【手続補正書】
【提出日】平成26年1月15日(2014.1.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
パルボウイルスのウイルス様粒子（ＶＬＰ）を生成する方法であって、（ａ）第１の制御エレメントに作動可能に連結しているパルボウイルスＶＰ１をコードするヌクレオチド配列と、第２の制御エレメントに作動可能に連結しているパルボウイルスＶＰ２タンパク質をコードするヌクレオチド配列とを含む組換え核酸分子を含有する宿主細胞を提供するステップと、（ｂ）前記ＶＰ１タンパク質およびＶＰ２タンパク質が発現され、集合してＶＬＰになる条件下で前記宿主細胞を維持するステップとを包含する、方法。
【請求項２】
ＶＰ１が、ＶＰ２よりも低いアバンダンスで生成される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＶＰ１およびＶＰ２を含有するＶＬＰが生成される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記組換え核酸分子がバイシストロン性ベクターである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記第１の制御エレメントが前記第２の制御エレメントの改変体であり、前記改変体が、ＶＰ２と比較してＶＰ１の生成を転写的に、翻訳的に、または転写的かつ翻訳的に減少させる修飾を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記第１の制御エレメントが、ＶＰ１をコードする核酸の上流のＴＡＴＡボックスの少なくとも一部分の欠失、ＶＰ１をコードする核酸の上流の接合部位の欠失、ＶＰ１をコードする核酸の上流の転写開始部位もしくは転写終止部位の導入、またはそれらの組み合わせを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記第２の制御エレメントが、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーター（配列番号１９）である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記宿主細胞が酵母細胞、昆虫細胞、哺乳動物細胞、トリの細胞、細菌、テトラヒメナの細胞またはそれらの組み合わせである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記宿主細胞を、ＶＰ１およびＶＰ２が生成され、これらのタンパク質が集合してＶＬＰになるのに適した培養条件下で維持する、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＶＬＰを単離するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＶＬＰを、宿主細胞の馴化培地、宿主細胞の溶解物、宿主細胞のホモジネート、またはそれらの組み合わせから単離する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
単離された前記ＶＬＰをさらに精製する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
単離された前記ＶＬＰを、スクロースクッション、スクロース勾配遠心分離、クロマトグラフィー法、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される精製方法を用いてさらに精製する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１から１３までのいずれか一項に記載の方法に従って生成される、ＶＰ１およびＶＰ２を含有するパルボウイルスのウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
【請求項１５】
請求項１４に記載のパルボウイルス・ＶＬＰを含む免疫原性組成物。
【請求項１６】
第１の制御エレメントに作動可能に連結しているパルボウイルスＶＰ１をコードするヌ
クレオチド配列と、第２の制御エレメントに作動可能に連結しているパルボウイルスＶＰ２タンパク質をコードするヌクレオチド配列とを含む組換え核酸であって、適切な宿主細胞内にＶＰ１をコードする前記配列とＶＰ２をコードする前記配列とが同量存在する場合、ＶＰ１が、ＶＰ２よりも低いアバンダンスで発現される、組換え核酸。
【請求項１７】
前記第１の制御エレメントが弱いプロモーターであり、前記第２の制御エレメントが強力なプロモーターである、請求項１６に記載の組換え核酸。
【請求項１８】
前記第１の制御エレメントが前記第２の制御エレメントの改変体であり、前記改変体が、ＶＰ２と比較してＶＰ１の生成を転写的に、翻訳的に、または転写的かつ翻訳的に減少させる修飾を含む、請求項１７に記載の組換え核酸。
【請求項１９】
前記修飾が、ＶＰ１をコードする核酸の上流のＴＡＴＡボックスの少なくとも一部分の欠失、ＶＰ１をコードする核酸の上流の接合部位の欠失、ＶＰ１をコードする核酸の上流の転写開始部位もしくは転写終止部位の導入、またはそれらの組み合わせを含む、請求項１８に記載の組換え核酸。
【請求項２０】
前記第２の制御エレメントが、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーター（配列番号１９）である、請求項１６に記載の組換え核酸。
【請求項２１】
前記核酸が、ＤＮＡまたはＲＮＡの形態であり、かつ一本鎖または二本鎖のいずれかである、請求項２０に記載の組換え核酸。
【請求項２２】
プラスミドである、請求項２１に記載の組換え核酸。
【請求項２３】
前記プラスミドが検出可能なマーカーを含む、請求項２２に記載の組換え核酸。
【請求項２４】
請求項１６から２３までのいずれか一項に記載の組換え核酸を含む宿主細胞。
【請求項２５】
前記組換え核酸が前記宿主細胞のゲノムに組み込まれているか、または染色体外のエレメントに保有されている、請求項２４に記載の宿主細胞。
【請求項２６】
酵母細胞、昆虫細胞、哺乳動物細胞、トリの細胞、細菌、テトラヒメナの細胞またはそれらの組み合わせである、請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項２７】
請求項１から１３までのいずれか一項に記載の方法に従って生成される、ＶＰ１およびＶＰ２を含有するパルボウイルスのウイルス様粒子（ＶＬＰ）を、診断用キット内の抗原として用いる方法。
【請求項２８】
生物学的試料中の抗パルボウイルス抗体を検出する方法であって、個体から得られた生物学的試料を準備するステップと、前記試料を、請求項１から１３までのいずれか一項に記載の方法によって生成されたパルボウイルス・ＶＬＰと組み合わせるステップと、抗体−ＶＬＰ複合体を検出するステップとを包含し、抗体−ＶＬＰ複合体が存在することにより、抗パルボウイルス抗体が前記生物学的試料中に存在することが示される、方法。
【請求項２９】
前記生物学的試料が血液試料または血清試料である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
哺乳動物における免疫応答を上昇させることができる医薬品として使用するための、請求項１６に記載の組換え核酸を含む免疫原性組成物。
【請求項３１】
前記医薬品は、小児における伝染性紅斑、鎌状赤血球貧血、溶血性貧血、遺伝性球状赤血球症、慢性赤血球形成不全、免疫不全の患者における貧血、成人における持続性の関節症、免疫無防備状態の患者における血球減少症、マラリア原虫に同時感染している間の貧血の悪化、マラリアにおける貧血の悪化、妊娠中の女性における胎児水腫および自然流産からなる群から選択される状態を処置または予防するため使用される、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
パルボウイルスＶＰ１および／またはＶＰ２に対する免疫応答を誘導するための組成物であって、該組成物は、請求項１６から２３までのいずれか一項に記載の組換え核酸を含み、該組成物は、個体に投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項３３】
前記組成物は、筋肉内注射によって投与されることを特徴とする、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
パルボウイルスＶＰ１および／またはＶＰ２に対する免疫応答を誘導するための組成物であって、該組成物は、請求項１４に記載のウイルス様粒子または請求項１５に記載の免疫原性組成物を含み、該組成物は、個体に投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項３５】
前記組成物は、筋肉内注射によって投与されることを特徴とする、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
可溶性のＶＰ１が、可溶性のＶＰ２よりも低いアバンダンスで生成される、請求項１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明は、本明細書に記載の方法に従って生成される、ＶＰ１およびＶＰ２を含有するパルボウイルスのウイルス様粒子（ＶＬＰ）を、治療目的および診断目的で、例えば診断用キット内の抗原として用いる方法にも関する。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
パルボウイルスのウイルス様粒子（ＶＬＰ）を生成する方法であって、（ａ）第１の制御エレメントに作動可能に連結しているパルボウイルスＶＰ１をコードするヌクレオチド配列と、第２の制御エレメントに作動可能に連結しているパルボウイルスＶＰ２タンパク質をコードするヌクレオチド配列とを含む組換え核酸分子を含有する宿主細胞を提供するステップと、（ｂ）前記ＶＰ１タンパク質およびＶＰ２タンパク質が発現され、ＶＬＰに集合する条件下で前記宿主細胞を維持するステップとを包含する、方法。
（項目２）
ＶＰ１が、ＶＰ２よりも低いアバンダンスで生成される、項目１に記載の方法。
（項目３）
ＶＰ１およびＶＰ２を含有するＶＬＰが生成される、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記組換え核酸分子がバイシストロン性ベクターである、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記第１の制御エレメントが前記第２の制御エレメントの改変体であり、前記改変体が、ＶＰ２と比較してＶＰ１の生成を転写的に、翻訳的に、または転写的かつ翻訳的に減少させる修飾を含む、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記第１の制御エレメントが、ＶＰ１をコードする核酸の上流のＴＡＴＡボックスの少なくとも一部分の欠失、ＶＰ１をコードする核酸の上流の接合部位の欠失、ＶＰ１をコードする核酸の上流の転写開始部位もしくは転写終止部位の導入、またはそれらの組み合わせを含む、項目４に記載の方法。
（項目７）
前記第２の制御エレメントが、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーター（配列番号１９）である、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記宿主細胞が酵母細胞、昆虫細胞、哺乳動物細胞、トリの細胞、細菌、テトラヒメナの細胞またはそれらの組み合わせである、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記宿主細胞を、ＶＰ１およびＶＰ２が生成され、これらのタンパク質がＶＬＰに集合するのに適した培養条件下で維持する、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記ＶＬＰを単離するステップをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記ＶＬＰを、宿主細胞の馴化培地、宿主細胞の溶解物、宿主細胞のホモジネート、またはそれらの組み合わせから単離する、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
単離された前記ＶＬＰをさらに精製する、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
単離された前記ＶＬＰを、スクロースクッション、スクロース勾配遠心分離、クロマトグラフィー法、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される精製方法を用いてさらに精製する、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
項目１から１３までのいずれか一項に記載の方法に従って生成される、ＶＰ１およびＶＰ２を含有するパルボウイルスのウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
（項目１５）
項目１４に記載のパルボウイルス・ＶＬＰを含む免疫原性組成物。
（項目１６）
第１の制御エレメントに作動可能に連結しているパルボウイルスＶＰ１をコードするヌ
クレオチド配列と、第２の制御エレメントに作動可能に連結しているパルボウイルスＶＰ２タンパク質をコードするヌクレオチド配列とを含む組換え核酸であって、適切な宿主細胞内にＶＰ１をコードする前記配列とＶＰ２をコードする前記配列とが同量存在する場合、ＶＰ１が、ＶＰ２よりも低いアバンダンスで発現される、組換え核酸。
（項目１７）
前記第１の制御エレメントが弱いプロモーターであり、前記第２の制御エレメントが強力なプロモーターである、項目１６に記載の組換え核酸。
（項目１８）
前記第１の制御エレメントが前記第２の制御エレメントの改変体であり、前記改変体が、ＶＰ２と比較してＶＰ１の生成を転写的に、翻訳的に、または転写的かつ翻訳的に減少させる修飾を含む、項目１７に記載の組換え核酸。
（項目１９）
前記修飾が、ＶＰ１をコードする核酸の上流のＴＡＴＡボックスの少なくとも一部分の欠失、ＶＰ１をコードする核酸の上流の接合部位の欠失、ＶＰ１をコードする核酸の上流の転写開始部位もしくは転写終止部位の導入、またはそれらの組み合わせを含む、項目１８に記載の組換え核酸。
（項目２０）
前記第２の制御エレメントが、ＡＤＨ２／ＧＡＰＤＨプロモーター（配列番号１９）である、項目１６に記載の組換え核酸。
（項目２１）
前記核酸が、ＤＮＡまたはＲＮＡの形態であり、かつ一本鎖または二本鎖のいずれかである、項目２０に記載の組換え核酸。
（項目２２）
プラスミドである、項目２１に記載の組換え核酸。
（項目２３）
前記プラスミドが検出可能なマーカーを含む、項目２２に記載の組換え核酸。
（項目２４）
項目１６から２３までのいずれか一項に記載の組換え核酸を含む宿主細胞。
（項目２５）
前記組換え核酸が前記宿主細胞のゲノムに組み込まれているか、または染色体外のエレメントに保有されている、項目２４に記載の宿主細胞。
（項目２６）
酵母細胞、昆虫細胞、哺乳動物細胞、トリの細胞、細菌、テトラヒメナの細胞またはそれらの組み合わせである、項目２５に記載の宿主細胞。
（項目２７）
項目１から１３までのいずれか一項に記載の方法に従って生成される、ＶＰ１およびＶＰ２を含有するパルボウイルスのウイルス様粒子（ＶＬＰ）を、診断用キット内の抗原として用いる方法。
（項目２８）
生物学的試料中の抗パルボウイルス抗体を検出する方法であって、個体から得られた生物学的試料を準備するステップと、前記試料を、項目１から１３までのいずれか一項に記載のパルボウイルス・ＶＬＰと組み合わせるステップと、抗体−ＶＬＰ複合体を検出するステップとを包含し、抗体−ＶＬＰ複合体が存在することにより、抗パルボウイルス抗体が前記生物学的試料中に存在することが示される、方法。
（項目２９）
前記生物学的試料が血液試料または血清試料である、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
項目１６に記載の組換え核酸を含む免疫原性組成物を、哺乳動物における免疫応答を上昇させることができる医薬品として使用する方法。
（項目３１）
前記医薬品を使用して、小児における伝染性紅斑、鎌状赤血球貧血、溶血性貧血、遺伝性球状赤血球症、慢性赤血球形成不全、免疫不全の患者における貧血、成人における持続性の関節症、免疫無防備状態の患者における血球減少症、マラリア原虫に同時感染している間の貧血の悪化、マラリアにおける貧血の悪化、妊娠中の女性における胎児水腫および自然流産からなる群から選択される状態を処置または予防する、項目２８に記載の方法。
（項目３２）
パルボウイルスＶＰ１および／またはＶＰ２に対する免疫応答を誘導する方法であって、個体に、有効量の項目１６から２３までのいずれか一項に記載の組換え核酸を投与し、それによって、免疫応答を誘導するステップを包含する、方法。
（項目３３）
前記組換え核酸を筋肉内注射によって投与する、項目３３に記載の方法。
（項目３４）
パルボウイルスＶＰ１および／またはＶＰ２に対する免疫応答を誘導する方法であって、個体に、項目１４に記載のウイルス様粒子または項目１５に記載の免疫原性組成物を有効量で投与し、それによって、免疫応答を誘導するステップを包含する、方法。
（項目３５）
前記ウイルス様または免疫原性組成物を筋肉内注射によって投与する、項目３４に記載の方法。