【手続補正書】
【提出日】平成26年2月4日(2014.2.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体の脳脊髄液から単離された幹細胞内のＨ３Ｋ２７のメチル化のレベルを、該被験体における神経変性疾患を発症するリスクの指標とする方法であって、該方法は：
該幹細胞内のＨ３Ｋ２７のメチル化のレベルを決定する工程を包含し、ここで、
Ｈ３Ｋ２７のメチル化のレベルの上昇は、該神経変性疾患を発症するリスクの増大の指標である、
方法。
【請求項２】
前記幹細胞内のＨ３Ｋ２７のメチル化のレベルを決定する工程が、Ｋ２７でジメチル化されたヒストンＨ３およびＫ２７でトリメチル化されたヒストンＨ３のうちの少なくとも１つに対する抗体と該幹細胞とを接触させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記幹細胞内のＨ３Ｋ２７のメチル化のレベルを決定する工程が、Ｋ２７でジメチル化されたヒストンＨ３およびＫ２７でトリメチル化されたヒストンＨ３のうちの少なくとも１つに特異的な抗体と該幹細胞とを接触させることを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮性側索硬化症からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記神経変性疾患がアルツハイマー病である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記神経変性疾患がパーキンソン病である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記神経変性疾患が筋萎縮性側索硬化症である、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
ＣＤ１３３、Ｓｏｘ２、Ｏｃｔ４およびＮａｎｏｇからなる群より選択される少なくとも１つの幹細胞マーカーが、前記幹細胞に存在するかまたは存在しないかを決定する工程をさらに包含し、該幹細胞マーカーの該決定する工程は、ＣＤ１３３、Ｓｏｘ２、Ｏｃｔ４およびＮａｎｏｇのうちの少なくとも１つに対する抗体と該幹細胞とを接触させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記幹細胞が、ＣＤ１３３、Ｓｏｘ２、Ｏｃｔ４およびＮａｎｏｇからなる群より選択される少なくとも１つの幹細胞マーカーに関して陽性である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
Ｂｒｎ３ａ、ＴｕＪ１、ＧＦＡＰおよびＯ４からなる群より選択される少なくとも１つの分化マーカーが、前記幹細胞に存在するかまたは存在しないかを決定する工程をさらに包含し、該分化マーカーの該決定する工程は、Ｂｒｎ３ａ、ＴｕＪ１、ＧＦＡＰおよびＯ４のうちの少なくとも１つに対する抗体と該幹細胞とを接触させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記幹細胞が、Ｂｒｎ３ａ、ＴｕＪ１、ＧＦＡＰおよびＯ４からなる群より選択される少なくとも１つの分化マーカーに関して陰性である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記幹細胞とβアミロイド抗体とを接触させることにより、該幹細胞におけるβアミロイドタンパク質の存在または量を決定する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記幹細胞とαシヌクレイン抗体とを接触させることにより、該幹細胞におけるαシヌクレインタンパク質の存在または量を決定する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記幹細胞とインターロイキン−６抗体とを接触させることにより、該幹細胞におけるインターロイキン−６タンパク質の存在または量を決定する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記方法は、前記被験体が前記神経変性疾患の任意の臨床症状を示す前に行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
神経変性疾患のリスクがある被験体を処置するための組成物であって、該組成物は、ビタミンＢまたはその代謝産物を含み、
ここで、該被験体は、該被験体の脳脊髄液から単離された幹細胞において、通常よりも高いＨ３Ｋ２７のメチル化のレベルを有する、組成物。
【請求項１７】
前記ビタミンＢの代謝産物が、Ｌ−メチルフォレートである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記幹細胞が、ＣＤ１３３、Ｓｏｘ２、Ｏｃｔ４およびＮａｎｏｇのうちの少なくとも１つに対する抗体と接触させられて、ＣＤ１３３、Ｓｏｘ２、Ｏｃｔ４およびＮａｎｏｇからなる群より選択される少なくとも１つ幹細胞マーカーが存在するかまたは存在しないかが決定される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】
前記幹細胞が、Ｂｒｎ３ａ、ＴｕＪ１、ＧＦＡＰおよびＯ４のうちの少なくとも１つに対する抗体と接触させられて、Ｂｒｎ３ａ、ＴｕＪ１、ＧＦＡＰおよびＯ４からなる群より選択される少なくとも１つの分化マーカーが存在するかまたは存在しないかが決定される、請求項１６に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
本発明の別の態様は一般的に、神経変性疾患のリスクがある被験体の処置をモニタリングする方法に関する。一実施形態では、本方法は、被験体の脳脊髄液から幹細胞を単離する工程、および幹細胞内のＨ３Ｋ２７のメチル化のレベルを決定する工程を含む。Ｈ３Ｋ２７のメチル化のレベルが通常より高い場合、被験体は、神経変性疾患のリスクが増大していると決定される。本方法は、被験体が神経変性疾患のリスクが増大していると決定された場合、ビタミンＢまたはその代謝産物を被験体に投与する工程をさらに含む。一実施形態では、ビタミンＢ代謝産物はＬ−メチルフォレートである。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
被験体における神経変性疾患を発症するリスクを決定する方法であって、該方法は：
該被験体の脳脊髄液から幹細胞を単離する工程；
該幹細胞内のＨ３Ｋ２７のメチル化のレベルを決定する工程を包含し、ここで、
Ｈ３Ｋ２７のメチル化のレベルの上昇は、該神経変性疾患を発症するリスクの増大の指標である、
方法。
（項目２）
前記幹細胞内のＨ３Ｋ２７のメチル化のレベルを決定する工程が、Ｋ２７でジメチル化されたヒストンＨ３およびＫ２７でトリメチル化されたヒストンＨ３のうちの少なくとも１つに対する抗体と該幹細胞とを接触させることを含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記幹細胞内のＨ３Ｋ２７のメチル化のレベルを決定する工程が、Ｋ２７でジメチル化されたヒストンＨ３およびＫ２７でトリメチル化されたヒストンＨ３のうちの少なくとも１つに特異的な抗体と該幹細胞とを接触させることを含む、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮性側索硬化症からなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記神経変性疾患がアルツハイマー病である、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記神経変性疾患がパーキンソン病である、項目４に記載の方法。
（項目７）
前記神経変性疾患が筋萎縮性側索硬化症である、項目４に記載の方法。
（項目８）
ＣＤ１３３、Ｓｏｘ２、Ｏｃｔ４およびＮａｎｏｇからなる群より選択される少なくとも１つの幹細胞マーカーが、前記幹細胞に存在するかまたは存在しないかを決定する工程をさらに包含し、該幹細胞マーカーの該決定する工程は、ＣＤ１３３、Ｓｏｘ２、Ｏｃｔ４およびＮａｎｏｇのうちの少なくとも１つに対する抗体と該幹細胞とを接触させることを含む、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記幹細胞が、ＣＤ１３３、Ｓｏｘ２、Ｏｃｔ４およびＮａｎｏｇからなる群より選択される少なくとも１つの幹細胞マーカーに関して陽性である、項目８に記載の方法。
（項目１０）
Ｂｒｎ３ａ、ＴｕＪ１、ＧＦＡＰおよびＯ４からなる群より選択される少なくとも１つの分化マーカーが、前記幹細胞に存在するかまたは存在しないかを決定する工程をさらに包含し、該分化マーカーの該決定する工程は、Ｂｒｎ３ａ、ＴｕＪ１、ＧＦＡＰおよびＯ４のうちの少なくとも１つに対する抗体と該幹細胞とを接触させることを含む、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記幹細胞が、Ｂｒｎ３ａ、ＴｕＪ１、ＧＦＡＰおよびＯ４からなる群より選択される少なくとも１つの分化マーカーに関して陰性である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記幹細胞とβアミロイド抗体とを接触させることにより、該幹細胞におけるβアミロイドタンパク質の存在または量を決定する工程をさらに包含する、項目１に記載の方法。
（項目１３）
前記幹細胞とαシヌクレイン抗体とを接触させることにより、該幹細胞におけるαシヌクレインタンパク質の存在または量を決定する工程をさらに包含する、項目１に記載の方法。
（項目１４）
前記幹細胞とインターロイキン−６抗体とを接触させることにより、該幹細胞におけるインターロイキン−６タンパク質の存在または量を決定する工程をさらに包含する、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記被験体は、前記神経変性疾患の任意の臨床症状を有する前に検査される、項目１に記載の方法。
（項目１６）
神経変性疾患のリスクがある被験体を処置する方法であって、該方法は：
該被験体の脳脊髄液から幹細胞を単離する工程；
該幹細胞内のＨ３Ｋ２７ｍ２メチル化のレベルを決定する工程であって、ここで、Ｈ３Ｋ２７のメチル化のレベルが通常レベルよりも高い場合、該被験体は、該神経変性疾患のリスクが増大していると決定される、工程；ならびに
該被験体は前記神経変性疾患のリスクが増大していると決定される場合、ビタミンＢまたはその代謝産物を該被験体に投与する工程
を包含する、方法。
（項目１７）
前記ビタミンＢの代謝産物が、Ｌ−メチルフォレートである、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
ＣＤ１３３、Ｓｏｘ２、Ｏｃｔ４およびＮａｎｏｇからなる群より選択される少なくとも１つの幹細胞マーカーが、前記幹細胞に存在するかまたは存在しないかを決定する工程をさらに包含し、該幹細胞マーカーの該決定する工程は、ＣＤ１３３、Ｓｏｘ２、Ｏｃｔ４およびＮａｎｏｇのうちの少なくとも１つに対する抗体と該幹細胞とを接触させることを含む、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
Ｂｒｎ３ａ、ＴｕＪ１、ＧＦＡＰおよびＯ４からなる群より選択される少なくとも１つの分化マーカーが、前記幹細胞に存在するかまたは存在しないかを決定する工程をさらに包含し、前記分化マーカーの該決定する工程は、Ｂｒｎ３ａ、ＴｕＪ１、ＧＦＡＰおよびＯ４のうちの少なくとも１つに対する抗体と該幹細胞とを接触させることを含む、項目１６に記載の方法。