【手続補正書】
【提出日】平成26年7月22日(2014.7.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血漿から濃縮インターα阻害タンパク質（Inter-alpha-Inhibitor protein（ＩａＩｐ））組成物を調製するための方法であって、
（ｉ）以下により血漿試料から画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈殿物を形成するステップ：
（ａ）第１の沈殿ステップにおいて、第１の沈殿物及び第１の上澄みを得るために、約７．０〜約７．５のｐＨで約６％〜約１０％アルコールを用いてコーン（Ｃｏｈｎ）プールからタンパク質を沈殿させること、及び
（ｂ）第２の沈殿ステップにおいて、約６．６〜約７．２のｐＨで約２０％〜約２５％アルコールを用いて該第１の上澄みからタンパク質を沈殿させることにより、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈殿物を形成すること、
（ｉｉ）画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液を形成するために、該画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈殿物を懸濁するステップ、
（ｉｉｉ）該画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液を固相に接触させて、該画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液から該ＩａＩｐを除去するステップ、並びに、
（ｉｖ）該固相から該ＩａＩｐを抽出することにより、濃縮ＩａＩｐ組成物を調製するステップ
を含む、方法。
【請求項２】
前記固相が超微粒子状二酸化ケイ素（ＳｉＯ２）を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
（ｉ）以下により血漿試料から画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈殿物を形成するステップ：
（ａ）第１の沈殿ステップにおいて、第１の沈殿物及び第１の上澄みを得るために、約７．０〜約７．５のｐＨで約６％〜約１０％アルコールを用いてコーンプールからタンパク質を沈殿させること、
（ｂ）第２の沈殿ステップにおいて、約６．６〜約７．２のｐＨで約２０％〜約２５％アルコールを用いて該第１の上澄みからＩａＩｐを沈殿させることにより、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈殿物を形成すること、
（ｉｉ）画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液を形成するために該画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈殿物を懸濁するステップ、
（ｉｉｉ）以下により該画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液を固相に接触させて、該画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液から該ＩａＩｐを除去するステップ：
（ｃ）超微粒子状二酸化ケイ素（ＳｉＯ２）をステップ（ｉｉ）の該画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液と混合すること、並びに
（ｉｖ）以下により該固相から該ＩａＩｐを抽出するステップ：
（ｄ）該画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液をフィルタープレスで濾過することにより、濾過ケーク及び上澄みを形成すること、及び、
（ｅ）ＩａＩｐ抽出緩衝液で該濾過ケークからＩａＩｐを抽出することにより、濃縮ＩａＩｐ組成物を調製すること
を含む、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
ＩａＩｐを複数の沈殿画分から抽出する、請求項１〜３の何れか１項に記載の方法。
【請求項５】
追加の沈殿ステップにおいて、前記濃縮ＩａＩｐ組成物から不純物を沈殿させることにより、ＩａＩｐを含有する上澄みを形成するステップ
を更に含む、請求項１〜４の何れか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記追加の沈殿ステップが約６．０〜約８．０のｐＨにおける約１０％〜約１９％アルコールを用いた沈殿を含む、請求項５記載の方法。
【請求項７】
追加の沈殿ステップにおいて、ＩａＩｐを沈殿させるステップ
を更に含む、請求項１〜６の何れか１項に記載の方法。
【請求項８】
約６．０〜約８．０のｐＨで約２０％〜約２５％アルコールを用いてＩａＩｐを沈殿させる、請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記濃縮ＩａＩｐ組成物由来のＩａＩｐをアニオン交換樹脂に結合させるステップ、及び、
溶離緩衝液を用いて該アニオン交換樹脂から該ＩａＩｐを溶離させることにより、ＩａＩｐを含有する第１の溶離液を形成するステップ
を更に含む、請求項１〜８の何れか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記第１の溶離液由来のＩａＩｐをヘパリン親和性樹脂に結合させるステップ、及び、
溶離緩衝液を用いて該ヘパリン親和性樹脂から該ＩａＩｐを溶離することにより、ＩａＩｐを含有する第２の溶離液を形成するステップ
を更に含む、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前記第１の溶離液中又は前記第２の溶離液中に存在するＩａＩｐが更に濃縮される、請求項９又は１０記載の方法。
【請求項１２】
前記沈殿ステップのうちの少なくとも１つがアルコールの噴霧添加を含む、請求項１〜１１の何れか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記沈殿ステップの全てがアルコールの噴霧添加を含む、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
ｐＨ調整剤の添加により、前記第１の沈殿ステップ、又は前記第２の沈殿ステップのうちの少なくとも１つにおいて、アルコールの添加の後に溶液のｐＨを調整する、請求項１〜１３の何れか１項に記載の方法。
【請求項１５】
ｐＨ調整剤の添加により、全ての前記沈殿ステップにおいてアルコールの添加の後に前記溶液のｐＨを調整する、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
ｐＨ調整剤の添加が、ｐＨ調整溶液の噴霧添加を含む、請求項１４又は１５記載の方法。
【請求項１７】
アルコール添加の前及びその後に、アルコール添加の間及びその後に、又はアルコール添加の前、その間及びその後に、沈殿ステップのｐＨを調整する、請求項１〜１６の何れか１項に記載の方法。
【請求項１８】
沈殿ステップのｐＨが、ｐＨの連続的調節により全沈殿ステップに関して維持される、請求項１〜１７の何れか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＩａＩｐを抽出するステップが、画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケークを含有するフィルタープレスを通してＩａＩｐ抽出緩衝液を再循環させることを含む、請求項１〜１８の何れか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＩａＩｐ抽出緩衝液を少なくとも約１０分間前記フィルタープレスを通して再循環させる、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
前記ＩａＩｐ抽出緩衝液を少なくとも約３０分間前記フィルタープレスを通して再循環させる、請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
前記ＩａＩｐ抽出緩衝液のｐＨが、少なくとも１つのＩａＩｐタンパク質の等電点とは少なくとも約０．３単位異なる、請求項１〜２１の何れか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記濃縮ＩａＩｐ組成物が少なくとも１つのウィルス不活性化ステップに更に供される、請求項１〜２２の何れか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ウィルス不活性化ステップが溶媒及び／もしくは洗浄剤による処理、ナノ濾過、熱処理、又は低ｐＨにおけるインキュベーションを含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
単一のインターα阻害タンパク質（ＩａＩｐ）種を単離する、請求項１〜２４の何れか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＩａＩｐ種がインターαトリプシン阻害剤（ＩａＩ）である、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
前記ＩａＩｐ種がプレα阻害剤（ＰａＩ）である、請求項２５記載の方法。
【請求項２８】
前記ＩａＩｐ種が抗体親和性方法により単離される、請求項２５〜２７の何れか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
第７の実施形態において、本発明は、ＩａＩｐ及びＨ因子の組成物の同時製造を、血漿分画による他の商業上重要な血液産物の調製の間に、それ以外では廃棄される１つ以上の画分から両方の因子を抽出することにより行う方法を提供する。ある特定の実施形態においては、ＩａＩｐ及びＨ因子は、画分Ｉ沈殿物、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈殿物、画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーク、沈殿物Ａの沈殿物又は沈殿物Ｂの沈殿物から回収される。
[本発明1001]
血漿から濃縮ＩａＩｐ組成物を調製するための方法であって、
（ａ）脱クリオ（cryo-poor）血漿画分を供給するステップ、
（ｂ）ＩａＩｐ含有沈殿物を形成するために、少なくとも第1のエタノール沈殿反応において該脱クリオ血漿画分からＩａＩｐを沈殿させるステップ、及び、
（ｃ）該ＩａＩｐ含有沈殿物からＩａＩｐを抽出することにより、濃縮ＩａＩｐ組成物を形成するステップ
を含み、
該ＩａＩｐ沈殿物が、画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーク、画分Ｉ沈殿物、画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ沈殿物、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈殿物、画分ＩＶ−1、キストラー−ニッチェマン（Ｋｉｓｔｌｅｒ−Ｎｉｔｓｃｈｍａｎｎ）沈殿物Ａ、及びキストラー−ニッチェマン沈殿物Ｂよりなる群から選択される、
方法。
[本発明1002]
血漿から濃縮インターα阻害剤（ＩａＩｐ）組成物を調製するための方法であって、
（ｉ）血漿試料から画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈殿物を形成するステップ、
（ｉｉ）画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液を形成するために、該画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈殿物を再懸濁するステップ、
（ｉｉｉ）該画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液を固相に接触させて、該画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液から該ＩａＩｐを除去するステップ、及び、
（ｉｖ）該固相から該ＩａＩｐを抽出することにより、濃縮ＩａＩｐ組成物を調製するステップ
を含む、方法。
[本発明1003]
前記固相が超微粒子状二酸化ケイ素（ＳｉＯ2）を含む、本発明1002の方法。
[本発明1004]
（ａ）第1の沈殿ステップにおいて、第1の沈殿物及び第1の上澄みを得るために、約7．0〜約7．5のｐＨで約6％〜約10％アルコールを用いて脱クリオ血漿画分からタンパク質を沈殿させるステップ、
（ｂ）第2の沈殿ステップにおいて、第2の沈殿物を形成するために、約6．7〜約7．3のｐＨで約20％〜約25％アルコールを用いて該第1の上澄みからＩａＩｐを沈殿させるステップ、
（ｃ）懸濁液を形成するために該第2の沈殿物を再懸濁するステップ、
（ｄ）超微粒子状二酸化ケイ素（ＳｉＯ2）をステップ（ｃ）の懸濁液と混合するステップ、
（ｅ）該懸濁液をフィルタープレスで濾過することにより、濾過ケーク及び上澄みを形成するステップ、並びに、
（ｆ）ＩａＩｐ抽出緩衝液で該濾過ケークからＩａＩｐを抽出することにより、濃縮ＩａＩｐ組成物を調製するステップ
を含む、本発明1002又は1003の方法。
[本発明1005]
血漿から濃縮インターα阻害剤（ＩａＩｐ）組成物を調製するための方法であって、
（ａ）沈殿物を得るために血漿試料からＩａＩｐを沈殿させるステップ、
（ｂ）ＩａＩｐ抽出緩衝液で該沈殿物からＩａＩｐを抽出することにより、濃縮ＩａＩｐ組成物を調製するステップ
を含み、
該沈殿物が、画分Ｉ、画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ、画分ＩＩ＋ＩＩＩ、画分ＩＶ−1、沈殿物Ａ、又は沈殿物Ｂの沈殿物である、
方法。
[本発明1006]
画分Ｉ沈殿物を形成するステップが、第1の沈殿ステップにおいて、画分Ｉ沈殿物を得るために、約7．0〜約7．5のｐＨで約6％〜約10％アルコールを用いて脱クリオ血漿画分からＩａＩｐを沈殿させることを含む、本発明1005の方法。
[本発明1007]
ＩａＩｐを画分ＩＶ−1沈殿物から抽出し、
（ａ）第1の沈殿ステップにおいて、第1の沈殿物及び第1の上澄みを得るために、約7．0〜約7．5のｐＨで約6％〜約10％アルコールを用いて脱クリオ血漿画分からタンパク質を沈殿させるステップ、
（ｂ）第2の沈殿ステップにおいて、第2の沈殿物及び第2の上澄みを形成するために、約6．7〜約7．3のｐＨで約20％〜約25％アルコールを用いて該第1の沈殿物からタンパク質を沈殿させるステップ、
（ｃ）第3の沈殿ステップにおいて、第3の沈殿物及び第3の上澄みを形成するために、約5．0〜約5．5のｐＨで約18％〜約23％アルコールを用いて該第2の上澄みからＩａＩｐを沈殿させるステップ、並びに、
（ｄ）ＩａＩｐ抽出緩衝液で該第3の沈殿物からＩａＩｐを抽出することにより、濃縮ＩａＩｐ組成物を調製するステップ
を含む、本発明1005の方法。
[本発明1008]
ＩａＩｐを画分ＩＶ−1沈殿物から抽出し、
（ａ）第1の沈殿ステップにおいて、第1の沈殿物及び第1の上澄みを得るために、約6．7〜約7．2のｐＨで約18％〜約23％アルコールを用いて脱クリオ血漿画分からタンパク質を沈殿させるステップ、
（ｂ）第2の沈殿ステップにおいて、第2の沈殿物及び第2の上澄みを形成するために、約5．0〜約5．5のｐＨで約18％〜約25％アルコールを用いて該第1の上澄みからＩａＩｐを沈殿させるステップ、並びに、
（ｃ）ＩａＩｐ抽出緩衝液で該第2の沈殿物からＩａＩｐを抽出することにより、濃縮ＩａＩｐ組成物を調製するステップ
を含む、本発明1005の方法。
[本発明1009]
ＩａＩｐを複数の沈殿画分から抽出する、本発明1001〜1008の何れかの方法。
[本発明1010]
血漿から濃縮インターα阻害剤（ＩａＩｐ）組成物を調製するための方法であって、
（ａ）血漿の単一のアリコートを分画してＩａＩｐ以外の少なくとも2つの血液産物の濃縮組成物を得るステップ、
（ｂ）1つ以上の抽出緩衝液で血漿分画の間に生じた少なくとも2つの異なる廃棄画分からＩａＩｐを抽出するステップ、及び、
（ｃ）抽出されたＩａＩｐ画分をプールすることにより、濃縮ＩａＩｐ組成物を調製するステップ
を含む、方法。
[本発明1011]
前記血漿を分画してＩｇＧ免疫グロブリン及びアルブミンの濃縮組成物を得る、本発明1010の方法。
[本発明1012]
前記血漿を分画してＩａＩｐ以外の少なくとも3つの血液産物を得る、本発明1010又は1011の方法。
[本発明1013]
（ｇ）追加の沈殿ステップにおいて、前記濃縮ＩａＩｐ組成物から不純物を沈殿させることにより、ＩａＩｐを含有する上澄みを形成するステップ
を更に含む、本発明1001〜1012の何れかの方法。
[本発明1014]
前記追加の沈殿ステップが約6．0〜約8．0のｐＨにおける約10％〜約19％アルコールを用いた沈殿を含む、本発明1013の方法。
[本発明1015]
血漿から濃縮ＩａＩｐ組成物を調製するための方法であって、
（ａ）画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーク、画分Ｉ、画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ、画分ＩＩ＋ＩＩＩ、画分ＩＶ−1、沈殿物Ａ、又は沈殿物Ｂの沈殿物よりなる群から選択される血漿画分からＩａＩｐを抽出するステップ、及び、
（ｂ）追加の沈殿ステップにおいて、該濃縮ＩａＩｐ組成物から不純物を沈殿させることにより、濃縮ＩａＩｐ組成物を調製するステップ
を含む、方法。
[本発明1016]
（ｈ）追加の沈殿ステップにおいて、ＩａＩｐを沈殿させるステップ
を更に含む、本発明1001〜1015の何れかの方法。
[本発明1017]
約6．0〜約8．0のｐＨで約20％〜約25％アルコールを用いてＩａＩｐを沈殿させる、本発明1016の方法。
[本発明1018]
（ｇ）前記濃縮ＩａＩｐ組成物由来のＩａＩｐをアニオン交換樹脂に結合させるステップ、及び、
（ｈ）溶離緩衝液を用いて該アニオン交換樹脂から該ＩａＩｐを溶離させることにより、ＩａＩｐを含有する第1の溶離液を形成するステップ
を更に含む、本発明1001〜1016の何れかの方法。
[本発明1019]
（ｉ）前記第1の溶離液由来のＩａＩｐをヘパリン親和性樹脂に結合させるステップ、及び、
（ｊ）溶離緩衝液を用いて該ヘパリン親和性樹脂から該ＩａＩｐを溶離することにより、ＩａＩｐを含有する第2の溶離液を形成するステップ
を更に含む、本発明1018の方法。
[本発明1020]
前記第1の溶離液中又は前記第2の溶離液中に存在するＩａＩｐが更に濃縮される、本発明1018又は1019の方法。
[本発明1021]
前記沈殿ステップのうちの少なくとも1つがアルコールの噴霧添加を含む、本発明1001〜1020の何れかの方法。
[本発明1022]
前記沈殿ステップの全てがアルコールの噴霧添加を含む、本発明1021の方法。
[本発明1023]
ｐＨ調整剤の添加により、前記第1の沈殿ステップ、前記第2の沈殿ステップ、又は前記第3の沈殿ステップのうちの少なくとも1つにおいて、アルコールの添加の後に溶液のｐＨを調整する、本発明1001〜1022の何れかの方法。
[本発明1024]
ｐＨ調整剤の添加により、全ての前記沈殿ステップにおいてアルコールの添加の後に前記溶液のｐＨを調整する、本発明1023の方法。
[本発明1025]
ｐＨ調整剤の添加が、ｐＨ調整溶液の噴霧添加を含む、本発明1023又は1024の方法。
[本発明1026]
アルコール添加の前及びその後に、アルコール添加の間及びその後に、又はアルコール添加の前、その間及びその後に、沈殿ステップのｐＨを調整する、本発明1001〜1025の何れかの方法。
[本発明1027]
沈殿ステップのｐＨが、ｐＨの連続的調節により全沈殿ステップに関して維持される、本発明1001〜1026の何れかの方法。
[本発明1028]
ＩａＩｐを抽出するステップが、画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーク、画分Ｉ、画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ、画分ＩＩ＋ＩＩＩ、画分ＩＶ−1、沈殿物Ａ、又は沈殿物Ｂの沈殿物よりなる群から選択される血漿画分を含有するフィルタープレスを通してＩａＩｐ抽出緩衝液を再循環させることを含む、本発明1001〜1027の何れかの方法。
[本発明1029]
前記ＩａＩｐ抽出緩衝液を少なくとも約10分間前記フィルタープレスを通して再循環させる、本発明1028の方法。
[本発明1030]
前記ＩａＩｐ抽出緩衝液を少なくとも約30分間前記フィルタープレスを通して再循環させる、本発明1028の方法。
[本発明1031]
前記ＩａＩｐ抽出緩衝液が、少なくとも1つのＩａＩｐタンパク質の等電点とは少なくとも約0．3単位異なるｐＨを含み有する、本発明1001〜1030の何れかの方法。
[本発明1032]
血漿から濃縮インターα阻害剤（ＩａＩｐ）組成物を調製するための方法であって、
（ａ）抽出物がＩａＩｐ及びＨ因子を含有する、脱クリオ血漿の分画の間に形成した沈殿物からＩａＩｐを抽出するステップ、
（ｂ）アニオン交換樹脂に該ＩａＩｐ及び該Ｈ因子を結合させるステップ、
（ｃ）第1の溶離緩衝液で該樹脂から該Ｈ因子を溶離させるステップ、並びに、
（ｄ）第2の溶離緩衝液で該樹脂から該ＩａＩｐを溶離することにより、濃縮ＩａＩｐ組成物を調製するステップ
を含む、方法。
[本発明1033]
血漿から濃縮インターα阻害剤（ＩａＩｐ）組成物を調製するための方法であって、
（ａ）抽出物がＩａＩｐ及びＨ因子を含有する、脱クリオ血漿の分画の間に形成した沈殿物からＩａＩｐを抽出するステップ、
（ｂ）アニオン交換樹脂にＨ因子が結合しない条件下で、該アニオン交換樹脂に該ＩａＩｐを結合させるステップ、並びに、
（ｃ）溶離緩衝液で該樹脂から該ＩａＩｐを溶離することにより、濃縮ＩａＩｐ組成物を調製するステップ
を含む、方法。
[本発明1034]
（ｅ）前記濃縮ＩａＩｐ組成物中の前記ＩａＩｐをヘパリン親和性カラムに結合させるステップ、及び、
（ｆ）該ヘパリン親和性カラムから該ＩａＩｐを溶離させるステップ
を更に含む、本発明1032又は1033の方法。
[本発明1035]
前記濃縮ＩａＩｐ組成物が少なくとも1つのウィルス不活性化ステップに更に供される、本発明1001〜1034の何れかの方法。
[本発明1036]
前記ウィルス不活性化ステップが溶媒及び／又は洗浄剤による処理、ナノ濾過、熱処理、又は低ｐＨにおけるインキュベーションを含む、本発明1035の方法。
[本発明1037]
単一のインターα阻害タンパク質（ＩａＩｐ）種を単離する、本発明1001〜1036の何れかの方法。
[本発明1038]
前記ＩａＩｐ種がインターαトリプシン阻害剤（ＩａＩ）である、本発明1037の方法。
[本発明1039]
前記ＩａＩｐ種がプレα阻害剤（ＰａＩ）である、本発明1037の方法。
[本発明1040]
前記ＩａＩｐ種が抗体親和性方法により単離される、本発明1037〜1039の何れかの方法。
[本発明1041]
本発明1001〜1040の何れかの方法により調製される、ＩａＩｐの水溶液。
[本発明1042]
前記溶液のタンパク質含有量の少なくとも90％がＩａＩｐである、本発明1041の水溶液。
[本発明1043]
本発明1001〜1040の何れかの方法により調製される、ＩａＩｐの医薬組成物。
[本発明1044]
前記溶液のタンパク質含有量の少なくとも95％がＩａＩｐである、本発明1043の医薬組成物。
[本発明1045]
静脈内投与のために製剤化される、本発明1043又は1044の医薬組成物。
[本発明1046]
ＩａＩｐの凍結乾燥された製剤を含む、本発明1043又は1044の医薬組成物。
[本発明1047]
それを必要とする対象においてＩａＩｐ機能不全に関連する疾患又は障害を治療するための方法であって、本発明1001〜1040の何れかの方法により調製されたＩａＩｐ組成物の治療有効量を投与するステップを含む、方法。
[本発明1048]
ＩａＩｐ機能不全に関連する前記疾患又は前記障害が敗血症である、本発明1047の方法。
[本発明1049]
それを必要とする対象において増大した血漿中セリンプロテアーゼ活性に関連する疾患又は障害を治療するための方法であって、本発明1001〜1040の何れかの方法により調製されたＩａＩｐ組成物の治療有効量を投与するステップを含む、方法。
[本発明1050]
増大した血漿中セリンプロテアーゼ活性に関連する前記疾患又は前記障害が、敗血症、敗血症性ショック、内毒素ショック、汎発性血管内凝固症、腺維増殖、炭疽中毒、癌転移、術中組織傷害、腎臓疾患、血管疾患、凝固、糖尿病、及び全身性炎症よりなる群から選択される、本発明1049の方法。