【手続補正書】
【提出日】平成25年11月12日(2013.11.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
多糖結合体であって、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ前駆体タンパク質（ｏｒｆ３５２６ポリペプチド）、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）およびＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  Ｓｅｌ１反復含有タンパク質（ｕｐｅｃ−５２１１ポリペプチド）からなる群より選択されるキャリアポリペプチドに結合体化した多糖を含む、多糖結合体。
【請求項２】
前記キャリアポリペプチドが、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ前駆体タンパク質（ｏｒｆ３５２６ポリペプチド）である、請求項１に記載の多糖結合体。
【請求項３】
キャリアポリペプチドが、配列番号３９のＥ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ前駆体タンパク質（ｏｒｆ３５２６ポリペプチド）と比較して毒性を低減する変異および／または精製を改善する欠失を含む、請求項２に記載の多糖結合体。
【請求項４】
前記変異が、ｚｉｎｃｉｎメタロプロテアーゼドメインの全部または一部の欠失、およびプロテアーゼ活性を低減するｚｉｎｃｉｎメタロプロテアーゼドメイン中の点変異から選択される、請求項３に記載の多糖結合体。
【請求項５】
前記キャリアポリペプチドが、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の１００のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の１２５のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の１５０のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の１７５のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の２００のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の２１０のＣ末端アミノ酸、または前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の２１７のＣ末端アミノ酸を含まず、場合によって、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の１０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の２０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の３０のＮ末端アミノ酸、または前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の３３のＮ末端アミノ酸を含まない、請求項３に記載の多糖結合体。
【請求項６】
前記キャリアポリペプチドが、
（ａ）配列番号２６〜４０からなる群より選択されるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番頭２６〜４０と比較しての１から１０までの単一アミノ酸変更；
（ｃ）配列番号２６〜４０のいずれか１つとの少なくとも８５％の配列同一性；
（ｄ）配列番号２６〜４０のいずれか１つからの少なくとも１０連続するアミノ酸の断片；
および／または
（ｅ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを用いて配列番号２６〜４０のいずれかとアラインメントさせた場合に、Ｎ末端からＣ末端までのｘアミノ酸のそれぞれの移動ウィンドウが、少なくともｘ・ｙの同一のアラインメントされたアミノ酸を有し、ここで、ｘは３０であり、ｙは０．７５である
を含む、請求項２〜５のいずれか１項に記載の多糖結合体。
【請求項７】
前記キャリアポリペプチドが、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して前記キャリアポリペプチドの溶解度を増加する前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質に対する欠失をさらに含有する、請求項２〜６のいずれか１項に記載の多糖結合体。
【請求項８】
前記欠失が、ｇｌｙ−ｓｅｒ領域までの実質的に全てのＮ末端アミノ酸の除去、Ｎ末端プロリンリッチ反復の全てもしくは一部分の除去、またはその両方である、請求項７に記載の多糖結合体。
【請求項９】
前記欠失が、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の１０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の２０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の３０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の３３のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の４０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の５０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の６０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の７０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の８０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の９０のＮ末端アミノ酸、または前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の９４のＮ末端アミノ酸の除去である、請求項７に記載の多糖結合体。
【請求項１０】
前記キャリアポリペプチドが、前記Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  Ｓｅｌ１反復含有タンパク質（ｕｐｅｃ−５２１１ポリペプチド）である、請求項１に記載の多糖結合体。
【請求項１１】
前記キャリアポリペプチドが、
（ａ）配列番号２３〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番頭２３〜２５と比較しての１から１０までの単一アミノ酸変更；
（ｃ）配列番号２３〜２５のいずれか１つとの少なくとも８５％の配列同一性；
（ｄ）配列番号２３〜２５のいずれか１つからの少なくとも１０連続するアミノ酸の断片；
および／または
（ｅ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを用いて配列番号２３〜２５のいずれかとアラインメントさせた場合に、Ｎ末端からＣ末端までのｘアミノ酸のそれぞれの移動ウィンドウが、少なくともｘ・ｙの同一のアラインメントされたアミノ酸を有し、ここで、ｘは３０であり、ｙは０．７５である
を含む、請求項１０に記載の多糖結合体。
【請求項１２】
前記多糖が、
（ａ）グルカン、
（ｂ）Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹのうちの少なくとも１つに由来する莢膜糖、
（ｃ）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅからの糖抗原、
（ｄ）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓからの莢膜多糖、
（ｅ）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ多糖、
（ｆ）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇｌａｃｔｉａｅからの糖抗原、
（ｇ）Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅからのリポ多糖、または
（ｈ）Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉからの莢膜多糖
を含むリストから選択される、請求項１〜１１のいずれかに記載の多糖結合体。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の多糖結合体を含むワクチン成分。
【請求項１４】
請求項１３に記載のワクチン成分を含むワクチン。
【請求項１５】
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ抗原、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ抗原、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ抗原、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ抗原、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ抗原、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ抗原、Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｅｒｉａｅ抗原、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ型（Ｈｉｂ）抗原、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ抗原、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ抗原、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ抗原、Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ抗原、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ抗原、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ抗原、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ抗原、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ抗原、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ抗原、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ抗原、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ抗原、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ抗原、追加のＥ．ｃｏｌｉ抗原、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ抗原、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ抗原、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ抗原、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ抗原、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ抗原、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ抗原、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ抗原、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗原、Ｓｈｉｇｅｌｌａ抗原およびＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ抗原から選択される追加のワクチン成分をさらに含む、請求項１４に記載のワクチン。
【請求項１６】
哺乳類被験体における多糖に対する増進した免疫応答を誘導するための組成物であって、該組成物は、
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の多糖結合体、請求項１３に記載のワクチン成分または請求項１４〜１５のいずれか１項に記載のワクチンを含む、組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
本発明の別の態様は、哺乳類被験体における多糖に対する増進した免疫応答を誘導するための、先行する態様による、任意のその実施形態における多糖結合体、先行する態様によるワクチン成分、または先行する態様による、任意のその実施形態におけるワクチンの使用を提供する。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
グルカン多糖結合体であって、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ前駆体タンパク質（ｏｒｆ３５２６ポリペプチド）、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）およびＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  Ｓｅｌ１反復含有タンパク質（ｕｐｅｃ−５２１１ポリペプチド）からなる群より選択されるキャリアポリペプチドに結合体化したグルカン多糖を含む、グルカン多糖結合体。
（項目２）
前記キャリアポリペプチドが、
（ａ）配列番号５０のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号５０と比較しての１から１０までの単一アミノ酸変更；
（ｃ）配列番号５０との少なくとも８５％の配列同一性；
（ｄ）配列番号５０からの少なくとも１０連続するアミノ酸の断片；
および／または
（ｅ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを用いて配列番号５０とアラインメントさせた場合に、Ｎ末端からＣ末端までのｘアミノ酸のそれぞれの移動ウィンドウが、少なくともｘ・ｙの同一のアラインメントされたアミノ酸を有し、ここで、ｘは３０であり、ｙは０．７５である、
を含む前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ前駆体タンパク質（ｏｒｆ３５２６ポリペプチド）である、項目１に記載のグルカン多糖結合体。
（項目３）
前記キャリアポリペプチドが、
（ａ）配列番号４４のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号４４と比較しての１から１０までの単一アミノ酸変更；
（ｃ）配列番号４４のいずれか１つとの少なくとも８５％の配列同一性；
（ｄ）配列番号４４からの少なくとも１０連続するアミノ酸の断片；
および／または
（ｅ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを用いて配列番号４４とアラインメントさせた場合に、Ｎ末端からＣ末端までのｘアミノ酸のそれぞれの移動ウィンドウが、少なくともｘ・ｙの同一のアラインメントされたアミノ酸を有し、ここで、ｘは３０であり、ｙは０．７５である、
を含む前記Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）である、項目１に記載のグルカン多糖結合体。
（項目４）
前記キャリアポリペプチドが、
（ａ）配列番号４８のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号４８と比較しての１から１０までの単一アミノ酸変更；
（ｃ）配列番号４８との少なくとも８５％の配列同一性；
（ｄ）配列番号４８からの少なくとも１０連続するアミノ酸の断片；
および／または
（ｅ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを用いて配列番号４８とアラインメントさせた場合に、Ｎ末端からＣ末端までのｘアミノ酸のそれぞれの移動ウィンドウが、少なくともｘ・ｙの同一のアラインメントされたアミノ酸を有し、ここで、ｘは３０であり、ｙは０．７５である、
を含む前記Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  Ｓｅｌ１反復含有タンパク質（ｕｐｅｃ−５２１１ポリペプチド）である、項目１に記載のグルカン多糖結合体。
（項目５）
前記グルカン多糖が、β−１，３連結および／またはβ−１，６連結を含有する、項目１〜４のいずれか１項に記載のグルカン多糖結合体。
（項目６）
前記グルカン多糖が、単一分子種である、項目１〜５のいずれか１項に記載のグルカン多糖結合体。
（項目７）
前記グルカン多糖が、キャリアタンパク質に直接結合体化している、項目１〜６のいずれか１項に記載のグルカン多糖結合体。
（項目８）
前記グルカン多糖が、キャリアタンパク質にリンカーを介して結合体化している、項目１〜６のいずれか１項に記載のグルカン多糖結合体。
（項目９）
前記グルカン多糖が、１００ｋＤａ未満（例えば、８０ｋＤａ未満、７０ｋＤａ未満、６０ｋＤａ未満、５０ｋＤａ未満、４０ｋＤａ未満、３０ｋＤａ未満、２５ｋＤａ未満、２０ｋＤａ未満または１５ｋＤａ未満）の分子量を有する、項目１〜８のいずれか１項に記載のグルカン多糖結合体。
（項目１０）
前記グルカン多糖が、６０以下のグルコース単糖単位を有する、項目１〜８のいずれか１項に記載のグルカン多糖結合体。
（項目１１）
前記グルカン多糖が、いくらかのβ−１，６分岐を有するβ−１，３グルカン多糖である、項目１〜１０のいずれか１項に記載のグルカン多糖結合体。
（項目１２）
前記グルカン多糖が、ラミナリンである、項目１１に記載のグルカン多糖結合体。
（項目１３）
前記グルカン多糖が、β−１，３連結グルコース残基とβ−１，６連結グルコース残基の両方を、少なくとも８：１のβ−１，３連結グルコース残基対β−１，６連結残基の比で含み、かつ／またはβ−１，３連結によってのみ他の残基と連結した少なくとも５の近接非末端残基の１もしくは複数の配列が存在する、項目１〜１１のいずれか１項に記載のグルカン多糖結合体。
（項目１４）
前記グルカン多糖が、β−１，３連結グルコース残基とβ−１，６連結グルコース残基の両方を、少なくとも８：１のβ−１，３連結グルコース残基対β−１，６連結残基の比で含む、項目１〜１１のいずれか１項に記載のグルカン多糖結合体。
（項目１５）
前記グルカン多糖が、β−１，３連結のみを有する、項目１〜１０のいずれか１項に記載のグルカン多糖結合体。
（項目１６）
前記グルカン多糖が、カードランである、項目１３〜１５のいずれか１項に記載のグルカン多糖結合体。
（項目１７）
アジュバントをさらに含む、項目１〜１６のいずれか１項に記載のグルカン多糖結合体。
（項目１８）
項目１〜１６に記載のグルカン多糖結合体を含むワクチン成分。
（項目１９）
項目１８に記載のワクチン成分を含むワクチン。
（項目２０）
アジュバントをさらに含む、項目１９に記載のワクチン。
（項目２１）
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ抗原、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ抗原、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ抗原、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ抗原、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ抗原、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ抗原、Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｅｒｉａｅ抗原、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ型（Ｈｉｂ）抗原、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ抗原、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ抗原、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ抗原、Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ抗原、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ抗原、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ抗原、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ抗原、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ
ｆａｅｃａｌｉｓ抗原、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ抗原、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ抗原、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ抗原、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ抗原、追加のＥ．ｃｏｌｉ抗原、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ抗原、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ抗原、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ抗原、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ抗原、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ抗原、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ抗原、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ抗原、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗原、Ｓｈｉｇｅｌｌａ抗原およびＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ抗原から選択される追加のワクチン成分をさらに含む、項目１９または項目２０に記載のワクチン。
（項目２２）
哺乳類被験体における多糖に対する増進した免疫応答を誘導する方法であって、
前記哺乳類被験体に、項目１〜１６に記載のグルカン多糖結合体、項目１８に記載のワクチン成分または項目１９〜２１に記載のワクチンを投与する工程、
を包含する、方法。
（項目２３）
哺乳類被験体における多糖に対する増進した免疫応答を誘導するための、項目１〜１６に記載のグルカン多糖結合体、項目１８に記載のワクチン成分または項目１９〜２１に記載のワクチンの使用。
（項目２４）
多糖結合体であって、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ前駆体タンパク質（ｏｒｆ３５２６ポリペプチド）、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）およびＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  Ｓｅｌ１反復含有タンパク質（ｕｐｅｃ−５２１１ポリペプチド）からなる群より選択されるキャリアポリペプチドに結合体化した多糖を含む、多糖結合体。
（項目２５）
前記キャリアポリペプチドが、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ前駆体タンパク質（ｏｒｆ３５２６ポリペプチド）である、項目２４に記載の多糖結合体。
（項目２６）
キャリアポリペプチドが、配列番号３９のＥ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ前駆体タンパク質（ｏｒｆ３５２６ポリペプチド）と比較して毒性を低減する変異および／または精製を改善する欠失を含む、項目２５に記載の多糖結合体。
（項目２７）
前記変異が、ｚｉｎｃｉｎメタロプロテアーゼドメインの全部または一部の欠失、およびプロテアーゼ活性を低減するｚｉｎｃｉｎメタロプロテアーゼドメイン中の点変異から選択される、項目２６に記載の多糖結合体。
（項目２８）
前記点変異が、亜鉛結合残基の変異または触媒残基の変異である、項目２６〜２７のいずれか１項に記載の多糖結合体。
（項目２９）
前記亜鉛結合残基が、配列番号３９とのアラインメントに基づくアミノ酸番号１３０５である、項目２６〜２８のいずれか１項に記載の多糖結合体。
（項目３０）
前記キャリアポリペプチドが、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の１００のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の２００のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の３００のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の４００のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の５００のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の６００のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の７００のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の７５０のＣ末端アミノ酸、もしくは前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の７５８のＣ末端アミノ酸を含まないか、または前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の１００のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の２００のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の３００のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の４００のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の５００のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の６００のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の７００のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の７５０のＮ末端アミノ酸、もしくは前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の７６０のＮ末端アミノ酸を含まない、項目２６〜２９のいずれか１項に記載の多糖結合体。
（項目３１）
前記キャリアポリペプチドが、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の１００のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の１２５のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の１５０のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の１７５のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の２００のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の２１０のＣ末端アミノ酸、または前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最後の２１７のＣ末端アミノ酸を含まず、場合によって、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の１０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の２０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の３０のＮ末端アミノ酸、または前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質の少なくとも最初の３３のＮ末端アミノ酸を含まない、項目２６〜２９のいずれか１項に記載の多糖結合体。
（項目３２）
前記キャリアポリペプチドが、
（ａ）配列番号２６〜４０からなる群より選択されるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番頭２６〜４０と比較しての１から１０までの単一アミノ酸変更；
（ｃ）配列番号２６〜４０のいずれか１つとの少なくとも８５％の配列同一性；
（ｄ）配列番号２６〜４０のいずれか１つからの少なくとも１０連続するアミノ酸の断片；
および／または
（ｅ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを用いて配列番号２６〜４０のいずれかとアラインメントさせた場合に、Ｎ末端からＣ末端までのｘアミノ酸のそれぞれの移動ウィンドウが、少なくともｘ・ｙの同一のアラインメントされたアミノ酸を有し、ここで、ｘは３０であり、ｙは０．７５である
を含む、項目２５〜３１のいずれか１項に記載の多糖結合体。
（項目３３）
前記キャリアポリペプチドが、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して前記キャリアポリペプチドの溶解度を増加する前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質に対する欠失をさらに含有する、項目２５〜３２に記載の多糖結合体。
（項目３４）
前記欠失が、ｇｌｙ−ｓｅｒ領域までの実質的に全てのＮ末端アミノ酸の除去、Ｎ末端プロリンリッチ反復の全てもしくは一部分の除去、またはその両方である、項目３３に記載の多糖結合体。
（項目３５）
前記欠失が、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の１０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の２０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の３０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の３３のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の４０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の５０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の６０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の７０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の８０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の９０のＮ末端アミノ酸、または前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の９４のＮ末端アミノ酸の除去である、項目３３に記載の多糖結合体。
（項目３６）
前記キャリアポリペプチドが、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）である、項目２４に記載の多糖結合体。
（項目３７）
前記キャリアポリペプチドが、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）の断片であり、前記断片が、全長Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）に対する欠失を含有し、前記欠失が、前記全長タンパク質と比較して前記断片の溶解度を増加する、項目３６に記載の多糖結合体。
（項目３８）
前記欠失が、カルボキシル末端β−バレルドメインを含む、項目３７に記載の多糖結合体。
（項目３９）
前記キャリアポリペプチドが、配列番号４４のアミノ酸配列に相当する、項目３８に記載の多糖結合体。
（項目４０）
前記断片が、前記ｆｌｕ抗原４３（ｏｒｆ１３６４）タンパク質の９５０未満のアミノ酸、９００未満のアミノ酸、８５０未満のアミノ酸、８００未満のアミノ酸、７５０未満のアミノ酸、７００未満のアミノ酸、６５０未満のアミノ酸、６００未満のアミノ酸、５５０未満のアミノ酸、５００未満のアミノ酸、４５０未満のアミノ酸、４４０未満のアミノ酸、または４３０未満のアミノ酸を含む、項目３７〜３９のいずれかに記載の多糖結合体。
（項目４１）
前記キャリアポリペプチドが、
（ａ）配列番号１〜２２からなる群より選択されるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番頭１〜２２と比較しての１から１０までの単一アミノ酸変更；
（ｃ）配列番号１〜２２のいずれか１つとの少なくとも８５％の配列同一性；
（ｄ）配列番号１〜２２のいずれか１つからの少なくとも１０連続するアミノ酸の断片；
および／または
（ｅ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを用いて配列番号１〜２２のいずれかとアラインメントさせた場合に、Ｎ末端からＣ末端までのｘアミノ酸のそれぞれの移動ウィンドウが、少なくともｘ・ｙの同一のアラインメントされたアミノ酸を有し、ここで、ｘは３０であり、ｙは０．７５である
を含む、項目３６〜４０のいずれか１項に記載の多糖結合体。
（項目４２）
前記断片が、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）と比較して少なくとも最初の１０のＮ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）と比較して少なくとも最初の２０のＮ末端アミノ酸、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）と比較して少なくとも最初の３０のＮ末端アミノ酸、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）と比較して少なくとも最初の４０のＮ末端アミノ酸、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）と比較して少なくとも最初の５０のＮ末端アミノ酸、または前記Ｅ．ｃｏｌｉ  ＡｃｆＤ（ｏｒｆ３５２６）タンパク質と比較して少なくとも最初の５２のＮ末端アミノ酸を含まない、項目４１に記載の多糖結合体。
（項目４３）
前記断片が、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）と比較して少なくとも最後の５０のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）と比較して少なくとも最後の１００のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）と比較して少なくとも最後の１５０のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）と比較して少なくとも最後の２００のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）と比較して少なくとも最後の２５０のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）と比較して少なくとも最後の３００のＣ末端アミノ酸、前記Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）と比較して少なくとも最後の３２５のＣ末端アミノ酸、または前記Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｆｌｕ抗原４３タンパク質（ｏｒｆ１３６４ポリペプチド）と比較して少なくとも最後の３２８のＣ末端アミノ酸を含まない、項目４１または項目４２に記載の多糖結合体。
（項目４４）
前記キャリアポリペプチドが、前記Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  Ｓｅｌ１反復含有タンパク質（ｕｐｅｃ−５２１１ポリペプチド）である、項目２４に記載の多糖結合体。
（項目４５）
前記キャリアポリペプチドが、
（ａ）配列番号２３〜２５からなる群より選択されるアミノ酸配列；
（ｂ）配列番頭２３〜２５と比較しての１から１０までの単一アミノ酸変更；
（ｃ）配列番号２３〜２５のいずれか１つとの少なくとも８５％の配列同一性；
（ｄ）配列番号２３〜２５のいずれか１つからの少なくとも１０連続するアミノ酸の断片；
および／または
（ｅ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを用いて配列番号２３〜２５のいずれかとアラインメントさせた場合に、Ｎ末端からＣ末端までのｘアミノ酸のそれぞれの移動ウィンドウが、少なくともｘ・ｙの同一のアラインメントされたアミノ酸を有し、ここで、ｘは３０であり、ｙは０．７５である
を含む、項目４４に記載の多糖結合体。
（項目４６）
前記多糖が、
（ａ）グルカン、
（ｂ）Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの血清群Ａ、Ｃ、Ｗ１３５およびＹのうちの少なくとも１つに由来する莢膜糖、
（ｃ）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅからの糖抗原、
（ｄ）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓからの莢膜多糖、
（ｅ）Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ多糖、
（ｆ）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇｌａｃｔｉａｅからの糖抗原、
（ｇ）Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅからのリポ多糖、または
（ｈ）Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉからの莢膜多糖
を含むリストから選択される、項目２４〜４５のいずれかに記載の多糖結合体。
（項目４７）
アジュバントをさらに含む、項目２４〜４６のいずれかに記載の多糖結合体。
（項目４８）
項目２４〜４６に記載の多糖結合体を含むワクチン成分。
（項目４９）
項目４８に記載のワクチン成分を含むワクチン。
（項目５０）
アジュバントをさらに含む、項目４９に記載のワクチン。
（項目５１）
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ抗原、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ抗原、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ抗原、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ抗原、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ抗原、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ抗原、Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｅｒｉａｅ抗原、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ型（Ｈｉｂ）抗原、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ抗原、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ抗原、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ抗原、Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ抗原、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ抗原、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ抗原、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｄｕｃｒｅｙｉ抗原、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ
ｆａｅｃａｌｉｓ抗原、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ抗原、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ抗原、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ抗原、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ抗原、追加のＥ．ｃｏｌｉ抗原、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ抗原、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ抗原、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ抗原、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ抗原、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ抗原、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ抗原、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ抗原、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ抗原、Ｓｈｉｇｅｌｌａ抗原およびＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ抗原から選択される追加のワクチン成分をさらに含む、項目４９または項目５０に記載のワクチン。
（項目５２）
哺乳類被験体における多糖に対する増進した免疫応答を誘導する方法であって、
前記哺乳類被験体に、項目２４〜４６に記載の多糖結合体、項目４８に記載のワクチン成分または項目４９〜５１に記載のワクチンを投与する工程
を含む方法。
（項目５３）
哺乳類被験体における前記多糖に対する増進した免疫応答を誘導するための、項目２４〜４６に記載の多糖結合体、項目４８に記載のワクチン成分または項目４９〜５１に記載のワクチンの使用。