【手続補正書】
【提出日】平成24年3月1日(2012.3.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
ユビキチン（Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ：Ｕｂ）およびユビキチン様タンパク質（ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ  ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｕｂｌｓ）が文献に記載されている（Ｊｅｎｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｐｙｒｏｗｏｌａｋｉｓ（２０００）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，１０：３３５〜４２；Ｙｅｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｇｅｎｅ，２４８：１〜１４；Ｌａｒｓｅｎ  ａｎｄ  Ｗａｎｇ（２００２）Ｊ．Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｒｅｓ．，１：４１１〜９）。ＳＵＭＯ系もまた述べられている（Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，２：２０２〜１０）。ＳＵＭＯ（ｓｍａｌｌ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ（低分子ユビキチン様修飾因子））は、公開文献ではＳｅｎｔｒｉｎ，ＳＭＴ３，ＰＩＣ１，ＧＭＰ１，およびＵＢＬ１としてもまた知られているＵｂｌである。ＳＵＭＯ経路は真核生物界の全般に存在し、ＳＵＭＯタンパク質は酵母からヒトまでに渡って非常に良く保存されている（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１９１：２５７〜６８）。ユビキチンとＳＵＭＯとの間の全体の配列相同性は１８％に過ぎないにもかかわらず、核磁気共鳴（ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ：ＮＭＲ）による構造決定によって、これら２つのタンパク質は、密度の高い球状折り畳みと、１つのアルファ−ヘリックスで囲まれたベータ−シートによって特徴付けられる、共通の３次元構造を有することが明らかになった（Ｂａｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２８０：２７５〜８６；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７５：１４１０２〜６）。ＳＵＭＯのシャペロン特性の解析によって、不安定なタンパク質のＮ末端へのＳＵＭＯの連結が、折りたたみの核として働いてタンパク質を凝集から保護することが可能であることが明らかになった。
全てのＳＵＭＯ遺伝子は、保存されたＣ末端のＧｌｙ−Ｇｌｙモチーフを超えて伸長した短いＣ末端配列を有する前駆体タンパク質をコードしている（Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，２：２０２〜１０）。前記伸長配列は長さに変化があり、典型的には２〜１２アミノ酸である。細胞内でのＳＵＭＯ化の前に、ＳＵＭＯプロテアーゼ（加水分解酵素としてもまた知られる）がＣ末端の伸長部を除去する（Ｃｏｌｏｍａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１５２：８９〜１０４）。標的タンパク質のリシン残基のイプシロン−アミノ基へのＳＵＭＯのＣ末端の結合はＳＵＭＯ化として知られる。細胞タンパク質のＳＵＭＯ化は、核移行、シグナル伝達、ストレス応答、および細胞周期の進行を制御すると提唱されている（Ｋｒｅｔｚ−Ｒｅｍｙ  ａｎｄ  Ｔａｎｇｕａｙ（１９９９）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７７：２９９〜３０９）。ＳＵＭＯが様々な細胞内コンパートメント間のタンパク質移行のシグナルを送るという可能性は非常に高いが、ＳＵＭＯのこの機能の正確な機構の詳細は判明していない。ＳＵＭＯ経路とユビキチン経路との間の類似性は、これら２つのタンパク質修飾による異なる効果を考えれば、注目に値することである（Ｇｏｅｔｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｂａｙｅｒ（２００２）Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．，７：ａ１４８〜６２）。
ＮｕｓＡは、おそらくその大きなサイズによって、パートナーとなるタンパク質の可溶性を促進する、もう１つの融合タグである（Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，６５：３８２〜８）。グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ  Ｓ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ：ＧＳＴ）（Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎ（１９８８）Ｇｅｎｅ，６７：３１〜４０）、およびマルトース結合タンパク質（ｍａｌｔｏｓｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ：ＭＢＰ）（ｄｉＧｕａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｇｅｎｅ，６７：２１〜３０）の融合タグもまた、融合パートナーの発現および生産を増強することが提唱されている。しかし、ＧＳＴが２
量体を形成するように用いられ、タンパク質の可溶性を阻害する可能性がある場合には、発現量増強は必ずしも観察されない。このような全ての融合システムにおけるもう１つの問題は、所望のタンパク質を融合から除去する必要があるかもしれないことである。この問題を回避するために、Ｘａ因子、トロンビン、エンテロキナーゼ、またはＴｅｖプロテアーゼ部位などのプロテアーゼ部位を融合タグの下流に作製することが多い。しかし、それらプロテアーゼは融合／標的タンパク質中に存在する短い特異的なアミノ酸配列を認識するため、不適切な切断がしばしば観察される（Ｊｏｎａｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，３５：９１〜１０５）。本発明は、これら問題点を回避する。さらに、ＳＵＭＯプロテアーゼとは異なり、Ｔｅｖプロテアーゼは、融合タンパク質の切断後に目的のタンパク質のＮ末端へ望ましくない配列を残す配列特異的プロテアーゼである。それとは対照的にＳＵＭＯプロテアーゼは、ＳＵＭＯのＣ末端からあらゆる配列を切断し、融合タンパク質の望みのＮ末端（プロリンを除く）を生成する。__
この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、以下のものがある（国際出願日以降国際段階で引用された文献及び他国に国内移行した際に引用された文献を含む）。
【先行技術文献】  
【特許文献】
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２００６／０７３９７６号
【非特許文献】
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
【非特許文献１】  ＫＯＮＯ，Ｋ．ｅｔ  ａｔ．Ｔｈｅ  Ｍｏｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｂａｃｈ２  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｆｏｃｉ  ｉｓ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ＳＵＭＯ−１  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．２００８，Ｖｏｌ  ３１４，ｐａｇｅｓ  ９０３−９１３．
【非特許文献２】  ＫＩＭ  ＫＥＵＮ  ＩＬ  ＥＴ  ＡＬ："Ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔａｇ，ＳＵＭＯ：ｉｔｓ  ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ"ＪＯＵＲＮＡＬ  ＯＦ  ＣＥＬＬＵＬＡＲ  ＰＨＹＳＩＯＬＯＧＹ，ＷＩＬＥＹ  ＬＩＳＳ，ＮＥＷ  ＹＯＲＫ，ＮＹ，ＵＳ  ＬＮＫＤ−ＤＯＩ：１０．１００２／ＪＣＰ．１０１００，ｖｏｌ．１９１，ｎｏ．３，１  Ｊｕｎｅ  ２００２（２００２−０６−０１），ｐａｇｅｓ  ２５７−２６８
【非特許文献３】  ＭＡＲＢＬＥＳＴＯＮＥ  Ｊｅｆｆｒｅｙ  Ｇ  ＥＴ  ＡＬ："Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ＳＵＭＯ  ｆｕｓｉｏｎ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ｗｉｔｈ  ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ  ｇｅｎｅ  ｆｕｓｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍｓ：Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ＳＵＭＯ"ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ，ＣＡＭＢＲＩＤＧＥ  ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ  ＰＲＥＳＳ，ＣＡＭＢＲＩＤＧＥ，ＧＢ  ＬＮＫＤ−ＤＯＩ：１０．１１１０／ＰＳ．０５１８１２７０６，ｖｏｌ．１５，ｎｏ．１，１  Ｊａｎｕａｒｙ  ２００６（２００６−０１−０１），ｐａｇｅｓ  １８２−１８９
【非特許文献４】  ＭＡＬＡＫＨＯＶ  ＭＩＣＨＡＥＬ  Ｐ  ＥＴ  ＡＬ："ＳＵＭＯ  ｆｕｓｉｏｎｓ  ａｎｄ  ＳＵＭＯ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｆｏｒ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ"ＪＯＵＲＮＡＬ  ＯＦ  ＳＴＲＵＣＴＵＲＡＬ  ＡＮＤ  ＦＵＮＣＴＩＯＮＡＬ  ＧＥＮＯＭＩＣＳ，ｖｏｌ．５，ｎｏ．１−２，２００４，ｐａｇｅｓ  ７５−８６
【非特許文献５】  ＰＥＲＯＵＴＫＡ  ＲＡＹＭＯＮＤ  Ｊ  ＥＴ  ＡＬ："Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｕｓｉｎｇ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ＳＵＭＯ  ｆｕｓｉｏｎｓ：Ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ａ（２）"ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＣＩＥＮＣＥ，ｖｏｌ．１７，ｎｏ．９，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００８（２００８−０９），ｐａｇｅｓ  １５８６−１５９５
【非特許文献６】  ＬＩＵ  ＬＩ  ＥＴ  ＡＬ："Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ／ｉｎｓｅｃｔ  ｃｅｌｌ  ｓｙｓｔｅｍ  ｕｓｉｎｇ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ＳＵＭＯ  ｆｕｓｉｏｎｓ．"ＰＲＯＴＥＩＮ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＡＮＤ  ＰＵＲＩＦＩＣＡＴＩＯＮ  ＮＯＶ  ２００８  ＬＮＫＤ−  ＰＵＢＭＥＤ：１８７１３６５０，ｖｏｌ．６２，ｎｏ．１，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００８（２００８−１１），ｐａｇｅｓ  ２１−２８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】