【手続補正書】
【提出日】平成26年2月10日(2014.2.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物における膵機能障害に関連する疾病又は疾患の治療又は予防のための医薬製剤であって、該医薬製剤は、１以上のFoxoタンパク質又はその生物活性のある断片若しくは変異体の発現又は生物活性を減少させる有効量の薬剤を含み、該薬剤は、該Foxoタンパク質の１以上をコードする遺伝子又はmRNAのいずれかに十分に相補的である単離されたshRNA、siRNA、アンチセンスRNA、アンチセンスDNA、キメラアンチセンスDNA/RNA、マイクロRNA、及びリボザイム、並びに１以上のFoxoタンパク質に特異的に結合し、それにより該１以上のタンパク質の生物活性を減少させる抗体又はその生物活性のある断片若しくは変異体からなる群から選択される、医薬製剤。
【請求項２】
疾病又は疾患が、１型糖尿病、２型糖尿病、メタボリックシンドローム、グルコース不耐性、高血糖、インスリン感受性の減少、空腹時血糖の増加、食後血糖の増加及び肥満からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項３】
有効量が、グルコース耐性の増加、血清中インスリンの増加、インスリン感受性の増加、空腹時血糖の減少、食後血糖の減少、体重増加の減少、体脂肪量の減少、体重減少の増加及びインスリンを産生し分泌する消化管における腸内分泌細胞の生成からなる群から選択される効果を生じさせる量である、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項４】
薬剤が消化管に投与されるものである、請求項１に記載の医薬製剤。
【請求項５】
哺乳動物においてインスリンを産生し分泌する腸内分泌細胞を産生させるための医薬製剤であって、該医薬製剤は、１以上のFoxoタンパク質又はその生物活性のある断片若しくは変異体の発現又は生物活性を減少させる有効量の薬剤を含み、該薬剤は、該Foxoタンパク質の１以上をコードする遺伝子又はmRNAのいずれかに十分に相補的である単離されたshRNA、siRNA、アンチセンスRNA、アンチセンスDNA、キメラアンチセンスDNA/RNA、マイクロRNA、及びリボザイム、並びに１以上のFoxoタンパク質に特異的に結合し、それにより該１以上のタンパク質の生物活性を減少させる抗体又はその生物活性のある断片若しくは変異体からなる群から選択される、医薬製剤。
【請求項６】
インスリン産生腸内分泌細胞が、該薬剤の投与に応答して、グルカゴン、膵ポリペプチド、グルコキナーゼ、及びglut2からなる群から選択される１以上の膵ホルモンを更に産生する、請求項５に記載の医薬製剤。
【請求項７】
インスリン産生腸内分泌細胞が、プロホルモン転換酵素Pc2、Pdx1、MafA、Nkx6.1、Nkx2.2、及びPax4からなる群から選択される１以上のタンパク質も産生する、請求項５に記載の医薬製剤。
【請求項８】
哺乳動物においてグルコース耐性を増加させるか又はインスリン感受性を減少させるための医薬製剤であって、該医薬製剤は、１以上のFoxoタンパク質又はその生物活性のある断片若しくは変異体の発現又は生物活性を減少させる治療有効量の薬剤を含み、該薬剤は、該Foxoタンパク質の１以上をコードする遺伝子又はmRNAのいずれかに十分に相補的である単離されたshRNA、siRNA、アンチセンスRNA、アンチセンスDNA、キメラアンチセンスDNA/RNA、マイクロRNA、及びリボザイム、並びに１以上のFoxoタンパク質に特異的に結合し、それにより該１以上のタンパク質の生物活性を減少させる抗体又はその生物活性のある断片若しくは変異体からなる群から選択される、医薬製剤。
【請求項９】
インスリン産生腸内分泌細胞の作製方法であって、
ａ．非インスリン産生腸内分泌前駆細胞の集団を哺乳動物から得ること、
ｂ．該集団を、集団の大部分がインスリンを産生することを可能にする量及び条件下で、１以上のFoxoタンパク質、又はその生物活性のある断片若しくは変異体の発現又は生物活性を減少させる薬剤と接触させることであって、ここで該薬剤は、該Foxoタンパク質の１以上をコードする遺伝子又はmRNAのいずれかに十分に相補的である単離されたshRNA、siRNA、アンチセンスRNA、アンチセンスDNA、キメラアンチセンスDNA/RNA、マイクロRNA、及びリボザイム、並びに１以上のFoxoタンパク質に特異的に結合し、それにより該１以上のタンパク質の生物活性を減少させる抗体又はその生物活性のある断片若しくは変異体からなる群から選択される、及び
ｃ．インスリン産生腸内分泌細胞を回収すること、
を含む、方法。
【請求項１０】
集団が、腸又は結腸の区域に含まれるものである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
区域が、十二指腸又は回腸から取得され、陰窩を含むものである、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
請求項９に記載の方法によって製造されたインスリン産生腸内分泌細胞。
【請求項１３】
該細胞が、グルカゴン、膵ポリペプチド、グルコキナーゼ、及びglut2からなる群から選択される１以上の膵ホルモンを更に産生する、請求項１２に記載の細胞。
【請求項１４】
該細胞が、プロホルモン転換酵素Pc2、Pdx1、MafA、Nkx6.1、Nkx2.2、及びPax4からなる群から選択される１以上のタンパク質を更に産生する、請求項１２に記載の細胞。
【請求項１５】
請求項１２に記載のインスリン産生腸内分泌細胞を含む医薬製剤。
【請求項１６】
哺乳動物における膵機能障害に関連する疾病又は疾患を治療又は予防するためのものである、請求項１５に記載の医薬製剤。
【請求項１７】
哺乳動物における膵機能障害に関連する疾病又は疾患を予防するための医薬であって、該医薬は、１以上のFoxoタンパク質又はその生物活性のある断片若しくは変異体の発現又は生物活性を減少させる薬剤を治療有効量で含み、該薬剤は、該Foxoタンパク質の１以上をコードする遺伝子又はmRNAのいずれかに十分に相補的である単離されたshRNA、siRNA、アンチセンスRNA、アンチセンスDNA、キメラアンチセンスDNA/RNA、マイクロRNA、及びリボザイム、並びに１以上のFoxoタンパク質に特異的に結合し、それにより該１以上のタンパク質の生物活性を減少させる抗体又はその生物活性のある断片若しくは変異体からなる群から選択される、医薬。
【請求項１８】
哺乳動物の腸の非インスリン産生腸内分泌前駆細胞がインスリンを発現することを誘導する薬剤の同定のための、ハイスループットスクリーニング細胞ベースアッセイであって、
ａ．腸の非インスリン産生腸内分泌前駆細胞を含む細胞の集団を単離すること、及びインスリンの産生及び分泌に適した条件下でそれらをインキュベートすること、
ｂ．非インスリン産生腸内分泌前駆細胞の対照及び被験集団を提供すること、
ｃ．被験集団を被験薬剤と接触させること、
ｄ．対照及び被験集団におけるインスリン発現のレベルを決定すること、並びに
ｅ．被験集団におけるインスリンのレベルが対照におけるレベルよりも有意に高い場合に該被験薬剤を選択すること、
を含むアッセイ。
【請求項１９】
腸の腸内分泌細胞においてインスリンをコードする遺伝子が、視覚化され得るタンパク質又はペプチドに作動可能に連結されている、請求項１８に記載のアッセイ。
【請求項２０】
タンパク質又はペプチドが蛍光タンパク質である、請求項１９に記載のアッセイ。
【請求項２１】
タンパク質又はペプチドが、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、ウレアーゼ、及びベータガラクトシダーゼからなる群から選択されるメンバーである、請求項１９に記載のアッセイ。
【請求項２２】
薬剤が、膵機能障害に関連する不耐性の疾病又は疾患を治療するために治療効果がある、請求項１９に記載のアッセイ。
【請求項２３】
腸の腸内分泌細胞が、インスリンを過剰発現するように操作されている、請求項１９に記載のアッセイ。
【請求項２４】
薬剤のライブラリーがスクリーニングされる、請求項１９に記載のアッセイ。
【請求項２５】
薬剤が、Foxo1、Foxo2、Foxo3若しくはFoxo4又はそれらの組み合わせの発現を減少させるものである、請求項１９に記載のアッセイ。
【請求項２６】
非インスリン産生腸内分泌細胞をインスリン産生細胞へと分化させる薬剤の同定方法であって、以下を含む方法：
（ａ）共に膵機能障害を有する非ヒト被験動物及び非ヒト対照動物を提供すること
（ｂ）薬剤を被験動物に投与すること、
（ｃ）両方の動物におけるインスリン産生細胞の指標のレベルを決定することであって、該指標は、血清中インスリン、インスリン感受性、及びグルコース耐性からなる群から選択される、並びに
（ｄ）該指標が、対照動物と比較して被験動物において有意に増加している場合、該薬剤を、非インスリン産生腸内分泌細胞をインスリン産生細胞へと分化させる薬剤として同定すること。
【請求項２７】
薬剤が、膵機能障害に関連する疾病又は疾患を治療するために有効なものである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
膵機能障害に関連する疾病又は状態の治療又は予防に有効である薬剤の同定方法であって、以下を含む方法：
（ａ）該疾病又は状態を有する非ヒト動物を提供すること；
（ｂ）該動物から取得された処理前の生体試料におけるFoxo 1、Foxo2、Foxo3又はFoxo4の発現量を決定すること；
（ｃ）該動物に薬剤を投与すること；及び
（ｄ）該動物から取得された処理後の生体試料におけるFoxo 1、Foxo2、Foxo3又はFoxo4の発現量を決定し、処理後の生体試料における量が処理前の試料における量よりも有意に低い場合、該薬剤を、疾病又は状態の治療又は予防において有効である薬剤として同定すること。
【請求項２９】
生体試料が、血清又は腸内分泌細胞の試料である、請求項２８に記載の方法。