【手続補正書】
【提出日】平成24年2月27日(2012.2.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の機能し得る形で連結された発現エレメント：
(A)ヒトサイトメガロウイルス極初期エンハンサーエレメント；
(B)(i)機能的ヒトβ-アクチンプロモーターからなる群より選択されるヒトプロモーター；
(C)ヒトグロビン遺伝子イントロン；ならびに
(D)免疫グロブリンスーパーファミリー8シグナルペプチドまたはα-フィブリノゲンシグナルペプチドからなるヒトシグナルペプチド、
を含むカセットを含む発現ベクター。
【請求項２】
シグナルペプチドの下流に位置し、請求項１に記載のエレメント(A)、(B)、(C)、および(D)に機能し得る形で連結されたポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１に記載の発現ベクター。
【請求項３】
(i)前記ポリヌクレオチドが、ヒトシグナルペプチドの下流の発現ベクター中に位置する転写終結シグナルに機能し得る形で連結されるか、または(ii)前記ポリヌクレオチド自身が終結シグナルを含む、請求項２に記載の発現ベクター。
【請求項４】
前記ポリヌクレオチドが、CMV極初期エンハンサー、β-アクチンプロモーター、ヒトグロビン遺伝子イントロン、および免疫グロブリンスーパーファミリー8シグナルペプチドに機能し得る形で連結された、請求項２に記載の発現ベクター。
【請求項５】
前記ポリヌクレオチドが、CMV極初期エンハンサー、β-アクチンプロモーター、ヒトグロビン遺伝子イントロン、およびα-フィブリノゲンシグナルペプチドに機能し得る形で連結された、請求項２に記載の発現ベクター。
【請求項６】
前記ポリヌクレオチドがサイトカインをコードする、請求項２に記載の発現ベクター。
【請求項７】
コードされるサイトカインが、アクチビンA、アクチビンB、アクチビンA/2xINHbA、アクチビンB/2xINHbB、AMH/MIS、アルテミン、BDNF、BMP2、BMP15/GDF9B、BMP2/BMP2A、BMP3/オステオゲニン、BMP4、BMP4/BMP2B、BMP5、BMP7/OP-1、BMP1、BMP10、BMP15/GDF9B、β-NGF、シスタチンC、デルタ1、EGF、エリスロポエチン(EPO)、酸性FGF、塩基性FGF、FGF10、FGF5、FGF7、FGF8b、FLT3リガンド、G-CSF、GDF15、GDF2/BMP9、GDF3、GDF5/BMP14、GDF8/ミオスタチン、GDF9、GDNF、GM-CSF、HGF、HGH、IFN-α2A、IFN-α2B、IFN-γ、IFN-β1、IGF I、IGF II、IGF IIv1、IGF IIv2、IL10、IL11、IL12、IL15、IL17/IL17A、IL17F、IL1β、IL2、IL23、IL27、IL28A/IFN-λ-2、IL28B/IFN-λ-3、IL29/IFN-λ-1、IL1β、IL2 IL3、IL32、IL35、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、インヒビンA/INHa&INHbA、インヒビンB/INHa&INHbB、インヒビンC/INHa&INHbC、インヒビンE/INHa&INHbE、LEFTYB、LEFTY1/LeftyB、M-CSF、マウスCSF、マウスSCF、NODAL、Noggin、NT3(ニューロトロフィン3)、オンコスタチンM、PDGFα、PDGFβ、ペルセフィン、SCF、SDF1α、SHH、ソマトトロピン、TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、TGFβ4/LEFTY2/LeftyA、TNFα、TPOα、VEGF121aa、VEGF165aa、WIF1、WNT1、Wnt10A、Wnt10B/12、Wnt11、Wnt16、Wnt2、Wnt2B/13、Wnt3、Wnt3A、Wnt4、Wnt5A、Wnt5B、Wnt6、Wnt7A、Wnt7B、Wnt8B、およびWnt9A/14からなる群より選択される、請求項６に記載の発現ベクター。
【請求項８】
コードされるサイトカインが、EPO、G-CSF、GM-CSF、IL-2、IL-4、IL-6、M-CSF、Noggin、SCF、ソマトトロピン、TGFβ1、TNFα、およびVEGF-165からなる群より選択される、請求項７に記載の発現ベクター。
【請求項９】
請求項２、４または５に記載の発現ベクターを単離されたヒト細胞中に導入することを含み、前記ポリヌクレオチドがヒトタンパク質をコードし、該単離されたヒト細胞中での該ポリヌクレオチドの発現が真正ヒトタンパク質を産生する、真正ヒトタンパク質を生産するための組換え方法。
【請求項１０】
真正ヒトタンパク質が、天然型の同じヒトタンパク質のものと同様のサイズ、構造、分子量、糖鎖付加パターン、および転写後修飾を有する、請求項９に記載の組換え方法。
【請求項１１】
前記ポリヌクレオチドが、サイトカイン、アルブミン、IgG、IgA、IgM、IgD、IgE、α-1-プロテイナーゼ阻害剤、血液前凝固タンパク質、血液抗凝固タンパク質、血栓溶解剤、抗血管形成タンパク質、α-2-抗プラスミン、C-1エステラーゼ阻害剤、アポリポタンパク質、HDL、LDL、フィブロネクチン、β-2-糖タンパク質I、プラスミノゲン、プラスミン、プラスミノゲン活性化因子、プラスミノゲン阻害因子、血漿プロテアーゼ阻害剤、抗トロンビンIII、ストレプトキナーゼ、インター-α-トリプシン阻害剤、α-2-マクログロブリン、アミロイドタンパク質、フェリチン、プレアルブミン、GC-グロブリン、ヘモペキシン、C3-補体、トランスフェリン、ウロキナーゼ、およびα-1-酸-糖タンパク質からなる群より選択されるタンパク質をコードする、請求項９に記載の組換え方法。
【請求項１２】
前記ポリヌクレオチドがサイトカインをコードする、請求項９に記載の組換え方法。
【請求項１３】
コードされるサイトカインが、アクチビンA、アクチビンB、アクチビンA/2xINHbA、アクチビンB/2xINHbB、AMH/MIS、アルテミン、BDNF、BMP2、BMP15/GDF9B、BMP2/BMP2A、BMP3/オステオゲニン、BMP4、BMP4/BMP2B、BMP5、BMP7/OP-1、BMP1、BMP10、BMP15/GDF9B、β-NGF、シスタチンC、デルタ1、EGF、エリスロポエチン(EPO)、酸性FGF、塩基性FGF、FGF10、FGF5、FGF7、FGF8b、FLT3リガンド、G-CSF、GDF15、GDF2/BMP9、GDF3、GDF5/BMP14、GDF8/ミオスタチン、GDF9、GDNF、GM-CSF、HGF、HGH、IFN-α2A、IFN-α2B、IFN-γ、IFN-β1、IGF I、IGF II、IGF IIv1、IGF IIv2、IL10、IL11、IL12、IL15、IL17/IL17A、IL17F、IL1β、IL2、IL23、IL27、IL28A/IFN-λ-2、IL28B/IFN-λ-3、IL29/IFN-λ-1、IL1β、IL2 IL3、IL32、IL35、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、インヒビンA/INHa&INHbA、インヒビンB/INHa&INHbB、インヒビンC/INHa&INHbC、インヒビンE/INHa&INHbE、LEFTYB、LEFTY1/LeftyB、M-CSF、マウスCSF、マウスSCF、NODAL、Noggin、NT3(ニューロトロフィン3)、オンコスタチンM、PDGFα、PDGFβ、ペルセフィン、SCF、SDF1α、SHH、ソマトトロピン、TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、TGFβ4/LEFTY2/LeftyA、TNFα、TPOα、VEGF121aa、VEGF165aa、WIF1、WNT1、Wnt10A、Wnt10B/12、Wnt11、Wnt16、Wnt2、Wnt2B/13、Wnt3、Wnt3A、Wnt4、Wnt5A、Wnt5B、Wnt6、Wnt7A、Wnt7B、Wnt8B、およびWnt9A/14からなる群より選択される、請求項１２に記載の組換え方法。
【請求項１４】
コードされるサイトカインが、EPO、G-CSF、GM-CSF、IL-2、IL-4、IL-6、M-CSF、Noggin、SCF、ソマトトロピン、TGFβ1、TNFα、およびVEGF-165からなる群より選択される、請求項１３に記載の組換え方法。
【請求項１５】
ヒト細胞がHZ-293TSである、請求項９に記載の組換え方法。
【請求項１６】
ヒト細胞から真正ヒトタンパク質を単離することをさらに含む、請求項９に記載の組換え方法。
【請求項１７】
請求項２、４または５に記載の発現ベクター中のポリヌクレオチドを発現する単離されたヒト細胞により産生された、組換え生産された真正ヒトタンパク質であって、前記ポリヌクレオチドがヒトタンパク質をコードし、該ポリヌクレオチドの発現が前記真正ヒトタンパク質を産生する、前記真正ヒトタンパク質。
【請求項１８】
前記ポリヌクレオチドが、サイトカイン、アルブミン、IgG、IgA、IgM、IgD、IgE、α-1-プロテイナーゼ阻害剤、血液前凝固タンパク質、血液抗凝固タンパク質、血栓溶解剤、抗血管形成タンパク質、α-2-抗プラスミン、C-1エステラーゼ阻害剤、アポリポタンパク質、HDL、LDL、フィブロネクチン、β-2-糖タンパク質I、フィブリノゲン、プラスミノゲン、プラスミン、プラスミノゲン活性化因子、プラスミノゲン阻害因子、血漿プロテアーゼ阻害剤、抗トロンビンIII、ストレプトキナーゼ、インター-α-トリプシン阻害剤、α-2-マクログロブリン、アミロイドタンパク質、フェリチン、プレアルブミン、GC-グロブリン、ヘモペキシン、C3-補体、トランスフェリン、ウロキナーゼ、およびα-1-酸-糖タンパク質からなる群より選択されるヒトタンパク質をコードする、請求項１７に記載の組換え生産された真正タンパク質。
【請求項１９】
真正ヒトタンパク質がヒトサイトカインである、請求項１８に記載の組換え生産された真正ヒトタンパク質。
【請求項２０】
ヒトサイトカインが、アクチビンA、アクチビンB、アクチビンA/2xINHbA、アクチビンB/2xINHbB、AMH/MIS、アルテミン、BDNF、BMP2、BMP15/GDF9B、BMP2/BMP2A、BMP3/オステオゲニン、BMP4、BMP4/BMP2B、BMP5、BMP7/OP-1、BMP1、BMP10、BMP15/GDF9B、β-NGF、シスタチンC、デルタ1、EGF、エリスロポエチン(EPO)、酸性FGF、塩基性FGF、FGF10、FGF5、FGF7、FGF8b、FLT3リガンド、G-CSF、GDF15、GDF2/BMP9、GDF3、GDF5/BMP14、GDF8/ミオスタチン、GDF9、GDNF、GM-CSF、HGF、HGH、IFN-α2A、IFN-α2B、IFN-γ、IFN-β1、IGF I、IGF II、IGF IIv1、IGF IIv2、IL10、IL11、IL12、IL15、IL17/IL17A、IL17F、IL1β、IL2、IL23、IL27、IL28A/IFN-λ-2、IL28B/IFN-λ-3、IL29/IFN-λ-1、IL1β、IL2 IL3、IL32、IL35、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、インヒビンA/INHa&INHbA、インヒビンB/INHa&INHbB、インヒビンC/INHa&INHbC、インヒビンE/INHa&INHbE、LEFTYB、LEFTY1/LeftyB、M-CSF、マウスCSF、マウスSCF、NODAL、Noggin、NT3(ニューロトロフィン3)、オンコスタチンM、PDGFα、PDGFβ、ペルセフィン、SCF、SDF1α、SHH、ソマトトロピン、TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、TGFβ4/LEFTY2/LeftyA、TNFα、TPOα、VEGF121aa、VEGF165aa、WIF1、WNT1、Wnt10A、Wnt10B/12、Wnt11、Wnt16、Wnt2、Wnt2B/13、Wnt3、Wnt3A、Wnt4、Wnt5A、Wnt5B、Wnt6、Wnt7A、Wnt7B、Wnt8B、およびWnt9A/14からなる群より選択される、請求項１９に記載の組換え生産された真正ヒトタンパク質。
【請求項２１】
ヒトサイトカインが、EPO、G-CSF、GM-CSF、IL-2、IL-4、IL-6、M-CSF、Noggin、SCF、ソマトトロピン、TGFβ1、TNFα、およびVEGF-165からなる群より選択される、請求項２０に記載の組換え生産された真正ヒトタンパク質。
【請求項２２】
ヒト細胞がHZ-293TSである、請求項１８に記載の組換え生産された真正ヒトタンパク質。
【請求項２３】
真正ヒトタンパク質がTGFβである、請求項１８に記載の組換え生産された真正ヒトタンパク質。
【請求項２４】
前記ポリヌクレオチドがnogginタンパク質をコードし、該ポリヌクレオチドの発現が細胞中でジスルフィド結合したnogginダイマーを産生する、請求項１８に記載の組換え生産された真正ヒトタンパク質。
【請求項２５】
請求項１８または２０に記載の真正ヒトタンパク質のエピトープに対する抗体。
【請求項２６】
HZ-293TSと呼ばれる安定なヒト細胞系。
【請求項２７】
請求項２、４または５に記載の発現ベクターを発現する単離されたヒト細胞。
【請求項２８】
ヒト細胞がHZ-293TSである、請求項２７に記載のヒト細胞。
【請求項２９】
細胞成長、細胞増殖、細胞分化もしくは炎症により引き起こされる症状、または細胞成長、細胞増殖、細胞分化もしくは炎症の欠如を生じる症状を治療するための医薬の製造における、(A)請求項１７に記載の組換え生産された真正ヒトタンパク質、(B)請求項１７に記載の組換え生産された真正ヒトタンパク質に対する抗体または(C)請求項２、４もしくは５に記載のベクターを含む組成物の使用。
【請求項３０】
組換え生産された真正ヒトタンパク質が、アクチビンA、アクチビンB、アクチビンA/2xINHbA、アクチビンB/2xINHbB、AMH/MIS、アルテミン、BDNF、BMP2、BMP15/GDF9B、BMP2/BMP2A、BMP3/オステオゲニン、BMP4、BMP4/BMP2B、BMP5、BMP7/OP-1、BMP1、BMP10、BMP15/GDF9B、β-NGF、シスタチンC、デルタ1、EGF、エリスロポエチン(EPO)、酸性FGF、塩基性FGF、FGF10、FGF5、FGF7、FGF8b、FLT3リガンド、G-CSF、GDF15、GDF2/BMP9、GDF3、GDF5/BMP14、GDF8/ミオスタチン、GDF9、GDNF、GM-CSF、HGF、HGH、IFN-α2A、IFN-α2B、IFN-γ、IFN-β1、IGF I、IGF II、IGF IIv1、IGF IIv2、IL10、IL11、IL12、IL15、IL17/IL17A、IL17F、IL1β、IL2、IL23、IL27、IL28A/IFN-λ-2、IL28B/IFN-λ-3、IL29/IFN-λ-1、IL1β、IL2 IL3、IL32、IL35、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、インヒビンA/INHa&INHbA、インヒビンB/INHa&INHbB、インヒビンC/INHa&INHbC、インヒビンE/INHa&INHbE、LEFTYB、LEFTY1/LeftyB、M-CSF、マウスCSF、マウスSCF、NODAL、Noggin、NT3(ニューロトロフィン3)、オンコスタチンM、PDGFα、PDGFβ、ペルセフィン、SCF、SDF1α、SHH、ソマトトロピン、TGFβ1、TGFβ2、TGFβ3、TGFβ4/LEFTY2/LeftyA、TNFα、TPOα、VEGF121aa、VEGF165aa、WIF1、WNT1、Wnt10A、Wnt10B/12、Wnt11、Wnt16、Wnt2、Wnt2B/13、Wnt3、Wnt3A、Wnt4、Wnt5A、Wnt5B、Wnt6、Wnt7A、Wnt7B、Wnt8B、およびWnt9A/14からなる群より選択されるサイトカインである、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
サンプルから請求項１８に記載の真正ヒトタンパク質を検出するための診断剤としての該ヒトタンパク質のエピトープに対する抗体の使用。
【請求項３２】
前記抗体を、前記ヒトタンパク質を検出するためのELISAアッセイにおける診断剤として用いる、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
ex vivoでの研究道具としての請求項１８に記載の組換え生産された真正タンパク質の使用。
【請求項３４】
前記組換え生産された真正タンパク質を、そのタンパク質と相互作用する薬剤のためのタンパク質または細胞スクリーニングアッセイにおいて用いる、請求項３３に記載の使用。