【手続補正書】
【提出日】平成24年3月30日(2012.3.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
長さが約15〜約60ヌクレオチドの二本鎖領域を含み、COP9シグナロソームサブユニット5(CSN5)遺伝子発現をサイレンシングすることができる、siRNA分子。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
本発明の他の目的、特徴、および利点は、以下の詳細な説明および図面から当業者に明らかであろう。
[本発明1001]
長さが約15〜約60ヌクレオチドの二本鎖領域を含み、COP9シグナロソームサブユニット5(CSN5)遺伝子発現をサイレンシングすることができる、siRNA分子。
[本発明1002]
二本鎖領域内のヌクレオチドの1つまたは複数が修飾ヌクレオチドを含む、本発明1001のsiRNA分子。
[本発明1003]
前記修飾ヌクレオチドが2'-O-メチル(2'OMe)ヌクレオチドを含む、本発明1002のsiRNA分子。
[本発明1004]
二本鎖領域内のヌクレオチドの約25％未満が修飾ヌクレオチドを含む、本発明1002のsiRNA分子。
[本発明1005]
対応する非修飾siRNA配列より免疫賦活性が少ない、本発明1002のsiRNA分子。
[本発明1006]
siRNA分子の一方の鎖または両方の鎖に3'オーバーハングを含む、本発明1001のsiRNA分子。
[本発明1007]
SEQ ID NO:4の核酸配列を含むアンチセンス鎖を含む、本発明1001のsiRNA分子。
[本発明1008]
SEQ ID NO:30の核酸配列を含むアンチセンス鎖を含む、本発明1001のsiRNA分子。
[本発明1009]
SEQ ID NO:3の核酸配列を含むセンス鎖を含む、本発明1001のsiRNA分子。
[本発明1010]
SEQ ID NO:27の核酸配列を含むセンス鎖を含む、本発明1001のsiRNA分子。
[本発明1011]
CSN5-2を含む、本発明1001のsiRNA分子。
[本発明1012]
CSN5-3/8を含む、本発明1001のsiRNA分子。
[本発明1013]
表1に示した配列の少なくとも1つを含む、本発明1001のsiRNA分子。
[本発明1014]
表2に示した配列の少なくとも1つを含む、本発明1001のsiRNA分子。
[本発明1015]
担体システムをさらに含む、本発明1001のsiRNA分子。
[本発明1016]
担体システムが核酸-脂質粒子を含む、本発明1015のsiRNA分子。
[本発明1017]
本発明1001のsiRNA分子および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
[本発明1018]
(a)本発明1001のsiRNA分子;
(b)カチオン性脂質;および
(c)非カチオン性脂質
を含む、核酸-脂質粒子。
[本発明1019]
カチオン性脂質が、粒子に存在する総脂質の約50mol％〜約85mol％を構成する、本発明1018の核酸-脂質粒子。
[本発明1020]
カチオン性脂質が、粒子に存在する総脂質の約20mol％〜約50mol％を構成する、本発明1018の核酸-脂質粒子。
[本発明1021]
カチオン性脂質が、1,2-ジリノレイルオキシ-N,N-ジメチルアミノプロパン(DLinDMA)、1,2-ジリノレニルオキシ-N,N-ジメチルアミノプロパン(DLenDMA)、またはそれらの混合物を含む、本発明1018の核酸-脂質粒子。
[本発明1022]
カチオン性脂質が、2,2-ジリノレイル-4-(2-ジメチルアミノエチル)-[1,3]-ジオキソラン(DLin-K-C2-DMA)を含む、本発明1018の核酸-脂質粒子。
[本発明1023]
非カチオン性脂質が、粒子に存在する総脂質の約13mol％〜約49.5mol％を構成する、本発明1018の核酸-脂質粒子。
[本発明1024]
非カチオン性脂質が、粒子に存在する総脂質の約5mol％〜約90mol％を構成する、本発明1018の核酸-脂質粒子。
[本発明1025]
非カチオン性脂質がリン脂質を含む、本発明1018の核酸-脂質粒子。
[本発明1026]
非カチオン性脂質が、リン脂質とコレステロールまたはその誘導体との混合物を含む、本発明1018の核酸-脂質粒子。
[本発明1027]
リン脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)、ジステアロイルホスファチジルコリン(DSPC)、またはそれらの混合物を含む、本発明1026の核酸-脂質粒子。
[本発明1028]
リン脂質が、粒子に存在する総脂質の約4mol％〜約10mol％を構成し、かつコレステロールが、粒子に存在する総脂質の約30mol％〜約40mol％を構成する、本発明1026の核酸-脂質粒子。
[本発明1029]
リン脂質が、粒子に存在する総脂質の約5mol％〜約15mol％を構成し、かつコレステロールが、粒子に存在する総脂質の約45mol％〜約55mol％を構成する、本発明1026の核酸-脂質粒子。
[本発明1030]
非カチオン性脂質がコレステロールまたはその誘導体を含む、本発明1018の核酸-脂質粒子。
[本発明1031]
コレステロールまたはその誘導体が、粒子に存在する総脂質の約31.5mol％〜約42.5mol％を構成する、本発明1030の核酸-脂質粒子。
[本発明1032]
粒子の凝集を阻害する複合脂質をさらに含む、本発明1018の核酸-脂質粒子。
[本発明1033]
粒子の凝集を阻害する複合脂質が、粒子に存在する総脂質の約0.5mol％〜約2mol％を構成する、本発明1032の核酸-脂質粒子。
[本発明1034]
粒子の凝集を阻害する複合脂質が、粒子に存在する総脂質の約1mol％〜約10mol％を構成する、本発明1032の核酸-脂質粒子。
[本発明1035]
粒子の凝集を阻害する複合脂質が、ポリエチレングリコール(PEG)-脂質結合体を含む、本発明1032の核酸-脂質粒子。
[本発明1036]
PEG-脂質結合体が、PEG-ジアシルグリセロール(PEG-DAG)結合体、PEG-ジアルキルオキシプロピル(PEG-DAA)結合体、またはそれらの混合物を含む、本発明1035の核酸-脂質粒子。
[本発明1037]
PEG-DAA結合体が、PEG-ジミリスチルオキシプロピル(PEG-DMA)結合体、PEG-ジステアリルオキシプロピル(PEG-DSA)結合体、またはそれらの混合物を含む、本発明1036の核酸-脂質粒子。
[本発明1038]
核酸-脂質粒子を37℃で30分間、血清中でインキュベーションした後に、前記粒子中のsiRNA分子が実質的に分解されていない、本発明1018の核酸-脂質粒子。
[本発明1039]
siRNA分子が完全に核酸-脂質粒子に封入されている、本発明1018の核酸-脂質粒子。
[本発明1040]
核酸-脂質粒子の脂質:siRNA質量比が約5〜約15である、本発明1018の核酸-脂質粒子。
[本発明1041]
核酸-脂質粒子の直径の中央値が約40nm〜約150nmである、本発明1018の核酸-脂質粒子。
[本発明1042]
本発明1018の核酸-脂質粒子および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
[本発明1043]
細胞と、本発明1001のsiRNA分子または本発明1018の核酸-脂質粒子とを接触させる工程
を含む、CSN5遺伝子発現をサイレンシングするsiRNAを細胞に導入する方法。
[本発明1044]
前記細胞が哺乳動物内にある、本発明1043の方法。
[本発明1045]
前記哺乳動物が癌を有すると診断されている、本発明1044の方法。
[本発明1046]
前記癌が肝臓癌である、本発明1045の方法。
[本発明1047]
本発明1001のsiRNA分子または本発明1018の核酸-脂質粒子を哺乳動物対象に投与する工程
を含む、CSN5遺伝子発現をサイレンシングするsiRNAをインビボ送達するための方法。
[本発明1048]
前記投与が、経口、鼻腔内、静脈内、腹腔内、筋肉内、関節内、病巣内、気管内、皮下、および皮内からなる群より選択される、本発明1047の方法。
[本発明1049]
前記哺乳動物対象が癌を有すると診断されている、本発明1047の方法。
[本発明1050]
前記癌が肝臓癌である、本発明1049の方法。
[本発明1051]
治療的に有効な量の本発明1001のsiRNA分子または本発明1018の核酸-脂質粒子を哺乳動物対象に投与する工程
を含む、癌の治療を必要とする哺乳動物対象において癌を治療するための方法。
[本発明1052]
前記投与が、経口、鼻腔内、静脈内、腹腔内、筋肉内、関節内、病巣内、気管内、皮下、および皮内からなる群より選択される、本発明1051の方法。
[本発明1053]
前記癌が肝臓癌である、本発明1051の方法。
[本発明1054]
前記肝臓癌が肝細胞癌である、本発明1053の方法。