【手続補正書】
【提出日】平成24年3月21日(2012.3.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィブロイン溶液から骨の修復、補強、又は置換のための移植可能な材料を調製する方法であって、
−フィブロイン溶液からゲルを調製するステップと、
−ゲルを１つ以上のステップの凍結及び解凍にさらす事によって材料を調製するステップと
を含み、
前記フィブロイン溶液からゲルを調製するステップは、リン酸イオンの存在下で実施される方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５３】
移植可能な本材料のゆっくりとした吸収性は、本材料が、徐々に且つ完全に、機能性内在骨への置換を可能にする。
本願発明はその実施態様として以下を含む。
第１項：
フィブロイン溶液から骨の修復、補強、又は置換のための移植可能な材料を調製する方法であって、
−フィブロイン溶液からゲルを調製するステップと、
−ゲルを１つ以上のステップの凍結及び解凍にさらす事によって材料を調製するステップと
を含み、
前記フィブロイン溶液からゲルを調製するステップは、リン酸イオンの存在下で実施される方法。
第２項：
前記材料を、引き続き架橋剤を用いて処理するさらなるステップを含む、第１項に記載の前記方法。
第３項：
フィブロイン溶液から骨の修復、補強、又は置換のための移植可能な材料を調製する方法であって、
−フィブロイン溶液からゲルを調製するステップと、
−ゲルを１ステップ以上の凍結及び解凍にさらす事によって材料を調製するステップと
を含み、
前記方法が、引き続いてイソシアン酸塩を用いて処理するさらなるステップを含む方法。
第４項：
前記ゲルを、リン酸を用いて処理し、若しくは前記フィブロイン溶液から前記ゲルを調製するステップをリン酸イオンの存在下で実施する、第３項に記載の前記方法
第５項：
前記フィブロイン溶液から前記ゲルを調製するステップが、前記フィブロイン溶液をアルカリン溶液で処理するステップを含む、第１乃至第４項のいずれか１項に記載の前記方法。
第６項：
前記フィブロイン溶液から前記ゲルを調製するステップが、リン酸イオンを含有するゲル化試薬を含む、第１乃至第２並びに第４乃至第５項のいずれか１項に記載の前記方法。
第７項：
前記材料は、前記材料を架橋剤で処理する前にフィブロイン−アパタイトを形成するため、前記材料をカルシウムイオンで処理する、第２乃至第６項のいずれか１項に記載の前記方法。
第８項：
前記材料が、略pH７．０及び略pH１０．０の溶液中でカルシウムイオンを用いて処理される、第７項に記載の前記方法。
第９項： 
前記カルシウムイオンが、塩化カルシウム溶液によって提供される、第７及び第８項に記載の前記方法。
第１０項：
前記材料を、余分な塩化カルシウムを除去するためエタノールで洗浄し、且つ前記フィブロインをシルク第ＩＩ状態へと変換する、第９項に記載の前記方法。
第１１項：
前記材料が、洗浄ステップ後に乾燥される、第１０項に記載の前記方法。
第１２項：
前記架橋剤が、イソシアン酸ヘキシル（ＨＭＩ）、イソシアン酸メチル（ＭＩＣ）、  ヘキサメチレンジイソシアネート（ＨＤＩ）、メチレンジフェニルジイソシアネート（ＭＤＩ）、トルエンジイソシアネート酸（ＴＤＩ）、及びイソホロンジイソシアネート（ＩＰＤＩ）を含む、第２乃至第１１項のいずれか１項に記載の前記方法。
第１３項：
前記架橋剤による処理が、実質的にフィブロイン非膨張剤を用いて実施される、第２乃至第１２項のいずれか１項に記載の前記方法。
第１４項：
前記方法は、前記フィブロイン溶液からゲルを調製するステップの前に、骨固定具の一方の端部を前記フィブロイン溶液へ挿入するステップをさらに含む、第１から第１３項のいずれか１項に記載の前記方法。
第１５項：
前記方法は、１回以上の濯ぐステップで、前記材料から過剰な架橋剤を除去するさらなるステップを含む、第２から第１４項のいずれか１項に記載の前記方法。
第１６項：
前記方法は、過剰なＣＮＯ基を加水分解するため水で前記材料を濯ぐさらなるステップを含む、第１から第１５項のいずれか１項に記載の前記方法。
第１７項：
前記方法は、前記材料を乾燥するさらなるステップを含む、第１６項に記載の前記方法。
第１８項：
前記材料を殺菌する、第１から第１７項のいずれか１項に記載の方法。
第１９項：
前記フィブロイン溶液が再生フィブロイン溶液である、第１〜第１８項のいずれか１項に記載の前記方法。
第２０項：
前記再生フィブロイン溶液が、絹又は絹繭を、一価カチオン及び一価アニオン水溶液を含むイオン試薬を用いて処理するステップを含む方法によって調製される、第１９項に記載の方法であって、前記カチオン及びアニオンが、少なくとも１．０５オングストロームのイオン半径を有し、２５℃で、０．００１乃至−０．０５のＪｏｎｅｓ−Ｄｏｌｅ  Ｂ係数を有する前記方法。
第２１項：
再生フィブロイン溶液から骨の修復、補強、又は置換のための移植可能な材料を調製する方法であって、前記再生フィブロイン溶液は、一価カチオン及び一価アニオンの水溶液を含むイオン試薬を用いて、絹又は絹繭を処理するステップを含む方法によって調製され、前記カチオン及び前記アニオンが、少なくとも１．０５オングストロームのイオン半径を有し、２５℃で、０．００１乃至−０．０５のＪｏｎｅｓ−Ｄｏｌｅ  Ｂ係数を有する方法。
第２２項：
前記イオン性試薬が、水酸化アンモニウム、塩化アンモニウム、臭化アンモニウム、硝酸アンモニウム、水酸化カリウム、塩化カリウム、臭化カリウム、硝酸カリウム、水酸化ルビジウム、塩化ルビジウム、臭化ルビジウム、又は硝酸ルビジウムのうち、１つ以上の水溶液を含む、第２０乃至第２１項のいずれか１項に記載の前記方法。
第２３項：
前記絹又は絹繭が精練される、第２０乃至第２２のいずれか１項に記載の方法。
第２４項：
前記絹又は絹繭の精練は、前記絹又は絹繭のセリシンを選択的に除去し、セリシンを開裂するが、フィブロインをほとんど又は全く開裂しないタンパク質分解酵素を使用する、第２３項に記載の前記方法。
第２５項：
前記絹又は絹繭を乾燥するさらなるステップを含む、第２０乃至２４項のいずれか１項に記載の前記方法。
第２６項：
前記乾燥ステップが、イオン試薬処理及び精練の両ステップが実施された後に実施される、第２３項又は第２４項に従属した場合、第２５項に記載の前記方法。
第２７項：
前記方法が、カオトロピック剤中で、前記精練された絹及び絹繭を溶解するさらなるステップを含む、第２３乃至２６項のいずれか１項に記載の方法。
第２８項：
前記絹及び絹繭を溶解するステップが、
温度が、６０℃未満；
カオトロピック剤の濃度が、９．５Ｍ未満；
期間が、２４時間未満、
のいずれか１つの条件またはこれらを組み合わせた条件下で実施することができる、第２７項に記載の前記方法。
第２９項：
前記カオトロピック剤が、臭化リチウム、チオシアン酸リチウム、又はチオシアン酸グアニジンのうち１つ以上を含む、第２７又は第２８項のいずれか１項に記載の前記方法。
第３０項：
前記カオトロピック剤が、透析によって、前記溶液から除去される、第２７乃至第２９項のいずれか１項に記載の前記方法。
第３１項：
前記再生フィブロイン溶液が、略１０ｗ／ｖ  ％の濃度に濃縮される、第１９乃至第３０項のいずれか１項に記載の前記方法。
第３２項：
第１乃至第３１項のいずれか１項に記載の方法で得られる、移植可能な修復、骨の補強、又は骨の置換材料。
第３３項：
前記材料は、
−Ｊ−積分法によって測定された６％歪みで略１ｋＪｍ−３乃至略２０ｋＪm−３間の圧縮靭性と、
−５％歪みで略０．１ＭＰａ乃至略２０ＭＰａ間の圧縮強度と、
−５％歪みで略１００ＭＰａ乃至略５００ＭＰａ間の平均圧縮弾性率
の特性を有し、骨修復、補強又は置換材料として使用する移植可能なフィブロイン材料。
第３４項：
フィブロイン−アパタイトを含む、第３３項に記載の前記材料。
第３５項：
前記アパタイトが、フィブロイン−アパタイトナノ複合材料として前記材料全体に一様に分布している、第３４項に記載の前記材料。
第３６項：
前記アパタイトが前記フィブロイン材料表面に塗布面として存在する、第３４又は第３５項のいずれか１項に記載の前記材料。
第３７項：
前記材料が、相互に接続した微細孔を含む、第３３乃至第３６項のいずれか１項に記載の前記材料。
第３８項：
前記平均微細孔径が、略１００μｍ乃至略３００μｍの間である、第３７項に記載の前記材料。
第３９項：
少なくとも前記アパタイトの一部が、前記微細孔の壁内に存在する、第３７又は第３８項のいずれか１項に記載の前記材料。
第４０項：
前記材料が、略１５ｗ／ｖ％乃至略７０ｗ／ｖ％のリン酸カルシウム成分を含む、第３３乃至第３９項のいずれか１項に記載の前記材料。
第４１項：
前記材料が、フィブロイン−フィブロイン架橋結合を含む、第３３乃至第４０項のいずれか１項に記載の前記材料。
第４２項：
前記材料が、付着性の粗面を含む、第３５乃至第４１項のいずれか１項に記載の前記材料。
第４３項：
前記材料が、骨髄間質細胞、間葉系幹細胞、骨形成性細胞株からの細胞、血液細胞、若しくは対象患者から採取した細胞を含む、組織培養細胞で播種される、第３３乃至第４２項のいずれか１項に記載の前記材料。
第４４項：
１つ以上の骨の実質的に全体又は一部の骨を修復、補強、若しくは置換する、若しくは第３２乃至第４３項のいずれか１項に記載の移植可能な前記材料を含む整形外科的用途の骨移植代用品としての移植片。
第４５項：
前記移植片が、前記材料に埋め込まれた骨固定具を含む、第４４項に記載の移植。
第４６項：
前記骨固定具が、前記材料に埋め込まれた複数の糸又はフィラメントを含む、第４４項に記載の前記移植片。
第４７項：
第３２乃至第４３項のいずれか１項に記載の移植可能な材料の使用、あるいは、１つ以上の骨の実質的に全体又は一部の骨を修復、補強、若しくは置換する、若しくは、骨移植代用品、又は整形外科的用途における固定具として、第４４乃至第４６項のいずれか１項に記載の移植片。