(57)【要約】      （修正有）【課題】神経組織変性疾患（例えば、虚血性又は出血性発作、局所性及び全体的な虚血、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチングトン病、多発性硬化症）の予防及び治療のための薬物組成物の提供。【解決手段】α−リポ酸、アンブロキソール及び／又はアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤を含む医薬調製品と、神経組織変性疾患の治療のためのその使用。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−リポ酸、その塩及びその異性体、アンブロキソール、その塩及びそのプロドラッグ、並びにアンギオテンシン変換酵素（ACE）阻害剤の群の２又はそれ以上の物質と、任意に通常の医薬的に許容される担体、添加剤及び補助剤とを共に含む医薬組成物。
【請求項２】
α−リポ酸、その塩又はその異性体と、アンブロキソール、その塩又はそのプロドラッグとの組み合わせを含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
α−リポ酸、その塩又はその異性体と、少なくとも１つのアンギオテンシン変換酵素阻害剤との組み合わせを含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
アンブロキソール、その塩又はそのプロドラッグと、少なくとも１つのアンギオテンシン変換酵素阻害剤との組み合わせを含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
α−リポ酸、その塩又はその異性体と、アンブロキソール、その塩又はそのプロドラッグと、少なくとも１つのアンギオテンシン変換酵素阻害剤との組み合わせを含む請求項１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
１又は幾つかの公知の担体、補助剤及び／又は添加剤を更に含む請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
３０〜１，２００ｍｇ／日の範囲、好ましくは２００〜６００ｍｇ／日の範囲の量のα−リポ酸、その塩若しくはその異性体及び／又は、７．５〜９０ｍｇ／日の範囲、好ましくは６０〜７５ｍｇ／日の範囲の量のアンブロキソール、その塩若しくはそのプロドラッグ及び／又は、１〜５０ｍｇ／日の範囲、好ましくは５〜２０ｍｇ／日の範囲の量の少なくとも１つのアンギオテンシン変換酵素阻害剤を含む請求項１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
経口、口腔内、肺、鼻、経皮的、静脈内、皮下、皮内、筋肉内、直腸、膣及びクモ膜下投与用の請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項９】
錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、水剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール、経皮的適用システム、座薬の形態及び単一又は全ての有効物質の遅延放出を有する投与形態の請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１０】
神経組織変性疾患の予防及び治療のための請求項１〜９の１または幾つかに記載の医薬組成物の使用。
【請求項１１】
虚血性疾患又は出血性発作、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチングトン病、多発性硬化症、老齢者の神経組織変性、痴呆、頭部大脳性損傷及び常染色体性優性下垂体尿崩症の予防及び治療のための請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
心臓及び心臓血管の傷害から生じた大脳性虚血の予防及び治療のための請求項１０に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α−リポ酸、アンブロキソール及び／又はＡＣＥ阻害剤（アンギオテンシン変換酵素阻害剤）を含む薬物製品に関する。さらに、本発明は、中枢神経系（ＣＮＳ）の消耗性疾患、例えば、虚血性又は出血性発作、局所性又は全体的な虚血、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチングトン病（Hunntington's disease）、多発性硬化症、老齢者の神経組織変性及び年齢関連の痴呆、損傷並びに常染色体性優性下垂体尿崩症（ＡＤＮＤＩ）を治療的に処置するための薬物製品の使用に関する。本発明に含まれるのは、また、心臓及び心臓血管の傷害後の大脳性虚血の予防及び治療のための本発明による製品の使用である。上記臨床的適用により、ＣＮＳの一定の領域の機能が損失し、ほとんど全てのケースにおいて、不可逆的な精神的及び身体的障害を生じる。神経組織変性疾患の場合における細胞チオール状態への調節的介入は、半影において比較的軽く損傷した細胞の場合、一方で損傷の発生を最小限にし、他方で損傷を防止することを意図している。
【背景技術】
【０００２】
細胞のチオール／ジスルフィド状態は、生物学的代謝性能の最も重要な基本的前提条件の一つである。特に、蛋白質の機能性が、チオール／ジスルフィド基の酸化及び還元により、大いに影響される。
【０００３】
ジスルフィド基を開裂させ、チオール基を生じる代謝（幾つかの分類の異なる酵素により調節される）を持続することと、適当に機能させることは、多種多様な生物学的機能の観点から、とりわけ、プログラムされた細胞死並びに細胞保護及び細胞除去のメカニズムを含む細胞成長及び分化の過程において、細胞生存力にとって必要不可欠である。この代謝システムにおける障害とチオール濃度の変化とにより、重篤な細胞機能障害という結果になるが、それは個々の場合において局所的にのみ限定される；通常、そのような障害は関連する組織の大部分に不利に働き、隣接する組織または生物全体に拡大さえする。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
神経組織変性疾患の発生の間及びそれらの進行の間における、細胞における乱されたチオール／ジスルフィド状態の役割は、今に到るまで充分に調べられていなかった。従って、特に、中枢神経系の疾患及び損傷の治療のために可能性ある有効物質を見出す目的で、チオール状態と、神経組織変性疾患の病態生理学との関連を解明する緊急な必要性がある。そのための同等の薬剤関与は、今に到るまで得られていない。
【０００５】
多くの酵素及び再生システムが虚血の後で阻害されるので、虚血発生後のニューロン変性のうちに、内因性保護メカニズムの阻害が、内皮の損傷に加えて（血液脳関門の障壁機能の変化）、不可欠な役割を果たす［１．  Ｂ．Ｃ．ホワイト（White, B.C.）ら, 「脳再潅流次いで心停止の間の過酸化脂質の蛍光組織化学局在化（"Fluorescent histochemical localization of lipid peroxidation during brain reperfusion following cardiac arrest"）」. Acta Neuropathol (Berl), 1993. 86(1): p. 1-9.及び２．  Ｇ．ミュンシュ（Munch, G.）ら, 「神経変性における進展した化学的糖化最終生成物：酸化ストレスの更に初期標識？（"Advanced glycation end products in neurodegeneration: more than early markers of oxidative stress?"）」 Ann Neurol, 1998. 44(3 Suppl 1): p. S85-8.］。これは特に再潅流相の間、実現される。
【０００６】
人が発作で影響を受けた場合のみならず、他の神経組織変性疾患、すなわち急性又は慢性経過を有する疾患、 例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病［３．  Ｔ．コパル（Koppal, T.）ら, 「シナプトソーム膜タンパク質におけるペルオキソ亜硝酸塩誘導変性：アルツハイマー病における酸化的ストレスについての識見（"Peroxynitrite-induced alterations in synaptosomal membrane proteins: insight into oxidative stress in Alzheimer's disease."）」 J Neurochem, 1999. 72(1): p. 310-7.］、老化プロセス［４．  Ｘ．ワン（Wang, X.）, Ｆ．マンガナロ（F. Manganaro） and Ｈ．Ｍ．シッパー（H.M. Schipper）, 「加齢及び変質神経系における酸化還元活性なグリア鉄の隔離のための細胞ストレスモデル（"A cellular stress model for the sequestration of redox-active glial iron in the aging and degenerating nervous system."）」 J Neurochem, 1995. 64(4): p. 1868-77.及び５．  Ｒ．Ｍ．リウ（Liu, R.M.）, 「加齢中のラット脳組織におけるガンマ−グルタミルシステイン・シンテターゼ調節サブユニット遺伝子発現の下方調節（"Down-regulation of gamma-glutamylcysteine synthetase regulatory subunit gene expression in rat brain tissue during aging."）」 J Neurosci Res, 2002. 68(3): p. 344-51.］、出血性発作［６．  Ｍ．イシエク（Iciek, M.）, Ｍ．ポラック（M. Polak）及びＬ．ウロデック（L. Wlodek）, 「ヒト赤血球における酸化的溶血に対するチオール薬物の効果（"Effect of thiol drugs on the oxidative hemolysis in human erythrocytes."）」 Acta Pol Pharm, 2000. 57(6): p. 449-54.］、興奮毒性（excitotoxicity）［７．  Ｒ．Ｓ．ケンチャッパ（Kenchappa, R.S.）ら, 「チオールトランスフェラーゼ（グルタレドキシン）が、興奮毒性ミトコンドリア損傷から運動ニューロンの回復を媒介する（"Thioltransferase (glutaredoxin) mediates recovery of motor neurons from excitotoxic mitochondrial injury."）」 J Neurosci, 2002. 22(19): p. 8402-10.］、ＡＬＳ及び損傷［８．  Ｄ．トロッティ（Trotti, D.）, Ｎ．Ｃ．ダンボルト（N.C. Danbolt）及びＡ．ボルテッラ（A. Volterra）, 「グルタメート輸送体は酸化剤に敏感である：酸化的および興奮毒性的神経変性の間に分子的リンク？（"Glutamate transporters are oxidant-vulnerable: a molecular link between oxidative and excitotoxic neurodegeneration?"）」 Trends Pharmacol Sci, 1998. 19(8): p. 328-34.］、保護若しくは再生システムの欠乏又はそれらの阻害の結果としてのニューロン性損傷が起きた場合においても、議論されている。何が実際貢献しているのか、まだ解明されていない。しかし、もし、ピラミッド状細胞の例で本文中に示すように、これらの内因性保護システムの部分的構成要素が欠けているか、又は僅かな程度のみ存在するとき、これは、劇的な因果関係を有するかもしれない。
【０００７】
細胞の保護メカニズム欠乏の結果、細胞膜の完全性が失われた結果として、とりわけ、脂質過酸化が結果として生じる。そのようなメカニズムによって、膜結合蛋白質が影響される。虚血の場合、例えば、グルタミン酸輸送蛋白質が機能的に影響され［８．  Ｄ．トロッティ（Trotti, D.）, Ｎ．Ｃ．ダンボルト（N.C. Danbolt）及びＡ．ボルテッラ（A. Volterra）, 「グルタメート輸送体は酸化剤に敏感である：酸化的および興奮毒性的神経変性の間に分子的リンク？（"Glutamate transporters are oxidant-vulnerable: a molecular link between oxidative and excitotoxic neurodegeneration?"）」 Trends Pharmacol Sci, 1998. 19(8): p. 328-34.］、その機能は、放出されたグルタミン酸を細胞に戻し、それにより、この神経伝達物質分子の毒性細胞外濃度が発生しないよう予防することである。
【０００８】
α−リポ酸は、現在まで、末梢性糖尿病性神経障害（polyneuropathia）の枠においてミスセンセーション（mis-sensations）の治療のための補助剤として中程度成功して用いられていた（Diabetologica 1995; 38: 1425 - 1433; Diabetes Res. Clin. Pract. 1995; 29: 19 - 26; Diab. Care 1999; 22: 1296 - 1301; Drug Metab. Rev. 1997; 29: 1025 - 1054; DE 43 43 592 C2（独国特許発明第４３４３５９２号明細書））。さらに、特許文献ＤＥ４４４７５９９Ｃ２（独国特許発明第４４４７５９９号明細書）及びＥＰ０５３０４４６Ｂ１（欧州特許第０５３０４４６号明細書）において、更なるニューロン性障害、例えば、耳鳴及び突然性難聴の治療のためのα−リポ酸の使用は、保護されている。
【０００９】
糖尿病を伴う症状の経過における細胞保護的（cytoprotective）メカニズムは、蛋白質の糖依存修飾に影響を及ぼすこと（蛋白質のグリコシレーション）及び毒性ケトン体の発生を減少させることのみならず、α−リポ酸の機能及び抗酸化剤としてのその代謝も、基にしている［９．  Ｌ．パッカー（Packer, L.）, Ｅ．Ｈ．ウィット（E.H. Witt）及びＨ．Ｊ．トリシュラー（H.J. Tritschler）, 「生物学的抗酸化剤としてのアルファ−リポ酸（"alpha-Lipoic acid as a biological antioxidant."）」 Free Radic Biol Med, 1995. 19(2): p. 227-50.］。
【００１０】
特許文献ＥＰ０８１２５９０Ａ２（欧州特許出願公開第０８１２５９０号明細書）及びＥＰ０４２７２４７Ｂ１（欧州特許第０４２７２４７号明細書）において、末梢性細胞保護的剤、抗鎮痛剤及び炎症性疾患に対する薬剤としてのα−リポ酸の使用が開示されている。
【００１１】
アンブロキソール（トランス−４−（２−アミノ−３，５−ジブロモベンジルアミノ−）シクロヘキサン 塩酸塩）は、肺及び気管支疾患の粘液細胞溶解性（mucolytical）薬剤として、幾つかの異なる投与形態で用いられる（ＷＯ９６／３３７０４（国際公開第９６／３３７０４号パンフレット）；ＧＢ２，２３９，２４２（英国特許出願公開第２，２３９，２４２号明細書）；ＷＯ０１／０５３７８（国際公開第０１／０５３７８号パンフレット））。さらに、尿酸過剰血症に対するその使用が、文献ＤＥ３５３０７６１（独国特許出願公開第３５３０７６１号明細書）から知られている。粘液細胞溶解性剤としてのアンブロキソールの効果は、気管支細胞の表面活性物質産生の刺激作用と、特に、その上、フリーラジカルを除去する能力とを基にしている［１０．  Ａ．ギリセン（Gillissen, A.）及びＤ．ノバク（D. Nowak）, 「抗酸化剤療法におけるＮ−アセチルシステイン及びアンブロキソールの特徴づけ（"Characterization of N-acetylcysteine and ambroxol in anti-oxidant therapy."）」 Respir Med, 1998. 92(4): p. 609-23.］。それを基にした前記物質の抗酸化活性は、主として肺細胞で検出されたが［１１．  Ｓ．テラモト（Teramoto, S.）ら, 「慢性閉塞性肺疾患であるかまたはそうではない患者から採取された気管支肺胞洗浄細胞による反応性酸素種の自然発生又は刺激発生に対するアンブロキソールの効果（"Effects of ambroxol on spontaneous or stimulated generation of reactive oxygen species by bronchoalveolar lavage cells harvested from patients with or without chronic obstructive pulmonary diseases."）」 Pharmacology, 1999. 59(3): p. 135-41.］、免疫メカニズムの枠においても検出された［１２．  Ｂ．Ｆ．ギブス（Gibbs, B.F.）ら, 「アンブロキソールがヒト白血球及び肥満細胞からのヒスタミン、ロイコトリエンおよびサイトカインの放出を阻害する（"Ambroxol inhibits the release of histamine, leukotrienes and cytokines from human leukocytes and mast cells."）」 Inflamm Res, 1999. 48(2): p. 86-93.］。さらに、グルタチオン代謝の調節酵素は、大用量のアンブロキソールの添加により、直接影響されることが知られている［１３．  Ｓ．ヤブロンカ（Jablonka, S.）ら, 「肺切除後のイヌの肺及び血漿における過酸化プロセスに対するアンブロキソールの影響（"The influence of Ambroxol on peroxidative processes in lung and plasma in dogs after pulmonectomy."）」 Arch Vet Pol, 1992. 32(1-2): p. 57-66.］。
【００１２】
アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）の阻害剤が、心臓血管疾患の広い範囲の治療において、非常に成功して用いられている。このクラスの物質は、アンギオテンシン−Ｉからアンギオテンシン−ＩＩへの転換を阻害すること、かつキニン（kinine）代謝に影響を及ぼすことのそれぞれにより、それらの血圧低下効果を生じる。細胞内酸化還元プロセスに影響を与えることについては、チオール基を有するＡＣＥ阻害剤、例えば、カプトプリル（１−［（２Ｓ）−３−メルカプト−２−メチルプロピオニル−］Ｌ−プロリン）の効果を、チオールを有さないＡＣＥ阻害剤、例えば、エナラプリル（１−｛Ｎ−［（Ｓ）１−エトキシカルボニル−３−フェニルプロピル−］Ｌ−アラニル−｝Ｌ−プロリン）の効果から区別しなければならない。前者はラジカル捕捉剤として直接反応し、それ故に、抗酸化効果を有する一方、後者のＳＨを有さないＡＣＥ阻害剤は、本来そのようには出来ない。しかし、両方の集団に共通の特徴は、グルタチオンレドクターゼの調節、グルタチオンペルオキシダーゼの調節およびスーパーオキシドジスムターゼの調節によるグルタチオン酸化還元サイクルに対するそれらの影響である（Am. J. Physiol. Regulatory Integrative Comp. Physiol. 2000; 278: 572 - 577）。
【００１３】
ＤＥ４４２０１０２Ａ１（独国特許出願公開第４４２０１０２号明細書）の出願書類中において、既に、α−リポ酸と異なる薬剤との組み合わせの使用が、心臓血管疾患および糖尿病を引き起こす疾患に対する現在の薬物療法の改善について、保護されている。この特許の請求の範囲は、α−リポ酸およびカルシウム拮抗薬の組み合わせを除外した、使用の領域（現在記述されている新規物質組み合わせの一部ではない）に限定されている。文献ＤＥ４４２０１０２Ａ１の出願書類中において、α−リポ酸とカルシウム拮抗薬との組み合わせの使用は、独占的に、神経組織変性疾患について請求されている。ＤＥ４４２０１０２Ａ１の出願書類の主要な請求項の主題は、特に使用できる有効物質および特定薬物処方として、α−リポ酸の異なる立体異性体の派生したものである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
前記とは逆に、本発明は、神経組織変性疾患の原因として、およびその結果として、ニューロン性損傷プロセスを減少させるための根拠に関し、新規な物質組み合わせと、新規な薬剤とを請求している。新規な神経保護薬剤の開発が、中枢神経系（ＣＮＳ）における細胞のチオール／ジスルフィド状態に積極的に影響を与える物質を基礎として行われた。神経組織変性疾患の有効な薬剤予防および治療が現在利用できないので（治療的にも、対症的にも）、現在記述した発明が、大きな薬剤の可能性をもしかしたら開くかもしれない。
【００１５】
実際、本発明の基礎は、ニューロンが、低含有量の遊離（還元された）チオール基を備えており、その事実が不定期に消耗性傷害に対するそれらの敏感性に消極的に影響を与えるという新規な知見である。驚いたことに、消耗性発生／傷害の後の大脳性損傷の著しい還元が、α−リポ酸、その塩及び異性体、アンブロキソール、その塩及びそのプロドラッグ並びに少なくとも１つのＡＣＥ阻害剤の群の２またはそれ以上の物質の組み合わせにより、達成できることを示すことができた。もしかすると、現在まで治療されないか、または不十分にのみ治療された神経組織変性疾患の予防及び治療に対する、将来有望な提案が見出されたかもしれない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明を導き出す研究の構成の中で、細胞内のチオール／ジスルフィド代謝が、神経組織変性疾患の病因論の中で大きな役割を果たしているという驚くべき事実が見出された。ＣＮＳの極度に敏感な神経細胞（ニューロン）は、遊離チオール含有量が低く、非ニューロン性細胞（例えば、星状細胞および神経膠細胞のような）より敏感性が低いことを本実施例中で示すことができる。このことは図１ａ、ｂの組織化学的蛍光写真から非常に明らかであり、またはニューロン性レベルについては、図２ａ、ｂから非常に明らかである。更に、これらの知見に基づき、神経組織変性における保護メカニズムとしてのチオール−反応性化合物の重要な役割は、α−リポ酸、その塩及びその異性体、並びにグルタチオン代謝のモジュレーター（アンブロキソール、その塩及びそのプロドラッグ、並びにＡＣＥ阻害剤）の群の２又はそれ以上の物質を用いることによる、細胞のチオール／ジスルフィド状態に対する調整された影響により、示すことができる。
【００１７】
驚いたことに、α−リポ酸、その塩及びその異性体、アンブロキソール、その塩及びそのプロドラッグ、少なくとも１つのＡＣＥ阻害剤の群の２またはそれ以上の物質の組み合わせにより、神経組織変性傷害後のニューロン生存は、ここに記述の実験において首尾よく著しく向上されることができた。これらの結果と対照的に、上記物質の単一の適用は、効果がなかった。本実験において、臨床的に特別に関連性のあるパラメータである変質ニューロンの比が測定された。
【００１８】
従って、本発明は、α−リポ酸、その塩及びその異性体、アンブロキソール、その塩及びそのプロドラッグ、並びに少なくとも１つのアンギオテンシン変換酵素（ACE）阻害剤の群の２またはそれ以上の物質と、任意に通常の医薬的に許容される担体、添加剤及び補助剤とを一緒に含む医薬調製品に関する。
【００１９】
本発明はまた、神経組織変性疾患の予防及び治療のための、α−リポ酸、その塩及びその異性体、アンブロキソール、その塩及びそのプロドラッグ、並びに少なくとも１つのアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤の群の２またはそれ以上の物質と、任意に通常の医薬的に許容される担体、添加剤及び補助剤とを一緒に含むそのような医薬調製品の使用に関する。
【００２０】
従って、α−リポ酸、アンブロキソール及び／又はＡＣＥ阻害剤による、乱されたチオール代謝の矯正は、特に、しかし、神経組織変性疾患の処置の予防方法および治療方法の観点から、異なる発生を有する多数の疾患の予防及び治療に基本的に重要である。１つの理論に固定されることを望むことなく、ここに記述した化合物の効果は、それらのチオール安定化効果に任意に基づき、それにより、本件の新規な標的とされた剤の組み合わせにより驚くべき相乗的神経保護効果が誘導されうることが想定される。それとは対照的に、単一の物質の適用は基本的に効果がなかった。
【００２１】
選択された実験条件は、臨床的状況とまさに大部分が一致する［14. Stoppini, L., P.A. Buchs, and D. Muller, A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. J Neurosci Methods, 1991. 37(2): p. 173-82.；15. Breder, J., et al., Organotypic hippocampal slice cultures as an in vitro model for the investigation of neuroprotective drugs against ischemic damage. Schriften des Forschungszentrums Julich, 1999. 3.］。試験した全ての化合物は、既に臨床的投与された薬物であった。従って、単一物質の安全クリアランス試験は、既に首尾よく行われていた。全ての単一物質並びに物質組み合わせは、神経毒性を示さなかった。
【００２２】
本発明に従い、請求項１の特徴を有する医薬調製品が請求される。換言すれば、本発明は、上記有効物質のいずれか２つの組み合わせと、３つの有効物質全ての組み合わせとを含む。好ましい実施態様は、従属項２〜９から得られる。請求項１０は、本発明の製品の、１領域の適用における使用を請求している。これらの使用の好ましい実施態様は、従属項１１および１２から得られる。
【００２３】
本発明による医薬組成物の１つの構成要素は、α−リポ酸であってもよい。本発明による用語「α−リポ酸」は、純粋な化合物α−リポ酸（その化合物の名前は、専門用語によれば、（Ｒ）−５−（１，２−ジチオラン−３−イル−）ペンタン酸である）及びその塩を含むと理解される。しかし、本件においては、医薬的に許容される塩のみが含まれる。用語「α−リポ酸」は、立体異性体及び２つの異性体の混合物及びラセミ混合物を含むと考えられる。用語「α−リポ酸」は、α−リポ酸の各代謝物、前記酸の酸化型および還元型も含むと考えられる。前記α−リポ酸物質の組み合わせも、同様に用いることができる。
【００２４】
グルタチオン代謝の作用因子の１つで、本発明の医薬組成物において使用可能な構成要素は、一般式Ｉのアンブロキソールである。
【００２５】
【化１】
2004307467.tif 000002
【００２６】
アンブロキソールは、それ自体で用いられ、好ましくはその塩及び／又はそのプロドラッグの形態で用いられる。医薬的に許容される塩のみを用いることができる。本発明の枠内で、用語「アンブロキソールのプロドラッグ」は、前記化合物の前駆体として適用及び／又は投与されることができる全ての物質を含み、例えば酵素により作用されたとき、身体中で活性剤に変換（「活性化」）されると考えられる。
【００２７】
グルタチオン代謝の第２の作用因子であり、本発明の医薬組成物の予想される別の構成要素としては、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）の１つの阻害剤（または幾つかの阻害剤が用いられている）が用いられている。アンギオテンシン変換酵素阻害剤としてそれ自体知られているものを用いることができる。例は、エナラプリル、カプトプリル、リソプリル（lisopril）、ラミプリル（ramipril）及びスピラプリル（spirapril）であり、本発明はこれらに限定されない。その間に、多数の分子変形態（それらの薬物動態的特性において本質的に区別され、一方、薬物動態的プロファイルが類似である）も利用可能である。
【００２８】
得られた結果の観点から、チオール基を含まないＡＣＥ阻害剤を用いたときに同等の実験データが得られたので、分子中の遊離チオール基の存在は、効力の前提条件ではない。本発明に従えば、以下の化合物を用いることが好ましい。
【００２９】
Ａ）  一般式ＩＩの１−［（２Ｓ）−３−メルカプト−２−メチルプロピオニル−］Ｌ−プロリン（カプトプリル）、
【００３０】
【化２】
2004307467.tif 000003
【００３１】
Ｂ）  一般式ＩＩＩの１−｛Ｎ2−［（Ｓ）−１−カルボキシ−３−フェニルプロピル−］Ｌ−リシル−｝Ｌ−プロリン（リシノプリル（Lisinopril））、
【００３２】
【化３】
2004307467.tif 000004
【００３３】
Ｃ）  一般式ＩＶの１−（Ｎ−［（Ｓ）−１−エトキシカルボニル−３−フェニルプロピル−］Ｌ−アラニル−（Ｌ−プロリン（エナラプリル）、
【００３４】
【化４】
2004307467.tif 000005
【００３５】
Ｄ）  一般式Ｖの（２Ｓ，３ａＳ，６ａＳ）−１−｛（Ｓ）−Ｎ−［（Ｓ）−１−エトキシカルボニル−３−フェニルプロピル−］アラニル−｝−オクタヒドロシクロペンタ［ｂ］−ピロール−２−カルボン酸（ラミプリル）。
【００３６】
【化５】
2004307467.tif 000006
【００３７】
また、例えば、プロリンが置換、修飾又は置き換えられた化合物も含まれる。
Ｅ）
【００３８】
【化６】
2004307467.tif 000007
【００３９】
スピラプリル  （８Ｓ）−７−｛（Ｓ）−Ｎ−［（Ｓ）−１−エトキシカルボニル−３−フェニルプロピル−］アラニル−｝−１，４−ジチア−７−アザスピロ［４，４］ノナン−８−カルボン酸；
【００４０】
【化７】
2004307467.tif 000008
【００４１】
イミダプリル（Imidapril）  （４Ｓ）−３−｛Ｎ−［（Ｓ）−１−エトキシカルボニル−３−フェニルプロピル−］Ｌ−アラニル−｝１−メチル−２−オキソ−４−イミダゾリジン  カルボン酸；
【００４２】
【化８】
2004307467.tif 000009
【００４３】
モエキプリル（Moexipril）  （３Ｓ）−２−｛Ｎ−［（Ｓ）−１−エトキシカルボニル−３−フェニルプロピル−］Ｌ−アラニル−｝１，２，３，４−テトラヒドロ−６，７−ジメトキシ−３−イソキノリン  カルボン酸。
【００４４】
上記化合物を投与する場合、ヒトへの医療適用の好ましい用量は、用いる化合物に応じて異なる。
【００４５】
本発明の医薬組成物において、上記群の物質は、各所望の組み合わせにおいて含まれてもよい。本発明による好ましい例は、
α−リポ酸、その塩、立体異性体若しくは代謝物と、アンブロキソール、その塩若しくはそのプロドラッグとを組み合わせて含有する複合医薬調製品、又は、
α−リポ酸、その塩、立体異性体若しくは代謝物と、１又は幾つかのアンギオテンシン変換酵素阻害剤とを組み合わせて含有する複合医薬調製品、又は、
１又は幾つかのアンギオテンシン変換酵素阻害剤と、アンブロキソール、その塩若しくはそのプロドラッグとを組み合わせて含有する複合医薬調製品、又は、
α−リポ酸、その塩、立体異性体若しくは代謝物と、アンブロキソール、その塩若しくはそのプロドラッグと、１又は幾つかのアンギオテンシン変換酵素阻害剤とを組み合わせて含有する複合医薬調製品である。
【００４６】
本発明の組成物に含まれる前記構成要素の量は、広い範囲内で多様であってもよく、本来的に、組成物が投与される患者において、当業分野の当業者により見出される事実次第である。疾患の種類及び重篤度合い、患者の状態、患者の体重及び代謝パラメータ、並びに選択された投与ルートが、投与される量の重要な変数である。α−リポ酸、その塩又はその異性体の効果的な用量−本発明による医薬組成物に含まれる他の構成要素の効果的な用量として−は、症例の事実に沿って決定されなければならず、公知分野の適用に対する通常の用量と、患者関連のパラメータ、例えば上記パラメータとに決定的に依存している。
【００４７】
本発明の好ましい実施態様において、ヒト医療用適用において患者に対し使用される組成物は、α−リポ酸を３０〜１，２００ｍｇ／日の量、特に好ましくは２００〜６００ｍｇ／日の量で含む。前記用量は、１日当たりの用量であり、それは１日当たり１回の用量で投与されてもよいし、又は１日当たり何回の用量で投与されてもよいが、最も好ましくは１日当たり３回までの用量で投与される。ヒト医療用適用のためのアンブロキソールの用量は、好ましくは７．５〜９０ｍｇ／日、特に好ましくは６０〜７５ｍｇ／日であり、その用量は１日当たりの用量でもあり、それはそれぞれ１日当たり１回の用量で投与されてもよいし、又は１日当たり何回の用量で投与されてもよいが、最も好ましくは１日当たり３回までの用量で投与される。ヒト医療用適用のためのＡＣＥ阻害剤の用量は、好ましくは１〜５０ｍｇ／日、特に好ましくは５〜２０ｍｇ／日であり、その用量は１日当たりの用量でもあり、それはそれぞれ１日当たり１回の用量で投与されてもよいし、又は１日当たり何回の用量で投与されてもよいが、最も好ましくは１日当たり３回までの用量で投与される。
【００４８】
追加的に、医薬組成物は、適用の領域、投与形態又は更なる必要条件に応じて、通常の担体、添加剤及び／又は補助剤を含んでもよい。これらの物質は、例えば、水性溶媒、安定化剤、懸濁剤、分散剤、湿潤剤、崩壊剤（錠剤の形態において組成物の経口投与が意図される場合）並びに食料栄養補助食品を含んでもよい。
【００４９】
本発明による医薬組成物は、それ自体公知の方法により任意の製剤に製造することができる。例えば、好ましい製剤には、水剤（有機及び／又は無機溶媒を含んでもよい）、顆粒剤、エアゾール、散剤、懸濁剤、乳剤、錠剤（任意に噛まれるもの）及び／又は被覆錠剤、錠剤（有効物質の低速又は遅延放出である）、カプセル剤並びに経皮的適用システムを含む。そのような製剤において、本発明による医薬組成物の構成要素は、一つの製剤型又は独立した製剤型のいずれで存在していてもよい。
【００５０】
本発明により適用される組み合わせ製品は、予防的又は治療的のいずれかの、通常の薬理学的投与形態で投与されてもよい。予想できる投与形態は、錠剤（胃液に抵抗性な錠剤、被覆錠剤）、散剤、顆粒剤、カプセル剤、水剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール、経皮的適用システム、１若しくは全ての有効物質を低速又は遅延放出する投与形態又は、前記剤を非遅延放出する投与形態である。構成要素は、場所的に分離された製品において投与されてもよい。さらに、これらの分離された製品は、特定の症例に従った濃度量の単一の構成要素が、錠剤（胃液に抵抗性な錠剤、被覆錠剤）、散剤、顆粒剤、カプセル剤、水剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール、経皮的適用システムの形態、１又は全ての有効物質を低速若しくは遅延放出又は非遅延放出する投与形態で投与される、１つの製剤において投与されることも可能である。
【００５１】
本発明による医薬組成物は、各々、任意の投与ルートで投与されてもよい。以下は、その非限定的な例である：任意に、それ自体公知な担体、補助剤及び添加剤と共に、並びに食料栄養補助食品と組み合わせて、経口、口腔内、肺、鼻、経皮的、静脈内、皮下、皮内、筋肉内、直腸、膣又はクモ膜下投与。構成要素は、場所的に分離された製品において投与されてもよい。さらに、これらの分離された製品は、特定の症例に従った濃度量の単一の構成要素が、任意に、それ自体公知な担体、補助剤及び添加剤と共に、並びに食料栄養補助食品と組み合わせて、全身適用、例えば、経口、口腔内、肺、鼻、経皮的、静脈内、皮下、皮内、筋肉内、直腸、膣又はクモ膜下投与で投与される、１つの製剤において投与されることも可能である。
【００５２】
上記に詳細に記載した構成要素の２つまたは２つより多くを含む本発明の医薬組成物は、中枢神経系（ＣＮＳ）の消耗性疾患の予防及び治療について、本発明の意味において特に適する。治療は、そのような場合、同時に、別々の製剤において、または一定間隔をあけて別々の時間段階で、行われてもよい。有利には、本発明による医薬組成物は、以下の疾患：虚血性及び出血性発作、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチングトン病、多発性硬化症、老齢者の神経組織変性、痴呆、頭部大脳性損傷及び常染色体性優性下垂体尿崩症（ＡＤＮＤＩ）の予防及び治療のうちに用いられてもよい。更なる実施態様において、本発明の医薬組成物は、心臓傷害及び心臓血管傷害から生じる大脳性虚血の予防及び治療のためにも用いられる。
【００５３】
α−リポ酸、アンブロキソール及びアンギオテンシン変換酵素阻害剤の群の２又はそれ以上の物質の組み合わせを含む、本発明による医薬組成物及び、ＣＮＳの消耗性疾患の予防及び治療の枠での使用は、実施例及び図によりさらに記述される。実施例は、本発明の好ましい実施態様を説明するための目的のために示したものであって、本発明を限定するために用いられるものではない。
【実施例１】
【００５４】
実施例１において、新規で驚くべき知見が示された。それによれば、ニューロン性細胞が、生理学的状況下で、非ニューロン性細胞より、遊離チオール基を著しく少なく有している。遊離チオール基の印は、蛍光染料５−［及び６−］（（（クロロメチル−）ベンゾイル−）アミノ−）テトラメチル ローダミン（ＣＭＴＭＲ）で成し遂げられる。ＣＭＴＭＲの反応性のクロロメチル基は、細胞のタイプと無関係で、蛋白質の遊離のチオール基と反応し、それによってこれらは、特定な刺激の後にＵＶ領域において視認できるようになる。
【００５５】
図１は、器官型（organotypical）海馬組織切片の像を示す。驚いたことに、海馬形成の明らかに敏感なニューロンのみ（ピラミッド状の細胞）が、遊離チオール基の非常に低い、従ってほとんど検出不可能な含有量を示す。
【００５６】
この特定（specifity）は、図１ｂ及び２ｂにおいて非常に明白である。これらの図において、二重の印の結果を示す。遊離チオール基（ＣＭＴＭＲ）のための特定な標識に加えて、ニューロトレース（NeuroTrace）（ＮＴ）が、ニューロン性標識として用いられる。図２ａには、ＣＭＴＭＲの蛍光（赤色で）及びＮＴの蛍光（緑色で）示される。両方の蛍光標識は、細胞内で相互に局在化しておらず、その事実により、ＮＴ及びＣＭＴＭＲが異なるタイプの細胞、すなわち、ニューロン性又は非ニューロン性の細胞それぞれにおいて、広く局在化していることが示される。図１ｂ及び２ｂは、両方のチャンネルの重ね合わせを示す。
【実施例２】
【００５７】
神経組織変性発生後のニューロン性細胞の生存に関する物質の組み合わせの影響
チオール反応性物質の神経保護効果を調べるため、器官型海馬組織切片について一過性虚血の手順を用い［14.  Stoppini, L., P.A. Buchs, and D. Muller, A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. J Neurosci Methods, 1991. 37(2): p. 173-82.；15.  Breder, J., et al., Organotypic hippocampal slice cultures as an in vitro model for the investigation of neuroprotective drugs against ischemic damage. Schriften des Forschungszentrums Julich, 1999. 3.；16.  Striggow, F., et al., The protease thrombin is an endogenous mediator of hippocampal neuroprotection against ischemia at low concentrations but causes degeneration at high concentrations. Proc Natl Acad Sci U S A, 2000. 97(5): p. 2264-9.］、その手順を我々の研究室で基準と定めた。そのような手順により、その後の臨床的実験について、高い予想値を有する３次元の培養外植片を得た。ニューロン性細胞及び非ニューロン性細胞を含むこれらの組織培養物において、高度に複雑な細胞内連結が大部分維持された。それらは、ＣＮＳ全体の機能性について、並外れて重要である。大脳性組織培養物は、消耗性発生にさらされ、そのため、結果として臨床的状況に類似してニューロン性細胞の死を生じる。
【００５８】
その組織切片（３７５μｍ）を、ラット（Ｐ７）の海馬からその後調製した。これらの切片培養物の培養は、０．０２μｍの孔サイズを有する膜挿入物上で成し遂げられた。培養（恒温器中３７℃；３．３％ＣＯ2；９８％相対空気湿度）の１０〜１２日後、組織培養物内における再構築（restructuration）プロセスが終了し、臨床的関連神経組織変性発生が、一過性の酸素／グルコース欠乏を用いて組織切片上で擬態された。その物質の効果を、標準の損傷変化（賦形剤適用）の形態において測定した。
【００５９】
図３において、α−リポ酸（１０μｇ／ｍｌ）、アンブロキソール（１０μＭ）及びエナラプリル（２０μｇ／ｍｌ）（以下、「カクテル」と呼ぶ）の組み合わせの、ＯＧＤ後のニューロン性細胞の生存に対する効果を示す。標準ＯＧＤ後のニューロン性損傷（カクテル適用の有り及び無しでの）、並びにカクテルそれ自体の適用による損傷（その物質の任意毒性）の量が測定された。表１には、対応するランダム試験の統計的パラメータをまとめた。その損傷は、損傷された領域の％で表現される。そのような図を得るために、各組織切片において、表面領域全体を損傷された表面領域と比較した。
【００６０】
【表１】
2004307467.tif 000010
【００６１】
驚いたことに、ニューロン性損傷の著しく有意な還元が、本発明の組み合わせ（請求項で請求され、上記に詳細に明記された構成要素を含む）の適用により達成することができた。神経保護的効果の定量化は、約４０〜４５％までの量を達成した。同時に、この実験は、試験した組み合わせが、結果として、消耗性発生がなく、ニューロン性細胞の損傷を生じることを示す。これは、神経組織変性疾患の治療若しくは予防に対する、物質又は組み合わせの臨床的使用についての自然力の前提条件である。
【実施例３】
【００６２】
単一構成要素の効果と、本発明により請求された組み合わせの複合使用との比較
これらの実験のうちで、単一物質の適用により、結果として有意な神経保護効果を生じなかったことが検出された。実験は実施例２に記述のプロトコルを基にした。図４ａ〜ｃに示した実験のうちで、カクテルの保護効果を、ＯＧＤ後の標準的損傷と、単一物質の適用から生じる効果と比較した。その結果、明らかに全ての実験から、試験した単一物質単独では神経組織変性後の損傷を減らさず、一方、カクテルは有意な保護を提供することができたという結果を生じた。表２ａ〜ｃには、関連する統計的パラメータを示す。
【００６３】
【表２】
2004307467.tif 000011
【００６４】
カクテル（α−リポ酸、アンブロキソール及びＡＣＥ阻害剤を含む組成物）とは対照的に、α−リポ酸、アンブロキソール、ＡＣＥ阻害剤のいずれも、単独で適用したときは、一過性ＯＧＤ後のニューロン性損傷を著しく減じることができなかった。
【００６５】
参照文献
1.  White, B.C., et al., Fluorescent histochemical localization of lipid peroxidation during brain reperfusion following cardiac arrest. Acta Neuropathol (Berl), 1993. 86(1): p. 1-9.
2.  Munch, G., et al., Advanced glycation end products in neurodegeneration: more than early markers of oxidative stress? Ann Neurol, 1998. 44(3 Suppl 1): p. S85-8.
3.  Koppal, T., et al., Peroxynitrite-induced alterations in synaptosomal membrane proteins: insight into oxidative stress in Alzheimer's disease. J Neurochem, 1999. 72(1): p. 310-7.
4.  Wang, X., F. Manganaro, and H.M. Schipper, A cellular stress model for the sequestration of redox-active glial iron in the aging and degenerating nervous system. J Neurochem, 1995. 64(4): p. 1868-77.
5.  Liu, R.M., Down-regulation of gamma-glutamylcysteine synthetase regulatory subunit gene expression in rat brain tissue during aging. J Neurosci Res, 2002. 68(3): p. 344-51.
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8.  Trotti, D., N.C. Danbolt, and A. Volterra, Glutamate transporters are oxidant-vulnerable: a molecular link between oxidative and excitotoxic neurodegeneration? Trends Pharmacol Sci, 1998. 19(8): p. 328-34.
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10.  Gillissen, A. and D. Nowak, Characterization of N-acetylcysteine and ambroxol in anti-oxidant therapy. Respir Med, 1998. 92(4): p. 609-23.
11.  Teramoto, S., et al., Effects of ambroxol on spontaneous or stimulated generation of reactive oxygen species by bronchoalveolar lavage cells harvested from patients with or without chronic obstructive pulmonary diseases. Pharmacology, 1999. 59(3): p. 135-41.
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14.  Stoppini, L., P.A. Buchs, and D. Muller, A simple method for organotypic cultures of nervous tissue. J Neurosci Methods, 1991. 37(2): p. 173-82.
15.  Breder, J., et al., Organotypic hippocampal slice cultures as an in vitro model for the investigation of neuroprotective drugs against ischemic damage. Schriften des Forschungszentrums Julich, 1999. 3.
16.  Striggow, F., et al., The protease thrombin is an endogenous mediator of hippocampal neuroprotection against ischemia at low concentrations but causes degeneration at high concentrations. Proc Natl Acad Sci U S A, 2000. 97(5): p. 2264-9.
【図面の簡単な説明】
【００６６】
【図１】器官型海馬組織切片（組織化学的）の像の例を示す。（ａ）は、ＣＭＴＭＲの蛍光（赤色で）および、ＮＴの蛍光（緑色で）で示している。（ｂ）は、（ａ）の両方のチャンネルの重ね合わせを示している。
【図２】器官型海馬組織切片（ニューロン性レベル）の像の例を示す。（ａ）は、ＣＭＴＭＲの蛍光（赤色で）および、ＮＴの蛍光（緑色で）で示している。（ｂ）は、（ａ）の両方のチャンネルの重ね合わせを示している。
【図３】α−リポ酸（１０μｇ／ｍｌ）、アンブロキソール（１０μＭ）及びエナラプリル（２０μｇ／ｍｌ）（以下、「カクテル」と呼ぶ）の組み合わせの、ＯＧＤ後のニューロン性細胞の生存に対する効果の例を示す図である。
【図４】カクテルの保護効果を、ＯＧＤ後の標準的損傷と、単一物質の適用から生じる効果とを比較した例の図である。
【図１】
2004307467.tif 000012
【図２】
2004307467.tif 000013
【図３】
2004307467.tif 000014
【図４】
2004307467.tif 000015
【手続補正書】
【提出日】平成16年3月25日(2004.3.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−リポ酸、その塩及びその異性体、アンブロキソール、その塩及びそのプロドラッグ、並びにアンギオテンシン変換酵素（ACE）阻害剤の群の２又はそれ以上の物質を含む医薬組成物。
【請求項２】
α−リポ酸、その塩又はその異性体と、アンブロキソール、その塩又はそのプロドラッグとの組み合わせを含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
α−リポ酸、その塩又はその異性体と、少なくとも１つのアンギオテンシン変換酵素阻害剤との組み合わせを含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
アンブロキソール、その塩又はそのプロドラッグと、少なくとも１つのアンギオテンシン変換酵素阻害剤との組み合わせを含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
α−リポ酸、その塩又はその異性体と、アンブロキソール、その塩又はそのプロドラッグと、少なくとも１つのアンギオテンシン変換酵素阻害剤との組み合わせを含む請求項１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
１又は幾つかの公知の担体、補助剤及び／又は添加剤を更に含む請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
３０〜１，２００ｍｇ／日の範囲の量のα−リポ酸、その塩若しくはその異性体及び／又は、７．５〜９０ｍｇ／日の範囲の量のアンブロキソール、その塩若しくはそのプロドラッグ及び／又は、１〜５０ｍｇ／日の範囲の量の少なくとも１つのアンギオテンシン変換酵素阻害剤を含む請求項１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
経口、口腔内、肺、鼻、経皮的、静脈内、皮下、皮内、筋肉内、直腸、膣及びクモ膜下投与用の請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項９】
錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、水剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール、経皮的適用システム、座薬の形態及び単一又は全ての有効物質の遅延放出を有する投与形態の請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１０】
神経組織変性疾患の予防及び治療のための請求項１〜９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１１】
虚血性疾患又は出血性発作、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチングトン病、多発性硬化症、老齢者の神経組織変性、痴呆、頭部大脳性損傷及び常染色体性優性下垂体尿崩症の予防及び治療のための請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
心臓及び心臓血管の傷害から生じた大脳性虚血の予防及び治療のための請求項１０に記載の医薬組成物。
【外国語明細書】
2004307467000001.pdf