【手続補正書】
【提出日】平成23年5月13日(2011.5.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体内でヒト肝細胞を増大させる方法であって、
ｉ）ヒト肝細胞をＲａｇ２−／−／Ｉｌ２ｒｇ−／−マウスに移植するステップであって、前記マウスが、Ｆａｈの発現が欠損している、ステップと、
ｉｉ）前記ヒト肝細胞を、少なくとも約２週間増大させるステップと、
を含む、方法。
【請求項２】
前記マウスが、前記Ｆａｈ遺伝子において、欠失に対してホモ接合体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記マウスが、Ｆａｈ−／−／Ｒａｇ２−／−／Ｉｌ２ｒｇ−／−（ＦＲＧ）マウスである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記マウスが、前記Ｆａｈ遺伝子において、点変異に対してホモ接合体である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記マウスが、Ｆａｈｐｍ／Ｒａｇ２−／−／Ｉｌ２ｒｇ−／−（ＦｐｍＲＧ）マウスである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ヒトウロキナーゼをコード化するベクターが、前記ヒト肝細胞を注入する前に、前記マウスに投与される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記ウロキナーゼが、分泌型のウロキナーゼである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ウロキナーゼが、非分泌型のウロキナーゼである、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記ベクターが、アデノウイルスベクターである、請求項６〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ベクターが、アデノ随伴ウイルスベクターである、請求項６〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ベクターが、静脈内投与される、請求項６〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ベクターが、肝細胞注入の約２４〜４８時間前に投与される、請求項６〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記マウスに、肝細胞注入前に、２−（２−ニトロ−４−トリフルオロ−メチル−ベンゾイル）−１，３  シクロヘキサンジオン（ＮＴＢＣ）が投与される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＮＴＢＣが、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／日から約０．１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記マウスに、肝細胞注入後、少なくとも約３日間、ＮＴＢＣがさらに投与される、請求項１３または請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記マウスに、肝細胞注入後、少なくとも約６日間、ＮＴＢＣがさらに投与される、請求項１３または請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ＮＴＢＣの前記用量が、肝細胞注入後、６日間の過程にわたり漸減される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＮＴＢＣが、飲料水内投与される、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
肝細胞注入前、飲料水内投与されるＮＴＢＣの濃度が、約１ｍｇ／Ｌから約８ｍｇ／Ｌである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＮＴＢＣが、食物内投与される、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＮＴＢＣが、注入することにより投与される、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ヒト肝細胞が、少なくとも約６週間、増大可能である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ヒト肝細胞が、最長約６ヶ月間、増大可能である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ヒト肝細胞が、前記マウスの脾臓または門脈に注入される、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記増大されたヒト肝細胞を前記マウスの肝臓から採取するステップをさらに含む、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ヒト肝細胞が、臓器ドナーの肝臓から単離された、または外科的切除術から単離された、または幹細胞もしくは単球もしくは羊膜細胞に由来した、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記肝細胞は、注入前、凍結保存された、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
肝細胞注入前、前記ＦＲＧマウスからマクロファージを減損させるステップをさらに含む、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
マクロファージを減損させるステップが、化学的減損を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
マクロファージを減損させるステップが、マクロファージに特異的に結合する抗体の使用を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
連続移植により採取されたヒト肝細胞を増大させるステップをさらに含む、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
遺伝子組み換えマウスであって、そのゲノムは、欠失または点変異が、機能的ＦＡＨ、ＲＡＧ−２、およびＩＬ−２Ｒγタンパク質の発現の喪失をもたらすような、Ｆａｈ、Ｒａｇ２、およびＩｌ２ｒｇ遺伝子において、前記欠失または１つもしくは複数の点変異に対して、ホモ接合体であり、前記マウスは、免疫不全であり、肝機能の低下を示し、ヒト肝細胞は、前記マウスにおいて、増大させることができる、遺伝子組み換えマウス。
【請求項３３】
前記欠失または点変異が、Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびＮＫ細胞の完全喪失をもたらす、請求項３２に記載のマウス。
【請求項３４】
前記マウスが、ＦＲＧマウスである、請求項３２または３３に記載のマウス。
【請求項３５】
前記マウスが、ＦｐｍＲＧマウスである、請求項３２または３３に記載のマウス。
【請求項３６】
前記マウスが、ヒトウロキナーゼを発現する、請求項３２〜３５のいずれか１項に記載のマウス。
【請求項３７】
前記ウロキナーゼが、分泌型のウロキナーゼである、請求項３６に記載のマウス。
【請求項３８】
前記ウロキナーゼが、非分泌型のウロキナーゼである、請求項３６に記載のマウス。
【請求項３９】
ヒトウロキナーゼの発現が、ヒトウロキナーゼをコード化する導入遺伝子の取り込みに起因する、請求項３６〜３８のいずれか１項に記載のマウス。
【請求項４０】
ヒトウロキナーゼの発現が、ヒトウロキナーゼをコード化するベクターの投与に起因する、請求項３６〜３８のいずれか１項に記載のマウス。
【請求項４１】
前記ベクターが、アデノウイルスベクターである、請求項４０に記載のマウス。
【請求項４２】
前記ベクターが、アデノ随伴ウイルスベクターである、請求項４０に記載のマウス。
【請求項４３】
前記ヒト肝細胞が単離されている、請求項１に記載の方法。
【請求項４４】
前記マウスからヒト肝細胞を採取するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
前述ならびに他の特性および利点は、いくつかの以下の実施形態の発明を実施するための形態からさらに明らかになり、添付の図を参照して進める。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
生体内でヒト肝細胞を増大させる方法であって、
ｉ）単離されたヒト肝細胞をＲａｇ２−／−／Ｉｌ２ｒｇ−／−マウスに移植するステップであって、前記マウスが、Ｆａｈの発現が欠損している、ステップと、
ｉｉ）前記ヒト肝細胞を、少なくとも約２週間増大させるステップと、
ｉｉｉ）前記マウスからヒト肝細胞を採取するステップと、を含む、方法。
（項目２）
前記マウスが、前記Ｆａｈ遺伝子において、欠失に対してホモ接合体である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記マウスが、Ｆａｈ−／−／Ｒａｇ２−／−／Ｉｌ２ｒｇ−／−（ＦＲＧ）マウスである、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記マウスが、前記Ｆａｈ遺伝子において、点変異に対してホモ接合体である、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記マウスが、Ｆａｈｐｍ／Ｒａｇ２−／−／Ｉｌ２ｒｇ−／−（ＦｐｍＲＧ）マウスである、項目４に記載の方法。
（項目６）
ヒトウロキナーゼをコード化するベクターが、前記ヒト肝細胞を注入する前に、前記マウスに投与される、項目１〜５のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
前記ウロキナーゼが、分泌型のウロキナーゼである、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記ウロキナーゼが、非分泌型のウロキナーゼである、項目６に記載の方法。
（項目９）
前記ベクターが、アデノウイルスベクターである、項目６〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記ベクターが、アデノ随伴ウイルスベクターである、項目６〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
前記ベクターが、静脈内投与される、項目６〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
前記ベクターが、肝細胞注入の約２４〜４８時間前に投与される、項目６〜１１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
前記マウスに、肝細胞注入前に、２−（２−ニトロ−４−トリフルオロ−メチル−ベンゾイル）−１，３  シクロヘキサンジオン（ＮＴＢＣ）が投与される、項目１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
前記ＮＴＢＣが、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／日から約０．１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与される、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記マウスに、肝細胞注入後、少なくとも約３日間、ＮＴＢＣがさらに投与される、項目１３または項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記マウスに、肝細胞注入後、少なくとも約６日間、ＮＴＢＣがさらに投与される、項目１３または項目１４に記載の方法。
（項目１７）
ＮＴＢＣの前記用量が、肝細胞注入後、６日間の過程にわたり漸減される、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記ＮＴＢＣが、飲料水内投与される、項目１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
肝細胞注入前、飲料水内投与されるＮＴＢＣの濃度が、約１ｍｇ／Ｌから約８ｍｇ／Ｌである、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記ＮＴＢＣが、食物内投与される、項目１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
前記ＮＴＢＣが、注入することにより投与される、項目１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２２）
前記ヒト肝細胞が、少なくとも約６週間、増大可能である、項目１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
（項目２３）
前記ヒト肝細胞が、最長約６ヶ月間、増大可能である、項目１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
前記単離されたヒト肝細胞が、前記マウスの脾臓または門脈に注入される、項目１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
前記増大されたヒト肝細胞は、前記マウスの肝臓から採取される、項目１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
（項目２６）
前記ヒト肝細胞が、臓器ドナーの肝臓から単離された、または外科的切除術から単離された、または幹細胞もしくは単球もしくは羊膜細胞に由来した、項目１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
前記肝細胞は、注入前、凍結保存された、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
肝細胞注入前、前記ＦＲＧマウスからマクロファージを減損させるステップをさらに含む、項目１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
マクロファージを減損させるステップが、化学的減損を含む、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
マクロファージを減損させるステップが、マクロファージに特異的に結合する抗体の使用を含む、項目２８に記載の方法。
（項目３１）
連続移植により採取されたヒト肝細胞を増大させるステップをさらに含む、項目１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
遺伝子組み換えマウスであって、そのゲノムは、欠失または点変異が、機能的ＦＡＨ、ＲＡＧ−２、およびＩＬ−２Ｒγタンパク質の発現の喪失をもたらすような、Ｆａｈ、Ｒａｇ２、およびＩｌ２ｒｇ遺伝子において、前記欠失または１つもしくは複数の点変異に対して、ホモ接合体であり、前記マウスは、免疫不全であり、肝機能の低下を示し、ヒト肝細胞は、前記マウスにおいて、増大させることができる、遺伝子組み換えマウス。
（項目３３）
前記欠失または点変異が、Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびＮＫ細胞の完全喪失をもたらす、項目３２に記載のマウス。
（項目３４）
前記マウスが、ＦＲＧマウスである、項目３２または３３に記載のマウス。
（項目３５）
前記マウスが、ＦｐｍＲＧマウスである、項目３２または３３に記載のマウス。
（項目３６）
前記マウスが、ヒトウロキナーゼを発現する、項目３２〜３５のいずれか１項に記載のマウス。
（項目３７）
前記ウロキナーゼが、分泌型のウロキナーゼである、項目３６に記載のマウス。
（項目３８）
前記ウロキナーゼが、非分泌型のウロキナーゼである、項目３６に記載のマウス。
（項目３９）
ヒトウロキナーゼの発現が、ヒトウロキナーゼをコード化する導入遺伝子の取り込みに起因する、項目３６〜３８のいずれか１項に記載のマウス。
（項目４０）
ヒトウロキナーゼの発現が、ヒトウロキナーゼをコード化するベクターの投与に起因する、項目３６〜３８のいずれか１項に記載のマウス。
（項目４１）
前記ベクターが、アデノウイルスベクターである、項目４０に記載のマウス。
（項目４２）
前記ベクターが、アデノ随伴ウイルスベクターである、項目４０に記載のマウス。