【手続補正書】
【提出日】平成24年7月13日(2012.7.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の段階を含む、電気穿孔法：
（a）電気パルスの際、パルスの際の電気穿孔培地における導電率の増加を表す第一の時定数（t1）が、キャパシタの放電を表す第二の時定数（t2）以上となるように、電気穿孔パラメータを決定する段階であって、パルスの持続期間がt1またはt2のいずれかより短い、段階；および
（b）電気穿孔される試料に該電気穿孔パラメータ下で1つまたは複数の電気パルスを印加する段階。
【請求項２】
電気パルスが少なくとも1μ秒であるか、または電気パルスが大きさ0.001〜10,000Vの電気パルスである、請求項1記載の方法。
【請求項３】
以下の段階を含む、電気穿孔法：
（a）減衰する電気パルスの際に、電気穿孔培地における導電率の増加速度が電圧減衰速度より低くなるように、電気穿孔パラメータを決定する段階；および
（b）電気穿孔される試料に該電気穿孔パラメータ下で1つまたは複数の電気パルスを印加する段階。
【請求項４】
試料が、生細胞、細胞粒子、または脂質小胞を含み、特に、細胞が血液細胞である、請求項1または3記載の方法。
【請求項５】
化学物質または生物学的物質を細胞に負荷する段階をさらに含む方法であって、特に、生物学的物質が核酸または低分子である、請求項4記載の方法。
【請求項６】
電気穿孔パラメータが、緩衝液の導電率、電源キャパシタンス、電気穿孔チャンバーの幾何学、および電場強度を含む、請求項1または3記載の方法。
【請求項７】
（i）緩衝液の導電率が0〜3Ω/mである、
（ii）電源キャパシタンスが1〜106μFのあいだである、
（iii）電気穿孔チャンバーの幾何学が、長さ0.1〜100 cm、幅0.1〜10 cm、および間隙0.001〜10 cmの寸法を包含する、または
（iv）電場強度が0.01〜10 kV/cmのあいだであり、かつ、
方法が請求項1記載の方法である、請求項6記載の方法。
【請求項８】
電圧減衰速度が10μs〜10 sである、請求項3記載の方法。
【請求項９】
請求項1または3記載の方法を用いて産生された、電気穿孔された細胞、細胞粒子、または脂質小胞。
【請求項１０】
細胞粒子が血小板であり、かつ、方法が請求項1記載の方法である、請求項9記載の電気穿孔された細胞、細胞粒子、または脂質小胞。
【請求項１１】
少なくとも50、60、70、80、または90％の負荷効率を有する、電気穿孔された細胞、細胞粒子、または脂質小胞の集団。
【請求項１２】
請求項1または3記載の方法を実行するように構成された電気穿孔装置。
【請求項１３】
疾患を処置する方法において薬物または生物製剤もしくは他の生物活性分子のための送達媒体として使用するための、請求項9または11記載の細胞、粒子、または小胞。
【請求項１４】
疾患が、感染疾患、炎症疾患、癌、または血管閉塞疾患であり、特に、感染疾患が、マイコバクテリア感染症を含む細菌感染症、真菌感染症、寄生虫感染症、または、HIV感染症などのレトロウイルス感染症を含むウイルス感染症である、請求項13記載の使用のための細胞、粒子、または小胞。
【請求項１５】
薬物送達妨害のために処置効力が制限される、および／または処置の毒性が用量制限的である、請求項13記載の使用のための細胞、粒子、または小胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
本発明の他の目的、特色、および長所は以下の詳細な説明から明らかとなるであろう。しかし、本発明の趣旨および範囲内の様々な変化および改変が、本発明の詳細な記述から当業者に明らかとなるであろうことから、詳細な記述および具体的な実施例は、本発明の具体的な態様を示しているが、例証されているに過ぎないことを理解すべきである。
[本発明1001]
以下の段階を含む、電気穿孔法：
（a）電気パルスの際、パルスの際の電気穿孔培地における導電率の増加を表す第一の時定数（t1）が、キャパシタの放電を表す第二の時定数（t2）以上となるように、電気穿孔パラメータを決定する段階であって、パルスの持続期間がt1またはt2のいずれかより短い、段階；および
（b）電気穿孔される試料に該電気穿孔パラメータ下で1つまたは複数の電気パルスを印加する段階。
[本発明1002]
電気穿孔パラメータが、緩衝液の導電率、電源キャパシタンス、電気穿孔チャンバーの幾何学、および電場強度を含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
緩衝液の導電率が0〜3Ω/mのあいだである、本発明1002の方法。
[本発明1004]
電源キャパシタンスが1〜106μFのあいだである、本発明1002の方法。
[本発明1005]
電気穿孔チャンバーが、長さ0.1〜100 cm、幅0.1〜10 cm、および間隙0.001〜10 cmの寸法を有する、本発明1002の方法。
[本発明1006]
電場が0.01〜10 kV/cmのあいだである、本発明1002の方法。
[本発明1007]
電気パルスが少なくとも1μ秒である、本発明1001の方法。
[本発明1008]
電気パルスが大きさ0.001〜10,000ボルトの電気パルスである、本発明1001の方法。
[本発明1009]
試料が、生細胞、細胞粒子、または脂質小胞を含む、本発明1001の方法。
[本発明1010]
細胞が血液細胞である、本発明1009の方法。
[本発明1011]
化学または生物学的物質を細胞に負荷する段階をさらに含む、本発明1009の方法。
[本発明1012]
生物活性物質が、核酸または低分子である、本発明1011の方法。
[本発明1013]
本発明1001の方法を用いて産生された、電気穿孔された細胞、細胞粒子、または脂質小胞。
[本発明1014]
細胞粒子が血小板である、本発明1013の電気穿孔された細胞、細胞粒子、または脂質小胞。
[本発明1015]
少なくとも50、60、70、80、または90％の負荷効率を有する、電気穿孔された細胞、細胞粒子、または脂質小胞の集団。
[本発明1016]
本発明1001の方法を実行するように構成された電気穿孔装置。
[本発明1017]
以下の段階を含む、電気穿孔法：
（a）減衰する電気パルスの際に、電気穿孔培地における導電率の増加速度が電圧減衰速度より低くなるように、電気穿孔パラメータを決定する段階；および
（b）電気穿孔される試料に該電気穿孔パラメータ下で1つまたは複数の電気パルスを印加する段階。
[本発明1018]
電気穿孔パラメータが、緩衝液の導電率、電源キャパシタンス、電気穿孔チャンバーの幾何学、および電場強度を含む、本発明1017の方法。
[本発明1019]
電圧減衰速度が10μs〜10 sである、本発明1017の方法。
[本発明1020]
試料が、生細胞、細胞粒子、または脂質小胞を含む、本発明1017の方法。
[本発明1021]
細胞が血液細胞である、本発明1020の方法。
[本発明1022]
化学物質または生物学的物質を細胞に負荷する段階をさらに含む、本発明1020の方法。
[本発明1023]
生物活性物質が、核酸または低分子である、本発明1022の方法。
[本発明1024]
本発明1017の方法を用いて産生された、電気穿孔された細胞。
[本発明1025]
電気穿孔後、少なくとも50、60、70、80、または90％の負荷効率を有する、電気穿孔された細胞、細胞粒子、または脂質小胞の集団。
[本発明1026]
本発明1017の方法を実行するように構成された電気穿孔装置。
[本発明1027]
本発明1013、本発明1015、本発明1024、または本発明1025の粒子に含まれる薬物、生物製剤、または他の生物活性分子の有効量を投与することによって、疾患または病態を有するまたは有することが疑われる対象を処置する方法。
[本発明1028]
疾患が感染疾患である、本発明1027の方法。
[本発明1029]
感染疾患が、細菌、真菌、寄生虫、またはウイルス感染症である、本発明1028の方法。
[本発明1030]
細菌感染症が、マイコバクテリア感染症である、本発明1029の方法。
[本発明1031]
ウイルス感染症がレトロウイルス感染症である、本発明1027の方法。
[本発明1032]
レトロウイルス感染症がHIV感染症である、本発明1031の方法。
[本発明1033]
疾患が炎症疾患である、本発明1027の方法。
[本発明1034]
疾患が癌である、本発明1027の方法。
[本発明1035]
疾患が血管閉塞疾患である、本発明1027の方法。
[本発明1036]
薬物送達妨害のために処置効力が制限される、および／または処置の毒性が用量制限的である、本発明1027の方法。