【手続補正書】
【提出日】平成23年10月3日(2011.10.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６７】
本発明は、上述もしくは下述の態様および実施形態の任意の組み合わせを意図している。例えば、分化したＲＰＥ細胞および成熟ＲＰＥ細胞の任意の組み合わせを含むＲＰＥ細胞の製剤は、本明細書で説明される疾患および状態のうちのいずれかの治療で使用することができる。同様に、出発材料としてヒト胚幹細胞を使用した、ＲＰＥ細胞を生成するための本明細書で説明される方法は、出発材料として任意のヒト多能性幹細胞を使用して同様に実行され得る。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
実質的に精製した網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞の培養物を生成する方法であって、
ａ）ヒト胚幹細胞を提供する工程と、
ｂ）富栄養性で低タンパク質の培地内で、胚様体として前記ヒト性幹細胞を培養する工程と、
ｃ）富栄養性で低タンパク質の培地内で、付着培養物として前記胚様体を培養する工程と、
ｄ）培地が無血清のＢ−２７サプリメントを含有しない、富栄養性で低タンパク質の培地内で、前記（ｃ）の細胞の付着培養物を培養する工程と、
ｅ）高密度体細胞培養物の成長を支持することができ、それによってＲＰＥ細胞が前記細胞の培養物内に現れる培地内で、前記（ｄ）の細胞を培養する工程と、
ｆ）前記（ｅ）の培養物と酵素とを接触させる工程と、
ｇ）前記培養物から前記ＲＰＥ細胞を選択して、前記ＲＰＥ細胞を、成長因子を補充した培地を含有する別個の培養物に移入して、ＲＰＥ細胞の富化培養物を生成する工程と、
ｈ）前記ＲＰＥ細胞の富化培養物を繁殖させて、実質的に精製したＲＰＥ細胞の培養物を生成する工程と、
を含む、方法。
（項目２）
前記ＲＰＥ細胞は、成熟ＲＰＥ細胞の培養物を生成するようにさらに培養される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記（ｂ）および／または（ｃ）の培地は、無血清のＢ−２７サプリメントを含有する、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記細胞は、ＶＰ−ＳＦＭ、ＥＧＭ−２、およびＭＤＢＫ−ＭＭから成る群より選択される培地内で培養される、項目２に記載の方法。
（項目５）
前記（ｇ）の成長因子は、ＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、および組み換え型のインスリン様成長因子から成る群より選択される、項目２に記載の方法。
（項目６）
前記培地は、ヘパリン、ヒドロコルチゾン、もしくはアスコルビン酸のうちの１つ以上を含有する、項目２に記載の方法。
（項目７）
前記（ｂ）の細胞は、７〜１４日間培養される、項目１〜６のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
前記（ｃ）の細胞は、７日間培養される、項目１〜７のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
前記（ｄ）の細胞は、７〜１０日間培養される、項目１〜８のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記（ｅ）の細胞は、１４〜２１日間培養される、項目１〜９のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
前記（ｂ）の培地は、ＭＤＢＫ−ＧＭ、ＯｐｔｉＰｒｏ  ＳＦＭ、およびＶＰ  ＳＦＭから成る群より選択される、項目１〜１０のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
前記（ｃ）の培地は、ＭＤＢＫ−ＧＭ、ＯｐｔｉＰｒｏ  ＳＦＭ、およびＶＰ  ＳＦＭから成る群より選択される、項目１〜１１のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
前記（ｄ）の培地は、ＭＤＢＫ−ＧＭ、ＯｐｔｉＰｒｏ  ＳＦＭ、およびＶＰ  ＳＦＭから成る群より選択される、項目１〜１２のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
前記（ｅ）の培地は、ＭＤＢＫ−ＭＭ、ＯｐｔｉＰｒｏ  ＳＦＭ、およびＶＰ  ＳＦＭから成る群より選択される、項目１〜１３のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
前記（ｇ）の培地は、ＥＧＭ−２およびＭＤＢＫ−ＭＭから成る群より選択される、項目１〜１４のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目１６）
前記（ｇ）の成長因子は、ＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、および組み換え型のインスリン様成長因子から成る群より選択される、項目１〜１５のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
前記（ｇ）の培地は、ヘパリン、ヒドロコルチゾン、もしくはアスコルビン酸のうちの１つ以上を含有する、項目１〜１６のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記（ｆ）の酵素は、トリプシン、コラゲナーゼ、およびディスパーゼから成る群より選択される、項目１〜１７のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
前記ｈＥＳ細胞は、複雑さを低減したＨＬＡ抗原を有する、項目１〜１８のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目２０）
前記方法は、適正製造基準（ＧＭＰ）に従って実施される、項目１〜１９のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
成熟網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞を生成する方法であって、
ａ）ヒト胚幹細胞を提供する工程と、
ｂ）富栄養性で低タンパク質の培地内で、胚様体として前記ヒト胚幹細胞を培養する工程と、
ｃ）富栄養性で低タンパク質の培地内で、付着培養物として前記ヒト胚幹細胞を培養する工程と、
ｄ）培地が無血清のＢ−２７サプリメントを含有しない、富栄養性で低タンパク質の培地内で、前記工程（ｃ）の細胞の付着培養物を培養する工程と、
ｅ）高密度体細胞培養物の成長を支持することができ、それによってＲＰＥ細胞が前記細胞の培養物内に現れる培地内で、前記（ｄ）の細胞を培養する工程と、
ｆ）前記（ｅ）の培養物と酵素とを接触させる工程と、
ｇ）前記ＲＰＥ細胞を選択して、前記ＲＰＥ細胞を、成長因子を補充した培地を含有する別個の培養物に移入して、ＲＰＥ細胞の富化培養物を生成する工程と、
ｈ）前記ＲＰＥ細胞の富化培養物を繁殖させる工程と、
ｉ）前記ＲＰＥ細胞の富化培養物を培養して、成熟網膜色素上皮細胞を生成して、成熟ＲＰＥ細胞を生成する工程と、
を含む、方法。
（項目２２）
前記（ｂ）および／または（ｃ）の培地は、無血清のＢ−２７サプリメントを含有する、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記（ｂ）の細胞は、７〜１４日間培養される、項目２１もしくは２２に記載の方法。
（項目２４）
前記（ｃ）の細胞は、７日間培養される、項目２１〜２３のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
前記（ｄ）の細胞は、７〜１０日間培養される、項目２１〜２４のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
前記（ｅ）の細胞は、（ｅ）１４〜２１日間培養される、項目２１〜２５のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
前記（ｂ）の培地は、ＭＤＢＫ−ＧＭ、ＯｐｔｉＰｒｏ  ＳＦＭ、およびＶＰ  ＳＦＭから成る群より選択される、項目２１〜２６のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
前記（ｃ）の培地は、ＭＤＢＫ−ＧＭ、ＯｐｔｉＰｒｏ  ＳＦＭ、およびＶＰ  ＳＦＭから成る群より選択される、項目２１〜２７のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
前記（ｄ）の培地は、ＭＤＢＫ−ＧＭ、ＯｐｔｉＰｒｏ  ＳＦＭ、およびＶＰ  ＳＦＭから成る群より選択される、項目２１〜２８のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目３０）
前記（ｅ）の培地は、ＭＤＢＫ−ＭＭ、ＯｐｔｉＰｒｏ  ＳＦＭ、およびＶＰ  ＳＦＭから成る群より選択される、項目２１〜２９のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目３１）
前記（ｇ）の培地は、ＥＧＭ−２およびＭＤＢＫ−ＭＭから成る群より選択される、項目２１〜３０のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
前記（ｇ）の成長因子は、ＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、および組み換え型のインスリン様成長因子から成る群より選択される、項目２１〜３１のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
前記（ｉ）の細胞は、ＶＰ−ＳＦＭ、ＥＧＭ−２、およびＭＤＢＫ−ＭＭから成る群より選択される培地内で培養される、項目２１〜３２のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目３４）
前記（ｇ）もしくは（ｉ）の培地は、ヘパリン、ヒドロコルチゾン、もしくはアスコルビン酸のうちの１つ以上を含有する、項目２１〜３３のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目３５）
前記（ｆ）の酵素は、トリプシン、コラゲナーゼ、およびディスパーゼから成る群より選択される、項目２１〜３４のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目３６）
前記ｈＥＳ細胞は、複雑さを低減したＨＬＡ抗原を有する、項目２１〜３５のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目３７）
前記方法は、適正製造基準（ＧＭＰ）に従って実行される、項目２１〜３６のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目３８）
網膜変性を特徴とする状態を治療もしくは予防する方法であって、ＲＰＥ細胞を含む有効量の製剤を、それを必要とする対象に投与する工程を含み、ＲＰＥ細胞が、項目１〜３７もしくは５３〜７６のうちのいずれか１項に記載の方法による、ヒト多能性幹細胞に由来する、方法。
（項目３９）
前記状態は、スタルガルト黄斑ジストロフィ、加齢性黄斑変性症、もしくは網膜色素変性症から成る群より選択される、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記製剤は、懸濁液、マトリクス、もしくは基質内に移植される、項目３８もしくは３９に記載の方法。
（項目４１）
前記製剤は、注射によって眼の網膜下腔内に投与される、項目３８〜４０のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目４２）
約１０４〜約１０６個のＲＰＥ細胞が前記対象に投与される、項目３８〜４１のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目４３）
対象における網膜電図応答、視運動視力閾値、もしくは輝度閾値を測定することによって、治療もしくは予防の有効性を監視する工程をさらに含む、項目３８〜４２のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目４４）
有効量のＲＰＥ細胞を含む、網膜変性を特徴とする状態を治療もしくは予防するための医薬製剤であって、ＲＰＥ細胞が、項目１〜３７もしくは５３〜７６のうちのいずれか１項に記載の方法による、ヒト多能性幹細胞に由来する、医薬製剤。
（項目４５）
前記状態は、スタルガルト黄斑ジストロフィ、加齢性黄斑変性症、もしくは網膜色素変性症から成る群より選択される、項目４４に記載の製剤。
（項目４６）
組成物は、眼の網膜下腔への投与のために製剤化される、項目４４もしくは４５に記載の製剤。
（項目４７）
前記組成物は、懸濁液、マトリクス、もしくは基質の形態である、項目４４〜４６のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目４８）
前記組成物は、少なくとも１０４個のＲＰＥ細胞を含む、項目４４〜４７のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目４９）
前記組成物は、少なくとも１０５個のＲＰＥ細胞を含む、項目４４〜４８のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目５０）
前記組成物は、少なくとも１０６個のＲＰＥ細胞を含む、項目４４〜４９のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目５１）
前記ＲＰＥ細胞は、成熟ＲＰＥ細胞を含む、項目４４〜５０のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目５２）
前記ＲＰＥ細胞は、本質的に成熟ＲＰＥ細胞で構成される、項目４４〜５１のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目５３）
実質的に精製した網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）の培養物を生成する方法であって、
ａ）ヒト多能性幹細胞を提供する工程と、
ｂ）富栄養性で低タンパク質の培地内で、前記ヒト多能性幹細胞を培養する工程と、
ｃ）富栄養性で低タンパク質の培地内で、付着培養物として前記ヒト多能性幹細胞を培養する工程と、
ｄ）培地が無血清のＢ−２７サプリメントを含有しない、富栄養性で低タンパク質の培地内で、前記（ｃ）の細胞の付着培養物を培養する工程と、
ｅ）高密度体細胞培養物の成長を支持することができ、それによってＲＰＥ細胞が前記細胞の培養物内に現れる培地内で、前記（ｄ）の細胞を培養する工程と、
ｆ）前記（ｅ）の培養物と酵素とを接触させる工程と、
ｇ）前記培養物から前記ＲＰＥ細胞を選択して、前記ＲＰＥ細胞を、成長因子を補充した培地を含有する別個の培養物に移入して、ＲＰＥ細胞の富化培養物を生成する工程と、
ｈ）前記ＲＰＥ細胞の富化培養物を繁殖させて、実質的に精製したＲＰＥ細胞の培養物を生成する工程と、
を含む、方法。
（項目５４）
前記ＲＰＥ細胞は、成熟ＲＰＥ細胞の培養物を生成するようにさらに培養される、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記ヒト多能性幹細胞は、人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞である、項目５３もしくは５４に記載の方法。
（項目５６）
工程（ｂ）において、前記ヒト多能性幹細胞が、凝集物として培養される、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
前記ヒト多能性幹細胞は、ヒト胚幹細胞である、項目５３〜５６のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目５８）
工程（ｂ）において、前記ヒト胚幹細胞が、胚様体として培養される、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記（ｂ）および／または（ｃ）の培地は、無血清のＢ−２７サプリメントを含有する、項目５３〜５８のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目６０）
前記細胞は、ＶＰ−ＳＦＭ、ＥＧＭ−２、およびＭＤＢＫ−ＭＭから成る群より選択される培地内で培養される、項目５４に記載の方法。
（項目６１）
前記（ｇ）の成長因子は、ＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、および組み換え型のインスリン様成長因子から成る群より選択される、項目５４に記載の方法。
（項目６２）
前記培地は、ヘパリン、ヒドロコルチゾン、もしくはアスコルビン酸のうちの１つ以上を含有する、項目５４に記載の方法。
（項目６３）
前記（ｂ）の細胞は、７〜１４日間培養される、項目５３〜６２のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目６４）
前記（ｃ）の細胞は、７日間培養される、項目５３〜６３のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目６５）
前記（ｄ）の細胞は、７〜１０日間培養される、項目５３〜６４のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目６６）
前記（ｅ）の細胞は、１４〜２１日間培養される、項目５３〜６５のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目６７）
前記（ｂ）の培地は、ＭＤＢＫ−ＧＭ、ＯｐｔｉＰｒｏ  ＳＦＭ、およびＶＰ  ＳＦＭから成る群より選択される、項目５３〜６６のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目６８）
前記（ｃ）の培地は、ＭＤＢＫ−ＧＭ、ＯｐｔｉＰｒｏ  ＳＦＭ、およびＶＰ  ＳＦＭから成る群より選択される、項目５３〜６７のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目６９）
前記（ｄ）の培地は、ＭＤＢＫ−ＧＭ、ＯｐｔｉＰｒｏ  ＳＦＭ、およびＶＰ  ＳＦＭから成る群より選択される、項目５３〜６８のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目７０）
前記（ｅ）の培地は、ＭＤＢＫ−ＭＭ、ＯｐｔｉＰｒｏ  ＳＦＭ、およびＶＰ  ＳＦＭから成る群より選択される、項目５３〜６９のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目７１）
前記（ｇ）の培地は、ＥＧＭ−２およびＭＤＢＫ−ＭＭから成る群より選択される、項目５３〜７０のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目７２）
前記（ｇ）の成長因子は、ＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、および組み換え型のインスリン様成長因子から成る群より選択される、項目５３〜７１のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目７３）
前記（ｇ）の培地は、ヘパリン、ヒドロコルチゾン、もしくはアスコルビン酸のうちの１つ以上を含有する、項目５３〜７２のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目７４）
前記（ｆ）の酵素は、トリプシン、コラゲナーゼ、およびディスパーゼから成る群より選択される、項目５３〜７３のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目７５）
前記多能性細胞は、複雑さを低減したＨＬＡ抗原を有する、項目５３〜７４のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目７６）
前記方法は、適正製造基準（ＧＭＰ）に従って実行される、項目５３〜７５のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目７７）
網膜変性を特徴とする状態を治療もしくは予防する方法であって、ＲＰＥ細胞を含む有効量の製剤を、それを必要とする対象に投与する工程を含み、ＲＰＥ細胞が、ヒト人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞に由来する、方法。
（項目７８）
前記状態は、スタルガルト黄斑ジストロフィ、加齢性黄斑変性症、もしくは網膜色素変性症から成る群より選択される、項目７７に記載の方法。
（項目７９）
前記製剤は、懸濁液、マトリクス、もしくは基質内に移植される、項目７７もしくは７８に記載の方法。
（項目８０）
前記製剤は、注射によって前記眼の前記網膜下腔内に投与される、項目７７〜７９のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目８１）
約１０４〜約１０６個のＲＰＥ細胞が前記対象に投与される、項目７７〜８０のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目８２）
対象における網膜電図応答、視運動視力閾値、もしくは輝度閾値を測定することによって、治療もしくは予防の有効性を監視する工程をさらに含む、項目７７〜８１のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目８３）
有効量のＲＰＥ細胞を含む、網膜変性を特徴とする状態を治療もしくは予防するための医薬製剤であって、ＲＰＥ細胞が、ヒト人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞に由来する、医薬製剤。
（項目８４）
前記状態は、スタルガルト黄斑ジストロフィ、加齢性黄斑変性症、もしくは網膜色素変性症から成る群より選択される、項目８３に記載の製剤。
（項目８５）
前記組成物は、眼の網膜下腔への投与のために製剤化される、項目８３もしくは８４に記載の製剤。
（項目８６）
前記組成物は、懸濁液、マトリクス、もしくは基質の形態である、項目８３〜８５のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目８７）
前記組成物は、少なくとも１０４個のＲＰＥ細胞を含む、項目８３〜８６のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目８８）
前記組成物は、少なくとも１０５個のＲＰＥ細胞を含む、項目８３〜８７のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目８９）
前記組成物は、少なくとも１０６個のＲＰＥ細胞を含む、項目８３〜８８のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目９０）
前記ＲＰＥ細胞は、成熟ＲＰＥ細胞を含む、項目８３〜８９のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目９１）
前記ＲＰＥ細胞は、本質的に成熟ＲＰＥ細胞で構成される、項目８３〜９０のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目９２）
実質的に精製したヒトＲＰＥ細胞の製剤であって、前記ＲＰＥ細胞が、ＲＰＥ−６５、ベストロフィン、ＰＥＤＦ、ＣＲＡＬＢＰ、Ｏｔｘ２、およびＭｉｔ−Ｆのうちの１つ以上を発現する、製剤。
（項目９３）
前記製剤は、少なくとも７５％のＲＰＥ細胞を含む、項目９２に記載の製剤。
（項目９４）
前記ＲＰＥ細胞は、少なくとも３０％の成熟ＲＰＥ細胞を含む、項目９２に記載の製剤。
（項目９５）
前記ＲＰＥ細胞は、ＲＰＥ−６５、ベストロフィン、ＰＥＤＦ、ＣＲＡＬＢＰ、Ｏｔｘ２、およびＭｉｔ−Ｆのうちの２つ以上を発現する、項目９２〜９４のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目９６）
前記ＲＰＥ細胞は、ＲＰＥ−６５、ベストロフィン、ＰＥＤＦ、ＣＲＡＬＢＰ、Ｏｔｘ２、およびＭｉｔ−Ｆのうちの３つ以上を発現する、項目９５に記載の製剤。
（項目９７）
前記ＲＰＥ細胞は、ＲＰＥ−６５、ベストロフィン、ＰＥＤＦ、ＣＲＡＬＢＰ、Ｏｔｘ２、およびＭｉｔ−Ｆのうちの４つ以上を発現する、項目９６に記載の製剤。
（項目９８）
前記ＲＰＥ細胞は、ＲＰＥ−６５、ベストロフィン、ＰＥＤＦ、ＣＲＡＬＢＰ、Ｏｔｘ２、およびＭｉｔ−Ｆのうちの５つ以上を発現する、項目９７に記載の製剤。
（項目９９）
前記ＲＰＥ細胞は、ＲＰＥ−６５、ベストロフィン、ＰＥＤＦ、ＣＲＡＬＢＰ、Ｏｔｘ２、およびＭｉｔ−Ｆを発現する、項目９８に記載の製剤。
（項目１００）
前記ＲＰＥ細胞は、ＥＳ細胞遺伝子Ｏｃｔ−４、ｎａｎｏｇ、および／またはＲｅｘ−１の実質的な発現が不足する、項目９２〜９９のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１０１）
前記発現は、ｍＲＮＡ発現である、項目９２〜１００のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１０２）
前記発現は、タンパク質発現である、項目９２〜１００のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１０３）
前記発現は、ｍＲＮＡおよびタンパク質発現の両方を含む、項目９２〜１００のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１０４）
前記ＲＰＥ細胞は、ｐａｘ−２、ｐａｘ−６、チロシナーゼのうちの１つ以上を発現する、項目９２〜１００のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１０５）
前記製剤は、成熟ＲＰＥ細胞を含み、前記成熟ＲＰＥ細胞は、ｐａｘ−２、ｐａｘ−６、およびチロシナーゼを発現する、項目９２〜１００のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１０６）
前記ＲＰＥ細胞は、表２に列記される遺伝子のうちの１つ以上を発現し、ヒトＥＳ細胞での発現と比較して、前記ＲＰＥ細胞で前記１つ以上の遺伝子の発現が増加する、項目９２〜１０５のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１０７）
前記ＲＰＥ細胞は、表３に列記される遺伝子のうちの１つ以上を発現し、ヒトＥＳ細胞での発現と比較して、前記ＲＰＥ細胞で前記１つ以上の遺伝子の発現が減少する、項目９２〜１０６のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１０８）
前記製剤は、少なくとも１×１０５個のＲＰＥ細胞を含む、項目９２〜１０７のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１０９）
前記製剤は、少なくとも１×１０６個のＲＰＥ細胞を含む、項目１０８に記載の製剤。
（項目１１０）
前記製剤は、ヒトＥＳ細胞から分化される、項目９２〜１０９のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１１１）
前記製剤は、ヒト人工多能性幹細胞から分化される、項目９２〜１０９のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１１２）
前記製剤は、項目１〜３７もしくは５３〜７６のうちのいずれか１項に記載の方法を使用して、ヒト多能性幹細胞から分化される、項目９２〜１０９のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１１３）
前記製剤は、実質的にウイルス、細菌、および／または菌類の汚染もしくは感染が無い、項目９２〜１１２のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１１４）
前記製剤は、ＧＭＰに準拠する、項目９２〜１１３のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１１５）
薬剤として許容される担体内で製剤化される、項目９２〜１１４のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１１６）
前記眼への投与のために製剤化される、項目１１５に記載の製剤。
（項目１１７）
前記網膜下腔または角膜への投与のために製剤化される、項目１１６に記載の製剤。
（項目１１８）
前記ＲＰＥ細胞は、移植の際に前記網膜内に組み込むことができる、機能ＲＰＥ細胞である、項目９２〜１１７のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１１９）
少なくとも１×１０５個のヒトＲＰＥ細胞を含む凍結保存製剤であって、前記製剤は、ヒト多能性幹細胞に由来する実質的に精製したヒトＲＰＥ細胞の製剤であり、前記ＲＰＥ細胞は、ＲＰＥ−６５、ベストロフィン、ＰＥＤＦ、ＣＲＡＬＢＰ、Ｏｔｘ２、およびＭｉｔ−Ｆを発現する、製剤。
（項目１２０）
前記ヒトＲＰＥ細胞は、ヒト胚幹細胞に由来する、項目１１９に記載の製剤。
（項目１２１）
前記ヒトＲＰＥ細胞は、人工多能性幹細胞に由来する、項目１１９に記載の製剤。
（項目１２２）
前記ＲＰＥ細胞のうちの少なくとも６５％は、解凍後も生存度を維持する、項目１１９〜１２１のうちのいずれか１項に記載の製剤。
（項目１２３）
治療を必要とする患者の状態を治療する薬物の製造における、項目９２〜１１８のうちのいずれか１項に記載の製剤の使用。
（項目１２４）
網膜変性を特徴とする状態を治療もしくは予防する方法であって、項目９２〜１１８のうちのいずれか１項に記載の有効量の製剤を、それを必要とする対象に投与する工程を含み、ＲＰＥ細胞が、ヒト多能性幹細胞に由来する、方法。
（項目１２５）
前記状態は、スタルガルト黄斑ジストロフィ、加齢性黄斑変性症、もしくは網膜色素変性症から成る群より選択される、項目１２４に記載の方法。
（項目１２６）
前記製剤は、懸濁液、マトリクス、もしくは基質内に移植される、項目１２４もしくは１２５に記載の方法。
（項目１２７）
前記製剤は、注射によって前記眼の前記網膜下腔内に投与される、項目１２４〜１２６のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目１２８）
約１０４〜約１０６個のＲＰＥ細胞が前記対象に投与される、項目１２４〜１２７のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目１２９）
対象における網膜電図応答、視運動視力閾値、もしくは輝度閾値を測定することによって、治療もしくは予防の有効性を監視する工程をさらに含む、項目１２４〜１２８のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目１３０）
ヒト多能性幹細胞から分化される実質的に精製したヒトＲＰＥ細胞の製剤であって、前記ＲＰＥ細胞は、ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルにおいて、ＲＰＥ−６５、ベストロフィン、ＰＥＤＦ、ＣＲＡＬＢＰ、Ｏｔｘ２を発現し、前記細胞は、Ｏｃｔ−４、ｎａｎｏｇ、およびＲｅｘ−１の実質的な発現が不足する、製剤。
（項目１３１）
前記ＲＰＥ細胞は、分化したＲＰＥ細胞と成熟分化したＲＰＥ細胞とを含み、少なくとも前記分化したＲＰＥ細胞は、ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルにおいて、ｐａｘ−２、ｐａｘ−６、チロシナーゼをさらに発現する、項目１３０に記載の製剤。
（項目１３２）
前記ＲＰＥ細胞は、ヒト胚幹細胞から分化される、項目１３０もしくは１３１に記載の製剤。
（項目１３３）
前記ＲＰＥ細胞は、ヒト人工多能性幹細胞から分化される、項目１３０もしくは１３１に記載の製剤。
（項目１３４）
前記ＲＰＥ細胞は、分化したＲＰＥ細胞と成熟分化したＲＰＥ細胞とを含み、少なくとも前記分化したＲＰＥ細胞は、ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルにおいて、ｐａｘ−２、ｐａｘ−６、チロシナーゼをさらに発現する、項目１３０〜１３３のうちのいずれか１項に記載の製剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）富栄養性で低タンパク質の培地内で、ヒト多能性細胞を培養して、胚様体を形成する工程と、
ｂ）富栄養性で低タンパク質の培地内で、付着培養物として前記胚様体を培養する工程と、
ｃ）高密度体細胞培養物の成長を支持することができ、それによってＲＰＥ細胞が前記細胞の培養物内に現れる培地内で、工程（ｂ）の細胞を培養する工程と、
ｄ）工程（ｃ）の培養物からＰＲＥ細胞を選択する工程と、
ｅ）ＰＲＥ前駆細胞の増殖を促進する一つ以上の因子を含む培地内で、工程（ｄ）で選択された前記ＰＲＥ細胞を培養する工程と、
ｆ）ＰＲＥ細胞の形成を促進する培地内で、工程（ｅ）の培養物を培養して、それによりＰＲＥ細胞を含む培養物を生成する工程と、
を含む、方法。
【請求項２】
工程（ｆ）のＲＰＥ細胞を培養して、成熟ＲＰＥ細胞の培養物を生成する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程（ａ）の培地は、無血清のＢ−２７サプリメントを含有し、工程（ｂ）の培地は、無血清のＢ−２７サプリメントを含有しない、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
工程（ｃ）の培養培地は、低タンパク質の培地または無タンパク質の培地である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
工程（ｅ）の因子は、ＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＶＥＧＦ、インスリン様成長因子、ヘパリン、ヒドロコルチゾン、およびアスコルビン酸から成る群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
工程（ｃ）の細胞は、１４日間以上培養される、請求項１〜５のうちのいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
工程（ｄ）が、工程（ｃ）の培養物を、ＰＲＥ細胞を前記付着培養物から剥離させる酵素と接触させる工程、および剥離された色素細胞または色素細胞を含む剥離された細胞クラスターを選択する工程を含む、請求項１〜６のうちのいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記酵素は、コラゲナーゼＩＶ、およびディスパーゼから成る群より選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ヒト多能性幹細胞は、人工多能性幹（ｉＰＳ）細胞および胚性幹細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
工程（ｄ）が、色素細胞を含む前記選択された細胞クラスターを解離させて、それによりＰＲＥ細胞を含む単一の細胞懸濁物を形成する工程をさらに含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｅ）および（ｆ）のうちの一つ以上における培地が、アクチビンＡを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
網膜変性を特徴とする状態を治療もしくは予防するための組成物であって、ＲＰＥ細胞を含む有効量の製剤を含み、前記ＲＰＥ細胞が、請求項１〜９のうちのいずれか１項に記載の方法による、ヒト多能性細胞に由来する、組成物。
【請求項１３】
前記状態は、スタルガルト黄斑ジストロフィ、加齢性黄斑変性症、もしくは網膜色素変性症から成る群より選択される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
請求項１〜９のうちのいずれか１項に記載の方法による、ヒト多能性細胞に由来するヒトＰＲＥ細胞を含む、組成物。
【請求項１５】
前記製剤中のＰＲＥ細胞が、ＲＰＥ−６５、ベストロフィン、ＰＥＤＦ、ＣＲＡＬＢＰ、Ｏｔｘ２、Ｍｉｔ−Ｆ、ｐａｘ−２、ｐａｘ−６、およびチロシナーゼからなる群から選択される一つ以上のマーカーを発現し、該ＰＲＥ細胞は、Ｏｃｔ−４、ｎａｎｏｇ、およびＲｅｘ−１からなる群から選択される一つ以上のＥＳ細胞遺伝子の実質的な発現が不足する、請求項１４に記載の組成物。