【手続補正書】
【提出日】平成24年6月29日(2012.6.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを特異的に認識する、抗体またはその断片。
【請求項２】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３、１４、および１５に示されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそれと機能的に等価なＣＤＲを含むＨ（重）鎖Ｖ（可変）領域と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、１７、および１８に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲまたはそれと機能的に等価なＣＤＲを含むＬ（軽）鎖Ｖ領域とを含み、かつＣＤＨ３タンパク質またはその部分ペプチドに結合できる、請求項１記載の抗体またはその断片。
【請求項３】
前記抗体が、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体断片、および一本鎖抗体からなる群より選択される、請求項２記載の抗体またはその断片。
【請求項４】
前記抗体が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１に示されるアミノ酸配列を有するＨ鎖および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２に示されるアミノ酸配列を有するＬ鎖を含む、請求項３記載の抗体またはその断片。
【請求項５】
前記キメラ抗体が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１に示されるアミノ酸配列を有するＨ鎖Ｖ領域を含む、請求項３記載の抗体またはその断片。
【請求項６】
前記キメラ抗体が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２に示されるアミノ酸配列を有するＬ鎖Ｖ領域を含む、請求項３記載の抗体またはその断片。
【請求項７】
前記キメラ抗体が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１に示されるアミノ酸配列を有するＨ鎖Ｖ領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２に示されるアミノ酸配列を有するＬ鎖Ｖ領域を含む、請求項４記載の抗体またはその断片。
【請求項８】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項２記載の抗体またはその断片。
【請求項９】
前記ヒト化抗体が、ヒト抗体ＦＲ（フレームワーク）領域および／またはヒト抗体Ｃ領域をさらに含む、請求項８記載の抗体またはその断片。
【請求項１０】
細胞毒性物質、治療剤、放射性同位体標識、または蛍光標識と結合した、請求項１〜９のいずれか一項記載の抗体またはその断片。
【請求項１１】
前記放射性同位体標識が９０イットリウム（９０Ｙ）および１１１インジウム（１１１Ｉｎ）から選択される、請求項１０記載の抗体またはその断片。
【請求項１２】
以下の段階を含む、対象におけるＣＤＨ３関連疾患の診断マーカーまたは予後診断マーカーの検出方法：
（ａ）該対象から得られた試料または検体を請求項１〜１１のいずれか一項記載の抗体または断片と接触させる段階；および
（ｂ）該試料または該検体中のＣＤＨ３タンパク質を検出する段階。
【請求項１３】
請求項１０または１１記載の抗体または断片と薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、ＣＤＨ３関連疾患を治療または予防するための薬学的組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１１のいずれか一項記載の抗体または断片を含む、ＣＤＨ３関連疾患の診断または予後診断のためのキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
癌特異的分子に対するモノクローナル抗体は、癌治療において有用であることが証明されている（Harris, M.(2004). Lancet Oncol, 5, 292-302（非特許文献１４））。乳癌、悪性リンパ腫、および結腸癌に対するトラスツズマブ（Baselga, J. (2001). Oncology, 61, Suppl 2 14-21（非特許文献１５））、リツキシマブ（Maloney, D.G., et al. (1997). Blood, 90, 2188-2195（非特許文献１６））、およびベバシズマブ（Ferrara, N., et al. (2004). Nat Rev Drug Discov, 3, 391-400（非特許文献１７））のようなヒト化抗体またはキメラ抗体の臨床応用の成功例の他に、他の分子標的に対するいくつかのモノクローナル抗体が開発中であり、これらの抗腫瘍活性が評価中である。これらのモノクローナル抗体は、効果的な治療法のない腫瘍を有する患者に希望を与えるものと期待される。これらのモノクローナル抗体に関するその他の重要な課題の一つは、標的分子を発現している細胞に対するこれらの特異的な反応により、重篤な毒性を伴うことなく癌細胞に対して選択的な治療効果を達成することである（Crist, W.M., et al. (2001). J Clin Oncol, 19, 3091-3102（非特許文献１８）；Wunder, J.S., et al. (1998). J Bone Joint Surg Am, 80, 1020-1033（非特許文献１９）；Ferguson, W.S. and Goorin, A.M. (2001). Cancer Invest, 19, 292-315（非特許文献２０）、国際公開公報第２００２／０９７３９５号（特許文献１）、国際公開公報第２００４／１１０３４５号（特許文献２）、国際公開公報第２００６／１１４７０４号（特許文献３）、国際公開公報第２００７／１０２５２５号（特許文献４））。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
【非特許文献１】Conacci-Sorrell M, et al., J Clin Invest, 109:987-91,(2002)
【非特許文献２】Nose A, et al., Cell, 54:993-1001,(1988)
【非特許文献３】Steinberg MS, et al., Proc Natl Acad Sci USA, 91:206-9,(1994)
【非特許文献４】Takeichi M. Science, 251:1451-5,(1991)
【非特許文献５】Daniel CW, et al., Dev Biol, 169:511-9,(1995)
【非特許文献６】Nose A and Takeichi M. J Cell Biol, 103:2649-58,(1986)
【非特許文献７】Behrens J. Cancer Metastasis Rev, 18:15-30(1999)
【非特許文献８】Takeichi M. Development, 102:639-55(1988)
【非特許文献９】Takeichi M. J Cell Biol 103:2649-58,(1986)
【非特許文献１０】Shimoyama Y, et al., Cancer Res, 49:2128-33(1989)
【非特許文献１１】Gamallo, Modern Pathology, 14:650-654,(2001)
【非特許文献１２】Stefansson, et al., J. Clin. Oncol. 22(7):1242-1252(2004)
【非特許文献１３】Shimoyama, et al., Cancer Res., 49:2128-2133(1989)
【非特許文献１４】Harris, M.(2004)Lancet Oncol, 5, 292-302
【非特許文献１５】Baselga, J.(2001)Oncology, 61, Suppl 2 14-21
【非特許文献１６】Maloney, D.G., et al.(1997)Blood, 90, 2188-2195
【非特許文献１７】Ferrara, N., et al.(2004)Nat Rev Drug Discov, 3, 391-400
【非特許文献１８】Crist, W.M., et al.(2001)J Clin Oncol, 19, 3091-3102
【非特許文献１９】Wunder, J.S., et al.(1998)J Bone Joint Surg Am, 80, 1020-1033
【非特許文献２０】Ferguson, W.S. and Goorin, A.M.(2001)Cancer Invest, 19, 292-315
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
具体的には、本発明は以下に関する：
［１］ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを特異的に認識する、抗体またはその断片。典型的な態様において、本発明の抗体または断片は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３、１４、および１５に示されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそれと機能的に等価な（すなわち同一の抗原性決定基に結合する）ＣＤＲを含むＨ（重）鎖Ｖ（可変）領域と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６、１７、および１８に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲまたはそれと機能的に等価な（すなわち同一の抗原性決定基に結合する）ＣＤＲを含むＬ（軽）鎖Ｖ領域とを含み、かつＣＤＨ３タンパク質またはその部分ペプチドに特異的に結合できる。さらに典型的な態様において、前記抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体断片、および一本鎖抗体からなる群より選択される。
［２］放射性同位体標識で標識することができる、本発明の抗体またはその断片。典型的な態様において、前記放射性同位体標識は、９０イットリウム（９０Ｙ）、１２５ヨウ素（１２５Ｉ）、および１１１インジウム（１１１Ｉｎ）からなる群より選択される。
［３］本発明の抗体またはその断片の薬学的有効量を含む、癌を治療または予防するための組成物。典型的な態様において、前記癌は膵臓癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌、乳癌、胃癌、または肝臓癌である。
［４］本発明の抗体またはその断片の薬学的有効量を対象に投与する段階を含む、該対象における癌を治療または予防するための方法。典型的な態様において、前記癌は膵臓癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌、乳癌、胃癌、または肝臓癌である。
［５］以下の段階を含む、対象におけるＣＤＨ３関連疾患または該疾患の発症素因を診断または予後診断するための方法：
（ａ）該対象由来の試料または検体を本発明の抗体またはその断片と接触させる段階；
（ｂ）該試料または該検体中のＣＤＨ３タンパク質の有無を検出する段階；および
（ｃ）対照と比較したＣＤＨ３タンパク質の相対存在量に基づいて、該対象が該疾患を患っているかまたはその発症リスクを有するかどうかを判定する段階。
典型的な態様において、前記癌は膵臓癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌、乳癌、胃癌、または肝臓癌細胞である。
［６］本発明の抗体または断片を含む、ＣＤＨ３関連疾患の診断または予後診断のためのキット。典型的な態様において、前記癌は膵臓癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌、乳癌、胃癌、または肝臓癌である。
[本発明1001]
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：3に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドを特異的に認識する、抗体またはその断片。
[本発明1002]
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：13、14、および15に示されるアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそれと機能的に等価なＣＤＲを含むＨ（重）鎖Ｖ（可変）領域と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：16、17、および18に示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲまたはそれと機能的に等価なＣＤＲを含むＬ（軽）鎖Ｖ領域とを含み、かつＣＤＨ3タンパク質またはその部分ペプチドに結合できる、本発明1001の抗体またはその断片。
[本発明1003]
前記抗体が、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体断片、および一本鎖抗体からなる群より選択される、本発明1002の抗体またはその断片。
[本発明1004]
前記抗体が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：11に示されるアミノ酸配列を有するＨ鎖および／またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：12に示されるアミノ酸配列を有するＬ鎖を含む、本発明1003の抗体またはその断片。
[本発明1005]
前記キメラ抗体が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：11に示されるアミノ酸配列を有するＨ鎖Ｖ領域を含む、本発明1003の抗体またはその断片。
[本発明1006]
前記キメラ抗体が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：12に示されるアミノ酸配列を有するＬ鎖Ｖ領域を含む、本発明1003の抗体またはその断片。
[本発明1007]
前記キメラ抗体が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：11に示されるアミノ酸配列を有するＨ鎖Ｖ領域およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：12に示されるアミノ酸配列を有するＬ鎖Ｖ領域を含む、本発明1004の抗体またはその断片。
[本発明1008]
前記抗体がヒト化抗体である、本発明1002の抗体またはその断片。
[本発明1009]
前記ヒト化抗体が、ヒト抗体ＦＲ（フレームワーク）領域および／またはヒト抗体Ｃ領域をさらに含む、本発明1008の抗体またはその断片。
[本発明1010]
細胞毒性物質、治療剤、放射性同位体標識、または蛍光標識と結合した、本発明1001〜1009のいずれかの抗体またはその断片。
[本発明1011]
前記放射性同位体標識が90イットリウム（90Ｙ）および111インジウム（111Ｉｎ）から選択される、本発明1010の抗体またはその断片。
[本発明1012]
本発明1010または1011のいずれかの抗体または断片の有効量を対象に投与する段階を含む、該対象におけるＣＤＨ3関連疾患を治療または予防するための方法。
[本発明1013]
以下の段階を含む、対象におけるＣＤＨ3関連疾患または該疾患の発症素因を診断または予後診断するための方法：
（ａ）該対象由来の試料または検体を本発明1001〜1011のいずれかの抗体または断片と接触させる段階；
（ｂ）該試料または該検体中のＣＤＨ3タンパク質を検出する段階；および
（ｃ）対照と比較したＣＤＨ3タンパク質の相対存在量に基づいて、該対象が該疾患を患っているかまたはその発症リスクを有するかどうかを判断する段階。
[本発明1014]
本発明1010または1011の抗体または断片と薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む、ＣＤＨ3関連疾患を治療または予防するための薬学的組成物。
[本発明1015]
本発明1001〜1011のいずれかの抗体または断片を含む、ＣＤＨ3関連疾患の診断または予後診断のためのキット。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
【図１】図１は、細胞株におけるＣＤＨ３発現の結果を示す。上方パネルは各抗体を用いたフローサイトメトリー分析を示す。ＫＬＭ−１およびＨ３５８はＣＤＨ３陽性の癌細胞株である。ＭＩＡＰａＣａ−２は陰性の対照細胞株である。抗ｅｒｂＢ２は陽性対照として使用される。開示した抗ＣＤＨ３抗体クローンの全てが、ＣＤＨ３を発現している細胞を特異的に認識することができる。下方パネルは、癌細胞株におけるＣＤＨ３遺伝子に関する半定量的ＲＴ−ＰＣＲ分析の結果を示す写真である。
【図２Ａ−Ｂ】図２Ａは、各Ａｌｅｘａ  ６４７標識抗体クローンを注射した後の担腫瘍マウスのインビボ蛍光イメージングを示す。蛍光標識された抗体クローンを静脈内投与している。全ての蛍光画像は注射から３、２４、４８、および７２時間後に得た。Ａｌｅｘａ６４７からの蛍光シグナルは擬似着色されており、赤色は高密度であることを意味する。  図２Ｂは、ＥＢＣ１ヒト肺癌異種移植マウスにおける１１１Ｉｎ標識抗ＣＤＨ３抗体の生体内分布をそれぞれ示す（Ｂ：クローン１）。
【図２Ｃ−Ｄ】図２Ｃ−Ｄは、ＥＢＣ１ヒト肺癌異種移植マウスにおける１１１Ｉｎ標識抗ＣＤＨ３抗体の生体内分布をそれぞれ示す（Ｃ：クローン３、Ｄ：クローン４）。
【図２Ｅ−Ｆ】図２Ｅ−Ｆは、ＥＢＣ１ヒト肺癌異種移植マウスにおける１１１Ｉｎ標識抗ＣＤＨ３抗体の生体内分布をそれぞれ示す（Ｅ：クローン５、Ｆ：クローン６）。
【図３Ａ−Ｂ】図３Ａ−Ｂは、１１１Ｉｎ標識クローン＃６抗体または対照抗体の生体内分布を示す。移植腫瘍（Ａ：ＥＢＣ−１、Ｂ：ＳＷ９４８）、肝臓、腎臓、腸、胃、脾臓、膵臓、肺、心臓、筋肉、および骨を注射から４８時間後に単離し、放射能を測定した。黒四角は各組織に対する抗ＣＤＨ３抗体の蓄積を示す。
【図３Ｃ−Ｄ】図３Ｃ−Ｄは、１１１Ｉｎ標識クローン＃６抗体または対照抗体の生体内分布を示す。移植腫瘍（Ｃ：ＫＬＭ−１、Ｄ：Ｈ１３７３）、肝臓、腎臓、腸、胃、脾臓、膵臓、肺、心臓、筋肉、および骨を注射から４８時間後に単離し、放射能を測定した。黒四角は各組織に対する抗ＣＤＨ３抗体の蓄積を示す。
【図３Ｅ】１１１Ｉｎ標識抗ＣＤＨ３キメラ抗体もしくはマウス抗体＃６、または対照としての正常ヒトＩｇＧもしくはマウスＩｇＧ１の生体内分布を示す。移植腫瘍（Ｈ１３７３）、肝臓、腎臓、腸、胃、脾臓、膵臓、肺、心臓、筋肉、および骨を注射から４８時間後に単離し、放射能を測定した。黒四角は各組織に対する抗ＣＤＨ３キメラ抗体の蓄積を示す。白四角は各組織に対する抗ＣＤＨ３マウス抗体の蓄積を示す。
【図４Ａ−Ｂ】図４は、腫瘍増殖に対する９０Ｙ標識抗ＣＤＨ３抗体（クローン＃６）の効果を示す。図４Ａは、９０Ｙ標識抗ＣＤＨ３抗体（クローン＃６）の単回投与が、ヌードマウスに移植されたＥＢＣ−１細胞の増殖を抑制することを示す。図４Ｂは、注射後の腫瘍組織のＨＥ染色を示す。右パネルに示されるように、腫瘍組織の代わりに、エオシンによって染色された線維組織（赤色）が存在する。
【図５Ａ−Ｂ】図５Ａは、９０Ｙ標識抗ＣＤＨ３抗体（クローン＃６）の単回投与が、ヌードマウスに移植されたＳＷ９４８細胞の増殖を抑制することを示す。図５Ｂは、腫瘍外観の写真を示す。９０Ｙ標識抗ＣＤＨ３抗体の注射後、腫瘍は、見かけ上減少している。
【図６】図６は９０Ｙ標識抗ＣＤＨ３抗体（クローン＃６）の単回投与が、ヌードマウスに移植されたＫＬＭ−１細胞の増殖を抑制することを示す。
【図７】図７は９０Ｙ標識抗ＣＤＨ３抗体（クローン＃６）の単回投与および二回投与の両方が、ヌードマウスに移植されたＳＷ９４８細胞の増殖を抑制することを示す。
【図８】図８は９０Y標識抗ＣＤＨ３キメラ抗体（ｃｈ−＃６）の単回投与が、ヌードマウスに移植されたＫＬＭ−１細胞の増殖を抑制することを示す。ＣＨＸおよびＳＣＮとはそれぞれ、ｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＣＨＸ−Ａ”−ＤＴＰＡおよびｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＤＴＰＡを表す。９０Ｙによる放射標識のためこれらの二官能性キレート剤に抗体が抱合されている。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
本発明によって用いられる例示的な抗体産生技術について記載する。
（ｉ）  ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、関連抗原（例えばＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ３）およびアジュバントの複数回の皮下（ｓｃ）注射または腹腔内（ｉｐ）注射により動物中で産生されることが好ましい。二官能性物質または誘導体化物質、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介した結合）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介して）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣ１２、またはＲ’Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（Ｒ’およびＲは異なるアルキル基である）を用いて、免疫されるべき種における免疫原性を有するタンパク質、例えばキーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、またはダイズトリプシン阻害因子に関連抗原を結合させることが有用でありうる。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
所望の特異性、親和性、および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を同定した後に、このクローンを限界希釈法によってサブクローニングし、標準的な方法によって増殖させることができる（Goding, Monoclonal Antibodies : Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)）。この目的に適した培養培地の例として、Ｄ−ＭＥＭ培地またはＲＰＭＩ−１６４０培地が含まれる。さらに、ハイブリドーマ細胞は動物における腹水腫瘍のようなインビボで増殖させることもできる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
インビトロ活性化Ｂ細胞によってヒト抗体を作製することもできる（米国特許５，５６７，６１０および５，２２９，２７５参照）。ＳＣＩＤマウスを用いてヒト抗体を作製する好ましい手段は、共同所有される同時係属中の出願に開示されている。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
（ｖ）  抗体断片
さまざまな技術が抗体断片の産生のために開発されている。従来は、無傷の抗体のタンパク質分解消化を介してこれらの断片が得られていた（例えば、Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24: 107-117 (1992)およびBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)を参照されたい）。しかしながら、これらの断片は現在、組換え宿主細胞によって直接産生することができる。例えば、抗体断片を上記の抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片を大腸菌から直接回収し、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成させてもよい（Carter et al., Bio/Technology 10: 163-167 (1992)）。別のアプローチによれば、Ｆ（ａｂ’）２断片を組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。抗体断片の産生のための他の技術は、当業者には明らかであろう。他の態様において、最適な抗体とは一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。国際公開公報第９３／１６１８５号；米国特許第５，５７１，８９４号；および米国特許第５，５８７，４５８号を参照されたい。また抗体断片は、例えば米国特許第５，６４１，８７０号に記載されているように、「直鎖状抗体」であってもよい。そのような直鎖状抗体断片は単一特異性または二重特異性を有しうる。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
（ｖｉ）  二重特異性抗体
二重特異性抗体とは、少なくとも二つの異なる抗原決定基に対する結合特異性を有する抗体である。例示として、細胞防御機構が癌細胞に集中するように、抗癌細胞マーカー結合アームと、Ｔ細胞受容体分子（例えばＣＤ２またはＣＤ３）のような白血球上の誘発（ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ）分子またはＦｃｙＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃｙＲＩＩ（ＣＤ３２）、およびＦｃｙＲＩＨ（ＣＤ１６）のようなＩｇＧに対するＦｃ受容体（ＦｃｙＲ）に結合するアームとを組み合わせることができる。また二重特異性抗体を用いて、細胞毒性物質を癌細胞に局在化させることもできる。これらの抗体は、癌細胞マーカー結合アームおよび細胞毒性物質（例えばサポリン、抗インターフェロン−ａ、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキサート、または放射性同位体ハプテン）に結合するアームを包含する。二重特異性抗体は、完全長の抗体または抗体断片（例えばＦ（ａｂ）２二重特異性抗体）として調製することができる。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
抗体断片から二重特異性抗体を作製するための技術も文献に記載されている。例えば、二重特異性抗体は化学的結合を用いて調製することができる。Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)では、無傷の抗体をタンパク質分解的に切断して、Ｆ（ａｂ’）２断片を作製する手順について記載している。これらの断片を、ジチオール錯化剤である亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元して、隣接ジチオールを安定化し、分子間ジスルフィド形成を妨害する。次に、作製されたＦａｂ’断片を、チオニトロ安息香酸（ＴＮＢ）誘導体に変換する。その後、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の一つを、メルカプトエチルアミンでの還元によってＦａｂ’−チオールに再変換し、等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合して二重特異性抗体を形成させる。作製された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための作用物質として用いることができる。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６１】
最近の進歩によって大腸菌からＦａｂ’−ＳＨ断片を直接回収することが容易になっており、それを化学的にカップリングして二重特異性抗体を形成することができる。Shalaby et al., J. Exp. Med., 175: 2 17-225 (1992)では、完全にヒト化された二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の産生について記載している。各Ｆａｂ’断片を大腸菌から別々に分泌させ、インビトロにおいて指向性の化学的カップリングに供して、二重特異性抗体を形成させる。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６３】
結合価が２を上回る抗体が意図される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Tutt et al. J Immunol. 147: 60 (1991)。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
本明細書で用いられる治療剤には、癌の治療に有用である任意の化学療法剤が含まれる。化学療法剤の例には、以下が含まれる：チオテパおよびシクロスホスファミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなどのアルキルスルホネート；ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ、およびウレドパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、およびトリメチロールメラミンを含む、エチレンイミンおよびメチルメラミン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノべムビチン、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロソ尿素；アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６ージアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシンなどの抗生物質；メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸アナログ；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリンアナログ；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵなどのピリミジンアナログ；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）；フォリン酸などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグルコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトレキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジクオン；エフロルニチン；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；���ピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメト（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ＆ｃｏｍｍａｔ；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬＯ，  Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，  Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，  ＮＪ）およびドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（ＴＡＸＯＴＥＷ，  Ｒｈ６ｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，  Ａｎｔｏｎｙ，  Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金アナログ；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラミシン；カペシタビン；ならびに、上記いずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体。本治療剤にはまた、腫瘍に対するホルモンの作用を調節または阻害するよう作用する抗ホルモン剤、例えば抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害性４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、オナプリストン、およびトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）を含む）；および抗アンドロゲン剤（例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリン）；ならびに上記いずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体も含まれる。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
カリチアマイシン、メイタンシン（米国特許第５，２０８，０２０号）、トリコテセン、およびＣＣ  １０６５などの低分子毒素の１つまたは複数と抗体との結合体もまた、本明細書において意図される。本発明の好ましい一態様において、１個または複数のメイタンシン分子に抗体を結合させる（例えば、抗体分子あたり約１〜約１０個のメイタンシン分子）。メイタンシンを例えばＭａｙ  ＳＳ−Ｍｅに変換してもよく、メイタンシノイド−抗体結合体を作製するためにこれを還元してＭａｙ−ＳＨ３とし、修飾抗体と反応させることができる（Chari et al. Cancer Research 52: 127-131 (1992)）。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７０】
抗体と細胞毒性物質との結合体は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリイルジトリオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えばアジピミド酸ジメチルＨＣＬ）、活性エステル（例えばスベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えばビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えばビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えばトルエン２，６−ジイソシアネート）、およびビス−活性フッ素化合物（例えば１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）などの、種々の二官能性タンパク質カップリング剤を用いて作製することができる。例えば、リシン免疫毒素はVitetta et al. Science 238: 1098 (1987)に記載のように調製することができる。炭素１４で標識した１−イソチオシアネートベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体に結合させるための例示的なキレート剤である（国際公開公報第９４／１１０２６号を参照されたい）。リンカーは、細胞中での細胞毒薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ感受性のリンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Charm et al. Cancer Research 52: 127-131 (1992)）を用いることができる。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７９】
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いる逆相蒸発法によって作製することができる。リポソームを規定の孔径をもつフィルタから押し出して、所望の直径を有するリポソームを得る。本発明の抗体のＦａｂ’断片を、ジスルフィド交換反応を介して、Martin et al. J. Biol. Chem. 257: 286-288 (1982）に記載のリポソームと結合させることができる。任意で、化学療法剤をリポソームに含めてもよい（Gabizon et al. A National Cancer Inst. 81 (19) 1484 (1989)を参照されたい）。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９４】
Wolff et al. Cancer Research 53: 2560-2565 (1993)に記載されているようにヘテロ二官能性架橋剤を用いて、抗腫瘍活性が増大したホモ二量体抗体を調製することもできる。あるいは、二重Ｆｃ領域を有しかつそれによって補体溶解およびＡＤＣＣ能が増大されうる抗体を設計することもできる（Stevenson et al. Anti-Cancer Drug Design 3: 2 19-230 (1989)を参照されたい）。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９５】
抗体の血清中半減期を増大させるため、例えば米国特許第５，７３９，２７７号に記載されているようにサルベージ受容体結合性の抗原決定基を抗体（とりわけ抗体断片）に組み入れることができる。本明細書で用いる「サルベージ受容体結合性の抗原決定基」という用語は、ＩｇＧ分子のインビボ血清中半減期の増大の原因となるＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域の抗原決定基を指す。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１００
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１００】
あるいは、本発明によると、癌細胞または組織を患者において検出することができる。例えば本発明は、ＣＤＨ３が患者の腫瘍組織において発現している、癌を検出するための方法を提供し、該方法は、以下の段階を含む：抗体または抗体断片を対象に投与して、該抗体または抗体断片を細胞または組織中のＣＤＨ３に特異的に結合させる段階；該細胞または組織中で結合した該抗体を可視化する段階；および、該細胞または組織中での抗体の結合度合いを正常な対照細胞または組織と比較する段階であって、該正常な対照細胞または組織と比べて該患者の細胞または組織に結合した抗体の結合度合いが上昇したことが、該患者における癌の指標となる、段階。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４５】
細胞培養
６種の癌細胞株を用いた：非小細胞肺癌細胞株としてＥＢＣ−１、Ｈ１３７３、およびＨ３５８、膵臓癌細胞株としてＫＬＭ−１およびＭＩＡＰａＣａ−２、結腸直腸癌細胞株としてＳＷ９４８。全ての細胞株はアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（Ｍａｎａｓｓａｓｍ，  ＶＡ）から入手し、５％  ＣＯ２の加湿雰囲気中３７℃で１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充した、ＥＭＥＭ（ＥＢＣ−１、ＭＩＡＰａＣａ−２）、ＲＰＭＩ（Ｈ３５８、ＫＬＭ−１、Ｈ１３７３）、およびＬ−１５（ＳＷ９４８）の中で維持した。
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５５】
キメラマウス／ヒト抗体
マウスモノクローナル抗体クローン＃６に基づくキメラマウス／ヒト抗体ｃｈ−＃６を、ＧＳ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｌｏｎｚａ，  Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて調製した。オーバーラップ伸長ポリメラーゼ連鎖反応によって重鎖と軽鎖の両方を増幅させた。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２３および２４のプライマーを用いたＰＣＲにより重鎖の可変領域を増幅した。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７および２８のプライマーを用いたＰＣＲによりヒトＩｇＧ１の定常領域を増幅した。オーバーラップ伸長のために、これらの二つのＰＣＲ産物には、末端に共通配列を含めた。次にＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３１および２８のプライマーを用いたオーバーラップ伸長ＰＣＲにより、これらの二つのＰＣＲ産物を用いて、重鎖の遺伝子を増幅した。同様に、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２５および２６のプライマーを用いたＰＣＲにより軽鎖の可変領域を増幅した。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２９および３０のプライマーを用いたＰＣＲによりヒトκの定常領域を増幅した。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３２および３０のプライマーを用いたオーバーラップ伸長ＰＣＲにより、末端に共通配列を含むこれらの二つのＰＣＲ産物を用いて、軽鎖の遺伝子を増幅した。軽鎖および重鎖の可変領域の各々に対応する遺伝子を、それぞれ、ＰＣＲによりヒトκの定常領域（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１をコードするＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９）およびヒトＩｇＧ１の定常領域（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２２をコードするＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）を用いて増幅し、制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩおよびＥｃｏＲＩを用いて、それぞれ抗体発現ベクターｐＥＥ１２．４およびｐＥＥ６．４にクローニングした。これらの二つの単一遺伝子ベクター（ＳＧＶ）を制限酵素ＮｏｔＩおよびＰｖｕＩで消化した。消化された重鎖ＳＧＶ  ＤＮＡはｈＣＭＶ−ＭＩＥプロモータ−重鎖−ＳＶ４０転写単位を含み、消化された軽鎖ＳＧＶ  ＤＮＡはＧＳ転写単位およびｈＣＭＶ−ＭＩＥプロモータ−軽鎖−発現カセットを含む。両精製断片を連結して二重遺伝子発現ベクターを構築した。ベクターで大腸菌を形質転換し、次いで調製した。Ｈ鎖とＬ鎖の両方を発現するベクターを２９３Ｔ細胞にトランスフェクトした。培地を無血清培地（ＤＭＥＭ；ＧＩＢＣＯ，  １１９６５−０９２）と交換し、培養上清中に含まれるキメラ抗体をプロテインＡカラムによって精製した。