【手続補正書】
【提出日】平成24年9月27日(2012.9.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．フィブロネクチン又はそのフラグメント、および
ｂ．アグリカン又はそのフラグメント
からなることを特徴とする単離フィブロネクチン−アグリカン複合体。
【請求項２】
前記複合体は脊椎試料または関節試料より単離される、ことを特徴とする請求項１に記載のフィブロネクチン−アグリカン複合体。
【請求項３】
前記フィブロネクチン又はそのフラグメント及び前記アグリカン又はそのフラグメントは遺伝子組み換え型、天然、又は合成、又はそれらの組合せである、ことを特徴とする請求項１に記載のフィブロネクチン−アグリカン複合体。
【請求項４】
前記アグリカン又はそのフラグメントは、アグリカンのＧ１，ＩＧＤ、Ｇ２，ＫＳ，ＣＳ１，ＣＳ２，又はＧ３領域の少なくとも１つからなるグループから選択されるアグリカンフラグメントとして存在する、ことを特徴とする請求項１−３のいずれか１項に記載のフィブロネクチン−アグリカン複合体。
【請求項５】
前記複合体はフィブロネクチンのアグリカン結合フラグメントを含む、ことを特徴とする請求項１−４のいずれか１項に記載のフィブロネクチン−アグリカン複合体。
【請求項６】
抗体、受容体、ポリペプチド、糖鎖、結合試薬、およびそれらの組合せからなるグループから選択される、請求項１−５に記載のフィブロネクチン−アグリカン複合体に選択的に結合するフィブロネクチン−アグリカン複合体結合パートナー。
【請求項７】
フィブロネクチン−アグリカン複合体に存在しないフィブロネクチン又はアグリカンに有意に結合しないことをさらに特徴とする、請求項６に記載のフィブロネクチン−アグリカン複合体結合パートナー。
【請求項８】
患者の脊椎の疼痛又は炎症を治療するための治療部位の識別においてフィブロネクチン−アグリカン複合体を使用する方法であって、
前記方法は、前記患者の脊椎内の１つ以上の潜在的治療部位から獲得された１つ以上の生体試料を使用し、
前記方法は、フィブロネクチン又はそのフラグメントとアグリカン又はそのフラグメントからなるフィブロネクチン−アグリカン複合体の検知可能な量を有する治療部位を選択するステップを有する、
ことを特徴とする方法。
【請求項９】
患者の関節に関連する疼痛又は炎症を治療するための治療部位としてある関節を識別することにフィブロネクチン−アグリカン複合体を使用する方法であって、
前記方法は、関節に関連する疼痛又は炎症に対する潜在的治療部位である前記患者の１つ以上の関節から獲得された１つ以上の生体試料を使用し、
前記方法は、フィブロネクチン又はそのフラグメント及びアグリカン又はそのフラグメントからなるフィブロネクチン−アグリカン複合体の検知可能な量を有する１つの関節を選択するステップを有する、
ことを特徴とする方法。
【請求項１０】
アグリカンのフラグメントはアグリカンのＧ３領域からなる、ことを特徴とする請求項８又は９に記載のフィブロネクチン−アグリカン複合体を使用する方法。
【請求項１１】
フィブロネクチン−アグリカン複合体は、色層分析技術、結合検定法、免疫学的技術、または質量分析法を使用して検知される、ことを特徴とする請求項８又は９に記載のフィブロネクチン−アグリカン複合体を使用する方法。
【請求項１２】
前記治療部位は疼痛または炎症の発生源である、ことを特徴とする請求項８又は９に記載のフィブロネクチン−アグリカン複合体を使用する方法。
【請求項１３】
前記１つ以上の生体試料は、洗浄、吸引、注入―吸引、生体組織検査、微小針吸引生検、コア生検、内視鏡又は切開生検のグループから選択された１つの技術を使用して得られ、
ａ）ここにおいて前記試料は、硬膜外、椎間板間、椎間板外、小関節円板内の空間のグループから選択された脊椎内の１つの空間から得られ、
そして前記試料は、大後頭孔、尾、椎弓間、経皮、内視鏡、切開、前側、後ろ側又は横方向のグループから選択された脊椎へのアプローチによって得られ、
ここにおいて、吸引液、組織、又は液体試料は、注入生理食塩水、他の注入された水溶液、注入された非水の液体又は溶液、滑膜液、髄核液、線維輪、硬膜外脂肪、骨、関節嚢、靭帯、又は腱のリストから選択され、
試料となった液体又は組織は、スポンジ、灯芯、綿球、縫合糸、親水性カテーテル、疎水性カテーテル、又は中空内腔カテーテルのグループから選択された追加の吸収剤、吸着剤、又は毛細官材料又はデバイスの助けにより獲得され、
ｂ）ここにおいて、前記試料は、滑膜（即ち、可動関節）、半関節、関節癒合のリストから選択される関節のクラスから獲得され、
ここにおいて関節は、肩、肘、毛根、中手骨、指骨、肩鎖、胸鎖、肋骨、仙腸、腰、膝、足根骨、中足骨の関節のグループから選択され、
ここにおいて、吸引液、組織、又は液体試料は、注入生理食塩水、他の注入された水溶液、注入された非水の液体又は溶液、滑膜液、骨、関節嚢、靭帯、又は腱のリストから選択され、
試料となった液体又は組織は、スポンジ、灯芯、綿球、縫合糸、親水性カテーテル、疎水性カテーテル、又は中空内腔カテーテルのグループから選択された追加の吸収剤、吸着剤、又は毛細官材料又はデバイスの助けにより獲得される、
ことを特徴とする、請求項８又は９に記載のフィブロネクチン−アグリカン複合体を使用する方法。
【請求項１４】
前記治療部位は少なくとも１つの椎間板である、ことを特徴とする請求項８に記載のフィブロネクチン−アグリカン複合体を使用する方法。
【請求項１５】
前記患者の前記少なくとも１つの椎間板内のフィブロネクチンーアグリカン複合体のレベルを測定するステップと、
ここにおいて前記複合体はフィブロネクチン又はそのフラグメント及びアグリカン又はそのフラグメントからなり、
治療の必要な脊椎疼痛又は炎症の無い患者の椎間板内の前記複合体のレベルに比較して、増加した前記複合体のレベルを有する椎間板を識別するステップと、
を有することを特徴とする請求項１４に記載のフィブロネクチン−アグリカン複合体を使用する方法。
【請求項１６】
試料内のフィブロネクチン又はそのフラグメント及びアグリカン又はそのフラグメントからなるフィブロネクチンーアグリカン複合体を選択的に検知するキットであって、前記キットは、
ａ）フィブロネクチン又はそのフラグメント及びアグリカン又はそのフラグメントからなるフィブロネクチンーアグリカン複合体に選択的に結合する少なくとも１つの結合パートナーと、
ｂ）前記複合体を検知するためのポジティブ対照と、
ここにおいて、前記ポジティブ対照は、請求項１−５のいずれか１つに記載の前記複合体からなり、
からなることを特徴とするキット。
【請求項１７】
前記少なくとも１つの結合パートナーは、フィブロネクチン−アグリカン複合体に存在しないフィブロネクチン又はアグリカン又はそれらのフラグメントに有意に結合しないことをさらに特徴とする、請求項１６に記載のキット。
【請求項１８】
第２の結合パートナーをさらに有し、ここにおいて前記第１の結合パートナーは、フィブロネクチン又はそのフラグメントに結合し、また、前記第２の結合パートナーは、アグリカン又はそのフラグメントに結合する、ことを特徴とする請求項１６に記載のキット。
【請求項１９】
前記少なくとも１つの結合パートナーは、抗体、受容体、ポリペプチド、糖鎖、結合試薬、およびそれらの組合せからなるグループから選択される、ことを特徴とする請求項１６に記載のキット。
【請求項２０】
前記第１の結合パートナーと前記第２の結合パートナーの内の少なくとも１つは抗体からなる、ことを特徴とする請求項１８に記載のキット。
【請求項２１】
前記第１の結合パートナーと前記第２の結合パートナーの内の少なくとも１つは標識からなる、ことを特徴とする請求項１８に記載のキット。
【請求項２２】
前記標識は、フルオロフォア、放射標識、酵素、磁気ビーズ、又はそれらの組合せからなる、ことを特徴とする請求項２１に記載のキット。
【請求項２３】
請求項２４の前記ラベルは基質に結合し、前記基質に作用する酵素であることを特徴とする請求項２１に記載のキット。
【請求項２４】
前記第１の結合パートナーまたは前記第２の結合パートナーは固体表面に束縛され、それにより前記キットは前記複合体のその結合パートナーからの単離を提供する、ことを特徴とする請求項１８に記載のキット。
【請求項２５】
前記複合体の前記アグリカン部位は、アグリカンのＧ１，ＩＧＤ、Ｇ２，ＫＳ，ＣＳ１，ＣＳ２，又はＧ３領域、またはそのフラグメントからなる、ことを特徴とする請求項１６に記載のキット。
【請求項２６】
前記複合体の前記フィブロネクチン部位は、アグリカン又はそのフラグメントとの結合部位を含むフィブロネクチン分子の１つのフラグメントからなる、ことを特徴とする請求項１６に記載のキット。
【請求項２７】
抗炎症性治療の有効性を測定する方法であって、
（ａ）フィブロネクチン又はそのフラグメント及びアグリカンのフラグメントからなる複合体のレベルを治療後の患者から得られた第１の生体試料内で測定するステップと、
（ｂ）前記第１の生体試料内の前記複合体のレベルを治療前又は治療前期の前記患者から得られた第２の生体試料内の前記複合体のレベルと比較するステップと、
からなり、
ここにおいて前記第１の試料の複合体のレベルの前記第２の試料に対する減少は、有効な治療を示す、
ことを特徴とする方法。