【誤訳訂正書】
【提出日】平成26年2月5日(2014.2.5)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生物工学、化粧品、医薬および生物医学への応用を可能にするのに適した、１０〜９９９ｎｍの大きさの共有結合的に架橋されたタンパク質ナノ粒子であって、１種以上のタンパク質、１種以上の吸着質および少なくとも１種のゼロ以上の長さのタンパク質間架橋を含む当該ナノ粒子が、各方向の最小長さが１ミクロンである組成的に同等またはほぼ同等な前駆体材料のナノ断片化製品であることを特徴とし、該前駆体材料中の該吸着質が、水、有機溶媒、塩、リオプロテクタント、凍結保護剤および／または界面活性剤を含む、ナノ粒子。
【請求項２】
該タンパク質成分が、酵素クラスのタンパク質、ホルモンクラスのタンパク質、受容体クラスのタンパク質、構造クラスのタンパク質、輸送クラスのタンパク質もしくは抗体クラスのタンパク質の１種以上含む、請求項１に記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
【請求項３】
該タンパク質成分が、加水分解酵素、プロヒドロラーゼ、異性化酵素、転移酵素、酸化還元酵素、リアーゼ、合成酵素、インスリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、エキセンジン、シムリン、ソマトカイン、インスリン抗体、プロインスリン抗体、インターフェロン、抗癌モノクローナル抗体、抗癌ワクチン、ナトレコール、抗血小板剤、サイトカイン、腫瘍壊死因子α、インターロイキン１受容体拮抗薬、ＨＩＶ−１阻害性ペプチドＴ２０、人工タンパク質５Ｈ−ｅｘ、ソマトスタチン、ＨＩＶ融合阻害剤Ｔ−１２４９、抗微生物タンパク質、リゾチーム、ラクトフェリン、バクテリオシン、インターロイキン２、アンギオテンシノーゲン、アンジオテンシン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、ゼラチン、コラーゲン、プロコラーゲン、キトサン、絹タンパク質、ケラチン、ミオシン、アクチン、成長ホルモン、アルブミン、グロブリン、ヘモグロビン、ミオグロビンおよび／またはシトクロムのうちの１種以上からなる、請求項１または２に記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
【請求項４】
該ナノ粒子が、該前駆体材料の化学組成、架橋履歴およびの処理履歴を反映している、請求項１〜３のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
【請求項５】
該前駆体が、架橋されたタンパク質凝集体もしくは結晶であり、当該タンパク質凝集体が沈殿物または凍結乾燥物である、請求項１〜４のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
【請求項６】
該共有結合的架橋が、該前駆体材料を化学処理、酵素処理または脱水熱処理することによって達成されている、請求項１〜５のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
【請求項７】
該ゼロ以上の長さのタンパク質間架橋が、該前駆体材料を化学処理、酵素処理または脱水熱処理することによって実現されている、請求項１〜６のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
【請求項８】
該前駆体材料中で架橋を形成する化学物質が、水または有機溶媒材料に可溶性または分散性であり、カルボジイミド；デキストランアルデヒド；ジイミド酸ジアルキル、および最大２０個の架橋炭素原子を有する他の二官能性もしくは三官能性架橋剤；および／またはグルタルアルデヒドポリマー、澱粉アルデヒド、ポリアミン、有機シリコーン、および少なくとも５個の官能基を有する他の多量体リンカーを含む、請求項１〜７のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
【請求項９】
該前駆体材料中で架橋を形成する該酵素が、加水分解酵素、転移酵素および／または酸化還元酵素である、請求項１〜８のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
【請求項１０】
該前駆体材料中で架橋を形成する該酵素はアミノ基転移酵素である、請求項１〜９のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
【請求項１１】
該前駆体材料が、真空条件下７０〜１２０℃で６〜４８時間のタンパク質粉末の加熱によって脱水熱架橋されている、請求項１〜１０のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
【請求項１２】
請求項１に記載の該架橋されたタンパク質ナノ粒子の調製方法であって、ミクロン以上のスケールのタンパク質凝集体もしくは結晶を調製する工程と、該凝集体もしくは結晶を架橋して該前駆体材料を得る工程とを含むプロセスによるものであり、該前駆体を、ナノ化を引き起こして該最終製品を得るサイズ縮小プロセスに供することを特徴とする方法。
【請求項１３】
機械的剪断力を該前駆体材料に加える、請求項１２に記載のナノ化方法。
【請求項１４】
１００〜１５０００ｒｐｍで動作する従来の高剪断混合／配合装置を用いて、機械的剪断力を該前駆体材料に加える、請求項１２又は１３に記載のナノ化方法。
【請求項１５】
機械的剪断力を１２０℃未満の温度で３０秒〜１０分間、該前駆体材料に加える、請求項１２〜１４のいずれかに記載のナノ化方法。
【請求項１６】
流体力学的剪断応力を該前駆体材料に加える、請求項１２〜１５のいずれかに記載のナノ化方法。
【請求項１７】
１００〜５０００ｒｐｍで動作する分散／混合装置としてのホモジナイザを用いて、水性もしくは有機媒体中で流体力学的剪断応力を該前駆体材料に加える、請求項１２〜１６のいずれかに記載のナノ化方法。
【請求項１８】
流体力学的剪断応力を１００℃未満の温度で５分〜３時間、該前駆体材料に加える、請求項１２〜１７のいずれかに記載のナノ化方法。
【請求項１９】
破砕機械力を該前駆体材料に加える、請求項１２〜１８のいずれかに記載のナノ化方法。
【請求項２０】
該前駆体を破砕するために乳鉢および乳棒を用いて手動粉砕によって破砕機械力を加え、加えられる該前駆体材料：粉砕助剤としての固体粉末の比が、重量で２：１〜１：１０００の範囲である、請求項１２〜１９のいずれかに記載のナノ化方法。
【請求項２１】
圧力勾配応力を、８０℃未満の温度で音波もしくは流体力学的キャビテーションによって該前駆体材料に加える、請求項１２〜２０のいずれかに記載のナノ化方法。
【請求項２２】
該前駆体材料を冷却して、脆化させる、及び分解減少させる、請求項１２〜２１のいずれかに記載のナノ化方法。
【請求項２３】
液体窒素を用いてサイズ縮小の前および間の冷却を実現する、請求項１２〜２２のいずれかに記載のナノ化方法。
【請求項２４】
タンパク質分解を減少させるために、該前駆体材料に対して０．０１〜２重量％の範囲の量で捕捉剤分子を添加する、請求項１２〜２３のいずれかに記載のナノ化方法であって、
前記捕捉剤分子が、α−トコフェロール、ナリンゲニン、レチノール、ヨウ化物、コエンザイムＱ１０、メラトニン、カロテノイドテルペノイド、フラボノイドポリフェノール類、フェノール酸およびエステル、グルタチオン、Ｎ−アセチルシステイン、フィチン酸、シュウ酸、クエン酸、オイゲノール、キサントン、クルクミン、フラボノリグナン、Ｒ−リポ酸、尿酸、カロテン、ユビキノール、アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシトルエン、ビスルファイトおよび／またはチオスルフェートである、前記ナノ化方法。
【請求項２５】
該物理的サイズ縮小プロセスを容易にするために固体粉末を添加し、その際、加えられる該前駆体材料：該固体粉末の比が、重量で２：１〜１：１０００の範囲である、請求項１２〜２４のいずれかに記載のナノ化方法。
【請求項２６】
該固体粉末が、ヨウ化カリウム、ヨウ化ナトリウム、塩化ナトリウムまたは任意の他のアルカリもしくはアルカリ土類塩、活性炭、二酸化ケイ素、酸化アルミニウム、二酸化チタン、キチン、ケラチンおよび／またはポリイミドである、請求項１２〜２５のいずれかに記載のナノ化方法。
【請求項２７】
再凝集を防止／制限するために、２〜１００倍の過剰重量で安定剤分子を添加する、請求項１２〜２６のいずれかに記載のナノ化方法であって、安定剤分子が、ヨウ化カリウム、ヨウ化ナトリウム、塩化ナトリウムまたは任意のアルカリもしくはアルカリ土類塩、アンモニウム塩、炭水化物、ポリオール類、ポリビニルピリジン、ポリビニルピロリドン、ポリアミド類、クエン酸、アスコルビン酸、アルブミン、ヒプロメロースおよび／またはゼラチンである、前記ナノ化方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
製品の詳細
本発明は、１種以上のタンパク質、吸着質、および少なくとも１種のゼロ以上の長さのタンパク質間架橋を含むナノ粒子が、各次元（demension）軸の物理的長さが少なくとも１ミクロンの組成的に同等またはほぼ同等の前駆体材料のナノ断片化製品として得られる（すなわち、それがナノ断片化製品である）ことを特徴とする、生物工学、化粧品、医薬および生物医学への応用を可能にするのに適した１０〜９９９ｎｍ、好ましくは５０〜２００ｎｍの大きさの共有結合的に架橋されたタンパク質ナノ粒子を提供する。「ほぼ同等である」という用語は、サイズ縮小により生じ得る軽微な変化（例えば、溶媒交換、溶媒置換またはタンパク質間パッキングの変化）を可能にするように使用されている。「ナノ断片化」という用語は、本発明のミクロン以上の大きさの前駆体材料をナノサイズの断片に断片化または細分するという考えを伝えるために使用されている（そこで、ナノ断片化という用語を新しく作り出す）。タンパク質成分は、酵素、ホルモン、受容体、構造、輸送または抗体クラスのタンパク質の１種以上を含んでもよい。より具体的には、タンパク質成分は、加水分解酵素、プロヒドロラーゼ(prohydrolase）、異性化酵素、転移酵素、酸化還元酵素、リアーゼ、合成酵素、インスリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、エキセンジン（extendin）、エキセンジン誘導体、シムリン、ソマトカイン(somatokine)、インスリン抗体、プロインスリン抗体、インターフェロン、抗癌モノクローナル抗体、抗癌ワクチン、ナトレコール、抗血小板剤、サイトカイン、腫瘍壊死因子α、インターロイキン１受容体拮抗薬、ＨＩＶ−１阻害性ペプチドＴ２０、人工タンパク質５Ｈ−ｅｘ、ソマトスタチン、ＨＩＶ融合阻害剤Ｔ−１２４９、抗微生物タンパク質、リゾチーム、ラクトフェリン、バクテリオシン、インターロイキン２、アンギオテンシノーゲン、アンジオテンシン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、ゼラチン、コラーゲン、プロコラーゲン、キトサン、絹タンパク質、ケラチン、ミオシン、アクチン、成長ホルモン、アルブミン、グロブリン、ヘモグロビン、ミオグロビンおよび／またはシトクロムで構成されていてもよい。調製方法に目を向けると、各架橋されたタンパク質ナノ粒子は、サイズ縮小時に、その前駆体材料の化学組成および架橋履歴を反映していることは明らかである。前駆体は、その後に架橋されるミクロン以上の大きさのタンパク質凝集体（タンパク質沈殿事象または凍結乾燥事象のいずれかによって生じる）またはタンパク質結晶である。前駆体の架橋の性質は、化学、酵素または脱水熱性であってもよく、全ての場合に共有結合性である。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３８】
架橋は、カルボジイミドで処理されたか真空下で（すなわち、脱水熱的に）加熱された直接に結合したタンパク質の場合のようにゼロ長さのものから、二量体、三量体もしくは多量体リンカーを用いた２０個以上の炭素単位タンパク質内架橋まで、様々であってもよい。前駆体材料中で架橋を形成するか架橋形成を促進する化学物質は、水または有機溶媒に可溶性または分散性であってもよい。化学物質は、限定されるものではないが、カルボジイミド、デキストランアルデヒド、ジイミド酸ジアルキルおよび最大２０個の架橋炭素原子を有する他の二官能性もしくは三官能性架橋剤および／またはグルタルアルデヒドポリマー、澱粉アルデヒド、ポリアミン、有機シリコーンおよび少なくとも５個の官能基を有する他の多量体リンカーのうちのいずれか１つであってもよい。酵素的に形成された架橋の場合、前駆体は、任意の好適な加水分解酵素、転移酵素および／または酸化還元酵素、および場合によりグルタミン転移酵素などのアミノ基転移酵素で処理されていてもよい。脱水熱的に形成された架橋の場合、前駆体材料は、真空条件下７０〜１２０℃で６〜４８時間加熱されていてもよい。大部分がタンパク質系である架橋されたタンパク質ナノ粒子および前駆体は、それでもなお、表面に沿って吸着質を収容することが期待されている。吸着質の性質は、前駆体材料の調製履歴およびナノ粒子を生成する処理履歴を反映するものでなければならない。ナノ粒子および前駆体は、水、有機溶媒、塩、リオプロテクタント(lyoprotectant)、凍結保護剤および／または界面活性剤のうちの１つまたは多くを含み得る吸着質を担持する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３９】
方法の詳細
本発明は、架橋されたタンパク質ナノ粒子の調製方法を開示する。本工程は、ミクロン以上の大きさのタンパク質凝集体もしくは結晶を調製すること、および凝集体もしくは結晶を架橋して前駆体材料を得ることを含む。次いで、前駆体をサイズ縮小プロセスに供し、それにより、ナノ化を達成して、架橋されたタンパク質ナノ粒子を得る。サイズ縮小プロセスでは、前駆体材料に沿って機械的剪断力を加える。例えば、１２０℃未満の温度で３０秒〜１０分の範囲の加力時間で、１００〜１５０００ｒｐｍ、好ましくは１０００〜６０００ｒｐｍで動作する従来の高剪断混合／配合装置を用いて必要な機械的剪断力を生成してもよい。サイズ縮小プロセスでは、流体力学的剪断応力を加えてもよく、ここでは、例えば、分散／混合装置としてのホモジナイザを用いて、水性もしくは有機媒体中で前記流体力学的剪断応力を前駆体材料に加える。均質化の場合、規定の操作条件は、１００〜５００ｒｐｍ、好ましくは１０００〜２０００ｒｐｍであり、５分〜３時間、好ましくは３０分〜１．５時間であり、かつ１００℃未満の温度である。皮肉にも、過剰なヨウ化カリウムの存在下での乳鉢および乳棒を用いた手動粉砕（破砕機械力）であっても、架橋されたタンパク質ナノ粒子が本発明によって得られるため、器具は必ずしも必要ではない。前駆体／粉末（すなわち、粉砕助剤）の重量比は、２：１〜１：１０００重量の間のいずれかの範囲とすることができる。最後に、ナノ化は、８０℃未満の温度で音波もしくは流体力学的キャビテーションによって生成される圧力勾配応力を用いても達成することもできる。サイズ縮小方法のさらなる側面は、粉砕プロセスの前および間での任意の冷却の使用であり、それにより、前駆体材料を脆化させかつ好ましくない分解を減少させることができる。好都合な冷却源は液体窒素である。サイズ縮小方法のさらなる側面は、ラジカルプロセス、異方性結合分裂プロセスおよび酸化プロセスから生じるタンパク質分解を減少させるために、適当であると思われる場所で捕捉剤分子を含めるという選択肢である。そのような予防措置の組み込みは、かなりのラジカルを生成することで知られているキャビテーションプロセスの場合に有用であると証明することができる。添加する捕捉剤の有用な量は、前駆体材料に対して０．０１〜２重量％である。前記捕捉剤は、必ずしも限定されるものではないが、α−トコフェロール、ナリンゲニン、レチノール、ヨウ化物、コエンザイムＱ１０、メラトニン、カロテノイドテルペノイド、フラボノイドポリフェノール類、フェノール酸およびエステル、グルタチオン、Ｎ−アセチルシステイン、フィチン酸、シュウ酸、クエン酸、オイゲノール、キサントン、クルクミン、フラボノリグナン、Ｒ−リポ酸、尿酸、カロテン、ユビキノール、アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシトルエン、ビスルファイトおよび／またはチオスルフェートのうちの１種以上を含むことができる。物理的サイズ縮小プロセスを容易にするために、固体の粉末添加剤も推奨されている。前駆体および固体粉末をそれぞれ、２：１〜１：１０００の範囲の重量比で、サイズ縮小前に一緒にすることができる。固体粉末の選択肢は、ヨウ化カリウム、ヨウ化ナトリウム、塩化ナ���リウム、他のアルカリ塩、アルカリ土類塩、活性炭、二酸化ケイ素、酸化アルミニウム、二酸化チタン、キチン、ケラチンおよび／またはポリイミドを含んでもよい。サイズ縮小プロセスのさらなる側面は、再凝集を防止／制限するために、２〜１００倍の過剰重量の安定剤分子の添加である。安定剤分子の選択肢は、必ずしも限定されるものではないが、ヨウ化カリウム、ヨウ化ナトリウム、塩化ナトリウム、または任意のアルカリもしくはアルカリ土類塩、アンモニウム塩、炭水化物、ポリオール類、ポリビニルピリジン、ポリビニルピロリドン、ポリアミド類、クエン酸、アスコルビン酸、アルブミン、ヒプロメロースおよび／またはゼラチンのうちの１種以上の薬剤であってもよい。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４９】
本文献の全体にわたって例示的な態様が示されている。本発明が他の具体的な形態で具現化できることが当業者によって理解されるであろう。当業者であれば、過度の実験をせずにそのような他の態様を実施することができるであろう。本発明の範囲は、本特許文献の目的において、具体的かつ例示的な態様または上記説明の代替物のみに限定されない。
以下に、本願出願時の特許請求の範囲の記載を示す。
［請求項１］
生物工学、化粧品、医薬および生物医学への応用を可能にするのに適した、１０〜９９９ｎｍ、好ましくは５０〜２００ｎｍの大きさの共有結合的に架橋されたタンパク質ナノ粒子であって、１種以上のタンパク質、１種以上の吸着質および少なくとも１種のゼロ以上の長さのタンパク質間架橋を含む当該ナノ粒子が、各方向の最小長さが１ミクロンである組成的に同等またはほぼ同等な前駆体材料のナノ断片化製品であることを特徴とする、ナノ粒子。
［請求項２］
該タンパク質成分が、酵素、ホルモン、受容体、構造、輸送もしくは抗体クラスのタンパク質の１種以上含む、請求項１に記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
［請求項３］
該タンパク質成分が、加水分解酵素、プロヒドロラーゼ、異性化酵素、転移酵素、酸化還元酵素、リアーゼ、合成酵素、インスリン、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、エキセンジン、エキセンジン誘導体、シムリン、ソマトカイン、インスリン抗体、プロインスリン抗体、インターフェロン、抗癌モノクローナル抗体、抗癌ワクチン、ナトレコール、抗血小板剤、サイトカイン、腫瘍壊死因子α、インターロイキン１受容体拮抗薬、ＨＩＶ−１阻害性ペプチドＴ２０、人工タンパク質５Ｈ−ｅｘ、ソマトスタチン、ＨＩＶ融合阻害剤Ｔ−１２４９、抗微生物タンパク質、リゾチーム、ラクトフェリン、バクテリオシン、インターロイキン２、アンギオテンシノーゲン、アンジオテンシン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、ゼラチン、コラーゲン、プロコラーゲン、キトサン、絹タンパク質、ケラチン、ミオシン、アクチン、成長ホルモン、アルブミン、グロブリン、ヘモグロビン、ミオグロビンおよび／またはシトクロムのうちの１種以上からなる、請求項１または２に記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
［請求項４］
該ナノ粒子が、該前駆体材料の化学組成、架橋履歴およびの処理履歴を反映している、請求項１〜３のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
［請求項５］
該前駆体が、架橋されたタンパク質凝集体（沈殿物または凍結乾燥物）もしくは結晶である、請求項１〜４のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
［請求項６］
該共有結合的架橋が、該前駆体材料を化学処理、酵素処理または脱水熱処理することによって達成されている、請求項１〜５のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
［請求項７］
該ゼロ以上の長さのタンパク質間架橋が、該前駆体材料を化学処理、酵素処理または脱水熱処理することによって実現されている、請求項１〜６のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
［請求項８］
該前駆体材料中で架橋を形成する化学物質が、水または有機溶媒材料に可溶性または分散性であり、カルボジイミド；デキストランアルデヒド；ジイミド酸ジアルキル、および最大２０個の架橋炭素原子を有する他の二官能性もしくは三官能性架橋剤；および／またはグルタルアルデヒドポリマー、澱粉アルデヒド、ポリアミン、有機シリコーン、および少なくとも５個の官能基を有する他の多量体リンカーを含む、請求項１〜７のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
［請求項９］
該前駆体材料中で架橋を形成する該酵素が、加水分解酵素、転移酵素および／または酸化還元酵素である、請求項１〜８のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
［請求項１０］
該前駆体材料中で架橋を形成する該酵素はアミノ基転移酵素である、請求項１〜９のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
［請求項１１］
該前駆体材料が、真空条件下７０〜１２０℃で６〜４８時間のタンパク質粉末の加熱によって脱水熱架橋されている、請求項１〜１０のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
［請求項１２］
該前駆体材料中の該吸着質が、水、有機溶媒、塩、リオプロテクタント、凍結保護剤および／または界面活性剤を含む、請求項１〜１１のいずれかに記載の架橋されたタンパク質ナノ粒子。
［請求項１３］
請求項１に記載の該架橋されたタンパク質ナノ粒子の調製方法であって、ミクロン以上のスケールのタンパク質凝集体もしくは結晶を調製する工程と、該凝集体もしくは結晶を架橋して該前駆体材料を得る工程とを含むプロセスによるものであり、該前駆体を、ナノ化を引き起こして該最終製品を得るサイズ縮小プロセスに供することを特徴とする方法。
［請求項１４］
機械的剪断力を該前駆体材料に加える、請求項１３に記載のナノ化方法。
［請求項１５］
１００〜１５０００ｒｐｍ、好ましくは１０００〜６０００ｒｐｍで動作する従来の高剪断混合／配合装置を用いて、機械的剪断力を該前駆体材料に加える、請求項１３または１４に記載のナノ化方法。
［請求項１６］
機械的剪断力を１２０℃未満の温度で３０秒〜１０分間、該前駆体材料に加える、請求項１３〜１５のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項１７］
流体力学的剪断応力を該前駆体材料に加える、請求項１３〜１６のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項１８］
１００〜５０００ｒｐｍ、好ましくは１０００〜２０００ｒｐｍで動作する分散／混合装置としてのホモジナイザを用いて、水性もしくは有機媒体中で流体力学的剪断応力を該前駆体材料に加える、請求項１３〜１７のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項１９］
流体力学的剪断応力を１００℃未満の温度で５分〜３時間、好ましくは３０分〜１．５時間、該前駆体材料に加える、請求項１３〜１８のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項２０］
破砕機械力を該前駆体材料に加える、請求項１３〜１９のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項２１］
該前駆体を破砕するために乳鉢および乳棒を用いて手動粉砕によって破砕機械力を加え、その際、該前駆体材料および粉砕助剤としての固体粉末が２：１〜１：１０００の範囲の各重量比で加えられている、請求項１３〜２０のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項２２］
圧力勾配応力を、８０℃未満の温度で音波もしくは流体力学的キャビテーションによって該前駆体材料に加える、請求項１３〜２１のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項２３］
該前駆体材料を冷却して、脆化させる、及び分解減少させる、請求項１３〜２２のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項２４］
液体窒素を用いてサイズ縮小の前および間の冷却を実現する、請求項１３〜２３のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項２５］
タンパク質分解を減少させるために、該前駆体材料に対して０．０１〜２重量％の範囲の量で捕捉剤分子を添加する、請求項１３〜２４のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項２６］
前記捕捉剤分子が、α−トコフェロール、ナリンゲニン、レチノール、ヨウ化物、コエンザイムＱ１０、メラトニン、カロテノイドテルペノイド、フラボノイドポリフェノール類、フェノール酸およびエステル、グルタチオン、Ｎ−アセチルシステイン、フィチン酸、シュウ酸、クエン酸、オイゲノール、キサントン、クルクミン、フラボノリグナン、Ｒ−リポ酸、尿酸、カロテン、ユビキノール、アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシトルエン、ビスルファイトおよび／またはチオスルフェートである、請求項１３〜２５のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項２７］
該物理的サイズ縮小プロセスを容易にするために固体粉末を添加し、その際、該前駆体および該固体粉末が２：１〜１：１０００の範囲の各重量比で加えられている、請求項１３〜２６のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項２８］
該固体粉末が、ヨウ化カリウム、ヨウ化ナトリウム、塩化ナトリウムまたは任意の他のアルカリもしくはアルカリ土類塩、活性炭、二酸化ケイ素、酸化アルミニウム、二酸化チタン、キチン、ケラチンおよび／またはポリイミドである、請求項１３〜２７のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項２９］
再凝集を防止／制限するために、２〜１００倍の過剰重量で安定剤分子を添加する、請求項１３〜２８のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項３０］
安定剤分子が、ヨウ化カリウム、ヨウ化ナトリウム、塩化ナトリウムまたは任意のアルカリもしくはアルカリ土類塩、アンモニウム塩、炭水化物、ポリオール類、ポリビニルピリジン、ポリビニルピロリドン、ポリアミド類、クエン酸、アスコルビン酸、アルブミン、ヒプロメロースおよび／またはゼラチンである、請求項１３〜２９のいずれかに記載のナノ化方法。
［請求項３１］
経口、バッカル、舌下、ＧＡＬＴ、腹腔内、筋肉内、真皮下、皮下、クモ膜下腔内、実質内および静脈内などの任意の投与経路による治療性能を向上させるための、請求項１〜１２のいずれかに記載され、かつ請求項１３〜２９のいずれかに記載の方法によって調製された架橋されたタンパク質ナノ粒子の使用。
［請求項３２］
リソソーム貯蔵障害に起因する代謝不均衡の回復のための、請求項１〜１２のいずれかに記載され、かつ請求項１３〜２９のいずれかに記載の方法によって調製された架橋されたタンパク質ナノ粒子の使用。
［請求項３３］
奇病、嚢胞性線維症、消化疾患、酵素反応性の癌、糖尿病および低酸素性状態、再灌流関連傷害、慢性創傷および脳病理の治療のための、請求項１〜１２のいずれかに記載され、かつ請求項１３〜２９のいずれかに記載の方法によって調製された架橋されたタンパク質ナノ粒子の使用。