【手続補正書】
【提出日】平成26年8月14日(2014.8.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
硝酸塩輸送体活性を有するポリペプチドをコードするコード配列に動作可能に連結するプロモーターを含む遺伝的構築物であって、該プロモーターがカリフラワーモザイクウイルス３５Ｓプロモーターでなく、該プロモーターが、カーネーションエッチドリングウイルス（ＣＥＲＶ）プロモーター、エンドウ豆プラストシアニンプロモーター、ルビスコプロモーター、ノパリンシンターゼプロモーター、クロロフィルａ／ｂ結合プロモーター、高分子量グルテニンプロモーター、α，β−グリアジンプロモーター、ホルデインプロモーター、パタチンプロモーター、又は配列特異的プロモーターである、遺伝的構築物。
【請求項２】
該プロモーターが、構成的、非構成的、組織特異的、発生学的に調節された、又は誘導性／抑制性プロモーターである、請求項１記載の遺伝的構築物。
【請求項３】
該プロモーターが、ＣＥＲＶプロモーター又はエンドウ豆プラストシアニンプロモーターである、請求項１又は２記載の遺伝的構築物。
【請求項４】
硝酸塩輸送体活性を有するポリペプチドをコードするコード配列に動作可能に連結する、カーネーションエッチドリングウイルス（ＣＥＲＶ）プロモーター又はエンドウ豆プラストシアニンプロモーターのいずれかを含む遺伝的構築物。
【請求項５】
該プロモーターが、実質的に配列番号１で示されるヌクレオチド配列、又はその機能的変異体若しくは機能的断片を含む、請求項１〜４のいずれか１項記載の遺伝的構築物。
【請求項６】
該プロモーターが、実質的に配列番号２で示されるヌクレオチド配列、又はその機能的変異体若しくは機能的断片を含む、請求項１〜４のいずれか１項記載の遺伝的構築物。
【請求項７】
硝酸塩輸送体活性を有するポリペプチドをコードするコード配列が、シロイヌナズナ種、イネ属種、ポプラ属種又はタバコ属種に由来する、請求項１〜６のいずれか１項記載の遺伝的構築物。
【請求項８】
該コード配列が、シロイヌナズナ、タバコ、コメ又はヨーロッパヤマナラシに由来し、好ましくはシロイヌナズナに由来する、請求項１〜７のいずれか１項記載の遺伝的構築物。
【請求項９】
硝酸塩輸送体活性を有するポリペプチドをコードするコード配列が、実質的に配列番号３若しくは配列番号４で示される核酸配列、又はその機能的変異体若しくは断片を含む、請求項１〜８のいずれか１項記載の遺伝的構築物。
【請求項１０】
硝酸塩輸送体活性を有するポリペプチドが、実質的に配列番号５で示されるアミノ酸配列、又はその機能的変異体若しくは断片を含む、請求項１〜９のいずれか１項記載の遺伝的構築物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項記載の遺伝的構築物を含有する組換えベクター。
【請求項１２】
試験植物の葉の硝酸塩濃度を、同一条件で栽培した野生型植物の葉の対応する硝酸塩の濃度よりも低濃度に下げる方法であって、試験植物の植物代謝を変化させ、植物の葉の硝酸塩輸送体の濃度を上昇させることを含み、請求項１〜１０のいずれか１項記載の遺伝的構築物、又は請求項１１記載のベクターで、該試験植物細胞を形質転換することを含む方法。
【請求項１３】
下記工程を含む、同一条件で栽培した、対応する野生型植物よりも高い割合で硝酸塩を葉の外に輸送する形質転換植物を製造する方法：
（ｉ）請求項１〜１０のいずれか１項記載の遺伝的構築物、又は請求項１１記載のベクターで、植物細胞を形質転換する工程；及び
（ｉｉ）該形質転換細胞から植物を再生する工程。
【請求項１４】
修飾されていない植物に、硝酸塩輸送体をコードする外来遺伝子を導入することを含む、形質転換植物を製造する方法であって、該外来遺伝子によりコードされる硝酸塩輸送体の発現により、修飾されていない植物の葉の硝酸塩濃度と比較して、形質転換植物の葉の硝酸塩濃度を下げる方法。
【請求項１５】
請求項１〜１０のいずれか１項記載の遺伝的構築物、又は請求項１１記載のベクターを含有する形質転換植物。
【請求項１６】
硝酸塩輸送体をコードする外来遺伝子を含有する形質転換植物であって、該形質転換植物の葉の硝酸塩濃度が、修飾されていない植物の葉の硝酸塩濃度と比較して低い、形質転換植物。
【請求項１７】
外来核酸配列を用いた植物の形質転換により、植物の葉の硝酸塩濃度を下げるための、硝酸塩輸送体をコードする外来核酸配列の使用。
【請求項１８】
外来核酸配列を用いた植物の形質転換により、試験植物の老化又は老化表現型を誘導するための、硝酸塩輸送体をコードする外来核酸配列の使用。
【請求項１９】
該外来遺伝子が、実質的に配列番号３若しくは配列番号４で示されるヌクレオチド配列、又はその機能的変異体若しくは断片を含み、又は実質的に配列番号５で示されるアミノ酸配列、又はその機能的変異体若しくは断片を含む硝酸塩輸送体をコードする、請求項１４記載の方法、請求項１５若しくは１６記載の形質転換植物、又は請求項１７若しくは１８記載の使用。
【請求項２０】
請求項１〜１０のいずれか１項記載の遺伝的構築物、又は請求項１１記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２１】
該細胞が植物細胞である、請求項２０記載の宿主細胞。
【請求項２２】
該植物が、アブラナ科、例えばアブラナ属に由来し、好ましくはセイヨウアブラナ（菜種）である、請求項１２〜１４いずれか１項記載の方法、請求項１５若しくは１６記載の形質転換植物、又は請求項１７若しくは１８記載の使用。
【請求項２３】
該植物が、イネ目、例えば、コムギ連、好ましくはコムギ属（小麦）に由来する、請求項１２〜１４のいずれか１項記載の方法、請求項１５若しくは１６記載の形質転換植物、又は請求項１７若しくは１８記載の使用。
【請求項２４】
該植物が、ナス科、例えばチョウセン朝顔、ナスビ、マンドレイク、セイヨウハシリドコロ（ベラドンナ）、唐辛子（パプリカ、チリペッパー）、ジャガイモ又はタバコに由来する、請求項１２〜１４のいずれか１項記載の方法、請求項１５若しくは１６記載の形質転換植物、又は請求項１７若しくは１８記載の使用。
【請求項２５】
該植物が、タバコ属に由来し、好ましくはタバコである、請求項１２〜１４のいずれか１項記載の方法、請求項１５若しくは１６記載の形質転換植物、又は請求項１７若しくは１８記載の使用。
【請求項２６】
請求項１４、１５又は請求項２２〜２５のいずれか１項記載の形質転換植物から得られる植物繁殖産物。
【請求項２７】
該繁殖産物が、請求項１〜１０のいずれか１項記載の遺伝的構築物、請求項１１記載のベクター、又は請求項１９に定義された外来遺伝子を含む、請求項２６記載の植物繁殖産物。
【請求項２８】
同一条件で栽培した、野生型植物から得られた収穫された葉の対応する硝酸塩濃度よりも低濃度の硝酸塩を含む、収穫された葉であって、該葉が、請求項１５、１６又は２２〜２５のいずれか１項記載の形質転換植物から収穫されているか、又は請求項１３若しくは請求項１４記載の方法により生産されている、収穫された葉。
【請求項２９】
変異体タバコ植物から得られた、硝酸塩が少ないタバコを含むタバコ製品であって、変異体がその葉の硝酸塩濃度を下げることができ、該タバコ製品のタバコが由来する変異体タバコ植物が、請求項１〜１０のいずれか１項記載の遺伝的構築物、請求項１１記載のベクター、又は請求項１９に定義された外来遺伝子を含むタバコ製品。
【請求項３０】
該タバコ製品が、無煙タバコ製品、例えば嗅ぎタバコ、又は口で供給可能な口腔タバコ製品、例えば、スヌース、又は喫煙物品である、請求項２９記載のタバコ製品。
【請求項３１】
変異体タバコ植物から得られる、硝酸塩が減少したタバコを含む喫煙物品であって、変異体が、その葉の硝酸塩濃度を下げることができるものであり、タバコ製品のタバコが由来する変異体タバコ植物が、請求項１〜１０のいずれか１項記載の遺伝的構築物、請求項１１記載のベクター、又は請求項１９に定義された外来遺伝子を含む、喫煙物品。