【手続補正書】
【提出日】平成26年8月19日(2014.8.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記を含む、インビボでRNA干渉ポリヌクレオチドを肝細胞に送達するための結合体送達システム組成物：
RNAi-A＋メリチン-(L-Gal)x
式中、
メリチンはメリチンペプチドであり、
Lは生理的に不安定な連結であり、
Galはアシアロ糖タンパク質受容体（ASGPr）リガンドであり、
xはメリチンの一級アミンの80％よりも大きい値を有する整数であり、
RNAiはRNA干渉ポリヌクレオチドであり、かつ
Aは少なくとも20個の炭素原子を有する疎水性基またはガラクトースクラスターのいずれかである。
【請求項２】
RNA干渉ポリヌクレオチドが、DNA、RNA、dsRNA、siRNA、およびmicroRNAからなる群より選択される、請求項1記載の組成物。
【請求項３】
肝細胞が肝実質細胞からなる、請求項1または2記載の組成物。
【請求項４】
ASGPrリガンドが複数のメリチンペプチド上のアミンの少なくとも90％に可逆的に連結している、請求項1〜3のいずれか一項記載の組成物。
【請求項５】
メリチンペプチドがSeq. ID 1、Seq. ID 7、Seq. ID 11、Seq. ID 51、Seq. ID 57、Seq. ID 58、Seq. ID 92、およびSeq. ID 96からなるリストから選択される、請求項1〜4のいずれか一項記載の組成物。
【請求項６】
メリチンペプチドがD型アミノ酸からなる、請求項1〜4のいずれか一項記載の組成物。
【請求項７】
Lが二置換マレアマートである、請求項1〜6のいずれか一項記載の組成物。
【請求項８】
Lがアミドベンジルカルバマートである、請求項1〜6のいずれか一項記載の組成物。
【請求項９】
メリチンペプチドのアミノ末端に共有結合されたポリエチレングリコール（PEG）をさらに含む、請求項7記載の組成物。
【請求項１０】
メリチンペプチドのアミノ末端に共有結合されたASGPrリガンド-PEG結合体をさらに含む、請求項7記載の組成物。
【請求項１１】
メリチンペプチドのアミノ末端に共有結合されたポリエチレングリコール（PEG）をさらに含む、請求項8記載の組成物。
【請求項１２】
メリチンペプチドのアミノ末端に共有結合されたASGPrリガンド-PEG結合体をさらに含む、請求項8記載の組成物。
【請求項１３】
ASGPrリガンドがラクトース、ガラクトース、N-アセチルガラクトサミン（GalNAc）、ガラクトサミン、N-ホルミルガラクトサミン、N-アセチル-ガラクトサミン、N-プロピオニルガラクトサミン、N-n-ブタノイルガラクトサミン、およびN-イソ-ブタノイル-ガラクトサミンからなる群より選択される、請求項1〜12のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１４】
生理的に不安定な連結L2を介してRNAiがAに連結されている、請求項1〜13のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１５】
L2がLに直交である、請求項14記載の組成物。
【請求項１６】
ガラクトースクラスターがN-アセチルガラクトサミントリマーからなる、請求項1〜15のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１７】
疎水性基がコレステロールからなる、請求項1〜15のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１８】
薬学的に許容される担体または希釈剤中で提供される、請求項1〜17のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１９】
下記の段階を含む、哺乳動物の肝細胞において発現される遺伝子の発現を阻害する方法：
a）該遺伝子の配列の一部と同一またはほぼ同一の配列を有するRNAiポリヌクレオチドを生成する段階；および
b）該哺乳動物の血管に請求項1〜18のいずれか一項記載の組成物を注入する段階。
【請求項２０】
下記の段階を含む、RNA干渉ポリヌクレオチド送達組成物を製造する方法：
a）メリチンペプチドを生成する段階；
b）二置換無水マレイン酸またはジペプチドアミンドベンジルアミン反応性カルボナートに共有結合されたASGPrリガンドをそれぞれが含む、複数の非荷電マスキング剤を生成する段階；
c）メリチンペプチドの集団上の一級アミンの80％よりも多くを段階bのマスキング剤で修飾する段階、
d）RNA干渉ポリヌクレオチドを少なくとも20個の炭素原子を有する疎水性基またはガラクトーストリマーに連結する段階；
f）インビボでの投与に適した溶液中のRNA干渉ポリヌクレオチドおよび修飾メリチンペプチドを提供する段階。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
[本発明1001]
下記を含む、インビボでRNA干渉ポリヌクレオチドを肝細胞に送達するための結合体送達システム組成物：
RNAi-A＋メリチン-(L-Gal)x
式中、
メリチンはメリチンペプチドであり、
Lは生理的に不安定な連結であり、
Galはアシアロ糖タンパク質受容体（ASGPr）リガンドであり、
xはメリチンの一級アミンの80％よりも大きい値を有する整数であり、
RNAiはRNA干渉ポリヌクレオチドであり、かつ
Aは少なくとも20個の炭素原子を有する疎水性基またはガラクトースクラスターのいずれかである。
[本発明1002]
RNA干渉ポリヌクレオチドが、DNA、RNA、dsRNA、siRNA、およびmicroRNAからなる群より選択される、本発明1001の組成物。
[本発明1003]
肝細胞が肝実質細胞からなる、本発明1001の組成物。
[本発明1004]
ASGPrリガンドが複数のメリチンペプチド上のアミンの少なくとも90％に可逆的に連結している、本発明1001の組成物。
[本発明1005]
メリチンペプチドがSeq. ID 1、Seq. ID 7、Seq. ID 11、Seq. ID 51、Seq. ID 57、Seq. ID 58、Seq. ID 92、およびSeq. ID 96からなるリストから選択される、本発明1001の組成物。
[本発明1006]
メリチンペプチドがD型アミノ酸からなる、本発明1001の組成物。
[本発明1007]
Lが二置換マレアマートである、本発明1001の組成物。
[本発明1008]
Lがアミドベンジルカルバマートである、本発明1001の組成物。
[本発明1009]
メリチンペプチドのアミノ末端に共有結合されたポリエチレングリコール（PEG）をさらに含む、本発明1007の組成物。
[本発明1010]
メリチンペプチドのアミノ末端に共有結合されたASGPrリガンド-PEG結合体をさらに含む、本発明1007の組成物。
[本発明1011]
メリチンペプチドのアミノ末端に共有結合されたポリエチレングリコール（PEG）をさらに含む、本発明1008の組成物。
[本発明1012]
メリチンペプチドのアミノ末端に共有結合されたASGPrリガンド-PEG結合体をさらに含む、本発明1008の組成物。
[本発明1013]
ASGPrリガンドがラクトース、ガラクトース、N-アセチルガラクトサミン（GalNAc）、ガラクトサミン、N-ホルミルガラクトサミン、N-アセチル-ガラクトサミン、N-プロピオニルガラクトサミン、N-n-ブタノイルガラクトサミン、およびN-イソ-ブタノイル-ガラクトサミンからなる群より選択される、本発明1001の組成物。
[本発明1014]
生理的に不安定な連結L2を介してRNAiがAに連結されている、本発明1001の組成物。
[本発明1015]
L2がLに直交である、本発明1014の組成物。
[本発明1016]
ガラクトースクラスターがN-アセチルガラクトサミントリマーからなる、本発明1001の組成物。
[本発明1017]
疎水性基がコレステロールからなる、本発明1001の組成物。
[本発明1018]
薬学的に許容される担体または希釈剤中で提供される、本発明1001の組成物。
[本発明1019]
下記の段階を含む、哺乳動物の肝細胞において発現される遺伝子の発現を阻害する方法：
a）該遺伝子の配列の一部と同一またはほぼ同一の配列を有するRNAiポリヌクレオチドを生成する段階；および
a）該哺乳動物の血管に本発明1001の組成物を注入する段階。
[本発明1020]
下記の段階を含む、RNA干渉ポリヌクレオチド送達組成物を製造する方法：
a）メリチンペプチドを生成する段階；
b）二置換無水マレイン酸またはジペプチドアミンドベンジルアミン反応性カルボナートに共有結合されたASGPrリガンドをそれぞれが含む、複数の非荷電マスキング剤を生成する段階；
c）メリチンペプチドの集団上の一級アミンの80％よりも多くを段階bのマスキング剤で修飾する段階、
d）RNA干渉ポリヌクレオチドを少なくとも20個の炭素原子を有する疎水性基またはガラクトーストリマーに連結する段階；
f）インビボでの投与に適した溶液中のRNA干渉ポリヌクレオチドおよび修飾メリチンペプチドを提供する段階。
本発明のさらなる目的、特徴、および利点は、添付の図面と一緒に読めば、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。