【手続補正書】
【提出日】平成24年9月27日(2012.9.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性薬剤を含む組成物を作製するためのプロセスであって、
ａ）  活性薬剤の水性緩衝溶液を含む第１の流れを提供することと、
ｂ）  有機溶媒中に１つ以上のリポソーム形成化合物の非水溶液を含む第２の流れを提供することと、
ｃ）  前記第１の流れと前記第２の流れとを衝突させ、それによって、約２０％〜約５０％ｖ／ｖの前記有機溶媒の濃度を有し、約６〜約７．４のｐＨを有する、衝突流を形成することと、
ｄ）  約２０℃〜約３５℃の温度で、約０．５時間〜約８時間、収集リザーバ中で前記衝突流を培養し、それによって、リポソームを含む培養物を形成することと、を含む、プロセス。
【請求項２】
約２０％ｖ／ｖ未満の前記有機溶媒の濃度を作製するのに十分な緩衝液を前記培養物に添加することによって、前記培養物を反応停止させることをさらに含む、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
前記リポソーム形成化合物は、式Ｉ：
Ｒ３−（Ｃ＝Ｏ）−Ｘａａ−Ｚ−Ｒ４  式Ｉ
（式中、
Ｘａａは、一般式−ＮＲＮ−ＣＲ１Ｒ２−（Ｃ＝Ｏ）−を有する任意のＤ−またはＬ−アミノ酸残基、または２〜２０アミノ酸残基のペプチドであり、式中、
Ｒ１は、非水素、アミノ酸の、置換もしくは非置換の側鎖であり、
Ｒ２は、水素、または炭素、酸素、窒素、硫黄、および水素原子からなり、かつ１〜２０個の炭素原子を有する有機基、またはＣ（１−５）アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ（３−５）アルケニル、Ｃ（３−５）アルキニル、Ｃ（１−５）アルカノイル、Ｃ（１−５）アルカノイルオキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルキル、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、Ｃ（１−５）ジアルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、ニトロ−Ｃ（１−５）アルキル、シアノ−Ｃ（１−５）アルキル、アリール−Ｃ（１−５）アルキル、４−ビフェニル−Ｃ（１−５）アルキル、カルボキシル、もしくはヒドロキシルであり、
ＲＮは、水素、または炭素、酸素、窒素、硫黄、および水素原子からなり、かつ１〜２０個の炭素原子を有する有機基、またはＣ（１−５）アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、Ｃ（３−５）アルケニル、Ｃ（３−５）アルキニル、Ｃ（１−５）アルカノイル、Ｃ（１−５）アルカノイルオキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルキル、Ｃ（１−５）アルコキシ−Ｃ（１−５）アルコキシ、Ｃ（１−５）アルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、Ｃ（１−５）ジアルキル−アミノ−Ｃ（１−５）アルキル−、ニトロ−Ｃ（１−５）アルキル、シアノ−Ｃ（１−５）アルキル、アリール−Ｃ（１−５）アルキル、４−ビフェニル−Ｃ（１−５）アルキル、カルボキシル、もしくはヒドロキシルであり、
Ｒ３は、天然に存在するか、もしくは合成のリン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシドに由来する親油性尾部；または置換もしくは非置換の、Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキル；または任意の他の天然に存在するか、もしくは合成の脂質の親油性尾部であり；
Ｒ４は、天然に存在するか、もしくは合成のリン脂質、糖脂質、トリアシルグリセロール、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、セラミド、スフィンゴミエリン、セレブロシド、もしくはガングリオシドに由来する親油性尾部；または置換もしくは非置換の、Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル、Ｃ（６−１２）シクロアルキル−Ｃ（３−２２）アルキル、Ｃ（３−２２）アルケニル、Ｃ（３−２２）アルキニル、Ｃ（３−２２）アルコキシ、もしくはＣ（６−１２）アルコキシ−Ｃ（３−２２）アルキル；または任意の他の天然に存在するか、もしくは合成の脂質の親油性尾部であり；
Ｚは、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２Ｓ（Ｏ）−、または水素、炭素、酸素、窒素、および硫黄原子から選択される１〜４０個の原子からなる有機リンカーである）
を有する、１つ以上のＤＩＬＡ２アミノ酸化合物、ならびにその塩である、請求項１に記載のプロセス。
【請求項４】
前記リポソーム形成化合物の１つは、ＰＯＮＡであり、前記ＰＯＮＡは、Ｃ１８：１−ノルＡｒｇ−Ｃ１６である、請求項１に記載のプロセス。
【請求項５】
前記第１の流れの体積流量は、前記第２の流れの体積流量の２倍以上である、請求項１に記載のプロセス。
【請求項６】
前記衝突流の前記ｐＨを、約３〜約６であるように調節することと、
約３〜約６のｐＨで培養することと
をさらに含む、請求項１に記載のプロセス。
【請求項７】
前記有機溶媒の濃度を調節するために、前記収集リザーバに緩衝液を添加することをさらに含む、請求項１に記載のプロセス。
【請求項８】
前記活性薬剤が、約５０％を上回るレベルで、好ましくは約７０％を上回るレベルでリポソーム中にカプセル化される、請求項１に記載のプロセス。
【請求項９】
前記活性薬剤は、遺伝子発現抑制剤、遺伝子調節剤、アンチセンス薬剤、ペプチド核酸薬剤、リボザイム薬剤、ＲＮＡ薬剤、またはＤＮＡ薬剤であり、好ましくはロックされない核酸塩基アナログを含有するｓｉＲＮＡである、請求項１に記載のプロセス。
【請求項１０】
接線流濾過後、前記リポソームは、直径約１６０ｎｍ未満の均一の大きさであるか、または約４０ｎｍ〜約１６０ｎｍ、もしくは約８０ｎｍ〜約１５０ｎｍの平均直径を有する、請求項１に記載のプロセス。
【請求項１１】
前記有機溶媒は、注射用の滅菌水中で約４０〜約９９％ｖ／ｖの濃度の（Ｃ１−６）アルカノールである、請求項１に記載のプロセス。
【請求項１２】
前記培養時間は、約１時間〜約４時間である、請求項１に記載のプロセス。
【請求項１３】
請求項１〜１２のうちのいずれか１項に記載のプロセスによって作製される、薬学的組成物。
【請求項１４】
生体細胞に治療核酸を送達するための非治療的方法であって、請求項１〜１２のうちのいずれか１項に記載のプロセスに従って組成物を調製することと、前記組成物で前記細胞を処置することと、を含む、方法。
【請求項１５】
癌、膀胱癌、肝臓癌、肝疾患、高コレステロール血症、炎症性疾患、代謝性疾患、炎症、関節炎、リウマチ性関節炎、脳炎、骨折、心臓疾患、およびウイルス性疾患を含む疾患を治療するための組成物であって、請求項１〜１２のうちのいずれか１項に記載のプロセスに従って作製される組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
幾つかの変形において、本開示は、リウマチ性関節炎を含む炎症性疾患、高コレステロール血症を含む代謝性疾患、肝疾患、脳炎、骨折、心臓疾患、肝炎およびインフルエンザを含むウイルス性疾患、ならびに癌から選択される疾患を治療するためのリポソーム組成物の使用を提供する。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
活性薬剤を含む組成物を作製するためのプロセスであって、
ａ）  活性薬剤の水性緩衝溶液を含む第１の流れを提供することと、
ｂ）  有機溶媒中に１つ以上のリポソーム形成化合物の非水溶液を含む第２の流れを提供することと、
ｃ）  前記第１の流れを前記第２の流れに衝突させ、それによって、約２０％〜約５０％ｖ／ｖの前記有機溶媒の濃度を有し、約６〜約７．４のｐＨを有する、衝突流を形成することと、
ｄ）  約２０℃〜約３５℃の温度で、約０．５時間〜約８時間、収集リザーバ中で前記衝突流を培養し、それによって、リポソームを含む培養物を形成することと、を含む、プロセス。
（項目２）
約２０％ｖ／ｖ未満の前記有機溶媒の濃度を作製するのに十分な緩衝液を前記培養物に添加することによって、前記培養物を反応停止させることをさらに含む、項目１に記載のプロセス。
（項目３）
前記リポソーム形成化合物は、１つ以上のＤＩＬＡ２アミノ酸化合物である、項目１に記載のプロセス。
（項目４）
前記リポソーム形成化合物の１つは、ＰＯＮＡ、Ｃ１８：１−ノルＡｒｇ−Ｃ１６である、項目１に記載のプロセス。
（項目５）
前記第１の流れの体積流量は、前記第２の流れの体積流量の２倍以上であることをさらに含む、項目１に記載のプロセス。
（項目６）
前記第１の流れの体積流量は、前記第２の流れの体積流量の３倍以上であることをさらに含む、項目１に記載のプロセス。
（項目７）
前記第１の流れの体積流量は、前記第２の流れの体積流量の５倍以上であることをさらに含む、項目１に記載のプロセス。
（項目８）
前記衝突流の前記ｐＨを、約３〜約６であるように調節することをさらに含む、項目１に記載のプロセス。
（項目９）
約３〜約６のｐＨで培養することをさらに含む、項目１に記載のプロセス。
（項目１０）
前記有機溶媒の濃度を調節するために、前記収集リザーバに緩衝液を添加することをさらに含む、項目１に記載のプロセス。
（項目１１）
前記活性薬剤が、約５０％を上回るレベルでリポソーム中にカプセル化されることをさらに含む、項目１に記載のプロセス。
（項目１２）
前記活性薬剤が、約７０％を上回るレベルでリポソーム中にカプセル化されることをさらに含む、項目１に記載のプロセス。
（項目１３）
前記活性薬剤は、遺伝子発現抑制剤、遺伝子調節剤、アンチセンス薬剤、ペプチド核酸薬剤、リボザイム薬剤、ＲＮＡ薬剤、またはＤＮＡ薬剤である、項目１に記載のプロセス。
（項目１４）
前記活性薬剤はＵｓｉＲＮＡである、項目１に記載のプロセス。
（項目１５）
前記活性薬剤は薬学的化合物である、項目１に記載のプロセス。
（項目１６）
前記リポソーム組成物は、４５℃の温度で７日間、遺伝子発現抑制活性を保持する、項目１に記載のプロセス。
（項目１７）
前記リポソーム組成物は、４５℃の温度で７日間、前記活性薬剤のカプセル化を保持する、項目１に記載のプロセス。
（項目１８）
接線流濾過後、前記リポソームは、直径約１６０ｎｍ未満の均一の大きさである、項目１に記載のプロセス。
（項目１９）
接線流濾過後、前記リポソームは、約４０ｎｍ〜約１６０ｎｍの平均直径を有する均一の大きさである、項目１に記載のプロセス。
（項目２０）
接線流濾過後、前記リポソームは、約８０ｎｍ〜約１５０ｎｍの平均直径を有する均一の大きさである、項目１に記載のプロセス。
（項目２１）
接線流濾過および透析濾過によって前記培養物を濾過することをさらに含む、項目１に記載のプロセス。
（項目２２）
前記培養物を滅菌することをさらに含む、項目１に記載のプロセス。
（項目２３）
異なる薬学的に許容される緩衝液と前記有機溶媒を交換することをさらに含む、項目１に記載のプロセス。
（項目２４）
約１％〜約４０％ｖ／ｖの濃度で、前記第１の流れに有機溶媒を添加することをさらに含む、項目１に記載のプロセス。
（項目２５）
前記有機溶媒は、注射用の滅菌水中で約４０〜約９９％ｖ／ｖの濃度の（Ｃ１−６）アルカノールである、項目１に記載のプロセス。
（項目２６）
前記有機溶媒は、注射用の滅菌水中の約７０〜約９５％ｖ／ｖの濃度の（Ｃ１−６）アルカノールである、項目１に記載のプロセス。
（項目２７）
前記培養時間は、約１時間〜約４時間である、項目１に記載のプロセス。
（項目２８）
項目１〜２７のうちのいずれか１項に記載のプロセスによって作製される、薬学的組成物。
（項目２９）
生体細胞に治療核酸を送達するための方法であって、項目１〜２７のうちのいずれか１項に記載のプロセスに従って組成物を調製することと、前記組成物で前記細胞を処置することと、を含む、方法。
（項目３０）
生体細胞内の遺伝子の発現を阻害するための方法であって、項目１〜２７のうちのいずれか１項に記載のプロセスに従って組成物を調製すること、および前記組成物で前記細胞を処置することを含む、方法。
（項目３１）
哺乳動物において、遺伝子の発現を阻害するための方法であって、項目１〜２７のうちのいずれか１項に記載のプロセスに従って組成物を調製することと、前記哺乳動物に前記組成物を投与することと、を含む、方法。
（項目３２）
ヒトにおいて、疾患を治療するための方法であって、項目１〜２７のうちのいずれか１項に記載のプロセスに従って組成物を調製することと、前記ヒトに前記組成物を投与することと、を含み、前記疾患は、癌、膀胱癌、肝臓癌、肝疾患、高コレステロール血症、炎症性疾患、代謝性疾患、炎症、関節炎、リウマチ性関節炎、脳炎、骨折、心臓疾患、およびウイルス性疾患である、方法。
（項目３３）
癌、膀胱癌、肝臓癌、肝疾患、高コレステロール血症、炎症性疾患、代謝性疾患、炎症、関節炎、リウマチ性関節炎、脳炎、骨折、心臓疾患、およびウイルス性疾患を含む疾患を治療するための、項目１〜２７のうちのいずれか１項に記載のプロセスに従って作製される組成物の使用。
（項目３４）
癌、膀胱癌、肝臓癌、肝疾患、高コレステロール血症、炎症性疾患、代謝性疾患、炎症、関節炎、リウマチ性関節炎、脳炎、骨折、心臓疾患、およびウイルス性疾患を含む疾患を治療するための医薬の調製における、項目１〜２７のうちのいずれか１項に記載のプロセスに従って作製される組成物の使用。
（項目３５）
１個以上の担体粒子を含有するリポソームを含む組成物であって、各担体粒子は、活性核酸薬剤およびペプチドを含み、前記ペプチドの質量＋前記リポソームの質量／前記核酸薬剤の質量の比は、約１５未満である、組成物。
（項目３６）
前記ペプチドの質量＋前記リポソームの質量／前記核酸薬剤の質量の比は、約１２未満である、項目３５に記載の組成物。
（項目３７）
前記ペプチドの質量＋前記リポソームの質量／前記核酸薬剤の質量の比は、約１０未満である、項目３５に記載の組成物。
（項目３８）
前記ペプチドの質量＋前記リポソームの質量／前記核酸薬剤の質量の比は、約９未満である、項目３５に記載の組成物。
（項目３９）
前記ペプチドの質量＋前記リポソームの質量／前記核酸薬剤の質量の比は、約８未満である、項目３５に記載の組成物。
（項目４０）
前記ペプチドの質量＋前記リポソームの質量／前記核酸薬剤の質量の比は、約５未満である、項目３５に記載の組成物。
（項目４１）
前記組成物は、生体内で、ＡｐｏＢの遺伝子発現を抑制するための５０％以上のノックダウン活性を有する、項目３５に記載の組成物。
（項目４２）
前記組成物は、生体内で、ＡｐｏＢの遺伝子発現を抑制するための７０％以上のノックダウン活性を有する、項目３５に記載の組成物。
（項目４３）
前記組成物は、生体内で、ＡｐｏＢの遺伝子発現を抑制するための９０％以上のノックダウン活性を有する、項目３５に記載の組成物。
（項目４４）
前記組成物は、アミノ酸脂質を含むリポソームを含有する、項目３５に記載の組成物。
（項目４５）
前記組成物は、荷電した担体粒子を含有する、項目３５に記載の組成物。
（項目４６）
前記組成物は、負に荷電した担体粒子を含有する、項目３５に記載の組成物。
（項目４７）
前記組成物は、正に荷電した担体粒子を含有する、項目３５に記載の組成物。
（項目４８）
前記活性核酸薬剤は、ＲＮＡｉ誘導薬剤またはアンチセンス薬剤である、項目３５に記載の組成物。
（項目４９）
前記活性核酸薬剤は、ＲＮＡｉ誘導薬剤またはアンチセンス薬剤であり、各リポソームは、前記活性薬剤分子の５００個以上の複製を含有する、項目３５に記載の組成物。
（項目５０）
前記活性核酸薬剤は、ＲＮＡｉ誘導薬剤またはアンチセンス薬剤であり、各リポソームは、前記活性薬剤分子の１０００個以上の複製を含有する、項目３５に記載の組成物。
（項目５１）
前記活性核酸薬剤は、ＲＮＡｉ誘導薬剤またはアンチセンス薬剤であり、各リポソームは、前記活性薬剤分子の５０００個以上の複製を含有する、項目３５に記載の組成物。
（項目５２）
前記ペプチドは、切断可能なペプチドである、項目３５に記載の組成物。
（項目５３）
前記ペプチドは、架橋可能なペプチドである、項目３５に記載の組成物。
（項目５４）
前記ペプチドは、配列番号３７３を有するＰＮ４１１０である、項目３５に記載の組成物。
（項目５５）
前記ペプチドは、配列番号３７５を有するＰＮ１８３である、項目３５に記載の組成物。
（項目５６）
細胞に活性核酸薬剤を送達するための方法であって、項目３５〜５５のうちのいずれか１項に従って組成物を調製することと、前記組成物で前記細胞を処置することと、を含む、方法。
（項目５７）
細胞内の遺伝子の発現を阻害するための方法であって、項目３５〜５５のうちのいずれか１項に従って組成物を調製することと、前記組成物で前記細胞を処置することと、を含む、方法。
（項目５８）
哺乳動物において、遺伝子の発現を阻害するための方法であって、項目３５〜５５のうちのいずれか１項に従って組成物を調製することと、前記哺乳動物に前記組成物を投与することと、を含む、方法。
（項目５９）
ヒトにおいて、疾患を治療するための方法であって、該疾患は、リウマチ性関節炎を含む炎症性疾患、高コレステロール血症を含む代謝性疾患、肝疾患、脳炎、骨折、心臓疾患、肝炎およびインフルエンザを含むウイルス性疾患、ならびに癌から選択され、項目３５〜５５のうちのいずれか１項に従って組成物を調製することと、前記ヒトに前記組成物を投与することと、を含む、方法。
（項目６０）
リウマチ性関節炎を含む炎症性疾患、高コレステロール血症を含む代謝性疾患、肝疾患、脳炎、骨折、心臓疾患、肝炎およびインフルエンザを含むウイルス性疾患、ならびに癌を含む疾患を治療するための医薬の調製における、項目３５〜５５のうちのいずれか１項に記載の組成物の使用。
（項目６１）
リウマチ性関節炎を含む炎症性疾患、高コレステロール血症を含む代謝性疾患、肝疾患、脳炎、骨折、心臓疾患、肝炎およびインフルエンザを含むウイルス性疾患、ならびに癌を含む疾患を治療するための、項目３５〜５５のうちのいずれか１項に記載の組成物の使用。