【手続補正書】
【提出日】平成24年4月24日(2012.4.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
低いコアフコシル化を有する修飾抗体又は抗体誘導体を製造する方法であって、
糖鎖の還元末端のN-アセチルグルコサミンを介してFcドメインに結合した少なくとも一つの複合N-グリコシド結合糖鎖を有するFcドメインを有する抗体又は抗体誘導体を発現する宿主細胞を有効量のフコース類似体を含む培地中で適切な成長条件下で培養する段階、及び
前記抗体又は抗体誘導体を細胞から分離する段階を含み、
ここで、前記フコース類似体が以下の式(III)又は(IV)の一つ
【化１】
2011519567.tif 000001
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、式(III)又は(IV)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、フルオロ、クロロ、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R2a及びR3aのそれぞれは、H、F及びClからなる群から独立に選択され、
R5は、-CH3、-CHF2、-CH=C=CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択され、
R5が-CH=C=CH2又は-CHF2以外である場合、R1、R2、R3、R2a及びR3aの少なくとも一つは、フルオロ又はクロロであり、
前記抗体又は抗体誘導体が前記フコース類似体の不存在下で培養した宿主細胞からの抗体又は抗体誘導体と比較して低いコアフコシル化を有する、
あるいは、前記フコース類似体が以下の式(I)又は(II)の一つ
【化２】
2011519567.tif 000002
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、
式(I)又は(II)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択され、
前記抗体又は抗体誘導体が前記フコース類似体の不存在下で培養した宿主細胞からの抗体又は抗体誘導体と比較して低いコアフコシル化を有する、
あるいは、前記フコース類似体が以下の式(V)又は(VI)の一つ
【化３】
2011519567.tif 000003
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、式(V)又は(VI)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1、R2、R2a、R3、R3a及びR4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル、-OC1〜C10アルキル及び小電子求引基からなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-CH3、-CH2X、非置換又はハロゲンで置換された-CH(X')-C1〜C4アルキル、非置換又はハロゲンで置換された-CH(X')-C2〜C4アルケン、非置換又はハロゲンで置換された-CH(X')-C2〜C4アルキン、-CH=C(R10)(R11)、-C(CH3)=C(R12)(R13)、-C(R14)=C=C(R15)(R16)、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換された-C3炭素環、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換された-CH(X')-C3炭素環、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換されたC3複素環、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換された-CH(X')-C3複素環、-CH2N3、-CH2CH2N3及びベンジルオキシメチルからなる群から選択されるメンバーか、或いはR5は、小電子求引基であり、
R10は、水素或いは非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R11は、非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R12は、水素、ハロゲン或いは非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R13は、水素或いは非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R14は、水素又はメチルであり、
R15及びR16は、水素、メチル及びハロゲンから独立に選択され、
Xは、ハロゲンであり、
X'は、ハロゲン又は水素であり、
さらに、R1、R2、R2a、R3及びR3aのそれぞれが場合によって水素であり、R1、R2、R2a、R3及びR3aのうち隣接炭素原子上の二つが場合によって結合して、前記隣接炭素原子間の二重結合を形成しており、
ただし、(i)R2及びR2aが両方とも水素である、(ii)R3及びR3aが両方とも水素である、(iii)R1が水素である、(iv)二重結合が前記隣接炭素原子間に存在する、又は(v)R5がベンジルオキシメチルである場合を除き、R1、R2、R2a、R3、R3a、R4及びR5の少なくとも一つは、小電子求引基であり、或いはR5は、ハロゲン、不飽和部位、炭素環、複素環又はアジドを含み、
前記抗体又は抗体誘導体が前記フコース類似体の不存在下で培養した宿主細胞からの抗体又は抗体誘導体と比較して低いコアフコシル化を有する、上記方法。
【請求項２】
前記フコース類似体の5%未満が前記抗体又は抗体誘導体の複合N-グリコシド結合糖鎖に組み込まれる、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記フコース類似体の有効量が、抗体又は抗体誘導体の複合N-グリコシド結合糖鎖へのフコースの組み込みを少なくとも80%減少させるのに十分な類似体の量である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記フコース類似体が式(III)又は(IV)の一つからなる群より選択され、R2がFである、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
【請求項５】
前記フコース類似体が式(III)又は(IV)の一つからなる群より選択され、R1及びR2がそれぞれFである、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
【請求項６】
前記フコース類似体が式(III)又は(IV)の一つからなる群より選択され、R1、R3及びR4は、-OH及び-OAcからそれぞれ独立に選択され、ここで、R2はFであり、R2a及びR3aは、それぞれHであり、R5は、-CH3である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
【請求項７】
前記フコース類似体が式(I)又は(II)の一つからなる群より選択され、ここで、R1〜R4のそれぞれが-OH及び-OC(O)C1〜C10アルキルからなる群から独立に選択される、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
【請求項８】
前記フコース類似体が式(I)又は(II)の一つからなる群より選択され、ここで、R5が-C≡CH及び-C≡CCH3からなる群から選択される、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
【請求項９】
前記フコース類似体が式(I)又は(II)の一つからなる群より選択され、ここで、  R5が-C(O)OCH3又は-CH2CNである、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１０】
前記フコース類似体が、表１に示されるアルキニルフコース、アルキニルフコーステトラアセテート、5-プロピニルフコーステトラアセテート、アルキニルフコーステトラプロパノエート、アルキニルフコーステトラ-ｎ-ヘキサノエート、アルキニルフコースジ（トリメチルアセテート）、アルキニルフコースペルニコチネート、アルキニルフコースペルイソニコチネート、アルキニルフコースペル-PEGエステル、1-メチル-2,3,4-トリアセチルアルキニルフコースもしくはアルキニルフコースペルイソブタノエート、5-シアノフコーステトラアセテートもしくは5-メチルエステルフコーステトラアセテート、又は表２に示される2-デオキシ-2-フルオロフコースジアセテート、2-デオキシ-2-クロロフコーストリアセテート、2-デオキシ-2-フルオロフコース、2-デオキシ-2-フルオロフコースペルアセテート、1,2-ジフルオロ-1,2-ジデオキシフコースペルアセテートもしくは6,6-ジフルオロフコーステトラアセテートである、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１１】
前記培地が少なくとも500リットルの容積を有する、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１２】
有効量のフコース類似体を含む、低いコアフコシル化を有する抗体又は抗体誘導体の産生のための哺乳類細胞培養培地であって、
ここで、前記フコース類似体が以下の式(III)又は(IV)の一つ
【化４】
2011519567.tif 000004
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、式(III)又は(IV)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、フルオロ、クロロ、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R2a及びR3aのそれぞれは、H、F及びClからなる群から独立に選択され、
R5は、-CH3、-CHF2、-CH=C=CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択され、
R5が-CH=C=CH2又は-CHF2以外である場合、R1、R2、R3、R2a及びR3aの少なくとも一つは、フルオロ又はクロロである、
あるいは、前記フコース類似体が以下の式(I)又は(II)の一つ
【化５】
2011519567.tif 000005
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、式(I)又は(II)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択される、
あるいは、前記フコース類似体が以下の式(V)又は(VI)の一つ
【化６】
2011519567.tif 000006
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択され、式(V)又は(VI)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1、R2、R2a、R3、R3a及びR4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル、-OC1〜C10アルキル及び小電子求引基からなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-CH3、-CH2X、非置換又はハロゲンで置換された-CH(X')-C1〜C4アルキル、非置換又はハロゲンで置換された-CH(X')-C2〜C4アルケン、非置換又はハロゲンで置換された-CH(X')-C2〜C4アルキン、-CH=C(R10)(R11)、-C(CH3)=C(R12)(R13)、-C(R14)=C=C(R15)(R16)、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換された-C3炭素環、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換された-CH(X')-C3炭素環、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換されたC3複素環、非置換又はメチル若しくはハロゲンで置換された-CH(X')-C3複素環、-CH2N3、-CH2CH2N3及びベンジルオキシメチルからなる群から選択されるメンバーか、或いはR5は、小電子求引基であり、
R10は、水素或いは非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R11は、非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R12は、水素、ハロゲン或いは非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R13は、水素或いは非置換又はハロゲンで置換されたC1〜C3アルキルであり、
R14は、水素又はメチルであり、
R15及びR16は、水素、メチル及びハロゲンから独立に選択され、
Xは、ハロゲンであり、
X'は、ハロゲン又は水素であり、
さらに、R1、R2、R2a、R3及びR3aのそれぞれが場合によって水素であり、R1、R2、R2a、R3及びR3aのうち隣接炭素原子上の二つが場合によって結合して、前記隣接炭素原子間の二重結合を形成しており、
ただし、(i)R2及びR2aが両方とも水素である、(ii)R3及びR3aが両方とも水素である、(iii)R1が水素である、(iv)二重結合が前記隣接炭素原子間に存在する、又は(v)R5がベンジルオキシメチルである場合を除き、R1、R2、R2a、R3、R3a、R4及びR5の少なくとも一つは、小電子求引基であり、或いはR5は、ハロゲン、不飽和部位、炭素環、複素環又はアジドを含む、上記哺乳類細胞培養培地。
【請求項１３】
前記フコース類似体が式(III)又は(IV)の一つからなる群より選択され、R1、R2、R2a、R3及びR3aの少なくとも一つがフルオロ又はクロロである、請求項12に記載の培地。
【請求項１４】
前記フコース類似体が式(III)又は(IV)の一つからなる群より選択され、R1、R2、R2a、R3及びR3aの二つがフルオロ又はクロロである、請求項12に記載の培地。
【請求項１５】
前記フコース類似体が式(I)又は(II)の一つからなる群より選択され、R5が-C≡CHであり、R1〜R4が-OAcである、請求項12に記載の培地。
【請求項１６】
前記フコース類似体が、表１に示されるアルキニルフコース、アルキニルフコーステトラアセテート、5-プロピニルフコーステトラアセテート、アルキニルフコーステトラプロパノエート、アルキニルフコーステトラ-ｎ-ヘキサノエート、アルキニルフコースジ（トリメチルアセテート）、アルキニルフコースペルニコチネート、アルキニルフコースペルイソニコチネート、アルキニルフコースペル-PEGエステル、1-メチル-2,3,4-トリアセチルアルキニルフコースもしくはアルキニルフコースペルイソブタノエート、5-シアノフコーステトラアセテートもしくは5-メチルエステルフコーステトラアセテート、又は表２に示される2-デオキシ-2-フルオロフコースジアセテート、2-デオキシ-2-クロロフコーストリアセテート、2-デオキシ-2-フルオロフコース、2-デオキシ-2-フルオロフコースペルアセテート、1,2-ジフルオロ-1,2-ジデオキシフコースペルアセテートもしくは6,6-ジフルオロフコーステトラアセテートである、請求項12に記載の培地。
【請求項１７】
以下の式(III)又は(IV)からなる群から選択される式を有するフコース類似体
【化７】
2011519567.tif 000007
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物[ここで、
式(III)又は(IV)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、フルオロ、クロロ、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)C2〜C10アルケニル、-OC(O)C2〜C10アルキニル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキレン(アリール)、-OC(O)C2〜C10アルキニル(アリール)、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OC(O)C2〜C10アルケニレン(複素環)、-OC(O)C2〜C10アルキニル複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3、-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3、-O-tri-C1〜C3アルキルシリル及び-OC1〜C10アルキルからなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R2a及びR3aのそれぞれは、H、F及びClからなる群から独立に選択され、
R5は、-CH3、-CHF2、-CH=C=CH2、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及びメトキシランからなる群から選択され、
R5が-CH=C=CH2又は-CHF2以外である場合、R1、R2、R3、R2a及びR3aの少なくとも一つは、フルオロ又はクロロである]
あるいは、以下の式(I)又は(II)の一つを有するフコース類似体
【化８】
2011519567.tif 000008
或いはその生物学的に許容される塩又は溶媒和物[ここで、
式(I)又は(II)のそれぞれは、アルファ若しくはベータアノマー又は対応するアルドース形であってよく、
R1〜R4のそれぞれは、-OH、-OC(O)H、-OC(O)C1〜C10アルキル、-OC(O)アリール、-OC(O)複素環、-OC(O)C1〜C10アルキレンアリール、-OC(O)C1〜C10アルキレン複素環、-OCH2OC(O)アルキル、-OCH2OC(O)Oアルキル、-OCH2OC(O)アリール、-OCH2OC(O)Oアリール、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3及び-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3からなる群から独立に選択され、各nは、0〜5から独立に選択される整数であり、
R5は、-C≡CH、-C≡CCH3、-CH2C≡CH、-C(O)OCH3、-CH(OAc)CH3、-CN、-CH2CN、-CH2X(XはBr、Cl又はIである)及び-メトキシランからなる群から選択され、
ただし、R1〜R4のいずれかが-OH又は-OAcである場合、R5は-C≡CHでない]。