【手続補正書】
【提出日】平成25年12月17日(2013.12.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）  フレームワーク領域（ＦＲ）２内に位置する少なくとも２つのシステイン残基であって、ＦＲ２のシステイン残基の少なくとも２つが化合物に結合しない場合にフレームワーク領域内ジスルフィド結合がＦＲ２のシステイン残基間に形成可能である残基；および／または
（ｉｉ）  フレームワーク領域（ＦＲ）３内に位置する少なくとも２つのシステイン残基であって、ＦＲ３のシステイン残基の少なくとも２つが化合物に結合しない場合にフレームワーク領域内ジスルフィド結合がＦＲ３のシステイン残基間に形成可能である残基
を含む免疫グロブリン可変領域を含む単離タンパク質。
【請求項２】
免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）および免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む単離タンパク質であって、可変領域の少なくとも１つが、
（ｉ）  フレームワーク領域（ＦＲ）２内に位置する少なくとも２つのシステイン残基であって、ＦＲ２のシステイン残基の少なくとも２つが化合物に結合しない場合にフレームワーク領域内ジスルフィド結合がＦＲ２のシステイン残基間に形成可能である残基；および／または
（ｉｉ）  フレームワーク領域（ＦＲ）３内に位置する少なくとも２つのシステイン残基であって、ＦＲ３のシステイン残基の少なくとも２つが化合物に結合しない場合にフレームワーク領域内ジスルフィド結合がＦＲ３のシステイン残基間に形成可能である残基
を含むタンパク質。
【請求項３】
ジスルフィド結合が非還元条件下で存在する、請求項１又は２に記載のタンパク質。
【請求項４】
システイン残基がＶＨ内にあり、ＦＲ２内のシステイン残基が、１またはそれ以上の、以下に示す領域内に位置する：
（ｉ）  カバット付番方式に従って付番された残基３６から４９の間、および／または
（ｉｉ）  カバット付番方式に従って付番された残基３９から４５の間、
並びに／または
ＦＲ３内のシステイン残基が１またはそれ以上の以下に示す領域内に位置する：
（ｉｉｉ）  カバット付番方式に従って付番された残基６６から９４の間
（ｉｖ）  カバット付番方式により付番された残基６８から８６の間、および／または
（ｖ）  カバット付番方式により付番された残基６８から８１の間
請求項２または３に記載のタンパク質。
【請求項５】
前記システイン残基が、
（ｉ）  カバット付番方式に従って付番されたＦＲ２の３９および４３の位置；
（ｉｉ）  カバット付番方式に従って付番されたＦＲ２の３９および４５の位置；
（ｉｉｉ）  カバット付番方式に従って付番されたＦＲ３の７０および７９の位置；
および／または
（ｉｖ）  カバット付番方式に従って付番されたＦＲ３の７２および７５の位置；
に位置する、請求項４に記載のタンパク質。
【請求項６】
システイン残基がＶＬ内にあり、ＦＲ２内のシステイン残基が、１またはそれ以上の以下に示す領域内に位置する：
（ｉ）  カバット付番方式に従って付番された残基３５から４９の間、および／または
（ｉｉ）  カバット付番方式に従って付番された残基３８から４４の間
、および／または、
ＦＲ３内に位置するシステイン残基が、１またはそれ以上の以下に示す領域内に位置する：
（ｉｉｉ）  カバット付番方式により付番された残基５７から８８の間
（ｉｖ）  カバット付番方式により付番された残基６３から８２の間、および／または
（ｖ）  カバット付番方式に従って付番された残基６３から７４の間
に位置する、請求項２または３に記載のタンパク質。
【請求項７】
システイン残基が、
（ｉ）  カバット付番方式に従って付番されたＦＲ２の３８および４２の位置；
（ｉｉ）  カバット付番方式に従って付番されたＦＲ２の３８および４４の位置；
および／または
（ｉｉｉ）  カバット付番方式に従って付番されたＦＲ３の６５および７２の位置；に位置する、請求項６に記載のタンパク質。
【請求項８】
ヒト上皮成長因子（Ｈｅｒ）２、腫瘍関連糖タンパク質ＴＡＧ７２、ＭＵＣ１または前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）に特異的に結合する請求項１から請求項７のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項９】
前記タンパク質が、
（ｉ）配列番号：５９、６１、６３または６５の１以上に示されるＶＨおよびＶＬ配列に少なくとも約８０％同一の配列を含むＶＨおよびＶＬを含み、ＦＲ２および／またはＦＲ３内に位置する２以上のシステイン残基を含むように改変される、または、
（ｉｉ）
配列番号：１０１，１０３，１０５，１０７，１０９，１１１，１１３，１１５，１１７，１１９，１２１，１２３，１２５，１２７，１２９，１３１，１３３，１３５，１３７，１３９，１４１，１４３，１４５，１４７または１４９の１またはそれ以上に示される配列に少なくとも約８０％同一の配列を含み、任意でＮ−末端セリン残基を含み、前記タンパク質がＦＲ２および／またはＦＲ３内に位置する前記２以上のシステイン残基を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１０】
請求項２から９のいずれか一項に記載の少なくとも１つのタンパク質を含むＦｖを含む単離タンパク質であって、少なくとも１つのＶＬが少なくとも１つのＶＨと結合して抗原結合部位を形成するタンパク質。
【請求項１１】
抗原結合部位を形成するＶＬおよびＶＨが単一のポリペプチド鎖にある、または、抗原結合部位を形成するＶＬおよびＶＨが異なるポリペプチド鎖にある、請求項１０に記載のタンパク質。
【請求項１２】
前記ＶＬおよびＶＨが単一のポリペプチド鎖にある場合、
前記タンパク質は、
（ｉ）  単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）；
（ｉｉ）  二量体ｓｃＦｖ（ｄｉ−ｓｃＦｖ）；又は
（ｉｉｉ）  Ｆｃ又は重鎖定常ドメイン（ＣＨ）２及び／又はＣＨ３に連結した（ｉ）及び／又は（ｉｉ）の少なくとも１つであり、または、
ＶＬおよびＶＨが異なるポリペプチド鎖にある場合
前記タンパク質は
（ｉ）  ダイアボディ；
（ｉｉ）  トリアボディ；
（ｉｉｉ）  テトラボディ；又は
（ｉｖ）  免疫グロブリンである、請求項１１に記載のタンパク質。
【請求項１３】
前記システイン残基がジスルフィド結合によって連結される、請求項１から１２のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１４】
前記システイン残基の少なくとも１つに結合した化合物を含み、該化合物の結合が前記タンパク質の抗原への結合を妨げない請求項１から１２のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１５】
少なくとも１つのＮ−末端スレオニンまたはセリン残基をさらに含む、請求項１から請求項１４のいずれか一項に記載のタンパク質。
【請求項１６】
スレオニン残基またはセリン残基に結合した化合物を含み、該化合物の結合が前記タンパク質の抗原への結合を妨げない請求項１５に記載のタンパク質。
【請求項１７】
前記化合物が、放射性同位体、検出可能標識、治療化合物、コロイド、毒素、核酸、ペプチド、タンパク質、被験体でタンパク質の半減期を延長する化合物、およびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１４または１６に記載のタンパク質。
【請求項１８】
前記化合物が生理学的に許容されるポリマーである、請求項１４または１６に記載のタンパク質。
【請求項１９】
前記生理学的に許容されるポリマーがポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項１８に記載のタンパク質。
【請求項２０】
前記ＰＥＧが単分散ＰＥＧである、請求項１９に記載のタンパク質。
【請求項２１】
ＦＲ２および／またはＦＲ３のシステイン残基の少なくとも１つに結合した第１化合物、およびスレオニン残基又はセリン残基に結合した第２化合物を含み、第２化合物が第１化合物と異なる、請求項１６又は１７に記載のタンパク質。
【請求項２２】
請求項１から請求項２１のいずれか一項に記載のタンパク質および薬学的に許容できる担体を含む組成物。
【請求項２３】
請求項１から請求項１２または請求項１５のいずれか一項に記載のタンパク質をコードする単離核酸。
【請求項２４】
プロモーターに操作可能に連結される請求項２３に記載の核酸を含む発現構築物。
【請求項２５】
請求項２３に記載の外来核酸および／または請求項２４の発現構築物を含む単離細胞であって、前記タンパク質を発現する細胞。
【請求項２６】
請求項１から１３または１５のいずれか一項に記載のタンパク質の産生方法であって、コードするタンパク質を産生するのに十分な条件下で請求項２３に記載の発現構築物を維持する工程、および任意でタンパク質を単離する工程を含む方法。
【請求項２７】
コードするタンパク質を産生するのに十分な条件下で請求項２４に記載の細胞を培養する工程を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
請求項１４または１６から１９のいずれか一項に記載のタンパク質の産生方法であって、
（ｉ）  請求項１から１２又は１５のいずれか一項に記載のタンパク質を得る工程；および
（ｉｉ）  タンパク質のＦＲ２および／またはＦＲ３のシステイン残基の少なくとも１つに化合物を結合することにより、タンパク質を産生する工程を含む方法。
【請求項２９】
被験体の病態の治療用又は予防の用途のための、請求項１から２１のいずれか１項に記載のタンパク質または、請求項２２に記載の組成物を含む医薬組成物。
【請求項３０】
組成物を細胞中に送達する目的で用いる、請求項１４、または請求項１６から２１のいずれか１項に記載のタンパク質または請求項２２に記載の組成物を含む医薬組成物。
【請求項３１】
被験体で抗原の局在を特定する方法又は抗原を検出する方法であって、
（ｉ）  タンパク質が抗原に結合するのに十分な時間および条件下で、請求項１４または１６から２１のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項２２に記載の組成物を被験体に投与する工程であって、タンパク質が検出可能な標識と結合する工程、ならびに
（ｉｉ）  検出可能な標識をインビボで検出又は局在を特定する工程、を含む方法。
【請求項３２】
被験体における状態の診断方法又は予後判定方法であって、タンパク質が抗原に結合して複合体を形成するのに十分な時間および条件下で、被験体からの試料を請求項１から２１のいずれか一項に記載のタンパク質又は請求項２２に記載の組成物に接触させる工程、ならびに複合体を検出する工程を含み、複合体の検出が被験体の状態の診断又は予後判定である方法。
【請求項３３】
複合体のレベルを測定する工程を含み、該複合体のレベルの増強又は低減が被験体の状態の診断又は予後判定である、請求項３２に記載の方法。