【手続補正書】
【提出日】平成24年10月5日(2012.10.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
精巣癌および／もしくはその前駆体の検出のための方法であって、該方法は、同じ細胞における少なくとも２種のマーカーの存在についてサンプルをスクリーニングする工程によるものであり、ここで該サンプルは、ヒト男性由来の精液サンプルおよび／もしくは射精液であり、該少なくとも２種のマーカーのうち、少なくとも１種のマーカーは、核マーカーであり、少なくとも１種の他方のマーカーは、非核マーカーである、方法。
【請求項２】
前記少なくとも１種の核マーカーは、ＴＦＡＰ２Ｃ（Ａｐ−２γ）、ＰＯＵ５Ｆ１（ＯＣＴ３／４）、ＮＡＮＯＧ、ＴＰ５３、ＳＯＸ２、ＳＯＸ１５、ＳＯＸ１７、Ｅ２Ｆ１、ＩＦＩ１６、ＴＥＡＤ４、ＴＬＥ１、ＴＡＴＤＮ２、ＮＦＩＢ、ＬＭＯ２、ＭＥＣＰ２、ＨＨＥＸ、ＸＢＰ１、ＲＲＳ１、ＭＹＣＮ、ＥＴＶ４、ＥＴＶ５、ＭＹＣＬ１、ＨＩＳＴ１Ｈ１Ｃ、ＷＤＨＤ１、ＲＣＣ２、およびＭＤＣ１からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも１種の非核マーカーは、ＡＬＰＰＬ２（ＰＬＡＰ）、ＡＬＰＬ、ＫＩＴ、ＰＤＰＮ、ＤＰＰＡ４、ＴＣＬ１Ａ、ＣＤＨ１、ＧＬＤＣ、ＴＣＬ１Ａ、ＤＰＰＡ４、ＣＤＫ５、ＣＤ１４、ＦＧＤ１、ＮＥＵＲＬ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＤＹＳＦ、ＭＴＨＦＤ１、ＥＮＡＨ、ＺＤＨＨＣ９、ＮＭＥ１、ＳＤＣＢＰ、ＳＬＣ２５Ａ１６、ＡＴＰ６ＡＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＰＤＫ４、ＰＣＤＨ８、ＲＡＢ１５、ＥＶＩ２Ｂ、ＬＲＰ４、Ｂ４ＧＡＬＴ４、ＣＨＳＴ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＣＤ５３、ＣＤ３８、ＰＩＧＬ、ＣＫＭＴ１Ｂ、ＲＡＢ３Ｂ、ＮＲＣＡＭ、ＡＬＫ２、ＨＲＡＳＬＳ３、およびＴＲＡ−１−６０からなる群より選択される、請求項１〜２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも１種の核マーカーは、Ａｐ−２γ（ＴＦＡＰ２Ｃ）、ＰＯＵ５Ｆ１、ＮＡＮＯＧ、およびＴＰ５３から選択され、１種の非核マーカーは、ＡＬＰＰＬ２（ＰＬＡＰ）である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１種の核マーカーは、Ａｐ−２γ（ＴＦＡＰ２Ｃ）、ＰＯＵ５Ｆ１、およびＮＡＮＯＧから選択され、１種の非核マーカーは、ＡＬＰＰＬ２（ＰＬＡＰ）である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも２種のマーカーは、Ａｐ−２γ（ＴＦＡＰ２Ｃ）およびＰＬＡＰ（ＡＬＰＰＬ２）である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記精液サンプルおよび／もしくは射精液の前記スクリーニングは、以下の方法のうちの少なくとも１つ：イムノアッセイ、免疫染色、免疫蛍光、免疫組織化学（ＩＨＣ）、直接ＩＨＣ、間接ＩＨＣ、免疫細胞化学、インサイチュハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）、蛍光ＩＳＨ（ＦＩＳＨ）、ＦＩＳＨ  Ｉｎ  Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ（ＦＩＳＨ−ＩＳＴＭ）、ウェスタンブロット、フローサイトメトリー、ＦＡＣＳ（蛍光活性化セルソーティング）、ＩｍａｇｅＳｔｒｅａｍ、Ｔｕｒｔｌｅ  Ｐｒｏｂｅｓ、標的刺激ローリングサークルＰＲＩＮＳ、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）、ｑＲＴ−ＰＣＲ（定量的逆転写酵素ＰＣＲもしくは「リアルタイムＰＣＲ」）、ネステッドＰＣＲ、質量分析、ＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベントアッセイ；もしくは酵素イムノアッセイＥＩＡ）、間接的ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ、ローリングサークル複製（もしくはローリングサークル増幅）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、磁性式イムノアッセイ（ＭＩＡ）、ラテラルフロー試験（もしくはラテラルフローイムノクロマトグラフィーアッセイ）、濁度測定、補体固定試験、ＤＮＡマイクロアレイ、タンパク質マイクロアレイ、ノーザンブロット、ドットブロットおよび／もしくは酵素活性、を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記精液／射精液の前記スクリーニングは、免疫染色および／もしくは酵素アッセイを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記酵素アッセイは、アルカリホスファターゼ活性の検出を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＴＦＡＰ２Ｃ（Ａｐ−２γ）は、免疫染色によって検出され、ＰＬＡＰは、請求項９に記載の方法によって検出される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
精巣癌は、精巣上皮内癌（ＣＩＳ）、精巣胚細胞腫瘍（ＴＧＣＴ）、精巣の非胚細胞腫瘍もしくは精巣の続発性腫瘍のうちの少なくとも１つを含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記精巣胚細胞腫瘍は、混合腫瘍、精上皮腫、胎生期癌、奇形腫、絨毛癌もしくは管内胚細胞新生物（ＣＩＳ）である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記射精液の総容積が試験のために使用されるか、または該総容積のサブセットが１０〜９０％の範囲で使用される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記射精液は、少なくとも１日の禁欲の後に回収される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記射精液サンプルは、若年ヒト男性から採取され、該若年の男性は、５〜５０歳の年齢範囲である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
さらに、本発明の一実施形態は、全体の射精液／精液サンプルの使用に関する。好ましくは、上記全体の射精液サンプルは、１手順で上記サンプル全体を加工処理することを可能にする様式で処理される。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
精巣癌および／もしくはその前駆体の検出のための方法であって、該方法は、同じ細胞における少なくとも２種のマーカーの存在についてサンプルをスクリーニングする工程によるものであり、ここで該サンプルは、ヒト男性由来の精液サンプルおよび／もしくは射精液である、方法。
（項目２）
前記少なくとも２種のマーカーのうち、少なくとも１種のマーカーは、核マーカーであり、少なくとも１種の他方のマーカーは、非核マーカーである、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記少なくとも２種のマーカーのうち、少なくとも２種は、核マーカーである、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記少なくとも２種のマーカーのうち、少なくとも２種は、細胞質マーカーである、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記少なくとも１種の核マーカーは、ＴＦＡＰ２Ｃ（Ａｐ−２γ）、ＰＯＵ５Ｆ１（ＯＣＴ３／４）、ＮＡＮＯＧ、ＳＯＸ２、ＳＯＸ１５、ＳＯＸ１７、Ｅ２Ｆ１、ＩＦＩ１６、ＴＥＡＤ４、ＴＬＥ１、ＴＡＴＤＮ２、ＮＦＩＢ、ＬＭＯ２、ＭＥＣＰ２、ＨＨＥＸ、ＸＢＰ１、ＲＲＳ１、ＭＹＣＮ、ＥＴＶ４、ＥＴＶ５、ＭＹＣＬ１、ＨＩＳＴ１Ｈ１Ｃ、ＷＤＨＤ１、ＲＣＣ２、ＴＰ５３、およびＭＤＣ１からなる群より選択される、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
前記少なくとも１種の核マーカーは、ＴＦＡＰ２Ｃ（Ａｐ−２γ）、ＰＯＵ５Ｆ１、ＮＡＮＯＧおよびＴＰ５３からなる群より選択される、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
前記細胞質マーカーは、ＡＬＰＰＬ２（ＰＬＡＰ）、ＡＬＰＬ、ＤＰＰＡ４、ＴＣＬ１Ａ、ＣＤＨ１、ＧＬＤＣ、ＴＣＬ１Ａ、ＤＰＰＡ４、ＣＤＫ５、ＣＤ１４、ＦＧＤ１、ＮＥＵＲＬ、ＨＬＡ−ＤＯＡ、ＤＹＳＦ、ＭＴＨＦＤ１、ＥＮＡＨ、ＺＤＨＨＣ９、ＮＭＥ１、ＳＤＣＢＰ、ＳＬＣ２５Ａ１６、ＡＴＰ６ＡＰ２、ＰＯＤＸＬ、ＰＤＫ４、ＰＣＤＨ８、ＲＡＢ１５、ＥＶＩ２Ｂ、ＬＲＰ４、Ｂ４ＧＡＬＴ４、ＣＨＳＴ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＣＤ５３、ＣＤ３８、ＰＩＧＬ、ＣＫＭＴ１Ｂ、ＲＡＢ３Ｂ、ＮＲＣＡＭ、ＫＩＴ、ＡＬＫ２、ＰＤＰＮ、ＨＲＡＳＬＳ３、およびＴＲＡ−１−６０からなる群より選択される、項目１〜２、または４のいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
前記細胞質マーカーは、ＡＬＰＰＬ２（ＰＬＡＰ）、ＡＬＰＬ、ＫＩＴおよびＰＤＰＮからなる群より選択される、項目１〜２、または４のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
前記少なくとも２種のマーカーは、Ａｐ−２γ（ＴＦＡＰ２Ｃ）およびＰＬＡＰ（ＡＬＰＰＬ２）である、項目１〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記精液サンプルおよび／もしくは射精液の試験は、以下の方法のうちの少なくとも１つ：イムノアッセイ、免疫染色、免疫蛍光、免疫組織化学（ＩＨＣ）、直接ＩＨＣ、間接ＩＨＣ、免疫細胞化学、インサイチュハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）、蛍光ＩＳＨ（ＦＩＳＨ）、ＦＩＳＨ  Ｉｎ  Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ（ＦＩＳＨ−ＩＳＴＭ）、ウェスタンブロット、フローサイトメトリー、ＦＡＣＳ（蛍光活性化セルソーティング）、ＩｍａｇｅＳｔｒｅａｍ、Ｔｕｒｔｌｅ  Ｐｒｏｂｅｓ、標的刺激ローリングサークルＰＲＩＮＳ、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）、ｑＲＴ−ＰＣＲ（定量的逆転写酵素ＰＣＲもしくは「リアルタイムＰＣＲ」）、ネステッドＰＣＲ、質量分析、ＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベントアッセイ；もしくは酵素イムノアッセイＥＩＡ）、間接的ＥＬＩＳＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ、ローリングサークル複製（もしくはローリングサークル増幅）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、磁性式イムノアッセイ（ＭＩＡ）、ラテラルフロー試験（もしくはラテラルフローイムノクロマトグラフィーアッセイ）、濁度測定、補体固定試験、ＤＮＡマイクロアレイ、タンパク質マイクロアレイ、ノーザンブロット、ドットブロットおよび／もしくは酵素活性、を含む、項目１〜９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
前記精子／射精液の試験は、免疫染色および／もしくは酵素アッセイを含む、項目１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
前記酵素アッセイは、アルカリホスファターゼ活性の検出を含む、項目１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
ＴＦＡＰ２Ｃ（Ａｐ−２γ）は、免疫染色によって検出され、ＰＬＡＰは、項目１２に記載の方法によって検出される、項目１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
精巣癌は、精巣上皮内癌（ＣＩＳ）、胚細胞腫瘍（ＴＧＣＴ）、精巣の非胚細胞腫瘍もしくは精巣の続発性腫瘍のうちの少なくとも１つを含む、項目１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
前記精巣癌は、上皮内癌（ＣＩＳ）である、項目１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
（項目１６）
前記精巣胚細胞腫瘍は、混合腫瘍、精上皮腫、胎生期癌、奇形腫、絨毛癌もしくは管内胚細胞新生物（ＣＩＳ）である、項目１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
前記射精液の総容積は、試験のために使用される、項目１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記総容積のサブセットが、１０〜９０％の範囲（例えば、１０〜２０％、例えば、２０〜３０％、例えば、３０〜４０％、例えば、４０〜５０％、例えば、５０〜６０％、例えば、６０〜７０％、例えば、７０〜８０％、例えば、８０〜９０％）において使用される、項目１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
前記射精液は、少なくとも１日の禁欲（例えば、２日間、例えば、３日間、例えば、４日間、例えば、５日間、例えば、６日間、例えば、７日間、例えば、８日間、例えば、９日間、例えば、１０日間、の禁欲）の後に回収される、項目１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０）
前記射精液サンプルは、若年ヒト男性から採取され、該若年の男性は、５〜５０歳の年齢範囲（例えば、１０〜３５歳、例えば、１５〜３５歳、例えば、１５〜３０歳、もしくは例えば、１５〜２５歳）である、項目１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
前記射精液サンプルは、処置の前および後に、他の手段によって、証明された精巣癌を有する男性から；停留精巣の前歴を有する男性から；超音波検査によって小結石（ｍｉｃｒｏｌｉｔｓ）パターンの疑いを示す男性から；もしくは受精能問題を有する男性から得る、項目１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
前記方法は、前記精液／射精液の、顕微鏡用スライド上への固定を含む、項目１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
（項目２３）
前記射精液は、サイトスピンによって固定される、項目１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
ヒト男性の精液／射精液サンプルにおいて精巣癌の存在に関しスクリーニングするための、項目１〜２３のいずれか１項に記載の方法の使用。