【手続補正書】
【提出日】平成23年9月30日(2011.9.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プライミングした結合組織細胞及び薬学的に許容可能なその担体を含む組成物。
【請求項２】
細胞が線維芽細胞、軟骨細胞又は線維芽細胞様軟骨細胞である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
細胞がヒト細胞である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
注射可能である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
請求項１に記載の組成物を含む、約−７０℃〜約−１９６℃の温度で細胞を貯蔵する貯蔵容器。
【請求項６】
発現させようとする遺伝子をトランスフェクト又は形質導入した哺乳動物細胞の第２の集団をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
混合細胞組成物であって、硝子軟骨を生成するのに有効な量で、
（ａ）プライミングした軟骨細胞又は線維芽細胞の第１の集団、
（ｂ）ＴＧＦ−βスーパーファミリーの成員をコードする遺伝子をトランスフェクト又は形質導入した線維芽細胞又は軟骨細胞の第２の集団、及び
（ｃ）薬学的に許容可能なその担体を含む、組成物。
【請求項８】
前記遺伝子がＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−３、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−６、ＢＭＰ−７又はＢＭＰ−９である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの成員をコードする遺伝子をトランスフェクト又は形質導入した線維芽細胞又は軟骨細胞の該第２の集団に対する、プライミングした細胞の該第１の集団の比率が約１〜２０対１である、請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
前記比率が約１〜１０対１である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記比率が約１〜３対１である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
遺伝子をトランスフェクト又は形質導入した細胞の該第２の集団が、照射を受けたものである、請求項７に記載の組成物。
【請求項１３】
細胞の第１の集団及び細胞の第２の集団が、同じ供給源生物に由来するものである、請求項７に記載の組成物。
【請求項１４】
細胞の第１の集団及び細胞の第２の集団が、異なる供給源生物に由来するものである、請求項７に記載の組成物。
【請求項１５】
骨関節炎の治療剤であって、
（Ａ）
（ｉ）結合組織細胞をサイトカインを含む組成物とインキュベートして、プライミングした細胞の第１の集団を作り出す、インキュベートする工程、及び
（ｉｉ）任意で該サイトカインと該結合組織細胞とを分離する工程
を含む、細胞の第１の集団を作り出すこと、
（Ｂ）
（ｉ）プロモーターと操作可能に結合した、治療用タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含む組み換えベクターを生成する工程、
（ｉｉ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞の集団に前記組み換えベクターをトランスフェクト又は形質導入して、細胞の第２の集団を作り出す、トランスフェクト又は形質導入する工程
を含む、細胞の第２の集団を作り出すこと、並びに、
（Ｃ）治療的有効量の細胞の該第１及び第２の集団の混合物、並びに非生物三次元構造ではない薬学的に許容可能なその担体を、哺乳動物の関節腔の軟骨を生成することが望まれる標的関節部位に注射することを含み、内因的に存在する形態の該結合組織細胞が該標的部位で減少しており、該標的部位での該細胞混合物の存在が軟骨の再生を刺激して、骨関節炎が治療される、治療剤。
【請求項１６】
請求項７に記載の混合細胞組成物を含む、約−７０℃〜約−１９６℃の温度で細胞を貯蔵する貯蔵容器。
【請求項１７】
哺乳動物において標的部位で軟骨の再生を刺激する方法であって、
（ｉ）結合組織細胞をサイトカインを含む組成物とインキュベートし、プライミングした細胞を作り出す、インキュベートすること、
（ｉｉ）任意で該サイトカインと該結合組織細胞とを分離すること、及び
（ｉｉｉ）治療的有効量の該プライミングした細胞を、軟骨を生成することが望まれる標的関節部位に注射することを含み、内因的に存在する形態の該結合組織細胞が該標的部位で減少しており、該標的部位での該プライミングした細胞の存在が軟骨の再生を刺激する、方法。
【請求項１８】
結合組織細胞が線維芽細胞、軟骨細胞又は線維芽細胞様軟骨細胞である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
軟骨細胞が初代ヒト軟骨細胞である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
サイトカインがＴＧＦ−βスーパーファミリーに属する成員である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
結合組織細胞を約１時間〜約４０時間インキュベートする、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
サイトカインがＴＧＦ−βである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
サイトカインが少なくとも１ｎｇ／ｍｌの量で存在する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
混合細胞組成物を生成する方法であって、
（Ａ）
（ｉ）結合組織細胞をサイトカインを含む組成物とインキュベートして、プライミングした細胞の第１の集団を作り出す、インキュベートする工程、及び
（ｉｉ）任意で該サイトカインと該結合組織細胞とを分離する工程
を含む、細胞の第１の集団を作り出すこと、
（Ｂ）
（ｉ）プロモーターと操作可能に結合した、治療用タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含む組み換えベクターを生成する工程、
（ｉｉ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞の集団に前記組み換えベクターをトランスフェクト又は形質導入して、細胞の第２の集団を作り出す、トランスフェクト又は形質導入する工程
を含む、細胞の第２の集団を作り出すこと、並びに、
（Ｃ）細胞の該第１及び第２の集団を混合し、該混合細胞組成物を得る、混合することを含む、方法。
【請求項２５】
哺乳動物において標的部位で軟骨の再生を刺激する方法であって、
（Ａ）
（ｉ）結合組織細胞をサイトカインを含む組成物とインキュベートして、プライミングした細胞の第１の集団を作り出す、インキュベートする工程、及び
（ｉｉ）任意で該サイトカインと該結合組織細胞とを分離する工程
を含む、細胞の第１の集団を作り出すこと、
（Ｂ）
（ｉ）プロモーターと操作可能に結合した、治療用タンパク質をコードするＤＮＡ配列を含む組み換えベクターを生成する工程、
（ｉｉ）ｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞の集団に前記組み換えベクターをトランスフェクト又は形質導入して、細胞の第２の集団を作り出す、トランスフェクト又は形質導入する工程
を含む、細胞の第２の集団を作り出すこと、並びに、
（Ｃ）治療的有効量の細胞の該第１及び第２の集団の混合物を、軟骨を生成することが望まれる標的関節部位に注射することを含み、内因的に存在する形態の該結合組織細胞が該標的部位で減少しており、該標的部位での該細胞混合物の存在が軟骨の再生を刺激する、方法。
【請求項２６】
前記遺伝子がＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−３、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−６又はＢＭＰ−７である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
細胞の第１及び第２の集団が宿主レシピエントに関して同系である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
第１及び第２の集団の細胞が宿主レシピエントに関して同種異系である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
第１及び第２の細胞の集団が宿主レシピエントに関して異種である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
前記組み換えベクターがウイルスベクターである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
前記組み換えベクターがプラスミドベクターである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
前記細胞を移植の前に貯蔵する、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
前記細胞を移植の前に凍結保存剤中に貯蔵する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
結合組織細胞の倍加時間を短縮する方法であって、結合組織細胞をサイトカインを含む組成物とインキュベートして、プライミングした細胞を作り出す、インキュベートすることを含む、方法。
【請求項３５】
結合組織細胞が線維芽細胞、軟骨細胞又は線維芽細胞様軟骨細胞である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
軟骨細胞が初代ヒト軟骨細胞である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
サイトカインがＴＧＦ−βスーパーファミリーに属する成員である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
細胞を該サイトカインと約１時間〜約４０時間インキュベートする、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
倍加時間が対照のインキュベートしていない細胞の約半分である、請求項３４に記載の方法。
【請求項４０】
サイトカインがＦＧＦとＴＧＦβ１との組み合わせである、請求項３４に記載の方法。
【請求項４１】
組成物が３，３’，５−トリヨード−Ｌ−サイロニンをさらに含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
被験体が変性性関節炎を患っている、請求項１７に記載の方法。
【請求項４３】
標的部位が脊髄である、請求項１７に記載の方法。