(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
卵殻膜と、該卵殻膜に含有されるリジルオキシダーゼの基質となりうるアミノ化合物とを有効成分として含有する殺菌剤であって、
前記アミノ化合物が、塩基性アミノ酸、加水分解コラーゲン、加水分解フィブロイン、加水分解コンキオリン、および加水分解大豆タンパク質からなる群から選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする殺菌剤。
【請求項２】
前記リジルオキシダーゼによる前記アミノ化合物の酵素反応により使用時に過酸化水素が存在することを特徴とする請求項１に記載の殺菌剤。
【請求項３】
偏性嫌気性菌に対し特異的な殺菌作用を有することを特徴とする請求項１または２に記載の殺菌剤。
【請求項４】
前記偏性嫌気性菌が、ポルフィロモナス  ジンジバリス（porphylomonas  gingivalis）、プリボテラ  インターメディア（prevotella  intermedia）、フソバクテリウム  ヌクレアトゥム（fusobacterium  nucleatum）のいずれか１種または２種以上であることを特徴とする請求項３に記載の殺菌剤。
【請求項５】
前記卵殻膜の形態がパウダーであることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の殺菌剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の殺菌剤を含有する口腔用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、歯周病などの口腔疾患の主要な原因菌である偏性嫌気性菌に特異的な殺菌作用を有する殺菌剤および該殺菌剤を含有する口腔用組成物に関し、詳しくは、安全性の高い天然物由来の卵殻膜と特定のアミノ化合物を有効成分として含有する殺菌剤、および該殺菌剤を含有する口腔用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
周知のように、殺菌剤は既に市場に多種類のものが存在し、主に合成殺菌剤が使用されている。この合成殺菌剤としては、例えば、塩化ベンザルコニウムや塩化セチルピリジニウム等の陽イオン系界面活性剤、クロロフェノール系の合成殺菌剤であるトリクロサン、塩素系殺菌剤である次亜塩素酸ナトリウム等が挙げられる。これらの物質は、使用条件によっては、皮膚刺激や環境毒性等に配慮する必要がある。したがって、各種使用製品および使用条件下においても安心して利用できる殺菌剤が望まれている。
【０００３】
例えば、口腔内には種々の菌が存在し、それらは、口腔環境を保つ役割を持つ善玉菌と、う触、歯周病、口臭等の原因となる悪玉菌とに大別できる。一般に悪玉菌は、偏性嫌気性菌であることが多いため、偏性嫌気性菌のみを殺菌することが望ましい。しかしながら、塩化セチルピリジニウム等の既存の前記合成殺菌剤は全ての菌を殺菌してしまい、口腔内に占有菌がいなくなるため、カンジダ菌に感染するなどの不具合が生じる。
【０００４】
本発明者らは、各種使用製品および使用条件下においても安心して利用できる殺菌物質を探求する過程で、卵殻膜の存在を知るに至った。
卵殻膜は、卵を使用した際に廃棄物として大量に排出されることから、その有効利用法が研究されている。例えば、可溶性卵殻膜と、硬タンパク質およびその加水分解物との配合物からなる美肌、保湿効果を高めた化粧料が開示されている（下記特許文献１参照）。また、卵殻膜分解物からなる肌荒れ改善効果の高い化粧料が開示されている（下記特許文献２参照）。さらに、卵殻膜分解物を含有し、マトリックスメタプロテアーゼ（ＭＭＰ）及びシステインプロテアーゼ阻害活性を有し、歯周疾患、角膜潰瘍などの予防又は治療に有効な口腔用及び眼科用組成物が開示されている（下記特許文献３参照）。
【０００５】
このように生体に有用な作用を有する卵殻膜を用いて殺菌性組成物を構成できれば、有用であることこの上ない。しかしながら、現在のところ、そのような組成物の開発は実現していない。
【０００６】
【特許文献１】特開平３−２５５０１４号公報
【特許文献２】特開平５−９７８９７号公報
【特許文献３】特開２００１−８９３８３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記事情に鑑みなされたもので、歯周病などの口腔疾患の主要な原因菌である偏性嫌気性菌に特異的に作用することを特徴とする、天然物由来である卵殻膜を用いた安心して利用できる殺菌剤、および該殺菌剤を含有する口腔用組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意検討を行なった結果、リジルオキシダーゼを含有する卵殻膜と、リジン、加水分解コラーゲン、加水分解フィブロイン、加水分解コンキオリン、加水分解大豆蛋白質などから選ばれるアミノ化合物との配合組成物が、偏性嫌気性菌に対して特異的な殺菌作用を示すという知見を得た。即ち、歯周病原因菌であり偏性嫌気性菌であるポルフィロモナス  ジンジバリス（porphylomonas gingivalis）、プリボテラ  インターメディア（prevotella intermedia）、口臭原因菌であり偏性嫌気性菌であるフソバクテリウム  ヌクレアトゥム（fusobacterium nucleatum）、口腔内ではう触、歯周病等の為害作用が低い、通性嫌気性菌のストレプトコッカス  サンギス（streptococcus sanguis）、ストレプトコッカス  サリバリウス（streptococcus salivarius）に対する殺菌作用を評価した結果、上記配合組成物が偏性嫌気性菌に対する特異的な殺菌力を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
本発明は、卵殻膜と、該卵殻膜に含有されるリジルオキシダーゼの基質となりうるアミノ化合物とを有効成分として含有する殺菌剤であり、前記リジルオキシダーゼによる前記アミノ化合物の酵素反応により使用時に過酸化水素が存在することを特徴とする殺菌剤である。
【００１０】
また本発明は、前記過酸化水素による殺菌作用により、通性嫌気性菌に比較して偏性嫌気性菌を選択的に殺菌することができることを特徴とする殺菌剤である。前記偏性嫌気性菌としては、ポルフィロモナス  ジンジバリス（porphylomonas  gingivalis）、プリボテラ  インターメディア（prevotella  intermedia）、フソバクテリウム  ヌクレアトゥム（fusobacterium  nucleatum）のいずれか１種または２種以上を対象とすることができる。
【００１１】
また、前記アミノ化合物としては、１種または２種以上の塩基性アミノ酸、１種または２種以上の塩基性アミノ酸残基を含有するペプチド、１種または２種以上の塩基性アミノ酸と１種または２種以上の塩基性アミノ酸残基を含有するペプチドとの混合物を用いることができる。
前記塩基性アミノ酸としては、リジンまたはヒドロキシリジンが好ましく、前記塩基性アミノ酸残基がリジン残基またはヒドロキシリジン残基であることが好ましい。また、前記卵殻膜の形態としては、パウダーであることが好ましい。
【００１２】
また、本願の他の発明は、前記殺菌剤を含有する口腔用組成物である。
【発明の効果】
【００１３】
本発明にかかる殺菌剤および口腔用組成物は、偏性嫌気性菌を特異的に殺菌するために、口腔環境を保ったまま、歯周病原因菌などの悪玉菌のみを殺菌することができる。
また、本発明にかかる殺菌剤および口腔用組成物は、含有される卵殻膜が天然物であり、食品素材であることから、皮膚刺激や環境毒性などの心配が無く安心して利用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明につき更に詳しく説明する。
本発明の殺菌剤は、卵殻膜と、該卵殻膜に含有されるリジルオキシダーゼの基質となりうるアミノ化合物とを有効成分として含有し、前記リジルオキシダーゼによる前記アミノ化合物の酵素反応により使用時に過酸化水素が存在することを特徴とする。
【００１５】
本発明の殺菌剤の成分である卵殻膜はアミン酸化酵素であるリジルオキシダーゼを含有している。他の成分であるアミノ化合物は、前記リジルオキシダーゼの基質となりうるアミノ化合物であり、リジルオキシダーゼによる酵素反応により酸化され、一般的にアルデヒド化合物に変換される。この酵素反応は、アミノ化合物の酸化反応と共役する反応により過酸化水素を生成し、生成する過酸化水素が殺菌作用を発揮する。
【００１６】
生成した過酸化水素は、過酸化水素分解酵素を有する通性嫌気性菌には殺菌作用を示さず、過酸化水素分解酵素を有さない偏性嫌気性菌に対し特異的に殺菌作用を示すものと考えられる（微生物学（上）、培風館、1978年）。このため、本発明の殺菌剤は、通性嫌気性菌に比較して偏性嫌気性菌に特異的殺菌作用を有し、口腔環境を保ったまま、歯周病原因菌などの悪玉菌のみを殺菌することができる。
【００１７】
また本発明の殺菌剤では、リジルオキシダーゼ活性が発揮される条件で、卵殻膜リジルオキシダーゼにより前記アミノ化合物の酵素反応が徐々に進行し、継続的に過酸化水素を発生する。このため少なくとも使用時において、継続的に発生する新鮮な過酸化水素が存在するため、持続的な殺菌作用を発揮することが可能となっている。
【００１８】
本発明において、卵殻膜とは、鳥類の卵の卵殻内面に密着する薄膜のことで、微生物の侵入を防ぐと共に、卵の鈍端では２枚になって気室を形成し、卵を防御する役目を果たしている物質である。
【００１９】
本発明におけるリジルオキシダーゼ（Ｌｙｓｙｌ  ｏｘｉｄａｓｅ  ＥＣ１．４．３．１３）は、タンパク質−リシン６−オキシダーゼとも呼ばれ、コラーゲンやエラスチンのペプチド鎖中のリシンやヒドロキシリシン残基のε−アミノ基をアルデヒド基に酸化的脱アミノ反応で変換するアミノ酸化酵素（生化学辞典）である。
【００２０】
本発明の殺菌剤は、前述のように、通性嫌気性菌に比較して偏性嫌気性菌を特異的に殺菌することを特徴とする。前記偏性嫌気性菌としては、例えば、歯周病原因菌であるポルフィロモナス  ジンジバリス（porphylomonas  gingivalis）、プリボテラ  インターメディア（prevotella  intermedia）、口臭原因菌でであるフソバクテリウム  ヌクレフトゥム（fusobacterium  nucleatum）などを挙げることができる。また、通性嫌気性菌としては、例えば、口腔内ではう触、歯周病等の為害作用が低いストレプトコッカス  サンギス（streptococcus  sanguis）、ストレプトコッカス  サリバリウス（streptococcus  salivarius）などを挙げることができる。
【００２１】
前記卵殻膜に含有されるリジルオキシダーゼの基質となりうるアミノ化合物としては、リジルオキシダーゼの基質となり医薬として許容されるアミノ化合物であれば特に限定されない。医薬として許容されるアミノ化合物とは、特に安全性の点から医薬として許容されるアミノ化合物のことである。
【００２２】
前記アミノ化合物としては、例えば、１種または２種以上の塩基性アミノ酸、１種または２種以上の塩基性アミノ酸残基を含有するペプチド、１種または２種以上の塩基性アミノ酸と１種または２種以上の塩基性アミノ酸残基を含有するペプチドとの混合物などを挙げることができる。
【００２３】
前記塩基性アミノ酸としては、リジルオキシダーゼの基質となりうるものであれば特に限定されず、例えば、リジン、ヒドロキシリジンなどを挙げることができる。この中でも、リジルオキシダーゼの基質としての適合性からリジン、ヒドロキシリジンが前記塩基性アミノ酸として好ましく、リジンがさらに好ましい。これらの塩基性アミノ酸の１種を単独で、またはいずれか２種以上を混合して使用することができる。
【００２４】
前記塩基性アミノ酸残基としては、リジルオキシダーゼの基質となりうるものであれば特に限定されず、例えば、リジン残基、ヒドロキシリジン残基などを挙げることができる。この中でも、リジルオキシダーゼの基質としての適合性からリジン残基、ヒドロキシリジン残基が前記塩基性アミノ酸残基として好ましく、リジン残基がさらに好ましい。
【００２５】
前記塩基性アミノ酸残基を有するペプチドとしては、リジルオキシダーゼの基質となりうる塩基性アミノ酸残基を有するペプチドであれば特に限定されない。好ましいペプチドとしては、加水分解コラーゲン、加水分解フィブロイン、加水分解コンキオリン、加水分解大豆蛋白質などを挙げることができる。これらの加水分解タンパク質の１種を単独で、またはいずれか２種以上を混合して使用することができる。
【００２６】
前記アミノ化合物として、１種または２種以上の塩基性アミノ酸と１種または２種以上の塩基性アミノ酸残基を含有するペプチドとの混合物を使用することもできる。
【００２７】
前記塩基性アミノ酸残基を有するペプチドは、それぞれのタンパク質を加水分解して調製することができる。
【００２８】
前記塩基性アミノ酸残基を有するペプチドの分子量の上限は、１００００である。分子量が１００００以上になると、含有されるリジルオキシダーゼの反応性が低くなる。また、前記ペプチドの分子量は、反応性の点から２０００以下であることが好ましい。
【００２９】
前記卵殻膜としては、殺菌作用の点からは破砕物の形態が好ましく、製剤化の点からはパウダーの形態が好ましいが、そうである必要はない。
【００３０】
本発明の殺菌剤において、卵殻膜パウダーの配合率は組成物全体の０．０１〜５０重量％、塩基性アミノ酸或いはペプチドは組成物全体の０．０１〜２０重量％、好ましくは、卵殻膜パウダーは組成物全体の１〜２０重量％、塩基性アミノ酸或いはペプチドは組成物全体の０．１〜１０重量％にすることが望ましい。配合率が下限未満では殺菌作用が消失する。
【００３１】
本発明の殺菌剤は、その種類、使用目的に応じて前記有効成分以外の成分を配合することができる。そのような成分としては、界面活性剤、研磨剤、香料、増粘剤などを挙げることができる。
【００３２】
本発明の殺菌剤の利用分野は、殺菌成分として、各種の外用製剤類（動物用に使用する製剤も含む）全般において利用でき、前記各種の外用製剤類としては、具体的には、カプセル状、粉末状、顆粒状、固形状、液状、ゲル状、軟膏状、或いは気泡性の１）医薬品類、２）医薬部外品類、３）局所又は全身用の皮膚化粧品類、４）頭皮・頭髪に適用する薬用及び／又は化粧用の製剤類（例えば、シャンプー剤、リンス剤、トリートメント剤、パーマネント液、染毛料、整髪料、ヘアートニック剤など）が挙げられる。
【００３３】
本発明の殺菌剤は、上述のように、前記卵殻膜と、該卵殻膜に含有されるリジルオキシダーゼの基質となりうるアミノ化合物とを有効成分として含有する。このアミノ化合物としては、例えば、１種または２種以上の塩基性アミノ酸、１種または２種以上の塩基性アミノ酸残基を含有するペプチド、１種または２種以上の塩基性アミノ酸と１種または２種以上の塩基性アミノ酸残基を含有するペプチドとの混合物を挙げることができる。
【００３４】
本発明の口腔用組成物は、前記殺菌剤を含有することを特徴とし、その種類に応じて公知の成分を配合することができる。
【００３５】
即ち、口腔用組成物の場合、練歯磨、液状歯磨、泡状歯磨等の歯磨剤、歯肉マッサージクリーム、局所塗布剤、洗口剤、マウスウォッシュ、口中清涼剤、トローチ剤、チューインガム等の様々な剤型とすることが可能であるが、例えば歯磨剤の場合には、研磨剤、粘結剤、粘稠剤、甘味剤、香料などを常用量で配合することができる。
【００３６】
この場合、研磨剤としては、リン酸水素カルシウム・２水和物、第３リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、ピロリン酸カルシウム、水酸化アルミニウム、無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウム、不溶性メタリン酸ナトリウム、第３リン酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、硫酸カルシウム、ベントナイト、ケイ酸ジルコニウム、ポリメタクリル酸メチル、その他の合成樹脂等の１種又は２種以上の化合物を本発明の効果を損なわない範囲で配合することができる。
【００３７】
また、粘結剤としては、カラギーナン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコール等のアルギン酸誘導体、キサンタンガム、ジェランガム、トラガントガム、カラヤガム等のガム類、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー等の合成粘結剤、シリカゲル、ビーガム、ラポナイト等の無機粘結剤等の１種又は２種以上の化合物を配合することができる。
【００３８】
保湿剤としては、グリセリン、ソルビット、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール等の多価アルコールの１種又は２種以上の化合物を配合することができる。
【００３９】
界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム等のアニオン性界面活性剤、ラウリン酸デカグリセリル、ミリスチン酸ジエタノールアミド等の非イオン性界面活性剤、ベタイン系等の両性界面活性剤を配合することができる。
【００４０】
香料成分としては、メントール、アネトール、カルボン、オイゲノール、リモネン、ｎ−デシルアルコール、シトロネロール、α−テルピネオール、シネオール、リナロール、エチルリナロール、ワニリン、チモール、ペパーミント油、スペアミント油、ウィンターグリーン油、丁字油、ユーカリ油等の香料を単独で又は組み合わせて配合し得るほか、サッカリンナトリウム、ステビオサイド、グリチルリチン、ペリラルチン、ソーマチン等の甘味剤を配合することができる。
【００４１】
また、本発明の口腔用組成物においては、クロルヘキシジン、ベンゼトニウムクロライド、ベンザルコニウムクロライド、セチルピリジニウムクロライド、デカニウムクロライドなどの陽イオン性殺菌剤、トリクロサン、ヒノキチオール、ビオゾールなどのフェノール性化合物、デキストラナーゼ、ムタナーゼ、リゾチーム、アミラーゼ、プロテアーゼ、溶菌酵素、スーパーオキサイドディスムターゼなどの酵素、ビタミンＥ、ビタミンＢ６などのビタミン類、モノフルオロリン酸ナトリウム、モノフルオロリン酸カリウムなどのアルカリ金属モノフルオロリン酸塩、フッ化ナトリウム、フッ化第１錫などのフッ化物、トラネキサム酸、イプシロンアミノカプロン酸、アルミニウムクロルヒドロキシルアラントイン、ジヒドロコレスタノール、グリチルリチン酸類、グリチルレチン酸、ビサボロール、グリセロフォスフェート、クロロフィル、塩化ナトリウム、水溶性無機リン酸化合物などの公知の有効成分を１種又は２種以上の化合物を配合することができる。
【実施例】
【００４２】
以下、実験例及び実施例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
〔実験例〕
殺菌力試験
１）実験材料
（１）被検液
１０％卵殻膜（天野エンザイム株式会社製）、１％塩基性アミノ酸或いはペプチド溶液（リジン（和光純薬工業株式会社製）、加水分解コラーゲン（株式会社  成和化成製）、加水分解フィブロイン（株式会社  成和化成製）、加水分解コンキオリン（株式会社  成和化成製）、加水分解大豆蛋白質（株式会社  成和化成製））を１００ｍＭリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．０）中に調製した。
（２）菌液
porphylomonas gingivalis  （Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（以下、ＡＴＣＣという）から取得）：終濃度５μｇ／ｍＬのヘミン、終濃度０．５μｇ／ｍＬのメナジオンを含むＴｏｄｄ  Ｈｅｗｉｔｔ  Ｂｒｏｔｈで嫌気的に１日前培養した。
prevotella intermedia  （ＡＴＣＣから取得）：終濃度５μｇ／ｍＬのヘミン、終濃度０．５μｇ／ｍＬのメナジオンを含むＴｏｄｄ  Ｈｅｗｉｔｔ  Ｂｒｏｔｈで嫌気的に１日前培養した。
streptococcus sanguis、streptococcus salivarius（ＡＴＣＣから取得）：Ｔｏｄｄ  Ｈｅｗｉｔｔ  Ｂｒｏｔｈで嫌気的に１日前培養した。３５００ｒｐｍで２０分間遠心し上清を捨てた。
fusobacterium nucleatum（ＡＴＣＣから取得）：Ｔｏｄｄ  Ｈｅｗｉｔｔ  Ｂｒｏｔｈで嫌気的に１日前培養した。
２）方法
（１）の被検液１ｍＬに（２）各種菌液の中から１種類を終濃度１．０×１０7／ｍＬとなるように添加する。３７℃で２時間インキュベート後、菌液を寒天培地に塗布し、生菌数をカウントした。
【００４３】
下記の表１に示すように、比較例１〜５および実施例１〜５を実施した。実施例１〜５は殺菌剤を想定したものである。
【００４４】
【表１】
0004625625.tif 000002
【００４５】
表１に見られる通り、セチルピリジニウムクロライドを使用した比較例４および５では通性嫌気性菌を含む全ての菌を殺菌しているのに対し、本発明の全ての実施例で偏性嫌気性菌に対する特異的な殺菌効果が認められた。
【００４６】
本発明の殺菌剤は、練歯磨、液状歯磨、泡状歯磨、洗口剤、マウスウォッシュ、口中清涼剤、トローチに転用可能であり、それらの配合例を実施例６〜１２として、表２〜表８に示した。
【００４７】
【表２】
0004625625.tif 000003
【００４８】
【表３】
0004625625.tif 000004
【００４９】
【表４】
0004625625.tif 000005
【００５０】
【表５】
0004625625.tif 000006
【００５１】
【表６】
0004625625.tif 000007
【００５２】
【表７】
0004625625.tif 000008
【００５３】
【表８】
0004625625.tif 000009
【産業上の利用可能性】
【００５４】
以上のように、本発明にかかる殺菌剤は、安全性が高く偏性嫌気性菌特異的に作用する殺菌性の薬剤として有用であり、特に、口腔環境を保ったまま、歯周病原因菌などの悪玉菌のみを殺菌する口腔用組成物の有効成分として用いるに適している。