【手続補正書】
【提出日】平成25年12月18日(2013.12.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
架橋マトリックスであって、
改変酵素分子により架橋される基質ポリマーを含み、
改変酵素分子が、基質ポリマーの架橋によってマトリックスが形成されるのに伴い架橋マトリックス内における酵素分子の感知体積が変化するように改変されたものであることを特徴とする、架橋マトリックス。
【請求項２】
前記改変酵素分子が、
ａ）前記改変酵素分子の実際のサイズが増加するように改変されたもの、
ｂ）前記改変酵素分子の流体力学的体積が増加するように改変されたもの、または
ｃ）改変していない酵素と比較して前記改変酵素の等電点を変化させることにより、前記改変酵素分子の静電荷が前記基質ポリマーの正味の電荷と反対の符号の電荷となるように改変されたもの
であることを特徴とする、請求項１に記載のマトリックス。
【請求項３】
前記改変が、スクシニル化、アセチル化、カルバミル化、還元的アルキル化、および無水マレイン酸処理からなる群から選択される方法による前記酵素のリシンのε−アミノ基における改変、または負の荷電量を減少させるための前記酵素の１つ以上のカルボン酸含有側鎖における改変であることを特徴とする、請求項２に記載のマトリックス。
【請求項４】
前記改変が、少なくとも１つの分子または部分を前記改変酵素分子に共有結合または非共有結合させることを含む、請求項２または３に記載のマトリックス。
【請求項５】
前記改変が、改変作用を有する分子を前記改変酵素分子に共有結合させることを含む、請求項４に記載のマトリックス。
【請求項６】
前記改変作用を有する分子が担体またはポリマーを含むことを特徴とする、請求項５に記載のマトリックス。
【請求項７】
前記ポリマーが、合成ポリマー、セルロースポリマー、タンパク質、または多糖を含むことを特徴とする、請求項６に記載のマトリックス。
【請求項８】
ａ）前記セルロースポリマーが、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、およびメチルセルロースのうちの１種以上を含むこと、
ｂ）前記多糖が、デキストラン、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、およびデンプン誘導体のうちの１種以上を含むこと、または
ｃ）前記改変作用を有する分子が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含むこと
を特徴とする、請求項７に記載のマトリックス。
【請求項９】
前記ＰＥＧが活性化ＰＥＧを含み、
該活性化ＰＥＧが、メトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）、ｍＰＥＧ−ＮＨＳ、ｍＰＥＧのスクシンイミジルエステル、ｍＰＥＧ−グルタレート−ＮＨＳ、ｍＰＥＧ−バレラート−ＮＨＳ、ｍＰＥＧ−カルボナート−ＮＨＳ、ｍＰＥＧ−カルボキシメチル−ＮＨＳ、ｍＰＥＧ−プロピオナート−ＮＨＳ、ｍＰＥＧ−カルボキシペンチル−ＮＨＳ、ｍＰＥＧ−ニトロフェニルカルボナート、ｍＰＥＧ−プロピルアルデヒド、ｍＰＥＧ−トシラート、ｍＰＥＧ−カルボニルイミダゾール、ｍＰＥＧ−イソシアネート、ｍＰＥＧ−エポキシド、およびこれらの組み合わせのうちの１種以上を含むことを特徴とする、請求項８に記載のマトリックス。
【請求項１０】
ａ）前記活性化ＰＥＧが、前記酵素のアミン基もしくはチオール基と反応すること、
ｂ）前記活性化された酵素のリシン残基に対する前記活性化ＰＥＧのモル比が、０．５〜２５の範囲であること、
ｃ）前記活性化ＰＥＧが、一官能基型、ヘテロ二官能基型、ホモ二官能基型、もしくは多官能基型であること、
ｄ）前記活性化ＰＥＧが、分岐ＰＥＧもしくはマルチアームＰＥＧであること、および／または
ｅ）前記活性化ＰＥＧが、１０００ダルトン〜４０，０００ダルトンの範囲のサイズであること
を特徴とする、請求項９に記載のマトリックス。
【請求項１１】
前記酵素および前記基質ポリマーのいずれにも共有結合していないコポリマーをさらに含む、前記請求項のいずれかに記載のマトリックス。
【請求項１２】
前記コポリマーが、多糖またはセルロースポリマーを含むことを特徴とする、請求項１１に記載のマトリックス。
【請求項１３】
ａ）前記多糖が、デキストラン、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ケラタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、もしくはデンプンを含むこと、または
ｂ）前記セルロースポリマーが、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、もしくはメチルセルロースを含むこと
を特徴とする、請求項１２に記載のマトリックス。
【請求項１４】
前記改変酵素分子が、前記改変酵素分子と複数の他の酵素分子とを架橋させることによって複数の架橋化酵素分子凝集体が形成されるように改変されたものであることを特徴とする、前記請求項のいずれかに記載のマトリックス。
【請求項１５】
マトリックスの形成を調節する方法であって、
マトリックスが形成されるのに伴い架橋マトリックス内における酵素分子の感知体積が変化するように酵素分子を改変すること；
改変した酵素分子と、改変した酵素分子の基質である少なくとも１種の基質ポリマーとを混合すること；および
改変した酵素分子による該少なくとも１種の基質ポリマーの架橋によってマトリックスを形成させることを含み、
このマトリックス形成の少なくとも一部が酵素分子の改変によって調節されることを特徴とする方法。
【請求項１６】
ａ）前記改変酵素分子と前記少なくとも１種の基質ポリマーとを溶液中で混合すること、および／または
ｂ）前記改変が、ｐＨ７〜９において前記酵素をＰＥＧ化することを含むこと
を特徴とする、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ａ）前記少なくとも１種の基質ポリマーが、元より架橋可能なポリマー、前記改変酵素により架橋可能な部分変性ポリマー、および前記改変酵素により架橋可能な官能基もしくはペプチドを含む改変ポリマーからなる群から選択される基質ポリマーを含むこと、
ｂ）前記少なくとも１種の基質ポリマーが、ゼラチン、コラーゲン、カゼイン、アルブミン、もしくは改変ポリマーを含み、前記改変酵素分子が、改変トランスグルタミナーゼおよび／もしくは改変酸化酵素を含むこと、ならびに／または
ｃ）前記ゼラチンが、動物組織もしくは動物組織から得られるコラーゲンを部分的に加水分解することによって得られるゼラチン；細菌系、酵母系、動物系、昆虫系、植物系、もしくは任意の種類の細胞培養を用いて産生される組換えゼラチン；およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、該動物組織が、動物の皮、結合組織、枝角、角、骨、および魚鱗からなる群から選択されること
を特徴とする、前記請求項のいずれかに記載の方法またはマトリックス。
【請求項１８】
ａ）前記改変トランスグルタミナーゼが、改変された微生物トランスグルタミナーゼを含むこと、ならびに
ｂ）前記改変酸化酵素が、チロシナーゼ、ラッカーゼ、およびペルオキシダーゼのうちの１種以上を含むこと
を特徴とする、請求項１７に記載の方法またはマトリックス。
【請求項１９】
前記酵素分子をＰＥＧ化により改変し、このＰＥＧ化によって、マトリックスが使用される宿主動物の免疫系から前記酵素分子がマスクされ、その免疫原性がマスクされることを特徴とする、前記請求項のいずれかに記載の方法またはマトリックス。
【請求項２０】
前記請求項のいずれかに記載のマトリックスを含む、止血剤または外科用シーラント。
【請求項２１】
前記請求項のいずれかに記載のマトリックスを含む、創傷を密封するための組成物。
【請求項２２】
組織における縫合線またはステープルラインを密封するための、請求項２１に記載の組成物の使用。
【請求項２３】
前記請求項のいずれかに記載のマトリックスを含む、局所的薬物送達用のビヒクルのための組成物。
【請求項２４】
注入可能な足場として適した前記請求項のいずれかに記載のマトリックスを含む、組織工学のための組成物。
【請求項２５】
組成物を改変する方法であって、
架橋可能な官能基を有する改変酵素と、該改変酵素によって架橋可能な少なくとも１種の部分を有するタンパク質とを提供すること；および
該改変酵素と該タンパク質とを混合することを含み、
該改変酵素により該タンパク質を架橋し、かつ該架橋可能な官能基を介して該改変酵素を該タンパク質に架橋することを特徴とする方法。