【手続補正書】
【提出日】平成24年10月18日(2012.10.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂肪組織から細胞の集団を得る方法であって、該方法は、少なくとも約２００Ｕ／ｍｌ溶液かつ約３１９Ｕ／ｍｌ溶液以下の濃度で酵素を含む溶液中で、該脂肪組織を約３０分と６０分の間の時間インキュベートする工程を包含し、そのことにより該脂肪組織から細胞の集団を得る方法。
【請求項２】
前記酵素の濃度が約２００Ｕ／ｍｌ溶液と約３００Ｕ／ｍｌ溶液の間である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記酵素の濃度が約２２５Ｕ／ｍｌ溶液と約２７５Ｕ／ｍｌ溶液の間である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記酵素の濃度が約２４５Ｕ／ｍｌ溶液と２５５Ｕ／ｍｌ溶液の間である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記時間が約４５分と約５５分の間である、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記酵素がコラゲナーゼ、トリプシン、ディスパーゼ、もしくは少なくとも前述のうちの１つを含む酵素の混合物である、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
脂肪組織の容量と酵素溶液の容量の比が約１：１である、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
脂肪組織１ｍｌ当たり少なくとも６．０×１０５個細胞が得られる、前記請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
脂肪組織１ｍｌ当たり少なくとも８．０×１０５個細胞が得られる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
脂肪組織から標的細胞の濃縮された集団を得る方法であって、以下：
ａ．請求項１から９のいずれか１項に記載の方法に従って脂肪組織から細胞の集団を得る工程；および
ｂ．一次抗体を含む第二の溶液内で該細胞の集団をインキュベートする工程であって、該一次抗体は、該細胞の集団を、標的細胞を含むサブ集団と標的細胞を実質的に含まないサブ集団とに分けるものであり、そのことにより、標的細胞の濃縮された集団を得る工程を包含する方法。
【請求項１１】
前記一次抗体が、前記標的細胞によって発現されない細胞マーカーに対して特異的な抗体である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記一次抗体がＣＤ４５、グリコホリン‐ＡおよびＣＤ３１からなる群から選択される細胞マーカーに対して特異的な抗体である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記一次抗体が、前記標的細胞によって発現される細胞マーカーに対して特異的な抗体である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞マーカーがＣＤ３４である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記標的細胞がＣＤ３４陽性細胞である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞の集団をビーズとインキュベートする工程を包含し、そのことによりビーズおよび前記一次抗体を含む複合体を形成する、請求項１０から１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ビーズが前記一次抗体に結合するタンパク質を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記タンパク質が：（ｉ）前記一次抗体に特異的に結合する二次抗体、もしくはその抗原結合フラグメント、（ｉｉ）プロテインＡ、（ｉｉｉ）プロテインＧ、および（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ビーズが、１：１と５：１の間のビーズと標的細胞の比で存在する、請求項１６から１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ビーズと標的細胞の比が約４：１である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記第二の溶液から前記複合体を取り出す工程を包含する、請求項１６から２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ビーズが常磁性ビーズであり、前記複合体が前記溶液から磁石で取り出される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記複合体を放出ペプチドとともにインキュベートする工程を包含する、請求項１３から２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記放出ペプチドが、ＣＤ３４のエピトープもしくは前記一次抗体のエピトープであるエピトープを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記放出ペプチドが、可溶性のＣＤ３４もしくはＰＲ３４放出ペプチドである、請求項２３もしくは２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記複合体を注射器で粉砕する工程を包含する、請求項２３から２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
得られた前記集団が、１日より短い間、培養もしくはプレートされる、請求項１から２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
得られた前記集団を拡張する、あらゆる工程が存在しない、請求項１から２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
請求項１０から２８のいずれか１項に記載の方法にしたがって、脂肪組織から得られた標的細胞の濃縮された集団。
【請求項３０】
前記濃縮された集団における標的細胞の割合が、（ａ）の前記細胞の集団における標的細胞の割合の約１．５倍から約５倍である、請求項２９に記載の濃縮された集団。
【請求項３１】
前記標的細胞がＣＤ３４陽性細胞である、請求項２９もしくは３０に記載の濃縮された集団。
【請求項３２】
患者への投与のための細胞を含む薬学的組成物を調製する方法であって、該方法は、請求項２９から３１のいずれか１項に記載の標的細胞の濃縮された集団を薬学的に受容可能なキャリアと調合する工程を包含する方法。
【請求項３３】
前記細胞が患者にとって自己由来である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記細胞が、１日以下の間、培養もしくはプレートされた、請求項３２もしくは３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記薬学的組成物の前記細胞の少なくとも５０％がＣＤ３４陽性細胞である、請求項３２から３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
請求項３２から３５のいずれか１項に記載の方法にしたがって調製された薬学的組成物。
【請求項３７】
患者における疾患もしくは医学的状態を処置するための組成物であって、該組成物は、該疾患もしくは医学的状態を処置するのに効果的な量で、請求項３６に記載の薬学的組成物を含む組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
その脂肪組織から得られた細胞集団（例えば、標的細胞の濃縮された細胞集団）を含む薬学的組成物を調製する関連した方法、およびこれらの方法にしたがって調製された薬学的組成物、および患者における疾患もしくは医学的状態を処置する方法においてその薬学的組成物を用いる方法が、本明細書中に提供される。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
脂肪組織から細胞の集団を得る方法であって、該方法は、少なくとも約２００Ｕ／ｍｌ溶液かつ約３１９Ｕ／ｍｌ溶液以下の濃度で酵素を含む溶液中で、該脂肪組織を約３０分と６０分の間の時間インキュベートする工程を包含し、そのことにより該脂肪組織から細胞の集団を得る方法。
（項目２）
上記酵素の濃度が約２００Ｕ／ｍｌ溶液と約３００Ｕ／ｍｌ溶液の間である、項目１に記載の方法。
（項目３）
上記酵素の濃度が約２２５Ｕ／ｍｌ溶液と約２７５Ｕ／ｍｌ溶液の間である、項目２に記載の方法。
（項目４）
上記酵素の濃度が約２４５Ｕ／ｍｌ溶液と２５５Ｕ／ｍｌ溶液の間である、項目３に記載の方法。
（項目５）
上記時間が約４５分と約５５分の間である、項目１から４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
上記酵素がコラゲナーゼ、トリプシン、ディスパーゼ、もしくは少なくとも前述のうちの１つを含む酵素の混合物である、上記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
脂肪組織の容量と酵素溶液の容量の比が約１：１である、上記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
脂肪組織１ｍｌ当たり少なくとも６．０×１０５個細胞が得られる、上記項目のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
脂肪組織１ｍｌ当たり少なくとも８．０×１０５個細胞が得られる、項目８に記載の方法。
（項目１０）
脂肪組織から標的細胞の濃縮された集団を得る方法であって、以下：
ａ．項目１から９のいずれか１項に記載の方法に従って脂肪組織から細胞の集団を得る工程；および
ｂ．一次抗体を含む第二の溶液内で該細胞の集団をインキュベートする工程であって、該一次抗体は、該細胞の集団を、標的細胞を含むサブ集団と標的細胞を実質的に含まないサブ集団とに分けるものであり、そのことにより、標的細胞の濃縮された集団を得る工程を包含する方法。
（項目１１）
上記一次抗体が、上記標的細胞によって発現されない細胞マーカーに対して特異的な抗体である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
上記一次抗体がＣＤ４５、グリコホリン‐ＡおよびＣＤ３１からなる群から選択される細胞マーカーに対して特異的な抗体である、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
上記一次抗体が、上記標的細胞によって発現される細胞マーカーに対して特異的な抗体である、項目１０に記載の方法。
（項目１４）
上記細胞マーカーがＣＤ３４である、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
上記標的細胞がＣＤ３４陽性細胞である、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
上記細胞の集団をビーズとインキュベートする工程を包含し、そのことによりビーズおよび上記一次抗体を含む複合体を形成する、項目１０から１５に記載の方法。
（項目１７）
上記ビーズが上記一次抗体に結合するタンパク質を含む、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
上記タンパク質が：（ｉ）上記一次抗体に特異的に結合する二次抗体、もしくはその抗原結合フラグメント、（ｉｉ）プロテインＡ、（ｉｉｉ）プロテインＧ、および（ｉｖ）これらの組み合わせからなる群から選択される、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
上記ビーズが、１：１と５：１の間のビーズと標的細胞の比で存在する、項目１６から１８のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０）
上記ビーズと標的細胞の比が約４：１である、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
上記第二の溶液から上記複合体を取り出す工程を包含する、項目１６から２０のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
上記ビーズが常磁性ビーズであり、上記複合体が上記溶液から磁石で取り出される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
上記複合体を放出ペプチドとともにインキュベートする工程を包含する、項目１３から２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
上記放出ペプチドが、ＣＤ３４のエピトープもしくは上記一次抗体のエピトープであるエピトープを含む、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
上記放出ペプチドが、可溶性のＣＤ３４もしくはＰＲ３４放出ペプチドである、項目２３もしくは２４に記載の方法。
（項目２６）
上記複合体を注射器で粉砕する工程を包含する、項目２３から２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
得られた上記集団が、１日より短い間、培養もしくはプレートされる、項目１から２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
得られた上記集団を拡張する、あらゆる工程が存在しない、項目１から２６のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
項目１０から２８のいずれか１項に記載の方法にしたがって、脂肪組織から得られた標的細胞の濃縮された集団。
（項目３０）
上記濃縮された集団における標的細胞の割合が、（ａ）の上記細胞の集団における標的細胞の割合の約１．５倍から約５倍である、項目２９に記載の濃縮された集団。
（項目３１）
上記標的細胞がＣＤ３４陽性細胞である、項目２９もしくは３０に記載の濃縮された集団。
（項目３２）
患者への投与のための細胞を含む薬学的組成物を調製する方法であって、該方法は、項目２９から３１のいずれか１項に記載の標的細胞の濃縮された集団を薬学的に受容可能なキャリアと調合する工程を包含する方法。
（項目３３）
上記細胞が患者にとって自己由来である、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
上記細胞が、１日以下の間、培養もしくはプレートされた、項目３２もしくは３３に記載の方法。
（項目３５）
上記薬学的組成物の上記細胞の少なくとも５０％がＣＤ３４陽性細胞である、項目３２から３４のいずれか１項に記載の方法。
（項目３６）
項目３２から３５のいずれか１項に記載の方法にしたがって調製された薬学的組成物。
（項目３７）
患者における疾患もしくは医学的状態を処置する方法であって、該方法は、該疾患もしくは医学的状態を処置するのに効果的な量で、項目３６に記載の薬学的組成物を該患者に投与する工程を包含する方法。