【手続補正書】
【提出日】平成24年3月29日(2012.3.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
変異体グリコシル化パターンを呈するよう修飾された糖タンパク質であって、前記変異体グリコシル化パターンが、式（Ｉ）または（ＩＩ）の構造：
【化１】
2012503656.tif 000001
を有するＮ連結型グリカンを含む、糖タンパク質。
【請求項２】
Ｎ連結型グリカンを含む、修飾された宿主細胞によって産生される抗体であって、修飾されていない宿主細胞によって産生される対応する抗体と比較して、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）に対して高い結合親和性を、および／または、Ｆｃγ受容体ＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）に対して低い結合親和性を有し、それによりＦｃγＲＩＩＩａおよび／またはＦｃγＲＩＩｂを発現するエフェクター細胞に対してＡＤＣＣ（抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用）活性を増大させる、抗体。
【請求項３】
Ｎ連結型グリカンを含む、修飾された宿主細胞によって産生される抗体であって、対応する修飾されていない宿主細胞によって産生される対応する抗体と比較して、高いＡＤＣＣ活性を呈し、かつ前記高いＡＤＣＣ活性が、高親和性Ｆｃγ受容体であるＦｃγＲＩＩＩａ  １５８Ｖ／Ｖを発現するエフェクター細胞、および低親和性Ｆｃγ受容体であるＦｃγＲＩＩＩａ  １５８Ｆ／ＦまたはＦｃγＲＩＩＩａ  １５８Ｆ／Ｖを発現するエフェクター細胞に対してである、抗体。
【請求項４】
Ｎ連結型グリカンが、式（Ｉ）または（ＩＩ）の構造：
【化２】
2012503656.tif 000002
を有する、請求項２または３に記載の抗体。
【請求項５】
前記Ｎ連結型グリカンが、前記抗体のＦｃ領域に結合する、請求項２または３に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体が、癌抗原に結合する、請求項２または３に記載の抗体。
【請求項７】
前記癌抗原が、ＨＥＲ２、免疫グロブリンεＦｃ受容体ＩＩ、Ａｌｋ−１、ＣＤ２０、ＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦ受容体、ＦＧＦ受容体、ＮＧＦ受容体、ＰＤＧＦ受容体、ＥｐＣａｍ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５１、ＣＤ５５、ＣＤ８０、ＣＤ９５、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＴＬＡ−４、ムチン１、ムチン１６、エンドグリン、メソテリン受容体、ノゴ（Ｎｏｇｏ）受容体、葉酸受容体、ＣＸＣＲ４、インスリン様増殖因子受容体、ガングリオシドＧＤ３、ならびにαおよびβインテグリンからなる群から選択される、請求項６に記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体が、阻害抗体である、請求項２または３に記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体が、ＩｇＧ抗体である、請求項２または３に記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体が、修飾されていないＣＨＯ細胞クローンであるＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ  ＃ＣＣＬ−６１およびＣＲＬ−９６１８）またはＣＨＯ−ＤＧ４４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１２６０９−０１２）によって産生される対応する抗体と比較して、低親和性ＦｃＲであるＦｃγＲＩＩＩａ  １５８Ｆ／ＦまたはＦｃγＲＩＩＩａ  １５８Ｆ／Ｖを発現するエフェクター細胞に対して高いＡＤＣＣ（抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用）活性を有する、請求項２または３に記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体が、修飾されていないＣＨＯ細胞クローンであるＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ  ＃ＣＣＬ−６１およびＣＲＬ−９６１８）またはＣＨＯ−ＤＧ４４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１２６０９−０１２）によって産生される対応する抗体と比較して、高親和性ＦｃＲであるＦｃγＲＩＩＩａ  １５８Ｖ／Ｖを発現するエフェクター細胞に対して高いＡＤＣＣ（抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用）活性を有する、請求項２または３に記載
の抗体。
【請求項１２】
前記宿主細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項２または３に記載の抗体。
【請求項１３】
前記宿主細胞が、ＮＳ０、ＳＰ２／０、ＨＥＫ２９３、ＰＥＲ．Ｃ６、およびＹＢ２／０細胞からなる群から選択される、請求項２または３に記載の抗体。
【請求項１４】
前記宿主細胞が、ミエローマ細胞である、請求項２または３に記載の抗体。
【請求項１５】
前記エフェクター細胞が、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、請求項２または３に記載の抗体。
【請求項１６】
前記抗体が、抗Ｈｅｒ２抗体である、請求項２または３に記載の抗体。
【請求項１７】
前記エフェクター細胞が、ＮＫ細胞、単球、マクロファージ、または多形核ニュートラフィルス（ｎｅｕｔｒａｐｈｉｌｓ）（ＰＭＮ）である、請求項２または３に記載の抗体。
【請求項１８】
式（Ｉ）または（ＩＩ）の構造
【化３】
2012503656.tif 000003
を有する、Ｎ連結型グリカン。
【請求項１９】
請求項１８に記載のＮグリカンを含む、単離した糖タンパク質。
【請求項２０】
前記糖タンパク質が抗体である、請求項１９に記載の糖タンパク質。
【請求項２１】
前記糖タンパク質が酵素である、請求項１９に記載の糖タンパク質。
【請求項２２】
前記Ｎ連結型グリカンが、前記抗体のＦｃ領域に結合する、請求項２０に記載の糖タンパク質。
【請求項２３】
前記抗体が癌抗原に結合する、請求項２０に記載の糖タンパク質。
【請求項２４】
前記癌抗原が、ＨＥＲ２、免疫グロブリンεＦｃ受容体ＩＩ、Ａｌｋ−１、ＣＤ２０、ＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦ受容体、ＦＧＦ受容体、ＮＧＦ受容体、ＰＤＧＦ受容体、ＥｐＣａｍ、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５１、ＣＤ５５、ＣＤ８０、ＣＤ９５、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＴＬＡ−４、ムチン１、ムチン１６、エンドグリン、メソテリン受容体、ノゴ受容体、葉酸受容体、ＣＸＣＲ４、インスリン様増殖因子受容体、ガングリオシドＧＤ３、ならびにαおよびβインテグリンからなる群から選択される、請求項２３に記載の糖タンパク質。
【請求項２５】
前記抗体が、Ｎ連結型グリカンの実質的に均質な集団を産生する修飾された宿主細胞によって産生される、請求項２０に記載の糖タンパク質。
【請求項２６】
前記抗体が、修飾されていないＣＨＯ細胞クローンであるＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ  ＃ＣＣＬ−６１およびＣＲＬ−９６１８）またはＣＨＯ−ＤＧ４４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１２６０９−０１２）によって産生される対応する抗体と比較して、高いＡＤＣＣ（抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用）活性を有する、請求項２０に記載の糖タンパク質。
【請求項２７】
前記抗体が、修飾されていないＣＨＯ細胞クローンであるＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ  ＃ＣＣＬ−６１およびＣＲＬ−９６１８）またはＣＨＯ−ＤＧ４４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１２６０９−０１２）によって産生される対応する抗体と比較して、ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体に対する高い結合親和性を有する、請求項２０に記載の糖タンパク質。
【請求項２８】
前記抗体が阻害抗体である、請求項２０に記載の糖タンパク質。
【請求項２９】
前記抗体がＩｇＧ抗体である、請求項２０に記載の糖タンパク質。
【請求項３０】
（ａ）前記修飾された糖タンパク質をコードする異種性ポリヌクレオチド配列を提供すること；および
（ｂ）宿主細胞が、式（Ｉ）または（ＩＩ）の構造
【化４】
2012503656.tif 000004
を有する変異体グリコシル化パターンを有するＮ連結型グリカンを産生する宿主細胞において前記修飾された糖タンパク質を発現させることを含む、修飾された糖タンパク質を産生する方法。
【請求項３１】
前記宿主細胞が、無血清培地において維持される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記宿主細胞が、懸濁培養において維持される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記修飾された糖タンパク質が、抗体である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
修飾されていない親宿主細胞と比較して、グルコース、ガラクトース、マンノース、およびグルコサミンからなる群から選択される１つ以上の糖部分のレベルの変化によって特徴づけられる変異体グリコシル化パターンを有するＮ連結型グリカンを産生する、修飾された宿主細胞。
【請求項３５】
実質的に均質なパターンのＮ連結型グリカンを呈する糖タンパク質を産生する単離された宿主細胞。
【請求項３６】
前記実質的に均質なパターンのＮ連結型グリカンが、質量分析によって分離される単一ピークによって立証される、請求項３５に記載の宿主細胞。
【請求項３７】
Ｎ連結型グリカンを有する修飾された抗体を産生する能力によって特徴づけられる修飾された宿主細胞であって、前記抗体が、修飾されていない宿主細胞によって産生される対応する抗体と比較して、Ｆｃγ受容体ＩＩＩａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）に対する高い結合親和性、および／またはＦｃγ受容体ＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ）に対する低い結合親和性を呈し、それにより、ＦｃγＲＩＩＩａおよび／またはＦｃγＲＩＩｂを発現するエフェクター細胞に対するＡＤＣＣ（抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用）活性を増大させる、宿主細胞。
【請求項３８】
前記増大されたＡＤＣＣ活性が、高親和性Ｆｃγ受容体であるＦｃγＲＩＩＩａ  １５８Ｖ／Ｖを発現するエフェクター細胞、および低親和性Ｆｃγ受容体であるＦｃγＲＩＩＩａ  １５８Ｆ／ＦまたはＦｃγＲＩＩＩａ  １５８Ｆ／Ｖを発現するエフェクター細胞に対してである、請求項３７に記載の宿主細胞。
【請求項３９】
対応する修飾されていない宿主細胞よりも高いＡＤＣＣ活性を呈する抗体を産生する、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項４０】
前記Ｎ連結パターンが、式ＩまたはＩＩの構造：
【化５】
2012503656.tif 000005
を有する、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項４１】
前記宿主細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項４２】
前記細胞が、ミエローマ細胞である、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項４３】
前記細胞が、少なくともおよそ６０回の継代後に変異体グリコシル化パターンを維持する、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の宿主細胞。
【請求項４４】
請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の宿主細胞を含む培地。
【請求項４５】
無血清培地において請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の複数の宿主細胞を含む培養発酵槽。
【請求項４６】
（ａ）複数の真核細胞を提供すること；
（ｂ）無作為な遺伝子突然変異を前記複数の真核細胞に導入すること；および
（ｃ）式（Ｉ）または（ＩＩ）の構造
【化６】
2012503656.tif 000006
を有するＮ連結パターンによって特徴づけられる変異体グリコシル化パターンを呈する少なくとも１つの細胞を前記複数の細胞から選択することを含む、変異体グリコシル化パターンを用いて真核細胞を選択する方法。
【請求項４７】
前記遺伝子突然変異が、化学的変異原によって誘導される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
選択された前記真核細胞が、前記無作為な遺伝子突然変異に供されていない対応する細胞のＡＤＣＣ活性と比較して高いＡＤＣＣ活性を呈する抗体を産生する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
選択された前記真核細胞が、前記無作為の遺伝子突然変異に供されていない対応する細
胞によって産生される対応する抗体と比較して、ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体に対する高い結合親和性を有する抗体を産生する、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
前記真核細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５１】
前記真核細胞が、ＮＳ０、ＳＰ２／０、ＨＥＫ２９３、ＰＥＲ．Ｃ６、およびＹＢ２／０細胞からなる群から選択される、請求項４６に記載の方法。
【請求項５２】
前記真核細胞が、ミエローマ細胞である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５３】
選択された前記細胞が、少なくともおよそ６０回の継代後に前記変異体グリコシル化パターンを維持する、請求項４６に記載の方法。
【請求項５４】
選択された前記細胞が、無血清培地において増殖する、請求項４６に記載の方法。
【請求項５５】
選択された前記細胞が、懸濁液において増殖する、請求項４６に記載の方法。
【請求項５６】
選択された前記細胞が、異種性糖タンパク質をコードする異種性配列を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項５７】
選択された前記細胞が、実質的に均質なパターンのＮ連結型グリカンを発現する、請求項４６に記載の方法。
【請求項５８】
前記Ｎ連結型グリカンの実質的に均質なパターンが、質量分析によって分離される単一のピークによって立証される、請求項５７に記載の方法。