【手続補正書】
【提出日】平成24年1月20日(2012.1.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）バチルス・リケニフォルミス細胞を提供するステップと、
（ii）脂質アシルトランスフェラーゼをコードする異種ヌクレオチド配列でバチルス・リケニフォルミス細胞を形質転換するステップと、
（iii）プロモーター配列の制御下で前記細胞において脂質アシルトランスフェラーゼを発現させるステップと
を含む、脂質アシルトランスフェラーゼの製造方法。
【請求項２】
プロモーター配列が、脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列と天然には結合しない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
脂質アシルトランスフェラーゼ酵素をコードするヌクレオチド配列が以下のヌクレオチド配列のいずれか１つである、請求項１又は２に記載の方法。
（ａ）配列番号４９で示されるヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号３６で示されるヌクレオチド配列；
（ｃ）配列番号３８で示されるヌクレオチド配列；
（ｄ）配列番号３９で示されるヌクレオチド配列；
（ｅ）配列番号４２で示されるヌクレオチド配列；
（ｆ）配列番号４４で示されるヌクレオチド配列；
（ｇ）配列番号４６で示されるヌクレオチド配列；
（ｈ）配列番号４８で示されるヌクレオチド配列；
（ｉ）配列番号５０で示されるヌクレオチド配列；
（ｊ）配列番号５１で示されるヌクレオチド配列；
（ｋ）配列番号５２で示されるヌクレオチド配列；
（ｌ）配列番号５３で示されるヌクレオチド配列；
（ｍ）配列番号５４で示されるヌクレオチド配列；
（ｎ）配列番号５５で示されるヌクレオチド配列；
（ｏ）配列番号５６で示されるヌクレオチド配列；
（ｐ）配列番号５７で示されるヌクレオチド配列；
（ｑ）配列番号５８で示されるヌクレオチド配列；
（ｒ）配列番号５９で示されるヌクレオチド配列；
（ｓ）配列番号６０で示されるヌクレオチド配列；
（ｔ）配列番号６１で示されるヌクレオチド配列；
（ｕ）配列番号６２で示されるヌクレオチド配列；
（ｖ）配列番号６３で示されるヌクレオチド配列；及び
（ｗ）配列番号３６、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２又は配列番号６３で示されるいずれか１つの配列と７０％以上の同一性を有するヌクレオチド配列；
【請求項４】
脂質アシルトランスフェラーゼ酵素をコードするヌクレオチド配列が、配列番号３６、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２又は配列番号６３で示されるいずれか１つの配列と７５％以上の同一性を有するヌクレオチド配列である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
脂質アシルトランスフェラーゼをコードする異種ヌクレオチド配列に、シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列が作動可能に連結されている、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
脂質アシルトランスフェラーゼを単離／回収する追加のステップを含む、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
プロモーター配列が宿主細胞と同種である、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
プロモーター配列が、α−アミラーゼプロモーター配列、プロテアーゼプロモーター配列、サブチリシンプロモーター配列、グルタミン酸特異的プロテアーゼプロモーター配列及びレバンスクラーゼプロモーター配列からなる群から選択される、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
プロモーター配列が、α−アミラーゼプロモーター配列である、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列が、ＧＤＳｘモチーフ及び／又はＧＡＮＤＹモチーフを含む脂質アシルトランスフェラーゼをコードする、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列が、アシルトランスフェラーゼ活性を有し、且つアミノ酸配列モチーフＧＤＳＸ（Ｘは、アミノ酸残基Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｆ、Ｙ、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｍ及びＳの１又は複数である）を含む酵素である脂質アシルトランスフェラーゼをコードする、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列が、１又は複数の以下の属、即ち、アエロモナス、ストレプトマイセス、サッカロミセス、ラクトコッカス、マイコバクテリウム、ストレプトコッカス、ラクトバチルス、デスルフィトバクテリウム、バチルス、カンピロバクター、ビブリオナシエ、キシレラ、スルホロブス、アスペルギルス、シゾサッカロミセス、リステリア、ナイセリア、メソリゾビウム、ラルストニア、ザントモナス及びカンジダに属する生物から得ることができる脂質アシルトランスフェラーゼをコードする、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列が、アエロモナス属に属する生物から得ることができる脂質アシルトランスフェラーゼをコードする、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列が、配列番号３５で示されるアエロモナス・ヒドロフィラ脂質アシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列のＮ−８０に対応する位置にアスパラギン酸残基を含む脂質アシルトランスフェラーゼをコードする、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列が、配列番号１６で示されるアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列と少なくとも７５％の相同性を有するアミノ酸配列を含む脂質アシルトランスフェラーゼをコードする、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列が、配列番号１６で示されるアミノ酸配列を含む脂質アシルトランスフェラーゼをコードする、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
異種の脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列を含むバチルス・リケニフォルミス宿主細胞。
【請求項１８】
脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列が、ＧＤＳｘモチーフ及び／又はＧＡＮＤＹモチーフを含む脂質アシルトランスフェラーゼをコードする、請求項１７に記載の宿主細胞。
【請求項１９】
脂質アシルトランスフェラーゼ酵素をコードするヌクレオチド配列が以下のヌクレオチド配列のいずれか１つである、請求項１７又は１８に記載の宿主細胞。
（ａ）配列番号４９で示されるヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号３６で示されるヌクレオチド配列；
（ｃ）配列番号３８で示されるヌクレオチド配列；
（ｄ）配列番号３９で示されるヌクレオチド配列；
（ｅ）配列番号４２で示されるヌクレオチド配列；
（ｆ）配列番号４４で示されるヌクレオチド配列；
（ｇ）配列番号４６で示されるヌクレオチド配列；
（ｈ）配列番号４８で示されるヌクレオチド配列；
（ｉ）配列番号５０で示されるヌクレオチド配列；
（ｊ）配列番号５１で示されるヌクレオチド配列；
（ｋ）配列番号５２で示されるヌクレオチド配列；
（ｌ）配列番号５３で示されるヌクレオチド配列；
（ｍ）配列番号５４で示されるヌクレオチド配列；
（ｎ）配列番号５５で示されるヌクレオチド配列；
（ｏ）配列番号５６で示されるヌクレオチド配列；
（ｐ）配列番号５７で示されるヌクレオチド配列；
（ｑ）配列番号５８で示されるヌクレオチド配列；
（ｒ）配列番号５９で示されるヌクレオチド配列；
（ｓ）配列番号６０で示されるヌクレオチド配列；
（ｔ）配列番号６１で示されるヌクレオチド配列；
（ｕ）配列番号６２で示されるヌクレオチド配列；
（ｖ）配列番号６３で示されるヌクレオチド配列；及び
（ｗ）配列番号３６、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２又は配列番号６３で示されるいずれか１つの配列と７０％以上の同一性を有するヌクレオチド配列；
【請求項２０】
脂質アシルトランスフェラーゼ酵素をコードするヌクレオチド配列が、配列番号３６、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２又は配列番号６３で示されるいずれか１つの配列と７５％以上の同一性を有するヌクレオチド配列である、請求項１７又は１８に記載の宿主細胞。
【請求項２１】
脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列が、アシルトランスフェラーゼ活性を有し、且つアミノ酸配列モチーフＧＤＳＸ（Ｘは、アミノ酸残基Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｆ、Ｙ、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｍ及びＳの１又は複数である）を含む酵素である脂質アシルトランスフェラーゼをコードする、請求項１７〜２０のいずれかに記載の宿主細胞。
【請求項２２】
脂質アシルトランスフェラーゼが、１又は複数の以下の属、即ち、アエロモナス、ストレプトマイセス、サッカロミセス、ラクトコッカス、マイコバクテリウム、ストレプトコッカス、ラクトバチルス、デスルフィトバクテリウム、バチルス、カンピロバクター、ビブリオナシエ、キシレラ、スルホロブス、アスペルギルス、シゾサッカロミセス、リステリア、ナイセリア、メソリゾビウム、ラルストニア、ザントモナス及びカンジダに属する生物から得ることができる、請求項１７〜２１のいずれかに記載の宿主細胞。
【請求項２３】
脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列が、アエロモナス属に属する生物から得ることができる脂質アシルトランスフェラーゼをコードする、請求項１７〜２２のいずれかに記載の宿主細胞。
【請求項２４】
脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列が、配列番号３５で示されるアエロモナス・ヒドロフィラ脂質アシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列のＮ−８０に対応する位置にアスパラギン酸残基を含む脂質アシルトランスフェラーゼをコードする、請求項１７〜２３のいずれかに記載の宿主細胞。
【請求項２５】
脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列が、配列番号１６で示されるアミノ酸配列、又は該アミノ酸配列と７５％以上の相同性を有するアミノ酸配列を含む脂質アシルトランスフェラーゼをコードする、請求項１７〜２４のいずれかに記載の宿主細胞。
【請求項２６】
脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列が、配列番号１６で示されるアミノ酸配列を含む脂質アシルトランスフェラーゼをコードする、請求項１７〜２５のいずれかに記載の宿主細胞。
【請求項２７】
異種の脂質アシルトランスフェラーゼの製造におけるバチルス・リケニフォルミス宿主細胞の使用。
【請求項２８】
バチルス・サブチリス宿主細胞での発現と比べて発現が増加する、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
バチルス・リケニフォルミスと同種のプロモーター配列に作動可能に連結された脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクター。
【請求項３０】
脂質アシルトランスフェラーゼ酵素をコードするヌクレオチド配列が以下のヌクレオチド配列のいずれか１つである、請求項２９に記載の発現ベクター。
（ａ）配列番号４９で示されるヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号３６で示されるヌクレオチド配列；
（ｃ）配列番号３８で示されるヌクレオチド配列；
（ｄ）配列番号３９で示されるヌクレオチド配列；
（ｅ）配列番号４２で示されるヌクレオチド配列；
（ｆ）配列番号４４で示されるヌクレオチド配列；
（ｇ）配列番号４６で示されるヌクレオチド配列；
（ｈ）配列番号４８で示されるヌクレオチド配列；
（ｉ）配列番号５０で示されるヌクレオチド配列；
（ｊ）配列番号５１で示されるヌクレオチド配列；
（ｋ）配列番号５２で示されるヌクレオチド配列；
（ｌ）配列番号５３で示されるヌクレオチド配列；
（ｍ）配列番号５４で示されるヌクレオチド配列；
（ｎ）配列番号５５で示されるヌクレオチド配列；
（ｏ）配列番号５６で示されるヌクレオチド配列；
（ｐ）配列番号５７で示されるヌクレオチド配列；
（ｑ）配列番号５８で示されるヌクレオチド配列；
（ｒ）配列番号５９で示されるヌクレオチド配列；
（ｓ）配列番号６０で示されるヌクレオチド配列；
（ｔ）配列番号６１で示されるヌクレオチド配列；
（ｕ）配列番号６２で示されるヌクレオチド配列；
（ｖ）配列番号６３で示されるヌクレオチド配列；及び
（ｗ）配列番号３６、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２又は配列番号６３で示されるいずれか１つの配列と７０％以上の同一性を有するヌクレオチド配列；
【請求項３１】
プロモーターが、脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列と天然には結合しない、請求項２９又は３０に記載の発現ベクター。
【請求項３２】
シグナルペプチドをコードするヌクレオチド配列が、脂質アシルトランスフェラーゼをコードする異種ヌクレオチド配列に作動可能に連結されている、請求項２９〜３１のいずれかに記載の発現ベクター。
【請求項３３】
プロモーター配列が、α−アミラーゼプロモーター配列、プロテアーゼプロモーター配列、サブチリシンプロモーター配列、グルタミン酸特異的プロテアーゼプロモーター配列及びレバンスクラーゼプロモーター配列からなる群から選択される、請求項２９〜３２のいずれかに記載の発現ベクター。
【請求項３４】
プロモーター配列がα−アミラーゼプロモーター配列である、請求項２９〜３３のいずれかに記載の発現ベクター。
【請求項３５】
（ｉ）バチルス・サブチリス以外のバチルス細胞を提供するステップと、
（ii）脂質アシルトランスフェラーゼをコードする異種ヌクレオチド配列で、バチルス・サブチリス以外のバチルス細胞を形質転換するステップと、
（iii）プロモーター配列の制御下で前記細胞において脂質アシルトランスフェラーゼを発現させるステップと
を含む、脂質アシルトランスフェラーゼの製造方法。
【請求項３６】
請求項１〜１６、及び３５のいずれかに記載の方法により得られる脂質アシルトランスフェラーゼ。
【請求項３７】
異種の脂質アシルトランスフェラーゼをコードするヌクレオチド配列を含む、バチルス・サブチリス以外の細胞であるバチルス宿主細胞。
【請求項３８】
異種の脂質アシルトランスフェラーゼの製造における、バチルス・サブチリス以外のバチルス宿主細胞の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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