【手続補正書】
【提出日】平成24年6月29日(2012.6.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
多重特異性融合タンパク質であって、該多重特異性融合タンパク質は、介在ドメインにより異種結合ドメインに連結されたＴＧＦ−βアンタゴニストドメインを含み；
ここで、該異種結合ドメインは、異種標的に結合し、そして、以下：
ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ６アンタゴニスト、ＩＬ１０アンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＨＧＦアンタゴニスト、ＩＧＦアンタゴニスト、およびＧＩＴＲアゴニストからなる群から選択される、多重特異性融合タンパク質。
【請求項２】
前記ＴＧＦ−βアンタゴニストドメインが、前記多重特異性融合タンパク質のＮ末端に存在する、請求項１に記載の多重特異性融合タンパク質。
【請求項３】
前記ＴＧＦ−βアンタゴニストドメインが、前記多重特異性融合タンパク質のＣ末端に存在する、請求項１に記載の多重特異性融合タンパク質。
【請求項４】
ＴＮＦＲ外部ドメインまたはそのサブドメインが、前記多重特異性融合タンパク質のＮ末端に存在する、請求項３に記載の多重特異性融合タンパク質。
【請求項５】
前記ＴＧＦ−βアンタゴニストドメインが、ＴＧＦβＲ２外部ドメイン、もしくはそのサブドメイン、またはＴＧＦ−β特異的結合ドメインである、請求項１から４のいずれか一項に記載の多重特異性融合タンパク質。
【請求項６】
前記ＴＧＦ−β特異的結合ドメインが、ＴＧＦ−βに対して特異的な、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ドメイン抗体、および重鎖のみの抗体からなる群から選択される、請求項５に記載の多重特異性融合タンパク質。
【請求項７】
前記異種結合ドメインが、前記異種標的に特異的な、外部ドメインもしくはそのサブドメイン、または結合ドメインである、請求項１から６のいずれか一項に記載の多重特異性融合タンパク質。
【請求項８】
前記異種標的に特異的な前記結合ドメインが、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ドメイン抗体、および重鎖のみの抗体からなる群から選択される、請求項７に記載の多重特異性融合タンパク質。
【請求項９】
前記介在ドメインが、Ｎ末端からＣ末端までに、免疫グロブリンヒンジ領域リンカー；ＩｇＧ１  ＣＨ２ドメイン；およびＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の多重特異性融合タンパク質。
【請求項１０】
前記免疫グロブリンヒンジ領域リンカーが、第一のシステインを異なるアミノ酸で置換することにより変異される、請求項９に記載の多重特異性融合タンパク質。
【請求項１１】
前記介在ドメインが、Ｎ末端からＣ末端までに、第一のリンカー；ＩｇＧ１  ＣＨ２ドメイン；ＩｇＧ１  ＣＨ３ドメイン；および第二のリンカーを含み、前記第一のリンカーと第二のリンカーとは同じであるかまたは異なるものである、請求項１から１０のいずれか一項に記載の多重特異性融合タンパク質。
【請求項１２】
前記ＩｇＧ１  ＣＨ２ドメインおよびＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインが、ＦｃＲｎ結合性を保持しながら、ＦｃγＲＩ−ＩＩＩ結合性が除かれるように変異される、請求項９または１１に記載の多重特異性融合タンパク質。
【請求項１３】
前記第１のリンカーおよび前記第２のリンカーが、配列番号４９７〜６０４および配列番号１２２３〜１２２８からなる群から独立して選択される、請求項１１に記載の多重特異性融合タンパク質。
【請求項１４】
前記第１のリンカーが、配列番号５７６であり、前記第２のリンカーが、配列番号１２２３である、請求項１１または１３に記載の多重特異性融合タンパク質。
【請求項１５】
配列番号７３５のアミノ酸２３〜６９３、配列番号７３６のアミノ酸２３〜６６８、配列番号７３７のアミノ酸２３〜６９３、配列番号７３８のアミノ酸２３〜６６８、および配列番号１２３６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の多重特異性融合タンパク質。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれかに記載の多重特異性融合タンパク質、および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む組成物。
【請求項１７】
前記多重特異性融合タンパク質が、前記組成物中に二量体または多量体として存在する、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の多重特異性融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１９】
発現制御配列に作動可能に連結している、請求項１８に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項２０】
請求項１９に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項２１】
多重特異性融合タンパク質を産生する方法であって、培地中で請求項２０に記載の宿主細胞を培養する工程、および前記タンパク質を発現する工程を含む、方法。
【請求項２２】
被験体において、悪性の状態を治療するための組成物であって、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の多重特異性融合タンパク質、請求項１６〜１７のいずれか一項に記載の組成物、請求項１８に記載のポリヌクレオチド、請求項１９に記載のベクター、または請求項２０に記載の宿主細胞を含む、組成物。
【請求項２３】
前記悪性の状態が、乳癌、腎細胞癌、メラノーマおよび前立腺癌からなる群から選択される、請求項２２に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
本開示は、多重特異性融合タンパク質を提供し、これを、本明細書ではｘｃｅｐｔｏｒ分子と呼ぶ。そのような多重特異性融合タンパク質の例示的な構造は、Ｎ−ＢＤ−ＩＤ−ＥＤ−Ｃ、Ｎ−ＥＤ−ＩＤ−ＢＤ−Ｃ、およびＮ−ＥＤ１−ＩＤ−ＥＤ２−Ｃ［式中、Ｎ−および−Ｃはそれぞれ、アミノ末端およびカルボキシ末端を表し、ＢＤは、免疫グロブリン様または免疫グロブリン可変領域の結合ドメインであり、ＩＤは、介在ドメインであり、かつＥＤは、外部ドメイン（例えば、細胞外ドメイン）、例として、受容体リガンド結合ドメイン、システインに富むドメイン（Ａドメイン；ＷＯ０２／０８８１７１およびＷＯ０４／０４４０１１を参照されたい）、セマフォリンまたはセマフォリン様のドメインなどである］を含む。いくつかの構築物中では、ＩＤは、第１の結合ドメインと第２の結合ドメインとの間に配置された免疫グロブリンの定常領域またはそのサブ領域を含むことができる。その上さらなる構築物中では、ＢＤおよびＥＤがそれぞれ、同じまたは異なるリンカー（例えば、１〜５０個のアミノ酸を含むリンカー）、例として、（例えば、上部領域およびコア領域から構成される）免疫グロブリンヒンジ領域もしくはその機能性変異体、またはレクチンのドメイン間領域もしくはその機能性変異体、または分化抗原群（ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）（ＣＤ）分子の茎領域もしくはその機能性変異体を介して、ＩＤに連結されている。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
アミノ末端からカルボキシ末端までに、以下の構造のうちの１つを有する多重特異性融合タンパク質：
（ａ）ＢＤ−ＩＤ−ＥＤ、
（ｂ）ＥＤ−ＩＤ−ＢＤ、または
（ｃ）ＥＤ１−ＩＤ−ＥＤ２
［式中、
ＥＤは、ＴＧＦβアンタゴニストであり、ＥＤ１とＥＤ２とは、異なるアンタゴニストであり、ＥＤ１またはＥＤ２は、ＴＧＦβアンタゴニストであり、
ＩＤは、介在ドメインであり、そして
ＢＤは、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ６アンタゴニスト、ＩＬ１０アンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＨＧＦアンタゴニスト、ＩＧＦアンタゴニストまたはＧＩＴＲアゴニストである］。
（項目２）
前記結合ドメインが、免疫グロブリン可変結合ドメインである、項目１に記載の多重特異性融合タンパク質。
（項目３）
前記外部ドメインが、受容体リガンドドメインである、項目１または２に記載の多重特異性融合タンパク質。
（項目４）
前記介在ドメインが、以下の構造：−Ｌ１−ＣＨ２ＣＨ３−
［式中、
Ｌ１は、免疫グロブリンヒンジリンカーであって、場合により、第１システインが異なるアミノ酸で置換されているＩｇＧ１ヒンジであり、
−ＣＨ２ＣＨ３−は、ＩｇＧ１のＦｃドメインのＣＨ２ＣＨ３領域であって、場合により、突然変異させて、ＦｃＲｎの相互作用は保持されるが、ＦｃγＲＩ−ＩＩＩの相互作用が除かれている］
を有する、項目１から３のいずれかに記載の多重特異性融合タンパク質。
（項目５）
前記ＢＤが、第１のリンカーによって前記介在ドメインに接続しており、前記ＥＤが、第２のリンカーによって前記介在ドメインに接続しており、前記第１および前記第２のリンカーは、同じであってもまたは異なっていてもよい、項目１から４のいずれかに記載の多重特異性融合タンパク質。
（項目６）
前記第１および前記第２のリンカーが、配列番号４９７〜６０４および１２２３〜１２２８から選択され、場合により、前記第１リンカーが、配列番号５７６であり、前記第２リンカーが配列番号１２２３である、項目５に記載の多重特異性融合タンパク質。
（項目７）
配列番号７３５〜７４２のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む、項目１から６のいずれかに記載の多重特異性融合タンパク質。
（項目８）
１つまたは複数の項目１から７のいずれかに記載の多重特異性融合タンパク質、および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む組成物。
（項目９）
前記多重特異性融合タンパク質が、前記組成物において二量体または多量体として存在する、項目８に記載の組成物。
（項目１０）
項目１から７のいずれか一項に記載の多重特異性融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
（項目１１）
発現制御配列に作動可能に連結している項目１０に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
（項目１２）
項目１１に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
（項目１３）
悪性の状態を有する被験体を治療するための方法であって、治療有効量の項目１から９のいずれかに記載の多重特異性融合タンパク質またはその組成物を投与する工程を含む方法。
（項目１４）
前記悪性の状態が、乳癌、腎細胞癌、メラノーマまたは前立腺癌である、項目１３に記載の方法。