(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト成長ホルモンを含む、インビボにおいて造血を再生できるＣＤ３４+循環細胞の数を患者において増加させるための医薬であって、前記細胞は再注入、移植（transplantation）又は移植（engraftment）によって、骨髄破壊的治療または抗細菌発育性薬剤治療の後の造血系および免疫系の回復のために同じ患者を治療するために用いられる、前記医薬。
【請求項２】
G-CSFと別々にまたは同時に投与される、請求項１記載の医薬。
【請求項３】
患者にインビボにおいて造血を再生できるＣＤ３４+循環細胞の数を２０日までの期間にわたって増加するための、請求項１記載の医薬。
【請求項４】
医薬が、以下のグループ：造血性成長因子、サイトカイン、ケモカイン、モノクローナル抗体の間から選択される一つまたはいくつかのさらなる化合物を含む、請求項１ないし３のいずれか１項記載の医薬。
【請求項５】
以下のグループ：造血性成長因子、サイトカイン、ケモカイン、モノクローナル抗体の間から選択される一つまたはいくつかの化合物を含む、一つまたはいくつかのさらなる医薬と別々にまたは同時に投与される請求項１ないし３のいずれか１項記載の医薬。
【請求項６】
サイトカイングループがＩＬ−１，ＩＬ−３，ＩＬ−６，ＩＬ−１１，インスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）、Ｇ−ＣＳＦ，ＧＭ−ＣＳＦまたはＳＣＦを含み；ケモカイングループがＭＩＰ−１αまたはトロンボポイエチン（ＴＰＯ）を含み；モノクローナル抗体グループが抗−ＶＬＡ−４抗体を含む、請求項４または５記載の医薬。
【請求項７】
さらなる化合物または医薬がＧ−ＣＳＦを含む請求項４または５記載の医薬。
【請求項８】
投与を毎日または１日あたり３回行う、請求項１ないし３のいずれか１項記載の医薬。
【請求項９】
成長ホルモンの投与を１日あたり３回行い、そしてＧ−ＣＳＦの投与を毎日行う、請求項２記載の医薬。
【請求項１０】
医薬の投与を３日の期間にわたり行う、および／または白血球除去輸血まで行う、請求項１ないし３のいずれか１項記載の医薬。
【請求項１１】
医薬の投与を、抗細菌発育性薬剤治療開始約７日後または抗細菌発育性薬剤治療終了約２日後に開始する、請求項１ないし３のいずれか１項記載の医薬。
【請求項１２】
成長ホルモンが組換え成長ホルモンである、請求項１ないし３のいずれか１項記載の医薬。
【請求項１３】
成長ホルモンがヒト成長ホルモンである、請求項１２記載の医薬。
【請求項１４】
インビボにおいて造血を再生することができる循環細胞が、ＣＤ３４+／ＣＤ３３+細胞および／またはＣＤ３４+／ＣＤ３８-細胞および／またはＣＤ３４+／Ｔｈｙ−Ｉ細胞および／またはＣＤ３４+／Ｔｈｙ−Ｉ／ＣＤ３８-細胞である、請求項３記載の医薬。
【請求項１５】
Ｇ−ＣＳＦが体重ｋｇあたり３から１５μｇの間の量にて投与されるか、体重ｋｇあたり４から１２μｇの間の量にて投与されるかまたは体重ｋｇあたり約５または１０μｇの量にて投与される、請求項７記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
骨髄移植（ＢＭＴ）は、骨髄から得た多能性造血幹細胞を患者に移植する臨床上の手法である。ＢＭＴは、悪性腫瘍、重度の複合性免疫不全（ＳＣＩＤｓ）、先天的または遺伝的に決定された造血異常、貧血、再生不能性貧血、白血病および骨粗鬆症を含むいくつかの血液学上の障害において選択される治療である（Fischer et al.，1998）。ここ１０年、ＢＭＴの使用は年間５’０００未満から４０’０００以上に増えた（Waters et al.，1998）。
【０００２】
安定した症状においては、造血幹細胞および始原細胞の大部分は骨髄中に存在しており、そしてほんのわずかな数のこれら細胞が末梢血中に検出できる。しかしながら、骨髄抑圧剤および／または特定の造血性成長因子を用いて治療することにより追加の幹細胞を末梢血に動員させることができる（Van Hoef，1998）。研究が示してきたことは、宿主内で融合された末梢血幹細胞（ＰＢＳＣ）が、骨髄由来の幹細胞および始原細胞に比して移植に関して増強された能力を示すことである（Gianni et al.，1989；Larsson et al.，1998）。即ち、化学治療により動員させられたＰＢＳＣ、造血性成長因子またはこれらのモダリティーの組み合わせが、現在、自己および非自己移植のセッティングの両方において使用される（Van Hoef，1998；Anderlini and Korbling，1997）。非自己の移植の場合、幹細胞のドナーは正常な個体であり、そして幹細胞の血流への動員の手法は最小の不快にて達成されなければならない。この場合、造血性成長因子を用いた幹細胞の動員は抗細菌発育性薬剤（即ち、シクロホスファミド）を用いた治療に好ましい。
【０００３】
いくつかの造血成長因子、例えばＧ−ＣＳＦ，ＥＰＯおよびＣＳＦは動員剤（mobilizing agents）として研究されており、白血球除去血輸血前にＰＢＳＣの数を増加させるために現在使用されている（Henry，1997；Weaver and Testa，1998）。総合的な造血を刺激することを目的とした治療は、大きなセットの始原細胞および幹細胞を動員させることに多大な重要性があるのかもしれない。幹細胞の増大された動員は、移植される十分な量の造血幹細胞を回収するのに必要な白血球除去血輸血の数を減じることにより造血幹細胞移植のコンテクストにおいて極めて価値がある。
【０００４】
本発明の第一の部分は、個体においてインビボにおいて造血を再生することができる循環細胞の数を増加させるために使用される新規な動員剤を提供することである。
【０００５】
本発明の上記の新規な動員剤は、成長ホルモンおよび特にヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子である。
【０００６】
他に特定しない限り、用語「ＧＨ」は、成長ホルモン、その誘導体の一つまたは本発明のコンテクストにおいて成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を意味する。
【０００７】
成長ホルモンおよび特にヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）またはその誘導体または成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を投与することにより、インビボにおいて造血を再生することが可能な細胞の動員が末梢血において得られることを、今発見した。よって、単独でまたは他の因子と共に投与された成長ホルモンおよび特にヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）またはその誘導体または成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は、造血を再生することができる細胞をインビボにおいて末梢血に動員するための新規な方法または用途を表す。
【０００８】
成長ホルモンとしても知られるヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）は下垂体前葉の成長ホルモン産生細胞により生産および分泌される蛋白質ホルモンである。ｈＧＨは、蛋白質、糖質および脂質の代謝に対するその効果を通して体細胞成長において鍵となる役割を担う。体細胞成長に対するその効果に加えて、ｈＧＨはインビトロにおいて血液細胞を刺激すること（Derfalvi et al.，1998；Merchav et al.，1988）、赤血球およびヘモグロビンのカウントを増加させること（Valerio et al.，1997；Vihervuori et al.，1996）、血漿細胞系において増殖およびＩｇ生産の両方を増強すること（Kimata and Yoshida，1994）、そしてＣＤ８+細胞カウントを刺激し、そして低い範囲のＣＤ４+細胞カウントにすること（Geffner，1997）が示された。
【０００９】
本発明の動員剤を使用する本発明の方法および使用はいくつかの利点を有する：
−少数の造血を再生することができる循環細胞が存在する。この数は、無理のない期間において単一のまたは複数の除去血輸血（apheresis）により細胞の移植用量を提供するのに不十分であると考えられる。本発明の方法および使用は、上記細胞およびサブセットの、インビボにおいて造血を再生することができる循環細胞の収量を血液中において増加させるのに広く使用される循環血液への一時的な末梢化により、即ち移植用量を達成するのに必要な除去血輸血の数を最小にすることにより、この問題を解決する。
−本発明の方法および使用の他の利点は：
ａ）全身麻酔の要求を回避する可能性、
ｂ）たとえ腸骨が以前の放射線治療により損傷を受けるかまたは悪性腫瘍により潜入されても、収穫する（harvesting）可能性、
ｃ）ＢＭ由来の始原細胞よりも迅速に、保持された造血機能の回復を達成する可能性、
ｄ）本発明の方法または使用を含む前処理を用いない場合よりも迅速且つ効果的に、保持された造血機能の回復を達成する可能性
を含む。
−一般的に、本発明の方法および使用はインビボにおいて造血を再生できる末梢血細胞を動員するのに効果的且つ安全である。
−本発明の方法および使用は、例えば腫瘍の成長、臨床上および機器性症状（instrumental symptoms）である毒性の主要なパラメーター、または心臓、肝臓または腎臓機能の実験室の試験の観点からは、無毒性である。
−本発明の方法および使用により得られるインビボにおいて造血を再生することができる循環細胞の動員の増加は、移植される十分な量の造血細胞を回収するのに必要な白血球除去血輸血の数を減じることにより造血幹細胞の移植のコンテクストにおいて極めて価値がある。
【００１０】
−指定された目標数の細胞を得るためには、本発明の方法および使用は除去血輸血または白血球除去血輸血手法の間に加工されるのに必要な血液の体積の低下を導く。低下した体積の血液を加工する利点は、患者が細胞分離器上ですごす時間が少ないこと、上記手法の障害性を減じ、特に上記手法の間に患者が暴露されるはずの抗凝血剤の体積に関して減じること、機械および操作者の時間を減らすことである。
【００１１】
−さらに、インビボにおいて造血を再生することができる細胞で富裕化された血液細胞集団が、本発明の方法または使用により末梢血から得た手段であり、その移植が骨髄破壊的（myeloablative）治療または抗細菌発育性薬剤（antiblastic）治療の後のレシピエントの造血系および免疫系の回復を増強するのに効果を有する。
【００１２】
第一の側面において、本発明は、インビボにおいて造血を再生することができる循環細胞の集団の調製の方法に関し、以下：
ａ）インビボにおいて造血を再生できる循環細胞の数をドナーにおいて増加させるのに十分な量にて、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物をドナーに投与し、
ｂ）インビボ造血を再生することができる循環細胞の集団を上記ドナーの末梢血から単離すること
からなる。
【００１３】
本発明の方法は、即ち、インビボにおいて造血を再生することができる細胞集団を生産し、この集団は同じかまたは異なる個体の移植のために運命付けられる。
【００１４】
即ち、本発明は、インビボにおいて造血を再生することができる細胞で富裕化された血液細胞の集団の調製の方法に関し、以下：
ａ）インビボにおいて造血を再生できる循環細胞の数をドナーにおいて増加させるのに十分な量にて、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物をドナーに投与し、
ｂ）インビボ造血を再生することができる細胞で富裕化された血液細胞の集団を上記ドナーの末梢血から単離すること
からなる。
【００１５】
好ましい態様において、本発明は、インビボにおいて造血を再生することができる、増加した数の循環細胞をドナーから単離する方法に関し、以下：
ａ）インビボにおいて造血を再生できる細胞の末梢血への動員を誘導するのに十分な量にて、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物をドナーに投与し、
ｂ）インビボ造血を再生することができる細胞で富裕化された血液細胞の集団を上記ドナーの末梢血から単離すること
からなる。
【００１６】
別の態様において、本発明は、インビボにおいて造血を再生することができる循環細胞の集団を調製する方法に関し、以下：
ａ）インビボにおいて造血を再生できる循環細胞の動員または末梢化を上記ドナーにおいて誘導するのに十分な量にて、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物をドナーに投与し、
ｂ）インビボ造血を再生することができる循環細胞の集団を上記ドナーの末梢血から単離するか、またはインビボ造血を再生することができる循環細胞で富裕化された血液細胞の集団を上記ドナーの末梢血から単離すること
からなる。
【００１７】
本発明の方法または使用の工程ｂ）［即ち、＜＜インビボ造血を再生することができる循環細胞（で富裕化された血液細胞）の集団を上記ドナーの末梢血から単離すること＞＞］は、インビボ造血を再生することができる循環細胞の数を、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の投与により増加させた場合の、ドナーからの末梢血の除去の操作に相当するかもしれない。
【００１８】
インビボ造血を再生することができる循環細胞の数を増加させるのに十分な量、インビボ造血を再生することができる循環細胞の動員または末梢化を誘導するのに十分な量またはインビボ造血を再生することができる細胞の末梢血への動員を誘導するのに十分な量を一日または数日の間に単一用量または数用量にて投与することができる。
【００１９】
ドナーからの末梢血の除去操作は白血球除去血輸血に相当するかもしれない。白血球除去血輸血は、期限切れ血液から白血球を取り出して残りの血液をドナーに再輸血する手法である。
【００２０】
血液細胞の単離された集団に存在するインビボ造血を再生することができる細胞をさらに精製することにより、上記細胞の濃度を増加させることができる。上記精製は、ＣＤ３４陽性細胞の陽性選択により実施してよい。
【００２１】
さらなる態様において、本発明は、インビボ造血を再生することができる循環細胞のドナーの調製方法に関し、上記ドナーにおいてインビボにおいて造血を再生できる循環細胞の数を増加させるのに十分な量にて、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物をドナーに投与することからなる。
【００２２】
別の態様において、本発明は、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物のドナーへの投与によりドナーにおいてインビボ造血を再生することができる循環細胞の数を増加させる方法に関する。
【００２３】
用語「増加した」または「増加」および「富裕化」は一般的に「増加した」か「富裕化」したパラメーター（数）がこのパラメーターの標準値以上の値を有することを本発明のコンテクストにおいて意味する。上記パラメーターの標準値は、インビボ造血を再生することができる細胞のいずれかの動員剤を受けなかった体内または体のサンプルにおいて測定する。血液マイクロリットルあたりのＣＤ３４+細胞の数の標準値は、例えば、末梢血のマイクロリットルあたり３．８（＋または−３．２）細胞である（Anderlini et al.，1997）。
【００２４】
インビボ造血を再生することができる循環細胞はＣＤ３４+細胞であってよい。
血液中のＣＤ３４+細胞の頻度はＦＡＣＳｃａｎ測定により測定してよい（Siena et al.，1989 & 1991）。
【００２５】
ドナーの末梢血中のＣＤ３４+細胞の増加した数または血液細胞の単離された調製物中のＣＤ３４+細胞の富裕化のレベルは、末梢血のマイクロリットルあたり１０、２５、３４または８０  ＣＤ３４+細胞を超えてよい。
【００２６】
ドナーの末梢血中のＣＤ３４+細胞の増加した数または血液細胞の単離された調製物中のＣＤ３４+細胞の富裕化のレベルは、レシピエントの体重キログラムあたり少なくとも２ｘ１０6ＣＤ３４+細胞、またはレシピエントの体重キログラムあたり少なくとも４ｘ１０6ＣＤ３４+細胞またはレシピエントの体重キログラムあたり少なくとも８ｘ１０6ＣＤ３４+細胞であってよい。
【００２７】
ドナーの末梢血中のＣＤ３４+細胞の増加した数または血液細胞の単離された調製物中のＣＤ３４+細胞の富裕化のレベルは、レシピエントの体重キログラムあたり少なくとも２ｘ１０6、５ｘ１０6、６ｘ１０6、８ｘ１０6または１５ｘ１０6ＣＤ３４+細胞であってよい。
【００２８】
移植に必要なＣＤ３４+細胞の数と相当する測定可能なＧＭ−ＣＦＣ活性の間には相関がある（Weaver et al.，1998）。よって、増加した数のインビボ造血を再生できる循環細胞または血液細胞の単離調製物中でインビボ造血を再生できる細胞の富裕化のレベルは、ドナーまたはレシピエントの体重キログラムあたり少なくとも１ｘ１０5ＧＭ−ＣＦＣに相当してよい。
【００２９】
血液中のＣＤ３４+細胞の数はＣＦＵ−ＧＭとうまく相関する（Siena et al.，1991）。ＣＦＵ−ＧＭはコロニー形成ユニット、顆粒球およびマクロファージである。よって、増加した数のインビボ造血を再生できる循環細胞または血液細胞の単離調製物中でインビボ造血を再生できる細胞の富裕化のレベルは、末梢血ミリリットルあたり少なくとも５００ＣＦＵ−ＧＭに相当してよい。
【００３０】
同じ理由から、増加した数のインビボ造血を再生できる循環細胞または血液細胞の単離調製物中でインビボ造血を再生できる細胞の富裕化のレベルは、増加したレベルのＣＦＵ−Ｃ，ＣＦＵ−ＭｅｇまたはＢＦＵ−Ｅに相当してよい。ＣＦＵ−Ｃはコロニー形成ユニット、培養物；ＣＦＵ−Ｍｅｇはコロニー形成ユニット、巨核球そしてＢＦＵ−Ｅはバースト形成ユニット、赤血球である。
【００３１】
血液中のＣＤ３４+細胞の数は白血球細胞のカウントにうまく相関する。よって、増加した数のインビボ造血を再生できる循環細胞または血液細胞の単離調製物中でインビボ造血を再生できる細胞の富裕化のレベルは、末梢血のマイクロリットルあたり少なくとも１０００の白血球細胞に相当してよい。
【００３２】
インビボ造血を再生できる循環細胞は、ＣＤ３４+／ＣＤ３３+細胞および／またはＣＤ３４+／ＣＤ３８-細胞および／またはＣＤ３４+／Ｔｈｙ−Ｉ細胞および／またはＣＤ３４+／Ｔｈｙ−Ｉ／ＣＤ３８-細胞および／またはＣＤ３３+細胞および／または骨髄幹細胞および／または始原細胞および／または長期間培養開始（initiating）細胞（ＬＴＣ−ＩＣ）および／または自己再生能力を満たす細胞および／または多能特性を満たす細胞および／または複数の細胞系列を生じることができる細胞であってよい。細胞系列は完全に分化した血液細胞であってよい。
【００３３】
ＣＤ３４+／ＣＤ３８-細胞およびＣＤ３４+／Ｔｈｙ−Ｉ細胞およびＣＤ３４+／Ｔｈｙ−Ｉ／ＣＤ３８-細胞は、例えばAnderlini et alに列挙される（文献を参照）。ＣＤ３４+／ＣＤ３３+細胞およびＣＤ３３+細胞は、例えばSiena et al；1991に列挙される（文献を参照）。長期間培養開始細胞（ＬＴＣ−ＩＣ）は例えばHeather et alに列挙される（文献参照）。自己再生能力を充たす細胞および／または多能特性を充たす細胞および／または長期間骨髄培養を開始する細胞は例えばAnderlini et alに列挙される（文献を参照）。
【００３４】
さらなる態様において、本発明は、以下の使用に関する：
−成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の、インビボ造血を再生できる循環細胞の数を増加または拡大するための使用。
−成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の、インビボ造血を再生できる細胞の末梢化のための使用。
−成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の、インビボ造血を再生できる循環細胞の数を増加または拡大するための医薬または組成物の製造のための使用。
−成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の、インビボ造血を再生できる細胞を末梢化するための医薬または組成物の製造のための使用。
−インビボ造血を再生できる循環細胞がＣＤ３４+細胞である、上記使用の何れか一つの使用。
−増加した数のＣＤ３４+細胞が末梢血のマイクロリットルあたり１０、２５、３４または８０  ＣＤ３４+細胞より多い、上記使用の何れかの使用。
−増加した数のＣＤ３４+細胞がレシピエントの体重キログラムあたり少なくとも２ｘ１０6ＣＤ３４+細胞、またはレシピエントの体重キログラムあたり少なくとも４ｘ１０6ＣＤ３４+細胞またはレシピエントの体重キログラムあたり少なくとも８ｘ１０6ＣＤ３４+細胞である、上記使用の何れか一つの使用。
−増加した数のＣＤ３４+細胞がドナーの体重キログラムあたり少なくとも２ｘ１０6、５ｘ１０6、６ｘ１０6、８ｘ１０6または１５ｘ１０6ＣＤ３４+細胞である、上記使用の何れか一つの使用。
−増加した数のインビボ造血を再生できる循環細胞がドナーまたはレシピエントの体重キログラムあたり少なくとも１ｘ１０5ＧＭ−ＣＦＣに相当する、上記使用の何れか一つの使用。
−増加した数のインビボ造血を再生できる循環細胞が末梢血ミリリットルあたり少なくとも５００ＣＦＵ−ＧＭに相当する、上記使用の何れか一つの使用。
−増加した数のインビボ造血を再生できる循環細胞が増加したレベルのＣＦＵ−Ｃ，ＣＦＵ−ＭｅｇまたはＢＦＵ−Ｅに相当する、上記使用の何れか一つの使用。
−増加した数のインビボ造血を再生できる循環細胞が末梢血のマイクロリットルあたり少なくとも１０００の白血球細胞に相当する、上記使用の何れか一つの使用。
−インビボ造血を再生できる循環細胞がＣＤ３４+／ＣＤ３３+細胞および／またはＣＤ３４+／ＣＤ３８-細胞および／またはＣＤ３４+／Ｔｈｙ−Ｉ細胞および／またはＣＤ３４+／Ｔｈｙ−Ｉ／ＣＤ３８-細胞および／またはＣＤ３３+細胞および／または骨髄幹細胞および／または始原細胞および／または長期間培養開始細胞（ＬＴＣ−ＩＣ）および／または自己再生能力を満たす細胞および／または多能特性を満たす細胞および／または複数の細胞系列を生じることができる細胞である、上記使用の何れか一つの使用。
−以下のグループの化合物：造血成長因子、サイトカイン、ケモカイン、モノクローナル抗体の間から選択される一つまたはいくつかの化合物を上記医薬または組成物がさらに含む、上記使用の何れか一つの使用。
−サイトカイングループがＩＬ−１，ＩＬ−３，Ｇ−ＣＳＦ，ＧＭ−ＣＳＦまたはＳＣＦを含み；ケモカイングループがＭＩＰ−１αまたはトロンボポイエチン（ＴＰＯ）を含み；モノクローナル抗体が抗−ＶＬＡ−４抗体を含む、上記使用の何れか一つの使用。
−上記医薬または組成物が成長ホルモンおよびＧ−ＣＳＦを含む、上記使用の何れか一つの使用。
−ＧＨとＧ−ＣＳＦを別々におよび／または同時に投与する、上記使用の何れか一つの使用。
−成長ホルモンを体重キログラムあたり約３３μｇの量にて投与する、上記使用の何れか一つの使用。
−Ｇ−ＣＳＦをキログラムあたり約５μｇまたは約１０μｇの量にて投与する、上記使用の何れか一つの使用。
−上記投与を静脈内または皮下経路により与える、上記使用の何れか一つの使用。
−上記投与を非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、経皮または口内経路により与える、上記使用の何れか一つの使用。
−成長ホルモンの投与を１日３回実施し、そしてＧ−ＣＳＦの投与を毎日実施する、上記使用の何れか一つの使用。
−上記投与を白血球除去血輸血まであるいは完全な回復まで５日の期間にわたりまたは１０日の期間にわたり与える、上記使用の何れか一つの使用。
−上記投与を白血球除去血輸血まであるいは完全な回復まで与える、上記使用の何れか一つの使用。
−成長ホルモンが組換え成長ホルモンである、上記使用の何れか一つの使用。
−成長ホルモンがヒト成長ホルモンである、上記使用の何れか一つの使用。
【００３５】
第二の側面において、本発明は、インビボ造血を再生できる循環細胞の集団の調製の方法に関し：
ａ）インビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数を得るために加工されることが必要な血液の体積を減らすのに十分な量にて、成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物をドナーに投与し、
ｂ）上記の減じられた体積の血液を加工または単離し；そして任意に
ｃ）インビボ造血を再生できる循環細胞の集団を上記単離された体積から単離する
ことからなる。
【００３６】
本発明の方法または使用の工程ｂ）またはｃ）［インビボ造血を再生できる循環細胞の集団を上記単離された体積から単離すること］は、インビボ造血を再生できる循環細胞の数が、成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を単独であるいは他の因子と共に投与することにより増加させた、ドナーからの末梢血の除去操作に相当してよい。
【００３７】
インビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数を得るために加工されることが必要な血液の体積を減じるのに十分な量を、一日または数日の間、単一用量または数用量にて投与することができる。
【００３８】
ドナーからの末梢血の除去の操作は白血球除去血輸血に相当してよい。白血球除去血輸血は、白血球が期限切れの血液から除去されて血液の残りをドナーに再輸血する手法である。
【００３９】
血液細胞の単離された集団中に存在するインビボ造血を再生できる細胞をさらに精製することにより、上記細胞の濃度を増加させることができる。上記精製はＣＤ３４陽性細胞の陽性選択により実施してよい。
【００４０】
他の態様において、本発明は、インビボ造血を再生できる循環細胞のドナーの調製方法に関し、成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物のドナーへの投与を、加工されることが必要な血液の体積を減じるのに十分な量にて投与することにより、インビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数を得るか、および／またはインビボ造血を再生できる循環細胞が移植されるのに十分な量を回収するのに必要な白血球除去血輸血の数を減じる量にて投与することからなる。
【００４１】
インビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数を得るために加工されることが必要な血液の体積を減じるか、および／または移植されるインビボ造血を再生できる循環細胞を十分な量回収するのに必要な白血球除去血輸血の数を減じるのに十分な量を一日または数日の間に単一容量または複数容量投与することができる。
【００４２】
加工されるのに必要な血液の体積は、除去血輸血または白血球除去血輸血手法の間に加工されることが必要な血液の体積であってよい。
さらなる態様において、本発明は、ドナーにおいてインビボ造血を再生できる指定された目標数の循環細胞を得るために加工されるのが必要な血液の体積を減じるための方法、および／または成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物のドナーへの投与により、移植されるインビボ造血を再生できる循環細胞の十分な量を回収するのに必要な白血球除去血輸血の数を減じる方法に関する。
【００４３】
用語「減じられた」は、一般に、本発明の観点から、「減じられた」パラメーター（体積）がこのパラメーターの標準値より劣る値を有することを意味する。
インビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数は、ドナーまたはレシピエントの体重ｋｇあたり少なくとも２ｘ１０4ＬＴＣ−ＩＣであり、ドナーまたはレシピエントの体重キログラムあたり約２ｘ１０6以上のＣＤ３４+細胞、ドナーまたはレシピエントの体重キログラムあたり約４ｘ１０6以上のＣＤ３４+細胞またはドナーまたはレシピエントの体重キログラムあたり約８ｘ１０6以上のＣＤ３４+細胞である。
【００４４】
必要とされる血液の体積は約３０から約９００ミリリットルの範囲であってよい。
他の態様において、本発明は、以下の使用に関する：
−成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の、インビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数を得るために加工されることが必要な血液の体積を減らすための使用。
−成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の、インビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数を得るために加工されることが必要な血液の体積を減らすための医薬または組成物の製造のための使用。
−インビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数がドナーまたはレシピエントの体重キログラムあたり少なくとも２ｘ１０4より多いＬＴＣ−ＩＣ、ドナーまたはレシピエントの体重ｋｇあたり少なくとも２ｘ１０6より多いＣＤ３４+細胞、ドナーまたはレシピエントの体重キログラムあたり少なくとも４ｘ１０6ＣＤ３４+細胞またはドナーまたはレシピエントの体重キログラムあたり少なくとも８ｘ１０6ＣＤ３４+細胞である、上記使用の何れか一つの使用。
−必要な血液の体積が約３０から約９００ミリリットルの範囲に含まれる、上記使用のいずれか一つの使用。
−以下のグループの化合物：造血成長因子、サイトカイン、ケモカイン、モノクローナル抗体の間から選択される一つまたはいくつかの化合物を上記医薬または組成物がさらに含む、上記使用の何れか一つの使用。
−サイトカイングループがＩＬ−１，ＩＬ−３，Ｇ−ＣＳＦ，ＧＭ−ＣＳＦまたはＳＣＦを含み；ケモカイングループがＭＩＰ−１αまたはトロンボポイエチン（ＴＰＯ）を含み；モノクローナル抗体が抗−ＶＬＡ−４抗体を含む、上記使用の何れか一つの使用。
−上記医薬または組成物が成長ホルモンおよびＧ−ＣＳＦを含む、上記使用の何れか一つの使用。
−ＧＨとＧ−ＣＳＦを別々におよび／または同時に投与する、上記使用の何れか一つの使用。
−成長ホルモンを体重キログラムあたり約３３μｇの量にて投与する、上記使用の何れか一つの使用。
−Ｇ−ＣＳＦをキログラムあたり約５μｇまたは約１０μｇの量にて投与する、上記使用の何れか一つの使用。
−上記投与を静脈内または皮下経路により与える、上記使用の何れか一つの使用。
−上記投与を非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、経皮または口内経路により与える、上記使用の何れか一つの使用。
−上記投与が毎日または１日３回である、上記使用の何れか一つの使用。
−成長ホルモンの投与を１日３回実施し、そしてＧ−ＣＳＦの投与を毎日実施する、上記使用の何れか一つの使用。
−上記投与を白血球除去血輸血まであるいは完全な回復まで５日の期間にわたりまたは１０日の期間にわたり与える、上記使用の何れか一つの使用。
−上記投与を白血球除去血輸血まであるいは完全な回復まで与える、上記使用の何れか一つの使用。
−投与が化学治療、放射線治療、骨髄抑圧性治療、インビボ造血を再生できる循環細胞の移植または骨髄の移植後である、上記使用の何れか一つの使用。
−投与を化学治療法の治療開始後約７日目または化学治療法の治療終了後約２日目に始める、上記使用の何れか一つの使用。
−成長ホルモンが組換え成長ホルモンである、上記使用の何れか一つの使用。
−成長ホルモンがヒト成長ホルモンである、上記使用の何れか一つの使用。
【００４５】
本出願において：
−用語「循環」は用語「血液」または「末梢血」に置換してよい。
−表現「調製方法」における用語「調製」は「前処理」または「血液抽出または白血球除去血輸血のための調製」により置換してよい。
−本発明の方法または使用において列挙される「ドナー」はヒトまたは動物、健常個体または病気の個体（患者）であってよい。上記動物は好ましくは哺乳類であって、家畜、例えばイヌ、ネコ等あるいはウマ、ウシ、ヒツジ等の動物から選択してよい。
−用語「造血」は血液細胞の形成を意味しうる。
−用語「成長ホルモン」は、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）および異なる種のヒト成長ホルモンの相同蛋白質の全ておよびヒト以外の種におけるヒト成長ホルモンの相同物の全てを包含する。ヒト以外の種は、あらゆる種類の家畜あるいは例えばウマであってよい。
【００４６】
好ましい態様において、成長ホルモンはヒト成長ホルモンである。ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）はソマトトロピンとしても知られており、下垂体前葉の成長ホルモン産生細胞により生産および分泌される蛋白質ホルモンである。ｈＧＨは蛋白質、糖質および脂質の代謝に対するその作用を通して体細胞成長において鍵となる役割を担う。
【００４７】
ヒト成長ホルモンは１０１アミノ酸の単一ポリペプチド鎖であり、２つのジスルフィド結合を有し、一つはＣｙｓ−５３とＣｙｓ−１６５の間であって分子中に大きなループを形成し、そして他方はＣｙｓ−１８２とＣｙｓ−１８９の間であってＣ−末端近傍に小さなループを形成する。
【００４８】
表現「成長ホルモンの誘導体」における用語「誘導体」は、本発明のコンテクストにおいて、構造上ＧＨとは異なるが、蛋白質、糖質および脂質の代謝に対するその直接または間接の作用に関しておよび／または移動効果および／または回収効果に関してＧＨの機能を保存している分子である（即ち、「インビボ造血を再生できる循環細胞の動員または末梢化、インビボ造血を再生できる循環細胞の数の増加、移植のために十分な量の循環細胞を回収するために必要な白血球除去血輸血の数の減少、インビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数を得るために加工されることが必要な血液の体積の減少」）。
【００４９】
本発明に包含されるヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）の誘導体は天然に生じる誘導体、変更物および代謝産物、主として生合成ｈＧＨの分解産物および遺伝学の方法により生産されたｈＧＨの工作された誘導体を含む。ｈＧＨのあらゆる誘導体は本発明の観点からｈＧＨの生物活性を保持する範囲において本発明の目的のために使用することができる。
【００５０】
誘導体の例は、スプライス変更物、オリゴマー、凝集体、蛋白質分解産物、一つ以上のアミノ酸の置換、挿入または欠失を有する変更物等を含む。
メチオニルｈＧＨは組換えＤＮＡ技術を通して生産されるｈＧＨ誘導体の一例である。この化合物は、実は、そのＮ末端に一つの追加のメチオニン残基を有するｈＧＨ誘導体である（Goeddel et al.，1979）。
【００５１】
ｈＧＨの誘導体の別の例は、下垂体および血流において起こることが報告された２０−Ｋ−ｈＧＨと呼ばれるｈＧＨの天然変更物である（Lewis et al，1978；Lewis et al，1980）。この化合物はＧｌｕ−３２からＧｌｎ−４６の１５アミノ酸を欠き、メッセンジャーリボ核酸のもう一つのスプライシングにより生じる（DeNoto et al.，1981）。
【００５２】
ｈＧＨ誘導体の別の例は、Ｎ末端においてアセチル化される（Lewis et al.，1979）。
ヒト成長ホルモンはさらにモノマー、ダイマーおよび高分子量オリゴマー形態であるかまたは上記形態の混合物であってよい。
【００５３】
ヒト成長ホルモンは下垂体中および血液循環中の両方において見いだされる凝集形態であってよい（Stolar et al.，1984；Stolar and Baumann，1986）。
ダイマー形態のｈＧＨは別の種類であってよい：
−鎖内ジルフィド結合を通して連結したジスルフィドダイマー（Lewis et al.，1977）、
−ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル上に検出されてジスルフィドダイマーではない共有または不可逆ダイマー（Bewley and Li，1975）、および
−蛋白質中の疎水性相互作用を破壊する試薬を用いた処理によりモノマーｈＧＨへ容易に解離する非共有ダイマー（Becker et al.，1987）、
−Ｚｎ2+を伴うダイマー複合体（Cunningham et al.，1991）。
【００５４】
スキャッチャード分析は２つのＺｎ2+イオンが協調性様式においてｈＧＨダイマーあたり関係し、そしてこのＺｎ2+−ｈＧＨダイマー複合体がモノマーｈＧＨに比して変性に対してより安定であることがわかった（Cunningham et al.，1991）。
【００５５】
多くのｈＧＨ誘導体がこの分子の蛋白質分解修飾により生じる。ｈＧＨ代謝の最初の経路は蛋白質分解を含む。残基１３０−１５０付近のｈＧＨ領域は極めて蛋白質分解に感受性であり、そしてこの領域においてニックまたは欠失を有するｈＧＨのいくつかの誘導体が記載されてきた（Thorlacius-Ussing，1987）。この領域はｈＧＨの大きなループ中にあり、そしてそこでのペプチド結合の分解は、Ｃｙｓ−５３とＣｙｓ−１６５におけるジスルフィド結合を通して連結された２つの鎖の生成をもたらす。これらの２つの鎖の形態の多くが増加した生物活性を有すると報告された（Singh et al.，1974）。
【００５６】
ヒト成長ホルモンの多くの誘導体は、酵素の使用を通して人工的に生じさせてきた。酵素トリプシンおよびズブチリシン並びにその他を使用することにより、上記分子の隅から隅まで様々な点においてｈＧＨを修飾した（Lewis et al.，1977）。そのような誘導体の一つは２鎖同化作用蛋白質（２−ＣＡＰ）と呼ばれ、トリプシンを使用したｈＧＨの制御された蛋白質分解を通して形成された。
【００５７】
ｈＧＨ誘導体の別の例は脱アミド化されたｈＧＨである。蛋白質中のアスパラギンおよびグルタミン残基は適切な条件下で脱アミド反応に感受性である。脱アミドされたｈＧＨの一例はこの種の反応を受けることが示された下垂体ｈＧＨであり、Ａｓｎ−１５２のアスパラギン酸への変更、および低い程度でのＧｌｎ−１３７からグルタミン酸への変更をもたらす（Lewis et al.，1981）。脱アミドされたｈＧＨの別の例は特定の保存条件下で分解することが知られている生合成ｈＧＨであり、別のアスパラギン（Ａｓｎ−１４９）における脱アミドをもたらす。これは脱アミドの主な部位であるが、Ａｓｎ−１５２における脱アミドも観察される（Becker et al.，1988）。Ｇｌｎ−１３７における脱アミドは生合成ｈＧＨにおいて観察されない。
【００５８】
ｈＧＨ誘導体の別の例は、スルフォキシドｈＧＨである。蛋白質中のメチオニン残基は酸化、主にスルフォキシドに感受性である。下垂体由来およびのｈＧＨおよび生合成ｈＧＨの両者はＭｅｔ−１４およびＭｅｔ−１２５においてスルフォキシデーションを受ける（Becker et al.，1988）。Ｍｅｔ−１７０における酸化も下垂体において報告されているが、生合成ｈＧＨにおける報告はない。
【００５９】
ｈＧＨの別の誘導体の例は、酵素の作用によるかまたは遺伝学の方法の何れかにより生成されたｈＧＨの末端欠損形態である。２−ＣＡＰはトリプシンの制御された作用により生じ、ｈＧＨのＮ末端の最初の８残基が除去されている。他の末端欠損バージョンのｈＧＨは、適切な宿主における発現の前に遺伝子を修飾することにより生成された。最初の１３残基を欠損させることにより、上記ポリペプチド鎖が分割されていないで異なる生物特性を有する誘導体を生じさせた（Gertler et al.，1986）。
【００６０】
ｈＧＨとその誘導体は、多数の異なる酵素中でｈＧＨの無制限の供給の生産を許容する組換えＤＮＡ技術により生産してよい。培養培地からのｈＧＨまたはその誘導体の精製は、存在する少量の汚染蛋白質により促進される。事実、ｈＧＨは逆相ＨＰＬＣカラム上の単一の精製工程において実験室スケールにおいて精製することができる。
【００６１】
組換えｈＧＨは、一般的に、ｈＧＨプラス追加の賦形剤、例えばグリシンおよびマニトールを凍結乾燥形態で含むバイアルとして市販される。一対のもう片方の希釈剤バイアルを供給し、容量投与前に患者が所望の濃度に精製物を再構成することを可能にする。
【００６２】
一般的に、組換え天然配列ｈＧＨ、組換えＮ−メチオニル−ｈＧＨ、またはヒトの下垂体由来の物質の間で薬剤動力学または生物活性における顕著な変化は観察されなかった（Moore et al.，1988；Jorgensen et al.，1988）。
【００６３】
本発明において使用されるヒト成長ホルモンは、上記のような機能性誘導体、並びに他の種類の誘導体、断片、変更物、類似体または化学誘導体を含み得る。機能性誘導体はｈＧＨの少なくとも一分のアミノ酸配列を保持し、本発明によるその利用性、即ち例えばインビボ造血を再生できる循環細胞の動員を許容する。
【００６４】
本発明の意味において、「誘導体」は以下であってよい：
−本発明に従うヒト成長ホルモンの「断片」は、あらゆるサブセットの分子、即ち短いペプチドを意味する。
−本発明に従うヒト成長ホルモンの「変更物」は、完全なペプチドまたはその断片の何れかに実質類似の分子を意味する。変更ペプチドは当業界にて知られた方法を使用して変更ペプチドの直接の化学合成により都合よく製造してよい。
【００６５】
あるいは、ｈＧＨのアミノ酸変更物は、合成されたｈＧＨ誘導体をコードするｃＤＮＡ中の変異により製造することができる。そのような変更物は、アミノ酸配列中の残基の欠失、挿入または置換を含む。欠失、挿入または置換のあらゆる組み合わせも、最終構築物が所望の活性を有する限り、作成してよい。
【００６６】
遺伝子レベルにおいては、これらの変更物は、通常、ペプチド分子をコードするＤＮＡ内のヌクレオチドの部位特異的変異導入（Adelman et al.，1983により例示されるとおり）により製造し、それにより変更物をコードするＤＮＡを生産し、そしてその後組換え細胞培養物中で該ＤＮＡを発現する。上記変更物は、典型的に、非変更物ペプチドと同じ生物活性を呈する。
−本発明に従うヒト成長ホルモンの「類似体」は、完全な分子またはその活性断片の何れかに実質類似の非天然分子を意味する。
−本発明に従うヒト成長ホルモンの「化学誘導体」は、ヒト成長ホルモン誘導体アミノ酸配列の通常一部ではない追加の化学モイエティを含む。上記アミノ酸配列の共有修飾は本発明の範囲内に包含される。そのような修飾は、選択された側鎖または末端残基と反応可能な有機誘導剤でペプチドの目標とするアミノ酸残基を反応させることによりヒト成長ホルモンに導入してよい。
【００６７】
本発明に従うヒト成長ホルモンおいてなされてよい置換の種類は、異なる種の相同蛋白質間のアミノ酸の変更頻度の分析に基づいてよい。そのような分析に基づき、保存性置換は本明細書において以下の５グループの一つにおける交換として定義してよい：
Ｉ：小さくて、脂肪族の、非極性かまたはわずかに極性の残基：Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ｇｌｙ
ＩＩ：極性の、陰性荷電した残基およびそれらのアミド：Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｇｌｎ
ＩＩＩ：極性の、陽性荷電した残基：Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｌｙｓ
ＩＶ：大きくて、脂肪族の、非極性残基：Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｃｙｓ
Ｖ：大きな芳香族残基：Ｐｈｅ，Ｔｒｙ，Ｔｒｐ。
【００６８】
前記のグループにおいて、以下の置換は「高度に保存された」と考えられる：
−Ａｓｐ／Ｇｌｕ
−Ｈｉｓ／Ａｒｇ／Ｌｙｓ
−Ｐｈｅ／Ｔｙｒ／Ｔｒｐ
−Ｍｅｔ／Ｌｅｕ／Ｉｌｅ／Ｖａｌ。
【００６９】
半保存的置換は、上記のグループ（Ｉ）−（ＩＶ）の２つの間での交換と定義され、（Ｉ），（Ｉ），および（ＩＩＩ）からなるスーパーグループ（Ａ）または上記（ＩＶ）および（Ｖ）からなるスーパーグループ（Ｂ）に限定される。置換は遺伝子によりコードされることに限定されず、あるいは天然に生じるアミノ酸でさえある。エピトープをペプチド合成により製造する場合、所望のアミノ酸を直接使用してよい。別法として、遺伝子コードされたアミノ酸を、選択された側鎖または末端残基と反応可能な有機誘導剤と反応させることにより該アミノ酸を修飾してよい。
【００７０】
もっとも共通のシステニル残基は、アルファ−ハロアセテート（および対応するアミン）、例えばクロロ酢酸またはクロロアセトアミドと反応させることにより、カルボキシメチル誘導体またはカルボキシアミドメチル誘導体を供給する。システニル残基は、ブロモトリフルオロアセトン、アルファ−ブロモ−ベータ−（５−イミダゾール）プロピオン酸、クロロアセチルリン酸、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィド、メチル−２−ピリジルジスルフィド、ｐ−クロロ水銀安息香酸、２−クロロ水銀−４−ニトロフェノール、またはクロロ−７−ニトロベンゾ−２−オクサ−１，３−ジアゾールを用いた反応によっても誘導される。
【００７１】
ヒスチジル残基はｐＨ５．５−７．０においてジエチルプロカーボネートとの反応により誘導されるが、何故ならばこの試薬は相対的にヒスチジル側鎖に特異的だからである。パラブロモフェナシルブロミドも有用である：反応は０．１Ｍカコジル酸ナトリウム中でｐＨ６．０において実施するのが好ましい。
【００７２】
リジニル残基およびアミノ末端残基は琥珀酸または他のカルボキシル酸無水物と反応させる。これらの試薬を用いた誘導は、リジニル残基の変化を転換させる作用を有する。α−アミノ酸含有残基を誘導する他の適切な試薬は、イミドエステル、例えばメチルピコリニミデート；ピリドキサルホスフェート；ピリドキサル；クロロボロヒドリド；トリニトロベンゼンスルホン酸；Ｏ−メチリオスウレア；２，４−ペンタンジオン；およびグリオキシレートを用いたトランスアミナーゼ触媒反応を含む。
【００７３】
アルギニル残基は一つまたはいくつかの慣用的な試薬、とりわけフェニルグルオキサル；２，３−ブタンジオン；およびニンヒドリンとの反応により修飾される。アルギニル残基の誘導は、グアニジン官能基の高いｐＫａのために、反応がアルカリ条件下で実施されることを必要とする。さらに、これらの試薬はリジンのグループ並びにアルギニンエプシロンアミノグループと反応させてよい。
【００７４】
チロシル残基それ自体の特異的修飾は広範囲に研究されており、芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンとの反応によりチロシン残基へスペクトル標識導入することに特に関心が注がれている。もっとも共通には、Ｎ−アセチルイミダゾールおよびテトラニトロメタンを使用することにより、Ｏ−アセチルチロシル種およびｅ−ニトロ誘導体をそれぞれ形成する。
【００７５】
カルボキシル側鎖グループ（アスパルチルまたはグルタミル）は、カルボジイミド（Ｒ‘Ｎ−Ｃ−Ｎ−Ｒ’）例えば１−シクロヘキシル１−３−［２−モルフォリニル−（４−エチル）］カルボジイミドまたは１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミドとの反応により選択的に修飾する。さらに、アンモニウムイオンとの反応により、アスパルチルまたはグルタミル残基をアスパラギニルおよびグルタミニル残基に変換する。
【００７６】
グルタミニルおよびアスパラギニル残基はしばしば脱アミド化されて対応するグルタミルおよびアスパルチル残基になる。別法として、これらの残基をマイルドな酸性条件下で脱アミド化する。これらの残基の何れかの形態はこの発明の範囲内である。
【００７７】
本発明は組換えＤＮＡ技術、例えば原核細胞または真核細胞により作成されたヒト成長ホルモン誘導体を用いて実施されるが、これらの誘導体は当業者によく知られた慣用の蛋白質合成方法によって作成することもできる。
【００７８】
成長ホルモンは、蛋白質、ペプチド、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子であってよい。ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子はｈＧＨおよび上記列挙されたものを含むその誘導体をコードしてよい。
【００７９】
成長ホルモンは組換え成長ホルモンであることが好ましい。
上記の本発明の方法および使用において投与される、成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の量の測定は当業界の範囲内である。
【００８０】
成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の典型的な用量は１日あたり患者の体重キログラムあたり約１マイクログラムから開始し、そして所望の効果（インビボ造血を再生できる循環細胞の動員または末梢化、インビボ造血を再生できる循環細胞の数の増加、移植のために十分な量の循環細胞を回収するために必要な白血球除去血輸血の数の減少、インビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数を得るために加工されることが必要な血液の体積の減少）に到達するまで上昇させる。
【００８１】
投与される、成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の用量は、ドナーの年齢、性別、健康状態および体重、以前または現在の治療の種類、もし必要であれば治療の頻度および所望の効果の性質に依存する。
【００８２】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つは体重キログラムあたり２０から５０μｇの間を含む量、より特定すれば体重キログラムあたり３０から４０μｇの間の投与に有利かもしれない。投与される成長ホルモンまたはその誘導体の一つの好ましい用量は体重キログラムあたり約３３μｇである。
【００８３】
成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は、単独または他の因子と共にあるいは結合させて投与してよい。
成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は、以下のグループ：造血成長因子、サイトカイン、ケモカインモノクローナル抗体に属する化合物の間から選択される一つ以上の化合物をさらに含む組成物中に存在することが有利かもしれない。
【００８４】
成長ホルモン、その誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子と、以下のグループ：造血成長因子、サイトカイン、ケモカインモノクローナル抗体に属する化合物の間から選択される一つ以上の化合物を、同時または別々の時に、および／または同じ部位または異なる部位においておよび／または同じかまたは異なる組成物または医薬中において投与することができる。
【００８５】
サイトカイングループは、ＩＬ−１，ＩＬ−３，Ｇ−ＣＳＦ，ＧＭ−ＣＳＦまたはＳＣＦを含むことができる。ケモカイングループは、ＭＩＰ−１αまたはトロンボポイエチン（ＴＰＯ）を含むことができる。モノクローナル抗体は抗−ＶＬＡ−４抗体を含むことができる。
【００８６】
好ましくは、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は、顆粒球刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）を含む組成物中に存在する。
【００８７】
好ましくは、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は、Ｇ−ＣＳＦと結合させる。
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子とＧ−ＣＳＦは、同時または別々の時に、および／または同じ部位または異なる部位においておよび／または同じかまたは異なる組成物または医薬中において投与することができる。
【００８８】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子とＧ−ＣＳＦは、別々に投与することが有利かもしれない。
Ｇ−ＣＳＦは、体重のキログラムあたり３から１５μｇの間、より特定すれば体重のキログラムあたり４から１２μｇの間を含む量にて投与するのが有利かもしれない。
【００８９】
投与されるＧ−ＣＳＦの好ましい用量は、体重キログラムあたり約５μｇまたは約１０μｇの量である。
好ましい態様において、成長ホルモンまたはその誘導体の一つは、体重キログラムあたり２０から５０μｇを含む量にて、より特定すれば体重キログラムあたり３０から４０μｇを含む量にて投与され、そしてＧ−ＣＳＦは、体重キログラムあたり３から１５μｇを含む量にて、より特定すれば体重キログラムあたり４から１２μｇを含む量にて投与される。
【００９０】
好ましい態様において、成長ホルモンまたはその誘導体の一つは体重キログラムあたり３３μｇを含む量にて投与され、そしてＧ−ＣＳＦは体重キログラムあたり１０μｇを含む量にて投与される。
【００９１】
本発明によれば、表現「インビボ造血を再生できる循環細胞の数を増加させるか、またはインビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数を得るために加工されることが必要な血液の体積を減じるのに十分な量の投与」は、１回または数回投与を意味することができ、インビボ造血を再生できる循環細胞の数を増加させるか、またはインビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数を得るために加工されることが必要な血液の体積を減じるのに十分な蓄積された量に関して１日あたりおよび１日または数日間で１回または数回である。
【００９２】
本発明の方法および使用において使用される薬剤組成物または組成物は受容可能な担体に任意に化合された薬学上受容可能な形態である。
これらの組成物はそれらの意図される目的を達成するあらゆる手段により投与することができる。
【００９３】
本発明の方法および使用において使用される組成物は、単独であるいは疾患に対して向けられたかあるいはその疾患の他の兆候に向けられた他の治療法と共に投与してよい。
【００９４】
本発明の方法および使用において使用される組成物は、静脈内または皮下にて投与してよい。
静脈内投与の後、動物およびヒトの両方において１２−３０分の半減期を有する血清を用いた一次動力学によるｈＧＨの除去が記載される（Moore et al.，1988；Hendricks et al.，1985）。伝統的には、筋肉内注射が好ましい送達経路としての選択法であった。ヒトにおいては、外来ｈＧＨの吸収は筋肉内部位からはより迅速であるらしく、２から３時間の最大濃度到達時間であり、皮下投与後の４から６時間に比較される。血清からの消失相は筋肉内投与で１２−２０時間の範囲と報告されており、皮下投与後では２０−２４時間である（Albertsson et al.，1996；Jorgensen et a.，1987）。
【００９５】
本発明の方法および使用において使用される組成物は、非経口経路、例えば皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、または経皮経路によるかあるいは粘膜経路例えば口内または経口経路により投与してよい。
【００９６】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物は、非経口経路、例えば皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、または経皮経路によるかあるいは粘膜経路例えば口内または経口経路により投与してよい。
【００９７】
好ましくは、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は皮下投与される。
本発明の各治療、方法または使用に必要な全用量または量は複数あるいは単一の用量にて投与してよい。
【００９８】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物は、毎日あるいは日に３回投与してよい。
好ましくは、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物は、日に３回投与する。
【００９９】
好ましくは、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は、毎日あるいは日に３回投与してよい。
好ましい態様において、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は、日に３回投与する。
【０１００】
本発明の方法または使用が成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子とＧ−ＣＳＦの投与を含むなら、Ｇ−ＣＳＦは日に１回および／または皮下投与することが好ましい。
【０１０１】
本発明の方法または使用が成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子とＧ−ＣＳＦの投与を含むなら、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は日に３回投与することが好ましく、そしてＧ−ＣＳＦは毎日投与することが好ましい。
【０１０２】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物は、毎日投与してよく、白血球除去血輸血に先立ち最大２０日までの間に開始できる。
【０１０３】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物は、所望の効果（インビボ造血を再生できる循環細胞の動員または末梢化、インビボ造血を再生できる循環細胞の数の増加、移植のために十分な量の循環細胞を回収するために必要な白血球除去血輸血の数の減少、インビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数を得るために加工されることが必要な血液の体積の減少）に到達するまで、５日の期間または１０日の期間をかけて投与してよい。
【０１０４】
好ましくは、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物は、所望の効果（インビボ造血を再生できる循環細胞の動員または末梢化、インビボ造血を再生できる循環細胞の数の増加、移植のために十分な量の循環細胞を回収するために必要な白血球除去血輸血の数の減少、インビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数を得るために加工されることが必要な血液の体積の減少）に到達するまで投与する。
【０１０５】
本発明の方法および使用は、化学治療、放射線治療、骨髄抑圧性治療、インビボ造血を再生できる循環細胞の移植または骨髄の移植後に実施するのが有利である。
【０１０６】
本発明の方法および使用は、化学治療法の治療開始後約７日目または化学治療法の治療終了後約２日目に実施するのが有利である。
好ましい態様において、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子とＧ−ＣＳＦは、白血球除去血輸血まで、インビボ造血を再生できる循環細胞の動員または末梢化まで、インビボ造血を再生できる循環細胞の数の増加まで、移植のために十分な量の循環細胞を回収するために必要な白血球除去血輸血の数の減少まで、および／またはインビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数を得るために加工されることが必要な血液の体積の減少まで投与する。この好ましい態様において、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は１日３回投与するのが好ましく、そしてＧ−ＣＳＦは１日１回投与するのが好ましい。
【０１０７】
本発明の方法および使用は、「ケモプライミング」と呼ぶ前処置と組み合わせてよい。「ケモプライミング」養生法は以下を使用してよい：
−胸部癌または多発性骨髄腫を有する患者のための高い用量のシクロホスファミド（４ｇ／ｍ2）、
−非ホジキンリンパ腫またはホジキン疾患を有する患者のためのイフォスファミド、エトポシド、
−固形の癌（例えば、胸部癌）の患者のためのシクロホスファミド、エトポシド、シスプラチン（ＣＶＰ）。
【０１０８】
インビボ造血を再生できる循環細胞の回復（rebound）への誘導を増強するため、本発明の方法および使用はケモプライミング完了の直後に開始して除去血輸血の完了まで続ける（５から１２μｇ／ｋｇ／ｄ）。
【０１０９】
以前の化学療法により骨髄幹細胞のプールが顕著に低下している患者においては、追加のケモプライミング養生法はインビボ造血末梢化を再生できる循環細胞の末梢化への誘導よりもむしろ障害性であるかもしれないことも注目すべきである。幹細胞障害性化学治療剤、例えばブスルファン、ドクソルブシン、メルファラン、チオテパおよびおそらくフルダラビン（およびその他）はケモプライミング養生法の一部であるべきではない。他方、シクロホスファミドは最小限のインビボ造血を再生できる細胞にしか障害を与えない理想的なケモプライミング薬剤であると考えられるが、心臓障害性（用量＞４ｇ／ｍ2）および出血性膀胱炎はよく知られた用量制限的な脊髄外副作用である（Shepperd et al.，1990）。
【０１１０】
本発明の方法および使用により末梢血から得られたインビボ造血を再生できる細胞で富裕にされた血液細胞の集団は、一つまたはいくつかの化学治療、放射線治療、骨髄抑圧、骨髄切除または骨髄障害性治療を以前に受けた個体に注入することが有利である。
【０１１１】
再注入、移植（engraftment）または移植（transplantation）の上記操作は、いわゆる造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）手法に属する。ＨＳＣＴは、骨髄または末梢血から得た、インビボ造血を再生できる細胞を、患者に移植する臨床上の手法である。
【０１１２】
自己移植はドナーとレシピエントが同じ個体の移植であるが、非自己移植はドナーとレシピエントが違う個体の移植である。本発明の方法は、自己および非自己両方の移植を包含する。
【０１１３】
別の部分において、本発明は、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の、Ｇ−ＣＳＦの動員作用または末梢化作用を増強するための方法または使用を提供する。
【０１１４】
上記方法は、インビボ造血を再生できる循環細胞の動員をＧ−ＣＳＦにより増強するため、インビボ造血を再生できる循環細胞の数をＧ−ＣＳＦにより増加させるため、移植のために十分な量の循環細胞をＧ−ＣＳＦにより回収するために必要な白血球除去血輸血の数を減少させるため、および／またはインビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数をＧ−ＣＳＦにより得るために加工されることが必要な血液の体積を減少させるための、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の方法および使用を提供する。
【０１１５】
即ち、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子とＧ−ＣＳＦの投与は、Ｇ−ＣＳＦを単独であるいは成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子なしに投与することにより得られる効果に関して、インビボ造血を再生できる循環細胞の動員を相乗的に増強または増加させるか、インビボ造血を再生できる循環細胞の数を相乗的に増強または増加させるか、移植のために十分な量の循環細胞を回収するために必要な白血球除去血輸血の数を減少させるか、および／またはインビボ造血を再生できる循環細胞の指定された目標数を得るために加工されることが必要な血液の体積を減少させる。
【０１１６】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子とＧ−ＣＳＦの投与は、Ｇ−ＣＳＦを単独であるいは成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子なしに投与する場合よりも低いＧ−ＣＳＦ用量の使用を可能にする。
【０１１７】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子とＧ−ＣＳＦの投与は、同時または異なる時間に、および／または同じ部位または異なる部位において、および／または同じ組成物または医薬中または異なる組成物または医薬中にて実施することができる。
【０１１８】
第２の部分において、本発明は、造血再構成を増強するための新規な使用を提供する。本発明は、造血の再生、回復または再構成を促進するか、増強するかまたは加速することができる薬剤に関する。本発明は、造血再構成を増強する新規な使用を提供する。
【０１１９】
即ち、本発明は、ヒトにおいて造血再構成を増強する医薬を製造するための、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の使用に関する。
【０１２０】
本出願を通して、用語「増強する」および同じ根源を有するすべての用語は、用語「促進する」または用語「加速する」により置換してよい。
本出願を通して、用語「再構成」および同じ根源を有するすべての用語は、用語「回復」または用語「再生」により置換してよい。
【０１２１】
別の態様において、本発明は、ヒトにおいて骨髄移植後の造血を増強するための、ヒト成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたはヒト成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の使用に関する。
【０１２２】
別の態様において、本発明は、ヒトにおいてインビボの造血を再生することができる骨髄または細胞の移植を増強するための、ヒト成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたはヒト成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の使用に関する。
【０１２３】
本発明の別の態様は、インビボの造血を再生することができる細胞の移植後に造血の再構成を増強するための医薬の製造のための、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の使用である。
【０１２４】
さらなる態様において、本発明は、インビボの造血を再生することができる細胞の移植を増強するための医薬の製造のための、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の使用に関する。
【０１２５】
成長ホルモンは、好都合にはヒト成長ホルモンであってよい。
成長ホルモンおよびその誘導体は、本発明の第１の部分に関連して本出願において前に列挙された成長ホルモンおよびその誘導体に相当してよい。
【０１２６】
造血再構成または増強された移植は、末梢白血球細胞（ＷＢＣ）のカウントおよび／または顆粒球カウントおよび／またはリンパ球カウントおよび／または血小板カウントおよび／または赤血球カウントの増加により検出してよい。
【０１２７】
末梢白血球細胞（ＷＢＣ）のカウントおよび／または顆粒球カウントおよび／またはリンパ球カウントおよび／または血小板カウントおよび／または赤血球カウントの増加は、同じ移植養生法を受けたが何ら造血再構成治療を受けなかった個体におけるカウントの増加率の比較により検出してよい。
【０１２８】
造血再構成または増強された移植は、正常または標準の、末梢白血球細胞（ＷＢＣ）のカウントおよび／または顆粒球カウントおよび／またはリンパ球カウントおよび／または血小板カウントおよび／または赤血球カウントを取り戻すのに必要な時間を減少させることにより検出してよい。
【０１２９】
正常または標準の、末梢白血球細胞（ＷＢＣ）のカウントおよび／または顆粒球カウントおよび／またはリンパ球カウントおよび／または血小板カウントおよび／または赤血球カウントは、健常な個体または何ら骨髄除去、骨髄障害性治療、骨髄抑圧性治療、何ら化学治療、何ら放射線治療または何ら移植を受けなかった個体において測定する。
【０１３０】
正常な好中球のカウントは末梢血のリットルあたり少なくとも０．５ｘ１０9好中球細胞であってよい。
正常な血小板のカウントは末梢血のリットルあたり少なくとも２０ｘ１０9であってよい。
【０１３１】
造血再構成または増強性移植は、好中球減少症および／または血小板減少症および／または貧血症および／または出血の範囲および／または期間の減少および／または予防期間の減少により検出してよい。
【０１３２】
造血再構成または増強性移植は、発熱および／または感染の期間および／または重度の減少により検出してよい。
好中球減少症および／または血小板減少症および／または貧血症および／または出血の範囲および／または期間の減少および／または予防期間の減少または発熱および／または感染の期間および／または重度の減少は、同じ移植養生法、同じ化学治療、同じ放射線治療または同じ骨髄抑圧性治療、骨髄除去治療または骨髄障害性治療を受けたが何ら造血再構成処置を受けなかった個体において測定された上記程度および／または期間および／または重度と比較してよい。
【０１３３】
造血再構成または増強性移植は、末梢血マイクロリットルあたり少なくとも１０００の顆粒球の回復により検出してよい。
別の態様において、本発明は、新形成疾患、造血不全、悪性腫瘍、重度の複合性免疫不全（ＳＣＩＤｓ）、先天的または遺伝的に決定された造血異常、貧血、再生不能性貧血、白血病および骨粗鬆症を治療するための医薬の製造のための、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の使用に関する。
【０１３４】
新形成疾患は胸部癌であってよい。
別の態様において、本発明は、移植、化学治療、放射線治療または骨髄除去、骨髄抑圧性治療または骨髄障害性治療の後の骨髄形成不全の期間を少なくするための医薬、化学治療、放射線治療または骨髄除去、骨髄抑圧性治療または骨髄障害性治療の後の日和見感染を予防するかまたは治療するための医薬、または化学治療、放射線治療または骨髄除去、骨髄抑圧性治療または骨髄障害性治療の後の腫瘍の再発の危険を制限するための医薬を製造するための、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の使用に関する。
【０１３５】
さらなる態様において、本発明は、骨髄除去、骨髄抑圧性治療または骨髄障害性治療および／または放射線治療および／または化学治療および／または移植の二次的な作用を予防するかまたは治療するための医薬を製造するための、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の使用に関する。
【０１３６】
さらなる態様において、本発明は、放射線治療および／または化学治療および／または造血幹細胞の移植および／または造血を再生できる細胞の移植および／または骨髄移植および／または骨髄抑圧性治療または骨髄障害性治療のあとの貧血症を予防するかまたは治療するための医薬を製造するための、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の使用に関する。
【０１３７】
さらなる態様において、本発明は、放射線治療および／または化学治療および／または造血幹細胞の移植および／または造血を再生できる細胞の移植および／または骨髄移植および／または骨髄抑圧性治療または骨髄障害性治療のあとの好中球減少症を予防するかまたは治療するための医薬を製造するための、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の使用に関する。
【０１３８】
さらなる態様において、本発明は、放射線治療および／または化学治療および／または造血幹細胞の移植および／または造血を再生できる細胞の移植および／または骨髄移植および／または骨髄抑圧性治療または骨髄障害性治療のあとの血小板減少症を予防するかまたは治療するための医薬を製造するための、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の使用に関する。
【０１３９】
インビボにおいて造血を再生できる細胞は、以下のグループ：ＣＤ３４+細胞、ＣＤ３４+ＣＤ３３+細胞、ＣＤ３４+ＣＤ３８-細胞、ＣＤ３４+Ｔｈｙ−Ｉ細胞、ＣＤ３４+Ｔｈｙ−ＩＣＤ３８−細胞、ＣＤ３３-細胞、幹細胞、始原細胞、長期間培養開始細胞（ＬＴＣ−ＩＣ）、自己再生能力を果たす細胞、多能性特性を果たす細胞、長期間骨髄培養を開始する細胞の一つまたは複数に属してよい。
【０１４０】
上記の本発明の方法または使用において投与される、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の量の測定は、当業者の範囲である。
【０１４１】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の典型的な用量は、１日あたり患者の体重キログラムあたり約１マイクログラムで開始して、所望の効果（造血回復または移植）に達するまで用量を増加することになる。
【０１４２】
投与される、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子の用量は、ドナーの年齢、性別、健康状態および体重、以前または現在の治療の種類、もしあれば治療の頻度および所望の効果の性質に依存する。
【０１４３】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は単独または他の因子と共に投与してよい。
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は、以下のグループ：造血成長因子、サイトカイン、ケモカイン、モノクローナル抗体に属する化合物の間から選択される一つまたはいくつかの化合物をさらに含む組成物または医薬中に存在させることが有利である。
【０１４４】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子および以下のグループ：造血成長因子、サイトカイン、ケモカイン、モノクローナル抗体に属する化合物の間から選択される一つまたはいくつかの化合物は、同時または異なる時におよび／または同じ部位においてまたは異なる部位においておよび／または同じかまたは異なる組成物または医薬中にて投与することが有利である。
【０１４５】
サイトカイングループは、ＩＬ−１，ＩＬ−３，Ｇ−ＣＳＦ，ＧＭ−ＣＳＦまたはＳＣＦを含みうる。ケモカイングループは、ＭＩＰ−１αまたはトロンボポイエチン（ＴＰＯ）を含みうる。モノクローナル抗体グループは、抗−ＶＬＡ−４抗体を含みうる。
【０１４６】
好ましくは、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）を含む組成物または医薬中に存在する。
【０１４７】
好ましくは、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は、Ｇ−ＣＳＦと結合している。
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子およびＧ−ＣＳＦは、同時または異なる時におよび／または同じ部位においてまたは異なる部位においておよび／または同じかまたは異なる組成物または医薬中にて投与することができる。
【０１４８】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子およびＧ−ＣＳＦは、別々に投与することが有利である。
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子および／またはＧ−ＣＳＦは、造血再構成または移植を増強するのに十分な量にて投与される。
【０１４９】
造血再構成または移植を増強するのに十分な量の投与は、造血再構成または移植を増強するのに十分な蓄積量のための、１回または複数回の投与、１日あたり１回または数回および１日または数日間を意味しうる。
【０１５０】
本発明の方法または使用において使用される薬剤組成物または医薬または組成物は、任意に受容可能な担体と組み合わせた薬学上受容可能な形態中にある。
これらの組成物または医薬はそれらの意図される目的を達成するいずれかの手段により投与することができる。
【０１５１】
本発明の方法または使用において使用される組成物または医薬は、単独あるいは疾患に向けられた他の治療剤またはその他の兆候に向けられた他の治療剤と共に投与してよい。
【０１５２】
本発明の方法または使用において使用される組成物または医薬は、静脈内経路または皮下経路により投与してよい。
本発明の方法または使用において使用される組成物または医薬は、非経口経路、例えば皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、または経皮経路によりあるいは経粘膜経路、例えば頬内または口内経路により投与してよい。
【０１５３】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物または医薬は、非経口経路、例えば皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、または経皮経路によりあるいは経粘膜経路、例えば頬内または口内経路により投与してよい。
【０１５４】
好ましくは、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は皮下投与される。
本発明の各治療、方法または使用に必要な全用量または全量は、複数用量または単一用量にて投与される。
【０１５５】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物または医薬は、毎日または日に３回投与してよい。
好ましくは、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物または医薬は、日に３回投与する。
【０１５６】
好ましくは、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は、毎日または日に３回投与してよい。
好ましい態様において、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は、日に３回投与する。
【０１５７】
本発明の方法または使用が、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子およびＧ−ＣＳＦを含むなら、Ｇ−ＣＳＦは日に１回および／または皮下投与することが好ましい。
【０１５８】
本発明の方法または使用が、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子およびＧ−ＣＳＦを含むなら、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は日に３回投与することが好ましく、そしてＧ−ＣＳＦは毎日投与することが好ましい。
【０１５９】
上記医薬の投与は、白血球除去血輸血までまたは完全な回復まで、３日の期間にわたりずっと行ってよい。
上記医薬の投与は、移植後１日から３日行ってよい。
【０１６０】
用語「移植（transplantation）」は、骨髄移植または造血幹細胞移植を包含する。
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物または医薬は、毎日投与してよく、白血球除去血輸血に先立ち最大２０日までの間に開始できる。
【０１６１】
成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物は、所望の効果（造血回復または移植）に達するまでの５日間または１０日間にわたり投与してよい。
【０１６２】
好ましくは、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子を含む組成物は、所望の効果（造血回復または移植）に達するまで投与してよい。
【０１６３】
本発明の方法および使用は、化学治療、放射線治療、骨髄抑圧性治療、インビボにおいて造血を再生できる細胞の移植（transplantation）または移植（engraftment）または骨髄の移植の後に実施してよい。
【０１６４】
本発明の方法および使用は、化学治療処置の開始約７日後または化学治療処置終了約２日後に実施することが有利である。
好ましい態様において、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子およびＧ−ＣＳＦは、造血または移植まで投与する。この好ましい態様において、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は日に３回投与することが好ましく、そしてＧ−ＣＳＦは日に１回投与することが好ましい。
【０１６５】
上記医薬において使用される成長ホルモンは、組換え成長ホルモンであることが有利である。
上記医薬において使用される成長ホルモンは、ヒト成長ホルモンであることが有利である。
【０１６６】
第３の部分において、本発明は、本発明の第１の部分の方法および使用（動員）と本発明の第２の部分の方法および使用（回復）の組み合わせを提供する。
上記組み合わせの方法および使用は、ドナーとレシピエントが同じ人物または個体である、造血幹細胞の自己移植の場合に適用してよい動員方法および回復方法である。即ち、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子は、血液細胞抽出の観点から前処理である第１の動員工程において動員剤として、および移植後の第２工程において造血回復剤として使用することができる。
【０１６７】
上記組み合わせの方法および使用は極めて有用である。事実、成長ホルモンまたはその誘導体の一つまたは成長ホルモンの放出を誘導するいずれかの因子により動員された細胞の患者への移植は、この患者の前動員処置なしの移植よりも早い造血回復をもたらす。
【０１６８】
本発明の方法および使用は、多くの臨床上重要な分野、即ち自己骨髄移植、同種異系骨髄移植、遺伝子治療、造血幹細胞移植、インビボにおいて造血を再生できる細胞の移植、放射線治療、化学治療、骨髄抑圧性治療または骨髄障害性治療において適用することができる。
【０１６９】
本発明の方法および使用は放射線治療または化学治療を受けた患者、骨髄あるいはインビボにおいて造血を再生できる細胞を移植された患者または骨髄障害性治療あるいは骨髄除去治療を受けた患者を治療するのに応用することができる。実施例
略語および注意：
−  ＢＦＵ−Ｅ：バースト形成ユニット、赤血球
−  ＣＦＵ−Ｃ：コロニー形成ユニット、培養
−  ＣＦＵ−ＧＭ：コロニー形成ユニット、顆粒球およびマクロファージ
−  ＣＦＵ−Ｍｅｇ：コロニー形成ユニット、巨核球
−  Ｇ−ＣＳＦ：顆粒球刺激因子
−  ＩＧＦ−Ｉ：インスリン成長因子Ｉ
−  ＬＴＣ−ＩＣ：長期間培養開始細胞
−  ＨＧＨ：ヒト成長ホルモン
−  Ｒｈｇ−ＣＳＦ：組換えヒト顆粒球コロニー刺激因子
−  ＲｈＧＨ：組換えヒト成長ホルモン。
実施例１：マウス前臨床モデルにおいて研究されたｈＧＨの動員活性
ＢＡＬＢ／ｃマウスに全部で１０日間毎日１０μＬのｒｈＧＨを静脈内注射する、それぞれ５日目および１０日目の末梢血中に循環する全ＣＦＵ−ＣまたはＢＦＵ−Ｅ活性をインビトロ培養技術における標準法に従い測定し、そして
（ｉ）定常状態の前処理レベル、
（ｉｉ）連続５日間毎日１０μＬにて静脈投与されたｒｈＧ−ＣＳＦ処理後、それぞれ３日目および５日目の絶対ＣＦＵ−ＣおよびＢＦＵ−Ｅのカウント
と比較する。
実施例２：動員と回復の臨床研究に関する選択の基準
Ａ）包有基準：
−筆記されたインフォームドコンセント
−年齢１８歳および６０歳
−現在のＩＮＴガイドラインに従い高い用量の化学治療を受ける、組織学上確認された高い危険度の癌（リンパ腫癌）。
Ｂ）排除基準：
−化学治療および／または放射線治療の化学治療コースで強く前処理された患者−腎臓（クレアチン＞１．５Ｎ）または肝臓の機能不全および／またはＳＧＰＴ＞２．５Ｎ；ビリルビン＞１．５、または重度のＣＮＳまたは精神医学疾患。
−臨床上有意な心臓疾患または心筋疾患。エコー心臓グラフ評価による＜５０％休息またはアイソトニック測定による＜５５％のの左心室噴出画分。
−Ｂ型またはＣ型肝炎、あるいはＨＩＶ試験陽性。
実施例３：動員および回復臨床研究に関する基底研究手法
動員および回復臨床研究の間、いくつかのパラメーターを研究する：
−完全な病歴、生理学試験、心臓試験、マルチゲートによるシンチグラフスキャンまたはエコーグラフ、胸部Ｘ線による左心室噴出画分（ＬＶＥＦ）
−妊娠試験（もし適用可能なら）
−ＨＢＶ，ＨＣＶおよびＨＩＶ試験
−微分による全血液カウント
−循環するＣＤ３４+細胞とＣＦＵの絶対数
−血液化学（トランスアミナーゼ、血清ホスファターゼ、ガンマＧＴ、ＬＤＨ，全ビリルビン、ＢＵＮ，クレアチン、グリセミア、Ｎａ，Ｋ，Ｃａ，Ｐ，尿酸、全蛋白質、アルブミン、コレステロールトリグリセリド）
−両側骨髄生検
−インフォームドコンセント。
実施例４：動員および回復の臨床研究に関する障害性の主要なパラメーター
−腫瘍成長（動員研究のみ）
−臨床上および機器上の兆候
−心臓、肝臓および腎臓の機能に関する実験室試験。
実施例５：動員の臨床研究
Ａ）動員の臨床研究の目的
−（ｉ）循環するＣＤ３４+細胞を増加させること、および
（ｉｉ）骨髄造血区画を拡張することにより続くｒｈＧ−ＣＳＦ投与による増強された動員を可能にすることにおけるｒｈＧＨの活性を評価するため
−化学治療後の癌患者にｒｈＧ−ＣＳＦを与えてｒｈＧＨの安全性および寛容性を評価するため（造血回復研究）。
ｂ）治療プラン
ｒｈＧＨを用いた動員研究：
−ｒｈＧＨを静脈内経路により１日から１０日間投与する。ｒｈＧＨの用量は、１日当たり患者の体重キログラムあたり１マイクログラムから開始して、所望の効果（インビボにおいて造血を再生できる循環細胞の動員または末梢化、インビボにおいて造血を再生できる循環細胞の数のドナーにおける増加、移植のための十分な量の循環細胞の回収に必要な白血球除去血輸血の数の減少、インビボにおいて造血を再生できる循環細胞の指定された目的数を得るために加工されることが必要な血液の体積の減少）に達するまで用量を上昇させる。（ｘｘμｇ／ｋｇ  ＱＤ，ｉｖ）
ｒｈＧＨおよびｒｈＧ−ＣＳＦを用いた動員の研究：
−ｒｈＧＨ投与：ｒｈＧＨを静脈内経路により１日から５日間投与する。ｒｈＧＨの用量は、１日当たり患者の体重キログラムあたり１マイクログラムから開始して、所望の効果（インビボにおいて造血を再生できる循環細胞の動員または末梢化、インビボにおいて造血を再生できる循環細胞の数のドナーにおける増加、移植のための十分な量の循環細胞の回収に必要な白血球除去血輸血の数の減少、インビボにおいて造血を再生できる循環細胞の指定された目的数を得るために加工されることが必要な血液の体積の減少）に達するまで用量を上昇させる。
−ＣＤ３４+細胞収穫の完了（標的細胞用量は８Ｘ１０ｅ6ＣＤ３４+細胞／ｋｇ体重である）からｒｈＧ−ＣＳＦ投与（１０μｇ／ｋｇ  ＱＤ，ｉｖ）
Ｃ）活性の主要なパラメーター
＋６日から開始して、以下のパラメーターを評価する：
−絶対ＣＤ３４+細胞カウント／μＬ（末梢において毎日および白血球除去血輸血された細胞内において１回）
−絶対ＣＦＵ−ＧＭ細胞カウント／μＬ（末梢において毎日および白血球除去血輸血された細胞内において１回）
Ｄ）研究手法
−＋５日から白血球除去血輸血までのＣＤ３４+細胞／μＬおよびＣＦＵ−ＧＭ末梢血濃度毎日の評価。
−白血球除去血輸血された細胞におけるＣＤ３４+細胞、ＣＦＵ−ＧＭ，ＢＦＵ−Ｅ，ＣＦＵ  ＩＣの全収量。
−臨床および実験を通しての障害性の評価（ＥＫＧ，胸部Ｘ線、および必要に応じて他の実験）。
−動員研究を終了させる全腫瘍パラメーターの測定と評価。
実施例６：回復の臨床研究
Ａ）回復の臨床研究の目的
−高い用量の化学治療および末梢血幹細胞自己移植で処置された癌患者の末梢血中のＷＢＣ，ＲＢＣおよび血小板の回復を促進することにおける単独であるいは組み合わせて与えられたｒｈＧＨの能力の評価。
−化学治療後の癌患者にｒｈＧ−ＣＳＦを与えた、ｒｈＧＨの安全性および寛容性の評価。
Ｂ）治療プラン
−高い用量の化学治療の投与、続く動員研究において収穫された低温保存細胞の最適量（即ち、８Ｘ１０ｅ6ＣＤ３４+細胞／ｋｇ）の０日目の注入。
−１日目から、１０００μＬ以上の顆粒球カウント、および５０，０００／μＬ以上の血小板カウントの安定な（即ち、３日連続）回復までのｒｈＧＨおよびｒｈＧ−ＣＳＦ（μｇ／ｋｇ  ＱＤ，ｉｖ）の同時投与（ｉｖ）。
Ｃ）活性の主要なパラメーター
＋０日目から開始して、完全かつ安定な回復まで、以下のパラメーターを評価する：
−絶対顆粒球カウント／μＬ（毎日）
−絶対血小板カウント／μＬ（毎日）
−絶対赤血球カウント／μＬ（毎日）
−顆粒球最下点
−血小板最下点
−好中球減少症の程度および期間
−血小板減少症の程度および期間
−造血支持細胞輸血、ＲＢＣ輸血
−感染予防の期間、および感染
−出血。
Ｄ）研究手法
−ＷＢＣ，ＲＢＣおよび血小板カウントの毎日の評価
−血小板輸血の数
−ＲＢＣ輸血の数
−発熱および証明された感染の種類と重度
−障害性造血の臨床上および機器上の評価。
実施例７：動員の臨床研究の結果
Ｉ  −  ２サイクルの化学治療内の動員の研究
Ａ）再発したホジキン病を有する３人の患者に以下の２サイクルの治療を施した：
・サイクル１（対照サイクル）：
−イフォスファミド（化学治療剤）：３ｇ／ｍ2  ｉｖ（静脈内）（１日１回）、１−４日；
−ビノレルビン（化学治療剤）：２５ｍｇ／ｍ2  ｉｖ（静脈内）（１日１回）、１日目および５日目；
−Ｇ−ＣＳＦ：５μｇ／ｋｇ  ｓｃ（皮下）（１日１回）７日から白血球除去血輸血までまたはＣＤ３４+細胞の十分な数の回復まで（約３から８−１０6細胞／ｋｇ）。
・サイクル２：
−イフォスファミド：３ｇ／ｍ2  ｉｖ（静脈内）（１日１回）、１−４日；
−ビノレルビン：２５ｍｇ／ｍ2  ｉｖ（静脈内）（１日１回）、１日目および５日目；
−Ｇ−ＣＳＦ：５μｇ／ｋｇ  ｓｃ（１日１回）７日からＣＤ３４+細胞の十分な数の回復まで（約３から８−１０6細胞／ｋｇ）または白血球除去血輸血まで。
−ｒｈＧＨ（組換えヒト成長ホルモン）：３３μｇ／ｋｇ  ｓｃ（１日３回）７日からＣＤ３４+細胞の十分な数の回復まで（約３から８−１０6細胞／ｋｇ）または白血球除去血輸血まで。
Ｂ）結果
結果は図１の表中に描写される。
【０１７０】
インスリン投与を要求する高血糖症を除いて障害性は観察されなかった。
対照（サイクル１）と比較すると、サイクル２におけるｒｈＧＨの添加は以下：
１）血流中のＣＤ３４+細胞の動員の２倍または３倍化
２）白血球除去血輸血されたＣＤ３４+細胞の回復またはＣＤ３４+白血球除去血輸血された細胞の数の増加
をもたらした。
【０１７１】
ＧＨにより誘導された、ＣＤ３４+白血球除去血輸血された細胞の数の増加は、自己移植に関して十分な量のＣＤ３４+細胞の３人すべての患者からの収穫を可能にする（約３から８−１０6細胞／ｋｇ）。
ＩＩ  −  ３サイクルの化学治療内の動員の研究
Ａ）再発したホジキン病を有する１人の患者に以下の３サイクルの治療を施した：
・サイクル１：
−イフォスファミド（化学治療剤）：３ｇ／ｍ2  ｉｖ（静脈内）（１日１回）、１−４日；
−ビノレルビン（化学治療剤）：２５ｍｇ／ｍ2  ｉｖ（静脈内）（１日１回）、１日目および５日目；
−Ｇ−ＣＳＦ：５μｇ／ｋｇ  ｓｃ（皮下）（１日１回）７日から白血球除去血輸血までまたはＣＤ３４+細胞の十分な数の回復まで（約３から８−１０6細胞／ｋｇ）。
・サイクル２：
−イフォスファミド：３ｇ／ｍ2  ｉｖ（１日１回）、１−４日；
−ビノレルビン：２５ｍｇ／ｍ2  ｉｖ（１日１回）、１日目および５日目；
−Ｇ−ＣＳＦ：５μｇ／ｋｇ  ｓｃ（１日１回）７日からＣＤ３４+細胞の十分な数の回復まで（約３から８−１０6細胞／ｋｇ）または白血球除去血輸血まで。
−ｒｈＧＨ（組換えヒト成長ホルモン）：３３μｇ／ｋｇ  ｓｃ（１日３回）７日からＣＤ３４+細胞の十分な数の回復まで（約３から８−１０6細胞／ｋｇ）または白血球除去血輸血まで。
・サイクル３：
−イフォスファミド（化学治療剤）：３ｇ／ｍ2  ｉｖ（静脈内）（１日１回）、１−４日；
−ビノレルビン（化学治療剤）：２５ｍｇ／ｍ2  ｉｖ（静脈内）（１日１回）、１日目および５日目；
−Ｇ−ＣＳＦ：５μｇ／ｋｇ  ｓｃ（皮下）（１日１回）７日から白血球除去血輸血までまたはＣＤ３４+細胞の十分な数の回復まで（約３から８−１０6細胞／ｋｇ）。
Ｂ）結果
セクションＡにおいて列挙された臨床治療の結果は、図２のグラフに描写される。
【０１７２】
図２のグラフは、２１日ごとに開始する３日連続の化学治療後のＣＤ３４+細胞動員の時間経過を示す。
図２のグラフにおいて描写された各点は１ミリリットルの血液のサンプル中に見いだされるＣＤ３４+細胞／血液μｌの数の測定値に相当する。
【０１７３】
結果は、サイクル２（ｒｈＧＨの添加）がサイクル１および３よりも優れていることを明確に示す。即ち、血液中のＣＤ３４+細胞の動員はｒｈＧＨの添加により増強される。
【０１７４】
ＧＨによる血液中のＣＤ３４+細胞の動員の増強は、特に研究された患者がいくつかのコースの骨髄障害性化学治療を受けていたこと、そして次の各コースが動員の程度を邪魔するからである。連続した骨髄障害性化学治療および動員サイクルの後の循環するＣＤ３４+細胞の数の低下が、サイクル１およびサイクル３に比較して観察することができる。
【０１７５】
ＣＤ３４+細胞数／測定された血液のμｌが最大のとき（サイクル１の１３日目；サイクル２の２０日目）、上記患者の血液は白血球除去血輸血される。白血球除去血輸血された細胞は低温保存されて、骨髄除去治療後の患者に再注入されることになる。
【０１７６】
【表１】
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【０１７７】
【表２】
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【０１７８】
【表３】
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【０１７９】
【表４】
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【０１８０】
【表５】
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【０１８１】
【表６】
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【図面の簡単な説明】
【図１】  略語：
ＧＨ：成長ホルモン
Ｇ−ＣＳＦ：顆粒球−細胞刺激因子
ＮＤ：検出不可能。
【図２】  このグラフは、Ｇ−ＣＳＦのみ（サイクル１）、ＧＨ＋Ｇ−ＣＳＦ（サイクル２）およびＧ−ＣＳＦ（サイクル３）を用いた動員処置後の３サイクルの化学治療の間に患者において得られたＣＤ３４+細胞／血液のμｌを描写する。
【図１】
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【図２】
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