【手続補正書】
【提出日】平成24年5月21日(2012.5.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
増加した濃度のイソプレノイドを生成するように修飾された遺伝的に改変された酵母を含む組成物であって、
前記遺伝的に改変された酵母は、遺伝子修復オリゴ核酸塩基によって変異された修飾酵素を含む組成物。
【請求項２】
遺伝的に改変された酵母から抽出されるイソプレノイドを含む組成物であって、
前記遺伝的に改変された酵母は、遺伝子修復オリゴ核酸塩基によって変異された修飾酵素を含む組成物。
【請求項３】
遺伝的に改変された酵母を含む組成物であって、
前記遺伝的に改変された酵母は、１つ以上の設計変異を有する、１つ以上の修飾酵素を発現し、
前記１つ以上の設計変異は、前記酵素内の規定位置に存在し、
前記１つ以上の設計変異のうちの少なくとも１つは、遺伝子修復オリゴ核酸塩基によって変異され、
前記酵母は天然酵母と比較して増加した量のイソプレノイドを生成する、
ことを特徴とする組成物。
【請求項４】
前記イソプレノイドはスクアレンであり、前記酵母は対応する天然酵母と比較して増加した濃度のスクアレンを生成する、請求項１−３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記修飾酵素は前記イソプレノイド生合成経路中に存在する、請求項１−４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記修飾酵素は、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（「ＡＣＣａｓｅ」）、ＨＭＧ-ＣｏＡレダクターゼ、スクアレンエポキシダーゼスクアレンシンターゼ、およびＡＴＰクエン酸リアーゼから成る群から選択される、請求項１−５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
前記修飾酵素は、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼであり、
前記アセチルＣｏＡカルボキシラーゼは、減少した活性または発現を有し、
前記活性または発現は、対応する天然酵母の活性または発現の約９０％、または約８０％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２０％、または約１０％、または約５％まで減少している、
請求項１−６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記修飾酵素は、ＨＭＧ-ＣｏＡレダクターゼであり、
前記ＨＭＧ-ＣｏＡレダクターゼは、増加した活性または減少した発現を有し、
前記活性または発現は、対応する天然酵母の活性または発現の少なくとも１．２倍、または１．５倍、または２倍、または３倍、または４倍、または５倍、または１０倍、または１０倍、または２０倍、または５０倍、または１００倍、または１，０００倍、または１０，０００倍、または１００，０００倍、または１，０００，０００倍以上増加している、
請求項１−７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
前記修飾酵素は、スクアレンエポキシダーゼであり、
前記スクアレンエポキシダーゼは、減少した活性または発現を有し、
前記活性または発現は、対応する天然酵母の活性または発現の約９０％、または約８０％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２０％、または約１０％、または約５％まで減少している、
請求項１−８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
前記修飾酵素は、スクアレンシンターゼまたはＡＴＰクエン酸リアーゼであり、
前記スクアレンシンターゼまたはＡＴＰクエン酸リアーゼは、増加した活性または発現を有し、
前記活性または発現は、対応する天然酵母の活性または発現の少なくとも１．２倍、または１．５倍、または２倍、または３倍、または４倍、または５倍、または１０倍、または１０倍、または２０倍、または５０倍、または１００倍、または１，０００倍、または１０，０００倍、または１００，０００倍、または１，０００，０００倍以上増加している、
請求項１−９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
前記遺伝子修復オリゴ核酸塩基は、混合二本鎖オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド非含有分子、および一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドから成る群から選択される、請求項１−１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
遺伝的に改変された酵母によって、スクアレンを生成する方法であって、
イソプレノイド生合成経路中の１つ以上の酵素の活性または発現を増加または減少させることを含み、
前記酵素活性または発現は、１つ以上の設計変異によって増加または減少され、
前記１つ以上の設計変異のうちの少なくとも１つは、遺伝子修復オリゴ核酸塩基によって変異され、
前記１つ以上の設計変異は、前記酵素内の規定位置に存在し、
前記遺伝的に改変された酵母は天然酵母と比較して増加した量のイソプレノイドを生成する、
ことを特徴とする方法。
【請求項１３】
前記イソプレノイドはスクアレンであり、前記酵母は対応する天然酵母と比較して増加した濃度のスクアレンを生成する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記修飾酵素は前記イソプレノイド生合成経路中に存在する、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記修飾酵素は、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（「ＡＣＣａｓｅ」）、ＨＭＧ-ＣｏＡレダクターゼ、スクアレンエポキシダーゼスクアレンシンターゼ、およびＡＴＰクエン酸リアーゼから成る群から選択される、請求項１２−１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記修飾酵素は、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼであり、
前記アセチルＣｏＡカルボキシラーゼは、減少した活性または発現を有し、
前記活性または発現は、対応する天然酵母の活性または発現の約９０％、または約８０％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２０％、または約１０％、または約５％まで減少している、
請求項１２−１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記修飾酵素は、ＨＭＧ-ＣｏＡレダクターゼであり、
前記ＨＭＧ-ＣｏＡレダクターゼは、増加した活性または減少した発現を有し、
前記活性または発現は、対応する天然酵母の活性または発現の少なくとも１．２倍、または１．５倍、または２倍、または３倍、または４倍、または５倍、または１０倍、または１０倍、または２０倍、または５０倍、または１００倍、または１，０００倍、または１０，０００倍、または１００，０００倍、または１，０００，０００倍以上増加している、
請求項１２−１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記修飾酵素は、スクアレンエポキシダーゼであり、
前記スクアレンエポキシダーゼは、減少した活性または発現を有し、
前記活性または発現は、対応する天然酵母の活性または発現の約９０％、または約８０％、または約７０％、または約６０％、または約５０％、または約４０％、または約３０％、または約２０％、または約１０％、または約５％まで減少している、
請求項１２−１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記修飾酵素は、スクアレンシンターゼまたはＡＴＰクエン酸リアーゼであり、
前記スクアレンシンターゼまたはＡＴＰクエン酸リアーゼは、増加した活性または発現を有し、
前記活性または発現は、対応する天然酵母の活性または発現の少なくとも１．２倍、または１．５倍、または２倍、または３倍、または４倍、または５倍、または１０倍、または１０倍、または２０倍、または５０倍、または１００倍、または１，０００倍、または１０，０００倍、または１００，０００倍、または１，０００，０００倍以上増加している、
請求項１２−１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
前記遺伝子修復オリゴ核酸塩基は、混合二本鎖オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド非含有分子、および一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドから成る群から選択される、請求項１２−１９のいずれかに記載の方法。