【手続補正書】
【提出日】平成24年5月24日(2012.5.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ｈＮＧＡＬ）、ラットα2ミクログロブリン類縁タンパク質（Ａ２ｍ）、およびマウス２４ｐ３／ウテロカリン（２４ｐ３）からなる群から選択されるタンパク質に由来するムテインであって、ｈＮＧＡＬの直鎖状ポリペプチド配列の配列位置３３、３６、４１、５２、５４、６８、７０、７９、８１、１３４、１３６、および１３８に対応する配列位置のうちのいずれかにおいて、少なくとも４つの突然変異させたアミノ酸残基を含み、検出可能なアフィニティーで所与の標的に結合するムテイン。
【請求項２】
ｈＮＧＡＬの直鎖状ポリペプチド配列の配列位置４２、４８、４９、５５、７５、７７、８０、および１２７に対応する配列位置のうちのいずれかにおいて、少なくとも１つの突然変異させたアミノ酸残基をさらに含む、請求項１に記載のムテイン。
【請求項３】
ｈＮＧＡＬの直鎖状ポリペプチド配列の配列位置４３、４４、４６、４７、５０、５１、５９、６５、７８、８６、８７、９８、９９、１０３、１０７、１１０、および１１１に対応する配列位置のうちのいずれかにおいて、少なくとも１つの突然変異させたアミノ酸残基をさらに含む、請求項１または２に記載のムテイン。
【請求項４】
ｈＮＧＡＬの野生型配列の配列位置１４、２１、６０、８４、８８、１１６、１４１、１４５、１４３、１４６、または１５８に対応する配列位置のうちの少なくとも１カ所においてＣｙｓ残基が導入される、請求項１から３のいずれか一項に記載のムテイン。
【請求項５】
ｈＮＧＡＬの野生型配列の配列位置６５、７１、７３、７４、１１６、１２５、および１３５に対応する配列位置のうちの少なくとも１カ所において、成熟ｈＮＧＡＬの野生型アミノ酸配列に対してさらなるアミノ酸置換を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のムテイン。
【請求項６】
有機低分子またはペプチドに結合する、請求項１から５のいずれか一項に記載のムテイン。
【請求項７】
有機低分子が、金属キレート化剤または薬剤である、請求項６に記載のムテイン。
【請求項８】
Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｔｒｐ７９→Ａｌａ、Ｌｅｕ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；Ｔｈｒ１３６→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕからなる群から選択される、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ所のアミノ酸置換を、成熟ｈＮＧＡＬの野生型アミノ酸配列に対して含む、請求項１から７のいずれか一項に記載のムテイン。
【請求項９】
Ｌｅｕ４２→Ｐｒｏ、Ｐｒｏ４８→Ｌｅｕ、Ｇｌｎ４９→Ｌｅｕ、Ｉｌｅ５５→Ｔｈｒ、Ｌｙｓ７５→Ｍｅｔ、Ａｓｐ７７→Ｇｌｕ、Ｉｌｅ８０→Ｔｈｒ、およびＳｅｒ１２７→Ｇｌｎからなる群から選択されるアミノ酸置換を、成熟ｈＮＧＡＬの野生型アミノ酸配列に対してさらに含む、請求項８に記載のムテイン。
【請求項１０】
Ａｒｇ４３→Ｐｒｏ、Ｇｌｕ４４→Ｖａｌ、Ｇｌｕ４４→Ｍｅｔ、Ｌｙｓ４６→Ｐｒｏ、Ａｓｐ４７→Ｇｌｕ、Ｌｙｓ５０→Ｌｅｕ、Ｍｅｔ５１→Ｌｅｕ、Ｌｙｓ５９→Ａｒｇ、Ａｓｎ６５→Ａｓｐ、Ｔｙｒ７８→Ｈｉｓ、Ｇｌｙ８６→Ｓｅｒ、Ｓｅｒ８７→Ｐｒｏ、Ｓｅｒ８７→Ｐｈｅ、Ｌｙｓ９８→Ｇｌｕ、Ｓｅｒ９９→Ａｓｎ、Ｌｅｕ１０３→Ｉｌｅ、Ｌｅｕ１０７→Ｐｈｅ、Ｖａｌ１１０→Ｍｅｔ、およびＶａｌ１１１→Ａｌａからなる群から選択されるアミノ酸置換を、成熟ｈＮＧＡＬの野生型アミノ酸配列に対してさらに含む、請求項８または９に記載のムテイン。
【請求項１１】
アミノ酸置換：
（ａ）Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｔｒｐ７９→Ａｌａ；Ｉｌｅ ８０→Ｔｈｒ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕ；
（ｂ）Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｔｒｐ７９→Ｌｅｕ；Ｉｌｅ ８０→Ｔｈｒ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕ；
（ｃ）Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｔｒｐ７９→Ｌｅｕ；Ｉｌｅ ８０→Ｔｈｒ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｓｅｒ１２７→Ｇｌｎ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕ；
（ｄ）Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｔｒｐ７９→Ｌｅｕ；Ｉｌｅ ８０→Ｔｈｒ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；Ｔｈｒ１３６→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕ；
（ｅ）Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｔｒｐ７９→Ｌｅｕ；Ｉｌｅ ８０→Ｔｈｒ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｓｅｒ１２７→Ｇｌｎ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；Ｔｈｒ１３６→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕ；
（ｆ）Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ａｓｐ７７→Ｇｌｕ；Ｔｒｐ７９→Ｌｅｕ；Ｉｌｅ ８０→Ｔｈｒ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｓｅｒ１２７→Ｇｌｎ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；Ｔｈｒ１３６→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕ；
（ｇ）Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｌｅｕ４２→Ｐｒｏ；Ｐｒｏ４８→Ｌｅｕ；Ｇｌｎ４９→Ｌｅｕ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｉｌｅ５５→Ｔｈｒ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｌｙｓ７５→Ｍｅｔ；Ａｓｐ７７→Ｇｌｕ；Ｔｒｐ７９→Ｌｅｕ；Ｉｌｅ ８０→Ｔｈｒ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｓｅｒ１２７→Ｇｌｎ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；Ｔｈｒ１３６→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕ；
（ｈ）Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｌｅｕ４２→Ｐｒｏ；Ａｒｇ４３→Ｐｒｏ；Ｇｌｕ４４→Ｖａｌ；Ｌｙｓ４６→Ｐｒｏ；Ａｓｐ４７→Ｇｌｕ；Ｐｒｏ４８→Ｌｅｕ；Ｇｌｎ４９→Ｌｅｕ；Ｌｙｓ５０→Ｌｅｕ；Ｍｅｔ５１→Ｌｅｕ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｉｌｅ５５→Ｔｈｒ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｌｙｓ７５→Ｍｅｔ；Ａｓｐ７７→Ｇｌｕ；Ｔｒｐ７９→Ｌｅｕ；Ｉｌｅ ８０→Ｔｈｒ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｓｅｒ１２７→Ｇｌｎ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；Ｔｈｒ１３６→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕ；
（ｉ）Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｌｅｕ４２→Ｐｒｏ；Ａｒｇ４３→Ｐｒｏ；Ｇｌｕ４４→Ｖａｌ；Ｌｙｓ４６→Ｐｒｏ；Ａｓｐ４７→Ｇｌｕ；Ｐｒｏ４８→Ｌｅｕ；Ｇｌｎ４９→Ｌｅｕ；Ｌｙｓ５０→Ｌｅｕ；Ｍｅｔ５１→Ｌｅｕ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｉｌｅ５５→Ｔｈｒ；Ａｓｎ６５→Ａｓｐ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｌｙｓ７５→Ｍｅｔ；Ａｓｐ７７→Ｇｌｕ；Ｔｒｐ７９→Ｌｅｕ；Ｉｌｅ ８０→Ｔｈｒ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｌｙｓ９８→Ｇｌｕ；Ｖａｌ１１０→Ｍｅｔ；Ｓｅｒ１２７→Ｇｌｎ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；Ｔｈｒ１３６→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕ；
（ｊ）Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｌｅｕ４２→Ｐｒｏ；Ａｒｇ４３→Ｐｒｏ；Ｇｌｕ４４→Ｖａｌ；Ｌｙｓ４６→Ｐｒｏ；Ａｓｐ４７→Ｇｌｕ；Ｐｒｏ４８→Ｌｅｕ；Ｇｌｎ４９→Ｌｅｕ；Ｌｙｓ５０→Ｌｅｕ；Ｍｅｔ５１→Ｌｅｕ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｉｌｅ５５→Ｔｈｒ；Ａｓｎ６５→Ａｓｐ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｌｙｓ７５→Ｍｅｔ；Ａｓｐ７７→Ｇｌｕ；Ｔｒｐ７９→Ｌｅｕ；Ｉｌｅ ８０→Ｔｈｒ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｇｌｙ８６→Ｓｅｒ；Ｓｅｒ１２７→Ｇｌｎ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；Ｔｈｒ１３６→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕ；
（ｋ）Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｌｅｕ４２→Ｐｒｏ；Ａｒｇ４３→Ｐｒｏ；Ｇｌｕ４４→Ｍｅｔ；Ｌｙｓ４６→Ｐｒｏ；Ａｓｐ４７→Ｇｌｕ；Ｐｒｏ４８→Ｌｅｕ；Ｇｌｎ４９→Ｌｅｕ；Ｌｙｓ５０→Ｌｅｕ；Ｍｅｔ５１→Ｌｅｕ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｉｌｅ５５→Ｔｈｒ；Ａｓｎ６５→Ａｓｐ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｌｙｓ７５→Ｍｅｔ；Ａｓｐ７７→Ｇｌｕ；Ｔｒｐ７９→Ｌｅｕ；Ｉｌｅ ８０→Ｔｈｒ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｇｌｙ８６→Ｓｅｒ；Ｓｅｒ８７→Ｐｒｏ；Ｓｅｒ９９→Ａｓｎ；Ｌｅｕ１０７→Ｐｈｅ；Ｓｅｒ１２７→Ｇｌｎ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；Ｔｈｒ１３６→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕ；
（ｌ）Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｌｅｕ４２→Ｐｒｏ；Ａｒｇ４３→Ｐｒｏ；Ｇｌｕ４４→Ｖａｌ；Ｌｙｓ４６→Ｐｒｏ；Ａｓｐ４７→Ｇｌｕ；Ｐｒｏ４８→Ｌｅｕ；Ｇｌｎ４９→Ｌｅｕ；Ｌｙｓ５０→Ｌｅｕ；Ｍｅｔ５１→Ｌｅｕ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｉｌｅ５５→Ｔｈｒ；Ｌｙｓ５９→Ａｒｇ；Ａｓｎ６５→Ａｓｐ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｌｙｓ７５→Ｍｅｔ；Ａｓｐ７７→Ｇｌｕ；Ｔｒｐ７９→Ｌｅｕ；Ｉｌｅ ８０→Ｔｈｒ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｓｅｒ１２７→Ｇｌｎ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；Ｔｈｒ１３６→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕ；
（ｍ）Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｌｅｕ４２→Ｐｒｏ；Ａｒｇ４３→Ｐｒｏ；Ｇｌｕ４４→Ｖａｌ；Ｌｙｓ４６→Ｐｒｏ；Ａｓｐ４７→Ｇｌｕ；Ｐｒｏ４８→Ｌｅｕ；Ｇｌｎ４９→Ｌｅｕ；Ｌｙｓ５０→Ｌｅｕ；Ｍｅｔ５１→Ｌｅｕ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｉｌｅ５５→Ｔｈｒ；Ａｓｎ６５→Ａｓｐ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｌｙｓ７５→Ｍｅｔ；Ａｓｐ７７→Ｇｌｕ；Ｔｒｐ７９→Ｌｅｕ；Ｉｌｅ ８０→Ｔｈｒ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｓｅｒ８７→Ｐｈｅ；Ｓｅｒ１２７→Ｇｌｎ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；Ｔｈｒ１３６→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕ；または
（ｎ）Ｖａｌ３３→Ｇｌｎ；Ｌｅｕ３６→Ａｒｇ；Ｉｌｅ４１→Ａｌａ；Ｌｅｕ４２→Ｐｒｏ；Ａｒｇ４３→Ｐｒｏ；Ｇｌｕ４４→Ｖａｌ；Ｌｙｓ４６→Ｐｒｏ；Ａｓｐ４７→Ｇｌｕ；Ｐｒｏ４８→Ｌｅｕ；Ｇｌｎ４９→Ｌｅｕ；Ｌｙｓ５０→Ｌｅｕ；Ｍｅｔ５１→Ｌｅｕ；Ｔｙｒ５２→Ｔｈｒ；Ｔｈｒ５４→Ｇｌｎ；Ｉｌｅ５５→Ｔｈｒ；Ｓｅｒ６８→Ａｌａ；Ｌｅｕ７０→Ａｒｇ；Ｌｙｓ７５→Ｍｅｔ；Ａｓｐ７７→Ｇｌｕ；Ｔｙｒ７８→Ｈｉｓ；Ｔｒｐ７９→Ｌｅｕ；Ｉｌｅ ８０→Ｔｈｒ；Ａｒｇ８１→Ｍｅｔ；Ｌｅｕ１０３→Ｉｌｅ；Ｌｅｕ１０７→Ｐｈｅ；Ｖａｌ１１１→Ａｌａ；Ｓｅｒ１２７→Ｇｌｎ；Ｌｙｓ１３４→Ｓｅｒ；Ｔｈｒ１３６→Ｓｅｒ；およびＴｙｒ１３８→Ｌｅｕ
を、成熟ｈＮＧＡＬの野生型アミノ酸配列に対して含む、請求項９または１０に記載のムテイン。
【請求項１２】
Ｇｌｕ２８→Ｈｉｓ、Ｃｙｓ８７→Ｓｅｒ、およびＴｈｒ１４５→Ａｌａからなる群から選択されるアミノ酸置換を、成熟ｈＮＧＡＬの野生型アミノ酸配列に対してさらに含む、請求項９から１１のいずれか一項に記載のムテイン。
【請求項１３】
選択される標的分子に対する結合アフィニティーでターゲティング部分とコンジュゲートされているか、あるいは、有機分子、酵素標識、放射性標識、着色標識、蛍光標識、発色標識、発光標識、ハプテン、ジゴキシゲニン、ビオチン、金属錯体、金属、金コロイドからなる群から選択される標識にコンジュゲートされている、請求項１から１２のいずれか一項に記載のムテイン。
【請求項１４】
そのＮ末端および／またはそのＣ末端において、タンパク質、タンパク質ドメイン、またはペプチドと融合されているか、あるいは、その血清半減期を延長する部分とコンジュゲートされている、請求項１から１３のいずれか一項に記載のムテイン。
【請求項１５】
ムテインが、所与の標的に、１μＭ以下、１００μＭ以下、１μＭ以下、５００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、または１ｎＭ以下のＫDにより結合する、請求項１から１４のいずれか一項に記載のムテイン。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の少なくとも１つのムテインを含む医薬組成物。
【請求項１７】
化合物を事前に選択された部位にターゲティングするための、請求項１から１５のいずれか一項に記載のムテインの使用であって、
（ａ）前記ムテインを、前記化合物と接触させるステップと、
（ｂ）前記ムテイン／標的複合体を、前記事前に選択された部位に送達するステップと
を含む使用。
【請求項１８】
請求項１から１５のいずれか一項に記載のムテインを含む診断用キットまたは解析用キット。
【請求項１９】
請求項１から１５のいずれか一項に記載のムテインをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子。
【請求項２０】
請求項１９に記載の核酸分子を含有する宿主細胞。
【請求項２１】
請求項１から１４のいずれか一項に記載のムテインを生成させる方法であって、
（ａ）ｈＮＧＡＬタンパク質をコードする核酸分子を、ｈＮＧＡＬの直鎖状ポリペプチド配列の配列位置３３、３６、４１、５２、５４、６８、７０、７９、８１、１３４、１３６、および１３８に対応する配列位置のうちの任意の少なくとも４カ所をコードするヌクレオチドトリプレットにおいて突然変異誘発にかける結果、１または複数のムテイン核酸分子を得るステップと、
（ｂ）適切な発現系において、（ａ）で得られた１または複数のムテイン核酸分子を発現させるステップと、
（ｃ）選択および／または単離により、所与の標的に対する検出可能な結合アフィニティーを有する１または複数のムテインを濃縮するステップと
を含む方法。
【請求項２２】
核酸分子を、ｈＮＧＡＬの直鎖状ポリペプチド配列の配列位置４２、４８、４９、５５、７５、７７、８０、および１２７に対応する配列位置のうちのいずれかをコードする、少なくとも１つのヌクレオチドトリプレットにおいて突然変異誘発にかけるステップをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
核酸分子を、ｈＮＧＡＬの直鎖状ポリペプチド配列の配列位置４３、４４、４６、４７、５０、５１、５９、６５、７８、８６、８７、９８、９９、１０３、１０７、１１０、および１１１に対応する配列位置のうちのいずれかをコードする、少なくとも１つのヌクレオチドトリプレットにおいて突然変異誘発にかけるステップをさらに含む、請求項２１または２２に記載の方法。