【手続補正書】
【提出日】平成24年7月27日(2012.7.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
補因子の非存在下において凝固活性を有することを特徴とする第ＩＸ因子（Ｆ．ＩＸ）または活性化第ＩＸ因子（Ｆ．ＩＸａ）の変異体であって、
前記補因子は第ＶＩＩＩ因子（Ｆ．ＶＩＩＩ）または活性化第ＶＩＩＩ因子（Ｆ．ＶＩＩＩａ）であり、
前記第ＩＸ因子または活性化第ＩＸ因子は２６５位のアミノ酸置換を、１８１位のアミノ酸置換および／または３８３位のアミノ酸置換と組み合わせて含む、
前記変異体。
【請求項２】
１８１位のアミノ酸置換がＶ１８１Ｉであり、そして／または３８３位のアミノ酸置換がＩ３８３Ｖである、請求項１の変異第ＩＸ因子。
【請求項３】
２９０、３８８、３４、２５、３５３、３５８、３３８、３７７、４、８６、２１７および／または２７７から選択された位置におけるアミノ酸置換を、
好ましくはＩ２９０Ｌ、Ｅ３８８Ｇ、Ｎ３４Ｄ、Ｆ２５Ｙ、Ｆ３５３Ｙ、Ｒ３５８Ａ、Ｒ３３８Ａ、Ｒ３３８Ｌ、Ｓ３７７Ｗ、Ｇ４Ｙ、Ｖ８６Ａ、Ｖ２１７Ｌおよび／またはＥ２７７Ａから選択されたアミノ酸置換をさらに含む、請求項１または２の変異第ＩＸ因子。
【請求項４】
２６５位のアミノ酸置換が、Ｋ２６５Ｔ、Ｋ２６５Ａ、Ｋ２６５Ｄ、Ｋ２６５Ｅ、Ｋ２６５Ｆ、Ｋ２６５Ｇ、Ｋ２６５Ｈ、Ｋ２６５Ｉ、Ｋ２６５Ｎ、Ｋ２６５ＳおよびＫ２６５Ｖから選択される、請求項１〜３のいずれかの変異第ＩＸ因子。
【請求項５】
２６５位のアミノ酸置換が、Ｋ２６５Ｔ、Ｋ２６５Ａ、Ｋ２６５Ｇ、Ｋ２６５Ｖ、Ｋ２６５ＮおよびＫ２６５Ｄから選択される、請求項４の変異第ＩＸ因子。
【請求項６】
さらに２９０、３８８、３４、２５、３５３および／または３５８から選択された位置におけるアミノ酸置換を含む、
好ましくはアミノ酸置換Ｋ２６５Ｔを、１８１および／または３８３の位置におけるアミノ酸置換と組み合わせて含み、さらに２９０、３８８、３４、２５、３５３および／または３５８から選択された位置におけるアミノ酸置換含む、
例えばアミノ酸置換Ｋ２６５Ｔを、Ｖ１８１Ｉおよび／またはＩ３８３Ｖの位置におけるアミノ酸置換と組み合わせて、そしてＩ２９０Ｌ、Ｅ３８８Ｇ、Ｎ３４Ｄ、Ｆ２５Ｙ、Ｆ３５３Ｙおよび／またはＲ３５８Ａから選択されたアミノ酸置換と組み合わせて含む、
請求項１〜５のいずれかの変異第ＩＸ因子。
【請求項７】
さらに２９０、３３８、３７７、４、８６、２１７および／または２７７から選択された位置においてアミノ酸置換を含む、
例えばＩ２９０Ｌ、Ｒ３３８Ａ、Ｒ３３８Ｌ、Ｓ３７７Ｗ、Ｇ４Ｙ、Ｖ８６Ａ、Ｖ２１７Ｌおよび／またはＥ２７７Ａから選択されたアミノ酸置換を含む、
好ましくはアミノ酸置換Ｋ２６５Ｔを、１８１および／または３８３の位置におけるアミノ酸置換と組み合わせて含み、さらに２９０、３３８、３７７、４、８６、２１７および／または２７７から選択された位置におけるアミノ酸置換と組み合わせて含む、
例えばアミノ酸置換Ｋ２６５Ｔを、Ｖ１８１Ｉおよび／またはＩ３８３Ｖと組み合わせて、そしてＩ２９０Ｌ、Ｒ３３８Ａ、Ｒ３３８Ｌ、Ｓ３７７Ｗ、Ｇ４Ｙ、Ｖ８６Ａ、Ｖ２１７Ｌおよび／またはＥ２７７Ａから選択されたアミノ酸置換と組み合わせて含む、
請求項１〜６のいずれかの変異第ＩＸ因子。
【請求項８】
変異体Ｋ２６５Ｔ／Ｖ１８１Ｉ、
変異体Ｋ２６５Ｔ／Ｉ３８３Ｖ、
変異体Ｋ２６５Ｔ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ、
変異体Ｋ２６５Ｔ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ／Ｒ３３８Ａ／Ｓ３７７Ｗ、
変異体Ｋ２６５Ｔ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ／Ｅ３８８Ｇ、
変異体Ｋ２６５Ｔ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ２９０Ｌ／Ｉ３８３Ｖ、
変異体Ｋ２６５Ｔ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ２９０Ｌ／Ｉ３８３Ｖ／Ｅ３８８Ｇ、
Ｒ３３８ＡおよびＳ３７７Ｗをさらに含む変異体、
変異体Ｋ２６５Ａ／Ｖ１８１Ｉ、
変異体Ｋ２６５Ａ／Ｉ３８３Ｖ、
変異体Ｋ２６５Ａ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ、または
変異体Ｋ２６５Ａ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ／Ｒ３３８Ａ／Ｓ３７７Ｗ
から選択される、請求項１〜７のいずれかの変異第ＩＸ因子。
【請求項９】
１８１位および／または３８３位におけるアミノ酸置換（好ましくはＶ１８１Ｉおよび／またはＩ３８３Ｖ）と組み合わせた、２６５位におけるアミノ酸置換を有する変異体（好ましくはＫ２６５Ｔ、Ｋ２６５Ａ、Ｋ２６５Ｄ、Ｋ２６５Ｅ、Ｋ２６５Ｆ、Ｋ２６５Ｇ、Ｋ２６５Ｈ、Ｋ２６５Ｉ、Ｋ２６５Ｎ、Ｋ２６５ＳおよびＫ２６５Ｖから選択される、より好ましくはＫ２６５Ｔ、Ｋ２６５Ａ、Ｋ２６５Ｇ、Ｋ２６５Ｖ、Ｋ２６５ＮおよびＫ２６５Ｄから選択される）、
好ましくは
変異体Ｋ２６５Ｔ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ、
変異体Ｋ２６５Ａ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ、
変異体Ｋ２６５Ｇ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ、
変異体Ｋ２６５Ｖ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ、
変異体Ｋ２６５Ｎ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ、
変異体Ｋ２６５Ｄ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ、
変異体Ｋ２６５Ｅ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ、
変異体Ｋ２６５Ｆ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ、
変異体Ｋ２６５Ｈ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ、
変異体Ｋ２６５Ｉ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ、または
変異体Ｋ２６５Ｓ／Ｖ１８１Ｉ／Ｉ３８３Ｖ
から選択される、請求項１〜７のいずれかの変異第ＩＸ因子。
【請求項１０】
前記変異体に好ましくは共有結合的に付着した、タンパク質、ラベルおよび／またはポリマーなどの、さらなる化合物または部分を含む、請求項１〜９のいずれかの変異第ＩＸ因子。
【請求項１１】
好ましくはプロモーターおよび／または転写終結配列に作動可能に連結した、より好ましくは発現プラスミド、遺伝子療法構築物、ウイルスもしくは非ウイルスベクターまたは遺伝子修復のための鋳型である、請求項１〜１０のいずれかの変異第ＩＸ因子をコードする核酸。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれかの第ＩＸ因子（Ｆ．ＩＸ）の少なくとも１つの変異体または請求項１１の少なくとも１つの核酸と、場合により薬学的に許容される担体および／または賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項１３】
疾病の診断、予防および／または処置に使用するための、請求項１〜１０のいずれかの第ＩＸ因子（Ｆ．ＩＸ）変異体、請求項１１の核酸または請求項１２の薬学的組成物。
【請求項１４】
疾病が出血性疾患または出血であり、
前記出血性疾患が、好ましくは血友病Ａ、第Ｆ．ＶＩＩＩ因子もしくは第Ｆ．ＶＩＩＩａ因子に対する阻害抗体によって引き起こされたかもしくは併発した血友病、血友病Ｂであり、
そして／または、出血性疾患もしくは出血が、例えば、新生児凝固障害；重度の肝疾病；ハイリスクな手術；外傷性失血；骨髄移植；血小板減少症および血小板機能異常症；経口抗凝血療法の迅速な逆転；第Ｖ因子、第ＶＩＩ因子、第Ｘ因子および第ＸＩ因子の先天性欠損症；並びにフォンヴィルブランド因子に対するインヒビターによるフォンヴィルブランド病、大きな損傷に関連した失血、脳出血、血小板機能異常症を含む、バイパス剤が使用される出血性疾患である、請求項１３の第ＩＸ因子（Ｆ．ＩＸ）変異体、核酸または薬学的組成物。
【請求項１５】
細胞療法、遺伝子療法、タンパク質輸液療法のための、請求項１３または１４の第ＩＸ因子（Ｆ．ＩＸ）変異体、核酸または薬学的組成物。
【請求項１６】
請求項１〜１０のいずれかの変異第ＩＸ因子の使用を含む、抗凝血物質を、好ましくはＦ．ＩＸａを直接的に阻害する物質を、スクリーニングする方法。