(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
情緒障害の処置に使用される薬学的組成物であり、２４００（±２００）Ｄの平均分子量を有するグリコサミノグリカン画分を含んでなり、前記グリコサミノグリカン画分は、ヘパリン又はヘパラン硫酸の脱重合により得られるものであり、前記情緒障害は、抑うつ障害、不安病、不安神経症、動揺又は錯乱であることを特徴とする薬学的組成物。
【請求項２】
前記グリコサミノグリカン画分は、ヘパリンの脱重合により得られるものであることを特徴とする請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
２４００（±２００）Ｄの平均分子量を有する前記グリコサミノグリカン画分を１０ｍｇ以上１００ｍｇ以下有することを特徴とする請求項１又は２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
皮下、筋肉内、静脈内又は経口用組成物の形をした請求項１〜３のいずれかに記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グリコサミノグリカンの新規の薬学的適用に係り、特に、２４００（±２００）Ｄの平均分子量を有するグリコサミノグリカンの適用に関する。
【背景技術】
【０００２】
情緒障害は、抑うつ障害、不安症、精神病、躁病を含む精神領域における疾病に属し、周囲への異常な反応の態様で主に発現され、攻撃的な面から、錯乱及び無感動にまで及ぶ。
【０００３】
情緒障害は、原因に依存した種々の方法で、薬理学的に処置される。単極性情動障害は、イミプラミンなどの三環系抗うつ薬や、フルオキセチンなどのセロトニン取込の選択的阻害剤などのヘテロ環系抗うつ薬や、フェネルジンなどのモノアミンンオキシダーゼ阻害剤などで処置される（この種の薬物は、非特許文献１のチャプター１９に好ましく収載されているものである）。
【０００４】
一方、双極性情動障害は、リチウム塩、バルプロ酸又は抗けいれん作用を有するその他の薬物で処置される（この種の薬物は、非特許文献１のチャプター２０に好ましく収載されているものである）。
【０００５】
全般性不安障害や強迫症状群などの初期の不安症は、上述の薬物や、ベンゾジアゼピン及び／又はブスピロンで処置される。
【０００６】
しかしながら、上述の全ての症状は、種々の症候群を暗示しており、非特許文献２に定義されている。
【０００７】
これら全ての症状を処置することが強く推奨され、患者の７５％は、医療的に有意な有益性を得る。
【０００８】
情緒障害の薬理学的処置は、しかしながら、正常な意識状態を変更するなど、種々の副作用を伴う。
【０００９】
攻撃性、錯乱状態、新しい環境への適用不全などの特定の情緒障害は、脳シナプスや脳内伝達のレベルに対する結果的な効果により、流動性や容量の点（及び伝達容量の点）で脳内における細胞外マトリクス（ＥＣＭ）の変化に起因すると考えられている。
【００１０】
従って、ＥＣＭの流動性及び容量を改変させ得る製品は、脳内伝達を向上させるのに有用であり得る。
【００１１】
さらに、グリコサミノグリカンは、脳内注入により、過剰不安効果（ｈｙｐｅｒａｎｘｉｏｇｅｎｉｃ  ｅｆｆｅｃｔ）を有することが知られている。
【特許文献１】欧州特許第１１８１０２４号明細書
【非特許文献１】Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｘ編、２００１年
【非特許文献２】Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  （Ｍａｎｕａｌｅ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｏ  ｅ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃｏ  ｄｅｉ  ｄｉｓｔｕｒｂｉ  ｍｅｎｔａｌｉ、ＤＭＳ−ＩＶ−Ｒ）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従って、本発明は、脳内の細胞外マトリクスの病態的変化を阻止又は減弱させ得る薬学的組成物の調製への、２４００（±２００）Ｄの平均分子量を有するグリコサミノグリカン画分の使用に関する。この組成物は、従って、情緒障害の処置に使用され得る。また、特に、抑うつ障害、不安症、不安神経症、動揺、錯乱などの処置にも使用され得る。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
ここで、驚くべきことに、２４００（±２００）Ｄの平均分子量を有するグリコサミノグリカンは、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、脳内の細胞外マトリクス（ＥＣＭ）の変化を抑制又は減弱させる能力に起因して、通常の意識状態を変化させることなく情緒障害を修正し得ることを見出した。
【００１４】
従って、２４００（±２００）Ｄの平均分子量を有するグリコサミノグリカン画分は、情緒障害の処置に適した薬学的組成物の調製に使用され得る。
【００１５】
よく知られているように、グリコサミノグリカンは、人体において最も豊富なヘテロ多糖体であり、改変された糖であるＮ−アセチルガラクトサミン又はＮ−アセチルグルコサミンの１つか２つと、グルクロン酸又はイズロン酸などのウロン酸とから形成される二糖類の繰り返し単位で形成される。
【００１６】
本発明は、特に、２４００（±２００）Ｄの平均分子量を有するグリコサミノグリカン画分に関する。
【００１７】
好ましくは、本発明のグリコサミノグリカンは、ヒアルロン酸、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸又はケラタン硫酸から得られる。
【００１８】
上述の画分は、以下の種々のステップで、対応するグリコサミノグリカンの脱重合により製造されてもよい：つまり、グリコサミノグリカンをガンマ線で照射するステップと、その後ゲル濾過を行い、且つ限外濾過を行うことにより製造されてもよい。本発明によるグリコサミノグリカンを得る方法は、当業者に知られている。
【００１９】
本発明の特定の好適実施例によると、本発明のグリコサミノグリカン画分は、例えば特許文献１に開示の方法により、ヘパリンから得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明によるグリコサミノグリカン画分の薬理学的な検討に関して、以下の評価により、ラットに実験系を適用した。つまり：
１）オープンフィールド試験又はＯＦ試験を用いた、環境に対する反応性；
２）モリス水迷路（ＭＷＭ）試験を用いた、水迷路中での学習性；及び
３）コンテキスト依存恐怖条件付け試験（ｃｏｎｔｅｘｔ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｆｅａｒ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ；ＣＤＦＣ）試験を用いた、敵対的環境に対する条件付け；
の実験系を適用した。
【００２１】
（試験に用いた材料）
Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ  Ｉｎｃ．（インディアナポリス  Ｉｎ．）製で、３００〜３５０ｇの体重の１１月齢のブラウンノルウェー（ＢＮ）ラットを用いた。
【００２２】
種々の処置又は生物学的試験を行う前に、２週間、新しい環境にラットを適合させた。薬物を処置する動物（７匹）及びビヒクル単独で処置する動物（７匹）をランダムに指定した。これらの動物を、個々のケージ内に保持し、温度を調節し（２２〜２６℃）１２時間のサーカディアンリズム（照射は７：００から開始）で、実験動物管理認定協会の指針に従って評価した。動物には、食事と水とを自由に与えた。挙動に関する全ての評価は、居住場所に近接した防音環境において９：００〜１３：００の間に行った。実験の終期である、検討中の製品又はビヒクルによる処理後４２〜４４日において、ペントバルビタールナトリウムを高い用量（１００ｍｇ／ｋｇ静注）で屠殺した。これら全ての手法は、ロヤラ大学医療センター（Ｌｏｙａｌａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ；ＩＡＣＵＣ）のＩＡＵＣ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）により承認されている。
【００２３】
２４００（±２００）Ｄの平均分子量を有するグリコサミノグリカン画分（以下、Ｃ３と称する。）は、特許文献１に述べるように、γ線照射によるヘパリンの脱重合の後所望の分子量を有する連続する画分を得るように、得られ、水溶性の白色粉末からなる。これを、４２〜４４日の間、動物が２５ｍｇ／ｋｇの日投与量で投与されるように、飲料水で希釈した。個々の動物の水消費量は、適合期間の最初の２週間の間に測定した。実験の間、Ｃ３を有する飲料水を、３〜４日おきに交換した。
【００２４】
週毎に分割した以下のスキームに、挙動分析に関する実験手法を示す。
【００２５】
【表１】
0004757197.tif 000002
【００２６】
２週間後（１週間は、適合を行い、もう一週間は、水の消費量の評価を行う）、動物に３つの試験、つまり、ＯＦ、ＭＷＭ及びＣＤＦＣを行った。
【００２７】
（ＯＦ（オープンフィールド））
新たな環境への曝露（１２分間）で得られる挙動により、新規環境への嫌悪反応（新規環境の恐怖）及び探索反応の測定が可能となる。
【００２８】
ＯＦ試験は、１００ｃｍ×１００ｃｍ×４０ｃｍの寸法のプラットフォーム上で行った。ニス塗りしたベニア板で壁を構築した。床には、白色を塗布し、床を、薄い黒線でマークした２５区画（２５ｃｍ×２５ｃｍ）で分割した。上述のプラットフォームの中央の９つの区画で形成された端部に配置された角には、３．５ｃｍ径の４つの穴を設けた。
【００２９】
間接的に照明を行った防音室にプラットフォームを載置した。
【００３０】
動物をプラットフォームの中央に載置し、１２分間観察した。
【００３１】
動物の挙動をビデオカセットに記録した。以下の挙動要素を検討した：つまり、１）プラットフォームの中心の区画を去るのに要した時間（秒）及び壁に沿った区画の一つに入るのに要する時間（走触性）；２）歩いた区画の数（水平探索）；３）レアリングの数、つまり、ラットが後脚で立った回数（垂直探索）；並びに４）床の穴の一つに鼻を突き入れた数；を検討した。
【００３２】
各セッションの後、ＯＦを７０％エタノール溶液で洗浄し、個々の動物に関連した種々の臭覚刺激物を除去した。
【００３３】
（ＭＷＭ（モリス水迷路））
水迷路を用いて、学習及び空間記憶を評価し得る。これは、水から脱出可能なプラットフォームの位置を学習し記憶する動物の能力を測定するものである。加えて、この試験で評価され得るのは、動物の興奮状態又は鎮静状態である。
【００３４】
この迷路は、プラスティック製シリンダー（１５２ｃｍ径、７４ｃｍ高）で構築され、白色を塗布し、５６ｃｍまで水を充填し、４分円とした。中央と端部との間の中間で水表面の下１．５ｃｍの位置に、９ｃｍ２のプラットフォームを設けた。水には、粉ミルクを添加して不透明とし、水温は、２２〜２６℃に保った。水迷路の外部の参照地点は、一定に保持した。各動物の挙動を、ビデオ（ＳＭＡＲＴ  Ｖｉｄｅｏ  Ｔｒａｃｋｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、サンディエゴ、ＣＡ）で記録した。ビデオカメラをコンピューターに接続し、水迷路の中央の上部に載置した。コンピューターを用いて：１）上述の隠されたプラットフォームに動物が到達するのに要する軌道の長さ（ｃｍ）；２）各４分円で停止した時間（秒）及び移動した距離（ｃｍ）；並びに３）プラットフォームを発見し、登るのに要した時間（秒）；を測定した。
【００３５】
一日当たりこの試験を４回行った。各試験において、動物を、水迷路の端部に置いた。プラットフォームは、最初の６日間は常に同じ位置（４分円１）に起き、次の７〜９日目の３日間は、「回復（ｒｅｖｅｒｓａｌ）試験」用に、異なる位置（４分円３）に置いた。
【００３６】
第１試験において、プラットフォームを有する１区画の隣、つまり４分円１の隣にある４分円２に動物を置いた。次の３つの試験の間、時計回りの方向の４分円の一つに動物を置いた。動物がプラットフォームに到達するか、最大６０秒が経過するまで、試験を行った。動物が６０秒以内にプラットフォームに到達しなかった場合は、プラットフォーム上に動物を静かに載置し、６０秒間、そのままにしておいた。各動物をプラットフォーム上に６０秒間置き、その後即座に試験を繰り返した。４つの試験の後、タオルで静かに動物を乾燥させ、ケージに戻した。
【００３７】
（ＣＤＦＣ（ｃｏｎｔｅｘｔ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｆｅａｒ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ））
この試験は、逆行的に条件付けされていない刺激（ＵＣＳ）を対とした条件付け刺激（ＣＳ）を学習し記憶する動物の能力を測定するものである。
【００３８】
５日間の連続して行われるこの試験は、条件付けされた（ＣＳ又は光）出来事（ｅｖｅｎｔ）（前景（ｆｏｒｅｇｒｏｕｎｄ））と、条件付けされておらず（ＵＣＳ、弱い電気ショック）、且つ環境（背景）の出来事との関係を学習し記憶する動物の能力を分析することを可能とする。
【００３９】
動物を２日の連続する間、第１環境状況（状況Ａ）に適合させた。
【００４０】
光の後にショック（通常の強度で若干の電流が脚を通過するが、疼痛を与えるには十分な強度である）を与えることからなる３つの連続した刺激の間、３日目において、動物の挙動を分析した。なお、これが、それぞれＣＳ及びＵＳＣである；これらの刺激により、「フリーズ（ｆｒｅｅｚｉｎｇ）」（動物が特徴的な姿勢ですくむ）という現象を発現させる恐怖の状態を発生させ、これが、恐怖の度合いを正確に測定させることとなる。事実、刺激の連続により、状況Ａにおいて実行される「前景」という出来事を示す。
【００４１】
４日目において、種々のＣＳ又はＵＣＳ刺激を発生させることなく、動物を状況Ａに戻した。これにより、「背景」の状態（つまり、ＣＳ−ＵＣＳという出来事を前に経験した状況）にある動物の挙動を分析することが可能となる。以前の実験において、海馬の損傷は、この「背景」が条件付け、つまり「前景」に関連付けられたことを思い出すことが全体的に不能となる事象を包含することを示す。４日目におけるフリーズする現象が完全に欠如するということは、記憶障害が起こっていることを示すものであって、つまり、動物は、上述の出来事が起こっている状況を思い出さないということである。
【００４２】
５日目において、動物を、異なる環境（状況Ｂ）に載置し、光刺激（ＣＳ）のみを適用し、環境とは独立して（このセッションでは、ＵＣＳ型の刺激を適用しない）、この刺激が逆行する性質の出来事を示すことを思い出せるかどうかを同定した。この異なる状況に対してフリーズして反応する動物の能力は、光刺激に係る負の認識、つまり、この後に疼痛を伴う刺激があることを理解したことを示すものである。
【００４３】
状況Ａ及びＢは、小型チャンバー（４８ｃｍ長×２５ｃｍ深×２８ｃｍ高）で発生させた。実験は、８分間続けた。
【００４４】
状況Ａにおいて、床は、２．５ｍｍの径で中心から中心まで１０ｍｍ離れた金属チューブで形成された格子からなる。上述のチャンバーの壁は、すべて、プレキシグラス（登録商標）製であり、前壁は、透明であり、後部は黒であり、その他は、白色である。光刺激用の７．５Ｗのランプは、チャンバーの後部から１４ｃｍの位置で、チャンバーの側壁の一つの中心に置いた。
【００４５】
３日目の「前景」なる条件付けは、以下の通り行った。２分間の間隔の後、光を点灯させ（ＣＳ）、２０秒後、動物の脚に電気ショックを与えた（脚ショック）。なお、この電気ショックは、上述の金属製の格子を介して、交流０．８ｍＡの強度で２秒間行い、交流は、Ｇｒａｓｏｎ−Ｓｔａｄｌｅｒ社製発電器（モデルＥ１０６４ＧＳ）から発生させた。２分の間隔でＣＳ及びＵＣＳを行う他の２つのセッションに動物をさらし、全体で、３回のＣＳ−ＵＣＳを行った。全てのセッションをビデオに記録し、その後評価した。
【００４６】
ストップウォッチを用いて、ビデオ記録に基づいて、４つのセッション（２×４分＝８分／日）における「フリーズ」の程度を秒単位で測定した。
【００４７】
４日目において、状況Ａを再び用いたが、動物には、種々の刺激を与えず、従って、試験は、背景単独に対する反応、つまり、敵対的環境の記憶を評価したものである。フリーズは、３日目のフリーズとして測定した。
【００４８】
４日目において、状況Ｂを使用した。チャンバーの寸法は、状況Ａのものと同一であるが、格子と後部壁は、ベニア板に置き換えた。各セッションの後、すぐにペットザイム（ＰｅｔＺｙｍｅ（登録商標））（色及び臭いを除去するもの）を用いて、チャンバーを洗浄した。ペットザイムは、１〜５日目における状況Ａに使用した７０％エタノール溶液とは異なる臭覚刺激を発生する。２分の間隔の後、２分の間隔で、ＣＳ刺激（２０秒間の光照射）を３回適用した。ＵＣＳは、適用しなかった。従って、５日目は、前景の条件付け、つまり、環境と敵対との関連を測定する機能を有する。フリーズは、３日目のフリーズとして測定した。
【００４９】
データの統計分析は、平均値及び標準誤差の算出に基づいたが、２つの群の比較は、非パラメータ統計（Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙのＵ試験）を用いて行った。
【００５０】
（結果）
動物が日毎に消費する水分量は、３５．７±１．１ｍＬであり、Ｃ３は、消費に影響を及ぼさなかった。
【００５１】
（オープンフィールド）
１）中央を去るのに要する時間（秒）：平均±標準誤差
（垂直探査）
コントロール：        ２５±８．０
Ｃ３：            １２．６±２．５
Ｕ試験：          ｐ＜０．０５
【００５２】
２）歩いた区画の数：平均±標準誤差
コントロール：    ５６．５±３．４
Ｃ３：                ７６±８．４
Ｕ試験：          ｐ＜０．０５
【００５３】
これらの結果により、Ｃ３による処理は、環境に対する恐怖を減少させ、且つ結果として、動物の探索行動を増加させることが示された。
【００５４】
（ＭＷＭ（モリス水迷路））
この試験については、処置動物とコントロール動物との間に有意な変化は観察されなかった。習得特性と「回復」特性とは、ほぼ同一であった（データ示さず）。この試験の評価は軌道の長さとプラットフォームに到達するのに要する時間とに基づいているので、Ｃ３は、学習又は運動を変化させないことが示されたといえ、したがって、種々の刺激作用を惹起しない。言い換えれば、Ｃ３で処理した動物は、鎮静も刺激も示さないといえる。
【００５５】
（ＣＤＦＣ（Ｃｏｎｔｅｘｔ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｆｅａｒ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ））
１）フリーズ時間（秒：３日目における４セッションでの平均±標準誤差）
【表２】
0004757197.tif 000003
＊Ｕ試験：ｐ＜０．０５
【００５６】
これらの結果、Ｃ３は、ＣＳ及びＵＣＳ刺激を適用する全てのセッションにおいて、フリーズを有意に減少させることが示された。これは、前景での作用を示しており、敵対的な環境に直面した際、パニックを減少させることを示すものである。
【００５７】
２）上述の方法に示したように、ＣＤＦＣの４日目において、８分間のうち、各２分で種々の刺激を適用せずに試験チャンバーに動物を載置した。
【００５８】
これらの環境において、しかしながら、動物は、この環境（背景）を敵対的な出来事（前景）に関連付ける傾向にあり、従って、恐怖の条件付けを構築する。
【００５９】
これらの結果を以下の表に示す。
【００６０】
フリーズ時間（秒）：４日目における４セッションでの平均±標準誤差
【表３】
0004757197.tif 000004
＊Ｕ試験：ｐ＜０．０５
【００６１】
第一セッションにおいてＣ３で処理した動物に係る平均値は、コントロールに比較して、より有意に減少した。これは、敵対的な環境に直面した際、より制御された恐怖を一般的に示すものである。最後のセッションにおいて、処置群とコントロール群との間の差は、もはやなく、フリーズ時間の増加は、２つの群の間で有意な差ではない値で安定した。このことは、両群において、敵対的であった環境に係る記憶が残存することを示すものである。
【００６２】
３）５日目における結果、つまり、環境的な状況が変化せず、光刺激のみを適用して、疼痛刺激（つまり、格子がない状態）を適用しなかった場合、以下の結果となった。
【００６３】
フリーズ時間（秒）：５日目のセッションにおける平均±標準誤差
【表４】
0004757197.tif 000005
＊Ｕ試験：ｐ＜０．０５
【００６４】
これらの結果は、フリーズ挙動が、２つの群と同様であることを示し、つまり、両群において一様に増加することを示す。Ｃ３で処置した群では、フリーズが減少しており、これは、６分目においてゼロと有意に異なるとともに、全体のセッションにおいて基本的に、より減少したものである。
【００６５】
（結論）
４２〜４４日の間、２５ｍｇ／ｋｇ／日の用量でＣ３により処置すると、以下の効果を示す。
【００６６】
１）ＯＦ情動反応は減少し、探索行動は増加する。
【００６７】
２）習得期間（３日目）におけるＣＤＦＣによりフリーズが減少し、敵意を発生することなく敵対的環境にのみ曝露することによりフリーズが減衰し（４日目）、最終的に、同様の新規の状況及び部分的刺激に対してフリーズが減衰した（５日目）。これらの３つの要素の全て、特に習得期間に関連するものは、環境及びその可能性のある敵対性に対して良好な適合性に係る一義的な指標である。
【００６８】
３）水迷路により検討され得る状況及び位相（学習及び回復）における学習及び部分的な記憶の補完はなかった。
【００６９】
４）運動活性の変化で明らかにされ得るＣＮＳ刺激又は抑圧効果はなかった。
【００７０】
したがって、得られた結果が示すのは、Ｃ３は、ＣＮＳ抑制剤又は刺激剤として作用することなく、環境に対する情動反応を向上させることである。
【００７１】
従って、２４００（±２００）Ｄの平均分子量を有するグリコサミノグリカンは、情緒障害の処置に適した薬学的組成物の調製に使用され得る。
【００７２】
この組成物は、薬剤学的に許容可能な希釈剤又は賦形剤とともに薬理学的に有効な量の上述の活性本体を有し、皮下、筋肉内、静脈内及び経口投与に適した形態であってもよい。
【００７３】
上述の薬剤学的に許容可能な希釈剤又は賦形剤の例としては、生理食塩水、コロイダルシリカなどが挙げられる。
【００７４】
本発明による組成物は、１０ｍｇ以上１００ｍｇ以下の範囲の量のグリコサミノグリカンを通常有する。
【００７５】
情緒障害の処置は、患者に約１０ｍｇ／日以上４００ｍｇ／日以下の活性本体を投与することを有する。
【００７６】
特に、皮下、筋肉内又は静脈投与では、１０ｍｇ／日以上５０ｍｇ／日以下で投与することが好ましく、経口投与では、５０ｍｇ／日以上１００ｍｇ／日以下で投与することが好ましい。