【誤訳訂正書】
【提出日】平成25年12月24日(2013.12.24)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
この目的は、冒頭にある名称のタイプの方法によって達成される。この方法では、ステップｄ）を実行した後に、少なくとも１つのフレームを評価すること又は一群のフレームを評価することと、ステップａ〜ｄの少なくとも１つの操作変数を、ステップａ〜ｄの後続の繰り返しのために変更することとによって、いくつかのフレームの取得の調整が行われる。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１５】
本発明によれば、フレームの取得は、このとき、フレーム又は一群のフレームを評価することと、フレーム取得に関連するある操作変数の変化を該評価から導出することと、対応する操作変数をそれに応じて変更することとによって、閉ループ制御された方法で実行される。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
最適な測定パラメーターの値は、フレームから導出され、後続のフレーム取得中に操作変数を訂正する際の対応する変更により、像取得速度又は他の基準（たとえば上述した装置保護）について調整される。したがって、新しいフレーム取得サイクルは、以前のフレーム分析に基づいて変更されてより最適な（たとえば、より高速な）取得をもたらす設定を用いて実行される。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
制御される補正操作変数は、以下のパラメーター、すなわち、フィルタリング、偏光フィルタリング、増幅、検出器温度、積分持続時間、検出場の選択、ルミネセンス放射の検出中の焦点の位置及びサイズ、出力、パルス形状、パルス周波数、波長、放射持続時間、放射場の選択、ＴＩＲＦ照明の侵入深さ、スイッチング信号の導入中又は活性化された分子の励起中の焦点の位置及びサイズ、のうちの少なくとも１つを含むことができる。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
次の操作変数、すなわち、ラベル分子のブリーチングレート、ラベル分子の励起スペクトル及び放出スペクトル、ラベル分子のルミネセンス状態の寿命、ラベル分子の活性化しきい値、ラベル分子のフラッシュ頻度(flash frequency)、個々のラベル分子が平均して可視的である期間、光学分解能の範囲内を同時に占めるルミネセントラベル分子の数、１ルミネセントラベル分子当たりの収集された光子の数、１フレーム当たりの活性化されたラベル分子の数、１フレーム当たりのラベル分子の平均ロケーション特定精度、のうちの少なくとも１つを記録し、像評価において評価することができる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３８】
閉ループ制御の枠内のさらなる最適化手法は、分子がどれくらいの間蛍光するのかをチェックする。理想的には、活性化され励起されたラベル分子は、ただ１つのみのフレームに寄与する。その理由は、可能な限り多くのラベル分子が分離している確率がその時最大であるからである。２フレーム以上にわたってルミネセンス放射に励起することができる分子は、次のステップに現れるラベル分子、すなわち新しく活性化されたラベル分子と組み合わされ、分離不能なルミネセント領域を形成する可能性がある。これは望ましくない。したがって、説明する変形形態は、ただ１つのフレームにわたってのみルミネセンス放射を放出する個々の分子の数を最適化する。ブリーチングによって（すなわち、非常に強い励起であるので、ラベル分子が永久的又は少なくとも一時的にルミネセンスに再び励起することができない励起によって）、ラベル分子を不活性化している間、或るフレームの間、ルミネセンス放射を放出するラベル分子の最適化を、励起強度を増加させることによって達成することができる。この変形形態は、操作変数の補正をラベル分子の活性化に自動的に関与させる必要はないが、操作変数の補正が励起にも確かに影響を与えることができることを示す一例である。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６７】
図６は方法を示している。この方法において、図３ですでに表されたステップであってこの図を用いて説明されるものには同じ参照番号が提供されており、したがって、説明を繰り返す必要を回避している。図６は、開始ステップＳ０及び終了ステップＳ９と、像取得が完了したか否かに関する照会Ｓ７（本方法の図３でも暗黙的に設けられていたもの）に加えて、フレーム評価及び操作変数変更を表すステップＳ８も示している。このステップＳ８において、以前に生成されたフレームが評価され、この評価の結果、スイッチング信号の導入（ステップＳ１）中の、蛍光励起（ステップＳ２）中の、及び／又は、蛍光検出（ステップＳ３）中の、動作パラメーターの変更が行われる。ステップＳ８は、各フレームの生成ごとに実行される必要はない。要求される制御速度及び正当な制御努力に応じて、ステップＳ８は、パス２回ごとに１回のみ、パス３回ごとに１回のみ、等行うこともできる。この場合、ステップＳ８が最後に実行されてから生成された単一のフレーム又はフレーム群全体を評価に用いることができる。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８５】
フレーム取得を調整するのに用いられる操作変数は、次のものとすることができる。
１．検出側：
ａ．周波数帯域／フィルター；
ｂ．増幅率（たとえばプリアンプ利得、ＥＭＣＣＤ利得）；
ｃ．検出器の温度；
ｄ．検出の積分時間；
ｅ．検出の検出モード（たとえば光子カウント、ベースラインクランプ）；
ｆ．特定のＲＯＩのみの読み出し；
ｇ．検出された放射の偏光；
ｈ．焦点。
２．励起側：
ａ．放射励起及び／又は活性化励起；
ｉ．パルス形状又はＣＷ；
ｉｉ．出力及びパルス周波数；
ｉｉｉ．波長；
ｂ．放射持続時間；
ｃ．局所的に特定の（ピクセルごとの）励起、又は特定のＲＯＩの励起、又はエリア全体にわたる励起；
ｄ．照明場のサイズ；
ｅ．ＴＩＲＦ照明の場合の侵入深さ；
ｆ．焦点位置。
３．サンプル側：
サンプル内の観測領域の位置。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性化状態でのみ特定のルミネセンス放射を放出するように励起することができるように、スイッチング信号によって活性化することができるラベル分子を用いてラベル付けされるサンプルの、ルミネセンス顕微鏡法のための方法であって、
前記方法は、次の各ステップ、すなわち、
ａ）前記サンプルに存在する前記ラベル分子のサブセットのみが活性化されるように前記スイッチング信号を前記サンプル上に導入するステップであって、
前記サンプル内にエリアの各部分が存在し、
前記各部分において、活性化されたラベル分子が、最も近い近傍の活性化されたラベル分子まである距離を有し、前記ある距離は、少なくとも所定の光学分解能に起因する長さ以上である、
前記スイッチング信号を前記サンプル上に導入するステップと、
ｂ）前記活性化された分子をルミネセンス放射を放出するように励起するステップと、
ｃ）前記ルミネセンス放射を前記所定の光学分解能で検出するステップと、
ｄ）ステップｃ）において記録された前記ルミネセンス放射からフレームを生成するステップであって、
ルミネセンス放射を放出する前記ラベル分子の幾何学的ロケーションが、前記所定の光学分解能を超えて増進された空間分解能で特定される、
フレームを生成するステップと、
を有し、
前記ステップａ〜ｄのうち少なくとも１つは、最適化されるべき少なくとも１つの操作変数を持ち、
前記ステップａ〜ｄは、複数回繰り返され、
得られた複数の前記フレームが組み合わされて全体像にされる
方法において、
前記各フレームの取得の制御は、
ステップｄ）の後に、前記フレームのうち少なくとも１つを評価すること、又は、一群の前記フレームを評価することと、
ステップａ〜ｄの前記少なくとも１つの操作変数を、ステップａ〜ｄの後続の繰り返しのために変更することと
によって行われ、
前記制御中に、品質関数が評価されるとともに、前記品質関数の値が最大にされ、
前記品質関数は、直接的又は間接的に、前記ラベル分子の部分の尺度になるように選ばれ、
前記部分は、前記サンプル内における、活性化されたラベル分子であって、その最も近い近傍の活性化されたラベル分子までの距離が、少なくとも前記所定の光学分解能で解像することができる距離となる、そのようなラベル分子の部分である、方法。
【請求項２】
前記品質関数は、分離されたラベル分子の密度の測定値であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
近傍のルミネセント領域から分離されたルミネセント領域が、前記評価されるフレームのそれぞれにおける前記品質関数の前記評価用に特定され、
前記分離されたルミネセント領域それぞれによって放出された前記ルミネセンス放射の量の尺度が、各分離されたルミネセント領域について特定され、
尺度がしきい値未満となる前記ルミネセント領域の部分が、前記品質関数の値として取得される
ことを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記放出されるルミネセンス放射の量の前記尺度は、前記ルミネセンス放射の強度の積分であるか、又は、前記ルミネセンス放射の強度の最大値であることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記品質関数を評価するために、近傍のルミネセント領域から分離されたルミネセント領域が、前記評価されるフレームのそれぞれにおいて特定され、
これらの分離されたルミネセント領域のそれぞれについて、最も近い近傍のルミネセント領域までの最小距離が求められ、
前記最小距離が、解像可能最小距離よりも、又は、当該解像可能最小距離の事前に設定された倍数よりも、大きくなるルミネセント領域の部分が、前記品質関数の値として選ばれ、
前記解像可能最小距離は、前記所定の光学分解能に基づいて規定されることを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記最小距離を求めるために、各前記ルミネセント領域の幾何学的中心の周りに１つの円が配置され、
前記円は、前記最も近い近傍のルミネセント領域まで延びる
ことを特徴とし、かつ、
前記円の半径が、前記距離よりも、又は、前記距離の事前に設定された倍数よりも、大きくなる前記領域の部分が、前記品質関数の値として取得される
ことを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
一群の連続したフレームが評価され、
近傍のルミネセント領域から分離されたルミネセント領域が、前記評価されるフレームのそれぞれにおいて特定され、
前記一群のうち、ただ１つのみのフレームでルミネセンスする前記ルミネセント領域の割合が、前記品質関数の値として取得されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記操作変数は、以下のパラメーター、すなわち、
‐フィルタリング、偏光フィルタリング、増幅、検出器温度、積分持続時間、検出場の選択、前記ルミネセンス放射の前記検出中の焦点の位置及びサイズと、
‐出力、パルス形状、パルス周波数、波長、放射持続時間、放射場の選択、ＴＩＲＦ照明の侵入深さ、前記スイッチング信号の導入中又は前記活性化された分子の前記励起中の焦点の位置及びサイズと、
のうちの少なくとも１つを含むことを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
次の操作変数、すなわち、
前記ラベル分子のブリーチングレート、前記ラベル分子の励起スペクトル及び放出スペクトル、前記ラベル分子のルミネセンス状態の寿命、前記ラベル分子の活性化しきい値、前記ラベル分子の点滅レート、個々のラベル分子が平均して可視的である期間、前記光学分解能の範囲内を同時に占めるルミネセントラベル分子の数、１ルミネセントラベル分子当たりの収集された光子の数、１フレーム当たりの活性化されたラベル分子の数、１フレーム当たりの前記ラベル分子の平均ロケーション精度、
のうちの少なくとも１つが記録され、前記フレームのうち少なくとも１つを前記評価することにおいて、又は、一群の前記フレームを前記評価することにおいて、評価されることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
通常の光学分解能を有するさらなる蛍光像が複数の励起波長において記録され、
前記各フレームは、前記評価用にこれらの蛍光像と相関される
ことを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
通常の光学分解能を有するさらなる蛍光像がコントラスト方法を用いて記録され、
前記各フレームは、前記評価用にこれらの蛍光像と相関される
ことを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記さらなる蛍光像は、前記フレームの取得中に取得されることを特徴とする、請求項１０または１１に記載の方法。