【手続補正書】
【提出日】平成26年5月12日(2014.5.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
富化腎臓細胞集団による分泌産物とネイティブ腎臓をインビボで接触させることによりネイティブ腎臓に再生効果を与える方法における使用のための組成物であって、腎臓細胞集団から単離された分泌産物を含む組成物。
【請求項２】
産物がパラクリン因子を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
産物が内分泌因子を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
産物がジャクスタクライン因子を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
産物が小胞を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
小胞が微小胞を含む請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
小胞がエキソソームを含む請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
小胞が、パラクリン因子、内分泌因子、ジャクスタクライン因子、およびＲＮＡ、からなる群より選択される分泌産物を含む請求項５〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
産物が足場の上または中に直接播種された富化腎臓細胞集団を含む腎臓細胞構築物から分泌される請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
足場が生体適合性材料を含む請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
生体適合性材料がヒドロゲルである請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
産物の分泌が酸素レベルに対する生物学的応答である請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
分泌が大気中酸素レベル未満の酸素により誘導される請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
より低い酸素レベルが約５％酸素未満である請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
再生効果が上皮間葉転換（ＥＭＴ）の減少である請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
上皮間葉転換（ＥＭＴ）の減少がＴＧＦ−βシグナル伝達の減弱化を介する請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
再生効果が腎臓線維形成の減少および／または腎臓炎症の減少である請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
再生効果がネイティブ腎臓中の幹細胞マーカーの発現差異を特徴とする請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
集団が尿細管細胞の富化集団を含む第１細胞集団、Ｂ２を含む請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
集団が第１細胞集団、Ｂ２を含むヒト腎臓細胞、および第２細胞集団の混合物を含み、Ｂ２が尿細管細胞の富化集団を含み、第２細胞集団が１つまたは複数のエリスロポエチン（ＥＰＯ）産生細胞、糸球体細胞および血管細胞を含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
Ｂ２細胞集団が約１．０４５ｇ／ｍＬ〜約１．０５２ｇ／ｍＬの密度を有する請求項１９または２０に記載の組成物。
【請求項２２】
第２細胞集団が約１．０６３ｇ／ｍＬ〜約１．０９１ｇ／ｍＬの密度を有するＢ４細胞集団である請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
第２細胞集団が約１．０５２ｇ／ｍＬ〜約１．０６３ｇ／ｍＬの密度を有するＢ３細胞集団である請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
混合物が第３細胞集団をさらに含み、第３細胞集団が１つまたは複数のエリスロポエチン（ＥＰＯ）産生細胞、糸球体細胞および血管細胞を含む請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２５】
第３細胞集団が約１．０６３ｇ／ｍＬ〜約１．０９１ｇ／ｍＬの密度を有するＢ４細胞集団である請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
第３細胞集団が約１．０５２ｇ／ｍＬ〜約１．０６３ｇ／ｍＬの密度を有するＢ３細胞集団である請求項２４に記載の組成物。
【請求項２７】
富化腎臓細胞集団がネイティブ腎臓に対し非自己である請求項１〜２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２８】
富化腎臓細胞集団がネイティブ腎臓に対し自己である請求項１〜２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２９】
腎疾患（ＫＤ）患者が治療薬による処置に応答するか否かを評価するためのキットの製造におけるマーカー発現の検出のための薬剤の使用であって、対照検体中の小胞またはその内腔含有物の量と比較して、治療薬で処置したＫＤ患者から採取した試験検体中の小胞またはその内腔含有物の量を検出することを含み、対照検体中の小胞またはその内腔含有物の量に比べて、試験検体中のより多いかまたはより少ない小胞またはその内腔含有物の量が該治療薬による処置に対する該患者の応答を示す使用。
【請求項３０】
小胞が腎臓由来小胞である請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
小胞がバイオマーカーを含む請求項２９または３０に記載の使用。
【請求項３２】
バイオマーカーがｍｉＲＮＡである請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
治療薬が腎臓細胞の富化集団を含む請求項２９に記載の使用。
【請求項３４】
試験検体が尿を含む請求項２９に記載の使用。
【請求項３５】
富化腎臓細胞集団により分泌されたヒトｍｉＲＮＡを含む請求項１〜２８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３６】
ｍｉＲＮＡが小胞またはエキソソームの一部であるか、内部にあるか、または結合している請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
ｍｉＲＮＡが小胞外である請求項３５に記載の組成物。
【請求項３８】
ネイティブ腎臓がヒト被検体のネイティブ腎臓である請求項１〜２８および請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３９】
ネイティブ腎臓が腎臓疾患を有するヒト被検体のネイティブ腎臓である請求項１〜２８および請求項３５〜３８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４０】
インビボでの接触が組成物の被検体へのインビボ投与を含む請求項３８または３９に記載の組成物。
【請求項４１】
再生効果が血管新生を含む請求項１〜２８および請求項３５〜４０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４２】
再生効果が
ａ）上皮間葉転換（ＥＭＴ）の減少；
ｂ）腎臓線維形成の減少および／または腎臓炎症の減少；
ｃ）ネイティブ腎臓中の幹細胞マーカーの発現差異を特徴とする；および
ｄ）血管新生
の一または複数を含む、請求項１〜１４、請求項１９〜２８および請求項３５〜４１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４３】
上皮間葉転換（ＥＭＴ）の減少がＴＧＦ−βシグナル伝達の減弱化を介する請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
富化腎臓細胞集団が、集合管および尿細管系の大型顆粒細胞を含有するＢ１細胞集団を枯渇している富化ヒト腎臓細胞集団である請求項１〜１８および請求項２７〜４２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４５】
富化腎臓細胞集団が、集合管および尿細管系の大型顆粒細胞を含有するＢ１細胞集団および低粒度および／または低生存率の壊死組織片および小細胞を含有するＢ５細胞集団を枯渇している富化ヒト腎臓細胞集団である請求項１〜１８および請求項２７〜４２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４６】
Ｂ１細胞集団が１．０４５ｇ／ｍＬ未満の密度を有する請求項４４または４５に記載の組成物。
【請求項４７】
Ｂ５細胞集団が１．０９１ｇ／ｍＬを超える密度を有する請求項４５に記載の組成物。
【請求項４８】
富化腎臓細胞集団が腎臓尿細管細胞で富化されている請求項４４または４５に記載の組成物。
【請求項４９】
富化ヒト腎臓細胞集団が一または複数の生理活性細胞集団で富化されている請求項４４または４５に記載の組成物。
【請求項５０】
各生理活性細胞集団が生体外培養後に密度勾配遠心法により取得可能な請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
生理活性細胞集団が尿細管細胞の富化集団を含有し、１．０４５ｇ／ｍＬ〜１．０５２ｇ／ｍＬの密度を有するＢ２細胞集団を含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
生理活性細胞集団がエリスロポエチン（ＥＰＯ）産生細胞、糸球体細胞および血管細胞を含有し、１．０５２ｇ／ｍＬ〜１．０６３ｇ／ｍＬの密度を有するＢ３細胞集団を含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５３】
生理活性細胞集団がエリスロポエチン（ＥＰＯ）産生細胞、糸球体細胞および血管細胞を含有し、１．０６３ｇ／ｍＬ〜１．０９１ｇ／ｍＬの密度を有するＢ４細胞集団を含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５４】
生理活性細胞集団が
（ａ）尿細管細胞の富化集団を含有し、１．０４５ｇ／ｍＬ〜１．０５２ｇ／ｍＬの密度を有するＢ２細胞集団；
（ｂ）エリスロポエチン（ＥＰＯ）産生細胞、糸球体細胞、尿細管細胞および血管細胞を含有し、１．０５２ｇ／ｍＬ〜１．０６３ｇ／ｍＬの密度を有するＢ３細胞集団；および
（ｃ）エリスロポエチン（ＥＰＯ）産生細胞、糸球体細胞および血管細胞を含有し、１．０６３ｇ／ｍＬ〜１．０９１ｇ／ｍＬの密度を有するＢ４細胞集団
を含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５５】
生理活性細胞集団が
（ａ）尿細管細胞の富化集団を含有し、１．０４５ｇ／ｍＬ〜１．０５２ｇ／ｍＬの密度を有するＢ２細胞集団；および
（ｂ）エリスロポエチン（ＥＰＯ）産生細胞、糸球体細胞および血管細胞を含有し、１．０５２ｇ／ｍＬ〜１．０６３ｇ／ｍＬの密度を有するＢ３細胞集団
を含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５６】
生理活性細胞集団が
（ａ）尿細管細胞の富化集団を含有し、１．０４５ｇ／ｍＬ〜１．０５２ｇ／ｍＬの密度を有するＢ２細胞集団；および
（ｂ）エリスロポエチン（ＥＰＯ）産生細胞、糸球体細胞および血管細胞を含有し、１．０６３ｇ／ｍＬ〜１．０９１ｇ／ｍＬの密度を有するＢ４細胞集団
を含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５７】
各細胞集団が生体外培養後に密度勾配遠心法により取得可能な請求項２１〜２３および請求項２５〜２６のいずれか１項に記載の組成物。