【手続補正書】
【提出日】平成24年7月12日(2012.7.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
改変したＦＧＦＲ４タンパク質をコードする内因性遺伝子を含む齧歯類動物であって、その改変が、配列番号１のアミノ酸位置３８５に相応するアミノ酸位置での前記齧歯類の野生型ＦＧＦＲ４におけるアミノ酸置換である齧歯類動物。
【請求項２】
（ａ）前記齧歯類がマウス、ハムスター又はラット、好ましくはマウスである、
（ｂ）前記齧歯類がマウスであり、前記アミノ酸位置が配列番号１のアミノ酸位置３８５である、
（ｃ）前記齧歯類がラットであり、前記アミノ酸位置が配列番号４のアミノ酸位置３８６である、
（ｄ）前記齧歯類中で配列番号１のアミノ酸位置３８５に相応するアミノ酸位置がグリシンである、
（ｅ）前記齧歯類においてアミノ酸置換が、グリシンとは異なるアミノ酸を伴う、
（ｆ）前記アミノ酸置換が、荷電した側鎖を有するアミノ酸、好ましくはリシン、アルギニン又はヒスチジン、より好ましくはアルギニンを伴う、
（ｇ）前記改変したＦＧＦＲ４が、配列番号５又は配列番号６のアミノ酸配列を有する、
（ｈ）前記非ヒト動物の少なくともいくつかのその細胞又は全細胞が、前記内因性の改変したＦＧＦＲ４コード遺伝子を含有する、
（ｉ）前記の少なくともいくつかの細胞又は全細胞が、前記改変したＦＧＦＲ４に関してヘテロ接合又はホモ接合である、
（ｊ）前記ＦＧＦＲ４の改変が、腫瘍プログレッション及び／又は形成における変化に関連するフェノタイプを生じる、及び／又は
（ｋ）腫瘍プログレッションにおける前記変化が、野生型動物に比較した、腫瘍成長及び／又は転移形成の増加した速度により特徴付けられる
請求項１記載の動物。
【請求項３】
付加的に、制御されていない細胞成長、好ましくは癌及び／又は転移形成を示す請求項１又は２記載の動物。
【請求項４】
さらに、照射され、癌誘発剤で処置され、かつ／又は導入遺伝子を含み、前記導入遺伝子がオンコジーンを含む、請求項１から３のいずれか１項記載の動物。
【請求項５】
（ａ）前記オンコジーンが、ＴＧＦ−α（配列番号７４）、ＴＧＦ−β、ＥＧＦＲ（配列番号７６）、ｖ−ｓｒｃ、ｃ−ｋｉｔ、ＨＥＲ２、ｅｒｂ−Ｂ２、ｐ５３、ｍｙｃ、又は／及びｒａｓである；及び／又は
（ｂ）前記癌誘発剤が、ジメチルヒドラジン（ＤＭＨ）、アゾキシメタン（ＡＯＭ）、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロソウレア（ＭＮＵ）、エチル−ニトロソ−ウレア（ＥＮＵ）又は１２−０−テトラデカノイルホルボール−１３−アセタート（ＴＰＡ）である
請求項４記載の動物。
【請求項６】
前記導入遺伝子が、乳房の細胞及び／又は肝細胞中で発現される請求項４又は５記載の動物。
【請求項７】
請求項１から６のいずれか１項記載の動物に由来するプライマリー細胞又は細胞株であって、前記プライマリー細胞が好ましくはマウスの胚性フィーダー細胞（ＭＥＦｓ）であるプライマリー細胞又は細胞株。
【請求項８】
（ａ）前記細胞又は細胞株が、前記改変したＦＧＦＲ４に関してホモ接合又はヘテロ接合である請求項１から２（ｇ）のいずれか１の齧歯類の細胞に由来する、及び／又は
（ｂ）前記細胞又は細胞株が、ＥＧＦＲをコードする核酸（配列番号７６）又はＥＧＦＲタンパク質（配列番号７７）を含む、請求項７記載の動物に由来するプライマリー細胞又は細胞株。
【請求項９】
（ａ）好ましくは乳癌、肺癌、結腸直腸癌、肝細胞癌、前立腺癌、メラノーマ、及び／又は膵臓癌において、制御されていない細胞成長、例えば、癌及び／又は転移形成の、分子的機構、又はこれに関連する生理学的プロセスを研究する、
（ｂ）好ましくは乳癌、肺癌、結腸直腸癌、肝細胞癌、前立腺癌、メラノーマ、及び／又は膵臓癌において、制御されていない細胞成長、例えば、癌及び／又は転移形成の、予防、改善又は治療において有用な剤を同定及び／又は試験する、
（ｃ）好ましくは乳癌、肺癌、結腸直腸癌、肝細胞癌、前立腺癌、メラノーマ、及び／又は膵臓癌において、制御されていない細胞成長、例えば、癌及び／又は転移形成についての、タンパク質及び／又は核酸診断マーカーを同定する、及び／又は
（ｄ）前記改変したＦＧＦＲ４の不所望な活性、発現、又は産生の、分子的機構、又はこれに関連する生理学的プロセス又は医学的状態を研究する
ためのモデルとしての請求項１から８のいずれか１項記載の動物、プライマリー細胞又は細胞株の使用。
【請求項１０】
配列番号５又は配列番号６に応じた、改変したＦＧＦＲ４ポリペプチド。
【請求項１１】
請求項１０記載のポリペプチドをコードする核酸分子。
【請求項１２】
請求項１１記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項１３】
請求項１０記載のポリペプチド、請求項１１記載の核酸分子又は請求項１２記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１４】
改変したＦＧＦＲ４タンパク質をコードする内因性遺伝子を含む齧歯類動物であって、その際前記改変が、野生型ＦＧＦＲ４タンパク質、好ましくは配列番号１のＦＧＦＲ４タンパク質に比較して少なくとも１のアミノ酸置換であり、この改変が、ヘテロ接合又はホモ接合の方式で前記動物の少なくともいくつかの又は全ての又は実質的に全ての細胞において存在する場合には、野生型動物に比較して増加した速度の腫瘍成長及び／又は転移形成と関連するフェノタイプを生じる齧歯類動物。
【請求項１５】
（ａ）付加的に、少なくともいくつかのその細胞のゲノム中で、ＴＧＦ−αタンパク質をコードする導入遺伝子を発現する、
（ｂ）前記導入遺伝子が、乳房の細胞において、好ましくはＷＡＰプロモーターの制御下の発現により発現される、及び／又は
（ｃ）前記腫瘍が、乳房の腫瘍である
請求項１４記載の齧歯類動物。
【請求項１６】
（ａ）改変したＦＧＦＲ４タンパク質を過剰発現する細胞の培養；
（ｂ）試験すべき剤の培地への添加；及び
（ｃ）前記剤の存在下で培養された細胞の、同じ剤の存在下で培養された野生型ＦＧＦＲ４タンパク質を過剰発現する細胞に比較した、増殖速度の減少、アポトーシスの増加及び／又は細胞移動の減少の決定
を含む改変したＦＧＦＲタンパク質及びＥＧＦＲタンパク質の間の相互作用を阻害する剤を同定する方法。
【請求項１７】
（ａ）前記改変したＦＧＦＲ４タンパク質が配列番号５のタンパク質であり、前記野生型ＦＧＦＲタンパク質が配列番号１のタンパク質である、
（ｂ）前記細胞がＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞である、及び／又は
（ｃ）増殖速度がＭＴＴ増殖アッセイにより決定され、アポトーシスがＦＡＣＳ分析により決定され、かつ／又は移動がボイデンチャンバーアッセイを用いて決定される、
請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
ＥＧＦＲ関連疾患の治療のためのＦＧＦＲ４の阻害剤。
【請求項１９】
（ａ）前記ＥＧＦＲ関連疾患が、ＥＧＦ及び／又はＴＧＦ−アルファ媒介疾患である、
（ｂ）前記ＥＧＦＲ関連疾患が、癌、好ましくは乳癌又は肝細胞癌である
（ｃ）阻害剤が、ＦＧＦＲ４に対して指向した抗体、ＦＧＦＲ４に対して指向したアプタマー、ＦＧＦＲ４に対して指向したアンチセンスオリゴヌクレオチド、及び、ＦＧＦＲ４に対して指向したＲＮＡｉ分子からなる群から選択される、
（ｄ）前記ＦＧＦＲ４タンパク質が、ヒトＦＧＦＲ４タンパク質、特に配列番号２又は配列番号３のヒトＦＧＦＲ４タンパク質である、及び／又は
（ｅ）前記ＦＧＦＲ４タンパク質が、改変したヒトＦＧＦＲ４タンパク質であり、その際、この改変が、配列番号２又は配列番号３のアミノ酸位置３８８でのアミノ酸グリシンのアミノ酸置換であり、好ましくはアルギニンでの置換である
請求項１８記載のＦＧＦＲ４の阻害剤。
【請求項２０】
（ａ）ＥＧＦＲ遺伝子又はタンパク質の発現の決定；及び／又は
（ｂ）ＦＧＦＲ４タンパク質及びＥＧＦＲタンパク質の間での相互作用の決定；及び／又は
（ｃ）ＴＧＦ−アルファ及び／又はＥＧＦによるＥＧＦＲタンパク質の刺激の決定；及び／又は
（ｄ）ＦＧＦＲ４が、野生型タンパク質又は遺伝子、特に配列番号２又は配列番号３の野生型タンパク質又は遺伝子又は改変したヒトＦＧＦＲ４タンパク質であるかの決定、その際、前記改変が、配列番号２又は配列番号３のアミノ酸位置３８８でのアミノ酸グリシンのアミノ酸置換であり、好ましくはアルギニンでの置換である
による深刻な癌プログレッションの診断方法であって、
その際、ＥＧＦＲ遺伝子又はタンパク質の発現の上方調節；ＴＧＦ−アルファ及び／又はＥＧＦによるＥＧＦＲタンパク質の刺激の上方調節；及び／又は前記の改変したヒトＦＧＦＲ４タンパク質の存在が、深刻な癌プログレッションの指標である
深刻な癌プログレッションの診断方法。