【手続補正書】
【提出日】平成24年9月21日(2012.9.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中の1つまたは複数の標的を検出する方法であって、
a）検出表面を含む容器に>1mmの最短線寸法を有する検出域を提供する工程;
b）容器内の液体上部層において、シグナリング部分、選択部分、および該標的を含む組成物を接触させ、該標的と該シグナリング部分または該選択部分との複合体を形成する工程;
c）選択力を加えて該上部層の該選択部分を下部クッション層を通って移動させ、該検出域に対応する検出帯内に該選択部分を沈着させる工程;ならびに
d）検出域に対応する該検出帯内で該シグナリング部分の個々の複合体を同時に検出することにより該標的を検出する工程であって、該検出は5×未満の倍率を用いる、工程
を含み、洗浄工程を含まず、かつ該標的が少なくとも2つの直交次元で50ミクロン未満である、方法。
【請求項２】
（i）下部クッション層がシグナリング部分を出入りする光の透過に干渉する色素を含むか;または（ii）上部層がシグナリング部分を出入りする光の透過に干渉する色素をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項３】
標的が細胞であり、かつ工程（d）が増殖阻害剤の存在下および不在下での該細胞の差示的増殖を決定する、請求項1記載の方法。
【請求項４】
シグナリング部分が光子シグナリング特徴を含むか;またはシグナリング部分が、フルオロフォア、化学発光剤、生物発光剤、共鳴光散乱粒子、光吸収剤もしくは発色シグナリング剤、量子ドット、またはアップコンバーティング蛍光体を含むか、または蛍光粒子であるか、またはDNA染色剤を含む、請求項1記載の方法。
【請求項５】
工程（d）の複合体が、シグナリング部分、標的、および選択部分の複合体である、請求項1記載の方法。
【請求項６】
工程（b）で形成される複合体が選択部分とシグナリング部分との間のものであり、かつ標的の検出が、標的の不在下で形成される複合体の数に比較しての、標的の存在下で形成される選択部分とシグナリング部分との複合体の数の減少により起こる、請求項1記載の方法。
【請求項７】
シグナリング部分または選択部分がカテゴリー結合分子とコンジュゲートし、特に、該カテゴリー結合分子は抗体、抗原、レクチン、炭水化物、タンパク質、核酸分子、リガンド、受容体、または小分子である、請求項1記載の方法。
【請求項８】
標的が生体試料に存在するかまたは生体試料から得られ、特に、該生体試料はヒト全血、血清、血漿、粘液、尿、胆液、滑膜関節液、血清、血漿、髄液、羊水、汗、鼻呼吸液、膣分泌物、精液、創傷滲出液、唾液もしくは気管支肺胞洗浄液、排泄物、骨、毛髪、乾燥細胞、皮膚の試料、生の、凍結または固定した病理試料、または鼻、鼻咽頭、咽喉、腋窩、会陰もしくは直腸の部位から採取したスワブである、請求項1記載の方法。
【請求項９】
選択力が、重力、磁力、電位、遠心力、求心力、浮遊密度、濾過、または圧力である、請求項1記載の方法。
【請求項１０】
容器が2mmを上回る画像化深度を有する画像化ウェルである、請求項1記載の方法。
【請求項１１】
標的が細胞、ウイルス、または分子であり、特に細菌細胞であり、特に大腸菌（E. coli）、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（S. aureus）（MRSA）細胞、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）細胞または炭疽菌（Bacillus anthracis）細胞であるか; 標的が炭疽菌抗原であり、特に該抗原が致死因子（LF）、防御抗原（PA）、およびポリ-D-γ-グルタミン酸（PDGA）カプセルポリペプチドから選択されるか;または標的がC.アルビカンス（C. albicans）である、請求項1記載の方法。
【請求項１２】
シグナリング部分または選択部分が容器内で乾燥形態にあるか、または下部クッション層が容器内で乾燥形態にあり、特に工程（b）において、標的を含む組成物が下部のクッションを水和させ、特に工程（b）において、標的を含む組成物が上部層および下部クッション層を水和させる、請求項1記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
特に断りのない限り、本明細書に記載される微生物株は、American Type Culture Collection（ATCC）、Manassas、VAから入手する。
[本発明1001]
試料中の1つまたは複数の標的を検出する方法であって、
a）検出表面を含む容器に>1mmの最短線寸法を有する検出域を提供する工程;
b）容器内の液体上部層において、シグナリング部分、選択部分、および該標的を含む組成物を接触させ、該標的と該シグナリング部分または該選択部分との複合体を形成する工程;
c）選択力を加えて該上部層の該選択部分を下部クッション層を通って移動させ検出表面と接触させる工程;ならびに
d）検出域に対応する検出帯内で該シグナリング部分の個々の複合体を同時に検出することにより、5×未満の倍率で該標的を検出する工程
を含み、洗浄工程を含まず、かつ該標的が少なくとも2つの直交次元で50ミクロン未満である、方法。
[本発明1002]
シグナリング部分が光子シグナリング特徴を含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
シグナリング部分または選択部分がカテゴリー結合分子とコンジュゲートする、本発明1001の方法。
[本発明1004]
カテゴリー結合分子が抗体、抗原、レクチン、核酸分子、リガンド、受容体、または小分子である、本発明1003の方法。
[本発明1005]
下部クッション層がシグナリング部分を出入りする光の生成または透過に干渉する色素を含む、本発明1001の方法。
[本発明1006]
シグナリング部分が特異的に標的に結合する、本発明1001の方法。
[本発明1007]
標的が細胞である、本発明1001の方法。
[本発明1008]
細胞が細菌細胞である、本発明1007の方法。
[本発明1009]
細菌細胞が黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）細胞または炭疽菌（Bacillus anthracis）細胞である、本発明1001の方法。
[本発明1010]
細胞の内部成分に特異的に結合する第2のシグナリング部分と細胞とを接触させる工程をさらに含む、本発明1007の方法。
[本発明1011]
内部成分が核酸分子または脂質である、本発明1010の方法。
[本発明1012]
第2のシグナリング部分を光退色させる工程および上部層内または下部クッション層内で工程（b）のシグナリング部分を検出する工程を工程（c）の後にさらに含む、本発明1010の方法。
[本発明1013]
標的が微生物細胞により分泌される分子である、本発明1001の方法。
[本発明1014]
シグナリング部分が蛍光粒子である、本発明1001の方法。
[本発明1015]
シグナリング部分がDNA染色剤を含む、本発明1001の方法。
[本発明1016]
工程（b）の前に試料が微生物増殖培地と混合され、続いて1時間より長くインキュベーションされる、本発明1001の方法。
[本発明1017]
微生物増殖培地が抗生物質または微生物増殖阻害剤を含む、本発明1016の方法。
[本発明1018]
シグナリング部分または選択部分が容器内で乾燥形態にある、本発明1001の方法。
[本発明1019]
下部クッション層が容器内で乾燥形態にある、本発明1001の方法。
[本発明1020]
工程（b）において、標的を含む組成物が下部のクッションを水和させる、本発明1019の方法。
[本発明1021]
工程（b）において、標的を含む組成物が上部層および下部クッション層を水和させる、本発明1020の方法。
[本発明1022]
上部層がシグナリング部分を出入りする光の生成または透過に干渉する色素をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1023]
標的がヒト甲状腺刺激ホルモンまたは炭疽菌抗原から選択される、本発明1001の方法。
[本発明1024]
抗原が致死因子（LF）、防御抗原（PA）、およびポリ-D-γ-グルタミン酸（PDGA）カプセルポリペプチドから選択される、本発明1023の方法。
[本発明1025]
標的がメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）細胞である、本発明1001の方法。
[本発明1026]
標的が生体液に存在するかまたは生体液から得られる、本発明1001の方法。
[本発明1027]
生体液がヒト全血、血清、血漿、粘液、または尿である、本発明1026の方法。
[本発明1028]
選択力が、重力、磁力、電位、遠心力、求心力、浮遊密度、濾過、または圧力である、本発明1001の方法。
[本発明1029]
シグナリング部分が、フルオロフォア、化学発光剤、生物発光剤、共鳴光散乱粒子、光吸収剤もしくは発色シグナリング剤、アップコンバーティング蛍光体を含む、本発明1001の方法。
[本発明1030]
選択部分が、磁気粒子、シリカ粒子、またはフェリチンを含む、本発明1001の方法。
[本発明1031]
選択部分が標的競合相手とコンジュゲートされ;工程（b）で形成される複合体が選択部分とシグナリング部分との間および標的とシグナリング部分との間であり;標的が選択部分と特異的に結合せず;かつ標的の検出が、標的の不在下で形成される選択部分とシグナリング部分との複合体の量の減少により、間接的に起こる、本発明1001の方法。
[本発明1032]
容器が2mmを上回る画像化深度を有する画像化ウェルである、本発明1001の方法。
[本発明1033]
試料中の1つまたは複数の標的を検出する方法であって、
a）検出表面を含む容器に>1mmの最短線寸法を有する検出域を提供する工程;
b）該容器内の液体において、1つまたは複数のシグナリング部分、選択部分、および該標的を含む組成物を接触させ、該標的と該シグナリング部分または選択部分との複合体を形成する工程;
c）選択力を加えて該複合体を液体中を通過させ検出表面と接触させる工程;ならびに
d）検出域に対応する検出帯内で該シグナリング部分の個々の複合体を同時に検出することにより、5×未満の倍率で該標的を検出する工程
を含み、洗浄工程を含まず、かつ該標的が少なくとも2つの直交次元で50ミクロン未満である、方法。
[本発明1034]
シグナリング部分が光子シグナリング特徴を含む、本発明1033の方法。
[本発明1035]
シグナリング部分または選択部分がカテゴリー結合分子と結合する、本発明1033の方法。
[本発明1036]
カテゴリー結合分子が抗体、抗原、レクチン、核酸分子、リガンド、受容体、または小分子である、本発明1035の方法。
[本発明1037]
シグナリング部分が特異的に標的に結合する、本発明1033の方法。
[本発明1038]
標的が細胞である、本発明1033の方法。
[本発明1039]
細胞が細菌細胞である、本発明1038の方法。
[本発明1040]
細菌細胞が黄色ブドウ球菌細胞または炭疽菌細胞である、本発明1039の方法。
[本発明1041]
細胞の内部成分に特異的に結合する第2のシグナリング部分と細胞とを接触させる工程をさらに含む、本発明1038の方法。
[本発明1042]
成分が核酸分子または脂質である、本発明1041の方法。
[本発明1043]
第2のシグナリング部分を光退色させる工程および（a）のシグナリング部分を検出する工程を工程（c）の後にさらに含む、本発明1041の方法。
[本発明1044]
標的が、微生物細胞により分泌される分子である、本発明1033の方法。
[本発明1045]
シグナリング部分が蛍光粒子である、本発明1033の方法。
[本発明1046]
シグナリング部分がDNA染色剤を含む、本発明1033の方法。
[本発明1047]
工程（b）の前に試料が微生物増殖培地と混合され、続いて1時間より長くインキュベーションされる、本発明1033の方法。
[本発明1048]
微生物増殖培地が抗生物質または微生物増殖阻害剤を含む、本発明1047の方法。
[本発明1049]
シグナリング部分または選択部分が容器内で乾燥形態にある、本発明1033の方法。
[本発明1050]
シグナリング部分または選択部分が工程（b）中に水和される、本発明1049の方法。
[本発明1051]
液体が、シグナリング部分を出入りする光の生成または透過に干渉する色素をさらに含む、本発明1033の方法。
[本発明1052]
検出工程（d）が直接捕捉、磁気捕捉、または密度に基づく捕捉により標的を検出する工程を含む、本発明1033の方法。
[本発明1053]
標的がヒト甲状腺刺激ホルモンまたは炭疽菌抗原から選択される、本発明1033の方法。
[本発明1054]
抗原が致死因子（LF）、防御抗原（PA）、およびポリ-D-γ-グルタミン酸（PDGA）カプセルポリペプチドから選択される、本発明1053の方法。
[本発明1055]
標的がメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）細胞である、本発明1033の方法。
[本発明1056]
標的が生体液に存在するかまたは生体液から得られる、本発明1033の方法。
[本発明1057]
生体液がヒト全血、血清、血漿、粘液、または尿である、本発明1056の方法。
[本発明1058]
選択力が、重力、磁力、電位、遠心力、求心力、浮遊密度、濾過、または圧力である、本発明1033の方法。
[本発明1059]
シグナリング部分が、フルオロフォア、化学発光剤、生物発光剤、共鳴光散乱粒子、光吸収剤もしくは発色シグナリング剤、またはアップコンバーティング蛍光体を含む、本発明1033の方法。
[本発明1060]
選択部分が、磁気粒子、シリカ粒子、またはフェリチンを含む、本発明1033の方法。
[本発明1061]
選択部分が標的競合相手とコンジュゲートされ;工程（b）で形成される複合体が選択部分とシグナリング部分との間および標的とシグナリング部分との間であり;標的が選択部分と特異的に結合せず;かつ標的の検出が標的の不在下で形成される選択部分とシグナリング部分との複合体の量の減少により間接的に起こる、本発明1033の方法。
[本発明1062]
容器が2mmを上回る画像化深度を有する画像化ウェルである、本発明1033の方法。