【手続補正書】
【提出日】平成26年3月7日(2014.3.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
【図１】図1は、百日咳菌（B. pertussis）、パラ百日咳菌（B. parapertussis）、及び気管支敗血症菌（B. bronchiseptica）のアデニル酸シクラーゼ（CyaA）のタンパク質配列（配列番号1〜3）、並びに百日咳菌、パラ百日咳菌、及び気管支敗血症菌のCyaAのヌクレオチド配列（配列番号4〜6）を示している。
【図２】図2は、百日咳菌、パラ百日咳菌、及び気管支敗血症菌のCyaAタンパク質のタンパク質アラインメントを示している。
【図３】図3は、CyaA-HPV16E7D30-42（A）及びCyaA-HPV18E7D32-42（B）の関連制限部位及び挿入配列が示されているpkTRACE5の模式的な遺伝子地図である。
【図４】図4（A）は、CyaA-CysOVAの関連制限部位及び挿入配列が示されているpTRACE5の模式的な遺伝子地図であり；図4（B）は、CyaA-MAGEA397-178/190-295の関連制限部位及び挿入配列が示されているpkTRACE5の模式的な遺伝子地図である。*MAGE-A3190-295は、MAGE A3の残基242〜295に融合された残基190〜221を表している。数字97、178、190、221、242、及び295は、全MAGE-A3配列のアミノ酸残基の位置を示し；図4（C）は、CyaA-MAGEA3ベクターのタンパク質配列（配列番号7）を示している。MAGEA3配列には下線が引かれている。制限部位：NheI（AS）、KpnI（GT）、AgeI（TG）、及びSpeI（TS）は、太字で示されている。
【図５】図5は、第11日目のアジュバント添加ProCervixによる治療的ワクチン接種により、定着した固形TC-1誘発腫瘍が根絶されている。監視の最後に：PBS+Aldara（商標）が接種されたマウスの群は、3/10のマウスが腫瘍の退縮を示し（A）、8μgのProCervixのみが接種されたマウスの群は、0/10のマウスが腫瘍の退縮を示している（B）。Poly-ICLC（C）又はAldara（商標）（局所イミキモド）（D）のいずれかがアジュバント添加されたProCervixを接種されたマウスは、7/10のマウスが腫瘍の退縮を示している。
【図６】図6は、アジュバント添加ProCervixによる治療的ワクチン接種が、第50日目におけるマウスの高い生存率と、腫瘍のないマウスの高い割合との両方をもたらすことを示している。第50日目に、ProCervix+Aldara（商標）又はProCervix+Poly-ICLCのいずれかが接種されたマウスは、腫瘍を示していない（A）。第50日目の生存率に関しては：第11日目にProCervix+Aldara（商標）が投与されたマウスの生存率が100％であり、ProCervix+Poly-ICLCが投与されたマウスの生存率が70％である（B）。
【図７】図7は、アジュバント添加ProCervixによる治療的ワクチン接種から60日後に、腫瘍のないマウスが、機能的HPV16 E749-57及びHPV18 E7AS43-49特異的記憶CD8+ T細胞を有することを示している。第60日目に、異なる群の腫瘍のないマウスに、CFSEhi HPV16E749-57パルス標的細胞、CFSEin非パルス標的細胞、及びCFSElo HPV18E7AS43-49パルス標的細胞を1：1：1の比で静注した。一晩置いてから、マウスを安楽死させ、脾臓を摘出し、抗原特異的in vivo細胞傷害性をFACS分析によって測定した。それぞれの点は、個々のマウスから得られた結果を表し；白丸は、HPV18 E7AS43-49パルス標的細胞の死滅率を表し、黒丸は、HPV16 E749-57パルス標的細胞の死滅率を表している。横線は、マウスの群の平均値を表している。
【図８】図8は、ワクチン接種の一般的な計画（Dは日数を意味する）を示し；表は、細胞接種及びワクチン接種（/：非接種）の種類及び部位をまとめたものである。
【図９】図9は、HPV16 E7抗原を包埋した、Aldara（商標）アジュバント添加CyaA二価ワクチンによる治療的ワクチン接種により、TC-1誘発固形腫瘍が排除されることを示している。1つの群が10匹であるマウスの右側腹部における腫瘍性TC-1細胞の体積（mm3）を、第0日目（D0）から第100日目（D100）まで観察した。群1のマウスには、プラセボを接種し、群2のマウスには、プラセボ+ Aldara（商標）を接種し、群3のマウスには、Aldara（商標）アジュバント添加CyaA-MAGEA397-178/190-295/CyaA-HPV16 E7を接種し、群4のマウスには、Aldara（商標）アジュバント添加CyaA-cysOVA/CyaA-HPV16 E7を接種し、群5及び群6のマウスには、Aldara（商標）アジュバント添加ProCervixを接種した。各グラフの右の番号は、各群の各マウスに割り当てられた番号に対応している。
【図１０】図10は、CyaAをベースとした二価ワクチン接種によりTC1誘発腫瘍が治癒したマウスが、抗原特異的に別の無関連の腫瘍の曝露から保護されていることを示している。TC1曝露されて第60日目に生存していたマウスの左側腹部における腫瘍性B16 MAGE A3細胞（a及びc）又は腫瘍性EG7-OVA細胞（b及びd）の体積を、第60日目（D60）から第100日目（D100）まで観察した。各グラフの右の番号は、TC1曝露された各マウスに予め割り当てられた番号に対応している（図9）。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
一実施態様では、本発明はまた、（i）特に、第1の群のエピトープに対するT細胞免疫応答を誘発することによる、哺乳動物宿主で診断される第1の確定される病的状態（複数可）の免疫治療、（ii）特に、第2の群のエピトープに対するT細胞記憶免疫応答を誘発することによる、第2の確定される病的状態（複数可）に対する予防、及び（iii）任意である、特に第1の群のエピトープに対するT細胞記憶免疫応答を誘発することによる、前記第1の確定される病的状態（複数可）の再発の防止を、同じ哺乳動物宿主で達成する方法にも関し、第2の確定される病的状態（複数可）に対する前記予防が、前記第2の群のエピトープが前記投与されるベクター保持ポリペプチド（複数可）に含まれていない場合には観察されず、前記方法が、前記哺乳動物宿主に以下のいずれかを少なくとも1回投与するステップを含む：
（1）ベクター保持ポリペプチド（複数可）であって、ポリペプチド（複数可）を保持する前記ベクターが、前記ポリペプチド（複数可）を哺乳動物宿主の免疫系に提示するのに適したCyaAタンパク質又はその断片からなり、前記第1の群のエピトープ及び第2の群のエピトープが、前記ベクターによって保持された少なくとも1つのポリペプチド（複数可）に含まれており、前記第2の群のエピトープの少なくとも1つのエピトープが、第1の群のエピトープのエピトープとは異なる、該ベクター保持ポリペプチド（複数可）；
（2）医薬として許容し得るビヒクルと組み合わせた、（1）で定義されたベクター保持ポリペプチド（複数可）を含む組成物；又は
（3）（a）第1のベクター保持ポリペプチド（複数可）であって、ポリペプチド（複数可）を保持する前記第1のベクターが、前記ポリペプチド（複数可）を哺乳動物宿主の免疫系に提示するのに適したCyaAタンパク質又はその断片からなり、前記第1の群のエピトープが、前記第1のベクターによって保持された少なくとも1つのポリペプチド（複数可）に含まれている、該第1のベクター保持ポリペプチド（複数可）、及び（b）第2の別のベクター保持ポリペプチド（複数可）であって、ポリペプチド（複数可）を保持する前記第2のベクター分子が、前記ポリペプチド（複数可）を哺乳動物宿主の免疫系に提示するのに適したCyaAタンパク質又はその断片からなり、前記第2の群のエピトープが、前記第2のベクターによって保持された少なくとも1つのポリペプチド（複数可）に含まれている、該第2の別のベクター保持ポリペプチド（複数可）を含む組成物。