【手続補正書】
【提出日】平成24年6月29日(2012.6.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行う方法であって、該方法は：
デオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程；および
該核酸を含む溶液に対してＰＣＲを行う工程を含み、該直接緩衝剤は、少なくとも０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ
を含む、方法。
【請求項２】
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ヒトのアイデンティティーを決定する方法であって、該方法は：
ヒト由来のデオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程であって、ここで該直接緩衝剤は、複数のプライマーペアを含み、ここで各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接する、工程；
該核酸を含む溶液に対してＰＣＲを行って、複数のＰＣＲアンプリコンを形成する工程であって、ここで各ＰＣＲアンプリコンは、確認可能なサイズを有する、工程；および
該ＰＣＲアンプリコンのサイズを参照することによって該ヒトを同定する工程を含み、ここで該直接緩衝剤は、０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡをさらに含む、方法。
【請求項５】
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
核酸を調製する方法であって、該方法は：
デオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程；および
該溶液に対して下流の酵素的操作を行う工程を含み、該直接緩衝剤は、０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡを含む、方法。
【請求項８】
前記下流の酵素的操作はＰＣＲである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
以下：
複数のプライマーペアであって、各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接する、プライマーペア；および
０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡを含む、直接緩衝剤、
を含む、キット。
【請求項１３】
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、請求項１２に記載のキット。
【請求項１５】
直接緩衝剤および複数のプライマーペアを含む反応混合物であって、
各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接し、そして
該直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１%〜０．０４%のアジ化ナトリウム、３％〜８％のグリセロール、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、０．２％〜０．９％のポリソルベート２０、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、反応混合物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
他の実施態様は、直接緩衝剤および複数のプライマーペアを含む反応混合物であり、ここで各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接し、そしてここでその直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１%〜０．０４%のアジ化ナトリウム、３％〜８％のグリセロール、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、０．２％〜０．９％のポリソルベート、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む。いくつかの実施態様において、上記で述べたようなキットは、細胞溶解のために、ＮａＯＨまたは他の強アルカリ性化合物、または他の薬剤を必要に応じて含み得る。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行う方法であって、該方法は：
デオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程；および
該核酸を含む溶液に対してＰＣＲを行う工程を含み、該直接緩衝剤は、少なくとも０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ
を含む、方法。
（項目２）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、項目１に記載の方法。
（項目４）
ヒトのアイデンティティーを決定する方法であって、該方法は：
ヒト由来のデオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程であって、ここで該直接緩衝剤は、複数のプライマーペアを含み、ここで各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接する、工程；
該核酸を含む溶液に対してＰＣＲを行って、複数のＰＣＲアンプリコンを形成する工程であって、ここで各ＰＣＲアンプリコンは、確認可能なサイズを有する、工程；および
該ＰＣＲアンプリコンのサイズを参照することによって該ヒトを同定する工程を含み、ここで該直接緩衝剤は、０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡをさらに含む、方法。
（項目５）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、項目３に記載の方法。
（項目７）
核酸を調製する方法であって、該方法は：
デオキシリボ核酸を含む粗製サンプルを提供する工程；
該粗製サンプルをＮａＯＨと必要に応じてインキュベートする工程；
該粗製サンプルを直接緩衝剤と混合して、核酸を含む溶液を形成する工程；
該溶液に対して下流の酵素的操作を行う工程を含み、該直接緩衝剤は、０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡを含む、方法。
（項目８）
前記下流の酵素的操作はＰＣＲである、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、項目７に記載の方法。
（項目１０）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、項目７に記載の方法。
（項目１１）
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、項目７に記載の方法。
（項目１２）
以下：
複数のプライマーペアであって、各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接する、プライマーペア；および
０．２％〜０．９％のポリソルベート、３％〜８％のグリセロール、および１０００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡを含む、直接緩衝剤、
を含む、キット。
（項目１３）
前記直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％〜０．０４％のアジ化ナトリウム、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、項目１２に記載のキット。
（項目１４）
前記ポリソルベートは、ポリソルベート２０である、項目１３に記載のキット。
（項目１５）
直接緩衝剤および複数のプライマーペアを含む反応混合物であって、
各プライマーペアは、短いタンデム反復（ＳＴＲ）を含む遺伝子座に隣接し、そして
該直接緩衝剤は、１０〜５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、３０〜８０ｍＭのＫＣｌ、１．４〜２．４ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１%〜０．０４%のアジ化ナトリウム、３％〜８％のグリセロール、１００〜３５０μＭの各ｄＮＴＰ、０．２％〜０．９％のポリソルベート２０、１２００〜３０００μｇ／ｍｌのＢＳＡ、および０．１０〜０．３５Ｕ／μｌのＤＮＡポリメラーゼを含む、反応混合物。