【手続補正書】
【提出日】平成24年8月20日(2012.8.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一つ以上の病原体が引き起こすかまたは一因となった疾病および／または疾患の治療または予防に用いる炭水化物結合分子（ＣＢＭ）。
【請求項２】
一つ以上の病原体が引き起こすかまたは一因となった疾病および／または疾患の治療または予防用の薬剤の製造への炭水化物結合分子（ＣＢＭ）の使用。
【請求項３】
一つ以上の病原体が引き起こすかまたは一因となった疾病および／または疾患を治療または予防するのに用いるＣＢＭおよび薬学的に許容し得る賦形剤を含む医薬品組成物。
【請求項４】
経口、非経口または局所的な投与用に処方した請求項３に記載の医薬品組成物。
【請求項５】
前記疾病または疾患がウイルス性の呼吸性病原体および／または細菌性病原体によって生じる前記請求項のいずれかに記載のＣＢＭ、使用または組成物。
【請求項６】
前記ウイルス性の呼吸性病原体がオルトミクソウイルスまたはパラミキソウイルス科に属する請求項５に記載のＣＢＭ、使用または組成物。
【請求項７】
前記細菌性病原体がストレプトコッカス属、インフルエンザ菌またはシュードモーナス・エールジノーサである請求項５に記載のＣＢＭ、使用または組成物。
【請求項８】
インフルエンザ、偽膜性喉頭炎、肺炎および／または気管支炎を治療および／または予防するための請求項１〜５に記載のＣＢＭ、組成物および／または使用。
【請求項９】
前記ＣＢＭがシアル酸に親和性を示すかまたは結合する前記請求項のいずれかに記載のＣＢＭ、組成物または使用。
【請求項１０】
前記ＣＢＭがＣＢＭの族40に属する前記請求項のいずれかに記載のＣＢＭ、組成物または使用。
【請求項１１】
前記ＣＢＭをコレラ菌またはウェルシュ菌から得る前記請求項のいずれかに記載のＣＢＭ、組成物または使用。
【請求項１２】
前記ＣＢＭが２つ以上のＣＢＭモノマーを含む多価のＣＢＭである前記請求項のいずれかに記載のＣＢＭ、使用または組成物。
【請求項１３】
２つ以上のＣＢＭ分子を含むＣＢＭポリマー。
【請求項１４】
１つ以上の細胞表面炭水化物に結合するかまたは親和性を有する請求項１３に記載のＣＢＭポリマー。
【請求項１５】
一つ以上の病原体が引き起こすかまたは一因となった疾病および／または疾患を治療または予防するための請求項１４に記載のＣＢＭポリマー。
【請求項１６】
(a) ＣＢＭをコード化する複数のヌクレオチド配列を結合するステップ;および
（b）結合ＣＢＭヌクレオチド配列を発現させてＣＢＭポリマーを作り出すステップを備えるＣＢＭポリマーの製造方法。
【請求項１７】
(i) ＣＢＭまたはＣＢＭポリマーを細胞と、該細胞に結合または感染することが既知の病原体の存在下で接触させるステップ;
(ii) 病原体が結合したかまたは病原体が感染した細胞を識別するステップ;および
(iii) 結果をＣＢＭまたはＣＢＭポリマーを加えない標準または対照アッセイと比較するステップを備え、
対照アッセイと比べて病原体が結合した細胞数の減少または病原体に感染した細胞数の減少がその病原体が引き起こすかまたは一因となった疾病および／または疾患の治療に潜在的に有用なＣＢＭまたはＣＢＭポリマーを示すことを特徴とする疾病および／または疾患の治療に潜在的に有用なＣＢＭをスクリーニングするかまたは識別するための方法。
【請求項１８】
(a) サンプルを請求項１３のＣＢＭまたはＣＢＭポリマーと、該ＣＢＭ/ＣＢＭポリマーとこれに結合するかまたは親和性を有する炭水化物との結合を可能にするのに適した条件下で接触させるステップ；
(b) 未結合のＣＢＭまたはＣＢＭポリマーを取り除くステップ;および
（c）結合ＣＢＭまたはＣＢＭポリマーを検出するステップを備えるサンプル中の炭水化物をスクリーニング、識別、検出、ラベリングおよび／またはタギングする方法。
【請求項１９】
前記サンプルが組織生検、剥離物または分泌物から得た細胞からなる請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＣＢＭまたはＣＢＭポリマーを更に修飾して細胞に送達すべき部分を含める前記請求項のいずれかに記載のＣＢＭ、使用、組成物または方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
シアル酸認識は、レクチンまたはレクチン様分子およびその対応するレセプターを介してもたらされる(3)。ほとんどの場合、いくつかのウイルス糖タンパク質および細菌毒素（2,4）並びにシグレック(5)およびセレクチン(6)のような哺乳類のレクチン超族も含むシアル酸結合レクチンは、これら分子の多価性により比較的高い親和性でレセプターと結合し、したがって大部分のタンパク質-炭水化物相互作用に関連する低い固有の親和性を緩和する（7,8）。一般に、かかるレクチンによる1価および2価のシアロシドの結合の会合定数（Ka）は、104M-1に達することができる。しかしなから、その多価性のため、いくつかのシアル酸結合レクチンが多価の細胞表面グリカンと相互作用して、結合活性効果によって109M-1に及ぶ親和性を達成することができる。これら増強された親和性は、好ましい結合エネルギー論に関連したリガンド結合によって促進されるタンパク質の改良された構造的パッキングによることが部分的に示された（9-11）。最もよく研究された多価のレクチン-シアル酸相互作用のうちの一つは、インフルエンザウイルス三量体血球凝集素であり、独立体の一つまたは両方が多価の状態でない場合に約4 x 102M-1と対照に最高108M-1親和性を達成することができる(12)。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
ここで用いる用語「病原体」は、細胞表面炭水化物と結合、認識またはさもなくば関連し得るあらゆる病原体、特に細胞に結合／付着するかおよび／または入り込む手段として細胞表面炭水化物の存在を活用または利用するように進化しているものを含むと理解されたい。そのようなものとして、一実施形態における用語「病原体」は、微生物の病原菌を包含し、オルトミクソウイルス科またはパラミキソウイルス属科に属するウイルス、例えばインフルエンザおよびヒトパラインフルエンザウイルスのような呼吸性の病原菌、並びに肺炎連鎖球菌および／またはヘモフィルス属インフルエンザ、緑膿菌のような連鎖球菌属に属するバクテリアがあり、いずれもが哺乳動物細胞の表面上で炭水化物を結合することができる。当業者は、ここに記載するタイプの病原体によって最も頻繁にコロニー形成/感染された哺乳類の細胞は上皮細胞、特に粘膜路を裏打ちするもの（例えば呼吸性の上皮細胞）であると理解するであろう。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
ＣＢＭは、自然界で広く見いだされ、種々の異なる炭水化物に対し広範囲にわたる親和性を示す。これまで、ＣＢＭは一次配列類似性に基づいて52の族に分類されてきたが、本発明があらゆるＣＢＭに関し得ることを理解されたい。勿論、特定の細胞表面炭水化物に結合する病原体によって生じることが既知の疾病または疾患を治療するために、該炭水化物に対して結合するかまたは親和性を示すＣＢＭが、その疾病または疾患の治療または予防に特に有用である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
これら潜在的に有用なＣＢＭのうち、族40に属するものは“ＣＢＭ40”のＣＢＭとして既知である。コレラ菌およびウェルシュ菌に由来するＣＢＭがＣＢＭ40族に含まれる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
例えば、関連したＣＢＭをエンコード化するヌクレオチド配列をPCRによって増幅し、その一つ以上のコピーを一緒にまたは他のＣＢＭエンコード化ヌクレオチド配列に結合できるように修飾することができる。加えて、ＣＢＭヌクレオチド配列を、一つ以上のアミノ酸残基を含むリンカー部分をエンコード化する配列をその3’および／または5’末端で含むように更に修飾させることができる。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
ＣＢＭポリマー（または多価のＣＢＭ）はまた、例えば、オリゴマー形成領域を含むように修飾したＣＢＭモノマーを用いて生成させることができる。かかる領域を有する分子が自己集合してオリゴマー構造を形成することができる。一実施形態において、オリゴマー化領域を、例えばトリマー形成領域をコード化することが既知の緑膿菌のような細菌性種に由来することができる。このように、PCRに基づく技術を用いて、ＣＢＭ分子を修飾することができる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
上記を鑑みて、本発明の第６の態様は、ＣＢＭポリマーを生成する方法を提供するもので、該方法は
(a)複数のＣＢＭエンコード化ヌクレオチド配列を結合するステップ、および
(b)ＣＢＭ ポリマーを生成するために結合したＣＢＭヌクレオチド配列を発現するステップを備える。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
本発明の第７の態様は、疾病および／または疾患の治療に潜在的に有用なＣＢＭをスクリーニングするかまたは識別する方法を提供するもので、該記方法は
(i) 細胞に結合または感染することが既知の病原体の存在下でＣＢＭまたはＣＢＭポリマーを前記細胞と接触させるステップ;
(ii) 病原体が結合したかまたは病原体が感染したこれら細胞を識別するステップ;および
(iii)かかる結果をＣＢＭまたはＣＢＭポリマーが加えられてない標準または対照アッ
セイと比較するステップとを備え、
ここで、対照アッセイに対し病原体が結合した細胞数の減少または病原体に感染した細胞数の減少が、該病原体が引き起こしたまたは一因となった疾病および／または疾患の治療に潜在的に有用なＣＢＭまたはＣＢＭポリマーを示す。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
したがって、本発明の第８の態様は、サンプル中の炭水化物をスクリーニング、識別、標識付けおよび／またはタギングする方法を提供するもので、該方法は
(a) ここに記載したようなＣＢＭ／ＣＢＭポリマーと、該ＣＢＭまたはＣＢＭポリマーとそれに結合するかまたは親和性を有する炭水化物との結合を可能にするのに適した条件下で試料を接触させるステップと、
(b) 未結合のＣＢＭまたはＣＢＭポリマーを除去するステップと、
(c)結合したＣＢＭまたはＣＢＭポリマーを検出するステップとを備える。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
（材料および方法）
（組換えＤＮＡ技術）  コレラ菌シアリダーゼ/ノイラミニダーゼ（ＶＣＮＡ）の族40のＣＢＭである残基25-216をコード化するＤＮＡ断片を、表2の配列アウトラインに基づくオリゴヌクレオチドプライマペア1Fおよび1Rを用いてnanH遺伝子(16)を含む構築物pET30b+からPCRによって増幅した。573bpの増幅ＤＮＡ断片をNco IおよびXho Iで消化し、pEHISTEVベクター（タバコエッチ病ウイルス（TEV）プロテアーゼによって切断されるＮ末端基６ｘHisタグを有するpET30の改変体）（Dr H. Liu、未発表の研究）にクローン化し、同じ酵素で消化し、大腸菌DH5aを形質転換するのに用いた。構築物p1ＣＢＭをＤＮＡシーケンシングによって検証した（ダンディ大学シーケンシングサービス、英国）。