【手続補正書】
【提出日】平成26年10月3日(2014.10.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
未再構成のヒト遺伝子セグメントJH6*02と、1または複数のVH遺伝子セグメントと、1または複数のD遺伝子セグメントとを定常領域の上流に含む免疫グロブリン重鎖遺伝子座を含むゲノムを有する非ヒト脊椎動物(場合によりマウスまたはラット)または非ヒト脊椎動物細胞であって、重鎖遺伝子座中の遺伝子セグメントが、ヒトJH6*02とDセグメントおよびVHセグメントとの組換えにより生成される抗体重鎖を脊椎動物が生成できるように定常領域に作動可能に連結しており、JH6*02遺伝子セグメントが、以下のヌクレオチド配列：ATTACTA CTACTACTAC GGTATGGACG TCTGGGGCCA AGGGACCACG GTCACCGTCT CCTCAGを含む、非ヒト脊椎動物または非ヒト脊椎動物細胞。
【請求項２】
脊椎動物が、標的抗原で免疫化されており、重鎖の可変ドメインが、VHとDとJH6*02との間の組換えの生成物であり、HCDR3の長さが、少なくとも20アミノ酸である、請求項1に記載の脊椎動物。
【請求項３】
未再構成のヒト遺伝子セグメントJH6*02と、1または複数のVH遺伝子セグメントと、1または複数のD遺伝子セグメントとを定常領域の上流に含む免疫グロブリン重鎖遺伝子座を含むゲノムを有する非ヒト脊椎動物細胞(場合によりマウス細胞またはラット細胞)であって、重鎖遺伝子座中の遺伝子セグメントが、ヒトJH6*02とDセグメントおよびVHセグメントとの組換えにより生成される抗体重鎖を(例えば後続の子孫細胞において)生成するために定常領域に作動可能に連結しており、JH6*02遺伝子セグメントが、以下のヌクレオチド配列：ATTACTA CTACTACTAC GGTATGGACG TCTGGGGCCA AGGGACCACG GTCACCGTCT CCTCAGを含み、
場合によっては、前記重鎖を発現する子孫の抗体生成細胞に分化できるES細胞である、非ヒト脊椎動物細胞。
【請求項４】
重鎖遺伝子座が、JH6*02遺伝子セグメントの5'に作動可能に接続したヒトJH6*02組換えシグナル配列(RSS)を含み、場合によっては、RSSが、配列番号238であり、または配列番号238の22塩基長の配列と少なくとも70%同一である配列に隣接する同一の9塩基長および7塩基長の配列を有する配列であり、更に場合によっては、RSSおよびJH6*02が、配列番号237のとおりに提供される、請求項1から3のいずれか一項に記載の脊椎動物または細胞。
【請求項５】
遺伝子座が、ヒトD遺伝子セグメントD3-9;D4-17;D3-10;D2-2;D5-24;D6-19;D3-22;D6-13;D5-12;D1-26;D1-20;D5-18;D3-16;D2-21;D1-14;D7-27;D1-1;D6-25;D2-14;およびD4-23の1、複数または全てを含み、場合によっては、遺伝子座が、ヒトD遺伝子セグメントD3-9、D3-10、D6-19、D4-17、D6-13、D3-22、D2-2、D2-25およびD3-3の1、複数または全てを含む、請求項1から4のいずれか一項に記載の脊椎動物または細胞。
【請求項６】
i)JH6*02が、ゲノム中の唯一のJH6タイプ遺伝子セグメントである、ii)JH6*02が、遺伝子座中で定常領域に最も近いJH遺伝子セグメントである、および/またはiii)遺伝子座が、複数のヒトD遺伝子セグメントを含み、JH6*02が、最も3'側のヒトD遺伝子セグメントに関してヒト生殖系列配置にある、請求項1から5のいずれか一項に記載の脊椎動物または細胞。
【請求項７】
遺伝子座が、V3-21、V3-13、V3-7、V6-1、V1-8、V1-2、V7-4-1、V1-3、V1-18、V4-4、V3-9、V3-23、V3-11、V3-20、D3-9*01、D3-10*01、D6-19*01、D6-13*01、D1-26*01、IGHV1-8*01、IGHV4-61*01、IGHV6-1*01、IGHV4-4*02、IGHV1-3*01、IGHV3-66*03、IGHV3-7*01およびIGHV3-9*01の1から選択されるヒト遺伝子セグメントの1、複数または全てを含む、請求項1から6のいずれか一項に記載の脊椎動物または細胞。
【請求項８】
抗体重鎖が、JH6*02と、請求項7に定義のヒトVH遺伝子セグメントおよび/または請求項5もしくは7に定義のD遺伝子セグメントとの組換えの生成物である、請求項1から7のいずれか一項に記載の脊椎動物または細胞。
【請求項９】
全ての内因性非ヒト脊椎動物重鎖可変領域遺伝子セグメントが、ゲノムにおいて不活性化されている、および/または、ゲノムが、前記重鎖遺伝子座についてホモ接合性である、請求項1から8のいずれか一項に記載の脊椎動物または細胞。
【請求項１０】
標的抗原に特異的な重鎖、VHドメインまたは抗体を生成するための方法であって、請求項1、2および4から9のいずれか一項に記載の非ヒト脊椎動物を抗原で免疫化する工程と、標的抗原に特異的な重鎖、VHドメインもしくは抗体または重鎖、VHドメインもしくは抗体を生成する細胞を単離する工程とを含み、重鎖、VHドメインまたは抗体が、ヒトJH6*02とVH遺伝子セグメントおよびD遺伝子セグメントとの組換えに由来するHCDR3を含み、
場合によっては、遺伝子座の定常領域が、非ヒト脊椎動物(例えばマウスまたはラット)定常領域であり、単離重鎖または抗体の非ヒト定常領域をヒト定常領域で置き換える、方法。
【請求項１１】
第1および第2のヒトJH6遺伝子セグメントを含むゲノムを有する非ヒト脊椎動物(例えばマウスまたはラット)または非ヒト脊椎動物細胞(例えばES細胞またはB細胞)であって、第1の遺伝子セグメントが、以下のヌクレオチド配列：ATTACTA CTACTACTAC GGTATGGACG TCTGGGGCCA AGGGACCACG GTCACCGTCT CCTCAGを含むJH6*02遺伝子セグメントであり、第2の遺伝子セグメントが、対応する参照配列(例えばIGHJ6 ref;配列番号244)である、非ヒト脊椎動物または非ヒト脊椎動物細胞。
【請求項１２】
(i)ゲノムが、前記タイプの第3のヒト遺伝子セグメントを含み、第3の遺伝子セグメントが、第1および第2の遺伝子セグメントとは異なる、および/または、(ii)第1および第2の遺伝子セグメントが、同じ染色体上でシスの位置関係にあり、場合により、第3の遺伝子セグメントも、前記染色体上でシスの位置関係にあり、更に場合によっては、遺伝子セグメントが、内因性非ヒトIg遺伝子座への標的化挿入である、請求項11に記載の脊椎動物または細胞。
【請求項１３】
第1および第2の遺伝子セグメントが、異なる染色体上でトランスの位置関係にある、請求項11または12に記載の脊椎動物または細胞。
【請求項１４】
第1および第2のヒトJH6遺伝子セグメントを含む非ヒト脊椎動物の集団(例えばマウスまたはラット)であって、第1の遺伝子セグメントが、以下のヌクレオチド配列：ATTACTA CTACTACTAC GGTATGGACG TCTGGGGCCA AGGGACCACG GTCACCGTCT CCTCAGを含むJH6*02遺伝子セグメントであり、第2の遺伝子セグメントが、対応する参照配列(例えば配列番号244)であり、第1の遺伝子セグメントが、集団の第1の脊椎動物のゲノムにおいて提供され、第2の遺伝子セグメントが、集団の第2の脊椎動物のゲノムにおいて提供され、
場合によっては、第1の脊椎動物のゲノムが、第2の遺伝子セグメントを含まず、および/または、集団が、同じタイプの第3のヒト遺伝子セグメントを含み、第3の遺伝子セグメントが、第1および第2の遺伝子セグメントとは異なり、場合によっては、第1および第3の遺伝子セグメントが、第1の脊椎動物のゲノムに存在する、集団。
【請求項１５】
遺伝子セグメントが、それぞれのゲノム中の内因性非ヒトIg遺伝子座への標的化挿入である、請求項14に記載の集団。
【請求項１６】
非ヒト脊椎動物(例えばマウスまたはラット)のヒト免疫グロブリン遺伝子多様性を増進する方法であって、第1および第2のヒトJH6遺伝子セグメントを含むゲノムを有する脊椎動物を提供する工程を含み、第1の遺伝子セグメントが、以下のヌクレオチド配列：ATTACTA CTACTACTAC GGTATGGACG TCTGGGGCCA AGGGACCACG GTCACCGTCT CCTCAGを含むJH6*02遺伝子セグメントであり、第2の遺伝子セグメントが、対応する参照配列(例えば配列番号244)である方法。
【請求項１７】
請求項14または15に記載の集団を提供する工程を含む、増進されたヒト免疫グロブリン遺伝子セグメントレパートリーを提供する方法。
【請求項１８】
(i)定常領域が、非ヒト脊椎動物の定常領域である、(ii)抗体の重鎖が標的抗原に特異的に結合する、および/または、(iii)抗体の重鎖のHCDR3の長さが、少なくとも20アミノ酸である、請求項1から10のいずれか一項に記載の脊椎動物、細胞または方法。
【請求項１９】
ヒト遺伝子セグメントJH6*02と、1または複数のVH遺伝子セグメントと、1または複数のD遺伝子セグメントとを定常領域の上流に含む免疫グロブリン重鎖遺伝子座を含むゲノムを有する非ヒト脊椎動物において、20アミノ酸を超えるHCDR3を産生するための、ヒトJH6*02の使用であって、重鎖遺伝子座中の遺伝子セグメントが、ヒトJH6*02とDセグメントおよびVHセグメントとの組換えにより生成される抗体重鎖を脊椎動物が生成できるように定常領域に作動可能に連結しており、JH6*02遺伝子セグメントが、以下のヌクレオチド配列：ATTACTA CTACTACTAC GGTATGGACG TCTGGGGCCA AGGGACCACG GTCACCGTCT CCTCAGを含む、使用。