【手続補正書】
【提出日】平成23年2月7日(2011.2.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｚ１−ＰＭＢ−Ｚ２
（式中、
Ｚ１およびＺ２はそれぞれ独立して、複素環部分を含んでなる多環基を表し、
ＰＭＢは架橋ポリシクロ部分を含んでなるポリメチン架橋を表す）で表される化合物およびそれらの塩類。
【請求項２】
前記化合物が蛍光色素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＰＭＢが架橋ビシクロ部分を含んでなる、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
前記化合物が、
【化１】
2010518236.tif 000001
（式中、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、Ｃ（ＣＨ２Ｋ１）（ＣＨ２Ｋ２）（式中、Ｋ１およびＫ２はそれぞれ独立して、ＨおよびＣ１〜Ｃ２０アルキルからなる群から選択され、Ｋ１およびＫ２は場合により一緒になってサイクリック環の一部を形成できる）、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択され、
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜２０、アルキル、アルキルアリール、および−Ｒ９Ｔ１（式中、Ｒ９は独立してＣ１〜Ｃ２０アルキル、アリール、アルキルアリール、および−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｙＣＨ２（式中、ｙは１〜１００の整数から選択される）からなる群から選択され、Ｔ１は生体分子と共有結合を形成できるリンカー部分である）からなる群から選択され、
Ｘ３はＨ、ハロゲン、−Ｔ２Ｒ１０（式中、Ｔ２はＳ、Ｏ、およびＮＲ’からなる群から選択され、Ｒ１０はＨ、Ｃ１〜２０アルキル、アリール、アリールアルキルからなる群から選択される）、−Ｔ２Ｒ９Ｔ１、および−Ｒ９Ｔ１からなる群から選択され、
Ｘ４およびＸ５はそれぞれ独立して、（ＣＫ１Ｋ２）ｉ（式中、ｉは１〜７の整数から選択される）、ＮＲ’（式中、Ｒ’はＨおよびアルキルからなる群から選択される）、−ＮＲ’Ｒ９Ｔ１、Ｏ、およびＳからなる群から選択され、
Ｗ１およびＷ２はそれぞれアリール部分の一部としての非金属原子を表し、
ｎ１、およびｎ２はそれぞれ独立して、０〜４から選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、カルボキシレート、カルボン酸、カルボン酸エステル、アミン、アミド、スルホンアミド、ヒドロキシル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、アルキル、スルホン酸、スルホン酸塩、ホスホリル、ＳＯ２ＮＲ７−Ｑ−ＣＨＲ８−［（ＣＨ２）ｍ−Ｙ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｏ）ｋ］ｈ（ＣＨ２）ｄＴ１
（式中、
Ｒ７は独立してＣ１〜Ｃ２０アルキル、アリール、アルキルアリールからなる群から選択され、
Ｒ８は独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、アリール、アルキルアリール、およびアリールアルキルからなる群から選択され、
Ｒ７およびＲ８は合わさるとき、場合により置換されていてもよい４、５、６または７員環の飽和または不飽和環を形成し、
Ｑは独立して結合、カルボニル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、およびＣ１〜Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択され
Ｙは独立して結合、−ＳＯ２ＮＲ１−、−Ｏ−、−ＣＯＯ−、および−ＣＯＮＲ’−からなる群から選択され、
ｈは０〜７０から選択される整数であり、
ｋは０または１であり、
ｄは０〜１２の整数であり、
ｍは０〜１２の整数であり、
ｐは０〜１２の整数である）、
および−Ｒ９Ｔ１からなる群から選択される）によって表される、請求項３に記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
前記分子が約５００ｎｍ〜約１１００ｎｍの範囲の吸収および放射波長を有する、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
前記分子が約６００ｎｍ〜約９００ｎｍの範囲の吸収および放射波長を有する、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｘ３が、Ｏ−（ＣＨ２）ｊ−Ｔ１、Ｓ−（ＣＨ２）ｊ−Ｔ１、Ｏ−Ｐｈ−（ＣＨ２）ｊ−Ｔ１、Ｓ−Ｐｈ−（ＣＨ２）ｊ−Ｔ１
（式中、
ｊは０〜６の整数であり、
Ｐｈはフェニルである）からなる群から選択される、請求項４に記載の化合物。
【請求項８】
Ｔ１が、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、カルボキシル、−ＣＯＣｌ、−（ＣＯ）Ｏ（ＣＯ）Ｒ１３（式中、Ｒ１３はＨ、アルキル、およびアリールからなる群から選択される）、−ＣＯＮＨＮＨ２、置換および非置換Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、置換および非置換Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル、ニトロ−またはフルオロ−フェノールエステル、アジド、−ＮＣＳ、−ＣＨＯ、アジド、−ＣＯＣＨ２Ｉ、ホスホラミダイト、フタルアミド、およびマレイミドからなる群から選択される、請求項４または７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｘ４が−ＣＨ２−ＣＨ２−であり、Ｘ５が−ＣＨ２、−ＮＣＨ３、および−Ｃ（ＣＨ３）２からなる群から選択される、請求項４に記載の化合物。
【請求項１０】
ｎ１、およびｎ２が１である、請求項４に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｗ１およびＷ２が同一である、請求項４に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｗ１およびＷ２が、
【化２】
2010518236.tif 000002
からなる群から選択される、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｘ１およびＸ２がＣ（ＣＨ３）２である、請求項４に記載の化合物。
【請求項１４】
式１１〜２２、
【化３】
2010518236.tif 000003
【化４】
2010518236.tif 000004
（式中、
Ｔ２はＯまたはＳであり、
Ｘ５はＮ−ＭｅまたはＣＨ２であり、
Ｒ１１はＳＯ３Ｈ、ＣＯＯＨ、ＯＨ、ＳＨ、およびＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ１２はＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＣＳ、（ＣＨ２）ｋＣＯＯＨ（式中、ｋは０〜６の整数である）からなる群から選択される）のいずれか１つを有する、請求項４に記載の化合物、およびその塩。
【請求項１５】
Ｚ１、Ｚ２またはＰＭＢが、生体分子と共有結合を形成できるリンカー部分をさらに含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
前記蛍光分子が生体適合性である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
一般構造式４０および４１、
【化５】
2010518236.tif 000005
（式中、
Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５については請求項４に定義されるとおりであり、Ｐｈはフェニルである）で表される化合物。
【請求項１８】
Ｘ４およびＸ５がそれぞれ独立して、ＣＨ２−ＣＨ２、ＮＭｅ、およびＣＭｅ２からなる群から選択される、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
式４２〜４５、
【化６】
2010518236.tif 000006
で表される構造のいずれかを有する、請求項１７に記載の化合物。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の蛍光色素化合物と化学的に結合する生体分子を含んでなる、蛍光性生体分子。
【請求項２１】
前記生体分子が細胞、タンパク質または核酸である、請求項２０に記載の蛍光性生体分子。
【請求項２２】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の蛍光色素化合物を含む、生体内での光学的イメージングのための組成物であって、
前記蛍光色素化合物は対象に投与され、および、前記対象中に分布され、または生物学的標的と接触されもしくは反応されること可能とし、
前記対象は、前記化合物が吸収できる波長の光に曝露され、そして、
前記蛍光色素化合物によって放出される光学信号が検出されることを特徴とする、組成物。
【請求項２３】
前記化合物によって放出される前記信号を使用して画像を構築する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記画像が断層画像である、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記断層画像が、磁気共鳴またはＸ線コンピュータ断層撮影によって得られる画像と位置合わせされる、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記投与、分布、曝露および検出を所定の間隔で反復して、経時的に前記対象における前記蛍光性化合物の放出信号を評価できるようにすることを特徴とする、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２７】
前記対象が動物またはヒトである、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２８】
信号特性が識別可能である２つ以上の化合物を前記対象に投与することを特徴とする、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２９】
前記曝露および検出が、内視鏡、カテーテル、断層撮影システム、平面イメージングシステム、ハンドヘルド光学イメージングシステム、または術中顕微鏡を使用して実施される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項３０】
前記蛍光色素化合物によって放出される信号の存在、不在、またはレベルが疾患状態を示す、請求項２２に記載の組成物。
【請求項３１】
前記光学信号が検出された後に、疾患が検出されることを特徴とする、請求項２２に記載の組成物。
【請求項３２】
前記光学信号が検出された後に、疾患がモニターされることを特徴とする、請求項２２に記載の組成物。
【請求項３３】
前記疾患が、骨疾患、癌、心血管疾患、皮膚疾患、公害病、免疫疾患、感染症、炎症、遺伝性疾患、代謝疾患、神経変性疾患、眼疾患、および呼吸器疾患からなる群から選択される、請求項３０、３１または３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記疾患が炎症性疾患である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３５】
前記疾患が癌である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３６】
前記疾患が心血管疾患である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３７】
前記蛍光色素化合物が細胞に化学的に結合される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項３８】
前記蛍光色素化合物によって放出される前記信号を使用して、細胞の輸送および局在化をモニターし、または細胞治療法の有効性を評価する、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３９】
ａ）サンプルを、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の蛍光色素化合物に接触させるステップと、
ｂ）前記蛍光色素化合物を生物学的標的によって活性化させ、またはそれに結合させるステップと、
ｃ）場合により非結合蛍光色素化合物を除去するステップと、
ｄ）前記サンプルを、前記蛍光色素化合物が吸収できる波長の光に曝すステップと、
ｅ）前記蛍光色素化合物から放出される信号を検出し、それによって前記蛍光色素化合物が前記生物学的標的によって活性化され、またはそれに結合したかどうかを判定するステップと、
を含んでなる、生体外での光学的イメージング方法。
【請求項４０】
前記サンプルが生物学的サンプルである、請求項３９に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
別の態様では、本発明は、生体外での光学的イメージング方法を提供する。本方法は、（ａ）例えば生物学的サンプルなどのサンプルを本発明の蛍光色素化合物に接触させるステップと、（ｂ）蛍光色素化合物を生物学的標的によって活性化させ、またはそれに結合させるステップと、（ｃ）場合により非結合蛍光色素化合物を除去するステップと、（ｄ）サンプルを例えば蛍光色素化合物が吸収できる波長の光などの電磁放射に曝すステップと、（ｅ）蛍光色素化合物から放出される信号を検出し、それによって蛍光色素化合物が生物学的標的によって活性化され、またはそれに結合したかどうかを判定するステップとを含んでなる。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
Ｚ１−ＰＭＢ−Ｚ２
（式中、
Ｚ１およびＺ２はそれぞれ独立して、複素環部分を含んでなる多環基を表し、
ＰＭＢは架橋ポリシクロ部分を含んでなるポリメチン架橋を表す）で表される化合物およびそれらの塩類。
（項目２）
前記化合物が蛍光色素である、項目１に記載の化合物。
（項目３）
ＰＭＢが架橋ビシクロ部分を含んでなる、項目１または２に記載の化合物。
（項目４）
前記化合物が、
【化１】
2010518236.tif 000007
（式中、
Ｘ１およびＸ２はそれぞれ独立して、Ｃ（ＣＨ２Ｋ１）（ＣＨ２Ｋ２）（式中、Ｋ１およびＫ２はそれぞれ独立して、ＨおよびＣ１〜Ｃ２０アルキルからなる群から選択され、Ｋ１およびＫ２は場合により一緒になってサイクリック環の一部を形成できる）、Ｏ、Ｓ、およびＳｅからなる群から選択され、
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１〜２０、アルキル、アルキルアリール、および−Ｒ９Ｔ１（式中、Ｒ９は独立してＣ１〜Ｃ２０アルキル、アリール、アルキルアリール、および−（ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｙＣＨ２（式中、ｙは１〜１００の整数から選択される）からなる群から選択され、Ｔ１は生体分子と共有結合を形成できるリンカー部分である）からなる群から選択され、
Ｘ３はＨ、ハロゲン、−Ｔ２Ｒ１０（式中、Ｔ２はＳ、Ｏ、およびＮＲ’からなる群から選択され、Ｒ１０はＨ、Ｃ１〜２０アルキル、アリール、アリールアルキルからなる群から選択される）、−Ｔ２Ｒ９Ｔ１、および−Ｒ９Ｔ１からなる群から選択され、
Ｘ４およびＸ５はそれぞれ独立して、（ＣＫ１Ｋ２）ｉ（式中、ｉは１〜７の整数から選択される）、ＮＲ’（式中、Ｒ’はＨおよびアルキルからなる群から選択される）、−ＮＲ’Ｒ９Ｔ１、Ｏ、およびＳからなる群から選択され、
Ｗ１およびＷ２はそれぞれアリール部分の一部としての非金属原子を表し、
ｎ１、およびｎ２はそれぞれ独立して、０〜４から選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、カルボキシレート、カルボン酸、カルボン酸エステル、アミン、アミド、スルホンアミド、ヒドロキシル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、アルキル、スルホン酸、スルホン酸塩、ホスホリル、ＳＯ２ＮＲ７−Ｑ−ＣＨＲ８−［（ＣＨ２）ｍ−Ｙ−（ＣＨ２）ｐ−（Ｏ）ｋ］ｈ（ＣＨ２）ｄＴ１
（式中、
Ｒ７は独立してＣ１〜Ｃ２０アルキル、アリール、アルキルアリールからなる群から選択され、
Ｒ８は独立してＨ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、アリール、アルキルアリール、およびアリールアルキルからなる群から選択され、
Ｒ７およびＲ８は合わさるとき、場合により置換されていてもよい４、５、６または７員環の飽和または不飽和環を形成し、
Ｑは独立して結合、カルボニル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、およびＣ１〜Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択され
Ｙは独立して結合、−ＳＯ２ＮＲ１−、−Ｏ−、−ＣＯＯ−、および−ＣＯＮＲ’−からなる群から選択され、
ｈは０〜７０から選択される整数であり、
ｋは０または１であり、
ｄは０〜１２の整数であり、
ｍは０〜１２の整数であり、
ｐは０〜１２の整数である）、
および−Ｒ９Ｔ１からなる群から選択される）によって表される、項目３に記載の化合物またはその塩。
（項目５）
前記分子が約５００ｎｍ〜約１１００ｎｍの範囲の吸収および放射波長を有する、項目４に記載の化合物。
（項目６）
前記分子が約６００ｎｍ〜約９００ｎｍの範囲の吸収および放射波長を有する、項目５に記載の化合物。
（項目７）
Ｘ３が、Ｏ−（ＣＨ２）ｊ−Ｔ１、Ｓ−（ＣＨ２）ｊ−Ｔ１、Ｏ−Ｐｈ−（ＣＨ２）ｊ−Ｔ１、Ｓ−Ｐｈ−（ＣＨ２）ｊ−Ｔ１
（式中、
ｊは０〜６の整数であり、
Ｐｈはフェニルである）からなる群から選択される、項目４に記載の化合物。
（項目８）
Ｔ１が、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、カルボキシル、−ＣＯＣｌ、−（ＣＯ）Ｏ（ＣＯ）Ｒ１３（式中、Ｒ１３はＨ、アルキル、およびアリールからなる群から選択される）、−ＣＯＮＨＮＨ２、置換および非置換Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、置換および非置換Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル、ニトロ−またはフルオロ−フェノールエステル、アジド、−ＮＣＳ、−ＣＨＯ、アジド、−ＣＯＣＨ２Ｉ、ホスホラミダイト、フタルアミド、およびマレイミドからなる群から選択される、項目４または７に記載の化合物。
（項目９）
Ｘ４が−ＣＨ２−ＣＨ２−であり、Ｘ５が−ＣＨ２、−ＮＣＨ３、および−Ｃ（ＣＨ３）２からなる群から選択される、項目４に記載の化合物。
（項目１０）
ｎ１、およびｎ２が１である、項目４に記載の化合物。
（項目１１）
Ｗ１およびＷ２が同一である、項目４に記載の化合物。
（項目１２）
Ｗ１およびＷ２が、
【化２】
2010518236.tif 000008
からなる群から選択される、項目１１に記載の化合物。
（項目１３）
Ｘ１およびＸ２がＣ（ＣＨ３）２である、項目４に記載の化合物。
（項目１４）
式１１〜２２、
【化３】
2010518236.tif 000009
【化４】
2010518236.tif 000010
（式中、
Ｔ２はＯまたはＳであり、
Ｘ５はＮ−ＭｅまたはＣＨ２であり、
Ｒ１１はＳＯ３Ｈ、ＣＯＯＨ、ＯＨ、ＳＨ、およびＮＨ２からなる群から選択され、
Ｒ１２はＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＣＳ、（ＣＨ２）ｋＣＯＯＨ（式中、ｋは０〜６の整数である）からなる群から選択される）のいずれか１つを有する、項目４に記載の化合物、およびその塩。
（項目１５）
Ｚ１、Ｚ２またはＰＭＢが、生体分子と共有結合を形成できるリンカー部分をさらに含む、項目１に記載の化合物。
（項目１６）
前記蛍光分子が生体適合性である、項目１〜１５のいずれか一項に記載の化合物。
（項目１７）
一般構造式４０および４１、
【化５】
2010518236.tif 000011
（式中、
Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５については項目４に定義されるとおりであり、Ｐｈはフェニルである）で表される化合物。
（項目１８）
Ｘ４およびＸ５がそれぞれ独立して、ＣＨ２−ＣＨ２、ＮＭｅ、およびＣＭｅ２からなる群から選択される、項目１７に記載の化合物。
（項目１９）
式４２〜４５、
【化６】
2010518236.tif 000012
で表される構造のいずれかを有する、項目１７に記載の化合物。
（項目２０）
項目１〜１９のいずれか一項に記載の蛍光色素化合物と化学的に結合する生体分子を含んでなる、蛍光性生体分子。
（項目２１）
前記生体分子が細胞、タンパク質または核酸である、項目２０に記載の蛍光性生体分子。
（項目２２）
ａ）項目１〜１９のいずれか一項に記載の蛍光色素化合物を対象に投与するステップと、
ｂ）前記蛍光色素化合物を前記対象中に分布させ、または生物学的標的と接触させもしくは反応させるステップと、
ｃ）前記対象を、前記化合物が吸収できる波長の光に曝すステップと、
ｄ）前記蛍光色素化合物によって放出される光学信号を検出するステップと、
を含んでなる、生体内での光学的イメージング方法。
（項目２３）
前記化合物によって放出される前記信号を使用して画像を構築する、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記画像が断層画像である、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記断層画像が、磁気共鳴またはＸ線コンピュータ断層撮影によって得られる画像と位置合わせされる、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
ステップ（ａ）〜（ｄ）を所定の間隔で反復して、経時的に前記対象における前記蛍光性化合物の放出信号を評価できるようにする、項目２２に記載の方法。
（項目２７）
前記対象が動物またはヒトである、項目２２に記載の方法。
（項目２８）
ステップ（ａ）において、その信号特性が識別可能である２つ以上の化合物を前記対象に投与する、項目２２に記載の方法。
（項目２９）
ステップ（ｃ）および（ｄ）が、内視鏡、カテーテル、断層撮影システム、平面イメージングシステム、ハンドヘルド光学イメージングシステム、または術中顕微鏡を使用して実施される、項目２２に記載の方法。
（項目３０）
前記蛍光色素化合物によって放出される信号の存在、不在、またはレベルが疾患状態を示す、項目２２に記載の方法。
（項目３１）
ステップｄの後に、疾患を検出するステップをさらに含んでなる、項目２２に記載の方法。
（項目３２）
ステップｄの後に、疾患をモニターするステップをさらに含んでなる、項目２２に記載の方法。
（項目３３）
前記疾患が、骨疾患、癌、心血管疾患、皮膚疾患、公害病、免疫疾患、感染症、炎症、遺伝性疾患、代謝疾患、神経変性疾患、眼疾患、および呼吸器疾患からなる群から選択される、項目３０、３１または３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
前記疾患が炎症性疾患である、項目３０に記載の方法。
（項目３５）
前記疾患が癌である、項目３０に記載の方法。
（項目３６）
前記疾患が心血管疾患である、項目３０に記載の方法。
（項目３７）
ステップ（ａ）において蛍光色素化合物で標識した前記細胞を前記対象に投与する、項目２２に記載の方法。
（項目３８）
前記蛍光色素化合物によって放出される信号を使用して、前記細胞の輸送および局在化をモニターし、または細胞治療法の有効性を評価する、項目３５に記載の方法。
（項目３９）
ａ）サンプルを、項目１〜１９のいずれか一項に記載の蛍光色素化合物に接触させるステップと、
ｂ）前記蛍光色素化合物を生物学的標的によって活性化させ、またはそれに結合させるステップと、
ｃ）場合により非結合蛍光色素化合物を除去するステップと、
ｄ）前記サンプルを、前記蛍光色素化合物が吸収できる波長の光に曝すステップと、
ｅ）前記蛍光色素化合物から放出される信号を検出し、それによって前記蛍光色素化合物が前記生物学的標的によって活性化され、またはそれに結合したかどうかを判定するステップと、
を含んでなる、生体外での光学的イメージング方法。
（項目４０）
前記サンプルが生物学的サンプルである、項目３８に記載の方法。