【手続補正書】
【提出日】平成25年11月13日(2013.11.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成できる形質転換されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞を作製する方法であって、該方法は、
ａ）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された形質転換されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞を提供するステップと、
ｂ）該細胞に、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該核酸が、コードされた該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩを細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩの発現が、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するステップと
を含む方法。
【請求項２】
以下の（ｉ）〜（ｘｖ）のいずれかに示す特徴を有する、請求項１に記載の方法：
（ｉ）該方法は、前記細胞に、標的タンパク質をコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該細胞が、前記ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された該標的タンパク質を生成するステップをさらに含む；
（ｉｉ）前記標的タンパク質が、Ｆｃ受容体と結合する；
（ｉｉｉ）前記標的タンパク質が、抗体またはその断片である；
（ｉｖ）前記標的タンパク質が、治療用の糖タンパク質である；
（ｖ）前記標的タンパク質が、インターフェロン−β、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロンγまたはエリスロポエチンである；
（ｖｉ）前記細胞内区画が、ゴルジ装置である；
（ｖｉｉ）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された前記細胞が、ＡＬＧ３活性を欠損し、α−１，２−マンノシダーゼをコードする核酸を含み、該核酸が、コードされた該α−１，２−マンノシダーゼを小胞体に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含む；
（ｖｉｉｉ）該方法が、上記（ｖｉｉ）に記載の方法であって、かつＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された該細胞が、ＯＣＨ１活性をさらに欠損する；
（ｉｘ）該方法が、上記（ｖｉｉ）または（ｖｉｉｉ）に記載の方法であって、かつＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された該細胞が、α−１，３−グルコシルトランスフェラーゼをコードする核酸をさらに含む；
（ｘ）前記α−１，３−グルコシルトランスフェラーゼが、ＡＬＧ６である；
（ｘｉ）該方法は、前記細胞に、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩをコードする該核酸が、コードされた該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩを細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩの発現が、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するステップをさらに含む；
（ｘｉｉ）該方法は、前記細胞に、ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする該核酸が、コードされた該ガラクトシルトランスフェラーゼをゴルジ装置に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該ガラクトシルトランスフェラーゼの発現が、ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２またはＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するステップをさらに含む；
（ｘｉｉｉ）該方法が、上記（ｘｉｉ）に記載の方法であって、かつ該方法は、該細胞に、標的タンパク質をコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該細胞が、前記ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２またはＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された該標的タンパク質を生成するステップをさらに含む；
（ｘｉｖ）該方法が、上記（ｘｉｉ）に記載の方法であって、かつ、ここで、該ガラクトシルトランスフェラーゼが、ＵＤＰ−Ｇｌｃ−４−エピメラーゼと、β−１，４−ガラクトシルトランスフェラーゼＩの触媒ドメインとの融合体である；ならびに
（ｘｖ）該方法が、上記（ｘｉｉ）に記載の方法であって、かつ該方法は、前記細胞に、グルコシダーゼＩＩのαおよびβサブユニットをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該細胞における該グルコシダーゼＩＩの該αおよびβサブユニットの発現が、ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２またはＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するステップをさらに含む。
【請求項３】
ＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成できる形質転換されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞を作製する方法であって、該方法は、
ａ）Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された形質転換されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞を提供するステップと、
ｂ）該細胞に、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該核酸が、コードされた該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩを細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩの発現が、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するステップと
を含む方法。
【請求項４】
以下の（ｉ）〜（ｘ）のいずれかに示す特徴を有する、請求項３に記載の方法：
（ｉ）該方法は、前記細胞に、標的タンパク質をコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該細胞が、前記ＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された該標的タンパク質を生成するステップをさらに含む；
（ｉｉ）該方法が、上記（ｉ）に記載されたとおりであり；ここで、該標的タンパク質が、以下のａ）〜ｃ）のいずれかに示す特徴を有する：
ａ）Ｆｃ受容体と結合する；
ｂ）抗体またはその断片である；
ｃ）治療用の糖タンパク質である；
ｄ）インターフェロン−β、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロンγまたはエリスロポエチンである；
（ｉｉｉ）前記細胞内区画が、ゴルジ装置である；
（ｉｖ）Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された前記細胞が、ＯＣＨ１活性を欠損し、α−１，２−マンノシダーゼをコードする核酸を含み、ここで、該α−１，２−マンノシダーゼをコードする該核酸が、コードされた該α−１，２−マンノシダーゼを小胞体に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含む；
（ｖ）該方法が、上記（ｉｖ）に記載の方法であって、かつ該ターゲティング配列が、ＨＤＥＬ配列である；
（ｖｉ）該方法は、前記細胞に、マンノシダーゼＩＩをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該マンノシダーゼＩＩをコードする該核酸が、コードされた該マンノシダーゼＩＩをゴルジ装置に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該マンノシダーゼＩＩの発現が、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するステップをさらに含む；
（ｖｉｉ）該方法は、前記細胞に、ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする該核酸が、コードされた該ガラクトシルトランスフェラーゼをゴルジ装置に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該ガラクトシルトランスフェラーゼの発現が、ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２またはＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するステップをさらに含む；
（ｖｉｉｉ）該方法が、（ｖｉｉ）に記載の方法であって、該方法は、該細胞に、標的タンパク質をコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該細胞が、前記ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２またはＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された該標的タンパク質を生成するステップをさらに含む；
（ｉｘ）該方法が、（ｖｉｉ）に記載の方法であって、該ガラクトシルトランスフェラーゼが、ＵＤＰ−Ｇｌｃ−４−エピメラーゼと、β−１，４−ガラクトシルトランスフェラーゼＩの触媒ドメインとの融合体である；ならびに
（ｘ）該方法が、（ｖｉｉｉ）に記載の方法であって、該ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２またはＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された前記標的タンパク質を単離するステップをさらに含む。
【請求項５】
ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む標的タンパク質を生成する方法であって、該方法は、
ａ）ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、α−１，２−マンノシダーゼと、マンノシダーゼＩＩとをコードする核酸を含むように遺伝子工学的に改変された形質転換されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞を提供するステップであって、ここで、該核酸が、それぞれのコードされたタンパク質を細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞が、ＯＣＨ１活性を欠損しているステップと、
ｂ）該細胞に、標的タンパク質をコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該細胞が、該ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む該標的タンパク質を生成するステップと
を含む方法。
【請求項６】
以下の（ｉ）〜（ｉｘ）のいずれかに示す特徴を有する、請求項５に記載の方法：
（ｉ）前記α−１，２−マンノシダーゼをコードする前記核酸が、コードされた該α−１，２−マンノシダーゼを小胞体に向かわせるための小胞体ターゲティング配列を含む；
（ｉｉ）該方法が、上記（ｉ）に記載の方法であって、ここで、該ターゲティング配列が、ＨＤＥＬ配列である；
（ｉｉｉ）前記ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩおよび前記マンノシダーゼＩＩをコードする前記核酸が、コードされた該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩおよびマンノシダーゼＩＩをゴルジ装置に向かわせるためのゴルジターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含む；
（ｉｖ）前記標的タンパク質が、Ｆｃ受容体と結合する；
（ｖ）前記標的タンパク質が、抗体またはその断片である；
（ｖｉ）前記標的タンパク質が、治療用の糖タンパク質である；
（ｖｉｉ）前記標的タンパク質が、インターフェロン−β、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロンγまたはエリスロポエチンである；
（ｖｉｉｉ）該方法が、前記細胞に、ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする該核酸が、コードされた該ガラクトシルトランスフェラーゼをゴルジ装置に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで該細胞における該ガラクトシルトランスフェラーゼの発現が、ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された前記標的タンパク質を生成するステップをさらに含む；ならびに
（ｉｘ）該方法が上記（ｖｉｉｉ）に記載の方法であって、前記ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された該標的タンパク質を単離するステップをさらに含む。
【請求項７】
Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む標的タンパク質を生成する方法であって、該方法は、
ａ）ＡＬＧ３活性を欠損するように遺伝子工学的に改変され、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩと、ガラクトシルトランスフェラーゼとをコードする核酸を含む形質転換されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞を提供するステップであって、ここで、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩと、該ガラクトシルトランスフェラーゼとをコードする該核酸が、それぞれのコードされたタンパク質を細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含むステップと、
ｂ）該細胞に、標的タンパク質をコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該細胞が、該Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む該標的タンパク質を生成するステップと
を含む方法。
【請求項８】
以下の（ｉ）〜（ｉｖ）のいずれかに示す特徴を有する、請求項７に記載の方法：
（ｉ）前記細胞が、ＯＣＨ１活性をさらに欠損する；
（ｉｉ）該方法が、請求項７または上記（ｉ）に記載の方法であって；ここで、該細胞が、α−１，３−グルコシルトランスフェラーゼをコードする核酸をさらに含む；
（ｉｉｉ）該方法が、上記（ｉｉ）に記載の方法であり、該α−１，３−グルコシルトランスフェラーゼをコードする該核酸が、ＡＬＧ６である；ならびに
（ｉｖ）該方法が、請求項７、または上記（ｉ）もしくは（ｉｉ）に記載の方法であって、ここで、該細胞が、グルコシダーゼＩＩのαおよびβサブユニットをコードする核酸をさらに含み、ここで、該細胞における該グルコシダーゼＩＩの該αおよびβサブユニットの発現が、前記Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む該標的タンパク質を生成する、方法。
【請求項９】
ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された形質転換されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞であって、ここで、該細胞は、ＯＣＨ１活性を欠損し、α−１，２−マンノシダーゼと、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、マンノシダーゼＩＩとをコードする核酸を含み、ここで、該α−１，２−マンノシダーゼと、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、該マンノシダーゼＩＩとをコードする該核酸が、それぞれのコードされたタンパク質を細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該α−１，２−マンノシダーゼ、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩおよび該マンノシダーゼＩＩの発現が、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成する、細胞。
【請求項１０】
以下の（ｉ）〜（ｖ）のいずれかに示す特徴を有する、請求項９に記載の細胞：
（ｉ）標的タンパク質をコードする核酸をさらに含み、ここで、該細胞が、前記ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された該標的タンパク質を生成する；
（ｉｉ）ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩをコードする核酸をさらに含み、ここで、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩをコードする該核酸が、コードされた該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩを細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩの発現が、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成する；
（ｉｉｉ）上記（ｉｉ）に記載の細胞であって、該細胞は、ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする核酸をさらに含み、ここで、該ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする該核酸が、コードされた該ガラクトシルトランスフェラーゼをゴルジ装置に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該ガラクトシルトランスフェラーゼの発現が、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成する；
（ｉｖ）上記（ｉｉ）の細胞であって、該細胞によって生成されるタンパク質上のＮ−グリカンのうちの少なくとも５０％、少なくとも７０％または少なくとも８５％がＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンである；ならびに
（ｖ）単離された形態である。
【請求項１１】
ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された形質転換されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞であって、ここで、該細胞は、ＡＬＧ３活性を欠損するように遺伝子工学的に改変され、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩとＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩとをコードする核酸を含み、ここで、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩとをコードする該核酸が、それぞれのコードされたタンパク質を細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩおよび該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩの発現が、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成する、細胞。
【請求項１２】
以下の（ｉ）〜（ｖｉｉ）のいずれかに示す特徴を有する、請求項１１に記載の細胞：
（ｉ）ＯＣＨ１活性を欠損する；
（ｉｉ）請求項１１または上記（ｉ）に記載の細胞であって、前記遺伝子工学的に改変された細胞が、α−１，３−グルコシルトランスフェラーゼをコードする核酸をさらに含む；
（ｉｉｉ）請求項１１または上記（ｉ）もしくは（ｉｉ）に記載の細胞であって、ここで、該遺伝子工学的に改変された細胞が、標的タンパク質をコードする核酸をさらに含み、ここで、該細胞が、前記ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された該標的タンパク質を生成する；
（ｉｖ）請求項１１または上記（ｉ）〜（ｉｉｉ）のいずれかに記載の細胞であって、該細胞は、グルコシダーゼＩＩのαおよびβサブユニットをコードする核酸をさらに含み、ここで、該細胞における該グルコシダーゼＩＩの該αおよびβサブユニットの発現が、前記ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む前記タンパク質を生成する；
（ｖ）上記（ｉｖ）に記載の細胞であって、該細胞は、ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする核酸をさらに含み、ここで、該ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする該核酸が、コードされた該ガラクトシルトランスフェラーゼをゴルジ装置に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該ガラクトシルトランスフェラーゼの発現が、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成する；
（ｖｉ）請求項１１または上記（ｉ）〜（ｉｖ）のいずれかに記載の細胞であって、該細胞によって生成されるタンパク質上のＮ−グリカンのうちの少なくとも５０％、少なくとも７０％または少なくとも８５％がＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンである；ならびに
（ｖ）単離された形態である。
【請求項１３】
Ｇａｌ２ＧｌｃＮａｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む糖タンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変されている形質転換されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞を含む実質的に純粋な培養物であって、ここで、該細胞が、ＡＬＧ３活性を欠損するように遺伝子工学的に改変され、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩと、ガラクトシルトランスフェラーゼとをコードする核酸を含み、ここで、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩと、該ガラクトシルトランスフェラーゼとをコードする該核酸が、それぞれのコードされたタンパク質を細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩ、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩおよび該ガラクトシルトランスフェラーゼの発現が、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成する、実質的に純粋な培養物。
【請求項１４】
以下の（ｉ）〜（ｉｉｉ）のいずれかに示す特徴を有する、請求項１３に記載の実質的に純粋な培養物：
（ｉ）該細胞が、ＯＣＨ１活性をさらに欠損する；
（ｉｉ）該実質的に純粋な培養物が、請求項１３または上記（ｉ）に記載の培養物であり；ここで、該細胞が、α−１，３−グルコシルトランスフェラーゼをコードする核酸をさらに含む；ならびに
（ｉｉｉ）該実質的に純粋な培養物が、請求項１３または上記（ｉ）もしくは（ｉｉ）に記載の培養物であり、ここで、前記細胞が、グルコシダーゼＩＩのαおよびβサブユニットをコードする核酸をさらに含み、ここで、該細胞における該グルコシダーゼＩＩの該αおよびβサブユニットの発現が、前記Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む前記標的タンパク質を生成する。
【請求項１５】
Ｇａｌ２ＧｌｃＮａｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む糖タンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変されている形質転換されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞を含む実質的に純粋な培養物であって、ここで、該細胞が、ＯＣＨ１活性を欠損するように遺伝子工学的に改変され、α−１，２−マンノシダーゼと、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、マンノシダーゼＩＩと、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩと、ガラクトシルトランスフェラーゼとをコードする核酸を含み、ここで、該α−１，２−マンノシダーゼと、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、該マンノシダーゼＩＩと、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩと、該ガラクトシルトランスフェラーゼとをコードする該核酸が、それぞれのコードされたタンパク質を細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該α−１，２−マンノシダーゼ、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩ、該マンノシダーゼＩＩ、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩおよびガラクトシルトランスフェラーゼの発現が、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成する、実質的に純粋な培養物。
【請求項１６】
糖タンパク質を含む組成物であって、該糖タンパク質上のＮ−グリカンの少なくとも５０％、少なくとも７０％、または少なくとも８５％が、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンであり、ここで、該糖タンパク質が、遺伝子工学的に改変されている形質転換されたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞を用いて生成された、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
本発明のその他の特徴および利点は、以下の詳細な記載および特許請求の範囲から明らかになる。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
ＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成できる真菌細胞を生成する方法であって、該方法は、
ａ）Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された真菌細胞を提供するステップと、
ｂ）該細胞に、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該核酸が、コードされた該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩを細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該真菌細胞における該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩの発現が、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するステップと
を含む方法。
（項目２）
項目１に記載の方法であって、該方法は、前記細胞に、標的タンパク質をコードする核酸を導入するステップをさらに含み、ここで、該細胞が、前記ＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された該標的タンパク質を生成する、方法。
（項目３）
前記標的タンパク質が、Ｆｃ受容体と結合する、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記標的タンパク質が、抗体またはその断片である、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記標的タンパク質が、治療用の糖タンパク質である、項目２に記載の方法。
（項目６）
前記標的タンパク質が、インターフェロン−β、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロンγまたはエリスロポエチンである、項目２に記載の方法。
（項目７）
前記細胞内区画が、ゴルジ装置である、項目１に記載の方法。
（項目８）
項目１に記載の方法であって、ここで、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された前記真菌細胞が、ＯＣＨ１活性を欠損し、α−１，２−マンノシダーゼをコードする核酸を含み、ここで、該α−１，２−マンノシダーゼをコードする該核酸が、コードされた該α−１，２−マンノシダーゼを小胞体に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
（項目９）
前記ターゲティング配列が、ＨＤＥＬ配列である、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記真菌細胞が、Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓである、項目１に記載の方法。
（項目１１）
項目１に記載の方法であって、該方法は、前記細胞に、マンノシダーゼＩＩをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該マンノシダーゼＩＩをコードする該核酸が、コードされた該マンノシダーゼＩＩをゴルジ装置に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該真菌細胞における該マンノシダーゼＩＩの発現が、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するステップをさらに含む、方法。
（項目１２）
項目１または項目１１に記載の方法であって、該方法は、前記細胞に、ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該ガラク
トシルトランスフェラーゼをコードする該核酸が、コードされた該ガラクトシルトランスフェラーゼをゴルジ装置に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、該真菌細胞における該ガラクトシルトランスフェラーゼの発現が、ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２またはＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２
Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するステップをさらに含む、方法。
（項目１３）
項目１２に記載の方法であって、該方法は、前記細胞に、標的タンパク質をコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該細胞が、前記ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２またはＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された該標的タンパク質を生成するステップをさらに含む、方法。
（項目１４）
前記ガラクトシルトランスフェラーゼが、ＵＤＰ−Ｇｌｃ−４−エピメラーゼと、β−１，４−ガラクトシルトランスフェラーゼＩの触媒ドメインとの融合体である、項目１２に記載の方法。
（項目１５）
前記ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ５ＧｌｃＮＡｃ２またはＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された前記標的タンパク質を単離するステップをさらに含む、項目１３に記載の方法。
（項目１６）
ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む標的タンパク質を生成する方法であって、該方法は、
ａ）ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、α−１，２−マンノシダーゼと、マンノシダーゼＩＩとをコードする核酸を含むように遺伝子工学的に改変された真菌細胞を提供するステップであって、ここで、該核酸が、それぞれのコードされたタンパク質を細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該真菌細胞が、ＯＣＨ１活性を欠損しているステップと、
ｂ）該細胞に、標的タンパク質をコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該細胞が、該ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む該標的タンパク質を生成するステップと
を含む方法。
（項目１７）
前記真菌細胞が、Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓである、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記α−１，２−マンノシダーゼをコードする前記核酸が、コードされた該α−１，２−マンノシダーゼを小胞体に向かわせるための小胞体ターゲティング配列を含む、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記ターゲティング配列が、ＨＤＥＬ配列である、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩおよび前記マンノシダーゼＩＩをコードする前記核酸が、コードされた該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩおよびマンノシダーゼＩＩをゴルジ装置に向かわせるためのゴルジターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含む、項目１６に記載の方法。
（項目２１）
前記標的タンパク質が、Ｆｃ受容体と結合する、項目１６に記載の方法。
（項目２２）
前記標的タンパク質が、抗体またはその断片である、項目１６に記載の方法。
（項目２３）
前記標的タンパク質が、治療用の糖タンパク質である、項目１６に記載の方法。
（項目２４）
前記標的タンパク質が、インターフェロン−β、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロンγまたはエリスロポエチンである、項目１６に記載の方法。
（項目２５）
前記細胞に、ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする核酸を導入するステップをさらに含む項目１６に記載の方法であって、ここで、該ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする該核酸が、コードされた該ガラクトシルトランスフェラーゼをゴルジ装置に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで該真菌細胞における該ガラクトシルトランスフェラーゼの発現が、ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された前記標的タンパク質を生成する、方法。
（項目２６）
前記ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された前記標的タンパク質を単離するステップをさらに含む、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成できる真菌細胞を作製する方法であって、該方法は、
ａ）Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された真菌細胞を提供するステップと、
ｂ）該細胞に、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該核酸が、コードされた該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩを細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該真菌細胞における該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩの発現が、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するステップと
を含む方法。
（項目２８）
項目２７に記載の方法であって、該方法は、前記細胞に、標的タンパク質をコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該細胞が、前記ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された該標的タンパク質を生成するをさらに含む、方法。
（項目２９）
前記標的タンパク質が、Ｆｃ受容体と結合する、項目２７に記載の方法。
（項目３０）
前記標的タンパク質が、抗体またはその断片である、項目２７に記載の方法。
（項目３１）
前記標的タンパク質が、治療用の糖タンパク質である、項目２７に記載の方法。
（項目３２）
前記標的タンパク質が、インターフェロン−β、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロンγまたはエリスロポエチンである、項目２７に記載の方法。
（項目３３）
前記細胞内区画が、ゴルジ装置である、項目２７に記載の方法。
（項目３４）
項目２７に記載の方法であって、ここで、Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された前記真菌細胞が、ＡＬＧ３活性を欠損し、α−１，２−マンノシダーゼをコードする核酸を含み、該核酸が、コードされた該α−１，２−マンノシダーゼを小胞体に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含む、方法。
（項目３５）
Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された前記真菌細胞が、ＯＣＨ１活性をさらに欠損する、項目３４に記載の方
法。
（項目３６）
Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された前記真菌細胞が、α−１，３−グルコシルトランスフェラーゼをコードする核酸をさらに含む、項目３４または３５に記載の方法。
（項目３７）
前記α−１，３−グルコシルトランスフェラーゼが、ＡＬＧ６である、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記真菌細胞が、Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａまたはＡｒｘｕｌａ  ａｄｅｎｉｎｉｖｏｒａｎｓである、項目２７に記載の方法。
（項目３９）
項目２７に記載の方法であって、該方法は、前記細胞に、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩをコードする該核酸が、コードされた該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩを細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該真菌細胞における該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩの発現が、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するステップをさらに含む、方法。
（項目４０）
項目２７または項目３９に記載の方法であって、該方法は、前記細胞に、ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする該核酸が、コードされた該ガラクトシルトランスフェラーゼをゴルジ装置に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該真菌細胞における該ガラクトシルトランスフェラーゼの発現が、ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２またはＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するステップをさらに含む、方法。
（項目４１）
項目４０に記載の方法であって、該方法は、前記細胞に、標的タンパク質をコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該細胞が、前記ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２またはＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された該標的タンパク質を生成するステップをさらに含む、方法。
（項目４２）
前記ガラクトシルトランスフェラーゼが、ＵＤＰ−Ｇｌｃ−４−エピメラーゼと、β−１，４−ガラクトシルトランスフェラーゼＩの触媒ドメインとの融合体である、項目４０に記載の方法。
（項目４３）
項目４０に記載の方法であって、該方法は、前記細胞に、グルコシダーゼＩＩのαおよびβサブユニットをコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該真菌細胞における該グルコシダーゼＩＩの該αおよびβサブユニットの発現が、ＧａｌＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２またはＧａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するステップをさらに含む、方法。
（項目４４）
Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む標的タンパク質を生成する方法であって、該方法は、
ａ）ＡＬＧ３活性を欠損するように遺伝子工学的に改変され、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩと、ガラクトシルトランスフェラーゼとをコードする核酸を含む真菌細胞を提供するステップであって、ここで、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩと、該ガラクトシル
トランスフェラーゼとをコードする該核酸が、それぞれのコードされたタンパク質を細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含むステップと、
ｂ）該細胞に、標的タンパク質をコードする核酸を導入するステップであって、ここで、該細胞が、該Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む該標的タンパク質を生成するステップと
を含む方法。
（項目４５）
前記真菌細胞が、ＯＣＨ１活性をさらに欠損する、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
前記真菌細胞が、α−１，３−グルコシルトランスフェラーゼをコードする核酸をさらに含む、項目４４または４５に記載の方法。
（項目４７）
前記α−１，３−グルコシルトランスフェラーゼをコードする前記核酸が、ＡＬＧ６である、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
項目４４、項目４５または項目４６に記載の方法であって、ここで、前記真菌細胞が、グルコシダーゼＩＩのαおよびβサブユニットをコードする核酸をさらに含み、ここで、該真菌細胞における該グルコシダーゼＩＩの該αおよびβサブユニットの発現が、前記Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む前記標的タンパク質を生成する、方法。
（項目４９）
ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された単離真菌細胞であって、ここで、ＯＣＨ１活性を欠損し、α−１，２−マンノシダーゼと、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、マンノシダーゼＩＩとをコードする核酸を含み、ここで、該α−１，２−マンノシダーゼと、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、該マンノシダーゼＩＩとをコードする該核酸が、それぞれのコードされたタンパク質を細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該真菌細胞における該α−１，２−マンノシダーゼ、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩおよび該マンノシダーゼＩＩの発現が、ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成する、単離真菌細胞。
（項目５０）
前記遺伝子工学的に改変された真菌細胞が、標的タンパク質をコードする核酸をさらに含み、ここで、該細胞が、前記ＧｌｃＮＡｃＭａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された該標的タンパク質を生成する、項目４９に記載の真菌細胞。
（項目５１）
項目４９または項目５０に記載の真菌細胞であって、ここで、前記遺伝子工学的に改変された真菌細胞が、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩをコードする核酸をさらに含み、ここで、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩをコードする該核酸が、コードされた該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩを細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該真菌細胞における該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩの発現が、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成する、真菌細胞。
（項目５２）
項目５１に記載の真菌細胞であって、該真菌細胞は、ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする核酸をさらに含み、ここで、該ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする該核酸が、コードされた該ガラクトシルトランスフェラーゼをゴルジ装置に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該真菌細胞における該ガラクトシルトランスフェラーゼの発現が、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３
ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成する、真菌細胞。
（項目５３）
ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変された単離真菌細胞であって、ここで、該真菌細胞は、ＡＬＧ３活性を欠損するように遺伝子工学的に改変され、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩとＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩとをコードする核酸を含み、ここで、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩとをコードする該核酸が、それぞれのコードされたタンパク質を細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該真菌細胞における該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩおよび該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩの発現が、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成する、単離真菌細胞。
（項目５４）
前記遺伝子工学的に改変された真菌細胞が、ＯＣＨ１活性をさらに欠損する、項目５３に記載の真菌細胞。
（項目５５）
前記遺伝子工学的に改変された真菌細胞が、α−１，３−グルコシルトランスフェラーゼをコードする核酸をさらに含む、項目５３または項目５４に記載の真菌細胞。
（項目５６）
項目５３、項目５４または項目５５に記載の真菌細胞であって、ここで、前記遺伝子工学的に改変された真菌細胞が、標的タンパク質をコードする核酸をさらに含み、ここで、該細胞が、前記ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むように改変された該標的タンパク質を生成する、真菌細胞。
（項目５７）
項目５３から５６のいずれか一項に記載の真菌細胞であって、該真菌細胞は、グルコシダーゼＩＩのαおよびβサブユニットをコードする核酸をさらに含み、ここで、該真菌細胞における該グルコシダーゼＩＩの該αおよびβサブユニットの発現が、前記ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む前記タンパク質を生成する、真菌細胞。
（項目５８）
項目５７に記載の真菌細胞であって、該真菌細胞は、ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする核酸をさらに含み、ここで、該ガラクトシルトランスフェラーゼをコードする該核酸が、コードされた該ガラクトシルトランスフェラーゼをゴルジ装置に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該真菌細胞における該ガラクトシルトランスフェラーゼの発現が、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成する、真菌細胞。
（項目５９）
相当数のＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞が、Ｇａｌ２ＧｌｃＮａｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む糖タンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変されているＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞の実質的に純粋な培養物であって、ここで、該細胞が、ＡＬＧ３活性を欠損するように遺伝子工学的に改変され、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩと、ガラクトシルトランスフェラーゼとをコードする核酸を含み、ここで、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩと、該ガラクトシルトランスフェラーゼとをコードする該核酸が、それぞれのコードされたタンパク質を細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩ、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩおよび該ガラクトシルトランスフェラーゼの発現が、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成する、実質的に純粋な培養物。
（項目６０）
前記細胞が、ＯＣＨ１活性をさらに欠損する、項目４９に記載の実質的に純粋な培養物。
（項目６１）
前記細胞が、α−１，３−グルコシルトランスフェラーゼをコードする核酸をさらに含む、項目５９または項目６０に記載の実質的に純粋な培養物。
（項目６２）
前記細胞が、グルコシダーゼＩＩのαおよびβサブユニットをコードする核酸をさらに含み、ここで、該真菌細胞における該グルコシダーゼＩＩの該αおよびβサブユニットの発現が、前記Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む前記標的タンパク質を生成する、項目５９、項目６０または項目６１に記載の実質的に純粋な培養物。
（項目６３）
相当数のＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞が、Ｇａｌ２ＧｌｃＮａｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含む糖タンパク質を生成するように遺伝子工学的に改変されているＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞の実質的に純粋な培養物であって、ここで、該細胞が、ＯＣＨ１活性を欠損するように遺伝子工学的に改変され、α−１，２−マンノシダーゼと、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、マンノシダーゼＩＩと、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩと、ガラクトシルトランスフェラーゼとをコードする核酸を含み、ここで、該α−１，２−マンノシダーゼと、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩと、該マンノシダーゼＩＩと、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩと、該ガラクトシルトランスフェラーゼとをコードする該核酸が、それぞれのコードされたタンパク質を細胞内区画に向かわせるためのターゲティング配列をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、該細胞における該α−１，２−マンノシダーゼ、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩ、該マンノシダーゼＩＩ、該ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼＩＩおよびガラクトシルトランスフェラーゼの発現が、Ｇａｌ２ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンを含むタンパク質を生成する、実質的に純粋な培養物。
（項目６４）
糖タンパク質を含む組成物であって、該糖タンパク質上のＮ−グリカンの少なくとも５０％が、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンである組成物。
（項目６５）
前記糖タンパク質上のＮ−グリカンの少なくとも７０％が、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンである、項目６４に記載の組成物。
（項目６６）
前記糖タンパク質上のＮ−グリカンの少なくとも８５％が、ＧｌｃＮＡｃ２Ｍａｎ３ＧｌｃＮＡｃ２  Ｎ−グリカンである、項目６４に記載の組成物。