【手続補正書】
【提出日】平成24年1月27日(2012.1.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
親脂肪分解酵素の変異体であって、
当該親脂肪分解酵素と比較して、配列番号２のＤ２７Ｒ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒに対応するアミノ酸残基の置換からなるアミノ酸配列を有し、
当該親脂肪分解酵素よりも洗剤中でより安定である、
親脂肪分解酵素の変異体。
【請求項２】
前記置換に加えて更に、配列番号２のＬ２２７Ｇに対応するアミノ酸残基の置換からなるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の変異体。
【請求項３】
前記親脂肪分解酵素が、真菌脂肪分解酵素又は酵母脂肪分解酵素である、請求項１又は２に記載の変異体。
【請求項４】
酵母脂肪分解酵素が、カンジダ（Candida）属、クリベロマイセス（Kluyveromyces）属、ピキア（Pichia）属、サッカロマイセス（Saccharomyces）属、シゾサッカロマイセス（Schizosaccharomyces）属、又はヤロウイア（Yarrowia）属に由来する、請求項３に記載の変異体。
【請求項５】
サッカロマイセス（Saccharomyces）属由来の脂肪分解酵素が、サッカロマイセス・カールスバーゲンシス（Saccharomyces carlsbergensis）、サッカロマイセス・セレビシアエ（Saccharomyces cerevisiae）、サッカロマイセス・ジアスタティクス（Saccharomyces diastaticus）、サッカロマイセス・ドウグラシイ（Saccharomyces douglasii）、サッカロマイセス・クルイベリ（Saccharomyces kluyveri）、サッカロマイセス・ノルベンシス（Saccharomyces norbensis）、又はサッカロマイセス・オビフォルミス（Saccharomyces oviformis）由来の脂肪分解酵素である、請求項４に記載の変異体。
【請求項６】
真菌脂肪分解酵素が、アクレモニウム（Acremonium）属、アスペルギルス（Aspergillus）属、オウレオバシジウム（Aureobasidium）属、クリプトコッカス（Cryptococcus）属、フィロバシジウム（Filobasidium）属、フサリウム（Fusarium）属、フミコラ（Humicola）属、マグナポルテ（Magnaporthe）属、ムコール（Mucor）属、ミセリオプソラ（Myceliophthora）属、ネオカリマスティクス（Neocallimastix）属、ネウロスポラ（Neurospora）属、パエシロマイセス（Paecilomyces）属、ペニシリウム（Penicillium）属、ピロマイセス（Piromyces）属、シゾフィラム（Schizophyllum）属、タラロマイセス（Talaromyces）属、サーモアスカス（Thermoascus）属、チエラビア（Thielavia）属、トリポクラジウム（Tolypocladium）属、サーモマイセス（Thermomyces）属又はトリコデルマ（Trichoderma）属由来の糸状菌脂肪分解酵素である、請求項３に記載の変異体。
【請求項７】
糸状菌脂肪分解酵素が、アスペルギルス・アクレアタス（Aspergillus aculeatus）、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）、アスペルギルス・フミガタス（Aspergillus fumigatus）、アスペルギルス・ホエティダス（Aspergillus foetidus）、アスペルギルス・ジャポニクス（Aspergillus japonicus）、アスペルギルス・ニデュランス（Aspergillus nidulans）、アスペルギルス・ニゲル（Aspergillus niger）、アスペルギルス・オリザエ（Aspergillus oryzae）、アスペルギルス・タービゲンシス（Aspergillus turbigensis）、フサリウム・バクトリジオイデス（Fusarium bactridioides）、フサリウム・セレアリス（Fusarium cerealis）、フサリウム・クルークウェレンス（Fusarium crookwellense）、フサリウム・クルモルム（Fusarium culmorum）、フサリウム・グラミネアルム（Fusarium graminearum）、フサリウム・グラミナム（Fusarium graminum）、フサリウム・ヘテロスポラム（Fusarium heterosporum）、フサリウム・ネグンジ（Fusarium negundi）、フサリウム・オキシスポラム（Fusarium oxysporum）、フサリウム・レチクラタム（Fusarium reticulatum）、フサリウム・ロセウム（Fusarium roseum）、フサリウム・サムブシナム（Fusarium sambucinum）、フサリウム・サルコクロウム（Fusarium sarcochroum）、フサリウム・スポロトリチオイデス（Fusarium sporotrichioides）、フサリウム・スルフレウム（Fusarium sulphureum）、フサリウム・トルロサム（Fusarium torulosum）、フサリウム・トリコテシオイデス（Fusarium trichothecioides）、フサリウム・ベネナツム（Fusarium venenatum）、フミコラ・インソレンス（Humicola insolens）、サーモマイセス・ラヌギノーサス（Thermomyces lanuginosus）（フミコラ・ラヌギノーサス（Humicola lanuginosa））、ムコール・ミエヘイ（Mucor miehei）、ミセリフソラ・サーモフィラ（Myceliophthora thermophila）、ネウロスポラ・クラッサ（Neurospora crassa）、ペニシリウム・パープロゲナム（Penicillium purpurogenum）、トリコデルマ・ハージアナム（Trichoderma harzianum）、トリコデルマ・コニンギイ（Trichoderma koningii）、トリコデルマ・ロンギブラチアタム（Trichoderma longibrachiatum）、トリコデルマ・レエセイ（Trichoderma reesei）、又はトリコデルマ・ビリデ（Trichoderma viride）由来の脂肪分解酵素である、請求項６に記載の変異体。
【請求項８】
前記親脂肪分解酵素が、
配列番号２に示すサーモマイセス・ラヌギノーサス（Thermomyces lanuginosus）由来のリパーゼのアミノ酸配列、
配列番号３に示すアブシディア・レフレクサ（Absidia reflexa）由来のリパーゼのアミノ酸配列、
配列番号４に示すアブシディア・コリムビフェラ（Absidia corymbifera）由来のリパーゼのアミノ酸配列、
配列番号５に示すリゾムコール・ミエヘイ（Rhizomucor miehei）由来のリパーゼのアミノ酸配列、
配列番号６に示すリゾプス・オリザエ（Rhizopus oryzae）由来のリパーゼのアミノ酸配列、
配列番号７に示すアスペルギルス・ニゲル（Aspergillus niger）由来のリパーゼのアミノ酸配列、
配列番号８に示すアスペルギルス・ツビンゲンシス（Aspergillus tubingensis）由来のリパーゼのアミノ酸配列、
配列番号９に示すフサリウム・オキシスポラム（Fusarium oxysporrum）由来のリパーゼのアミノ酸配列、
配列番号１０に示すフサリウム・ヘテロスポラム（Fusarium heterosporum）由来のリパーゼのアミノ酸配列、
配列番号１１に示すアスペルギルス・オリザエ（Aspergillus oryzae）由来のリパーゼのアミノ酸配列、
配列番号１２に示すペニシリウム・カメンバーティレクサ（Penicillium camembertilexa）由来のリパーゼのアミノ酸配列、
配列番号１３に示すアスペルギルス・ホエティダス（Aspergillus foetidus）由来のリパーゼのアミノ酸配列、
配列番号１４に示すアスペルギルス・ニゲル（Aspergillus niger）由来のリパーゼのアミノ酸配列、
配列番号１５に規定されるアスペルギルス・オリザエ（Aspergillus oryzae）由来のリパーゼのアミノ酸配列、及び、
配列番号１６に規定されるランデリナ・ペニサポラ（Landerina penisapora）由来のリパーゼのアミノ酸配列
から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１又は２に記載の変異体。
【請求項９】
前記洗剤が液体洗剤状態である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の変異体。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の変異体をコードする、単離ポリヌクレオチド。
【請求項１１】
発現宿主において、前記変異体の作製を指示する少なくとも１つの調節配列と作動的に結合する、請求項１０の単離ポリヌクレオチドを含んでなる、核酸構築物。
【請求項１２】
請求項１１の核酸構築物を含んでなる、組換え発現ベクター。
【請求項１３】
請求項１１の核酸構築物又は請求項１２の組換え発現ベクターを含んでなる、組換え宿主細胞。
【請求項１４】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の脂肪分解酵素変異体を調製する方法であって、
ａ）前記変異体の作製に適する条件下で、前記ポリペプチドを含んでなる前記核酸構築物又は組換え発現ベクターを含んでなる、組換え宿主細胞を培養するステップ；及び
ｂ）前記変異体を回収するステップ、
を含んでなる方法。
【請求項１５】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の脂肪分解酵素変異体を調製する方法であって、
ａ）親脂肪分解酵素を選択するステップ、
ｂ）親脂肪分解酵素において、配列番号２のＤ２７Ｒ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒに対応するアミノ酸残基を置換するステップ、
ｃ）（ｂ）に記載の置換に加えて、任意に、配列番号２のＬ２２７Ｇに対応するアミノ酸を変更するステップ、
ｄ）ステップ（ａ）〜（ｃ）から得られる変異体を調製するステップ、
ｅ）変異体の洗剤中での安定性を試験するステップ、
ｆ）洗剤中での安定性が向上した変異体を選択するステップ、
ｇ）選択した変異体を作製するステップ、
を含んでなる方法。
【請求項１６】
カルボン酸エステルの加水分解における、請求項１〜９のいずれか１項に記載の脂肪分解酵素変異体の使用。
【請求項１７】
エステルの加水分解、合成又はエステル交換における、請求項１〜９のいずれか１項に記載の脂肪分解酵素変異体の使用。
【請求項１８】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の脂肪分解酵素変異体を含んでなる調製物。
【請求項１９】
液体調製物である、請求項１８に記載の調製物。
【請求項２０】
洗剤中で安定な調製物の製造のための、請求項１〜９のいずれか１項に記載の脂肪分解酵素変異体の使用。