【手続補正書】
【提出日】平成24年8月2日(2012.8.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）骨髄を提供する工程；
（ｂ）前記骨髄を、組織培養皿の培養培地で２〜１０日間培養する工程；
（ｃ）非接着細胞を除去する工程；
（ｄ）接着細胞を、血小板溶解産物添加培地で９〜２０日間培養する工程；および
（ｅ）前記接着細胞を前記組織培養皿から取り出す工程；
によって生成される、間充織間質細胞の集団。
【請求項２】
前記間充織間質細胞の集団が、哺乳動物の間充織間質細胞の集団である、請求項１に記載の集団。
【請求項３】
前記哺乳動物の間充織間質細胞の集団が、ヒトの間充織間質細胞の集団である、請求項２に記載の集団。
【請求項４】
前記血小板溶解産物が、培養培地１ｍｌ当たり血小板溶解産物約２０μｌの割合で前記培養培地に存在する、請求項１に記載の集団。
【請求項５】
前記血小板溶解産物が、プールされた血小板濃縮物または遠心分離後のプールされたバフィーコートからなる、請求項１に記載の集団。
【請求項６】
間充織間質細胞の集団であって、前記間充織間質細胞の集団が、血小板溶解産物添加培養培地で培養されたものであり、前記間充織間質細胞の集団が、ウシ胎仔血清添加培養培地で培養された間充織間質細胞よりも高い程度でＰｉｃｋｌｅ  １を発現する、集団。
【請求項７】
血小板溶解産物で培養された前記間充織間質細胞の集団が、ウシ胎仔血清添加培養培地で培養された間充織間質細胞よりも免疫原性が低い、請求項６に記載の集団。
【請求項８】
間充織間質細胞の集団であって、前記集団が、その表面に抗原ＣＤ１０５、ＣＤ９０、ＣＤ７３、およびＭＨＣ  Ｉを発現する、集団。
【請求項９】
前記集団が、その表面にＣＤ４５、ＣＤ３４、およびＣＤ１４からなる群から選択されるタンパク質を発現しない、請求項８に記載の集団。
【請求項１０】
間充織間質細胞の集団の治療有効用量を含む、神経障害、炎症性障害、または腎障害の処置を必要とする被験体の神経障害、炎症性障害、または腎障害を処置するための組成物であって、前記間充織間質細胞の集団は：
（ａ）骨髄を提供する工程；
（ｂ）前記骨髄を組織培養皿の培養培地で２〜１０日間培養する工程；
（ｃ）非接着細胞を除去する工程；
（ｄ）接着細胞を、血小板溶解産物添加培地で９〜２０日間培養する工程；および
（ｅ）前記接着細胞を前記組織培養皿から取り出す工程；を含む方法によって単離される、組成物。
【請求項１１】
前記障害が神経障害である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記神経障害が脳卒中である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記障害が炎症性障害である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１４】
前記炎症性障害が多臓器不全である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記障害が腎障害である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１６】
前記腎障害が、急性腎不全、慢性腎不全、および慢性腎疾患からなる群から選択される、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
間充織間質細胞の集団を単離する方法であって、前記方法は：
（ａ）骨髄を提供する工程；
（ｂ）前記骨髄を組織培養皿の培養培地で２〜１０日間培養する工程；
（ｃ）非接着細胞を除去する工程；
（ｄ）接着細胞を、血小板溶解産物添加培地で９〜２０日間培養する工程；および
（ｅ）前記接着細胞を前記組織培養皿から取り出し、それによって間充織間質細胞の集団を単離する工程を含む、方法。
【請求項１８】
前記間充織間質細胞の集団が、哺乳動物の間充織間質細胞の集団である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記哺乳動物の間充織間質細胞の集団が、ヒトの間充織間質細胞の集団である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記血小板溶解産物が、培養培地１ｍｌ当たり血小板溶解産物約２０μｌの割合で前記培養培地に存在する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記血小板溶解産物が、プールされた血小板濃縮物または遠心分離後のプールされたバフィーコートで構成されている、請求項１７に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本発明はまた、骨髄を提供する工程；骨髄を組織培養皿の培養培地で２〜１０日間培養する工程；非接着細胞を除去する工程；接着細胞を、血小板溶解産物添加培地で９〜２０日間培養する工程；および接着細胞を組織培養皿から取り出す工程；を含む間充織間質細胞の集団を単離する方法も包含する。特定の実施形態では、この間充織間質細胞は、哺乳動物の間充織間質細胞である。一部の実施形態では、哺乳動物の間充織間質細胞は、ヒトの間充織間質細胞である。一部の特定の実施形態では、血小板溶解産物は、培養培地１ｍｌ当たり血小板溶解産物約２０μｌの割合で培養培地に存在する。他の特定の実施形態では、血小板溶解産物は、プールされた血小板濃縮物または遠心分離後のプールされたバフィーコートからなる。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
（ａ）骨髄を提供する工程；
（ｂ）前記骨髄を、組織培養皿の培養培地で２〜１０日間培養する工程；
（ｃ）非接着細胞を除去する工程；
（ｄ）接着細胞を、血小板溶解産物添加培地で９〜２０日間培養する工程；および
（ｅ）前記接着細胞を前記組織培養皿から取り出す工程；
によって生成される、間充織間質細胞の集団。
（項目２）
前記間充織間質細胞の集団が、哺乳動物の間充織間質細胞の集団である、項目１に記載の集団。
（項目３）
前記哺乳動物の間充織間質細胞の集団が、ヒトの間充織間質細胞の集団である、項目２に記載の集団。
（項目４）
前記血小板溶解産物が、培養培地１ｍｌ当たり血小板溶解産物約２０μｌの割合で前記培養培地に存在する、項目１に記載の集団。
（項目５）
前記血小板溶解産物が、プールされた血小板濃縮物または遠心分離後のプールされたバフィーコートからなる、項目１に記載の集団。
（項目６）
間充織間質細胞の集団であって、前記間充織間質細胞の集団が、血小板溶解産物添加培養培地で培養されたものであり、前記間充織間質細胞の集団が、ウシ胎仔血清添加培養培地で培養された間充織間質細胞よりも高い程度でＰｉｃｋｌｅ  １を発現する、集団。
（項目７）
血小板溶解産物で培養された前記間充織間質細胞の集団が、ウシ胎仔血清添加培養培地で培養された間充織間質細胞よりも免疫原性が低い、項目６に記載の集団。
（項目８）
間充織間質細胞の集団であって、前記集団が、その表面に抗原ＣＤ１０５、ＣＤ９０、ＣＤ７３、およびＭＨＣ  Ｉを発現する、集団。
（項目９）
前記集団が、その表面にＣＤ４５、ＣＤ３４、およびＣＤ１４からなる群から選択されるタンパク質を発現しない、項目８に記載の集団。
（項目１０）
間充織間質細胞の集団を治療有効用量投与することによって、必要とする被験体の神経障害、炎症性障害、または腎障害を処置する方法であって、前記間充織間質細胞の集団は：
（ａ）骨髄を提供する工程；
（ｂ）前記骨髄を組織培養皿の培養培地で２〜１０日間培養する工程；
（ｃ）非接着細胞を除去する工程；
（ｄ）接着細胞を、血小板溶解産物添加培地で９〜２０日間培養する工程；および
（ｅ）前記接着細胞を前記組織培養皿から取り出す工程；を含む方法によって単離される、方法。
（項目１１）
前記障害が神経障害である、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記神経障害が脳卒中である、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記障害が炎症性障害である、項目１０に記載の方法。
（項目１４）
前記炎症性障害が多臓器不全である、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記障害が腎障害である、項目１０に記載の方法。
（項目１６）
前記腎障害が、急性腎不全、慢性腎不全、および慢性腎疾患からなる群から選択される、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
間充織間質細胞の集団を単離する方法であって、前記方法は：
（ａ）骨髄を提供する工程；
（ｂ）前記骨髄を組織培養皿の培養培地で２〜１０日間培養する工程；
（ｃ）非接着細胞を除去する工程；
（ｄ）接着細胞を、血小板溶解産物添加培地で９〜２０日間培養する工程；および
（ｅ）前記接着細胞を前記組織培養皿から取り出し、それによって間充織間質細胞の集団を単離する工程を含む、方法。
（項目１８）
前記間充織間質細胞の集団が、哺乳動物の間充織間質細胞の集団である、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記哺乳動物の間充織間質細胞の集団が、ヒトの間充織間質細胞の集団である、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記血小板溶解産物が、培養培地１ｍｌ当たり血小板溶解産物約２０μｌの割合で前記培養培地に存在する、項目１７に記載の方法。
（項目２１）
前記血小板溶解産物が、プールされた血小板濃縮物または遠心分離後のプールされたバフィーコートで構成されている、項目１７に記載の集団。