【手続補正書】
【提出日】平成24年8月20日(2012.8.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標準化されたコロニー形成単位のアッセイ法であって、
造血細胞を含む組織又は体液の検体から取得された細胞を造血前駆細胞のコロニーの成長を支える半固形培地中で培養する工程、
該半固形培地中で該コロニーを洗浄なしに一段で染色する工程、
該コロニーを撮像する工程、及び
前駆細胞のタイプ毎に該コロニーを計数する工程
を含むアッセイ法。
【請求項２】
前記検体中の前駆細胞の数及びタイプに基づいて前記コロニーの機能状態及び生着可能性を決定する工程をさらに含む、請求項１に記載のアッセイ法。
【請求項３】
培養の前に前記検体からＣＤ３４＋細胞の亜集団、光密度富化細胞の亜集団、アフェレーシス産物及びこれらの組合せからなる群から選ばれる１種以上を分離する工程をさらに含む、請求項１に記載のアッセイ法。
【請求項４】
前記造血細胞を含む組織又は体液が血液または臍帯血である、請求項１に記載のアッセイ法。
【請求項５】
実験室情報管理システム内に前記画像を保存する工程をさらに含む、請求項１に記載のアッセイ法。
【請求項６】
染色の前に前記コロニーを撮像する任意選択的工程をさらに含む、請求項１に記載のアッセイ法。
【請求項７】
前記染色剤が臭化３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）である、請求項１に記載のアッセイ法。
【請求項８】
前記コロニーが多系統コロニー形成単位（ＣＦＵ−ＧＭ／Ｅ）、顆粒球−マクロファージコロニー形成単位（ＣＦＵ−ＧＭ）、赤芽球コロニー形成単位（ＣＦＵ−Ｅ）及びこれらの組合せからなる群から選ばれる細胞を含む、請求項１に記載のアッセイ法。
【請求項９】
前記異なる前駆細胞タイプが異なる色に染色される、請求項１に記載のアッセイ法。
【請求項１０】
前記撮像工程が、
高解像度カメラ、
適切な光配向、
広帯域閃光管、及び
陽性検体識別
を含む画像検出及び定量化システムを用いて実施される、請求項１に記載のアッセイ法。
【請求項１１】
検体中の造血前駆細胞数を決定する方法であって、
造血細胞を含む組織又は体液の検体から取得された細胞を造血前駆細胞のコロニーの成長を支える半固形培地中で培養する工程、
該コロニーを洗浄なしに一段で染色する工程、
該コロニーを撮像する工程、及び
該検体中の前駆細胞のタイプ毎に該コロニーを計数する工程
を含む方法。
【請求項１２】
前記撮像が、
高解像度カメラ、
適切な光配向、
広帯域閃光管、及び
陽性検体識別
を含む画像検出及び定量化システムを用いて実施される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記造血細胞を含む組織又は体液が臍帯血、末梢血、胎盤、骨髄及びこれらの組合せからなる群から選ばれる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記コロニーがＣＦＵ−ＧＭ／Ｅ、ＣＦＵ−Ｅ、ＣＦＵ−ＧＭ及びこれらの組合せからなる群から選ばれる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記染色剤が臭化３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記培養工程の前にＣＤ３４＋細胞の亜集団又は光密度富化細胞の亜集団を分離する工程をさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
実験室情報管理システム内に前記画像を保存する工程をさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
染色の前に前記コロニーを撮像する工程をさらに含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
前記検体及び識別を含む陽性検体識別をさらに含む請求項１に記載のアッセイ法であって、該識別が特定の検体及びこれに関連する情報を識別するアッセイ法。
【請求項２０】
前記識別が前記検体に関連づけられるバーコードを含む、請求項１９に記載のアッセイ法。
【請求項２１】
前記検体に関連する前記情報が前記検体の日付、アッセイ情報及びこれらの組合せからなる群から選ばれる１種以上を含む、請求項１９に記載のアッセイ法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
さらに別の実施態様では、検体及び識別を含む陽性検体識別を提供する。その検体は臍帯血単位であり、その識別は特定の臍帯血単位及びこれに関連する情報を識別する。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
標準化されたコロニー形成単位のアッセイ法であって、
造血細胞を含む組織又は体液の検体を取得する工程、
該細胞を造血前駆細胞のコロニーの成長を支える培地中で培養する工程、
該コロニーを染色する工程、
該コロニーを撮像する工程、及び
該前駆細胞のタイプ毎に該コロニーを計数する工程
を含むアッセイ法。
（項目２）
前記検体中の前記前駆細胞の数及びタイプに基づいて前記コロニーの機能状態及び生着可能性を測定する工程をさらに含む、項目１に記載のアッセイ法。
（項目３）
前記培養工程の前にＣＤ３４＋の亜集団、光密度富化細胞、アフェレーシス産物及びこれらの組合せからなる群から選ばれる１種以上を分離する工程をさらに含む、項目１に記載のアッセイ法。
（項目４）
前記造血細胞を含む組織又は体液が血液である、項目１に記載のアッセイ法。
（項目５）
前記造血細胞を含む組織又は体液が臍帯血である、項目１に記載のアッセイ法。
（項目６）
実験室情報管理システム内に前記画像を保存する工程をさらに含む、項目１に記載のアッセイ法。
（項目７）
前記染色の前に前記コロニーを撮像する任意選択的工程をさらに含む、項目１に記載のアッセイ法。
（項目８）
前記コロニーが一段で染色される、項目１に記載のアッセイ法。
（項目９）
前記染色剤が臭化３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）である、項目１に記載のアッセイ法。
（項目１０）
前記コロニーが多系統コロニー形成単位（ＣＦＵ−ＧＭ／Ｅ）、顆粒球−マクロファージコロニー形成単位（ＣＦＵ−ＧＭ）、赤芽球コロニー形成単位（ＣＦＵ−Ｅ）及びこれらの組合せからなる群から選ばれる細胞を含む、項目１に記載のアッセイ法。
（項目１１）
前記異なる前駆細胞タイプが異なる色に染色される、項目１に記載のアッセイ法。
（項目１２）
画像検出及び定量化システムであって、
高解像度カメラ、
適切な光配向、
広帯域閃光管、及び
陽性検体識別
を含む画像検出及び定量化システム。
（項目１３）
前記撮像工程が項目１２に記載の画像検出及び定量化システムを用いて実施される、項目１に記載のアッセイ法。
（項目１４）
検体中の造血前駆細胞数を測定する方法であって、
造血細胞を含む組織又は体液の検体を取得する工程、
該細胞を造血前駆細胞のコロニーの成長を支える培地中で培養する工程、
該コロニーを染色する工程、
該コロニーを撮像する工程、及び
該検体中の該前駆細胞のタイプ毎に該コロニーを計数する工程
を含む方法。
（項目１５）
前記撮像が項目１２に記載のシステムを用いて実施される、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記造血細胞を含む組織又は体液が臍帯血、末梢血、胎盤、骨髄及びこれらの組合せからなる群から選ばれる、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
前記コロニーがＣＦＵ−ＧＭ／Ｅ、ＣＦＵ−Ｅ、ＣＦＵ−ＧＭ及びこれらの組合せからなる群から選ばれる、項目１４に記載の方法。
（項目１８）
前記染色剤が臭化３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム（ＭＴＴ）である、項目１４に記載の方法。
（項目１９）
前記培養工程の前にＣＤ３４＋の亜集団又は光密度富化細胞を分離する工程をさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目２０）
実験室情報管理システム内に前記画像を保存する工程をさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目２１）
前記染色の前に前記コロニーを撮像する工程をさらに含む、項目１４に記載の方法。
（項目２２）
検体及び識別を含む陽性検体識別であって、該検体が臍帯血検体であり、該識別が特定の臍帯血単位及びこれに関連する情報を識別する陽性検体識別。
（項目２３）
前記識別が前記臍帯血検体に関連づけられるバーコードを含む、項目２２に記載の陽性検体識別。
（項目２４）
前記臍帯血単位に関連する前記情報が前記検体の日付、アッセイ情報及びこれらの組合せからなる群から選ばれる１種以上を含む、項目２２に記載の陽性検体識別。