【手続補正書】
【提出日】平成24年3月2日(2012.3.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
亜硫酸の硫化物への変換を触媒しないMET10ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んだ酵母細胞と発酵培地とを接触させる段階を含む、発酵培地中のH2Sレベルを低減するための方法であって、該MET10ポリペプチドの662位のアミノ酸がAla、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Val、Trp、またはTyr (SEQ ID NO:5)である、方法。
【請求項２】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:34のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがLys、Arg、His、Gln、Asn、Glu、Asp、Ile、Leu、Val、Phe、Tyr、またはTrpである、請求項1記載の方法。
【請求項３】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:6のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがLys、Arg、His、Gln、またはAsnである、請求項1記載の方法。
【請求項４】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:7のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがリジンである、請求項1記載の方法。
【請求項５】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:1の核酸配列と少なくとも95%の配列同一性を共有する、請求項1記載の方法。
【請求項６】
検出可能なレベルのH2Sを有さない発酵産物が産生される、請求項1記載の方法。
【請求項７】
発酵産物が飲料である、請求項6記載の方法。
【請求項８】
発酵産物がワイン、ビール、シャンパン、ポルトおよびマディラからなる群より選択される、請求項7記載の方法。
【請求項９】
酵母細胞がサッカロマイセス・セレビシェ(Saccharomyces cerevisiae)細胞である、請求項1記載の方法。
【請求項１０】
酵母細胞が、プリーズ・ド・ムース(Prise de Mousse)、プルミエ・キュヴェ(Premier Cuvee)、フレンチ・レッド(French Red)、モンラッシェ(Montrachet)、ラレマンK1(Lallemand K1)、ボルドー(Bordeaux)、UCD522、UCD940、Ba25、Ba126、Ba137、Ba220、Bb23、Bb25、Ba30、Bb32、Bb19、およびBb22からなる群より選択されるワイン酵母株である、請求項9記載の方法。
【請求項１１】
発酵培地が飲料である、請求項1記載の方法。
【請求項１２】
発酵培地が、果汁、マストおよび麦汁からなる群より選択される、請求項11記載の方法。
【請求項１３】
発酵培地がブドウ果汁マストである、請求項12記載の方法。
【請求項１４】
亜硫酸の硫化物への変換を触媒しないMET10ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んだ発現ベクターであって、該MET10ポリペプチドの662位のアミノ酸がAla、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Val、Trp、またはTyr (SEQ ID NO:5)であり、かつ該ポリヌクレオチドが発現制御配列に機能的に連結された、発現ベクター。
【請求項１５】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:34のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがLys、Arg、His、Gln、Asn、Glu、Asp、Ile、Leu、Val、Phe、Tyr、またはTrpである、請求項14記載の発現ベクター。
【請求項１６】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:6のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがLys、Arg、His、Gln、またはAsnである、請求項14記載の発現ベクター。
【請求項１７】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:7のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがリジンである、請求項14記載の発現ベクター。
【請求項１８】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:1の核酸配列と少なくとも95%の配列同一性を共有する、請求項14記載の発現ベクター。
【請求項１９】
請求項14記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項２０】
酵母細胞である、請求項19記載の宿主細胞。
【請求項２１】
サッカロマイセス・セレビシェ細胞である、請求項19記載の宿主細胞。
【請求項２２】
亜硫酸の硫化物への変換を触媒しないMET10ポリペプチドをコードする外因性ポリヌクレオチドを含む、硫化水素を産生しない改良された酵母細胞であって、該MET10ポリペプチドの662位のアミノ酸がAla、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Val、Trp、またはTyr (SEQ ID NO:5)であり、該改良された酵母細胞の親細胞が硫化水素を産生する、改良された酵母細胞。
【請求項２３】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:34のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがLys、Arg、His、Gln、Asn、Glu、Asp、Ile、Leu、Val、Phe、Tyr、またはTrpである、請求項22記載の酵母細胞。
【請求項２４】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:6のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがLys、Arg、His、Gln、またはAsnである、請求項22記載の酵母細胞。
【請求項２５】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:7のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがリジンである、請求項22記載の酵母細胞。
【請求項２６】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:1の核酸配列と少なくとも95%の配列同一性を共有する、請求項22記載の酵母細胞。
【請求項２７】
サッカロマイセス・セレビシェ細胞である、請求項22記載の酵母細胞。
【請求項２８】
プリーズ・ド・ムース、プルミエ・キュヴェ、フレンチ・レッド、モンラッシェ、ラレマンK1、ボルドー、UCD522、UCD940、Ba25、Ba126、Ba137、Ba220、Bb23、Bb25、Ba30、Bb32、Bb19、およびBb22からなる群より選択されるワイン酵母株である、請求項27記載の酵母細胞。
【請求項２９】
亜硫酸の硫化物への変換を触媒しないMET10ポリペプチドをコードする外因性ポリヌクレオチドを含んだ酵母細胞の集団を含む、低減したレベルの硫化水素を産生する改良された酵母細胞培養物であって、該MET10ポリペプチドの662位のアミノ酸がAla、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Val、Trp、またはTyr (SEQ ID NO:5)であり、該改良された酵母細胞培養物が、親細胞の培養物と比較して低減した硫化水素を産生する、改良された酵母細胞培養物。
【請求項３０】
検出可能なレベルの硫化水素を産生しない、請求項29の酵母細胞培養物。
【請求項３１】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:34のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがLys、Arg、His、Gln、Asn、Glu、Asp、Ile、Leu、Val、Phe、Tyr、またはTrpである、請求項29記載の酵母細胞培養物。
【請求項３２】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:6のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがLys、Arg、His、Gln、またはAsnである、請求項29記載の酵母細胞培養物。
【請求項３３】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:7のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがリジンである、請求項29記載の酵母細胞培養物。
【請求項３４】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:1の核酸配列と少なくとも95%の配列同一性を共有する、請求項29記載の酵母細胞培養物。
【請求項３５】
酵母細胞の集団がサッカロマイセス・セレビシェ細胞を含む、請求項29記載の酵母細胞培養物。
【請求項３６】
酵母細胞の集団が、プリーズ・ド・ムース、プルミエ・キュヴェ、フレンチ・レッド、モンラッシェ、ラレマンK1、ボルドー、UCD522、UCD940、Ba25、Ba126、Ba137、Ba220、Bb23、Bb25、Ba30、Bb32、Bb19、およびBb22からなる群より選択されるワイン酵母株由来である、請求項29記載の酵母細胞培養物。
【請求項３７】
請求項22記載の酵母細胞または請求項29記載の酵母細胞培養物を含む、発酵培地。
【請求項３８】
飲料である、請求項37記載の発酵培地。
【請求項３９】
果汁、マスト、麦汁からなる群より選択される、請求項38記載の発酵培地。
【請求項４０】
ブドウ果汁マストである、請求項39記載の発酵培地。
【請求項４１】
請求項22記載の酵母細胞または請求項29記載の酵母細胞培養物を含む、発酵産物。
【請求項４２】
飲料である、請求項41記載の発酵産物。
【請求項４３】
ワイン、ビール、シャンパン、ポルトおよびマディラからなる群より選択される、請求項42記載の発酵産物。
【請求項４４】
亜硫酸の硫化物への変換を触媒しない硫化物不活性のMET10ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを酵母細胞の親細胞に導入することにより、硫化物活性のMET10ポリペプチドをコードする内因性ポリヌクレオチドを、硫化物不活性のMET10ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと置き換える段階を含む、低減したレベルの硫化水素を産生する改良された酵母細胞を産生する方法であって、該硫化物不活性のMET10ポリペプチドの662位のアミノ酸がAla、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Val、Trp、またはTyr (SEQ ID NO:5)であり、該改良された酵母細胞の親細胞が硫化水素を産生する、方法。
【請求項４５】
硫化物不活性のMET10ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが組換えにより導入される、請求項44記載の方法。
【請求項４６】
硫化物不活性のMET10ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが戻し交雑により導入される、請求項44記載の方法。
【請求項４７】
改良された酵母細胞が検出可能なレベルの硫化水素を産生しない、請求項44記載の方法。
【請求項４８】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:34のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがLys、Arg、His、Gln、Asn、Glu、Asp、Ile、Leu、Val、Phe、Tyr、またはTrpである、請求項44記載の方法。
【請求項４９】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:6のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがLys、Arg、His、Gln、またはAsnである、請求項44記載の方法。
【請求項５０】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:7のMET10ポリペプチドをコードし、662位のXがリジンである、請求項44記載の方法。
【請求項５１】
ポリヌクレオチドがSEQ ID NO:1を含む、請求項44記載の方法。