【誤訳訂正書】
【提出日】平成26年3月17日(2014.3.17)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における脳の黒質領域へ投与されるときに、ドーパミン作動性ニューロンの成長および生存を高めるための医薬組成物であって、中脳星状細胞由来神経栄養因子（ＭＡＮＦ）を含む医薬組成物。
【請求項２】
対象における腹側中脳領域へ投与されるときに、ドーパミン作動性ニューロンの成長および生存を高めるための医薬組成物であって、ＭＡＮＦを含む医薬組成物。
【請求項３】
対象における脳の黒質領域へ投与されるときに、黒質でＧＡＢＡ作動性末端からのＧＡＢＡの放出を増加させるための医薬組成物であって、ＭＡＮＦを含む、医薬組成物。
【請求項４】
対象における脳の黒質領域へ投与されるときに、ＤＡニューロンに対するグルタミン酸の興奮毒性作用に拮抗するための医薬組成物であって、ＭＡＮＦを含む、医薬組成物。
【請求項５】
ＭＡＮＦ２、インターフェロンγ、神経成長因子、上皮成長因子（ＥＧＦ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、ニューロゲニン、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、甲状腺ホルモン、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰｓ）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、ソニックヘッジホッグ、グリア細胞系由来神経栄養因子（ＧＤＮＦｓ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、インターロイキン、インターフェロン、幹細胞因子（ＳＣＦ）、アクチビン、インヒビン、ケモカイン、レチノイン酸、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）およびそれらの組合せからなる群から選択される、１つまたは複数の追加の剤と一緒に投与される、請求項１−４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
ＭＡＮＦ２、インターフェロンγ、神経成長因子、上皮成長因子（ＥＧＦ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、ニューロゲニン、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、甲状腺ホルモン、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰｓ）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、ソニックヘッジホッグ、グリア細胞系由来神経栄養因子（ＧＤＮＦｓ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、インターロイキン、インターフェロン、幹細胞因子（ＳＣＦ）、アクチビン、インヒビン、ケモカイン、レチノイン酸、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）およびそれらの組合せからなる群から選択される、１つまたは複数の追加の治療剤をさらに含む、請求項１−４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
神経幹細胞をさらに含む、請求項１−６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
対象における脳の黒質領域へ投与されるときに、ドーパミン作動性ニューロンの成長および生存を高めるための医薬組成物であって、ウイルス発現ベクターを含み、前記ベクターは、作動可能的に連結するポリペプチドの発現を誘導することができるプロモーター配列を含み、そして、前記ポリペプチドは、哺乳動物細胞で機能することができるシグナルペプチド、およびヒト、マウスまたはラットのＭＡＮＦポリペプチドを含む、医薬組成物。
【請求項９】
パーキンソン病治療用である、請求項１−８のいずれかに記載の医薬組成物。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００２】
本発明は、ニューロンの生存を増加させるための組成物および方法に関する。末梢および中枢神経系（それぞれＰＮＳおよびＣＮＳ）におけるニューロンの成長（growth）、生存および分化は、標的由来、パラクリンおよびオートクリンの神経栄養因子に一部依存する。逆に言えば、神経栄養因子の不足は、パーキンソン病（Parkinson's disease）、アルツハイマー病および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳまたはルー−ゲーリック病）などの神経変性疾患の病因で一役担うと考えられる。ニューロン細胞培養では、神経栄養性支援は、星状細胞との共培養によって、または星状細胞から調製される順化培地（ＣＭ）の提供によって提供される。新線条体および大脳皮質などの他のＣＮＳ領域の星状細胞と比較して、腹側中脳起源の星状細胞は、腹側の中脳ドーパミン作動性ニューロンの生存の促進においてずっと大きな効力を発揮する。２１日以上のインビトロ日数（ＤＩＶ）の中脳長期培養では、ドーパミン作動性ニューロンの割合は２０％から６０％に増加し、星状細胞の単層の増殖と一致する。対照的に、星状細胞の増殖が阻害された条件では、ＧＡＢＡ作動性ではなくドーパミン作動性のニューロンは、５ＤＩＶまでに培養からほとんど消滅した。これらの結果は、隣接するドーパミン作動性ニューロンの生存および発達のための同型由来の星状細胞の重要性を証明し、中脳星状細胞が中脳ドーパミン作動性ニューロンのための生理的、パラクリン神経栄養因子の供給源である可能性が高いことを示唆する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
本明細書で証明されるように、ドーパミン作動性ニューロンの維持、生存または成長（growth）は、ＭＡＮＦポリペプチドの投与を通して高められる。中脳のドーパミン作動性ニューロンは、パーキンソン病を有する患者では死滅する。したがって本発明は、パーキンソン病の治療法を提供する。さらに、ドーパミン作動性ニューロンの欠損が存在するか予測される神経系の障害または疾患の治療でのＭＡＮＦポリペプチドの使用が、本発明に含まれる。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
前に示されている（Commissiong et al.、米国特許出願公開第２００２／０１８２１９８号または特許出願第１０／１０２２６５号）ように、中脳起源の細胞系（「ＶＭＣＬ−１」と呼ぶ）は、ドーパミン作動性ニューロンの分化および生存をその次に促進する因子を分泌する。この細胞系は、無血清培地で逞しく（robustly）成長（grow）する。さらに、これらの細胞から調製されるＣＭは、中脳ドーパミン作動性ニューロンの生存を少なくとも３倍増加させ、それらの発達も促進する、１つまたは複数のドーパミン作動性ニューロン生存因子を含む。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
タンパク質療法
本発明の一態様では、ＭＡＮＦまたはその生物学的に機能的な断片は、対象を予防的に治療するために、またはニューロパチーの対象を治療するために対象に投与される。例えば、一部の実施形態では、対象は、ドーパミン作動性ニューロンの維持を強化するため、および／またはその成長（growth）を促進するために治療される。本発明の方法での使用が企図される様々な投薬製剤が、本明細書で下に開示される。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３５】
本発明の様々な実施形態では、ＭＡＮＦの分泌された形態および／または非分泌形態が、ドーパミン作動性ニューロンの成長（growth）または生存を高めるために対象に投与される。ＭＡＮＦの分泌された形態および非分泌形態（ＭＡＮＦポリペプチドと総称する）は、神経栄養活性を有し、パーキンソン病などの神経変性疾患の治療のための、およびヒトへの移植の間またはその後にドーパミン作動性ニューロンの生存を向上させるための神経栄養性因子として有用である。ＭＡＮＦポリペプチドは、移植のためのニューロンのインビトロ生成を向上させるために用いることもできる。別の使用では、ＭＡＮＦポリペプチドは、ＭＡＮＦのドーパミン作動性ニューロン生存促進活性を調節または模倣する化合物の同定のために用いることができる。ＭＡＮＦポリペプチドは、ＭＡＮＦ受容体の同定のために用いることもできる。これらの用途の各々は、後にさらに詳しく記載する。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９０】
ｂ．複合タンパク質（Conjugated Proteins）
本発明の一態様では、ＭＡＮＦまたはその生物学的機能的断片は結合される。例えば、様々な実施形態では、本発明は、複合ポリペプチド、例えば少なくとも１つの剤に連結されて複合体を形成する翻訳されたタンパク質、ポリペプチドおよびペプチドをさらに提供する。抗体部分が特定の部位を剤の標的にする、抗体複合体が特に有用である。診断薬または治療薬としての抗体分子の効力を増加させるために、従来、少なくとも１つの所望の分子または部分を連結または共有結合するかまたは複合体を形成させる。そのような分子または部分は、少なくとも１つのエフェクターまたはリポーター分子であってもよいが、それに限定されるものではない。エフェクター分子は、所望の活性、例えば、細胞成長（growth）活性または細胞傷害活性を有する分子を含む。抗体に結合されているエフェクター分子の限定されない例には、成長剤、毒素、抗腫瘍剤、治療用酵素、放射標識ヌクレオチド、抗ウイルス剤、キレート化剤、サイトカイン、成長因子およびオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドが含まれる。対照的に、リポーター分子は、アッセイを用いて検出することができる任意の部分と定義される。抗体に結合されているリポーター分子の限定されない例には、酵素、放射性標識、ハプテン、蛍光標識、リン光性分子、化学発光分子、発色団、ルミネッセンス分子、光親和性分子、着色粒子またはリガンド、例えばビオチンが含まれる。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０１】
医薬組成物
本明細書で記載される治療的タンパク質の医薬組成物は、本発明の範囲内である。本発明の一態様では、ＭＡＮＦまたはＭＡＮＦおよび１つまたは複数の追加の治療薬を含む医薬組成物が対象に投与されて、予防効果または治療効果を達成する。そのような組成物は、ＭＡＮＦまたはその機能的断片の治療的または予防的に有効量を含む。そのような追加の１つまたは複数の治療薬の例には、「神経栄養因子」であるタンパク質、または「神経栄養因子」であるタンパク質をコードする核酸が含まれるが、これらに限定されない。神経栄養因子は、分化を促進し、成熟した表現型を維持し、栄養支援を提供して、ニューロンの成長（growth）および生存を促進する成長因子である。神経栄養因子は、神経系または神経分布組織に存在する。以下は、神経栄養因子として記載されている：塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、酸性線維芽細胞成長因子（ａＦＧＦ）、線毛神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、グリア由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ３）、ＮＴ４／５、インスリン様成長因子（ＩＧＦ−１）、ＩＧＦ−ＩＩ、ＮＴ−４、ＩＬ−１β、ＴＮＦα、形質転換成長因子β（ＴＧＦ−β、ＴＧＦ−β１）、ＭＡＮＦ（ＮＴＮ）、ペルセフィン（ＰＳＰ）、アルテミンおよびＡＬ−１。神経栄養因子の使用は当業者に周知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれている米国特許出願公開第２００１００１１１２６号、米国特許第６，２８４，５４０号、第６，２８０，７３２号、第６，２７４，６２４号、第６，２２１，６７６号で見出すことができる。参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６，１１１，０７５号に開示されるように、Ｐａｒ４の使用は当業者に周知である。様々な実施形態では、神経障害を治療する方法が本発明の範囲に企図され、そこにおいて、ＭＡＮＦまたはその機能的断片は、１つまたは複数の神経栄養因子と一緒に対象に同時投与される。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５２】
培養のＥ１４ドーパミン作動性ニューロンに及ぼすＶＭＣＬ−１  ＣＭの作用
ＶＭＣＬ−１  ＣＭを、培養のＥ１４中脳ドーパミン作動性ニューロンの生存および発達に影響するその能力について、０、５、２０および５０ｖ／ｖ％で試験した。培養を１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）で１２時間初回刺激し、その後、７ＤＩＶ後にそれらを染色および分析するまで、無血清成長（growth）培地で成長（grown）させた。ドーパミン作動性ニューロンの生存の増加に対して、ＣＭの用量依存的作用があった。ＣＭは、生存を５倍増加させた。対照的に、非ドーパミン作動性ニューロン生存の有意な増加はなかった。この推定上の因子の生物作用プロフィールは、ＧＤＮＦの供給源であるＢ４９グリオーマ細胞系に由来するＣＭのものと非常に異なる（Lin et al., Science 260: 1130-1132）。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８１】
中脳培養（Mesencephalic Cultures）
前に記載（Shimoda et al., Brain Res. 586:319-323, 1992、Takeshima et al., J. Neurosci. 14:4769-4779, 1994、Takeshima et al., Neuroscience. 60:809-823, 1994、Takeshima et al., J. Neurosci. Meth. 67:27-41, 1996）のように、一次中脳細胞培養は、時限妊娠ＳＤラット（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ；Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、Ｎ．Ｙ．）から調製した。切開組織を集め、実験の目的によって、酸素化した冷たい（４℃）ＨＢＳＳ、または１０％ウシ胎児血清含有培地（Ｂｉｏｆｌｕｉｄｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍｄ．）にプールした。妊娠ラットは妊娠１４日目（すなわち、Ｅ１４）にＣＯ２曝露によって屠殺し、腹部位を７０％ＥｔＯＨで洗浄し、開腹を実施し、胎児を集めて、Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含まないｐＨ７．４の冷たいダルベッコのリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）にプールした。無傷の脳を次に取り出し、間脳と中脳との間をカットし、蓋中央を裂き、横に広げた。中脳ドーパミン作動性領域を含む組織の腹側中央の１．０ｍｍ３ブロックを単離した。切開した組織ブロックを、冷たい（４℃）酸素化した培地にプールした。事前の消化なしで組織を磨砕した。あるいは、パパイン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）、１０Ｕ／ｍＬを含有するＬ−１５成長培地において細胞を３７℃で１５分間インキュベートし、培地で洗浄し（３×２ｍＬ）、針および注射器だけを用いて磨砕した。分散細胞を１．５ｍＬエッペンドルフ試験管（１．０ｍＬ／管）に移し、６００ｇで２分間遠心分離した。より速い遠心分離速度のより長い時間の使用は、破片による培養の汚染をもたらし、その結果、細胞の最適以下の成長（growth）をもたらす。培地を注意深く吸引し、細胞を新しい培地に再懸濁し、血球計数器を用いて計数した。開腹から平板培養までのすべての手順は、２時間以内に完了した。一般的な実験では、胎児数１０〜１５の一腹は、１．０×１０５細胞数／胎児、または１．０×１０６〜１．５×１０６細胞数／一腹を与えた。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８２】
中脳マイクロアイランド培養（Mesencephalic Microisland Cultures）
中脳マイクロアイランド培養を作製するために、上に述べたように細胞を調製し、５．０×１０５ｍＬの最終密度で再懸濁した。１００μＬピペットを用いて、懸濁液の２５μＬ液滴（１．２５×１０４個の細胞）を、ポリ−Ｄ−リジン（５０μｇ／ｍＬ）でコーティングした８ウェルチャンバスライドに平板培養した。１．０×１０５／ｃｍ２の最終平均細胞密度では、液滴の面積は約１２．５ｍｍ２であった。液滴を一様に注入し、スミアリングを回避するためにピペットチップを垂直に引き抜いた。マイクロアイランド培養が占めた領域は、培養の間中均一に保たれた。細胞を付着させるために、湿度１００％の５％ＣＯ２で、培養を３７℃で３０分間インキュベートし、次に３７５μＬの成長（growth）培地を各ウェルに加えた。培地は最初の１２時間後に交換し、その後２日ごとに培地の約半分を交換した。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８５】
ＶＭＣＬ−１細胞系からの順化培地の調製
ＶＭＣＬ−１細胞系からの順化培地の調製において、１５ｃｍのコーティングしていない培養皿内の１．０％のＦＢＳを含む２０ｍＬの成長（growth）培地に、２．０×１０６個の細胞を平面培養した。８０％集密度の時点で、培地を吸引し、細胞を無血清培地で一度洗浄した。アルブミンを含まない２０ｍＬの無血清Ｎ２培地を加え、順化を４８時間継続させた。この間に、細胞は１００％集密度に通常増殖した。培地を吸引し、５０ｍＬ管にプールし、遠心分離し（１５，０００ｒｐｍで２０分間）、その後１．０Ｌプラスチックボトルにプールした。通常、０．２２μｍフィルターを用いてＣＭの各バッチの５ｍＬをろ過滅菌し、−７０℃において５ｍＬの一定分量で保存し、神経栄養効力を測定するために用いてから、より大きな保存量のＣＭと一緒にプールした。所望により、当業者に公知である標準の産業用細胞培養技術を用いて、ＶＭＣＬ−１  ＣＭを大量に作製することができる。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８７】
ＶＭＣＬ−１細胞の培養
ＶＭＣＬ−１の培養およびＶＭＣＬ−１  ＣＭの調製において、１５ｃｍのコーティングしていない培養皿内の当初１０％のＦＢＳを含む２０ｍＬの成長（growth）培地に、２．０×１０６個の細胞を平面培養した。８０％集密度の時点で、培地を吸引し、細胞を無血清培地で一度洗浄した。アルブミンを含まない２０ｍＬの無血清培地を通常加え、順化を４８時間継続させた。順化培地の収集用に、Ｎ２培地が特に適していることが判明した。この４８時間の間に、細胞は通常１００％集密度に増殖した。培地を吸引し、５０ｍＬ管にプールし、遠心分離し（１５，０００ｒｐｍで２０分間）、１．０Ｌプラスチックボトルにプールした。０．２２ｍｍフィルターを用いてＣＭの各バッチの約５ｍＬを滅菌し、−７０℃において０．５ｍＬの一定分量で保存し、神経栄養効力を測定するために用いてから、より大きな保存量のＣＭと一緒にプールした。ＶＭＣＬ−１細胞系を、次に５０回を超えて継代培養した。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９２】
染色体分析
細胞を２．５％ＦＢＳ、Ｄ−グルコース（２．５ｇ／Ｌ）および１：１００希釈のＩＴＳ補助剤を補った１：１のＤＭＥＭ／Ｆ−１２培地で成長（grown）させた。２４時間後に、中期の継代培養をコルヒチン（１０μｇ／ｍＬ）で停止させた。細胞をトリプシン処理し、低張性ショック（７５ｍＭ  ＫＣｌ）を受けさせた。次に、３回交換した３：１のＭｅＯＨ／ＣＨ３ＣＯＯＨで細胞を固定し、空気乾燥させた。次に４％ギズマ（Geisma）を用いて細胞を染色し、顕微鏡で調べた。