【手続補正書】
【提出日】平成26年7月17日(2014.7.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2013539015.tif 000001
を有する化学的に反応性の高い発光性色素であって、式中、ＤＹＥは、発光性色素を表し、ＲＭは、化学的に反応性の高い部分であり、かつ、ＷＳＢは、発光性色素の同じ環の２つの巨大な置換基を架橋するため、または発光性色素の２つの異なる環を架橋するためのいずれかに使用される水溶性の橋であり、但し、ＷＳＢは少なくとも１つのスルホネートまたはホスホネート基を含有することを特徴とする発光性色素、または
式：
【化２】
2013539015.tif 000002
を有する複合体であって、式中、ＤＹＥは、発光性色素を表し；ＷＳＢは、発光性色素の同じ環の２つの巨大な置換基を架橋するため、または発光性色素の２つの異なる環を架橋するために使用される水溶性の橋であり、かつ、少なくとも１つのスルホネートまたはホスホネート基を含有し；ＢＩＯＰＯＬＹＭＥＲは、１０００ダルトンより大きい分子量を有する生物学的物質であり；ｎは、１〜３０の整数であり、但し、ＤＹＥは、直接的に、またはリンカー「Ｌ」を介して間接的にＢＩＯＰＯＬＹＭＥＲと共有結合しており；かつ、Ｌは、０〜３０原子の長さのリンカーであることを特徴とする複合体、
である化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、ＤＹＥは、シアニン、フルオレセイン、ローダミン、オキサジン、オキサゾール、ボディピー、フタロシアニンまたは金属錯体誘導体であることを特徴とする化合物。
【請求項３】
前記請求項１または２に記載の化合物であって、前記化合物は前記化学的に反応性の高い発光性色素であり、ＲＭは、アクリルアミド、アミン、カルボン酸、カルボン酸の活性化エステル、アシルアジド、アシルニトリル、アルデヒド、ハロゲン化アルキル、無水物、ハロゲン化アリール、アジド、アジリジン、ボロネート、ジアゾアルカン、ハロアセトアミド、ハロトリアジン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、イミドエステル、イソシアネート、イソチオシアネート、マレイミド、反応性白金錯体、ハロゲン化スルホニルまたはソラーレン誘導体であることを特徴とする化合物。
【請求項４】
前記請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物であって、ＷＳＢは、スルホネートおよびホスホネート基から選択される少なくとも２つの基を含有することを特徴とする化合物。
【請求項５】
前記請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物であって、ＷＳＢは、下記の構造またはそれらの類似体：
【化３−１】
2013539015.tif 000003
【化３−２】
2013539015.tif 000004
【化３−３】
2013539015.tif 000005
の１つを含有することを特徴とする化合物。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物であって、
前記化合物は前記化学的に反応性の高い発光性色素であって、
第１の式：
【化４】
2013539015.tif 000006
（式中、Ｒ1からＲ3は、独立に、水素、ハロゲン、１〜２０個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはＲＭであり；Ｒ5およびＲ6は、独立に、１〜２０個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはＲＭであり；Ｒ10からＲ19は、独立に、水素、１〜２０個の炭素を有するアルキル、１〜２０個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはＲＭであり；Ｒ20およびＲ21は、独立に、アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはＲＭであり；Ｒ10およびＲ21、Ｒ10およびＲ11、Ｒ11およびＲ12、Ｒ12およびＲ13、Ｒ5およびＲ13、Ｒ6およびＲ15、Ｒ15およびＲ16、Ｒ16およびＲI7、Ｒ17およびＲ18、またはＲ18およびＲ20の１つまたは複数は、任意選択的に組み合わさって、シクロアルキル、ヘテロ環、アリールまたはヘテロアリール環を形成し；ＲＭは、化学的に反応性の高い部分であり；かつ、ｎは０から３である）；
第２の式：
【化５】
2013539015.tif 000007
（式中、ＸおよびＹは、独立に、Ｏ、Ｓ、ＳｅまたはＣＲ20Ｒ21であり；ｎは０から３であり；Ｒ1からＲ3は、独立に、水素、ハロゲン、１〜２０個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはＲＭであり；Ｒ10からＲ19は、独立に、水素、１〜２０個の炭素を有するアルキル、１〜２０個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはＲＭであり；Ｒ20およびＲ21は、独立に、アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはＲＭであり；ＹおよびＲ10、Ｒ10およびＲ11、Ｒ11およびＲ12、Ｒ12およびＲ13、ＸおよびＲ18、Ｒ15およびＲ16、Ｒ16およびＲ17、またはＲ17およびＲ18の１つまたは複数は、任意選択的に組み合わさって、シクロアルキル、ヘテロ環、アリールまたはヘテロアリール環を形成し；Ｒ20およびＲ21は、独立に、アルキル、シクロアルキル、ヘテロ環、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはＲＭであり；Ｒ20およびＲ21は、任意選択的に組み合わさって、シクロアルキルまたはヘテロ環を形成し；かつ、ＲＭは、化学的に反応性の高い部分である）；
第３の式：
【化６】
2013539015.tif 000008
（式中、Ｒ1からＲ3は、独立に、水素、ハロゲン、１〜２０個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはＲＭであり；Ｒ4からＲ6は、独立に、１〜２０個の炭素を有するアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはＲＭであり；Ｒ10からＲ19は、独立に、水素、１〜２０個の炭素を有するアルキル、１〜２０個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはＲＭであり；Ｒ20は、アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはＲＭであり；Ｒ4およびＲ10、Ｒ5およびＲ10、Ｒ10およびＲ11、Ｒ11およびＲ12、Ｒ12およびＲ13、Ｒ6およびＲ15、Ｒ15およびＲ16、Ｒ16およびＲ17、Ｒ17およびＲ18、またはＲ18およびＲ20の１つまたは複数は、任意選択的に組み合わさって、シクロアルキル、ヘテロ環、アリールまたはヘテロアリール環を形成し；ＲＭは、化学的に反応性の高い部分であり；ｎは０から３である）；  
第４の式：
【化７】
2013539015.tif 000009
（式中、Ｒ1は、水素、アルキル、アルコキシ、カルボキシまたはスルホであり；Ｒ2からＲ9は、独立に、水素、１〜２０個の炭素を有するアルキル、１〜２０個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはＲＭであり；Ｒ10、Ｒ11、Ｒ12およびＲ13は、独立に、アルキル、ハロゲン化アルキル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ポリエチレングリコールまたはＲＭであり；Ｒ8およびＲ10、またはＲ7およびＲ13の１つまたは複数は、組み合わさって、５から８員環を形成し；Ｒ6およびＲ7、またはＲ8およびＲ9の１つまたは複数は、組み合わさって、アリールまたはヘテロアリール環を形成し；かつ、ＲＭは、化学的に反応性の高い部分である）；
第５の式：
【化８】
2013539015.tif 000010
（式中、Ｌは、０〜３０原子の長さのリンカーであり；かつ、ＲＭは、アミン、カルボン酸、カルボン酸の活性化エステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、イソチオシアネート、マレイミドまたはハロゲン化スルホニルである）；
第６の式：
【化９】
2013539015.tif 000011
（式中、Ｒ1からＲ6は、独立に、水素、１〜２０個の炭素を有するアルキル、１〜２０個の炭素を有するアルコキシ、トリフルオロメチル、ハロゲン、メチルチオ、スルホニル、ボロニル、ホスホニル、シアノ、カルボニル、ヒドロキシ、アミノ、チオール、アリール、ヘテロアリールまたはＲＭであり；かつ、ＲＭは、化学的に反応性の高い部分である）；または
第７の式：
【化１０】
2013539015.tif 000012
（式中、Ｌは、０〜３０原子の長さのリンカーであり；かつ、ＲＭは、アミン、カルボン酸、カルボン酸の活性化エステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、イソチオシアネート、マレイミドまたはハロゲン化スルホニルである）
を有する前記化学的に反応性の高い発光性色素であることを特徴とする化合物。
【請求項７】
請求項６に記載の化合物であって、ＲＭは、アミン、カルボン酸、カルボン酸の活性化エステル、ハロアセトアミド、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、イソチオシアネート、マレイミドまたはハロゲン化スルホニルであることを特徴とする化合物。
【請求項８】
請求項６および７のいずれかに記載の化合物であって、ＷＳＢは、スルホネートおよびホスホネート基から選択される少なくとも２つの基を含有することを特徴とする化合物。
【請求項９】
請求項６〜８のいずれか一項に記載の化合物であって、ＷＳＢは、ＲＭを含有することを特徴とする化合物。
【請求項１０】
請求項６〜９のいずれか一項に記載の化合物であって、
前記化学的に反応性の高い発光性色素が第１の式を有する場合、Ｒ12およびＲ16は、独立に、スルホネートまたはホスホネート基であり、
前記化学的に反応性の高い発光性色素が第２の式を有する場合、Ｒ11およびＲ17は、独立に、スルホネートまたはホスホネート基であり、
前記化学的に反応性の高い発光性色素が第４の式を有する場合、Ｒ1、Ｒ3およびＲ4は、独立に、カルボキシまたはスルホネート基であることを特徴とする化合物。
【請求項１１】
請求項６〜１０のいずれか一項に記載の化合物であって、前記化合物は前記複合体であり、前記複合体は、式１、２、３、４、５、６、または７を有する化学的に反応性の高い発光性色素と、ＢＩＯＰＯＬＹＭＥＲとの反応から誘導されることを特徴とする化合物。
【請求項１２】
請求項１〜２および１１のいずれか一項に記載の化合物であって、前記化合物は前記複合体であり、ＢＩＯＰＯＬＹＭＥＲは、ペプチド、タンパク質、多糖、オリゴヌクレオチド、核酸、脂質、リン脂質、リポタンパク質、リポ多糖、リポソーム、脂溶性高分子、高分子微粒子、動物細胞、植物細胞、細菌、酵母またはウイルスであることを特徴とする化合物。
【請求項１３】
請求項１〜２および１１〜１２のいずれか一項に記載の化合物であって、前記化合物は前記複合体であり、ＢＩＯＰＯＬＹＭＥＲは抗体であることを特徴とする化合物。
【請求項１４】
試料中における特異的な結合対の相補的メンバーを検出する方法であって、
ａ）前記試料に請求項１に記載の化合物を添加するステップであって、前記化合物は前記複合体であり、前記ＢＩＯＰＯＬＹＭＥＲは、前記特異的な結合対の一方のメンバーを含むステップと、
ｂ）前記複合体が前記試料中において前記相補的メンバーとの錯体を形成するための十分な時間を与え、前記錯体は検出可能な蛍光応答を呈するステップと、
ｃ）蛍光機器で前記錯体を検出して前記相補的メンバーを位置づけるステップと
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１５】
前記特異的な結合対の第１のメンバーは、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、核酸高分子または多糖であること、または前記特異的な結合対の第１のメンバーは、抗体、抗体フラグメント、アビジン、ストレプトアビジン、レクチンまたは酵素を含むことを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
細胞機能をモニターする方法であって、
ａ）請求項１に記載の化合物を、細胞を含有する試料に添加するステップであって、前記化合物は前記複合体であり、前記ＢＩＯＰＯＬＹＭＥＲは、特異的な結合対の一方のメンバーを含み、前記細胞は、前記特異的な結合対の他方のメンバーを含有するステップと、
ｂ）前記試料を、前記複合体が前記特異的な結合対の前記他方のメンバーとの錯体を形成するための十分な時間にわたってインキュベートするステップと、
ｃ）前記試料を、前記複合体からの蛍光応答を発生させる波長で照射するステップと、
ｄ）前記複合体からの蛍光応答を検出するステップと、
ｅ）前記蛍光応答を細胞機能と相関させるステップと
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１７】
ａ）前記細胞を刺激するステップと、
ｂ）前記複合体からの前記蛍光応答の強度における変化をモニターするステップと、
ｃ）前記蛍光強度における前記変化を細胞機能と相関させるステップと
をさらに含むことを特徴とする、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１に記載の化合物と、
第２のアッセイ構成要素と
を含む細胞アッセイを実施するためのキットであって、
前記化合物は前記複合体であることを特徴とするキット。