【手続補正書】
【提出日】平成23年5月2日(2011.5.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
造血幹細胞数を増大させる方法であって、単離されたインスリン成長因子結合タンパク質２（ＩＧＦＢＰ−２）およびアンジオポエチン様タンパク質（Ａｎｇｐｔｌ）を含む合成培地中でヒト細胞をインキュベートするステップを含み、該ヒト細胞の少なくとも１つが１つまたは複数の血液細胞型に分化することができる、方法。
【請求項２】
前記単離されたＩＧＦＢＰ−２が約１．０ｎｇ／ｍＬから約５μｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記単離されたＩＧＦＢＰ−２が組換え産生される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ヒト細胞が少なくとも５日間培養される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ヒト細胞が少なくとも１０日間インキュベートされる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記Ａｎｇｐｔｌが、Ａｎｇｐｔｌ３およびＡｎｇｐｔｌ５からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記培地が、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）および幹細胞因子（ＳＣＦ）からなる群から選択される少なくとも１つの追加の成長因子をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記追加の成長因子が約０．５ｎｇ／ｍＬから約５μｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ヒト細胞が、骨髄細胞、末梢血細胞、臍帯血細胞および胎児肝細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ＣＤ１３３を発現する１つまたは複数の初代ヒト細胞を、該ヒト細胞を培養する前に選択するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ＣＤ３４を発現する１つまたは複数の初代ヒト細胞を、該ヒト細胞をインキュベートする前に選択するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１に記載の方法で産生された造血幹細胞。
【請求項１３】
ヒト造血幹細胞数をｉｎ  ｖｉｔｒｏで増大させる方法であって、単離されたインスリン成長因子結合タンパク質２（ＩＧＦＢＰ−２）、アンジオポエチン様タンパク質５（Ａｎｇｐｔｌ５）、線維芽細胞成長因子１（ＦＧＦ−１）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）および幹細胞因子（ＳＣＦ）を含む合成培地中で少なくとも５日間ヒト細胞をインキュベートするステップを含み、該ヒト細胞のうちの少なくとも１つが、ＣＤ１３３およびＣＤ３４からなる群から選択される表面マーカーの発現に関して選択されたものであり、該ヒト細胞の少なくとも１つが１つまたは複数の血液細胞型に分化することができる、方法。
【請求項１４】
造血幹細胞を含む組成物であって、該造血幹細胞が、単離されたＩＧＦＢＰ−２およびアンジオポエチン様成長因子（Ａｎｇｐｔｌ）を含む合成培地中でインキュベートされたヒト細胞であり、ここで、該ヒト細胞は、インキュベーション前に、ドナーから得られたものであり、１つまたは複数の血液細胞型に分化することができる、組成物。
【請求項１５】
前記単離されたＩＧＦＢＰ−２が約１．０ｎｇ／ｍＬから約５μｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記単離されたＩＧＦＢＰ−２が組換え産生される、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記Ａｎｇｐｔｌが、Ａｎｇｐｔｌ３およびＡｎｇｐｔｌ５からなる群から選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１８】
前記Ａｎｇｐｔｌが組換え産生される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ヒト細胞が、骨髄細胞、末梢血細胞、臍帯血細胞および胎児肝細胞からなる群から選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２０】
ＣＤ１３３を発現する１つまたは複数の初代ヒト細胞をさらに含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２１】
ＣＤ３４を発現する１つまたは複数の初代ヒト細胞をさらに含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２２】
個体を治療するための組成物であって、ＩＧＦＢＰ−２およびＡｎｇｐｔｌを含む組成物。
【請求項２３】
前記Ａｎｇｐｔｌが、Ａｎｇｐｔｌ３およびＡｎｇｐｔｌ５からなる群から選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
ヒト造血幹細胞数を増大させるための培地であって、
ａ）合成造血幹細胞基本培地と、
ｂ）単離されたＩＧＦＢＰ−２と、
ｃ）Ａｎｇｐｔｌと
を含む培地。
【請求項２５】
前記Ａｎｇｐｔｌが、Ａｎｇｐｔｌ３およびＡｎｇｐｔｌ５からなる群から選択される、請求項２４の培地。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
ここに記載した様々な実施形態は、相補的でありえ、ここに含まれている教示に鑑みて、当業者によって理解される方法で組み合わせるか、または併用することができる。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
造血幹細胞数を増大させる方法であって、単離されたインスリン成長因子結合タンパク質２（ＩＧＦＢＰ−２）およびアンジオポエチン様タンパク質（Ａｎｇｐｔｌ）を含む合成培地中でヒト細胞をインキュベートするステップを含み、該ヒト細胞の少なくとも１つが１つまたは複数の血液細胞型に分化することができる、方法。
（項目２）
前記単離されたＩＧＦＢＰ−２が約１．０ｎｇ／ｍＬから約５μｇ／ｍＬの濃度で存在する、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記単離されたＩＧＦＢＰ−２が組換え産生される、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記ヒト細胞が少なくとも５日間培養される、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記ヒト細胞が少なくとも１０日間インキュベートされる、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記Ａｎｇｐｔｌが、Ａｎｇｐｔｌ３およびＡｎｇｐｔｌ５からなる群から選択される、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記培地が、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）および幹細胞因子（ＳＣＦ）からなる群から選択される少なくとも１つの追加の成長因子をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記追加の成長因子が約０．５ｎｇ／ｍＬから約５μｇ／ｍＬの濃度で存在する、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記ヒト細胞が、骨髄細胞、末梢血細胞、臍帯血細胞および胎児肝細胞からなる群から選択される、項目１に記載の方法。
（項目１０）
ＣＤ１３３を発現する１つまたは複数の初代ヒト細胞を、該ヒト細胞を培養する前に選択するステップをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１１）
ＣＤ３４を発現する１つまたは複数の初代ヒト細胞を、該ヒト細胞をインキュベートする前に選択するステップをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１２）
項目１に記載の方法で産生された造血幹細胞。
（項目１３）
ヒト造血幹細胞数をｉｎ  ｖｉｔｒｏで増大させる方法であって、単離されたインスリン成長因子結合タンパク質２（ＩＧＦＢＰ−２）、アンジオポエチン様タンパク質５（Ａｎｇｐｔｌ５）、線維芽細胞成長因子１（ＦＧＦ−１）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）および幹細胞因子（ＳＣＦ）を含む合成培地中で少なくとも５日間ヒト細胞をインキュベートするステップを含み、該ヒト細胞のうちの少なくとも１つが、ＣＤ１３３およびＣＤ３４からなる群から選択される表面マーカーの発現に関して選択されたものであり、該ヒト細胞の少なくとも１つが１つまたは複数の血液細胞型に分化することができる、方法。
（項目１４）
造血幹細胞を個体に投与する方法であって、
ａ）該個体またはドナーからヒト細胞を得るステップであって、該ヒト細胞の少なくとも１つが１つまたは複数の血液細胞型に分化することができる、ステップと、
ｂ）単離されたＩＧＦＢＰ−２およびアンジオポエチン様成長因子（Ａｎｇｐｔｌ）を含む合成培地中で該ヒト細胞をインキュベートするステップと、
ｃ）該培養された細胞を該個体に移植するステップと
を含む、方法。
（項目１５）
前記単離されたＩＧＦＢＰ−２が約１．０ｎｇ／ｍＬから約５μｇ／ｍＬの濃度で存在する、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記単離されたＩＧＦＢＰ−２が組換え産生される、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記Ａｎｇｐｔｌが、Ａｎｇｐｔｌ３およびＡｎｇｐｔｌ５からなる群から選択される、項目４に記載の方法。
（項目１８）
前記Ａｎｇｐｔｌが組換え産生される、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記ヒト細胞が、骨髄細胞、末梢血細胞、臍帯血細胞および胎児肝細胞からなる群から選択される、項目１４に記載の方法。
（項目２０）
ＣＤ１３３を発現する１つまたは複数の初代ヒト細胞を、該初代ヒト細胞をインキュベートする前に選択するステップをさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目２１）
ＣＤ３４を発現する１つまたは複数の初代ヒト細胞を、該ヒト細胞をインキュベートする前に選択するステップをさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目２２）
個体を治療する方法であって、該個体にＩＧＦＢＰ−２およびＡｎｇｐｔｌを投与するステップを含む方法。
（項目２３）
前記Ａｎｇｐｔｌが、Ａｎｇｐｔｌ３およびＡｎｇｐｔｌ５からなる群から選択される、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
ヒト造血幹細胞数を増大させるための培地であって、
ａ）合成造血幹細胞基本培地と、
ｂ）単離されたＩＧＦＢＰ−２と、
ｃ）Ａｎｇｐｔｌと
を含む培地。
（項目２５）
前記Ａｎｇｐｔｌが、Ａｎｇｐｔｌ３およびＡｎｇｐｔｌ５からなる群から選択される、項目２４の培地。
（項目２６）
培養中の造血幹細胞の増殖を促進する方法であって、細胞の集団を、アンジオポエチン２を含む培地中で、該細胞の増殖に十分な条件下で培養するステップを含む、方法。
（項目２７）
前記アンジオポエチン２がヒトアンジオポエチン２である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記細胞が１０日間培養される、項目２６に記載の方法。
（項目２９）
前記培地が無血清培地である、項目２６に記載の方法。
（項目３０）
前記培地が、インスリン成長因子（ＩＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）および幹細胞因子（ＳＣＦ）からなる群から選択される少なくとも１つの追加の因子をさらに含む、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記細胞がＣＤ４５＋、Ｓｃａ−１＋骨髄細胞である、項目２６に記載の方法。
（項目３２）
前記細胞がサイドポピュレーション細胞（side  population  ｃｅｌｌ）である、項目２６に記載の方法。
（項目３３）
造血幹細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで増殖させるのに適した培地であって、無血清培地およびアンジオポエチン２を含む、培地。
（項目３４）
前記アンジオポエチン２がヒトアンジオポエチン２である、項目３３に記載の培地。
（項目３５）
前記培地が、インスリン成長因子（ＩＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）および幹細胞因子（ＳＣＦ）からなる群から選択される少なくとも１つの追加の因子をさらに含む、項目３３に記載の培地。
（項目３６）
インスリン成長因子（ＩＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）および幹細胞因子（ＳＣＦ）からなる群から選択される少なくとも２つの追加の因子を含む、項目３３に記載の培地。
（項目３７）
前記ＩＧＦが１ＧＦ−２である、項目３５に記載の培地。
（項目３８）
前記ＦＧＦがＦＧＦ−１である、項目３５に記載の培地。
（項目３９）
ＩＧＦ−２、ＦＧＦ−１、ＳＣＦおよびＴＰＯをさらに含む、項目３５に記載の培地。