(57)【要約】【課題】優れたエストロゲン様作用を発揮することができるローヤルゼリー抽出物を提供する。ローヤルゼリー抽出物を効率良く製造することができる製造方法を提供する。優れたエストロゲン様作用を発揮することができるエストロゲン欠乏症治療剤及び食品製剤を提供する。【解決手段】ローヤルゼリー抽出物は、エストロゲン受容体に親和性を示す物質、すなわちステロール類、ステロイド類又は糖類を１重量％以上含有するものである。その製造方法は、ローヤルゼリー原料を分離用担体又は樹脂、或いはエストロゲン受容体を結合させたアフィニティー担体に供し、分取するものである。エストロゲン欠乏症治療剤及び食品製剤は、上記のローヤルゼリー抽出物を含有するものである。【選択図】　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エストロゲン受容体に親和性を示す物質を１重量％以上含有するローヤルゼリー抽出物。
【請求項２】
エストロゲン受容体に親和性を示す物質は、ステロール類、ステロイド類又は糖類である請求項１に記載のローヤルゼリー抽出物。
【請求項３】
ローヤルゼリー原料に有機溶媒を混合し、抽出される抽出物を分離用担体又は樹脂に供し、分離用溶媒により分取される請求項１又は２に記載のローヤルゼリー抽出物の製造方法。
【請求項４】
ローヤルゼリー原料をエストロゲン受容体を結合させたアフィニティー担体又は樹脂に供し、分離用溶媒により分取される請求項１又は２に記載のローヤルゼリー抽出物の製造方法。
【請求項５】
請求項１又は２に記載のローヤルゼリー抽出物を含有するエストロゲン欠乏症治療剤。
【請求項６】
請求項１又は２に記載のローヤルゼリー抽出物を含有する食品製剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、エストロゲン様作用を示すローヤルゼリー抽出物、その製造方法、それを含有するエストロゲン欠乏症治療剤及び食品製剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
ローヤルゼリーは、羽化後３〜１５日の雌のミツバチが下咽頭腺及び大腮腺から分泌する分泌物を混合して作るゼリー状の物質で、特有のタンパク質、脂肪酸及びミネラル等が含有されている。このローヤルゼリーは、抗菌作用、免疫増強作用、抗腫瘍作用、抗炎症作用、血圧調節作用等の有用な作用を有しており、食品製剤、医薬品製剤及び化粧品製剤として広く利用されている。
【０００３】
近年、骨粗しょう症や更年期障害等のエストロゲンの欠乏に伴うエストロゲン欠乏症が増加している。エストロゲン補充療法において、βエストラジオール等のエストロゲン製剤は、無月経、無排卵周期症、機能性子宮出血、子宮発育不全、更年期障害等を適応症とする医薬品製剤として用いられている。このエストロゲンに類似した作用を示すものが、エストロゲン様物質であり、骨粗しょう症や婦人科疾患、乳癌、子宮癌、前立腺癌、前立腺肥大症、アルツハイマー病等の予防、さらには血中コレステロールの減少や記憶力向上に寄与する可能性が示唆されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
ローヤルゼリーはエストロゲン様作用を抑制する作用、すなわち、抗エストロゲン様作用を有するため、２〜３か月程度の長期間に亘り服用しないとエストロゲン様作用が発揮されにくいという問題がある。これは、ローヤルゼリー中に、微量の抗エストロゲン様物質、例えばテストステロン様作用を発揮する物質が含有されているためである。
【０００５】
この発明は上記のような従来技術に存在する問題点に着目してなされたものである。その目的とするところは、抗エストロゲン様物質を除去することにより、優れたエストロゲン様作用を発揮することができるローヤルゼリー抽出物を提供することにある。また、ローヤルゼリー抽出物を効率良く製造することができる製造方法を提供することにある。さらに、優れたエストロゲン様作用を発揮できるエストロゲン欠乏症治療剤及び食品製剤を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記の目的を達成するために、請求項１に記載の発明のローヤルゼリー抽出物は、エストロゲン受容体に親和性を示す物質を１重量％以上含有するものである。
【０００７】
請求項２に記載の発明のローヤルゼリー抽出物は、エストロゲン受容体に親和性を示す物質は、ステロール類、ステロイド類又は糖類である請求項１に記載のものである。
【０００８】
請求項３に記載の発明のローヤルゼリー抽出物の製造方法は、ローヤルゼリー原料に有機溶媒を混合し、抽出される抽出物を分離用担体又は樹脂に供し、分離用溶媒により分取されるものである。
【０００９】
請求項４に記載の発明のローヤルゼリー抽出物の製造方法は、ローヤルゼリー原料をエストロゲン受容体を結合させたアフィニティー担体又は樹脂に供し、分離用溶媒により分取されるものである。
【００１０】
請求項５に記載の発明のエストロゲン欠乏症治療剤は、請求項１又は２に記載のローヤルゼリー抽出物を含有するものである。
請求項６に記載の発明の食品製剤は、請求項１又は２に記載のローヤルゼリー抽出物を含有するものである。
【００１１】
【発明の実施の形態】
以下、この発明を具体化した実施形態を詳細に説明する。
本実施形態のエストロゲン受容体に親和性を示す物質を１重量％以上含有するローヤルゼリー抽出物について説明する。エストロゲン受容体に親和性を示す物質としては、好ましくは、ステロール類、ステロイド類又は糖類である。一般的に、エストロゲン及びエストロゲン様物質は、エストロゲン受容体上にあるエストロゲン結合部位と結合し、次いで、エストロゲン反応エレメント（ＥＲＥ）等の転写因子を活性化する。さらに、活性化された転写因子は、特定の遺伝子を複製又は転写する。
【００１２】
前記のエストロゲン受容体に親和性を示す物質のうち、ステロイド類はエストロゲンに類似した化学構造を有するため、エストロゲン結合部位に結合する。この結合により、エストロゲン様作用が発現する。
【００１３】
前記のステロイド類としては、コレステロール、エストロン、エストラジオール及びヒドロキシステロイド並びにそれらの誘導体であり、後述する糖類と配糖体を形成している場合がある。
【００１４】
前記のエストロゲン受容体に親和性を示す物質であるステロール類及び糖類は、ＥＲＥ等の転写因子を活性化する作用を有する。前記のステロール類としては、デルタ−７−ステロール、シトステロール、２４−メチレンステロール、２８−メチレンステロール、スティグマステロール、カンペストジエノール、デスモステロール、カンペステロール等である。また、これらのステロール類は、糖類と配糖体を形成している場合がある。
【００１５】
前記の糖類としては、Ｎ−アセチルグルコサミン、グルコサミン、グルコース、フルクトース、リボース、デオキシリボース等である。また、これらの糖類は、前記のステロール類と配糖体を形成している場合がある。
【００１６】
これらのエストロゲン受容体に親和性を示す物質の含有量は１重量％以上であり、２重量％以上であることが好ましい。この含有量が１重量％を下回る場合、エストロゲン受容体及び転写因子の活性化が生じないため、エストロゲン様作用を発揮することができない。この含有量の上限は、有機溶媒を用いて抽出する方法又はエストロゲン受容体を結合させたアフィニティー担体又は樹脂を用いて分取する方法による場合５重量％程度であり、両方法を併用する場合１０重量％程度である。
【００１７】
前記のステロール類、ステロイド類又は糖類は、単独又は２種以上の共存のいずれでも良い。特に、ステロール類、ステロイド類及び糖類が共存することは、エストロゲン受容体及び転写因子の活性化が同時に生じるため、相乗的なエストロゲン様効果が発揮される点から、最も好ましい。
【００１８】
なお、抗エストロゲン様作用を示す抗エストロゲン様物質は、エストロゲン受容体には親和性を示さないことから、前記のローヤルゼリー抽出物には含有されないことが好ましい。また、この抗エストロゲン様物質は、テストステロン様作用を呈する場合がある。
【００１９】
次に、ローヤルゼリー原料に有機溶媒を混合し、抽出される抽出物を分離用担体又は樹脂に供し、分離用溶媒により分取されるローヤルゼリー抽出物の製造方法について説明する。
【００２０】
まず、ローヤルゼリー原料の産地は、中国、台湾、日本等のアジア諸国、ヨーロッパ諸国、北アメリカ諸国、南アメリカ諸国のいずれでも良い。生ローヤルゼリー又はローヤルゼリー粉末（生ローヤルゼリーを凍結乾燥等で乾燥させて粉末化したもの）が、取り扱いの点から好ましく、このうち、ローヤルゼリー粉末はより好ましい。生ローヤルゼリーは、通常６５〜６７重量％の水分を含んでいるので、このままクロロホルム、エタノール、メタノール等の有機溶媒で抽出すると、有機溶媒の濃度が低下し、抽出効率が低下するおそれがある。従って、生ローヤルゼリーを原料として使用した場合、これらの有機溶媒で抽出した残渣から再度抽出した画分にもエストロゲン様物質が比較的高濃度に含まれる場合がある。
【００２１】
抽出に用いる有機溶媒は、エタノール、メタノール等の低級アルコール類、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、又はこれらの混合溶媒が好ましい。これらの有機溶媒の量は、抽出効率の点から、前記のローヤルゼリー原料の１重量部に対して１〜１０重量部が好ましく、２〜８重量部がより好ましく、３〜６重量部がさらに好ましい。これらの有機溶媒は、ローヤルゼリー原料とともに混合される。
【００２２】
抽出に用いる容器は、有機溶媒の揮発を防ぐため、密閉容器が好ましく、取り扱いの点から、防爆型容器がより好ましい。抽出の温度は、溶媒の揮発を防ぐ点から、１０〜３０℃が好ましい。抽出の時間は、収率の点から、１〜２４時間が好ましく、２〜１２時間がより好ましく、３〜６時間がさらに好ましい。得られた抽出液は、固液分離され、その上清又は濾液は濃縮乾固されることが好ましい。
【００２３】
次いで、前記の抽出物は分離用担体又は樹脂により分離され、分取される。分離用担体又は樹脂としては、表面が後述のようにコーティングされた、セルロース、アガロース等の多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。０．１〜３００μｍの粒度を有するものが好ましく、粒度が細かい程、精度の高い分離が行なわれるが、分離時間が長い欠点がある。
【００２４】
逆相担体又は樹脂として表面が疎水性化合物でコーティングされたものは、疎水性の高い物質の分離に利用される。陽イオン物質でコーティングされたものは陰イオン性に荷電した物質の分離に適している。また、陰イオン物質でコーティングされたものは陽イオン性に荷電した物質の分離に適している。分配性担体又は樹脂は、シリカゲル（メルク社製）等のように、物質と分離用溶媒の間の分配係数に差異がある場合、それらの物質の単離に利用される。
【００２５】
これらのうち、ローヤルゼリー抽出物の分離に適し、製造コストを低くすることができる点から、吸着性担体又は樹脂、分配性担体又は樹脂、分子篩用担体又は樹脂及びイオン交換担体又は樹脂が好ましい。さらに、ステロール類及びステロイド類は疎水性を示し、分離用溶媒に対する分配係数の差異が大きい点から、逆相担体又は樹脂及び分配性担体又は樹脂はより好ましい。後述するエストロゲン受容体を結合したアフィニティー担体又は樹脂は、特異的な分離ができる点から、最も好ましい。
【００２６】
分離用溶媒として有機溶媒を用いる場合には、有機溶媒に耐性を有する担体又は樹脂が用いられる。また、医薬品製造又は食品製造に利用される担体又は樹脂は好ましい。これらの点から吸着性担体としてダイヤイオン（三菱化学（株）製）及びＸＡＤ−２又はＸＡＤ−４（ロームアンドハース社製）、分子篩用担体としてセファデックスＬＨ−２０（アマシャムファルマシア社製）、分配用担体としてシリカゲルがより好ましい。また、イオン交換担体としてＩＲＡ−４１０（ロームアンドハース社製）、逆相担体としてＤＭ１０２０Ｔ（富士シリシア社製）がより好ましい。これらのうち、ダイヤイオン、セファデックスＬＨ−２０及びＤＭ１０２０Ｔはさらに好ましい。
【００２７】
得られた抽出物は、分離前に分離用担体又は樹脂を膨潤化させるために用いる溶媒に溶解される。この膨潤化のための溶媒は、後述する分離用溶媒が用いられる。この溶媒の量は、分離効率の点から抽出物の重量に対して１〜５０倍量が好ましく、３〜２０倍量がより好ましい。分離の温度としては物質の安定性の点から４〜３０℃が好ましく、１０〜２５℃がより好ましい。
【００２８】
分離用溶媒には、水、又は、水を含有する低級アルコール、親水性溶媒、親油性溶媒が用いられる。低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールが用いられるが、食用として利用されているエタノールが好ましい。セファデックスＬＨ−２０を用いる場合、分離用溶媒には低級アルコールが好ましい。シリカゲルを用いる場合、分離用溶媒にはクロロホルム、メタノール、酢酸又はそれらの混合液が好ましい。ダイヤイオン及びＤＭ１０２０Ｔを用いる場合、分離用溶媒はメタノール、エタノール等の低級アルコール又は低級アルコールと水の混合液が好ましい。
【００２９】
エストロゲン様物質の分離の指標としてエストロゲンに感受性を示すヒト乳癌細胞株、例えばＭＣＦ−７細胞、を用いた増殖試験を用いることが好ましい。一方、抗エストロゲン様物質の分離の指標としてテストステロンに感受性を示すヒト前立腺細胞株、例えばＬＮＣａＰ細胞細胞、を用いた増殖試験を用いることが好ましい。
【００３０】
以上の操作に、低速クロマトグラムシステム、精製用クロマトグラムシステム、膜分離クロマトグラムシステム等のシステム化された装置を用いることが好ましい。
【００３１】
加えて、同一或いは異なる分離用担体又は樹脂を用い、かつ、同一又は異なる分離用溶媒を用い、分離操作を繰返し行なうことが好ましい。以上の操作により、目的とするローヤルゼリー抽出物が液体として得られる。
【００３２】
得られたローヤルゼリー抽出物は製剤化を容易にする目的で、乾燥することが好ましい。乾燥には減圧蒸留装置、真空乾燥機等が用いられる。物質の安定性の点から乾燥の温度は、２０〜５０℃が好ましく、３０〜４０℃がより好ましい。また、真空乾燥機の温度は、２０〜６０℃が好ましく、２５〜４０℃がより好ましい。
【００３３】
また、高圧の液化二酸化炭素で抽出すると、まず水分が抽出され、その後、脂肪酸、ステロール類、ステロイド類等の脂溶性成分が抽出されるために抽出効率が低下する場合がある。従って、生ローヤルゼリーについては、有機溶媒や液化二酸化炭素で抽出する前に、乾燥して粉体化し、抽出し易い状態にすることが好ましい。乾燥方法としては、水分を減少して粉体化できる方法であれば手法は問わないが、例えば凍結乾燥法や減圧乾燥法等が採用できる。これらのローヤルゼリー原料は、水又は緩衝液に溶解又は懸濁され、溶液とされる。
【００３４】
なお、前記のローヤルゼリー原料が脂質分解酵素で分解されたものであることは、ステロール類、ステロイド類又は糖類が遊離される点から、好ましい。すなわち、ローヤルゼリー中の有効成分であるステロール類、ステロイド類は脂質に含有されている。また、糖類の一部は、ステロール類と配糖体を形成している。従って、この脂質を脂質分解酵素で分解することにより、ステロール類、ステロイド類又は糖類が遊離され、抽出が容易になるため、ローヤルゼリー抽出物を収率良く製造することができる。
【００３５】
次に、エストロゲン受容体を結合させたアフィニティー担体又は樹脂を用いるローヤルゼリー抽出物の製造方法について説明する。
用いるエストロゲン受容体を固定した担体又は樹脂は、エストロゲンがエストロゲン受容体に特異的に結合する原理を利用しており、ローヤルゼリー中からローヤルゼリー抽出物を特異的かつ高純度に分離することができる。エストロゲン受容体を粗抽出する材料としては、ラット子宮のほかに、マウス子宮、ウシ子宮、さらに、ＭＣＦ−７細胞等の培養細胞等を使用しても良い。遺伝子工学的又は細胞培養により製造されたヒト由来エストロゲン受容体を用いても良い。
【００３６】
また、エストロゲン受容体を固定するリガンド固定化担体は、シアノブロム活性化担体、リガンド分子に存在するアミノ基、カルボキシル基、チオール基、水酸基等の官能基を利用して担体に固定化するための、種々のリガンド固定用担体又は樹脂が市販されており、これらを使用することができる。また、リガンドに吸着させたエストロゲンを抽出する条件も、ｐＨをアルカリ性や酸性にする方法や、尿素等の変性剤を用いる方法も使用することができる。
【００３７】
このように調製されたエストロゲン受容体を固定した担体又は樹脂をカラムに充填し、ここに前記のローヤルゼリー原料の溶液を供し、分離用溶媒を流して分離を行なう。分離用溶媒としては、塩を含有した緩衝液、有機溶媒、三フッ化酢酸溶液が好ましい。三フッ化酢酸溶液を用いる場合、分取された溶液を乾燥して三フッ化酢酸を除去する。また、その他の溶媒については、減圧蒸留又は凍結乾燥することにより、溶媒を除去する。こうして、目的とするローヤルゼリー抽出物が得られる。
【００３８】
なお、前述したように、抗エストロゲン様物質はエストロゲン受容体には結合しないため、前述した製造方法によれば、抗エストロゲン様物質を除去することができる。
【００３９】
次に、前記のローヤルゼリー抽出物を含有するエストロゲン欠乏症治療剤について説明する。このエストロゲン欠乏症治療剤は、前記のローヤルゼリー抽出物を含有する医薬品製剤である。ここでいうエストロゲン欠乏症とは、骨粗しょう症及び更年期障害であり、エストロゲン欠乏症治療剤は、例えば、骨粗しょう症治療剤又は更年期障害治療剤である。
【００４０】
このエストロゲン欠乏症治療剤は、医薬品製剤の製造に関わる常法に従って医薬品又は医薬部外品として利用される。医薬品として経口剤又は非経口剤として利用され、医薬部外品としては、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、石鹸、歯磨き粉等に配合されて利用される。
【００４１】
前記の経口剤としては、錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、ドリンク剤等が挙げられる。前記の錠剤及びカプセル剤に混和される場合には、結合剤、賦形剤、膨化剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤等とともに用いることができる。前記の錠剤は、シェラック又は砂糖で被覆することもできる。また、前記のカプセル剤の場合には、上記の材料にさらに油脂等の液体担体を含有させることができる。前記のシロップ剤及びドリンク剤の場合には、甘味剤、防腐剤、色素香味剤等を含有させることができる。前記の非経口剤としては、軟膏剤、クリーム剤、水剤等の外用剤の他に、注射剤が挙げられる。
【００４２】
前記の外用剤の基材としては、ワセリン、パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロゴールド等が用いられ、通常の方法によって軟膏剤やクリーム剤等とすることができる。前記の注射剤には、液剤があり、その他、凍結乾燥剤があり、これは使用時に、注射用蒸留水、生理食塩液又は輸液等に無菌的に溶解して用いられる。
【００４３】
このエストロゲン欠乏症治療剤中における前記のローヤルゼリー抽出物の含有量としては、０．１〜３０重量％が好ましく、１〜２０重量％がより好ましく、３〜１０重量％がさらに好ましい。前記のローヤルゼリー抽出物の含有量が０．１重量％未満の場合には、含有量が少なすぎることからエストロゲン様作用を発揮することができないおそれがある。また、３０重量％を越える場合には、製剤を形成している結合剤及び賦形剤等の含有量が相対的に低下し、剤形を維持できないおそれがある。このエストロゲン欠乏症治療剤は、エストロゲン作用に基づかないビタミンＤ製剤等の骨粗しょう症治療剤及び自律神経調節剤等の更年期障害治療剤と併用することができる。
【００４４】
次に、前記のローヤルゼリー抽出物を用いて食品製剤を調製することができる。その場合、ローヤルゼリー抽出物を種々の食品素材又は飲料品素材に添加することによって、粉末状、錠剤状、液状（ドリンク剤等）、カプセル状等の形状の食品製剤とすることができる。また、基材、賦形剤、添加剤、副素材、又は増量剤を適宜添加してもよい。
【００４５】
前記の食品製剤は、１日数回に分けて摂食される。１日の摂食量は０．１〜１０ｇが好ましく、０．３〜５ｇがより好ましく、０．５〜３ｇがさらに好ましい。１日の摂食量が、０．１ｇを下回る場合、十分な効果が発揮されないおそれがある。１日の摂食量が、１０ｇを越える場合、コストが高くなるおそれがある。上記の他に、飴、せんべい、クッキー、飲料等の形態で使用することができる。これらの食品製剤は、骨粗しょう症又は更年期障害の発症が心配な人に対して使用される。
【００４６】
さらに、前記のローヤルゼリー抽出物は、エストロゲン様作用を示すことから、副作用の少ない優れた抗痴呆剤とすることができる。この製剤においては、エストロゲン様物質が中枢神経系の障害及び変性プリオンやウイルスによる神経障害を改善することにより、優れた抗痴呆効果を発揮する。
【００４７】
加えて、前記のローヤルゼリー抽出物は、エストロゲン様作用を示すことから、優れた血栓形成抑制作用を呈する血栓形成抑制剤とすることができる。この製剤においては、エストロゲン様物質が血小板凝集を抑制することにより、優れた血栓形成抑制効果を発揮する。
【００４８】
なお、前記のローヤルゼリー抽出物を有効成分として、化粧品製剤を調製することができる。前記のローヤルゼリー抽出物の含有量は、０．１〜３０重量％が好ましく、０．３〜１５重量％がより好ましく、０．５〜１０重量％がさらに好ましい。この含有量が０．１重量％を下回る場合、にきびやしわに対する防止効果が発揮されないおそれがある。また、この含有量が３０重量％を上回る場合、コストが高くなるおそれがある。
【００４９】
この場合、常法に従って油分、界面活性化剤、ビタミン剤、紫外線吸収剤、増粘剤、保湿剤、副素材等とともに用いることができる。化粧水、クリーム、軟膏、ローション、乳液、パック、オイル、石鹸、洗顔料、香料、オーディコロン、浴用剤、シャンプー、リンス等の形態とすることができる。化粧品製剤の形態は任意であり、溶液状、クリーム状、ペースト状、ゲル状、ジェル状、固形状又は粉末状として用いることができる。
【００５０】
化粧品製剤として皮膚に１日数回に分けて塗布される。１日の塗布量は０．０１〜１０ｇが好ましく、０．０５〜３ｇがより好ましく、０．１〜１ｇがさらに好ましい。１日の塗布量が、０．０１ｇを下回る場合、にきびやしわの防止効果が発揮されないおそれがある。１日の塗布量が、１０ｇを越える場合、コストが高くなるおそれがある。
【００５１】
さらに、前述した食品製剤及び化粧品製剤における副素材としてローヤルゼリー抽出物の物性を安定化させる目的から、プロポリス抽出物を用いることは好ましい。このように構成することにより、ローヤルゼリー抽出物とプロポリス抽出物からなる組成物が得られる。プロポリスは、ローヤルゼリーと同様、ミツバチが作り出す天然物であり、強い抗酸化作用に基づいてローヤルゼリー抽出物を安定に維持することができる。プロポリス抽出物としては、水で抽出される水抽出物及びエタノールで抽出されるエタノール抽出物のいずれでも良い。
【００５２】
さらに、ローヤルゼリー抽出物、脂肪酸及び脂質分解酵素を含有するローヤルゼリー組成物を調製することができる。このローヤルゼリー組成物は、より優れたエストロゲン様作用を発揮するものである。ローヤルゼリー抽出物に含まれるステロール類、ステロイド類及びイソフラボン類の水酸基を有する物質が脂質分解酵素を介し、脂肪酸とエステル結合する。これにより、ステロール類、ステロイド類及び糖類と脂肪酸とのエステル体が形成され、脂溶性が増す。得られた組成物は、脂質から構成される細胞膜を容易に通過し、核内にあるエストロゲン受容体と反応しやすくなり、強いエストロゲン様作用が発揮される。
【００５３】
用いる脂肪酸は、細胞膜の通過性を高めるため、脂溶性が高いものが望まれる点から、炭素数８〜２２個からなるものが好ましい。抗炎症作用を有する点から、ローヤルゼリー中に含まれる１０−ヒドロキシ−２−デセン酸（１０−ＨＤＡ）、大豆、シソ等に含まれるリノレン酸、魚に含まれるエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）やドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）が好ましい。特に、もともとローヤルゼリー中に含有され、取り扱い易い点から、１０−ＨＤＡは最も好ましい。
【００５４】
脂質分解酵素は、脂質を加水分解する反応の他に、ステロール類やステロイド類の水酸基に脂肪酸を導入するエステル合成反応を触媒する酵素である。前記の脂肪酸をステロール類又はステロイド類の水酸基にエステル結合させる。脂質分解酵素としては、リパーゼＡ「アマノ」、リパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇ（（株）天野エンザイム製）リパーゼＰＬ、リパーゼＱＬ（名糖産業（株）製）、リボパン及びリポザイム（ノボザイムス社製）が挙げられる。これらのうち、活性が高く、取り扱い易い点から、リパーゼＱＬが最も好ましい。
【００５５】
ローヤルゼリー組成物における脂肪酸の含有量は、ローヤルゼリー抽出物の１重量部に対し、０．１〜９重量部が好ましく、０．２〜８重量部がより好ましく、０．５〜３重量部がより好ましい。脂肪酸の含有量が０．１重量部を下回る場合、脂肪酸の量が不足し、十分なエステル体が得られないおそれがある。一方、９重量部を上回る場合、ローヤルゼリー抽出物の水酸基の量が不足し、十分なエステル体が得られないおそれがある。
【００５６】
ローヤルゼリー組成物における脂質分解酵素の含有量は、ローヤルゼリー抽出物の１重量部に対し、０．０１〜０．８重量部が好ましく、０．０５〜０．６重量部がより好ましく、０．１〜０．４重量部がより好ましい。脂質分解酵素の含有量が０．０１重量部を下回る場合、酵素量が不足し、十分なエステル体が得られないおそれがある。一方、０．８重量部を上回る場合、製造コストが高くなるおそれがある。
【００５７】
前記の組成物の製造においてはエステル体を容易に形成させる点から、ローヤルゼリー抽出物、脂肪酸及び脂質分解酵素を添加して一定の温度で一定時間処理した後、この反応液を濃縮乾燥することが好ましい。反応温度は収率の点から、２０〜５０℃が好ましく、２５〜４５℃がより好ましい、３０〜４０℃がさらに好ましい。反応時間は収率の点から、１〜４８時間が好ましく、２〜３６時間がより好ましく、４〜２４時間がさらに好ましい。
【００５８】
得られたローヤルゼリー組成物は、そのまま又は前記の種々の添加剤又は賦形剤とともに、食品製剤及び化粧品製剤として利用される。
なお、ローヤルゼリー原料に液化二酸化炭素を混合し、９．８〜５８．８ＭＰａの圧力で抽出される前記ローヤルゼリー抽出物を製造することができる。この方法ではステロール類、ステロイド類及び糖類を高純度で分離するために、高圧の液化二酸化炭素を用いて抽出する。なお、糖類の一部はステロイド類と配糖体を形成しているため、液化二酸化炭素に抽出される。液化二酸化炭素以外の抽出に使用する高圧流体には、亜酸化窒素（Ｎ２Ｏ）、フロン、アンモニア、ジエチルエーテル等があるが、毒性及び引火性がなく、高純度のものが容易に入手でき、安価である等の利点を考慮して、液化二酸化炭素を抽出流体とする。
【００５９】
抽出圧力は、９．８〜５８．８ＭＰａであり、特に、１９．６〜４９ＭＰａが好ましい。この圧力が９．８ＭＰａ未満では脂溶性成分が高圧の液化二酸化炭素に殆ど溶解せず、抽出分離が困難となり、一方、この圧力が５８．８ＭＰａを超えると製品の生産コストに占める装置建設費の割合が大きく、またその分だけ生産コストも高くなり、経済性の点からも好ましくない。
【００６０】
また、抽出の温度は、１０〜６０℃、特に２０〜５５℃が好ましい。１０℃未満の抽出温度では二酸化炭素の水和物が析出し、配管、バルブ等を閉塞し、安定運転が困難になり、一方、６０℃を超えるとローヤルゼリー中に含まれる有効成分が変性し、析出するおそれがある。こうして、目的とするローヤルゼリー抽出物が粉末として得られる。なお、抗エストロゲン様物質は、リポタンパク質が主体であり、液化二酸化炭素には溶解しないため、前述した製造方法では、抽出されない。
【００６１】
なお、前述したエストロゲン受容体に親和性を示す物質は、他の素材からも製造することができる。この素材としては、例えば、オリーブ豆、大豆、大豆醗酵物、大麦若葉、小麦若葉、フランス西海岸松樹皮及びそれらの抽出物である。
【００６２】
以上詳述した本実施形態によれば次のような効果が発揮される。
・　本実施形態で示されるローヤルゼリー抽出物によれば、優れたエストロゲン様作用を発揮することができる。
・　本実施形態で示されるローヤルゼリー抽出物の製造方法によれば、エストロゲン受容体に親和性を示すローヤルゼリー抽出物を効率良く製造することができる。
・　本実施形態で示されるエストロゲン欠乏症治療剤によれば、エストロゲン欠乏症に対してより優れたエストロゲン様作用を発揮することができる。
・　本実施形態で示される食品製剤によれば、骨粗しょう症及び更年期障害の発症が心配な人に対してより優れたエストロゲン様作用を発揮することができる。
・　本実施形態で示されるローヤルゼリー抽出物によれば、優れた痴呆症治療効果及び血栓形成抑制効果を発揮することができる。
・　本実施形態で示される化粧品製剤によれば、にきびやしわの発症が心配な人に対して優れたエストロゲン様作用を発揮することができる。
・　本実施形態で示されるローヤルゼリー組成物によれば、より優れたエストロゲン様作用を発揮することができる。
・　本実施形態で示されるローヤルゼリー原料に液化二酸化炭素を混合し、９．８〜５８．８ＭＰａの圧力で抽出される前記ローヤルゼリー抽出物の製造方法によれば、ローヤルゼリー抽出物を効率良く製造することができる。
【００６３】
【実施例】
以下に実施例、製造例及び試験例を挙げて前記実施形態を更に詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００６４】
（実施例１）
Ｔｈｉｂｏｄｅａｕらの方法（Ｔｈｉｂｏｄｅａｕ，　Ｓ．　Ｎ．，　Ｆｒｅｅｍａｎ，　Ｌ．，　ａｎｄ　Ｊｉａｎｇ，　Ｎ．　Ｓ．，　Ｃｌｉｎ．　Ｃｈｅｍ．，　２７巻，　６８７−６９１頁，　１９８１年）を一部改変してエストロゲン受容体を部分精製した。即ち、ラット子宮を摘出してホモジナイズし、１０００００ｇで１時間超遠心して得られる細胞可溶性画分を凍結乾燥した。次に、ＣＮＢｒ活性化セファロース４Ｂゲルを２０ｇビーカーにとり、５００ｍｌの１ｍＭ　塩酸に懸濁し、室温で約１５分間膨潤させた。
【００６５】
ろ過後、ゲルを１ｍＭ塩酸５００ｍｌで２回洗浄し、０．１ＭＮａＨＣＯ３、　０．５ＭＮａＣｌを含むカップリング緩衝液５００ｍｌに懸濁後、ろ過した。エストロゲン受容体をカップリング緩衝液１００ｍｌに溶解後、ゲルと混合し、穏やかに攪拌しながら４℃で一晩反応させた。反応液を除去後、ゲルに０．２Ｍグリシン溶液（ｐＨ８．３）１００ｍｌを加え、室温で２時間穏やかに攪拌した。ゲルをろ過後、カップリング緩衝液５００ｍｌで洗浄し、０．１Ｍ酢酸、０．５ＭＮａＣｌを含む溶液（ｐＨ４．０）５００ｍｌで洗浄した。
【００６６】
さらに、２０ｍＭ２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール（以下、Ｔｒｉｓと略す）塩酸、０．０１％（ｗ／ｖ）ポリエチレン（２３）ラウリルエステル（以下、Ｂｒｉｊ３５と略す）、０．５ＭＮａＣｌを含む基礎的緩衝液（ｐＨ７．５）１リットルで洗浄した。
【００６７】
加えて、前記の基礎的緩衝液３００ｍｌに充分に懸濁し、カラム（内径２．５ｃｍ、高さ２０ｃｍ）にゲルを充填し、２００ｍｌの前記の基礎的緩衝液を流した。次に、中国産ローヤルゼリー粉末３ｇに水を３０ｍｌ加えて２０℃で１６時間攪拌し、前記のカラムのゲル上に静かに添加した。２０ｍＭＴｒｉｓ塩酸、０．０１％（ｗ／ｖ）Ｂｒｉｊ３５、１ＭＮａＣｌを含む緩衝液（ｐＨ７．５）３００ｍｌおよび２０ｍＭＴｒｉｓ塩酸、０．０１％（ｗ／ｖ）Ｂｒｉｊ３５を含む緩衝液（ｐＨ７．５）２００ｍｌを流した。最後に、０．０５％（ｗ／ｖ）三フッ化酢酸３００ｍｌでカラムに吸着した物質を溶出した。
【００６８】
得られた画分をヒト乳癌細胞ＭＣＦ−７細胞に添加し、その増殖性を調べ、増殖が認められた画分をエストロゲン様作用を有する画分として採取した。同様に、ヒト前立腺細胞ＬＮＣａＰ細胞を用い、抗エストロゲン様作用を有する画分を調べた。エストロゲン様作用を有するが、抗エストロゲン様作用を有さない画分を採取した。
【００６９】
これらの画分を凍結乾燥し、三フッ化酢酸を気化して０．３ｇのローヤルゼリー抽出物を得た。ローヤルゼリー抽出物の収率は、１０％であった。
（実施例２）
中国産ローヤルゼリー凍結乾燥粉末５００ｇに、圧力３９．２ＭＰａ、温度５５℃の液化二酸化炭素を連続的に２時間導入して抽出を行った。２時間後、高圧の液化二酸化炭素は、３．９ＭＰａ、温度３５℃まで減圧および冷却した。
【００７０】
得られた分画をヒト乳癌細胞ＭＣＦ−７細胞に添加し、その増殖性を調べ、増殖が認められた画分をエストロゲン様作用を有する画分として採取した。同様に、ヒト前立腺細胞ＬＮＣａＰ細胞を用い、抗エストロゲン様作用を有する画分を調べた。エストロゲン様作用を有するが、抗エストロゲン様作用を有さない画分を採取した。ローヤルゼリー抽出物４５．１ｇを得た。ローヤルゼリー抽出物の収率は、９．０％であった。
【００７１】
（実施例３）
中国産生ローヤルゼリー５０ｇに９５容量％エタノール１００ｍｌを加えて３時間攪拌し、３０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した（１度目の遠心分離）。この１度目の遠心分離における沈殿画分に９５容量％エタノール１００ｍｌを加えて３時間攪拌し、３０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した（２度目の遠心分離）。１度目の遠心分離における上清画分と２度目の遠心分離における上清画分を混合し、減圧濃縮して粗抽出物１０．２ｇを得た。
【００７２】
クロロホルム・メタノール（９９：１、ｖ／ｖ）混合液で平衡化したシリカゲル６０をカラムに充填した（内径４ｃｍ、高さ１５ｃｍ）。前記の粗抽出物１０ｇをクロロホルム・メタノール（９９：１、ｖ／ｖ）に溶解してカラムに添加した。クロロホルム・メタノール（９９：１、ｖ／ｖ）３００ｍｌで溶出した画分を分取し画分１とした。次に、クロロホルム・メタノール（７：１、ｖ／ｖ）３００ｍｌで溶出した画分を分取し画分２とした。画分１および画分２をそれぞれ減圧濃縮し、クロロホルムおよびメタノールを除いて抽出物を得た。
【００７３】
得られた画分をヒト乳癌細胞ＭＣＦ−７細胞に添加し、その増殖性を調べ、増殖が認められた画分をエストロゲン様作用を有する画分として採取した。同様に、ヒト前立腺細胞ＬＮＣａＰ細胞を用い、抗エストロゲン様作用を有する画分を調べた。エストロゲン様作用を有するが、抗エストロゲン様作用を有さない画分を採取した。
【００７４】
画分１および画分２からそれぞれ抽出物０．２ｇおよび０．６ｇを得た。これらの抽出物を合わせてローヤルゼリー抽出物とした。ローヤルゼリー抽出物の収率は、１．６％であった。
【００７５】
以下に、エストロゲン受容体と親和性を示す物質の受容体結合実験について説明する。
（試験例１）
実施例１〜３で得られた試料及びトリチウム標識したエストラジオールをエストロゲン受容体と混合し、反応させる方法により測定した。すなわち、試験管にトリチウム標識したエストラジオール（シグマ社製）溶液の０．１ｍｌを添加し、さらに、実施例１の試料を０．１ｍｌ添加した。これに、前述の方法により得られたエストロゲン受容体１０ｎｇ／ｍｌ溶液０．１ｍｌを添加して４℃で、２４時間反応させた。
【００７６】
この反応液をメンブランフィルター（アドバンテック東洋（株）製）で濾過し、さらに、リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で洗浄した。フィルター上にトラップされた放射線量をシンチレーションカウンター（島津製作所（株）製）で測定した。トリチウム標識したエストラジオール溶液の濃度を０．０１〜１００ｐｇ／ｍｌの間で変化させ、実験することにより、実施例１及び２中のエストロゲン受容体と親和性を示す物質の含有量を算出した。
【００７７】
その結果、実施例１、２及び３のローヤルゼリー抽出物には、それぞれ３．４、２．５及び１．９重量％のエストロゲン受容体に親和性を示す物質が含有されていた。さらに、得られた画分をヒト乳癌細胞ＭＣＦ−７細胞に添加し、その増殖性を調べ、増殖が認められた画分をエストロゲン様作用を調べた結果、相関性が認められた。
【００７８】
以下に、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）による成分分析について説明する。
（試験例２）
実施例１〜３で得られた試料についてＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣの測定条件としては、カプセルパックＡＧ１２０（（株）資生堂製、直径４．６ｍｍ、長さ２５０ｍｍ）をセットした液体クロマト装置（島津製作所（株）製）を用いた。検体溶液１０μｌを添加後、第１移動相による分離を開始した。２０容量％アセトニトリル及び２％酢酸含有水溶液を第１移動相とし、１００容量％アセトニトリル及び２容量％酢酸含有水溶液を第２移動相とした。クロマト開始から６０分後に第２移動相が１００容量％となるように、設定した。カラム流速は、１ｍｌ／分とし、２８０ｎｍの吸光度を検出させ、クロマトグラフを得た。ピーク面積より、それぞれの成分の含有量を算出した。
【００７９】
その結果、実施例１の試料中には、ステロール類としてデルタ−７−ステロール、シトステロール、２４−メチレンステロール、２８−メチレンステロール、スティグマステロール、カンペストジエノール、デスモステロール、カンペステロール及びそのエステル体が検出された。これらのステロール類の含有量は、１．７重量％であった。
【００８０】
また、ステロイド類として、エストロン、エストラジオール、エストリオール及びそのエステル体が検出された。これらのステロール類の含有量は、１．１重量％であった。
【００８１】
さらに、糖類として、Ｎ−アセチルグルコサミン、アセチルグルコサミン、リボース、デオキシリボースが検出された。これら糖類の含有量は、１．２重量％であった。これらの糖類の一部は、前述したステロール類との配糖体であることが確認された。
【００８２】
なお、実施例２のローヤルゼリー抽出物についても同様の成分が検出され、ステロール類、ステロイド類及び糖類の含有量は、それぞれ１．２、１．１、１．４重量％であった。
【００８３】
また、実施例３のローヤルゼリー抽出物についても同様の成分が検出され、ステロール類、ステロイド類及び糖類の含有量は、それぞれ１．３、１．２及び１．３重量％であった。
【００８４】
（試験例３）
前記の実施例１〜３の試料並びに中国産生ローヤルゼリーについて、ヒト乳癌細胞ＭＣＦ−７細胞を用いたエストロゲン様作用の評価を行った。ＭＣＦ−７細胞は、エストロゲン濃度に依存して増殖するため、エストロゲン様物質のスクリーニングや乳癌治療を目的とした抗癌剤の評価、更に、河川や土壌に含まれる内分泌撹乱物質の評価に汎用されている。ＭＣＦ−７　細胞（ＴＫＧ０４７９、東北大学加齢医学研究所附属医用細胞資源センターより供給を受けた）は、１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ−１６４０培地（シグマ社、＃Ｒ８７５８）で３７℃、５％二酸化炭素存在下で継代培養を行った。
【００８５】
シャーレより０．０２％ＥＤＴＡで細胞を剥離し、ＰＢＳ（１３７ｍＭＮａＣｌ、２．７ｍＭＫＣｌ、１．５ｍＭＫＨ２ＰＯ４、８ｍＭＮａ２ＨＰＯ４、ｐＨ７．３）で洗浄した。Ｋａｔｈｒｙｎらの方法（Ｈｏｒｗｉｔｚ，　Ａ．　Ｂ．，　ａｎｄ　ＭｃＧｕｉｒｅ，　Ｗ．　Ｌ．，　Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２５３巻，　２２２３−２２２８頁，　１９７８年）で活性炭処理したＦＢＳを１０％添加したフェノールレッドを含まない改変型ＲＰＭＩ−１６４０培地（シグマ社、＃Ｒ７５０９）で８０，０００細胞／ｍｌになるように希釈した。９６ウェルプレート（ヌンク社、＃１６７００８）に、１ウェル当たり０．１ｍｌ（８０００細胞）を分注し、３７℃、５％二酸化炭素存在下で２４時間培養した。
【００８６】
エタノールに溶解した前記の試料１μｌを細胞に添加し、４８時間培養後、培地を除いて０．１ｍｌのＰＢＳを加えた。次に、ＭＴＴアッセイキット（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，　Ｉｎｃ．　＃２８８３５；　Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｃｅｌｌ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｋｉｔ）を用い、取り扱い説明書のとおりに反応を行った。細胞数の測定には、マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，　Ｉｎｃ．；　μＱｕａｎｔ）で６３０ｎｍを対照にとり、５７０ｎｍの吸収を測定した。
【００８７】
なお、陰性対照群は試料の代わりにエタノールを添加し、陽性対照群としては１７βエストラジオール（シグマ社、＃Ｅ８８７５）を終濃度１０ｐｇ／ｍｌになるように添加した。各試料および各対照群は、ｎ＝６で行った。また、生細胞数を顕微鏡下で数えた値と、上記マイクロプレートリーダーで測定した値は、比例関係にあることを予備的試験において確認している。
【００８８】
試料のエストロゲン様作用の強さは、陰性対照群における吸光度、即ち、ＭＣＦ−７細胞の増殖を１００としたときの相対値で表した。また、溶媒対照群に対してｔ−ｔｅｓｔを行って、危険率５％未満を有意とし、＊は危険率５％未満、＊＊は危険率１％未満をそれぞれ表した。
【００８９】
【表１】
2004075543.tif 000002
表１に示すように、実施例１〜３のローヤルゼリー抽出物は低濃度でもＭＣＦ−７細胞を増殖させた。この結果、エストロゲン様作用を示すことが確認された。一方、中国産生ローヤルゼリーは、１００μｇ／ｍｌという高濃度でのみＭＣＦ−７細胞を増殖させたが、低濃度では、変化はなかった。したがって、実施例１〜３のローヤルゼリー抽出物に比して生ローヤルゼリーのエストロゲン様作用は軽度であった。
【００９０】
抗エストロゲン様作用を検出する目的で、ヒト前立腺細胞（ＬＮＣａＰ細胞）の増殖性を調べた。
（試験例４）
ＬＮＣａＰ細胞（ＡＴＣＣ　ＣＲＬ−１７４０）をＲＰＭＩ１６４０培地（フェノールレッド不含、１５ｍＭ　ＨＥＰＥＳ含、シグマ社製、＃Ｒ７５０９）＋１０％ウシ胎児血清（活性炭処理）に懸濁し、９６ウェルプレートに各ウェル５，０００細胞／０．１ｍｌずつ播種し、２４時間培養した。実施例１〜３の検体溶液を添加し、４８時間培養後、ＭＴＴアッセイで生細胞数を測定した。陽性対照として５ＤＨＴ（５α−ジヒドロテストステロン）を終濃度１０ｎｇ／ｍｌ加えた。溶媒対照群に対してｔ−ｔｅｓｔを行って、危険率５％未満を有意とし、＊は危険率５％未満、＊＊は危険率１％未満をそれぞれ表した。
【００９１】
【表２】
2004075543.tif 000003
表２に示すように、実施例１〜３のローヤルゼリー抽出物はＬＮＣａＰ細胞を増殖させなかった。一方、原料の中国産生ローヤルゼリーの１００μｇ／ｍｌ及び陽性対照の５ＤＨＴはＬＮＣａＰ細胞を増殖させた。これらの結果、生ローヤルゼリーとは異なり、実施例１〜３のローヤルゼリー抽出物には抗エストロゲン様物質は存在しないものと考えられた。
【００９２】
以下に、卵巣摘出動物を用いたエストロゲン様作用の試験について説明する。この試験は、卵巣を摘出した状態でエストロゲン様物質が子宮重量を増加させるという原理に基づくものである。
【００９３】
（試験例５）
日本エスエルシー株式会社より購入したウイスターラット（雌、１０週齢、ＳＰＦ動物）を用いた。カゼイン、卵白タンパク質、異性化糖を主体とし、エストロゲン様物質を含有しない餌（オリエンタル酵母（株）製）を食餌とした。１週間の予備飼育後、両側の卵巣を摘出した。卵巣摘出１週間後から、実施例１〜３のローヤルゼリー抽出物及び中国産生ローヤルゼリーを水に懸濁し、１０ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で、２８日間経口投与した。
【００９４】
なお、陽性対照として１７βエストラジオールを１ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で、２８日間皮下投与した。投与２８日後に、動物をエーテル麻酔下で、屠殺し、子宮を摘出してその重量を測定した。各群５匹の動物を用いた。値を平均値及び標準偏差で示した。また、溶媒対照群に対してｔ−ｔｅｓｔを行って、危険率５％未満を有意とし、＊は危険率５％未満、＊＊は危険率１％未満をそれぞれ表した。
【００９５】
【表３】
2004075543.tif 000004
表３に示すように、実施例１〜３のローヤルゼリー抽出物を投与された動物の子宮重量は、溶媒対照群の値に比して増加していた。陽性対照である１７βエストラジオールについても子宮重量の増加が認められた。一方、中国産生ローヤルゼリーを投与された動物の子宮重量は、溶媒対照群の値と同程度であり、エストロゲン様作用は認められなかった。これらの結果、実施例１〜３のローヤルゼリー抽出物は、エストロゲン様作用を示すことが確認された。
【００９６】
以下に、ローヤルゼリー抽出物を含有するエストロゲン欠乏症治療剤について説明する。
（実施例４）
実施例１で得られたローヤルゼリー抽出物０．５ｇ、乳糖５．０ｇ及びステアリン酸マグネシウム４．５ｇを混合した。これを常法によりハードカプセルに充填し、１粒５００ｍｇのハードカプセル剤を得た。
【００９７】
（試験例６）
実施例４で得られたエストロゲン欠乏症治療剤を用いて骨粗しょう症改善試験を行なった。すなわち、６０〜７０才の閉経女性３例に、実施例４で得られたハードカプセルを毎日、３食後に１錠ずつ、４週間、経口投与した。投薬前及び投薬４週後の腰椎の骨密度をＸ線骨密度測定装置（ＱＤＲ４５００Ａ、東洋メティック（株）製）を用いて測定した。その結果、３例ともに投薬後の骨密度が増加し、増加率の平均は１１％であった。なお、自覚症状、臨床症状、尿検査値、血液検査値、血液生化学検査値、体温、呼吸、心拍及び血圧等に異常は認められなかった。血液凝固系の亢進及び性器出血等の異常も認められなかった。
【００９８】
以下に、ローヤルゼリー抽出物を含有する食品製剤について説明する。
（実施例５）
実施例１で得られたローヤルゼリー抽出物０．２ｇ、プロポリス抽出物０．２ｇ、異性化糖３ｇ、食用セルロース１．８ｇ、アスコルビン酸０．０１ｇ及び食用香料０．１ｇの比率で混合した。これを常法により打錠し、直径１０ｍｍ、重量０．３ｇの三角型錠剤を得た。
【００９９】
（試験例７）
実施例５で得られた食品製剤を用いて健常人を対象に、更年期障害に対する試験を行なった。すなわち、５０〜６０才の更年期女性３例に、前記の三角型錠剤を１日６錠、７日間摂食させた。摂食前及び摂食後の精神状態を聴取した。その結果、３例ともに、摂食前に比し、摂食後では、イライラ感、のぼせ感、脱力感等からなる不定愁訴が減少した。また、使用感においても特に苦情は聞かれなかった。さらに、尿検査値、血液検査値及び血液生化学的検査値に異常は認められなかった。
【０１００】
以下に、ローヤルゼリー抽出物を含有する化粧品製剤について説明する。
（実施例６）
モノステアリン酸ポリエチレングリコール１ｇ、親油型モノステアリン酸グリセリン１ｇ、馬油エステル２ｇ及びオレイン酸３ｇを加熱し、溶解した。得られた溶液に、実施例１で得られたローヤルゼリー抽出物０．２ｇ、プロポリス抽出物０．２ｇ、プロピレングリコール２ｇ、グリチルリチン酸ジカリウム０．１ｇ、α−トコフェロール０．１ｇ及び精製水７０ｇを添加した。これらを溶解した後、冷却して乳液を得た。
【０１０１】
（試験例８）
実施例６で得られた乳液を使用して、健常人を対象に、にきびに対する改善試験を行なった。すなわち、年齢１２〜１７才の男性３例を対象に、前記の乳液を１日当たり０．５ｇずつ、７日間、顔面部に塗布させた。その結果、３例とも、塗布前に比してにきびの発症が減少した。また、使用感においても特に苦情は聞かれなかった。
【０１０２】
（実施例７）
実施例１で得られたローヤルゼリー抽出物１０ｇと１０−ヒドロキシデセン酸（アピ（株）社製）１０ｇをエタノール１リットルに懸濁した。これにリパーゼＰＬ０．２ｇを添加し、３７℃で、６時間加温した。これを減圧濃縮機により、濃縮乾燥し、ローヤルゼリー組成物１７．８ｇを得た。
【０１０３】
なお、前記実施形態を次のように変更して構成することもできる。
・　前記記載のステロール類、ステロイド類又は糖類として、化学合成されたものを用いても良い。これにより、より効率良く製造することができる。
【０１０４】
・　前記記載のローヤルゼリー抽出物にイソフラボン類、花粉荷又は胎盤エキスを添加しても良い。イソフラボン類、花粉荷又は胎盤エキスは、エストロゲン様物質を含有することから、より優れたエストロゲン様作用を発揮することができる。
【０１０５】
次に、前記実施形態から把握できる技術的思想について以下に記載する。
・　請求項１又は２に記載のローヤルゼリー抽出物にイソフラボン類、花粉荷又は胎盤エキスを添加した組成物。このように構成した場合には、イソフラボン類、花粉荷又は胎盤エキスにエストロゲン様物質が含有されているため、より優れたエストロゲン様効果が発揮される。
【０１０６】
・　ローヤルゼリー原料は脂質分解酵素で分解されたものである請求項３又は４に記載のローヤルゼリー抽出物の製造方法。このように構成した場合には、ローヤルゼリー抽出物を収率良く製造することができる。
【０１０７】
・　請求項１又は２に記載のローヤルゼリー抽出物を含有する化粧品製剤。このように構成した場合には、にきびやしわの防止作用を有し、優れたエストロゲン様効果が発揮される。
【０１０８】
・　請求項１又は２に記載のローヤルゼリー抽出物、脂肪酸及び脂質分解酵素を含有するローヤルゼリー組成物。このように構成した場合には、より優れたエストロゲン様作用が発揮される。
【０１０９】
・　ローヤルゼリー原料に液化二酸化炭素を混合し、９．８〜５８．８ＭＰａの圧力で抽出される請求項１又は２に記載のローヤルゼリー抽出物の製造方法。この製造方法によれば、ローヤルゼリー抽出物を効率良く製造することができる。
【０１１０】
【発明の効果】
この発明は、以上のように構成されているため、次のような効果を奏する。
請求項１及び２に記載の発明のローヤルゼリー抽出物によれば、優れたエストロゲン様作用を発揮することができる。
【０１１１】
請求項３及び４に記載の発明のローヤルゼリー抽出物の製造方法によれば、ローヤルゼリー抽出物を効率良く製造することができる。
請求項５に記載の発明のエストロゲン欠乏症治療剤によれば、エストロゲン欠乏症に対し、優れたエストロゲン様作用を発揮することができる。
【０１１２】
請求項６に記載の発明の食品製剤によれば、骨粗しょう症や更年期障害が心配な人に対し、優れたエストロゲン様作用を発揮することができる。