【誤訳訂正書】
【提出日】平成26年9月4日(2014.9.4)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮｉｋＡ分泌ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドからなる単離核酸分子であって、前記核酸分子が、
ａ）配列番号：１５のヌクレオチド配列を含む核酸分子；
ｂ）配列番号：１５のヌクレオチド配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ヌクレオチド配列が、作動可能に連結された対象タンパク質又はポリペプチドをグラム陰性細菌のペリプラズム又は細胞外間隙へとターゲティングするポリペプチドをコードする、核酸分子；
ｃ）配列番号：１６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子；及び
ｄ）配列番号：１６のアミノ酸配列に少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリペプチドが、作動可能に連結された対象タンパク質又はポリペプチドをグラム陰性細菌のペリプラズム又は細胞外間隙へとターゲティングする、核酸分子；
から成る群より選択される、核酸分子。
【請求項２】
ＮｉｋＡ分泌ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むベクターであって、前記ポリヌクレオチドが、
ａ）配列番号：１５のヌクレオチド配列を含む核酸分子；
ｂ）配列番号：１５のヌクレオチド配列に少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ヌクレオチド配列が、作動可能に連結された対象タンパク質又はポリペプチドをグラム陰性細菌のペリプラズム又は細胞外間隙へとターゲティングするポリペプチドをコードする、核酸分子；
ｃ）配列番号：１６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子；及び
ｄ）配列番号：１６のアミノ酸配列に少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリペプチドが、作動可能に連結された対象タンパク質又はポリペプチドをグラム陰性細菌のペリプラズム又は細胞外間隙へとターゲティングする、核酸分子；
から成る群より選択される、ベクター。
【請求項３】
ＮｉｋＡ分泌ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ構築物で組換えられた組換え細胞であって、
前記ポリヌクレオチドが、
ａ）配列番号：１５のヌクレオチド配列を含む核酸分子；
ｂ）配列番号：１５のヌクレオチド配列に少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ヌクレオチド配列が、作動可能に連結された対象タンパク質又はポリペプチドをグラム陰性細菌のペリプラズム又は細胞外間隙へとターゲティングするポリペプチドをコードする、核酸分子；
ｃ）配列番号：１６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子；及び
ｄ）配列番号：１６のアミノ酸配列に少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリペプチドが、作動可能に連結された対象タンパク質又はポリペプチドをグラム陰性細菌のペリプラズム又は細胞外間隙へとターゲティングする、核酸分子；
から成る群より選択される、組換え細胞。
【請求項４】
ａ）宿主細胞；及び
ｂ）ＮｉｋＡ分泌ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、
i)  配列番号：１５のヌクレオチド配列を含む核酸分子；
ii) 配列番号：１５のヌクレオチド配列に少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ヌクレオチド配列が、作動可能に連結された対象タンパク質又はポリペプチドをグラム陰性細菌のペリプラズム又は細胞外間隙へとターゲティングするポリペプチドをコードする、核酸分子；
iii)配列番号：１６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子；及び
iv) 配列番号：１６のアミノ酸配列に少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリペプチドが、作動可能に連結された対象タンパク質又はポリペプチドをグラム陰性細菌のペリプラズム又は細胞外間隙へとターゲティングする、核酸分子；
から成る群より選択されるポリヌクレオチド
に作動可能に連結された対象タンパク質又はポリペプチドをコードする核酸分子を含む、発現ベクター
を含む、対象タンパク質又はポリペプチドの発現のための発現系。
【請求項５】
ＮｉｋＡ分泌ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであって、
ａ）配列番号：１５のヌクレオチド配列を含む核酸分子；
ｂ）配列番号：１５のヌクレオチド配列に少なくとも８５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ヌクレオチド配列が、作動可能に連結された対象タンパク質又はポリペプチドをグラム陰性細菌のペリプラズム又は細胞外間隙へとターゲティングするポリペプチドをコードする、核酸分子；
ｃ）配列番号：１６のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子；及び
ｄ）配列番号：１６のアミノ酸配列に少なくとも８５％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリペプチドが、作動可能に連結された対象タンパク質又はポリペプチドをグラム陰性細菌のペリプラズム又は細胞外間隙へとターゲティングする、核酸分子；
から成る群より選択されるポリヌクレオチド
に作動可能に連結された対象タンパク質又はポリペプチドをコードする核酸分子を含む発現ベクターを含有する宿主細胞を提供することを含む、宿主細胞における組換えタンパク質の発現のための方法。
【請求項６】
前記ＮｉｋＡ分泌ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結された対象タンパク質又はペプチドをコードする核酸分子が、その核酸分子を発現するために選択された宿主生物のコドン選択を反映するように調整されている、請求項４に記載の発現系。
【請求項７】
前記対象タンパク質又はポリペプチドは、前記対象タンパク質又はポリペプチドが発現される宿主生物に本来備わっている、請求項４に記載の発現系。
【請求項８】
前記対象タンパク質又はポリペプチドがシュードモナスの種に本来備わっている、請求項４に記載の発現系。
【請求項９】
前記対象タンパク質又はポリペプチドがシュードモナスフルオレッセンスに本来備わっている、請求項４に記載の発現系。
【請求項１０】
前記対象タンパク質又はポリペプチドは、前記対象タンパク質又はポリペプチドが発現される宿主生物に本来備わっていない、請求項４に記載の発現系。
【請求項１１】
前記分泌シグナルポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したプロモーターをさらに含む、請求項２に記載のベクター。
【請求項１２】
前記ポリヌクレオチドを含むベクターが発現ベクターである、請求項２に記載のベクター。
【請求項１３】
前記細胞が、前記分泌シグナルポリペプチドに作動可能に連結された前記対象タンパク質又はポリペプチドを発現する、請求項４に記載の発現系。
【請求項１４】
前記対象タンパク質又はポリペプチドが前記細胞のペリプラズム画分において発現される、請求項４に記載の発現系。
【請求項１５】
前記細胞内の酵素が、前記対象タンパク質又はポリペプチドから前記分泌シグナルポリペプチドを切断する、請求項４に記載の発現系。
【請求項１６】
前記細胞が、シュードモナス・フルオレッセンスであって少なくとも２０ｇ／Ｌの細胞密度で増殖される、請求項５に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
ＩＩ．組成物
Ａ．単離ポリペプチド
本発明の１つの実施形態では、作動可能に連結された対象タンパク質又はポリペプチド
をグラム陰性細菌のペリプラズム又は細胞外間隙にターゲティングするために有用な新規
分泌シグナルである、単離ポリペプチドが提供される。１つの実施形態では、ポリペプチ
ドは、ｐｂｐ＊、ｄｓｂＡ、ｄｓｂＣ、Ｂｃｅ、ＣｕｐＡ２、ＣｕｐＢ２、ＣｕｐＣ２、
ＮｉｋＡ、ＦｌｇＩ、ＯＲＦ５５５０、Ｔｔｇ２Ｃ又はＯＲＦ８１２４分泌シグナル、又
はそのフラグメント又は変異体であるか又はそれに実質的に相同であるアミノ酸配列を有
する。もう１つの実施形態では、この単離ポリペプチドは分泌シグナルと対象タンパク質
又はポリペプチドの融合タンパク質である。さらなる実施形態において、前記対象タンパク質又はポリペプチドは、前記宿主細胞が由来する生物に本来備わっている。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０９】
前記発明を、理解の明瞭さのために説明及び例としてある程度詳細に記述したが、ある
種の変更及び修正が付属の特許請求の範囲内で実施され得ることは明白である。
上記の説明により、例えば本願発明として以下の発明が提供される。
［１］  タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＣ（ｄｓｂＣ）、突然変異型リン酸結合タ
ンパク質（ｐｂｐ＊）、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＡ（ｄｓｂＡ）、Ｂｃｅ、
ＣｕｐＡ２、ＣｕｐＢ２、ＣｕｐＣ２、ＮｉｋＡ、ＦｌｇＩ、テトラトリコペプチドリピ
ートファミリータンパク質（ＯＲＦ５５５０）、トルエン耐性タンパク質（Ｔｔｇ２Ｃ）
及びメチル基受容走化性タンパク質（ＯＲＦ８１２４）分泌ポリペプチドから成る群より
選択される分泌ポリペプチドについての分泌シグナルコード配列を含む、単離核酸分子。
［２］  前記核酸分子が、
ａ）配列番号：５、１、３、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１又は２３の
ヌクレオチド配列を含む核酸分子；
ｂ）配列番号：５、３、７、９、１１、１３、１５、１７、２１又は２３のヌクレオチ
ド配列に少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子であっ
て、前記ヌクレオチド配列が分泌ポリペプチドをコードする、核酸分子；
ｃ）配列番号：６、２、４、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２又は２４
のアミノ酸配列を含むポリポリペプチドをコードする核酸分子；
ｄ）配列番号：６、４、８、１０、１２、１４、１６、１８、２２又は２４のアミノ酸
配列に少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するポリポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリポリペプチドが分泌ポリペプチドであ
る、核酸分子；
ｅ）配列番号：２０のアミノ酸配列に少なくとも９６％のアミノ酸配列同一性を有する
ポリポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリポリ
ペプチドが分泌ポリペプチドである、核酸分子；
ｆ）配列番号：５、３、７、９、１１、１３、１５、１７又は２１のヌクレオチド配列
の実質的に全長にわたってストリンジェント条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配
列；及び
ｇ）配列番号：６、４、８、１０、１２、１４、１６、１８及び２２から成る群より選
択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に、実質的に全長にわたってストリ
ンジェント条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列
から成る群より選択される、［１］に記載の核酸分子。
［３］  前記ハイブリダイゼーション条件が約６０℃〜約７０℃の温度を含む、［２］に
記載の核酸分子。
［４］  前記ハイブリダイゼーション条件が約６８℃の温度を含む、［２］又は［３］に
記載の核酸分子。
［５］  前記核酸分子が、核酸分子を発現するために選択された宿主生物のコドン選択を
反映するように調整されている、［１］に記載の核酸分子。
［６］  タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＣ（ｄｓｂＣ）、突然変異型リン酸結合タ
ンパク質（ｐｂｐ＊）、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＡ（ｄｓｂＡ）、Ｂｃｅ、
ＣｕｐＡ２、ＣｕｐＢ２、ＣｕｐＣ２、ＮｉｋＡ、ＦｌｇＩ、テトラトリコペプチドリピ
ートファミリータンパク質（ＯＲＦ５５５０）、トルエン耐性タンパク質（Ｔｔｇ２Ｃ）
又はメチル基受容走化性タンパク質（ＯＲＦ８１２４）分泌ポリペプチドについての分泌
シグナルコード配列を含む、ベクター。
［７］  前記核酸分子が、
ａ）配列番号：５、１、３、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１又は２３の
ヌクレオチド配列を含む核酸分子；
ｂ）配列番号：５、３、７、９、１１、１３、１５、１７、２１又は２３のヌクレオチ
ド配列に少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子であっ
て、前記ヌクレオチド配列が分泌ポリペプチドをコードする、核酸分子；
ｃ）配列番号：６、２、４、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２又は２４
のアミノ酸配列を含むポリポリペプチドをコードする核酸分子；
ｄ）配列番号：６、４、８、１０、１２、１４、１６、１８、２２又は２４のアミノ酸
配列に少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するポリポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリポリペプチドが分泌ポリペプチドであ
る、核酸分子；
ｅ）配列番号：２０のアミノ酸配列に少なくとも９６％のアミノ酸配列同一性を有する
ポリポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリポリ
ペプチドが分泌ポリペプチドである、核酸分子；
ｆ）配列番号：５、３、７、９、１１、１３、１５、１７又は２１のヌクレオチド配列
の実質的に全長にわたってストリンジェント条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配
列；及び
ｇ）配列番号：６、４、８、１０、１２、１４、１６、１８及び２２から成る群より選
択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に、実質的に全長にわたってストリ
ンジェント条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列
から成る群より選択される、［６］に記載のベクター。
［８］  前記ハイブリダイゼーション条件が約６０℃〜約７０℃の温度を含む、［７］に
記載のベクター。
［９］  前記ハイブリダイゼーション条件が約６８℃の温度を含む、［７］又は［８］に
記載のベクター。
［１０］  前記核酸分子が、核酸分子を発現するために選択された宿主生物のコドン選択
を反映するように調整されている、［６］に記載のベクター。
［１１］  前記分泌シグナルコード配列が、対象タンパク質又はポリペプチドをコードす
る配列に作動可能に連結されている、［６］に記載のベクター。
［１２］  前記対象タンパク質又はポリペプチドが、前記対象タンパク質又はポリペプチ
ドが発現される宿主生物に対してネイティブである、［１１］に記載のベクター。
［１３］  前記対象タンパク質又はポリペプチドがＰ．フルオレッセンスに対してネイテ
ィブである、［６］に記載のベクター。
［１４］  前記対象タンパク質又はポリペプチドが、前記対象タンパク質又はポリペプチ
ドが発現される宿主生物に対してネイティブではないタンパク質又はポリペプチドに由来
する、［１１］に記載のベクター。
［１５］  前記対象タンパク質又はポリペプチドがシュードモナスではない生物に由来す
る、［１１］に記載のベクター。
［１６］  前記対象タンパク質又はポリペプチドが真核生物に由来する、［６］に記載の
ベクター。
［１７］  前記対象タンパク質又はポリペプチドが哺乳類生物に由来する、［１６］に記
載のベクター。
［１８］  シグナルポリペプチド配列と前記対象タンパク質又はポリペプチド配列との間
に連結配列をさらに含む、［６］に記載のベクター。
［１９］  前記連結配列がシグナルペプチダーゼによって切断可能である、［１９］に記
載のベクター。
［２０］  前記対象タンパク質又はポリペプチド配列が２番目のシグナル配列に作動可能
に連結されている、［６］に記載のベクター。
［２１］  前記２番目のシグナル配列が、外膜分泌シグナルを標的する配列を含む、［２
０］に記載のベクター。
［２２］  前記ベクターがプロモーターをさらに含む、［６］に記載のベクター。
［２３］  前記プロモーターが細菌宿主細胞に対してネイティブである、［２２］に記載
のベクター。
［２４］  前記プロモーターが細菌宿主細胞に対してネイティブではない、［２２］に記
載のベクター。
［２５］  前記プロモーターが大腸菌に対してネイティブである、［２３］に記載のベク
ター。
［２６］  前記プロモーターが誘導的プロモーターである、［２２］に記載のベクター。
［２７］  前記プロモーターがｌａｃプロモーター又はｌａｃプロモーターの誘導体であ
る、［２２］に記載のベクター。
［２８］  タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＣ（ｄｓｂＣ）、突然変異型リン酸結合
タンパク質（ｐｂｐ＊）、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＡ（ｄｓｂＡ）、Ｂｃｅ
、ＣｕｐＡ２、ＣｕｐＢ２、ＣｕｐＣ２、ＮｉｋＡ、ＦｌｇＩ、テトラトリコペプチドリ
ピートファミリータンパク質（ＯＲＦ５５５０）、トルエン耐性タンパク質（Ｔｔｇ２Ｃ
）及びメチル基受容走化性タンパク質（ＯＲＦ８１２４）分泌ポリペプチドから成る群よ
り選択される分泌ポリペプチドについての分泌シグナルコード配列を含む、組換え細胞。
［２９］  前記コード配列が、
ａ）配列番号：５、１、３、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１又は２３の
ヌクレオチド配列を含む核酸分子；
ｂ）配列番号：５、３、７、９、１１、１３、１５、１７、２１又は２３のヌクレオチ
ド配列に少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子であっ
て、前記ヌクレオチド配列が分泌ポリペプチドをコードする、核酸分子；
ｃ）配列番号：６、２、４、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２又は２４
のアミノ酸配列を含むポリポリペプチドをコードする核酸分子；
ｄ）配列番号：６、４、８、１０、１２、１４、１６、１８、２２又は２４のアミノ酸
配列に少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するポリポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリポリペプチドが分泌ポリペプチドであ
る、核酸分子；
ｅ）配列番号：２０のアミノ酸配列に少なくとも９６％のアミノ酸配列同一性を有する
ポリポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリポリ
ペプチドが分泌ポリペプチドである、核酸分子；
ｆ）配列番号：５、３、７、９、１１、１３、１５、１７又は２１のヌクレオチド配列
の実質的に全長にわたってストリンジェント条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配
列；及び
ｇ）配列番号：６、４、８、１０、１２、１４、１６、１８及び２２から成る群より選
択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に、実質的に全長にわたってストリ
ンジェント条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列
から成る群より選択される、［２８］に記載の組換え細胞。
［３０］  分泌シグナルコード配列が発現ベクター内にある、［２８］に記載の細胞。
［３１］  前記分泌シグナルコード配列が、対象タンパク質又はポリペプチドをコードす
る配列に作動可能に連結されている、［２８］に記載の細胞。
［３２］  細胞が、分泌シグナルポリペプチドに作動可能に連結された前記対象タンパク
質又はポリペプチドを発現する、［３１］に記載の細胞。
［３３］  前記タンパク質又はポリペプチドが細胞のペリプラズム画分（periplasmic co
mpartment）において発現される、［３２］に記載の細胞。
［３４］  前記細胞内の酵素が、前記対象タンパク質又はポリペプチドから前記分泌シグ
ナルポリペプチドを切断する、［３２］に記載の細胞。
［３５］  前記細胞が細菌宿主に由来する、［２８］に記載の細胞。
［３６］  前記宿主がシュードモナスである、［３５］に記載の細胞。
［３７］  前記宿主がＰ・フルオレッセンスである、［３６］に記載の細胞。
［３８］  前記宿主が大腸菌である、［３５］に記載の細胞。
［３９］  タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＣ（ｄｓｂＣ）、突然変異型リン酸結合
タンパク質（ｐｂｐ＊）、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＡ（ｄｓｂＡ）、Ｂｃｅ
、ＣｕｐＡ２、ＣｕｐＢ２、ＣｕｐＣ２、ＮｉｋＡ、ＦｌｇＩ、テトラトリコペプチドリ
ピートファミリータンパク質（ＯＲＦ５５５０）、トルエン耐性タンパク質（Ｔｔｇ２Ｃ
）及びメチル基受容走化性タンパク質（ＯＲＦ８１２４）分泌ポリペプチドから成る群よ
り選択される分泌ポリペプチドを含む、単離ポリペプチド。
［４０］  前記ポリペプチドが、
ａ）配列番号：６、２、４、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２又は２４
のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
ｂ）配列番号：５、１、３、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１又は２３の
ヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド；
ｃ）配列番号：６、４、８、１０、１２、１４、１６、１８、２２又は２４のアミノ酸
配列に少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、分泌シグナルポリペ
プチドであるポリペプチド；
ｄ）配列番号：２０のアミノ酸配列に少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸
配列を含み、分泌シグナルポリペプチドであるポリペプチド；
ｅ）配列番号：５、３、７、９、１１、１３、１５、１７、２１又は２３のヌクレオチ
ド配列に少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチ
ドであって、分泌シグナルポリペプチドであるポリペプチド；及び
ｅ）配列番号：５、３、７、９、１１、１３、１５、１７又は２１のヌクレオチド配列
の実質的に全長にわたってストリンジェント条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配
列によってコードされるポリペプチド
から成る群より選択される、［３９］に記載の単離ポリペプチド。
［４１］  前記ハイブリダイゼーション条件が約６０℃〜約７０℃の温度を含む、［４０
］に記載の核酸分子。
［４２］  前記ハイブリダイゼーション条件が約６８℃の温度を含む、［３９］に記載の
核酸分子。
［４３］  前記分泌シグナルポリペプチドが対象タンパク質又はポリペプチドに作動可能
に連結されている、［３９］に記載のポリペプチド。
［４４］  前記対象タンパク質又はポリペプチドが、Ｐ．フルオレッセンス生物ではない
生物に由来する、［４３］に記載のポリペプチド。
［４５］  ａ）宿主細胞；及び
ｂ）タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＣ（ｄｓｂＣ）、突然変異型リン酸結合タン
パク質（ｐｂｐ＊）、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＡ（ｄｓｂＡ）、Ｂｃｅ、Ｃ
ｕｐＡ２、ＣｕｐＢ２、ＣｕｐＣ２、ＮｉｋＡ、ＦｌｇＩ、テトラトリコペプチドリピー
トファミリータンパク質（ＯＲＦ５５５０）、トルエン耐性タンパク質（Ｔｔｇ２Ｃ）及
びメチル基受容走化性タンパク質（ＯＲＦ８１２４）分泌ポリペプチドから成る群より選
択される分泌シグナルポリペプチドに作動可能に連結された対象タンパク質又はポリペプ
チドをコードする核酸分子を含むベクター
を含む、対象タンパク質又はポリペプチドの発現のための発現系。
［４６］  前記分泌シグナルポリペプチドが、
ａ）配列番号：５、１、３、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１又は２３の
ヌクレオチド配列を含む核酸分子；
ｂ）配列番号：５、３、７、９、１１、１３、１５、１７、２１又は２３のヌクレオチ
ド配列に少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子であっ
て、前記ヌクレオチド配列が分泌ポリペプチドをコードする、核酸分子；
ｃ）配列番号：６、２、４、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２又は２４
のアミノ酸配列を含むポリポリペプチドをコードする核酸分子；
ｄ）配列番号：６、４、８、１０、１２、１４、１６、１８、２２又は２４のアミノ酸
配列に少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するポリポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリポリペプチドが分泌ポリペプチドであ
る、核酸分子；
ｅ）配列番号：２０のアミノ酸配列に少なくとも９６％のアミノ酸配列同一性を有する
ポリポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリポリ
ペプチドが分泌ポリペプチドである、核酸分子；
ｆ）配列番号：５、３、７、９、１１、１３、１５、１７又は２１のヌクレオチド配列
の実質的に全長にわたってストリンジェント条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配
列；及び
ｇ）配列番号：６、４、８、１０、１２、１４、１６、１８及び２２から成る群より選
択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に、実質的に全長にわたってストリ
ンジェント条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列
から成る群より選択される核酸分子によってコードされる、［４５］に記載の発現系。
［４７］  前記ハイブリダイゼーション条件が約６０℃〜約７０℃の温度を含む、［４６
］に記載の発現系。
［４８］  前記ハイブリダイゼーション条件が約６８℃の温度を含む、［４６］に記載の
発現系。
［４９］  前記宿主細胞が、前記分泌シグナルポリペプチドに作動可能に連結された前記
対象タンパク質又はポリペプチドを発現する、［４５］に記載の発現系。
［５０］  前記対象タンパク質又はポリペプチドが細胞のペリプラズム画分において発現
される、［４９］に記載の発現系。
［５１］  前記細胞内の酵素が、前記対象タンパク質又はポリペプチドから前記シグナル
ポリペプチドを切断する、［４９］に記載の発現系。
［５２］  前記細胞が細菌宿主に由来する、［４５］に記載の発現系。
［５３］  前記宿主がシュードモナスである、［４５］に記載の発現系。
［５４］  前記宿主がＰ・フルオレッセンスである、［５３］に記載の発現系。
［５５］  前記宿主が大腸菌である、［５２］に記載の発現系。
［５６］  発酵培地をさらに含む、［４５］に記載の発現系。
［５７］  前記発酵培地が化学誘導物質を含む、［５６］に記載の発現系。
［５８］  タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＣ（ｄｓｂＣ）、突然変異型リン酸結合
タンパク質（ｐｂｐ＊）、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼＡ（ｄｓｂＡ）、Ｂｃｅ
、ＣｕｐＡ２、ＣｕｐＢ２、ＣｕｐＣ２、ＮｉｋＡ、ＦｌｇＩ、テトラトリコペプチドリ
ピートファミリータンパク質（ＯＲＦ５５５０）、トルエン耐性タンパク質（Ｔｔｇ２Ｃ
）及びメチル基受容走化性タンパク質（ＯＲＦ８１２４）分泌ポリペプチドから成る群よ
り選択される分泌シグナルポリペプチドに作動可能に連結された対象タンパク質又はポリ
ペプチドをコードするベクターを含有する宿主細胞を提供することを含む、宿主細胞にお
ける組換えタンパク質の発現のための方法。
［５９］  前記分泌シグナルポリペプチドが、
ａ）配列番号：５、１、３、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１又は２３の
ヌクレオチド配列を含む核酸分子；
ｂ）配列番号：５、３、７、９、１１、１３、１５、１７、２１又は２３のヌクレオチ
ド配列に少なくとも９０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子であっ
て、前記ヌクレオチド配列が分泌ポリペプチドをコードする、核酸分子；
ｃ）配列番号：６、２、４、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２又は２４
のアミノ酸配列を含むポリポリペプチドをコードする核酸分子；
ｄ）配列番号：６、４、８、１０、１２、１４、１６、１８、２２又は２４のアミノ酸
配列に少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有するポリポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリポリペプチドが分泌ポリペプチドであ
る、核酸分子；
ｅ）配列番号：２０のアミノ酸配列に少なくとも９６％のアミノ酸配列同一性を有する
ポリポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリポリ
ペプチドが分泌ポリペプチドである、核酸分子；
ｆ）配列番号：５、３、７、９、１１、１３、１５、１７又は２１のヌクレオチド配列
の実質的に全長にわたってストリンジェント条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配
列；及び
ｇ）配列番号：６、４、８、１０、１２、１４、１６、１８及び２２から成る群より選
択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に、実質的に全長にわたってストリ
ンジェント条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列
から成る群より選択される核酸分子によってコードされる、［５８］に記載の方法。
［６０］  前記ハイブリダイゼーション条件が約６０℃〜約７０℃の温度を含む、［５９
］に記載の発現系。
［６１］  前記ハイブリダイゼーション条件が約６８℃の温度を含む、［５９］に記載の
発現系。
［６２］  前記細胞を無機塩培地で増殖させる、［５８］に記載の方法。
［６３］  前記細胞を高細胞密度で増殖させる、［５８］に記載の方法。
［６４］  前記細胞を少なくとも２０ｇ／Ｌの細胞密度で増殖させる、［６３］に記載の
方法。
［６５］  前記組換えタンパク質を精製することをさらに含む、［５８］に記載の方法。
［６６］  前記組換えタンパク質をアフィニティークロマトグラフィーによって精製する
、［６５］に記載の方法。
［６７］  前記対象タンパク質又はポリペプチドと前記分泌シグナルポリペプチドの作動
可能な連結が、前記宿主細胞に対してネイティブな酵素によって切断され得る、［５８］
に記載の方法。
［６８］  前記分泌シグナルポリペプチドが発現の間に前記対象タンパク質又はポリペプ
チドから切断される、［６７］に記載の方法。
［６９］  前記対象タンパク質又はポリペプチドは、前記宿主細胞が由来する生物に本来備わっている、［５８］に記載の方法。
［７０］  前記対象タンパク質又はポリペプチドがＰ．フルオレッセンス生物に対してネ
イティブである、［５８］に記載の方法。
［７１］  前記対象タンパク質又はポリペプチドが、前記宿主細胞が由来する生物に対し
てネイティブではない、［５８］に記載の方法。
［７２］  前記対象タンパク質又はポリペプチドがシュードモナスではない生物に由来す
る、［５８］に記載の方法。
［７３］  前記対象タンパク質又はポリペプチドが真核生物に由来する、［５８］に記載
の方法。
［７４］  前記組換えタンパク質が、少なくとも２個のシステイン残基を有する配列を含
む、［５８］に記載の方法。
［７５］
少なくとも１つのジスルフィド結合が、前記細胞における前記組換えタンパク質内で形
成される、［５８］に記載の方法。
［７６］  前記シグナルポリペプチド配列と前記対象タンパク質又はポリペプチドの配列
との間に連結配列をさらに含む、［５８］に記載の方法。
［７７］  前記対象タンパク質又はポリペプチドの少なくとも５０％がネイティブアミノ
末端を含む、［６９］に記載の方法。
［７８］  前記対象タンパク質又はポリペプチドの少なくとも８０％がネイティブアミノ
末端を含む、［７７］に記載の方法。
［７９］  前記対象タンパク質又はポリペプチドの少なくとも９０％がネイティブアミノ
末端を含む、［７８］に記載の方法。
［８０］  前記組換えタンパク質の少なくとも５０％が活性である、［５８］に記載の方
法。
［８１］  前記組換えタンパク質の少なくとも８０％が活性である、［８０］に記載の方
法。
［８２］  前記組換えタンパク質の少なくとも５０％がペリプラズム画分において発現さ
れる、［５８］に記載の方法。
［８３］  前記組換えタンパク質の少なくとも７５％がペリプラズム画分において発現さ
れる、［８２］に記載の方法。
［８４］  前記組換えタンパク質の少なくとも９０％がペリプラズム画分において発現さ
れる、［８３］に記載の方法。
［８５］  前記宿主細胞がシュードモナス細胞である、［５８］に記載の方法。
［８６］  前記細胞がＰ．フルオレッセンス細胞である、［８５］に記載の方法。
［８７］  前記細胞が大腸菌細胞である、［５８］に記載の方法。