【誤訳訂正書】
【提出日】平成23年11月11日(2011.11.11)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Rhoキナーゼ（ROK）タンパク質の活性を調節する化合物の同定のためのアッセイ方法であって、ここで、
ａ）ROKタンパク質によりリン酸化を受けることができる、以下のアミノ酸配列：GGGGAKRRRLSSLRASTSを有するペプチドを準備し；
ｂ）ROKタンパク質を準備し；
ｃ）ａ）からのペプチドがリン酸化されていた場合にこのペプチドを認識することができるリン酸化特異的抗体を準備し；
ｄ）化学的化合物を準備し；
ｅ）ａ）からのペプチドを、このペプチドのリン酸化を可能にする条件下で、ｂ）からのROKタンパク質およびｄ）からの化学的化合物と共にインキュベーションし；
ｆ）ｅ）に従って行なったインキュベーションが終了した後、ｃ）からの抗体をこのペプチドのリン酸化を検出するために使用し；
ｇ）ｆ）からの結果を、場合により、ｄ）からの化学的化合物を存在させないでａ）からのペプチド、ｂ）からのROKタンパク質のインキュベーションを行なった試験からの結
果と比較する、
上記方法。
【請求項２】
工程ｅ）、ｆ）およびｇ）によるインキュベーションがELISAアッセイ法として行われ
る、請求項１に記載のアッセイ方法。
【請求項３】
工程ｅ）、ｆ）およびｇ）によるインキュベーションがRIAアッセイ法として行われる、請求項１に記載のアッセイ方法。
【請求項４】
ペプチドがビオチニル化されている、請求項１〜３のいずれかに記載のアッセイ方法。
【請求項５】
ROKタンパク質がヒト由来である、請求項１〜４のいずれかに記載のアッセイ方法。
【請求項６】
ROKタンパク質が組換え方法により製造される、請求項１〜５のいずれかに記載のアッ
セイ方法。
【請求項７】
ROKタンパク質活性を調節する化合物のハイスループットスクリーニングのための、請
求項１〜６のいずれかに記載のアッセイ方法の使用。
【請求項８】
ａ）ROKタンパク質によりリン酸化を受けることができる、以下のアミノ酸配列：GGGGAKRRRLSSLRASTSを有するペプチド；
ｂ）ROKタンパク質；
ｃ）ａ）からのペプチドがリン酸化されていた場合にこのペプチドを認識することができるリン酸化特異的抗体；
ｄ）場合により、ｃ）からの抗体を認識することができ、および／または、標識系に結合した、第二抗体；
ｅ）場合により、ａ）からのペプチドのリン酸化を実現するための試薬、緩衝液および／または器材、および／またはELISA装置、
から成る部品のキット。
【請求項９】
ペプチドがビオチニル化されている、請求項８に記載の部品のキット。
【請求項１０】
ROKタンパク質がヒト由来である、請求項８または９に記載の部品のキット。
【請求項１１】
ROKタンパク質が組換え方法により製造される、請求項８〜１０のいずれかに記載の部品のキット。
【請求項１２】
ａ）ROKタンパク質によりリン酸化を受けることができる、以下のアミノ酸配列：GGGGAKRRRLSSLRASTSを有するペプチドを準備し；
ｂ）ROKタンパク質を準備し；
ｃ）ａ）からのペプチドがリン酸化されていた場合にこのペプチドを認識することができるリン酸化特異的抗体を準備し；
ｄ）場合により、ｃ）からの抗体を認識することができ、および／または、標識系に結合した、第二抗体を準備し；
ｅ）場合により、ａ）からのペプチドのリン酸化を実現するための試薬、緩衝液および／または器材、および／またはELISA装置を準備し、
ｆ）ａ）〜ｅ）からの成分を適宜包装し、そして部品のキットの成分と同時に、それにより提供されるROKタンパク質のアッセイ方法の操作手順を記述した手順書と組み合わせ
る、
請求項８〜１１のいずれかに記載の部品のキットの製造方法。
【請求項１３】
ROKタンパク質活性を測定するための、請求項８〜１１のいずれかに記載の部品のキ
ットの使用。
【請求項１４】
ROKタンパク質活性を調節する化合物を同定するための、請求項８〜１１のいずれか
に記載の部品のキットの使用。
【請求項１５】
ハイスループットスクリーニングのための、請求項８〜１１のいずれかに記載の部品のキットの使用。
【請求項１６】
以下のアミノ酸配列：GGGGAKRRRLSSLRASTSから成るペプチド。
【請求項１７】
ビオチニル化されている請求項１６に記載のペプチド。
【請求項１８】
ROKタンパク質の活性を測定するための、請求項１６または１７に記載のペプチドの使
用。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
ROK−ELISA 96−穴フォーマット
総体積＝100μl
１）所望の最終濃度の阻害剤（10×濃縮溶液の10μl）をROKの80μlと共に10分間、プレインキュベートする。
２）所望の最終濃度で10×濃縮ATP溶液の10μl ATPを加える。
３）プレートを30℃で１時間インキュベートする。
４）500mM EDTA溶液の100μlを用いてキナーゼ反応を停止する。
５）全てのウエルの上清を取り除く。
６）一次モノクローナルリン酸化特異的抗体（phosphospecific antibody）（1：1000）を100μl／ウエル加え、そして室温で15分間インキュベートする。
７）二次抗体（1：2000）を100μl／ウエル加え、そして室温で１時間インキュベートする。
８）上清を取り除き、そしてPBSを200μl／ウエル用いて５回洗浄する。
９）基質溶液を100μl全てのウエルに加え、そして室温で10分間インキュベートする。
１０）停止溶液を100μl全てのウエルに加える。
１１）492nmで光学的濃度（OD）を測定する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２２】
ROK−ELISA 384−穴フォーマット
総体積＝10μl
１）所望の最終濃度の阻害剤（10×濃縮溶液の１μl）をROKの８μlと共に10分間、プ
レインキュベートする。
２）所望の最終濃度で10×濃縮ATP溶液の１μl ATPを加える。
３）プレートを30℃で１時間インキュベートする。
４）500mM EDTA溶液の10μlを用いてキナーゼ反応を停止する。
５）全てのウエルの上清を取り除く。
６）一次モノクローナルリン酸化特異的抗体（1：1000）を10μl／ウエル加え、そして室温で15分間インキュベートする。
７）二次抗体（1：2000）を100μl／ウエル加え、そして室温で１時間インキュベート
する。
８）上清を取り除き、そしてPBSを30μl／ウエル用いて５回洗浄する。
９）基質溶液を10μl全てのウエルに加え、そして室温で10分間インキュベートする。
１０）停止溶液を10μl全てのウエルに加える。
１１）492nmで光学的濃度（OD）を測定する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
材料
ROK（ROKα／ROCK−II（活性型組換えaa 11−550またはそれ以上）、
ビオチン化S6ペプチド（ビオチン−GGGGARRRLSSLRASTS）、
ストレプトアビジン被覆96−または384−穴プレート（例えば、ロシュのストレプタウエル、高結合（透過性）1989685／1989677、ロシュ・デアグノステクス、マンハイム）、
モノクローナルリン酸化特異的抗体、トランスダクション・ラブスより（クローン22a、BDバイオサイエンス、ハイデルベルグ）、
ヤギ抗マウスIgG−HRP抗体、200μg／0.5ml（サンタクルツ、カタログ番号sc−2005）。