【手続補正書】
【提出日】平成23年1月31日(2011.1.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト患者における乳癌または乳癌関連骨量減少を治療または予防するための組成物であって、有効量のＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質を含む、組成物。
【請求項２】
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が、
ａ．配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｂ．配列番号３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド、および
ｃ．配列番号２の少なくとも５０個の連続したアミノ酸を含むポリペプチド
からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が、以下の特性：
ｉ．少なくとも１０−７ＭのＫＤでＡｃｔＲＩＩａリガンドと結合すること、および
ｉｉ．細胞中のＡｃｔＲＩＩａシグナル伝達を阻害すること
の１つまたは複数を有する、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分と結合したアミノ酸、および有機誘導体化剤と結合したアミノ酸から選択される１つまたは複数の修飾アミノ酸残基を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項９】
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を各々が含む２個のポリペプチドで形成される二量体であり、該ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が３個以上のシアル酸部分を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が３〜５個のシアル酸部分を含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記患者の骨格筋量の１０％未満の増大を引き起こすことを特徴とする、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記患者中で少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇの前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質の血清濃度に到達するように投与されることを特徴とする、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が配列番号７のアミノ酸配列を有する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が、正常で健常なヒト中で１５〜４０日の血清半減期を有する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】
１週間当たり１回を超えない頻度で前記患者に投与されることを特徴とする、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１７】
１カ月当たり１回を超えない頻度で前記患者に投与されることを特徴とする、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１８】
３カ月当たり１回を超えない頻度で前記患者に投与されることを特徴とする、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記患者が、骨吸収阻害療法（ｂｏｎｅ  ａｎｔｉ-ｒｅｓｏｒｐｔｉｖｅ  ｔｈｅｒａｐｙ）を受けているか、またはＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質の投与前１年以内にそれを受けたことを特徴とする、請求項１から１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
再吸収阻害薬が、ビスホスホネート薬、ＲＡＮＫリガンドアンタゴニストおよびオステオプロテグリンアンタゴニストからなる群から選択される、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
放射線療法、内分泌療法または細胞毒性薬の前記ヒト患者への投与とともに投与されることをさらに特徴とする、請求項１から１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
前記ヒト患者が乳癌について１つまたは複数の危険因子を有する女性である、請求項１から１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
乳癌または乳癌関連骨量減少を治療または予防するための組成物であって、有効量のアクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストを含む組成物。
【請求項２４】
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストがアクチビンまたはＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストポリペプチドである、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストが、
ａ．抗アクチビン抗体、および
ｂ．抗ＡｃｔＲＩＩａ抗体
からなる群から選択される抗体である、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物の投与が乳癌の発症の遅延を引き起こすか、乳癌の進行を阻害するか、転移の発症を遅延させるか、または腫瘍の大きさを低下させる、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記対象がヒトである、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２８】
前記ヒトが乳癌について１つまたは複数の危険因子を有する女性である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
放射線療法、内分泌療法または細胞毒性薬の前記対象への投与とともに投与されることをさらに特徴とする、請求項２３に記載の組成物。
【請求項３０】
乳癌を治療または予防するのに有用である作用物質を同定する方法であって、
ａ．ＡｃｔＲＩＩａリガンドと競合的にＡｃｔＲＩＩａポリペプチドのリガンド結合ドメインと結合する試験作用物質を同定することと、
ｂ．乳癌細胞の増殖または生存に対する該作用物質の効果を評価することと
を含む方法。
【請求項３１】
乳癌を有するヒト患者におけるアクチビン媒介シグナル伝達を阻害するための組成物であって、有効量のアクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストを含む、組成物。
【請求項３２】
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストがアクチビンまたはＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストポリペプチドである、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストがアクチビンまたはＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストポリペプチドである、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストが、
ａ．抗アクチビン抗体、および
ｂ．抗ＡｃｔＲＩＩａ抗体
からなる群から選択される抗体である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３５】
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストポリペプチドが、
ａ．配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｂ．配列番号３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド、および
ｃ．配列番号２から選択される少なくとも５０個の連続したアミノ酸を含むポリペプチド
からなる群から選択される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３６】
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストポリペプチドが、以下の特性：
ｉ．少なくとも１０−７ＭのＫＤでＡｃｔＲＩＩａリガンドと結合すること、および
ｉｉ．細胞中のＡｃｔＲＩＩａシグナル伝達を阻害すること
の１つまたは複数を有する、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３７】
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストポリペプチドが、ＡｃｔＲＩＩａポリペプチドドメインに加えて、ｉｎ  ｖｉｖｏ安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期、摂取／投与、組織局在または分布、タンパク質複合体の形成、および／または精製の１つまたは複数を高める１つまたは複数のポリペプチド部分を含む融合タンパク質である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３８】
前記融合タンパク質が、免疫グロブリンＦｃドメインおよび血清アルブミンからなる群から選択されるポリペプチド部分を含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストポリペプチドが、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分と結合したアミノ酸、および有機誘導体化剤と結合したアミノ酸から選択される１つまたは複数の修飾アミノ酸残基を含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４０】
ヒト患者における乳癌または乳癌関連骨量減少の治療または予防用の医薬品を製造するためのＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質の使用。
【請求項４１】
ヒト患者における乳癌または乳癌関連骨量減少の治療または予防において使用するためのＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質。
【請求項４２】
対象における乳癌または乳癌関連骨量減少の治療または予防用の医薬品を製造するためのアクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストの使用。
【請求項４３】
対象における乳癌または乳癌関連骨量減少の治療または予防において使用するためのアクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニスト。
【請求項４４】
乳癌を有するヒト患者におけるアクチビン媒介シグナル伝達を阻害するための医薬品を製造するためのアクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストの使用。
【請求項４５】
乳癌を有するヒト患者におけるアクチビン媒介シグナル伝達を阻害する際に使用するためのアクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニスト。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
特定の態様において本開示は、癌細胞（例えば、乳癌細胞）の増殖または生存を阻害する作用物質を同定するための方法を提供する。この方法は、ａ）アクチビンまたはＡｃｔＲＩＩａポリペプチドのリガンド結合ドメインと結合する試験作用物質を同定すること、およびｂ）癌細胞の増殖、生存、またはアポトーシスに対する作用物質の効果を評価することを含む。
したがって、本発明は以下の項目を提供する：
（項目１）
ヒト患者における乳癌または乳癌関連骨量減少を治療または予防するための方法であって、有効量のＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質を該患者に投与することを含む、方法。
（項目２）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が、
ａ．配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｂ．配列番号３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド、および
ｃ．配列番号２の少なくとも５０個の連続したアミノ酸を含むポリペプチド
からなる群から選択される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が、以下の特性：
ｉ．少なくとも１０−７ＭのＫＤでＡｃｔＲＩＩａリガンドと結合すること、および
ｉｉ．細胞中のＡｃｔＲＩＩａシグナル伝達を阻害すること
の１つまたは複数を有する、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分と結合したアミノ酸、および有機誘導体化剤と結合したアミノ酸から選択される１つまたは複数の修飾アミノ酸残基を含む、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、項目２に記載の方法。
（項目６）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、項目２に記載の方法。
（項目７）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が配列番号３のアミノ酸配列を含む、項目２に記載の方法。
（項目８）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目２に記載の方法。
（項目９）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を各々が含む２個のポリペプチドで形成される二量体であり、該ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が３個以上のシアル酸部分を含む、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目９に記載の方法。
（項目１１）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が３〜５個のシアル酸部分を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記患者の骨格筋量の１０％未満の増大を引き起こす、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記患者中で少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇの血清濃度に到達するように前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質を投与する、項目１１に記載の方法。
（項目１４）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が配列番号７のアミノ酸配列を有する、項目１１に記載の方法。
（項目１５）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質が、正常で健常なヒト中で１５〜４０日の血清半減期を有する、項目１１に記載の方法。
（項目１６）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質を、１週間当たり１回を超えない頻度で前記患者に投与する、項目１１に記載の方法。
（項目１７）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質を、１カ月当たり１回を超えない頻度で前記患者に投与する、項目１１に記載の方法。
（項目１８）
前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質を、３カ月当たり１回を超えない頻度で前記患者に投与する、項目１１に記載の方法。
（項目１９）
前記患者が、前記ＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質の投与前１年以内に、骨吸収阻害療法（ｂｏｎｅ  ａｎｔｉ-ｒｅｓｏｒｐｔｉｖｅ  ｔｈｅｒａｐｙ）を受けているか
、または受けた、項目１から１８のいずれかに記載の方法。
（項目２０）
再吸収阻害薬が、ビスホスホネート薬、ＲＡＮＫリガンドアンタゴニストおよびオステオプロテグリンアンタゴニストからなる群から選択される、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
放射線療法、内分泌療法または細胞毒性薬を前記ヒト患者に施すことをさらに含む、項目１から１８のいずれかに記載の方法。
（項目２２）
前記ヒト患者が乳癌について１つまたは複数の危険因子を有する女性である、項目１から１８のいずれかに記載の方法。
（項目２３）
乳癌または乳癌関連骨量減少を治療または予防する方法であって、有効量のアクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストをその必要がある対象に投与することを含む方法。
（項目２４）
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストがアクチビンまたはＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストポリペプチドである、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストが、
ａ．抗アクチビン抗体、および
ｂ．抗ＡｃｔＲＩＩａ抗体
からなる群から選択される抗体である、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストの投与が乳癌の発症の遅延を引き起こすか、乳癌の進行を阻害するか、転移の発症を遅延させるか、または腫瘍の大きさを低下させる、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記対象がヒトである、項目２３に記載の方法。
（項目２８）
前記ヒトが乳癌について１つまたは複数の危険因子を有する女性である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
放射線療法、内分泌療法または細胞毒性薬を前記対象に施すことをさらに含む、項目２３に記載の方法。
（項目３０）
乳癌を治療または予防するのに有用である作用物質を同定する方法であって、
ａ．ＡｃｔＲＩＩａリガンドと競合的にＡｃｔＲＩＩａポリペプチドのリガンド結合ドメインと結合する試験作用物質を同定することと、
ｂ．乳癌細胞の増殖または生存に対する該作用物質の効果を評価することと
を含む方法。
（項目３１）
乳癌を有するヒト患者におけるアクチビン媒介シグナル伝達を阻害する方法であって、有効量のアクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストを該ヒト患者に投与することを含む、方法。
（項目３２）
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストがアクチビンまたはＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストポリペプチドである、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストがアクチビンまたはＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストポリペプチドである、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストが、
ａ．抗アクチビン抗体、および
ｂ．抗ＡｃｔＲＩＩａ抗体
からなる群から選択される抗体である、項目３１に記載の方法。
（項目３５）
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストポリペプチドが、
ａ．配列番号２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド、
ｂ．配列番号３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド、および
ｃ．配列番号２から選択される少なくとも５０個の連続したアミノ酸を含むポリペプチド
からなる群から選択される、項目３１に記載の方法。
（項目３６）
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストポリペプチドが、以下の特性：
ｉ．少なくとも１０−７ＭのＫＤでＡｃｔＲＩＩａリガンドと結合すること、および
ｉｉ．細胞中のＡｃｔＲＩＩａシグナル伝達を阻害すること
の１つまたは複数を有する、項目３１に記載の方法。
（項目３７）
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストポリペプチドが、ＡｃｔＲＩＩａポリペプチドドメインに加えて、ｉｎ  ｖｉｖｏ安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期、摂取／投与、組織局在または分布、タンパク質複合体の形成、および／または精製の１つまたは複数を高める１つまたは複数のポリペプチド部分を含む融合タンパク質である、項目３５に記載の方法。
（項目３８）
前記融合タンパク質が、免疫グロブリンＦｃドメインおよび血清アルブミンからなる群から選択されるポリペプチド部分を含む、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記アクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストポリペプチドが、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分と結合したアミノ酸、および有機誘導体化剤と結合したアミノ酸から選択される１つまたは複数の修飾アミノ酸残基を含む、項目３７に記載の方法。
（項目４０）
ヒト患者における乳癌または乳癌関連骨量減少の治療または予防用の医薬品を製造するためのＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質の使用。
（項目４１）
ヒト患者における乳癌または乳癌関連骨量減少の治療または予防において使用するためのＡｃｔＲＩＩａ−Ｆｃ融合タンパク質。
（項目４２）
対象における乳癌または乳癌関連骨量減少の治療または予防用の医薬品を製造するためのアクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストの使用。
（項目４３）
対象における乳癌または乳癌関連骨量減少の治療または予防において使用するためのアクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニスト。
（項目４４）
乳癌を有するヒト患者におけるアクチビン媒介シグナル伝達を阻害するための医薬品を製造するためのアクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニストの使用。
（項目４５）
乳癌を有するヒト患者におけるアクチビン媒介シグナル伝達を阻害する際に使用するためのアクチビン−ＡｃｔＲＩＩａアンタゴニスト。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２５】
【化１０】
2010518006.tif 000001
ＡｃｔＲＩＩａ−ｈＦｃとＡｃｔＲＩＩａ−ｍＦｃの両方が、組換え発現の影響を特に受けやすかった。図１中に示すように、タンパク質の単一の明確なピークとしてタンパク質を精製した。Ｎ末端の配列決定によって、−ＩＬＧＲＳＥＴＱＥ（配列番号１１）という単一の配列が明らかになった。精製は、例えば任意の順序で以下の：プロテインＡクロマトグラフィー、Ｑセファロースクロマトグラフィー、フェニルセファロースクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、およびカチオン交換クロマトグラフィーの３個以上を含む一連のカラムクロマトグラフィーステップによって実施することができた。精製はウイルス濾過およびバッファー交換を用いて完了することができた。ＡｃｔＲＩＩａ−ｈＦｃタンパク質は、サイズ排除クロマトグラフィーにより決定して９８％を超える純度、およびＳＤＳＰＡＧＥにより決定して９５％を超える純度に精製した。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2010518006000001.app