【手続補正書】
【提出日】平成24年11月6日(2012.11.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
うま味物質またはうま味調節物質の少なくとも１つの化合物と結合可能なＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質であって、
配列番号２と、少なくとも９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ１ポリペプチド、および
配列番号４と、少なくとも９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ３ポリペプチド、
から選択される１または２以上のＣＳＲ：：Ｔ１Ｒポリペプチドを含み、
該タンパク質が、ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ１ホモマー性キメラタンパク質、ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ１／ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ３ヘテロダイマー性キメラタンパク質、ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ１／Ｔ１Ｒ３ヘテロダイマー性キメラタンパク質およびＴ１Ｒ１／ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ３ヘテロダイマー性キメラタンパク質からなる群から選択される、前記ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質。
【請求項２】
ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ１／ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ３ヘテロダイマー性キメラタンパク質、ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ１／Ｔ１Ｒ３ヘテロダイマー性キメラタンパク質およびＴ１Ｒ１／ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ３ヘテロダイマー性キメラタンパク質からなる群から選択されるヘテロダイマー性タンパク質の形態の２つのポリペプチドサブユニットを含み、
ヘテロダイマーの該Ｔ１Ｒ１サブユニットが、配列番号８と、少なくとも９０％以上の配列同一性を有する、本質的に相同なポリペプチドを含み、
ヘテロダイマーの該Ｔ１Ｒ３サブユニットが、配列番号１０と、少なくとも９０％以上の配列同一性を有する、本質的に相同なポリペプチドを含む、
請求項１に記載のＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質。
【請求項３】
ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ１ホモマー性キメラタンパク質である、請求項１に記載のＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質。
【請求項４】
ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ１／ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ３ヘテロダイマー性キメラタンパク質である、二つのポリペプチドサブユニットを含む請求項２に記載のＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質。
【請求項５】
請求項１において定義されたＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質を産生する方法であって、ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質をコードする発現ベクターを含む宿主細胞を、発現に十分な条件下で培養し、それによってＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質を形成し、任意に細胞からそれを回収するステップを含む、前記方法。
【請求項６】
味覚細胞中のうま味シグナリングを調節する剤を同定する方法であって、該方法が、
（ｉ）うま味刺激およびカルシウム刺激から選択される刺激に応答する、ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質を発現する細胞と剤とを接触し、それによって、任意に他の剤の存在下で、機能応答を提供すること、および
（ｉｉ）少なくとも１つの剤が、前記細胞中の前記ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質の機能応答に影響するかどうかを、前記細胞中の少なくとも１つの機能応答によって決定すること、
のステップを含み、前記ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質が請求項１において定義される、前記方法。
【請求項７】
細胞が、Ｇタンパク質もまた発現する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
Ｇタンパク質が、Ｇａｑ−ガストデューシンと実質的に相同なキメラＧタンパク質である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
Ｇタンパク質が、キメラＧタンパク質Ｇアルファ１６−ガストデューシン４４である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
ステップ（ｉｉ）が、細胞内メッセンジャーの変化または細胞内メッセンジャーに起因する変化を計測することによって行われる、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
機能応答が、ＩＰ３およびカルシウム２＋から選択される細胞内メッセンジャーの変化を計測することによって決定される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
細胞が、真核細胞、酵母細胞、昆虫細胞、哺乳類細胞、両生類細胞、ぜん虫細胞およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項１３】
細胞が、哺乳類細胞である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
細胞が、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａおよびＨＥＫ−２９３細胞からなる群から選択される哺乳類細胞である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ステップ（ｉ）が、ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質と試験剤とをカルシウムの存在下で接触させることをさらに含む、請求項６に記載の方法。
【請求項１６】
カルシウムが、塩化カルシウムの形態で提供される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
試験剤をＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質の調節物質として同定するために組み合わせて利用される、
（ｉ）請求項１において定義されるＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質を発現する組換え細胞、および
（ｉｉ）ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質のアゴニスト、
を含むキット。
【請求項１８】
請求項１７に記載のキットを使用する方法であって、
（ｉ）ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質を発現する組換え細胞を成長させること、
（ｉｉ）アゴニストの存在下、適切な濃度で試験剤を添加すること、および
（ｉｉｉ）試験剤の存在下および非存在下での応答を比較することにより、細胞の機能応答の変化を決定し、その結果、試験剤がＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質の調節物質であることが同定されること
を含む、前記方法。
【請求項１９】
請求項１において定義されるＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質を調節する剤を同定する方法であって、該方法が、
（ｉ）リガンドのＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質への結合に応答して変化するパラメータを計測すること、および
（ｉｉ）任意にリガンドの存在下で、試験剤に応答したパラメータの、ネガティブコントロールと比較した変化を決定し、それによりリガンドを含む調節物質を同定すること
のステップを含む、前記方法。
【請求項２０】
リガンドが、カルシウム、カルシ  ウムイオン、および塩化カルシウムからなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
ステップ（ｉ）が、蛍光分光法、ＮＭＲ分光法、１または２以上の吸収、屈折率の計測、流体力学法、クロマトグラフィ、溶解度計測、生物化学的方法からなる群より選択される方法で行われ、該方法が、溶液、二重膜、固相への連結、単脂質膜中、膜上への結合、および小胞内からなる群より選択される適切な環境においてＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質の特性を計測する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
うま味調節物質が、うま味受容体のリガンド、アゴニスト、部分的アゴニスト、アンタゴニスト、逆アゴニスト、阻害物質または増強物質である、請求項１に記載のＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質。
【請求項２３】
うま味物質またはうま味調節物質の少なくとも１つの化合物と結合可能なＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ１キメラタンパク質をコードする核酸であって、１または２以上の、
配列番号２と少なくとも９０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ１ポリペプチド、または、配列番号４と、少なくとも９０％以上の配列同一性を有するＣＳＲ：：Ｔ１Ｒ３ポリペプチドをコードする、配列番号１と少なくとも９０％以上の配列同一性を有する、ヌクレオチド配列を含む核酸
を含み、
該核酸が、任意に配列番号６（ＨＳＶタグ）を末端またはその近傍に含んで、対応するタンパク質のＣ末端を形成する、前記核酸。
【請求項２４】
請求項２３において定義される核酸を含む、発現ベクター。
【請求項２５】
請求項２４において定義される発現ベクターをトランスフェクトされた、宿主細胞。
【請求項２６】
ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質およびＧタンパク質を安定的に発現し、Ｇタンパク質は任意にＧａｑ−ガストデューシンと実質的に相同である、請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項２７】
ＣＳＲ：：Ｔ１Ｒキメラタンパク質およびＧタンパク質を一時的に発現し、Ｇタンパク質は任意にＧａｑ−ガストデューシンと実質的に相同である、請求項２５に記載の宿主細胞。
【請求項２８】
うま味調節物質が、うま味受容体のリガンド、アゴニスト、部分的アゴニスト、アンタゴニスト、逆アゴニスト、阻害物質または増強物質である、請求項２３に記載の核酸。