【手続補正書】
【提出日】平成24年8月23日(2012.8.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物において補体を活性化させる官能基がナノ粒子の外側に配置された、抗原と合成ポリマーとを含む平均粒子直径が約７０ｎｍ未満の合成ナノ粒子の集合体を含み、前記抗原がジスルフィド結合を介して前記ナノ粒子に結合している、哺乳動物に導入するための医療用組成物。
【請求項２】
前記官能基がヒドロキシルおよび／またはチオールを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ナノ粒子がミセルである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ミセルが親水性ポリマーおよび疎水性ポリマーのブロックコポリマーを含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記親水性ポリマーがポリエチレンオキシドを含み、前記疎水性ポリマーがポリ（プロピレンスルフィド）を含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記ミセルでカプセル化された治療剤をさらに含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物が合成ポリマー以外のアジュバントを含まない、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記官能基が哺乳動物でＴｈ−１応答を誘導する、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記集合体が生体分子危険シグナル、疎水性危険シグナル、炎症性サイトカインおよびＴｏｌｌ様受容体のリガンドからなる群から選択される危険シグナルをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記合成ポリマーが、ポリアルキレンオキシド、ポリエチレングリコール、ＰＬＵＲＯＮＩＣ、ＰＬＵＲＯＮＩＣ−Ｆ１２７またはポリプロピレンスルフィドを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記抗原が腫瘍抗原または感染症の抗原である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ナノ粒子が細胞に特異的に結合する標的用リガンドを含まず、前記抗原が腫瘍免疫療法または感染症の抗原であり、炎症性サイトカインおよびＴｏｌｌ様受容体のリガンドからなる群から選択される危険シグナルをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記合成ポリマーが少なくとも１つの疎水性ブロックおよび少なくとも１つの親水性ブロックの両親媒性ブロックコポリマーを含み、前記ブロックコポリマーが水溶液中にて自己会合して前記粒子を形成し、前記官能基がヒドロキシルおよび／またはチオールを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ナノ粒子が疎水性コアと親水性コロナとを含み、前記コアがポリ（プロピレンスルフィド）で構成され、前記親水性コロナがポリエチレングリコールを含む合成ポリマーで構成され、前記官能基が求核種を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記求核種がヒドロキシルおよび／またはチオールを含み、前記抗原が、Ｃａｓｐａｓｅ−８、ＭＡＧＥ−１、チロシナーゼ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＭＵＣ−１またはサバイビンを含む、請求項１に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
ナノ粒子は、多様性について本明細書にて詳細に説明する１つ以上の抗原または危険シグナルと関連していてもよい。このような関連付けには、共有結合、イオンおよび／またはジスルフィド結合を伴うものもある。危険シグナルは、ナノ粒子を形成するのに用いるポリマーまたは官能基以外の生物活性分子であってもよい；言葉をかえると、ナノ粒子を製造するための製剤を、危険シグナルである別の分子でさらに修飾してもよく、これが天然に見られるものであっても天然に見られないものであってもよい。いくつかの危険シグナルは疎水性であり、ナノ粒子の疎水性部分と結合していてもよい。関連付けの方法は、電荷と電荷の相互作用、粒子に対する関連付けの対象となる部分が一方の電荷を持ち、ナノ粒子が、関連付けの前に他方の電荷を持てばよく、例えばナノ粒子が正電荷、関連付け対象となる部分が負電荷といった具合である。例えば、アスパラギン酸および／またはグルタミン酸などの複数の正または負に荷電した部分でペプチドを発現させてもよい（電荷の状態は一般的なｉｎ  ｖｉｖｏでのｐＨ条件を示す）。抗原の例としては、Ｃａｓｐａｓｅ−８、ＭＡＧＥ−１、チロシナーゼ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕまたはＭＵＣ−１などの腫瘍抗原または感染症の抗原があげられる。危険シグナルの例としては、炎症性サイトカインまたはＴｏｌｌ様受容体のリガンドがあげられる。ナノ粒子は、細胞に特異的に結合する標的用リガンドを含まないものであってもよい。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
実施形態は、患者のリンパ節で樹状細胞をトランスフェクトする組成物または方法であって、リンパ節外の場所で、抗原をコードする核酸を含む合成ナノ粒子の集合体を患者に投与することを含み、ナノ粒子が、平均粒子直径約７０ｎｍ未満であり、樹状細胞による取り込み用に患者のリンパ節まで移動して樹状細胞を核酸でトランスフェクトする表面化学を有し、表面化学が、補体を活性化させる合成親水性ポリマーと結合した複数の求核基を有する。トランスフェクション効率は、例えば、リンパ節の樹状細胞の少なくとも約３０％が核酸でトランスフェクトされるなどである。この場合、様々なナノ粒子の実施形態を利用でき、例えば、ナノ粒子がポリ（プロピレンスルフィド）のコアを含み、合成親水性ポリマーがポリエチレングリコールを含み、官能基がヒドロキシルおよび／またはチオールを含むか、ナノ粒子がコアと、親水性ポリマーおよび求核基を含む親水性コロナとを含み、コアがポリ（プロピレンスルフィド）で構成されるか、ナノ粒子がミセルを含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
実施形態は、患者のリンパ節で樹状細胞を刺激する組成物または方法であって、リンパ節外の場所で、抗原を含み補体を活性化させる合成分岐鎖ポリマーの集合体を患者に投与することを含み、ポリマーが、リンパ節での樹状細胞による取り込みと樹状細胞に対する抗原の放出用に求核基を含む少なくとも４つの末端をさらに含み、表面化学が合成親水性ポリマーと結合した複数の求核基を含む。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
実施形態は、ナノ粒子の集合体を提供することを含む、医療用ワクチンを送達する組成物または方法である。例えば、患者のリンパ節で樹状細胞をトランスフェクトする方法は、穏やかな圧力下で、抗原を含む合成ナノ粒子の集合体を患者の外粘膜表面に投与することを含み、ナノ粒子は、平均粒子直径約７０ｎｍ未満であり、樹状細胞による取り込み用に患者のリンパ節まで移動して樹状細胞を核酸でトランスフェクトする表面化学を有し、表面化学が、補体を活性化させる合成親水性ポリマーと結合した複数の求核基を有する。粘膜表面の例が鼻粘膜である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２４】
実施形態は、危険シグナルと結合したナノ粒子および／または分岐鎖ポリマーを含む。危険シグナルは、例えば本明細書の他の部分で説明したように、共有結合的に結合または吸着できるものである。ナノ粒子および／または分岐鎖ポリマーは、危険シグナルあるいは、このシグナルで誘導体化されたその利用可能な末端または表面基の一部または全部との組み合わせで、チオールおよび／またはヒドロキシルを有するものであってもよい。実施例２２および図２１では、イミキモドすなわち現時点で薬剤として用いられている化学的危険シグナルをロードしたナノ粒子を用いる実験が極めて効果的で、ＬＰＳに匹敵するものであったことを説明する。図２９（実施例２３参照）は、ナノ粒子が一例としてＣｐＧ  ＤＮＡと反応した、送達用に共有結合的に結合された危険シグナルの例を提供するものである。危険シグナルは、フラジェリン、フラジェリン断片、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド、モノホスホリル脂質Ａ、特にサポニンなど、現段階でアジュバント分子として調査されている化合物を含む。