【手続補正書】
【提出日】平成26年2月28日(2014.2.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
連結成分を介して互いに共有結合で連結された少なくとも２つのα−ガラクトシダーゼモノマーを含む多量体型タンパク質構造体であって、下記の特性からなる群から選択される特性を特徴とする多量体型タンパク質構造体：
（ａ）天然型α−ガラクトシダーゼをヒト血漿条件に１時間さらしたときの天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体をヒト血漿条件に１時間さらしたときのα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｂ）天然型α−ガラクトシダーゼの活性が、天然型α−ガラクトシダーゼをヒト血漿条件に１時間さらしたときに低下する割合よりも少なくとも１０％小さい割合で、多量体型タンパク質構造体をヒト血漿条件に１時間さらしたときに低下するα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｃ）多量体型タンパク質構造体をヒト血漿条件に１時間さらしたとき、実質的に変化しないままであるα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｄ）天然型α−ガラクトシダーゼをリソソーム条件に１週間さらしたときの天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１週間さらしたときのα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｅ）天然型α−ガラクトシダーゼの活性が、天然型α−ガラクトシダーゼをリソソーム条件に１日間さらしたときに低下する割合よりも少なくとも１０％小さい割合で、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１日間さらしたときに低下するα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｆ）多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１日間さらしたとき、実質的に変化しないままであるα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｇ）多量体型タンパク質の天然型形態をリソソーム条件にさらした直後の天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件にさらした直後のα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｈ）天然型α−ガラクトシダーゼを、７のｐＨおよび３７℃の温度を有する水溶液にさらした直後の天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体を、７のｐＨおよび３７℃の温度を有する水溶液にさらした直後のα−ガラクトシダーゼ活性；および
（ｉ）天然型α−ガラクトシダーゼの循環半減期よりも少なくとも２０％大きい生理学的システムにおける循環半減期。
【請求項２】
連結成分を介して互いに共有結合で連結された少なくとも２つのα−ガラクトシダーゼモノマーを含む多量体型タンパク質構造体であって、連結成分が天然型α−ガラクトシダーゼにおいて存在しない多量体型タンパク質構造体。
【請求項３】
下記の特性からなる群から選択される特性を特徴とする、請求項２に記載の多量体型タンパク質構造体：
（ａ）天然型α−ガラクトシダーゼをヒト血漿条件に１時間さらしたときの天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体をヒト血漿条件に１時間さらしたときのα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｂ）天然型α−ガラクトシダーゼの活性が、天然型α−ガラクトシダーゼをヒト血漿条件に１時間さらしたときに低下する割合よりも少なくとも１０％小さい割合で、多量体型タンパク質構造体をヒト血漿条件に１時間さらしたときに低下するα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｃ）多量体型タンパク質構造体をヒト血漿条件に１時間さらしたとき、実質的に変化しないままであるα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｄ）天然型α−ガラクトシダーゼをリソソーム条件に１週間さらしたときの天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１週間さらしたときのα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｅ）天然型α−ガラクトシダーゼの活性が、天然型α−ガラクトシダーゼをリソソーム条件に１日間さらしたときに低下する割合よりも少なくとも１０％小さい割合で、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１日間さらしたときに低下するα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｆ）多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１日間さらしたとき、実質的に変化しないままであるα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｇ）天然型α−ガラクトシダーゼをリソソーム条件にさらした直後の天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件にさらした直後のα−ガラクトシダーゼ活性；
（ｈ）天然型α−ガラクトシダーゼを、７のｐＨおよび３７℃の温度を有する水溶液にさらした直後の天然型α−ガラクトシダーゼの活性よりも少なくとも１０％大きい、多量体型タンパク質構造体を、７のｐＨおよび３７℃の温度を有する水溶液にさらした直後のα−ガラクトシダーゼ活性；および
（ｉ）天然型α−ガラクトシダーゼの循環半減期よりも大きい生理学的システムにおける循環半減期。
【請求項４】
天然型α−ガラクトシダーゼの循環半減期よりも大きい多量体型タンパク質構造体の循環半減期は、天然型α−ガラクトシダーゼの循環半減期よりも少なくとも２０％大きい、請求項３に記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項５】
多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１日間さらしたとき、実質的に変化しないままである多量体型タンパク質構造体のα−ガラクトシダーゼ活性はさらに、多量体型タンパク質構造体をリソソーム条件に１週間さらしたとき、実質的に変化しないままである、請求項３または４に記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項６】
多量体型タンパク質構造体は、多量体型タンパク質構造体を脊椎動物に投与したときの器官におけるα−ガラクトシダーゼ活性によって特徴づけられ、器官は、脾臓、心臓および腎臓からなる群から選択される、請求項２〜５のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項７】
多量体型タンパク質構造体は２つのα−ガラクトシダーゼモノマーを含み、タンパク質構造体はダイマー型タンパク質構造体である、請求項２〜６のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項８】
α−ガラクトシダーゼは、配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項２〜７のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項９】
連結成分はポリ（アルキレングリコール）を含む、請求項２〜８のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項１０】
前記連結成分は下記一般式を有する、請求項２〜８のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体：
−Ｘ１−（ＣＲ１Ｒ２−ＣＲ３Ｒ４−Ｙ）ｎ−Ｘ２−
式中、Ｘ１およびＸ２の各々は、少なくとも１つのα−ガラクトシダーゼモノマーとの共有結合を形成する官能基であり；
ＹはＯ，ＳまたはＮＲ５であり；
ｎは１〜２００の整数であり：および
Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４およびＲ５の各々は、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ヒドロキシ、オキソ、チオールおよびチオアルコキシからなる群から独立して選択される。
【請求項１１】
ｎは少なくとも２５である、請求項１０に記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項１２】
２つのα−ガラクトシダーゼモノマーを含む、請求項１０に記載の多量体型タンパク質構造体であって、タンパク質構造体がダイマー型タンパク質構造体であり、前記α−ガラクトシダーゼが配列番号１、配列番号２および配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、前記官能基の各々がα−ガラクトシダーゼモノマーとアミド結合を形成し、ｎが４０〜７０の整数である、多量体型タンパク質構造体。
【請求項１３】
２つのα−ガラクトシダーゼモノマーを含む、請求項８に記載の多量体型タンパク質構造体であって、タンパク質構造体がダイマー型タンパク質構造体であり、前記連結部分が下記一般式を有する、多量体型タンパク質構造体：
2013520986.tif 000001
ただし、前記連結部分におけるポリエチレングリコールの分子量は２ｋＤａであり、前記連結部分の末端基はそれぞれα−ガラクトシダーゼモノマーとアミド結合を形成する。
【請求項１４】
ファブリー病を処置する際に使用されるためのものである、請求項２〜１２のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体。
【請求項１５】
請求項２〜１３のいずれかに記載の多量体型タンパク質構造体を調製するプロセスであって、α−ガラクトシダーゼを、連結成分と、少なくとも２つの反応基とを含む架橋剤と反応させることを含むプロセス。
【請求項１６】
α−ガラクトシダーゼのモノマーに対する架橋剤のモル比が５：１〜５００：１の範囲にある、請求項１５に記載のプロセス。