【誤訳訂正書】
【提出日】平成26年3月17日(2014.3.17)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
[0009]  （i）HCCと診断された患者から得られた腫瘍サンプル中のmiR-26発現レベルを検出する工程；（ii）腫瘍サンプル中のmiR-26発現レベルを対照と比較する工程；および（iii）その患者に対する治療方法を選択する工程；を含む、HCCと診断された患者を治療する方法をさらに提供し、ここでその患者について、対照と比較した場合、腫瘍サンプル中のmiR-26発現レベルが1/1.5倍またはそれ以下へ減少する場合にのみ、治療がIFN-α療法を含む。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
[00013]  特許または出願は、1またはそれ以上のカラー図面および／または1またはそれ以上の写真を含有してもよい。（1または複数の）カラー図面および／または（1または複数の）写真を含む本件特許または特許出願公開のコピーは、請求に応じてそして必要な費用の支払い基づいて、特許庁により提供される。
【図１】[00014]  図1A〜1D：雄性および雌性の肝細胞および腫瘍におけるmiR-26発現。  [00015]  図1A：マイクロアレイ解析により決定した、雌性（n＝30）および雄性（n＝194）の非-癌性肝組織におけるmiR-26a-1の発現レベル。非-対応t-検定を使用した。  [00016]  図1B：雌性事例（n＝26）および齢適合雄性G1およびG2事例（n＝56）由来のmiR-26aの相対発現レベルを、qRT-PCRにより決定した。非-対応t-検定を使用した。  [00017]  図1C：腫瘍中のmiR-26の状態により二分した場合の、224例の対応NT組織およびT組織の間のmiR-26a-1の相対レベルの比較。対応t-検定を使用した：低miR-26-1群からはp＜0.001；高miR-26-1群からはp＝0.23。図1A〜1Cにおけるデータは、疾患を有さない正常な肝臓プール（n＝8）に対して正規化したlog 2相対発現として、表現される。  [00018]  図1D：マイクロアレイ解析により決定された腫瘍中のmiR-26a-1発現レベル、および生存転帰。ログランク検定を使用し、そして中央値発現レベルをカットオフ値として使用した。低miR-26発現（n＝106）は、中央値（50th percentile）よりも低いものとして分類された（NTと比較してTにおいて平均1/2.69倍への減少）。高miR-26発現（n＝111）は、中央値（50th percentile）よりも高いものとして分類された（NTと比較してTにおいて平均1/0.98倍への減少）。
【図２−１】[00019]  図2A〜2C：低miR-26 HCCにおける特徴的な転写活性。  [00020]  図2A：11,580種の遺伝子の発現に基づく、224例のHCC症例の多次元スケールプロット。サンプルを中央値二分に基づいて低miR-26発現（青色または明色）または高miR-26発現（赤色または暗色）に着色する。  [00021]  図2B：低miR-26 HCC中で同時発現されるmRNAのベン図。
【図２−２】[00022]  図2C：低miR-26 HCCにおけるNFκB／IL-6シグナル伝達の遺伝子ネットワーク。低miR-26 HCCにおける亢進制御された遺伝子は、オレンジまたは明るい灰色で目立たせる。灰色で印刷した遺伝子は、顕著な遺伝子のリストには載っていないが、ネットワークに関連することが報告されている。実線および点線は、それぞれが直接的な相互作用および間接的な相互作用を示し、一方矢印は、遺伝子発現の正の制御を示す（すなわち、作用する）。線で繋いだ遺伝子は、結合のみを示す。詳細なネットワーク関連およびネットワーク形状は、図15に記載される。
【図３】[00023]  図3A〜3F：2種の予想される無作為化対照IFN治療施行（IFN試験コホート、n＝118；IFN検証コホート、n＝79）における、腫瘍におけるmiR-26a発現と生存の予後診断との関連性。  [00024]  図3A〜3B：miR-26a発現の、対照群由来のHCC患者（コホート2、パネル図3A；コホート3、パネル図3B）における全生存との関連性。コホート2：高miR-26a事例、n＝24；低miR-26a事例、n＝35。コホート3：高miR-26a事例、n＝21；低miR-26a事例、n＝19。  [00025]  図3C〜3D：IFNアジュバント療法の、低miR-26a発現を有するHCC患者における全生存との関連性。コホート2：IFN事例、n＝24；対照事例、n＝35. コホート3：IFN事例、n＝20；対照事例、n＝19。  [00026]  図3E〜3F：IFNアジュバント療法の、高miR-26a発現を有するHCC患者における全生存との関連性。コホート2：IFN事例、n＝35；対照事例、n＝24. コホート3：IFN事例、n＝19；対照事例、n＝21。
【図４Ａ】[00027]  図4A：表1 - コホート1およびコホート2についての被検体の臨床的特徴。
【図４Ｂ】[00028]  図4B：追加の表1 - INF試験についての被検体の臨床的特徴- コホート2およびコホート3。
【図４Ｃ】[00029]  図4C：追加の表2 - 性別関連microRNAについて検索するために使用した事例の臨床的特徴。
【図５Ａ】[00030]  図5A：表2 - HCCを有する被検体における、miR-26発現レベルおよび全生存の単変量および多変量のCox回帰分析。
【図５Ｂ】[00031]  図5B：表3 -低miR-26発現を有する被検体における、インターフェロン療法および全生存の単変量および多変量のCox回帰分析。
【図６−１】[00032]  図6A：追加の表3 - 8種の性別関連microRNA。
【図６−２】[00033]  図6B：表3 - INGENUITYTM経路解析に由来する、遺伝子ネットワークの上位20種のリスト。
【図６−３】[00033]  図6B：表3 - INGENUITYTM経路解析に由来する、遺伝子ネットワークの上位20種のリスト。
【図６−４】[00033]  図6B：表3 - INGENUITYTM経路解析に由来する、遺伝子ネットワークの上位20種のリスト。
【図６−５】[00033]  図6B：表3 - INGENUITYTM経路解析に由来する、遺伝子ネットワークの上位20種のリスト。
【図７】[00034]  図7A〜7F：検定コホート由来の雄性および雌性の肝臓組織および腫瘍における、miR-26発現の存在度。  [00035]  図7A：雌性（n＝30）および雄性（n＝194）の非-腫瘍肝組織における、miR-26a-2の発現レベル。  [00036]  図7A：miR-26の状態により二分された場合の、対応TおよびNTのあいだのmiR-26a-2の相対レベルの比較。中央値発現レベルを、カットオフ値として使用した。低miR-26発現は、中央値（50th percentile）よりも低いものとして分類された（NTと比較してTにおいて平均1/2.69倍への減少）。高miR-26発現は、中央値（50th percentile）よりも高いものとして分類された（NTと比較してTにおいて平均1/0.98倍への減少）。図7Aおよび図7Bにおけるデータは、マイクロアレイ解析により決定され、そして疾患を有さない正常な肝臓プール（n＝8）に対して正規化した、log 2相対発現として表現された。  [00037]  図7C：腫瘍および生存転帰におけるmiR-26a-2発現レベル。  [00038]  図7D〜7F：miR-26b発現状態による、図7A〜7Cにおけるのと同様の結果。
【図８】[00039]  図8：miR-26発現状態に基づく、サンプルの層化。HCCサンプルを、それらの平均的なmicroRNA発現（すなわち、miR-26a-1、miR-26a-2、およびmiR-26b）に基づいて、分類した。中央値発現を使用して、事例を、低miR-26（青色または明色）そして高miR-26（赤色または暗色）に分類した。各ドット（事例）の位置を、3種のmicroRNA発現レベル（miR-26a-1、miR-26a-2およびmiR-26b）により決定する。層化の転帰を使用して、MDSプロットを生成した。
【図９】[00040]  図9A-9B：HCCにおけるS100PおよびSLC2A6の発現およびマイクロアレイとqRT-PCRとの間のそれらの相関。qRT-PCR（左パネル）により決定した、低-miR-26レベルを有する10種のHCCにおけるおよび高miR-26レベルを有する10種のHCC事例におけるS100Pの発現レベル（図9A）およびSLC2A6の発現レベル（図9B）。qRT-PCR対マイクロアレイ由来のデータ間の直線回帰および相関が、r（スピアマン）および示されるp-値（右パネル）とともに示される。発現状態は、腫瘍（T）／非-腫瘍（NT）比として示される。
【図１０】[00041]  図10A〜10C：HCCにおけるmiR-26およびIL-6の発現。  [00042]  図10A：qRT-PCRにより決定される、82の対応腫瘍（T）および非-腫瘍組織（NT）におけるIL-6の発現レベル。TとNTとの間でのIL-6の示差的発現を調べるため、スチューデントのt-検定を行った。  [00043]  図10B〜10C：qRT-PCRにより決定された82の対応腫瘍および非-腫瘍組織における、IL-6とmiR-26a（B 図10B）またはmiR-26b（図10C）との間の発現レベルの相関。データは、log2スケールに対するT/NT比として示される。
【図１１】[00044]  図11：検証コホート由来の雄性および雌性の肝臓組織および腫瘍における、miR-26発現の存在度。雄性の非-腫瘍組織（左パネル）と比較して、雌性のより多い発現を有する腫瘍におけるmiR-26aの発現およびmiR-26bの発現の低下（右パネル）を、遡及的な無作為化臨床試行から独立した検証コホートにおいて、立証する。miR-26aおよびmiR-26bの発現レベルを、qRT-PCRにより測定した。P値は、非-対応t-検定に由来する。
【図１２】[00045]  図12A〜12F：腫瘍におけるmiR-26b発現の、IFNアジュバント療法についての2種の予想される無作為化対照試行における生存予後診断との関連性。  [00046]  図12A〜12B：miR-26b発現の、コホート2（図6A）またはコホート3（図12B）に由来する対照事例における全生存との関連性。コホート2：高miR-26b事例、n＝23；低miR-26b事例、n＝36。コホート3：高miR-26b事例、n＝21；低miR-26b事例、n＝19。  [00047]  図12C〜12D：IFNアジュバント療法の、低miR-26b発現を有するHCC患者における全生存との関連性。コホート2：IFN事例、n＝22；対照事例、n＝36。コホート3：IFN事例、n＝20；対照事例、 n＝19。  [00048]  図12E〜12F：IFNアジュバント療法の、高miR-26a発現を有するHCC患者における全生存との関連性。コホート2：IFN事例、n＝37；対照事例、n＝23。コホート3：IFN事例、n＝19；対照事例、n＝21。
【図１３】[00049]  図13：初代の新たに単離された肝細胞、hTERT-不死化正常肝細胞株HHT4、2種のHCC細胞株、および健康なドナー由来のPBMCを含む、様々な細胞種におけるqRT-PCRにより決定されたmiR-26の発現。
【図１４】[00050]  図14：HCCにおけるHGFの発現およびmiR-26との関連性。qRT-PCRにより決定された、低-miR-26レベルを有する10例のHCCにおけるHGFの発現レベルおよび高miR-26レベルを有する10例のHCC事例におけるHGFの発現レベル（左パネル）。qRT-PCR由来のHGFレベルとマイクロアレイ由来のmiR-26レベルとのあいだの直線回帰および相関を、r（スピアマン）および示されるp-値とともに示す（右パネル）。発現状態が、腫瘍（T）／非-腫瘍（NT）比として示される。
【図１５】[00051]  図15：経路解析において使用されるネットワーク関係性およびネットワーク形態の詳細な記載。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
[000125]  腫瘍サンプルにおけるmiR-26の発現は、（対照と比較した場合）例えば、腫瘍をIFN-αによる治療に対してより感受性にすること、腫瘍の増殖速度を変更すること、腫瘍を転移できる様にすることなど、表現型効果を付与するために十分な量減少する。理論により束縛されることを望まない一方、表現型効果は、miR-26により制御される異なる遺伝子発現により媒介されると考えられる。表現型効果は、1またはそれ以上のmiR-26の発現により制御された遺伝子の増加または減少であってもよい。いくつかの態様において、腫瘍サンプル中のmiR-26の発現は、1/1.1倍以下、1/1.2倍以下、1/1.3倍以下または1/1.4倍以下に減少する。一態様において、, 腫瘍サンプル中のmiR-26の発現は、対照と比較した場合、1/1.5倍以下に減少する。別の態様において、腫瘍サンプル中のmiR-26の発現は、対照と比較した場合、1/2倍以下に減少する。別の態様において、腫瘍サンプル中のmiR-26の発現は、対照と比較した場合、1/2.5倍以下に減少する。別の態様において、腫瘍サンプル中のmiR-26の発現は、対照と比較した場合、1/3倍以下に減少する。別の態様において、腫瘍サンプル中のmiR-26の発現は、対照と比較した場合、1/3.5倍以下に減少する。別の態様において、腫瘍サンプル中のmiR-26の発現は、対照と比較した場合、1/4倍以下に減少する。その他の態様において、腫瘍サンプルのmiR-26の発現は、1/5倍以下、1/6倍以下、1/7倍以下、1/8倍以下、1/9倍以下、または1/10倍以下に減少する。miR-26の発現を、検出することができ、そして当該技術分野において公知のいずれかの方法、例えばマイクロアレイおよびqRT-PCRなど（しかしそれらには限定されない）を使用して、定量する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６０】
[000129]  （i）HCCと診断された患者から得られた腫瘍サンプル中のmiR-26発現レベルを検出する工程；（ii）腫瘍サンプル中のmiR-26発現レベルを対照と比較する工程；そして（iii）HCCと診断された患者のための治療方法を選択する工程；を含み、ここでHCCと診断された患者が、対照と比較した場合、腫瘍サンプル中のmiR-26発現レベルの1.5倍またはそれ以下に減少する場合にのみ、治療がIFN-α療法を含む、HCCと診断された患者を治療する方法が、さらに提供される。いくつかの態様において、miR-26は、miR-26a-1、miR-26a-2、miR-26b、またはこれらの組合せである。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６３】
[000132]  本発明の方法のいくつかの態様において、腫瘍サンプル中でのmiR-26の発現は、1/2倍以下、1/2.5倍以下、1/3倍以下または1/4倍以下に減少する。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９０】
[000166]  対照と比較した場合、HCC腫瘍サンプル中において1またはそれ以上のmiR-26ファミリー構成成分の発現が低いことは、その患者ついて悪い予後診断を示唆し、そしてその患者をIFN-α補助療法に対するよい候補として同定する。本明細書中で使用される場合、“悪い予後診断”は、一般的に生存の低下を意味し、または言い換えると、死のリスクの増加またはしまでの時間の減少を意味する。悪い予後診断は、癌のその他の器官への広がりの増加（転移）など、疾患重症度の増加を意味することもできる。一態様において、miR-26の低発現は、対照と比較した場合、1/1.5倍以下への発現の減少により示される。その他の態様において、miR-26の低発現は、対照と比較した場合、1/2倍以下、1/2.5倍以下、1/3倍以下、1/3.5倍以下、または1/4倍以下へのmiR-26発現の減少により示される。