【手続補正書】
【提出日】平成26年6月10日(2014.6.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物である加水分解酵素基質
【化３９】
2014505059.tif 000001
［式中、
Ａは、芳香族基もしくは複素芳香族基、１−アルケン、または１−アルキンであり、そのそれぞれは、必要に応じて置換されており、
各Ｒは、独立に、Ｈ、または必要に応じて置換されているＣ１−Ｃ４アルキルもしくはアリールであり、
ｎは、１〜４の整数であり、
Ｘは、基質部分を含む基であり、
ここで、該基質部分は、加水分解酵素のための基質の認識成分を含み、ここで、該加水分解酵素の活性は、該式（Ｉ）の化合物を加水分解して、化合物（ＩＩ）および（ＩＩＩ）を形成することができる］。
【化４０】
2014505059.tif 000002
【請求項２】
Ａが、式（ＩＶ）の１−アルケンである
【化４１】
2014505059.tif 000003
［式中、
波線が、式（Ｉ）の−［ＣＨ（Ｒ）］ｎ−Ｏ−ＸへのＡの付着点を示し、各Ｇ、Ｇ’およびＧ’’が、独立に、Ｈであるか、またはＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される、必要に応じて置換されている基である］か、あるいは
Ａが、式（Ｖ）の１−アルキンである
【化４２】
2014505059.tif 000004
［式中、
波線が、式（Ｉ）の−［ＣＨ（Ｒ）］ｎ−Ｏ−ＸへのＡの付着点を示し、Ｇが、Ｈであるか、またはＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される、必要に応じて置換されているメンバーである］、
請求項１に記載の加水分解酵素基質。
【請求項３】
前記化合物が、式（ＶＩａ）または（ＶＩｂ）
【化４３】
2014505059.tif 000005
［式中、Ｒ２は、Ｈまたは−ＣＨ２ＯＱであり、各Ｑは、独立に、Ｈ、または単糖、二糖もしくはオリゴ糖であり、Ａ、Ｒおよびｎは、請求項１に定義されている通りであり、
式ＶＩｂを有する化合物について、Ｒ２が−ＣＨ２ＯＱであり、かつ該Ｑが単糖である場合、Ａは、芳香族基もしくは複素芳香族基、または１−アルキンであり、これらの各々は、必要に応じて置換されており、そしてＡが１−アルケンであり、かつＲ２が−ＣＨ２ＯＱである場合、該ＱはＨ、二糖またはオリゴ糖であり、
式ＶＩａを有する化合物について、ＱがＨである場合、Ａは複素芳香族基、１−アルケンまたは１−アルキンであり、これらの各々は、必要に応じて置換されており、そしてＡが芳香族基である場合、各Ｑは独立して、単糖、二糖またはオリゴ糖であり、
式ＶＩｂを有する化合物について、ＱがＨである場合、Ａは、複素芳香族基、１−アルケンまたは１−アルキンであり、これらの各々は、必要に応じて置換されており、そしてＡが芳香族基である場合、各Ｑは独立して、二糖またはオリゴ糖であり、そしてＲ２が−ＣＨ２ＯＱであり、該Ｑが単糖である場合、Ａは複素芳香族基、または１−アルキンであり、これらの各々は、必要に応じて置換されている］
を有するか；あるいは
該化合物が、式（ＶＩＩ）のエステル
【化４４】
2014505059.tif 000006
［式中、Ｒ３は、Ｈ、または必要に応じて置換されているアリール基、ヘテロアリール基、Ｃ３−Ｃ８アルキル基、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル基もしくはＣ３−Ｃ８ヘテロシクリル基であり、
Ａ、Ｒおよびｎは、請求項１に定義されている通りであり、
Ａが芳香族基である場合、Ｒ３は、Ｈ、または必要に応じて置換されたヘテロアリール基、Ｃ３−Ｃ８アルキル基、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル基もしくはＣ３−Ｃ８ヘテロシクリル基であり、そしてＲ３が置換されたアリールである場合、Ａは、複素芳香族基、１−アルケンまたは１−アルキンであり、これらの各々は、必要に応じて置換されている］
であるか；あるいは
該化合物が、式（ＶＩＩＩ）の化合物
【化４５】
2014505059.tif 000007
［式中、Ｚは、Ｎ、Ｓ、Ｓ＝Ｏ、ＰまたはＰ−ＯＨであり、Ｒ４は、Ｏ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはアリールであり、
Ａが芳香族基である場合、Ｚは、Ｎ、ＳもしくはＳ＝Ｏであるか、またはＺは、Ｎ、Ｓ、Ｓ＝Ｏ、Ｐ、もしくはＰ−ＯＨであり、かつＲ４は、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはアリールであり、そしてＺがＰまたはＰ−ＯＨの場合、Ａは複素芳香族基、１−アルケン、または１−アルキンであり、これらの各々は、必要に応じて置換されている］
であるか；あるいは
該化合物が、式（ＩＸ）の化合物
【化４６】
2014505059.tif 000008
［式中、Ａは、１−アルケンまたは１−アルキンであり、これらの各々は、必要に応じて置換されている］
またはその塩である、請求項１に記載の加水分解酵素基質。
【請求項４】
Ｘが、グルコシダーゼのための基質部分、ベータ−ガラクトシダーゼ、エステラーゼ、カルボキシルエステラーゼ、アセチルエステラーゼ、アルファ−アミノ酸エステラーゼ、ホスファターゼ、またはアルカリホスファターゼを含む、請求項１に記載の加水分解酵素基質。
【請求項５】
ａ）請求項１から４のいずれかに記載の加水分解酵素基質と、
ｂ）加水分解酵素であって、該加水分解酵素は、該加水分解酵素基質を切断して、アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、該加水分解酵素によって触媒される該切断反応の生成物として生成することができ、該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子は、前記式（ＩＩ）の構造
【化４８】
2014505059.tif 000009
（式中、Ａ、Ｒおよびｎは、請求項１に定義されている通りである）
を有する、加水分解酵素
とを含む、組合せ物。
【請求項６】
前記加水分解酵素が、エステラーゼ、ホスファターゼ、グリコシダーゼ、アセチルエステラーゼ、アミノ酸エステラーゼ、カルボキシルエステラーゼ、ヌクレアーゼ、ホスホジエステラーゼ、リパーゼ、ホスファターゼ、アルカリホスファターゼ、α−アミノ酸エステラーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、またはβ−グリコシダーゼである、請求項５に記載の組合せ物。
【請求項７】
前記加水分解酵素が触媒する前記切断反応によって生成された前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を酸化することができる酸化試薬をさらに含む、請求項５に記載の組合せ物。
【請求項８】
前記酸化試薬が、酸素の存在下で、前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を酸化して、アリールアルデヒド分子または不飽和脂肪族アルデヒド分子およびＨ２Ｏ２を生成することができるアリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼであるか、あるいは、
前記酸化試薬が、ＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋の存在下で、前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を酸化して、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨを生成することができるアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼである、請求項７に記載の組合せ物。
【請求項９】
試料中の加水分解酵素の活性および／または量を評価する方法であって、
ａ）式（Ｉ）：
【化４９】
2014505059.tif 000010
の構造を有する、請求項１から４のいずれかに記載の加水分解酵素基質を、加水分解酵素を含有するか、または加水分解酵素を含有すると疑われる試料と、該加水分解酵素が該試料中に存在する場合には該基質を切断する条件下で接触させて、式（ＩＩ）の構造を有するアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子および式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物
【化５０】
2014505059.tif 000011
［式中、Ａ、Ｒ、ｎおよびＸは、請求項１に定義されている通りである］
を生成するステップと、
ｂ）該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量を評価して、該試料中の該加水分解酵素の活性および／または量を評価するステップと
を含む、方法。
【請求項１０】
前記加水分解酵素が、エステラーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、グリコシダーゼ、アセチルエステラーゼ、アミノ酸エステラーゼ、カルボキシルエステラーゼ、ヌクレアーゼ、ホスホジエステラーゼ、リパーゼ、ホスファターゼ、アルカリホスファターゼ、α−アミノ酸エステラーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、またはβ−グリコシダーゼである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量が、酸素の存在下で、該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子をアリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼで酸化して、Ｈ２Ｏ２を生成し、該Ｈ２Ｏ２の存在および／または量を評価することによって評価されるか、あるいは
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量が、ＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋の存在下で、該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子をアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼで酸化して、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨを生成し、該ＮＡＤ＋、ＮＡＤＰ＋、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの存在および／または量を評価することによって評価される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量が、
ａ）該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、酸素の存在下でアリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼで酸化して、アリールアルデヒド分子または不飽和脂肪族アルデヒド分子およびＨ２Ｏ２を生成することと、ｂ）該アリールアルデヒド分子または不飽和脂肪族アルデヒド分子を、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの存在下でアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼで還元して、該還元されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子が、酸素の存在下で該アリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼによって酸化されて、追加のアリールアルデヒド分子または不飽和脂肪族アルデヒド分子およびＨ２Ｏ２を生成する反応サイクルを形成することと、
ｃ）該Ｈ２Ｏ２の存在および／もしくは量、またはＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、ＮＡＤ＋もしくはＮＡＤＰ＋の量を評価することと
によって評価される、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記加水分解酵素基質が、β−グリコシダーゼ基質分子の少なくとも一部を含み、前記加水分解酵素が、β−グリコシダーゼまたはベータ−ガラクトシダーゼであり、
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量が、
ａ）該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、酸素の存在下でアリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼで酸化して、酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子およびＨ２Ｏ２を生成することと、
ｂ）該酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの存在下でアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼで還元して、該還元されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子が、酸素の存在下で該アリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼによって酸化されて、追加の酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子およびＨ２Ｏ２を生成する反応サイクルを形成することと、 ｃ）該Ｈ２Ｏ２の存在および／または量を評価することと
によって評価される、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
前記加水分解酵素基質が、アルカリホスファターゼ基質分子の少なくとも一部を含み、前記加水分解酵素が、アルカリホスファターゼであり、前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量が、
ａ）該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、酸素の存在下でアリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼで酸化して、酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子およびＨ２Ｏ２を生成することと、
ｂ）該酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの存在下でアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼで還元して、該還元されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子が、酸素の存在下で該アリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼによって酸化されて、追加の酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子およびＨ２Ｏ２を生成する反応サイクルを形成することと、ｃ）該Ｈ２Ｏ２の存在および／または量を評価することと
によって評価される、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
標的のアッセイ、単離および／または生成の一部として実施されるか、免疫アッセイ、タンパク質配列決定、核酸増幅、ハイブリダイゼーションまたは配列決定の一部として実施されるか、またはＲＮＡまたはＤＮＡの配列決定をモニタするために使用される、請求項９〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
加水分解酵素、アルコールオキシダーゼ、アリールアルコールオキシダーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼおよび／またはアリールアルコールデヒドロゲナーゼを含む様々な試薬および／または酵素は、任意の適切な形態で提供することができ、かつ／または使用することができる。いくつかの実施形態では、様々な試薬および／または酵素は、単離形態で提供され、かつ／または使用される。他の実施形態では、様々な試薬および／または酵素は、混合物で提供され、かつ／または使用される。
本発明の好ましい実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
式（Ｉ）の化合物である加水分解酵素基質
【化３９】
2014505059.tif 000012
［式中、
Ａは、芳香族基もしくは複素芳香族基、１−アルケン、または１−アルキンであり、そのそれぞれは、必要に応じて置換されており、
各Ｒは、独立に、Ｈ、または必要に応じて置換されているＣ１−Ｃ４アルキルもしくはアリールであり、
ｎは、１〜４の整数であり、
Ｘは、基質部分を含む基であり、
ここで、該基質部分は、加水分解酵素のための基質の認識成分を含み、ここで、該加水分解酵素の活性は、該式（Ｉ）の化合物を加水分解して、化合物（ＩＩ）および（ＩＩＩ）を形成することができる］。
【化４０】
2014505059.tif 000013
（項目２）
Ａが、必要に応じて置換されている芳香族基または複素芳香族基である、項目１に記載の加水分解酵素基質。
（項目３）
Ａが、必要に応じて置換されているフェニルまたはナフチルである、項目２に記載の加水分解酵素基質。
（項目４）
Ａが、式（ＩＶ）の１−アルケンである
【化４１】
2014505059.tif 000014
［式中、
波線が、式（Ｉ）の−［ＣＨ（Ｒ）］ｎ−Ｏ−ＸへのＡの付着点を示し、各Ｇ、Ｇ’およびＧ’’が、独立に、Ｈであるか、またはＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される、必要に応じて置換されている基である］、
項目１に記載の加水分解酵素基質。
（項目５）
Ａが、式（Ｖ）の１−アルキンである
【化４２】
2014505059.tif 000015
［式中、
波線が、式（Ｉ）の−［ＣＨ（Ｒ）］ｎ−Ｏ−ＸへのＡの付着点を示し、Ｇが、Ｈであるか、またはＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される、必要に応じて置換されているメンバーである］、
項目１に記載の加水分解酵素基質。
（項目６）
Ｒが、Ｈ、Ｍｅまたはフェニルである、項目１に記載の加水分解酵素基質。
（項目７）
Ｘが糖を含む、項目１に記載の加水分解酵素基質。
（項目８）
前記化合物が、式（ＶＩａ）または（ＶＩｂ）を有する、項目７に記載の加水分解酵素基質
【化４３】
2014505059.tif 000016
［式中、Ｒ２は、Ｈまたは−ＣＨ２ＯＱであり、各Ｑは、独立に、Ｈ、または単糖、二糖もしくはオリゴ糖であり、Ａ、Ｒおよびｎは、項目１に定義されている通りである］。
（項目９）
前記化合物が、式（ＶＩＩ）のエステルである、項目１に記載の加水分解酵素基質
【化４４】
2014505059.tif 000017
［式中、Ｒ３は、Ｈ、または必要に応じて置換されているアリール基、ヘテロアリール基、Ｃ１−Ｃ８アルキル基、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル基もしくはＣ３−Ｃ８ヘテロシクリル基であり、Ａ、Ｒおよびｎは、項目１に定義されている通りである］。
（項目１０）
Ｒ３が、Ｍｅ、Ｅｔおよびフェニルからなる群から選択され、または、ここで、ＨＯ２Ｃ−Ｒ３がアルファ−アミノ酸である、項目９に記載の加水分解酵素基質。
（項目１１）
前記化合物が、式（ＶＩＩＩ）を有する、項目１に記載の加水分解酵素基質
【化４５】
2014505059.tif 000018
［式中、Ｚは、Ｎ、Ｓ、Ｓ＝Ｏ、ＰまたはＰ−ＯＨであり、Ｒ４は、Ｏ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはアリールである］。
（項目１２）
Ｘがリン酸基を含む、項目１に記載の加水分解酵素基質。
（項目１３）
前記化合物が、式（ＩＸ）を有する化合物
【化４６】
2014505059.tif 000019
またはその塩である、項目１２に記載の加水分解酵素基質。
（項目１４）
Ａが、必要に応じて置換されているフェニル基である、項目１から３または６から１３のいずれかに記載の加水分解酵素基質。
（項目１５）
前記フェニル基が、非置換であるか、またはハロ、ヒドロキシ、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯＯＲ’、ＣＯＮＲ’２、ＮＲ’２、ＯＲ’、必要に応じて置換されているＣ１−４アルキル、ＳＲ’、ＳＯ２Ｒ’もしくはＳＯ２ＮＲ’２から選択される１〜３個の基で置換されており、
ここで、各Ｒ’が、独立に、Ｈまたは必要に応じて置換されているＣ１−４アルキルであり、同じまたは隣接する原子上の２つのＲ’が、一緒になって、必要に応じて置換されているＣ３−Ｃ８複素環式環を形成することができる、
項目１４に記載の加水分解酵素基質。
（項目１６）
アルキル基および複素環式基の任意選択の置換基が、ハロ、オキソ、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＯＯＲ’’、ＣＯＮＲ’’２、ＮＲ’’２、ＯＲ’’、必要に応じて置換されているＣ１−４アルキル、ＳＲ’、ＳＯ２Ｒ’’またはＳＯ２ＮＲ’’２から選択され、ここで、各Ｒ’’が、独立に、ＨまたはＣ１−４アルキルである、先行する項目のいずれかに記載の加水分解酵素基質。
（項目１７）
Ａが、式（Ｘ）の基である
【化４７】
2014505059.tif 000020
［式中、
波線が、式（Ｉ）の−［ＣＨ（Ｒ）］ｎ−Ｏ−ＸへのＡの付着点を示し、
各Ｇが、独立に、Ｈであるか、またはＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択される、必要に応じて置換されている基である］、
項目１に記載の加水分解酵素基質。
（項目１８）
ＲがＨである、先行する項目のいずれかに記載の加水分解酵素基質。
（項目１９）
ｎが１である、先行する項目のいずれかに記載の加水分解酵素基質。
（項目２０）
Ｘが、グリコシダーゼのための基質部分を含む、項目１に記載の加水分解酵素基質。
（項目２１）
前記グリコシダーゼが、ベータ−ガラクトシダーゼである、項目２０に記載の加水分解酵素基質。
（項目２２）
Ｘが、エステラーゼのための基質部分を含む、項目１に記載の加水分解酵素基質。
（項目２３）
前記エステラーゼが、カルボキシルエステラーゼ、アセチルエステラーゼおよびアルファ−アミノ酸エステラーゼからなる群から選択される、項目２２に記載の加水分解酵素基質。
（項目２４）
Ｘが、ホスファターゼのための基質部分を含む、項目１に記載の加水分解酵素基質。
（項目２５）
前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼである、項目２４に記載の加水分解酵素基質。
（項目２６）
ａ）項目１から２５のいずれかに記載の加水分解酵素基質と、
ｂ）加水分解酵素であって、該加水分解酵素基質を切断して、アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、該加水分解酵素によって触媒される該切断反応の生成物として生成することができる加水分解酵素（該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子は、前記式（ＩＩ）の構造を有し、
【化４８】
2014505059.tif 000021
式中、Ａ、Ｒおよびｎは、項目１に定義されている通りである）
とを含む、組合せ物。
（項目２７）
前記加水分解酵素が、エステラーゼ、ホスファターゼまたはグリコシダーゼである、項目２６に記載の組合せ物。
（項目２８）
前記加水分解酵素が、アセチルエステラーゼ、アミノ酸エステラーゼ、カルボキシルエステラーゼ、ヌクレアーゼ、ホスホジエステラーゼ、リパーゼおよびホスファターゼからなる群から選択される、項目２７に記載の組合せ物。
（項目２９）
前記加水分解酵素が、アルカリホスファターゼである、項目２７に記載の組合せ物。
（項目３０）
前記加水分解酵素が、α−アミノ酸エステラーゼである、項目２８に記載の組合せ物。
（項目３１）
前記加水分解酵素が、ベータ−ガラクトシダーゼである、項目２７に記載の組合せ物。
（項目３２）
前記加水分解酵素が、β−グリコシダーゼである、項目２７に記載の組合せ物。
（項目３３）
前記加水分解酵素が触媒する前記切断反応によって生成された前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を酸化することができる酸化試薬をさらに含む、項目２６に記載の組合せ物。
（項目３４）
前記酸化試薬が、酸素の存在下で、前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を酸化して、アリールアルデヒド分子または不飽和脂肪族アルデヒド分子およびＨ２Ｏ２を生成することができるアリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼである、項目３３に記載の組合せ物。
（項目３５）
前記Ｈ２Ｏ２を測定するための試薬をさらに含む、項目３４に記載の組合せ物。
（項目３６）
前記Ｈ２Ｏ２を測定するための前記試薬が、ペルオキシダーゼ、４−ＡＡおよび／またはアニリン類似体を含む、項目３５に記載の組合せ物。
（項目３７）
前記酸化試薬が、ＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋の存在下で、前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を酸化して、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨを生成することができるアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼである、項目３３に記載の組合せ物。
（項目３８）
ＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋をさらに含む、項目３７に記載の組合せ物。
（項目３９）
前記ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨを測定するための試薬をさらに含む、項目３８に記載の組合せ物。
（項目４０）
ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨと、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの存在下で前記アリールアルデヒド分子または不飽和脂肪族アルデヒド分子を還元することができるアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼとをさらに含む、項目３４に記載の組合せ物。
（項目４１）
前記Ｈ２Ｏ２を測定するための試薬をさらに含む、項目４０に記載の組合せ物。
（項目４２）
前記Ｈ２Ｏ２を測定するための前記試薬が、ペルオキシダーゼ、アンチピリン、フェノールおよび／またはアニリン類似体の少なくとも１つを含む、項目４１に記載の組合せ物。
（項目４３）
前記加水分解酵素基質が、β−グリコシダーゼ基質分子の少なくとも一部を含み、前記加水分解酵素が、β−グリコシダーゼまたはベータ−ガラクトシダーゼである、項目２６に記載の組合せ物。
（項目４４）
ａ）前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、酸素の存在下で酸化して、アリールアルデヒド分子または不飽和脂肪族アルデヒド分子およびＨ２Ｏ２を生成することができるアリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼと、
ｂ）ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨと、
ｃ）該アリールアルデヒド分子または不飽和脂肪族アルデヒド分子を、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの存在下で還元することができるアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼと、
をさらに含む、項目４３に記載の組合せ物。
（項目４５）
Ｈ２Ｏ２を測定するための試薬をさらに含む、項目４４に記載の組合せ物。
（項目４６）
前記加水分解酵素基質が、アルカリホスファターゼ基質分子の少なくとも一部を含み、前記加水分解酵素が、アルカリホスファターゼである、項目２６に記載の組合せ物。
（項目４７）
ａ）前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、酸素の存在下で酸化して、酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子およびＨ２Ｏ２を生成することができるアリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼと、
ｂ）ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨと、
ｃ）該酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの存在下で還元することができるアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼと、
をさらに含む、項目４６に記載の組合せ物。
（項目４８）
Ｈ２Ｏ２を測定するための少なくとも１つの試薬をさらに含む、項目４７に記載の組合せ物。
（項目４９）
前記組合せ物の成分が、キットに含まれる、項目２６から４８のいずれかに記載の組合せ物。
（項目５０）
標的のためのアッセイ系、単離系および／または生成系に含まれる、項目２６から４９のいずれかに記載の組合せ物。
（項目５１）
前記標的が、無機分子、有機分子および／またはその複合体である、項目５０に記載の組合せ物。
（項目５２）
前記標的が、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、ビタミン、単糖、オリゴ糖、炭水化物、脂質およびその複合体からなる群から選択される有機分子である、項目５１に記載の組合せ物。
（項目５３）
前記系が、免疫アッセイ、タンパク質配列決定、核酸増幅、ハイブリダイゼーションおよび／または配列決定のための系である、項目５２に記載の組合せ物。
（項目５４）
試料中の加水分解酵素の活性および／または量を評価する方法であって、
ａ）実施形態１から２５のいずれかに記載の、式（Ｉ）：
【化４９】
2014505059.tif 000022
の構造を有する加水分解酵素基質を、
加水分解酵素を含有するか、または加水分解酵素を含有すると疑われる試料と、該加水分解酵素が該試料中に存在する場合には該基質を切断する条件下で接触させて、式（ＩＩ）の構造を有するアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子および式（ＩＩＩ）の構造を有する化合物
【化５０】
2014505059.tif 000023
［式中、Ａ、Ｒ、ｎおよびＸは、項目１に定義されている通りである］
を生成するステップと、
ｂ）該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量を評価して、該試料中の該加水分解酵素の活性および／または量を評価するステップとを含む、方法。
（項目５５）
前記加水分解酵素が、エステラーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼまたはグリコシダーゼである、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
前記加水分解酵素が、アセチルエステラーゼ、アミノ酸エステラーゼ、カルボキシルエステラーゼ、ヌクレアーゼ、ホスホジエステラーゼ、リパーゼおよびホスファターゼからなる群から選択されるエステラーゼである、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記加水分解酵素が、アルカリホスファターゼである、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
前記加水分解酵素が、α−アミノ酸エステラーゼである、項目５６に記載の方法。
（項目５９）
前記加水分解酵素が、ベータ−ガラクトシダーゼである、項目５５に記載の方法。
（項目６０）
前記加水分解酵素が、β−グリコシダーゼである、項目５５に記載の方法。
（項目６１）
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量を評価する前記ステップが、該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を酸化試薬で酸化させるステップを含む、項目５４に記載の方法。
（項目６２）
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量が、酸素の存在下で、該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子をアリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼで酸化して、Ｈ２Ｏ２を生成し、該Ｈ２Ｏ２の存在および／または量を評価することによって評価される、項目６１に記載の方法。
（項目６３）
前記Ｈ２Ｏ２の存在および／または量が、該Ｈ２Ｏ２を、ペルオキシダーゼ、フェノール、アンチピリンおよび／またはアニリン類似体と接触させることによって評価される、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量が、ＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋の存在下で、該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子をアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼで酸化して、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨを生成し、該ＮＡＤ＋、ＮＡＤＰ＋、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの存在および／または量を評価することによって評価される、項目５４に記載の方法。
（項目６５）
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量が、
ａ）該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、酸素の存在下でアリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼで酸化して、アリールアルデヒド分子または不飽和脂肪族アルデヒド分子およびＨ２Ｏ２を生成することと、ｂ）該アリールアルデヒド分子または不飽和脂肪族アルデヒド分子を、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの存在下でアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼで還元して、該還元されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子が、酸素の存在下で該アリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼによって酸化されて、追加のアリールアルデヒド分子または不飽和脂肪族アルデヒド分子およびＨ２Ｏ２を生成する反応サイクルを形成することと、
ｃ）該Ｈ２Ｏ２の存在および／もしくは量、またはＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、ＮＡＤ＋もしくはＮＡＤＰ＋の量を評価することと
によって評価される、項目５４に記載の方法。
（項目６６）
前記Ｈ２Ｏ２の存在および／または量が、該Ｈ２Ｏ２を、ペルオキシダーゼ、アンチピリン、フェノールおよび／またはアニリン類似体と接触させることによって評価される、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
前記加水分解酵素基質が、β−グリコシダーゼ基質分子の少なくとも一部を含み、前記加水分解酵素が、β−グリコシダーゼまたはベータ−ガラクトシダーゼである、項目５４に記載の方法。
（項目６８）
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量を評価する前記ステップが、該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を酸化試薬で酸化させるステップを含む、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量が、該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、酸素の存在下でアリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼで酸化して、酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子およびＨ２Ｏ２を生成し、該Ｈ２Ｏ２の存在および／または量を評価することによって評価される、項目６７に記載の方法。
（項目７０）
前記Ｈ２Ｏ２の存在および／または量が、該Ｈ２Ｏ２を、ペルオキシダーゼ、４−ＡＡおよび／またはアニリン類似体と接触させることによって評価される、項目６９に記載の方法。
（項目７１）
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量が、該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、ＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋の存在下でアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼで酸化して、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨを生成し、該ＮＡＤ＋、ＮＡＤＰ＋、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの存在および／または量を評価することによって評価される、項目６７に記載の方法。
（項目７２）
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量が、
ａ）該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、酸素の存在下でアリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼで酸化して、酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子およびＨ２Ｏ２を生成することと、
ｂ）該酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの存在下でアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼで還元して、該還元されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子が、酸素の存在下で該アリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼによって酸化されて、追加の酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子およびＨ２Ｏ２を生成する反応サイクルを形成することと、ｃ）該Ｈ２Ｏ２の存在および／または量を評価することと
によって評価される、項目６７に記載の方法。
（項目７３）
前記Ｈ２Ｏ２の存在および／または量が、該Ｈ２Ｏ２を、ペルオキシダーゼ、フェノール、アンチピリンおよび／またはアニリン類似体と接触させることによって評価される、項目７２に記載の方法。
（項目７４）
前記加水分解酵素基質が、アルカリホスファターゼ基質分子の少なくとも一部を含み、前記加水分解酵素が、アルカリホスファターゼである、項目５４に記載の方法。
（項目７５）
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量を評価する前記ステップが、該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を酸化試薬で酸化させるステップを含む、項目７４に記載の方法。
（項目７６）
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量が、該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、酸素の存在下でアリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼで酸化して、酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子およびＨ２Ｏ２を生成し、該Ｈ２Ｏ２の存在および／または量を評価することによって評価される、項目７４に記載の方法。
（項目７７）
前記Ｈ２Ｏ２の存在および／または量が、該Ｈ２Ｏ２を、ペルオキシダーゼ、フェノール、アンチピリンおよび／またはアニリン類似体と接触させることによって評価される、項目７６に記載の方法。
（項目７８）
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量が、該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、ＮＡＤ＋またはＮＡＤＰ＋の存在下でアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼで酸化して、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨを生成し、該ＮＡＤ＋、ＮＡＤＰ＋、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの存在および／または量を評価することによって評価される、項目７４に記載の方法。
（項目７９）
前記アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子の存在および／または量が、
ａ）該アリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、酸素の存在下でアリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼで酸化して、酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子およびＨ２Ｏ２を生成することと、
ｂ）該酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子を、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨの存在下でアリールアルコールデヒドロゲナーゼまたはアルコールデヒドロゲナーゼで還元して、該還元されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子が、酸素の存在下で該アリールアルコールオキシダーゼまたは脂肪族アルコールオキシダーゼによって酸化されて、追加の酸化されたアリールアルコール分子または不飽和脂肪族アルコール分子およびＨ２Ｏ２を生成する反応サイクルを形成することと、ｃ）該Ｈ２Ｏ２の存在および／または量を評価することと
によって評価される、項目７４に記載の方法。
（項目８０）
前記Ｈ２Ｏ２の存在および／または量が、該Ｈ２Ｏ２を、ペルオキシダーゼ、フェノール、アンチピリンおよび／またはアニリン類似体と接触させることによって評価される、項目７９に記載の方法。
（項目８１）
標的のアッセイ、単離および／または生成の一部として実施される、項目５４から８０のいずれかに記載の方法。
（項目８２）
前記標的が、無機分子、有機分子および／またはその複合体である、項目８１に記載の方法。
（項目８３）
前記有機分子が、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、ビタミン、単糖、オリゴ糖、炭水化物、脂質およびその複合体からなる群から選択される、項目８２に記載の方法。
（項目８４）
免疫アッセイ、タンパク質配列決定、核酸増幅、ハイブリダイゼーションまたは配列決定の一部として実施される、項目８２に記載の方法。
（項目８５）
ＲＮＡまたはＤＮＡの配列決定をモニタするために使用される、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記加水分解酵素が、アルカリホスファターゼである、項目８５に記載の方法。