【手続補正書】
【提出日】平成26年10月2日(2014.10.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘッジホッグシグナル伝達経路を特徴付けるための研究ツールとしての、次の一般式(I)：
【化１】
2014500957.tif 000001
（式中、
- Xは、オルト、メタまたはパラ位において、-H、-OH、-NH2、ハロゲン原子、1〜10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基、アルコキシ基、3〜8個の炭素原子を有するシクロアルキルまたはアリール基を表し；
- R8は、X基を有する炭素以外の炭素上のオルト、メタまたはパラ位において、-(C=O)-NH-R1、-(C=O)-O-R1または-NH-(C=O)-R1を表し；
- Wは、-H、-OH、-NH2またはハロゲン原子を表し；
- R1、R2およびR3は、同じかまたは異なっていてもよく、かつ互いに独立して；
- 水素原子；または
- 1〜10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基（1以上の2重もしくは3重結合で任意に不飽和であり、1以上のヘテロ原子、1以上のハロゲン原子または1以上のアリールもしくはヘテロアリール基で任意に置換される）；
または
- 3〜8個の炭素原子を有するシクロアルキル（1〜10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基またはアルコキシ基で任意に置換される）
を表し；
- R4、R5、R6およびR7は、同じかまたは異なっていてもよく、かつ互いに独立して、-H、-Cl、-Br、-I、-CN、-NO2、1〜10個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖状の炭素ベース鎖からなるアルキル基、アルコキシ基、または3〜8個の炭素原子を有するシクロアルキルから選択され；
R3およびR4は、それらを有するキノリン環の隣接する窒素および炭素原子と一緒になって5-もしくは6-員環を形成するように縮合することもできる）
の少なくとも１つの化合物の使用。
【請求項２】
一般式(I)の化合物が、
- プロピル 4-(1-ヘキシル-4-ヒドロキシ-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-カルボキシアミド)ベンゾエート (化合物 1):
- エチル 4-(1-ベンジル-4-ヒドロキシ-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-カルボキシアミド)ベンゾエート (化合物 2):
- エチル 4-(1-ヘキシル-4-ヒドロキシ-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-カルボキシアミド)ベンゾエート (化合物 3):
- 4-(1-ヘキシル-4-ヒドロキシ-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-カルボキシアミド)安息香酸 (化合物 4):
- ブチル 4-(1-ヘキシル-4-ヒドロキシ-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-カルボキシアミド)ベンゾエート (化合物 5):
- tert-ブチル 4-(1-ヘキシル-4-ヒドロキシ-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-カルボキシアミド)ベンゾエート (化合物 6):
- ベンジル 4-(1-ヘキシル-4-ヒドロキシ-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-カルボキシアミド)ベンゾエート (化合物 7):
- N-(4-ブチルカルバモイル)フェニル)-1-ヘキシル-4-ヒドロキシ-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-カルボキシアミド (化合物 8):
- イソプロピル 4-(1-ヘキシル-4-ヒドロキシ-2-オキソ-1,2-ジヒドロキノリン-3-カルボキシアミド)ベンゾエート (化合物 9)
から選択されることを特徴とする、請求項1に記載の使用。
【請求項３】
次の工程：
a) [Smo-一般式(I)の化合物]複合体を得るため、Smoothened受容体と一般式(I)の化合物の少なくとも1つとを接触させ；
b) Smoothened受容体、一般式(I)の前記化合物および試験分子を接触させ；
c) 工程b)で回収されたSmoothened受容体を[Smo-一般式(I)の化合物]複合体と比較することによって、前記Smoothened受容体と前記試験分子との相互作用を検出し；そして
d) Smoothened受容体との相互作用が測定される前記試験分子を選択する
を含む、Smoothened受容体のSmo2結合部位のリガンドをスクリーニングおよび／または特定するための方法。
【請求項４】
前記工程a)が液相で行われ、該工程が次の工程：
a) [Smo-一般式(I)の化合物]複合体を得るため、Smoothened受容体と一般式(I)の化合物の少なくとも1つとを接触させ；
b) Smoothened受容体、一般式(I)の前記化合物および試験分子を接触させ；
c) 場合により1以上の試験分子および／または一般式(I)の前記化合物に結合させた、前記Smoothened受容体を回収し；
d) 工程c)で回収されたSmoothened受容体を[Smo-一般式(I)の化合物]複合体と比較することによって、前記Smoothened受容体と前記試験分子との相互作用を検出し；そして
e) 相互作用が測定される前記試験分子を選択する
を含むことを特徴とする、請求項3に記載の方法。
【請求項５】
工程a)が固体担体上で行われることを特徴とする、請求項3に記載の方法。
【請求項６】
前記方法が、Smo2結合部位に結合しないSmoothened受容体リガンドを特定することができる方法であることを特徴とする、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
その方法が、請求項3〜6のいずれか1つに記載の1つの方法の工程と追加の工程：
− Smoothened受容体の活性化後に細胞応答を示す細胞と前記の選択された分子とを接触させ、そして
− 前記細胞の前記細胞応答を誘導することができる分子を選択する
とを含むことを特徴とする、Smoothened受容体アゴニストを特定するための方法。
【請求項８】
次の工程：
a) 前記細胞応答を誘導するために、Smoothened受容体の活性化後に細胞応答を示す細胞を、請求項1または請求項2で定義された一般式(I)の化合物の少なくとも1つと一緒に培養し；
b) 工程a)の最後で得られる細胞を試験分子と接触させ；
c) 前記細胞の前記細胞応答の阻害を誘導する分子を選択する
を含む、Smoothened受容体アンタゴニスト分子を特定するための方法。
【請求項９】
次の工程：
a) 前記細胞応答を誘導するために、Smoothened受容体の活性化後に細胞応答を示す細胞を、請求項1で定義された一般式(I)の化合物の少なくとも1つと一緒に培養し；
b) 工程a)の最後で得られる細胞を試験分子と接触させ；
c) Smoothened受容体の活性化後に細胞応答を示す細胞の細胞応答の増大を誘導する分子を選択する
を含む、Smoothened受容体活性化の増強を誘導することができるアンタゴニスト分子を特定するための方法。
【請求項１０】
少なくとも機能的Smoothened受容体と請求項1または請求項2で定義された一般式(I)の化合物の少なくとも1つを含むキット。
【請求項１１】
次の工程：
a) 試験細胞を請求項1または請求項2で定義された一般式(I)の標識された化合物と接触させ；
b) 前記試験細胞の受容体に少しも結合していない、一般式(I)の前記標識された化合物を除くために前記細胞を洗浄し；
c) 標識された細胞を検出する
を含む、Smoothened受容体を発現している、腫瘍細胞のような細胞を特定するための方法。