(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホップ苞に含有されるポリフェノールで、ホップ苞から水または５０ｖ／ｖ％以下の有機溶媒水溶液にて４〜９５℃の条件で抽出され、ゲル型合成樹脂に吸着し、６０ｖ／ｖ％以上のエタノール水溶液またはエタノールにより溶出する性質を有し、分画分子量が１００００〜５００００の限外ろ過膜により処理した際に該膜を透過しないことを特徴とする体重増加抑制物質を含む体重増加抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ホップ苞より得られる体重増加抑制物質およびその用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ホップはクワ科の多年生植物であり、その毬果（未受精の雌花が成熟したもの）を一般にホップと呼んでいる。このホップのルプリン部分（球果の内苞の根元に形成される黄色の顆粒）は、ホップの苦味、芳香の本体であり、ビール醸造において酵母、麦芽と並んで重要なビール原料である。またホップは、民間療法では鎮静剤や抗催淫剤として通用している。
【０００３】
一方、ホップ苞はホップ毬果よりルプリン部分を除いたものであり、ビール醸造には有用とされず、場合によってはビール醸造の際にホップ苞は取り除かれ、副産物として生じる。その際、ホップ苞は土壌改良用の肥料として用いられる他に特に有効な利用法は見い出されておらず、より付加価値の高い利用法の開発が望まれている。なお、本出願人の出願にかかる特開平９−２９１７号、特開平９−１６３９６９号、特開平９−２９５９４４号、特開平１０−２５２３２号公報ではホップ、特にホップ苞由来のポリフェノール類について、抗酸化作用、発泡麦芽飲料に対する泡安定化作用、抗う蝕作用、消臭作用を有することを確認している。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
近年の日本において、食生活の欧米化と慢性的な運動不足が引き起こす肥満は、高血圧・心臓病・糖尿病などの生活習慣病の危険因子として重大な問題となってきている。これらの生活習慣病は現在日本人の死因の約６割を占めており、その治療および予防には肥満を防ぐことが有効であると考えられる。肥満の治療薬としては、食欲抑制剤、消化吸収抑制剤、代謝賦活剤等が提案されてきたが、副作用などの問題により、安全でかつ十分な臨床効果を得られる抗肥満剤は見出されていないのが実状である。
【０００５】
従って本発明の目的はホップまたはホップ苞よりポリフェノール類を得、これを体重増加抑制剤、あるいは体重増加抑制食品として利用することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の課題について鋭意検討した結果、ホップ苞に含有されるポリフェノール様物質で、ゲル型合成樹脂に吸着し、分画分子量が1,000以上の限外ろ過膜により処理した際に膜を透過しない物質、すなわちホップ苞を水または水と混和する有機溶媒の水溶液で抽出し、ゲル型合成樹脂または限外ろ過膜により処理して、それぞれ各処理工程を経て得られる画分が、体重増加抑制剤として用いることのできる物質であることを見い出した。更にこの物質を、医薬品や飲食品に利用することにより本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明の第１は、ホップ苞に含有されるポリフェノール様物質で、ゲル型合成樹脂に吸着し、分画分子量が1,000以上の限外ろ過膜により処理した際に膜を透過しない物質である体重増加抑制物質に関する。
【０００８】
本発明の第２は、ホップ苞を、水または水と混和する有機溶媒の水溶液で抽出し、その抽出液をゲル型合成樹脂に通じて、水または水と混和する有機溶媒の水溶液で洗浄後、さらに水と混和する有機溶媒の水溶液により、前記樹脂に吸着した画分を溶出させて得られることを特徴とする体重増加抑制物質に関する。
【０００９】
本発明の第３は、ホップ苞を、水または水と混和する有機溶媒の水溶液で抽出し、その抽出液を分画分子量が1,000以上の限外ろ過膜により処理し、その上残り液より溶媒を除いて得られることを特徴とする体重増加抑制物質に関する。
【００１０】
本発明の第４は、上記の体重増加抑制物質を含む医薬品および飲食品に関する。
【００１１】
なお特開平８−１９１６６８号公報では、ペットフードに含まれる不飽和脂肪酸のトランス／シス比が重量比として0.001〜0.3であり、且つ、ペットフードを乾燥させた場合の重量としてその中に2〜30重量％の食物繊維を含むペットフードについて、ホップ原末およびその溶媒抽出物を加えることにより、ペットの体重増加抑制作用を有することを確認しているが、本特許ではそのような不飽和脂肪酸および食物繊維を必要とせず体重増加抑制作用を認めることができる。また特にホップ苞由来のポリフェノール類について体重増加抑制効果を明らかにした例は見あたらない。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明の原料となるホップ苞とは、ホップ毬果よりルプリン部分を取り除いて得られるものであり、一般に、ホップ毬果を粉砕後、ふるい分けによってルプリン部分を除くことによってホップ苞を得る。しかし、最近のビール醸造において、ホップ苞をふるい分けして除去する手間を省くために、ビール醸造に有用でないホップ苞を取り除かずにホップ毬果をそのままペレット状に成形し、ホップペレットとして、ビール醸造に利用する傾向にある。従って、本発明の原料としては、ホップ苞を含むものであれば特に限定せず、ホップ苞を含むホップ毬果やホップペレットを原料としてもなんら問題ない。
【００１３】
体重増加抑制物質の製造法としては、原料であるホップ苞またはホップ苞を含むホップ毬果やホップペレットなどを、水または50v/v%以下のアルコール、アセトン、アセトニトリルなどの水と混和する有機溶媒の水溶液で抽出する。好適な例としては、水またはエタノール50v/v%以下の含水エタノールが挙げられる。原料と抽出溶媒の割合は、1：20〜100（重量比）程度が望ましく、また抽出は4〜95℃、撹拌下、20〜60分間程度行われることが望ましい。濾過により抽出液を得るが、その際必要があればパーライトなどの濾過助材を用いることもできる。このようにして得られた抽出液は、ゲル型合成樹脂および／または限外ろ過膜により処理する。
【００１４】
まず、ゲル型合成樹脂を利用する方法について述べる。上記の抽出工程で得られた原料の抽出液について、ゲル型合成樹脂に体重増加抑制物質を吸着させる吸着工程、水またはエタノール水溶液、好ましくは1〜10v/v%のエタノール水溶液によりゲル型合成樹脂を洗浄する洗浄工程、60v/v%以上のエタノール水溶液またはエタノールによりゲル型合成樹脂から体重増加抑制物質を溶出する溶出工程を行い、体重増加抑制物質を得る。
【００１５】
吸着工程とは、同抽出溶液を15〜30℃の室温程度まで冷却した後、ゲル型合成樹脂を充填したカラムに通液し、樹脂に体重増加抑制物質を吸着させる工程である。その際、必要があれば、吸着効率をあげるために、減圧濃縮などによりあらかじめ抽出液の有機溶媒濃度を下げておくこともできる。ゲル型合成樹脂の材質としては、親水性ビニルポリマー、ヒドロキシプロピル化デキストラン、スチレン−ジビニルベンゼン重合体などを挙げることができる。通液時間は、ＳＶ値が0.5〜100の間となるように設定するのが好ましい。なお、ここで言うＳＶ値とは、以下の式で定義される値である。
【００１６】
ＳＶ値＝（通液量(L)）／｛（樹脂量(L)）× （通液時間(ｈ)）｝
洗浄工程は、体重増加抑制物質を保持したゲル型合成樹脂を洗浄する工程であり、この工程により夾雑成分を除き、体重増加抑制物質の精製度をより上げることが可能となる。洗浄に用いる溶媒としては、水ないし1〜10v/v%のエタノール水溶液が好適であり、樹脂量の1〜10倍程度の溶媒量を通液し、洗浄することが望ましい。
【００１７】
溶出工程は、体重増加抑制物質を保持したゲル型合成樹脂より体重増加抑制物質を脱離溶出する工程であり、溶出に用いる溶媒としては含水アルコール、含水アセトン、含水アセトニトリルなどを用いることができ、特に好適な例としては30v/v%以上のエタノール水溶液またはエタノールが挙げられる。溶出溶媒の通液量は樹脂量の2〜6倍程度が望ましい。
【００１８】
得られた溶出溶媒を濃縮、凍結乾燥、スプレードライなどの通常の方法により除き、体重増加抑制物質を粉末として得ることができる。また減圧濃縮の際、アルコール、アセトン、アセトニトリルなどを回収し、再利用することもできる。使用したゲル型合成樹脂は80v/v%以上のアルコール水溶液、0.05Ｎ程度の水酸化ナトリウム水溶液などで洗浄した後、繰り返し使用することが可能である。
【００１９】
次に、限外ろ過膜を用いる方法について述べる。上記の抽出工程で得られたホップ苞の抽出液を、分画分子量が1,000以上の限外ろ過膜で処理する。その際必要があれば、抽出液を減圧濃縮し、有機溶媒濃度を下げておくこともできる。回収された有機溶媒は再利用することもできる。膜の素材としては、セルロース、セルロースアセテート、ポリサルフォン、ポリプロピレン、ポリエステル、ポリエーテルスルホン、ＰＶＤＦなど、通常限外ろ過膜の材質として使用するものであれば、特に制限なく用いることができる。また分画分子量は1,000以上であれば特に問題なく用いることができるが、あまり分画分子量の大きい膜を用いると、収量が極端に下がり、また分画分子量が小さい場合は、処理に要する時間が長くなるので、分画分子量10,000〜50,000の限外ろ過膜が好適である。また処理は、抽出溶媒の種類や抽出溶媒とホップまたはホップ苞の割合にもよるが、およそ上残り液の量が処理開始時の1／10〜1／100程度になるまで行うのが望ましい。その際の圧力は、限外ろ過膜やろ過装置にもよるが、およそ0.1〜10.0kg/cm2であることが望ましい。また必要があれば、一度処理した上残り液を再び水などの適当な溶媒で薄め、同様に再処理して精製度を高めることもできる。
【００２０】
得られた上残り液の溶媒を濃縮、凍結乾燥、スプレードライなどの通常の方法により除き、体重増加抑制物質を粉末として得ることができる。また減圧濃縮の際、アルコール、アセトン、アセトニトリルなどを回収し、再利用することもできる。
【００２１】
このようにして得られた体重増加抑制物質は、かすかに苦味を呈した無臭の肌色、褐色ないし淡黄色の粉末であり、ゲル型合成樹脂に吸着し、分画分子量が1,000以上の限外ろ過膜により処理した際に膜を透過しないポリフェノール様物質である。なお収率は、ホップ苞重量換算で0.5〜20.0w/w％、ホップ毬果重量換算で0.5〜15.0w/w％である。
【００２２】
上記ゲル型合成樹脂を用いる方法および限外ろ過膜を用いる方法によって得られた体重増加抑制物質の活性本体は同一のポリフェノール類であるので、ゲル型合成樹脂を用いる方法で得られた体重増加抑制物質をアルコール水溶液などの適当な溶媒に溶解し、限外ろ過膜を用いる方法でさらに活性本体であるポリフェノール類の精製度を高めることもできる。またその逆も可能であり、もちろんゲル型合成樹脂を用いる方法または限外ろ過膜を用いる方法の単独でも十分に有用な体重増加抑制物質を得ることができる。
【００２３】
得られた体重増加抑制物質は、一般に使用される担体、助剤、添加剤等とともに製剤化することができ、常法に従って経口の製品として医薬品として用いることができ、また食品素材と混合して飲食品とすることができる。
【００２４】
医薬品は経口剤として錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シラップ剤などがある。これらの製品を医薬として人体に投与するときは、１回当たり125mg〜2,000mg/kg体重の量、好ましくは250mg〜1,000mg/kg体重の量を１日に１ないしは数回投与し、十分にその効果を奏し得るものである。
【００２５】
本発明の体重増加抑制物質を含有する医薬品は、生理的に認めうるベヒクル、担体、賦形剤、統合剤、安定剤、香味剤などとともに要求される単位容量形態をとることができる。錠剤、カプセル剤に混和される佐薬は次のようなものである。トラガント、アラビアゴム、コーンスターチ、ゼラチンのような結合剤、微晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、全ゼラチン化澱粉、アルギン酸のような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤、ショ糖、乳糖、サッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油、チェリーのような香味剤など。また、カプセル剤の場合は上記の材料に更に油脂のような液体担体を含有することができ、また、他の材料は被覆剤として、または製剤の物理的形態を別な方法で変化させることができる。例えば、錠剤はシェラック、砂糖で被覆することができる。シロップまたはエリキシル剤は、甘味剤としてショ糖、防腐剤としてメチルまたはプロピルパラベン、色素およびチェリーまたはオレンジ香味のような香味剤を含有することができる。
【００２６】
本発明の体重増加抑制物質を含有した飲食品は、上記製剤の形態でもよいが、あめ、せんべい、クッキー、飲料などの形態でそれぞれの食品原料に所要量を加えて、一般の製造法により加工製造することもできる。健康食品、機能性食品としての摂取は、病気予防、健康維持に用いられるので、経口摂取として１日数回に分けて、全日量として6.25g〜100g、好ましくは12.5 g〜50 gを含む加工品として摂取される。
【００２７】
これらの飲食品に体重増加抑制物質を添加する際には、体重増加抑制物質を粉末のまま添加してもよいが、好ましくは体重増加抑制物質を１〜２％の水溶液またはアルコール水溶液の溶液あるいはアルコール溶液とし、飲食品に対し最終濃度が0.001〜15％、好ましくは0.01〜10％となるように添加することが望ましい。本発明の体重増加抑制物質を含有する医薬品および飲食品は、体重の増加を抑制する効果を有するので、肥満の予防および治療上有効なものである。
【００２８】
【実施例】
以下、実施例を示すが本発明はこれに限定されるものではない。
実施例１  （ゲル型合成樹脂によるホップ毬果からの体重増加抑制物質の調製）
ホップ毬果20gを乳鉢で粉砕し、2Lの水で撹拌下、95℃、40分間抽出した。ろ過後、放冷し、抽出液を親水性ビニルポリマー樹脂（東ソー社製トヨパールHW40）80mlを充填したカラムに2時間かけて通液し（ＳＶ＝12.5）、次いで400mlの5％エタノール水溶液で洗浄した。さらに同カラムに80％エタノール水溶液400mlを通液し、同溶出液を回収し、凍結乾燥して、体重増加抑制物質800mgを無臭のかすかに苦味を呈した淡黄色の粉末として得た。ホップからの収率は4％であった。
【００２９】
実施例２  （ゲル型合成樹脂によるホップ苞からの体重増加抑制物質の調製）
ホップ苞20gを600mlの50％エタノール水溶液で撹拌下、80℃、40分間抽出した。ろ過後、容積が300mlになるまで減圧濃縮し、その濃縮液をスチレン−ジビニルベンゼン樹脂（三菱化学社製セパビーズ825）80mlを充填したカラムに1時間かけて通液し（ＳＶ＝3.75）、次いで400mlの水で洗浄した。さらに同カラムに80％エタノール水溶液400mlを通液し、同溶出液を回収し、凍結乾燥して、体重増加抑制物質1.6gを無臭のかすかに苦味を呈した淡黄色の粉末として得た。ホップ苞からの収率は8％であった。
【００３０】
実施例３  （限外ろ過膜によるホップ毬果からの体重増加抑制物質の調製）
ホップ毬果20gを乳鉢で粉砕し、2Lの水で撹拌下、95℃、40分間抽出した。ろ過後、放冷し、抽出液を分画分子量が50,000の限外ろ過膜（アミコン社製XM50）により、1.0kg/cm2、室温下、20mlになるまで処理した。得られた上残り液を減圧乾固し、体重増加抑制物質200mgを無臭のかすかに苦味を呈した淡黄色の粉末として得た。ホップからの収率は1％であった。
【００３１】
実施例４  （限外ろ過膜によるホップ苞からの体重増加抑制物質の調製）
ホップ苞20gを600mlの50％エタノール水溶液で撹拌下、80℃、40分間抽出した。ろ過後、抽出液を分画分子量が10,000の限外ろ過膜（アミコン社製YM10）により、3.0kg/cm2、室温下、60mlになるまで処理した。得られた上残り液を凍結乾燥して、体重増加抑制物質0.8gを無臭のかすかに苦味を呈した淡黄色の粉末として得た。ホップ苞からの収率は4％であった。
【００３２】
実施例５  （体重増加抑制物質のさらなる精製および定性分析）
実施例２で得た体重増加抑制物質0.8gを、500mlの10％エタノール水溶液に溶解し、分画分子量が10,000の限外ろ過膜（アミコン社製YM10）により、1.0kg/cm2、室温下、20mlになるまで処理した。得られた上残り液を凍結乾燥して、体重増加抑制物質0.4gを無臭のかすかに苦味を呈した肌色の粉末として得た。この粉末3mgを100mlのメタノールに溶解しUV吸収スペクトル分析を行ったところ、図１に示すように吸収極大を280nmに、吸収極小を260nmに持つ特徴的なスペクトルを示した。また一般的なポリフェノール類の定量法のひとつであるカテキン定量（食品公定分析法）を行ったところカテキン含量に換算して40.6％の値を得た。
【００３３】
実施例６  （錠剤、カプセル剤）
実施例５で得られた物質                １０．０g
乳糖                                  ７５．０g
ステアリン酸マグネシウム              １５．０g
合  計                              １００．０g
上記の各重量部を均一に混合し、常法に従って錠剤、カプセル剤とした。なお実施例５で得られた物質の代わりに、それぞれ実施例１、２、３、４で得られた物質を添加した錠剤、カプセル剤も同様に得た。
【００３４】
実施例７  （散剤、顆粒剤）
実施例５で得られた物質                ２０．０g
澱粉                                  ３０．０g
乳糖                                  ５０．０g
合  計                              １００．０g
上記の各重量部を均一に混合し、常法に従って散剤、顆粒剤とした。なお実施例５で得られた物質の代わりに、それぞれ実施例１、２、３、４で得られた物質を添加した散剤、顆粒剤も同様に得た。
【００３５】
実施例８  （飴）
ショ糖                                ２０．０g
水飴（75％固形分）                    ７０．０g
水                                      ９．５g
着色料                                  ０．４５g
香  料                                  ０．０４５g
実施例５で得られた物質                  ０．００５g
合  計                              １００．０g
上記の各重量部の各成分を用い、常法に従って飴とした。なお実施例５で得られた物質の代わりに、それぞれ実施例１、２、３、４で得られた物質を添加した飴も同様に得た。
【００３６】
実施例９  （ジュース）
濃縮ミカン果汁                        １５．０g
果  糖                                  ５．０g
クエン酸                                ０．２g
香  料                                  ０．１g
色  素                                  ０．１５g
アスコルビン酸ナトリウム                ０．０４８g
実施例５で得られた物質                  ０．００２g
水                                    ７９．５g
合  計                              １００．０g
上記の各重量部の各成分を用い、常法に従ってジュースとした。なお実施例５で得られた物質の代わりに、それぞれ実施例１、２、３、４で得られた物質を添加したジュースも同様に得た。
【００３７】
実施例１０  （クッキー）
薄力粉                                ３２．０g
全  卵                                １６．０g
バター                                １６．０g
砂  糖                                ２５．０g
水                                  １０．８g
ベーキングパウダー                      ０．１９８g
実施例５で得られた物質                  ０．００２g
合  計                              １００．０g
上記の各重量部の各成分を用い、常法に従ってクッキーとした。なお実施例５で得られた物質の代わりに、それぞれ実施例１、２、３、４で得られた物質を添加したクッキーも同様に得た。
【００３８】
実施例１１  （体重増加抑制効果）
５週齢のＢＡＬＢ／ｃ系雄性マウスを１群１０匹とし、精製水（対照群）または実施例５で得られた物質を懸濁した水溶液を１日１回２週間反復経口投与した。試験期間中は飼料（CRF-1、日本チャールス・リバー）および飲料水を自由摂取させた。投与期間中の一般症状を観察し、体重変化および血液生化学値BUN（尿素窒素）、CRE（クレアチニン）、GOT（グルタミックオキザロアセティックトランスアミナーゼ）、GPT（グルタミックピルビックトランスアミナーゼ）、ALB（アルブミン）、TP（総タンパク質）、LDH（乳酸デヒドロゲナーゼ）、ALP（アルカリフォスファターゼ）を測定した。
試験結果は以下に示す通りであったが、250mg／kg体重以上の投与群でマウスの体重増加の抑制が見られた（表１）。また、一般症状に異常は認められず、血液生化学値はいずれも正常範囲内であった（表２）。すなわち実施例５で得られた物質は、マウスの健康に影響を及ぼすことなく体重増加抑制効果を示すことが明らかとなった。
【００３９】
0004678904.tif 000002
【００４０】
0004678904.tif 000003
【００４１】
【発明の効果】
本発明によれば、ホップ苞及びホップ苞を含むホップ毬果等を原料として、体重増加抑制物質を得ることができた。更にこれを、医薬品や飲食品の材料として容易に利用することができた。
【図面の簡単な説明】
【図１】 実施例５で得られた物質のUV吸収スペクトルである。縦軸は吸光度を、横軸は波長（nm）を示す。
【図１】
0004678904.tif 000004