【誤訳訂正書】
【提出日】平成26年3月24日(2014.3.24)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一つの常磁性金属陽イオンと配位結合した少なくとも二つのリン酸基を有するキレート分子を含む磁気共鳴映像（ＭＲＩ）用造影剤であって、
前記ＭＲＩ用造影剤と同一のモル比に該当する量のカルシウムを更に含み、
上記常磁性金属陽イオンが、Ｇｄ３＋、Ｆｅ２＋及びＦｅ３＋からなる群から選択されるＭＲＩ用造影剤。
【請求項２】
前記キレート分子は、フィテート、イノシトールフォスフェートまたはフォスファチジル イノシトールフォスフェートからなる群から選択される、請求項１に記載のＭＲＩ用造影剤。
【請求項３】
前記フィテートは、ｄ−ミオーイノシトール−１，２，３，４，５，６−六リン酸(d-myo-inositol-1,2,3,4,5,6-hexakisphosphate)である、請求項２に記載のＭＲＩ用造影剤。
【請求項４】
前記ｄ−ミオ−イノシトール−１，２，３，４，５−ペンタフォスフェート(d-myo-inositol-1,2,3,4,5-pentaphosphate)、ｄ−ミオ−イノシトール−１，３，４，５−テトラフォスフェート(d-myo-inositol-1、3、4、5-tetraphosphate)、ｄ−ミオ−イノシトール−１，４，５−トリスフォスフェート(d-myo-inositol-1,4,5-trisphosphate)及びｄ−ミオ−イノシトール−１，３，４−トリスフォスフェート(d-myo-inositol-1,3,4-trisphosphate)からなる群から選択される、請求項２に記載のＭＲＩ用造影剤。
【請求項５】
前記フォスファチジルイノシトールフォスフェートは、フォスファチジルイノシトール−３，４，５−トリフォスフェート(phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate)及びフォスファチジル イノシトール−４，５−ビスフォスフェート(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate)からなる群から選択される、請求項２に記載のＭＲＩ用造影剤。
【請求項６】
対象の体内の関心の部位近くでＴ１またはＴ２弛緩時間を減少させるように設計された、請求項１に記載のＭＲＩ用造影剤。
【請求項７】
前記常磁性金属陽イオンは、常磁性金属陽イオンの放射性同位元素形態または  ＰＥＴ−ＭＲＩ造影剤として９９テクネチウムイオンを使うことを特徴とする請求項１に記載のＭＲＩ用造影剤。
【請求項８】
前記キレート分子のｐＨ範囲は、４〜９である、請求項１に記載のＭＲＩ用造影剤。
【請求項９】
前記キレート分子のｐＨ範囲は、６〜８である、請求項１４に記載のＭＲＩ用造影剤。
【請求項１０】
前記常磁性金属イオンと前記キレート化合物とのモル比は、０．５〜３．０である、請求項１に記載のＭＲＩ用造影剤。
【請求項１１】
前記キレート化合物と前記常磁性金属イオンとのモル比は、０．５〜３．０である、請求項１に記載のＭＲＩ用造影剤。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００１】
本発明は、全般的に新規な磁気共鳴映像用造影剤に関し、具体的には、少なくとも１つの常磁性物質と配位結合された少なくとも２つのリン酸基を有する新規な磁気共鳴映像用造影剤である。また、本発明は、それを用いた映像化方法に関する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
本発明の一つの目的は、少なくとも１つの常磁性金属陽イオンと配位結合された少なくとも２つのリン酸基を有したキレート分子を含むＭＲＩ用造影剤を提供するものである。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２０】
【図１】図１Ａと１Ｂは、フィテート溶液に結合されるＧｄ３＋イオンに対する結合力、結合個数、結合形態の等温滴定熱量測定(isothermal titration calorimetry(ＩＴＣ))’分析結果である。図１Ａは、Ｇｄ３＋イオンが二座配位子の形態でフィテートのリン酸基から２つの酸素陰イオンに結合したがＧｄ−フィテート複合体を説明する模式図である。図１Ｂは、Ｇｄ３＋がフィテート溶液に結合するＩＴＣ分析結果である。図１Ｂの上段は、０．５ｍＭのフィテート溶液(ｐＨ７．０、３７℃)に１０ｍＭのＧｄ３＋イオンを１μｌずつ間歇的に注入して測定した熱量滴定(calorimetric titration)を示す。図１Ｂの下段は、全体フィテート溶液の濃度に対するリガンドの全体濃度の比に対する滴定のモル当りの熱交換を示す。赤色実線は、数学的に計算された部位モデルの２つのセットに対する最適合(best-fit)を示す。
【図２】図２は、フィテート溶液とＭｎ２＋に対する結合力、結合個数、結合形態のＩＴＣ分析結果である。図２の上段は、０．５ｍＭのフィテート溶液(ｐＨ７．０、３７℃)に１５ｍＭのＭｎ２＋１．５μｌの熱量滴定を示す。下段は、全体フィテート溶液の濃度に対するリガンドの全体濃度の比に対する滴定のモル当りの熱交換を示す。赤色実線は、数学的に計算されたシーケンシャル結合部位モデルに対する最適合である。
【図３】図３は、フィテート溶液とＣａ２＋に対する結合力、結合個数、結合形態のＩＴＣ分析結果である。上段は、０．５ｍＭのフィテート溶液(ｐＨ７．０、３７℃)に１５ｍＭのＣａ２＋１．５μｌの熱量滴定を示す。下段は、全体フィテート溶液の濃度に対するリガンドの全体濃度の比に対する滴定のモル当りの熱交換を示す。赤色実線は、数学的に計算された部位モデルの２つのセットに対する最適合である。
【図４】図４は、フィテート溶液とＭｇ２＋に対する結合力、結合個数、結合形態のＩＴＣ分析結果である。上段は、０．５ｍＭのフィテート溶液(ｐＨ７．０、３７℃)に３０ｍＭのＭｇ２＋１．５μｌの熱量滴定を示す。下段は、全体フィテート溶液の濃度に対するリガンドの全体濃度の比に対する滴定のモル当りの熱交換を示す。赤色実線は、数学的に計算された部位モデルの１つのセットに対する最適合である。
【図５】図５は、イノシトール−１，３，４−トリフォスフェート(inositol-1,3,4-trisphosphate)とＧｄ３＋に対する結合力、結合個数、結合形態のＩＴＣ分析結果である。上段は、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ(ｐＨ７．０、２５℃)の０．２ｍＭのイノシトール−１，３，４−トリフォスフェート溶液に５ｍＭのＧｄ３＋１．５μｌの熱量滴定を示す。下段は、全体イノシトール−１，３，４−トリフォスフェートの濃度に対するリガンドの全体濃度の比に対する滴定のモル当りの熱交換を示す。赤色実線は、数学的に計算された部位モデルの１つのセットに対する最適合である。
【図６】図６は、イノシトール−１，４，５−トリフォスフェートとＧｄ３＋に対する結合力、結合個数、結合形態のＩＴＣ分析結果である。上段は、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ(ｐＨ７．０、２５℃)中の０．２ｍＭのイノシトール−１，４，５−トリフォスフェート溶液に５ｍＭのＧｄ３＋１．５μｌの熱量滴定を示す。下段は、全体イノシトール−１，４，５−トリフォスフェートの濃度に対するリガンドの全体濃度の比に対する滴定のモル当りの熱交換を示す。赤色実線は、数学的に計算された部位モデルの１つのセットに対する最適合である。
【図７】図７は、イノシトール−１，３，４，５−テトラフォスフェート(inositol-1、3、4、5-tetraphosphate)とＧｄ３＋に対する結合力、結合個数、結合形態のＩＴＣ分析結果である。上段は、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ(ｐＨ７．０、２５℃)中の０．２ｍＭのイノシトール−１，３，４，５−テトラフォスフェート溶液に５ｍＭのＧｄ３＋１．５μｌの熱量滴定を示す。下段は、全体イノシトール−１，３，４，５−テトラフォスフェートの濃度に対するリガンドの全体濃度の比に対する滴定のモル当りの熱交換を示す。赤色実線は、数学的に計算された部位モデルの２つのセットに対する最適合である。
【図８】図８Ａ及び８Ｂは、フィテート溶液とＦｅ３＋に対する結合力、結合個数、結合形態のＩＴＣ分析結果である。図８Ａは、フィテート溶液に結合するＦｅ３＋のＩＴＣ分析である。図８Ａの上段は、０．５ｍＭのフィテート溶液(ｐＨ７．０、３７℃)に５ｍＭのＦｅ３＋を１．５μｌずつ間歇的に注入して得た熱量滴定を示す。図８Ａの下段は、全体フィテート溶液の濃度に対するリガンドの全体濃度の比に対する滴定のモル当りの熱交換を示す。赤色実線は、数学的に計算された部位モデルの２つのセットに対する最適合である。図８Ｂは、二座配位子の形態でフィテートのリン酸基から２つの酸素陰イオンにＦｅ３＋イオンが結合したＦｅ−フィテート複合体を示したものである。
【図９】図９は、ＥＤＴＡ溶液とＧｄ３＋に対する結合力、結合個数、結合形態のＩＴＣ分析結果である。上段は、１０ｍＭのＭＥＳ(ｐＨ５．６、２５℃)中の０．４ｍＭのＥＤＴＡ溶液に５ｍＭのＧｄ３＋１．５μｌの熱量滴定を示す。下段は、全体ＥＤＴＡ溶液の濃度に対するリガンドの全体濃度の比に対する滴定のモル当りの熱交換を示す。赤色実線は、数学的に計算されたモデル部位の１つのセットに対する最適合である。
【図１０】図１０は、ジエチレントリアミン五酢酸(diethylene triamine pentaacetic acid、 ＤＴＰＡ)とＧｄ３＋に対する結合力、結合個数、結合形態のＩＴＣ分析結果である。上段は、１０ｍＭの酢酸ナトリウム(ｐＨ４．８、２５℃)中の０．２ｍＭのＤＴＰＡ溶液に５ｍＭのＧｄ３＋１．５μｌの熱量滴定を示す。下段は、全体ＤＴＰＡ溶液の濃度に対するリガンドの全体濃度の比に対する滴定のモル当りの熱交換を示す。赤色実線は、数学的に計算された部位モデルの２つのセットに対する最適合である。
【図１１】図１１は、ジエチレントリアミン五酢酸(ＤＴＰＡ)とＧｄ３＋に対する結合力、結合個数、結合形態のＩＴＣ分析結果である。上段は、１０ｍＭのトリス(ｐＨ７．８、２５℃)中の０．２ｍＭのＤＴＰＡ溶液に５ｍＭのＧｄ３＋１．５μｌの熱量滴定を示す。下段は、全体ＤＴＰＡ溶液の濃度に対するリガンドの全体濃度の比に対する滴定のモル当りの熱交換を示す。赤色実線は、数学的に計算されたもののような部位モデルの２つのセットに対する最適合である。
【図１２】図１２Ａと図１２Ｂは、９．４ＴのＭＲＩスキャナで多様な濃度のＭｎ２＋、Ｇｄ−ＤＴＰＡ、Ｍｎ−フィテート及びＧｄ−フィテート複合体に対する弛緩率(relaxation rates、Ｒ１)測定を示した結果である。（Ａ）は、多様な濃度のＭｎ２＋、Ｇｄ−ＤＴＰＡ、Ｍｎ−フィテート及びＧｄ−フィテート複合体に対する２４個のファントム (phantom)などの３０００ｍｓの反複回復時間(inversion recovery time、Ｔ１)でのＭＲ映像の例である。（Ｂ）は、前記のファントムなどのそれぞれを互いに比較して秒(sec)単位で示した結果である。本実施例のすべての濃度において、Ｍｎ−フィテート、Ｇｄ−フィテートの弛緩率(Ｒ１)は、Ｍｎ２＋及びＧｄ−ＤＴＰＡよりはるかに高く示された。
【図１３】図１３Ａと図１３Ｂは、９．４ＴでＲＡＷ２６４．７大食細胞細胞株(macrophage cell line)でＧｄ−フィテートの濃度にＭＲ信号の変化を測定した結果である。（Ａ）は、０、０．１２５、０．２５、０．３７５、０．５及び０．７５ｍＭのＧｄ−フィテート溶液を使って準備された大食細胞を含む６つのファントムに対するＴ１−強調ＭＲ映像の結果である。Ｇｄ−フィテートの濃度増加に応じて信号の強度がはっきりと増加した。（Ｂ）は、関心のある部分を目標とする生体内(in vivo)メカニズムを示す大略的な概念図である。
【図１４】図１４Ａ〜図１４Ｃは、９．４ＴでＭｎ−フィテート複合体を静脈注射投与後にラットの肝の時間−依存的変化によるＴ１−強調ＭＲ信号を示す結果である。正常なラットの肝のＴ１−強調ＭＲ映像をＭｎ−フィテート(５μｍｏｌ／ｋｇ)を静脈注射投与の前（Ａ）、４０分後（Ｂ）、１日後（Ｃ）で示した結果である。静脈注射４０分後の肝実質組織の信号強度（Ｂ）は、投与前の肝（Ａ）と比較する時、約３２％向上したものとして示された。投与２４時間の後、肝の信号強度がベースラインの下に減少し、これは投与された造影剤が２４時間内にラットの肝から除去されることを提案する。
【図１５】図１５は、９．４ＴでＧｄ−フィテート複合体を静脈注射投与後にラットの肝の時間−依存的変化によるＴ２強調ＭＲ信号を示す結果である。正常ラットの肝のＴ２−強調ＭＲ映像をＧｄ−フィテート(４μｍｏｌ／ｋｇ)の静脈注射投与の前（Ａ）、３時間後（Ｂ）、２４時間後（Ｃ）及び５日後（Ｄ）で示した結果である。投与３時間（Ｂ）及び２４時間（Ｃ）後の肝実質組織の信号強度は、投与の前（Ａ）と比較する時、１４％及び２６％がそれぞれ減少されたものとして示された。投与５日後、肝の減少された信号強度がベースラインの〜９５％まで増加し、これは投与された造影剤が約５日後にラットの肝から除去されたことを提案する。
【図１６】図１６Ａ〜図１６Ｄは、１．５及び４．７ＴでＧｄ−フィテート複合体を静脈注射投与後にラットの肝のＭＲ信号の時間−依存的変化を示す。１．５Ｔ（Ａ及びＢ）及び４．７Ｔ（Ｃ及びＤ）で正常ラットの肝の前後造影−Ｔ１−強調ＭＲ映像である。Ｇｄ−フィテート(４μｍｏｌ／ｋｇ)の低い服量は皮下に投与された。ポジティブ造影剤(positive contrast agent)としてＧｄ−フィテートの効能はこのような低い磁場強度でよく証明される。
【図１７】図１７は、一次腫瘍の巨視的な検査及びリンパ節の切開を示す。ラットの左側前肢に注入された一次腫瘍の大きさは約１ｃｍであった。左側腋窩のリンパ節及び上腕のリンパ節は、拡張され、黒い点を含んだ。しかし、右側腋窩及び上腕のリンパ節は、変化せずに残っていた。
【図１８】図１８は、監視リンパ節のＴ１−強調ＭＲ映像を示す。上腕リンパ節前−造影(pre-contrast)（Ａ）、Ｆｅ−フィテートの皮下投与後、４時間（Ｂ）、８時間（Ｃ）、そして、２４時間（Ｄ）後の映像である。矢印は、監視リンパ節でのハイポインテンス(hypointense)部分を示す。
【図１９】図１９は、監視リンパ節のＴ２−強調ＭＲ映像を示す。上腕リンパ節前−造影（Ａ）、Ｆｅ−フィテートの皮下投与後、４時間（Ｂ）、８時間（Ｃ）、そして、２４時間（Ｄ）後の映像である。矢印は、監視リンパ節でのハイポインテンス部分を示す。
【図２０】図２０は、映像化されたマウスから得られた左腕リンパ節の病理組織学的特徴を示す。（Ａ）Ｈ＆Ｅで染色した上腕リンパ節、（Ｂ）プルシアンブルー で染色した上腕リンパ節、（Ｃ）Ａで示した関心のある矩形部位の拡大図。（Ｄ）一次腫瘍の拡大図。スケールバー (scale bars)、５００μｍ（Ａ、Ｂ）；１００μｍ（Ｃ、Ｄ）。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
一つの態様として、本発明は、少なくとも１つの常磁性物質と配位結合された少なくとも２つのリン酸基を有するキレート分子を含むＭＲＩ用造影剤に関する。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２９】
本発明において、用語“キレート分子”または“キレーター(chelator)”とは、少なくとも１つの供与体原子を介して金属イオンに結合され得る化合物または物質の残基をいう。常磁性キレート複合体のＴ１磁気弛緩時間を減少及び常磁性物質の安定化能力は、常磁性物質に配位結合されるキレート物質の化学的構造に完全に依存している。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
本願において、本発明において有用なキレート分子は、少なくとも２つのリン酸基を有し、好ましい例としては、フィテート、イノシトールフォスフェート及びフォスファチジル イノシトールフォスフェートがある。より好ましい例としては、前記キレート分子は、ｄ−ミオ−イノシトール−１，２，３，４，５，６−六リン酸、ｄ−ミオ−イノシトール−１，２，３，４，５−五リン酸、ｄ−ミオ−イノシトール−１，３，４，５−四リン酸、ｄ−ミオ−イノシトール−１，４，５−三リン酸、ｄ−ミオ−イノシトール−１，３，４−三リン酸、フォスファチジル イノシトール−３，４，５−三リン酸、およびフォスファチジル イノシトール−４，５−二リン酸を含む。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６６】
実施例１．４：イノシトールフォスフェートとＧｄ３＋の熱力学結合に対するＩＴＣ分析
イノシトールフォスフェート(イノシトール−１，３，４−トリスフォスフェート(inositol-1,3,4-trisphosphate)、イノシトール−１，４，５−トリスフォスフェート(inositol-1,4,5-trisphosphate)、またはイノシトール−１，３，４，５−テトラキスフォスフェート(inositol-1,3,4,5-tetrakisphosphate))(０．２ｍＭ)とＧｄ３＋(５ｍＭ)の熱力学的適定反応は、２５℃、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０で行った。Ｇｄ３＋／イノシトールフォスフェートモル比による統合された熱の直線に該当する結合等温線は、図５、図６、図７にそれぞれ示した。各イノシトールフォスフェート誘導体１モル当りＧｄ３＋の結合に該当する熱力学的変数などは、下記表４に要約した。本結果は、イノシトールフォスフェートも  Ｇｄ３＋と強く結合するということを示した。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８１】
イノシトールフォスフェートに基づいた造影剤は、任意のｄ−ミオ−イノシトール−１，２，３，４，５−ペンタフォスフェート(d-myo-inositol-1,2,3,4,5-pentaphosphate)、ｄ−ミオ−イノシトール−１，３，４，５−テトラフォスフェート(d-myo-inositol-1,3,4,5-tetraphosphate)、ｄ−ミオ−イノシトール−１，４，５−トリスフォスフェート(d-myo-inositol-1,4,5-trisphosphate)及びｄ−ミオ−イノシトール−１，３，４−トリスフォスフェート(d-myo-inositol-1,3,4-trisphosphate)を含む。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８２】
実施例５．１：Ｇｄ−イノシトールフォスフェートの製造
Ｇｄ３＋に対するイノシトールフォスフェート(ｄ−ミオ−イノシトール−１，３，４−トリスフォスフェート、ｄ−ミオ−イノシトール−１，４，５−トリスフォスフェート、またはｄ−ミオ−イノシトール−１，３，４，５−テトラキスフォスフェート)の結合力は、最も強いものであって、ＩＴＣで測定した。この結果に基づいて(図５、図６、図７と表４)、Ｇｄ−イノシトールフォスフェートは、Ｇｄ３＋とイノシトールフォスフェートを同一モル濃度で使って製造した。この点に係って、５ｍｌの滅菌水に２０ｍＭのイノシトールフォスフェート(Sigma chemical Co.，USA)を溶解させた後、１Ｎの塩酸溶液を使ってｐＨを７．０に適定し、５ｍｌの２０ｍＭのＧｄ３＋(Sigma chemical Co.，USA)溶液と混合して、Ｇｄ−イノシトールフォスフェートの水溶液を得た。水溶液のｐＨ範囲は、４〜９であり得り、生理的条件で前記造影剤を診断用として使用する時に最も好ましくは６〜８であり得る。Ｇｄ−イノシトールフォスフェートは、Ｇｄ３＋とイノシトールフォスフェートの任意のモル比が０．５〜４．０の範囲で製造可能であり、または、逆も可能である。最も好ましい濃度は、同一モル濃度のＧｄ３＋とイノシトールフォスフェートである。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８４】
フォスファチジル イノシトールフォスフェート誘導体に基づいた造影剤は、任意のフォスファチジル イノシトール−３，４，５−トリフォスフェート(phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate)及びフォスファチジル イノシトール−４，５−ビスフォスフェート(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate)を含み得る。