【誤訳訂正書】
【提出日】平成26年9月29日(2014.9.29)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫グロブリンタンパク質産生のためのキットであって、
第１の単離核酸と、パッケージと、その説明書とを含み、
前記第１の単離核酸は、ｉ）前記免疫グロブリンタンパク質をコードする翻訳可能領域と、ｉｉ）核酸修飾とを含み、
前記第１の単離核酸は、該第１の単離核酸が導入される細胞の固有免疫応答を回避可能であり、
前記翻訳可能領域は、シチジンヌクレオチドおよびウラシルヌクレオチドを実質的に欠失している、キット。
【請求項２】
前記免疫グロブリンタンパク質が、全長抗体、重鎖ポリペプチド、軽鎖ポリペプチド、Ｆａｂドメイン、および一本鎖可変フラグメント（ＳｃＦｖ）ポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含み、かつ前記第１の単離核酸が、５−メチル−シチジンおよびプソイドウリジンを含むメッセンジャーリボ核酸を含む、請求項１に記載のキット。
【請求項３】
前記第１の単離核酸が、
ａ）  配列番号４および配列番号６の少なくとも一方のヌクレオチド配列［リツキシマブ］、
ｂ）  ａ）のヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、
ｃ）  配列番号５および配列番号７の少なくとも一方のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列［リツキシマブ］、
ｄ）  ｃ）のヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、
ｅ）  配列番号５および配列番号７の少なくとも一方に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列［リツキシマブ］、
ｆ）  ｅ）のヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、
ｇ）  ａ）〜ｆ）のヌクレオチド配列のいずれか１つのフラグメントを含むヌクレオチド配列、および
ｈ）  ａ）〜ｇ）のヌクレオチド配列のいずれか１つのヌクレオチド配列のコドン最適
化変異体、
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のキット。
【請求項４】
前記免疫グロブリンタンパク質がＣＤ２０ポリペプチドに免疫特異的に結合する、請求項３に記載のキット。
【請求項５】
前記免疫グロブリンタンパク質がＣＤ２０＋細胞との接触時に該細胞の抗体依存性細胞傷害を特異的に誘導する、請求項３に記載のキット。
【請求項６】
前記免疫グロブリンタンパク質が、白血病、リンパ腫、臓器移植拒絶、または自己免疫疾患もしくは障害の治療における使用のために産生される、請求項３に記載のキット。
【請求項７】
請求項１に記載のキットの使用により生成される、哺乳動物細胞。
【請求項８】
前記第１の単離核酸が、
ａ）  配列番号８および配列番号１０の少なくとも一方のヌクレオチド配列、
ｂ）  ａ）のヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、
ｃ）  配列番号９および配列番号１１の少なくとも一方のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、
ｄ）  ｃ）のヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、
ｅ）  配列番号９および配列番号１１の少なくとも一方に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、
ｆ）  ｅ）のヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列、ならびに
ｇ）  ａ）〜ｆ）のヌクレオチド配列のいずれか１つの少なくとも３０ヌクレオチド長のフラグメントを含むヌクレオチド配列、
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のキット。
【請求項９】
前記免疫グロブリンタンパク質が、ＨＥＲ−２／ｎｅｕレセプターポリペプチドに免疫特異的に結合する、請求項８に記載のキット。
【請求項１０】
前記免疫グロブリンタンパク質が、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＋細胞との接触時に該細胞の抗体依存性細胞傷害、アポトーシス、細胞周期停止、またはそれらの組合せを、特異的に誘導する、請求項８に記載のキット。
【請求項１１】
前記免疫グロブリンタンパク質が、ＨＥＲ２／ｎｅｕ＋乳癌の治療における使用のために産生される、請求項８に記載のキット。
【請求項１２】
産生細胞から産生される単離された免疫グロブリンタンパク質であって、
前記産生細胞は、ｉ）免疫グロブリンタンパク質をコードする翻訳可能領域とｉｉ）核酸修飾とを含む第１の単離核酸を含み、
前記第１の単離核酸は、細胞の固有免疫応答を回避可能であり、
前記翻訳可能領域は、シチジンヌクレオチド、ウラシルヌクレオチド、およびシチジンとウラシルヌクレオチドとの組合せのいずれかを実質的に欠失している、タンパク質。
【請求項１３】
前記産生細胞がヒト被験体から単離された細胞である、請求項１２に記載のタンパク質。
【請求項１４】
請求項１３に記載のタンパク質の有効量を含む、医薬製剤。
【請求項１５】
ｉ）免疫グロブリンタンパク質をコードする翻訳可能領域とｉｉ）核酸修飾とを含む有効量の第１の核酸を含む、医薬製剤であって、
前記第１の核酸は、細胞ヌクレアーゼによる分解の低減を呈し、かつ該第１の核酸が導入される細胞の固有免疫応答を回避可能であり、
前記翻訳可能領域は、シチジンヌクレオチドおよびウラシルヌクレオチドを実質的に欠失している、医薬製剤。
【請求項１６】
対象の異種タンパク質を細胞内で産生する方法であって、
ｉ）タンパク質翻訳が可能な標的細胞を提供する工程と、
ｉｉ）対象のタンパク質が細胞内で産生される条件下で、対象の前記異種タンパク質をコードする翻訳可能領域とヌクレオシド修飾とを含む第１の単離核酸を含む組成物を前記標的細胞内に導入する工程と、
を含む、方法。
【請求項１７】
前記細胞から前記対象のタンパク質を実質的に精製する工程をさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記対象のタンパク質が分泌タンパク質である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記対象のタンパク質が免疫グロブリンタンパク質である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記対象のタンパク質が細胞内タンパク質である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
細胞内で組換え発現される対象のタンパク質の産生を増大させる方法であって、
ｉ）前記対象のタンパク質をコードする異種核酸を含む標的細胞を提供する工程と、
ｉｉ）細胞内で翻訳エフェクタータンパク質が産生されることにより細胞内で組換え発現タンパク質の産生が増大される条件下で、前記翻訳エフェクタータンパク質をコードする翻訳可能領域とヌクレオシド修飾とを含む第１の単離核酸を含む組成物を前記標的細胞内に導入する工程と、
を含む、方法。
【請求項２２】
前記対象のタンパク質が免疫グロブリンタンパク質である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象のタンパク質が分泌タンパク質である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記対象のタンパク質が細胞内タンパク質である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記標的細胞が哺乳動物細胞である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記標的細胞が酵母細胞である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記標的細胞が、細菌細胞、昆虫細胞、または植物細胞である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
前記翻訳エフェクタータンパク質がセラミド輸送タンパク質（ＣＥＲＴ）である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２９】
標的細胞内で対象のタンパク質のレベルを調整する方法であって、
ｉ）標的細胞内における少なくとも１つの翻訳エフェクター分子の活性を調整する工程であって、該調整は、翻訳エフェクタータンパク質をコードする翻訳可能領域とヌクレオシド修飾とを含む第１の単離核酸を前記標的細胞内に導入することを含む、工程と、
ｉｉ）前記細胞を培養する工程と、
を含む、方法。
【請求項３０】
タンパク質産生のためのキットであって、
タンパク質をコードする翻訳可能領域を含む第１の単離核酸と、パッケージと、その説明書とを含み、
前記第１の核酸は核酸修飾を含み、
前記第１の核酸は、核酸修飾を含まない核酸と比較して、該第１の単離核酸が導入される細胞内における分解の低減を示す、キット。
【請求項３１】
タンパク質産生のためのキットであって、
タンパク質をコードする翻訳可能領域を含む第１の単離核酸と、パッケージと、その説明書とを含み、
前記第１の核酸は核酸修飾を含み、
前記第１の核酸は核酸修飾を含まない核酸と比較して、該第１の単離核酸が導入される細胞内でより安定である、キット。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００５】
核酸の細胞内翻訳の調整に対処する生物学的方法の必要性が、当技術分野に存在する。
特に説明がないかぎり、本明細書中で使用されているすべての科学技術用語は、本開示が属する技術分野の当業者により一般に理解されているものと同一の意味を有する。本開示の実施または試験に本明細書で説明されるものと類似のまたは等価な方法および材料を使用することが可能であるが、好適な方法および材料を本明細書で説明する。材料、方法、および実施例は、例示的なものにすぎず、それらに限定しようとするものではない。本開示の他の特徴は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかである。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
他の態様では、本開示は、対象のタンパク質（たとえば、異種タンパク質）を細胞内で産生する方法であって、次の工程、すなわち、（ｉ）タンパク質翻訳が可能な標的細胞を提供する工程と、（ｉｉ）対象のタンパク質が産生されるような条件下で、（ａ）対象のタンパク質をコードする翻訳可能領域とヌクレオシド修飾とを含む第１の単離核酸と（ｂ）阻害性核酸を含む第２の核酸とを含む組成物を標的細胞内に導入する工程と、を含む方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、この方法はさらに、細胞から対象のタンパク質を実質的に精製する工程を含む。いくつかの実施形態では、対象のタンパク質は、分泌タンパク質である。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
いくつかの実施形態では、標的細胞は、哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、酵母細胞である。いくつかの実施形態では、標的細胞は、細菌細胞、昆虫細胞、または植物細胞である。いくつかの実施形態では、対象のタンパク質は、分泌タンパク質である。いくつかの実施形態では、対象のタンパク質は、膜貫通タンパク質である。いくつかの実施形態では、対象のタンパク質は、抗体またはその抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、対象のタンパク質は、増殖因子またはサイトカインである。いくつかの実施形態では、対象のタンパク質は、ペプチドまたはペプチド模倣体である。いくつかの実施形態では、翻訳エフェクタータンパク質は、セラミド輸送タンパク質（ＣＥＲＴ）である。いくつかの実施形態では、翻訳エフェクタータンパク質は、組換え発現タンパク質の翻訳の効率を増大させるのに有効な量で標的細胞内で翻訳される。いくつかの実施形態では、翻訳エフェクタータンパク質は、組換え発現タンパク質以外の細胞内のタンパク質の翻訳の効率を低減するのに有効な量で標的細胞内で翻訳される。いくつかの実施形態では、翻訳エフェクタータンパク質は、組換え発現タンパク質を含有する封入体の形成を低減するのに有効な量で標的細胞内で翻訳される。いくつかの実施形態では、翻訳エフェクタータンパク質は、組換え発現タンパク質の細胞内分解を低減するのに有効な量で標的細胞内で翻訳される。いくつかの実施形態では、翻訳エフェクタータンパク質は、組換え発現タンパク質の分泌を増大させるのに有効な量で標的細胞内で翻訳される。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１６】
他の態様では、本開示は、タンパク質産生のための組成物であって、（ｉ）翻訳可能領域とヌクレオシド修飾とを含む第１の単離核酸（ここで、この核酸は、細胞ヌクレアーゼによる分解の低減を呈する）と、（ｉｉ）阻害性核酸を含む第２の核酸と、（ｉｉｉ）第１の核酸の翻訳可能領域の翻訳に好適な哺乳動物細胞（ここで、この哺乳動物細胞は、阻害性核酸が作用可能な標的核酸を含む）と、を含む組成物を特徴とする。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞は、組換え核酸を含む。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
前述の方法、細胞、培養物、組成物、製剤、およびキットの実施形態は、以下の特徴の１つ以上を含みうる。
いくつかの実施形態では、第１の単離核酸は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、ピリジン−４−オンリボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオウリジン、４−チオ−プソイドウリジン、２−チオ−プソイドウリジン、５−ヒドロキシウリジン、３−メチルウリジン、５−カルボキシメチル−ウリジン、１−カルボキシメチル−プソイドウリジン、５−プロピニル−ウリジン、１−プロピニル−プソイドウリジン、５−タウリノメチルウリジン、１−タウリノメチル−プソイドウリジン、５−タウリノメチル−２−チオ−ウリジン、１−タウリノメチル−４−チオ−ウリジン、５−メチル−ウリジン、１−メチル−プソイドウリジン、４−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−１
−デアザ−プソイドウリジン、ジヒドロウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−ジヒドロプソイドウリジン、２−メトキシウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−プソイドウリジン、および４−メトキシ−２−チオ−プソイドウリジンからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、５−アザ−シチジン、プソイドイソシチジン、３−メチル−シチジン、Ｎ４−アセチルシチジン、５−ホルミルシチジン、Ｎ４−メチルシチジン、５−ヒドロキシメチルシチジン、１−メチル−プソイドイソシチジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−プソイドイソシチジン、２−チオ−シチジン、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−チオ−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−プソイドイソシチジン、および４−メトキシ−１−メチル−プソイドイソシチジンからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、２−アミノプリン、２，６−ジアミノプリン、７−デア−ザアデニン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノプリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、１−メチルアデノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、Ｎ６−（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６−グリシニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデノシン、７−メチルアデニン、２−メチルチオ−アデニン、および２−メトキシ−アデニンからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡは、イノシン、１−メチル−イノシン、ワイオシン、ワイブトシン、７−デアザ−グアノシン、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−メチルイノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチルグアノシン、Ｎ２−メチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシン、およびＮ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシンからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオシドを含む。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
タンパク質、ポリペプチド、およびペプチドを産生する方法を本明細書で説明する。本開示は、少なくとも部分的には、対象のタンパク質、ポリペプチド、またはペプチド（たとえば、異種タンパク質）を細胞内で産生する方法、細胞内で対象のタンパク質、ポリペプチド、またはペプチド（たとえば、組換え発現タンパク質）の産生を増大させる方法、および、細胞内で対象のタンパク質、ポリペプチド、またはペプチドのレベルを変化させる方法を提供する。たとえば、これらの方法は、対象のタンパク質、ポリペプチド、またはペプチドが細胞内で産生（たとえば、翻訳）される条件下で、対象のタンパク質、ポリペプチド、またはペプチドをコードする核酸（たとえば、本明細書で説明される修飾核酸）を細胞（たとえば、ヒト細胞）内に導入する工程を含みうる。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のヌクレオシド修飾（たとえば、本明細書で説明される１つ以上のヌクレオシド修飾）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、核酸が導入される細胞の固
有免疫応答を回避することにより、細胞内でタンパク質産生の効率を増大させることが可能である。いくつかの実施形態では、タンパク質は、本明細書で説明される治療用タンパク質である。いくつかの実施形態では、タンパク質は、１つ以上の翻訳後修飾（たとえば、ヒト細胞に存在する翻訳後修飾）を含む。また、タンパク質産生のための組成物およびキットを本明細書で説明する。さらに、本明細書では、変化したタンパク質レベルを有する細胞および培養物（たとえば、本明細書で説明される方法により生成される）を説明する。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
本開示に係る細胞は、精製および従来の投与経路による送達が可能な治療用産物のｉｎ
ｖｉｔｒｏ産生に有用である。増幅の有無にかかわらず、この細胞は、細胞内または細胞外のタンパク質産物を収集するための大規模培養の対象となりうる。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
タンパク質産生のための細胞内への修飾ＲＮＡまたは一過性ＲＮＡの導入
一過性トランスフェクト細胞は、当業者に周知のトランスフェクション法、電気穿孔法、カチオン剤法、ポリマー法、または脂質系送達分子法により生成可能である。修飾一過性ＲＮＡは、適切であれば、伝統的バッチ式工程または連続フロースルー工程のいずれかで培養細胞内に導入可能である。本開示に係る方法および組成物は、１つ以上の対象のタンパク質の産生の増大を伴う細胞を産生するために使用可能である。細胞に１つ以上のＲＮＡをトランスフェクトまたは他の形で導入することが可能である。細胞は、２つ以上のＲＮＡ構築物で同時にまたは逐次的にトランスフェクト可能である。特定の実施形態では、本明細書で説明される方法を複数ラウンド用いて、１つ以上の対象のＲＮＡまたはタンパク質の発現増大を有する細胞を得ることが可能である。たとえば、本明細書で説明される方法に従って、対象のＲＮＡまたはタンパク質をコードする１つ以上のＲＮＡ構築物を細胞にトランスフェクトして単離することが可能である。次いで、単離された細胞を、対象のＲＮＡまたはタンパク質をコードする１つ以上の他のＲＮＡによるさらなるトランスフェクションラウンドに付して、再度、単離することが可能である。たとえば、この方法は、タンパク質の複合体、同一もしくは関連の生物学的経路のＲＮＡもしくはタンパク質、互いの上流または下流で作用するＲＮＡもしくはタンパク質、互いに調整、活性化、もしくは抑制する機能を有するＲＮＡもしくはタンパク質、互いに機能もしくは活性を依存するＲＮＡもしくはタンパク質、または相同性（たとえば、配列、構造、もしくは機能の相同性）を共有するＲＮＡもしくはタンパク質の発現増大を有する細胞を生成するのに有用である。たとえば、この方法は、免疫グロブリンタンパク質（たとえば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ）の重鎖および軽鎖またはその抗原結合フラグメントの発現増大を有する細胞系を生成するために使用可能である。免疫グロブリンタンパク質は、完全ヒト、ヒト化、またはキメラの免疫グロブリンタンパク質でありうる。本開示に係る細胞内にトランスフェクトされるＲＮＡは、対象のタンパク質をコードするＲＮＡである配列を含みうる。本明細書で説明される方法に従って任意のタンパク質を産生することが可能である。本開示に係る方法に従って産生可能なタンパク質の例は、ペプチドホルモン（たとえば、インスリン）、糖タンパク質ホルモン（たとえば、エリスロポエチン）、抗生物質、サイトカイン、酵素、ワクチン（たとえば、ＨＩＶワクチン、ＨＰＶワクチン
、およびＨＢＶワクチン）、抗癌療法剤（たとえば、Ｍｕｃｌ）、および治療用抗体を含むが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態では、ＲＮＡは、免疫グロブリンタンパク質またはその抗原結合フラグメント、たとえば、免疫グロブリン重鎖、免疫グロブリン軽鎖、一本鎖Ｆｖ、抗体のフラグメント、たとえば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、もしくは（Ｆａｂ’）２、または免疫グロブリンの抗原結合フラグメントをコードする。特定の実施形態では、ＲＮＡは、エリスロポエチンをコードする。他の特定の実施形態では、ＲＮＡは、細胞表面レセプター、すなわち、表皮増殖因子レセプター（ＥＧＦＲ）、ＨＥＲ２、またはｃ−ＥｒｂＢ−１に結合する、かつ任意選択により、それをアンタゴナイズまたはアゴナイズする、１つ以上の免疫グロブリンタンパク質またはそのフラグメント、たとえば、エルビタックス（Ｅｒｂｉｔｕｘ）（商標）（セツキシマブ）をコードする。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
タンパク質の単離または精製
本明細書で説明される方法はさらに、本明細書で説明される方法により産生されるタンパク質、ポリペプチド、またはペプチドを単離または精製する工程を含みうる。当業者であれば、培養細胞から対象のタンパク質を精製または単離する適正な方法の決定を容易に行うことが可能である。一般的には、これは、アフィニティー結合精製または非アフィニティー精製を用いた捕獲方法により行われる。対象のタンパク質が培養細胞により分泌されない場合、上述した精製または単離の前に、培養細胞の溶解が行われるであろう。本開示では、細胞培養培地成分さらには細胞培養添加剤、たとえば、消泡性化合物ならびに他の栄養剤および栄養補助剤、細胞、細胞片、宿主細胞タンパク質、ＤＮＡ、ウイルスなどと共に対象のタンパク質を含有する非清澄細胞培養液を使用することが可能である。さらに、このプロセスは、所望により、バイオリアクター自体で行うことが可能である。ｐＨ、温度、他の刺激特性などの所望の刺激因子に対して、流体を事前調整することが可能であるか、またはポリマーの添加時に流体を調整することが可能であるか、または流体中にポリマーを可溶化させるのに必要な刺激条件の所要のパラメーターに対して適正に調整された担体液にポリマーを添加することが可能であるか、のいずれかである。ポリマーを流体と共に十分に循環させ、次いで、刺激因子を適用すると（ｐＨ、温度、塩濃度などの変化）、所望のタンパク質およびポリマーが溶液から沈殿する。ポリマーおよび所望のタンパク質を流体の残りの部分から分離し、かつ任意選択により、トラップされたまたは緩く結合されたいずれの夾雑物をも除去すべく１回以上洗浄を行う。次いで、溶出などを行って所望のタンパク質をポリマーから回収する。典型的には、ポリマーがその固体（沈殿）形態を維持して所望のタンパク質の選択的溶出時にいずれの不純物をも保持するような一連の条件下で、溶出を行う。他の選択肢として、ポリマーおよびタンパク質さらにはいずれの不純物をも、水や緩衝溶液などの新しい流体中に可溶化させることが可能であり、そしてポリマーまたは不純物に対するよりもタンパク質に対して優先性および選択性を有するアフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、なにか他のタイプのクロマトグラフィーなどの手段により、タンパク質を回収することが可能である。次いで、溶出されたタンパク質を回収し、所望により、適切であれば伝統的バッチ式工程または連続フロースルー工程のいずれかの追加のプロセス工程に付す。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３８】
そのほかに、細胞系または一群の細胞系において、可能性のある対象の特定のポリペプチドの発現を最適化することが有用である。特定のポリペプチドとは、特に、工学操作されたタンパク質、たとえば既知の活性を有する参照タンパク質のタンパク質変異体である。一実施形態では、複数の標的細胞型を提供するとともに、工学操作されたポリペプチドをコードする修飾ｍＲＮＡを複数の標的細胞型のそれぞれに独立して接触させることにより、工学操作されたタンパク質の標的細胞における発現を最適化する方法を提供する。そのほかに、培養条件を変化させてタンパク質産生効率を増大させることが可能である。続いて、工学操作されたポリペプチドの複数の標的細胞型での存在および／またはレベルを検出および／または定量して、効率的な標的細胞およびそれに関連する細胞培養条件の選択により、工学操作されたポリペプチドの発現の最適化を可能にする。そのような方法は、工学操作されたポリペプチドが１つ以上の翻訳後修飾を含むかまたは、実質的な三次構造を有する場合、すなわち、効率的なタンパク質産生を複雑化することが多い状況で、特に有用である。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４０】
対象のタンパク質は、典型的には、分泌ポリペプチドとして培養培地から回収されるか、または分泌シグナルなしで発現される場合、宿主細胞溶解物から回収可能である。対象のタンパク質の実質的に均一な調製物が得られるように、対象のタンパク質を他の組換えタンパク質および宿主細胞タンパク質から精製することが必要である。最初の工程として、細胞および／または粒子状細胞片を培養培地または溶解物から除去する。その後、対象の産物は、たとえば、免疫アフィニティーカラムもしくはイオン交換カラムによる分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）クロマトグラフィー、シリカもしくはＤＥＡＥなどの陽イオン交換樹脂によるクロマトグラフィーにより、夾雑物の可溶性タンパク質、ポリペプチド、および核酸から精製される。一般的には、宿主細胞により異種発現されたタンパク質をいかに精製するかを当業者に教示する方法は、当技術分野で周知である。そのような方法は、たとえば、（ハリス（Ｈａｒｒｉｓ）およびアンガル（Ａｎｇａｌ）著、タンパク質精製方法：実用的手法（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ）、オックスフォード大学出版局（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）、１９９５年）または（ロバート・スコープス（Ｒｏｂｅｒｔ  Ｓｃｏｐｅｓ）著、タンパク質精製：原理と実際（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ）、シュプリンガー（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）、１９８８年）に記載されている。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４３】
アンタゴニストタンパク質の発現
本明細書で説明される方法および組成物は、哺乳動物被験体で内因性アゴニストの生物学的応答を減衰もしくはブロックすることおよび／またはレセプターもしくはシグナリング分子をアンタゴナイズすることが可能な産生タンパク質に使用可能である。たとえば、ＩＬ−１２およびＩＬ−２３レセプターシグナリングは、多発性硬化症などの慢性自己免疫障害、および関節リウマチ、乾癬、エリテマトーデス、強直性脊椎炎、クローン（Ｃｒ
ｏｈｎ）病などの炎症性疾患で、増強される（キクリー，Ｋ（Ｋｉｋｌｙ  Ｋ）、リュウ，Ｌ（Ｌｉｕ  Ｌ）、ナー，Ｓ（Ｎａ  Ｓ）、セジウィック，Ｊ，Ｄ（Ｓｅｄｇｗｉｃｋ
Ｊ  Ｄ）、２００６年、免疫学の現在の見解（Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）、第１８巻、第６号、ｐ．６７０〜５）。他の実施形態では、核酸は、ケモカインレセプターのアンタゴニストをコードする。ケモカインレセプターＣＸＣＲ−４およびＣＣＲ−５は、宿主細胞へのＨＩＶ進入に必要とされる（アレンザナ−セイスデドス，Ｆ（Ａｒｅｎｚａｎａ−Ｓｅｉｓｄｅｄｏｓ  Ｆ）ら著、１９９６年、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、１０月３日、第３８３巻、第６５９９号、ｐ．４００）。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４６】
機序の詳細。分裂酵母は、ｓｉＲＮＡ媒介ヘテロクロマチン集合のために、２つのＲＮＡｉ複合体、すなわち、ＲＮＡ誘導転写サイレンシング（ＲＩＴＳ）複合体およびＲＮＡ指令ＲＮＡポリメラーゼ複合体（ＲＤＲＣ）を必要とする（モタメディ（Ｍｏｔａｍｅｄｉ）ら著、細胞（Ｃｅｌｌ）、２００４年、第１１９巻、ｐ．７８９〜８０２）。分裂酵母では、ＲＩＴＳ複合体は、ｓｉＲＮＡ結合アルゴノートファミリータンパク質Ａｇｏｌ、クロモドメインタンパク質Ｃｈｐ１およびＴａｓ３を含有する。分裂酵母ＲＤＲＣ複合体は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼＲｄｐ１、推定ＲＮＡヘリカーゼＨｒｒ１、およびポリＡポリメラーゼファミリータンパク質Ｃｉｄ１２で構成される。これらの２つの複合体は、活性のために、ダイサー（Ｄｉｃｅｒ）リボヌクレアーゼおよびＣｌｒ４ヒストンＨ３メチルトランスフェラーゼを必要とする。全体として、Ａｇｏｌは、Ｒｄｐ１共転写生成ｄｓＲＮＡ転写物のダイサー媒介切断を介して生成されたｓｉＲＮＡ分子に結合して、Ｃｈｐ１、Ｔａｓ３、Ｈｒｒ１、およびＣｌｒ４が、ＤＮＡ領域に対して配列特異的直接会合することを可能にする。このＤＮＡ領域は、メチル化およびヒストン修飾およびそれに続く転写サイレンシングヘテロクロマチンへの緊密化（コンパクション）のためのものである。この機序は、ＤＮＡの動原体領域とシスで機能するが、ＤＮＡの特定領域に対する二本鎖ｓｉＲＮＡとの共トランスフェクションおよびｓｉＲＮＡリボヌクレアーゼＥｒｉ１の付随的ＲＮＡｉ指令サイレンシングを介して、配列特異的トランスサイレンシングが可能である（ビューラー（Ｂｕｈｌｅｒ）ら著、セル（Ｃｅｌｌ）、２００６年、第１２５巻、ｐ．８７３〜８８６）。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４９】
当業者であればわかるように、タンパク質断片、機能性タンパク質ドメイン、および相同タンパク質もまた、本開示の範囲内にあるとみなされる。たとえば、本明細書には、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００アミノ酸、または１００アミノ酸超の長さの参照タンパク質の任意のタンパク質断片（参照ポリペプチド配列よりも少なくとも１アミノ酸残基短いがそれ以外は同等であるポリペプチド配列を意味する）が提供される。他の例では、本明細書で説明される配列のいずれかに対して約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、または約１００％同一である、約２０、約３０、約４０、約５０、または約１００アミノ酸の伸長部を含む任意のタンパク質を、本開示に従って利用することが可能である。特定の実施形態では、本開示に従って利用されるタンパク質配列は、本明細書に提供されたまたはそこで参照された配列のいずれかに示される２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、またはそれよりも
多くの突然変異を含む。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７２】
本開示は、ｅｘ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏなどにおける標的細胞集団への修飾核酸の繰返し導入（たとえば、トランスフェクション）を提供する。細胞集団に接触させる工程は、１回以上繰返し可能である（たとえば、２、３、４、５回、または５回超）。いくつかの実施形態では、修飾核酸を細胞集団に接触させる工程は、細胞集団でタンパク質翻訳の所定の効率が達成されるように十分な回数繰り返される。核酸修飾により提供される標的細胞集団の細胞傷害性の低減を考慮して、そのような繰返しトランスフェクションは、多様な一連の細胞型で達成可能である。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７８】
本明細書で説明される修飾核酸を用いて細胞集団で組換えポリペプチドの翻訳を誘導する方法を提供する。そのような翻訳は、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、培養下、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏでありうる。細胞集団は、少なくとも１つのヌクレオシド修飾と組換えポリペプチドをコードする翻訳可能領域とを有する核酸を含有する有効量の組成物に接触される。細胞集団の１つ以上の細胞に核酸が局在化されて、組換えポリペプチドが核酸から細胞内で翻訳される条件下で集団は接触される。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８７】
機能不全または異常なタンパク質活性により特徴付けられる疾患は、癌および増殖性疾患、遺伝病（たとえば、嚢胞性繊維症）、自己免疫疾患、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患、および代謝性疾患を含むが、これらに限定されるものではない。本開示は、本明細書に提供される修飾核酸を用いた方法により産生されるタンパク質または細胞に基づく療法剤を導入することにより、被験体でそのような病態または疾患を治療する方法を提供する。この修飾核酸は、被験体の細胞内に存在する異常なタンパク質活性をアンタゴナイズするかまたは他の形で克服するタンパク質をコードする。機能不全タンパク質の特定例は、嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンスレギュレータ（ＣＦＴＲ）遺伝子のミスセンス突然変異であり、これは、ＣＦＴＲタンパク質の機能不全タンパク質変異体を産生し、これは、嚢胞性繊維症を引き起こす。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９０】
他の実施形態では、本開示は、本明細書で説明される方法によりソルチリンをコードする修飾ｍＲＮＡ分子を用いて産生されるソルチリン（最近のゲノム研究により特徴付けら
れたタンパク質）を被験体の細胞集団に導入して、これによって被験体での高脂血症を改善することにより、被験体で高脂血症を治療する方法を提供する。ＳＯＲＴ１遺伝子は、ソルチリンと呼ばれるトランスゴルジ網（ＴＧＮ）膜貫通タンパク質をコードする。遺伝学的研究では、５名のうち１名は、低レベルの低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）および極低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の素因となるＳＯＲＴ１遺伝子の１ｐ１３遺伝子座に単一ヌクレオチド多型ｒｓ１２７４０３７４を有することが示された。約３０％の者に存在する副次対立遺伝子の各コピーは、ＬＤＬコレステロールを８ｍｇ／ｄＬ変化させるが、集団の約５％に存在する副次対立遺伝子の２つのコピーは、ＬＤＬコレステロールを１６ｍｇ／ｄＬ低減する。副次対立遺伝子の保有者はまた、心筋梗塞のリスクが４０％低減されることが示されている。マウスでのｉｎ  ｖｉｖｏ機能研究では、マウス肝臓組織でＳＯＲＴ１の過剰発現を行うと、ＬＤＬコレステロールレベルが有意に低下して８０％程度低くなり、かつＳＯＲＴ１増大ＬＤＬコレステロールが約２００％サイレンシングされると記載されている（ムスヌル，Ｋ（Ｍｕｓｕｎｕｒｕ  Ｋ）ら著、１ｐ１３コレステロール遺伝子座のＳＯＲＴ１を介して非コード変異体から表現型へ（Ｆｒｏｍ  ｎｏｎｃｏｄｉｎｇ  ｖａｒｉａｎｔ  ｔｏ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｖｉａ  ＳＯＲＴ１  ａｔ  ｔｈｅ  １ｐ１３  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｌｏｃｕｓ）、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１０年、第４６６巻、ｐ．７１４〜７２１）。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９４】
本開示に係る医薬組成物は、シングルユニット用量としておよび／または複数のシングルユニット用量として、大量に、調製、包装、および／または販売が可能である。本明細書で用いられる場合、「ユニット用量」は、所定量の活性成分を含む医薬組成物の個別量である。活性成分の量は、一般的には、被験体に投与される活性成分の投与量および／またはそのような投与量の便利な部分量たとえばそのような投与量の１／２もしくは１／３に等しい。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０３】
例示的保存剤は、抗酸化剤、キレート化剤、抗微生物保存剤、抗菌類保存剤、アルコール保存剤、酸性保存剤、および／または他の保存剤を含むが、これらに限定されるものではない。例示的抗酸化剤は、αトコフェロール、アスコルビン酸、アコルビル（ａｃｏｒｂｙｌ）パルミテート、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、プロピルガレート、アスコルビン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、および／または亜硫酸ナトリウムを含むが、これらに限定されるものではない。例示的キレート化剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、ジナトリウムエデテート、ジカリウムエデテート、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、ナトリウムエデテート、酒石酸、および／またはトリナトリウムエデテートを含む。例示的抗微生物保存剤は、ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、セチルピリジニウムクロリド、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミドウレア、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、および／またはチメロサールを含むが
、これらに限定されるものではない。例示的抗菌類性保存剤は、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、カリウムベンゾエート、カリウムソルベート、ナトリウムベンゾエート、ナトリウムプロピオネート、および／またはソルビン酸を含むが、これらに限定されるものではない。例示的アルコール保存剤は、エタノール、ポリエチレングリコール、フェノール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシベンゾエート、および／またはフェニルエチルアルコールを含むが、これらに限定されるものではない。例示的酸性保存剤は、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、β−カロテン、クエン酸、酢酸、デヒドロ酢酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、および／またはフィチン酸を含むが、これらに限定されるものではない。他の保存剤は、トコフェロール、トコフェロールアセテート、デテロキシム（ｄｅｔｅｒｏｘｉｍｅ）メシレート、セトリミド、ブチル化、ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）ブチル化する、ヒドロキシトルエン化（ＢＨＴ）エチレンジアミン、ナトリウムラウリルスルフェート（ＳＬＳ）、ナトリウムラウリルエーテルスルフェート（ＳＬＥＳ）、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、グライダント（Ｇｌｙｄａｎｔ）＋（登録商標）、フェノニップ（Ｐｈｅｎｏｎｉｐ）（登録商標）、メチルパラベン、ジェルマール（Ｇｅｒｍａｌｌ）（登録商標）１１５、ゲルマベン（Ｇｅｒｍａｂｅｎ）（登録商標）ＩＩ、ネオロン（Ｎｅｏｌｏｎｅ）（商標）、ケーソン（Ｋａｔｈｏｎ）（商標）、および／またはオイクシール（Ｅｕｘｙｌ）（登録商標）を含むが、これらに限定されるものではない。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０６】
例示的油は、アーモンド油、キョウニン油、アボカド油、ババス油、ベルガモット油、クロフサスグリ油、ボラージ油、カデ油、カモミール油、カノーラ油、キャラウェー油、カルナウバ油、カスター油、シナモン油、ココア脂油、ヤシ油、タラ肝油、コーヒー油、トウモロコシ油、綿実油、エミュー油、ユーカリ油、マツヨイグサ油、魚油、アマニ油、ゲラニオール油、ヒョウタン油、ブドウ種子油、ハシバミ油、ヒソップ油、イソプロピルミリステート、ホホバ油、ククイナッツ油、ラバンジン油、ラベンダー油、レモン油、アオモジ油、マカダミアナッツ油、マンゴー種子油、メドウフォーム種子油、ミンク油、ナツメグ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラフィー油、パーム油、パーム核油、トウニン油、ラッカセイ油、ケシの実油、カボチャ種子油、ナタネ油、コメヌカ油、ローズマリー油、サフラワー油、ビャクダン油、サスクアナ（ｓａｓｑｕａｎａ）油、セイボリー油、シーバックソーン油、ゴマ油、シアバター、シリコーン、ダイズ油、ヒマワリ油、ティーツリー油、アザミ油、ツバキ油、ベチベル油、クルミ油、およびコムギ胚芽油を含むが、これらに限定されるものではない。例示的油は、ブチルステアレート、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコン、ジエチルセバケート、ジメチコン３６０、イソプロピルミリステート、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油、および／またはそれらの組合せを含むが、これらに限定されるものではない。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０９】
注射用組成物は、たとえば、細菌保持フィルターに通して濾過することにより、および／または使用前に滅菌水または他の滅菌注射用媒体に溶解可能または分散可能な殺菌固体
組成物の形態で滅菌剤を組み込むことにより、滅菌可能である。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１２】
経口投与に供される固体製剤は、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉末剤、および顆粒剤を含む。そのような固体製剤では、活性成分は、少なくとも１つの不活性な薬学的に許容可能な賦形剤、たとえば、ナトリウムシトレートまたはリン酸二カルシウムおよび／または充填剤または増量剤（たとえば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸）、結合剤（たとえば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、およびアカシア）、湿潤剤（たとえば、グリセロール）、崩壊剤（たとえば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム）、溶解遅延剤（たとえば、パラフィン）、吸収促進剤（たとえば、第四級アンモニウム化合物）、湿潤剤（たとえば、セチルアルコールおよびグリセロールモノステアレート）、吸収剤（たとえば、カオリンおよびベントナイトクレー）、および滑沢剤（たとえば、タルク、スカルシウムステアレート、マグネシウムステアレート、固体ポリエチレングリコール、ナトリウムラウリルスルフェート）、あるいはそれらの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、製剤は、緩衝剤を含みうる。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１５】
本明細書で説明される真皮内医薬組成物送達で使用するための好適な用具は、短針用具、たとえば、米国特許第４，８８６，４９９号明細書、同第５，１９０，５２１号明細書、同第５，３２８，４８３号明細書、同第５，５２７，２８８号明細書、同第４，２７０，５３７号明細書、同第５，０１５，２３５号明細書、同第５，１４１，４９６号明細書、および同第５，４１７，６６２号明細書に記載されるものを含む。真皮内組成物は、皮膚中への針の有効進入長さを制限する用具により、たとえば、ＰＣＴ国際公開第９９／３４８５０号に記載されるものおよびその機能的等価物により、投与可能である。液体ジェット注射器を介して、および／または角質層に突刺して真皮に達するジェットを生成する針を介して、真皮に液体組成物を送達するジェット式注射用具は、好適である。ジェット式注射用具は、たとえば、米国特許第５，４８０，３８１号明細書、同第５，５９９，３０２号明細書、同第５，３３４，１４４号明細書、同第５，９９３，４１２号明細書、同第５，６４９，９１２号明細書、同第５，５６９，１８９号明細書、同第５，７０４，９１１号明細書、同第５，３８３，８５１号明細書、同第５，８９３，３９７号明細書、同第５，４６６，２２０号明細書、同第５，３３９，１６３号明細書、同第５，３１２，３３５号明細書、同第５，５０３，６２７号明細書、同第５，０６４，４１３号明細書、同第５，５２０，６３９号明細書、同第４，５９６，５５６号明細書、同第４，７９０，８２４号明細書、同第４，９４１，８８０号明細書、同第４，９４０，４６０号明細書、ならびにＰＣＴ国際公開第９７／３７７０５号およびＰＣＴ国際公開第９７／１３５３７号に記載されている。皮膚の外層を介して真皮に粉末形態のワクチンを加速すべく圧縮ガスを使用するバリスティック粉末／粒子送達用具は、好適である。他の選択肢としてまたは追加として、従来の注射器を真皮内投与の古典的マントー法で使用されてもよい。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１８】
低沸点噴射剤は、一般的には、大気圧で１８．３℃（６５°Ｆ）未満の沸点を有する液体噴射剤を含む。一般的には、噴射剤は、組成物の約５０％〜約９９．９％（ｗ／ｗ）を構成可能であり、活性成分は、組成物の約０．１％〜約２０％（ｗ／ｗ）を構成可能である。噴射剤はさらに、液体非イオン性界面活性剤および／または固体陰イオン性界面活性剤および／または固体希釈剤などの追加の成分（これは、活性成分を含む粒子と同程度の粒子サイズを有しうる）を含みうる。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２１】
鼻投与に供すべく製剤化される組成物は、たとえば、約０．１％（ｗ／ｗ）程度の少量および１００％（ｗ／ｗ）程度の大量の活性成分を含みうる。また、本明細書で説明される１つ以上の追加の成分を含みうる。医薬組成物は、頬腔内投与に供すべく、製剤化、調製、包装、および／または販売を行うことが可能である。そのような組成物は、たとえば、従来の方法を用いて作製される錠剤および／またはロゼンジ剤の形態で製剤化可能であり、かつたとえば、０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含有し、残分は、経口的に可溶性および／または分解性の組成物と、任意選択により、本明細書で説明される１つ以上の追加の成分と、を含みうる。他の選択肢として、頬腔内投与に供すべく製剤化される組成物は、活性成分を含む粉末剤および／またはエアロゾル化溶液剤および／またはアトマイズ化溶液剤および／またはサスペンジョン剤を含みうる。そのような粉末状、エアロゾル化、および／またはエアロゾル化組成物は、分散時、約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲内の平均粒子サイズおよび／または平均ドロップレットサイズを有しうる。またさらに、本明細書で説明される１つ以上の任意の追加の成分を含みうる。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２４】
投与
本開示は、本明細書で説明される方法により産生されるタンパク質または組成物を必要な被験体に投与することを含む方法を提供する。タンパク質もしくは複合体またはその医薬組成物、イメージング組成物、診断組成物、または予防組成物は、疾患、障害、および／または病態（たとえば、作業記憶欠損に関連する疾患、障害、および／または病態）を予防、治療、診断、または画像化するのに有効な任意の量および任意の投与経路を用いて、被験体に投与可能である。厳密な必要量は、被験体の種類、年齢、全身状態、疾患の重症度、特定の組成物、その投与形態、その活性形態などに依存して、被験体によって変化するであろう。本開示に係る組成物は、典型的には、投与が容易になるようにかつ投与量が均一になるように投与ユニット形態で製剤化される。しかしながら、本開示に係る組成物の１日合計使用量が、健全な医学的判断の範囲内で主治医により決定されることは、理解されよう。任意の特定の患者に対する特定の予防上有効な用量レベル、治療上有効な用量レベル、または適切なイメージングの用量レベルは、治療される疾患および疾患の重症度、利用される特定の化合物の活性、利用される特定の組成物、患者の年齢、体重、全般的健康状態、性別、および食事、利用される特定の化合物の投与時期、投与経路、および
排泄速度、治療の継続時間、利用される特定の化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬剤、ならびに医療技術分野で周知の同様の因子を含むさまざまな因子に依存するであろう。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２８】
一般的には、最も適切な投与経路は、タンパク質または送達される少なくとも１つの作用剤と一体化されたタンパク質を含む複合体の性質（たとえば、胃腸管、血流などの環境中のその安定性）、患者の病態（たとえば、患者が特定の投与経路に耐えることができるか）などを含むさまざまな因子に依存するであろう。本開示は、薬剤送達の科学の進歩の可能性を考慮して、任意の適切な経路による、医薬組成物、予防組成物、診断組成物、またはイメージング組成物の送達を包含する。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３１】
さらに、組み合わせて利用される治療活性剤、予防活性剤、診断活性剤、またはイメージング活性剤は、単一組成物として一緒に投与可能であるか、または異なる組成物として独立して投与可能であることがわかるであろう。一般的には、組み合わせて利用される作用剤は、個別に利用されるレベルを超えないレベルで利用されることが予想される。いくつかの実施形態では、組み合わせて利用されるレベルは、個別に利用されるレベルよりも低いであろう。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３９】
保存：本明細書で用いられる場合、「保存」という用語は、ポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列のヌクレオチド残基またはアミノ酸残基が、それぞれ、比較される２つ以上の関連配列の同一位置で不変で存在するものであることを意味する。比較的保存されるヌクレオチドまたはアミノ酸は、配列の他の箇所に現れるヌクレオチドまたはアミノ酸よりも関連性のある配列間で保存されるものである。いくつかの実施形態では、２つ以上の配列は、それらが互いに１００％同一であれば、「完全に保存されている」と言われる。いくつかの実施形態では、２つ以上の配列は、それらが互いに少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一であれば、「高度に保存されている」と言われる。いくつかの実施形態では、２つ以上の配列は、それらが互いに約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％、約９８％、または約９９％同一であれば、「高度に保存されている」と言われる。いくつかの実施形態では、２つ以上の配列は、それらが互いに少なくとも３０％同一、少なくとも４０％同一、少なくとも５０％同一、少なくとも６０％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一であれば、「保存されている」と言われる。いくつかの実施形態では、２つ以上の配列は、それらが互いに約３０％同一、約４０％同一、約５０％同一、約６０％同一、約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％同一、約９８％同一、または約９９％同一であれば、「保存されている」と言わ
れる。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４２】
機能性：本明細書で用いられる場合、「機能性」生物学的分子とは、特徴付けられる性質および／または活性を呈する形態の生物学的分子のことである。
相同性：本明細書で用いられる場合、「相同性」という用語は、高分子間、たとえば、核酸分子（たとえば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間および／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を意味する。いくつかの実施形態では、高分子は、それらの配列が少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一であれば、互いに「相同である」と考えられる。いくつかの実施形態では、高分子は、それらの配列が少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の類似性であれば、互いに「相同である」と考えられる。「相同」という用語は、必然的に、少なくとも２つの配列（ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列）間の比較を意味する。本開示によれば、２つのヌクレオチド配列は、それらがコードするポリペプチドが、少なくとも約２０アミノ酸の少なくとも１つの伸長に対して、少なくとも約５０％同一、少なくとも約６０％同一、少なくとも約７０％同一、少なくとも約８０％同一、または少なくとも約９０％同一であれば、相同であると考えられる。いくつかの実施形態では、相同ヌクレオチド配列は、独自に特定された少なくとも４〜５アミノ酸の伸長をコードする能力により特徴付けられる。相同であると考えられるヌクレオチド配列に対して、互いに対するアミノ酸の同一性およびおよその間隔の両方を考えなければならない。６０ヌクレオチド長未満のヌクレオチド配列では、相同性は、独自に特定された少なくとも４〜５アミノ酸の伸長をコードする能力により決定される。本開示によれば、２つのタンパク質配列は、タンパク質が、少なくとも約２０アミノ酸の少なくとも１つの伸長に対して、少なくとも約５０％同一、少なくとも約６０％同一、少なくとも約７０％同一、少なくとも約８０％同一、または少なくとも約９０％同一であれば、相同であると考えられる。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４３】
同一性：本明細書で用いられる場合、「同一性」という用語は、高分子間、たとえば、核酸分子（たとえば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間および／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を意味する。たとえば、２つの核酸配列の同一性パーセントの計算は、最適な比較目的で２つの配列をアライメントすることにより、行うことが可能である（たとえば、最適アライメントになるように第１および第２の核酸配列の一方または両方にギャップを導入することが可能であり、比較目的では異なる配列を無視することが可能である）。特定の実施形態では、比較目的でアライメントされる配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、ま
たは１００％である。次いで、対応するヌクレオチド位置のヌクレオチドを比較する。第１の配列の位置が第２の配列の対応する位置と同一のヌクレオチドにより占有される場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列が最適アライメントになるように導入する必要のあるギャップの数および各ギャップの長さを考慮して、配列により共有される同一位置の数の関数である。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成可能である。たとえば、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、計算分子生物学（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、レスク，Ａ．Ｍ．（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．）編、オックスフォード大学出版局（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９８８年、バイオコンピューティング：情報科学およびゲノムプロジェクト（Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ）、スミス，Ｄ．Ｗ．（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．）編、アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９９３年、分子生物学における配列解析（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、フォンヘインジ，Ｇ．（ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．）、アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８７年、配列データのコンピュータ解析（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ）、第Ｉ部、グリフィン，Ａ．Ｍ．（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．）およびグリフィン，Ｈ．Ｇ．（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．）編、フマナプレス（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）、ニュージャージー、１９９４年、ならびに配列解析プライマー（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ）、グリブスコワ，Ｍ．（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．）およびデベルー，Ｊ．（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．）編、Ｍストックトンプレス（Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９９１年に記載される方法などを用いて、決定可能である（それぞれ参照により本明細書に組み込まれる）。たとえば、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０重み残基表、１２のギャップ長ペナルティー、および４のギャップペナルティーを用いて、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているマイヤー（Ｍｅｙｅｒｓ）およびミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）のアルゴリズム（生物科学におけるコンピュータ利用（ＣＡＢＩＯＳ）、１９８９年、第４巻、ｐ．１１〜１７）により、決定可能である。２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、他の選択肢として、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを用いて、ＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラムにより、決定可能である。配列間の同一性パーセントを決定するのに一般に利用される方法は、カリロ，Ｈ．（Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．）およびリップマン，Ｄ．（Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．）著、ＳＩＡＭ応用数学誌（ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．）、第４８巻、ｐ．１０７３、１９８８年（参照により本明細書に組み込まれる）に開示さ���るものを含むが、これに限定されるものではない。同一性を決定するための技術は、公的に入手可能なコンピュータプログラムの形態で体系化されている。２つの配列間の相同性を決定する例示的コンピュータソフトウェアは、ＧＣＧプログラムパッケージ（デベルー，Ｊ．（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．）ら著、核酸研究（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第１２巻、第１号、ｐ．３８７、１９８４年）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（アッチュル，Ｓ．Ｆ．（Ａｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．）ら著、分子生物学誌（Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．）、第２１５巻、ｐ．４０３、１９９０年）を含むが、これらに限定されるものではない。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４６】
ｉｎ  ｖｉｖｏ：本明細書で用いられる場合、「ｉｎ  ｖｉｖｏ」という用語は、生物（たとえば、動物、植物または微生物）内に起こるイベントを意味する。
単離：本明細書で用いられる場合、「単離」という用語は、（１）最初に産生された時（天然環境または実験現場にかかわらず）に会合していた成分の少なくとも一部から分離された、および／または（２）人の手を経て、産生、調製、および／または製造された、物質または要素を意味する。単離された物質および／または要素は、それが最初に会合していた他の成分の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、またはより多くから分離されうる。いくつかの実施形態では、単離された作用剤は、約８０％超、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または、約９９％超の純度である。本明細書で用いられる場合、物質は、それが他の成分を実質的に含まないのであれば、「純粋」である。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６３】
【表３】
2013543381.tif 000001
図１は、Ｇ−ＣＳＦのｍｏｄＲＮＡでトランスフェクトしたチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）に由来するヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）の酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を示している。Ｌ−グルタミン、ヒポキサンチン、およびチミジンを追加したＣＤ  ＣＨＯ培地中で、ＣＨＯ細胞を増殖させた。７ｍｌの培地の入ったコーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）製の７５ｃｍ２培養フラスコ中で、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）製のＲＮＡｉＭａｘと複合体化された２４μｇのｍｏｄＲＮＡで２×１０６個の細胞をトランスフェクトした。最初に、５倍体積希釈でＣＤ  ＣＨＯ培地を用いて、ＲＮＡを室温で１０分間インキュベートすることにより、ＲＮＡ：ＲＮＡｉＭＡＸ複合体を生成した。第２のバイアル中で、１０倍体積希釈でＣＤ  ＣＨＯ培地を用いて、ＲＮＡｉＭＡＸ試薬を室温で１０分間インキュベートした。次いで、ＲＮＡバイアルをＲＮＡｉＭＡＸバイアルと混合して、室温で２０〜３０インキュベートし、その後、細胞に滴下した。トランスフェクションの１２および２４時間後、培養培地中の分泌ｈｕＧ−ＣＳＦの濃度を測定した。細胞上清を−２０℃で貯蔵した。製造業者推奨説明書に従って、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）製のＥＬＩＳＡキットを用いて、トランスフェクトヒト胚性腎細胞からのヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）の分泌を定量した。これらのデータから、ｈｕＧ−ＣＳＦ  ｍｏｄＲＮＡ（配列番号３）は、ＣＨＯ細胞内で翻訳可能であり、かつｈｕＧ−ＣＳＦは、細胞から分泌されて、細胞外環境中に放出されることが示される。さらに、これらのデータから、分泌タンパク質を産生するためのｍｏｄＲＮＡ  ｈｕＧ−ＣＳＦによる細胞のトランスフェクションは、バイオリアクターまたは大細胞培養条件にスケールアップ可能であることが実証される。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６５】
【表４】
2013543381.tif 000002
2013543381.tif 000003
リツキシマブの重鎖のｍＲＮＡの核酸配列を配列番号５に示す。
【誤訳訂正３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７２】
【表１１】
2013543381.tif 000004
野生型ＣＥＲＴタンパク質のヌクレオチド配列の核酸配列を配列番号１２に示す。
【誤訳訂正３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７８】
ｍｏｄＲＮＡ産生トラスツズマブおよびリツキシマブの細胞免疫染色
図５は、トラスツズマブまたはリツキシマブの重鎖および軽鎖を各５００ｎｇ用いて共トランスフェクトしたＣＨＯ−Ｋ１細胞を示している。ギブコ（Ｇｉｂｃｏ）製のＦ−１２Ｋ培地および１０％ＦＢＳで細胞を増殖させた。ＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒドを用いて細胞を固定化し、そしてＰＢＳ中の０．１％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００を用いて室温で５〜１０分間。次いで、細胞を室温ＰＢＳで３回洗浄した。製造業者推奨希釈に従って、ディライト（ＤｙＬｉｇｈｔ）（登録商標）５９４（ａｂ９６９０４、アブカム（ａｂｃａｍ）（ケンブリッジ，ＭＡ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）））にコンジュゲートされたヒトＩｇＧのウサギポリクローナル抗体を用いて、トラスツズマブおよびリツキシマブの染色を行った。インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）製のＤＡＰＩ染料を用いて、核ＤＮＡ染色を行った。ｍｏｄＲＮＡトランスフェクション時、トラスツズマブおよびリツキシマブに対するタンパク質が翻訳され、細胞質に局在化される。トランスフェクションの１３時間後、写真を撮影した。
【誤訳訂正３９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８１】
ＳＫＯＶ−３腫瘍モデル
ＳＫＯＶ−３異種移植マウスで、２８日間にわたり、１）ｍｏｄＲＮＡトラスツズマブ、２）トラスツズマブ、および３）ｍｏｄＲＮＡトラスツズマブ＋ｍｏｄＲＮＡ  ＧＣＳＦの逐次注射を行うことにより、ｍｏｄＲＮＡ生成トラスツズマブの抗癌作用を決定することが可能である。腫瘍増殖サイズの低減を経時的にモニターすることが可能である。
【誤訳訂正４０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８２】
（実施例４）樹立ＣＨＯ細胞系におけるセラミド輸送タンパク質の過剰発現による治療用抗体タンパク質産生の増大
ａ）バッチ培養
脂質カチオン性送達剤単独（対照）、または野生型セラミド輸送タンパク質（ＣＥＲＴ）をコードする合成ｍＲＮＡ転写物、または非リン酸化コンピテントＳｅｒ１３２Ａ  ＣＥＲＴ突然変異体で、ヒト化治療ＩｇＧ抗体を分泌する抗体産生ＣＨＯ細胞系（ＣＨＯ  ＤＧ４４）を一回トランスフェクトする。ＣＥＲＴは、哺乳動物細胞内の必須サイトゾルタンパク質であり、スフィンゴ脂質セラミドを小胞体からゴルジ複合体に移動させる。そこで、スフィンゴ脂質セラミドはスフィンゴミエリンに変換される（ハナダ（Ｈａｎａｄａ）ら、２００３年）。ＣＥＲＴの過剰発現は、形質膜への分泌タンパク質の輸送を有意に増強し、真核細胞から分泌経路を介して輸送されるタンパク質の産生を改善し、それにより培養培地中へのタンパク質の分泌を増強する。合成ｍＲＮＡ転写物は、２〜５：１担体：ＲＮＡ比で脂質カチオン性送達剤と予備混合される。初期接種密度は、約２×１０５個の生存可能細胞／ｍＬである。合成ｍＲＮＡ転写物は、指数関数的培養増殖期の初期培養接種後に送達されて、１細胞あたり１０×１０２〜１０×１０３個の最終合成ｍＲＮＡコピー数に達する。すべての相の細胞接種物の生成におよびバイオリアクター内での培養物の増殖に使用される基底細胞培養培地は、グルタミン、重炭酸ナトリウム、インスリン、およびメトトレキセートを含有する改変ＣＤ−ＣＨＯ培地である。培地のｐＨは、すべての成分を添加した後、１Ｎ  ＨＣｌまたは１Ｎ  ＮａＯＨを用いて、７．０に調整される。培養運転期間は、７、１４、２１、または２８日目＋で終わる。製造レベルの５０Ｌスケール反応器（２つの海洋インペラーを備えたステンレス鋼反応器）を使用することが可能であり、＞１０，０００Ｌステンレス鋼反応器（２００２年１２月２３日出願の同一譲受人の米国特許出願第６０／４３６，０５０号明細書、および米国特許出願第１０／７４０，６４５号明細書に記載されている）に拡張可能である。データ取得システム（インテルーション・フィックス３２（Ｉｎｔｅｌｌｕｔｉｏｎ  Ｆｉｘ  ３２））は、全運転期間を通じて、温度、ｐＨ、および溶存酸素（ＤＯ）を記録する。ガス流量は、ロータメーターにより制御される。空気は、浸漬フリット（５μｍ細孔サイズ）を介して反応器内にスパージングされ、さらにＣＯ２除去のために反応器ヘッドスペースに通してスパージングされる。ＤＯ制御のために、同一のフリットを介して分子状酸素がスパージングされる。ＣＯ２は、ｐＨ調整に使用される場合、同一のフリットを介してスパージングされる。細胞のサンプルは、反応器から毎日取り出される。細胞計数に使用されたサンプルは、トリパンブルー（ジクマ（Ｓｉｇｍａ）（セントルイス，Ｍｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）））で染色される。細胞数および細胞生存能の決定は、顕微鏡を用いた血球計算法により行われる。代謝物の分析では、細胞分離のために、追加サンプルを２０００ｒｐｍ（４℃）で２０分間遠心分離する。次のパラメーター、すなわち、力価、シアル酸、グルコース、乳酸、グルタミン、グルタミン酸、ｐＨ、ｐＯ２、ｐＣＯ２、アンモニア、および任意選択により乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）に関して、上清を分析する。追加のバックアップサンプル���−２０℃で凍結する。分泌ヒト化ＩｇＧ抗体力価を測定するために
、すべての安定な細胞プールのシードストック培養物から上清を取得し、ＥＬＩＳＡによりＩｇＧ力価を決定し、細胞の平均数で割り算して特異的生産性を計算する。最高値は、Ｓｅｒ１３２Ａ  ＣＥＲＴ突然変異体（配列番号１４）を有する細胞プールであり、続いて、野生型ＣＥＲＴ（配列番号１２）である。両方とも、ＩｇＧ発現は、担体単独または非トランスフェクト細胞と比較して著しく増強される。
【誤訳訂正４１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８３】
ｂ）連続培養またはバッチフェド培養
脂質カチオン性送達剤単独（対照）、または野生型セラミド輸送タンパク質をコードする合成ｍＲＮＡ転写物、または非リン酸化コンピテントＳｅｒ１３２Ａ  ＣＥＲＴ突然変異体を用いて、ヒト化ＩｇＧ抗体を分泌する抗体産生ＣＨＯ細胞系（ＣＨＯ  ＤＧ４４）をトランスフェクトする。合成ｍＲＮＡ転写物は、２〜５：１担体：ＲＮＡ比で脂質カチオン性送達剤と予備混合される。初期接種密度は、約２×１０５個の生存可能細胞／ｍＬであった。合成ｍＲＮＡ転写物は、指数関数的培養増殖期の初期培養接種後に送達されて、１細胞あたり１０×１０２〜１０×１０３個の最終合成ｍＲＮＡコピー数に達する。すべての相の細胞接種物の生成におよびバイオリアクター内での培養物の増殖に使用される基底細胞培養培地は、グルタミン、重炭酸ナトリウム、インスリン、およびメトトレキセートを含有する改変ＣＤ−ＣＨＯ培地であった。培地のｐＨは、すべての成分を添加した後、１Ｎ  ＨＣｌまたは１Ｎ  ＮａＯＨを用いて、７．０に調整される。最大ＣＥＲＴタンパク質産生および分泌ヒト化ＩｇＧ抗体曲線を得るために、５Ｌスケール（１つの海洋インペラーを備えたガラス反応器）のバイオリアクターを使用する。連続培養またはフェドバッチ培養では、運転時に新しい培地で１日１回以上（または連続的に）培養培地を補うことにより、培養運転期間が延長される。連続供給レジメンおよびフェドバッチ供給レジメンでは、培養物は、培養物中で適切量の合成ｍＲＮＡ：担体を達成かつ維持するために、時限方式、規則方式、および／またはプログラム方式で、連続供給注入または培養物への他の自動添加として、供給培地を受け取る。典型的な方法は、培養運転の開始日から細胞の収集日まで、毎日の培養運転で、合成ｍＲＮＡ：担体を含有する供給媒体で１日１回のポーラス供給を行う供給レジメンである。１日供給量は、バッチシート上に記録される。製造レベルの５０Ｌスケール反応器（２つの海洋インペラーを備えたステンレス鋼反応器）を使用することが可能であり、＞１０，０００Ｌステンレス鋼反応器に拡張可能である。データ取得システム（インテルーション・フィックス３２（Ｉｎｔｅｌｌｕｔｉｏｎ  Ｆｉｘ  ３２））は、全運転期間を通じて、温度、ｐＨ、および溶存酸素（ＤＯ）を記録する。ガス流量は、ロータメーターにより制御される。空気は、浸漬フリット（５μｍ細孔サイズ）を介して反応器内にスパージングされ、さらにＣＯ２除去のために反応器ヘッドスペースに通してスパージングされる。ＤＯ制御のために、同一のフリットを介して分子状酸素がスパージングされた。ＣＯ２は、ｐＨ調整に使用される場合、同一のフリットを介してスパージングされる。細胞のサンプルは、反応器から毎日取り出される。細胞計数に使用されたサンプルは、典型的には、トリパンブルー（ジクマ（Ｓｉｇｍａ）（セントルイス，Ｍｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）））で染色される。細胞数および細胞生存能の決定は、顕微鏡を用いた血球計算法により行われる。代謝物の分析では、細胞分離のために、追加サンプルを２０００ｒｐｍ（４℃）で２０分間遠心分離する。次のパラメーター、すなわち、力価、シアル酸、グルコース、乳酸、グルタミン、グルタミン酸、ｐＨ、ｐＯ２、ｐ���Ｏ２、アンモニア、および任意選択により乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）に関して、上清を分析する。追加のバックアップサンプルを−２０℃で凍結する。分泌ヒト化ＩｇＧ抗体力価を測定するために、すべての安定な細胞プールのシードストック培養物から上清を取得し、ＥＬＩＳＡによりＩｇＧ力価を決定し、細胞の平均数で割
り算して特異的生産性を計算する。最高値は、Ｓｅｒ１３２Ａ  ＣＥＲＴ突然変異体（配列番号１４）を有する細胞プールであり、続いて、野生型ＣＥＲＴ（配列番号１０または１２）である。両方とも、ＩｇＧ発現は、担体単独または非トランスフェクト細胞と比較して著しく増強される。
【誤訳訂正４２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８６】
特許請求の範囲では、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」などの冠詞は、相反する指示がないがきりまたは特に文脈から自明でないかぎり、１つ以上を意味しうる。グループの１つ以上のメンバー間に「ｏｒ（または）」を含む特許請求の範囲または説明は、相反する指示がないがきりまたは特に文脈から自明でないかぎりに、グループメンバーの１つ、１つ超、またはすべてが、所与のプロダクトまたはプロセスに存在するか、そこで利用されるか、またはそれ以外の形でそれに適合する場合に満たされると考えられる。本開示は、厳密にグループの１つのメンバーが、所与のプロダクトまたはプロセスに存在するか、そこで利用されるか、またはそれ以外の形でそれに適合する、実施形態を含む。本開示は、グループメンバーの１つ超またはすべてが、所与のプロダクトまたはプロセスに存在するか、そこで利用されるか、またはそれ以外の形でそれに適合する、実施形態を含む。さらに、本開示は、列挙された請求項の１つ以上から他の請求項に１つ以上の限定、要素、文節、記述語などが導入された、変形形態、組合せ形態、および入替え形態をすべて包含するとみなされるものとする。たとえば、他の請求項に従属する請求項はいずれも、同一の基本請求項に従属するいずれかの他の請求項に見いだされる１つ以上の限定を含むように変更を加えることが可能である。さらに、請求項に組成物が記載された場合、特に指定がないかぎりまたは矛盾や不一致を生じることが当業者に自明でないかぎり、本明細書に開示された目的のいずれかのための組成物の使用方法が含まれ、かつ本明細書に開示された製造方法または当技術分野で公知の他の方法のいずれかに基づく組成物の製造方法が含まれるとみなされるものとする。
【誤訳訂正４３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８９】
それに加えて、先行技術に包含される本開示の特定の実施形態はいずれも、請求項の任意の１項以上から明示的に除外されうるとみなされるものとする。そのような実施形態は、当業者に公知であるとみなされるので、たとえ本明細書で明示的に除外が明記されていないとしても、それらは除外しうる。本開示に係る組成物の特定の実施形態（たとえば、任意のタンパク質、任意の核酸、任意の製造方法、任意の使用方法など）はいずれも、先行技術の存在の有無にかかわらず、任意の理由で、いずれか１項以上の請求項から除外しうる。