(57)【要約】【課題】カスパーゼ−９阻害剤の提供。【解決手段】本発明は、ツバキ科チャノキ葉エキス、バラ科トルメンチラエキス、ブドウ科ブドウ葉エキス、ツバキ科コウチャエキス、ツバキ科アッサムチャエキス、マメ科アスパラサスリネアリスエキス、シナノキ科ボダイジュエキス、ムラサキ科コンフリーエキス、ユリアニア科クアチャララーテエキス、ダテ科地上部エキス、ツツジ科葉エキス、オトギリソウ科樹皮エキス、ツバキ科樹皮エキス、シナノキ科幹エキス、クスノキ科幹又は葉エキス、カンラン科樹皮エキス、ハイノキ科樹皮エキス及びクワ科樹皮エキスから成る群から選ばれる１又は複数の生薬エキスをカスパーゼ−９活性阻害成分として含んで成る、カスパーゼ−９阻害組成物を提供する。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ツバキ科チャノキ（Ｔｈｅａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ  Ｌ．  （Ｔｈｅａｃｅａｅ））葉エキス、バラ科トルメンチラ（Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ  ｔｏｒｍｅｎｔｉｌｌａ  Ｎｅｃｋ．）エキス、ブドウ科ブドウ葉（Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ  Ｌ．）エキス、ツバキ科コウチャ（Ｔｈｅａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ  Ｌ．）エキス、ツバキ科アッサムチャ（Ｔｈｅａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ  Ｌ．  ｖａｒ．  ａｓｓａｍｉｃａ  Ｐｉｅｒｒｅ）エキス、マメ科アスパラサスリネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ  （Ｎ．Ｌ．Ｂｕｒｍ．）  Ｒ．Ｄａｈｌｇｒ．）エキス、シナノキ科ボダイジュ（Ｔｉｌｉａ  ｃｏｒｄａｔａ  Ｍｉｌｌｅｒ（和名：フエボダイジュ）エキス、ムラサキ科コンフリー（Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ  Ｌ．（和名：ヒレハリソウ））エキス、ユリアニア科クアチャララーテ（Ｊｕｌｉａｎｉａ  ａｄｓｔｒｉｎｇｅｎｓ）エキス、ダテ科（Ｒｕｍｅｘ  ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ  Ｗｅｉｎｍ）地上部エキス、ツツジ科（Ａｒｃｔｏｓｔａｐｈｙｌｏｓ  ｐａｔｕｌａ  Ｇｒｅｅｎｅ）葉エキス、オトギリソウ科（Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ  Ｃａｍｂｅｓｓ）樹皮エキス、ツバキ科（Ｓｃｈｉｍａ  ｎｏｒｏｎｈａｅ  Ｒｅｉｎｗ）樹皮エキス、シナノキ科（Ｇｒｅｗｉａ  ｓａｌｕｔａｒｉｓ  Ｓｐａｎ）幹エキス、クスノキ科（Ｐｅｒｓｅａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ  Ｍｉｌｌ）幹又は葉エキス、カンラン科（Ｂｏｓｗｅｌｌｉａ  ｓｅｒｒａｔａ）樹皮エキス、ハイノキ科（Ｓｙｍｐｌｏｃｏｓ  ｒａｃｅｍｏｓａ）樹皮エキス及びクワ科（Ｆｉｃｕｓ  ｒｅｌｉｇｉｏｓａ）樹皮エキスから成る群から選ばれる１又は複数の生薬エキスをカスパーゼ−９活性阻害成分として含んで成る、カスパーゼ−９阻害組成物。
【請求項２】
育毛剤として利用される、請求項１記載のカスパーゼ−９阻害組成物。
【請求項３】
カスパーゼ−９の存在が関与する神経疾患の治療又は予防のための医薬製剤として利用される、請求項１記載のカスパーゼ−９阻害組成物。
【請求項４】
ＵＶＢ照射を原因とするカスパーゼ−９の活性化が関与する皮膚細胞死又は皮膚老化を治療又は予防するための医薬製剤又は化粧製剤として利用される、請求項１記載のカスパーゼ−９阻害組成物。
【請求項５】
育毛のため、請求項１記載のカスパーゼ−９阻害組成物を頭皮に塗布することを含んで成る方法。
【請求項６】
カスパーゼ−９の存在が関与する神経疾患の治療又は予防のため、請求項１記載のカスパーゼ−９阻害組成物を投与することを含んで成る方法。
【請求項７】
ＵＶＢ照射を原因とするカスパーゼ−９の活性化が関与する皮膚細胞死又は皮膚老化を治療又は予防するため、請求項１記載のカスパーゼ−９阻害組成物を皮膚に塗布することを含んで成る方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、カスパーゼ−９の活性を阻害する組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アポトーシスは発生過程における不要細胞の排除、恒常性維持のための細胞の除去、感染症や癌に対する生体防御の目的で引き起こされる細胞死であり、様々なシグナル伝達系を介して実行される。アポトーシスは様々な疾患における病態に関与していることも報告され、その人為的な制御は様々な疾患の治療に有効であるものと考えられている。このアポトーシス分子機構に深く関与しているのがシステインプロテアーゼであるカスパーゼ分子群であり、現在までにヒト、マウスに由来のものを含め、約１５種類の存在が知られている。
【０００３】
アポトーシスの分子機構は大きく分けてミトコンドリアを介する経路で活性化が行われる内因系活性化系と、ミトコンドリアを介さない経路で活性化が行われる外因系活性化系との二つの経路がある。内因系活性化経路におけるアポトーシス誘導においては、アポトーシス誘導作用をもつＢＨ３−ｏｎｌｙ因子が同様に誘導活性作用をもつＢａｘとＢａｋ因子を活性化し、その活性化をアポトーシス抑制作用をもつＢｃｌ−２やＢｃｌ−ＸＬ等といった因子が抑える、あるいはＢＨ３−ｏｎｌｙ因子がＢｃｌ−２やＢｃｌ−ＸＬ因子を抑えることでＢａｘとＢａｋが活性化されるという制御系列が考えられる。この制御系により細胞死が決定されると、ミトコンドリアからアポトーシスシグナル伝達分子チトクロームｃが放出され、そのチトクロームｃがアダプタータンパク質Ａｐａｆ−１を介してカスパーゼ−９を活性化し、活性化されたカスパーゼ−９がアポトーシス実行に関わる実行カスパーゼ−２、３、６、７を活性化する。このように、カスパーゼ−９が内因系活性化経路における開始カスパーゼを担う。
【０００４】
カスパーゼ−９は他のカスパーゼ分子群と同様活性中心にシステイン残基をもつプロテアーゼであり、不活性型のプロカスパーゼの状態で存在し、切断されることで活性化される。カスパーゼ−９の全長配列についてはｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ−ｐｅｒｓｏｎａｌ．ｕｍｉｃｈ．ｅｄｕ／￣ｉｎｏ／Ｌｉｓｔ／３１９１９．ｈｔｍにおいて公開されている。
【０００５】
開始カスパーゼを司ることで、カスパーゼ−９は様々な疾患、例えば脳梗塞等の脳神経疾患、脊髄損傷、脳損傷等の外傷性損傷、アルツハイマー病等の変性疾患に関与することが示唆されている（実験医学  Ｖｏｌ．１８，  Ｎｏ．３（８月号）２０００）。また、カスパーゼ−９はＵＶにより媒介される細胞収縮やヒト角化細胞におけるＵＶ死実行経路に関与し、カスパーゼ−９の阻害が正常角化細胞をＵＶＢ誘導アポトーシスから保護できることが報告されている（Ｃｏｌｌｉｎ  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌ．２７６，  Ｎｏ．４０．  ２００１，  ｐｐ．  ３７６０２−  ３７６１１  及び  Ｌｅｏｎｉｄ  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌ．２７７，  Ｎｏ．２２．  ２００２，  ｐｐ．  １９３４６−１９３５２）。このように、カスパーゼ−９は様々な疾患における病態やＵＶＢによる皮膚細胞死に関与していることから、その人為的な制御は神経疾患を含む様々な疾患の治療・予防、ＵＶＢによる皮膚老化の予防・治療等に有効となり得るものと考えられている。
【非特許文献１】
実験医学  Ｖｏｌ．１８，  Ｎｏ．３（８月号）２０００
【非特許文献２】
Ｃｏｌｌｉｎ  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌ．２７６，  Ｎｏ          ．４０．  ２００１，  ｐｐ．  ３７６０２−  ３７６１１
【非特許文献３】
Ｌｅｏｎｉｄ  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｖｏｌ．２７７，  Ｎｏ          ．２２．  ２００２，  ｐｐ．  １９３４６−１９３５２
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記カスパーゼ−９の活性を阻害し、その結果カスパーゼ−９の存在が関与する疾患の予防・治療、またはＵＶＢによる皮膚細胞死の抑制等に使用できる医薬又は化粧製剤の提供を課題とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者は数ある生薬の中から、下記の生薬がカスパーゼ−９の酵素活性を効果的に阻害できることを見出し、本発明を完成するに至った：
ツバキ科チャノキ（Ｔｈｅａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ  Ｌ．  （Ｔｈｅａｃｅａｅ））葉エキス、
バラ科トルメンチラ（Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ  ｔｏｒｍｅｎｔｉｌｌａ  Ｎｅｃｋ．）エキス
ブドウ科ブドウ葉（Ｖｉｔｉｓ  ｖｉｎｉｆｅｒａ  Ｌ．）エキス
ツバキ科コウチャ（Ｔｈｅａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ  Ｌ．）エキス
ツバキ科アッサムチャ（Ｔｈｅａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ  Ｌ．  ｖａｒ．  ａｓｓａｍｉｃａ  Ｐｉｅｒｒｅ）エキス
マメ科アスパラサスリネアリス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓ  ｌｉｎｅａｒｉｓ  （Ｎ．Ｌ．Ｂｕｒｍ．）  Ｒ．Ｄａｈｌｇｒ．）エキス
シナノキ科ボダイジュ（Ｔｉｌｉａ  ｃｏｒｄａｔａ  Ｍｉｌｌｅｒ（和名：フエボダイジュ）エキスムラサキ科コンフリー（Ｓｙｍｐｈｙｔｕｍ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ  Ｌ．（和名：ヒレハリソウ））エキス
ユリアニア科クアチャララーテ（Ｊｕｌｉａｎｉａ  ａｄｓｔｒｉｎｇｅｎｓ）エキス（〜６ｍ喬木樹皮）
ダテ科（Ｒｕｍｅｘ  ｓａｌｉｃｉｆｏｌｉｕｓ  Ｗｅｉｎｍ）地上部エキス
ツツジ科（Ａｒｃｔｏｓｔａｐｈｙｌｏｓ  ｐａｔｕｌａ  Ｇｒｅｅｎｅ）葉エキス
オトギリソウ科（Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ  Ｃａｍｂｅｓｓ）樹皮エキス
ツバキ科（Ｓｃｈｉｍａ  ｎｏｒｏｎｈａｅ  Ｒｅｉｎｗ）果実エキス
シナノキ科（Ｇｒｅｗｉａ  ｓａｌｕｔａｒｉｓ  Ｓｐａｎ）樹皮エキス
クスノキ科（Ｐｅｒｓｅａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ  Ｍｉｌｌ）樹皮エキス
カンラン科（Ｂｏｓｗｅｌｌｉａ  ｓｅｒｒａｔａ）樹皮エキス
ハイノキ科（Ｓｙｍｐｌｏｃｏｓ  ｒａｃｅｍｏｓａ）樹皮エキス
クワ科（Ｆｉｃｕｓ  ｒｅｌｉｇｉｏｓａ）樹皮エキス
【０００８】
従って、本発明は上記生薬を１又は複数種、カスパーゼ−９活性阻害成分として含んで成る、カスパーゼ−９阻害組成物を提供する。
好適な態様において、かかるカスパーゼ−９阻害組成物は育毛剤として利用される。この場合、当該カスパーゼ−９阻害組成物は頭皮に塗布することで使用されるのが好ましい。別の好適な態様において、かかるカスパーゼ−９阻害組成物はカスパーゼ−９の存在が関与する神経疾患の治療又は予防のための医薬製剤として利用される。この場合、この医薬製剤は経口又は非経口投与されるのが好ましい。更なる別の好適な態様において、かかるカスパーゼ−９阻害組成物はＵＶＢ照射を原因とするカスパーゼ−９の活性化が関与する皮膚細胞死又は皮膚老化を治療又は予防するための医薬製剤又は化粧製剤として利用される。この場合、当該カスパーゼ−９阻害組成物は皮膚に塗布することで使用されるのが好ましい。
上記生薬は全て慣用の医薬製剤や化粧製剤に既に使用されているものであり、従って人体を含む生体や環境に対し安全に使用できることも確認されているものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】
カスパーゼ−９の属するカスパーゼ分子群はシステインプロテアーゼであり、Ａｓｐ−Ｘ結合（ここで「Ｘ」は任意のアミノ酸である）基質切断活性を有する。従って、カスパーゼ−９の活性、即ち、基質切断活性は、この酵素を例えば合成蛍光基質アセチル−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−メチルクマリンアミド（Ａｃ−ＬＥＨＤ−ＭＣＡ）に作用させ、Ａｓｐ−Ｘ結合の切断の結果遊離する蛍光物質メミノメチルクマリンに由来する蛍光を測定することで決定することができる。従って、本発明でいうカスパーゼ−９活性とは、カスパーゼ−９がもつＡｓｐ−Ｘ結合特異的基質切断活性を意味し得る。
【００１０】
本発明者はカスパーゼ−９の基質切断特性を阻害する生薬をスクリーニングするため、上記基質を用いて種々の生薬のカスパーゼ−９活性阻害作用を調べた。詳しくは、Ａｃ−ＬＥＨＤ−ＭＣＡを含む緩衝液にリコンビナントカスパーゼ−９および種々のサンプル生薬を加えてインキュベートして酵素反応させ、遊離したアミノメチルクマリンの蛍光強度を、サンプル生薬を加えずに同様の条件下で酵素反応させたコントロールの値と比較することで、各生薬のカスパーゼ−９活性阻害作用を調べた。
【００１１】
リコンビナントカスパーゼ−９は例えばＲｙａｎ  Ｃ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．  ２００２  Ｓｅｐ．  １；  ３６６（Ｐｔ．２）：  ５９５−６０１  の記載に従い作製でき、具体的には以下のようにして作製できる。
カスパーゼ−９はどのような細胞でも発現しているので、適当な培養細胞から例えばＩｓｏｇｅｎなどを用いてＲＮＡを取得し、ＲＴ−ＰＣＲによりその遺伝子のｃＤＮＡを得ることができる。通常、６個のヒスチジン残基の結合した（Ｈｉｓ−ｔａｇ）リコンビナントタンパク質として作製することができる。これには、ｐＱＥ３０（ＱＩＡＧＥＮ）というプラスミドベクタ−を用いる。ｃＤＮＡを適当な制限酵素サイトを付加したリンカープライマーを用いて増幅し、当確ベクターに組み込む。これを大腸菌（例えばＪＭ１０９やＢＬ２１）にトランスフォームし、ＬＢ倍地中で一晩培養する。ＩＰＴＧ添加により、目的のタンパク質を合成させ、しばらく培養した後、大腸菌を溶解し、上清をニケルカラムにアプライする。良く洗浄した後、２５０ｍＭ程度のイミダゾールを含む緩衝液をカラムに流すことにより、結合したＨｉｓ−ｔａｇのついたリコンビナントカスパーゼ−９を精製することができる。
【００１２】
カスパーゼ−９の活性を効果的に阻害することのできる本発明に係る植物生薬エキスを得るには、好ましくは抽出植物材料を乾燥し、必要に応じて小片化又は破砕してよい。抽出剤としては、水、有機液剤、水に混和性の有機溶剤と水との混合溶剤等が使用でき、水に混和性の有機溶剤と水との混合溶液が特に好ましい。有機溶剤としては、エタノール、メタノール等が挙げられる。エタノール水溶液が好ましく、特に７０％エタノール水溶液が好ましい。抽出濃度としては、室温〜抽出剤の沸点までの温度を使用することができ、２０℃〜３７℃が特に好ましい。抽出は３時間〜７日間行ってよい。
【００１３】
エキスは、減圧蒸発等常法に従って溶剤を除去して乾燥することもでき、また抽出溶剤として非毒性の溶剤、例えば、水、エタノール水溶液等を使用した場合には、抽出液をそのままで、又は適当に濃縮して用いることができる。
【００１４】
本発明に係るカスパーゼ−９の活性阻害組成物はカスパーゼ−９の活性を抑制する様々な目的に使用することができる。例えば、本発明にかかる阻害組成物はカスパーゼ−９の存在が関与する神経疾患、例えば脳梗塞等の脳神経疾患、脊髄損傷、脳損傷等の外傷性損傷、アルツハイマー病等の変性疾患の治療又は予防のための医薬製剤、ＵＶＢ照射を原因とする皮膚細胞死による皮膚老化の治療又は予防のための医薬製剤又は化粧製剤等として利用できる。また、脱毛はカスパーゼ依存性のアポトーシスによるものであり、カスパーゼ−９が活性化されることによって起きる。従って、カスパーゼ−９阻害活性を有する上記生薬は、育毛剤として利用できる。
【００１５】
上記医薬製剤又は化粧製剤は、通常、上記生薬エキスを水やエタノール等の水性溶媒に含有させて用いられる。本発明にかかる生薬エキスの配合量は特に限定されないが、例えば０．０１〜１０重量％、特に０．１〜５．０重量％程度の範囲が好ましい。上記水性溶媒としては、低級アルコールが好ましく、低級アルコールの含有量は、当該医薬製剤又は化粧製剤中に、２０〜８０重量％、さらに好ましくは４０〜６０重量％である。
【００１６】
また、上記医薬製剤又は化粧製剤には、上記必須成分以外に、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、その他の美白剤、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００１７】
その他、薬剤の用途に合わせ、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の他の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類、レチノイン酸、レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール等のビタミンＡ類なども適宜配合することができる。
【００１８】
上記医薬製剤又は化粧製剤剤は、その用途に合わせ、例えば化粧料、医薬品、医薬部外品等の外用剤、例えば化粧水、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤、軟膏、ヘアーローション、ヘアートニック、ヘアーリキッド、シャンプー、リンス、養毛・育毛剤等、従来皮膚外用剤に用いるものであればいずれでもよく、剤型は特に問わない。
【００１９】
以下に本発明の限定でない実施例を提供する。
【００２０】
【実施例】
実施例１
カスパーゼ−９の活性阻害物質のスクリーニング法
カスパーゼ−９の活性測定は、合成の蛍光基質アセチル−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−メチルクマリンアミド（Ａｃ−ＬＥＨＤ−ＭＣＡ）を用いて行った。１０ｍＭのＡｃ−ＬＥＨＤ−ＭＣＡ  １０μｌ、１００ｍＭのジチオスレイトール１μｌ、１ＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）５μｌ、蒸留水７５μｌを含む緩衝液に４μｌのリコンビナントカスパーゼ−９およびサンプル生薬５μｌ（５μｇ）を加えて、３７℃で３０分間インキュベートした。
【００２１】
反応は０．１Ｍクロロ酢酸２ｍｌを添加して停止させ、遊離したメミノメチルクマリンの４６０ｎｍの蛍光強度（励起波長３８０ｎｍ）をフルオロメーターで測定した。サンプルのカスパーゼ−９阻害活性は、溶媒コントロールに対する値として示す。
【００２２】
その結果、以下の生薬エキスがカスパーゼ−９の活性を有為に阻害した：
2004307443.tif 000002
【００２３】
実施例２
退行期毛包における活性化カスパーゼ−９の検出
毛周期における退行期に毛乳頭周囲の毛母細胞にアポトーシスが起っており、このアポトーシスにカスパーゼファミリーの一員たるカスパーゼ−３が関与していること、及び毛包の器官培養においてカスパーゼ−３阻害剤が、毛周期における成長期を延長し、退行期の進行を抑制することがわかっている（例えば、特開２０００−２５８４０８号公報を参照のこと）。本実験では、内因系活性化経路においてカスパーゼ−３の活性化を司るカスパーゼ−９の、退行期毛包におけるその活性化状態での存在について調べた。
【００２４】
形成外科手術により得られたヒト頭皮から様々な段階の退行期毛包を単離し、凍結切片作製用包埋剤ＯＣＴコンパウンド（Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ；  Ｓａｋｕｒａ社製）に包埋し、５ミクロンの凍結切片を作製した。４％パラフォルムアルデヒドで２０分間固定した後、活性化カスパーゼ−９特異的抗体（一次抗体）又は対照としての活性化カスパーゼ−３特異的抗体（一次抗体）と室温で１時間インキュベートし、洗浄後、テキサスレッドを結合させたロバの抗ウサギ抗体と反応させ、蛍光顕微鏡（オリンパス（株）社製；ＡＨＳ）で観察して、毛包内の活性化カスパーゼ−９又は活性化カスパーゼ−３の存在を調べた。その結果を図１に示す。
【００２５】
尚、活性化カスパーゼ−９特異的抗体はＦｕｊｉｔａ  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．  Ｄｅｖ．  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．  （２０００）  Ｖｏｌ．１２２，  ｐｐ．１３５−１４７  （Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｓｐａｓｅ−９  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｃｌ−ｘ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｏｕｓｅ  ｅｍｂｒｙｏ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ  ｂｙ  ｃｌｅａｖａｇｅ  ｓｉｔｅｓ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｎｔｉｓｅｒａ）の記載に従って作製したものであり、活性化カスパーゼ−３特異的抗体はＵｒａｓｅ  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．  Ｄｅｖ．  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．  （１９９８）  Ｖｏｌ．１１１，  ｐｐ．７７−８７  （Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｃａｓｐａｓｅ−３  （ＣＰＰ３２）  ｉｎ  ｔｈｅ  ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ  ｄｕｒｉｎｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｂｙ  ａ  ｃｌｅａｖａｇｅ  ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｎｔｉｓｅｒｕｍ）  の記載に従って作製したものである。
【００２６】
図１（ａ）は退行初期毛包の染色写真を示す。カスパーゼ−３、９のいずれの写真においても、毛乳頭のすぐ上部がよく染色され、その部分での活性化カスパーゼ−３及び９の同程度で顕著な存在が示された。図１（ｂ）は退行中期毛包の染色写真を示す。これも同様にカスパーゼ−３、９のいずれの写真において、上皮系細胞全体、特に棍棒上皮細胞及びストランド部分がよく染色され、その部分での活性化カスパーゼ−３及び９の同程度で顕著な存在が示された。前述の通り、カスパーゼ−３の内因系活性化はカスパーゼ−９が担う。従って、活性化カスパーゼ−３が実行する退行期の毛母細胞のアポトーシスの開始にはカスパーゼ−９の活性化が関与し、その結果カスパーゼ−３阻害剤と同様、カスパーゼ−９阻害剤も毛周期における成長期を延長し、退行期の進行を抑制することが明らかである。以上の結果から、実施例１においてカスパーゼ−９阻害活性の認められた生薬は、育毛剤として利用できるものと予想される。
【００２７】
【発明の効果】
上記生薬含有組成物はカスパーゼ−９の特異的基質切断活性を阻害できる。従って、上記生薬含有組成物は、カスパーゼ−９の存在が関与する神経疾患、例えば脳梗塞等の脳神経疾患、脊髄損傷、脳損傷等の外傷性損傷、アルツハイマー病等の変性疾患の治療又は予防のための医薬製剤、ＵＶＢ照射を原因とする皮膚細胞死による皮膚老化の治療又は予防のための医薬製剤又は化粧製剤等として利用できる。また、上記生薬含有組成物は育毛剤としても利用できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】退行期毛包における活性化カスパーゼ−３及び９の存在を示す顕微鏡写真図。
【図１】
2004307443.tif 000003