【誤訳訂正書】
【提出日】平成26年10月30日(2014.10.30)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７０】
発色団試薬への酸化防止剤の添加は、試薬の色の安定性をさらに経時的に改善し得ると仮定した。驚くべきことに、還元型グルタチオン(発色アッセイにおいて一般的に見られない成分)の添加は、発色団試薬の経時的な発色を防止することを成功裏に示し(これは、キシレノール自己酸化防止に部分的に起因する可能性が高い)、それによって試薬の安定性を改善した。グルタチオンはスカベンジャーとしても機能し、したがって、酸化カップリング反応において潜在的に干渉し得る試薬中ラジカルを除去し得る。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７１】
ヒドロキシルアミン、3,3'-チオジプロピオン酸、チオ尿素または還元型グルタチオンを用いて試験を実施した。これらの試薬の経時的な変色について定性的かつ定量的にモニタリングした。該試薬への還元型グルタチオンの添加は経時的な発色防止において最も効果的であった。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７２】
したがって、R2は任意に酸化防止剤を含む。任意の適切な酸化防止剤を本発明に従い用い得る。一実施形態では、R2は、酸化防止剤を約0.005g/L〜約5.00g/L、または約0.05g/L〜約5g/L、または約0.1g/L〜約1g/Lの濃度で含む。一実施形態では、酸化防止剤はグルタチオンである。還元型グルタチオンが特に好ましい。一実施形態では、R2は還元型グルタチオンを約0.5g/Lの濃度で含む。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性試料中のアセトアミノフェン濃度を決定する方法であり、該方法は、下記工程:
アセトアミノフェンをアリールアシルアミダーゼと接触させることにより、アセトアミノフェンを加水分解してp-アミノフェノールを形成させる工程;
適切な触媒の存在下で前記p-アミノフェノールをキシレノール発色団と酸化カップリングさせて着色生成物を形成させる工程、ここで前記触媒は弱酸化剤である;および
前記形成された着色生成物の量を決定する工程(前記形成された着色生成物の量は前記水性試料中に初めに存在するアセトアミノフェン量に比例する)を含み、
前記水性試料中の治療濃度のN-アセチルシステイン(NAC)の存在下もしくは不在下において信頼性のある、
水性試料中アセトアミノフェン濃度を決定する方法。
【請求項２】
前記キシレノール発色団が2,5-ジメチルフェノール、2,6-ジメチルフェノールおよび2,3-ジメチルフェノールからなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記キシレノール発色団が2,5-ジメチルフェノールであり、かつ前記触媒が無水物または水和物のMnCl2である、請求項1または2に記載の方法。
【請求項４】
前記水性試料が血清または血漿である、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
水性試料中のアセトアミノフェン濃度を決定するアッセイであり、該アッセイは、下記工程:
前記水性試料を、アリールアシルアミダーゼ酵素および適切な希釈剤を含む第一試薬(R1)と接触させて加水分解液を形成する工程;
任意に、前記加水分解液を希釈する工程;
前記加水分解液をインキュベートして加水分解反応を起こし、前記アセトアミノフェンをp-アミノフェノールに変換させる工程;
前記加水分解液を、キシレノール発色団および適切な希釈剤を含む第二試薬(R2)と接触させて、酸化カップリング溶液を形成させる工程;
前記酸化カップリング溶液をインキュベートして、適切な触媒の存在下、前記キシレノール発色団がp-アミノフェノールとカップリングする酸化カップリング反応を起こして着色生成物を形成させる工程、ここで前記適切な触媒は弱酸化触媒である;ならびに
前記形成された着色生成物の量を決定する工程(形成された着色生成物量は水性試料中に初めに存在するアセトアミノフェン量に比例する)を含み、
該アッセイは前記水性試料中の治療濃度のN-アセチルシステイン(NAC)の存在下または不在下で信頼性のある、
水性試料中のアセトアミノフェン濃度を決定するアッセイ。
【請求項６】
R1がアリールアシルアミダーゼを約10U/L〜約5000U/Lの濃度で含む、請求項5に記載のアッセイ。
【請求項７】
前記キシレノール発色団が2,5-ジメチルフェノール、2,6-ジメチルフェノールおよび2,3-ジメチルフェノールからなる群から選択される、請求項5または6に記載のアッセイ。
【請求項８】
前記触媒が弱酸化触媒であり、かつ前記触媒がR1中に約0.0005g/L〜約1.000g/Lの濃度で存在する、請求項5から7のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項９】
R2が2,5-ジメチルフェノールを約0.075g/L〜約115g/Lの濃度で含み、および/または前記触媒がMnCl2・4H2OでR1中に約2.5g/L〜約20g/Lの濃度で存在する、請求項5から8のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１０】
R2がさらに還元型グルタチオンを約0.005g/L〜約5.000g/Lの濃度で含む、請求項5から9のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１１】
R1がさらに、1つまたは複数のタンパク質可溶化剤、タンパク安定化剤、酵素安定化剤、金属キレート剤、緩衝液、界面活性剤、pH調整剤、防腐剤、または賦形剤を含む、請求項5から10のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１２】
前記酵素安定化剤がPVP-40、BSAフラクションV、トレハロース、ナトリウムp-ヒドロキシベンゾアート、p-ヒドロキシ安息香酸およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項11に記載のアッセイ。
【請求項１３】
R2がさらに、1つまたは複数の緩衝液、界面活性剤、pH調整剤、防腐剤、酸化防止剤または賦形剤を含む、請求項5から12のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１４】
前記希釈剤が脱イオン水であり、前記加水分解液が加水分解反応の前に希釈剤により約1:1希釈される、請求項5から13のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１５】
R1がアリールアシルアミダーゼ約932.7U/LおよびMnCl2・4H2O約0.0525g/Lを含み;ならびにR2が2,5-ジメチルフェノール約7.5g/Lおよび還元型グルタチオン約0.500g/Lを含む、請求項5から14のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１６】
前記加水分解反応および前記酸化カップリング反応がそれぞれ、温度約37℃で約3〜10分間行われ、前記加水分解反応がpH 約8.6で行われ、前記酸化カップリング反応がpH 約10.8で行われる、請求項5から15のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１７】
前記アセトアミノフェン濃度が、前記加水分解反応終了時と前記酸化カップリング反応終了時との吸光度差を得ること;ならびに標準液もしくは一連の標準液との差を比較することによって決定され、該吸光度は波長約610nm〜665nmで測定される、請求項5から16のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項１８】
前記吸光度が波長約660nmで測定される、請求項17に記載のアッセイ。
【請求項１９】
前記水性試料が血清または血漿である、請求項5から18のいずれか一項に記載のアッセイ。
【請求項２０】
水性試料中のアセトアミノフェン濃度を決定するためのキットであり、該キットは:
アセトアミノフェンをp-アミノフェノールに加水分解するためのアリールアシルアミダーゼを含む第一試薬(R1)を含む第一容器;
p-アミノフェノールとの酸化カップリング用に、2,5-ジメチルフェノール、2,6-ジメチルフェノールおよび2,3-ジメチルフェノールからなる群から選択されるキシレノール発色団を含む第二試薬(R2)を含む第二容器;
任意に、アセトアミノフェン標準液;ならびに
請求項5に従いアセトアミノフェン決定アッセイを実施するための説明書を含み、
R1がさらに前記キシレノール発色団と前記p-アミノフェノールの酸化カップリングを触媒するために適した触媒、ここで該触媒は弱酸化剤である
を含む水性試料中のアセトアミノフェン濃度を決定するためのキット。
【請求項２１】
前記キシレノール発色団が2,5-ジメチルフェノールであり、前記触媒が弱酸化剤であり、ならびに前記試薬が液状安定試薬である、請求項20に記載のキット。
【請求項２２】
水性試料中のp-アミノフェノール濃度を決定する方法であり、該方法は、下記工程:
p-アミノフェノールを、2,5-ジメチルフェノールおよび2,3-ジメチルフェノールからなる群から選択されるキシレノール発色団と触媒の存在下で酸化カップリングさせて着色生成物を形成させる工程(触媒は弱酸化剤である);ならびに
前記形成された着色生成物の量を決定する工程(前記形成された着色生成物の量は前記水性試料中に初めに存在するp-アミノフェノール量に比例する)
を含む水性試料中のp-アミノフェノール濃度を決定する方法。
【請求項２３】
前記触媒がMnCl2水和物であり、および前記キシレノール発色団が2,5-ジメチルフェノールである、請求項22に記載の方法。