【手続補正書】
【提出日】平成24年6月5日(2012.6.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）：
【化１】
2011522037.tif 000001
（式中、
Ａは−ＣＨＲ７−
（式中、
Ｒ７は、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルである；）であり、
Ｇは−ＮＨ−、−ＮＲ６−、−Ｏ−、又は−Ｃ（Ｒ６）２−
（式中、
Ｒ６は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル及び置換されていてもよいアルキニルから独立して選ばれる；）であり、
Ｒ１は、−Ｒａ−Ｒ１０
（式中、
Ｒａは置換されていてもよい低級アルキレンであり、且つ
Ｒ１０は、置換されていてもよいナフチル又は置換されていてもよい縮合二環式へテロアリールである）であり；
Ｒ２は−Ｗ２１−Ｗ２２−Ｒｂ−Ｒ２０
（式中、
Ｗ２１は−（ＣＯ）−又は−（ＳＯ２）−であり；
Ｗ２２は結合、−Ｏ−、−ＮＨ−又は置換されていてもよい低級アルキレンであり；
Ｒｂは結合又は置換されていてもよい低級アルキレンであり；且つ
Ｒ２０は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルである；）であり、且つ
Ｒ３は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル又は置換されていてもよいアルキニルである；）
を有する化合物又は医薬的に許容されるその塩。
【請求項２】
Ｒ７が、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキルである、請求項１の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が−Ｗ２１−Ｗ２２−Ｒｂ−Ｒ２０
（式中、
Ｗ２１は−（ＣＯ）−であり；
Ｗ２２は−ＮＨ−であり；
Ｒｂは結合又は置換されていてもよい低級アルキレンであり；且つ
Ｒ２０は、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルである）である、請求項１の化合物。
【請求項４】
Ｒ３がＣ１−４アルキルである、請求項１の化合物。
【請求項５】
Ｒ７が、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキルである、請求項１の化合物。
【請求項６】
Ｇが−ＮＨ−、−ＮＲ６−、又は−Ｏ−
（式中、Ｒ６は低級アルキル又は低級アルケニルである）である、請求項１の化合物。
【請求項７】
Ｒａが置換されていてもよい低級アルキレンであり、且つ
Ｒ１０が、置換されていてもよいナフチル、置換されていてもよいキノリニル、置換されていてもよいイソキノリニル、置換されていてもよいキナゾリニル、置換されていてもよいキノザリニル、置換されていてもよいシンノリニル、置換されていてもよいナフチリジニル、置換されていてもよいベンゾトリアジニル、置換されていてもよいピリドピリミジニル、置換されていてもよいピリドピラジニル、置換されていてもよいピリドピリダジニル、置換されていてもよいピリドトリアジニル、置換されていてもよいインデニル、置換されていてもよいベンゾフリル、置換されていてもよいベンゾチエニル、置換されていてもよいインドリル、置換されていてもよいインダゾリル、置換されていてもよいベンゾキサゾリル、置換されていてもよいベンズイミダゾリル、置換されていてもよいベンゾチアゾリル、置換されていてもよいベンゾチアジアゾリル、置換されていてもよいフロピリジニル、置換されていてもよいチエノピリジニル、置換されていてもよいピロピリジニル、置換されていてもよいオキサゾロピリジニル、置換されていてもよいチアゾロピリジニル又は置換されていてもよいイミダゾピリジニルである、請求項１の化合物。
【請求項８】
Ｒａが置換されていてもよい低級アルキレンであり、且つ
Ｒ１０が、置換されていてもよいナフチル、置換されていてもよいキノリニル、置換されていてもよいイソキノリニル、置換されていてもよいキナゾリニル、置換されていてもよいキノザリニル、置換されていてもよいシンノリニル、置換されていてもよいナフチリジニル、置換されていてもよいベンゾトリアジニル、置換されていてもよいピリドピリミジニル、置換されていてもよいピリドピラジニル、置換されていてもよいピリドピリダジニル、置換されていてもよいピリドトリアジニル、置換されていてもよいインデニル、置換されていてもよいベンゾフリル、置換されていてもよいベンゾチエニル、置換されていてもよいインドリル、置換されていてもよいインダゾリル、置換されていてもよいベンゾキサゾリル、置換されていてもよいベンズイミダゾリル、置換されていてもよいベンゾチアゾリル、置換されていてもよいベンゾチアジアゾリル、置換されていてもよいフロピリジニル、置換されていてもよいチエノピリジニル、置換されていてもよいピロピリジニル、置換されていてもよいオキサゾロピリジニル、置換されていてもよいチアゾロピリジニル又は置換されていてもよいイミダゾピリジニルである、請求項２〜６のいずれか１項の化合物。
【請求項９】
Ｒ３がＣ１−４アルキルである、請求項７の化合物。
【請求項１０】
Ｒ２が−Ｗ２１−Ｗ２２−Ｒｂ−Ｒ２０
（式中、
Ｗ２１は−（ＣＯ）−であり；
Ｗ２２は−ＮＨ−であり；
Ｒｂは結合又は置換されていてもよい低級アルキレンであり；且つ
Ｒ２０は、置換されていてもよいアリール、又は置換されていてもよいヘテロアリールである）である、請求項７の化合物。
【請求項１１】
Ｒ７が、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキルであり；
Ｒ１が−Ｒａ−Ｒ１０
（式中、
Ｒａは置換されていてもよい低級アルキレンであり、且つ
Ｒ１０は、置換されていてもよいナフチル、置換されていてもよいキノリニル、置換されていてもよいイソキノリニル、置換されていてもよいキナゾリニル、置換されていてもよいキノザリニル、置換されていてもよいシンノリニル、置換されていてもよいナフチリジニル、置換されていてもよいベンゾトリアジニル、置換されていてもよいピリドピリミジニル、置換されていてもよいピリドピラジニル、置換されていてもよいピリドピリダジニル、置換されていてもよいピリドトリアジニル、置換されていてもよいインデニル、置換されていてもよいベンゾフリル、置換されていてもよいベンゾチエニル、置換されていてもよいインドリル、置換されていてもよいインダゾリル、置換されていてもよいベンゾキサゾリル、置換されていてもよいベンズイミダゾリル、置換されていてもよいベンゾチアゾリル、置換されていてもよいベンゾチアジアゾリル、置換されていてもよいフロピリジニル、置換されていてもよいチエノピリジニル、置換されていてもよいピロピリジニル、置換されていてもよいオキサゾロピリジニル、置換されていてもよいチアゾロピリジニル又は置換されていてもよいイミダゾピリジニルである；）であり；
Ｒ３がＣ１−４アルキルであり；
Ｒ２が−Ｗ２１−Ｗ２２−Ｒｂ−Ｒ２０
（式中、
Ｗ２１は−（ＣＯ）−であり；
Ｗ２２は−ＮＨ−であり；
Ｒｂは結合又は置換されていてもよい低級アルキレンであり；
Ｒ２０は、置換されていてもよいアリール又は置換されていてもよいヘテロアリールである）である、請求項１の化合物。
【請求項１２】
Ｒ７が、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキルであり；
Ｒ１が−Ｒａ−Ｒ１０
（式中、
Ｒａは置換されていてもよい低級アルキレンであり、且つ
Ｒ１０は、置換されていてもよいナフチル、置換されていてもよいキノリニル、置換されていてもよいイソキノリニル、置換されていてもよいキナゾリニル、置換されていてもよいキノザリニル、置換されていてもよいシンノリニル、置換されていてもよいナフチリジニル、置換されていてもよいベンゾトリアジニル、置換されていてもよいピリドピリミジニル、置換されていてもよいピリドピラジニル、置換されていてもよいピリドピリダジニル、置換されていてもよいピリドトリアジニル、置換されていてもよいインデニル、置換されていてもよいベンゾフリル、置換されていてもよいベンゾチエニル、置換されていてもよいインドリル、置換されていてもよいインダゾリル、置換されていてもよいベンゾキサゾリル、置換されていてもよいベンズイミダゾリル、置換されていてもよいベンゾチアゾリル、置換されていてもよいベンゾチアジアゾリル、置換されていてもよいフロピリジニル、置換されていてもよいチエノピリジニル、置換されていてもよいピロピリジニル、置換されていてもよいオキサゾロピリジニル、置換されていてもよいチアゾロピリジニル又は置換されていてもよいイミダゾピリジニルである；）であり；
Ｒ３がＣ１−４アルキルであり；
Ｒ２が−Ｗ２１−Ｗ２２−Ｒｂ−Ｒ２０
（式中、
Ｗ２１は−（ＣＯ）−であり；
Ｗ２２は−ＮＨ−であり；
Ｒｂは結合又は置換されていてもよい低級アルキレンであり；
Ｒ２０は、置換されていてもよいアリール又は置換されていてもよいヘテロアリールである）である、請求項６の化合物。
【請求項１３】
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、
（６Ｓ，９Ｓ）−２−アリル−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４，７−ジオキソヘキサヒドロピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］オキサジアジン−１（６Ｈ）−カルボキサミド、
（６Ｓ，９Ｓ）−８−（（２−アミノベンゾ［ｄ］チアゾール−４−イル）メチル）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、
（６Ｓ，９Ｓ）−２−アリル−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、
４−（（（６Ｓ，９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニル  ジハイドロゲンホスフェート、
４−（（（６Ｓ，９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−８−（ナフタレン−１−イルメチル）−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニル  ジハイドロゲンホスフェート、
４−（（（６Ｓ，９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニル  ホスフェートナトリウム、
４−（（（６Ｓ，９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（ナフタレン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニル  ホスフェートナトリウム、
（６Ｓ，９Ｓ）−２−アリル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−４，７−ジオキソ−Ｎ−（（Ｒ）−１−フェニルエチル）−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、
（６Ｓ，９Ｓ）−２−アリル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−９−メチル−４，７−ジオキソ−Ｎ−（（Ｓ）−１−フェニルエチル）−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシ−２，６−ジメチルベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、
（６Ｓ，９Ｓ）−８−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−イルメチル）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、
（６Ｓ，９Ｓ）−８−（ベンゾ［ｃ］［１，２，５］チアジアゾール−４−イルメチル）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−８−（イソキノリン−５−イルメチル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−８−（（５−クロロチエノ［３，２−ｂ］ピリジン−３−イル）メチル）−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソオクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノザリン−５−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド、及び
（６Ｓ，９Ｓ）−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）−Ｎ−（チオフェン−２−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド
から選ばれる、請求項１の化合物。
【請求項１４】
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド。
【請求項１５】
４−（（（６Ｓ，９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニル  ジハイドロゲンホスフェート。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物又は医薬的に許容されるその塩、及び医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物又は医薬的に許容されるその塩を含む、癌の治療剤又は予防剤。
【請求項１８】
癌が、肺癌、乳癌、直腸結腸癌、胃癌、膵癌、肝癌、子宮癌、卵巣癌、神経膠腫、黒色腫、リンパ腫、及び白血病からなる群から選ばれる、請求項１７記載の剤。
【請求項１９】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物又は医薬的に許容されるその塩を含む、線維症の治療剤又は予防剤。
【請求項２０】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物又は医薬的に許容されるその塩を含む、Ｗｎｔシグナル伝達経路により調節された疾患の治療剤又は予防剤。
【請求項２１】
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物又は医薬的に許容されるその塩を含む、癌、線維症、血管形成術に関連する再狭窄、多発性嚢胞腎、血管形成異常、結節性硬化症（ＴＳＣ）、ＫＳＨＶ関連腫瘍、脱毛、及びアルツハイマー病からなる群から選ばれる疾患又は状態の治療剤又は予防剤。
【請求項２２】
以下の一般式（ＩＩ）：
【化２】
2011522037.tif 000002
（式中、
Ａは−ＣＨＲ７−
（式中、
Ｒ７は、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルである；）であり、
Ｇは−ＮＨ−、−ＮＲ６−、−Ｏ−、又は−Ｃ（Ｒ６）２−
（式中、
Ｒ６は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル及び置換されていてもよいアルキニルから独立して選ばれる；）であり、
Ｒ１は、−Ｒａ−Ｒ１０
（式中、
Ｒａは置換されていてもよい低級アルキレンであり、且つ
Ｒ１０は、置換されていてもよいナフチル又は置換されていてもよい縮合二環式へテロアリールである）であり；
Ｒ２は−Ｗ２１−Ｗ２２−Ｒｂ−Ｒ２０
（式中、
Ｗ２１は−（ＣＯ）−又は−（ＳＯ２）−であり；
Ｗ２２は結合、−Ｏ−、−ＮＨ−又は置換されていてもよい低級アルキレンであり；
Ｒｂは結合又は置換されていてもよい低級アルキレンであり；且つ
Ｒ２０は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルである；）であり、
Ｒ３は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル又は置換されていてもよいアルキニルであり；
Ｒ９１は、置換されていてもよいアルキル、リンカー又は固相支持体から選ばれ；且つ
Ｒ９２は、置換されていてもよいアルキル、リンカー及び固相支持体から選ばれる；）を有する化合物又はその塩。
【請求項２３】
以下の一般式（Ｉ）：
【化３】
2011522037.tif 000003
（式中、
Ａは−ＣＨＲ７−
（式中、
Ｒ７は、水素、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルである；）であり、
Ｇは−ＮＨ−、−ＮＲ６−、−Ｏ−、又は−Ｃ（Ｒ６）２−
（式中、
Ｒ６は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル及び置換されていてもよいアルキニルから独立して選ばれる；）であり、
Ｒ１は、−Ｒａ−Ｒ１０
（式中、
Ｒａは置換されていてもよい低級アルキレンであり、且つ
Ｒ１０は、置換されていてもよいナフチル又は置換されていてもよい縮合二環式へテロアリールである）であり；
Ｒ２は−Ｗ２１−Ｗ２２−Ｒｂ−Ｒ２０
（式中、
Ｗ２１は−（ＣＯ）−又は−（ＳＯ２）−であり；
Ｗ２２は結合、−Ｏ−、−ＮＨ−又は置換されていてもよい低級アルキレンであり；
Ｒｂは結合又は置換されていてもよい低級アルキレンであり；且つ
Ｒ２０は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクロアルキル又は置換されていてもよいヘテロシクロアルキルである；）であり、且つ
Ｒ３は、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル又は置換されていてもよいアルキニルである；）を有する化合物又はその塩を調製する方法であって、
以下の一般式（ＩＩ）：
【化４】
2011522037.tif 000004
（式中、
Ｒ９１は、置換されていてもよいアルキル、リンカー又は固相支持体から選ばれ；
Ｒ９２は、置換されていてもよいアルキル、リンカー又は固相支持体から選ばれ；且つ他の記号は上記定義の通りである）を有する化合物、又はその塩と、酸とを反応させることを含む、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
最近、ｃ−ｍｙｃ（公知の発癌遺伝子）は、β−カテニン／ＴＣＦ４介在性の転写の標的遺伝子であることが示された（Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８１  １５０９−１５１２：Ｋｏｌｌｉｇｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９  Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１９，５６９６−５７０６）。多くの他の重要な遺伝子は、サイクリンＤ１及びメタロプロテイナーゼ（これらもまた、発癌に関与している）を含めて、ＴＣＦ４／β−カテニン転写経路により調節されることが確認されている（Ｃｒａｗｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８，２８８３−２８９１：Ｓｈｔｕｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，１１，５５２２−５５２７：Ｔｅｔｓｕ  ａｎｄ  ＭｃＣｏｒｍｉｃｋ，１９９９  Ｎａｔｕｒｅ，３９８，４２２−４２６）。更に、Ｗｎｔシグナル伝達のいくつかの下流メディエーターの過剰発現は、アポトーシスを調節することが見出されている（Ｍｏｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３，７９５０−７９５４：Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｃｅｌｌ  ９９，３３５−３４５：  Ｏｒｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ，１９９９  Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１４６，８５５−８６８：Ｓｔｒｏｖｅｌ  ａｎｄ  Ｓｕｓｓｍａｎ，１９９９，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．，２５３，６３７−６４８）。ヒトの直腸結腸癌細胞におけるＡＰＣの過剰発現は、アポトーシスを誘導し（Ｍｏｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，９３，７９５０−７９５４）、β−カテニンの異所発現は、細胞外マトリックスへの接着が失われることと関連するアポトーシスを阻害した（Ｏｒｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ，１９９９，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１４６，８５５−８６８）。ＴＣＦ４のドミナントネガティブ変異体の発現によるＴＣＦ４／β−カテニン転写の阻害は、Ｗｎｔ−１介在性の細胞生存を阻止し、細胞をアポトーシス刺激（例えば、抗癌剤）に感受性にした（Ｓｈａｏｑｉｏｎｇ  Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１５２，１，８７−９６）、また、ＡＰＣ変異は、サバイビン（周知の抗アポトーシスタンパク質）の構成的発現を可能にすることにより、アポトーシスを阻害する（Ｔａｏ  Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６２，８６６４−８６６７）。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
Ｗｎｔ遺伝子の変異は、ヒトの癌では発見されていないものの、ＡＰＣ又はβ−カテニンの変異は、大部分の直腸結腸腫瘍の場合と同様に、ＴＣＦ４の不適切な活性化、ｃ−ｍｙｃの過剰発現及び新生物の成長を引き起こす（Ｒｕｂｉｎｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ，１９９７，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７５，１７９０−１７９２：Ｍｏｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ，１９９７，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７５，１７８７−１７９０：Ｃａｃａ  ｅｔ  ａｌ，１９９９，Ｃｅｌｌ．Ｇｒｏｗｔｈ．Ｄｉｆｆｅｒ．１０，３６９−３７６）。直腸結腸癌の８５％では、腫瘍抑制遺伝子（ＡＰＣ）は、失われるか不活性化され、種々の他の癌でも、同様である（Ｋｉｎｚｌｅｒ  ａｎｄ  Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ，１９９６，Ｃｅｌｌ  ８７，１５９−１７０）。ＡＰＣの主要な役割は、Ｗｎｔシグナル伝達カスケードの負の調節因子という役割である。この経路の中心的な特徴は、大きなＡｘｉｎベースの複合体（これは、ＡＰＣを含む）との相互作用による、細胞質基質プールのβ−カテニンの安定性及び局在性の調節を包含する。この相互作用により、β−カテニンのリン酸化が起こり、それにより、その分解を標的化する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６４】
（式中、
Ａは−ＣＨＲ７−（式中、Ｒ７は、水素、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアルケニル、必要に応じて置換されたアルキニル、必要に応じて置換されたアリールアルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルキルアルキル、必要に応じて置換されたヘテロシクロアルキルアルキル、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたシクロアルキル又は必要に応じて置換されたヘテロシクロアルキルである；）であり、
Ｇは−ＮＨ−、−ＮＲ６−、−Ｏ−、−ＣＨＲ６−又は−Ｃ（Ｒ６）２−（式中、Ｒ６は、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアルケニル及び必要に応じて置換されたアルキニルから独立して選ばれる；）であり、
Ｒ１は、必要に応じて置換されたアリールアルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルキルアルキル又は必要に応じて置換されたヘテロシクロアルキルアルキルであり；
Ｒ２は−Ｗ２１−Ｗ２２−Ｒｂ−Ｒ２０（式中、Ｗ２１は−（ＣＯ）−又は−（ＳＯ２）−であり；Ｗ２２は結合、−Ｏ−、−ＮＨ−又は必要に応じて置換された低級アルキレンであり；Ｒｂは結合又は必要に応じて置換された低級アルキレンであり；且つＲ２０は、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアルケニル、必要に応じて置換されたアルキニル、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたシクロアルキル又は必要に応じて置換されたヘテロシクロアルキルである；）であり、
Ｒ３は、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアルケニル又は必要に応じて置換されたアルキニルであり；
Ｒ９１は、必要に応じて置換されたアルキル、リンカー又は固相支持体から選ばれ；且つ
Ｒ９２は、必要に応じて置換されたアルキル、リンカー又は固相支持体から選ばれる；）。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８７】
本発明のライブラリーのペプチドミメティックの合成は、本発明の第一、第二及び第三成分片と組み合わせて、公知のペプチド合成技術を使用して、達成され得る。更に具体的には、立体配座的に制限されたアルファへリックスミメティックのＮ−末端及び／又はＣ−末端には、アミノ酸配列が付加され得る。この目的のために、当該ミメティックは、固相支持体（例えば、ＰＡＭ樹脂）上で、公知技術（例、Ｊｏｈｎ  Ｍ．Ｓｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｊａｎｉｓ  Ｄ．Ｙｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９８４，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＩＩ．を参照）により、又はシリル連結樹脂上にて、アルコール結合（Ｒａｎｄｏｌｐｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ  Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１７：５７１２−１９，１９９５を参照）により、合成され得る。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９４】
本発明のライブラリーも、他の種々の技術及び方法により、生物活性についてスクリーニングし得る。例えば、このスクリーニングアッセイは、（１）ライブラリーのミメティックを目的の生体標的（例えば受容体）と接触させて、そのライブラリーのミメティックと標的との間の結合を生じさせることにより、そして（２）適当なアッセイ（例えば、Ｌａｍ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８２−８４，１９９１）又はＧｒａｍｉｎｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２：１００８−１０１１，１９９４））により開示された熱量測定アッセイ）（これらの両方は、本明細書中参照により援用される）により、その結合イベントを検出することにより、実行され得る。好ましい実施形態では、これらのライブラリーメンバーは、溶液中にあり、標的は、固相に固定化される。或いは、このライブラリーは、固相に固定化され得、それを溶液中で標的と接触させることにより、精査され得る。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９５】
結合アッセイを行うための方法も、以下のとおり適用され得る。当該方法は、第一補助活性化因子、相互作用タンパク質、及び試験化合物を含めた組成物を提供することを含み得る。前記第一補助活性化因子のアミノ酸構造は、ＬＸＸＬＬ、ＬＸＸＬＩ、又はＦＸＸＦＦ（式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）の結合モチーフを含む。この方法は、化合物の存在に起因する前記第一補助活性化因子と前記相互作用タンパク質との間の結合の変化を検出することと、その後、試験化合物の結合への影響を特徴づけることを更に含む。アッセイは、試験化合物が２つのタンパク質間の結合に及ぼす影響を測定できる方法であれば、いずれの方法で行われてもよい。このようなアッセイが当該技術分野で多く知られており、本発明の方法に利用され得るが、いわゆる、２ハイブリッドシステム及びスプリットハイブリッドシステムが挙げられる。２ハイブリッドシステムと、このシステムを用いてアッセイを行う種々の方法は、例えば米国特許第６、４１０、２４５号に記載されている。スプリットハイブリッドシステムは、例、Ｈｓｉｕ−Ｍｉｎｇ  Ｓｈｉｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：１３８９６−１３９０１，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １９９６；及び  Ｊｏｈｎ  Ｄ．Ｃｒｉｓｐｉｎｏ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ，３：１−２０，Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １９９９に記載されている。スプリットハイブリッドシステムにおいて、融合タンパク質が用いられるが、この際、タンパク質Ｘは、ｌｅｘＡ  ＤＮＡ結合部位（ｐＬｅｘＡ）に融合され、タンパク質Ｙは、転写活性化剤であるＶＰ１６（ｐＳＨＭ．１−ＬａｃＺ）に融合される。ｌｅｘＡ−Ｘ及びＶＰ１６−Ｙ間の相互作用は、テトラサイクリンリプレッサータンパク質（ＴｅｔＲ）の発現をもたらす。ＴｅｔＲは、ＨＩＳ３レポーター遺伝子の転写を妨げ、細胞がヒスチジンの欠けている培地で増殖できないようにする。タンパク質−タンパク質相互作用の崩壊は、テトラサイクリンリプレッサーの発現を停止させることにより、細胞がそのような培地で増殖する能力を回復させるであろう。従って、本発明の化合物は、増殖中の細胞に加えられてもよく、もし、その化合物を加えて細胞が培地で成長する能力を回復させれば、その化合物は、タンパク質間相互作用の有効な撹乱物質と認められ得る。スプリットハイブリッド系を形成するのに必要な酵母菌株としては、Ｓｔａｎｌｅｙ  Ｍ．Ｈｏｌｌｅｎｂｅｒｇ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １５（７）：３８１３−３８２２，Ｊｕｌｙ  １９９５に記載されたような、２ハイブリッド体のＬｅｘＡ／ＶＰ１６コンストラクトが用いられ得る。スプリットハイブリッドシステムの有用な変更は、Ｔａｋｅｍａｒｕ，Ｋ．Ｉ．ａｎｄ  Ｍｏｏｎ，Ｒ．Ｔ．Ｊ．ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１４９：２４９−２５４，２０００によって活用された。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９８】
前記転写補助活性化因子は、ヒト転写補助活性化因子であり得る。他の実施形態においては、前記転写補助活性化因子は、ヒストン・アセチルトランスフェラーゼ活性を有する補助活性化因子のｐ３００／ＣＢＰファミリーのメンバーである。ｐ３００は、例えば、Ｅｃｋｎｅｒら．（１９９４）により開示され、ＣＢＰは、Ｂａｎｎｉｓｔｅｒ及びＫｏｕｚａｒｉｄｅｓ（１９９６）により開示されている。本発明の５つの目的のために、ｐ３００／ＣＢＰの引用は、ヒトのｐ３００のアレリック及び合成変異体に言及し、他の哺乳動物の変異体及びそのアレリック及び合成変異体に言及するのみならず、前記ヒト及び哺乳動物のｐ３００の形態のフラグメントに言及する。このアッセイの一つの態様においては、相互作用タンパク質が、転写因子又は第二補助活性化因子である。このアッセイの一つの態様においては、前記相互作用タンパク質は：ＲＩＰ１４０；ＳＲＣ−１（ＮＣｏＡ−１）；ＴＩＦ２（ＧＲＩＰ−１；ＳＲＣ−２）；ｐ（ＣＩＰ；ＲＡＣ３；ＡＣＴＲ；ＡＩＢ−１；ＴＲＡＭ−１；ＳＲＣ−３）；ＣＢＰ（ｐ３００）；ＴＲＡＰｓ（ＤＲＩＰｓ）；ＰＧＣ−１；ＣＡＲＭ−１；ＰＲＩＰ（ＡＳＣ−２；ＡＩＢ３；ＲＡＰ２５０；ＮＲＣ）；ＧＴ−１９８；及びＳＨＡＲＰ（ＣｏＡＡ；ｐ６８；ｐ７２）のいずれか一つである。このアッセイの他の態様においては、前記相互作用タンパク質は：ＴＡＬ１；ｐ７３；ＭＤｍ２；ＴＢＰ；ＨＩＦ−１；Ｅｔｓ−１；ＲＸＲ；ｐ６５；ＡＰ−１；Ｐｉｔ−１；ＨＮＦ−４；Ｓｔａｔ２；ＨＰＶＥ２；ＢＲＣＡ１；ｐ４５（ＮＦ−Ｅ２）；ｃ−Ｊｕｎ；ｃ−ｍｙｂ；Ｔａｘ；Ｓａｐ  １；ＹＹ１；ＳＲＥＢＰ；ＡＴＦ−１；ＡＴＦ−４；Ｃｕｂｉｔｕｓ；Ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｕｓ；Ｇｌｉ３；ＭＲＦ；ＡＦＴ−２；ＪＭＹ；ｄＭａｄ；ＰｙＬＴ；ＨＰＶ  Ｅ６；ＣＩＴＴＡ；Ｔａｔ；ＳＦ−１；Ｅ２Ｆ；ｊｕｎＢ；ＲＮＡヘリカーゼＡ；Ｃ／ＥＢＰβ；ＧＡＴＡ−１；Ｎｅｕｒｏ  Ｄ；Ｍｉｃｒｏｐｈｔｈａｌｉｍｉａ；Ｅ１Ａ；ＴＦＩＩＢ；ｐ５３；Ｐ／ＣＡＦ；Ｔｗｉｓｔ；Ｍｙｏ  Ｄ；ｐｐ９Ｏ  ＲＳＫ；ｃ−Ｆｏｓ；及びＳＶ４０Ｌａｒｇｅ  Ｔのいずれか一つである。このアッセイの他の態様においては、前記相互作用タンパク質は：ＥＲＡＰ１４０；ＲＩＰ１４０；ＲＩＰ１６０；Ｔｒｉｐ１；ＳＷＩ（ＳＮＦ）；ＡＲＡ７０；ＲＡＰ４６；ＴＩＦ１；ＴＩＦ２；ＧＲＩＰ１；及びＴＲＡＰのいずれか一つである。本発明のアッセイの他の態様においては、前記相互作用タンパク質は：ＶＰ１６；ＶＰ６４；ｐ３００；ＣＢＰ；ＰＣＡＦ；ＳＲＣ１  ＰｖＡＬＦ；ＡｔＨＤ２Ａ；ＥＲＦ−２；ＯｓＧＡＩ；ＨＡＬＦ−１；Ｃ１；ＡＰ−１；ＡＲＦ−５；ＡＲＦ−６；ＡＲＦ−７；ＡＲＦ−８；ＣＰＲＦ１；ＣＰＲＦ４；ＭＹＣ−ＲＰ／ＧＰ；及びＴＲＡＢ１のいずれか一つである。本発明の他の態様において、前記第一補助活性化因子は、ＣＢＰ又はｐ３００である。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１９】
腫瘍成長に対する本発明の特定の化合物又は組成物の阻害効果は、当該分野において公知である任意の適宜方法により特徴づけられてもよい。例えば、サバイビン発現に対する化合物又は組成物の効果を測定することができる。サバイビン発現をダウンレギュレートする化合物又は組成物は、おそらく腫瘍成長に対する阻害効果を示す。更に、腫瘍細胞株を用いたアッセイ（例えば、ＳＷ４８０細胞を用いた軟寒天アッセイ）及び腫瘍成長の動物モデル（例えば、腫瘍細胞を移植したヌードマウス及びＭｉｎマウスモデル）はまた、実施例において詳述するように、所定の化合物又は組成物の、腫瘍の成長に対する阻害効果を評価するのに用いられ得る。腫瘍成長に対する他の例示的な動物モデル又は異種移植片は、乳癌（Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：４６７８−８４，２００２；Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．５７：１８３−９２，１９９９）、膵癌（Ｂｏｕｖｅｔ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：１５３４−４０，２００２）、卵巣腫瘍（Ｎｉｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４９：９３−１００，２００２；Ｂａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．７８：３７３−９，２０００）、黒色腫（Ｄｅｍｉｄｅｍ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：２２９４−３００，２００１）、直腸結腸癌（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．Ｓｃｉ．４５：１５７８−８４，２０００；Ｔｓｕｎｏｄａ  ｅｔ  ａｌ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９：１１４９−５２，１９９９；Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５：２６７−７４，１９９９；Ｓｈａｗｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．Ｅｍｐｈａｓｉｓ  Ｔｕｍｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：２０１−８，１９９５；ＭｃＧｒｅｇｏｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｄｉｓ．Ｃｏｌｏｎ．Ｒｅｃｔｕｍ．３６：８３４−９，１９９３；Ｖｅｒｓｔｉｊｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．８：１１９３−２００，１９８８）、肝細胞癌（Ｌａｂｏｎｔｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｈｅｐａｔｏｌ．Ｒｅｓ．１８：７２−８５，２０００）、及び胃癌（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ８５：２４３−７，２０００）に関するものを含む。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４１】
本発明の化合物は、Ｗｎｔ経路のＴＣＦ／β−カテニンのシグナル伝達も阻害し得る。従って、本発明の他の態様は、結節硬化症（ＴＳＣ）を治療又は予防する方法を提供し、当該方法は、それが必要な被験体に、本発明のアルファヘリックスミメティックの安全有効量を投与することを含む。ＴＳＣを有する被験体は、典型的に脳、心臓、腎臓、及び他の組織において多発性局所性病変が発達する（例えばＧｏｍｅｚ，Ｍ．Ｒ．Ｂｒａｉｎ  Ｄｅｖ．１７（ｓｕｐｐｌ）：５５−５７（１９９５）を参照）。哺乳動物細胞の研究は、ＴＳＣ１（ハマルチンを発現させる）及びＴＳＣ２（ツベリンを発現させる）の過剰発現が、細胞増殖を負に調節し、また、Ｇ１／Ｓ停止を誘発することが明らかとなっている（例えば、Ｍｉｌｏｌｏｚａ，Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．９：１７２１−１７２７（２０００）を参照）。ハマルチン及びツベリンがβ−カテニン分解複合体のレベルで機能し、また、より具体的には、これらのタンパク質がβ−カテニン分解複合体に加わることにより、β−カテニンの安定性及び活性を負に調節することが明らかとなっている（例えば、Ｍａｋ，Ｂ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（８）：５９４７−５９５１，（２００３）を参照）。β−カテニンは、膜結合型カドヘリンファミリのメンバーとの結合を通じて細胞接着に関与し、また、Ｗｎｔ／Ｗｉｎｇｌｅｓｓ経路の鍵コンポーネントとして細胞増殖及び細胞分化に関与する、９５−ｋＤａタンパク質である（例えば、Ｄａｎｉｅｌｓ，Ｄ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ  ２６：６７２−６７８（２００１）を参照）。この経路の誤調節は、ヒト及び齧歯動物において腫瘍を発生させることが明らかとなっている。本発明は、β−カテニンの活性及び、特に他のタンパク質とのその相互作用を調節する化合物を提供し、従って、ＴＳＣの治療に使用され得る化合物を提供する。１つの実施形態においては、本発明は、ＴＳＣを治療する。即ち、ＴＳＣに罹った被験体に本発明のアルファヘリックスミメティックを投与すると、ＴＳＣの重症度、程度（ｅｘｔｅｎｔ）又は程度（ｄｅｇｒｅｅ）などの低減が達成される。他の実施形態においては、本発明は、ＴＳＣを予防する。即ち、新規又は追加のＴＳＣを発症すると予測されている被験体に本発明のアルファヘリックスミメティックを投与すると、ＴＳＣの予想される重症度、程度（ｅｘｔｅｎｔ）又は程度（ｄｅｇｒｅｅ）などの低減が達成される。必要に応じて、当該被験体は、哺乳動物被験体である。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４３】
ＬＥＦ／ＴＣＦ  ＤＮＡ結合タンパク質は、活性化したβ−カテニン（Ｗｎｔシグナル伝達の産物）と共に作用して、下流標的遺伝子を転写活性化する。ＤａｓＧｕｐｔａ，Ｒ．ａｎｄＦｕｃｈｓ，Ｅ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １２６（２０）：４５５７−６８（１９９９）は、細胞運命の変化と分化のコミットメントが起こった場合、毛髪発生及び周期において特定時間に活性化したＬＥＦ／ＴＣＦ複合体の重要性を明らかにしている。更に、皮膚形態形成において、β−カテニンは、毛嚢形成において必須であることが明らかとなっていて、その過剰発現はマウスにおける「ｆｕｒｒｙ」表現型の原因となる、（Ｇａｔ，Ｕ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ９５：６０５−６１４（１９９８）  ａｎｄ  Ｆｕｃｈｓ，Ｅ．Ｈａｒｖｅｙ  Ｌｅｃｔ．９４：４７−４８（１９９９）。また、Ｘｉａ，Ｘ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９８：１０８６３−１０８６８（２００１）を参照）。本発明の化合物は、Ｗｎｔシグナル伝達の発現を阻害し、また、β−カテニン複合体の形成を妨げることが明らかとなっている。従って、本発明は、それが必要な被験体に、本発明のアルファヘリックスミメティックの安全有効量を投与することを含む、毛髪の成長を調節する方法を提供する。ここで、前記量は、被験体において毛髪の成長を調節するのに有効な量である。必要に応じて、当該被験体は、哺乳動物被験体である。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４７】
治療を必要とする被験体は、アルツハイマー病の様々な段階にあるヒト又は非ヒト霊長類或いは他の動物であってもよい。アルツハイマー病の診断方法としては、神経心理学的措置、機能的画像化措置、生物学的マーカー、及び頭脳組織の剖検の使用が挙げられ、当該分野において公知である（例、Ｄｉｎｓｍｏｒｅ，Ｊ．Ａｍ．Ｏｓｔｅｏｐａｔｈ．Ａｓｓｏｃ．９９（９）Ｓｕｐｐｌ．：Ｓ１−６，１９９９；Ｋｕｒｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓｍ．Ｓｕｐｐｌ．６２：１２７−３３，２００２；Ｓｔｏｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｒｏｎｔ  Ｖｉｏｓｃｉ．７：ｅ１５５−８４，２００２；Ｍａｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｒｉａｔｒｉｃｓ  ５７：３６−４０，２００２；Ｋｒｉｌ  ａｎｄ  Ｈａｌｌｉｄａｙ，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．４８：１６７−２１７，２００１；Ｇｕｒｗｉｔｚ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２３：３８６，２０００；Ｍｕｌｌｅｒ−Ｓｐａｈｎ  ａｎｄ  Ｈｏｃｋ，Ｅｕｒ．Ａｒｃｈ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  Ｃｌｉｎ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２４９  Ｓｕｐｐｌ．３：３７−４２；Ｆｏｘ  ａｎｄ  Ｒｏｓｓｏｒ，Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏ．（Ｐａｒｉｓ）１５５  Ｓｕｐｐｌ．４：Ｓ３３−７，１９９９を参照）。予防を必要とする被験体は、アルツハイマー病が発症する危険性のあるヒト又は非ヒト霊長類或いは他の動物、例えば、この疾患の原因である特定の遺伝子（例えば、アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン−１、及びプレセニリン−２をコードする遺伝子）及び／又はこの疾患への発病に関与する遺伝子（例えば、アポリポタンパク質Ｅ遺伝子）の変異を有する個体であってもよい（Ｒｏｃｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．Ｂｕｌｌ．６１：１−２４，２００３）。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４９】
本発明はまた、神経突起伸長を促進する方法を提供する。当該方法は、神経突起伸長を促進する有効量で、神経と式（Ｉ）による化合物とを接触させる工程を含む。当該方法は、神経変性疾患（例、緑内障、黄斑変性、パーキンソン病、及びアルツハイマー病）及び神経系の損傷の治療に有用である。神経細胞の神経突起の長さが、化合物の非存在下よりも、化合物の存在下で統計的に有意に長ければ、その化合物は、神経突起伸長を促進する。このような化合物は、インビトロ培養細胞（例、ＰＣ−１２細胞、神経芽細胞種Ｂ１−４細胞）（Ｂｉｔａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓ．２９８：２３３−４２，１９９９；Ｐｅｌｌｉｔｔｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．４５：３６７−７６，２００１；Ｓａｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５８：５０−３，１９９９；Ｈｉｒａｔａ  ａｎｄ  Ｆｕｊｉｓａｗａ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．３２：４１５−２５，１９９７；Ｃｈａｕｖｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｉａ  １８：２１１−２３，１９９６；Ｖｅｔｔｅｒ  ａｎｄ  Ｂｉｓｈｏｐ，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．５：１６８−７８，１９９４；Ｋｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：４７４８−５２，１９９３；Ｓｋｕｂｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１１５：１１３７−４８，１９９１；Ｏ'Ｓｈｅａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ  ７：２３１−７，１９９１；Ｒｙｄｅｌ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：１２５７−６１，１９８８）を使用するか、或いは、外植片（Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．３１：１４３−７，１９８３；Ｖａｎｈｅｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２：７７６−８２，１９９０；Ｃａｒｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１２：５６７−７８，１９９４）を使用して同定することができる。本発明による化合物と神経細胞とを接触させることは、インビトロ又はインビボにおいて行うことができる。得られた処理神経細胞は、インビトロで生成されれば、必要とする組織に移植することができる（Ｌａｃｚａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．Ｐｒｏｔｏｃ．１１：１４５−５４，２００３；Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．３４３：１２９−３３，２００３；Ｆｕｋｕｎａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ８：４３５−４１，１９９９）。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５０】
本発明はまた、神経幹細胞の分化を促進する方法も提供し、前記方法は、神経幹細胞の分化を促進する有効量で、神経幹細胞と一般式（Ｉ）による化合物とを接触させることを含む。当該方法は、神経変性疾患（例えば、緑内障、黄斑変性、パーキンソン病、及びアルツハイマー病）及び神経系の損傷の治療にも有用である。「神経幹細胞」は、適切な条件下で、神経細胞、星状細胞、又は乏突起膠細胞に分化できる、クローン化可能細胞、未分化細胞、多能性細胞を意味する。神経幹細胞が化合物の非存在下よりも、化合物の存在下で統計的に有意に高い分化程度を示せば、その化合物は神経幹細胞の分化を促進する。このような化合物は、インビトロ培養幹細胞又は動物モデルと関係したアッセイを用いて確認され得る（Ａｌｂｒａｎｃｈｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．２５：７２５−３０，２００３；Ｄｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．  Ｎｅｕｒｏｌ．１８２：３７３−８２，２００３；Ｍｕｎｏｚ−Ｅｌｉａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  ２１：４３７−４８，２００３；Ｋｕｄｏ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６６：２８９−９５，２００３；Ｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｉｎ．Ｍｅｄ．Ｊ．１１６：４２８−３１，２００３；Ｋａｗａｍｏｒｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｃｅｌｌ  １５：１７８−８２，２００２；Ｓｔａｖｒｉｄｉｓ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３１：４５−９，２００３；Ｐａｃｈｅｒｎｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｐｒｏｄ．Ｎｕｔｒ．Ｄｅｖ．４２：３１７−２６，２００２；Ｆｕｋｕｎａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ）。神経幹細胞は、培養された幹細胞、そのソースの組織から新たに単離した幹細胞又はそのソースの生物体内の幹細胞であってもよい。従って、神経幹細胞と本発明による化合物とを接触させることは、インビトロ（培養幹細胞又は新たに分離した幹細胞の場合）又はインビボ（そのソースの生物体内の幹細胞の場合）のいずれかで行い得る。生じる分化神経細胞は、インビトロで作製されれば、必要とする組織に移植されてもよい（Ｌａｃｚａ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｆｕｋｕｎａｇａ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ）。このような組織としては、外傷又は神経変性病に罹った脳組織又は他の神経組織が挙げられる。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５２】
線維症の発症の鍵となるメディエーターである形質転換成長因子β（ＴＧＦβ）は、細胞の増殖及び分化、アポトーシス、並びに細胞外基質（ＥＣＭ）の沈着に重要である。ＴＧＦβシグナル伝達は、Ｓｍａｄ及びＡＰ−１の転写経路双方を活性化させる。肺線維症（ＰＦ）患者の気道におけるＴＧＦβは、最初に初期気道炎症の縮小と組織修復に関わる「治癒分子」として機能し得る。しかし、ＰＦにおいて発症する可能性があるもののような持続性の炎症反応を伴う場合は、過剰なＥＣＭ沈着及び気道線維症の発症にバランスがシフトすることがある。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６５】
放射線誘導性線維症（ＲＩＦ）は、慢性痛、神経障害、関節の運動制限、及びリンパ節の腫脹を引き起こし得る、放射線治療の重篤且つ一般的な合併症である。それは胸、頭、首、及び結合組織において最もよく生じる。ＲＩＦは放射線治療に曝した後４〜６月乃至１〜２年までに発症し得、時間とともに重篤となる。ＲＩＦ発症の危険因子としては、高放射線量、大きな体積の組織の放射線への曝露、及び外科手術、化学療法、又は両方と併用される放射線が挙げられる。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２７６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２７６】
他の病的状態
アポトーシスのインヒビター、サバイビンは肺高血圧症に関係する。β−カテニン  Ｔｃｆ／Ｌｅｆ介在性の転写を通じたサバイビン発現の上昇によって、ＣＫ２キナーゼ活性により細胞の生存が促進されることが示されている（Ｔａｐｉａ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０３：１５０７９−８４（２００６））。従ってこの経路は、β−カテニン介在性の遺伝子転写過程を改変するために本化合物を利用する別の機会を提供する。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２７７】
ＭｃＭｕｒｔｒｙ，Ｍ．Ｓ．（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１５：１４６１−１４６３（２００５））らは、肺動脈高血圧症の患者の肺動脈においてサバイビンが発現したが、肺動脈高血圧症でない患者の肺動脈においては発現しなかったことを報告した。肺動脈高血圧症を誘導するためにモノクロタリンで処理したラットにおいて同様の結果が見出された。当該ラットにおいては、生存期間が延長されて、ドミナント−ネガティブな特性を有するサバイビン変異体を有するアデノウイルスの吸入を伴う遺伝子治療により、肺動脈高血圧症が治療された。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２７８】
サバイビンの発現は過剰増殖性の新生血管系においてアップレギュレートされる（Ｓｉｍｏｓａ，Ｈ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．４１：６８２−６９０，２００５）。サバイビンは、ヒト動脈硬化性プラーク及び狭窄静脈移植血管において特異的に発現した。大腿動脈のバルーン障害後過形成のウサギモデルにおいては、リン酸化欠損サバイビン変異体ベクターによる治療で新生内膜領域が減少した。サバイビン発現と血管傷害後の平滑筋細胞表現型の調節とが相関することにより、サバイビンが血管疾患の治療における治療法のための標的であることが指摘される。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８１】
サバイビンは静脈移植血管過形成においても役割を果たす（Ｗａｎｇ，Ｇ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．２５：２０８１−２０８７，２００５）。バイパス移植ではよく、内膜過形成、内膜肥厚により特徴づけられる線維増殖性病変が発達する。ウサギの静脈移植血管がアデノウイルス性のサバイビンコンストラクトで治療された。アデノウイルスで治療された移植血管すべてで導入遺伝子の発現が証明された。ドミナントネガティブ型変異アデノウイルスによる治療で移植リモデリングの初期における細胞増殖が減少した。当該データにより、この系においても同様に、静脈移植血管リモデリングの調節におけるサバイビンの重要な役割についての証拠が提供され、そしてバイパス移植と併用する、本発明の化合物の役割が更に支持される。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８７】
ＴＧＦ−βは、ＣＯＰＤ患者の気道上皮及び末梢気道のマクロファージで高発現している。コルチコステロイド及びインターフェロン−γ等の、ＰＦを治療するための抗炎症療法の使用は、効果のばらつきや重大な副作用のために、期待はずれとなっている。従って、患者に見られる線維症の進行防止又は治療のための重要な目標は、予め同定された、線維症の発症に関わる分子経路（即ち、ＴＧＦ−βシグナル伝達）と相互作用する小分子を同定することである。
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８８】
Ｗｎｔシグナル伝達とヒトの疾患
脊椎動物のＷｎｔタンパク質は、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａのｗｉｎｇｌｅｓｓ遺伝子のホモログであり、細胞分化、増殖、及び極性の調節において重要な役割を果たすことが示されている。Ｃａｄｉｇａｎ，Ｋ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１１：３２８６−３３０５（１９９７）；Ｐａｒｒ，Ｂ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．４：５２３−５２８（１９９４）；Ｓｍａｌｌｅｙ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔ．Ｒｅｖ．１８：２１５−２３０（１９９９）；ａｎｄ  Ｗｉｌｌｅｒｔ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．８：９５−１０２（１９９８）。Ｗｎｔタンパク質は、少なくとも３つの公知の経路を通じてシグナルを伝達する、システインリッチな分泌性糖タンパク質である。これらのうち最もよく理解され、一般に標準経路と呼ばれる経路は、細胞表面レセプターｆｒｉｚｚｌｅｄ及び細胞表面低密度リポタンパク質共受容体へのＷｎｔタンパク質の結合を包含し、それによってグリコーゲンシンターゼキナーゼ３１３（ＧＳＫ−３１３）による細胞骨格タンパク質β−カテニンのリン酸化を阻害する。次いで、このリン酸化過少のβ−カテニンは核へと移行し、そこで転写因子のＬＥＦ／ＴＣＦファミリーのメンバーと結合する。β−カテニンの結合によりＬＥＦ／ＴＣＦ因子がリプレッサーからアクチベーターへと転換し、それによって細胞特異的な遺伝子転写のスイッチをオンにする。Ｗｎｔタンパク質がシグナル伝達し得る他の２経路は、カルモジュリンキナーゼＩＩ及びプロテインキナーゼＣ（Ｗｎｔ／Ｃａ＋＋経路として知られる）又はｊｕｎ  Ｎ−ターミナルキナーゼ（平面内細胞極性経路としても知られる）のいずれかの活性化を通したものである。
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８９】
Ｗｎｔ経路のいくつかのコンポーネントはヒト及びマウスにおける腫瘍形成に関係しているが、それらの研究が、ひいてはβ−カテニンの役割を同定している。Ｗｎｔ１は、マウスにおいて乳腺腫瘍を引き起こす、レトロウイルスの組み込みから最初に同定された。Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，Ａ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ５５：６１９−６２５（１９８８）；ａｎｄ  Ｊｕｅ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１２：３２１−３２８（１９９２）。乳腺におけるプロテインキナーゼＣＫ２の過剰発現により、β−カテニン依存性のＷｎｔシグナル伝達が促進されるが、トランスジェニックマウスにおいては乳腺腫瘍の発生率も増加する。Ｌａｎｄｅｓｍａｎ−Ｂｏｌｌａｇ，Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２０：３２４７−３２５７（２００１）；ａｎｄ  Ｓｏｎｇ，Ｄ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：２３７９０−２３７９７（２０００）。Ｗｎｔシグナル伝達と腫瘍形成との最も克明な相関が、腸管上皮で明らかとなっている。幾例かの結腸腫瘍におけるβ−カテニン自体の変異が、いくつかの報告に記載されているが、これらの変異はＧＳＫ−３１３リン酸化部位か、又はその付近に生じている。Ｐｏｌａｋｉｓ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．４７０：２３−３２（１９９９）；ａｎｄ  Ｍｏｒｉｎ，Ｐ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７５：１７８７−１７９０（１９９７）。Ｃｈｉｌｏｓｉと協力者ら（Ｃｈｉｌｏｓｉ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６２：１４９５−１５０２，２００３）は、ＩＰＦ患者においてβ−カテニンの変異を調査したが、何も同定しなかった。これは、Ｗｎｔ経路の異常な活性化は応答であってＩＰＦの原因ではないとする機序と一貫する。
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９１】
発生の間に、上皮−間充組織シグナル伝達は、上皮細胞及び間葉細胞の両方の分化及び発生の調節において重要な役割を果たす。気道上皮にはいくつかの重要なシグナル伝達分子が発現しており、骨形成ファミリーのメンバー（ＢＭＰ−４）、形質転換増殖因子ファミリーのメンバー（ＴＧＦ−β１、−２）及びソニック・ヘッジホッグ（ＳＨＨ）を含む、隣接する間充組織へシグナルを伝達する。すると今度は、間充組織でＦＧＦ−７、−９、及び−１０等のいくつかのシグナル伝達分子が発現するが、これらは肺の上皮組織の発生及び増殖に重要である。マウスでのｇａｉｎ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ型及びｌｏｓｓ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ型の実験により、肺上皮及び間充組織の増殖及び分化の調節におけるこれら各因子の重要な役割が証明されている。Ｂｅｌｌｕｓｃｉ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １９９７，１２４：４８６７−４８７８；Ｓｉｍｏｎｅｔ，Ｗ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９９５，９２：１２４６１−１２４６５；Ｃｌａｒｋ，Ｊ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００１，２８０：Ｌ７０５−Ｌ７１５；Ｍｉｎ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１９９８，１２：３１５６−３１６１；Ｍｏｔｏｙａｍａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１９９８，２０：５４−５７；Ｌｉｔｉｎｇｔｕｎｇ，Ｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１９９８，２０：５８−６１；Ｐｅｐｉｃｅｌｌｉ，Ｃ．Ｖ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１９９８，８：１０８３−１０８６；Ｗｅａｖｅｒ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １９９９，１２６：４００５−４０１５。
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９２】
Ｗｎｔシグナル伝達は肺発生の間も役割を果たす。発生中の肺及び成人の肺においては、Ｗｎｔ２、Ｗｎｔ２ｂ／１３、Ｗｎｔ７ｂ、Ｗｎｔ５ａ及びＷｎｔｌｌを含む、いくつかのＷｎｔ遺伝子が発現する。Ｋｉｓｐｅｒｔ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １９９６，１２２：３６２７−３６３７；Ｌｉｎ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．２００１，２２２：２６−３９；Ｍｏｎｋｌｅｙ，Ｓ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １９９６，１２２：３３４３−３３５３；Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ｔ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １９９９，１２６：１２１１−１２２３；Ｗｅｉｄｅｎｆｅｌｄ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００２，２７７：２１０６１−２１０７０。これらのうち、Ｗｎｔ５ａ及びＷｎｔ７ｂは肺発生の間に、専ら発生中の気道上皮に高レベルで発現する。マウスにおいて、Ｗｎｔ２、Ｗｎｔ５ａ及びＷｎｔ７ｂが相同組換えにより不活化されている。Ｗｎｔ２ヌルマウスは明確な肺の表現形を示さず、Ｗｎｔ５ａヌルマウスは後期の肺成熟に欠陥があるが、これはＷｎｔ５ａが肺発生の後期において発現することと対応する（Ｍｏｎｋｌｅｙ，（１９９６）；Ｌｉ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２４８：６８−８１（２００２）。Ｗｎｔ７ｂの不活化により、胚以降の組織の欠陥のために胚が早期に死ぬか、又は肺発生の欠陥のために出産前後期に死ぬかのいずれかとなる。Ｐａｒｒ，Ｂ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２３７：３２４−３３２（２００１）；Ｓｈｕ，Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １２９：４８３１−４８４２（２００２））。これらの肺の欠陥としては、間充組織増殖の減少、分枝の減少により引き起こされる肺形成不全、及び肺における血管からの出血につながる肺血管平滑筋の欠陥が挙げられる（Ｓｈｕ，Ｗ．（２００２））。従って、Ｗｎｔシグナル伝達は、おそらく自己分泌及び傍分泌の両方のシグナル伝達機構を通じて、妊娠期間の間の上皮及び間充組織の両方の発生の重要局面を調節する。
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９３】
核β−カテニンの蓄積は、ヒト成体の肺において、上皮及び間葉（筋線維芽細胞）の両方の細胞系統において観察されている。マウスの肺発生の間のこれらの観察は、他の報告により支持される（Ｔｅｂａｒ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｃｈ．Ｄｅｖ．１０９：４３７−４４０（２００１））。ＩＩ型肺細胞は胚及び成体の両方において、高レベルのβ−カテニンを発現すると見られる（Ｔｅｂａｒ，２００１）。ＩＩ型細胞はＩ型細胞の前駆細胞であり、肺におけるガス交換のために重要な、散気可能な薄い層を形成する。肺上皮再形成のいくつかのモデルにおいては、ＩＩ型細胞は再び細胞周期に入り、増殖し、そしてＩ型細胞へと分化することが示されている（Ｂｏｒｏｋ，Ｚ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１２：５０−５５（１９９５）；Ｄａｎｔｏ，Ｓ．ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１２：４９７−５０２（１９９５））。
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９７】
Ｗｎｔシグナル伝達による細胞−マトリクス相互作用の調節
Ｗｎｔシグナル伝達と細胞接着及び移動を含む細胞−マトリクス相互作用の調節との関連が示されている。特に、Ｗｎｔシグナル伝達が黒色腫細胞の細胞移動性と侵襲性に影響を与えることが示されている（Ｗｅｅｒａｒａｔｎａ，Ａ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  １：２７９−２８８（２００２））。この系において、Ｗｎｔ５ａを過剰発現する黒色腫細胞は、アクチン細胞骨格の再構築に関連する、接着性の増大を示す（Ｗｅｅｒ，２００２）。これらのデータにより、Ｗｎｔ５ａ発現が黒色腫腫瘍の転移能に直接関係することが示唆される。ＩＰＦの肺組織において（Ｃｈｉｌｏｓｉ，２００３）は、高レベルの核β−カテニンを含有する細胞のうちのいくつかにおいて、重要な細胞外マトリクスメタロプロテイナーゼ、マトリリシンが過剰発現した。これは、マトリリシンがＷｎｔシグナル伝達の分子標的であることを示す以前の研究により支持される（Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｈ．Ｃ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：２８８３−２８９１，１９９９）。マトリリシンは小腸癌及び子宮内膜癌の両方において、発癌における役割に関連している。マトリリシン発現の増大は核β−カテニン発現の増大と強く相関し、この核移行の阻害はマトリリシン発現の減少をもたらす（Ｃｒａｗｆｏｒｄ，１９９９）。特定の仮説に縛られないが、そのメカニズムはマトリリシン発現の増大に起因する細胞外マトリクスの分解の増加を包含し、細胞接着の低減と細胞移動性の増加につながり得る。ＩＰＦにおいては、これで上皮細胞及び間葉細胞の両方の、障害後気道構造を適切に再構築する能力が低減し得る。更に、Ｉ型細胞の分化には細胞外マトリクスの完全性が必要であり得るが、それはそれらが扁平な形態であること及びそれらが肺胞において被覆する表面領域が非常に広いからである。この過程はＩＩ型細胞の増殖の増加に寄与し得、ひいてはＩ型細胞分化を減少させ得る。
【手続補正２８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９８】
Ｗｎｔシグナル伝達とＩＰＦ
特定の仮説に縛られないが、いくつかのモデルで、ＩＰＦにおいてＷｎｔシグナル伝達が異常に活性化されるという知見を説明し得る。第一に、Ｗｎｔシグナル伝達経路の無秩序な活性化が肺障害又は修復過程のいずれかへの生理学的応答となり得るが、これは恐らく、ＩＩ型肺胞上皮及び隣接する筋線維芽細胞等の細胞の増殖においてＷｎｔ経路が必要なためである。このモデルにおいては、一度修復過程が完了すると、Ｗｎｔシグナル伝達が失活して、正常な増殖への回帰につながらなくてはならない。第二のモデルにおいては、異常なＷｎｔシグナル伝達はＩＩ型細胞における細胞増殖の増加につながる初期イベントであり、これがそのＩ型細胞への分化能及び肺胞構造の適切な再構築を阻害し得る。標準的なＷｎ経路のいくつかのコンポーネント又はこの経路を調節する調節分子における傷害誘導性又は自発性のいずれかの変異が、この細胞増殖の異常調節をもたらし得る。肺の他の増殖性疾患において核β−カテニンがアップレギュレートされるという事実により、以前のデータ（Ｃｈｉｌｏｓｉ，２００３）は、ＩＰＦにおける応答であり、原因となる主要なイベントではないかもしれないということが示唆される。その上、存在する核β−カテニンの増加と合わせ、ＩＩ型細胞及び間葉性線維芽細胞の無秩序増殖により、ＩＰＦ等の肺疾患においてはＷｎｔ経路が継続的に刺激されること、及びＷｎｔシグナル伝達の阻害剤がこの増殖の制御手段を提供し得ることが示唆される。核β−カテニンの増加は、筋線維芽細胞と記載される、気道上皮に隣接する間充組織で検出された（Ｃｈｉｌｏｓｉ，２００３）。これらの筋線維芽細胞は、おそらく細胞外マトリクスの分解を通じて、隣接する上皮細胞において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏでアポトーシスを誘導し得る（Ｕｈａｌ，Ｂ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７５：Ｌ１１９２−Ｌ１１９９，１９９８；Ｕｈａｌ，Ｂ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６９：Ｌ８１９−Ｌ８２８，１９９５；Ｓｅｌｍａｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７９：Ｌ５６２−Ｌ５７４，２０００）。更に、ＩＰＦにおいては、上皮再形成の欠如又は、あるとすればわずかなＩ型細胞の成熟を伴う、ＩＩ型細胞の増加のいずれかが起きるように思われ、傷害領域で中胚葉性のコンポーネントが露出するか、又は未成熟ＩＩ型細胞により上皮が再形成される。ＩＰＦにおいて、ＩＩ型細胞は高レベルの、線維化促進性のサイトカインであるＴＧＦ−β１を発現することが証明されているので、いずれかのシナリオでこれら傷害領域の適切な上皮再形成が阻害され、線維症がもっと引き起こされるのだろう（Ｋａｐａｎｃｉ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１５２：２１６３−２１６９，１９９５；Ｋｈａｌｉｌ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５：１５５−１６２，１９９１）。この過程はチェックされずに進行し得、結局は組織構造の大規模変化、結果的な組織破壊、及び肺機能の喪失をもたらす。
【手続補正２９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２９９】
結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）は３６〜３８ｋＤの、３４９アミノ酸を含むシステインリッチなペプチドであり、増殖因子のＣＣＮファミリー（ＣＴＧＦ，ｃｙｒ  ６１／ｃｅｆ  １０，ｎｏｖ）に属する。ＣＴＧＦの遺伝子は、ヒト臍帯内皮細胞のｃＤＮＡライブラリーから最初にクローニングされた。ＣＴＧＦは内皮細胞、線維芽細胞、軟骨細胞、平滑筋細胞、及びいくつかの癌細胞株で検出されている。より初期の研究では、ヒト包皮線維芽細胞においてＴＧＦ−βが、ＣＴＧＦｍＲＮＡを顕著に増加させることが明らかとなった。ＰＤＧＦ，ＥＧＦ，及びＦＧＦもＣＴＧＦ発現を誘導することが示されたが、それらの効果は単に一過的であり、弱かった。
【手続補正３０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０５２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０５２７】
［実施例Ｉ−７］
４−（（（６Ｓ，９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニル  ジハイドロゲンホスフェート（化合物Ｉ−７）の合成
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド（化合物Ｉ−５）３２５ｍｇ（０．４３ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ１７９μｌ（１．２９ｍｍｏｌ）の６ｍｌテトラヒドロフラン溶液に塩化ホスホリル２００μｌ（２．１５ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温で４時間攪拌した。水を反応混合物に加え、更に一晩攪拌した。反応混合物を１０％クエン酸３０ｍｌで酸性化し、クロロホルム１５０ｍｌで抽出した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。濾液を減圧下濃縮して標題化合物１７９ｍｇ（６０％）を得た。
【手続補正３１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０５２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０５２８】
［実施例Ｉ−８］
４−（（（６Ｓ，９Ｓ）−１−（ベンジルカルバモイル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−６−イル）メチル）フェニル  ホスフェートナトリウム（化合物Ｉ−８）の合成
（６Ｓ，９Ｓ）−Ｎ−ベンジル−６−（４−ヒドロキシベンジル）−２，９−ジメチル−４，７−ジオキソ−８−（キノリン−８−イルメチル）オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド（化合物Ｉ−５）３２３ｍｇ（０．４３ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ１７９μｌ（１．２９ｍｍｏｌ）の６ｍｌテトラヒドロフラン溶液に塩化ホスホリル２００μｌ（２．１５ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温で４時間攪拌した。飽和重炭酸ナトリウムを反応混合物に加え、更に一晩攪拌した。反応混合物を１０％クエン酸３０ｍｌで酸性化し、クロロホルム１５０ｍｌで抽出した。濾液を減圧下濃縮し、テトラヒドロフラン１０ｍｌで希釈した。１Ｎ水酸化ナトリウム８６０μｌを残渣に加え、減圧下濃縮して標題化合物１８１ｍｇ（６０％）を得た。