【手続補正書】
【提出日】平成25年12月9日(2013.12.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプル中のビタミンＤ２またはビタミンＤ３の量をタンデム質量分析法によって決定するための方法であって、
（Ｉ）
（ｉ）サンプル由来のビタミンＤ２を３９７．２±０．５又は３７９．２±０．５の質量対電荷比（ｍ／ｚ）を備えるイオン（複数）からなる群から選択される質量分析法によって検出可能な１つ又はそれ以上の前駆体イオンを生成するために適合する条件下でイオン化源に曝露させる工程、
（ｉｉ）少なくとも１つの前記前駆体イオンを、質量分析法によって検出可能な１つ又はそれ以上のフラグメントイオンを生成するためにフラグメント化する工程、
（ｉｉｉ）工程（ｉ）及び（ｉｉ）において生成された１つ又はそれ以上の前記イオンの量を質量分析法によって決定する工程、及び
（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）において決定されたビタミンＤ２イオンの存在を前記サンプル中のビタミンＤ２の存在と関連付ける工程
を含み、
ここで、前記フラグメント化前駆体イオンが３９７．２±０．５のｍ／ｚを備えるイオンを含む場合は、前記フラグメントイオンが１５９．０±０．５、１４６．９±０．５、１３３．１±０．５及び１２１．０±０．５のｍ／ｚを備えるイオン（複数）からなる群から選択される１つ又はそれ以上のイオンを含み、及び前記フラグメント化前駆体イオンが３７９．２±０．５のｍ／ｚを備えるイオンを含む場合は、前記フラグメントイオンが２８３．２±０．５、１８７．３±０．５、１７５．２±０．５及び１５９．０±０．５のｍ／ｚを備えるイオン（複数）からなる群から選択される１つ又はそれ以上のイオンを含む、または
（ＩＩ）
（ｉ）サンプル由来のビタミンＤ３を３８５．２±０．５又は３６７．２±０．５の質量対電荷比（ｍ／ｚ）を備えるイオン（複数）からなる群から選択される質量分析法によって検出可能な１つ又はそれ以上の前駆体イオンを生成するために適合する条件下でイオン化源に曝露させる工程、
（ｉｉ）少なくとも１つの前記前駆体イオンを、質量分析法によって検出可能な１つ又はそれ以上のフラグメントイオンを生成するためにフラグメント化する工程、
（ｉｉｉ）工程（ｉ）及び（ｉｉ）において生成された１つ又はそれ以上の前記イオンの量を質量分析法によって決定する工程、及び
（ｉｖ）工程（ｉｉｉ）において決定されたビタミンＤ３イオンの存在を前記サンプル中のビタミンＤ３の存在と関連付ける工程
を含み、
ここで、前記フラグメント化前駆体イオンが３８５．２±０．５のｍ／ｚを備えるイオンを含む場合は、前記フラグメントイオンが１５９．０±０．５、１４７．０±０．５、１３３．１±０．５及び１０７．１±０．５のｍ／ｚを備えるイオン（複数）からなる群から選択される１つ又はそれ以上のイオンを含み、及び前記フラグメント化前駆体イオンが３６７．２±０．５のｍ／ｚを備えるイオンを含む場合は、前記フラグメントイオンが１７２．２±０．５、１４５．０±０．５、及び１１９．１±０．５のｍ／ｚを備えるイオン（複数）からなる群から選択される１つ又はそれ以上のイオンを含む
方法。
【請求項２】
前記サンプルは、イオン化の前に抽出カラムにかけられ、ここで、
前記抽出カラムは、固相抽出（ＳＰＥ）カラムであるか、
前記抽出カラムは、乱流液体クロマトグラフィー（ＴＦＬＣ）カラムであるか、および／または
前記サンプルは、イオン化の前にさらに分析カラムにかけられてもよく、ここで、
前記分析カラムは、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）カラムであるか、または
前記抽出及び分析カラム並びに工程（ｉ）の前記イオン化源は、オンライン方式で接続されてもよい、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記イオン化源は、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）源であり、および／または前記タンデム質量分析法は、多重反応モニタリング、前駆体イオンスキャニング又は生成物イオンスキャニングとして実施される、請求項１から２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
前記サンプル中でビタミンＤ３を検出する工程をさらに含み、ここで前記ビタミンＤ２及びビタミンＤ３は同時にイオン化されてもよい、請求項１の（Ｉ）に記載の方法。
【請求項５】
前記サンプル中でビタミンＤ２を検出する工程をさらに含み、ここで前記ビタミンＤ２及びビタミンＤ３は同時にイオン化されてもよい、請求項１の（ＩＩ）に記載の方法。
【請求項６】
前記サンプルが、生物学的サンプルを含み、ここで
前記生物学的サンプルはヒト由来であり、前記サンプル中で決定されたビタミンＤ２の量は、前記ヒトから採取されたときに前記サンプル中に存在した量であってもよく、および／または前記サンプルは、血清又は血漿を含んでもよい、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
サンプル中のビタミンＤ２及びビタミンＤ３の量をタンデム質量分析法によって決定するための方法であって、
（ｉ）前記サンプル中のビタミンＤ２及びビタミンＤ３を３９７．２±０．５及び３７９．２±０．５の質量対電荷比（ｍ／ｚ）を備えるイオンの群から選択される質量分析法によって検出可能な１つ又はそれ以上のビタミンＤ２前駆体イオン、並びに３８５．２±０．５及び３６７．２±０．５の質量対電荷比（ｍ／ｚ）を備えるイオンの群から選択される質量分析法によって検出可能な１つ又はそれ以上のビタミンＤ３前駆体イオンを生成するために適合する条件下でイオン化源に曝露させる工程、
（ｉｉ）少なくとも１つの前記ビタミンＤ２前駆体イオンを、質量分析法によって検出可能な１つ又はそれ以上のビタミンＤ２フラグメントイオンを生成するためにフラグメント化する工程であって、
ここで、前記フラグメント化ビタミンＤ２前駆体イオンが３９７．２±０．５のｍ／ｚを備えるイオンを含む場合は、前記ビタミンＤ２フラグメントイオンが１５９．０±０．５、１４６．９±０．５、１３３．１±０．５及び１２１．０±０．５のｍ／ｚを備えるイオン（複数）からなる群から選択される１つ又はそれ以上のイオンを含み、及び前記フラグメント化ビタミンＤ２前駆体イオンが３７９．２±０．５のｍ／ｚを備えるイオンを含む場合は、前記ビタミンＤ２フラグメントイオンが２８３．２±０．５、１８７．３±０．５、１７５．２±０．５及び１５９．０±０．５のｍ／ｚを備えるイオン（複数）からなる群から選択される１つ又はそれ以上のイオンを含む工程、
（ｉｉｉ）少なくとも１つの前記ビタミンＤ３前駆体イオンを、質量分析法によって検出可能な１つ又はそれ以上のビタミンＤ３フラグメントイオンを生成するためにフラグメント化する工程であって、
ここで、前記フラグメント化ビタミンＤ３前駆体イオンが３８５．２±０．５のｍ／ｚを備えるイオンを含む場合は、前記ビタミンＤ３フラグメントイオンは、１５９．０±０．５、１４７．０±０．５、１３３．１±０．５及び１０７．１±０．５のｍ／ｚを備えるイオン（複数）からなる群から選択される１つ又はそれ以上のイオンを含み、及び前記フラグメント化ビタミンＤ３前駆体イオンが３６７．２±０．５のｍ／ｚを備えるイオンを含む場合は、前記ビタミンＤ３フラグメントイオンは、１７２．２±０．５、１４５．０±０．５及び１１９．１±０．５のｍ／ｚを備えるイオン（複数）からなる群から選択される１つ又はそれ以上のイオンを含む工程、
（ｉｖ）工程（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）において生成された１つ又はそれ以上の前記ビタミンＤ２及びビタミンＤ３イオンの量を質量分析法によって決定する工程、及び
（ｖ）工程（ｖｉ）で決定されたビタミンＤ２及びビタミンＤ３イオンの量を前記サンプル中のビタミンＤ２及びビタミンＤ３の量と関連付ける工程
を含む方法。
【請求項８】
前記フラグメント化ビタミンＤ２前駆体イオンは、３９７．２±０．５のｍ／ｚを備えるイオンである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記フラグメント化ビタミンＤ２前駆体イオンは、３７９．２±０．５のｍ／ｚを備えるイオンである、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記フラグメント化ビタミンＤ３前駆体イオンは、３８５．２±０．５のｍ／ｚを備えるイオンである、請求項７から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記フラグメント化ビタミンＤ３前駆体イオンは、３６７．２±０．５のｍ／ｚを備えるイオンである、請求項７から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記サンプルは、イオン化の前に抽出カラムにかけられ、ここで
前記抽出カラムは、固相抽出（ＳＰＥ）カラムであるか、または
前記抽出カラムは、乱流液体クロマトグラフィー（ＴＦＬＣ）カラムであるか、および／または
前記サンプルは、イオン化の前にさらに分析カラムにかけられてもよく、ここで
前記分析カラムは、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）カラムであるか、または
前記抽出及び分析カラム並びに工程（ｉ）の前記イオン化源は、オンライン方式で接続されてもよい、請求項７から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記イオン化源は、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）源であり、および／または
前記タンデム質量分析法は、多重反応モニタリング、前駆体イオンスキャニング又は生成物イオンスキャニングとして実施される、請求項７から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記サンプルは、生物学的サンプルを含み、
前記生物学的サンプルはヒト由来であり、前記サンプル中で決定されたビタミンＤ２及びビタミンＤ３の量は前記ヒトから採取された場合に前記サンプル中に存在する量であってもよく、および／または
前記サンプルは、血清又は血漿を含んでもよい、請求項７から１３のいずれか一項に記載の方法。