【手続補正書】
【提出日】平成15年6月27日(2003.6.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＭ２２αプロモーターを含む単離された、血管平滑筋細胞特異的な調節核酸セグメントを含む組換えベクターであって、該プロモーターがマウスＳＭ２２α遺伝子の転写開始部位のすぐ上流の約５，０００塩基のセグメント内にあり、そして該プロモーターが、異種核酸配列に作動可能に連結し、
但し、該異種核酸が、ルシフェラーゼ、βガラクトシダーゼ、またはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼをコードしない、組換えベクター。
【請求項２】
請求項１に記載のベクターであって、
（ａ）前記単離された核酸セグメントが、配列番号１の塩基８９９〜１３８２に記載の配列を有する核酸セグメントを含むか、または高ストリンジェントな条件下で配列番号１の塩基８９９〜１３８２の相補体にハイブリダイズ可能であり、かつ血管平滑筋細胞における異種遺伝子の転写を促進するのに効果的であるようにさらに定義され；そして／または
（ｂ）前記プロモーター配列が、配列番号１の塩基８９９〜１３８２の連続配列を含むようにさらに定義され；そして／または
（ｃ）前記プロモーター配列が、配列番号１の塩基１〜１３８２の連続配列を含むようにさらに定義され；そして／または
（ｄ）前記プロモーター配列が、配列番号１の塩基１０６０〜１３８２の連続配列を含むようにさらに定義される、
ベクター。
【請求項３】
複製欠損アデノウイルスベクターであって、該ベクターが、血管平滑筋細胞特異的転写調節セグメントを含み、該調節セグメントは、ＳＭ２２αプロモーター、平滑筋カルポニンプロモーター、平滑筋ミオシン重鎖プロモーター、平滑筋αアクチンプロモーター、平滑筋αアクチンエンハンサー、テロキンプロモーター、平滑筋γアクチンプロモーター、および平滑筋γアクチンエンハンサーからなる群より選択され；そして、該調節セグメントが、異種核酸配列に作動可能に連結される、複製欠損アデノウイルスベクター。
【請求項４】
前記異種核酸配列が、筋肉収縮阻害分子をコードし、該分子は、ペプチドＭＩＲＩＣＲＫＫ（配列番号１９）である、請求項１に記載のベクター。
【請求項５】
前記異種核酸配列が、血管形成を誘導するにコンピテントなポリペプチドをコードし、該ポリペプチドは、ＶＥＧＦ、ｉＮＯＳ、ｅＮＯＳ、塩基性ＦＧＦおよびＦＧＦ−５ポリペプチドからなる群より選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項６】
前記異種核酸配列が、細胞周期調節分子をコードする、請求項１〜３のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項７】
前記細胞周期調節分子が、平滑筋細胞増殖を阻害するにコンピテントな分子であり、該分子は、（ｉ）リン酸化欠損Ｒｂ細胞周期調節分子、構成的に活性なＲｂ細胞周期調節分子、ｐ５３、ｐ２１、ｐ１６、ｐ２７、細胞周期依存性キナーゼ、Ｅ２Ｆインヒビター、ＣＤＫキナーゼ、およびサイクリンからなる群より選択され；あるいは（ｉｉ）ＲＮＡアンチセンス分子、である、請求項６に記載のベクター。
【請求項８】
前記異種核酸配列が、（ｉ）細胞傷害性遺伝子であって、該遺伝子は、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子である、遺伝子；または（ｉｉ）レポーター分子であって、該分子は、ｎｅｏ、ＤＨＦＲ、ＣＡＴ、ＨＩＶｇｐ１２０、エステラーゼ、ホスファターゼ、プロテアーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、ウロキナーゼ、およびヘルペスｇＤからなる群より選択される、レポーター分子のいずれかをコードする、請求項１〜３のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項９】
前記ウイルスベクターが、ラウス肉腫ウイルスベクター、ｐ２１ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、サイトメガロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルスベクターである、請求項１〜８のいずれか１項に記載のウイルスベクター。
【請求項１０】
前記ウイルスベクターが、複製欠損である、請求項９に記載のウイルスベクター。
【請求項１１】
前記平滑筋細胞が、内臓平滑筋細胞である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１２】
薬学的に受容可能な溶液に分散される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれかに記載のベクターを含む宿主細胞であって、該宿主細胞が、血管平滑筋細胞、またはＡ７ｒ５細胞である、宿主細胞。
【請求項１４】
血管平滑筋細胞においてマウスＳＭ２２α以外のポリペプチドを発現するための医薬の製造のための、請求項１〜１２のいずれかに記載のベクターの使用。
【請求項１５】
血管平滑筋細胞においてエキソビボでマウスＳＭ２２α以外のポリペプチドを発現する方法であって、該細胞に請求項１〜１２のいずれかに記載のベクターを提供する工程、および該細胞において該ペプチドの発現を得る工程、を包含する、方法。
【請求項１６】
以下の工程：（ｉ）前記細胞を被験体に移植する工程であって、該被験体は非ヒト被験体である、工程；または（ｉｉ）該細胞を生物人工器官に播種して、播種された移植片またはステントを得、そして該播種された生物人工器官を、被験体の冠状動脈または静脈あるいは末梢動脈または静脈に配置する工程であって、該被験体は非ヒト被験体である、工程のいずれか、をさらに包含する、請求項１４に記載の使用。
【請求項１７】
前記細胞が、静脈平滑筋細胞である、請求項１４もしくは１６に記載の使用。
【請求項１８】
哺乳動物において平滑筋細胞増殖を調節するための医薬の製造のための、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のベクターの使用。
【請求項１９】
前記細胞周期調節分子が、血管壁における平滑筋細胞において発現される場合に再狭窄を阻害するにコンピテントであり、該再狭窄が、バルーン血管形成術後に、血管に対する機械的損傷から生じる、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記血管が、冠状静脈、腎臓静脈、末梢静脈、または頸静脈のいずれかである、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記ベクターが、カテーテルを介して、またはステント上のいずれかで、前記血管壁に送達される、請求項１９または２０のいずれかに記載の使用。
【請求項２２】
前記ベクターが、構築物で、エキソビボにてトランスフェクトされた初代平滑筋細胞において前記血管壁に提供される、請求項１９または２０のいずれかに記載の使用。
【請求項２３】
哺乳動物における血管形成を促進するための医薬の製造のための、請求項５に記載のベクターの使用。
【請求項２４】
前記平滑筋細胞が、（ｉ）構築物が、ステント上で該平滑筋細胞に送達されるか、または該構築物が、該構築物で、エキソビボにてトランスフェクトされた初代平滑筋細胞において前記哺乳動物に提供される、血管平滑筋細胞、あるいは（ｉｉ）該構築物が、カテーテルを介して該平滑筋細胞に送達される、冠状または末梢平滑筋細胞、のいずれかである、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
哺乳動物における血管に目的の分子を提供するための医薬の製造のための、核酸セグメントでトランスフェクトされた平滑筋細胞で播種された生物人工器官の使用であって、該核酸セグメントは、マウスＳＭ２２α以外の該目的の分子をコードするＤＮＡ配列に作動可能に連結されたＳＭ２２αプロモーター領域を含む、使用。
【請求項２６】
前記核酸セグメントが、請求項１〜１２のいずれかに記載のベクターを介してトランスフェクトされる、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
播種された生物人工器官をエキソビボにて作製するためのキットであって、以下：
（ａ）マウスＳＭ２２α以外の遺伝子に作動可能に連結されたＳＭ２２αプロモーター領域を含む、核酸セグメント：および
（ｂ）該核酸セグメントを受容するにコンピテントな生物人工器官、
を含む、キット。
【請求項２８】
その表面上に、核酸セグメントでトランスフェクトされた平滑筋細胞を含む生物人工器官であって、該核酸セグメントは、マウスＳＭ２２α以外の該分子をコードするＤＮＡ配列に作動可能に連結されるＳＭ２２αプロモーター領域を含む、生物人工器官。
【請求項２９】
前記核酸セグメントが、請求項１〜１２のいずれかに記載のウイルスベクター内で保持される単離された核酸構築物である、請求項２７に記載のキット。
【請求項３０】
さらに、以下：
（ｉ）被験体へ前記細胞を移植する工程であって、該被験体は、非ヒト被験体である、工程；または（ｉｉ）生物人工器官へ該細胞を播種して、播種された移植片またはステントを入手する工程、そして該播種された生物人工器官を、被験体の冠状動脈または静脈あるいは末梢動脈または静脈に配置する工程であって、該被験体は非ヒト被験体である、工程、
のいずれかを包含する、請求項１５に記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞が動脈または静脈の平滑筋細胞である、請求項１５または１６のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記核酸セグメントは、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のウイルスベクター内に保持される、単離された核酸構築物である、請求項２８に記載の生物人工器官。