(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
振盪法またはスパーテルによる解砕により粉末化したフィブリノゲンを含む溶解性に優れ短時間のうちに溶解するフィブリノゲン製剤であって、下記（ａ）〜（ｃ）のいずれかの要件を 満たすことを特徴とするフィブリノゲン製剤：
（ａ）冷所から３７℃の温度域にて溶解した場合、１％以上のフィブリノゲン濃度で１０分以内に完全に溶解すること、
（ｂ）溶解直後の性状が肉眼的に沈殿を認めない透明もしくはわずかに混濁した溶液であり、溶解後に室温で２時間放置したときにゼラチン化または沈殿物を認めないこと、または
（ｃ）総タンパク質量の８０％以上が凝固性タンパク質であること。
【請求項２】
組織接着剤として用いられる請求項１に記載のフィブリノゲン製剤。
【請求項３】
全量の９０重量％以上が１７００μｍ以下の粒径である請求項１または２に記載のフィブリノゲン製剤。
【請求項４】
フィブリノゲン粉末を充填した容器が陰圧化処理を施されている請求項１〜３のいずれかに記載のフィブリノゲン製剤。
【請求項５】
陰圧化処理により容器内の圧力が少なくとも３００Ｔｏｒｒ以下である請求項４に記載のフィブリノゲン製剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、医療用医薬品の分野に関し、詳細には組織接着剤の構成成分であるフィブリノゲン及びフィブリノゲン製剤に関し、さらに詳細には溶解性に優れたフィブリノゲン製剤及びそれを用いる組織接着剤に関する。
【０００２】
【従来技術及び発明が解決しようとする問題点】
臨床医療用の組織接着剤には、タンパク質成分からなる天然型接着剤のフィブリン接着剤及びゼラチン系糊などがあり、広く使用されてきている（Biomedical Perspectives, Vol.6, No.1, pp9-72, 1997年「特集・生体接着剤」参照）。なかでも最もよく用いられているのがフィブリン接着剤である。フィブリン接着剤はフィブリンの膠着性を利用したものであり、生体内でゲル化して接着作用を発揮する。フィブリン接着剤の用途は、止血、創傷部位の閉鎖、神経、腱、血管や組織などの接着または縫合補強、肺におけるエアリークの閉鎖など広範にわたっている。また、フィブリノゲン製剤は、例えば敗血症における汎発性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）のような血液凝固因子の消費状態の改善や先天性及び後天性のフィブリノゲン欠乏症における補充療法の目的で静脈投与製剤として臨床的に使用されることもあり、血液中のフィブリノゲン濃度を高めることによって重篤な出血を阻止する。
【０００３】
フィブリノゲンを含有する組織接着剤の製造方法は知られている（特公昭６３−４０５４６号参照）。該公報に記載された方法では、フィブリノゲンは血液凝固第XIII因子（第XIII因子）や場合によってはアルブミンなどとともに凍結乾燥され、凍結乾燥されたフィブリノゲンもしくはフィブリノゲンを高い割合で含有する血漿タンパク質混合物の凍結乾燥物は、使用に際して通常室温などに温められた後に溶解液で再構成される。凍結乾燥物は、室温などに高められた温度において徐々に再溶解する。
【０００４】
現在、臨床上使用されているフィブリノゲン製剤及びこれを用いる組織接着剤は、一般に凍結乾燥品である。すなわち、フィブリノゲン溶液をバイアルに充填後、凍結乾燥し、必要に応じてウィルス不活化工程として加熱処理が施されたものである。このようにして調製されたフィブリノゲン製剤は、充填時の溶液の嵩をそのまま残した塊状(ケーキ状)の形態をしている。また、実際に臨床場面で使用するに際しては、この塊状(ケーキ状)の形態のフィブリノゲン製剤を溶解する必要があるが、そのための溶解液として、注射用蒸留水、注射用生理食塩水、緩衝液などや所定のフィブリン接着剤調製用の溶解液などが用いられている。
【０００５】
このように、フィブリノゲン製剤を実際にフィブリン接着剤として使用するには、まず溶解液で溶解する必要があるが、さらにフィブリン接着剤として十分な接着作用を得るためには調製するフィブリノゲン溶液を一定濃度以上の高濃度とする必要がある。しかしながら、従来のフィブリノゲン製剤は上記のように塊状(ケーキ状)の形態であるため、特に高濃度のフィブリノゲン溶液を得ようとすると、フィブリノゲン自体の溶解性がもともと低いことからフィブリノゲンの溶解に長時間（通常、室温で５〜１５分程度、貯蔵温度である４℃では３０分以上）を要し、そのため緊急を要する外科手術での使用には適しないという問題があった。
【０００６】
このような長時間を要するフィブリノゲンの溶解時間を短縮するため、溶解補助剤を添加して溶解性向上を試みた報告がある（特開平２−０３６８７２号、特開平８−１５１３３０号参照）。具体的な溶解補助剤としては、界面活性剤、アルブミン、アミノ酸、糖類などが開示されている。しかしながら、この方法においても溶解操作には依然として３〜６分近くを要しており、しかも、この溶解時間は室温で操作した場合に要する時間である。冷所保存された状態のままのフィブリノゲンを溶解補助剤を用いて溶解した場合にどの程度の溶解時間を要するかは定かではないが、上記溶解時間に比べて長時間を要することが予想される。一般に、通常のフィブリノゲン製剤及び組織接着剤と溶解液とは冷所環境下で保存されているため、使用に際しての溶解作業は室温に戻した後に実施される。すなわち、溶解補助剤を用いた方法では溶解操作自体に要する時間は上記のように３〜６分近くに短縮されたが、フィブリノゲン製剤もしくは組織接着剤が冷所保存であるため、室温に戻すための時間としてさらに３０分程度を考慮しなければならない。
【０００７】
また、フィブリノゲン溶液を低温氷結して安定性を高めようとする方法（特公昭６３−４０５４７号）や、溶媒に着目し種々のフィブリノゲン溶解促進剤を添加したフィブリノゲン溶液を凍結状態で保存し、用時に融解して使用する方法（特開昭５７−１４９２２９号）も報告されている。しかしながら、これら凍結製剤では、凍結乾燥製剤に比較して使用時の利便性は向上したものの、用時融解に際して時間を有するうえ、凍結状態で流通・保存するための設備を必要とする点でなお問題を有する。
このような状況下、外科手術等の臨床場面に十分に対応しうる、溶解性の向上したフィブリノゲン製剤の開発が望まれていた。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
そこで、本発明者らは、外科手術等の臨床場面に十分に対応しうる、溶解性の向上したフィブリノゲン製剤を開発すべく鋭意検討した結果、凍結乾燥したケーキ状の塊を粉末化することにより、十分な接着作用に必要な高濃度であってもフィブリノゲンの溶解性が著しく向上することを見出し、本発明を完成するに至った。とりわけ、予期しないことに、凍結乾燥したケーキ状の塊を粉末化することにより、フィブリノゲンの室温での溶解性が向上するのみならず、冷所保存状態の低温での溶解性も室温と同程度であることが見出された。それゆえ、実際の使用に際しては、冷所貯蔵状態から取り出した後に室温に戻すことなく溶解操作を開始でき、その結果、冷所保存状態から溶解を経て実際に組織接着剤等として使用するまでの時間が著しく短縮される（約１０分）。
【０００９】
本発明により凍結乾燥したケーキ状のフィブリノゲン塊を粉末化することにより、溶解時の温度やその容量に左右されることなく短時間のうちに完全に溶解することが可能となる。
通常、溶解性の劣る製剤は溶解液注入後から継子と呼ばれるダマを形成しやすい。これは、その製剤の持つ疎水性の強度に依存していると考えられ、溶媒が速やかにその製剤全体に行き渡らないこと及びそれにより主剤の周囲のみに溶媒が集まってしまうために、溶解時間の遅延を引き起こすものと考えられる。したがって、溶媒が製剤全体に均一に分散するためには製剤を粉末化することが有効である。粉末化された製剤は、溶媒への接触面積が増大するが、その均一分散性を維持するために溶解時に激しい振盪を加えることによって速やかに溶解することが可能となる。
【００１０】
なお、造粒操作を施して粉末化を行うことは、抗生剤などでは一般的な方法であるが、血漿タンパク質を製剤化した製品の中では粉末剤（顆粒剤もしくは細粒剤）の剤型を採用しているのはトロンビン製剤のみである。トロンビンは分子量６,０００の軽鎖と分子量３１,０００の重鎖がジスルフィド結合で結合したタンパク質であり、タンパク質を形作るペプチド鎖の構成は比較的単純であり分子量も小さい。しかしながら、本発明による粉末化の対象であるフィブリノゲンは、α鎖、β鎖、γ鎖という３種類のペプチドそれぞれ２本ずつからなる計６本のペプチド鎖がジスルフィド結合により結びついた立体構造を形成する分子量３４０,０００のタンパク質であり、上記トロンビンに比べて立体構造がはるかに複雑であり、分子量も大きい。このように複雑な構造と大きな分子量を有するフィブリノゲン分子は物理的衝撃に弱く、容易にその立体構造が破壊されることが予想される。一方、血漿タンパク質でフィブリノゲンと同様に複雑な構造を有する免疫グロブリン製剤では、凍結乾燥ケーキ品を粉末化すると抗補体価の上昇が観察され、製剤として好ましくない変化が生じることが確認されている。このように、血漿タンパク質製剤での粉末化は、トロンビン製剤等のごく限られた製剤のみしか例がなく、フィブリノゲンのように複雑な構造を有する血漿タンパク質に対する粉末化は当業者の予期するところではなかった。
【００１１】
フィブリノゲンを粉末化する方法としては、（１）凍結乾燥塊を封入した製品容器に物理的負荷（好ましくは振盪）を加え容器内で粉体を調製する方法、（２）凍結乾燥塊を解砕機に投入し、プロペラの物理的負荷などにより粉体を調製する方法、及び（３）液状の試料から直接粉末を調製する方法などが挙げられる。これら粉末化法のうち、（１）に示した方法（とりわけ振盪法）が、▲１▼無菌性を維持できること、▲２▼得られた粉末を容器に再充填する必要がないこと、▲３▼容器に充填するフィブリノゲン粉末の量を均一に保持できること、及び▲４▼容器内の陰圧化処理へ容易に対応できることなどの理由から好適な方法である。
とりわけ、振盪法の利点は、▲１▼試料の凍結乾燥によるタンパク質の安定化、▲２▼容器の封栓（好ましくは陰圧下での）、及び▲３▼容器内での無菌性を保持した状態で振盪機を用いた振幅運動によりケーキ形状にある凍結乾燥塊を粉末状へと緩やかに処理する、といった一連の工程をタンパク質の変性を伴うことなく実施できる点にある。
【００１２】
一方、上記（２）及び（３）に示す粉末化法は、血漿タンパク質の中でも特に高分子かつ複雑な構造を有するフィブリノゲンの場合はタンパク質の変性が懸念されるため好ましくない。とりわけ、（３）に示す粉末化法のように液状試料から直接粉末を調製すると、試料中の水分を除去するに際して薬液は高温にさらされるため、タンパク質が変性することが考えられる。また、（２）のプロペラの物理的負荷を加える方法もフィブリノゲンタンパク質の構造を物理的に破壊するおそれがあるので好ましくない。
【００１３】
これに対して、（１）に示す粉末化法は、凍結乾燥後に容器を未開封のままで粉末化処理を施すものであり、上記のようなタンパク質の変性が最も少なく、本発明において最も好ましい。粉末化処理のための物理的負荷としては、容器の振動・振幅運動の繰返しによる凍結乾燥塊の破砕（振盪法）や超音波処理による破砕が挙げられるが、振盪法が好ましい。このような振盪法によれば、（２）に示す粉末化法におけるプロペラなどによる大きな物理的負担を回避することができる。
【００１４】
振盪法を行うに際しては、所望する容器に充填した凍結乾燥塊の試料を容器ごとに振盪機にセットし振盪させることにより、凍結乾燥塊自身の容器内での振幅による往復運動を行うことで凍結乾燥塊を徐々に崩壊させ、粉末試料を調製する。具体的には、フラスコや試験管などを振盪する際に用いる往復式振盪機に、凍結乾燥処理を施した封栓済みの容器をセットし、数十ｍｍ程度の振幅、より好適には４０ｍｍ程度の振幅、及び１分間当たり１００〜３００回程度、通常２００回程度の振盪速度で数時間、より好適には約３〜約１２時間、通常５時間程度の振盪処理を施すことで容器内の凍結乾燥塊を解砕し、粉末試料を得ることができる。当該振盪処理は、タンパク質の安定性を考慮して、変性を生じないように室温以下の温度で実施するのが好ましく、また、前記の振盪処理の振幅、振盪速度及び振盪時間等の各種条件は、対象となる製剤の容器の大小等を考慮して当業者が適宜調整することができる。
【００１５】
以上のような粉末化処理を施すことにより、フィブリノゲンの濃度として１％以上で短時間のうちに溶解することがわかった。特に組織接着剤として用いる場合、フィブリノゲンの濃度は８％と高濃度であるが、このような高濃度であっても本発明に従って粉末化すればフィブリノゲンはきわめて短時間の内に完全に溶解することが可能となる。
【００１６】
フィブリノゲンの溶解時間の短縮はまた、溶解時の温度が室温の場合のみならず、凍結乾燥塊の貯蔵温度のような低温においても同様に認められた。特に凍結乾燥品(ケーキ形状)は通常、冷所で保存されているが、これを冷所から取り出した直後に溶解させた場合、従来は３０分近くを要していたが、本発明により粉末化することにより６分以内に短縮される。
さらに、一般的には容量も溶解時間に影響を及ぼす因子であるといわれているが、本発明による粉末化フィブリノゲンでは、０.５ｍｌ〜５.０ｍｌの範囲では容量は溶解時間にほとんど影響を及ぼさないことがわかった。また、粉末化処理に伴う性状の変化については、溶解後の性状、凝固時間、凝固性タンパク質含量、血液凝固第XIII因子活性含量などに変化は認められなかった。特に溶解時間、溶解後の性状、凝固時間及び凝固性タンパク質含量は生物学的製剤基準の乾燥ヒトフィブリノゲンの溶解性試験、力価試験及び凝固性タンパク質含量試験における基準をすべて満たしており、本発明による粉末品はフィブリノゲン製剤として用いるのに適している。
【００１７】
粉末化試料（フィブリノゲン製剤）の溶解性は、試料を収容した容器内を陰圧化することによってさらに改善することができる。これは、容器内を陰圧化することで、溶解液が粉末に一層浸透しやすくなることによるものと考えられる。また、溶解後の操作として通常、シリンジによる抜き取り操作が行われるが、常圧下で溶解した場合には、振盪により形成された気泡が消失しにくいために抜き取り操作に支障をきたし、特に容量が小さくなるほど残存する気泡によって正確に抜き取ることが困難であるのに対し、陰圧化処理を施しておけば、抜き取り操作直前に常圧化させることによって気泡を消失させることができ、溶解後のシリンジ抜き取り操作が行いやすくなる。
【００１８】
本発明の振盪法により粉末化して調製したフィブリノゲン製剤（粉末品）を局方ふるいを用いて粒径別にし、その重量比から粒度分布を測定したところ、１７００μm以下の粒径が全量の９０％以上を占めていることが確認された。
医薬品における粒状製剤には顆粒剤や散剤といった分類がある。日本薬局方第１３改正の製剤総則における顆粒剤・散剤の粒度基準に基づくと、粒径の最大値は１７００μmであることが記載されている。そこで本発明者らは、医薬品分類上のこの粒度基準に基づく粒径の上限値に関して測定を行った。
【００１９】
本発明によるフィブリノゲン粉末化製剤の出発物質であるフィブリノゲンは、常法により精製されたものであってよい。たとえば冷エタノール沈殿法にグリシンによるフィブリノゲンの溶解度低下効果を組み合わせた方法（Blomback, B.及びBlomback, M., Arkiv Kemi, 10, p.415〜443, (1956)）及びグリシンを単独で使用するグリシン沈殿法（Kazal, L.A.,ら、Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 113, p.989〜994, (1963)）などを用いることができる。
出発材料のフィブリノゲンは、臨床上の生体適合性の観点から、ヒト血漿から得られたもの、もしくは遺伝子組換フィブリノゲンなどを原料として使用することが望ましい。
【００２０】
本明細書において「フィブリノゲン製剤」あるいは「フィブリノゲン粉末製剤」とは、「タンパク質成分からなる組織接着剤」、特に「フィブリノゲン及び血液凝固第XIII因子を有効成分とする主剤と、トロンビン及び塩化カルシウムで形成される補助剤からなる組織接着剤」を意味し、一般にフィブリン接着剤または、フィブリン糊として呼ばれているものを包含する。
【００２１】
なお、市販のフィブリノゲン製剤及びこれを用いる組織接着剤は、添付文書によれば「フィブリノゲンを凍結乾燥した製剤」、「フィブリノゲン末」、「フィブリノゲン凍結乾燥粉末」等と表記してあり、あたかもフィブリノゲンが粉末の性状であるかのような印象を与えるが、実際にはこれらはフィブリノゲンが高濃度であるため凍結乾燥品は粉末状ではなくケーキ形状をしている。従って、従来のフィブリノゲン製剤及び組織接着剤は、その表記に係らず実際は決して粉末ではなくケーキ形状であり、本明細書における粉末品ではないことを銘記すべきである。それゆえ、従来のフィブリノゲン製剤及び組織接着剤は本明細書においては凍結乾燥ケーキ品に相当するものである。
【００２２】
【実施例】
以下に実施例及び試験例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
実施例１：振盪法を利用したフィブリノゲン粉末の調製
クエン酸血漿から得られた寒冷沈殿物を可溶化し、１.５Ｍグリシン溶液を用いて沈殿させたフィブリノゲン沈殿を、０.１５Ｍ塩化ナトリウムを含むｐＨ８.０の０.０２５Ｍクエン酸緩衝液に３７℃で溶解させた。このフィブリノゲン溶液を−２℃に冷却した後、８％（ｖ／ｖ）エタノールを添加し、沈殿を回収した。得られた沈殿を、０.０７５Ｍ塩化ナトリウムを含むｐＨ７.０の５ｍＭクエン酸緩衝液に３７℃で溶解させた。フィブリノゲン濃度を約２％（ｗ／ｖ）に調整した後、フィブリノゲン溶液１ｍｌあたり３０単位の第ＸＩＩＩ因子を添加した。この溶液を無菌濾過し、凍結乾燥及びそれに続く乾燥加熱処理を行ってフィブリノゲン凍結乾燥品（ケーキ形状）を得た。
【００２３】
つぎに、上記で調製したフィブリノゲン凍結乾燥品（ケーキ形状）（２４０ｍｇのフィブリノゲンを含有）を容器ごと、RECIPRO SHAKER SR-II（ＴＡＩＹＯ社製）に装着し、振幅４０ｍｍ、振盪速度を２００回／分になるように調整し、往復運動の繰り返しにより５時間連続して振盪させることでケーキ形状を解砕し、粉末化フィブリノゲン製剤（２４０ｍｇのフィブリノゲンを含有）を得た。
【００２４】
試験例１：フィブリノゲン製剤の粉末化による溶解時間短縮効果
凍結乾燥処理を施した約２４０ｍｇのフィブリノゲンを含有する製剤（凍結乾燥ケーキ品）と、それをさらに実施例１に記載のようにして振盪することにより調製した粉末状のフィブリノゲン製剤（粉末品）とを注射用水で８％濃度（８０ｍｇ／ｍｌ）になるように室温下にて溶解し、その溶解時間を測定した。その結果を図１に示す。図１から明らかなように、ケーキ形状のフィブリノゲン製剤のフィブリノゲン溶解時間が約４００秒（６分４０秒）〜約６００秒（１０分）であるのに対し、本発明による粉末状のフィブリノゲン製剤では１４０秒（２分２０秒）〜約２４０秒（４分）であり、粉末化によりフィブリノゲンの溶解時間が２倍以上短縮された。
【００２５】
試験例２：フィブリノゲン溶解時間に及ぼすフィブリノゲン濃度の影響
フィブリノゲン粉末品を１、２、４、及び８％の各終濃度になるようにそれぞれ注射用水で溶解し、その溶解時間を室温で測定した。その結果を図２に示す。図２から明らかなように、フィブリノゲンの濃度が１〜８％の範囲内では粉末品の溶解時間が大きく変化することはなかった。
【００２６】
試験例３：溶解時間に及ぼす温度の影響
実施例１で調製したフィブリノゲンケーキ品（２４０ｍｇのフィブリノゲンを含有）及び粉末品（２４０ｍｇのフィブリノゲンを含有）を、冷房下（５℃）、室温及び３７℃で保存した。その後、これらフィブリノゲンケーキ品及び粉末品をそれぞれ同じ温度で保存した注射用水で各々８％濃度に溶解し、その溶解時間を測定した。その結果を図３に示す。図３から明らかなように、冷房下（５℃）ではケーキ品で約３０分であったのに対し、粉末品では約２分で溶解し、室温ではケーキ品では約４００秒（６分４０秒）〜約６００秒（１０分）であったのに対し、粉末品では約２００秒（３分２０秒）であり、３７℃ではケーキ品では約３００秒（５分）〜約７００秒（１１分４０秒）であったのに対し、粉末品では約２００秒（３分２０秒）であった。このように、冷房下（５℃）、室温及び３７℃いずれの場合にもケーキ品に比べて粉末品で溶解時間の短縮が認められたが、とりわけ冷房下（５℃）での溶解時間の短縮が顕著に認められた。
【００２７】
試験例４：溶解時間に及ぼす粉末粒子の粒径の影響
実施例１で得たフィブリノゲン凍結乾燥品をスパーテルで解砕した後に局方ふるい（２０００μｍ／８５０μｍ／３００μｍ／１５０μｍのふるい）を用いて粒径ごとに選別した。３ｍｌ容量の凍結乾燥品（ケーキ品）、及び同重量の粉末品をそれぞれバイアルに再充填した後に室温で注射用水により８％濃度に溶解し、その溶解時間を測定した。その結果を図４に示す。図４から明らかなように、ケーキ品では１０分近くを要したのに対して、解砕した粉末ではいずれの粒径でも２００秒（３分２０秒）前後もしくはそれ以下であった。とりわけ、粒径が２０００μｍ以上であっても１５０μｍ以下〜２０００μｍの場合と同様の溶解時間を示し、２０００μｍ以下の粒径であればいかなる粒径であっても２００秒（３分２０秒）前後で溶解することが示唆された。これらの結果から粒径が少なくとも２０００μｍ以下であれば粉末品はケーキ品よりも短時間のうちに溶解することがわかる。
【００２８】
試験例５：溶解時間に及ぼす真空度の影響
実施例１で得たフィブリノゲン粉末を陰圧（０.０５Ｔｏｒｒ以下、及び３００Ｔｏｒｒ）充填したもの、及び常圧（大気圧）充填したものを調製した。すなわち、実施例１で得たフィブリノゲン粉末を０.０５Ｔｏｒｒ以下に陰圧充填したものを調製し、ついで通気針で空気を注入して常圧（大気圧）充填したものを調製し、また３００Ｔｏｒｒ試料については、０.０５Ｔｏｒｒ以下に陰圧充填したものにバイアルの体積から３００Ｔｏｒｒとなるように空気を所定の体積だけ注入して調製した。
【００２９】
これらの陰圧試料及び常圧試料について注射用水で８％濃度に溶解し、その溶解時間を測定した。その結果を図５に示す。図５から明らかなように、０.０１Ｔｏｒｒ以下の陰圧化試料では、溶解時間が約３分、３００Ｔｏｒｒの陰圧化試料では、約２分〜約４分３０秒であるのに対して、常圧試料では約４分〜約３８０秒（６分２０秒）であった。このように少なくとも３００Ｔｏｒｒ以下に陰圧化させることによって溶解時間の短縮効果が認められた。したがって、陰圧化することも溶解性をさらに向上させる重要な因子であることがわかった。
【００３０】
試験例６：振盪粉末品の容量と溶解時間の関係
一般に容量も溶解時間に影響を及ぼす因子であるといわれているので、本発明による振盪粉末品の容量と溶解時間の関係を調べた。
各容量（０.５ｍｌ、１ｍｌ、２ｍｌ、３ｍｌ、及び５ｍｌ：それぞれフィブリノゲンを４０、８０、１６０、２４０及び４００ｍｇ含有する）のフィブリノゲン製剤（ケーキ品）を実施例１と同様にして振盪することにより粉末製剤を調製し、室温にてそれぞれの容量（０.５ｍｌ、１ｍｌ、２ｍｌ、３ｍｌ、及び５ｍｌ）の注射用水を注入し、いずれも８％濃度となるように溶解し、溶解時間の測定を行った。その結果を図６に示す。図６から明らかなように、０.５ｍｌ〜５.０ｍｌの範囲ではいずれの容量であってもほとんどが２００秒（３分２０秒）以内で溶解することがわかった。これらの結果から、粉末品の溶解時間は０.５ｍｌ〜５.０ｍｌの範囲では容量による影響をほとんど受けないことが示唆された。
【００３１】
試験例７：フィブリノゲン製剤のケーキ品及び粉末品の溶解後の性状観察
実施例１で調製したフィブリノゲン粉末品及びケーキ品（各２４０ｍｇのフィブリノゲンを含有）を、室温下で注射用水にて８％濃度に溶解し、その性状を溶解直後、及び室温で２時間放置した後に目視で観察した。その結果を表１に示す。
表１から明らかなように、溶解直後の性状及び室温で２時間放置後の性状ともに粉末品及びケーキ品での有意の違いは認められず、透明で沈殿は観察されなかった。
0004679730.tif 000002
【００３２】
試験例８：３ロットでのフィブリノゲン製剤のケーキ品及び粉末品の溶解後の性状分析
３ロットのフィブリノゲンケーキ品（２４０ｍｇ）を実施例１に準じて調製した。さらに、それぞれのロットのケーキ品を用いて粉末品（２４０ｍｇ）を調製した。これらのケーキ品及び粉末品を、室温下で注射用水にて８％濃度に溶解し、その性状分析を行った（ｎ＝３）。なおここで、凝固時間は生物学的製剤基準の乾燥ヒトフィブリノゲンの力価試験に準じて行い、凝固性タンパク質含量（clottability）は、生物学的製剤基準一般試験法に記載されている方法に基づき、検体１ｍｌ中の総タンパク質量及び凝固性タンパク質量を測定し、総タンパク質中に占める凝固性タンパク質の純度を求めたものである。その結果を表２に示す。
【００３３】
0004679730.tif 000003
【００３４】
表２にはｎ＝３で測定した際のそれぞれの項目の平均値±標準偏差で示してある。ケーキ品及び粉末品は３ロット共に凝固時間は２０秒以内であり、凝固性タンパク質含量（clottability）は８０％以上であった。またその他の指標として血液凝固第XIII因子の活性を測定したところ、同一ロット内の及びロット間におけるケーキ品及び粉末品の性状の違いは認められなかった。従って、粉末化処理を施すことにより溶解時間の顕著な短縮効果が認められるが、その他の性状に関しては粉末品はケーキ品と同等であり、さらに３ロットの比較においても有意な変動は認められず同等の性状であった。
【００３５】
【発明の効果】
本発明によれば、フィブリノゲンを粉末化することにより溶解性が改善したフィブリノゲン製剤及びこれを用いた組織接着剤が得られる。本発明により得られるフィブリノゲン製剤及びこれを用いた組織接着剤は、従来の凍結乾燥品であるケーキ形状の組織接着剤と比べて、所望の溶解液を用いて高濃度で短時間にて溶解し得るものであり、溶解時の温度も室温のみならず冷所保存環境から３７℃までと広範囲にわたって選択が可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】  凍結乾燥ケーキ品及び粉末品のフィブリノゲン製剤の溶解時間を比較して示す図である。
【図２】  粉末品のフィブリノゲン製剤のタンパク濃度が溶解時間に及ぼす影響を示す図である。
【図３】  凍結乾燥ケーキ品及び粉末品のフィブリノゲン製剤における溶解時間の溶解時の温度による影響を示す図である。
【図４】  種々の粒径のフィブリノゲン粉末品の溶解時間を示す図である。
【図５】  フィブリノゲン粉末品の陰圧試料（０.０１Ｔｏｒｒ以下及び３００Ｔｏｒｒ）と常圧試料の溶解時間を比較して示す図である。
【図６】  種々の容量のフィブリノゲン粉末製剤の溶解時間を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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