【手続補正書】
【提出日】平成25年11月22日(2013.11.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
各々がそのゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２を含むダイズ植物、又はその細胞、部分、種子若しくは子孫であって、該イベントＥＥ−ＧＭ３を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下にＮＣＩＭＢに寄託されており、そして、該イベントＥＥ−ＧＭ２を含むレファレンス種子が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下にＮＣＩＭＢに寄託されているか、又は、自身のゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２を含むレファレンス種子が寄託番号ＰＴＡ−１１０４２の下にＡＴＣＣに寄託されている、トランスジェニックダイズ植物、又はその細胞、部分、種子若しくは子孫。
【請求項２】
請求項１記載のダイズ植物、種子、細胞、部分若しくは子孫であって、ゲノムＤＮＡが、それぞれが配列番号４及び配列番号５のヌクレオチド配列を含む２つのプライマーでＥＥ−ＧＭ３に関する優良イベント識別プロトコルを用いて分析した場合に、約２６３ｂｐのＤＮＡフラグメントを与え、そして、ゲノムＤＮＡが、それぞれが配列番号１８及び配列番号１９のヌクレオチド配列を含む２つのプライマーでＥＥ−ＧＭ２に関する優良イベント識別プロトコルを用いて分析した場合に、約１５１ｂｐのＤＮＡフラグメントを与える、請求項１記載のダイズ植物、種子、細胞、部分若しくは子孫。
【請求項３】
請求項１記載のダイズ植物、種子、細胞、部分若しくは子孫であって、ここで前記優良イベントＥＥ−ＧＭ３がキメラＨＰＰＤ  ＰＦＷ３３６コード遺伝子及びキメラ２ｍＥＰＳＰＳコード遺伝子を含む外来性ＤＮＡを含み、該優良イベントＥＥ−ＧＭ３が配列番号２のヌクレオチド１〜１４５１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列も該外来性ＤＮＡの直近上流に隣接して含みそして配列番号３のヌクレオチド２４１〜１４０８と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列も該外来性ＤＮＡの直近下流に隣接して含み、そしてここで該優良イベントＥＥ−ＧＭ２もまた配列番号１４のヌクレオチド１〜３１１と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を該外来性ＤＮＡの直近上流に隣接して含みそして配列番号１５のヌクレオチド５０８〜１８８０と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を該外来性ＤＮＡの直近下流に隣接して含む、ダイズ植物、種子、細胞、部分若しくは子孫。
【請求項４】
請求項１記載のダイズ植物、種子、細胞、部分若しくは子孫であって、各々がそのゲノム内に優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２を含み、ここでＥＥ−ＧＭ３の挿入された外来性ＤＮＡは図１に示された通りであり、そしてここで該イベントは５’及び３’フランキングＤＮＡ及びそれに隣接する外来性ＤＮＡ内部の配列によっても特徴付けされ、ここで該５’フランキングＤＮＡ及びそれに隣接する外来性ＤＮＡが配列番号２のヌクレオチド配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み、そして該３’フランキングＤＮＡ及びそれに隣接する外来性ＤＮＡが配列番号３のヌクレオチド配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み、前記図１の挿入された外来性ＤＮＡが寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６５９の下に寄託されているダイズイベントＥＥ−ＧＭ３に存在しており、そしてここでＥＥ−ＧＭ２の挿入された外来性ＤＮＡは図４に示された通りであり、そしてここで該イベントは５’及び３’フランキングＤＮＡ及びそれに隣接する外来性ＤＮＡ内部の配列によっても特徴付けされ、ここで該５’フランキングＤＮＡ及びそれに隣接する外来性ＤＮＡが配列番号１４のヌクレオチド配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み、そして該３’フランキングＤＮＡ及びそれに隣接する外来性ＤＮＡが配列番号１５のヌクレオチド配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み、前記図４の挿入された外来性ＤＮＡが寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下に寄託されているダイズイベントＥＥ−ＧＭ２において存在している、ダイズ植物、種子、細胞、部分若しくは子孫。
【請求項５】
下記のヌクレオチド配列：
ａ）配列番号２のヌクレオチド１から１４５１までのヌクレオチド配列；
ｂ）配列番号１のヌクレオチド６７６０からヌクレオチド６９５８までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｃ）配列番号１のヌクレオチド６８７４からヌクレオチド７２９８までのヌクレオチド配列：
ｄ）配列番号１のヌクレオチド７からヌクレオチド７２９１までのヌクレオチド配列；
ｅ）の配列番号１ヌクレオチド１２からヌクレオチド７２６５までのヌクレオチド配列；
ｆ）配列番号３のヌクレオチド２１７からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列；及び、
ｇ）配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までのヌクレオチド配列；
又はそれと少なくとも９９％同一な配列を順次自身のゲノム内に含み、そして、以下の配列：
ｈ）配列番号１４のヌクレオチド１から３１１までのヌクレオチド配列；
ｉ）配列番号１１のヌクレオチド３４５８からヌクレオチド３８４８までのヌクレオチド配列；
ｊ）配列番号１１のヌクレオチド４１３からヌクレオチド３４５７までのヌクレオチド配列；
ｋ）配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までのヌクレオチド配列；
又はそれと少なくとも９９％同一な配列を順次さらに含む、ダイズ植物、種子、細胞、部分若しくは子孫。
【請求項６】
下記のヌクレオチド配列：
ａ）配列番号２のヌクレオチド１から１４５１までのヌクレオチド配列；
ｂ）配列番号１のヌクレオチド６７６０からヌクレオチド６９５８までのヌクレオチド配列の相補体のヌクレオチド配列；
ｃ）配列番号１のヌクレオチド６８７４からヌクレオチド７２９８までのヌクレオチド配列：
ｄ）配列番号１のヌクレオチド７からヌクレオチド７２９１までのヌクレオチド配列；
ｅ）配列番号１のヌクレオチド１２からヌクレオチド７２６５までのヌクレオチド配列；
ｆ）配列番号３のヌクレオチド２１７からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列；及び、
ｇ）配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までのヌクレオチド配列；
又はそれらと少なくとも９９％同一な配列を順次含み、そして、以下の配列：
ｈ）配列番号１４のヌクレオチド１から３１１までのヌクレオチド配列；
ｉ）配列番号１１のヌクレオチド３４５８からヌクレオチド３８４８までのヌクレオチド配列；
ｊ）配列番号１１のヌクレオチド４１３からヌクレオチド３４５７までのヌクレオチド配列；
ｋ）配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までのヌクレオチド配列；
又はそれらと少なくとも９９％同一な配列を順次さらに含む、ＤＮＡ分子。
【請求項７】
ダイズ植物、植物細胞、組織又は種子であって、配列番号１のヌクレオチド位置１８８からヌクレオチド位置７２５２までのヌクレオチド配列又はその相補体と少なくとも９７、９８、または少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子を自身のゲノム内に含むか、配列番号１のヌクレオチド位置１８８からヌクレオチド位置７２５２までのヌクレオチド配列又はその相補体にハイブリダイズする核酸分子を含むかするものであり、そしてＥＥ−ＧＭ２のヌクレオチド配列又はその相補体にハイブリダイズする核酸分子を自身のゲノム内に含むか、ＥＥ−ＧＭ２のヌクレオチド配列にハイブリダイズする核酸分子を含むかするものであり、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６６０の下に寄託されているＥＥ−ＧＭ２を含むレファレンス種子、例えば、ＥＥ−ＧＭ２のヌクレオチド配列が、配列番号１４若しくは１５中の外来性ＤＮＡ配列又は、配列番号１４の配列と配列番号１５の配列との間にある植物ゲノム中の外来性ＤＮＡ配列を含むか、又はそれ自体である、ダイズ植物、植物細胞、組織又は種子。
【請求項８】
請求項７記載のダイズ植物、植物細胞、組織又は種子であって、それらのゲノム内に配列番号２０若しくは配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８又はそれらの相補体のヌクレオチド配列と少なくとも９７、９８または少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子を自身のゲノム内に含むか、配列番号２０若しくは配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８又はそれらの相補体とハイブリダイズする核酸分子を含むかする、ダイズ植物、植物細胞、組織又は種子。
【請求項９】
請求項１〜５又は７又は８のいずれか一項記載のイベントＥＥ−ＧＭ３及びイベントＥＥ−ＧＭ２を含む種子から生産されたダイズ製品であって、ダイズ穀粉、粉砕種子、粉末又はフレークであるか又は含む、ダイズ製品。
【請求項１０】
請求項１〜５又は７又は８のいずれか一項記載のイベントＥＥ−ＧＭ３及びイベントＥＥ−ＧＭ２を含むダイズ種子を得ること、そしてそれからダイズ製品を生産することを含む、ダイズ製品を生産する方法。
【請求項１１】
請求項１〜５又は７又は８のいずれか一項記載のイベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２を含むダイズ植物の圃場において又はそのようなダイズ植物を植栽するべき圃場において雑草を抑制するための方法であって、該圃場をイソキサフルトール系及び／又はグリホセート系及び／又はグルホシネート系除草剤の有効量で処理することを含み、ここでそのような植物はそのような除草剤に対して耐性である、方法。
【請求項１２】
雑草を抑制するための方法であって、請求項１〜５又は７又は８のいずれか一項記載のイベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２を含む種子が播かれた圃場を、ＨＰＰＤ阻害剤除草剤、例えばイソキサフルトール、で処理すること、任意で続けてグリホセート及び／若しくはグルホシネート又はＨＰＰＤ阻害剤とグリホセート及び／若しくはグルホシネートとの混合物を植物の上面に出芽後除草剤として適用することを含む、方法。
【請求項１３】
雑草を抑制するための方法であって、請求項１〜５又は７又は８のいずれか一項記載のＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２を含むダイズ植物をＨＰＰＤ阻害剤除草剤、例えばイソキサフルトール、で植物の上面に処理すること、そして処理と共に、その後、又はそれに先立ってグリホセート及び／又はグルホシネートでの出芽後除草剤として植物の上面への処理が適用される、方法。
【請求項１４】
グリホセート及び／又はグルホシネート及び／又はイソキサフルトール除草剤に耐性であるダイズ植物を生産するための方法であって、請求項１〜５又は７又は８のいずれか一項のイベントＥＥ−ＧＭ３及びイベントＥＥ−ＧＭ２をその様な植物のゲノム内に導入することを含む、方法。
【請求項１５】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２の同時存在を識別するための方法であって、方法がＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブを用いたＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、及び、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブを用いたＥＥ−ＧＭ２特異的領域の検出を含む、方法。
【請求項１６】
少なくとも２つのプライマーを用いた第１のポリメラーゼ連鎖反応、ただしここで、該プライマーの一方は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域、ここで該５’フランキング領域は配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域、ここで該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を認識し、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列を含むＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識するか、又は、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１のヌクレオチド１８８〜ヌクレオチド７２５２のヌクレオチド配列若しくはその相補体を含むか又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列若しくはその相補体を含むかするＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する、を使用し、そして、少なくとも２つのプライマーを用いた第２のポリメラーゼ連鎖反応、ただしここで、該プライマーの一方は、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域、ここで該５’フランキング領域は配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ２中に除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域、ここで該３’フランキング領域は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を認識し、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列を含むＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識するか、又は、該プライマーの他方のプライマーは、配列番号１１のヌクレオチド配列又はその相補体を含むＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する、を使用して該生物学的試料中に存在する核酸から５０〜１０００ｂｐの２つのＤＮＡフラグメントを増幅すること、ここで、該第１及び第２のポリメラーゼ反応は逐次的であっても又は同時であってもよい、を含む、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ３の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、ヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの配列番号３の相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むかするものであり、そして、ＥＥ−ＧＭ３の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド１８８からヌクレオチド７２５２までのヌクレオチド配列若しくはその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ２の５’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むか、又は、ＥＥ−ＧＭ２の３’フランキング領域を認識する該プライマーが、その３’最末端において、配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むかするものであり、そして、ＥＥ−ＧＭ２の外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する該プライマーが、その３’末端において、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列若しくはその相補体から選択される少なくとも１７個の連続ヌクレオチドを含む、例えば前記ＥＥ−ＧＭ３特異的プライマーがそれぞれ配列番号５及び配列番号４の配列、又は、それぞれ配列番号７及び配列番号５の配列を含み、そして、前記ＥＥ−ＧＭ２特異的プライマーがそれぞれ配列番号１８及び配列番号１９の配列を含む、請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２の同時存在を識別するためのキットであって、キットが、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該５’フランキング領域はヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までの配列番号２のヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する１つのプライマー、ここで該外来性ＤＮＡは配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列、又は配列番号１のヌクレオチド１８８からヌクレオチド７２５２までのヌクレオチド配列若しくはその相補体、又は配列番号２０のヌクレオチド位置１４５２からヌクレオチド位置１６６３８までのヌクレオチド配列若しくはその相補体を含む、を含み、そして、該キットが更に、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該５’フランキング領域は配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列を含む、又は、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの３’フランキング領域を認識する１つのプライマー、ここで該３’フランキング領域は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列を含む、及び、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する１つのプライマー、ここで該外来性ＤＮＡは配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列、又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列、又は配列番号１１のヌクレオチド配列若しくはその相補体を含む、を含む、キット。
【請求項１９】
ＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２特異的検出における使用に適する二つのプライマー対であって、該第１のプライマーは、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域内部の配列を特異的に認識する配列、ここで該５’フランキング領域は配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列を含みそして該３’フランキング領域は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列を含む、を含み、そして、該第２のプライマーは、ＥＥ−ＧＭ３の該５’ 又は３’フランキング領域に隣接する挿入された外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する配列、ここで該５’フランキング領域に隣接する該挿入された外来性ＤＮＡはヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの配列番号２の相補体のヌクレオチド配列を含み該３’フランキング領域に隣接する該挿入された外来性ＤＮＡはヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までの配列番号３のヌクレオチド配列を含む、を含み；該第３のプライマーは、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域内部の配列を認識する配列、ここで該５’フランキング領域は配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列を含みそして該３’フランキング領域は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列を含み、そして該第４のプライマーは、ＥＥ−ＧＭ２の該５’ 又は３’フランキング領域に隣接する挿入された外来性ＤＮＡ内部の配列を認識する配列、ここで該５’フランキング領域に隣接する該挿入された外来性ＤＮＡはヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの配列番号１４の相補体のヌクレオチド配列を含み該３’フランキング領域に隣接する該挿入された外来性ＤＮＡはヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までの配列番号１５のヌクレオチド配列を含む、を含む、二つのプライマー対。
【請求項２０】
該第１のプライマーが、配列番号２のヌクレオチド１からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド１４０８までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列をその３’最末端に含み、そして該第２のプライマーが、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１８４３までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号３のヌクレオチド１からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列をその３’最末端に含み、そして該第３のプライマーが、配列番号１４のヌクレオチド１からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド１８８０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列をその３’最末端に含み、そして該第４のプライマーが、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド８１０までの相補体のヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列又は配列番号１５のヌクレオチド１からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列から選択される１７〜２００個までの連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列をその３’最末端に含む、請求項１９記載のプライマー対。
【請求項２１】
下記の４つのプライマー：
配列番号５の配列をその３’最末端に含む第１のプライマー；
配列番号４の配列をその３’最末端に含む第２のプライマー；
配列番号１８の配列をその３’最末端に含む第３のプライマー；及び、
配列番号１９の配列をその３’最末端に含む第４のプライマー；
を含むセット。
【請求項２２】
ＥＥ−ＧＭ３に対する第１の特異的プローブに、そして、ＥＥ−ＧＭ２に対する第２の特異的プローブに、生物学的試料の核酸をハイブリダイズさせることを含み、該第１の特異的プローブの配列が、ＥＥ−ＧＭ３の５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列が、ＥＥ−ＧＭ２の５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有する、例えば該第１の特異的プローブの配列が配列番号２のヌクレオチド１４３１〜１４７２若しくは配列番号３のヌクレオチド２２０〜２６１又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列が配列番号１４のヌクレオチド３０１〜３２２若しくは配列番号１５のヌクレオチド４９７〜５１８又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項１５記載の方法。
【請求項２３】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２の同時存在を識別するためのキットであって、該キットがＥＥ−ＧＭ３の特異的領域に特異的にハイブリダイズすることができる第１の特異的プローブ、及び、ＥＥ−ＧＭ２の特異的領域に特異的にハイブリダイズすることができる第２の特異的プローブを含み、該第１の特異的プローブの配列がＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、該第２の特異的プローブの配列がＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列の部分及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列を含む配列と少なくとも８０％配列同一性を有する、例えば該第１の特異的プローブの配列が配列番号２のヌクレオチド１４４１〜１４６２若しくは配列番号３のヌクレオチド２３０〜２５１又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含み、そして、該第２の特異的プローブの配列が配列番号１４のヌクレオチド３０１〜３２２若しくは配列番号１５のヌクレオチド４９７〜５１８までの又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、キット。
【請求項２４】
生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及び優良イベントＥＥ−ＧＭ２の同時存在の識別のための特異的プローブの対。
【請求項２５】
ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分の配列又はその相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む第１のプローブ、及び、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’フランキング配列又は３’フランキング配列及びそれに隣接する外来性ＤＮＡの配列の部分の配列又はその相補体と少なくとも８０％配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む第２のプローブを含む、例えば第１のプローブが配列番号２のヌクレオチド１４４１〜１４６２若しくは配列番号３のヌクレオチド２３０〜２５１、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有し、そして、第２のプローブが配列番号１４のヌクレオチド３０１〜３２２若しくは配列番号１５のヌクレオチド４９７〜５１８、又は該配列の相補体と少なくとも８０％配列同一性を有する、請求項２４記載のプローブの対。
【請求項２６】
種子の純度を確認するための、又はＥＥ−ＧＭ３の存在に関して種子をスクリーニングするための方法であって、方法が種子試料において、ＥＥ−ＧＭ３の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ３特異的領域の検出、及び、ＥＥ−ＧＭ２の除草剤耐性遺伝子を含む外来性ＤＮＡの５’又は３’フランキング領域を特異的に認識する特異的プライマー又はプローブによるＥＥ−ＧＭ２特異的領域の検出、を含む方法。
【請求項２７】
標的核酸配列の再利用を介してプローブ：標的核酸の比を増幅する実質的に相補な標識された核酸プローブとのハイブリダイゼーションを介して生物学的試料中の優良イベントＥＥ−ＧＭ３及びＥＥ−ＧＭ２の存在を検出するための方法であって、該方法が下記工程：
ａ）該標的核酸配列を、配列番号２のヌクレオチド１４５２からヌクレオチド１４６９までのヌクレオチド配列若しくはその相補体を含む第１の核酸オリゴヌクレオチド、又は、配列番号３のヌクレオチド２２３からヌクレオチド２４０までのヌクレオチド配列若しくはその相補体を含む第１の核酸オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせること；
ｂ）該標的核酸配列を配列番号２のヌクレオチド１４３４からヌクレオチド１４５１までのヌクレオチド配列若しくはその相補体を含む第２の核酸オリゴヌクレオチド、又は配列番号３のヌクレオチド２４１からヌクレオチド２５８までのヌクレオチド配列若しくはその相補体を含む該標識された核酸プローブにハイブリダイズさせること、ここで、該第１及び第２のオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのヌクレオチドで重複しており、そしてここで該第１又は該第２のオリゴヌクレオチドの何れかが標識されて該標識された核酸プローブとなるものである；
ｃ）選択的プローブ切断を起こすことによりデュプレックス解離をもたらす酵素によりプローブ:標的核酸配列デュプレックス内部の標識されたプローブのみを切断し、標的配列は未損傷のままとすること；
ｄ）工程（ａ）〜（ｃ）を反復することにより標的核酸配列を再利用すること；
ｅ)切断された標識されたプローブを検出することにより、該標的核酸配列の存在を決定すること；及び、
ｆ）該標的核酸配列を、配列番号１４のヌクレオチド３１２からヌクレオチド３２９までのヌクレオチド配列若しくはその相補体を含む第３の核酸オリゴヌクレオチド、又は、配列番号１５のヌクレオチド４９０からヌクレオチド５０７までのヌクレオチド配列若しくはその相補体を含む該第３の核酸オリゴヌクレオチドにハイブリダイズさせること；
ｇ）該標的核酸配列を配列番号１４のヌクレオチド２９４からヌクレオチド３１１までのヌクレオチド配列若しくはその相補体を含む第４の核酸オリゴヌクレオチド、又は配列番号１５のヌクレオチド５０８からヌクレオチド５２５までのヌクレオチド配列若しくはその相補体を含む該標識された核酸プローブにハイブリダイズさせること、ここで、該第３及び第４のオリゴヌクレオチドは少なくとも１つのヌクレオチドで重複しており、そしてここで該第３又は該第４のオリゴヌクレオチドの何れかが標識されて該標識された核酸プローブとなるものである；
ｈ）選択的プローブ切断を起こすことによりデュプレックス解離をもたらす酵素によりプローブ:標的核酸配列デュプレックス内部の標識されたプローブのみを切断し、標的配列は未損傷のままとすること；
ｉ）工程（ｆ）〜（ｈ）を反復することによる標的核酸配列を再利用すること；
ｊ)切断された標識されたプローブを検出することにより、該標的核酸配列の存在を決定すること；
を含む、方法。