【手続補正書】
【提出日】平成26年8月14日(2014.8.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
天然ではコードされないアミノ酸を含む改変レラキシンポリペプチドであって、
（ａ）前記レラキシンポリペプチドは、Ａ鎖残基１、Ａ鎖残基２、Ａ鎖残基５、Ａ鎖残基１３、Ａ鎖残基１８、Ｂ鎖残基５およびＢ鎖残基７からなる群より選択される位置が天然ではコードされないアミノ酸で置換されている、配列番号４またはそれと配列８０％同一性のレラキシンＡ鎖ポリペプチドおよび配列番号５もしくは配列番号６またはそれらと配列８０％同一性のレラキシンＢ鎖ポリペプチドを含み、
（ｂ）前記天然ではコードされないアミノ酸は、
（ｉ）リンカー、ポリマー、水溶性ポリマーまたは生物学的に活性な分子に連結されているか、または
（ｉｉ）以下の構造を有し：
【化１】
2013542715.tif 000001
式中、Ｒ基は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシンまたはバリンで見られる側鎖以外の任意の置換基である、
改変レラキシンポリペプチド。
【請求項２】
天然ではコードされないアミノ酸を含む改変レラキシンポリペプチドであって、
（ａ）前記レラキシンポリペプチドは、Ａ鎖残基１、Ａ鎖残基２、Ａ鎖残基５、Ａ鎖残基１３、Ａ鎖残基１８、Ｂ鎖残基５およびＢ鎖残基７からなる群より選択される位置が天然ではコードされないアミノ酸で置換されている、配列番号４のレラキシンＡ鎖ポリペプチドおよび配列番号５または配列番号６のレラキシンＢ鎖ポリペプチドを含み、前記Ａ鎖および前記Ｂ鎖はそれぞれ、最大１つのさらなるアミノ酸置換を含み、
（ｂ）前記天然ではコードされないアミノ酸は、
（ｉ）リンカー、ポリマー、水溶性ポリマーまたは生物学的に活性な分子に連結されているか、または
（ｉｉ）以下の構造を有し：
【化２】
2013542715.tif 000002
式中、Ｒ基は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシンまたはバリンで見られる側鎖以外の任意の置換基である、
改変レラキシンポリペプチド。
【請求項３】
前記天然ではコードされないアミノ酸が、カルボニル基、アミノオキシ基、ヒドラジド基、ヒドラジン基、セミカルバジド基、アジド基またはアルキン基からなる群より選択される官能基を含む、請求項１または２に記載の改変レラキシンポリペプチド。
【請求項４】
前記天然ではコードされないアミノ酸が、オキシム連結またはトリアゾール連結により、リンカー、ポリマーまたは生物学的に活性な分子に連結されている、請求項１または２に記載の改変レラキシンポリペプチド。
【請求項５】
前記オキシム連結がカルボニル成分およびアミノオキシ成分の反応により形成されるか、または前記トリアゾール連結がアジド成分およびアルキン成分の反応により形成される、請求項４に記載の改変レラキシンポリペプチド。
【請求項６】
前記天然ではコードされないアミノ酸が、フェニルアラニン類似体または誘導体であるか、または、カルボニル基、アミノオキシ基、ヒドラジド基、ヒドラジン基、セミカルバジド基、アジド基もしくはアルキン基を含むパラ置換、オルト置換もしくはメタ置換フェニルアラニンから選択されるか、または、パラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンもしくはパラ−アジド−Ｌ−フェニルアラニンである、請求項１−５のいずれかに記載の改変レラキシンポリペプチド。
【請求項７】
前記天然ではコードされないアミノ酸が、ポリマー、水溶性ポリマーまたはオリゴ糖に連結されている、請求項１−６のいずれかに記載の改変レラキシンポリペプチド。
【請求項８】
前記天然ではコードされないアミノ酸が、ポリ（エチレングリコール）を含むポリマーに連結されている、請求項１−６のいずれかに記載の改変レラキシンポリペプチド。
【請求項９】
前記ポリ（エチレングリコール）が、約０．１ｋＤａ〜約１００ｋＤａ、約０．１ｋＤａ〜約５０ｋＤａ、約１ｋＤａ〜約４０ｋＤａ、約５ｋＤａ〜約４０ｋＤａまたは約２０ｋＤａの平均分子量を有する、請求項８に記載の改変レラキシンポリペプチド。
【請求項１０】
前記改変レラキシンポリペプチドが、組換え型であるか、真核宿主細胞において産生されるか、非真核宿主細胞において産生されるか、またはインビトロ翻訳により産生される、請求項１−９のいずれかに記載の改変レラキシンポリペプチド。
【請求項１１】
前記改変レラキシンポリペプチドが、配列番号４および配列番号５からなるヒトレラキシンに比べて、インビボ半減期の増加を示す、請求項１−１０のいずれかに記載の改変レラキシンポリペプチド。
【請求項１２】
前記半減期が、少なくとも２倍、５倍または１０倍から選択される量で延長されている、請求項１１に記載の改変レラキシンポリペプチド。
【請求項１３】
天然ではコードされないアミノ酸を含む改変レラキシンポリペプチドであって、
（ａ）前記レラキシンポリペプチドは、位置Ａ鎖残基１が天然ではコードされないアミノ酸で置換されている、配列番号４のレラキシンＡ鎖ポリペプチドおよび配列番号５または配列番号６のレラキシンＢ鎖ポリペプチドを含み、
（ｂ）前記天然ではコードされないアミノ酸は、約２０ｋＤａの平均分子量を有するポリ（エチレングリコール）成分を含むポリマーに連結されているパラ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンを含む、改変レラキシンポリペプチド。
【請求項１４】
前記天然ではコードされないアミノ酸が、カルボニル成分およびアミノオキシ（ヒドロキシルアミン）成分の反応により形成されるオキシム連結により、前記ポリマーに連結されている、請求項１３に記載の改変レラキシンポリペプチド。
【請求項１５】
前記改変レラキシンポリペプチドが生物学的に活性である、請求項１−１４のいずれかに記載の改変レラキシンポリペプチド。
【請求項１６】
請求項１−１５のいずれかに記載の改変レラキシンポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項１７】
アテローム性動脈硬化；１型糖尿病、２型糖尿病；冠動脈疾患、強皮症、脳卒中、拡張機能障害、家族性高コレステロール血症、収縮期高血圧、原発性高血圧、二次性高血圧、左室肥大、長期喫煙関連動脈壁硬化、肥満症関連動脈壁硬化、年齢関連動脈壁硬化、全身性エリテマトーデス、子癇前症、高コレステロール血症から選択される疾患の処置のために使用するための；または、上述の疾患の危険のある閉経期前後の、閉経期の、および閉経後の女性の動脈コンプライアンスを高めるために使用するための；または、血管収縮、ＮＯ産生または血小板凝集を調節するために使用するための；またはアンギオテンシン−ＩＩ（ＡｎｇＩＩ）媒介血管収縮またはエンドセリン−ｌ（ＥＴ−１）媒介血管収縮のために使用するための；または、心不全、うっ血性心不全、心筋組織の損失または損傷、心室充満圧または心室壁応力の増加、および／または動脈および静脈拡張の統合の障害の処置のために使用するための、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
Ａ鎖残基１、Ａ鎖残基２、Ａ鎖残基５、Ａ鎖残基１３、Ａ鎖残基１８、Ｂ鎖残基５およびＢ鎖残基７からなる群より選択される位置が天然ではコードされないアミノ酸で置換されている、配列番号４またはそれと配列８０％同一性のレラキシンＡ鎖ポリペプチドおよび配列番号５もしくは配列番号６またはそれらと配列８０％同一性のレラキシンＢ鎖ポリペプチドを含む少なくとも１つのレラキシンポリペプチドをコードする単離核酸であって、前記核酸が、前記天然ではコードされないアミノ酸をコードする少なくとも１つのセレクターコドンを含む、単離核酸。
【請求項１９】
前記セレクターコドンが、アンバーコドン、オーカーコドン、オパールコドン、ユニークコドン、レアコドンおよび４塩基コドンからなる群より選択される、請求項１８に記載の単離核酸。
【請求項２０】
請求項１−１５のいずれかに記載の改変レラキシンポリペプチドの作製方法であって、（１）前記レラキシンＡ鎖ポリペプチドおよび前記レラキシンＢ鎖ポリペプチドをコードし、前記天然ではコードされないアミノ酸をコードするセレクターコドンを含むポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチド、（２）直交性ＲＮＡシンテターゼ、および（３）直交性ｔＲＮＡを含む細胞を、前記天然ではコードされないアミノ酸を含むレラキシンポリペプチドの発現を可能とする条件下で培養すること；および前記天然ではコードされないアミノ酸を含むレラキシンポリペプチドを精製すること、を含む方法。