【手続補正書】
【提出日】平成22年12月27日(2010.12.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
本発明は、部分的には、スルファターゼ酵素およびポリペプチド、それらをコードする核酸、並びに前述の分子の組成物、およびそれらを使用する方法に関する。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
スルファターゼが配列番号２または４に記載のアミノ酸配列を含む、実質的に純粋なスルファターゼ。
（項目２）
スルファターゼが配列番号２または４に記載のアミノ酸配列を含む、単離されたスルファターゼ。
（項目３）
前記スルファターゼが、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む、項目１または２に記載のスルファターゼ。
（項目４）
前記スルファターゼが、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む、項目１または２に記載のスルファターゼ。
（項目５）
修飾されたスルファターゼが配列番号２に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、少なくとも１つのアミノ酸残基は置換または欠失されていて、該置換または欠失された少なくとも１つのアミノ酸残基は４０、４１、８０、８４、１２８、１３０、２０６、２７７、３８７または５０４位の残基である、修飾されたスルファターゼ。
（項目６）
修飾されたスルファターゼが配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、少なくとも１つのアミノ酸残基は置換または欠失されていて、該置換または欠失された少なくとも１つのアミノ酸残基は４０、８０、８４、１２９、１７６または２４６位の残基である、修飾されたスルファターゼ。
（項目７）
修飾されたスルファターゼが配列番号２に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、少なくとも１つのアミノ酸残基は置換または欠失されていて、該置換または欠失された少なくとも１つのアミノ酸残基は４０、４１、８０、８４、１２８、１３０、２０６、２７７、３８７および５０４位の残基でない、修飾されたスルファターゼ。
（項目８）
修飾されたスルファターゼが配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、少なくとも１つのアミノ酸残基は置換または欠失されていて、該置換または欠失された前記少なくとも１つのアミノ酸残基は４０、８０、８４、１２９、１７６または２４６位の残基でない、修飾されたスルファターゼ。
（項目９）
項目１〜８のいずれか１項に記載のスルファターゼおよび医薬として許容される担体を含む組成物。
（項目１０）
前記組成物がカルシウムを含む、項目９に記載の組成物。
（項目１１）
前記組成物がキレート剤を含まない、項目９に記載の組成物。
（項目１２）
前記組成物が、ＥＤＴＡまたはＥＧＴＡを含まない、項目９に記載の組成物。
（項目１３）
前記組成物が、３ｍＭ、２ｍＭまたは１ｍＭ未満であるかまたはそれに等しい濃度のＥＤＴＡまたはＥＧＴＡを有する、項目９に記載の組成物。
（項目１４）
前記組成物が硫酸イオンを含まない、項目９に記載の組成物。
（項目１５）
前記組成物がリン酸イオンを含まない、項目９に記載の組成物。
（項目１６）
前記組成物が硫酸イオンまたはリン酸イオンを含まない、項目９に記載の組成物。
（項目１７）
前記組成物が、５ｍＭもしくは２ｍＭ未満であるかまたはそれに等しい濃度のリン酸イオンを有する、項目９に記載の組成物。
（項目１８）
前記組成物が、２０ｍＭ未満であるかまたはそれに等しい濃度の硫酸イオンを有する、項目９に記載の組成物。
（項目１９）
前記組成物が、１Ｍ未満の濃度の塩化ナトリウムを有する、項目９に記載の組成物。
（項目２０）
前記組成物が、０．５Ｍ未満の濃度の塩化ナトリウムを有する、項目１９に記載の組成物。
（項目２１）
前記塩化ナトリウムの濃度が２００ｍＭ未満である、項目２０に記載の組成物。
（項目２２）
前記組成物のｐＨが４．５よりも大きい、項目９に記載の組成物。
（項目２３）
前記組成物のｐＨが９未満である、項目９または２２に記載の組成物。
（項目２４）
前記ｐＨが５〜９の範囲にある、項目２２に記載の組成物。
（項目２５）
前記ｐＨが６〜８の範囲にある、項目２３に記載の組成物。
（項目２６）
前記ｐＨが５．５〜６．５の範囲にある、項目２５に記載の組成物。
（項目２７）
前記組成物が、酢酸塩バッファーをさらに含む、項目９に記載の組成物。
（項目２８）
前記組成物が、少なくとも１つの追加のＧＡＧ分解酵素をさらに含む、項目９〜２７のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２９）
前記少なくとも１つの追加のＧＡＧ分解酵素が、ヘパリナーゼＩ、ヘパリナーゼＩＩ、ヘパリナーゼＩＩＩ、２−ＯスルファターゼまたはΔ４，５グリクロニダーゼである、項目２８に記載の組成物。
（項目３０）
前記少なくとも１つの追加のＧＡＧ分解酵素が、別のスルファターゼ、グリコシルヒドロラーゼ、エンドグルクロニダーゼまたはリアーゼである、項目２８または２９に記載の組成物。
（項目３１）
項目１〜８のいずれか１項に記載のスルファターゼと固体支持体メンブレンとを含む組成物であって、ここで、前記スルファターゼが該固体支持体メンブレンに固定化されている組成物。
（項目３２）
（ａ）ストリンジェントな条件下で、配列番号１または３に記載のヌクレオチド配列を有する核酸分子にハイブリダイズする核酸分子、
（ｂ）遺伝コードの縮重によりコドン配列において、（ａ）の核酸分子とは異なった核酸配列、
（ｃ）（ａ）または（ｂ）の相補体
からなる群から選択される単離された核酸分子。
（項目３３）
前記単離された核酸分子が、配列番号１に記載のヌクレオチド配列を有する、項目３２に記載の単離された核酸分子。
（項目３４）
前記単離された核酸分子が、配列番号３に記載のヌクレオチド配列を有する、項目３２に記載の単離された核酸分子。
（項目３５）
プロモーターに作動可能に連結された、項目３２〜３４のいずれか１項に記載の単離された核酸分子を含む発現ベクター。
（項目３６）
項目３５に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
（項目３７）
項目３２〜３６のいずれか１項に記載の単離された核酸分子、ベクターまたは宿主細胞および医薬として許容される担体を含む組成物。
（項目３８）
グリコサミノグリカンと、該グリコサミノグリカンを分解するのに有効な量で項目１〜３１のいずれか１項に記載の前記スルファターゼまたはその組成物とを接触させることを含む分解するための方法。
（項目３９）
前記グリコサミノグリカンが、少なくとも１つの追加のグリコサミノグリカン分解酵素と接触される、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記少なくとも１つの追加のグリコサミノグリカン分解酵素が、前記スルファターゼ前、その後またはそれと同時に用いられる、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記少なくとも１つの追加のグリコサミノグリカン分解酵素が、ヘパリナーゼＩ、ヘパリナーゼＩＩ、ヘパリナーゼＩＩＩ、２−ＯスルファターゼまたはΔ４，５グリクロニダーゼである、項目３９または４０に記載の方法。
（項目４２）
前記少なくとも１つの追加のＧＡＧ分解酵素が、別のスルファターゼ、グリコシルヒドロラーゼ、エンドグルクロニダーゼまたはリアーゼである、項目３９〜４１のいずれか１項に記載の方法。
（項目４３）
前記少なくとも１つの追加のグリコサミノグリカン分解酵素がΔ４，５グリクロニダーゼである、項目４１に記載の方法。
（項目４４）
前記Δ４，５グリクロニダーゼが、前記スルファターゼ前に前記グリコサミノグリカンと接触される、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記グリコサミノグリカンが、２−Ｏスルファターゼと接触され、前記２−Ｏスルファターゼとの接触がΔ４，５グリクロニダーゼとの接触前である、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記グリコサミノグリカンがヘパリナーゼと接触され、前記ヘパリナーゼとの接触が前記２−Ｏスルファターゼとの接触前である、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記スルファターゼが６−Ｏスルファターゼであり、ここで、前記グリコサミノグリカンもＮ−スルファミダーゼと接触され、前記グリコサミノグリカンが前記Ｎ−スルファミダーゼ前に前記６−Ｏスルファターゼと接触される、項目３９または４６に記載の方法。
（項目４８）
前記グリコサミノグリカンが、６−ＯスルファターゼまたはＮ−スルファミダーゼと接触される前に３−Ｏ脱硫酸化される、項目３８〜４７のいずれか１項に記載の方法。
（項目４９）
項目３８〜４８のいずれか１項に記載の方法によって生成される分解されたグリコサミノグリカン。
（項目５０）
項目４９に記載の前記分解されたグリコサミノグリカンおよび医薬として許容される担体を含む組成物。
（項目５１）
グリコサミノグリカンと、グリコサミノグリカンを分析するのに有効な量で項目１〜３１のいずれか１項に記載の前記スルファターゼまたはその組成物とを接触させることを含む、分析するための方法。
（項目５２）
前記グリコサミノグリカンが、少なくとも１つの追加のグリコサミノグリカン分解酵素と接触される、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記少なくとも１つの追加のグリコサミノグリカン分解酵素が、前記スルファターゼ前、その後またはそれと同時に用いられる、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記少なくとも１つの追加のグリコサミノグリカン分解酵素が、ヘパリナーゼＩ、ヘパリナーゼＩＩ、ヘパリナーゼＩＩＩ、２−ＯスルファターゼまたはΔ４，５グリクロニダーゼである、項目５２または５３に記載の方法。
（項目５５）
前記少なくとも１つの追加のＧＡＧ分解酵素が、別のスルファターゼ、グリコシルヒドロラーゼ、エンドグルクロニダーゼまたはリアーゼである、項目５２〜５４のいずれか１項に記載の方法。
（項目５６）
前記少なくとも１つの追加のグリコサミノグリカン分解酵素がΔ４，５グリクロニダーゼである、項目５４に記載の方法。
（項目５７）
前記Δ４，５グリクロニダーゼが、前記スルファターゼ前に前記グリコサミノグリカンと接触される、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記グリコサミノグリカンが、２−Ｏスルファターゼと接触され、前記２−Ｏスルファターゼとの接触が前記Δ４，５グリクロニダーゼとの接触前である、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記グリコサミノグリカンがヘパリナーゼと接触され、該ヘパリナーゼとの接触が前記２−Ｏスルファターゼとの接触前である、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
前記スルファターゼが６−Ｏスルファターゼであり、ここで、前記グリコサミノグリカンもＮ−スルファミダーゼと接触され、前記グリコサミノグリカンが前記Ｎ−スルファミダーゼ前に前記６−Ｏスルファターゼと接触される、項目５２または５９に記載の方法。
（項目６１）
前記グリコサミノグリカンが、６−ＯスルファターゼまたはＮ−スルファミダーゼと接触される前に３−Ｏ脱硫酸化される、項目５１〜６０のいずれか１項に記載の方法。
（項目６２）
前記方法が、試料に含まれる特定のグリコサミノグリカンの存在を同定するための方法である、項目５１〜６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６３）
前記方法が、試料に含まれるグリコサミノグリカンの純度を決定するための方法である、項目５１〜６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６４）
前記方法が、試料に含まれるグリコサミノグリカンの組成を決定するための方法である、項目５１〜６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６５）
前記方法が、グリコサミノグリカンにおける糖単位の順番を決定するための方法である、項目５１〜６１のいずれか１項に記載の方法。
（項目６６）
前記方法が、さらに、質量分析、ＮＭＲ分光計、ゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動またはＨＰＬＣの分析技術を用いることを含む、項目５１〜６５のいずれか１項に記載の方法。
（項目６７）
血管形成を阻害するのに有効な量の項目９または５０の組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む、血管形成を阻害する方法。
（項目６８）
癌を治療するのに有効な量の項目９または５０の組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む、癌を治療する方法。
（項目６９）
転移を阻害するのに有効な量の項目９または５０の組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む、転移を阻害する方法。
（項目７０）
凝固障害を治療するのに有効な量でそれを必要とする対象に項目９または５０のいずれかに記載の組成物を投与することを含む、対象の凝固障害を治療する方法。
（項目７１）
炎症性障害を治療するのに有効な量でそれを必要とする対象に項目９または５０の組成物を投与することを含む、炎症性障害を治療する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２または４に記載のアミノ酸配列を含む、実質的に純粋かつ単離されたスルファターゼ。
【請求項２】
配列番号２に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、少なくとも１つのアミノ酸残基は置換または欠失されていて、該置換または欠失された少なくとも１つのアミノ酸残基は４０、４１、８０、８４、１２８、１３０、２０６、２７７、３８７または５０４位の残基である、修飾されたスルファターゼ。
【請求項３】
配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、少なくとも１つのアミノ酸残基は置換または欠失されていて、該置換または欠失された少なくとも１つのアミノ酸残基は４０、８０、８４、１２９、１７６または２４６位の残基である、修飾されたスルファターゼ。
【請求項４】
請求項１、２または３のいずれか１項に記載のスルファターゼおよび医薬として許容される担体を含む組成物。
【請求項５】
（ａ）ストリンジェントな条件下で、配列番号１または３に記載のヌクレオチド配列を有する核酸分子にハイブリダイズする核酸分子、
（ｂ）遺伝コードの縮重によりコドン配列において、（ａ）の核酸分子とは異なった核酸配列、
（ｃ）（ａ）または（ｂ）の相補体
からなる群から選択される単離された核酸分子。
【請求項６】
配列番号１に記載のヌクレオチド配列を有する、請求項５に記載の単離された核酸分子。
【請求項７】
配列番号３に記載のヌクレオチド配列を有する、請求項５に記載の単離された核酸分子。
【請求項８】
プロモーターに作動可能に連結された、請求項５〜７のいずれか１項に記載の単離された核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項９】
請求項８に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１０】
グリコサミノグリカンを分解するための組成物であって、該グリコサミノグリカンを分解するのに有効な量で請求項１、２または３のいずれか１項に記載のスルファターゼを含む、組成物。
【請求項１１】
グリコサミノグリカンと、該グリコサミノグリカンを分析するのに有効な量で請求項１、２または３のいずれか１項に記載のスルファターゼとを接触させることを含む、分析するための方法。
【請求項１２】
前記方法が、さらに、質量分析、ＮＭＲ分光計、ゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動またはＨＰＬＣの分析技術を用いることを含む、請求項１１に記載の方法。