【手続補正書】
【提出日】平成26年7月18日(2014.7.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組み換え型ヒトＮ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ（ＧＡＬＮＳ）酵素を精製する方法であって、前記ＧＡＬＮＳ酵素は、配列番号４のアミノ酸２７〜５２２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記ＧＡＬＮＳ酵素は、
非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供されると、クマシーブルー染色により判定される、少なくとも約９５％の純度を有し、
位置５３のシステイン残基のＣα−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）への少なくとも約５０％の変換を有し、
単量体タンパク質鎖当たり、０．５〜０．８のビスリン酸化されたオリゴマンノース鎖を有し、
前記ＧＡＬＮＳ酵素の少なくとも９８％は、ＳＤＳ−ＣＧＥによって判定される、前駆体形態にあり、
ａ）ヒトスルファターゼ修飾因子１（ＳＵＭＦ１）および前記組み換え型ヒトＧＡＬＮＳ酵素を発現する哺乳動物の細胞株から分泌される、前記ＧＡＬＮＳ酵素を含有する培養培地を濾過し、前記濾過された培養培地を限外濾過／透析濾過し、それによって、前記限外濾過／透析濾過された培養培地を、２０倍に濃縮し、前記２０倍に濃縮した限外濾過／透析濾過された培養培地を、炭濾過することと、
ｂ）ステップａ）からの前記炭濾過した２０倍の限外濾過／透析濾過培養培地を、Ｚｎキレート化Ｓｅｐｈａｒａｏｓｅ  ＦＦ捕捉カラムに充填し、前記ＧＡＬＮＳ酵素が前記カラム上に保持されるような条件下で、前記カラムを洗浄し、前記カラムから前記ＧＡＬＮＳ酵素を溶出することと、
ｃ）任意で、ステップｂ）における前記Ｚｎキレート化Ｓｅｐｈａｒａｏｓｅ  ＦＦ捕捉カラムからの溶出液を、フィルタを通して濾過し、ウイルスを除去することと、
ｄ）ステップｂ）からの前記Ｚｎキレート化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ捕捉カラムからの前記溶出液、またはステップｃ）からの前記濾液のｐＨを、約ｐＨ４．５±０．１に調節し、前記ｐＨ４．５に調節された前記Ｚｎキレート化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ捕捉カラムからの溶出液または濾液を濾過することと、
ｅ）前記ｐＨ４．５に調節された前記Ｚｎキレート化ＦＦ捕捉カラムからの溶出液またはステップｄ）からの濾液を、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  ＥＭＤ  ＳＥ  Ｈｉ−Ｃａｐ陽イオン交換カラムに充填し、前記ＧＡＬＮＳ酵素が前記カラム上に保持されるような条件下で、前記カラムを洗浄し、前記カラムから前記ＧＡＬＮＳ酵素を溶出することと、
ｆ）ステップｅ）からの前記Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  ＥＭＤ  ＳＥ  Ｈｉ−Ｃａｐ陽イオン交換カラムからの前記溶出液のｐＨを、ウイルス不活性化のために約ｐＨ３．５±０．１に調節することと、
ｇ）ステップｆ）からの前記ｐＨ３．５のウイルス不活性化溶出液を約ｐＨ５．０に調節し、次いで前記ｐＨ５．０に調節されたウイルス不活性化溶出液をＴｏｙｏＰｅａｒｌ  Ｂｕｔｙｌ  ６５０Ｍのポリッシングカラムに充填し、前記ＧＡＬＮＳ酵素が前記カラム上に保持されるような条件下で、前記カラムを洗浄し、前記カラムから前記ＧＡＬＮＳ酵素を溶出することと、
ｈ）ステップｇ）からの前記ＴｏｙｏＰｅａｒｌ  Ｂｕｔｙｌ  ６５０Ｍのポリッシングカラムからの前記溶出液を緩衝液交換して、２０ｍＭ  ＮａＯＡｃ／ＨＯＡｃ、５０ｍＭ
ＮａＨ２ＰＯ４、３０ｍＭアルギニンＨＣｌ、２％（ｗ／ｖ）ソルビトールを含む、ｐＨ５．４の製剤にし、前記製剤中の前記ＧＡＬＮＳ酵素の濃度を、約３ｍｇ／ｍＬに調節することと、
ｉ）ステップｈ）の前記緩衝液交換した製剤を、ＤＶ２０フィルタおよびＭｕｓｔａｎｇ
Ｑフィルタで濾過することによって、あらゆる残存ウイルスおよび／またはＤＮＡを除去することと、
ｊ）ステップｉ）の前記製剤に、最終濃度０．０１％（ｗ／ｖ）まで、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）を添加することと、を含む、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の精製される組成物であって、前記組成物は、組み換え型ヒトＮ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ（ＧＡＬＮＳ）酵素を含み、前記ＧＡＬＮＳ酵素は、配列番号４のアミノ酸２７〜５２２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記ＧＡＬＮＳ酵素が、
非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供されると、クマシーブルー染色により判定される、少なくとも約９５％の純度を有し、
位置５３のシステイン残基のＣα−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）への少なくとも約５０％の変換を有し、
単量体タンパク質鎖当たり、０．５〜０．８のビスリン酸化されたオリゴマンノース鎖を有し、
前記ＧＡＬＮＳ酵素の少なくとも９８％は、ＳＤＳ−ＣＧＥによって判定される、前駆体形態にある、組成物。
【請求項３】
請求項１に従って精製された、精製された組み換え型ヒトＮ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ（ＧＡＬＮＳ）酵素を含む組成物の、ムコ多糖症ＩＶａ型（ＭＰＳ  ＩＶａ）またはモルキオＡ症候群を患う対象を治療するための医薬の製造における使用であって、前記ＧＡＬＮＳ酵素は、配列番号４のアミノ酸２７〜５２２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記ＧＡＬＮＳ酵素が、
非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供されると、クマシーブルー染色により判定される、少なくとも約９５％の純度を有し、
位置５３のシステイン残基のＣα−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）への少なくとも約５０％の変換を有し、
単量体タンパク質鎖当たり、０．５〜０．８のビスリン酸化されたオリゴマンノース鎖を有し、
前記ＧＡＬＮＳ酵素の少なくとも９８％は、ＳＤＳ−ＣＧＥによって判定される、前駆体形態にある、使用。
【請求項４】
製剤であって、
（ａ）請求項１に従って精製された組み換え型ヒトＮ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ（ＧＡＬＮＳ）酵素であって、前記ＧＡＬＮＳ酵素は、配列番号４のアミノ酸２７〜５２２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、
非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供されると、クマシーブルー染色により判定される、少なくとも約９５％の純度を有し、
位置５３のシステイン残基のＣα−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）への少なくとも約５０％の変換を有し、
単量体タンパク質鎖当たり、０．５〜０．８のビスリン酸化されたオリゴマンノース鎖を有し、
前記ＧＡＬＮＳ酵素の少なくとも９８％は、ＳＤＳ−ＣＧＥによって判定される、前駆体形態にある、酵素と、
（ｂ） （ｉ）前記ＧＡＬＮＳ酵素の脱リン酸化を低減するのに効果的な量のリン酸緩衝
液と、
（ｉｉ）アミノ酸塩、アミノ酸緩衝液、界面活性剤、およびポリオールからなる群から選択される、１つ以上の安定剤の安定量と、を含む、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含み、
前記製剤が、約５．０〜５．８のｐＨである、製剤。
【請求項５】
前記製剤は、酢酸緩衝液である第２の緩衝液を、さらに含む、請求項４に記載の製剤。
【請求項６】
前記１つ以上の安定剤は、アルギニンの塩または緩衝液、任意で塩酸アルギニン；ポリソルベート、任意でポリソルベート２０；および三価以上の糖アルコール、任意でソルビトールである、請求項４に記載の製剤。
【請求項７】
前記ＧＡＬＮＳ酵素は、ＲＰ−ＨＰＬＣによって判定される場合、少なくとも９５％純粋である、請求項４に記載の製剤。
【請求項８】
前記ＧＡＬＮＳ酵素の５０％〜８０％は、マンノース−６−リン酸受容体カラムに結合する、請求項４に記載の製剤。
【請求項９】
前記ＧＡＬＮＳ酵素は、約１〜５ｎＭの、好ましくは約１〜３．５ｎＭの、線維芽細胞内への特異的取り込み（Ｋ取り込み）を示す、請求項４に記載の製剤。
【請求項１０】
ＧＡＬＮＳ酵素の濃度は、約０．５〜１．５ｍｇ／ｍＬである、請求項４に記載の製剤。
【請求項１１】
前記緩衝剤は、ＮａＯＡｃ／ＨＯＡｃおよびＮａＨ２ＰＯ４である、請求項５に記載の製剤。
【請求項１２】
ＮａＯＡｃ／ＨＯＡｃの濃度は、約１０〜３０ｍＭであり、ＮａＨ２ＰＯ４の濃度は、約２５〜７５ｍＭである、請求項１１に記載の製剤。
【請求項１３】
前記安定剤は、アルギニンＨＣｌ、Ｔｗｅｅｎ−２０、およびソルビトールである、請求項６に記載の製剤。
【請求項１４】
アルギニンＨＣｌの濃度は、約１０〜５０ｍＭであり、Ｔｗｅｅｎ−２０の濃度は、約０．００５％〜０．０１５％（ｗ／ｖ）であり、ソルビトールの濃度は、約１．０％〜３．０％（ｗ／ｖ）である、請求項１３に記載の製剤。
【請求項１５】
製剤であって、
（ａ）請求項１に従って精製された組み換え型ヒトＮ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ（ＧＡＬＮＳ）酵素であって、前記ＧＡＬＮＳ酵素は、配列番号４のアミノ酸２７〜５２２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、
非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供されると、クマシーブルー染色により判定される、少なくとも約９５％の純度を有し、
位置５３のシステイン残基のＣα−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）への少なくとも約５０％の変換を有し、
単量体タンパク質鎖当たり、０．５〜０．８のビスリン酸化されたオリゴマンノース鎖を有し、
前記ＧＡＬＮＳ酵素の少なくとも９８％が、非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供されると、クマシーブルー染色によって判定される、前駆体形態にある、酵素と、
（ｂ） （ｉ）緩衝剤としてＮａＯＡｃ／ＨＯＡｃおよびＮａＨ２ＰＯ４であって、ここで、ＮａＯＡｃ／ＨＯＡｃの濃度は、約２０±１０ｍＭであり、ＮａＨ２ＰＯ４の濃度は、約５０±２５ｍＭである、と、
（ｉｉ）安定剤としてアルギニンＨＣｌ、Ｔｗｅｅｎ−２０、およびソルビトールであて、ここで、アルギニンＨＣｌの濃度は、約３０±２０ｍＭであり、Ｔｗｅｅｎ−２０の濃度は、約０．０１％±０．００５％（ｗ／ｖ）であり、ソルビトールの濃度は、約２．０％±１．０％（ｗ／ｖ）である、と、
（ｉｉｉ）約５．４±０．４のｐＨと、を含み、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、製剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６３】
この細胞に基づく方法は、リソソーム酵素活性の検出において、高い感受性を可能にする。幾つかの実施形態において、リソソーム酵素活性は、リソソーム酵素の濃度が、約１０ｎＭ、または約５ｎＭ、または約１ｎＭ、または約０．７５ｎＭ、または約０．５ｎＭ、または約０．２５ｎＭ、または約０．１ｎＭ、または約０．０５ｎＭ、または約０．０１ｎＭ、または約０．００５ｎＭ、または約１ｐＭ、または約０．５ｐＭ程度の低さである場合に、検出可能である。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
組み換え型ヒトＮ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ（ＧＡＬＮＳ）酵素を精製する方法であって、前記ＧＡＬＮＳ酵素は、配列番号４のアミノ酸２７〜５２２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記ＧＡＬＮＳ酵素が、
（ｉ）非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供されると、クマシーブルー染色により判定される、少なくとも約９５％の純度を有し、
（ｉｉ）位置５３のシステイン残基のＣα−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）への少なくとも約５０％の変換を有し、
（ｉｉｉ）任意で、単量体タンパク質鎖当たり、０．５〜０．８のビスリン酸化されたオリゴマンノース鎖を有し、
前記ＧＡＬＮＳ酵素の少なくとも９７％は、ＳＤＳ−キャピラリーゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＣＧＥ）によって判定される、前駆体形態にあり、
ａ）ヒトスルファターゼ修飾因子１（ＳＵＭＦ１）および前記組み換え型ヒトＧＡＬＮＳ酵素を発現する哺乳動物の細胞株から分泌される、前記ＧＡＬＮＳ酵素を含有する培養培地を濾過し、前記濾過された培養培地を限外濾過／透析濾過し、前記限外濾過／透析濾過された培養培地を炭濾過することと、
ｂ）ステップａ）からの前記炭濾過された限外濾過／透析濾過培養培地を、捕捉カラムに充填し、前記ＧＡＬＮＳ酵素が前記捕捉カラム上に保持されるような条件下で、前記捕捉カラムを洗浄し、前記捕捉カラムから前記ＧＡＬＮＳ酵素を溶出することと、
ｃ）任意で、ステップｂ）の前記捕捉カラムからの前記溶出液を、フィルタを通して濾過し、ウイルスを除去することと、
ｄ）ステップｂ）からの前記捕捉カラムからの前記溶出液、またはステップｃ）からの前記濾液のｐＨを、酸性ｐＨに調節し、前記酸性ｐＨに調節された前記捕捉カラムからの溶出液または酸性ｐＨに調節された濾液を濾過することと、
ｅ）前記酸性ｐＨに調節された前記捕捉カラムからの溶出液または酸性ｐＨに調節されたステップｄ）からのＱ濾液を、中間カラムに充填し、前記ＧＡＬＮＳ酵素が前記中間カラム上に保持されるような条件下で、前記中間カラムを洗浄し、前記中間カラムから前記ＧＡＬＮＳ酵素を溶出することと、
ｆ）ステップｅ）の前記中間カラムからの前記溶出液を、ウイルス不活性化のために、低ｐＨに調節することと、
ｇ）ステップｆ）からの前記低ｐＨのウイルス不活性化溶出液を、ポリッシングカラムに充填し、前記ＧＡＬＮＳ酵素が前記ポリッシングカラム上に保持されるような条件下で、前記ポリッシングカラムを洗浄し、前記ポリッシングカラムから前記ＧＡＬＮＳ酵素を溶出することと、を含む、方法。
（項目２）
前記培養培地は、ステップａ）において約２０倍に濃縮される、項目１に記載の方法。
（項目３）
ステップａ）の前記炭フィルタは、Ｚｅｔａ  Ｐｌｕｓ  Ｒ５５活性炭フィルタである、項目１に記載の方法。
（項目４）
ステップｂ）の前記捕捉カラムは、Ｚｎ固定化金属親和性クロマトグラフィー（Ｚｎ−ＩＭＡＣ）カラムである、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記Ｚｎ−ＩＭＡＣカラムは、Ｚｎキレート化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦカラムである、項目４に記載の方法。
（項目６）
ステップｃ）が実行され、前記フィルタは、Ｍｕｓｔａｎｇ  Ｑフィルタである、項目１に記載の方法。
（項目７）
ステップｂ）からの前記捕捉カラムからの前記溶出液またはステップｃ）の前記濾液の前記ｐＨは、ステップｄ）において、約４．５±０．１に調節される、項目１に記載の方法。
（項目８）
ステップｅ）の前記中間カラムは、陽イオン交換カラムである、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記陽イオン交換カラムは、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  ＥＭＤ  ＳＥ  ＨｉＣａｐカラムである、項目８に記載の方法。
（項目１０）
ウイルス不活性化のための前記酸性ｐＨは、ステップｆ）で約３．５±０．１に調節される、項目１に記載の方法。
（項目１１）
ステップｇ）の前記ポリッシングカラムは、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）カラムである、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記ＨＩＣカラムは、ＴｏｙｏＰｅａｒｌ  Ｂｕｔｙｌ  ６５０Ｍカラムである、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
ｈ）ステップｇ）の前記ポリッシングカラムからの前記溶出液を緩衝液交換して、製剤にすることと、
ｉ）ステップｈ）からの前記緩衝液交換した製剤を、ウイルスフィルタおよびＤＮＡフィルタで濾過することによって、あらゆる残存ウイルスおよびＤＮＡを除去することと、
ｊ）ステップｉ）からの前記製剤に、非イオン性界面活性剤を添加することと、をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１４）
ステップｈ）における前記製剤は、２０ｍＭ  ＮａＯＡｃ／ＨＯＡｃ、５０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、３０ｍＭ  アルギニンＨＣｌ、２％（ｗ／ｖ）ソルビトール、ｐＨ５．４を含む、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
ステップｈ）における前記製剤中の前記ＧＡＬＮＳ酵素は、約３ｍｇ／ｍＬに調節される、項目１３に記載の方法。
（項目１６）
ステップｉ）における前記ウイルスフィルタは、ＤＶ２０フィルタであり、ステップｉ）における前記ＤＮＡフィルタは、Ｍｕｓｔａｎｇ  Ｑフィルタである、項目１３に記載の方法。
（項目１７）
ステップｊ）における前記非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）であり、最終形成時のＰＳ２０の濃度は、０．０１％（ｗ／ｖ）である、項目１３に記載の方法。
（項目１８）
組み換え型ヒトＮ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ（ＧＡＬＮＳ）酵素を精製する方法であって、前記ＧＡＬＮＳ酵素は、配列番号４のアミノ酸２７〜５２２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記ＧＡＬＮＳ酵素は、
（ｉ）非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供されると、クマシーブルー染色により判定される、少なくとも約９５％の純度を有し、
（ｉｉ）位置５３のシステイン残基のＣα−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）への少なくとも約５０％の変換を有し、
（ｉｉｉ）任意で、単量体タンパク質鎖当たり、０．５〜０．８のビスリン酸化されたオリゴマンノース鎖を有し、
前記ＧＡＬＮＳ酵素の少なくとも９７％は、ＳＤＳ−ＣＧＥによって判定される、前駆体形態にあり、
ａ）ヒトスルファターゼ修飾因子１（ＳＵＭＦ１）および前記組み換え型ヒトＧＡＬＮＳ酵素を発現する哺乳動物の細胞株から分泌される、前記ＧＡＬＮＳ酵素を含有する培養培地を濾過し、前記濾過された培養培地を限外濾過／透析濾過し、それによって、前記限外濾過／透析濾過された培養培地を、２０倍に濃縮し、前記２０倍に濃縮した限外濾過／透析濾過された培養培地を、炭濾過することと、
ｂ）ステップａ）からの前記炭濾過した２０倍の限外濾過／透析濾過培養培地を、Ｚｎキレート化Ｓｅｐｈａｒａｏｓｅ  ＦＦ捕捉カラムに充填し、前記ＧＡＬＮＳ酵素が前記カラム上に保持されるような条件下で、前記カラムを洗浄し、前記カラムから前記ＧＡＬＮＳ酵素を溶出することと、
ｃ）任意で、ステップｂ）における前記Ｚｎキレート化Ｓｅｐｈａｒａｏｓｅ  ＦＦ捕捉カラムからの溶出液を、フィルタを通して濾過し、ウイルスを除去することと、
ｄ）ステップｂ）からの前記Ｚｎキレート化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ捕捉カラムからの前記溶出液、またはステップｃ）からの前記濾液のｐＨを、約ｐＨ４．５±０．１に調節し、前記ｐＨ４．５に調節された前記Ｚｎキレート化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ捕捉カラムからの溶出液または濾液を濾過することと、
ｅ）前記ｐＨ４．５に調節された前記Ｚｎキレート化ＦＦ捕捉カラムからの溶出液またはステップｄ）からの濾液を、Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  ＥＭＤ  ＳＥ  Ｈｉ−Ｃａｐ陽イオン交換カラムに充填し、前記ＧＡＬＮＳ酵素が前記カラム上に保持されるような条件下で、前記カラムを洗浄し、前記カラムから前記ＧＡＬＮＳ酵素を溶出することと、
ｆ）ステップｅ）からの前記Ｆｒａｃｔｏｇｅｌ  ＥＭＤ  ＳＥ  Ｈｉ−Ｃａｐ陽イオン交換カラムからの前記溶出液のｐＨを、ウイルス不活性化のために約ｐＨ３．５±０．１に調節することと、
ｇ）ステップｆ）からの前記ｐＨ３．５のウイルス不活性化溶出液を、ＴｏｙｏＰｅａｒｌ  Ｂｕｔｙｌ  ６５０Ｍのポリッシングカラムに充填し、前記ＧＡＬＮＳ酵素が前記カラム上に保持されるような条件下で、前記カラムを洗浄し、前記カラムから前記ＧＡＬＮＳ酵素を溶出することと、
ｈ）ステップｇ）からの前記ＴｏｙｏＰｅａｒｌ  Ｂｕｔｙｌ  ６５０Ｍのポリッシングカラムからの前記溶出液を緩衝液交換して、２０ｍＭ  ＮａＯＡｃ／ＨＯＡｃ、５０ｍＭ
ＮａＨ２ＰＯ４、３０ｍＭアルギニンＨＣｌ、２％（ｗ／ｖ）ソルビトールを含む、ｐＨ５．４の製剤にし、前記製剤中の前記ＧＡＬＮＳ酵素の濃度を、約３ｍｇ／ｍＬに調節することと、
ｉ）ステップｈ）の前記緩衝液交換した製剤を、ＤＶ２０フィルタおよびＭｕｓｔａｎｇ
Ｑフィルタで濾過することによって、あらゆる残存ウイルスおよび／またはＤＮＡを除去することと、
ｊ）ステップｉ）の前記製剤に、最終濃度０．０１％（ｗ／ｖ）まで、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）を添加することと、を含む、方法。
（項目１９）
項目１または１８に記載の精製される組成物であって、前記組成物は、組み換え型ヒトＮ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ（ＧＡＬＮＳ）酵素を含み、前記ＧＡＬＮＳ酵素は、配列番号４のアミノ酸２７〜５２２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記ＧＡＬＮＳ酵素が、
（ｉ）非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供されると、クマシーブルー染色により判定される、少なくとも約９５％の純度を有し、
（ｉｉ）位置５３のシステイン残基のＣα−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）への少なくとも約５０％の変換を有し、
（ｉｉｉ）任意で、単量体タンパク質鎖当たり、０．５〜０．８のビスリン酸化されたオリゴマンノース鎖を有し、
前記ＧＡＬＮＳ酵素の少なくとも９８％は、ＳＤＳ−ＣＧＥによって判定される、前駆体形態にある、組成物。
（項目２０）
ムコ多糖症ＩＶａ型（ＭＰＳ  ＩＶａ）またはモルキオＡ症候群を患う対象を治療する方法であって、項目１または１８に従って精製される組成物の治療有効量を、前記対象に投与することを含み、前記組成物は、精製された組み換え型ヒトＮ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ（ＧＡＬＮＳ）酵素を含み、前記ＧＡＬＮＳ酵素は、配列番号４のアミノ酸２７〜５２２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記ＧＡＬＮＳ酵素が、
（ｉ）非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供されると、クマシーブルー染色により判定される、少なくとも約９５％の純度を有し、
（ｉｉ）位置５３のシステイン残基のＣα−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）への少なくとも約５０％の変換を有し、
（ｉｉｉ）任意で、単量体タンパク質鎖当たり、０．５〜０．８のビスリン酸化されたオリゴマンノース鎖を有し、
前記ＧＡＬＮＳ酵素の少なくとも９８％は、ＳＤＳ−ＣＧＥによって判定される、前駆体形態にある、方法。
（項目２１）
製剤であって、
（ａ）組み換え型ヒトＮ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ（ＧＡＬＮＳ）酵素であって、前記ＧＡＬＮＳ酵素は、配列番号４のアミノ酸２７〜５２２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｉ）非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供されると、クマシーブルー染色により判定される、少なくとも約９５％の純度を有し、
（ｉｉ）位置５３のシステイン残基のＣα−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）への少なくとも約５０％の変換を有し、
（ｉｉｉ）任意で、単量体タンパク質鎖当たり、０．５〜０．８のビスリン酸化されたオリゴマンノース鎖を有し、
前記ＧＡＬＮＳ酵素の少なくとも９７％は、ＳＤＳ−ＣＧＥによって判定される、前駆体形態にある、酵素と、
（ｂ） （ｉ）前記ＧＡＬＮＳ酵素の脱リン酸化を低減するのに効果的な量のリン酸緩衝
液と、
（ｉｉ）アミノ酸塩、アミノ酸緩衝液、界面活性剤、およびポリオールからなる群から選択される、１つ以上の安定剤の安定量と、を含む、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含み、
前記製剤が、約５．０〜５．８のｐＨである、製剤。
（項目２２）
前記製剤中の前記リン酸緩衝液は、約２５ｍＭ〜７５ｍＭの濃度である、項目２１に記載の製剤。
（項目２３）
前記製剤は、任意で酢酸緩衝液である第２の緩衝液を、さらに含む、項目２１に記載の製剤。
（項目２４）
前記安定剤は、アルギニンまたはヒスチジンの塩または緩衝液、任意で塩酸アルギニンである、項目２１に記載の製剤。
（項目２５）
前記安定剤は、ポリソルベート、任意でポリソルベート２０である、項目２１に記載の製剤。
（項目２６）
前記安定剤は、三価以上の糖アルコール、任意でソルビトールである、項目２１に記載の製剤。
（項目２７）
アルギニン塩または緩衝液、ポリソルベート、およびポリオールを含む、項目２１に記載の製剤。
（項目２８）
組み換え型ヒトＧＡＬＮＳ酵素の脱リン酸化を防止する方法であって、リン酸緩衝液の最終濃度約２５ｍＭ〜７５ｍＭまで、ＧＡＬＮＳ酵素とリン酸緩衝液とを混合することを含む、方法。
（項目２９）
前記ＧＡＬＮＳ酵素は、ＲＰ−ＨＰＬＣによって判定される場合、少なくとも９５％純粋である、項目２１に記載の製剤。
（項目３０）
前記ＧＡＬＮＳ酵素の５０％〜８０％は、マンノース−６−リン酸受容体カラムに結合する、項目２１に記載の製剤。
（項目３１）
前記ＧＡＬＮＳ酵素は、約１〜５ｎＭの、線維芽細胞内への特異的取り込み（Ｋ取り込み）を示す、項目２１に記載の製剤。
（項目３２）
前記ＧＡＬＮＳ酵素は、約１〜３．５ｎＭの、線維芽細胞内への特異的取り込み（Ｋ取り込み）を示す、項目２１に記載の製剤。
（項目３３）
ＧＡＬＮＳ酵素の濃度は、約０．５〜１．５ｍｇ／ｍＬである、項目２１に記載の製剤。
（項目３４）
前記緩衝剤は、ＮａＯＡｃ／ＨＯＡｃおよびＮａＨ２ＰＯ４である、項目２１に記載の製剤。
（項目３５）
ＮａＯＡｃ／ＨＯＡｃの濃度は、約１０〜３０ｍＭであり、ＮａＨ２ＰＯ４の濃度は、約２５〜７５ｍＭである、項目３４に記載の製剤。
（項目３６）
前記安定剤は、アルギニンＨＣｌ、Ｔｗｅｅｎ−２０、およびソルビトールである、項目２１に記載の製剤。
（項目３７）
アルギニンＨＣｌの濃度は、約１０〜５０ｍＭであり、Ｔｗｅｅｎ−２０の濃度は、約０．００５％〜０．０１５％（ｗ／ｖ）であり、ソルビトールの濃度は、約１．０％〜３．０％（ｗ／ｖ）である、項目３６に記載の製剤。
（項目３８）
製剤であって、
（ａ）組み換え型ヒトＮ−アセチルガラクトサミン−６−スルファターゼ（ＧＡＬＮＳ）酵素であって、前記ＧＡＬＮＳ酵素は、配列番号４のアミノ酸２７〜５２２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、
（ｉ）非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供されると、クマシーブルー染色により判定される、少なくとも約９５％の純度を有し、
（ｉｉ）位置５３のシステイン残基のＣα−ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）への少なくとも約５０％の変換を有し、
（ｉｉｉ）単量体タンパク質鎖当たり、０．５〜０．８のビスリン酸化されたオリゴマンノース鎖を有し、
前記ＧＡＬＮＳ酵素の少なくとも９７％が、非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに供されると、クマシーブルー染色によって判定される、前駆体形態にある、酵素と、
（ｂ） （ｉ）緩衝剤としてＮａＯＡｃ／ＨＯＡｃおよびＮａＨ２ＰＯ４と、
（ｉｉ）安定剤としてアルギニンＨＣｌ、Ｔｗｅｅｎ−２０、およびソルビトールと、
（ｉｉｉ）約５．４±０．４のｐＨと、を含み、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、製剤。
（項目３９）
前記ＧＡＬＮＳ酵素は、ＲＰ−ＨＰＬＣによって判定される場合、少なくとも９５％純粋である、項目３８に記載の製剤。
（項目４０）
前記ＧＡＬＮＳ酵素の５０％〜８０％は、マンノース−６−リン酸受容体カラムに結合する、項目３８に記載の製剤。
（項目４１）
前記ＧＡＬＮＳ酵素は、約１〜５ｎＭの、線維芽細胞内への特異的取り込み（Ｋ取り込み）を示す、項目３８に記載の製剤。
（項目４２）
前記ＧＡＬＮＳ酵素は、約１〜３．５ｎＭの、線維芽細胞内への特異的取り込み（Ｋ取り込み）を示す、項目３８に記載の製剤。
（項目４３）
ＧＡＬＮＳ酵素の濃度は、約１．０±０．５ｍｇ／ｍＬである、項目３８に記載の製剤。
（項目４４）
ＮａＯＡｃ／ＨＯＡｃの濃度は、約２０±１０ｍＭであり、ＮａＨ２ＰＯ４の濃度は、約５０±２５ｍＭである、項目３８に記載の製剤。
（項目４５）
アルギニンＨＣｌの濃度は、約３０±２０ｍＭであり、Ｔｗｅｅｎ−２０の濃度は、約０．０１％±０．００５％（ｗ／ｖ）であり、ソルビトールの濃度は、約２．０％±１．０％（ｗ／ｖ）である、項目３８に記載の製剤。
（項目４６）
ＮａＯＡｃ／ＨＯＡｃの濃度は、約２０±１０ｍＭであり、ＮａＨ２ＰＯ４の濃度は、約５０±２５ｍＭである、項目４５に記載の製剤。