【誤訳訂正書】
【提出日】平成24年10月31日(2012.10.31)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  細胞傷害性の遺伝子産物をコードする異種配列に機能的に連結されたＨ１９調節配列を含むポリヌクレオチドを含有する、腫瘍細胞において配列を発現させるためのベクターであって、前記腫瘍細胞が膀胱癌細胞または膀胱癌であり、前記Ｈ１９調節配列がＨ１９プロモーターならびにＨ１９プロモーターおよびＨ１９エンハンサーからなる群より選択される、前記ベクター。
【請求項２】  Ｈ１９調節配列がＨ１９プロモーターとＨ１９エンハンサーとを含み、そして異種配列がジフテリア毒素をコードする、請求項１記載のベクター。
【請求項３】  Ｈ１９プロモーターが配列番号１のヌクレオチド１〜８３０からなる、請求項１または２記載のベクター。
【請求項４】  Ｈ１９プロモーターが配列番号２の配列からなる、請求項１または２記載のベクター。
【請求項５】  Ｈ１９エンハンサーがプラスミドｐＨ１９ＥＨ１９（ＡＴＣＣ受託番号２０９３２２）中にクローン化されたＨ１９エンハンサーの配列からなる、請求項１または２記載のベクター。
【請求項６】  Ｈ１９エンハンサーが配列番号３の配列からなる、請求項１または２記載のベクター。
【請求項７】  Ｈ１９エンハンサーが配列番号４の配列からなる、請求項１または２記載のベクター。
【請求項８】Ｈ１９エンハンサーが配列番号５の配列からなる、請求項１または２記載のベクター。
【請求項９】Ｈ１９エンハンサーが異種配列の３'側に配置される、請求項１〜８のいずれか１項記載のベクター。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
H19 RNAの転写は、胎児期および胎盤発達を通して多数の異なる胚組織において生じるが、H19の発現は出生後にはダウンレギュレーションを受ける。しかしながら、成体マウス筋および肝では、相対的に低いレベルのH19転写が報告されている(Brunkow & Tilghman, 1991, Genes & Dev., 5:1092-1101)。H19はまた、癌細胞では出生後に活性化される。アリールら(Ariel et al., 1997, Molec. Pathol., 50:34-44)は、出生前にH19が発現している組織から生じる多数の腫瘍においてH19が発現することを示した。さらに著者らは、H19発現と関連していることが知られていない神経組織由来の腫瘍、特に星状細胞腫および神経節芽細胞腫においてH19 RNAを見つけている。H19 RNAを発現する癌の多数のアレイ(array)が得られ、著者らはH19が癌胎児性RNAではないかと考え、H19をヒト組織の異常増殖に対する腫瘍マーカーとして研究することを提案した。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
本発明の1つの態様において、本発明は、異種遺伝子と機能的に連結された上記調節領域を含むポリヌクレオチドを含む発現ベクターに関する。特に好ましい調節領域は、プロモーターおよびエンハンサー配列などのH19調節領域、IGF-2 P3若しくはP4プロモーターまたはIGF-1プロモーターをコードするものである。この点に関し、H19エンハンサーおよびその活性部は、H19プロモーター、IGF-1プロモーター、IGF-2 P3プロモーターまたはIGF-2 P4プロモーターの任意の組み合わせで使用することができる。本発明はまた、そのようなベクターを含む宿主細胞も包含する。その点に関し、H19エンハンサーの存在下または不存在下、H19プロモーターによって制御される異種遺伝子を含む発現構築物は、H19エンハンサーと組み合わせて、IGF-1プロモーターまたはIGF-2 P3若しくはP4プロモーターにより制御される異種遺伝子を含む第2の構築物と共に細胞中に導入してもよい。他の態様によれば、本発明は、そのようなベクターを使用して、腫瘍細胞に異種遺伝子を発現する方法を提供するものである。さらに他の態様によれば、本発明は遺伝子治療に本発明のベクターを用いて癌を治療する方法に関する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１５】
5.1  H19遺伝子の調節配列、IGF-2 P3およびP4プロモーターならびにIGF-１プロモーター
本明細書中に記載されているのは、異種コード配列の腫瘍細胞特異的な発現を指令するために使用できるH19調節配列である。これらのH19調節配列には、上流のH19プロモーター領域および／または下流のH19エンハンサー領域が含まれる。ある１つのH19プロモーター領域のヌクレオチド配列を図１A〜１C(配列番号１)に示す。この830ヌクレオチド配列は(Brannanら、上掲に記載されたように)キャップ部位から−837〜−7位のヌクレオチドにわたる。共通TATA配列はヌクレオチド−27〜−35位に見出される。２つの共通AP2結合部位(8／9一致)は、転写開始部位から約−500〜−40ヌクレオチド上流に見出される。コード領域の上流を異種遺伝子と置き換えた場合は、以下により詳細に論じるように、癌細胞(該細胞もまた内在性H19を発現する)中に機能的に連結された異種遺伝子の発現を指令するには、約830塩基対の調節領域で十分である。さらに、ヌクレオチド−819〜＋14間の別のH19プロモーター領域(図５、配列番号２)もまた、癌細胞中に機能的に連結された異種遺伝子の発現を指令するには十分である。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４５】
5.3.2  遺伝子療法
本発明は同様に、ガン及び高増殖性疾患を治療する目的で遺伝子療法において使用するための非相同性遺伝子に作動的に連鎖された遺伝子調節領域を含有するポリヌクレオチドの使用をも包含するものである。遺伝子療法を目的として、本発明の発現構成体は、in vivoで細胞に対し組換え型遺伝子を有効に送達する能力をもつあらゆる製剤又は組成物といった生物学的に有効な任意の担体内で投与することができる。アプローチとしては、組換え型レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連性ウイルス及び単純ヘルペスウイルス−１を含むウイルスベクター又は組換え型細菌もしくは真核性プラスミド内への対象遺伝子の挿入が含まれる。ウイルスベクターは、細胞を直接トランスフェクションする：すなわち、プラスミドＤＮＡは、例えばカチオン重合体、カチオン性リポゾーム（例えばリポフェクチン、コレステロール誘導体、例えば、Ｄ.Ｄ.Ａ.Ｂ.及びカチオンリン脂質）、又は誘導体化された（例えば抗体接合された）ポリリシン接合体、グラミシジンＳ、人工ウイルスエンベロープ又はその他のこのような細胞内担体ならびに裸の遺伝子構成体の直接注入、in vivo で行なわれるＣａＰＯ4沈降法又は電気穿孔法を援用して、送達されうる。ガン遺伝子療法のための遺伝子の移入及び発現系の最近の論評としては、Cooper, １９９６，Seminars in Oncology（腫瘍学セミナー）２３；１７２−１８７がある。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７８】
簡単に言うと、Optimen の無血清培地（ＢＲＬ Life Technologies, Gaithersburg, MD）５００μｌ中に溶解させた５０μｇのプラスミドＤＮＡを２５０μｌのリポフェクタミン及び、２５０μｌの水に添加する。混合物を室温で３０分間インキュベートし、次に平衡化された１０mls の塩溶液（ＢＳＳ（−）：１４０ｍＭ  ＮａＣｌ，５.４ｍＭ  ＫＣl，１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ，ｐＨ７.６）の中に希釈させる。３０分間１５０００rpm で溶液を遠心分離することによってペレット化した後、リポソームを、１ｍＭのＣａＣｌ2を含むＢＳＳ（−）１ml中に再懸濁させる。約０.２mls の濃縮リポソームを、カテーテルを介して化学的に誘発された膀胱腫瘍を有するマウスに対し投与する。膀胱腫瘍をもつマウスの対照グループは、Ｈ１９調節配列の制御下でＤＮＡを含まない又は関連性のない遺伝子を含む構成体を伴うリポソームを受ける。規定の時点で、各グループからのマウスを屠殺し、標準的手順を用いて膀胱を切除し、定着させ、パラフィンブロック内に埋込む。上述のとおりのＨ１９プローブ又はシュードモナス毒素遺伝子のコーディング配列に対するプローブのいずれかを用いて、in situ ハイブリダイゼーションのため代替的切片を処理する。さらに、対照及び実験群の間で、腫瘍のサイズ、数及び壊死を比較する。シュードモナス毒素の発現は、マウスの実験群からの膀胱腫瘍内のＨ１９の発現と同時局在化することがわかる。さらに、マウスの実験群内の膀胱腫瘍は、マウスの対照群内の膀胱腫瘍に比べてサイズが減少し、膀胱腫瘍が壊死している。