【手続補正書】
【提出日】平成26年5月1日(2014.5.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつT022A-E271F, G020R-N043R, N062E-A158E, S103G-A158E, S128N-A158E, A016S-A158E, V104L-A158E, E089P-A158E, L111V-A158E, T022A-A158E, S101A-A158E, L148I-A158E, P129E-A158E, T022A-E089P, A016S-E089P, N062E-E089P, N062E-E271F, A158E-E271F, R186H-E271F, P129E-E271F, L111V-E271F, Y209E-E271F, A016S-E271F, S188D-E271F, G159E-E271F, V104L-E271F, S101A-E271F, E089P-E271F, S128N-E271F, S103G-E271F, L148I-E271F, H249R-E271F, N062E-G159E, A016S-G159E, S128N-G159E, L148I-G159E, L111V-G159E, E089P-G159E, T022A-G159E, P129E-G159E, S103G-G159E, V104L-G159E, A158E-G159E, S101A-G159E, A158E-H249R, L111V-H249R, P129E-H249R, N062E-H249R, A016S-H249R, R186H-H249R, L148I-H249R, G159E-H249R, S101A-H249R, S188D-H249R, V104L-H249R, Y209E-H249R, T022A-H249R, S128N-H249R, S103G-H249R, E089P-H249R, T022A-L111V, S101A-L111V, A016S-L111V, V104L-L111V, N062E-L111V, S103G-L111V, E089P-L111V, A016S-L148I, N062E-L148I, T022A-L148I, P129E-L148I, V104L-L148I, S103G-L148I, S128N-L148I, S101A-L148I, E089P-L148I, L111V-L148I, A016S-N062E, T022A-N062E, N062E-P129E, T022A-P129E, S128N-P129E, A016S-P129E, S101A-P129E, V104L-P129E, E089P-P129E, S103G-P129E, L111V-P129E, N062E-R186H, S128N-R186H, S101A-R186H, T022A-R186H, A016S-R186H, A158E-R186H, E089P-R186H, P129E-R186H, G159E-R186H, S103G-R186H, V104L-R186H, L111V-R186H, L148I-R186H, N062E-S101A, T022A-S101A, A016S-S101A, E089P-S101A, N062E-S103G, T022A-S103G, A016S-S103G, S101A-S103G, E089P-S103G, N062E-S128N, A016S-S128N, T022A-S128N, S101A-S128N, V104L-S128N, E089P-S128N, S103G-S128N, L111V-S128N, L111V-S188D, N062E-S188D, A016S-S188D, L148I-S188D, T022A-S188D, S128N-S188D, S101A-S188D, V104L-S188D, E089P-S188D, P129E-S188D, G159E-S188D, R186H-S188D, S103G-S188D, A158E-S188D, A016S-T022A, A016S-V104L, T022A-V104L, S101A-V104L, N062E-V104L, S103G-V104L, E089P-V104L, G159E-Y209E, L111V-Y209E, S101A-Y209E, A016S-Y209E, S128N-Y209E, L148I-Y209E, P129E-Y209E, N062E-Y209E, T022A-Y209E, S103G-Y209E, A158E-Y209E, S188D-Y209E, V104L-Y209E, E089P-Y209E, R186H-Y209E, N018R-W241R, G020R-W241R, S024R-W241R, S009A-W241R, G020R-W241R, V004R-W241R, N043R-W241R, S078R-W241R, T022R-W241R, G115R-W241R, A001R-W241R, S212F-W241R, L082R-W241R, N018R-V244R, S024R-V244R, S078R-V244R, G020R-V244R, S212F-V244R, S009A-V244R, L082R-V244R, A001R-V244R, N043R-V244R, T022R-V244R, V004R-V244R, G115R-V244R, W241R-V244R, S242R-V244R, A001R-V004R, S009A-T022R, N018R-T022R, G020R-T022R, V004R-T022R, A001R-T022R, S024R-S242R, N018R-S242R, V004R-S242R, G020R-S242R, S212F-S242R, L082R-S242R, S078R-S242R, A001R-S242R, S009A-S242R, T022R-S242R, G115R-S242R, N043R-S242R, W241R-S242R, N018R-S212F, T022R-S212F, V004R-S212F, S024R-S212F, A001R-S212F, G115R-S212F, G020R-S212F, S009A-S212F, N043R-S212F, S078R-S212F, L082R-S212F, S009A-S078R, G020R-S078R, S024R-S078R, T022R-S078R, N018R-S078R, V004R-S078R, A001R-S078R, N043R-S078R, T022R-S024R, G020R-S024R, N018R-S024R, A001R-S024R, V004R-S024R, S009A-S024R, V004R-S009A, A001R-S009A, S242R-N269R, S024R-N269R, G020R-N269R, T022R-N269R, H249R-N269R, S212F-N269R, N043R-N269R, V244R-N269R, A001R-N269R, N018R-N269R, S078R-N269R, S009A-N269R, G115R-N269R, W241R-N269R, V004R-N269R, L082R-N269R, N018R-N043R, G020R-N043R, V004R-N043R, T022R-N043R, S009A-N043R, A001R-N043R, S024R-N043R, S009A-N018R, V004R-N018R, A001R-N018R, S024R-L082R, S009A-L082R, N018R-L082R, A001R-L082R, S078R-L082R, G020R-L082R, T022R-L082R, V004R-L082R, N043R-L082R, N043R-H249R, G020R-H249R, V004R-H249R, N018R-H249R, S009A-H249R, S212F-H249R, T022R-H249R, S024R-H249R, G115R-H249R, A001R-H249R, L082R-H249R, S242R-H249R, W241R-H249R, V244R-H249R, S078R-H249R, N018R-G115R, G020R-G115R, T022R-G115R, S078R-G115R, S009A-G115R, V004R-G115R, A001R-G115R, L082R-G115R, N043R-G115R, S024R-G115R, S009A-G020R, N018R-G020R, V004R-G020R, A001R-G020R, S009A-E271L, G020R-E271L, S024R-E271L, V244R-E271L, W241R-E271L, N043R-E271L, T022R-E271L, H249R-E271L, S212F-E271L, G115R-E271L, S242R-E271L, S078R-E271L, V004R-E271L, N269R-E271L, A001R-E271L, N018R-E271L, 及び L082R-E271Lから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、
前記変異体が、親プロテアーゼである、配列番号２で示されるアミノ酸配列を含むバチルス・レンタス（Bacillus lentus)のサブチリシンＧＣ３６プロテアーゼの変異体であり、
前記変異体は配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有し、
前記プロテアーゼ変異体のアミノ酸位置が、配列番号１で示されるバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）のサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の、対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる、
サブチリシン変異体。
【請求項２】
単離されたサブチリシン変異体であって、タンパク質分解活性を有する成熟型であり、かつA016S-T022A-A158E-R186H-E271F, H017R-T022A-N076D-S101G-S103A-V104I-G159D-A232V-Q245R-N248D-E271F, H017R-T022A-N076D-S101G-S103A-V104I-G159D-A232V-Q245R-N248D-E271F, H017R-T022A-N076D-S101G-S103A-V104I-G159D-S188D-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-A158E-R186H-H249R-E271F, T022A-N043R-N062E-S103A-V104I-G159D-S188D-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-N043R-N076D-S101G-S103A-V104I-G159D-A232V-Q245R-N248D-H249R-E271F, T022A-N043R-N076D-S101G-S103A-V104I-G159D-S188D-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-N043R-S101D-S103A-V104I-G118R-P129E-G159D-S188D-A232V-N248D-E271F, T022A-N043R-S101G-S103A-V104I-G159D-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-N043R-S101G-S103A-V104I-G159D-S188D-L217E-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-N043R-S103A-V104I-G118R-G159D-S188D-A232V-N248D-E271F, T022A-N043R-S103A-V104I-G118R-G159D-S188D-L217D-A232V-N248D-E271F, T022A-N043R-S103A-V104I-G118R-S128I-P129E-G159D-S188D-A232V-N248D-E271F, T022A-N076D-S101G-S103A-V104I-G159D-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-N076D-S101G-S103A-V104I-G159D-A232V-Q245R-N248D-H249R-E271F, T022A-N076D-S101G-S103A-V104I-G159D-S188D-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-S024R-N043R-S103A-V104I-G118R-S128I-P129E-G159D-S188D-L217D-A232V-N248D-E271F, T022A-S024R-N043R-S103A-V104I-G159D-S188D-L217D-A232V-N248D-E271F, T022A-S024R-S101D-S103A-V104I-G118R-G159D-S188D-A232V-N248D-E271F, T022A-S024R-S103A-V104I-G118R-P129E-G159D-S188D-A232V-N248D-E271F, T022A-S024R-S103A-V104I-G159D-S188D-L217D-A232V-N248D-E271F, T022A-S024R-S103A-V104I-G159D-S188D-L217D-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-S024R-S103A-V104I-P129E-G159D-S188D-A232V-N248D-E271F, T022A-S101D-S103A-V104I-G118R-G159D-S188D-L217D-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-S101G-G102A-S103A-V104I-G159D-S188D-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-S101G-S103A-V104I-G159D-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-S101G-S103A-V104I-G159D-L217E-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-S101G-S103A-V104I-G159D-S188D-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-S101G-S103A-V104I-G159D-S188D-A232V-Q245R-N248D-H249R-E271F, T022A-S103A-V104I-G118R-G159D-S188D-L217D-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-S103A-V104I-G118R-P129E-G159D-S188D-A232V-Q245R-N248D-E271F, T022A-S103A-V104I-G159D-S188D-L217D-A232V-Q245R-N248D-E271F, 及び T022A-S103A-V104I-S128I-P129E-G159D-S188D-A232V-N248D-E271Fから選択されるアミノ酸置換の組み合わせを含むアミノ酸配列からなり、
前記変異体が、親プロテアーゼである、配列番号２で示されるアミノ酸配列を含むバチルス・レンタス（Bacillus lentus)のサブチリシンＧＣ３６プロテアーゼの変異体であり、
前記変異体は配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有し、
前記プロテアーゼ変異体のアミノ酸位置が、配列番号１で示されるバチルス・アミロリケファシエンスのサブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の、対応するアミノ酸位置に割り振られた番号に従って番号付けされる、
サブチリシン変異体。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のプロテアーゼ変異体であって、
前記変異体の合計正味電荷が、バチルス・レンタス（Bacillus lentus）のサブチリシンＧＧ３６プロテアーゼの合計正味電荷と比較して０、＋１、＋２、＋３、＋４、＋５、−１、−２、−３、−４、又は−５であり、
前記合計正味電荷が：Ｎ４３Ｄ、Ｒ４５Ｔ、Ｎ６２Ｅ、Ｎ７６Ｄ、Ｓ１０１Ｄ、Ｐ１２９Ｅ、Ａ１５８Ｅ、Ｇ１５９Ｄ、Ｇ１５９Ｅ、Ｓ１６６Ｄ、Ｓ１８８Ｄ、Ａ２３０Ｅ、Ｎ１８Ｒ、Ｇ２０Ｋ、Ｇ２０Ｒ、Ｔ２２Ｒ、Ｓ２４Ｒ、Ｎ４３Ｒ、Ｇ１１８Ｒ、Ｑ２４５Ｒ、Ｈ２４９Ｒ、Ｎ２６９Ｒ、Ｅ２７１Ｆ、及びＥ２７１Ｌから選択された１箇所以上の置換により得られる、
プロテアーゼ変異体。
【請求項４】
前記プロテアーゼ変異体が、次の特性：ａ）試験方法２による性能指数が、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．１〜約１０、１．１〜約８、又は更には１．１〜約５である；ｂ）試験方法３による性能指数が、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．１〜約１０、１．１〜約８、又は更には１．１〜約５である；ｃ）試験方法４による性能指数が、少なくとも１．０、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０〜約１０、１．０〜約８、又は更には１．０〜約５である；及び／あるいはｄ）試験方法６による性能指数が、少なくとも１．０、少なくとも１．１、少なくとも１．２、少なくとも１．３、少なくとも１．４、少なくとも１．５、少なくとも１．６、少なくとも１．７、少なくとも１．８、少なくとも１．９、少なくとも２、１．０〜約１０、１．０〜約８、又は更には１．０〜約５である、のうちの１つ以上を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のプロテアーゼ変異体。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のサブチリシン変異体をコードするポリヌクレオチド配列からなる、単離された核酸。
【請求項６】
バチルスサブチリシンの少なくとも１種のサブチリシン変異体を生産する方法であって、  ａ）請求項１〜４のいずれか一項に記載のサブチリシン変異体を少なくとも１種コードする少なくとも１種の核酸を含む発現ベクターにより、宿主細胞を形質転換させることで、形質転換された宿主細胞を生産する工程；及び  ｂ）前記形質転換された宿主細胞を、少なくとも１種のサブチリシン変異体を生産するのに好適な条件下で培養して、少なくとも１種のサブチリシン変異体を生産する工程、を含む、方法。
【請求項７】
前記組成物が布地ケア製品及びホームケア製品ではない、請求項１〜４のいずれか一項に記載のサブチリシン変異体を少なくとも１種含む、組成物。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のサブチリシン変異体を少なくとも１種含む組成物であって、前記変異体が冷水用プロテアーゼの変異体でない、組成物。
【請求項９】
前記組成物がクリーニング組成物である、請求項７又は８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記クリーニング組成物が、粒状、粉末、固体、バー状、液体、錠剤型、ゲル状又はペースト組成物である、請求項７〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
更に漂白剤を少なくとも１種含む、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記クリーニング組成物がリン酸塩を含まない、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記クリーニング組成物がリン酸塩を含有する、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
少なくとも１種の追加の酵素を更に含む請求項７〜１３のいずれか一項に記載の組成物であって、前記少なくとも１種の追加の酵素が、ヘミセルラーゼ、セルラーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、メタロプロテアーゼ、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ、ペルヒドロラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β−グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ、及びアミラーゼ、又はこれらの任意の組み合わせから選択される、組成物。
【請求項１５】
表面又は物品を、請求項１〜４のいずれか一項に記載のサブチリシン変異体を少なくとも１種含むクリーニング組成物と接触させる工程を含む、クリーニング方法。
【請求項１６】
表面又は物品を、請求項７〜１４のいずれか一項に記載のクリーニング組成物と接触させる工程を含む、クリーニング方法。