【手続補正書】
【提出日】平成25年11月18日(2013.11.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１，３−ブタンジオール（１，３−ＢＤＯ）を産生するに十分な量で発現された１，３−ＢＤＯ経路酵素またはタンパク質をコードする少なくとも一つの外因性核酸を含む１，３−ＢＤＯ経路を有する非天然の微生物であって、
上記１，３−ＢＤＯ経路が、
ギ酸デヒドロゲナーゼ、ホルミルテトラヒドロ葉酸シンセターゼ、メテニルテトラヒドロ葉酸シクロヒドロラーゼ、メチレンテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼ、メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ、メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、コリノイド鉄−硫黄タンパク質、ニッケル−タンパク質会合タンパク質、フェレドキシン、アセチルＣｏＡシンセターゼ、一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、ヒドロゲナーゼ、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡトランスフェラーゼ、３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡヒドロラーゼ、３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡシンセターゼ、３−ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ、３−ヒドロキシブチレートレダクターゼ、アセトアセチルＣｏＡトランスフェラーゼ、アセトアセチルＣｏＡヒドロラーゼ、アセトアセチルＣｏＡシンセターゼ、またはアセトアセテートレダクターゼ
を含む、非天然の微生物。
【請求項２】
前記１，３−ＢＤＯ経路が、
アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ＣｏＡ依存、アルデヒド形成）、３−オキソブチルアルデヒドレダクターゼ（ケトン還元）、３−ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ＣｏＡ依存、アルコール形成）、３−オキソブチルアルデヒドレダクターゼ（アルデヒド還元）、４−ヒドロキシ−２−ブタノンレダクターゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ケトン還元）、３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド形成）、または３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡレダクターゼ（アルコール形成）をさらに含む、請求項１に記載の非天然の微生物。
【請求項３】
前記１，３−ＢＤＯ経路酵素が、
Ａ：１）３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド形成）、２）アセチルＣｏＡシンセターゼ、３）ギ酸デヒドロゲナーゼ、４）ホルミルテトラヒドロ葉酸シンセターゼ、５）メテニルテトラヒドロ葉酸シクロヒドロラーゼ、６）メチレンテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼ、７）メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ、８）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、９）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、１０）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、１１）フェレドキシン、１２）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１３）ヒドロゲナーゼ、１４）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１５）アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ケトン還元）、および１６）３−ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ；
Ｂ：１）３−ヒドロキシブチレートレダクターゼ、２）アセチルＣｏＡシンセターゼ、３）ギ酸デヒドロゲナーゼ、４）ホルミルテトラヒドロ葉酸シンセターゼ、５）メテニルテトラヒドロ葉酸シクロヒドロラーゼ、６）メチレンテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼ、７）メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ、８）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、９）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、１０）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、１１）フェレドキシン、１２）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１３）ヒドロゲナーゼ、１４）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１５）アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ケトン還元）、１６）３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼまたはシンセターゼ、および１７）３−ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ；
Ｃ：１）３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡレダクターゼ（アルコール形成）、２）アセチルＣｏＡシンセターゼ、３）ギ酸デヒドロゲナーゼ、４）ホルミルテトラヒドロ葉酸シンセターゼ、５）メテニルテトラヒドロ葉酸シクロヒドロラーゼ、６）メチレンテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼ、７）メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ、８）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、９）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、１０）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、１１）フェレドキシン、１２）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１３）ヒドロゲナーゼ、１４）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、および１５）アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ケトン還元）；
Ｄ：１）ギ酸デヒドロゲナーゼ、２）ホルミルテトラヒドロ葉酸シンセターゼ、３）メテニルテトラヒドロ葉酸シクロヒドロラーゼ、４）メチレンテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼ、５）メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ、６）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、７）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、８）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、９）フェレドキシン、１０）アセチルＣｏＡシンセターゼ、１１）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１２）ヒドロゲナーゼ、１３）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１４）アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ＣｏＡ依存、アルデヒド形成）、１５）３−オキソブチルアルデヒドレダクターゼ（アルデヒド還元）、および１６）４−ヒドロキシ−２−ブタノンレダクターゼ；
Ｅ：１）ギ酸デヒドロゲナーゼ、２）ホルミルテトラヒドロ葉酸シンセターゼ、３）メテニルテトラヒドロ葉酸シクロヒドロラーゼ、４）メチレンテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼ、５）メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ、６）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、７）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、８）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、９）フェレドキシン、１０）アセチルＣｏＡシンセターゼ、１１）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１２）ヒドロゲナーゼ、１３）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１４）アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ＣｏＡ依存、アルデヒド形成）、１５）３−オキソブチルアルデヒドレダクターゼ（ケトン還元）、および１６）３−ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ；
Ｆ：１）ギ酸デヒドロゲナーゼ、２）ホルミルテトラヒドロ葉酸シンセターゼ、３）メテニルテトラヒドロ葉酸シクロヒドロラーゼ、４）メチレンテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼ、５）メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ、６）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、７）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、８）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、９）フェレドキシン、１０）アセチルＣｏＡシンセターゼ、１１）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１２）ヒドロゲナーゼ、１３）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１４）アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ＣｏＡ依存、アルコール形成）、および１５）４−ヒドロキシ−２−ブタノンレダクターゼ；
Ｇ：１）ギ酸デヒドロゲナーゼ、２）ホルミルテトラヒドロ葉酸シンセターゼ、３）メテニルテトラヒドロ葉酸シクロヒドロラーゼ、４）メチレンテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼ、５）メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ、６）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、７）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、８）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、９）フェレドキシン、１０）アセチルＣｏＡシンセターゼ、１１）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１２）ヒドロゲナーゼ、１３）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１４）アセトアセチルＣｏＡトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、またはシンセターゼ、１５）アセトアセテートレダクターゼ、１６）３−オキソブチルアルデヒドレダクターゼ（ケトン還元）、および１７）３−ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ；
Ｈ：１）ギ酸デヒドロゲナーゼ、２）ホルミルテトラヒドロ葉酸シンセターゼ、３）メテニルテトラヒドロ葉酸シクロヒドロラーゼ、４）メチレンテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼ、５）メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ、６）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、７）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、８）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、９）フェレドキシン、１０）アセチルＣｏＡシンセターゼ、１１）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１２）ヒドロゲナーゼ、１３）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１４）アセトアセチルＣｏＡトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、またはシンセターゼ、１５）アセトアセテートレダクターゼ、１６）３−オキソブチルアルデヒドレダクターゼ（アルデヒド還元）、および１７）４−ヒドロキシ−２−ブタノンレダクターゼ；ならびに
Ｉ：１）ギ酸デヒドロゲナーゼ、２）ホルミルテトラヒドロ葉酸シンセターゼ、３）メテニルテトラヒドロ葉酸シクロヒドロラーゼ、４）メチレンテトラヒドロ葉酸デヒドロゲナーゼ、５）メチレンテトラヒドロ葉酸レダクターゼ、６）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、７）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、８）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、９）フェレドキシン、１０）アセチルＣｏＡシンセターゼ、１１）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１２）ヒドロゲナーゼ、１３）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１４）アセトアセチルＣｏＡトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、またはシンセターゼ、１５）３−ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ、１６）３−ヒドロキシブチレートレダクターゼ、および１７）３−ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ
からなる群より選択される酵素のセットである、請求項１または２に記載の非天然の微生物。
【請求項４】
１）ＣＯ、２）ＣＯ２およびＨ２、３）ＣＯ、ＣＯ２およびＨ２、４）ＣＯおよびＨ２からなる合成ガス、５）ＣＯ、ＣＯ２およびＨ２からなる合成ガス、ならびに６）一つまたはそれ以上の炭化水素
からなる群より選択される炭素原料を用いる、請求項１〜３の何れか１項に記載の非天然の微生物。
【請求項５】
１，３−ブタンジオール（１，３−ＢＤＯ）を産生するに十分な量で発現された１，３−ＢＤＯ経路酵素またはタンパク質をコードする少なくとも一つの外因性核酸を含む１，３−ＢＤＯ経路を有する非天然の微生物であって、
上記１，３−ＢＤＯ経路が、
メタノールメチルトランスフェラーゼ、コリノイドタンパク質、メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、コリノイド鉄−硫黄タンパク質、ニッケル−タンパク質会合タンパク質、フェレドキシン、アセチルＣｏＡシンセターゼ、一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、ヒドロゲナーゼ、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡトランスフェラーゼ、３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡヒドロラーゼ、３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡシンセターゼ、３−ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ、３−ヒドロキシブチレートレダクターゼ、アセトアセチルＣｏＡトランスフェラーゼ、アセトアセチルＣｏＡヒドロラーゼ、アセトアセチルＣｏＡシンセターゼ、またはアセトアセテートレダクターゼ
を含む、非天然の微生物。
【請求項６】
前記１，３−ＢＤＯ経路が、
アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ＣｏＡ依存、アルデヒド形成）、３−オキソブチルアルデヒドレダクターゼ（ケトン還元）、３−ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ＣｏＡ依存、アルコール形成）、３−オキソブチルアルデヒドレダクターゼ（アルデヒド還元）、４−ヒドロキシ−２−ブタノンレダクターゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ケトン還元）、３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド形成）、または３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡレダクターゼ（アルコール形成）をさらに含む、請求項５に記載の非天然の微生物。
【請求項７】
前記１，３−ＢＤＯ経路酵素が、
Ａ：１）メタノールメチルトランスフェラーゼ、２）コリノイドタンパク質、３）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、４）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、５）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、６）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、７）フェレドキシン、８）アセチルＣｏＡシンセターゼ、９）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１０）ヒドロゲナーゼ、１１）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１２）アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ＣｏＡ依存、アルデヒド形成）、１３）３−オキソブチルアルデヒドレダクターゼ（アルデヒド還元）、および１４）４−ヒドロキシ−２−ブタノンレダクターゼ；
Ｂ：１）メタノールメチルトランスフェラーゼ、２）コリノイドタンパク質、３）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、４）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、５）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、６）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、７）フェレドキシン、８）アセチルＣｏＡシンセターゼ、９）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１０）ヒドロゲナーゼ、１１）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１２）アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ＣｏＡ依存、アルデヒド形成）、１３）３−オキソブチルアルデヒドレダクターゼ（ケトン還元）、および１４）３−ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ；
Ｃ：１）メタノールメチルトランスフェラーゼ、２）コリノイドタンパク質、３）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、４）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、５）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、６）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、７）フェレドキシン、８）アセチルＣｏＡシンセターゼ、９）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１０）ヒドロゲナーゼ、１１）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１２）アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ケトン還元）、１３）３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡレダクターゼ（アルデヒド形成）、および１４）３−ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ；
Ｄ：１）メタノールメチルトランスフェラーゼ、２）コリノイドタンパク質、３）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、４）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、５）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、６）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、７）フェレドキシン、８）アセチルＣｏＡシンセターゼ、９）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１０）ヒドロゲナーゼ、１１）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１２）アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ケトン還元）、および１３）３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡレダクターゼ（アルコール形成）；
Ｅ：１）メタノールメチルトランスフェラーゼ、２）コリノイドタンパク質、３）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、４）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、５）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、６）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、７）フェレドキシン、８）アセチルＣｏＡシンセターゼ、９）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１０）ヒドロゲナーゼ、１１）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１２）アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ＣｏＡ依存、アルコール形成）、および１３）４−ヒドロキシ−２−ブタノンレダクターゼ；
Ｆ：１）メタノールメチルトランスフェラーゼ、２）コリノイドタンパク質、３）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、４）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、５）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、６）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、７）フェレドキシン、８）アセチルＣｏＡシンセターゼ、９）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１０）ヒドロゲナーゼ、１１）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１２）アセトアセチルＣｏＡトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、またはシンセターゼ、１３）アセトアセテートレダクターゼ、１４）３−オキソブチルアルデヒドレダクターゼ（ケトン還元）、および１５）３−ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ；
Ｇ：１）メタノールメチルトランスフェラーゼ、２）コリノイドタンパク質、３）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、４）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、５）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、６）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、７）フェレドキシン、８）アセチルＣｏＡシンセターゼ、９）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１０）ヒドロゲナーゼ、１１）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１２）アセトアセチルＣｏＡトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、またはシンセターゼ、１３）アセトアセテートレダクターゼ、１４）３−オキソブチルアルデヒドレダクターゼ（アルデヒド還元）、および１５）４−ヒドロキシ−２−ブタノンレダクターゼ；
Ｈ：１）メタノールメチルトランスフェラーゼ、２）コリノイドタンパク質、３）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、４）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、５）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、６）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、７）フェレドキシン、８）アセチルＣｏＡシンセターゼ、９）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１０）ヒドロゲナーゼ、１１）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１２）アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ（ケトン還元）、１３）３−ヒドロキシブチリル−ＣｏＡトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、またはシンセターゼ、１４）３−ヒドロキシブチレートレダクターゼ、および１５）３−ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ；ならびに
Ｉ：１）メタノールメチルトランスフェラーゼ、２）コリノイドタンパク質、３）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、４）メチルテトラヒドロ葉酸：コリノイドタンパク質メチルトランスフェラーゼ、５）コリノイド鉄−硫黄タンパク質、６）ニッケル−タンパク質会合タンパク質、７）フェレドキシン、８）アセチルＣｏＡシンセターゼ、９）一酸化炭素デヒドロゲナーゼ、１０）ヒドロゲナーゼ、１１）アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、１２）アセトアセチルＣｏＡトランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、またはシンセターゼ、１３）３−ヒドロキシブチレートデヒドロゲナーゼ、１４）３−ヒドロキシブチレートレダクターゼ、および１５）３−ヒドロキシブチルアルデヒドレダクターゼ
からなる群より選択される酵素のセットである、請求項５または６に記載の非天然の微生物。
【請求項８】
１）メタノールおよびＣＯ、２）メタノール、ＣＯ２およびＨ２、３）メタノール、ＣＯ、ＣＯ２およびＨ２、４）メタノール、ならびにＣＯおよびＨ２からなる合成ガス、５）メタノール、ならびにＣＯ、ＣＯ２およびＨ２からなる合成ガス、６）一つまたはそれ以上の炭化水素、７）メタノールおよび一つまたはそれ以上の炭化水素、ならびに８）メタノール
からなる群より選択される炭素原料を用いる、請求項５〜７の何れか１項に記載の非天然の微生物。
【請求項９】
請求項１〜８の何れか１項に記載の非天然の微生物であって、
（ａ）上記微生物が、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、または１７個の外因性核酸を含み、該外因性核酸の各々が１，３−ＢＤＯ経路酵素をコードし、
（ｂ）前記少なくとも一つの外因性核酸が、異種性の核酸であり、
（ｃ）上記微生物が、実質的に嫌気性である培養媒体に存在し、
（ｄ）上記微生物が、細菌、酵母、または真菌である、非天然の微生物。
【請求項１０】
１，３−ＢＤＯを製造するための条件下で十分な期間にわたって、請求項１〜９の何れか１項に記載の非天然の微生物を培養する工程を含む、１，３−ＢＤＯを製造する方法。
【請求項１１】
培養物中の他の成分から１，３−ＢＤＯを分離する工程をさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記分離する工程が、抽出、連続的液体−液体抽出、浸透気化、膜濾過、膜分離、逆浸透圧、電気泳動、蒸留、結晶化、遠心分離、抽出濾過、イオン交換クロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ、吸収クロマトグラフィ、または限外濾過を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１０に記載の方法に従って製造された、１，３−ＢＤＯを含む培養媒体。
【請求項１４】
前記非天然の微生物から分離される、請求項１３に記載の培養媒体。
【請求項１５】
生合成された１，３−ＢＤＯおよび請求項１〜９の何れか１項に記載の非天然の微生物を含む、組成物。
【請求項１６】
請求項１０に記載の方法に従って製造された、生合成された１，３−ＢＤＯ。
【請求項１７】
請求項１６に記載の生合成された１，３−ＢＤＯを含む、化合物または他の生成物。
【請求項１８】
有機溶媒、ポリウレタン樹脂、ポリエステル樹脂、血糖低下剤、ゴム、ラテックス、１，３−ブタジエン、または１，３−ブタジエンに基づく生成物である、請求項１７に記載の化合物または他の生成物。
【請求項１９】
化合物または他の生成物の製造における、請求項１６に記載の生合成された１，３−ＢＤＯの、使用。
【請求項２０】
前記化合物または他の生成物が、有機溶媒、ポリウレタン樹脂、ポリエステル樹脂、血糖低下剤、ゴム、ラテックス、１，３−ブタジエン、または１，３−ブタジエンに基づく生成物である、請求項１９に記載の使用。