【手続補正書】
【提出日】平成24年8月23日(2012.8.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含む、がんを治療もしくは予防するための、またはがん細胞増殖を阻害するための候補化合物をスクリーニングする方法：
（ａ）試験化合物を、ＰＲＭＴ１遺伝子によってコードされるポリペプチドと接触させる工程；
（ｂ）工程（ａ）のポリペプチドの生物学的活性を検出する工程；および
（ｃ）試験化合物の非存在下で検出された生物学的活性と比較して、ポリペプチドの生物学的活性を抑制する試験化合物を選択する工程。
【請求項２】
生物学的活性がメチルトランスフェラーゼ活性または細胞増殖活性である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
以下の工程を含む、がんを治療もしくは予防するための、またはがん細胞増殖を阻害するための候補化合物をスクリーニングする方法：
（ａ）試験化合物を、ＰＲＭＴ１遺伝子によってコードされるポリペプチドと接触させる工程；
（ｂ）ポリペプチドと試験化合物との間の結合活性を検出する工程；および
（ｃ）ポリペプチドに結合する化合物を選択する工程。
【請求項４】
以下の工程を含む、がんを治療もしくは予防するための、またはがん細胞増殖を阻害するための候補化合物をスクリーニングする方法：
（ａ）試験化合物を、ＰＲＭＴ１遺伝子を発現している細胞と接触させる工程；および
（ｂ）試験化合物の非存在下での発現レベルと比較して、ＰＲＭＴ１遺伝子の発現レベルを低下させる試験化合物を選択する工程。
【請求項５】
以下の工程を含む、がんを治療もしくは予防するための、またはがん細胞増殖を阻害するための候補化合物をスクリーニングする方法：
（ａ）ＰＲＭＴ１遺伝子の転写調節領域と、該転写調節領域の制御下で発現されるレポーター遺伝子とを含むベクターが導入されている細胞に、試験化合物を接触させる工程；
（ｂ）前記レポーター遺伝子の発現または活性を測定する工程；および
（ｃ）試験化合物の非存在下でのレベルと比較して、前記レポーター遺伝子の発現または活性のレベルを低下させる試験化合物を選択する工程。
【請求項６】
がんが膀胱がん、胃がん、結腸直腸がん、乳がん、食道がん、肺がん、リンパ腫、膵臓がん、および精巣がんからなる群より選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
対象から採取された生物学的試料におけるＰＲＭＴ１遺伝子の発現レベルを決定する工程を含む、対象におけるがんマーカーを検出する方法であって、前記遺伝子の正常対照レベルと比較した前記レベルの増加が、癌細胞の存在をを示し、前記発現レベルが、以下からなる群より選択される任意の１つの方法によって決定される、方法：
（ａ）ＰＲＭＴ１のｍＲＮＡを検出する方法、
（ｂ）ＰＲＭＴ１遺伝子によってコードされるタンパク質を検出する方法、および
（ｃ）ＰＲＭＴ１遺伝子によってコードされるタンパク質の生物学的活性を検出する方法。
【請求項８】
前記増加が正常対照レベルより少なくとも１０％大きい、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
対象から採取された生物学的試料が生検材料である、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
がんが膀胱がん、胃がん、結腸直腸がん、乳がん、食道がん、肺がん、リンパ腫、膵臓がん、および精巣がんからなる群より選択される、請求項７〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
以下からなる群より選択される試薬を含む、がん細胞を検出するためのキット：
（ａ）ＰＲＭＴ１のｍＲＮＡを検出するための試薬；
（ｂ）ＰＲＭＴ１遺伝子によってコードされるタンパク質を検出するための試薬；および
（ｃ）ＰＲＭＴ１遺伝子によってコードされるタンパク質の生物学的活性を検出するための試薬。
【請求項１２】
試薬がＰＲＭＴ１の遺伝子転写物に対するプローブである、請求項１１に記載のキット。
【請求項１３】
試薬がＰＲＭＴ１遺伝子によってコードされるタンパク質に対する抗体である、請求項１１に記載のキット。
【請求項１４】
センス鎖とアンチセンス鎖とを含み、かつＰＲＭＴ１遺伝子を発現している細胞に導入された場合に該遺伝子の発現を阻害する二本鎖分子であって、前記センス鎖がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７からなる標的配列に対応するヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が前記センス鎖に相補的なヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖とが互いにハイブリダイズして二本鎖分子を形成する、二本鎖分子。
【請求項１５】
約１９〜約２５ヌクレオチド長である、請求項１４に記載の二本鎖分子。
【請求項１６】
一本鎖ヌクレオチド配列を介して連結されたセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む単一のポリヌクレオチド分子である、請求項１４に記載の二本鎖分子。
【請求項１７】
ポリヌクレオチドが下記一般式を有する、請求項１６に記載の二本鎖分子：
５’−［Ａ］−［Ｂ］−［Ａ’］−３’
式中、［Ａ］はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７の標的配列に対応するヌクレオチド配列を含むセンス鎖であり；［Ｂ］は約３〜約２３ヌクレオチドからなるヌクレオチド配列であり；かつ［Ａ’］は［Ａ］に相補的なヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖である。
【請求項１８】
センス鎖核酸およびアンチセンス鎖核酸を含むポリヌクレオチドの組み合わせの各々または両方をコードし、かつＰＲＭＴ１遺伝子を発現している細胞に導入された場合に該遺伝子の発現を阻害するベクターであって、前記センス鎖核酸がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７のヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が前記センス鎖に相補的なヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖の転写物と前記アンチセンス鎖の転写物とが互いにハイブリダイズして二本鎖分子を形成する、ベクター。
【請求項１９】
ポリヌクレオチドが約１９〜約２５ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドである、請求項１８に記載のベクター。
【請求項２０】
ベクターによってコードされる二本鎖分子が、一本鎖ヌクレオチド配列を介して連結されたセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む単一の転写物分子である、請求項１８に記載のベクター。
【請求項２１】
ポリヌクレオチドが下記一般式を有する、請求項２０に記載のベクター：
５’−［Ａ］−［Ｂ］−［Ａ’］−３’
式中、［Ａ］はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７の標的配列に対応するヌクレオチド配列を含むセンス鎖であり；［Ｂ］は約３〜約２３ヌクレオチドからなるヌクレオチド配列であり；かつ［Ａ’］は［Ａ］に相補的なヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖である。
【請求項２２】
薬学的に有効な量の、ＰＲＭＴ１遺伝子に対する二本鎖分子、またはそれをコードするベクターと、薬学的に許容可能な担体とを含む、がんを治療または予防するための組成物であって、二本鎖分子が、ＰＲＭＴ１遺伝子を発現している細胞に導入された場合に細胞増殖およびＰＲＭＴ１遺伝子の発現を阻害する、組成物。
【請求項２３】
二本鎖分子が請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の二本鎖分子である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
ベクターが請求項１８〜２１のいずれか一項に記載のベクターである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
がんが膀胱がん、胃がん、結腸直腸がん、乳がん、食道がん、肺がん、リンパ腫、膵臓がん、および精巣がんからなる群より選択される、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
別の局面において、本発明は、ＰＲＭＴ１の発現および／またはＰＲＭＴ１タンパク質の機能を阻害する剤を投与することにより、ＰＲＭＴ１を過剰発現しているがん性細胞の増殖を阻害する方法を提供する。好ましくは、剤は阻害性の核酸（例えば、アンチセンス、リボザイム、二本鎖分子）である。剤は、二本鎖分子を提供するための核酸分子またはベクターであり得る。ＰＲＭＴ１遺伝子の発現を阻害するのに十分な量の二本鎖分子を、標的細胞へ導入することによって、遺伝子の発現を阻害することができる。本発明は、対象におけるＰＲＭＴ１を過剰発現しているがん性細胞の増殖を阻害する方法も提供する。該方法は、がん、特に、膀胱がん、胃がん、結腸直腸がん、乳がん、食道がん、肺がん、リンパ腫、膵臓がん、および精巣がんを治療または予防するために有用である。別の局面において、本発明は、活性成分としての二本鎖分子またはそれをコードするベクターと、薬学的に許容可能な担体とを含む、がんを治療または予防するための薬学的組成物に関する。本発明において提供される二本鎖分子は、細胞に導入された場合に、ＰＲＭＴ１遺伝子の発現を阻害し、かつＰＲＭＴ１を過剰発現しているがん性細胞の増殖を阻害する特性を有する。例えば、そのような分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の８０３〜８２１位に対応する配列を標的とする。本発明の分子は、センス鎖とアンチセンス鎖とを含み、センス鎖は標的配列を含む配列を含み、アンチセンス鎖はセンス鎖に相補的な配列を含む。分子のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、互いにハイブリダイズして二本鎖分子を形成する。
[本発明1001]
対象由来の生物学的試料におけるＰＲＭＴ1遺伝子の発現レベルを決定する工程を含む、対象におけるがんを検出または診断する方法であって、前記遺伝子の正常対照レベルと比較した前記レベルの増加が、前記対象ががんに罹患しているかまたはがんを発症するリスクを有することを示し、前記発現レベルが、以下からなる群より選択される任意の1つの方法によって決定される、方法：
（ａ）ＰＲＭＴ1のｍＲＮＡを検出する方法、
（ｂ）ＰＲＭＴ1遺伝子によってコードされるタンパク質を検出する方法、および
（ｃ）ＰＲＭＴ1遺伝子によってコードされるタンパク質の生物学的活性を検出する方法。
[本発明1002]
前記増加が正常対照レベルより少なくとも10％大きい、本発明1001の方法。
[本発明1003]
対象由来の生物学的試料が生検材料である、本発明1001の方法。
[本発明1004]
がんが膀胱がん、胃がん、結腸直腸がん、乳がん、食道がん、肺がん、リンパ腫、膵臓がん、および精巣がんからなる群より選択される、本発明1001の方法。
[本発明1005]
以下からなる群より選択される試薬を含む、がんを診断するためのキット：
（ａ）ＰＲＭＴ1のｍＲＮＡを検出するための試薬；
（ｂ）ＰＲＭＴ1遺伝子によってコードされるタンパク質を検出するための試薬；および
（ｃ）ＰＲＭＴ1遺伝子によってコードされるタンパク質の生物学的活性を検出するための試薬。
[本発明1006]
試薬がＰＲＭＴ1の遺伝子転写物に対するプローブである、本発明1005のキット。
[本発明1007]
試薬がＰＲＭＴ1遺伝子によってコードされるタンパク質に対する抗体である、本発明1005のキット。
[本発明1008]
以下の工程を含む、がんを治療もしくは予防するための、またはがん細胞増殖を阻害するための候補化合物をスクリーニングする方法：
（ａ）試験化合物を、ＰＲＭＴ1遺伝子によってコードされるポリペプチドと接触させる工程；
（ｂ）ポリペプチドと試験化合物との間の結合活性を検出する工程；および
（ｃ）ポリペプチドに結合する化合物を選択する工程。
[本発明1009]
以下の工程を含む、がんを治療もしくは予防するための、またはがん細胞増殖を阻害するための候補化合物をスクリーニングする方法：
（ａ）試験化合物を、ＰＲＭＴ1遺伝子を発現している細胞と接触させる工程；および
（ｂ）試験化合物の非存在下での発現レベルと比較して、ＰＲＭＴ1遺伝子の発現レベルを低下させる試験化合物を選択する工程。
[本発明1010]
以下の工程を含む、がんを治療もしくは予防するための、またはがん細胞増殖を阻害するための候補化合物をスクリーニングする方法：
（ａ）試験化合物を、ＰＲＭＴ1遺伝子によってコードされるポリペプチドと接触させる工程；
（ｂ）工程（ａ）のポリペプチドの生物学的活性を検出する工程；および
（ｃ）試験化合物の非存在下で検出された生物学的活性と比較して、ポリペプチドの生物学的活性を抑制する試験化合物を選択する工程。
[本発明1011]
生物学的活性が細胞増殖活性またはメチルトランスフェラーゼ活性である、本発明1010の方法。
[本発明1012]
以下の工程を含む、がんを治療もしくは予防するための、またはがん細胞増殖を阻害するための候補化合物をスクリーニングする方法：
（ａ）ＰＲＭＴ1遺伝子の転写調節領域と、該転写調節領域の制御下で発現されるレポーター遺伝子とを含むベクターが導入されている細胞に、試験化合物を接触させる工程；
（ｂ）前記レポーター遺伝子の発現または活性を測定する工程；および
（ｃ）試験化合物の非存在下でのレベルと比較して、前記レポーター遺伝子の発現または活性のレベルを低下させる試験化合物を選択する工程。
[本発明1013]
がんが膀胱がん、胃がん、結腸直腸がん、乳がん、食道がん、肺がん、リンパ腫、膵臓がん、および精巣がんからなる群より選択される、本発明1008、1009、1010、および1012のいずれかの方法。
[本発明1014]
センス鎖とアンチセンス鎖とを含み、かつＰＲＭＴ1遺伝子を発現している細胞に導入された場合に該遺伝子の発現を阻害する二本鎖分子であって、前記センス鎖がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：17からなる標的配列に対応するヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が前記センス鎖に相補的なヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖とが互いにハイブリダイズして二本鎖分子を形成する、二本鎖分子。
[本発明1015]
約19〜約25ヌクレオチド長である、本発明1014の二本鎖分子。
[本発明1016]
一本鎖ヌクレオチド配列を介して連結されたセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む単一のポリヌクレオチド分子である、本発明1014の二本鎖分子。
[本発明1017]
ポリヌクレオチドが下記一般式を有する、本発明1016の二本鎖分子：
5’−［Ａ］−［Ｂ］−［Ａ’］−3’
式中、［Ａ］はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：17の標的配列に対応するヌクレオチド配列を含むセンス鎖であり；［Ｂ］は約3〜約23ヌクレオチドからなるヌクレオチド配列であり；かつ［Ａ’］は［Ａ］に相補的なヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖である。
[本発明1018]
センス鎖核酸およびアンチセンス鎖核酸を含むポリヌクレオチドの組み合わせの各々または両方をコードし、かつＰＲＭＴ1遺伝子を発現している細胞に導入された場合に該遺伝子の発現を阻害するベクターであって、前記センス鎖核酸がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：17のヌクレオチド配列を含み、前記アンチセンス鎖が前記センス鎖に相補的なヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖の転写物と前記アンチセンス鎖の転写物とが互いにハイブリダイズして二本鎖分子を形成する、ベクター。
[本発明1019]
ポリヌクレオチドが約19〜約25ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドである、本発明1018のベクター。
[本発明1020]
ベクターによってコードされる二本鎖分子が、一本鎖ヌクレオチド配列を介して連結されたセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む単一の転写物分子である、本発明1018のベクター。
[本発明1021]
ポリヌクレオチドが下記一般式を有する、本発明1020のベクター：
5’−［Ａ］−［Ｂ］−［Ａ’］−3’
式中、［Ａ］はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：17の標的配列に対応するヌクレオチド配列を含むセンス鎖であり；［Ｂ］は約3〜約23ヌクレオチドからなるヌクレオチド配列であり；かつ［Ａ’］は［Ａ］に相補的なヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖である。
[本発明1022]
薬学的に有効な量の、ＰＲＭＴ1遺伝子に対する二本鎖分子、またはそれをコードするベクターと、薬学的に許容可能な担体とを対象に投与する工程を含む、対象におけるがんを治療または予防する方法であって、二本鎖分子が、ＰＲＭＴ1遺伝子を発現している細胞に導入された場合に細胞増殖およびＰＲＭＴ1遺伝子の発現を阻害する、方法。
[本発明1023]
二本鎖分子が本発明1014の二本鎖分子である、本発明1022の方法。
[本発明1024]
ベクターが本発明1018のベクターである、本発明1022の方法。
[本発明1025]
がんが膀胱がん、胃がん、結腸直腸がん、乳がん、食道がん、肺がん、リンパ腫、膵臓がん、および精巣がんからなる群より選択される、本発明1022の方法。
[本発明1026]
薬学的に有効な量の、ＰＲＭＴ1遺伝子に対する二本鎖分子、またはそれをコードするベクターと、薬学的に許容可能な担体とを含む、がんを治療または予防するための組成物であって、二本鎖分子が、ＰＲＭＴ1遺伝子を発現している細胞に導入された場合に細胞増殖およびＰＲＭＴ1遺伝子の発現を阻害する、組成物。
[本発明1027]
二本鎖分子が本発明1014の二本鎖分子である、本発明1026の組成物。
[本発明1028]
ベクターが本発明1018のベクターである、本発明1026の組成物。
[本発明1029]
がんが膀胱がん、胃がん、結腸直腸がん、乳がん、食道がん、肺がん、リンパ腫、膵臓がん、および精巣がんからなる群より選択される、本発明1026の組成物。