(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉで表される５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体の少なくとも一種と、医薬的に許容しうる担体または賦形剤を含有することを特徴とするうつ病を治療、予防するための医薬組成物。
【化１】
0004714304.tif 000032
式Ｉ
（式中、
Ｒ１は、水素、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル、マンノシル、アロシル、ガラクトシル、ラムノシル、フコシル、キシロシル、アラビノシル、アセチル、プロピオニル、ベンゾイル、シンナモイル、スクシニル、メチル、エチル、プロピル、ブチル、またはベンジルであり、
Ｒ２は、水素、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル、マンノシル、アロシル、ガラクトシル、ラムノシル、フコシル、キシロシル、アラビノシル、アセチル、プロピオニル、ベンゾイル、シンナモイル、スクシニル、メチル、エチル、プロピル、ブチル、またはベンジルである。）
【請求項２】
式ＩＩで表される５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体の少なくとも一種と、医薬的に許容しうる担体または賦形剤を含有することを特徴とするうつ病を治療、予防するための医薬組成物。
【化２】
0004714304.tif 000033
式ＩＩ
（式中、Ｒ１は、水素、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル、マンノシル、アロシル、ガラクトシル、ラムノピラノシル、フコシル、キシロシル、アラビノシル、アセチル、プロピオニル、ベンゾイル、シンナモイル、スクシニル、メチル、エチル、プロピル、ブチル、またはベンジルである。）
【請求項３】
Ｒ１は、水素、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル、マンノシル、アロシル、ガラクトシル、ラムノピラノシル、フコシル、キシロシル、またはアラビノシルである請求項２に記載の式ＩＩで表される５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体の少なくとも一種と、医薬的許容しうる担体または賦形剤を含有することを特徴とするうつ病を治療、予防するための医薬組成物。
【請求項４】
Ｒ１は、水素、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシルである請求項２に記載の式ＩＩで表される５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体の少なくとも一種と、医薬的に許容しうる担体または賦形剤を含有することを特徴とするうつ病を治療、予防するための医薬組成物。
【請求項５】
式ＩＩＩで表される５−メチル−１，３−ベンゼンジオール誘導体の少なくとも一種と、医薬的に許容しうる担体または賦形剤を含有することを特徴とするうつ病を治療、予防するための医薬組成物。
【化３】
0004714304.tif 000034
式ＩＩＩ
（式中、Ｒ２は、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル、マンノシル、アロシル、ガラクトシル、ラムノピラノシル、フコシル、キシロシル、アラビノシル、アセチル、プロピオニル、ベンゾイル、シンナモイル、スクシニル、メチル、エチル、プロピル、ブチル、またはベンジルである。）
【請求項６】
Ｒ２は、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル、マンノシル、アロシル、ガラクトシル、ラムノピラノシル、フコシル、キシロシル、またはアラビノシルである、請求項５に記載の式ＩＩＩで表される５−メチル−１，３−ベンゼンジオール誘導体の少なくとも一種と、医薬的に許容しうる担体または賦形剤を含有することを特徴とするうつ病を治療、予防するための医薬組成物。
【請求項７】
Ｒ２は、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、またはラムノピラノシルと、医薬的に許容しうる担体または賦形剤を含有することを特徴とする請求項６記載のうつ病を治療、予防するための医薬組成物。
【請求項８】
式ＩＶで表される５−メチル−１，３−ベンゼンジオール誘導体の少なくとも一種と、医薬的に許容しうる担体または賦形剤を含有することを特徴とするうつ病を治療、予防するための医薬組成物。
【化４】
0004714304.tif 000035
式ＩＶ
（式中、Ｒ２は、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル、マンノシル、アロシル、ガラクトシル、ラムノピラノシル、フコシル、キシロシル、アラビノシル、アセチル、プロピオニル、ベンゾイル、シンナモイル、スクシニル、メチル、エチル、プロピル、ブチル、またはベンジルである。）
【請求項９】
Ｒ２は、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル、マンノシル、アロシル、ガラクトシル、ラムノピラノシル、フコシル、キシロシル、アラビノシル、アセチル、プロピオニル、ベンゾイル、シンナモイル、またはスクシニルである、式ＩＶで表される５−メチル−１，３−ベンゼンジオール誘導体の少なくとも一種を含有する請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
Ｒ２は、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル、またはアセチル：１，３−Ｏ−ジアセチルオルシノール、または３−Ｏ−アセチル−オルシノール−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラアセチル）−β−Ｄ−グルコピラノシドである、式ＩＶで表される５−メチル−１，３−ベンゼンジオール誘導体の少なくとも一種を含有する請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
日内リズム障害、睡眠障害、慢性ストレス、不安、急性ストレス誘発障害、または認知機能障害を始めとするうつ病を示唆する症状の治療のための医薬的に許容しうる賦形剤と、式Ｉで表される５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体または５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体を含有する医薬製剤であって、１２時間明所および１２時間暗所に関連する脳機能の基礎的基盤の一つが、日内リズムであり、その障害は、脳機能の一連の悪化を起こすことが知られ、睡眠障害として、（１）睡眠異常、不眠症、過眠症、ナルコレプシー、呼吸関連睡眠障害、および日内リズム関連睡眠障害、（２）悪夢、睡眠パニック、および夢遊症のような睡眠時随伴症、（３）物質（たとえば、習慣性薬物）または療法（たとえば、外科手術、放射線療法、または化学療法）に起因する健康関連睡眠障害および睡眠障害が挙げられ、不安障害として、２つの大きな分野が挙げられ、（１）パニック障害、たとえば、広所恐怖症、特定のパニック障害（たとえば、特定の動物、環境および輸血に反応するパニック、社会恐怖、および強迫性障害）、外傷後ストレス障害、急性ストレス障害、および一般的な不安障害、（２）健康関連不安障害および物質誘発障害（たとえば、習慣性薬物）または療法（たとえば、外科手術、放射線療法、または化学療法）であり、ストレスは、環境因子、ある習慣性物質の摂取、あるいは、たとえば、外科手術のような療法を受けることに起因する現象に対する肉体的、心理的または情動的応答であり、ストレスは、海馬シナプス可塑性の減少および学習および記憶損傷のような、対応する「急性ストレス誘発障害」を引き起こす可能性があり、認知機能低下または障害は、記憶、思考、意志決定、注意力、および気分のような高次脳機能の低下を言う、請求項１から請求項１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
用語「うつ病」として、以下のサブタイプ、
（１）うつ病、躁うつ病、混合性うつ病、および躁病、あるいは軽躁病のようなうつ病および気分障害、または（２）うつ病性障害および気分変調症のようなうつ病性障害、または（３）物質（たとえば、習慣性薬物）または療法（たとえば、外科手術、放射線療法、または化学療法）に起因するうつ病性障害および感情障害の特徴を示す精神疾患または異なるサブタイプの障害に起因する感情障害のような他の感情障害、または（４）うつ病および軽躁病の２種以上のエピソード、および躁病およびうつ病の交代性エピソードを含む双極性障害または双極性感情障害を含む、請求項１から請求項１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
うつ病の症状またはうつ病を示唆する症状は、日内リズム障害、睡眠障害、慢性ストレス、不安、急性ストレス誘発障害、または認知機能障害の治療または予防のための請求項１から１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
うつ病を治療または予防するための活性成分（５−メチル１，３―ベンゼンジオールまたは誘導体）の少なくとも一種の含有量は０．１ｍｇ〜１２ｇであり、好ましくは、５０ｍｇ〜２００ｍｇを含む請求項１から請求項１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体、あるいは医薬品または機能性食品の製剤においてこれらを含有する医薬組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
うつ病は、総人口の最大２０％の人々に発症している、一般に見られるの精神障害である。うつ病では、以下の症状、持続性または反復性抑うつ気分、不安、動揺、睡眠障害、異常なストレス応答、および認知機能障害が共通している。
【０００３】
過去数十年間にわたり、神経薬理学の起動力の下、多くの公認された動物モデルが、抗うつ剤の活性を評価するために開発されてきた。最も広く使用されているモデルは、げっ歯類の強制水泳テストおよび尾懸垂テストである。近年、多くの研究により、恒常的な暗闇、睡眠遮断、および慢性の予測不能な軽度のストレスは、うつ病の発生の病因学的モデルであることが示されている。これらのモデルにより、抗うつ剤の研究の土台が築かれた。うつ病の発病機序はまだ完全に明らかではないが、海馬シナプス可塑性（たとえば、長期強化）における変化および認知機能における役割は、うつ病に内在する重要なメカニズムの一つであるかもしれない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
５−メチル−１，３−ベンゼンジオール（一般的にオルシノールとして知られる）は、通常、有機合成用の熱分解中間体の加工における熱重合の阻害剤として使用される。また、ＲＮＡの特異的定量用の試薬でもある。５−メチル−１，３−ベンゼンジオールおよびその誘導体は、抗酸化剤としてしばしば使用されてきた。これらは、一定の抗菌活性を有する。今までのところ、それらを、うつ病、不安、動揺、睡眠障害、異常なストレス応答、または認知機能障害を軽減するために使用することについては報告がない。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体、あるいは医薬品または機能性食品の製剤中にこれらを含有する医薬組成物を、うつ病の治療または予防のために使用することに関する。さらに詳しくは、本発明は、うつ病またはそれに関連する疾病およびこれらの疾患の原因の治療に使用される５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体に関する。
【０００６】
本発明の化合物は、式Ｉで表される５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体である。
【化１】
0004714304.tif 000002
式Ｉ
（式中、Ｒ１および／またはＲ２は、水素、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、マンノシル、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル、アロシル、ガラクトシル、ラムノピラノシル、フコシル、キシロシル、アラビノシル、アセチル、プロピオニル、ベンゾイル、シンナモイル、スクシニル、メチル、エチル、プロピル、ブチル、またはベンジルである。）
【０００７】
より好ましくは、本発明の化合物は、式ＩＩで表される５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体である。
【化２】
0004714304.tif 000003
式ＩＩ
（式中、Ｒ１は、水素、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、マンノシル、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル、アロシル、ガラクトシル、ラムノピラノシル、フコシル、キシロシル、アラビノシル、アセチル、プロピオニル、ベンゾイル、シンナモイル、スクシニル、メチル、エチル、プロピル、ブチル、またはベンジルである。）
【０００８】
より好ましくは、式中、Ｒ１は、水素、β−Ｄ−グルコピラノシル、オルシノールとして挙げられる、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、またはオルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド、またはオルシノール−１−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシドである。
【０００９】
より好ましくは、本発明の化合物は、式ＩＩＩで表される５−メチル−１，３−ベンゼンジオールの誘導体である。
【化３】
0004714304.tif 000004
式ＩＩＩ
（式中、Ｒ２は、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル、マンノシル、アロシル、ガラクトシル、ラムノピラノシル、フコシル、キシロシル、アラビノシル、アセチル、プロピオニル、ベンゾイル、シンナモイル、スクシニル、メチル、エチル、プロピル、ブチル、またはベンジルである。）
【００１０】
とりわけ、Ｒ２は、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、またはラムノピラノシルである。
【００１１】
より好ましくは、本発明の化合物は、式ＩＶで表される５−メチル−１，３−ベンゼンジオールの誘導体である。
【化４】
0004714304.tif 000005
式ＩＶ
（式中、Ｒ２は、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル、マンノシル、アロシル、ガラクトシル、ラムノピラノシル、フコシル、キシロシル、アラビノシル、アセチル、プロピオニル、ベンゾイル、シンナモイル、スクシニル、メチル、エチル、プロピル、ブチル、またはベンジルである。）
【００１２】
好ましくは、Ｒ２は、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルまたはアセチルである。
【００１３】
アメリカ精神医学会により出版された精神障害の診断と統計マニュアル、第４版（ＤＳＭ−ＩＶ）、および国際疾病分類、第１０版（ＩＣＤ−１０）に記載されているように、うつ病は、異なるサブタイプの精神疾患および障害が挙げられ、（１）うつ病、躁病、混合性躁病、および軽躁病のようなうつ病および気分障害、（２）うつ病性障害およびおよび不機嫌のようなうつ病性障害、（３）たとえば健康不良に起因する他の感情障害であって、健康不良として、物質（たとえば、習慣性薬物）または療法（たとえば、外科手術、放射線療法、または化学療法）に起因するうつ病性障害および感情障害の特徴を持つ、異なる精神疾患またはサブタイプの障害が挙げられ、（４）うつ病および軽躁病の２種以上のエピソード、および躁病およびうつ病の交代性エピソードを含む双極性障害または双極性感情障害である。
【００１４】
ＤＳＭ−ＩＶおよびＩＣＤ−１０に記載されたうつ病の症状の他に、本発明は、日内リズム障害、睡眠障害、慢性ストレス、不安、急性ストレス誘発障害、または認知機能低下または障害の治療および予防も含む。
【００１５】
うつ病の他に、本発明は、日内リズム障害、睡眠障害、慢性ストレス、不安、急性  ストレス誘発障害、または認知機能低下または障害に関連する疾患の治療および予防も含む。さらに、本発明は、絶望感（たとえば、自殺念慮および行動）、気分障害、および異常な急性ストレス応答の予防および治療も含む。
【００１６】
睡眠および日内リズム障害：うつ病を持つ患者に非常に一般的な疾患である睡眠障害は、うつ病の程度を評価するための評価尺度の中身の一つである。日内リズム障害は、最も重要な生理学的機能を言う。正常な日内リズムは、明暗が交互に変わることによって動かされる。時差、季節、生活習慣または遺伝は、日内リズム障害を引き起こす可能性があり、さらにうつ病および認知機能低下のような高次脳機能の欠損を引き起こす可能性がある。ＤＳＭ−ＩＶまたはＩＣＤ−１０によれば、睡眠障害は、三つの大きな範疇、（１）不眠症、過眠症、ナルコレプシー、呼吸関連睡眠障害および日内リズム関連睡眠障害のような睡眠異常、（２）悪夢、睡眠パニック、および夢遊症のような睡眠時随伴症、（３）物質（たとえば，習慣性薬物）または療法（たとえば、外科手術、放射線療法、または）に起因する健康関連睡眠障害および睡眠障害に分類される。
【００１７】
不安は、うつ病を持つ患者に非常に一般的な症状である。それは、うつ病の程度を評価するためのガイドラインの一つである。不安障害は、二つの大きな範疇、（１）パニック障害、たとえば、広所恐怖症、特定のパニック障害（たとえば、特定の動物、環境、または輸血の恐怖、社会恐怖、または強迫性障害）、外傷後ストレス障害、急性ストレス障害、および大きな不安障害、および（２）健康関連不安障害および物質誘発障害（たとえば，習慣性薬物）または療法誘発障害（外科手術、放射線療法または化学療法）を含む。薬物の抗不安活性を評価するため、げっ歯類モデルの高架式十字迷路およびすくみ挙動が広く使用されている。
【００１８】
ストレスは、生物系において、生物の生理的なまたは心理的な恒常性維持を重篤にかく乱する任意の状態と規定される。ストレスは、精神疾患および認知機能障害のような多くの疾病を悪化させるあるいは該疾病を発症させる主な要因の一つと考えられる。ストレス源として、数多くの日常の出来事を挙げることができ、これは人によって異なる。ある物質、たとえば習慣性薬物を摂取すること、あるいは外科手術のような療法を受けることは、普通、異常なストレス応答に導く。ストレスを評価するために一般的に用いられている生物学的指示薬として、コルチコステロイド濃度（たとえば、げっ歯類におけるコルチコステロンおよびヒトにおけるコルチゾール）が挙げられ、関連する急性ストレス誘発障害、たとえば、海馬シナプス可塑性の損傷ならびに学習および記憶の損傷を発症する可能性がある。動物実験で一般的に用いられているストレス方法として、フットショックおよび高架式台が挙げられる。
【００１９】
認知は、最も重要な高次脳機能の一つである。これは、学習、記憶、言語、思考および気分を言う。うつ病は一種の認知障害とみなされ、これを患う患者は、ネガティブ思考および気分（気分障害）を無意識に持つ。１９４９年、へブは、シナプス修飾が学習および記憶の基礎であるという考えを提案した。１９７３年、この仮説は海馬の長期強化（ＬＴＰ）を発見したブリスらによる実験で検証された。しかし、今のところ、臨床でＬＴＰを直接調節する薬物を使用してうつ病を治療したことはない。より良好で速い治癒効果は、うつ病、その関連症状、およびその原因の治療において、シナプスの可塑性を改変する薬物の開発によって達成されるかもしれない。
【００２０】
５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体は、遊離の形態または医薬組成物中で直接使用することができる。記載した医薬組成物は、医薬的に許容しうる賦形剤中、０．１〜９９重量％の５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体を含む。
【００２１】
本明細書で使用される用語「医薬担体および／または賦形剤」は、１種以上の固体、半固体または液状希釈剤、充填剤、または任意のタイプの形成補助剤を意味する。５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体の医薬組成物は、医薬品および食品分野で周知の技術によって、種々の医薬的に許容しうる賦形剤または食事療法的に許容しうる栄養補助食品として調製される。医薬的に許容しうる賦形剤または食事療法的に許容しうる栄養補助食品としては、噴霧剤、エアロゾル剤、注射剤、懸濁液剤、エマルジョン剤およびシロップ剤のような液体剤、および錠剤、カプセル剤および顆粒剤のような固体剤、または液体に溶解または懸濁した粉末が挙げられる。
【００２２】
本発明では、投与方法として、注射または注入（静脈内、筋肉内、腹腔内または皮下）、経口、舌下および粘膜投与が挙げられる。
【００２３】
前記疾患、それらの原因および症状を治療または予防するための活性成分（５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたは誘導体）の有効投与量は、０．１ｍｇ／成人／日と１２ｇ／成人／日との間、最適投与量は、５０〜２００ｍｇ／成人／日である。
【００２４】
本発明は、５−メチル−１，３−ベンゼンジオールまたはその誘導体、あるいはそれらをうつ病の治療または予防用の医薬品および機能性食品の製剤中に含有する医薬組成物が、うつ病、および不安、ストレスおよび認知機能低下のようなうつ病を示唆する症状を治療および予防するための新しい選択を提供することを明らかにしている。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
以下の実施例に、本発明の理解および補足のために化合物および方法の詳細を記載するが、これらの実施例は、以下に続く請求項に記載された本発明を、いかなる方法によっても限定するものではないし、また本発明を限定的に解釈すべきではない。任意の他の方法によって調製された本発明に記載の化合物、およびうつ病、うつ病を示唆する症状、およびうつ病の病原学的原因を治療するための使用は、本発明に包含される。
【００２６】
ここで、オルシノール（ＯＲ）、オルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＯＲＧ）およびオルシノール−１−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＯＲＧＧ）は、クルクリゴ・キンバイザサ（Ｃｕｒｃｕｌｉｇｏ  ｏｒｃｈｉｏｉｄｅｓ）Ｇａｒｒ．により抽出することができる。オルシノールの他の誘導体は、周知の技術により調製することができる。特定の方法を以下に示す。
【００２７】
１．オルシノールは、対応する糖類のアセチル化生成物（ここで、Ｒ１および／またはＲ２は、β−Ｄ−グルコピラノシル、β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル、マンノシル、アロシル、ガラクトシル、ラムノピラノシル、フコシル、キシロシルまたはアラビノシルである）と反応させることができ、該対応化合物は、オルシノールを前記糖類のアセチル化生成物と、光防護下、メタノ−ル中で反応させ、臭化水素酸および酢酸を添加し、室温で１〜５時間攪拌することによって得ることができる。オルシノールアセチル化グリコシド類が得られる。対応するオルシノールアセチル化グリコシド類を、ナトリウムメトキシドで、メタノ−ル中、室温で１〜５時間処理し、対応するオルシノールグリコシド類を得る。
【００２８】
２．Ｒ１およびＲ２がアシルの場合、対応する酸無水物または塩化アシル物および１０〜２０％の４−ジメチルアミノピリジンの添加により、オルシノールまたはオルシノールグリコシド類をピリジン中に溶解し、６０〜１２０℃で３〜５時間攪拌する。混合物を水に注ぎ込み、次いでクロロホルムで抽出し、粗生成物を得、これをさらに精製し、アシル化生成物を得る。
【００２９】
３．Ｒ１およびＲ２がアルキルの場合、水素化ナトリウムの添加により、オルシノールまたはオルシノールグリコシド類をテトラヒドロフランまたはジメチルスルホキシドに溶解し、３０〜６０分攪拌する。対応するアルキロゲンの添加後、反応混合物をさらに３〜５時間攪拌し、次いで水に注ぎ込み、クロロホルムで抽出し、粗生成物を得、これをさらに精製し、アルキル化生成物を得る。
【実施例１】
【００３０】
オルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド、オルシノール、およびオルシノール−１−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシドの
抽出および単離
【００３１】
クルクリゴ・キンバイザサＧａｒｒ．を集め、陰または日向で乾燥し、粉末化した。
【００３２】
粉末材料（２０ｋｇ）を、還流下、９０％エタノ−ル（２００ｋｇ）で各回それぞれ２時間で３回抽出した。抽出物を合わせ、濃縮し、約３０ｋｇを得、１２時間沈降させたのち、ろ過した。次いで、粗抽出物をＤ−１０１マクロ多孔性樹脂カラムでクロマトグラフに供し（樹脂の重さは２０ｋｇであった）、１００ｋｇの蒸留水、６０ｋｇの７０％エタノ−ルおよび６０ｋｇの９０％エタノールで連続的に溶出した。７０％エタノール溶出液および９０％エタノール溶出液を別々に集め、蒸発乾固し、７０％エタノール溶出液（３４０ｇ）および９０％エタノール溶出液（６０ｇ）を得た。
【００３３】
得られた７０％エタノール溶出液（３４０ｇ）をメタノールに溶解し、４００ｇのシリカゲルに吸収させた。室温で乾燥したのち、固形物を粉砕し、ふるいにかけ、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（２．１ｋｇ，２００〜３００メッシュ）に供し、クロロホルム−メタノール−水（９０：１０：１〜７０：３０：３，ｖ／ｖ／ｖ）で溶出し、２６画分を得た。各画分は１５００ｍｌであった。画分２および画分３を合わせ、濃縮し、エタノールで結晶化し、オルシノール（５ｇ）を得た。画分９〜画分１５を合わせ、濃縮し、エタノールで結晶化し、オルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（５０ｇ）を得た。画分２２〜画分２６を合わせ、濃縮し、エタノールで結晶化し、オルシノール−１−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシド（１０ｇ）を得た。
【００３４】
構造決定：旋光度をＳＥＰＡ−３００偏光計で測定し、ＵＶ−ＶＩＳスペクトルをＵＶ−２１０Ａ分光計で得、ＩＲデータを、ＫＢｒペレットを備えるＢｉｏ−Ｒａｄ  ＦＴＳ−１３５分光計で集め、核磁気共鳴（１Ｈ  ＮＭＲおよび１３Ｃ  ＮＭＲ）スペクトルを、内部標準としてＴＭＳを用い、ＣＤＣｌ３中でＢｒｕｋｅｒ  ＤＲＸ５００分光計によって測定した。カラムクロマトグラフィおよび薄層クロマトグラフィシリカゲル用の材料は、Ｍａｋａｌｌ  Ｇｒｏｕｐ社（Ｑｉｎｇｄａｏ，Ｃｈｉｎａ）から入手した。
【００３５】
【化５】
0004714304.tif 000006
名称：オルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシド
分子式：Ｃ１３Ｈ１８Ｏ７、
分子量：２８６、
特性：薄黄色粉末、
［a］Ｄ−６３．０３°（ｃ５．９５，メタノール）、
ＵＶ（メタノール）：λｍａｘ（ｌｏｇε）２７９（３．１９）、２７３（３．２１）、２１９（３．９９）、２０３（４．５８）、
ＩＲ（ＫＢｒ）：νｍａｘ３４９５、３３８５、１６２０、１５９６、１１７５、１０７６、１０３２ｃｍ−１、
ＦＡＢ−ＭＳ（−）：ｍ／ｚ２８５［（Ｍ−１）−，１００］、１２３［（Ｍ−１−ｇｌｃ）−，８７］、
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δＨ：６．４１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−２）、６．３６（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６）、６．２９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）、４．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−１’）、２．２２（３Ｈ，ｓ，Ｈ−７）、
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００  ＭＨｚ）δＣ：１６０．１（ｓ，Ｃ−１）、１１１．４（ｄ，Ｃ−２）、１５９．２（ｓ，Ｃ−３）、１０２．４（ｓ，Ｃ−４）、１４１．３（ｓ，Ｃ−５）、１１０．０（ｄ，Ｃ−６）、２１．６（ｑ，Ｃ−７）、１０２．５（ｄ，Ｃ−１’）、７５．０（ｄ，Ｃ−２’）、７８．１（ｄ，Ｃ−３’）、７１．６（ｄ，Ｃ−４’）、７８．２（ｄ，Ｃ−５’）、６２．７（ｔ，Ｃ−６’）。
【００３６】
【化６】
0004714304.tif 000007
名称：オルシノール
分子式：Ｃ７Ｈ８Ｏ２、
分子量：１２４、
特性：薄黄色−白色粉末、
ＵＶ（メタノール）：λｍａｘ（ｌｏｇε）２８１（３．２０）、２７５（３．２２）、２０４（４．５９）、
ＩＲ（ＫＢｒ）：νｍａｘ３３１３、１６２９、１６０１、１５１２、１４７７、１３３２、１２０８、１１４８、１０３２、９７３ｃｍ−１、
ＥＩ−ＭＳ（７０ｅｖ）：ｍ／ｚ１２５［（Ｍ＋１）＋，８］、１２４［Ｍ＋，１００］、１２３［（Ｍ−１）＋，５５］、１０７［（Ｍ＋１-１８）＋，７］、９５（１２）、７７（８）、
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ、４００ＭＨｚ）δＨ：６．１４（２Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−２，６）、６．１０（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−４）、２．１６（３Ｈ，ｓ，Ｈ−７）、
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ）δＣ：１５９．２（ｓ×２、Ｃ−１、３），１０８．７（ｄ×２，Ｃ−２、６）、１０８．７（ｓ，Ｃ−４）、１４１．２（ｓ，Ｃ−５）、２１．５（ｑ，Ｃ−７）。
【００３７】
【化７】
0004714304.tif 000008
名称：オルシノール−１−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシド
分子式：Ｃ１９Ｈ２８Ｏ１２、
分子量：４４８、
特性：白色無定形粉末、
融点：１１７〜１１９℃、
ＦＡＢ−ＭＳ（−）（ｍ／ｚ）：４４７［Ｍ−１］−、１２３［Ｍ−１−２ｇｌｃ］、
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δＨ：６．４３（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−２）、６．４０（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−４）、６．２８（１Ｈ，ｂｒｓ，Ｈ−６）、４．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３０Ｈｚ，Ｈ−１’）、４．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７３Ｈｚ，Ｈ−１’’）、２．２１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−７）、
１３Ｃ  ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δＣ：１６０．０（ｓ，Ｃ−１）、１０２．０（ｄ，Ｃ−２）、１５９．２（ｓ，Ｃ−３）、１１１．２（ｄ，Ｃ−４）、１４１．３（ｓ，Ｃ−５）、１０９．８（ｄ，Ｃ−６）、２１．７（ｓ，Ｃ−７）、１０２．１（ｄ，Ｃ−１’）、７４．８（ｄ，Ｃ−２’）、７７．７（ｄ，Ｃ−３’）、７１．３（ｓ，Ｃ−４’）、７７．５（ｄ，Ｃ−５）、６９．６（ｔ，Ｃ−６’）、１０４．６（ｄ，Ｃ−１’’）、７５．２（ｄ，Ｃ−２’’）、７７．８（ｄ，Ｃ−３’’）、７１．５（ｄ，Ｃ−４’’）、７７．９（ｄ，Ｃ−５’’）、６２．６（ｔ，Ｃ−６’’）。
【実施例２】
【００３８】
１，３−Ｏ−ジアセチルオルシノールの調製
１００ｍｌの丸底フラスコにピリジン（４０ｍｌ）およびオルシノール（１．２４ｇ，０．０１ｍｏｌ）を充填した。反応混合物を室温で攪拌し、無水酢酸（３ｍｌ）を滴下した。室温で２４時間攪拌した後、反応混合物を２００ｍｌの氷水に注ぎいれた。混合物を酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせ、５％塩酸で３回、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で３回、および飽和塩化ナトリウムで３回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、真空下で蒸発乾固した。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィに供し、石油エーテル−アセトン（９０：１０，ｖ／ｖ）で溶出し、１，３−Ｏ−ジアセチルオルシノール（１．８７ｇ，収率９０％）を得た。
【００３９】
【化８】
0004714304.tif 000009
名称：１，３−Ｏ−ジアセチルオルシノール
分子式：Ｃ１１Ｈ１２Ｏ４、
分子量：２０８、
特性：無色油状物
１，３−Ｏ−ジアセチルオルシノールの構造データ：
ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ：２３１［Ｍ＋Ｎａ］＋、
ＩＲ（ＫＢｒ）nｍａｘ：１７６９、１６０２、１５９２、１４６６、１４３４、１３６９、１２９２、１１９８、１１２４、１０３６ｃｍ−１、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δＨ：６．７８（２Ｈ，ｓ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，Ｈ−４，６）、６．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，Ｈ−２）、２．３０（３Ｈ，ｓ，Ｈ−７）、２．１９（ｓ，６Ｈ）、
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δＣ：１６９．０（ｓ，ＣＨ３ＣＯ）、１６９．０（ｓ，ＣＨ３ＣＯ）、１５０．９（ｓ，Ｃ−１）、１５０．９（ｓ，Ｃ−３）、１４０．３（ｓ，Ｃ−５）、１１９．７（ｄ，Ｃ−４）、１１９．７（ｄ，Ｃ−６）、１１２．５（ｄ，Ｃ−２）、２１．２（ｑ，Ｃ−７）、２０．９（ｑ，ＣＨ３ＣＯ）、２０．９（ｑ，ＣＨ３ＣＯ）。
【実施例３】
【００４０】
３−Ｏ−アセチル−オルシノール−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラアセチル）−β−Ｄ−グルコピラノシドの調製
オルシノール（２８６ｍｇ）をピリジン（２０ｍｌ）に溶解した。反応混合物を室温で攪拌し、無水酢酸（２．５ｇ，２５ｍｍｏｌ）を滴下した。室温で２４時間攪拌した後、反応混合物を５０ｍｌの氷水に注ぎ入れた。混合物を酢酸エチル（３×２０ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせ、５％塩酸で３回、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で３回および飽和塩化ナトリウムで３回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、真空下で蒸発乾固した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィに供し、３−Ｏ−アセチル−オルシノール−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラアセチル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（４２１ｍｇ，収率８５％）を得た。
【００４１】
【化９】
0004714304.tif 000010
名称：３−Ｏ−アセチル−オルシノール−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラアセチル）−β−Ｄ−グルコピラノシド
分子式：Ｃ２３Ｈ２８Ｏ１２、
分子量：４９６、
特性：白色無定形粉末、
ＥＳＩ−ＭＳ（＋）ｍ／ｚ：５１９［Ｍ＋Ｎａ］＋、
ＩＲ（ＫＢｒ）nｍａｘ：１７５９、１６２５、１５９０、１３７３、１２４１、１２１１ｃｍ−１、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δＨ：６．６８（１Ｈ，ｓ，Ｊ＝１．９Ｈｚ）、６．６３（１Ｈ，ｓ，Ｊ＝１．９Ｈｚ）、６．５４（１Ｈ，ｓ，Ｊ＝１．９Ｈｚ）、５．３０〜５．２２（ｍ，２Ｈ）、５．１４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．７Ｈｚ）、５．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）、４．２８〜４．１４（ｍ，２Ｈ）、３．８９〜３．８５（ｍ，１Ｈ）、２．３１（ｓ，３Ｈ）、２．２７（ｓ，３Ｈ）、２．０８（ｓ，３Ｈ）、２．０５（ｓ，３Ｈ）、２．０４（ｓ，３Ｈ）、２．０３（ｓ，３Ｈ）、
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δＣ：１７０．６（ｓ，ＣＨ３ＣＯ）、１７０．２（ｓ，ＣＨ３ＣＯ）、１６９．４（ｓ，ＣＨ３ＣＯ）、１６９．３（ｓ，ＣＨ３ＣＯ）、１６９．３（ｓ，ＣＨ３ＣＯ）、１５７．２（ｓ，Ｃ−３）、１５１．１（ｓ，Ｃ−１）、１４０．６（ｓ，Ｃ−５）、１１７．２（ｄ，Ｃ−６）、１１５．１（ｄ，Ｃ−４）、１０７．６（ｄ，Ｃ−２）、９８．８（ｓ，Ｃ−１’）、７２．６（ｄ，Ｃ−３’）、７２．０（ｄ，Ｃ−５’）、７１．０（ｄ，Ｃ−２’）、６８．２（ｄ，Ｃ−４’）、６２．０（ｔ，Ｃ−６’）、２１．５（ｑ，Ｃ−７）、２１．１（ｑ，ＣＨ３ＣＯ）、２０．６（ｑ，ＣＨ３ＣＯ×４）。
【実施例４】
【００４２】
オルシノール−１−テトラ−Ｏ−アセチル−ラムノピラノースの調製
テトラ−Ｏ−アセチル−ラムノピラノース（３６ｇ）を臭化水素酸および酢酸の混合物（１００ｍｌ）に溶解した。反応混合物を、光防護下、５時間攪拌した。反応混合物を５００ｍｌの氷水に注ぎ入れ、酢酸エチル（３×５００ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせ、水で３回、５％ＮａＨＣＯ３水溶液で３回、および飽和塩化ナトリウムで３回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、真空下で蒸発乾固し、テトラ−Ｏ−アセチル−ラムノピラノシルブロミドを得た。
【００４３】
オルシノール（１２．４ｇ）をクロロホルム（２０ｍｌ）に溶解した。反応混合物を攪拌し、５％水酸化ナトリウム溶液（２０ｍｌ）を加えた。温度が５０℃まで上昇した時、テトラ−Ｏ−アセチル−ラムノピラノシルブロミド（０．１２ｍｏｌ）をクロロホルムに溶解した溶液を滴下した。反応が完了するまで、反応混合物を５０℃で攪拌し、次いで１５０ｍｌの氷水に注ぎ入れた。５％塩酸でｐＨを７に調節した。混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、真空下で蒸発乾固した。粗生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィに供し、酢酸エチル−石油エーテル（５：１，ｖ／ｖ）で溶出し、オルシノール−１−テトラ−Ｏ−アセチル−ラムノピラノース（１．８７ｇ，収率９０％）を得た。
【実施例５】
【００４４】
オルシノール−１−ラムノピラノースの調製
ナトリウムメトキシド（０．１８ｇ）を、オルシノール−１−テトラ−Ｏ−アセチル−ラムノピラノース（４．１４ｇ）のメタノール（２０ｍｌ）溶液に加えた。室温で２時間攪拌した後、反応混合物を５％塩酸で中性にした。蒸留水（５０ｍｌ）を添加した後、メタノールを真空下で除去した。混合物をｎ−ブタノール（３×５０ｍｌ）で抽出した。有機層を合わせ、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、真空下で蒸発乾固した。粗生成物をエタノールで結晶化し、オルシノール−１−ラムノピラノースを得た。
【実施例６】
【００４５】
実施例１に従って調製したオルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシドを、注射用の水に溶解した。細菌ろ過（０．２〜０．４５μｍろ過）の後、溶液をバイアルにサブパッケージし、密封し、滅菌しオルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシドの注射液を得た。
【実施例７】
【００４６】
実施例１に従って調製したオルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシドを、注射用の無菌水に溶解した。該溶液を、ブフナー漏斗を使用して真空ろ過によりろ過し、無菌条件下、精密フィルターでろ過（０．２〜０．４５μｍろ過）し、アンプルにサブパッケージし、凍結乾燥の後密封し、オルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシドの注射用凍結乾燥粉末を得た。
【実施例８】
【００４７】
実施例１に従って調製したオルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシドを賦形剤と混合し、オルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシドの注射用粉末を得た。前者の後者に対する重量比は、９：１であった。
【実施例９】
【００４８】
オルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシドを実施例１に従って調製した。オルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシドと賦形剤とを、１：５と１：１０との間の化合物と賦形剤との重量比で混合することによって錠剤、カプセル剤および顆粒剤を調製した。
【実施例１０】
【００４９】
オルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシドを実施例１に従って調製した。オルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシドの経口液剤を、従来の方法に従って調製した。
【実施例１１】
【００５０】
オルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシドを実施例１に従って調製した。オルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシドと賦形剤とを５：１の重量比で混合することによって、カプセル剤および顆粒剤を調製した。
【実施例１２】
【００５１】
実施例１に従って調製したオルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシド（１２．４ｇ）、デンプン（６００ｇ）、ラクトース（２００ｇ）、メントール（５ｇ）およびカルボキシメチルスターチナトリウム（１８３ｇ）を混合し、機能性食品としてトローチとなるよう更に調製した。
【００５２】
本発明の本質をより深く理解するために、オルシノールまたはその誘導体、および医薬担体または賦形剤を含有する医薬組成物の薬理学的効果を試験する。しかし、本発明は、特定の詳細な記載に限定されないことは理解されるものである。
【００５３】
［実験例１］
ＯＲＧおよびＯＲの薬理学的試験
１．ラットおよびマウスの尾懸垂テスト（ＴＳＴ）および強制水泳テスト（ＦＳＴ）における投与量−効果関係に関するＯＲＧおよびＯＲの抗うつ効果
【００５４】
１．１  実験方法
四川省の実験動物人民病院（ｔｈｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｎｉｍａｌｓ，Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ）から入手した昆明マウスおよびスプラーグ・ドーリー・ラット（認証番号：Ａ４ＣＸＫ（Ｃｈｕａｎ）２００３−１６）を使用した。マウスは、実験例開始時、３〜４週齢で、体重は２５〜３０ｇであった。ラットの体重は２５０〜３００ｇであった。各群の動物の数を表１〜表５に示す。オルシノール（ＯＲ）、オルシノール−１−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＯＲＧ）、オルシノール−１−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）］−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＯＲＧＧ）、１，３−Ｏ−ジアセチルオルシノール（ＯＲ−２Ａｃ）、および３−Ｏ−アセチル−オルシノール−１−Ｏ−（２，３，４，６−テトラアセチル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＯＲＧ−５Ａｃ）を、実施例１、２および３に従って調製した。動物を、異なる投与量の実験例群、ビヒクル群、およびイミプラミン群（Ｓｉｇｍａ，バッチＮｏ．１０６ｋ１５８８）およびベンラファキシン群（Ｗｕｈａｎ  Ｙｕａｎｃｈｅｎｇ社，バッチＮｏ．２００７０１００１）を含む２つのD群に分けた。
【００５５】
薬剤：ＯＲＧを通常の生理食塩水に溶解した。正の対照では、イミプラミンまたはベンラファキシンを、音波処理により０．５％ＣＭＣ−ナトリウムを含有する通常の生理食塩水に懸濁させた。イミプラミンまたはベンラファキシンの投与量は、１５ｍｇ／ｋｇであった。歯肉内または腹腔内注射の容量は、マウスで０．１ｍｌ／１０ｇ、およびラットで１ｍｌ／１００ｇまたは０．１ｍｌ／１００ｇであった。
【００５６】
マウスにおけるＦＳＴ：装置は水を深さ１７ｃｍまで満たしたシリンダ（高さ２４ｃｍ×直径１５ｃｍ）で構成され、温度は２４±２℃であった。ＦＳＴを開始する２４時間および５時間前に、全ての薬剤およびビヒクルを投与した。合計６分間の最後の４分間の間のマウスの不動時間を手動で記録した。
【００５７】
ラットにおけるＦＳＴ：各実験例で２回の水泳セッションを行った。先ず、１５分間のプレテスト水泳セッションを行い、最初の５分間の不動時間を手動で記録した。不動時間が長すぎるあるいは短すぎる場合は、該ラットは排除した。全ての薬剤およびビヒクルを、プレテスト水泳セッション後０時間および１９時間の２回投与した。プレテスト水泳セッションの２４時間後、５分間の試験セッションの間の不動時間を手動で記録した。
【００５８】
マウスにおけるＴＳＴ：ＴＳＴを開始する２４時間および５時間前に、全ての薬剤およびビヒクルを投与した。マウスを、試験チャンバの床から５０ｃｍ上に位置する水平のバーに、尾の先から２ｃｍの部分を接着テープで貼り付けることによって、ぶら下げた。６分間の不動時間を手動で記録した。
【００５９】
データ分析：結果は平均±ＳＥＭとして表し、ＳＰＳＳ１１ソフトウェアを使用して分析した。群間の比較は、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）、次いで最小有意差（ＬＳＤ）テストを使用して行った。有意レベルはＰ＜０．０５に設定した。ＥＤ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して計算した。
【００６０】
１．２  結果
１．２．１  ラットのＦＳＴにおけるＯＲＧ（歯肉内注射）の抗うつ効果
【表１】
0004714304.tif 000011
【００６１】
ラットにおいて、経口投与したＯＲＧの投与量−効果関係を評価した。ＯＲＧにより不動時間が減らされ、その効果は投与量に有意に依存していた（表１）。最高効力の投与量は４ｍｇ／ｋｇであり、ＥＤ５０は約０．２２ｍｇ／ｋｇであった。
【００６２】
１．２．２  マウスのＦＳＴにおけるＯＲＧ（歯肉内注射）の抗うつ効果
この試験では、ＦＳＴを開始する２４時間および５時間前に、ＯＲＧを歯肉内投与した。不動時間は減少し、その効果は投与量に有意に依存していた（表２）。最高効力の投与量は３ｍｇ／ｋｇであり、ＥＤ５０は約０．２２ｍｇ／ｋｇであった。
【表２】
0004714304.tif 000012
【００６３】
１．２．３  マウスのＴＳＴにおけるＯＲＧ（歯肉内注射）の抗うつ効果
ＴＳＴを開始する２４時間および５時間前に、ＯＲＧを歯肉内投与した。不動時間は減少し、その効果は投与量に有意に依存していた（表３）。最高効力の投与量は１２ｍｇ／ｋｇであり、ＥＤ５０は約０．７３ｍｇ／ｋｇであった。
【表３】
0004714304.tif 000013
【００６４】
１．２．４  マウスのＦＳＴにおけるＯＲ（腹腔内注射）の抗うつ効果
この試験では、ＦＳＴを開始する２４時間および５時間前に、ＯＲを腹腔内投与した。不動時間は減少した（表４）。
【表４】
0004714304.tif 000014
【００６５】
１．２．５  マウスのＦＳＴにおけるＯＲＧの誘導体（腹腔内注射）の抗うつ効果
この試験では、ＦＳＴを開始する２４時間および５時間前に、ＯＲＧの誘導体（ＯＲＧＧ、ＯＲ−２Ａｃ、およびＯＲＧ−５Ａｃ）を、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって投与した。ＯＲＧの全ての誘導体により、ＦＳＴモデルのマウスの不動時間は減少した（表５）。
【表５】
0004714304.tif 000015
【００６６】
１．３  ＯＲＧの抗うつ活性の治療指数（ＴＩ）
急性毒性テストでは、コンメイマウスに１７５０ｍｇ／ｋｇの投与量でＯＲＧを投与した場合、飽和濃度、動物行動学的および組織学的検査で、異常は発見されなかった。したがって、ＯＲＧの中毒量の中央値（ＴＤ５０）は、１７５０ｍｇ／ｋｇよりも高かった。
【００６７】
ＦＳＴのマウスにおけるＯＲＧの治療指数（ＴＩ）＝ＴＤ５０÷ＥＤ５０≧１７５０ｍｇ／ｋｇ÷０．２２ｍｇ／ｋｇ≧７９５５。
【００６８】
ＴＳＴのマウスにおけるＯＲＧの治療指数（ＴＩ）＝ＴＤ５０÷ＥＤ５０≧１７５０ｍｇ／ｋｇ÷０．７３ｍｇ／ｋｇ≧２３９７。
【００６９】
［実験例２］
マウスの強制水泳テスト（ＦＳＴ）における時間経過依存性に関するＯＲＧの抗うつ効果
【００７０】
２．１  実験方法
四川省の実験動物人民病院から入手したコンメイマウス（認証番号：Ａ４ＣＸＫ（Ｃｈｕａｎ）２００３−１６）を使用した。これらは、実験例開始時、３〜４週齢で、体重は２５〜３０ｇであった。各群の動物の数を表６〜表８に示す。ＯＲＧを実施例１に記載するように調製した。動物を、異なる投与量の実験例群、およびビヒクル対照群に分けた。
【００７１】
２．１．１  投与および実験計画：
ＯＲＧを異なる濃度で通常の生理食塩水（ＮＳ）に溶解した。全ての薬物およびそれらのビヒクルを、０．１ｍｌ／１０ｇの容量で経口投与した。
【００７２】
２．１．２  投与回数：
動物を、ＯＲＧ（３ｍｇ／ｋｇ）またはＮＳで、２４時間以内に１〜５回処置した。最後のＯＲＧ処置から５時間後、不動時間を記録した。
【００７３】
２．１．３  異なる投与量および投与回数の比較：
マウスを、２４時間以内で、６ｍｇ／ｋｇのＯＲＧで１回、あるいは３ｍｇ／ｋｇのＯＲＧで２回処置した。最後のＯＲＧ処置から５時間後に不動時間を記録した。
【００７４】
２．１．４  抗うつ活性に関するＯＲＧの効果（発現時間および保持時間）：
マウスをＯＲＧ（３ｍｇ／ｋｇ）で処置した。投与から１９時間後、さらにＯＲＧ（３ｍｇ／ｋｇ）の投与量を与えた。
【００７５】
２回目の投与から２．５時間、５時間、２４時間、７２時間および２週間後に、不動時間を記録した。
【００７６】
２．１．５  データ分析：
結果は平均±ＳＥＭ（％）として表す。ＮＳ群の不動時間を１００％と設定し、各群の抗うつ効果をＮＳ群に基づいて計算した。パーセントの値が低いほど、より良好な抗うつ効果が示されている。このノーマライズの方法により、実験例群の間の比較が可能になった。統計分析は、一元配置ＡＮＯＶＡ、次いでＬＳＤテストで行った。Ｐ値＜０．０５で有意であるとした。
【００７７】
２．２  結果
２．２．１  マウスのＦＳＴにおける２４時間以内の投与の異なる回数でのＯＲＧの抗うつ効果
ＯＲＧ（３ｍｇ／ｋｇ）を２４時間以内に１〜５回投与した。ＯＲＧで２回または３回処置した群において、不動時間が有意に減少した（表６）。結果は、最も良好な薬物効果は、１０〜１９時間の時間間隔で、２４時間以内に２回または３回の投与後に得られたことを示している。
【表６】
0004714304.tif 000016
【００７８】
２．２．２  同じ最終投与量を用いた、２４時間以内に異なる投与回数の中での抗うつ効果の比較
マウスを、２４時間内に、６ｍｇ／ｋｇのＯＲＧで１回、あるいは３ｍｇ／ｋｇのＯＲＧで２回処置した場合、不動時間は全ての群で減少した（表７）。しかし、２４時間内に、３ｍｇ／ｋｇのＯＲＧで２回処置されたマウスがより良好な効果を示した。
【表７】
0004714304.tif 000017
【００７９】
２．２．３  ＦＳＴにおける迅速な発現および長期的な持続に関するＯＲＧの抗うつ効果
マウスにＯＲＧを経口的に与えた（３ｍｇ／ｋｇ）。１９時間後、さらにＯＲＧ（３ｍｇ／ｋｇ）の投与量を与えた。２回目の投与から２．５時間、５時間、２４時間、７２時間および２週間後に、不動時間を記録した。ＯＲＧの抗うつ効果は、２回目の投与から２．５時間後に迅速に現れた。最高の効果は２回目の投与から２４時間後に現れ、該効果は、少なくとも７２時間持続した（表８）。結果は、ＯＲＧが抗うつ効果を素早く発現し、この効果は少なくとも７２時間持続することを示している。
【表８】
0004714304.tif 000018
【００８０】
［実験例３］
マウスの慢性の予測不能軽度ストレスモデルにおけるＯＲＧの抗うつ効果
慢性の予測不能軽度ストレス（ＣＭＳ）は、ヒトにおいてうつ病を悪化させるまたは引き起こすのと同じ慢性ストレスの病因を持つうつ病モデルであると考えられる。飲料または食物制限、抑制および水泳のような種々の予測不能な軽度のストレスにより、動物は、報酬に対する反応（たとえば、糖飲料の好み）をなくすことがある。ＣＭＳに曝した後、ＦＳＴおよびＴＳＴにおける不動時間は有意に増加し、これはうつ病がより重症化したことを示す。したがって、ＣＭＳは、ストレスに起因するうつ病に関して、抗うつ剤の効果を評価するために、広く使用される。
【００８１】
３．１  実験方法
四川省の実験動物人民病院から入手したコンメイマウス（認証番号：Ａ４ＣＸＫ（Ｃｈｕａｎ）２００３−１６）を使用した。これらは、実験例開始時、３〜４週齢で、体重は２５〜３０ｇであった。各群の動物の数を表９および表１０に示す。ＯＲＧを実施例１に記載するように調製した。動物を、異なる投与量の実験例群、ビヒクル対照群、および正の対照としてイミプラミン群（Ｓｉｇｍａ，バッチＮｏ．１０６ｋ１５８８）に分けた。
【００８２】
ＣＭＳモデル：コンメイマウスに与えた慢性的な軽度ストレスは、日内リズムの逆転、連続照射、寒さ、湿った寝具、傾斜のあるケージ、食物および飲料制限、および拘束であった。これらのストレスのうち一つだけを、無作為に各マウスに２４時間与え、同じストレスは、継続して２回与えなかった。ストレス期間を８週間続けた。最後の週で、ＯＲＧ１日１回を７日間連続して経口投与した。行動テストを最後の投与から３０分後に行った。テストしたパラメータは、ＣＭＳモデルマウスのＦＳＴおよびＴＳＴにおける不動時間であった。ＦＳＴおよびＴＳＴの方法およびデータ分析は、先に記載の通りであった。
【００８３】
３．２  結果
３．２．１  ＣＭＳモデルマウスのＦＳＴにおけるＯＲＧの抗うつ効果
ＯＲＧは、ＦＳＴにおいて、不動時間を有意に減らし、その効果は投与量に有意に依存していた（表９）。抗うつ効果に関する最高投与量は２０ｍｇ／ｋｇであり、ＥＤ５０は０．８１ｍｇ／ｋｇであった。
【表９】
0004714304.tif 000019
【００８４】
３．２．２  ＣＭＳモデルマウスのＴＳＴにおけるＯＲＧの抗うつ効果
ＯＲＧは、ＴＳＴにおいて不動時間を有意に減らし、その効果は投与量に有意に依存していた（表１０）。抗うつ効果に関する最高投与量は２０ｍｇ／ｋｇであり、ＥＤ５０は約４．２２ｍｇ／ｋｇであった。
【表１０】
0004714304.tif 000020
【００８５】
３．３  ＣＭＳモデルマウスのＴＳＴおよびＦＳＴにおけるＯＲＧのＴＩ
急性毒性テストにおいて、マウスにＯＲＧを１７５０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した場合、飽和濃度、動物行動学的および組織学的検査で、異常は発見されなかった。したがって、ＯＲＧの中毒量の中央値（ＴＤ５０）は、１７５０ｍｇ／ｋｇよりも高かった。
ＦＳＴのＣＭＣマウスにおけるＯＲＧの治療指数（ＴＩ）≧１７５０ｍｇ／ｋｇ÷０．８１ｍｇ／ｋｇ≧２１６０。
ＴＳＴのＣＭＳマウスにおけるＯＲＧの治療指数（ＴＩ）＝ＴＤ５０÷ＥＤ５０≧１７５０ｍｇ／ｋｇ÷４．２２ｍｇ／ｋｇ≧４１５。
【００８６】
［実験例４］
マウスの恒暗（ＤＤ）モデルにおけるＯＲＧの抗うつ効果
ＤＤモデルは、日内リズム障害に関連するうつ病の試験のために使用されると近年報告された病原学的モデルである。このモデルでは、動物の日内リズムを、うつ病を誘発するまたは悪化させる連続した暗室飼育条件で変化させる。したがって、この試験では、ＤＤモデルを、うつ病を起こすまたは悪化させるために使用し、次いでＯＲＧの抗うつ効果をＦＳＴおよびＴＳＴでテストした。
【００８７】
４．１  実験方法
四川省の実験動物人民病院から入手したコンメイマウス（認証番号：Ａ４ＣＸＫ（Ｃｈｕａｎ）２００３−１６）を使用した。これらは、実験例開始時、３〜４週齢で、体重は２５〜３０ｇであった。各群の動物の数を表１１および表１２に示す。ＯＲＧを実施例１に記載するように調製した。動物を、異なる投与量の実験例群、ビヒクル対照群、および正の対照としてイミプラミン群（Ｓｉｇｍａ，バッチＮｏ．１０６ｋ１５８８）に分けた。
【００８８】
マウスのＤＤモデル：マウスを２４時間連続的に暗い条件下に置いた。パッドの交換、食物および水の追加、および他の操作は、輝度が１．０ルクス未満の赤色灯の条件下で行った。この条件の期間を、２８日間継続した。最終の週で、ＯＲＧを１日１回１週間経口投与した。ＦＳＴおよびＴＳＴを最後の投与から３０分後に行った。方法およびデータ分析は先に記載した通りであった。
【００８９】
４．２  結果
４．２．１  ＤＤモデルマウスのＦＳＴにおけるＯＲＧの抗うつ効果
ＯＲＧは、ＦＳＴにおいて不動時間を有意に減らし、その効果は投与量に有意に依存していた（表１１）。最高効力の投与量は１０ｍｇ／ｋｇであり、ＥＤ５０は約１．４８ｍｇ／ｋｇであった。
【表１１】
0004714304.tif 000021
【００９０】
４．２．２  ＤＤモデルマウスのＴＳＴにおけるＯＲＧの抗うつ効果
ＯＲＧは、ＴＳＴにおいて不動時間を有意に減らし、その効果は投与量に有意に依存していた（表１２）。最高効力の投与量は２０ｍｇ／ｋｇであり、ＥＤ５０は約１．７５ｍｇ／ｋｇであった。
【表１２】
0004714304.tif 000022
【００９１】
［実験例５］
マウスの睡眠遮断（ＳＤ）モデルにおけるＯＲＧの抗うつ効果
睡眠障害は、うつ病の症状の一つである。うつ病を発症するまたは悪化させる病理学的要因の一つであるかもしれない。不動状態のようなうつ病様行動は、睡眠遮断によって亢進される。そこで、ＳＤモデルをうつ病を起こすまたは悪化させるために使用し、次いでＯＲＧの抗うつ効果を、ＳＤモデルマウスのＦＳＴおよびＴＳＴにおいてテストした。
【００９２】
５．１  実験方法
四川省の実験動物人民病院から入手したコンメイマウス（認証番号：Ａ４ＣＸＫ（Ｃｈｕａｎ）２００３−１６）を使用した。これらは、実験例開始時、３〜４週齢で、体重は２５〜３０ｇであった。各群の動物の数を表１３に示す。ＯＲＧを実施例１に記載するように調製した。動物を、異なる投与量の実験例群、ビヒクル対照群、および正の対照としてイミプラミン群（Ｓｉｇｍａ，バッチＮｏ．１０６ｋ１５８８）に分けた。
【００９３】
ＳＤモデル：マウスのＳＤモデルを確立するために、水環境中の複数の台を用いる修正法を使用した。台上のマウスは、飲食は自由であった。しかし眠ってしまうと、筋緊張を失うため、水中に落ちた。落ちた動物は、台を支えている傾斜した柱を介して、台に再び這い上がった。７２時間の睡眠遮断の後、ＯＲＧを、ＦＳＴを開始する２４時間および５時間前に経口投与した。動物の不動時間を記録した。方法およびデータ分析は、先に記載した通りであった。
【００９４】
５．２  結果
５．２．１  ＳＤモデルマウスのＦＳＴにおけるＯＲＧの抗うつ効果
３日間の睡眠遮断の第３日目、ＯＲＧを、ＦＳＴを開始する２４時間および５時間前の２回投与した。ＯＲＧは、ＦＳＴにおいて不動時間を有意に減らし、その効果は投与量に有意に依存していた（表１３）。最高効力の投与量は１０ｍｇ／ｋｇであり、ＥＤ５０は約３．７９ｍｇ／ｋｇであった。
【表１３】
0004714304.tif 000023
【００９５】
５．３  ＤＤモデルおよびＳＤモデルマウスにおけるＯＲＧの治療指数
ＯＲＧの中毒量の中央値（ＴＤ５０）は１７５０ｍｇ／ｋｇよりも高かった（前を参照）。ＦＳＴのＤＤマウスにおけるＯＲＧの治療指数＝ＴＤ５０÷ＥＤ５０≧１７５０ｍｇ／ｋｇ÷１．４８ｍｇ／ｋｇ≧１１８２。ＴＳＴのＤＤマウスにおけるＯＲＧの治療指数＝ＴＤ５０÷ＥＤ５０≧１７５０ｍｇ／ｋｇ÷１．７５ｍｇ／ｋｇ≧１０００。ＦＳＴのＳＤマウスにおけるＯＲＧの治療指数＝ＴＤ５０÷ＥＤ５０≧１７５０ｍｇ／ｋｇ÷３．７９ｍｇ／ｋｇ≧４６２。
【００９６】
［実験例６］
ＯＲＧの抗不安効果の薬理試験
げっ歯類におけるフットショックおよび調整された恐怖ストレスにより誘発されたすくみ挙動は、不安のレベルを評価するためのモデルとして広く認められている。げっ歯類は、嫌悪刺激が与えられると、すくみ挙動を示す。避けられない恐怖刺激に対する動物の正常な応答であるすくみは、身体運動の完全な欠如またはしゃがんだ姿勢の維持と規定される。抗不安剤は動物のすくみ挙動を減らす。さらに、高架式十字迷路は、げっ歯類における不安の評価のための、広く認められているモデルである。該不安の査定は、げっ歯類は、恐ろしければ、自発的に高架式十字迷路のクローズドアームにより多くの時間を費やすように、新規探査への動向と高さの恐怖との間の葛藤に基づく。したがって、新規探査行動は、抗不安剤によって強化され、不安惹起剤によって抑制される。
【００９７】
６．１  実験方法
四川省の実験動物人民病院から入手したコンメイマウス（認証番号：Ａ４ＣＸＫ（Ｃｈｕａｎ）２００３−１６）を使用した。これらは、実験例開始時、３〜４週齢で、体重は２５〜３０ｇであった。各群の動物の数を表１３に示す。ＯＲＧを実施例１に記載するように調製した。動物を、異なる投与量のＯＲＧを与えた薬物投与群、ビヒクル対照群、および正の対照としてジアゼパム群（Ｊｉｎｙａｏ社，バッチＮｏ．１０６ｋ１５８８）に分けた。
【００９８】
フットショック誘発すくみ挙動：１０分間のトレーニングセッションのために標準のコンディショニングチャンバ（Ｍｅｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，ＵＳＡ）に置く２４時間および５時間前に、動物にＯＲＧまたはビヒクルの腹腔内注射を与えた。セッション開始から２、４、６、８および１０分後、フットショック（０．８ｍＡ、２秒）をチャンバのグリッド床を通して送った。最後の５分間のすくみ時間を記録した。最初のトレーニングから２４時間後、ラットをフットショックのないチャンバに再び置き、すくみ時間を記録した。
【００９９】
高架式十字迷路（ＥＰＭ）：ＥＰＭは、等しい寸法（長さ３０ｃｍ×幅５ｃｍ）の２個のオープンアームおよび２個のクローズドアームを備えていた。２個のクローズドアームを、５ｃｍ×５ｃｍの中央領域によって接続した。全迷路を３５ｃｍの高さに上げた。テストを始める２４時間および５時間前に、ＯＲＧを腹腔内投与した。マウスを、クローズドアームに面する迷路の中央に個々に置いた。それぞれの動物を、５分間の単一セッションでテストした。オープンアームに入る数、クローズドアームに入る数、オープンアームに居る合計時間、およびクローズドアームに居る合計時間を記録し、全ての肢がアームに入ることを入場する基準として定義した。オープンアームへの入場の数およびオープンアームに居た時間は、動物の不安レベルを評価する主要な指標であり、より入場の回数が多いほど、あるいは時間が長いほど、不安レベルは小さい。
【０１００】
データ分析：テストの結果は、平均±ＳＥＭとして表す。一方向ＡＮＯＶＡ、次いでＳＰＳＳ１１ソフトウェアを使用するＬＳＤテストを使用した。有意レベルは、Ｐ＜０．０５に設定した。
【０１０１】
６．２  結果
６．２．１  ラットのフットショック誘発すくみ挙動試験におけるＯＲＧの抗不安効果
【０１０２】
テストを開始する２４時間および５時間前にＯＲＧを腹腔内投与した場合、ラットのすくみ時間は、有意に減少した（表１４）。
【表１４】
0004714304.tif 000024
【０１０３】
６．２．２  ラットの調整された恐怖ストレス誘発すくみ挙動試験におけるＯＲＧの抗不安効果
フットショックを受ける２４時間および５時間前に２回、ラットにＯＲＧを腹腔内投与し、２４時間後、フットショックを与えずに、同じ環境に再び曝した。環境要因により誘発される恐れの記憶の回復により、ラットはすくみ挙動を誘発する調整された恐怖ストレスを起こす。ＯＲＧは、すくみ挙動を著しく減らした（表１５）。
【表１５】
0004714304.tif 000025
【０１０４】
６．２．３  マウスの高架式十字迷路試験におけるＯＲＧの抗不安効果
高架式十字迷路テストの２４時間および５時間前に２回投与されたＯＲＧにより、オープンアームへの入場の回数およびオープンアームに居た合計時間は有意に増加した（表１６および表１７）。この結果は、ＯＲＧの有意な抗不安効果を示していた。
【表１６】
0004714304.tif 000026
【表１７】
0004714304.tif 000027
【０１０５】
［実験例７］
ＯＲＧの抗ストレス効果の薬理試験
ストレスは、生物系において、生物の生理的または心理的な恒常性維持を深刻にかく乱する任意の状態として定義される。ストレスは、多くの病気を悪化させるあるいは至らせる主要な要因の一つであると考えられている。海馬は、学習および記憶、ならびにストレス応答の調節において重要な脳の構造である。ストレスにより、海馬シナプス可塑性、学習および記憶の機能低下に至るかもしれない。血清コルチコステロンの濃度は、ストレスレベルを評価するための、最も一般的な指標の一つである。
【０１０６】
７．１  実験方法
四川省の実験動物人民病院から入手した２５０〜３００ｇの重さのラットを使用した。ＯＲＧを実施例１に記載するように調製した。フルオキセチンは、Ｗｕｈａｎ  Ｙｕａｎｃｈｅｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社（Ｗｕｈａｎ，Ｃｈｉｎａ、バッチＮｏ：１００４−０８０１００２）からのものであった。
【０１０７】
血清コルチコステロンの測定：放射性免疫測定法（ＲＩＡ、ＤＳＬ８０１００、Ｔｅｘａｓ）を使用して、血清コルチコステロンの濃度におけるＯＲＧの効果を測定した。非ストレス群で、ＯＲＧ注射の１時間後に、エーテル麻酔下心穿刺によって血液を採取した。ストレス群では、ＯＲＧ注射の１時間後、ラットに高架式台ストレスを３０分与え、次いで同じ方法でサンプルを採取した。血液サンプルを、室温で４時間維持し、次いで１５分間（３０００ｒｐｍ）遠心した。上澄み（血清）を採取し、−２０℃で保存した。
【０１０８】
海馬における長期強化（ＬＴＰ）記憶の方法：海馬の興奮性シナプス後電位（ＥＰＳＰ）を記録し、ＯＲＧの抗ストレス効果を測定した。ストレスは海馬のＣＡ１領域のＬＴＰを損ない、これは、抗ストレス薬によって減らすことができる。ラットは、フットショックによって以下のように、すなわち、２分間の間隔で、１ｍＡ、２秒のストレスを５回受けた。海馬切片を調製し、３４〜３６℃で１時間、インキュベートし、次いで室温に保った。ＯＲＧを浴溶液中で与えた。ＣＡ１領域におけるＮＭＤＡおよびＡＭＰＡ受容体により媒介されたＥＰＳＰを、べースラインが２０分間安定になるまで記録した。次いで、高周波刺激（ＨＦＳ、１００Ｈｚ、１００パルス、２０秒の間隔）を使用してＬＴＰを誘発した。ＥＰＳＰをＨＦＳ後１時間記録した。
【０１０９】
データ分析：データは平均±ＳＥＭとして表し、ＬＴＰはベースラインに対する最後の１０分間の平均振幅のパーセントとして表した。一方向ＡＮＯＶＡ、次いでＳＰＳＳ１１ソフトウェアを使用するＬＳＤテストを使用した。有意レベルはＰ＜０．０５に設定した。
【０１１０】
７．２  結果
７．２．１  血清コルチコステロンレベルの急性ストレス誘発上昇におけるＯＲＧ（腹腔内注射）の抗ストレス効果。
血液を、対照では、ＯＲＧの腹腔内注射から１時間後に、あるいはストレスを受けてから３０分後に心穿刺により採取した。ＯＲＧにより、血清コルチコステロンの濃度は、投与量依存性方式で有意に増加した（表１８）。
【表１８】
0004714304.tif 000028
【０１１１】
７．２．２  ストレスで損なわれた海馬ＬＴＰにおけるＯＲＧの回復効果
海馬切片をフットショックストレスに曝した後のラットから調製した。これは、海馬ＬＴＰを損なう一般的に認められたプロトコルである。ＯＲＧで１時間インキュベートした切片において、ベースラインＥＰＳＰを２０分間記録した。ＯＲＧは、ストレスで損なわれたＬＴＰを回復し、５μＭ／Ｌの投与量で、ＬＴＰを有意に増加さえし、投与量依存性効果を示した（表１９）。
【０１１２】
前記結果は、ＯＲＧが有意な抗ストレス効果を有し、ストレスが原因のうつ病の治療において重要な臨床価値を有することを示す。
【表１９】
0004714304.tif 000029
【０１１３】
［実験例８］
ＯＲＧの薬理試験および学習および記憶の強化
モリス水迷路（ＭＷＭ）は、海馬依存性学習および記憶、ならびにその細胞および分子メカニズムの試験に広く使用されている。ＭＷＭは、学習および記憶の薬理学的評価の効果的な方法であると一般的に認められている。動物の逃避潜伏期間、戦略および軌跡を、自動的に追跡および分析し、動物の空間的な学習および記憶を調べる。動物がどのようにして逃避するかを学んだ後、隠された台を取り除き、標的の四分の一の区での滞在をテストする。正しい四分の一の区に滞在する時間が長いほど、記憶が良いことを示す。
【０１１４】
８．１  実験方法
四川省の実験動物人民病院から入手したコンメイマウス（認証番号：Ａ４ＣＸＫ（Ｃｈｕａｎ）２００３−１６）を使用した。これらは、実験例開始時、３〜４週齢で、体重は２５〜３０ｇであった。各群の動物の数を表２０および表２１に示す。ＯＲＧを実施例１に記載するように調製した。動物を、フルオキセチンまたは異なる投与量のＯＲＧを与えた薬物投与群およびビヒクル対照群に分けた。薬物投与群には、１．７５ｍｇ／ｋｇまたは３．５ｍｇ／ｋｇのＯＲＧ、あるいは１５ｍｇ／ｋｇのフルオキセチンを与えた。動物には、薬物またはビヒクルの単独腹腔内注射を、毎日訓練の３０分後に、あるいは第８日目の滞在テストの３０分前に、のどちらかで与えた。
【０１１５】
モーリス水迷路：ＭＷＭは、水面から約１ｃｍ下にある隠れた台（１０ｃｍ×１０ｃｍ）の付いた円形プール（直径１００ｃｍおよび深さ３６ｃｍ）で行った。プールを、各四分の一の区に吊るした、異なる形のマーカーをつけた黄色のカーテンで囲んだ。隠れた台を見つけるまでにかかった時間およびマウスの軌跡をコンピュータで記録した。１日〜７日まで、マウスはプールに置かれ、固定された隠れた台を見つけた。第８日目、台を取り除き、マウスが標的四分の一の区に滞在する時間を、自由遊泳の１分も含めてカウントした。
【０１１６】
データ分析：テストのテスト結果は、平均±ＳＥＭとして表す。一方向ＡＮＯＶＡ、次いでＳＰＳＳ１１ソフトウェアを使用するＬＳＤテストを使用した。有意なレベルをＰ＜０．０５に設定した。
【０１１７】
８．２  結果
８．２．１  ＭＷＭテストにおける訓練直後のＯＲＧ（腹腔内注射）の効果
ＯＲＧを毎日訓練後に与えた場合、空間的な記憶の回復（動物が標的四分の一の区に滞在した時間）は、記憶固定に影響することによって、有意に強化された（表２０）。
【表２０】
0004714304.tif 000030
【０１１８】
８．２．２  ＭＷＭテストにおける回復前のＯＲＧ（腹腔内注射）の効果
訓練は７日後に終了した。第８日目に回復テストを行った。回復の３０分前にＯＲＧを投与した場合、空間的記憶回復は有意に強化された（表２１）。
【表２１】
0004714304.tif 000031
【０１１９】
［実験例９］
ＯＲＧの毒性テスト
９．１  マウスにおけるＯＲＧの急性毒性テスト
９．１．１  実験方法
四川省の実験動物人民病院から入手したコンメイマウス（認証番号：Ａ４ＣＸＫ（Ｃｈｕａｎ）２００３−１６）を使用した。これらは、実験例開始時、３〜４週齢で、体重は２５〜３０ｇであった。ＯＲＧを実施例１に記載するように調製した。ＯＲＧ（１７５０ｍｇ）を１０ｍｌのＮＳに溶解し、濃度を１７５ｍｇ／ｍｌとした。マウスを２つの群に分け、評価用としてＯＲＧ群にはＯＲＧを与え、もう一つの群はビヒクル対照としてＮＳで処置した。ＯＲＧおよびＮＳをそれぞれの群に、０．１ｍｌ／１０ｇの容積で経口投与した。
【０１２０】
９．１．２  結果
急性毒性テストにおいて、ＯＲＧを１７５０ｍｇ／ｋｇでマウスに投与し、動物の外観、行動、精神的状態、食欲、毛、色、および呼吸を１４日間観察したが、異常は発見されなかった。全てのマウスが該実験で生き残り、体重増加も正常であった。２つの群の間で有意な違いはなかった。全てのマウスを１４日目に屠殺し、心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓、膵臓、卵巣、精巣、小腸および他の内臓を病理学切片により調べた。ここでも、異常な証拠はなかった。
【０１２１】
９．２  ラットにおけるＯＲＧの亜急性毒性
９．２．１  実験方法
四川省の実験動物人民病院から入手したラット（認証番号：Ａ４ＣＸＫ（Ｃｈｕａｎ）２００３−１６）を使用した。これらの体重は２５０〜３００ｇであった。ＯＲＧを実施例１に記載するように調製した。
【０１２２】
９．２．２  結果
マウスＦＳＴにおいて７９５５倍のＥＤ５０、マウスＴＳＴにおいて２３９７倍のＥＤ５０であるＯＲＧ（１７５０ｍｇ／ｋｇ）を、１４日間連続して、１日１回経口投与した。動物の外観、行動、精神的状態、食欲、毛、色、および呼吸を１４日間観察したが、異常は発見されなかった。全てのラットが該実験で生き残り、体重増加も正常であった。２つの群の間で有意な違いはなかった。全てのマウスを１４日目に屠殺し、心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓、膵臓、卵巣、精巣、小腸および他の内臓を病理学切片により調べた。組織切片の画像は、異常な証拠を示さなかった。
５−メチル−１，３−ベンゼンジオールおよびその誘導体の薬理学的な概要
【０１２３】
ＯＲＧおよびその誘導体の抗うつ効果の投与量−効果および時間経過−応答を、ＦＳＴ、ＴＳＴ、ＤＤ、ＳＤおよびＣＭＳモデルを使用して試験した。結果は、ＯＲ、ＯＲＧおよびその誘導体は、うつ病およびうつ病を示唆する症状、すなわち、日内リズム障害、睡眠障害および慢性ストレスの治療および予防に有用な活性を示すことを表している。抗うつ剤メカニズムの実験により、ＯＲ、ＯＲＧおよびその誘導体は、海馬ＬＴＰの機能障害を改善し、海馬依存性学習および記憶を強化し、不安および急性ストレスのようなうつ病が関連する要因を治療し、予防することが示された。海馬ＬＴＰのメカニズムは、主に、ＮＭＤＡおよびＡＭＰＡ受容体、ならびにこれらの分子および細胞経路に関連する。要するに、ＯＲ、ＯＲＧおよびその誘導体は、調節剤として、これらの標的を調節し、海馬ＬＴＰの回復によってうつ病を治療および予防する効果を生み出す。
【０１２４】
主に化学シナプスおよび記憶を介する多くのニューロンによる伝達は、それらのシナプス内に記憶されると考えられるので、ＬＴＰは、学習および記憶の基本の主要細胞メカニズムの一つと考えられる。したがって、ＯＲ、ＯＲＧおよびその誘導体は、アルツハイマー病、小児期ＡＤＨＤ、喘息および統合失調症のような他の障害の治療および予防にも適用することができる。全ての疾患の９０％超の疾患が、ストレスによって誘発されあるいは悪化されうるので、ストレス調節の海馬機能は、シナプス可塑性に関与し、ＯＲ、ＯＲＧおよびその誘導体は、服用中止期間の間、極度のストレスを感じる薬物中毒者、および過度のストレスまたは不安を受ける癌または心臓血管関連の病気の患者のような、臨床において多くの疾患の治療、予防およびリハビリテーションに有益である。
【０１２５】
毒性における先の実験例の結果と組合わせると、ＯＲ、ＯＲＧおよびその誘導体は、高い性能および低毒性の特徴によって、うつ病およびうつ病の病原学的原因の治療および予防において新しい応用がある。ＯＲ、ＯＲＧおよびその誘導体の他の用途は、急性ストレスおよび不安のようなうつ病を示唆する症状の治療および予防における適用である。ＯＲ、ＯＲＧおよびその誘導体の抗うつ効果に関与するメカニズムは、血清コルチコステロイド、ＮＭＤＡおよびＡＭＰＡ受容体、およびそれらの細胞内シグナル伝達を含む海馬シナプス可塑性、ならびに学習および記憶の調節である。
【０１２６】
したがって、ＯＲ、ＯＲＧおよびその誘導体に関する本発明の治療的用途および有益な効果は、以下の通りである。（１）うつ病に対する治療効果、（２）うつ病の原因に対する治療効果、（３）うつ病または類似の症状のある他の疾患に対する治療効果、（４）それらの潜在的用途は、いかなる方法でも、うつ病を治療および予防する方法に限定すると解釈するつもりはなく、またそのように解釈すべきではなく、ストレス、不安および認知機能低下に関与する他の疾患にも有用であろう。