【手続補正書】
【提出日】平成24年7月17日(2012.7.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
本発明はさらに、単離された核酸と、本明細書に開示された新規なプローブおよびプライマーセットの様々な組み合わせとを含む試薬混合物を企図している。一実施形態では、試薬混合物は、単離された核酸；各々がフォワードプライマーおよびリバースプライマーを含む、ＲＨＤ遺伝子の３個以上のエクソンを増幅するための３種以上のプライマーセット；および３種以上の標識プローブを含む。別の実施形態では、試薬混合物は、単離された核酸；ＲＨＤ遺伝子の４個のエクソンを増幅するための４種のプライマーセット；および４種の標識プローブを含む。プライマーセットおよび標識プローブは好ましくは、ヒトＲＨＤ遺伝子のエクソン４、エクソン５、エクソン７およびエクソン１０から選択される３個以上のエクソンにハイブリダイズする。
したがって、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
配列番号１、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２２および配列番号２３からなる群より選択される配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、上記単離されたポリヌクレオチドが５０未満の塩基を含む、単離されたポリヌクレオチド。
（項目２）
上記ポリヌクレオチドがヒトＲＨＤ遺伝子のエクソンにハイブリダイズする、項目１に記載の単離されたポリヌクレオチド。
（項目３）
配列番号３、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１および配列番号２４からなる群より選択される配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、上記単離されたポリヌクレオチドが５０未満の塩基を含む、単離されたポリヌクレオチド。
（項目４）
レポーター分子が上記ポリヌクレオチドの５’末端に結合し、クエンチャー分子が上記ポリヌクレオチドの３’末端に結合する、項目３に記載の単離されたポリヌクレオチド。
（項目５）
上記ポリヌクレオチドがヒトＲＨＤ遺伝子のエクソンを検出する、項目３に記載の単離されたポリヌクレオチド。
（項目６）
配列番号３１、配列番号３２または配列番号３３に記載された配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、上記単離されたポリヌクレオチドが５０未満の塩基を含む、単離されたポリヌクレオチド。
（項目７）
上記ポリヌクレオチドがヒトＹ染色体を検出する、項目６に記載の単離されたポリヌクレオチド。
（項目８）
フォワードプライマーおよびリバースプライマーを含む少なくとも１種のプライマーセット、
少なくとも１種の標識プローブ、および
生物学的サンプルにおいてＲＨＤ遺伝子を検出するための、上記少なくとも１種のプライマーセットおよび上記少なくとも１種のプローブの使用説明書
を含み、上記フォワードプライマーおよび上記リバースプライマーがヒトＲＨＤ遺伝子のエクソンにハイブリダイズする、ＲｈＤジェノタイピングキット。
（項目９）
上記エクソンがヒトＲＨＤ遺伝子のエクソン４、エクソン５、エクソン７またはエクソン１０である、項目８に記載のキット。
（項目１０）
上記エクソンがエクソン４である、項目９に記載のキット。
（項目１１）
上記フォワードプライマーが配列番号１または配列番号４であり、上記リバースプライマーが配列番号２または配列番号５である、項目１０に記載のキット。
（項目１２）
上記少なくとも１種の標識プローブが配列番号３または配列番号６である、項目１０に記載のキット。
（項目１３）
上記エクソンがエクソン５である、項目９に記載のキット。
（項目１４）
上記フォワードプライマーが配列番号７または配列番号１０であり、上記リバースプライマーが配列番号８または配列番号１１である、項目１３に記載のキット。
（項目１５）
上記少なくとも１種の標識プローブが配列番号９または配列番号１２である、項目１３に記載のキット。
（項目１６）
上記エクソンがエクソン７である、項目９に記載のキット。
（項目１７）
上記フォワードプライマーが配列番号１３または配列番号１６であり、上記リバースプライマーが配列番号１４または配列番号１７である、項目１６に記載のキット。
（項目１８）
上記少なくとも１種の標識プローブが配列番号１５または配列番号１８である、項目１６に記載のキット。
（項目１９）
上記エクソンがエクソン１０である、項目９に記載のキット。
（項目２０）
上記フォワードプライマーが配列番号１９または配列番号２２であり、上記リバースプライマーが配列番号２０または配列番号２３である、項目１９に記載のキット。
（項目２１）
上記少なくとも１種の標識プローブが配列番号２１または配列番号２４である、項目１９に記載のキット。
（項目２２）
上記キットが２種以上のプライマーセットおよび２種以上の標識プローブを含む、項目８に記載のキット。
（項目２３）
上記２種以上のプライマーセットがヒトＲＨＤ遺伝子の１個のエクソンにハイブリダイズする、項目２２に記載のキット。
（項目２４）
上記２種以上のプライマーセットがヒトＲＨＤ遺伝子の２個以上のエクソンにハイブリダイズする、項目２２に記載のキット。
（項目２５）
溶解試薬をさらに含む、項目８に記載のキット。
（項目２６）
上記溶解試薬がＳ−（２−グアニジノ−４−チアゾイル）−メチル−イソチオ尿素を含む、項目２５に記載のキット。
（項目２７）
上記溶解試薬がＳ−（２−グアニジノ−４−チアゾイル）−メチル−イソチオ尿素、ビタミンＥ、サポニン、ＤＭＳＯ、トリトンＸ−１００およびｐＨ７．２〜７．４の緩衝液を含む、項目２６に記載のキット。
（項目２８）
被験体のＲｈＤ遺伝子型を判定する方法であって、上記方法は、
上記被験体由来の１つまたは複数の細胞を含む生物学的サンプル中の細胞を溶解させて溶解混合物を形成する工程、
上記溶解混合物から核酸を抽出する工程、および
上記抽出された核酸においてＲＨＤ遺伝子の少なくとも１個のエクソンを検出する工程を含み、ここで、上記エクソンの有無から上記被験体のＲｈＤ遺伝子型が示される、方法。
（項目２９）
上記被験体が胎児である、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
上記生物学的サンプルが胎児細胞を含む母親の生物学的サンプルである、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
上記母親の生物学的サンプルが全血サンプルである、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
上記胎児細胞が母親の細胞よりも優先的に溶解させられる、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
細胞を溶解させる上記工程が、上記母親の生物学的サンプルを溶解試薬と一定の時間接触させる工程を含み、上記溶解試薬がＳ−（２−グアニジノ−４−チアゾイル）−メチル−イソチオ尿素を含む、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
上記溶解試薬がＳ−（２−グアニジノ−４−チアゾイル）−メチル−イソチオ尿素、ビタミンＥ、サポニン、トリトンＸ−１００、ＤＭＳＯおよびｐＨ７．２〜７．４の緩衝液を含む、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
上記時間が約１０分から約３０分である、項目３３に記載の方法。
（項目３６）
ＲＨＤ遺伝子の少なくとも１個のエクソンの上記検出が、上記少なくとも１個のエクソンを１種または複数種のプライマーセットで増幅する工程、および上記少なくとも１個のエクソンを１種または複数種の標識プローブで同定する工程を含む、項目２８に記載の方法。
（項目３７）
上記１種または複数種のプライマーセットがフォワードプライマーおよびリバースプライマーを含む、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
上記少なくとも１個のエクソンがヒトＲＨＤ遺伝子のエクソン４、エクソン５、エクソン７またはエクソン１０である、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
上記少なくとも１個のエクソンがエクソン４である、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
上記フォワードプライマーが配列番号１または配列番号４であり、上記リバースプライマーが配列番号２または配列番号５である、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
上記１種または複数種の標識プローブが配列番号３または配列番号６である、項目３９に記載の方法。
（項目４２）
上記少なくとも１個のエクソンがエクソン５である、項目３８に記載の方法。
（項目４３）
上記フォワードプライマーが配列番号７または配列番号１０であり、上記リバースプライマーが配列番号８または配列番号１１である、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
上記１種または複数種の標識プローブが配列番号９または配列番号１２である、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
上記少なくとも１個のエクソンがエクソン７である、項目３８に記載の方法。
（項目４６）
上記フォワードプライマーが配列番号１３または配列番号１６であり、上記リバースプライマーが配列番号１４または配列番号１７である、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
上記１種または複数種の標識プローブが配列番号１５または配列番号１８である、項目４５に記載の方法。
（項目４８）
上記少なくとも１個のエクソンがエクソン１０である、項目３８に記載の方法。
（項目４９）
上記フォワードプライマーが配列番号１９または配列番号２２であり、上記リバースプライマーが配列番号２０または配列番号２３である、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
上記１種または複数種の標識プローブが配列番号２１または配列番号２４である、項目４８に記載の方法。
（項目５１）
２種以上のプライマーセットが上記少なくとも１個のエクソンを増幅するために使用され、２種以上の標識プローブが上記少なくとも１個のエクソンを同定するために使用される、項目３６に記載の方法。
（項目５２）
上記２種以上のプライマーセットがヒトＲＨＤ遺伝子の１個のエクソンを増幅する、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
上記２種以上のプライマーセットがヒトＲＨＤ遺伝子の２個以上のエクソンを増幅する、項目５１に記載の方法。
（項目５４）
上記抽出された核酸において胎児ＤＮＡの存在を確認する工程をさらに含む、項目３２に記載の方法。
（項目５５）
胎児ＤＮＡの存在を確認する上記工程がＹ染色体を検出する工程を含む、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
上記Ｙ染色体が、フォワードプライマーおよびリバースプライマーを含む１種または複数種のプライマーセットで上記Ｙ染色体上にある遺伝子を増幅する工程、および、上記遺伝子を１種または複数種の標識プローブで同定する工程により検出される、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
上記Ｙ染色体上にある上記遺伝子がＳＲＹ、ＦＣＹおよびＤＡＺからなる群より選択される、項目５６に記載の方法。
（項目５８）
上記遺伝子がＤＡＺである、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
上記フォワードプライマーが配列番号３１であり、上記リバースプライマーが配列番号３２である、項目５８に記載の方法。
（項目６０）
上記１種または複数種の標識プローブが配列番号３３である、項目５８に記載の方法。
（項目６１）
胎児ＤＮＡの存在を確認する上記工程が父系遺伝の対立遺伝子を検出する工程を含む、項目５４に記載の方法。
（項目６２）
被験体のＲｈＤ遺伝子型を判定する方法であって、上記方法は、
上記被験体由来の１つまたは複数の細胞を含む生物学的サンプルから核酸を抽出する工程、および
上記抽出された核酸においてＲＨＤ遺伝子の少なくとも３個のエクソンを検出する工程を含み、ここで、上記エクソンの有無から上記被験体のＲｈＤ遺伝子型が示される、方法。
（項目６３）
ＲＨＤ遺伝子の少なくとも３個のエクソンの上記検出が、上記少なくとも３個のエクソンを３種以上のプライマーセットで増幅する工程、および上記少なくとも３個のエクソンを３種以上の標識プローブで同定する工程を含む、項目６２に記載の方法。
（項目６４）
上記少なくとも３個のエクソンがヒトＲＨＤ遺伝子のエクソン４、エクソン５、エクソン７およびエクソン１０からなる群より選択される、項目６２に記載の方法。
（項目６５）
ＲＨＤ遺伝子の４個のエクソンが、上記抽出された核酸において検出される、項目６２に記載の方法。
（項目６６）
上記４個のエクソンがヒトＲＨＤ遺伝子のエクソン４、エクソン５、エクソン７およびエクソン１０である、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
上記被験体が胎児である、項目６２に記載の方法。
（項目６８）
上記生物学的サンプルが胎児細胞を含む母親の生物学的サンプルである、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
上記抽出された核酸において胎児ＤＮＡの存在を確認する工程をさらに含む、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
胎児ＤＮＡの存在を確認する上記工程がＹ染色体を検出する工程を含む、項目６９に記載の方法。
（項目７１）
上記Ｙ染色体が、上記Ｙ染色体上にある遺伝子を１種または複数種のプライマーセットで増幅する工程、および、上記遺伝子を１種または複数種の標識プローブで同定する工程により検出される、項目７０に記載の方法。
（項目７２）
上記Ｙ染色体上にある上記遺伝子がＳＲＹ、ＦＣＹおよびＤＡＺからなる群より選択される、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
胎児ＤＮＡの存在を確認する上記工程が父系遺伝の対立遺伝子を検出する工程を含む、項目６９に記載の方法。
（項目７４）
単離された核酸、各々がフォワードプライマーおよびリバースプライマーを含む、ＲＨＤ遺伝子の３個以上のエクソンを増幅するための３種以上のプライマーセット、ならびに３種以上の標識プローブを含む、試薬混合物。
（項目７５）
上記３個以上のエクソンがヒトＲＨＤ遺伝子のエクソン４、エクソン５、エクソン７およびエクソン１０からなる群より選択される、項目７４に記載の試薬混合物。
（項目７６）
上記３種以上のプライマーセットの上記フォワードプライマーが配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９および配列番号２２からなる群より選択される、項目７５に記載の試薬混合物。
（項目７７）
上記３種以上のプライマーセットの上記リバースプライマーが配列番号２、配列番号５、配列番号８、配列番号１１、配列番号１４、配列番号１７、配列番号２０および配列番号２３からなる群より選択される、項目７５に記載の試薬混合物。
（項目７８）
上記３種以上の標識プローブが配列番号３、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１および配列番号２４からなる群より選択される、項目７５に記載の試薬混合物。
（項目７９）
上記混合物が、単離された核酸、ＲＨＤ遺伝子の４個のエクソンを増幅するための４種のプライマーセット、および４種の標識プローブを含む、項目７４に記載の試薬混合物。
（項目８０）
上記４個のエクソンがヒトＲＨＤ遺伝子のエクソン４、エクソン５、エクソン７およびエクソン１０である、項目７９に記載の試薬混合物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１、配列番号２、配列番号４、配列番号５、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２２および配列番号２３からなる群より選択される配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、ここで、前記単離されたポリヌクレオチドが５０未満の塩基を含み；かつ前記ポリヌクレオチドが、好ましくはヒトＲＨＤ遺伝子のエクソンにハイブリダイズする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２】
配列番号３、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１および配列番号２４からなる群より選択される配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、前記単離されたポリヌクレオチドが５０未満の塩基を含み；好ましくは
（ａ）レポーター分子が前記ポリヌクレオチドの５’末端に結合し、クエンチャー分子が前記ポリヌクレオチドの３’末端に結合するか、または
（ｂ）前記ポリヌクレオチドがヒトＲＨＤ遺伝子のエクソンを検出する、
単離されたポリヌクレオチド。
【請求項３】
配列番号３１、配列番号３２または配列番号３３に記載された配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、前記単離されたポリヌクレオチドが５０未満の塩基を含み；かつ前記ポリヌクレオチドが、好ましくはヒトＹ染色体を検出する、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項４】
フォワードプライマーおよびリバースプライマーを含む少なくとも１種のプライマーセット、
少なくとも１種の標識プローブ、および
生物学的サンプルにおいてＲＨＤ遺伝子を検出するための、前記少なくとも１種のプライマーセットおよび前記少なくとも１種のプローブの使用説明書
を含む、ＲｈＤジェノタイピングキットであって、
前記フォワードプライマーおよび前記リバースプライマーがヒトＲＨＤ遺伝子のエクソンにハイブリダイズする、ＲｈＤジェノタイピングキット。
【請求項５】
被験体のＲｈＤ遺伝子型を判定する方法であって、前記方法は、
前記被験体由来の１つまたは複数の細胞を含む生物学的サンプル中の細胞を溶解させて溶解混合物を形成する工程、
前記溶解混合物から核酸を抽出する工程、および
前記抽出された核酸においてＲＨＤ遺伝子の少なくとも１個のエクソンを検出する工程を含み、ここで、前記エクソンの有無から前記被験体のＲｈＤ遺伝子型が示される、方法。
【請求項６】
前記被験体が胎児であり；そして好ましくは、前記生物学的サンプルが胎児細胞を含む母親の生物学的サンプルであり、そしてより好ましくは：
（ａ）前記母親の生物学的サンプルが全血サンプルであるか、または
（ｂ）前記胎児細胞が母親の細胞よりも優先的に溶解させられ、そして好ましくは：
（ｉ）細胞を溶解させる前記工程が、好ましくは前記母親の生物学的サンプルを溶解試薬と一定の時間接触させる工程を含み、前記溶解試薬がＳ−（２−グアニジノ−４−チアゾイル）−メチル−イソチオ尿素を含み；より好ましくは前記溶解試薬がＳ−（２−グアニジノ−４−チアゾイル）−メチル−イソチオ尿素、ビタミンＥ、サポニン、トリトンＸ−１００、ＤＭＳＯおよびｐＨ７．２〜７．４の緩衝液を含み、そして前記時間が、必要に応じて約１０分から約３０分であるか、または
（ｉｉ）前記方法が、前記抽出された核酸において胎児ＤＮＡの存在を確認する工程をさらに含み、ここで、好ましくは：
（Ａ）胎児ＤＮＡの存在を確認する前記工程が、必要に応じてＹ染色体を検出する工程を含み；ここで、好ましくは、前記Ｙ染色体が、フォワードプライマーおよびリバースプライマーを含む１種または複数種のプライマーセットで前記Ｙ染色体上にある遺伝子を増幅する工程、および、前記遺伝子を１種または複数種の標識プローブで同定する工程により検出され、より好ましくは、前記Ｙ染色体上にある前記遺伝子がＳＲＹ、ＦＣＹおよびＤＡＺからなる群より選択され；そして最も好ましくは、前記遺伝子がＤＡＺであり、そして必要に応じて、（Ｉ）前記フォワードプライマーが配列番号３１であり、前記リバースプライマーが配列番号３２であるか、および／もしくは（ＩＩ）前記１種または複数種の標識プローブが配列番号３３であるか、または
（Ｂ）胎児ＤＮＡの存在を確認する前記工程が父系遺伝の対立遺伝子を検出する工程を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ＲＨＤ遺伝子の少なくとも１個のエクソンの前記検出が、前記少なくとも１個のエクソンを１種または複数種のプライマーセットで増幅する工程、および前記少なくとも１個のエクソンを１種または複数種の標識プローブで同定する工程を含み；ここで、好ましくは、前記１種または複数種のプライマーセットがフォワードプライマーおよびリバースプライマーを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
（ａ）前記エクソンがエクソン４であり、そして好ましくは：
ｉ．前記フォワードプライマーが配列番号１または配列番号４であり、前記リバースプライマーが配列番号２または配列番号５であるか、および／または
ｉｉ．前記少なくとも１種の標識プローブが配列番号３または配列番号６であるか、
（ｂ）前記エクソンがエクソン５であり、そして好ましくは：
ｉ．前記フォワードプライマーが配列番号７または配列番号１０であり、前記リバースプライマーが配列番号８または配列番号１１であるか、および／または
ｉｉ．前記少なくとも１種の標識プローブが配列番号９または配列番号１２であるか、
（ｃ）前記エクソンがエクソン７であり、そして好ましくは：
ｉ．前記フォワードプライマーが配列番号１３または配列番号１６であり、前記リバースプライマーが配列番号１４または配列番号１７であるか、および／または
ｉｉ．前記少なくとも１種の標識プローブが配列番号１５または配列番号１８であるか、ならびに／あるいは
（ｄ）前記エクソンがエクソン１０であり、そして好ましくは：
ｉ．前記フォワードプライマーが配列番号１９または配列番号２２であり、前記リバースプライマーが配列番号２０または配列番号２３であるか、および／または
ｉｉ．前記少なくとも１種の標識プローブが配列番号２１または配列番号２４である、請求項４に記載のキット。
【請求項９】
（ａ）前記エクソンがエクソン４であり、そして好ましくは：
ｉ．前記フォワードプライマーが配列番号１または配列番号４であり、前記リバースプライマーが配列番号２または配列番号５であるか、および／または
ｉｉ．前記少なくとも１種の標識プローブが配列番号３または配列番号６であるか、
（ｂ）前記エクソンがエクソン５であり、そして好ましくは：
ｉ．前記フォワードプライマーが配列番号７または配列番号１０であり、前記リバースプライマーが配列番号８または配列番号１１であるか、および／または
ｉｉ．前記少なくとも１種の標識プローブが配列番号９または配列番号１２であるか、
（ｃ）前記エクソンがエクソン７であり、そして好ましくは：
ｉ．前記フォワードプライマーが配列番号１３または配列番号１６であり、前記リバースプライマーが配列番号１４または配列番号１７であるか、および／または
ｉｉ．前記少なくとも１種の標識プローブが配列番号１５または配列番号１８であるか、ならびに／あるいは
（ｄ）前記エクソンがエクソン１０であり、そして好ましくは：
ｉ．前記フォワードプライマーが配列番号１９または配列番号２２であり、前記リバースプライマーが配列番号２０または配列番号２３であるか、および／または
ｉｉ．前記少なくとも１種の標識プローブが配列番号２１または配列番号２４である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記キットが２種以上のプライマーセットおよび２種以上の標識プローブを含み、そして前記２種以上のプライマーセットが、必要に応じて以下：
（ａ）ヒトＲＨＤ遺伝子の１個のエクソン、または
（ｂ）ヒトＲＨＤ遺伝子の２個以上のエクソン
にハイブリダイズする、請求項４に記載のキット。
【請求項１１】
溶解試薬をさらに含む、請求項４に記載のキットであって、好ましくは前記溶解試薬がＳ−（２−グアニジノ−４−チアゾイル）−メチル−イソチオ尿素を含み；そしてより好ましくは、前記溶解試薬がＳ−（２−グアニジノ−４−チアゾイル）−メチル−イソチオ尿素、ビタミンＥ、サポニン、ＤＭＳＯ、トリトンＸ−１００およびｐＨ７．２〜７．４の緩衝液を含む、請求項４に記載のキット。
【請求項１２】
２種以上のプライマーセットが前記少なくとも１個のエクソンを増幅するために使用され、２種以上の標識プローブが前記少なくとも１個のエクソンを同定するために使用され、そして好ましくは：
（ａ）前記２種以上のプライマーセットがヒトＲＨＤ遺伝子の１個のエクソンを増幅するか、または
（ｂ）前記２種以上のプライマーセットがヒトＲＨＤ遺伝子の２個以上のエクソンを増幅する、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
被験体のＲｈＤ遺伝子型を判定する方法であって、前記方法は、
前記被験体由来の１つまたは複数の細胞を含む生物学的サンプルから核酸を抽出する工程、および
前記抽出された核酸においてＲＨＤ遺伝子の少なくとも３個のエクソンを検出する工程を含み、ここで、前記エクソンの有無から前記被験体のＲｈＤ遺伝子型が示され、ここで好ましくは：
（ａ）ＲＨＤ遺伝子の少なくとも３個のエクソンの前記検出が、前記少なくとも３個のエクソンを３種以上のプライマーセットで増幅する工程、および前記少なくとも３個のエクソンを３種以上の標識プローブで同定する工程を含むか、
（ｂ）前記少なくとも３個のエクソンが、好ましくはヒトＲＨＤ遺伝子のエクソン４、エクソン５、エクソン７およびエクソン１０からなる群より選択されるか、
（ｃ）ＲＨＤ遺伝子の４個のエクソンが、前記抽出された核酸において検出され；好ましくは、前記４個のエクソンがヒトＲＨＤ遺伝子のエクソン４、エクソン５、エクソン７およびエクソン１０であるか、ならびに／あるいは
（ｄ）前記被験体が胎児であり；そして好ましくは、前記生物学的サンプルが胎児細胞を含む母親の生物学的サンプルであり；そして最も好ましくは、前記方法が、前記抽出された核酸において胎児ＤＮＡの存在を確認する工程をさらに含み、そして必要に応じて：
ｉ．胎児ＤＮＡの存在を確認する前記工程がＹ染色体を検出する工程を含み、ここで好ましくは、前記Ｙ染色体が、前記Ｙ染色体上にある遺伝子を１種または複数種のプライマーセットで増幅する工程、および、前記遺伝子を１種または複数種の標識プローブで同定する工程により検出され；より好ましくは、前記Ｙ染色体上にある前記遺伝子がＳＲＹ、ＦＣＹおよびＤＡＺからなる群より選択されるか、または
ｉｉ．胎児ＤＮＡの存在を確認する前記工程が父系遺伝の対立遺伝子を検出する工程を含む、方法。
【請求項１４】
単離された核酸、各々がフォワードプライマーおよびリバースプライマーを含む、ＲＨＤ遺伝子の３個以上のエクソンを増幅するための３種以上のプライマーセット、ならびに３種以上の標識プローブを含む、試薬混合物であって、ここで好ましくは：
（ａ）前記３個以上のエクソンがヒトＲＨＤ遺伝子のエクソン４、エクソン５、エクソン７およびエクソン１０からなる群より選択され；より好ましくは：
（ｉ）前記３種以上のプライマーセットの前記フォワードプライマーが配列番号１、配列番号４、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３、配列番号１６、配列番号１９および配列番号２２からなる群より選択されるか、
（ｉｉ）前記３種以上のプライマーセットの前記リバースプライマーが配列番号２、配列番号５、配列番号８、配列番号１１、配列番号１４、配列番号１７、配列番号２０および配列番号２３からなる群より選択されるか、または
（ｉｉｉ）前記３種以上の標識プローブが配列番号３、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号１５、配列番号１８、配列番号２１および配列番号２４からなる群より選択されるか、
あるいは
（ｂ）前記混合物が、単離された核酸、ＲＨＤ遺伝子の４個のエクソンを増幅するための４種のプライマーセット、および４種の標識プローブを含み、ここで好ましくは前記４個のエクソンがヒトＲＨＤ遺伝子のエクソン４、エクソン５、エクソン７およびエクソン１０である、試薬混合物。