【手続補正書】
【提出日】平成26年4月15日(2014.4.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体液試料から標的を単離するための方法であって、
約１：１の比で体液試料とバッファーとを混合し、それによって希釈された体液試料を形成する工程であって、前記バッファーは、血液細胞の溶解を実質的に防止する、工程と、
標的特異的結合部分を含む磁気粒子を前記希釈された体液試料に導入して、混合物を作製する工程と、
前記混合物をインキュベートして前記粒子を標的に結合させる工程と、
前記混合物をチャネルを通って流す工程と、
磁場を加えて、前記チャネルの表面上に標的／磁気粒子複合体を捕捉する工程と、
粒子凝集を低減する洗浄溶液で洗浄する工程と、
前記磁場を除去し、それによって前記標的／磁気粒子複合体を再懸濁させる工程と、
前記洗浄溶液を再導入して、それによって前記標的／磁気粒子複合体を再懸濁させる工程と、
再び加えられた磁場の存在下で再懸濁された前記標的／磁気粒子複合体を前記表面上に流し、それによって標的／磁気粒子複合体を捕捉する工程と
を含む、方法。
【請求項２】
前記標的特異的結合部分が抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗体が細菌特異的である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記粒子が超常磁性ビーズである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記インキュベーション工程が、細胞溶解を阻害するバッファー中で前記混合物をインキュベートすることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記体液が、血液、痰（ｓｐｕｔｕｍ）、尿、唾液、汗および脳脊髄液から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記バッファーが約７５ｍＭの濃度のトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン塩酸塩を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記磁気粒子が少なくとも７０重量％の超常磁性ビーズを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記超常磁性ビーズの直径が約１００ｎｍから約２５０ｎｍである、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
粒子凝集を低減する前記洗浄溶液で洗浄する前記洗浄工程の間に前記磁気粒子を磁場に保持する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記細菌が病原性である、請求項３に記載の方法。
【請求項１２】
前記細菌がグラム陽性細菌である、請求項３に記載の方法。
【請求項１３】
前記細菌がグラム陰性細菌である、請求項３に記載の方法。
【請求項１４】
前記細菌が、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓおよびそれらの組合せからなる群より選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項１５】
前記磁気粒子が鉄含有磁気粒子である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記磁気粒子が酸化鉄または白金鉄を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
体液試料から標的微生物を単離するための方法であって、
約１：１の比で体液試料とバッファーとを混合し、それによって希釈された体液試料を形成する工程であって、前記バッファーは、血液細胞の溶解を実質的に防止する、工程と、
標的特異的結合部分を含む磁気粒子を前記希釈された体液試料に導入して、混合物を作製する工程と、
前記混合物をインキュベートして前記粒子を前記試料中の標的微生物に結合させる工程と、
前記混合物をチャネルを通って流す工程と、
磁場を加えて、前記標的微生物が結合している磁気粒子を前記チャネルの表面上に単離する工程と、
粒子凝集を低減する洗浄溶液で洗浄する工程と、
前記磁場を除去し、それによって前記標的／磁気粒子複合体を再懸濁させる工程と、
前記洗浄溶液を再導入して、それによって前記標的／磁気粒子複合体を再懸濁させる工程と、
再び加えられた磁場の存在下で再懸濁された前記標的／磁気粒子複合体を前記表面上に流し、それによって前記表面上で前記粒子を捕捉する工程と
捕捉された微生物を溶解して、ＰＣＲ、マイクロアレイハイブリダイゼーションまたは配列決定によるさらなる分析のためにＤＮＡを抽出する工程と
を含む、方法。
【請求項１８】
体液試料から標的を単離するための方法であって、
約１：１の比で体液試料とバッファーとを混合し、それによって希釈された体液試料を形成する工程であって、前記バッファーは、血液細胞の溶解を実質的に防止する、工程と、
７０重量％の超常磁性粒子を含み、標的特異的結合部分を有する磁気ビーズを希釈された体液試料に導入して、混合物を作製する工程と、
前記混合物をインキュベートして前記粒子を標的に結合させる工程と、
前記混合物をチャネルを通って流す工程と、
磁場を加えて、標的が結合している磁気粒子を前記チャネルの表面上に単離する工程と、
粒子凝集を低減する洗浄溶液で洗浄する工程と、
前記磁場を除去し、それによって前記標的／磁気粒子複合体を再懸濁させる工程と、
前記洗浄溶液を再導入して、それによって前記標的／磁気粒子複合体を再懸濁させる工程と、
再び加えられた磁場の存在下で再懸濁された前記標的／磁気粒子複合体を前記表面上に流し、それによって標的／磁気粒子複合体を捕捉する工程と
を含む、方法。
【請求項１９】
体液試料から標的を単離するための方法であって、
約１：１の比で体液試料とバッファーとを混合し、それによって希釈された体液試料を形成する工程であって、前記バッファーは、血液細胞の溶解を実質的に防止する、工程と、
約１００ｎｍから約２５０ｎｍの直径を有し、標的特異的結合部分を含む超常磁性粒子を希釈された体液試料に導入して、混合物を作製する工程と、
前記混合物をインキュベートして前記粒子を標的に結合させる工程と、
前記混合物をチャネルを通って流す工程と、
磁場を加えて、前記チャネルの表面上に標的／磁気粒子複合体を単離する工程と、
粒子凝集を低減する洗浄溶液で洗浄する工程と、
前記磁場を除去し、それによって前記標的／磁気粒子複合体を再懸濁させる工程と、
前記洗浄溶液を再導入して、それによって前記標的／磁気粒子複合体を再懸濁させる工程と、
再び加えられた磁場の存在下で再懸濁された前記標的／磁気粒子複合体を前記表面上に流し、それによって標的／磁気粒子複合体を捕捉する工程と
を含む、方法。
【請求項２０】
血液試料中の１ＣＦＵ／ｍｌという低い濃度の細菌を単離するための方法であって、
約１：１の比で体液試料とバッファーとを混合し、それによって希釈された体液試料を形成する工程であって、前記バッファーは、血液細胞の溶解を実質的に防止する、工程と、
約１００ｎｍから約２５０ｎｍの直径を有し、細菌特異的結合部分を含む超常磁性粒子を希釈された体液試料に導入して、混合物を作製する工程と、
前記混合物をインキュベートして前記粒子を細菌に結合させる工程と、
前記混合物をチャネルを通って流す工程と、
磁場を加えて、前記チャネルの表面上に細菌／磁気粒子複合体を単離する工程と、
粒子凝集を低減する洗浄溶液で洗浄する工程と、
前記磁場を除去し、それによって前記標的／磁気粒子複合体を再懸濁させる工程と、
前記洗浄溶液を再導入して、それによって前記標的／磁気粒子複合体を再懸濁させる工程と、
再び加えられた磁場の存在下で再懸濁された前記標的／磁気粒子複合体を前記表面上に流し、それによって前記血液試料中の１ＣＦＵ／ｍｌという低い濃度の細菌を捕捉する工程と
を含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
本発明の別の態様は、血液試料中の１ＣＦＵ／ｍｌという低い濃度の細菌を単離するための方法であって、約１００ｎｍから約２５０ｎｍの直径を有し、細菌特異的結合部分を有する超常磁性粒子を体液試料に導入して混合物を作製すること、上記混合物をインキュベートして上記粒子を細菌に結合させること、細菌／磁気粒子複合体を表面上に単離するために磁場を加えること、および粒子凝集を低減する洗浄溶液で混合物を洗浄し、それによって血液試料中の生存可能な１ＣＦＵ／ｍｌという低い濃度の細菌を単離することを含む方法を提供する。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
体液試料から標的分析物を単離するための方法であって、
標的特異的結合部分を含む磁気粒子を体液試料に導入して、混合物を作製する工程と、
前記混合物をインキュベートして前記粒子を標的に結合させる工程と、
磁場を加えて、表面上に標的／磁気粒子複合体を捕捉する工程と、
粒子凝集を低減する洗浄溶液で洗浄し、それによって標的／磁気粒子複合体を単離する工程と
を含む、方法。
（項目２）
前記標的特異的結合部分が抗体である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記抗体が細菌特異的である、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記粒子が超常磁性ビーズである、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記インキュベーション工程が、細胞溶解を阻害するバッファー中で前記混合物をインキュベートすることを含む、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記体液が、血液、痰（ｓｐｕｔｕｍ）、尿、唾液、汗および脳脊髄液から選択される、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記バッファーが約７５ｍＭの濃度のトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン塩酸塩を含む、項目５に記載の方法。
（項目８）
前記磁気粒子が少なくとも７０重量％の超常磁性ビーズを含む、項目４に記載の方法。
（項目９）
前記超常磁性ビーズの直径が約１００ｎｍから約２５０ｎｍである、項目４に記載の方法。
（項目１０）
前記洗浄工程の間に前記磁気粒子を磁場に保持する工程をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１１）
洗浄する工程が、
前記磁場を除去し、それによって前記標的／磁気粒子複合体を再懸濁させる工程と、
前記洗浄溶液を導入する工程と、
再び加えられた磁場の存在下で再懸濁された標的／磁気粒子複合体を前記表面上に流し、それによって前記表面上に標的／磁気粒子複合体を再捕捉する工程と
を含む、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記抗体が真菌に特異的である、項目２に記載の方法。
（項目１３）
前記細菌が病原性である、項目３に記載の方法。
（項目１４）
前記細菌がグラム陽性細菌である、項目３に記載の方法。
（項目１５）
前記細菌がグラム陰性細菌である、項目３に記載の方法。
（項目１６）
前記細菌が、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓおよびそれらの組合せからなる群より選択される、項目３に記載の方法。
（項目１７）
前記磁気粒子が鉄含有磁気粒子である、項目１に記載の方法。
（項目１８）
前記磁気粒子が酸化鉄または白金鉄を含む、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
体液試料から標的微生物を単離するための方法であって、
標的特異的結合部分を含む磁気粒子を体液試料に導入して、混合物を作製する工程と、
前記混合物をインキュベートして前記粒子を標的に結合させる工程と、
磁場を加えて、標的が結合している磁気粒子を表面上に単離する工程と、
粒子凝集を低減する洗浄溶液で洗浄する工程と、
捕捉された細菌を溶解して、ＰＣＲ、マイクロアレイハイブリダイゼーションまたは配列決定によるさらなる分析のためにＤＮＡを抽出する工程と
を含む、方法。
（項目２０）
体液試料から標的分析物を単離するための方法であって、
７０重量％の超常磁性粒子を含み、標的特異的結合部分を有する磁気ビーズを体液試料に導入して、混合物を作製する工程と、
前記混合物をインキュベートして前記粒子を標的に結合させる工程と、
磁場を加えて、標的が結合している磁気粒子を表面上に単離する工程と、
粒子凝集を低減する洗浄溶液で洗浄する工程と
を含む、方法。
（項目２１）
体液試料から標的分析物を単離するための方法であって、
約１００ｎｍから約２５０ｎｍの直径を有し、標的特異的結合部分を含む超常磁性粒子を体液試料に導入して、混合物を作製する工程と、
前記混合物をインキュベートして前記粒子を標的に結合させる工程と、
磁場を加えて、表面上に標的／磁気粒子複合体を単離する工程と、
粒子凝集を低減する洗浄溶液で洗浄する工程と
を含む、方法。
（項目２２）
血液試料中の１ＣＦＵ／ｍｌという低い濃度の細菌を単離するための方法であって、
約１００ｎｍから約２５０ｎｍの直径を有し、細菌特異的結合部分を含む超常磁性粒子を体液試料に導入して、混合物を作製する工程と、
前記混合物をインキュベートして前記粒子を細菌に結合させる工程と、
磁場を加えて、表面上に細菌／磁気粒子複合体を単離する工程と、
粒子凝集を低減する洗浄溶液で洗浄し、それによって前記血液試料中の１ＣＦＵ／ｍｌという低い濃度の細菌を単離する工程と
を含む、方法。