【０１７１】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．２０（シリカ、１５：１０：１：１ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）。
【０１７２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、６．５４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、４．６９（ｂｒｓ、１Ｈ）、３．１３（ｍ、２Ｈ）、２．７２（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、２．６４（ｍ、４Ｈ）、２．７〜１．７０（ｍ、６Ｈ）、１．６５（ｍ、２Ｈ）。
【０１７３】
段階Ｆ：３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］アゼピン−２−イル）−プロピル］−２，３−ジヒドロ−イミダゾール−１−イル｝−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３−７）
トリホスゲン（０．２４６ｇ、０．８０４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液に０℃で、１−６（０．７８ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．３６ｍＬ、３．０９ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１ｍＬ）の混合物を１０分間かけて加えた。３０分後、反応液を昇温させて室温とし、１時間撹拌した。混合物をアルゴンで３０分間パージし、それに３−６（０．４３５ｇ、２．５２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．３６ｍＬ、３．０９ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（５ｍＬ）の混合物を加えた。混合物を０℃で２時間加熱し、放冷して室温とした。２Ｍ  Ｈ２ＳＯ４（２．５ｍＬ）を加え、混合物を１５時間撹拌した。１０重量／体積％のＫ２ＣＯ３溶液（１０ｍＬ）で反応停止し、酢酸エチルで希釈し、水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮して３−７  ８５０ｍｇを黄色油状物として得た。それを粗生成物のまま次の段階で用いた。
【０１７４】
段階Ｇ：３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］アゼピン−２−イル）−プロピル］−２，３−ジヒドロ−イミダゾール−１−イル｝−プロピオン酸（３−８）
３−７（０．８５ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１０ｍＬ）溶液に、脱水ＴＦＡ（５ｍＬ）を加えた。４時間後、混合物を濃縮し、トルエンで希釈し、再度濃縮した。残留物についてシリカゲルでのクロマトグラフィーを行って（１５：１０：１：１から１５：１０：１：１ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）、３−８  ６００ｍｇを白色固体として得た。
【０１７５】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．１９（シリカ、１５：１０：１：１ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）。
【０１７６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ８．１６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２Ｈｚ）、７．７４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３、９Ｈｚ）、７．５２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、６．８０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９Ｈｚ）、６．６３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、６．５５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３Ｈｚ）、６．５０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３Ｈｚ）、５．６４（ｍ、１Ｈ）、３．９０（ｓ、３Ｈ）、３．７６（ｍ、１Ｈ）、３．６２〜３．４１（ｍ、４Ｈ）、３．０８〜２．８２（ｍ、４Ｈ）、２．６９（ｍ、１Ｈ）、２．５０（ｍ、１Ｈ）、２．０９〜１．８６（ｍ、５Ｈ）。
【０１７７】
段階Ｈ：３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−ピリド［２，３−ｂ］アゼピン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸（３−９）
３−８（０．４０ｇ、０．８８６ｍｍｏｌ）、２０％Ｐｄ（ＯＨ）２（０．４０ｇ）、１Ｎ  ＮａＯＨ（２ｍＬ）およびエタノール（２０ｍＬ）の混合物を、パールの装置中、約０．４５ＭＰａ（６５ｐｓｉｇ）の水素下に１８時間振盪した。混合物をセライト濾過し、濾液を濃縮した。残留物についてシリカゲルでのクロマトグラフィーを行って（２５：１０：１：１から１５：１０：１：１ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）、３−９  ３５０ｍｇを白色固体として得た。
【０１７８】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．１９（シリカ、１５：１０：１：１ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）。
【０１７９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ８．０９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２Ｈｚ）、７．６３（ｍ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、６．８０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、６．６４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、５．４４（ｍ、１Ｈ）、３．９０（ｓ、３Ｈ）、３．６１（ｍ、１Ｈ）、３．５０（ｍ、４Ｈ）、３．１８（ｍ、２Ｈ）、２．９３（ｍ、２Ｈ）、２．７２（ｍ、２Ｈ）、２．５９（ｍ、４Ｈ）、２．１０〜１．７６（ｍ、５Ｈ）。
【０１８０】
【化１３】
0004787447.tif 000017
【０１８１】
実施例４
３（Ｓ）−（６−エトキシピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸（４−３）
段階Ａ：３−ブロモ−６−エトキシピリジン（４−２）の製造
ＮａＯＥｔのＥｔＯＨ溶液（２１％；１５７ｍＬ、４２２ｍｍｏｌ）を２，５−ジブロモピリジン（４−１）（２０ｇ；８４．４ｍｍｏｌ）に加え、混合物を８０℃で１６時間加熱した。冷却後、混合物を水に投入し、ＥｔＯＡｃで２回抽出し、水と次にブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、減圧下に濃縮して、粗生成物４−２を固体として得た。
【０１８２】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ１．３８（３Ｈ、ｔ）、４．３３（２Ｈ、ｑ）、６．６３（１Ｈ、ｄ）、７．６２（１Ｈ、ｄｄ）、８．１９（１Ｈ、ｄ）。
【０１８３】
段階Ｂ：３（Ｓ）−（６−エトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸（４−３）の製造
原料として４−２を用いた以外、実施例１に記載の手順に従って、標題化合物４−３をＴＦＡ塩として得た。
【０１８４】
質量分析スペクトラム：実測値４４７．１；計算値（Ｍ＋Ｈ）＝４４７．２。
【０１８５】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ；ＣＤ３ＯＤ）：δ１．３６（３Ｈ、ｔ）、１．８５（２Ｈ、５重線）、２．００（２Ｈ、５重線）、２．４１（２Ｈ、ｔ）、３．００（２Ｈ、ｄ）、３．０９（１Ｈ、ｑ）、３．２２（２Ｈ、ｍ）、３．３５（２Ｈ、ｍ）、３．４７（５Ｈ、ｍ）、４．３１（２Ｈ、ｑ）、５．３７（１Ｈ、ｔ）、６．８１（１Ｈ、ｄ）、７．７２（１Ｈ、ｄｄ）、８．０９（１Ｈ、ｄ）。
【０１８６】
実施例５
３（Ｓ）−（６−エトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（４−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸（４−４）
原料として４−２および２−アミノ−４−メチル−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン（２−アミノ−４−メチルピリミジン塩酸塩のＥｔＯＨ中Ｐｄ（ＯＨ）２での水素化によって得たもの）を用いた以外、実施例１に記載の手順に従って、標題化合物４−４をＴＦＡ塩として得た。
【０１８７】
質量分析スペクトラム：実測値４６１．１；計算値（Ｍ＋Ｈ）＝４６１．３。
【０１８８】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ；ＣＤ３ＯＤ）：δ１．３３（３Ｈ、ｄｄ）、１．３６（３Ｈ、ｔ）、１．７５（１Ｈ、ｍ）、１．８５（２Ｈ、５重線）、２．１（１Ｈ、ｍ）、２．４２（２Ｈ、ｔ）、３．０１（２Ｈ、ｄ）、３．０９（１Ｈ、ｍ）、３．２２（２Ｈ、ｍ）、３．３５（２Ｈ、ｍ）、３．４〜３．６（３Ｈ、ｍ）、３．７４（１Ｈ、ｍ）、４．３１（２Ｈ、ｑ）、５．３６（１Ｈ、ｔ）、６．８０（１Ｈ、ｄ）、７．７１（１Ｈ、ｄｄ）、８．０９（１Ｈ、ｄ）。
【０１８９】
【化１４】
0004787447.tif 000018
【０１９０】
実施例６
３（Ｓ）−（ジヒドロベンゾフラン−６−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（１，４，５，６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イルカルバモイル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸（５−２）
原料として５−１（Coleman et al, Tetrahedron Lett., 41: 5803-5806 (2000)）を用いた以外、実施例１に記載の手順に従って、標題化合物５−２をＴＦＡ塩として製造した。
【０１９１】
質量分析スペクトラム：実測値４４４．２；計算値（Ｍ＋Ｈ）＝４４４．２。
【０１９２】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤ３ＯＤ）：δ１．８５（２Ｈ、ｍ）、２．０１（２Ｈ、５重線）、２．４３（２Ｈ、ｔ）、２．９５（２Ｈ、ｄ）、３．０４（１Ｈ、ｑ）、３．１７（２Ｈ、ｔ）、３．２３（２Ｈ、ｍ）、３．３０（２Ｈ、ｍ）、３．４０（１Ｈ、ｍ）、３．４６（４Ｈ、ｔ）、４．５３（２Ｈ、ｔ）、５．３６（１Ｈ、ｔ）、６．７１（１Ｈ、ｄ）、６．７９（１Ｈ、ｄｄ）、７．１７（１Ｈ、ｄ）。
【０１９３】
【化１５】
0004787447.tif 000019
0004787447.tif 000020
【０１９４】
実施例７
３（Ｓ）−（ジヒドロベンゾフラン−６−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（４−アミノ−２−エチルアミノピリミジン−６−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸（６−９）
段階Ａ：４−アミノ−６−クロロ−２−エチルアミノピリミジン（６−２）
２，６−ジクロロ−４−アミノピリミジン６−１（４．８ｇ、２９．３ｍｍｏｌ）、エチルアミン塩酸塩（７．０ｇ、８５．８ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２０ｍＬ、１４４ｍｍｏｌ）およびｎ−ブタノール（１５０ｍＬ）の混合物を９０℃で６時間加熱した。冷却後、溶媒を減圧下に除去し、残留物を飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液とＥｔＯＡｃの間で分配した。ＥｔＯＡｃ層をブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮して橙赤色固体を得た。カラムクロマトグラフィー精製によって（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：１）、標題化合物６−２を白色固体として得た。
【０１９５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：５．７８（１Ｈ、ｓ）、５．０３（１Ｈ、ｂｒｓ）、４．７５（２Ｈ、ｂｒｓ）、３．３７（２Ｈ、５重線）、１．１８（３Ｈ、ｔ）。
【０１９６】
段階Ｂ：４−ピバロイルアミノ−６−クロロ−２−エチルアミノピリミジン（６−３）
ピリミジン６−２（３．７６ｇ、２１．８ｍｍｏｌ）、ピバロイルクロライド（１０．７ｍＬ、８７ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（１５．２ｍＬ、１０９ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（８０ｍＬ）の混合物を室温で２４時間撹拌した。追加のピバロイルクロライド３ｍＬおよびＥｔ３Ｎ  ４ｍＬを加え、混合物をさらに２４時間撹拌した。溶液を飽和Ｎａ２ＣＯ３に投入し、ＥｔＯＡｃで２回抽出し、ブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、シリカゲル層で濾過した。溶媒除去によって、橙赤色固体を得た。エーテル／ヘキサン（約２０：１）での磨砕および濾過によって、標題化合物６−３を白色固体として得た。
【０１９７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：７．７７（１Ｈ、ｂｒｓ）、７．５（１Ｈ、ｓ）、５．０６（１Ｈ、ｂｒｓ）、３．４０（２Ｈ、５重線）、１．３０（９Ｈ、ｓ）、１．２０（３Ｈ、ｔ）。
【０１９８】
段階Ｃ：３−（４−ピバロイルアミノ−２−エチルアミノピリミジン−６−イル）プロピル−１−Ｎ−フタルイミド（６−４）
９−ＢＢＮ溶液（０．５Ｍ  ＴＨＦ溶液１４．６ｍＬ、７．２８ｍｍｏｌ）をＮ−アリルフタルイミド（１．１３ｇ、６．０６ｍｍｏｌ）に加え、室温で１６時間撹拌した。それにピリミジン６−３（１．４ｇ、５．４６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１３６ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）、ＤＰＰＦ（３３６ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１．２６ｇ、９．１ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１５ｍＬ）を加えた。混合物を窒素で１５分間脱気し、９０℃で１６時間加熱してから、減圧下に溶媒をほとんど除去した。残留物に飽和Ｎａ２ＣＯ３（３０ｍＬ）、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）およびＮａＢＯ３・４Ｈ２Ｏを加え、混合物を３時間撹拌した。水に投入後、溶液をＥｔＯＡｃで２回抽出し、水および次にブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、シリカゲル層で濾過し、濃縮して暗褐色油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー精製により（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ３：２と次に１：２）、標題化合物６−４を油状物として得た。
【０１９９】
質量分析スペクトラム：実測値４１０．１；計算値（Ｍ＋Ｈ）＝４１０．２。
【０２００】
段階Ｄ：３−（４−ピバロイルアミノ−２−エチルアミノピリミジン−６−イル）−１−プロピルアミン（６−５）
フタルイミド６−４（９２０ｍｇ、２．２５ｍｍｏｌ）およびヒドラジン（０．４２０ｍＬ、１３．５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液を５０℃で２時間加熱し、冷却し、ＭＴＢＥ  １０ｍＬを加えた。得られた固体を濾去し、濾液を濃縮して粗生成物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー精製によって（ＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ８：１：１、次にＮＨ３で飽和した５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）、標題化合物６−５を得た。
【０２０１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：７．７３（１Ｈ、ｂｒｓ）、７．３４（１Ｈ、ｓ）、４．８８（１Ｈ、ｂｒｓ）、３．３９（２Ｈ、ｍ）、２．７５（２Ｈ、ｍ）、２．５９（２Ｈ、ｍ）、１．８３（２Ｈ、ｍ）、１．３（９Ｈ、ｓ）、１．２（３Ｈ、ｔ）。
【０２０２】
段階Ｅ：３（Ｓ）−（ジヒドロベンゾフラン−６−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（４−ピバロイルアミノ−２−エチルアミノピリミジン−６−イル）−プロピル］−２，３−ジヒドロ−イミダゾール−１−イル｝−プロピオン酸ｔ−ブチルエステル（６−７）
アミン６−５およびアミン６−６（実施例１に記載の手順に従って５−１から製造）を、実施例１の化合物１−７について記載の手順を用いてカップリングさせて、標題化合物６−７を得た。
【０２０３】
質量分析スペクトラム：実測値５９３．３；計算値（Ｍ＋Ｈ）＝５９３．３。
【０２０４】
段階Ｆ：３（Ｓ）−（ジヒドロベンゾフラン−６−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（４−アミノ−２−エチルアミノピリミジン−６−イル）−プロピル］−２，３−ジヒドロ−イミダゾール−１−イル｝−プロピオン酸（６−８）
エステル６−７（８７０ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２０ｍＬ）溶液を、１Ｎ  ＮａＯＨ（１２ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）で処理し、７０℃で８時間加熱した。溶液を冷却し、水で希釈し、３Ｎ  ＨＣｌで中和した。分取ＨＰＬＣ精製（Ｃ−１８カラム；水／アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ；勾配溶離）とそれに続く凍結乾燥によって標題化合物６−８をＴＦＡ塩として得た。
【０２０５】
質量分析スペクトラム：実測値４５３．１；計算値（Ｍ＋Ｈ）＝４５３．２。
【０２０６】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤ３ＯＤ）：δ１．２２（３Ｈ、ｔ）、１．９９（２Ｈ、ｍ）、２．４７（２Ｈ、ｍ）、３．１〜３．２（４Ｈ、ｍ）、３．４５（２Ｈ、ｑ）、３．７（２Ｈ、ｍ）、４．５２（２Ｈ、ｔ）、５．６１（１Ｈ、ｄｄ）、５．９２（１Ｈ、ｓ）、６．５４（１Ｈ、ｄ）、６．６８（１Ｈ、ｄ）、６．７２（１Ｈ、ｓ）、６．８２（１Ｈ、ｄｄ）、７．１６（１Ｈ、ｄ）。
【０２０７】
段階Ｇ：３（Ｓ）−（ジヒドロベンゾフラン−６−イル）−３−｛２−オキソ−３−［３−（４−アミノ−２−エチルアミノピリミジン−６−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸（６−９）
酸６−８（５２０ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）および１Ｎ  ＮａＯＨ（５ｍＬ）のＥｔＯＨ（２５ｍＬ）および水（１０ｍＬ）溶液を、Ｐｄ（ＯＨ）２／炭素（２０％；２ｇ）で約０．４５ＭＰａ（６５ｐｓｉ）にて４日間水素化した。混合物をセライト濾過し、溶媒を除去し、残留物を３Ｎ  ＨＣｌで中和した。分取ＨＰＬＣによる精製（Ｃ−１８カラム；水／アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ；勾配溶離）とそれに続く凍結乾燥によって、標題化合物６−９をＴＦＡ塩として得た。
【０２０８】
質量分析スペクトラム：実測値４５５．２；計算値（Ｍ＋Ｈ）＝４５５．２。
【０２０９】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤ３ＯＤ）：δ１．２２（３Ｈ、ｔ）、１．８３（２Ｈ、ｍ）、２．５０（２Ｈ、ｔ）、２．９５（２Ｈ、ｍ）、３．０６（２Ｈ、ｑ）、３．１７（２Ｈ、ｔ）、３．２３（２Ｈ、ｍ）、３．３３（２Ｈ、ｍ）、３．４５（３Ｈ、ｍ）、４．５３（２Ｈ、ｔ）、５．３８（１Ｈ、ｔ）、５．９３（１Ｈ、ｓ）、６．７２（１Ｈ、ｄｄ）、６．８１（１Ｈ、ｄｄ）、７．１７（１Ｈ、ｄ）。
【０２１０】
【化１６】
0004787447.tif 000021
0004787447.tif 000022
0004787447.tif 000023
0004787447.tif 000024
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【０２１１】
実施例８
３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５−エチレノ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸（８−９）
１−ピリジン−３−イル−シクロペンタンカルボン酸メチルエステル（７−２）
ＬＤＡ（２．０Ｍ、２７２ｍＬ）の脱水ＴＨＦ（５００ｍＬ）およびＨＭＰＡ（２００ｍＬ；モレキュラーシーブスで脱水）溶液を冷却し（−７８℃）、それに３−ピリジル酢酸エチル７−１（７５．０ｇ、４５４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を徐々に加えた。混合物を−７８℃で５０分間撹拌し、無希釈の１，２−ジブロモエタン（１１７ｍＬ、１３６３ｍｍｏｌ）を一気に加えた。反応混合物を、昇温させて室温に戻しながら終夜撹拌した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌで反応停止し、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏで３回、次にブラインで洗浄した。溶媒除去後、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（１００％ヘキサンからＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝７／３）を用いて精製して、所望の生成物７−２を油状物として得た。
【０２１２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．６０（ｍ、１Ｈ）、８．５０（ｍ、１Ｈ）、７．６４（ｍ、１Ｈ）、７．２８（ｍ、１Ｈ）、４．０５（ｑ、２Ｈ）、１．６６（ｑ、２Ｈ）、１．２２（ｑ、２Ｈ）、１．１６（ｔ、３Ｈ）。
【０２１３】
（１−ピリジン−３−イル−シクロプロピル）−メタノール（７−３）
７−２（７６ｇ、３９８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５００ｍＬ）溶液を冷却し（−７８℃）、それにＬｉＡｌＨ４（１．０Ｍ溶液２５０ｍＬ、２５０ｍｍｏｌ）を徐々に加えた。反応混合物を２時間撹拌し、Ｈ２Ｏ  ９．５ｍＬ、１５％ＮａＯＨ  ９．５ｍＬおよびＨ２Ｏ  ２８．５ｍＬの順序で反応停止した。混合物を終夜撹拌した。セライト（５０ｇ）を加え、混合物を２０分間撹拌し、シリカゲル層で濾過し、濃縮して、所望の生成物７−３を油状物として得た。それをそれ以上精製せずに、次の段階で用いた。
【０２１４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．５８（ｍ、１Ｈ）、８．４０（ｍ、１Ｈ）、７．６５（ｍ、１Ｈ）、７．２０（ｍ、１Ｈ）、３．７０（ｓ、２Ｈ）、０．９０（ｍ、４Ｈ）。
【０２１５】
（１−ピリジン−３−イル−シクロプロピル）−アセトニトリル（７−４）
ＰＰｈ３（２．６ｇ、１０ｍｍｏｌ）のエーテル（３０ｍＬ）溶液を冷却し（−２０℃）、それに５分間かけてＤＥＡＤ（１．８ｇ、１０ｍｍｏｌ）のエーテル（２０ｍＬ）溶液を加えた。混合物を−２０℃で２５分間撹拌した。７−３（１．０ｇ、６．７ｍｍｏｌ）のエーテル（１０ｍＬ）溶液を加え、反応混合物を−２０℃で３０分間撹拌した。アセトンシアノヒドリン（１．９ｇ、２０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、昇温させて室温に戻しながら終夜撹拌した。溶媒除去後、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（１００％ヘキサンから１００％ＥｔＯＡｃ）を用いて精製して、所望の生成物７−４を油状物として得た。
【０２１６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．６５（ｍ、１Ｈ）、８．５４（ｍ、１Ｈ）、７．７２（ｍ、１Ｈ）、７．２９（ｍ、ｌＨ）、２．６８（ｓ、２Ｈ）、１．０６（ｓ、４Ｈ）。
【０２１７】
２−（１−ピリジン−３−イル−シクロプロピル）−エチルアミン（７−５）
７−４（３１．３ｇ、１９８ｍｍｏｌ）の脱水ＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液を冷却し（０℃）、それにボラン−ＴＨＦ溶液（１．５Ｍ溶液６６０ｍＬ、９９０ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。それについて、ガスが発生しなくなるまでメタノールでゆっくり反応停止した。次に、追加のメタノール（１５０ｍＬ）を加え、次に６Ｎ  ＨＣｌ  ３０ｍＬを加えた。混合物を１時間撹拌し、濃縮して粘稠残留物を得た。それを、ｐＨ＞１１となるまで６Ｎ  ＮａＯＨで処理し、３０分間撹拌し、ＣＨＣｌ３で４回抽出した。溶媒除去後、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（１００％ＥｔＯＡｃから５０％ＥｔＯＡｃ／４６％ＥｔＯＨ／２％ＮＨ４ＯＨ／２％Ｈ２Ｏ）を用いて精製して、所望の生成物７−５を油状物として得た。
【０２１８】
質量分析スペクトラム：［Ｍ＋Ｈ］＋の実測値１６３．２；計算値１６２．１２。
【０２１９】
１，２，３，４−テトラヒドロ−４，４−エチレノ−［１，８］ナフチリジン（７−６）
７−５（１５．０ｇ、９２．６ｍｍｏｌ）および脱水トルエン３００ｍＬの混合物に、窒素下でＮａＨ（１７．８ｇ、４４５ｍｍｏｌ）を徐々に加えた。懸濁液を１２０℃で８時間撹拌した。それを冷却し、均一となるまでＥｔＯＨで非常にゆっくり反応停止した。飽和ＮａＨＣＯ３  １５０ｍＬを加えた。混合物をＥｔＯＡｃで３回抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、脱水した（ＭｇＳＯ４）。溶媒除去後、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：２から１００％ＥｔＯＡｃ）を用いて精製して、所望の生成物７−６を油状物として得た。
【０２２０】
質量分析スペクトラム：［Ｍ＋Ｈ］＋の実測値１６１．１；計算値１６０．１２。
【０２２１】
１，２，３，４−テトラヒドロ−４，４−エチレノ−［１，８］ナフチリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７−７）
７−６（８．５０ｇ、５３．１ｍｍｏｌ）、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（３４．８ｇ、１５９ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．１３ｇ、１．０６ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン（７０ｍＬ）中混合物を５時間加熱還流し、冷却して室温とし、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液およびブラインで別個に洗浄した。溶媒を減圧下に除去し、残留物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１００％ヘキサンから１００％ＥｔＯＡｃ）によって精製して、７−７を淡色固体として得た。
【０２２２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．２８（ｍ、１Ｈ）、６．９５（ｍ、２Ｈ）、３．９１（ｍ、２Ｈ）、１．８１（ｍ、２Ｈ）、１．５５（ｓ、９Ｈ）、１．０１（ｍ、２Ｈ）、０．９２（ｍ、２Ｈ）。
【０２２３】
８−ヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロ−４，４−エチレノ−［１，８］ナフチリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７−８）
７−７（５．８５ｇ、２２．５ｍｍｏｌ）および３−クロロ過安息香酸（ｍＣＰＢＡ）（６．１１ｇ、２４．８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出液をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。溶媒除去後、純粋な生成物７−８をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１００％ＥｔＯＡｃから１０％ＭｅＯＨ／９０％ＥｔＯＡｃ）によって得た。
【０２２４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．９８（ｍ、１Ｈ）、６．８６（ｍ、１Ｈ）、６．５０（ｍ、１Ｈ）、３．９５（ｍ、１Ｈ）、３．６１（ｍ、１Ｈ）、１．７５（ｍ、２Ｈ）、１．４４（ｓ、９Ｈ）、１．０３（ｍ、２Ｈ）、０．９５（ｍ、２Ｈ）。
【０２２５】
８−ヒドロキシ−７−ヨード−１，２，３，４−テトラヒドロ−４，４−エチレノ−［１，８］ナフチリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７−９）
７−８（５．４０ｇ、１９．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液を、窒素下に−７８℃で、ＬＤＡ（２．０Ｍヘプタン溶液、ＴＨＦおよびエチルベンゼン溶液１１．８ｍＬ、２３．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）溶液に加えた。混合物を−７８℃で１時間撹拌後、溶液ofヨウ素（９．９０ｇ、３９．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液をカニューレを用いて加えた。得られた混合物を−７８℃で９０分間撹拌し、次にＡｃＯＨ（２．６ｍＬ）で反応停止し、昇温させて室温とし、Ｈ２Ｏ、ＮａＨＣＯ３（水溶液）およびＮａ２Ｓ２Ｏ３（水溶液）で希釈した。混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた有機抽出液をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水した。溶媒除去後、生成物７−９をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０％ＥｔＯＡｃ／８０％ヘキサンから６５％ＥｔＯＡｃ／３５％ヘキサン）で精製した。
【０２２６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．５３（ｄ、１Ｈ）、６．２４（ｄ、１Ｈ）、４．１３（ｍ、１Ｈ）、３．５２（ｍ、１Ｈ）、１．９５（ｍ、１Ｈ）、１．５４（ｍ、１Ｈ）、１．４９（ｓ、９Ｈ）、１．０５（ｍ、４Ｈ）。
【０２２７】
（アリル−ベンジルオキシカルボニル−アミノ）−酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８−２）
８−１（６．３０ｇ、２３．７ｍｍｏｌ）および臭化アリル（使用前に短いポリ（４−ビニルピリジン）層で濾過したもの２．４０ｍＬ、２６．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）およびＤＭＦ（５０ｍＬ）中混合物に、窒素下０℃で、ＮａＨ（鉱油中６０％分散品１．０５ｇ、２６．１ｍｍｏｌ）を一気に加えた。得られた混合物を０℃で３０分間、次に室温で３時間撹拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で反応停止し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出液をＨ２Ｏ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水した。溶媒除去後、生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％から２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製した。
【０２２８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．３４（ｍ、５Ｈ）、５．８０（ｍ、Ｈ）、５．１６（ｍ、４Ｈ）、４．００（ｍ、２Ｈ）、３．８７（ｍ、２Ｈ）、１．４１（ｍ、９Ｈ）。
【０２２９】
アリル−［（メトキシ−メチル−カルバモイル）−メチル］−カルバミン酸ベンジルエステル（８−３）
８−２（６．０ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（１０ｍＬ）の混合物を、６０℃で２０分間撹拌した。揮発分を減圧下に除去し、残留物をトルエンと共沸させ（２０ｍＬで３回）、脱水ＤＭＦ６０ｍＬに溶かし、それにＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（２．２０ｇ、２１．７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１０．３ｍＬ、５９．１ｍｍｏｌ）およびＴＢＴＵ（６．９７ｇ、２１．７ｍｍｏｌ）を室温で加えた。得られた混合物を１．５時間撹拌し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液、Ｈ２Ｏおよびブラインで別個にで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水した。溶媒除去後、生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％から４５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製した。
【０２３０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．３４（ｍ、５Ｈ）、５．８１（ｍ、Ｈ）、５．１７（ｍ、４Ｈ）、４．１０（ｍ、４Ｈ）、３．７３／３．５４（ｓ、３Ｈ）、３．２０／３．１５（ｓ、３Ｈ）。
【０２３１】
１−ヒドロキシ−２−（３−｛ベンジルオキシカルボニル−［（メトキシ−メチル−カルバモイル）−メチル］−アミノ｝−プロピル）−８−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５−エチレノ−［１，８］ナフチリジン（８−４）
８−３（４．１ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）および９−ＢＢＮ（０．５Ｍ  ＴＨＦ溶液３４．０ｍＬ、１６．８ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素下に室温で１５時間撹拌した。揮発分を減圧下に除去し、残留物をＤＭＦ１５０ｍＬに溶かし、それに７−９（５．５５ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２．９０ｇ、２１．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（０．３１ｇ、１．４０ｍｍｏｌ）およびＤＰＰＦ（０．７８ｇ、１．４０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を６０℃で１時間、１１０℃で３０分間撹拌し、冷却して室温とし、Ｈ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機抽出液をＨ２Ｏ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水した。溶媒除去後、生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％から８０％ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（８：２）／ヘキサン）で精製した。
【０２３２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．３４（ｍ、５Ｈ）、５．８１（ｍ、Ｈ）、５．１７（ｍ、４Ｈ）、４．１０（ｍ、４Ｈ）、３．７３／３．５４（ｓ、３Ｈ）、３．２０／３．１５（ｓ、３Ｈ）。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋＝５６９．１。
【０２３３】
１−ヒドロキシ−２−［３−（ベンジルオキシカルボニル−｛２−［１−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−オキソ−ブチルアミノ］−エチル−アミノ）−プロピル）］−８−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５エチレノ−［１，８］ナフチリジン（８−６）
８−４（２．００ｇ、３．５２ｍｍｏｌ）の脱水ＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液を−７８℃で撹拌しながら、それにＤＩＢＡＬ−Ｈ（１．０Ｍヘキサン溶液８．８０ｍＬ、８．８０ｍｍｏｌ）を滴下した。２時間後、混合物を昇温させて室温とし、ＭｅＯＨ（１．６ｍＬ）をゆっくり加えることで反応停止した。１．０Ｍロシェル塩水溶液を加え、混合物を３０分間撹拌した。ＥｔＯＡｃを加え、有機層を溶媒留去し、ＭｇＳＯ４で脱水し、溶媒を減圧下に除去し、粗生成物８−５をトルエンと共沸させ、イソプロパノール４０ｍＬに溶かした。その溶液に、３（Ｓ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）−β−アラニンｔｅｒｔ−ブチルエステルｐ−トルエンスルホン酸塩１−５（１．７３ｇ、４．２２ｍｍｏｌ）、ＮａＯＡｃ（２．８９ｇ、３５．２ｍｍｏｌ）および粉砕モレキュラーシーブス３．５ｇを加えた。混合物を室温で１２時間撹拌し、冷却して０℃とし、ＮａＣＮＢＨ３（０．６７ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）を一気に加えた。混合物を昇温させて室温とし。２４時間撹拌した。１Ｎ  ＨＣｌを加えて、ｐＨを２とした。混合物を１０分間撹拌した後、ＥｔＯＡｃを加え、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液でｐＨを１１に調節した。有機部分を分液し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０％から１０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）で精製した。
【０２３４】
質量分析スペクトラム：実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝７４６．３。
【０２３５】
３−（２−｛ベンジルオキシカルボニル−［３−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５−エチレノ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−プロピル］−アミノ｝−エチルアミノ）−３（Ｓ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８−７）
８−６（１．５０ｇ、２．０１ｍｍｏｌ）のＡｃＯＨ（１２ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２ｍＬ）溶液に７０℃で、亜鉛粉末（１００メッシュ、２．０ｇ、３０．２ｍｍｏｌ）を一気に加えた。混合物を７０℃で３０分間撹拌し、冷却して室温とした。固体を濾去し、溶媒を減圧下に除去し、残留物をＥｔＯＡｃと５％ＮＨ４ＯＨ水溶液の間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水した。溶媒を除去して粗生成物を得た。それをそれ以上精製せずに、８−８の製造に用いた。
【０２３６】
質量分析スペクトラム：実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝６３０．２。
【０２３７】
３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３｛２−［３−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５−エチレノ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−プロピルアミノ］−エチルアミノ｝−プロピオン酸（８−８）
粗８−７（２．０１ｍｍｏｌ）のＨＢｒ（３ｍＬ）（３０重量％のＡｃＯＨ溶液）およびＡｃＯＨ（３ｍＬ）溶液を室温で３０分間撹拌し、エーテルを加え、混合物を１０分間撹拌し、エーテル溶液を傾斜法によって除去し、残留物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（４％ＮＨ４ＯＨを含む５％から２０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製して、標題化合物を得た。
【０２３８】
質量分析スペクトラム：実測値［Ｍ＋Ｈ］＋＝４４０．２。
【０２３９】
３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５−エチレノ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸（８−９）
クロロギ酸４−ニトロフェニル（０．２９ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）溶液を、８−８（０．６１ｇ、１．３９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１．１ｍＬ、６．２６ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１５０ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）中混合物に、窒素下０℃で滴下した。得られた混合物を０℃で４０分間撹拌し、昇温させて室温とし、３時間加熱還流した。揮発分を減圧下に除去し、生成物をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３％のＮＨ４ＯＨを含む５％から１５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製した。
【０２４０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：δ１１．０（ｓ、広い、１Ｈ）、８．１１（ｍ、１Ｈ）、７．５７（ｍ、１Ｈ）、６．９１（ｄ、１Ｈ）、６．７２（ｄ、１Ｈ）、６．２８（ｄ、１Ｈ）、５．５７（ｍ、１Ｈ）、３．９２（ｓ、３Ｈ）、３．３８〜３．６６（ｍ、５Ｈ）、３．１６（ｑ、１Ｈ）、２．９５〜３．０３（ｍ、２Ｈ）、２．６５〜２．８５（ｍ、４Ｈ）、１．９０〜１．９８（ｍ、１Ｈ）、１．７４〜１．８３（ｍ、１Ｈ）、１．６９（ｔ、２Ｈ）、１．０１（ｍ、２Ｈ）、０．８３（ｍ、２Ｈ）。
【０２４１】
質量分析スペクトラム：［Ｍ＋Ｈ］＋＝４６６．２。
【０２４２】
【化１７】
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【０２４３】
３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−（７−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸（９−７Ａおよび９−７Ｂ）
段階Ａ：２−［３−（５−（３−Ｎ−トリチルアミノブト−１−イル）−ピリジン−２−イル）−プロピル］−イソインドール−１，３−ジオン（９−１）
９−ＢＢＮ溶液（０．５Ｍ  ＴＨＦ溶液４４ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）に３−トリチルアミノブト−１−エン（A. Albeck and R. Persky, J. Org. Chem., 1994, 59, 653；５．７５ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１８時間撹拌した。Ｋ２ＣＯ３（３．８ｇ、２８ｍｍｏｌ）、ブロモピリジン３−２（６．３４ｇ、１８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（４．１２ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）、ＤＰＰＦ（１．０２ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（５０ｍＬ）を加え、混合物を窒素ガスで脱気した。得られた混合物を９０℃で１８時間撹拌し、冷却し、減圧下に濃縮して５０ｍＬとし、次に酢酸エチル（１００ｍＬ）、飽和Ｎａ２ＣＯ３（７５ｍＬ）およびＮａＢＯ３・４Ｈ２Ｏ（４０ｇ）で処理した。混合物を３時間撹拌し、ＥｔＯＡｃと水の間で分配し、ＥｔＯＡｃで抽出し、水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物についてシリカゲルでのクロマトグラフィーを行って（３３％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、９−１を得た。
【０２４４】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．１２（ｓ、１Ｈ）、７．８３（ｍ、２Ｈ）、７．７０（ｍ、２Ｈ）、７．５５（ｍ、６Ｈ）、７．４９（ｄ、１Ｈ）、７．２（ｍ、９Ｈ）、７．０２（ｄ、１Ｈ）、４．１２（ｄｑ、１Ｈ）、３．７７（ｄｔ、２Ｈ）、２．８０（ｍ、２Ｈ）、２．６（ｍ、１Ｈ）、２．４３（ｍ、１Ｈ）、２．２２（ｍ、１Ｈ）、２．１２（ｍ、２Ｈ）、１．２７（ｍ、２Ｈ）、０．８２（ｄｄ、３Ｈ）。
【０２４５】
段階Ｂ：２−［３−（５−（３−アミノブト−１−イル）−ピリジン−２−イル）−プロピル］−イソインドール−１，３−ジオン（９−２）
トリチルアミン９−１（６．７５ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）溶液を、飽和するまでＨＣｌで処理した。３０分後、混合物を１Ｎ  ＨＣｌで抽出し（５回）、水溶液を固体Ｋ２ＣＯ３で塩基性とし、ＥｔＯＡｃで抽出した（３回）。有機層を水と次にブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、減圧下に濃縮して、標題化合物９−２を油状物として得た。それをそれ以上精製せずに段階Ｃで用いた。
【０２４６】
質量分析スペクトラム：Ｍ＋Ｈ実測値３３８．８、計算値３３８．２。
【０２４７】
段階Ｃ：３−（５−（３−アミノブト−１−イル）−ピリジン−２−イル）−プロピルアミン（９−３）
フタルイミド９−２（３．０５ｇ、９．０５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）溶液をヒドラジン（２．８４ｍＬ、９０．５ｍｍｏｌ）で処理し、５０℃で１時間加熱した。混合物を冷却し、メチルｔ−ブチルエーテル（１００ｍＬ）を加え、１時間撹拌し、濾過した。濾液を減圧下に濃縮して、所望の生成物９−３を得た。それをそれ以上精製せずに段階Ｄで用いた。
【０２４８】
質量分析スペクトラム：Ｍ＋Ｈ実測値２０８．２、計算値２０８．２。
【０２４９】
段階Ｄ：３−（７−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ［１，８］ナフチリジン−２−イル）−プロピルアミン（９−４）
ジアミン９−３（１．８７ｇ、９．０５ｍｍｏｌ）のキシレン（１００ｍＬ）溶液を窒素ガスで脱気し、ＮａＨ（１．３ｇ、５４．３ｍｍｏｌ）で処理し、１００℃で１６時間加熱した。質量分析スペクトラムでは、所望の生成物が生成したことが示された。混合物を冷却し、ＥｔＯＨを加え、次に水に投入し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水、ブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。残留物のシリカゲルでの精製（２％から５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によって固体を得た。それは、質量分析スペクトラムおよびＮＭＲにより、所望の化合物のＮ−アセテートであることが明らかになった。次に、ＮａＯＨ水溶液／ＴＨＦ／ＭｅＯＨとともに７２時間還流することで、加水分解生成物を得た。ＴＨＦ／ＭｅＯＨを減圧下に除去し、残留物を水とＣＨ２Ｃｌ２の間で分配し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水した。溶媒除去によって、標題化合物９−４を得た。
【０２５０】
質量分析スペクトラム：Ｍ＋Ｈ実測値２０６．２、計算値２０６．２。
【０２５１】
段階Ｅ：３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−（７−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−プロピル］−２，３−ジヒドロ−イミダゾール−１−イル｝−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（９−５）
図式３に記載の手順に従って、アミン９−４およびジメトキシアセタール１−６を標題化合物９−５に変換した。
【０２５２】
質量分析スペクトラム：Ｍ＋Ｈ実測値５０８．１、計算値５０８．３。
【０２５３】
段階Ｆ：３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−（７−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（９−６、９−６Ａおよび９−６Ｂ）
エステル９−５（７００ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）およびＨＯＡｃ（１ｍＬ）溶液を窒素ガスで脱気してから、Ｐｄ（ＯＨ）２／炭素を加え、パールの水素化装置に入れた。混合物を、約０．４８ＭＰａ（７０ｐｓｉ）の水素ガスを用いて１６時間水素化した。濾過後、溶媒を減圧下に除去して、標題化合物９−６をメチルジアステレオマーの１：１混合物として得た。
【０２５４】
質量分析スペクトラム：Ｍ＋Ｈ実測値５１０．２、計算値５１０．３。
【０２５５】
３０：７０ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（０．１％ジエチルアミン含有）で溶離を行うキラルセル（Chiracel）ＡＤカラムを用いた分取ＨＰＬＣによって、純粋なジアステレオマーＡ（９−６Ａ）を先に溶出する成分として得た。
【０２５６】
さらに溶離を続けることで、遅く溶出するジアステレオマーＢ（９−６Ｂ）を得た。
【０２５７】
段階Ｇ：３（Ｓ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−３−｛２−オキソ−３−（７−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−プロピル］−イミダゾリジン−１−イル｝−プロピオン酸（９−７Ａおよび９−７Ｂ）
エステル９−６Ａ（２００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）、ＴＨＦ（２０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）および１Ｎ  ＬｉＯＨ（５０ｍＬ）溶液を６０℃で４８時間加熱した。混合物を濃縮し、逆相ＨＰＬＣ（Ｃ−１８カラム；０．１％ＴＦＡを含む５：９５ＣＨ３ＣＮ：Ｈ２Ｏ；勾配）によって精製して、凍結乾燥後に、標題化合物９−７ＡをＴＦＡ塩として得た。
【０２５８】
高分解能質量分析スペクトラム：実測値４５４．２４４７、Ｃ２４Ｈ３２Ｎ５Ｏ４についてのＭ＋Ｈの計算値は４５４．２４４９である。
【０２５９】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）：δ８．１３（ｄ、１Ｈ）、７．７３（ｄｄ、１Ｈ）、７．５９（ｄ、１Ｈ）、６．８２（ｄ、１Ｈ）、６．６４（ｄ、１Ｈ）、５．４１（ｔ、１Ｈ）、３．９０（ｓ、３Ｈ）、３．７２（ｍ、１Ｈ）、３．４８（ｍ、１Ｈ）、３．３９（ｍ、２Ｈ）、３．２４（ｍ、２Ｈ）、３．１１（ｍ、１Ｈ）、３．０３（ｍ、２Ｈ）、２．８３（ｍ、２Ｈ）、２．６８（ｔ、２Ｈ）、２．０５（ｍ、１Ｈ）、１．８７（ｍ、２Ｈ）、１．６３（ｍ、１Ｈ）、１．３４（ｄ、３Ｈ）。
【０２６０】
上記の手順に従い、エステル９−６Ｂを酸９−７Ｂに変換した。
【０２６１】
高分解能質量分析スペクトラム：実測値４５４．２４４９、Ｃ２４Ｈ３２Ｎ５Ｏ４についてのＭ＋Ｈの計算値は４５４．２４４９である。
【０２６２】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ８．１４（ｄ、１Ｈ）、７．７４（ｄｄ、１Ｈ）、７．５９（ｄ、１Ｈ）、６．８３（ｄ、１Ｈ）、６．６４（ｄ、１Ｈ）、５．４１（ｔ、１Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、３．７４（ｍ、１Ｈ）、３．４９（ｍ、１Ｈ）、３．３９（ｍ、２Ｈ）、３．２４（ｍ、２Ｈ）、３．１１（ｍ、１Ｈ）、３．０４（ｍ、２Ｈ）、２．８４（ｍ、２Ｈ）、２．６７（ｔ、２Ｈ）、２．０５（ｍ、１Ｈ）、１．８７（ｍ、２Ｈ）、１．６３（ｍ、１Ｈ）、１．３４（ｄ、３Ｈ）。
【０２６３】
構造を以下に示す下記の化合物も、合成有機化学の当業者には公知かつ理解される合成法またはそれの変法を用いて、上記で説明の方法および図式１〜８に示した方法に従って製造することができる。
【０２６４】
【化１８】
0004787447.tif 000028
0004787447.tif 000029
0004787447.tif 000030
【０２６５】
【化１９】
0004787447.tif 000031
0004787447.tif 000032
0004787447.tif 000033
0004787447.tif 000034
【０２６６】
Ｎ−（４−ヨード−フェニルスルホニルアミノ）−Ｌ−アスパラギン（Ａ−２）
酸Ａ−１（４．３９ｇ、３３．２ｍｍｏｌ）、ＮａＯＨ（１．４９ｇ、３７．２ｍｍｏｌ）、ジオキサン（３０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（３０ｍＬ）の０℃溶液を攪拌しながら、それに塩化ピプシル（１０．３４ｇ、３４．２ｍｍｏｌ）を加えた。約５分後、ＮａＯＨ（１．４９、３７．２ｍｍｏｌ）をＨ２Ｏ  １５ｍＬに溶かしたものを加えてから、冷却浴を外した。２．０時間後、反応混合物を濃縮した。残留物をＨ２Ｏ（３００ｍＬ）に溶かし、ＥｔＯＡｃで洗浄した。水層を冷却して０℃とし、濃ＨＣｌで酸性とした。固体を回収し、Ｅｔ２Ｏで洗浄して、Ａ−２を白色固体として得た。
【０２６７】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ７．８６（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．４８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）３．７０（ｍ、１Ｈ）、２．３９（ｍ、２Ｈ）。
【０２６８】
２（Ｓ）−（４−ヨード−フェニルスルホニルアミノ）−β−アラニン（Ａ−３）
ＮａＯＨ（７．１４ｇ、１８１．８ｍｍｏｌ）およびＨ２Ｏ（４０ｍＬ）の攪拌溶液を０℃とし、それにＢｒ２（１．３０ｍＬ、２４．９ｍｍｏｌ）を１０分間かけて滴下した。約５分後、酸Ａ−２（９．９ｇ、２４．９ｍｍｏｌ）、ＮａＯＨ（２．００ｇ、４９．８ｍｍｏｌ）およびＨ２Ｏ（３５ｍＬ）を合わせ、冷却して０℃とし、それを上記反応液に１回で加えた。０℃で２０分間攪拌後、反応液を加熱して９０℃とし、３０分間経過させ、再度冷却して０℃とした。濃ＨＣｌを滴下することでｐＨを約７に調節した。固体を回収し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、減圧乾燥して、酸Ａ−３を白色固体として得た。
【０２６９】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、Ｄ２Ｏ）δ８．０２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．６３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、４．３６（ｍ、１Ｈ）、３．５１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝５Ｈｚ、１３Ｈｚ）３．２１（ｍ、１Ｈ）。
【０２７０】
２（Ｓ）−（４−ヨード−フェニルスルホニルアミノ）−β−アラニンエチル塩酸塩（Ａ−４）
酸Ａ−３（４．０ｇ、１０．８１ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）懸濁液に、０℃で１０分間ＨＣｌガスを急速に吹き込んだ。冷却浴を外し、反応液を加熱して６０℃とした。１８時間後、反応液を濃縮して、エステルＡ−４を白色固体として得た。
【０２７１】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ７．９８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．６３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、４．２５（ｑ、１Ｈ、Ｊ＝５Ｈｚ）、３．９２（ｍ、２Ｈ）、３．３３（ｍ、１Ｈ）、３．０６（ｍ、１Ｈ）、１．０１（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）。
【０２７２】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］安息香酸エチル（Ａ−５ａ）
エステルＡ−５（７００ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）（製造については、米国特許第５７４１７９６号（１９９８年４月２１日）の図式２９（中間体２９−３）参照）、１０％Ｐｄ／Ｃ（３５０ｍｇ）およびＥｔＯＨの混合物を１気圧Ｈ２下に攪拌した。２０時間後、反応液をセライト層濾過し、濃縮して、エステルＡ−５ａを褐色油状物として得た。
【０２７３】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．２３（シリカ、４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンｓ）。
【０２７４】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．９５（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．２６（ｍ、３Ｈ）、６．４３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、６．３５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、４．３７（ｍ、４Ｈ）、３．０５（ｍ、２Ｈ）、２．９１（ｍ、２Ｈ）、１．３９（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）。
【０２７５】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］安息香酸塩酸塩（Ａ−６）
エステルＡ−５ａ（６２５ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）の６Ｎ  ＨＣｌ（１２ｍＬ）懸濁液を加熱して６０℃とした。約２０時間後、反応液を濃縮して、酸Ａ−６を黄褐色固体として得た。
【０２７６】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ７．９６（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．８０（ｍ、１Ｈ）、７．３３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、６．８４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９Ｈｚ）、６．６９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、３．０９（ｍ、４Ｈ）。
【０２７７】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］ベンゾイル−２（Ｓ）−（４−ヨード−フェニルスルホニルアミノ）−β−アラニンエチル（Ａ−７）
酸１５−６（４００ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）、アミンＡ−４（６８６ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（３５８ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（２５２ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（６３２μＬ、５．７２ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１０ｍＬ）の溶液を、約２０時間攪拌した。反応液をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＡｃから５％イソプロパノール／ＥｔＯＡｃ）によって、アミドＡ−７を白色固体として得た。
【０２７８】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４（シリカ、１０％イソプロパノール／ＥｔＯＡｃ）。
【０２７９】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ７．７９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝９Ｈｚ）７．６１（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．５２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝９Ｈｚ）、７．２９（ｍ、１Ｈ）、７．２７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、４．２０（ｍ、１Ｈ）、３．９５（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、３．６６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝６Ｈｚ、１４Ｈｚ）、３．４９（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ、１３Ｈｚ）、３．０１（ｍ、２Ｈ）、２．８６（ｍ、２Ｈ）、１．０８（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）。
【０２８０】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］ベンゾイル−２（Ｓ）−（４−ヨードフェニル−スルホニルアミノ）−β−アラニン（Ａ−８）
エステルＡ−７（２００ｍｇ、０．３２１３ｍｍｏｌ）および６Ｎ ＨＣｌ（３０ｍＬ）の溶液を加熱して６０℃とした。約２０時間後、反応混合物を濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカ、２０：２０：１：１ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）によって、酸Ａ−８を白色固体として得た。
【０２８１】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４５（シリカ、２０：２０：１：１ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）。
【０２８２】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４０（ｍ、１Ｈ）、８．１４（Ｂｓ、１Ｈ）、７．８１（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．６２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．４８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．２７（ｍ、３Ｈ）、６．３４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、６．２５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、５．８５（ｂｓ、２Ｈ）、３．８９（ｂｓ、１Ｈ）、３．３５（ｍ、２Ｈ）、２．９７（ｍ、２Ｈ）、２．７９（ｍ、２Ｈ）。
【０２８３】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル）ベンゾイル−２（Ｓ）−（４−トリメチルスタニル−フェニルスルホニルアミノ−β−アラニン（Ａ−９）
ヨウ化物Ａ−８（７０ｍｇ、０．１１７８ｍｍｏｌ）、［（ＣＨ３）３Ｓｎ］２（４９μＬ、０．２３５６ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（５ｍｇ）およびジオキサン（７ｍＬ）の溶液を加熱して９０℃とした。２時間後、反応液を濃縮し、分取ＨＰＬＣ（デルタパック（Delta-Pak）Ｃ１８  １５μＭ １００Å、４０×１００ｍｍ；９５：５から次に５：９５Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ）精製を行って、トリフルオロ酢酸塩を得た。その塩をＨ２Ｏ（１０ｍＬ）に懸濁させ、ＮＨ４ＯＨ（５滴）で処理し、凍結乾燥して、アミドＡ−９を白色固体として得た。
【０２８４】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４０（ｍ、１Ｈ）、８．１８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．６７（ｍ、５Ｈ）、７．５６（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．２９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、６．９５〜７．５２（ｍ、２Ｈ）、６．４５（ｂｓ、２Ｈ）、４．００（ｍ、１Ｈ）、３．５０（ｍ、１Ｈ）、３．３３（ｍ、１Ｈ）、２．９７（ｍ、２Ｈ）、２．８６（ｍ、２Ｈ）。
【０２８５】
４−［２−（２−アミノピリジン−６−イル）エチル］ベンゾイル−２（Ｓ）−４−１２５ヨード−フェニルスルホニルアミノ−β−アラニン（Ａ−１０）
５ｍＣｉのＮａ１２５Ｉ（Amersham, IMS30）の輸送用瓶にヨウ素玉（Pierce）を入れ、室温で５分間攪拌した。Ａ−９  ０．１ｍｇの１０％Ｈ２ＳＯ４／ＭｅＯＨ（０．０５ｍＬ）溶液を調製し、直ちにＮａ１２５Ｉ／ヨウ素玉瓶に加えた。室温で３分間攪拌後、ＮＨ４ＯＨ約０．０４〜０．０５ｍＬを加えて、反応混合物をｐＨ６〜７とした。全反応混合物をＨＰＬＣに注入して精製した［Ｖｙｄａｃペプチド−蛋白Ｃ−１８カラム、４．６×２５０ｍｍ、３０分間かけての１０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）：Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）から９０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）：Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）への直線勾配、１ｍＬ／分］。この条件下でのＡ−１０の保持時間は１７分である。放射能の大半を含む分画を集め、凍結乾燥し、エタノールで希釈して、約１ｍＣｉのＡ−１０を得た。それをＡ−８の標品とともにＨＰＬＣ分析で同時に溶離させた。
【０２８６】
【化２０】
0004787447.tif 000035
【０２８７】
２（Ｓ）−（４−ヨード−ベンゼンスルホニルアミノ）−３−｛４−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エチル］−ベンゾイルアミノ｝−プロピオン酸エチルエステル（Ｂ−２）
Ｂ−１（０．２３ｇ、０．７２ｍｍｏｌ；製造については、米国特許５７４１７９６号参照）、Ａ−４（０．３４３ｇ、０．７９２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（０．１７９ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（０．１２６ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（０．３１６ｍＬ、２．８６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３ｍＬ）およびＤＭＦ（３ｍＬ）中混合物を室温で２時間撹拌し、次に酢酸エチルで希釈し、水、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。残留物についてシリカゲルでのクロマトグラフィー（７０：２５：５ＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ）を行って、Ｂ−２を白色固体として得た。
【０２８８】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．２２（シリカ、７０：２５：５ＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ）。
【０２８９】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．６３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．５４（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．２７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．０４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、６．６０（ｍ、１Ｈ）、６．２９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、４．８３（ｂｒｓ、１Ｈ）、４．０９（ｍ、３Ｈ）、３．８４（ｍ、１Ｈ）、３．６８（ｍ、１Ｈ）、３．４２（ｍ、２Ｈ）、３．０１（ｍ、４Ｈ）、２．８６（ｍ、４Ｈ）、２．６９（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６Ｈｚ）、１．８８（ｍ、２Ｈ）。
【０２９０】
２（Ｓ）−（４−ヨード−ベンゼンスルホニルアミノ）−３−｛４−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エチル］−ベンゾイルアミノ｝−プロピオン酸（Ｂ−３）
Ｂ−２（０．３８ｇ、０．５７３ｍｍｏｌ）および６Ｎ  ＨＣｌ（５０ｍＬ）の混合物を６０℃で１４時間撹拌した。室温まで冷却した後、混合物を濃縮し、残留物についてシリカゲルでのクロマトグラフィー（２５：１０：１：１から１５：１０：１：１ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）を行って、Ｂ−３を白色固体として得た。
【０２９１】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４３（シリカ、１０：１０：１：１ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）。
【０２９２】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．４２（ｍ、１Ｈ）、７．７９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．６３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．４４（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．２７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．１０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、６．５８（ｂｒｓ、１Ｈ）、６．３２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、３．９６（ｍ、１Ｈ）、３．５１（ｍ、１Ｈ）、３．３０（ｍ、５Ｈ）、２．９６（ｍ、２Ｈ）、２．７８（ｍ、２Ｈ）、２．６２（ｍ、２Ｈ）、１．７７（ｍ、２Ｈ）。
【０２９３】
ＨＲＭＳ：Ｃ２６Ｈ２７ＩＮ４Ｏ５Ｓ、予測値６３５．０８１８、実測値６３５．０８３１。
【０２９４】
３−｛４−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エチル］−ベンゾイルアミノ｝−２（Ｓ）−（４−トリメチルスタンニル−ベンゼンスルホニルアミノ）−プロピオン酸（Ｂ−４）
Ｂ−３（０．１０ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、ヘキサメチルジスタンナン（０．０６５ｍＬ、０．３２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４およびジオキサン（１０ｍＬ）の混合物を９０℃で１時間撹拌した。室温まで冷却した後、混合物を濃縮し、残留物についてシリカゲルでのクロマトグラフィーを行って（５０：１０：１：１から２５：１０：１：１ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）を行って、Ｂ−４を白色固体として得た。
【０２９５】
ＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４８（シリカ、１５：１０：１：１ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ＮＨ４ＯＨ／Ｈ２Ｏ）。
【０２９６】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ８．３８（ｍ、１Ｈ）、８．１４（ｍ、１Ｈ）、７．６３（ｍ、４Ｈ）、７．２８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８Ｈｚ）、７．０８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、６．５０（ｂｒｓ、１Ｈ）、６．２８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７Ｈｚ）、３．９６（ｍ、１Ｈ）、３．４８（ｍ、１Ｈ）、３．３１（ｍ、５Ｈ）、２．９６（ｍ、２Ｈ）、２．７８（ｍ、２Ｈ）、２．６２（ｍ、２Ｈ）、１．７７（ｍ、２Ｈ）、０．２８（ｓ、９Ｈ）。
【０２９７】
高分解能質量分析スペクトラム：Ｃ２９Ｈ３６Ｎ４Ｏ５ＳＳｎ、予測値６６５．１５３３（１１２Ｓｎ）および６７３．１５０７（１２０Ｓｎ）、実測値６６５．１５１０および６７３．１５０５。
【０２９８】
２（Ｓ）−（４−１２５ヨード−ベンゼンスルホニルアミノ）−３−｛４−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，８］ナフチリジン−２−イル）−エチル］−ベンゾイルアミノ｝−プロピオン酸（Ｂ−５）
Ｎａ１２５Ｉ（１０ｍＣｉ、Amersham, IMS300）の輸送用瓶に、撹拌子、メタノール（０．０５ｍＬ）およびヨウ素玉（Pierce）を入れ、室温で５分間攪拌した。Ｂ−４（約０．１ｍｇ）のメタノール（０．０４ｍＬ）溶液を調製し、一部（０．０２ｍＬ）をＨ２ＳＯ４（０．００５ｍＬ）のメタノール（０．０２５ｍＬ）中混合液に加え、その溶液を直ちにＮａ１２５Ｉ／ヨウ素玉瓶に加えた。室温で２分間攪拌後、ＮＨ４ＯＨ（０．０４〜０．０５ｍＬ）で反応停止し、全反応混合物をＨＰＬＣに注入して精製した［Ｖｙｄａｃペプチド−蛋白Ｃ−１８カラム、４．６×２５０ｍｍ、２０分間かけての１０％アセトニトリル：Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）から９０％アセトニトリル：Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）への直線勾配、１ｍＬ／分］。この条件下でのＢ−５の保持時間は１６分である。放射能の大半を含む分画を集め、凍結乾燥し、エタノールで希釈して、約１ｍＣｉのＢ−５を得た。それをＢ−３の標品とともにＨＰＬＣ分析で同時に溶離させた。
【０２９９】
装置：分析および分取ＨＰＬＣは、レオダイン（Rheodyne）７１２５インジェクタを搭載した０．１ｍＬヘッドを有するウォーターズ（Waters）の装置（600E Powerline Multi Solvent Delivery System）およびギルソン（Gilson）のＦＣ２０３微量フラクションコレクタを搭載したウォーターズの９９０フォトダイオードアレイ検出器を用いて行った。分析および分取ＨＰＬＣには、バイダック（Vydac）ペプチド−蛋白Ｃ−１８カラム（４．６×２５０ｍｍ）を、Ｃ−１８ブラウンリー（Brownlee）モジュール保護カラムとともに使用した。ＨＰＬＣ分析に使用したアセトニトリルは、フィッシャーオプティマ（Fisher Optima）用であった。使用したＨＰＬＣ放射能検出器は、ベックマン（Beckman）１７０放射性同位元素検出器であった。分析および分取ＨＰＬＣには、バイダックＣ−１８蛋白およびペプチドカラム（３．９×２５０ｍｍ）を使用した。放射能溶液は、スピードバック（Speedvac）真空遠心機を用いて濃縮した。ヒューレットパッカード（Hewlett Packard）８４５２Ａ型ＵＶ／Ｖｉｓダイオードアレイ分光光度計を用いて、較正曲線および化学濃度を測定した。サンプルの放射能は、パッカード（Packard）Ａ５５３０ガンマカウンタで測定した。
【０３００】
本発明の化合物のαｖβ３およびαｖβ５結合ならびに骨吸収阻害活性の測定に用いた試験方法について以下に記載する。
【０３０１】
骨吸収−孔（ＰＩＴ）アッセイ
破骨細胞が骨吸収を行っている時は、その細胞が作用している骨の表面に孔を形成し得る。従って、化合物が破骨細胞を阻害する能力を調べる場合、阻害化合物が存在している場合での破骨細胞の上記吸収孔形成能力を測定するのが有用である。
【０３０２】
ウシ大腿骨幹の６ｍｍ円柱からの厚さ２００μｍの連続断面片を、低速ダイヤモンドノコ（Isomet, Beuler, Ltd., Lake Bluff, II）によって切り取る。骨切片を蓄積し、１０％エタノール溶液に入れ、用時まで冷蔵する。
【０３０３】
実験に先だって、ウシ骨切片をＨ２Ｏ中で各２０分間、２回超音波処理する。清浄となった切片を９６ウェルプレートに入れて、２列の対照と各薬剤用量について１列とを使えるようにする。各列が３連または４連の培養を示す。９６ウェルプレートに入れた骨切片をＵＶ照射によって滅菌する。破骨細胞とのインキュベーションに先だって、５％ウシ胎仔血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むｐＨ６．９のαＭＥＭ（０．１ｍＬ）を加えることで、骨切片を水和させる。
【０３０４】
７〜１４日齢ウサギ（New Zealand White Hare）からの長骨を切り取り、軟組織を清浄化し、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳを含むαＭＥＭに入れる。細片が＜１ｍｍとなるまで鋏を用いて骨を刻み、容量２５ｍＬで５０ｍＬ管に移し入れる。管を手で６０回ゆっくり振盪し、１分間組織を沈降させ、上清を除去する。追加の培地２５ｍＬを組織に加え、再度振盪する。第２の上清を第１の上清と合わせる。赤血球以外の細胞数をカウントする（代表的には細胞約２×１０７個／ｍＬ）。５％ウシ胎仔血清、１０ｎＭ  １，２５（ＯＨ）２Ｄ３およびペニシリン−ストレプトマイシンを含むαＭＥＭ中、５×１０６／ｍＬからなる細胞懸濁液を調製する。ウシ骨切片（２００ｍｍ×６ｍｍ）に２００ｍＬずつを加え、加湿５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で２時間インキュベートする。培地を微量ピペッタで丁寧に除去し、被験化合物を含む新鮮な培地を加える。培養液を４８時間インキュベートし、培地についてのクロスラップス（Crosslaps；Herlev, Denmark）によってｃ−テロペプチド（Ｉ型コラーゲンのａ１鎖の断片）のアッセイを行う。
【０３０５】
ウシ骨切片を２０〜２４時間破骨細胞に曝露し、染色処理する。各骨切片から組織培地を除去する。各ウェルをＨ２Ｏ２００ｍＬで洗浄し、骨切片を２．５％グルタルアルデヒド、０．１Ｍカコジル酸（ｐＨ７．４）中で２０分間固定する。固定後、０．２５Ｍ  ＮＨ４ＯＨ存在下での２分間の超音波処理と次にＨ２Ｏ中での１５分間の超音波処理２回によって細胞残滓を除去する。骨切片を直ちに、濾過した１％トルイジンブルーおよび１％ホウ砂によって６〜８分間染色する。
【０３０６】
骨切片を乾燥した後、吸収孔を試験切片および対照切片でカウントする。偏光ニコンＩＧＳフィルターキューブを用いるマイクロフォト（Microphot）Ｆｘ（ニコン）蛍光顕微鏡で見る。試験用量結果を対照と比較し、各被験化合物について得られるＩＣ５０値を求める。
【０３０７】
このアッセイからのデータを哺乳動物（ヒトを含む）疾患状態に外挿することが適切であることは、サトウらの報告に記載の内容によって裏付けられている（Sato, M. et al., Journal of Bone and Mineral Research, Vol.5, No.1, 1990）；この報告の内容は全て、引用によって本明細書に含まれるものとする）。その論文では、ある種のビスホスホネート類を臨床的に用いて、それがページェット病、悪性高カルシウム血症、骨代謝によって生じる溶骨性病変、固定化もしくは性ホルモン欠乏による骨損失に有効であるように思われることが記載されている。次に、上記の吸収孔アッセイでそれらと同じビスホスホネートについて試験を行って、それらの公知の有用性とアッセイにおける陽性の成績との間の相関を確認する。
【０３０８】
ＥＩＢアッセイ
デュオンらの報告（Duong et al., J.Bone Miner.Res., 8:S 378 (1993)）には、ヒトインテグリンαｖβ３を発現する系について記載されている。エキスタチン（echistatin；欧州特許公開３８２４５１号）などのインテグリンすなわち含ＲＧＤ分子に対する抗体は骨吸収を効果的に遮断し得ることから、インテグリンが骨基質への破骨細胞の付着を刺激することが示唆されている。
【０３０９】
反応混合物：
１．ＴＢＳ緩衝液１７５μＬ（５０ｍＭＴｒｉｓ・ＨＣｌ  ｐＨ７．２、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％ＢＳＡ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２）
２．細胞抽出物２５ｍＬ（１００ｍＭオクチルグルコシド緩衝液で希釈して、２０００ｃｐｍ／２５μＬとする）
３．１２５Ｉ−エキスタチン（２５μＬ／５００００ｃｐｍ）（ＥＰ３８２４５１号参照）
４．緩衝液（全結合）または未標識エキスタチン（非特異的結合）２５μＬ。
【０３１０】
次に、反応混合物を室温で１時間インキュベーションした。未結合および結合αｖβ３を、濾過（Skatron Cell Harvester使用）によって分離した。次に、フィルター（予め１．５％ポリエチレンイミンで１０分間濡らしたもの）を洗浄緩衝液（５０ｍＭトリスＨＣｌ、１ｍＭ ＣａＣｌ２／ＭｇＣｌ２、ｐＨ７．２）で洗浄した。そして、γ−カウンタでフィルターのカウンティングを行った。
【０３１１】
ＳＰＡＶ３アッセイ
材料：
１．小麦胚凝集素シンチレーション近接ビーズ（Scintillation Proximity Beads（ＳＰＡ）；Amersham）
２．オクチルグルコピラノシド(Calbiochem）
３．ＨＥＰＥＳ（Calbiochem）
４．ＮａＣｌ（Fisher）
５．ＣａＣｌ２（Fisher）
６．ＭｇＣｌ２（SIGMA）
７．フェニルメチルスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）（SIGMA）
８．オプティプレート（Optiplate；PACKARD）
９．化合物Ａ−１０（比放射能５００〜１０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）
１０．被験化合物
１１．精製インテグリン受容体：αｖβ３は、ピテラの方法（Pytela, Methods in Enzymology, 144:475, 1987）に従ってαｖβ３（Duong et al., J.Bone Min. Res., 8:S378, 1993）を過剰発現する２９３個の細胞から精製した。
１２．結合緩衝液：５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．８、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋、０．５ｍＭ  ＰＭＳＦ
１３．オクチルグルコシドの５０ｍＭ結合緩衝液溶液：５０−ＯＧ緩衝液。
【０３１２】
手順：
１．ＳＰＡビーズの前処理
凍結乾燥ＳＰＡビーズ５００ｍｇを最初に５０−ＯＧ緩衝液２００ｍＬで４回、結合緩衝液１００ｍＬで１回洗浄し、結合緩衝液１２．５ｍＬに再度懸濁させた。
２．ＳＰＡビーズと受容体との混合物の調製
各アッセイ管中で、前処理したビーズ２．５μＬ（４０ｍｇ／ｍＬ）を、結合緩衝液９７．５μＬおよび５０−ＯＧ緩衝液２０ｍＬに懸濁させた。精製受容体５ｍＬ（約３０ｎｇ／μＬ）をビーズの懸濁液に加え、室温で３０分間攪拌した。混合物を４℃でベックマンの遠心管（Beckman GPR Benchtop遠心管）中２５００ｒｐｍにて１０分間遠心した。得られたペレットを結合緩衝液５０μＬおよび５０−ＯＧ緩衝液２５μＬに再懸濁させた。
３．反応
以下のものを、相当するウェル中のオプティプレートにこの順序で加えた。
（ｉ）受容体／ビーズ混合物（７５μＬ）
（ｉｉ）以下のそれぞれを２５μＬ：被験化合物、全結合用の結合緩衝液、または非特異的結合用のＡ−８（最終濃度１μＭ）
（ｉｉｉ）結合緩衝液中のＡ−１０（２５μＬ、最終濃度４０ｐＭ）
（ｉｖ）結合緩衝液（１２５μＬ）
（ｖ）各プレートをプレートシーラー（PACKARD）で密封し、４℃で振盪しながら終夜インキュベートした。
４．プレートのカウンティングを行った（PACKARD TOPCOUNTを使用）。
５．阻害％を以下のように計算した。
Ａ＝総カウント
Ｂ＝非特異的カウント
Ｃ＝サンプルカウント
阻害％＝［｛（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｂ）｝／（Ａ−Ｂ）］／（Ａ−Ｂ）×１００。
【０３１３】
ＯＣ型アッセイ
マウス頭蓋冠由来の骨芽細胞様細胞（１．８細胞）を、ＣＯＲＮＩＮＧ２４ウェル組織培養プレートで、リボヌクレオシドおよびデオキシリボヌクレオシド、１０％ウシ胎仔血清およびペニシリン−ストレプトマイシンを含むαＭＥＭ培地に入れた。細胞は、午前中に４００００個／ウェルで接種した。午後に、以下の方法に従って６週齢オスＢａｌｂ／Ｃマウスから骨髄細胞を得た。
【０３１４】
マウスを屠殺し、脛骨を摘出し、上記の培地に入れた。末端を切り落とし、骨髄を骨小腔から試験管中に、２７．５ゲージ針を有する１ｍＬ注射器を用いて流し出した。ピペットで吸引・吐き出しを行って、骨髄を懸濁させた。懸濁液を＞１００ｍｍナイロン細胞濾過器に通した。得られた懸濁液を３５０×ｇで７分間遠心した。ペレットを再懸濁させ、サンプルを２％酢酸で希釈して、赤血球を溶解させた。残った細胞を血球計数器でカウントした。細胞をペレット状とし、１×１０６個／ｍＬで再懸濁させた。１．８細胞の各ウェルに５０μＬを加えて細胞５００００個／ウェルとし、各ウェルに１，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３（Ｄ３）を加えて、最終濃度を１０ｎＭとした。培養液を、加湿５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃でインキュベートした。４８時間後、培地を交換した。骨髄を加えてから７２時間後に、４連ウェルに、Ｄ３を含む新鮮な培地とともに被験化合物を加えた。４８時間後に再度、Ｄ３を含む新鮮な培地とともに化合物を加えた。さらに４８時間後、培地を除去し、細胞を室温で１０分間、１０％ホルムアルデヒドのリン酸緩衝生理食塩水溶液で固定し、次にエタノール：アセトン（１：１）で１〜２分間処理し、風乾した。以下のようにして、細胞を酒石酸耐性酸ホスファターゼについて染色した。
【０３１５】
３０ｍＭ酒石酸ナトリウム、０．３ｍｇ／ｍＬＦａｓｔ Ｒｅｄ Ｖｉｏｌｅｔ ＬＢ塩および０．１ｍｇ／ｍＬナフトールＡＳ−ＭＸホスフェートを含む５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）で、室温にて１０〜１５分間細胞を染色した。染色後、プレートを脱イオン水で十分に洗浄し、風乾した。各ウェルについて多核の染色陽性細胞の数をカウントした。
【０３１６】
ＳＰＡＶ５アッセイ
材料：
１．小麦胚凝集素シンチレーション近接ビーズ（Scintillation Proximity Beads（ＳＰＡ）；Amersham）
２．オクチルグルコピラノシドおよびホルボ（Phorbo）−１２−ミリステート−１３−アセテート（ＰＭＡ）（Calbiochem）
３．Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ＮａＣｌおよびＣａＣｌ２（Fisher）
４．最小必須培地（ＭＥＭ）（Gibco/BRL）
５．ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Hyclone）
６．ＭｇＣｌ２、ＭｎＣｌ２およびフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）（SIGMA）
７．プロテアーゼ阻害薬カクテル錠剤（Boehringer Mannheim）
８．オプティプレート−９６ウェル（PACKARD）
９．Ｂ−５を放射能標識リガンド（比放射能５００〜１０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）として用い、Ｂ−３（２．５μＭ）を用いて１００％阻害を得た。
１０．被験化合物
１１．αｖβ５インテグリン類を過剰発現するＨＥＫ２９３細胞（Simon et al., J. Biol. Chem., 272, 29380-29389, 1997）を、１５０ｍｍシャーレ中にて１０％ＦＢＳ／ＭＥＭ培地（Gibco/BRL）で培養する。
１２．溶解緩衝液：１００ｍＭオクチルグルコピラノシド、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．５ｍＭ  ＰＭＳＦおよびプロテアーゼ阻害薬（錠剤１個／緩衝液５０ｍＬ）
１３．結合緩衝液：５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１ｍＭ  ＭｎＯ２
１４．オクチルグルコピラノシドの５０ｍＭ結合緩衝液溶液：５０−ＯＧ緩衝液。
【０３１７】
手順：
１．αｖβ５−細胞溶解物：
αｖβ５インテグリンを発現するＨＥＫ２９３細胞を集密まで培養した。次に細胞を、０．５％ＦＢＳを含む培地にて終夜で飢餓状態とし、次に１００ｎＭ  ＰＭＡで２０分間処理した。細胞を冷リン酸緩衝生理食塩水（４℃）で２回洗浄し、氷上で溶解緩衝液中にて３０分間溶解させた。溶解物をベックマン（Beckman）ＪＡ−２０を用いて２００００×ｇにて透明とした。透明化溶解物の蛋白濃度をマイクロＢＣＡキット（Pierce）を用いて測定し、８０℃で少量ずつ保存した。
２．ＳＰＡビーズの前処理
凍結乾燥ＳＰＡビーズ５００ｍｇを最初に５０−ＯＧ緩衝液２００ｍＬで４回、結合緩衝液１００ｍＬで１回洗浄し、結合緩衝液１２．５ｍＬに再度懸濁させた。
３．ＳＰＡＶ５結合反応の準備
各アッセイウェルに、オプティプレート平板に下記のものをこの順序で加えた。
（ｉ）ウェル当たりの最終容量を１２５μＬとする結合緩衝液
（ｉｉ）５０−ＯＧ緩衝液２２μＬで希釈した前処理ビーズ３μＬ（１２０μｇ／ウェル）
（ｉｉｉ）αｖβ５−細胞溶解物蛋白１５μｇ
（ｉｖ）５００００ｃｐｍでのＢ−５
（ｖ）段階的濃度の被験化合物２５μＬ
（ｖｉ）各プレートをプレートシーラー（PACKARD）で密封し、４℃で振盪しながら終夜インキュベートした。
４．微小プレートシンチレーションカウンター（PACKARD TOPCOUNT）を用いて、プレートのカウンティングを行った。
５．阻害％を以下のように計算した。
Ａ＝総カウント（Ｂ−５への受容体の結合）
Ｂ＝非特異的カウント（２．５μＭ冷リガンド存在下でのＢ−５への受容体の結合）
Ｃ＝被験化合物への受容体結合からのカウント
阻害％＝［｛（Ａ−Ｂ）−（Ｃ−Ｂ）｝／（Ａ−Ｂ）］×１００。
被験薬のＩＣ５０を、５０％阻害として計算した。
【０３１８】
本発明の代表的化合物について調べたところ、ヒトαｖβ３インテグリンに結合することが認められた。これらの化合物は、ＳＰＡＶ３アッセイで５０ｎＭ未満のＩＣ５０値を有することが認められた。
【０３１９】
本発明の代表的化合物について、ＳＰＡＶ５アッセイでの試験も行って、αｖβ５受容体に対する親和性も確認した。これらの化合物は、１００ｎＭ未満のＩＣ５０値を有していた。
【０３２０】
以上、本発明のある種の好ましい実施態様を参照しながら、本発明について説明・解説したが、当業者であれば、本発明の精神および範囲から逸脱しない限りにおいて、各種の変更、修正および置き換えを行うことができることは明らかである。例えば、吸収によって生じる骨障害の重度あるいは上記の本発明の化合物における他の適応症についての治療対象哺乳動物の応答性における変動の結果として、本明細書に記載のような好ましい用量以外の有効な用量が用いられる場合がある。同様に、認められる具体的な薬理的応答は、選択される特定の活性化合物または医薬担体の有無、ならびに用いられる製剤および投与形態の種類によって変動し、それらによって決まり得るものであり、結果においてそのように予想される変動もしくは相違は、本発明の対象および実務に応じて想到されるものである。従って、本発明は、特許請求の範囲のみによって限定されるものであって、そのような特許請求の範囲は妥当な限り広く解釈すべきものである。