【手続補正書】
【提出日】平成26年7月10日(2014.7.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性化ナチュラルキラー(NK)細胞の集団を産生する方法であって:
(a)造血幹細胞又は前駆細胞の集団が拡大し、かつ該拡大することの間に、該造血幹細胞又は前駆細胞の集団内の複数の造血幹細胞又は前駆細胞がNK細胞に分化するように、インターロイキン-15(IL-15)、並びに任意に幹細胞因子(SCF)及びインターロイキン-7(IL-7)のうちの1つ又は複数を含み、ここで、該IL-15並びに任意のSCF及びIL-7が該培地の不確定成分に含まれない、第一の培地中に、該集団を播種すること;並びに
(b)工程(a)由来の細胞をインターロイキン-2(IL-2)を含む第二の培地中で拡大して、活性化NK細胞の集団を産生すること
を含む、前記方法。
【請求項２】
活性化ナチュラルキラー(NK)細胞の集団を産生する二工程方法であって、該方法の第一の工程が、幹細胞因子(SCF)、インターロイキン-7(IL-7)、及びインターロイキン-15(IL-15)のうちの1つ又は複数を含む第一の培地中で、造血幹細胞又は前駆細胞の集団を拡大することを含み、ここで、該SCF、IL-7、及びIL-15が該培地の不確定成分に含まれず、かつここで、該拡大することの間に、該造血幹細胞又は前駆細胞の集団内の複数の造血幹細胞又は前駆細胞がNK細胞に分化し;かつ
該方法の第二の工程が、該第一の工程由来の細胞をインターロイキン-2(IL-2)を含む第二の培地中で拡大して、活性化NK細胞を産生すること
を含む、前記方法。
【請求項３】
前記第一の培地が、Fms様チロシンキナーゼ3リガンド(Flt3-L)、トロンボポエチン(Tpo)、インターロイキン-2(IL-2)、又はヘパリンのうちの1つ又は複数を更に含む、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記第一の培地が、胎仔ウシ血清又はヒト血清を更に含む、請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記SCFが、前記第一の培地中、約1〜約150ng/mLの濃度で存在する、請求項３記載の方法。
【請求項６】
前記Flt3-Lが、前記第一の培地中、約1〜約150ng/mLの濃度で存在する、請求項３記載の方法。
【請求項７】
前記IL-2が、前記第一の培地中、約50〜約1500IU/mLの濃度で存在する、請求項３記載の方法。
【請求項８】
前記IL-7が、前記第一の培地中、約1〜約150ng/mLの濃度で存在する、請求項３記載の方法。
【請求項９】
前記IL-15が、前記第一の培地中、1〜約150ng/mLの濃度で存在する、請求項３記載の方法。
【請求項１０】
前記Tpoが、前記第一の培地中、約1〜約150ng/mLの濃度で存在する、請求項３記載の方法。
【請求項１１】
前記ヘパリンが、前記第一の培地中、約0.1〜約30U/mLの濃度で存在する、請求項３記載の方法。
【請求項１２】
前記第二の工程における前記IL-2が、前記第二の培地中、50〜約1500IU/mLの濃度で存在する、請求項１記載の方法。
【請求項１３】
該第二の培地が、胎仔ウシ血清(FCS)、トランスフェリン、インスリン、エタノールアミン、オレイン酸、リノール酸、パルミチン酸、ウシ血清アルブミン(BSA)、及びフィトヘマグルチニンのうちの1つ又は複数を更に含む、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
前記造血幹細胞又は前駆細胞がCD34+である、請求項１記載の方法。
【請求項１５】
前記造血幹細胞又は前駆細胞が、ヒト胎盤灌流液由来の造血幹細胞又は前駆細胞、及び臍帯由来の造血幹細胞又は前駆細胞を含み、ここで、該胎盤灌流液及び該臍帯血が同じ胎盤に由来するものである、請求項１記載の方法。
【請求項１６】
工程(b)のフィーダー細胞が、マイトマイシンC処理した末梢血単核細胞(PBMC)、K562細胞、又は組織培養物接着性幹細胞を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
前記NK細胞が、CD3-CD56+CD16-である、請求項１記載の方法。
【請求項１８】
前記NK細胞が更にCD94+CD117+である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記NK細胞が更にCD161-である、請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
前記NK細胞が更にNKG2D+である、請求項１７記載の方法。
【請求項２１】
前記NK細胞が更にNKp46+である、請求項１７記載の方法。
【請求項２２】
前記NK細胞が更にCD226+である、請求項１７記載の方法。
【請求項２３】
(a)造血幹細胞又は前駆細胞の集団が拡大し、かつ該拡大することの間に、該造血幹細胞又は前駆細胞の集団内の複数の造血幹細胞又は前駆細胞がNK細胞に分化するように、インターロイキン-15(IL-15)、並びに任意に幹細胞因子(SCF)及びインターロイキン-7(IL-7)のうちの1つ又は複数を含み、ここで、該IL-15並びに任意のSCF及びIL-7が該培地の不確定成分に含まれない、第一の培地中に、該集団を播種すること;並びに
(b)工程(a)由来の細胞をインターロイキン-2(IL-2)を含む第二の培地中で拡大して、活性化NK細胞の集団を産生すること:
を含む方法によって得られる、活性化NK細胞の集団。
【請求項２４】
腫瘍細胞の増殖を抑制する方法であって、該腫瘍細胞を複数のCD94+CD117+ NK細胞とインビトロで接触させることを含み、ここで、該NK細胞が、請求項１記載の方法によって産生されたものである、前記方法。
【請求項２５】
前記腫瘍細胞が、原発性腺管癌細胞、膠芽腫細胞、白血病細胞、急性T細胞白血病細胞、慢性骨髄リンパ腫(CML)細胞、急性骨髄性白血病細胞、慢性骨髄性白血病(CML)細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、多発性骨髄腫細胞、結腸直腸癌細胞、結腸直腸腺癌細胞、前立腺癌細胞、又は網膜芽腫細胞である、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
CD3-、CD56+及びCD16-であるNK細胞の集団であって、該NK細胞が更に、CD94+、CD117+、CD161-、NKG2D+又はNKp46+の1つ又は複数である、前記NK細胞の集団。
【請求項２７】
前記細胞の少なくとも50％が、CD94+及びCD117+である、請求項２６記載の活性化NK細胞の集団。
【請求項２８】
腫瘍細胞の増殖を抑制する方法であって、該腫瘍細胞をNK細胞の集団とインビトロで接触させることを含み、ここで、該NK細胞が、請求項２６記載のNK細胞である、前記方法。
【請求項２９】
前記腫瘍細胞が、原発性腺管癌細胞、膠芽腫細胞、白血病細胞、急性T細胞白血病細胞、慢性骨髄リンパ腫(CML)細胞、急性骨髄性白血病細胞、慢性骨髄性白血病(CML)細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、多発性骨髄腫細胞、結腸直腸癌細胞、結腸直腸腺癌細胞、前立腺癌細胞、又は網膜芽腫細胞である、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
腫瘍細胞の増殖を抑制する方法に使用するためのNK細胞の集団であって、該方法が、該腫瘍細胞を複数のNK細胞と接触させることを含み、かつ該NK細胞が、請求項２６記載のNK細胞である、前記NK細胞の集団。
【請求項３１】
前記腫瘍細胞が、原発性腺管癌細胞、膠芽腫細胞、白血病細胞、急性T細胞白血病細胞、慢性骨髄リンパ腫(CML)細胞、急性骨髄性白血病細胞、慢性骨髄性白血病(CML)細胞、肺癌細胞、結腸腺癌細胞、組織球性リンパ腫細胞、多発性骨髄腫細胞、結腸直腸癌細胞、結腸直腸腺癌細胞、前立腺癌細胞、又は網膜芽腫細胞である、請求項３０記載の使用のためのNK細胞の集団。