【手続補正書】
【提出日】平成26年9月11日(2014.9.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａ１アデノシン受容体時間分解蛍光（ＴＲＦ）アッセイを用いてサンプル中のＬＰＳレベルを測定する方法であって、
ａ）Ａ１アデノシン受容体タンパク質源を選択すること；
ｂ）  ｉ．  タグ；
ｉｉ．  代謝標識；
ｉｉｉ．  タンパク質標識；
ｉｖ．  タグ、代謝標識、またはタンパク質標識に対する抗体；
ｖ．  Ａ１アデノシン受容体タンパク質またはペプチドについての抗体；
ｖｉ．  Ａ１アデノシン受容体タンパク質またはペプチド；
ｖｉｉ．  Ａ１アデノシン受容体シグナル伝達経路のタンパク質またはペプチド；
ｖｉｉｉ．  Ａ１アデノシン受容体シグナル伝達経路のタンパク質またはペプチドに対する抗体；
ｉｘ．  Ａ１アデノシン受容体リガンド；
ｘ．  シグナル伝達分子；
ｘｉ．  Ａ１アデノシン受容体シグナル伝達経路の分子；
ｘｉｉ．  Ａ１アデノシン受容体シグナル伝達経路の分子に対する抗体；および
ｘｉｉｉ．  Ａ１アデノシン受容体シグナル伝達経路において測定されうる分子
を含む群から選択される部分と結合した少なくとも１つのＴＲＦフルオロフォアを選択すること；ならびに
ｃ）Ａ１アデノシン受容体タンパク質源；結合した少なくとも１つのＴＲＦフルオロフォア；およびサンプルを利用して、時間分解蛍光の測定がＬＰＳの測定と相関する様式にてＴＲＦアッセイを行うこと
を含む方法。
【請求項２】
フルオロフォアがランタニドフルオロフォアである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ランタニドフルオロフォアがユーロピウムである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
フルオロフォアがＧＴＰにキレートされている、請求項２または３に記載の方法。
【請求項５】
アッセイがＧＴＰ結合アッセイである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
フルオロフォアがＧＴＰ、Ａ１アデノシン受容体タンパク質またはペプチド、Ａ１アデノシン受容体タンパク質またはペプチドについての抗体、タグ、タンパク質標識、タグまたはタンパク質標識に対する抗体、トロンボキサン、ｃＡＭＰ、およびトロンボキサンまたはｃＡＭＰに対する抗体から選択される部分と結合している、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
Ａ１アデノシン受容体タンパク質が細胞または細胞膜内で発現している、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
アッセイが不均一ＴＲＦアッセイである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
アッセイが均一ＴＲＦアッセイである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
サンプルが生物学的サンプルである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
サンプルが非生物学的サンプルである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１に記載のＴＲＦアッセイを利用し、時間分解蛍光の測定がＬＰＳの測定と相関する様式にてサンプル中のＬＰＳの量を測定することを含む、患者の敗血症、グラム陰性細菌感染、およびＬＰＳ関連状態を含む群から選択される疾患の存在または活性を診断することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
Ａ１アデノシン受容体ＴＲＦアッセイを用いてサンプル中のＬＰＳレベルを測定する方法であって、
ａ）Ａ１アデノシン受容体タンパク質源を選択すること；
ｂ）  ｉ．  タグ；
ｉｉ．  代謝標識；
ｉｉｉ．  タンパク質標識；
ｉｖ．  タグ、代謝標識、またはタンパク質標識についての抗体；
ｖ．  Ａ１アデノシン受容体タンパク質またはペプチドについての抗体；
ｖｉ．  Ａ１アデノシン受容体タンパク質またはペプチド；
ｖｉｉ．  Ａ１アデノシン受容体シグナル伝達経路のタンパク質またはペプチド；
ｖｉｉｉ．  Ａ１アデノシン受容体シグナル伝達経路のタンパク質またはペプチドに対する抗体；
ｉｘ．  Ａ１アデノシン受容体リガンド；
ｘ．  シグナル伝達分子；
ｘｉ．  Ａ１アデノシン受容体シグナル伝達経路の分子；
ｘｉｉ．  Ａ１アデノシン受容体シグナル伝達経路の分子に対する抗体；および
ｘｉｉｉ．  Ａ１アデノシン受容体シグナル伝達経路において測定されうる分子；
を含む群から選択される異なる部分とそれぞれ結合した第１および第２ＴＲＦフルオロフォアを選択することであって、２つのフルオロフォア間に、ＴＲＦアッセイにおける励起後、測定されうるエネルギー移動があるように選択すること；ならびに
ｃ）Ａ１アデノシン受容体タンパク質源；結合した第１および第２ＴＲＦフルオロフォア；ならびにサンプルを利用して、時間分解蛍光の測定がＬＰＳの測定と相関する様式にてＴＲＦアッセイを行うこと
を含む方法。
【請求項１４】
フルオロフォアがＧＴＰ、Ａ１アデノシン受容体タンパク質またはペプチド、Ａ１アデノシン受容体タンパク質またはペプチドについての抗体、タグ、タンパク質標識、タグまたはタンパク質標識に対する抗体、トロンボキサン、ｃＡＭＰ、およびトロンボキサンまたはｃＡＭＰに対する抗体から選択される部分と結合している、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
Ａ１アデノシン受容体が細胞または細胞膜内で発現している、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
サンプルが生物学的サンプルである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
サンプルが非生物学的サンプルである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１３に記載のＴＲＦアッセイを利用し、時間分解蛍光の測定がサンプル中のＬＰＳの測定と相関する様式にてサンプル中のＬＰＳの量を測定することを含む、患者の敗血症、グラム陰性細菌感染、およびＬＰＳ関連状態を含む群から選択される疾患の存在または活性を診断することをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
敗血症、グラム陰性細菌感染、またはＬＰＳ関連状態の存在について患者を診断する方法であって、患者から採取した生物学的サンプル中のＬＰＳを測定することを含む方法であり、
ａ）Ａ１アデノシン受容体タンパク質源を選択すること；
ｂ）アッセイがＬＰＳについて定量的である、少なくとも１つのＴＲＦフルオロフォアを利用する定量的ＴＲＦアッセイを選択すること；
ｃ）サンプルでアッセイを行うこと；
ｄ）アッセイにおいてサンプルについての時間分解蛍光の量を測定すること；
ｅ）該サンプルについての時間分解蛍光測定と、既知量のＬＰＳを添加したサンプルを使用したステップａ）〜ｄ）のアッセイによって作成されたＬＰＳについての標準曲線を比較することによって、時間分解蛍光の量から該サンプル中のＬＰＳの量を決定すること；および
ｆ）患者から採取した生物学的サンプル中のＬＰＳの量から患者の状態を診断すること
を含む方法。
【請求項２０】
アッセイが不均一ＴＲＦアッセイである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
アッセイが均一ＴＲＦアッセイである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
アッセイがＧＴＰ結合アッセイである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
フルオロフォアがＧＴＰ、Ａ１アデノシン受容体タンパク質またはペプチド、Ａ１アデノシン受容体タンパク質またはペプチドについての抗体、タグ、タンパク質標識、タグまたはタンパク質標識についての抗体、トロンボキサン、ｃＡＭＰ、およびトロンボキサンまたはｃＡＭＰに対する抗体から選択される部分と結合している、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
Ａ１アデノシン受容体が細胞または細胞膜内で発現している、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
サンプル中のＬＰＳレベルを決定するためのキットであって、
ａ）少なくとも１つのフルオロフォアを利用する選択されたＴＲＦアッセイ；
ｂ）Ａ１アデノシン受容体タンパク質源；および
ｃ）ＬＰＳ標準
を含むキット。
【請求項２６】
フルオロフォアがＧＴＰまたはＧＴＰ結合アッセイ用に設計されたストレプトアビジンにキレートされているランタニドフルオロフォアである、請求項２５に記載のキット。
【請求項２７】
ＴＲＦアッセイが不均一アッセイである、請求項２５に記載のキット。
【請求項２８】
ＴＲＦアッセイが均一アッセイである、請求項２５に記載のキット。