【誤訳訂正書】
【提出日】平成26年2月6日(2014.2.6)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘモグロビンを含む生体試料に含有される、ベータグロビン鎖のN末端位のアミノ酸に結合しているグルコース残基を含む、少なくとも1つのベータグロビン鎖を含む1つまたはいくつかの糖化ヘモグロビンのキャピラリー電気泳動による分析のための方法であって、
前記生体試料の糖化ヘモグロビンにおけるN末端位のアミノ酸に結合しているグルコース残基と特異的に複合体を形成し、かつ前記糖化ヘモグロビンにアルカリ性pHでいくつかの負電荷を与える少なくとも1つの化合物を含む緩衝組成物を使用することを含み、
前記化合物が、2つまたは2つを超える官能基を含み、前記官能基のうちの少なくとも1つが1つまたはいくつかのグルコース残基と特異的に複合体を形成し、それによって、複合体化したグルコース残基ごとに一つの負電荷を与え、
その他の残りの官能基、すなわち、その他の残りの官能基のうちの1つまたはその他の官能基のうちのすべてが前記グルコース残基と複合体を形成せず、かつ、前記グルコース残基にアルカリ性pHで1つまたはいくつかの追加の負電荷を与える、方法。
【請求項２】
ヘモグロビンを含む生体試料に含有されるヘモグロビンA1cのキャピラリー電気泳動による分析のための、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
1つまたはいくつかのグルコース残基と特異的に複合体を形成する前記官能基が、グルコース残基の2つの近接するヒドロキシル基と相互作用する、請求項1または2に記載の方法。
【請求項４】
生体試料の糖化ヘモグロビンのグルコース残基と特異的に複合体を形成し、かつアルカリ性pHで負電荷を与える前記化合物が、1つまたはいくつかのカルボキシレート、カルボキシル、スルホネートおよび/またはスルホニルである、アルカリ性pHでアニオン性基である1つまたはいくつかの基を含む、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
生体試料の糖化ヘモグロビンのグルコース残基と特異的に複合体を形成でき、かつアルカリ性pHで負電荷を与えることができる前記化合物が、少なくとも1つのボロニルおよび/またはボロネート基を含み、
(i)一般式RB(OH)2またはRB(OH)-3(式中、基Rは、直鎖状、分枝状または環状アリールおよび/またはアルキルおよび/またはアラルキル、および/または他の官能基もしくはヘテロ原子および/またはその組合せから選択される少なくとも1つを含み、前記基Rは、糖化ヘモグロビンに、ボロネート基と複合体化したグルコース残基ごとにアルカリ性pHで1つまたはいくつかの負電荷を与える)を有するボロネート化合物、または
(ii)前記ボロネート化合物の塩
である、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記ボロネート化合物が、多置換フェニルボロネートである、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
前記ボロネート化合物が、二置換されているフェニルボロネートである、請求項5または6に記載の方法。
【請求項８】
前記ボロネート化合物が、カルボキシルおよび/またはスルホニル基で二置換されているフェニルボロネートである、請求項7に記載の方法。
【請求項９】
前記基Rが二価酸である、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
前記基Rがジカルボン酸である、請求項9に記載の方法。
【請求項１１】
前記ボロネート化合物が、ジカルボキシフェニルボロン酸である、請求項5から10のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ボロネート化合物が、3,4-ジカルボキシフェニルボロン酸および3,5-ジカルボキシフェニルボロン酸から選択される、請求項5から11のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
生体試料の糖化ヘモグロビンのグルコース残基と特異的に複合体を形成し、かつアルカリ性pHで負電荷を与える化合物の緩衝組成物中の濃度が、生体試料中に存在するすべてのヘモグロビンの総量と比べて、または生体試料中に存在するグルコースを含むすべてのヘモグロビンの総量と比べて、タンパク質の総量に関して化学量論的に過剰である、請求項1から12のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
生体試料の糖化ヘモグロビンのグルコース残基と特異的に複合体を形成し、かつアルカリ性pHで負電荷を与える化合物の緩衝組成物中の濃度が、0.10〜100mMの範囲である、請求項1から13のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記緩衝組成物が、流動遅延剤をさらに含む、請求項1から14のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記流動遅延剤が、脂肪族ジアミンである、請求項15に記載の方法。
【請求項１７】
前記流動遅延剤が、1,3-ジアミノプロパン、1,4-ジアミノブタン(プトレシン)、1,5-ジアミノペンタン(カダベリン)、1-6-ジアミノヘキサン、スペルミンおよびDETAから選択される脂肪族ジアミン、または前記脂肪族ジアミンの誘導体、またはそれらの混合物である、請求項16に記載の方法。
【請求項１８】
前記脂肪族ジアミンの誘導体が、脂肪族ポリアミン、環状ポリアミン、または脂肪族ジアミン塩である、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
前記緩衝組成物中の流動遅延剤の濃度が、0.10〜40mMの範囲である、請求項15から18のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記緩衝組成物が、
8.0〜11.0の範囲のpKaを有する緩衝化合物、および/または
塩基、および/または
塩、および/または
希釈溶液、
をさらに含む、請求項1から19のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記緩衝化合物が、AMP、AMPD、AMPSO、ビシン、CABS、CAPS、CAPSO、CHES、HEPBS、メチルアミン、TABS、TAPS、タウリン、トリシンおよびTrisから選択される双イオン化合物である、請求項20に記載の方法。
【請求項２２】
前記緩衝化合物が、CHES、CAPSまたはCAPSOである、請求項21に記載の方法。
【請求項２３】
前記緩衝組成物中の緩衝化合物の濃度が、20〜500mMの範囲である、請求項20から22のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記緩衝組成物が、9またはそれ以上のpHを有する、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
a)前記緩衝組成物および生体試料を電気泳動キャピラリーに導入する段階と、
b)前記生体試料の成分をキャピラリー電気泳動により分離する段階と
を含む、請求項1から24のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記生体試料の成分を分離するための段階の後に、生体試料中に存在する1つまたはいくつかのヘモグロビンの検出のための段階が続く、請求項25に記載の方法。
【請求項２７】
検出されるヘモグロビンの量に比例する検出シグナルから電気泳動図を作製するための段階をさらに含む、請求項25または26に記載の方法。
【請求項２８】
生体試料中に存在する1つもしくはいくつかのヘモグロビンの量、および/または生体試料中に存在するタンパク質の総量、ヘモグロビンの総量もしくはある種のヘモグロビンの量に対する、生体試料中に存在する1つもしくはいくつかのヘモグロビンの割合を決定するための段階をさらに含む、請求項1から27のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
1つまたはいくつかの標準化されたキャリブレーターと比べた生体試料中に存在する1つまたはいくつかのヘモグロビンの定量化のための段階をさらに含む、請求項1から28のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記生体試料が、血液試料である、請求項1から29のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記生体試料が、
溶血溶液Capillaries(登録商標)Hemoglobin(e)、
溶血溶液Hydragel(登録商標)HbA1c、
溶血溶液MINICAP(登録商標)Hemoglobin(e)、
純水、
界面活性剤が補充された水、および
それらの混合物
により構成される群から選択される溶血溶液に希釈されている、請求項1から30のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
1つまたはいくつかのヘモグロビンを含む生体試料に含有される、少なくとも1つのベータグロビン鎖上でN末端位のアミノ酸に結合しているグルコース残基を含む、1つまたはいくつかの糖化ヘモグロビンのキャピラリー電気泳動による分析に適した、請求項1から24のいずれか一項において規定される緩衝組成物。
【請求項３３】
請求項32に記載の緩衝組成物および使用説明書を含むキット。
【請求項３４】
ヒトもしくは非ヒト哺乳動物における糖尿病の診断において使用するための、および/または、ヒトもしくは非ヒト哺乳動物における血糖バランスをモニターするための、請求項1から24のいずれか一項において規定される緩衝組成物、および／もしくは請求項32に記載の緩衝組成物、ならびに/または請求項33に記載のキット。
【請求項３５】
生体試料の糖化ヘモグロビンのグルコース残基と特異的に複合体を形成でき、かつアルカリ性pHで負電荷を与えることができる化合物を含む緩衝組成物であって、
前記化合物が、
(i)一般式RB(OH)2もしくはRB(OH)-3(式中、基Rは、直鎖状、分枝状または環状アリールおよび/またはアルキル、および/またはアラルキルおよび/または他の官能基もしくはヘテロ原子、および/またはそれらの組合せから選択される少なくとも1つを含み、前記基Rは、糖化ヘモグロビンに、ボロネート基と複合体化したグルコース残基ごとにアルカリ性pHで1つまたはいくつかの負電荷を与える)を有するボロネート化合物、または
(ii)前記ボロネート化合物の塩
である、請求項34に記載の緩衝組成物。
【請求項３６】
生体試料中に存在する他のタンパク質由来の、N末端位のアミノ酸に結合しているグルコース残基を含む少なくとも1つのグロビン鎖を含む、1つまたはいくつかの糖化ヘモグロビンのキャピラリー電気泳動による分離のための、請求項1から14のいずれか一項において規定される、生体試料の糖化ヘモグロビンのグルコース残基と特異的に複合体を形成でき、かつアルカリ性pHでいくつかの負電荷を与えることができる化合物、および/または請求項1から24のいずれか一項において規定される緩衝組成物、および／もしくは請求項32に記載の緩衝組成物、および/または請求項33に記載のキットの使用。
【請求項３７】
生体試料中に存在する少なくとも1つの他のタンパク質由来の、N末端位のアミノ酸に結合しているグルコース残基を含む少なくとも1つのグロビン鎖を含む、1つまたはいくつかの糖化ヘモグロビンのキャピラリー電気泳動による分離のための、請求項36に記載の使用。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
ネイキッドキャピラリーを使用する自由溶液分析法(米国特許第5,599,433号)は、ヘモグロビンに結合している糖錯化剤(ホウ酸塩)および塩基性pH(9〜12のpH)の双性イオン緩衝液(CAPS)を必要とする。記載される条件下で得られるプロファイル(本出願の図1に示されている)は、HbA1(米国特許第5,599,433号にはHbA1cを表すピークとして記載されている)およびHbA0を表すピークの分離はかなり小さいことを示している(実施例1参照)。さらに、精製されたマイナー画分の分析では、HbA1a、A1b画分はHbA1cと同時移動(co-migration)して、最終アッセイ結果を妨げていることを示している(本出願の実施例2および図2参照)。実際、その技法はHbA0とHbA1の画分を分離するが、HbA1画分それ自体を分離しない。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６７】
【図１】米国特許第5,599,433号に記載され、100mMのCAPSおよび300mMのホウ酸を含有する分析緩衝液(pH:11.00、温度:24℃、電圧:6.1kV、すなわち190V/cm、注入:50ミリバール20秒)を使用して正常なヒト血液試料からCE Agilent上で得られる電気泳動図。
【図２】米国特許第5,599,433号に記載され、100mMのCAPSおよび300mMのホウ酸を含有する分析緩衝液(pH:11、温度:24℃、電圧:6.1kV、すなわち190V/cm、注入:50ミリバール20秒)を使用して、糖化ヘモグロビンの異なる精製された画分を含有する基準試料からCE Agilent上で得られるA1a、A1bおよびA1cについての標準電気泳動プロファイル。
【図３】200mMのCAPSOおよび10mMのプトレシンを含有するがホウ酸塩化合物もボロネート化合物も含有しない緩衝組成物(pH:10.20、温度:24℃、電圧:6.1kV、すなわち190V/cm、注入:50ミリバール20秒)を使用して、糖化ヘモグロビンの異なる精製された画分を含有する基準試料からCE Agilent上で得られるA1a、A1bおよびA1cについての標準電気泳動プロファイル。
【図４】200mMのCAPSO、10mMのプトレシンおよび50mMのホウ酸塩を含有する緩衝組成物(pH:10.20、温度:24℃、電圧:6.1kV、すなわち190V/cm、注入:50ミリバール20秒)を使用して、糖化ヘモグロビンの異なる精製された画分を含有する基準試料からCE Agilent上で得られるA1a、A1bおよびA1cについての標準電気泳動プロファイル。
【図５】200mMのCAPSO、10mMのプトレシンおよび50mMの3-カルボキシフェニルボロン酸を含有する緩衝組成物(pH:10.20、温度:24℃、電圧:6.1kV、すなわち190V/cm、注入:50ミリバール20秒)を使用して、糖化ヘモグロビンの異なる精製された画分を含有する基準試料からCE Agilent上で得られるA1a、A1bおよびA1cについての標準電気泳動プロファイル。
【図６】200mMのCAPSO、10mMのプトレシンおよび50mMの3,5-ジカルボキシフェニルボロン酸を含有する緩衝組成物(pH:10.20、温度:24℃、電圧:6.1kV、すなわち190V/cm注入:50ミリバール20秒)を使用して、糖化ヘモグロビンの異なる精製された画分を含有する基準試料からCE Agilent上で得られるA1a、A1bおよびA1cについての標準電気泳動プロファイル。
【図７】200mMのCAPSO、15mMのプトレシンおよび100mMの3,5-ジカルボキシフェニルボロン酸を含有する緩衝組成物(pH:10.20、温度:30℃、電圧:10kV、すなわち310V/cm、注入:50ミリバール20秒)を使用して、糖化ヘモグロビンの異なる精製された画分を含有する基準試料からCE Agilent上で得られるA1a、A1bおよびA1cについての標準電気泳動プロファイル。
【図８】200mMのCHES、20mMのプトレシンおよび30mMの3,5-ジカルボキシフェニルボロン酸を9.40のpHで含有する緩衝組成物を使用して、糖化ヘモグロビンのHbA0および/または異なる精製された画分を含有する基準試料からCE Agilent上で得られる標準電気泳動プロファイルA0、A1a、A1bおよびA1c。石英ガラスキャピラリー、非被膜(温度:34℃、電圧:17.3kV、すなわち520V/cm、注入:50ミリバール20秒)。
【図９】200mMのCHES、20mMのプトレシンおよび30mMの3,4-ジカルボキシフェニルボロン酸を9.40のpHで含有する緩衝組成物を使用して、糖化ヘモグロビンのHbA0および/または異なる精製された画分を含有する基準試料からCE Agilent上で得られる標準電気泳動プロファイルA0、A1a、A1bおよびA1c。石英ガラスキャピラリー、非被膜(温度:34℃、電圧:17.3kV、すなわち520V/cm、注入:50ミリバール20秒)。
【図１０】200mMのCHES緩衝液、20mMのプトレシンおよび30mMの3,5-ジカルボキシフェニルボロン酸を9.40のpHで含有する緩衝組成物を使用して、糖化ヘモグロビンの異なる精製された画分を含有する基準試料からCapillaries(登録商標)(Sebia)上で得られるA1a、A1bおよびA1cについての標準電気泳動プロファイル。石英ガラスキャピラリー、非被膜(温度:34℃、電圧:9.4kV、すなわち520V/cm、注入20ミリバール6秒)。
【図１１】(A)200mMのCAPSO緩衝液、10mMのプトレシンおよび50mMの3,5-ジカルボキシフェニルボロン酸を10.2のpHでまたは(B)200mMのCHES緩衝液、20mMのプトレシンおよび30mMの3,5-ジカルボキシフェニルボロン酸を9.40のpHで含有する緩衝組成物を使用して、溶血溶液(水+1g/LのTriton X100)に6分の1まで希釈された正常なヒト血液試料からCapillaries(登録商標)(Sebia)上で得られる電気泳動図。石英ガラスキャピラリー、非被膜(温度:34℃、電圧:9.4kV、すなわち520V/cm、注入8ミリバール6秒)。
【図１２】A1cとA0ヘモグロビンの分離に対する緩衝組成物中の3,5-ジカルボキシフェニルボロン酸の濃度の影響についての研究(温度:30℃、電圧:10kV、すなわち310V/cm)。
【図１３】200mMのCHES緩衝液、20mMのプトレシンおよび30mMの3,5-ジカルボキシフェニルボロン酸を9.40のpHで含有する緩衝組成物、ならびに石英ガラスキャピラリー、非被膜(温度:34℃、電圧:9.4kV、すなわち520V/cm、注入8ミリバール6秒)を使用して、溶血溶液(水+1g/LのTriton X100)に6分の1まで希釈された、バリアントHbEを含む正常なヒト血液試料からCapillaries(登録商標)(Sebia)上で得られる電気泳動図。
【図１４】200mMのCHES緩衝液、20mMのプトレシンおよび30mMの3,5-ジカルボキシフェニルボロン酸を9.40のpHで含有する緩衝組成物、ならびに石英ガラスキャピラリー、非被膜(温度:34℃、電圧:9.4kV、すなわち520V/cm、注入8ミリバール6秒)を使用して、溶血溶液(水+1g/LのTriton X100)に6分の1まで希釈された対照AFSCからCapillaries(登録商標)(Sebia)上で得られる電気泳動図。
【図１５】200mMのCHES緩衝液、20mMのプトレシンおよび30mMの3,5-ジカルボキシフェニルボロン酸を9.40のpHで含有する緩衝組成物、ならびに石英ガラスキャピラリー、非被膜(温度:34℃、電圧:9.4kV、すなわち520V/cm、注入8ミリバール6秒)を使用して、溶血溶液(水+1g/LのTritonX 100)に6分の1まで希釈された、Fおよびバーツ(Bart's)バリアントを含む正常血液のプールからCapillaries(登録商標)(Sebia)上で得られる電気泳動図。
【図１６】200mMのCHES緩衝液、20mMのプトレシンおよび30mMの3,5-ジカルボキシフェニルボロン酸を9.40のpHで含有する緩衝組成物、ならびに石英ガラスキャピラリー、非被膜(温度:34℃、電圧:9.4kV、すなわち520V/cm、注入8ミリバール6秒)を使用して、溶血溶液(水+1g/LのTriton X100)に6分の1まで希釈された、HbDバリアントを含む正常なヒト血液試料からCapillaries(登録商標)(Sebia)上で得られる電気泳動図。
【図１７】Capillaries(登録商標)(Sebia)分析計を使用するキャピラリー電気泳動によって発明者らにより得られた結果とVariant II Turbo(登録商標)(Bio-Rad)分析計を用いたHPLCにより得られた結果の比較。
【図１８Ａ】Hydrasys(登録商標)(Sebia)自動装置上で実施されたHbA1cのアガロースゲル。トラック1と2:弱い(5.0%)A1cキャリブレーターと強い(10.8%)A1cキャリブレーター。トラック3〜9: 0g/L(基準;トラック3)、1g/L(トラック4)、5g/L(トラック5)、10g/L(トラック6)、20g/L(トラック7)、30g/L(トラック8)および50g/L(トラック9)の濃度のグルコースと一緒に37℃で3時間インキュベートされた正常全血。
【図１８Ｂ】図18Aの試料を用いたCapillaries(登録商標)(Sebia)分析計により得られたキャピラリー電気泳動プロファイル。しかし、ゲル中に目に見える差が存在しなかった(図18A)ので、1g/Lのグルコースを含有する試料について分析は実施されなかった。前記試料は、200mMのCHES緩衝液、20mMのプトレシンおよび30mMの3,5-ジカルボキシフェニルボロン酸を9.40のpHで含有する緩衝組成物、ならびに石英ガラスキャピラリー、非被膜(温度:34℃、電圧:9.4kV、すなわち520V/cm、注入8ミリバール6秒)を使用して、溶血溶液(水+1g/LのTriton X100)に6分の1まで希釈された。
【図１８Ｃ】図18Aおよび18Bにおいて示される血液の分析のために、アガロースゲル上でCapillaries(登録商標)(Sebia)分析計を用いて得られたHbA1cについての値を集約した表を示す。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７１】
緩衝組成物
キャピラリー電気泳動が実施される緩衝組成物は、水、8〜11の範囲のpKaを有する緩衝化合物(場合に応じてCAPS、CAPSOまたはCHES)、pHを目的の値に調整することが可能な塩基、任意の流動遅延剤(プトレシン)、および任意のホウ酸塩化合物(ホウ酸)またはボロネートを含んでいた。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７４】
B.結果
(実施例1)
キャピラリー電気泳動は、米国特許第5,599,433号に記載され、100mMのCAPSおよび300mMのホウ酸、pH11を含有する分析緩衝液を使用して、溶血溶液(脱塩された水に溶解された1g/LのTriton X100)に6分の1まで希釈された正常なヒト血液(ヘモグロビンHbA0、HbA1およびHbA2を含む)から実施された。得られた電気泳動図は図1に示されている。ヘモグロビンのピーク間の分離は不十分である。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７５】
(実施例2)
キャピラリー電気泳動は、米国特許第5,599,433号に記載され、100mMのCAPSおよび300mMのホウ酸、pH10.20を含有する分析緩衝液を使用して、糖化ヘモグロビンの異なる精製された画分(画分A0およびA1cまたは画分A0、A1bおよびA1a)を含有する標準試料(Exocell、USA)から実施された。得られたA1a、A1bおよびA1cの標準電気泳動プロファイルは図2に示されている。HbA1cとHbA1a、A1bヘモグロビン間の分離は明らかに不十分であり、HbA1cの電気泳動ピークはHbA1a/HbA1bピークと重なっている。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７６】
(実施例3)
キャピラリー電気泳動は、200mMのCAPSOおよび10mMのプトレシン(pH 10.20)を含有するがホウ酸塩化合物もボロネート化合物も含有しない緩衝組成物を使用して、糖化ヘモグロビンの異なる精製された画分(画分A0およびA1cまたは画分A0、A1bおよびA1a)を含有する標準試料(Exocell、USA)から実施された。得られたA1a、A1bおよびA1cの標準電気泳動プロファイルは図3に示されている。HbA1cに対応するピークはHbA0のピークと同時移動した。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７７】
(実施例4)
キャピラリー電気泳動は、200mMのCAPSO、10mMのプトレシンおよび50mMのホウ酸塩(pH 10.20)を含有する緩衝組成物を使用して、糖化ヘモグロビンの異なる精製された画分(画分A0およびA1cまたは画分A0、A1bおよびA1a)を含有する標準試料(Exocell、USA)から実施された。得られたA1a、A1bおよびA1cについての標準電気泳動プロファイルは図4に示されている。HbA1cに対応するピークはHbA0とHbA1a/HbA1bに対応するピークの間にあり、他のHbA1に対応するピークに近すぎて、HbA1cの信頼できるアッセイをすることができない。