【手続補正書】
【提出日】平成24年9月18日(2012.9.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内器官の細胞質側から内腔側に、1個のマンノース残基を含む脂質結合オリゴ糖(LLO)を効率的にフリップすることができる、2個のマンノース残基を含むLLOを効率的にフリップすることができる、及び3個のマンノース残基を含むLLOを効率的にフリップすることができるLLOフリッパーゼ活性を発現するように改変された細胞。
【請求項２】
前記LLOフリッパーゼが、Man1GlcNAc2、Man2GlcNAc2及びMan3GlcNAc2から成る群より選択される脂質結合オリゴ糖のフリップにおいて活性であることを特徴とする、請求項１に記載の細胞。
【請求項３】
前記LLOフリッパーゼ活性が、
a) 配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５及び配列番号１７、配列番号２１、配列番号２３、配列番号２５、配列番号２７、及び配列番号２９のうちの1個以上の配列を含む核酸分子；
b) 配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６及び配列番号１８、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、及び配列番号３０のうちの1個以上の配列を含むポリアミノ酸をコードする核酸分子；並びに
c) a)又はb)の核酸分子の断片、変異体、類似体又は誘導体、
から成る群より選択される1個以上の核酸分子の発現により付与される、請求項１又は２に記載の細胞。
【請求項４】
前記細胞が、オリゴサッカリルトランスフェラーゼ活性をコードする1種以上の核酸分子を含み、それがGlc3Man9GlcNAc2以外のオリゴ糖をタンパク質に転移させることができることを特徴とし、好ましくはオリゴサッカリルトランスフェラーゼ活性が原生動物オリゴサッカリルトランスフェラーゼ(POT)活性である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項５】
3個のマンノース残基、4個のマンノース残基及び/又は5個のマンノース残基を含むオリゴ糖をタンパク質に効率的に転移させることができるオリゴサッカリルトランスフェラーゼ活性を発現するように改変された細胞であって、好ましくはオリゴサッカリルトランスフェラーゼ活性が原生動物型オリゴサッカリルトランスフェラーゼ(POT)である、前記細胞。
【請求項６】
原生動物オリゴサッカリルトランスフェラーゼ活性が、トキソプラズマ・ゴンジ(Toxoplasma gondii) (Tg)、リーシュマニア・メジャー(Leishmania major) (Lm)、リーシュマニア・インファンタム(Leishmania infantum) (Li)、リーシュマニア・ブラジリエンシス(Leishmania braziliensis) (Lb)、リーシュマニア・メキシカーナ(Leishmania mexicana) (Lmx)、リーシュマニア・ドノバニ(Leishmania donovani) (Ld)、リーシュマニア・グヤネンシス(Leishmania guyanensis) (Lg)、リーシュマニア・トロピカ(Leishmania tropica) (Lt)、トリパノソーマ・クルージ(Trypanosoma cruzi) (Tc)又はトリパノソーマ・ブルセイ(Trypanosoma brucei) (Tb)に由来し、且つ好ましくは、該原生動物オリゴサッカリルトランスフェラーゼ活性がTbStt3B型活性、TbStt3C型活性、LmStt3A型活性、LmStt3B型活性、LmStt3C型活性、及びLmStt3D型活性、LiStt3-1型活性、LiStt3-2型活性、及びLiStt3-3型活性、LbStt3-1型活性、LbStt3-2型活性、及びLbStt3-3型活性から成る群より選択されることを特徴とする、請求項４又は５に記載の細胞。
【請求項７】
前記細胞は、
脂質結合単糖(LLM)フリッパーゼ活性；
Alg2型；
Alg11型活性；
Alg11型活性と脂質結合単糖(LLM)フリッパーゼ型活性の双方；
Alg11型活性とAlg3型活性の双方；及び、
alg11型活性とβ-D-マンノシルトランスフェラーゼ又はDPM1型活性の双方、
から成るグルコシルトランスフェラーゼ活性及びその組合せの群より好ましくは選択される、1種以上のER局在性グリコシルトランスフェラーゼ活性又はその組合せを欠くか、又は該1種以上のER局在性グリコシルトランスフェラーゼ活性又はその組合せが抑制されるか、減少するか若しくは枯渇していることをさらに特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項８】
前記細胞が、
脂質結合単糖(LLM)フリッパーゼ活性をコードする遺伝子；
alg2又はalg2相同体；
alg11又はalg11相同体；
alg11又はalg11相同体と脂質結合単糖(LLM)フリッパーゼ活性をコードする遺伝子の双方；
alg11又はalg11相同体とalg3又はalg3相同体の双方；及び、
alg11又はalg11相同体とdpm1又はdpm1相同体の双方、
から成る遺伝子及びその組合せの群より選択される1種以上の遺伝子又はその組合せのノックアウト突然変異体である、請求項７に記載の細胞。
【請求項９】
前記細胞は、Och1型活性、Mnn1型活性、Mnn2型活性、Mnn4型活性、Mnn5型活性、Mnn9型活性、Mnn10型活性及びMnn11型活性から成る群より好ましくは選択される、1種以上のゴルジ体局在性マンノシルトランスフェラーゼ活性を欠くか、又は該1種以上のゴルジ体局在性マンノシルトランスフェラーゼ活性が抑制されるか、減少するか若しくは枯渇していることを特徴とし、特にoch1、mnn1、mnn2、mnn4、mnn5、mnn9、mnn10、mnn11及びそれらの相同体から成る群より選択される少なくとも1個の遺伝子のノックアウト突然変異体である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項１０】
前記細胞が、
マンノシル(α-1,3-)-糖タンパク質β-1,2-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ(GnTI)；
マンノシル(α-1,6-)-糖タンパク質β-1,2-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ(GnTII)；
β-1,4-マンノシル-糖タンパク質4-β-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ(GnTIII)；
マンノシル(α-1,3-)-糖タンパク質β-1,4-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ(GnTIV)；
マンノシル(α-1,6-)-糖タンパク質β-1,6-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ(GnTV)；
マンノシル(α-1,6-)-糖タンパク質β-1,4-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ(GnTVI)；
β-N-アセチルグルコサミニルグリコペプチドβ-1,4-ガラクトシルトランスフェラーゼ(GalT)；
α(1,6)フコシルトランスフェラーゼ(FucT)；
β-ガラクトシドα-2,6-シアリルトランスフェラーゼ(ST)；
UDP-N-アセチルグルコサミン2-エピメラーゼ(NeuC)；
シアル酸シンターゼ(NeuB)；
CMP-Neu5Acシンテターゼ；
N-アシルノイラミン酸-9-リン酸シンターゼ；
N-アシルノイラミン酸-9-ホスファターゼ；
UDP-N-アセチルグルコサミン輸送因子；
UDP-ガラクトース輸送因子；
GDP-フコース輸送因子；
CMP-シアル酸輸送因子；
ヌクレオチドジホスファターゼ；
GDP-D-マンノース4,6-デヒドラターゼ；及び、
GDP-4-ケト-6-デオキシ-D-マンノース-3,5-エピメラーゼ-4-リダクターゼ、
から成る群より選択される1種以上のゴルジ体局在性異種酵素又はその触媒ドメインを発現することを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項１１】
前記細胞が、菌類細胞を含む下等真核細胞並びに哺乳動物細胞及び哺乳動物細胞系、植物細胞、及び昆虫細胞を含む高等真核細胞から選択されることを特徴とし、且つ好ましくは酵母細胞である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項１２】
前記細胞が、異種(糖)タンパク質をコードする少なくとも1種の核酸を含み、且つ該(糖)タンパク質を発現することを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項１３】
請求項１又は２に記載のLLOフリッパーゼ活性をコードするか又は付与することができる単離された1又は複数の核酸分子であって、好ましくは請求項３に記載の1種以上の核酸分子から選択される、前記核酸分子。
【請求項１４】
プロモーターをコードする核酸分子及びターミネーターをコードする核酸分子の少なくとも1つと連結した1コピー以上の請求項１３に記載の核酸分子の1つを含む、真核宿主細胞中での発現のための発現カセットであって、好ましくはさらに1コピー以上の請求項４〜６のいずれか１項に記載のオリゴサッカリルトランスフェラーゼ活性をコードする核酸分子を含む、前記発現カセット。
【請求項１５】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の細胞を提供する工程、
前記細胞中での糖タンパク質又は糖タンパク質組成物の産生を可能にする条件下で、培養培地中で前記細胞を培養する工程、及び、
必要に応じて、前記細胞及び/又は前記培養培地から糖タンパク質又は糖タンパク質組成物を単離する工程、
を含む、糖タンパク質又は糖タンパク質組成物の産生方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法により産生された1種以上の糖タンパク質を含む糖タンパク質組成物。
【請求項１７】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の細胞、及び、
糖タンパク質の産生を付与するように前記細胞を培養するための培養培地、
を含む、糖タンパク質又は糖タンパク質組成物を産生するためのキット。