【手続補正書】
【提出日】平成23年12月19日(2011.12.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングするための、19〜25ヌクレオチド長の二本鎖領域を含む修飾siRNA分子であって、
該修飾siRNA分子が、SEQ ID NO:57を含むセンス鎖と相補的なアンチセンス鎖とを含み、
該アンチセンス鎖が、二本鎖領域内に少なくとも1つの2'OMe-グアノシンヌクレオチドと少なくとも1つの2'OMe-ウリジンヌクレオチドとを含む、修飾siRNA分子。
【請求項２】
SEQ ID NO:57における5'-NN-3'配列が、前記修飾siRNA分子のセンス鎖における3'突出に対応する、請求項1記載の修飾siRNA分子。
【請求項３】
3'突出内のヌクレオチドのうちの1個または複数個が修飾ヌクレオチドを含む、請求項2記載の修飾siRNA分子。
【請求項４】
二本鎖領域内のヌクレオチドのうちの30％未満が修飾ヌクレオチドを含む、請求項1記載の修飾siRNA分子。
【請求項５】
対応する未修飾siRNA配列より低免疫刺激性である、請求項1記載の修飾siRNA分子。
【請求項６】
アンチセンス鎖がSEQ ID NO:403からなる、請求項1記載の修飾siRNA分子。
【請求項７】
センス鎖がSEQ ID NO:400からなる、請求項1記載の修飾siRNA分子。
【請求項８】
PLK1424 2/6である、請求項1記載の修飾siRNA分子。
【請求項９】
担体系をさらに含む、請求項1記載の修飾siRNA分子。
【請求項１０】
担体系が、核酸-脂質粒子、リポソーム、ミセル、ビロソーム、核酸複合体、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項9記載の修飾siRNA分子。
【請求項１１】
担体系が、核酸-脂質粒子である、請求項10記載の修飾siRNA分子。
【請求項１２】
請求項1記載の修飾siRNA分子と薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
【請求項１３】
請求項1記載の修飾siRNA分子、
カチオン性脂質、および
非カチオン性脂質
を含む、核酸-脂質粒子。
【請求項１４】
カチオン性脂質が、1,2-ジリノレイルオキシ-N,N-ジメチルアミノプロパン（DLinDMA）、1,2-ジリノレニルオキシ-N,N-ジメチルアミノプロパン（DLenDMA）、N,N-ジオレイル-N,N-ジメチルアンモニウムクロリド（DODAC）、N,N-ジステアリル-N,N-ジメチルアンモニウムブロミド（DDAB）、N-(1-(2,3-ジオレオイルオキシ)プロピル)-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド（DOTAP）、ジステアリルジメチルアンモニウム（DSDMA）、N-(1-(2,3-ジオレイルオキシ)プロピル)-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド（DOTMA）、N,N-ジメチル-2,3-ジオレイルオキシプロピルアミン（DODMA）、3-(N-(N',N'-ジメチルアミノエタン)-カルバモイル)コレステロール（DC-Chol）、N-(1,2-ジミリスチルオキシプロパ-3-イル)-N,N-ジメチル-N-ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（DMRIE）、2,3-ジオレイルオキシ-N-[2(スペルミン-カルボキサミド)エチル]-N,N-ジメチル-1-プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（DOSPA）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン(DOGS）、3-ジメチルアミノ-2-(コレスタ-5-エン-3-ベータ-オキシブタン-4-オキシ)-1-(cis,cis-9,12-オクタデカジエンオキシ)プロパン（CLinDMA）、2-[5'-(コレスタ-5-エン-3-ベータ-オキシ)-3'-オキサペントキシ)-3-ジメチル-1-(cis,cis-9',1-2'-オクタデカジエンオキシ)プロパン（CpLinDMA）、N,N-ジメチル-3,4-ジオレイルオキシベンジルアミン（DMOBA）、1,2-N,N'-ジオレイルカルバミル-3-ジメチルアミノプロパン（DOcarbDAP）、2,3-ジリノレオイルオキシ-N,N-ジメチルプロピルアミン（DLinDAP）、1,2-N,N'-ジリノレイルカルバミル-3-ジメチルアミノプロパン（DLincarbDAP）、1,2-ジリノレオイルカルバミル-3-ジメチルアミノプロパン（DLinCDAP）、およびそれらの混合物からなる群より選択されるメンバーである、請求項13記載の核酸-脂質粒子。
【請求項１５】
カチオン性脂質がDLinDMAである、請求項13記載の核酸-脂質粒子。
【請求項１６】
非カチオン性脂質が、ジステアロイルホスファチジルコリン（DSPC）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（DOPE）、パルミトイルオレオイル-ホスファチジルコリン（POPC）、パルミトイルオレオイル-ホスファチジルエタノールアミン（POPE）、パルミトイルオレイオル-ホスファチジルグリセロール（POPG）、ジパルミトイル-ホスファチジルコリン（DPPC）、ジパルミトイル-ホスファチジルエタノールアミン（DPPE）、ジミリストイル-ホスファチジルエタノールアミン（DMPE）、ジステアロイル-ホスファチジルエタノールアミン（DSPE）、モノメチル-ホスファチジルエタノールアミン、ジメチル-ホスファチジルエタノールアミン、ジエライドイル-ホスファチジルエタノールアミン（DEPE）、ステアロイルオレオイル-ホスファチジルエタノールアミン（SOPE）、卵ホスファチジルコリン（EPC）、コレステロール、およびそれらの混合物からなる群より選択されるメンバーである、請求項13記載の核酸-脂質粒子。
【請求項１７】
非カチオン性脂質が、DSPC、DPPC、またはDSPEである、請求項13記載の核酸-脂質粒子。
【請求項１８】
粒子の凝集を阻害する複合脂質をさらに含む、請求項13記載の核酸-脂質粒子。
【請求項１９】
粒子の凝集を阻害する複合脂質が、ポリエチレングリコール（PEG）-脂質コンジュゲート、ポリアミド（ATTA）-脂質コンジュゲート、およびそれらの混合物からなる群より選択されるメンバーである、請求項18記載の核酸-脂質粒子。
【請求項２０】
PEG-脂質コンジュゲートが、PEG-ジアシルグリセロール、PEGジアルキルオキシプロピル、PEG-リン脂質、PEG-セラミド、およびそれらの混合物からなる群より選択されるメンバーである、請求項19記載の核酸-脂質粒子。
【請求項２１】
粒子の凝集を阻害する複合脂質が、ポリエチレングリコール（PEG）-ジアルキルオキシプロピル（PEG-DAA）コンジュゲートを含む、請求項19記載の核酸-脂質粒子。
【請求項２２】
修飾siRNA分子が核酸-脂質粒子に完全に封入されている、請求項13記載の核酸-脂質粒子。
【請求項２３】
請求項13記載の核酸-脂質粒子と薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
【請求項２４】
非カチオン性脂質がリン脂質とコレステロールまたはその誘導体との混合物を含む、請求項13記載の核酸-脂質粒子。
【請求項２５】
リン脂質が、粒子中に存在する全脂質の約4モル％〜約10モル％を構成し、かつコレステロールが、粒子中に存在する全脂質の約30モル％〜約40モル％を構成する、請求項24記載の核酸-脂質粒子。
【請求項２６】
カチオン性脂質が、粒子中に存在する全脂質の約50モル％〜約65モル％を構成する、請求項13記載の核酸-脂質粒子。
【請求項２７】
PEG-脂質コンジュゲートが、粒子中に存在する全脂質の約1モル％〜約15モル％を構成する、請求項19記載の核酸-脂質粒子。
【請求項２８】
請求項1記載の修飾siRNA分子を含む、ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングするsiRNAを細胞へ導入するための組成物。
【請求項２９】
修飾siRNA分子が担体系の中にある、請求項28記載の組成物。
【請求項３０】
担体系が、核酸-脂質粒子、リポソーム、ミセル、ビロソーム、核酸複合体、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項29記載の組成物。
【請求項３１】
担体系が、
修飾siRNA分子、
カチオン性脂質、
および非カチオン性脂質
を含む核酸-脂質粒子である、請求項29記載の組成物。
【請求項３２】
核酸-脂質粒子が、粒子の凝集を防止する複合脂質をさらに含む、請求項31記載の組成物。
【請求項３３】
細胞が哺乳動物体内にある、請求項28記載の組成物。
【請求項３４】
請求項1記載の修飾siRNA分子を含む、ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングするsiRNAのインビボ送達のための組成物。
【請求項３５】
修飾siRNA分子が担体系の中にある、請求項34記載の組成物。
【請求項３６】
担体系が、核酸-脂質粒子、リポソーム、ミセル、ビロソーム、核酸複合体、およびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項35記載の組成物。
【請求項３７】
担体系が、
修飾siRNA分子、
カチオン性脂質、
および非カチオン性脂質
を含む核酸-脂質粒子である、請求項35記載の組成物。
【請求項３８】
核酸-脂質粒子が、粒子の凝集を防止する複合脂質をさらに含む、請求項37記載の組成物。
【請求項３９】
請求項1記載の修飾siRNA分子を含む、哺乳動物対象において癌を処置するための薬学的組成物。
【請求項４０】
癌が肝臓癌である、請求項39記載の薬学的組成物。
【請求項４１】
肝臓癌が肝細胞癌である、請求項40記載の薬学的組成物。
【請求項４２】
ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングするsiRNA分子を含む、化学療法薬の効果に対して細胞を感作するための薬学的組成物であって、化学療法薬を投与する前に、細胞に接触させられる、前記薬学的組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
関連する局面において、本発明は、PLK-1発現を標的とする本明細書に記載されたマイクロRNA（miRNA）分子を含む組成物、およびPLK-1発現をサイレンシングするためのそのような組成物の使用法を提供する。
[本発明1001]
ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングすることができる、約15〜約60ヌクレオチド長の二本鎖領域を含む修飾siRNA分子であって、二本鎖領域内のヌクレオチドのうちの1個または複数個が修飾ヌクレオチドを含む、修飾siRNA分子。
[本発明1002]
2'-O-メチル（2'OMe）ヌクレオチド、2'-デオキシ-2'-フルオロ（2'F）ヌクレオチド、2'-デオキシヌクレオチド、2'-O-(2-メトキシエチル)（MOE）ヌクレオチド、ロックド核酸（LNA）ヌクレオチド、およびそれらの混合物からなる群より選択される修飾ヌクレオチドを含む、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1003]
2'OMeヌクレオチドを含む、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1004]
二本鎖領域内に1個または複数個の修飾ヌクレオチドを有するセンス鎖を含む、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1005]
二本鎖領域内に1個または複数個の修飾ヌクレオチドを有するアンチセンス鎖をさらに含む、本発明1004の修飾siRNA分子。
[本発明1006]
二本鎖領域内に1個または複数個の修飾ヌクレオチドを有するアンチセンス鎖を含む、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1007]
二本鎖領域内に1個または複数個の修飾ヌクレオチドを有するセンス鎖をさらに含む、本発明1006の修飾siRNA分子。
[本発明1008]
その一方の鎖または両方の鎖に3'突出を含む、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1009]
3'突出内のヌクレオチドのうちの1個または複数個が修飾ヌクレオチドを含む、本発明1008の修飾siRNA分子。
[本発明1010]
二本鎖領域内のヌクレオチドのうちの約25％未満が修飾ヌクレオチドを含む、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1011]
対応する未修飾siRNA配列より低免疫刺激性である、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1012]
SEQ ID NO:2の核酸配列を含むアンチセンス鎖を含む、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1013]
SEQ ID NO:1の核酸配列を含むセンス鎖を含む、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1014]
SEQ ID NO:4の核酸配列を含むアンチセンス鎖を含む、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1015]
SEQ ID NO:3の核酸配列を含むセンス鎖を含む、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1016]
SEQ ID NO:403の核酸配列からなるアンチセンス鎖を含む、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1017]
SEQ ID NO:400の核酸配列からなるセンス鎖を含む、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1018]
PLK1424 2/6、PLK1424 U4/GU、PLK1424 U4/G、PLK773 G/GU、PLK1425 3/5、およびそれらの混合物からなる群より選択される、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1019]
PLK1424 2/6である、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1020]
担体系をさらに含む、本発明1001の修飾siRNA分子。
[本発明1021]
担体系が、核酸-脂質粒子、リポソーム、ミセル、ビロソーム、核酸複合体、およびそれらの混合物からなる群より選択される、本発明1020の修飾siRNA分子。
[本発明1022]
担体系が、核酸-脂質粒子である、本発明1021の修飾siRNA分子。
[本発明1023]
本発明1001の修飾siRNA分子と薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
[本発明1024]
本発明1001の修飾siRNA分子、
カチオン性脂質、および
非カチオン性脂質
を含む、核酸-脂質粒子。
[本発明1025]
カチオン性脂質が、1,2-ジリノレイルオキシ-N,N-ジメチルアミノプロパン（DLinDMA）、1,2-ジリノレニルオキシ-N,N-ジメチルアミノプロパン（DLenDMA）、N,N-ジオレイル-N,N-ジメチルアンモニウムクロリド（DODAC）、N,N-ジステアリル-N,N-ジメチルアンモニウムブロミド（DDAB）、N-(1-(2,3-ジオレオイルオキシ)プロピル)-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド（DOTAP）、ジステアリルジメチルアンモニウム（DSDMA）、N-(1-(2,3-ジオレイルオキシ)プロピル)-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド（DOTMA）、N,N-ジメチル-2,3-ジオレイルオキシプロピルアミン（DODMA）、3-(N-(N',N'-ジメチルアミノエタン)-カルバモイル)コレステロール（DC-Chol）、N-(1,2-ジミリスチルオキシプロパ-3-イル)-N,N-ジメチル-N-ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（DMRIE）、2,3-ジオレイルオキシ-N-[2(スペルミン-カルボキサミド)エチル]-N,N-ジメチル-1-プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（DOSPA）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン(DOGS）、3-ジメチルアミノ-2-(コレスタ-5-エン-3-ベータ-オキシブタン-4-オキシ)-1-(cis,cis-9,12-オクタデカジエンオキシ)プロパン（CLinDMA）、2-[5'-(コレスタ-5-エン-3-ベータ-オキシ)-3'-オキサペントキシ)-3-ジメチル-1-(cis,cis-9',1-2'-オクタデカジエンオキシ)プロパン（CpLinDMA）、N,N-ジメチル-3,4-ジオレイルオキシベンジルアミン（DMOBA）、1,2-N,N'-ジオレイルカルバミル-3-ジメチルアミノプロパン（DOcarbDAP）、2,3-ジリノレオイルオキシ-N,N-ジメチルプロピルアミン（DLinDAP）、1,2-N,N'-ジリノレイルカルバミル-3-ジメチルアミノプロパン（DLincarbDAP）、1,2-ジリノレオイルカルバミル-3-ジメチルアミノプロパン（DLinCDAP）、およびそれらの混合物からなる群より選択されるメンバーである、本発明1024の核酸-脂質粒子。
[本発明1026]
カチオン性脂質がDLinDMAである、本発明1024の核酸-脂質粒子。
[本発明1027]
非カチオン性脂質が、ジステアロイルホスファチジルコリン（DSPC）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（DOPE）、パルミトイルオレオイル-ホスファチジルコリン（POPC）、パルミトイルオレオイル-ホスファチジルエタノールアミン（POPE）、パルミトイルオレイオル-ホスファチジルグリセロール（POPG）、ジパルミトイル-ホスファチジルコリン（DPPC）、ジパルミトイル-ホスファチジルエタノールアミン（DPPE）、ジミリストイル-ホスファチジルエタノールアミン（DMPE）、ジステアロイル-ホスファチジルエタノールアミン（DSPE）、モノメチル-ホスファチジルエタノールアミン、ジメチル-ホスファチジルエタノールアミン、ジエライドイル-ホスファチジルエタノールアミン（DEPE）、ステアロイルオレオイル-ホスファチジルエタノールアミン（SOPE）、卵ホスファチジルコリン（EPC）、コレステロール、およびそれらの混合物からなる群より選択されるメンバーである、本発明1024の核酸-脂質粒子。
[本発明1028]
非カチオン性脂質が、DSPC、DPPC、またはDSPEである、本発明1024の核酸-脂質粒子。
[本発明1029]
粒子の凝集を阻害する複合脂質をさらに含む、本発明1024の核酸-脂質粒子。
[本発明1030]
粒子の凝集を阻害する複合脂質が、ポリエチレングリコール（PEG）-脂質コンジュゲート、ポリアミド（ATTA）-脂質コンジュゲート、およびそれらの混合物からなる群より選択されるメンバーである、本発明1029の核酸-脂質粒子。
[本発明1031]
PEG-脂質コンジュゲートが、PEG-ジアシルグリセロール、PEGジアルキルオキシプロピル、PEG-リン脂質、PEG-セラミド、およびそれらの混合物からなる群より選択されるメンバーである、本発明1030の核酸-脂質粒子。
[本発明1032]
粒子の凝集を阻害する複合脂質が、ポリエチレングリコール（PEG）-ジアルキルオキシプロピル（PEG-DAA）コンジュゲートを含む、本発明1030の核酸-脂質粒子。
[本発明1033]
カチオン性脂質が、粒子中に存在する全脂質の約20モル％〜約50モル％を構成する、本発明1024の核酸-脂質粒子。
[本発明1034]
カチオン性脂質が、粒子中に存在する全脂質の約40モル％を構成する、本発明1024の核酸-脂質粒子。
[本発明1035]
非カチオン性脂質が、粒子中に存在する全脂質の約5モル％〜約90モル％を構成する、本発明1024の核酸-脂質粒子。
[本発明1036]
非カチオン性脂質が、粒子中に存在する全脂質の約10モル％を構成する、本発明1024の核酸-脂質粒子。
[本発明1037]
非カチオン性脂質が、粒子中に存在する全脂質の約60モル％を構成する、本発明1024の核酸-脂質粒子。
[本発明1038]
PEG-DAAコンジュゲートが、粒子中に存在する全脂質の0モル％〜約20モル％を構成する、本発明1032の核酸-脂質粒子。
[本発明1039]
PEG-DAAコンジュゲートが、粒子中に存在する全脂質の約2モル％を構成する、本発明1032の核酸-脂質粒子。
[本発明1040]
コレステロールをさらに含む、本発明1024の核酸-脂質粒子。
[本発明1041]
コレステロールが、粒子中に存在する全脂質の約10モル％〜約60モル％を構成する、本発明1040の核酸-脂質粒子。
[本発明1042]
コレステロールが、粒子中に存在する全脂質の約48モル％を構成する、本発明1040の核酸-脂質粒子。
[本発明1043]
修飾siRNA分子が核酸-脂質粒子に完全に封入されている、本発明1024の核酸-脂質粒子。
[本発明1044]
本発明1024の核酸-脂質粒子と薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
[本発明1045]
（a）ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングするsiRNA分子、
（b）粒子中に存在する全脂質の約50モル％〜約85モル％を構成するカチオン性脂質、
（c）粒子中に存在する全脂質の約13モル％〜約49.5モル％を構成する非カチオン性脂質、および
（d）粒子中に存在する全脂質の約0.5モル％〜約2モル％を構成し、粒子の凝集を阻害する複合脂質
を含む、核酸-脂質粒子。
[本発明1046]
siRNA分子が、表1〜7および10〜11に示された配列のうちの少なくとも一つを含む、本発明1045の核酸-脂質粒子。
[本発明1047]
カチオン性脂質が、1,2-ジリノレイルオキシ-N,N-ジメチルアミノプロパン（DLinDMA）、1,2-ジリノレニルオキシ-N,N-ジメチルアミノプロパン（DLenDMA）、N,N-ジオレイル-N,N-ジメチルアンモニウムクロリド（DODAC）、N,N-ジステアリル-N,N-ジメチルアンモニウムブロミド（DDAB）、N-(1-(2,3-ジオレイルオキシ)プロピル)-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド（DOTAP）、ジステアリルジメチルアンモニウム（DSDMA）、N-(1-(2,3-ジオレイルオキシ)プロピル)-N,N,N-トリメチルアンモニウムクロリド（DOTMA）、N,N-ジメチル-2,3-ジオレイルオキシプロピルアミン（DODMA）、3-(N-(N',N'-ジメチルアミノエタン)-カルバモイル)コレステロール（DC-Chol）、N-(1,2-ジミリスチルオキシプロパ-3-イル)-N,N-ジメチル-N-ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（DMRIE）、2,3-ジオレイルオキシ-N-[2(スペルミン-カルボキサミド)エチル]-N,N-ジメチル-1-プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（DOSPA）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン(DOGS）、3-ジメチルアミノ-2-(コレスタ-5-エン-3-ベータ-オキシブタン-4-オキシ)-1-(cis,cis-9,12-オクタデカジエンオキシ)プロパン（CLinDMA）、2-[5'-(コレスタ-5-エン-3-ベータ-オキシ)-3'-オキサペントキシ)-3-ジメチル-1-(cis,cis-9',1-2'-オクタデカジエンオキシ)プロパン（CpLinDMA）、N,N-ジメチル-3,4-ジオレイルオキシベンジルアミン（DMOBA）、1,2-N,N'-ジオレイルカルバミル-3-ジメチルアミノプロパン（DOcarbDAP）、2,3-ジリノレオイルオキシ-N,N-ジメチルプロピルアミン（DLinDAP）、1,2-N,N'-ジリノレイルカルバミル-3-ジメチルアミノプロパン（DLincarbDAP）、1,2-ジリノレオイルカルバミル-3-ジメチルアミノプロパン（DLinCDAP）、およびそれらの混合物からなる群より選択されるメンバーである、本発明1045の核酸-脂質粒子。
[本発明1048]
カチオン性脂質がDLinDMAを含む、本発明1047の核酸-脂質粒子。
[本発明1049]
非カチオン性脂質がコレステロールまたはその誘導体を含む、本発明1045の核酸-脂質粒子。
[本発明1050]
コレステロールまたはその誘導体が、粒子中に存在する全脂質の約30モル％〜約45モル％を構成する、本発明1049の核酸-脂質粒子。
[本発明1051]
コレステロール誘導体が、コレスタノール、コレスタノン、コレステノン、コプロスタノール、コレステリル-2'-ヒドロキシエチルエーテル、およびコレステリル-4'-ヒドロキシブチルエーテルからなる群より選択されるメンバーである、本発明1049の核酸-脂質粒子。
[本発明1052]
非カチオン性脂質がリン脂質を含む、本発明1045の核酸-脂質粒子。
[本発明1053]
非カチオン性脂質がリン脂質とコレステロールまたはその誘導体との混合物を含む、本発明1045の核酸-脂質粒子。
[本発明1054]
リン脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン（DPPC）、ジステアロイルホスファチジルコリン（DSPC）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（DOPE）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（POPC）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（POPE）、パルミトイルオレイオルホスファチジルグリセロール（POPG）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（DPPE）、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（DMPE）、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（DSPE）、モノメチルホスファチジルエタノールアミン、ジメチルホスファチジルエタノールアミン、ジエライドイルホスファチジルエタノールアミン（DEPE）、ステアロイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（SOPE）、卵ホスファチジルコリン（EPC）、およびそれらの混合物からなる群より選択されるメンバーである、本発明1052または1053の核酸-脂質粒子。
[本発明1055]
リン脂質が、粒子中に存在する全脂質の約4モル％〜約10モル％を構成し、かつコレステロールが、粒子中に存在する全脂質の約30モル％〜約40モル％を構成する、本発明1053の核酸-脂質粒子。
[本発明1056]
コレステロール誘導体が、コレスタノール、コレスタノン、コレステノン、コプロスタノール、コレステリル-2'-ヒドロキシエチルエーテル、およびコレステリル-4'-ヒドロキシブチルエーテルからなる群より選択されるメンバーである、本発明1053の核酸-脂質粒子。
[本発明1057]
リン脂質がDPPCを含む、本発明1054の核酸-脂質粒子。
[本発明1058]
粒子の凝集を阻害する複合脂質が、ポリエチレングリコール（PEG）-脂質コンジュゲート、ポリアミド（ATTA）-脂質コンジュゲート、およびそれらの混合物からなる群より選択されるメンバーである、本発明1045の核酸-脂質粒子。
[本発明1059]
PEG-脂質コンジュゲートが、PEG-ジアシルグリセロール、PEGジアルキルオキシプロピル、PEG-リン脂質、PEG-セラミド、PEG-コレステロール、およびそれらの混合物からなる群より選択されるメンバーである、本発明1058の核酸-脂質粒子。
[本発明1060]
粒子の凝集を阻害する複合脂質が、ポリエチレングリコール（PEG）-ジアルキルオキシプロピル（PEG-DAA）コンジュゲートを含む、本発明1058の核酸-脂質粒子。
[本発明1061]
siRNA分子が核酸-脂質粒子に封入されている、本発明1045の核酸-脂質粒子。
[本発明1062]
（a）ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングするsiRNA分子、
（b）粒子中に存在する全脂質の約56.5モル％〜約66.5モル％を構成するカチオン性脂質、
（c）粒子中に存在する全脂質の約31.5モル％〜約42.5モル％を構成する非カチオン性脂質、および
（d）粒子中に存在する全脂質の約1モル％〜約2モル％を構成し、粒子の凝集を阻害する複合脂質
を含む、核酸-脂質粒子。
[本発明1063]
siRNA分子が、表1〜7および10〜11に示された配列のうちの少なくとも一つを含む、本発明1062の核酸-脂質粒子。
[本発明1064]
カチオン性脂質がDLinDMAを含む、本発明1062の核酸-脂質粒子。
[本発明1065]
非カチオン性脂質がコレステロールを含む、本発明1062の核酸-脂質粒子。
[本発明1066]
粒子の凝集を阻害する複合脂質がPEG-DAAコンジュゲートを含む、本発明1062の核酸-脂質粒子。
[本発明1067]
（a）ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングするsiRNA分子、
（b）粒子中に存在する全脂質の約52モル％〜約62モル％を構成するカチオン性脂質、
（c）粒子中に存在する全脂質の約36モル％〜約47モル％を構成する非カチオン性脂質、および
（d）粒子中に存在する全脂質の約1モル％〜約2モル％を構成し、粒子の凝集を阻害する複合脂質
を含む、核酸-脂質粒子。
[本発明1068]
siRNA分子が、表1〜7および10〜11に示された配列のうちの少なくとも一つを含む、本発明1067の核酸-脂質粒子。
[本発明1069]
カチオン性脂質がDLinDMAを含む、本発明1067の核酸-脂質粒子。
[本発明1070]
非カチオン性脂質がDPPCとコレステロールとの混合物を含む、本発明1067の核酸-脂質粒子。
[本発明1071]
DPPCが、粒子中に存在する全脂質の約5モル％〜約9モル％を構成し、かつコレステロールが、粒子中に存在する全脂質の約32モル％〜約37モル％を構成する、本発明1070の核酸-脂質粒子。
[本発明1072]
粒子の凝集を阻害する複合脂質がPEG-DAAコンジュゲートを含む、本発明1067の核酸-脂質粒子。
[本発明1073]
本発明1045、1062、または1067のいずれかの核酸-脂質粒子と薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
[本発明1074]
細胞を本発明1045、1062、または1067のいずれかの核酸-脂質粒子と接触させる工程を含む、ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングするsiRNAを細胞へ導入するための方法。
[本発明1075]
細胞が哺乳動物体内にある、本発明1074の方法。
[本発明1076]
本発明1045、1062、または1067のいずれかの核酸-脂質粒子を哺乳動物対象へ投与する工程を含む、ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングするsiRNAのインビボ送達のための方法。
[本発明1077]
投与が、経口、鼻腔内、静脈内、腹腔内、筋肉内、関節内、病巣内、気管内、皮下、および皮内からなる群より選択される、本発明1076の方法。
[本発明1078]
治療的に有効な量の本発明1045、1062、または1067のいずれかの核酸-脂質粒子を哺乳動物対象へ投与する工程を含む、その必要のある哺乳動物対象において癌を処置するための方法。
[本発明1079]
癌が肝臓癌である、本発明1078の方法。
[本発明1080]
肝臓癌が肝細胞癌である、本発明1079の方法。
[本発明1081]
細胞を本発明1001の修飾siRNA分子と接触させる工程を含む、ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングするsiRNAを細胞へ導入するための方法。
[本発明1082]
修飾siRNAが担体系の中にある、本発明1081の方法。
[本発明1083]
担体系が、核酸-脂質粒子、リポソーム、ミセル、ビロソーム、核酸複合体、およびそれらの混合物からなる群より選択される、本発明1082の方法。
[本発明1084]
担体系が、
修飾siRNA分子、
カチオン性脂質、
および非カチオン性脂質
を含む核酸-脂質粒子である、本発明1082の方法。
[本発明1085]
核酸-脂質粒子が、粒子の凝集を防止する複合脂質をさらに含む、本発明1084の方法。
[本発明1086]
細胞が哺乳動物体内にある、本発明1081の方法。
[本発明1087]
本発明1001の修飾siRNA分子を哺乳動物対象へ投与する工程を含む、ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングするsiRNAのインビボ送達のための方法。
[本発明1088]
修飾siRNAが担体系の中にある、本発明1087の方法。
[本発明1089]
担体系が、核酸-脂質粒子、リポソーム、ミセル、ビロソーム、核酸複合体、およびそれらの混合物からなる群より選択される、本発明1088の方法。
[本発明1090]
担体系が、
修飾siRNA分子、
カチオン性脂質、
および非カチオン性脂質
を含む核酸-脂質粒子である、本発明1088の方法。
[本発明1091]
核酸-脂質粒子が、粒子の凝集を防止する複合脂質をさらに含む、本発明1090の方法。
[本発明1092]
治療的に有効な量の本発明1001の修飾siRNA分子を哺乳動物対象へ投与する工程を含む、その必要のある哺乳動物対象において癌を処置するための方法。
[本発明1093]
癌が肝臓癌である、本発明1092の方法。
[本発明1094]
肝臓癌が肝細胞癌である、本発明1093の方法。
[本発明1095]
（a）免疫刺激特性を有しかつ約15〜約60ヌクレオチド長の二本鎖領域を含む、PLK-1発現をサイレンシングすることができる未修飾siRNA配列を準備する工程、および
（b）1個または複数個のヌクレオチドを修飾ヌクレオチドに置換することにより、未修飾siRNA配列を修飾し、それにより、未修飾siRNA配列より低免疫刺激性でありかつPLK-1発現をサイレンシングすることができる修飾siRNA分子を作製する工程
を含む、ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングする免疫刺激性siRNAを修飾するための方法。
[本発明1096]
修飾siRNA分子が、2'-O-メチル（2'OMe）ヌクレオチド、2'-デオキシ-2'-フルオロ（2'F）ヌクレオチド、2'-デオキシヌクレオチド、2'-O-(2-メトキシエチル)（MOE）ヌクレオチド、ロックド核酸（LNA）ヌクレオチド、およびそれらの混合物からなる群より選択される修飾ヌクレオチドを含む、本発明1095の方法。
[本発明1097]
修飾siRNA分子が2'OMeヌクレオチドを含む、本発明1095の方法。
[本発明1098]
未修飾siRNA配列の二本鎖領域内のヌクレオチドのうちの約25％未満が、修飾ヌクレオチドに置換される、本発明1095の方法。
[本発明1099]
（c）修飾siRNA分子を哺乳動物応答細胞と、該応答細胞が検出可能な免疫応答を生ずるのに適した条件の下で、接触させることにより、修飾siRNA分子が低免疫刺激性であることを確認する工程
をさらに含む、本発明1095の方法。
[本発明1100]
（a）PLK-1発現をサイレンシングすることができる未修飾siRNA分子を、哺乳動物応答細胞と、該応答細胞が検出可能な免疫応答を生ずるのに適した条件の下で接触させる工程、
（b）応答細胞における検出可能な免疫応答の存在により、未修飾siRNA配列を、免疫刺激性siRNAとして同定する工程、および
（c）1個または複数個のヌクレオチドを修飾ヌクレオチドに置換することにより、未修飾siRNA配列を修飾し、それにより、未修飾siRNA配列より低免疫刺激性である修飾siRNA分子を作製する工程
を含む、ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングする免疫刺激性siRNAを同定しかつ修飾するための方法。
[本発明1101]
修飾siRNA分子が、2'-O-メチル（2'OMe）ヌクレオチド、2'-デオキシ-2'-フルオロ（2'F）ヌクレオチド、2'-デオキシヌクレオチド、2'-O-(2-メトキシエチル)（MOE）ヌクレオチド、ロックド核酸（LNA）ヌクレオチド、およびそれらの混合物からなる群より選択される修飾ヌクレオチドを含む、本発明1100の方法。
[本発明1102]
修飾siRNA分子が2'OMeヌクレオチドを含む、本発明1100の方法。
[本発明1103]
未修飾siRNA配列の二本鎖領域内のヌクレオチドのうちの約25％未満が、修飾ヌクレオチドに置換される、本発明1100の方法。
[本発明1104]
哺乳動物応答細胞が末梢血単核細胞または樹状細胞である、本発明1100の方法。
[本発明1105]
検出可能な免疫応答が、TNF-α、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-6、IL-12、およびそれらの組み合わせからなる群より選択されるサイトカインまたは増殖因子の産生を含む、本発明1100の方法。
[本発明1106]
検出可能な免疫応答が、テトラトリコペプチドリピートを含むインターフェロンにより誘導されるタンパク質1（interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 1（IFIT1））の誘導を含む、本発明1100の方法。
[本発明1107]
化学療法薬を投与する前に、細胞を、ポロ様キナーゼ1（PLK-1）発現をサイレンシングするsiRNA分子と接触させる工程
を含む、化学療法薬の効果に対して細胞を感作するための方法。
[本発明1108]
細胞が、PLK-1発現をサイレンシングする修飾siRNA分子と接触させられる、本発明1107の方法。
[本発明1109]
前記siRNA分子が担体系の中にある、本発明1107の方法。
[本発明1110]
担体系が、
前記siRNA分子、
カチオン性脂質、および
非カチオン性脂質
を含む核酸-脂質粒子である、本発明1109の方法。
[本発明1111]
細胞が癌細胞である、本発明1107の方法。
[本発明1112]
癌細胞が哺乳動物体内にある、本発明1111の方法。
[本発明1113]
化学療法薬が、パクリタキセル、フルオロウラシル（5-FU）、イリノテカン、ソラフェニブ、およびそれらの混合物からなる群より選択される、本発明1107の方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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