【手続補正書】
【提出日】平成23年5月12日(2011.5.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
本発明は、ＲＮＡ誘導遺伝子調節または遺伝子分析、特に、ＲＮＡ干渉に対して使用するためのＲＮＡ鎖に取り込まれた１個または複数個のヒドロキシメチル置換モノマーを有するＲＮＡ複合体を提供する。そのため、本発明の目的は、通常使用されるＲＮＡ複合体と比較して、オフターゲット効果が低いＲＮＡ複合体を提供することである。別の目的は、インターフェロン応答性の低減を誘導するＲＮＡ複合体を提供することである。さらに別の目的は、細胞培養物中で、またはｉｎ  ｖｉｖｏで酵素的分解への安定性に関する特性を改善したＲＮＡ複合体を提供することである。さらに別の目的は、未改変ＲＮＡ複合体に対して、細胞培養物中で、またはｉｎ  ｖｉｖｏで、遺伝子調節機能、例えば、遺伝子サイレンシング効果の強化を示すＲＮＡ複合体を提供することである。さらなる目的は、特定の器官または組織に対して標的とされるＲＮＡ複合体、および細胞膜を通過することができるＲＮＡ複合体を提供することである。本発明は、ヒドロキシメチル置換モノマーのオリゴヌクレオチドへの取り込みに適切なモノマー、およびそれらの合成のための方法も提供する。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
非環式ヌクレオチドモノマーを含むオリゴヌクレオチド。
（項目２）
前記非環式ヌクレオチドモノマーは、２’−３’−セコ−ヌクレオチドモノマーである、項目２に記載のオリゴヌクレオチド。
（項目３）
前記非環式ヌクレオチドモノマーは、以下のモノマーＤ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、およびＪから成る群より選択され、
【化２７】
2010528041.tif 000001
式中、Ｒは、Ｈ、アルキル、コレステロール誘導体、フルオロフォア、ポリアミン、脂肪酸、アミノ酸、単糖類、およびポリペプチドから成る群より選択される、項目１〜２のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド。
（項目４）
１５〜４０個のヌクレオチドモノマーを含む、項目１〜３のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド。
（項目５）
１〜５個の非環式ヌクレオチドモノマーを含む、項目１〜５のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド。
（項目６）
４個未満の連続的ＤＮＡモノマーを含む、項目１〜５のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド。
（項目７）
５０％を上回るＲＮＡモノマーを含む、項目１〜６のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド。
（項目８）
２’−Ｏ−アルキル−ＲＮＡモノマー、２’−アミノ−ＤＮＡモノマー、２’−フルオロ−ＤＮＡモノマー、ＬＮＡモノマー、ＰＮＡモノマー、ＨＮＡモノマー、ＡＮＡモノマー、ＦＡＮＡモノマー、ＣｅＮＡモノマー、ＥＮＡモノマー、ＤＮＡモノマー、およびＩＮＡモノマーから成る群より選択されるヌクレオチド類似体をさらに含む、項目１〜７のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド。
（項目９）
少なくとも２つのＬＮＡヌクレオチド類似体を含む、項目１〜８のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１０）
ホスホロチオエート結合またはボラノホスフェート結合を含む、項目１〜９のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１１）
前記オリゴヌクレオチドは、該オリゴヌクレオチドに相補的な標的ｍＲＮＡのＲＩＳＣ依存性翻訳抑制または分解を媒介することが可能である、項目１〜１０のいずれかに記載のオリゴヌクレオチド。
（項目１２）
項目１〜１１のいずれかに記載の少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む、ＲＮＡ二本鎖。
（項目１３）
１５〜４０個の多数の塩基対を含む、項目１２に記載のＲＮＡ二本鎖。
（項目１４）
１４〜２６個の多数の塩基対を含む、項目１２に記載のＲＮＡ二本鎖。
（項目１５）
少なくとも１つの突出を含む、項目１２〜１４のいずれかに記載のＲＮＡ二本鎖。
（項目１６）
前記突出の長さは、１〜１４個のヌクレオチドである、項目１５に記載のＲＮＡ二本鎖。
（項目１７）
少なくとも１つの３’突出を含む、項目１２〜１５のいずれかに記載のＲＮＡ二本鎖。
（項目１８）
前記少なくとも１つの３’突出の長さは、１〜１４個のヌクレオチドである、項目１７に記載のＲＮＡ二本鎖。
（項目１９）
少なくとも１つの平滑末端を含む、項目１２に記載のＲＮＡ二本鎖。
（項目２０）
前記ＲＮＡ二本鎖は、標的ｍＲＮＡに相補的なヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドを含み、ここで、該ＲＮＡ二本鎖は、該標的ｍＲＮＡの発現を低減させる、項目１２〜１９のいずれかに記載のＲＮＡ二本鎖。
（項目２１）
前記ＲＮＡ二本鎖は、非環式モノマーの代わりに天然ＲＮＡモノマーを有する同一のＲＮＡ二本鎖と比較して、オフターゲット効果を低下させる、項目１２〜２０のいずれかに記載のＲＮＡ二本鎖。
（項目２２）
前記ＲＮＡ二本鎖は、非環式モノマーの代わりに天然ＲＮＡモノマーを有する同一のＲＮＡ二本鎖と比較して、有効性を増大または持続させる、項目１２〜２１のいずれかに記載のＲＮＡ二本鎖。
（項目２３）
前記ＲＮＡ二本鎖は、非環式モノマーの代わりに天然ＲＮＡモノマーを有する同一のＲＮＡ二本鎖と比較して、安定性を改善させる、項目１２〜２２のいずれかに記載のＲＮＡ二本鎖。
（項目２４）
前記ＲＮＡ二本鎖は、非環式モノマーの代わりに天然ＲＮＡモノマーを有する同一のＲＮＡ二本鎖と比較して、免疫刺激を低減させる、項目１２〜２３のいずれかに記載のＲＮＡ二本鎖。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非環式モノマーを含むＲＮＡ二本鎖。
【請求項２】
前記非環式モノマーは、２’−３’−セコ−ヌクレオチドモノマーである、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項３】
前記非環式モノマーは、２’−ヒドロキシ基が、アミノ基、アシル化アミノ基、アルキル化アミノ基、ジアルキル化アミノ基、カルバモイル化アミノ基、ピペラジノ基、アシル化ピペラジノ基、アルキル化ピペラジノ基、カルバモイル化ピペラジノ基、メルカプト基、アシル化メルカプト基、アルキル化メルカプト基、ジスルフィド基、アシル化ヒドロキシ基、アルキル化ヒドロキシ基、またはカルバモイル化ヒドロキシ基に置換された２’，３’−セコ−ヌクレオチドモノマーである、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項４】
前記非環式モノマーは、モノマーＤ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、およびＪから成る群より選択され、
【化２７−２】
2010528041.tif 000002
式中、Ｒは、Ｈ、アルキル、コレステロール誘導体、フルオロフォア、ポリアミン、脂肪酸、アミノ酸、単糖類、またはポリペプチドである、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項５】
前記非環式モノマーは、アンチセンス鎖の種領域に位置する、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項６】
１５〜４０個のヌクレオチドおよび非環式モノマーをさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項７】
１〜５個の非環式ヌクレオチドモノマーをさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項８】
４個未満の連続的ＤＮＡモノマーをさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項９】
５０％を上回るＲＮＡモノマーをさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項１０】
２’−Ｏ−アルキル−ＲＮＡモノマー、２’−アミノ−ＤＮＡモノマー、２’−フルオロ−ＤＮＡモノマー、ＬＮＡモノマー、ＰＮＡモノマー、ＨＮＡモノマー、ＡＮＡモノマー、ＦＡＮＡモノマー、ＣｅＮＡモノマー、ＥＮＡモノマー、ＤＮＡモノマー、およびＩＮＡモノマーから選択されるヌクレオチド類似体をさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項１１】
少なくとも２つのＬＮＡヌクレオチド類似体をさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項１２】
ホスホロチオエート結合またはボラノホスフェート結合をさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項１３】
前記ＲＮＡ二本鎖は、該ＲＮＡ二本鎖に相補的な標的ｍＲＮＡのＲＩＳＣ依存性翻訳抑制または分解を媒介することが可能である、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項１４】
１５〜４０個の数の塩基対をさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項１５】
１４〜２６個の数の塩基対をさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項１６】
少なくとも１つの突出をさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項１７】
少なくとも１つの突出をさらに含み、該突出の長さは、１〜１４個のヌクレオチドである、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項１８】
少なくとも１つの突出をさらに含み、該突出は、少なくとも１つの非環式モノマーを含む、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項１９】
少なくとも１つの３’突出をさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項２０】
少なくとも１つの３’突出をさらに含み、該３’突出の長さは、１〜１４個のヌクレオチドである、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項２１】
少なくとも１つの平滑末端をさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項２２】
標的ｍＲＮＡに相補的なヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項２３】
非環式モノマーを含むオリゴヌクレオチドであって、該非環式モノマーは、２’−ヒドロキシ基が、アミノ基、アシル化アミノ基、アルキル化アミノ基、ジアルキル化アミノ基、カルバモイル化アミノ基、ピペラジノ基、アシル化ピペラジノ基、アルキル化ピペラジノ基、カルバモイル化ピペラジノ基、メルカプト基、アシル化メルカプト基、アルキル化メルカプト基、ジスルフィド基、アシル化ヒドロキシ基、アルキル化ヒドロキシ基、またはカルバモイル化ヒドロキシ基に置換された２’，３’−セコ−ヌクレオチドモノマーである、オリゴヌクレオチド。
【請求項２４】
前記非環式ヌクレオチドモノマーは、以下のモノマーＦ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、およびＪから成る群より選択され、
【化２７−３】
2010528041.tif 000003
式中、Ｒは、Ｈ、アルキル、コレステロール誘導体、フルオロフォア、ポリアミン、脂肪酸、アミノ酸、単糖類、またはポリペプチドである、請求項１に記載のＲＮＡ二本鎖。
【請求項２５】
請求項１〜２４のいずれか一項に記載のＲＮＡ二本鎖またはオリゴヌクレオチド、および医薬的に許容可能な希釈剤、担体、またはアジュバントを含む、医薬組成物。
【請求項２６】
細胞または生物における標的核酸の核酸改変を媒介するための組成物であって、請求項１〜２４のいずれか一項に記載のＲＮＡ二本鎖またはオリゴヌクレオチドを含む、組成物。
【請求項２７】
治療標的のための薬剤の調製における、請求項１〜２４のいずれか一項に記載のＲＮＡ二本鎖またはオリゴヌクレオチドの使用。
【請求項２８】
標的ｍＲＮＡの発現レベルを減少させるための薬剤の調製における、請求項１〜２４のいずれか一項に記載のＲＮＡ二本鎖またはオリゴヌクレオチドの使用。
【請求項２９】
疾患の治療のための組成物であって、請求項１〜２４のいずれか一項に記載のＲＮＡ二本鎖またはオリゴヌクレオチドを含む、組成物。
【請求項３０】
標的ｍＲＮＡの発現レベルを減少させるための組成物であって、請求項１〜２４のいずれか一項に記載のＲＮＡ二本鎖またはオリゴヌクレオチドを含む、組成物。
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2010528041.tif 000004
【図２】
2010528041.tif 000005
【図３】
2010528041.tif 000006
【図４】
2010528041.tif 000007
【図５】
2010528041.tif 000008
【図６】
2010528041.tif 000009
【図７】
2010528041.tif 000010
【図８】
2010528041.tif 000011
【図９】
2010528041.tif 000012