【手続補正書】
【提出日】平成26年10月31日(2014.10.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
集合ドメイン（ＡＤ）と、細胞ターゲティングドメイン（ＣＴＤ）と、ヌクレオチド結合ドメイン（ＮＢＤ）を含む単離されたポリペプチド。
【請求項２】
さらに、薬剤結合ドメイン（ＤＢＤ）を含む請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
単離されたポリペプチドが配列番号５６を含む請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】
核酸結合ドメイン（ＮＢＤ）が、任意で
Ｋが１より大きい整数であるアミノ酸配列（Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＬｙｓＫ−Ｇｌｙ）を含むオリゴリジンドメイン及び／又は
Ｒが１より大きい整数であるアミノ酸配列（Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＡｒｇＲ−Ｇｌｙ）を含むオリゴアルギニンを含む、カチオン性ドメインを含む請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】
Ｋが８に等しく及び／又はＲが９に等しい請求項４に記載のポリペプチド。
【請求項６】
ＡＤがエラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）及び／又は
アミノ酸配列（Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ）Ｎ（配列番号５７）を含み、ＸがＶａｌ、Ａｌａ及びＧｌｙを含むペプチドであり、Ｎが１以上の整数である請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項７】
Ｎが６０に等しく、及び／又はＸが約５：２：３の比にてＶａｌ、Ａｌａ及びＧｌｙを含むペプチドである請求項６に記載のポリペプチド。
【請求項８】
ＣＴＤが、配列番号１〜２７のいずれかの配列を含む請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
ＣＴＤが配列番号１９を含む請求項１〜８のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
ＣＴＤが、標的細胞の外側、標的細胞の内側、標的細胞の外表面上、標的細胞の内表面上、及び／又は標的細胞の他の表面上に存在する生体分子と相互作用する請求項１〜９のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
請求項１に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１２】
単離されたポリヌクレオチドが配列番号５５を含む請求項１１に記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１３】
請求項１１又は請求項１２のいずれかのポリヌクレオチドを含む宿主細胞及び／又は組換え発現構築物。
【請求項１４】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の１以上のポリペプチドを含むナノ粒子であって、溶液中で集合する前記ナノ粒子。
【請求項１５】
さらに薬剤を含む請求項１４に記載のナノ粒子。
【請求項１６】
標的細胞に薬剤を向けるための組成物であって、
集合ドメイン（ＡＤ）と、細胞ターゲティングドメイン（ＣＴＤ）と、ヌクレオチド（ＮＢＤ）及び／又は薬剤（ＤＢＤ）を結合するドメインを含む１以上のポリペプチドを含み、
薬剤が１以上のポリペプチドのＮＢＤ及び／又はＤＢＤと接触させられることと、
１以上のポリペプチドのＡＤを集合させて集合ポリペプチドが生成されることと、
集合ポリペプチドが標的細胞と接触させられることと、
集合ポリペプチドのＣＴＤが標的細胞の外側及び／又は内側に存在する生体分子と接触させられることとを特徴とする、組成物。
【請求項１７】
１以上のポリペプチドが配列番号５６を含む請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
薬剤が、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、アンチセンスＲＮＡ、一本鎖核酸、二本鎖核酸、ＤＮＡ発現ベクター、ＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、ウイルスベクター、オリゴヌクレオチド及び／又は化合物を含む請求項１６〜１７のいずれかに記載の組成物又は請求項１５に記載のナノ粒子。
【請求項１９】
標的細胞が、ヒト膀胱細胞、ヒト乳腺細胞、ヒト結腸細胞、ヒト肝臓細胞、ヒト肺細胞、ヒト神経芽腫細胞、ヒト卵巣細胞、ヒト膵臓細胞、ヒト前立腺細胞、又はヒト皮膚細胞を含む腫瘍細胞である請求項１６〜１８のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
生体分子が、フィブロネクチン、ラミニン、細胞接着分子及び／又は受容体分子を含む請求項１６〜１９のいずれかに記載の組成物又は請求項１０に記載のポリペプチド。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
本発明は、治療用組成物に対してポリペプチド送達ビヒクルを提供することによって従来技術における欠陥を克服する。本発明のポリペプチド送達ビヒクルは一般に治療用分子との複合体にてエラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）を含む。たとえば、そのようなＥＬＰ組成物は、治療用の小分子、ポリペプチド又は核酸と複合体化したＥＬＰを含み得る。場合によっては、ＥＬＰは治療用分子と共有結合し得る。たとえば、ＥＬＰ組成物は、小分子と共有結合したＥＬＰドメイン又はペプチド結合によって治療用ポリペプチドに結合したＥＬＰ（すなわち、ＥＬＰ融合タンパク質）を含み得る。さらに場合によっては、ＥＬＰは治療用分子に結合するポリペプチドに融合し得る。同様に、ＥＬＰはたとえば、治療用分子に結合するアプタマーのような核酸アプタマーとともに複合体化し得るし、又はそれと共有結合し得る。
記載されるナノ粒子システムのモジュール型の性質は、化学合成技術又は組換えＤＮＡ技術のいずれかによって異なった薬物結合ペプチドの又はターゲティングペプチドの配列を分子の構造に容易に導入することができるという点で、現在のリポソーム又はナノ粒子の薬剤送達システムに有利な柔軟性を提供する。非限定例では、ナノ粒子ポリペプチドを調製するのに使用されるプラスミドベクターに本発明に係るポリペプチドをコードする核酸をクローニングすることができ、特定のターゲティング配列をその特定の実施形態に導入することができる。別の利点は製造の簡素性であり、その際、組換えベクター又は発現構築物を適切な細胞種に導入することができ（たとえば、ナノ粒子ポリペプチド用のＤＮＡ配列を持つプラスミドを細菌細胞に導入する）、ポリペプチドが多量に産生され、特異的な結合、とりわけ、ＤＮＡアフィニティカラムを用いて精製される。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
集合ドメイン（ＡＤ）と、細胞ターゲティングドメイン（ＣＴＤ）と、核酸結合ドメイン（ＮＢＤ）を含む単離されたポリペプチド。
（項目２）
さらに薬剤結合ドメイン（ＤＢＤ）を含む項目１に記載のポリペプチド。
（項目３）
核酸結合ドメイン（ＮＢＤ）がｓｉＲＮＡに結合する項目１に記載のポリペプチド。
（項目４）
単離されたポリペプチドが配列番号５６を含む項目１に記載のポリペプチド。
（項目５）
ＮＢＤがカチオン性ドメインを含む項目１に記載のポリペプチド。
（項目６）
ＮＢＤがオリゴリジンドメインを含み、前記オリゴリジンドメインがアミノ酸配列（Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＬｙｓＫ−Ｇｌｙ）を含み、Ｋが１より大きい整数である項目１に記載のポリペプチド。
（項目７）
Ｋが８に等しい項目６に記載のポリペプチド。
（項目８）
ＮＢＤがオリゴアルギニンドメインを含み、前記オリゴアルギニンドメインがアミノ酸配列（Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＡｒｇＲ−Ｇｌｙ）を含み、Ｒが１より大きい整数である項目１に記載のポリペプチド。
（項目９）
Ｒが９に等しい項目８に記載のポリペプチド。
（項目１０）
ＤＢＤが、従来の薬剤又は試験中の薬剤に結合する項目２に記載のポリペプチド。
（項目１１）
ＡＤがエラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）を含む項目１に記載のポリペプチド。
（項目１２）
ＥＬＰがアミノ酸配列（Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｇｌｙ）Ｎ（配列番号５７）を含み、ＸがＶａｌ、Ａｌａ及びＧｌｙを含むペプチドであり、Ｎが１以上の整数である項目１１に記載のポリペプチド。
（項目１３）
Ｎが６０に等しい項目１２に記載のポリペプチド。
（項目１４）
Ｘが、約５：２：３の比率でＶａｌ、Ａｌａ及びＧｌｙを含むペプチドである項目１２に記載のポリペプチド。
（項目１５）
ＣＴＤが、標的細胞の表面上に存在する生体分子と相互作用する項目１に記載のポリペプチド。
（項目１６）
ＣＴＤが、標的細胞の外表面上に存在する生体分子と相互作用する項目１に記載のポリペプチド。
（項目１７）
ＣＴＤが、標的細胞の内表面上に存在する生体分子と相互作用する項目１に記載のポリペプチド。
（項目１８）
ＣＴＤが配列番号１９を含む項目１に記載のポリペプチド。
（項目１９）
生体分子が細胞接着分子を含む項目１５に記載のポリペプチド。
（項目２０）
生体分子が受容体分子を含む項目１５に記載のポリペプチド。
（項目２１）
細胞接着分子がフィブロネクチン又はラミニンを含む項目１９に記載のポリペプチド。
（項目２２）
項目１に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有する単離されたポリヌクレオチド。
（項目２３）
単離されたポリヌクレオチドが配列番号５５を含む項目２２に記載の単離されたポリヌクレオチド。
（項目２４）
項目２２に記載のポリヌクレオチドを含む組換え発現構築物。
（項目２５）
項目２２に記載のポリヌクレオチドを含む宿主細胞。
（項目２６）
項目１に記載の１以上のポリペプチドを含むナノ粒子であって、溶液中で集合する前記ナノ粒子。
（項目２７）
薬剤をさらに含む項目２６に記載のナノ粒子。
（項目２８）
薬剤がｓｉＲＮＡ分子である項目２７に記載のナノ粒子。
（項目２９）
ポリペプチドが配列番号５６を含む項目２６に記載のナノ粒子。
（項目３０）
標的細胞に対して薬剤を向ける方法であって、
凝集ドメイン（ＡＤ）、ヌクレオチド結合ドメイン（ＮＢＤ）、及び細胞ターゲティングドメイン（ＣＴＤ）を含む１以上のポリペプチドを得ることと；
１以上のポリペプチドのＮＢＤに薬剤を接触させることと；
１以上のポリペプチドのＡＤを凝集させて集合ポリペプチドを生成することと；
集合ポリペプチドを標的細胞に接触させることと；
標的細胞の外側に存在する生体分子に集合ポリペプチドのＣＴＤを接触させることを含む、前記方法。
（項目３１）
標的細胞に対して薬剤を向ける方法であって、
凝集ドメイン（ＡＤ）、薬剤結合ドメイン（ＤＢＤ）、及び細胞ターゲティングドメイン（ＣＴＤ）を含む１以上のポリペプチドを得ることと；
１以上のポリペプチドのＤＢＤに薬剤を接触させることと；
１以上のポリペプチドのＡＤを凝集させて集合ポリペプチドを生成することと；
集合ポリペプチドを標的細胞に接触させることと；
標的細胞の外側に存在する生体分子に集合ポリペプチドのＣＴＤを接触させることを含む、前記方法。
（項目３２）
１以上のポリペプチドが配列番号５６を含む項目３０に記載の方法。
（項目３３）
生体分子が標的細胞の内側に存在する項目３０に記載の方法。
（項目３４）
薬剤がｓｉＲＮＡ分子を含む項目３０に記載の方法。
（項目３５）
細胞が腫瘍細胞を含む項目３０に記載の方法。
（項目３６）
腫瘍細胞が、ヒト膀胱細胞、ヒト乳腺細胞、ヒト結腸細胞、ヒト肝臓細胞、ヒト肺細胞、ヒト神経芽腫細胞、ヒト卵巣細胞、ヒト膵臓細胞、ヒト前立腺細胞又はヒト皮膚細胞である項目３５に記載の方法。
（項目３７）
生体分子が細胞接着分子を含む項目３０に記載の方法。
（項目３８）
生体分子が受容体分子を含む項目３０に記載の方法。
（項目３９）
細胞接着分子がフィブロネクチン又はラミニンを含む項目３７に記載の方法。