(57)【要約】【課題】人の皮下または筋肉内などに容易にしかも苦痛を起こさない量の同微粒子の注射で、長期にわたって徐放効果が得られる徐放性組成物を提供すること。【解決手段】多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔に生物学的活性薬剤、ヒト血清タンパク質、ムコ多糖類を充填し、２価金属イオンを加えることにより栓塞したことからなる。又、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔に生物学的活性薬剤、ヒト血清タンパク質、水溶性のカルシウム塩を次々または一度に充填し、次に炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム又は炭酸イオン水溶液を加えることにより、該微粒子の外層を栓塞してなる。【選択図】　　図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔に生物学的活性薬剤、ヒト血清タンパク質、ムコ多糖類を充填し、２価金属イオンを加えることにより栓塞してなることを特徴とする徐放性組成物。
【請求項２】
前記多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子がハイドロキシアパタイト懸濁液をスプレードライし、１００〜８００℃で焼成したものであることを特徴とする請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項３】
前記多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子の粒径が０．１〜２０μｍであることを特徴とする請求項１又は２記載の徐放性組成物。
【請求項４】
前記生物学的活性薬剤の徐放性組成物中の含量が少なくとも０．０１重量％であることを特徴とする請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項５】
前記ヒト血清タンパク質がヒト血清アルブミンあるいはγ−グロブリンであることを特徴とする請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項６】
前記ヒト血清タンパク質の徐放性組成物中の含量が少なくとも１重量％であることを特徴とする請求項１又は５記載の徐放性組成物。
【請求項７】
前記２価金属イオンが亜鉛イオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオンであることを特徴とする請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項８】
前記２価金属イオンの徐放性組成物中の含量が少なくとも０．０１重量％であることを特徴とする請求項１又は６記載の徐放性組成物。
【請求項９】
前記ムコ多糖体がコンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸あるいはケラタン硫酸及びそれらの塩、のうち少なくとも１種であることを特徴とする請求項１記載の徐放性組成物。
【請求項１０】
前記ムコ多糖体の徐放性組成物中の含量がヒト血清タンパク質の１／１００以上であることを特徴とする請求項１又は９記載の徐放性組成物。
【請求項１１】
前記徐放性組成物が皮下注射、皮内注射、筋肉内注射、眼球内投与及び皮膚塗布に適した形態であることを特徴とする請求項１から請求項１０のいずれかに記載の徐放性組成物。
【請求項１２】
前記請求項１記載の組成物に、必要に応じて製剤学的に受容可能な添加物を加えたことからなることを特徴とする徐放性製剤。
【請求項１３】
前記製剤学的に受容可能な添加物が界面活性剤、防腐剤、又は安定化剤であることを特徴とする請求項１２記載の製剤。
【請求項１４】
前記請求項１２記載の製剤が凍結乾燥されたものであることを特徴とする製剤。
【請求項１５】
前記製剤が皮下注射、皮内注射、筋肉内注射、眼球内投与及び皮膚塗布に適した形態であることを特徴とする請求項１２から請求項１４のいずれかに記載の製剤。
【請求項１６】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔に生物学的活性薬剤、ヒト血清タンパク質、ムコ多糖類を充填した後、十分あるいは中等度凍結乾燥し、それに２価金属イオン溶液を入れ、微粒子全体を栓塞してなることを特徴とする徐放性組成物。
【請求項１７】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔に生物学的活性薬剤、ヒト血清タンパク質を充填し、２価金属イオンを加えることにより該微粒子の外層に栓塞してなることを特徴とする徐放性組成物。
【請求項１８】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔に生物学的活性薬剤、ヒト血清アルブミン、水溶性のカルシウム塩を次々または一度に充填し、次に炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム又は炭酸イオン水溶液を加えることにより該微粒子の外層を栓塞してなることを特徴とする徐放性組成物。
【請求項１９】
前記水溶性のカルシウム塩が塩化カルシウム、酢酸カルシウム、硝酸カルシウムであることを特徴とする請求項１８記載の徐放性組成物。
【請求項２０】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔に生物学的活性薬剤、ヒト血清アルブミン、水溶性のカルシウム塩を次々または一度に充填した後、十分あるいは中等度凍結乾燥し、次に炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム又は炭酸イオン水溶液を加えることにより、微粒子全体を栓塞してなることを特徴とする徐放性組成物。
【請求項２１】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔に生物学的活性薬剤、水溶性のカルシウム塩を次々または一度に充填し、次に炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム又は炭酸イオン水溶液を加えることにより、微粒子の外層を栓塞してなることを特徴とする徐放性組成物。
【請求項２２】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔の内部表面にハイドロキシアパタイトと特に結合性の高い生物学的活性薬剤を結合させてなることを特徴とする徐放性組成物。
【請求項２３】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔の内部表面に生物学的活性薬剤を結合させ更に２価金属イオンを加えることにより栓塞してなることを特徴とする徐放性組成物。
【請求項２４】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔の内部表面に２価金属イオンを結合させ更に生物学的活性薬剤を加えることにより栓塞してなることを特徴とする徐放性組成物。
【請求項２５】
前記２価金属イオンが亜鉛イオン、銅イオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオンであることを特徴とする請求項２３又は２４記載の徐放性組成物。
【請求項２６】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に皮膚疾患治療薬剤または日焼け止めなどの医薬部外品を基材とともに充填し、これを軟膏、クリーム、ローションと混和してなることを特徴とする皮膚用徐放性組成物。
【請求項２７】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、生物学的活性薬剤とヒト血清タンパク質からなる水溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、これにムコ多糖類水溶液及び２価金属イオン溶液を混合し、分離して作製されることを特徴とする徐放性組成物の製造方法。
【請求項２８】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、生物学的活性薬剤とヒト血清タンパク質からなる水溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、これにムコ多糖類水溶液及び２価金属イオン溶液を混合し、分離し、さらにこれを凍結乾燥することにより作製されることを特徴とする徐放性組成物の製造方法。
【請求項２９】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、生物学的活性薬剤とヒト血清タンパク質からなる水溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、これにムコ多糖類水溶液を混合し、分離し、これを凍結乾燥後２価金属イオン溶液を加えてさらに凍結乾燥することにより作製されることを特徴とする徐放性組成物の製造方法。
【請求項３０】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、生物学的活性薬剤、ヒト血清タンパク質及び水溶性のカルシウム塩からなる水溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、これに炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム又は炭酸イオン水溶液を混合し、分離して作製されることを特徴とする徐放性組成物の製造方法。
【請求項３１】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、生物学的活性薬剤、ヒト血清タンパク質及び水溶性のカルシウム塩からなる水溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、分離し、これを凍結乾燥後、炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム又は炭酸イオン水溶液を加えてさらに凍結乾燥することにより作製されることを特徴とする徐放性組成物の製造方法。
【請求項３２】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、生物学的活性薬剤及び水溶性のカルシウム塩からなる水溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、分離し、これを凍結乾燥後、炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム又は炭酸イオン水溶液を加えてさらに凍結乾燥することにより作製されることを特徴とする徐放性組成物の製造方法。
【請求項３３】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、生物学的活性薬剤からなる水溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、これに２価金属イオン溶液を混合し、分離して作製されることを特徴とする徐放性組成物の製造方法。
【請求項３４】
多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、２価金属イオン溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、これに生物学的活性薬剤からなる水溶液を混合し、分離して作製されることを特徴とする徐放性組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子含有徐放性組成物、その製造法およびその製剤に関し、詳しくは栓塞処理したハイドロキシアパタイト微粒子含有徐放性組成物、その製造法およびその製剤さらには皮膚用徐放性組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
注射用徐放製剤は、再生医療への応用もでき、最近その重要性が増している。
これまで無機・有機微粒子やカプセル、ハイドロゲルなどによる徐放性製剤が開発されている。水溶性薬物の長期間にわたる徐放性注射剤は、これまでポリ乳酸・グリコール酸（ＰＬＧＡ）を基剤にしてその多くは検討されてきた（例えば、特許文献１，特許文献２，特許文献３参照）。又、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）を含有するＰＬＧＡを基剤としたの徐放性マイクロカプセルが報告されている（例えば、非特許文献１参照）。又、ＬＨＲＨアゴニストであるリュープロレリンを含有するＰＬＧＡを基剤とした徐放性マイクロカプセルが報告されている（例えば、非特許文献２参照）。ＰＬＧＡは生体内で加水分解して消失する生体内消化性の基剤で注射剤の基剤としては好ましい性質を有している。しかし、一般的にＰＬＧＡを使用する徐放性製剤を製造する際には、それを溶解する有機溶剤を使用するが、ｈＧＨは、有機溶剤中で変性し、一部が失活する。このような活性の低下は、有効性を損なうのみならず、生体にもわるい影響をもたらす危険性がある。さらに、ｈＧＨは、水溶性が高く、ＰＬＧＡ製剤を用いると投与初期に過剰な放出をすることは避けられない。その他、ハイドロゲルなどの使用が報告されているが通常の注射投与は困難である。すなわち、ゲルが注入可能となる太い針を使用しなければならず、患者にとって好ましいものではない。また、ヒドロキシアパタイトと生物活性薬剤であるヒト成長ホルモンを用いた徐放性粒子についてすでに報告はある（例えば非特許文献３、非特許文献４参照）。しかし、いずれも２成分系であり、アパタイトの粒子径も４０から８０μｍ　あるいは２００μｍと大きくそのため注射するのが困難であり、又、ｉｎ　ｖｉｖｏにおける徐放効果は不明である。又、アパタイト粒子に吸着したｈＧＨ量（封入量）も１％　以下と小さいものであった。
さらに、前記徐放性製剤には、バーストが起こるものがあり、器質化してバイオアベイラビリティがかなり落ちるものがあり、生体内で完全に分解されないものなどがあり、かつ超徐放が期待できないなど、いずれかの点で問題点があった。
【０００３】
【特許文献１】
特開平１１−２８６４０３（請求項１）
【特許文献２】
特開２０００−２３９１０４（請求項１）
【特許文献３】
特開２００２−３２６９６０（請求項１３，１５）
【非特許文献１】
Ｎａｔｕｒｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，　２：　７９５−７９９，　１９９６
【非特許文献２】
Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，　３６：　１０９５−１１０３，　１９８８
【非特許文献３】
Ｈ．　Ｇａｕｔｉｅｒ　ｅｔ　ａｌ：　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｍａｔｅｒｉａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，　４０，　６０６−６１３，　１９９８
【非特許文献４】
Ｊ．　Ｇｕｉｃｈｅｕｘ　ｅｔ　ａｌ：　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ｍａｔｅｒｉａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，　３４，　１６５−１７０，　１９９７
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明者らは、これらの問題点を解決するために、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子のナノの空間を栓塞する徐放製剤の作製を試みた。まず、ハイドロキシアパタイトは生体反応性が少ないため、現在までの検討では、器質化がなく、焼き方によるが２〜５週間で皮下で完全に溶解し、バイオアベイラビリティも良く、バーストも起こらず、そして、栓塞併用でかなりの徐放効果が得られることを発見した。
【０００５】
そこで、本発明は、人の皮下または筋肉内に容易にしかも苦痛を起こさない量の同微粒子の注射で、長期にわたって徐放効果が得られる徐放性組成物、その製造法、その製剤及び皮膚用徐放性組成物を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
前記目的を達成するため、本発明の徐放性組成物は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔に生物学的活性薬剤（高分子、低分子医薬品）、ヒト血清タンパク質、ムコ多糖類を充填し、２価金属イオンを加えることにより栓塞してなるものである。
【０００７】
又、本発明の徐放性組成物は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔に生物学的活性薬剤、ヒト血清タンパク質、ムコ多糖類を充填した後、十分あるいは中等度凍結乾燥し、それに２価金属イオン溶液を入れ、微粒子全体を栓塞してなるものである。
【０００８】
又、本発明の徐放性組成物は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔に生物学的活性薬剤、ヒト血清タンパク質を充填し、２価金属イオンを加えることにより該微粒子の外層に栓塞してなるものである。
【０００９】
又、本発明の徐放性組成物は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔に生物学的活性薬剤、ヒト血清アルブミン、水溶性のカルシウム塩を次々または一度に充填し、次に炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム又は炭酸イオン水溶液を加えることにより、該微粒子の外層を栓塞してなるものである。
【００１０】
又、本発明の徐放性組成物は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔に生物学的活性薬剤、ヒト血清アルブミン、水溶性のカルシウム塩を次々または一度に充填した後、十分あるいは中等度凍結乾燥し、次に炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム又は炭酸イオン水溶液を加えることにより、該微粒子全体を栓塞してなるものである。
【００１１】
又、本発明の徐放性組成物は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔に生物学的活性薬剤、水溶性のカルシウム塩を次々または一度に充填し、次に炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム又は炭酸イオン水溶液を加えることにより、微粒子の外層を栓塞してなるものである。
【００１２】
又、本発明の徐放性組成物は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔の内部表面にハイドロキシアパタイトと特に結合性の高い生物活性薬剤を結合させてなるものである。
【００１３】
又、本発明の徐放性組成物は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔の内部表面に生物活性薬剤を結合させ更に２価金属イオンを加えることにより栓塞してなるものである。
【００１４】
又、本発明の徐放性組成物は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に存在する細孔の内部表面に２価金属イオンを結合させ更に生物活性薬剤を加えることにより栓塞してなるものである。
【００１５】
又、本発明の皮膚用徐放性組成物は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に皮膚疾患治療薬剤または日焼け止めなどの医薬部外品を基材とともに充填し、これを軟膏、クリーム、ローションと混和してなるものである。
【００１６】
この皮膚用徐放性組成物は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に充填されているので適切な量が皮膚に塗布される。そこで、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子から徐々に有効な成分が徐放されることになり、かつ多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に充填されている皮膚疾患治療薬剤または日焼け止めなどの医薬部外品等の紫外線吸収物質が徐々にしみ出す（即ち、徐放する）ので効果が持続することになる。
【００１７】
本発明の徐放性組成物の製造方法は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、生物学的活性薬剤とヒト血清タンパク質からなる水溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、これにムコ多糖類水溶液及び２価金属イオン溶液を混合し、分離して作製されるものである。
【００１８】
又、本発明の徐放性組成物の製造方法は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、生物学的活性薬剤とヒト血清タンパク質からなる水溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、これにムコ多糖類水溶液及び２価金属イオン溶液を混合し、分離し、さらにこれを凍結乾燥することにより作製されるものである。
【００１９】
又、本発明の徐放性組成物の製造方法は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、生物学的活性薬剤とヒト血清タンパク質からなる水溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、これにムコ多糖類水溶液を混合し、分離し、これを凍結乾燥後２価金属イオン溶液を加えてさらに凍結乾燥することにより作製されるものである。
【００２０】
又、本発明の徐放性組成物の製造方法は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、生物学的活性薬剤、ヒト血清タンパク質及び水溶性のカルシウム塩からなる水溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、これに炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム又は炭酸イオン水溶液を混合し、分離して作製されるものである。
【００２１】
又、本発明の徐放性組成物の製造方法は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、生物学的活性薬剤、ヒト血清タンパク質及び水溶性のカルシウム塩からなる水溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、分離し、これを凍結乾燥後、炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム又は炭酸イオン水溶液を加えてさらに凍結乾燥することにより作製されるものである。
【００２２】
又、本発明の徐放性組成物の製造方法は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、生物学的活性薬剤及び水溶性のカルシウム塩からなる水溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、分離し、これを凍結乾燥後、炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム又は炭酸イオン水溶液を加えてさらに凍結乾燥することにより作製されるものである。
【００２３】
又、本発明の徐放性組成物の製造方法は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、生物学的活性薬剤からなる水溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、これに２価金属イオン溶液を混合し、分離して作製されるものである。
【００２４】
さらに、本発明の徐放性組成物の製造方法は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に、２価金属イオン溶液を混和、攪拌して懸濁液を製し、これに生物学的活性薬剤からなる水溶液を混合し、分離して作製されるものである。
【００２５】
前記多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子がハイドロキシアパタイト懸濁液をスプレードライし、１００〜８００℃で焼成したものであることが好適である。８００℃以上だと細孔がつぶれてしまい、１００℃以下では焼成できないからである。
【００２６】
前記多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子の粒径が０．１〜２０μｍであることが好適である。
【００２７】
前記生物学的活性薬剤の徐放性組成物中の含量が少なくとも０．０１重量％であることが好適である。
【００２８】
前記ヒト血清タンパク質がヒト血清アルブミンあるいはγ−グロブリンであることが好適である。
【００２９】
前記ヒト血清タンパク質の徐放性組成物中の含量が少なくとも１重量％であることが好適である。
【００３０】
前記２価金属イオンが亜鉛イオン、銅イオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオンであることが好適である。
【００３１】
前記２価金属イオンの徐放性組成物中の含量が少なくとも０．０１重量％であることが好適である。
【００３２】
前記ムコ多糖体がコンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、デルマタン硫酸あるいはケラタン硫酸及びそれらの塩、のうち少なくとも１種であることが好適である。
【００３３】
前記ムコ多糖体の徐放性組成物中の含量がヒト血清タンパク質の１／１００以上であることが好適である。
【００３４】
前記徐放性組成物が皮下注射、皮内注射、筋肉内注射、眼球内投与及び皮膚塗布などに適した形態であることが好適である。
【００３５】
又、本発明の徐放性製剤は、前記の組成物に、必要に応じて製剤学的に受容可能な添加物を加えたことからなることが好適である。
【００３６】
前記製剤学的に受容可能な添加物が界面活性剤、防腐剤、又は安定化剤であることが好適である。
【００３７】
前記製剤が凍結乾燥されたものであることが好適である。
【００３８】
前記製剤が皮下注射、皮内注射、筋肉内注射、眼球内投与及び皮膚塗布などに適した形態であることが好適である。
【００３９】
前記水溶性のカルシウム塩が塩化カルシウム、酢酸カルシウム、硝酸カルシウムであることが好適である。
【００４０】
さらに、本発明の特徴を下記に記載する。
本発明は外層栓塞と全層栓塞とからなっている。いずれの栓塞方法の場合でも、まず主薬を単独又は栓塞に使用する物質や安定剤とともに、多孔性ハイドロキシアパタイトの細孔に入れ、沈殿を生じさせる物質すなわち２価金属イオンや炭酸ナトリウムもしくは炭酸水素ナトリウム又は炭酸イオン水溶液を加えることにより上記組成物を沈殿させることによって栓塞をつくる。或いは２価金属イオンを多孔性ハイドロキシアパタイトの細孔に入れ、次いで生物学的活性薬剤の水溶液を加えること、又、生物学的活性薬剤の水溶液を多孔性ハイドロキシアパタイトの細孔に入れ、次いで２価金属イオン溶液を加えることにより栓塞を形成させる。外層のみを栓塞する場合は組成物により内部の細孔を充填させた後、沈澱化物質を加える。全層を栓塞させる場合は、組成物の入った微粒子を一度凍結乾燥し、細孔に空気を入れ、沈澱化物が微粒子の内部にまで浸透することにより全層を栓塞することが出来る、ということである。
【００４１】
なお、ａ）多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子の大きさ、間隙のサイズと量、適切な焼成温度は何度か、ｂ）外層栓塞法の時、亜鉛塩、炭酸ナトリウムのみを最後に加えていること、又、医薬品、タンパク、ムコ多糖体は、混合液として充填した方が良いか、順次加えた方が良いか、ｃ）全体を栓塞する場合、凍結乾燥は完全にする方が良いか中等度が良いか、ｄ）医薬品は臨床上、必要量封入するとし、タンパク／ムコ多糖体／亜鉛などの最適比、ｅ）ムコ多糖体としてはコンドロイチン硫酸で良いか、ｆ）　薬物の性質によっては、２価金属イオンのみで栓塞が可能であるなど、個々の医薬品によって異なる。
【００４２】
【実施例】
以下に、本発明の実施例について記述する。
（実施例１）
１８０℃で焼成した多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子（ＨＡｐ）２０ｍｇに４．５４ｍｇ／ｍｌのＰＣ−ＢＤＮＦ（レシチン化ＢＤＮＦ）溶液を６６μｌ加え、ボルテックスにて１分間攪拌し、それに０．１％ＨＳＡ溶液を４３４μｌ加え、再び１分間攪拌した。それらを３分間静置させてから１０００ｒｐｍ、３分間の遠心をかけ、上清を回収し、沈渣に５ｍＭ　Ｚｎ（ＣＨ３ＣＯＯ）２　／５％　Ｍａｎｎｉｔｏｌ溶液を５００μｌ加え、攪拌しサンプルを調製した。コントロールとして４．５４ｍｇ／ｍｌ　のＰＣ−ＢＤＮＦ溶液を６６μｌと５％Ｍａｎｎｉｔｏｌを４３４μｌとを混和させたサンプルも調製した。これらを６週齢雄ｄｄｙマウスの皮下に５００μｌ投与し、投与後、２、７、１７時間、１、２、４日後に眼窩採血を行い、ＰＣ−ＢＤＮＦの血中濃度をＥＬＩＳＡ　ＫＩＴ（Ｐｒｏｍｅｇａ）にて測定を行った。その結果すぐれた徐放効果が得られた。この結果を図１に示した。
【００４３】
（実施例２）
２２５μｇ／ｍｌ　ＩＦＮα（インターフェロンα，住友製薬）　０．８５４ｍｌと２０ｍｇ／ｍｌ　ＨＳＡ　１．２ｍｌを混合し、タンパク混合液を調製した。１８０℃で焼成したＨＡｐ　２００ｍｇにタンパク混合液　０．８５６ｍｌを混和し攪拌してタンパクをＨＡｐに封入させた。これに２０ｍｇ／ｍｌ　コンドロイチン硫酸（ＣＳ，ＷＡＫＯ）　０．０５ｍｌ、Ｈ２Ｏ　０．０７４ｍｌ、１Ｍ　Ｚｎ（ＣＨ３ＣＯＯ）２　０．０２ｍｌを順に加えた。１５０００ｒｐｍ，５ｍｉｎ．の遠心を行い、沈渣に２０ｍＭ　Ｚｎ（ＣＨ３ＣＯＯ）２　／５％　Ｍａｎｎｉｔｏｌ溶液を２ｍｌ加えてサンプルとした。
コントロールは、ＩＦＮα入りタンパク混合液０．８５６ｍｌにＨ２Ｏ　０．６４４ｍｌ、２０％　Ｍａｎｎｉｔｏｌ　０．５ｍｌ加えて、これをＩＦＮα（ｆｒｅｅ）の溶液とした。
８週齢雄のｄｄｙマウス（体重３３〜４０ｇ，ＳＬＣ）に上記で調整したサンプルを０．５ｍｌ皮下投与した。投与４時間後、１〜１０日後までマウスから眼窩採血を行い、血液を採取した。この血液のＩＦＮα血中濃度をＥＬＩＳＡ　ＫＩＴ（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ社）にて測定、血中薬物動態を図２に示した。結果、すぐれた徐放効果が得られた。
【００４４】
（実施例３）
０．９３７ｍｇ／ｍｌ　ＩＦＮα　０．０６ｍｌと２０ｍｇ／ｍｌ　ＨＳＡ　０．３ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ　ＣＳ　０．０３ｍｌ、Ｈ２Ｏ　１．２２ｍｌを混合し、この溶液に１８０℃で焼成したＨＡｐ　２００ｍｇを作用させた。攪拌によりタンパクをＨＡｐに封入させた後、Ｈ２Ｏ　１０ｍｌを加え、軽く攪拌し、３０００ｒｐｍ，５ｍｉｎ．で遠心をした。沈渣を凍結乾燥して、２等分した。一方には２０ｍＭ　Ｚｎ（ＣＨ３ＣＯＯ）２　／５％　Ｍａｎｎｉｔｏｌ溶液を１ｍｌ、他方には５ｍＭ　Ｚｎ（ＣＨ３ＣＯＯ）２　／５％　Ｍａｎｎｉｔｏｌ溶液１ｍｌを加えた。
コントロールとして、０．９３７ｍｇ／ｍｌ　ＩＦＮα　０．０１５ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ　ＨＳＡ　０．０７５ｍｌ、Ｈ２Ｏ　０．６６ｍｌ、２０％　Ｍａｎｎｉｔｏｌ　０．２５ｍｌ加えて、ＩＦＮα（ｆｒｅｅ）の溶液として調整した。
７週齢雄のｄｄｙマウス（体重３１〜３３ｇ，ＳＬＣ）に上記で調整したサンプルを０．７ｍｌ皮下投与した。投与４時間後、１〜７日後までマウスから眼窩採血を行い、血液を採取した。この血液のＩＦＮα血中濃度をＥＬＩＳＡ　ＫＩＴ（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ社）にて測定、血中薬物動態を図３に示した。結果、亜鉛が２０ｍＭの場合は、血中濃度の上昇は不十分であったが著しく長期にわたって徐放を示した。一方、亜鉛が５ｍＭの場合は、血中濃度の上昇は良いが比較的すみやかに血中濃度は低下した。
【００４５】
（実施例４）
１８０℃で焼成したＨＡｐ５０ｍｇに予め混和しておいたＧ−ＣＳＦ、ＨＳＡ、ＣａＣｌ２溶液（３μｇ、３０μｇ、２８０ｍｇ／ｍｌ）を１００μｌ加え、ボルテックスにて３分間攪拌し、５分間静置させ、凍結乾燥した。得られた粒子に２２０ｍｇ／ｍｌのＮａ２ＣＯ３溶液を１００μｌ加え、ボルテックスにて３分間攪拌し、さらに水１００μｌを加え、軽く攪拌した。一部をＥＬＩＳＡ測定用に採取し、残りを１０００ｒｐｍ、３分間の遠心をかけ、上清を回収、沈渣にＰＢＳ　２ｍｌを加えて、室温で軽く振とうし、０時間、０．５時間後にそれぞれ上清を回収した。さらにその沈渣にＰＢＳ　１０　ｍｌを加えて室温で振とうし、０時間、０．５時間後にそれぞれ上清を回収、最後の沈渣と途中で得られた上清をＥＬＩＳＡ　ＫＩＴ（ＩＢＬ）により測定した。最後の沈渣は１％　ＢＳＡ／Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ５）にて溶解し、ＥＬＩＳＡ測定用とした。この結果を図４−Ａに示した。また、ＨＡｐ　５０ｍｇに１．５μｇ／　ｍｌのＧ−ＣＳＦ　溶液を２００μｌ加え、多孔を充填し、さらにＰＢＳを２　ｍｌ加え、同様に放出試験を行った結果を図４−Ｂに示した。このように栓塞技術により放出は著しく抑えられた。
【００４６】
（実施例５）
１８０℃で焼成したＨＡｐ５０ｍｇに１００ｍｇ／ｍｌのＳＯＤ溶液を１０μｌまたは４０ｍｇ／ｍｌのＰＣ−ＳＯＤ（レシチン化ＳＯＤ）溶液を２５μｌ加え、ボルテックスにて１分間攪拌し、それに水を９９０μｌまたは９７５μｌ加え、再び１分間攪拌した。それらを３分間静置させてから１０００ｒｐｍ、３分間の遠心をかけ、上清を回収し、沈渣に水２ｍｌを加え攪拌し、１０００ｒｐｍ、３分間の遠心をかけ、上清を回収、さらにその沈渣にＰＢＳ　２ｍｌを加え攪拌し、１０００ｒｐｍ、３分の遠心をかけ、上清を回収した。これで得られた沈渣にＰＢＳ　１ｍｌを加えて室温で振とうし、０時間、１時間後にそれぞれ上清を回収し、上清と最後の沈渣はＢＣＡ　ａｓｓａｙ（ＰＩＥＲＣＥ）により測定した。その結果を図５に示した。このように化学修飾により、ＨＡｐへの吸着量が増す蛋白がある。
【００４７】
（実施例６）
凍結乾燥品と１８０℃、８００℃で焼成したＨＡｐ　２４ｍｇに５％　Ｍａｎｎｉｔｏｌを６ｍｌ加えボルテックスで１分間攪拌し、ＨＡｐ溶液を調整した。１３週齢雄のＷｉｓｔａｒラット（体重３３０．４００ｇ，　ＳＬＣ）の背中３ケ所に、それぞれのＨＡｐ溶液を、投与した場所が重ならないように５００μｌずつ投与した。これらを２時間、４，７，１１，１４，１８，２１日後に背中を切開し、ＨＡｐの残存量を写真で撮影した。後日、数名により写真にて、おおよその残存量を目で評価した。その結果、ＨＡｐはいずれもほぼ２〜３週で消失するが焼成温度が高いほど消失しにくかった。この結果を図６に示した。
【００４８】
（実施例７）　　亜鉛を介したＧ−ＣＳＦのヒドロキシアパタイトへの吸着
４０ｍｇのヒドロキシアパタイト粒子をＧ−ＣＳＦ溶液（１００μｇ／ｍｌ）１００μｌ中に１０分間浸した後９００μｌの精製水を加え攪拌、遠心分離後上清をすて、再度精製水で沈殿を攪拌し遠心分離することによって過剰のＧ−ＣＳＦを除去した。沈殿をｐＨ４の酢酸緩衝液に懸濁し、Ｇ−ＣＳＦを溶出させ遠心分離後上清のＧ−ＣＳＦ量をＥＬＩＳＡで測定しＧ−ＣＳＦの吸着量を求めたところ０．１μｇ以下とほとんど吸着がみられなかった。
そこで以下の様な操作で亜鉛をヒドロキシアパタイト粒子に吸着させその粒子へＧ−ＣＳＦ吸着を試みた。１０ｍｇのヒドロキシアパタイトを２００μｌの酢酸亜鉛（５ｍｇ／ｍｌ）に懸濁、１０分間室温に放置後１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離、上清を捨てた。沈殿を５００μｌの精製水で懸濁し、１０分間室温に放置後１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離、上清を捨てた。再度、懸濁、遠心分離後、上清を捨てた。この沈殿を０．５ｍｌの２００μｇ／ｍｌあるいは１０００μｇ／ｍｌのＧ−ＣＳＦ溶液中に懸濁し、１０分間放置後１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清のＧ−ＧＳＦ量をＥＬＩＳＡ法で測定した。さらに沈殿を０．１ＭＥＤＴＡ、１％ＨＡＳ溶液でハイドロキシアパタイトに含まれるＧ−ＣＳＦを溶出させ、遠心分離後上清のＧ−ＣＳＦ濃度をＥＬＩＳＡ法で測定しハイドロキシアパタイトへの吸着量を求めた。
表１に示すようにあらかじめヒドロキシアパタイトを亜鉛塩で処理することによって１０ｍｇのヒドロキシアパタイトに添加したＧ−ＣＳＦの８０．０〜８６．４％が吸着した。
１０ｍｇのヒドロキシアパタイトに最大４００μｇのＧ−ＣＳＦを吸着させることができた。
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【００４９】
（実施例８）
多孔性ヒドロキシアパタイト（ＨＡＰ）を４５ｍｇ精秤し、それにインターフェロン−α（ＩＦＮ）の２．４ｍｇ／ｍｌ溶液からＩＦＮとして３０μｇを加え、１０分間放置した。その後、これに２０ｍＭ／１ｍｌの酢酸亜鉛溶液を１ｍｌ加え、３０分間振とうした。この分散液に１．５ｍｌの水を加え、洗浄して洗浄液中ＩＦＮを定量したところ、ＩＦＮは検出されなかった。すなわち、全てのＩＦＮはＨＡＰに吸着していることが確認された。このように、有機溶媒を使用しないでタンパク質であるＩＦＮを吸着した微粒子製剤をえることができた。洗浄後得られた粉末に２０％ＦＣＳ含有のＰＢＳ溶液２０ｍｌを加え、３７℃で１６時間振とうした。上清に溶出してきたＩＦＮを定量して溶出率を算出した。表２に示す結果が得られた。
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酢酸亜鉛の添加によって溶出は抑制され、無添加に比較してより長時間にわたる徐放性を示した。
【図面の簡単な説明】
【図１】ｄｄｙマウスにおけるＰＣ−ＢＤＮＦ−ＨＡｐ製剤投与後のＰＣ−ＢＤＮＦの血中濃度の推移を示す図である。
【図２】ＩＦＮα−ＨＡｐ製剤投与後ｄｄｙマウスＩＦＮα血中濃度の推移を示す図である。
【図３】Ｚｎ濃度がＩＦＮ−ＨＡｐ製剤の徐放に与える影響を示す図である。
【図４】栓塞の有・無によるＧ−ＣＳＦのＨＡｐへの結合の違いを示す図である。
【図５】ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける医薬品溶出結果を示す図である。
【図６】焼成温度の違いによる生体内溶解性の比較を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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