【手続補正書】
【提出日】平成26年11月5日(2014.11.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞を含む生物学的サンプルを染色するための自動化方法であって、
別個のヘマテイン溶液と媒染剤溶液を提供し；
別個のヘマテイン溶液と媒染剤溶液を混合することにより新鮮なヘマテイン−媒染剤溶液を調製し；及び
前記生物学的サンプルを、前記生物学的サンプル中の細胞の構造が染色される条件下で、前記新鮮なヘマテイン−媒染剤溶液と接触させることを含む自動化方法。
【請求項２】
前記ヘマテイン溶液と媒染剤溶液は、生物学的サンプルを接触させる前に、約４時間未満、３時間未満、２時間未満、１時間未満、４５分間未満、３０分未満、１０分未満、５分未満、１分未満、３０秒未満及び２０秒未満からなる群から選択される時間混合される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ヘマテイン溶液と媒染剤溶液は別個の溶液としてサンプルに適用され、生物学的サンプル上で混合され、新鮮なヘマテイン−媒染剤溶液を提供する、請求項１又は２の何れかに記載の方法。
【請求項４】
別個のヘマテイン溶液と媒染剤溶液の比率は、ヘマテイン−媒染剤溶液の少なくとも一特性を調整するように可変される、請求項１から３の何れかに記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも一特性が染色強度である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ヘマテイン媒染剤溶液中の媒染剤は、ヘマテイン媒染剤溶液中のヘマテインの濃度より高い濃度で存在する、請求項１から５の何れかに記載の方法。
【請求項７】
ヘマテイン媒染剤溶液中の媒染剤は、ヘマテイン媒染剤溶液中のヘマテインの濃度より低い濃度で存在する、請求項１から５の何れかに記載の方法。
【請求項８】
ヘマテイン媒染剤溶液中の、媒染剤に対するヘマトキシリンのモル比は、２：１と１：１００の間である、請求項１から５の何れかに記載の方法。
【請求項９】
ヘマテイン媒染剤溶液中の、媒染剤に対するヘマトキシリンのモル比は、1：５と１：２０の間である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ヘマテイン溶液が半酸化ヘマトキシリン溶液である、請求項１から９の何れかに記載の方法。
【請求項１１】
半酸化ヘマトキシリン溶液は、ヘマテイン溶液中の約５０％のヘマトキシリンを酸化するのに十分な量で酸化剤を含有する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
酸化剤は、化学酸化剤である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ヘマテイン溶液は化学酸化剤を含み、溶液中の、酸化剤に対するヘマトキシリンのモル比は、６：１と１：１の間である、請求項１から９の何れかに記載の方法。
【請求項１４】
化学酸化剤は、ヨウ素酸塩、酸化第二水銀、過マンガン酸塩、過ヨウ素酸塩、及び過酸化物からなる群から選択される、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
化学酸化剤は、ヨウ素酸ナトリウム、ヨウ素酸カリウム、過マンガン酸カリウム、過ヨウ素酸ナトリウム、過ヨウ素酸カリウム及び過酸化水素からなる群から選択され、好ましくは、化学酸化剤はヨウ素酸ナトリウムを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記媒染剤溶液が硫酸アルミニウムを含む、請求項１から１５の何れかに記載の方法。
【請求項１７】
前記生物学的サンプルがスライド上にマウントされる、請求項１から１６の何れかに記載の方法。
【請求項１８】
前記ヘマテイン溶液及び媒染剤溶液が低揮発性溶媒を含む、請求項１から１７の何れかに記載の方法。
【請求項１９】
前記低揮発性溶媒が、グリセロール、ポリエチレングリコール及びプロピレングリコールからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ヘマテイン溶液と媒染剤溶液が混合されて、ヘマテイン−媒染剤溶液を与えることができるように、第一容器と第二容器が混合容器に流体的に連結された、前記ヘマテイン溶液を含む前記第一容器と前記媒染剤溶液を含む前記第二容器と；
基体が基体ホルダーを占有するときに、前記ヘマテイン−媒染剤溶液が前記基体上にマウントされた生物学的サンプルに適用され得るように、混合容器と流体連通している前記基体ホルダーを含む、前記基体上にマウントされた前記生物学的サンプルを染色するシステム。
【請求項２１】
前記混合容器は第一容器と第二容器に流体的に連結されるチューブである、請求項２０に記載のシステム。
【請求項２２】
前記システムが自動化された、請求項２０又は２１の何れかに記載のシステム。
【請求項２３】
一以上の組織染色剤又は標識剤を含む付加的容器を更に含む、請求項２０から２２の何れかに記載のシステム。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
幾つかの実施態様において、本発明は、ヘマテイン溶液と媒染剤溶液が混合されて、ヘマテイン−媒染剤溶液を与えることができるように、第一容器と第二容器が混合容器に流体的に連結された、ヘマテイン溶液を含む第一容器と媒染剤溶液を含む第二容器；基体が基体ホルダーを占有するときに、ヘマテイン−媒染剤溶液が基体上にマウントされた生物学的サンプルに適用され得るように、混合容器と流体連通している基体ホルダーを含む、基体（ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）上にマウントされた生物学的サンプルを染色するためのシステムを提供する。幾つかの実施態様において、混合容器は第一容器と第二容器に流体的に連結されるチューブである。幾つかの実施態様において、システムは自動化されている。幾つかの実施態様において、システムは、一以上の組織染色剤又は標識化剤を含む付加的容器を更に包含する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
幾つかの実施態様において、本発明は、ヘマテイン溶液と媒染剤溶液が混合されて、ヘマテイン溶液と媒染剤溶液が基体上にマウントされたサンプルに適用できるようにディスペンサーに流体的に連結された、ヘマテイン溶液を含む第一容器と媒染剤溶液を含む第二容器；該基体が基体ホルダーを占有するときに、ヘマテイン−媒染剤溶液が基体上にマウントされた生物学的サンプルに適用され得るように、混合容器と流体連通している基体ホルダーを含む、基体上にマウントされた生物学的サンプルを染色するためのシステムを提供する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
用語「酸化剤」は、第二分子よりも大きい還元電位、例えば、ヘマトキシリンと反応しヘマテインへ酸化するように、ヘマトキシリンより大きい還元電位を有する原子又は分子を指す。酸化剤は、拡散してヘマトキシリンを酸化する、大気中に自然に生じる分子酸素、及びヘマトキシリンの少なくとも一部分をヘマテインに変換するために能動的にヘマトキシリンと（典型的には溶液中で）組み合わされる「化学酸化剤」を包含する。半酸化ヘマトキシリンの溶液は、本明細書において参照によりその全体が援用されるＧｉｌｌ，Ａｃｔａ Ｃｙｔｏｌｏｇｉｃａ，１８（４）：３００−１１（１９７４）に説明されるように、酸化剤が利用可能なヘマトキシリンのおよそ半分を酸化する量で含まれる溶液である。有用な化学酸化剤の例は、（ヨウ素酸ナトリウムおよびヨウ素酸カリウムのような）ヨウ素酸塩、酸化第二水銀、（過マンガン酸カリウムのような）過マンガン酸塩、（過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウムのような）過ヨウ素酸塩、及び（過酸化水素のような）過酸化物の１種若しくはそれ以上を包含する。特定の実施態様において、化学酸化剤はヨウ素酸ナトリウムを包含する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
組成物の幾つかの実施態様において利用される化学酸化剤の量は、ヘマトキシリンをヘマテインへ完全に酸化するのに十分であるか、又はヘマトキシリンをヘマテインへ部分的に酸化することのみに十分であり得る。特定に実施態様において、ヘマトキシリンの半分以上が化学酸化剤によりヘマテインへと酸化され、別においては、ヘマトキシリンの半分未満が化学酸化剤によりヘマテインへと酸化される。例えば、ヘマトキシリンの１％から５０％が化学酸化剤により酸化され得るが、より典型的には、約１０％から約５０％のヘマトキシリンが化学酸化剤により酸化される。特定の実施例において、組成物中で使用される酸化剤に対するヘマトキシリンのモル比は、６：１と１：１の間である。化学酸化剤は組成物の部分と考えられるものの、ヘマトキシリンとの反応の際にその還元生成物へと変換され、その還元生成物は組成物中に残存するままであろうことは理解されるべきである。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
組成物の媒染剤は、アルミニウム媒染剤、鉄媒染剤、ビスマス媒染剤、銅媒染剤、モリブデン媒染剤、バナジウム媒染剤、及びジルコニウム媒染剤の一又は複数など任意の媒染剤であって良い。幾つかの実施態様において、媒染剤はミョウバンを含み、より特定の実施例においては、媒染剤は、硫酸アルミニウムを含む。媒染剤は、（屈折率測定、薄層クロマトグラフィー又は分光法によって決定できる）組成物中のヘマテインの濃度より高い濃度で存在することができ、又は組成物中のヘマテインの濃度より低い濃度で存在することができる。あるいは、幾つかの実施態様において、組成物中で媒染剤に対するヘマトキシリンのモル比は、２：１と１：１００の間であり、特定の実施態様において、組成物中で媒染剤に対するヘマトキシリンのモル比は、１：５と１：２０の間である。