【手続補正書】
【提出日】平成26年4月14日(2014.4.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも1つの小ペプチドを含む、無血清でタンパク質不含である濃縮供給物であって、該ペプチドが、6つまたはそれより少ないアミノ酸を含み、該アミノ酸の少なくとも1つがシステインおよび/またはチロシンであり、かつ残りのアミノ酸の少なくとも1つが、アラニン、セリン、グリシン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群より選択され、かつ、該濃縮供給物が加水分解物またはその一部を含まない、濃縮供給物。
【請求項２】
細胞培養システムへの前記濃縮供給物の添加によって、該細胞培養システムが中性pHに維持され、かつ該細胞培養システムの量が最小限に増加する、請求項1記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項３】
前記小ペプチドの残りのアミノ酸の少なくとも1つが、アラニンまたはグリシンである、請求項1記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項４】
前記小ペプチドの少なくとも1つが、X-チロシン、X-システイン、チロシン-X、およびシステイン-X、もしくはそれらの塩からなる群より選択されるジペプチドであり、かつXが、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群より選択され、かつ/または、1つもしくは複数の該小ペプチドのN末端アミノ酸が遊離アミノ基を有する、請求項1記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項５】
細胞培養システムへの前記濃縮供給物の添加によって、可溶性の単量体システインまたは可溶性の単量体チロシンの添加による場合よりも該細胞培養システムにおける前記システインまたは前記チロシンの濃度が増加する、請求項1〜4のいずれか一項記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項６】
液体である、請求項1〜5のいずれか一項記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項７】
乾燥粉末または粒状乾燥粉末である、請求項1〜6のいずれか一項記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項８】
炭水化物、およびアミノ酸またはその塩をさらに含む、請求項1記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項９】
前記炭水化物がヘキソースである、請求項8記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項１０】
前記アミノ酸またはその塩が、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンのうちの1つまたは複数である、請求項8記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項１１】
ビタミン、塩、緩衝剤、または無機元素をさらに含む、請求項1記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項１２】
脂質または増殖因子を含まない、請求項1記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項１３】
2×または2×超の配合物として濃縮される、請求項4記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項１４】
1つまたは複数の前記ジペプチドが、アラニルチロシンおよび/またはアラニルシステインおよび/またはアラニルシスチン二量体である、請求項4記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項１５】
前記濃縮供給物が細胞培養培地に添加される場合に、1つまたは複数の前記ジペプチドが、約1 g/L〜約16 g/Lの濃度で存在する、請求項4記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項１６】
1つまたは複数の前記ジペプチドが、約2.5 g/L〜約8.5 g/Lの濃度で存在する、請求項15記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項１７】
2〜8℃で保存された前記液体が、12ヵ月超の間沈殿物のない状態のままである、請求項6記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項１８】
前記ヘキソースが、グルコース、ガラクトース、フルクトース、およびマルトースからなる群より選択される、請求項9記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項１９】
組換えタンパク質の産生を支援する、請求項1〜18のいずれか一項記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項２０】
前記組換えタンパク質が免疫グロブリンまたはその断片である、請求項19記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【請求項２１】
請求項1〜20のいずれか一項記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物と、細胞とを含む、組成物。
【請求項２２】
ウイルスまたは組換えタンパク質を産生するための、請求項1〜21のいずれか一項記載の濃縮供給物の使用。
【請求項２３】
前記小ペプチドが、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、またはヘキサペプチドのいずれかである、請求項1記載の無血清でタンパク質不含である濃縮供給物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
別の態様において、細胞を培養する方法は、細胞の培養を支援する条件下で細胞培養基礎培地と細胞を接触させる段階、および本明細書に記載される、1つもしくは複数の小ペプチドまたは1つもしくは複数のジペプチドを有する細胞培養培地、細胞培養補充物、または細胞培養供給物を該細胞培養基礎培地に補充する段階を含む。1つの態様において、1つまたは複数のジペプチドは、X-チロシン、X-システイン、チロシン-X、もしくはシステイン-X、またはそれらの塩より選択され、ここでXは、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸より選択され、1つまたは複数のジペプチドのN末端アミノ酸は遊離アミノ基を有する。別の態様において、1つまたは複数のジペプチドはアラニルチロシンおよび/またはアラニルシステインである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
別の局面は、グルコースなどの炭水化物、ならびにアルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、グルタミン、およびバリンなどの少なくとも1つのアミノ酸またはその塩と、本明細書に記載される1つまたは複数の小ペプチドまたはジペプチドを混合する段階を含む、細胞培養培地を調製する方法を提供する。1つの態様において、1つまたは複数のジペプチドは、X-チロシン、X-システイン、チロシン-X、もしくはシステイン-X、またはそれらの塩より選択され、ここでXは、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸より選択され、1つまたは複数のジペプチドのN末端アミノ酸は遊離アミノ基を有する。別の態様において、1つまたは複数のジペプチドはアラニルチロシンおよび/またはアラニルシステインである。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
したがって、本発明の1つの局面は、少なくとも1つの小ペプチドを含む細胞培養培地、濃縮供給物、または濃縮供給補充物に関し、該ペプチドは少なくとも2つのアミノ酸を含み、アミノ酸の少なくとも1つはシステインまたはチロシンである。本発明の別の局面は、小ペプチドの残りのアミノ酸の少なくとも1つが、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群より選択される、上記の細胞培養培地、濃縮供給物、または濃縮供給補充物に関する。本発明のさらに別の局面において、小ペプチドの残りのアミノ酸の少なくとも1つはアラニンまたはグリシンである。本発明の別の局面は、小ペプチドの少なくとも1つが、X-チロシン、X-システイン、チロシン-X、およびシステイン-X、もしくはそれらの塩からなる群より選択されるジペプチドである、上記の細胞培養培地、濃縮供給物、もしくは濃縮供給補充物に関し、ここでXは、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群より選択され、かつ/または、1つもしくは複数の小ペプチドのN末端アミノ酸は遊離アミノ基を有する。1つの局面において、Xはアラニンまたはグリシンである。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
本発明はまた、上記の方法によって産生された組換えタンパク質；または上記の方法によって産生されたウイルスもしくはウイルス粒子；またはウイルスもしくは組換えタンパク質を産生するための、上記の細胞培養培地、濃縮供給物、もしくは再構成された培地の使用；または上記の方法によって作製された培養培地、濃縮供給物、もしくは再構成された培地に関する。
[本発明1001]
少なくとも1つの小ペプチドを含む細胞培養培地であって、該ペプチドが少なくとも2つのアミノ酸を含み、該アミノ酸の少なくとも1つがシステインまたはチロシンである、細胞培養培地。
[本発明1002]
前記小ペプチドの残りのアミノ酸の少なくとも1つが、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群より選択される、本発明1001の細胞培養培地。
[本発明1003]
前記小ペプチドの残りのアミノ酸の少なくとも1つが、アラニンまたはグリシンである、本発明1002の細胞培養培地。
[本発明1004]
前記小ペプチドの少なくとも1つが、X-チロシン、X-システイン、チロシン-X、およびシステイン-X、もしくはそれらの塩からなる群より選択されるジペプチドであり、かつXが、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群より選択され、かつ/または、1つもしくは複数の該小ペプチドのN末端アミノ酸が遊離アミノ基を有する、本発明1001の細胞培養培地。
[本発明1005]
Xがアラニンまたはグリシンである、本発明1001の細胞培養培地。
[本発明1006]
液体である、本発明1001〜1005のいずれかの細胞培養培地。
[本発明1007]
乾燥粉末または粒状乾燥粉末である、本発明1001〜1005のいずれかの細胞培養培地。
[本発明1008]
炭水化物、およびアミノ酸またはその塩をさらに含む、本発明1001〜1007のいずれかの細胞培養培地。
[本発明1009]
前記炭水化物がヘキソースである、本発明1008の細胞培養培地。
[本発明1010]
前記アミノ酸またはその塩が、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンのうちの1つまたは複数である、本発明1008または1009の細胞培養培地。
[本発明1011]
ビタミン、塩、緩衝剤、または無機元素をさらに含む、本発明1001〜1010のいずれかの細胞培養培地。
[本発明1012]
脂質、加水分解物もしくはその一部、または増殖因子を含まない、本発明1001〜1011のいずれかの細胞培養培地。
[本発明1013]
タンパク質を含まない、本発明1001〜1012のいずれかの細胞培養培地。
[本発明1014]
2×または2×超の配合物として濃縮される、本発明1001〜1013のいずれかの細胞培養培地。
[本発明1015]
1つまたは複数の前記ジペプチドが、アラニルチロシンおよび/またはアラニルシステインおよび/またはアラニルシスチン二量体である、本発明1004〜1014のいずれかの細胞培養培地。
[本発明1016]
1つまたは複数の前記ジペプチドが、約1 g/L〜約16 g/Lの濃度で存在する、本発明1004〜1006または1008〜1014のいずれかの細胞培養培地。
[本発明1017]
1つまたは複数の前記ジペプチドが、約2.5 g/L〜約8.5 g/Lの濃度で存在する、本発明1004〜1006または1008〜1014のいずれかの細胞培養培地。
[本発明1018]
2〜8℃で保存された前記液体が、12ヵ月超の間沈殿物のない状態のままである、本発明1006または1008〜1017のいずれかの細胞培養培地。
[本発明1019]
細胞を培養する方法であって、
該細胞の培養を支援する条件下で、細胞培養基礎培地と該細胞を接触させる段階、および
本発明1001〜1018のいずれかの濃縮供給物または濃縮培地を、該細胞培養基礎培地に補充する段階
を含む方法。
[本発明1020]
前記細胞培養基礎培地に、2日目以降に前記濃縮供給物または前記濃縮培地を補充する、本発明1019の方法。
[本発明1021]
前記細胞培養基礎培地への前記濃縮供給物または前記濃縮培地の補充を、細胞培養の開始後0日目、1日目、2日目、3日目、4日目、または5日目のいずれかから行い、かつ、その後13日目または14日目まで毎日補充する、本発明1020の方法。
[本発明1022]
前記細胞培養基礎培地への補充が、該細胞培養基礎培地の全出発量の約1〜10%または約5〜20%である、本発明1019〜1021のいずれかの方法。
[本発明1023]
前記細胞が、動物細胞、植物細胞、昆虫細胞、鳥類細胞、酵母細胞、藻類細胞、または魚類細胞である、本発明1019〜1022のいずれかの方法。
[本発明1024]
前記細胞が免疫グロブリンまたはその断片を産生する、本発明1022の方法。
[本発明1025]
前記細胞が、3000 mg/L超の免疫グロブリンまたはその断片を産生する、本発明1024の方法。
[本発明1026]
炭水化物、および少なくとも1つのアミノ酸またはその塩と、1つまたは複数の小ペプチドを混合する段階を含む、細胞培養培地を調製する方法であって、1つまたは複数の該小ペプチドがそれぞれシステインまたはチロシンを含む方法。
[本発明1027]
システインまたはチロシン以外の、1つまたは複数の前記小ペプチドのアミノ酸が、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、アルギニン、グルタミン、またはグルタミン酸より選択される、本発明1026の方法。
[本発明1028]
システインまたはチロシン以外の、1つまたは複数の前記小ペプチドのアミノ酸が、アラニンまたはグリシンである、本発明1027の方法。
[本発明1029]
1つまたは複数の前記小ペプチドが、X-チロシン、X-システイン、チロシン-X、もしくはシステイン-X、またはそれらの塩より選択される1つまたは複数のジペプチドであり、Xが、アラニン、グリシン、セリン、バリン、プロリン、アスパラギン酸、アルギニン、またはグルタミン酸より選択され、かつ1つまたは該ジペプチドのN末端アミノ酸が遊離アミノ基を有する、本発明1026の方法。
[本発明1030]
Xがアラニンまたはグリシンである、本発明1029の方法。
[本発明1031]
前記炭水化物がグルコースである、本発明1026〜1030のいずれかの方法。
[本発明1032]
少なくとも1つの前記アミノ酸またはその塩が、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンのうちの1つまたは複数である、本発明1026〜1031のいずれかの方法。
[本発明1033]
前記細胞培養培地が、ビタミン、塩、緩衝剤、または無機元素をさらに含む、本発明1026〜1032のいずれかの方法。
[本発明1034]
前記細胞培養培地が、脂質、加水分解物もしくはその一部、または増殖因子を含まない、本発明1026〜1033のいずれかの方法。
[本発明1035]
前記細胞培養培地がタンパク質を含まない、本発明1026〜1034のいずれかの方法。
[本発明1036]
前記細胞培養培地が2×または2×超の配合物として濃縮される、本発明1026〜1035のいずれかの方法。
[本発明1037]
1つまたは複数の前記ジペプチドが、アラニルチロシンおよび/またはアラニルシステインである、本発明1029〜1036のいずれかの方法。
[本発明1038]
1つまたは複数の前記ジペプチドが、約1 g/L〜約16 g/Lの濃度で前記細胞培養培地中に存在する、本発明1029〜1037のいずれかの方法。
[本発明1039]
1つまたは複数の前記ジペプチドが約2.5 g/L〜約8.5 g/Lの濃度で存在する、本発明1029〜1037のいずれかの方法。
[本発明1040]
2〜8℃で保存された前記細胞培養培地が、12ヵ月超の間沈殿物のない状態のままである、本発明1029〜1039のいずれかの方法。
[本発明1041]
細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地を解析するための方法であって、該培地中において、システインまたはチロシンを含む短いペプチドの存在または非存在を判定する段階を含む方法。
[本発明1042]
質量分析(LCMS)、キャピラリー電気泳動、およびHPLCを含む群より選択される手法によって解析を行う、無血清で、タンパク質不含で、加水分解物不含である細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地を解析するための本発明1041の方法。
[本発明1043]
前記短いペプチドが2個、3個、4個、5個、または6個のアミノ酸を含む、無血清で、タンパク質不含で、加水分解物不含である細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地を解析するための本発明1041の方法。
[本発明1044]
前記短いペプチドがジペプチドである、培地を解析するための本発明1041の方法。
[本発明1045]
前記CHO細胞がウイルスを産生する、本発明1023の方法。
[本発明1046]
前記ウイルスが、組換えウイルスまたはウイルス様粒子(VLP)である、本発明1045の方法。
[本発明1047]
前記ウイルスが、アデノウイルス、レンチウイルス、バキュロウイルス、センダイウイルス、ワクシニアウイルス、または操作されたそれらのウイルス誘導体である、本発明1046の方法。
[本発明1048]
前記VLPが核酸を保有する、本発明1046の方法。
[本発明1049]
前記核酸がRNAである、本発明1048の方法。
[本発明1050]
前記ヘキソースが、グルコース、ガラクトース、フルクトース、およびマルトースからなる群より選択される、本発明1009の細胞培養培地。
[本発明1051]
システインまたはチロシンを含む小ペプチドを含み、無血清で、タンパク質不含で、かつ/または加水分解物不含である、細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地。
[本発明1052]
前記小ペプチドが2個、3個、4個、5個、または6個のアミノ酸を含む、本発明1051の細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地。
[本発明1053]
組換えタンパク質の産生を支援する、本発明1001の細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地。
[本発明1054]
前記組換えタンパク質が免疫グロブリンまたはその断片である、本発明1053の細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地。
[本発明1055]
本発明1001の細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地と、細胞とを含む、組成物。
[本発明1056]
細胞培養培地中で組換えタンパク質を作製する方法であって、
本発明1001の細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地と、細胞を接触させる段階；ならびに
該細胞の増殖および/または該組換えタンパク質の発現に適した条件下で、該細胞を培養する段階
を含む方法。
[本発明1057]
1つまたは複数の容器を含む、インビトロで細胞を培養するためのキットであって、第1容器が、少なくとも1つのジペプチドを含む本発明1001の培地を含み、かつ該培地が、培養中の該細胞の増殖、および/または組換えタンパク質の発現を支援する、キット。
[本発明1058]
前記培養が懸濁培養であるかまたは接着培養である、本発明1057のキット。
[本発明1059]
前記増殖が高密度増殖である、本発明1057のキット。
[本発明1060]
本発明1001の細胞培養培地、濃縮供給物、または再構成された培地中でウイルスまたはウイルス粒子を作製する方法であって、本発明1001の細胞培養培地中で組換え細胞を培養する段階を含み、該培地が、該ウイルスまたは該ウイルス粒子の発現に適した条件下で該細胞の増殖を支援する、方法。
[本発明1061]
本発明1056の方法によって産生された、組換えタンパク質。
[本発明1062]
本発明1060の方法によって産生された、ウイルスまたはウイルス粒子。
[本発明1063]
ウイルスまたは組換えタンパク質を産生するための、本発明1001の細胞培養培地、濃縮供給物または再構成された培地の使用。
[本発明1064]
本発明1026の方法によって作製された、培養培地、濃縮供給物または再構成された培地。
[本発明1065]
前記小ペプチドが、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、またはデカペプチドのいずれかである、本発明1001または1064の細胞培養培地。
[本発明1066]
前記小ペプチドが少なくとも約2〜10アミノ酸長である、本発明1001または1064の細胞培養培地。
[本発明1067]
前記小ペプチドが少なくとも約10アミノ酸長である、本発明1001または1064の細胞培養培地。
[本発明1068]
流加培養中に前記補充を行う、本発明1022の方法。