(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラジカル消去活性を有する有効成分として、エリオシトリン及び／又は柑橘類の果皮若しくは果汁若しくは搾汁粕から抽出して得たエリオシトリン含有物にビタミンＣだけを混合すること、を特徴とするフリーラジカル消去剤のラジカル消去活性を相乗的に高める方法。
【請求項２】
エリオシトリン及び／又は柑橘類の果皮若しくは果汁若しくは搾汁粕から抽出して得たエリオシトリン含有物とビタミンＣを４：１〜１０：１の割合で混合すること、を特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ラジカル消去活性を有する有効成分として、エリオシトリン及び／又は柑橘類の果皮若しくは果汁若しくは搾汁粕から抽出して得たエリオシトリン含有物にビタミンＣだけを混合すること、を特徴とするラジカル消去活性を相乗的に高めたフリーラジカル消去剤の製造方法。
【請求項４】
エリオシトリン及び／又は柑橘類の果皮若しくは果汁若しくは搾汁粕から抽出して得たエリオシトリン含有物とビタミンＣを４：１〜１０：１の割合で混合すること、を特徴とする請求項３に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、フリーラジカル消去剤及びそれを含有する飲食料、化粧料、医薬品などの組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
生体内で発生するフリーラジカルである活性酸素ラジカルは、スーパーオキサイドアニオン（・Ｏ2-）、ハイドロキシラジカル（・ＯＨ）等、非常に反応性に富んだ物質であり、これらは、細胞やＤＮＡの損傷等の組織障害を引き起こし、ガン、動脈硬化、老化などの様々な疾病と大きく関与していると言われている。このフリーラジカルを消去する効果のあるものについては、これらの疾病予防につながるものと考えられている。
【０００３】
このような状況において、特開平６−１４５０６２号において緑茶葉抽出物とカロチノイド色素を含有することを特徴とする活性酸素フリーラジカル消去剤、特開平９−２０８４６１号において、リグナン化合物又はその類縁体を有効成分とする活性酸素ラジカル消去剤等が提案されている。たしかに、これらの提案は優れたものではあるが、完全に満足できるものとはいい難く、改良の余地が残されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、このような情況を踏まえてなされたものであり、更に有効な新しいタイプのラジカル消去剤を提供することを課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、ラジカルを消去する物質を求めて鋭意研究を重ねた結果、柑橘果実由来のフラボノイドであるエリオシトリン及びその含有物にフリーラジカル消去効果があることを見出し、更に研究の結果、エリオシトリン及び／又はその含有物にビタミンＣを組合わせることにより、相乗的にラジカル消去活性が高まることを新たに見出し発明を完成させるに至った。以下、本発明について更に詳細に説明する。
【０００６】
エリオシトリンとは、構造物名がエリオジクチオール ７−ルチノシド（Eriodictyol   7-rutinoside）であり、フラボノイド化合物のうちフラバノン類に属するエリオジクチオールにルチノース（二糖類：グルコースとラムノース）が結合したフラボノイド配糖体である。エリオシトリンは柑橘類に存在し、特にレモンやライムに多く含まれ、オレンジ類にも存在する。エリオシトリンが優れた抗酸化性を有することは従来全く知られておらず、特に本出願人が初めて発見した新規な知見であり、この新知見に基づき柑橘果実由来の抗酸化性物質に関する新規発明について、特開平９−４８９６９号としてすでに出願している。しかしながら、エリオシトリン、及び／又はエリオシトリン含有物とビタミンＣを組合わせることでラジカル消去効果が相乗的に強くなることは全く知られていない。
【０００７】
本発明においては、エリオシトリンとしては、精製したエリオシトリン自体が使用できることはもちろんのこと、エリオシトリン含有物も使用することができる。前者の例としては、本出願人の出願に係る特開平９−４８９６９号において提案した、柑橘類の果皮、果皮含有物、果汁、搾汁粕から、水及び／又は有機溶媒、例えば極性溶媒で抽出後、樹脂処理、分取クロマトグラフィー等の精製処理を行いエリオシトリンを得る方法や、後者の例としては、特願平１０−３５２１９７号において提案した、柑橘類の果皮、果汁、搾汁粕から極性溶媒で抽出後、合成吸着樹脂に供し、温水を流した後、３０％エタノールで溶出し、濃縮して得られるエリオシトリン含有物等を用いることができる。そして必要あれば、更にペースト化したり、あるいは乾燥物も使用することができる。このエリオシトリン含有物には、エリオシトリン以外にフラボノイド類等が含有されており、その具体例としては、6,8-di-C-glucosyldiosmin、hesperidin、naringin等が挙げられる。また、前者において、抽出後に精製処理を全く行なわない、あるいは一部しか行なわない場合も、エリオシトリン含有抽出物に包含される。
【０００８】
グルコシルジオスミンとしては、６，８−ジ−Ｃ−グルコシルジオスミン（ジオスミン−６，８−Ｃ−ジ−β−Ｄ−グルコピラノシド）、６−Ｃ−グルコシルジオスミン（ジオスミン−６−Ｃ−β−Ｄ−グルコピラノシド）等が例示される。グルコシルジオスミンがすぐれた抗酸化作用を有することは、本発明者らが先に発見したもので、従来知られていないものである。
【０００９】
グルコシルジオスミンとしては、純品が使用できるほか、上記した含有物が使用可能であるし、また、例えば本出願人に係る特開平１０−２４５５５２号において提案した、柑橘類の果汁、果皮、果皮含有物及び／又は搾り粕を、水、有機溶媒又はこれらの混合物で抽出し、得られた抽出物を逆相樹脂処理、液体クロマトグラフィー等の精製処理を組み合わせて行うこと、を特徴とする抗酸化性物質６，８−ジ−Ｃ−グルコシルジオスミン、又は、６−Ｃ−グルコシルジオスミンの製造方法によって製造したものを使用してもよい。
【００１０】
なお、エリオシトリン（グルコシルジオスミンその他フラボノイド類も同様である）としては、化学合成品、抽出品を更に精製して純品化したものが使用できることはもちろんのこと、エリオシトリン含有物としては、エリオシトリンを含有した物質すべてを指し、エリオシトリンを水その他の液体、固体担体等に含有せしめたものもすべて本発明に包含される。したがって、エリオシトリン含有物には、レモン果汁、オレンジ果汁、ライム果汁その他柑橘果汁又はその濃縮物といったエリオシトリン含有素材も包含される。
【００１１】
本発明を実施するに際して、例えばフラボノイド類含有物、含有素材、抽出物等の場合においては、経済性等からフラボノイド類を必らずしも各成分にまで純粋に単離、精製して使用する必要がない場合もあり、このような場合には、各種フラボノイド類が混合したままで使用することも可能である。
【００１２】
ビタミンＣとしては、柑橘類やアセロラ等各種原料から抽出して得たもの、発酵糖生合成によってえたもの、化学合成によって得たもののいずれも使用することができ、市販品も適宜使用可能である。ビタミンＣは、精製品はもちろんのこと、飲食品等用途によっては粗製品ないしビタミンＣ含有物も使用することができる。
【００１３】
本発明のフリーラジカル消去剤は、エリオシトリン、及び／又はエリオシトリン含有物、又はビタミンＣの含有量、その組み合わせについては、適宜自由にその量を使用することができる。その含有量を挙げるとすると０．００００１〜５０重量％が好ましく、更に好ましくは、０．０００１〜４０重量％、特に好ましくは０．００５〜３０重量％である。有効成分の含有量が上記範囲より低い場合は効果が充分に発揮されず、また上記範囲以上に配合してもよいが、その場合はコストが高くなり現実的でない。
【００１４】
エリオシトリン、及びエリオシトリン含有物とビタミンCとの組み合わせ割合については、１：２０００〜２０００：１が好ましく、更に好ましくは、１：１００〜１００：１の割合である。
【００１５】
本発明において、フリーラジカルとは、体内で発生する活性酸素フリーラジカルとしてのスーパーオキサイドアニオン（・Ｏ2-）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）、及び安定なフリーラジカルを有する１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）等を包含するものである。
【００１６】
飲食品タイプの組成物として使用する場合には、本有効成分であるビタミンＣ及びエリオシトリン（又は含有物）をそのまま使用したり、他の食品ないし食品成分と併用したりして適宜常法にしたがって使用できる。本有効成分を用いる本発明に係る組成物は、固体状（粉末、顆粒状その他）、ペースト状、液状ないし懸濁状のいずれでもよいが、甘味料、酸味料、ビタミン剤その他ドリンク剤製造に常用される各種成分を用いて、健康ドリンクに製剤化すると好適である。その際、有効成分は０．１〜０．０００１％配合すると特に好適である。
【００１７】
医薬品タイプの組成物として使用する場合、本有効成分は、種々の形態で投与される。その投与形態としては例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与をあげることができる。これらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦型剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。その使用量は症状、年令、体重、投与方法および剤型等によって異なるが、通常は、成人に対して１回約０．１ｍｇ乃至１，０００ｍｇを投与することができる。
【００１８】
化粧料タイプの組成物として使用する場合、本有効成分に加え、必要に応じて本発明の効果を損なわない範囲内で、化粧料、医薬部外品、医薬品に一般に用いられる各種成分、水性成分、保湿剤、増粘剤、防腐剤、酸化防止剤、香料、色剤、薬剤等を配合することができる。例えば、固体状或いは液状パラフィン、クリスタルオイル、セレシン等の炭化水素類、オリーブ油、カルナバロウ、ラノリンのような植物性もしくは動物性油脂やロウ、更にステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸のような脂肪酸又はそのエステル類、アルコール類、多価アルコール類又はそのエステル類、非イオン性界面活性剤アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤のような界面活性剤を挙げることができる。
【００１９】
本発明の有効な皮膚外用剤（化粧料）全量における有効成分の配合量は、乾燥物として０．００５〜３０重量％が好ましい。配合量が０．００５重量％未満であるとラジカル消去効果が十分に発揮されず、また３０重量％以上配合してもコストが高くなり現実的でない。
【００２０】
エリオシトリン、及びエリオシトリン含有物は、天然物由来の成分であり、既に食経験があるレモン、ライム等の柑橘果汁にエリオシトリンが１０ｍｇ／１００ｍｌと多量に含まれており、生体への安全性は問題ない。Ｒｅｃ−ａｓｓａｙ法やＡｍｅｓ法による変異原性試験でも陰性であり、安全性を確認した。
【００２１】
以下、本発明の実施例を記載する。
【００２２】
【実施例１】
レモン果皮３ｋｇを、ホモジナイザーで粉砕し、１２Ｌの水を加え２時間煮沸処理をし、その後抽出液をろ過し、ろ液を得た。これをエバポレーターで減圧濃縮して抽出物を得た。次に２００ｍｌの水に溶かし、逆相樹脂カラム（４ｃｍ×５０ｃｍ、ｃｏｓｍｏｓｉｌ  １７５Ｃ１８−ＯＰＮ；（株）ナカライテスク）に流した。１．５Ｌの水に溶かした後、４０％メタノール溶出画分を減圧濃縮し、濃縮物を５．１の水に溶かした。これを分取高速液体クロマトグラフィーにより、エリオシトリンを分取し、これを濃縮乾固し、粉末５．０ｇを得た（エリオシトリン；９０％以上含有）。これを用いて、試験に使用するサンプル水溶液を調製した。
【００２３】
ラジカル消去活性については、安定ラジカルであるＤＰＰＨ（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）を用いて、各サンプルのＤＰＰＨの減少率をＨＰＬＣを用いて定量し、ラジカル消去活性を求めた。測定方法については以下の通りとした。
【００２４】
１００ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ＝７．４）８００μｌに５００μＭのＤＰＰＨエタノール溶液１ｍｌ、サンプル溶液２００μｌを加え良く撹拌した後、室温、暗所にて２０分間静置した。この溶液中のＤＰＰＨ量をＨＰＬＣを用いて定量し、ブランクのＤＰＰＨ量を１００とした時のＤＰＰＨの消去率を求めラジカル消去活性を算出した。ＨＰＬＣの分析条件は、検出波長：５１７ｎｍ、移動相はメタノール７０％；水３０％、流速：１ｍｌ／ｍｉｎ、カラム：Ｏｃｔｙｌ−８０Ｔｓ（４．６φｍｍ×１５０ｍｍ）、カラム温度３０度の条件にて実施した。上記方法に基づいて、得られたエリオシトリンを用いてラジカル消去活性について確認を行った。得られた結果を下記表１及び図１に示した。
【００２５】
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【００２６】
このように、エリオシトリン単独のラジカル消去活性は３１．０％であり、ビタミンＣ単独では１０．４％であり、合計すると４１．４％となるが、エリオシトリンとビタミンＣを組み合わせることで、ラジカル消去活性は７１．０％となった。即ち、エリオシトリンとビタミンＣを組み合わせることで、非常に強い相乗効果が認められた。
【００２７】
【実施例２】
レモン果皮２ｋｇを粉砕し１０Ｌの水を加えて、常温にて３０分間浸漬し、その後、抽出液をろ過してろ液を得る。これを遠心分離（９０００ｒｐｍ、２０分間）を行い、上澄み液を合成吸着樹脂（２００ｍｌ；アンバーライトＸＡＤ−１６；ローム  アンド  ハース社製）に通した。その後、１Ｌの水を流した後、６０℃の温水２Ｌの樹脂に流した後、３０％エタノール１Ｌで溶出した。この溶出液を濃縮乾固し、レモンフラボノイド含有抽出物１０．５ｇを得た（エリオシトリン：３０％含有）。これを用いて、試験に使用するサンプル水溶液を調整した。得られたレモンフラボノイド含有抽出物を用いて実施例１と同様にラジカル消去活性について確認を行った。得られた結果を下記表２及び図２に示した。
【００２８】
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【００２９】
このように、レモンフラボノイド単独のラジカル消去活性は３５．３％であり、ビタミンＣ単独では１０．４％であり、合計すると４５．７％となるが、レモンフラボノイドとビタミンＣを組み合わせることで、ラジカル消去活性は６９．７％となった。即ち、レモンフラボノイドとビタミンＣを組み合わせることで、非常に強い相乗効果が認められた。
【００３０】
【実施例３】
実施例２で得られたレモンフラボノイド含有抽出物１ｇ、果糖７０ｇ、クエン酸２ｇ、ビタミンＣ０．５ｇ、レモン香料１ｇを水１Ｌに溶解し、飲料を製造した。
【００３１】
【実施例４】
次の配合によりフリーラジカル消去剤を製造した。（１）実施例１で得たエリオシトリン凍結乾燥物４ｇとビタミンＣ  １ｇの混合物、（２）ラクトース  ９０ｇ、（３）コーンスターチ２９ｇ、（４）ステアリン酸マグネシウム１ｇ。
先ず、（１）、（２）、（３）（但し１７ｇ）を混合し、（３）（但し７ｇ）から調製したペーストとともに顆粒化した。得られた顆粒に（３）（但し５ｇ）と（４）を加えてよく混合し、この混合物を圧縮錠剤機により圧縮して、１錠あたり有効成分を４０ｍｇ含有する錠剤１００個を製造した。
【００３２】
【実施例５】
以下の配合により、レモンフラボノイド（実施例１）及びビタミンＣを配合した皮膚外用剤（クリーム）を製造した。
【００３３】
（Ａ．油相）
ステアリン酸                                          １０．０％
ステアリルアルコール                                    ４．０
グリセリンモノステアリン酸エステル                      ８．０
ビタミンＥアセテート                                    ０．５
香料                                                    ０．４
エチルパラベン                                          ０．１
ブチルパラベン                                          ０．１
プロピルパラベン                                        ０．１
（ｂ．水相）
レモンフラボノイド                                      ０．０３
ビタミンＣ                                              ０．０１
１，３−ブチレングリコール                            １０．０
プロピレングリコール                                    ８．０
グリセリン                                              ２．０
水酸化カリウム                                          ０．４
精製水                                                  残  余
【００３４】
【発明の効果】
本発明は、エリオシトリン及び／又はエリオシトリン含有物（レモンフラボノイド）がすぐれたラジカル消去能を有することを見出し、そして更に研究を進めた結果、ビタミンＣ（アスコルビン酸）と併用することによって更に相乗的にラジカル消去能を高めることにはじめて成功したものであって、本発明によれば、エリオシトリン又はレモンフラボノイドにビタミンＣを組み合わせることで有効なラジカル消去剤を得ることができる。
【００３５】
生体内で発生するフリーラジカルについてはガン、動脈硬化、老化などの疾病と大きく関与していると言われており、本発明品については、これらの疾病の予防食、飲料、健康食品、医薬品として利用できるだけではなく、化粧料、トイレタリー製品、工業薬品など幅広く利用することが出来る。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１におけるラジカル消去活性を示す。
【図２】実施例２におけるラジカル消去活性を示す。
【図１】
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【図２】
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