【手続補正書】
【提出日】平成24年5月21日(2012.5.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一つ以上の細胞運命デターミナントおよび一つ以上の転写因子をコードするヌクレオチド配列を含むベクターであって、該一つ以上の細胞運命デターミナントおよび一つ以上の転写因子は、Ｎｕｍｂ、Ｎｕｍｂｌｉｋｅ、ＨＯＸＢ４、ＯＣＴ３／４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、ｌｉｎ２８、ｃ−ｍｙｃ、ＦＧＦ４、ＬＩＦ活性を有するタンパク質、Ｍａｓｈ１（Ａｓｃｌ１）、ＭｙｏＤ、ミオゲニン、Ｍｙｆ５、Ｍｙｆ６、Ｍｅｆ２、ミオカーディン、Ｉｆｒｄ１、筋肉転写因子、筋タイプ特定ｂＨＬＨ−コード化配列、Ｆｏｘａ２、Ｓｏｘ１７、ＨＬＸＢ９、Ｐｄｘ１、肝核因子（ＨＮＦ）−１、ＨＮＦ−３、ＨＮＦ−４、ＨＮＦ−６、ＣＲＥＢ−結合タンパク質、Ｒｕｎｘ１／ＡＭＬ１、ＮＯＶ（ＣＣＮ３）、Ｓｏｘ９、ＯＬＩＧ１、ＯＬＩＧ２、Ｚｆｐ４８８、Ｇａｔａ４、Ｇａｔａ５、Ｇａｔａ６、Ｒｕｎｘ２、Ｎｕｒｒ１、ＲＥＮ、ニューロゲニン１、ニューロゲニン２、ニューロゲニン３、Ｐｈｏｘ２ａ、Ｐｈｏｘ２ｂ、ｄＨａｎｄ、Ｓｈｈ、ＦＧＦ８、Ｌｍｘ１ｂ、Ｎｋｘ２．２、Ｐｅｔ１、Ｌｂｘ１、Ｒｎｘ、Ｐｔｘ−３、Ｇａｔａ２、Ｇａｔａ３、Ｒｅｓｔ４、ＰＩＴＸ２、Ｄｌｘ２、Ｄｌｘ５、ｓｔａｔ３、テロメラーゼ、およびＨＥＳ１標的合成オリゴヌクレオチド、またはその一部分から選択され、該ベクターは、体細胞、分化細胞、再プログラミングされた細胞、生殖細胞、精原細胞、または遺伝子改変細胞をトランスフェクトし、そして所望の細胞集団を産生するためのものである、ベクター。
【請求項２】
請求項１に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項３】
所望の細胞集団を産生するためのインビトロの方法であって、該方法は、
分裂細胞および非分裂細胞、外因性細胞および内因性細胞、体細胞、分化細胞、再プログラミングされた細胞、生殖細胞、精原細胞、および遺伝子改変細胞からなる群から、細胞を選択する工程；および
該選択された細胞中で一つ以上のタンパク質、または該タンパク質をコードする一つ以上のヌクレオチド配列を過剰発現するのに有効なように、該選択された細胞を、請求項１に記載のベクターと接触させる工程であって、該タンパク質は、該所望の細胞集団に特異的な細胞運命デターミナントおよび転写因子からなる群から選択される、工程
を含み、その結果、該所望の細胞集団は、該分裂細胞および非分裂細胞、外因性細胞および内因性細胞、体細胞、分化細胞、再プログラミングされた細胞、生殖細胞、精原細胞、および遺伝子改変細胞から産生される、方法。
【請求項４】
前記一つ以上の細胞運命デターミナントまたは転写因子、あるいは、該細胞運命デターミナントまたは転写因子をコードする一つ以上のヌクレオチド配列は、
ａ）前記所望の細胞集団が、神経細胞集団である場合、Ｍａｓｈ１（Ａｓｃｌ１）またはその一部分；
ｂ）該所望の細胞集団が、筋肉細胞集団である場合、ＭｙｏＤ、ミオゲニン、Ｍｙｆ５、Ｍｙｆ６、Ｍｅｆ２、ミオカーディン、Ｉｆｒｄ１、筋肉転写因子および／または筋タイプ特異的ｂＨＬＨ−コード化配列、またはその一部分；
ｃ）該所望の細胞集団が、内胚葉細胞または膵臓ランゲルハンス島細胞集団である場合、Ｆｏｘａ２、Ｓｏｘ１７、ＨＬＸＢ９、および／またはＰｄｘ１、またはその一部分；
ｄ）該所望の細胞集団が、肝細胞集団である場合、肝核因子（ＨＮＦ）−１、ＨＮＦ−３、ＨＮＦ−４、ＨＮＦ−６、および／またはＣＲＥＢ結合タンパク質、またはその一部分；
ｅ）該所望の細胞集団が、造血細胞集団である場合、Ｒｕｎｘ１／ＡＭＬ１および／またはＮＯＶ（ＣＣＮ３）、またはその一部分；
ｆ）該所望の細胞集団が、軟骨細胞集団である場合、Ｓｏｘ９、ＣＲＥＢ結合タンパク質、Ｇａｔａ６および／またはＲｕｎｘ２、またはその一部分；
ｇ）該所望の細胞集団が、希突起膠細胞集団である場合、ＯＬＩＧ１、ＯＬＩＧ２および／またはＺｆｐ４８８、またはその一部分；
ｈ）該所望の細胞集団が、筋肉細胞である場合、ＭｙｏＤ、ミオゲニン、ミオカーディン、Ｍｙｆ５、Ｍｙｆ６、Ｍｅｆ２Ａ、Ｇａｔａ４、Ｇａｔａ５、およびＧａｔａ６、またはその一部分；
ｉ）該所望の細胞集団が、心筋細胞集団である場合、Ｇａｔａ４、Ｇａｔａ５、および／またはＧａｔａ６、またはその一部分；
ｊ）該所望の細胞集団が、平滑筋細胞集団である場合、ミオカーディン、またはその一部分；
ｋ）該所望の細胞集団が、骨格筋細胞集団である場合、ミオゲニンおよびＭｙｏＤ、またはその一部分；
ｌ）該所望の細胞集団が、骨細胞型である場合、Ｒｕｎｘ２、またはその一部分；
ｍ）該所望の細胞集団が、多能（ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｔ）、多能性（ｍｕｌｔｉｐｏｔｅｎｔ）または自己再生する細胞集団である場合、ＰＲＲ＋Ｎｕｍｂ、Ｎａｎｏｇ、ＨｏｘＢ４、ＦＧＦ４、Ｎｏｔｃｈ活性を有するタンパク質、およびＬＩＦ活性を有するタンパク質、またはその一部分；
ｎ）該所望の細胞集団が、多能、多能性または自己再生する細胞集団である場合、ＰＲＲ＋Ｎｕｍｂ、ＯＣＴ３／４、ＨＯＸＢ４、ＦＧＦ４、Ｎｏｔｃｈ活性を有するタンパク質およびＬＩＦ活性を有するタンパク質、またはその一部分；
ｏ）該所望の細胞集団が、多能、多能性または自己再生する細胞集団である場合、ＰＲＲ＋Ｎｕｍｂ、Ｓｏｘ２、ＨｏｘＢ４、ＦＧＦ４、Ｎｏｔｃｈ活性を有するタンパク質およびＬＩＦ活性を有するタンパク質、またはその一部分；
ｐ）該所望の細胞集団が、多能、多能性または自己再生する細胞集団である場合、ＰＲＲ＋Ｎｕｍｂ、Ｌｉｎ２８、ｃ−ｍｙｃ、およびＬＩＦ活性を有するタンパク質、またはその一部分；
ｑ）該所望の細胞集団が、多能、多能性または自己再生する細胞集団である場合、ＰＲＲ＋Ｎｕｍｂ、Ｎａｎｏｇ、ｃ−ｍｙｃ、およびＬＩＦ活性を有するタンパク質、またはその一部分；
ｒ）該所望の細胞集団が、多能、多能性または自己再生する細胞集団である場合、ＰＲＲ＋Ｎｕｍｂ、ＯＣＴ３／４、Ｓｏｘ２、ＨＯＸＢ４、Ｎｏｔｃｈ活性を有するタンパク質、およびＬＩＦ活性を有するタンパク質、またはその一部分；
ｓ）Ｎａｎｏｇ、ＯＣＴ３／４、Ｓｏｘ２、ＨＯＸＢ４、ＦＧＦ−４、ＬＩＦ、ＬＩＦＲ、ＣＮＴＦ、オンコスタチン（ＯＳＭ）、オンコスタチン受容体（ＯＳＭＲ）、カーディオトロフィン−１、ＩＬ−６、ＩＬ６Ｒ、ｈｙｐｅｒ  ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ｇｐ１３０、ＬＩＦ活性を有する他のタンパク質、およびＮｏｔｃｈ活性を有する他のタンパク質（単数または複数）またはその一部分；
ｔ）該所望の分化細胞中に通常存在する、転写因子またはその一部分；ならびに
ｕ）細胞を、該所望の細胞に分化させ始めることを促進する、転写因子またはその一部分；
からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記細胞は、ＦＧＦ４、Ｎｏｔｃｈ、Ｎｕｍｂｌｉｋｅ、Ｎｕｍｂアイソフォームまたはその一部分から選択される細胞運命デターミナントとさらに接触させられる、請求項３または４に記載の方法。
【請求項６】
前記選択された細胞を、一つ以上のタンパク質、または該タンパク質をコードする一つ以上のヌクレオチド配列と接触させる工程をさらに含み、該タンパク質は、
ａ）前記所望の細胞集団が、ドーパミン作動性ニューロン細胞型である場合、Ｍａｓｈ１（Ａｓｃｌ１）、Ｎｇｎ２、Ｎｕｒｒ１、Ｌｍｘ１ｂ、および／またはＰｔｘ−３、またはその一部分；
ｂ）該所望の細胞集団が、セロトニン作動性ニューロン細胞集団である場合、Ｍａｓｈ１（Ａｓｃｌ１）、Ｐｈｏｘ２ｂ、Ｌｍｘ１ｂ、Ｎｋｘ２．２、Ｐｅｔ１、Ｇａｔａ２、Ｇａｔａ３、Ｐｅｔ１および／またはその一部分；
ｃ）該所望の細胞集団が、コリン作動性ニューロン細胞集団である場合、Ｍａｓｈ１（Ａｓｃｌ１）、Ｐｈｏｘ２ａ、およびＲＥＳＴ４、および／またはその一部分；
ｄ）該所望の細胞集団が、ＧＡＢＡ作動性ニューロン細胞集団である場合、Ｍａｓｈ１（Ａｓｃｌ１）、ＰＩＴＸ２、Ｄｌｘ２、Ｄｌｘ５、ＨＥＳ１標的合成オリゴヌクレオチド、Ｐｈｏｘ２ａ、およびＲＥＳＴ４、および／またはその一部分；
ｅ）該所望の細胞集団が、ノルアドレナリン作動性ニューロン細胞集団である場合、Ｍａｓｈ１（Ａｓｃｌ１）、Ｐｈｏｘ２ａ、Ｐｈｏｘ２ｂ、ｄＨａｎｄ、Ｇａｔａ２、およびＧａｔａ３、および／またはその一部分；ならびに
ｆ）該所望の細胞集団が、ニューロン細胞型である場合、Ｍａｓｈ１（Ａｓｃｌ１）、Ｎｕｒｒ１、ＲＥＮ、ニューロゲニン１、ニューロゲニン２、ニューロゲニン３、Ｍａｓｈ１、Ｐｈｏｘ２ｂ、Ｐｈｏｘ２ａ、ｄＨａｎｄ、Ｓｈｈ、ＦＧＦ８、Ｌｍｘ１ｂ、Ｎｋｘ２．２、Ｐｅｔ１、Ｌｂｘ１、Ｒｎｘ、Ｇａｔａ３、アンチセンスＨｅｓ１  ＲＮＡおよび／またはその一部分
からなる群から選択される、請求項３または４に記載の方法。
【請求項７】
前記選択された細胞および／またはそれらの子孫細胞を、成長培地中で培養する工程であって、該成長培地は、該選択された細胞が一定の速度で増殖するのに有効なサイトカインを含み、該速度は、該成長培地中の該選択された細胞の倍加時間から決定される、工程、および
該細胞を、所望の細胞数が達成されるまでこれらの培養条件下で維持する工程
をさらに含む、請求項３または４に記載の方法。
【請求項８】
前記サイトカインは、ＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＬＩＦ、鉄因子、ＩＬ−６、ｈｙｐｅｒ  ＩＬ−６、ＩＬ−７、オンコスタチン−Ｍ、カーディオトロフィン−１、他の成長促進サイトカイン、および誘導因子から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記選択された細胞および／またはそれらの子孫細胞を、分化培地中で培養する工程をさらに含み、
ここで、該分化培地は、該選択された細胞が該分化培地中で第二の増殖速度で増殖するのに有効であり、該第二の増殖速度は、該分化培地中の該選択された細胞の倍加時間から決定され、該第二の増殖速度は、第一の増殖速度未満の増殖速度であり；該分化培地は、少なくとも一つの分化作用物質を含む、請求項３または４に記載の方法。
【請求項１０】
請求項３または４に記載の方法であって、分化培地中で前記細胞を培養する工程をさらに含み、該分化培地は、以下：
ａ）レチノイン酸、Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ３（ＮＴ３）、神経成長因子（ＮＧＦ）、グリア細胞株由来成長因子（ＧＤＮＦ）、および／またはインターフェロン−γ（ＩＦＮγ）、ヘキサメチレンビスアクリルアミド、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）、正常ウシ血清（ＮＢＳ）、心筋細胞の訓化培地、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＬＩＦ、トロンボポエチン、コロニー刺激因子、Ｍ−ＣＳＦ（ＣＳＦ−１）、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−７、ＣＤ４＋Ｔ細胞分化を促進するサイトカイン、酪酸ナトリウム、アクチビンＡ、上皮増殖因子、塩基性線維芽細胞増殖因子、ノギン、インスリン様成長因子およびニコチンアミド；
ｂ）前記所望の細胞集団が、神経細胞集団である場合、レチノイン酸、Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ３（ＮＴ３）、神経成長因子（ＮＧＦ）、グリア細胞株由来成長因子（ＧＤＮＦ）、および／またはインターフェロン−γ（ＩＦＮγ）；
ｃ）該所望の細胞集団が、筋肉細胞集団である場合、ヘキサメチレンビスアクリルアミド、またはジメチルスルホキシド；
ｄ）胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）；
ｅ）該所望の細胞集団が、心筋細胞集団である場合、正常ウシ血清（ＮＢＳ）、ジメチルスルホキシド、レチノイン酸および／または心筋細胞の訓化培地；
ｆ）該所望の細胞集団が、造血細胞集団である場合、所望の細胞型に適切な、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、トロンボポエチン、およびコロニー刺激因子；
ｇ）該所望の細胞集団が、ＧＡＢＡ作動性ニューロンである場合、ＬＩＦ、Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ３（ＮＴ３）、および／または神経成長因子（ＮＧＦ）；
ｈ）コロニー刺激因子、必要に応じて、Ｍ−ＣＳＦ（ＣＳＦ−１）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−７、またはＣＤ４＋Ｔ細胞分化を促進するサイトカイン；ならびに
ｉ）該所望の細胞集団が、膵臓ランゲルハンス島細胞または内胚葉細胞である場合、酪酸ナトリウム、アクチビンＡ、レチノイン酸、上皮増殖因子、塩基性線維芽細胞増殖因子、ノギン、インスリン様成長因子ＩＩおよびニコチンアミド
からなる群から選択される一つ以上の因子を含む、方法。
【請求項１１】
前記一つ以上のタンパク質、または該タンパク質をコードする一つ以上のヌクレオチド配列が、ＰＲＲ＋Ｎｕｍｂ、Ｎｏｔｃｈ、ＨＯＸＢ４、ＯＣＴ３／４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、ｌｉｎ２８、ｃ−ｍｙｃ、ｓｔａｔ３、およびＬＩＦ活性を有するタンパク質、またはその一部分から選択され、そして前記選択された細胞中で過剰発現される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法であって、該方法は、治療用ベクターでトランスフェクトする工程を含み、該治療用ベクターは、
アスパルトアシラーゼ（ＡＳＰ）、ヘキソサミニダーゼＡ（ＨＥＸＡ）、ヘキソサミニダーゼＢ（ＨＥＸＢ）、レッシュナイハン症候群（ＨＲＰＴ）、ハンチントン病（ＨＴＴ）、ガラクトシダーゼα（ＧＬＡ）、グルコシダーゼβ酸（ＧＢＡ）、フォンヒッペルリンダウ腫瘍抑制因子（ＶＨＬ）、βグロブリン（ＨＢＢ）、ＮＰＣ１、ＰＡＲＫ２５４、または患者において欠損している遺伝子産物から選択されるタンパク質をコードする、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）もしくはリボ核酸（ＲＮＡ）配列、合成オリゴヌクレオチド、もしくは核酸配列、を含むか、あるいは、
核酸配列、デコイ配列、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、またはアンチセンスＲＮＡを含み、そして該治療用ベクターは、ＦＩＶ、ＳＩＶ、ＨＩＶ−１、および／またはＨＩＶ−２感染を阻止することができる、方法。
【請求項１３】
前記細胞が、３次元または２次元の足場で培養されるか、該細胞は、脱細胞化器官中または脱細胞化組織上で増殖されるか、あるいは該細胞は、印刷技術と組み合わせるか、もしくは組織工学と組み合わせて利用される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記過剰発現工程は、トランスフェクトする工程を含み、該トランスフェクトする工程は、電気穿孔法、ナノカプセル、ナノヴォールト、およびリポソームのうちの1つ以上を使用する工程を含むか、あるいは、レトロウィルス／レンチウイルスの組込み、または前記選択された細胞のゲノムのランダムな変換を避ける工程を含む、請求項３、４、または１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記選択された細胞は、タンパク質、または該タンパク質をコードするヌクレオチドを過剰発現し、該タンパク質は、ｎｕｍｂｌｉｋｅ、ｎｕｍｂ、ＦＧＦ４、ＨＯＸＢ４、ＯＣＴ３／４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、ｌｉｎ２８、ｃ−ｍｙｃ、ＬＩＦ活性を有するタンパク質、Ｍａｓｈ１（Ａｓｃｌ１）、ＭｙｏＤ、ミオゲニン、Ｍｙｆ５、Ｍｙｆ６、Ｍｅｆ２、ミオカーディン、Ｉｆｒｄ１、筋肉転写因子、ｂＨＬＨ−コード化配列、Ｆｏｘａ２、Ｓｏｘ１７、ＨＬＸＢ９、Ｐｄｘ１、肝核因子（ＨＮＦ）−１、ＨＮＦ−３、ＨＮＦ−４、ＨＮＦ−６、ＣＲＥＢ結合タンパク質、Ｒｕｎｘ１／ＡＭＬ１、ＮＯＶ（ＣＣＮ３）、Ｓｏｘ９、Ｇａｔａ６、Ｒｕｎｘ２、ＯＬＩＧ１、ＯＬＩＧ２、Ｚｆｐ４８８、Ｇａｔａ４、Ｇａｔａ５、Ｎｕｒｒ１、ＲＥＮ、ニューロゲニン１、ニューロゲニン２、ニューロゲニン３、Ｐｈｏｘ２ａ、Ｐｈｏｘ２ｂ、ｄＨａｎｄ、Ｓｈｈ、ＦＧＦ８、Ｌｍｘ１ｂ、Ｎｋｘ２．２、Ｐｅｔ１、Ｌｂｘ１、Ｒｎｘ、Ｐｔｘ−３（Ｐｉｔｘ３）、Ｇａｔａ２、Ｇａｔａ３、Ｒｅｓｔ４、ＰＩＴＸ２、Ｄｌｘ２、Ｄｌｘ５、ｓｔａｔ３、テロメラーゼ、ＨＥＳ１標的合成オリゴヌクレオチド、またはその一部分から選択される、請求項３または４に記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞は、低温保存されるか、または細胞株として維持される、請求項３〜１５のいずれか一項に記載の方法。