(57)【要約】【課題】納豆の有する生理活性だけでなく、乳酸菌やビフィズス菌等の有する生理活性も期待できる生理活性機能をより高めた納豆製品を提供する。【解決手段】乳酸菌、ビフィズス菌、酵母、クロレラ及びスピルリナからなる群から選ばれた少なくとも１種以上の菌体及び／又は藻体を充填した小袋を納豆に添付し、喫食する際に納豆と前記菌体及び／又は藻体を混ぜることができるようにする。前記菌体及び／又は藻体の懸濁液が充填された小袋あるいは前記菌体及び／又は藻体を配合したカラシ及び／又はタレの小袋を添付することが好ましい。また、前記菌体は乳酸菌及び／又はビフィズス菌であることが好ましく、前記乳酸菌はＩＬ−１２誘導活性がＯＫ４３２と同等かそれよりも高い乳酸菌であることが好ましい。更に、前記菌体及び／又は藻体は加熱殺菌されたものであることが好ましい。本発明の納豆製品は、コレステロール低減剤又は免疫賦活剤として好適に用いることができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
納豆とそれに添付された小袋を有する納豆製品であって、前記小袋に、乳酸菌、ビフィズス菌、酵母、クロレラ及びスピルリナからなる群から選ばれた少なくとも１種以上の菌体及び／又は藻体が充填されていることを特徴とする納豆製品。
【請求項２】
前記菌体及び／又は藻体の懸濁液が充填された小袋が添付されている、請求項１に記載の納豆製品。
【請求項３】
前記菌体及び／又は藻体が配合されたカラシ及び／又はタレの小袋が添付されている、請求項１に記載の納豆製品。
【請求項４】
前記菌体は、乳酸菌及び／又はビフィズス菌である、請求項１〜３のいずれか一つに記載の納豆製品。
【請求項５】
前記乳酸菌は、ＩＬ−１２誘導活性がＯＫ４３２と同等かそれよりも高い乳酸菌である、請求項１〜４のいずれか一つに記載の納豆製品。
【請求項６】
前記菌体及び／又は藻体は加熱殺菌されたものである、請求項１〜５のいずれか一つに記載の納豆製品。
【請求項７】
コレステロール低減剤又は免疫賦活剤として用いられる、請求項１〜６のいずれか一つに記載の納豆製品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生理活性機能をより高めた納豆製品に関し、更に詳細には、納豆の有する生理活性だけでなく、乳酸菌やビフィズス菌等の有する生理活性も期待できる納豆製品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
蒸煮した大豆を納豆菌で発酵させた納豆は、植物性タンパク質、カルシウム、鉄、食物繊維、ビタミンＢ等を豊富に含む栄養価値の高い食品であり、わが国の伝統的な発酵食品の一つである。納豆は、発酵によって大豆の成分がある程度分解されているため、煮豆に比べてタンパク質の消化吸収率が高いだけでなく、有用な発酵産物を多く含有している。
【０００３】
納豆や納豆菌には様々な生理活性があることが知られており、納豆や納豆菌等を利用した健康食品も提案されている。例えば、特許文献１には、納豆菌含有物である納豆末と、納豆菌の餌となる生育因子物質と、納豆菌を繁殖させるための住居となる多孔物質とを少なくとも成分として含み、これらを一体としてなることを特徴とする納豆末を用いた腸内活性化食品が開示されている。
【０００４】
また、特許文献２には、牛乳と乳酸菌を入れた容器を、醗酵室に入れて醗酵してつくられたはっ酵乳に、納豆菌を入れて、再び、醗酵室で再醗酵してつくられる納豆菌と乳酸菌が共生するはっ酵乳食品の製造方法が開示されている。
【０００５】
更に、特許文献３には、納豆のねば成分に乳酸特に乳酸菌発酵食品を加えた納豆のねば成分食品が開示されている。
【０００６】
更にまた、特許文献４には、ビフィズス菌、乳酸菌及び納豆菌を含有する組成物が開示されている。
【０００７】
一方、上記の技術とは別に、納豆臭が低減された納豆の製造方法として、特許文献５には、納豆原材料に、死滅酵母菌体を添加配合することを特徴とする、納豆の製造方法が開示されている。
【０００８】
また、特許文献６には、納豆の発酵に際し、酵母を懸濁した溶液１〜５ｍｌを、各納豆用容器の底に予め注入した後、納豆菌を散布した大豆煮豆を盛り込み、発酵させることを特徴とする納豆の製造方法が開示されている。
【０００９】
【特許文献１】
特開２００２−８５００９号公報
【特許文献２】
特開平９−２５２７２１号公報
【特許文献３】
特開平６−３１９４８０号公報
【特許文献４】
特開２００１−１６９７４９号公報
【特許文献５】
特開平１０−１３６９２５号公報
【特許文献６】
特開２００２−２５３１６２号公報
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上記特許文献１〜４に開示された食品や組成物は、いわゆるサプリメントとして摂取されるものであり、その製品形態は納豆とは程遠いものであった。
【００１１】
また、納豆は多くの製造業者によって多種多様な商品が製造・販売されているが、単に大豆や納豆菌の品種を変えたり、上記特許文献５、６に開示されているように発酵条件等で差別化がなされる程度であり、より付加価値の高い納豆製品が求められていた。
【００１２】
したがって、本発明の目的は、納豆の有する生理活性だけでなく、乳酸菌やビフィズス菌等の有する生理活性も期待できる生理活性機能をより高めた納豆製品を提供することにある。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意研究した結果、納豆を製造する際に、納豆菌と乳酸菌等の他の有用菌とを一緒に加えて発酵させると、他の有用菌が本来有しているはずの生理活性が消失してしまい、これらの有用菌の有する生理活性が有効に発揮されないことを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。
【００１４】
すなわち、本発明の納豆製品は、納豆とそれに添付された小袋を有する納豆製品であって、前記小袋に、乳酸菌、ビフィズス菌、酵母、クロレラ及びスピルリナからなる群から選ばれた少なくとも１種以上の菌体及び／又は藻体が充填されていることを特徴とする。
【００１５】
本発明の納豆製品は、乳酸菌、ビフィズス菌、酵母、クロレラ及びスピルリナからなる群から選ばれた少なくとも１種以上の菌体及び／又は藻体が充填された小袋を別添として、喫食する際に納豆と混ぜることができるようにしたので、これらの菌体や藻体が有する生理活性が納豆菌の発酵により損なわれることがない。したがって、納豆の有する生理活性と上記菌体や藻体の有する生理活性の両方が効率よく発揮され、優れた生理活性機能を有する納豆製品を提供することができる。
【００１６】
本発明の納豆製品においては、前記菌体及び／又は藻体の懸濁液が充填された小袋が添付されていることが好ましい。これによれば、上記菌体及び／又は藻体と納豆の混合を容易に行うことができる。
【００１７】
また、前記菌体及び／又は藻体が配合されたカラシ及び／又はタレの小袋が添付されていることが好ましい。これによれば、喫食する際に、納豆の調味と同時に上記菌体及び／又は藻体を添加することができるので、上記菌体及び／又は藻体を簡便に摂取することができる。
【００１８】
更に、前記菌体は、乳酸菌及び／又はビフィズス菌であることが好ましい。これによれば、納豆の有する生理活性と、乳酸菌やビフィズス菌の有する様々な生理活性とが期待できる納豆製品を提供できる。
【００１９】
更にまた、前記乳酸菌はＩＬ−１２誘導活性がＯＫ４３２と同等かそれよりも高い乳酸菌であることが好ましい。これによれば、優れた免疫賦活効果が期待できる納豆製品を提供できる。
【００２０】
更にまた、前記菌体及び／又は藻体は加熱殺菌されたものであることが好ましい。これによれば、前記菌体及び／又は藻体の食品としての安全性や保存性を高めることができる。また、前記菌体及び／又は藻体をカラシやタレに配合した際の保存安定性を高めることができる。
【００２１】
本発明の納豆製品は、納豆の有する生理活性と、前記菌体及び／又は藻体の有する生理活性等により、コレステロール低減剤又は免疫賦活剤として好適に用いることができる。
【００２２】
【発明の実施の形態】
本発明で用いられる納豆は、通常の糸引納豆と同様のものを用いることができる。したがって、原料として用いられる大豆や発酵に用いられる納豆菌は、一般的に納豆の製造に使用されているものであれば特に制限なく用いることができる。納豆菌は、例えば、有限会社宮城野納豆製造所等から入手することができる。
【００２３】
また、納豆の製造方法も常法に従って行うことができ、例えば、精選・洗浄した大豆を、水に浸漬して充分に吸水させた後（大豆の質量が浸漬前の２．２〜２．５倍になる程度）、蒸煮し、納豆菌を接種し、所定の容器に計量・充填して、常法に従って所定時間（通常１４〜１８時間）発酵させればよい。
【００２４】
本発明の納豆製品に添付される菌体及び／又は藻体としては、乳酸菌、ビフィズス菌、酵母、クロレラ及びスピルリナからなる群から選ばれた少なくとも１種以上が用いられる。
【００２５】
上記乳酸菌としては、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・クレモリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｃｒｅｍｏｒｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、ラクトバチルス・ガッセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカス・ラクチス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｂｒｅｖｉｓ）等が例示できる。これらの乳酸菌を摂取することにより、コレステロール低減効果、免疫賦活効果、便秘改善効果等が期待できる。
【００２６】
エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）としては、例えばＡＴＣＣ  １９４３３、ＡＴＣＣ  １４５０８、ＡＴＣＣ  １２３６５５、ＩＦＯ  １６８０３等を用いることができる。また、ストレプトコッカス・クレモリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｃｒｅｍｏｒｉｓ）は、黒海の東に位置するグルジア共和国で食べられているヨーグルト等に用いられている乳酸菌である。ストレプトコッカス・ラクチス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓ）も、チーズ等に用いられている乳酸菌である。ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）は、例えばヤクルト（商品名、株式会社ヤクルト本社製）等の乳酸菌飲料に用いられている乳酸菌である。ラクトバチルス・アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）は、生菌製剤やアシドフィルスミルク等に用いられている乳酸菌である。したがって、これらの乳酸菌は、いずれも当業者が容易に入手できるものである。
【００２７】
本発明においては、上記の乳酸菌の中でもＩＬ−１２誘導活性がＯＫ４３２と同等かそれよりも高い乳酸菌が好ましく用いられる。このような乳酸菌を摂取することにより、特に優れた免疫賦活効果が期待できる。
【００２８】
ここで、ＩＬ−１２（インターロイキン−１２）とは、マクロファージから分泌されるサイトカイン「生理活性物質」で、ガン細胞を直接攻撃するナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）や、ラック細胞（ＬＡＫ細胞）、キラーＴ細胞（ＣＴＬ細胞）を活性化したり、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）の産生を増強する、非常に強力な免疫活性物質として知られている。
【００２９】
また、ＯＫ４３２とは、「ピシバニール」（商品名、中外製薬株式会社製）として市販されている抗悪性腫瘍剤であり、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ａ群３型）Ｓｕ株をペニシリンＧの存在下、一定条件で処理し、凍結乾燥して得られる菌体製剤である。ＯＫ４３２は、免疫活性測定の際の指標となる物質として当業界で広く使用されているものである。
【００３０】
ＩＬ−１２誘導活性の測定は以下の方法で行うことができる。
（１）試薬の調製
ＰＢＳ：ＮａＣｌ  ８０ｇ、Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ  ２９ｇ、ＫＣｌ  ２ｇ、ＫＨ２ＰＯ４  ２ｇを蒸留水に溶解し１Ｌとする。
ＦＣＳ（Ｆｅｔａｌ  Ｃａｌｆ  Ｓｅｒｕｍ）：冷凍保存してあるＦＣＳを５６℃ウォーターバスに４０分処理により非働化し、氷冷する。７０μｍセルストレーナーを通し、滅菌容器に入れ冷蔵保存する。１〜２ヵ月程度使用する。
ＥＴ（−）ＲＰＭＩ１６４０Ｍｅｄｉｕｍ：ＲＰＭＩ１６４０  ３１．２ｇ、ＮａＨＣＯ３  ３．７５ｇ、ペニシリンＧ−Ｋ（萬有製薬１００万単位）０．１８ｇ、カナマイシン  ０．１８ｇを注射用水３Ｌに溶解後ＣＯ２ガスを吹き込んだ後０．４５μｍのフィルターでろ過する。
Ｔｕｒｃ染色後：０．０１％ゲンチアナバイオレット水溶液：酢酸：水＝１：１：９８に混合し、冷蔵保存する。
【００３１】
（２）マクロファージの調製
雄のＩＣＲマウス（４〜８Ｗ）の腹腔内に１ｇ／１００ｍｌ濃度のグリセリン溶液を０．４ｍｌ注射し１晩飼育する。マウスを頚椎脱臼で屠殺した後、冷却したＰＢＳを５ｍｌ腹腔内に注射し腹をよくもんだ後、腹腔内液を約４ｍｌ注射器で取り出す。シリコンコートしたスピッツ管に腹腔内液を入れ、冷却遠心機で１２００ｒｐｍ、５分遠心し、上清及び壁面の赤血球を除去する。冷ＰＢＳを加えピペッティングで分散し、８００ｒｐｍ、５分遠心する。上清及び壁面の赤血球を除去する。この操作を更に１回繰り返し最後に１％ＦＣＳ加ＥＴ−ＲＰＭＩ１６４０Ｍｅｄｉｕｍ（インビトロジェイン社製）を１ｍｌ／マウス加える。この液を５０μｌとチェルク染色液５０μｌを混合し、血球計算板にて生細胞数を数える。この数値から１％ＦＣＳ加ＥＴ−ＲＰＭＩ１６４０Ｍｅｄｉｕｍを用いて細胞数を１×１０６／ｍｌに調整する。（マクロファージ液）。９６穴平底プレートにマクロファージ液を２００μｌずつ入れ、１．５〜５時間ＣＯ２インキュベーターで培養する。
【００３２】
（３）ＩＬ−１２の誘導
菌末を１ｍｇ／ｍｌになるよう５％ＦＣＳ加ＥＴ−ＲＰＭＩ１６４０Ｍｅｄｉｕｍで調整した後、超音波処理を行い菌体を分散させる。この液を５％ＦＣＳ加ＥＴ−ＲＰＭＩ１６４０Ｍｅｄｉｕｍで１００倍に希釈し、９６穴Ｕ型プレートに２５０μｌに入れてＣＯ２インキュベーターで１時間保温する。
【００３３】
上記（２）で得たマクロファージ液の上清を抜き、３７℃に保温したＰＢＳで２回洗浄する。これに上記の希釈した菌末液を２００μｌ加え、ＣＯ２インキュベーターで２２時間培養してＩＬ−１２を誘導する。
【００３４】
（４）ＩＬ−１２の測定
ＢＩＯ  ＳＯＵＲＣＥ  ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ社製マウスＩＬ−１２測定キット「Ｃｙｔｏｓｃｒｅｅｎ」を用いて行う。なお、マクロファージのロット差を調整するためにサンプルと同濃度のＯＫ４３２を測定し、その測定値との比活性として表す。
【００３５】
本発明者らは、上記方法で各種の乳酸菌についてＩＬ−１２誘導活性を測定した。その結果の一例を表１に示す。
【００３６】
【表１】
2004236599.tif 000002
【００３７】
これらの結果から、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・クレモリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃｉｕｍ）、ラクトバチルス・ガッセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）等が、ＩＬ−１２誘導活性がＯＫ４３２と同等かそれよりも高いことが分かった。したがって、本発明においては、これらの乳酸菌がより好ましく用いられる。
【００３８】
また、上記ビフィズス菌としては、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｒｅｖｅ）等が例示できる。ビフィズス菌を摂取することにより、腸管内へのＩｇＡの分泌を促進して感染抵抗性を高める免疫賦活効果、便秘改善効果、コレステロール低減効果等が期待できる。これらのビフィズス菌は、乳酸菌飲料やヨーグルト等に用いられており、当業者が容易に入手できるものである。
【００３９】
また、上記酵母としては、サッカロミセス・セルビシア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）等が例示できる。酵母を摂取することにより、ビタミンやアミノ酸の補給、抗腫瘍効果、便秘改善効果、コレステロール低減効果、免疫賦活効果等が期待できる。酵母は、ビール、ワイン、パン等に用いられており、当業者が容易に入手できるものである。
【００４０】
また、クロレラとしては、クロレラ・ピレノイドーサ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｐｙｒｅｎｏｉｄｏｓａ）等が例示できる。クロレラを摂取することにより、抗腫瘍効果、抗潰瘍効果、便秘改善効果、コレステロール低減効果、免疫賦活効果等が期待できる。クロレラは市販されており、例えば、日本クロレラ株式会社、クロレラ工業株式会社等から容易に入手できる。
【００４１】
また、スピルリナとしては、スピルリナ・プラテンシス（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）等が例示できる。スピルリナを摂取することにより、抗腫瘍効果、便秘改善効果、コレステロール低減効果、免疫賦活効果等が期待できる。スピルリナは、市販されており、例えば、大日本インキ株式会社等から容易に入手できる。
【００４２】
本発明においては、上記菌体及び／又は藻体は、加熱殺菌されたものが好ましく用いられる。加熱殺菌の方法は特に制限されず、例えば、常法に従って上記菌体や藻体を培養し、培養液ごと加熱殺菌してもよく、培養液から菌体や藻体を回収して適量の水に懸濁して加熱殺菌してもよい。また、市販されている上記菌体や藻体の粉末を水に懸濁して加熱殺菌してもよい。加熱殺菌条件は、通常、８０〜１０５℃で５〜３０分間殺菌すればよい。なお、加熱殺菌した菌体は、適宜粉末化して用いてもよく、懸濁液として用いてもよい。
【００４３】
本発明の納豆製品は、納豆の入った容器にタレやカラシの小袋が添付されている製品と同形態の製品であり、上記菌体や藻体は、喫食する際に納豆と混ぜることができるように小袋に充填して添付される。本発明においては、上記菌体及び／又は藻体の粉末、あるいは懸濁液をそのまま小袋に充填して添付することができる。この場合、タレやカラシは別の小袋に充填して添付することができる。また、納豆の調味と上記菌体や藻体の添加を同時に行うことができるように、上記菌体及び／又は藻体をタレやカラシに配合し、これを小袋に充填して添付することもできる。
【００４４】
本発明の納豆製品における上記菌体及び／又は藻体の添付量は、該菌体及び／又は藻体の有する生理活性が期待できる量であれば特に制限はないが、納豆１食分（通常、納豆５０ｇ）当り、１〜２００ｍｇが好ましく、５〜１００ｍｇがより好ましい。また、上記菌体及び／又は藻体をタレやカラシに配合して添付する場合は、タレやカラシの添付量に基づいて、上記所定量の菌体及び／又は藻体を摂取できるように、上記菌体及び／又は藻体をタレやカラシに配合すればよい。
【００４５】
本発明の納豆製品は、喫食する際に、納豆と上記菌体及び／又は藻体を混ぜることができるようにしたので、納豆菌の発酵によって、これらの菌体や藻体の有する生理活性効果が損なわれることがなく、納豆の有する生理活性効果と、上記菌体及び／又は藻体の有する生理活性効果の両方が効率よく発揮される。
【００４６】
例えば、本発明の納豆製品は、後述する実施例に示されるように、通常の納豆に比べて優れたコレステロール低減効果を有しており、コレステロール低減剤として利用できる。また、ＩＬ−１２誘導活性がＯＫ４３２と同等かそれよりも高い乳酸菌を用いることにより、乳酸菌の有する免疫賦活効果が期待できるので、免疫賦活剤としても利用できる。
【００４７】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。なお、以下の実施例において、ＩＬ−１２誘導活性は上述した方法に従って測定した。
【００４８】
実施例１
納豆菌とエンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、ＡＴＣＣ  １９４３３）とを一緒に培養することにより、エンテロコッカス・フェカリスの有する生理活性（ＩＬ−１２誘導活性）が変化するかどうかの試験を行った。納豆菌株としては、▲１▼市販の納豆菌（宮城野菌、有限会社宮城野納豆製造所製、単菌ではなく数種の菌株が混合されたもの）、▲２▼市販の納豆菌より単離した納豆菌（以下、単に単離納豆菌という）を用いた。
【００４９】
（１）１２１℃で１５分滅菌した０．１％グルコースＳＰＣ培地（以下、単にＳＰＣ培地という）３０ｍｌに、エンテロコッカス・フェカリスの懸濁液（１０ｍｇ／ｍｌ）０．３ｍｌと、納豆菌の懸濁液１００μｌとを接種し、３７℃で２０時間振とう培養した後、沸騰浴中（１００℃）で２０分間殺菌した。なお、納豆菌とエンテロコッカス・フェカリスとを混合した直後のサンプルを対照サンプルとした。
【００５０】
そして、エンテロコッカス・フェカリスに対するポリクローナル抗体（商品名「ＥＦ−アッセイ」、コンビ株式会社製）を用いて各培養液中のエンテロコッカス・フェカリスを検出し、培養液１ｍｌ当りの菌数を測定した。その結果を表２に示す。
【００５１】
【表２】
2004236599.tif 000003
【００５２】
表２から、納豆菌とエンテロコッカス・フェカリスを混合培養しても、エンテロコッカス・フェカリスの菌数に変化は見られず、エンテロコッカス・フェカリスの菌体は納豆菌の酵素によって溶解しないことが分かった。
【００５３】
（２）上記（１）で得られた培養物を用いて、ＩＬ−１２誘導活性を測定した。また、対照として、市販の納豆菌のみでも同様の操作を行った。その結果を表３に示す。
【００５４】
【表３】
2004236599.tif 000004
【００５５】
表３から、納豆菌とエンテロコッカス・フェカリスを混合培養することにより、ＩＬ−１２誘導能が消失していることが分かる。
【００５６】
以上の結果から、納豆菌とエンテロコッカス・フェカリスを一緒に培養した場合、エンテロコッカス・フェカリスの有するＩＬ−１２誘導能が損なわれてしまい、免疫賦活効果が期待できないことが示唆された。
【００５７】
実施例２（コレステロール低減効果）
普段からコレステロール値の高いボランティア１３名に、▲１▼殺菌したエンテロコッカス・フェカリス（ＡＴＣＣ  １９４３３）を含むタレ（２０ｍｇ／袋）を添付した納豆（納豆自体は常法に従って製造したもの、以下納豆▲１▼という。）、▲２▼蒸煮大豆に納豆菌接種後、更に殺菌したエンテロコッカス・フェカリス（ＡＴＣＣ  １９４３３）を２０ｍｇ／大豆５０ｇ添加して発酵させて得られた納豆（以下納豆▲２▼という）、▲３▼普通の納豆（以下納豆▲３▼という）を、それぞれ１ヶ月間毎日摂取してもらった。なお、納豆の種類が変わるたびに、ボランティアには１ヶ月間の休止期間を設けると共に、その間の納豆の摂取を禁止した。
【００５８】
そして、試験開始直前、試験終了後に、血液検査を行い、血中の総コレステロール値、ＨＤＬ−コレステロール値、中性脂肪値、血糖値を測定した。納豆▲１▼を摂取した結果を表４、納豆▲２▼を摂取した結果を表５、納豆▲３▼を摂取した結果を表６に示す。
【００５９】
【表４】
2004236599.tif 000005
【００６０】
【表５】
2004236599.tif 000006
【００６１】
【表６】
2004236599.tif 000007
【００６２】
表４〜６から、納豆▲１▼を摂取することにより、摂取前に比べて総コレステロール値及び中性脂肪値が低下していることが分かる。一方、納豆▲２▼を摂取することにより、若干総コレステロール値が低下しているものの、中性脂肪値は上昇していることが分かる。また、納豆▲３▼を摂取しても、総コレステロール値に変化はなく、中性脂肪値が上昇していることが分かる。
【００６３】
【発明の効果】
以上説明したように本発明の納豆製品は、乳酸菌、ビフィズス菌、酵母、クロレラ及びスピルリナからなる群から選ばれた少なくとも１種以上の菌体及び／又は藻体が充填された小袋を別添として、喫食する際に納豆と混ぜることができるようにしたので、これらの菌体や藻体が有する生理活性を損なうことなく摂取することができる。その結果、納豆の有する生理活性と上記菌体や藻体の有する生理活性の両方が効率よく発揮され、コレステロール低減効果や免疫賦活効果等の優れた生理活性機能を有する納豆製品を提供することができる。