【手続補正書】
【提出日】平成24年1月24日(2012.1.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸コンジュゲートを形成する方法であって、
ａ）ＤＮＡ増幅酵素の存在下で、アジド修飾ヌクレオチドヌクレオチドを少なくとも１種の他のヌクレオチドと接触させることにより、前記アジド修飾ヌクレオチドを核酸ポリマーに組み込み、アジド修飾核酸ポリマーを形成する工程、および
ｂ）前記アジド修飾核酸ポリマーを、活性化もしくは末端アルキンまたはホスフィン部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と接触させて、核酸ポリマー−レポーター分子、担体分子、固体支持体コンジュゲートを形成する工程
を含む、方法。
【請求項２】
核酸コンジュゲートを形成する方法であって、
ａ）ＤＮＡ増幅酵素の存在下で、末端アルキン修飾ヌクレオチドヌクレオチドを少なくとも１種の他のヌクレオチドと接触させることにより、前記末端アルキン修飾ヌクレオチドを核酸ポリマーに組み込み、末端アルキン修飾核酸ポリマーを形成する工程、および
ｂ）前記末端アルキン修飾核酸ポリマーを、アジド部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と接触させて、核酸ポリマー−レポーター分子、担体分子、固体支持体コンジュゲートを形成する工程
を含む、方法。
【請求項３】
核酸コンジュゲートを形成する方法であって、
ａ）ＤＮＡ増幅酵素の存在下で、ホスフィン修飾ヌクレオチドヌクレオチドを少なくとも１種の他のヌクレオチドと接触させることにより、前記ホスフィン修飾ヌクレオチドを核酸ポリマーに組み込み、ホスフィン修飾核酸ポリマーを形成する工程、および
ｂ）前記ホスフィン修飾核酸ポリマーを、アジド部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と接触させて、核酸ポリマー−レポーター分子、担体分子、固体支持体コンジュゲートを形成する工程
を含む、方法。
【請求項４】
アジド、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーを作製する方法であって、
核酸増幅酵素の存在下で、少なくとも１種のアジド、アルキンまたはホスフィン修飾ヌクレオチドをインキュベートして、アジド、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーを形成する工程
を含む、方法。
【請求項５】
前記核酸酵素がＤＮＡポリメラーゼである、請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記核酸酵素がＲＮＡポリメラーゼである、請求項４記載の方法。
【請求項７】
前記アジド、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーの融解温度が高められる、請求項４記載の方法。
【請求項８】
前記レポーター分子が、キサンテン、シアニン、クマリン、ボラポリアザインダセンまたはピレン色素である、請求項１記載の方法。
【請求項９】
前記レポーター分子が酵素基質またはハプテンである、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
前記担体分子が、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、多糖類、ヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、核酸、ハプテン、ソラレン、薬物、ホルモン、脂質、脂質集合体、合成ポリマー、ポリマー微粒子、生物細胞またはウイルスである、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記担体分子が、抗体もしくはその断片、アビジンもしくはストレプトアビジン、ビオチン、血液成分タンパク質、デキストラン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ＩｇＧ結合タンパク質、蛍光タンパク質、増殖因子、レクチン、リポ多糖、微生物、金属結合タンパク質、金属キレート化部分、非生物微粒子、ペプチド毒素、ホスファチジルセリン−結合タンパク質、構造タンパク質、低分子薬物、またはチラミドを含む、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記固体支持体が、微小流体チップ、シリコンチップ、顕微鏡スライド、マイクロプレートウェル、シリカゲル、ポリマー膜、粒子、誘導体化プラスチックフィルム、ガラスビーズ、綿、プラスチックビーズ、アルミナゲル、多糖類、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ナイロン、ラテックスビーズ、電磁ビーズ、常磁性ビーズ、または超常磁性ビーズである、請求項１記載の方法。
【請求項１３】
前記固体支持体が、セファロース、ポリ（アクリレート）、ポリスチレン、ポリ（アクリルアミド）、ポリオール、アガロース、寒天、セルロース、デキストラン、デンプン、ＦＩＣＯＬＬ、ヘパリン、グリコーゲン、アミロペクチン、マンナン、イヌリン、ニトロセルロース、ジアゾセルロースまたはデンプンである、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
アジド修飾核酸ポリマーを検出する方法であって、
ａ）末端アルキン部分を含むレポーター分子と、
アジド修飾核酸ポリマーと
を含むアジド−アルキン環化付加反応混合物を形成する工程、
ｂ）前記アジド−アルキン環化付加反応混合物を、十分な時間量の間インキュベートして、核酸ポリマー−レポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｃ）前記核酸ポリマー−レポーターコンジュゲートを、核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートの大きさおよび／または重量によって分離して、分離された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｄ）前記分離された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを、適切な波長で照射して、照射された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｅ）前記照射された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを観察する工程であって、ここで前記核酸ポリマーが検出される工程
を含む、方法。
【請求項１５】
前記工程ａ）が、
ａ．銅イオンと、
ｂ．少なくとも１種の還元剤と、
ｃ．銅キレート剤と
をさらに含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記レポーター分子が、キサンテン、シアニン、クマリン、ボラポリアザインダセンまたはピレン色素である、請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
前記レポーター分子が、酵素基質、蛍光タンパク質またはハプテンである、請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
前記銅キレート剤が銅（Ｉ）キレート剤である、請求項１５記載の方法。
【請求項１９】
前記銅キレート剤が、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、ＥＤＴＡ、ネオクプロイン、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、ピリジン−２，６−ジカルボン酸（ＰＤＡ）、Ｓ−カルボキシメチル−Ｌ−システイン（ＳＣＭＣ）、１，１０フェナントロリン、もしくはその誘導体、トリエンチン、グルタチオン、ヒスタジン（ｈｉｓｔａｄｉｎｅ）、ポリヒスタジン（ｐｏｌｙｈｉｓｔａｄｉｎｅ）またはテトラエチレンポリアミン（ＴＥＰＡ）である、請求項１５記載の方法。
【請求項２０】
前記銅キレート剤が、１，１０フェナントロリン、バソフェナントロリンジスルホン酸（４，７オジフェニル（ｏｄｉｐｈｅｎｙｌ）−１，１０−フェナントロリンジスルホン酸）またはバソキュプロインジスルホン酸（２，９−ジメチル−４，７−ジフェニル−１，１０−フェナントロリンジスルホネート）である、請求項１５記載の方法。
【請求項２１】
前記還元剤が、アスコルベート、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、ＴＣＰ（２，４，６−トリクロロフェノール）、ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、チオサルフェート、２−メルカプトエタノール、ジチオトレオトール（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｏｔｏｌ）、グルタチオン、システイン、金属銅、キノン、ヒドロキノン、ビタミンＫ１、Ｆｅ２＋、Ｃｏ２＋、または印加電位である、請求項１５記載の方法。
【請求項２２】
前記還元剤がアスコルベートである、請求項１５記載の方法。
【請求項２３】
前記分離する工程が、クロマトグラフィまたは電気泳動を含む、請求項１４記載の方法。
【請求項２４】
前記クロマトグラフィが、ＦＰＬＣ、ＨＰＬＣ、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）、サイズ排除クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、またはアフィニティークロマトグラフィのうちの１つ以上を含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
前記電気泳動が、ゲル電気泳動、一次元（１Ｄ）ゲル電気泳動、二次元（２Ｄ）ゲル電気泳動、未変性ゲル電気泳動、変性ゲル電気泳動、等電点電気泳動、またはキャピラリー電気泳動を含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２６】
末端アルキン部分を含むレポーター分子、
アジド修飾核酸、
銅イオン、
少なくとも１種の還元剤、および
銅キレート剤
を含む、アジド−アルキン環化付加反応混合物。
【請求項２７】
固定化されたアジド修飾核酸を検出する方法であって、
ａ）前記アジド修飾核酸を、固体または半固体マトリクスに固定化して、固定化されたアジド修飾核酸を形成する工程、
ｂ）前記固定化されたアジド修飾核酸を、アジド反応性基を含有するレポーター分子と接触させて、接触されたアジド修飾核酸を形成する工程、
ｃ）前記接触されたアジド修飾核酸を、十分な量の時間インキュベートして、レポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｄ）前記レポーター分子−核酸コンジュゲートを、適切な波長で照射して、照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｅ）前記照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを観察する工程であって、それにより前記固定化されたアジド修飾核酸が検出される工程
を含む、方法。
【請求項２８】
固定化されたアルキン修飾核酸を検出する方法であって、
ａ）前記アルキン修飾核酸を、固体または半固体マトリクスに固定化して、固定化されたアルキン修飾核酸を形成する工程、
ｆ）前記固定化されたアルキン修飾核酸を、アジド基を含有するレポーター分子と接触させて、接触されたアルキン修飾核酸を形成する工程、
ｇ）前記接触されたアルキン修飾核酸を、十分な量の時間インキュベートして、レポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｈ）前記レポーター分子−核酸コンジュゲートを、適切な波長で照射して、照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｉ）前記照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを観察する工程であって、それにより前記固定化されたアルキン修飾核酸が検出される工程
を含む、方法。
【請求項２９】
前記固体または半固体支持体が、スライド、アレイ、アガロースゲル、ポリアクリルアミドゲル、ヒドロゲル、ポリマー粒子またはガラスである、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
アジドまたはアルキン−ｄＵＴＰと、
テロメラーゼ酵素と、
アジドもしくはアルキン反応性レポーター分子、担体分子または固体支持体と
を含む、キット。
【請求項３１】
アジド、アルキンまたはホスフィン部分を含む少なくとも１種のヌクレオチド類似体と、
アジド、アルキンもしくはホスフィン部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と
を含む、核酸ポリマーを標識するためのキット。
【請求項３２】
核酸増幅酵素をさらに含む、請求項３１記載のキット。
【請求項３３】
テロメラーゼ酵素活性を測定する方法であって、
ａ）細胞を、有効量の、アジド基を含むｄＮＴＰヌクレオチドおよびテロメラーゼ酵素と接触させ、前記ｄＮＴＰヌクレオチドが少なくとも１種の核酸ポリマーに組み込まれるようにする工程、
ｂ）前記核酸ポリマーを、アルキンまたはホスフィン部分を含むレポーター分子と接触させ、アジド修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｃ）前記アジド修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを、レポーター分子を含まない核酸ポリマーから分離する工程、ならびに
ｄ）前記アジド修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを照射して、テロメラーゼ活性を決定する工程
を含む、方法。
【請求項３４】
テロメラーゼ酵素活性を測定する方法であって、
ａ）細胞を、有効量の、アルキンまたはホスフィン基を含むｄＮＴＰヌクレオチドおよびテロメラーゼ酵素と接触させ、前記ｄＮＴＰヌクレオチドが少なくとも１種の核酸ポリマーに組み込まれるようにする工程、
ｂ）前記核酸ポリマーを、アジド部分を含むレポーター分子と接触させ、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｃ）前記アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを、レポーター分子を含まない核酸ポリマーから分離する工程、ならびに
ｄ）前記アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを照射して、テロメラーゼ活性を決定する工程
を含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
本発明の別の態様は、テロメラーゼ酵素活性を測定する方法であって、
ａ）細胞を、有効量の、アルキンまたはホスフィン基を含むｄＮＴＰヌクレオチドおよびテロメラーゼ酵素と接触させ、前記ｄＮＴＰヌクレオチドが少なくとも１種の核酸ポリマーに組み込まれるようにする工程と、
ｂ）前記核酸ポリマーを、アジド部分を含むレポーター分子と接触させ、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを形成する工程と、
ｃ）前記アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを、レポーター分子を含まない核酸ポリマーから分離する工程と、
ｄ）前記アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを照射して、テロメラーゼ活性を決定する工程と
を含む方法を提供する。
[請求項1001]
核酸コンジュゲートを形成する方法であって、
ａ）ＤＮＡ増幅酵素の存在下で、アジド修飾ヌクレオチドヌクレオチドを少なくとも1種の他のヌクレオチドと接触させることにより、前記アジド修飾ヌクレオチドを核酸ポリマーに組み込み、アジド修飾核酸ポリマーを形成する工程、および
ｂ）前記アジド修飾核酸ポリマーを、活性化もしくは末端アルキンまたはホスフィン部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と接触させて、核酸ポリマー−レポーター分子、担体分子、固体支持体コンジュゲートを形成する工程
を含む、方法。
[請求項1002]
核酸コンジュゲートを形成する方法であって、
ａ）ＤＮＡ増幅酵素の存在下で、末端アルキン修飾ヌクレオチドヌクレオチドを少なくとも1種の他のヌクレオチドと接触させることにより、前記末端アルキン修飾ヌクレオチドを核酸ポリマーに組み込み、末端アルキン修飾核酸ポリマーを形成する工程、および
ｂ）前記末端アルキン修飾核酸ポリマーを、アジド部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と接触させて、核酸ポリマー−レポーター分子、担体分子、固体支持体コンジュゲートを形成する工程
を含む、方法。
[請求項1003]
核酸コンジュゲートを形成する方法であって、
ａ）ＤＮＡ増幅酵素の存在下で、ホスフィン修飾ヌクレオチドヌクレオチドを少なくとも1種の他のヌクレオチドと接触させることにより、前記ホスフィン修飾ヌクレオチドを核酸ポリマーに組み込み、ホスフィン修飾核酸ポリマーを形成する工程、および
ｂ）前記ホスフィン修飾核酸ポリマーを、アジド部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と接触させて、核酸ポリマー−レポーター分子、担体分子、固体支持体コンジュゲートを形成する工程
を含む、方法。
[請求項1004]
アジド、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーを作製する方法であって、
核酸増幅酵素の存在下で、少なくとも1種のアジド、アルキンまたはホスフィン修飾ヌクレオチドをインキュベートして、アジド、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーを形成する工程
を含む、方法。
[請求項1005]
前記核酸酵素がＤＮＡポリメラーゼである、請求項1004記載の方法。
[請求項1006]
前記核酸酵素がＲＮＡポリメラーゼである、請求項1004記載の方法。
[請求項1007]
前記アジド、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーの融解温度が高められる、請求項1004記載の方法。
[請求項1008]
前記レポーター分子が、キサンテン、シアニン、クマリン、ボラポリアザインダセンまたはピレン色素である、請求項1001記載の方法。
[請求項1009]
前記レポーター分子が酵素基質またはハプテンである、請求項1001記載の方法。
[請求項1010]
前記担体分子が、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、多糖類、ヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、核酸、ハプテン、ソラレン、薬物、ホルモン、脂質、脂質集合体、合成ポリマー、ポリマー微粒子、生物細胞またはウイルスである、請求項1001記載の方法。
[請求項1011]
前記担体分子が、抗体もしくはその断片、アビジンもしくはストレプトアビジン、ビオチン、血液成分タンパク質、デキストラン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ＩｇＧ結合タンパク質、蛍光タンパク質、増殖因子、レクチン、リポ多糖、微生物、金属結合タンパク質、金属キレート化部分、非生物微粒子、ペプチド毒素、ホスファチジルセリン−結合タンパク質、構造タンパク質、低分子薬物、またはチラミドを含む、請求項1001記載の方法。
[請求項1012]
前記固体支持体が、微小流体チップ、シリコンチップ、顕微鏡スライド、マイクロプレートウェル、シリカゲル、ポリマー膜、粒子、誘導体化プラスチックフィルム、ガラスビーズ、綿、プラスチックビーズ、アルミナゲル、多糖類、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ナイロン、ラテックスビーズ、電磁ビーズ、常磁性ビーズ、または超常磁性ビーズである、請求項1001記載の方法。
[請求項1013]
前記固体支持体が、セファロース、ポリ（アクリレート）、ポリスチレン、ポリ（アクリルアミド）、ポリオール、アガロース、寒天、セルロース、デキストラン、デンプン、ＦＩＣＯＬＬ、ヘパリン、グリコーゲン、アミロペクチン、マンナン、イヌリン、ニトロセルロース、ジアゾセルロースまたはデンプンである、請求項1001記載の方法。
[請求項1014]
アジド修飾核酸ポリマーを検出する方法であって、
ａ）末端アルキン部分を含むレポーター分子と、
アジド修飾核酸ポリマーと
を含むアジド−アルキン環化付加反応混合物を形成する工程、
ｂ）前記アジド−アルキン環化付加反応混合物を、十分な時間量の間インキュベートして、核酸ポリマー−レポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｃ）前記核酸ポリマー−レポーターコンジュゲートを、核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートの大きさおよび／または重量によって分離して、分離された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｄ）前記分離された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを、適切な波長で照射して、照射された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｅ）前記照射された核酸ポリマー−レポーター−レポーター分子コンジュゲートを観察する工程であって、ここで前記核酸ポリマーが検出される工程
を含む、方法。
[請求項1016]
前記工程ａ）が、
ａ．銅イオンと、
ｂ．少なくとも1種の還元剤と、
ｃ．銅キレート剤と
をさらに含む、請求項1014記載の方法。
[請求項1016]
前記レポーター分子が、キサンテン、シアニン、クマリン、ボラポリアザインダセンまたはピレン色素である、請求項1014記載の方法。
[請求項1017]
前記レポーター分子が、酵素基質、蛍光タンパク質またはハプテンである、請求項1014記載の方法。
[請求項1018]
前記銅キレート剤が銅（Ｉ）キレート剤である、請求項1015記載の方法。
[請求項1019]
前記銅キレート剤が、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（2−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、ＥＤＴＡ、ネオクプロイン、Ｎ−（2−アセトアミド）イミノジ酢酸（ＡＤＡ）、ピリジン−2，6−ジカルボン酸（ＰＤＡ）、Ｓ−カルボキシメチル−Ｌ−システイン（ＳＣＭＣ）、1，10フェナントロリン、もしくはその誘導体、トリエンチン、グルタチオン、ヒスタジン（ｈｉｓｔａｄｉｎｅ）、ポリヒスタジン（ｐｏｌｙｈｉｓｔａｄｉｎｅ）またはテトラエチレンポリアミン（ＴＥＰＡ）である、請求項1015記載の方法。
[請求項1020]
前記銅キレート剤が、1，10フェナントロリン、バソフェナントロリンジスルホン酸（4，7オジフェニル（ｏｄｉｐｈｅｎｙｌ）−1，10−フェナントロリンジスルホン酸）またはバソキュプロインジスルホン酸（2，9−ジメチル−4，7−ジフェニル−1，10−フェナントロリンジスルホネート）である、請求項1015記載の方法。
[請求項1021]
前記還元剤が、アスコルベート、トリス（2−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、ＴＣＰ（2，4，6−トリクロロフェノール）、ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ、チオサルフェート、2−メルカプトエタノール、ジチオトレオトール（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｏｔｏｌ）、グルタチオン、システイン、金属銅、キノン、ヒドロキノン、ビタミンＫ1、Ｆｅ2＋、Ｃｏ2＋、または印加電位である、請求項1015記載の方法。
[請求項1022]
前記還元剤がアスコルベートである、請求項1015記載の方法。
[請求項1023]
前記分離する工程が、クロマトグラフィまたは電気泳動を含む、請求項1014記載の方法。
[請求項1024]
前記クロマトグラフィが、ＦＰＬＣ、ＨＰＬＣ、液体クロマトグラフィ（ＬＣ）、サイズ排除クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、またはアフィニティークロマトグラフィのうちの1つ以上を含む、請求項1023記載の方法。
[請求項1025]
前記電気泳動が、ゲル電気泳動、一次元（1Ｄ）ゲル電気泳動、二次元（2Ｄ）ゲル電気泳動、未変性ゲル電気泳動、変性ゲル電気泳動、等電点電気泳動、またはキャピラリー電気泳動を含む、請求項1023記載の方法。
[請求項1026]
末端アルキン部分を含むレポーター分子、
アジド修飾核酸、
銅イオン、
少なくとも1種の還元剤、および
銅キレート剤
を含む、アジド−アルキン環化付加反応混合物。
[請求項1027]
固定化されたアジド修飾核酸を検出する方法であって、
ａ）前記アジド修飾核酸を、固体または半固体マトリクスに固定化して、固定化されたアジド修飾核酸を形成する工程、
ｂ）前記固定化されたアジド修飾核酸を、アジド反応性基を含有するレポーター分子と接触させて、接触されたアジド修飾核酸を形成する工程、
ｃ）前記接触されたアジド修飾核酸を、十分な量の時間インキュベートして、レポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｄ）前記レポーター分子−核酸コンジュゲートを、適切な波長で照射して、照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｅ）前記照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを観察する工程であって、それにより前記固定化されたアジド修飾核酸が検出される工程
を含む、方法。
[請求項1028]
固定化されたアルキン修飾核酸を検出する方法であって、
ａ）前記アルキン修飾核酸を、固体または半固体マトリクスに固定化して、固定化されたアルキン修飾核酸を形成する工程、
ｆ）前記固定化されたアルキン修飾核酸を、アジド基を含有するレポーター分子と接触させて、接触されたアルキン修飾核酸を形成する工程、
ｇ）前記接触されたアルキン修飾核酸を、十分な量の時間インキュベートして、レポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｈ）前記レポーター分子−核酸コンジュゲートを、適切な波長で照射して、照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを形成する工程、
ｉ）前記照射されたレポーター分子−核酸コンジュゲートを観察する工程であって、それにより前記固定化されたアルキン修飾核酸が検出される工程
を含む、方法。
[請求項1029]
前記固体または半固体支持体が、スライド、アレイ、アガロースゲル、ポリアクリルアミドゲル、ヒドロゲル、ポリマー粒子またはガラスである、請求項1028記載の方法。
[請求項1030]
アジドまたはアルキン−ｄＵＴＰと、
テロメラーゼ酵素と、
アジドもしくはアルキン反応性レポーター分子、担体分子または固体支持体と
を含む、キット。
[請求項1031]
アジド、アルキンまたはホスフィン部分を含む少なくとも1種のヌクレオチド類似体と、
アジド、アルキンもしくはホスフィン部分を含む、レポーター分子、担体分子または固体支持体と
を含む、核酸ポリマーを標識するためのキット。
[請求項1032]
核酸増幅酵素をさらに含む、請求項1031記載のキット。
[請求項1033]
テロメラーゼ酵素活性を測定する方法であって、
ａ）細胞を、有効量の、アジド基を含むｄＮＴＰヌクレオチドおよびテロメラーゼ酵素と接触させ、前記ｄＮＴＰヌクレオチドが少なくとも1種の核酸ポリマーに組み込まれるようにする工程、
ｂ）前記核酸ポリマーを、アルキンまたはホスフィン部分を含むレポーター分子と接触させ、アジド修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｃ）前記アジド修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを、レポーター分子を含まない核酸ポリマーから分離する工程、ならびに
ｄ）前記アジド修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを照射して、テロメラーゼ活性を決定する工程
を含む、方法。
[請求項1034]
テロメラーゼ酵素活性を測定する方法であって、
ａ）細胞を、有効量の、アルキンまたはホスフィン基を含むｄＮＴＰヌクレオチドおよびテロメラーゼ酵素と接触させ、前記ｄＮＴＰヌクレオチドが少なくとも1種の核酸ポリマーに組み込まれるようにする工程、
ｂ）前記核酸ポリマーを、アジド部分を含むレポーター分子と接触させ、アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを形成する工程、
ｃ）前記アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを、レポーター分子を含まない核酸ポリマーから分離する工程、ならびに
ｄ）前記アルキンまたはホスフィン修飾核酸ポリマーレポーター分子コンジュゲートを照射して、テロメラーゼ活性を決定する工程
を含む、方法。