【手続補正書】
【提出日】平成25年11月11日(2013.11.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
成熟ヒトＢＭＰ−７（配列番号１）と少なくとも９０％の配列同一性を含む、ＢＭＰ−７変異体であって、該ＢＭＰ−７変異体は、成熟ヒトＢＭＰ−７に対応する、以下：
Ｇ６１、Ａ６３、Ｙ６５、Ｙ６６、Ｅ６８、Ｅ７０、Ａ７２、Ｈ９２、Ｆ９３、Ｉ９４、Ｎ９５、Ｐ９６、Ｅ９７、Ｔ９８、Ｖ９９、Ｐ１００、Ｐ１０２、またはＡ１０５のうちの１つ以上の位置において置換を含む、ＢＭＰ−７変異体。
【請求項２】
前記置換は、以下：
Ｇ６１Ｅ、Ａ６３Ｅ／Ｑ／Ｈ、Ｙ６５Ｆ／Ｎ、Ｙ６６Ｅ、Ｅ６８Ｄ／Ｋ／Ｈ、Ｅ７０Ｇ／Ｄ、Ａ７２Ｓ／Ｆ／Ｐ、Ｈ９２Ｎ、Ｆ９３Ｎ／Ｌ／Ｓ、Ｉ９４Ｍ／Ｋ／Ｓ／Ｖ、Ｎ９５Ｖ／Ｆ、Ｐ９６Ｓ／Ｎ、Ｅ９７Ｓ／Ｔ／Ｄ／Ｋ、Ｔ９８Ｋ／Ｉ／Ｓ／Ｙ／Ｈ、Ｖ９９Ｉ、Ｐ１００Ｇ、Ｐ１０２Ａ、またはＡ１０５Ｖ、のうちの一つ以上である、請求項１に記載のＢＭＰ−７変異体。
【請求項３】
前記変異体は、ＢＭＰ−７活性を示す、請求項１に記載のＢＭＰ−７変異体。
【請求項４】
前記変異体は、成熟ヒトＢＭＰ−７と少なくとも９５％の配列同一性を含む、請求項１に記載のＢＭＰ−７変異体。
【請求項５】
請求項１に記載のＢＭＰ−７変異体をコードする核酸。
【請求項６】
請求項５に記載の核酸を含む、組換え発現ベクター。
【請求項７】
請求項６に記載の発現ベクターを含む、細胞。
【請求項８】
前記細胞は、原核生物細胞である、請求項７に記載の細胞。
【請求項９】
前記細胞は、真核生物細胞である、請求項７に記載の細胞。
【請求項１０】
請求項１に記載のＢＭＰ−７変異体および薬学的キャリアを含む、組成物。
【請求項１１】
患者における骨格障害を処置するための組成物であって、治療的に有効な量の請求項１に記載のＢＭＰ−７変異体を含む、組成物。
【請求項１２】
ヒトＢＭＰ−７タンパク質の免疫原性を抑制する方法であって、
ヒトＢＭＰ−７のアミノ酸配列において免疫原性エピトープを同定する工程；および
ＢＭＰ−７のアミノ酸配列において１つ以上の置換を工学技術で作製することによって該エピトープを改変する工程であって、ここで、該１つ以上の置換が、成熟ヒトＢＭＰ−７に対応する、Ｇ６１、Ａ６３、Ｙ６５、Ｙ６６、Ｅ６８、Ｅ７０、Ａ７２、Ｈ９２、Ｆ９３、Ｉ９４、Ｎ９５、Ｐ９６、Ｅ９７、Ｔ９８、Ｖ９９、Ｐ１００、Ｐ１０２、またはＡ１０５のうちのいずれかの１つ以上の位置に起こって、改変されたアミノ酸配列を生じる、工程、
を含む、方法。
【請求項１３】
前記１つ以上の置換が、以下：
Ｇ６１Ｅ、Ａ６３Ｅ／Ｑ／Ｈ、Ｙ６５Ｆ／Ｎ、Ｙ６６Ｅ、Ｅ６８Ｄ／Ｋ／Ｈ、Ｅ７０Ｇ／Ｄ、Ａ７２Ｓ／Ｆ／Ｐ、Ｈ９２Ｎ、Ｆ９３Ｎ／Ｌ／Ｓ、Ｉ９４Ｍ／Ｋ／Ｓ／Ｖ、Ｎ９５Ｖ／Ｆ、Ｐ９６Ｓ／Ｎ、Ｅ９７Ｓ／Ｔ／Ｄ／Ｋ、Ｔ９８Ｋ／Ｉ／Ｓ／Ｙ／Ｈ、Ｖ９９Ｉ、Ｐ１００Ｇ、Ｐ１０２Ａ、またはＡ１０５Ｖのうちのいずれか１つ以上である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
適切な発現システムにおいて前記改変されたアミノ酸配列によってコードされるタンパク質を発現する工程、および該タンパク質を精製する工程をさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記タンパク質を発現する工程が、真核生物細胞中で起こる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記タンパク質を発現する工程が、原核生物細胞中で起こる、請求項１２に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
またさらなる局面によって、本発明は、ヒトＢＭＰ−７タンパク質の免疫原性を抑制する方法に関する。上記方法は、ヒトＢＭＰ−７の免疫原性エピトープを同定すること、およびＢＭＰ−７のアミノ酸配列において１つ以上の置換を工学技術で作製することによって、ヒトＢＭＰ−７のアミノ酸配列においてエピトープを改変して、改変アミノ酸配列を作製することを必要とする。１つ以上の置換が、成熟ヒトＢＭＰ−７に対応する、１つ以上の位置Ｇ６１、Ａ６３、Ｙ６５、Ｙ６６、Ｅ６８、Ｅ７０、Ａ７２、Ｈ９２、Ｆ９３、Ｉ９４、Ｎ９５、Ｐ９６、Ｅ９７、Ｔ９８、Ｖ９９、Ｐ１００、Ｐ１０２、またはＡ１０５において起こる。１つの実施態様において、上記ヒトＢＭＰ−７は組換体である。さらなる実施態様において、上記１つ以上の置換は、Ｇ６１Ｅ、Ａ６３Ｅ／Ｑ／Ｈ、Ｙ６５Ｆ／Ｎ、Ｙ６６Ｅ、Ｅ６８Ｄ／Ｋ／Ｈ、Ｅ７０Ｇ／Ｄ、Ａ７２Ｓ／Ｆ／Ｐ、Ｈ９２Ｎ、Ｆ９３Ｎ／Ｌ／Ｓ、Ｉ９４Ｍ／Ｋ／Ｓ／Ｖ、Ｎ９５Ｖ／Ｆ、Ｐ９６Ｓ／Ｎ、Ｅ９７Ｓ／Ｔ／Ｄ／Ｋ、Ｔ９８Ｋ／Ｉ／Ｓ／Ｙ／Ｈ、Ｖ９９Ｉ、Ｐ１００Ｇ、Ｐ１０２Ａ、またはＡ１０５Ｖのいずれか１つ以上である。さらなる実施態様において、上記方法は、適当な発現システムにおいて、上記改変されたアミノ酸配列によってコードされるタンパク質を発現する工程、および上記タンパク質を精製する工程を含み得る。上記タンパク質を、１つの実施態様において真核細胞において発現し得る、または別の実施態様において原核細胞において発現し得る。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
成熟ヒトＢＭＰ−７（配列番号１）と少なくとも９０％の配列同一性を含む、ＢＭＰ−７変異体であって、該ＢＭＰ−７変異体は、成熟ヒトＢＭＰ−７に対応する、以下：
Ｇ６１、Ａ６３、Ｙ６５、Ｙ６６、Ｅ６８、Ｅ７０、Ａ７２、Ｈ９２、Ｆ９３、Ｉ９４、Ｎ９５、Ｐ９６、Ｅ９７、Ｔ９８、Ｖ９９、Ｐ１００、Ｐ１０２、またはＡ１０５のうちの１つ以上の位置において置換を含む、ＢＭＰ−７変異体。
（項目２）
前記置換は、以下：
Ｇ６１Ｅ、Ａ６３Ｅ／Ｑ／Ｈ、Ｙ６５Ｆ／Ｎ、Ｙ６６Ｅ、Ｅ６８Ｄ／Ｋ／Ｈ、Ｅ７０Ｇ／Ｄ、Ａ７２Ｓ／Ｆ／Ｐ、Ｈ９２Ｎ、Ｆ９３Ｎ／Ｌ／Ｓ、Ｉ９４Ｍ／Ｋ／Ｓ／Ｖ、Ｎ９５Ｖ／Ｆ、Ｐ９６Ｓ／Ｎ、Ｅ９７Ｓ／Ｔ／Ｄ／Ｋ、Ｔ９８Ｋ／Ｉ／Ｓ／Ｙ／Ｈ、Ｖ９９Ｉ、Ｐ１００Ｇ、Ｐ１０２Ａ、またはＡ１０５Ｖ、のうちの一つ以上である、項目１に記載のＢＭＰ−７変異体。
（項目３）
前記変異体は、ＢＭＰ−７活性を示す、項目１に記載のＢＭＰ−７変異体。
（項目４）
前記変異体は、成熟ヒトＢＭＰ−７と少なくとも９５％の配列同一性を含む、項目１に記載のＢＭＰ−７変異体。
（項目５）
項目１に記載のＢＭＰ−７変異体をコードする核酸。
（項目６）
項目１に記載の核酸を含む、組換え発現ベクター。
（項目７）
項目６に記載の発現ベクターを含む、細胞。
（項目８）
前記細胞は、原核生物細胞である、項目７に記載の細胞。
（項目９）
前記細胞は、真核生物細胞である、項目７に記載の細胞。
（項目１０）
項目１に記載のＢＭＰ−７変異体および薬学的キャリアを含む、組成物。
（項目１１）
患者における骨格障害を処置する方法であって、治療的に有効な量の項目１に記載のＢＭＰ−７変異体を該患者に投与する工程を含む、方法。
（項目１２）
ヒトＢＭＰ−７タンパク質の免疫原性を抑制する方法であって、
ヒトＢＭＰ−７のアミノ酸配列において免疫原性エピトープを同定する工程；および
ＢＭＰ−７のアミノ酸配列において１つ以上の置換を工学技術で作製することによって、該エピトープを改変する工程であって、ここで、該１つ以上の置換が、成熟ヒトＢＭＰ−７に対応する、Ｇ６１、Ａ６３、Ｙ６５、Ｙ６６、Ｅ６８、Ｅ７０、Ａ７２、Ｈ９２、Ｆ９３、Ｉ９４、Ｎ９５、Ｐ９６、Ｅ９７、Ｔ９８、Ｖ９９、Ｐ１００、Ｐ１０２、またはＡ１０５のうちの１つ以上のいずれかの位置に起こって、改変されたアミノ酸配列を生じる工程、を含む、方法。
（項目１３）
前記１つ以上の置換が、以下：
Ｇ６１Ｅ、Ａ６３Ｅ／Ｑ／Ｈ、Ｙ６５Ｆ／Ｎ、Ｙ６６Ｅ、Ｅ６８Ｄ／Ｋ／Ｈ、Ｅ７０Ｇ／Ｄ、Ａ７２Ｓ／Ｆ／Ｐ、Ｈ９２Ｎ、Ｆ９３Ｎ／Ｌ／Ｓ、Ｉ９４Ｍ／Ｋ／Ｓ／Ｖ、Ｎ９５Ｖ／Ｆ、Ｐ９６Ｓ／Ｎ、Ｅ９７Ｓ／Ｔ／Ｄ／Ｋ、Ｔ９８Ｋ／Ｉ／Ｓ／Ｙ／Ｈ、Ｖ９９Ｉ、Ｐ１００Ｇ、Ｐ１０２Ａ、またはＡ１０５Ｖのうちのいずれか１つ以上である、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
適切な発現システムにおいて前記改変されたアミノ酸配列によってコードされるタンパク質を発現する工程、および該タンパク質を精製する工程をさらに含む、項目１２に記載の方法。
（項目１５）
前記タンパク質を発現する工程が、真核生物細胞中で起こる、項目１２に記載の方法。
（項目１６）
前記タンパク質を発現する工程が、原核生物細胞中で起こる、項目１２に記載の方法。