【手続補正書】
【提出日】平成26年6月24日(2014.6.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンフィリポ症候群Ｂ型（サンフィリポＢ）を処置するための組成物であって、前記組成物は、組換えα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（Ｎａｇｌｕ）タンパク質を含み、そして前記組成物は、対象に髄腔内投与されることを特徴とする、組成物。
【請求項２】
前記組換えＮａｇｌｕタンパク質が、Ｎａｇｌｕドメインと、リソソーム標的化部分とを含む融合タンパク質であり、
必要に応じて、前記Ｎａｇｌｕドメインが、配列番号１（成熟ヒトＮａｇｌｕタンパク質）と少なくとも８０％、もしくは少なくとも９５％同一のアミノ酸配列、または配列番号１（成熟ヒトＮａｇｌｕタンパク質）と同一のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記リソソーム標的化部分が、ＩＧＦ−ＩＩ部分であり、必要に応じて、前記ＩＧＦ−ＩＩ部分が、
（ｉ）成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号３）と少なくとも７０％、少なくとも８０％、もしくは少なくとも９０％同一のアミノ酸配列、または
（ｉｉ）成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号３）の残基８〜６７を含むアミノ酸配列
を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記融合タンパク質が、Ｎａｇｌｕドメインと、リソソーム標的化部分との間にリンカーをさらに含み、
必要に応じて、前記リンカーが１以上のＧＡＰ配列をさらに含み、
必要に応じて、前記リンカーが、配列番号６の残基７２１〜７７７に対応する、ＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰのアミノ酸配列を含む、請求項２または３に記載の組成物。
【請求項５】
請求項２〜４のいずれか一項に記載の組成物であって、
（ｉ）前記リソソーム標的化部分が、ＮａｇｌｕドメインのＣ末端に直接または前記リンカーを介して融合するか、または
（ｉｉ）前記リソソーム標的化部分が、ＮａｇｌｕドメインのＮ末端に直接または前記リンカーを介して融合する、組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物であって、
（ｉ）前記組換えタンパク質が、ヒト細胞から産生されるか、または
（ｉｉ）前記組換えタンパク質が、ＣＨＯ細胞から産生される、組成物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物であって、
（ｉ）前記髄腔内投与が、１以上の標的脳組織内にＮａｇｌｕタンパク質の送達を生じさせ、必要に応じて、
（ａ）前記１以上の標的脳組織が、灰白質、白質、室周囲領域、軟膜クモ膜、髄膜、新皮質、小脳、大脳皮質の深部組織、分子層、尾状核／被殻領域、中脳、脳橋もしくは髄質の深部およびその組合せからの組織からなる群から選択され、そして／または
（ｂ）前記Ｎａｇｌｕタンパク質が、ニューロン、グリア細胞、血管周囲細胞および／または髄膜細胞に送達され、
（ｉｉ）前記Ｎａｇｌｕタンパク質が、脊髄内のニューロンにさらに送達され、
（ｉｉｉ）前記髄腔内投与が、末梢標的組織においてＮａｇｌｕタンパク質の全身送達をさらに生じさせ、必要に応じて、前記末梢標的組織が、肝臓、腎臓および／または心臓から選択され、
（ｉｖ）前記髄腔内投与が、脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内でリソソーム局在化を生じさせ、
（ｖ）前記髄腔内投与が、前記脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内でリソソーム貯蔵を減少させ、必要に応じて、前記リソソーム貯蔵が、ＬＡＭＰ−１染色によって決定され、そして前記リソソーム貯蔵が、対照と比較して少なくとも２０％、４０％、５０％、６０％、８０％、９０％、１倍、１．５倍または２倍減少し、そして／あるいは、
（ｖｉ）前記髄腔内投与が、ニューロン内で空胞化を減少させ、必要に応じて、前記ニューロンがプルキンエ細胞を含む、組成物。
【請求項８】
前記髄腔内投与が、前記脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内でＮａｇｌｕ酵素活性を増加させ、必要に応じて、
（ｉ）前記Ｎａｇｌｕ酵素活性が、対照と比較して少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍増加し、そして／または
（ｉｉ）前記ＨＮＳ酵素活性の増加が、少なくとも約１０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、６０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、７０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、８０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、９０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１５０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、２００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇまたは６００ｎｍｏｌ／時・ｍｇであり、あるいは
（ｉｉｉ）前記Ｎａｇｌｕ酵素活性が腰部領域で増加され、必要に応じて、前記腰部領域でのＮａｇｌｕ酵素活性の増加が、少なくとも約５００ｎｍｏｎ／時・ｍｇ、６００ｎｍｏｎ／時・ｍｇ、７００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、８００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、９００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１５００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、６０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、７０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、８０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、９０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇまたは１０，０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記髄腔内投与が、サンフィリポ症候群Ｂ型の少なくとも１つの症状または特徴の強度の減少、重症度もしくは頻度の低下または発症の遅延を生じさせ、必要に応じて、
サンフィリポＢ疾患の少なくとも１つの症状または特徴が、難聴、発達性言語障害、運動能力の欠損、多動、知能障害、攻撃性および／または睡眠障害である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
（ｉ）前記髄腔内投与が、静脈内投与と組み合わせて用いられ、必要に応じて、前記静脈内投与が、１ヶ月に１回以下の頻度であるか、または２ヶ月に１回以下の頻度であり、あるいは
（ｉｉ）前記髄腔内投与が、静脈内投与の不在で用いられ、そして／または
（ｉｉｉ）前記髄腔内投与が、２週間に１回、１ヶ月に１回、または２ヶ月に１回実施されるか、そして／または
（ｉｖ）前記髄腔内投与が、同時免疫抑制療法を併用せずに用いられる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組換えＮａｇｌｕタンパク質が、約２０ｍｇ／ｍＬを超える濃度で投与される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
治療用融合タンパク質であって、
Ｎａｇｌｕドメインと、
リソソーム標的化部分とを含み、
前記治療用融合タンパク質は一旦投与されると、リソソームを標的にして、ｉｎ  ｖｉｖｏで治療的に活性になる、治療用融合タンパク質。
【請求項１３】
前記Ｎａｇｌｕドメインが、配列番号１（成熟ヒトＮａｇｌｕタンパク質）と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み、必要に応じて、
前記Ｎａｇｌｕドメインが、配列番号１（成熟ヒトＮａｇｌｕタンパク質）と同一のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の治療用融合タンパク質。
【請求項１４】
前記リソソーム標的化部分が、ＩＧＦ−ＩＩ部分であり、必要に応じて、
（ｉ）前記ＩＧＦ−ＩＩ部分が、成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号３）と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含むか、または
（ｉｉ）前記ＩＧＦ−ＩＩ部分が、成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号３）の残基８〜６７を含むアミノ酸配列を含む、請求項１２または１３に記載の治療用融合タンパク質。
【請求項１５】
前記融合タンパク質が、前記Ｎａｇｌｕドメインと、前記リソソーム標的化部分との間にリンカーをさらに含み、必要に応じて、
（ｉ）前記リンカーが、配列番号６の残基７２１〜７７７に対応する、ＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧ  ＧＧＧＡＰのアミノ酸配列を含み、そして／または
（ｉｉ）前記リソソーム標的化部分が、ＮａｇｌｕドメインのＣ末端に直接または前記リンカーを介して融合する、請求項１３〜１４のいずれか一項に記載の治療用融合タンパク質。
【請求項１６】
前記治療用融合タンパク質が、配列番号６（全長Ｎａｇｌｕ−ＩＧＦ−ＩＩ融合タンパク質）と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の治療用融合タンパク質。
【請求項１７】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物または請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の治療用融合タンパク質を含む、薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、５ｍｇ／ｍｌより高い濃度の前記タンパク質を含む、薬学的組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物または請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の治療用融合タンパク質を含む、薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、５０ｍＭ以下のリン酸塩を含む、薬学的組成物。
【請求項１９】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物または請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の治療用融合タンパク質を含む、薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は、界面活性剤を含む、薬学的組成物。
【請求項２０】
前記界面活性剤は、約０．００１％〜０．５％の濃度で存在する、請求項１９に記載の薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
いくつかの実施形態では、リソソームターゲッティング部分は、ＩＧＦ−ＩＩ残基である。特定の実施形態では、ＩＧＦ−ＩＩ残基は、成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号３）と少なくとも７０％（例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％）同一のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＩＧＦ−ＩＩ残基は、成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号３）と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、ＩＧＦ−ＩＩ残基は、成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号３）と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＧＦ−ＩＩ残基は、成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号３）の８〜６７の残基を含むアミノ酸配列を含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
さらに別の態様では、本発明は、配列番号６（全長のＮａｇｌｕ−ＩＧＦ−ＩＩ融合タンパク質）と少なくとも７０％（例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％）同一のアミノ酸配列を含む治療用融合タンパク質を提供する。一旦投与されると、該治療用融合タンパク質は、リソソームを標的にして、ｉｎ  ｖｉｖｏで治療的に活性になる。
本発明の好ましい実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
サンフィリポ症候群Ｂ型（サンフィリポＢ）の治療方法であって、治療を必要とする対象に組換えα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ（Ｎａｇｌｕ）タンパク質を髄腔内投与するステップを含む、方法。
（項目２）
前記組換えＮａｇｌｕタンパク質が、Ｎａｇｌｕドメインと、リソソーム標的化部分とを含む融合タンパク質である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記Ｎａｇｌｕドメインが、配列番号１（成熟ヒトＮａｇｌｕタンパク質）と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記Ｎａｇｌｕドメインが、配列番号１（成熟ヒトＮａｇｌｕタンパク質）と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、項目２に記載の方法。
（項目５）
前記Ｎａｇｌｕドメインが、配列番号１（成熟ヒトＮａｇｌｕタンパク質）と同一のアミノ酸配列を含む、項目２に記載の方法。
（項目６）
前記リソソーム標的化部分が、ＩＧＦ−ＩＩ残基である、項目２〜５のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
前記ＩＧＦ−ＩＩ残基が、成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号３）と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記ＩＧＦ−ＩＩ残基が、成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号３）と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、項目６に記載の方法。
（項目９）
前記ＩＧＦ−ＩＩ残基が、成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号３）と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、項目６に記載の方法。
（項目１０）
前記ＩＧＦ−ＩＩ残基が、成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号３）の８〜６７の残基を有するアミノ酸配列を含む、項目６に記載の方法。
（項目１１）
前記融合タンパク質が、Ｎａｇｌｕドメインと、リソソーム標的化部分との間にリンカーをさらに含む、項目２〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
前記リンカーが、ＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧ（配列番号４）のうちの１以上のアミノ酸配列を含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記ＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧ（配列番号４）のアミノ酸配列が、タンデム反復で存在する、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記リンカーが１以上のＧＡＰ配列をさらに含む、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記リンカーが、ＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＡＰ（配列番号５）のアミノ酸配列を含む、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記リソソーム標的化部分が、ＮａｇｌｕドメインのＣ末端に直接または前記リンカーを介して融合する、項目２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１７）
前記リソソーム標的化部分が、ＮａｇｌｕドメインのＮ末端に直接または前記リンカーを介して融合する、項目２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
（項目１８）
前記組換えタンパク質が、ヒト細胞から産生される、項目１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目１９）
前記組換えタンパク質が、ＣＨＯ細胞から産生される、項目１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２０）
前記髄腔内投与が、１以上の標的脳組織内にＮａｇｌｕタンパク質の送達を生じさせる、項目１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
（項目２１）
前記１以上の標的脳組織が、灰白質、白質、室周囲領域、軟膜クモ膜、髄膜、新皮質、小脳、大脳皮質の深部組織、分子層、尾状核／被殻領域、中脳、脳橋または髄質の深部およびその組合せの組織からなる群から選択される、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記Ｎａｇｌｕタンパク質が、ニューロン、グリア細胞、血管周囲細胞および／または髄膜細胞に送達される、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２３）
前記Ｎａｇｌｕタンパク質が、脊髄内のニューロンにさらに送達される、項目１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
（項目２４）
前記髄腔内投与が、末梢標的組織においてＮａｇｌｕタンパク質の全身送達をさらに生じさせる、項目１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
（項目２５）
前記末梢標的組織が、肝臓、腎臓および／または心臓から選択される、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記髄腔内投与が、脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内でリソソーム局在化を生じさせる、項目１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
前記髄腔内投与が、前記脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内でリソソーム貯蔵を減少させる、項目１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２８）
前記リソソーム貯蔵が、ＬＡＭＰ−１染色によって決定される、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記リソソーム貯蔵が、対照と比較して少なくとも２０％、４０％、５０％、６０％、８０％、９０％、１倍、１．５倍または２倍減少する、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記髄腔内投与が、ニューロン内で空胞化を減少させる、項目１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
（項目３１）
前記ニューロンがプルキンエ細胞を含む、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記髄腔内投与が、前記脳標的組織、脊髄ニューロンおよび／または末梢標的組織内でＮａｇｌｕ酵素活性を増加させる、項目１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
（項目３３）
前記Ｎａｇｌｕ酵素活性が、対照と比較して少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍増加する、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
ＨＮＳ酵素活性の増加が、少なくとも約１０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、６０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、７０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、８０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、９０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１５０ｎｍｏｌ／ｈｒ／ｍｇ、２００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５５０ｎｍｏｌ／時・ｍｇまたは６００ｎｍｏｌ／時・ｍｇである、項目３２または３３に記載の方法。
（項目３５）
前記Ｎａｇｌｕ酵素活性が腰部領域で増加する、項目３２に記載の方法。
（項目３６）
前記腰部領域でのＮａｇｌｕ酵素活性の増加が、少なくとも約５００ｎｍｏｎ／時・ｍｇ、６００ｎｍｏｎ／時・ｍｇ、７００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、８００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、９００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、１５００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、２０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、３０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、４０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、５０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、６０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、７０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、８０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇ、９０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇまたは１０，０００ｎｍｏｌ／時・ｍｇである。項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記髄腔内投与が、サンフィリポ症候群Ｂ型の少なくとも１つの症状または特徴の強度の減少、重症度もしくは頻度の低下または発症の遅延を生じさせる、項目１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
（項目３８）
サンフィリポＢ疾患の少なくとも１つの症状または特徴が、難聴、発達性言語障害、運動能力の欠損、多動、知能障害、攻撃性および／または睡眠障害である、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記髄腔内投与が、２週間に１回実施される、項目１〜３８のいずれか１項に記載の方法。
（項目４０）
前記髄腔内投与が、１ヶ月に１回実施される、項目１〜３８のいずれか１項に記載の方法。
（項目４１）
前記髄腔内投与が、２ヶ月に１回実施される、項目１〜３８のいずれか１項に記載の方法。
（項目４２）
前記髄腔内投与が、静脈内投与と組み合わせて用いられる、項目１〜４１のいずれか１項に記載の方法。
（項目４３）
前記静脈内投与が、１ヶ月に１回以下の頻度である、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記静脈内投与が、２ヶ月に１回以下の頻度である、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
前記髄腔内投与が、静脈内投与の不在で用いられる、項目１〜４１のいずれか１項に記載の方法。
（項目４６）
前記髄腔内投与が、同時免疫抑制療法を併用せずに用いられる、項目１〜４５のいずれか１項に記載の方法。
（項目４７）
前記Ｎａｇｌｕ融合タンパク質が、約２０ｍｇ／ｍＬを超える濃度で投与される、項目１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
（項目４８）
治療用融合タンパク質であって、
Ｎａｇｌｕドメインと、
リソソームターゲティング部分とを含み、
該治療用融合タンパク質は一旦投与されると、リソソームを標的にして、ｉｎ  ｖｉｖｏで治療的に活性になる、治療用融合タンパク質。
（項目４９）
前記Ｎａｇｌｕドメインが、配列番号１（成熟ヒトＮａｇｌｕタンパク質）と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含む、項目４８に記載の治療用融合タンパク質。
（項目５０）
前記Ｎａｇｌｕドメインが、配列番号１（成熟ヒトＮａｇｌｕタンパク質）と同一のアミノ酸配列を含む、項目４８に記載の治療用融合タンパク質。
（項目５１）
前記リソソーム標的化部分が、ＩＧＦ−ＩＩ残基である、項目４８〜５０のいずれか１項に記載の治療用融合タンパク質。
（項目５２）
前記ＩＧＦ−ＩＩ残基が、成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号２）と少なくとも７０％同一のアミノ酸配列を含む、項目５１に記載の治療用融合タンパク質。
（項目５３）
前記ＩＧＦ−ＩＩ残基が、成熟ヒトＩＧＦ−ＩＩ（配列番号２）の８〜６７の残基を有するアミノ酸配列を含む、項目５１に記載の治療用融合タンパク質。
（項目５４）
前記融合タンパク質が、前記Ｎａｇｌｕドメインと、前記リソソーム標的化部分との間にリンカーをさらに含む、項目４８〜５３のいずれか１項に記載の治療用融合タンパク質。
（項目５５）
前記リンカーが、ＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＡＰ（配列番号４）のアミノ酸配列を含む、項目５４に記載の治療用融合タンパク質。
（項目５６）
前記リソソーム標的化部分が、ＮａｇｌｕドメインのＣ末端に直接または前記リンカーを介して融合する、項目５４または５５に記載の治療用融合タンパク質。
（項目５７）
治療用融合タンパク質であって、配列番号５（全長Ｎａｇｌｕ−ＩＧＦ−ＩＩ融合タンパク質）と少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を含み、該治療用融合タンパク質は一旦投与されると、リソソームを標的にして、ｉｎ  ｖｉｖｏで治療的に活性になる、治療用融合タンパク質。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８９】
リソソーム標的化部分は、リソソーム酵素をコードするポリペプチドのＮ末端もしくはＣ末端に融合する、または内部に挿入されることができる。リソソーム標的化部分は、リソソーム酵素ポリペプチドに直接融合することができる、
またはリンカーもしくはスペーサーによってリソソーム酵素ポリペプチドから分離されることができる。アミノ酸リンカーまたはスペーサーは、通常、可動性であるように、または２つのタンパク質残基の間のα−ヘリックスなどの構造を挿入するように設計される。リンカーまたはスペーサーは、配列ＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧ（配列番号４）、ＧＡＰ、ＧＧＧＧＧＰ（配列番号７）などのように比較的短いこともあり得、または例えば、１０〜５０個（例えば、１０〜２０個、１０〜２５個、１０〜３０個、１０〜３５個、１０〜４０個、１０〜４５個、１０〜５０個）などの長いアミノ酸長でもあり得る。いくつかの実施形態では、種々の短いリンカー配列は、タンデム反復で存在し得る。例えば、好適なリンカーは、タンデム反復で存在するＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧ（配列番号４）のアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施形態では、そのようなリンカーは、ＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧ（配列番号４）の配列を構成する１以上のＧＡＰ配列をさらに含み得る。例えば、好適なリンカーは、ＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＡＰ（配列番号５）のアミノ酸配列を含み得る。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８９】
表５
ＭＥＡＶＡＶＡＡＡＶＧＶＬＬＬＡＧＡＧＧＡＡＧＤＥＡＲＥＡＡＡＶＲＡＬＶＡＲＬＬＧＰＧＰＡＡＤＦＳＶＳＶＥＲＡＬＡＡＫＰＧＬＤＴＹＳＬＧＧＧＧＡＡＲＶＲＶＲＧＳＴＧＶＡＡＡＡＧＬＨＲＹＬＲＤＦＣＧＣＨＶＡＷＳＧＳＱＬＲＬＰＲＰＬＰＡＶＰＧＥＬＴＥＡＴＰＮＲＹＲＹＹＱＮＶＣＴＱＳＹＳＦＶＷＷＤＷＡＲＷＥＲＥＩＤＷＭＡＬＮＧＩＮＬＡＬＡＷＳＧＱＥＡＩＷＱＲＶＹＬＡＬＧＬＴＱＡＥＩＮＥＦＦＴＧＰＡＦＬＡＷＧＲＭＧＮＬＨＴＷＤＧＰＬＰＰＳＷＨＩＫＱＬＹＬＱＨＲＶＬＤＱＭＲＳＦＧＭＴＰＶＬＰＡＦＡＧＨＶＰＥＡＶＴＲＶＦＰＱＶＮＶＴＫＭＧＳＷＧＨＦＮＣＳＹＳＣＳＦＬＬＡＰＥＤＰＩＦＰＩＩＧＳＬＦＬＲＥＬＩＫＥＦＧＴＤＨＩＹＧＡＤＴＦＮＥＭＱＰＰＳＳＥＰＳＹＬＡＡＡＴＴＡＶＹＥＡＭＴＡＶＤＴＥＡＶＷＬＬＱＧＷＬＦＱＨＱＰＱＦＷＧＰＡＱＩＲＡＶＬＧＡＶＰＲＧＲＬＬＶＬＤＬＦＡＥＳＱＰＶＹＴＲＴＡＳＦＱＧＱＰＦＩＷＣＭＬＨＮＦＧＧＮＨＧＬＦＧＡＬＥＡＶＮＧＧＰＥＡＡＲＬＦＰＮＳＴＭＶＧＴＧＭＡＰＥＧＩＳＱＮＥＶＶＹＳＬＭＡＥＬＧＷＲＫＤＰＶＰＤＬＡＡＷＶＴＳＦＡＡＲＲＹＧＶＳＨＰＤＡＧＡＡＷＲＬＬＬＲＳＶＹＮＣＳＧＥＡＣＲＧＨＮＲＳＰＬＶＲＲＰＳＬＱＭＮＴＳＩＷＹＮＲＳＤＶＦＥＡＷＲＬＬＬＴＳＡＰＳＬＡＴＳＰＡＦＲＹＤＬＬＤＬＴＲＱＡＶＱＥＬＶＳＬＹＹＥＥＡＲＳＡＹＬＳＫＥＬＡＳＬＬＲＡＧＧＶＬＡＹＥＬＬＰＡＬＤＥＶＬＡＳＤＳＲＦＬＬＧＳＷＬＥＱＡＲＡＡＡＶＳＥＡＥＡＤＦＹＥＱＮＳＲＹＱＬＴＬＷＧＰＥＧＮＩＬＤＹＡＮＫＱＬＡＧＬＶＡＮＹＹＴＰＲＷＲＬＦＬＥＡＬＶＤＳＶＡＱＧＩＰＦＱＱＨＱＦＤＫＮＶＦＱＬＥＱＡＦＶＬＳＫＱＲＹＰＳＱＰＲＧＤＴＶＤＬＡＫＫＩＦＬＫＹＹＰＲＷＶＡＧＳＷ（配列番号２）
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９１】
表６
ＤＥＡＲＥＡＡＡＶＲＡＬＶＡＲＬＬＧＰＧＰＡＡＤＦＳＶＳＶＥＲＡＬＡＡＫＰＧＬＤＴＹＳＬＧＧＧＧＡＡＲＶＲＶＲＧＳＴＧＶＡＡＡＡＧＬＨＲＹＬＲＤＦＣＧＣＨＶＡＷＳＧＳＱＬＲＬＰＲＰＬＰＡＶＰＧＥＬＴＥＡＴＰＮＲＹＲＹＹＱＮＶＣＴＱＳＹＳＦＶＷＷＤＷＡＲＷＥＲＥＩＤＷＭＡＬＮＧＩＮＬＡＬＡＷＳＧＱＥＡＩＷＱＲＶＹＬＡＬＧＬＴＱＡＥＩＮＥＦＦＴＧＰＡＦＬＡＷＧＲＭＧＮＬＨＴＷＤＧＰＬＰＰＳＷＨＩＫＱＬＹＬＱＨＲＶＬＤＱＭＲＳＦＧＭＴＰＶＬＰＡＦＡＧＨＶＰＥＡＶＴＲＶＦＰＱＶＮＶＴＫＭＧＳＷＧＨＦＮＣＳＹＳＣＳＦＬＬＡＰＥＤＰＩＦＰＩＩＧＳＬＦＬＲＥＬＩＫＥＦＧＴＤＨＩＹＧＡＤＴＦＮＥＭＱＰＰＳＳＥＰＳＹＬＡＡＡＴＴＡＶＹＥＡＭＴＡＶＤＴＥＡＶＷＬＬＱＧＷＬＦＱＨＱＰＱＦＷＧＰＡＱＩＲＡＶＬＧＡＶＰＲＧＲＬＬＶＬＤＬＦＡＥＳＱＰＶＹＴＲＴＡＳＦＱＧＱＰＦＩＷＣＭＬＨＮＦＧＧＮＨＧＬＦＧＡＬＥＡＶＮＧＧＰＥＡＡＲＬＦＰＮＳＴＭＶＧＴＧＭＡＰＥＧＩＳＱＮＥＶＶＹＳＬＭＡＥＬＧＷＲＫＤＰＶＰＤＬＡＡＷＶＴＳＦＡＡＲＲＹＧＶＳＨＰＤＡＧＡＡＷＲＬＬＬＲＳＶＹＮＣＳＧＥＡＣＲＧＨＮＲＳＰＬＶＲＲＰＳＬＱＭＮＴＳＩＷＹＮＲＳＤＶＦＥＡＷＲＬＬＬＴＳＡＰＳＬＡＴＳＰＡＦＲＹＤＬＬＤＬＴＲＱＡＶＱＥＬＶＳＬＹＹＥＥＡＲＳＡＹＬＳＫＥＬＡＳＬＬＲＡＧＧＶＬＡＹＥＬＬＰＡＬＤＥＶＬＡＳＤＳＲＦＬＬＧＳＷＬＥＱＡＲＡＡＡＶＳＥＡＥＡＤＦＹＥＱＮＳＲＹＱＬＴＬＷＧＰＥＧＮＩＬＤＹＡＮＫＱＬＡＧＬＶＡＮＹＹＴＰＲＷＲＬＦＬＥＡＬＶＤＳＶＡＱＧＩＰＦＱＱＨＱＦＤＫＮＶＦＱＬＥＱＡＦＶＬＳＫＱＲＹＰＳＱＰＲＧＤＴＶＤＬＡＫＫＩＦＬＫＹＹＰＲＷＶＡＧＳＷ（配列番号１）
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９９】
Ｎａｇｌｕ−ＩＧＦＩＩ分子は、Ｎａｇｌｕと８−６７ＩＧＦＩＩとの間に挿入されたリンカー配列を含む。このリンカー配列は、各端が隣接する２つの「ＧＡＰ」配列と、各反復の間に１つの「ＧＡＰ」配列とを含む、３つのタンデム反復「ＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧ」（配列番号４）からなっていた。リンカーの実際の配列は、以下の表７に示す。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２００
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２００】
表７：リンカー配列
Ｎａｇｌｕｅ
ＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＧＧＧＧＧＡＰ−ＩＧＦＩＩ（配列番号５）
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０２】
表８：組換えＮａｇｌｕ−ＩＧＦＩＩ融合タンパク質のタンパク質配列
ＤＥＡＲＥＡＡＡＶＲＡＬＶＡＲＬＬＧＰＧＰＡＡＤＦＳＶＳＶＥＲＡＬＡＡＫＰＧＬＤＴＹＳＬＧＧＧＧＡＡＲＶＲＶＲＧＳＴＧＶＡＡＡＡＧＬＨＲＹＬＲＤＦＣＧＣＨＶＡＷＳＧＳＱＬＲＬＰＲＰＬＰＡＶＰＧＥＬＴＥＡＴＰＮＲＹＲＹＹＱＮＶＣＴＱＳＹＳＦＶＷＷＤＷＡＲＷＥＲＥＩＤＷＭＡＬＮＧＩＮＬＡＬＡＷＳＧＱＥＡＩＷＱＲＶＹＬＡＬＧＬＴＱＡＥＩＮＥＦＦＴＧＰＡＦＬＡＷＧＲＭＧＮＬＨＴＷＤＧＰＬＰＰＳＷＨＩＫＱＬＹＬＱＨＲＶＬＤＱＭＲＳＦＧＭＴＰＶＬＰＡＦＡＧＨＶＰＥＡＶＴＲＶＦＰＱＶＮＶＴＫＭＧＳＷＧＨＦＮＣＳＹＳＣＳＦＬＬＡＰＥＤＰＩＦＰＩＩＧＳＬＦＬＲＥＬＩＫＥＦＧＴＤＨＩＹＧＡＤＴＦＮＥＭＱＰＰＳＳＥＰＳＹＬＡＡＡＴＴＡＶＹＥＡＭＴＡＶＤＴＥＡＶＷＬＬＱＧＷＬＦＱＨＱＰＱＦＷＧＰＡＱＩＲＡＶＬＧＡＶＰＲＧＲＬＬＶＬＤＬＦＡＥＳＱＰＶＹＴＲＴＡＳＦＱＧＱＰＦＩＷＣＭＬＨＮＦＧＧＮＨＧＬＦＧＡＬＥＡＶＮＧＧＰＥＡＡＲＬＦＰＮＳＴＭＶＧＴＧＭＡＰＥＧＩＳＱＮＥＶＶＹＳＬＭＡＥＬＧＷＲＫＤＰＶＰＤＬＡＡＷＶＴＳＦＡＡＲＲＹＧＶＳＨＰＤＡＧＡＡＷＲＬＬＬＲＳＶＹＮＣＳＧＥＡＣＲＧＨＮＲＳＰＬＶＲＲＰＳＬＱＭＮＴＳＩＷＹＮＲＳＤＶＦＥＡＷＲＬＬＬＴＳＡＰＳＬＡＴＳＰＡＦＲＹＤＬＬＤＬＴＲＱＡＶＱＥＬＶＳＬＹＹＥＥＡＲＳＡＹＬＳＫＥＬＡＳＬＬＲＡＧＧＶＬＡＹＥＬＬＰＡＬＤＥＶＬＡＳＤＳＲＦＬＬＧＳＷＬＥＱＡＲＡＡＡＶＳＥＡＥＡＤＦＹＥＱＮＳＲＹＱＬＴＬＷＧＰＥＧＮＩＬＤＹＡＮＫＱＬＡＧＬＶＡＮＹＹＴＰＲＷＲＬＦＬＥＡＬＶＤＳＶＡＱＧＩＰＦＱＱＨＱＦＤＫＮＶＦＱＬＥＱＡＦＶＬＳＫＱＲＹＰＳＱＰＲＧＤＴＶＤＬＡＫＫＩＦＬＫＹＹＰＲＷＶＡＧＳＷＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＧＧＧＧＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＰＬＣＧＧＥＬＶＤＴＬＱＦＶＣＧＤＲＧＦＹＦＳＲＰＡＳＲＶＳＲＲＳＲＧＩＶＥＥＣＣＦＲＳＣＤＬＡＬＬＥＴＹＣＡＴＰＡＫＳＥ（配列番号６）