(57)【要約】【課題】本発明は皮膚基底膜構造の修復、再形成を促進するための新規な手段および皮膚外用剤、並びに人工皮膚の製造において基底膜の十分な形成を達成する新規な手段を提供することを課題とするものである。【解決手段】本発明は、セリンプロテアーゼ阻害剤、また任意的に表皮基底膜成分の細胞外マトリックス蛋白質産生促進剤を有効成分とする表皮基底膜構造形成促進剤と皮膚外用剤を提供する。更には、十分に形成された基底膜を持つ人工皮膚を製造する方法として、セリンプロテアーゼ阻害剤、また任意的に表皮基底膜成分の細胞外マトリックス蛋白質産生促進剤、マトリックスメタロプロテアーゼの阻害剤を混和したものを含む人工皮膚培養用の培地およびその製造方法を提供する。【選択図】　　　図７
2004075661.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
セリンプロテアーゼ阻害剤の１種または２種以上を有効成分として含んで成る、皮膚基底膜構造形成促進剤。
【請求項２】
更に、細胞外マトリックス蛋白質産生促進剤の１種または２種以上を有効成分として含んで成る、請求項１記載の皮膚基底膜構造形成促進剤。
【請求項３】
前記細胞外マトリックス蛋白質がＩＶ型コラーゲン、ＶＩＩ型コラーゲンおよびラミニン５からなる群から選ばれる１種または２種以上である、請求項２記載の皮膚基底膜構造形成促進剤。
【請求項４】
更に、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の１種または２種以上を有効成分として含んで成る、請求項１〜３のいずれか１項記載の皮膚基底膜構造形成促進剤。
【請求項５】
前記セリンプロテアーゼ阻害剤がアプロチニンである、請求項１〜４のいずれか１項記載の皮膚基底膜構造形成促進剤。
【請求項６】
前記細胞外マトリックス蛋白質産生促進剤がインターロイキン−１、トランスフォーミング増殖因子−αまたは血小板由来増殖因子である、請求項１〜５のいずれか１項記載の皮膚基底膜構造形成促進剤。
【請求項７】
皮膚外用剤である、請求項１〜６のいずれか１項記載の皮膚基底膜構造形成促進剤。
【請求項８】
人工皮膚形成培地中にセリンプロテアーゼ阻害剤の１種または２種以上を添加することを特徴とする、人工皮膚の製造方法。
【請求項９】
更に、人工皮膚形成培地中に細胞外マトリックス蛋白質産生促進剤の１種または２種以上を添加することを特徴とする、請求項７記載の人工皮膚の製造方法。
【請求項１０】
前記細胞外マトリックス蛋白質がＩＶ型コラーゲン、ＶＩＩ型コラーゲンおよびラミニン５からなる群から選ばれる１種または２種以上である、請求項９記載の人工皮膚の製造方法。
【請求項１１】
更に、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の１種または２種以上を添加する、請求項８〜１０のいずれか１項記載の人工皮膚の製造方法。
【請求項１２】
前記セリンプロテアーゼ阻害剤がアプロチニンである、請求項８〜１１のいずれか１項記載の人工皮膚の製造方法。
【請求項１３】
前記細胞外マトリックス蛋白質の産生促進剤がインターロイキン−１、トランスフォーミング増殖因子−αまたは血小板由来増殖因子である、請求項８〜１２のいずれか１項記載の人工皮膚の製造方法。
【請求項１４】
ブナ科ブナ属植物の抽出物と、下記一般式（１）または（２）で表される１−アシルリゾリン脂質と、シソ科ハッカ属植物の抽出物とが配合されていることを特徴とする皮膚外用剤：
【化１】
2004075661.tif 000009
【化２】
2004075661.tif 000010
（式中、Ｒ１は炭素数１１〜２４の飽和脂肪酸残基または炭素数１８、２０、２２、２４で、１〜４個の不飽和２重結合を有する脂肪酸残基を表し、Ｒ２は炭素数１３〜２４の飽和脂肪酸残基または炭素数１８、２０、２２、２４で、１〜４個の不飽和２重結合を有する脂肪酸残基を表し、ＭはＨまたはアルカリ金属原子を表す。）
【請求項１５】
肌荒れ改善用の皮膚外用剤である請求項１４記載の皮膚外用剤。
【請求項１６】
老化防止用の皮膚外用剤である請求項１４記載の皮膚外用剤。
【請求項１７】
ブナ科ブナ属植物の抽出物を０．００１〜５．０重量％と、１−アシルリゾリン脂質を０．００１〜１．０重量％と、シソ科ハッカ属植物の抽出物を０．００１〜５．０重量％とが配合されている、請求項１４〜１６のいずれか１項記載の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、皮膚基底膜ケア剤、皮膚基底膜構造形成または修復促進剤、そして皮膚外用剤に関する。本発明はまた人工皮膚構造形成促進剤及び人工皮膚の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
化粧および皮膚科学分野では、皮膚に対する日光の照射をはじめとする外界環境の影響や加齢による損傷を軽減もしくは治療すべく多種多様な手段が提案され、また、試みられている。例えば、加齢に伴う皮膚変化としては、しわの形成、硬化もしくは弾力性の低下等が主なものとしてあげられる。
【０００３】
このような変化の原因として、皮膚真皮におけるコラーゲン、エラスチン、グルコサミノグリカンからなる膠原線維、弾性線維の機能低下に主な関心が向けられている。これまで、このような変化を防止もしくは修復する手段として、ヒドロキシカルボン酸類の使用（例、特許第２５３３３９号公報）、リゾリン脂質の使用（特開平８−６７６２１号公報）が検討されている。
【０００４】
前者の公報には、コラーゲン線維減損の防止により角質やシワを抑制しうることが示唆されている。一方、後者の公報では、リゾリン脂質がヒト線維芽細胞におけるグルコサミノグリカン（具体的にはヒアルロン酸）の産生能を亢進することから真皮での保湿効果が示唆されている。
【０００５】
皮膚の構造は大きく分けて角層、表皮、基底膜、真皮からなる。ＩＶ、ＶＩＩ型コラーゲンは表皮と真皮とを結合させる働きを担う表皮基底膜の成分である。ＩＶ型コラーゲンは表皮基底膜の骨格をなすラミナ・デンサ構造の主要構成成分である。また、ＶＩＩ型コラーゲンは基底膜と真皮とを結合させるアンカリング線維の主成分である。
【０００６】
表皮基底膜のＩＶ型コラーゲンの発現レベルは、加齢と共に低下することが観察されており（Ｖａｚｑｕｅｚ　Ｆ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｍａｔｕｒｉｔａｓ　１９９６，　２５：　２０９−２１５）、また、ＶＩＩ　型コラーゲンに関しても、高齢者由来の皮膚線維芽細胞では若い人由来の皮膚線維芽細胞に比べて、蛋白質レベルおよびｍＲＮＡレベルで産生能が低下するとの報告　（Ｃｈｅｎ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ．　Ｉｎｖｅｓｔ．　Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，　１０２：２０５−２０９，　１９９４）がある。また、ＶＩＩ　型コラーゲンにより構成されるアンカリング線維は、正常皮膚において生理的老化および光老化に伴い減少するとの報告（辻卓夫、日皮会誌　１０５：９６３−９７５，　１９９５，Ｔｉｄｍａｎ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ．　Ｉｎｖｅｓｔ　Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，　８３：４４８−４５３，　１９８４）もある。したがって、基底膜骨格を形成するＩＶ型コラーゲン、表皮と真皮を結合させているアンカリング線維形成、あるいはアンカリング線維の主構成成分であるＶＩＩ　型コラーゲンの産生を促進することは、若齢時のような健康で若々しい皮膚を維持するために重要な成分である。
【０００７】
外界環境の皮膚老化に及ぼす影響として、最も強力なものは太陽光に含まれる紫外線であり、明確に老化促進因子として位置付けられており、深いシワを特徴とする光老化と言われる皮膚変化を誘導していることが知られている（Ｓｃｈａｒｆｆｅｔｔｅｒ−Ｋｏｃｈａｎｅｋ，　Ａｄｖａｎｃｅ　ｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，　１９９７，　５８，　６３９−６５５）。紫外線の皮膚に及ぼす影響は多岐にわたり、遺伝子ＤＮＡの傷害から始まり、活性酸素の産生の誘導、そして最近では、マトリックスメタロプロテアーゼの産生誘導がある（Ｆｉｓｃｈｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，　１９９６，　３７９，　３３５−３３９）。
【０００８】
紫外線の持つこの多能性のために、紫外線で誘導される光老化がどのような機構で起るかに関しては十分に解明されてこなかった。ヘアレスマウスに紅班を起こさない程度のエネルギーの紫外線を照射し続けることによって、マウス背部皮膚にヒトの光老化皮膚に対応するような深いシワが形成されることが明らかになり、このマウスモデルを用いてシワに影響を及ぼす物質の評価も行われてきた（Ｍｏｌｏｎｅｙら、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．　Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．，　１９９２，　５６，　４９５−５０４）。しかし、十分にシワ形成機構に関しては解明されておらず、その解明が待たれていた。
【０００９】
一方、１９９４年、Ｋｏｉｖｕｋａｎｇａｓらは紫外線を照射した皮膚にて基底膜分解酵素であるゼラチナーゼが高まることを報告している（Ａｃｔａ　Ｄｅｒｍ．　Ｖｅｎｅｒｅｏｌ．　１９９４，　７４，　２７９−２８２）。また、Ｍａｒｓｃｈａｌｌらは紫外線照射によって表皮細胞でのウロキナーゼ（プラスミノーゲンアクチベータ：ｕＰＡ）とその受容体であるｕＰＡレセプターの発現が増加することを報告しており（Ｊ．　Ｉｎｖｅｓｔ．　Ｄｅｒｍａｔｏｌ．　１９９９，　１１３，　６９−７６）、血漿由来のプラスミノーゲンが供給されることによって、ケラチノサイト周囲でプラスミノーゲンが活性化され、紫外線暴露部位でプラスミン活性が増加することが示唆されている。日光暴露部位皮膚では、基底膜が構造変化を示し、特に多重化が頻繁に観察されることも報告されている（Ｌａｖｋｅｒ，　Ｊ．　Ｉｎｖｅｓｔ．　Ｄｅｒｍａｔ．，１９７９，　７３，　５９−６６）。これは、日光に含まれる紫外線が皮膚における基底膜分解酵素の産生量を高めることによって、基底膜構造に影響を与えている可能性を示唆している。
【００１０】
表皮基底膜が傷害を受けると皮膚老化が促進されるだけではなく、日々の表皮のターンオーバーが乱れ、肌傷害を誘発する。したがって、傷害を受けた皮膚基底膜の構造を早期に修復することは、皮膚老化の予防だけではなく、日常のスキンケアとして重要である。
【００１１】
基底膜の修復を促進する具体的な手段については、人工皮膚モデルを用いて検討されてきた。人工皮膚モデルはその製造方法の１例としては、真皮と類似する構造を有するヒト線維芽細胞を含む収縮Ｉ型コラーゲンゲルの上に正常ヒト表皮ケラチノサイトを培養して表皮層を形成せしめる方法が知られている。この方法においては、真皮を模倣するコラーゲンゲルと表皮を模倣する表皮層との間に基底膜が十分に形成されず、傷害を受けた皮膚基底膜構造の修復、再形成を促進する物質の評価に用いることができる。この人工皮膚を用い、マトリックスメタロプロテアーゼの阻害剤、またはマトリックスメタロプロテアーゼとマトリックス蛋白質産生亢進剤の両者を投与することで（特開２００１−２６９３９８号公報）、皮膚基底膜構造の再形成を促進させてきた。しかし、再形成されたラミナ・デンサ構造が正常の皮膚のものと比較して未成熟であり、ＶＩＩ型コラーゲンの沈着状態が不十分であることが問題点であった。
【００１２】
さらに、人工皮膚は、何らかの原因で損傷を受けた生来の皮膚の代替物として、または、皮膚に対する医薬や化粧品の作用や薬物を試験するための実験材料として重要であり、いずれの用途においても、天然の皮膚の構造を可能な限り模倣した構造を有する人工皮膚が望まれている。
【００１３】
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては次のものがある。
【特許文献１】
特開２００１−２６９３９８号公報
【特許文献２】
特許第２５３３３９号公報
【特許文献３】
特開平８−６７６２１号公報
【００１４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は皮膚基底膜構造の修復、再形成を促進するための新規な手段および皮膚外用剤、並びに人工皮膚の製造において基底膜の十分な形成を達成する新規な手段を提供することを目的とするものである。
【００１５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、皮膚基底膜構造の修復、再形成の促進の課題および良好な基底膜構造をもつ人工皮膚の製造の課題を解決すべく、鋭意検討した結果、セリンプロテアーゼを阻害する物質および表皮基底膜成分の主要構成成分であるＩＶ型、ＶＩＩ型コラーゲンまたはラミニン５の産生量を高める物質が、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤よる基底膜形成促進効果を著しく促進させることを見出し、本発明を完成した。
【００１６】
従って本発明は、セリンプロテアーゼ阻害剤の１種または２種以上を有効成分として含有される表皮基底膜構造形成促進剤と皮膚外用剤を提供する。
【００１７】
また、本発明は、セリンプロテアーゼ阻害剤の１種または２種以上を有効成分とし、また、表皮基底膜成分の主要構成成分であるＩＶ型、ＶＩＩ型コラーゲンあるいはラミニン５などの細胞外マトリックスの産生を高める物質を１種または２種以上を有効成分とし、それぞれを混和することによって調製される表皮基底膜構造形成促進剤と皮膚外用剤を提供する。
【００１８】
また更に、本発明は、セリンプロテアーゼ阻害剤の１種または２種以上を有効成分とし、また、表皮基底膜成分の主要構成成分であるＩＶ型、ＶＩＩ型コラーゲンあるいはラミニン５などの細胞外マトリックスの産生を高める物質を１種または２種以上を有効成分とし、さらにマトリックスメタロプロテアーゼの阻害剤の１種または２種以上を有効成分として混和することによって調製される皮膚基底膜構造形成促進剤と皮膚外用剤を提供する。
【００１９】
本発明者らは、十分に形成された基底膜を持つ人工皮膚を製造する方法として、セリンプロテアーゼ阻害剤の１種または２種以上を有効成分とし、また、表皮基底膜成分の主要構成成分であるＩＶ型、ＶＩＩ型コラーゲンあるいはラミニン５などの細胞外マトリックスの産生を高める物質を１種または２種以上を有効成分とし、また、マトリックスメタロプロテアーゼの阻害剤の１種または２種以上を有効成分とし、それぞれを単独または混和したものを含む人工皮膚培養用の培地およびその製造方法を提供する。
【００２０】
さらに、本発明者らは、ＩＶ型、ＶＩＩ型コラーゲンの産生促進剤作用を示すブナ科ブナ属植物の抽出物と、ラミニン５産生促進剤１−アシルリゾリン脂質と、基底膜安定化作用を示すセリンプロテアーゼ阻害剤のシソ科ハッカ属植物の抽出物とを組み合わせることにより、基底膜修復促進効果が高く、肌荒れ改善効果にも優れ、かつ肌のはりを保ち、しわの形成を抑制する効果にも優れた皮膚外用剤が得られることを見出した。
【００２１】
詳しくは、特に好適態様として、本発明は、ブナ科ブナ属植物の抽出物と、下記一般式（１）または（２）で表される１−アシルリゾリン脂質と、シソ科ハッカ属植物の抽出物とを配合することを特徴とする皮膚外用剤を提供する。
【化３】
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【化４】
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（式中、Ｒ１は炭素数１１〜２４の飽和脂肪酸残基または炭素数１８、２０、２２、２４で、１〜４個の不飽和２重結合を有する脂肪酸残基を表し、Ｒ２は炭素数１３〜２４の飽和脂肪酸残基または炭素数１８、２０、２２、２４で、１〜４個の不飽和２重結合を有する脂肪酸残基を表し、ＭはＨまたはアルカリ金属原子を表す。）
【００２２】
【発明の実施の形態】
セリンプロテアーゼ阻害剤
本発明において使用するセリンプロテアーゼを阻害する物質としては、このような阻害活性を有する物質であればよく、特に制限はない。セリンプロテアーゼとしては、たとえば、プラスミン、ウロキナーゼ等があげられる。従って、セリンプロテアーゼを阻害する物質としては、プラスミン、ウロキナーゼ等を阻害する物質として選択することができる。
【００２３】
セリンプロテアーゼを阻害する物質の具体例としては、アプロチニン、トラネキサム酸、ε−アミノカプロン酸などが挙げられる。
【００２４】
さらに、本発明のセリンプロテアーゼ阻害剤の具体例としては、セリンプロテアーゼ阻害活性を示す種々の植物抽出物やそれから得られる精製物を使用することができる。このような植物として、カロフイラム・ブラジリエンセ（Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍｂａｓｅｎｓｅ　Ｃａｍｂｅｓｓ．）、ミルキア・スフアエロカルパ（Ｍｙｒｃｉａｓｐｈａｅｒｏｃａｒｐａ　ＤＣ）、ヒプテイス・クレナタ（Ｈｙｐｔｉｓｃｒｅｎａｔａ　Ｐｏｈｌｅｘ　Ｂｅｎｔｈ．）、ハマスゲ（Ｃ．　ｒｏｔｕｎｄｕｓＬ）、ハルトノキまたはモガシ（Ｅ．　ｄｅｃｉｐｉｅｎｓＨｅｌｍｓｌ．）、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）に属する植物、特にはばら科のバラ属（Ｒｏｓａｃｅａｅ）、キイチゴ属（Ｒｕｂｕｓ）、シモツケソウ属（Ｆｉｌｉｐｅｎｄｕｌａ）、サンザシ属（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ）に属する植物、ボタン科（Ｐａｅｏｎｉａｃｅａｅ）ボタン属（Ｐａｅｏｎｉａ）に属する植物、クワ科（Ｍｏｒａｃｅａｅ）カナムグラ属（Ｈｕｍｕｌｕｓ）、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）ウサギギク属（Ａｒｎｉｃａ）、キク科カミツレモドキ属（Ａｎｔｈｅｍｉｓ）に属する植物、イチヤクソウ科（Ｐｙｒｏｌａｃｅａｅ）に属する植物、オトギリソウ科オトギリソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｉｕｍｅｒｃｔｕｍ　Ｔ．）、セイヨウオトギリソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｉｕｍ　ｐｅｒｆｏｒａｔｉｕｍＬ．）、等のオトギリソウ科（Ｈｙｐｅｒｉｃａｃｅａｅ）に属する植物、セイヨウハッカ（Ｍｅｎｔｈａ　ｐｉｐｅｒｉａｔａ　Ｌ．）、ミドリハッカ（Ｍｅｎｔｈａ　ｖｉｒｉｄｉｓ　Ｌ．）などのシソ科（Ｌａｂｉａｔａｅ）ハッカ属（Ｍｅｎｔｈａ）に属するから選ばれる植物、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）ベニバナ属（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ）ベニバナ（Ｃａｒｔｈａｍｕｓｔｉｎａｃｔｏｒｉｕｓ　Ｌ．）、フクロソウ科（Ｇｅｒａｎｉａｃｅａｅ）フクロソウ属（Ｇｅｒａｎｉｕｍ）ゲンノショウコ（Ｇｅｒａｎｉｕｍ　ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ　Ｓｉｅｂｏｌｄ　ｅｔ　Ｚｕｃｃａｒｉｎｉ）、ブドウ科（Ｖｉｔａｃｅａｅ）ブドウ属（Ｖｉｔｉｓ）に属する植物、シラカバ（Ｂｅｔｕｌａ　ａｌｂａ　Ｌ．）、北米産シラカバ（Ｂｅｔｕｌａ　ｌｅｕｔａ　Ｌ．）、ヨーロッパシラカバ（Ｂｅｔｕｌａ　ｐｅｎｄｕｌａ　Ｒｏｔｈ．）等の属するカバノキ属（Ｂｕｔｕｌａｃｅａｅ）の植物、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）サクラ属（Ｐｒｕｎｕｓ）のアンズ（Ｐ．　ａｒｍｅｎｉａｃａ　Ｌ．，　Ｐ　ａｎｓｕ　Ｋｏｍａｒ，　Ｐ．　ｍａｎｄｓｈｕｒｉｃａ　Ｋｏｅｈｎｅ，　Ｐ．　ｓｉｂｉｒｉｃａ　Ｌ．）の属するサクラ属の植物、乾性草原、牧草地に生える植物であるザポテ、クエ・シャー、サノーサノ、コラ・デ・カバロ等を挙げることができる。
【００２５】
これらの植物の抽出物は、草本植物にあっては、根、葉、茎、花等から得られ、木本植物にあっては、根、芽、樹皮、果実、葉、花等から得られる。
【００２６】
これらの植物からの抽出物は、植物材料を必要に応じて乾燥させ、さらに必要に応じて細断又は粉砕した後、水性抽出剤としては、例えば、冷水、温水、又は沸点もしくはそれより低温の熱水を用いることができ、また有機溶媒としては、メタノール、エタノール、１，３−ブタンジオール、エーテル等を、常温で又は加熱して用いることができる。
【００２７】
細胞外マトリックス蛋白質産生促進剤
本発明において使用するマトリックス蛋白質産生促進剤としては、これらの蛋白質の産生を亢進する場合である。
【００２８】
本発明においてマトリックス蛋白質としては、基底膜の構成成分であるラミニン、ＶＩＩ型コラーゲン、パーレカン、ナイドジェン等の基底膜成分であり、特に、皮膚基底膜に特徴的なラミニン５、ＩＶ型コラーゲン、ＶＩＩ型コラーゲンが挙げられる。
【００２９】
ラミニン５産生促進剤の具体例としては、例えば、トランスフォーミング・グロスファクター−α、トランスフォーミング・グロスファクター−β１、トランスフォーミング・グロスファクター−β２、トランスフォーミング・グロスファクター−β３、表皮増殖因子などが挙げられる。
【００３０】
さらに、種々の植物抽出物やそれから得られる精製物を使用することができる。このような植物としては、カンゾウ、ヒオウギ、ジタノキ、イボツヅラフジ、コロハ、ケシ科ボコニア属ポロ・アマリロ、マメ科ブソフォカルプス属シカクマメ、マメ科カシア属レタマ、マメ科エリスレア属カンチャラグア、大豆、カッコン、オノニス、メリロート、モヤシ、アズキが挙げられる。これらの植物の抽出物は、草本植物にあっては、根、葉、茎、花等から得られ、木本植物にあっては、根、芽、樹皮、果実、葉、花等から得られる。
【００３１】
これらの植物からの抽出物は、植物材料を必要に応じて乾燥させ、さらに必要に応じて細断又は粉砕した後、水性抽出剤としては、例えば、冷水、温水、又は沸点もしくはそれより低温の熱水を用いることができ、また有機溶媒としては、メタノール、エタノール、１，３−ブタンジオール、エーテル等を、常温で又は加熱して用いることができる。植物から得られる精製物として、大豆リゾレシチン、大豆サポニン画分、大豆レシチン画分などがある。
【００３２】
ＩＶ型コラーゲン産生促進剤の具体例としては、例えば、腫瘍壊死因子−α、トランスフォーミング・グロスファクター−β１、トランスフォーミング・グロスファクター−β２、トランスフォーミング・グロスファクター−β３、表皮増殖因子、インターロイキン−１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、血小板由来増殖因子などが挙げられる。
【００３３】
さらには、種々の動物由来のものを使用することができる。例えば、牛乳カゼインより調製されるブロモイスミルク、鶏の卵の卵殻膜を加水分解して調製したＥＭプロテインＬ等が挙げられる。
【００３４】
さらに、種々の植物抽出物やそれから得られる精製物を使用することができる。このような植物としては、プレ（Ｐｕｌｅ：Ａｌｓｔｏｎｉａ　ｓｃｈｏｌａｒｉｓ．）などのキョウチクトウ科に属する植物、ヨーロパブナ（Ｆａｇｕｓ　ｓｙｌｖａｔｉｃａ）などのブナ科の樹木　、カッコン（Ｐｕｅｒａｒｉａ　ｌｏｂａｔａ　Ｏｈｗｉ）などのマメ科植物　、セイヨウキズタ（Ｈｅｄｅｒａ　ｈｅｌｉｘ）　などのウコギ科植物、ランなどの植物が挙げられる。これらの植物の抽出物は、草本植物にあっては、根、葉、茎、花等から得られ、木本植物にあっては、根、芽、樹皮、果実、葉、花等から得られる。
【００３５】
これらの植物からの抽出物は、植物材料を必要に応じて乾燥させ、さらに必要に応じて細断又は粉砕した後、水性抽出剤としては、例えば、冷水、温水、又は沸点もしくはそれより低温の熱水を用いることができ、また有機溶媒としては、メタノール、エタノール、１，３−ブタンジオール、エーテル等を、常温で又は加熱して用いることができる。
【００３６】
ＶＩＩ型コラーゲン産生促進剤の具体例としては、腫瘍壊死因子−α、トランスフォーミング・グロスファクター−β１、トランスフォーミング・グロスファクター−β２、トランスフォーミング・グロスファクター−β３、表皮増殖因子、インターロイキン−１α、インターロイキン−１β、血小板由来増殖因子などが挙げられる。
【００３７】
さらには、種々の動物由来のものを使用することができる。例えば、牛乳カゼインより調製されるブロモイスミルク、鶏の卵の卵殻膜を加水分解して調製したＥＭプロテインＬ等が挙げられる。
【００３８】
さらに、種々の植物抽出物やそれから得られる精製物を使用することができる。このような植物としては、プレ（Ａｌｓｔｏｎｉａ　ｓｃｈｏｌａｒｉｓ．）などのキョウチクトウ科に属する植物、ヨーロッパブナ（Ｆａｇｕｓ　ｓｙｌｖａｔｉｃａ）などのブナ科の樹木　、カッコン（Ｐｕｅｒａｒｉａ　ｌｏｂａｔａ　Ｏｈｗｉ）などのマメ科植物　、セイヨウキズタ（Ｈｅｄｅｒａ　ｈｅｌｉｘ）　などのウコギ科植物、ランなどの植物が挙げられる。これらの植物の抽出物は、草本植物にあっては、根、葉、茎、花等から得られ、木本植物にあっては、根、芽、樹皮、果実、葉、花等から得られる。
【００３９】
これらの植物からの抽出物は、植物材料を必要に応じて乾燥させ、さらに必要に応じて細断又は粉砕した後、水性抽出剤としては、例えば、冷水、温水、又は沸点もしくはそれより低温の熱水を用いることができ、また有機溶媒としては、メタノール、エタノール、１，３−ブタンジオール、エーテル等を、常温で又は加熱して用いることができる。
【００４０】
マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤
本発明において使用するマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤としては、このような阻害活性を有する物質であればよく、特に制限がない。マトリックスメタロプロテアーゼとしては、例えばゼラチナーゼ、コラゲナーゼ、ストロメライシン、マトリライシン等が挙げられる。したがって、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は、例えば、ゼラチナーゼ、コラゲナーゼ、ストロメライシン、マトリライシン等を阻害する物質として選択することができる。
【００４１】
マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の具体例としては、例えばＮ−ヒドロキシ−２−［［（４−メトキシフェニル）スルフォニル］３−ピコリル］アミノ）］−３−メチルブタンアミド塩酸塩（以下、「化合物Ａ」とする）（Ｊ．　Ｍｅｄ．　Ｃｈｅｍ．　１９９７，　４０，　ｐ．２５２５−２５３２）、ＭＭＰ　‐インヒビター（ｐ−ＮＨ２−Ｂｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−ＮＨＯＨ）（ＦＮ−４３７）（ＢＢＲＣ，　１９９４，　１９９，　１４４２−１４４６）などが挙げられる。
【００４２】
さらに、本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の具体例としては、種々の植物抽出物やそれから得られる精製物を使用することができる。このような植物としては、イブキジャコウソウ　（Ｔｈｙｍｕｓ　ｓｅｒｐｙｌｌｕｍ　Ｌ．）、カノコソウ　（Ｖａｌｅｒｉａｎａ　ｆａｕｒｉｅｉ　Ｂｒｉｑｕｅｔ）又はその他の近縁植物　（Ｖａｌｅｒｉａｎａｃｅａｅ）、カキノキ　（Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ　ｋａｋｉ　Ｔｈｕｎｂｅｒｇ　（Ｅｂｅｎａｃｅａｅ））、レンゲソウ　（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｓｉｎｉｃｕｓ　Ｌｉｎｎｅ　（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ））　、サンザシ　（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ　ｃｕｎｅａｔａ　Ｓｉｅｂｏｌｄ　ｅｔ　Ｚｕｃｃａｒｉｎｉ　（Ｒｏｓａｃｅａｅ））、ボタン　（Ｐａｅｏｎｉａ　ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ　Ａｎｄｒｅｗｓ　（Ｐｏｅｏｎｉａ　ｍｏｎｔａｎ　Ｓｉｍｓ）　（Ｐａｃｏｎｉａｃｅａｅ））　、コウチャ　（Ｔｈｅａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ　Ｌｉｎｎｅ　ｖａｒ．　ａｓｓａｍｉｃａ　Ｐｉｅｒｒｅ，　（Ｔｈｅａｃｃａｅ））　、
【００４３】
ユーカリ　（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ　ｇｌｏｂｕｌｕｓ　Ｌａｂｉｌｌａｒｄｉｅｒｅ）又はその近縁植物　（Ｍｙｒｔａｃｅａｅ）、トルメンチラ　（Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ　ｔｏｒｍｅｎｔｉｌｌａ　Ｓｃｈｒｋ　（Ｒｏｓａｃｅａｅ））、シナノキ　（Ｔｉｌｉａ　ｃｏｒｄａｔａ　Ｍｉｌｌ．，　Ｔｉｌｉａ　ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌｕｓ　Ｓｃｏｐ．，　Ｔｉｌｉａ　ｅｕｒｏｐａｅａ　Ｌｉｎｎｅ　（Ｔｉｌｉａｃｅａｅ））、シラカバ　（Ｂｅｔｕｌａ　ａｌｂａ　Ｌｉｎｎｅ　（Ｂｅｔｕｌａｃｅｚｅ））　、マジョラム　（Ｏｒｉｇａｎｕｍｍａｊｏｒａｎａ　Ｌ．）　、アセンヤク　（Ｕｎｃａｒｉａ　ｇａｍｂｉｒ　Ｒｏｘｂｕｒｇｈ　（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ））、クルミ殻　（Ｊｕｇｌａｎｓ　ｒｅｇｉａ　Ｌｉｎｎｅ　ｖａｒ．　ｓｉｎｅｎｓｉｓ　Ｄｅ　Ｃａｎｄｏｌｉｅ）又はその近縁植物　（Ｊｕｇｌａｎｄａｃｅａｅ）　、クララ　（Ｓｏｐｈｏｒａ　ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ　Ａｉｔｏｎ　（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ））　、ワレモコウ（Ｓａｎｇｕｉｓｏｒｂａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ　Ｌｉｎｎｅ　（Ｒｏｓａｃｅａｅ））　、オトギリソウ　（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ　ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ　Ｌｉｎｎｅ又はＨｙｐｅｒｉｃｕｍ　ｅｒｅｃｔｕｍ　Ｔｈｕｎｂｅｒｇ　（Ｇｕｔｔｉｆｅｒａｅ））、チャ　（Ｔｈｅａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ　Ｌｉｎｎｅ　（Ｔｈｅａｃｅａｅ））　、
【００４４】
ウコン　（Ｃｕｒｃｕｍａ　ｌｏｎｇａ　Ｌ　（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ））、ウコンの抽出精製物であるクルクミン、ハマスゲ　（Ｓｙｍｐｌｏｃｏｓ　ｒａｃｅｍｏｓａ，　Ｃｙｐｅｒｕｓ　ｒｏｔｕｎｄｕｓ）　、ミロバランノキ（Ｃｙｐｅｒｕｓ　ｓｃａｒｉｏｓｕｓ，　Ｇａｕｌｔｈｅｒｉａ　ｆｒａｇｒａｎｔｉｓｓｉｍａ，　Ａｃａｃｉａ　ｆｏｒｎｅｎｓｉａ，　Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ｃｈｅｂｕｌａ）　、ベンガルボダイジュ　（バンヤジュ）　（Ｆｉｃｕｓ　ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓ）　、ナンバンサイカチ　（Ｃａｓｓｉａ　ｆｉｓｔｕｌａ　Ｌｉｎｎ）、ネジキ　（Ｌｙｏｎｉａ　ｏｖａｌｉｆｏｌｉａ）、テリハボク　（ヤラボ、タマナ）　（Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍ　ｉｎｏｐｈｙｌｌｕｍ）、テンジクボダイジュ　（Ｆｉｃｕｓ　ｒｅｌｉｇｉｏｓａ）等を挙げることができる。
【００４５】
これらの植物の抽出物は、草本植物にあっては、根、葉、茎、花等から得られ、木本植物にあっては、根、芽、樹皮、果実、葉、花等から得られる。
【００４６】
これらの植物からの抽出物は、植物材料を必要に応じて乾燥させ、さらに必要に応じて細断又は粉砕した後、水性抽出剤又は有機溶剤により抽出することにより得られる。水性抽出剤としては、例えば、冷水、温水、又は沸点もしくはそれより低温の熱水を用いることができ、また有機溶剤としては、メタノール、エタノール、１，３−ブタンジオール、エーテル等を、常温で又は加熱して用いることができる。
【００４７】
人工皮膚
本発明における人工皮膚の製造に用いる基礎培地としては、人工皮膚の製造に従来から使用されている任意の培地を用いることができ、これらの培地としては１０％の牛胎児血清を含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）　；１０％の牛胎児血清、トランスフェリン５μｇ／ｍｌ、インシュリン５μｇ／ｍｌ、ｔｒｉ−ヨードチロニン２ｎＭ、コレラトキシン０．１ｎＭ　、ヒドロコーチゾン　０．４μｇ／ｍｌを含むＤＭＥＭ−Ｈａｍ’ｓＦ１２　（３：１）；ケラチノサイト増殖培地（ＫＧＭ）と１０％牛胎児血清を含むＤＭＥＭとを１：１に混合した培地、等が挙げられる。これらの基礎培地に添加されるセリンプロテアーゼ阻害剤は、その種類により異なるが、およそ１ｎｇ／Ｌから１ｇ／Ｌ程度である。また基礎培地に添加されるマトリックス蛋白質産生促進剤の量は１ｎｇ／Ｌから１ｇ／Ｌ程度であり、添加されるマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の量は１ｎｍｏｌ／Ｌ〜１０−２ｍｏｌｅ／Ｌ程度である。
【００４８】
本発明の人工皮膚の製造においてはまず、金網の上にヒト線維芽細胞を含む収縮Ｉ型コラーゲンゲルを静置する。ヒト線維芽細胞を含む収縮Ｉ型コラーゲンゲルは例えば次のようにして調製することができる。線維芽細胞懸濁コラーゲン溶液を氷上にて作製後、ペトリ皿内にてコラーゲンをゲル化させて調製する。その後、ペトリ皿壁面からゲルを剥離し、コラーゲンゲルをＣＯ２インキュベーター内にて収縮させる。
【００４９】
次に、上記コラーゲンゲルの上に、表皮細胞、例えばヒト正常表皮ケラチノサイトを培養し、表皮を形成する。皮膚細胞の培養による表皮層の形成は次のようにして行うことができる。収縮コラーゲンゲルを金網の上にのせ、さらにガラスリングをこのゲルの上にのせる。このガラスリング内に液漏れをさせないようにヒト包皮由来の表皮ケラチノサイト懸濁液を入れる。ＣＯ２インキュベーター内にてケラチノサイトを接着させ、リングを外す。上記培地を表皮層の境界まで満たし、表皮層を空気に曝しながら、培養を継続し、角層を形成させる。
【００５０】
この方法によれば、線維芽細胞を含む収縮Ｉ型コラーゲンゲルから成る真皮層と、表皮層との間に十分に基底膜成分が沈着した天然皮膚に近い人工皮膚が得られる。
【００５１】
表皮基底膜構造形成促進剤又は修復促進剤
老化に伴う変化として加齢に伴う基底膜の多重化、断裂を特徴とする構造変化の報告（Ｌａｖｋｅｒ，　Ｊ．　Ｉｎｖｅｓｔ．　Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，　１９７９，　７３，　５９−６６）に着目し、化粧の主たる対象である顔面皮膚の基底膜構造変化に関して検討した結果によれば、この基底膜の構造変化が２０代後半から起き始め、加齢と共に蓄積していくことが見出される（Ａｍａｎｏ，　Ｓ．ら、ＩＦＳＣＣ　Ｍａｇａｚｉｎｅ，　４（４），　１５−２３，　２０００）。この基底膜の構造変化は、しわの形成、硬化もしくは弾力性の低下等の加齢に伴う皮膚変化に先行する皮膚変化である。したがって、表皮基底細胞がきちんと基底膜に結合していることが正常な皮膚機能発現にとって必須であり、基底膜修復の促進が重要であると考えられる。日常の紫外線を想定した紫外線照射光老化マウスモデルを用いてシワ形成を阻害する活性を見出した。したがって、皮膚老化の防御剤として、皮膚における基底膜の再生・修復の促進剤が有効である。
【００５２】
したがって、本発明によれば、上記セリンプロテアーゼ阻害剤の１種またはそれらの２種以上の混合物、または、セリンプロテアーゼ阻害剤の１種またはそれらの２種以上の混合物と上記細胞外マトリックス蛋白質産生促進剤の１種またはそれらの２種以上の混合物をまたは、セリンプロテアーゼ阻害剤の１種またはそれらの２種以上の混合物と細胞外マトリックス蛋白質産生促進剤の１種またはそれらの２種以上の混合物と上記マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の１種またはそれらの２種以上の混合物を表皮基底膜の再生・修復の促進、形成促進効果を示すに十分な濃度で含有する皮膚賦活用組成物または基底膜形成促進人工皮膚培養液が新たに提供される。かかる「皮膚賦活」とは、たとえば、加齢などによる基底膜の構造変化に伴う皮膚の機能低下、具体的には皮膚のはりの低下、しわ、硬化などを防御・改善することを意味する。
【００５３】
上記「基底膜の再生・修復の促進、形成促進効果を示すに十分な濃度」は、使用する化合物の種類や各組成物を調製するのに使用されるその他の成分、または剤形、さらには施用時間によって変動しうる。
【００５４】
上述した通り、本発明は、上記皮膚基底膜構造形成促進剤の好適な態様として、ブナ科ブナ属植物の抽出物と、上記一般式（１）または（２）で表される１−アシルリゾリン脂質と、シソ科ハッカ属植物の抽出物とが配合されていることを特徴とする皮膚外用剤を提供する。かかる皮膚外用剤は、基底膜保護用の皮膚外用剤、肌荒れ改善用の皮膚外用剤もしくは老化防止用の皮膚外用剤として用いることが望ましい。
【００５５】
上記ブナ科ブナ属植物としては、別名シロブナ、ホンブナ、ソバグリ等の名称で呼ばれるブナ科ブナ属ブナ（Ｆａｇｕｓ　ｃｒｅｎａｔａ　Ｂｌｕｍｅ）、同科同属クロブナ（Ｆａｇｕｓ　ｊａｐｏｎｉｋａ　Ｍａｘｉｍ）、同科同属アメリカブナ（Ｆａｇｕｓ　ｇｒａｎｄｉｆｏｌｉａ）、同科同属ヨーロッパブナ（Ｆａｇｕｓ　ｓｙｌｖａｔｉｃａ　Ｌ．）、同科同属シダレブナ（Ｆａｇｕｓ　ｓｙｌｖａｔｉｃａＬ．ｖａｒ．　ｐｅｎｄｕｌａ）、同科同属ムラサキブナ（Ｆａｇｕｓ　ｓｙｌｖａｔｉｃａ　Ｌ．ｖａｒ．　ｐｕｒｐｕｒｅａ）、または同科同属オリエントブナ（Ｆａｇｕｓ　ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ　Ｌｉｐｓｋｙ）等の植物が含まれる。これらの植物は、芽、花、茎、葉、果実、種子、根、全草等が用いられる。抽出方法は特に限定されるものではなく、例えば水、エタノール、メタノール、プロパノール、ブタノール、１，３−ブチレングリコール等の親水性有機溶剤等の化粧品用原料を製造する際に通常用いられる溶媒の単品もしくは混合物が用いられる。
【００５６】
本発明のブナ属植物抽出物の市販品としては、例えば、フランス国在のガッテフォッセ社（Ｇａｔｔｆｏｓｓｅ　Ｓ．Ａ．）にて製造市販されている「ＧＡＴＵＬＩＮＥ（登録商標）　ＲＣ」、「ＧＡＴＵＬＩＮＥ（登録商標）　Ｒ」が挙げられる。
【００５７】
上記態様に係る皮膚外用剤にはこれらのブナ属植物からの抽出物の１種または２種以上が任意に選択されて用いられる。配合量は皮膚外用剤全量中、０．００１〜５．０重量％、特に０．０１〜１．０重量％が好ましい。ブナ属植物からの抽出物の配合量が０．００１重量％未満では十分な肌荒れ改善効果が得られず、５．０重量％を超えて配合してもより大きな効果は望めず、不経済である。
【００５８】
当該１−アシルリゾリン脂質は市販のものであってもよく、あるいは市販のリン脂質をホスホリパーゼＡ２で処理することにより得ることもできる。あるいは、合成された１，２−ジアシルリン脂質をホスホリパーゼＡ２で処理することにより炭素数が一定の１−アシルリゾリン脂質を得ることも可能である。また、グリセロホスホコリン１モルに対して１モル以下の脂肪酸無水物または脂肪酸ハライドを触媒下に反応させて得られるリゾホスファチジルコリンの場合にも、一定の炭素鎖を有するものが得られる（特開昭６３−２２５３８８号公報）。また、大豆由来などのリン脂質をホスホリパーゼＡ２で処理してもよい。
【００５９】
当該１−アシルリゾリン脂質は、Ｒ１が単一のアシル基である場合にはこれは不飽和脂肪酸に由来するアシル基であるのが好ましく、Ｒ２が単一のアシル基である時にはこれは不飽和脂肪酸に由来するアシル基であるのが好ましく、Ｒ２が天然物由来の２種類以上のアシル基を含む場合にはこれは大豆由来の脂肪酸残基であるのが好ましい。
【００６０】
これらは１種を単独で、または２種以上を組み合わせて用いることができる。これらの１−アシルリゾリン脂質のうち特に好ましいのは、一般式（２）でＲ２が炭素数１８で、３個の不飽和２重結合を有する脂肪酸残基のもの、および一般式（２）でＲ２が炭素数１８の１−２個の不飽和２重結合を有する脂肪酸残基のものである。
【００６１】
当該１−アシルリゾリン脂質は、市販品として、例えば、リピデュール（日本油脂株式会社製：一般式（２）でＲ２が炭素数１８で、２個の不飽和２重結合を有する脂肪酸残基のものを主成分とする。）、サンリゾレシチン（太陽化学株式会社製：一般式（２）でＲ２が炭素数１８で、２個の不飽和２重結合を有する脂肪酸残基のものを主成分とする。）、リゾレシチン協和（岩瀬コスファ株式会社製：一般式（２）でＲ２が炭素数１８で、２個の不飽和２重結合を有する脂肪酸残基のものを主成分とする。）等が挙げられる。
【００６２】
１−アシルリゾリン脂質の配合量としては、皮膚外用剤全量中の０．００１〜１．０重量％、特に０．００１〜０．１重量％とすることが好ましい。０．００１重量％未満では肌荒れ改善効果に劣り、１．０重量％を超えて配合すると経時的に変臭が起こり、安定性上好ましくない。
【００６３】
上記シソ科ハッカ属植物（学名：Ｌａｂｉａｔａｅ　Ｍｅｎｔｈａ）の抽出物は、上記植物の葉、茎、花部、根の何れか、または混合物を抽出溶媒と共に浸漬または加熱環流した後、濾過し、濃縮して得られる。本発明に用いられる抽出溶媒は、通常抽出に用いられる溶媒であれば何でもよく、特にメタノール、エタノールあるいは１，３−ブチレングリコール等のアルコール類、含水アルコール類、アセトン、酢酸エチルエステル等の有機溶媒を単独あるいは組み合わせて用いることができる。本発明のシソ科ハッカ属植物の抽出物は、市販品として、例えば、ペパーミント抽出液（丸善製薬株式会社製）が挙げられる。
【００６４】
シソ科ハッカ属植物抽出物の配合量としては皮膚外用剤全量中の０．００１〜５．０重量％、特に０．００１〜０．１重量％とすることが好ましい。０．００１重量％未満では肌荒れ改善効果に劣り、５．０重量％を超えて配合すると経時的に変色が起こり、安定性上好ましくない。
【００６５】
本発明の皮膚基底膜安定剤は、水溶液、油液、その他の溶液、乳液、クリーム、ゲル、懸濁液、マイクロカプセル、粉末、顆粒、カプセル、固形等の形態をとり得る。それ自体既知の方法でこれらの形態に調製した上で、ローション製剤、乳液剤、クリーム剤、軟膏剤、硬膏剤、ハップ剤、エアゾール剤、注射剤、内服剤（錠剤、散剤、顆粒剤、丸剤、シロップ剤、トローチ剤等）、坐剤等として、身体に塗布、貼付、噴霧、注射、飲用、挿入することができる。これらの製剤形の中でも、ローション製剤、乳液剤、クリーム剤、軟膏剤、硬膏剤、ハップ剤、エアゾール剤等の皮膚外用剤が、本発明の組成物に適する製剤形であると考えられる。ここで記す皮膚外用剤には、医薬品、医薬部外品、化粧料が含まれ、以下同様の意味で用いることとする。
【００６６】
本発明の組成物には、それらを調製する際に常用されている賦形剤、香料等をはじめ、油脂類、界面活性剤、防腐剤、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子、増粘剤、粉末成分、紫外線防御剤、保湿剤、薬効成分、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、洗浄剤、乾燥剤、乳化剤等を適宜配合できる。これら各種成分を本発明の皮膚賦活用組成物に配合する場合には、本発明の所期の効果を損なわない範囲内で行う必要がある。
【００６７】
前記油脂類としては、液体油脂、固体油脂、ロウ類、炭化水素油、高級脂肪酸、高級アルコール、合成エステル油、シリコーン類がある。
【００６８】
具体的には、液体油脂として、アボガド油、ツバキ油、月見草油、タートル油、マカデミアナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、オリーブ油、ナタネ油、卵黄油、ゴマ油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、シナギリ油、日本キリ油、ホホバ油、胚芽油、トリグリセリン、トリオクタン酸グリセリン、トリイソパルミチン酸グリセリン等が、固体油脂としては、カカオ脂、ヤシ油、馬脂、硬化ヤシ油、パーム油、牛脂、羊脂、硬化牛脂、パーム核油、豚脂、牛骨脂、モクロウ核油、硬化油、牛脚脂、モクロウ、硬化ヒマシ油等、
【００６９】
ロウ類としては、ミツロウ、キャンデリラロウ、綿ロウ、カルナウバロウ、ベイベリーロウ、イボタロウ、鯨ロウ、モンタンロウ、ヌカロウ、ラノリン、カポックロウ、酢酸ラノリン、液状ラノリン、サトウキビロウ、ラノリン脂肪酸イソプロピル、ラウリン酸ヘキシル、還元ラノリン、ジョジョバロウ、硬質ラノリン、セラックロウ、ＰＯＥ　ラノリンアルコールエーテル、ＰＯＥ　ラノリンアルコールアセテート、ＰＯＥ　コレステロールエーテル、ラノリン脂肪酸ポリエチレングリコール、ＰＯＥ　水素添加ラノリンアルコールエーテル等、炭化水素油としては、流動パラフィン、オゾケライト、スクワレン、プリスタン、パラフィン、セレシン、スクワレン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス等の油分が挙げられる。
【００７０】
高級脂肪酸としては、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン（ベヘニン）酸、オレイン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、トール酸、イソステアリン酸、リノール酸、リノレイン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸　（ＤＨＡ）等が挙げられる。
【００７１】
高級アルコールとしては、例えば、ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、ミリスチルアルコール、オレイルアルコール、セトステアリルアルコール等の直鎖アルコール、モノステアリルグリセリンエーテル　（バチルアルコール）　、２−デシルテトラデシノール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、ヘキシルドデカノール、イソステアリルアルコール、オクチルドデカノール等の分岐鎖アルコール等が挙げられる。
【００７２】
合成エステル油としては、ミリスチン酸イソプロピル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸デシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、酢酸ラノリン、ステアリン酸イソセチル、イソステアリン酸イソセチル、１２−ヒドロキシステアリル酸コレステリル、ジ−２−エチルヘキシル酸エチレングリコール、ジペンタエリスリトール脂肪酸エステル、モノイソステアリン酸Ｎ−アルキルグリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキシル酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ−２−エチルヘキシル酸ペンタンエリスリトール、
【００７３】
トリ−２−エチルヘキシル酸グリセリン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、セチル２−エチルヘキサノエート、２−エチルヘキシルパルミテート、トリミリスチン酸グリセリン、トリ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセライド、ヒマシ油脂肪酸メチルエステル、オレイン酸オイル、セトステアリルアルコール、アセトグリセライド、パルミチン酸２−ヘプチルウンデシル、アジピン酸ジイソブチル、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸−２−オクチルドデシルエステル、アジピン酸ジ−２−ヘプチルウンデシル、エチルラウレート、セバチン酸ジ−２−エチルヘキシル、ミリスチン酸２−ヘキシルデシル、パルミチン酸２−ヘキシルデシル、アジピン酸２−ヘキシルデシル、セバチン酸ジイソプロピル、コハク酸２−エチルヘキシル、酢酸エチル、酢酸ブチル、酢酸アミル、クエン酸トリエチル等が挙げられる。
【００７４】
シリコーン類としては、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、メチルハイドロジェンポリシロキサン等の鎖状ポリシロキサン、デカメチルポリシロキサン、ドデカメチルポリシロキサン、テトラメチルテトラハイドロジェンポリシロキサンなどの環状ポリシロキサン、３次元網目構造を形成しているシリコーン樹脂、シリコーンゴム等が挙げられる。
【００７５】
本発明の皮膚基底膜安定剤は、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤等を単独で、又は組合せて含むことができる。
【００７６】
かような、アニオン界面活性剤としては、例えば、セッケン用素地、ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等の脂肪酸セッケン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸Ｋ等の高級アルキル硫酸エステル塩、ＰＯＥ　ラウリル硫酸トリエタノールアミン、ＰＯＥ　ラウリル硫酸ナトリウム等のアルキルエーテル硫酸エステル塩、ラウロイルサルコシンナトリウム等のＮ−アシルサルコシン酸、Ｎ−ミリストイル−Ｎ−メチルタウリンナトリウム、ヤシ油脂肪酸メチルタウリッドナトリウム、
【００７７】
ラウリルメチルタウリッドナトリウム等の高級脂肪酸アミドスルホン酸塩、ＰＯＥ　オレイルエーテルリン酸ナトリウム、ＰＯＥ　ステアリルエーテルリン酸等のリン酸エステル塩、ジ−２−エチルヘキシルスルホコハク酸ナトリウム、モノラウロイルモノエタノールアミドポリオキシエチレンスルホコハク酸ナトリウム、ラウリルポリプロピレングリコールスルホコハク酸ナトリウム等のスルホコハク酸塩、リニアドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、リニアドデシルベンゼンスルホン酸トリエタノールアミン、リニアドデシルベンゼンスルホン酸等のアルキルベンゼンスルホン酸塩、
【００７８】
Ｎ−ラウロイルグルタミン酸モノナトリウム、Ｎ−ステアロイルグルタミン酸ジナトリウム、Ｎ−ミリストイル−Ｌ−グルタミン酸モノナトリウム等のＮ−アシルグルタミン酸塩、硬化ヤシ油脂肪酸グリセリン硫酸ナトリウム等の高級脂肪酸エステル硫酸エステル塩、ロート油等の硫酸化油、ＰＯＥ　アルキルエーテルカルボン酸、ＰＯＥ　アルキルアリルエーテルカルボン酸塩、α−オレフィンスルホン酸塩、高級脂肪酸エステルスルホン酸塩、二級アルコール硫酸エステル塩、高級脂肪酸アルキロールアミド硫酸エステル塩、ラウロイルモノエタノールアミドコハク酸ナトリウム、Ｎ−パルミトイルアスパラギン酸ジトリエタノールアミン、カゼインナトリウム等が挙げられる。
【００７９】
カチオン界面活性剤としては、例えば、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ラウリルトリメチルアンモニウム等のアルキルトリメチルアンモニウム塩、塩化ジステアリルジメチルアンモニウムジアルキルジメチルアンモニウム塩、塩化ポリ（Ｎ，Ｎ′−ジメチル−３，５−メチレンピペリジニウム）、塩化セチルピリジニウム等のアルキルピリジニウム塩、アルキル四級アンモニウム塩、アルキルジメチルベンジルアンモニウム塩、アルキルイソキノリニウム塩、ジアルキルモリホニウム塩、ＰＯＥ　アルキルアミン、アルキルアミン塩、ポリアミン脂肪酸誘導体、アミルアルコール脂肪酸誘導体、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム等が挙げられる。
【００８０】
両性界面活性剤としては、例えば、２−ウンデシル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−（ヒドロキシエチルカルボキシメチル）−２−イミダゾリンナトリウム、２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等のイミダゾリン系両性界面活性剤、２−ヘプタデシル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン、アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等のベタイン系界面活性剤等が挙げられる。
【００８１】
親油性非イオン界面活性剤としては、例えば、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノイソステアレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンセスキオレエート、ソルビタントリオレエート、ペンタ−２−エチルヘキシル酸ジグリセロールソルビタン、テトラ−２−エチルヘキシル酸ジグリセロールソルビタン等のソルビタン脂肪酸エステル類、モノ綿実油脂肪酸グリセリン、モノエルカ酸グリセリン、セスキオレイン酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリン、α，α′−オレイン酸ピログルタミン酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリン、リンゴ酸等のグリセリンポリグリセリン脂肪酸類、モノステアリン酸プロピレングリコール等のプロピレングリコール脂肪酸エステル類、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体等が挙げられる。
【００８２】
親水性非イオン界面活性剤としては、例えば、ＰＯＥ　ソルビタンモノオレエート、ＰＯＥ−ソルビタンモノステアレート、ＰＯＥ−ソルビタンモノオレート、ＰＯＥ−ソルビタンテトラオレエート等のＰＯＥ　ソルビタン脂肪酸エステル類、ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート、ＰＯＥ−ソルビットモノオレエート、ＰＯＥ−ソルビットペンタオレエート、ＰＯＥ−ソルビットモノステアレート等のＰＯＥ　ソルビット脂肪酸エステル類、ＰＯＥ−グリセリンモノステアレート、ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレート、ＰＯＥ−グリセリントリイソステアレート等のＰＯＥ　グリセリン脂肪酸エステル類、ＰＯＥ　モノオレエート、ＰＯＥ　ジステアレート、ＰＯＥ　モノジオレエート、システアリン酸エチレングリコール等のＰＯＥ　脂肪酸エステル類、
【００８３】
ＰＯＥ　ラウリルエーテル、ＰＯＥ　オレイルエーテル、ＰＯＥ　ステアリルエーテル、ＰＯＥ　ベヘニルエーテル、ＰＯＥ　２−オクチルドデシルエーテル、ＰＯＥ　コレスタノールエーテル等のＰＯＥ　アルキルエーテル類、ＰＯＥ　オクチルフェニルエーテル、ＰＯＥ　ノニルフェニルエーテル、ＰＯＥ　ジノニルフェニルエーテル等のＰＯＥ　アルキルフェニルエーテル類、プルロニック等のプルアロニック型類、　ＰＯＥ・ＰＯＰ　セチルエーテル、　ＰＯＥ・ＰＯＰ　２−デシルテトラデシルエーテル、　ＰＯＥ・ＰＯＰ　モノブチルエーテル、　ＰＯＥ・ＰＯＰ　水添ラノリン、　ＰＯＥ・ＰＯＰ　グリセリンエーテル等の　ＰＯＥ・ＰＯＰ　アルキルエーテル類、テトロニック等のテトラＰＯＥ　・テトラＰＯＰ　エチレンジアミン縮合物類、
【００８４】
ＰＯＥ　ヒマシ油、ＰＯＥ　硬化ヒマシ油、ＰＯＥ　硬化ヒマシ油モノイソステアレート、ＰＯＥ　硬化ヒマシ油トリイソステアレート、ＰＯＥ　硬化ヒマシ油モノピログルタミン酸モノイソステアリン酸ジエステル、ＰＯＥ　硬化ヒマシ油マレイン酸等のＰＯＥ　ヒマシ油硬化ヒマシ油誘導体、ＰＯＥ　ソルビットミツロウ等のＰＯＥ　ミツロウ・ラノリン誘導体、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド、ラウリン酸モノエタノールアミド、脂肪酸イソプロパノールアミド等のアルカノールアミド、ＰＯＥ　プロピレングリコール脂肪酸エステル、ＰＯＥ　アルキルアミン、ＰＯＥ　脂肪酸アミド、ショ糖脂肪酸エステル、ＰＯＥ　ノニルフェニルホルムアルデヒド縮合物、アルキルエトキシジメチルアミンオキシド、トリオレイルリン酸等が挙げられる。
【００８５】
前記防腐剤としては、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチルパラベン等が挙げられる。
【００８６】
前記金属イオン封鎖剤としては、エデト酸ナトリウム塩、ＥＤＴＡ等が挙げられる。
【００８７】
前記水溶性高分子としては、天然の高分子、半合成の高分子、合成の高分子、無機の高分子が挙げられる。
【００８８】
天然の水溶性高分子としては、アラビアガム、トラガカントガム、ガラクタン、グアガム、キャロブガム、カラヤガム、カラギーナン、タマリンドガム、キサンタンガム、ペクチン、カンテン、クインスシード　（マルメロ）　、アルゲコロイド　（カッソウエキス）　、デンプン　（コメ、トウモロコシ、バレイショ、コムギ）、
【００８９】
グリチルリチン酸等の植物系高分子、キサンタンガム、デキストラン、サクシノグルカン、プルラン等の微生物系高分子、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、ゼラチン等の動物系高分子等が挙げられる。
【００９０】
半合成の水溶性高分子としては、デキストリン、カルボキシメチルデンプン、メチルヒドロキシプロピルデンプン等のデンプン系高分子、メチルセルロース、ニトロセルロース、エチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、硫酸セルロースジメチルジアルキル（１２〜２０）アンモニウム、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）、結晶セルロース、セルロース末等のセルロース系高分子、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル等のアルギン酸系高分子等が挙げられる。
【００９１】
合成の水溶性高分子としては、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルキル変性カルボキシビニルポリマー等のビニル系高分子、ポリエチレングリコール２０００，　４０００，
【００９２】
６０００等のポリオキシエチレン系高分子、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体系高分子、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリエチレンアクリレート、ポリアクリルアミド等のアクリル系高分子、ポリエチレンイミン、カチオンポリマー等が挙げられる。
【００９３】
無機の水溶性高分子としては、ベントナイト、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ラポナイト、ヘクトライト、無水ケイ酸等が挙げられる。
【００９４】
前記粉末成分としては、タルク、カオリン、雲母、絹雲母　（セリサイト）　、白雲母、金雲母、合成雲母、紅雲母、黒雲母、リチア雲母、バーミキュライト、炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、ケイ酸アルミニウム、ケイ酸バリウム、ケイ酸カルシウム、ケイ酸マグネシウム、ケイ酸ストロンチウム、タングステン酸金属塩、マグネシウム、シリカ、ゼオライト、硫酸バリウム、焼成硫酸カルシウム（焼セッコウ）、リン酸カルシウム、弗素アパタイト、ヒドロキシアパタイト、セラミックパウダー、金属石鹸（ミリスチン酸亜鉛、パルミチン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム）、窒化ホウ素等の無機粉末、ポリアミド樹脂粉末（ナイロン粉末）、
【００９５】
ポリエチレン粉末、ポリメタクリル酸メチル粉末、ポリスチレン粉末、スチレンとアクリル酸の共重合体樹脂粉末、ベンゾグアナミン樹脂粉末、ポリ四弗化エチレン粉末、セルロース粉末等の有機粉末、二酸化チタン、酸化亜鉛等の無機白色顔料、酸化鉄（ベンガラ）、チタン酸鉄等の無機赤色系顔料、γ−酸化鉄等の無機褐色系顔料、黄酸化鉄、黄土等の無機黄色系顔料、黒酸化鉄、カーボンブラック、低次酸化チタン等の無機黒色系顔料、マンゴバイオレット、コバルトバイオレット等の無機紫色系顔料、酸化クロム、水酸化クロム、チタン酸コバルト等の無機緑色系顔料、群青、紺青等の無機青色系顔料、酸化チタンコーテッドマイカ、
【００９６】
酸化チタンコーテッドオキシ塩化ビスマス、酸化チタンコーテッドタルク、着色酸化チタンコーテッドマイカ、オキシ塩化ビスマス、魚鱗箔等のパール顔料、アルミニウムパウダー、カッパーパウダー等の金属粉末顔料、　赤色　２０１号、赤色　２０２号、赤色　２０４号、赤色　２０５号、赤色　２２０号、赤色　２２６号、赤色　２２８号、赤色　４０５号、橙色　２０３号、橙色　２０４号、黄色　２０５号、黄色　４０１号、黄色　４０４号、赤色３号、赤色　１０４号、赤色　１０６号、赤色　２２７号、赤色　２３０号、赤色　４０１号、赤色５０５号、橙色　２０５号、黄色４号、黄色５号、黄色　２０２号、黄色　２０３号、緑色３号、青色１号などのジルコニウム、バリウム又はアルミニウムレーキ等の有機顔料、クロロフィル、β−カロチン等の天然色素等、チタンイエロー、カーサミン、紅花赤等の色剤、等が挙げられる。
【００９７】
前記紫外線防御剤としては、化学的に紫外線を吸収する物質である「紫外線吸収剤」と、物理的作用によって紫外線を散乱および反射させる物質である「紫外線遮断剤」の両者を含む。
【００９８】
すなわち、長波長紫外線（ＵＶＡ）吸収剤として、メチルアントラニレート、ホモメンチル−Ｎ−アセチルアントラニレート等のアントラニル酸系紫外線吸収剤、例えば２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２，２−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２，２′−ジヒドロキシ−４，４′−ジメトキシベンゾフェノン、２，２′，４，４′−テトラヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−４′−メチルベンゾフェノン、
【００９９】
２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン塩酸、４−フェニルベンゾフェノン、２−エチルヘキシル−４′−フェニル−ベンゾフェノン−２−カルボキシレート、２−ヒドロキシ−４−ｎ−オクトキシベンゾフェノン、４−ヒドロキシ−３−カルボキシベンゾフェノン等のベンゾフェノン系紫外線吸収剤、例えば２，２′−ヒドロキシ−５−メチルフェニルベンゾトリアゾール、２−（２′−ヒドロキシ−５′−ｔ−オクチルフェニル）ベンゾトリアゾール、２−（２′−ヒドロキシ−５′−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール等のベンゾトリアゾール系紫外線吸収剤、例えばジアニソイルメタン、４−メトキシ−４′−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン等を挙げることができる。
【０１００】
これらの長波長紫外線吸収剤の中でも、４−メトキシ−４′−ｔｅｒｔ−ブチルジベンゾイルメタン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン誘導体、たとえば２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩は安全性及び有効性に優れた長波長紫外線吸収剤であり、好ましいものである。
【０１０１】
また、中波長紫外線（ＵＶＢ）吸収剤として、パラアミノ安息香酸　（以下、ＰＡＢＡという。）　、ＰＡＢＡモノグリセリンエステル、Ｎ，Ｎ−ジプロポキシＰＡＢＡエチルエステル、Ｎ，Ｎ−ジエトキシＰＡＢＡエチルエステル、Ｎ，Ｎ−ジメチルＰＡＢＡエチルエステル、Ｎ，Ｎ−ジメチルＰＡＢＡブチルエステル、Ｎ，Ｎ−ジメチルＰＡＢＡアミルエステル等の安息香酸系紫外線吸収剤、ジプロピレングリコールサリシレート、エチレングリコールサリシレート、ミリスチルサリシレート、メチルサリシレート、アミルサリシレート、メンチルサリシレート、ホモメンチルサリシレート、オクチルサリシレート、フェニルサリシレート、ベンジルサリシレート、ｐ−イソプロパノールフェニルサリシレート等のサリチル酸系紫外線吸収剤、
【０１０２】
オクチルシンナメート、エチル−４−イソプロピルシンナメート、メチル−２，５−ジイソプロピルシンナメート、エチル−２，４−ジイソプロピルシンナメート、メチル−２，４−ジイソプロピルシンナメート、プロピル−ｐ−メトキシシンナメート、イソプロピル−ｐ−メトキシシンナメート、イソアミル−ｐ−メトキシシンナメート、オクチル−ｐ−メトキシシンナメート（２−エチルヘキシル−ｐ−メトキシシンナメート）、２−エトキシエチル−ｐ−メトキシシンナメート、シクロヘキシル−ｐ−メトキシシンナメート、エチル−α−シアノ−β−フェニルシンナメート、２−エチルヘキシル−α−シアノ−β−フェニルシンナメート、グリセリルモノ−２−エチルヘキサノイル−ジパラメトキシシンナメート、
【０１０３】
メトキシケイ皮酸オクチル、３，４，５−トリメトキシケイ皮酸−３−メチル−４−［メチルビス（トリメチルシロキシ）シリル］ブチル、ｐ−ジメトキシケイ皮酸モノエチルエステル等のケイ皮酸系紫外線吸収剤、３−（４′−メチルベンジリデン）−ｄ、１−カンファー、３−ベンジリデン−ｄ、１−カンファー、５−（３，３−ジメチル−２−ノルボルニリデン）−３−ペンチン−２−オン等のカンファー誘導体、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチルエステル、２−フェニル−５−メチルベンゾオキサゾール、ジベンザラジン等を挙げることができる。
【０１０４】
さらに、紫外線遮断剤として、酸化チタン（ＴｉＯ２）、タルク（ＭｇＳｉＯ２）　、カルミン　（ＦｅＯ２）　、ベントナイト、カオリン、酸化亜鉛　（ＺｎＯ）等を挙げることができる。
【０１０５】
前記保湿剤としては、例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、ヘキシレングリコール、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸、ムコイチン硫酸、カロニン酸、アテロコラーゲン、コレステリル−１２−ヒドロキシステアレート、乳酸ナトリウム、胆汁酸塩、ｄ１−ピロリドンカルボン酸塩、短鎖可溶性コラーゲン、ジグリセリン（ＥＯ）ＰＯ付加物、イザヨイバラ抽出物、セイヨウノコギリソウ抽出物、メリロート抽出物等を挙げることができる。
【０１０６】
前記薬効成分としては、アルブチン、ビタミンＣおよびその誘導体、コウジ酸胎盤抽出物、グルタチオン、ユキノシタ抽出物等の美白剤、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸誘導体、サリチル酸誘導体、ヒオキチオール、酸化亜鉛、アラントイン等の消炎剤、ローヤルゼリー、感光素、コレステロール誘導体、幼牛血液抽出物等の賦活剤、ノニル酸ワレニルアミド、ニコチン酸ベンジルエステル、ニコチン酸β−ブトキシエチルエステル、カプサイシン、ジンゲロン、カンタリスチンキ、イクタモール、カフェイン、タンニン酸、α−ボルネオール、ニコチン酸トコフェロール、イノシトールヘキサニコチネート、シクランデレート、シンナリジン、トラゾリン、アセチルコリン、
【０１０７】
ベラパミル、セファランチン、γ−オリザノール等の血行促進剤：硫黄、チアントール等の抗脂漏剤、多様な目的から、オクバク抽出成分、オウレン抽出成分、シコン抽出成分、シャクヤク抽出成分、センブリ抽出成分、バーチ抽出成分、セージ抽出成分、ビワ抽出成分、ニンジン抽出成分、アロエ抽出成分、ゼニアオイ抽出成分、アイリス抽出成分、ブドウ抽出成分、ヨクイニン抽出成分、ヘチマ抽出成分、ユリ抽出成分、サフラン抽出成分、センキュウ抽出成分、ショウキョウ抽出成分、オトギリソウ抽出成分、オノニス抽出成分、ローズマリー抽出成分、ニンニク抽出成分、トウガラシ抽出成分、チンピ、トウキ等、レチノール、酢酸レチノール等のビタミンＡ類、リボフラビン、酪酸リボフラビン、フラビンアデニンヌクレオチド等のビタミンＢ２　類、ピリドキシン塩酸塩、ピリドキシンジオクタノエート等のビタミンＢ６　類、
【０１０８】
Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸ジパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステル、ＤＬ−α−トコフェロール−Ｌ−アスコルビン酸リン酸ジエステルジカリウム等のビタミンＣ類、パントテン酸カルシウム、Ｄ−パントテニルアルコール、パントテニルエチルエーテル、アセチルパントテニルエチルエーテル等のパントテン酸類、エルゴカルシフェロール、コレカルシフェロール等のビタミンＤ類、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等のニコチン酸類、α−トコフェロール、酢酸トコフェロール、ニコチン酸ＤＬ−α−トコフェロール、コハク酸ＤＬ−α−トコフェロール等のビタミンＥ類、ビタミンＰ、ビオチン等のビタミン類、を挙げることができる。
【０１０９】
なお、その薬剤成分に関しては、その配合により本発明の所期の効果が損われない範囲で広く配合することができる。
【０１１０】
こうして調製された本発明の組成物は、基底膜の構造変化に伴う機能低下を防止し、また、皮膚の賦活化を促進することができる。
【０１１１】
【実施例】
次に、本発明を実施例により更に具体的に説明する。
実施例１　マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、マトリックス産生促進剤（サイトカイン）、セリンプロテアーゼ阻害剤を用いた人工皮膚の製造
【０１１２】
コラーゲンゲルは、ヒト真皮由来の線維芽細胞（０．３−１ｘ１０５ｃｅｌｌ／ｍｌ）懸濁コラーゲン溶液１０ｍｌ（コラーゲンは高研株式会社製品Ｉ−ＡＣを使用した）を氷上にて作製後、６０ｍｍのペトリディシュ内にて３７℃でコラーゲンをゲル化した。その後、シャーレ壁面からゲルを剥離し、コラーゲンゲルを金属の上にのせ、さらにガラスリング（内径１２ｍｍ）をこのゲルの上にのせる。このガラスリング内に液漏れをおこさないようにヒト包皮由来の表皮ケラチノサイト（１ｘ１０６／ｍｌ）懸濁液（５％牛胎児血清を含むＫＧＭ−ＤＭＥＭ（１：１）混合培地）を０．４ｍｌ入れる。一晩、ＣＯ２インキュベーター内にてケラチノサイトを接着させ、翌日、リングを外す。上記培地を表皮層の境界まで満たし、表皮層を空気に曝しながら、培地を継続して角層形成を示す重層化した表皮を持つ皮膚モデルを作製した。
【０１１３】
表皮細胞を接種した後、４日目より、（１）無添加（−化合物Ａ）、（２）１０μＭの化合物Ａ（＋化合物Ａ）、（３）１０μＭの化合物Ａと１０μｇ／ｍｌのアプロチニン（＋化合物Ａ　＋　Ａｐｒｏｔｉｎｉｎ）、（４）１０μＭの化合物Ａと１ｎｇ／ｍｌのインターロイキン−１β（＋化合物Ａ　＋　ＩＬ−１）、（５）１０μＭの化合物Ａと１ｎｇ／ｍｌのインターロイキン−１βと１０μｇ／ｍｌのアプロチニン（＋化合物Ａ　＋　ＩＬ−１　＋　Ａｐｒｏｔｉｎｉｎ）、（６）１０μＭの化合物Ａと１ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−α（＋化合物Ａ　＋　ＴＧＦａｌｐｈａ）、（７）１０μＭの化合物Ａと１ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−αと１０μｇ／ｍｌのアプロチニン（＋化合物Ａ　＋　ＴＧＦａｌｐｈａ＋　Ａｐｒｏｔｉｎｉｎ）、（８）１０μＭの化合物Ａと１００ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦ（＋化合物Ａ　＋　ＰＤＧＦ）、（９）１０μＭの化合物Ａと１００ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦと１０μｇ／ｍｌのアプロチニン（＋化合物Ａ　＋　ＰＤＧＦ　＋　Ａｐｒｏｔｉｎｉｎ）を含む培地に換え、その後２−３日おきに、同種の同一濃度のマトリックスメタロプロテアーゼ、マトリックス産生促進剤（サイトカイン）、セリンプロテアーゼ阻害剤を含有する培地と交換し、さらに２週間培養した。
【０１１４】
形成された人工皮膚は、ヘマトキシリン−エオジン染色（Ｈ＆Ｅ）、並びに免疫染色（抗−ＩＶ型コラーゲン抗体（Ｃｏｌｌａｇｅｎ　ＩＶ）、及び抗−ＶＩＩ型コラーゲン抗体（Ｃｏｌｌａｇｅｎ　ＶＩＩ）を使用）により染色した。結果を図１〜４に示す。
【０１１５】
対照（１）においては表皮の基底細胞直下にＶＩＩ型コラーゲンの染色はほとんど観察されなかったが、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤である（２）化合物Ａを添加した場合にはＶＩＩ型コラーゲンの染色が弱いながらも観察された。一方、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤である化合物Ａに加えてセリンプロテアーゼ阻害剤アプロチニン（３）を添加した場合にはＩＶ型、ＶＩＩ型コラーゲンの染色性が更に高まった。また、化合物Ａとともにマトリックス蛋白質の産生を高めるインターロイキン１（ＩＬ−１）（４）、トランスフォーミング増殖因子−α（ＴＧＦ−α）（６）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）（８）を作用させると特にＶＩＩ型コラーゲンの染色性が亢進した。さらに、アプロチニンを化合物Ａ並びにマトリックス蛋白質の産生を高めるインターロイキン１（ＩＬ−１）（５）、トランスフォーミング増殖因子−α（ＴＧＦ−α）（７）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）（９）を作用させるとＩＶ型、ＶＩＩ型コラーゲンの染色性が明らかに表皮基底細胞の直下に濃縮され、シャープな染色像となり、それぞれの分子がきちんとした高次構造とっている可能性を示唆した。
【０１１６】
上記マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤化合物Ａに代えて、下記の植物抽出物を用い、上記と同様の培養を行った。
イブキジャコウソウ（Ｔｈｙｍｕｓ　ｓｅｒｐｙｌｌｕｍ　Ｌ．）、カノコソウ　（Ｖａｌｅｒｉａｎａ　ｆａｕｒｉｅｉ　Ｂｒｉｑｕｅｔ）又はその他の近縁植物　（Ｖａｌｅｒｉａｎａｃｅａｅ）、カキノキ　（Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ　ｋａｋｉＴｈｕｎｂｅｒｇ　（Ｅｂｅｎａｃｅａｅ））、レンゲソウ　（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ　ｓｉｎｉｃｕｓ　Ｌｉｎｎｅ　（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ））　、サンザシ　（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ　ｃｕｎｅａｔａ　Ｓｉｅｂｏｌｄ　ｅｔ　Ｚｕｃｃａｒｉｎｉ　（Ｒｏｓａｃｅａｅ））、ボタン　（Ｐａｅｏｎｉａ　ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ　Ａｎｄｒｅｗｓ　（Ｐｏｅｏｎｉａ　ｍｏｎｔａｎ　Ｓｉｍｓ）　（Ｐａｃｏｎｉａｃｅａｅ））　、コウチャ　（Ｔｈｅａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ　Ｌｉｎｎｅ　ｖａｒ．　ａｓｓａｍｉｃａ　Ｐｉｅｒｒｅ，　（Ｔｈｃａｃｃａｅ））　、ユーカリ　（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ　ｇｌｏｂｕｌｕｓ　Ｌａｂｉｌｌａｒｄｉｅｒｅ）とその近縁植物　（Ｍｙｒｔａｃｅａｅ）、
【０１１７】
トルメンチラ　（Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ　ｔｏｒｍｅｎｔｉｌｌａ　Ｓｃｈｒｋ　（Ｒｏｓａｃｅａｅ））、シナノキ　（Ｔｉｌｉａ　ｃｏｒｄａ：ａ　Ｍｉｌｌ．，　Ｔｉｌｉａ　ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌｕｓ　Ｓｃｏｐ．，　Ｔｉｌｉａ　ｅｕｒｏｐａｅａ　Ｌｉｎｎｅ　（Ｔｉｌｉａｃｅａｅ））、シラカバ　（Ｂｅｔｕｌａ　ａｌｂａ　Ｌｉｎｎｅ　（Ｂｅｔｕｌａｃｅｚｅ））　、マジョラム　（Ｏｒｉｇａｎｕｍ　ｍａｊｏｒａｎａ　Ｌ．）　、アセンヤク　（Ｕｎｃａｒｉａ　ｇａｍｂｉｒ　Ｒｏｘｂｕｒｇｈ　（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ））、クルミ殻（Ｊｕｇｌａｎｓ　ｒｅｇｉａ　Ｌｉｎｎｅ　ｖａｒ．　ｓｉｎｅｎｓｉｓ　Ｄｅ　Ｃａｎｄｏｌｉｅ）とその近縁植物　（Ｊｕｇｌａｎｄａｃｅａｅ）　、クララ　（Ｓｏｐｈｏｒａ　ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ　Ａｉｔｏｎ　（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ））　、ワレモコウ　（Ｓａｎｇｕｉｓｏｒｂａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ　Ｌｉｎｎｅ　（Ｒｏｓａｃｅａｅ））　、
【０１１８】
オトギリソウ　（Ｈｙｐｅｒｉｃｕｍ　ｐｅｒｆｏｒａｔｕｍ　Ｌｉｎｎｅ又はＨｙｐｅｒｉｃｕｍ　ｅｒｅｃｔｕｍ　Ｔｈｕｎｂｅｒｇ（Ｇｕｔｔｉｆｅｒａｅ））、チャ　（Ｔｈｅａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ　Ｌｉｎｎｅ　（Ｔｈｅａｃｅａｅ））　、ウコン　（Ｃｕｒｃｕｍａｌｏｎｇａ　Ｌ　（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ））、ウコンの抽出精製物であるクルクミン、ハマスゲ　（Ｓｙｍｐｌｏｃｏｓ　ｒａｃｅｍｏｓａ，　Ｃｙｐｅｒｕｓ　ｒｏｔｕｎｄｕｓ）　、ミロバランノキ　（Ｃｙｐｅｒｕｓ　ｓｃａｒｉｏｓｕｓ，　Ｇａｕｌｔｈｅｒｉａ　ｆｒａｇｒａｎｔｉｓｓｉｍａ，　Ａｃａｃｉａ　ｆｏｒｎｅｎｓｉａ，　Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ｃｈｅｂｕｌａ）　、ベンガルボダイジュ　（バンヤジュ）　（Ｆｉｃｕｓ　ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓ）　、ナンバンサイカチ　（Ｃａｓｓｉａ　ｆｉｓｔｕｌａ　Ｌｉｎｎ）、ネジキ　（Ｌｙｏｎｉａ　ｏｖａｌｉｆｏｌｉａ）、テリハボク　（ヤラボ、タマナ）　（Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍ　ｉｎｏｐｈｙｌｌｕｍ）、テンジクボダイジュ　（Ｆｉｃｕｓ　ｒｅｌｉｇｉｏｓａ）。
【０１１９】
その結果、マトリックスメタロプロテアーゼとして化合物Ａを用いた場合と同様の結果が得られた。
【０１２０】
上記のセリンプロテアーゼ阻害剤アプロチニンに代えて、下記の植物抽出物を用い、上記と同様の培養を行った。
カロフイラム・ブラジリエンセ（Ｃａｌｏｐｈｙｌｌｕｍｂａｓｅｎｓｅ　Ｃａｍｂｅｓｓ．）、ミルキア・スフアエロカルパ（Ｍｙｒｃｉａｓｐｈａｅｒｏｃａｒｐａ　ＤＣ）、ヒプテイス・クレナタ（Ｈｙｐｔｉｓｃｒｅｎａｔａ　Ｐｏｈｌｅｘ　Ｂｅｎｔｈ．）、ハマスゲ（Ｃ．　ｒｏｔｕｎｄｕｓＬ）、ハルトノキまたはモガシ（Ｅ．　ｄｅｃｉｐｉｅｎｓＨｅｌｍｓｌ．）、バラ属（Ｒｏｓａｃｅａｅ）、キイチゴ属（Ｒｕｂｕｓ）、シモツケソウ属（Ｆｉｌｉｐｅｎｄｕｌａ）、サンザシ属（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ）に属する植物、ボタン科（Ｐａｅｏｎｉａｃｅａｅ）ボタン属（Ｐａｅｏｎｉａ）に属する植物、クワ科（Ｍｏｒａｃｅａｅ）カナムグラ属（Ｈｕｍｕｌｕｓ）、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）ウサギギク属（Ａｒｎｉｃａ）、キク科カミツレモドキ属（Ａｎｔｈｅｍｉｓ）に属する植物、イチヤクソウ科（Ｐｙｒｏｌａｃｅａｅ）に属する植物、オトギリソウ科オトギリソウ（Ｈｙｐｅｒｉｃｉｕｍｅｒｃｔｕｍ　Ｔ．）、オトギリソウ科（Ｈｙｐｅｒｉｃａｃｅａｅ）に属する植物、セイヨウハッカ（Ｍｅｎｔｈａ　ｐｉｐｅｒｉａｔａ　Ｌ．）　に属する植物、ミドリハッカ（Ｍｅｎｔｈａ　ｖｉｒｉｄｉｓ　Ｌ．）　に属する植物、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）ベニバナ属（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ）ベニバナ（Ｃａｒｔｈａｍｕｓｔｉｎａｃｔｏｒｉｕｓ　Ｌ．）、フクロソウ科（Ｇｅｒａｎｉａｃｅａｅ）フクロソウ属（Ｇｅｒａｎｉｕｍ）ゲンノショウコ（Ｇｅｒａｎｉｕｍ　ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ　Ｓｉｅｂｏｌｄ　ｅｔ　Ｚｕｃｃａｒｉｎｉ）、ブドウ科（Ｖｉｔａｃｅａｅ）ブドウ属（Ｖｉｔｉｓ）に属する植物、シラカバ（Ｂｅｔｕｌａ　ａｌｂａ　Ｌ．）、北米産シラカバ（Ｂｅｔｕｌａ　ｌｅｕｔａ　Ｌ．）、ヨーロッパシラカバ（Ｂｅｔｕｌａ　ｐｅｎｄｕｌａ　Ｒｏｔｈ．）の属するカバノキ属（Ｂｕｔｕｌａｃｅａｅ）の植物、バラ科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）サクラ属（Ｐｒｕｎｕｓ）のアンズ（Ｐ．　ａｒｍｅｎｉａｃａ　Ｌ．，　Ｐ　ａｎｓｕ　Ｋｏｍａｒ，　Ｐ．　ｍａｎｄｓｈｕｒｉｃａ　Ｋｏｅｈｎｅ，　Ｐ．　ｓｉｂｉｒｉｃａ　Ｌ．）の属するサクラ属の植物、ザポテ、クエ・シャー、サノーサノ、コラ・デ・カバロ。
その結果、セリンプロテアーゼ阻害剤としてアプロチニンを用いた場合と同様の結果が得られた。
【０１２１】
上記のマトリックス蛋白質産生促進剤として、ＩＬ−１、ＴＧＦ−α、ＰＤＧＦの代わりに、ラミニン５の産生を促進する薬剤として、大豆リゾレシチン、カンゾウ、ヒオウギ、ジタノキ、イボツヅラフジ、コロハ、ケシ科ボコニア属ポロ・アマリロ、マメ科ブソフォカルプス属シカクマメ、マメ科カシア属レタマ、マメ科エリスレア属カンチャラグア、大豆、カッコン、オノニス、メリロート、モヤシ又はアズキの抽出物を用い、上記と同様の培養を行った。また、ＩＶ型コラーゲンやＶＩＩ型コラーゲンの産生を促進する薬剤としてプレ（Ａｌｓｔｏｎｉａ　ｓｃｈｏｌａｒｉｓ．）、ヨーロパブナ（Ｆａｇｕｓ　ｓｙｌｖａｔｉｃａ）、カッコン（Ｐｕｅｒａｒｉａ　ｌｏｂａｔａ　Ｏｈｗｉ）、セイヨウキズタ（Ｈｅｄｅｒａ　ｈｅｌｉｘ）の抽出物を用い、さらには、ＶＩＩ型コラーゲンの産生を促進する薬剤としてランの抽出物を用い、上記と同様の培養を行った。その結果、ＩＬ−１、ＴＧＦ−α、ＰＤＧＦを用いた場合と同様の結果が得られた。
【０１２２】
マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤である（２）化合物Ａを添加した場合と、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤である化合物Ａに加えてセリンプロテアーゼ阻害剤アプロチニン（３）を添加した場合に関して、透過型電子顕微鏡を用いて表皮直下の基底膜構造を観察すると、図５に示すように、化合物Ａは基底膜形成を誘導し、さらにアプロチンを添加することによって、更に、基底膜の電子密度の増加と連続性の亢進が確認された。
【０１２３】
実施例２　マトリックス産生促進剤とセリンプロテアーゼ阻害剤を用いた人工皮膚の製造
【０１２４】
実施例１と同様の方法を反復したが、被験物質として下記のものを用い、培養を行なった。
（１）無添加（対照：Ｃｏｎｔｒｏｌ）；
（２）ラミニン５産生促進剤「大豆リゾレシチン」３０μｇ／ｍｌのみ（Ｓｏｙｂｅａｎ　ＬＰＣ）；
（３）セリンプロテアーゼ阻害剤「ペパーミントエキス」０．５％のみ（ＰｅｐｐｅｒｍｉｎｔＥｘｔｒａｃｔ）；
（４）ＩＶ型、ＶＩＩ型コラーゲン産生促進薬剤「ブナの芽エキス」０．３％のみ（ＢｅｅｃｈＢｕｄ　Ｅｘｔｒａｃｔ）；
（５）ラミニン５産生促進剤「大豆リゾレシチン」３０μｇ／ｍｌ、並びにセリンプロテアーゼ阻害剤「ペパーミントエキス」０．５％およびＩＶ型、ＶＩＩ型コラーゲン産生促進薬剤「ブナの芽エキス」０．３％（Ｍｉｘｔｕｒｅ）。
【０１２５】
形成された人工皮膚は、ヘマトキシリン・エオジン染色（Ｈ＆Ｅ）、並びに免疫染色（抗−ＩＶ型コラーゲン抗体（Ｃｏｌｌａｇｅｎ　ＩＶ）、及び抗−ＶＩＩ型コラーゲン抗体（Ｃｏｌｌａｇｅｎ　ＶＩＩ）を使用）により染色した。結果を図６および７に示す。
【０１２６】
対照（１）においてはＩＶ型コラーゲンは弱く染色されたが、ＶＩＩ型コラーゲンはほとんど観察されなかった。これに対し、ラミニン５産生促進剤大豆リゾレシチンは、ＩＶ型コラーゲンの染色性を高めた（２）。ペパーミントエキスはＶＩＩ型コラーゲンの染色性を高めた（３）。ブナの芽エキスは、ＩＶ型、ＶＩＩ型コラーゲンの産生をともに高めた（４）。これらを混和すると、さらにＶＩＩ型コラーゲンの染色性が明らかに増加することが確認された（５）。
【０１２７】
実施例３
３０才以上の男性健常人３名を集め、ブナの芽エキス、ペパーミントエキス、大豆リゾレシチン（リピデュール）を皮膚に塗布したときのスキンケア効果に関して評価した。効果の指標として、角層水分量を用い、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ　ＣＭ　８２５Ｃ　（Ｃｏｕｒａｇｅ　ａｎｄ　Ｋｈａｚａｋａ　ｅｌｅｃｔｒｉｃ　ＧｍｂＨ）　をその製造者の仕様書に従って用いて測定した。被験物質はブナの芽エキスとペパーミントエキスを当量混和後、リピデュールを０．００１重量％となるように溶解させた。対照にはイオン交換水を用いた。それぞれの検体を前腕の内側、３ｃｍ四方の正方形内に１８μｌずつ塗布した。塗布後１時間目の角層水分量を測定した。その結果を以下の表に示す。
【表１】
2004075661.tif 000005
【０１２８】
角層水分量の改善効果を示す上記表１の結果より、被験物質塗布によって、角層中の水分量が上昇し、肌改善効果があることが示された。
【０１２９】
実施例４
クリーム
Ａ．油相
ナイロン粉末　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０重量％
シクロメチコン　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０．０
スクワラン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
オクタン酸セチル　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
ジメチコン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
パラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
イソステアリン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
ジメチルジステアリルアンモニウムヘクトライト　　　２．０
Ｂ．水相
ポリオキシアルキレン変性オルガノポリシロキサン　　２．０
イオン交換水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　７．０
ジプロピレングリコール　　　　　　　　　　　　　　７．０
エデト酸塩　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
ポリエチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　１．０
フェノキシエタノール　　　　　　　　　　　　　　　適量
パール剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
ブナの芽エキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
大豆リゾレシチン（リピデュール）　　　　　　　　　０．１
ペパーミントエキス　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
【０１３０】
（製法）　Ａ相とＢ相をそれぞれ７０℃に加熱し、完全溶解した。Ａ相をＢ相に加えて、乳化機で乳化した。乳化物を熱交換機を用いて冷却してクリームを得た。
【０１３１】
肌荒れ防止および肌荒れ改善効果試験
上記の処方の実施例３のクリームを用いて、年齢２８歳から６５歳の女性の評価者により肌荒れ防止および肌荒れ改善効果試験を行った。すなわち、女性健康人の顔面に４週間、実施例４のクリームを毎日塗布した。下記に示す方法で肌状態を観察した。経表皮水分蒸散量はＴｅｗａｍｅｔｅｒ　ＴＭ２１０（Ｃｏｕｒａｇｅ　ａｎｄ　Ｋｈａｚａｋａ　ｅｌｅｃｔｒｉｃ　ＧｍｂＨ）をその製造者の仕様書に従って用いて測定し、角層水分量はＣｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ　ＣＭ　８２５Ｃ（Ｃｏｕｒａｇｅ　ａｎｄ　Ｋｈａｚａｋａ　ｅｌｅｃｔｒｉｃ　ＧｍｂＨ）をその製造者の仕様書に従って用いて測定した。皮膚表面レプリカ解析はシアノアクリレート　グルー（Ｃｙａｎｏａｃｒｙｌａｔｅ　ｇｌｕｅ：Ｃｙａｎｏｌｉｔ，　Ｅｌｅｃｏ　ｐｒｏｄｕｃｔ）をつけたスライドグラス用いて皮膚表面のレプリカを採取し、光学顕微鏡（ＯＬＹＭＰＵＳ　ＳＺ　４０４５　ＴＲ）を用いて皮溝皮丘で形成される皮膚表面形態を目視により判定した。
【０１３２】
【表２】
2004075661.tif 000006
【表３】
2004075661.tif 000007
【表４】
2004075661.tif 000008
【０１３３】
経表皮水分蒸散の改善効果を示す表２の結果より、クリームの４週間の連用によって肌が改善され、バリア機能が回復したことにより、表皮からの水分の蒸散量が低下したことが示された。
角層水分量の改善効果を示す表３の結果より、クリームの４週間の連用によって肌が改善され、角層中の水分量が上昇し、肌状態が改善したことが示された。更に、皮膚表面レプリカの改善効果を示す表４の結果より、クリームの４週間の連用によって肌が改善され、皮溝・皮紋から構成される皮膚の表面形態が改善され、肌状態が改善したことが示された。
【０１３４】
以下に、種々の剤型の本発明に係る皮膚外用剤の配合例を実施例として説明する。
【０１３５】
実施例５
クリーム
Ａ．油相
ステアリン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０　重量％
ステアリルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
ステアリン酸ブチル　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
ステアリン酸モノグリセリンエステル　　　　　　　　　　　　２．０
ビタミンＥアセテート　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
ビタミンＡパルミテート　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
マカデミアナッツ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
防腐剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
Ｂ．水相
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
１，２ペンタンジオール　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０
アセチル化ヒアルロン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
水酸化カリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
アスコルビン酸リン酸マグネシウム　　　　　　　　　　　　　０．５
トラネキサム酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
エデト酸三ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
ブナの芽エキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
大豆リゾレシチン（リピデュール）　　　　　　　　　　　　　０．１
ペパーミントエキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
（製法）　Ａの油相部とＢの水相部をそれぞれ７０℃に加熱し完全溶解した。Ａ相をＢ相に加えて、乳化機で乳化した。乳化物を熱交換機を用いて冷却してクリームを得た。
【０１３６】
実施例６
クリーム
Ａ．油相
セタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０　重量％
ワセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　７．０
イソプロピルミリステート　　　　　　　　　　　　　　　　８．０
スクワラン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１５．０
ステアリン酸モノグリセリンエステル　　　　　　　　　　　２．２
ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノステアレート　　　　　　　　　　２．８
ビタミンＥニコチネート　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．３
酸化防止剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
防腐剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
Ｂ．水相
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
ジプロピレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０
ピロリドンカルボン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　１．０
ブナの芽エキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
大豆リゾレシチン（リピデュール）　　　　　　　　　　　　０．１
ペパーミントエキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
エデト酸二ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
（製法）　実施例５に準じてクリームを得た。
【０１３７】
実施例７
乳液
Ａ．油相
スクワラン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０　重量％
オレイルオレート　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０
ワセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
ソルビタンセスキオレイン酸エステル　　　　　　　　　　　１．０
ポリオキシエチレンオレイルエーテル（２０ＥＯ）　　　　　　　　１．５
月見草油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
防腐剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
Ｂ．水相
１，３ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
メリッサ抽出液　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０
カルボキシビニルポリマー　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
水酸化カリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
ブナの芽エキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
大豆リゾレシチン（リピデュール）　　　　　　　　　　　　０．１
ペパーミントエキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
ヘキサメタリン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
（製法）　実施例５に準じて乳液を得た。
【０１３８】
実施例８
ファンデーション
Ａ．油相
セタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０％
脱臭ラノリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０
ホホバ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
ワセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
スクワラン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．０
ステアリン酸モノグリセリンエステル　　　　　　　　　　　３．０
ＰＯＥ（６０）硬化ヒマシ油　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
ＰＯＥ（２０）セチルエーテル　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
ピリドキシントリパルミテート　　　　　　　　　　　　　　０．１
防腐剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
Ｂ．水相
プロピレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
ブナの芽エキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
大豆リゾレシチン（リピデュール）　　　　　　　　　　　　０．１
ペパーミントエキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
エデト酸三ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
（製法）　実施例５に準じてファンデーションを得た。
【０１３９】
実施例９
化粧水
Ａ．油相
エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０重量％
ＰＯＥオレイルアルコールエーテル　　　　　　　　　　　　２．０
２−エチルヘキシル−ｐ−　ジメチルアミノベンゾエート　　　０．２
防腐剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
Ｂ．水相
１，３ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　９．５
ピロリドンカルボン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　０．５
ニコチン酸アミド　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン　　　　　　　　　１．０
クエン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
クエン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
ブナの芽エキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
大豆リゾレシチン（リピデュール）　　　　　　　　　　　　０．１
ペパーミントエキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
（製法）　Ａのアルコール相をＢの水相に添加し、可溶化して化粧水を得た。
【０１４０】
実施例１０
パック
（１）　ポリビニルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０重量％
（２）　ポリエチレングリコール（分子量４００）　　　　　　０．４
（３）　グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０
（４）　エタノール（９５％）　　　　　　　　　　　　　　　８．０
（５）　ブナの芽エキス　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
（６）　大豆リゾレシチン（リピデュール）　　　　　　　　　０．１
（７）　ペパーミントエキス　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
（８）　防腐剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
（９）　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
（１０）精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残余
（製法）　室温で（４），（８），（９）を混合溶解し、（１），（２），（３）および（５），（６），（７），（１０）を８０℃で混合溶解した中に攪拌添加した後、室温まで放冷してパックを得た。
【０１４１】
以上説明したように、本発明の皮膚外用剤は、基底膜改善効果に優れ、種々の皮膚疾患、肌荒れ、荒れ性等の改善・予防に優れた効果を有するものであると共に、肌改善を通して皮膚老化の防止にもその効力を発揮するものである。
【０１４２】
実施例１１
人工皮膚移植
実施例１と同一の方法で人工皮膚を作製した。表皮細胞をのせて３日目から１週間、無添加対照の人工皮膚と基底膜改善剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤化合物Ａ（１０μＭ）とセリンプロテアーゼ阻害剤アプロチン（１０μｇ／ｍｌ）を共存させて培養した人工皮膚を、それぞれをヌードマウスの背部皮膚を切除した場所に移植した。移植部にシリコーンガーゼをのせ、伸縮性のプラスチック接着テープであるテガターム（住友スリーエム）にて患部を被覆した。移植後７日目に外観を観察し、組織を採取した。採取した組織は冷アセトン固定し、通常のパラフィン切片を作製した。移植人工皮膚は、ヘマトキシリン・エオジン染色（ヘマトキシリン＆エオジン）、ならびに抗ラミニン５抗体による免疫染色（ラミニン５）を施した。その結果を図８〜９に示す。
【０１４３】
図８を参照されたい。移植した人工皮膚を比較すると、対照群では表皮直下のラミニン５の染色が所々されていないところが見出されたが、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤化合物Ａとアプロチニンを共存させた群ではラミニン５の染色性がより良く、ほぼ均一に染色された。移植後７日目の皮膚を組織学的に解析すると、対照群では、移植皮膚での表皮真皮接合部に隙間が観察され、ラミニン５の染色性が幅広くなり、基底膜が傷害を受けている可能性が示唆された。また、表皮の厚み、形態が不良であった。これに対し、添加群では、表皮真皮接合部の構造が良好で、ラミニン５が連続性をもって染色された。また、表皮の状態がより良好であった。
【０１４４】
更に、移植人工皮膚ともともとの皮膚の境界部を観察すると、差異が明確で、良好な基底膜を持つ人口皮膚を移植すると、無添加対照群と比較してより良好に移植人工皮膚が生着し、境界部ぎりぎりまで、ヒト由来のラミニン５の染色、およびヒト細胞を特異的に認識するβ２ミクログロブリンの染色が観察され、良好な皮膚がマウス由来の表皮の進入を阻害していた。また、境界部からの血管の新生も促進されていた。従って、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤とアプロチニンを共存させて良好な基底膜をもたせた人工皮膚を移植すると移植後の状態が明らかに良好となることが認められた。
【０１４５】
外観写真（図９）を比較すると、移植後１８日目の状態は、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤とアプロチニンを共存させて良好な基底膜を持たせた群では、無添加対照群と比較して、周囲のマウス皮膚による収縮が抑制されており、表面の角層の形成も明らかにより良好であった。
【０１４６】
以上説明したように、良好な基底膜を持つ人工皮膚を移植すると、移植組織の生着が良好であり、かつ、表皮、真皮の状態が良好であることによって移植部がより美しく維持できることが確認された。
【０１４７】
【発明の効果】
セリンプロテアーゼ阻害剤および表皮基底膜成分の主要構成成分であるＩＶ型、ＶＩＩ型コラーゲンまたはラミニン５の産生促進剤が、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤による基底膜形成促進効果を著しく促進させる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、人工皮膚の形成のための培養において、培地にマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤化合物Ａを添加していない場合（１）と添加した場合（２）とを比較した、人工皮膚の断面写真である。
【図２】図２は、人工皮膚の形成のための培養において、培地に、１０μＭの化合物Ａと１０μｇ／ｍｌのアプロチニン（３）、１０μＭの化合物Ａと１ｎｇ／ｍｌのインターロイキン−１β（４）および１０μＭの化合物Ａと１ｎｇ／ｍｌのインターロイキン−１βと１０μｇ／ｍｌのアプロチニン（５）を添加した場合を比較した、人工皮膚の断面写真である。
【図３】図３は、人工皮膚の形成のための培養において、培地に、１０μＭの化合物Ａと１ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−α（６）および１０μＭの化合物Ａと１ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−αと１０μｇ／ｍｌのアプロチニン（７）を添加した場合を比較した、人工皮膚の断面写真である。
【図４】図４は、人工皮膚の形成のための培養において、培地に、１０μＭの化合物Ａと１００ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦ（８）および１０μＭの化合物Ａと１００ｎｇ／ｍｌのＰＤＧＦと１０μｇ／ｍｌのアプロチニン（９）を添加した場合を比較した、人工皮膚の断面写真である。
【図５】人工皮膚の形成のための培養において、培地にマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤化合物Ａのみを添加した場合（１）と、更にセリンプロテアーゼ阻害剤アプロチニンを添加した場合（２）とを比較した、人工皮膚の透過型電子顕微鏡写真である。
【図６】人工皮膚の形成のための培養において、培地に、（１）無添加（対照）；（２）大豆リゾレシチン；（３）ペパーミントエキス；（４）ブナの芽エキス；（５）大豆リゾレシチン＋ペパーミントエキス＋ブナの芽エキス；を添加した場合を比較した、人工皮膚のヘマトキシリン・エオジン染色断面写真のである。
【図７】人工皮膚の形成のための培養において、培地に、（１）無添加（対照）；（２）大豆リゾレシチン；（３）ペパーミントエキス；（４）ブナの芽エキス；（５）大豆リゾレシチン＋ペパーミントエキス＋ブナの芽エキス；を添加した場合を比較した、人工皮膚の免疫染色断面写真のである。
【図８】人工皮膚を無添加、または、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤化合物Ａ（１０μＭ）とセリンプロテアーゼ阻害剤アプロチン（１０μｇ／ｍｌ）の共存下に培養し、ヌードマウスに移植し、７日目に採取した人工皮膚の断面組織像である。移植前の人工皮膚（ラミニン５染色）と生着した人工皮膚（ヘマトキシリン・エオジン染色、ラミニン５染色、β２ミクログロブリン染色）の組織像である。
【図９】人工皮膚を無添加、または、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤化合物Ａ（１０μＭ）とセリンプロテアーゼ阻害剤アプロチン（１０μｇ／ｍｌ）の共存下に培養し、ヌードマウスに移植し、７日目と１８日目の人工皮膚の外観写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2004075661.tif 000017
【図８】
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【図９】
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