【手続補正書】
【提出日】平成24年9月11日(2012.9.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物において骨成長を促進するための移植組成物を調製する方法であって、該方法は（ａ）単離された幹細胞を１種または複数の活性剤と２４時間以下の間接触させて、活性化幹細胞を調製するステップ、（ｂ）該活性化幹細胞から該活性剤を分離して、活性剤を実質的に含まない活性化幹細胞集団を形成するステップ、および（ｃ）活性剤を実質的に含まない該活性化幹細胞集団と骨移植片代用物とを混合することにより、哺乳動物において骨成長を促進する移植組成物を調製するステップを含み、少なくとも１種の活性剤が、幹細胞の骨形成原細胞または骨形成前駆細胞への分化を促進する、方法。
【請求項２】
前記幹細胞を１種または複数の活性剤と５分間から１時間接触させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記幹細胞を１種または複数の活性剤と５分間から０．５時間接触させる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記幹細胞が、骨髄、脂肪組織、筋肉組織、臍帯血、胚卵黄嚢、胎盤、臍帯、骨膜、胎児の皮膚、青年の皮膚または血液に由来する、請求項１から３までのいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記幹細胞が、自家、同種異系または異種である、請求項１から４までのいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記幹細胞が、胚性、生後または成体の幹細胞である、請求項１から５までのいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記幹細胞が、間葉幹細胞を含む、請求項１から６までのいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記幹細胞が、自家骨髄穿刺液を含む、請求項１から４までのいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記骨髄穿刺液が、手術中に取り出されたものである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記骨髄穿刺液中の細胞が、単離または濃縮される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記活性剤が、細胞の増殖および／または分化を調節でき、小分子、ペプチド、増殖因子、サイトカイン、リガンド、ホルモンおよびそれらの組合せからなる群より選択される、請求項１から１０までのいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記活性剤が、トランスホーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）、インターロイキン−Ｉ（ＩＬ−Ｉ）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、シンバスタチン、デキサメタゾン、オキシステロール、ソニックヘッジホッグ、インターフェロン、腫瘍壊死因子、神経増殖因子（ＮＧＦ）、フィブロネクチン、ＲＧＤペプチド、インテグリン、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子、骨原性タンパク質、およびそれらの組合せからなる群より選択される、請求項１から１１までのいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記活性剤が、ＢＭＰ−２、ＴＧＦ−β３、ＰＳＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＦＧＦ−２、ＴＧＦ−β１、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−７、ＢＭＰ−６、ＦＧＦ−８、ＩＬ−１１、シンバスタチン、デキサメタゾン、オキシステロール、ソニックヘッジホッグ、およびそれらの組合せからなる群より選択される、請求項１から１２までのいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記活性剤が、ＴＧＦ−βおよびＦＧＦｂを含む、請求項１から１３までのいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記活性剤が、ＰＤＧＦを含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記活性剤が、溶液中にある、請求項１から１５までのいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記活性剤が、固体支持体に結合されている、請求項１から１５までのいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記活性剤の少なくとも一部は、ペプチド、抗体、化学架橋剤またはそれらの組合せを介して、固体支持体に結合されている、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記活性化幹細胞が、ろ過、ゲルろ過、接線流ろ過、免疫沈降、免疫吸収、アフィニティクロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィー、またはそれらの組合せを含む手順によって、前記活性剤から分離される、請求項１から１８までのいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
前記骨移植片代用物が、カルシウム塩を含む、請求項１から１９までのいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記カルシウム塩が、リン酸一カルシウム一水和物、α−リン酸三カルシウム、β−リン酸三カルシウム、炭酸カルシウム、またはそれらの組合せを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記骨移植片代用物が、脱灰骨、リン酸ナトリウム塩、ポリマー、またはそれらの組合せを更に含む、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ポリマーが、コラーゲン、ゼラチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、キサンタンガム、ガーガム、アルギネート、またはそれらの組合せである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記幹細胞においてアルカリホスファターゼおよび／または骨形成タンパク質（ＢＭＰ）受容体サブユニットの発現を増加させる、請求項１から２３までのいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
請求項１から２４までのいずれかの方法により調製された移植組成物。
【請求項２６】
前記移植組成物が患者に移植されるものであることをさらに特徴とする、請求項２５に記載の移植組成物。
【請求項２７】
被験体における骨の損傷、障害または状態を処置するための請求項２５に記載の移植組成物であって、該移植組成物は、該被験体における骨の損傷、障害または状態の部位へ投与されるものであることを特徴とする、移植組成物。
【請求項２８】
前記骨の損傷、障害または状態が、骨折、骨欠陥、骨移植、骨移植片、骨癌、関節置換、関節修復、骨癒合、骨面修復、骨変性、歯科インプラント、歯の修復、関節炎、骨再建、またはそれらの組合せを含む、請求項２７に記載の移植組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
幾つかの実施形態では、該方法は、刺激した間葉幹細胞を患者に移植するステップを更に含み、そのステップは、幹細胞源と共に活性剤を移植することを含んでもよい。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
哺乳動物において骨成長を促進するための移植組成物を調製する方法であって、該方法は（ａ）幹細胞を１種または複数の活性剤と２４時間以下の間接触させて、活性化幹細胞を調製するステップ、（ｂ）該活性化幹細胞から該活性剤を分離して、活性剤を実質的に含まない活性化幹細胞集団を形成するステップ、および（ｃ）活性剤を実質的に含まない該活性化幹細胞集団と骨移植片代用物とを混合することにより、哺乳動物において骨成長を促進する移植組成物を調製するステップを含み、少なくとも１種の活性剤が、幹細胞の骨形成原細胞または骨形成前駆細胞への分化を促進する、方法。
（項目２）
前記幹細胞を１種または複数の活性剤と５分間から１時間接触させる、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記幹細胞を１種または複数の活性剤と５分間から０．５時間接触させる、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記幹細胞が、骨髄、脂肪組織、筋肉組織、臍帯血、胚卵黄嚢、胎盤、臍帯、骨膜、胎児の皮膚、青年の皮膚または血液に由来する、項目１から３までのいずれかに記載の方法。
（項目５）
前記幹細胞が、自家、同種異系または異種である、項目１から４までのいずれかに記載の方法。
（項目６）
前記幹細胞が、胚性、生後または成体の幹細胞である、項目１から５までのいずれかに記載の方法。
（項目７）
前記幹細胞が、間葉幹細胞を含む、項目１から６までのいずれかに記載の方法。
（項目８）
前記幹細胞が、自家骨髄穿刺液を含む、項目１から４までのいずれかに記載の方法。
（項目９）
前記骨髄穿刺液が、手術中に取り出される、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記骨髄穿刺液中の細胞が、単離または濃縮される、項目８に記載の方法。
（項目１１）
前記活性剤が、細胞の増殖および／または分化を調節でき、小分子、ペプチド、増殖因子、サイトカイン、リガンド、ホルモンおよびそれらの組合せからなる群より選択される、項目１から１０までのいずれかに記載の方法。
（項目１２）
前記活性剤が、トランスホーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）、インターロイキン−Ｉ（ＩＬ−Ｉ）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、シンバスタチン、デキサメタゾン、オキシステロール、ソニックヘッジホッグ、インターフェロン、腫瘍壊死因子、神経増殖因子（ＮＧＦ）、フィブロネクチン、ＲＧＤペプチド、インテグリン、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子、骨原性タンパク質、およびそれらの組合せからなる群より選択される、項目１から１１までのいずれかに記載の方法。
（項目１３）
前記活性剤が、ＢＭＰ−２、ＴＧＦ−β３、ＰＳＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＦＧＦ−２、ＴＧＦ−β１、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−７、ＢＭＰ−６、ＦＧＦ−８、ＩＬ−１１、シンバスタチン、デキサメタゾン、オキシステロール、ソニックヘッジホッグ、およびそれらの組合せからなる群より選択される、項目１から１２までのいずれかに記載の方法。
（項目１４）
前記活性剤が、ＴＧＦ−βおよびＦＧＦｂを含む、項目１から１３までのいずれかに記載の方法。
（項目１５）
前記活性剤が、ＰＤＧＦを含む、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記活性剤が、溶液中にある、項目１から１５までのいずれかに記載の方法。
（項目１７）
前記活性剤が、固体支持体に結合されている、項目１から１５までのいずれかに記載の方法。
（項目１８）
前記活性剤の少なくとも一部は、ペプチド、抗体、化学架橋剤またはそれらの組合せを介して、固体支持体に結合されている、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記活性化幹細胞が、ろ過、ゲルろ過、接線流ろ過、免疫沈降、免疫吸収、アフィニティクロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィー、またはそれらの組合せを含む手順によって、前記活性剤から分離される、項目１から１８までのいずれかに記載の方法。
（項目２０）
前記骨移植片代用物が、カルシウム塩を含む、項目１から１９までのいずれかに記載の方法。
（項目２１）
前記カルシウム塩が、リン酸一カルシウム一水和物、α−リン酸三カルシウム、β−リン酸三カルシウム、炭酸カルシウム、またはそれらの組合せを含む、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記骨移植片代用物が、脱灰骨、リン酸ナトリウム塩、ポリマー、またはそれらの組合せを更に含む、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２３）
前記ポリマーが、コラーゲン、ゼラチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸塩、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、キサンタンガム、ガーガム、アルギネート、またはそれらの組合せである、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記幹細胞においてアルカリホスファターゼおよび／または骨形成タンパク質（ＢＭＰ）受容体サブユニットの発現を増加させる、項目１から２３までのいずれかに記載の方法。
（項目２５）
患者に前記移植組成物を移植するステップを更に含む、項目１から２４までのいずれかに記載の方法。
（項目２６）
項目１から２５までのいずれかの方法により調製された移植組成物。
（項目２７）
被験体における骨の損傷、障害または状態を処置するための方法であって、該被験体における骨の損傷、障害または状態の部位へ、項目２６に記載の移植組成物を投与することを含む、方法。
（項目２８）
前記骨の損傷、障害または状態が、骨折、骨欠陥、骨移植、骨移植片、骨癌、関節置換、関節修復、骨癒合、骨面修復、骨変性、歯科インプラント、歯の修復、関節炎、骨再建、またはそれらの組合せを含む、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
固体支持体と、幹細胞の骨形成原細胞または骨形成前駆細胞への分化を促進する少なくとも１種の活性剤とを含む、幹細胞を活性化するためのデバイスであって、（ｉ）該幹細胞を少なくとも１種の該活性剤と共にインキュベートするため、および（ｉｉ）インキュベートするステップ（ｉ）の後、少なくとも１種の該活性剤を該幹細胞から分離するために、適合しているデバイス。
（項目３０）
少なくとも１種の前記活性剤が、トランスホーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）、インターロイキン−Ｉ（ＩＬ−Ｉ）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、シンバスタチン、デキサメタゾン、オキシステロール、ソニックヘッジホッグ、インターフェロン、腫瘍壊死因子、神経増殖因子（ＮＧＦ）、フィブロネクチン、ＲＧＤペプチド、インテグリン、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子、骨原性タンパク質、およびそれらの組合せからなる群より選択される、項目２９に記載のデバイス。
（項目３１）
少なくとも１種の前記活性剤が、ＢＭＰ−２、ＴＧＦ−β３、ＰＳＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＦＧＦ−２、ＴＧＦ−β１、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−７、ＢＭＰ−６、ＦＧＦ−８、ＩＬ−１１、シンバスタチン、デキサメタゾン、オキシステロール、ソニックヘッジホッグ、およびそれらの組合せからなる群より選択される、項目２９または３０に記載のデバイス。
（項目３２）
少なくとも１種の前記活性剤が、ＴＧＦ−βおよびＦＧＦｂを含む、項目２９、３０または３１に記載のデバイス。
（項目３３）
少なくとも１種の前記活性剤が、ＰＤＧＦを更に含む、項目３２に記載のデバイス。
（項目３４）
少なくとも１種の前記活性剤が、溶液中にある、項目２９から３３までのいずれかに記載のデバイス。
（項目３５）
少なくとも１種の前記活性剤が、前記固体支持体に結合している、項目２９から３３までのいずれかに記載のデバイス。
（項目３６）
前記固体支持体が、カラムマトリックス材料、フィルター、培養用のプレート、チューブもしくは皿、フラスコ、マイクロタイタープレート、ビーズ、ディスク、またはそれらの組合せを含む、項目２９から３５までのいずれかに記載のデバイス。
（項目３７）
前記固体支持体が、プラスチック、セルロース、セルロース誘導体、磁気粒子、ニトロセルロース、ガラス、グラスファイバー、ラテックス、またはそれらの組合せを含む、項目２９から３６までのいずれかに記載のデバイス。
（項目３８）
前記固体支持体が、少なくとも１種の前記活性剤を除去するために、親和性マトリックスを含む、項目２９から３７までのいずれかに記載のデバイス。
（項目３９）
前記固体支持体が、少なくとも１種の活性剤に結合する、ストレプトアビジン、ビオチン、架橋剤、抗体またはペプチドを含む、項目２９から３８までのいずれかに記載のデバイス。
（項目４０）
前記固体支持体が、容器を含む、項目２９から３９までのいずれかに記載のデバイス。
（項目４１）
前記固体支持体が、フィルターを含む、項目２９から４０までのいずれかに記載のデバイス。
（項目４２）
前記フィルターが、細胞および骨移植片代用物材料を保持するが、少なくとも１種の前記活性剤を通過させる、項目４１に記載のデバイス。
（項目４３）
前記フィルターが、少なくとも１種の前記活性剤を保持するが、前記幹細胞を通過させる、項目４１に記載のデバイス。
（項目４４）
前記固体支持体材料が、幹細胞と結合することも、幹細胞に対して有害な相互作用をすることもしない、項目２９から４３までのいずれかに記載のデバイス。
（項目４５）
前記幹細胞が、骨髄、脂肪組織、筋肉組織、臍帯血、胚卵黄嚢、胎盤、臍帯、骨膜、胎児の皮膚、青年の皮膚、または血液に由来する、項目２９から４４までのいずれかに記載のデバイス。
（項目４６）
前記幹細胞が、間葉幹細胞を含む、項目２９から４５までのいずれかに記載のデバイス。
（項目４７）
前記幹細胞が、自家骨髄穿刺液を含む、項目２９から４６までのいずれかに記載のデバイス。
（項目４８）
少なくとも１種の前記活性剤と共に前記幹細胞をインキュベートする時間を制御するために、タイマーを更に備える、項目２９から４７までのいずれかに記載のデバイス。
（項目４９）
前記タイマーが、インキュベートするステップ（ｉ）の後に、前記幹細胞から少なくとも１種の前記活性剤を分離することを誘発する、項目４８に記載のデバイス。
（項目５０）
前記タイマーが、少なくとも１種の前記活性剤と共に前記幹細胞をインキュベートする時間を２４時間以下に制御する、項目４８に記載のデバイス。
（項目５１）
前記タイマーが、少なくとも１種の前記活性剤と共に前記幹細胞をインキュベートする時間を５分間から１時間に制御する、項目４８に記載のデバイス。
（項目５２）
前記タイマーが、少なくとも１種の前記活性剤と共に前記幹細胞をインキュベートする時間を５分間から０．５時間に制御する、項目４８に記載のデバイス。