【手続補正書】
【提出日】平成24年7月5日(2012.7.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グリア線維酸性蛋白質（GFAP）を指向するラクダ科動物の重鎖抗体の可変ドメイン（VHHドメイン）。
【請求項２】
前記GFAPが哺乳動物、好ましくはヒト由来であることを特徴とする請求項１に記載のVHHドメイン。
【請求項３】
配列番号1のコンセンサスアミノ酸配列を含むか、または該配列からなることを特徴とする請求項１または２に記載のVHHドメイン。
【請求項４】
配列番号3、配列番号6、配列番号9および配列番号12からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか、または該配列からなることを特徴とする請求項３に記載のVHHドメイン。
【請求項５】
（a）請求項１または２に定義されるGFAPでラクダ科動物を免疫にするステップと、
（b）免疫にされたラクダ科動物の末梢リンパ球を単離し、トータルRNAを得、対応するcDNAを合成するステップと、
（c）VHHドメインをコードするcDNAフラグメントのライブラリを構築するステップと、
（d）PCRを用いて、ステップ（c）で得られたVHHドメインをコードするcDNAフラグメントをmRNAに転写し、mRNAをリボソームディスプレイ方式に変換し、リボソームディスプレイによってVHHドメインを選択するステップと、
（e）ベクター内のVHHドメインを発現するステップと
を含む方法によって得ることができることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載のVHHドメイン。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のVHHドメインを含むことを特徴とするポリペプチド。
【請求項７】
C末端にアミノ酸配列LEHHHHHH（配列番号15）を含むことを特徴とする請求項６に記載のポリペプチド。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のVHHドメインを含むことを特徴とする単離された抗体またはそのフラグメント。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のVHHドメイン、請求項６もしくは７に記載のポリペプチド、または請求項８に記載の抗体もしくはそのフラグメントをコードすることを特徴とする単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１０】
ヒンジがないか、または長いヒンジを有するVHHドメインDNAをコードする遺伝子由来のcDNAであることを特徴とする請求項９に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１】
請求項９または１０に記載のポリヌクレオチドを、転写プロモーターの制御下に含むことを特徴とする組換え発現カセット。
【請求項１２】
請求項９もしくは１０に記載のポリヌクレオチドまたは請求項１１に記載の組換え発現カセットを含むことを特徴とする組換えベクター。
【請求項１３】
請求項１１に記載の組換え発現カセットまたは請求項１２に記載の組換えベクターを含むことを特徴とする宿主細胞。
【請求項１４】
‐28 rue du Dr Roux, 75724 Paris Cedex 15, FranceのCollection Nationale de Cultures de Microorganisms（CNCM）に、寄託番号I‐3923で寄託された宿主細胞、
‐CNCMに寄託番号I‐3924で寄託された宿主細胞、
‐CNCMに寄託番号I‐3925で寄託された宿主細胞、および
‐CNCMに寄託番号I‐3926で寄託された宿主細胞
からなる群より選択されることを特徴とする請求項１３に記載の宿主細胞。
【請求項１５】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のVHHドメイン、または請求項６もしくは７に記載のポリペプチド、または請求項８に記載の抗体を含み、興味対象の物質に直接的もしくは間接的に、共有結合もしくは非共有結合で結合していることを特徴とする治療剤。
【請求項１６】
前記興味対象の物質がペプチド、酵素、核酸、ウイルス、蛍光体、重金属、化学物質および放射性同位体からなる群より選択される治療用化合物であることを特徴とする請求項１５に記載の治療剤。
【請求項１７】
前記興味対象の物質が請求項１６で定義された治療用化合物を含むリポソームまたはポリマー物質であることを特徴とする請求項１５に記載の治療剤。
【請求項１８】
前記治療用化合物が抗癌化合物、鎮痛化合物、抗炎症化合物、抗うつ化合物、抗痙攣化合物、または抗神経変性化合物からなる群より選択されることを特徴とする請求項１６または１７に記載の治療剤。
【請求項１９】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のVHHドメイン、または請求項６もしくは７に記載のポリペプチド、または請求項８に記載の抗体を含み、興味対象の物質に直接的もしくは間接的に、共有結合もしくは非共有結合で結合していることを特徴とする診断剤。
【請求項２０】
前記興味対象の物質がペプチド、酵素、核酸、ウイルス、蛍光体、重金属、化学物質および放射性同位体からなる群より選択される診断用化合物であることを特徴とする請求項１９に記載の診断剤。
【請求項２１】
前記興味対象の物質が請求項２０で定義された診断用化合物を含むリポソームまたはポリマー物質であることを特徴とする請求項１９に記載の診断剤。
【請求項２２】
脳のイメージングまたは脳障害の診断もしくはモニタリングにおける、請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の診断剤の使用。
【請求項２３】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のVHHドメイン、請求項６もしくは７に記載のポリペプチド、請求項８に記載の抗体、請求項９もしくは１０に記載のポリヌクレオチド、または請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の診断剤を少なくとも含むことを特徴とする脳のイメージング、または脳障害の診断もしくはモニタリングのためのキット。
【請求項２４】
（a）請求項１〜５のいずれか１項に記載のVHHドメイン、請求項６もしくは７に記載のポリペプチド、または請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の診断剤と、適切な生体試料とをインビトロまたはエクスビボにおいて接触させるステップと、
（b）生体試料中のGFAP量を測定するステップと、
（c）ステップ（b）で測定した量と、標準量とを比較し、量の差が疾患の存在のマーカーを構成するステップと
を含む対象のグリア線維酸性蛋白質（GFAP）によって媒介される疾患の検出方法。
【請求項２５】
請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の治療剤または請求項９に記載のポリヌクレオチドおよび医薬的に許容される担体を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項２６】
グリア線維酸性蛋白質（GFAP）によって媒介される疾患の治療に使用するための、または脳腫瘍、星状細胞腫、疼痛、精神障害もしくは神経変性障害の治療に使用するための請求項１〜５のいずれか１項に記載のVHHドメイン、請求項６もしくは７に記載のポリペプチド、請求項８に記載の抗体、請求項９もしくは１０に記載のポリヌクレオチド、請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の治療剤または請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記GFAPによって媒介される疾患がアレキサンダー病、グリオーシスおよび星状細胞腫からなる群より選択される請求項２６に記載のVHHドメイン。
【請求項２８】
治療剤または診断剤を製造するための、請求項１〜５のいずれか１項に記載のVHHドメイン、請求項８に記載の抗体、または請求項６もしくは７に記載のポリペプチドの使用。
【請求項２９】
哺乳動物の血液脳関門もしくは細胞膜を横切っての、好ましくは星状細胞膜を横切っての興味対象の物質の送達用の、または興味対象の物質の哺乳動物星状細胞内への送達用のペプチドベクターを製造するための請求項１〜５のいずれか１項に記載のVHHドメイン、請求項６もしくは７に記載のポリペプチドまたは請求項８に記載の抗体の使用。
【請求項３０】
細胞内標的をターゲティングするための、または細胞内標的を含む哺乳動物細胞内への興味対象の物質の送達用のペプチドベクターを製造するための、細胞内標的を指向し、少なくとも8.5の等電点を有するラクダ科動物の重鎖抗体の可変ドメイン（VHHドメイン）の使用。
【請求項３１】
前記VHHドメインが超安定性であることを特徴とする請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
前記VHHドメインが請求項１〜５のいずれか１項に記載のグリア線維酸性蛋白質（GFAP）を指向することを特徴とする請求項３０または３１に記載の使用。
【請求項３３】
前記哺乳動物細胞が星状細胞であることを特徴とする請求項３０〜３２のいずれか１項に記載の使用。