【手続補正書】
【提出日】平成23年3月23日(2011.3.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トロンビンと、
ベンジルアルコールおよびクロロブタノールからなる群から選択された静菌的に効果的な量の防腐剤と、
０．１０％〜５．０％（ｗ／ｖ）のスクロースと
を水溶液中に含む医薬組成物。
【請求項２】
緩衝液、塩、ポリオール、界面活性剤、アミノ酸、または追加の炭水化物の１つまたはそれ以上をさらに含む請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記防腐剤がベンジルアルコールである請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ベンジルアルコールが０．８％〜１．５％（ｖ／ｖ）の濃度で存在する請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
マンニトールをさらに含む請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記マンニトールおよびスクロースが、マンニトール：スクロースの割合が１：１を超えるが２．５：１以下（ｗ／ｗ）で存在する請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記トロンビンがヒトトロンビンである請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記ヒトトロンビンが組み換えヒトトロンビンである請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記トロンビンがウシトロンビンである請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
トロンビンと、
薬学的に許容される緩衝液と、
０．１０％〜５％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
濃度０．８％〜１．５％（ｖ／ｖ）のベンジルアルコールまたは濃度０．４％〜０．６％（ｗ／ｖ）のクロロブタノールからなる群から選択された防腐剤と、
をｐＨ５．７〜７．４の水溶液中に含む組成物。
【請求項１１】
前記防腐剤がベンジルアルコールである請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ベンジルアルコールの濃度が０．８％〜１．０％（ｖ／ｖ）である請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記スクロースの濃度が０．５％〜３．０％（ｗ／ｖ）である請求項１０に記載の組成物。
【請求項１４】
前記スクロースの濃度が約１％（ｗ／ｖ）である請求項１０に記載の組成物。
【請求項１５】
前記緩衝液が、ヒスチジン緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、コハク酸緩衝液、および酢酸緩衝液からなる群から選択された請求項１０に記載の組成物。
【請求項１６】
マンニトールをさらに含む請求項１０に記載の組成物。
【請求項１７】
前記マンニトールおよびスクロースが、マンニトール：スクロースの割合が１：１を超えるが２．５：１以下（ｗ／ｗ）で存在する請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記希釈液が塩化ナトリウムを含む請求項１０に記載の組成物。
【請求項１９】
前記トロンビンがヒトトロンビンである請求項１０に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ヒトトロンビンが組み換えヒトトロンビンである請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記トロンビンがウシトロンビンである請求項１０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記トロンビンが０．１ｍｇ／ｍＬ〜５．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する請求項１０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記トロンビンが０．３ｍｇ／ｍＬ〜３．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
ｐＨ５．７〜７．４の水溶液中で、
０．０３ｍｇ／ｍＬ〜１．６ｍｇ／ｍＬのトロンビンと、
０．１７％〜１．３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
１．１％〜１．６％（ｗ／ｖ）のマンニトールと、
０．８％〜２．０％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌと、
０〜１．６ｍＭのＣａＣｌ２と、
０．００１％〜０．３２％（ｗ／ｖ）の界面活性剤または高分子量ポリエチレングリコールと、
薬学的に許容される緩衝液と、
ベンジルアルコールおよびクロロブタノールからなる群から選択された静菌的に効果的な量の防腐剤と、
から実質的になる水溶性の組成物であって、
前記緩衝液の濃度が外科手術の状況で前記組成物を利用するときにほぼ生理的ｐＨになるように選択され、前記マンニトール：スクロースの割合が１：１を超えるが２．５：１以下（ｗ／ｗ）である水溶性の組成物。
【請求項２５】
前記マンニトール対スクロースの割合が１．３３：１（ｗ／ｗ）である請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記スクロース：トロンビンのモル比が少なくとも７００：１である請求項２４に記載の組成物。
【請求項２７】
前記スクロース：トロンビンのモル比が少なくとも２０００：１である請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記防腐剤が濃度０．８％〜１．５％（ｖ／ｖ）のベンジルアルコールである請求項２４に記載の組成物。
【請求項２９】
トロンビンと、ベンジルアルコールおよびクロロブタノールからなる群から選択された静菌的に効果的な量の防腐剤の存在下で前記タンパク質を安定化させるのに十分な量のスクロースとを含む凍結乾燥した組成物を提供するステップと、
静菌的に効果的な量のベンジルアルコールまたはクロロブタノールを水中に含む希釈液を提供するステップと、
前記凍結乾燥した組成物と前記希釈液とを合わせて溶液を作るステップであって、溶液中の前記スクロースの濃度が０．１０％〜５．０％（ｗ／ｖ）であるステップと、
を含む、安定化したトロンビン溶液を調製するための方法。
【請求項３０】
前記凍結乾燥した組成物が緩衝液、塩、またはポリオールをさらに含む請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
トロンビンと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む凍結乾燥した組成物を提供するステップと、
前記凍結乾燥した組成物を希釈液の中で再構成して薬学的に許容されるトロンビン溶液を提供するステップであって、前記希釈液は前記溶液中でベンジルアルコールの濃度を０．８％〜１．５％（ｖ／ｖ）にし、スクロースの濃度を０．１０％〜５％（ｗ／ｖ）にするように選択されるステップと、
を含む、安定化したトロンビン溶液を調製するための方法。
【請求項３２】
前記溶液がマンニトールをさらに含む請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記マンニトールおよびスクロースが前記溶液中にマンニトール：スクロースの割合が１：１を超えるが２．５：１以下（ｗ／ｗ）で存在する請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
第１密閉容器に入った、静菌的に効果的な量のベンジルアルコールまたはクロロブタノールを水中に含む薬学的に許容される希釈液と、
第２密閉容器に入ったトロンビンおよびある量のスクロースを含む凍結乾燥した組成物であって、前記スクロースの量は、前記凍結乾燥した組成物を前記希釈液で再構成するときにスクロースの濃度が０．１０％〜５．０％（ｗ／ｖ）になるように選択される、凍結乾燥した組成物と
を具備するキット。
【請求項３５】
前記希釈液がＮａＣｌをさらに含む請求項３４に記載のキット。
【請求項３６】
前記希釈液が静菌性の食塩水である請求項３５に記載のキット。
【請求項３７】
前記希釈液を前記第１密閉容器から前記第２密閉容器に移動するための手段をさらに具備する請求項３４に記載のキット。
【請求項３８】
説明書をさらに具備する請求項３４に記載のキット。
【請求項３９】
塗布用デバイスをさらに具備する請求項３４に記載のキット。
【請求項４０】
前記塗布用デバイスがシリンジまたは噴霧器である請求項３９に記載のキット。
【請求項４１】
前記第１密閉容器および前記第２密閉容器が第３容器に梱包されている請求項３４に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
トロンビンと、
ベンジルアルコールおよびクロロブタノールからなる群から選択された静菌的に効果的な量の防腐剤と、
０．１０％〜５．０％（ｗ／ｖ）のスクロースと
を水溶液中に含む医薬組成物。
（項目２）
緩衝液、塩、ポリオール、界面活性剤、アミノ酸、または追加の炭水化物の１つまたはそれ以上をさらに含む項目１に記載の組成物。
（項目３）
上記防腐剤がベンジルアルコールである項目１に記載の組成物。
（項目４）
上記ベンジルアルコールが０．８％〜１．５％（ｖ／ｖ）の濃度で存在する項目３に記載の組成物。
（項目５）
マンニトールをさらに含む項目１に記載の組成物。
（項目６）
上記マンニトールおよびスクロースが、マンニトール：スクロースの割合が１：１を超えるが２．５：１以下（ｗ／ｗ）で存在する項目５に記載の組成物。
（項目７）
上記トロンビンがヒトトロンビンである項目１に記載の組成物。
（項目８）
上記ヒトトロンビンが組み換えヒトトロンビンである項目７に記載の組成物。
（項目９）
上記トロンビンがウシトロンビンである項目１に記載の組成物。
（項目１０）
トロンビンと、
薬学的に許容される緩衝液と、
０．１０％〜５％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
濃度０．８％〜１．５％（ｖ／ｖ）のベンジルアルコールまたは濃度０．４％〜０．６％（ｗ／ｖ）のクロロブタノールからなる群から選択された防腐剤と、
をｐＨ５．７〜７．４の水溶液中に含む組成物。
（項目１１）
上記防腐剤がベンジルアルコールである項目１０に記載の組成物。
（項目１２）
上記ベンジルアルコールの濃度が０．８％〜１．０％（ｖ／ｖ）である項目１１に記載の組成物。
（項目１３）
上記スクロースの濃度が０．５％〜３．０％（ｗ／ｖ）である項目１０に記載の組成物。
（項目１４）
上記スクロースの濃度が約１％（ｗ／ｖ）である項目１０に記載の組成物。
（項目１５）
上記緩衝液が、ヒスチジン緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、コハク酸緩衝液、および酢酸緩衝液からなる群から選択された項目１０に記載の組成物。
（項目１６）
マンニトールをさらに含む項目１０に記載の組成物。
（項目１７）
上記マンニトールおよびスクロースが、マンニトール：スクロースの割合が１：１を超えるが２．５：１以下（ｗ／ｗ）で存在する項目１６に記載の組成物。
（項目１８）
上記希釈液が塩化ナトリウムを含む項目１０に記載の組成物。
（項目１９）
上記トロンビンがヒトトロンビンである項目１０に記載の組成物。
（項目２０）
上記ヒトトロンビンが組み換えヒトトロンビンである項目１９に記載の組成物。
（項目２１）
上記トロンビンがウシトロンビンである項目１０に記載の組成物。
（項目２２）
上記トロンビンが０．１ｍｇ／ｍＬ〜５．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する項目１０に記載の組成物。
（項目２３）
上記トロンビンが０．３ｍｇ／ｍＬ〜３．０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する項目２２に記載の組成物。
（項目２４）
ｐＨ５．７〜７．４の水溶液中で、
０．０３ｍｇ／ｍＬ〜１．６ｍｇ／ｍＬのトロンビンと、
０．１７％〜１．３％（ｗ／ｖ）のスクロースと、
１．１％〜１．６％（ｗ／ｖ）のマンニトールと、
０．８％〜２．０％（ｗ／ｖ）のＮａＣｌと、
０〜１．６ｍＭのＣａＣｌ２と、
０．００１％〜０．３２％（ｗ／ｖ）の界面活性剤または高分子量ポリエチレングリコールと、
薬学的に許容される緩衝液と、
ベンジルアルコールおよびクロロブタノールからなる群から選択された静菌的に効果的な量の防腐剤と、
から実質的になる水溶性の組成物であって、
上記緩衝液の濃度が外科手術の状況で上記組成物を利用するときにほぼ生理的ｐＨになるように選択され、上記マンニトール：スクロースの割合が１：１を超えるが２．５：１以下（ｗ／ｗ）である水溶性の組成物。
（項目２５）
上記マンニトール対スクロースの割合が１．３３：１（ｗ／ｗ）である項目２４に記載の組成物。
（項目２６）
上記スクロース：トロンビンのモル比が少なくとも７００：１である項目２４に記載の組成物。
（項目２７）
上記スクロース：トロンビンのモル比が少なくとも２０００：１である項目２６に記載の組成物。
（項目２８）
上記防腐剤が濃度０．８％〜１．５％（ｖ／ｖ）のベンジルアルコールである項目２４に記載の組成物。
（項目２９）
トロンビンと、ベンジルアルコールおよびクロロブタノールからなる群から選択された静菌的に効果的な量の防腐剤の存在下で上記タンパク質を安定化させるのに十分な量のスクロースとを含む凍結乾燥した組成物を提供するステップと、
静菌的に効果的な量のベンジルアルコールまたはクロロブタノールを水中に含む希釈液を提供するステップと、
上記凍結乾燥した組成物と上記希釈液とを混合して溶液を作るステップであって、溶液中のスクロースの濃度が０．１０％〜５．０％（ｗ／ｖ）であるステップと、
を含む、安定化したトロンビン溶液を調製するための方法。
（項目３０）
上記凍結乾燥した組成物が緩衝液、塩、またはポリオールをさらに含む項目２９に記載の方法。
（項目３１）
トロンビンと、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む凍結乾燥した組成物を提供するステップと、
上記凍結乾燥した組成物を希釈液の中で再構成して薬学的に許容されるトロンビン溶液を提供するステップであって、上記希釈液は上記溶液中でベンジルアルコールの濃度を０．８％〜１．５％（ｖ／ｖ）にし、スクロースの濃度を０．１０％〜５％（ｗ／ｖ）にするように選択されるステップと、
を含む、安定化したトロンビン溶液を調製するための方法。
（項目３２）
上記溶液がマンニトールをさらに含む項目３１に記載の方法。
（項目３３）
上記マンニトールおよびスクロースが上記溶液中にマンニトール：スクロースの割合が１：１を超えるが２．５：１以下（ｗ／ｗ）で存在する項目３２に記載の方法。
（項目３４）
第１密閉容器に入った、静菌的に効果的な量のベンジルアルコールまたはクロロブタノールを水中に含む薬学的に許容される希釈液と、
第２密閉容器に入ったトロンビンおよびある量のスクロースを含む凍結乾燥した組成物であって、上記スクロースの量は、上記凍結乾燥した組成物を上記希釈液で再構成するときにスクロースの濃度が０．１０％〜５．０％（ｗ／ｖ）になるように選択される、凍結乾燥した組成物と
を具備するキット。
（項目３５）
上記希釈液がＮａＣｌをさらに含む項目３４に記載のキット。
（項目３６）
上記希釈液が静菌性の食塩水である項目３５に記載のキット。
（項目３７）
上記希釈液を上記第１密閉容器から上記第２密閉容器に移動するための手段をさらに具備する項目３４に記載のキット。
（項目３８）
説明書をさらに具備する項目３４に記載のキット。
（項目３９）
塗布用デバイスをさらに具備する項目３４に記載のキット。
（項目４０）
上記塗布用デバイスがシリンジまたは噴霧器である項目３９に記載のキット。
（項目４１）
上記第１密閉容器および上記第２密閉容器が第３容器に梱包されている項目３４に記載のキット。
（項目４２）
トロンビンを、これを必要とするほ乳類に投与する方法であり、
ベンジルアルコールおよびクロロブタノールからなる群から選択された静菌的に効果的な量の防腐剤を含む薬学的に許容される希釈液を提供するステップと、
トロンビンおよびある量のスクロースを含む凍結乾燥した組成物を提供するステップと、
上記凍結乾燥した組成物を上記希釈液で再構成して溶液を作るステップと、
上記溶液を上記ほ乳類に適用するステップと、
を含む方法であって、
上記凍結乾燥した組成物を上記希釈液で再構成するときにスクロースの濃度が０．１０％〜５．０％（ｗ／ｖ）になるように上記スクロースの量が選択される方法。
（項目４３）
上記希釈液が静菌性の食塩水である項目４２に記載の方法。
本発明の上記および他の態様は、以下の本発明の説明を参照することで明らかになるであろう。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
ヒトトロンビンおよび非ヒトトロンビンは当技術分野で周知の方法によって調製される。たとえば血漿からのトロンビンの精製は、Ｂｕｉ‐Ｋｈａｃ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許第５，９８１，２５４号明細書で開示されている。コーンフラクションＩＩＩのような血漿分画からのトロンビンの精製は、Ｆｅｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：３５８７‐３５９８，１９７７で開示されている。米国特許第５，４７６，７７７号明細書で開示されているように、組み換えトロンビンは、ヘビの毒活性化因子を用いた活性化によってプレトロンビン前駆体から調製することができる。適切な毒活性化因子は、エカリンおよびＯｘｙｕｒａｎｕｓ  ｓｃｕｔｅｌｌａｔｕｓ由来のプロトロンビン活性化因子を含む。活性化第Ｘａ因子のような他の活性化因子も利用できる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
（実施例５）
ｒｈＴｈｒｏｍｂｉｎ  ＤＰのバイアル（５，０００ＩＵ）を５ｍｌの米国薬局方静菌性の食塩注射で再構成した（ｎ＝３）。再構成したサンプルを上下逆にして２〜８℃で１週間、２週間、４週間、６週間、９週間および１３週間、ならびに２５℃で８時間、２４時間、および４８時間保存した。保存後、サンプルを，外見、含有量（ＲＰ‐ＨＰＬＣによる）、純度（ＲＰ‐ＨＰＬＣ）、有効性（凝血活性）、および高分子量（ｈｉｇｈ−ｍｏｌｅｃｕｌａｒ−ｗｅｉｇｈｔ：ＨＭＷ）の不純物（ＳＥ‐ＨＰＬＣ）について分析した。表５に示す通り、評価した期間と条件では著しい不安定性は観察されなかった。