(57)【要約】【課題】魚類に対するウイルス感染や細菌感染に対する予防・治療剤の提供。【解決手段】次の成分（Ａ）及び（Ｂ）（Ａ）トロロコンブ属藻類、カジメ属藻類、ジャイアントケルプ、アスコフィラム属藻類、モズク、これらの抽出物及びフコイダンから選ばれる１種又は２種以上、（Ｂ）乳酸球菌及びポリフェノールから選ばれる１種又は２種以上、を含有することを特徴とする魚類の感染予防・治療剤。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の成分（Ａ）及び（Ｂ）
（Ａ）トロロコンブ属藻類、カジメ属藻類、ジャイアントケルプ、アスコフィラム属藻類、モズク、これらの抽出物及びフコイダンから選ばれる１種又は２種以上、
（Ｂ）乳酸球菌及びポリフェノールから選ばれる１種又は２種以上、
を含有することを特徴とする魚類の感染予防・治療剤。
【請求項２】
乳酸球菌が、エンテロコッカス・フェカリスである請求項１記載の魚類の感染予防・治療剤。
【請求項３】
ポリフェノールが、茶由来のポリフェノールである請求項１又は２記載の魚類の感染予防・治療剤。
【請求項４】
感染症が、親魚からの垂直感染による感染症である請求項１〜３のいずれか１項記載の魚類の感染予防・治療剤。
【請求項５】
感染症が、ウイルス性神経壊死症である請求項１〜４のいずれか１項記載の魚類の感染予防・治療剤。
【請求項６】
薬浴、又は薬浴と経口の併用で投与するためのものである請求項１〜５記載の魚類の感染予防・治療剤。
【請求項７】
（Ａ）トロロコンブ属藻類、カジメ属藻類、ジャイアントケルプ、アスコフィラム属藻類、モズク、これらの抽出物及びフコイダンから選ばれる１種又は２種以上、並びに（Ｂ）乳酸球菌及びポリフェノールから選ばれる１種又は２種以上の有効量を投与することを特徴とする、魚類の感染予防・治療方法。
【請求項８】
投与方法が、薬浴、又は薬浴と経口の併用である請求項７記載の魚類の感染予防・治療方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、魚類の感染予防・治療剤及びその方法に関し、詳細には、親魚からのウイルス又は病原性細菌等による垂直感染を予防・治療する薬剤及びその方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
マダイ、ヒラメ、キジハタ、クエ、ブリ、カンパチ等の養殖場では、魚類が高密度で飼育されているため、病気が発生することが多い。病気の原因は、ウイルス、病原性細菌、寄生虫等による感染が主である。これらが親魚から垂直感染することが知られており、これに対して様々な対策が講じられている（特許文献１）。
【０００３】
感染症の中でも、特に近年、急激に流行し始めた魚類を死滅させるウイルス感染症は、深刻な被害をもたらしている。これらの感染症に対しては、抗生物質や免疫活性物質等を経口的に投与するなどの対抗手段が講じられている。しかしながら、ふ化直後の仔・稚魚は、開口しておらず餌を食べることができない。したがって、これらの対抗手段をとったとしても、開口後の摂餌可能な時期からとなり、その効果は必ずしも満足できるものではなかった。
【０００４】
一方、最近になって、多糖類の魚類感染症に対する効果も知られるようになっており、例えば、キノコ等から得られるグルカンが魚類感染症の予防・治療効果を有すること（特許文献２）、硫酸化多糖類や海藻類がウイルス感染症の予防・治療効果を有すること（特許文献３及び４）が開示されている。しかしながら、このように魚類の養殖場等における感染を予防・治療する試みは多種なされているものの、親魚から由来する感染（垂直感染）による被害は減少しておらず、より効果の高い予防・治療剤及びそれらの投与方法が要望されている。
【０００５】
特にウイルス性神経壊死症、又はウイルス性腹水症と呼ばれる感染症（Ｖｉｒａｌ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ；ＶＮＮＶ、Ｖｉｒａｌ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ  ａｎｄ  Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ；ＶＥＲ）の場合、感染から１〜２週間で感染魚が含まれる魚群が全滅してしまい、仔・稚魚の感染については経口投与による治療方法だけでは間に合わないという問題があった。予防策としては、これまでＰＣＲ法によって選別された無感染魚を産卵させることが行なわれていた。また、ハタ類の水平感染を遮断する方法としてＶＮＮＶの外皮タンパク質を用いたワクチン療法が開示されている（特許文献１）が、ワクチンは高価である上、対象魚１尾づつに投与しなくてはならないことから、使用者に対し過度の負担を強いることになり、現実的ではなかった。一方、既に感染した魚に関しては有効な対策は無かった。
【０００６】
【特許文献１】
特開２００１−２７８８９６号公報
【特許文献２】
特開平２−２１８６１５号公報
【特許文献３】
国際公開第９８／４２２０４号パンフレット
【特許文献４】
国際公開第０２／０９２１１４号パンフレット
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的は、親魚に由来するウイルス感染や細菌感染に対する優れた予防・治療効果を有する魚類の感染予防・治療剤及び予防・治療方法を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
かかる事情を鑑み、本発明者は、鋭意研究した結果、（Ａ）トロロコンブ属藻類、カジメ属藻類、ジャイアントケルプ、アスコフィラム属藻類、モズク、これらの抽出物、及びフコイダンから選ばれる１種又は２種以上と、（Ｂ）エンテロコッカス・フェカリス等の乳酸球菌及びポリフェノールから選ばれる１種又は２種以上とを併用することで、高いウイルス感染や細菌感染に対する予防・治療効果が得られることを見出した。更に、本発明の組成物は薬浴法で投与することも可能であり、親魚には経口法で、ふ化仔・稚魚には薬浴法及び経口法で投与を行なうことが、ウイルス、病原性細菌による魚類の感染予防・治療に有効であることを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、次の成分（Ａ）及び（Ｂ）
（Ａ）トロロコンブ属藻類、カジメ属藻類、ジャイアントケルプ、アスコフィラム属藻類、モズク、これらの抽出物、及びフコイダンから選ばれる１種又は２種以上、
（Ｂ）乳酸球菌及びポリフェノールから選ばれる１種又は２種以上、
を含有することを特徴とする魚類の感染予防・治療剤を提供するものである。
また、本発明は上記成分（Ａ）及び（Ｂ）の有効量を投与することを特徴とする魚類の感染予防・治療方法を提供するものである。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明の魚類の感染予防・治療剤に用いられる成分（Ａ）のうち、トロロコンブ属藻類とは、北海道の釧路・根室等の道北地方に多く繁殖するトロロコンブ属の褐藻であり、粘質に富んだ長さ１〜５ｍ、幅１０ｃｍ程の細長い帯状、或いは板状の葉を有しており、その表面には複雑な雲文様の凹凸が認められる。藻体には、カリウムやナトリウム、ビタミンＡ、ヨード、アルギン酸等の栄養素を含むことが知られている。本発明で用いられるトロロコンブ属藻類としては、例えばトロロコンブ（Ｋｊｅｌｌｍａｎｉｅｌｌａ  ｃｒａｓｓｉｆｏｌｉａ）、ガゴメ（Ｋｊｅｌｌｍａｎｉｅｌｌａ  ｇｙｒａｔａ）等が挙げられ、いずれも好適に使用できるが、特にトロロコンブを使用することが好ましい。
カジメ属藻類とは、関東以南の太平洋岸の岩礁地帯に群生するカジメ属の褐藻であり、細長い茎の上部に板状或いは帯状の中央葉を有し、その左右に羽を広げたような側葉が認められる。藻体はマンニット、ヨード、アルギン酸等の栄養素に富み、これらの製造原料としても使用されている。本発明に用いられるカジメ属褐藻類としては、例えばカジメ（Ｅｃｋｌｏｎｉａ  ｃａｖａ）、クロメ（Ｅｃｋｌｏｎｉａ  ｋｕｒｏｍｅ）、ツルアラメ（Ｅｃｋｌｏｎｉａ  ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒａ）等が挙げられ、いずれも好適に使用できるが、特にカジメを使用することが好ましい。
【００１１】
本発明に用いられるジャイアントケルプとは、北アメリカのカリフォルニア沿岸の岩礁地帯に生育するコンブ目の褐藻であり、細長い茎に多数の側葉をつけ、数十メートルにまで成長することが知られている。藻体にはカルシウムやビタミンＢ１、ヨード、アルギン酸等の栄養素を含むことが知られている。
【００１２】
アスコフィラム属藻類とは、北欧の海岸沿いに多く繁殖するヒバマタ属の褐藻であり、ベタイン類、オーキシン、サイトカイニン、アブシジン酸、多糖類、オリゴ糖、ミネラル、ビタミン類、アミノ酸等の栄養素を含み、特にアルギン酸量の含有量の高い海藻として知られている。本発明に用いられるアスコフィラム属藻類としては、例えばアスコルフィルム・ノドサム（Ａｓｃｏｐｈｙｌｌｕｍ  Ｎｏｄｏｓｕｍ）が挙げられる。
【００１３】
モズクとは、北海道、本州、四国、九州、南西諸島に多く繁殖する褐藻であり、長さ３０ｃｍ又はそれ以上、太さ０．４〜３．５ｍｍの粘質に富んだ極めて柔らかい細線状で不規則に分枝した葉を有している。藻体にはカルシウムやマグネシウムなどのミネラル分のほか、フコイダンを多く含みアルギン酸も存在することが知られている。本発明で用いられるモズクとしては、例えばモズク科のイトモズク、ナガマツモ科のオキナワモズク、イシモズク、フトモズク、樺太モズク等が挙げられ、いずれも好適に使用できるが、特にオキナワモズクを使用することが好ましい。
【００１４】
上記の海藻類は、生の藻体、乾燥物、或いは塩蔵したものを、そのまま、もしくは粉砕して用いてもよく、或いは水、親水性溶媒、又はこれらの混液によって抽出されたものを用いることもできる。抽出温度や時間はそれぞれの海藻に適した方法を選択すればよく、例えば低温或いは室温で数日間浸潤させても、加熱して数分から数時間で抽出してもよい。このような抽出物は、そのまま使用する事ができ、或いは効果を損なわない範囲で精製処理等を行なってもよい。
【００１５】
フコイダンとは、主としてフコースからなる分子量数十万前後の硫酸化多糖類であって、褐藻類のモズク、ウミウチワ、マコンブ、ワカメ、コンブ、アミジグサ等に豊富に含有されており人体に無害のものである。本発明に用いられるフコイダンとしては、フコイダンを含有する褐藻類を粉砕等したものを用いてもよく、適当な方法を用いて抽出、精製されたものを用いてもよい。抽出方法としては、通常用いられる方法であれば特に限定されるものではないが、酸抽出や熱水抽出等が挙げられる。また、海藻から抽出された高分子のものを、例えば弱酸処理等による加水分解によって、低分子化もしくはオリゴ糖化させてから用いてもよい。
【００１６】
上記の海藻類は、そのまま用いることができ、経口法に用いるのであれば、通常魚類の養殖に用いられる飼料原料に混合又は配合して用いてもよい。飼料に混合又は配合する量としては、魚類や養殖方法にあわせて適宜決定すればよいが、例えば飼料中に１５００ｍｇ／ｋｇ〜１００００ｍｇ／ｋｇ程度、特に４０００ｍｇ／ｋｇ〜７０００ｍｇ／ｋｇ配合するのが好ましい。これらを含有する飼料の給餌量は、１日に魚類の体重の３質量％程度がよい。また、薬浴法に用いるのであれば、ふすま及びセルロースパウダーに混合、又は配合して用いてもよい。これらの海藻類を水槽に投与する量としては、魚類や養殖方法にあわせて適宜決定すればよいが、例えば水槽の水量に対し６０ｍｇ／トン〜６００ｍｇ／トン程度、特に１００ｍｇ／トン〜３００ｍｇ／トン配合するのが好ましい。これらを含有する薬浴剤は、１日に１〜３回程度投与すればよい。
【００１７】
一方、フコイダンの配合量も魚類の種類等にあわせて適宜決定すればよく、通常、経口法であれば飼料中に１０００ｍｇ／ｋｇ〜４０００ｍｇ／ｋｇ程度、特に２０００ｍｇ／ｋｇ〜３０００ｍｇ／ｋｇ配合するのが好ましい。また、薬浴法であれば、水槽の水量に対し６０ｍｇ／トン〜２００ｍｇ／トン程度、特に１００ｍｇ／トン〜１５０ｍｇ／トン配合するのが好ましい。
【００１８】
本発明では、上記成分（Ａ）に、更に（Ｂ）乳酸球菌及びポリフェノールから選ばれる１種又は２種以上を含有させる。乳酸球菌とは、球状の外観を有する乳酸菌の１種であり、ストレプトコッカス・ラクティス、ストレプトコッカス・クレモリス等のストレプトコッカス属細菌、ペディオコッカス・ハロフィルス等のペディオコッカス属細菌、エンテロコッカス・フェカリス等のエンテロコッカス属細菌などが挙げられる。これらの乳酸球菌のうち、特に免疫賦活効果の点からエンテロコッカス・フェカリスが好ましい。
【００１９】
乳酸球菌の投与形態としては、菌体を通常の増殖用培地、例えば、ロゴサ培地等で増殖させたものをそのまま投与してもよく、該培養液から遠心分離し、静置後上清を取り除く等の手段により回収した菌体を投与してもよい。更に賦形剤として澱粉かスキムミルク等とともに凍結乾燥もしくは加熱乾燥したものを用いることもできる。得られた菌体は、生菌、死菌何れも使用できるが、特に生菌が好ましい。
【００２０】
乳酸球菌の配合量も魚類の種類等にあわせて適宜決定すればよく、通常、経口法であれば、例えば１×１０１０  ｃｆｕ／ｇの菌体に賦形剤１００ｍｇを混合し得られた菌体含有混合物を飼料中に１００ｍｇ／ｋｇ〜３００ｍｇ／ｋｇ程度、特に１５０ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇ配合するのが好ましい。また、薬浴法であれば、水槽の水量に対し菌体含有混合物を１００ｍｇ／トン〜４００ｍｇ／トン程度、特に１５０ｍｇ／トン〜３００ｍｇ／トン配合するのが好ましい。
【００２１】
一方、ポリフェノールとは、分子内に数個以上、特に３個以上のフェノール性水酸基をもつ植物成分の総称で、陸上植物のほとんどに存在する植物の代謝産物である。植物中では、紫外線防御、誘虫、抗菌、酸化抑制効果があるとされており、一方人体に対しても抗酸化や抗炎症効果が期待されている。これらポリフェノール類は、その基本骨格から、フラボノイド類、クロロゲン酸、没食子酸、エラグ酸といったモノマーポリフェノールと、ポリマーポリフェノール（タンニン類）に分類されている（食品と開発，３４（６），２１−，１９９９．）。
【００２２】
本発明で用いられるポリフェノールとしては、モノマーポリフェノール、ポリマーポリフェノールの何れを用いてもよいが、特に抗菌効果の点からカテキン等の茶由来のポリフェノールが好ましい。このようなポリフェノールとしては、ポリフェノールを含有する植物をそのまま用いてもよいが、水、熱水、又はアルコール等により抽出したものを用いてもよい。このようなポリフェノールの抽出方法としては、例えば、茶由来のポリフェノールであれば、乾燥茶葉を熱水で抽出し、通常用いられる方法でろ過後、ろ液を凍結乾燥して水溶性茶ポリフェノールを得ることができる。これをそのまま用いてもよいが、水溶性茶ポリフェノールを酢酸エチル等を用いて処理し、得られた不溶化ポリフェノールを用いてもよい。
【００２３】
ポリフェノールの配合量も魚類の種類等にあわせて適宜決定すればよく、例えば経口法であれば飼料中に１００ｍｇ／ｋｇ〜５０００ｍｇ／ｋｇ程度、特に２００ｍｇ／ｋｇ〜２０００ｍｇ／ｋｇ配合するのが好ましい。また、薬浴法であれば、水槽の水量に対し２００ｍｇ／トン〜５０００ｍｇ／トン程度、特に２００ｍｇ／トン〜２０００ｍｇ／トン配合するのが好ましい。
【００２４】
上記成分（Ａ）及び（Ｂ）は各々を別個に投入することができる。すなわち、上記成分（Ａ）をそのまま、或いは抽出物を直接投与してもよい。又、別途成分（Ｂ）をそのまま、或いは上記乳酸球菌の培養液又は遠心分離の手段により回収した菌体をそのまま、又は上記ポリフェノールを含む植物や抽出乾燥物をそのまま、もしくは担体に担持して投与してもよい。
【００２５】
本発明の魚類感染予防・治療剤の投与方法としては、経口法、薬浴法、あるいは両法の併用のいずれを用いてもよく、対象となる魚の状態や養殖環境に併せて適宜選択すればよいが、例えば、特に開口前のふ化仔魚であれば、薬浴法を選択すればよく、開口後、特に開口直後の稚魚であれば経口法と薬浴法を併用させることが好ましい。また、感染、又は未感染の親魚に経口投与して、親魚を治療・感染防御するだけでなく、卵への垂直感染を防ぐと言う方法も有効である。
経口法の場合、これらを含有する飼料の給餌量は、１日に魚類の体重の３質量％程度が良い。一方薬浴法の場合、これらを含有する薬浴剤の投与量は、１日に１〜３回程度が良い。
【００２６】
本発明の感染予防・治療剤を適用し得る魚類としては、特に限定されず、海水魚、特にシマアジ、ブリ、タイ、ギンザケ、マアジ、ヒラメ、キジハタ、マツカワ、クエ、マハタ、カレイ、クロソイ、トラフグ、カンパチ、バラムンディ、シーバス、ターボット等が挙げられる。また適用できる感染症としては、親魚から垂直感染するウイルス感染症又は細菌感染症が挙げられる。中でも、ウイルス性神経壊死症（ＶＮＮＶ）に対する効果が高く好ましい。
【００２７】
ここで言うウイルス性神経壊死症とは、ノダウイルスの１種であるＳｔｒｉｐｅｄ  ｊａｃｋ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｎｅｃｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓにより引き起こされる疾患で、仔稚魚に発生する斃死率の高い感染症である。８０年代にはシマアジ、キジハタ等の魚類に頻繁に発病することで知られ、近年ではヒラメ等にその感染対象が拡大してきている。感染した魚は外見上顕著な病変部は認められないが、中枢神経組織・網膜の神経細胞に壊死・崩壊が認められ、また表層部を力なく遊泳し、旋回・回転しながら沈下するという行動が認められる。
【００２８】
【実施例】
以下、実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２９】
実施例１  海藻の調製
海藻（トロロコンブ、カジメ、アスコフィラム・ノドサム、ジャイアントケルプ、オキナワモズク）としては、塩蔵されたものを用いた。各海藻をホモジナイズし、その湿重量と同量の水に懸濁させて塩抜きを行なった。更に藻体１ｋｇあたり１リットルの割合で水に懸濁し、１００℃で２時間加熱し、その後室温で静置して抽出した。ガーゼにて藻体を濾別し、その懸濁液を遠心分離した（９０００ｒｐｍ、６０分）。更にその上清を乾燥させて、各海藻抽出物を粉末として得た。
【００３０】
実施例２  フコイダンの調製
原料には塩蔵されたオキナワモズクを用いた。オキナワモズクをその湿重量と同量の水に懸濁させ塩抜きを行なった後、塩酸水溶液を加えてｐＨ３に調整した。本懸濁液を１００℃、１０分間加熱し、フコイダンを抽出させた。更に、遠心分離機を用いて７０００Ｇで不溶分を除去し、分画分子量６０００の限外濾過膜を用いて、ｐＨ３で回分加水濾過を繰り返すことで、分子量６０００以下の低分子画分を除去した。得られた画分に水酸化ナトリウムを加え、ｐＨを５．５〜６．０の範囲に調整した。このフコイダンを主成分とする濃縮液を噴霧によって乾燥し、湿藻体１ｋｇに対し５ｇのフコイダン画分の粉末を得た。
【００３１】
実施例３  乳酸球菌の調製
乳酸球菌（エンテロコッカス・フェカリス  ＩＦＯ１６８０４）を増殖培地（ロゴサ培地）にて２日間培養後、培養液を遠心分離（３，０００ｒｐｍ、３０分）し、静置後上清を取り除き、得られた菌体（１×１０１０  ｃｆｕ／ｇ）に賦形剤としてスキムミルク（１００ｍｇ）を混合し、凍結乾燥して乳酸球菌試料を得た。
【００３２】
実施例４  ポリフェノールの調製
乾燥茶葉５０ｇを熱水５５０ｍＬにて３０分抽出し、ろ紙濾過後、ろ液を凍結乾燥した。乾燥後、酢酸エチルに溶解し、上清を回収して減圧乾固し、ポリフェノール試料とした。
【００３３】
実施例５  親魚への経口投与
マダイ親魚を用いてフコイダンの単独投与、及びフコイダンと乳酸球菌、ポリフェノールの併用投与によるウイルス性神経壊死症ウイルス（ＶＮＮＶ）の体外排除効果（親魚からの垂直感染防御効果）を確認した。試料としては、実施例２〜４で得られたフコイダン、エンテロコッカス・フェカリス、及びポリフェノールを使用した。
【００３４】
（投与方法）フコイダン投与区としては、フコイダンのみを通常飼料（エビアン協和製）に２％吸着させた餌を使用した。一方、混合投与区としては、通常飼料にフコイダン２００ｇ、乳酸球菌試料１０ｇ及びポリフェノール２０ｇの混合物（以下、混合物Ａと記す）を通常飼料に２質量％吸着させたものを用いた。いずれの試験区も、１日１回、６日間連続投与した。
【００３５】
（供試魚種）マダイ
（供試尾数）マダイ親魚１８尾
（飼育方法）２０ｔコンクリート水槽を各試験区ごとに１面づつ使用した。
【００３６】
（試験方法）試験には、ＰＣＲにより選別したＶＮＮＶに自然感染したマダイ親魚（以下、ＶＮＮＶ陽性マダイ親魚と記す）を用いた。マダイ親魚１８尾を９尾づつ各水槽で８日間飼育した。各試験区において、飼料投与前（飼育開始１日目）及び飼料投与後（飼育開始８日目）にＰＣＲ検査を行い、ＶＮＮＶの感染率を調べた。ＰＣＲ検査にはマダイ親魚の総排泄口からカテーテルを用いて採取した未受精卵を用いた。卵に感染が認められた親魚の尾数を陽性尾数とし、供試尾数に対する陽性尾数の割合を陽性率として算出した。得られた結果を表１に示す。
【００３７】
【表１】
2004307346.tif 000002
【００３８】
表１に示した通り、フコイダン単独投与によりＶＮＮＶの垂直感染率が低下することがわかった。また、混合物Ａを投与することによりフコイダン単独に比べ更に垂直感染率を低下させる効果が得られた。
【００３９】
実施例６  ウイルス性神経壊死症陽性親魚由来ふ化仔魚に対する効果１
ＶＮＮＶ陽性マダイ親魚から採卵しふ化させた稚魚を用いて、フコイダン、並びにフコイダン及び乳酸球菌の混合物を用いた場合のＶＮＮＶによる死亡率の低減効果を確認した。
【００４０】
（投与方法）フコイダン、及びエンテロコッカス・フェカリスは、実施例２〜３で得られたものを使用した。実施例５と同様に調製したフコイダン６ｇ、及び通常飼料にフコイダン２００ｇ及び乳酸球菌試料１０ｇとなるよう調整した混合物（以下、混合物Ｂと記す）を通常飼料に２質量％吸着させた混合物６ｇを、２０００ｍｌの温水（約６０℃）で溶解し、フコイダン液及び混合物Ｂ液とし、飼育水槽に散布する方法で投与（薬浴法）した。
【００４１】
（供試魚種）マダイ
（供試尾数）ＶＮＮＶ陽性マダイ親魚メス４尾から採卵し、２０万粒の受精卵を得た。これから無作為に１５万粒とり、各試験区にそれぞれ６万粒ずつ供した。
（飼育方法）７ｔの室内コンクリート水槽を各試験区ごとに１面づつ、計３面使用した。
【００４２】
（試験方法）フコイダン投与区にはフコイダン液２００ｍｌ、混合物Ｂ投与区には混合物Ｂ液２００ｍｌ、対照区には温水のみ２００ｍｌをそれぞれ受精卵と同様に散布し、３日間止水飼育した。
飼育終了後に、各区から無作為に１００尾を採取し、光学顕微鏡（４００倍率）で稚魚の神経組織を観察し、ウイルス性神経壊死症の感染率を測定した。得られた結果を表２に示す。
【００４３】
【表２】
2004307346.tif 000003
【００４４】
表２に示したとおり、フコイダン投与により、ウイルス神経壊死症の感染率を低下させる結果になった。また、混合物Ｂを投与することにより、同症の感染率を更に顕著に低下させる効果が得られた。
【００４５】
実施例７  ウイルス性神経壊死症陽性親魚由来ふ化仔魚に対する効果２
ＶＮＮＶ陽性マダイ親魚から採卵しふ化させた稚魚を用いて、フコイダン、並びにフコイダン、乳酸球菌、及びポリフェノールの混合物を用いた場合のＶＮＮＶによる死亡率の低減効果を確認した。
【００４６】
（投与方法）フコイダン、エンテロコッカス・フェカリス、及び茶ポリフェノールは、実施例２〜４で得られたものを使用した。フコイダン６ｇ、及び実施例５と同様に調整した混合物Ａ６ｇを、２０００ｍｌの温水（約６０℃）で溶解し、フコイダン液及び混合物液とし、飼育水槽に散布する方法で投与（薬浴法）した。
【００４７】
（供試魚種）マダイ
（供試尾数）ＶＮＮＶ陽性マダイ親魚メス４尾から採卵し、２０万粒の受精卵を得た。これから無作為に１５万粒とり、各試験区にそれぞれ６万粒ずつ供した。
（飼育方法）７ｔの室内コンクリート水槽を各試験区ごとに１面づつ、計３面使用した。
【００４８】
（試験方法）フコイダン投与区にはフコイダン液２００ｍｌ、混合投与区には混合物Ａ液２００ｍｌ、対照区には温水のみ２００ｍｌをそれぞれ受精卵と同様に散布し、９日間止水飼育した。
飼育終了後に、各区から無作為に１００尾を採取し、光学顕微鏡（４００倍率）で稚魚の神経組織を観察し、ウイルス性神経壊死症の感染率を測定した。得られた結果を表３に示す。
【００４９】
【表３】
2004307346.tif 000004
【００５０】
表３に示したとおり、フコイダン投与により、ウイルス神経壊死症の感染率を低下させる結果になった。また、混合物Ａを投与することにより、同症の感染率を更に顕著に低下させる効果が得られた。
【００５１】
実施例８  ふ化仔魚に対する効果
ＶＮＮＶ陽性マダイ親魚より採卵し、ふ化させたマダイ稚魚を用いて、フコイダン及びフコイダンと乳酸球菌、ポリフェノールの混合物（以下混合物）を使用することにより、ウイルス性神経壊死症による死亡率の低下効果を確認した。
【００５２】
（投与方法）フコイダン、エンテロコッカス・フェカリス、及び茶ポリフェノールは、実施例２〜４で得られたものを使用した。フコイダン６０ｇ、及び混合物Ａ６０ｇをそれぞれ２０００ｍｌの温水（約５５℃）で溶かし、フコイダン液及び混合物Ａ液とし、飼育水槽に散布する方法で投与（薬浴法）した。
（供試魚種）マダイ
（供試尾数）マダイ受精卵約４００万粒から、マダイふ化仔魚約３５０万尾を得た。この稚魚を無作為に４６万尾採取し、各試験区にそれぞれ１５万尾ずつ供した。
（飼育方法）６０ｔの室内コンクリート水槽を各試験区ごとに１面づつ、計３面使用した。飼料は稚魚の発育段階に応じて適宜増加させ、総給餌量は体重あたり５〜１５％とし、６０日間飼育した。
【００５３】
（試験方法）フコイダン投与区にはフコイダン液２００ｍｌ、混合投与区には混合物液２００ｍｌを１日１回６０ｔ水槽に散布し、対照区には塩水のみ２００ｍｌを同様に散布した。死亡稚魚を回収し、稚魚の死亡原因の主因がウイルス性神経壊死症であることを適宜ＰＣＲ検査及び光学顕微鏡（４００倍率）による神経組織観察診断を行い、診断結果から、飼育期間中のＶＮＮＶによる日間最大死亡数、飼育終了時の累積死亡数及び累積死亡率を調べた。得られた結果を表４に示す。
【００５４】
【表４】
2004307346.tif 000005
【００５５】
表４に示したとおり、フコイダン投与によりウイルス性神経壊死症による死亡率を低下させる結果が得られた。また、混合物Ａを投与することにより、同症の死亡率を更に顕著に低下させる効果が得られた。
【００５６】
【発明の効果】
本発明の組成物を使用することにより、ウイルスによる感染症に対し、親魚由来の垂直感染を防御する事ができる。更に、開口前のふ化仔魚に対しても高い感染予防・治療効果が得られる。