【手続補正書】
【提出日】平成25年11月13日(2013.11.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号４のポリペプチドに結合する、単離抗体またはその断片。
【請求項２】
ＩｇＧ抗体である、請求項１に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項３】
前記ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、またはＩｇＧ４抗体であり；ここで、前記ＩｇＧ抗体がカッパ軽鎖またはラムダ軽鎖を含む、請求項２に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４】
モノクローナル抗体またはその断片である、請求項１から３のいずれか１項に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項５】
ヒトに対して実質的に非免疫原性である、請求項１から４のいずれか１項に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項６】
ヒト、ヒト化またはキメラである、請求項１から５のいずれか１項に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項７】
ＭＣＦ−７細胞またはＭＶ４−１１細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記ＭＣＦ−７細胞またはＭＶ４−１１細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させるか；ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも５０％を死滅させるか；または、ＭＣＦ−７細胞およびＭＣＦ１０Ａ細胞の個別の集団および熱不活化血清と共に７２または９６時間にわたりインキュベートすると、前記ＭＣＦ１０Ａ細胞より多くの前記ＭＣＦ−７細胞を死滅させる、請求項１から６のいずれか１項に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項８】
Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、もしくはＦｖ断片；ダイアボディー；直鎖状抗体；単鎖抗体；または抗体断片から形成される多重特異性抗体である、請求項１から７のいずれか１項に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項９】
不死化Ｂ細胞によって産生される請求項１から８のいずれか１項に記載の単離抗体またはその断片であって、ここで、前記不死化Ｂ細胞は、それぞれ、クローン５Ｄ１、クローン３Ｈ１１（３Ｇ５）、クローン２Ｄ３、クローン７Ｇ７（１Ｈ９）、クローン２Ｈ３、クローン９Ｆ９、クローン８Ｇ４、またはクローンＰ１Ｃ６と命名されている、受託番号ＰＴＡ−１１４９３、ＰＴＡ−１１４９５、ＰＴＡ−１１４９０、ＰＴＡ−１１４９６、ＰＴＡ−１１４９１、ＰＴＡ−１１４９２、ＰＴＡ−１１４９７またはＰＴＡ−１１４９４として、２０１０年１１月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されている、単離抗体またはその断片。
【請求項１０】
放射性核種、フルオロフォア、化学発光化合物、蛍光化合物、酵素、毒素または化学療法剤をさらに含み、特に前記放射性核種、前記フルオロフォア、前記化学発光化合物、前記蛍光化合物、前記酵素、前記毒素、または前記化学療法剤は、前記単離抗体またはその断片に結合されている、請求項１から９のいずれか１項に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項１１】
ヌクレオリンをその表面に発現する細胞を死滅させるために使用するための組成物であって、請求項１から１０のいずれか１項に記載の単離抗体またはその断片を含む組成物。
【請求項１２】
前記細胞が、肺癌細胞、乳癌細胞、前立腺癌細胞、結腸癌細胞、膵臓癌細胞、腎細胞癌細胞、卵巣癌細胞、白血病細胞、黒色腫細胞、膠芽腫細胞、神経芽腫細胞、肉腫細胞、および胃癌細胞を包含する癌細胞であるか、またはリンパ球、樹状細胞、末梢血単球、マクロファージ、および神経膠細胞を包含する免疫細胞である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、少なくとも１つのさらなる阻害剤または治療と組み合わせて使用されることを特徴とし、ここで、前記さらなる治療が、好ましくは、手術、放射線療法、化学療法、毒素療法、免疫療法、ホルモン療法、抗血管新生療法、遺伝子療法、および他の生物学的療法のうちの１または複数を含み、前記さらなる阻害剤が、好ましくは、放射性核種、化学療法剤、毒素、免疫療法剤、ホルモン、核酸、およびポリペプチドのうちの１または複数を含み、特にここで、
前記毒素が、ジフテリア毒素、外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質、ブタクサ抗ウイルス性タンパク質、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、カリケアマイシン、またはトリコテセン毒素であるか、または
前記化学療法剤が、アルキル化剤、アントラサイクリン、細胞骨格破壊剤、エポチロン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ヌクレオシド類似体もしくはヌクレオチド類似体、前駆体類似体、ペプチド抗生物質、白金ベースの薬剤、レチノイド、ビンカアルカロイド、またはそれらの誘導体であり、特に、ここで、前記化学療法剤が、アクチノマイシン−Ｄ、ａｌｌ−ｔｒａｎｓレチノイン酸、アザシチジン、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブレオマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、過酸化水素、イダルビシン、イマチニブ、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テニポシド、チオグアニン、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、またはビノレルビンである、請求項１１または１２に記載の組成物。
【請求項１４】
請求項１から９のいずれか１項に記載の単離抗体またはその断片を産生する、不死化Ｂ細胞。
【請求項１５】
ＥＢＶにより不死化させたＢ細胞である、請求項１４に記載の不死化Ｂ細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
別の態様では、本発明が、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、もしくはＦｖ断片；ダイアボディー；直鎖状抗体；単鎖抗体；または抗体断片から形成される多重特異性抗体である抗体断片の使用を含む、前記請求項のいずれかに記載の方法を提供する。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
ヒトヌクレオリンに結合する抗体を分泌する不死化ヒトＢ細胞を生成する方法であって、
（ａ）ＩｇＭ陽性ヒトＢ細胞の集団を得るステップと、
（ｂ）前記集団を、
（ｉ）前記ヒトＢ細胞を不死化させるエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、および
（ｉｉ）ＩｇＭからＩｇＧへの免疫グロブリンアイソタイプのクラススイッチを誘導するサイトカイン／増殖因子／シグナル伝達剤カクテル
と接触させるステップと、
（ｃ）前記不死化および前記免疫グロブリンアイソタイプのクラススイッチを支援する条件下で細胞を培養するステップと
を含む、方法。
（項目２）
（ｄ）ヒトヌクレオリンに対する抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞を選択するステップをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
選択するステップが、不死化Ｂ細胞の培養培地上清に対して実施されるイムノアッセイを含む、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記サイトカインカクテルが、共起刺激シグナルをヒトＢ細胞に送達する作用物質を含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記サイトカインカクテルが、抗ＩｇＭ  Ｆ（ａｂ’）２インターロイキン（ＩＬ）−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＮＦα、ＢＡＦＦ、可溶性ＣＤ４０Ｌを含む、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記ＩｇＭ陽性ヒトＢ細胞の集団を、末梢血、扁桃腺、骨髄、脾臓、リンパ節、臍帯血、肝臓、アフェレーシス手順、またはバフィコートから得る、項目１に記載の方法。
（項目７）
ステップ（ｄ）の不死化ヒトＢ細胞から、重鎖および／または軽鎖の全体をコードする核酸を単離するステップをさらに含む、項目２に記載の方法。
（項目８）
ステップ（ｄ）の不死化ヒトＢ細胞から、重鎖および／または軽鎖の抗原結合領域をコードする核酸を単離するステップをさらに含む、項目２に記載の方法。
（項目９）
前記核酸を、重鎖および／または軽鎖のフレームワーク領域をコードする核酸へとクローニングするステップをさらに含む、項目８に記載の方法。
（項目１０）
ステップ（ｂ）が、感染時におけるＥＢＶの濃縮ステップ、遠心分離ステップ、またはこれらの両方をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１１）
ステップ（ｃ）の後に、前記ヒトＢ細胞集団を凍結させるステップをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１２）
ステップ（ｂ）（ｉｉ）の約０〜９６時間後にステップ（ｂ）（ｉｉ）を実施する、項目１に記載の方法。
（項目１３）
ステップ（ｂ）（ｉｉ）の約１６〜２０時間後にステップ（ｂ）（ｉｉ）を実施する、
項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記集団のうちの約５０％〜９９％を、ＥＢＶ感染により不死化させる、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記集団のうちの約９５％〜９９％を、ＥＢＶ感染により不死化させる、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
ステップ（ｄ）を、感染の１〜４週間後に行う、項目２に記載の方法。
（項目１７）
ステップ（ｄ）を、感染の２〜３週間後に行う、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
ステップ（ｄ）を、凍結保存した不死化Ｂ細胞を融解させた後に、かつ／または前記不死化Ｂ細胞に由来する凍結保存した培養培地上清を融解させた後に行う、項目２に記載の方法。
（項目１９）
前記Ｂ細胞が、抗原ナイーブ細胞である、項目１に記載の方法。
（項目２０）
前記Ｂ細胞が、抗原経験細胞である、項目１に記載の方法。
（項目２１）
ヒトヌクレオリンに結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
（項目２２）
配列番号２のタンパク質に結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
（項目２３）
配列番号１によりコードされるタンパク質に結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
（項目２４）
配列番号４を含むタンパク質に結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
（項目２５）
配列番号３によりコードされるタンパク質に結合するＩｇＧ抗体を発現する不死化ヒトＢ細胞。
（項目２６）
前記ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、またはＩｇＧ４抗体である、項目２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
（項目２７）
前記ＩｇＧ抗体が、ＩｇＧ１抗体である、項目２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
（項目２８）
前記ＩｇＧ抗体が、カッパ軽鎖を含む、項目２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
（項目２９）
前記ＩｇＧ抗体が、ラムダ軽鎖を含む、項目２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
（項目３０）
ＥＢＶにより不死化させた、項目２１から２５に記載の不死化ヒトＢ細胞。
（項目３１）
Ｔ−５Ｄ１、Ｖ−３Ｈ１１（３Ｇ５）、Ｔ−２Ｄ３、Ｔ−７Ｇ７（１Ｈ９）、Ｔ−２Ｈ３、Ｔ−９Ｆ９、Ｔ−８Ｇ４、またはＴ−Ｐ１Ｃ６と命名されている、項目２１に記載の不死化ヒトＢ細胞。
（項目３２）
受託番号＿＿＿として寄託されている不死化ヒトＢ細胞であって、それぞれ、クローン５Ｄ１、クローン３Ｈ１１（３Ｇ５）、クローン２Ｄ３、クローン７Ｇ７（１Ｈ９）、クローン２Ｈ３、クローン９Ｆ９、クローン８Ｇ４、またはクローンＰ１Ｃ６と命名されており、２０１０年１１月１７日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されている不死化ヒトＢ細胞。
（項目３３）
項目２１から２５に記載の細胞により生成される、単離抗体またはその断片。
（項目３４）
モノクローナル抗体またはその断片である、項目３３に記載の単離抗体またはその断片。
（項目３５）
ヒトに対して実質的に非免疫原性である、項目３３に記載の単離抗体またはその断片。
（項目３６）
ヒト抗体またはその断片である、項目３３に記載の単離抗体またはその断片。
（項目３７）
配列番号４のタンパク質に特異的に結合する、単離ヒトモノクローナル抗体またはその断片。
（項目３８）
ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、項目３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
（項目３９）
ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、ＭＶ４−１１細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、項目３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
（項目４０）
ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインに結合する、項目３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
（項目４１）
ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインを不活化させる、項目３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
（項目４２）
癌細胞に対する補体依存性細胞傷害を誘導する、項目３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
（項目４３）
癌細胞に対する補体非依存性細胞傷害を誘導する、項目３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
（項目４４）
接触時に癌細胞においてアポトーシスを誘導する、項目３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
（項目４５）
ＡＭＬ癌細胞、ＣＬＬ癌細胞、または乳癌細胞を阻害するかまたは死滅させる、項目３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
（項目４６）
癌細胞におけるＢＣＬ−２レベルを低減する、項目３３から３７に記載の単離抗体またはその断片。
（項目４７）
ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する単離抗体またはその断片であって、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記Ｍ
ＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、単離抗体またはその断片。
（項目４８）
ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する単離抗体またはその断片であって、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、ＭＶ４−１１細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、単離抗体またはその断片。
（項目４９）
前記ヒトヌクレオリンのアミノ酸配列が、配列番号２を含む、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目５０）
配列番号２のアミノ酸残基１〜２８３からなるアミノ酸配列に結合する、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目５１）
モノクローナル抗体またはその断片である、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目５２）
ヒトに対して実質的に非免疫原性である、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目５３）
ヒト抗体またはその断片である、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目５４）
ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインに結合する、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目５５）
ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインを不活化させる、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目５６）
診断剤または治療剤に連結されている、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目５７）
癌細胞に対する補体依存性細胞傷害を呈示する、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目５８）
癌細胞に対する補体非依存性細胞傷害を呈示する、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目５９）
接触時に癌細胞においてアポトーシスを誘導する、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目６０）
ＡＭＬ癌細胞、ＣＬＬ癌細胞、または乳癌細胞を阻害するかまたは死滅させる、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目６１）
癌細胞におけるＢＣＬ−２レベルを低減する、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目６２）
診断剤に連結されている、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目６３）
前記診断剤が、放射性核種、フルオロフォア、化学発光化合物、蛍光化合物、または酵素である、項目６２に記載の抗体またはその断片。
（項目６４）
治療剤に連結されている、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目６５）
前記治療剤が、放射性核種、毒素、または化学療法剤部分である、項目６４に記載の抗体またはその断片。
（項目６６）
ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する１または複数の単離抗体またはそれらの断片を含む抗ヌクレオリン組成物であって、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記１または複数の抗体が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、抗ヌクレオリン組成物。
（項目６７）
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、モノクローナル抗体またはその断片である、項目６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
（項目６８）
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、ヒトに対して実質的に非免疫原性である、項目６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
（項目６９）
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、ヒト抗体またはその断片である、項目６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
（項目７０）
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインに結合する、項目６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
（項目７１）
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、ヒトヌクレオリンのＲＮＡ結合ドメインを不活化させる、項目６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
（項目７２）
前記ヒトヌクレオリンのアミノ酸配列が、配列番号２を含む、項目４７または４８に記載の抗体またはその断片。
（項目７３）
前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片が、配列番号４に結合する、項目６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
（項目７４）
放射性核種、フルオロフォア、化学発光化合物、蛍光化合物、酵素、毒素、または化学療法剤をさらに含む、項目６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
（項目７５）
前記放射性核種、フルオロフォア、化学発光化合物、蛍光化合物、酵素、毒素、または化学療法剤が、前記１または複数の単離抗体またはそれらの断片にコンジュゲートされている、項目６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
（項目７６）
前記ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する２つ以上の単離抗体またはそれらの断片を含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記１または複数の抗体が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、項目６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
（項目７７）
前記ヒトヌクレオリンタンパク質に特異的に結合する３つ以上の単離抗体またはそれらの断片を含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記１または複数の抗体が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、項目６６に記載の抗ヌクレオリン組成物。
（項目７８）
ヌクレオリンをその表面に発現する細胞を阻害するかまたは死滅させる方法であって、前記細胞を、ヒトヌクレオリンに結合する抗体またはその断片と接触させるステップを含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、
前記抗体またはその断片が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、方法。
（項目７９）
前記抗体またはその断片が、ヒト抗体またはその断片である、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
前記抗体またはその断片が、モノクローナル抗体またはその断片である、項目７８に記載の方法。
（項目８１）
前記抗体またはその断片が、配列番号２に結合する、項目７８に記載の方法。
（項目８２）
前記抗体またはその断片が、配列番号１によりコードされるアミノ酸配列に結合する、項目７８に記載の方法。
（項目８３）
前記抗体またはその断片が、配列番号４に結合する、項目７８に記載の方法。
（項目８４）
前記抗体またはその断片が、配列番号３によりコードされるアミノ酸配列に結合する、項目７８に記載の方法。
（項目８５）
前記細胞が、癌細胞である、項目７８に記載の方法。
（項目８６）
前記癌細胞が、肺癌細胞、乳癌細胞、前立腺癌細胞、結腸癌細胞、膵臓癌細胞、腎細胞癌細胞、卵巣癌細胞、白血病細胞、黒色腫細胞、膠芽腫細胞、神経芽腫細胞、肉腫細胞、または胃癌細胞である、項目７８に記載の方法。
（項目８７）
前記細胞が、免疫細胞である、項目７８に記載の方法。
（項目８８）
前記免疫細胞が、リンパ球、樹状細胞、末梢血単球、マクロファージ、または神経膠細胞である、項目８７に記載の方法。
（項目８９）
前記抗体またはその断片が、治療剤に連結されている、項目７８から８８に記載の方法。
（項目９０）
前記治療剤が、放射性核種、毒素、または化学療法剤である、項目８９に記載の方法。
（項目９１）
前記阻害するかまたは死滅させることが、前記細胞においてアポトーシスを誘導するステップを含む、項目７８に記載の方法。
（項目９２）
前記細胞が、ヒト被験体体内に存在し、前記接触させるステップが、前記抗体またはその断片を前記被験体に投与するステップを含む、項目７８に記載の方法。
（項目９３）
前記細胞を、少なくとも１つのさらなる阻害剤または治療と接触させるステップをさらに含む、項目７８に記載の方法。
（項目９４）
前記さらなる治療が、手術、放射線療法、化学療法、毒素療法、免疫療法、ホルモン療法、抗血管新生療法、もしくは遺伝子療法、または他の生物学的療法のうちの１または複数を含む、項目９３に記載の方法。
（項目９５）
前記さらなる阻害剤が、放射性核種、化学療法剤、毒素、免疫療法剤、ホルモン、核酸
、またはポリペプチドのうちの１または複数を含む、項目９３に記載の方法。
（項目９６）
前記毒素が、ジフテリア毒素、外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質、ブタクサ抗ウイルス性タンパク質、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、カリケアマイシン、またはトリコテセン毒素である、項目９５に記載の方法。
（項目９７）
前記化学療法剤が、アルキル化剤、アントラサイクリン、細胞骨格破壊剤、エポチロン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ヌクレオシド類似体もしくはヌクレオチド類似体、前駆体類似体、ペプチド抗生物質、白金ベースの薬剤、レチノイド、ビンカアルカロイド、またはそれらの誘導体である、項目９５に記載の方法。
（項目９８）
前記化学療法剤が、アクチノマイシン−Ｄ、ａｌｌ−ｔｒａｎｓレチノイン酸、アザシチジン、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブレオマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、過酸化水素、イダルビシン、イマチニブ、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テニポシド、チオグアニン、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、またはビノレルビンである、項目９５に記載の方法。
（項目９９）
ヌクレオリンをその表面に発現する細胞を検出する方法であって、前記細胞を、前記ヌクレオリンに免疫学的に結合するヒト抗体またはその断片と接触させるステップを含む、方法。
（項目１００）
前記細胞が、癌細胞、免疫細胞、ヌクレオリンをその表面に発現する血管平滑筋細胞、ヌクレオリンをその表面に発現する内皮細胞、またはウイルスに感染した細胞である、項目９９に記載の方法。
（項目１０１）
前記細胞が、ヌクレオリンをその表面に発現する前癌性細胞である、項目９９に記載の方法。
（項目１０２）
前記癌細胞が、肺癌細胞、乳癌細胞、前立腺癌細胞、結腸癌細胞、膵臓癌細胞、腎細胞癌細胞、卵巣癌細胞、白血病細胞、黒色腫細胞、膠芽腫細胞、神経芽腫細胞、肉腫細胞、または胃癌細胞からなる群から選択される、項目９９に記載の方法。
（項目１０３）
前記免疫細胞が、リンパ球、樹状細胞、末梢血単球、マクロファージ、または神経膠細胞である、項目９９に記載の方法。
（項目１０４）
前記細胞が、免疫細胞である、項目９９に記載の方法。
（項目１０５）
前記免疫細胞が、活性化免疫細胞である、項目９９に記載の方法。
（項目１０６）
前記免疫細胞が、活性化Ｂ細胞である、項目９９に記載の方法。
（項目１０７）
前記免疫細胞が、メモリーＢ細胞である、項目９９に記載の方法。
（項目１０８）
前記免疫細胞が、活性化Ｔ細胞である、項目９９に記載の方法。
（項目１０９）
前記免疫細胞が、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞である、項目９９に記載の方法。
（項目１１０）
前記免疫細胞が、活性化ＣＤ８＋Ｔ細胞である、項目９９に記載の方法。
（項目１１１）
前記細胞が、血管平滑筋細胞または内皮細胞である、項目９９に記載の方法。
（項目１１２）
前記抗体またはその断片が、診断剤に連結されている、項目９９に記載の方法。
（項目１１３）
前記診断剤が、放射性核種、フルオロフォア、化学発光化合物、蛍光化合物、量子ドット、ナノ粒子、または酵素である、項目１１２に記載の方法。
（項目１１４）
前記細胞が、ヒト被験体体内に存在し、前記接触させるステップが、前記抗体またはその断片を前記被験体に投与するステップを含む、項目９９に記載の方法。
（項目１１５）
前記細胞が、単離組織試料中または単離細胞懸濁液中に存在する、項目９９に記載の方法。
（項目１１６）
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン剤および薬学的に許容される担体を投与するステップを含み、前記抗ヌクレオリン剤が、抗ヌクレオリン抗体またはその断片を含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記抗体またはその断片が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、方法。
（項目１１７）
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン抗体もしくはその断片、毒素、または化学療法剤および薬学的に許容される担体を投与するステップを含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記抗体またはその断片が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、方法。
（項目１１８）
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン抗体またはその断片および薬学的に許容される担体を投与するステップと、前記哺乳動物を放射線療法でさらに治療するステップとを含み、ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記抗体またはその断片が、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも２０％を死滅させる、方法。
（項目１１９）
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン剤および薬学的に許容される担体を投与するステップを含み、前記抗ヌクレオリン剤が、配列番号４のタンパク質に特異的に結合する抗ヌクレオリン抗体またはその断片を含む、方法。
（項目１２０）
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン抗体もしくはその断片、毒素、または化学療法剤および薬学的に許容される担体を投与するステップを含み、前記抗体またはその断片が、配列番号４のタンパク質に特異的に結合する、方法。
（項目１２１）
哺乳動物における癌を治療または予防する方法であって、前記哺乳動物に、治療有効量の抗ヌクレオリン抗体またはその断片および薬学的に許容される担体を投与するステップと、前記哺乳動物を放射線療法でさらに治療するステップとを含み、前記抗体またはその断片が、配列番号４のタンパク質に特異的に結合する、方法。
（項目１２２）
前記哺乳動物が、ヒトである、項目１１６から１２１に記載の方法。
（項目１２３）
前記抗ヌクレオリン抗体またはその断片が、ヒトに対して実質的に非免疫原性である、項目１１６から１２１に記載の方法。
（項目１２４）
前記抗ヌクレオリン抗体またはその断片が、ヒト抗体またはその断片である、項目１１６から１２１に記載の方法。
（項目１２５）
前記抗ヌクレオリンモノクローナル抗体またはその断片が、モノクローナル抗体またはその断片である、項目１１６から１２１に記載の方法。
（項目１２６）
前記毒素が、ジフテリア毒素、外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチンタンパク質、ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質、ブタクサ抗ウイルス性タンパク質、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、カリケアマイシン、またはトリコテセン毒素である、項目１１６から１２１に記載の方法。
（項目１２７）
前記化学療法剤が、アルキル化剤、アントラサイクリン、細胞骨格破壊剤、エポチロン、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ヌクレオシド類似体もしくはヌクレオチド類似体、前駆体類似体、ペプチド抗生物質、白金ベースの薬剤、レチノイド、ビンカアルカロイド、またはこれらの誘導体である、項目１１６から１２１に記載の方法。
（項目１２８）
前記化学療法剤が、アクチノマイシン−Ｄ、ａｌｌ−ｔｒａｎｓレチノイン酸、アザシチジン、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブレオマイシン、カンプトテシン、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、過酸化水素、イダルビシン、イマチニブ、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テニポシド、チオグアニン、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、またはビノレルビンである、項目１１６から１２１に記載の方法。
（項目１２９）
ＭＣＦ−７細胞およびヒトＡＢ血清と共に４８時間にわたりインキュベートすると、前記ＭＣＦ−７細胞の集団のうちの少なくとも５０％を死滅させる、抗ヌクレオリン剤。
（項目１３０）
ＭＣＦ−７細胞およびＭＣＦ１０Ａ細胞の個別の集団および熱不活化血清と共に７２または９６時間にわたりインキュベートすると、ＭＣＦ１０Ａ細胞より多くのＭＣＦ−７細胞を死滅させる、抗ヌクレオリン剤。
（項目１３１）
ＭＣＦ−７細胞およびＭＣＦ１０Ａ細胞の個別の集団およびヒトＡＢ血清と共に９６時間にわたりインキュベートすると、ＭＣＦ１０Ａ細胞より多くのＭＣＦ−７細胞を死滅させる、抗ヌクレオリン剤。
（項目１３２）
配列番号４のタンパク質に特異的に結合し、それらの細胞表面においてヌクレオリンを発現する１または複数の癌細胞を阻害するかまたは死滅させる、抗ヌクレオリン剤。
（項目１３３）
ヒトに対して実質的に非免疫原性である、項目１２９から１３２に記載の抗ヌクレオリン剤。
（項目１３４）
１または複数の前癌性細胞における細胞表面ヌクレオリン発現の増大を検出することにより、被験体が癌を発生させる可能性を決定する方法。
（項目１３５）
Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、もしくはＦｖ断片；ダイアボディー；直鎖状抗体；単鎖抗体；または抗体断片から形成される多重特異性抗体である、前記項目のいずれかに記載の抗体。
（項目１３６）
Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、もしくはＦｖ断片；ダイアボディー；直鎖状抗体；単鎖抗体；または抗体断片から形成される多重特異性抗体である抗体断片の使用を含む、前記項目のいずれかに記載の方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２３】
Ｄ．細胞系の寄託
１または複数のヌクレオリン（ＮＣＬ）ポリペプチド（例えば、配列番号４またはその断片）に免疫特異的に結合する抗体を発現する細胞系は、２０１０年１１月１７日、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．２０１１０−２２０９、Ｕ．Ｓ．Ａ．）に原寄託物として寄託され、受託番号ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１４９０、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１４９１、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１４９２、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１４９３、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１４９４、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１４９５、ＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１４９６およびＡＴＣＣ  ＰＴＡ−１１４９７を与えられた。該寄託は、ブダペスト条約下でなされたものであり、本特許が交付されれば、３７
Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．８０８（ｂ）において明記される要件を除き、寄託物質の一般公開可能性に対するすべての制約は取消不能な形で取り除かれるものとし、寄託の期限は３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．８０６に準拠するものとする。