【手続補正書】
【提出日】平成24年1月16日(2012.1.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における肝細胞癌（ＨＣＣ）またはＨＣＣを発症するリスクを検出する方法であって、以下：
対象からの試験試料中のｍｉＲサインのレベルを測定し、
ｍｉＲサインが以下：ｍｉＲ−３０ｃ 、ｍｉＲ−１２４ａ、ｍｉＲ−２０７及びｍｉＲ−２１９、の少なくとも１つまたはそれより多くを含み、
ｍｉＲ遺伝子産物がｍｉＲ−２１９である場合、ｍｉＲサインはｍｉＲ−３０ｃ、ｍｉＲ−１２４ａ、及びｍｉＲ−２０７の１つまたはそれより多くを含む、
ここで、試験試料中のｍｉＲ遺伝子産物のレベルの、対照試料中の対応するｍｉＲ遺伝子産物のレベルと比較した変化が、対象におけるＨＣＣまたはＨＣＣを発症するリスクの指標である、前記方法。
【請求項２】
ｍｉＲ遺伝子産物サインがｍｉＲ‐３０ｃ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６］、ｍｉｒ‐１２４Ａ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４］、ｍｉＲ‐２０７［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８］およびｍｉＲ‐２１９［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０］である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ｍｉＲ‐２１９［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０］およびｍｉｒ‐２０７［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８］の少なくとも１つのレベルが予め定められた標準レベルより多く、および／またはｍｉＲ‐３０ｃ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６］およびｍｉＲ‐１２４Ａ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４］の少なくとも１つのレベルが予め定められた標準レベルより少ない、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
対象におけるＨＣＣ、またはＨＣＣを発症するリスクを検出する方法であって、以下：
（１）対象から得られた試験試料からＲＮＡを逆転写して、１組の標的オリゴデオキシヌクレオチドを提供すること；
（２）ｍｉＲＮＡ‐特有プローブオリゴヌクレオチドを含むマイクロアレイに標的オリゴデオキシヌクレオチドをハイブリダイズし、試験試料のハイブリダイゼーションプロファイルを提供すること、ここで当該マイクロアレイは、ｍｉＲ−３０ｃ、ｍｉＲ−１２４ａ、ｍｉＲ−２０７およびｍｉＲ−２１９の少なくとも１つまたはそれより多くのｍｉＲ遺伝子産物を含むｍｉＲ遺伝子産物サインについてのｍｉＲＮＡ−特異的プローブオリゴヌクレオチドを含み、そして、ｍｉＲ遺伝子産物がｍｉＲ−２１９である場合、ｍｉＲサインはｍｉＲ−３０ｃ、ｍｉＲ−１２４ａ、およびｍｉＲ−２０７の１つまたはそれより多くを含む；および
（３）試験試料ハイブリダイゼーションプロファイルを対照試料から生み出されたハイブリダイゼーションプロファイルに比較すること；
を含み、ここで、少なくとも１つのｍｉＲＮＡのシグナルにおける変化が、対象におけるＨＣＣまたはＨＣＣを発症するリスクの指標である、前記方法。
【請求項５】
マイクロアレイがｍｉＲ‐３０ｃ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６］、ｍｉｒ‐１２４Ａ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４］、ｍｉＲ‐２０７［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８］およびｍｉＲ‐２１９［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０］に対するｍｉＲＮＡ‐特有プローブオリゴヌクレオチドを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
対象における１つ以上の有害な予後予測マーカーに関連するＨＣＣ、または当該疾患を発症するリスクを検出する方法であって、以下：
（１）対象から得られた試験試料からＲＮＡを逆転写して、１組の標的オリゴデオキシヌクレオチドを提供すること；
（２）ｍｉＲＮＡ‐特有プローブオリゴヌクレオチドを含むマイクロアレイに標的オリゴデオキシヌクレオチドをハイブリダイズし、試験試料のハイブリダイゼーションプロファイルを提供すること、ここで当該マイクロアレイは、ｍｉＲ−３０ｃ、ｍｉＲ−１２４ａ、ｍｉＲ−２０７およびｍｉＲ−２１９の少なくとも１つまたはそれより多くのｍｉＲ遺伝子産物を含むｍｉＲ遺伝子産物サインについてのｍｉＲＮＡ−特異的プローブオリゴヌクレオチドを含み、そして、ｍｉＲ遺伝子産物がｍｉＲ−２１９である場合、ｍｉＲサインはｍｉＲ−３０ｃ、ｍｉＲ−１２４ａ、およびｍｉＲ−２０７の１つまたはそれより多くを含む；および
（３）試験試料ハイブリダイゼーションプロファイルを対照試料から生み出されたハイブリダイゼーションプロファイルに比較すること；
を含み、シグナルにおける変化が、対象におけるＨＣＣまたはＨＣＣを発症するリスクの指標である、前記方法。
【請求項７】
マイクロアレイがｍｉＲ‐３０ｃ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６］、ｍｉｒ‐１２４Ａ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４］、ｍｉＲ‐２０７［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８］およびｍｉＲ‐２１９［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０］に対する少なくとも１つのｍｉＲＮＡ‐特有プローブオリゴヌクレオチドを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
非転移ＨＣＣからＨＣＣ静脈転移を識別することをさらに含む、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
初期ステージ疾患の患者を含む、多結節性または孤発性腫瘍を有するＨＣＣ患者の生存および再発を予測することを含む、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
非転移ＨＣＣからＨＣＣ静脈転移を識別することをさらに含む、請求項４または５に記載の方法。
【請求項１１】
初期ステージ疾患の患者を含む、多結節性または孤発性腫瘍を有するＨＣＣ患者の生存および再発を予測することを含む、請求項４または５に記載の方法。
【請求項１２】
非転移ＨＣＣからＨＣＣ静脈転移を識別することをさらに含む、請求項６または７に記載の方法。
【請求項１３】
初期ステージ疾患の患者を含む、多結節性または孤発性腫瘍を有するＨＣＣ患者の生存および再発を予測することを含む、請求項６または７に記載の方法。
【請求項１４】
ＨＣＣを治療するための医薬組成物であって、少なくとも１つの単離されたｍｉＲ遺伝子産物および薬剤的に受容できるキャリアを含み、ここで当該単離されたｍｉＲ遺伝子産物は以下：ｍｉＲ‐３０ｃ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６］、ｍｉｒ‐１２４Ａ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４］、ｍｉＲ‐２０７［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８］およびｍｉＲ‐２１９［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０］、の１またはそれより多くから選択される、前記医薬組成物。
【請求項１５】
少なくとも１つの単離されたｍｉＲ遺伝子産物が、適切な対照細胞に比較してＨＣＣ細胞においてアップレギュレーションされているか、またはダウンレギュレーションされているｍｉＲ遺伝子産物に対応する、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
少なくとも１つの単離されたｍｉＲ遺伝子産物が、適切な対照細胞に比較してＨＣＣ細胞においてダウンレギュレーションされているｍｉＲ遺伝子産物に対応しており、ここで当該組成物は、ｍｉＲ−３０ｃ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６］およびｍｉＲ−１２４ａ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４］の１またはそれより多くから選択される少なくとも１つのｍｉＲ遺伝子産物を含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
ＨＣＣを治療するための医薬組成物であって、少なくとも１つのｍｉＲ発現阻害化合物および薬剤的に受容できるキャリアを含み、ここで当該ｍｉＲ発現阻害剤は、以下：ｍｉＲ‐３０ｃ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６］、ｍｉｒ‐１２４Ａ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４］、ｍｉＲ‐２０７［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８］およびｍｉＲ‐２１９［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０］、の１またはそれより多くから選択されるｍｉＲ遺伝子産物に特異的である、前記医薬組成物。
【請求項１８】
少なくとも１つのｍｉＲ発現阻害化合物が、適切な対照細胞に比較してＨＣＣ細胞においてアップレギュレーションされているｍｉＲ遺伝子産物に特異的である、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
少なくとも１つのｍｉＲ発現阻害化合物が、適切な対照細胞に比較してＨＣＣ細胞においてアップレギュレーションされているｍｉＲ遺伝子産物に特異的であり、そしてここで当該組成物は、ｍｉＲ−２１９［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０］およびｍｉＲ−２０７［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８］の１またはそれより多くから選択されるｍｉＲ遺伝子産物に特異的である少なくとも１つのｍｉＲ発現阻害化合物を含む、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
抗−ＨＣＣ剤を同定する方法であって：以下
−細胞に試験薬剤を提供すること；および
−ＨＣＣ細胞において減少した発現レベルに関連した少なくとも１つのｍｉＲ遺伝子産物のレベルを測定すること；
を含み、ここで当該少なくとも１つのｍｉＲ遺伝子産物は、以下：ｍｉＲ‐３０ｃ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６］、ｍｉｒ‐１２４Ａ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４］、ｍｉＲ‐２０７［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８］およびｍｉＲ‐２１９［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０］、ならびにそれらの組み合わせ、の１またはそれより多くから選択され、そしてここで適切な対照細胞に比較した該細胞における該ｍｉＲ遺伝子産物のレベルの増加が、試験薬剤が抗‐ＨＣＣ剤であることの指標である、前記方法。
【請求項２１】
ｍｉＲ遺伝子産物が、ｍｉＲ‐３０ｃ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６］、およびｍｉｒ‐１２４Ａ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４］の１またはそれより多くから選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
抗−ＨＣＣ剤を同定する方法であって、以下：
−細胞に試験薬剤を提供すること；および
−ＨＣＣ細胞において増加した発現レベルに関連した少なくとも１つのｍｉＲ遺伝子産物のレベルを測定すること；
を含み、ここで当該少なくとも１つのｍｉＲ遺伝子産物は、以下：ｍｉＲ‐３０ｃ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６］、ｍｉｒ‐１２４Ａ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４］、ｍｉＲ‐２０７［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８］およびｍｉＲ‐２１９［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０］、ならびにそれらの組み合わせ、の１またはそれより多くから選択され、そしてここで適切な対照細胞に比較した該細胞におけるｍｉＲ遺伝子産物のレベルの減少が、試験薬剤が抗‐ＨＣＣ剤であることの指標である、前記方法。
【請求項２３】
ｍｉＲ遺伝子産物が、ｍｉＲ‐２０７［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８］、およびｍｉｒ‐２１９［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０］の１またはそれより多くから選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
固体支持物上に固定された１つ以上のｍｉＲＮＡプローブを含むｍｉＲＮＡアレイであって、プローブがａ）ｍｉＲＮＡコーディング配列；ｂ）プローブの５′または３′末端に結合したアミンを含み、プローブがｍｉＲ‐３０ｃ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６］、ｍｉｒ‐１２４Ａ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４］、ｍｉＲ‐２０７［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８］およびｍｉＲ‐２１９［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０］、ならびにその組み合わせの１つ以上からなる１つ以上のｍｉＲＮＡコーディング配列を有する、ｍｉＲＮＡアレイ。
【請求項２５】
ｍｉＲＮＡアレイが、プロセッシングされたｍｉＲＮＡ配列のすべてを含むｍｉＲＮＡコーディング配列を有するｍｉＲＮＡプローブを含む、請求項２４に記載のｍｉＲＮＡアレイ。
【請求項２６】
ｍｉＲＮＡコーディング配列がプロセッシングされたｍｉＲＮＡ配列の上流および／または下流の、少なくとも２〜５ヌクレオチドのコーディング配列をさらに含む、請求項２５に記載のｍｉＲＮＡアレイ。
【請求項２７】
ｍｉＲＮＡコーディング配列がプロセッシングされたｍｉＲＮＡ配列の上流および下流の、４ヌクレオチドのコーディング配列をさらに含む、請求項２６に記載のｍｉＲＮＡアレイ。
【請求項２８】
ｍｉＲＮＡアレイが、ｃ）ｍｉＲＮＡコーディング配列に隣接する少なくとも第１のリンカー配列をさらに含むｍｉＲＮＡプローブを含む、請求項２４〜２７のいずれか１項に記載のｍｉＲＮＡアレイ。
【請求項２９】
適切な容器手段中に２以上のｍｉＲＮＡプローブを含む、試料のｍｉＲＮＡプロファイルを生み出すためのキットであって、プローブがｍｉＲ‐３０ｃ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６］、ｍｉｒ‐１２４Ａ［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４］、ｍｉＲ‐２０７［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８］およびｍｉＲ‐２１９［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０］、ならびにその組み合わせの１つ以上のｍｉＲＮＡコーディング配列を有する、キット。
【請求項３０】
試料中のｍｉＲＮＡを標識するための試薬をさらに含む、請求項２９に記載のキット。