【手続補正書】
【提出日】平成26年7月25日(2014.7.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記工程：
（ａ）細胞集団を準備すること；
（ｂ）第１の染色及び第２の染色を該細胞集団に適用することであって、
ここで該第１の染色は自身の発現が標的細胞の存在を示す第１のマーカーを検出し、そして該第２の染色は自身の発現がやはり同じ標的細胞の存在を示す第２のマーカーを検出し、
そしてここで、該第１の染色は可視光下に検出可能であり、そして該第２の染色は紫外光下に検出可能であるか、又は
ここで、該第１の染色は可視光下に検出可能であり、そして該第２の染色は可視光下に検出可能であり、そしてここで該第１の染色及び該第２の染色は目視により区別可能であること；
（ｃ）可視光下に該細胞集団を顕微鏡観察することにより該第１のマーカーに関して陽性である何れかの細胞を検出すること；
（ｄ）該第２の染色が紫外光下に検出可能である紫外光下に、又は該第２の染色が可視光下に検出可能である可視光下に、該第１のマーカーに関して陽性である該細胞を顕微鏡観察すること、及び、該検出された細胞の何れかが該第１のマーカー及び該第２のマーカーに関して陽性であるかどうか調べること；及び、
（ｅ）該第１のマーカー及び該第１のマーカーに関して陽性である何れかの細胞を標的細胞として識別すること；
を含む、細胞集団における標的細胞の存在を検出する、又は非存在を確認する方法。
【請求項２】
該標的細胞が脂肪細胞；骨髄線維芽細胞；心筋細胞；軟骨細胞；分化ＲＢＣ及びＷＢＣ直系；内皮骨髄線維芽細胞；外胚葉；外胚葉前駆体；胚様体（ＥＢ）；胎生期癌（ＥＣ）；胚性幹（ＥＳ）；内胚葉；内皮；造血細胞；造血幹細胞（ＨＳＣ）、付随体、内皮前駆体；肝細胞；ケラチノサイト；間葉；間葉性幹細胞（ＭＳＣ）；中胚葉；ＭＳＣ前駆体；筋芽細胞；筋細胞；神経前駆体；神経幹細胞；ニューロン；稀突起神経膠細胞；骨芽細胞；膵上皮；膵島；膵前駆体；骨格筋細胞；平滑筋；間質性（間葉）前駆細胞；及び白血球（ＷＢＣ）よりなる群から選択されるか；又は
該標的細胞がウィルス感染細胞、癌性又は前癌性の細胞、癌幹細胞及び免疫細胞から選択され、そして／又は
該方法は、該細胞集団から検出された標的細胞を除去又は単離することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該細胞集団が多能性細胞１つ以上に由来し、
該標的細胞が多能性細胞、胚性幹細胞、又は誘導多能性（ｉＰＳ）細胞であり、必要に応じて、該細胞集団が多能性細胞、胚性幹細胞、又は誘導多能性（ｉＰＳ）細胞から分化した細胞を更に含むか、又は
該方法は、多能性細胞１つ以上に由来する細胞集団複数に対して行われ、必要に応じて該細胞集団が異なるＨＬＡ型の多能性細胞に由来し、そして／又は
該細胞集団がレイヨウ、ウシ、ラクダ、ネコ、マメジカ（ネズミジカ）、チンパンジー、乳牛、シカ、イヌ、キリン、ヤギ、モルモット、ハムスター、カバ、ウマ、ヒト、マウス、非ヒト霊長類、ヒツジ類、イノシシ、ブタ、プロングホーン、ウサギ、ラット、マカク、サイ、ヒツジ、バク、及び有蹄類よりなる群から選択される種の細胞を含み、好ましくは、該細胞集団は、ヒト細胞を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
該第１の染色が可視光下及び紫外光下に観察可能である、請求項１記載の方法。
【請求項５】
該第１のマーカーが該標的細胞により発現されるアルカリホスファターゼを含むか、又は、
該第１の染色が該第１のマーカーに特異的に結合する抗体を含み、そして該抗体がアルカリホスファターゼに直接又は間接的にカップリングし、必要に応じて、該第１の染色がナフトールＡＳ−ＢＩホスフェート；５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）及びニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）；ＢＣＩＰ試薬及びＩＮＴＸ試薬；ナフトールＡＳ−ＢＩ及びファーストレッドバイオレットＬＢ；テトラゾリウム塩；ジアゾ化合物；ＶＥＣＴＯＲ（登録商標）Ｒｅｄ；ＶＥＣＴＯＲ（登録商標）Ｂｌｕｅ；ＶＥＣＴＯＲ（登録商標）Ｂｌａｃｋ；及びｐ−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）よりなる群から選択されるアルカリホスファターゼ基質を含み、好ましくは、該第１の染色がベクターレッド又はベクターブルーを含む、請求項１〜４の何れかに記載の方法。
【請求項６】
該第２の染色は紫外光下に検出可能であり、該第２の染色が該第２のマーカーに特異的に結合する一次抗体を含み、そして該一次抗体が蛍光標識に直接又は間接的にカップリングされ、必要に応じて該第２の染色が二次抗体を更に含み、必要に応じて該二次抗体が蛍光標識を含み、該蛍光標識がＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ３５０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４０５、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４３０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５１４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５３２、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５４６、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５５５、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５６８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５９４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６１０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６３３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６３５、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６６０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６８０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ７００、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ７５０及びＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ７９０、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、テキサスレッド、ＳＹＢＲグリーン、ＤｙＬｉｇｈｔＦｌｕｏｒｓ、緑色蛍光蛋白（ＧＦＰ）、ＴＲＩＴ（テトラメチルローダミンイソチオール）、ＮＢＤ（７−ニトロベンズ−２−オキサ−１,３−ジアゾール）、テキサスレッド染料、フタル酸、テレフタル酸、イソフタル酸、クレジルファーストバイオレット、クレジルブルーバイオレット、ブリリアントクレジルブルー、ｐ−アミノ安息香酸、エリスロシン、ビオチン、ジゴキシゲニン、５−カルボキシ−４',５'−ジクロロ−２',７'−ジメトキシフルオレセイン、ＴＥＴ（６−カルボキシ−２',４,７,７'−テトラクロロフルオレセイン）、ＨＥＸ（６−カルボキシ−２',４,４',５',７,７'−ヘキサクロロフルオレセイン）、Ｊｏｅ（６−カルボキシ−４',５'−ジクロロ−２',７'−ジメトキシフルオレセイン）、５−カルボキシ−２',４',５',７'−テトラクロロフルオレセイン、５−カルボキシフルオレセイン、５−カルボキシローダミン、Ｔａｍｒａ（テトラメチルローダミン）、６−カルボキシローダミン、Ｒｏｘ（カルボキシ−Ｘ−ローダミン）、Ｒ６Ｇ（ローダミン６Ｇ）、フタロシアニン類、アゾメチン類、シアニン類（例えばＣｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５）、キサンチン類、スクシニルフルオレセイン類、Ｎ,Ｎ−ジエチル−４−（５'−アゾベンゾトリアゾリル）−フェニルアミン、アミノアクリジン及び量子ドットよりなる群から選択されるか、又は
該第２の染色が該第２のマーカーに特異的に結合する一次抗体を含み、そして該一次抗体が可視光下に観察可能な試薬に直接又は間接的にカップリングし、必要に応じて、可視光下に観察可能な該試薬が金粒子、銀粒子、又はラテックス粒子を含むか、又は
該第２の染色が該第２のマーカーに特異的に結合する一次抗体を含み、そして該一次抗体が可視光下に観察可能な生成物を生成する反応を触媒する酵素に直接又は間接的にカップリングし、該酵素がアルカリホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ、及びパーオキシダーゼよりなる群から選択され、好ましくは該パーオキシダーゼがセイヨウワサビパーオキシダーゼを含むか、又は
該第２の染色が該第２のマーカーに特異的に結合する一次抗体を含み、該一次抗体が金粒子に直接又は間接的にカップリングし、そして該方法が更に該金粒子上に銀沈殿を形成することを含む、請求項１または５に記載の方法。
【請求項７】
該第２のマーカーがアルカリホスファターゼ、Ｏｃｔ−４、Ｎａｎｏｇ、期特異的胚性抗原−３（ＳＳＥＡ−３）、期特異的胚性抗原−４（ＳＳＥＡ−４）、ＴＲＡ−１−６０、ＴＲＡ−１−８１、ＴＲＡ−２−４９／６Ｅ、Ｓｏｘ２、成長分化因子３（ＧＤＦ３）、低下発現１（ＲＥＸ１）、線維芽細胞成長因子４（ＦＧＦ４）、胚細胞特異的遺伝子１（ＥＳＧ１）、発生多能性関連２（ＤＰＰＡ２）、ＤＰＰＡ４、テロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ＳＡＬＬ４、Ｅ−ＣＡＤＨＥＲＩＮ、クラスター指定３０（ＣＤ３０）、Ｃｒｉｐｔｏ（ＴＤＧＦ−１）、ＧＣＴＭ−２、Ｇｅｎｅｓｉｓ、生殖細胞核因子、及び幹細胞因子（ＳＣＦ又はｃ−Ｋｉｔリガンド）よりなる群から選択され、必要に応じて、該標的細胞が胚性幹細胞であり、該第２のマーカーがＯｃｔ−４及びＮａｎｏｇよりなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
該第１の染色が該第１のマーカーに特異的に結合する第１の一次抗体を含み、該第１の一次抗体が可視光下に観察可能な第１の試薬に直接又は間接的にカップリングし、必要に応じて、可視光下に観察可能な該第１の試薬が金粒子、銀粒子、又はラテックス粒子を含むか、又は
該第１の染色が該第１のマーカーに特異的に結合する第１の一次抗体を含み、該第１の一次抗体が可視光下に観察可能な生成物を生成する反応を触媒する第１の酵素に直接又は間接的にカップリングし、必要に応じて、該第１の酵素がアルカリホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ及びパーオキシダーゼよりなる群から選択され、好ましくは、該第１の酵素がカップリングする該パーオキシダーゼがセイヨウワサビパーオキシダーゼを含むか、又は
該第１の染色が該第１のマーカーに特異的に結合する一次抗体を含み、該一次抗体が金粒子に直接又は間接的にカップリングし、そして該方法が更に該金粒子上に銀沈殿を形成することを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
第１のマーカーが、アルカリホスファターゼ、Ｏｃｔ−４、Ｎａｎｏｇ、期特異的胚性抗原−３（ＳＳＥＡ−３）、期特異的胚性抗原−４（ＳＳＥＡ−４）、ＴＲＡ−１−６０、ＴＲＡ−１−８１、ＴＲＡ−２−４９／６Ｅ、Ｓｏｘ２、成長分化因子３（ＧＤＦ３）、低下発現１（ＲＥＸ１）、線維芽細胞成長因子４（ＦＧＦ４）、胚細胞特異的遺伝子１（ＥＳＧ１）、発生多能性関連２（ＤＰＰＡ２）、ＤＰＰＡ４、テロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ＳＡＬＬ４、Ｅ−ＣＡＤＨＥＲＩＮ、クラスター指定３０（ＣＤ３０）、Ｃｒｉｐｔｏ（ＴＤＧＦ−１）、ＧＣＴＭ−２、Ｇｅｎｅｓｉｓ、生殖細胞核因子、及び幹細胞因子（ＳＣＦ又はｃ−Ｋｉｔリガンド）よりなる群から選択され、
必要に応じて、該標的細胞が胚性幹細胞であり、該第２のマーカーがＯｃｔ−４、Ｏｃｔ−４、Ｌｉｎ２８、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４、ｎ−又はｃ−Ｍｙｃ及びＮａｎｏｇよりなる群から選択され、
必要に応じて、該第１のマーカーが該第２のマーカーとは異なり、
必要に応じて、該第１のマーカー及び該第２のマーカーが胚性幹細胞マーカーである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
該細胞集団中の細胞の概数を測定することを更に含むか、又は
該細胞集団中の細胞の少なくとも９０％を可視光下に検査することにより該第１のマーカーに関して陽性である細胞を検出し、必要に応じて、該第１のマーカーに関して陽性である各細胞が、その細胞が該第２のマーカーに関して陽性であるかどうかを調べるために検査されるか、又は
該細胞集団が少なくとも１０５個の細胞、少なくとも１０６個の細胞、少なくとも１０７個の細胞、少なくとも１０８個の細胞、少なくとも１０９個の細胞、少なくとも１０１０個の細胞、又は１０５〜１０１０個の細胞を含有するか、又は
細胞の該集団が胚性幹細胞のインビボ又はインビトロの分化により生産される、請求項１〜９のいずれか一項の何れかに記載の方法。
【請求項１１】
該細胞集団を標的細胞型の増殖又は維持に好都合な条件下に培養し、
必要に応じて、該標的細胞型が胚性幹細胞であり、
必要に応じて、該培養条件がフィーダー細胞上で該細胞集団を培養することを含み、
必要に応じて、該フィーダー細胞がＭＥＦである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
該標的細胞が、胚性幹細胞又は誘導多能性（ｉＰＳ）細胞であり、該細胞集団が、胚性幹細胞又は誘導多能性（ｉＰＳ）細胞から分化した細胞をさらに含み、胚性幹細胞又はｉＰＳ細胞から分化した該細胞が網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞であり、
必要に応じて、該ＲＰＥ細胞がヒトのものであり、そして／又は
必要に応じて、該ＲＰＥ細胞が下記工程：
（ａ）多能性幹細胞を準備することであって、必要に応じて、該多能性幹細胞が誘導多能性幹（ｉＰＳ）細胞、胚性幹（ＥＳ）細胞、成人幹細胞、造血幹細胞、胎児幹細胞、間葉性幹細胞、分娩後幹細胞、複能性幹細胞、胚性生殖細胞、ヒトＥＳ細胞又はヒトｉＰＳ細胞であること；
（ｂ）多能性幹細胞を培養することにより多能性幹細胞の多層集団又は多能性幹細胞を含む胚様体を形成すること；
（ｃ）細胞培養物中にＲＰＥ細胞が出現するために十分な期間、多層集団又は胚様体を培養すること；及び、
（ｄ）培養物からＲＰＥ細胞を単離すること；
を含む方法により作製され、
必要に応じて、工程（ｃ）の期間が少なくとも約７〜１０日間、または少なくとも約２週間、または少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間、または少なくとも約５週間、または少なくとも約６週間であり、
必要に応じて、該ＲＰＥ細胞培養物がマウス胚性フィーダー細胞（ＭＥＦ）及びヒト胚性幹細胞（ｈＥＳ）を実質的に含有せず、そして／又は
ＲＰＥ細胞のリッチ化された培養物を増殖させるために使用される培養培地が未分化の多能性幹細胞の増殖又は維持を支援しない、請求項１〜１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
標的細胞型を含む第２の細胞集団をプレーティングすること、及び、工程（ａ）の該細胞集団と同じ方法により該第２の細胞集団を分析することにより該方法の検出限界を明確化することを更に含み、必要に応じて、該第２の細胞集団が該標的細胞型の細胞よりなるか又は本質的になり、
必要に応じて、該第２の細胞集団が細胞の第１の群及び細胞の第２の群の混合物を含み、細胞の該第１の群が標的細胞型と同じ型のものであり、
必要に応じて、細胞の該第２の群が工程（ａ）の該細胞集団と本質的に同じコンスティテュエンシーを有し、又は
必要に応じて、細胞の該第１の群及び細胞の該第２の群における細胞の数の比が１：１０；１：１００；１：１，０００；１：１０，０００；１：１００，０００；１：１，０００，０００；１：１０，０００，０００；１：１００，０００，０００；１：１，０００，０００，０００；１：１０と１：１００との間；１：１０と１：１，０００との間；１：１０と１：１０，０００との間；１：１０と１：１００，０００との間；１：１０と１：１，０００，０００との間；１：１０と１：１０，０００，０００との間；１：１０と１：１００，０００，０００との間；１：１０と１：１，０００，０００，０００との間；１：１００と１：１，０００との間；１：１００と１：１０，０００との間；１：１００と１：１００，０００との間；１：１００と１：１，０００，０００との間；１：１００と１：１０，０００，０００との間；１：１００と１：１００，０００，０００との間；１：１００と１：１，０００，０００，０００との間；１：１，０００と１：１０，０００との間；１：１，０００と１：１００，０００との間；１：１，０００と１：１，０００，０００との間；１：１，０００と１：１０，０００，０００との間；１：１，０００と１：１００，０００，０００との間；１：１，０００と１：１，０００，０００，０００との間；１：１０，０００と１：１００，０００との間；１：１０，０００と１：１，０００，０００との間；１：１０，０００と１：１０，０００，０００との間；１：１０，０００と１：１００，０００，０００との間；１：１０，０００と１：１，０００，０００，０００との間；１：１００，０００と１：１，０００，０００との間；１：１００，０００と１：１０，０００，０００との間；１：１００，０００と１：１００，０００，０００との間；１：１００，０００と１：１，０００，０００，０００との間；１：１，０００，０００と１：１０，０００，０００との間；１：１，０００，０００と１：１００，０００，０００との間；１：１，０００，０００と１：１，０００，０００，０００との間；１：１０，０００，０００と１：１００，０００，０００との間；１：１０，０００，０００と１：１，０００，０００，０００との間；及び１：１００，０００，０００と１：１，０００，０００，０００との間よりなる群から選択され、そして／又は
必要に応じて、該第２の細胞集団中の標的細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％が標的細胞の該第１のマーカー及び該第２のマーカーに関して陽性として検出され、必要に応じて、該第２の細胞集団中の該標的細胞が標的細胞又はそれらの子孫を識別するさらなるマーカーを発現する、請求項１〜１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
該細胞集団に第３の染色を適用すること、ここで該第３の染色は自身の発現が標的細胞の存在を示す第３のマーカーを検出すること；該細胞集団の細胞を顕微鏡観察することにより該第３のマーカーに関して陽性である何れかの細胞を検出すること；及び該第１のマーカー、該第２のマーカー及び該第３のマーカーに関して陽性である何れかの細胞を標的細胞として識別することを更に含み、
必要に応じて、該第３の染色が該第１の染色から、及び該第２の染色から目視により区別可能であり、そして／又は、
必要に応じて、該第３の染色が可視光下又は紫外光下に検出可能である請求項１〜１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
細胞及び存在する幹細胞の数又は割合を示すインジケーターを含む組成物であって、該組成物中の細胞の代表となる細胞集団に適用された請求項１〜１４の何れか一項に記載した方法を使用して、該インジケーターの値が測定され、必要に応じて、該組成物は、少なくとも１０５個の細胞、少なくとも１０６個の細胞、少なくとも１０７個の細胞、少なくとも１０８個の細胞、少なくとも１０９個の細胞、少なくとも１０１０個の細胞、又は１０５〜１０１０個の細胞を含み、そして／又は、必要に応じて該組成物は、低温保存された細胞を含む、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７８】
本発明は上記又は後述する側面及び実施形態の何れかの組み合わせを意図している。例えば分化ＲＰＥ細胞及び成熟ＲＰＥ細胞の何れかの組み合わせを含むＲＰＥ細胞の調製物を本明細書に記載する状態の何れかの治療において使用できる。同様に、出発物質としてヒト胚性幹細胞を用いながらＲＰＥ細胞を生産する眼の本明細書に記載した方法は、同様に、出発物質として何れかのヒト多能性幹細胞を用いながら実施してよい。
本発明の好ましい実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
下記工程：
（ａ）細胞集団を準備すること；
（ｂ）第１の染色及び第２の染色を該細胞集団に適用すること、ここで該第１の染色は自身の発現が標的細胞の存在を示す第１のマーカーを検出し、そして該第２の染色は自身の発現がやはり同じ標的細胞の存在を示す第２のマーカーを検出し、そしてここで、該第１の染色は可視光下に検出可能であり、そして該第２の染色は紫外光下に検出可能であること；
（ｃ）可視光下に該細胞集団を顕微鏡観察することにより該第１のマーカーに関して陽性である何れかの細胞を検出すること；
（ｄ）紫外光下に該第１のマーカーに関して陽性である該細胞を顕微鏡観察すること、及び、該検出された細胞の何れかが該第１のマーカー及び該第２のマーカーに関して陽性であるかどうか調べること；及び、
（ｅ）該第１のマーカー及び該第１のマーカーに関して陽性である何れかの細胞を標的細胞として識別すること；
を含む、細胞集団における標的細胞の存在を検出する、又は非存在を確認する方法。
（項目２）
下記工程：
（ａ）細胞集団を準備すること；
（ｂ）第１の染色及び第２の染色を該細胞集団に適用すること、ここで  該第１の染色は自身の発現が標的細胞を示す第１のマーカーを検出し、そして第２の染色は自身の発現が同じ標的細胞を示す第２のマーカーを検出し、ここで該第１の染色は可視光下に検出可能であり、そして該第２の染色は可視光下に検出可能であり、そしてここで該第１の染色及び該第２の染色は目視により区別可能であること；
（ｃ）可視光下に該細胞集団を顕微鏡観察することにより該第１のマーカーに関して陽性である何れかの細胞を検出すること；
（ｄ）可視光下に該細胞集団の細胞を顕微鏡観察することにより該第２のマーカーに関して陽性である何れかの細胞を検出すること；そして、
（ｅ）標的細胞として該第１のマーカー及び該第２のマーカーに関して陽性である何れかの細胞を（ｃ）及び（ｄ）で検出された細胞から識別すること；
を含む、細胞集団における標的細胞の存在を検出するか、又は非存在を確認する方法。
（項目３）
細胞集団から検出された標的細胞を除去又は単離することを更に含む項目１又は２記載の方法。
（項目４）
細胞集団が多能性細胞１つ以上に由来する項目１又は２記載の方法。
（項目５）
多能性細胞１つ以上に由来する細胞集団複数に対して行う項目１又は２記載の方法。
（項目６）
該細胞集団が異なるＨＬＡ型の多能性細胞に由来する項目５記載の方法。
（項目７）
該第１の染色が可視光下及び紫外光下に観察可能である項目１又は２記載の方法。
（項目８）
該第１のマーカーが該標的細胞により発現されるアルカリホスファターゼを含む項目１〜７の何れかに記載の方法。
（項目９）
該第１の染色が該第１のマーカーに特異的に結合する抗体を含み、そして該抗体がアルカリホスファターゼに直接又は間接的にカップリングする項目１〜７の何れかに記載の方法。
（項目１０）
該第１の染色がナフトールＡＳ−ＢＩホスフェート；５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）及びニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）；ＢＣＩＰ試薬及びＩＮＴＸ試薬；ナフトールＡＳ−ＢＩ及びファーストレッドバイオレットＬＢ；テトラゾリウム塩；ジアゾ化合物；ＶＥＣＴＯＲ（登録商標）Ｒｅｄ；ＶＥＣＴＯＲ（登録商標）Ｂｌｕｅ；ＶＥＣＴＯＲ（登録商標）Ｂｌａｃｋ；及びｐ−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ）よりなる群から選択されるアルカリホスファターゼ基質を含む項目８又は９の何れかに記載の方法。
（項目１１）
該第１の染色がベクターレッド又はベクターブルーを含む項目１０記載の方法。
（項目１２）
該第２の染色が該第２のマーカーに特異的に結合する一次抗体を含み、そして該一次抗体が蛍光標識に直接又は間接的にカップリングされる項目１又は７〜１１の何れかに記載の方法。
（項目１３）
該第２のマーカーがアルカリホスファターゼ、Ｏｃｔ−４、Ｎａｎｏｇ、期特異的胚性抗原−３（ＳＳＥＡ−３）、期特異的胚性抗原−４（ＳＳＥＡ−４）、ＴＲＡ−１−６０、ＴＲＡ−１−８１、ＴＲＡ−２−４９／６Ｅ、Ｓｏｘ２、Ｌｉｎ２８、成長分化因子３（ＧＤＦ３）、低下発現１（ＲＥＸ１）、線維芽細胞成長因子４（ＦＧＦ４）、胚細胞特異的遺伝子１（ＥＳＧ１）、発生多能性関連２（ＤＰＰＡ２）、ＤＰＰＡ４、テロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ＳＡＬＬ４、Ｅ−ＣＡＤＨＥＲＩＮ、クラスター指定３０（ＣＤ３０）、Ｃｒｉｐｔｏ（ＴＤＧＦ−１）、ＧＣＴＭ−２、Ｇｅｎｅｓｉｓ、生殖細胞核因子、及び幹細胞因子（ＳＣＦ又はｃ−Ｋｉｔリガンド）よりなる群から選択される項目１２記載の方法。
（項目１４）
該標的細胞が胚性幹細胞である項目１３記載の方法。
（項目１５）
該第２のマーカーがＯｃｔ−４及びＮａｎｏｇよりなる群から選択される項目１４記載の方法。
（項目１６）
該一次抗体が蛍光標識を含む項目１２〜１５の何れかに記載の方法。
（項目１７）
該第２の染色が更に二次抗体を含む項目１２〜１５の何れかに記載の方法。
（項目１８）
該二次抗体が蛍光標識を含む項目１７記載の方法。
（項目１９）
該蛍光標識がＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ３５０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４０５、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４３０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５１４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５３２、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５４６、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５５５、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５６８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ５９４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６１０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６３３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６３５、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６４７、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６６０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ６８０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ７００、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ７５０及びＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ７９０、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、テキサスレッド、ＳＹＢＲグリーン、ＤｙＬｉｇｈｔＦｌｕｏｒｓ、緑色蛍光蛋白（ＧＦＰ）、ＴＲＩＴ（テトラメチルローダミンイソチオール）、ＮＢＤ（７−ニトロベンズ−２−オキサ−１,３−ジアゾール）、テキサスレッド染料、フタル酸、テレフタル酸、イソフタル
酸、クレジルファーストバイオレット、クレジルブルーバイオレット、ブリリアントクレジルブルー、ｐ−アミノ安息香酸、エリスロシン、ビオチン、ジゴキシゲニン、５−カルボキシ−４',５'−ジクロロ−２',７'−ジメトキシフルオレセイン、ＴＥＴ（６−カルボキシ−２',４,７,７'−テトラクロロフルオレセイン）、ＨＥＸ（６−カルボキシ−２',４,４',５',７,７'−ヘキサクロロフルオレセイン）、Ｊｏｅ（６−カルボキシ−４',５'−ジクロロ−２',７'−ジメトキシフルオレセイン）、５−カルボキシ−２',４',５',７'−テトラクロロフルオレセイン、５−カルボキシフルオレセイン、５−カルボキシローダミン、Ｔａｍｒａ（テトラメチルローダミン）、６−カルボキシローダミン、Ｒｏｘ（カルボキシ−Ｘ−ローダミン）、Ｒ６Ｇ（ローダミン６Ｇ）、フタロシアニン類、アゾメチン類、シアニン類（例えばＣｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５）、キサンチン類、スクシニルフルオレセイン類、Ｎ,Ｎ−ジエチル−４−（５'−アゾベンゾトリアゾリル）−フェニルアミン、アミノアクリジン及び量子ドットよりなる群から選択される項目１６又は１８記載の方法。
（項目２０）
該蛍光標識がＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８を含む項目１９記載の方法。
（項目２１）
該第２の染色が該第２のマーカーに特異的に結合する一次抗体を含み、そして該一次抗体が可視光下に観察可能な試薬に直接又は間接的にカップリングする項目２〜１１の何れかに記載の方法。
（項目２２）
可視光下に観察可能な該試薬が金粒子、銀粒子、又はラテックス粒子を含む項目２１記載の方法。
（項目２３）
該第２の染色が該第２のマーカーに特異的に結合する一次抗体を含み、そして該一次抗体が可視光下に観察可能な生成物を生成する反応を触媒する酵素に直接又は間接的にカップリングする項目２〜１１の何れかに記載の方法。  
（項目２４）
該酵素がアルカリホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ、及びパーオキシダーゼよりなる群から選択される項目２３記載の方法。
（項目２５）
該パーオキシダーゼがセイヨウワサビパーオキシダーゼを含む項目２４記載の方法。
（項目２６）
該パーオキシダーゼを３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）；３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）；３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）；４−クロロ−１−ナフトール；２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−スルホン酸）（ＡＢＴＳ）；２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロリド；２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３−シクロヘキサンジオン；３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジン；３，３′−ジアミノベンジジンテトラクロリド；３−ニトロテトラゾリウムブルークロリド；４−アミノフタルヒドラジド；４−クロロ−１−ナフトール；４−クロロ−７−ニトロベンゾフラザン；５−アミノサリチル酸；２塩酸ジカルボキシジン；グアイアコール；過酸化水素−尿素付加物；ヨードニトロテトラゾリウムクロリド；ルミノール；ＭＴＴホルマザン；Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−エチルイソルミノール；Ｎ−（６−アミノヘキシル）−Ｎ−エチルイソルミノール；ニトロテトラゾリウムブルークロリド；ピロガロール；テトラニトロブルーテトラゾリウムクロリド；テトラゾリウムブルークロリド指示薬；テトラゾリウムバイオレット；ｏ−ジアニシジン；ｏ−ジアニシジン２塩酸塩；ｏ−フェニレンジアミン２塩酸塩；ｏ−フェニレンジアミン遊離塩基；及びトランス−５−フェニル−４−ペンテニルヒドロパーオキシドよりなる群から選択されるパーオキシダーゼ基質と接触させることを更に含む項目２３又は２４記載の方法。
（項目２７）
該酵素がベータガラクトシダーゼを含む項目２４記載の方法。
（項目２８）
該ベータガラクトシダーゼを、１−メチル−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；２−ニトロフェニルβ−Ｄ−ガラクトピラノシド；４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−ガラクトピラノシド；４−ニトロフェニルβ−Ｄ−ガラクトピラノシド；５−ブロモ−３−インドリルβ−Ｄ−ガラクトピラノシド；５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルβ−Ｄ−ガラクトピラノシド；５−ブロモ−６−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；６−ブロモ−２−ナフチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシド；６−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；フルオレセインジ（β−Ｄ−ガラクトピラノシド）；及びレゾルフィンβ−Ｄ−ガラクトピラノシドよりなる群から選択されるベータガラクトシダーゼ基質と接触させることを更に含む項目２７記載の方法。
（項目２９）
該第２の染色が該第２のマーカーに特異的に結合する一次抗体を含み、  該一次抗体が金粒子に直接又は間接的にカップリングし、そして該方法が更に該金粒子上に銀沈殿を形成することを含む項目２〜１１の何れかに記載の方法。
（項目３０）
該第２のマーカーがアルカリホスファターゼ、Ｏｃｔ−４、Ｎａｎｏｇ、期特異的胚性抗原−３（ＳＳＥＡ−３）、期特異的胚性抗原−４（ＳＳＥＡ−４）、ＴＲＡ−１−６０、ＴＲＡ−１−８１、ＴＲＡ−２−４９／６Ｅ、Ｓｏｘ２、成長分化因子３（ＧＤＦ３）、低下発現１（ＲＥＸ１）、線維芽細胞成長因子４（ＦＧＦ４）、胚細胞特異的遺伝子１（ＥＳＧ１）、発生多能性関連２（ＤＰＰＡ２）、ＤＰＰＡ４、テロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ＳＡＬＬ４、Ｅ−ＣＡＤＨＥＲＩＮ、クラスター指定３０（ＣＤ３０）、Ｃｒｉｐｔｏ（ＴＤＧＦ−１）、ＧＣＴＭ−２、Ｇｅｎｅｓｉｓ、生殖細胞核因子、及び幹細胞因子（ＳＣＦ又はｃ−Ｋｉｔリガンド）よりなる群から選択される項目２１〜２９の何れかに記載の方法。
（項目３１）
該標的細胞が胚性幹細胞である項目３０記載の方法。
（項目３２）
該第２のマーカーがＯｃｔ−４及びＮａｎｏｇよりなる群から選択される項目３１記載の方法。
（項目３３）
該第１の染色が該第２のマーカーに特異的に結合する第１の一次抗体を含み、該第１の一次抗体が可視光下に観察可能な第１の試薬に直接又は間接的にカップリングする項目１〜２又は１２〜３２の何れかに記載の方法。
（項目３４）
可視光下に観察可能な該第１の試薬が金粒子、銀粒子、又はラテックス粒子を含む項目３３記載の方法。
（項目３５）
該第１の染色が該第１のマーカーに特異的に結合する第１の一次抗体を含み、該第１の一次抗体が可視光下に観察可能な生成物を生成する反応を触媒する第１の酵素に直接又は間接的にカップリングする項目１〜２又は１２〜３２の何れかに記載の方法。
（項目３６）
該第１の酵素がアルカリホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ及びパーオキシダーゼよりなる群から選択される項目３５記載の方法。
（項目３７）
該第１の酵素がカップリングする該パーオキシダーゼがセイヨウワサビパーオキシダーゼを含む項目３６記載の方法。
（項目３８）
該第１の酵素がカップリングする該パーオキシダーゼを３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）；３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）；３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）；４−クロロ−１−ナフトール；２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−スルホン酸）（ＡＢＴＳ）；２，３，５−トリフェニルテトラゾリウムクロリド；２−クロロ−５，５−ジメチル−１，３−シクロヘキサンジオン；３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジン；３，３′−ジアミノベンジジンテトラクロリド；３−ニトロテトラゾリウムブルークロリド；４−アミノフタルヒドラジド；４−クロロ−１−ナフトール；４−クロロ−７−ニトロベンゾフラザン；５−アミノサリチル酸；２塩酸ジカルボキシジン；グアイアコール；過酸化水素−尿素付加物；ヨードニトロテトラゾリウムクロリド；ルミノール；ＭＴＴホルマザン；Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−エチルイソルミノール；Ｎ−（６−アミノヘキシル）−Ｎ−エチルイソルミノール；ニトロテトラゾリウムブルークロリド；ピロガロール；テトラニトロブルーテトラゾリウムクロリド；テトラゾリウムブルークロリド指示薬；テトラゾリウムバイオレット；ｏ−ジアニシジン；ｏ−ジアニシジン２塩酸塩；ｏ−フェニレンジアミン２塩酸塩；ｏ−フェニレンジアミン遊離塩基；及びトランス−５−フェニル−４−ペンテニルヒドロパーオキシドよりなる群から選択されるパーオキシダーゼ基質と接触させることを更に含む項目３６又は３７記載の方法。
（項目３９）
該第１の酵素がベータガラクトシダーゼを含む項目３５記載の方法。
（項目４０）
該第１の酵素がカップリングする該ベータガラクトシダーゼを１−メチル−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；２−ニトロフェニルβ−Ｄ−ガラクトピラノシド；４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−ガラクトピラノシド；４−ニトロフェニルβ−Ｄ−ガラクトピラノシド；５−ブロモ−３−インドリルβ−Ｄ−ガラクトピラノシド；５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルβ−Ｄ−ガラクトピラノシド；５−ブロモ−６−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；６−ブロモ−２−ナフチルβ−Ｄ−ガラクトピラノシド；６−クロロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド；フルオレセインジ（β−Ｄ−ガラクトピラノシド）；及びレゾルフィンβ−Ｄ−ガラクトピラノシドよりなる群から選択されるベータガラクトシダーゼ基質と接触させることを更に含む項目２７記載の方法。
（項目４１）
該第１の染色が該第１のマーカーに特異的に結合する一次抗体を含み、該一次抗体が金粒子に直接又は間接的にカップリングし、  そして該方法が更に該金粒子上に銀沈殿を形成することを含む項目１〜２又は１２〜３２の何れかに記載の方法。
（項目４２）
第１のマーカーが、アルカリホスファターゼ、Ｏｃｔ−４、Ｎａｎｏｇ、期特異的胚性抗原−３（ＳＳＥＡ−３）、期特異的胚性抗原−４（ＳＳＥＡ−４）、ＴＲＡ−１−６０、ＴＲＡ−１−８１、ＴＲＡ−２−４９／６Ｅ、Ｓｏｘ２、成長分化因子３（ＧＤＦ３）、低下発現１（ＲＥＸ１）、線維芽細胞成長因子４（ＦＧＦ４）、胚細胞特異的遺伝子１（ＥＳＧ１）、発生多能性関連２（ＤＰＰＡ２）、ＤＰＰＡ４、テロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ＳＡＬＬ４、Ｅ−ＣＡＤＨＥＲＩＮ、クラスター指定３０（ＣＤ３０）、Ｃｒｉｐｔｏ（ＴＤＧＦ−１）、ＧＣＴＭ−２、Ｇｅｎｅｓｉｓ、生殖細胞核因子、及び幹細胞因子（ＳＣＦ又はｃ−Ｋｉｔリガンド）よりなる群から選択される項目３３〜４１の何れかに記載の方法。
（項目４３）
該標的細胞が胚性幹細胞である項目４２記載の方法。
（項目４４）
該第２のマーカーがＯｃｔ−４、Ｏｃｔ−４、Ｌｉｎ２８、Ｓｏｘ２、Ｋｌｆ４、ｎ−又はｃ−Ｍｙｃ及びＮａｎｏｇよりなる群から選択される項目４３記載の方法。
（項目４５）
該第１のマーカーが該第２のマーカーとは異なる項目４２〜４４の何れかに記載の方法。
（項目４６）
該標的細胞が胚性幹細胞であり、そして該第２のマーカーがアルカリホスファターゼ、Ｏｃｔ−４、Ｎａｎｏｇ、期特異的胚性抗原−３（ＳＳＥＡ−３）、期特異的胚性抗原−４（ＳＳＥＡ−４）、ＴＲＡ−１−６０、ＴＲＡ−１−８１、ＴＲＡ−２−４９／６Ｅ、Ｓｏｘ２、成長分化因子３（ＧＤＦ３）、低下発現１（ＲＥＸ１）、線維芽細胞成長因子４（ＦＧＦ４）、胚細胞特異的遺伝子１（ＥＳＧ１）、発生多能性関連２（ＤＰＰＡ２）、ＤＰＰＡ４、テロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ＳＡＬＬ４、Ｅ−ＣＡＤＨＥＲＩＮ、クラスター指定３０（ＣＤ３０）、Ｃｒｉｐｔｏ（ＴＤＧＦ−１）、ＧＣＴＭ−２、Ｇｅｎｅｓｉｓ、生殖細胞核因子、及び幹細胞因子（ＳＣＦ又はｃ−Ｋｉｔリガンド）よりなる群から選択される上記項目の何れかに記載の方法。
（項目４７）
該細胞集団がレイヨウ、ウシ、ラクダ、ネコ、マメジカ（ネズミジカ）、  チンパンジー、乳牛、シカ、イヌ、キリン、ヤギ、モルモット、ハムスター、カバ、ウマ、ヒト、マウス、非ヒト霊長類、ヒツジ類、イノシシ、ブタ、プロングホーン、ウサギ、ラット、マカク、サイ、ヒツジ、バク、及び有蹄類よりなる群から選択される種の細胞を含む上記項目の何れかに記載の方法。
（項目４８）
該細胞集団がヒト細胞を含む項目４７記載の方法。
（項目４９）
細胞集団中の細胞の概数を測定することを更に含む上記項目の何れかに記載の方法。
（項目５０）
該細胞集団中の細胞の少なくとも９０％を可視光下に検査することにより該第１のマーカーに関して陽性である細胞を検出する上記項目の何れか一項に記載の方法。
（項目５１）
該第１のマーカーに関して陽性である各細胞を、その細胞が該第２のマーカーに関して陽性であるかどうかを調べるために検査する項目５０記載の方法。
（項目５２）
該細胞集団が少なくとも１０５個の細胞、少なくとも１０６個の細胞、少なくとも１０７個の細胞、少なくとも１０８個の細胞、少なくとも１０９個の細胞、少なくとも１０１０個の細胞、又は１０５〜１０１０個の細胞を含有する上記項目の何れか一項に記載の方法。
（項目５３）
該第１のマーカー及び該第２のマーカーが胚性幹細胞マーカーである上記項目の何れか一項に記載の方法。
（項目５４）
細胞の該集団が胚性幹細胞のインビボ又はインビトロの分化により生産される上記項目の何れか一項に記載の方法。
（項目５５）
該標的細胞が多能性細胞、胚性幹細胞、又は誘導多能性（ｉＰＳ）細胞である上記項目の何れか一項に記載の方法。
（項目５６）
該細胞集団が多能性細胞、胚性幹細胞、又は誘導多能性（ｉＰＳ）細胞から分化した細胞を更に含む項目５５の方法。
（項目５７）
該細胞集団を標的細胞型の増殖又は維持に好都合な条件下に培養する上記項目の何れかに記載の方法。
（項目５８）
該標的細胞型が胚性幹細胞である項目５７記載の方法。
（項目５９）
該培養条件がフィーダー細胞上で該細胞集団を培養することを含む項目５８記載の方法。
（項目６０）
該フィーダー細胞がＭＥＦである項目５９記載の方法。
（項目６１）
胚性幹細胞又はｉＰＳ細胞から分化した該細胞が網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞である項目５６〜６０の何れかに記載の方法。
（項目６２）
該ＲＰＥ細胞がヒトのものである項目６１記載の細胞。
（項目６３）
該ＲＰＥ細胞が下記工程：
（ａ）多能性幹細胞を準備すること；
（ｂ）多能性幹細胞を培養することにより多能性幹細胞の多層集団又は多能性幹細胞を含む胚様体を形成すること；
（ｃ）細胞培養物中にＲＰＥ細胞が出現するために十分な期間、多層集団又は胚様体を培養すること；及び、
（ｄ）培養物からＲＰＥ細胞を単離すること；
を含む方法により作製される項目６１又は６２記載の方法。
（項目６４）
該多能性幹細胞が誘導多能性幹（ｉＰＳ）細胞、胚性幹（ＥＳ）細胞、成人幹細胞、造血幹細胞、胎児幹細胞、間葉性幹細胞、分娩後幹細胞、複能性幹細胞、又は胚性生殖細胞である項目６３記載の方法。
（項目６５）
多能性幹細胞がヒトＥＳ細胞又はヒトｉＰＳ細胞である項目６３記載の方法。
（項目６６）
工程（ｃ）の期間が少なくとも約７〜１０日間である項目６３〜６５の何れか一項に記載の方法。
（項目６７）
工程（ｃ）の期間が少なくとも約２週間である項目６３〜６５の何れか一項に記載の方法。
（項目６８）
工程（ｃ）の期間が少なくとも約３週間である項目６３〜６５の何れか一項に記載の方法。
（項目６９）
工程（ｃ）の期間が少なくとも約４週間である項目６３〜６５の何れか一項に記載の方法。
（項目７０）
工程（ｃ）の期間が少なくとも約５週間である項目６３〜６５の何れか一項に記載の方法。
（項目７１）
工程（ｃ）の期間が少なくとも約６週間である項目６３〜６５の何れか一項に記載の方法。
（項目７２）
該ＲＰＥ細胞培養物がマウス胚性フィーダー細胞（ＭＥＦ）及びヒト胚性幹細胞（ｈＥＳ）を実質的に含有しない項目６１〜７１の何れか一項に記載の方法。
（項目７３）
ＲＰＥ細胞のリッチ化された培養物を増殖させるために使用される培地が未分化の多能性幹細胞の増殖又は維持を支援しない項目６１〜７２の何れか一項に記載の方法。
（項目７４）
標的細胞が脂肪細胞；骨髄線維芽細胞；心筋細胞；軟骨細胞；分化ＲＢＣ及びＷＢＣ直系；内皮骨髄線維芽細胞；外胚葉；外胚葉前駆体；胚様体（ＥＢ）；胎生期癌（ＥＣ）；胚性幹（ＥＳ）；内胚葉；内皮；造血細胞；造血幹細胞（ＨＳＣ）、付随体、内皮前駆体；肝細胞；ケラチノサイト；間葉；間葉性幹細胞（ＭＳＣ）；中胚葉；ＭＳＣ前駆体；筋芽細胞；筋細胞；神経前駆体；神経幹細胞；ニューロン；稀突起神経膠細胞；骨芽細胞；膵上皮；膵島；膵前駆体；骨格筋細胞；平滑筋；間質性（間葉）前駆細胞；及び白血球（ＷＢＣ）よりなる群から選択される項目１〜７４の何れか一項に記載の方法。
（項目７５）
第１のマーカー及び第２のマーカーが表１に記載するとおり上記標的細胞と関連しているマーカーである項目７１記載の方法。
（項目７６）
工程（ａ）の前に、標的細胞型のメンテナンス細胞に好都合な条件下に細胞集団を培養することを更に含む上記項目の何れかに記載の方法。
（項目７７）
標的細胞が胚性幹細胞又は誘導多能性（ｉＰＳ）細胞である項目７６記載の方法。
（項目７８）
該培養条件が胚性幹細胞培地及びマウス胚性線維芽細胞フィーダー細胞の存在を含む項目７７記載の方法。
（項目７９）
標的細胞型を含む第２の細胞集団をプレーティングすること、及び、工程（ａ）の該細胞集団と同じ方法により該第２の細胞集団を分析することにより該方法の検出限界を明確化することを更に含む上記項目の何れか一項に記載の方法。
（項目８０）
該第２の細胞集団が該標的細胞型よりなるか、本質的にこれよりなる項目７９記載の方法。
（項目８１）
該第２の細胞集団が細胞の第１の群及び細胞の第２の群の混合物を含み、細胞の該第１の群が標的細胞型と同じ型のものである項目７９記載の方法。
（項目８２）
細胞の該第２の群が工程（ａ）の該細胞集団と本質的に同じコンスティテュエンシーを有する項目８１記載の方法。
（項目８３）
細胞の該第１の群及び細胞の該第２の群における細胞の数の比が１：１０；１：１００；１：１，０００；１：１０，０００；１：１００，０００；１：１，０００，０００；１：１０，０００，０００；１：１００，０００，０００；１：１，０００，０００，０００；１：１０と１：１００との間；１：１０と１：１，０００との間；１：１０と１：１０，０００との間；１：１０と１：１００，０００との間；１：１０と１：１，０００，０００との間；１：１０と１：１０，０００，０００との間；１：１０と１：１００，０００，０００との間；１：１０と１：１，０００，０００，０００との間；１：１００と１：１，０００との間；１：１００と１：１０，０００との間；１：１００と１：１００，０００との間；１：１００と１：１，０００，０００との間；１：１００と１：１０，０００，０００との間；１：１００と１：１００，０００，０００との間；１：１００と１：１，０００，０００，０００との間；１：１，０００と１：１０，０００との間；１：１，０００と１：１００，０００との間；１：１，０００と１：１，０００，０００との間；１：１，０００と１：１０，０００，０００との間；１：１，０００と１：１００，０００，０００との間；１：１，０００と１：１，０００，０００，０００との間；１：１０，０００と１：１００，０００との間；１：１０，０００と１：１，０００，０００との間；１：１０，０００と１：１０，０００，０００との間；１：１０，０００と１：１００，０００，０００との間；１：１０，０００と１：１，０００，０００，０００との間；１：１００，０００と１：１，０００，０００との間；１：１００，０００と１：１０，０００，０００との間；１：１００，０００と１：１００，０００，０００との間；１：１００，０００と１：１，０００，０００，０００との間；１：１，０００，０００と１：１０，０００，０００との間；１：１，０００，０００と１：１００，０００，０００との間；１：１，０００，０００と１：１，０００，０００，０００との間；１：１０，０００，０００と１：１００，０００，０００との間；１：１０，０００，０００と１：１，０００，０００，０００との間；及び１：１００，０００，０００と１：１，０００，０００，０００との間よりなる群から選択される項目８１又は８２記載の方法。
（項目８４）
該第２の細胞集団中の標的細胞の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％が標的細胞の該第１のマーカー及び該第２のマーカーに関して陽性として検出される項目７９〜８３の何れか一項に記載の方法。
（項目８５）
工程（ａ）の該細胞集団と同じ培養条件と期間の下に標的細胞型の第３の細胞集団をプレーティングすること、及び、該第３の細胞集団中の標的細胞型の細胞を検出及び計数することにより、該培養条件下に標的細胞の該第１及び第２のマーカーの発現を維持する標的細胞型の細胞の比率を測定することを更に含む項目７９〜８４の何れか一項に記載の方法。  
（項目８６）
該第２の細胞集団における標的細胞型の細胞の予測される数を測定するため補正計数として該培養条件下に維持される標的細胞型の細胞の該集団を用いながら該第２の細胞集団を用いて測定される方法の検出限界を計算する項目８５記載の方法。
（項目８７）
該第２の細胞集団中及び／又は該第３の細胞集団中の該標的細胞が標的細胞又はそれらの子孫を識別する別のマーカーを発現する項目７９〜８６の何れか一項に記載の方法。
（項目８８）
該別のマーカーがＧＦＰ又は細胞により発現される別の蛍光蛋白を含む項目８７記載の方法。
（項目８９）
標的細胞がウィルス感染細胞、癌性又は前癌性の細胞、癌幹細胞及び免疫細胞から選択される上記項目の何れか一項に記載の方法。
（項目９０）
標的細胞を含有すると推定される組成物が骨髄、血球、又は膵細胞である項目８９記載の方法。
（項目９１）
標的細胞を含有すると推定される細胞集団が、細胞ソーティング、放射線照射、化学療法又は標的細胞を除去するための他の手段により予め処理されている項目８９記載の方法。
（項目９２）
幹細胞を本質的に含有しない該幹細胞に由来する体細胞を含む組成物。
（項目９３）
細胞及び存在する幹細胞の数又は割合を示すインジケーターを含む組成物であって、該組成物中の細胞の代表となる細胞集団に適用される上記項目の何れかに記載の方法を用いて該インジケーターの値を測定する上記組成物。
（項目９４）
少なくとも１０５個の細胞、少なくとも１０６個の細胞、少なくとも１０７個の細胞、少なくとも１０８個の細胞、少なくとも１０９個の細胞、少なくとも１０１０個の細胞、又は１０５と１０１０個の間の細胞を含む項目９３記載の組成物。
（項目９５）
低温保存された細胞を含む項目９２〜９４の何れかに記載の組成物。
（項目９６）
下記工程：
（ａ） 細胞集団を準備すること；
（ｂ） 第１の染色及び第２の染色を該細胞集団に適用すること、ここで該第１の染色は
アルカリホスファターゼを検出し、そして該第２の染色は胚性幹細胞を示すマーカーを検出し、そして該第１の染色に関して陽性である細胞は可視及び紫外光下に検出可能であり、そして該第２の染色に関して陽性である細胞は紫外光下に検出可能であること；
（ｃ） 該第１のマーカーに関して陽性である細胞を検出するために可視光下に該細胞集
団の細胞を顕微鏡観察すること；
（ｅ） 紫外光下に該第１のマーカーに関して陽性である該細胞を顕微鏡観察すること、
及び、細胞が該第１のマーカー及び該第２のマーカーに関して陽性であるかどうか測定すること；及び、
（ｆ） 該第１のマーカー及び該第２のマーカーに関して陽性である細胞を胚性幹細胞と
して識別すること；
を含む細胞集団中のヒト胚性幹細胞の存在を検出する方法。
（項目９７）
フィーダー細胞上のｈＥＳ細胞培地中に細胞集団をプレーティングすること、ｈＥＳ細胞を示すマーカーを検出する染色を適用すること、及び該マーカーに関して陽性である細胞を識別することを含む、細胞集団中のヒト胚性幹（ｈＥＳ）細胞の存在を検出する方法。
（項目９８）
該細胞集団に第３の染色を適用すること、ここで該第３の染色は自身の発現が標的細胞の存在を示す第３のマーカーを検出すること；該細胞集団の細胞を顕微鏡観察することにより該第３のマーカーに関して陽性である何れかの細胞を検出すること；及び該第１のマーカー、該第２のマーカー及び該第３のマーカーに関して陽性である何れかの細胞を標的細胞として識別することを更に含む何れかの上記項目に記載の方法。
（項目９９）
該第３の染色が該第１の染色から、及び該第２の染色から目視により区別可能である項目９８記載の方法。
（項目１００）
該第３の染色が可視光下又は紫外光下に検出可能である項目９８又は９９記載の方法。