【手続補正書】
【提出日】平成25年10月30日(2013.10.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非ＧＡＧ化デコリンコアタンパク質の製造方法であって、
非ＧＡＧ化デコリンコアタンパク質を発現する宿主細胞を提供する工程と、
前記非ＧＡＧ化デコリンコアタンパク質が生成されるように前記宿主細胞を培養する工程と、
前記非ＧＡＧ化デコリンコアタンパク質を精製する工程と
を含む方法。
【請求項２】
前記非ＧＡＧ化デコリンコアタンパク質が、前記宿主細胞を培養するために用いられる培地中に分泌される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記精製工程が、
前記培養培地とイオン交換媒体とを接触させる工程、または
前記培養培地とヒドロキシアパタイト媒体とを接触させる工程、または
任意の順序で、前記培養培地と少なくとも１つのイオン交換媒体および少なくとも１つのヒドロキシアパタイト媒体とを接触させる工程
を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記精製工程が、
前記培養培地と陽イオン交換媒体とを接触させる工程と、
前記陽イオン交換媒体を洗浄する工程と、
前記陽イオン交換媒体から第１のデコリン含有溶出液を溶出する工程と、
前記第１のデコリン含有溶出液とヒドロキシアパタイト媒体とを接触させる工程と、
前記ヒドロキシアパタイト媒体を洗浄する工程と、
前記ヒドロキシアパタイト媒体から第２のデコリン含有溶出液を溶出する工程と
を含む、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
（ａ）さらに、イオン交換膜またはイオン交換カラムを用いて前記第２のデコリン含有溶出液を精製する工程、および／または
（ｂ）ウイルス不活化ステップ、および／または
（ｃ）ウイルス濾過ステップ、および／または
（ｄ）前記デコリンを濃縮する工程
を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記非ＧＡＧ化デコリンコアタンパク質が、１、５、または１０ｐｇ／細胞／日を上回る速度で前記宿主細胞によって生成される、請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
デコリン含有培地からデコリンを精製するための方法であって、
前記デコリン含有培地と陽イオン交換媒体とを接触させる工程と、
前記陽イオン交換媒体を洗浄する工程と、
前記陽イオン交換媒体から第１のデコリン含有溶出液を溶出する工程と、
前記第１のデコリン含有溶出液とヒドロキシアパタイト媒体とを接触させる工程と、
前記ヒドロキシアパタイト媒体を洗浄する工程と、
前記ヒドロキシアパタイト媒体から第２のデコリン含有溶出液を溶出する工程と、
イオン交換膜を用いて前記第２のデコリン含有溶出液を濾過して、デコリン含有濾液を提供する工程と、
前記濾液を処理してウイルスを除去する工程と、
前記濾液からデコリンを濃縮する工程と
を含む方法。
【請求項８】
前記成熟デコリンコアタンパク質の４位に変異を含む精製されたデコリンコアタンパク質を含む組成物であって、
前記デコリンタンパク質がＧＡＧ化されておらず、前記組成物中にデコリンコアタンパク質１ｍｇあたり１００ｎｇ未満の残留宿主細胞タンパク質およびデコリンコアタンパク質１ｍｇあたり２０ｐｇ未満の残留宿主細胞ＤＮＡを含む組成物。
【請求項９】
前記デコリンが水溶液として製剤化される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
デコリンをコードする配列に作動可能に連結した異種シグナルペプチドを含む融合タンパク質。
【請求項１１】
前記デコリンをコードする配列が、デコリンコアタンパク質をコードする、請求項１０に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
前記デコリンコアタンパク質が、成熟デコリンコアタンパク質の４位におけるグリコサミノグリカン分子による修飾を欠く、請求項１０または１１に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
請求項１０から１２のいずれか１項に記載の融合タンパク質をコードするベクター。
【請求項１４】
前記ベクターが、デコリンコアタンパク質をコードする配列に作動可能に連結されたα−ラクトアルブミンシグナル配列をコードする核酸配列を含む、請求項１３に記載のベクター。
【請求項１５】
請求項１３または１４に記載のベクターを含む宿主細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
本発明のプロセスは、好ましくは、ヒト患者の臨床使用に適するデコリン組成物を提供する。いくつかの実施形態では、これらの組成物は、デコリンタンパク質が実質的にＧＡＧ化されないように、成熟デコリンコアタンパク質の４位に変異を含む精製されたデコリンコアタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、これらの組成物は、精製されたデコリンコアタンパク質を提供し、これらの組成物は、組成物中、デコリンコアタンパク質１ｍｇあたり約１００、５０、２０、１０、５もしくは２ｎｇ未満の残留宿主細胞タンパク質および／またはデコリンコアタンパク質１ｍｇあたり約２０、１０、５、または２ｐｇ未満の残留宿主細胞ＤＮＡを含むことを特徴とする。いくつかの実施形態では、デコリンを水溶液で提供する。いくつかの実施形態では、この水溶液は、ｐＨが約６.５〜７.５、好ましくは、約７．０であるリン酸緩衝生理食塩水（例えば、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１５０ｍＭの塩化ナトリウム）である。
（１）非ＧＡＧ化デコリンコアタンパク質の製造方法であって、
非ＧＡＧ化デコリンコアタンパク質を発現する宿主細胞を提供する工程と、
前記非ＧＡＧ化デコリンコアタンパク質が生成されるように前記宿主細胞を培養する工程と、
前記非ＧＡＧ化デコリンコアタンパク質を精製する工程と
を含む方法。
（２）前記非ＧＡＧ化デコリンコアタンパク質が、前記宿主細胞を培養するために用いられる培地中に分泌される、（１）に記載の方法。
（３）前記精製工程が、前記培養培地とイオン交換媒体とを接触させる工程を含む、（２）に記載の方法。
（４）前記精製工程が、前記培養培地とヒドロキシアパタイト媒体とを接触させる工程を含む、（２）に記載の方法。
（５）前記精製工程が、任意の順序で、前記培養培地と少なくとも１つのイオン交換媒体および少なくとも１つのヒドロキシアパタイト媒体とを接触させる工程を含む、（２）に記載の方法。
（６）前記精製工程が、
前記培養培地と陽イオン交換媒体とを接触させる工程と、
前記陽イオン交換媒体を洗浄する工程と、
前記陽イオン交換媒体から第１のデコリン含有溶出液を溶出する工程と、
前記第１のデコリン含有溶出液とヒドロキシアパタイト媒体とを接触させる工程と、
前記ヒドロキシアパタイト媒体を洗浄する工程と、
前記ヒドロキシアパタイト媒体から第２のデコリン含有溶出液を溶出する工程と
を含む、（２）に記載の方法。
（７）前記陽イオン交換媒体がＳＰ−セファロースＦＦである、（６）に記載の方法。
（８）前記ヒドロキシアパタイト媒体がセラミックヒドロキシアパタイトタイプＩである、（６）に記載の方法。
（９）さらに、イオン交換膜またはイオン交換カラムを用いて前記第２のデコリン含有溶出液を精製する工程を含む、（６）に記載の方法。
（１０）前記イオン交換膜が、Ｑイオン交換膜である、（９）に記載の方法。
（１１）さらに、ウイルス不活化ステップを含む、（６）に記載の方法。
（１２）前記ウイルス不活化ステップが、界面活性剤による処理を含む、（１）に記載の方法。
（１３）前記界面活性剤がトリトンＸ−１００である、（２）に記載の方法。
（１４）さらに、ウイルス濾過ステップを含む、（６）に記載の方法。
（１５）さらに、前記デコリンを濃縮する工程を含む、（６）に記載の方法。
（１６）前記非ＧＡＧ化デコリンコアタンパク質が、約１、５、または１０ｐｇ／細胞／日を上回る速度で前記宿主細胞によって生成される、（１）に記載の方法。
（１７）デコリン含有培地からデコリンを精製するための方法であって、
前記デコリン含有培地と陽イオン交換媒体とを接触させる工程と、
前記陽イオン交換媒体を洗浄する工程と、
前記陽イオン交換媒体から第１のデコリン含有溶出液を溶出する工程と、
前記第１のデコリン含有溶出液とヒドロキシアパタイト媒体とを接触させる工程と、
前記ヒドロキシアパタイト媒体を洗浄する工程と、
前記ヒドロキシアパタイト媒体から第２のデコリン含有溶出液を溶出する工程と、
イオン交換膜を用いて前記第２のデコリン含有溶出液を濾過して、デコリン含有濾液を提供する工程と、
前記濾液を処理してウイルスを除去する工程と、
前記濾液からデコリンを濃縮する工程と
を含む方法。
（１８）前記成熟デコリンコアタンパク質の４位に変異を含む精製されたデコリンコアタンパク質を含む組成物であって、
前記デコリンタンパク質が実質的にＧＡＧ化されておらず、前記組成物中にデコリンコアタンパク質１ｍｇあたり約１００ｎｇ未満の残留宿主細胞タンパク質およびデコリンコアタンパク質１ｍｇあたり約２０ｐｇ未満の残留宿主細胞ＤＮＡを含む組成物。
（１９）前記組成物が、前記組成物中にデコリンコアタンパク質１ｍｇあたり約５ｎｇ未満の残留宿主細胞タンパク質およびデコリンコアタンパク質１ｍｇあたり約５ｐｇ未満の残留宿主細胞ＤＮＡを含む、（１８）に記載の組成物。
（２０）前記デコリンが水溶液として製剤化される、（１８）に記載の組成物。
（２１）前記水溶液が、約６.５〜約７.５のｐＨを有するリン酸緩衝液を含む、（２０）に記載の組成物。
（２２）デコリンをコードする配列に作動可能に連結した異種シグナルペプチドを含む融合タンパク質。
（２３）前記シグナル配列が、α−ラクトアルブミンシグナル配列である、（２２）に記載の融合タンパク質。
（２４）前記α−ラクトアルブミン配列が、ウシα−ラクトアルブミンシグナル配列である、（２３）に記載の融合タンパク質。
（２５）前記デコリンをコードする配列が、デコリンコアタンパク質をコードする、（２２）に記載の融合タンパク質。
（２６）前記デコリンコアタンパク質が、成熟デコリンコアタンパク質の４位に変異を含む、（２５）に記載の融合タンパク質。
（２７）前記変異がセリンからアラニンへの変異である、（２６）に記載の融合タンパク質。
（２８）前記デコリンコアタンパク質が、実質的に、成熟デコリンコアタンパク質の４位におけるグリコサミノグリカン分子による修飾を欠く、（２５）に記載の融合タンパク質。
（２９）（２２）に記載の融合タンパク質をコードするベクター。
（３０）前記ベクターが、デコリンコアタンパク質をコードする配列に作動可能に連結されたα−ラクトアルブミンシグナル配列をコードする核酸配列を含む、（２９）に記載のベクター。
（３１）（２９）に記載のベクターを含む宿主細胞。