【手続補正書】
【提出日】平成23年11月22日(2011.11.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体液サンプル中のエストラジオールの前記量をタンデム型質量分析によって決定するための方法であって：
（ａ）前記体液サンプルから液体クロマトグラフィーによってエストラジオールを精製する工程と；
（ｂ）２７１．１４±０．５の質量／電荷比を有している前記エストラジオールの前駆イオンを生成する工程と；
（ｃ）前記前駆イオンの１つ以上の断片イオンを生成する工程であって、前記１つ以上の断片イオンの少なくとも１つが、１８３．１０±０．５の質量／電荷比を有するイオンフラグメントを含む工程と；
（ｄ）工程（ｂ）もしくは（ｃ）またはその両方で生成される１つ以上の前記イオンの量を検出する工程、および前記検出されたイオンを前記体液サンプル中の前記エストラジオールの量に対して関連付ける工程、を含む上記方法。
【請求項２】
前記方法が８０ｐｇ／ｍＬ以下の定量限界を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記エストラジオールが質量分析前に誘導体化されない、請求項１−２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記液体クロマトグラフィーが高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）である、請求項１−３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記精製工程がさらに、高乱流液体クロマトグラフィー（ＨＴＬＣ）続いて、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を含む、請求項１−４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記前駆イオンが２７１．１４±０．５の質量／電荷比を有し、前記１つ以上の断片イオンが、１４５．１０±０．５の質量／電荷比を有する断片イオンを含む、請求項１−５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記イオン化工程の前に前記体液サンプルに存在し得るタンパク質由来の遊離のエストラジオールに対して十分な量である試薬が前記体液サンプルに添加される、請求項１−６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記試薬が塩である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記塩が硫酸アンモニウムである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記試薬が、前記体液サンプルを酸性にするのに十分な量で添加される、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記試薬がギ酸である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記体液サンプル中に存在するグルクロン酸化エストラジオールおよび非グルクロン酸化エストラジオールの両方が前記方法によって検出および測定される、請求項１−１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
試験サンプル中のエストラジオールの量を決定するための方法であって：
（ａ）前記試験サンプルを前記試験サンプル中に存在し得るタンパク質由来の遊離のエストラジオールに対して十分な量の試薬を用いて酸性にする工程と；
（ｂ）前記試験サンプルからエストラジオールを液体クロマトグラフィーによって精製する工程と；
（ｃ）前記試験サンプルから精製された前記エストラジオールをイオン化して、タンデム型質量分析によって検出可能な１つ以上のイオンを生成する工程と：
（ｄ）前記エストラジオールイオン（単数または複数）の量をタンデム型質量分析によって正のイオンモードで検出し、ここで前記エストラジオールイオン（単数または複数）の量が前記試験サンプル中のエストラジオールの量に対して関連付けられる工程と、
を含む上記方法。
【請求項１４】
前記前記液体クロマトグラフィーが高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記精製工程がさらに、高乱流液体クロマトグラフィー（ＨＴＬＣ）、続いて高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記エストラジオールイオンが、２７１．１４±０．５、２５５．０７±０．５、１８３．１０±０．５、１５９．２０±０．５、１４５．１０±０．５および１３３．２０±０．５の質量／電荷比を有するイオンからなる群より選択される１つ以上のイオンを含む、請求項１３−１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記イオン化が、２７１．１４±０．５の質量／電荷比を有する前駆イオンを生成する工程と、１８３．１０±０．５および１４５．１０±０．５の質量／電荷比を有するイオンからなる群より選択される１つ以上の断片イオンを生成する工程とを含む、請求項１３−１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記イオン化が、２５５．０７±０．５の質量／電荷比を有する前駆イオンを生成する工程と、１５９．２０±０．５および１３３．２０±０．５の質量／電荷比を有するイオンからなる群より選択される１つ以上の断片イオンを生成する工程とを含む、請求項１３−１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記試薬がギ酸である、請求項１３−１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記試験サンプル中に存在するグルクロン酸化エストラジオールおよび非グルクロン酸化エストラジオールの両方が前記方法によって検出および測定される、請求項１３−１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記試験サンプルが体液である、請求項１３−２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記方法が、８０ｐｇ／ｍＬ以下の定量限界を有する、請求項１３−２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記エストラジオールが質量分析の前に誘導体化されない、請求項１３−２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
試験サンプル中のエストラジオールの量を決定するための方法であって：
（ａ）前記試験サンプル中に存在し得るタンパク質由来の遊離のエストラジオールに対して十分な量で前記試験サンプルに対して試薬を添加する工程と；
（ｂ）前記試験サンプルから液体クロマトグラフィーによってエストラジオールを精製する工程と；
（ｃ）前記試験サンプルから精製されたエストラジオールをイオン化して、タンデム型質量分析によって検出可能な１つ以上のイオンを生成する工程と；
（ｄ）前記エストラジオールイオン（単数または複数）の量をタンデム型質量分析によって負のイオンモードで検出し、ここで前記エストラジオールイオン（単数または複数）の量が前記試験サンプル中のエストラジオールの量に対して関連付けられる工程と、
を含む上記方法。
【請求項２５】
前記方法が８０ｐｇ／ｍＬ以下の定量限界を有する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記エストラジオールが質量分析前に誘導体化されない、請求項２４−２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記液体クロマトグラフィーが高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）である、請求項２４−２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記精製工程がさらに、高乱流液体クロマトグラフィー（ＨＴＬＣ）続いて、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を含む、請求項２４−２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記試薬が塩である、請求項２４−２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記塩が硫酸アンモニウムである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記試験サンプル中に存在するグルクロン酸化エストラジオールおよび非グルクロン酸化エストラジオールの両方が前記方法によって検出および測定される、請求項２４−３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記試験サンプルが体液である、請求項２４−３１のいずれか１項に記載の方法。