【手続補正書】
【提出日】平成26年6月25日(2014.6.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一および第二核酸鎖を含む、単離二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であって、
前記第一鎖が長さにして１５〜３５ヌクレオチドであり、前記ｄｓＲＮＡの前記第二鎖が長さにして１９〜３５ヌクレオチドであり、
前記第二オリゴヌクレオチド鎖は、前記二本鎖核酸が哺乳動物細胞内に導入される時に、ＡＲ標的遺伝子発現を減少させるために、前記第二オリゴヌクレオチド鎖長の少なくとも１９ヌクレオチドにそって、配列番号２３９９、または表１３から選択されるいずれかの配列の、標的ＡＲ  ｃＤＮＡ配列に十分に相補的である、
単離ｄｓＲＮＡ。
【請求項２】
ａ）前記単離ｄｓＲＮＡが少なくとも２５塩基対の二本鎖領域を含む、または
ｂ）前記第二オリゴヌクレオチド鎖が、その３’末端にて、１〜５一本鎖ヌクレオチドを含む、または
ｃ）前記第一鎖が、長さにして２５〜３５ヌクレオチドである、または
ｄ）前記第二鎖が、長さにして２５〜３５ヌクレオチドである、または
ｅ）前記第二オリゴヌクレオチド鎖が、前記第二オリゴヌクレオチド鎖長の最大で２７ヌクレオチドにそって、ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号ＮＭ＿００００４４．２およびＮＭ＿００１０１１６４５．１からなる群より選択される標的ＡＲ  ｃＤＮＡ配列に相補的である、または
ｆ）第一オリゴヌクレオチド鎖の３’末端での第一ヌクレオチド（位置１）から開始して、位置１、２および／または３が、好ましくは修飾ヌクレオチドによって置換され、前記第一鎖の前記３’末端の前記修飾ヌクレオチド残基が、デオキシリボヌクレオチド、アシクロヌクレオチドおよび蛍光分子からなる群より選択される、または
ｇ）前記第一鎖の前記３’末端と、前記第二鎖の前記５’末端が平滑末端を形成する、または
ｈ）前記第一鎖が長さにして２５ヌクレオチドであり、前記第二鎖が長さにして２７ヌクレオチドである、または
ｉ）配列番号：１５８９および配列番号：１９９４によって表された、もしくは表２、３、５、７、９および１１にて示したＤｓｉＲＮＡ試薬からなる群より選択された一組の第一鎖／第二鎖配列を含む、または
ｊ）前記ｄｓＲＮＡが、Ｄｉｃｅｒによって前記細胞中に内因的に開裂される、または
ｋ）標的遺伝子の発現を減少させるために十分な前記単離二本鎖核酸の量が、前記細胞の環境中、１ナノモルまたはそれ以下、２００ピコモルまたはそれ以下、１００ピコモルまたはそれ以下、５０ピコモルまたはそれ以下、２０ピコモルまたはそれ以下、１０ピコモルまたはそれ以下、５ピコモルまたはそれ以下、２ピコモルまたはそれ以下および１ピコモルまたはそれ以下からなる群より選択される、または
ｌ）前記単離ｄｓＲＮＡが、１ナノモルまたはそれ以下の細胞環境中での効果的な濃度で、哺乳動物細胞内でｉｎ  ｖｉｔｒｏでアッセイした時に、標的ＡＲ遺伝子発現を減少させることにおいて、前記標的ＡＲ  ｃＤＮＡの同一の少なくとも１９ヌクレオチドに対して指向した単離２１ｍｅｒのｓｉＲＮＡよりも、大きな強度を有する、または
ｍ）前記単離ｄｓＲＮＡが、前記二本鎖核酸を哺乳動物細胞に導入した時に、少なくとも１０％、少なくとも５０％、少なくとも８０〜９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％および少なくとも９９％からなる群より選択される量（％で表示）まで、ＡＲ標的遺伝子発現を減少させるために、標的ＡＲｃＤＮＡ配列に十分に相補的である、または
ｎ）前記第一および第二鎖が、化学的リンカーによって連結する、または
ｏ）モルホリノ核酸およびペプチド核酸（ＰＮＡ）からなる群より選択される修飾を含む、
請求項１に記載の単離ｄｓＲＮＡ。
【請求項３】
前記第二鎖が、配列番号：１９９４、１６４、１６６、１７４、１７７、１７９、１９７５、１９８４、１９８６、１９８７、１９９２、１９９８、２２４、２０７４、１２８３、２１３６、２４６、２２０４、２２２０、２２２７、２２３０、２２３５および２２３９からなる群より選択される配列を含み、または
前記第一鎖が、配列番号：１５８９、１１、１３、２１、２４、２６、１５７０、１５７９、１５８１、１５８２、１５８７、１５９３、７１、１６６９、１２２０、１７３１、９３、１７９９、１８１５、１８２２、１８２５、１８３０および１８３４からなる群より選択される配列を含む、
請求項１に記載の単離ｄｓＲＮＡ。
【請求項４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏで哺乳動物細胞を、前記細胞中の標的ＡＲ遺伝子の発現を減少させるのに十分な量で、請求項１の単離ｄｓＲＮＡと接触させることを含み、
好ましくは標的ＡＲ遺伝子発現が、少なくとも１０％、少なくとも５０％および少なくとも８０〜９０％からなる群より選択される量（％で表示）まで減少する、
哺乳動物細胞内の標的ＡＲ遺伝子の発現を減少させるための方法。
【請求項５】
哺乳動物中の標的ＡＲ遺伝子の発現を減少させるために効果的な量の請求項１の単離ｄｓＲＮＡの使用であって、
好ましくは、前記単離ｄｓＲＮＡを、１マイクログラム〜５ミリグラム／前記哺乳動物のキログラム／日、１００マイクログラム〜０．５ミリグラム／キログラム、０．００１〜０．２５ミリグラム／キログラム、０．０１〜２０マイクログラム／キログラム、０．０１〜１０マイクログラム／キログラム、０．０１〜５マイクログラム／キログラムおよび０．１〜２．５マイクログラム／キログラムからなる群より選択される用量で投与する、または
好ましくは、前記ｄｓＲＮＡの投与段階が、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、点滴、皮下注射、経皮、エアロゾル、直腸、膣、局所、経口および吸入伝達からなる群より選択された様式を含む、
使用。
【請求項６】
細胞を、前記細胞の増殖を阻害するのに十分な量の請求項１に記載の単離ｄｓＲＮＡと接触させることを含み、
好ましくは、前記細胞が対象の腫瘍細胞または好ましくは前立腺癌細胞である、
細胞の増殖を選択的に阻害するための方法。
【請求項７】
請求項１の単離ｄｓＲＮＡを含む製剤であって、
前記ｄｓＲＮＡが、前記ｄｓＲＮＡを、少なくとも１０％、少なくとも５０％および少なくとも８０〜９０％からなる群より選択される量（％で表示）まで、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにて哺乳動物細胞内に導入する時に、標的ＡＲ  ＲＮＡレベルを減少させるのに効果的な量で存在し、前記ｄｓＲＮＡが、１ナノモルまたはそれ以下の細胞環境中での効果的な濃度で、哺乳動物細胞内でｉｎ  ｖｉｔｒｏでアッセイした時に、標的ＡＲ  ＲＮＡレベルを減少させることにおいて、前記標的ＡＲ  ｃＤＮＡの同一の少なくとも１９ヌクレオチドに対して指向した単離２１ｍｅｒのｓｉＲＮＡよりも、大きな強度を有し、
好ましくは、前記効果的な量が、前記細胞の環境中、１ナノモルまたはそれ以下、２００ピコモルまたはそれ以下、１００ピコモルまたはそれ以下、５０ピコモルまたはそれ以下、２０ピコモルまたはそれ以下、１０ピコモルまたはそれ以下、５ピコモルまたはそれ以下、２ピコモルまたはそれ以下および１ピコモルまたはそれ以下からなる群より選択される、
製剤。
【請求項８】
請求項１の単離ｄｓＲＮＡを含む哺乳動物細胞。
【請求項９】
請求項１の単離ｄｓＲＮＡと、薬理学的に許容可能な担体を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１の単離ｄｓＲＮＡと、その利用のための取扱説明書を含むキット。
【請求項１１】
対象中のＡＲ関連疾患または障害を治療するため、または予防するための、請求項１の単離ｄｓＲＮＡの使用であって、
前記対象中の前記ＡＲ関連疾患または障害を治療する、または予防するために十分な量で、対象に請求項１の単離ＲＮＡと薬理学的に許容可能な担体を投与することを含み、
好ましくは、前記ＡＲ関連疾患または障害が、前立腺癌および腺癌からなる群より選択される、
使用。
【請求項１２】
（ａ）センス領域およびアンチセンス領域であり、前記センス領域および前記アンチセンス領域が一緒に、１５〜３５塩基対からなる二本鎖領域を形成し、前記アンチセンス領域が、表１３より選択される配列の相補体である配列を含む、センス領域およびアンチセンス領域；および
（ｂ）０〜２の３’オーバーハング領域であり、各オーバーハング領域は、長さにして６またはそれより少ないヌクレオチドである、０〜２の３’オーバーハング領域
からなり、
好ましくは、前記二本鎖領域が１９〜３５塩基対、２５〜３５塩基対または２５〜３０塩基対からなる、
単離ｄｓＲＮＡ分子。
【請求項１３】
第一および第二核酸鎖と、少なくとも２５塩基対の二本鎖領域を含む、単離二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であって、
前記第一鎖の長さは２５〜３４ヌクレオチドであり、前記第二鎖の長さは２６〜３５ヌクレオチドであり、３‘末端に１〜５単一鎖ヌクレオチドを含み、
前記第二オリゴヌクレオチド鎖は、前記二本鎖核酸が哺乳動物細胞内に導入される時に、ＡＲ標的遺伝子発現を減少させるために、前記第二オリゴヌクレオチド鎖長の少なくとも１９ヌクレオチドにそって、配列番号２３９９、または配列番号３０７〜４５９、８２６〜９１５、１０２４〜１０７７、１３１２〜１３７４、２３１１〜２７１５および３６２２〜３６６９からなる群より選択されるいずれか１つを含む、標的ＡＲ  ｃＤＮＡ配列に十分に相補的である、
単離二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）。
【請求項１４】
ｐ）前記第二オリゴヌクレオチド鎖は、前記第二オリゴヌクレオチド鎖の最大で２７ヌクレオチドの長さに沿って、配列番号３７６６、３７６８および３７７０からなる群より選択される標的ＡＲ  ｃＤＮＡ配列に相補的である、または
ｑ）第一オリゴヌクレオチド鎖の３’末端で第一ヌクレオチド（位置１）から開始し、位置１、２および／または３が修飾ヌクレオチドで置換される、または
ｒ）前記第一鎖の３’末端および前記第二鎖の５’末端が平滑末端を形成する、または
ｓ）前記第一鎖の長さが２５ヌクレオチドであり、および前記第二鎖の長さが２７ヌクレオチドである、
請求項１３の単離ｄｓＲＮＡ。