【手続補正書】
【提出日】平成26年6月30日(2014.6.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
飼料補助剤に使用されるペプシン耐性αアミラーゼ酵素の同定方法であって、
ｉ）αアミラーゼ酵素を備えるステップと、
ii）該αアミラーゼをトウモロコシベースの飼料及びペプシンと混合し、ｐＨ３でインキュベートし、そしてｐＨ３でのインキュベーション中ペプシンが存在しない点で異なる対照試料と比較した該αアミラーゼのαアミラーゼ活性を分析するステップと、
iii）アッセイ条件下で実質的にαアミラーゼ活性を維持するαアミラーゼ酵素を選択するステップと
を含む、上記方法。
【請求項２】
飼料補助剤が単胃動物用であり、好ましくは家禽、ブタ又は魚類であり、より好ましくは家禽である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
単胃動物用の飼料補助剤の調製方法であって、ペプシン耐性αアミラーゼを、マルトデキストリン、石灰石（炭酸カルシウム）、シクロデキストリン、コムギ又はコムギ成分、スクロース、デンプン、Ｎａ２ＳＯ４、タルク、ＰＶＡ、ソルビトール、ベンゾエート、ソルベート（ｓｏｒｂｉａｔｅ）、グリセリン、スクロース、プロピレングリコール、１，３−プロパンジオール、グルコース、パラベン類、塩化ナトリウム、シトレート、アセテート、ホスフェート、カルシウム、メタビスルフィット、ホルメート及びそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの生理学的に許容可能な担体と混合するステップを含む、上記方法。
【請求項４】
ペプシン耐性αアミラーゼ、並びにマルトデキストリン、石灰石（炭酸カルシウム）、シクロデキストリン、コムギ又はコムギ成分、スクロース、デンプン、Ｎａ２ＳＯ４、タルク、ＰＶＡ、ソルビトール、ベンゾエート、ソルベート（ｓｏｒｂｉａｔｅ）、グリセリン、スクロース、プロピレングリコール、１，３−プロパンジオール、グルコース、パラベン、塩化ナトリウム、シトレート、アセテート、ホスフェート、カルシウム、メタビスルフィット、ホルメート及びそれらの混合物からなる群から選択される少なくとも１つの生理学的に許容可能な担体を含む単胃動物用の飼料補助剤。
【請求項５】
前記ペプシン耐性アミラーゼが、
ｉ）配列番号１又は配列番号３に示されるとおりであるか；
ii）１個又は数個のアミノ酸付加／挿入、欠失又は置換を除いては配列番号１又は配列番号３に示されるとおりであるか；
iii）配列番号１と少なくとも８５％の同一性、若しくは配列番号３と少なくとも７
０％の同一性を有するか；
iv）配列番号２又は配列番号４の配列を含むヌクレオチド配列の発現により生産されるか；
ｖ）遺伝子コードの縮重に起因して配列番号２又は配列番号４と異なるヌクレオチド配列の発現により生産されるか；
vi）１個又は数個のヌクレオチド付加／挿入、欠失又は置換だけ配列番号２又は配列番号４と異なるヌクレオチド配列の発現により生産されるか；又は
vii）配列番号２又は配列番号４と少なくとも７０％の同一性を有するヌクレオチド配列の発現により生産される
アミノ酸配列を有する、請求項３に記載の方法又は請求項４に記載のの飼料補助剤。
【請求項６】
配列番号１とのギャップアラインメントでのペプシン耐性αアミラーゼが、Ｋ８８；Ｉ１０３；Ｈ１３３；Ｙ１７５；Ｙ２９０；Ｆ２９２；Ｒ４４２及びＨ４５０からなる群から選択されるアミノ酸のうちの任意の１つ以上を含み、ここでアミノ酸の付番は配列番号１に関係する、請求項３に記載の方法又は請求項４に記載の飼料補助剤。
【請求項７】
ペプシン耐性トリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）αアミラーゼを含む飼料補助剤。
【請求項８】
αアミラーゼが、
ｉ）配列番号３に示されるとおりであるか；
ii）１個又は数個のアミノ酸付加／挿入、欠失又は置換を除いては配列番号３に示されるとおりであるか；
iii）配列番号３と少なくとも７０％の同一性を有するか；又は
iv）配列番号４の配列を含むヌクレオチド配列の発現により生産されるか；
ｖ）遺伝子コードの縮重に起因して配列番号４と異なるヌクレオチド配列の発現により生産されるか；
vi）１個又は数個のヌクレオチド付加／挿入、欠失又は置換だけ配列番号４と異なるヌクレオチド配列の発現により生産されるか；若しくは
vii）配列番号４と少なくとも７０％の同一性を有するヌクレオチド配列の発現により生産される
アミノ酸配列を有する、請求項７に記載の飼料補助剤。
【請求項９】
ペプシン耐性αアミラーゼを含む家禽飼料補助剤。
【請求項１０】
αアミラーゼが、
ｉ）配列番号１に示されるとおりであるか；
ii）１個又は数個のアミノ酸付加／挿入、欠失又は置換を除いては配列番号１に示されるとおりであるか；
iii）配列番号１と少なくとも８５％の同一性を有するか；又は
iv）配列番号２の配列を含むヌクレオチド配列の発現により生産されるか；
ｖ）遺伝子コードの縮重に起因して配列番号２と異なるヌクレオチド配列の発現により生産されるか；
vi）１個又は数個のヌクレオチド付加／挿入、欠失又は置換だけ配列番号２と異なる
ヌクレオチド配列の発現により生産されるか；若しくは
vii）配列番号２と少なくとも７０％の同一性を有するヌクレオチド配列の発現により生産される
アミノ酸配列を有する、請求項９に記載の飼料補助剤。
【請求項１１】
配列番号１とのギャップアラインメントでのペプシン耐性αアミラーゼが、Ｋ８８；Ｉ１０３；Ｈ１３３；Ｙ１７５；Ｙ２９０；Ｆ２９２；Ｒ４４２及びＨ４５０からなる群から選択されるアミノ酸のうちの任意の１つ以上を含み、ここでアミノ酸の付番は配列番号１に関係する、請求項９又は１０に記載の飼料補助剤。
【請求項１２】
請求項４〜８のいずれか一項に記載の飼料補助剤を、１つ以上の飼料材料と混合するステップを含む、単胃動物、好ましくは家禽用飼料の調製方法であって、ここで前記１つ以上の飼料材料が、ａ）穀類、例えば小粒穀類（例えば、小麦、大麦、ライ麦、オート麦及びそれらの組み合わせ）及び／又はメイズ若しくはソルガムなどの大粒穀類；ｂ）穀類の副産物、例えばコーングルテンミール、トウモロコシ蒸留粕（ＤＤＧＳ）、小麦ふすま、小麦ミドリング粉、小麦ショーツ、米糠、米の籾殻、オート麦の籾殻、あぶらやしの種、及び柑橘パルプ；ｃ）大豆、ヒマワリ、ピーナッツ、ルピナス、エンドウ豆、ソラ豆、綿、キャノーラ、魚粉、乾燥血漿タンパク質、肉骨粉、ジャガイモタンパク質、ホエー、コプラ、ゴマなどの原料から得られるタンパク質；ｄ）植物源及び動物源から得られる油及び脂肪；及びｅ）ミネラル及びビタミン；ｆ）ａ）〜ｅ）の任意の１つ以上のプレミックスからなる群から選択される、上記方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法により調製される、又は請求項４〜８のいずれか一項に記載の飼料補助剤を含む、単胃動物用の飼料。
【請求項１４】
単胃動物が家禽及び／又はブタ、好ましくは家禽である、請求項１３に記載の飼料。
【請求項１５】
ペプシン耐性トリコデルマ属（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）αアミラーゼを含む飼料。
【請求項１６】
αアミラーゼが、
ｉ）配列番号３に示されるとおりであるか；
ii）１個又は数個のアミノ酸付加／挿入、欠失又は置換を除いては配列番号３に示されるとおりであるか；
iii）配列番号３と少なくとも７０％の同一性を有するか；又は
iv）配列番号４の配列を含むヌクレオチド配列の発現により生産されるか；
ｖ）遺伝子コードの縮重に起因して配列番号４と異なるヌクレオチド配列の発現により生産されるか；
vi）１個又は数個のヌクレオチド付加／挿入、欠失又は置換だけ配列番号４と異なるヌクレオチド配列の発現により生産されるか；若しくは
vii）配列番号４と少なくとも７０％の同一性を有するヌクレオチド配列の発現により生産される
アミノ酸配列を有する、請求項１５に記載の飼料。
【請求項１７】
ペプシン耐性αアミラーゼを含む単胃動物用の飼料であって、飼料１キログラム当たり３０００単位未満のαアミラーゼを含む、該飼料。
【請求項１８】
αアミラーゼが、
ｉ）配列番号１又は配列番号３に示されるとおりであるか；
ii）１個又は数個のアミノ酸付加／挿入、欠失又は置換を除いては配列番号１又は配列番号３に示されるとおりであるか；
iii）配列番号１と少なくとも８５％の同一性；若しくは配列番号３と少なくとも７０％の同一性を有するか；
iv）配列番号２又は配列番号４の配列を含むヌクレオチド配列の発現により生産されるか
ｖ）遺伝子コードの縮重に起因して配列番号２又は配列番号４と異なるヌクレオチド配列の発現により生産されるか；
vi）１個又は数個のヌクレオチド付加／挿入、欠失又は置換だけ配列番号２又は配列番号４と異なるヌクレオチド配列の発現により生産されるか；又は
vii）配列番号２又は配列番号４と少なくとも７０％の同一性を有するヌクレオチド配列の発現により生産される
アミノ酸配列を有する、請求項１７に記載の飼料。
【請求項１９】
配列番号１とのギャップアラインメントでのペプシン耐性αアミラーゼが、Ｋ８８；Ｉ１０３；Ｈ１３３；Ｙ１７５；Ｙ２９０；Ｆ２９２；Ｒ４４２及びＨ４５０からなる群から選択されるアミノ酸のうちの任意の１つ以上を含み、ここでアミノ酸の付番は配列番号１に関係する、請求項１８に記載の飼料。
【請求項２０】
飼料補助剤及び／又は飼料に使用されるαアミラーゼであって、１００，０００Ｕ／ｍｌのペプシンの存在下で実質的にαアミラーゼ活性を維持する、上記αアミラーゼ。
【請求項２１】
アミラーゼが、
ｉ）配列番号３に示されるとおりであるか、若しくは
ii）１個又は数個のアミノ酸付加／挿入、欠失又は置換を除いては配列番号３に示されるとおりであるか；
iii）配列番号３と少なくとも７０％の同一性を有するか；又は
iv）配列番号４の配列を含むヌクレオチド配列の発現により生産されるか；
ｖ）遺伝子コードの縮重に起因して配列番号４と異なるヌクレオチド配列の発現により生産されるか；若しくは
vi）１個又は数個のヌクレオチド付加／挿入、欠失又は置換だけ配列番号４と異なるヌクレオチド配列の発現により生産されるか；若しくは
vii）配列番号４と少なくとも７０％の同一性を有するヌクレオチド配列の発現により生産される
アミノ酸配列を有する、請求項２０に記載のアミラーゼ。
【請求項２２】
単胃動物用の飼料補助剤であって、前記飼料が、畜産能力を改善するためペプシン耐性αアミラーゼを含む、上記飼料補助剤。
【請求項２３】
家禽又はブタの体重増加を増進する方法であって、該家禽又はブタにペプシン耐性アミラーゼを含む飼料を与えるステップを含む、上記方法。
【請求項２４】
動物における内在性αアミラーゼの発現を低下させるためのペプシン耐性αアミラーゼの使用。
【請求項２５】
畜産能力を改善し、そして／又はエネルギー吸収及び／又は飼料効率を高めるための、そして／又は飼料中の原材料の消化率（例えばデンプン消化率などの栄養分消化率）を改善するための、そして／又は飼料転換率（ＦＣＲ）を改善するための、そして／又は動物の体重増加を改善するための、ペプシン耐性αアミラーゼを含む飼料補助剤の使用。
【請求項２６】
ペプシン耐性αアミラーゼと、少なくとも１つのミネラル及び／又は少なくとも１つのビタミンとを含むプレミックス。
【請求項２７】
請求項４〜１１又は２２のいずれか一項に記載の飼料補助剤を含む、請求項２６に記載のプレミックス。