【手続補正書】
【提出日】平成24年5月10日(2012.5.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内の対象の遺伝子の発現を非侵襲性で監視する方法であって、
ａ）
ａａ）プロモーター配列と、
ｂｂ）動作的に前記プロモーター配列とリンクされた、対象のポリペプチドの前記遺伝子をコード化する配列と、
ｃｃ）動作的に前記ｂｂ）の配列と融合した蛍光レポーターポリペプチドをコード化する配列とを有する核酸分子を前記細胞内へ誘導するステップと、
ｂ）非侵襲性光学撮像方法により前記細胞内の前記蛍光レポーターポリペプチドを検出するステップと、
ｃ）前記細胞を対象の前記遺伝子の発現に影響する化合物と接触させるステップと、
ｄ）前記ステップｃ）の際に、非侵襲性光学撮像方法により前記細胞内の前記蛍光レポーターポリペプチドを検出するステップと、
ｅ）前記ステップｂ）で検出された蛍光レポーターポリペプチドのレベルと、前記ステップｄ）で検出された蛍光レポーターポリペプチドのレベルとを比較するステップと、
ｆ）前記ステップｅ）での比較に基づいて前記化合物により誘発された対象の前記遺伝子の発現についての変化を割り当てるステップとを少なくとも有する、方法。
【請求項２】
細胞内の対象の遺伝子の発現を体内で非侵襲性で監視する請求項１に記載の方法であって、
ａ）
ａａ）メチル化プロモーター配列と、
ｂｂ）動作的に前記プロモーター配列とリンクされた、対象のポリペプチドの前記遺伝子をコード化する配列と、
ｃｃ）動作的に前記ｂｂ）の配列と融合した蛍光レポーターポリペプチドをコード化する配列とを有する核酸分子を前記細胞内へ誘導するステップと、
ｂ）非侵襲性光学撮像方法により前記細胞内の前記蛍光レポーターポリペプチドを検出するステップと、
ｃ）前記細胞をデメチル化薬と接触させるステップと、
ｄ）前記ステップｃ）の際に、非侵襲性光学撮像方法により前記細胞内の前記蛍光レポーターポリペプチドを検出するステップと、
ｅ）前記ステップｂ）で検出された蛍光レポーターポリペプチドのレベルと、前記ステップｄ）で検出された蛍光レポーターポリペプチドのレベルとを比較するステップと、
ｆ）前記ステップｅ）での比較に基づいて前記デメチル化薬により誘発された対象の前記遺伝子の発現についての増加を割り当てるステップとを少なくとも有する、方法。
【請求項３】
ａ）
ａａ）メチル化プロモーター配列と、
ｂｂ）動作的に前記プロモーター配列とリンクされた、対象のポリペプチドの前記遺伝子をコード化する配列と、
ｃｃ）動作的に前記ｂｂ）の配列と融合した蛍光レポーターポリペプチドをコード化する配列とを有する核酸分子を、人体外又は動物体外の細胞内へ誘導するステップと、
ｂ）非侵襲性光学撮像方法により前記細胞内の前記蛍光レポーターポリペプチドを検出するステップと、
ｃ）前記細胞をデメチル化薬と接触させるステップと、
ｄ）前記ステップｃ）の際に、非侵襲性光学撮像方法により前記細胞内の前記蛍光レポーターポリペプチドを検出するステップと、
ｅ）前記ステップｂ）で検出された蛍光レポーターポリペプチドのレベルと、前記ステップｄ）で検出された蛍光レポーターポリペプチドのレベルとを比較するステップと、
ｆ）前記ステップｅ）での比較に基づいて前記デメチル化薬により誘発された対象の前記遺伝子の発現についての増加を割り当てるステップとを少なくとも有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
細胞内の対象の遺伝子の生体内での発現を非侵襲性で監視する請求項１に記載の方法であって、
ａ）
ａａ）プロモーター配列と、
ｂｂ）動作的に前記プロモーター配列とリンクされた、対象の前記遺伝子の機能的でないポリペプチドをコード化する配列と、
ｃｃ）動作的に前記ｂｂ）の配列と融合した蛍光レポーターポリペプチドをコード化する配列とを有する核酸分子を前記細胞内へ誘導するステップと、
ｂ）非侵襲性光学撮像方法により前記細胞内の前記蛍光レポーターポリペプチドを検出するステップと、
ｃ）前記細胞を対象の前記遺伝子に対して調整されたＲＮＡｉと接触させるステップと、
ｄ）前記ステップｃ）の際に、非侵襲性光学撮像方法により前記細胞内の前記蛍光レポーターポリペプチドを検出するステップと、
ｅ）前記ステップｂ）で検出された蛍光レポーターポリペプチドのレベルと、前記ステップｄ）で検出された蛍光レポーターポリペプチドのレベルとを比較するステップと、
ｆ）前記ステップｅ）での比較に基づいて前記ＲＮＡｉにより誘発された対象の前記遺伝子の発現についての減少を割り当てるステップとを少なくとも有する、方法。
【請求項５】
ａ）
ａａ）プロモーター配列と、
ｂｂ）動作的に前記プロモーター配列とリンクされた、対象のポリペプチドの前記遺伝子をコード化する配列と、
ｃｃ）動作的に前記ｂｂ）の配列と融合した蛍光レポーターポリペプチドをコード化する配列とを有する核酸分子を人体外又は動物体外の細胞内へ誘導するステップと、
ｂ）非侵襲性光学撮像方法により前記細胞内の前記蛍光レポーターポリペプチドを検出するステップと、
ｃ）前記細胞を対象の前記遺伝子に対して調整されたＲＮＡｉと接触させるステップと、
ｄ）前記ステップｃ）の際に、非侵襲性光学撮像方法により前記細胞内の前記蛍光レポーターポリペプチドを検出するステップと、
ｅ）前記ステップｂ）で検出された蛍光レポーターポリペプチドのレベルと、前記ステップｄ）で検出された蛍光レポーターポリペプチドのレベルとを比較するステップと、
ｆ）前記ステップｅ）での比較に基づいて前記ＲＮＡｉにより誘発された対象の前記遺伝子の発現についての減少を割り当てるステップとを少なくとも有する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記核酸分子及び／又は前記ＲＮＡｉが、正しいターゲッティング、識別及び位置決定又はこれらの混合のため、ソノポレーション、局在注入、又は抗体を宿主細胞抗原へ搬送するリポソームバッグの助けを借りて遺伝子移入により前記細胞へ導入される、請求項１乃至５の何れか一項に記載の方法。
【請求項７】
対象のポリペプチドの前記遺伝子が、ＣＡＤＭ１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．２）、Ｒｂ（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１）、ＺＭＹＮＤ１０（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．３）、ＲＡＳＳＦ５（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．４）、ＰＴＥＮ（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．５）、ＳＥＲＰＩＮＢ５（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．６）、ＥＰＢ４１Ｌ３（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．７）、及びＤＡＰＫ１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．８）を有するポリペプチドのグループから選択される、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項８】
対象のポリペプチドの前記遺伝子が、Ｈｅｒ−２ｎｅｕ（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．９）、ＶＥＧＦ（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１０）、ＲＡＳ（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１１）、Ｗｎｔ（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１２）、ＭＹＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１３）、ＥＲＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１４）及びＴＲＫ（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ．１５）を有するグループから選択される、請求項４又は５に記載の方法。
【請求項９】
細胞を対象の遺伝子の発現に影響する化合物と接触させる時間にわたって前記細胞内の対象の前記遺伝子の発現を監視し、よって前記化合物の効果を監視するための請求項１乃至８の何れか一項に記載の方法の使用。
【請求項１０】
細胞内の対象の遺伝子の発現に影響する化合物を送出し、同時に、前記化合物により誘発される対象の前記遺伝子の発現での影響を監視するだけでなく前記化合物の送出を監視するための請求項１乃至８の何れか一項に記載の方法の使用。
【請求項１１】
対象の遺伝子の発現での他の変化を得るために、対象の前記遺伝子の発現に影響する化合物の量を調整するための請求項１乃至８の何れか一項に記載の方法の使用。
【請求項１２】
別々に又は組み合わせて、最も有力なデメチル化薬を識別するために、種々異なるデメチル化薬をテストするための請求項２、３又は７に記載の方法の使用。
【請求項１３】
別々に又は組み合わせて、最も有力なＲＮＡｉを識別するために、対象の一つの遺伝子に対して調整される種々異なるＲＮＡｉをテストするための請求項４、５又は８に記載の方法の使用。