【手続補正書】
【提出日】平成24年11月5日(2012.11.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト用または動物用のワクチンにおいて許容されるレベルの感染因子を有するエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物を単離する方法であって、
（ａ）前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物を作製するのに用いられる宿主細胞、または前記宿主細胞の成分から、前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物を分離するステップと、
（ｂ）前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物に電磁放射を適用して前記調製物中の感染因子を不活化するステップと
を含み、ステップ（ｂ）の後の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物は、ステップ（ｂ）の前の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物の少なくとも５０パーセントの免疫原性を有し、１ｍｌあたりの前記感染単位は、ステップ（ｂ）の前の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物の少なくとも１０分の１に低下している、方法。
【請求項２】
前記分離するステップ（ａ）が、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティー−クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、混合方式クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、およびサイズ除外クロマトグラフィーからなる群より選択される少なくとも１つのクロマトグラフィーステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記分離するステップ（ａ）が、ノーマルフロー濾過、限外濾過、またはタンジェンシャルフロー濾過からなる群より選択される少なくとも１つの濾過ステップを含む、請求項１から２のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項４】
前記電磁放射が、可視光、ｘ線放射、紫外線放射、およびガンマ放射からなる群より選択される、請求項１から３のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記紫外線放射が、ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ、およびＵＶ−Ｃからなる群より選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記紫外線放射の波長が、３２０ｎｍ〜４００ｎｍである、請求項４から５のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記宿主細胞が昆虫細胞であり、前記昆虫細胞は、前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子の少なくとも１つの成分を発現するバキュロウイルス発現ベクターで感染させられる、請求項１から６のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記宿主細胞が、Ｂｏｍｂｙｘ  ｍｏｒｉ宿主細胞、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ宿主細胞、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ  ｆｕｍｉｆｅｒａｎａ宿主細胞、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ宿主細胞、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｚｅａ宿主細
胞、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ  ｚｅａ宿主細胞、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ  ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ宿主細胞、Ｏｒｇｙｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａｔａ宿主細胞、Ｌｙｍａｎｔｒｉａ  ｄｉｓｐａｒ宿主細胞、Ｐｌｕｔｅｌｌａ  ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ宿主細胞、Ｍａｌａｃｏｓｔｏｍａ  ｄｉｓｓｔｒｉａ宿主細胞、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ宿主細胞、Ｐｉｅｒｉｓ  ｒａｐａｅ宿主細胞、Ｍａｍｅｓｔｒａ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔａ宿主細胞、Ｍａｍｅｓｔｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａ宿主細胞、およびＨｙａｌｏｐｈｏｒａ
ｃｅｃｒｏｐｉａ宿主細胞からなる群より選択される、請求項１から７のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記宿主細胞が哺乳動物細胞であり、前記哺乳動物細胞は、前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子の少なくとも１つの成分を発現する、アデノウイルス発現ベクター、アデノ関連ウイルス発現ベクター、アルファウイルス発現ベクター、ヘルペスウイルス発現ベクター、ポックスウイルス発現ベクター、またはレトロウイルス発現ベクターで感染させられる、請求項１から６のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記適用するステップ（ｂ）の前に、前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物にＤＮＡインターカレート化合物を添加するステップをさらに含む、請求項１から９のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記ＤＮＡインターカレート化合物が、光反応性である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＤＮＡインターカレート化合物が、ソラーレン、イソソラーレン、ならびにこれらの誘導体および類似体からなる群より選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
（ｃ）前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物にアジュバントを添加するステップをさらに含む、請求項１から１２のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記分離するステップ（ａ）の前に、（ｉ）ｇａｇポリペプチドと、天然では脂質ラフトと会合しない抗原に連結した脂質ラフト会合ポリペプチドとを併せて発現する、１または複数の発現ベクターを供給するステップと；（ｉｉ）前記１または複数の発現ベクターを細胞内へと導入するステップと；（ｉｉｉ）前記ｇａｇポリペプチドと、前記抗原に連結した脂質ラフト会合ポリペプチドとを発現させて、前記ウイルス様粒子を作製するステップとにより、前記宿主細胞内において前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子を作製する、請求項１から１３のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記分離するステップ（ａ）の前に、（ｉ）ＲＳウイルスＭポリペプチドと、ＲＳウイルスＦポリペプチドとを発現する、１または複数の発現ベクターを供給するステップと；（ｉｉ）前記１または複数の発現ベクターを細胞内へと導入するステップと；（ｉｉｉ）前記ＲＳウイルスＭポリペプチドと、前記ＲＳウイルスＦポリペプチドとを発現させて、前記ウイルス様粒子を作製するステップとにより、前記宿主細胞内において前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子を作製する、請求項１から１３のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記１または複数の発現ベクターが、ＲＳウイルスＧポリペプチドをさらに発現する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記分離するステップ（ａ）の前に、（ｉ）ｇａｇポリペプチドと、インフルエンザ赤血球凝集素ポリペプチドとを併せて発現する、１または複数の発現ベクターを供給するステップと；（ｉｉ）前記１または複数の発現ベクターを細胞内へと導入するステップと；（ｉｉｉ）前記ｇａｇポリペプチドと、前記インフルエンザ赤血球凝集素ポリペプチドとを発現させて、前記ウイルス様粒子を作製するステップとにより、前記宿主細胞内において前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子を作製する、請求項１から１３のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記分離するステップ（ａ）の前に、（ｉ）インフルエンザＭ１ポリペプチドと、赤血球凝集素ポリペプチドとを併せて発現する、１または複数の発現ベクターを供給するステップと；（ｉｉ）前記１または複数の発現ベクターを細胞内へと導入するステップと；（ｉｉｉ）前記インフルエンザＭ１ポリペプチドと、前記赤血球凝集素ポリペプチドとを発現させて、前記ウイルス様粒子を作製するステップとにより、前記宿主細胞内において前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子を作製する、請求項１から１３のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記１または複数の発現ベクターが、ノイラミニダーゼポリペプチドをさらに発現する、請求項１７から１８のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
前記１または複数の発現ベクターが、バキュロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、およびレトロウイルスからなる群より選択される、ウイルスベクターである、請求項１４から１９のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
ウイルスベクターを用いて、前記宿主細胞内において、前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子の少なくとも１つの成分を発現させる、請求項１から２０のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
前記感染因子が、前記ウイルスベクターを含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記調製物が、１ミリリットル当たり２０個未満、１５個未満、１０個未満、８個未満、６個未満または５個未満の感染因子を含む、請求項１から２２のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
ステップ（ｂ）の後の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物が、ステップ（ｂ）の前の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物の少なくとも６０パーセント、少なくとも７０パーセント、少なくとも８０パーセント、少なくとも８５パーセント、少なくとも９０パーセントまたは少なくとも９５パーセントの免疫原性を有する、請求項１から２３のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子が、赤血球凝集素ポリペプチドを含み、前記免疫原性が、赤血球凝集抑制アッセイを用いて測定される、請求項１から２４のうちのいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
感染因子を含まないエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子を含む、エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物であって、前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子が、感染因子を含まないわけではないエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子の少なくとも５０パーセントの免疫原性を有する、調製物。
【請求項２７】
前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子が、昆虫または哺乳動物グリコシル化をさらに含む、請求項２６に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項２８】
前記昆虫グリコシル化が、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ；Ｂｏｍｂｙｘ  ｍｏｒｉ；Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ；Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ  ｆｕｍｉｆｅｒａｎａ；Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ；Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｚｅａ；Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ  ｚｅａ；Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ  ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ；Ｏｒｇｙｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａｔａ；Ｌｙｍａｎｔｒｉａ  ｄｉｓｐａｒ；Ｐｌｕｔｅｌｌａ  ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ；Ｍａｌａｃｏｓｔｏｍａ  ｄｉｓｓｔｒｉａ；Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ；Ｐｉｅｒｉｓ  ｒａｐａｅ；Ｍａｍｅｓｔｒａ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔａ；Ｍａｍｅｓｔｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａ；およびＨｙａｌｏｐｈｏｒａ  ｃｅｃｒｏｐｉａからなる群より選択される、請求項２６または２７に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項２９】
前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子が、
（ａ）ｇａｇポリペプチドと、
（ｂ）非ウイルス性脂質ラフト会合ポリペプチド、または連結を形成するための抗原に連結した脂質ラフト会合ポリペプチドであって、前記抗原は天然では脂質ラフトと会合しない、ポリペプチドと
を含む、請求項２６から２８のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項３０】
前記非ウイルス性脂質ラフト会合ポリペプチドが、ＧＰＩアンカーポリペプチド、ミリストイル化配列ポリペプチド、パルミトイル化配列ポリペプチド、二重アセチル化配列ポリペプチド、シグナル伝達ポリペプチド、および膜輸送ポリペプチドからなる群より選択される、請求項２９に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項３１】
前記非ウイルス性脂質ラフト会合ポリペプチドが、ＧＰＩアンカーポリペプチド、ミリストイル化配列ポリペプチド、パルミトイル化配列ポリペプチド、二重アセチル化配列ポリペプチド、カベオリンポリペプチド、フロチリンポリペプチド、シンタクシン−１ポリペプチド、シンタクシン−４ポリペプチド、シナプシンＩポリペプチド、アデューシンポリペプチド、ＶＡＭＰ２ポリペプチド、ＶＡＭＰ／シナプトブレビンポリペプチド、シナプトブレビンＩＩポリペプチド、ＳＮＡＲＥポリペプチド、ＳＮＡＰ−２５ポリペプチド、ＳＮＡＰ−２３ポリペプチド、シナプトタグミンＩポリペプチド、およびシナプトタグミンＩＩポリペプチドからなる群より選択される、請求項２９に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項３２】
前記ウイルス性脂質ラフト会合ポリペプチドが、赤血球凝集素ポリペプチド、ノイラミニダーゼポリペプチド、融合タンパク質ポリペプチド、糖タンパク質ポリペプチド、およびエンベロープタンパク質ポリペプチドからなる群より選択される、請求項２９に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項３３】
前記連結が、共有結合、イオン性相互作用、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス力、金属−配位子相互作用、および抗体−抗原相互作用からなる群より選択される、請求項２９から３２のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項３４】
前記脂質ラフト会合ポリペプチドが、内在性膜タンパク質である、請求項２９から３３のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項３５】
赤血球凝集素ポリペプチドをさらに含む、請求項２６から３４のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項３６】
ＲＳウイルスＭポリペプチド、Ｇポリペプチドおよび／またはＦポリペプチドをさらに含む、請求項２６から３５のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項３７】
前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子が、
（ａ）ｇａｇポリペプチドと、
（ｂ）赤血球凝集素ポリペプチドと
を含む、請求項２６から２８のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項３８】
前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子が、
（ａ）インフルエンザＭ１ポリペプチドと、
（ｂ）赤血球凝集素ポリペプチドと
を含む、請求項２６から２８のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項３９】
ノイラミニダーゼポリペプチドをさらに含む、請求項２６から３８に記載のエンベロー
プウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項４０】
前記ウイルス様粒子と会合するアジュバントをさらに含む、請求項２６から３９に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項４１】
前記アジュバントを、前記ｇａｇポリペプチドと共有結合させて、共有結合を形成させる、請求項４０に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項４２】
前記アジュバントを、前記脂質ラフト会合ポリペプチドと共有結合させて、共有結合を形成させる、請求項４０に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項４３】
前記アジュバントが、フラジェリンのアジュバント活性断片を含む、請求項４０から４２のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項４４】
免疫系の疾患または症状を処置または予防する方法に使用するための、請求項２６から４３のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物、または請求項１から２５のうちのいずれかに記載の方法を用いて単離したエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項４５】
免疫原性量で投与される前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物が、被験体において、防御的免疫化反応を誘導するものであることを特徴とする、請求項４４に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項４６】
前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物の投与が、皮下送達、皮内送達、真皮下送達、筋肉内送達、経口による送達、経口送達、鼻腔内送達、口腔内送達、舌下送達、腹腔内送達、膣内送達、経肛門送達、および頭蓋内送達からなる群より選択されることを特徴とする、請求項４４から４５のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
【請求項４７】
免疫原性量の、請求項２６から４３のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物、または請求項１から２５のうちのいずれかに記載の方法を用いて単離したエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物と、薬学的に許容されるキャリアとを含む、医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
本発明の別の態様は、免疫系の疾患または症状を処置または予防する方法であって、免疫原性量の、前出の実施形態のうちのいずれかによるエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物、または前出の方法およびその実施形態のうちのいずれかを用いて単離したエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物を、被験体に投与するステップを含む方法を包含する。一実施形態では、被験体がヒトである。前出の実施形態と組み合わせ得る別の実施形態では、投与するステップにより、被験体において、防御的免疫化反応が誘導される。前出の実施形態のうちのいずれかと組み合わせ得るさらに別の実施形態では、投与するステップを、皮下（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ）送達、皮内送達、真皮下（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ）送達、筋肉内送達、経口による（ｐｅｒｏｒａｌ）送達、経口（ｏｒａｌ）送達、鼻腔内送達、口腔内送達、舌下送達、腹腔内送達、膣内送達、経肛門送達、および頭蓋内送達からなる群よりさらに選択することができる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
本発明の別の態様は、免疫原性量の、前出の実施形態のうちのいずれかによるエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物、または前出の方法およびその実施形態のうちのいずれかを用いて単離したエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物を含む医薬組成物を包含する。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
感染因子を実質的に含まないエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物を単離する方法であって、
（ａ）前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物を作製するのに用いられる宿主細胞、または前記宿主細胞の成分から、前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物を単離するステップと、
（ｂ）前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物における実質的にすべての感染因子を不活化するのに十分な線量の電磁放射を、前記調製物へと適用するステップと
を含み、ステップ（ｂ）の後の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物は、ステップ（ｂ）の前の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物と実質的に同じ免疫原性を有する、方法。
（項目２）
前記分離するステップ（ａ）が、少なくとも１つのクロマトグラフィーステップを含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記少なくとも１つのクロマトグラフィーステップが、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティー−クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、混合方式クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、およびサイズ除外クロマトグラフィーからなる群より選択される、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記分離するステップ（ａ）が、少なくとも１つの濾過ステップを含む、項目１から３のうちのいずれかに記載の方法。
（項目５）
前記少なくとも１つの濾過ステップが、ノーマルフロー濾過、限外濾過、またはタンジェンシャルフロー濾過である、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記分離するステップ（ａ）が、少なくとも１つの遠心分離ステップを含む、項目１から５のうちのいずれかに記載の方法。
（項目７）
前記電磁放射が、可視光、ｘ線放射、紫外線放射、およびガンマ放射からなる群より選択される、項目１から６のうちのいずれかに記載の方法。
（項目８）
前記紫外線放射が、ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ、およびＵＶ−Ｃからなる群より選択される、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記紫外線放射の波長が、３２０ｎｍ〜４００ｎｍである、項目７から８のうちのいずれかに記載の方法。
（項目１０）
前記宿主細胞が、昆虫細胞または哺乳動物細胞である、項目１から９のうちのいずれかに記載の方法。
（項目１１）
前記宿主細胞が昆虫細胞であり、前記昆虫細胞は、前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子の少なくとも１つの成分を発現するバキュロウイルス発現ベクターで感染させられる、項目１から１０のうちのいずれかに記載の方法。
（項目１２）
前記宿主細胞が、Ｂｏｍｂｙｘ  ｍｏｒｉ宿主細胞、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ宿主細胞、Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ  ｆｕｍｉｆｅｒａｎａ宿主細胞、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ宿主細胞、Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｚｅａ宿主細
胞、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ  ｚｅａ宿主細胞、Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ  ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ宿主細胞、Ｏｒｇｙｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａｔａ宿主細胞、Ｌｙｍａｎｔｒｉａ  ｄｉｓｐａｒ宿主細胞、Ｐｌｕｔｅｌｌａ  ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ宿主細胞、Ｍａｌａｃｏｓｔｏｍａ  ｄｉｓｓｔｒｉａ宿主細胞、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ宿主細胞、Ｐｉｅｒｉｓ  ｒａｐａｅ宿主細胞、Ｍａｍｅｓｔｒａ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔａ宿主細胞、Ｍａｍｅｓｔｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａ宿主細胞、およびＨｙａｌｏｐｈｏｒａ
ｃｅｃｒｏｐｉａ宿主細胞からなる群より選択される、項目１から１１のうちのいずれかに記載の方法。
（項目１３）
前記電磁放射線量が、前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物におけるバキュロウイルスを不活化させるのに十分である、項目１１から１２のうちのいずれかに記載の方法。
（項目１４）
前記宿主細胞が哺乳動物細胞であり、前記哺乳動物細胞は、前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子の少なくとも１つの成分を発現する、アデノウイルス発現ベクター、アデノ関連ウイルス発現ベクター、アルファウイルス発現ベクター、ヘルペスウイルス発現ベクター、ポックスウイルス発現ベクター、またはレトロウイルス発現ベクターで感染させられる、項目１から１０のうちのいずれかに記載の方法。
（項目１５）
前記適用するステップ（ｂ）の前に、前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物にＤＮＡインターカレート化合物を添加するステップをさらに含む、項目１から１４のうちのいずれかに記載の方法。
（項目１６）
前記ＤＮＡインターカレート化合物が、光反応性である、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記ＤＮＡインターカレート化合物が、ソラーレン、イソソラーレン、ならびにこれらの誘導体および類似体からなる群より選択される、項目１５に記載の方法。
（項目１８）
前記電磁放射が、紫外線放射および可視光からなる群より選択される、項目１から１７のうちのいずれかに記載の方法。
（項目１９）
（ｃ）前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物にアジュバントを添加するステップをさらに含む、項目１から１７１８のうちのいずれかに記載の方法。
（項目２０）
前記分離するステップ（ａ）の前に、（ｉ）ｇａｇポリペプチドと、天然では脂質ラフトと会合しない抗原に連結した脂質ラフト会合ポリペプチドとを併せて発現する、１または複数の発現ベクターを供給するステップと；（ｉｉ）前記１または複数の発現ベクターを細胞内へと導入するステップと；（ｉｉｉ）前記ｇａｇポリペプチドと、前記抗原に連結した脂質ラフト会合ポリペプチドとを発現させて、前記ウイルス様粒子を作製するステップとにより、前記宿主細胞内において前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子を作製する、項目１から１９のうちのいずれかに記載の方法。
（項目２１）
前記分離するステップ（ａ）の前に、（ｉ）ＲＳウイルスＭポリペプチドと、ＲＳウイルスＦポリペプチドとを発現する、１または複数の発現ベクターを供給するステップと；（ｉｉ）前記１または複数の発現ベクターを細胞内へと導入するステップと；（ｉｉｉ）前記ＲＳウイルスＭポリペプチドと、前記ＲＳウイルスＦポリペプチドとを発現させて、前記ウイルス様粒子を作製するステップとにより、前記宿主細胞内において前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子を作製する、項目１から１９のうちのいずれかに記載の方法。
（項目２２）
前記１または複数の発現ベクターが、ＲＳウイルスＧポリペプチドをさらに発現する、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記分離するステップ（ａ）の前に、（ｉ）ｇａｇポリペプチドと、インフルエンザ赤血球凝集素ポリペプチドとを併せて発現する、１または複数の発現ベクターを供給するステップと；（ｉｉ）前記１または複数の発現ベクターを細胞内へと導入するステップと；（ｉｉｉ）前記ｇａｇポリペプチドと、前記インフルエンザ赤血球凝集素ポリペプチドとを発現させて、前記ウイルス様粒子を作製するステップとにより、前記宿主細胞内において前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子を作製する、項目１から１９のうちのいずれかに記載の方法。
（項目２４）
前記分離するステップ（ａ）の前に、（ｉ）インフルエンザＭ１ポリペプチドと、赤血球凝集素ポリペプチドとを併せて発現する、１または複数の発現ベクターを供給するステップと；（ｉｉ）前記１または複数の発現ベクターを細胞内へと導入するステップと；（ｉｉｉ）前記インフルエンザＭ１ポリペプチドと、前記赤血球凝集素ポリペプチドとを発現させて、前記ウイルス様粒子を作製するステップとにより、前記宿主細胞内において前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子を作製する、項目１から１９のうちのいずれかに記載の方法。
（項目２５）
前記１または複数の発現ベクターが、ノイラミニダーゼポリペプチドをさらに発現する、項目２３から２４のうちのいずれかに記載の方法。
（項目２６）
前記１または複数の発現ベクターが、ウイルスベクターである、項目２０から２５のうちのいずれかに記載の方法。
（項目２７）
前記ウイルスベクターが、バキュロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、アルファウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、およびレトロウイルスからなる群より選択される、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
ウイルスベクターを用いて、前記宿主細胞内において、前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子の少なくとも１つの成分を発現させる、項目１から２７のうちのいずれかに記載の方法。
（項目２９）
前記感染因子が、前記ウイルスベクターを含む、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記調製物が、１ミリリットル当たり２０個未満の感染因子を含む、項目１から２９のうちのいずれかに記載の方法。
（項目３１）
前記調製物が、１ミリリットル当たり１５個未満の感染因子を含む、項目１から２９のうちのいずれかに記載の方法。
（項目３２）
前記調製物が、１ミリリットル当たり１０個未満の感染因子を含む、項目１から２９のうちのいずれかに記載の方法。
（項目３３）
前記調製物が、１ミリリットル当たり８個未満の感染因子を含む、項目１から２９のうちのいずれかに記載の方法。
（項目３４）
前記調製物が、１ミリリットル当たり６個未満の感染因子を含む、項目１から２９のうちのいずれかに記載の方法。
（項目３５）
前記調製物が、１ミリリットル当たり５個未満の感染因子を含む、項目１から２９のうちのいずれかに記載の方法。
（項目３６）
ステップ（ｂ）の後の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物が、ステップ（ｂ）の前の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物の少なくとも５０パーセントの免疫原性を有する、項目１から３５のうちのいずれかに記載の方法。
（項目３７）
ステップ（ｂ）の後の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物が、ステップ（ｂ）の前の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物の少なくとも６０パーセントの免疫原性を有する、項目１から３５のうちのいずれかに記載の方法。
（項目３８）
ステップ（ｂ）の後の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物が、ステップ（ｂ）の前の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物の少なくとも７０パーセントの免疫原性を有する、項目１から３５のうちのいずれかに記載の方法。
（項目３９）
ステップ（ｂ）の後の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物が、ステップ（ｂ）の前の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物の少なくとも８０パーセントの免疫原性を有する、項目１から３５のうちのいずれかに記載の方法。
（項目４０）
ステップ（ｂ）の後の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物が、ステップ（ｂ）の前の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物の少なくとも８５パーセントの免疫原性を有する、項目１から３５のうちのいずれかに記載の方法。
（項目４１）
ステップ（ｂ）の後の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物が、ステップ（ｂ）の前の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物の少なくとも９０パーセントの免疫原性を有する、項目１から３５のうちのいずれかに記載の方法。
（項目４２）
ステップ（ｂ）の後の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物が、ステップ（ｂ）の前の前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物の少なくとも９５パーセントの免疫原性を有する、項目１から３５のうちのいずれかに記載の方法。
（項目４３）
前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子が、赤血球凝集素ポリペプチドを含み、前記免疫原性が、赤血球凝集抑制アッセイを用いて測定される、項目１から４２のうちのいずれかに記載の方法。
（項目４４）
感染因子を実質的に含まないエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子を含む、エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物であって、前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子が、感染因子を実質的に含まないわけではないエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子と実質的に同じ免疫原性を有する、調製物。
（項目４５）
前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子が、昆虫または哺乳動物グリコシル化をさらに含む、項目４４に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目４６）
前記昆虫グリコシル化が、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ；Ｂｏｍｂｙｘ  ｍｏｒｉ；Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ；Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ  ｆｕｍｉｆｅｒａｎａ；Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ；Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｚｅａ；Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ  ｚｅａ；Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ  ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ；Ｏｒｇｙｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａｔａ；Ｌｙｍａｎｔｒｉａ  ｄｉｓｐａｒ；Ｐｌｕｔｅｌｌａ  ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ；Ｍａｌａｃｏｓｔｏｍａ  ｄｉｓｓｔｒｉａ；Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ；Ｐｉｅｒｉｓ  ｒａｐａｅ；Ｍａｍｅｓｔｒａ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔａ；Ｍａｍｅｓｔｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａ；およびＨｙａｌｏｐｈｏｒａ  ｃｅｃｒｏｐｉａからなる群より選択される、項目４４または４５に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目４７）
前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子が、共有結合した光化学作用物質、タンパク質サブユニットの三次構造もしくは四次構造においてＵＶ照射もしくはガンマ照射により誘導される変化、ガンマ照射により誘導される化学結合の開裂、またはＵＶ照射もしくはガンマ照射により誘導される、脂質の酸化、タンパク質の架橋形成、アミノ酸の酸化、およびアミノ酸の修飾からなる群より選択される化学修飾から選択される１または複数の欠損をさらに示す、項目４４から４６のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目４８）
前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子が、以下の欠損：共有結合した光化学作用物質、タンパク質サブユニットの三次構造もしくは四次構造においてＵＶ照射もしくはガンマ照射により誘導される変化、ガンマ照射により誘導される化学結合の開裂、またはＵＶ照射もしくはガンマ照射により誘導される、脂質の酸化、タンパク質の架橋形成、アミノ酸の酸化、およびアミノ酸の修飾からなる群より選択される化学修飾のいずれもを含まない、項目４７に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目４９）
前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子が、
（ａ）ｇａｇポリペプチドと、
（ｂ）非ウイルス性脂質ラフト会合ポリペプチド、または連結を形成するための抗原に連結した脂質ラフト会合ポリペプチドであって、前記抗原は天然では脂質ラフトと会合しない、ポリペプチドと
を含む、項目４４から４８のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目５０）
前記非ウイルス性脂質ラフト会合ポリペプチドが、ＧＰＩアンカーポリペプチド、ミリストイル化配列ポリペプチド、パルミトイル化配列ポリペプチド、二重アセチル化配列ポリペプチド、シグナル伝達ポリペプチド、および膜輸送ポリペプチドからなる群より選択される、項目４９に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目５１）
前記非ウイルス性脂質ラフト会合ポリペプチドが、ＧＰＩアンカーポリペプチド、ミリストイル化配列ポリペプチド、パルミトイル化配列ポリペプチド、二重アセチル化配列ポリペプチド、カベオリンポリペプチド、フロチリンポリペプチド、シンタクシン−１ポリペプチド、シンタクシン−４ポリペプチド、シナプシンＩポリペプチド、アデューシンポリペプチド、ＶＡＭＰ２ポリペプチド、ＶＡＭＰ／シナプトブレビンポリペプチド、シナプトブレビンＩＩポリペプチド、ＳＮＡＲＥポリペプチド、ＳＮＡＰ−２５ポリペプチド、ＳＮＡＰ−２３ポリペプチド、シナプトタグミンＩポリペプチド、およびシナプトタグミンＩＩポリペプチドからなる群より選択される、項目４９に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目５２）
前記ウイルス性脂質ラフト会合ポリペプチドが、赤血球凝集素ポリペプチド、ノイラミニダーゼポリペプチド、融合タンパク質ポリペプチド、糖タンパク質ポリペプチド、およびエンベロープタンパク質ポリペプチドからなる群より選択される、項目４９に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目５３）
前記連結が、共有結合、イオン性相互作用、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス力、金属−配位子相互作用、および抗体−抗原相互作用からなる群より選択される、項目４９から５２のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目５４）
前記連結が、共有結合である、項目４９から５２のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目５５）
前記共有結合が、ペプチド結合、炭素−酸素結合、炭素−硫黄結合、炭素−窒素結合、炭素−炭素結合、およびジスルフィド結合からなる群より選択される、項目５４に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目５６）
前記脂質ラフト会合ポリペプチドが、内在性膜タンパク質である、項目４９から５５のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目５７）
前記抗原が、タンパク質、ポリペプチド、グリコポリペプチド、リポポリペプチド、ペプチド、多糖、多糖結合体、多糖のペプチド性または非ペプチド性模倣体、低分子、脂質、糖脂質、および炭水化物からなる群より選択される、項目４９から５６のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目５８）
赤血球凝集素ポリペプチドをさらに含む、項目４４から５７のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目５９）
ＲＳウイルスＭポリペプチドをさらに含む、項目４４から５８のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目６０）
ＲＳウイルスＧポリペプチドをさらに含む、項目４４から５９のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目６１）
ＲＳウイルスＦポリペプチドをさらに含む、項目４４から６０のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目６２）
前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子が、
（ａ）ｇａｇポリペプチドと、
（ｂ）赤血球凝集素ポリペプチドと
を含む、項目４４から４７のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目６３）
前記エンベロープウイルスベースのウイルス様粒子が、
（ａ）インフルエンザＭ１ポリペプチドと、
（ｂ）赤血球凝集素ポリペプチドと
を含む、項目４４から４７のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目６４）
ノイラミニダーゼポリペプチドをさらに含む、項目４４から６３に記載のエンベロー
プウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目６５）
前記ウイルス様粒子と会合するアジュバントをさらに含む、項目４４から６４に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目６６）
前記アジュバントが、前記ウイルス様粒子の内側に位置する、項目６５に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目６７）
前記アジュバントが、前記ウイルス様粒子の外側に位置する、項目６５に記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目６８）
前記アジュバントを、前記ｇａｇポリペプチドと共有結合させて、共有結合を形成させる、項目６５から６７のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目６９）
前記アジュバントを、前記脂質ラフト会合ポリペプチドと共有結合させて、共有結合を形成させる、項目６５から６７のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目７０）
前記アジュバントが、フラジェリンのアジュバント活性断片を含む、項目６５から６９のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物。
（項目７１）
免疫系の疾患または症状を処置または予防する方法であって、免疫原性量の、項目４４から７０のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物、または項目１から４３のうちのいずれかに記載の方法を用いて単離したエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物を投与するステップを含む、方法。
（項目７２）
前記投与するステップにより、被験体において、防御的免疫化反応が誘導される、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
前記投与するステップが、皮下送達、皮内送達、真皮下送達、筋肉内送達、経口による送達、経口送達、鼻腔内送達、口腔内送達、舌下送達、腹腔内送達、膣内送達、経肛門送達、および頭蓋内送達からなる群より選択される、項目７１から７２のうちのいずれかに記載の方法。
（項目７４）
免疫原性量の、項目４４から７０のうちのいずれかに記載のエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物、または項目１から４３のうちのいずれかに記載の方法を用いて単離したエンベロープウイルスベースのウイルス様粒子調製物と、薬学的に許容されるキャリアとを含む、医薬組成物。