【手続補正書】
【提出日】平成24年3月1日(2012.3.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内のヒトキネシンファミリーメンバー１１（Ｅｇ５／ＫＳＰ）遺伝子の発現を阻害するための、第１の二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）と、細胞内のヒトＶＥＧＦの発現を阻害するための第２のｄｓＲＮＡとを含む、組成物であって、
前記第１のｄｓＲＮＡおよび前記第２のｄｓＲＮＡの両方が、安定な核酸脂質粒子（ＳＮＡＬＰ）に製剤化され、
前記第１のｄｓＲＮＡは、第１のセンス鎖と第１のアンチセンス鎖とからなり、前記第１のセンス鎖は、第１の配列を含み、前記第１のアンチセンス鎖は、配列番号１３１１（5'-UCGAGAAUCUAAACUAACU-3'）の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドに相補的な第２の配列を含み、前記第１の配列は、前記第２の配列に相補的であり、前記第１のｄｓＲＮＡは、１５〜３０塩基対長であり、前記第２のｄｓＲＮＡは、第２のセンス鎖と第２のアンチセンス鎖とからなり、前記第２のセンス鎖は、第３の配列を含み、前記第２のアンチセンス鎖は、配列番号１５３８（5'-GCACAUAGGAGAGAUGAGCUU-3'）の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドに相補的な第４の配列を含み、前記第３の配列は、前記第４の配列に相補的であり、それぞれの鎖は、１５〜３０塩基対長である、組成物。
【請求項２】
前記第１のアンチセンス鎖は、配列番号１３１１（5'- UCGAGAAUCUAAACUAACU-3'）に相補的な第２の配列を含み、第２のアンチセンス鎖は、配列番号１５３８(5'-GCACAUAGGAGAGAUGAGCUU-3'）に相補的な第４の配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記第１のｄｓＲＮＡは、配列番号１５３４（5'-UCGAGAAUCUAAACUAACUTT-3'）からなるセンス鎖と、配列番号１５３５（5'- AGUUAGUUUAGAUUCUCGATT-3'）からなるアンチセンス鎖とからなり、前記第２のｄｓＲＮＡは、配列番号１５３６（5'-GCACAUAGGAGAGAUGAGCUU- 3'）からなるセンス鎖と、配列番号１５３７（5'-AAGCUCAUCUCUCCUAUGUGCUG-3'）からなるアンチセンス鎖とからなる、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
それぞれの鎖が、小文字「ｃ」もしくは「ｕ」で示される２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドと、小文字「ｓ」で示されるホスホロチオエートとを含むように、
前記第１のｄｓＲＮＡは、
配列番号１２４０（5'ucGAGAAucuAAAcuAAcuTsT- 3'）
からなるセンス鎖と、
配列番号１２４１（5'-AGUuAGUUuAGAUUCUCGATsT）
からなるアンチセンス鎖とからなり、
前記第２のｄｓＲＮＡは、
配列番号１２４２（5'-GcAcAuAGGAGAGAuGAGCUsU-3'）
からなるセンス鎖と、
配列番号１２４３（5'-AAGCUcAUCUCUCCuAuGuGCusG-3'）
からなるアンチセンス鎖とからなるように修飾される、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記第１のｄｓＲＮＡおよび前記第２のｄｓＲＮＡは、少なくとも１個の修飾ヌクレオチドを含む、請求項１、２、および３のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記修飾ヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド、５’−ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、コレステリル誘導体もしくはドデカン酸ビスデシルアミド基に結合される終端ヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾ヌクレオチド、２’−デオキシ−修飾ヌクレオチド、ロックされたヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’−アミノ−修飾ヌクレオチド、２’−アルキル−修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、およびヌクレオチドを含む非天然塩基からなる群から選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記第１のｄｓＲＮＡおよび前記第２のｄｓＲＮＡは、それぞれ少なくとも１個の２’−Ｏ−メチル修飾リボヌクレオチドと、５’−ホスホロチオエート基を含む少なくとも１個のヌクレオチドとを含む、請求項１、２、および３のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
それぞれのｄｓＲＮＡのそれぞれの鎖が、１９〜２３または２１〜２３塩基長である、請求項１、２および５〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
前記第１のｄｓＲＮＡのそれぞれの鎖が２１塩基長であり、前記第２のｄｓＲＮＡの前記センス鎖が２１塩基長であり、前記第２のｄｓＲＮＡの前記アンチセンス鎖が２３塩基長である、請求項１、２および５〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
前記第１のｄｓＲＮＡおよび前記第２のｄｓＲＮＡは、等モル比で存在する、請求項１〜９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＳＮＡＬＰは、ＤＬｉｎＤＭＡ、コレステロール、ＤＰＰＣ、およびＰＥＧ２０００−Ｃ−ＤＭＡを含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
以下の表に列記される割合の構成成分を含む、請求項１〜１１のいずれかに記載の組成物：
【表１】
2011518117.tif 000001
*  薬品中の２つのｓｉＲＮＡの１：１のモル比を、薬品粒子の粒経分布全体に維持する。
【請求項１３】
前記組成物は、ｎＭ濃度で投与される、請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
ソラフェニブをさらに含む、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記第１のｄｓＲＮＡは、２つのオーバーハングを含有し、前記第２のｄｓＲＮＡは前記アンチセンスの３’にオーバーハングと、前記アンチセンス鎖の５’末端に平滑末端とを含有する、請求項１〜１４のうちのいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
細胞内のＥｇ５／ＫＳＰおよびＶＥＧＦの発現を阻害するためのインビトロでの方法であって、前記細胞に、請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項１７】
非ヒト細胞内のＥｇ５／ＫＳＰおよびＶＥＧＦの発現を阻害するための方法であって、前記非ヒト細胞に、請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
【請求項１８】
請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物を含む、細胞内のＥｇ５／ＫＳＰおよびＶＥＧＦの発現を阻害するための医薬組成物。
【請求項１９】
癌の治療を必要とする哺乳動物における、腫瘍成長の阻止、腫瘍成長の低下、または生存の延長のための請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物を含む医薬組成物。
【請求項２０】
前記哺乳動物は、肝臓癌を有する、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
ソラフェニブがさらに投与される、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項２２】
ソラフェニブをさらに含む、請求項１８〜２０のいずれかに記載の医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
【図１】Ｈｅｐ３ＢマウスモデルにおけるＳＮＡＬＰ−ｓｉＲＮＡの投与後の、体重の割合としての肝重量を示すグラフである。
【図２】図２Ａ〜２Ｄは、Ｈｅｐ３Ｂマウスモデルにおける、体重に対するＳＮＡＬＰ−ｓｉＲＮＡの効果を示すグラフである。
【図３】Ｈｅｐ３Ｂマウスモデルにおける、体重に対するＳＮＡＬＰ−ｓｉＲＮＡの効果を示すグラフである。
【図４】未処置対照動物の体重を示すグラフである。
【図５】Ｈｅｐ３Ｂマウスモデルにおける、体重に対する対照ルシフェラーゼＳＮＡＬＰ  ｓｉＲＮＡの効果を示すグラフである。
【図６】Ｈｅｐ３Ｂマウスモデルにおける、体重に対するＶＳＰ−ＳＮＡＬＰ  ｓｉＲＮＡの効果を示すグラフである。
【図７Ａ】Ｈｅｐ３Ｂマウスモデルにおける、マウスＧＡＰＤＨレベルに基準化したヒトＧＡＰＤＨレベルに対する、ＳＮＡＬＰ−ｓｉＲＮＡの効果を示すグラフである。
【図７Ｂ】Ｈｅｐ３Ｂマウスモデルにおける、血清ＥＬＩＳＡによって測定される血清ＡＦＰレベルに対する、ＳＮＡＬＰ−ｓｉＲＮＡの効果を示すグラフである。
【図８】Ｈｅｐ３Ｂマウスモデルにおける、マウスＧＡＰＤＨレベルに基準化したヒトＧＡＰＤＨレベルに対する、ＳＮＡＬＰ−ｓｉＲＮＡの効果を示すグラフである。
【図９】Ｈｅｐ３Ｂマウスモデルにおける、ヒトＧＡＰＤＨレベルに基準化したヒトＫＳＰレベルに対する、ＳＮＡＬＰ−ｓｉＲＮＡの効果を示すグラフである。
【図１０】Ｈｅｐ３Ｂマウスモデルにおける、ヒトＧＡＰＤＨレベルに基準化したヒトＶＥＧＦレベルに対する、ＳＮＡＬＰ−ｓｉＲＮＡの効果を示すグラフである。
【図１１Ａ】Ｈｅｐ３Ｂマウスモデルにおける、ヒトＧＡＰＤＨレベルに基準化したマウスＶＥＧＦレベルに対する、ＳＮＡＬＰ−ｓｉＲＮＡの効果を示すグラフである。
【図１１Ｂ】Ｈｅｐ３Ｂマウスモデルにおける、ヒトＧＡＰＤＨレベルおよび血清ＡＦＰレベルに対する、ＳＮＡＬＰ−ｓｉＲＮＡの効果を示す一連のグラフである。
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｃは、Ｈｅｐ３Ｂマウスモデルにおける、腫瘍ＫＳＰ、ＶＥＧＦ、およびＧＡＰＤＨレベルに対する、ＳＮＡＬＰ−ｓｉＲＮＡの効果を示すグラフである。
【図１３】図１３Ａおよび図１３Ｂは、肝臓腫瘍を有するモデルにおける、生存に対するＳＮＡＬＰ−ｓｉＲＮＡの効果を示すグラフである。腫瘍細胞の播種後１８日（図１３Ａ）および２６日（図１３Ｂ）に処置が開始された。
【図１４】血清アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）レベルに対するＳＮＡＬＰ−ｓｉＲＮＡの効果を示すグラフである。
【図１５】図１５Ａおよび１５Ｂは、２ｍｇ／ｋｇのＳＮＡＬＰ−ＶＳＰ（Ａ）または２ｍｇ／ｋｇのＳＮＡＬＰ−Ｌｕｃ（Ｂ）を投与した担腫瘍動物（Ｈｅｐ３Ｂ細胞の埋め込み後３週間）の、ＨＥ染色した切片の画像である。２４時間後、担腫瘍肝葉を組織学的分析のために処理した。矢印は単星を示す。
【図１６】ＡＬＮ−ＶＳＰＤＳ０１の製造過程を図示する流れ図である。
【図１７】ＡＬＮ−ＶＳＰ０２のクライオ透過型電子顕微鏡（クライオ−ＴＥＭ）画像である。
【図１８】ＡＬＮ−ＶＳＰ０２の製造過程を図示する流れ図である。
【図１９】ＫＳＰに標的化されたｓｉＲＮＡを用いるＭＹＣ−癌遺伝子により起こされるデノボ肝臓癌のトランスジェニックマウスモデルの処置プロトコールを示す。
【図２０】ＳＮＡＬＰに製剤化されたｓｉＲＮＡおよびソラフェニブの投与の、生存に対する効果を図示するグラフである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３３９】
生存率のデータを図２０に示す。ソラフェニブまたはＶＳＰ  ｓｉＲＮＡ−ＳＮＡＬＰのみの投与と比較して、ＶＳＰ  ｓｉＲＮＡ−ＳＮＡＬＰとソラフェニブとの同時投与によって、生存割合が増加した。ソラフェニブと比較して、ＶＳＰ  ｓｉＲＮＡ−ＳＮＡＬＰによって生存割合が増加した。