【手続補正書】
【提出日】平成26年10月24日(2014.10.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物
【化１】
2013545729.tif 000001
［式中、
ｎは２〜６であり、
Ｒは−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、または−ＣＨ（ＯＨ）―であり、
ＢがＨのとき、Ａは、
【化２】
2013545729.tif 000002
であり、
ＡがＨのとき、Ｂは、
【化３】
2013545729.tif 000003
であり、または、
ＡおよびＢは、共有結合して、ＣＯＯＨで置換された５、６、または７員のシクロアルキルを形成し、
ここで、
ＹはＯ、Ｓ、ＮＨ、又はＣＨ２であり、かつ
ｐは１〜７である。］またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｒが−Ｃ（Ｏ）−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ｐが３〜７である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
前記塩が、金属対イオンを含む塩基付加塩であり、該金属対イオンがナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムおよびリチウムからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
前記化合物が下記化合物Ｉ、ＩＩＩ〜ＸＩＶおよびＸＶＩのいずれか１つである、請求項１に記載の化合物。
【表１−１】
2013545729.tif 000004
【表１−２】
2013545729.tif 000005
【請求項６】
前記化合物が化合物Ｉ、ＩＩＩ、またはＸである、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物および薬学的に許容し得る担体を含む、医薬組成物。
【請求項８】
（ｉ）血液障害、（ｉｉ）炎症関連疾患、（ｉｉｉ）腎障害もしくは腎障害合併症、または（ｉｖ）線維症関連臓器機能不全の予防または治療のための、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記組成物が腎保護性組成物である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記血液障害が貧血または好中球減少症である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
対象の赤血球生成および／または血液生成を刺激するためのものである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記腎障害が腎症である、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
対象の化学療法薬を用いた治療から生じる毒作用に対する腎保護のためのものである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
対象の腎機能を改善するためのものである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
クレアチニンのクリアランスまたは尿酸のクリアランスを改善するためのものである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記炎症関連疾患が、免疫介在性炎症性疾患または自己免疫疾患であるか、あるいは関節炎、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、糸球体腎炎、脈管炎、乾癬性関節炎、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、強直性脊椎炎、シェーグレン症候群、スティル病、ブドウ膜炎、強皮症、筋炎、ライター症候群またはヴェゲナー症候群である、
請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記線維症関連臓器機能不全が、線維症関連腎臓機能不全、線維症関連心臓機能不全、線維症関連肺機能不全、線維症関連肝臓機能不全、線維症関連脳機能不全、腎症、糖尿病性腎症、心内膜心筋線維症、肺線維症、特発性肺線維症または肝硬変である、請求項８に記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
【図１】非炎症性および炎症性の状態下で、化合物Ｉがインビトロで（ＲＡＷ．２６４細胞）ＩＬ−１２の産生に及ぼす効果を示す棒グラフである。
【図２】化合物Ｉおよび化合物ＩＩがドキソルビシン誘導性腎毒性マウスモデルの腎保護に及ぼすインビボの効果を示す棒グラフである。
【図３】化合物Ｉを用いた予防的治療がドキソルビシンに誘導されたマウスの腎病変を減少させることを示す棒グラフである。
【図４】対照で治療したマウスおよび化合物Ｉで治療したマウスのドキソルビシン誘導性病変の組織学的マイクログラムである。
【図５】化合物Ｉを用いた経口的治療がドキソルビシン誘導性腎毒性マウスモデルの血清ＣＴＧＦに及ぼす効果を示す棒グラフである。
【図６】シクロホスファミドによる免疫抑制マウスに対する化合物Ｉおよび化合物ＩＩを用いた経口的治療の直後に認められた赤色骨髄細胞数の有意な増加を示すグラフである。
【図７】シクロホスファミドによる免疫抑制マウスに対する化合物Ｉおよび化合物ＩＩを用いた経口的治療の直後に認められた白色骨髄細胞数の有意な増加を示すグラフである。
【図８】５／６−腎摘出（ＮＸ）ラットに対する化合物Ｉの経口投与の直後に得られたＧＦＲの改善を示す棒グラフである。
【図９】５／６−ＮＸラットおよび化合物Ｉ（１０ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇ）で治療した５／６−ＮＸラットの１日目および１２５日目におけるＧＦＲ改善率の変化をパーセントで示した棒グラフである。
【図１０】化合物Ｉが、５／６−ＮＸラットの６３日目および８４日目のタンパク尿を、１０ｍｇ／ｋｇの用量で減少させることを示す棒グラフである。
【図１１】化合物Ｉを１０ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇの用量で投与すると、５／６−ＮＸラットの血清尿素が減少することを示す棒グラフである。
【図１２】化合物Ｉを１０ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した場合の血清クレアチンに対する作用を示す棒グラフである。
【図１３】５／６−ＮＸラット、および２１日目、４２日目、６３日目、８４日目、および１０５日目に１０ｍｇ／ｋｇの化合物Ｉで治療した５／６−ＮＸラットにおけるＭＣＰ−１の尿中排泄を示す棒グラフである。化合物Ｉで治療したラットでは、尿中排泄が有意に低下している（８４日目から）。
【図１４】５／６ＮＸ−ラットおよび１０ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ｉで治療した５／６−ＮＸラットの腎臓ＩＬ−１２ｐ４０タンパク質を示す棒グラフである。化合物Ｉで治療したラットでは、腎臓ＩＬ−１２ｐ４０が有意に上昇している。
【図１５】１０ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ｉで治療した治療済みの５／６−ＮＸラットにおける間質および糸球体の線維症／硬化症の減少を示す棒グラフである。
【図１６】化合物Ｉを用いた５／６−ＮＸラットの治療（経口、１０ｍｇ／ｋｇ）が、５／６−ＮＸラットにおける腎臓ＣＴＧＦの発現を減少させることを示すノーザンブロットである。
【図１７】５／６−ＮＸラットおよび化合物Ｉの経口投与による治療を受けた（経口、１０ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇ）５／６−ＮＸラットの生存率を示すグラフである。化合物Ｉによる治療が生存率を上昇させる。
【図１８】化合物Ｉ（１０および５０ｍｇ／ｋｇ）で治療したＵＵＯ（片側尿管閉塞）−ラットの血清アルブミン濃度を示す棒グラフである。
【図１９】化合物Ｉ（１０および５０ｍｇ／ｋｇ）で治療したＵＵＯ−ラットの腎臓のＭＣＰ−１レベルを示す棒グラフである。
【図２０】正常ＨＫ−２細胞およびＴＧＦ−β誘導ＥＭＴ細胞の上皮型カドヘリンに対する化合物Ｉの作用を示す棒グラフである。ヒトＧＡＰＤＨ内因性対照に標準化したヒト上皮型カドヘリンＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイを用いたリアルタイムＰＣＲ；基準はＴＧＦ−β処理細胞２４時間（ＲＱ＝１）。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１（ｔ−検定）
【図２１】正常ＨＫ−２細胞およびＴＧＦ−β誘導ＥＭＴ細胞のＣＴＧＦに対する化合物Ｉの作用を示す棒グラフである。ヒトＧＡＰＤＨ内因性対照に標準化したヒトＣＴＧＦＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイを用いたリアルタイムＰＣＲ；基準はＴＧＦ−β処理細胞２４時間（ＲＱ＝１）。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１（ｔ−検定）
【図２２】正常ＨＫ−２細胞およびＴＧＦ−β誘導性ＥＭＴ細胞のコラーゲン１に対する化合物Ｉの作用を示す棒グラフである。ヒトＧＡＰＤＨ内因性対照に標準化したヒトＣＴＧＦＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイを用いたリアルタイムＰＣＲ；基準はＴＧＦ−β処理細胞２４時間（ＲＱ＝１）。＊＊ｐ＜０．０１（ｔ−検定）
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９１】
機器類：
ＨＰＬＣクロマトグラムおよび質量スペクトルはいずれも、５分勾配で０．０１％のトリフルオロ酢酸と共に１５〜９９％のアセトニトリル−水を溶離剤として、流量２ｍＬ／分にて分析用Ｃ１８カラム（２５０ｘ４．６ｍｍ、５ミクロン）を用いて、ＨＰ１１００  ＬＣ−ＭＳ  Ａｇｉｌｅｎｔ計器上に記録した。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０８】
３−ホルミル安息香酸メチル（２．０ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）溶液を、窒素下で−７８℃まで冷却した。ｎ−へプチルマグネシウム臭化物のテトラヒドロフラン（１Ｍ、１２．２ｍＬ）溶液を、３０分間にわたり滴加し、反応物を−７８℃で３時間撹拌した。塩化水素水溶液（１Ｍ）の添加により反応物を急冷し、混合物を酢酸エチルで抽出した（３ｘ）。抽出物をまとめて硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中でろ過および蒸発を行った。粗材料を、１０％酢酸エチル／ヘキサンで溶出しながらＢｉｏｔａｇｅ（商標）４０Ｍカラム（シリカ）上で精製し、（ＲＳ）−３−｛１−ヒドロキシオクチル｝安息香酸メチル（２．２ｇ、６９％）を無色油として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.98 (s, 1H), 7.91 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 7.8, 7.8 Hz, 1H), 4.65-4.71 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 2.33 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 1.62-1.80 (m, 2H), 1.18-1.41 (m, 10H), 0.85 (t, J = 6.9 Hz, 3H)。第２級アルコール（２．０ｇ、７．５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５０ｍＬ）溶液をシリカゲル（１６ｇ）およびクロロクロム酸ピリジニウム（３．２ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）で処理し、反応物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をシリカゲルでろ過し、残渣をジクロロメタンで洗浄した。混合ろ過液と洗液を真空蒸発させて、３−オクタノイル安息香酸メチル（９．５ｇ、８６％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 8.58-8.59 (m, 1H), 8.20-8.23 (m, 1H), 8.14-8.17 (m, 1H), 7.53-7.57 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.00 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.74 (tt, J = 7.3, 7.3 Hz, 2H), 1.24-1.40 (m, 8H), 0.88 (t, J = 6.9 Hz, 3H)。メチルエステル（１．０ｇ、３．８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）溶液を、水酸化リチウム一水和物（８００ｍｇ、１９．１ｍｍｏｌ）の水（７ｍＬ）溶液で処理した。次にメタノール（７ｍＬ）を添加し、混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物を、ｐＨが５未満になるまで水性塩化水素（１Ｍ）で処理した後、酢酸エチル（３ｘ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中でろ過と蒸発を行い、３−オクタノイル安息香酸（９１９ｍｇ、９７％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD：δ 8.59 (dd, J = 1.7, 1.2 Hz, 1H), 8.18-8.24 (m, 2H), 7.61 (ddd, J = 7.8, 7.8, 0.4 Hz, 1H), 3.05 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.71 (tt, J = 7.3, 7.3 Hz, 2H), 1.27-1.41 (m, 8H), 0.90 (t, J = 7.0 Hz, 3H)。この酸（９１９ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ）と重炭酸ナトリウム（３１１ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ）との混合物を水（２０ｍＬ）で処理し、反応物を超音波処理で加熱し、固体がほとんど溶解するまで撹拌した。アセトニトリルを添加し、混合物をろ過し（０．４５μｍ）、凍結乾燥して、３−オクタノイル安息香酸ナトリウムを白色固体（１．０ｇ、１００％）として得た。1H NMR (400 MHz, D2O：δ 8.14 (s, 1H), 7.81 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 8.0, 7.8 Hz, 1H), 2.69 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.33 (tt, J = 7.0, 7.0 Hz, 2H), 0.88-1.03 (m, 8H), 0.54 (t, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, D2O：δ 203.93, 173.62, 137.25, 136.27, 133.92, 130.27, 128.59, 128.48, 38.58, 31.41, 28.82, 28.79, 24.25, 22.32, 13.60; LRMS (ESI): m/z 249 (M - Na+ + 2H+); HPLC: 4 min。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１１】
インダン−２−カルボン酸（５０４ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）および硫酸（２ｍＬ）の乾燥エタノール中溶液を、７５℃で３日間加熱した。この溶液を真空濃縮した後、ジクロロメタンと水に分離した。水性水酸化ナトリウム（５Ｍ）で水層のｐＨを１３〜１４に調節し、層を分離させた。水層を飽和塩化ナトリウムで希釈し、ジクロロメタンで抽出した（２ｘ）。飽和塩化ナトリウムで混合有機抽出物を洗浄し、真空中でろ過し、蒸発させて、粗生成物を得た。Ｂｉｏｔａｇｅ（商標）２５Ｓカラム（シリカ）上で、３％酢酸エチル／ヘキサンで溶出しながら精製し、インダン−２−カルボン酸エチル（５２６ｍｇ、９６％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.22-7.26 (m, 2H), 7.17-7.20 (m, 2H), 4.21 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.19-3.39 (m, 5H), 1.31 (t, J = 7.0 Hz, 3H)。インダン−２−カルボン酸エチル（１００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）と塩化アルミニウム（１６４ｍｇ、１２ｍｍｏｌ）とのジクロロメタン（４ｍＬ）中の混合物を、塩化オクタノイル（０．１ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）を用いて室温で処理し、反応物を周囲温度で一晩撹拌した。この反応混合物を氷と塩酸水溶液（１Ｍ）との混合物の上に注ぎ、ジクロロメタンで抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中でろ過し、蒸発させた。この粗材料をＢｉｏｔａｇｅ（商標）カラム（シリカ）上で５％酢酸エチル／ヘキサンで溶出しながら精製し、（ＲＳ）−５−オクタノイル−インダン−２−カルボン酸エチル（１１０ｍｇ、６５％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.69-7.77 (m, 2H), 7.29-7.32 (m, 1H), 4.07-4.17 (m, 2H), 3.15-3.36 (m, 5H), 2.84-2.90 (m, 2H), 1.62-1.70 (m, 2H), 1.19-1.34 (m, 8H), 0.80-0.87 (m, 3H)。テトラヒドロフラン（３ｍＬ）、メタノール（１ｍＬ）、および水（１ｍＬ）の混合物中のエチルエステル（８２ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の懸濁液を水酸化リチウム（４３ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、残渣を水で希釈した。ｐＨは、水性塩化水素（１Ｍ）でｐＨ４に調節し、混合物を酢酸エチルで抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空でろ過し、蒸発させ、粗生成物を得た。Ｂｉｏｔａｇｅ（商標）１２Ｍカラム（シリカ）上で、２％酢酸エチル／ヘキサンで溶出しながら精製し、（ＲＳ）−５−オクタノイル−インダン−２−カルボン酸（６０ｍｇ、８０％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD：δ 7.80 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.36 (tt, J = 8.2, 8.2 Hz, 1H), 3.24 (d, J = 8.2 Hz, 4H), 2.96 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.67 (tt, J = 7.2, 7.2 Hz, 2H), 1.26-1.39 (m, 8H), 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 3H)。この酸（６０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）のエタノール（４ｍＬ）および水（１ｍＬ）中の溶液を重炭酸ナトリウム（１８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）で処理し、反応物を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空濃縮し、溶液を水で希釈し、ろ過し（２０μｍ）、凍結乾燥して、（ＲＳ）−５−オクタノイル−インダン−２−カルボン酸ナトリウムを白色固体（５４ｍｇ、８７％）として得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD：δ 7.91 (s, 1H), 7.76 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.16-3.25 (m, 5H), 2.97 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.68 (tt, J = 7.3, 7.3 Hz, 2H), 1.28-1.40 (m, 8H), 0.90 (t, J = 7.0 Hz, 3H); LRMS (ESI): m/z 289 (M - Na+ + 2H+); HPLC: 5 min。
【手続補正６】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１９】
2013545729.tif 000006
【手続補正７】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２０】
2013545729.tif 000007
【手続補正８】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２１】
2013545729.tif 000008
【手続補正９】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図２２】
2013545729.tif 000009