【手続補正書】
【提出日】平成23年12月12日(2011.12.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）少なくとも１つのリン脂質；
ｂ）少なくとも１つの不飽和脂質、好ましくは不飽和ステロールエステル、さらに好ましくは不飽和コレステロールエステル、さらに好ましくはオレイン酸コレステリル；および
ｃ）少なくとも１つの両親媒性αらせんを形成可能なアミノ酸配列を含む、少なくとも１つのペプチド
を含み、
構成要素ａ）、ｂ）およびｃ）が会合して、ペプチド−リン脂質ナノ足場を形成する
非天然存在ペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項２】
ｄ）少なくとも１つのホーミング分子
をさらに含み；そして
構成要素ａ）、ｂ）、ｃ）およびｄ）が会合して、ペプチド−リン脂質ナノ足場を形成する
請求項１のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項３】
少なくとも１つのホーミング分子が、少なくとも１つのリン脂質に共有結合している、請求項２のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項４】
少なくとも１つのホーミング分子が少なくとも１つのペプチドに共有結合している、請求項２のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項５】
少なくとも１つのホーミング分子が、両親媒性αらせんの親水性面および疎水性面の間の移行部分またはその近傍のアミノ酸で、ペプチドに結合している、請求項４のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項６】
ホーミング分子に結合するペプチドのアミノ酸が、リジン、システイン、スレオニンおよびセリンからなる群より選択される、好ましくはリジンである、請求項５のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項７】
少なくとも１つのホーミング分子が、少なくとも１つの活性細胞表面受容体リガンドである、請求項２のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項８】
ｅ）少なくとも１つの活性剤
をさらに含み；そして
構成要素ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）およびｅ）が会合して、ペプチド−脂質ナノ足場を形成する
請求項７のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項９】
ペプチドが、クラスＡ、Ｈ、ＬおよびＭ両親媒性αらせん、その断片、ならびに前記クラスＡ、Ｈ、ＬおよびＭ両親媒性αらせんまたはその断片の逆ペプチド配列を含むペプチドからなる群より選択される、請求項８のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項１０】
ペプチドが、２Ｆ、４Ｆ、２Ｆの逆配列および４Ｆの逆配列からなる群より選択される、請求項８のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項１１】
少なくとも１つの両親媒性αらせんまたはペプチドが、６〜３０アミノ酸の間の長さであるか、８〜２８アミノ酸の間の長さであるか、１０〜２４アミノ酸の間の長さであるか、１１〜２２アミノ酸の間の長さであるか、１４〜２１アミノ酸の間の長さであるか、１６〜２０アミノ酸の間の長さであるか、または１８アミノ酸の長さである、請求項８のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項１２】
リン脂質が、ホスファチジルコリン（好ましくはＤＭＰＣ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン、ＰＯＰＣ（１−パルミトイル−１−オレオイル−ホスファチジルコリン）およびＥＹＰＣ（卵黄ホスファチジルコリン））、リゾホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトールおよび前述のものの組み合わせからなる群より選択される、請求項８のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項１３】
ナノ足場が直径５〜５０ｎｍの間であるか、直径５〜４０ｎｍの間であるか、直径５〜３０ｎｍの間であるか、直径５〜２５ｎｍの間であるか、直径５〜２０ｎｍの間であるか、または直径１０〜１５ｎｍの間である、請求項８のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項１４】
少なくとも１つの活性剤が、好ましくはオレイン酸コレステロール部分、ラウリン酸コレステリル部分、フィトール部分、ならびに好ましくはオレイン酸部分および不飽和コレステロール−エステル部分からなる群より選択される少なくとも１つの脂質アンカーに結合している、請求項８のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項１５】
少なくとも１つの活性剤が、エステル結合によって、少なくとも１つの脂質アンカーに結合している、請求項１４のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項１６】
細胞表面受容体リガンドが、癌細胞において過剰発現される受容体のリガンドである、請求項８のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項１７】
細胞表面受容体リガンドが、心臓血管斑において過剰発現される受容体のリガンドである、請求項８のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項１８】
細胞表面受容体リガンドが、葉酸、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ、インテグリン、ＥＧＦＲ、メタスチン、ＥｒｂＢ、ｃ−Ｋｉｔ、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＸＲ４、ＣＣＲ７、エンドセリン−Ａ、ＰＰＡＲ−デルタ、ＰＤＧＦＲ  Ａ、ＢＡＧ−ｉ、およびＴＧＦベータからなる群より選択される受容体のリガンドである、請求項１６のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項１９】
ホーミング分子が、ペプチド、アプタマー、抗体および抗体断片からなる群より選択される、請求項８のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項２０】
細胞表面受容体リガンドが抗体断片であり、そしてＦａｂ領域を含む、請求項１９のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項２１】
活性剤が親油性化合物である、請求項８のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項２２】
親油性化合物が、アセトアニリド、アニリド、アミノキノリン、ベンズヒドリル化合物、ベンゾジアゼピン、ベンゾフラン、カンナビノイド、環状ペプチド、ジベンザゼピン、ジギタリスグリコシド、麦角アルカロイド、フラボノイド、イミダゾール、キノリン、マクロライド、ナフタレン、オピエート（またはモルフィナン）、オキサジン、オキサゾール、フェニルアルキルアミン、ピペリジン、ポリ環状芳香族炭化水素、ピロリジン、ピロリジノン、スチルベン、スルホニル尿素、スルホン、トリアゾール、トロパン、およびビンカアルカロイドからなる群より選択される、請求項２１のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項２３】
活性剤が、親油性および親水性構成要素を含む分子である、請求項８のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項２４】
活性剤が、診断剤、画像化剤または療法剤である、請求項８のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項２５】
活性剤が診断剤である、請求項２４のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項２６】
活性剤が療法剤である、請求項２４のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項２７】
アミノ酸配列が、順方向または逆方向で、好ましくはアポＢ−１００、アポＢ−４８、アポＣ、アポＥおよびアポＡからなる群より選択されるアポタンパク質の連続するアミノ酸を含む、請求項１のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項２８】
１以上のトリアシルグリセロール、ステロール、ステロールエステル、またはその組み合わせをさらに含む、請求項１のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項２９】
ａ）少なくとも１つのリン脂質；
ｂ）少なくとも１つの不飽和脂質、好ましくは不飽和ステロールエステル、さらに好ましくは不飽和コレステロールエステル、さらに好ましくはオレイン酸コレステリル；
ｃ）少なくとも１つのペプチド；
ｄ）少なくとも１つのホーミング分子；および
ｅ）二本鎖ＲＮＡを含む少なくとも１つの活性剤
を含み、活性細胞表面受容体リガンドが、少なくとも１つのペプチドに共有結合し、そして構成要素ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）およびｅ）が会合して、ペプチド−リン脂質ナノ足場を形成する
非天然存在ペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項３０】
二本鎖ＲＮＡがｓｉＲＮＡである、請求項２９のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項３１】
二本鎖ＲＮＡが、オレイン酸コレステロール部分、ラウリン酸コレステリル部分、フィトール部分、ならびに好ましくはオレイン酸部分および不飽和コレステロール−エステル部分からなる群より選択される少なくとも１つの脂質アンカーに結合している、請求項３０のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項３２】
少なくとも１つのペプチドが、両親媒性αらせんを形成可能なアミノ酸配列を含む、請求項２９〜３１のいずれか一項のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項３３】
少なくとも１つのペプチドがアポタンパク質であり、そして活性細胞表面受容体リガンドが低密度リポタンパク質受容体リガンドまたは高密度リポタンパク質受容体リガンドではない、請求項２９〜３１のいずれか一項のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項３４】
細胞表面受容体リガンドがＨＩＶ感染細胞において発現される受容体のリガンドである、請求項８のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項３５】
活性剤がｓｉＲＮＡである、請求項３４のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項３６】
疾患を防止するかまたは治療するための請求項２６のペプチド−脂質ナノ足場であって、該ペプチド−脂質ナノ足場が療法量で投与され、該疾患が、該療法剤で防止可能または治療可能である、前記ペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項３７】
疾患を防止するかまたは治療するために使用される請求項２６のペプチド−脂質ナノ足場であって、該疾患が該療法剤で防止可能または治療可能である、前記ペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項３８】
疾患を防止するかまたは治療するための薬剤調製における、請求項２６のペプチド−脂質ナノ足場の使用であって、該疾患が該療法剤で防止可能または治療可能である、前記使用。
【請求項３９】
被験体において疾患を診断するための請求項２５のペプチド−脂質ナノ足場であって、該ペプチド−脂質ナノ足場が被験体に投与される、前記ペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項４０】
被験体において疾患を診断するために使用される、請求項２５のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項４１】
ＳＲ−Ｂ１受容体の過剰発現と関連する疾患を防止するかまたは治療するための請求項１のペプチド−脂質ナノ足場であって、該ペプチド−脂質ナノ足場がさらに療法剤を含み、そして該疾患が該療法剤で防止可能または治療可能である、前記ペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項４２】
疾患が癌、好ましくは乳癌である、請求項４１のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項４３】
ＳＲ−Ｂ１受容体の過剰発現と関連する疾患を防止するかまたは治療するために使用される請求項１のペプチド−脂質ナノ足場であって、該ペプチド−脂質ナノ足場がさらに療法剤を含み、そして該疾患が該療法剤で防止可能または治療可能である、前記ペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項４４】
ＳＲ−Ｂ１受容体の過剰発現と関連する疾患を防止するかまたは治療するための薬剤製造における、請求項１のペプチド−脂質ナノ足場の使用であって、該ペプチド−脂質ナノ足場がさらに療法剤を含み、そして該疾患が該療法剤で防止可能または治療可能である、前記使用。
【請求項４５】
疾患が癌、好ましくは乳癌である、請求項４３のペプチド−脂質ナノ足場。
【請求項４６】
疾患が癌、好ましくは乳癌である、請求項４４の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５８】
アポＡ〜Ｉの脂質結合特性の多くを所持する小さい両親媒性らせんペプチドの例には、２つのフェニルアラニンアミノ酸残基を含む１８アミノ酸ペプチド配列である２Ｆが含まれる（Ｄ−Ｗ−Ｌ−Ｋ−Ａ−Ｆ−Ｙ−Ｄ−Ｋ−Ｖ−Ａ−Ｅ−Ｋ−Ｌ−Ｋ−Ｅ−Ａ−Ｆ）（配列番号１）（Ａｎａｎｔｈａａｒａｍａｉａｈら  ＪＢＣ．  １９８５；  ２６０：１０２４８−１０２５５）。各研究は、この配列が強い脂質会合を示し、そして安定な円盤状のリン脂質粒子を形成可能であることを示した。続いて、２つのさらなるＦ残基を取り込むと（全部で４Ｆ；  Ｄ−Ｗ−Ｆ−Ｋ−Ａ−Ｆ−Ｙ−Ｄ−Ｋ−Ｖ−Ａ−Ｅ−Ｋ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ−Ｆ）（配列番号２）、ペプチドの脂質会合特性がさらに増進することを示す実験が行われた（Ａｎａｎｔｈａａｒａｍａｉａｈら  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．  ２００５；  ２５：１３２５−１３３１）。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６７】
臓器または組織ホーミング分子
本発明は、肺、皮膚、血液、膵臓、網膜、前立腺、卵巣、リンパ節、副腎、肝臓、乳房、消化器系または腎組織を含む、多様な臓器または組織に選択的にホーミングする分子の使用を提供する。例えば、本発明は、ペプチドＣＧＦＥＣＶＲＱＣＰＥＲＣおよびＣＧＦＥＬＥＴＣを含む、ＧＦＥモチーフを含有するものなどの肺ホーミングペプチド；  ＣＶＡＬＣＲＥＡＣＧＥＧＣなどの皮膚ホーミングペプチド；ペプチドＳＷＣＥＰＧＷＣＲなどの膵臓ホーミングペプチド；ならびに、ペプチドＣＳＣＦＲＤＶＣＣ（配列番号４３）およびＣＲＤＶＶＳＶＩＣ（配列番号４４）を含む、ＲＤＶモチーフを含有するものなどの網膜ホーミングペプチドの使用を提供する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６９】
本発明のＨＰＰＳナノ粒子を、選択される臓器または組織に部分をターゲティングする、臓器および組織ホーミング分子とともに用いてもよい。本発明で使用するホーミング分子には、肺、皮膚、膵臓、網膜、前立腺、卵巣、リンパ節、副腎、肝臓または腸を含む多様な正常臓器または組織に、そして肺腫瘍を所持する肺および膵臓腫瘍を所持する膵臓を含めて、腫瘍を所持する臓器に、ホーミングするペプチドが含まれる。例えば、本発明には、各々、３ペプチドＧＦＥモチーフを含有する、ペプチドＣＧＦＥＣＶＲＱＣＰＥＲＣおよびＣＧＦＥＬＥＴＣ、ならびにペプチドＧＩＧＥＶＥＶＣ（配列番号４５）を含む肺ホーミングペプチドの使用が含まれる。本発明にはまた、ペプチドＣＶＡＬＣＲＥＡＣＧＥＧＣなどの皮膚ホーミングペプチド；ペプチドＳＷＣＥＰＧＷＣＲなどの膵臓ホーミングペプチド、ならびに、各々、３ペプチドＲＤＶモチーフを含有するペプチドＣＳＣＦＲＤＶＣＣおよびＣＲＤＶＶＳＶＩＣなどの網膜ホーミングペプチドの使用も含まれる。前立腺、卵巣、リンパ節、副腎、肝臓および腸にホーミングするペプチドの例もまた提供される（以下の表３を参照されたい）。１つの態様において、ホーミング分子は、全長ＥＧＦタンパク質（ＥＧＦ）またはその断片などのＥＧＦＲ特異的ペプチドであってもよい。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７５】
【表３−１】
2011507807.tif 000001
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７６】
【表３−２】
2011507807.tif 000002
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７７】
本発明には、ＧＦＥモチーフを共有するＣＧＦＥＣＶＲＱＣＰＥＲＣおよびＣＧＦＥＬＥＴＣ；  ＣＴＬＲＤＲＮＣ；およびＣＧＦＥＬＥＴＣ中に存在するＥＬＥモチーフと類似のＥＶＥモチーフを含有するＣＩＧＥＶＥＶＣ（配列番号４６）などの肺ホーミングペプチドの使用が含まれる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７８】
好ましくは、本発明はまた、ＣＶＡＬＣＲＥＡＣＧＥＧＣなどの皮膚ホーミングペプチドも使用してもよい。本発明はさらに、ＳＷＣＥＰＧＷＣＲなどの膵臓ホーミングペプチドを含むＨＰＰＳナノ粒子を提供する。ＣＳＣＦＲＤＶＣＣおよびＣＲＤＶＶＳＶＩＣなどの網膜ホーミングペプチドもまた、本発明のＨＰＰＳナノ粒子と組み合わせて使用可能である。ＳＭＳＩＡＲＬおよびＶＳＦＬＥＹＲなどの前立腺ホーミングペプチドもまた、本発明のＨＰＰＳナノ粒子と組み合わせて使用可能である。ＲＶＧＬＶＡＲおよびＥＶＲＳＲＬＳなどの卵巣ホーミングペプチドもまた提供する。本発明はまた、ＬＰＲモチーフを共有するＬＭＬＰＲＡＤおよびＬＰＲＹＬＬＳ、またはモチーフＬＡＧＧを共有するＲ（Ｙ／Ｆ）ＬＬＡＧＧ（配列番号４７）およびＲＹＰＬＡＧＧ（配列番号４８）などの副腎ホーミングペプチドも使用可能である。さらに、ＡＧＣＳＶＴＶＣＧ（配列番号４９）などのリンパ節ホーミングペプチドが、本発明と組み合わせて使用可能である。本発明はまた、ＹＳＧＫＷＧＫおよびＹＳＧＫＷＧＷ（配列番号５０）などの腸ホーミングペプチドも使用可能である。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４０】
実施例１
出発物質の調製
１）サイズ制御ペプチド（ｓｃＰｅｐ）
商業的に入手可能なＮ−α−Ｆｍｏｃ保護アミノ酸、固体支持体としてのＳｉｅｂｅｒアミド樹脂、およびカルボキシル基活性化剤としてのＨＢＴＵ／ＨＯＢｔを用いて、Ｆｍｏｃ固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）プロトコル（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ，  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  ｆｏｒ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｍｄｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ．ｃｏｍ／ｇ．ａｓｐ？ｆ＝ＮＢＣ／  ｐｅｐｔｉｄｅｒｅｓ．ｈｔｍ）を用いることによって、Ａｃ−ＤＷＬＫＡＦＹＤＫＶＡＥＫＬＫＥＡＦ（「２Ｆ」）、Ａｃ−ＤＷＦＫＡＦＹＤＫＶＡＥＫＦＫＥＡＦ（「４Ｆ」、本明細書において、「＋４Ｆ」ともまた称される））、およびＡｃ−ＦＡＥＫＦＫＥＡＶＫＤＹＦＡＫＦＷＤ（−４Ｆ）（配列番号５１）を、ペプチド合成装置ＰＳ−３（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ．）上で合成した。保護された配列の合成後、ペプチド−樹脂のＮ末端Ｆｍｏｃを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％ピペリジンで除去して、末端アミンを曝露させた。次いで、１０％無水酢酸を含むテトラヒドロフラン中の１０％ピリジンで、ＮＨ２−ペプチド−樹脂をキャッピングした。Ａｃ−ペプチド−樹脂を、９５％トリフルオロ酢酸および５％トリイソプロピルシランによってさらに処理して、ペプチド配列上の保護基を除去し、そして固体支持体を切断した。切断した固体樹脂をろ過によって取り除いた後、ろ過物を濃縮し、そして無水エーテルを添加することによって沈殿させてｓｃＰｅｐを得た。トリプトファン（Ｗ）の蛍光を用いて、ＨＰＰＳのｓｃＰｅｐ含量を決定した。当業者に知られる他の方法、例えばアミノ酸分析を用いて、ＨＰＰＳのペプチド含量を決定してもよい。ターゲティングリガンドをコンジュゲート化するため、未結合側鎖アミン基を有するリジン（Ｋ）を用いた。