【手続補正書】
【提出日】平成24年6月25日(2012.6.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞の富化された集団を生成する方法であって、以下の工程：
マイクロ流体デバイスの中に含まれる小滴の第１の集団を提供する工程であって、該小滴の少なくとも一部は１つまたは複数の細胞を被包し、該小滴の少なくとも一部は第１の細胞型を含み、そして該小滴の少なくとも一部は第２の細胞型を含む、工程；
該小滴の少なくとも一部について、該各小滴の中の１つまたは複数の細胞が糖と反応する能力を決定する工程であって、ここで、該第１の細胞型は、該第２の細胞型よりも大きな程度まで該糖を代謝することができる、工程；ならびに、
該決定に基づいて、該第２の細胞型と比較して該第１の細胞型の細胞小滴の富化された集団を生成する工程
を含む、方法。
【請求項２】
前記第２の細胞型と比較した前記第１の細胞型の富化の量が、少なくとも約１０倍、少なくとも約１００倍、および少なくとも約１０００倍からなる群から選択される倍数である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記小滴中の１つまたは複数の細胞が糖と反応する能力を決定する工程は、該１つまたは複数の細胞が該糖と反応する能力を蛍光を使用して決定する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
細胞の富化された集団を生成する方法であって、以下の工程：
マイクロ流体デバイスの中に含まれる小滴の集団を提供する工程であって、該小滴の少なくとも一部は１つまたは複数の細胞を被包し、該小滴の集団の小滴の少なくとも一部は第１の細胞型を含み、そして該小滴の少なくとも一部は第２の細胞型を含む、工程；
該小滴の少なくとも一部について、該小滴の中の１つまたは複数の細胞が作用剤と反応する能力を決定する工程であって、ここで、該第１の細胞型は、該第２の細胞型が反応するよりも大きな程度まで該作用剤と反応する工程；ならびに、
該決定に基づいて、該第２の細胞型と比較して該第１の細胞型の細胞小滴の富化された集団を生成する工程
を含む、方法。
【請求項５】
前記第２の細胞型と比較して前記第１の細胞型の細胞小滴の富化された集団を生成する工程は、該第１の細胞型の少なくとも一部を前記マイクロ流体デバイスの中の第１の位置に向けさせる工程、および該第２の細胞型の少なくとも一部をマイクロ流体デバイスの中の第２の位置に向けさせる工程を含む、請求項１または４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記第１の細胞型のＤＮＡを配列決定する工程をさらに含む、請求項１または４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記小滴の集団が、前記第２の細胞型に対する前記第１の細胞型の第１の比を有し、そして前記富化された小滴の集団が、該第２の細胞型に対する該第１の細胞型の第２の比を有し、ここで、該第１の比は該第２の比よりも少なくとも１０倍大きい、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記小滴の中の１つまたは複数の細胞が作用剤と反応する能力を決定する工程の前に、少なくとも約１時間および／または約１日、該小滴の中の細胞を培養する工程をさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
以下の工程：
マイクロ流体デバイスの中に含まれる小滴の集団を提供する工程であって、該小滴の少なくとも一部は１つまたは複数の細胞を被包し、そして該小滴の少なくとも一部は糖を含む、工程；
該小滴の少なくとも一部を該糖と反応することができる酵素に曝す工程；ならびに、
該酵素の該糖との反応の程度を決定する工程
を含む、方法。
【請求項１０】
以下の工程：
マイクロ流体デバイスの中に含まれる小滴の集団を、糖に対して、少なくとも該糖を該小滴の少なくとも一部に侵入させるために十分な時間、曝す工程であって、該小滴の少なくとも一部は１つまたは複数の細胞を被包する、工程；
該小滴の少なくとも一部を該糖と反応することができる酵素に曝す工程；ならびに、
該酵素の該糖との反応の程度を決定する工程
を含む方法。
【請求項１１】
前記酵素がオキシダーゼである、請求項９または１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記糖がキシロースおよび／またはグルコースである、請求項１、９または１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記反応の程度を決定する工程は、以下の工程：
前記小滴をマイクロ流体チャンネルを通り抜けるように促す工程、および
該マイクロ流体チャンネルの中での該小滴の位置を決定して、反応の程度を決定する工程
を含む、請求項９または１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記酵素の前記糖との反応の程度を決定する工程は、該酵素を該糖に曝して過酸化水素を生成する工程を含む、請求項９または１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記小滴の少なくとも一部を前記酵素に曝す前に、前記糖の少なくとも一部を代謝するための時間を前記細胞に与える工程をさらに含む、請求項９または１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記小滴の少なくとも一部を前記糖と反応することができる酵素に曝す工程は、以下の工程：
複数の第２の小滴を提供する工程であって、該第２の小滴の少なくとも一部は該酵素を含む工程；および
該小滴の少なくとも一部と該第２の小滴の一部とを融合させ、それにより１つまたは複数の細胞を該酵素に曝す工程
を含む、請求項９または１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
富化された種の集団を生成する方法であって、以下の工程：
マイクロ流体デバイスの中に含まれる小滴の集団を提供する工程であって、該小滴の集団の少なくとも一部は第１の種を被包し、そして該小滴の集団の小滴の少なくとも一部は第２の種を含む、工程；
該小滴の少なくとも一部について、該小滴の中の１つまたは複数の種が作用剤と反応する能力を決定する工程であって、ここで、該第１の種は、該第２の種よりも大きい程度まで該作用剤と反応する工程；ならびに、
該決定に基づいて、該第２の種を含む小滴と比較して、該第１の種を含む小滴の富化された集団を生成する工程
を含む、方法。
【請求項１８】
前記小滴の中の１つまたは複数の種が作用剤と反応する能力を決定する工程は、前記作用剤を第２の作用剤に曝す工程、および該第２の作用剤を決定する工程を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記第２の作用剤が小滴を懸濁している担体流体の中に含まれる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記第２の作用剤が第２の小滴の中に含まれる、請求項１８に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
本発明は、一般的には、細胞もしくは他の種を培養および／またはアッセイするための小滴の使用に関する。いくつかの場合には、細胞または他の種は、培養および／またはアッセイの結果に基づいて選別され得る。本発明の主題には、いくつかの場合には、相互関係のある生成物、特定の問題のための代替えの溶液、ならびに／あるいは１つもしくは複数のシステムおよび／または物品の多数の様々な用途が含まれる。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
細胞の富化された集団を生成する方法であって、以下の工程：
マイクロ流体デバイスの中に含まれる小滴の第１の集団を提供する工程であって、該小滴の少なくとも一部は１つまたは複数の細胞を被包し、該小滴の少なくとも一部は第１の細胞型を含み、そして該小滴の少なくとも一部は第２の細胞型を含む、工程；
該小滴の少なくとも一部について、該各小滴の中の１つまたは複数の細胞が糖と反応する能力を決定する工程であって、ここで、該第１の細胞型は、該第２の細胞型よりも大きな程度まで糖を代謝することができる、工程；ならびに、
該決定に基づいて、該第２の細胞型と比較して該第１の細胞型の細胞小滴の富化された集団を生成する工程
を含む、方法。
（項目２）
前記糖がキシロースである、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記糖がグルコースである、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記第２の細胞型と比較した前記第１の細胞型の富化の量が少なくとも約１０倍である、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記第２の細胞型と比較した前記第１の細胞型の富化の量が少なくとも約１００倍である、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記第２の細胞型と比較した前記第１の細胞型の富化の量が少なくとも約１０００倍である、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記第２の細胞型と比較して前記第１の細胞型の細胞小滴の富化された集団を生成する工程は、前記第１の細胞型の少なくとも一部を、マイクロ流体デバイスの中の第１の位置に向けさせる工程、および前記第２の細胞型の少なくとも一部を、マイクロ流体デバイスの中の第２の位置に向けさせる工程を含む、項目１に記載の方法。
（項目８）
細胞に電場を加えることにより、前記細胞が前記第１の位置および／または前記第２の位置に向けられる、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記第１の細胞型のＤＮＡを配列決定する工程をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記第１の細胞型と前記第２の細胞型が同じ種に由来する、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記第１の細胞型と前記第２の細胞型が異なる種に由来する、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記小滴中の１つまたは複数の細胞が糖と反応する能力を決定する工程は、該１つまたは複数の細胞が糖と反応する能力を蛍光を使用して決定する工程を含む、項目１に記載の方法。
（項目１３）
前記細胞小滴の富化された集団の少なくとも一部を培養する工程をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１４）
細胞の富化された集団を生成する方法であって、以下の工程：
マイクロ流体デバイスの中に含まれる小滴の集団を提供する工程であって、該小滴の少なくとも一部は１つまたは複数の細胞を被包し、該小滴の集団の小滴の少なくとも一部は第１の細胞型を含み、そして該小滴の少なくとも一部は第２の細胞型を含む、工程；
該小滴の少なくとも一部について、該小滴の中の１つまたは複数の細胞が作用剤と反応する能力を決定する工程であって、ここで、該第１の細胞型は、該第２の細胞型が反応するよりも大きな程度まで該作用剤と反応する工程；ならびに、
該決定に基づいて、該第２の細胞型と比較して該第１の細胞型の細胞小滴の富化された集団を生成する工程
を含む、方法。
（項目１５）
前記第２の細胞型と比較して前記第１の細胞型についての細胞小滴の富化された集団を生成する工程は、該第１の細胞型の少なくとも一部をマイクロ流体デバイスの中の第１の位置に向けさせる工程、および該第２の細胞型の少なくとも一部をマイクロ流体デバイスの中の第２の位置に向けさせる工程を含む、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
細胞に電場を加えることにより、前記細胞が前記第１の位置および／または前記第２の位置に向けられる、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記作用剤が、少なくとも第１の細胞型によって代謝される糖である、項目１４に記載の方法。
（項目１８）
前記作用剤がキシロースである、項目１４に記載の方法。
（項目１９）
前記作用剤がグルコースである、項目１４に記載の方法。
（項目２０）
前記第１の細胞型のＤＮＡを配列決定する工程をさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目２１）
前記小滴の集団が、前記第２の細胞型に対する前記第１の細胞型の第１の比を有し、そして前記富化された小滴の集団が、該第２の細胞型に対する該第１の細胞型の第２の比を有し、ここで、該第１の比は該第２の比よりも少なくとも１０倍大きい、項目１４に記載の方法。
（項目２２）
前記小滴の中の１つまたは複数の細胞が作用剤と反応する能力を決定する工程の前に、少なくとも約１時間、該小滴の中の細胞を培養する工程をさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目２３）
前記小滴の中の１つまたは複数の細胞の作用剤と反応する能力を決定する工程の前に、少なくとも約１日、前記小滴の中の細胞を培養する工程をさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目２４）
前記第１の細胞型と前記第２の細胞型が同じ種に由来する、項目１４に記載の方法。
（項目２５）
前記第１の細胞型と前記第２の細胞型が異なる種に由来する。項目１４に記載の方法。
（項目２６）
前記小滴が担体流体中に含まれる、項目１４に記載の方法。
（項目２７）
前記小滴が約２００マイクロメートル未満の平均直径を有する、項目１４に記載の方法。
（項目２８）
前記小滴が約１００マイクロメートル未満の平均直径を有する、項目１４に記載の方法。
（項目２９）
前記小滴が約１マイクロメートル未満の平均直径を有する、項目１４に記載の方法。
（項目３０）
前記小滴が約１００ｎｍ未満の平均直径を有する、項目１４に記載の方法。
（項目３１）
前記小滴の中の１つまたは複数の細胞が作用剤と反応する能力を決定する工程は、１つまたは複数の細胞の作用剤と反応する能力を、蛍光を使用して決定する工程を含む、項目１４に記載の方法。
（項目３２）
前記小滴の中の１つまたは複数の細胞が作用剤と反応する能力を決定する工程は、前記作用剤を第２の作用剤に曝すこと、および前記第２の作用剤を決定する工程を含む、項目１４に記載の方法。
（項目３３）
前記第２の作用剤が前記小滴を懸濁している担体流体の中に含まれる、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記第２の作用剤が第２の小滴の中に含まれる、項目３２に記載の方法。
（項目３５）
前記小滴の中の１つまたは複数の細胞が作用剤と反応する能力を決定する工程は、該小滴と第２の小滴とを融合させる工程を含む、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
細胞小滴の富化された集団の少なくとも一部を培養する工程をさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目３７）
以下の工程：
マイクロ流体デバイスの中に含まれる小滴の集団を提供する工程であって、該小滴の少なくとも一部は１つまたは複数の細胞を被包し、そして該小滴の少なくとも一部は糖を含む、工程；
該小滴の少なくとも一部を糖と反応することができる酵素に曝す工程；ならびに、
該酵素の該糖との反応の程度を決定する工程
を含む、方法。
（項目３８）
前記酵素がオキシダーゼである、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記酵素がピラノースオキシダーゼである、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記糖がキシロースである、項目３７に記載の方法。
（項目４１）
前記糖がグルコースである、項目３７に記載の方法。
（項目４２）
前記反応の程度を決定する工程は、以下の工程：
前記小滴をマイクロ流体チャンネルを通り抜けるように促す工程、および
該マイクロ流体チャンネルの中での該小滴の位置を決定して、反応の程度を決定する工程
を含む、項目３７に記載の方法。
（項目４３）
前記酵素の前記糖との反応の程度を決定する工程は、該酵素を該糖に曝して過酸化水素を生成する工程を含む、項目３７に記載の方法。
（項目４４）
前記過酸化水素を非蛍光化合物に曝して蛍光化合物を生成する工程をさらに含む、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記非蛍光化合物がＡｍｐｌｅｘ  ＵｌｔｒａＲｅｄである、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記小滴の少なくとも一部を前記酵素に曝す前に、前記糖の少なくとも一部を代謝するための時間を前記細胞に与える工程をさらに含む、項目３７に記載の方法。
（項目４７）
前記小滴の少なくとも一部を糖と反応することができる酵素に曝す工程は、以下の工程：
複数の第２の小滴を提供する工程であって、該第２の小滴の少なくとも一部は該酵素を含む工程；および
該小滴の少なくとも一部と該第２の小滴の一部とを融合させ、それにより１つまたは複数の細胞を該酵素に曝す工程
を含む、項目３７に記載の方法：
（項目４８）
以下の工程：
マイクロ流体デバイスの中に含まれる小滴の集団を、糖に対して、少なくとも該糖を該小滴の少なくとも一部に侵入させるために十分な時間、曝す工程であって、該小滴の少なくとも一部は１つまたは複数の細胞を被包する、工程；
該小滴の少なくとも一部を糖と反応することができる酵素に曝す工程；ならびに、
該酵素の該糖との反応の程度を決定する工程
を含む方法。
（項目４９）
前記酵素がオキシダーゼである、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記酵素がピラノースオキシダーゼである、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記糖がキシロースである、項目４８に記載の方法。
（項目５２）
前記糖がグルコースである、項目４８に記載の方法。
（項目５３）
前記反応の程度を決定する工程は、以下の工程：
前記小滴をマイクロ流体チャンネルを通り抜けるように促す工程、および
該マイクロ流体チャンネルの中での該小滴の位置を決定して、反応の程度を決定する工程
を含む、項目４８に記載の方法。
（項目５４）
前記酵素の前記糖との反応の程度を決定する工程は、該酵素を該糖に曝して過酸化水素を生成する工程を含む、項目４８に記載の方法。
（項目５５）
前記過酸化水素を非蛍光化合物に曝して蛍光化合物を生成する工程をさらに含む、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
前記非蛍光化合物がＡｍｐｌｅｘ  ＵｌｔｒａＲｅｄである、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記小滴の少なくとも一部を前記酵素に曝す前に、前記糖の少なくとも一部を代謝するための時間を前記細胞に与える工程をさらに含む、項目４８に記載の方法。
（項目５８）
前記小滴の少なくとも一部を前記糖と反応することができる酵素に曝す工程は、以下の工程：
複数の第２の小滴を提供する工程であって、該第２の小滴の少なくとも一部は該酵素を含む工程；および
該小滴の少なくとも一部と該第２の小滴の一部とを融合させ、それにより１つまたは複数の細胞を該酵素に曝す工程
を含む、項目４８に記載の方法。
（項目５９）
富化された種の集団を生成する方法であって、以下の工程：
マイクロ流体デバイスの中に含まれる小滴の集団を提供する工程であって、該小滴の少なくとも一部は第１の種を被包し、そして該小滴の集団の小滴の少なくとも一部は第２の種を含む、工程；
該小滴の少なくとも一部について、該小滴の中の１つまたは複数の種が作用剤と反応する能力を決定する工程であって、ここで、該第１の種は、該第２の種よりも大きい程度まで該作用剤と反応する工程；ならびに、
該決定に基づいて、該第２の種を含む小滴と比較して、該第１の種を含む小滴の富化された集団を生成する工程
を含む、方法。
（項目６０）
前記第２の種と比較した前記第１の種の富化された種の小滴の集団を生成する工程は、前記第１の種の少なくとも一部をマイクロ流体デバイスの中の第１の位置に向けさせる工程、および前記第２の種の少なくとも一部をマイクロ流体デバイスの中の第２の位置に向けさせる工程を含む、項目５９に記載の方法。
（項目６１）
前記小滴の集団が、前記第２の種に対する前記第１の種の第１の比を有し、そして前記富化された小滴の集団が、該第２の種に対する該第１の種の第２の比を有し、ここで、該第２の比は該第１の比よりも少なくとも１０倍大きい、項目５９に記載の方法。
（項目６２）
前記小滴の中の１つまたは複数の種が作用剤と反応する能力を決定する工程は、前記作用剤を第２の作用剤に曝す工程、および該第２の作用剤を決定する工程を含む、項目５９に記載の方法。
（項目６３）
前記第２の作用剤が小滴を懸濁している担体流体の中に含まれる、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記第２の作用剤が第２の小滴の中に含まれる、項目６２に記載の方法。
（項目６５）
前記小滴の中の１つまたは複数の種が作用剤と反応する能力を決定する工程は、該小滴と前記第２の小滴とを融合させる工程を含む、項目６４に記載の方法。