(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃを有効成分として含有し、前記有効成分は、低級アルコールを含む抽出溶媒により抽出されたオオバギ抽出物として含有されることで、ポルフィロモナス（Ｐｒｏｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ）属に含まれる歯周病菌の増殖を抑制することを特徴とする歯周病菌増殖抑制剤。
【請求項２】
前記抽出溶媒は、前記低級アルコールとしてエタノールを含むことを特徴とする請求項１に記載の歯周病菌増殖抑制剤。
【請求項３】
前記ポルフィロモナス（Ｐｒｏｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ）属に含まれる歯周病菌がポルフィロモナス・ジンジバリスであることを特徴とする請求項１又は請求項２に記載の歯周病菌増殖抑制剤。
【請求項４】
前記歯周病菌増殖抑制剤は、前記ニムフェオール−Ａ、前記ニムフェオール−Ｂ、及び前記ニムフェオール−Ｃの合計量の濃度が少なくとも５０ｐｐｍとなるように用いられることを特徴とする請求項１から請求項３のいずれか一項に記載の歯周病菌増殖抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、歯周病菌増殖抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
歯周病菌の感染により発症する歯周病は、歯肉炎、歯周炎、及び咬合性外傷に大別されている。最近では、歯周病が慢性化することで歯周病菌を原因として、呼吸器疾患、心疾患、糖尿病、早産等といった感染症を引き起こすことが知られている。こうした歯周病菌に対する抗菌剤として、カカオマス中に含まれるココア分を有効成分としたものが知られている（特許文献１参照）。
【０００３】
一方、トウダイグサ科オオバギ属に属するオオバギ（大葉木）の抽出物は抗菌作用を発揮することが知られている（特許文献２参照）。
【特許文献１】国際公開第２００３／９９３０４号パンフレット
【特許文献２】特開２００７−４５７５４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ところで、上記特許文献１の抗菌剤では、原料のカカオマスを得るためにはカカオ豆を焙煎する工程等が必要である。すなわち、植物由来の原料から得られるととともに、歯周病菌の増殖を抑制することのできる歯周病菌増殖抑制剤であっても、原料の製造工程が複雑なものとなるという問題がある。本発明は、本研究者らによる鋭意研究の結果、オオバギ抽出物が歯周病菌の増殖を抑制する作用を発揮することを見出すことでなされたものである。なお、上記特許文献２では、歯周病菌に対するオオバギ抽出物の作用は解明されていない。
【０００５】
本発明の目的は、前処理の複雑化を回避可能な原料から得ることのできる歯周病菌増殖抑制剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記の目的を達成するために、請求項１に記載の発明の歯周病菌増殖抑制剤は、ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃを有効成分として含有し、前記有効成分は、低級アルコールを含む抽出溶媒により抽出されたオオバギ抽出物として含有されることで、ポルフィロモナス（Ｐｒｏｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ）属に含まれる歯周病菌の増殖を抑制することを特徴とする。
【０００８】
請求項２に記載の発明は、請求項１に記載の歯周病菌増殖抑制剤において、前記抽出溶媒は、前記低級アルコールとしてエタノールを含むことを特徴とする。
請求項３に記載の発明は、請求項１又は請求項２に記載の歯周病菌増殖抑制剤において、前記ポルフィロモナス（Ｐｒｏｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ）属に含まれる歯周病菌がポルフィロモナス・ジンジバリスであることを特徴とする。
請求項４に記載の発明は、請求項１から請求項３のいずれか一項に記載の歯周病菌増殖抑制剤において、前記歯周病菌増殖抑制剤は、前記ニムフェオール−Ａ、前記ニムフェオール−Ｂ、及び前記ニムフェオール−Ｃの合計量の濃度が少なくとも５０ｐｐｍとなるように用いられることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、前処理の複雑化を回避可能な植物原料から得ることのできる歯周病菌増殖抑制剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明を具体化した一実施形態を詳細に説明する。
本実施形態の歯周病菌増殖抑制剤は、少なくとも有機溶媒を含む抽出溶媒により抽出されたオオバギ抽出物を有効成分として含有する。オオバギ抽出物の原料であるオオバギ（大葉木）は、マカランガ・タナリウス（Ｍａｃａｒａｎｇａ  ｔａｎａｒｉｕｓ）とも呼ばれる植物であって、トウダイグサ科オオバギ属に属する常緑広葉樹（雌雄異株）である。オオバギは、沖縄、台湾、中国南部、マレー半島、フィリピン、マレーシア、インドネシア、タイなどの東南アジア、オーストラリア北部などに生育している。また、オオバギは、樹木の中でも成長が極めて早く、荒廃地における成長も可能である。
【００１２】
オオバギ抽出物の原料としては、オオバギの各器官やそれらの構成成分を用いることができる。原料としては、単独の器官又は構成成分を用いてもよいし、二種以上の器官や構成成分を混合して用いてもよい。オオバギ抽出物の歯周病菌増殖抑制作用が高まるという観点から、原料には果実、種子、花、根、幹、茎の先端部、葉身、及び分泌物（ワックス等）を含むことが好ましい。茎の先端部は、茎の成長点及び葉芽を含んでおり、葉身に比べて柔軟であるため、抽出操作を効率的に行うことが容易である。また、オオバギの全体に対して各器官が占める割合を比較すると、幹、根、及び葉の占める割合は高い。このため、扱いやすいオオバギの葉身をオオバギ抽出物の原料として用いることは、原料確保が容易であるという観点から、工業的に好適である。こうした原料は、採取したままの状態、採取後に粉砕、破砕若しくはすり潰した状態、採取・乾燥後に粉砕、破砕若しくはすり潰した状態、又は、採取後に粉砕、破砕若しくはすり潰した後に乾燥させた状態として、抽出操作を行うことができる。抽出操作を効率的に行うべく、破砕した原料を用いることが好ましい。こうした破砕には、例えばカッター、裁断機、クラッシャー等を用いることができる。破砕した原料の形状は、特に限定されず、例えば三角形状、四角形状等の多角形状が挙げられる。なお、破砕した原料の寸法は、１辺が１ｃｍ程度であることが好ましい。一方、粉砕した原料を調製する際には、例えばミル、クラッシャー、グラインダー等を用いることができる。すり潰した原料を調製する際には、ニーダー、乳鉢等を用いることができる。
【００１３】
上述した原料からオオバギ抽出物を抽出するための抽出溶媒としては、水と有機溶媒との混合溶媒、低級アルコール、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン、グリセリン、プロピレングリコール等の有機溶媒が挙げられる。低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール等が挙げられる。有機溶媒としては、単独種を用いてもよいし、複数種を混合した混合溶媒を用いてもよい。グリセリン又はプロピレングリコールは、歯磨剤、洗口剤等の口腔衛生品において、溶剤、湿潤剤等として配合されることがある。従って、グリセリン又はプロピレングリコールを抽出溶媒として用いたオオバギ抽出液の配合に伴って、口腔衛生品の溶剤、湿潤剤等として、グリセリン又はプロピレングリコールを配合することができるようになる。このように口腔衛生品の製造について効率化を図るという観点から、抽出溶媒はグリセリン又はプロピレングリコールを含むことが好ましい。抽出溶媒として水と有機溶媒の混合溶媒を用いる場合、混合溶媒中における有機溶媒の含有量は、好ましくは５０体積％以上、より好ましくは８０体積％以上である。混合溶媒中における有機溶媒の含有量が５０体積％未満の場合、オオバギに含まれる有効成分を効率的に抽出できないおそれがある。なお、有機溶媒としては、低級アルコールが好ましく、エタノールがより好ましい。
【００１４】
なお、抽出溶媒中に、有機塩、無機塩、緩衝剤、乳化剤、デキストリン等を溶解させてもよい。
抽出操作としては、抽出溶媒中に上記原料を所定時間浸漬させる。こうした抽出操作においては、抽出効率を高めるべく、必要に応じて攪拌操作、加温等を行ってもよい。また、原料から抽出される夾雑物を削減すべく、抽出操作に先だって、別途水抽出操作又は熱水抽出操作を行ってもよい。歯周病菌の増殖の抑制に対して有効に作用する成分は、オオバギに含まれるニムフェオール類である。ニムフェオール類は、水のみに対して不溶の成分であるため、オオバギを例えば熱湯で煮沸することで、ニムフェオール類以外の不必要な侠雑物を効率的に除去することができる。
【００１５】
抽出操作の後には固液分離操作が行われることで、オオバギ抽出液と原料の残渣とを分離する。こうした固液分離操作の分離法としては、例えばろ過、遠心分離等の公知の分離法を利用することができる。得られたオオバギ抽出液は、必要に応じて濃縮してもよい。
【００１６】
また、オオバギ抽出液に含まれる抽出溶媒を必要に応じて除去することにより、固体状のオオバギ抽出物を得ることができる。こうした溶媒の除去は、例えば減圧下で加熱することにより行ってもよいし、凍結乾燥により行ってもよい。
【００１７】
少なくとも有機溶媒を含む抽出溶媒により抽出されたオオバギ抽出物には、ニムフェオール類が含有されている。ニムフェオール類は、ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも一種を含む。ニムフェオール−Ａ（ｎｙｍｐｈａｅｏｌ−Ａ）は、5,7,3´,4´-テトラヒドロキシ-6-ゲラニルフラバノン（5,7,3´,4´-tetrahydroxy-6-geranylflavanone）である。ニムフェオール−Ｂ（ｎｙｍｐｈａｅｏｌ−Ｂ）は、5,7,3´,4´-テトラヒドロキシ-2´-ゲラニルフラバノン（5,7,3´,4´-tetrahydroxy-2´-geranylflavanone）である。ニムフェオール−Ｃ（ｎｙｍｐｈａｅｏｌ−Ｃ）は、5,7,3´,4´-テトラヒドロキシ-6-(3´´´,3´´´-ジメチルアリル)-2´-ゲラニルフラバノン（5,7,3´,4´-tetrahydroxy-6-(3´´´,3´´´-dimethylallyl)-2´-geranylflavanone）である。
【００１８】
オオバギ抽出物の主要な成分は、上述したニムフェオール類であり、こうしたニムフェオール類が歯周病菌の抑制作用に寄与していると推測される。
さらにオオバギ抽出物には、プロポリンＡが含有されている。プロポリンＡ（ｐｒｏｐｏｌｉｎＡ）は、5,7,3´,4´-テトラヒドロキシ-2´-(7´´-ヒドロキシ-3´´,7´´-ジメチル-2´´-オクテニル)-フラバノン（5,7,3´,4´-tetrahydroxy-2´-(7´´-hydroxy-3´´,7´´-dimethyl-2´´-octenyl)-flavanone）である。オオバギ抽出物には、微量成分として、5,7,3´,4´-テトラヒドロキシ-5´-ゲラニルフラバノン（イソニムフェオールＢ：ｉｓｏｎｙｍｐｈａｅｏｌ−Ｂ：5,7,3´,4´-tetrahydroxy-5´-geranylflavanone）、5,7,3´,4´-テトラヒドロキシ-5´-(7´´-ヒドロキシ-3´´,7´´-ジメチル-2´´-オクテニル)-フラバノン（5,7,3´,4´-tetrahydroxy-5´-(7´´-hydroxy-3´´,7´´-dimethyl-2´´-octenyl)-flavanone）、5,7,3´,4´-テトラヒドロキシ-6-(7´´-ヒドロキシ-3´´,7´´-ジメチル-2´´-オクテニル)-フラバノン（5,7,3´,4´-tetrahydroxy-6-(7´´-hydroxy-3´´,7´´-dimethyl-2´´-octenyl)-flavanone）、5,7,4´-トリヒドロキシ-3´-(7´´-ヒドロキシ-3´´,7´´-ジメチル-2´´-オクテニル)-フラバノン（5,7,4´-trihydroxy-3´-(7´´-hydroxy-3´´,7´´-dimetyl-2´´-octenyl)-flavanone）、5,7,4´-トリヒドロキシ-3´-ゲラニルフラバノン（5,7,4´-trihydroxy-3´-geranylflavanone）等が挙げられる。なお、オオバギの各部位から抽出された抽出液の中でも、実の部位（ワックスを含む）から抽出された抽出液には、ニムフェオールＡ，Ｂ，Ｃ及びイソニムフェオールＢが高濃度で含有されている。
【００１９】
歯周病菌増殖抑制剤には、その増殖抑制作用を損なわない範囲でオオバギ抽出物以外の成分を含有させてもよい。オオバギ抽出物以外の成分としては、例えば賦形剤、基剤、乳化剤、安定剤、香料、甘味料等が挙げられる。
【００２０】
歯周病菌増殖抑制剤は、液状であってもよいし、固体状であってもよい。剤形としては、特に限定されないが、例えば散剤、粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、液剤、注射剤等が挙げられる。
【００２１】
歯周病菌の感染により発症する歯周病は、歯肉炎、歯周炎、及び咬合性外傷に大別されている。本実施形態の歯周病菌増殖抑制剤は、歯周病菌の増殖を抑制することで、歯周病の治療、予防等に使用される。歯周病菌としては、アクチノバシルス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ポルフィロモナス（Ｐｒｏｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ）属、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）属、フゾバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属等に含まれる歯周病菌が知られている。
【００２２】
アクチノバシルス属に含まれる歯周病菌としては、アクチノバシルス・アクチノミセテムコミタンス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ）等が挙げられる。
【００２３】
ポルフィロモナス属に含まれる歯周病菌としては、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｒｏｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）、ポルフィロモナス・アサッカロリティカ（Ｐｒｏｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ａｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃａ）、ポルフィロモナス・エンドドンタリス（Ｐｒｏｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｅｎｄｏｄｏｎｔａｌｉｓ）等が挙げられる。
【００２４】
プレボテラ属に含まれる歯周病菌としては、プレボテラ・インテルメディア（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）、プレボテラ・ニグレセンス（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｎｉｇｒｅｓｃｅｎｓ）、プレボテラ・メラニノゲニカ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｍｅｌａｎｉｎｏｇｅｎｉｃａ）等が挙げられる。
【００２５】
フゾバクテリウム属に含まれる歯周病菌としては、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｅｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、フソバクテリウム・ネクロフォルム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ）、フソバクテリウム・ナビフォルム  ＡＡ（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎａｖｉｆｏｒｍｅ）等が挙げられる。
【００２６】
こうした歯周病菌の中でも、アクチノバシルス属、及び、ポルフィロモナス属の少なくとも一方に含まれる歯周病菌は、歯周病の主要な原因菌とされている。本実施形態の歯周病菌増殖抑制剤は、アクチノバシルス属、及び、ポルフィロモナス属の少なくとも一方に含まれる歯周病菌の増殖を抑制することで、歯周病の予防及び治療に優れた効果を発揮する。
【００２７】
歯周病菌増殖抑制剤は、口腔衛生品、飲食品、医薬品、医薬部外品等として利用される。歯周病菌増殖抑制剤は、歯周組織へ有効成分を接触させ易く、その有効成分を作用が十分に発揮され易いという観点から、口腔衛生品又は飲食品として利用されることが好ましい。
【００２８】
本実施形態の口腔衛生品は、上記歯周病菌増殖抑制剤を含有する。口腔衛生品としては、粉歯磨剤、練歯磨剤、液状歯磨剤、洗口剤、歯肉マッサージクリーム、局所塗布剤、トローチ剤、チューイングガム、デンタルフロス等が挙げられる。このような口腔衛生品は、口腔内の歯周病菌の増殖を抑制することができるため、歯周病の予防及び治療に有効である。こうした口腔衛生品中には、オオバギ抽出物が固形分換算で好ましくは０．００１〜１０質量％、より好ましくは０．０１〜１質量％の範囲で含有される。口腔衛生品中におけるオオバギ抽出物の含有量が固形分換算で０．００１質量％未満の場合には、歯周病菌の増殖を抑制する作用を高めることが困難となるおそれがある。一方、口腔衛生品中におけるオオバギ抽出物の含有量が固形分換算で１０質量％を超える場合には、歯周病菌の増殖を抑制する作用をそれ以上に高めることが困難となる。口腔衛生品には、その形態に応じた基材の他に、必要に応じて乳化剤、溶剤、安定剤等が含有される。
【００２９】
本実施形態の飲食品は、飲料品又は食品であって、上記歯周病菌増殖抑制剤を含有する。飲料品としては、炭酸飲料、茶飲料、清涼飲料、酒類、牛乳、コーヒー、フルーツシロップ、ゼリー飲料、栄養ドリンク剤等が挙げられる。炭酸飲料としては、サイダー、レモンスカッシュ、コーラ等が挙げられる。茶飲料としては、緑茶、ウーロン茶、紅茶等が挙げられる。清涼飲料としては、果汁入り飲料、ミネラルウォーター等が挙げられる。酒類としては、ビール、発泡酒、日本酒、ウイスキー、焼酎、カクテル等が挙げられる。食品としては、ヨーグルト、スープ、カレー、のど飴、キャンディー、クッキー、ケーキ、和菓子、スナック菓子、シロップ等が挙げられる。
【００３０】
飲食品は、健康食品、特定保健用食品、健康飲料、栄養補助食品等であってもよい。こうした飲食品中には、オオバギ抽出物が固形分換算で好ましくは０．００１〜１０質量％、より好ましくは０．０１〜１質量％の範囲で含有される。飲食品中におけるオオバギ抽出物の含有量が固形分換算で０．００１質量％未満の場合には、歯周病菌の増殖を抑制する作用を高めることが困難となるおそれがある。一方、飲食品中におけるオオバギ抽出物の含有量が固形分換算で１０質量％を超える場合には、歯周病菌の増殖を抑制する作用をそれ以上に高めることが困難となる。飲食品には、その形態に応じた基材の他に、必要に応じて乳化剤、溶剤、安定剤等が含有される。
【００３１】
前記の実施形態によって発揮される効果について、以下に記載する。
（１）本実施形態の歯周病菌増殖抑制剤は、少なくとも有機溶媒を含む抽出溶媒により抽出されたオオバギ抽出物を有効成分として含有している。オオバギ抽出物は、オオバギの抽出操作によって容易かつ効率的に得ることができる。そして本研究者らは、こうしたオオバギ抽出物に含まれるニムフェオール類が歯周病菌の増殖を抑制する作用を発揮することを見出している。これにより、本実施形態の歯周病菌増殖抑制剤は、前処理の複雑化を回避可能な植物原料から得ることができる。
【００３２】
（２）オオバギは、樹木の中でも成長が極めて早く、荒廃地における成長も可能である。このようにオオバギは、その栽培管理に手間がかからない。また、オオバギ抽出物は、植物由来の原料であるため、安全性が高い。従って、本実施形態の歯周病菌増殖抑制剤は、歯周病菌の増殖を抑制する作用に加えて、原料の供給、生産性、安全性等についても、優れている。
【００３３】
（３）本実施形態の歯周病菌増殖抑制剤は、アクチノバシルス属、及び、ポルフィロモナス属の少なくとも一方に含まれる歯周病菌の増殖を抑制することで、歯周病の予防及び治療に優れた効果を発揮する。
【００３４】
（４）本実施形態の口腔衛生品及び飲食品は、上記歯周病菌増殖抑制剤を含むため、前処理の複雑化を回避可能な植物原料から得ることができる。さらに、こうした口腔衛生品及び飲食品は、歯周病菌の増殖を抑制する作用に加えて、原料の供給、生産性、安全性等についても優れている。
【００３５】
なお、前記実施形態を次のように変更して構成することもできる。
・前記歯周病菌増殖抑制剤は、ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも一種を有効成分として含有し、歯周病菌の増殖を抑制するように構成することもできる。すなわち、歯周病菌の増殖を抑制する有効成分は、ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ及びニムフェオール−Ｃから選ばれる少なくとも一種であるため、それら有効成分は、オオバギ抽出物を由来とする以外に、例えば沖縄産プロポリス等を由来としてもよい。また例えば、沖縄産プロポリス由来のニムフェオールとオオバギ抽出物由来のニムフェオールとの混合物を有効成分としてもよい。
【００３６】
上記有効成分がオオバギ抽出物由来であることにより、上記（２）欄に記載の作用効果を得ることができる。
上記実施形態から把握できる技術的思想について以下に記載する。
【００３７】
・前記オオバギ抽出物が、水と有機溶媒との混合溶媒から抽出されたものである請求項１に記載の歯周病菌増殖抑制剤。
【００３８】
・アクチノバシルス・アクチノミセテムコミタンス、及び、ポルフィロモナス・ジンジバリスの少なくとも一方の歯周病菌の増殖を抑制する前記歯周病菌増殖抑制剤。
【実施例】
【００３９】
次に、試験例を挙げて前記実施形態をさらに具体的に説明する。
（実施例１）
＜オオバギ抽出物の調製１＞
沖縄県で採集して冷凍したオオバギの生葉を解凍した後に、はさみでその生葉を細かくカットした。カットした生葉３０ｇと、溶媒１００ｍｌとをチューブ内に入れ、室温で２週間浸漬させて溶媒抽出を行った後に、ろ過することにより、ろ液としてオオバギ抽出液を採取した。なお、前記溶媒抽出には、エタノールと水とを体積比率でエタノール：水＝９０：１０とした混合溶媒を使用した。次に、オオバギ抽出液を凍結乾燥することにより、オオバギ抽出液に含まれる固形分の粉末であるオオバギ抽出物を調製した。このオオバギ抽出物中に含まれるニムフェオールの濃度を、下記のＨＰＬＣ条件で分析して得られたクロマトグラムから算出した結果、５０質量％であった。なお、このニムフェオールの濃度は、ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ、及びニムフェオール−Ｃを合計した濃度を示している。以下においても、ニムフェオールの量は、ニムフェオール−Ａ、ニムフェオール−Ｂ、及びニムフェオール−Ｃの合計量を示している。
【００４０】
（ＨＰＬＣ条件）
システム：  ＰＤＡ−ＨＰＬＣシステム（島津製作所）、ＬＣ１０ＡＤｖｐシリーズ、ＵＶ；ＳＰＤ−１０Ａｖｐ、ＰＤＡ；ＳＰＤ−Ｍ１０Ａｖｐ
カラム  ：  Ｌｕｎａ  Ｃ１８  （２．０×２５０ｍｍ）（島津ＧＬＣ）
溶媒    ：  Ａ：水（５％酢酸）、Ｂ：アセトニトリル（５％酢酸）
溶出条件：  ０−２０ｍｉｎ
（グラジエント溶出；Ａ：Ｂ＝８０：２０→Ａ：Ｂ＝３０：７０）
２０−５０ｍｉｎ
（グラジエント溶出；Ａ：Ｂ＝３０：７０→Ａ：Ｂ＝０：１００）
５０−６０ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝０：１００）
６０−７５ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝８０：２０）
流速    ：  ０．２ｍｌ／ｍｉｎ
ＰＤＡ検出：ＵＶ１９０−３７０ｎｍ
ＵＶ検出：  ＵＶ２８７ｎｍ
注入量  ：  ２０μｌ
温度    ：  ４０℃
この５０質量％のサンプルのクロマトグラムを図１に示す。
【００４１】
＜歯周病菌に対するオオバギ抽出物の抗菌活性試験＞
以下に示される歯周病菌の菌株１及び菌株２をＧＡＭ寒天培地に白金耳を用いて接種した後に、３５℃で７日間培養した。
【００４２】
菌株１：アクチノバシルス・アクチノミセテムコミタンス（ＪＣＭ８５７７）
菌株２：ポルフィロモナス・ジンジバリス（ＪＣＭ１２２５７）
これにより、増殖したコロニーをＧＡＭ寒天培地から白金耳を用いて採取した後、生理食塩水に溶解することで１０４ｃｆｕ／ｍｌの接種菌液１及び接種菌液２を調製した。
【００４３】
ＧＡＭ寒天培地にエタノール及び、上記オオバギ抽出物の調製１で得られたオオバギ抽出物を混合することにより、終濃度を以下の値としたブランク培地及び各サンプル培地を調製した。
【００４４】
ブランク：エタノール  ０．７％
サンプル１：オオバギ抽出物  １００ｐｐｍ
サンプル２：オオバギ抽出物  ２５０ｐｐｍ
サンプル３：オオバギ抽出物  ５００ｐｐｍ
各培地を１１５℃、１５分間の条件で滅菌することにより平板培地を作成した。
【００４５】
各平板培地に上記接種菌液１及び接種菌液２を白金耳で塗抹した後、それら平板培地を三菱ガス化学社製嫌気システムにて３５℃で７日間培養した。その結果、コロニーの検出が全く認められなかった平板培地についてオオバギ抽出物の濃度を以下の表１に示す。
【００４６】
【表１】
0004796043.tif 000002
表１の結果から明らかなように、上記オオバギ抽出物の調製１で得られたオオバギ抽出物は菌株１の歯周病菌の発育を２５０ｐｐｍの濃度で阻止することが確認された。また、菌株２の歯周病菌の発育に対しては、１００ｐｐｍの濃度で阻止することが確認された。なお、こうしたオオバギ抽出物の抗菌活性は、オオバギ抽出物中に含まれるニムフェオール類が有効成分として寄与することで発現されると推測される。オオバギ抽出物中のニムフェオールに換算すると、上記オオバギ抽出物は、菌株１及び菌株２をそれぞれ１２５ｐｐｍ及び５０ｐｐｍの濃度で阻止することができると推定される。こうした結果から、本試験例のオオバギ抽出物は、とくに菌株２の増殖を抑制する作用に優れることがわかる。
【００４７】
（実施例２）
＜オオバギ抽出物の調製２＞
カットした生葉０．２〜０．３ｇをまず水（９５℃）に３０分浸漬し、これを濾過した後、溶媒抽出を行った以外は、オオバギ抽出物の調製１と同様の方法にて抽出を行った。
【００４８】
カットした生葉３０ｇをまず水（９５℃）で３０分浸漬し、これを濾過した。濾過した後の残った葉に１００％エタノールを添加し、３日間浸漬させて溶媒抽出を行った。この抽出液をろ過してオオバギ抽出液を採取した後、そのオオバギ抽出液を凍結乾燥することにより、オオバギ抽出液に含まれる固形分の粉末であるオオバギ抽出物を調製した。
【００４９】
このオオバギ抽出物中に含まれるニムフェオールの濃度を、上記のＨＰＬＣ条件で分析して得られたクロマトグラムから算出した結果、４０質量％であった。
この４０質量％のサンプルのクロマトグラムを図２に示す。
【００５０】
＜歯周病菌に対するオオバギ抽出物の抗菌活性試験＞
実施例１と同様に抗菌活性試験を実施したところ、実施例２で調製したオオバギ抽出物においても同様の抗菌活性を示した。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】実施例１に係るオオバギ抽出物について高速液体クロマトグラフィーにて分析した結果を示すクロマトグラム。
【図２】実施例２に係るオオバギ抽出物について高速液体クロマトグラフィーにて分析した結果を示すクロマトグラム。
【図１】
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【図２】
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