【手続補正書】
【提出日】平成23年5月9日(2011.5.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）少なくとも一つの開始コドンが除去されているアルファウイルス５’複製認識配列と、
ｂ）アルファウイルス構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列と、
ｃ）アルファウイルス３’複製認識配列と
を含み、（ｂ）の該ヌクレオチド配列の転写を誘導するプロモーターを含まないことを条件とする、単離されたＲＮＡ分子であって、
（ａ）および（ｃ）の該アルファウイルス５’および３’複製認識配列が、アルファウイルス非構造タンパク質の存在下において該ＲＮＡ分子全体の複製を誘導する、ＲＮＡ分子。
【請求項２】
前記アルファウイルス構造タンパク質をコードする前記ヌクレオチド配列が、
１）アルファウイルスカプシドタンパク質、
２）任意の順序のアルファウイルスＥ１およびＥ２タンパク質、
３）任意の順序のアルファウイルスカプシドタンパク質およびアルファウイルスＥ１タンパク質、
５）任意の順序のアルファウイルスカプシドタンパク質およびアルファウイルスＥ２タンパク質、
６）アルファウイルスＥ２タンパク質、並びに
７）アルファウイルスＥ１タンパク質
をコードするヌクレオチド配列からなる群より選択される、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項３】
前記アルファウイルス５’複製認識配列が、Ｖｅｎｅｚｕｅｌａｎ  ｅｑｕｉｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓウイルスの５’複製認識配列である、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項４】
前記５’複製認識配列が、７０ヌクレオチドと５２４ヌクレオチドの間の長さである、請求項３に記載のＲＮＡ分子。
【請求項５】
前記アルファウイルス３’複製認識配列が、Ｖｅｎｅｚｕｅｌａｎ  ｅｑｕｉｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓウイルスの３’複製認識配列である、請求項１または３に記載のＲＮＡ分子。
【請求項６】
前記３’複製認識配列が、１９ヌクレオチドから３２５ヌクレオチドまでの長さである、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項７】
前記少なくとも一つの開始コドンが、非構造タンパク質１（ｎｓｐ１）のための開始コドンである、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項８】
全ての開始コドンが、前記５’複製認識配列から除去されている、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項９】
前記ＲＮＡが、５’末端でキャップされている、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項１０】
アルファウイルスレプリコン粒子を製造する方法であって、該方法は、請求項１に記載のＲＮＡ分子の１つ以上を細胞に導入する工程を含み、これによって、ＲＮＡ分子の組み合わせが、アルファウイルスレプリコン粒子が産生される条件下において、アルファウイルスレプリコンＲＮＡと共に、アルファウイルスレプリコン粒子の産生に必要な全てのアルファウイルス構造タンパク質をコードする、方法。
【請求項１１】
２つのＲＮＡ分子が前記細胞中に導入され、
該２つのＲＮＡ分子の第一のＲＮＡ分子が、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質をコードし、
該２つのＲＮＡ分子の第二のＲＮＡ分子が、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質をコードし、そのうちの少なくとも１つが、該第一のＲＮＡ分子によってコードされる該アルファウイルス構造タンパク質とは異なる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
３つのＲＮＡ分子が前記細胞中に導入され、
該３つのＲＮＡ分子の第一のＲＮＡ分子が、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質をコードし、
該３つのＲＮＡ分子の第二のＲＮＡ分子が、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質をコードし、そのうちの少なくとも１つが、該第一のＲＮＡ分子によってコードされる該アルファウイルス構造タンパク質とは異なり、
第三のＲＮＡ分子が、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質をコードし、そのうちの少なくとも１つが、該第一のＲＮＡ分子および該第二のＲＮＡ分子によってコードされる該アルファウイルス構造タンパク質とは異なる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記１つ以上のＲＮＡ分子の少なくとも１つが、５’末端でキャップされている、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
アルファウイルスレプリコン粒子を製造する方法であって、該方法は、
ａ）アルファウイルスレプリコンＲＮＡと、
ｂ）請求項１に記載のＲＮＡ分子の１つ以上と、
ｃ）１つ以上のプロモーター補助アルファウイルスヘルパー構築物と
を細胞に導入する工程を含み、
これによって、（ｂ）のＲＮＡ分子と（ｃ）のヘルパー構築物との組み合わせが、アルファウイルスレプリコン粒子が産生される条件下において、アルファウイルスレプリコン粒子の産生に必要な全てのアルファウイルス構造タンパク質をコードする、方法。
【請求項１５】
前記１つ以上のＲＮＡ分子の少なくとも１つが、５’末端でキャップされている、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１に記載のＲＮＡ分子を含む粒子のサブセットを含む、アルファウイルスレプリコン粒子の集団であって、該集団が、培養における許容細胞での継代によって決定されるような、アルファウイルスレプリコン粒子１０８個当たりに検出可能な複製能力のあるアルファウイルスウイルス粒子を含まない、集団。
【請求項１７】
請求項１に記載のＲＮＡ分子を含む粒子のサブセットを含む、アルファウイルスレプリコン粒子の集団であって、該集団が、培養における許容細胞での継代によって決定されるような、アルファウイルスレプリコン粒子１０８個当たりに検出可能な複製能力のあるアルファウイルス粒子を含まず、該アルファウイルスレプリコン粒子が、アルファウイルス構造タンパク質またはアルファウイルス非構造タンパク質のいずれか、あるいはアルファウイルス構造タンパク質およびアルファウイルス非構造タンパク質の両方に、１つ以上の弱毒化変異を含む、集団。
【請求項１８】
薬学的に許容される担体中に、請求項１６または１７に記載の集団を含む組成物。
【請求項１９】
被験体において免疫応答を誘起するための組成物であって、請求項１６または１７に記載の集団の有効量を含む、組成物。
【請求項２０】
請求項１に記載のＲＮＡ分子を含む細胞。
【請求項２１】
請求項１に記載のＲＮＡ分子を含むベクター。
【請求項２２】
請求項１に記載のＲＮＡ分子を含む核酸構築物。
【請求項２３】
請求項２１に記載のベクターを含む細胞。
【請求項２４】
請求項２２に記載の核酸構築物を含む細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
さらに、本発明は、被験体において免疫応答を誘発する方法であって、有効量の本発明のアルファウイルスレプリコン粒子の集団を当該被験体に投与する段階を含む方法を提供する。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
ａ）少なくとも一つの開始コドンが除去されているアルファウイルス５’複製認識配列と、
ｂ）アルファウイルス構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列と、
ｃ）アルファウイルス３’複製認識配列と
を含み、（ｂ）の該ヌクレオチド配列の転写を誘導するプロモーターを含まないことを条件とする、単離されたＲＮＡ分子であって、
（ａ）および（ｃ）の該アルファウイルス５’および３’複製認識配列が、アルファウイルス非構造タンパク質の存在下において該ＲＮＡ分子全体の複製を誘導する、ＲＮＡ分子。
（項目２）
前記アルファウイルス構造タンパク質をコードする前記ヌクレオチド配列が、１）アルファウイルスカプシドタンパク質、２）任意の順序のアルファウイルスＥ１およびＥ２タンパク質、３）任意の順序のアルファウイルスカプシドタンパク質およびアルファウイルスＥ１タンパク質、５）任意の順序のアルファウイルスカプシドタンパク質およびアルファウイルスＥ２タンパク質、６）アルファウイルスＥ２タンパク質、並びに７）アルファウイルスＥ１タンパク質をコードするヌクレオチド配列からなる群より選択される、項目１に記載のＲＮＡ分子。
（項目３）
前記アルファウイルス５’複製認識配列が、Ｖｅｎｅｚｕｅｌａｎ  ｅｑｕｉｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓウイルスの５’複製認識配列である、項目１に記載のＲＮＡ分子。
（項目４）
前記５’複製認識配列が、７０ヌクレオチドと５２４ヌクレオチドの間の長さである、項目３に記載のＲＮＡ分子。
（項目５）
前記アルファウイルス３’複製認識配列が、Ｖｅｎｅｚｕｅｌａｎ  ｅｑｕｉｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓウイルスの３’複製認識配列である、項目１または３に記載のＲＮＡ分子。
（項目６）
前記３’複製認識配列が、１９ヌクレオチドから３２５ヌクレオチドまでの長さである、項目１に記載のＲＮＡ分子。
（項目７）
前記少なくとも一つの開始コドンが、非構造タンパク質１（ｎｓｐ１）のための開始コドンである、項目１に記載のＲＮＡ分子。
（項目８）
全ての開始コドンが、前記５’複製認識配列から除去されている、項目１に記載のＲＮＡ分子。
（項目９）
前記ＲＮＡが、５’末端でキャップされている、項目１に記載のＲＮＡ分子。
（項目１０）
アルファウイルスレプリコン粒子を製造する方法であって、該方法は、項目１に記載のＲＮＡ分子の１つ以上を細胞に導入する工程を含み、これによって、ＲＮＡ分子の組み合わせが、アルファウイルスレプリコン粒子が産生される条件下において、アルファウイルスレプリコンＲＮＡと共に、アルファウイルスレプリコン粒子の産生に必要な全てのアルファウイルス構造タンパク質をコードする、方法。
（項目１１）
２つのＲＮＡ分子が前記細胞中に導入され、該２つのＲＮＡ分子の第一のＲＮＡ分子が、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質をコードし、該２つのＲＮＡ分子の第二のＲＮＡ分子が、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質をコードし、そのうちの少なくとも１つが、該第一のＲＮＡ分子によってコードされる該アルファウイルス構造タンパク質とは異なる、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
３つのＲＮＡ分子が前記細胞中に導入され、該３つのＲＮＡ分子の第一のＲＮＡ分子が、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質をコードし、該３つのＲＮＡ分子の第二のＲＮＡ分子が、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質をコードし、そのうちの少なくとも１つが、該第一のＲＮＡ分子によってコードされる該アルファウイルス構造タンパク質とは異なり、第三のＲＮＡ分子が、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質をコードし、そのうちの少なくとも１つが、該第一のＲＮＡ分子および該第二のＲＮＡ分子によってコードされる該アルファウイルス構造タンパク質とは異なる、項目１０に記載の方法。
（項目１３）
前記１つ以上のＲＮＡ分子の少なくとも１つが、５’末端でキャップされている、項目１０に記載の方法。
（項目１４）
アルファウイルスレプリコン粒子を製造する方法であって、該方法は、
ａ）アルファウイルスレプリコンＲＮＡと、
ｂ）項目１に記載のＲＮＡ分子の１つ以上と、
ｃ）１つ以上のプロモーター補助アルファウイルスヘルパー構築物と
を細胞に導入する工程を含み、
これによって、（ｂ）のＲＮＡ分子と（ｃ）のヘルパー構築物との組み合わせが、アルファウイルスレプリコン粒子が産生される条件下において、アルファウイルスレプリコン粒子の産生に必要な全てのアルファウイルス構造タンパク質をコードする、方法。
（項目１５）
前記１つ以上のＲＮＡ分子の少なくとも１つが、５’末端でキャップされている、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
項目１に記載のＲＮＡ分子を含む粒子のサブセットを含む、アルファウイルスレプリコン粒子の集団であって、該集団が、培養における許容細胞での継代によって決定されるような、アルファウイルスレプリコン粒子１０８個当たりに検出可能な複製能力のあるアルファウイルスウイルス粒子を含まない、集団。
（項目１７）
項目１に記載のＲＮＡ分子を含む粒子のサブセットを含む、アルファウイルスレプリコン粒子の集団であって、該集団が、培養における許容細胞での継代によって決定されるような、アルファウイルスレプリコン粒子１０８個当たりに検出可能な複製能力のあるアルファウイルス粒子を含まず、該アルファウイルスレプリコン粒子が、アルファウイルス構造タンパク質またはアルファウイルス非構造タンパク質のいずれか、あるいはアルファウイルス構造タンパク質およびアルファウイルス非構造タンパク質の両方に、１つ以上の弱毒化変異を含む、集団。
（項目１８）
薬学的に許容される担体中に、項目１６または１７に記載の集団を含む組成物。
（項目１９）
被験体において免疫応答を誘起する方法であって、該被験体に項目１６または１７に記載の集団の有効量を投与する工程を含む、方法。
（項目２０）
項目１に記載のＲＮＡ分子を含む細胞。
（項目２１）
項目１に記載のＲＮＡ分子を含むベクター。
（項目２２）
項目１に記載のＲＮＡ分子を含む核酸構築物。
（項目２３）
項目２１に記載のベクターを含む細胞。
（項目２４）
項目２２に記載の核酸構築物を含む細胞。