【手続補正書】
【提出日】平成24年2月13日(2012.2.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ルシフェラーゼ配列および変異cAMP結合部位の異種アミノ酸配列を含む修飾ルシフェラーゼをコードするポリヌクレオチドであって、1以上の置換を欠くcAMP結合部位を有する対応するルシフェラーゼと比較して、前記変異cAMP結合部位が、前記修飾ルシフェラーゼの発光シグナルを増強する1以上の置換、細胞内のcAMP量を改変する薬剤に対する前記修飾ルシフェラーゼの反応を増強する1以上の置換、野生型cAMP結合ドメインの親和性を低下させる1以上の置換またはそれらの組み合わせを有する前記ポリヌクレオチド。
【請求項２】
前記修飾ルシフェラーゼにおけるルシフェラーゼ配列が、野生型ルシフェラーゼと比較して円順列変異された、請求項1記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記修飾ルシフェラーゼにおけるルシフェラーゼ配列が、
a.甲虫ルシフェラーゼ配列、
b.コメツキムシルシフェラーゼ配列、
c.ホタルルシフェラーゼ配列、または
d.花虫類ルシフェラーゼ配列
である、請求項1または2記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
前記cAMP結合部位が、
a.ホタルルシフェラーゼの残基2〜12、残基32〜53、残基70〜88、残基102〜126、残基139〜165、残基183〜203、残基220〜247、残基262〜273、残基303〜313、残基353〜408、残基485〜495もしくは残基535〜546、
b.コメツキムシルシフェラーゼの残基15〜30、残基112〜122、残基352〜362、残基371〜384、残基393〜414もしくは残基485〜495、
c.レニラ(Renilla)ルシフェラーゼの残基2〜12、残基26〜47、残基64〜74、残基86〜116、残基147〜157、残基223〜234もしくは残基301〜311、
d.ガウシア(Gaussia)ルシフェラーゼの残基43〜53、残基63〜73、残基79〜89、残基95〜105、残基105〜115、残基109〜119、残基121〜131もしくは残基157〜168、または
e.オプロフォラス(Oplophorus)ルシフェラーゼの残基45〜55もしくは残基79〜89
に対応する領域中に存在する、請求項1〜3のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
円順列変異が、
a.ホタルルシフェラーゼの残基2〜12、残基32〜53、残基70〜88、残基102〜126、残基139〜165、残基203〜193、残基220〜247、残基262〜273、残基303〜313、残基353〜408、残基485〜495、もしくは残基535〜546、
b.コメツキムシルシフェラーゼの残基15〜30、残基112〜122、残基352〜362、残基371〜384、残基393〜414もしくは残基485〜495、
c.レニラルシフェラーゼの残基26〜47、残基64〜74、残基85〜116、残基147〜157、残基223〜234もしくは残基301〜311、
d.オプロフォラスルシフェラーゼの残基45〜55もしくは残基79〜89、または
e.ガウシアルシフェラーゼの残基43〜53、残基63〜73、残基79〜89、残基95〜105、残基105〜115、残基109〜119、残基121〜131もしくは残基157〜168
に対応する領域中に存在する、請求項2記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記変異cAMP結合部位が、変異RIIβB配列またはRIα配列を含む、請求項1〜5のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
前記置換のうちの1以上が、配列番号4を有するRIIβBの残基266、282、284、286、296、316、333、338、382、389、404または407に対応する位置に存在する、請求項1〜6のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
前記変異cAMP結合部位のオープンリーディングフレームが、ペプチドリンカーをコードする核酸配列と少なくとも1つの末端で隣接する、請求項1〜7のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
前記ペプチドリンカーが、GSSGGSGGSGGG(配列番号41)、GSSSDSDSSAGS(配列番号42)、GSNDSSGGSEGG(配列番号43)、GSNGGFDSSEGG(配列番号44)、GSIRWSGLSGGD(配列番号45)、GSRGGSVYSEGG(配列番号46)、GSSEGSSDFGGD(配列番号47)、GSIVVSCSSEGG(配列番号48)、GSNWDSGCSREG(配列番号49)、GSNWDSGCSREC(配列番号50)、GSSGCTGDAGGS(配列番号51)、GSNWDSGCSRQC(配列番号52)、GSS/NS/D/GD/S/GS/FD/GS/GSA/EGS/G(配列番号53)、GSI/R/SR/G/EW/GSG/V/SL/Y/DS/FG/EGD/G(配列番号54)、GSI/N/SV/W/GV/D/CS/TC/GS/C/DS/AE/R/GG/EG/S(配列番号55)、GSI/SV/G/AV/GS/CG/DG/D/SS/AG/EG/EG/N(配列番号56)、GSI/N/SV/W/G/AV/D/C/GS/T/CC/GS/C/DS/AE/R/GG/EG/S(配列番号57)、GSIAGCGDAGEG(配列番号126)、GSNWDSGCSRE(配列番号127)、GSNWDSGCSREG(配列番号129)、NWDSGCSREG(配列番号130)またはIAGCGDAGEG(配列番号131)を含む、請求項8記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
請求項1〜9のいずれか1項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１１】
請求項1〜9のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド又は請求項10に記載のベクターによりコードされるポリペプチド。
【請求項１２】
請求項11記載のポリペプチドを含む融合タンパク質。
【請求項１３】
a)請求項1〜9のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、請求項10に記載のベクター又は請求項11に記載のポリペプチドと、発光反応試薬とを含む試料を提供すること;及び
b)混合物中の発光を検出または測定し、それによって、細胞内のcAMPの量または濃度を検出または測定すること
を含む、細胞内のサイクリックヌクレオチドの量または濃度の変化を検出する方法。
【請求項１４】
a)1以上の試験薬剤と、請求項1〜9のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、請求項10に記載のベクター又は請求項11に記載のポリペプチドと、発光反応試薬とを含む試料を提供すること;及び
b)前記試料中の発光を検出または測定すること
を含む、Gタンパク質共役型受容体の1以上のモジュレーターを検出する方法。
【請求項１５】
請求項1〜9のいずれか1項に記載のポリヌクレオチド、請求項10に記載のベクター、請求項11に記載のポリペプチド又は請求項12に記載の融合タンパク質を含むキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、米国特許出願第61/054,374号(出願日:2008年5月19日)および米国特許出願第61/119,983号(出願日:2008年12月4日)の出願日に基づく利益を主張し、これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。