【手続補正書】
【提出日】平成26年3月24日(2014.3.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｌ−オルニチンを製造する方法において、該方法は以下：
ａ）Ｌ−オルニチンエクスポーターの活性を有し、かつそのアミノ酸配列が、配列番号２のアミノ酸配列と同一であるポリペプチド、又は前記アミノ酸配列が配列番号２のアミノ酸配列から、最大２５個の欠失、挿入、置換、若しくはＮ末端及び／若しくはＣ末端上のアミノ酸の付加により得られるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを過剰発現して存在する、コリネバクテリウム属、バシラス属、ストレプトミセス属、アルスロバクター属及び腸内細菌科から成るグループから選択されるＬ−オルニチンを排出する細菌を培地中で発酵し、
ｂ）Ｌ−オルニチンを前記培地中で蓄積し、その際、発酵ブロスが得られ、かつ
ｃ）その際、過剰発現については、ＤＳＭ２３２３９に寄託されているプラスミドｐＥＣ７ＬｙｓＥは除外され、
の工程を行うことを特徴とする、Ｌ−オルニチンを製造する方法。
【請求項２】
コリネバクテリウム・グルタミクム（Corynebacterium glutamicum）の場合は、過剰発現によってＡＴＣＣ１３０３２又はＡＴＣＣ１４０６７又はＡＴＣＣ１３８６９と比較して、Ｌ−オルニチンの排出活性の高さは少なくとも１０％だけ高まって存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
過剰発現は、次のグループ：
ａ）コピー数を増やすことと、
ｂ）強力なプロモーターを使用することと、
ｃ）プロモーターを突然変異させることと、
ｄ）アクチベータータンパク質を過剰発現させることと、
から選択される１つ以上の措置によって達成される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
細菌は、コリネバクテリウム、有利にはコリネバクテリウム・グルタミクムである、請求項１から３までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
次のグループ：
ａ）α−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ（ＥＣ１．２．４．２）のＥ１サブユニットをコードするｏｄｈＡ遺伝子、
ｂ）ジヒドロリポアミドスクシニルトランスフェラーゼ（ＥＣ２．３．１．６１）をコードするｓｕｃＡ遺伝子、
ｃ）ジヒドロジピコリネート−シンターゼ（ＤａｐＡ、ＥＣ４．２．１．５２）をコードするｄａｐＡ遺伝子、
ｄ）ジヒドロジピコリネート−シンターゼ（ＤａｐＢ、ＥＣ１．３．１．２６）をコードするｄａｐＢ遺伝子、
ｅ）メソ−ジアミノピメレートデヒドロゲナーゼ（Ｄｄｈ，ＥＣ１．４．１．１６）をコードするｄｄｈ遺伝子、
ｆ）ジアミノピメレート−デヒドロカルボキシラーゼ（ＬｙｓＡ，ＥＣ４．１．１．２０）をコードするｌｙｓＡ遺伝子、
ｇ）Ｌ−アルギニンの生合成のリプレッサー（ＡｒｇＲ）をコードするａｒｇＲ遺伝子、
ｈ）オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ（ＡｒｇＦ，ＥＣ２．１．３．３）をコードするａｒｇＦ遺伝子、
ｉ）アルギニノコハク酸シンターゼ（ＡｒｇＧ，ＥＣ６．３．４．５）をコードするａｒｇＧ遺伝子、
ｊ）アルギニノコハク酸リアーゼ（ＡＳＡＬ）（ＡｒｇＨ，ＥＣ４．３．２．１）をコードするａｒｇＨ遺伝子、
ｋ）アスパラギン酸キナーゼ（ＬｙｓＣ，ＥＣ２．７．２．４）をコードするｌｙｓＣ遺伝子及び
ｌ）アスパラギン酸セミアルデヒド−デヒドロゲナーゼ（Ａｓｄ，ＥＣ１．２．１．１１）をコードするａｓｄ遺伝子
から選択される１つ以上の遺伝子を更に弱める、請求項１から４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
更に、次のグループ：
ａ）ｇｄｈ遺伝子によりコードされるグルタメートデヒドロゲナーゼ（ＥＣ１．４．１．３）、
ｂ）ａｒｇＪ遺伝子によりコードされるグルタメートＮ−アセチルトランスフェラーゼ（ＥＣ２．３．１．３５及びＥＣ２．３．１．１）、
ｃ）ａｒｇＢ遺伝子によりコードされるアセチルグルタメートキナーゼ（ＥＣ２．７．２．８）、
ｄ）ａｒｇＣ遺伝子によりコードされるＮ−アセチル−γ−グルタミル−ホスフェートリダクターゼ（ＥＣ１．２．１．３８）、
ｅ）ａｒｇＤ遺伝子によりコードされるアセチル−オルニチンアミノトランスフェラーゼ（ＥＣ２．６．１．１１）、
ｆ）ｐｔｓＧ遺伝子によりコードされるグルコース取込み系のグルコース−特異的成分ＥＩＩＢ（ＰｔｓＧ）（ＥＣ２．７．１．６９）、
ｇ）ｐｔｓＳ遺伝子によりコードされるサッカロース取込み系のサッカロース特異的成分ＥＩＩＢ（ＰｔｓＳ）（ＥＣ２．７．１．６９）、
ｈ）ｚｗｆ遺伝子によりコードされるグルコース−６−ホスフェート１−デヒドロゲナーゼ（ＥＣ１．１．１．４９）、
ｉ）ｐｇｉ遺伝子によりコードされるグルコース−６−ホスフェートイソメラーゼ（ＥＣ５．３．１．９）、
ｊ）ｐｆｋＡ遺伝子によりコードされるホスホフルクトキナーゼ（ＥＣ２．７．１．１１）、
ｋ）ｆｄａ遺伝子によりコードされるフルクトース−ビスホスフェートアルドラーゼ（ＥＣ４．１．２．１３）、
ｌ）ｇａｐ遺伝子によりコードされるグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＥＣ１．２．１．５９）、
ｍ）ｐｇｋ遺伝子によりコードされるホスホグリセリン酸キナーゼ（ＥＣ２．７．２．３）、
ｎ）ｐｙｋ遺伝子によりコードされるピルビン酸キナーゼ（ＥＣ２．７．１．４０）、
ｏ）ａｃｅＥ遺伝子によりコードされるピルビン酸デヒドロゲナーゼのＥ１サブユニット（ＥＣ１．２．４．１）、
ｐ）ｐｐｃ遺伝子によりコードされるホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ（ＥＣ４．１．１．３１）、
ｑ）ｐｙｃ遺伝子によりコードされるピルビン酸カルボキシラーゼ（ＥＣ６．４．１．１）、
ｒ）ａｃｎ遺伝子によりコードされるアコニターゼ（ＥＣ４．２．１．３）、及び
ｓ）ｉｃｄ遺伝子によりコードされるイソシトレートデヒドロゲナーゼ（ＥＣ１．１．１．４２）
から選択される１つ以上の遺伝子を更に増強させる、請求項１から５までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
回分法、流加回分法、繰り返し流加回分法及び連続的方法のグループから選択される方法である、請求項１から６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
Ｌ−オルニチン含有発酵ブロスから、Ｌ−オルニチン又は液体又は固体Ｌ−オルニチン含有生成物を回収する、請求項１から７までのいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８３】
場合により、Ｌ−オルニチン生産を改善するために、次のグループ：
ａ）α−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ（ＥＣ１．２．４．２）のＥ１サブユニットをコードするｏｄｈＡ遺伝子、
ｂ）ジヒドロリポアミドスクシニルトランスフェラーゼ（ＥＣ２．３．１．６１）をコードするｓｕｃＡ遺伝子、
ｃ）ジヒドロジピコリネート−シンターゼ（ＤａｐＡ、ＥＣ４．２．１．５２）をコードするｄａｐＡ遺伝子、
ｄ）ジヒドロジピコリネート−シンターゼ（ＤａｐＢ、ＥＣ１．３．１．２６）をコードするｄａｐＢ遺伝子、
ｅ）メソ−ジアミノピメレートデヒドロゲナーゼ（Ｄｄｈ，ＥＣ１．４．１．１６）をコードするｄｄｈ遺伝子、
ｆ）ジアミノピメレート−デヒドロカルボキシラーゼ（ＬｙｓＡ，ＥＣ４．１．１．２０）をコードするｌｙｓＡ遺伝子、
ｇ）Ｌ−アルギニンの生合成のリプレッサー（ＡｒｇＲ）をコードするａｒｇＲ遺伝子、
ｈ）オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ（ＡｒｇＦ，ＥＣ２．１．３．３）をコードするａｒｇＦ遺伝子、
ｉ）アルギニノコハク酸シンターゼ（ＡｒｇＧ，ＥＣ６．３．４．５）をコードするａｒｇＧ遺伝子、
ｊ）アルギニノコハク酸リアーゼ（ＡＳＡＬ）（ＡｒｇＨ，ＥＣ４．３．２．１）をコードするａｒｇＨ遺伝子、
ｋ）アスパラギン酸キナーゼ（ＬｙｓＣ，ＥＣ２．７．２．４）をコードするｌｙｓＣ遺伝子及び
ｌ）アスパラギン酸セミアルデヒド−デヒドロゲナーゼ（Ａｓｄ，ＥＣ１．２．１．１）をコードするａｓｄ遺伝子
から選択される１つ以上の遺伝子を更に減衰させることが便利である。