【手続補正書】
【提出日】平成24年5月24日(2012.5.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞集団におけるＢＡＴ前駆細胞を同定するための方法であって、
少なくとも２つの細胞を用意するステップと、
内皮細胞と関連するが、造血細胞、筋原細胞、または周皮細胞とは関連しないマーカーに特異的である抗体と前記少なくとも２つの細胞とを接触させるステップと、
前記抗体が結合する細胞を決定するステップと
を含み、前記抗体が結合する細胞がＢＡＴ前駆細胞として同定される、方法。
【請求項２】
前記抗体がＣＤ３４に特異的である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記接触ステップが、前記細胞を、内皮細胞と関連するマーカーに特異的な抗体と接触させる前に、
前記細胞を、造血細胞、筋原細胞、および周皮細胞の少なくとも１つと関連するマーカーに特異的な抗体と接触させるステップと、
前記造血細胞、筋原細胞、および周皮細胞の少なくとも１つと関連するマーカーに特異的な抗体が結合する細胞を除去するステップと
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ＢＡＴ前駆細胞として同定された細胞を単離するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ＢＡＴ前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を誘導するための組成物であって、
分化培地を含み、前記分化培地が、褐色脂肪細胞に分化するように前記ＢＡＴ前駆細胞を誘導する、組成物。
【請求項６】
前記分化培地が、以下：ＰＰＡＲγ活性化因子、調節因子もしくは阻害因子；ＰＰＡＲα活性化因子もしくは調節因子；ＰＰＡＲδ活性化因子もしくは調節因子；デュアルＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲδ活性化因子もしくは調節因子；ｐａｎ−ＰＰＡＲ（α、δ、γ）活性化因子もしくは調節因子；ＰＤＥ４阻害因子；ＰＤＥ７阻害因子；ＮＲＩＰ１（ＲＩＰ１４０）阻害因子、ＰＴＥＮ阻害因子；α１−アドレナリン作用性の完全もしくは部分的なアゴニスト；ＲＸＲα活性化因子もしくは調節因子；ＰＧＣ−１α活性化因子；ＰＧＣ−１β阻害因子もしくは活性化因子；アディポネクチンもしくはアディポネクチン受容体ＡｄｉｐｏＲ１および／もしくはＡｄｉｐｏＲ２の活性化因子；ＮＯＳ阻害因子もしくは活性化因子；ＲｈｏキナーゼＲＯＣＫ阻害因子；ＢＤＮＦ；モノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）Ａ阻害因子および／もしくはＭＡＯ  Ｂ阻害因子；ＳＲＣ活性化因子、ＥＧＦＲ阻害因子；ＦＡＡＨ阻害因子；ＭＡＰＫ１もしくは２もしくは４もしくは５もしくは７もしくは８の阻害因子；ＣＤＫ９阻害因子；ＴＧＲ５アゴニスト；ＡＭＰＫ活性化因子；ＢＭＰ−７、ｍＴＯＲ阻害因子；アデニル酸シクラーゼ活性化因子；または前述の任意の組合せのうちの１つまたは複数を含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記分化培地がロシグリタゾンを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
患者においてＢＡＴ前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を誘導する作用物質を含む、前記患者における代謝性疾患または病状を処置するための組成物。
【請求項９】
前記代謝性疾患が、肥満、体重超過、耐糖能異常、インスリン抵抗性、２型糖尿病、脂質異常症、高血圧症、心血管疾患、またはメタボリックシンドロームのうちの１つである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
ＢＡＴ前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を誘導する作用物質を同定するための方法であって、
ＢＡＴ前駆細胞を用意するステップと、
前記ＢＡＴ前駆細胞を作用物質と接触させるステップと、
前記ＢＡＴ前駆細胞が褐色脂肪細胞への分化の指標を示すかどうかを決定するステップと
を含む、方法。
【請求項１１】
前記分化の指標が、以下：ＵＣＰ１タンパク質もしくはｍＲＮＡの発現、ｍｔＴＦＡタンパク質もしくはｍＲＮＡの発現、ＰＧＣ−１αタンパク質もしくはｍＲＮＡの発現、脱共役呼吸、代謝率、グルコース利用率、脂肪酸酸化率、および前述の任意の組合せのうちの１つまたは複数における増加である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ＵＣＰ１の発現または活性レベルを誘導する作用物質を同定するための方法であって、
ＢＡＴ前駆細胞を用意するステップと、
前記ＢＡＴ前駆細胞を作用物質と接触させるステップと、
前記ＢＡＴ前駆細胞がＵＣＰ１発現または活性の増加を示すかどうかを決定するステップと
を含む、方法。
【請求項１３】
前記ＵＣＰ１発現または活性の増加が、以下：ＵＣＰ１遺伝子転写の増加、ＵＣＰ１のｍＲＮＡの安定化、ＵＣＰ１のｍＲＮＡの翻訳の増加、ＵＣＰ１タンパク質の安定化、ＵＣＰ１タンパク質の活性化、ＵＣＰ１遺伝子発現阻害の減少、ＵＣＰ１活性阻害の減少のうちの１つまたは複数に起因している、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
患者における代謝性疾患を処置するための薬剤の製造における、請求項１０に記載の方法または請求項１２に記載の方法のいずれかを用いて同定される作用物質の使用。
【請求項１５】
前記代謝性疾患が、肥満、体重超過、耐糖能異常、インスリン抵抗性、２型糖尿病、脂質異常症、高血圧症、心血管疾患、またはメタボリックシンドロームのうちの１つである、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
低体温症を予防するための薬剤の製造における、請求項１０に記載の方法または請求項１２に記載の方法のいずれかを用いて同定される作用物質の使用。
【請求項１７】
患者における代謝性疾患を処置するための組成物であって、請求項１０に記載の方法または請求項１２に記載の方法のいずれかを用いて同定される作用物質を含む、組成物。
【請求項１８】
前記代謝性疾患が、肥満、体重超過、耐糖能異常、インスリン抵抗性、２型糖尿病、脂質異常症、高血圧症、心血管疾患、またはメタボリックシンドロームのうちの１つである、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
低体温症を予防するための組成物であって、請求項１０に記載の方法または請求項１２に記載の方法のいずれかを用いて同定される作用物質を含む、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本開示は、ＵＣＰ１遺伝子の発現を誘導するか、インビトロにおいてＢＡＴ前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進するか、インビボにおいてＢＡＴ前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進するか、またはこれらの活性の組合せを有する作用物質（例えば、化合物、タンパク質、生物学的製剤など）の同定を可能にするアッセイを提供する。いくつかの実施形態によれば、この様式で同定された作用物質を用いて、肥満、２型糖尿病、インスリン抵抗性、脂質異常症などの代謝性疾患を処置することができる。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
細胞集団におけるＢＡＴ前駆細胞を同定するための方法であって、
少なくとも２つの細胞を用意するステップと、
内皮細胞と関連するが、造血細胞、筋原細胞、または周皮細胞とは関連しないマーカーに特異的である抗体と前記少なくとも２つの細胞とを接触させるステップと、
前記抗体が結合する細胞を決定するステップと
を含み、前記抗体が結合する細胞がＢＡＴ前駆細胞として同定される、方法。
（項目２）
前記抗体がＣＤ３４に特異的である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記接触ステップが、前記細胞を、内皮細胞と関連するマーカーに特異的な抗体と接触させる前に、
前記細胞を、造血細胞、筋原細胞、および周皮細胞の少なくとも１つと関連するマーカーに特異的な抗体と接触させるステップと、
前記造血細胞、筋原細胞、および周皮細胞の少なくとも１つと関連するマーカーに特異的な抗体が結合する細胞を除去するステップと
をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目４）
ＢＡＴ前駆細胞として同定された細胞を単離するステップをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
ＢＡＴ前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を誘導するための方法であって、
ＢＡＴ前駆細胞を用意するステップと、
前記ＢＡＴ前駆細胞を分化培地に曝露するステップと
を含み、前記分化培地が、褐色脂肪細胞に分化するように前記ＢＡＴ前駆細胞を誘導する、方法。
（項目６）
前記分化培地が、以下：ＰＰＡＲγ活性化因子、調節因子もしくは阻害因子；ＰＰＡＲα活性化因子もしくは調節因子；ＰＰＡＲδ活性化因子もしくは調節因子；デュアルＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲδ活性化因子もしくは調節因子；ｐａｎ−ＰＰＡＲ（α、δ、γ）活性化因子もしくは調節因子；ＰＤＥ４阻害因子；ＰＤＥ７阻害因子；ＮＲＩＰ１（ＲＩＰ１４０）阻害因子、ＰＴＥＮ阻害因子；α１−アドレナリン作用性の完全もしくは部分的なアゴニスト；ＲＸＲα活性化因子もしくは調節因子；ＰＧＣ−１α活性化因子；ＰＧＣ−１β阻害因子もしくは活性化因子；アディポネクチンもしくはアディポネクチン受容体ＡｄｉｐｏＲ１および／もしくはＡｄｉｐｏＲ２の活性化因子；ＮＯＳ阻害因子もしくは活性化因子；ＲｈｏキナーゼＲＯＣＫ阻害因子；ＢＤＮＦ；モノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）Ａ阻害因子および／もしくはＭＡＯ  Ｂ阻害因子；ＳＲＣ活性化因子、ＥＧＦＲ阻害因子；ＦＡＡＨ阻害因子；ＭＡＰＫ１もしくは２もしくは４もしくは５もしくは７もしくは８の阻害因子；ＣＤＫ９阻害因子；ＴＧＲ５アゴニスト；ＡＭＰＫ活性化因子；ＢＭＰ−７、ｍＴＯＲ阻害因子；アデニル酸シクラーゼ活性化因子；または前述の任意の組合せのうちの１つまたは複数を含む、項目４に記載の方法。
（項目７）
前記分化培地がロシグリタゾンを含む、項目４に記載の方法。
（項目８）
患者においてＢＡＴ前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を誘導するステップを含む、前記患者における代謝性疾患または病状を処置するための方法。
（項目９）
前記代謝性疾患が、肥満、体重超過、耐糖能異常、インスリン抵抗性、２型糖尿病、脂質異常症、高血圧症、心血管疾患、またはメタボリックシンドロームのうちの１つである、項目８に記載の方法。
（項目１０）
ＢＡＴ前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を誘導する作用物質を同定するための方法であって、
ＢＡＴ前駆細胞を用意するステップと、
前記ＢＡＴ前駆細胞を作用物質と接触させるステップと、
前記ＢＡＴ前駆細胞が褐色脂肪細胞への分化の指標を示すかどうかを決定するステップと
を含む、方法。
（項目１１）
前記分化の指標が、以下：ＵＣＰ１タンパク質もしくはｍＲＮＡの発現、ｍｔＴＦＡタンパク質もしくはｍＲＮＡの発現、ＰＧＣ−１αタンパク質もしくはｍＲＮＡの発現、脱共役呼吸、代謝率、グルコース利用率、脂肪酸酸化率、および前述の任意の組合せのうちの１つまたは複数における増加である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
ＵＣＰ１の発現または活性レベルを誘導する作用物質を同定するための方法であって、
ＢＡＴ前駆細胞を用意するステップと、
前記ＢＡＴ前駆細胞を作用物質と接触させるステップと、
前記ＢＡＴ前駆細胞がＵＣＰ１発現または活性の増加を示すかどうかを決定するステップと
を含む、方法。
（項目１３）
前記ＵＣＰ１発現または活性の増加が、以下：ＵＣＰ１遺伝子転写の増加、ＵＣＰ１のｍＲＮＡの安定化、ＵＣＰ１のｍＲＮＡの翻訳の増加、ＵＣＰ１タンパク質の安定化、ＵＣＰ１タンパク質の活性化、ＵＣＰ１遺伝子発現阻害の減少、ＵＣＰ１活性阻害の減少のうちの１つまたは複数に起因している、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
患者における代謝性疾患を処置するための薬剤の製造における、項目１０に記載の方法または項目１２に記載の方法のいずれかを用いて同定される作用物質の使用。
（項目１５）
前記代謝性疾患が、肥満、体重超過、耐糖能異常、インスリン抵抗性、２型糖尿病、脂質異常症、高血圧症、心血管疾患、またはメタボリックシンドロームのうちの１つである、項目１２に記載の方法。
（項目１６）
低体温症を予防するための薬剤の製造における、項目１０に記載の方法または項目１２に記載の方法のいずれかを用いて同定される作用物質の使用。