【手続補正書】
【提出日】平成24年3月27日(2012.3.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
らせんポリペプチドのインビボ半減期を２つ以上の架橋を配置することにより増大させる方法であって、それにより、前記架橋のない対応するポリペプチドに比べて少なくとも５０倍増大したインビボ半減期を有する、架橋ポリペプチドを得る、方法。
【請求項２】
２つの架橋が配置される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記らせんポリペプチドのインビボ半減期が平均少なくとも１００倍、１５０倍または２００倍増大する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記架橋の少なくとも１つは２つのα−炭素原子を接続する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
連続した炭素−炭素結合により少なくとも１つの架橋が形成される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
少なくとも１つの架橋に少なくとも７個、８個、９個、１０個または１２個の連続した結合が含まれる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項７】
１つの架橋が結合される１つのα−炭素原子が、式Ｒ−の置換基で置換されているか、または１つの架橋が結合される２つのα−炭素原子が、式Ｒ−の独立した置換基で置換されており、例えばＲ−はアルキル、例えばメチルである、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記架橋ポリペプチドが１〜１０、１〜７０、または１〜７００マイクロモル濃度のＫｄ＊、例えば、３、１０、７０マイクロモル濃度のＫｄ＊または３、１０、７０マイクロモル濃度を超えるＫｄ＊を有する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項９】
前記架橋ポリペプチドが、ヒト血液中で０．１〜５０％、例えば０．１５〜１０％という推定の遊離の割合を有するように選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１０】
前記架橋ポリペプチドが、式：
【化７−１】
2012509902.tif 000001
【化７−２】
2012509902.tif 000002
のポリペプチドを含み、式中、各Ｌは、独立して架橋であり、「ＡＡ」は、任意の天然または非天然のアミノ酸側鎖を表し、かつ
【化９】
2012509902.tif 000003
は、［Ｄ］ｖまたは［Ｅ］ｗであり；
各ＤまたはＥは、独立して、天然または非天然のアミノ酸であり；
ｖおよびｗの各々は、独立して、１〜１０００の整数であり；そして
ｎは、０と２０、５０、１００、２００、３００、４００、または５００との間の整数である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記架橋ポリペプチドがエネルギー依存性のプロセスによって細胞膜を透過し、細胞内標的に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
２つ以上の架橋、例えば２つの架橋を含む架橋ポリペプチドであって、前記架橋ポリペプチドが、前記架橋のない対応するポリペプチドに比べて少なくとも５０倍増大したインビボ半減期を有する、架橋ポリペプチド。
【請求項１３】
前記インビボ半減期が、前記架橋ポリペプチドをマウスまたはラットに投与し、前記マウスまたはラットから得た血清中でのインタクトなポリペプチドのレベルを決定することにより測定されるか、またはインタクトなポリペプチドのレベルがＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって決定される、請求項１２に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
請求項１２に記載の架橋ポリペプチドを含み、例えば、液体キャリアを含む、医薬製剤。
【請求項１５】
前記製剤は、水溶液での静脈内投与に適している、請求項１４に記載の製剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
いくつかの実施形態では、上記架橋ポリペプチドはエネルギー依存性のプロセスによって細胞膜を透過し、かつ細胞内標的に結合する。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
らせんポリペプチドのインビボ半減期を１つ以上の架橋を配置することにより増大させる方法であって、前記ポリペプチドのインビボ半減期が、前記架橋のない対応するポリペプチドに比べて少なくとも５０倍増大する、方法。
（項目２）
前記らせんポリペプチドのインビボ半減期が平均少なくとも５０倍増大する、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記らせんポリペプチドのインビボ半減期が少なくとも１００倍増大する、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記らせんポリペプチドのインビボ半減期が少なくとも１５０倍増大する、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記らせんポリペプチドのインビボ半減期が少なくとも２００倍増大する、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記架橋の少なくとも１つは２つのα−炭素原子を接続する、項目１に記載の方法。
（項目７）
１つの架橋が結合される１つのα−炭素原子が、式Ｒ−の置換基で置換されている、項目１に記載の方法。
（項目８）
１つの架橋が結合される２つのα−炭素原子が、式Ｒ−の独立した置換基で置換されている、項目７に記載の方法。
（項目９）
Ｒ−がアルキルである、項目７に記載の方法。
（項目１０）
Ｒ−がメチルである、項目７に記載の方法。
（項目１１）
前記らせんポリペプチド内に１つの架橋が配置される、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記らせんポリペプチド内に２つの架橋が配置される、項目１に記載の方法。
（項目１３）
連続した炭素−炭素結合で１つの架橋が形成される、項目１に記載の方法。
（項目１４）
１つの架橋に少なくとも８個の連続した結合が含まれる、項目１に記載の方法。
（項目１５）
１つの架橋に９個の連続した結合が含まれる、項目１に記載の方法。
（項目１６）
１つの架橋に１２個の連続した結合が含まれる、項目１に記載の方法。
（項目１７）
１つの架橋に少なくとも７個の炭素原子が含まれる、項目１に記載の方法。
（項目１８）
１つの架橋に少なくとも１０個の炭素原子が含まれる、項目１に記載の方法。
（項目１９）
前記架橋ポリペプチドがＢＣＬ−２ファミリーメンバーのα−らせんドメインを含む、項目１に記載の方法。
（項目２０）
前記架橋ポリペプチドがＢＨ３ドメインを含む、項目１に記載の方法。
（項目２１）
前記架橋ポリペプチドが表１、２、３または４の配列の少なくとも６０％を含む、項目１に記載の方法。
（項目２２）
前記架橋ポリペプチドが表１、２、３または４の配列の少なくとも８０％を含む、項目１に記載の方法。
（項目２３）
前記架橋ポリペプチドがエネルギー依存性のプロセスによって細胞膜を透過し、細胞内標的に結合する、項目１に記載の方法。
（項目２４）
前記架橋ポリペプチドが、前記架橋ポリペプチドのみかけの血清結合親和性（Ｋｄ＊）が１マイクロモル濃度以上となるように選択される、項目１に記載の方法。
（項目２５）
前記架橋ポリペプチドが１〜７００マイクロモル濃度のＫｄ＊を有する、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記架橋ポリペプチドが１〜７０マイクロモル濃度のＫｄ＊を有する、項目２４に記載の方法。
（項目２７）
前記架橋ポリペプチドが１〜１０マイクロモル濃度のＫｄ＊を有する、項目２４に記載の方法。
（項目２８）
前記架橋ポリペプチドが３、１０、７０マイクロモル濃度のＫｄ＊または３、１０、７０マイクロモル濃度を超えるＫｄ＊を有する、項目２４に記載の方法。
（項目２９）
前記架橋ポリペプチドが、ヒト血液中で０．１〜５０％という推定の遊離の割合を有するように選択される、項目１に記載の方法。
（項目３０）
前記架橋ポリペプチドが、ヒト血液中で０．１５〜１０％という推定の遊離の割合を有するように選択される、項目１に記載の方法。
（項目３１）
１つ以上の架橋を含むらせんポリペプチドであって、前記架橋らせんポリペプチドが、前記架橋のない対応するポリペプチドのインビボ半減期より少なくとも５０倍長いインビボ半減期を有する、らせんポリペプチド。
（項目３２）
前記架橋らせんポリペプチドが、前記架橋のない対応するポリペプチドのインビボ半減期より少なくとも１００倍長いインビボ半減期を有する、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目３３）
前記架橋らせんポリペプチドが、前記架橋のない対応するポリペプチドのインビボ半減期より少なくとも１５０倍長いインビボ半減期を有する、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目３４）
前記架橋らせんポリペプチドが、前記架橋のない対応するポリペプチドのインビボ半減期より少なくとも２００倍長いインビボ半減期を有する、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目３５）
前記架橋の少なくとも１つは、２つのα−炭素原子を接続する、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目３６）
１つの架橋が結合される１つのα−炭素原子が式Ｒ−の置換基で置換されている、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目３７）
１つの架橋が結合される２つのα−炭素原子が式Ｒ−の独立した置換基で置換されている、項目３６に記載のポリペプチド。
（項目３８）
Ｒ−がアルキルである、項目３６に記載のポリペプチド。
（項目３９）
Ｒ−がメチルである、項目３６に記載のポリペプチド。
（項目４０）
前記らせんポリペプチド内に１つの架橋が配置される、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目４１）
前記らせんポリペプチド内に２つの架橋が配置される、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目４２）
連続した炭素−炭素結合で１つの架橋が形成される、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目４３）
１つの架橋に少なくとも８個の連続した結合が含まれる、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目４４）
１つの架橋に９個の連続した結合が含まれる、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目４５）
１つの架橋に１２個の連続した結合が含まれる、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目４６）
１つの架橋に少なくとも７個の炭素原子が含まれる、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目４７）
１つの架橋に少なくとも１０個の炭素原子が含まれる、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目４８）
前記架橋ポリペプチドがＢＣＬ−２ファミリーメンバーのα−らせんドメインを含む、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目４９）
前記架橋ポリペプチドがＢＨ３ドメインを含む、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目５０）
前記架橋ポリペプチドが表１、２、３または４の配列の少なくとも６０％を含む、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目５１）
前記架橋ポリペプチドが表１、２、３または４の配列の少なくとも８０％を含む、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目５２）
エネルギー依存性のプロセスによって細胞膜を透過し、細胞内標的に結合する、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目５３）
ハロゲン、アルキル基、蛍光性部分、親和性標識、標的部分、または放射性同位体の１つ以上で置換されている、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目５４）
治療効果をもたらす、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目５５）
薬学的に許容され得る塩の形態である、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目５６）
前記架橋ポリペプチドのみかけの血清結合親和性（Ｋｄ＊）が１マイクロモル濃度以上である、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目５７）
前記架橋ポリペプチドが１〜７００マイクロモル濃度のＫｄ＊を有する、項目５６に記載のポリペプチド。
（項目５８）
前記架橋ポリペプチドが１〜７０マイクロモル濃度のＫｄ＊を有する、項目５６に記載のポリペプチド。
（項目５９）
前記架橋ポリペプチドが１〜１０マイクロモル濃度のＫｄ＊を有する、項目５６に記載のポリペプチド。
（項目６０）
前記架橋ポリペプチドが３、１０、７０マイクロモル濃度のＫｄ＊または３、１０、７０マイクロモル濃度を超えるＫｄ＊を有する、項目５６に記載のポリペプチド。
（項目６１）
前記架橋ポリペプチドがヒト血液中で０．１〜５０％という推定の遊離の割合を有する、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目６２）
前記架橋ポリペプチドがヒト血液中で０．１５〜１０％という推定の遊離の割合を有する、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目６３）
上記項目のいずれかに記載のポリペプチドを、薬学的に許容され得る希釈剤またはキャリアとの組合せまたは集合状態で含む医薬組成物。
（項目６４）
前記架橋ポリペプチドが、前記架橋ポリペプチドのヘリシティ％が水性条件下、室温で２５％以上となるように選択される、項目１に記載の方法。
（項目６５）
前記架橋ポリペプチドが、前記架橋ポリペプチドのヘリシティ％が水性条件下、室温で５０％以上となるように選択される、項目１に記載の方法。
（項目６６）
前記架橋ポリペプチドが、前記架橋ポリペプチドのヘリシティ％が水性条件下、室温で７５％以上となるように選択される、項目１に記載の方法。
（項目６７）
前記ポリペプチドのインビボ半減期が静脈内投与後に決定される、項目１に記載の方法。
（項目６８）
水性条件下、室温での前記架橋ポリペプチドの前記ヘリシティ％が、前記架橋のない対応するポリペプチドのヘリシティ％より少なくとも２倍大きい、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目６９）
水性条件下、室温での前記架橋ポリペプチドの前記ヘリシティ％が、前記架橋のない対応するポリペプチドのヘリシティ％より少なくとも５倍大きい、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目７０）
水性条件下、室温での前記架橋ポリペプチドの前記ヘリシティ％が、前記架橋のない対応するポリペプチドのヘリシティ％より少なくとも１０倍大きい、項目３１に記載のポリペプチド。
（項目７１）
前記ポリペプチドの前記インビボ半減期が静脈内投与後に決定される、項目３１に記載のポリペプチド。