(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
マツ科マツ属（Pinus）ニ葉松類の樹皮の溶媒抽出物を有効成分とすることを特徴とするゼラチナーゼ群、及びストロメライシン群に属するマトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害剤。
【請求項２】
ニ葉松類が、アカマツ、クロマツ、リュウキュウアカマツ、タイワンアカマツ、カシヤマツ、ヨーロッパアカマツ、ダイオウショウ、フランスカイガンショウ、リギダマツ、ラジアータマツ、カサマツの1種又は2種以上である請求項１のマトリックスメタロプロテアーゼ（ただし、コラゲナーゼ及びエラスターゼを除く。）活性阻害剤。
【請求項３】
マトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害剤が、ラミニンの分解抑制剤である、請求項１又は２のいずれか１項に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害剤。
【請求項４】
マトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害剤が、プロテオグリカンの分解抑制剤である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ）活性阻害剤及び皮膚弾力性維持化粧料に関する。さらに詳しくは、皮膚の弾力性、たるみに大きな影響を与える特定のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ）の活性に対して優れた拮抗作用を有し、皮膚の若々しさを保つことのできるマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ）活性阻害剤及び皮膚弾力性保持化粧料に関する。本発明は、基礎化粧品をはじめ、メークアップ化粧品、頭髪化粧品、浴剤などに好適に使用し得るものである。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚の真皮は結合組織からなり、表皮と接する部分は凹凸を呈している。より深部の真皮は、網状層と呼ばれ、細胞が密に詰まっておらず細胞外空間が多く細胞外マトリックスと呼ばれる巨大分子の網目構造によって満たされている。細胞外マトリックスは、Ｉ型、III型、Ｖ型、ＶI型コラーゲン、エラスチン、プロテオグリカン、フィブロネクチンなどが複雑に絡み合って構成されている。真皮は、これらの構成により、皮膚の弾力や張りなどに大きな影響を与えている。一方、表皮基底膜も一種の細胞外マトリックスとみなされ、4つの構成部分から成り立っている。Attachment plaque、透明層、緻密層、sub-lamina densa fibrilar zoneと呼ばれる構成部分である。これらは、IＶ型コラーゲン、ラミニン、リンキン、ナイドジェンなどが結合して構成されている。皮膚基底膜も皮膚真皮同様に皮膚の弾力性の維持に関与している。
【０００３】
近年細胞外マトリックスに関する研究が進み、細胞外マトリックスを特異的に分解し、組織の構造や恒常性の維持に重要な役割を果たすと考えられるさまざまのマトリキシンファミリーのマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ）が精製されてきた。これらマトリックスメタロプロテアーゼのなかのコラゲナーゼ群としては、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１８が精製されている。ＭＭＰ−１は、繊維状コラーゲンＩ、II、III、IＶ、Ｖを基質とする。ＭＭＰ−８は、繊維状コラーゲンＩ、II、IIIを基質とする。ストロメライシン群としては、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ゼラチナーゼ群としては、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９が精製されている。ＭＭＰ−３は、プロテオグリカン、フィブロネクチン、ラミニン、コラーゲンIII、IＶ、Ｖ、IＸを基質とし、ＭＭＰ−７は、プロテオグリカン、フィブロネクチン、ゼラチンproＭＭＰ−１を基質とし、ＭＭＰ−２は、コラーゲンIＶ、Ｖ、ＶII、Ｘを基質とし、ＭＭＰ−９は、コラーゲンIＶ、Ｖ、ゼラチンを基質としている。
【０００４】
皮膚の基底膜や真皮を構成する細胞外マトリックスの構成成分の分解を抑制することは、皮膚に弾力性やハリを与え、皮膚の老化防止に重要である。現在まで、これら皮膚老化を予防する目的でいくつかのＭＭＰ−ｓ阻害剤が開発されてきた（特開２０００−１５４１３１、特開２０００−１５９６３１、特開２０００−２５６１２２、特開２０００−３１９１５５、特開２００１−１３９４６６、特開２００１−１９２３１６、特開２００１−１９２３１７）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、これまでの皮膚組織におけるマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は、効果は必ずしも十分でなく製品への配合では、有効な結果を得るに至っていない。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の課題を解決するために広く種々の物質についてそれぞれのマトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害作用を検討した結果、マツ科マツ属ニ葉松類であるアカマツ、クロマツ、リュウキュウアカマツ、タイワンアカマツ、カシヤマツ、ヨーロッパアカマツ、ダイオウショウ、フランスカイガンショウ、リギダマツ、ラジアータマツ、カサマツの溶媒抽物に優れたマトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害作用があることを見出し、本発明を完成するに至った。本発明は、皮膚の弾力性の保持に大きな影響を与えるマトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害効果を有し、皮膚安全性を保ちながら、皮膚の弾力性保持に有効である化粧料を提供するものである。
本願発明は下記の請求項１〜請求項５により構成されている。
請求項１：マツ科マツ属（Pinus）ニ葉松類の樹皮の溶媒抽出物を有効成分とすることを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ（ただし、コラゲナーゼ及びエラスターゼを除く。）活性阻害剤。
請求項２：ニ葉松類が、アカマツ、クロマツ、リュウキュウアカマツ、タイワンアカマツ、カシヤマツ、ヨーロッパアカマツ、ダイオウショウ、フランスカイガンショウ、リギダマツ、ラジアータマツ、カサマツの1種又は2種以上である請求項１のマトリックスメタロプロテアーゼ（ただし、コラゲナーゼ及びエラスターゼを除く。）活性阻害剤。
請求項３：マトリックスメタロプロテアーゼが、ゼラチナーゼ群、ストロメライシン群に属する酵素の中から選ばれる１種又は２種以上である、請求項１又は２記載のマトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害剤。
請求項４：マトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害剤が、ラミニンの分解抑制剤である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害剤。
請求項５：マトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害剤が、プロテオグリカンの分解抑制剤である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害剤。
【０００７】
本発明で用いられるマツ科マツ属ニ葉松類とは、マツ属のなかで、針葉の維管束が２個の複数維管束類のことである。
【０００８】
マツ属の植物についてのこれまで検討されたものとしては、アカマツのテストステロン−５α−レダクダーゼ阻害作用（特開平７−２７８００３）、保湿剤としてのマツ抽出物（特開２０００−２２９８２７）、体臭の脱臭活性としてのマツ属植物抽出物（特開２０００−２４７８５３）、保湿性植物抽出物の組み合わせ配合としてのマツ抽出物（特開２００１−３１５２１）、マツ抽出物のテストステロン−５α−レダクダーゼ阻害作用（特開２００１−１３１０２６）、マツ属由来のプロトアントシアニジンの安定化（特開２００１−１５８７３９）などがある。フランスカイガンショウ（海岸松）に関しては、数々の検討がされてきた（特開平１１−７５７７０、特開２０００−２２９８３４、特開２００１−１９９８６８）。また、「ピクノジェノールの癒し」（旭岡光志，ＤＨＣ，１９９９年１０月２０日発行）があり、経口投与での研究成果をまとめている。しかしながら、マトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害とマツ属植物に関する検討は、これまで全くなされていない。
【０００９】
本発明で用いられるアカマツとは、学名Pinus densiflora Sieb. et Zucc.で日本の代表的な二葉松である。クロマツとは、学名Pinus thunbergii Parl.で海岸に多い二葉松である。リュウキュウアカマツとは、学名 Pinus luchuensis Maryrでアカマツに似た二葉松で、琉球諸島、南西諸島に分布する。タイワンアカマツは、学名 Pinus massoniana Lamb.で中国東部、台湾、ベトナムに分布する。カシヤマツとは、学名 Pinus khasya Royle ex Gordonでインド東部、インドシナ、フィリピンに分布する。ヨーロッパアカマツとは、学名 Pinus sylvestris L.でヨーロッパ中部及び北部に分布する。ダイオウショウとは、学名 Pinus palustris Mill.で米国南東部に分布する。フランスカイガンショウとは、学名 Pinus pinaster Ait.でフランス南西部から西地中海沿海地に分布する。リギダマツとは、学名Pinus rigida Mill.で北米南東部に分布する。ラジアータマツとは、学名 Pinus radiata D.Donでカリフォルニアに分布する。カサマツとは、学名 Pinus pinea L.で地中海北岸地方に分布する。これらマツは上記分布地の他、各地で栽培も行なわれている。
【００１０】
本発明で用いられる抽出物の調製方法は特に限定されないが、例えば種々の溶媒を用い、低温から加温下において抽出する方法があげられる。具体的に抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール等の低級一価アルコール、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール、酢酸エチル等の低級アルキルエステルが例示され、これらの一種又は二種以上の混合溶媒を用いることができる。
【００１１】
本発明で使用する抽出物は、そのまま用いてもよいが、必要に応じてろ過、濃縮してもよい。また、抽出物を吸着法、カラムクロマト法、向流分配法等により、分画、精製して用いることもできる。更に、上記のものを減圧乾燥又は凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製し、適宜製剤化して用いることもできる。以下抽出物製造例を示すが、製造方法はこれらに限定されるものではない。
【００１２】
（抽出物製造例１）
アカマツの乾燥樹皮１００ｇに５０vol％エタノール溶液１０００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出し、冷後、ろ過してアカマツ抽出物を製した。製品の蒸発残留物は、１．６３％であった。
【００１３】
（抽出物製造例２）
クロマツの乾燥樹皮２００ｇに５０vol％エタノール溶液２０００ｇを加え、６０℃にて８時間攪拌抽出を行い、冷後ろ過した後、濃縮し、合成吸着体ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学製）1Ｌを充填したカラムに通液した。水洗後、５０vol％エタノール溶液にて溶出し、溶出液を減圧乾固後、３０％エタノール溶液３００ｇに溶解し、クロマツ抽出物を製した。製品の蒸発残留物は、２．３８％であった。
【００１４】
（抽出物製造例３）
リュウキュウアカマツの乾燥樹皮１００ｇに５０vol％エタノール溶液１０００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出し、冷後、ろ過してリュウキュウアカマツ抽出物を製した。製品の蒸発残留物は、１．７８％であった。
【００１５】
（抽出物製造例４）
タイワンアカマツの乾燥樹皮１００ｇに５０％１，３−ブチレングリコール溶液１０００ｇを加え、６０℃にて1０時間抽出し、冷後、ろ過してタイワンアカマツ抽出物を製した。製品の蒸発残留物は、１．５９％であった。
【００１６】
（抽出物製造例５）
カシヤマツの乾燥樹皮２００ｇに５０vol％エタノール溶液２０００ｇを加え、６０℃にて８時間攪拌抽出を行い、冷後ろ過した後、濃縮し、合成吸着体ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学製）1Ｌを充填したカラムに通液した。水洗後、５０vol％エタノール溶液にて溶出し、溶出液を減圧乾固後、３０％エタノール溶液３００ｇに溶解し、カシヤマツ抽出物を製した。製品の蒸発残留物は、２．５７％であった。
【００１７】
（抽出物製造例６）
ヨーロッパアカマツの乾燥樹皮２００ｇに５０vol％エタノール溶液２０００ｇを加え、６０℃にて８時間攪拌抽出を行い、冷後ろ過した後、濃縮し、合成吸着体ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学製）1Ｌを充填したカラムに通液した。水洗後、５０vol％エタノール溶液にて溶出し、溶出液を減圧乾固後、３０vol％エタノール溶液３００ｇに溶解し、ヨーロッパアカマツ抽出物を製した。製品の蒸発残留物は、２．６６％であった。
【００１８】
（抽出物製造例７）
ダイオウショウの乾燥樹皮１００ｇに５０％１，３−ブチレングリコール溶液１０００ｇを加え、６０℃にて1０時間抽出し、冷後、ろ過してダイオウショウ抽出物を製した。製品の蒸発残留物は、１．３７％であった。
【００１９】
（抽出物製造例８）
フランスカイガンショウの乾燥樹皮５０ｋｇに３０vol％エタノール１０００ｋｇを加え、室温で５日間抽出した。これをろ過した後、約１００Ｌまで濃縮し、合成吸着体ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学製）１００Ｌを充填したカラムに通液した。水洗後、さらに１０vol％エタノール溶液にて洗浄し、５０vol％エタノール溶液にて溶出した。溶出液を減圧乾固し、４５３ｇの乾固物を得た。乾固物を２５vol％エタノール溶液に溶解し、２５vol％エタノール溶液で平衡化したセファデックスＬＨ−２０（ファルマシア製）２０Ｌを充填したカラムに通液した後、２５vol％エタノール溶液で洗浄した。さらに、４０vol％エタノール溶液で洗浄後、７５vol％エタノール溶液で溶出し、溶出液を濃縮乾固し９１．３ｇの乾固物を製した。
【００２０】
（抽出物製造例９）
リギダマツの乾燥樹皮１００ｇに５０vol％エタノール溶液１０００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出し、冷後、ろ過してリギダマツ抽出物を製した。製品の蒸発残留物は、１．５８％であった。
【００２１】
（抽出物製造例１０）
ラジアータマツの乾燥樹皮２００ｇに３０vol％エタノール溶液２０００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出した。これをろ過し、ろ液を減圧下、濃縮乾固した。乾固物を５０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇに溶解した後、ろ過してラジアータマツ抽出物を製した。製品の蒸発残留物は、２.３２％であった。
【００２２】
（抽出物製造例１１）
カサマツ２００ｇに５０vol％エタノール溶液２０００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出した。冷後ろ過した後、濃縮し、合成吸着体ダイヤイオンＨＰ−２０を充填したカラムに通液した。水洗後、５０vol％エタノール溶液にて溶出し、溶出液を減圧乾固後、５０％１，３−ブチレングリコール溶液３００ｇに溶解し、カサマツ抽出物を製した。製品の蒸発残留物は、２．１７％であった。
【００２３】
本発明においてアカマツ、クロマツ、リュウキュウアカマツ、タイワンアカマツ、カシヤマツ、ヨーロッパアカマツ、ダイオウショウ、フランスカイガンショウ、リギダマツ、ラジアータマツ、カサマツの1種又は2種以上の抽出物を用いることにより、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ）中、コラゲナーゼ群、ゼラチナーゼ群、ストロメライシン群に属するいずれのマトリッスメタロプロテアーゼに対しても拮抗作用を有する阻害剤を得ることができた。
【００２４】
コラゲナーゼ群に属するマトリックスメタロプロテアーゼの活性阻害剤としては、コラーゲン分解抑制剤としての適用が例示される。
【００２５】
ゼラチナーゼ群に属するマトリックスメタロプロテアーゼの活性阻害剤としては、ラミニンの分解抑制、基底膜を構成するIＶ型コラーゲンの分解抑制剤としての適用が例示される。
【００２６】
ストロメライシン群に属するマトリックスメタロプロテアーゼの活性阻害剤としては、プロテオグリカン分解抑制剤、ラミニン分解抑制剤としての適用が例示される。
【００２７】
また、これらはシワの予防・改善を目的とした抗シワ剤としての適用も可能である。
【００２８】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ）活性阻害剤は、皮膚弾力性保持化粧料として用いることを好適とし、その場合、アカマツ、クロマツ、リュウキュウアカマツ、タイワンアカマツ、カシヤマツ、ヨーロッパアカマツ、ダイオウショウ、フランスカイガンショウ、リギダマツ、ラジアータマツ、カサマツの1種又は2種以上の抽出物の配合量は、化粧品全量中、乾燥エキス重量として０．００００１〜１０重量％、好ましくは０．０００１％〜５重量％である。０．００００１重量％未満では、本発明の効果が十分に発揮され難く、１０重量％を超えて配合した場合、製剤化が難しくなり、安定性、安全性の面から好ましくない。
【００２９】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ）活性阻害剤を、例えば皮膚弾性保持化粧料に用いる場合、有効成分であるアカマツ、クロマツ、リュウキュウアカマツ、タイワンアカマツ、カシヤマツ、ヨーロッパアカマツ、ダイオウショウ、フランスカイガンショウ、リギダマツ、ラジアータマツ、カサマツの1種又は2種以上の抽出物に加えて、本発明の効果を損なわない範囲で、通常化粧品、医薬部外品、医薬品等の外用剤に用いられる他の成分を必要に応じて適宜配合することができる。具体例を示すと次のとおりである。
【００３０】
界面活性剤としては、石けん用素地、脂肪酸石けん、高級アルキル硫酸エステル、アルキルエーテル硫酸エステル塩、N−アシルサルコシン酸、高級脂肪酸アミドスルホン酸塩、リン酸エステル塩、スルホコハク酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、Ｎ−アシルグルタミン酸塩、高級脂肪酸エステル硫酸エステル塩、硫酸化油、ＰＯＥアルキルエーテルカルボン酸塩、ＰＯＥアルキルアリルエーテルカルボン酸塩、α−オレフィンスルホン酸塩、高級脂肪酸エステルスルホン酸塩、二級アルコール硫酸エステル塩、高級脂肪酸アルキロールアミド硫酸エステル塩、ラウロイルモノエタノールアミドコハク酸塩、Ｎ−パルミトイルアスパラギン酸ジトリエタノールアミン、カゼインナトリウム等のアニオン界面活性剤。アルキルトリメチルアンモニウム塩、ジアルキルジメチルアンモニウム塩、アルキルピリジウム塩、アルキル四級アンモニウム塩、アルキルジメチルベンジルアンモニウム塩、アルキルイソキノニウム塩、ジアルキルモルホニウム塩、ＰＯＥアルキルアミン、アルキルアミン塩、ポリアミン脂肪酸誘導体、アミルアルコール脂肪酸誘導体、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム等のカチオン界面活性剤。
イミダゾリン系界面活性剤、ベタイン系界面活性剤等の両性界面活性剤。ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体等の親油性非イオン界面活性剤。ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル、ＰＯＥ脂肪酸エステル、ＰＯＥアルキルエーテル、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル、テトラＰＯＥ・テトラＰＯＰエチレンジアミン縮合物、ＰＯＥ硬化ヒマシ油誘導体、ＰＯＥミツロウ・ラノリン誘導体、アルカノールアミド、ＰＯＥプロピレングリコール脂肪酸エステル、ＰＯＥアルキルアミン、ＰＯＥ脂肪酸アミド、ショ糖脂肪酸エステル等の親水性非イオン界面活性剤が挙げられる。
【００３１】
油類としては、アボカド油、オリーブ油、ゴマ油、ツバキ油、月見草油、タートル油、マカデミアンナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、ナタネ油、卵黄油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、キリ油、ホホバ油、カカオ脂、ヤシ油、馬油、パーム油、パーム核油、牛脂、羊脂、豚脂、ラノリン、鯨ロウ、ミツロウ、カルナウバロウ、モクロウ、キャンデリラロウ、スクワラン等の動植物油及びその硬化油。流動パラフィン、ワセリン等の鉱物油。トリパルミチン酸グリセリン等の合成トリグリセリンがある。
【００３２】
高級脂肪酸としては、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、イソステアリン酸、ウンデシン酸、トール酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などがある。高級アルコールとしては、例えば、ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、ミリスチルアルコール、オレイルアルコール、セトステアリルアルコール、ホホバアルコール、ラノリンアルコール、バチルアルコール、２−デシルテトラテセシノール、コレステロール、フィトステロール、イソステアリルアルコール等がある。合成エステルとしては、例えば、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ミリスチル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、オレンイ酸デシル、ジメチルオクタン酸、乳酸セチル、乳酸ミリスチル等がある。シリコーンとしては、例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン等の鎖状ポリシロキサン、デカメチルシクロポリシロキサン等の環状ポリシロキサン、シリコーン樹脂等の三次元網目構造のもの等がある。
【００３３】
保湿剤としては、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ヘキシレングリコール、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸、ムコイチン硫酸、アテロコラーゲン、尿素、乳酸ナトリウム、胆汁酸塩、dlピロリドンカルボン酸塩、可溶性コラーゲン、等のほか、各種動植物抽出物、酵母抽出物等がある。
【００３４】
紫外線吸収剤としては、パラアミノ安息香酸、パラアミノ安息香酸誘導体等の安息香酸系紫外線吸収剤、ホモメンチル−Ｎ−アセチルアントラニレート等のアントラニル酸系紫外線吸収剤、アミルサシリレート等のサリチル酸系紫外線吸収剤、オクチルシンナメート等の桂皮酸系紫外線吸収剤、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン等のベンゾフェノン系紫外線吸収剤、４−メチルベンジリデンカンファー、３−ベンジリデンカンファー、２−フェニル−５−メチルベンゾキサゾール等がある。
【００３５】
ビタミン類としては、例えば、ビタミン油、レチノール等のビタミンＡ類、リボフラビン等のビタミンＢ2類、ピリドキシン塩酸塩等のビタミンB6類、Ｌ−アスコルビン酸等のビタミンＣ類、パントテン酸カルシウム等のパントテン酸類、エルゴカルシフェノール等のビタミンＤ類、ニコチン酸アミド等のニコチン酸類、酢酸トコフェノール等のビタミンＥ類、ビタミンＰ、ビオチン等がある。
【００３６】
天然水溶性高分子としては、例えば、アラビアガム、トラガントガム、ガラクタン、グアガム、キャロブガム、カラヤガム、カラギーナン、ペクチン、カンテン、クインスシード、アルゲコロイド、デンプン、キサンタンガム、デキストラン、サクシノグルカン、プルラン、コラーゲン、カゼイン、ヒアルロン酸、アルブミン、ゼラチンなどがある。半合成水溶性高分子としては、例えば、メチルセルロース、ニトロセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等のセルロース系高分子、カルボキシメチルデンプン等のデンプン系高分子、アルギン酸ナトリウム等のアルギン酸系高分子等がある。合成水溶性高分子としては、例えば、ポリビニルアルコール、カルボキシビニルポリマー等のビニル系高分子、ポリエチレングリコール2000等のポリオキシエチレン系高分子、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体等の共重合高分子系、ポリアクリルアミド等のアクリル系高分子、ポリエチレンイミン、カチオンポリマー等がある。
【００３７】
粉末成分としては、例えば、タルク、カオリン、雲母、セリサイト、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、ケイ酸塩、シリカ、硫酸バリウム、焼セッコウ、フッ素アパタイト、セラミックパウダー等の無機粉末、ナイロン粉末、ポリエチレン粉末、ポリスチレン粉末、セルロース粉末等の有機粉末などがある。色素剤としては、二酸化チタン、酸化鉄、カーボンブラック、コバルトバイオレツト等の無機顔料、赤色２０１号、赤色３号、黄色２０５号、黄色４号等の有機顔料、クロロフィル、リボフラビン、β−カロチン等の天然色素、ベニバナ、ウコン等の植物抽出物色素等がある。防腐剤としては、安息香酸塩、サリチル酸塩、ソルビン酸塩、デヒドロ酢酸塩、パラオキシ安息香酸エステル、塩化ベンザルコニウム、ヒノキチオール、レゾルシン、エタノール等がある。酸化防止剤としては、トコフェノール、アスコルビン酸、ブチルヒドロキシアニソール、ジブチルヒドロキシトルエン、没食子酸エステル等がある。キレート剤としては、エチレンジアミン四酢酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、クエン酸等がある。
【００３８】
さらに、抗菌、細胞賦活、保湿、皮脂分泌調整、消炎、収斂、抗酸化、美白、活性酸素抑制、抗アレルギー等の生理活性作用を有する植物抽出物及びこれらの抽出分画、精製物を併用することもできる。また、上記の他、香料、アルコール、水等を適宜配合することができる。
【００３９】
本発明は、その剤型が特に限定されるものではなく、溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水−油二層系、水−油−粉末三層系、軟膏、ゲル、エアゾール等、任意の剤型が適用される。
【００４０】
また、その使用形態も任意であり、例えば化粧水、乳液、クリーム、パック等のフェイシャル化粧品、ファンデーション、メーキャップ化粧料、毛髪化粧料、芳香化粧料、浴用剤等に用いることができるが、これらの例示に限定されるものではない。
【００４１】
実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれら実施例によってなんら限定されるものではない。
【００４２】
（試験例1）マトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害の評価
１．  試料の調製
抽出物製造例に示した１１の抽出物のほか、フランスカイガンショウ抽出物の市販品ピクノジェノール（ホーファー・リサーチ・ラボラトリー社製）を用いた。ピクノジェノールは、フランスカイガンショウ樹皮から抽出精製されたエキス末で、プロアントシアニジン６０％以上、カテキン類7％、有機酸２．５％以上からなる。上記１２種の抽出物のうち、粉末はジメチルスルホキシドにて２重量％になるように溶解した。これら抽出物溶液を希釈用緩衝液（０．４ＭNaCl、１０ｍＭCaCl2を含むｐＨ７．４のトリス緩衝液）で希釈して濃度を調製し、これを試験溶液として用いた。濃度は、抽出物の乾燥エキス換算とし、以下の実験を行なった。
【００４３】
２．  測定法
活性阻害の測定には、ヤガイ中央研究所製のMMP Activity Assay Kit製品のType-Ｉ Collagenase Activity Assay Kit、Type-IＶ Collagenase Activity Assay Kit、Stromelysin Activity Assay Kitを用いた。また、ＭＭＰｓとしては、ヤガイ中央研究所製のヒト皮膚細胞由来の各酵素を用いた。コラゲナーゼ群に属する酵素としてＭＭＰ−１、ゼラチナーゼ群に属する酵素としてＭＭＰ−９、ストロメライシン群に属する酵素としてＭＭＰ−３を用いた。
【００４４】
ＦＩＴＣ蛍光標識したコラーゲン溶液マイクロチューブに、それぞれ氷冷した中和溶液（ＮａＣｌ，ＣａＣｌ2，ＮａＮ3を含む０．１Ｍトリス−塩酸緩衝液、ｐＨ７．５）５０μＬを加えた後、各試験溶液５０μＬ、０．４unit/mLの酵素を含んだ酵素溶液１００μＬ加え攪拌した。各マイクロチューブを３７℃にて３時間インキュベートした後、氷冷した酵素反応停止剤／溶液（ＮａＣｌ，ｏ−フェナントロリンを含む０．０５Ｍトリス−塩酸緩衝液、ｐＨ９．５／エタノール）２００μＬを各マイクロチューブに加え数秒間強く攪拌した。３０分間室温に放置後、２０００ｒｐｍにて１５分間遠心分離し、上清の蛍光強度（励起波長４９５ｎｍ、蛍光波長５２０ｎｍ）を蛍光分光光度計にて測定した。
【００４５】
試験試料を含まない反応系（コントロール：試料希釈用緩衝液）の酵素活性を１００として各試験試料濃度でのＭＭＰｓ活性を求めることにより阻害活性を評価した。ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−３の結果について、表１、表２、表３に結果を示す。優れた活性阻害作用が確認された。
【００４６】
【表１】
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【００４７】
【表２】
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【００４８】
【表３】
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【００４９】
（試験例２）皮膚弾力性保持試験
皮膚の弾力性保持効果を調べるために、下記実施例１〜１２、比較例１に示す組成の化粧料を用いて、以下の方法により、皮膚弾力保持効果とシワに対する改善効果について評価試験を行った。
【００５０】
無作為に抽出した年齢３１〜５０歳の健常な女性１２０名を被験者とし、各１０名ずつ実施例及び比較例化粧料を顔面皮膚に連日３ケ月使用した後、弾力性保持とシワに対する改善効果について調べた。
【００５１】
（実施例１）クリーム
下記成分（1）〜（10）、別に下記成分（11）〜（16）を７５℃に加温溶解しそれぞれＡ液及びＢ液とする。Ａ液にＢ液を加えて乳化し、攪拌しながら５０℃まで冷却し、成分（17）を加え、クリームを調製した。
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【００５２】
（実施例２〜１２）
実施例１のアカマツ抽出物に換えてクロマツ抽出物（抽出物製造例２）としたものを実施例２、同様にリュウキュウアカマツ抽出物（抽出物製造例３）としたものを実施例３、同様にタイワンアカマツ抽出物（抽出物製造例４）としたものを実施例４、同様にカシヤマツ抽出物（抽出物製造例５）としたものを実施例５、同様にヨーロッパアカマツ抽出物（抽出物製造例６）としたものを実施例６、同様にダイオウショウ抽出物（抽出物製造例７）としたものを実施例７、同様にフランスカイガンショウ抽出物（抽出物製造例８）の１％溶液（５０重量％エタノール溶液に溶解）としたものを実施例８、同様にリギダマツ抽出物（抽出物製造例９）としたものを実施例９、同様にラジアータマツ抽出物（抽出物製造例１０）としたものを実施例１０、同様にカサマツ抽出物（抽出物製造例１１）としたものを実施例１１とした。また、同様に市販品ピクノジェノールの１％溶液（５０重量％エタノール溶液）に換えたものを実施例１２とした。
【００５３】
（比較例１）
クリーム実施例１において、アカマツ抽出物３．０％を精製水３．０％に代えた以外は、実施例１と同様にしてクリームを調製した。
【００５４】
「皮膚弾力性保持効果」
肌のはり、たるみを視覚評価した。
（判定基準）
有効    ：使用前に比べ肌にはりがあり、たるみがない
やや有効：使用前に比べ肌にややはりがあり、たるみが減少した
効果なし：変化なし
「しわに対する改善効果」
目尻のしわの状態を視覚評価した。
（判定基準）
有効    ：しわがかなり目立たなくなった
やや有効：しわが以前より目立たなくなった
効果なし：変化なし
【００５５】
【表４】
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【００５６】
表４から明らかなように、実施例１〜１２のクリームを用いた場合には、比較例１のクリームを用いた場合よりも、肌のはり、たるみ、目尻のしわの点で改善されていることが認められた。これにより、アカマツ、クロマツ、リュウキュウアカマツ、タイワンアカマツ、カシヤマツ、ヨーロッパアカマツ、ダイオウショウ、フランスカイガンショウ、リギダマツ、ラジアータマツ、カサマツの各抽出物及び市販品ピクノジェノールには、皮膚弾力性保持効果があることが確認された。
【００５７】
以下にさらに、本発明の処方例を示す。
【００５８】
（実施例１３）化粧水
下記成分（5）〜（8）を混合溶解させＡ液とし、これとは別に下記成分（1）〜（4）及び（9）を混合溶解させてＢ液とし、Ａ液とＢ液を均等に混合し、化粧水を調整した。
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【００５９】
（実施例１４）乳液
下記成分（1）〜（10）、別に（11）〜（14）及び（16）を７５℃で加熱溶解させてそれぞれＡ液及びＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて乳化し、攪拌しながら５０℃まで冷却し、成分（15）を加え、乳液を調製した。
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【００６０】
（実施例１５）石けん
石けん製造の定法により下記成分を混合し製した。
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【００６１】
（実施例１６）クレンジングジェル
下記成分（1）〜（3）、別に（4）〜（6）及び（8）を70℃に加熱溶解させてそれぞれＡ液及びＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて均一になるまで攪拌する。攪拌しながら50℃まで冷却し、成分（7）を加えてクレンジングジェルを製した。
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【００６２】
（実施例１７）パック剤
Ａ相、Ｂ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ａ相にＢ相を加えて可溶化し、次いでＣ相を加えて均一に溶解し、製する。
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【００６３】
（実施例１８）乳化型ファンデーション
下記成分（1）〜（6）を充分に混合粉砕した粉末部をＡとし、（７）（８）をＢ液、（9）〜（12）及び（14）をＣ液とする。Ｃ液を加熱攪拌後、Ａを添加しホモミキサー処理し、さらに過熱混合したＢ液を加えてホモミキサー処理する。
攪拌しながら５０℃まで冷却し、（13）を加え、さらに室温まで冷却して製する。
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【００６４】
（実施例１９）固形ファンデーション
下記成分（1）〜（7）をブレンダーで均一に混合し、これに（8）〜（14）を加え、よく混練して製する。
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【００６５】
上記実施例１３〜１９の化粧料は、いずれも皮膚弾力性保持効果に優れるものであった。
【００６６】
【発明の効果】
以上に説明したように、本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ活性阻害剤及び皮膚弾力性保持化粧料は、優れたマトリックスメタロプロテアーゼ阻害活性を有し、皮膚弾力性保持効果を有し、弾力のある、しわやたるみのない、若々しい肌の状態を保持することができる。