【手続補正書】
【提出日】平成24年3月29日(2012.3.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
混合された細胞の集団から比較的大きな細胞を分離する方法であって、
前記混合された細胞の集団の懸濁液を本体と、カバーと、分離素子とを有する装置の入口領域に導入する工程であって、
前記本体およびカバーは前記分離素子を含む空所を画定し、当該空所は入口領域と出口領域とを有し、
前記分離素子は第１の段と第２の段とを有し、かつ流体によって前記入口領域と前記出口領域を接続する階段状通路を画定し、
前記階段状通路は、前記第１の段と前記本体および前記カバーのうちの少なくとも１つとによって境界が定められた第１の経路と、さらに前記第２の段と前記本体部および前記カバーのうちの少なくとも１つとによって境界が定められた第２の経路とを含み、
前記第１の経路は、狭寸法を有し、前記第２の経路と前記入口領域を流体接続し、
前記第２の経路は、前記第１の経路の狭寸法よりさらに狭い狭寸法を有し、前記第２の経路の狭寸法は前記集団における比較的大きな細胞が前記第２の経路を横切ることができないように選択されるものである、前記導入する工程と、
前記階段状通路において前記入口領域から前記出口領域に向かう流体の流れを誘導する工程とを有し、
これにより、前記集団における比較的大きな細胞は前記第２の経路に実質的に入ることができず、及び、前記集団における他の細胞は前記第２の経路に入ることができ、且つ横切ることができるものである、
ことを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法において、この方法は、さらに、
前記階段状通路において前記入口領域から前記出口領域に向かう流体の流れを誘導した後、前記比較的大きな細胞を前記装置から収集する工程を有するものである。  
【請求項３】
請求項２記載の方法において、前記比較的大きな細胞は、前記階段状通路において前記出口領域から前記入口領域の方向へと流体流動を誘導することによって回収されるものである。
【請求項４】
請求項２記載の方法において、前記比較的大きな細胞は、前記装置を分解してそこから前記比較的大きな細胞を回収することによって収集されるものである。
【請求項５】
請求項１記載の方法において、前記比較的大きな細胞は、少なくとも１つの胎児細胞、胚性幹細胞、成体幹細胞、及び腫瘍細胞を含むものである。
【請求項６】
請求項１記載の方法において、この方法は、さらに、
前記第１の経路内で前記分離された比較的大きな細胞を溶解し溶解生成物を生成する工程と、前記溶解生成物を含む流体を収集する工程とを有するものである。
【請求項７】
請求項１記載の方法において、前記分離素子は、前記本体および前記カバーのうちの少なくとも１つと一体になっているものである。
【請求項８】
請求項１記載の方法において、この方法は、さらに、
前記第１の経路及び前記第２の経路の少なくとも１つの狭寸法を保持する支持体を有し、この支持体は前記第１または第２の経路の少なくとも１つに位置し、それらの狭寸法の方向に延出しているものである。
【請求項９】
請求項１記載の方法において、前記分離素子は、複数の階段状通路を画定し、かつこのうちのそれぞれが、ｉ）前記入口領域と前記出口領域を流体接続させ、ｉｉ）前記第１の段によって境界が定められる第１の経路と、第２の段によって境界が定められる第２の経路とを含むものである。
【請求項１０】
請求項１記載の方法において、前記第１および第２の経路の幾何学的寸法は、前記階段等通路内を流れている流体の直線流速度（ｌｉｎｅａｒ  ｆｌｏｗ  ｖｅｌｏｃｉｔｉｅｓ）が、第１および第２の経路において略等しくなるように選択されるものである。
【請求項１１】
請求項１記載の方法において、前記第１の経路の幅（大半の流体の流れに対して垂直方向）は、前記第１の経路の狭寸法の少なくとも１０００倍である。
【請求項１２】
請求項１記載の方法において、前記懸濁液は血液である。
【請求項１３】
請求項１２記載の方法において、前記血液は、細胞が前記装置内へ導入される前の８時間以内に提供者から入手されたものである。
【請求項１４】
大きさにより細胞を分離する装置であって、この装置は本体と、カバーと、分離素子とを有し、
前記本体およびカバーは、前記分離素子を含む空所を画定し、当該空所は入口領域と出口領域とを有し、
前記分離素子は、第１の段と第２の段とを有し、かつ前記入口領域と出口領域を流体接続する階段状通路を画定し、
前記階段状通路は、前記第１の段と、前記本体および前記カバーのうちの少なくとも１つとによって境界が定められた第１の経路と、さらに前記第２の段と、前記本体部および前記カバーのうちの少なくとも１つとによって境界が定められた第２の経路とを含み、
前記第１の経路は、狭寸法を有し、前記第２の経路と前記入口領域を流体接続し、
前記第２の経路は、前記第１の経路の狭寸法よりさらに狭い狭寸法を有するものであり、
これによって、前記入口領域から前記出口領域へ流れる細胞は、前記第１の経路および前記第２の経路のいずれかまたはそれらの両方を通過するこれら細胞の不能性により分離されるものである
ことを特徴とする装置。
【請求項１５】
請求項１４記載の装置において、前記第１および第２の経路の幾何学的寸法は、前記第１の経路の流動領域と前記第２の経路の流動領域との割合が、０．５〜２の間になるよう選択されるものである。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
機械的デバイスであって、生体細胞やその他の小粒子を操作することを目的とし、構成要素が何十マイクロメートル（つまり生体細胞の大きさ）からナノメートル（一部の生体高分子の大きさ）である装置が記載されている。例えば、米国特許番号第５，９２８，８８０号、米国特許番号第５，８６６，３４５号、米国特許番号第５，７４４，３６６号、米国特許番号第５，４８６，３３５号、及び米国特許番号第５，４２７，９４６号は細胞や生体分子を取り扱うデバイスを記載している。ＰＣＴ国際公開公報第ＷＯ０３／００８９３１号は、粒子及び細胞の分離、同定、選別、及び操作に関する微細構造を記載している。
空間中の血液の経路は一次元、マイクロメートル単位で定義され、これは困難を引き起こす。細胞の完全性（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ）を乱す傾向をもつ潮汐力によって前記経路の空間内にて細胞が"詰め込まれる（ｐａｃｋｉｎｇ）"ことにより生じる、詰まりの可能性を考慮しなければならないからである。これは、細胞の完全性が低下した場合、血液自体に凝固する傾向（連鎖的なものである）があり、それによって複雑化する。更に、大きな粒子（細胞、凝集された細胞、細胞外物質、及び生体サンプル内の特徴付けし難い「残骸」（ｄｅｂｒｉｓ）が従来のデバイスの液体経路を詰まらせ、効率性と作業性を阻害する。
本明細書に開示される発明の要旨は、生体細胞、細胞小器官、及び他の粒子を、粒子若しくは細胞の混在集団から分離し操作する目的で使用することができるものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
【特許文献１】    米国特許第７，９９３，９０８号
【特許文献２】    米国特許第６，００８，０４０号
【特許文献３】    米国特許第５，８６６，３４５号
【特許文献４】    米国特許第５，０２３，０５４号
【特許文献５】    米国特許第６，７８３，９２８号
【特許文献６】    米国特許第５，０８９，３８４号
【特許文献７】    米国特許第６，００４，８２１号
【特許文献８】    米国特許第５，７２８，５８１号
【特許文献９】    米国特許第７，２４４，７０７号
【特許文献１０】    米国特許第５，９２８，８８０号
【特許文献１１】    米国特許第５，７４４，３６６号
【特許文献１２】    米国特許第５，４８６，３３５号
【特許文献１３】    米国特許第５，４２７，９４６号
【特許文献１４】    米国特許第６，６３０，３４９号
【特許文献１５】    米国特許出願公開第２００７／００７２２９０号
【特許文献１６】    米国特許出願公開第２００７／０１７２９０３号
【非特許文献】
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
【非特許文献１】    Ｗｅｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．１２：６９−７８
【非特許文献２】    Ｒａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｌａｃｅｎｔａ  ３０  Ｓｕｐｐｌ．Ａ：Ｓ９６−１００．Ｅｐｕｂ  ２００８  Ｄｅｃ  １７
【非特許文献３】    Ｒｅｄ−Ｈｏｒｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｊ．  Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１４：７４４−７５４
【非特許文献４】    Ｇｅｎｂａｃｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７７：１６６９−１６７２
【非特許文献５】    Ｇｏｂｂｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｐｌａｃｅｎｔａ  ３０：８６９−８７５
【非特許文献６】    Ｗｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２７９：４２０−４３２
【非特許文献７】    Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．７０：６０６−６１８
【非特許文献８】    Ｌｏｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：６００１−６００９
【非特許文献９】    Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．５７：６０５−６１２
【非特許文献１０】    Ｇｕｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ  ５３：３３７−３３９
【非特許文献１１】    Ｓｃｈｕｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｐｌａｃｅｎｔａ  ２２：７０２−７１５
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】