(57)【要約】【課題】保護化デオキシヌクレオシドの製造中間体であるＮ６−アシル化−２’−デオキシアデノシン誘導体を工業的に製造する方法を提供する。【解決手段】Ｎ６，３’，５’−トリ−またはＮ６，Ｎ６，３’，５’−テトラ−アシル化−２’−デオキシアデノシン誘導体をアミン及び炭素数２から３のアルコール存在下２５％以上の重量濃度のアルカリ水溶液により加水分解をおこない、選択的にＮ６−アシル化−２’−デオキシアデノシン誘導体を得る。【効果】高濃度のアルカリ水溶液を用いることで反応容器の容積効率が向上し、工業的スケールでの製造が可能になった。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）［化１］
【化１】
2004307407.tif 000008
（式中、Ｒ１は水素原子、あるいは置換されている水酸基を表す。Ｒ２はフェニル基、置換されてもよいフェニル基、置換されてもよいフェニルメチル基、置換されてもよいフェノキシメチル基を表す。Ｒ３、Ｒ４，Ｒ５基は水素原子または置換されてもよいアシル基を表す（ただし、Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５は同時に水素原子にはならない））で表された化合物を炭素数２〜３のアルコール存在下、２５％重量濃度以上のアルカリ水溶液を加えて加水分解反応させることにより一般式（２）［化２］
【化２】
2004307407.tif 000009
（式中、Ｒ１およびＲ２は前記に同じ）で表される化合物を得ることを特徴とするＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法。
【請求項２】
一般式（１）に示される化合物において、加水分解反応の際にアミン存在下反応させることを特徴とする、請求項１に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法。
【請求項３】
一般式（１）に示される化合物においてＲ１が水素原子であらわされ、Ｒ２がフェニル基で表されることを特徴とする請求項１または２に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法。
【請求項４】
アルカリ水溶液滴下後のアルコールと水の重量がそれぞれアミンの重量以下である請求項２または３のいずれか一項に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法。
【請求項５】
アルカリ水溶液滴下後のアルコールの重量がアミン重量の１／２重量以下である請求項２〜４のいずれか一項に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法。
【請求項６】
アルカリ水溶液滴下後のアルコールの重量がアミン重量の１／２重量以下、水の重量がアミン重量の１／２重量以下である請求項２〜５のいずれか一項に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法。
【請求項７】
アシル化工程におけるアミンの量が、一般式（１）で表される化合物に対して５重量倍以下であることを特徴とする請求項２〜６のいずれか一項に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法。
【請求項８】
アルカリ水溶液による反応の温度が５℃以下であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法。
【請求項９】
アルカリ水溶液が水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムを含有する水溶液であり、アルコールがエタノールである事を特徴とする請求項１〜８のいずれか一項に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法。
【請求項１０】
加水分解反応の際に用いられるアミンがピリジンである事を特徴とする請求項２〜９のいずれか一項に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、保護化デオキシヌクレオシドに関する。さらに詳しくは、本発明は保護化２’−デオキシヌクレオシドの製造方法に関する。保護化２’−デオキシヌクレオシド類は近年開発されつつあるアンチセンスＤＮＡなどの原料として有用な化合物である。
【０００２】
【従来の技術】
近年、ゲノム創薬の進展に伴い、アンチセンスＤＮＡ医薬などが急速に開発されている。それに伴い、原料となるＤＮＡオリゴマー、さらにオリゴマーの原料となる保護化デオキシヌクレオシド類の需要が増大している。その中で、Ｎ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体は保護化デオキシヌクレオシド類の製造の際の重要な中間体として用いられている。
【０００３】
Ｎ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体を合成する際においては、Ｎ６，Ｎ６，３’，５’−テトラアシル化デオキシアデノシン誘導体を加水分解することにより得る方法が一般的に知られている。たとえば２Ｎの水酸化ナトリウム水溶液をさらにエタノールで希釈して用いる例（特開昭６０−１５２４９５号公報、ジャーナル  オブ  アメリカン  ケミカル  ソサエティ  ８５巻、３８２１項（１９６３年）  （Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  ８５，  ３８２１（１９６３）））、或いは２Ｎの水酸化ナトリウム  水−メタノール  １：１混合溶液を用いる例（特開昭５８−１８０５００号公報）などが知られている。しかしながらいずれも非常に希薄な溶液を用いていることで大量製造における容積効率等に問題がある。また、ヘルベチカキミカ  アクタ  第６５巻  ２２３２項（１９８２年）（Ｈｅｌｖ．  Ｃｈｉｍ．  Ａｃｔａ  ，  ６５，  ２２３２（１９８２））．においては、中間体をピリジンに溶解したのちに、冷却したエタノールを加え，中間体の結晶が析出する前にすぐに水酸化ナトリウムの６％冷水−冷エタノール溶液を装入する方法が知られているが、工業的な製造においては、短時間での操作は非常に難しい。また、ＰＣＴ出願  ＷＯ２００２／６８４３７公報においてはメタノール性ナトリウムメトキシドを用いて−１５℃という低温条件下、加水分解する方法が知られているが、工業的に行う上で超低温での操作は非常に難しい。
【０００４】
【特許文献１】特開昭５８−１８０５００号公報
【０００５】
【特許文献２】特開昭６０−１５２４９５号公報
【０００６】
【特許文献３】ＷＯ２００２／６８４３７公報
【０００７】
【非特許文献１】Ｈｅｌｖ．  Ｃｈｉｍ．  Ａｃｔａ  ，  ６５，  ２２３２（１９８２）．
【０００８】
【非特許文献２】Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  ８５，  ３８２１（１９６３）
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
以上述べたように従来知られていたＮ６−アシル化−２’−デオキシアデノシン類の製造方法においては以下のような問題点があった。
（１）希薄な水酸化ナトリウム水溶液を用いるために、可溶化剤として大量のアルコールを必要としていた。
（２）加水分解の選択性を高めるために、非常に低い温度での加水分解を行う必要があった。
これらの問題を解決し、工業的に有用なＮ６−アシル化−２’−デオキシアデノシン類の製造方法を開発することである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、２’−デオキシアデノシン類のアシル化により得られた、アシル化２’−デオキシアデノシン誘導体を高濃度の水酸化ナトリウム水溶液をもちいて加水分解反応を行うことにより、効率的にＮ６−アシル化−２’−デオキシアデノシン誘導体を得る方法を見出し、本発明を完成した。すなわち本発明は、
［１］  一般式（１）［化３］
【００１１】
【化３】
2004307407.tif 000002
【００１２】
（式中、Ｒ１は水素原子、あるいは置換されている水酸基を表す。Ｒ２はフェニル基、置換されてもよいフェニル基、置換されてもよいフェニルメチル基、置換されてもよいフェノキシメチル基を表す。Ｒ３、Ｒ４，Ｒ５基は水素原子または置換されてもよいアシル基を表す（ただし、Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５は同時に水素原子にはならない））で表された化合物を炭素数２〜３のアルコール存在下、２５％重量濃度以上のアルカリ水溶液を加えて加水分解反応させることにより一般式（２）［化４］
【００１３】
【化４】
2004307407.tif 000003
【００１４】
（式中、Ｒ１およびＲ２は前記に同じ）で表される化合物を得ることを特徴とするＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法であり、
［２］  一般式（１）に示される化合物において、加水分解反応の際にアミン存在下反応させることを特徴とする、［１］に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法であり、
［３］  一般式（１）に示される化合物においてＲ１が水素原子であらわされ、Ｒ２がフェニル基で表されることを特徴とする［１］または［２］に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法であり、
［４］  アルカリ水溶液滴下後のアルコールと水の重量がそれぞれアミンの重量以下である［２］または［３］のいずれか一項に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法であり、
［５］  アルカリ水溶液滴下後のアルコールの重量がアミン重量の１／２重量以下である［２］〜［４］のいずれか一項に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法であり、
［６］  アルカリ水溶液滴下後のアルコールの重量がアミン重量の１／２重量以下、水の重量がアミン重量の１／２重量以下である［２］〜［５］のいずれか一項に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法であり、
［７］アシル化工程におけるアミンの量が、一般式（１）で表される化合物に対して５重量倍以下であることを特徴とする［２］〜［６］のいずれか一項に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法であり、
［８］  アルカリ水溶液による反応の温度が５℃以下であることを特徴とする、［１］〜［７］のいずれか一項に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法であり、
［９］  アルカリ水溶液が水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムを含有する水溶液であり、アルコールがエタノールである事を特徴とする［１］〜［８］のいずれか一項に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法であり、
［１０］  加水分解反応の際に用いられるアミンがピリジンである事を特徴とする［２］〜［９］のいずれか一項に記載のＮ６−アシル化デオキシアデノシン誘導体の製造法である。
【００１５】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
一般式（１）に示される化合物のＲ１における置換されている水酸基とは、水酸基の先にアルキル基、あるいは他の官能基によりさらに置換されているアルキル基を表す。具体的には、メトキシ基、エトキシ基、メトキシエトキシ基、ベンジルオキシメトキシ基、ｔ−ブチルジメチルシリル基などがあげられる。
【００１６】
Ｒ２における置換されてもよいフェニル基とは、置換基がフェニル基の芳香環２位、３位，４位いずれの位置にあってもよい。また、複数の位置に置換基があってもよい。置換基としてはたとえばメチル基、エチル基、２−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｔ−ブチル基等のアルキル基、ヒドロキシル基、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロピルオキシ基、２−プロピルオキシ基、ｎ−ブチルオキシ基などのアルキルオキシ基、ニトロ基、フルオロ基、クロロ基、ブロモ基、ヨード基などのハロゲン基、アミノ基、メチルアミノ基、エチルアミノ基、ｎ−プロピルアミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基などのアルキルアミノ基、アセチル基、プロピオニル基、ベンゾイル基などのアシル基、フェニル基、ピリジニル基等が挙げられる。具体的にはフェニル基、２−ニトロフェニル基、３−ニトロフェニル基、４−ニトロフェニル基、２−メトキシフェニル基、３−メトキシフェニル基、４−メトキシフェニル基、２−クロロフェニル基、３−クロロフェニル基、４−クロロフェニル基、２，４−ジニトロフェニル基などが挙げられる。
【００１７】
Ｒ２における置換されてもよいフェニルメチル基とは、フェニル基あるいはメチル基部分にそれぞれ置換基を有してもよいフェニルメチル基を表す。具体的には、フェニルメチル基、２−ニトロフェニルメチル基、３−ニトロフェニルメチル基、４−ニトロフェニルメチル基、４−メトキシフェニルメチル基などが挙げられる。
【００１８】
Ｒ２における置換されてもよいフェノキシメチル基とはフェニル基、あるいはメチル基部分にそれぞれ置換基を有してもよいフェノキシメチル基を表す。具体的にはフェノキシメチル基、４−ニトロフェノキシメチル基、４−メトキシフェノキシメチル基等が挙げられる。
【００１９】
炭素数２から３のアルコールとは、エタノール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、エチレングリコール、グリセリンがあげられ，さらに望ましいのはエタノールである。
【００２０】
アルカリ水溶液とは、アシル基を加水分解できれば特に限定は無いが、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム等の水酸化物、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸リチウム等の炭酸塩、アンモニア、メチルアミン、エチルアミンなどのアミン類が挙げられ、好適には水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム等の水酸化物である。
【００２１】
加水分解反応の際に用いられるアミンとは、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、トリブチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピロリジン、Ｎ−メチルピペリジン、ピリジン等が挙げられ、好適にはピリジンである。
加水分解反応の際に用いられるアミンの使用量は特に限定は無いが、原料である一般式（１）で示される化合物に対し、３〜２０重量倍、好ましくは３〜１０重量倍用いれば良い。
【００２２】
加水分解反応におけるアルカリの当量に関しては、反応系内に含まれる塩酸の中和およびＲ３からＲ５の加水分解に必要な量以上であればいずれでもよいが，一般式（１）の化合物に対して４当量から２０当量の範囲で加えるのが望ましく、さらに望ましくは４．５当量から１０当量の範囲で加えるのが望ましい。
【００２３】
加水分解反応の温度については、加水分解反応の進行に十分であればいずれでもよいが、温度があまり高いとさらに加水分解が進行することから、−１０℃から５℃の範囲が望ましく、さらに望ましくは−１０℃から０℃である。
【００２４】
加水分解反応の反応時間は、加水分解反応が十分進行する時間であればいずれでもよいが、０．５時間から２４時間の間が望ましく、さらに望ましくは１時間から６時間である。
【００２５】
加水分解におけるアルカリ水溶液の濃度については、２５％濃度以上、飽和溶液の範囲で撹拌に問題なければいずれでもかまわないが、２５％から４０％の範囲が望ましく、さらに望ましくは３０から４０％の範囲である。
【００２６】
加水分解を行った反応マス（反応液）はさらに中和操作，濃縮操作、精製操作などを行いＮ６−アシル化デオキシアデノシン類を単離することができる。
【００２７】
中和操作においては、種々の塩酸、硫酸、燐酸、などに代表される無機酸、蟻酸、酢酸などに代表される有機酸、陽イオン交換樹脂などが利用できるが、塩酸が望ましい。塩酸の濃度は１％から飽和濃度の間で任意に選ぶことができるが、１％から２５％の範囲が望ましく、さらに望ましくは１０％から２０％重量濃度である。
中和後のｐＨについては、その後の操作に応じ，適宜選ばれるが、ｐＨ７．０から９．０の範囲が望ましい。
【００２８】
精製操作においては、たとえば、分液操作によるエステル類の除去、結晶化による不純物の除去などが挙げられる。エステル類の除去においては、反応マスと分離する有機溶媒を用いて、分液操作を行いエステル類を有機相に除去することができる。
【００２９】
有機溶媒としては、ヘキサン、ヘプタン、シクロヘキサン、トルエン，キシレン、ジイソプロピルベンゼンなどの脂肪族および芳香族炭化水素、シクロヘキサノン、メチルイソブチルケトンなどのケトン類、酢酸エチル，酢酸ブチルなどのエステル類、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテルなどのエーテル類、ジクロロメタン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素などがあげられるが、トルエン、キシレン，ジイソプロピルベンゼンなどの芳香族炭化水素，シクロヘキサノン，メチルイソブチルケトンなどのケトン類が望ましく，さらに望ましくは芳香族炭化水素である。
【００３０】
結晶化による不純物の除去においては、不純物を除去可能な溶媒であればいずれでもかまわないが、水が特に望ましい。結晶化時におけるｐＨについては、生成物が分解しない範囲であればいずれでもかまわないが、ｐＨ７〜９が望ましく、さらに望ましくはｐＨ８〜８．５である。
結晶化の際の温度については結晶化に十分な温度であればいずれでもかまわないが、−２℃から５℃が望ましくさらに望ましくは−１℃から２℃である。
【００３１】
以上、本発明により、高収率高純度のＮ６−アシル化−２’−デオキシアデノシン類を工業的に得ることができるようになった。
【００３２】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【００３３】
実施例及び比較例のＨＰＬＣ条件
カラム：Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ  ＴＭＳ−ＵＧ−５
１５０ｍｍ×φ４．６
流速：０．６ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：３５℃
検出波長：２５４ｎｍ
2004307407.tif 000004
【００３４】
〔Ａ液〕
水（２９４０ｍｌ）にＮａＨ２ＰＯ４・２水和物（１．９２ｇ）、Ｎａ２ＨＰＯ４（２．４３ｇ）を溶解後、ＭｅＯＨ（６０ｍｌ）を加え混和し、脱気する。
〔Ｂ液〕
水（３００ｍｌ）にＮａＨ２ＰＯ４・２水和物（１９６ｍｇ）、Ｎａ２ＨＰＯ４（２４８ｍｇ）を溶解後、ＭｅＯＨ（２７００ｍｌ）を加え混和し、脱気する。
【００３５】
実施例１    Ｎ６−ベンゾイル−２’−デオシキアデノシン一水和物の製造
２’−デオシキアデノシン１００ｇをピリジン７００ｇに懸濁し、ベンゾイルクロライド２８７ｇを室温で滴下し、３時間反応した。反応終了後、反応液にエタノール２２０ｇを加え１時間攪拌後、０℃まで冷却し３６％ＮａＯＨ水溶液４０５ｇを加え、同温で３時間反応した。得られた反応液を３５％塩酸水で中和後、トルエン９００ｇ、水９５０ｇを加えて分液し、更に有機層を同量の水を加え洗浄した。得られた水層を合わせて濃縮したのちに冷却し、析出した沈殿物をろ取、洗浄、乾燥し、目的物であるＮ６−ベンゾイル−２’−デオシキアデノシン一水和物１１７ｇ（８４．４％）を得た。
【００３６】
実施例２〜５、比較例１〜２
２’−デオシキアデノシン１０ｇをピリジン７０ｇに懸濁し、ベンゾイルクロライド２８．７ｇを室温で滴下し、３時間反応した。反応終了後、反応液にエタノール２２ｇを加え１時間攪拌後、０℃まで冷却した。この反応液に３６％ＮａＯＨ水溶液４０．５ｇに相当する水酸化ナトリウムを含むそれぞれの濃度の水酸化ナトリウム水溶液を加え、０℃にて２０時間反応させた。得られた反応液中のＮ６−ベンゾイルー２’−デオキシアデノシンの生成量について、ＨＰＬＣ法により分析を行った。結果を表１に示した。
【００３７】
【表１】
2004307407.tif 000005
【００３８】
上記表のように、２５％濃度以上の水酸化ナトリウム水溶液を用いた場合，高い反応収率にて生成物が得られることが判明した。低濃度における加水分解の副生成物は、中間体のＮ６，Ｎ６，３’，５’−テトラベンゾイル−２’−デオキシアデノシンであった。
【００３９】
実施例６〜７、比較例３
Ｎ６、Ｎ６，３’，５’−テトラベンゾイル−２’−デオキシアデノシン  １．０ｇにピリジン５ｇを加え，さらに種々のアルコール２ｇを加えた調整液に対して、４０％水酸化ナトリウム水溶液０．６ｇを氷冷下滴下したのちに、氷冷下２時間撹拌した。反応で得られたＮ６−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシンへの反応収率と、２’−デオキシアデノシン（Ｎ−無置換体）の生成量をＨＰＬＣ分析により定量した。結果を表２に示す。氷冷温度においては、エタノール、イソプロピルアルコールに比べメタノールでの加水分解選択性が低いことが判明した。
【００４０】
【表２】
2004307407.tif 000006
【００４１】
実施例８〜１１
２’−デオキシアデノシン  １水和物  ２０ｇのピリジン１５０ｇ懸濁液にベンゾイルクロリド６０．５６ｇを加え室温でアシル化を行った。エタノール８．２ｇを加え過剰の酸クロリドをエステル化したのちに、それぞれの温度まで冷却し、４０％水酸化ナトリウム水溶液７３ｇを滴下装入したのちにそれぞれの温度にて２０時間撹拌した。２０時間後の反応マス中のＮ６−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン量をＨＰＬＣにより定量した。結果を表３に示す。
【００４２】
【表３】
2004307407.tif 000007
【００４３】
上記表のように、５時間においてはいずれの温度においても高い反応収率を示したが、特に２℃、−５℃において高い反応収率を示した。
【００４４】
【発明の効果】
本発明により、中間体であるＮ６，３’，５’−トリ−またはＮ６，Ｎ６，３’，５’−テトラ−アシル化−２’−デオキシアデノシンから選択的に、Ｎ６−アシル化―２’−デオキシアデノシン類を製造できるようになった。