【手続補正書】
【提出日】平成24年10月16日(2012.10.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａｄｈＥ遺伝子、ｐｔａ遺伝子、ｐｏｘＢ遺伝子、ｐｐｃ遺伝子、またはｄｈαＫ遺伝子のうちの１つまたはそれ以上の破壊、
外因性シトロバクターフロインディ（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｆｒｅｕｎｄｉｉ）ｄｈａＫＬ遺伝子、および
外因性アクチノバチルスサクシノゲネス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎｅｓ）ｐｃｋＡ遺伝子
を含む、大腸菌株。
【請求項２】
過剰発現されるｇｌｄＡ遺伝子または過剰発現されるｄｈａＫＬＭオペロン、
ｆｒｄＡ、ｆｒｄＢ、ｆｒｄＣ、またはｆｒｄＤ遺伝子のうちの少なくとも１つの破壊、および
ｐｔａ遺伝子の破壊またはｐｏｘＢ遺伝子の破壊を含む、大腸菌株。
【請求項３】
過剰発現されるｇｌｄＡ遺伝子または過剰発現されるｄｈａＫＬＭオペロン、および
ａｄｈＥ遺伝子、ｐｔａ遺伝子、ｐｏｘＢ遺伝子；ｆｒｄＡ遺伝子、ｆｒｄＢ遺伝子、ｆｒｄＣ遺伝子、またはｆｒｄＤ遺伝子のうちの１つまたはそれ以上の破壊を含む、大腸菌株。
【請求項４】
代謝産物を生成するための細菌を培養する方法であって、
ａ．代謝産物を生成することができる細菌を用いて、供給原料としてグリセロールを含む培養培地を接種するステップと、
ｂ．前記グリセロールを代謝産物に変換するために前記反応器中で、≦２０ｍｇ  Ｏ２／Ｌ／時の微好気性であるが、好気性でも嫌気性でもない条件下で、前記細菌を育てるステップであって、グリセロールの前記代謝産物への変換は、代謝により生成される量より多く還元当量を消費しない、ステップと、
を含む、方法。
【請求項５】
前記細菌は、Δｐｔａ、ΔｆｒｄＡ、ならびに過剰発現されるｇｌｄＡおよびｄｈａＫＬＭを含む大腸菌である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記代謝産物は、エタノール、乳酸、コハク酸、プロピオン酸、アラニン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記代謝産物は、エタノール、乳酸、プロピオン酸、コハク酸、プロピオン酸、アラニン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
微生物内で還元炭素源から酸化還元中性または酸化した化学製品を製造するための方法であって、
電子受容体が、それらが提供される速度と少なくとも同じ速度で消費される速度で、前記微生物に電子受容体を提供することと、
前記酸化還元中性または酸化した生成物および少なくともいくつかの細胞集団が、前記還元炭素源から生じ、前記還元炭素源が、前記細胞集団よりもさらに還元されるように、前記微生物の供給原料として前記還元炭素源を提供することと、を含み、
前記還元炭素源の前記還元化学製品への変換のための還元バランスの度合いは、ゼロ以上であり、炭素源の細胞集団への変換のための還元バランスの度合いは、ゼロを超える、方法。
【請求項９】
前記還元炭素源はグリセロールを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記酸化還元中性または酸化した化学製品は、アルコール、有機酸、アミノ酸、またはラクトンを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記酸化還元中性または酸化した化学製品は、コハク酸、プロピオン酸、エタノール、乳酸、またはアラニンを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記電子受容体は、大気、酸素、硝酸、亜硝酸、またはこれらの組み合わせを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記電子受容体は、１時間当たり細胞集団１グラムにつき酸素１ミリグラムから１時間当たり細胞集団１グラムにつき酸素１５ミリグラムの範囲内の速度で、前記微生物に提供される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記微生物は、エシェリキア属、バシラス属、パエニバチルス属、またはサッカロミセス属に属する、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
前記化学製品は、コハク酸を含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のオキサロ酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のピルビン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのグリセロール−３−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する外因性遺伝子；グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、フマル酸へ還元当量を渡す外因性遺伝子；フマル酸のコハク酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、グリセロール−３−リン酸の酸化からの還元当量を受容する外因性遺伝子；ピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する外因性遺伝子；ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子；ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＡＤＰを使用し、副産物としてＡＴＰを生成する外因性遺伝子；または、ピルビン酸およびＣＯ２のリンゴ酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＮＡＤＨを使用する外因性遺伝子
のうちの１つまたはそれ以上を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
前記化学製品は、プロピオン酸を含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のオキサロ酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のピルビン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのグリセロール−３−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する外因性遺伝子；グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、フマル酸へ還元当量を渡す外因性遺伝子；フマル酸のコハク酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、グリセロール−３−リン酸の酸化からの還元当量を受容する外因性遺伝子；ピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する外因性遺伝子；ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子；ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＡＤＰを使用し、副産物としてＡＴＰを生成する外因性遺伝子；または、ピルビン酸およびＣＯ２のリンゴ酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＮＡＤＨを使用する外因性遺伝子；スクシニル−ＣｏＡをメチルマロニル−ＣｏＡに、メチルマロニル−ＣｏＡをプロピオニル−ＣｏＡおよびＣＯ２に、ならびにプロピオニル−ＣｏＡおよびコハク酸をプロピオン酸およびスクシニル−ＣｏＡに変換する酵素をコードする、外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現
のうちの１つまたはそれ以上を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１７】
前記化学製品は、エタノールを含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、フマル酸のコハク酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのグリセロール−３−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ギ酸のＣＯ２および水素への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する外因性遺伝子、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロールのグリセロール−３−Ｐへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、またはグリセロール−３−Ｐのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のアセトアルデヒドおよびＣＯ２への変換に関与する外因性遺伝子、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡ、ＣＯ２、およびＮＡＤＨへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡおよびギ酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ギ酸のＣＯ２およびＮＡＤＨへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現
のうちの少なくとも１つを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１８】
前記化学製品は、乳酸を含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、フマル酸のコハク酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のＤ−乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロールのグリセロール−３−Ｐへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロール−３−Ｐのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のＬ−乳酸もしくはＤ−乳酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現
のうちの少なくとも１つを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１９】
前記化学製品は、乳酸を含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、フマル酸のコハク酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のＤ−乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロールのグリセロール−３−Ｐへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロール−３−Ｐのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のアラニンへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現
のうちの少なくとも１つを含む、請求項８に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
このように生成された化学製品は、乳酸、エタノール、およびコハク酸であり得るが、これらに限定されない。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
微生物内で還元炭素源から酸化還元中性または酸化した化学製品を製造するための方法であって、
電子受容体は、それらが提供されるのと少なくとも同様に迅速に消費される速度で、前記微生物に電子受容体を提供することと、
前記酸化還元中性または酸化した生成物および少なくともいくつかの細胞集団が、前記還元炭素源から生じ、前記還元炭素源が、前記細胞集団よりもさらに還元されるように、前記微生物の供給原料として前記還元炭素源を提供することと、を含み、
前記還元炭素源の前記還元化学製品への変換のための還元バランスの度合いは、ゼロ以上であり、炭素源の細胞集団への変換のための還元バランスの度合いは、ゼロを超える、方法。
（項目２）
前記還元炭素源はグリセロールを含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記酸化還元中性または酸化した化学製品は、アルコール、有機酸、アミノ酸、またはラクトンを含む、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記酸化還元中性または酸化した化学製品は、コハク酸、プロピオン酸、エタノール、乳酸、またはアラニンを含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記電子受容体は、大気、酸素、硝酸、亜硝酸、またはこれらの組み合わせを含む、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記電子受容体は、１時間当たり細胞集団１グラムにつき酸素１ミリグラムから１時間当たり細胞集団１グラムにつき酸素１５ミリグラムの範囲内の速度で、前記微生物に提供される、項目４に記載の方法。
（項目７）
前記微生物は、エシェリキア属、バシラス属、パエニバチルス属、またはサッカロミセス属に属する、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記化学製品は、コハク酸を含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のオキサロ酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のピルビン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのグリセロール−３−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する）、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、フマル酸へ還元当量を渡す）、フマル酸のコハク酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、グリセロール−３−リン酸の酸化からの還元当量を受容する）、ピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する）、ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子、ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＡＤＰを使用し、副産物としてＡＴＰを生成する）、または、ピルビン酸およびＣＯ２のリンゴ酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＮＡＤＨを使用する）のうちの１つまたはそれ以上を含む、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記化学製品は、プロピオン酸を含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のオキサロ酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のピルビン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのグリセロール−３−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する）、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、フマル酸へ還元当量を渡す）、フマル酸のコハク酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、グリセロール−３−リン酸の酸化からの還元当量を受容する）、ピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する）、ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子、ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＡＤＰを使用し、副産物としてＡＴＰを生成する）、または、ピルビン酸およびＣＯ２のリンゴ酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＮＡＤＨを使用する）、スクシニル−ＣｏＡをメチルマロニル−ＣｏＡに、メチルマロニル−ＣｏＡをプロピオニル−ＣｏＡおよびＣＯ２に、ならびにプロピオニル−ＣｏＡおよびコハク酸をプロピオン酸およびスクシニル−ＣｏＡに変換する酵素をコードする、外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現のうちの１つまたはそれ以上を含む、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記化学製品は、エタノールを含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、フマル酸のコハク酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのグリセロール−３−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ギ酸のＣＯ２および水素への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する外因性遺伝子、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロールのグリセロール−３−Ｐへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、またはグリセロール−３−Ｐのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のアセトアルデヒドおよびＣＯ２への変換に関与する外因性遺伝子、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡ、ＣＯ２、およびＮＡＤＨへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡおよびギ酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ギ酸のＣＯ２およびＮＡＤＨへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現のうちの少なくとも１つを含む、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記化学製品は、乳酸を含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、フマル酸のコハク酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のＤ−乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロールのグリセロール−３−Ｐへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロール−３−Ｐのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のＬ−乳酸もしくはＤ−乳酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現のうちの少なくとも１つを含む、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記化学製品は、乳酸を含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、フマル酸のコハク酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のＤ−乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロールのグリセロール−３−Ｐへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロール−３−Ｐのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のアラニンへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現のうちの少なくとも１つを含む、項目１に記載の方法。
（項目１３）
ａｄｈＥ遺伝子、ｐｔａ遺伝子、ｐｏｘＢ遺伝子、ｐｐｃ遺伝子、またはｄｈαＫ遺伝子のうちの１つまたはそれ以上の破壊、
外因性シトロバクターフロインディ（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｆｒｅｕｎｄｉｉ）ｄｈａＫＬ遺伝子、および
外因性アクチノバチルスサクシノゲネス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎｅｓ）ｐｃｋＡ遺伝子
を含む、大腸菌株。
（項目１４）
過剰発現されるｇｌｄＡ遺伝子または過剰発現されるｄｈａＫＬＭオペロン、
ｆｒｄＡ、ｆｒｄＢ、ｆｒｄＣ、またはｆｒｄＤ遺伝子のうちの少なくとも１つの破壊、および
ｐｔａ遺伝子の破壊またはｐｏｘＢ遺伝子の破壊を含む、大腸菌株。
（項目１５）
過剰発現されるｇｌｄＡ遺伝子または過剰発現されるｄｈａＫＬＭオペロン、および
ａｄｈＥ遺伝子、ｐｔａ遺伝子、ｐｏｘＢ遺伝子；ｆｒｄＡ遺伝子、ｆｒｄＢ遺伝子、ｆｒｄＣ遺伝子、またはｆｒｄＤ遺伝子のうちの１つまたはそれ以上の破壊を含む、大腸菌株。
（項目１６）
代謝産物を生成するための細菌を培養する方法であって、
ａ．代謝産物を生成することができる細菌を用いて、供給原料としてグリセロールを含む培養培地を接種するステップと、
ｂ．前記グリセロールを代謝産物に変換するために前記反応器中で、≦２０ｍｇ  Ｏ２／Ｌ／時の微好気性であるが、好気性あるいは嫌気性でない条件下で、前記細菌を育てるステップであって、グリセロールの代謝産物への変換は、それが生成するよりもさらに還元当量を消費しない、ステップと、を含む、方法。
（項目１７）
前記細菌は、Δｐｔａ、ΔｆｒｄＡ、ならびに過剰発現されるｇｌｄＡおよびｄｈａＫＬＭを含む大腸菌である、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記代謝産物は、エタノール、乳酸、コハク酸、プロピオン酸、アラニン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記代謝産物は、エタノール、乳酸、プロピオン酸、コハク酸、プロピオン酸、アラニン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、項目１６に記載の方法。