【手続補正書】
【提出日】平成24年6月19日(2012.6.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
歯髄類似細胞（ＤＰＭＳＣ）の単離された集団であって、前記集団中の前記細胞の少なくとも９０％が、以下のマーカー：ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、Ｏｃｔ−４のアイソフォームＡおよびＢ、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２およびＳＳＥＡ−４のそれぞれを共発現する、集団。
【請求項２】
前記集団中の前記細胞の少なくとも９５％が、以下のマーカー：ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、Ｏｃｔ−４のアイソフォームＡおよびＢ、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２およびＳＳＥＡ−４のそれぞれを共発現する、請求項１に記載の集団。
【請求項３】
前記細胞集団の約９０〜９９％が、以下のマーカー：ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、Ｏｃｔ−４のアイソフォームＡおよびＢ、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２およびＳＳＥＡ−４のそれぞれを発現する、請求項１に記載の細胞集団。
【請求項４】
前記集団中の前記細胞の０．２５〜１％が、ＣＤ３４およびＣＤ４５を共発現する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の集団。
【請求項５】
前記集団の前記細胞が、以下のもの：Ｏｃｔ−４のアイソフォームＡおよびＢ、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２、ＳＳＥＡ−４、ｃ−Ｍｙｃ、Ｋｌｆ−４およびＲｅｘ−１のそれぞれのｍＲＮＡを共発現する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の集団。
【請求項６】
前記集団が、約２８〜３０時間の平均倍加速度を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の集団。
【請求項７】
前記ＤＰＭＳＣが、外胚葉系統、内胚葉系統または中胚葉系統の細胞型のうち、１つ以上に分化する能力を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の集団。
【請求項８】
前記ＤＰＭＳＣが、外胚葉系統、内胚葉系統または中胚葉系統の細胞型のうち、少なくとも２つに分化する能力を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の集団。
【請求項９】
前記ＤＰＭＳＣが、外胚葉系統、内胚葉系統または中胚葉系統の細胞型のうち、３種類すべてに分化する能力を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の集団。
【請求項１０】
前記ＤＰＭＳＣがヒトＤＰＭＳＣである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の集団。
【請求項１１】
ヒト歯髄に由来する細胞の単離された集団であって、前記集団中の前記細胞の少なくとも９０％が、以下のマーカー：ＣＤ１０、ＣＤ２９、ＣＤ１３、ＣＤ４４、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤｗ９０、ＣＤ１０５、Ｏｃｔ−４、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２およびＳＳＥＡ−４のそれぞれを共発現し、前記集団中の前記細胞の０．２５〜１％が、ＣＤ３４およびＣＤ４５を共発現し、前記細胞が、正常な核型を有し、前記集団の前記細胞が、外胚葉系統、内胚葉系統または中胚葉系統のうち、少なくとも２つの細胞型に分化する可能性を有する、集団。
【請求項１２】
前記細胞が、以下のもの：骨芽細胞、骨格筋細胞、平滑筋細胞、心筋細胞、グリア細胞およびニューロン細胞のうち、任意の１つ以上に分化する可能性を有する、請求項１〜３または１１のいずれか１項に記載の集団。
【請求項１３】
前記ＤＰＭＳＣが、歯器官に由来する、請求項１〜３または１１のいずれか１項に記載の集団。
【請求項１４】
前記歯器官が、子供由来である、請求項１３に記載の細胞集団。
【請求項１５】
前記歯器官が、成人由来である、請求項１３に記載の細胞集団。
【請求項１６】
分化を誘導するように培養された細胞の単離された集団であって、開始時の集団が請求項１に記載のＤＰＭＳＣであり、上記分化によって、上記ＤＰＭＳＣが、骨細胞、骨格筋細胞、平滑筋細胞、心筋細胞、グリア細胞、ニューロン細胞、皮膚上皮細胞、肝臓上皮細胞、膵臓上皮細胞、膵臓内分泌細胞、膵島細胞、膵臓外分泌細胞、腸上皮細胞、腎上皮細胞、表皮に関連する構造、毛包、歯の周囲にある軟組織、象牙質（歯）、エナメル質（歯）およびセメント質（歯）からなる群より選択される分化した細胞になる、細胞の単離された集団。
【請求項１７】
前記集団中の前記細胞のゲノムが、あらかじめ選択しておいたＤＮＡ単離物の挿入によって、または、あらかじめ選択しておいたＤＮＡ単離物による前記細胞ゲノムのあるセグメントの置換によって、または、前記細胞ゲノムの少なくとも一部分の欠失もしくは不活性化によって改変されていない、請求項１〜３または１１のいずれか１項に記載の集団。
【請求項１８】
請求項１に記載のＤＰＭＳＣ集団を得る方法であって、血小板由来増殖因子、インスリン、セレン、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、デキサメタゾン、リノール酸およびアスコルビン酸からなる群より選択される成長因子を加えた培地で、歯髄源を培養し、請求項１に記載のＤＰＭＳＣ集団を得る工程を含む、方法。
【請求項１９】
前記ＤＰＭＳＣがヒトＤＰＭＳＣであり、前記歯髄源がヒト由来である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
粘着細胞および非粘着細胞が、免疫除去、物理的な除去または化学的な除去によって選別されることなく一緒に培養される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記方法が、ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＣＤ６６ｂおよびＣＤ４５＋のグリコホリンＡを共発現する細胞出発源または単核細胞の細胞培養物を除去しない、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
細胞培養器に前記細胞を入れる工程をさらに含み、ここで、前記細胞培養器は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）基質を含まない、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
血清を約０．５〜２．２５％の割合で含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
インスリンが、約１０〜約５０μｇ／ｍｌの濃度で、トランスフェリンが、０より多いが約１０μｇ／ｍｌ未満の濃度で、セレンが、約０．１〜約５μｇ／ｍｌの濃度で、リノール酸が、約０〜約１μｇ／ｍｌの濃度で、デキサメタゾンが、約０．００５〜約０．１５μＭの濃度で、Ｌ−アスコルビン酸が、約１０〜５０ｍｇＦ／Ｌの濃度で、血小板由来増殖因子が、約５〜約１５ｎｇ／ｍｌの濃度で、上皮増殖因子が、１〜約１５ｎｇ／ｍｌの濃度で、インスリン様成長因子が、１〜約１５ｎｇ／ｍｌの濃度で、線維芽細胞増殖因子−ｂが、１〜約１５ｎｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
治療援助が必要な個体に治療援助を提供するための組成物であって、ＤＰＭＳＣを含む、組成物。
【請求項２６】
請求項１８〜２４のいずれか１項に記載の培養方法によって作り出される、ＤＰＭＳＣ集団。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
さらに別の態様では、本発明は、（ａ）少なくとも１個体に由来するＤＰＭＳＣからの、少なくとも１つの遺伝子を含む遺伝子プロフィールを決定する工程と、（ｂ）この遺伝子プロフィールを、アクセス可能な媒体に格納する工程によって、薬物探査を支援するために、多能性が誘導された幹細胞の遺伝子プロフィールのデータベースを与える方法を提供する。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
歯髄類似細胞（ＤＰＭＳＣ）の単離された集団であって、前記集団中の前記細胞の少なくとも９０％が、以下のマーカー、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、Ｏｃｔ−４のアイソフォームＡおよびＢ、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２、ＳＳＥＡ−４のそれぞれを共発現する、集団。
（項目２）
前記集団中の前記細胞の少なくとも９５％が、以下のマーカー、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、Ｏｃｔ−４のアイソフォームＡおよびＢ、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２、ＳＳＥＡ−４のそれぞれを共発現する、項目１に記載の集団。
（項目３）
前記細胞集団の約９０〜９９％が、以下のマーカー、ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、Ｏｃｔ−４のアイソフォームＡおよびＢ、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２、ＳＳＥＡ−４のそれぞれを発現する、項目１に記載の細胞集団。
（項目４）
前記集団中の前記細胞の０．２５〜１％が、ＣＤ３４およびＣＤ４５を共発現する、項目１〜３のいずれか１項に記載の集団。
（項目５）
前記集団の前記細胞が、以下のもの、Ｏｃｔ−４のアイソフォームＡおよびＢ、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２、ＳＳＥＡ−４、ｃ−Ｍｙｃ、Ｋｌｆ−４、Ｒｅｘ−１のそれぞれのｍＲＮＡを共発現する、項目１〜３のいずれか１項に記載の集団。
（項目６）
前記集団が、約２８〜３０時間の平均倍加速度を有する、項目１〜３のいずれか１項に記載の集団。
（項目７）
前記ＤＰＭＳＣが、外胚葉系統、内胚葉系統または中胚葉系統の細胞型のうち、１つ以上に分化する可能性を有する、項目１〜３のいずれか１項に記載の集団。
（項目８）
前記ＤＰＭＳＣが、外胚葉系統、内胚葉系統または中胚葉系統の細胞型のうち、少なくとも２つに分化する可能性を有する、項目１〜３のいずれか１項に記載の集団。
（項目９）
前記ＤＰＭＳＣが、外胚葉系統、内胚葉系統または中胚葉系統の細胞型のうち、３種類すべてに分化する可能性を有する、項目１〜３のいずれか１項に記載の集団。
（項目１０）
前記ＤＰＭＳＣがヒトＤＰＭＳＣである、項目１〜３のいずれか１項に記載の集団。
（項目１１）
ヒト歯髄に由来する細胞の単離された集団であって、前記集団中の前記細胞の少なくとも９０％が、以下のマーカー、ＣＤ１０、ＣＤ２９、ＣＤ１３、ＣＤ４４、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤｗ９０、ＣＤ１０５、Ｏｃｔ−４、Ｎａｎｏｇ、Ｓｏｘ−２、ＳＳＥＡ−４のそれぞれを共発現し、前記集団中の前記細胞の０．２５〜１％が、ＣＤ３４およびＣＤ４５を共発現し、前記細胞が、正常な核型を有し、前記集団の前記細胞が、外胚葉系統、内胚葉系統または中胚葉系統のうち、少なくとも２つの細胞型に分化する可能性を有する、集団。
（項目１２）
前記細胞が、以下のもの、骨芽細胞、骨格筋細胞、平滑筋細胞、心筋細胞、グリア細胞、神経細胞のうち、任意の１つ以上に分化する可能性を有する、項目１〜３または１１のいずれか１項に記載の集団。
（項目１３）
前記ＤＰＭＳＣが、歯器官に由来する、項目１〜３または１１のいずれか１項に記載の集団。
（項目１４）
前記歯器官が、子供由来である、項目１２に記載の細胞集団。
（項目１５）
前記歯器官が、成人由来である、項目１２に記載の細胞集団。
（項目１６）
分化を誘導するように培養された細胞の単離された集団であって、開始時の集団が項目１に記載のＤＰＭＳＣであり、上記分化によって、上記ＤＰＭＳＣが、骨細胞、骨格筋細胞、平滑筋細胞、心筋細胞、グリア細胞、神経細胞、皮膚上皮細胞、肝臓上皮細胞、膵臓上皮細胞、膵臓内分泌細胞、膵島細胞、膵臓外分泌細胞、腸上皮細胞、腎上皮細胞、表皮に関連する構造、毛包、歯の周囲にある軟組織、象牙質（歯）、エナメル質（歯）、セメント質（歯）からなる群より選択される分化した細胞になる、細胞の単離された集団。
（項目１７）
前記集団中の前記細胞のゲノムが、あらかじめ選択しておいたＤＮＡ単離物の挿入によって、または、あらかじめ選択しておいたＤＮＡ単離物による前記細胞ゲノムのあるセグメントの置換によって、または、前記細胞ゲノムの少なくとも一部分の欠失もしくは不活性化によって改変されていない、項目１〜３または１１のいずれか１項に記載の集団。
（項目１８）
項目１に記載のＤＰＭＳＣ集団を得る方法であって、血小板由来増殖因子、インスリン、セレン、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、デキサメタゾン、リノール酸、アスコルビン酸からなる群より選択される成長因子を加えた培地で、歯髄源を培養し、項目１に記載のＤＰＭＳＣ集団を得る工程を含む、方法。
（項目１９）
前記ＤＰＭＳＣがヒトＤＰＭＳＣであり、前記歯髄源がヒト由来である、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
粘着細胞および非粘着細胞が、免疫除去、物理的な除去または化学的な除去によって選別されることなく一緒に培養される、項目１８に記載の方法。
（項目２１）
前記方法が、ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＣＤ６６ｂおよびＣＤ４５＋のグリコホリンＡを共発現する細胞出発源または単核細胞の細胞培養物を除去しない、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
細胞培養器に前記細胞を入れる工程をさらに含み、ここで、前記細胞培養器は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）基質を含まない、項目２０に記載の方法。
（項目２３）
血清を約０．５〜２．２５％の割合で含む、項目２０に記載の方法。
（項目２４）
インスリンが、約１０〜約５０μｇ／ｍｌの濃度で、トランスフェリンが、０より多いが約１０μｇ／ｍｌ未満の濃度で、セレンが、約０．１〜約５μｇ／ｍｌの濃度で、リノール酸が、約０〜約１μｇ／ｍｌの濃度で、デキサメタゾンが、約０．００５〜約０．１５μＭの濃度で、Ｌ−アスコルビン酸が、約１０〜５０ｍｇＦ／Ｌの濃度で、血小板由来増殖因子が、約５〜約１５ｎｇ／ｍｌの濃度で、上皮増殖因子１が、約１５ｎｇ／ｍｌの濃度で、インスリン様成長因子が、１〜約１５ｎｇ／ｍｌの濃度で、線維芽細胞増殖因子−ｂ１が、約１５ｎｇ／ｍｌの濃度で存在する、項目１８に記載の方法。
（項目２５）
治療援助が必要な個体に治療援助を提供する方法であって、治療を支援するのに有効な量のＤＰＭＳＣを前記個体に投与する工程を含む、方法。
（項目２６）
項目１８〜２４のいずれか１項に記載の培養方法によって作り出される、ＤＰＭＳＣ集団。