【誤訳訂正書】
【提出日】平成26年7月3日(2014.7.3)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の粒子とサンプルホルダの表面との間の複数の相互作用を決定する方法であって、
前記サンプルホルダの上の複数の粒子のサンプル、及び、前記サンプルホルダの前記表面の少なくとも一方に、物理的力適用手段を用いて物理的力をかける段階と、
視野を持つ顕微鏡を有する撮像装置の照明源を利用して前記複数の粒子を照明する段階と、
前記物理的力適用手段と同期させて、前記撮像装置を利用して、前記視野内の前記複数の粒子の一連の複数のホログラフィック画像を取得する段階、及びコンピュータシステムのプロセッサを利用して、前記撮像装置により捕捉された前記複数の粒子の前記複数のホログラフィック画像を統計的に分析して、前記サンプルホルダの前記表面における前記複数の相互作用の性質、又は、前記複数の粒子の拡散若しくは粘弾性の特性を得る段階によって、前記物理的力適用手段に対する前記複数の粒子の反応を計測する段階と、
を備える、方法。
【請求項２】
前記複数のホログラフィック画像は、前記複数の粒子により回析される第１のコンポーネントと、前記複数の粒子により回析されない第２のコンポーネントとを含み、
前記第１のコンポーネント及び前記第２のコンポーネントは、撮影面で干渉して、前記プロセッサにより作成され、粒子間の複数の強度変動値を表す干渉パターンを生じさせる、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記物理的力適用手段または拡散の一方により動くことができる前記複数の粒子は、複数の高い強度の変動を呈し、前記サンプルホルダの前記表面に結合された前記複数の粒子は、複数の低い強度の変動を呈して、前記サンプルホルダの前記表面上の前記複数の相互作用の前記性質が生じる、
請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記複数の高い強度の変動は、粒子結合に基づく複数のテストにおいて、粒子結合を判断するために利用される、
請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記物理的力適用手段は、前記サンプルが、並進ステージと一緒に、急に、又は、継続して周期的に動くことを含む、
請求項１から請求項４までの何れか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記物理的力適用手段は、光学的力手段を利用して光学的に生成された力を含む、
請求項１から請求項５までの何れか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記物理的力適用手段は、前記サンプルに複数の超音波を作用させる超音波発振器、前記サンプルに複数の音波を作用させる音響手段、物理プローブの接触、及び、流体フローデバイスからの流体フローのうちの少なくとも１つを有する外部手段の適用を含む、
請求項１から請求項６までの何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記撮像装置の前記照明源は、コヒーレントな光源を有し、
前記コヒーレントな光源は、前記サンプルの焦点が大きくずれている場合であっても、前記サンプルの撮像が可能となるように、空間的にコヒーレントであるコヒーレントな照明を提供する、
請求項１から請求項７までの何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記複数の粒子は、複数のビーズ及び複数の細胞の少なくとも一方を含む、
請求項１から請求項８までの何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
露光時間中に前記複数の粒子が大きく拡散しないようにして、前記複数の拡大画像がぶれないようにするべく、前記サンプルの複数の拡大画像を取得するために利用されるカメラの露光時間は、拡散時間係数よりも非常に短い、
請求項１から請求項９までの何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
サンプルチャンバ内の複数の粒子にホログラフィック光合焦を行う方法であって、
撮像装置のコヒーレントな光源を利用して、透明なサンプルチャンバの複数の粒子のサンプルを照明する段階と、
合焦カメラを利用して、前記複数の粒子の複数の画像を取得する段階と、
前記複数の粒子の焦点のずれた回折パターンの複数の画像をディスプレイに表示する段階と、
コンピュータシステムのプロセッサを利用して、前記複数の画像のうちの１つの撮像されたホログラムの数値的合焦を実行して、前記複数の粒子の焦点面を決定する段階と、
を備え、
前記数値的合焦は、各画像の前記焦点のずれた回折パターンを複数の異なる距離伝播させて距離を決定し、前記プロセッサにより最大焦点計測値を数値的に決定させることを含む、
方法。
【請求項１２】
前記合焦カメラは、ビームスプリッタを用いた運動度(mobility)の計測に利用される計測カメラの撮像面とは異なる撮像面に配置される、
請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
複数の焦点計算は、前記計測カメラと比較して焦点がずれた面に配置される前記合焦カメラから収集された複数の画像から実行される、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記プロセッサを利用して、数値的に伝播された各画像と前記最大焦点計測値とを関連付けて、数値的に伝播された各画像に関連付けられた前記最大焦点計測値の極値を発見することができるようにする段階と、
前記コンピュータシステムに、前記サンプルを必要な焦点位置に位置させるべく、前記サンプルチャンバを一回ステージ運動させる段階と、
をさらに備える、
請求項１１から請求項１３までの何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
複数の粒子運動度の計測に利用されるカメラに加えて、前記複数の画像を取得する前記合焦カメラを利用する段階をさらに備え、
前記合焦カメラは、前記複数の粒子運動度の計測に利用されるカメラの撮像面とは異なる撮像面に配される、
請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
複数の運動度の計測のためだけでなく、合焦及び複数の画像の取得の両方のためにも、単一のカメラが利用される、
請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記複数の画像を取得する段階において、合焦用の画像は、前記サンプルのピンぼけが制御されてから収集される、
請求項１１から請求項１６までの何れか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記コヒーレントな光源は、レーザー、スーパールミネッセントダイオード、発光ダイオード（ＬＥＤ）、白熱光源及びアークランプのうちの少なくとも１つを含む、
請求項１１から請求項１７までの何れか一項に記載の方法。
【請求項１９】
複数の粒子とサンプルホルダの表面との間の複数の相互作用を決定する方法であって、
視野を有する顕微鏡を備えた撮像装置の照明源を利用して、流体フローデバイスの透明な底面に配置された複数の粒子のサンプルを照明する段階と、
前記撮像装置を利用して、前記視野内の前記複数の粒子の一連の複数の画像を取得することで、熱平衡における前記複数の粒子の運動を計測する段階と、
コンピュータシステムのプロセッサを利用して、前記撮像装置により捕捉された前記複数の粒子の前記複数の画像の統計的な分析を実行する段階と、
前記プロセッサを利用して、前記一連の複数の画像について画素のそれぞれの正規化標準偏差分布を表したものである、前記画素のそれぞれの変動画像を生成する段階と、
前記プロセッサを利用して、前記変動画像を処理して、前記複数の粒子それぞれの複数の平均正規化標準偏差の分布を生成する段階と、
前記サンプルホルダの前記表面における前記複数の粒子の相互作用に関する情報を得る段階と、
を備える、
方法。
【請求項２０】
前記プロセッサを利用して、前記画素のそれぞれのホログラフィック変動画像を生成する段階をさらに備え、
前記ホログラフィック変動画像は、前記一連の複数の画像について、前記画素のそれぞれの前記正規化標準偏差分布を表したものであり、
前記ホログラフィック変動画像は、各画素値が、前記画素の経時的の標準偏差によって与えられ、平均画素値で除算されるように生成される、
請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記プロセッサを利用して、前記ホログラフィック変動画像を処理して、前記複数の粒子のそれぞれについて、前記複数の平均正規化標準偏差の前記分布を生成する段階をさらに備える、
請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ホログラフィック変動画像は、複数の画素統計計測値の組み合わせによって生成され、
前記統計的な分析は、前記一連の複数の画像において各画素の位置を決定して、各画素の標準偏差と平均画素値とを決定することを含む、
請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
平均画素値、画素標準偏差、画素分散、上位画素変動、画素時間相関関数、画素空間相関関数、画素時空相関関数、背景画素値、背景画素標準偏差、背景画素分散、上位背景画素変動、背景画素時間相関関数、背景空間相関関数、及び、背景画素時空相関関数のうちの１つから選択される画素統計計測値によって、少なくとも１つの統計画像を生成する段階をさらに備える、
請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記統計画像は、リアルタイムに生成される、
請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記一連の複数の画像に画素単位で、粒子近隣（particle neighborhood）で平均化された前記複数の画素統計計測値を生成する段階をさらに備える、
請求項２３又は請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記複数の画素統計計測値は、前記粒子近隣で計算されてから、前記一連の複数の画像内の他の複数の画像内の対応する複数の近隣で計算される、
請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記一連の複数の画像内の１つのフレームを利用して、粒子近隣マスクを生成する段階をさらに備える、
請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
複数の粒子近隣マスクを生成するために、前記一連の複数の画像の複数のフレームが利用される、
請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記一連の複数の画像の複数のサブセットで、前記複数の画素統計計測値を計算する段階をさらに備える、
請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記一連の複数の画像の連続する複数のサブセットで、前記複数の画素統計計測値を計算して、粒子ごとの複数の時変統計計測値（time varying statistical measurements per particle）を生成する段階をさらに備える、
請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
粒子ごとの前記複数の時変統計計測値は、物理的運動、振動、溶剤条件、フロー条件、及び、その他の環境が持つ効果のうちの少なくとも１つを含む、複数の時変的な実験条件に関連する、
請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
粒子に基づく複数の統計計測値に関して、空間及び時間の複数の相関付けを実行する段階をさらに備える、
請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
粒子に基づく複数の統計計測値に関する前記空間及び時間の複数の相関付けは、時間とともに変化する、
請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
所望の表面親和性を有する複数の部分が選択されるように、粒子に基づく前記複数の統計計測値の複数の閾値を選択する段階をさらに備える、
請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ポジティブな結果が示される前に、所望の統計的有意性に基づいて、計測される必要がある最小割合レベルを示すように、前記選択された複数の部分の複数の閾値を選択する段階をさらに備える、
請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
経時的に複数の粒子位置を追跡する段階と、
変位の二乗平均及び正味の変位の少なくとも１つを含む、前記複数の粒子位置の複数の統計的計測値を生成する段階と、
複数の粒子について、前記複数の粒子位置に関する複数の分布をプロットする段階と、
をさらに備える、
請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
複数の粒子位置の計測値、及び、複数の粒子位置に基づく複数の粒子の複数の統計量の複数の閾値を利用して、対象となる粒子と表面との複数の親和性を有する複数の部分を決定する段階をさらに備える、
請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
粒子の運動の複数の統計的計測値は、二乗平均の位置、平均粒子位置、正味の粒子位置、及び、粒子位置に関する高次統計量の少なくとも１つに基づく、
請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
信号強度の複数の変動が比較的大きい場合、前記複数の粒子が運動していることを示し、
信号強度の複数の変動が比較的小さい又は存在しない場合、前記複数の粒子が複数の表面相互作用によって固定化されていることを示す、
請求項１９から請求項３８までの何れか一項に記載の方法。
【請求項４０】
より低温で強度の高い複数の領域は、より高温で強度の高い複数の領域と比較して、より拘束されており、強度の高い複数の変動を生じさせる粒子の動きは、前記低温でより拘束されることを示す、
請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記複数の粒子は、複数の細胞及び複数のビーズの少なくとも一方を含む、
請求項１９から請求項４０までの何れか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記複数の細胞は、複数の赤血球細胞である
請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記複数の画像のそれぞれは、ホログラフィック画像である、
請求項１９から請求項４２までの何れか一項に記載の方法。
【請求項４４】
溶剤中の前記複数の粒子の前記サンプルを、前記サンプルホルダの、抗体に覆われた表面に導くことにより、前記サンプルホルダの前記表面上の様々な種類の複数の粒子を選択的に検知する段階をさらに備え、
前記複数の粒子は、一の種類の抗原または別の種類の抗原のいずれかで被覆されており、
前記一の種類の抗原で被覆された複数の粒子は、前記サンプルホルダ上に塗布された固定化された複数の特異的な抗体に特異結合され、それにより当該複数の粒子の動きが制限され、
前記別の種類の抗原で被覆された複数の粒子は、前記サンプルホルダに特異的に結合されず、当該複数の粒子は前記サンプルホルダの前記表面上の前記溶剤中を自由に拡散する、
請求項２０から請求項４３までの何れか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記視野内の前記特異結合されている複数の粒子は、比較的小さな平均値を有する正規化標準偏差計測値において、マグニチュードが比較的小さく、比較的狭い複数の分布を示し、
自由に拡散している複数の粒子は、前記正規化標準偏差計測値の比較的大幅に大きな平均値を有し、マグニチュードが比較的大きく、比較的広い複数の分布を示し、
それによって、前記複数の粒子上の前記一の種類の抗原もしくは前記別の種類の抗原、または、前記サンプルホルダ上の前記複数の特異的な抗体が決定される、
請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記サンプルホルダの前記抗体が塗布された表面は、複数の固定化抗体パッチを含み、
複数の結合粒子は、前記表面に存在する前記複数の抗体に対してポジティブな反応を示し、
自由に拡散している複数の粒子は、ネガティブな反応を示す、
請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記複数の粒子の複数の中間的なレベルの結合を検知する段階をさらに備え、
中間的または非特異的な複数のレベルの結合を有する前記複数の粒子は、前記特異結合されている複数の粒子から区別可能である、
請求項４４から請求項４６までの何れか一項に記載の方法。
【請求項４８】
複数の粒子の特定の複数のサンプルに対して複数の結合試験を連続して実行し、複数の粒子付着動力学曲線を生成する段階をさらに備える、
請求項４４から請求項４７までの何れか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記複数の結合試験によって、特定の時間における結合の程度に関する情報と、結合の変化率に関する情報とが生成され、それにより結合動力学のモデル化を可能にする、
請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
コントラスト補正係数は、前記サンプルホルダ上に分散された各粒子または複数の粒子の集団に適用され、
前記コントラスト補正係数は、各粒子の近隣の複数の画素強度の標準偏差を計算して、同じ領域の複数の画素強度の平均値で除算することで決定される、
請求項４４から請求項４９までの何れか一項に記載の方法。
【請求項５１】
より高い表面たんぱく質濃度を示す複数の粒子は、より低い表面タンパク質濃度を有する複数の粒子よりも、前記サンプルホルダの前記表面により強固に結合する、
請求項４４から請求項５０までの何れか一項に記載の方法。
【請求項５２】
複数のテスト表面において、特定の表面密度を有する複数の抗体を含む複数の校正粒子が利用され、
複数の粒子の集団からの同質な運動度の反応は、同質な表面を示し、
異質な運動度の反応は、少なくとも部分的に異質な表面を示す、
請求項４４から請求項５１までの何れか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記サンプルホルダの表面に結合し、未結合の複数の粒子と比較してわずかに平坦な複数の結合粒子は、前記未結合の複数の粒子と比較して、幅広い分布を有し、はるかに小さな振幅で変化する複数の粒子を有し、
前記複数の結合粒子の多くの割合が、前記未結合の複数の粒子よりも小さな振幅の空間強度変動を有することを示す、
請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
複数の粒子近隣は、前記一連の複数の画像の各フレームにおいて、前記正規化標準偏差の複数の変動に対する質量中心の動きの複数の貢献を補正するように決定される、
請求項４４から請求項５３までの何れか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記撮像装置を利用して前記視野内の前記複数の粒子の前記一連の複数の画像を取得することにより、熱平衡における前記複数の粒子の形状を計測することで、前記複数の粒子の形状を検知する段階をさらに備え、
前記統計的な分析は、前記一連の複数の画像において、前記複数の粒子の強度の空間分布を決定する段階を含み、
前記一連の複数の画像における前記複数の粒子の空間強度の前記統計的な分析における複数の正規化標準偏差分布は、粒子の柔軟性、弾性／粘弾性、健康か病気か、年齢、溶剤の条件、及び、結合状態のうち少なくとも１つの決定に利用される、
請求項１９から請求項５４までの何れか一項に記載の方法。
【請求項５６】
複数の熱変動または外部から加えられた複数の力のいずれか一方によって、より容易にその形状を変化させる前記複数の粒子は、比較的より硬い前記複数の粒子と比較して、比較的より高い複数の空間強度変動を呈する、
請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
サンプルホルダ中の複数の粒子間の相互作用を決定する方法であって、
（１）視野を持つ顕微鏡を有する撮像装置の照明源を利用して、サンプルホルダ上に配置された複数の粒子のサンプルを照明する段階と、
（２）コンピュータシステムのプロセッサを利用して、前記撮像装置を利用して前記視野内の前記複数の粒子の一連の複数の画像を取得することで、熱平衡における前記複数の粒子の形状を計測する段階と、
（３）前記プロセッサを利用して、前記複数の画像のそれぞれの中で、前記複数の粒子それぞれを検知する段階と、
（４）前記プロセッサを利用して、前記複数の画像それぞれの中で、互いに隣接している前記複数の粒子のペアが、互いに結合することができ、相関性を有する運動をすることができることを証明する段階と、
（５）前記プロセッサを利用して、前記複数の粒子の前記隣接しているペアのそれぞれの画像を抽出して、２つのサブ画像を生成する段階と、
（６）前記プロセッサを利用して、前記２つのサブ画像を乗算して、サブ画像の積を生成する段階と、
を備え、
互いに結合される複数の粒子の隣接している複数のペアが、サブ画像の積の複数の値の対応する正規化標準偏差を、互いに結合されていない複数の粒子の隣接している複数のペアのものより増加させる相関性を有する複数の運動を行うことで、相関性を有さない複数の運動を行う結合されていない複数の粒子よりも、サブ画像の積の複数の値の前記正規化標準偏差が比較的低く、比較的狭い分布が得られる、
方法。
【請求項５８】
前記複数の画像の全てにおいて、隣接する複数の粒子の全てのペアに対して段階（３）から（６）を繰り返し行い、前記隣接する複数の粒子のペアのそれぞれに対応する複数のサブ画像の積のシーケンスを生成する段階と、
前記プロセッサを利用して、前記複数のサブ画像の積のシーケンスの画素単位の標準偏差を計算する段階と、
前記プロセッサを利用して、前記画素単位の標準偏差の平均値を、サブ画像の積全体における各画素についての平均値で除算した値を計算することで、前記隣接する複数の粒子のペアの１つの平均標準偏差を生成する段階と、
をさらに備える、
請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
隣接する複数の粒子のペアのそれぞれについて、複数の粒子の前記ペアのそれぞれの前記２つのサブ画像の近隣をフレームごとに乗算することで、平均正規化標準偏差を計算することで定量化される相関性を有する近隣を生成するように、相関性を有する変動が計算される、
請求項５７又は請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記相関性を有する近隣における複数の変動の振幅は、互いに結合された複数の粒子の複数のペアの位相のあった複数の運動が存在する場合に増加する、
請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記サブ画像の積の複数の値の前記正規化標準偏差は、複数の粒子の結合された複数のペアと、複数の粒子の結合されていない複数のペアとを区別することができるように、比較的広い分布を有し、比較的高い、
請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
複数の粒子の複数のペアが隣接することを構築した後、前記プロセッサを利用して、前記複数の粒子ペアのリストを作成する段階をさらに備える、
請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記サブ画像の積の前記正規化標準偏差は、前記一連の複数の画像における、単一の隣接する粒子のペアに起因する単一の数である、
請求項５７から請求項６２までの何れか一項に記載の方法。
【請求項６４】
コンピュータに、請求項１から請求項６３までの何れか一項に記載の方法を実行させるためのプログラム。
【請求項６５】
検知された運動度に基づいて複数の粒子の集団またはサブ集団を計測、テスト、および特徴付ける装置であって、
画像形成装置と、
複数の粒子の分散を含むサンプルを載置し、コリメートされた光ビームにより照明される、顕微鏡の透明なサンプルホルダと、
前記複数の粒子と前記サンプルホルダとの間の複数の相互作用の存否を推定するべく、前記サンプルホルダの上の前記複数の粒子の運動度を計測する手段と
を備え、
前記画像形成装置は、
光ビームを放射するコヒーレントな光源と、
前記コヒーレントな光源からの前記光ビームをコリメートするコリメータと
を有する、
装置。
【請求項６６】
前記コヒーレントな光源は、レーザー、スーパールミネッセントダイオード、発光ダイオード（ＬＥＤ）、白熱光源及びアークランプのうちの少なくとも１つを含む、
請求項６５に記載の装置。
【請求項６７】
前記コヒーレントな光源は、４００μｍより短いコヒーレンス長を有し、６００ｎｍで動作するレーザーを含む、
請求項６６に記載の装置。
【請求項６８】
前記レーザーは、光ファイバに連結される、
請求項６７に記載の装置。
【請求項６９】
前記複数の粒子は、重力、及び、遠心分離機を利用してサンプルチャンバに加えられた遠心力の一方によって、又は、その他の複数の力によって、前記サンプルホルダの表面に落ち着く、
請求項６５から請求項６８までの何れか一項に記載の装置。
【請求項７０】
前記複数の粒子は、複数の細胞及び複数のビーズの少なくとも一方を含む、
請求項６５から請求項６９までの何れか一項に記載の装置。
【請求項７１】
前記透明なサンプルホルダの表面は、平滑性を有する表面、テクスチャ加工されている表面、反射性を有する表面、及び、抗体、生分子、合成もしくはリンカー分子、試薬、検体、又は、非反応性の溶剤を用いて処理されている表面の少なくとも１つである、
請求項６５から請求項７０までの何れか一項に記載の装置。
【請求項７２】
前記透明なサンプルホルダの表面は、マイクロ流体装置またはマイクロタイタープレートのサンプルチャンバである、
請求項６５から請求項７１までの何れか一項に記載の装置。
【請求項７３】
前記複数の粒子を撮像する顕微鏡装置の顕微鏡対物レンズと、
第１のカメラと、
前記第１のカメラにおける前記複数の粒子の拡大パターンの撮像を可能にするチューブレンズと、
前記透明なサンプルホルダを移動させる並進ステージと、
をさらに備える、
請求項６５から請求項７２までの何れか一項に記載の装置。
【請求項７４】
前記第１のカメラに接続され、前記複数の粒子の複数の画像の画像処理を実行するコンピュータをさらに備える、
請求項７３に記載の装置。
【請求項７５】
位置合わせされた（in-line）ホログラフィック顕微鏡装置をさらに備える、
請求項７３又は請求項７４に記載の装置。
【請求項７６】
運動度計測のための複数の画像の取得及び合焦に専用の第２のカメラをさらに備え、
前記第２のカメラは、前記第１のカメラとは異なる撮像面に配置される
請求項７３から請求項７５までの何れか一項に記載の装置。
【請求項７７】
前記透明なサンプルホルダの表面上の前記複数の粒子に力を適用する手段をさらに備え、
前記力を適用する手段は、少なくともコヒーレントな光源を利用した光学力、並びに、超音波手段、音響手段、物理プローブ接触及び流体フローデバイスからの流体フローのうちの少なくとも１つを有する外部力の適用のうちの少なくとも１つを含む、
請求項７３から請求項７６までの何れか一項に記載の装置。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１Ｂ
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１Ｂ】
2013531787.tif 000001
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６４】
一実施形態では、粒子１０８が、粒子タイプを、蛍光またはルミネッセント発光スペクトルで区別可能な蛍光またはルミネッセント分子またはナノ粒子で覆われている、またはこれらが埋め込まれている場合、装置１０は、蛍光、ルミネッセント励起源１００、適切なフィルタ（不図示）、二色性部材（不図示）、および、色検知機能（例えばカラーカメラ１１２および／または発光フィルタ選択）を備える必要があると思われる。それぞれが固有のコーティングを施された様々な種類の粒子１０８の導入によって、計測を多重化することができるようになる（つまり、複数の種類の相互作用を同時に計測することができるようになる）。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
一実施形態では、サンプルホルダの表面上の様々な種類の粒子を選択的に検知する方法が、サンプルホルダの抗体を塗布した表面に、溶剤内に溶かした、２種類の抗原を塗布した粒子のサンプルを置き、第１の種類の抗原を塗布された粒子は、サンプルホルダに塗布された固定化された特異抗体（specific antibodies）に特異結合して、これら粒子の運動が制限され、別の種類の抗原を塗布された粒子は、サンプルホルダには特異結合されず、この粒子は、サンプルホルダの表面において溶剤内を自由に拡散する。方法はさらに、サンプルホルダに置かれた粒子のサンプルを、視野を有する顕微鏡を有する撮像装置の照明源を用いて照明して、撮像装置を利用して視野内での粒子のホログラフィック画像スタックを取得することで、熱平衡時における粒子の運動を計測して、コンピュータシステムのプロセッサを利用して、撮像装置が取得する粒子のホログラフィック画像を統計学的に分析して、この統計的分析には、ホログラフィック画像スタックから各画素の位置を判断して、各画素の標準偏差とその平均画素値とを求めて、プロセッサを利用して各画素のホログラフィック変動画像を生成して、このホログラフィック変動画像は、画像スタックの各画素についての正規化標準偏差分布を表現したものである。方法はさらに、プロセッサでホログラフィック変動画像を処理して、各粒子についての平均正規化標準偏差の分布を生成して、この、視野内の特異結合された粒子は、比較的低い正規化平均を有する正規化標準偏差計測値において、比較的小さいマグニチュードと、比較的狭い分布とを呈し、自由に拡散する粒子は、実質的に比較的に高い平均で、比較的大きく、比較的広い正規化標準偏差分布を呈するので、粒子およびサンプルホルダいずれの上の抗原かを見分けることが可能である。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４７】
【図１Ａ】細胞／粒子の表面相互作用および／または集合的分散／粘弾性特性を推定するために、細胞／粒子の運動度を計測するよう設計された、位置合わせされたホログラフィック顕微鏡装置を示す概略図である。
【図１Ｂ】少なくとも１つの細胞／粒子が提供された透明な表面を有するサンプルホルダの断面図である。
【図１Ｃ】ガラススライド、スペーサ、処置済みカバースリップを有し、粒子が分散されたサンプルチャンバを形成する透明なサンプルホルダの断面図である。粒子は、照明源、顕微鏡対象、撮像光学系および図１Ａの取得ハードウェアを利用して撮像されてよい。
【図１Ｄ】少なくとも１つの細胞／粒子が提供されている（１）最下面または（２）最上面に、反射性／部分的な反射性を有する表面を有するサンプルホルダの断面図であり、反射モードでも計測が可能である。サンプルチャンバには、処置済みカバースリップの表面に落ち着く粒子の分散が含まれている。
【図２】図１Ｂのホログラムが拡散によりシフトする様子を示し、これにより画素の強度を大幅に変動させることができる。
【図３Ａ】サンプル流体が内部を通るサンプルチャンバの断面図である。
【図３Ｂ】各々が異種の粒子混合を有しているカバースリップの様々な処置済み表面領域（Ａ、Ｂ，Ｃ，およびＤ）の上下方向の図を示しており、ここでは各種類の粒子が区別可能に表示されている（例えば蛍光による表示またはホログラフィック画像特性によって）。
【図４】スクリーンショットＡは２μｍのシリカビーズのホログラフィック画像を示しており、スクリーンショットＢは、ホログラフィック画像スタック（６０個の画像）から生成された変動画像を示している。
【図５Ａ】画像スタックの上の、各画素に対するピクセルワイズの平均によって、ピクセルワイズの標準偏差を除算することで得られるホログラフィック変動画像Ｓ（ｉ，ｊ）を生成するために行う、ホログラフィック画像の分析を示す。
【図５Ｂ】一連のホログラム内の１つの画像から生成される粒子の近隣のマスク画像でマスクされた変動画像（つまり、正規化標準偏差（ＮＳＤ）画像）を用いた、粒子ごとの変動計測値の計算方法を示す。各粒子の近隣における正規化標準偏差値は、平均化した後に、ヒストグラムとしてプロットした。
【図６】スクリーンショットＡは摂氏５度の脱イオン化された水内の２μｍのシリカビーズのホログラフィック変動画像を示しており（６０のフレームスタックから構築された）、スクリーンショットＢは、摂氏４７度の脱イオン化された水内の２μｍのシリカビーズのホログラフィック変動画像を示している（６０のフレームスタックから構築された）。光領域は、粒子の動きによって高い強度の変動を表しており、低温ではより制限されている。
【図７】摂氏６．８度（下のヒストグラム）、摂氏２８度（中間ヒストグラム）、摂氏４６．３度（上のヒストグラム）で計測した水中の直径が４．８μｍのシリカビーズの正規化標準偏差を示す３つのヒストグラムである。これらヒストグラムの主要なピークは、自由に拡散するビーズに対応しており、ＮＳＤの下位の値（５−１０％）は、表面に留まった、または部分的に留まった、ずっと小さいビーズの割合を表している。
【図８】様々な温度で計測した、自由に拡散する４．８μｍのビーズのＮＳＤ値の平均および標準偏差のグラフである（白い四角）。
【図９】スライド（１）は、抗体で覆われた表面に配置される各種類の粒子を示している（つまり、直接的な免疫試験（direct immunoassay））。Ａ抗原で覆われた粒子は、具体的には、カバースリップの表面を覆う固定化された特異抗体（Ａ抗体）に結合されて、粒子の動きが規制される。スライド（２）では、各種類の粒子により異なる行動が表されており、特異結合されていないＢ抗原を塗布された粒子は、表面上を溶剤内で自由に拡散しており、Ａ型の粒子の動きは、表面の抗体との特異結合によってかなり拘束されていることが分かる。
【図１０Ａ】抗Ａ塗布表面の上で計測された２つの異なるサンプルまたはＲＢＣ（赤血球細胞）の正規化標準偏差ヒストグラムのグラフである。表面にＡ抗原を持つ赤血球細胞（Ａ型）は、抗Ａ塗布表面と特異結合して、Ａ抗原のない赤血球細胞は（Ａネガティブ）は結合しないので、自由に拡散する。
【図１０Ｂ】図１０ＡのＡポジティブヒストグラムに比して、抗原Ａ（Ａ型、黒いほうのヒストグラム）についてポジティブに特異結合されている細胞が、同様に狭い分布であり、同様に低い平均を有する様子を示すグラフである。
【図１１】スライド（１）は、溶剤に相補抗体（complementary antibody）が存在する抗原を塗布された表面に各種類の粒子を置いた様子を示す（間接免疫測定法）。溶剤内のＡ抗体は、Ａ抗原を塗布された表面に結合することができ、同時にＡ抗原を塗布された粒子にも結合することができる。スライド（２）は、各種類の粒子で異なる行動を表しており、特異結合されていないＢ抗原を塗布された粒子が、溶剤内で表面上を自由に拡散している様子を示しており、Ａ種類の粒子の動きが、表面に特異結合されている抗体との特異結合によってかなり拘束されている様子を示している。
【図１２Ａ】それぞれの時点でとられた赤血球細胞のサンプルのＮＳＤヒストグラムシリーズを示す。カバースリップ表面にＢ型抗原がある表面に、合成プラズマで抗Ａ抗原（１００ｎＭ）が高濃度で存在しているなかの、Ａ型の赤血球細胞を示す。ＮＳＤの平均が高いことからも分かるように、細胞は拡散することもできる。
【図１２Ｂ】それぞれの時点でとられた赤血球細胞のサンプルのＮＳＤヒストグラムシリーズを示す。図１２Ａと類似した条件下でのヒストグラムのタイムシリーズを示すが、図１２Ａとの違いは、表面にＡ型抗原がある点である（Ｂ型抗原の表面を計測するのではなく）。図１２Ａおよび図１２Ｂのヒストグラムを比較することで、細胞が結合されているか否かを判断するためのＮＳＤの閾値を選択することができる。
【図１３Ａ】図１２Ａおよび図１２Ｂの計測条件に類似しているが、抗体の濃度がずっと低い点が異なっている。ｌｎＭ抗Ａ（1nM anti-A）を合成プラズマとして利用した。Ｂ型の表面の上のＡ型の細胞は、サンプルを表面に置いてから１９分経過したところで最初に計測した結果、殆どが未結合であった。
【図１３Ｂ】図１２Ａおよび図１２Ｂの計測条件に類似しているが、抗体の濃度がずっと低い点が異なっている。ｌｎＭ抗Ａを合成プラズマとして利用した。ｌｎＭ抗Ａを含む合成プラズマのＡ型の細胞を、Ａ型の抗原を有する表面に置いてから計測した。
【図１４】図１３Ａおよび図１３Ｂで観察されるものと同じサンプルの細胞接着動力学（cell adhesion kinetics）を示す。
【図１５】スライドＡは、直径が４．８μｍのシリカビーズの画像を示しており、この拡散ビーズの４０個のフレームシーケンスを（毎秒５フレームずつ取得した）、粒子追跡アルゴリズムを利用して分析して、図１５のスライドＢに示すようなΔｘおよびΔｙという計測された質量中心位置にシフトしたシーケンスが生じた。
【図１６】スライドＡは、図１５のスライドＢに示す粒子追跡分析で利用された、同様に計測された４０個のフレームシーケンスから計算されたＮＳＤの画像を示しており、ビーズ領域におけるＮＳＤの平均が２３．６％であった。ビーズ領域における平均ＮＳＤを図１６のスライドＢにプロットしており、これは、実験的に計測されたＮＳＤとよく調和していることが分かる。
【図１７】二乗平均平方根変位位置に、計測されたビーズＮＳＤ分布の平均を関連付ける検量線を示す。
【図１８】図１７に示す検量線とともに、２つの他のビーズ画像から生成された２つの他の検量線を示す。
【図１９】図１８のビーズとともに、量で示したコントラスト補正係数を示す。この係数は、各ビーズの近隣の画素強度の標準偏差を計算して（各ビーズを取り囲む矩形内を参照）、これを同じ領域の画素強度の平均で除算する（つまり、正規化された空間標準偏差）ことで得られる。
【図２０】プロットＡは、抗ＢがＡ抗原を有する表面上に分散された合成プラズマのＢ型の赤血球細胞のＮＳＤヒストグラムである。図２０のグラフＢは、図２０で計測した各赤血球細胞のＮＳＤ値を、その正規化空間標準偏差に関連付ける分散プロットを示す。
【図２１】プロットＡは、抗ＢがＢ抗原を有する表面上に分散された合成プラズマのＢ型の赤血球細胞のＮＳＤヒストグラムである。抗Ｂ抗体は、赤血球細胞のＢ抗原および表面のＢ抗原に付着して、細胞を固定化する。その結果生じる強度変動が、Ａ抗原パッチ（図２０のプロットＡ）の細胞に比べて顕著に低減する（図２１のプロットＡに示す低いＮＳＤ計測値が示すように）。図２１のプロットＢは、図２１で計測した各赤血球細胞のＮＳＤ値を、正規化された空間標準偏差に関連付けた散布図である。
【図２２】プロットＡおよびＢは、結合されていない（図２０のプロットＡ）、および、結合されている（図２１のプロットＡ）、補正された、および、補正されていない赤血球細胞のヒストグラムを示し、この補正は、線の適合（図２０のプロットＢおよび図２１のプロットＢ）により行うことで、ＮＳＤの正規化空間標準偏差に対する依存をなくした。
【図２３】図２２のプロットＡおよび図２２のプロットＢに示すヒストグラムの累積確率分布のプロットである（特定のＮＳＤ値以下のＮＳＤを持つ細胞の部分のプロットである）。
【図２４】水に４．８μｍの直径のビーズを入れたＮＳＤヒストグラム（上のヒストグラム）と、ガウス分布を利用して、０．１３１μｍの二乗平均平方根の変位を生成するシミュレーションによるＮＳＤヒストグラム（下のヒストグラム）とを示す。
【図２５】０．４％の生理的食塩水に４．８μｍの直径のビーズを入れたＮＳＤヒストグラム（上のヒストグラム）と、ガウス分布を利用して、０．００６４μｍの二乗平均平方根の変位を生成するシミュレーションによるＮＳＤヒストグラム（下のヒストグラム）とを示す。
【図２６】プロットＡ、Ｂ、およびＣは、５ｎＭの抗ＡがＢ抗原を有する表面に分散された合成プラズマ内のＡ型赤血球細胞のＮＳＤヒストグラムを示す。
【図２７】プロットＡおよびＢは、１つの画像からそれぞれ計測した未結合赤血球細胞および結合赤血球細胞の正規化された空間標準偏差値のプロットである。
【図２８】プロットＡおよびＢは、シーケンス内の４０個のフレーム全てにおける、図２０のプロットＡおよび図２４のプロットＡ（図２８のプロットＡ）の未結合の集団内の１００個の細胞、および図２０のプロットＢおよび図２４のプロットＢ（図２８のプロットＢ）の結合されている集団内の１００個の細胞について平均空間正規化標準偏差をグラフにしたものである。両プロットで、誤りバーには、４０個のフレームシーケンスにおける各細胞の空間正規化された偏差の標準偏差がプロットされている。
【図２９】結合された細胞および結合されていない細胞両方について、シーケンス内の４０個のフレームで各細胞について計測した空間正規化標準偏差の標準偏差をグラフにした。
【図３０】ホログラフィック合焦を利用した検量線を示す。粒子を含む校正サンプルは、焦点位置からの公知の距離に置かれ、画像が各距離で取得される。次に各画像は、数値的に伝播されて、その焦点計測極値の位置を、焦点からのサンプル距離の関数としてプロットした。
【図３１】当初の位置から＋１ｍｍと−１ｍｍ分、焦点から離れた範囲で最初開始されたサンプルの最終的な位置を示す。合焦している位置は、視覚的に決定されて、±１μｍの誤りを有すると推定された。ホログラフィック合焦の精度は、焦点位置推定の誤りに比較することができる。
【図３２Ａ】サブ画像を利用して、結合されている粒子／細胞対を、結合されていない粒子／細胞対から区別する対の粒子／細胞の相関図である。
【図３２Ｂ】サブ画像を利用して、結合されている粒子／細胞対を、結合されていない粒子／細胞対から区別する対の粒子／細胞の相関図である。
【図３３Ａ】外部力を利用せずに計測した（つまり熱平衡計測）、２つの異なるビーズ分散のサンプル（４．８μｍシリカ）のビーズ強度変動（ＮＳＤ、正規化標準偏差値）であり、１つのサンプルを表面に結合させ（濃い断面ハッチングを施されたさヒストグラム）、他のサンプルが表面に結合されていない（まばらな斜交いの線のパターンのヒストグラム）。ビーズは、０．９％の生理的食塩溶液で希釈することで、ガラスカバースリップの表面に結合され、ビーズは、脱イオン化水で希釈されることでカバースリップ上を自由に拡散する。未結合のビーズは、これら実験条件下で結合されたものと明確に区別できる（つまり、分布が最小限しか重なっていない）。
【図３３Ｂ】段階を追って運動させた後に計測された同じサンプルを示す。分析されたヒストグラムのスタックにおける各画像は、サンプルを一つの軸上で２５μｍ行きつ戻りつさせる、圧電による段階的運動の後にとられたものである。システム内の物理的通気（pertubation）は、ＮＳＤ計測法で力を与えずに計測された値と比べて、結合しているビーズの集団の運動度に影響を持たない。しかし、未結合のビーズは、図３３Ａの力を加えない例と比べて、段階的運動によりビーズの運動度が上がった結果、より高いＮＳＤを示している。従って物理力の利用によって、図３３Ｂの結合されているビーズのヒストグラムと、結合されていないビーズのヒストグラムの間が大きくかけ離れていることからも分かるように、結合されている集団および結合されていない集団の間の課題を解決することができる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７６】
一実施形態では、複数の粒子１０８が、銘々の表面上でたんぱく質を発現する細胞１０８であり、たんぱく質結合受容体等の部分または抗体で処理された表面１０９（固相）に配置され、この表面のたんぱく質が、固相の受容体または抗体に選択的に結合可能としてよい。言い換えると、粒子１０８は、相補的な抗原で覆われ、固相の上に固定化されているたんぱく質結合受容体／抗体の上の結合サイトを廻り、サンプル溶液内の抗原と競合する。上述したように、対象となる抗原を有するサンプル溶液は、覆われた粒子１０８の導入前に、固相を含むサンプルチャンバ１０５、マイクロ流体サンプルチャンバ１０５、またはマイクロタイターウェルで予め定温放置されてよく、この後で、固相上の占有されていない抗体に結合して、その運動度に基づいて、未結合の粒子１０８から区別可能であってよい。校正を行うことで、方法は、サンプル溶液で目標の抗原の濃度を達成することができる。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７８】
固相は、対称の検体の特定のエピトープに特定の固定化捕捉抗体からなり、粒子１０８は、同じ検体の異なる領域上のエピトープに特異な二次的な抗体（「表示抗体：label antibody」と同様なもの）で覆われ、固相の捕捉抗体と粒子に結合される「表示抗体」とが、同時に検体に結合されるようにする（サンドイッチ法：sandwich assay）。相互作用によって表面１０９に結合される粒子１０８は、未知のサンプル１０７の検体の濃度の計測値として利用することができる。加えて、部分的な粒子の結合（つまり、結合粒子の割合）の動力学を、検体の濃度および検体の生化学特性（例えば、比率定数、均衡定数等）を計測する方法として利用することができる。このような計測では「表示抗体」洗浄段階が不要であるが、それは、結合されている「表示抗体」（つまり、抗体で覆われた粒子）が、その拡散行動（つまり、結合されている粒子が、実質的に低減した運動度を示す）または物理的力に対する応答（つまり、結合した粒子が、物理的力に対して著しく低減した応答を示すこと）によって未結合の粒子１０８から区別可能であるからである。従来の量子免疫学（immunometric）的な試験とは異なり、「表示抗体」は、必ずしも、ポジティブな結合相互作用を示さなくても構わない。この存在は、必要ではあるが十分ではない。ポジティブな結合相互作用は、最終的には粒子の運動計測によって見分けられる。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８０】
一実施形態では、対象となる抗体を血液サンプルから採取して、固有処理された表面のアレイに対して試験を行うことで、抗体プロフィールが決定される。特に、対象となる抗体の血液サンプルからの採取は、ウィルス感染を検知する目的で行われる。任意のウィルスの表面に発生するたんぱく質が、表面（固相）で固定化されて、ウィルスに対する特異抗体を捕捉することができる。加えて、ウィルスの抗体の別の領域に対して相補的な抗体で覆われた粒子がテスト中に存在していると（対象となるウィルスの抗体のなかで存在していると）、粒子が固定化されることで、血液サンプル中の抗体の存在を知ることができる。この計測は、適宜制御を行いつつ、感染を診断する目的、または、対象となる抗体の濃度を定量化する目的で実行される。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３０】
図９は、スライド（１）は、抗体で覆われた表面１０９に配置される各種類の粒子１０８を示している。Ａ抗原で覆われた粒子１０８は、具体的には、カバースリップの表面１０９を覆う固定化特異抗体（specific antibodies）（Ａ抗体）に結合されて、粒子の動きが規制される。スライド（２）では、各種類の粒子１０８によって異なる行動が表されており、特異結合されていないＢ抗原を塗布された粒子は、表面１０９上を溶剤内で自由に拡散しており、Ａ型の粒子の動きは、表面の抗体との特異結合によってかなり拘束されていることが分かる。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３４】
患者の血液を希釈してから、底面１１９が固定化抗体パッチで処理されたカバースリップ１１９であるサンプルチャンバ１１８に投入した。赤血球細胞は、底面１１９に落ちてパッチの特異抗体と相互作用した。パッチの抗体に対応する特異抗原を表面１１９に持つ細胞１０８が、表面１１９に特異結合した。固定化抗体に対応する特異抗原がない細胞は、表面１１９上を自由に拡散した。このタイプのテスト（つまり、赤血球細胞膜の表面の抗原の型判断）は、血液型の順方向の型判断（forward typing of the blood sample）に類似している（血液のプラズマ内の表面の抗原に特異な抗体の存在を計測する相補的な型判断技術である逆方向の型判断（reverse typing）に対する概念である）。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３６】
図１０Ａは、抗Ａ塗布表面の上で計測された２つの異なるサンプルの正規化標準偏差ヒストグラムのグラフである。ドナーからの、固定化された抗Ａ抗体を有する表面上のＡ抗原に対してポジティブな赤血球細胞は、黒色（Ａ型）で示されており、別のドナーからの、同様に抗Ａで覆われた表面のＡ抗原に対してネガティブなＲＢＣは、ハッチングされたパターン（Ｂ型のドナー、つまりＡ抗原が細胞に存在していない）で示されている。Ａ型の細胞（黒色）は、特に表面に留まっており、細胞の正規化標準偏差が低い値を有していることからも分かるように、その動きの範囲がかなり制限されている。他方で、Ｂ型の細胞（ハッチングされているパターン）は、細胞の画素値の変動が大きく、正規化標準偏差値が高いことからも分かるように、表面に結合されていない。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４０】
図１０Ｂでは、Ｂ型のドナー細胞（ハッチングされたパターン）が、特異結合されておらず（抗Ａに対してネガティブ）、幅広いヒストグラムを有しており、これは、拡散行動を表している。しかし、７％までのＮＳＤ（正規化標準偏差）ピークを有するサブ集団も、１時間経過後には見られる。これら細胞は、時間とともに優位性の増していく表面との非特異性の相互作用によって、部分的に結合された部分を表している可能性がある。このサブ集団は、他の未結合の細胞に比べると、より固定化されていることを示しているものの、それでも、特異結合している集団（つまり抗原Ａに対してポジティブな集団）から区別可能であるので、この技術を利用すると、非特異結合から特異結合を区別することができる。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４２】
同様のデータは、抗Ｂで覆われたパッチおよび表面に固定化されている抗ＲｈＤｔとドナー細胞とを相互作用させて、収集することができる。このようにして各ドナーの赤血球細胞について、Ａ、Ｂ、および／またはＲｈＤ抗原の存否を調べて、順方向の血液型判断テスト結果を出した。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４３】
図１１のスライド１は、２つの種類の粒子を表しており、Ａ型の粒子はＡ型の抗原を塗布されており、Ｂ型の粒子はＢ型の抗原を塗布されている。この構成では、表面に抗原Ａが塗布されている。表面には、同時にＡ抗原を塗布した粒子にもＡ抗原を塗布した表面にも結合可能なＡ抗体（ＩｇＭ）が存在するＡ型粒子が結合可能であり、これにより粒子を固定化する。このテストは、患者の血液プラズマ（抗体を含む）を混合して、既に分かっている表面の抗原とともに、分かっている抗原の種類の表面で定温放置することを含む。このテストの目標は、プラズマ内に存在する抗体の種類を、各種類の表面での各種類の制御粒子の行動を計測することで判断することである。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４５】
図１２Ａは、それぞれの時点でとられた赤血球細胞のサンプルのＮＳＤヒストグラムシリーズを示す。サンプルは、ガラスのカバースリップ表面にＢ型抗原がある表面において、抗ＡのＩｇＭ抗原（１００ｎＭ）が高濃度で拡散している合成プラズマ内のＡ型赤血球細胞から構成されている。この計測法の構成は、既知の種類の表面に既知の種類の血液細胞が結合する度合いを検知するので、主体のプラズマに対して、自然に生じた抗体の存否を調べる、逆方向の血液型判断法に類似している。このケースにおいて結合が存在していることは、複数の細胞を表面に同時に結合してこれらを固定化することができる抗体の存在を示唆する。本質的に、順方向の型判断法は、赤血球細胞の表面の特異抗原の存在を検知することに関しており、逆方向の型判断法は、血液プラズマにおける特異抗体の存在を検知することに関している。試験は、ビーズ／細胞ホログラムシーケンスにおける変動の度合いに反映されうる、血液群の抗体の存否の検知に基づいて、逆血液型判断を行うよう設計されていてよい。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４７】
図１２Ｂは、図１２Ａと類似した条件下でのヒストグラムのタイムシリーズを示すが、図１２Ａとの違いは、表面にＡ型抗原がある点である（Ｂ型抗原の表面を計測するのではなく）。抗Ａ（１００ｎＭ）という高い濃度を選択して、Ａ細胞を確実にＡ型の表面に結合させた（視覚的にも確かめられる通りである）。第１の計測ヒストグラム（一番下のヒストグラム）は、細胞が表面に置かれてから１４分間とられたものであり、合成プラズマの抗体濃度が高いということを条件として予期されるように、細胞が固定化されていることを示している（低い平均ＮＳＤおよび狭い幅）。細胞は、後の時間になっても同様の拡散行動を示しているが、これは、２２、３０、３８および４６分の時間区切りにおけるヒストグラムが同様であることからも分かるだろう。図１２Ａおよび図１２Ｂのヒストグラムを比較することで、細胞が結合されているか否かを判断するためのＮＳＤの閾値を選択することができる。これら条件下における７％のＮＳＤの閾値は、図１２Ａの未結合の集団において大半の細胞がこの閾値を上回り、図１２Ｂの結合している集団の大半の細胞がこの閾値を下回っていることから、適切であることがわかる。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６０】
図２１のプロットＡは、抗ＢがＢ抗原を有する表面上に分散された合成プラズマのＢ型の赤血球細胞のＮＳＤヒストグラムである。抗Ｂ抗体は、赤血球細胞のＢ抗原および表面のＢ抗原に付着して、細胞を固定化する。その結果生じる強度変動が、Ａ抗原パッチ（図２０のプロットＡ）の細胞に比べて顕著に低減する（図２１のプロットＡに示す低いＮＳＤ計測値が示すように）。図２１のプロットＢは、図２１で計測した各赤血球細胞のＮＳＤ値を、正規化された空間標準偏差に関連付けた散布図である。図２０のプロットＢからは、ポジティブな相関性がみてとれる。一次曲線を利用することで、正規化された空間標準偏差値に対するＮＳＤの値の偽の依存性を補正することができる。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００１】
本発明は、細胞／粒子の集団および／またはこれらと化学的に改質された（または改質されていない）表面との間の相互作用を特徴付けるための測定およびテスト方法を生成し、および／または、これら検知された運動度に基づいて、迅速且つ効率的に、細胞／粒子のサブ集団を検知する装置、計測方法、および方法に関する。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
本発明は、検知した運動度に基づいて、検知された運動度に基づいて、迅速且つ効率的に、細胞／粒子のサブ集団を特徴付ける、装置および計測装置、および計測を行う方法およびテスト方法に関する。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
一実施形態では、検知された運動度に基づいて粒子の集団またはサブ集団を計測、テスト、および特徴付ける装置であって、画像形成装置と、粒子分散を含むサンプルを載置し、コリメートされた光ビームにより照明される、顕微鏡の透明なサンプルホルダと、粒子とサンプルホルダとの間の相互作用の存否を推定するべく、サンプルホルダの上の粒子の運動度を計測する手段とを備え、画像形成装置は、光ビームを放射するコヒーレントな光源と、コヒーレントな光源からの光ビームをコリメートするコリメータとを有する、装置が提供される。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４１】
一実施形態では、異種の有効拡散特性の計測により検知可能な、異種の結合特性を有する粒子同士は、分布の幅および形状を分析して、実験的に計測された分布を異種の拡散モデルに適合させて、粒子と表面との相互作用および親和性の分布を反映しうる拡散特性の集団分布の推定値を生成することで検知可能である。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
本発明は、検知された運動度に基づいて、迅速且つ効率的な方法で、細胞／粒子の集団を特徴付けたり、細胞／粒子のサブ集団を検知したりする計測およびテストに利用する機器および計測装置および方法に係る。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５８】
一例では、図３Ｂは、各々が異種の粒子１０８の混合物を有しているサンプルホルダ１０５の上のカバースリップ１０９Ａの様々な処置済み表面領域（Ａ、Ｂ，Ｃ，およびＤ）の上下方向の図を示しており、ここでは各種類の粒子１０８が区別可能に表示されている（例えば蛍光による表示またはホログラフィック画像特性によって）。各表面１０９、１０９Ａは、異種の粒子の集団１０８の運動度の計測値に対して、異なる相互作用を生じさせている（つまり、各領域で異なる種類の粒子１０８が拡散可能である）。図３Ｂは、本発明において、別々の処置された表面１０９、１０９Ａの領域があってもなくても区別可能な粒子１０８の異質性を利用することで、同時に調査可能な相互作用の種類の数を示している（多重計測）。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５９】
一実施形態では、異質の粒子の集団１０８は、同時に計測され、各種類の粒子が、異なる量で、または同様の量の範囲で計測可能である（例えば多重計測）（図３Ｂ）。全てまたは幾つかの種類の粒子１０８は、ラベル（例えば蛍光、ナノ粒子）、粒子画像（異なる吸収、分散、蛍光、ルミネッセンス特性、蛍光またはルミネッセンス発光プロフィール、蛍光またはルミネッセンスにより減った寿命）、および／または、粒子の位置（粒子の種類の堆積が制御されていることを想定している：controlled deposition of particle types）に基づいて区別可能であってよい。全てまたは幾つかの種類の粒子１０８は、各粒子１０８のデータのマルチモーダルな収集で区別することができるものもある。全てまたは幾つかの種類の粒子１０８は、コヒーレントな光源が生成するホログラムに基づいて区別可能であってもよい。全てまたは幾つかの種類の粒子１０８は、コヒーレントな光源１００が生成する、焦点が合った、および／または、焦点がずれたホログラムに基づいて区別可能であってもよい。全てまたは幾つかの種類の粒子１０８は、１を超える数の焦点面で収集されたホログラムに基づいて区別可能であってもよい。同質な粒子の集団１０８は、同時に計測されてよい。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０４】
図３３Ｂは、段階を追って運動させた後に計測された同じサンプルを示す。分析されたヒストグラムのスタックにおける各画像は、サンプルを一つの軸上で２５μｍ行きつ戻りつさせる、圧電による段階的運動の後にとられたものである。システム内の物理的通気（pertubation）は、ＮＳＤ計測法で力を与えずに計測された値と比べて、結合しているビーズの集団の運動度に影響を持たない。しかし、未結合のビーズは、図３３Ａの力を加えない例と比べて、段階的運動によりビーズの運動度が上がった結果、より高いＮＳＤを示している。従って物理力の利用によって、図３３Ｂの結合されているビーズのヒストグラムと、結合されていないビーズのヒストグラムの間が大きくかけ離れていることからも分かるように、結合されている集団および結合されていない集団の間の課題を解決することができる。結合されているビーズの集団および結合されていないビーズの集団の間の解像度は、力を加えない場合も良好であった（図３３Ａの熱平衡計測）が、物理的力を加えることにより、ビーズまたは細胞の運動度計測の際に大きな解像性能が得られるようなサンプルおよび状況もあると思われる。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２３】
計測値およびシミュレーション値の間の比較は、良好であり、正規化標準偏差が、ビーズの平均二乗変位の変化を温度の関数として定量計測する際の優秀な計測値の選択として間違っていないことを示し、粒子追跡アルゴリズムの代わりに利用可能であることが証明された。上述したように、計測されたビーについての、僅かに大きな誤りのバー、および、正規化標準偏差値の平均が低いことは、大半が未結合の集団のなか、少数しか結合ビーズがないことにより説明されうる（図７のヒストグラムにおける５−１０％ＮＳＤ間の小さなピークを参照）。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４１】
「中間」レベルの結合を有する細胞は、特異結合細胞から区別可能であることが明らかであり、この技術を、サブ集団の細胞が基板と別々の相互作用をすることにまつわる課題を解決するものとして推奨することができる。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５９】
コントラスト補正はまた、処理済みの表面の上に分散する細胞の集団に適用することもできる。図２０のプロットＡは、抗ＢがＡ抗原を有する表面上に分散された合成プラズマのＢ型の赤血球細胞のＮＳＤヒストグラムである。Ｂ細胞に付着する抗Ｂ抗体は、表面上のＡ光源には結合されないため、自由に拡散する。図２０のグラフＢは、図２０で計測した各赤血球細胞のＮＳＤ値を、その正規化空間標準偏差に関連付ける分散プロットを示す。適合が示すポジティブな相関性は、動力学に関わらず、低い正規化空間標準偏差により、低いＮＳＤ値が生じうることを示している。細胞／ビーズの動力学は基本的には正規化された空間標準偏差から独立したものなので、動的観測量（ＮＳＤ）は、一次曲線（linear fit）を利用してコントラスト補正されたデータを生成することで、正規化された空間標準偏差に対する依存性に対する補正を行うことができる。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６１】
図２２のプロットＡおよびＢは、結合されていない（図２０のプロットＡ）、および、結合されている（図２１のプロットＡ）、補正された、および、補正されていないヒストグラムを示し、この補正は、線の補正（図２０のプロットＢおよび図２１のプロットＢ）により行うことで、ＮＳＤの正規化空間標準偏差に対する依存をなくした。この補正は、ヒストグラムの全体の形状を実質的に変更はしていない。これのもつ最も重要な効果は、未結合のＮＳＤ分布の末尾の減衰に対するものである。閾値をＮＳＤ値に適用することで、細胞／ビーズが「結合」しているか（「結合」部分＝ＮＳＤヒストグラムにおける細胞部分＜閾値、「未結合」部分＝ＮＳＤヒストグラムの細胞部分＞閾値）を判断することができる。補正されたＮＡＤ分布の末尾の減衰は、末尾領域の閾値を利用するときに、「結合」されている細胞の部分が小さいことを示し、所謂未結合の集団の「非特異な結合（non-specifically bound）」の割合を減らすことができる。補正のこの特徴は、テストの「非特異な背景部分」を低減させることに等しい。アーチファクトを最小限にする別の選択肢である、ＮＳＤに対するコントラストの貢献を利用する方法では、許容可能な空間標準偏差に対する最小および／または最大閾値を設定して、閾値内の粒子のみを分析することができる。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６５】
図２６のプロットＡ、Ｂ、およびＣは、５ｎＭの抗ＡがＢ抗原を有する表面に分散された合成プラズマ内のＡ型赤血球細胞のＮＳＤヒストグラムを示す（図２６のプロットＡ（上のヒストグラム）は、２６５３個の細胞が計測されている）。抗Ａ抗体は、細胞を表面に架橋する結合（bond）を生成することができず、細胞を拡散させる。０．０６９μｍの二乗平均平方根の変位をガウスのステップサイズ分布の幅に利用する場合、平均的なＮＳＤ値のモデル化に、単一の特徴的な二乗平均平方根の変位を有するＲＢＣ拡散のシミュレーションを利用できることがわかった。シミュレーションは、２６５０回行われて、ＮＳＤ値の分布が得られた（図２６のプロットＢ，中間のヒストグラム）。計測ヒストグラムは、シミュレーションヒストグラムよりずっと幅が広く、これは、単一の平均平方根の変位が、表面上のＲＢＣの動力学を特徴付けていないことを示している。図２６のプロットＣは、二乗平均平方根の変位値のガウス分布（０．０６９±０．０２μｍ）を利用して、計測した細胞拡散を細胞の拡散率の異種の分布としてモデル化することで得られたシミュレーションによるＮＳＤ分布（２６５０回試された）を示す。二乗平均平方根の変位の同一の分布を生成する、自由に拡散する球の分布として拡散率をモデル化することで、半径が３倍を超える率で変化するガウス分布が生成され（平均の半径の１つの標準偏差の範囲内）、拡散動力学における顕著な異質性が示唆される。細胞の大きさ分布はずっと狭いので、この結果は、表面における細胞の相互作用のポテンシャルの異質性を生じさせる、表面および／または細胞の異質性に起因した、表面と細胞との異質な相互作用であることを示している。このように、本発明によって、異質および同質な拡散動力学の検知ができるようになり、表面条件がわかっている場合、細胞の特性の分布の診断として利用することができるようになる。特に、このような計測および分析により、表面が分かっている場合に、研究または診断目的で、細胞（粒子）の特性（例えば、表面結合密度、親和性など）の異質性に関する情報を得ることができるようになる。例えば、細胞の集団は、一定の発現レベルを有する、一定の範囲の表面たんぱく質を現すことができる。一定の密度の表面たんぱく質を発現する細胞の割合は、診断対象である。より高い表面たんぱく質の濃度を表す細胞は、より低い表面たんぱく質濃度を有する細胞よりも相補的な表面により強固に結合することは、運動度の観測量にも反映されるところである（正規化標準偏差値）。さらには、細胞の対象となる割合を検知した後で、さらなる診断値の情報を生成するための他の条件下において、他の表面から隔離され、および／または、これとともにテストされてよい。これら細胞は、さらなる操作（例えば遺伝子操作）および培養目的で隔離されてもよい。選択した細胞の培養は、治療に有効な細胞成分（例えば、たんぱく質）を発現させ、純化する目的で行うことができる。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６６】
これを補うように、存在している粒子が既知であるときには、計測および分析によって、表面特性の異質性に関する情報を得ることもできる（例えば、品質制御、調査目的で）。例えば、テスト表面における抗原の表面密度が分かっている場合、校正粒子を利用することで、集団からの同質な運動度の反応は、同質な表面を示し、異質な運動度の応答は、表面にある程度の異質性があることを示す（例えば、表面リンクされた部分の不均一な表面密度）。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６７】
＜細胞空間統計学データおよび細胞形状変化の動力学＞
結合状態に関する情報は、赤血球細胞の空間正規化標準偏差にも見られる。図２７のプロットＡおよびＢは、図２０のプロットＡおよび図２１のプロットＡでそれぞれ計測された、未結合赤血球細胞および結合赤血球細胞の正規化された空間標準偏差値のプロットである。赤血球細胞の結合された集団は、僅かに低い平均を有しているが、未結合の集団の正規化されている空間標準偏差値と実質的に重なっている。表面に結合されている細胞は、未結合の細胞と比べて僅かに平坦になっており、これは、赤血球細胞の両凹面特性を特徴付けている。この僅かな平坦性によって、細胞のコントラストが少し失われる。集団の平均的な差異はあるものの、未結合赤血球細胞と結合赤血球細胞との間で、空間正規化標準偏差値の分布はかなり重なっている。具体的に各細胞の正規化された空間標準偏差値は、計測期間におけるフレーム間で実質的に変化していない（図２８のプロットＡおよび図２８のプロットＢ）ので、上述した我々の構成方法の正当性を裏付けるものである。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６８】
図２８のプロットＡおよびＢは、シーケンス内の４０個のフレーム全てにおける、図２０のプロットＡおよび図２４のプロットＡ（図２８のプロットＡ）の未結合の集団内の１００個の細胞、および図２０のプロットＢおよび図２４のプロットＢ（図２８のプロットＢ）の結合されている集団内の１００個の細胞について平均空間正規化標準偏差をグラフにしたものである。両プロットで、誤りバーには、４０個のフレームシーケンスにおける各細胞の空間正規化された偏差の標準偏差がプロットされている。フレーム間での、ある細胞の変化は、細胞間の変化よりも僅かである。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７０】
図２９は、結合された細胞および結合されていない細胞両方について、シーケンス内の４０個のフレームで各細胞について計測した空間正規化標準偏差の標準偏差をグラフにした。フレームごとの正規化された空間標準偏差の変化の大きさは小さいが、結合された赤血球細胞および未結合の赤血球細胞の間の、正規化された空間標準偏差の変化はかなり異なっていることが分かった。結合されている細胞は未結合の細胞と比較して、幅広い分布を有し、ずっと低い振幅で変化する細胞を有しており、これは、結合されている細胞の多くの割合が、未結合の細胞よりも低い振幅の空間強度変動を有することを示している。図１９の結合されている細胞の１９パーセント（１９％）が、０．００５未満の正規化空間標準偏差(毎秒５フレームで得た４０個のフレームで計測した)を有し、未結合の集団では、細胞の０．３％のみが０．００５未満の値であった。前述した分析とは異なり、４０フレームシーケンスの各フレームでは、細胞の近隣が、空間標準偏差の変動に対する質量中心の動きの貢献を補正するように決定される（シーケンスから１つのフレームのみの細胞の近隣を決定する場合とは対照的に）。この細胞のフレームシーケンスにおける空間統計学データの分布は、膜の柔軟性、細胞質柔軟性／粘弾性、細胞が健康か病気か、細胞年齢、溶剤の条件、結合状態等の診断に利用することができ、これら全てが、経時的およびその量の分布において細胞の空間統計学データの動力学に反映される細胞の形状の変化の動力学に影響を与えうるものである。フレームの露光時間は、変動する細胞の画像を固定させる目的から十分短くすべきであり、フレームの露光時間が長くなりすぎると、細胞の動きが露光中に平均化されてしまって、技術の感度が低下する。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】発明の名称
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の名称】粒子の運動度および／または細胞の分散を求めるためのホログラフィック変動顕微鏡装置、方法並びにプログラム