(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ダイズ［Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ）Ｍｅｒｒ．］の種子からの揮発性画分を含有する皮膚傷害の治療、皮膚疾患の治療、細胞の再生増進又は体毛の増殖促進用組成物であって、該揮発性成分が、以下のステップ：
（ａ）１５重量％未満の濃度のアルコールを含有するアルコール溶液中、又は水中に種子の粗抽出物を供給し；そして
（ｂ）１気圧未満の気圧及び１１０℃未満の温度で、粗抽出物を蒸発させて揮発性画分を得る；
を含むプロセスによって調製され；且つ、
内径（Ｉ．Ｄ．）４．６ｍｍ、長さ（Ｌ）２５０ｍｍ及び粒子径５μｍのＷａｔｅｒｓ  Ｓｐｈｅｒｓｏｒｂ（ＴＭ）−ＯＤＳ２カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＣＬ）を通じて２００ｎｍで測定した、該揮発性画分５０μｌのスペクトルが、変動係数８％で、保持時間２．９１０、５．１９０、１３．１９０及び５０．８１５分にピークを有し、ここで、移動相は、０から５分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮ；５分から３０分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮの勾配；３０分から８０分が７５％Ｈ2Ｏ／２５％ＣＨ3ＣＮの勾配；８０分から１００分が０％Ｈ2Ｏ／１００％ＣＨ3ＣＮの勾配；１００分から１０１分が０％Ｈ2Ｏ／１００％ＣＨ3ＣＮの勾配；及び１０１分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮであり、流速が１ｍＬ／分である；
揮発性画分である組成物。
【請求項２】
揮発性画分が蒸気を冷却することによって液状で採取される請求項１記載の組成物。
【請求項３】
アルコールの濃度が５重量％未満である請求項１又は２記載の組成物。
【請求項４】
ステップ（ａ）における粗分画が水中である請求項１又は２記載の組成物。
【請求項５】
ステップ（ｂ）における温度が６０℃から１１０℃までの範囲である請求項１〜４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６】
医薬組成物、化粧品組成物又は皮膚の洗浄用組成物である請求項１〜５のいずれか１項記載の組成物。
【請求項７】
皮膚傷害又は皮膚疾患が、熱傷害、日焼け、照射性傷害、急性及び慢性外傷、斑状出血、皮膚炎、斑、丘疹、小結節、小水疱、気腫性嚢胞、膿疱、膨疹、斑点、嚢胞、鱗屑、痂皮、ひび、潰瘍、ざ瘡、乾皮症、落屑、そう痒、アレルギー性皮膚炎、皮疹、壊疽、慢性うっ血性潰瘍、擦過傷、アトピー性皮膚炎、縫合創傷、糖尿病創傷及び毛嚢欠損から成る群から選択されたものである請求項１〜６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項８】
皮膚傷害又は皮膚疾患が、熱傷害、照射性傷害、急性及び慢性外傷、皮膚炎、壊疽、慢性うっ血性潰瘍、擦過傷、アトピー性皮膚炎、縫合創傷、糖尿病創傷及び毛嚢欠損から成る群から選択されたものである請求項１〜６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項９】
抗菌剤を更に含む請求項１〜８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１０】
ボルネオール、ステアリン酸、ステアリルアルコール、パルミチン酸、セチルアルコール、蜜ろう及びポリオキシエチレンソルビタンモノステアリン酸エステルから選ばれる一種又は二種以上を更に含む請求項１〜９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１１】
ダイズ［Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ）Ｍｅｒｒ．］の種子、及び、ゴマ（Ｓｅｓａｍｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ）の種子、リョクトウ（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ  ｒａｄｉａｔｕｓ  Ｌ．）の種子及び抗菌薬草から成る群から選択された少なくとも１つを含む原料からの揮発性画分を含有する皮膚傷害の治療、皮膚疾患の治療、細胞の再生増進又は体毛の増殖促進用組成物であって、該揮発性成分が、以下のステップ：
（ａ）１５重量％未満の濃度のアルコールを含有するアルコール溶液中、又は水中に原料の粗抽出物を供給し；そして
（ｂ）１気圧未満の気圧及び１１０℃未満の温度で、粗抽出物を蒸発させて揮発性画分を得る；
を含むプロセスによって調製されるものである組成物。
【請求項１２】
抗菌薬草が、掌葉大黄（Ｒｈｅｕｍ  ｐａｌｍａｔｕｍ）の乾燥根茎、ダイオウ（大黄、Ｒｈｅｉ  Ｒｉｓｏｍａ）の乾燥根茎、キハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ  ａｍｕｒｅｎｓｅ  Ｒｕｐｒ．）の乾燥樹皮及びオウバク（黄柏、Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉ  Ｃｏｒｔｅｘ）の乾燥樹皮から成る群から選択されたものである請求項１１記載の組成物。
【請求項１３】
原料が、４０から１００％のダイズの種子、０から５０％のゴマの種子、０から５０％のリョクトウの種子及び０から３０％の抗菌薬草を含む請求項１１又は１２記載の組成物。
【請求項１４】
揮発性画分が蒸気を冷却することによって液状で採取される請求項１１〜１３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１５】
アルコールの濃度が５重量％未満である請求項１１〜１４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１６】
ステップ（ａ）における粗分画が水中である請求項１１〜１５のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１７】
ステップ（ｂ）における温度が６０℃から１１０℃までの範囲である請求項１１〜１６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１８】
医薬組成物、化粧品組成物又は皮膚の洗浄用組成物である請求項１１〜１７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９】
皮膚傷害又は皮膚疾患が、熱傷害、日焼け、照射性傷害、急性及び慢性外傷、斑状出血、皮膚炎、斑、丘疹、小結節、小水疱、気腫性嚢胞、膿疱、膨疹、斑点、嚢胞、鱗屑、痂皮、ひび、潰瘍、ざ瘡、乾皮症、落屑、そう痒、アレルギー性皮膚炎、皮疹、壊疽、慢性うっ血性潰瘍、擦過傷、アトピー性皮膚炎、縫合創傷、糖尿病創傷及び毛嚢欠損から成る群から選択されたものである請求項１１〜１８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２０】
皮膚傷害又は皮膚疾患が、熱傷害、照射性傷害、急性及び慢性外傷、皮膚炎、壊疽、慢性うっ血性潰瘍、擦過傷、アトピー性皮膚炎、縫合創傷、糖尿病創傷、及び毛嚢欠損から成る群から選択されたものである請求項１１〜１８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２１】
抗菌剤を更に含む、請求項１１〜２０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２２】
ボルネオール、ステアリン酸、ステアリルアルコール、パルミチン酸、セチルアルコール、蜜ろう及びポリオキシエチレンソルビタンモノステアリン酸エステルから選ばれる一種又は二種以上を更に含む請求項１１〜２１のいずれか１項記載の組成物
【請求項２３】
７０％のダイズの種子、２０％のゴマの種子、５％の掌葉大黄又はダイオウの乾燥根茎及び５％のキハダ又はオウバクの乾燥樹皮を含む原料からの揮発性画分を含む皮膚傷害の治療、皮膚疾患の治療、細胞の再生増進又は体毛の増殖促進用組成物であって、該揮発性画分が：
（ａ）２％のアルコール中に原料の粗抽出物を供給し；そして
（ｂ）１気圧未満の気圧及び１１０℃未満の温度で、粗抽出物を蒸発させて揮発性画分を得る；
ステップを含むプロセスによって調製されるものである組成物。
【請求項２４】
ボルネオール、ステアリン酸、ステアリルアルコール、パルミチン酸、セチルアルコール、蜜ろう及びポリオキシエチレンソルビタンモノステアリン酸から選ばれる一種又は二種以上をさらに含む請求項２３記載の組成物。
【請求項２５】
５３％のダイズの種子、２０％のゴマの種子、１７％のリョクトウの種子、５％の掌葉大黄又はダイオウの乾燥根茎、及び５％のキハダ又はオウバクの乾燥樹皮を含む原料からの揮発性画分を含有する皮膚傷害の治療、皮膚疾患の治療、細胞の再生増進又は体毛の増殖促進用であって、該揮発性成分が、：
（ａ）２％のアルコール中に原料の粗抽出物を供給し；そして
（ｂ）１気圧未満の気圧及び１１０℃未満の温度で、粗抽出物を蒸発させて揮発性画分を得る；
ステップを含むプロセスによって調製され；且つ、
内径（Ｉ．Ｄ．）４．６ｍｍ、長さ（Ｌ）２５０ｍｍ及び粒子径５μｍのＷａｔｅｒｓ  Ｓｐｈｅｒｓｏｒｂ（ＴＭ）−ＯＤＳ２カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＣＬ）を通じて２００ｎｍで測定した、揮発性画分５０μｌのスペクトルが、変動係数８％で、保持時間２．８９６、５．１１１、１２．９４４及び４６．６０３分にピークを有し、ここで、移動相は、０から５分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮ；５分から３０分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮの勾配；３０分から８０分が７５％Ｈ2Ｏ／２５％ＣＨ3ＣＮの勾配；８０分から１００分が０％Ｈ2Ｏ／１００％ＣＨ3ＣＮの勾配；１００分から１０１分が０％Ｈ2Ｏ／１００％ＣＨ3ＣＮの勾配；及び１０１分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮであり、流速が１ｍＬ／分である；
揮発性画分である組成物。
【請求項２６】
医薬組成物、化粧品組成物又は皮膚の洗浄用組成物である請求項２５記載の組成物。
【請求項２７】
皮膚傷害又は皮膚疾患が、熱傷害、日焼け、照射性傷害、急性及び慢性外傷、斑状出血、皮膚炎、斑、丘疹、小結節、小水疱、気腫性嚢胞、膿疱、膨疹、斑点、嚢胞、鱗屑、痂皮、ひび、潰瘍、ざ瘡、乾皮症、落屑、そう痒、アレルギー性皮膚炎、皮疹、壊疽、慢性うっ血性潰瘍、擦過傷、アトピー性皮膚炎、縫合創傷、糖尿病創傷及び毛嚢欠損から成る群から選択されたものである請求項２５又は２６記載の組成物。
【請求項２８】
皮膚傷害又は皮膚疾患が、熱傷害、照射性傷害、急性及び慢性外傷、皮膚炎、壊疽、慢性うっ血性潰瘍、擦過傷、アトピー性皮膚炎、縫合創傷、糖尿病創傷及び毛嚢欠損から成る群から選択されたものである請求項２５又は２６記載の組成物。
【請求項２９】
抗菌剤を更に含む請求項２５〜２８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項３０】
ボルネオール、ステアリン酸、ステアリルアルコール、パルミチン酸、セチルアルコール、蜜ろう及びポリオキシエチレンソルビタンモノステアリン酸エステルから選ばれる一種又は二種以上を更に含む請求項２５〜２９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項３１】
８０％のダイズの種子及び２０％のリョクトウの種子を含む原料からの揮発性画分を含有する皮膚傷害の治療、皮膚疾患の治療、細胞の再生増進又は体毛の増殖促進用組成物であって；該揮発性画分が：
（ａ）２％のアルコール中に原料の粗抽出物を供給し；そして
（ｂ）１気圧未満の気圧及び１１０℃未満の温度で、粗抽出物を蒸発させて揮発性画分を得る；
ステップを含むプロセスによって調製されるものである組成物。
【請求項３２】
ボルネオール、ステアリン酸、ステアリルアルコール、パルミチン酸、セチルアルコール、蜜ろう及びポリオキシエチレンソルビタンモノステアリン酸エステルから選ばれる一種又は二種以上をさらに含む請求項３１記載の組成物。
【請求項３３】
８０％のダイズの種子及び２０％のゴマの種子を含む原料からの揮発性画分を含む皮膚傷害の治療、皮膚疾患の治療、細胞の再生増進又は体毛の増殖促進用組成物であって；該揮発性画分が：
（ａ）２％のアルコール中に原料の粗抽出物を供給し；そして
（ｂ）１気圧未満の気圧及び１１０℃未満の温度で、粗抽出物を蒸発させて揮発性画分を得る；
ステップを含むプロセスによって調製されるものである組成物。
【請求項３４】
ボルネオール、ステアリン酸、ステアリルアルコール、パルミチン酸、セチルアルコール、蜜ろう及びポリオキシエチレンソルビタンモノステアリン酸エステルから選ばれる一種又は二種以上をさらに含む請求項３３記載の組成物。
【請求項３５】
９０％のダイズの種子及び１０％掌葉大黄又はダイオウの乾燥根茎を含む原料からの揮発性画分を含む皮膚傷害の治療、皮膚疾患の治療、細胞の再生増進又は体毛の増殖促進用組成物であって、該揮発性画分が：
（ａ）２％のアルコール中に原料の粗抽出物を供給し；そして
（ｂ）１気圧未満の気圧及び１１０℃未満の温度で、粗抽出物を蒸発させて揮発性画分を得る；
ステップを含むプロセスによって調製されるものである組成物。
【請求項３６】
ボルネオール、ステアリン酸、ステアリルアルコール、パルミチン酸、セチルアルコール、蜜ろう及びポリオキシエチレンソルビタンモノステアリン酸エステルから選ばれる一種又は二種以上をさらに含む請求項３５記載の組成物。
【請求項３７】
８０％のダイズの種子、１０％のゴマの種子及び１０％の掌葉大黄又はダイオウの乾燥根茎を含む原料からの揮発性画分を含む皮膚傷害の治療、皮膚疾患の治療、細胞の再生増進又は体毛の増殖促進用組成物であって、該揮発性画分が：
（ａ）２％のアルコール中に原料の粗抽出物を供給し；そして
（ｂ）１気圧未満の気圧及び１１０℃未満の温度で、粗抽出物を蒸発させて揮発性画分を得る；
ステップを含むプロセスによって調製されるものである組成物。
【請求項３８】
ボルネオール、ステアリン酸、ステアリルアルコール、パルミチン酸、セチルアルコール、蜜ろう及びポリオキシエチレンソルビタンモノステアリン酸エステルから選ばれる一種又は二種以上をさらに含む請求項３７記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、主として、皮膚傷害の治療において、皮膚疾患の治療において、細胞再生の促進において、及び体毛の増殖促進において効果を有するダイズ［Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ）Ｍｅｒｒ．］の種子からの揮発性画分に関する。
【背景技術】
【０００２】
大豆及び黒大豆を包含する、ダイズ［Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ）Ｍｅｒｒｉｌｌ］は、世界の油及びタンパク質の最も重要な供給源である。例えば、大豆は、加工処理して、サラダオイルとして、又はマーガリン及びショートニングの製造用として使用される食用の半乾性油を得ることができる。大豆油は、又、塗料、リノリウム、オイルクロス、印刷インキ、石鹸、殺虫剤及び消毒薬の製造において使用することができる。なお又、油工業の副産物から得られるレシチンリン脂質は、食品、化粧品、医薬、皮革、塗料、プラスチックス、石鹸及び洗剤において、湿潤剤及び安定化剤として使用することができる。大豆粕は、非常にタンパク質の豊富な家畜用の飼料である。更に、大豆タンパク質は、合成繊維、接着剤、織物の糊づけ、防水加工、消火用泡、その他の製造において使用することができる。
【０００３】
医学的使用においては、大豆は多くの疾病に効果を有することが報告されている。
【０００４】
大豆は、腸、心臓、腎臓、肝臓及び胃の機能を調節するための栄養補助食品として使用することができる。大豆油は不飽和脂肪酸を多く含んでいるので、高コレステロール血症と闘うために使用することができる。大豆からの医薬レシチンは、抗脂肝剤として機能する。更に、抗硬直因子として知られるスチグマステロール及びある種の抗高血圧症薬におけるジオスゲニンの代わりとして使用されるシトステロールは大豆から調製された。大豆において発見されたイソフラボン及び植物エストロゲンは、乳癌、前立腺癌及び大腸癌を含む種々の癌に対して予防効果を有することが示唆された（非特許文献１）。植物ステロール添加マーガリンの消費は、又、中高年の高コレステロール血症者の総血漿コレステロール及びＬＤＬ−コレステロール濃度を低減することが見出された（非特許文献２）。
【０００５】
大豆からのある種の抽出物は、又、医薬効果を有することが報告されている。茶大豆種、秋田在来の種皮から得た７０％水性アセトン抽出物の、１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）ラジカルに対する捕捉活性が開示されている（非特許文献３）。６０℃未満で粉末鉱石の下でゆっくりと焙煎し、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅで三日間にわたって発酵して各成分を低分子物質に変換した胚芽抽出物、大豆、米糠、ティア  グラス（ｔｅａｒ  ｇｒａｓｓ）、ゴマ、小麦、シトロン、緑茶、緑葉抽出物及び発芽米からの抽出物は、抗酸化効果を有することが見出された（非特許文献４）。ニンジン、アブラナの緑葉、及び黒豆、アズキ、緑豆、及び大豆を含む豆類の煮沸抽出物は、高い抗ガン促進及びラジカル捕捉活性を有することが示された（非特許文献５）。黒豆の水抽出物も、又、ラットにおける血清グルタミン酸−オキサロ酢酸トランスアミナーゼ（ｓＧＯＴ）及び血清グルタミン酸−ピルビン酸トランスアミナーゼ（ｓＧＰＴ）活性を測定することによって、アセトアミノフェン誘発肝傷害に対する効果が報告されている（非特許文献６）。低級脂肪族アルコール及び低沸点エステルの混合系からなる抽出液での大豆種子の抽出物が、渇きを癒すためのリフレッシュドリンク剤として示された（特許文献１）。
【０００６】
大豆からのある種の特別な抽出物が、ある種の皮膚疾患の治療における化粧品又は医薬に適用されることが見出された。
【０００７】
一定の比率でスフィンゴミエリン及びリン脂質を含有する大豆抽出物が、乾燥肌の治療用の化粧品に使用されることが開示された（特許文献２）。そのような抽出物は、熟した全粒大豆又は脱脂大豆粉を、脂肪族アルコールのみを使用して又は水との混合物で抽出し、次いで脂肪族炭化水素及び脂肪族ケトンで処理することによって製造された。それ故、抽出物は脂質可溶性である。
【０００８】
乳清（ホエー）及びキハダ抽出物から選択される一つ又はそれ以上の植物抽出物、及び更にコガネバナ、コンフリー及びダイズから選択される一つ又はそれ以上の抽出物を含有するざ瘡薬、面皰産生阻害剤又は化粧料組成物が、ざ瘡又はざ瘡に起因する炎症性のひび割れた皮膚のような皮膚疾患の予防又は治療に効果があることが見出された（特許文献３）。組成物は、一般の飲料、食品、その他の製造に使用することができる。
【０００９】
大豆又は大豆の水抽出液から得られたマロニルイソフラボングリコシド及び、例えば、マロニルダイジン等は、上皮細胞増殖促進剤として使用された（特許文献４）。グリコシドは、４５〜６５℃で２〜４時間、苛性ソーダでｐＨ７．５〜ｐＨ９．０に調節した水の中に皮をむいた大豆を液浸し、大豆を除去して水抽出溶液として浸漬水を得、限外ろ過膜によって抽出溶液からタンパク質を除去してろ液を得、ろ液を吸着剤と接触させ、そしてアルコールの水性溶液又はアルコールのアルカリ性水性溶液を使用することによって吸着した物質からグリコシドを溶出することによって得ることができる。
【００１０】
微生物による発酵大豆製品は、又、抗活性酸素作用組成物、薬剤、食品、化粧品及び医薬品として適用されている（例えば、特許文献５）。
【００１１】
しかしながら、いずれの公知技術も、ダイズからの低濃度のアルコールを含む或いは含まない揮発性画分が、皮膚傷害及び皮膚疾患を治療するために容易に調製されることを教示又は示唆していない。
【特許文献１】特許第１１１７７６７号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開ＵＳ２００２／０００９５０９Ａ１号公報
【特許文献３】特開２００１−０９７８４２号公報
【特許文献４】特許第９０５９１６６号明細書
【特許文献５】特許第４１３９１３２号明細書
【非特許文献１】Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚ，Ｈ．；「植物エストロゲン類と癌（Ｐｈｙｔｏ−ｏｅｓｔｒｏｇｅｎｓ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ）」．Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２００２，Ｖｏｌ．３，ｐ．３６４−３７３
【非特許文献２】Ｍａｔｖｉｅｎｋｏ，Ｏ．Ａ．，  Ｌｅｗｉｓ，Ｄ．Ｓ．，Ｓｗａｎｓｏｎ，  Ｍ．，Ａｅｎｄｔ，Ｂ．，Ｒａｉｎｗａｔｅｒ，Ｄ．Ｌ．，Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｊ．，ａｎｄ  Ａｌｅｋｅｌ，Ｄ．Ｌ．；「牛挽き肉での大豆植物ステロールの１日１回投与は、若年の軽症高コレステロール血症の男性の血清総コレステロール及びＬＤＬコレステロールを減少させる」、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．，２００２，７６，ｐ．５７−６４
【非特許文献３】Ｔａｋａｈａｔａ，Ｙ．，Ｏ．−Ｋａｍｅｙａｍａ，Ｍ．，Ｆｕｒｕｔａ，Ｓ．，Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｍ．，ａｎｄＳｕｄａ，Ｉ．；「高ラジカル捕捉活性を有する茶大豆種皮中の高重合プロシアニジン」、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，２００１，４９，ｐ．５８４３−５８４７
【非特許文献４】Ｍｉｎａｍｉｙａｍａ，Ｙ．，Ｙｏｓｈｉｋａｗａ，Ｔ．，Ｔａｎｉｇａｗａ，Ｔ．，Ｔａｋａｈａｓｈｉ，Ｓ．，Ｎａｉｔｏ，Ｙ．，Ｉｃｈｉｋａｗａ，Ｈ．，ａｎｄ  Ｋｏｎｄｏ，Ｍ．；「加工処理した穀類食品の抗酸化効果」、Ｊ．Ｎｕｔｒ．Ｓｃｉ．Ｖｉｔａｍｉｎｏｌ．，１９９４，４０，ｐ．４６７−４７７
【非特許文献５】Ｍａｅｄａ，Ｈ．，Ｋａｔｓｕｋｉ，Ｔ．，Ａｋａｉｋｅ，Ｔ．ａｎｄ  Ｙａｓｕｔａｋｅ，Ｒ．；「脂質過酸化ラジカルと癌促進効果の間の高い相関性：種々の植物抽出物によるエプスタイン・バーウイルス／Ｂリンパ球系における癌促進の抑制及びアルキル過酸化ラジカルの捕捉」、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１９９２，８３，ｐ．９２３−９２８
【非特許文献６】Ｗｕ．Ｓ．−Ｊ．，Ｗａｎｇ，Ｊ．−Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈａｎｇ，Ｃ．−Ｈ．；「マメ科植物の肝保護活性の評価」、Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００１，Ｖｏｌ．８（３），ｐ．２１３−２１９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、皮膚傷害の治療、皮膚疾患の治療、細胞の再生増進及び体毛の増殖促進の劇的な効果を示す、ダイズの種子からの揮発性画分を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の揮発性画分は、
（ａ）約１５重量％未満の濃度のアルコールを含有するアルコール溶液中、又は水中に種子の粗抽出物を供給し；そして
（ｂ）約１気圧未満の気圧及び約１１０℃未満の温度で粗抽出物を蒸発させて、揮発性画分を得る；
ステップを含むプロセスによって調製される。
【００１４】
該揮発性画分は、いずれの公知のダイズの種子抽出物とも異なっている。何故なら、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）のパターンは独特のプロフィールを示しているからである。特に、内径（Ｉ．Ｄ．）４．６ｍｍ、長さ（Ｌ）２５０ｍｍ及び粒子径５μｍのＷａｔｅｒｓ  Ｓｐｈｅｒｓｏｒｂ（ＴＭ）−ＯＤＳ２カラムを用いて２００ｎｍで測定した、揮発性画分５０μｌのＨＰＬＣスペクトルは、変動係数８％で、保持時間２．９１０、５．１９０、１３．１９０、及び５０．８１５分にピークを有する。ただし、この場合の移動相は、０から５分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮ；５分から３０分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮの勾配；３０分から８０分が７５％Ｈ2Ｏ／２５％ＣＨ3ＣＮの勾配；８０分から１００分が０％Ｈ2Ｏ／１００％ＣＨ3ＣＮの勾配；１００分から１０１分が０％Ｈ2Ｏ／１００％ＣＨ3ＣＮの勾配；及び１０１分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮであり、流速は１ｍＬ／分である。
【００１５】
本発明は、又、本発明の揮発性画分を含む組成物を提供する。特に、該組成物は、医薬組成物、化粧品組成物又は皮膚の洗浄用組成物に使用することができる。
【００１６】
本発明によれば、ダイズ［Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ）Ｍｅｒｒ．］の揮発性画分は、皮膚傷害の治療、皮膚障害の治療、細胞の再生増進、及び体毛の増殖促進において劇的な効果を有することが、意外にも見出された。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明によれば、ダイズの種子からの揮発性画分は、
（ａ）約１５重量％未満の濃度のアルコールを含有するアルコール溶液中、又は水中に種子の粗抽出物を供給し；そして
（ｂ）約１気圧未満の気圧及び約１１０℃未満の温度で粗抽出物を蒸発させて、揮発性画分を得る；
ステップを含むプロセスによって調製される。
【００１８】
アルコールを約１５％未満の濃度で含有するアルコール溶液中又は水中の種子の粗抽出物から得られる揮発性画分が、皮膚科学における効果を有することが意外にも発見された。該揮発性画分は容易に調製される。ダイズの種子から調製された医薬又は化粧品の製品は、（１）大豆が長年消費されてきたこと、そして非毒性であると信じられること、及び（２）大豆は高価でないことから有利である。
【００１９】
本発明の実施態様において、ダイズの種子からの粗抽出物は、約１５重量％未満の濃度のアルコール溶液又は水を用いた抽出によって得られる。当業者により通常使用される植物種子から粗抽出物を得るいかなる方法も、本発明の実施に使用することができる。例えば、粗抽出物は、種子を、粉砕、撹拌、攪乱、切断又は切り刻みのような、いかなる通常の手段であれ小片に細分化し、約１５重量％未満の濃度のアルコール溶液に浸漬することによって得ることができる。好ましい実施態様において、アルコールの濃度は、約１０重量％未満、より好ましくは約３重量％又は約２重量％である。本発明によれば、粗抽出物は、又、水で抽出することもできる。好ましい実施態様において、種子片は、約５重量部から約１０重量部の範囲のアルコール又は水に浸漬される。当業者によって通常使用される、種子を細分化し細分化した種子から抽出するいかなる方法も、本発明の実施に使用することができる。
【００２０】
本発明によれば、粗抽出物は、約１気圧未満の気圧及び約１１０℃未満の温度、好ましくは約６０℃から約１１０℃で、蒸発される。揮発性画分は、蒸気を冷却することによって液体の形で採取することができる。
【００２１】
本発明の好ましい実施態様において、一定の気圧及び温度で粗抽出物を蒸発し、その蒸気を冷却することによって該揮発性画分を採取するプロセスは、ロータリーエバポレーターで実施することができ、ここで、蒸気は、冷水が供給される凝縮管に蒸発され、そして蒸気は凝縮管を通過して冷却され、揮発性画分が液状で採取される。操作は単純でコストは低い。
【００２２】
本発明による揮発性画分は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析され、同定することができる。例えば、内径（Ｉ．Ｄ．）４．６ｍｍ、長さ（Ｌ）２５０ｍｍ及び粒子径５μｍのＷａｔｅｒｓ  Ｓｐｈｅｒｓｏｒｂ（ＴＭ）−ＯＤＳ２カラムを用いて２００ｎｍで測定した、揮発性画分５０μｌのＨＰＬＣスペクトルは、変動係数８％で、保持時間２．９１０、５．１９０、１３．１９０、及び５０．８１５分にピークを有する。ただし、この場合の移動相は、０から５分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮ；５分から３０分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮの勾配；３０分から８０分が７５％Ｈ2Ｏ／２５％ＣＨ3ＣＮの勾配；８０分から１００分が０％Ｈ2Ｏ／１００％ＣＨ3ＣＮの勾配；１００分から１０１分が０％Ｈ2Ｏ／１００％ＣＨ3ＣＮの勾配；及び１０１分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮであり、流速は１ｍＬ／分である。スペクトルによれば、揮発性画分中の物質は強い極性を示す。それらは、公知文献に開示された他の成分とは大きく異なっている。例えば、ダイゼイン（ｄａｉｄｚｅｉｎ）及びゲニステイン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）は、その構造中に四つの環を有し、弱い極性を有する。
【００２３】
本発明の一つの好ましい実施態様において、皮膚傷害の治療、皮膚疾患の治療、細胞の再生増進及び体毛の増殖促進において、ダイズの種子を補助するために幾種類かの薬草が加えられる。本発明によれば、揮発性画分は、ダイズの種子、及び、ゴマの種子、リョクトウの種子及び抗菌薬草から成る群から選択される少なくとも一つの材料を含む原料から得られる。該原料からの揮発性画分の調製並びに揮発性画分の分析及び同定は、上記に記載されている。好ましくは、抗菌薬草は、掌葉大黄の乾燥根茎、ダイオウの乾燥根茎、キハダの乾燥樹皮及びオウバクの乾燥樹皮からなる群から選択される。別の態様において、原料は、好ましくは、約４０から約１００％のダイズの種子、０から約５０％のゴマの種子、０から約５０％のリョクトウの種子及び０から約３０％の抗菌薬草を含む。
【００２４】
本発明の更に好ましい実施態様の一つにおいて、原料は、約７０％のダイズの種子、約２０％のゴマの種子、約５％の掌葉大黄又はダイオウの乾燥根茎、及び約５％のキハダ又はオウバクの乾燥樹皮を含む。該原料は約２％のアルコール中に浸漬される。
【００２５】
本発明の別の好ましい実施態様において、原料は、約８０％のダイズの種子及び約２０％のリョクトウの種子を含む。該原料は約２％のアルコール中に浸漬される。
【００２６】
本発明の更に別の好ましい実施態様において、原料は、約８０％のダイズの種子及び約２０％のゴマの種子を含む。該原料は約２％のアルコール中に浸漬される。
【００２７】
本発明の更に別の好ましい実施態様において、原料は、約９０％のダイズの種子及び約１０％の掌葉大黄又はダイオウの乾燥根茎を含む。該原料は水中に浸漬される。
【００２８】
本発明の更に別の好ましい実施態様において、原料は、約８０％のダイズの種子、約１０％のゴマの種子及び約１０％の掌葉大黄又はダイオウの乾燥根茎を含む。該原料は水中に浸漬される。
【００２９】
本発明の最も好ましい実施態様において、原料は、約５３％のダイズの種子、約２０％のゴマの種子、約１７％のリョクトウの種子、約５％の掌葉大黄又はダイオウの乾燥根茎及び約５％のキハダ又はオウバクの乾燥樹皮を含む。該原料は約３％又は約２％のアルコール中又は水中に浸漬される。更に、内径（Ｉ．Ｄ．）４．６ｍｍ、長さ（Ｌ）２５０ｍｍ及び粒子径５μｍのＷａｔｅｒｓ  Ｓｐｈｅｒｓｏｒｂ（ＴＭ）−ＯＤＳ２カラムを用いて２００ｎｍで測定した、揮発性画分５０μｌのＨＰＬＣスペクトルは、変動係数８％で、保持時間２．８９６、５．１１１、１２．９４４、及び４９．６０３分にピークを有する。ただし、この場合の移動相は、０から５分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮ；５分から３０分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮの勾配；３０分から８０分が７５％Ｈ2Ｏ／２５％ＣＨ3ＣＮの勾配；８０分から１００分が０％Ｈ2Ｏ／１００％ＣＨ3ＣＮの勾配；１００分から１０１分が０％Ｈ2Ｏ／１００％ＣＨ3ＣＮの勾配；及び１０１分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮであり、流速は１ｍＬ／分である。
【００３０】
本発明は、又、本発明による揮発性画分を含む組成物を提供する。好ましくは、組成物は、医薬組成物、化粧品組成物及び皮膚の洗浄用組成物から成る群から選択される。本発明による好ましい実施態様において、組成物は、更に、ボルネオール等の抗菌剤を含む。好ましくは、本発明による揮発性画分の量は、全組成物重量の約７０％から約８０％の範囲である。
【００３１】
本発明の一つの実施態様において、組成物は、人に容易に適用される軟膏を形成するボルネオール、ステアリン酸、ステアリルアルコール、パルミチン酸、セチルアルコール、蜜ろう及びポリオキシエチレンソルビタンモノステアリン酸エステル（ＰＯＥ）から選ばれる一種又は二種以上を更に含む。
【００３２】
皮膚傷害又は皮膚疾患を治療する方法は、皮膚傷害の治療、皮膚疾患の治療、細胞の再生増進、及び体毛の増殖を促進するために有効な十分な量で、本発明による組成物を適用することを含む。
【００３３】
本発明に記載の揮発性画分は、皮膚傷害の治療、皮膚疾患の治療、細胞の再生増進、及び体毛の増殖促進に有用である。例えば、皮膚傷害又は皮膚疾患は、熱傷害、日焼け、照射性傷害、急性及び慢性外傷、斑状出血、皮膚炎、斑、丘疹、小結節、小水疱、気腫性嚢胞、膿疱、膨疹、斑点、嚢胞、鱗屑、痂皮、ひび、潰瘍、ざ瘡、乾皮症、落屑、そう痒、アレルギー性皮膚炎、皮疹及び毛嚢欠損を包含する。好ましくは、本発明による組成物は、熱傷害、照射性傷害、急性及び慢性外傷、皮膚炎、壊疽、慢性うっ血性潰瘍、擦過傷、アトピー性皮膚炎、縫合創傷、糖尿病創傷及び毛嚢欠損を治療するのに効果的である。
【００３４】
以下に記載する動物モデルにおいて、本発明による揮発性画分は、肉芽、傷痕形成性及びアレルギーなしに大領域の皮膚欠損を治癒するのに効果的であることが証明された。更に、毛嚢欠損は治癒することができ、体毛は紅斑又は焼痂なしに再び増殖することができた。本発明による揮発性画分で治療された創傷の治癒率及び状態は、従来の医薬よりもよりよいものである。本発明による揮発性画分で治療された創傷は、瘢痕なしに治癒し、治癒した創傷の皮膚の色は、正常な皮膚の色と同じであった。更に、組織学的試験において、本発明による揮発性画分で治療された創傷の皮膚組織は、通常、外観に大きな障害と複雑な再建手術を生ずる原因となる線維性変性を示さなかった。
【００３５】
更に、アレルギー反応、炎症、膿疱又は紅疹は、本発明による揮発性画分で治療された創傷には見出されなかった。治療後、創傷の副器官及び細胞は、正常の皮膚と同じに増殖した。対照的に、従来の医薬で治療した創傷は、副器官及び細胞の数はより少なく、創傷の線維幅は正常よりも大きかった。
【００３６】
更に、本発明による揮発性画分は、照射傷害の治療にも効果的である。これまで、照射傷害の治療に有効な薬物はなかった。照射傷害にかかった人において、揮発性画分で治療された後の創傷は、体毛にほとんど損傷を示さず、アレルギーは示さないことが、意外にも見出された。
【００３７】
更に、創傷治癒において通常見られる炎症も組織の萎縮も、本発明による揮発性画分で治療された創傷には見出されなかった。揮発性画分は、皮膚が損傷された創傷の治癒に効果的である。それ故、本発明は、大きな領域と皮膚創傷を治療するのに、よりよい、便利な、そして経済的な方法を提供するものである。
【実施例】
【００３８】
以下の実施例は、例示のみの目的のものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【００３９】
実施例１
ダイズ［Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ）Ｍｅｒｒ．］の種子からの揮発性画分の調製
ダイズ［Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ）Ｍｅｒｒ．］の種子、ゴマ（Ｓｅｓａｍｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ）の種子、リョクトウ（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ  ｒａｄｉａｔｕｓ  Ｌ．）の種子、掌葉大黄（Ｒｈｅｕｍ  ｐａｌｍａｔｕｍ）又はダイオウ（大黄、Ｒｈｅｉ  Ｒｉｓｏｍａ）の乾燥根茎及びキハダ（Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｏｎ  ａｍｕｒｅｎｓｅ  Ｒｕｐｒ．）又はオウバク（黄柏、Ｐｈｅｌｌｏｄｅｎｄｒｉ  Ｃｏｒｔｅｘ）の乾燥樹皮を含む原料を粉にし、アルコール又は蒸留水８重量部で抽出して、粗抽出物を得た。含量を表１に示す。揮発性画分は、１気圧未満の圧力、６０℃の温度で、冷水を供給した濃縮管を通過させるロータリーエバポレーター（ＥＹＥＬＡ  Ｎ−１０００Ｓ、１０００Ｓ−Ｗ）を用いて、粗抽出物を蒸発させることによって得た。
【００４０】
【表１】
0004681218.tif 000002
【００４１】
画分１の５０μｌのＨＰＬＣの結果を図１に示す。ＨＰＬＣは、内径（Ｉ．Ｄ．）４．６ｍｍ、長さ（Ｌ）２５０ｍｍ及び粒子径５μｍのＷａｔｅｒｓ  Ｓｐｈｅｒｓｏｒｂ（ＴＭ）−ＯＤＳ２カラムで、移動相は、０から５分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮ；５分から３０分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮの勾配；３０分から８０分が７５％Ｈ2Ｏ／２５％ＣＨ3ＣＮの勾配；８０分から１００分が０％Ｈ2Ｏ／１００％ＣＨ3ＣＮの勾配；１００分から１０１分が０％Ｈ2Ｏ／１００％ＣＨ3ＣＮの勾配；及び１０１分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮであり、流速は１ｍＬ／分で行われた。ＨＰＬＣは、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ２７９５ＨＴで行われ、スペクトル測定は、Ｗａｔｅｒｓ  Ｐｈｏｔｏ  Ｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ２９９６によって１９０から４００ｎｍで行われた。２００ｎｍで測定したスペクトルに示すように、変動係数８％で、保持時間２．９１０、５．１９０、１３．１９０、及び５０．８１５分に鋭いピークがあった。
【００４２】
画分３の５０μｌのＨＰＬＣの結果を図２に示す。ＨＰＬＣは、内径（Ｉ．Ｄ．）４．６ｍｍ、長さ（Ｌ）２５０ｍｍ及び粒子径５μｍのＷａｔｅｒｓ  Ｓｐｈｅｒｓｏｒｂ（ＴＭ）−ＯＤＳ２カラムで、移動相は、０から５分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮ；５分から３０分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮの勾配；３０分から８０分が７５％Ｈ2Ｏ／２５％ＣＨ3ＣＮの勾配；８０分から１００分が０％Ｈ2Ｏ／１００％ＣＨ3ＣＮの勾配；１００分から１０１分が０％Ｈ2Ｏ／１００％ＣＨ3ＣＮの勾配；及び１０１分が９５％Ｈ2Ｏ／５％ＣＨ3ＣＮであり、流速は１ｍＬ／分であった。ＨＰＬＣは、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ２７９５ＨＴで行われ、スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ  Ｐｈｏｔｏ  Ｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ２９９６によって１９０から４００ｎｍで測定された。２００ｎｍで測定されたスペクトルに示すように、変動係数８％で、保持時間２．８９６、５．１１１、１２．９４４、及び４６．６０３分に鋭いピークがあった。
【００４３】
実施例２
軟膏の調製
本発明による軟膏を表２に例示する。
【００４４】
【表２】
0004681218.tif 000003
【００４５】
本発明の軟膏は、当業者によって通常使用されるいかなる従来の方法を用いても調製することができる。
【００４６】
実施例３
ウサギにおける全層皮膚創傷に対する効果
動物の処置：
体重２．９〜３．１ｋｇの雌性成獣ニュージランドホワイトウサギ、５羽、を動物モデルとして用いた。各ウサギは、単独でケージに入れ、固形飼料及び水で飼育した。ウサギは、塩酸ケタミン２５〜４０ｍｇ／ｋｇで麻酔した。各ウサギの背中を入念に毛刈りし、６カ所の全層皮膚（各領域は、１．５×１．５ｃｍ2）を切除した。ここで、全層皮膚は、表皮、真皮及び皮筋層を含む。
【００４７】
投与及び頻度：
各ウサギの創傷６領域を、画分１〜６をそれぞれ含む軟膏で、１日２回治療した。軟膏は、０．３５ｇ／ｃｍ2の量を局所に塗布した。
【００４８】
創傷の臨床的評価：
創傷は、毎日観察し、創傷治癒の過程を記録するため、光、焦点距離及び口径の同一条件下で、週に３回、参照用スケールと共に写真撮影した。これに加えて、創傷の大きさも測定した。その結果を表３に示す。
【００４９】
【表３】
0004681218.tif 000004
【００５０】
上記の結果は、創傷が（図３に示すように）全て治癒したことを示している。本発明による賦形剤（画分５を含む軟膏）も、又、全層皮膚創傷の治療に効果を有していた。
【００５１】
体毛増殖の評価：
新しい体毛の長さを測定した。画分１〜６を含む軟膏で治療した全ての創傷の体毛は、平均約１．７６ｃｍの長さであり（図４に示すように）、治療しない領域のそれは平均０．１〜０．２ｃｍであった。
【００５２】
結果は、本発明による揮発性画分が毛嚢欠損を修復する能力を有し、体毛増殖を促進した。これに加えて、本発明による賦形剤も、又、体毛増殖の増強に効果的であった。
【００５３】
実施例４
ラットにおける全層皮膚創傷に対する効果
動物の処置：
雄性、成獣スプラーグ−ドーリーラットは、台湾国立Ｃｈｅｎｇ  Ｋｕｎｇ大学実験動物センターから購入した。体重３００〜３５０ｇのラットは、塩酸ケタミン２５〜４０ｍｇ／ｋｇで麻酔した。各ラットの背中を電気クリッパで入念に毛刈りした。各ラットは、単独でケージに入れ、固形飼料及び水で飼育した。各ラットについて、２．５×２．５ｃｍ2の領域の全層皮膚を切除した。ここで、全層皮膚は、表皮、真皮、及び皮筋層を含む［Ｂ．Ｈａｆｅｍａｎｎら、真皮の組織工学用コラーゲン／エラスチン膜の使用、Ｂｕｒｎｓ．１９９９；２５：３７３−３８４；Ｈ．−Ｊ．Ｗａｎｇら、広範に拡張したメッシュの自己由来の中間層皮膚移植片増殖を増強するブタ真皮鋳型の使用、Ｊ．Ｔｒａｕｍａ．１９９７、２月；４２（２）：１７７−１８２］。
【００５４】
投与及び頻度：
２実験群のラットを、実施例２で用いられた画分７及び８を含む軟膏で治療し、各群はラット３匹を含んでいた。医薬組成物を、０．３５ｇ／ｃｍ2及び高さ０．１〜０．２ｃｍの量で、創傷に局所塗布した。全ての創傷は、滅菌ガーゼ及び弾性包帯により手当てし、包帯を毎日交換した。
【００５５】
実施例３と類似の評価方法を用い、創傷の大きさを測定した。結果を表４に示す。
【００５６】
【表４】
0004681218.tif 000005
【００５７】
画分７及び８を含む軟膏で治療した創傷は治癒した。特に、画分７を含む医薬組成物で治療した創傷領域はより速やかに減少した。
【００５８】
実施例５
深部中間層皮膚熱傷の治癒に対する効果
動物の処置：
雌性、成獣スプラーグ−ドーリーラットは、台湾国立Ｃｈｅｎｇ  Ｋｕｎｇ大学実験動物センターから購入した。体重２３０〜２８０ｇのラット９匹は、塩酸ケタミン２５〜４０ｍｇ／ｋｇで麻酔した。各ラットの背中を電気クリッパで、背中の中間部の予定した創傷領域を入念に毛刈りした。各ラットは、単独でケージに入れ、固形飼料及び水で飼育した。ラットの熱傷は、Ｗａｌｋｅｒ  ａｎｄ  Ｍａｓｏｎ［Ｚ−Ｒ．Ｇａｏら、皮膚ドナー部位及び深部中間層皮膚熱傷用の創傷用手当用品としてのブタ真皮コラーゲン、Ｂｕｒｎｓ．１９９２；１８（６）：４９２−４９６］によって記載された方法を用いて、背部皮膚表面を、４×４ｃｍ2の領域で深部中間層皮膚熱傷を生じるように設計された鋳型を通して、７５℃の水に１５秒間露出して生成させた。
【００５９】
投与及び頻度：
ラットの実験群（Ｇ３）を、アルコール含量を３％とした以外は実施例２と同様にして、画分３と同じように画分９を含む本発明に記載の医薬組成物で治療した。ラットの、無治療の１つの対照群（Ｇ１）とスルファジアジン銀（ＳＷＩＳＳ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＣＯ．，ＬＴＤ．）で治療した１つの比較群（Ｇ２）を用いた。各群はラット３匹を含んでいた。薬物は、体毛が増殖するまで、１日２回、０．３５ｇ／ｃｍ2の量を創傷に局所塗布した。
【００６０】
創傷の臨床的評価：
実施例３と類似した評価方法を用い、又、創傷の大きさを測定した。結果を表５に示す。
【００６１】
【表５】
0004681218.tif 000006
【００６２】
創傷治癒の進行において、本発明による軟膏で治療した創傷は瘢痕なしに治癒し、皮膚の色は正常と同じであった。しかしながら、スルファジアジン銀で治療した創傷には瘢痕が生じた。更に、ラットの創傷は、第３７日目においても創傷領域の２．８６％に瘢痕が残っていた従来のスルファジアジン銀で治療したよりも早く、第１８日目で治癒した。
【００６３】
新しい体毛増殖の成績（スコア）も評価し、記録した。新しい体毛増殖スコアは、以下のように定義された：「−２」は、幾分痂皮及び紅斑があり、新しい体毛増殖はないもの；「−１」は、幾分紅斑があり、新しい体毛増殖はないもの；「０」は、正常の皮膚で、新しい体毛増殖はないもの；「＋１」は、幾分新しい体毛増殖があるもの；及び「＋２」は、創傷領域のおよそ５０％の新しい体毛増殖があるもの。
【００６４】
新しい体毛増殖スコアを、表６に列挙する。
【００６５】
【表６】
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【００６６】
表６に示したように、本発明の軟膏は、従来のスルファジアジン銀よりも新しい体毛増殖により効果的であった。新しい体毛増殖は、本発明による医薬組成物で治療した第１８日目に観察され、新しい体毛増殖の５０％は第３５日目に観察された。本発明による医薬組成物で治療した創傷には、紅斑も痂皮も認められなかった。しかしながら、従来の薬物で治療した場合は、新しい体毛増殖は見られなかった。
【００６７】
皮膚の組織学的評価：
創傷が完全に治癒した後に、ラットを麻酔して各ラットの皮膚組織を採取し、Ｂ．Ｈａｆｅｍａｎｎら（Ｂ．Ｈａｆｅｍａｎｎら、真皮の組織工学用コラーゲン／エラスチン膜の使用、Ｂｕｒｎｓ．１９９９；２５：３７３−３８４）によって記載された評価方法を使用して組織学的試験を行った。試料を採取し、ホルムアルデヒド中に貯蔵した。各検体は、パラフィンブロックに包埋し、薄切片を調製し、ヘマトキシリン・エオジン法を用いて染色した。検体は、光学顕微鏡及び透過型電子顕微鏡で観察した。
【００６８】
組織学的試験の結果は、無治療のラット上皮組織の厚さが（図５に示すように）平らでなく、顆粒層が厚くなっていることを示した。線維層は、深部皮膚に見られた。従来のスルファジアジン銀で治療したラット群でも（図６に示すように）、又、不均一な厚さの上皮組織を有することが示された。線維層は深部皮膚に見られ、毛嚢は崩壊していた。一方、本発明による軟膏で治療した創傷は（図７に示すように）、正常であるように見え、多数の毛嚢が再生していた。線維層は、真皮の表面領域に見られた。
【００６９】
実施例６
ラットにおける大領域の全層皮膚傷害に対する効果
動物の処置：
雄性、成獣スプラーグ−ドーリーラットは、台湾国立Ｃｈｅｎｇ  Ｋｕｎｇ大学実験動物センターから購入した。体重３００〜３５０ｇのラットは、塩酸ケタミン２５〜４０ｍｇ／ｋｇで麻酔した。各ラットの背中を電気クリッパで入念に毛刈りした。各ラットは、単独でケージに入れ、固形飼料及び水で飼育した。各ラットについて、４．０×４．０ｃｍ2の領域の全層皮膚を切除した。ここで、全層皮膚は表皮、真皮、及び皮筋層を含む。
【００７０】
投与及び頻度：
ラットの実験群は、実施例５の画分９を含む軟膏で治療された。スルファジアジン銀（ＳＷＩＳＳ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＣＯ．，ＬＴＤ．）で治療したラットの１つの比較群（Ｇ２）も、又、使用された。各群は、ラット５匹を含んでいた。軟膏は、０．７５ｇ／ｃｍ2及び高さ０．１〜０．２ｃｍの量で、創傷に局所塗布した。全ての創傷は、滅菌ガーゼ及び弾性包帯により手当てし、包帯を毎日交換した。
【００７１】
実施例３と類似の評価方法を用い、創傷の大きさを測定した。結果を表７に示す。
【００７２】
【表７】
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【００７３】
創傷治癒の進行において、本発明による軟膏で治療した創傷は、アレルギーなしに治癒した。しかしながら、スルファジアジン銀で治療した創傷には瘢痕が生じた。更に、スルファジアジン銀で治療した創傷には、重篤なアレルギーが見られた。本発明による医薬組成物で治療したラットの治癒率（約２５〜３１日）は、スルファジアジン銀で治療した（約３７日）よりも早かった。
【００７４】
皮膚の組織学的評価：
組織学的評価方法は、実施例５に記載された通りである。
【００７５】
第４５日目に行った組織学的試験の結果は、従来のスルファジアジン銀で治療した創傷は、深部真皮に線維層を有していることが観察されることを示した。いくつかの表皮細胞は死亡し、胼胝を形成していた。慢性炎症及び好酸球浸潤の両者が真皮に観察された。いくらかの線維も、又、創傷から０．５ｃｍ離れたところに形成していた。
【００７６】
本発明による軟膏で治療したラットの群では、新生した上皮は均一で、多数の毛嚢が生成した。ほんの少しの線維が形成したのみであった。
【００７７】
第９５日目に行った組織学的試験の結果は、従来のスルファジアジン銀で治療した創傷には、不均一な上皮層を有していることが観察される（図８に示すように）ことを示した。線維層が深部真皮に形成された。少量の毛嚢が生成した。
【００７８】
図９に示すように、本発明による軟膏で治療したラットの群では、新生した上皮は均一で、多数の毛嚢が生成した。
【００７９】
実施例７
局所電子照射皮膚傷害に対する効果
動物の処置：
雌性、成獣スプラーグ−ドーリーラットは、台湾国立Ｃｈｅｎｇ  Ｋｕｎｇ大学実験動物センターから購入した。体重２５０〜３００ｇのラットは、単独でケージに入れ、固形飼料及び水で飼育した。
【００８０】
ラットの照射は、Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｍｏｕｌｄｅｒ  ａｎｄ  Ｊａｍｅｓ  Ｊ．Ｆｉｓｈｅｒ［ラット皮膚の放射線に対する反応：各Ｎｏ．の画分の役割と総処置時間、Ｃａｎｃｅｒ、６月、１９７６年、３７（６）：２７６２−２７６７］によって記載されたのと類似の方法を用いて行われた。ラットは、照射前に、４０〜５０ｍｇ／ｋｇのペントバルビタールナトリウム塩（ＴＣＩ．東京）の腹腔内投与により麻酔した。臀筋領域にわたる皮膚は完全に体毛を剃り落とし、照射前に、右と左の臀筋上の所望の２×２ｃｍ2の照射領域に印をつけた。線形加速器（Ｖａｒｉａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）によって発生した６ＭｅＶの電子ビームを照射に用いた。
【００８１】
分割照射及び単回照射を試験した。分割照射では、ラット３匹に対し、右及び左の臀筋に照射した。照射は、毎週２回、５週間行い、総線量は各領域につき３７．５Ｇｙであった。
【００８２】
投与及び頻度：
分割照射における照射傷害は、照射の後に１日１回、投与量０．２５ｇ／ｃｍ2の実施例５で用いられた画分９を含む軟膏で治療し、単回照射における照射傷害は、一日二回治療した。治療なしのラットは、対照（Ｇ２）として使用した。照射しないラットの一つのブランク群（Ｇ３）は、ブランクとした。
【００８３】
臨床評価
皮膚反応スコア［Ｙｏｓｈｉｎａｏ  Ａｂｅ  ａｎｄ  Ｍｕｎｅｙａｓｕ  Ｕｒａｎｏ、多回、一日二回照射後のマウスの分割照射側に依存した急性皮膚反応、Ｊ．Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｂｉｏｌ．  Ｐｈｙｓ．１９９０年２月；１８（２）：３５９−３６４；Ｙｕ−Ｊｅｎ  Ｃｈｅｎら、ラットにおける急性放射線皮膚炎に対するテトランドリン及びツボクサ抽出物の効果、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９９９年７月；２２（７）：７０３−７０６］を評価し、照射後３０日間記録した。皮膚反応スコアは、以下のように定義された：「０」は正常皮膚を示し；「０．５」は照射した領域の５０％未満に軽い脱毛が起こる、又は体毛の脱色が起こることを示し；「１．０」は照射した領域の約５０％に脱毛が起こることを示し；「１．５」は照射した領域の５０％以上に脱毛が起こり、いくつかの脱毛は紅皮を伴うことを示し；「２．０」は完全な脱毛及び照射した領域の５０％未満に乾燥した落屑が起こることを示し；「２．５」は照射した領域の５０％以上に乾燥した落屑が起こることを示し；「３．０」は幾分湿潤した落屑が起こることを示し；「３．５」は領域の殆どに湿潤した落屑が起こることを示す。
【００８４】
皮膚反応スコアを評価した。結果を表８に示す。
【００８５】
【表８】
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【００８６】
Ｇ１では、裂傷初期と僅かの体毛損傷が創傷に見られ、皮膚はアレルギーを示さなかった。
結果は、分割照射試験の場合と同様であった。
【００８７】
皮膚の組織学的評価：
実施例５におけると同様の評価方法を使用した。
【００８８】
図１０に示すように、Ｇ１において、表皮細胞は、多層の上皮細胞を覆っていることが見出された。又、多数の毛嚢が再生された。
【００８９】
図１１に示すように、Ｇ２において、ほんの少量の毛嚢が観察された。
【００９０】
図１２に示すように、Ｇ３において、組織は対照として使用した。
【００９１】
治療した創傷の組織は密であったが、無治療のものは粗であった。
【００９２】
実施例８
ウサギ耳における皮膚炎に対する効果
ウサギ耳における皮膚炎は、図１３に示すように、発赤、腫れ、炎症、潰瘍及び出血を有することが見出された。
【００９３】
アルコール含量を０％とした以外は画分３に類似した画分１０を用いた以外は実施例２と同じようにして、本発明による軟膏を創傷に３日間塗布した。
【００９４】
第１日目は、潰瘍が消失し、発赤が軽減した。毛嚢が図１４に示すよう現れた。
【００９５】
第２日目は、皮膚組織が回復し、ほんの軽い発赤が観察された。毛嚢は図１５に示すよう明らかであった。
【００９６】
第３日目は、皮膚組織及び色彩は正常であった。体毛が、図１６に示すように毛嚢に生えてきた。
【００９７】
実施例９
糖尿病性創傷に対する効果
６８歳の男性が糖尿病に２０年間かかっていた。彼の左足の足指は切断された。創傷は、図１７に示すように重篤な壊疽変性を示した。彼の右足の足指は切断されたが、しかし創傷治癒は図１８に示すように良好でなかった。
【００９８】
画分９を含む軟膏が、創傷に１日２〜３回塗布された。
【００９９】
図１９に示すように、２ヶ月間左足の治療の後、いくつかの肉芽組織が認められ、そして創傷は、それ以上壊死の進行がなく治癒し始めた。
【０１００】
５ヶ月間左足の治療の後、図２０に示すように、創傷は瘢痕なしに完全に治癒した。図２１に示すように、右足も又、瘢痕なしに完全に治癒した。
【０１０１】
実施例１０
慢性うっ血性潰瘍に対する効果
８０歳の男性の両下腿は、図２２に示すように色素過剰症及びうっ血性潰瘍に２０年間かかっていた。
【０１０２】
画分９を含む軟膏を、創傷に１日２〜３回塗布した。
【０１０３】
図２３に示すように、２週間足を治療した後、創傷は治癒し始めた。
【０１０４】
図２４に示すように、４週間足を治療した後、創傷は瘢痕なしに完全に治癒した。
【０１０５】
実施例１１
斑状出血に対する効果
女性患者は、図２５に示すように、事故に起因する斑状出血を有していた。
【０１０６】
創傷は、３日の間、１日１回、冷湿布で予備治療され、その後画分９を含む軟膏を１日２〜３回塗布した。
【０１０７】
斑状出血は消失し、創傷は図２６に示すように、治療後３日目に治癒した。自動車事故の前から既に存在していた瘢痕の色も又、図２７に示すように、７日間の治療の後、平らになり薄くなった。
【０１０８】
実施例１２
擦過傷に対する効果
女性患者は、図２８に示すように事故に起因する擦過傷を有していた。
【０１０９】
画分９を含む軟膏を、創傷に１日２〜３回塗布した。
【０１１０】
創傷は、図２９に示すように、７日間の治療の後治癒した。
【０１１１】
実施例１３
縫合創傷に対する効果
男性患者は、３ｃｍの裂傷と２０針の縫合の人中の重篤な裂傷、０．８ｃｍの裂傷と４針の縫合の鼻梁、及び１ｃｍの裂傷と６針の縫合及び１．５ｃｍの裂傷と８針の縫合の上唇を有していた。
【０１１２】
画分９を含む軟膏を、創傷に１日２〜３回塗布した。
【０１１３】
創傷は、図３０に示すように、瘢痕なしに完全に治癒した。
【０１１４】
実施例１４
アトピー性皮膚炎に対する効果
４．５歳の女性は、慢性アトピー性皮膚炎を有していた。頚部及び上胸部の皮膚は、図３１に示すように、長期間の局所コルチコステロイド療法の後に、痒み、発赤、腫張、かさかさの状態、湿潤状態、痂皮状態及びかさぶた状態であった。
【０１１５】
画分１０を含む軟膏を、創傷に１日２〜３回塗布した。
【０１１６】
図３２に示すように、１週間の治療の後、痒み、発赤、腫張、かさかさの状態、湿潤状態、痂皮状態及びかさぶた状態は、軽減し減少した。
【０１１７】
図３３に示すように、４週間の治療の後、皮膚病変は殆ど沈静化した。
【０１１８】
図３４に示すように、６週間の治療の後、皮膚病変は、後のリバウンド効果もなく完全に治癒した。
【０１１９】
本発明の実施態様が例示され記載されているが、種々の変形及び改良は、当業者によって行うことができる。本発明の実施態様は、それ故に、例示的に記載されたものであり、限定的な意味で記載されたものではない。本発明は、例示したような特定の形態に限定されるものではなく、本発明の精神及び範囲から逸脱していない全ての変形は、付属する特許請求の範囲に定義された範囲内にある。
【図面の簡単な説明】
【０１２０】
【図１】図１は、本発明のプロセスによって得られた画分１のＨＰＬＣスペクトルを例示したものである；図１ａ：０から２０分；図１ｂ：２０から４０分；図１ｃ：４０から６０分。
【図２】図２は、本発明のプロセスによって得られた画分３のＨＰＬＣスペクトルを例示したものである；図２ａ：０から２０分；図２ｂ：２０から４０分；図２ｃ：４０から６０分。
【図３】図３は、実施例３における本発明による軟膏で治療した全層皮膚創傷の写真を例示したものである。
【図４】図４は、実施例３における本発明による軟膏で治療した、全層皮膚創傷での毛の増殖の状態を示す写真を例示したものである；図４ａ：画分１から３を含む軟膏；図４ｂ：画分４から６を含む軟膏。
【図５】図５は、実施例５における治療なしの深部中間層熱傷の組織学的検査の結果の顕微鏡写真を例示したものである。
【図６】図６は、実施例５におけるスルファジアジン銀で治療した、深部中間層熱傷の組織学的検査の結果の顕微鏡写真を例示したものである。
【図７】図７は、実施例５における本発明による軟膏で治療した、深部中間層熱傷の組織学的検査の結果の顕微鏡写真を例示したものである。
【図８】図８は、実施例６におけるスルファジアジン銀で治療した、大領域の全層皮膚創傷の組織学的検査の結果の顕微鏡写真を例示したものである。
【図９】図９は、実施例６における本発明による軟膏で治療した、大領域の全層皮膚創傷の組織学的検査の結果の顕微鏡写真を例示したものである。
【図１０】図１０は、実施例７における本発明による軟膏で治療した、照射皮膚傷害の組織学的検査の結果の顕微鏡写真を例示したものである。
【図１１】図１１は、実施例７における治療なしの照射皮膚傷害の組織学的検査の結果の顕微鏡写真を例示したものである。
【図１２】図１２は、実施例７における正常組織の結果の顕微鏡写真を例示したものである。
【図１３】図１３は、実施例８における治療前のウサギ耳の皮膚炎の写真を例示したものである。
【図１４】図１４は、実施例８における第１日目の本発明による軟膏で治療後のウサギ耳の皮膚炎の写真を例示したものである。
【図１５】図１５は、実施例８における第２日目の本発明による軟膏で治療後のウサギ耳の皮膚炎の写真を例示したものである。
【図１６】図１６は、実施例８における第３日目の本発明による軟膏で治療後のウサギ耳の皮膚炎の写真を例示したものである。
【図１７】図１７は、実施例９における糖尿病性創傷の写真を例示したものである。
【図１８】図１８は、実施例９における糖尿病性創傷の写真を例示したものである。
【図１９】図１９は、実施例９における２ヶ月間本発明による軟膏で治療した糖尿病性創傷の写真を例示したものである。
【図２０】図２０は、実施例９における５ヶ月間本発明による軟膏で治療した糖尿病性創傷の写真を例示したものである。
【図２１】図２１は、実施例９における５ヶ月間本発明による軟膏で治療した糖尿病性創傷の写真を例示したものである。
【図２２】図２２は、実施例１０における慢性うっ血性潰瘍の写真を例示したものである。
【図２３】図２３は、実施例１０における２週間本発明による軟膏で治療した慢性うっ血性潰瘍の写真を例示したものである。
【図２４】図２４は、実施例１０における４週間本発明による軟膏で治療した慢性うっ血性潰瘍の写真を例示したものである。
【図２５】図２５は、実施例１１における斑状出血の写真を例示したものである。
【図２６】図２６は、実施例１１における３日間本発明による軟膏で治療した斑状出血の写真を例示したものである。
【図２７】図２７は、実施例１１における７日間本発明による軟膏で治療した斑状出血の写真を例示したものである。
【図２８】図２８は、実施例１２における擦過傷の写真を例示したものである。
【図２９】図２９は、実施例１２における７日間本発明による軟膏で治療した擦過傷の写真を例示したものである。
【図３０】図３０は、実施例１３における本発明による軟膏で治療した縫合創傷の写真を例示したものである。
【図３１】図３１は、実施例１４におけるアトピー性皮膚炎の写真を例示したものである。
【図３２】図３２は、実施例１４における１週間本発明による軟膏で治療したアトピー性皮膚炎の写真を例示したものである。
【図３３】図３３は、実施例１４における４週間本発明による軟膏で治療したアトピー性皮膚炎の写真を例示したものである。
【図３４】図３４は、実施例１４における６週間本発明による軟膏で治療したアトピー性皮膚炎の写真を例示したものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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