【手続補正書】
【提出日】平成23年12月9日(2011.12.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
機能性ポリプリントラクト（PPT）又は機能性中央ポリプリントラクト（cPPT）を欠く組込み欠損レトロウイルスベクター導入カセット。
【請求項２】
異種の配列を含む請求項１に記載のレトロウイルスベクターカセット。
【請求項３】
異種のヌクレオチド配列、１又は２個のレトロウイルス長末端反復（LTR）、パッケージングシグナル、rev応答配列及び真核生物プロモーターから成り、機能性PPT又は機能性中央ポリプリントラクト（cPPT）を欠く単離された核酸。
【請求項４】
ウイルスの複製起点又は宿主によるベクター核酸の複製を直接若しくは間接的に媒介できる配列を含む請求項３に記載の核酸。
【請求項５】
２個のLTRの間にバクテリアの複製起点及びバクテリアの選択マーカーを有する請求項３又は４に記載の核酸。
【請求項６】
前記宿主によるベクター核酸の複製を直接若しくは間接的に媒介できる配列が、下記（ａ）〜（ｃ）からなる群から選択される請求項４に記載の核酸。
（ａ）宿主細胞複製装置により認識される配列、
（ｂ）宿主細胞複製装置と結合及び／又は宿主細胞複製装置を調節できるタンパク質をコードする配列、及び
（ｃ）（ｂ）のタンパク質と結合できる又は前記ベクターの配列を認識できるタンパク質をコードする配列
【請求項７】
前記異種の配列が、１又は２以上のマーカー遺伝子、治療遺伝子、抗ウイルス遺伝子、抗腫瘍遺伝子、サイトカイン遺伝子、抗原をコードする遺伝子、宿主クロマチンと結合できる配列、宿主ＤＮＡ及び宿主クロマチン及びベクターの核酸と結合できる蛋白質をコードする配列、ＤＮＡメチル化活性を有するタンパク質をコードする配列、並びにこれらの組合せからなる群から選択される請求項３に記載の核酸。
【請求項８】
転写後の調節エレメントを含む請求項３に記載の核酸。
【請求項９】
請求項３に記載の核酸又は請求項１に記載の組込み欠損レトロウイルスベクター導入カセットを含むベクター。
【請求項１０】
LTRを一つだけ含む請求項９に記載のベクター。
【請求項１１】
前記LTRのU3領域に自己不活化欠失を有する請求項９に記載のベクター。
【請求項１２】
前記U3領域の欠失部分が誘導プロモーターに置換された請求項１１に記載のベクター。
【請求項１３】
部位特異的組み換え部位を含む請求項９に記載のベクター。
【請求項１４】
前記部位特異的組み換え部位が、前記LTRのU3領域にある請求項１３に記載のベクター。
【請求項１５】
前記部位特異的組み換え部位が、loxP及びFRTからなる群から選択される請求項１３に記載のベクター。
【請求項１６】
前記ベクターが、少なくとも２種の異なるレトロウイルスからの配列を含む請求項９に記載のベクター。
【請求項１７】
前記少なくとも２種の異なるレトロウイルスが、レンチウイルスを含む請求項１６に記載のベクター。
【請求項１８】
前記ベクターLTRが、少なくとも２種の異なるレトロウイルスからの配列を含む請求項９に記載のベクター。
【請求項１９】
前記少なくとも２種の異なるレトロウイルスが、レンチウイルスを含む請求項１８に記載のベクター。
【請求項２０】
前記ベクターが、少なくとも２種の異なるレトロウイルスからの配列及びウイルス粒子内でベクターの交差パッキングを提供するcis配列をコードする少なくとも１種の配列を含む請求項９に記載のベクター。
【請求項２１】
前記cis配列が、RRE、該RREに隣接する領域からのEnv遺伝子断片及びcPPTからなる群から選択される請求項２０に記載のベクター。
【請求項２２】
請求項９に記載のベクターを含む組み換えレトロウイルス粒子。
【請求項２３】
遺伝子治療における使用のための請求項２２に記載の組み換えレトロウイルス粒子。
【請求項２４】
標的細胞を請求項２２に記載の組み換えレトロウイルス粒子に感染させて産生されるレトロウイルスプロウイルス。
【請求項２５】
請求項９に記載のレトロウイルスベクター及びこのレトロウイルスベクターをパッケージングにするために必要な１又は２以上のタンパク質をコードする少なくとも１以上の構築体を含む誘導レトロウイルスベクターパッケージング細胞株。
【請求項２６】
下記（ａ）及び（ｂ）から成るレトロウイルスベクターキット。
（ａ）機能性PPTを欠く組込み欠損レトロウイルスベクター導入カセット
（ｂ）このレトロウイルスベクターをパッケージングするために必要な１又は２以上のタンパク質をコードする少なくとも１個の構築体を含むパッケージング細胞株
【請求項２７】
パッケージング細胞株に、機能性PPTを欠く組込み欠損レトロウイルスベクター導入カセットをトランスフェクトする段階から成り、該パッケージング細胞株がパッケージングされるレトロウイルスベクターのためのタンパク質を提供する、組込み欠損ベクター粒子の製法。
【請求項２８】
動物ゲノムへのヌクレオチド配列の組込み無しに、動物細胞内で所定のヌクレオチド配列を発現させる方法であって、１又は２以上の細胞を請求項２２に記載の組込み欠損レトロウイルス粒子に感染させることから成る方法（ヒトの治療方法を除く。）。
【請求項２９】
（ａ）適合しうる宿主細胞に、所定のヌクレオチド配列及び１又は２以上の部位特異的組み換え配列の実施可能な組合せを含む請求項９に記載の組み換え欠損ベクターを形質導入する段階、及び
（ｂ）該適合する宿主細胞へ、該組み換え配列における部位特異的組込みを媒介できるヌクレアーゼ又はリコンビナーゼをコードする配列から成る核酸を遺伝子導入又は形質導入する段階
から成り、該（ｂ）の遺伝子導入又は形質導入する段階が、（ａ）とは別の段階又は（ａ）と同じ段階で行われてもよく、また
（ｃ）該所定のヌクレオチド配列が、該宿主細胞のゲノムに部位特異的に挿入される、
該所定のヌクレオチド配列を宿主細胞ゲノムに部位特異的に挿入する方法（ヒトの治療法を除く。）。
【請求項３０】
前記組み換え配列における部位特異的組込みを媒介できるリコンビナーゼが、Cre又はFLPである請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記（ｂ）の遺伝子導入又は形質導入する段階が、（ａ）と同じ段階で行われ、かつ前記ヌクレアーゼ又はリコンビナーゼをコードする配列が、前記組み換え欠損ベクターである請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
（ａ）宿主細胞に、所定のヌクレオチド配列及び１又は２以上の部位特異的組み換え配列の実施可能な組合せを含む請求項９に記載の組み換え欠損ベクターを形質導入する段階、及び
（ｂ）該宿主細胞へ、該宿主ゲノムへの組込みを媒介できるトランスポザーゼをコードする配列から成る核酸を遺伝子導入又は形質導入する段階から成り、該（ｂ）の遺伝子導入又は形質導入する段階が、（ａ）とは別の段階又は（ａ）と同じ段階で行われてもよく、また
（ｃ）該所定のヌクレオチド配列が、該宿主細胞のゲノムに挿入される、
該所定のヌクレオチド配列を宿主細胞ゲノムに非特異的に挿入する方法（ヒトの治療法を除く。）。
【請求項３３】
前記（ｂ）の遺伝子導入又は形質導入する段階が、（ａ）と同じ段階で行われ、かつ前記トランスポザーゼをコードする配列が、前記組み換え欠損ベクターである請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記トランスポゾン又はトランスポザーセがSleeping Beauty（眠り姫）である請求項３２に記載の方法。