【手続補正書】
【提出日】平成26年11月4日(2014.11.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４８５】
処理されたＬＣ−３タンパク質とオートファゴソームとの会合は、オートファジーにおける特徴的なステップを表す。クロロキン処理は、自己貪食性流出をこの段階で停止させ、オートファゴソーム上にＬＣ−３タンパク質の蓄積をもたらす（点状の細胞内分布をつくる）。図９２Ａ〜Ｂは、２つの代表的なＨｅＬａ細胞試料における、ＰＢＩ−３９３９基質を用いての、ＯｇＬｕｃ  Ｌ２７Ｖ−ＬＣ３融合タンパク質（配列番号５９２および５９３）の、クロロキンにより誘導されたオートファゴソームタンパク質移行の生物発光画像法を示している。
表４７．但し書きリスト
【表４７】
2014500011.tif 000001
本発明の態様として、例えば以下のものがある。
〔１〕配列番号１に対して少なくとも６０％のアミノ酸配列同一性を有し、配列番号１中のアミノ酸に対応する位置に少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが非オキヒオドシエビ属（Oplophorus）ルシフェラーゼと比較して増強された発光を有する、単離ポリヌクレオチド。
〔２〕非オキヒオドシエビ属（Oplophorus）ルシフェラーゼがウミシイタケ属（Renilla）ルシフェラーゼである、前記〔１〕に記載のポリヌクレオチド。
〔３〕非オキヒオドシエビ属（Oplophorus）ルシフェラーゼがホタルルシフェラーゼである、前記〔１〕に記載のポリヌクレオチド。
〔４〕配列番号１に対して少なくとも６０％のアミノ酸配列同一性を有し、配列番号１中のアミノ酸に対応する位置に少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドは配列番号３のＯｇＬｕｃポリペプチドと比較して増強された発光を有し、ただし、前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記ポリペプチドが表４７に列挙されるもののうちの１つではない、ポリヌクレオチド。
〔５〕配列番号１に対して少なくとも６０％のアミノ酸配列同一性を有し、配列番号１中のアミノ酸に対応する位置に少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドは配列番号３１のポリペプチドと比較して増強された発光を有し、ただし前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記ポリペプチドが配列番号３または１５ではない、ポリヌクレオチド。
〔６〕配列番号１に対して少なくとも６０％のアミノ酸配列同一性を有し、配列番号１中のアミノ酸に対応する位置に少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが配列番号２９のポリペプチドと比較して増強された発光を有し、ただし、前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記ポリペプチドが配列番号３または１５ではない、ポリヌクレオチド。
〔７〕前記ポリペプチドが配列番号１に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する、前記〔１〕〜〔６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔８〕前記ポリペプチドが配列番号１に対して少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する、前記〔１〕〜〔７〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔９〕ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが配列番号３のポリペプチドと比較して増強されたタンパク質安定性または増強された生体適合性のうちの少なくとも１つを有する、前記〔１〕〜〔８〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔１０〕ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドがウミシイタケ属（Renilla）ルシフェラーゼと比較して増強された酵素安定性または増強された生体適合性のうちの少なくとも１つを有する、前記〔１〕〜〔９〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔１１〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドがホタルルシフェラーゼと比較して増強された酵素安定性または増強された生体適合性のうちの少なくとも１つを有する、前記〔１〕〜〔１０〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔１２〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドがセレンテラジンの存在下で配列番号３のポリペプチドと比較して増強された発光を有する、前記〔１〕〜〔１１〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔１３〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、式（Ｉａ）または（Ｉｂ）：
2014500011.tif 000002
または
2014500011.tif 000003
の化合物の存在下で配列番号３のポリペプチドと比較して増強された発光を有する前記〔１〕〜〔１２〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドであって、
式中、Ｒ2は、
2014500011.tif 000004
またはＣ2-5直鎖アルキルからなる群から選択され；
Ｒ6は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＯＣ（Ｏ）Ｒまたは−ＯＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒからなる群から選択され；
Ｒ8は、
2014500011.tif 000005
Ｈまたは低級シクロアルキルからなる群から選択され；
式中、Ｒ3およびＲ4は、共にＨまたは共にＣ1-2アルキルであり；
Ｗは、−ＮＨ2、ハロ、−ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ2Ｒであり；
Ｘは-Ｓ−、-Ｏ−または-ＮＲ22−であり；
Ｙは、-Ｈ、−ＯＨ、または-ＯＲ11であり；
Ｚは、-ＣＨ−または-Ｎ−であり；
各Ｒ11は独立して-Ｃ（Ｏ）Ｒ”または-ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒ”であり；
Ｒ22は、Ｈ、ＣＨ3またはＣＨ2ＣＨ3であり；
各Ｒは独立してＣ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
Ｒ”は、Ｃ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
破線の結合は、飽和でも不飽和でもよい任意の環の存在を表し；
ただし、
Ｒ2が、
2014500011.tif 000006
または
2014500011.tif 000007
のとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000008
ではなく；
Ｒ2が、
2014500011.tif 000009
であるとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000010
または低級シクロアルキルであり；
Ｒ6がＮＨ2であるとき、Ｒ2は、
2014500011.tif 000011
またはＣ2-5アルキルであり；
またはＲ8は、
2014500011.tif 000012
ではない、
ポリヌクレオチド。
〔１４〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、異なるセレンテラジンと比較した場合のあるセレンテラジンの存在下で、配列番号３のポリペプチドと比較して相対的基質特異性における変化を有する、前記〔１〕〜〔１３〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔１５〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、天然セレンテラジンまたは既知のセレンテラジンと比較して式（Ｉａ）または（Ｉｂ）：
2014500011.tif 000013
または
2014500011.tif 000014
の化合物の存在下で、配列番号３のポリペプチドと比較して相対的基質特異性における変化を有する、前記〔１〕〜〔１４〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドであって、
式中、Ｒ2は、
2014500011.tif 000015
またはＣ2-5直鎖アルキルからなる群から選択され；
Ｒ6は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＯＣ（Ｏ）Ｒまたは−ＯＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒからなる群から選択され；
Ｒ8は、
2014500011.tif 000016
Ｈまたは低級シクロアルキルからなる群から選択され；
式中、Ｒ3およびＲ4は、共にＨまたは共にＣ1-2アルキルであり；
Ｗは、−ＮＨ2、ハロ、−ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ2Ｒであり；
Ｘは−Ｓ−、−Ｏ−または−ＮＲ22−であり；
Ｙは、−Ｈ、−ＯＨ、または−ＯＲ11であり；
Ｚは、−ＣＨ−または−Ｎ−であり；
各Ｒ11は独立して−Ｃ（Ｏ）Ｒ”または−ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒ”であり；
Ｒ22は、Ｈ、ＣＨ3またはＣＨ2ＣＨ3であり；
各Ｒは独立してＣ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
Ｒ”は、Ｃ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
破線の結合は、飽和でも不飽和でもよい任意の環の存在を表し；
ただし、
Ｒ2が、
2014500011.tif 000017
または
2014500011.tif 000018
のとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000019
ではなく；
Ｒ2が、
2014500011.tif 000020
であるとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000021
または低級シクロアルキルであり；
Ｒ6がＮＨ2であるとき、Ｒ2は、
2014500011.tif 000022
またはＣ2-5アルキルであり；
またはＲ8は、
2014500011.tif 000023
ではない、
ポリヌクレオチド。
〔１６〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、配列番号３のポリペプチドと比較して増強された生体適合性を有する、前記〔１〕〜〔１５〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔１７〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、セレンテラジンの存在下でウミシイタケ属（Renilla）ルシフェラーゼと比較して増強された発光を有する、前記〔１〕〜〔１６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔１８〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、式（Ｉａ）または（Ｉｂ）：
2014500011.tif 000024
または
2014500011.tif 000025
の化合物の存在下で、ウミシイタケ属（Renilla）ルシフェラーゼと比較して増強された発光を有する、前記〔１〕〜〔１７〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドであって、式中、Ｒ2は、
2014500011.tif 000026
またはＣ2-5直鎖アルキルからなる群から選択され；
Ｒ6は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＯＣ（Ｏ）Ｒまたは−ＯＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒからなる群から選択され；
Ｒ8は、
2014500011.tif 000027
Ｈまたは低級シクロアルキルからなる群から選択され；
式中、Ｒ3およびＲ4は、共にＨまたは共にＣ1-2アルキルであり；
Ｗは、−ＮＨ2、ハロ、−ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ2Ｒであり；
Ｘは-Ｓ−、-Ｏ−または-ＮＲ22−であり；
Ｙは、-Ｈ、−ＯＨ、または-ＯＲ11であり；
Ｚは、-ＣＨ−または-Ｎ−であり；
各Ｒ11は独立して-Ｃ（Ｏ）Ｒ”または-ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒ”であり；
Ｒ22は、Ｈ、ＣＨ3またはＣＨ2ＣＨ3であり；
各Ｒは独立してＣ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
Ｒ”は、Ｃ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
破線の結合は、飽和でも不飽和でもよい任意の環の存在を表し；
ただし、
Ｒ2が、
2014500011.tif 000028
または
2014500011.tif 000029
のとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000030
ではなく；
Ｒ2が、
2014500011.tif 000031
であるとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000032
または低級シクロアルキルであり；
Ｒ6がＮＨ2であるとき、Ｒ2は、
2014500011.tif 000033
またはＣ2-5アルキルであり；
またはＲ8は、
2014500011.tif 000034
ではない、
ポリヌクレオチド。
〔１９〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、異なるセレンテラジンと比較してあるセレンテラジンの存在下で、ウミシイタケ属（Renilla）ルシフェラーゼと比較して相対的基質特異性における変化を有する、前記〔１〕〜〔１８〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔２０〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、天然セレンテラジンまたは既知のセレンテラジンと比較して式（Ｉａ）または（Ｉｂ）：
2014500011.tif 000035
または
2014500011.tif 000036
の化合物の存在下で、ウミシイタケ属（Renilla）ルシフェラーゼと比較して相対的基質特異性における変化を有する、前記〔１〕〜〔１９〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドであって、
式中、Ｒ2は、
2014500011.tif 000037
またはＣ2-5直鎖アルキルからなる群から選択され；
Ｒ6は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＯＣ（Ｏ）Ｒまたは−ＯＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒからなる群から選択され；
Ｒ8は、
2014500011.tif 000038
Ｈまたは低級シクロアルキルからなる群から選択され；
式中、Ｒ3およびＲ4は、共にＨまたは共にＣ1-2アルキルであり；
Ｗは、−ＮＨ2、ハロ、−ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ2Ｒであり；
Ｘは-Ｓ−、-Ｏ−または-ＮＲ22−であり；
Ｙは、-Ｈ、−ＯＨ、または-ＯＲ11であり；
Ｚは、-ＣＨ−または-Ｎ−であり；
各Ｒ11は独立して-Ｃ（Ｏ）Ｒ”または-ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒ”であり；
Ｒ22は、Ｈ、ＣＨ3またはＣＨ2ＣＨ3であり；
各Ｒは独立してＣ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
Ｒ”は、Ｃ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
破線の結合は、飽和でも不飽和でもよい任意の環の存在を表し；
ただし、
Ｒ2が、
2014500011.tif 000039
または
2014500011.tif 000040
のとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000041
ではなく；
Ｒ2が、
2014500011.tif 000042
であるとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000043
または低級シクロアルキルであり；
Ｒ6がＮＨ2であるとき、Ｒ2は、
2014500011.tif 000044
またはＣ2-5アルキルであり；
またはＲ8は、
2014500011.tif 000045
ではない、
ポリヌクレオチド。
〔２１〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドがウミシイタケ属（Renilla）ルシフェラーゼと比較して増強された生体適合性を有する、前記〔１〕〜〔２０〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔２２〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、ルシフェリン存在下のホタルルシフェラーゼと比較して、セレンテラジンの存在下で増強された発光を有する、前記〔１〕〜〔２１〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔２３〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、ルシフェリン存在下のホタルルシフェラーゼと比較して、式（Ｉａ）または（Ｉｂ）：
2014500011.tif 000046
または
2014500011.tif 000047
の化合物の存在下で増強された発光を有する、前記〔１〕〜〔２２〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドであって、
式中、Ｒ2は、
2014500011.tif 000048
またはＣ2-5直鎖アルキルからなる群から選択され；
Ｒ6は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＯＣ（Ｏ）Ｒまたは−ＯＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒからなる群から選択され；
Ｒ8は、
2014500011.tif 000049
Ｈまたは低級シクロアルキルからなる群から選択され；
式中、Ｒ3およびＲ4は、共にＨまたは共にＣ1-2アルキルであり；
Ｗは、−ＮＨ2、ハロ、−ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ2Ｒであり；
Ｘは-Ｓ−、-Ｏ−または-ＮＲ22−であり；
Ｙは、-Ｈ、−ＯＨ、または-ＯＲ11であり；
Ｚは、-ＣＨ−または-Ｎ−であり；
各Ｒ11は独立して-Ｃ（Ｏ）Ｒ”または-ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒ”であり；
Ｒ22は、Ｈ、ＣＨ3またはＣＨ2ＣＨ3であり；
各Ｒは独立してＣ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
Ｒ”は、Ｃ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
破線の結合は、飽和でも不飽和でもよい任意の環の存在を表し；
ただし、
Ｒ2が、
2014500011.tif 000050
または
2014500011.tif 000051
のとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000052
ではなく；
Ｒ2が、
2014500011.tif 000053
であるとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000054
または低級シクロアルキルであり；
Ｒ6がＮＨ2であるとき、Ｒ2は、
2014500011.tif 000055
またはＣ2-5アルキルであり；
またはＲ8は、
2014500011.tif 000056
ではない、
ポリヌクレオチド。
〔２４〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドがホタルルシフェラーゼと比較して増強された生体適合性を有する、前記〔１〕〜〔２３〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔２５〕ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、オプロポルス・グラキリロストゥリス（Oplophorus gracilirostris）、オプロポルス・グリマルディイ（Oplophorus grimaldii）、オプロポルス・スピニカウダ（Oplophorus spinicauda）、オプロポルス・フォリアケウス（Oplophorus foliaceus）、オプロポルス・ノヴァエゼエランディアエ（Oplophorus novaezeelandiae）、オプロポルス・テュプス（Oplophorus typus）、またはオプロポルス・スピノスス（Oplophorus spinosus）由来である、前記〔１〕〜〔２４〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔２６〕少なくとも１つのアミノ酸置換が、配列番号１の１位、４位、６位、１０位、１１位、１４位、１５位、１６位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２４位、２５位、２７位、２８位、３１位、３２位、３３位、３４位、３６位、３８位、３９位、４０位、４２位、４３位、４４位、４５位、４６位、４７位、４８位、４９位、５０位、５１位、５４位、５５位、５６位、５８位、５９位、６０位、６６位、６７位、６８位、６９位、７０位、７１位、７２位、７４位、７５位、７６位、７７位、８６位、８７位、８９位、９０位、９２位、９３位、９４位、９５位、９６位、９７位、９８位、９９位、１００位、１０２位、１０６位、１０９位、１１０位、１１１位、１１２位、１１３位、１１７位、１１９位、１２４位、１２５位、１２６位、１２７位、１２８位、１２９位、１３０位、１３５位、１３６位、１３８位、１３９位、１４２位、１４５位、１４６位、１４７位、１４８位、１４９位、１５０位、１５２位、１５４位、１５５位、１５８位、１５９位、１６３位、１６４位、１６６位、１６８位もしくは１６９位に対応する位置またはそれらの組み合わせに存在する、前記〔１〕〜〔２５〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔２７〕前記コードされたＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、配列番号１に対応するＦ１Ｉ、Ｅ４Ｋ、Ｆ６Ｙ、Ｗ１０Ｙ、Ｒ１１Ｑ、Ａ１４Ｖ／Ｓ、Ｇ１５Ｒ、Ｙ１６Ｅ、Ｑ１８Ｄ／Ｆ／Ｇ／Ｈ／Ｉ／Ｋ／Ｌ／Ｍ／Ｎ／Ｐ／Ｒ／Ｓ／Ｖ／Ｗ／Ｙ、Ｄ１９Ｎ、Ｑ２０Ｐ／Ｒ、Ｖ２１Ｌ／Ｍ、Ｌ２２Ｉ／Ｆ、Ｅ２３Ｋ、Ｑ２４Ａ、Ｇ２５Ｌ、Ｌ２７Ｍ／Ｖ／Ａ／Ｄ／Ｇ／Ｉ、Ｓ２８Ｙ、Ｆ３１Ｉ、Ｑ３２Ｈ／Ｌ／Ｐ、Ａ３３Ｎ／Ｍ、Ｌ３４Ｍ、Ｖ３６Ｅ／Ｍ、Ｖ３８Ｆ／Ｉ、Ｔ３９Ｉ、Ｐ４０Ｔ／Ｉ／Ｌ／Ｑ、Ｑ４２Ｈ、Ｋ４３Ｎ／Ｒ、Ｉ４４Ｆ、Ｖ４５Ｅ、Ｌ４６Ｑ、Ｓ４７Ｐ、Ｇ４８Ｒ、Ｅ４９Ｄ／Ｇ／Ｋ、Ｎ５０Ｋ／Ｓ、Ｇ５１Ｅ／Ｒ／Ｖ、Ａ５４Ｉ／Ｓ、Ｄ５５Ｅ／Ｇ、Ｉ５６Ｖ、Ｖ５８Ｉ／Ｌ、Ｉ５９Ｔ、Ｉ６０Ｖ、Ｓ６６Ｔ／Ｎ、Ｇ６７Ｄ／Ｓ、Ｆ６８Ｌ／Ｓ／Ｗ／Ｙ／Ｄ、Ｑ６９Ｈ、Ｍ７０Ｖ、Ｇ７１Ｄ、Ｌ７２Ａ／Ｃ／Ｆ／Ｇ／Ｈ／Ｉ／Ｍ／Ｎ／Ｐ／Ｑ／Ｒ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ｗ／Ｙ、Ｅ７４Ｉ／Ｋ、Ｍ７５Ｆ／Ｋ、Ｉ７６Ｆ／Ｎ／Ｖ、Ｆ７７Ａ／Ｃ／Ｄ／Ｇ／Ｍ／Ｎ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ｗ／Ｙ、Ｈ８６Ｌ／Ｒ、Ｈ８７Ｎ／Ｔ、Ｋ８９Ｅ、Ｉ９０Ｄ／Ｋ／Ｐ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｙ、Ｌ９２Ａ／Ｇ／Ｈ／Ｍ／Ｑ／Ｒ／Ｓ／Ｙ、Ｈ９３Ｒ、Ｙ９４Ｆ、Ｇ９５Ｄ／Ｓ、Ｔ９６Ａ、Ｌ９７Ｅ、Ｖ９８Ｆ、Ｉ９９Ｔ／Ｖ、Ｄ１００Ｉ、Ｖ１０２Ｅ／Ｍ／Ｔ、Ｍ１０６Ｉ／Ｋ、Ｙ１０９Ｆ、Ｆ１１０Ｉ、Ｇ１１１Ｎ、Ｒ１１２Ｃ、Ｐ１１３Ｈ／Ｔ／Ｋ、Ｉ１１７Ｆ、Ｖ１１９Ｍ、Ｋ１２４Ｍ、Ｉ１２５Ｌ、Ｔ１２６Ｒ、Ｖ１２７Ａ、Ｔ１２８Ａ／Ｓ、Ｇ１２９Ｑ、Ｔ１３０Ｋ、Ｎ１３５Ｄ／Ｙ、Ｌ１３６Ｍ、Ｉ１３８Ｓ、Ｄ１３９Ｇ、Ｌ１４２Ｖ／Ｅ／Ｋ／Ｗ、Ｐ１４５Ｌ／Ｑ、Ｄ１４６Ｇ、Ｇ１４７Ｎ、Ｓ１４８Ｔ、Ｌ１４９Ｉ／Ｍ、Ｌ１５０Ｖ、Ｒ１５２Ｈ／Ｓ／Ｅ／Ｔ、Ｔ１５４Ｓ、Ｉ１５５Ｔ、Ｖ１５８Ｉ、Ｔ１５９Ｉ／Ｓ、Ｌ１６３Ｉ、Ｃ１６４Ｓ、Ｎ１６６Ｉ／Ｆ／Ｅ、Ｌ１６８Ｆ、もしくはＡ１６９Ｖのうちの少なくとも１つに対応する置換またはそれらの組み合わせをさらに含む、前記〔１〕〜〔２６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔２８〕前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記ポリペプチドが、以下のアミノ酸のうちの少なくとも１つまたはそれらの組み合わせを含む、前記〔１〕〜〔２７〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド：配列番号１に対応する、１位のイソロイシン、４位のリジン、６位のチロシン、１０位のチロシン、１１位のグルタミン、１４位のバリンもしくはセリン、１５位のアルギニン、１６位のグルタミン酸、１８位のアスパラギン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、アルギニン、セリン、バリン、トリプトファン、もしくはチロシン、１９位のアスパラギン、２０位のアルギニンもしくはプロリン、２１位のロイシンもしくはメチオニン、２２位のイソロイシンもしくはフェニルアラニン、２３位のリジン、２４位のアラニン、２５位のロイシン、２７位のバリン、メチオニン、アラニン、アスパラギン酸、グリシンもしくはイソロイシン、２８位のチロシン、３１位のイソロイシン、３２位のプロリン、ヒスチジン、もしくはロイシン、３３位のアスパラギンもしくはメチオニン、３４位のメチオニン、３６位のメチオニンもしくはグルタミン酸、３８位のイソロイシンもしくはフェニルアラニン、３９位のイソロイシン、４０位のトレオニン、イソロイシン、ロイシンもしくはグルタミン、４２位のヒスチジン、４３位のアスパラギンもしくはアルギニン、４４位のフェニルアラニン、４５位のグルタミン酸、４６位のグルタミン、４７位のプロリン、４８位のアルギニン、４９位のアスパラギン酸、グリシン、もしくはリジン、５０位のリジンもしくはセリン、５１位のグルタミン酸、アルギニン、もしくはバリン、５４位のセリンもしくはイソロイシン、５５位のグリシンもしくはグルタミン酸、５６位のバリン、５８位のイソロイシンもしくはロイシン、５９位のトレオニン、６０位のバリン、６６位のトレオニンもしくはアスパラギン、６７位のセリンもしくはアスパラギン酸、６８位のロイシン、アスパラギン酸、セリン、チロシンもしくはトリプトファン、６９位のバリン、７０位のバリン、７１位のアスパラギン酸、７２位のグルタミン、アラニン、システイン、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、もしくはチロシン、７４位のリジンもしくはイソロイシン、７５位のリジンもしくはフェニルアラニン、７６位のアスパラギン、フェニルアラニン、もしくはバリン、７７位のアラニン、システイン、アスパラギン酸、グリシン、アスパラギン、メチオニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、もしくはチロシン、８６位のアルギニンもしくはロイシン、８７位のアスパラギンもしくはトレオニン、８９位のグルタミン酸、９０位のアスパラギン酸、リジン、プロリン、グルタミン、アルギニン、トレオニン、バリン、もしくはチロシン、９２位のアラニン、グリシン、ヒスチジン、メチオニン、グルタミン、アルギニン、セリン、もしくはチロシン、９３位のアルギニン、９４位のフェニルアラニン、９５位のセリンもしくはアスパラギン酸、９６位のアラニン、９７位のグルタミン酸、９８位のフェニルアラニン、９９位のトレオニンもしくはバリン、１００位のイソロイシン、１０２位のメチオニン、グルタミン酸、もしくはトレオニン、１０６位のイソロイシンもしくはリジン、１０９位のフェニルアラニン、１１０位のイソロイシン、１１１位のアスパラギン、１１２位のシステイン、１１３位のヒスチジン、トレオニン、もしくはリジン、１１７位のフェニルアラニン、１１９位のメチオニン、１２４位のメチオニン、１２５位のロイシン、１２６位のアルギニン、１２７位のアラニン、１２８位のアラニンもしくはセリン、１２９位のグルタミン、１３０位のリジン、１３５位のアスパラギン酸もしくはチロシン、１３６位のメチオニン、１３８位のセリン、１３９位のグリシン、１４２位のバリン、グルタミン酸、リジンもしくはトリプトファン、１４５位のロイシンもしくはグルタミン、１４６位のグリシン、１４７位のアスパラギン、１４８位のトレオニン、１４９位のイソロイシンもしくはメチオニン、１５０位のバリン、１５２位のヒスチジン、セリン、グルタミン酸もしくはトレオニン、１５４位のセリン、１５５位のトレオニン、１５８位のイソロイシン、１５９位のセリンもしくはイソロイシン、１６３位のイソロイシン、１６４位のセリン、１６８位のフェニルアラニン、もしくは１６９位のバリン。
〔２９〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、配列番号１に対応するアミノ酸置換Ａ４Ｅ、Ｑ１１Ｒ、Ａ３３Ｋ、Ｖ４４Ｉ、Ａ５４Ｆ、Ｐ１１５Ｅ、Ｑ１２４Ｋ、Ｙ１３８ＩおよびＮ１６６Ｒ、並びに配列番号１の１位、４位、６位、１１位、１４位、１５位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２７位、２８位、３１位、３２位、３３位、３４位、３６位、３８位、３９位、４０位、４２位、４３位、４４位、４５位、４６位、４７位、４８位、４９位、５０位、５１位、５４位、５５位、５６位、５８位、５９位、６０位、６６位、６７位、６８位、６９位、７０位、７１位、７２位、７４位、７５位、７６位、７７位、８６位、８９位、９０位、９２位、９３位、９４位、９５位、９６位、９８位、９９位、１０２位、１０６位、１０９位、１１０位、１１２位、１１３位、１１７位、１１９位、１２４位、１２６位、１２７位、１２８位、１３５位、１３６位、１３８位、１３９位、１４２位、１４５位、１４８位、１４９位、１５２位、１５４位、１５５位、１５８位、１５９位、１６３位、１６４位、１６８位、もしくは１６９位に対応する位置またはそれらの組み合わせに少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む、前記〔１〕〜〔２８〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔３０〕配列番号１に対応する４位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１１位のアミノ酸がアルギニンであり、３３位のアミノ酸がリジンであり、４４位のアミノ酸がイソロイシンであり、５４位のアミノ酸がフェニルアラニンであり、１１５位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１２４位のアミノ酸がリジンであり、１３８位のアミノ酸がイソロイシンであり、１６６位のアミノ酸がアルギニンであり、並びに配列番号１の１位、４位、６位、１１位、１４位、１５位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２３位、２７位、２８位、３１位、３２位、３３位、３４位、３６位、３８位、３９位、４０位、４２位、４３位、４４位、４５位、４６位、４７位、４８位、４９位、５０位、５１位、５４位、５５位、５６位、５８位、５９位、６０位、６６位、６７位、６８位、６９位、７０位、７１位、７２位、７４位、７５位、７６位、７７位、８６位、８９位、９０位、９２位、９３位、９４位、９５位、９６位、９８位、９９位、１０２位、１０６位、１０９位、１１０位、１１２位、１１３位、１１７位、１１９位、１２４位、１２６位、１２７位、１２８位、１３５位、１３６位、１３８位、１３９位、１４２位、１４５位、１４８位、１４９位、１５２位、１５４位、１５５位、１５８位、１５９位、１６３位、１６４位、１６８位、もしくは１６９位に対応しているある位置またはそれらの組み合わせにおいて少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む、前記〔１〕〜〔２９〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔３１〕少なくとも１つのアミノ酸置換が、配列番号１に対応するＦ１Ｉ、Ｅ４Ｋ、Ｆ６Ｙ、Ｒ１１Ｑ、Ａ１４Ｖ、Ｇ１５Ｒ、Ｑ１８Ｄ／Ｆ／Ｇ／Ｈ／Ｉ／Ｋ／Ｌ／Ｍ／Ｎ／Ｐ／Ｒ／Ｓ／Ｖ／Ｗ／Ｙ、Ｄ１９Ｎ、Ｑ２０Ｐ／Ｒ、Ｖ２１Ｌ／Ｍ、Ｌ２２Ｉ／Ｆ、Ｅ２３Ｋ、Ｌ２７Ｍ／Ｖ、Ｓ２８Ｙ、Ｆ３１Ｉ、Ｑ３２Ｈ／Ｌ／Ｐ、Ａ３３Ｎ／Ｍ、Ｌ３４Ｍ、Ｖ３６Ｅ／Ｍ、Ｖ３８Ｆ／Ｉ、Ｔ３９Ｉ、Ｐ４０Ｔ、Ｑ４２Ｈ、Ｋ４３Ｎ／Ｒ、Ｉ４４Ｆ、Ｖ４５Ｅ、Ｌ４６Ｑ、Ｓ４７Ｐ、Ｇ４８Ｒ、Ｅ４９Ｄ／Ｇ／Ｋ、Ｎ５０Ｋ／Ｓ、Ｇ５１Ｅ／Ｒ／Ｖ、Ａ５４Ｉ／Ｓ、Ｄ５５Ｅ／Ｇ、Ｉ５６Ｖ、Ｖ５８Ｉ／Ｌ、Ｉ５９Ｔ、Ｉ６０Ｖ、Ｓ６６Ｔ／Ｎ、Ｇ６７Ｄ／Ｓ、Ｆ６８Ｌ／Ｓ／Ｗ／Ｙ／Ｄ、Ｑ６９Ｈ、Ｍ７０Ｖ、Ｇ７１Ｄ、Ｌ７２Ａ／Ｃ／Ｆ／Ｇ／Ｈ／Ｉ／Ｍ／Ｎ／Ｐ／Ｑ／Ｒ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ｗ／Ｙ、Ｅ７４Ｉ／Ｋ、Ｍ７５Ｆ／Ｋ、Ｉ７６Ｆ／Ｎ／Ｖ、Ｆ７７Ａ／Ｃ／Ｄ／Ｇ／Ｍ／Ｎ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ｗ／Ｙ、Ｈ８６Ｌ／Ｒ、Ｋ８９Ｅ、Ｉ９０Ｄ／Ｋ／Ｐ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｙ、Ｌ９２Ａ／Ｇ／Ｈ／Ｍ／Ｑ／Ｒ／Ｓ／Ｙ、Ｈ９３Ｒ、Ｙ９４Ｆ、Ｇ９５Ｄ／Ｓ、Ｔ９６Ａ、Ｖ９８Ｆ、Ｉ９９Ｔ／Ｖ、Ｖ１０２Ｅ／Ｍ、Ｍ１０６Ｉ／Ｋ、Ｙ１０９Ｆ、Ｆ１１０Ｉ、Ｒ１１２Ｃ、Ｐ１１３Ｈ／Ｔ、Ｉ１１７Ｆ、Ｖ１１９Ｍ、Ｋ１２４Ｍ、Ｔ１２６Ｒ、Ｖ１２７Ａ、Ｔ１２８Ａ／Ｓ、Ｎ１３５Ｄ／Ｙ、Ｌ１３６Ｍ、Ｉ１３８Ｓ、Ｄ１３９Ｇ、Ｌ１４２Ｖ、Ｐ１４５Ｌ／Ｑ、Ｓ１４８Ｔ、Ｌ１４９Ｉ、Ｒ１５２Ｈ／Ｓ、Ｔ１５４Ｓ、Ｉ１５５Ｔ、Ｖ１５８Ｉ、Ｔ１５９Ｉ／Ｓ、Ｌ１６３Ｉ、Ｃ１６４Ｓ、Ｌ１６８Ｆ、もしくはＡ１６９Ｖのうちの少なくとも１つまたはそれらの組み合わせに対応している、前記〔２９〕または〔３０〕に記載のポリヌクレオチド。
〔３２〕前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記ポリペプチドが、以下のアミノ酸のうちの少なくとも１つまたはそれらの組み合わせを含む、前記〔２９〕または〔３０〕に記載のポリヌクレオチド：配列番号１に対応する１位のイソロイシン、４位のリジン、６位のチロシン、１１位のグルタミン、１４位のバリン、１５位のアルギニン、１８位のアスパラギン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、アルギニン、セリン、バリン、トリプトファン、もしくはチロシン、１９位のアスパラギン、２０位のアルギニンもしくはプロリン、２１位のロイシンもしくはメチオニン、２２位のイソロイシンもしくはフェニルアラニン、２３位のリジン、２７位のバリンもしくはメチオニン、２８位のチロシン、３１位のイソロイシン、３２位のプロリン、ヒスチジン、もしくはロイシン、３３位のアスパラギンもしくはメチオニン、３４位のメチオニン、３６位のメチオニンもしくはグルタミン酸、３８位のイソロイシンもしくはフェニルアラニン、３９位のイソロイシン、４０位のトレオニン、４２位のヒスチジン、４３位のアスパラギンもしくはアルギニン、４４位のフェニルアラニン、４５位のグルタミン酸、４６位のグルタミン、４７位のプロリン、４８位のアルギニン、４９位のアスパラギン酸、グリシン、もしくはリジン、５０位のリジンもしくはセリン、５１位のグルタミン酸、アルギニン、もしくはバリン、５４位のセリンもしくはイソロイシン、５５位のグリシンもしくはグルタミン酸、５６位のバリン、５８位のイソロイシンもしくはロイシン、５９位のトレオニン、６０位のバリン、６６位のトレオニンもしくはアスパラギン、６７位のセリンもしくはアスパラギン酸、６８位のアスパラギン酸、セリン、チロシンもしくはトリプトファン、６９位のヒスチジン、７０位のバリン、７１位のアスパラギン酸、７２位のグルタミン、アラニン、システイン、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、もしくはチロシン、７４位のリジンもしくはイソロイシン、７５位のリジンもしくはフェニルアラニン、７６位のアスパラギン、フェニルアラニン、もしくはバリン、７７位のアラニン、システイン、アスパラギン酸、グリシン、アスパラギン、メチオニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、もしくはチロシン、８６位のアルギニンもしくはロイシン、８９位のグルタミン酸、９０位のアスパラギン酸、リジン、プロリン、グルタミン、アルギニン、トレオニン、バリン、もしくはチロシン、９２位のアラニン、グリシン、ヒスチジン、メチオニン、グルタミン、アルギニン、セリン、もしくはチロシン、９３位のアルギニン、９４位のフェニルアラニン、セリンもしくは９５位のアスパラギン酸、９６位のアラニン、９８位のフェニルアラニン、９９位のトレオニンもしくはバリン、１０２位のメチオニンもしくはグルタミン酸、１０６位のイソロイシンもしくはリジン、１０９位のフェニルアラニン、１１０位のイソロイシン、１１２位のシステイン、１１３位のヒスチジンもしくはトレオニン、１１７位のフェニルアラニン、１１９位のメチオニン、１２４位のメチオニン、１２６位のアルギニン、１２７位のアラニン、１２８位のアラニンもしくはセリン、１３５位のアスパラギン酸もしくはチロシン、１３６位のメチオニン、１３８位のセリン、１３９位のグリシン、１４２位のバリン、１４５位のロイシンもしくはグルタミン、１４８位のトレオニン、１４９位のイソロイシン、１５２位のヒスチジンもしくはセリン、１５４位のセリン、１５５位のトレオニン、１５８位のイソロイシン、１５９位のセリンもしくはイソロイシン、１６３位のイソロイシン、１６４位のセリン、１６８位のフェニルアラニン、もしくは１６９位のバリン。
〔３３〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、配列番号１に対応するアミノ酸置換Ａ４Ｅ、Ｑ１１Ｒ、Ａ３３Ｋ、Ｖ４４Ｉ、Ａ５４Ｆ、Ｐ１１５Ｅ、Ｑ１２４Ｋ、Ｙ１３８ＩおよびＮ１６６Ｒ、並びに、配列番号１の１位、４位、１４位、１５位、１８位、２０位、２２位、２３位、２７位、３３位、３８位、３９位、４３位、４９位、５４位、５５位、５６位、５８位、５９位、６６位、６７位、６８位、７０位、７１位、７２位、７５位、７６位、７７位、８９位、９０位、９２位、９３位、１０２位、１０６位、１０９位、１１３位、１１７位、１２６位、１２７位、１３６位、１３９位、１４５位、１４８位、１６３位、１６４位もしくは１６９位に対応する位置またはそれらの組み合わせに少なくとも１つのアミノ酸を含む、前記〔１〕〜〔２６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔３４〕配列番号１に対応する４位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１１位のアミノ酸がアルギニンであり、３３位のアミノ酸がリジンであり、４４位のアミノ酸がイソロイシンであり、５４位のアミノ酸がフェニルアラニンであり、１１５位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１２４位のアミノ酸がリジンであり、１３８位のアミノ酸がイソロイシンであり、１６６位のアミノ酸がアルギニンであり、並びに配列番号１の１位、４位、１４位、１５位、１８位、２０位、２２位、２３位、２７位、３３位、３８位、３９位、４３位、４９位、５４位、５５位、５６位、５８位、５９位、６６位、６７位、６８位、７０位、７１位、７２位、７５位、７６位、７７位、８９位、９０位、９２位、９３位、１０２位、１０６位、１０９位、１１３位、１１７位、１２６位、１２７位、１３６位、１３９位、１４５位、１４８位、１６３位、１６４位もしくは１６９位に対応しているある位置またはそれらの組み合わせにおいて少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む、前記〔１〕〜〔２６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔３５〕前記コードされたＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、配列番号１に対応するＦ１Ｉ、Ｅ４Ｋ、Ａ１４Ｖ、Ｇ１５Ｒ、Ｑ１８Ｄ／Ｆ／Ｇ／Ｈ／Ｉ／Ｋ／Ｌ／Ｍ／Ｎ／Ｐ／Ｒ／Ｓ／Ｗ／Ｙ、Ｑ２０Ｒ、Ｌ２２Ｉ、Ｅ２３Ｋ、Ｌ２７Ｍ／Ｖ、Ａ３３Ｎ、Ｖ３８Ｉ、Ｔ３９Ｉ、Ｋ４３Ｒ、Ｅ４９Ｋ、Ａ５４Ｉ／Ｓ、Ｄ５５Ｇ、Ｉ５６Ｖ、Ｖ５８Ｉ／Ｌ、Ｉ５９Ｔ、Ｓ６６Ｔ／Ｎ、Ｇ６７Ｓ、Ｆ６８Ｓ／Ｗ／Ｙ／Ｄ、Ｍ７０Ｖ、Ｇ７１Ｄ、Ｌ７２Ａ／Ｃ／Ｆ／Ｇ／Ｈ／Ｉ／Ｍ／Ｎ／Ｐ／Ｑ／Ｒ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ｗ／Ｙ、Ｍ７５Ｆ／Ｋ、Ｉ７６Ｎ、Ｆ７７Ａ／Ｃ／Ｄ／Ｇ／Ｍ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ｗ／Ｙ、Ｋ８９Ｅ、Ｉ９０Ｄ／Ｋ／Ｐ／Ｑ／Ｒ／Ｔ／Ｖ／Ｙ、Ｌ９２Ａ／Ｇ／Ｈ／Ｍ／Ｑ／Ｓ／Ｙ、Ｈ９３Ｒ、Ｖ１０２Ｅ、Ｍ１０６Ｋ、Ｙ１０９Ｆ、Ｐ１１３Ｔ、Ｉ１１７Ｆ、Ｔ１２６Ｒ、Ｖ１２７Ａ、Ｌ１３６Ｍ、Ｄ１３９Ｇ、Ｐ１４５Ｌ、Ｓ１４８Ｔ、Ｌ１６３Ｉ、Ｃ１６４Ｓ、もしくはＡ１６９Ｖのうちの少なくとも１つに対応する置換またはそれらの組み合わせをさらに含む、前記〔３３〕または〔３４〕に基記載のポリヌクレオチド。
〔３６〕前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記ポリペプチドが、以下のアミノ酸のうちの少なくとも１つまたはそれらの組み合わせを含む、前記〔３３〕または〔３４〕に記載のポリヌクレオチド：配列番号１に対応する、１位のイソロイシン、４位のリジン、１４位のバリン、１５位のアルギニン、１８位のアスパラギン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、リジン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、アルギニン、セリン、トリプトファン、もしくはチロシン、２０位のアルギニン、２２位のイソロイシン、２３位のリジン、２７位のバリンもしくはメチオニン、３３位のアスパラギン、３８位のイソロイシン、３９位のイソロイシン、４３位のアルギニン、４９位のリジン、５４位のセリンまたはイソロイシン、５５位のグリシン、５６位のバリン、５８位のイソロイシンまたはロイシン、５９位のトレオニン、６６位のトレオニンまたはアスパラギン、６７位のセリン、６８位のアスパラギン酸、セリン、チロシンまたはトリプトファン、７０位のバリン、７１位のアスパラギン酸、７２位のグルタミン、アラニン、システイン、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、もしくはチロシン、７５位のリジンもしくはフェニルアラニン、７６位のアスパラギン、７７位のトリプトファン、チロシン、セリン、トレオニン、バリン、アラニン、グリシン、システイン、アスパラギン酸もしくはメチオニン、８９位のグルタミン酸、９０位のアスパラギン酸、リジン、プロリン、グルタミン、アルギニン、トレオニン、バリン、もしくはチロシン、９２位のアラニン、グリシン、ヒスチジン、メチオニン、グルタミン、セリン、もしくはチロシン、９３位のアルギニン、１０２位のグルタミン酸、１０６位のリジン、１０９位のフェニルアラニン、１１３位のトレオニン、１１７位のフェニルアラニン、１２６位のアルギニン、１２７位のアラニン、１３６位のメチオニン、１３９位のグリシン、１４５位のロイシン、１４８位のトレオニン、１６３位のイソロイシン、１６４位のセリン、もしくは１６９位のバリン。
〔３７〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが配列番号１に対応するアミノ酸置換Ａ４Ｅ、Ｑ１１Ｒ、Ａ３３Ｋ、Ｖ４４Ｉ、Ａ５４Ｆ、Ｐ１１５Ｅ、Ｑ１２４Ｋ、Ｙ１３８ＩおよびＮ１６６Ｒ、並びに配列番号１に対応する１位、４位、６位、１１位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２７位、２８位、３１位、３２位、３３位、３４位、３６位、３８位、４０位、４２位、４３位、４４位、４５位、４６位、４７位、４８位、４９位、５０位、５１位、５４位、５５位、５８位、６０位、６６位、６７位、６８位、６９位、７０位、７２位、７４位、７５位、７６位、７７位、８６位、９０位、９２位、９４位、９５位、９６位、９８位、９９位、１０２位、１０６位、１０９位、１１０位、１１２位、１１３位、１１９位、１２４位、１２８位、１３５位、１３８位、１４２位、１４５位、１４９位、１５２位、１５４位、１５５位、１５８位、１５９位もしくは１６８位に対応する位置またはそれらの組み合わせにおいて少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む、前記〔１〕〜〔２６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔３８〕配列番号１に対応する４位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１１位のアミノ酸がアルギニンであり、３３位のアミノ酸がリジンであり、４４位のアミノ酸がイソロイシンであり、５４位のアミノ酸がフェニルアラニンであり、１１５位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１２４位のアミノ酸がリジンであり、１３８位のアミノ酸がイソロイシンであり、１６６位のアミノ酸がアルギニンであり、並びに配列番号１に対応する１位、４位、６位、１１位、１８位、１９位、２０位、２１位、２２位、２７位、２８位、３１位、３２位、３３位、３４位、３６位、３８位、４０位、４２位、４３位、４４位、４５位、４６位、４７位、４８位、４９位、５０位、５１位、５４位、５５位、５８位、６０位、６６位、６７位、６８位、６９位、７０位、７２位、７４位、７５位、７６位、７７位、８６位、９０位、９２位、９４位、９５位、９６位、９８位、９９位、１０２位、１０６位、１０９位、１１０位、１１２位、１１３位、１１９位、１２４位、１２８位、１３５位、１３８位、１４２位、１４５位、１４９位、１５２位、１５４位、１５５位、１５８位、１５９位もしくは１６８位に対応しているある位置またはそれらの組み合わせにおいて少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む、前記〔１〕〜〔２６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔３９〕前記コードされたＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、配列番号１に対応するＦ１Ｉ、Ｅ４Ｋ、Ｆ６Ｙ、Ｒ１１Ｑ、Ｑ１８Ｈ／Ｉ／ＬＶ、Ｄ１９Ｎ、Ｑ２０Ｐ、Ｖ２１Ｌ／Ｍ、Ｌ２２Ｆ、Ｌ２７Ｖ、Ｓ２８Ｙ、Ｆ３１Ｉ、Ｑ３２Ｈ／Ｌ／Ｐ、Ａ３３Ｎ／Ｍ、Ｌ３４Ｍ、Ｖ３６Ｅ／Ｍ、Ｖ３８Ｆ／Ｉ、Ｐ４０Ｔ、Ｑ４２Ｈ、Ｋ４３Ｎ／Ｒ、Ｉ４４Ｆ、Ｖ４５Ｅ、Ｌ４６Ｑ、Ｓ４７Ｐ、Ｇ４８Ｒ、Ｅ４９Ｄ／Ｇ、Ｎ５０Ｋ／Ｓ、Ｇ５１Ｅ／Ｒ／Ｖ、Ａ５４Ｉ、Ｄ５５Ｅ、Ｖ５８Ｉ、Ｉ６０Ｖ、Ｓ６６Ｎ、Ｇ６７Ｄ／Ｓ、Ｆ６８Ｌ／Ｙ／Ｄ、Ｑ６９Ｈ、Ｍ７０Ｖ、Ｌ７２Ｑ、Ｅ７４Ｉ／Ｋ、Ｍ７５Ｋ、Ｉ７６Ｆ／Ｎ／Ｖ、Ｆ７７Ｎ／Ｙ、Ｈ８６Ｌ／Ｒ、Ｉ９０Ｔ／Ｖ、Ｌ９２Ｑ／Ｒ、Ｙ９４Ｆ、Ｇ９５Ｄ／Ｓ、Ｔ９６Ａ、Ｖ９８Ｆ、Ｉ９９Ｔ／Ｖ、Ｖ１０２Ｅ／Ｍ、Ｍ１０６Ｉ、Ｙ１０９Ｆ、Ｆ１１０Ｉ、Ｒ１１２Ｃ、Ｐ１１３Ｈ、Ｖ１１９Ｍ、Ｋ１２４Ｍ、Ｔ１２８Ａ／Ｓ、Ｎ１３５Ｄ／Ｙ、Ｉ１３８Ｓ、Ｌ１４２Ｖ、Ｐ１４５Ｑ、Ｌ１４９Ｉ、Ｒ１５２Ｈ／Ｓ、Ｔ１５４Ｓ、Ｉ１５５Ｔ、Ｖ１５８Ｉ、Ｔ１５９Ｉ／Ｓ、もしくはＬ１６８Ｆのうちの少なくとも１つに対応する置換またはそれらの組み合わせをさらに含む、前記〔３７〕または〔３８〕に記載のポリヌクレオチド。
〔４０〕前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記ポリペプチドが、以下のアミノ酸のうちの少なくとも１つまたはそれらの組み合わせを含む、前記〔３７〕または〔３８〕に記載のポリヌクレオチド：配列番号１に対応する、１位のイソロイシン、４位のリジン、６位のチロシン、１１位のグルタミン、１８位のヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、もしくはバリン、１９位のアスパラギン、２０位のプロリン、２１位のロイシンもしくはメチオニン、２２位のフェニルアラニン、２７位のバリン、２８位のチロシン、３１位のイソロイシン、３２位のプロリン、ヒスチジン、もしくはロイシン、３３位のアスパラギンもしくはメチオニン、３４位のメチオニン、３６位のメチオニンもしくはグルタミン酸、３８位のイソロイシンもしくはフェニルアラニン、４０位のトレオニン、４２位のヒスチジン、４３位のアスパラギンもしくはアルギニン、４４位のフェニルアラニン、４５位のグルタミン酸、４６位のグルタミン、４７位のプロリン、４８位のアルギニン、４９位のアスパラギン酸もしくはグリシン、５０位のリジンもしくはセリン、５１位のグルタミン酸、アルギニン、もしくはバリン、５４位のイソロイシン、５５位のグルタミン酸、５８位のイソロイシン、６０位のバリン、６６位のアスパラギン、６７位のセリンもしくはアスパラギン酸、６８位のアスパラギン酸、ロイシン、もしくはチロシン、６９位のヒスチジン、７０位のバリン、７２位のグルタミン、７４位のリジンもしくはイソロイシン、７５位のリジン、７６位のアスパラギン、フェニルアラニン、もしくはバリン、７７位のアスパラギンもしくはチロシン、８６位のアルギニンもしくはロイシン、９０位のトレオニンもしくはバリン、９２位のアルギニンもしくはグルタミン、９４位のフェニルアラニン、９５位のセリンもしくはアスパラギン酸、９６位のアラニン、９８位のフェニルアラニン、９９位のトレオニンもしくはバリン、１０２位のメチオニンもしくはグルタミン酸、１０６位のイソロイシン、１０９位のフェニルアラニン、１１０位のイソロイシン、１１２位のシステイン、１１３位のヒスチジン、１１９位のメチオニン、１２４位のメチオニン、１２８位のアラニンもしくはセリン、１３５位のアスパラギン酸もしくはチロシン、１３８位のセリン、１４２位のバリン、１４５位のグルタミン、１４９位のイソロイシン、１５２位のヒスチジンもしくはセリン、１５４位のセリン、１５５位のトレオニン、１５８位のイソロイシン、１５９位のセリンもしくはイソロイシン、もしくは１６８位のフェニルアラニン。
〔４１〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、配列番号１に対応するアミノ酸置換Ａ４Ｅ、Ｑ１１Ｒ、Ａ３３Ｋ、Ｖ４４Ｉ、Ｆ５４Ｉ、Ｉ９０Ｖ、Ｐ１１５Ｅ、Ｑ１２４Ｋ、Ｙ１３８ＩおよびＮ１６６Ｒ、並びに、配列番号１の１位、４位、１０位、１４位、１６位、１８位、２４位、２５位、２７位、３３位、３８位、４０位、６８位、７０位、７２位、７５位、８７位、９０位、９７位、１００位、１０２位、１１１位、１１３位、１２５位、１２９位、１３０位、１４２位、１４６位、１４７位、１４９位、１５０位、１５２位もしくは１６６位に対応する位置またはそれらの組み合わせにおける少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む、前記〔１〕〜〔２６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔４２〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、配列番号１に対応する４位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１１位のアミノ酸がアルギニンであり、３３位のアミノ酸がリジンであり、４４位のアミノ酸がイソロイシンであり、５４位のアミノ酸がイソロイシンであり、９０位のアミノ酸がバリンであり、１１５位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１２４位のアミノ酸がリジンであり、１３８位のアミノ酸がイソロイシンであり、１６６位のアミノ酸がアルギニンであるアミノ酸置換、および配列番号１の１位、４位、１０位、１４位、１６位、１８位、２４位、２５位、２７位、３３位、３８位、４０位、６８位、７０位、７２位、７５位、８７位、９０位、９７位、１００位、１０２位、１１１位、１１３位、１２５位、１２９位、１３０位、１４２位、１４６位、１４７位、１４９位、１５０位、１５２位もしくは１６６位に対応する位置またはそれらの組み合わせにおける少なくとも１つの追加のアミノ酸置換を含む、前記〔１〕〜〔２６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔４３〕少なくとも１つのアミノ酸置換が、配列番号１に対応するＦ１Ｉ、Ｅ４Ｋ、Ｗ１０Ｙ、Ａ１４Ｓ、Ｙ１６Ｅ、Ｑ１８Ｄ／Ｆ／Ｇ／Ｈ／Ｋ／Ｌ／Ｍ／Ｎ／Ｐ／Ｒ／Ｓ／Ｗ／Ｙ、Ｑ２４Ａ、Ｇ２５Ｌ、Ｌ２７Ｍ／Ａ／Ｄ／Ｇ／Ｉ、Ａ３３Ｎ、Ｖ３８Ｉ、Ｐ４０Ｉ／Ｌ／Ｑ、Ｆ６８Ｗ／Ｙ、Ｍ７０Ｖ、Ｌ７２Ａ／Ｃ／Ｆ／Ｇ／Ｈ／Ｉ／Ｍ／Ｎ／Ｐ／Ｒ／Ｓ／Ｔ／Ｖ／Ｗ／Ｙ、Ｍ７５Ｆ／Ｋ、Ｈ８７Ｎ／Ｔ、Ｉ９０Ｄ／Ｋ／Ｐ／Ｑ／Ｒ／Ｙ、Ｌ９７Ｅ、Ｄ１００Ｉ、Ｖ１０２Ｅ／Ｔ、Ｇ１１１Ｎ、Ｐ１１３Ｋ、Ｉ１２５Ｌ、Ｇ１２９Ｑ、Ｔ１３０Ｋ、Ｌ１４２Ｅ／Ｋ／Ｗ、Ｄ１４６Ｇ、Ｇ１４７Ｎ、Ｌ１４９Ｍ、Ｌ１５０Ｖ、Ｒ１５２Ｅ／Ｔ、もしくはＮ１６６Ｉ／Ｆ／Ｅのうちの少なくとも１つまたはそれらの組み合わせに対応している、前記〔４１〕または〔４２〕に記載のポリヌクレオチド。
〔４４〕前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記ポリペプチドが、以下のアミノ酸のうちの少なくとも１つまたはそれらの組み合わせを含む、前記〔４１〕または〔４２〕に記載のポリヌクレオチド：配列番号１に対応する、１位のイソロイシン、４位のリジン、１０位のチロシン、１４位のセリン、１６位のグルタミン酸、１８位のアスパラギン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、リジン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、アルギニン、セリン、トリプトファン、もしくはチロシン、２４位のアラニン、２５位のロイシン、２７位のメチオニン、アラニン、アスパラギン酸、グリシンもしくはイソロイシン、３３位のアスパラギン、３８位のイソロイシン、４０位のイソロイシン、ロイシンもしくはグルタミン、６８位のチロシンもしくはトリプトファン、７０位のバリン、７２位のアラニン、システイン、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、もしくはチロシン、７５位のリジンもしくはフェニルアラニン、８７位のアスパラギンもしくはトレオニン、９０位のアスパラギン酸、リジン、プロリン、グルタミン、アルギニン、もしくはチロシン、９７位のグルタミン酸、１００位のイソロイシン、１０２位のグルタミン酸もしくはトレオニン、１１１位のアスパラギン、１１３位のリジン、１２５位のロイシン、１２９位のグルタミン、１３０位のリジン、１４２位のグルタミン酸、リジンもしくはトリプトファン、１４６位のグリシン、１４７位のアスパラギン、１４９位のメチオニン、１５０位のバリン、１５２位のグルタミン酸もしくはトレオニン、もしくは１６６位のイソロイシン、フェニルアラニン、もしくはグルタミン酸。
〔４５〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、配列番号１に対応するアミノ酸置換Ａ４Ｅ、Ｑ１１Ｒ、Ａ３３Ｋ、Ｖ４４Ｉ、Ｐ１１５Ｅ、Ｑ１２４Ｋ、Ｙ１３８Ｉ、Ｎ１６６Ｒ、Ｉ９０Ｖ、Ｆ５４Ｉ、Ｑ１８Ｌ、Ｆ６８Ｙ、Ｌ７２Ｑ、およびＭ７５Ｋを含む、前記〔１〕〜〔２６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔４６〕配列番号１に対応する４位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１１位のアミノ酸がアルギニンであり、１８位のアミノ酸がロイシンであり、３３位のアミノ酸がリジンであり、４４位のアミノ酸がイソロイシンであり、５４位のアミノ酸がイソロイシンであり、６８位のアミノ酸がチロシンであり、７２位のアミノ酸がグルタミンであり、７５位のアミノ酸がリジンであり、９０位のアミノ酸がバリンであり、１１５位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１２４位のアミノ酸がリジンであり、１３８位のアミノ酸がイソロイシンであり、１６６位のアミノ酸がアルギニンである、前記〔１〕〜〔２６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔４７〕配列番号１の３３に対応する位置におけるアミノ酸置換がアスパラギンである、前記〔４５〕または〔４６〕に記載のポリヌクレオチド。
〔４８〕３９位がコドンＡＣＴによってコードされ、配列番号１に対応する３９位のアミノ酸がトレオニンであり、４３位のアミノ酸がアルギニンであり、６８位のアミノ酸がアスパラギン酸であり、前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドがルシフェラーゼ活性を有する、前記〔４７〕に記載のポリヌクレオチド。
〔４９〕配列番号１に対応する２７位のアミノ酸がバリンであり、前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドがルシフェラーゼ活性を有する、前記〔４８〕に記載のポリヌクレオチド。
〔５０〕配列番号１９のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、前記〔１〕〜〔２６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔５１〕配列番号１８、配列番号２４、配列番号２５、配列番号４２、配列番号８８、または配列番号９２のポリヌクレオチドを含む、前記〔１〕〜〔２６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔５２〕前記コードされたＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、配列番号１に対応するアミノ酸置換Ｑ１８Ｌ、Ｆ５４Ｉ、Ｌ９２Ｈ、およびＹ１０９Ｆをさらに含む、前記〔３７〕〜〔４０〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔５３〕前記コードされたＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、配列番号１に対応するアミノ酸置換Ｖ２１Ｌ、Ｆ６８Ｙ、Ｌ７２Ｑ、Ｍ７５Ｋ、Ｈ９２ＲおよびＶ１５８Ｉをさらに含む、〔５２〕に記載のポリヌクレオチド。
〔５４〕前記コードされたＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、配列番号１に対応するアミノ酸置換Ｆ５４Ｉ、Ｉ９０ＶおよびＦ７７Ｙを含む、前記〔３７〕〜〔４０〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔５５〕配列番号１に対応する１８位のアミノ酸がロイシンであり、５４位のアミノ酸がイソロイシンであり、９２位のアミノ酸がヒスチジンであり、１０９位のアミノ酸がフェニルアラニンである、前記〔３７〕〜〔４０〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔５６〕配列番号１に対応する２１位のアミノ酸がロイシンであり、６８位のアミノ酸がチロシンであり、７２位のアミノ酸がグルタミンであり、７５位のアミノ酸がリジンであり、９２位のアミノ酸がアルギニンであり、１５８位のアミノ酸がイソロイシンである、５５に記載のポリヌクレオチド。
〔５７〕配列番号１に対応する５４位のアミノ酸がイソロイシンであり、９０位のアミノ酸がバリンであり、７７位のアミノ酸がチロシンである、前記〔３７〕〜〔４０〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔５８〕前記コードされたＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが、配列番号１に対応するＦ１Ｉ、Ｅ４Ｋ、Ｆ６Ｙ、Ｒ１１Ｑ、Ｑ１８Ｈ／Ｉ／Ｖ、Ｄ１９Ｎ、Ｑ２０Ｐ、Ｖ２１Ｍ、Ｌ２２Ｆ、Ｌ２７Ｖ、Ｓ２８Ｙ、Ｆ３１Ｉ、Ｑ３２Ｈ／Ｌ／Ｐ、Ａ３３Ｎ／Ｍ、Ｌ３４Ｍ、Ｖ３６Ｅ／Ｍ、Ｖ３８Ｆ／Ｉ、Ｐ４０Ｔ、Ｑ４２Ｈ、Ｋ４３Ｎ／Ｒ、Ｉ４４Ｆ、Ｖ４５Ｅ、Ｌ４６Ｑ、Ｓ４７Ｐ、Ｇ４８Ｒ、Ｅ４９Ｄ／Ｇ、Ｎ５０Ｋ／Ｓ、Ｇ５１Ｅ／Ｒ／Ｖ、Ｄ５５Ｅ、Ｖ５８Ｉ、Ｉ６０Ｖ、Ｓ６６Ｎ、Ｇ６７Ｄ／Ｓ、Ｆ６８Ｌ／Ｄ、Ｑ６９Ｈ、Ｍ７０Ｖ、Ｅ７４Ｉ／Ｋ、Ｉ７６Ｆ／Ｎ／Ｖ、Ｆ７７Ｎ、Ｈ８６Ｌ／Ｒ、Ｉ９０Ｔ、Ｙ９４Ｆ、Ｇ９５Ｄ／Ｓ、Ｔ９６Ａ、Ｖ９８Ｆ、Ｉ９９Ｔ／Ｖ、Ｖ１０２Ｅ／Ｍ、Ｍ１０６Ｉ、Ｆ１１０Ｉ、Ｒ１１２Ｃ、Ｐ１１３Ｈ、Ｖ１１９Ｍ、Ｋ１２４Ｍ、Ｔ１２８Ａ／Ｓ、Ｎ１３５Ｄ／Ｙ、Ｉ１３８Ｓ、Ｌ１４２Ｖ、Ｐ１４５Ｑ、Ｌ１４９Ｉ、Ｒ１５２Ｈ／Ｓ、Ｔ１５４Ｓ、Ｉ１５５Ｔ、Ｔ１５９Ｉ／Ｓ、もしくはＬ１６８Ｆのうちの少なくとも１つに対応する置換またはそれらの組み合わせをさらに含む、前記〔５２〕〜〔５７〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔５９〕前記前記ポリヌクレオチドによってコードされる前記ポリペプチドが、以下のアミノ酸のうちの少なくとも１つ、またはそれらの組み合わせを含む、前記〔５２〕〜〔５７〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド：１位のイソロイシンアミノ酸、４位のリジン、６位のチロシン、１１位のグルタミン、１８位のヒスチジン、イソロイシン、もしくはバリン、１９位のアスパラギン、２０位のプロリン、２１位のメチオニン、２２位のフェニルアラニン、２７位のバリン、２８位のチロシン、３１位のイソロイシン、３２位のプロリン、ヒスチジン、またはロイシン、３３位のアスパラギンまたはメチオニン、３４位のメチオニン、３６位のメチオニンまたはグルタミン酸、３８位のイソロイシンまたはフェニルアラニン、４０位のトレオニン、４２位のヒスチジン、４３位のアスパラギンまたはアルギニン、４４位のフェニルアラニン、４５位のグルタミン酸、４６位のグルタミン、４７位のプロリン、４８位のアルギニン、４９位のアスパラギン酸またはグリシン、５０位のリジンまたはセリン、５１位のグルタミン酸、アルギニン、またはバリン、５５位のグルタミン酸、５８位のイソロイシン、６０位のバリン、６６位のアスパラギン、６７位のセリンまたはアスパラギン酸、６８位のロイシンまたはアスパラギン酸、６９位のヒスチジン、７０位のバリン、７４位のリジンまたはイソロイシン、７６位のアスパラギン、フェニルアラニン、またはバリン、７７位のアスパラギン、８６位のアルギニンまたはロイシン、９０位のトレオニン、９２位のグルタミン、９４位のフェニルアラニン、９５位のセリンまたはアスパラギン酸、９６位のアラニン、９８位のフェニルアラニン、９９位のトレオニンまたはバリン、１０２位のメチオニンまたはグルタミン酸、１０６位のイソロイシン、１１０位のイソロイシン、１１２位のシステイン、１１３位のヒスチジン、１１９位のメチオニン、１２４位のメチオニン、１２８位のアラニンまたはセリン、１３５位のアスパラギン酸またはチロシン、１３８位のセリン、１４２位のバリン、１４５位のグルタミン、１４９位のイソロイシン、１５２位のヒスチジンもしくはセリン、１５４位のセリン、１５５位のトレオニン、１５９位のセリンもしくはイソロイシン、もしくは１６８位のフェニルアラニン。
〔６０〕配列番号１のＯｇＬｕｃポリペプチドに対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有し、配列番号１に対応するアミノ酸置換Ａ４Ｅ、Ｑ１１Ｒ、Ａ３３Ｋ、Ｖ４４Ｉ、Ｐ１１５Ｅ、Ｑ１２４Ｋ、Ｙ１３８Ｉ、Ｎ１６６Ｒ、Ｉ９０Ｖ、Ｆ５４Ｉ、Ｑ１８Ｌ、Ｆ６８Ｙ、Ｌ７２Ｑ、およびＭ７５Ｋを含むＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドがルシフェラーゼ活性を有する、ポリヌクレオチド。
〔６１〕配列番号１のＯｇＬｕｃポリペプチドに対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、配列番号１に対応する４位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１１位のアミノ酸がアルギニンであり、１８位のアミノ酸がロイシンであり、３３位のアミノ酸がリジンであり、４４位のアミノ酸がイソロイシンであり、５４位のアミノ酸がイソロイシンであり、６８位のアミノ酸がチロシンであり、７２位のアミノ酸がグルタミンであり、７５位のアミノ酸がリジンであり、９０位のアミノ酸がバリンであり、１１５位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１２４位のアミノ酸がリジンであり、１３８位のアミノ酸がイソロイシンであり、１６６位のアミノ酸がアルギニンであり、前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドがルシフェラーゼ活性を有する、ポリヌクレオチド。
〔６２〕配列番号１の３３に対応する位置におけるアミノ酸置換がアスパラギンである、前記〔６０〕または〔６１〕に記載のポリヌクレオチド。
〔６３〕３９位がコドンＡＣＴによってコードされ、配列番号１に対応する３９位のアミノ酸がトレオニンであり、４３位のアミノ酸がアルギニンであり、６８位のアミノ酸がアスパラギン酸であり、前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドがルシフェラーゼ活性を有する、前記〔６２〕に記載のポリヌクレオチド。
〔６４〕配列番号１に対応する２７位のアミノ酸がバリンであり、前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドがルシフェラーゼ活性を有する、前記〔６３〕に記載のポリヌクレオチド。
〔６５〕配列番号１のＯｇＬｕｃポリペプチドに対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有し、配列番号１に対応するアミノ酸置換Ａ４Ｅ、Ｑ１１Ｒ、Ａ３３Ｋ、Ｖ４４Ｉ、Ｐ１１５Ｅ、Ｑ１２４Ｋ、Ｙ１３８Ｉ、Ｎ１６６Ｒ、Ｑ１８Ｌ、Ｆ５４Ｉ、Ｌ９２Ｈ、およびＹ１０９Ｆを含むＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドがルシフェラーゼ活性を有する、ポリヌクレオチド。
〔６６〕配列番号１に対応するアミノ酸置換Ｖ２１Ｌ、Ｆ６８Ｙ、Ｌ７２Ｑ、Ｍ７５Ｋ、Ｈ９２Ｒ、およびＶ１５８Ｆをさらに含む、前記〔６５〕に記載のポリヌクレオチド。
〔６７〕配列番号１のＯｇＬｕｃポリペプチドに対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有し、配列番号１に対応するアミノ酸置換Ａ４Ｅ、Ｑ１１Ｒ、Ａ３３Ｋ、Ｖ４４Ｉ、Ａ５４Ｉ、Ｆ７７Ｙ、Ｉ９０Ｖ、Ｐ１１５Ｅ、Ｑ１２４Ｋ、Ｙ１３８ＩおよびＮ１６６Ｒを含むＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドがルシフェラーゼ活性を有する、ポリヌクレオチド。
〔６８〕配列番号１のＯｇＬｕｃポリペプチドに対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、配列番号１に対応する４位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１１位のアミノ酸がアルギニンであり、１８位のアミノ酸がロイシンであり、３３位のアミノ酸がリジンであり、４４位のアミノ酸がイソロイシンであり、５４位のアミノ酸がイソロイシンであり、９２位のアミノ酸がヒスチジンであり、１０９位のアミノ酸がフェニルアラニンであり、１１５位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１２４位のアミノ酸がリジンであり、１３８位のアミノ酸がイソロイシンであり、１６６位のアミノ酸がアルギニンであり、前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドがルシフェラーゼ活性を有する、ポリヌクレオチド。
〔６９〕配列番号１に対応する２１位のアミノ酸がロイシンであり、６８位のアミノ酸がチロシンであり、７２位のアミノ酸がグルタミンであり、７５位のアミノ酸がリジンであり、９２位のアミノ酸がアルギニンであり、１５８位のアミノ酸がイソロイシンである、前記〔６８〕に記載のポリヌクレオチド。
〔７０〕配列番号１のＯｇＬｕｃポリペプチドに対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、配列番号１に対応する４位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１１位のアミノ酸がアルギニンであり、３３位のアミノ酸がリジンであり、４４位のアミノ酸がイソロイシンであり、５４位のアミノ酸がイソロイシンであり、７７位のアミノ酸がチロシンであり、９０位のアミノ酸がバリンであり、１１５位のアミノ酸がグルタミン酸であり、１２４位のアミノ酸がリジンであり、１３８位のアミノ酸がイソロイシンであり、１６６位のアミノ酸がアルギニンであり、前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドルシフェラーゼ活性を有する、ポリヌクレオチド。
〔７１〕配列番号１９のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド。
〔７２〕配列番号１８、配列番号２４、配列番号２５、配列番号４２、配列番号８８、または配列番号９２のポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド。
〔７３〕配列番号１に対して少なくとも３０％のアミノ酸配列同一性を有する十脚類ルシフェラーゼポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記ポリペプチドが、式（ＶＩＩ）の配列パターンに対応し、かつ多くて５つまでの差異を含む配列パターンを含み、差異が、表４に列挙されるＯｇＬｕｃパターンに記載の式（ＶＩＩ）に対するパターン位置１、２、３、５、８、１０、１２、１４、１５、１７、または１８との差異、並びに表４に列挙されるＯｇＬｕｃパターンに記載の式（ＶＩＩ）のパターン位置のいずれかの間のギャップまたは挿入を含み、前記十脚類ルシフェラーゼがセレンテラジンの存在下で発光を生ずる、単離ポリヌクレオチド。
〔７４〕前記十脚類ルシフェラーゼが、表４に列挙されるＯｇＬｕｃパターンに記載の式（ＶＩＩ）の配列パターンと多くて４つまでの差異を含む、前記〔７３〕に記載のポリヌクレオチド。
〔７５〕前記十脚類ルシフェラーゼが、表４に列挙されるＯｇＬｕｃパターンに記載の式（ＶＩＩ）の配列パターンと多くて３つまでの差異を含む、前記〔７３〕に記載のポリヌクレオチド。
〔７６〕前記十脚類ルシフェラーゼが、表４に列挙されるＯｇＬｕｃパターンに記載の式（ＶＩＩ）の配列パターンと多くて２つまでの差異を含む、前記〔７３〕に記載のポリヌクレオチド。
〔７７〕前記十脚類ルシフェラーゼが、表４に列挙されるＯｇＬｕｃパターンに記載の式（ＶＩＩ）の配列パターンと多くて１つまでの差異を含む、前記〔７３〕に記載のポリヌクレオチド。
〔７８〕前記ポリペプチドが表４に列挙されるＯｇＬｕｃパターンに記載の式（ＶＩＩ）に対応する配列を含む、前記〔７３〕に記載のポリヌクレオチド。
〔７９〕前記十脚類ルシフェラーゼが、チヒロエビ（Aristeidae）科、タラバエビ（Pandalidea）科、クダヒゲエビ（Solenoceridae）科、ユメエビ（Luciferidae）科、サクラエビ（Segestidae）科、オキエビ（Pasiphaeidae）科、ヒオドシエビ（Oplophoridae）科、またはタラッソカリダエ（Thalassocaridae）科由来である、前記〔７３〕に記載のポリヌクレオチド。
〔８０〕前記十脚類ルシフェラーゼがヒオドシエビ（Oplophoridae）科由来である、前記〔７９〕に記載のポリヌクレオチド。
〔８１〕前記十脚類ルシフェラーゼがオキヒオドシエビ属（Oplophorus）種由来である、前記〔８０〕に記載のポリヌクレオチド。
〔８２〕前記十脚類ルシフェラーゼが、プレシオペナエウス・コルスカンス（Plesiopenaeus coruscans）、ヘテロカルプス（Heterocarpus）種、パラパンダルス（Parapandalus）種、ヒュメノペナエウス・デビリス（Hymenopenaeus debilis）、メソペナエウス・トゥロピカリス（Mesopenaeus tropicalis）、ルキフェル・テュプス（Lucifer typus）、セルゲステス・アトゥランティクス（Sergestes atlanticus）、セルゲステス・アルクティクス（Sergestes arcticus）、セルゲステス・アルマトゥス（Sergestes armatus）、セルゲステス・ペディフォルミス（Sergestes pediformis）、セルゲステス・コルヌトゥス（Sergestes cornutus）、セルゲステス・エドゥワルドゥシ（Sergestes edwardsi）、セルゲステス・ヘンセニ（Sergestes henseni）、セルゲステス・ペクティナトゥス（Sergestes pectinatus）、セルゲステス・サルガッシ（Sergestes sargassi）、セルゲステス・シミリス（Sergestes similis）、セルゲステス・ヴィギラクス（Sergestes vigilax）、セルギア・カッレンゲリ（Sergia challengeri）、セルギア・グランディス（Sergia grandis）、セルギア・ルケンス（Sergia lucens）、セルギア・プレヘンシリス（Sergia prehensilis）、セルギア・ポテンス（Sergia potens）、セルギア・ロブスタ（Sergia robusta）、セルギア・スキンティッランス（Sergia scintillans）、セルギア・スプレンデンス（Sergia splendens）、グリュプス・マルスピアリス（Glyphus marsupialis）、レプトケラ・ベルムデンシス（Leptochela bermudensis）、パラパシパエ・スルカティフロンス（Parapasiphae sulcatifrons）、パシペア・タルダ（Pasiphea tarda）、アカンテピュラ・アカンティテルソニス（Acanthephyra acanthitelsonis）、アカンテピュラ・アクティフロンス（Acanthephyra acutifrons）、アカンテピュラ・ブレヴィロストゥリス（Acanthephyra brevirostris）、アカンテピュラ・ククッラタ（Acanthephyra cucullata）、アカンテピュラ・クルティロストゥリス（Acanthephyra curtirostris）、アカンテピュラ・エクシミア（Acanthephyra eximia）、アカンテピュラ・グラキリペス（Acanthephyra gracilipes）、アカンテピュラ・キングスレユィ（Acanthephyra kingsleyi）、アカンテピュラ・メディア（Acanthephyra media）、アカンテピュラ・ミクロプタルマ（Acanthephyra microphthalma）、アカンテピュラ・ペラギカ（Acanthephyra pelagica）、アカンテピュラ・プリオノタ（Acanthephyra prionota）、アカンテピュラ・プルプレア（Acanthephyra purpurea）、アカンテピュラ・サングイネア（Acanthephyra sanguinea）、アカンテピュラ・シボガエ（Acanthephyra sibogae）、アカンテピュラ・ステュロロストゥラティス（Acanthephyra stylorostratis）、エピュリナ・ビフィダ（Ephyrina bifida）、エピュリナ・フィグエイライ（Ephyrina figueirai）、エピュリナ・コスキュニイ（Ephyrina koskynii）、エピュリナ・オムバンゴ（Ephyrina ombango）、ヒュメノドラ・グラキアリス（Hymenodora glacialis）、ヒュメノドラ・グラキリス（Hymenodora gracilis）、メニンゴドラ・ミッキュラ（Meningodora miccyla）、メニンゴドラ・モッリス（Meningodora mollis）、メニンゴドラ・ヴェスカ（Meningodora vesca）、ノトストムス・ギッボスス（Notostomus gibbosus）、ノトストムス・アウリクラトゥス（Notostomus auriculatus）、オプロポルス・グラキリロストゥリス（Oplophorus gracilirostris）、オプロポルス・グリマルディイ（Oplophorus grimaldii）、オプロポルス・ノヴァエゼアランディアエ（Oplophorus novaezealandiae）、オプロポルス・スピニカウダ（Oplophorus spinicauda）、オプロポルス・フォリアケウス（Oplophorus foliaceus）、オプロポルス・スピノスス（Oplophorus spinosus）、オプロポルス・テュプス（Oplophorus typus）、シュステッラスピス・ブラウエリ（Systellaspis braueri）、シュステッラスピス・クリスタタ（Systellaspis cristata）、シュステッラスピス・デビリス（Systellaspis debilis）、シュステッラスピス・ペッルキダ（Systellaspis pellucida）、クロロトコイデス・スピニカウダ（Chlorotocoides spinicauda）、タラッソカリス・クリニタ（Thalassocaris crinita）、またはタラッソカリス・ルキダ（Thalassocaris lucida）由来のルシフェラーゼである、前記〔７９〕に記載のポリヌクレオチド。
〔８３〕式（ＶＩＩ）の配列パターンが、配列番号１の８番目の残基を先頭として配列番号１と整列されている、前記〔７３〕に記載のポリヌクレオチド。
〔８４〕配列がコドン最適化されている、前記〔１〕〜〔８３〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔８５〕ポリヌクレオチドが配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、または配列番号２５を含む、前記〔８４〕に記載のポリヌクレオチド。
〔８６〕ポリヌクレオチドがＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドと連結された目的のポリペプチドをさらにコードし、目的のポリペプチドおよびＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが融合タンパク質として発現されることが可能である、前記〔１〕〜〔８５〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔８７〕前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
〔８８〕前記ポリヌクレオチドがプロモーターに機能的に連結されている前記〔９６〕に記載のベクター。
〔８９〕前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドまたは前記〔８７〕もしくは〔８８〕に記載のベクターを含む細胞。
〔９０〕前記〔８９〕に記載の細胞を含む非ヒト遺伝子導入動物。
〔９１〕前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドまたは前記〔８７〕もしくは〔８８〕に記載のベクターを含む非ヒト遺伝子導入動物。
〔９２〕前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチド。
〔９３〕前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。
〔９４〕前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドを含む融合タンパク質。
〔９５〕前記〔８９〕に記載の細胞を、ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドの発現を可能にする条件下で増殖させることを含む、ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドの製造方法。
〔９６〕ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドの発現を可能にする条件下で前記〔８７〕または〔８８〕に記載のベクターを細胞に導入することを含む、ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドの製造方法。
〔９７〕前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドまたは前記〔８７〕もしくは〔８８〕に記載のベクターを含むキット。
〔９８〕前記〔９２〕に記載のＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドを含むキット。
〔９９〕  以下のうちの少なくとも１つをさらに含む、前記〔９７〕または〔９８〕のいずれか一項に記載のキット：
（ａ）式（Ｉａ）または（Ｉｂ）：
2014500011.tif 000057
または
2014500011.tif 000058
の化合物であって、
式中、Ｒ2は、
2014500011.tif 000059
またはＣ2-5直鎖アルキルからなる群から選択され；
Ｒ6は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＯＣ（Ｏ）Ｒまたは−ＯＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒからなる群から選択され；
Ｒ8は、
2014500011.tif 000060
Ｈまたは低級シクロアルキルからなる群から選択され；
式中、Ｒ3およびＲ4は、共にＨまたは共にＣ1-2アルキルであり；
Ｗは、−ＮＨ2、ハロ、−ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ2Ｒであり；
Ｘは-Ｓ−、-Ｏ−または-ＮＲ22−であり；
Ｙは、-Ｈ、−ＯＨ、または-ＯＲ11であり；
Ｚは、-ＣＨ−または-Ｎ−であり；
各Ｒ11は独立して-Ｃ（Ｏ）Ｒ”または-ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒ”であり；
Ｒ22は、Ｈ、ＣＨ3またはＣＨ2ＣＨ3であり；
各Ｒは独立してＣ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
Ｒ”は、Ｃ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
破線の結合は、飽和でも不飽和でもよい任意の環の存在を表し；
ただし、
Ｒ2が、
2014500011.tif 000061
または
2014500011.tif 000062
のとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000063
ではなく；
Ｒ2が、
2014500011.tif 000064
であるとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000065
または低級シクロアルキルであり；
Ｒ6がＮＨ2であるとき、Ｒ2は、
2014500011.tif 000066
またはＣ2-5アルキルであり；
またはＲ8は、
2014500011.tif 000067
ではない、
の化合物
；並びに
（ｂ）緩衝液試薬。
〔１００〕化合物
2014500011.tif 000068
または
2014500011.tif 000069
および前記〔６０〕〜〔６４〕または７１〜７２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドまたは前記〔６０〕〜〔６４〕もしくは７１〜７２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを含むキット。
〔１０１〕前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド；前記〔８７〕または〔８８〕のいずれか一項に記載のベクター；前記〔８９〕に記載の細胞；前記〔９０〕〜〔９１〕のいずれか一項に記載の動物；前記〔９２〕に記載のＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチド；前記〔９３〕に記載のポリペプチド；および前記〔９４〕に記載の融合タンパク質のうちの少なくとも１つを用いる、生物発光の測定方法。
〔１０２〕配列番号２を有する親核酸配列に対し８０％以下の核酸配列同一性を有し、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、もしくは配列番号２５に対し９０％以上の核酸配列同一性を有する少なくとも１００ヌクレオチドの断片またはその補体を含むＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドをコードする合成ヌクレオチド配列であって、減少した配列同一性が親核酸配列中のコドンと比較して合成ヌクレオチド配列中の異なるコドンによるものであり、合成ヌクレオチド配列が親核酸配列によってコードされる対応するルシフェラーゼに対し少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するＯｇＬｕｃ変異体をコードし、合成ヌクレオチド配列が親核酸配列と比較して減少した数の制御配列を有する、上記合成ヌクレオチド配列。
〔１０３〕配列番号１４を有する親核酸配列に対し８０％以下の核酸配列同一性を有し、配列番号２２もしくは配列番号２３に対し９０％以上の核酸配列同一性を有する少なくとも３００ヌクレオチドの断片またはその補体を含むＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドをコードする合成ヌクレオチド配列であって、減少した配列同一性が親核酸配列中のコドンと比較して合成ヌクレオチド配列中の異なるコドンによるものであり、合成ヌクレオチド配列が親核酸配列によってコードされる対応するルシフェラーゼに対し少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するホタルルシフェラーゼをコードし、合成ヌクレオチド配列が親核酸配列と比較して減少した数の制御配列を有する、上記合成ヌクレオチド配列。
〔１０４〕配列番号１８を有する親核酸配列に対し８０％以下の核酸配列同一性を有し、配列番号２４もしくは配列番号２５に対し９０％以上の核酸配列同一性を有する少なくとも１００ヌクレオチドの断片またはその補体を含むＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドをコードする合成ヌクレオチド配列であって、減少した配列同一性が親核酸配列中のコドンと比較して合成ヌクレオチド配列中の異なるコドンによるものであり、合成ヌクレオチド配列が親核酸配列によってコードされる対応するルシフェラーゼに対し少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するＯｇＬｕｃ変異体をコードし、合成ヌクレオチド配列が親核酸配列と比較して減少した数の制御配列を有する、上記合成ヌクレオチド配列。
〔１０５〕前記ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドが可溶性の単量体である、前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
〔１０６〕前記融合タンパク質がＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドのＮ末端にシグナル配列を含む、前記〔８６〕に記載のポリヌクレオチド。
〔１０７〕前記融合タンパク質が細胞から分泌される、前記〔１０６〕に記載のポリヌクレオチド。
〔１０８〕異種タンパク質と融合された、トゲオキヒオドシエビ（Oplophorus gracilirostris）由来のシグナルペプチドを含む融合ペプチドであって、前記シグナルペプチドが配列番号５４であり、前記融合ペプチドが細胞中で発現され、そして細胞から分泌される、上記融合ペプチド。
〔１０９〕第一の標的タンパク質および生物発光供与体分子を含み、生物発光供与体分子が前記〔１０〕〜〔８８〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるＯｇＬｕｃ変異体である、第一の融合タンパク質；第二の標的タンパク質および蛍光受容体分子を含む第二の融合タンパク質；並びにＯｇＬｕｃ基質、を含む生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）系。
〔１１０〕ＯｇＬｕｃ基質が天然セレンテラジンまたは既知のセレンテラジンである、前記〔１０９〕に記載のＢＲＥＴ系。
〔１１１〕ＯｇＬｕｃ基質が、式（Ｉａ）または（Ｉｂ）：
2014500011.tif 000070
または
2014500011.tif 000071
の化合物である、前記〔１０９〕に記載のＢＲＥＴ系であって、
式中、Ｒ2は、
2014500011.tif 000072
またはＣ2-5直鎖アルキルからなる群から選択され；
Ｒ6は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＯＣ（Ｏ）Ｒまたは−ＯＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒからなる群から選択され；
Ｒ8は、
2014500011.tif 000073
Ｈまたは低級シクロアルキルからなる群から選択され；
式中、Ｒ3およびＲ4は、共にＨまたは共にＣ1-2アルキルであり；
Ｗは、−ＮＨ2、ハロ、−ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ2Ｒであり；
Ｘは−Ｓ−、−Ｏ−または−ＮＲ22−であり；
Ｙは、−Ｈ、−ＯＨ、または−ＯＲ11であり；
Ｚは、−ＣＨ−または−Ｎ−であり；
各Ｒ11は独立して−Ｃ（Ｏ）Ｒ”または−ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒ”であり；
Ｒ22は、Ｈ、ＣＨ3またはＣＨ2ＣＨ3であり；
各Ｒは独立してＣ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
Ｒ”は、Ｃ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
破線の結合は、飽和でも不飽和でもよい任意の環の存在を表し；
ただし、
Ｒ2が、
2014500011.tif 000074
または
2014500011.tif 000075
のとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000076
ではなく；
Ｒ2が、
2014500011.tif 000077
であるとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000078
または低級シクロアルキルであり；
Ｒ6がＮＨ2であるとき、Ｒ2は、
2014500011.tif 000079
またはＣ2-5アルキルであり；
またはＲ8は、
2014500011.tif 000080
ではない、
ＢＲＥＴ系。
〔１１２〕ＯｇＬｕｃ基質が化合物
2014500011.tif 000081
または
2014500011.tif 000082
である、前記〔１０９〕に記載のＢＲＥＴ系。
〔１１３〕発光源タンパク質の酵素活性の測定方法であって、発光源タンパク質、脱保護酵素、および保護発光団を接触させること；並びに前記組成物から発せられた光を検出することを含み、発光源タンパク質が前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるＯｇＬｕｃ変異体であり、発光団が式（Ｉａ）または（Ｉｂ）：
2014500011.tif 000083
または
2014500011.tif 000084
の化合物であり、
式中、Ｒ2は、
2014500011.tif 000085
またはＣ2-5直鎖アルキルからなる群から選択され；
Ｒ6は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＯＣ（Ｏ）Ｒまたは−ＯＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒからなる群から選択され；
Ｒ8は、
2014500011.tif 000086
Ｈまたは低級シクロアルキルからなる群から選択され；
式中、Ｒ3およびＲ4は、共にＨまたは共にＣ1-2アルキルであり；
Ｗは、−ＮＨ2、ハロ、−ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ2Ｒであり；
Ｘは−Ｓ−、−Ｏ−または−ＮＲ22−であり；
Ｙは、−Ｈ、−ＯＨ、または−ＯＲ11であり；
Ｚは、−ＣＨ−または−Ｎ−であり；
各Ｒ11は独立して−Ｃ（Ｏ）Ｒ”または−ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒ”であり；
Ｒ22は、Ｈ、ＣＨ3またはＣＨ2ＣＨ3であり；
各Ｒは独立してＣ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
Ｒ”は、Ｃ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
破線の結合は、飽和でも不飽和でもよい任意の環の存在を表し；
ただし、
Ｒ2が、
2014500011.tif 000087
または
2014500011.tif 000088
のとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000089
ではなく；
Ｒ2が、
2014500011.tif 000090
であるとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000091
または低級シクロアルキルであり；
Ｒ6がＮＨ2であるとき、Ｒ2は、
2014500011.tif 000092
またはＣ2-5アルキルであり；
またはＲ8は、
2014500011.tif 000093
ではない、
方法。
〔１１４〕酵素活性が、生きている無傷の非ヒト動物において測定される、前記〔１１３〕に記載の方法。
〔１１５〕目的の非発光酵素の活性の測定方法であって、（ａ）目的の非発光酵素に対する基質である発光源分子および前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるＯｇＬｕｃ変異体の前基質を提供することと；ｂ）発光源分子を少なくとも１つの目的の非発光酵素および少なくとも１つのＯｇＬｕｃ変異体と接触させて反応混合物を生成することと；並びに（ｃ）反応混合物の発光を測定することによって目的の非発光酵素の活性を決定することと、を含む方法。
〔１１６〕発光源分子が、式（Ｉａ）または（Ｉｂ）：
2014500011.tif 000094
または
2014500011.tif 000095
の化合物の変更形態である、前記〔１１５〕に記載の方法であって、
式中、Ｒ2は、
2014500011.tif 000096
またはＣ2-5直鎖アルキルからなる群から選択され；
Ｒ6は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＯＣ（Ｏ）Ｒまたは−ＯＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒからなる群から選択され；
Ｒ8は、
2014500011.tif 000097
Ｈまたは低級シクロアルキルからなる群から選択され；
式中、Ｒ3およびＲ4は、共にＨまたは共にＣ1-2アルキルであり；
Ｗは、−ＮＨ2、ハロ、−ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ2Ｒであり；
Ｘは-Ｓ−、-Ｏ−または-ＮＲ22−であり；
Ｙは、-Ｈ、−ＯＨ、または-ＯＲ11であり；
Ｚは、-ＣＨ−または-Ｎ−であり；
各Ｒ11は独立して-Ｃ（Ｏ）Ｒ”または-ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒ”であり；
Ｒ22は、Ｈ、ＣＨ3またはＣＨ2ＣＨ3であり；
各Ｒは独立してＣ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
Ｒ”は、Ｃ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
破線の結合は、飽和でも不飽和でもよい任意の環の存在を表し；
ただし、
Ｒ2が、
2014500011.tif 000098
または
2014500011.tif 000099
のとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000100
ではなく；
Ｒ2が、
2014500011.tif 000101
であるとき、Ｒ8は、
2014500011.tif 000102
または低級シクロアルキルであり；
Ｒ6がＮＨ2であるとき、Ｒ2は、
2014500011.tif 000103
またはＣ2-5アルキルであり；
またはＲ8は、
2014500011.tif 000104
ではない、
方法。
〔１１７〕目的の非発光酵素がプロテアーゼ酵素、シトクロムＰ４５０酵素、モノアミンオキシダーゼ酵素、またはグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ酵素である、前記〔１１５〕および〔１１６〕のいずれか一項に記載の方法。
〔１１８〕非発光酵素の活性が生きている無傷動物において測定される、前記〔１１５〕〜〔１１７〕のいずれか一項に記載の方法。
〔１１９〕試料中の少なくとも２つの分子の存在を検出するための方法であって、試料を前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるＯｇＬｕｃ変異体を含む第一のレポーター分子に接触させることであって、第一のレポーター分子が試料の第一の成分に機能的に連結されることと；試料を第二のレポーター分子に接触させることであって、第二のレポーター分子が試料の第二の成分に機能的に連結されることと、；第一のレポーター分子および第二のレポーター分子の存在を検出して、試料中の第一の成分および第二の成分の存在および／または量を決定すること、を含む方法。
〔１２０〕細胞中の少なくとも２つの分子の存在を検出するための方法であって、細胞を前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるＯｇＬｕｃ変異体を含む第一のレポーター分子に接触させることであって、第一のレポーター分子が試料の第一の成分に機能的に連結されることと；試料を第二のレポーター分子に接触させることであって、第二のレポーター分子が試料の第二の成分に機能的に連結されることと；第一のレポーター分子および第二のレポーター分子の存在を検出して、試料中の第一の成分および第二の成分の存在および／または量を決定すること、を含む方法。
〔１２１〕ＯｇＬｕｃ変異体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの生成方法であって、
（ａ）親ＯｇＬｕｃポリペプチドおよび少なくとも１つの異種ポリペプチドを含む親融合タンパク質コンストラクトを用いて変異融合タンパク質のライブラリーを作製することと；並びに
（ｂ）親融合タンパク質コンストラクトと比較して増強された発光、増強された酵素安定性または増強された生体適合性のうちの少なくとも１つのために前記ライブラリーをスクリーニングすること、
を含む方法。
〔１２２〕異種ポリペプチドがＯｇＬｕｃポリペプチドに対してＣ末端側である、前記〔１２１〕に記載の方法。
〔１２３〕異種ポリペプチドがＯｇＬｕｃポリペプチドに対してＮ末端側である、前記〔１２１〕に記載の方法。
〔１２４〕異種ポリペプチドがＨａｌｏＴａｇ（登録商標）である、前記〔１２１〕〜〔１２３〕のいずれか一項に記載の方法。
〔１２５〕融合タンパク質コンストラクトが２つの異種ポリペプチドを含む、前記〔１２１〕に記載の方法。
〔１２６〕異種ポリペプチドの一方がＯｇＬｕｃポリペプチドに対しＮ末端側であり、もう一方の異種ポリペプチドがＯｇＬｕｃポリペプチドに対しＣ末端側である、前記〔１２５〕に記載の方法。
〔１２７〕異種ポリペプチドがＨａｌｏＴａｇ（登録商標）およびＩｄである、前記〔１２５〕または〔１２６〕に記載の方法。
〔１２８〕前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドまたはその断片を含むベクター。
〔１２９〕前記〔１〕〜〔８６〕のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドまたはその断片を含む、循環置換されたルシフェラーゼ。
〔１３０〕生物中で使用するためのルシフェラーゼをコードするコドン最適化ポリヌクレオチドの生成方法であって、ルシフェラーゼ中の各アミノ酸に対し、前記アミノ酸をコードするのに前記生物において使用される２つの最も頻繁に使用されるコドンから１つのコドンを無作為に選択し、第一のコドン最適化ポリヌクレオチドを生成すること、を含む方法。
〔１３１〕前記アミノ酸をコードするのに前記生物において使用される２つの最も頻繁に使用されるコドンのうちのもう一方を選択し、第二のコドン最適化ポリヌクレオチドを生成することをさらに含む、前記〔１３０〕に記載のコドンを最適化する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１に対して少なくとも７０％の配列同一性を有し、配列番号３に対して１つ以上のアミノ酸置換を含む発光ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドであって、少なくとも１つのアミノ酸置換が、配列番号１の１８位、２７位、４３位、３８位、１０９位、１５位、１９位、２１位、２２位、３６位、４０位、５６位、５８位、７０位、９３位、９５位、１０２位、１１０位、１１２位、１１９位、１２７位、１２８位、１４９位、１５２位、１５５位、１５８位、１５９位、１位、６位、１０位、１４位、１６位、２４位、２５位、３１位、３２位、３９位、４２位、４６位、４７位、４８位、４９位、５０位、５５位、５９位、６０位、６６位、６７位、６９位、７１位、７４位、８６位、８７位、９４位、９６位、９７位、９８位、１００位、１０６位、１１１位、１１３位、１１７位、１２５位、１２６位、１３０位、１３６位、１４２位、１４５位、１４６位、１４７位、１４８位、１５０位、１５４位、１６３位、又は１６８位に対応する位置にあり、前記発光ポリペプチドが配列番号３と比較して増強された発光を有する、前記単離ポリヌクレオチド。
【請求項２】
前記発光ポリペプチドが、配列番号１に対して、５４位及び９０位においてアミノ酸置換を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
配列番号１の５４位に対応する位置のアミノ酸がイソロイシン又はアラニンであり、配列番号１の９０位に対応する位置のアミノ酸がバリンである、請求項２に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
前記発光ポリペプチドが、配列番号１に対して、１８位、６８位、７２位及び７５位のうちの１つ以上においてアミノ酸置換を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
配列番号１の１８位に対応する位置のアミノ酸がロイシンであり、配列番号１の６８位に対応する位置のアミノ酸がチロシンであり、配列番号１の７２位に対応する位置のアミノ酸がグルタミンであり、配列番号１の７５位に対応する位置のアミノ酸がリジンである、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記発光ポリペプチドが、配列番号１に対して、３３位、２７位、４３位及び６８位のうちの１つ以上においてアミノ酸置換を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
配列番号１の３３位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギンであり、配列番号１の２７位に対応する位置のアミノ酸がバリンであり、配列番号１の４３位に対応する位置のアミノ酸がアルギニンであり、配列番号１の６８位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン酸である、請求項６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
前記発光ポリペプチドが、配列番号１の１１位、４４位、１１５位、１２４位又は１３８位に対応する位置において少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、配列番号１の１１位に対応する位置においてグルタミンに、配列番号１の４４位に対応する位置においてバリンに、配列番号１の１１５位に対応する位置においてプロリンに、配列番号１の１２４位に対応する位置においてグルタミンに、又は配列番号１の１３８位に対応する位置においてチロシンに対応する、請求項８に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
前記発光ポリペプチドが目的のポリペプチドと連結され、前記目的のポリペプチドおよび前記発光ポリペプチドが融合タンパク質として発現されることが可能である、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１】
前記発光ポリペプチドが可溶性の単量体である、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１２】
請求項１に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１３】
前記ポリヌクレオチドがプロモーターに機能的に連結されている請求項１２に記載のベクター。
【請求項１４】
請求項１に記載のポリヌクレオチドを含む細胞。
【請求項１５】
請求項１４に記載の細胞を含む非ヒト遺伝子導入動物。
【請求項１６】
請求項１に記載のポリヌクレオチドによってコードされる発光ポリペプチド。
【請求項１７】
請求項１に記載のポリヌクレオチドによってコードされる発光ポリペプチドを含む融合タンパク質。
【請求項１８】
請求項１に記載のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを含む、循環置換されたルシフェラーゼ。
【請求項１９】
請求項１に記載のポリヌクレオチドを含むキット。
【請求項２０】
以下のうちの少なくとも１つをさらに含む、請求項１９に記載のキット：
（ａ）式（Ｉａ）または（Ｉｂ）：
【化１】
2014500011.tif 000105
または
【化２】
2014500011.tif 000106
の化合物であって、
式中、Ｒ2は、
【化３】
2014500011.tif 000107
またはＣ2-5直鎖アルキルからなる群から選択され；
Ｒ6は、−Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ2、−ＯＣ（Ｏ）Ｒまたは−ＯＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒからなる群から選択され；
Ｒ8は、
【化４】
2014500011.tif 000108
Ｈまたは低級シクロアルキルからなる群から選択され；
式中、Ｒ3およびＲ4は、共にＨまたは共にＣ1-2アルキルであり；
Ｗは、−ＮＨ2、ハロ、−ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ2Ｒであり；
Ｘは-Ｓ−、-Ｏ−または-ＮＲ22−であり；
Ｙは、-Ｈ、−ＯＨ、または-ＯＲ11であり；
Ｚは、-ＣＨ−または-Ｎ−であり；
各Ｒ11は独立して-Ｃ（Ｏ）Ｒ”または-ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒ”であり；
Ｒ22は、Ｈ、ＣＨ3またはＣＨ2ＣＨ3であり；
各Ｒは独立してＣ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
Ｒ”は、Ｃ1-7直鎖アルキルまたはＣ1-7分岐鎖アルキルであり；
破線の結合は、飽和でも不飽和でもよい任意の環の存在を表し；
ただし、
Ｒ2が、
【化５】
2014500011.tif 000109
または
【化６】
2014500011.tif 000110
のとき、Ｒ8は、
【化７】
2014500011.tif 000111
ではなく；
Ｒ2が、
【化８】
2014500011.tif 000112
であるとき、Ｒ8は、
【化９】
2014500011.tif 000113
または低級シクロアルキルであり；
Ｒ6がＮＨ2であるとき、Ｒ2は、
【化１０】
2014500011.tif 000114
またはＣ2-5アルキルであり；
またはＲ8は、
【化１１】
2014500011.tif 000115
ではない、
化合物
；並びに
（ｂ）緩衝液試薬。