【手続補正書】
【提出日】平成23年11月24日(2011.11.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
レオウイルス科の一員であるウイルスのワクチン用ウイルス株を製造する方法であって、
必須遺伝子の機能が破壊されるようにレオウイルス科のウイルスに変異を導入するステップと、
前記ウイルスのゲノムに由来し、前記変異を含むウイルス一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を細胞に形質移入するステップと、
前記ワクチン用ウイルス株の製造を導くために適切な条件下で形質移入された前記細胞を培養するステップと
を含み、前記細胞が、前記必須ウイルス遺伝子の機能を補完し、それによりワクチン用ウイルス株の前記細胞内での複製を可能にする方法。
【請求項２】
細胞に形質移入することが、２以上の形質移入ステップを含み、
（１）第１の形質移入ステップが、ウイルスカプシドの内層の組み立てに必要な成分を少なくともコードするｓｓＲＮＡを細胞に形質移入することを含み、
（２）第２の形質移入ステップが、ウイルスゲノムの転写産物であり、前記変異を含み、前記ウイルスの組み立てに必要な全ての成分をコードするｓｓＲＮＡを細胞に形質移入することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
第１と第２の形質移入ステップの間に少なくとも６時間の間隔がある、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ウイルスが、ロタウイルス属又はオルビウイルス属の一員である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記ウイルスが、ブルータングウイルス、アフリカ馬疫ウイルスまたは流行性出血熱ウイルスである請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ウイルスがブルータングウイルスである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ｓｓＲＮＡの一部分が、前記変異を含むウイルスゲノムのｃＤＮＡクローンの転写産物である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
ｓｓＲＮＡが全て、前記変異を含むウイルスゲノムのｃＤＮＡクローンの転写産物である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
複数の必須遺伝子の機能が破壊される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記必須遺伝子が、ポリメラーゼ、ヘリカーゼ、キャップ形成酵素または非構造タンパク質である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記細胞が、ＢＨＫ  ２１細胞、Ｖｅｒｏ細胞、２９３Ｔ細胞、ＢＳＲ細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｃ６／３６細胞またはＫＣ細胞である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
細胞に形質移入するために用いられるウイルスｓｓＲＮＡが、単離ｓｓＲＮＡである、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
ワクチン用ウイルス株を細胞から単離するステップをさらに含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
レオウイルス科の一員であるウイルスのゲノムに由来する単離ウイルスｓｓＲＮＡであって、必須遺伝子の機能を破壊する変異を含み、細胞の形質移入について請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法での使用に適するｓｓＲＮＡ。
【請求項１５】
請求項１４に記載のｓｓＲＮＡからのワクチン用ウイルス株の複製を可能にする、レオウイルス科のウイルスの必須遺伝子を発現する細胞。
【請求項１６】
請求項１４に記載のｓｓＲＮＡに感染した請求項１５に記載の細胞。
【請求項１７】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法により製造されるワクチン用ウイルス株。
【請求項１８】
請求項１７に記載のワクチン用ウイルス株を、医薬的に許容される担体、アジュバントまたは媒体とともに含む医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１４に記載の単離ウイルスｓｓＲＮＡを、医薬的に許容される担体、アジュバントまたは媒体とともに含む医薬組成物。
【請求項２０】
治療で使用するための、請求項１７に記載のワクチン用ウイルス株。
【請求項２１】
治療で使用するための、請求項１４に記載の単離ウイルスｓｓＲＮＡ。
【請求項２２】
ウイルスに対して動物にワクチン接種する際に使用するための、請求項１７に記載のワクチン用ウイルス株。
【請求項２３】
ウイルスに対して動物にワクチン接種する際に使用するための、請求項１４に記載の単離ウイルスｓｓＲＮＡ。
【請求項２４】
前記ウイルスがＡＨＳＶであり、前記動物がウマ、ラバ、ロバまたはシマウマから選択される、請求項２２に記載のワクチン用ウイルス株または請求項２３に記載の単離ウイルスｓｓＲＮＡ。
【請求項２５】
前記ウイルスがＥＨＤＶであり、前記動物がシカ、ウシまたはヒツジから選択される、請求項２２に記載のワクチン用ウイルス株または請求項２３に記載の単離ウイルスｓｓＲＮＡ。
【請求項２６】
前記ウイルスがＢＴＶであり、前記動物がウシ、ヒツジ、ヤギ、スイギュウ、シカ、ヒトコブラクダおよびアンテロープから選択される、請求項２２に記載のワクチン用ウイルス株または請求項２３に記載の単離ウイルスｓｓＲＮＡ。
【請求項２７】
レオウイルス科の一員であるウイルスに対して動物にワクチン接種する方法であって、有効量の請求項１７に記載のワクチン用ウイルス株を前記動物に送達するステップを含む方法。
【請求項２８】
レオウイルス科の一員であるウイルスに対して動物にワクチン接種する方法であって、有効量の請求項１４に記載の単離ウイルスｓｓＲＮＡを前記動物に送達するステップを含む方法。
【請求項２９】
前記ウイルスがＡＨＳＶであり、前記動物がウマ、ラバ、ロバまたはシマウマから選択される、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ウイルスがＥＨＤＶであり、前記動物がシカ、ウシまたはヒツジから選択される、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記ウイルスがＢＴＶであり、前記動物がウシ、ヒツジ、ヤギ、スイギュウ、シカ、ヒトコブラクダおよびアンテロープから選択される、請求項２７または請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
請求項１４に記載の単離ｓｓＲＮＡと、前記ｓｓＲＮＡ中で変異した必須遺伝子を補完する細胞とを含むキット。
【請求項３３】
レオウイルス科の一員であるウイルスの必須遺伝子を同定するためのスクリーニング方法であって、
遺伝子の機能が破壊されるようにレオウイルス科のウイルスに変異を導入するステップと、
前記ウイルスのゲノムに由来し、前記変異を含むウイルスｓｓＲＮＡを細胞に形質移入するステップと、
適切な条件下で形質移入された前記細胞を培養するステップと
を含み、形質移入された前記細胞を培養した後に産生されるウイルスが病原性であれば、前記ウイルス遺伝子が必須遺伝子でない方法。
【請求項３４】
レオウイルス科の一員であるウイルスの改変ウイルス株を製造する方法であって、
レオウイルス科のウイルスに変異を導入するステップと、
前記ウイルスのゲノムに由来し、前記変異を含むウイルス一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を細胞に形質移入するステップと、
前記改変ウイルス株の製造を導くために適切な条件下で形質移入された前記細胞を培養するステップと
を含み、前記細胞が、前記改変ウイルス株の細胞内での複製を可能にする方法。
【請求項３５】
細胞に形質移入することが、２以上の形質移入ステップを含み、
（１）第１の形質移入ステップが、ウイルスカプシドの内層の組み立てに必要な成分を少なくともコードするｓｓＲＮＡを細胞に形質移入することを含み、
（２）第２の形質移入ステップが、ウイルスゲノムの転写産物であり、前記変異を含み、前記ウイルスの組み立てに必要な全ての成分をコードするｓｓＲＮＡを細胞に形質移入することを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
第１と第２の形質移入ステップの間に少なくとも６時間の間隔がある、請求項３５に記載の方法。