【誤訳訂正書】
【提出日】平成24年4月27日(2012.4.27)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性担体；
エリトリトール、その異性体またはそれらの適当な塩；
カルニチン、その異性体またはそれらの適当な塩；および
カルボキシメチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロース化合物の混合物からなる群から選択されるイオン荷電ポリマー
を含有し、ドライアイの処置に有効である、ドライアイの処置のための局所眼科組成物。
【請求項２】
３００〜６００mOsmols/kgの範囲のオスモル濃度を有する、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
イオン荷電ポリマーが、組成物中０．１％（ｗ／ｖ）〜１０％（ｗ／ｖ）の範囲の量で存在するポリアニオン性カルボキシメチルセルロースである、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
ポリアニオン性カルボキシメチルセルロースがカルボキシメチルセルロースナトリウムである、請求項３記載の組成物。
【請求項５】
さらにグリセリンを含有する、請求項４記載の組成物。
【請求項６】
さらに安定化二酸化塩素、ホウ酸およびクエン酸ナトリウムを含有する請求項５記載の組成物。
【請求項７】
エリトリトール、その異性体またはそれらの適当な塩；
カルニチン、その異性体またはそれらの適当な塩；
カルボキシメチルセルロース；および
水
を含有し、ドライアイの処置に有効である、眼表面に対し浸透圧的保護を与えることによりドライアイを処置するための人工涙液。
【請求項８】
０．０１％（ｗ／ｖ）〜３％（ｗ／ｖ）の量のエリトリトール、０．０１％（ｗ／ｖ）〜３％（ｗ／ｖ）の量のカルニチン、および０．１％（ｗ／ｖ）〜１０％（ｗ／ｖ）の量のカルボキシメチルセルロースを含有する請求項７記載の組成物。
【請求項９】
エリトリトールが０．２５％（ｗ／ｖ）〜０．７５％（ｗ／ｖ）の量で存在し、カルニチンが０．２５％（ｗ／ｖ）〜０．７５％（ｗ／ｖ）の量で存在し、カルボキシメチルセルロースが０．５％（ｗ／ｖ）の量で存在する、請求項８記載の組成物。
【請求項１０】
さらにグリセリン、ホウ酸、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムを含有する請求項８記載の組成物。
【請求項１１】
カルニチン、その異性体またはそれらの適当な塩；
エリトリトール、その異性体またはそれらの適当な塩；
アニオン性セルロース誘導体；および
水
を含有する、眼科的に許容し得る組成物。
【請求項１２】
３１０〜６００mOsmols/kgの浸透圧を有する、請求項１１記載の組成物。
【請求項１３】
１０〜７０ｃｐｓの粘度を有する、請求項１１記載の組成物。
【請求項１４】
アニオン性セルロース誘導体が、０．５％（ｗ／ｖ）の濃度のカルボキシメチルセルロースである、請求項１１記載の組成物。
【請求項１５】
０．２５％（ｗ／ｖ）〜０．５％（ｗ／ｖ）の濃度のエリトリトールを含有する、請求項１１記載の組成物。
【請求項１６】
０．２５％（ｗ／ｖ）〜０．５％（ｗ／ｖ）の濃度のエリトリトールを含有する、請求項１４記載の組成物。
【請求項１７】
０．１％（ｗ／ｖ）〜０．２５％（ｗ／ｖ）の濃度のカルニチンを含有する、請求項１１記載の組成物。
【請求項１８】
０．１％（ｗ／ｖ）〜０．２５％（ｗ／ｖ）の濃度のカルニチンを含有する、請求項１６記載の組成物。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の詳細な説明】
【発明の名称】眼科組成物および眼の治療方法
【技術分野】
【０００１】
本発明は、眼科組成物および眼の処置のための有用な方法に関する。より具体的には本発明はヒトまたは哺乳類の眼の眼表面の望ましい保護を提供するのに有効な成分の混合物を含有する組成物、および眼科組成物（例えば本発明の眼科組成物）を用いてヒトまたは動物の眼を処置するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトや他の哺乳類（動物）の眼などの哺乳類の眼は、眼の快適さやより効果的に良好ではっきりとした視界が得られるよう適切な湿潤状態にある。普段、そのような湿潤は、眼の外側に晒された眼表面を覆って形成する涙液膜から自然に得られている。この涙液膜は涙腺、瞼板および他の腺によって正常に継続的に補充される複合的な液であり、正常であれば不可欠な水分補給と栄養を眼表面にもたらしている。デリケートな眼表面をコーティングおよび保護するのに加えて、涙液膜／空気界面は眼の最初の屈折面としても働いている。しかしながら、しばしばこの涙液膜が十分な量で存在せず、「ドライアイ」として知られる状態が生じることがある。
【０００３】
ドライアイ症候群の治療や管理に用いるための組成物が比較的多く提案されている。例えば、天然の涙の機能を模倣するまたは類似の化学的組成を有する人工涙が用いられている。このような人工涙は眼から直ぐに失なわれるため頻繁に使用する必要があることが多い。さらに、これらは眼を濡れた状態にするが、眼に潤いを与える効果は期待するほどではない。特定の湿潤剤を含有する組成物も提案されている。例えば、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を含有する多くの組成物が眼に使用されている。
【０００４】
正常な状態では、ヒトまたは哺乳類の眼表面は、正常な浸透圧（例えば実質的に等張）の涙で濡れている。この浸透圧が減少した場合、眼表面の細胞が高浸透圧または高張度の環境に曝され、上皮を介する水の損失に起因して細胞容積の減少や他の望ましくない変化を引き起こす。これを補うメカニズムは限られ、多くの点で眼表面の障害や不快症状につながる。例えば、細胞は、内部電解質濃度を増大させて浸透圧のバランスを保とうとするかもしれない。しかし、電解質レベルが上昇すると、酵素活性の減少や膜のダメージを含め、いろんな意味で細胞の代謝が変化する。また、高浸透圧の環境は眼表面に炎症を誘発することが示されている。
【０００５】
多くの生物の細胞は、電解質のように浸透圧のバランスを保つ作用をするが、細胞の代謝には干渉しない、いわゆる「適合溶質」の自然の蓄積または産生を通じて高浸透圧に対して平衡状態を保つことができる。一般に非荷電の、適合溶質または適合溶質剤は、比較的分子量が小さく、また、細胞の代謝に適合する。適合溶質はまた、細胞の代謝を許容しおよび／または高浸透圧あるいは制限される状態での細胞の生存を増大し得るので、浸透圧保護剤であるとも考えられる。
【０００６】
例えば、塩湖、深海盆や人工的に作られた蒸発池などの高塩環境に生息する好塩性と呼ばれるクラスの微生物が存在する。これらの微生物は、真核生物あるいは原核生物であり、ポリオール類、糖類、グリシン、ベタイン、プロリン、エクトイン等のアミノ酸やその誘導体などの様々な適合溶質物質を合成および／または蓄積するためのメカニズムを持っている。
【０００７】
グリセリン（グリセロール）は幅広く用いられている浸透圧作用物質であり、様々な種に由来する様々な細胞において適合溶質として見つかっている。また、保湿剤や眼の潤滑剤であるともされている。米国では、炎症を軽減するために１％までの濃度で眼表面への局所用として適用されており、処方薬では浸透力を与えるためにより高い濃度で用いられている。そのサイズの小ささと生物由来であることから、細胞膜を容易に通過し、最近ではグリセロールの移動を促進するいくつかのタイプの細胞において輸送チャネルが見つかっている。
【０００８】
グリセロールは単独で適合溶質として働くことができるが、移動性が高すぎ、即ち、膜を自由に通過しすぎるため、ある特定の系では長期間恩恵を受けることができない。その例が本来グリセロールのレベルが低いヒトの涙液膜である。局所用の調製物を適用すると、細胞への移動は極めて急速に起こる傾向がある。しかしながら、涙中の濃度は低下するため、時間経過にともなってグリセロールが細胞から涙液膜へと失われ、効果の持続が制限される。
【０００９】
様々な組織において浸透圧保護特性を有する化合物の他の主なクラスは、特定のアミノ酸である。特にベタイン（トリメチルグリシン）は浸透圧の変化に応答して腎細胞から活発に取り込まれることが分かっており、タウリンは高浸透圧環境下で眼細胞によって蓄積される。
【００１０】
ヒトまたは動物の眼の表面に適合し、そのような眼表面を高浸透圧状態により耐えるようにするのに有効な眼科組成物、例えば人工涙、点眼薬等、を提供することが求められている。
【００１１】
低浸透圧組成物は、高浸透圧状態の作用を弱めるための方法として眼に対して用いられてきた。これらの組成物は水とともに眼表面を効果的に浸し、低浸透圧人工涙として適用すると急速に細胞内へ入る。細胞内へのおよび細胞から外への水の急速な移動に起因して、低浸透圧組成物の効果の持続は著しく短い。しかも、高浸透圧環境から等張または低浸透圧環境への細胞の移動は、細胞に対し、適合溶質を蓄積する輸送メカニズムを下方調節することが示されている。このように、低浸透圧人工涙の使用によって、細胞が高浸透圧に耐える能力が減少し、点眼後間もなくしてもとに戻る。
【００１２】
カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）やヒアルロン酸ナトリウム（ＳＨ）等の物質は、ドライアイ症候群または疾患の兆候や症状を処置するのに有用であるという臨床観察は十分に確立されている。これら２つのポリアニオン性物質はまた角膜の損傷の誘発（ＣＭＣおよびＬＡＳＩＫ外科手術）またはアレルギー性の角膜損傷（ＳＨおよびアレルギーにおけるシールド潰瘍）が存在する状態において特に有用であることが示されている。
【００１３】
さらに、主要塩基性タンパク質（ＭＢＰ）は、以前は好酸球が関与するアレルギー（遅発型アレルギー）状態下でのみ発現すると考えられていたが、正常とされるヒトまたは動物の眼の涙液膜に上昇したレベル（検出可能）でこのタンパク質が存在し得る。ＭＢＰは現在ではマスト細胞（ＭＣ）ならびに好酸球によって産生されると考えられており、一般的に眼表面組織内に存在し、抗原刺激、機械的な外傷や他の状態下で脱顆粒してＭＢＰや他のカチオン性化合物が放出されると考えられている。
【００１４】
眼表面において活性な他のカチオン性タンパク質のグループは、一般に身体の抗菌防御システムである１またはそれ以上のデフェンシンである。デフェンシンは、ドライアイ患者の涙液膜に上昇したレベルでみられ、直接かまたは他の物質との相互作用を介して眼表面の健康に有害な作用を及ぼす。
【００１５】
マスト細胞の脱顆粒の傾向を少なくするための処置が認識されており、その多くは、季節性または通年性アレルギー性結膜炎と関連して眼表面で用いられる。しかしながら、一旦脱顆粒が起こると、ＭＢＰを含むカチオン性メディエーターを吸収、排出または不活性化するための認識された処置は存在しない。生理食塩水による洗浄はそのような物質を希釈し得るが、多くの場合非実用的である。また、最近のデータでは、非アレルギーの眼においても眼表面に検出可能なＭＢＰが存在することが示されており、このことは、ある時点において、過剰なＭＢＰおよび潜在的な軽度の眼表面ダメージが生じているかもしれないということを意味している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
カチオン性、例えばポリカチオン性、の物質のヒトまたは動物の眼表面に対する悪影響を減少するまたはそれによる苦痛を和らげるのに有効な眼科組成物を提供することは有用である。
【００１７】
眼を処置するための新規な眼科組成物および眼を処置するための方法を発見した。本発明の組成物は眼、例えばドライアイ症候群、低湿度環境およびストレス／外傷（例えば外科手術に起因する）等の疾患／状態にかかっているまたはかかりやすい眼を非常に効果的に処置する。特にこれらの組成物は、原因に関わらず高浸透圧の涙液膜の損傷作用を軽減するのに有用である。本発明の組成物は比較的に簡単で、容易にそしてコスト的に有利に製造することができ、眼表面に非常に便利に投与（例えば局所投与）することができる。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明の広範な態様では、眼科組成物は担体成分を含有する、好ましくは、水溶性の担体成分および適合溶質物質、例えば１またはそれ以上の適合溶質物質およびそれらの混合物から選択される物質を含む有効量の浸透圧作用成分を含有する。非常に有用な一実施形態では、浸透圧作用成分はエリトリトール成分およびそれらの混合物から選択された物質を含有してなる。さらなる一実施形態では、浸透圧作用成分は少なくとも２つの異なる適合溶質物質の組み合わせから選択された物質を含んでなる。
【００１９】
本発明のさらなる広範な態様では担体、例えば水溶性の担体、成分、およびイノシトール成分、キシリトール成分およびそれらの混合物から選択される有効量の物質を含んでなる眼科組成物を提供する。このような組成物の浸透圧はしばしば等張よりも高いまたは大きい、例えば少なくとも３１０〜約６００または約１０００ミリオスモル／危惧の範囲である。
【００２０】
本発明のさらなる広範な態様では、例えば水溶性の担体、成分、およびカルニチン成分およびそれらの混合物から選択される有効量の浸透圧作用成分を含んでなる眼科組成物を提供する。特に有用な実施形態では、組成物は非等張の浸透圧を有する。
【００２１】
本発明のさらなる態様では、担体、例えば水溶性の担体、成分、および適合溶質物質、例えば１またはそれ以上のポリオール成分および／または１またはそれ以上のアミノ酸成分から選択される混合物または組合せから選択される材料を含んでなる有効量の浸透圧作用成分を含んでなる眼科組成物を提供する。
【００２２】
上記の本発明の態様のそれぞれにおいて、本発明の組成物は、浸透圧作用成分に含まれる有機の適合溶質の材料または混合物が、組成物を眼に投与したときに、有機の適合溶質物質を含有しない同一の組成物と比較して、眼表面を高浸透圧状態により耐えることができるような化学的組成を有する。
【００２３】
本発明のさらなる広範な態様では、担体成分、浸透圧作用成分およびポリアニオン性成分を含有する眼科組成物を提供する。浸透圧作用成分は所望の浸透圧を有する組成物を提供するのに有効な量で存在する。ポリアニオン性成分は組成物をヒトまたは動物の眼に投与した場合に、ポリアニオン成分を含有しない同一の組成物と比較して、ヒトまたは動物の眼表面に対する、カチオン性の、例えばポリカチオン性の材料の少なくとも１つの有害な影響を減少する量で存在する。このカチオン性材料は、任意の供給源、例えば内因的、環境汚染物、または例えば、保存溶液またはコンタクトレンズケア製品等の眼に用いる薬剤の適用の望ましくない結果によるものであり得る。非常に有用な一実施形態では、ヒアルロン酸は単独のポリアニオン性成分ではない。他のポリアニオン性成分は本発明の組成物において用いるためにより適合させる。例えばヒアルロン酸またはその塩よりもヒトまたは動物の眼の眼表面に対する局所投与に適合させる。本発明のさらなる実施形態では、組成物は約３００〜約６００または約１０００ミリオスモル／ｋｇの範囲の浸透圧を有する。
【００２４】
本発明のさらなる広範な態様では、担体成分、およびポリアニオン性ペプチド、ポリアニオン性ペプチドアナログ、ポリアニオン性ペプチドアナログの一部、グルコースや同様の糖およびそれらの混合物が含まれるがこれらに限定されない糖のカルボキシメチル置換ポリマーから選択されるポリアニオン性成分を含有する眼科組成物を提供する。そのようなポリアニオン性成分は、ヒトまたは動物の眼に投与したときに、カチオン性（例えばポリカチオン性）化学種および／または物質の眼表面に対する少なくとも１つの有害な影響を、そのポリアニオン性成分を含有しない同一の組成物にと比較して減少するのに有効な量で存在する。
【００２５】
ヒトまたは動物を処置する方法もまた提供される。そのような方法は、組成物の投与、例えば本発明の組成物、をヒトまたは動物の眼に投与し、眼に対して少なくとも１つの恩恵を与えることを含んでなる。
【００２６】
本明細書に記載したいずれかおよび全ての特徴およびそのような特徴の組み合わせは、
任意のそのような組合せの特徴が相互に矛盾しないという条件で、本発明の範囲に包含される。
【００２７】
これらのおよびその他の本発明の態様は以下の発明の詳細な説明、添付する図面、実施例および請求の範囲から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】特定の眼科組成物のリン酸化ｃ−ｊｕｎＮ末端キナーゼ（ｐ−ＪＮＫ１およびｐ−ＪＮＫ２）に関する強度を示すグラフである。
【図２】特定の眼科組成物のｐ−ＪＮＫ１およびｐ−ＪＮＫ２に関する強度を示すグラフである。
【図３】Ｂｅａｄｌｙｔｅ法を用いて得られた特定の眼科組成物についてのリン酸化：全ＪＮＫ比を示すグラフである。
【図４】Ｂｅａｄｌｙｔｅ法を用いて得られた特定の眼科組成物についてのホスホ：全ｐ−３８  ＭＡＰキナーゼ比を示すグラフである。
【図５】Ｂｅａｄｌｙｔｅ法を用いて得られた特定の眼科組成物についてのホスホ：全ＥＲＫ  ＭＡＰキナーゼ比を示すグラフである。
【図６】種々の眼科組成物についての経上皮電気抵抗値（ＴＥＥＲ）に対する濃度依存効果の概要を示すグラフである。
【図７】適合溶質剤の組み合わせを含む組成を含む種々の眼科組成物のＴＥＥＲに対する効果を示すグラフである。
【図８】適合溶質剤の組み合わせを含む組成を含む種々の他の眼科組成物のＴＥＥＲに対する効果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明は、ヒトまたは動物の眼の処置に有用な眼科組成物に関する。上記のとおり、本発明の一態様では、担体成分（例えば水溶性ベースのまたは水溶性の担体成分）、および少なくとも１つの適合溶質成分（例えば有機の適合溶質成分）から選択される材料を含んでなる浸透圧作用成分を含有する組成物を提供する。そのような組成物は、組成物を眼に投与したときに、該材料が眼の眼表面を、その材料を含有しない同一の組成物と比較して、眼表面に対する高浸透圧状態により耐えるようにするのに効果的であるように、有効な量の該材料を有利に含有する。
【００３０】
そのような組成物は任意の適当な張度または浸透圧（例えば、高浸透圧、実質的に等張の浸透圧または高浸透圧）を有していても良いが、非常に有用な組成物は等張の浸透圧以外の（例えば等張浸透圧よりも高い）浸透圧を有する。一実施形態では、本発明の組成物は、少なくとも３００または約３１０〜約６００または約１０００ミリオスモル／ｋｇの範囲の浸透圧を有する。
【００３１】
ポリオール（エリトリトール成分、キシリトール成分、イノシトール成分等）やそれらの混合物は、有効な張度／浸透圧作用剤であり、本発明の組成物に単独でまたはグリセロールおよび／または他の適合溶質剤と組み合わせて含有させることができる。本発明を特定の動作理論に限定することを意図しないが、それらのポリオール成分はサイズがグリセロールに比べて大きいために、眼に対して局所的に使用した場合に、グリセロールよりも細胞にゆっくりと蓄積され、グリセロールと比較して長期間細胞内に維持される。
【００３２】
非常に有用な一実施形態では、２またはそれ以上の異なる適合溶質成分（例えばグリセロールおよび／または１またはそれ以上の他のポリオール成分および／または１またはそれ以上の他の適合溶質成分（例えば１またはそれ以上の非荷電性または対イオンアミノ酸成分等））の混合物は、単一の適合溶質成分のみを含有する組成物を用いては得られない１またはそれ以上の眼に対する恩恵をもたらすために共に有利に用いることができる。
【００３３】
本明細書において、ある化合物に関して用いられる「成分」なる語は、その化合物そのもの、存在すればその化合物の異性体および立体異性体、その化合物の適当な塩、その化合物の誘導体およびそれらの混合物を意味する。
【００３４】
本明細書において、ある化合物に関して用いられる「誘導体」なる語は、ある特定の化合物と十分類似した化学的組成または構造を有し、本発明の組成物および／または方法において、その化合物と実質的に類似したまたは実質的に同一な形で機能する化合物を意味する。
【００３５】
快適性および許容性を本発明組成物の製剤化において考慮することができる。本発明の組成物において用いる有機の適合溶質成分の量は、患者に対して不当に有害な作用（例えば、不当な不快症状、涙反射等の有害な作用）を及ぼすことなく患者の眼に少なくとも１つの恩恵をもたらすのに有効な量である。
【００３６】
当業者にとって、より長い時間眼表面に保持される粘稠な液やジェルとすることが可能であるが、その代償としてしばしば一時的に視界がぼやける。しかしながら粘稠な液体やジェルには、所定量の物質を送達するのに頻繁に投与しなくてよいという利点がある。
【００３７】
キシリトールまたはエリトリトールを単独で用いる場合、適合溶質成分として効果的に機能させるため、例えば細胞取込に必要な時間によっては長時間接触させることが必要であるかもしれない。しかしながら、一旦in situになれば、例えば眼表面細胞内では、高浸透圧状態のバランスを保つ有益な作用は、細胞内へおよび細胞から外へより速く移動するグリセロールの等量での場合と比較して有利に長時間である。そのような長時間持続する効果と投与回数がすくないという恩恵は、視界がぼやけることなく得ることができる。
【００３８】
一実施形態では、本発明の組成物は、適合溶質物質の組み合わせまたは混合物を含有し、それぞれ化学的に異なるタイプであっておよび／または異なる分子量および／または移動性を有する。小さく移動性の高い物質は移動が早いが、効果、例えば高浸透圧状態の刺激からの保護、の持続は短かく、大きく移動性の低い物質は移動が遅く保護効果の持続は長い。
【００３９】
キシリトール、エリトリトールおよびグリセロールはいずれも、一炭素原子あたりのヒドロキシ基の密度が高い。ヒドロキシ基は、水とより強く結合し化合物の溶解度を増大させる。ドライアイ症候群の処置のための組成物において、そのような高いヒドロキシ基の密度は、組織からの水の損失を防止することにより組成物の能力を高めることができる。
【００４０】
ポリオールのなかで、５炭素のキシリトール、４炭素のエリトリトールおよび３炭素のグリセロールは眼科的使用に好ましい。２炭素の形態（エチレングリコール）はよく知られた毒素であり適当でない。６炭素の形態（マンニトール、ソルビトールおよび関連のデオキシ化合物）は小さい分子と組み合わせて有用かもしれない。一実施形態では、３〜６炭素のポリオールと１および２炭素のデオキシ誘導体（適宜、異性体、立体異性体等が挙げられるがこれに限定されない）の組み合わせが本発明において有用であり得る。
【００４１】
荷電していないまたは両性イオンアミノ酸は、本発明における有機の適合溶質成分として有用である。
【００４２】
カルチニン成分、例えば、カルチニン自体、その異性体／立体異性体、塩、誘導体やそれらの混合物は、本発明の眼科組成物に用いるための非常に有用な適合溶質成分である。カルチニンは脂肪酸代謝の種々の一部分として必要であることが十分知られており、肝臓や筋肉細胞の代謝において重要な役割を担っている。カルチニンは、眼細胞を含め多くのタイプの細胞のエネルギー源として働くこともある。カルチニン成分は、例えば、浸透圧保護剤として、脂肪酸代謝において、解毒剤として、創傷治癒の促進において、タンパク質シャペロンとして、および神経保護において、ユニークな特性を有し得る。
【００４３】
有機の適合溶質成分は、このような物質の異なるサイズ、移動性および作用メカニズムの組み合わせを用いることにより、本発明の組成物において有利に提供され得る。小さく移動性の高い物質、例えば小さなポリオール、は移動は速いが浸透圧的保護の持続は短かいと予想される。いくつかのアミノ酸や関連化合物は、長時間作用する細胞内適合溶質およびタンパク質安定化剤として機能し得る。本発明では、カルチニン成分は単独でまたは１またはそれ以上の他のアミノ有機適合溶質成分および／またはポリオール（例えば本明細書に記載の）と組み合わせることができる。
【００４４】
アミノベースの有機適合溶質成分および／または用いることができる成分としては、一般に、ベタイン、タウリン、カルニチン、サルコシン、プロリン、トリメチルアミン、他の両性イオンアミノ酸等およびそれらの混合物が挙げられるがこれに限定されない。カルニチンおよび／または他のアミンベースの有機適合溶質成分の１つとの組合せに有用なポリオールとしては、グリセロール、プロピレングリコール、エリトリトール、キシリトール、ミオイノシトール、マンニトール、ソルビトール等やそれらの混合物が挙げられるがこれに限定されない。
【００４５】
適合溶質成分は本発明の組成物に任意の量で含まれる。しかしながら、そのような量は、眼に対する適合溶質成分を含有する組成物の投与の結果として眼に対する恩恵をもたらすのに効果的な量である。過剰な量の適合溶質成分は、患者に不快症状をもたらすおよび／または処置すべき眼に対して潜在的に害となるので避けるべきである。適合溶質成分は組成物に対して所望の浸透圧をもたらすのに効果的な量で存在しているのが有益である。
【００４６】
用いられる適合溶質成分の具体的な量は、例えば全体的な化学的組成や組成物の意図する用途、組成物の所望の浸透圧、具体的な適合溶質または用いられるそのような溶質の組み合わせ等の因子に依存して、その範囲は非常に広い。一実施形態では、本発明の組成物に含まれる適合溶質成分の総量は、０．０１％（ｗ／ｖ）または約０．０５％（ｗ／ｖ）〜約１％（ｗ／ｖ）または約２％（ｗ／ｖ）または約３％またはそれ以上の範囲であり得る。
【００４７】
角膜表面細胞は、塩および水の輸送を調節して細胞容積を一定に保とうとすることで浸透力に応答する。例えば、ドライアイ疾患において存在するような慢性的な高浸透圧状態では、種々のアミノ酸やポリオールを含む適合溶質の取込に関する輸送メカニズムが上方調節される。本発明の一実施形態では、適合溶質を含有する眼科組成物（例えば、人工涙液）は、高浸透圧または等張を超えるように製剤化され、約３００または約３１０〜約６００または約１０００ミリオスモル／ｋｇの範囲である。発明をある特定の動作理論に限定することを意図するものではないが、そのような条件下では、細胞内に適合溶質を蓄積する迅速で長期間のメカニズムが刺激され、等張または低浸透圧状態での細胞活性と比較して、取込および保持の増大が可能になる。適合溶質成分が細胞によって蓄積されると、細胞は、受けている高浸透圧による損傷（例えば、ドライアイ症候群および／または１またはそれ以上の他の状態／疾患によって引き起こされるような）に対する保護が増大する。この増大した保護の結果には、細胞代謝や本発明の眼科組成物の投与後の生存期間が数時間から数日に改善されることが含まれる。
【００４８】
正常な涙器系では、涙産生、涙排出および涙蒸発のバランスが保たれ、眼表面を湿った潤滑状態にしている。正常な人における涙の浸透圧の典型的な値は、２９０〜３１０ミリオスモル／ｋｇであるが、これは一日を通してあるいは周囲の環境の変化に応じて変化し得る。正常な人では、眼表面から涙腺への神経フィードバックによって眼表面の液を安定に保つように涙産生がコントーロルされている。涙液膜の浸透圧はこのフィードバックの調節に対する主要な刺激の１つであることが提案されている。ドライアイ疾患では、産生装置（種々の腺）、排出系、神経シグナル伝達メカニズムまたは眼表面それ自体の機能不全が、不適切な涙液膜、眼表面への侵害や問題となる不快症状につながる。
【００４９】
細胞レベルでは、ドライアイ疾患は一般に、慢性的に高浸透圧の細胞外（涙液膜）環境によって特徴付けられる。ドライアイ患者の涙液膜の浸透圧は、３００〜５００ミリオスモル／ｋｇの範囲であり、多くは３２０〜４００ミリオスモル／ｋｇであるとの報告がある。これらの条件下では、細胞は水を損失するおよび／または塩を取込んで、細胞容積の変化を受ける。高浸透圧は細胞代謝のプロセスを変えることが分かっており、酵素的プロセスの機能を減少させ、アポトーシスや細胞死につながる。
【００５０】
高浸透圧の変化に対する防御として、角膜細胞が、アミノ酸やポリオール等の非イオン性溶質に関する輸送メカニズムを上方調節し、電解質バランスが変化することなく細胞容積を維持するためにこれら溶質を細胞内に蓄積することが示されている。これらの条件下で、細胞代謝に対する影響は容積および電解質の変化よりも少なく、そのような化合物は適合溶質と称される。適合溶質としては、アミノ酸であるベタイン（トリメチルグリシン）、タウリン、グリシンおよびプロリンや、ポリオールであるグリセロール、エリトリトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトールが挙げられるがこれに限定されない。適合溶質はまた、適合溶質が存在しなければ制限されるような高浸透圧条件下で、細胞代謝を許容しまたは細胞の生存を増大し得るので浸透圧保護物質であるとも考えられる。
【００５１】
細胞は、細胞内の生合成や細胞外液（この場合涙液）から膜を介する輸送の増大によってある特定の適合溶質を蓄積する。いずれの場合も、具体的な合成または輸送タンパク質がこのプロセスに関与している。これらのタンパク質が高浸透圧条件の存在下で活性化されること、これらタンパク質を産生する転写および翻訳イベントが高浸透圧条件によって上方調節されることが実験により示されている。逆に、低浸透圧条件に曝された場合、あるいは高浸透圧から等張環境下に移った場合に、角膜および他の細胞が適合溶質を排出することが実験で示されている。
【００５２】
ドライアイ疾患では、角膜表面の細胞は高浸透圧環境に曝されており、これら細胞が入手可能な浸透圧保護物質を蓄積するよう刺激を受ける。等張または低浸透圧の人工涙液の眼表面への添加は潤滑性の増大により症状の軽減をもたらすが、浸透圧保護物質の蓄積に対するこれら細胞におけるメカニズムを下方調節する。このことは、涙液膜が高浸透圧のドライアイの状態に戻る点眼後数分から数時間に、結果として浸透圧の刺激に対するさらなる脆弱性をもたらし得る。
【００５３】
現在のＦＤＡ指針は、「眼科溶液は、「等張溶液」の表示に適合するには０．８〜１．０％の塩化ナトリウムと等価な浸透圧を有すること」と明記している。これは、２７４〜３４２ミリオスモル／ｋｇの範囲と同等である。さらに、ＦＤＡガイドラインは「２〜５％の塩化ナトリウム眼科調製物は高浸透圧であり、「高浸透圧溶液」と表示する場合は許容できるＯＴＣ製品である」と記載している。この範囲は６８４〜１７１１ミリオスモル／ｋｇに等しい。本発明に関しては、「超等張性（supra-tonic）」溶液はこれら２つの範囲の中間の浸透圧を有すると定義され、約３００または３１０〜約６００または約８００または約１０００ミリオスモル／ｋｇの範囲、即ち約０．９〜約１．８％の塩化ナトリウムと同等である（１．８％は、高浸透圧であると表示しない局所眼科溶液のＦＤＡガイドラインの最大値である）。
【００５４】
本発明は、存在するドライアイの眼表面の高浸透圧状態により適合する超等張レベルの人工涙液を製剤化することによりこれらの概念を考慮に入れる。超等張性の範囲（全体の浸透圧約３００または約３１０〜約６００または約１０００ミリオスモル／ｋｇ）に製剤化することに加えて、本発明の組成物は本明細書に記載の１またはそれ以上の有機の適合溶質物質を含有する。本発明の組成物における、超等張性と１またはそれ以上の適合溶質との組み合わせは、これら保護物質の角膜表面細胞内への取込を刺激または維持し、これら材料または物質の豊富な供給をもたらすことに供している。
【００５５】
超等張性媒体における適合溶質の十分な量に加えて、本発明の組成物はさらに、快適さや潤滑をもたらす適当な粘滑剤や増粘剤を含有してもよく、有機の適合溶質組成物を角膜表面細胞による取込を増大させるのに十分な時間眼表面に保持することにも有効である。
【００５６】
ＦＤＡガイドラインは製剤の最終の浸透圧は、非イオン性ならびにイオン性化学種によって決定し得ると明確に示している。したがって、製剤は、有意の量のグリセロールと他の適合溶質を含有し得るが、実質量の何らかのイオン性の浸透圧作用物質（ナトリウム塩等）は含有しない。一実施形態では、本発明の組成物はイオン性の浸透圧作用物質は実質的に含有しない。
【００５７】
本発明の組成物は、使用中液滴に暴露される間（例えば粘度に依存して投与後５〜３０分間）に角膜細胞による取込をもたらし、点眼の間の数時間細胞内での保持をもたらすのに効果的な異なる有機の適合溶質物質を含有する。
【００５８】
本発明の組成物によってもたらされる浸透圧による刺激からの保護の増大によって、各用量から得られる臨床上の恩恵の持続時間が増大する。本発明の組成物の通常の使用では、細胞の代謝の影響が少なく細胞の生存率が増大するので、眼表面の健康状態が増強される。
【００５９】
本発明の別の実施形態では、担体成分およびポリアニオン性成分を含有する組成物が提供される。このようなポリアニオン性成分を含有する組成物は、ある特定の実施形態では不要であるが、本明細書に記載の有機の適合溶質成分を含有するのが有利である。
【００６０】
一実施形態では、担体成分およびポリアニオン性成分を、眼表面におけるカチオン性の化学種が増加している条件下（例えば増加した主要塩基性タンパク質（ＭＢＰ））および／またはポリアニオン性化学種が減少した条件下で、眼表面を処置するのに有効な量で含有する組成物が提供される。一実施形態では、本発明の眼科組成物は、組成物をヒトまたは動物の眼に投与したときに、眼表面に対するカチオン性（例えばポリアニオン性）材料の少なくとも１つの有害な影響を、そのポリアニオン性成分を含有しない同一の組成物と比較して減少するのに有効な量で存在するポリアニオン性成分を含有する。
【００６１】
有用な一実施形態では、ポリアニオン性成分を含有する組成物（例えば、適合溶質組成物を含有するまたは含有しない）は、眼がレーザーに暴露される外科手術が挙げられるがこれに限定されない外科手術の前、外科手術の間および／または外科手術の後（例えばレーシック後ステイニング、乾燥や他の眼表面の合併症の処置において）に有効に用いることができる。レーシック後の表面の傷害は、多因的で、手術により生じた神経鈍麻や角膜炎、吸着リングの力による角膜輪部に対する損傷、角膜の形状変化によるまばたきの際の眼瞼接合の変化、眼表面に対する局所的投薬や保存剤による化学的損傷などが挙げられるがそれらに限定されない。
【００６２】
眼表面や涙液膜に対する本発明のポリアニオン性成分を含有する組成物の投与は、レーシック後の眼表面の傷害の上記の原因の１またはそれ以上のあるいは全ての処置に有効である。
【００６３】
特に有用な一実施形態では、本発明の組成物は、９０残基のポリペプチドからなることが示されているＭＢＰのプロピースの活性（例えば抗原性および／または細胞毒性）を模擬するポリアニオン性成分を含有する。有用な物質としては、この配列またはこの配列の一部を有する１またはそれ以上のポリペプチドアナログが挙げられる。
【００６４】
本明細書において用いられる「模擬」なる語は、ポリアニオン性成分（例えば、ポリペプチドアナログ）が、ＭＢＰのプロピースの対応する活性のプラスマイナス約５％または約１０％または約１５％または約２０％以内の活性を有することを意味する。
【００６５】
ＭＢＰのプロピースは、以下の配列番号１に示すアミノ酸配列を有する：
lhlrsetstf etplgaktlp edeetpeqem eetpcrelee eeewgsgsed
askkdgaves isvpdmvdkn ltcpeeedtv kvvgipgcq
【００６６】
主要塩基性タンパク質プロピース配列または主要塩基性タンパク質プロピースの一部の配列を有するポリペプチドアナログは、配列番号１に含まれるホモローガスな連続したアミノ酸配列またはその一部と少なくとも約７５％または約８０％または約８５％または約９０％または約９５％または約９９％またはそれ以上の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるペプチドを意味する。
【００６７】
糖（例えば、グルコース等の糖が挙げられるがこれに限定されない）のカルボキシメチル置換されたポリマーは、本発明のポリアニオン性成分として用いることができる。
【００６８】
さらに、さらなる有用なポリアニオン性成分としては、修飾炭化水素、他のポリアニオン性ポリマー（例えば、製薬用にすでに入手可能なものが挙げられるがこれに限定されない）やそれらの混合物が挙げられるがこれに限定されない。１またはそれ以上の上記のポリペプチドアナログと１またはそれ以上の上記の他のポリアニオン性成分の混合物を用いることができる。
【００６９】
本発明の組成物は、眼科的に許容し得る担体成分、適合溶質成分および／またはポリアニオン性成分を含有するのが有利である。
【００７０】
組成物、担体成分または他の成分または材料は、眼組織に適合する場合、即ち眼表面に接触させたときにそれが有意のまたは過度の有害な影響をもたらさない場合、「眼科的に許容し得る」。好ましくは、眼科的に許容し得る成分または材料はまた、本発明の組成物の他の成分とも適合する。
【００７１】
本明細書中で使用される用語「ポリアニオン性成分」は、２以上の離れたアニオン性荷電（すなわち、複数の離れたアニオン性荷電）を含む化学的実体、例えば、イオン荷電化学種（イオン荷電ポリマー物質など）を意味する。好ましくは、ポリアニオン性成分は、複数のアニオン性荷電を有するポリマー物質およびその混合物からなる群から選択される。
【００７２】
ポリアニオン性成分は実質的に一定のまたは均一な分子量を有することができる、または分子量の異なる２またはそれ以上のポリアニオン性成分からなり得る。異なる分子量の２またはそれ以上のものを含んでなるポリアニオン性成分を有する眼科組成物は、本明細書の一部を構成する米国特許出願第10/017,817号（出願日２００１年１２月１４日）に記載されている。
【００７３】
好ましくは、本組成物は眼に投与した場合に、ポリアニオン性成分を含有しない実質的に同一の組成物と比較して、眼に対して増大した粘着能力を有する。上記の眼に対する増大した粘着能力の特徴について、本組成物は、好ましくは、ポリアニオン性成分を含有しない実質的に同一の組成物と比較して、再投与を必要とする前に、より長時間にわたり効果的な潤滑をもたらすのに有効である。
【００７４】
本明細書に記載したように機能し、全体として組成物またはその組成物が投与される眼に対して実質的に有害な影響を有しない限り、本発明に従って任意の適当なポリアニオン性成分を用いることができる。ポリアニオン性成分は好ましくは、使用される濃度で眼科的に許容し得るものである。ポリアニオン性成分は好ましくは３またはそれ以上のアニオン性（または負の）の電荷を含む。ポリアニオン性成分がポリマー材料である場合、ポリマー材料の反復単位の多くが分離したアニオン電荷を含むことが好ましい。特に有用なアニオン性成分は水溶性（例えば室温で本発明の組成物が用いられる濃度で可溶性）である。
【００７５】
本発明の組成物において好適なポリアニオン性成分の例には、アニオン性セルロース誘導体、アニオン性アクリル酸含有ポリマー、アニオン性メタクリル酸含有ポリマー、アニオン性アミノ酸含有ポリマー、およびそれらの混合物などが含まれるが、これらに限定されない。アニオン性セルロース誘導体が本発明において特に有用である。
【００７６】
特に有用なクラスのポリアニオン性成分は複数のアニオン性電荷を有する１またはそれ以上のポリマー物質である。以下の例が挙げられるがそれらには限定されない：
金属カルボキシメチルセルロース
金属カルボキシメチルヒドロキシエチルセルロース
金属カルボキシメチルデンプン
金属カルボキシメチルヒドロキシエチルデンプン
金属カルボキシメチルプロピルグアー
加水分解されたポリアクリルアミドおよびポリアクリロニトリル
ヘパリン
グコアミノグリカン（gucoaminoglycan）
ヒアルロン酸
コンドロイチン硫酸
デルマタン硫酸
ペプチドおよびポリペプチド
アルギン酸
アルギン酸金属塩
【００７７】
下記の１または複数のホモポリマーおよびコポリマー：
アクリル酸およびメタクリル酸
アクリル酸金属塩およびメタクリル酸金属塩
ビニルスルホン酸
金属ビニルスルホン酸
アミノ酸（例えば、アスパラギン酸およびグルタミン酸など）
アミノ酸の金属塩
p-スチレンスルホン酸
金属p-スチレンスルホン酸
2-メタクリロイルオキシエチルスルホン酸
金属2-メタクリロイルオキシエチルスルホン酸
3-メタクリロイルオキシ-2-ヒドロキシプロピルスルホン酸
金属3-メタクリロイルオキシ-2-ヒドロキシプロピルスルホン酸
2-アクリルアミド-2-メチルプロパンスルホン酸
2-アクリルアミド-2-メチルプロパンスルホン酸金属塩
アリルスルホン酸
アリルスルホン酸金属塩など。
【００７８】
優れた結果が、カルボキシメチルセルロースおよびその混合物（例えば、アルカリ金属および／またはアルカリ土類金属カルボキシメチルセルロース）から選択されるポリアニオン性成分を用いて達成される。
【００７９】
本組成物は好ましくは溶液であるが、軟膏やジェル等の他の形態も用いることができる。
【００８０】
担体成分は眼科的に許容し得るもので、そのような眼科的受容性を提供する、および／またはその組成物および／またはその組成物を投与する眼および／または眼を処置する患者に利益をもたらすのに有効である、１またはそれ以上の成分が挙げられる。担体成分は、水溶性で、例えば、水の少なくともの５０重量％の多量であるのが有利である。担体成分に含有することができる他の成分としては、緩衝成分、浸透圧作用成分、保存料成分、ｐＨ調製成分、人工涙に一般にみられる成分等が挙げられるがこれに限定されない。
【００８１】
本組成物は、好ましくは、水の粘度を超える粘度を有する。一実施形態では、本組成物の粘度は、数なくとも１０ｃｐｓ（センチポワズ）、より好ましくは約１０ｃｐｓ〜約５００ｃｐｓまたは約１０００ｃｐｓの範囲である。有利には、本組成物の粘度は、約１５ｃｐｓまたは約３０ｃｐｓまたは約７０ｃｐｓ〜約１５０ｃｐｓまたは約２００ｃｐｓまたは約３００ｃｐｓまたは約５００ｃｐｓの範囲である。本組成物の粘度は、なんらかの適当な、例えば慣用の方法で、測定することができる。慣用のBrookfield粘度計はこのような粘度を測定する。
【００８２】
非常に有用な実施形態では、ポリアニオン性成分は、組成物の約０．１％〜約５％、好ましくは約０．２％〜約２．５％、より好ましくは約０．２％〜約１．８％、さらにより好ましくは０．４％〜約１．３％（ｗ／ｖ）である。
【００８３】
担体成分に含有させてもよい他の成分としては、緩衝成分、浸透圧作用成分、保存料成分、ｐＨ調整成分、人工涙に一般にみられるような他の成分（例えば、１またはそれ以上の電解質）およびそれらの混合物等が挙げられるがこれに限定されない。非常に有用な実施形態では、担体成分は以下の少なくとも１つを含む：有効量の緩衝成分；有効量の浸透圧作用成分；有効量の保存料成分；および水。
【００８４】
これらのさらなる成分は、好ましくは眼科的に許容し得るものであり、眼科組成物（例えば、ドライアイ症候群に悩まされている眼を処置するのに用いられる組成物、人工涙製剤等）において慣用的に用いられる材料から選択することができる。
【００８５】
本発明の組成物において、これらのさらなる成分について許容し得る有効な濃度は、当業者には容易に理解されるものである。
【００８６】
担体成分には、好ましくは、組成物を所望の浸透圧にするための有効量の浸透圧作用成分が含まれる。担体成分には、好ましくは、組成物を所望の範囲のｐＨに維持するのに有効な量の緩衝成分が含まれる。用いることができる適当な浸透圧作用成分は、１またはそれ以上の各種無機塩等の眼科組成物に慣用的に用いられているものである。塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトール、デキストロース、グリセリン、プロピレングリコール等やそれらの混合物は非常に有用な浸透圧作用成分である。用いることができる適当な緩衝成分または緩衝剤は、眼科組成物において慣用的に用いられているものである。
緩衝塩としては、アルカリ金属、アルカリ土類金属および／またはアンモニウム塩、ならびにクエン酸塩、リン酸塩、ホウ酸塩、乳酸塩およびそれらの組合せ等が挙げられる。Ｇｏｏｄｅ’ｓバッファー等の慣用の有機緩衝剤もまた使用することができる。
【００８７】
ポリアニオン性成分の存在下での保存料として有効である限り、任意の適当な保存料成分を本組成物に含有させることができる。即ち、保存料成分は、ポリアニオン性成分の存在によって実質的な影響を受けないことが重要である。当然、保存料成分の選択は、様々な因子（例えば、存在する具体的なポリアニオン性成分、組成物に存在する他の成分等）に依存する。有用な保存料成分の例としては、過ホウ酸塩、過カルボン酸塩等の過酸塩；非常に低い濃度（例えば、約５０〜約２００ｐｐｍ（ｗ／ｖ））の過酸化水素等のペルオキシド；ベンジルアルコール、クロロブタノール等のアルコール；ソルビン酸およびその眼科的に許容し得る塩、ならびにこれらの混合物が挙げるがこれらに限定されない。
【００８８】
このような成分を含有する本組成物において含有する保存料成分の量は、例えば用いる具体的な保存料成分に依存して、比較的広い範囲で変わる。このような成分の量は、好ましくは、本組成物の約０．０００００１％〜約０．０５％（ｗ／ｖ）またはそれ以上である。
【００８９】
特に有用なクラスの保存料成分は、二酸化塩素前駆体である。二酸化塩素前駆体の具体例としては、安定化二酸化塩素（ＳＣＤ）、アルカリ金属やアルカリ土類金属等の金属亜塩素酸塩やそれらの混合物が挙げられる。テクニカルグレードの亜塩素酸ナトリウムは非常に有用な二酸化塩素前駆体である。二酸化塩素を含有する複合体（例えば、二酸化塩素と炭酸塩との複合体、二酸化塩素と炭酸水素塩との複合体、それらの混合物等）もまた二酸化塩素前駆体として含まれる。多くの二酸化塩素前駆体の正確な化学的組成（例えば、ＳＣＤや二酸化塩素複合体）は完全にはわかっていない。ある特定の二酸化塩素前駆体の製造については、本明細書の一部を構成する米国特許第３２７８４４７号に記載されている。有用なＳＣＤ製品の具体例としては、Allergan Inc.からＰｕｒｉｔｅ７の商標で販売されているもの、Rio Linda Chemical Company, Inc.からＤｕｒａ Ｋｌｏｒの商標で販売されているもの、International Dioxide, Inc.からＡｎｔｈｉｕｍ Ｄｉｏｘｉｄｅの商標で販売されているものが挙げられる。
【００９０】
二酸化塩素前駆体は、本組成物を効果的に保存するために本組成物に含有させる。このような有効な保存料濃度は、好ましくは、本組成物の、約０．０００２％または約０．００２％〜約０．０２％（ｗ／ｖ）またはそれ以上の範囲である。
【００９１】
二酸化塩素前駆体を保存料成分として用いる場合は、本組成物は好ましくは少なくとも約２００mOsmol/kgのオスモル濃度を有し、pＨを許容される生理学的範囲（例えば、約６〜約８または約１０）に維持するために緩衝化される。
【００９２】
本組成物は、好ましくは１またはそれ以上の電解質（例えば、天然の涙や人工涙製剤にみられるような）である、有効量の電解質成分を含有する。本組成物において含有するための特に有用なこのような電解質の例としては、アルカリ土類金属の塩（アルカリ土類金属無機塩およびその混合物（例えばカルシウム塩、マグネシウム塩およびそれらの混合物）が挙げられるがこれに限定されない。塩化カルシウム、塩化マグネシウムおよびそれらの混合物から選択される電解質成分を用いて非常に良好な結果が得られる。
【００９３】
本組成物におけるこのような電解質成分の量または濃度は非常に広い範囲で変化し、様々な因子（例えば、用いる電解質成分、その電解質を含有する組成物など）に依存し得る。有用な一実施形態では、電解質成分は、天然のヒトの涙における電解質濃度に少なくとも部分的に類似するかまたは実質的に類似するように選択される。好ましくは、電解質成分の濃度は、本組成物の約０．０１％〜約０．５％または約１％の範囲である。
【００９４】
本組成物は慣用の手順と技術を用いて調製することができる。例えば、本組成物は、成分を共に配合することにより、例えば一度に、調製することができる。
【００９５】
説明すれば、ある実施形態では、ポリアニオン性成分を精製水と混合し、例えば、混合および／または攪拌によって精製水に分散させる。緩衝成分、浸透圧作用成分、電解質成分、保存料成分等の他の成分を、混合を継続する際に導入する。最終の混合物を、蒸気滅菌等の滅菌をする（例えば、少なくとも１００℃、例えば約１２０℃〜約１３０℃の範囲、で少なくとも約１５分または少なくとも３０分、例えば約４５〜６０分の範囲）。一実施形態では、保存料成分を好ましくは滅菌後に混合物に添加する。最終産物は、好ましくは、例えば２０ミクロンの滅菌カートリッジフィルター（例えば、ＨＤＣ ＩＩの商品名でPallから販売されている２０ミクロン清澄化フィルターカートリッジ）を用いて濾過し、透明で滑らかな溶液を得、これを無菌的に濾過して容器（例えば、低密度ポリエチレンのティール容器）に入れる。
【００９６】
あるいは、それぞれのポリアニオン性成分を精製水と混合し、個々のポリアニオン性成分の溶液を得ることができる。個々のポリアニオン性成分の溶液を共に混合することにより、個々のポリアニオン性成分の、所望の、管理された比率を有する配合が容易且つ有効に行われる。次いで、配合された溶液を、上記のようにして、他の成分と混合し、滅菌し、容器に充填することができる。
【００９７】
特に有用な実施形態では、上記のように、ポリアニオン性成分と精製水の溶液を得る。次いで、この溶液を、例えば上記のようにして、滅菌する。別途、最終の組成物に含有させるべき他の成分を精製水に溶解する。この溶液は、ポリアニオン性成分を含有する溶液中に滅菌濾過（例えば、ＰａｌｌからＳｕｐｏｒｆｌｏｗの商品名で販売されているような、０．２ミクロンの滅菌フィルター）して、最終の溶液とする。この最終の溶液を、例えば上記のようにして濾過して透明でなめらかな溶液を得、上記のようにして容器に無菌的に充填した。
【００９８】
本発明の組成物は、必要に応じて、潤滑を必要としている眼（例えば、ドライアイ症候群に悩むまたはドライアイ症候群の傾向を有する眼）に有効量の組成物を投与することを含んでなる方法によって、有効に利用することができる。必要に応じて投与ステップを繰り返し、そのような眼に対し有効な潤滑を提供する。本組成物の投与の形式は、組成物の形態に依存する。例えば、組成物が溶液である場合、組成物の液滴を、例えば慣用の点眼器から、眼に適用する。一般に、本組成物は、慣用の眼科組成物が適用されるのと実質的に同じようにして眼の表面に適用することができる。本組成物のこのような投与によって、本明細書において記載するような実質的で予想し得ない恩恵がもたらされる。
【００９９】
下記の非限定的な実施例により、本発明のいくつかの態様を説明する。
【０１００】
実施例１
この実験では、角膜上皮細胞をウサギの眼から単離し、基底細胞、翼細胞および扁平上皮細胞を含む層状の「エア−リフト」カルチャーに分化する条件下で培養した。増殖および分化するにつれて、カルチャーは、頂上面と基底面との間の細胞の層を介する経上皮電気抵抗（TEER）についての基礎となる細胞間のタイトジャンクションを構築した。この経上皮電気抵抗値は、細胞の増殖、分化および健全な状態にセンシティブな測定値である。
５日間培養して層構造を形成した後、種々のカルチャーウェルを、高浸透圧液（400ｍOsmol／kg）に、６候補化合物の低濃度（2ｍM）溶液を添加または添加せずに暴露した。次いで、暴露から２２時間後にTEERを測定した。TEER値は、等張条件下（300ｍOsmol／kg）で同様のカルチャーから得られたTEERに対するパーセントで示した。これら試験の結果を表１に示す。
【表１】
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これらの結果は、試験した候補化合物がいずれも浸透圧保護能力を有し、高浸透圧対照に対して相対的にTEERが増大することを示している。意外にも、試験した薬剤のうち、カルニチンが最も有効であった。特定の理論に限定されることは意図しないが、カルチニンで得られた有益な結果は、浸透圧保護効果のほかに、エネルギー代謝や他の細胞メカニズムにおいてカルチニンの複数の役割が関係していると考えられている。
【０１０１】
さらに、予想外なことに、エリトリトールは、試験したポリオールのなかで最も良好な結果をもたらした。キシリトールおよびミオ−イノシトールも良好な結果をもたらした。
これらの結果は、６つの候補化合物のそれぞれ、好ましくはカルニチン、エリトリトール、キシリトールおよびミオ−イノシトール、が眼科組成物、例えば、ヒトまたは動物の眼表面の高浸透圧状態を和らげるための組成物において有用であり得ることを示している。
【０１０２】
加えて、特定の理論に限定されることは意図しないが、これら多くの化合物が果たす様々な役割によって、これら化合物の２以上の組合せ（例えば少なくとも１つのポリオールと少なくとも１つのアミノ酸）は、例えばドライアイ疾患で起こるような、乾燥や高浸透圧状態等に起因する障害からの角膜表面の保護を高めるであろうと考えられる。
【０１０３】
実施例２
リン酸化ＪＮＫ（ストレス応答性タンパク質キナーゼ（ＳＡＰＫ）の活性化形態）は、高浸透圧症を含むストレスに対する応答において、炎症およびアポトーシスの誘導に重要な役割を担っている。
１６〜５９歳のドナーのヒト角膜強膜組織を、Lions Eye Bank of Texas(Houston, TX)から入手した。輪部外植片から角膜上皮細胞を増殖させた。簡潔に言えば、注意深く角膜中央を取り出し、余分な結膜と虹彩および角膜内皮を除去した後、角膜縁を１２等分に切断した（各２×２ｍｍ）。これら切片を２つずつ６ウェルカルチャープレートの各ウェルに上位側を上にして置き、外植片をそれぞれ１滴のウシ胎児血清（ＦＢＳ）で一晩覆った。次いで、これらの外植片をＳＨＥＭ培地（５ｎｇ／ｍＬ  ＥＧＦ、５μｇ／ｍＬ  インスリン、５μｇ／ｍＬ  トランスフェリン、５ｎｇ／ｍＬ亜セレン酸ナトリウム、０．５μｇ／ｍＬ  ヒドロコルチゾン、３０ｎｇ／ｍＬ  コレラトキシンＡ、０．５％  ＤＭＳＯ、５０μｇ／ｍＬ  ゲンタマイシン、１．２５μｇ／ｍＬ  アムホテリシンＢおよび５％ＦＢＳを含む、ダルベッコ修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）とＨａｍ  Ｆ−１２培地の１：１混合物）にて、３７℃にて、５％ＣＯ2および湿度９５％にて培養した。培地を２〜３日毎に更新した。特徴的な形態とサイトケラチン抗体（ＡＥ−１／ＡＥ−３）による免疫蛍光染色から、これらカルチャーの上皮の表現型を確認した。
セルカルチャーデッシュ、プレート、遠心管および他のプラスチック容器は、Becton Dickinson (Lincoln Park, NJ)から購入した。Dulbecco修飾Eagle培地(DMEM)、Ham F-12培地、ファンギゾンおよびゲンタマイシンは、Invitrogen-GIBCO BRL (Grand Island, NY)から入手した。ウシ胎児血清(FBS)はHyclone (Logan, UT)から入手した。
一連のサブコンンフルエント初代角膜上皮カルチャー（培養期間１２〜１４日、約４〜５×１０5細胞／ウェル）を予め保存しておいた緩衝化生理食塩水 (PBS)で３回洗浄し、処置する前の２４時間、Earle’s Balanced Salt溶液 (EBSS, 300 mOsmols/kg)に切り替えた。角膜上皮細胞を、Ｌ−カルニチン内部塩、ベタイン塩酸塩、エリトリトールまたはキシリトール (濃度は全て2mM)のいずれかを、NaClまたはスクロースを添加する60分前に予め添加し、同体積(2.0 mL/ウェル)のEBSS培地または53mM NaClまたはスクロースを添加した400 mOsmols/kg培地にて１時間培養した。浸透圧保護剤を添加しないサンプルも調製し、試験した。
EDTA不含プロテアーゼ阻害剤カクテルタブレット(Roche Applied Science, Indianapolis, IN)を含有する、Beadlyte（登録商標）バッファーB (Beadlyte（登録商標）細胞シグナリングバッファーキット（Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY)に含まれる）中にて付着した細胞を１５分間溶解した。細胞抽出物を１５分間室温にて遠心（１２，０００×ｇ）し、上清を−８０℃にて保存し、ウェスタンブロットにより解析した。Micro BCAタンパク質分析キット (Pierce, Rockford, IL)を用いて細胞抽出液の総タンパク質濃度を測定した。
これらの組成物それぞれについて、JNK1およびJNK2の強度を、そのリン酸化種それぞれに特異的な抗体を用いたウェスタンブロット解析を用いて試験した。
ウェスタンブロット分析は以下のように行った。タンパク質サンプル (50μg／レーン)を６×SDS還元サンプル緩衝液と混合し、ロードする前に５分間煮沸した。タンパク質をSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動（4〜15％トリス−ＨＣｌ、グラジェントゲル（Bio-Rad, Hercules, CA)）により分離し、ポリビニリデンジフルオライド(PVDF)膜(Millipore, Bedford, MA)に電子的にトランスファーした。膜を５％ノンファトミルクのTTBS (50 mM トリス, pH 7.5, 0.9% NaClおよび0.1% Tween-20)溶液で１時間室温にてブロックした後、1:1000希釈のホスホ-p38 MAPKに対するウサギ抗体（Cell Signaling, Beverly, MA)、1:100希釈のホスホ-JNKに対するウサギ抗体または1:500希釈のホスホ-p44/42 ERKに対するモノクローナル抗体(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)と室温で２時間インキュベーションした。
ＴＴＢＳで３回洗浄した後、膜を、西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートした、ヤギ抗ウサギIgG二次抗体(1:2000希釈、Cell Signaling, Beverly, MA)またはヤギ抗マウスIgG(1:5000希釈, Pierce, Rockford, IL)と室温で１時間インキュベーションした。膜を４回洗浄後、シグナルをECL advance chemiluminescence reagent (Amersham, Piscataway, New Jersey)で測定し、画像をKodak image station 2000R (Eastman Kodak, New Haven, CT)により取得した。切り取った膜を2% SDSと100 mMα-メルカプトエタノールを含有する62.5 mM トリス HCl（pH 6.8）に入れて３０分間６０℃に保った後、それらを1:100希釈のJNKに対するウサギ抗体(Santa Cruz Biotechnology)または1:1000希釈のERKまたはp38 MAPKに対するウサギ抗体 (Cell Signaling)で再プローブした。これら３つの抗体は、リン酸化された形態とリン酸化されていない形態の両方を検出し、これらMAPKの総レベルを示す。上記のとおりシグナルを検出し捕捉した。
生じたバンドの画像解析から強度スコアを決定した。
試験結果を図１および図２に示す。
【０１０４】
図１を参照すると、エリトリトールまたはキシリトールのいずれもＪＮＫの活性化に対する効果はなかった。しかしながら、図２を参照すると、Ｌ−カルチニンとベタインカルチャーにおいて、400 mOsmols/kg 培地のみの場合と比較してＪＮＫ１とＪＮＫ２のレベルの明らかな減少が認められた。それほど強い効果ではないが、300 mOsmols/kg培地での効果もみられた。
【０１０５】
実施例３
別の一連の実験では、Beadlyte（登録商標）細胞シグナル伝達アッセイを用いた。このアッセイは、蛍光ビーズを用いたサンドウィッチ免疫アッセイである。例えば、各サンプル(10μｇ/25μＬ)を９６ウェルプレートのウェルにピペットで加え、タンパク質に特異的な捕捉抗体にカップリングしたビーズの５倍希釈液２５μＬと一晩インキュベーションすることができる。このような抗体は、ＪＮＫ、ｐ３８、およびＥＲＫ等のタンパク質を特異的に捕捉できる。一晩のインキュベーションは、捕捉ビーズと細胞リゼートからのタンパク質との反応に利用することができる。
ビーズを洗浄し、目的のタンパク質に対するビオチン化した特異的レポーター抗体、次いでストレプタビジン−フィコエリトリンと混合した。次いで、総タンパク質またはホスホタンパク質の量を、Luminex 100（商標）システム(Luminex, Austin, Texas)により定量した。リードするイベント数をビーズあたり５０とし、Bio-Plex Managerソフトウェアからアウトプットしたデータを、さらなる解析のためMicrosoft Excel（登録商標）にエクスポートした。結果は、総タンパクに対するホスホタンパクの比として示すことができる。
これら試験の結果を図３、４、５に示す。図３は、総ＪＮＫに対するホスホ−ｐ３８の比率を示す。図４は、総ｐ３８に対するホスホ−ｐ３８の比率を示す。図５は、総ＥＲＫに対するホスホＥＲＫの比率を示す。
【０１０６】
図３に示されるように、高浸透圧対照と比較して、すべての候補物質、即ちエリトリトール、キシリトール、Ｌ−カルニチンおよびベタイン、は、ホスホ−総ＪＮＫの量を減少した。
【０１０７】
図４を参照すると、ベタインを除くすべての候補物質は、高浸透圧対照と比較して、ホスホ−総ｐ３８の量を減少した。
【０１０８】
図５に示されるように、ポリオール候補物質、即ち、エリトリトールとキシリトールは、高浸透圧対照と比較してＥＲＫの量を減少した。アミノ酸であるベタインとカルニチンでは減少しなかった。
【０１０９】
実施例４
各候補物質について異なる濃度を用いたこと以外は実施例１に記載のとおり行い、ＴＥＥＲを０〜２４時間の種々の時間で測定した。
これら試験の結果を図６に示す。実施例１と同様、ＴＥＥＲ変数は、等張対照に対する相対的なＴＥＥＲの％で示す。
これらの結果は、Ｌ−カルニチン、ベタインおよびエリトリトールに関して、用量と関連した応答が観察されたことを示している。
【０１１０】
ベタインと保存剤として安定化二酸化塩素を含有する組成物を、成分の適合性について試験した。ベタインは、このような組成物においては完全に適合するとは言えないことが分かった。即ち、ベタインは、安定化二酸化塩素のような特定の保存剤に対しては有用ではない。しかしながら、ベタインは、他の保存剤の系を用いる、または保存剤を含有しない眼科組成物（例えば、単一または単位用量での適用）において適合溶質として有利に用いることができる。
【０１１１】
実施例５
適合溶質の組み合わせを含む組成物を用いたこと以外は、実施例４と同様に行った。適合溶質としてグリセロールのみを含有する組成物も試験した。
結果を図７および８に示す。
【０１１２】
これらの試験結果は、異なる適合溶質によってさらなる利点がもたらされる可能性があることを示している。
【０１１３】
実施例６
Major Basicタンパク質(MBP)のプロピースは９０残基のポリペプチドであることが示されている。
確立され周知の技術を用い、この９０残基ポリペプチドの配列のポリペプチド類縁体を製造した。
眼科組成物を、以下の成分を配合することにより製造した。
【表２】
2008520671.tif 000002
（１）Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標）は、安定化二酸化塩素に関するアラーガン社の登録商標である。この物質は熱滅菌後の混合物に添加する。
【０１１４】
実施例７
点眼薬の形態の実施例６の組成物を、レーザーエネルギーに暴露される外科処置（特に、ＬＡＳＩＫ外科処置）を受けようとしているヒトの患者の眼に投与した。
【０１１５】
ポリペプチドアナログを含まない同じ組成物を投与し同じ外科処置を受けた患者と比較して、術後の患者の疼痛は軽減し、および／または不快感は減少し、および／または眼の刺激が減少し、および／または外科処置からの回復は速かった。
【０１１６】
実施例８
点眼薬の形態の実施例６の組成物を、レーザーエネルギーに暴露される外科処置（特に、ＬＡＳＩＫ外科処置）を受けているヒトの患者の眼に投与した。
【０１１７】
ポリペプチドアナログを含まない同じ組成物を投与し同じ外科処置を受けた患者と比較して、術後の患者の疼痛は軽減し、および／または不快感は減少し、および／または眼の刺激が減少し、および／または外科処置からの回復は速かった。
【０１１８】
実施例９
点眼薬の形態の実施例６の組成物を、眼がレーザーエネルギーに暴露される外科処置（特に、ＬＡＳＩＫ外科処置）を受けた実質的に直後のヒトの患者の眼に投与した。
【０１１９】
ポリペプチドアナログを含まない同じ組成物を投与し同じ外科処置を受けた患者と比較して、患者の疼痛は軽減し、および／または不快感は減少し、および／または眼の刺激が減少し、および／または外科処置からの回復は速かった。
【０１２０】
実施例１０
本発明の一連の４種類の眼科製剤を、各種成分（以下に示す）を配合することにより製造した。
【表３】
2008520671.tif 000003
（１）Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標）は、安定化二酸化塩素に関するアラーガン社の登録商標である。この物質は熱滅菌後の混合物に添加する。
【０１２１】
実施例１１
実施例１０と同様に以下の組成物を製造した。
【表４】
2008520671.tif 000004
（１）Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標）は、安定化二酸化塩素に関するアラーガン社の登録商標である。この物質は熱滅菌後の混合物に添加する。
【０１２２】
実施例１２
実施例１０と同様に以下の組成物を製造した。
【表５】
2008520671.tif 000005
（１）Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標）は、安定化二酸化塩素に関するアラーガン社の登録商標である。この物質は熱滅菌後の混合物に添加する。
【０１２３】
実施例１３
実施例１０と同様に以下の組成物を製造した。
【表６】
2008520671.tif 000006
（１）Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標）は、安定化二酸化塩素に関するアラーガン社の登録商標である。この物質は熱滅菌後の混合物に添加する。
【０１２４】
実施例１４
実施例１０と同様に以下の組成物を製造した。
【表７】
2008520671.tif 000007
【０１２５】
実施例１５
実施例１０と同様に以下の組成物を製造した。
【表８】
2008520671.tif 000008
（１）Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標）は、安定化二酸化塩素に関するアラーガン社の登録商標である。この物質は熱滅菌後の混合物に添加する。
（２）ベタインはＰｕｒｉｔｅ（登録商標）保存剤と適合しないことが分かった。したがって保存剤は用いなかった。これらの組成物は単一または単位投与適用に有用である。
【０１２６】
実施例１６
実施例１０と同様に以下の組成物を製造した。
【表９】
2008520671.tif 000009
（１）Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標）は、安定化二酸化塩素に関するアラーガン社の登録商標である。この物質は熱滅菌後の混合物に添加する。
（３）  １０重量％の高分子量カルボキシルメチルセルロース（約７００、０００）と９０重量％の中程度の分子量のカルボキシメチルセルロース（約２５０、０００）の混合物。
【０１２７】
実施例１７
実施例１０〜１６で製造した各組成物を、点眼薬の形態で、ドライアイ患者の眼に１日１回以上投与した。投与は、例えば乾燥、風、低湿度、長時間のコンピュータ利用などの有害な環境条件への暴露に応じてか、あるいはそのような環境条件への暴露を予想して行った。そのような投与は慣用の人工涙組成物で使用する場合と実質的に同様である。
【０１２８】
投与から１週間後、すべての患者で、例えば、疼痛の減少および／または炎症の減少、および／または視力の改善またはドライアイの症状の改善の観点から、ドライアイ症候群の影響または症状からの軽減が観察された。さらに、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を含有する組成物を投与したこれらの患者は、ＣＭＣのアニオン性とそのような組成物と比較して増大した粘度からくる利益がもたらされたことが判った。そのような利益としては、投与後長時間に渡る炎症の減少および／または眼の潤滑性の増大および／または患者の眼表面におけるカチオン性物質に対する有害な影響からの保護などが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１２９】
実施例１８
カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を含有する実施例１０〜１６で製造した各組成物を、点眼薬の形態で、ＬＡＳＩＫ術をこれから受けようとしている種々のヒト患者の眼に投与した。
【０１３０】
術後、カルボキシメチルセルロースを含有しない同じ組成物を投与し同じ手術を受けた患者と比較して、各患者の疼痛の軽減および／または違和感の軽減および／または眼の炎症の軽減および／またはより急速な術後の回復が認められた。
【０１３１】
実施例１９
カルボキシメチルセルロースを含有する実施例１０〜１６の組成物を、点眼薬の形態で、ＬＡＳＩＫ術を受けている種々のヒト患者の眼に投与した。
【０１３２】
術後、カルボキシメチルセルロースを含有しない同じ組成物を投与し同じ手術を受けた患者と比較して、各患者の疼痛の軽減および／または違和感の軽減および／または眼の炎症の軽減および／またはより急速な術後の回復が認められた。
【０１３３】
実施例２０
カルボキシメチルセルロースを含有する実施例１０〜１６の組成物を、点眼薬の形態で、実質的にＬＡＳＩＫ術を受けた直後の種々のヒト患者の眼に投与した。
【０１３４】
術後、カルボキシメチルセルロースを含有しない同じ組成物を投与し同じ手術を受けた患者と比較して、各患者の疼痛の軽減および／または違和感の軽減および／または眼の炎症の軽減および／またはより急速な術後の回復が認められた。
【０１３５】
本発明を、種々の特定の実施例および態様に関して記載したが、本発明はそれらに限定されず、特許請求の範囲内において様々に実施し得るものと理解される。