(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式［Ｉ］
0004749652.tif 000014
もしくはその互変異性体である式［ＩＩ］
0004749652.tif 000015
で表される化合物。
【請求項２】
下記式［ＩＩＩ］
0004749652.tif 000016
で表されるＦＴ−０５５４物質をアルカリ処理することによる、下記式［Ｉ］
0004749652.tif 000017
もしくはその互変異性体である式［ＩＩ］
0004749652.tif 000018
で表される化合物の製造法。
【請求項３】
請求項１記載の化合物を有効成分とするＮＡＤＨ−フマル酸レダクターゼ阻害剤。
【請求項４】
請求項１記載の化合物を有効成分とする抗蠕虫剤。
【発明の詳細な説明】
発明の属する技術分野
本発明は、寄生虫とくに蠕虫の感染症に有効な新規ＦＴ−０５５４Ａ物質及びその製造法に関する。
従来の技術
寄生虫症は、衛生環境の改善、駆虫薬の進歩などにより減少してきたが、近年になって輸入寄生虫症、人獣共通寄生虫症、日和見寄生虫症、生鮮食品に由来する寄生虫症などが目立つようになり、改めて大きな問題となっている。また牧畜や農業においても、寄生虫症は多大な経済的負担をもたらしている。寄生虫の中で蠕虫の感染症については、現在、たとえばイベルメクチン、メベンダゾール、ブラジカンテルなど多くの化合物が使用されている。
発明が解決しようとする課題
しかし、現在、使用されているこれらのイベルメクチン、メベンダゾール、プラジカンテルなどの抗蠕虫剤がその有効性、毒性などの面ですべて満足できるとはいい難く、加えて従来の抗蠕虫剤に対しては耐性を獲得した蠕虫も増加していることから、新しい薬剤が強く求められている。
課題を解決するための手段
そこで本発明者らは、抗蠕虫剤の有望な標的の一つである電子伝達系の中のＮＡＤＨ−フマル酸レダクターゼに注目し、該ＮＡＤＨ−フマル酸レダクターゼの阻害物質について微生物培養物中からの探索を続けた。その結果、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属に属する一菌株である、アスペルギルス  ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）の生産する化合物ＦＴ−０５５４物質が、ＮＡＤＨ−フマル酸レダクターゼ阻害活性を有することを見出し、既に国際出願を行った（国際公開番号、ＷＯ９９／２４４３９）。
前記のアスペルギルス  ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）自体は、例えば、Ｂｏｒｉｓ  Ｓｃｈｉｌｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｍｉｎｅ  ｏｘｉｄａｓｅｓ  ｆｒｏｍ  Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ：ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｆｌａｖｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｅｎｚｙｍｅ”，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  Ｖｏｌ．１２４３（１９９５）Ｐ．５２９−５３７、およびＹｏｓｈｉｈａｒｕ  Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｏｆ  ２−ｏｘｏａｌｄｅｈｙｄｅ  ｉｎ  ｍｏｌｄ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｍｅｔｈｙｌｇｌｙｏｘａｌ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ  ｆｒｏｍ  Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ”，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｖｏｌ．１７１（１９８８）Ｐ．２１３−２１８等の文献により既に報告されている。
本発明者らはさらに研究を続けた結果、ＦＴ−０５５４物質から導かれる新規化合物のＦＴ−０５５４Ａ物質にも同等のＮＡＤＨ−フマル酸レダクターゼ阻害活性を有することを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。    すなわち、本発明は、
下記式［Ｉ］
0004749652.tif 000002
もしくはその互変異性体である式［ＩＩ］
0004749652.tif 000003
で表される化合物であるＦＴ−０５５４Ａ物質に関する。
さらに本発明は、下記の物理化学的性質を有するＦＴ−０５５４Ａ物質に関する。
（１）性状  ：白色粉末または飴状、
（２）分子量：３８３．２２０１（Ｍ＋Ｎａ、高分解能高速原子衝撃質量分析による）、
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３２Ｏ４
（４）融点  ：１０１〜１０３℃、
（５）比旋光度：［α］Ｄ２６＝＋４．６°（ｃ＝１、クロロホルム）、
（６）赤外部吸収極大（ＫＢｒ錠）：第１図に示す通りであって、３３７５、２９６０、２９２６、１７５５、１７３８、１６６０、１４５６、１２６１、１０７４、１０２４、８００ｃｍ−１に極大吸収を有する、
（７）溶剤に対する溶解性：クロロホルム、酢酸エチルに可溶、水、ｎ−ヘキサンに難溶、
（８）呈色反応：リンモリブデン酸試薬に陽性。
さらに本発明は、下記式［ＩＩＩ］
0004749652.tif 000004
で表されるＦＴ−０５５４物質をアルカリ処理することによる、下記式［Ｉ］
0004749652.tif 000005
もしくはその互変異性体である式［ＩＩ］
0004749652.tif 000006
で表される化合物であるＦＴ−０５５４Ａ物質の製造法に関する。
さらに本発明は、ＦＴ−０５５４Ａ物質を有効成分とするＮＡＤＨ−フマル酸レダクターゼ阻害剤に関する。さらに本発明はＦＴ−０５５４Ａ物質を有効成分とする抗蠕虫剤に関する。
本発明によるＦＴ−０５５４Ａ物質の物理化学的性質の詳細は以下の通りである。
（１）性状  ：白色粉末または飴状、
（２）分子量：３８３．２２０１（Ｍ＋Ｎａ、高分解能高速原子衝撃質量分析による）、
（３）分子式：Ｃ２２Ｈ３２Ｏ４、
（４）融点  ：１０１〜１０３℃、
（５）比旋光度：［α］Ｄ２６＝＋４．６°（ｃ＝１、クロロホルム）、
（６）赤外部吸収極大（ＫＢｒ錠）：第１図に示すとおりであって、３３７５、２９６０、２９２６、１７５５、１７３８、１６６０、１４５６、１２６１、１０７４、１０２４、８００ｃｍ−１に極大吸収を有する、
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重アセトン中におけるＦＴ−０５５４Ａ物質の式［Ｉ］の化学シフト（ｐｐｍ）は以下のとおりである。なお、ｓは一重線、ｄは二重線、ｔは三重線、ｑは四重線、ｍは多重線、ｂｒは幅広線、Ｈはプロトンの数、Ｊはスピン結合定数（Ｈｚ）を示す。
0004749652.tif 000007
６．１７ｓ（１Ｈ，Ｈ−３）、６．２５ｄｄ（１Ｈ，Ｊ＝１０．５，１５．１，Ｈ−７）、６．１８ｄｄ（１Ｈ，Ｊ＝１０．７，１５．１，Ｈ−１４）、６．０２ｄｄ（１Ｈ，Ｊ＝１０．５，１５．４，Ｈ−８）、５．７４ｄ（１Ｈ，Ｊ＝１０．７，Ｈ−１３）、５．６１ｄｄ（１Ｈ，Ｊ＝７．２，１５．４，Ｈ−９）、５．５８ｄｄ（１Ｈ，Ｊ＝７．２，１５．１，Ｈ−６）、５．３９ｄｄ（１Ｈ，Ｊ＝８．０，１５．１，Ｈ−１５）、４．３２ｂｒ．ｄ（１Ｈ，Ｊ＝４．０，５−ＯＨ）、４．０８ｍ（１Ｈ，Ｈ−５）、２．４０ｍ（１Ｈ，Ｈ−１０）、２．０５ｍ（１Ｈ，Ｈａ−１１）、２．０１ｍ（１Ｈ，Ｈ−１６）、１．９３ｍ（１Ｈ、Ｈｂ−１１）、１．６７ｓ（３Ｈ，１２−ＣＨ３）、１．３２ｓ（３Ｈ，４−ＣＨ３）、１．２５ｍ（２Ｈ，Ｈ２−１７）、０．９３ｄ（３Ｈ，Ｊ＝６．６，１６−ＣＨ３）、０．９１ｄ（３Ｈ，Ｊ＝６．９，１０−ＣＨ３）、０．８０ｔ（３Ｈ，Ｊ＝７．４，Ｈ３−１８）
（８）プロトン核磁気共鳴スペクトル：重アセトン中におけるＦＴ−０５５４Ａ物質の式［ＩＩ］の化学シフト（ｐｐｍ）は以下のとおりである。なお、ｓは一重線、ｄは二重線、ｔは三重線、ｑは四重線、ｍは多重線、ｂｒは幅広線、Ｈはプロトンの数、Ｊはスピン結合定数（Ｈｚ）を示す。
0004749652.tif 000008
６．３４ｄｄ（１Ｈ，Ｊ＝１０．５，１５．１，Ｈ−７）、６．１８ｄｄ（１Ｈ，Ｊ＝１０．７，１５．１，Ｈ−１４）、６．０５ｄｄ（１Ｈ，Ｊ＝１０．５，１５．４，Ｈ−８）、５．７４ｄ（１Ｈ，Ｊ＝１０．７，Ｈ−１３）、５．６７ｄｄ（１Ｈ，Ｊ＝７．２，１５．４，Ｈ−９）、５．６１ｄｄ（１Ｈ，Ｊ＝７．２，１５．１，Ｈ−６）、５．３９ｄｄ（１Ｈ，Ｊ＝８．０，１５．１，Ｈ−１５）、５．１１ｂｒ．ｄ（１Ｈ，Ｊ＝３．６，５−ＯＨ）、４．２２ｍ（１Ｈ，Ｈ−５）、２．８８ｄ（１Ｈ，Ｊ＝１８．７，Ｈａ−３）、２．５５ｄ（１Ｈ，Ｊ＝１８．７，Ｈｂ−３）、２．４０ｍ（１Ｈ，Ｈ−１０）、２．０５ｍ（１Ｈ，Ｈａ−１１）、２．０１ｍ（１Ｈ，Ｈ−１６）、１．９３ｍ（１Ｈ，Ｈｂ−１１）、１．６７ｓ（３Ｈ，１２−ＣＨ３）、１．４８ｓ（３Ｈ，４−ＣＨ３）、１．２５ｍ（２Ｈ，Ｈ２−１７）、０．９３ｄ（３Ｈ，Ｊ＝６．６，１６−ＣＨ３）、０．９１ｄ（３Ｈ，Ｊ＝６．９，１０−ＣＨ３）、０．８０ｔ（３Ｈ，Ｊ＝７．４，Ｈ３−１８）
（９）１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：重アセトン中におけるＦＴ−０５５４Ａ物質の式［Ｉ］の化学シフト（ｐｐｍ）は以下のとおりである。なお、ｓは一重線、ｄは二重線、ｔは三重線、ｑは四重線を示す。
0004749652.tif 000009
１６９．０ｓ（Ｃ−１）、１４１．４ｄ（Ｃ−９）、１３８．８ｄ（Ｃ−１５）、１３４．７４ｓ（Ｃ−１２）、１３３．８ｄ（Ｃ−７）、１３０．０ｄ（Ｃ−６）、１２８．６ｄ（Ｃ−８）、１２７．７ｄ（Ｃ−１３）、１２５．９ｄ（Ｃ−１４）、１２１．５ｄ（Ｃ−３）、８６．２ｓ（Ｃ−４）、７６．６ｄ（Ｃ−５）、４８．１ｔ（Ｃ−１１）、３９．３ｄ（Ｃ−１６）、３５．６ｄ（Ｃ−１０）、３０．４ｔ（Ｃ−１７）、２１．３ｑ（４−ＣＨ３）、２０．５ｑ（１６−ＣＨ３）、２０．１ｑ（１０−ＣＨ３）、１６．５ｑ（１２−ＣＨ３）、１２．０ｑ（Ｃ−１８）、Ｃ２は同定できなかった
（１０）１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル：重アセトン中におけるＦＴ−０５５４Ａ物質の式［ＩＩ］の化学シフト（ｐｐｍ）は以下のとおりである。なお、ｓは一重線、ｄは二重線、ｔは三重線、ｑは四重線を示す。
0004749652.tif 000010
１９３．７ｓ（Ｃ−２）、１６１．５ｓ（Ｃ−１）、１４２．４ｄ（Ｃ−９）、１３８．９ｄ（Ｃ−１５）、１３５．０ｄ（Ｃ−７）、１３４．６６ｓ（Ｃ−１２）、１２８．７ｄ（Ｃ−６）、１２８．３ｄ（Ｃ−８）、１２７．６ｄ（Ｃ−１３）、１２５．９ｄ（Ｃ−１４）、８４．９ｓ（Ｃ−４）、７７．０ｄ（Ｃ−５）、４８．２ｔ（Ｃ−１１）、４０．６ｄ（Ｃ−３）、３９．３ｄ（Ｃ−１６）、３５．５ｄ（Ｃ−１０）、３０．４ｔ（Ｃ−１７）、２３．３ｑ（４−ＣＨ３）、２０．５ｑ（１６−ＣＨ３）、２０．０ｑ（１０−ＣＨ３）、１６．５ｑ（１２−ＣＨ３）、１２．０ｑ（Ｃ−１８）
（１１）溶剤に対する溶解性：クロロホルム、酢酸エチルに可溶、水、ｎ−ヘキサンに難溶。
（１２）呈色反応：リンモリブデン酸試薬に陽性。
以上のように、ＦＴ−０５５４Ａ物質の各種物理化学的性質やスペクトルデータを検討した結果、ＦＴ−０５５４Ａ物質は下記式［Ｉ］
0004749652.tif 000011
もしくはその互変異性体である式［ＩＩ］
0004749652.tif 000012
で表される化合物であることが決定された。
以上のとおり、ＦＴ−０５５４Ａ物質の各種物理化学的性状、スペクトルデータについて詳述したが、このような性質に一致する化合物はこれまで報告されておらず、ＦＴ−０５５４Ａ物質は新規物質であると決定した。
次に、ＦＴ−０５５４物質から本発明によるＦＴ−０５５４Ａ物質を製造する製造法について具体的に説明する。
国際公開番号ＷＯ９９／２４４３９に詳細に開示した糸状菌に属するＦＴ−０５５４物質を生産する能力を有する微生物、アスペルギルス  ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）ＦＴ−０５５４（ＦＥＲＭ  ＢＰ−６４４３）を培地で培養し、培養物中にＦＴ−０５５４物質を蓄積せしめ、該培養物から下記式［ＩＩＩ］で示されるＦＴ−０５５４物質を採取する。
0004749652.tif 000013
このようにして得られたＦＴ−０５５４物質をアルカリ条件下で処理することにより本発明によるＦＴ−０５５４Ａ物質を製造することができる。
即ち、ＦＴ−０５５４物質を有機溶媒、例えばメタノール、エタノール等のアルコール類、ジエチルエーテル等のエーテル類、ジメチルスルホキシド、クロロホルム等の一般的な有機溶媒に溶解し、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素ナトリウム、ナトリウムメトキシド、水素化ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア等の塩基性化合物を加えることにより、ＦＴ−０５５４Ａ物質が生成する。
反応物からの精製は、通常の脂溶性有機化合物の精製に用いられる方法、例えばクロロホルム、酢酸エチル等の水不混和性の有機溶媒による抽出、各種クロマトグラフィー、例えば吸着クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーよりのかき取り、遠心向流分配クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、また難溶性溶媒からの析出等を適宜選択、組合せあるいは繰り返すことによって行うことができ、その結果、純粋なＦＴ−０５５４Ａ物質を得ることができる。
以上のようにして得られた本発明のＦＴ−０５５４Ａ物質のＮＡＤＨ−フマル酸レダクターゼ阻害活性は次のとおりである。
豚回虫筋肉を１２０ｍＭリン酸ナトリウム溶液（ｐＨ７．０）中でホモジナイズ後、３０００×ｇ、１０分間遠心して上清を集めた。それをさらに１００００×ｇ、２０分間遠心して沈殿を集めた。その沈殿を１２０ｍＭリン酸ナトリウム溶液（ｐＨ７．０）に懸濁することにより、ミトコンドリア画分とした。９６穴マイクロプレートに１０μｌの５０％ジメチルスルホキシド溶液試料を添加後、０．３５ｍＭのＮＡＤＨ、７．２ｍＭのフマル酸二ナトリウム、１８ｍｇ／ｍｌの牛血清アルブミンを含んだ１２０ｍＭリン酸ナトリウム溶液（ｐＨ７．０）を加えて、マイクロプレートリーダーＥＬＸ８０８（Ｂｉｏ−Ｔｅｃｋ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社製）にて３７℃、５分間プレインキュベーションを行った。そこに豚回虫ミトコンドリア画分を１０μｌ（蛋白量０．３ｍｇ）添加して、３７℃、１０分間インキュベーションを行い、３４０ｎｍのＮＡＤＨの吸収を１５秒ごとに測定した。
上記３４０ｎｍの吸光度の減少の傾きをＮＡＤＨ−フマル酸レダクターゼ酵素活性として定量した結果、ＦＴ−０５５４Ａ物質は０．４μＭの濃度でＮＡＤＨ−フマル酸レダクターゼ活性を５０％阻害した。したがって、ＦＴ−０５５４Ａ物質は蠕虫感染症の治療用あるいは予防用組成物として使用し得ることが期待される。
発明の実施の態様
次に実施例を挙げて、本発明を説明するが、本発明は実施例のみに限定されるものではない。
実施例
ＦＴ−０５５４物質１０．０ｍｇを２８０μｌのメタノールに溶解し、２．０ｍｇの炭酸カルシウムを加えて攪拌した。室温で３０分放置した後、酢酸エチルで希釈し、さらに飽和食塩水を加え、抽出操作を行った。有機層を分離後、芒硝で乾燥し、これを減圧濃縮することで、白色粉末のＦＴ−０５５４Ａ物質を９．３ｍｇ得た。
発明の効果
以上説明したように、本発明により新規なＦＴ−０５５４Ａ物質ならびにＦＴ−０５５４物質からＦＴ−０５５４Ａ物質の製造法を提供することができ、そして得られたＦＴ−０５５４Ａ物質は、寄生虫の感染症に対して満足し得る有用な薬剤として期待される。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明によるＦＴ−０５５４Ａ物質の赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ錠）である。
【図１】
0004749652.tif 000019