(57)【要約】【課題】ベシクルの利用範囲を拡張するための、イオン性を有さない物質による非イオン性ベシクルを提供すること。【解決手段】次の式（Ｉ）【化１】2004075592.tif 000014［式中、Ａは次の基【化２】2004075592.tif 000015（ここで、ｗ、ｘ、ｙおよびｚの合計は、０から１００の数を示す）から選ばれる親水性基を示し、ｎは、５から３０の数を示す］で表される化合物を主成分として形成される非イオン性ベシクル【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式（Ｉ）
【化１】
2004075592.tif 000012
［式中、Ａは次の基
【化２】
2004075592.tif 000013
（式中、ｗ、ｘ、ｙおよびｚの合計は、０から１００の数を示す）
から選ばれる親水性基を示し、ｎは、５から３０の数を示す］
で表される化合物を主成分として構成される非イオン性ベシクル。
【請求項２】
更に、コレステロールおよび／または他のステロイド類を含む請求項第１項記載の非イオン性ベシクル。
【請求項３】
請求項第１項または第２項記載の非イオン性ベシクルの閉鎖された水相に、水溶性薬効成分を含有せしめてなる薬物担体。
【請求項４】
請求項第１項または第２項記載の非イオン性ベシクルの二分子膜内に、脂溶性薬効成分を含有せしめてなる薬物担体。
【請求項５】
薬物が、コウジ酸もしくはそのエステル、ビタミンＣもしくはその誘導体またはビタミンＥもしくはその誘導体である請求項第３項または第４項記載の薬物担体。
【請求項６】
外用剤配合用のものである請求項第３項ないし第５項の何れかの項記載の薬物担体。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、非イオン性物質で形成される非イオン性ベシクルに関する。
【０００２】
【従来の技術】
以前より、リン脂質を水に懸濁させると、このリン脂質が会合して二分子膜を形成し、水相を閉じこめたベシクル（小胞体）を形成することが知られている。このベシクルは、リポソームとも呼ばれ、生体膜のモデルとしてや、薬物担体として注目を集めた。
【０００３】
その後、ベシクル形成能を有する人工脂質を見出す努力が行われ、２本の長鎖アルキル基を有する、例えばジ長鎖アルキルジメチルアンモニウム等が見出されている。
【０００４】
しかしながら、従来提供されているベシクル形成能を有する人工脂質は、イオン性を有するものがほとんどで、その利用が制限される場合もあり、イオン性を有さないベシクル形成物質の提供が、ベシクルの利用範囲を拡張する上で必要とされていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記実情においてなされたものであり、イオン性を有さない物質による非イオン性ベシクルを提供するものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく、両親媒性である非イオン性界面活性剤に着目し、それらのベシクル形成能を検討していたところ、特定の構造を有するものについてのみベシクル形成能が認められることおよびこのものとコレステロールを組み合わせて形成した非イオン性ベシクルは安定性が高いことを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち本発明は、次の式（Ｉ）
【化３】
2004075592.tif 000002
［式中、Ａは次の基
【化４】
2004075592.tif 000003
（ここで、ｗ、ｘ、ｙおよびｚの合計は、０から１００の数を示す）
から選ばれる親水性基を示し、ｎは、５から３０の数を示す］
で表される化合物を主成分として形成される非イオン性ベシクルを提供するものである。
【０００８】
また本発明は、更にコレステロールおよび／または他のステロイド類を含む上記非イオン性ベシクルを提供するものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明の非イオン性ベシクル（以下、「ベシクル」という）を形成する化合物は、上記式（Ｉ）で表される化合物であるが、この化合物（Ｉ）は、何れも非イオン性界面活性剤として公知であるか、公知化合物に準じて製造できるものである。
【００１０】
具体的には、上記化合物（Ｉ）のうち、基Ａが次の式
【化５】
2004075592.tif 000004
で示され、ｎが１７であるものは、スパン６０の商品名で販売されているソルビタンモノステアレートであり、基Ａが次の式
【化６】
2004075592.tif 000005
（式中、ｗ、ｘ、ｙおよびｚの合計は、２０である）
で示され、ｎが１７あるものは、ツィーン６１の商品名で販売されているポリオキシエチレンソルビタンモノステアレートである。
【００１１】
更に、基Ａが次の式
【化７】
2004075592.tif 000006
で示され、ｎが１８であるものは、ブリジ（Ｂｒｉｊ）７２の商品名で市販されているポリオキシエチレン（２）ステアリルエーテルであり、基Ａが次の式
【化８】
2004075592.tif 000007
で示され、ｎが１７であるものは、グリセリルモノステアレート（ＧＭＳ）である。
【００１２】
上記化合物（Ｉ）において、エチレン鎖（−ＣＨ２−）部分の長さｎは、ベシクルを形成するか否かの上で極めて重要である。すなわち、このポリエチレン鎖の長さ（ｎ）が１２未満では、ベシクルを形成することができず、少なくとも１３以上の長さが必要である。例えば、上記ツィーン６１と比べ、エチレン鎖のみが１１と短く、他は同じであるツィーン２０にはベシクル形成能を有さない。
【００１３】
また、従来のベシクル形成物質と異なり、エチレン鎖で形成されるアルキル基が１本であることが必要である。例えば、アルキル基が２本である点のみでグリセリルモノステアレートと異なるグリセリルジステアレートではベシクルは形成されない。
【００１４】
上記の化合物（Ｉ）は、これ単独でもベシクルを形成させることができるが、他の物質、例えばコレステロールを加えることにより、安定なベシクルを形成させることができる。この場合の化合物（Ｉ）とコレステロールの比は、９：１から１：９程度とすることが好ましく、特に、９：１から５：５とすることが好ましい。
【００１５】
以上説明した化合物（Ｉ）から、あるいはこれとコレステロールないしは他のステロイド類の組合せからベシクルを形成させるには、基本的にはバンガム（Ｂａｎｇｈａｍ）の方法に従えばよい。すなわち、化合物（Ｉ）やこれとコレステロールないしは他のステロイド類の混合物（以下、「ベシクル形成物質」という）を適当な溶媒に溶かし、これをナス型フラスコ等の容器中で減圧して薄膜を形成させる。溶媒が完全に除去された後、容器中に水性溶媒を加え、ボルテックスミキサーで激しく攪拌する。この溶液中に多層膜ベシクル（ＭＬＶ）が形成すると白濁するのでこれを目安に反応を終了させる。
【００１６】
このようにして得られたＭＬＶは、平均０．０５から１００μｍ程度の二分子膜（ベシクル形成物質の親水性基Ａが外側を向き、エチレン鎖で形成されるアルキル基同士が内側を向いた二分子膜）を有するものであるが、これを超音波処理（２０〜１０００ｋＨｚ）すると単層ベシクル（ＳＵＶ）が得られる。
【００１７】
上記のベシクルの製造に当たっては、種々の薬効成分を加え、これをベシクル中に含有せしめることができる。すなわち、上記製造法において、脂溶性薬効成分をベシクル形成物質とともに適当な溶媒に溶かし込めば、二分子膜のアルキル基の間の空間に保持することができる。この場合のベシクルの形態は、ＭＬＶであることが好ましい。
【００１８】
一方、上記製造方法において、溶媒が除去された後に加える水性溶媒中に水溶性の薬効成分を加え、更に超音波処理を行うことにより、ＳＵＶ中に当該成分を含有させることができる。この場合は、遠心分離等の手段で、ＳＵＶ中に取り込まれなかった水性溶媒を分離することが好ましい。
【００１９】
上記の薬効成分のうち、油溶性薬効成分としては、コウジ酸エステル、コウジ酸ジエステル等のコウジ酸エステル類やビタミンＥまたはその誘導体等が、水溶性薬効成分としては、コウジ酸やビタミンＣまたはその誘導体等が挙げられる。
【００２０】
上記の薬効成分を含有したベシクルは、薬物担体として使用することができ、種々の用途に使用可能である。例えば、外用医薬や化粧品等の外用剤の配合成分として使用することや、抗癌剤、抗結核剤、抗リューシュマニア症剤、抗炎症剤、ホルモン剤、経口ワクチン等のドラッグデリバリーに使用することができる。
【００２１】
本発明のベシクルを外用化粧品用の薬物担体として使用する場合、好ましい薬効成分としては、コウジ酸やそのエステルが挙げられる。このうち、コウジ酸は水溶性薬効成分として、コウジ酸エステルは脂溶性薬効成分としてそれぞれ使用することができる。
【００２２】
【実施例】
次に実施例を挙げ、本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれらにより何ら制約されるものではない。
【００２３】
実　施　例　１
ベシクルの形成確認試験（１）：
バンガム（Ｂａｎｇｈａｍ）法により、下記の非イオン界面活性剤について、ベシクル（ＭＬＶ）の形成を確認した。すなわち、クロロホルム等の有機溶媒に溶解した非イオン界面活性剤を共栓付ナス型フラスコに取り、ロータリーエバポレータで溶媒を減圧除去した。溶媒が見かけ上なくなった後もしばらくの間減圧除去操作を行った。次に、非イオン界面活性剤が０．０１〜５００ｍＭとなるように水溶液を加え、フラスコ内を窒素ガスで置換した。共栓をしてから、ボルテックスミキサーで約１時間攪拌した。攪拌後、フラスコ内の溶液が乳白色になった場合、ＭＬＶが形成したと判断した。各界面活性剤についてのＭＬＶの形成の有無を表１に示す。
【００２４】
＜　非イオン界面活性剤　＞
ソルビタンモノステアレート（スパン６０）
ソルビタンモノオレエート（スパン８０）
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート（ツィーン２０）
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート（ツィーン６１）
ポリオキシエチレン（２）ステアリルエーテル（ブリジ７２）
グリコールモノステアレート（ＧＭＳ）
グリコールジステアレート（ＧＤＳ）
【００２５】
【表１】
2004075592.tif 000008
【００２６】
実　施　例　２
ベシクルの形成確認試験（２）：
実施例１でＭＬＶの形成が確認された４種の非イオン界面活性剤について、種々の比率でコレスロールを加えた場合のベシクルの形成を、実施例１と同様にして調べた。この結果を表２に示す。
【００２７】
【表２】
2004075592.tif 000009
【００２８】
実　施　例　３
ベシクルの保持効率試験：
実施例２で試験を行った４種の非イオン界面活性剤について、コレステロールを等量使用して調製したベシクルの他物質の保持効率を次のようにして確認した。すなわち、水溶性蛍光物質マーカーであるカルセインの保持効率は、蛍光分光光度計を用いて測定した。ベシクルの調製に当たってのカルセイン濃度は０．１ｍＭとした。このベシクルは、精製水により１：５０，０００に希釈し、この時の蛍光強度を測定した（Ｉｔｏｔａｌ）。バルク状態の水相中のカルセインを、０．０１３μｇ／ｍｌ塩化コバルトをコバルトイオンとする複合体化によりクエンチし、この時の蛍光強度を測定した（Ｉｉｎ）。続いて、ベシクル膜をトリトンＸ−１００により壊し、Ｉｔｘ　値を求めた。これらの数値から保持効率は次の式により求めた。この結果を図１に示す。
【００２９】
【数１】
2004075592.tif 000010
【００３０】
この結果から、ステアリル鎖の界面活性剤［ツィーン６１、スパン６０、ブリジ７２およびグリセリルモノステアレート（ＧＭＳ）］とコレステロールよりなるベシクルにおいて、界面活性剤とコレステロールの濃度の増加と共にカルセインの保持効率は増加した。特に、ステアリル鎖の界面活性剤の中でツィーン６１は最も高い保持効率を示した。
【００３１】
実　施　例　４
ベシクルの温度に対する局部粘性変化試験：
実施例２で試験を行った４種の非イオン界面活性剤について、コレステロールとの比率を変化させた場合の温度と微小粘度の関係を調べた。試験は、１ｍＭ　１，６−ジフェニル−１，３，５−ヘキサトリエン（ＤＰＨ；蛍光プローブ）のテトラヒドロフラン溶液をベシクル分散液に加え、３７℃で１時間インキュベートした。また、界面活性剤／コレステロールとＤＰＨの配合モル比は、３００：１とした。そして、下記式で求められる蛍光偏光度（Ｐ）で定めた。
【００３２】
【数２】
2004075592.tif 000011
【００３３】
種々の温度における、種々の界面活性剤とコレステロールの組合せで得たベシクルのＩｐおよびＩｖを蛍光分光光度計で測定し、この測定値からＰの値を算出した。この結果を図２に示す。励起および蛍光波長は、それぞれ３５０ｎｍおよび４５０ｎｍとした。
【００３４】
この結果から、ステアリル鎖の界面活性剤より形成されるベシクルにおいて、コレステロールの配合比の増加により、蛍光偏光度（Ｐ）の増加、すなわち、ベシクル二分子膜（疎水部）の局部粘性の増大（または、膜流動性の低下）が生じた。特に、界面活性剤単独成分のベシクルにおいて測定範囲内にゲル−液晶転移温度のあるツィーン６１では、コレステロールの配合比の増加によりゲル−液晶転移温度が消失した。いずれにせよ、コレステロールの配合比の増加により、ベシクル二分子膜は高い局部粘性（低い流動性）を示して強固となり、保持効率と対応する結果になった。
【００３５】
実　施　例　５
コウジ酸エステル包埋ベシクルの調製：
バンガム法および超音波処理法の併用により、コウジ酸エステルを包埋したベシクルを調製した。すなわち、クロロホルム等の有機溶媒に溶解した非イオン界面活性剤、コレステロールおよびコウジ酸エステルを共栓付ナスフラスコに取り、ロータリーエバポレーターで溶媒を減圧除去した（使用非イオン性界面活性剤は、スパン６０およびツィーン６１であり、界面活性剤とコレステロールの比は１：１で、水溶液中での界面活性剤とコレステロールの合計濃度は、２０ｍＭ、水溶液中でのコウジ酸エステルの総濃度は、２〜４ｍＭである）。溶媒が見かけ上なくなった後もしばらくの間減圧除去操作を行った。
【００３６】
次に精製水を加え、フラスコ内を窒素ガスで置換した。共栓をしてから、ボルテックスミキサーで約１時間攪拌し、更に、この水溶液を窒素雰囲気下で超音波処理し（２０ｋＨｚ、約３分）、乳白色の水溶液を得た。この水溶液は、コウジ酸エステルを包埋するベシクルを含むものであった。
【００３７】
【発明の効果】
本発明のベシクルは、基本的には、非イオン性である化合物（Ｉ）で、またはこれと同じく非イオン性であるコレステロールにより構成されるものである。
【００３８】
従って、イオン性を有する従来のベシクルと異なる性質を有するものであり、イオン性物質をの使用が好ましくない薬効成分を含有せしめる場合等に有利に使用することができるものである。
【００３９】
また、非イオン性化合物（Ｉ）は、従来のベシクル形成物質に比べてコストが安く、また、必要に応じた性質を有するベシクルを調製することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ベシクルの保持効率を示す図面である。
【図２−１】非イオン界面活性剤とコレステロールとの比率を変化させた場合の、温度と局部粘性の関係を示す図面である。図中、Ａはスパン６０、ＢはＧＭＳを使用して調製されたベシクルを示す。
【図２−２】非イオン界面活性剤とコレステロールとの比率を変化させた場合の、温度と局部粘性の関係を示す図面である。図中、Ｃはツィーン６１、Ｄはブリジ７２を使用して調製されたベシクルを示す。
以　　上
【図１】
2004075592.tif 000016
【図２−１】
2004075592.tif 000017
【図２−２】
2004075592.tif 000018