【手続補正書】
【提出日】平成24年8月8日(2012.8.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞またはその祖先が、ＺＮＦ１４５ポリヌクレオチド（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６００６．４、ＮＭ＿００１０１８０１１）あるいは、ＺＮＦ１４５ポリヌクレオチドと少なくとも８０％の配列相同性を有し、軟骨形成活性を含むポリペプチドをコードする能力のある、その断片、相同体、変異体もしくは誘導体を含む、ＺＮＦ１４５発現ベクターの細胞への侵入を引き起こすことにより改変された、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）などの軟骨形成前駆細胞であって、該改変された軟骨形成前駆細胞が、改変されていない細胞と比較して、ＺＮＦ１４５ポリペプチド（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５９９７．２またはＮＰ＿００１０１８０１１．１）あるいは、ＺＮＦ１４５ポリペプチドと少なくとも８０％の配列相同性を有し、軟骨形成活性を含む、その断片、相同体、変異体もしくは誘導体の発現または活性の増加を提示する、軟骨形成前駆細胞。
【請求項２】
改変されていない軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞と比較して、
（ａ）２型コラーゲン（ＣＯＬ２Ａ１）、アグリカン、ｃｏｌ１０Ａ１またはＳｏｘ９などの軟骨形成マーカーの発現の増強；
（ｂ）例えばアルシアンブルー染色により検出される、軟骨プロテオグリカンの分泌の増強；あるいは
（ｃ）例えばＷａｋｉｔａｎｉ  ｅｔ  ａｌ（１９９４）により記載されるような組織学的類別により検出される、例えば細胞形態の任意の１以上の組織学的類別、マトリックス染色、表面規則性、軟骨の厚さおよびホスト隣接軟骨へのドナーの組込みにより検出される、軟骨、骨または靭帯欠損を修復する能力の増強；
あるいはそれらの任意の組合せを提示する、請求項１に記載の軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞。
【請求項３】
前記発現ベクターが制御配列を含む、好ましくは前記発現ベクターがレンチウイルス発現構築物を含む、請求項１または２に記載の軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞。
【請求項４】
Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００７に記載されるようなペレット培養系により、軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞をペレット化し、１０ｎｇ／ｍｌのトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）−β３、１０−７Ｍデキサメタゾン、５０μｇ／ｍｌのアスコルビン酸−２−リン酸、４０μｇ／ｍｌのプロリン、１００μｇ／ｍｌのピルビン酸、および５０ｍｇ／ｍｌのＩＴＳ＋プレミックス（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；６．２５μｇ／ｍｌのインスリン、６．２５μｇ／ｍｌのトランスフェリン、６．２５μｇ／ｍｌの亜セレン酸、１．２５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、および５．３５ｍｇ／ｍｌのリノール酸）を含有する軟骨形成培地で培養することにより軟骨細胞分化が誘導されている、請求項１、２または３に記載の軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞。
【請求項５】
Ｎａｎｏｇ、Ｏｃｔ４、テロメラーゼ、ＳＶ４０ラージＴ抗原、ＨＰＶ  Ｅ６、ＨＰＶ  Ｅ７およびＢｍｉ−１のいずれか１以上の発現または活性を増大させるように改変された、請求項１〜４のいずれか一項に記載の軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞、を含むかまたはそれに由来する細胞株であって、不死細胞株または不死化細胞株などの細胞株。
【請求項７】
疾患の治療、例えば軟骨性組織、軟骨、骨または靭帯欠損に関連する疾患、損傷、障害または傷害、外傷性疾患、加齢性変性疾患または変性関節疾患の修復または再生の方法において使用するための、軟骨形成活性を含むポリペプチドをコードする能力のあるＺＮＦ１４５配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６００６．４、またはＮＭ＿００１０１８０１１）、またはＺＮＦ１４５と少なくとも８０％の配列相同性を有するその断片、相同体、変異体もしくは誘導体を含む核酸、例えば発現ベクター。
【請求項８】
疾患の治療、例えば軟骨性組織、軟骨、骨または靭帯欠損に関連する疾患、損傷、障害または傷害、外傷性疾患、加齢性変性疾患または変性関節疾患の修復または再生の方法において使用するための、ＺＮＦ１４５配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５９９７．２またはＮＰ＿００１０１８０１１．１）、またはＺＮＦ１４５と少なくとも８０％の配列相同性を有するその断片、相同体、変異体もしくは誘導体を含む、軟骨形成活性を含むポリペプチド。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞、請求項６に記載の細胞株、請求項７に記載の核酸または請求項８に記載のポリペプチドを含む、それらに記載された使用のための、医薬組成物。
【請求項１０】
軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞において、ＺＮＦ１４５（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６００６．４、ＮＭ＿００１０１８０１１、ＮＰ＿００５９９７．２またはＮＰ＿００１０１８０１１．１）またはＺＮＦ１４５と少なくとも８０％の配列相同性を有し、軟骨形成活性を含むその断片、相同体、変異体もしくは誘導体の発現または活性を調節すること、例えばＺＮＦ１４５またはその断片、相同体、変異体もしくは誘導体の発現または活性を増大させて軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞の軟骨形成を促進すること、またはＺＮＦ１４５またはその断片、相同体、変異体もしくは誘導体の発現または活性を下方制御して、軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞の軟骨形成を低下させることを含む、方法。
【請求項１１】
軟骨、骨または靭帯修復を促進するか、あるいは軟骨性組織の修復または再生を誘導する方法であって、該方法が、軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞において、ＺＮＦ１４５（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６００６．４、ＮＭ＿００１０１８０１１、ＮＰ＿００５９９７．２またはＮＰ＿００１０１８０１１．１）またはＺＮＦ１４５と少なくとも８０％の配列相同性を有し、軟骨形成活性を含むその断片、相同体、変異体もしくは誘導体の前記発現または活性を増強させることを含む、方法。
【請求項１２】
軟骨性組織、軟骨、骨または靭帯欠損に関連する疾患、損傷、障害または傷害、外傷性疾患、加齢性変性疾患または変性関節疾患の修復または再生、のいずれか１つの治療のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の改変された軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞、請求項６に記載の細胞株、請求項７に記載の核酸、請求項８に記載のポリペプチドまたは請求項９に記載の医薬組成物の使用。
【請求項１３】
個体において疾患を治療する方法であって、例えば軟骨性組織、軟骨、骨または靭帯欠損に関連する疾患、損傷、障害または傷害、外傷性疾患、加齢性変性疾患または変性関節疾患を修復または再生する方法であって、該個体においてまたは該個体の軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞において、ＺＮＦ１４５（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６００６．４、ＮＭ＿００１０１８０１１、ＮＰ＿００５９９７．２またはＮＰ＿００１０１８０１１．１）またはＺＮＦ１４５と少なくとも８０％の配列相同性を有し、軟骨形成活性を含むその断片、相同体、変異体もしくは誘導体の発現または活性を上方制御すること、あるいは、ＺＮＦ１４５またはその断片、相同体、変異体もしくは誘導体の発現または活性の増加を提示する軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞を、そのような治療を必要とする個体に投与することを含む、方法。
【請求項１４】
軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞の軟骨細胞分化のマーカーとしての、ＺＮＦ１４５（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６００６．４、ＮＭ＿００１０１８０１１、ＮＰ＿００５９９７．２またはＮＰ＿００１０１８０１１．１）またはＺＮＦ１４５と少なくとも８０％の配列相同性を有し、軟骨形成活性を含むその断片、相同体、変異体もしくは誘導体の使用。
【請求項１５】
Ｓｏｘ９の発現または活性を調節する方法であって、該方法が、ＺＮＦ１４５（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６００６．４、ＮＭ＿００１０１８０１１、ＮＰ＿００５９９７．２またはＮＰ＿００１０１８０１１．１）またはＺＮＦ１４５と少なくとも８０％の配列相同性を有し、軟骨形成活性を含むその断片、相同体、変異体もしくは誘導体の発現または活性を調節することを含む、方法。
【請求項１６】
軟骨形成前駆細胞、例えば間葉系幹細胞の軟骨形成を可能にするかまたは促進する能力のある薬剤を同定する方法であって、該方法が、ＺＮＦ１４５（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００５９９７．２またはＮＰ＿００１０１８０１１．１）またはＺＮＦ１４５と少なくとも８０％の配列相同性を有し、軟骨形成活性を含むその断片、相同体、変異体もしくは誘導体を候補薬剤に接触させること、および該候補薬剤がＺＮＦ１４５またはその断片、相同体、変異体もしくは誘導体に結合するかどうかを決定すること、および所望によりＺＮＦ１４５またはその断片、相同体、変異体もしくは誘導体の発現または活性がそれによって調節されるかどうかを決定することを含む、方法。