【手続補正書】
【提出日】平成24年5月14日(2012.5.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試験化合物のGLP-1受容体アゴニスト活性を検出または測定するための方法であって、
（i）試験化合物および6-23（クローン6）細胞を含む試料を調製し；
（ii）細胞ベースのアッセイを用いて試料中のcAMPを定量的に測定し；ついで、
（iii）試験化合物のGLP-1受容体アゴニスト活性に対して試料中のcAMPの量を相関させる
ことを含む該方法。
【請求項２】
試料が（i）試験化合物を含む医薬組成物および（ii）6-23（クローン6）細胞を含む請求項１記載の方法。
【請求項３】
細胞ベースのアッセイが酵素結合免疫ソルベントアッセイ（enzyme-linked  immunosorbent  assay）である請求項１記載の方法。
【請求項４】
細胞ベースのアッセイが均質時間分解蛍光アッセイである請求項１記載の方法。
【請求項５】
試験化合物がエクセナチド；リラグルチド；アルビグルチド；タスポグルチド；LY2189265；LY2428757；リキシセナチド（lixisenatide）；CJC-1134；NN9535；［Nε-（17-カルボキシヘプタデカン酸）Lys20］エキセンジン-4-NH2；［Nε-（17-カルボキシヘプタデカノイル）Lys32］エキセンジン-4-NH2；［デスアミノ-His1,Nε-（17-カルボキシ-ヘプタデカノイル）Lys20］エキセンジン-4-NH2；［Arg12,27,NLe14,Nε-（17-カルボキシヘプタ-デカノイル）Lys32］エキセンジン-4-NH2；［Nε-（19-カルボキシノナデカノイルアミノ）Lys20］-エキセンジン-4-NH2；［Nε-（15-カルボキシペンタデカノイルアミノ）Lys20］エキセンジン-4-NH2；［Nε-（13-カルボキシトリデカノイルアミノ）Lys20］エキセンジン-4-NH2；［Nε-（11-カルボキシ-ウンデカノイルアミノ）Lys20］-エキセンジン-4-NH2；エキセンジン-4-Lys40（ε-MPA）-NH2；エキセンジン-4-Lys40（ε-AEEA-AEEA-MPA）-NH2；エキセンジン-4-Lys40（ε-AEEA-MPA）-NH2；エキセンジン-4-Lys40（ε-MPA）-アルブミン；エキセンジン-4-Lys40（ε-AEEA-AEEA-MPA）-アルブミン；エキセンジン-4-Lys40（ε-AEEA-MPA）-アルブミン；GLP-l（7-38）；デスアミノ-His7,Arg26,Lys34（Nε-（γ-Glu（N-α-ヘキサデカノイル）））-GLP-1（7-37）；デスアミノ-His7,Arg26,Lys34（Nε-オクタノイル）-GLP-l（7-37）；Arg26,34,Lys38（Nε-（ω-カルボキシペンタデカノイル））-GLP-l（7-38）；Arg26,34,Lys36（Nε-（γ-Glu（N-α-ヘキサデカノイル）））-GLP-l（7-36）；または配列番号:1−40および43−45のいずれか1のアミノ酸配列を含むいずれかのペプチドであり；配列番号:25−40のいずれか1のアミノ酸配列を含むペプチドは所望により配列番号:42のアミノ酸配列に結合していてもよく；試験化合物は所望によりアミド化されていてもよい請求項１記載の方法。
【請求項６】
試験化合物のGLP-1受容体アゴニスト活性を検出または測定するための方法であって、
（a）試験化合物および6-23（クローン6）細胞を含む試料を調製し；
（b）（i）工程（a）からの試料；
（ii）抗-cAMP抗体を含む化合物；および
（iii）検出可能に標識したcAMPを含む化合物
を合することによって反応混合物を形成し；
（c）試料中のcAMPを定量的に測定し；ついで
（d）試験化合物のGLP-1受容体アゴニスト活性に対して試料中のcAMPの量を相関させる
ことを含む該方法。
【請求項７】
試料が（i）試験化合物を含む医薬組成物および（ii）6-23（クローン6）細胞を含む請求項６記載の方法。
【請求項８】
さらに、反応混合物をインキュベートすることを含む請求項６記載の方法。
【請求項９】
抗-cAMP抗体が希土類クリプタートまたは希土類キレートに結合している請求項６記載の方法。
【請求項１０】
抗-cAMP抗体が、テルビウム・クリプタート、ユーロピウム・クリプタート、ジスプロシウム・クリプタート、サマリウム・クリプタート、ネオジム・クリプタート、テルビウム・キレート、ユーロピウム・キレート、ジスプロシウム・キレート、サマリウム・キレート、ネオジム・キレート、またはそれらの2またはそれを超える組合せに結合している請求項６記載の方法。
【請求項１１】
抗-cAMP抗体が抗-cAMPモノクローナル抗体である請求項６記載の方法。
【請求項１２】
検出可能に標識したcAMPが蛍光基に結合したcAMPである請求項６記載の方法。
【請求項１３】
蛍光基がアロフィコシアニン、アロフィコシアニンB、フィコシアニンC、フィコシアニンR、またはそれらの2またはそれを超える組合せである請求項６記載の方法。
【請求項１４】
蛍光基が架橋したアロフィコシアニンである請求項６記載の方法。
【請求項１５】
試料が、（i）エクセナチドを含む医薬組成物；（ii）6-23（クローン6）細胞；および（iii）アロフィコシアニン、アロフィコシアニンB、フィコシアニンC、フィコシアニンR、またはそれらの2またはそれを超える組合せよりなる群から選択される蛍光基に結合したcAMPを含む請求項６記載の方法。
【請求項１６】
試験化合物がエクセナチド；リラグルチド；アルビグルチド；タスポグルチド；LY2189265；LY2428757；リキシセナチド（lixisenatide）；CJC-1134；NN9535；［Nε-（17-カルボキシヘプタデカン酸）Lys20］エキセンジン-4-NH2；［Nε-（17-カルボキシヘプタデカノイル）Lys32］エキセンジン-4-NH2；［デスアミノ-His1,Nε-（17-カルボキシ-ヘプタデカノイル）Lys20］エキセンジン-4-NH2；［Arg12,27,NLe14,Nε-（17-カルボキシヘプタ-デカノイル）Lys32］エキセンジン-4-NH2；［Nε-（19-カルボキシノナデカノイルアミノ）Lys20］-エキセンジン-4-NH2；［Nε-（15-カルボキシペンタデカノイルアミノ）Lys20］エキセンジン-4-NH2；［Nε-（13-カルボキシトリデカノイルアミノ）Lys20］エキセンジン-4-NH2；［Nε-（11-カルボキシ-ウンデカノイルアミノ）Lys20］-エキセンジン-4-NH2；エキセンジン-4-Lys40（ε-MPA）-NH2；エキセンジン-4-Lys40（ε-AEEA-AEEA-MPA）-NH2；エキセンジン-4-Lys40（ε-AEEA-MPA）-NH2；エキセンジン-4-Lys40（ε-MPA）-アルブミン；エキセンジン-4-Lys40（ε-AEEA-AEEA-MPA）-アルブミン；エキセンジン-4-Lys40（ε-AEEA-MPA）-アルブミン；GLP-l（7-38）；デスアミノ-His7,Arg26,Lys34（Nε-（γ-Glu（N-α-ヘキサデカノイル）））-GLP-1（7-37）；デスアミノ-His7,Arg26,Lys34（Nε-オクタノイル）-GLP-l（7-37）；Arg26,34,Lys38（Nε-（ω-カルボキシペンタデカノイル））-GLP-l（7-38）；Arg26,34,Lys36（Nε-（γ-Glu（N-α-ヘキサデカノイル）））-GLP-l（7-36）；または配列番号:1−40および43−45のいずれか1のアミノ酸配列を含むいずれかのペプチドであり；配列番号:25−40のいずれか1のアミノ酸配列を含むペプチドは所望により配列番号:42のアミノ酸配列に結合していてもよく；試験化合物は所望によりアミド化されていてもよい請求項６記載の方法。
【請求項１７】
GLP-1受容体アゴニスト化合物のGLP-1受容体アゴニスト活性を検出または測定するための方法であって：
（a）GLP-1受容体アゴニスト化合物および6-23（クローン6）細胞を含む試料を調製し；
（b）工程（a）からの試料を刺激するための剤を加えて6-23（クローン6）細胞中にcAMPを生成させ；
（c）（i）工程（b）からの試料；
（ii）約620nmの測定用波長の蛍光を生成することができるユーロピウム-クリプタートに結合した抗-cAMPモノクローナル抗体；および
（iii）約665nmの補正用波長の蛍光を発することができる蛍光基に結合したcAMP
を合することによって反応混合物を形成し；
ここに、反応混合物は6-23（クローン6）細胞を溶解することができる緩衝液を含み；
（d）外部放射線源によって約337nmの単一励起波長にて工程（c）からの反応混合物を照射し；
（e）第1の化合物による約620nmの蛍光および反応混合物の干渉パラメータを考慮した第2の化合物による約665nmの蛍光の両方を同時に測定し；
（f）約665nmの第2の化合物によって発せられた蛍光に基づいて約620nmの第1の化合物によって発せられた蛍光について補正した蛍光を計算し；
（g）試料中のcAMPの存在または定量的な量に対して補正した蛍光の読みを相関させ；ついで、
（h）エクセナチドのGLP-1受容体アゴニスト活性に対して試料中のcAMPの量を相関させる
工程を含む該方法。
【請求項１８】
試料が、（i）GLP-1受容体アゴニスト化合物を含む医薬組成物および（ii）6-23（クローン6）細胞を含む請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
さらに、反応混合物をインキュベートすることを含む請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
試験化合物がエクセナチド；リラグルチド；アルビグルチド；タスポグルチド；LY2189265；LY2428757；リキシセナチド（lixisenatide）；CJC-1134；NN9535；［Nε-（17-カルボキシヘプタデカン酸）Lys20］エキセンジン-4-NH2；［Nε-（17-カルボキシヘプタデカノイル）Lys32］エキセンジン-4-NH2；［デスアミノ-His1,Nε-（17-カルボキシ-ヘプタデカノイル）Lys20］エキセンジン-4-NH2；［Arg12,27,NLe14,Nε-（17-カルボキシヘプタ-デカノイル）Lys32］エキセンジン-4-NH2；［Nε-（19-カルボキシノナデカノイルアミノ）Lys20］-エキセンジン-4-NH2；［Nε-（15-カルボキシペンタデカノイルアミノ）Lys20］エキセンジン-4-NH2；［Nε-（13-カルボキシトリデカノイルアミノ）Lys20］エキセンジン-4-NH2；［Nε-（11-カルボキシ-ウンデカノイルアミノ）Lys20］-エキセンジン-4-NH2；エキセンジン-4-Lys40（ε-MPA）-NH2；エキセンジン-4-Lys40（ε-AEEA-AEEA-MPA）-NH2；エキセンジン-4-Lys40（ε-AEEA-MPA）-NH2；エキセンジン-4-Lys40（ε-MPA）-アルブミン；エキセンジン-4-Lys40（ε-AEEA-AEEA-MPA）-アルブミン；エキセンジン-4-Lys40（ε-AEEA-MPA）-アルブミン；GLP-l（7-38）；デスアミノ-His7,Arg26,Lys34（Nε-（γ-Glu（N-α-ヘキサデカノイル）））-GLP-1（7-37）；デスアミノ-His7,Arg26,Lys34（Nε-オクタノイル）-GLP-l（7-37）；Arg26,34,Lys38（Nε-（ω-カルボキシペンタデカノイル））-GLP-l（7-38）；Arg26,34,Lys36（Nε-（γ-Glu（N-α-ヘキサデカノイル）））-GLP-l（7-36）；または配列番号:1−40および43−45のいずれか1のアミノ酸配列を含むいずれかのペプチドであり；配列番号:25−40のいずれか1のアミノ酸配列を含むペプチドは所望により配列番号:42のアミノ酸配列に結合していてもよく；試験化合物は所望によりアミド化されていてもよい請求項１７記載の方法。