【手続補正書】
【提出日】平成26年10月24日(2014.10.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
特異的内在性ｍｉＲＮＡを発現している細胞中でのみ目的の外因性タンパク質の発現を指示するための１つまたは複数のポリヌクレオチドを含む組成物であって、前記１つまたは複数のポリヌクレオチドが外因性ＲＮＡ分子をコードし、その外因性ＲＮＡ分子が：
ａ）目的の外因性タンパク質をコードする配列；
ｂ）目的の外因性タンパク質の発現を阻害できる阻害配列；および
ｃ）前記特異的内在性ｍｉＲＮＡ用の結合部位、
を含み、それにより、前記特異的内在性ｍｉＲＮＡの存在下でのみ、外因性ＲＮＡ分子が切断部位で切断され、その結果、目的の外因性タンパク質をコードする配列から阻害配列が放出され、目的の外因性タンパク質が発現可能となる組成物。
【請求項２】
前記切断部位が前記結合部位内に位置し、その切断部位が阻害配列および目的の外因性タンパク質をコードする配列の間に位置する；または、
前記特異的内在性ｍｉＲＮＡが切断部位での前記外因性ＲＮＡ分子の切断を指示するために、特異的内在性ｍｉＲＮＡ用前記結合部位が前記特異的内在性ｍｉＲＮＡ内の配列に対し充分な相補性を有する；または、
前記特異的内在性ｍｉＲＮＡが、細胞マイクロＲＮＡ、ウイルスマイクロＲＮＡ、または両方である；または、
前記内在性マイクロＲＮＡが、腫瘍性細胞中でのみ発現し、好ましくは、前記ウイルスマイクロＲＮＡが、二本鎖ＤＮＡウイルス、単鎖ＤＮＡウイルス、二本鎖ＲＮＡウイルス、二本鎖ＲＮＡウイルス、単鎖（プラス鎖）ウイルス、単鎖（マイナス鎖）ウイルスおよびレトロウイルス、からなる群より選択されるウイルスにより発現する；または、
前記阻害配列がポリペプチドに結合でき、前記ポリペプチドが、前記外因性ＲＮＡ分子からの前記目的の外因性タンパク質の翻訳の効率を低減させ、好ましくは、前記ポリペプチドが翻訳リプレッサータンパク質であり、前記翻訳リプレッサータンパク質が内在性翻訳リプレッサータンパク質、または組成物の１つまたは複数のポリヌクレオチドによりコードされる翻訳リプレッサータンパク質である；または、
前記阻害配列が細胞内局在のためのＲＮＡ局在化シグナル、内在性ｍｉＲＮＡ結合部位、または両方を含む；または、
前記組成物が、直接または間接的に内在性エキソヌクレアーゼの発現を阻害できる機能性ＲＮＡをコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む；または、
充分な相補性が少なくとも３０％の相補性である；または、
充分な相補性が少なくとも９０％の相補性である；または、
特異的内在性ｍｉＲＮＡ用の前記結合部位が、同じまたは異なる内在性ｍｉＲＮＡ対し複数の結合部位であり、前記切断部位が複数の切断部位である；または、
前記ポリヌクレオチドが１つまたは複数のＤＮＡ分子、１つまたは複数のＲＮＡ分子またはこれらの組み合わせを含む；または、
前記特異的内在性ｍｉＲＮＡが下記からなる群より選択される：ｈｓｖ１−ｍｉＲ−Ｈ１、ｈｓｖ１−ｍｉＲ−Ｈ２、ｈｓｖ１−ｍｉＲ−Ｈ３、ｈｓｖ１−ｍｉＲ−Ｈ４、ｈｓｖ１−ｍｉＲ−Ｈ５、ｈｓｖ１−ｍｉＲ−Ｈ６、ｈｓｖ２−ｍｉＲ−Ｉ、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＬ２２Ａ、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＬ３６、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＬ７０、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＬｌ１２、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＬ１４８Ｄ、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＳ４、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＳ５−Ｉ、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＳ５−２、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＳ２５−１、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＳ２５−２、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＳ３３、ｋｓｈｖ−ｍｉＲ−Ｋ１２−１、ｋｓｈｖ−ｍｉＲ−Ｋ１２−２、ｋｓｈｖ−ｍｉＲ−Ｋ１２−３、ｋｓｈｖ−ｍｉＲ−Ｋ１２−４、ｋｓｈｖ−ｍｉＲ−Ｋ１２−５、ｋｓｈｖ−ｍｉＲ−Ｋ１２−６、ｋｓｈｖ−ｍｉＲ−Ｋ１２−７、ｋｓｈｖ−ｍｉＲ−Ｋ１２−８、ｋｓｈｖ−ｍｉＲ−Ｋ１２−９、ｋｓｈｖ−ｍｉＲ−Ｋ１２−１０ａ、ｋｓｈｖ−ｍｉＲ−Ｋ１２−１０ｂ、ｋｓｈｖ−ｍｉＲ−Ｋ１２−１１、ｋｓｈｖ−ｍｉＲ−Ｋ１２−１２、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ１、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ２、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ３、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ４、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ５、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ６、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ７、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ８、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ９、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ１０、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ１１、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ１２、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ１３、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ１４、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ１５、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ１６、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ１７、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ１８、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ１９、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ２０、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＨＲＦ１−１、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＨＲＦ１−２、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＨＲＦ１−３、ｂｋｖ−ｍｉＲ−Ｂ１、ｊｃｖ−ｍｉＲ−Ｊ１、ｈｉｖ１−ｍｉＲ−Ｈ１、ｈｉｖ１−ｍｉＲ−Ｎ３６７、ｈｉｖ１−ｍｉＲ−ＴＡＲ、ｓｖ４０−ｍｉＲ−Ｓ１、ＭＣＰｙＶ−ｍｉＲ−Ｍ１、ｈｓｖ１−ｍｉＲ−ＬＡＴ、ｈｓｖ１−ｍｉＲ−ＬＡＴ−ＩＣＰ３４．５、ｈｓｖ２−ｍｉＲ−ＩＩ、ｈｓｖ２−ｍｉＲ−ＩＩＩ、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＬ２３、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＬ３６−１、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＬ５４−１、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＬ７０−１、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＬ２２Ａ−１、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＬ１１２−１、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＬ１４８Ｄ−１、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＳ４−１、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＳ２４、ｈｃｍｖ−ｍｉＲ−ＵＳ３３−１、ｈｃｍｖ−ＲＮＡβ２．７、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ１−１、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ１−２、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＡＲＴ１−３、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＨＦＲ１、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＨＦＲ２、ｅｂｖ−ｍｉＲ−ＢＨＦＲ３、ｈｉｖ１−ｍｉＲ−ＴＡＲ−５ｐ、ｈｉｖ１−ｍｉＲ−ＴＡＲ−ｐ、ｈｉｖ１−ＨＡＡｍｉＲＮＡ、ｈｉｖ１−ＶｍｉＲＮＡｌ、ｈｉｖ１−ＶｍｉＲＮＡ２、ｈｉｖ１−ＶｍｉＲＮＡ３、ｈｉｖ１−ＶｍｉＲＮＡ４、ｍｉｒ−６７５、ｈｉｖ１−ＶｍｉＲＮＡ５、ｈｉｖ２−ｍｉＲ−ＴＡＲ２−５ｐ、ｈｉｖ２−ｍｉＲ���ＴＡＲ２−３ｐ、ｍｄｖ１−ｍｉＲ−Ｍ１、ｍｄｖ１−ｍｉＲ−Ｍ２、ｍｄｖ１−ｍｉＲ−Ｍ３、ｍｄｖ１−ｍｉＲ−Ｍ４、ｍｄｖ１−ｍｉＲ−Ｍ５、ｍｄｖ１−ｍｉＲ−Ｍ６、ｍｄｖ１−ｍｉＲ−Ｍ７、ｍｄｖ１−ｍｉＲ−Ｍ８、ｍｄｖ１−ｍｉＲ−Ｍ９、ｍｄｖ１−ｍｉＲ−Ｍ１０、ｍｄｖ１−ｍｉＲ−Ｍ１１、ｍｄｖ１−ｍｉＲ−Ｍ１２、ｍｄｖ１−ｍｉＲ−Ｍ１３、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ１４、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ１５、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ１６、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ１７、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ１８、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ１９、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ２０、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ２１、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ２２、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ２３、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ２４、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ２５、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ２６、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ２７、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ２８、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ２９、ｍｄｖ２−ｍｉＲ−Ｍ３０、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−Ｍ２３−１、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−Ｍ２３−２、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−Ｍ４４−１、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−Ｍ５５−ｌ、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−Ｍ８７−１、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−Ｍ９５−１、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−ｍ０１−１、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−ｍ０１−２、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−ｍ０１−３、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−ｍ０１−４、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−ｍ２１−１、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−ｍ２２−１、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−ｍ５９−１、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−ｍ５９−２、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−ｍ８８−１、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−Ｍ１０７−１、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−Ｍ１０８−１、ｍｃｍｖ−ｍｉＲ−Ｍ１０８−２、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−１、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−２、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−３、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−４、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−５、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−６、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−７、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−８、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−９、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−１０、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−１１、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−１２、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−１３、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−１４、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−１５、ｒｌｃｖ−ｍｉＲ−ｒＬ１−１６、ｒｒｖ−ｍｉＲ−ｒＲ１−１、ｒｒｖ−ｍｉＲ−ｒＲ１−２、ｒｒｖ−ｍｉＲ−ｒＲ１−３、ｒｒｖ−ｍｉＲ−ｒＲ１−４、ｒｒｖ−ｍｉＲ−ｒＲ１−５、ｒｒｖ−ｍｉＲ−ｒＲ１−６、ｒｒｖ−ｍｉＲ−ｒＲ１−７、ｍｇｈｖ−ｍｉＲ−Ｍ１−１、ｍｇｈｖ−ｍｉＲ−Ｍ１−２、ｍｇｈｖ−ｍｉＲ−Ｍ１−３、ｍｇｈｖ−ｍｉＲ−Ｍ１−４、ｍｇｈｖ−ｍｉＲ−Ｍ１−５、ｍｇｈｖ−ｍｉＲ−Ｍ１−６、ｍｇｈｖ−ｍｉＲ−Ｍ１−７、ｍｇｈｖ−ｍｉＲ−Ｍ１−８、ｍｇｈｖ−ｍｉＲ−Ｍ１−９およびｓｖ４０−ｍｉＲ−Ｓ１；または、
前記外因性ＲＮＡ分子が、開始コドンおよび前記目的のタンパク質をコードする配列の出発コドンの間に位置する停止コドンをさらに含み、前記停止コドンおよび前記開始コドンが同じ読み枠にあり、前記停止コドンが、５’−ＵＡＡ−３’、５’−ＵＡＧ−３’および５’−ＵＧＡ−３’、からなる群より選択される；または、
前記阻害配列が目的の外因性タンパク質をコードする配列の上流に配置され、阻害配列が−３０ｋｃａｌ／ｍｏｌ未満の折り畳み自由エネルギーを有する二次構造を形成でき、それにより、前記二次構造が、スキャニングリボソームが前記目的の外因性タンパク質の出発コドンに到達するのを阻止するのに充分である；または、
前記細胞が、ヒト細胞、動物細胞、培養細胞および植物細胞、からなる群より選択される；または、
前記組成物が細胞中に導入される；または、
前記細胞が生物体中に存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
目的の外因性タンパク質が毒素であり、好ましくは、
前記毒素が、リシン、リシンＡ鎖、アブリン、アブリンＡ鎖、ジフテリア毒素Ａ鎖およびこれらの改変型、からなる群より選択される；または、
前記毒素が、アルファ毒素、サポリン、トウモロコシＲＩＰ、オオムギＲＩＰ、コムギＲＩＰ、ｃｏｍ  ＲＩＰ、ライムギＲＩＰ、亜麻ＲＩＰ、志賀毒素、志賀様ＲＩＰ、モモルジン、チミジンキナーゼ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、シュードモナス外毒素、シュードモナス外毒素Ａ、大腸菌シトシンデアミナーゼおよびこれらの改変型、からなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記阻害配列が切断部位の上流に配置され、前記阻害配列が、前記外因性ＲＮＡ分子からの前記目的の外因性タンパク質の翻訳の効率を低減させる請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記阻害配列が複数の開始コドンを含み、好ましくは、
各前記開始コドンおよび前記目的の外因性タンパク質をコードする配列が同じ読み枠にはない；または、
各前記開始コドンが５’−ＡＵＧ−３’を基本的に含む；または、
前記開始コドンがコザックコンセンサス配列内に配置される、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
請求項１の組成物を含む診断キット。
【請求項７】
請求項１の組成物および１つまたは複数の賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項８】
標的細胞の死滅を標的にする方法であって、標的細胞中に請求項１の組成物の導入を含み、標的細胞が特異的内在性ｍｉＲＮＡを含む方法。
【請求項９】
外因性ＲＮＡ分子をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターであって、前記外因性ＲＮＡ分子が、
ａ）目的の外因性タンパク質をコードする配列；
ｂ）目的の外因性タンパク質の発現を阻害できる阻害配列；および
ｃ）特異的内在性ｍｉＲＮＡ用の結合部位、
を含むベクター。
【請求項１０】
前記ベクターがウイルスベクターである；または、
前記ベクターが非ウイルスベクターである；または、
前記内在性マイクロＲＮＡが、腫瘍性細胞中でのみ発現する、
請求項９に記載のベクター。
【請求項１１】
ベクターを前記特異的内在性ｍｉＲＮＡを含む細胞中に導入するに場合に、特異的内在性ｍｉＲＮＡが切断部位での前記外因性ＲＮＡ分子の切断を指示するために、特異的内在性ｍｉＲＮＡ用の前記結合部位が特異的内在性ｍｉＲＮＡ内の配列に対し充分な相補性である請求項９に記載のベクター。
【請求項１２】
前記切断部位が特異的内在性ｍｉＲＮＡ用の前記結合部位内に位置し、切断部位が阻害配列および目的の外因性タンパク質をコードする配列の間に位置する請求項１１に記載のベクター。
【請求項１３】
特異的内在性ｍｉＲＮＡが細胞マイクロＲＮＡ、ウイルスマイクロＲＮＡ、または両方であり、好ましくは、
前記ウイルスマイクロＲＮＡが、二本鎖ＤＮＡウイルス、単鎖ＤＮＡウイルス、二本鎖ＲＮＡウイルス、二本鎖ＲＮＡウイルス、単鎖（プラス鎖）ウイルス、単鎖（マイナス鎖）ウイルスおよびレトロウイルス、からなる群より選択されるウイルスにより発現する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
目的の外因性タンパク質が、毒素であり、好ましくは、
前記毒素が、リシン、リシンＡ鎖、アブリン、アブリンＡ鎖、ジフテリア毒素Ａ鎖およびこれらの改変型、からなる群より選択される；または、
前記毒素が、アルファ毒素、サポリン、トウモロコシＲＩＰ、オオムギＲＩＰ、コムギＲＩＰ、ｃｏｍ  ＲＩＰ、ライムギＲＩＰ、亜麻ＲＩＰ、志賀毒素、志賀様ＲＩＰ、モモルジン、チミジンキナーゼ、ヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、ゲロニン、シュードモナス外毒素、シュードモナス外毒素Ａ、大腸菌シトシンデアミナーゼおよびこれらの改変型、からなる群より選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１５】
癌を治療するための、請求項１に記載の組成物の使用。