【手続補正書】
【提出日】平成25年12月9日(2013.12.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本願明細書中に記載の発明。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８４】
第ＶＩＩＩ抗体の存在は、トロンボエラストグラムにおける特性変化の原因となるので、本発明のさらなる態様では、請求項記載のトロンボモジュリン類似体を使用して、血友病患者を第ＶＩＩＩ因子抗体の存在についてスクリーニングすることができる（図１１Ａ対図１２Ａ参照）。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
トロンビンに結合するとＴＭＥＭ３３８Ｌと比較して低減された補因子活性を有するトロンボモジュリン類似体であって、
ａ．）配列番号２に記載のアミノ酸配列、または
ｂ）配列番号３に記載のアミノ酸配列、または
ｃ）配列番号４に記載のアミノ酸配列、または
ｄ）配列番号２、配列番号３もしくは配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、さらに好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列、または
ｅ）配列番号２、配列番号３もしくは配列番号４の６個のＥＧＦ様リピートドメイン（配列番号１において番号付けした場合のアミノ酸位置２２７から４６２）、配列番号２、配列番号３もしくは配列番号４のＥＧＦ様リピートドメイン３からＥＧＦ様リピートドメイン６（配列番号１において番号付けした場合のアミノ酸位置３０７から４６２）または配列番号２、配列番号３もしくは配列番号４のＥＧＦ様リピートドメイン３のｃループからＥＧＦ様リピートドメイン６（配列番号１において番号付けした場合のアミノ酸位置３３３から４６２）から本質的になるトロンボモジュリンフラグメント
を有するが、
位置３７６（配列番号１に従って番号付けした場合）におけるフェニルアラニンが欠失されているか、グリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシンによって置換されている、
トロンボモジュリン類似体。
（項目２）
位置３８７（配列番号１において番号付けした場合）におけるグルタミン残基の欠失または置換をさらに含むが、該置換が、好ましくは、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｔｒ、Ｔｙｒ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｈｅ、Ａｓｐ、Ｃｙｓで置換されている、項目１に記載のトロンボモジュリン。
（項目３）
位置３８８（配列番号において番号付けした場合）におけるメチオニン残基の欠失または置換をさらに含むが、該メチオニン残基が、好ましくは、Ｇｌｎ、Ｔｙｒ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｐｒｏ、Ｖａｌ、Ｔｈｒ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、Ｔｒｐ、Ａｓｎ、Ｌｙｓ、Ｇｌｙ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｃｙｓで置換されている、項目１または２に記載のトロンボモジュリン。
（項目４）
位置３８９（配列番号１において番号付けした場合）におけるフェニルアラニン残基の欠失または置換をさらに含むが、該フェニルアラニンが、好ましくは、Ｖａｌ、Ｇｌｕ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｔｙｒ、Ｇｌｙ、Ｃｙｓ、Ｐｒｏで置換されている、上記項目のいずれかに記載のトロンボモジュリン。
（項目５）
表４に示すような１つ以上の第一および第二のアミノ酸の改変を含む、前記項目のいずれかに記載のトロンボモジュリン。
（項目６）
表５に示すような１つ以上の第一、第二および第三のアミノ酸の改変を含む、前記項目のいずれかに記載のトロンボモジュリン。
（項目７）
ａ）ＴＭ類似体が、上記項目のうちの一項に記載のとおり定義される、または
ｂ）前記ＴＭ類似体が、治療有効投薬量で抗線溶効果を呈示することを特徴とする、
線溶亢進を伴う凝固障害の処置のための医薬品の製造のためのトロンボモジュリン類似体の使用。
（項目８）
前記トロンボモジュリン類似体が、以下の特徴：
（ｉ）ウサギ肺トロンボモジュリンと比較して減少される、トロンビンへの結合親和性、および／もしくは０．２ｎＭより大きいｋＤ値を有するトロンビンへの結合親和性、ならびに／または
（ｉｉ）ＴＭ類似体ＴＭＥＭ３８８Ｌの補因子活性と比較して低減された補因子活性、
（ｉｉｉ）ＴＭ類似体ＴＭＥＭ３８８Ｌと比較して増加された、ＴＡＦＩ活性化活性の補因子活性に対する比、
のうちの１つ以上を呈示する、項目７に記載の使用。
（項目９）
前記線溶亢進を伴う凝固障害が、次のとおりの疾患の群：血友病Ａ、血友病Ｂ、血友病Ｃ、フォン・ヴィレブランド病（ｖＷＤ）、後天性フォン・ヴィレブランド病、第Ｘ因子欠乏症、パラ血友病、第Ｉ、ＩＩ、ＶまたはＶＩＩクロッティング因子の遺伝性障害、循環抗凝血素による出血性障害または後天性凝固不全、から選択される、項目７または８に記載の使用。
（項目１０）
前記トロンボモジュリン類似体が、頭蓋内または他のＣＮＳ出血、関節、微小毛細血管、筋肉、胃腸管、呼吸器管、腹膜後腔または軟組織における出血からなる群より選択される出血事象のうちの１つ以上を処置するために使用される、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目１１）
患者が抗第ＶＩＩＩ因子抗体を有する、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目１２）
前記患者が、第ＶＩＩＩ因子、好ましくは組換え第ＶＩＩＩ因子または組換えＢドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子分子、さらに好ましくはオクトコグ・アルファまたはモロクトコグ・アルファで処置される、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目１３）
前記トロンボモジュリン類似体が、第ＶＩＩＩ因子、好ましくは組換え第ＶＩＩＩ因子、組換えＢドメイン欠失第ＶＩＩＩ因子分子、さらに好ましくはオクトコグ・アルファまたはモロクトコグ・アルファとの組み合わせで与えられることを特徴とする、線溶亢進を伴う凝固障害の処置のための上記項目のいずれかに記載のトロンボモジュリン類似体の使用。
（項目１４）
前記患者が、第ＶＩＩＩ因子、好ましくは組換え第ＶＩＩＩ因子、さらに好ましくはオクトコグ・アルファで処置される、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目１５）
前記トロンボモジュリン類似体が、出血エピソードの時点で投与される、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目１６）
前記トロンボモジュリン類似体が、出血リスク上昇（例えば外科手術または抜歯）に先立って投与される、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目１７）
前記トロンボモジュリン類似体が、輸血／血漿輸血または凝固因子補充療法に抗治性がある患者に投与される、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目１８）
前記トロンボモジュリン類似体が、多回投与で、好ましくは合計１週間未満から４週間の期間にわたって１日１回、２日に１回、または３日、４日、５日、６日もしくは７日ごとに、さらに好ましくは長期投与として、投与される、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目１９）
前記トロンボモジュリン類似体が、非経口適用として、好ましくは静脈内または皮下適用
として与えられる、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目２０）
前記トロンボモジュリン類似体が、可溶性ＴＭ類似体である、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目２１）
前記トロンボモジュリン類似体が、ヒト可溶性ＴＭ類似体である、項目２０に記載の使用。
（項目２２）
前記トロンボモジュリン類似体が、ＥＧＦ３、ＥＧＦ４、ＥＧＦ５、ＥＧＦ６を含有する、好ましくはフラグメントＥＧＦ３〜ＥＧＦ６を含む、およびさらに好ましくはＥＧＦドメイン１〜６を含む、群から選択される少なくとも１つの構造ドメインを含む、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目２３）
前記トロンボモジュリン類似体が、ＥＧＦドメインＥＧＦ１からＥＧＦ６からなる、およびさらに好ましくはＥＧＦドメインＥＧＦ３からＥＧＦ６からなる、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目２４）
前記トロンボモジュリン類似体が、成熟トロンボモジュリンのアミノ酸配列（配列番号１または配列番号３に示す）に対応するアミノ酸配列を有し、ならびに次の改変：
ａ）アミノ酸１〜３の除去
ｂ）Ｍ３８８Ｌ
ｃ）Ｒ４５６Ｇ
ｄ）Ｈ４５７Ｑ
ｅ）Ｓ４７４Ａ、およびＰ４９０での終結
のうちの１つ以上を含む、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目２５）
前記トロンボモジュリン類似体が、配列番号２と少なくとも８５％、または少なくとも９０％もしくは９５％配列同一性の配列を含むアミノ酸配列を有する、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目２６）
前記トロンボモジュリン類似体が、天然配列の（配列番号１または配列番号３に従う）
ａａ）３４９Ａｓｐ；
ｂｂ）３５５Ａｓｎ；
ａｃ）３５７Ｇｌｕ；
ａｄ）３５８Ｔｙｒ；
ａｅ）３５９Ｇｌｎ；
ａｆ）３６１Ｇｌｎ；
ａｇ）３６３Ｌｅｕ；
ａｈ）３６４Ａｓｎ；
ａｉ）３６８Ｔｙｒ；
ａｊ）３７１Ｖａｌ；
ａｋ）３７４Ｇｌｕ；
ａｌ）３７６Ｐｈｅ；
ａｍ）３８４Ｈｉｓ；
ａｎ）３８５Ａｒｇ；
ｂａ）３８７Ｇｌｎ；
ｂｂ）３８９Ｐｈｅ；
ｂｃ）３９８Ａｓｐ；
ｂｄ）４００Ａｓｐ；
ｂｅ）４０２Ａｓｎ；
ｂｆ）４０３Ｔｈｒ；
ｂｇ）４０８Ｇｌｕ；
ｂｈ）４１１Ｇｌｕ；
ｂｉ）４１３Ｔｙｒ；
ｂｊ）４１４Ｉｌｅ；
ｂｋ）４１５Ｌｅｕ；
ｂｌ）４１６Ａｓｐ；
ｂｍ）４１７Ａｓｐ；
ｂｎ）４２０Ｉｌｅ；
ｂｏ）４２３Ａｓｐ；
ｂｐ）４２４Ｉｌｅ；
ｂｑ）４２５Ａｓｐ；
ｂｒ）４２６Ｇｌｕ；
ｃａ）４２８Ｇｌｕ；
ｃｂ）４２９Ａｓｐ；
ｃｃ）４３２Ｐｈｅ；
ｃｄ）４３４Ｓｅｒ；
ｃｅ）４３６Ｖａｌ；
ｃｆ）４３８Ｈｉｓ；
ｃｇ）４３９Ａｓｐ；
ｃｈ）４４０Ｌｅｕ；
ｃｉ）４４３Ｔｈｒ；
ｃｊ）４４４Ｐｈｅ；
ｃｋ）４４５Ｇｌｕ；
ｃｌ）４５６Ａｒｇ；
ｃｍ）４５８Ｉｌｅ；または
ｃｎ）４６１Ａｓｐ
に対応する１つ以上の位置でのアミノ酸改変を有する、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目２７）
前記トロンボモジュリン類似体が、配列番号１または配列番号３に従う位置３７６におけるフェニルアラニンの改変を有する、好ましくは脂肪族アミノ酸で置換されている、さらに好ましくはグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、またはイソロイシンで置換されている、および最も好ましくはアラニンで置換されている、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目２８）
前記トロンボモジュリン類似体が、配列番号１または配列番号３に従う以下のアミノ酸：ａ）３８７Ｇｌｎ；
ｂ）３８８Ｍｅｔ；
ｂ）３８９Ｐｈｅ；
のうちの１つ以上の改変を有し、それによって前記アミノ酸が欠失しているか、前記アミノ酸に１つ以上の追加のアミノ酸が挿入されているか、または好ましくは前記アミノ酸が置換されている、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目２９）
前記トロンボモジュリン類似体が、その酸化形態で、好ましくはクロラミンＴ、過酸化水素または過ヨウ素酸ナトリウムで酸化されて、使用される、上記項目のいずれかに記載の使用。
（項目３０）
前記ＴＭ類似体中のメチオニン残基のうちの１つ以上が酸化されている、好ましくは（配列番号１または配列番号３に従う）位置３８８におけるメチオニン残基が酸化されている
、項目１９に記載の使用。
（項目３１）
線溶亢進を伴う凝固障害の処置に適するトロンボモジュリンの類似体をスクリーニングする方法であって、
該トロンボモジュリンが、以下の特徴：
（ｉ）トロンビンへの結合親和性低減、
（ｉｉ）補因子活性低減、
（ｉｉｉ）ＴＡＦＩ活性化活性増加
のうちの１つ以上を呈示し、該方法は、
ａ）トロンボモジュリン配列（配列番号１または配列番号３）の、好ましくは項目１５に記載のアミノ酸位置の、１つ以上のアミノ酸置換を行う工程；
ｂ）その改変された類似体と、対照分子、好ましくはウサギ肺ＴＭまたは可溶性ヒトＴＭ類似体、とを、以下の特性：
ｂａ）トロンビンへの結合親和性（ＫＤ値）；
ｂｂ）補因子活性；
ｂｃ）ＴＡＦＩ活性化活性またはＴＡＦＩａポテンシャル；
ｂｄ）ＴＡＦＩ活性化活性と補因子活性の比；
ｂｅ）タンパク質酸化の効果；
ｂｆ）インビトロアッセイにおける、時間での、クロット溶解に対する効果；または
ｂｇ）凝固関連動物モデルにおける効果
のうちの１つ以上に関して比較する工程
を含む、方法。
（項目３２）
治療有効量の、項目１から２０のいずれかに記載のトロンボモジュリン類似体を投与することを含む、線溶亢進を伴う凝固障害の処置方法。
（項目３３）
処置すべき被験体の体重１ｋｇあたり０．７５μｇと１４０μｇとの間の用量の、項目１から２０のいずれかに記載のトロンボモジュリン類似体を投与することを含む、線溶亢進を伴う凝固障害の処置方法。
（項目３４）
処置すべき被験体の体重１ｋｇあたり０．７５μｇと１４０μｇとの間の用量で線溶亢進を伴う凝固障害を処置するための、項目１から２０のいずれかに記載のトロンボモジュリン類似体を含む医薬組成物。