【手続補正書】
【提出日】平成24年8月27日(2012.8.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質含有溶液からタンパク質を単離する方法であって、以下の工程を含むタンパク質単離方法。
（ａ）タンパク質含有溶液を、温度応答性共重合体で官能化された架橋重合体粒子に接触させる工程であって、温度応答性共重合体は、特定割合のイオン化可能な化学基を含み、前記接触が、３０℃〜８０℃の温度範囲内で行なわれ、架橋重合体粒子によってタンパク質の保持を促進させる工程、
（ｂ）タンパク質含有溶液を、洗浄溶液で置換する工程、
（ｃ）洗浄溶液を、架橋重合体粒子からタンパク質を溶離させるのに有効な溶離溶液で置換する工程、
（ｄ）タンパク質を含有する溶離溶液を単離する工程。
【請求項２】
溶離溶液の温度が、タンパク質含有溶液を架橋重合体粒子と接触させた温度より低い、請求項１に記載のタンパク質単離方法。
【請求項３】
タンパク質溶液及び洗浄溶液の温度が３０℃〜６０℃である請求項１又は２に記載のタンパク質の単離方法。
【請求項４】
溶離溶液がイオン性溶質を含有し、該イオン性溶質がアルカリ金属ハロゲン化物又はアルカリ土類金属ハロゲン化物である請求項１〜３のいずれか一項に記載のタンパク質の単離方法。
【請求項５】
温度応答性共重合体が、下記を含有する請求項１〜４のいずれか一項に記載のタンパク質の単離方法。
（ａ）Ｎ−イソプロピルアクリルアミド単位、ビニルメチルエーテル単位及びＮ−ビニルカプロラクタム単位からなる群から選択される、共重合体に温度応答性を付与するモノマー単位
（ｂ）アクリル酸単位、メタクリル酸単位、エタクリル酸単位、ナトリウム２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホネート単位、ナトリウム３−アクリルアミド−３−メチルブタノエート単位、（３−アクリルアミドプロピル）トリメチルアンモニウムクロリド単位、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミド単位、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレート単位、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリレート単位、及び４−ビニルベンジルトリメチルアンモニウムクロリド単位からなる群から選択される、共重合体にイオン化可能な化学基を付与するモノマー単位
【請求項６】
温度応答性共重合体が、エチレングリコールジメタクリレート単位、１，４−ブタンジオールジメタクリレート単位、１，６−ヘキサンジオールジメタクリレート単位、エチレングリコールジアクリレート単位、１，４−ブタンジオールジアクリレート単位、１，６−ヘキサンジオールジアクリレート単位、及びＮ，Ｎ−メチレンビスアクリルアミド単位からなる群から選択される、少なくとも１の二官能性モノマー単位をさらに含有する請求項１〜５のいずれか一項に記載のタンパク質の単離方法。
【請求項７】
温度応答性共重合体が、メチルアクリレート単位、エチルアクリレート単位、プロピルアクリレート単位、ブチルアクリレート単位、メチルメタクリレート単位、エチルメタクリレート単位、プロピルメタクリレート単位、Ｎ−イソプロピルメタクリアミド単位、ブチルメタクリレート単位、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルアクリルアミド単位、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド単位、Ｎ，Ｎ−ジエチルアクリルアミド単位、及びＮ−フェニルアクリルアミド単位からなる群から選択される、少なくとも１の付加的なモノマー単位をさらに含有する請求項１〜６のいずれか一項に記載のタンパク質の単離方法。
【請求項８】
架橋重合体粒子が、架橋アガロース粒子、架橋セルロース粒子、親水性架橋ビニル重合体粒子、及びメタクリレートをベースとした重合体樹脂粒子からなる群から選択される請求項１〜７のいずれか一項に記載のタンパク質の単離方法。
【請求項９】
工程（ａ）〜（ｃ）が、入口と出口とを有するクロマトグラフィー用カラム内で行なわれ、温度応答性共重合体で官能化された架橋重合体粒子が、入口と出口との間の通路内に充填され、タンパク質含有溶液、洗浄溶液及び溶離溶液が、入口を通して連続的に注入され、出口から採取される請求項１〜８のいずれか一項に記載のタンパク質の単離方法。
【請求項１０】
タンパク質が、ラクトフェリン、ラクトペルオキシダーゼ、パパイン及びチトクロームＣからなる群から選択される請求項１〜９のいずれか一項に記載のタンパク質の単離方法。
【請求項１１】
温度応答性共重合体で官能化された架橋ヒドロキシル重合体粒子であって、前記温度応答性共重合体が、下記（ａ）及び（ｂ）を含有する架橋ヒドロキシル重合体粒子。
（ａ）共重合体に温度応答性を付与するモノマー単位
（ｂ）共重合体にイオン化可能な化学基を付与するモノマー単位
【請求項１２】
温度応答性を共重合体に付与するモノマー単位が、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド単位、ビニルメチルエーテル単位及びＮ−ビニルカプロラクタム単位からなる群から選択されるものであり；イオン化可能な化学基を付与するモノマー単位が、アクリル酸単位、メタクリル酸単位、エタクリル酸単位、ナトリウム２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホネート単位、ナトリウム３−アクリルアミド−３−メチルブタノエート単位、（３−アクリルアミドプロピル）トリメチルアンモニウムクロリド単位、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルアクリルアミド単位、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレート単位、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリレート単位、及び４−ビニルベンジルトリメチルアンモニウムクロリド単位からなる群から選択されるものである請求項１１に記載の架橋ヒドロキシル重合体粒子。
【請求項１３】
温度応答性共重合体が、エチレングリコールジメタクリレート単位、１，４−ブタンジオールジメタクリレート単位、１，６−ヘキサンジオールジメタクリレート単位、エチレングリコールジアクリレート単位、１，４−ブタンジオールジアクリレート単位、１，６−ヘキサンジオールジアクリレート単位、及びＮ，Ｎ−メチレンビスアクリルアミド単位からなる群から選択される、少なくとも１の二官能性モノマー単位をさらに含有する請求項１１又は１２に記載の架橋ヒドロキシル重合体粒子。
【請求項１４】
温度応答性共重合体が、メチルアクリレート単位、エチルアクリレート単位、プロピルアクリレート単位、ブチルアクリレート単位、メチルメタクリレート単位、エチルメタクリレート単位、プロピルメタクリレート単位、Ｎ−イソプロピルメタクリアミド単位、ブチルメタクリレート単位、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルアクリルアミド単位、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド単位、Ｎ，Ｎ−ジエチルアクリルアミド単位、及びＮ−フェニルアクリルアミド単位からなる群から選択される、少なくとも１の付加的なモノマー単位をさらに含有する請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の架橋ヒドロキシル重合体粒子。
【請求項１５】
架橋ヒドロキシル重合体が、架橋アガロース、架橋セルロース、ヒドロキシ官能性架橋ビニル重合体、ヒドロキシ官能性架橋アクリル重合体及びヒドロキシ官能性架橋メタクリル重合体からなる群から選択される請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の架橋ヒドロキシル重合体粒子。
【請求項１６】
請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の架橋ヒドロキシル重合体粒子を製造する方法であって、以下の工程を含む架橋ヒドロキシル重合体粒子の製造方法。
（ａ）架橋ヒドロキシル重合体粒子を供給する工程、
（ｂ）架橋ヒドロキシル重合体粒子を化学修飾して、重合開始可能な官能基を有する架橋ヒドロキシル重合体粒子を供給する、下記（ｉ）〜（ｉｉｉ）を含む工程、
（ｉ）架橋ヒドロキシル重合体粒子を少なくとも１のエポキシド基で官能化する工程、
（ｉｉ）エポキシド基をアンモニアと反応させて、アミン基で官能化された架橋ヒドロキシル重合体粒子を提供する工程、
（ｉｉｉ）アミン基を少なくとも１のカルボン酸基を有する重合開始剤と反応させる工程
（ｃ）架橋ヒドロキシル重合体粒子を、モノマー溶液に接触させる工程であって、架橋ヒドロキシル重合体粒子は、重合開始可能な官能基を有し、モノマー溶液は、共重合体に温度応答性を付与可能な少なくとも１のモノマーと共重合体にイオン化可能な化学基を付与可能な少なくとも１のモノマーを含有し、前記接触によりモノマーの重合が開始される工程、
（ｄ）温度応答性共重合体で官能化された架橋ヒドロキシル重合体粒子を単離する工程であって、温度応答性共重合体は、特定割合のイオン化可能な化学基を有する工程。