【手続補正書】
【提出日】平成24年1月5日(2012.1.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
SEQ ID NO：23と特異的に結合する、単離されたポリペプチドであって、
1）a）SEQ ID NO：5からなるCDR1；
b）SEQ ID NO：6からなるCDR2；および
c）SEQ ID NO：7からなるCDR3
を含む抗体可変ドメイン、
2）d）SEQ ID NO：10からなるCDR1；
e）SEQ ID NO：11からなるCDR2；および
f）SEQ ID NO：12からなるCDR3
を含む抗体可変ドメイン、
3）a）SEQ ID NO：15からなるCDR1；
b）SEQ ID NO：16からなるCDR2；および
c）SEQ ID NO：17からなるCDR3
を含む抗体可変ドメイン、
4）d）SEQ ID NO：20からなるCDR1；
e）SEQ ID NO：21からなるCDR2；および
f）SEQ ID NO：22からなるCDR3
を含む抗体可変ドメイン、ならびに
5）それらの組み合わせ
からなる群より選択される抗体可変ドメインを含む、前記ポリペプチド。
【請求項２】
1）SEQ ID NO：4のアミノ酸配列を有するVHドメイン、SEQ ID NO：9のアミノ酸配列を有するVLドメイン、若しくはそれらの組み合わせ；または
2）SEQ ID NO：14のアミノ酸配列を有するVHドメイン、SEQ ID NO：19のアミノ酸配列を有するVLドメイン、若しくはそれらの組み合わせ
を含む、請求項１記載の単離されたポリペプチド。
【請求項３】
SEQ ID NO：23との結合において、モノクローナル抗体KFCC-GY4またはモノクローナル抗体KFCC-GY5と特異的に競合する、単離された抗体。
【請求項４】
ヒト化される、請求項３記載の抗体。
【請求項５】
SEQ ID NO：23を含むPLVAPタンパク質と特異的に結合する抗体の治療的有効量を含む、肝細胞癌（HCC）を治療するための薬学的組成物であって、対象の肝臓における腫瘍形成、腫瘍成長、腫瘍血管新生、および腫瘍進行からなる群より選択される活性を阻害し、かつ動脈内注入によって対象に投与される、前記組成物。
【請求項６】
1）対象からの試料中のPLVAP遺伝子産物のレベルを検出する段階；および
2）試料中のPLVAP遺伝子産物のレベルが対照と比べて上昇していることを決定する段階であって、試料中のPLVAP遺伝子産物のレベルが対照と比べて上昇していることによって、対象における肝細胞癌（HCC）が示される、段階
を含み、それによって対象におけるHCCを検出する、対象における肝細胞癌（HCC）をインビトロで検出する方法。
【請求項７】
対象からの肝組織試料におけるPLVAP遺伝子産物の発現を検出する段階を含み、それによって対象における肝細胞癌（HCC）を検出する、対象における肝細胞癌（HCC）をインビトロで検出する方法。
【請求項８】
PLVAPと特異的に結合する抗体および放射性同位元素を含む、対象における肝細胞癌（HCC）を検出するための組成物であって、対象の肝臓の画像を得、かつ対象の肝臓における抗体の蓄積を検出し、それによってインビボで対象における肝細胞癌（HCC）を検出するために、動脈内注射によって対象に投与される、前記組成物。
【請求項９】
抗体が、放射性同位体または細胞傷害性物質とコンジュゲートしている、請求項５または８記載の組成物。
【請求項１０】
肝動脈内注入および経動脈化学塞栓術（transarterial chemoembolization）（TACE）からなる群より選択される手順によって対象に動脈内投与される、請求項５または８記載の組成物。
【請求項１１】
少なくとも1つの化学療法剤と組み合わせて投与される、請求項５記載の組成物。
【請求項１２】
抗体が、SEQ ID NO：23との結合において、モノクローナル抗体KFCC-GY4またはモノクローナル抗体KFCC-GY5と特異的に競合する、請求項５または８記載の組成物。
【請求項１３】
PLVAP RNA転写物と高ストリンジェンシー条件下で特異的にハイブリダイズする核酸プローブ、SEQ ID NO：23と特異的に結合する抗体、またはその組み合わせを含む、哺乳動物対象における肝細胞癌の検出のための診断キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
さらなる態様において、本発明は、SEQ ID NO：23との結合において、モノクローナル抗体KFCC-GY4またはモノクローナル抗体KFCC-GY5と特異的に競合するヒト化抗体を提供する。
[請求項1001]
少なくとも1つのPLVAPアンタゴニストの治療的有効量を対象に投与する段階を含む、それを必要とする対象における肝細胞癌(HCC)を治療する方法であって、前記PLVAPアンタゴニストが、対象の肝臓における腫瘍形成、腫瘍成長、腫瘍血管新生、および腫瘍進行からなる群より選択される活性を阻害する、方法。
[請求項1002]
PLVAPアンタゴニストが、PLVAPと特異的に結合する抗体である、請求項1001記載の方法。
[請求項1003]
抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、および抗原結合断片からなる群より選択される、請求項1002記載の方法。
[請求項1004]
抗体が放射性同位体または細胞傷害性物質とコンジュゲートしている、請求項1002記載の方法。
[請求項1005]
PLVAPアンタゴニストが動脈内投与される、請求項1001記載の方法。
[請求項1006]
PLVAPアンタゴニストが、肝動脈内注入および経動脈化学塞栓術(transarterial chemoembolization)(TACE)からなる群より選択される手順によって対象に動脈内投与される、請求項1005記載の方法。
[請求項1007]
PLVAPアンタゴニストが化学療法剤と組み合わせて投与される、請求項1001記載の方法。
[請求項1008]
化学療法剤が、ドキソルビシン、シスプラチン、マイトマイシン、5-フルオロウラシル、タモキシフェン、ソラフェニブ、およびオクトレオチド(octreotide)からなる群より選択される、請求項1007記載の方法。
[請求項1009]
対象がヒトである、請求項1001記載の方法。
[請求項1010]
1)SEQ ID NO:23を含むPLVAPタンパク質と特異的に結合し、かつ対象の肝臓における腫瘍形成、腫瘍成長、腫瘍血管新生、および腫瘍進行からなる群より選択される活性を阻害する抗体の治療的有効量であって、該抗体が動脈内注入によって対象に投与される、抗体の治療的有効量;ならびに
2)少なくとも1つの化学療法剤
を対象に投与する段階を含み、それによって対象における肝細胞癌(HCC)を治療する、それを必要とする対象における肝細胞癌(HCC)を治療する方法。
[請求項1011]
抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、および抗原結合断片からなる群より選択される、請求項1010記載の方法。
[請求項1012]
抗体が、放射性同位体、細胞傷害性物質、またはそれらの組み合わせとコンジュゲートしている、請求項1010記載の方法。
[請求項1013]
動脈内注入が、肝動脈内注入および経動脈化学塞栓術(TACE)からなる群より選択される、請求項1010記載の方法。
[請求項1014]
抗体が、対象の肝臓内のHCC腫瘍の内部または周囲の血管の内皮細胞に対して送達される、請求項1010記載の方法。
[請求項1015]
化学療法剤が動脈内投与される、請求項1010記載の方法。
[請求項1016]
化学療法剤が、ドキソルビシン、シスプラチン、マイトマイシン、5-フルオロウラシル、タモキシフェン、ソラフェニブ、およびオクトレオチドからなる群より選択される、請求項1010記載の方法。
[請求項1017]
対象がヒトである、請求項1010記載の方法。
[請求項1018]
1)対象からの試料中のPLVAP遺伝子産物のレベルを検出する段階;および
2)試料中のPLVAP遺伝子産物のレベルが対照と比べて上昇していることを決定する段階であって、試料中のPLVAP遺伝子産物のレベルが対照と比べて上昇していることによって、対象における肝細胞癌(HCC)が示される、段階
を含み、それによって対象におけるHCCを診断する、対象における肝細胞癌(HCC)を診断する方法。
[請求項1019]
PLVAP遺伝子産物が、PLVAP RNAおよびPLVAPタンパク質からなる群より選択される、請求項1018記載の方法。
[請求項1020]
試料中のPLVAP遺伝子産物のレベルが、定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)、インサイチューハイブリダイゼーション(ISH)、酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)、および免疫組織化学染色(IHC)からなる群より選択されるアッセイを用いて検出される、請求項1018記載の方法。
[請求項1021]
試料中のPLVAP遺伝子産物のレベルが、酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)または免疫組織化学染色(IHC)を用いて決定される、請求項1020記載の方法。
[請求項1022]
ELISAまたはIHCが、PLVAPと特異的に結合する抗体を用いて行われる、請求項1021記載の方法。
[請求項1023]
試料が肝組織試料である、請求項1018記載の方法。
[請求項1024]
肝組織試料が、生検試料および細針吸引試料からなる群より選択される、請求項1023記載の方法。
[請求項1025]
対照が、参照標準、同じ対象からの正常肝臓試料中のPLVAP遺伝子産物のレベル、および別の対象からの正常肝臓試料中のPLVAP遺伝子産物のレベルからなる群より選択される、請求項1018記載の方法。
[請求項1026]
対象がヒトである、請求項1018記載の方法。
[請求項1027]
対象からの肝組織試料におけるPLVAP遺伝子産物の発現を検出する段階を含み、それによって対象における肝細胞癌(HCC)を診断する、対象における肝細胞癌(HCC)を診断する方法。
[請求項1028]
PLVAP遺伝子産物の発現が、肝組織試料中の血管内皮細胞において検出される、請求項1027記載の方法。
[請求項1029]
血管内皮細胞が、肝組織試料中で肝細胞と隣接している、請求項1028記載の方法。
[請求項1030]
PLVAP遺伝子産物が、PLVAP mRNAおよびPLVAPタンパク質からなる群より選択される、請求項1027記載の方法。
[請求項1031]
試料中のPLVAP遺伝子産物のレベルが、定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)、インサイチューハイブリダイゼーション(ISH)、酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)、および免疫組織化学染色(IHC)からなる群より選択されるアッセイを用いて検出される、請求項1027記載の方法。
[請求項1032]
肝組織試料が、生検試料および細針吸引試料からなる群より選択される、請求項1027記載の方法。
[請求項1033]
対象がヒトである、請求項1027記載の方法。
[請求項1034]
1)PLVAPと特異的に結合する抗体を動脈内注射によって対象に投与する段階であって、該抗体が放射性同位元素を含む、段階;
2)対象の肝臓の画像を得る段階;および
3)対象の肝臓における抗体の蓄積を検出する段階
を含み、それによって対象における肝細胞癌(HCC)を検出する、対象における肝細胞癌(HCC)を検出するインビボでの方法。
[請求項1035]
抗体が、SEQ ID NO:4のアミノ酸配列を有するVHドメインおよびSEQ ID NO:9のアミノ酸配列を有するVLドメインを含む、請求項1034記載の方法。
[請求項1036]
抗体が、SEQ ID NO:14のアミノ酸配列を有するVHドメインおよびSEQ ID NO:19のアミノ酸配列を有するVLドメインを含む、請求項1034記載の方法。
[請求項1037]
対象がヒトである、請求項1034記載の方法。
[請求項1038]
SEQ ID NO:23と特異的に結合する、単離されたポリペプチドであって、
1)a)SEQ ID NO:5からなるCDR1;
b)SEQ ID NO:6からなるCDR2;および
c)SEQ ID NO:7からなるCDR3
を含む抗体可変ドメインと
2)d)SEQ ID NO:10からなるCDR1;
e)SEQ ID NO:11からなるCDR2;および
f)SEQ ID NO:12からなるCDR3
を含む抗体可変ドメインと
3)それらの組み合わせと
からなる群より選択される抗体可変ドメインを含む、単離されたポリペプチド。
[請求項1039]
抗体である、請求項1038記載の単離されたポリペプチド。
[請求項1040]
抗体がSEQ ID NO:23と約0.6×10-7Mの結合親和性で結合する、請求項1039記載の単離されたポリペプチド。
[請求項1041]
抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、および抗原結合断片からなる群より選択される、請求項1039記載の単離されたポリペプチド。
[請求項1042]
抗体が、SEQ ID NO:4のアミノ酸配列を有するVHドメインを含む、請求項1039記載の単離されたポリペプチド。
[請求項1043]
抗体が、SEQ ID NO:9のアミノ酸配列を有するVLドメインを含む、請求項1039記載の単離されたポリペプチド。
[請求項1044]
標識を含む、請求項1038記載の単離されたポリペプチド。
[請求項1045]
標識が、放射性同位体および細胞傷害性物質からなる群より選択される、請求項1044記載の単離されたポリペプチド。
[請求項1046]
SEQ ID NO:23と特異的に結合する、単離されたポリペプチドであって、
1)a)SEQ ID NO:15からなるCDR1;
b)SEQ ID NO:16からなるCDR2;および
c)SEQ ID NO:17からなるCDR3
を含む抗体可変ドメインと
2)d)SEQ ID NO:20からなるCDR1;
e)SEQ ID NO:21からなるCDR2;および
f)SEQ ID NO:22からなるCDR3
を含む抗体可変ドメインと
3)それらの組み合わせと
からなる群より選択される少なくとも1つの抗体可変ドメインを含む、単離されたポリペプチド。
[請求項1047]
抗体である、請求項1046記載の単離されたポリペプチド。
[請求項1048]
抗体がSEQ ID NO:23と約0.4×10-7Mの結合親和性で結合する、請求項1047記載の単離されたポリペプチド。
[請求項1049]
抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、および抗原結合断片からなる群より選択される、請求項1047記載の単離されたポリペプチド。
[請求項1050]
抗体が、SEQ ID NO:14のアミノ酸配列を有するVHドメインを含む、請求項1047記載の単離されたポリペプチド。
[請求項1051]
抗体が、SEQ ID NO:19のアミノ酸配列を有するVLドメインを含む、請求項1047記載の単離されたポリペプチド。
[請求項1052]
標識を含む、請求項1046記載の単離されたポリペプチド。
[請求項1053]
標識が、放射性同位体および細胞傷害性物質からなる群より選択される、請求項1052記載の単離されたポリペプチド。
[請求項1054]
少なくとも1つのPLVAPアンタゴニストと、薬学的に許容される担体とを含む、哺乳動物対象における肝細胞癌の治療のための薬学的組成物。
[請求項1055]
PLVAPアンタゴニストが、PLVAPと特異的に結合する抗体である、請求項1054記載の組成物。
[請求項1056]
抗体が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、および抗原結合断片からなる群より選択される、請求項1055記載の組成物。
[請求項1057]
抗体が、放射性同位体または細胞傷害性物質とコンジュゲートしている、請求項1055記載の組成物。
[請求項1058]
少なくとも1つの化学療法剤をさらに含む、請求項1054記載の組成物。
[請求項1059]
化学療法剤が、ドキソルビシン、シスプラチン、マイトマイシン、5-フルオロウラシル、タモキシフェン、ソラフェニブ、およびオクトレオチドからなる群より選択される、請求項1058記載の組成物。
[請求項1060]
PLVAP RNA転写物と高ストリンジェンシー条件下で特異的にハイブリダイズする核酸プローブを含む、哺乳動物対象における肝細胞癌の検出のための診断キット。
[請求項1061]
核酸プローブが標識を含む、請求項1060記載のキット。
[請求項1062]
SEQ ID NO:23と特異的に結合する抗体を含む、哺乳動物対象における肝細胞癌の検出のための診断キット。
[請求項1063]
抗体が標識を含む、請求項1062記載のキット。
[請求項1064]
SEQ ID NO:23との結合において、モノクローナル抗体KFCC-GY4と特異的に競合する、単離された抗体。
[請求項1065]
SEQ ID NO:23との結合において、モノクローナル抗体KFCC-GY5と特異的に競合する、単離された抗体。
[請求項1066]
PLVAPと特異的に結合するヒト化抗体またはその断片の治療的有効量を対象に投与する段階を含む、それを必要とする対象における肝細胞癌(HCC)を治療する方法であって、前記ヒト化抗体が対象に動脈内投与され、かつ前記ヒト化抗体が、対象の肝臓における腫瘍形成、腫瘍成長、腫瘍血管新生、および腫瘍進行からなる群より選択される活性を阻害する、方法。
[請求項1067]
ヒト化抗体が放射性同位体または細胞傷害性物質とコンジュゲートしている、請求項1066記載の方法。
[請求項1068]
ヒト化抗体が、肝動脈内注入および経動脈化学塞栓術(TACE)からなる群より選択される手順によって対象に動脈内投与される、請求項1066記載の方法。
[請求項1069]
少なくとも1つの化学療法剤を投与する段階をさらに含む、請求項1066記載の方法。
[請求項1070]
化学療法剤が、ドキソルビシン、シスプラチン、マイトマイシン、5-フルオロウラシル、タモキシフェン、ソラフェニブ、およびオクトレオチドからなる群より選択される、請求項1069記載の方法。
[請求項1071]
対象がヒトである、請求項1066記載の方法。
[請求項1072]
ヒト化抗体が、SEQ ID NO:23との結合において、モノクローナル抗体KFCC-GY4またはモノクローナル抗体KFCC-GY5と特異的に競合する、請求項1066記載の方法。
[請求項1073]
SEQ ID NO:23との結合において、モノクローナル抗体KFCC-GY4またはモノクローナル抗体KFCC-GY5と特異的に競合するヒト化抗体。
[請求項1074]
放射性同位体または細胞傷害性物質とコンジュゲートしている、請求項1073記載のヒト化抗体。
[請求項1075]
SEQ ID NO:23と特異的に結合するヒト化抗体であって、
1)a)SEQ ID NO:5からなるCDR1;
b)SEQ ID NO:6からなるCDR2;および
c)SEQ ID NO:7からなるCDR3
を含む抗体可変ドメインと
2)d)SEQ ID NO:10からなるCDR1;
e)SEQ ID NO:11からなるCDR2;および
f)SEQ ID NO:12からなるCDR3
を含む抗体可変ドメインと
3)それらの組み合わせと
からなる群より選択される抗体可変ドメインを含むヒト化抗体。
[請求項1076]
標識を含む、請求項1075記載のヒト化抗体。
[請求項1077]
標識が、放射性同位体および細胞傷害性物質からなる群より選択される、請求項1076記載のヒト化抗体。
[請求項1078]
SEQ ID NO:23と特異的に結合するヒト化抗体であって、
1)a)SEQ ID NO:15からなるCDR1;
b)SEQ ID NO:16からなるCDR2;および
c)SEQ ID NO:17からなるCDR3
を含む抗体可変ドメインと
2)d)SEQ ID NO:20からなるCDR1;
e)SEQ ID NO:21からなるCDR2;および
f)SEQ ID NO:22からなるCDR3
を含む抗体可変ドメインと
3)それらの組み合わせと
からなる群より選択される少なくとも1つの抗体可変ドメインを含むヒト化抗体。
[請求項1079]
標識を含む、請求項1078記載のヒト化抗体。
[請求項1080]
標識が、放射性同位体および細胞傷害性物質からなる群より選択される、請求項1079記載のヒト化抗体。