【手続補正書】
【提出日】平成24年7月30日(2012.7.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４５】
本明細書で用いられる用語「サーモトガ・ペトロフィラ」は、アセチルキシランエステラーゼ活性を有することが報告されている細菌細胞を意味する（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ＣＰ０００７０２）。サーモトガ・ペトロフィラ由来のペルヒドロラーゼ活性を有する酵素の推測したアミノ酸配列は、配列番号５８として示される。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２７】
ＣＥ−７炭水化物エステラーゼファミリー内の保存されたモチーフの更なる解析から、更にＣＥ−７炭水化物エステラーゼファミリーに属するペルヒドロラーゼを特徴付ける可能性のある更なる保存されたモチーフ（配列番号２のアミノ酸２６７〜２６９位におけるＬＸＤ）の存在が示される。更なる実施態様において、上記で特徴付けされたシグネチャーモチーフは、以下のように定義される第４の保存されたモチーフを含む。
【化８】
2012504938.tif 000001
【手続補正３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的濃度のペルオキシカルボン酸を生産する方法であって、
ａ.標的濃度のペルオキシカルボン酸を生産させるための一式の反応成分を選択すること、ここで該反応成分は、
１）下記の化合物の少なくとも１つ又はそれらの混合物：
ｉ）以下の構造
［Ｘ］mＲ5
［式中、
Ｘは式Ｒ6Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基であり、
Ｒ6は、場合によりヒドロキシル基又はＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基で置換される、Ｃ１〜Ｃ７の直鎖状、分枝鎖状又は環状のヒドロカルビル部分であり、ここでＲ6は、場合により、Ｒ6がＣ２〜Ｃ７の場合１つ又はそれ以上のエーテル結合を含み；
Ｒ5は、場合によりヒドロキシル基で置換される、Ｃ１〜Ｃ６の直鎖状、分枝鎖状又は環状のヒドロカルビル部分であり、ここでＲ5中の各炭素原子はそれぞれ最大で１つのヒドロキシル基又は最大で１つのエステル基を含み、ここでＲ5は、場合により、１つ又はそれ以上のエーテル結合を含み；
ｍは１からＲ5中の炭素数までの整数である］
を有するエステルであって、
２５℃で水に対して少なくとも５ｐｐｍの溶解度を有する、上記エステル；又は
ii）以下の構造
【化１】
2012504938.tif 000002
［式中、Ｒ1は場合によりヒドロキシル基又はＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基で置換される、Ｃ１〜Ｃ７の直鎖又は分岐鎖のアルキルであり、そしてＲ3及びＲ4はそれぞれＨ又はＲ1Ｃ（Ｏ）である］を有するグリセリド；又は
iii）アセチル化単糖、アセチル化二糖、又はアセチル化多糖；
２）過酸素源；
３）ペルヒドロリシス活性を有する酵素触媒、ここで該酵素触媒は、ＣＬＵＳＴＡＬＷを用いると参照配列の配列番号２にアラインするＣＥ−７シグネチャーモチーフを有する酵素を含み、該シグネチャーモチーフは、
ｉ）配列番号２のアミノ酸の位置１１８〜１２０におけるＲＧＱモチーフ；
ii）配列番号２のアミノ酸の位置１７９〜１８３におけるＧＸＳＱＧモチーフ；及び
iii）配列番号２のアミノ酸の位置２９８〜２９９におけるＨＥモチーフ；を含み、ここで該酵素は、配列番号２と少なくとも３０％のアミノ酸同一性を含む；そして
４）場合により、少なくとも１つの緩衝液；
を含み；そして
ｂ．選択された一式の反応成分を水性の反応条件下で混合して反応混合物を形成させ；それによって、ペルオキシカルボン酸を含む反応生産物を形成させること；ここで、ペルオキシカルボン酸を含む反応生産物により、反応混合物のｐＨが、反応成分を混合して約1分〜約１０分以内に約６未満に低下し、そして標的濃度のペルオキシカルボン酸が生産され、ここで反応混合物のｐＨ低下を、生産される標的濃度のペルオキシカルボン酸を制御するために使用する；
を含む、上記方法。
【請求項２】
少なくとも１つの緩衝液が約０．０１ｍＭ〜約２００ｍＭの範囲の濃度で存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
反応生産物により、反応混合物のｐＨが、反応成分を混合した後約１分〜約１０分以内に約５に低下する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ペルオキシカルボン酸の標的濃度が約２００ｐｐｍ〜約２５００ｐｐｍである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ペルオキシカルボン酸の標的濃度が約４００ｐｐｍ〜約１２００ｐｐｍである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ペルオキシカルボン酸の標的濃度が約４００ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
ペルオキシカルボン酸の標的濃度が、反応成分を混合した後約１〜約１０分以内に達成される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ペルオキシカルボン酸の標的濃度が、反応成分を混合した後約５分以内に達成される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ペルオキシカルボン酸の標的濃度が、反応成分を混合した後約１分以内に達成される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ペルオキシカルボン酸の濃度は、一旦ペルオキシカルボン酸の標的濃度に達すると、該標的濃度の約２０％未満で変動する、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
緩衝液が約８．０〜約６．０のｐＫａを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
初期反応混合物の初期ｐＨが、６．５、７．２、７．５、８．１、及び８．５を含むグループから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ペルヒドロリシス活性を有する酵素触媒が、サーモトガ・ネアポリタナ由来である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ペルヒドロリシス活性を有する酵素触媒が、サーモトガ・マリチマＭＳＢ８由来である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
ｐＨの低下により、反応成分を混合した後１０分以内に、ペルヒドロリシス活性が約８０％以上減少する、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
酵素触媒が、微生物細胞、透過性微生物細胞、微生物細胞抽出物、部分的精製酵素、精製酵素の形態にあるか、又は部分的精製酵素若しくは精製酵素の固定化形態である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
ペルオキシカルボン酸が、過酢酸、過プロピオン酸、過酪酸、過乳酸、過グリコール酸、過メトキシ酢酸、過β−ヒドロキシ酪酸、及びこれらの混合物から成るグループから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
酵素触媒がカタラーゼ活性を欠乏する、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
標的濃度のペルオキシカルボン酸を生産させることによって硬表面又は無生物を消毒する方法であって、
ａ．標的濃度のペルオキシカルボン酸を生産させるための一式の反応成分を選択すること、ここで該反応成分は、
１）下記の化合物の少なくとも１つ又はそれらの混合物：
ｉ）以下の構造
［Ｘ］mＲ5
［式中、
Ｘは式Ｒ6Ｃ（Ｏ）Ｏのエステル基であり、
Ｒ6は、場合によりヒドロキシル基又はＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基で置換される、Ｃ１
〜Ｃ７の直鎖状、分枝鎖状又は環状のヒドロカルビル部分であり、ここでＲ6は、場合に
より、Ｒ6がＣ２〜Ｃ７の場合１つ又はそれ以上のエーテル結合を含み；
Ｒ5は、場合によりヒドロキシル基で置換される、Ｃ１〜Ｃ６の直鎖状、分枝鎖状又は
環状のヒドロカルビル部分であり、ここでＲ5中の各炭素原子はそれぞれ最大で１つのヒ
ドロキシル基又は最大で１つのエステル基を含み、ここでＲ5は、場合により、１つ又は
それ以上のエーテル結合を含み；
ｍは１からＲ5中の炭素数までの整数である］
を有するエステルであって
２５℃で水に対して少なくとも５ｐｐｍの溶解度を有する、上記エステル；又は
ii）以下の構造
【化２】
2012504938.tif 000003
［式中、Ｒ1は場合によりヒドロキシル基又はＣ１〜Ｃ４のアルコキシ基で置換される、
Ｃ１〜Ｃ７の直鎖又は分岐鎖のアルキルであり、そしてＲ3及びＲ4はそれぞれＨ又はＲ1
Ｃ（Ｏ）である］を有するグリセリド；又は
iii）アセチル化単糖、アセチル化二糖、又はアセチル化多糖；
２）過酸素源；
３）ペルヒドロリシス活性を有する酵素触媒、ここで該酵素触媒は、ＣＬＵＳＴＡＬＷを用いると参照配列の配列番号２にアラインするＣＥ−７シグネチャーモチーフを有する酵素を含み、該シグネチャーモチーフは、
ｉ）配列番号２のアミノ酸の位置１１８〜１２０におけるＲＧＱモチーフ；
ii）配列番号２のアミノ酸の位置１７９〜１８３におけるＧＸＳＱＧモチーフ；及び
iii）配列番号２のアミノ酸の位置２９８〜２９９におけるＨＥモチーフ；を含み、ここで該酵素は、配列番号2と少なくとも３０％のアミノ酸同一性を含む；そして
４）場合により、少なくとも1つの緩衝液；
を含み；そして
ｂ．選択された一式の反応成分を水性の反応条件下で混合して反応混合物を形成させ；それによって、ペルオキシカルボン酸を含む反応生産物を形成させること；ここで、ペルオキシカルボン酸を含む反応生成物により、反応混合物のｐＨが、反応成分を混合して約１分〜約１０分以内に約６未満に低下し、そして標的濃度のペルオキシカルボン酸が生産され、ここで反応混合物のｐＨ低下を、生産される標的濃度のペルオキシカルボン酸を制御するために使用し；そして
ｃ．工程（ｂ）で生産されるペルオキシカルボン酸を硬表面又は無生物に適用すること；
を含む、上記方法。
【請求項２０】
少なくとも１つの緩衝液が約０．０１ｍＭ〜約２００ｍＭの範囲の濃度で存在する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
反応生産物により、反応混合物のｐＨが、反応成分を混合した後約１分〜約１０分以内
に約５に低下する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
ペルオキシカルボン酸の標的濃度が約２００ｐｐｍ〜約２５００ｐｐｍである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
ペルオキシカルボン酸の標的濃度が約４００ｐｐｍ〜約１２００ｐｐｍである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ペルオキシカルボン酸の標的濃度が約４００ｐｐｍ〜約６００ｐｐｍである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ペルオキシカルボン酸の標的濃度が、反応成分を混合した後約１〜約１０分以内に達成される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
ペルオキシカルボン酸の標的濃度が、反応成分を混合した後約５分以内に達成される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２７】
ペルオキシカルボン酸の標的濃度が、反応成分を混合した後約１分以内に達成される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ペルオキシカルボン酸の濃度は、一旦ペルオキシカルボン酸の標的濃度に達すると該標的濃度の約２０％未満で変動する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２９】
緩衝液が約８．０〜約６．０のｐＫａを有する、請求項１９に記載の方法。
【請求項３０】
初期反応混合物の初期ｐＨが、６．５、７．２、７．５、８．１、及び８．５を含むグループから選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項３１】
ペルヒドロリシス活性を有する酵素触媒がサーモトガ・ネアポリタナ由来である、請求項１９に記載の方法。
【請求項３２】
ペルヒドロリシス活性を有する酵素触媒がサーモトガ・マリチマＭＳＢ８由来である、請求項１９に記載の方法。
【請求項３３】
ｐＨの低下により、反応成分を混合した後１０分以内に、ペルヒドロリシス活性が約８０％以上減少する、請求項１９に記載の方法。
【請求項３４】
酵素触媒が、微生物細胞、透過性微生物細胞、微生物細胞抽出物、部分的精製酵素、精製酵素の形態にあるか、又は部分的精製酵素若しくは精製酵素の固定化形態である、請求項１９に記載の方法。
【請求項３５】
ペルオキシカルボン酸が、過酢酸、過プロピオン酸、過酪酸、過乳酸、過グリコール酸、過メトキシ酢酸、過β−ヒドロキシ酪酸、及びこれらの混合物から成るグループから選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項３６】
酵素触媒がカタラーゼ活性を欠乏する、請求項１９に記載の方法。