【手続補正書】
【提出日】平成26年5月7日(2014.5.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＲＰ６標的受容体の２つの異なる結合部位に対する少なくとも２つの受容体結合ドメインを有する単離された多価抗体であって、第１の受容体結合ドメインは、標的受容体上の第１の結合部位に結合し、第２の受容体結合ドメインは、同じＬＲＰ６標的受容体上の第２の結合部位に結合し、該第１および第２の受容体結合ドメインは、ＬＲＰ６標的受容体の第１および第２の結合部位への第１および第２の受容体結合ドメインの結合が古典的Ｗｎｔシグナル変換経路を阻害するように、互いに連結されており、該抗体または抗原結合断片は、Ｗｎｔシグナルの有意な増強を示さない、多価抗体。
【請求項２】
約１ナノモルまたは１ピコモル親和性の標的受容体に対する親和性を有する、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
第１および第２の受容体結合ドメインが、ＩｇＧ抗体、ｓｃＦｖ断片、一本鎖ダイアボディ、抗体模擬物および抗体可変ドメインからなる群から選択される、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
多価抗体、二価抗体、二重特異性抗体、および二パラトープ(biparatopic)抗体からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
第１の受容体結合ドメインがＩｇＧ抗体であり、第２の受容体結合ドメインがｓｃＦｖ断片であり、該ＩｇＧ抗体およびｓｃＦｖ断片は、ＩｇＧ抗体およびｓｃＦｖ断片がそれぞれＬＲＰ６の第１および第２のエピトープに結合することができる空間分布にて、リンカーにより互いに連結されている、請求項１に記載の抗体。
【請求項６】
リンカーが、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４および（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３からなる群から選択されるＧｌｙ−Ｓｅｒリンカーである、請求項５に記載の抗体。
【請求項７】
ＬＲＰ６標的受容体の第１のエピトープがβ−プロペラ１ドメインである、請求項１に記載の抗体。
【請求項８】
ＬＲＰ６標的受容体の第２のエピトープがβ−プロペラ３ドメインである、請求項１に記載の抗体。
【請求項９】
ＬＰＲ６  β−プロペラ１ドメインに結合し、配列番号：１、配列番号：２１および配列番号：４７からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１；配列番号：２、配列番号：２２および配列番号：４８からなる群から選択されるＣＤＲ２；および配列番号：３、配列番号：２３および配列番号：４９からなる群から選択されるＣＤＲ３；ならびに配列番号：４、配列番号：２４および配列番号：５０からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ１；配列番号：５、配列番号：２５および配列番号：５１からなる群から選択されるＣＤＲ２；および配列番号：６、配列番号：２６および配列番号：５２からなる群から選択されるＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１０】
ＬＰＲ６  β−プロペラ３ドメインに結合し、配列番号：６９、配列番号：９３および配列番号：１１５からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１；配列番号：７０、配列番号：９４および配列番号：１１６からなる群から選択されるＣＤＲ２；および配列番号：７１、配列番号：９５および配列番号：１１７からなる群から選択されるＣＤＲ３；ならびに配列番号：７２、配列番号：９６および配列番号：１１８からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ１；配列番号：７３、配列番号：９７および配列番号：１１９からなる群から選択されるＣＤＲ２；および配列番号：７４、配列番号：９８および配列番号：１２０からなる群から選択されるＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１１】
ＩｇＧ重鎖抗体が、配列番号：１８、６６、８６および１０１からなる群から選択され、軽鎖が配列番号：１７および８５からなる群から選択される、請求項５に記載の抗体。
【請求項１２】
ｓｃＦｖが、配列番号：１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２および１６４からなる群から選択される、請求項５に記載の抗体。
【請求項１３】
ｓｃＦｖ断片が、未変異ｓｃＦｖ断片と比較してｓｃＦｖの安定性を改善する少なくとも１つのアミノ酸変異を含み、該アミノ酸変異は図２９−３２から選択される、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１４】
Ｗｎｔ１シグナル経路およびＷｎｔ３シグナル変換経路からなる群から選択される古典的Ｗｎｔシグナル変換経路を阻害する機能活性を有する、請求項１に記載の抗体。
【請求項１５】
細胞集団を枯渇させる、細胞集団の増殖を阻害するか、または減少させる、細胞集団からの炎症性メディエーターの分泌を阻害するか、または減少させる、細胞集団からの細胞質顆粒の分泌を阻害するか、または減少させる機能活性を有し、該細胞集団は腫瘍細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＷｎｔ依存性細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の抗体。
【請求項１６】
ＬＲＰ６標的受容体上のβ−プロペラ１ドメインに結合するＩｇＧ抗体およびＬＲＰ６標的上のβ−プロペラ３ドメインに結合するｓｃＦｖを含む単離された二パラトープ抗体であって、該ＩｇＧ抗体およびｓｃＦｖは、β−プロペラ１ドメインおよびβ−プロペラ３ドメインへのＩｇＧ抗体およびｓｃＦｖのそれぞれの結合が、古典的Ｗｎｔシグナル変換経路を阻害するように、リンカーにより連結されており、該二パラトープ抗体は、Ｗｎｔシグナルの有意な増強を示さない、抗体。
【請求項１７】
約１ナノモルまたは１ピコモル親和性の標的受容体に対する親和性を有する、請求項１６に記載の抗体。
【請求項１８】
リンカーが、ＬＲＰ６のβ−プロペラ１ドメインおよびＬＲＰ６のβ−プロペラ３ドメインへのＩｇＧ抗体およびｓｃＦｖ断片のそれぞれの結合を可能にする空間分布を含む、請求項１６に記載の抗体。
【請求項１９】
ｓｃＦｖが、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカーにより、ＩｇＧ抗体のＦｃ結合部位に連結されており、該Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４および（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３からなる群から選択される、請求項１６に記載の抗体。
【請求項２０】
ＩｇＧ抗体のＦｃ結合部位がＣＨ３ドメインである、請求項１９に記載の抗体。
【請求項２１】
ｓｃＦｖが、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカーにより、ＩｇＧ抗体の軽鎖に連結されており、該Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４および（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３からなる群から選択される、請求項１６に記載の抗体。
【請求項２２】
ｓｃＦｖが、未変異ｓｃＦｖ断片と比較してｓｃＦｖの安定性を改善する少なくとも１つのアミノ酸変異を含み、該アミノ酸変異は図２９−３２から選択される、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２３】
配列番号：１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号：２の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号：３の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号：４の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号：５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号：６の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含むＬＲＰ６のβ−プロペラ１ドメインに結合する抗体、ならびに、配列番号：６９の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号：７０の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号：７１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号：７２の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号：７３の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号：７４の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含むＬＲＰ６のβ−プロペラ３ドメインに結合するｓｃＦｖを含む、請求項１６に記載の抗体。
【請求項２４】
配列番号：１６６の位置４５４のＬｙｓ欠失をさらに含む、請求項２３に記載の抗体。
【請求項２５】
配列番号：１６６の位置６７７でＰｒｏからＡｌａへの変異をさらに含む、請求項２３に記載の抗体。
【請求項２６】
配列番号：１６６の位置６７６−６７７でＡｓｐＰｒｏからＴｈｒＡｌａへの変異をさらに含む、請求項２３に記載の抗体。
【請求項２７】
配列番号：１６６、１７１、１７３、１７５、１９５、２０１および２０７からなる群から選択される重鎖配列と配列番号：１７０、１９３、１９９および２０５からなる群から選択される軽鎖配列を共に含む、請求項１６に記載の抗体。
【請求項２８】
配列番号：１６６／１７０、１７１／１７０、１７３／１７０、１７５／１７０、２０１／１９９、２０７／２０５および１９５／１９３からなる群から選択される重鎖および軽鎖配列の組合せを含む、請求項１６に記載の抗体。
【請求項２９】
配列番号：１６６／１７０を有する重鎖および軽鎖配列を含む、請求項１６に記載の抗体。
【請求項３０】
配列番号；１７７の重鎖配列および配列番号：１８１を含む軽鎖配列を含む、請求項２１に記載の抗体。
【請求項３１】
Ｗｎｔ１シグナル経路およびＷｎｔ３シグナル変換経路からなる群から選択される古典的Ｗｎｔシグナル変換経路を阻害する機能活性を有する、請求項１６に記載の抗体。
【請求項３２】
細胞集団を枯渇させる、細胞集団の増殖を阻害するか、または減少させる、細胞集団からの炎症性メディエーターの分泌を阻害するか、または減少させる、細胞集団からの細胞質顆粒の分泌を阻害するか、または減少させる機能活性を有し、該細胞集団は、腫瘍細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＷｎｔ依存性細胞からなる群から選択される、請求項１６に記載の抗体。
【請求項３３】
ＬＲＰ６標的受容体上のβ−プロペラ３ドメインに結合するＩｇＧ抗体およびＬＲＰ６標的上のβ−プロペラ１ドメインに結合するｓｃＦｖを含む単離された二パラトープ抗体であって、該ＩｇＧ抗体およびｓｃＦｖは、β−プロペラ３ドメインおよびβ−プロペラ１ドメインへのＩｇＧ抗体およびｓｃＦｖのそれぞれの結合が、古典的Ｗｎｔシグナル変換経路を阻害するように、リンカーにより連結されており、該二パラトープ抗体は、Ｗｎｔシグナルの有意な増強を示さない、抗体。
【請求項３４】
約１ナノモルまたは約１ピコモル親和性の標的受容体に対する親和性を有する、請求項３３に記載の抗体。
【請求項３５】
リンカーが、ＬＲＰ６のβ−プロペラ３ドメインおよびＬＲＰ６のβ−プロペラ１ドメインへのＩｇＧ抗体およびｓｃＦｖのそれぞれの結合を可能にする空間分布を含む、請求項３３に記載の抗体。
【請求項３６】
ｓｃＦｖが、Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカーにより、ＩｇＧ抗体のＦｃ結合部位に連結されており、該Ｓｅｒ−Ｇｌｙリンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４および（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３からなる群から選択される、請求項３３に記載の抗体。
【請求項３７】
ＩｇＧ抗体のＦｃ結合部位がＣＨ３ドメインである、請求項３６に記載の抗体。
【請求項３８】
ｓｃＦｖが、未変異ｓｃＦｖ断片と比較してｓｃＦｖの安定性を改善する少なくとも１つのアミノ酸変異を含み、該アミノ酸変異は図２９−３２から選択される、請求項３３に記載の抗体。
【請求項３９】
配列番号：６９の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号：７０の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号：７１の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号：７２の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号：７３の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号：７４の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含むＬＲＰ６のβ−プロペラ３ドメインに結合する抗体、ならびに、配列番号：１の重鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号：２の重鎖可変領域ＣＤＲ２；配列番号：３の重鎖可変領域ＣＤＲ３；配列番号：４の軽鎖可変領域ＣＤＲ１；配列番号：５の軽鎖可変領域ＣＤＲ２；および配列番号：６の軽鎖可変領域ＣＤＲ３を含むＬＲＰ６のβ−プロペラ１ドメインに結合するｓｃＦｖを含む、請求項３３に記載の抗体。
【請求項４０】
ｓｃＦｖ  ＶＨおよびＶＬが、３つまたは４つのアミノ酸を含むリンカーで連結されている、請求項３９に記載の抗体。
【請求項４１】
配列番号：１８７および１８９からなる群から選択される重鎖配列；ならびに配列番号：１８５を含む軽鎖配列を含む、請求項３９に記載の抗体。
【請求項４２】
Ｗｎｔ１シグナル経路およびＷｎｔ３シグナル変換経路からなる群から選択される古典的Ｗｎｔシグナル変換経路を阻害する機能活性を有する、請求項３３に記載の抗体。
【請求項４３】
細胞集団を枯渇させる、細胞集団の増殖を阻害するか、または減少させる、細胞集団からの炎症性メディエーターの分泌を阻害するか、または減少させる、細胞集団からの細胞質顆粒の分泌を阻害するか、または減少させる機能活性を有し、該細胞集団は、腫瘍細胞、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＷｎｔ依存性細胞からなる群から選択される、請求項３３に記載の抗体。
【請求項４４】
請求項１、１６および３３のいずれかに記載の多価抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【請求項４５】
配列番号：１６６、１７１、１７３、１７５、１９５、２０１および２０７からなる群から選択される重鎖配列；ならびに配列番号：１７０、１９３、１９９および２０５からなる群から選択される軽鎖配列を含む多価抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【請求項４６】
配列番号：１６６、１７１、１７３、１７５、１９５、２０１および２０７と少なくとも９８％配列同一性；ならびに配列番号：１７０、１９３、１９９および２０５からなる群から選択される軽鎖配列を有する多価抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【請求項４７】
配列番号：１６６および配列番号：１７０、または配列番号：１６６および配列番号：１７０と少なくとも９８％配列同一性を含む配列を含む多価抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【請求項４８】
配列番号：１７７からなる群から選択される配列；ならびに配列番号：１８１の軽鎖配列、または配列番号：１７７および配列番号：１８１と少なくとも９８％配列同一性を含む配列を含む多価抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【請求項４９】
配列番号：１８７および１８９からなる群から選択される配列；ならびに配列番号：１８５の軽鎖配列、または配列番号：１８７または配列番号：１８９および配列番号：１８５と少なくとも９８％配列同一性を含む配列を含む多価抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸。
【請求項５０】
請求項４４−４９のいずれかに記載の核酸を含むベクター。
【請求項５１】
標的受容体の２つの異なる結合部位に対する少なくとも２つの受容体結合ドメインを有する請求項１−４３のいずれかから選択される多価抗体、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項５２】
（ａ）ＬＲＰ６標的受容体の第１の結合部位に結合する第１の受容体結合ドメインを提供すること；（ｂ）ＬＲＰ６標的受容体の第２の結合部位に結合する第２の受容体結合ドメインを提供すること；および（ｃ）第１の受容体結合ドメインを第２の受容体結合ドメインに連結すること、を含む請求項１、１６または３３に記載の多価抗体を得る方法。
【請求項５３】
第１または第２の受容体結合ドメインが、ＩｇＧ抗体、ｓｃＦｖ断片、一本鎖ダイアボディ、抗体模擬物および抗体可変ドメインからなる群から選択される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
第１および第２の受容体結合ドメインが、第１および第２の受容体結合ドメインがＬＲＰ６の第１および第２のエピトープにそれぞれ結合することができる空間分布にて、リンカーにより互いに連結されている、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
リンカーが、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）４および（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３からなる群から選択されるＧｌｙ−Ｓｅｒリンカーである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
アミノ酸変異が、未変異第１または第２の受容体結合ドメインと比較して、第１または第２の受容体結合ドメインの安定性を改善するように、第１または第２の受容体結合ドメインに少なくとも１つのアミノ酸変異を導入することをさらに含む方法であって、該アミノ酸変異は図２９−３２から選択される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５７】
ＬＲＰ６を発現する癌を有する対象における癌の処置において使用するための、標的受容体の２つの異なる結合部位に対する少なくとも２つの受容体結合ドメインを有する請求項１−４３のいずれかに記載の多価抗体。
【請求項５８】
対象がヒトである、請求項５７に記載の多価抗体。
【請求項５９】
ＬＲＰ６を発現する癌を有する対象における癌の処置において使用するための、標的受容体の２つの異なる結合部位に対する少なくとも２つの受容体結合ドメインを有する請求項１−４３のいずれかに記載の多価抗体を含む組成物であって、該癌は、乳癌、肺癌、多発性骨髄腫、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、胃癌、前立腺癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨肉腫、扁平上皮癌および黒色腫からなる群から選択される、組成物。
【請求項６０】
癌が乳癌である、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
ＬＲＰ６に対する多価抗体を使用して、古典的Ｗｎｔシグナル伝達経路が介在する疾患を処置する方法であって、該抗体はＷｎｔシグナルの有意な増強を示さない、方法。
【請求項６２】
任意の癌の標準治療と組み合わせて、ＬＲＰ６を発現する癌を有する対象における癌の処置において使用するための、配列番号：１６６／１７０、１７１／１７０、１７３／１７０、１７５／１７０、２０１／１９９、２０７／２０５および１９５／１９３からなる群から選択される重鎖および軽鎖配列を有する多価抗体。
【請求項６３】
乳癌、肺癌、多発性骨髄腫、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、胃癌、前立腺癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨肉腫、扁平上皮癌および黒色腫からなる群から選択される癌の処置のための医薬の製造における、前記請求項のいずれかに記載の多価抗体の使用。
【請求項６４】
古典的Ｗｎｔシグナル伝達経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号：１４のＶＨ；配列番号：１３のＶＬ；配列番号：８２のＶＨ；および配列番号：８１のＶＬを有する多価抗体。
【請求項６５】
薬物としての使用のための、配列番号：１４のＶＨ；配列番号：１３のＶＬ；配列番号：８２のＶＨ；配列番号：８１のＶＬを有する多価抗体。
【請求項６６】
古典的Ｗｎｔシグナル伝達経路が介在する癌の処置における使用のための、配列番号：１６６および配列番号：１７０を有する多価抗体。
【請求項６７】
薬物としての使用のための配列番号：１６６および配列番号：１７０を有する多価抗体。
【請求項６８】
医薬としての使用のための、請求項１−４３のいずれかに記載の多価抗体。
【請求項６９】
ＬＲＰ６を発現する癌の処置のための医薬としての使用のための、請求項１−４３のいずれかに記載の多価抗体。
【請求項７０】
ＬＲＰ６を発現する癌の処置のための医薬としての使用のための多価抗体であって、該癌が、乳癌、肺癌、多発性骨髄腫、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、胃癌、前立腺癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨肉腫、扁平上皮癌および黒色腫からなる群から選択される、請求項１−４３のいずれかに記載の多価抗体。