【手続補正書】
【提出日】平成24年11月1日(2012.11.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的分子を含む共有結合複合体を生成する方法であって、
複数の標的固定化プローブを含む基質表面と、
反応ペアの複数の第一メンバーを含む検出可能な標識と、
標的分子を含むと思われる試料と、
連結分子と
を反応混合物中において混合することを含み、
このとき、前記連結分子が、
存在する前記標的分子に特異的に結合する標的特異的結合部分であって、該連結分子が標的特異的結合部分を複数含むとき、その標的特異的結合部分のそれぞれが、存在する前記標的分子の異なる領域に特異的に結合する、一又は複数の標的特異的結合部分と、
前記反応ペアの一以上の第二メンバーと
を含み、
このとき、前記の混合が、存在する前記標的分子が前記複数の標的固定化プローブの一つに特異的に結合するために十分な反応条件下にあり、
このとき、前記の混合が、前記連結分子が存在する前記標的分子に特異的に結合するために十分な反応条件下にあり、かつ、
前記反応混合物を前記反応ペアの第一メンバーと前記反応ペアの第二メンバーとの間に共有結合を形成するのに適した条件にさらすことを含み、
このとき、前記標的分子が前記試料中に存在する場合には、前記複数の標的固定化プローブの一つが前記標的分子に特異的に結合し、前記連結分子が前記標的分子に特異的に結合し、前記反応ペアの一以上の前記複数の第一メンバーと前記一以上の第二メンバーとの反応を介して一以上の共有結合を形成し、それによって前記基質表面、前記複数の標的固定化プローブの一つ、前記標的分子、前記連結分子および前記検出可能な標識を含む複合体が形成される、方法。
【請求項２】
標的分子を含む共有結合複合体を生成する方法であって、
複数の標的固定化プローブを含む基質表面と、
反応ペアの複数の第一メンバーを含む検出可能な標識と、
標的分子を含むと思われる試料と、
複数の連結分子と
を反応混合物中において混合することを含み、
このとき、前記複数の連結分子の各メンバーが独立して一以上のコピー数で存在し、各メンバーが、
存在する前記標的分子の異なる領域に特異的に結合する標的特異的結合部分と、
前記反応ペアの第二メンバーと
を含み、
このとき、前記の混合が、存在する前記標的分子が前記複数の標的固定化プローブの一つに特異的に結合するために十分な反応条件下にあり、
このとき、前記の混合が、前記複数の連結分子が存在する前記標的分子に特異的に結合するために十分な反応条件下にあり、かつ、
前記反応混合物を前記反応ペアの第一メンバーと前記反応ペアの第二メンバーとの間に共有結合を形成するのに適した条件にさらすことを含み、
このとき、前記標的分子が試料中に存在する場合に、前記複数の標的固定化プローブの一つが前記標的分子に特異的に結合し、前記複数の連結分子が前記標的分子の複数の異なる領域に特異的に結合し、前記反応ペアの第一メンバーと前記反応ペアの第二メンバーとの反応を介して複数の共有結合を形成し、それによって前記基質表面、前記複数の標的固定化プローブの一つ、前記標的分子、前記複数の連結分子および前記検出可能な標識を含む複合体が形成される、方法。
【請求項３】
複数の標的固定化プローブを含む基質表面と、
反応ペアの複数の第一メンバーを含む検出可能な標識と、
標的分子を含有すると思われる試料と、
連結分子と
を含む反応混合物であって、
ここで前記連結分子が、
存在する前記標的分子に特異的に結合する標的特異的結合部分であって、連結分子が複数の標的特異的結合部分を含む場合には、存在する前記標的分子の異なる領域にそれぞれが特異的に結合する一以上の標的特異的結合部分と、
前記反応ペアの一以上の第二メンバーと
を含み、
前記標的分子が試料中に存在するとき、前記複数の標的固定化プローブの一つが前記標的分子に特異的に結合し、前記連結分子が前記標的分子と特異的に結合し、前記反応ペアの前記複数の第一メンバーの一以上と前記反応ペアの前記一以上の第二メンバーとの反応を介して一以上の共有結合を形成し、それによって前記基質表面、前記複数の標的固定化プローブの一つ、前記標的分子、前記連結分子および前記検出可能な標識を含む複合体が形成される、反応混合物。
【請求項４】
連結分子が単一の標的特異的結合部分を含む場合に、連結分子が前記反応ペアの複数の第二メンバーを含み、かつ、連結分子が前記反応ペアの単一の第二メンバーを含む場合に、連結分子が複数の前記標的特異的結合部分を含む、請求項３記載の反応混合物。
【請求項５】
前記検出可能な標識が磁性粒子である、請求項３記載の反応混合物。
【請求項６】
前記連結分子が、複数の前記標的特異的結合部分と、前記反応ペアの前記第二メンバーの一つとを含む、請求項３記載の反応混合物。
【請求項７】
前記連結分子が、一つの前記標的特異的結合部分と、前記反応ペアの複数の前記第二メンバーとを含む、請求項３記載の反応混合物。
【請求項８】
前記連結分子が、複数の前記標的特異的結合部分と、前記反応ペアの複数の前記第二メンバーとを含む、請求項３記載の反応混合物。
【請求項９】
前記複数の標的固定化プローブのそれぞれが前記反応ペアの一以上の第一メンバーを含み、前記連結分子が前記反応ペアの一以上の第一メンバーと前記反応ペアの一以上の第二メンバーとの反応を介して一以上の前記複数の標的固定化プローブと一以上の共有結合を形成する、請求項３記載の反応混合物。
【請求項１０】
前記検出可能な標識が粒子である、請求項３記載の反応混合物。
【請求項１１】
複数の標的固定化プローブを含む基質表面と、
反応ペアの複数の第一メンバーを含む検出可能な標識と、
標的分子を含むと思われる試料と、
複数の連結分子と
を含む反応混合物であって、
このとき、前記複数の連結分子の各メンバーが独立して一以上のコピー数で存在し、各メンバーが、
存在する前記核酸標的分子の異なる領域に特異的に結合する標的特異的結合部分と、
前記反応ペアの第二メンバーと
を含み、
前記標的分子が試料中に存在するとき、前記複数の標的固定化プローブの一つが前記標的分子に特異的に結合し、前記複数の連結分子が前記標的分子の複数の異なる領域に特異的に結合し、前記反応ペアの第一メンバーと前記反応ペアの第二メンバーとの反応を介して複数の共有結合を形成し、それによって前記基質表面、前記複数の標的固定化プローブの一つ、前記標的分子、前記複数の連結分子および前記検出可能な標識を含む複合体が形成される、反応混合物。
【請求項１２】
前記検出可能な標識が磁性粒子である、請求項１１記載の反応混合物。
【請求項１３】
前記複数の標的固定化プローブのそれぞれが前記反応ペアの一以上の第一メンバーを含み、前記複数の連結分子の一以上が前記反応ペアの一以上の第一メンバーと前記反応ペアの一以上の第二メンバーとの反応を介して一以上の前記複数の標的固定化プローブと一以上の共有結合を形成する、請求項１１記載の反応混合物。
【請求項１４】
前記検出可能な標識が粒子である、請求項１１記載の反応混合物。
【請求項１５】
検出可能な共有結合複合体を形成する方法であって、
標的分子を含むと思われる試料を、反応ペアの複数の第一メンバーを含む修飾された標的分子を含む反応混合物を生成するのに十分な条件にさらし、
前記反応混合物を標的固定化プローブと接触させ、このとき、当該接触は、存在する前記修飾された標的分子および前記標的固定化プローブを含む非共有結合複合体の形成に適した条件下で行われ、かつ、前記標的固定化プローブは前記反応ペアの第二メンバーを含んでおり、
前記反応混合物を磁性粒子と接触させ、このとき、当該磁性粒子は前記反応ペアの第二メンバーを含んでおり、
前記反応混合物を前記反応ペアの第一および第二メンバー間で共有結合を形成するのに適した条件にさらし、このとき、前記標的分子が試料中に存在する場合には、前記修飾された標的分子を含む検出可能な共有結合複合体が形成される、
ことを含む、方法。
【請求項１６】
前記標的分子が核酸標的分子であり、存在する前記修飾された標的分子および前記標的固定化プローブを含む前記非共有結合複合体が特異的ハイブリダイゼーション反応の結果として形成される、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
磁性粒子が標識プローブを含み、磁性粒子に含まれる前記反応ペアの第二メンバーが前記標識プローブの成分である、請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
前記標識プローブが前記修飾された標的分子と非共有結合複合体を形成することができ、前記反応混合物を一以上の共有結合の形成に適した条件にさらす前に、前記反応混合物を、前記磁性粒子、前記修飾された標的分子および前記標的固定化プローブを含む非共有結合複合体の形成に適した条件にさらし、前記修飾された標的分子が前記反応混合物中に存在する場合に、前記磁性粒子、前記修飾された標的分子および前記標的固定化プローブを含む非共有結合複合体が形成される、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記標的分子は核酸標的分子であり、前記磁性粒子、前記修飾された標的分子および前記標的固定化プローブを含む前記非共有結合複合体が特異的ハイブリダイゼーション反応の結果として形成される、請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
前記検出可能な共有結合複合体の存在、不存在および／または量を検出することをさらに含む、請求項１５記載の方法。
【請求項２１】
前記共有結合形成反応ペアがアジド／アルキン反応ペアであり、前記共有結合の形成に適した条件が、前記反応混合物をＣｕイオン触媒と接触させることを含む、請求項１５記載の方法。
【請求項２２】
前記反応混合物を核酸架橋試薬と接触させることをさらに含む、請求項１５記載の方法。