【手続補正書】
【提出日】平成25年12月12日(2013.12.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍関連炭水化物抗原を発現するがん幹細胞の処置で使用するための、該腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合する結合剤を含む組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、ここで、前記腫瘍関連炭水化物抗原がＣＤ１７６、ＣＤ１７５、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ１７４、ＣＤ１７３、およびＣＡ１９−９から成る群より選択される組成物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の組成物であって、ここで、前記がん幹細胞が１個以上の以下の特徴：
ａ）該がん幹細胞が前記腫瘍関連炭水化物抗原を担持する糖タンパク質である、少なくとも１つの幹細胞マーカーを発現すること；
ｂ）該がん幹細胞がＣＤ３４、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ１３３およびＣＤ１６４から成る群より選択される１個以上の幹細胞マーカーを発現すること；
ｃ）該腫瘍関連炭水化物抗原が該がん幹細胞によって発現された腫瘍関連糖タンパク質に担持されていること；
ｄ）該腫瘍関連炭水化物抗原が腫瘍特異的であること；および／または
ｅ）該腫瘍関連炭水化物抗原ががん幹細胞で主としてまたは独占的に発現されるが、がん幹細胞ではないがん細胞では発現されないこと；
を有する組成物。
【請求項４】
請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物であって、ここで、前記がん幹細胞が１つ以上の以下の特徴：
ａ）がんが固形腫瘍であること；
ｂ）がんが白血病であること；
ｃ）がんが多発性骨髄腫もしくはリンパ腫であること；
ｄ）がんが上皮起源の腫瘍であること；ならびに／または
ｅ）がんが肺がん、乳がん、肝臓がん、卵巣がん、消化器がん、膵臓がん、前立腺がん、子宮頸がんおよび頭頸部がんから成る群より選択される腫瘍であること；
を有する該がんのがん幹細胞である組成物。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物であって、ここで、前記結合剤が１つ以上の以下の特徴：
ａ）該結合剤が抗体または抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体であること；
ｂ）該結合剤がヒト抗体、マウス抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体またはそれぞれの抗原結合フラグメントもしくは誘導体であること；
ｃ）該結合剤が単鎖抗体フラグメント、マルチボディ、Ｆａｂフラグメント、および／またはＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤアイソタイプの免疫グロブリンおよび／もしくはそのサブクラスであること；
ｄ）該結合剤が抗体または抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体であって、１つ以上の以下の特徴：
ｉ．それががん細胞のＡＤＣＣおよび／もしくはＣＤＣを媒介すること；
ｉｉ．それががん細胞のアポトーシスを誘起および／もしくは促進すること；
ｉｉｉ．それががん細胞の標的細胞の増殖を抑制すること；
ｉｖ．それががん細胞の食作用を誘起および／もしくは促進すること；ならびに／または
ｖ．それが細胞傷害剤の放出を誘起および／または促進すること；
を有すること；
ｅ）該結合剤が、腫瘍特異的炭水化物抗原である前記腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合すること；
ｆ）該結合剤が非がん細胞、非腫瘍細胞、良性がん細胞および／もしくは良性腫瘍細胞で発現される抗原、特に炭水化物抗原を結合しないこと；
ｇ）該結合剤が、がん幹細胞および正常がん細胞で発現される腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合すること；および／または
ｈ）該結合剤が、放射性医薬品、化学療法剤もしくは毒素のような少なくとも１つの治療剤にカップリングすること
を有する組成物。
【請求項６】
請求項５に記載の組成物であって、ここで、前記抗体または前記抗体の機能的に活性な前記フラグメントもしくは誘導体が：
ａ）ＣＤ１７６特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体であって、好ましくは少なくとも１つの以下の特徴：
ｉ）それが、配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２または３のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、および配列番号４または５または６のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３から成る群より選択される、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、好ましくは少なくとも２つのＣＤＲ、さらに好ましくは３つすべてのＣＤＲを含むこと；
ｉｉ）それが、配列番号７または８または９のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号１０または１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、および配列番号１２または１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３から成る群より選択される少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、好ましくは少なくとも２つのＣＤＲ、さらに好ましくは３つすべてのＣＤＲを含むこと；
ｉｉｉ）それが、配列番号４６から７９のうちの任意の１つのアミノ酸配列を含有する重鎖可変領域を含むこと；
ｉｖ）それが、配列番号８０から９４のうちの任意の１つのアミノ酸配列を含有する軽鎖可変領域を含むこと；
ｖ）それが、生理学的条件下でＧａｌα１−３ＧａｌＮＡｃα、Ｇａｌα１−３ＧａｌＮＡｃβ、ＧａｌＮＡｃα、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα、Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧａｌＮＡｃα、ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα、ＧｌｃＮＡｃα１−３Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα、ＧａｌＮＡｃα１−３Ｇａｌβおよび／または３’−Ｏ−Ｓｕ−Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃαと特異的に相互作用しないこと；
を有する、ＣＤ１７６特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体；
ｂ）（ａ）で定義された通りの抗体との交差特異性を示す、抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体；
ｃ）ＣＤ１７３特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体；
ｄ）ＣＤ１７４特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体；
ｅ）ＣＤ１７５特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体；
ｆ）ＣＤ１７５ｓ特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体；および／または
ｇ）ＣＡ１９−９特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体
から成る群より選択される組成物。
【請求項７】
前記腫瘍関連炭水化物抗原がＣＤ１７６であり、前記がん幹細胞が肺、乳房および肝臓から成る群より選択される腫瘍のがん幹細胞である、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記結合剤が、ＣＤ１７６特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体であり、該結合剤が、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）のセットのうちの１つを含む、請求項７に記載の組成物：
【表１】
2013517487.tif 000001
【請求項９】
前記腫瘍関連炭水化物抗原がＣＤ１７３またはＣＤ１７４であり、前記がん幹細胞が乳房腫瘍のがん幹細胞である、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記がん幹細胞がＣＤ４４および／またはＣＤ１３３を発現する、請求項７から９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
腫瘍関連炭水化物抗原を発現するがん幹細胞の処置で使用するための、該腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合する結合剤を含む薬学的組成物であって、ここで、該結合剤、該がん幹細胞および該腫瘍関連炭水化物抗原が請求項１から１０のいずれか一項で定義された通りの特徴の１つ以上を有する薬学的組成物。
【請求項１２】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の組成物または請求項１１に記載の薬学的組成物であって、腫瘍サイズの低減、悪性細胞の排除、転移の防止、再発の防止、播種性がんの低減または死滅、生存の延長および／または腫瘍それぞれがん進行までの時間の延長のための療法で使用するための、組成物または薬学的組成物。
【請求項１３】
腫瘍関連炭水化物抗原の存在を、がん幹細胞に影響を与える処置であって、腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合する結合剤による処置に対する、該がん幹細胞を含むがんの感受性の指標とする方法であって、該結合剤が特異的である該腫瘍関連炭水化物抗原を発現するがん幹細胞を、患者から取得したがん検体が含むかどうかを決定する工程であって、ここで、がん幹細胞での該腫瘍関連炭水化物抗原の存在が、該腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合する該結合剤による処置に該がんが感受性であることを示し、該処置が該がん幹細胞に影響を与える工程を含む方法。
【請求項１４】
腫瘍関連炭水化物抗原を発現する細胞の存在を、がんおよび／もしくは処置に対する感受性の指標とする方法であって、患者から単離された検体中の細胞での該腫瘍関連炭水化物抗原の発現を分析する工程であって、ここで、該腫瘍関連炭水化物抗原を発現する細胞の存在が、該検体中のがん幹細胞の存在を示す工程を含む方法。
【請求項１５】
請求項１３または１４に記載の方法であって、ここで、前記患者からの前記検体が前記腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合する結合剤によって染色される方法。
【請求項１６】
請求項１３から１５のいずれか一項に記載の方法であって、ここで、前記腫瘍関連炭水化物抗原がＣＤ１７６、ＣＤ１７５、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ１７４、ＣＤ１７３、およびＣＡ１９−９から成る群より選択される方法。
【請求項１７】
請求項１３から１６のいずれか一項に記載の方法であって、ここで、少なくとも１つの第２のがん幹細胞マーカーを同時発現する細胞の存在が、がん幹細胞の存在を示す方法。
【請求項１８】
請求項１３から１７のいずれか一項に記載の方法であって、ここで、ＣＤ３４、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ１３３およびＣＤ１６４から成る群より選択される、少なくとも１つの追加の糖タンパク質がん幹細胞マーカーの同時発現が試験される方法。
【請求項１９】
請求項１３から１８のいずれか一項に記載の方法であって、ここで、染色パターンの分析ががん幹細胞の相対分布を提供し、該分布によりがんの腫瘍原性（ｔｕｍｏｒｇｅｎｉｃｉｔｙ）を予測する、方法。
【請求項２０】
哺乳動物がん幹細胞の組成物であって、ここで、該組成物中の該細胞の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７５％が、腫瘍関連炭水化物抗原を発現するがん幹細胞である組成物。
【請求項２１】
請求項１３から１９のいずれか一項に記載の方法で使用するためのキットであって、請求項１３から１９の１つ以上に記載の方法で使用するための、腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合する結合剤および指示を含むキット。
【請求項２２】
腫瘍関連炭水化物抗原を発現するがん幹細胞に対する有効性について候補治療剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、
ａ）該剤を請求項２０に記載の細胞組成物と接触させる工程、および
ｂ）該腫瘍関連炭水化物抗原陽性がん細胞に対する該剤の有効性を決定する工程、
を含む方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
第６の態様により、腫瘍関連炭水化物抗原を発現するがん幹細胞に対する有効性について、候補治療剤、たとえば化学療法剤または別の抗がん薬をスクリーニングするための方法が提供され、上記方法は：
ａ．上記剤を本発明による細胞組成物と接触させる工程、および
ｂ．上記腫瘍関連炭水化物抗原陽性がん細胞に対する上記剤の有効性を決定する工程、を含む。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
腫瘍関連炭水化物抗原を発現するがん幹細胞の処置で使用するための、該腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合する結合剤。
（項目２）
項目１に記載の結合剤であって、ここで、前記腫瘍関連炭水化物抗原がＣＤ１７６、ＣＤ１７５、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ１７４、ＣＤ１７３、およびＣＡ１９−９から成る群より選択される結合剤。
（項目３）
項目１または２に記載の結合剤であって、ここで、前記がん幹細胞が１個以上の以下の特徴：
ａ）該がん幹細胞が前記腫瘍関連炭水化物抗原を担持する糖タンパク質である、少なくとも１つの幹細胞マーカーを発現すること；
ｂ）該がん幹細胞がＣＤ３４、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ１３３およびＣＤ１６４から成る群より選択される１個以上の幹細胞マーカーを発現すること；
ｃ）該腫瘍関連炭水化物抗原が該がん幹細胞によって発現された腫瘍関連糖タンパク質に担持されていること；
ｄ）該腫瘍関連炭水化物抗原が腫瘍特異的であること；および／または
ｅ）該腫瘍関連炭水化物抗原ががん幹細胞で主としてまたは独占的に発現されるが、がん幹細胞ではないがん細胞では発現されないこと；
を有する結合剤。
（項目４）
項目１から３のいずれか一項に記載の結合剤であって、ここで、前記がん幹細胞が１つ以上の以下の特徴：
ａ）がんが固形腫瘍であること；
ｂ）がんが白血病であること；
ｃ）がんが多発性骨髄腫もしくはリンパ腫であること；
ｄ）がんが上皮起源の腫瘍であること；ならびに／または
ｅ）がんが肺がん、乳がん、肝臓がん、卵巣がん、消化器がん、膵臓がん、前立腺がん、子宮頸がんおよび頭頸部がんから成る群より選択される腫瘍であること；
を有する該がんのがん幹細胞である結合剤。
（項目５）
項目１から４のいずれか一項に記載の結合剤であって、ここで、該結合剤が１つ以上の以下の特徴：
ａ）該結合剤が抗体または抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体であること；
ｂ）該結合剤がヒト抗体、マウス抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体またはそれぞれの抗原結合フラグメントもしくは誘導体であること；
ｃ）該結合剤が単鎖抗体フラグメント、マルチボディ、Ｆａｂフラグメント、および／またはＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤアイソタイプの免疫グロブリンおよび／もしくはそのサブクラスであること；
ｄ）該結合剤が抗体または抗体の抗原結合フラグメントもしくは誘導体であって、１つ以上の以下の特徴：
ｉ．それががん細胞のＡＤＣＣおよび／もしくはＣＤＣを媒介すること；
ｉｉ．それががん細胞のアポトーシスを誘起および／もしくは促進すること；
ｉｉｉ．それががん細胞の標的細胞の増殖を抑制すること；
ｉｖ．それががん細胞の食作用を誘起および／もしくは促進すること；ならびに／または
ｖ．それが細胞傷害剤の放出を誘起および／または促進する；
を有すること；
ｅ）該結合剤が、腫瘍特異的炭水化物抗原である前記腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合すること；
ｆ）該結合剤が非がん細胞、非腫瘍細胞、良性がん細胞および／もしくは良性腫瘍細胞で発現される抗原、特に炭水化物抗原を結合しないこと；ならびに／または
ｇ）該結合剤が、がん幹細胞および正常がん細胞で発現される腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合すること；
を有する結合剤。
（項目６）
項目５に記載の結合剤であって、ここで、前記抗体または前記抗体の機能的に活性な前記フラグメントもしくは誘導体が：
ａ）ＣＤ１７６特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体であって、好ましくは少なくとも１つの以下の特徴：
ｉ）それが、配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１、配列番号２または３のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ２、および配列番号４または５または６のアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３から成る群より選択される、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、好ましくは少なくとも２つのＣＤＲ、さらに好ましくは３つすべてのＣＤＲを含むこと；
ｉｉ）それが、配列番号７または８または９のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ１、配列番号１０または１１のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ２、および配列番号１２または１３のアミノ酸配列を有するＣＤＲＬ３から成る群より選択される少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、好ましくは少なくとも２つのＣＤＲ、さらに好ましくは３つすべてのＣＤＲを含むこと；
ｉｉｉ）それが、配列番号４６から７９のうちの任意の１つのアミノ酸配列を含有する重鎖可変領域を含むこと；
ｉｖ）それが、配列番号８０から９４のうちの任意の１つのアミノ酸配列を含有する軽鎖可変領域を含むこと；
ｖ）それが、生理学的条件下でＧａｌα１−３ＧａｌＮＡｃα、Ｇａｌα１−３ＧａｌＮＡｃβ、ＧａｌＮＡｃα、Ｎｅｕ５Ａｃα２−３Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα、Ｇａｌβ１−３（Ｎｅｕ５Ａｃα２−６）ＧａｌＮＡｃα、ＧｌｃＮＡｃβ１−２Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα、ＧｌｃＮＡｃα１−３Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα、ＧａｌＮＡｃα１−３Ｇａｌβおよび／または３’−Ｏ−Ｓｕ−Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃαと特異的に相互作用しないこと；
を有する、ＣＤ１７６特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体；
ｂ）（ａ）で定義された通りの抗体との交差特異性を示す、抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体；
ｃ）ＣＤ１７３特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体；
ｄ）ＣＤ１７４特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体；
ｅ）ＣＤ１７５特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体；
ｆ）ＣＤ１７５ｓ特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体；および／または
ｇ）ＣＡ１９−９特異的抗体またはその抗原結合フラグメントもしくは誘導体
から成る群より選択される結合剤。
（項目７）
腫瘍関連炭水化物抗原を発現するがん幹細胞の処置で使用するための、該腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合する結合剤を含む薬学的組成物であって、ここで、該結合剤、該がん幹細胞および該腫瘍関連炭水化物抗原が項目１から６のいずれか一項で定義された通りの特徴の１つ以上を有する薬学的組成物。
（項目８）
項目１から６のいずれか一項に記載の結合剤または項目７に記載の薬学的組成物であって、腫瘍サイズの低減、悪性細胞の排除、転移の防止、再発の防止、播種性がんの低減または死滅、生存の延長および／または腫瘍それぞれがん進行までの時間の延長のための療法で使用するための、結合剤または薬学的組成物。
（項目９）
がん幹細胞に影響を与える処置であって、腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合する結合剤による処置、に感受性である該がん幹細胞を含むがんを同定する方法であって、該結合剤が特異的である該腫瘍関連炭水化物抗原を発現するがん幹細胞を、患者から取得したがん検体が含むかどうかを決定する工程であって、ここで、がん幹細胞での該腫瘍関連炭水化物抗原の存在が、該腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合する該結合剤による処置に該がんが感受性であることを示し、該処置が該がん幹細胞に影響を与える工程を含む方法。
（項目１０）
がんを診断、病期分類および／もしくは予後を判定するならびに／または処置に対する感受性を監視するための方法であって、患者から単離された検体中の細胞での腫瘍関連炭水化物抗原の発現を分析する工程であって、ここで、該腫瘍関連炭水化物抗原を発現する細胞の存在が、該検体中のがん幹細胞の存在を示す工程を含む方法。
（項目１１）
項目９または１０に記載の方法であって、ここで、前記患者からの前記検体が前記腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合する結合剤によって染色される方法。
（項目１２）
項目９から１１のいずれか一項に記載の方法であって、ここで、前記腫瘍関連炭水化物抗原がＣＤ１７６、ＣＤ１７５、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ１７４、ＣＤ１７３、およびＣＡ１９−９から成る群より選択される方法。
（項目１３）
項目９から１２のいずれか一項に記載の方法であって、ここで、少なくとも１つの第２のがん幹細胞マーカーを同時発現する細胞の存在が、がん幹細胞の存在を示す方法。
（項目１４）
項目９から１３のいずれか一項に記載の方法であって、ここで、ＣＤ３４、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ１３３およびＣＤ１６４から成る群より選択される、少なくとも１つの追加の糖タンパク質がん幹細胞マーカーの同時発現が試験される方法。
（項目１５）
項目９から１４のいずれか一項に記載の方法であって、ここで、染色パターンの分析ががん幹細胞の相対分布を提供し、該分布によりがんの腫瘍原性（ｔｕｍｏｒｇｅｎｉｃｉｔｙ）を予測する、方法。
（項目１６）
哺乳動物がん幹細胞の組成物であって、ここで、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７５％の該組成物中の該細胞が、腫瘍関連炭水化物抗原を発現するがん幹細胞である組成物。
（項目１７）
項目９から１５のいずれか一項に記載の方法で使用するためのキットであって、項目９から１５の１つ以上に記載の方法で使用するための、腫瘍関連炭水化物抗原を特異的に結合する結合剤および指示を含むキット。
（項目１８）
腫瘍関連炭水化物抗原を発現するがん幹細胞に対する有効性について候補治療剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、
ａ）該剤を項目１６に記載の細胞組成物と接触させる工程、および
ｂ）該腫瘍関連炭水化物抗原陽性がん細胞に対する該剤の有効性を決定する工程、
を含む方法。