【手続補正書】
【提出日】平成24年6月4日(2012.6.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
親キシログルカナーゼの単離されたバリアントであって、位置６８における、並びに位置番号：
【化１】
2011521661.tif 000001
から成る群から選択される一つ以上の位置における、前記親キシログルカナーゼの変更を含み、前記位置は配列番号３のアミノ酸配列における位置に対応し、そして、
ａ）前記変更（単数又は複数）は：
ｉ）前記位置を占めるアミノ酸の下流におけるアミノ酸の挿入、及び／又は
ｉｉ）前記位置を占めるアミノ酸の欠失、及び／又は
ｉｉｉ）前記位置を占めるアミノ酸と、異なるアミノ酸との置換
であり；
ｂ）前記親キシログルカナーゼは、配列番号３、配列番号５、及び配列番号７から成る群から選択されるか、又は配列番号３の前記親キシログルカナーゼのアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するキシログルカナーゼから選択され；
ｃ）前記バリアントは、配列番号３の前記親キシログルカナーゼのアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み；そして
ｄ）前記バリアントはキシログルカナーゼ活性を有する、前記バリアント。
【請求項２】
【化２】
2011521661.tif 000002
から成る群から選択される一つ以上の置換を含む、請求項１に記載のバリアント。
【請求項３】
以下の変更の組み合わせ：
K13A+Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P;
D33V+Q68H+N168H+V450I;
Q68H,M,N;
Q68H+G200P+N331F;
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F;
Q68H+K118A+R156V+G200P+N331F;
Q68H+K118A+R156Y+H193T+D366H;
Q68H+K118R+R156F,Y;
Q68H+K118R+R156Y+G200P;
Q68H+K118S+R156F+G200P+G274D+N331F;
Q68H+K129A,T+R156K+G200P+N331F;
Q68H+R156F,V,Y+G200P+N331F;
Q68H+R156Y;
Q68H+R156Y+H193T;
Q68H+R156Y+H193T+D366H;
Q68H+R156Y+H193T+G200P+M310V;
Q68H+S76W+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F;
Q68H+T92A,D,I,S,V,Y+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F;
Q68H+T92N+D97N+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F;
Q68H+T92S+K118A+K129A+R156Y+G200P+G274D+N331F;
Q68H+T92V+G200P+M310V;
Q68H+T92V+G200P+M310V+N331F;
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+A224P+N331F;
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F;
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T;
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+D366H;
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+G200P+M310V+E446K;
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+N331H,K,Q;
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T;
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+D366H;
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+G200P+M310V;
Q68H+T92V+K118A+Q137E+N140F+R156Y+G200P+K470T;
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+D324N;
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+K470T;
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+M310L;
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F;
Q68H+T92V+K118A,R+R156Y,F;
Q68H+T92V+K118A+S123P,T+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F;
Q68H+T92V+K118R+R156Y+H193T+D366H;
Q68H+T92V+R156F+G200P+M310V+S484C;
Q68H+T92V+R156F,V,Y+G200P+M310V;
Q68H+T92V+R156F,V,Y+G200P+M310V+N331F;
Q68H+T92V+R156F,Y+H193T;
Q68H+T92V+R156F,Y+H193T+D366H;
Q68H+T92V+R156F,Y+H193T+G200P+M310V; 又は
Q68H+T92V+R156Y
のうち、一つ以上を含む、請求項１に記載のバリアント。
【請求項４】
前記親キシログルカナーゼと比較して改善された洗剤安定性を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のバリアント。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のバリアントをコードする、単離されたポリヌクレオチド配列。
【請求項６】
請求項５に記載のポリヌクレオチド配列を含む発現ベクターを含む、組み換え宿主細胞。
【請求項７】
キシログルカナーゼの洗剤安定性を改善するための方法であって、位置６８を変更し、並びに位置：
【化３】
2011521661.tif 000003
から成る群から選択される一つ以上の位置を変更することを含み、前記位置は配列番号３のアミノ酸配列における位置に対応し、そして、
ａ）前記変更（単数又は複数）は：
ｉ）前記位置を占めるアミノ酸の下流におけるアミノ酸の挿入、及び／又は
ｉｉ）前記位置を占めるアミノ酸の欠失、及び／又は
ｉｉｉ）前記位置を占めるアミノ酸と、異なるアミノ酸との置換
であり；
ｂ）前記親キシログルカナーゼは、配列番号３、配列番号５、及び配列番号７から成る群から選択されるか、又は配列番号３の前記親キシログルカナーゼのアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するキシログルカナーゼから選択され；
ｃ）前記バリアントは、配列番号３の前記親キシログルカナーゼのアミノ酸配列と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含み；そして
ｄ）前記バリアントはキシログルカナーゼ活性を有する、前記方法。
【請求項８】
前記バリアントが、以下の変更の組み合わせ：
K13A+Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P;
D33V+Q68H+N168H+V450I;
Q68H,M,N;
Q68H+G200P+N331F;
Q68H+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F;
Q68H+K118A+R156V+G200P+N331F;
Q68H+K118A+R156Y+H193T+D366H;
Q68H+K118R+R156F,Y;
Q68H+K118R+R156Y+G200P;
Q68H+K118S+R156F+G200P+G274D+N331F;
Q68H+K129A,T+R156K+G200P+N331F;
Q68H+R156F,V,Y+G200P+N331F;
Q68H+R156Y;
Q68H+R156Y+H193T;
Q68H+R156Y+H193T+D366H;
Q68H+R156Y+H193T+G200P+M310V;
Q68H+S76W+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F;
Q68H+T92A,D,I,S,V,Y+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F;
Q68H+T92N+D97N+K118A+K129A+R156Y+G200P+N331F;
Q68H+T92S+K118A+K129A+R156Y+G200P+G274D+N331F;
Q68H+T92V+G200P+M310V;
Q68H+T92V+G200P+M310V+N331F;
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+A224P+N331F;
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F;
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T;
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+D366H;
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+G200P+M310V+E446K;
Q68H+T92V+K118A+K129A+Q137E+R156Y+H193T+N331H,K,Q;
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T;
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+D366H;
Q68H+T92V+K118A+K129A+R156Y+H193T+G200P+M310V;
Q68H+T92V+K118A+Q137E+N140F+R156Y+G200P+K470T;
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+D324N;
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+K470T;
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+M310L;
Q68H+T92V+K118A+Q137E+R156Y+G200P+N331F;
Q68H+T92V+K118A,R+R156Y,F;
Q68H+T92V+K118A+S123P,T+K129A+Q137E+R156Y+G200P+N331F;
Q68H+T92V+K118R+R156Y+H193T+D366H;
Q68H+T92V+R156F+G200P+M310V+S484C;
Q68H+T92V+R156F,V,Y+G200P+M310V;
Q68H+T92V+R156F,V,Y+G200P+M310V+N331F;
Q68H+T92V+R156F,Y+H193T;
Q68H+T92V+R156F,Y+H193T+D366H;
Q68H+T92V+R156F,Y+H193T+G200P+M310V; 又は
Q68H+T92V+R156Y
のうち、一つ以上を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のバリアントを含む液体製剤。