【手続補正書】
【提出日】平成24年4月4日(2012.4.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
正常な疾患プロセスから生じる急性心筋梗塞に続く血管再生対象動物の梗塞領域損傷を治療する医薬組成物であって、前記組成物が、
（a）治療的に有効な量の無菌的単離走化性造血幹細胞生成物であって、前記治療的に有効な量の無菌的単離走化性造血幹細胞生成物が、CXCR−４媒介走化性活性を有するCD３４＋／CXCR−４＋有能細胞の亜集団をさらに含むCD３４＋細胞を濃縮した増殖させていない単離自己由来単核細胞集団であって、前記治療的に有効な量が少なくとも０.５ｘ１０6のCXCR−４媒介走化性活性を有するCD３４＋／CXCR−４＋有能細胞を含み、
前記治療的に有効な量が現存する心筋細胞を保存することにより梗塞領域障害を減少させるのに効果的である前記生成物であって
（b）安定化量の血清であって、前記安定化量の血清が２０％（v／v）を越える前記血清；および
（c）治療的に有効な量の心筋細胞増殖を促進する少なくとも１つの適合性薬剤を含み、
ここで、前記医薬組成物をカテーテルにより投与することができ；
前記医薬組成物が更に走化性造血幹細胞の入手後少なくとも２４時間、カテーテル通過後in vitro検査時に以下の特性を有することを特徴とする
（i）     少なくとも７０％の細胞がCD３４＋細胞であり；
（ii）    精製前に測定されたCD３４＋／CXCR−４＋有能細胞の亜集団のCXCR−４媒介走化性活性が少なくとも２％維持され、
（iii）   少なくとも７０％の生存率を有し；及び
（iv）    in vitroで造血細胞コロニーを形成することができる、
前記医薬組成物。
【請求項２】
前記治療的に有効な量の走化性造血幹細胞生成物が、CXCR−４媒介走化性活性を有する０.５ｘ１０6のCD３４＋／CXCR−４＋有能細胞の亜集団をさらに含む、少なくとも１０ｘ１０6のCD３４＋細胞を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記治療的に有効な量の組成物が、成分（ａ）＋（ｂ）からなる組成物よりも、または成分（ｃ）単独からなる組成物よりもさらに梗塞領域損傷を軽減するのに効果的である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
梗塞領域損傷が梗塞領域におけるアポトーシスによる心筋細胞の減少を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
梗塞領域損傷が、コントロールと比較したとき急性心筋梗塞後の不利な心室再造形を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
梗塞領域損傷が、急性心筋梗塞に続く心臓筋肉機能の進行性の低下を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
梗塞領域損傷が、心筋組織の少なくとも１つの虚血性梗塞周囲ゾーンの低灌流を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
梗塞領域損傷が梗塞周囲境界ゾーンの心筋の活動休止を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
増殖させていない単離自己由来単核細胞集団が、対象動物から入手した骨髄吸引物の細胞性成分から精製される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
増殖させていない単離自己由来単核細胞集団が、末梢血から精製される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
CXCR−４媒介走化性活性を有するCD３４＋／CXCR−４＋有能細胞の亜集団をさらに含むCD３４＋細胞を濃縮した増殖させていない単離自己由来単核細胞集団が、増殖させていない単離自己由来単核細胞集団を入手した後少なくとも約４８時間
（a）in vitroで造血細胞コロニーを形成することができ、さらに
（b）精製前に測定したCXCR−４媒介走化性活性の少なくとも２％を維持する、
請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
CXCR−４媒介走化性活性を有するCD３４＋／CXCR−４＋有能細胞の亜集団をさらに含むCD３４＋細胞を濃縮した増殖させていない単離自己由来単核細胞集団が、増殖させていない単離自己由来単核細胞集団を入手した後少なくとも約７２時間、
（a）in vitroで造血細胞コロニーを形成することができ、さらに
（b）精製前に測定したCXCR−４媒介走化性活性の少なくとも２％を維持する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
CXCR−４媒介走化性活性を有するCD３４＋／CXCR−４＋有能細胞の亜集団をさらに含むCD３４＋細胞を濃縮した増殖させていない単離自己由来単核細胞集団が、増殖させていない単離自己由来単核細胞集団を入手した後少なくとも約２４時間、精製前に測定したCXCR−４媒介走化性活性の少なくとも２％を維持する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物がカテーテルにより血管内を経由して梗塞関連動脈へ投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物がカテーテルを介して心筋層へ投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
治療的に有効な量の前記組成物が、コントロールと比較したとき梗塞領域における微細血管の血流を改善するのに効果的である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
治療的に有効な量の前記組成物が、コントロールと比較したとき心筋組織の少なくとも１つの虚血性梗塞周囲ゾーンの灌流を増加させるのに効果的である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
治療的に有効な量の前記組成物が、コントロールと比較したとき心筋組織の少なくとも１つの梗塞周囲ゾーン内の活動休止心筋層への灌流を増加させるのに効果的である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
治療的に有効な量の前記組成物が、コントロールと比較したとき梗塞領域の損傷面積を減少させるのに効果的である、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
治療的に有効な量の前記組成物が、コントロールと比較したとき梗塞量を減少させるのに効果的である、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
心筋細胞の増殖を促進する少なくとも１つの適合性薬剤が、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、ベーターブロッカー、利尿剤、抗不整脈剤、抗狭心症薬、チロシンキナーゼレセプターアゴニスト、血管作用性薬剤、抗凝固剤、フィブリン溶解剤、および高コレステロール血症薬から成る群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
心筋細胞の増殖を促進する少なくとも１つの適合性薬剤が、チロシンキナーゼレセプターアゴニストニューレグリン１を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
心筋細胞の増殖を促進する少なくとも１つの適合性薬剤が、VEGF−A、VEGF−B、VEGF−CおよびVEGF−Dから成る群から選択される血管内皮増殖因子を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２４】
心筋細胞の増殖を促進する少なくとも１つの適合性薬剤が胎盤増殖因子、カテコールアミン、エンドテリン１、プロスタグランジンF2α、アンギオテンシンII、ホルボルエステル、ニューロペプチドY、活性型形質転換増殖因子β１、Gq蛋白、ジアシルグリセロール、サリューシンα、サリューシンβ、インスリン様増殖因子１、ミオスタチン、顆粒球コロニー刺激因子、マクロファージコロニー刺激因子、チアゾリジンジオン、腫瘍壊死因子様低アポトーシスインデューサーまたはその組み合わせを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２５】
前記カテコールアミンがノルエピネフリンである、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記チアゾリジンジオンがロシグリタゾンである、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２７】
血管再生対象動物において正常な疾患プロセスから生じる急性心筋梗塞に続く梗塞領域の損傷を治療および／または予防的治療する為の、走化性造血幹細胞生成物を含む無菌的医薬組成物の製造の為の使用であって、以下の工程：
（ａ）増殖させていない単離自己由来単核細胞集団の第１のアリコットならびに複数のアリコットを提供する工程、
（ｂ）第１のアリコットから請求項１記載の無菌医薬組成物を調製する工程、
（ｃ）無菌医薬組成物（ｂ）をカテーテルから第一の輸液期日に投与する工程、
であって、
前記工程において、第一の輸液期日は１回目および２回目で規定される特定の時間間隔を含み、前記１回目は梗塞領域における最盛期炎症性サイトカインカスケード産生後であり、２回目は梗塞領域における心筋瘢痕形成前である工程、および
（ｄ）第一の輸液期日の後の複数の輸液期日における投与の為に複数のアリコットを凍結保存する工程
を含む前記使用。
【請求項２８】
前記治療的に有効な量の走化性造血幹細胞生成物（ｂ）が、CXCR−４媒介走化性活性を有する０.５ｘ１０6のCD３４＋／CXCR−４＋有能細胞の亜集団をさらに含む、少なくとも１０ｘ１０6の単離自己由来CD３４＋造血幹細胞の濃縮集団を含む、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
前記方法がさらに
（ａ）（ｂ）の増殖させていない単離自己由来単核細胞集団を含む凍結保存した複数のアリコットの第二のアリコットを解凍する工程
（ｂ）第２のアリコットから請求項１記載の無菌医薬組成物を調製する工程、および
（ｃ）第二の輸液期日に凍結保存し解凍した増殖させていない単離自己由来単核細胞集団を含む第二の走化性造血幹細胞生成物を投与する工程を含み、前記第二の走化性造血幹細胞生成物が、
（ｉ）CXCR−４媒介走化性活性を有する少なくとも０.５ｘ１０6のCD３４＋／CXCR−４＋有能細胞の亜集団をさらに含む凍結保存し解凍したCD３４＋を濃縮した増殖させていない単離自己由来単核細胞集団；および
（ｉｉ）安定化量の血清であって、前記安定化量の血清が２０％（v／v）を越える前記血清を含み、
前記工程において、CXCR−４媒介走化性活性を有する少なくとも０.５ｘ１０6のCD３４＋／CXCR−４＋有能細胞の亜集団をさらに含む凍結保存し解凍したCD３４＋を濃縮した増殖させていない単離自己由来単核細胞集団が、カテーテル通過後in vitro検査時に、第二のアリコットの融解後少なくとも約２４時間
（１）CD３４＋を濃縮した増殖させていない単離自己由来単核細胞集団が凍結保存前に測定したCXCR−４媒介活性を維持し、
（２）少なくとも７０％のCD３４＋細胞を含み、
（３）少なくとも７０％の生存率を有し、さらに
（４）in vitroで造血細胞コロニーを形成することができる、
請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記方法がさらに
（ａ）（ｂ）の増殖させていない単離自己由来単核細胞集団を含む凍結保存した複数のアリコットの第三のアリコットを解凍する工程
（ｂ）第三のアリコットから請求項１記載の無菌医薬組成物を調製する工程、および
（ｃ）第三の輸液期日に凍結保存し解凍した増殖させていない単離自己由来単核細胞集団を含む第三の走化性造血幹細胞生成物を投与する工程を含み、前記第三の走化性造血幹細胞生成物が、
（ｉ）CXCR−４媒介走化性活性を有する少なくとも０.５ｘ１０6のCD３４＋／CXCR−４＋有能細胞の亜集団をさらに含む凍結保存し解凍したCD３４＋を濃縮した増殖させていない単離自己由来単核細胞集団；および
（ｉｉ）安定化量の血清であって、前記安定化量の血清が２０％（v／v）を越える前記血清を含み、
前記工程において、CXCR−４媒介走化性活性を有する少なくとも０.５ｘ１０6のCD３４＋／CXCR−４＋有能細胞の亜集団をさらに含む凍結保存し解凍したCD３４＋を濃縮した増殖させていない単離自己由来単核細胞集団が、カテーテル通過後in vitro検査時に、第三のアリコットの融解後少なくとも２４時間
（１）CD３４＋を濃縮した増殖させていない単離自己由来単核細胞集団が凍結保存前に測定したCXCR−４媒介活性を維持し、
（２）少なくとも７０％のCD３４＋細胞を含み、
（３）少なくとも７０％の生存率を有し、さらに
（４）in vitroで造血細胞コロニーを形成することができる、
請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記第二の輸液期日が第一の輸液期日の約３０日後である、請求項２９に記載の使用。
【請求項３２】
前記第三の輸液期日が第一の輸液期日の約６０日後である、請求項３０に記載の使用。
【請求項３３】
前記カテーテルが流量制御カテーテルである、請求項２７に記載の使用
【請求項３４】
前記カテーテルがバルーン拡張カテーテルである、請求項２７に記載の使用。
【請求項３５】
前記カテーテルが少なくとも約０.３６mmの内径を有する、請求項２７に記載の使用。
【請求項３６】
前記第一の輸液期日の特定の時間間隔の１回目が心筋梗塞後少なくとも約５日である、請求項２７に記載の使用。
【請求項３７】
前記第一の輸液期日の特定の時間間隔の２回目が心筋梗塞後約１４日未満である、請求項２７に記載の使用。
【請求項３８】
前記第一の輸液期日の特定の時間間隔の１回目が心筋梗塞後少なくとも約５日であり、第一の輸液期日の特定の時間間隔の２回目が心筋梗塞後約１４日未満である、請求項２７に記載の使用。