【手続補正書】
【提出日】平成26年2月25日(2014.2.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸配列であって、
ａ）コード領域であって、好ましくはペプチドまたはタンパク質をコードし、但し、前記コード領域が、ヒストンタンパク質、ＥＧＦＰおよびルシフェラーゼから選択されるレポータータンパク質、ならびにαグロビン、ガラクトキナーゼ、およびキサンチン：グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＧＰＴ）から選択されるマーカータンパク質または選択タンパク質をコードしないものとする、コード領域、
ｂ）少なくとも１つのヒストンステムループ、および
ｃ）ポリ（Ａ）配列またはポリアデニル化シグナル
を含むかまたはコードする、核酸配列。
【請求項２】
前記核酸配列が、リボザイム（好ましくは、自己スプライシングリボザイム）、ウイルス核酸配列、ヒストンステムループプロセシングシグナル（特に、マウスヒストンＨ２Ａ６１４遺伝子由来のヒストンステムループプロセシング配列）、Ｎｅｏ遺伝子、不活化プロモーター配列、および不活化エンハンサー配列をコードする配列からなる群の成分の１つ、または２つ、または少なくとも１つ、または１つを除く全て、または全てを含まない、請求項１に記載の核酸配列。
【請求項３】
前記核酸配列が、リボザイム（好ましくは、自己スプライシングリボザイム）と、Ｎｅｏ遺伝子、不活化プロモーター配列、不活化エンハンサー配列、ヒストンステムループプロセシングシグナル（特に、マウスヒストンＨ２Ａ６１４遺伝子由来のヒストンステムループプロセシング配列）からなる群のうちの１つとを含まない、請求項１または２に記載の核酸配列。
【請求項４】
前記核酸配列がＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡである、請求項１〜３のいずれかに記載の核酸配列。
【請求項５】
前記少なくとも１つのヒストンステムループが、以下の式（Ｉ）または（ＩＩ）：
式（Ｉ）（ステム境界エレメントを持たないステムループ配列）：
【化２２】
2013535969.tif 000001
式（ＩＩ）（ステム境界エレメントを有するステムループ配列）：
【化２３】
2013535969.tif 000002
から選択され、ここで、
ステム１またはステム２境界エレメントＮ１〜６は、１〜６個、好ましくは２〜６個、より好ましくは２〜５個、さらにより好ましくは３〜５個、最も好ましくは４〜５個または５個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチドアナログから選択され、
ステム１［Ｎ０〜２ＧＮ３〜５］は、エレメントステム２と逆に相補的であるか、または部分的に逆に相補的であり、且つ５〜７ヌクレオチドの連続配列であり、
Ｎ０〜２は、０〜２個、好ましくは０〜１個、より好ましくは１個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｎ３〜５は、３〜５個、好ましくは４〜５個、より好ましくは４個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｇはグアノシンまたはそのアナログであり、シチジンまたはそのアナログによって必要に応じて置換することができ、但し、ステム２中のその相補的ヌクレオチドシチジンがグアノシンによって置換されるものとし、
ループ配列［Ｎ０〜４（Ｕ／Ｔ）Ｎ０〜４］は、エレメントステム１とステム２との間に存在し、３〜５個のヌクレオチド、より好ましくは４個のヌクレオチドの連続配列であり、
各Ｎ０〜４は、別のＮ０〜４とは独立した、０〜４個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１〜２個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｕ／Ｔはウリジン、または必要に応じてチミジンを示し、
ステム２［Ｎ３〜５ＣＮ０〜２］は、エレメントステム１と逆に相補的であるか、または部分的に逆に相補的であり、且つ５〜７ヌクレオチドの連続配列であり、
Ｎ３〜５は、３〜５個、好ましくは４〜５個、より好ましくは４個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｎ０〜２は、０〜２個、好ましくは０〜１個、より好ましくは１個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｃはシチジンまたはそのアナログであり、グアノシンまたはそのアナログに必要に応じて置換することができ、但し、ステム１中のその相補的ヌクレオチドグアノシンがシチジンに置換されるものとし、
ここで、
ステム１およびステム２が互いに塩基対合して、塩基対合がステム１とステム２との間で起こり得る逆相補配列を形成することができるか、または不完全な塩基対合がステム１およびステム２との間で起こり得る部分的に逆相補の配列を形成することができる、請求項１〜４のいずれかに記載の核酸配列。
【請求項６】
前記少なくとも１つのヒストンステムループが、以下の式（Ｉａ）または（ＩＩａ）：
【化２４】
2013535969.tif 000003
式（Ｉａ）（ステム境界エレメントを持たないステムループ配列）
【化２５】
2013535969.tif 000004
式（ＩＩａ）（ステム境界エレメントを有するステムループ配列）
のうちの少なくとも１つから選択される、請求項５に記載の核酸配列。
【請求項７】
前記ポリ（Ａ）配列が、約２５〜約４００個のアデノシンヌクレオチドの配列、好ましくは約５０〜約４００個のアデノシンヌクレオチドの配列、より好ましくは約５０〜約３００個のアデノシンヌクレオチドの配列、さらにより好ましくは約５０〜約２５０個のアデノシンヌクレオチドの配列、最も好ましくは約６０〜約２５０個のアデノシンヌクレオチドの配列を含む、請求項１〜６のいずれかに記載の核酸配列。
【請求項８】
前記ポリアデニル化シグナルが、コンセンサス配列ＮＮＵＡＮＡ、好ましくはＡＡＵＡＡＡまたはＡＵＵＡＡＡを含む、請求項１〜６のいずれかに記載の核酸配列。
【請求項９】
前記核酸配列が、治療的に活性なタンパク質またはペプチド、アジュバントタンパク質、抗原、腫瘍抗原、病原性抗原、動物抗原、ウイルス抗原、原生動物抗原、細菌抗原、アレルギー性抗原、自己免疫抗原、アレルゲン、抗体、免疫賦活性タンパク質もしくはペプチド、または抗原特異的Ｔ細胞受容体をコードする、請求項１〜８のいずれかに記載の核酸配列。
【請求項１０】
前記核酸配列が、モノシストロン性核酸配列、バイシストロン性核酸配列、またはさらにマルチシストロン性核酸配列である、請求項１〜９のいずれかに記載の核酸配列。
【請求項１１】
コードされたペプチドまたはタンパク質の発現レベルを増加させるための、請求項１〜１０のいずれかに記載の核酸配列を含む組成物。
【請求項１２】
医薬としての使用のための、請求項１〜１０のいずれかに記載の核酸配列を含む組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１０のいずれかに記載の核酸配列および必要に応じて、薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物。
【請求項１４】
抗原をコードするかまたは抗原を含む請求項１〜１０のいずれかに記載の核酸配列を含むワクチン。
【請求項１５】
前記抗原が、腫瘍抗原、アレルギー性抗原、自己免疫自己抗原、病原性抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、原生動物抗原、動物抗原、またはアレルギー性抗原から選択される、請求項１４に記載のワクチン。
【請求項１６】
癌または腫瘍疾患、感染症、好ましくは（ウイルス、細菌、または原生動物）感染症、自己免疫疾患、アレルギーまたはアレルギー疾患、一遺伝子性疾患（すなわち、（遺伝性）疾患）、または遺伝病全般（遺伝的背景を有し、典型的には、規定された遺伝子欠損によって引き起こされ、メンデルの法則に従って遺伝する疾患）、心血管疾患、ニューロン疾患、呼吸器系疾患、消化器系疾患、皮膚疾患、筋骨格系障害、結合組織障害、新生物、免疫欠損、内分泌性、栄養性および代謝性の疾患、眼の疾患、または耳の疾患の処置におけるタンパク質発現の増加のための、請求項１〜１０のいずれかに記載の核酸配列を含む組成物。
【請求項１７】
タンパク質発現を増加させるためのインビトロまたはエキソビボでの方法であって、
ａ）請求項１〜１０のいずれかに記載の核酸配列を提供する工程、
ｂ）該核酸配列を無細胞発現系、細胞（例えば、発現宿主細胞または体細胞）、組織、または生物に適用または投与する工程
を含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
の少なくとも１つのヒストンステムループ配列を含むかまたはコードし、ここで、
ステム１またはステム２境界エレメントＮ１〜６は、１〜６個、好ましくは２〜６個、より好ましくは２〜５個、さらにより好ましくは３〜５個、最も好ましくは４〜５個または５個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
ステム１［Ｎ０〜２ＧＮ３〜５］は、エレメントステム２と逆に相補的であるか、部分的に逆に相補的であり、且つ５〜７ヌクレオチドの連続配列であり、
Ｎ０〜２は、０〜２個、好ましくは０〜１個、より好ましくは１個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｎ３〜５は、３〜５個、好ましくは４〜５個、より好ましくは４個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｇはグアノシンまたはそのアナログであり、シチジンまたはそのアナログに必要に応じて置換することができ、但し、ステム２中のその相補的ヌクレオチドシチジンがグアノシンに置換されるものとし、
ループ配列［Ｎ０〜４（Ｕ／Ｔ）Ｎ０〜４］は、エレメントステム１とステム２との間に存在し、３〜５個のヌクレオチド、より好ましくは４個のヌクレオチドの連続配列であり、
各Ｎ０〜４は、別のＮ０〜４とは独立した、０〜４個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１〜２個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、Ｕ／Ｔはウリジン、または必要に応じてチミジンを示し、
ステム２［Ｎ３〜５ＣＮ０〜２］は、エレメントステム１と逆に相補的であるか、部分的に逆に相補的であり、且つ５〜７ヌクレオチドの連続配列であり、
Ｎ３〜５は、３〜５個、好ましくは４〜５個、より好ましくは４個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｎ０〜２は、０〜２個、好ましくは０〜１個、より好ましくは１個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、またはＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｃはシチジンまたはそのアナログであり、グアノシンまたはそのアナログに必要に応じて置換することができ、但し、ステム１中のその相補的ヌクレオチドグアノシンがシチジンに置換されるものとし、
ここで、
ステム１およびステム２が互いに塩基対合して逆相補配列を形成することができ、塩基対合が（例えば、ヌクレオチドＡおよびＵ／ＴまたはＧおよびＣのワトソン−クリック塩基対合によって、または非ワトソン−クリック塩基対合（例えば、ゆらぎ塩基対合、逆ワトソン−クリック塩基対合、フーグスティーン塩基対合、逆フーグスティーン塩基対合）によって）ステム１とステム２との間で起こり得るか、互いに塩基対合して部分的に逆相補の配列を形成することができ、不完全な塩基対合は、一方のステム中の１つ以上（ｏｎｅ  ｏｒｅ  ｍｏｒｅ）の塩基が他方のステムの逆相補配列中の相補塩基を持たないことに基づいて、ステム１とステム２との間で起こり得る。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７３】
本発明では、他で記載のない限り、代替物および実施形態の異なる特徴を相互に組み合わせることができる。さらに、用語「〜を含む」は、具体的に示さない限り、「〜からなる」を意味すると解釈しないものとする。しかし、本発明の文脈では、必要に応じ、用語「〜含む」を、用語「〜からなる」に置換することができる。
特定の実施形態では、以下が提供される：
（項目１）
核酸配列であって、
ａ）コード領域であって、好ましくはペプチドまたはタンパク質をコードし、但し、前記コード領域が、ヒストンタンパク質、ＥＧＦＰおよびルシフェラーゼから選択されるレポータータンパク質、ならびにαグロビン、ガラクトキナーゼ、およびキサンチン：グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＧＰＴ）から選択されるマーカータンパク質または選択タンパク質をコードしないものとする、コード領域、
ｂ）少なくとも１つのヒストンステムループ、および
ｃ）ポリ（Ａ）配列またはポリアデニル化シグナル
を含むかまたはコードする、核酸配列。
（項目２）
前記核酸が、リボザイム（好ましくは、自己スプライシングリボザイム）、ウイルス核酸配列、ヒストンステムループプロセシングシグナル（特に、マウスヒストンＨ２Ａ６１４遺伝子由来のヒストンステムループプロセシング配列）、Ｎｅｏ遺伝子、不活化プロモーター配列、および不活化エンハンサー配列をコードする配列からなる群の成分の１つ、または２つ、または少なくとも１つ、または１つを除く全て、または全てを含まない、項目１に記載の核酸。
（項目３）
前記核酸が、リボザイム（好ましくは、自己スプライシングリボザイム）と、Ｎｅｏ遺伝子、不活化プロモーター配列、不活化エンハンサー配列、ヒストンステムループプロセシングシグナル（特に、マウスヒストンＨ２Ａ６１４遺伝子由来のヒストンステムループプロセシング配列）からなる群のうちの１つとを含まない、項目１または２に記載の核酸。
（項目４）
前記核酸がＲＮＡ、好ましくはｍＲＮＡである、項目１〜３に記載の核酸。
（項目５）
前記少なくとも１つのヒストンステムループが、以下の式（Ｉ）または（ＩＩ）：
式（Ｉ）（ステム境界エレメントを持たないステムループ配列）：
【化２２】
2013535969.tif 000005
式（ＩＩ）（ステム境界エレメントを有するステムループ配列）：
【化２３】
2013535969.tif 000006
から選択され、ここで、
ステム１またはステム２境界エレメントＮ１〜６は、１〜６個、好ましくは２〜６個、より好ましくは２〜５個、さらにより好ましくは３〜５個、最も好ましくは４〜５個または５個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチド、またはそのヌクレオチドアナログから選択され、
ステム１［Ｎ０〜２ＧＮ３〜５］は、エレメントステム２と逆に相補的であるか、または部分的に逆に相補的であり、且つ５〜７ヌクレオチドの連続配列であり、
Ｎ０〜２は、０〜２個、好ましくは０〜１個、より好ましくは１個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｎ３〜５は、３〜５個、好ましくは４〜５個、より好ましくは４個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｇはグアノシンまたはそのアナログであり、シチジンまたはそのアナログによって必要に応じて置換することができ、但し、ステム２中のその相補的ヌクレオチドシチジンがグアノシンによって置換されるものとし、
ループ配列［Ｎ０〜４（Ｕ／Ｔ）Ｎ０〜４］は、エレメントステム１とステム２との間に存在し、３〜５個のヌクレオチド、より好ましくは４個のヌクレオチドの連続配列であり、
各Ｎ０〜４は、別のＮ０〜４とは独立した、０〜４個、好ましくは１〜３個、より好ましくは１〜２個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｕ／Ｔはウリジン、または必要に応じてチミジンを示し、
ステム２［Ｎ３〜５ＣＮ０〜２］は、エレメントステム１と逆に相補的であるか、または部分的に逆に相補的であり、且つ５〜７ヌクレオチドの連続配列であり、
Ｎ３〜５は、３〜５個、好ましくは４〜５個、より好ましくは４個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｎ０〜２は、０〜２個、好ましくは０〜１個、より好ましくは１個のＮの連続配列であり、各Ｎは、別のＮとは独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、Ｇ、およびＣから選択されるヌクレオチドまたはそのヌクレオチドアナログから選択され、
Ｃはシチジンまたはそのアナログであり、グアノシンまたはそのアナログに必要に応じて置換することができ、但し、ステム１中のその相補的ヌクレオチドグアノシンがシチジンに置換されるものとし、
ここで、
ステム１およびステム２が互いに塩基対合して、塩基対合がステム１とステム２との間で起こり得る逆相補配列を形成することができるか、または不完全な塩基対合がステム１およびステム２との間で起こり得る部分的に逆相補の配列を形成することができる、項目１〜４のいずれかに記載の核酸。
（項目６）
前記少なくとも１つのヒストンステムループが、以下の式（Ｉａ）または（ＩＩａ）：
【化２４】
2013535969.tif 000007
式（Ｉａ）（ステム境界エレメントを持たないステムループ配列）
【化２５】
2013535969.tif 000008
式（ＩＩａ）（ステム境界エレメントを有するステムループ配列）
のうちの少なくとも１つから選択される、項目５に記載の核酸。
（項目７）
前記ポリ（Ａ）配列が、約２５〜約４００個のアデノシンヌクレオチドの配列、好ましくは約５０〜約４００個のアデノシンヌクレオチドの配列、より好ましくは約５０〜約３００個のアデノシンヌクレオチドの配列、さらにより好ましくは約５０〜約２５０個のアデノシンヌクレオチドの配列、最も好ましくは約６０〜約２５０個のアデノシンヌクレオチドの配列を含む、項目１〜６のいずれかに記載の核酸。
（項目８）
前記ポリアデニル化シグナルが、コンセンサス配列ＮＮＵＡＮＡ、好ましくはＡＡＵＡＡＡまたはＡＵＵＡＡＡを含む、項目１〜６のいずれかに記載の核酸。
（項目９）
前記核酸が、治療的に活性なタンパク質またはペプチド、アジュバントタンパク質、抗原、腫瘍抗原、病原性抗原、動物抗原、ウイルス抗原、原生動物抗原、細菌抗原、アレルギー性抗原、自己免疫抗原、アレルゲン、抗体、免疫賦活性タンパク質もしくはペプチド、または抗原特異的Ｔ細胞受容体をコードする、項目１〜８のいずれかに記載の核酸。
（項目１０）
前記核酸が、モノシストロン性核酸、バイシストロン性核酸、またはさらにマルチシストロン性核酸である、項目１〜９のいずれかに記載の核酸。
（項目１１）
コードされたペプチドまたはタンパク質の発現レベルを増加させるための項目１〜１０のいずれかに記載の核酸の使用。
（項目１２）
医薬としての使用のための項目１〜１０のいずれかに記載の核酸。
（項目１３）
項目１〜１０のいずれかに記載の核酸および必要に応じて、薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物。
（項目１４）
抗原をコードするかまたは抗原を含む項目１〜１０のいずれかに記載の核酸を含むワクチン。
（項目１５）
前記抗原が、腫瘍抗原、アレルギー性抗原、自己免疫自己抗原、病原性抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、原生動物抗原、動物抗原、またはアレルギー性抗原から選択される、項目１４に記載のワクチン。
（項目１６）
癌または腫瘍疾患、感染症、好ましくは（ウイルス、細菌、または原生動物）感染症、自己免疫疾患、アレルギーまたはアレルギー疾患、一遺伝子性疾患（すなわち、（遺伝性）疾患）、または遺伝病全般（遺伝的背景を有し、典型的には、規定された遺伝子欠損によって引き起こされ、メンデルの法則に従って遺伝する疾患）、心血管疾患、ニューロン疾患、呼吸器系疾患、消化器系疾患、皮膚疾患、筋骨格系障害、結合組織障害、新生物、免疫欠損、内分泌性、栄養性および代謝性の疾患、眼の疾患、または耳の疾患の処置におけるタンパク質発現の増加のための項目１〜１０のいずれかに記載の核酸の使用。
（項目１７）
タンパク質発現を増加させるためのインビトロまたはエキソビボでの方法であって、
ａ）項目１〜１０のいずれかに記載の核酸を提供する工程、
ｂ）該核酸を無細胞発現系、細胞（例えば、発現宿主細胞または体細胞）、組織、または生物に適用または投与する工程
を含む、方法。