【手続補正書】
【提出日】平成24年3月30日(2012.3.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経因性疼痛を治療する薬剤において、
単離した臍帯組織由来細胞集団、
を含み、
前記細胞集団は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、培養中に自己再生および増殖することができ、ＣＤ１１７に陰性である、薬剤。
【請求項２】
神経の痙攣を治療する薬剤において、
単離した臍帯組織由来細胞集団、
を含み、
前記細胞集団は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、培養中に自己再生および増殖することができ、ＣＤ１１７に陰性である、薬剤。
【請求項３】
神経因性疼痛を治療する薬剤において、
臍帯組織由来細胞、
を含み、
前記細胞は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、培養中に自己再生および増殖することができ、ＣＤ１１７に陰性である、薬剤。
【請求項４】
請求項３に記載の薬剤において、
前記臍帯組織由来細胞は、ｈＴＥＲＴまたはテロメラーゼを発現しない、薬剤。
【請求項５】
請求項１または２に記載の薬剤において、
前記単離した臍帯組織由来細胞集団は、ｈＴＥＲＴまたはテロメラーゼを発現しない、薬剤。
【請求項６】
請求項１または２に記載の薬剤において、
前記単離した臍帯組織由来細胞集団は、組織部位に局所投与される、薬剤。
【請求項７】
請求項６に記載の薬剤において、
前記単離した臍帯組織由来細胞集団は、カテーテル、注射器、シャント、ステント、マイクロカテーテル、ポンプ、装置による植え込み、または足場による植え込みを使用することで、前記組織部位の近位または遠位で投与される、薬剤。
【請求項８】
請求項１または２に記載の薬剤において、
前記単離した臍帯組織由来細胞集団は、全身投与される、薬剤。
【請求項９】
請求項８に記載の薬剤において、
前記単離した臍帯組織由来細胞集団は、静脈内、腹腔内、動脈内に、または、ポンプ装置を備えるかもしくは備えない針もしくはカテーテルを備えた注射器によって、投与される、薬剤。
【請求項１０】
請求項６または８に記載の薬剤において、
前記単離した臍帯組織由来細胞集団は、生理食塩水、緩衝水溶液、溶媒、分散培地組成物、およびこれらの混合物からなる群から選択される、医薬的に許容可能な担体および／または希釈剤を含む、薬剤。
【請求項１１】
請求項６または８に記載の薬剤において、
前記単離した臍帯組織由来細胞集団は、コラーゲン、アテロコラーゲン、フィブリン、トロンビン−フィブリン、およびそれらの混合物からなる群から選択される、１つまたは複数のヒドロゲルをさらに含む、薬剤。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の薬剤において、
前記単離した臍帯組織由来細胞集団は、治療的に有用な遺伝子産物を産生するため、または神経組織形成もしくは成長を促進もしくは支援する薬剤を産生するために、遺伝子操作された細胞を含む、薬剤。
【請求項１３】
慢性疼痛を治療するのに使用される組成物において、
医薬的に許容可能な担体および／または希釈剤と、
臍帯組織由来細胞集団と、
を含み、
前記細胞集団は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、培養中に自己再生および増殖することができ、ＣＤ１１７に陰性である、組成物。
【請求項１４】
神経因性疼痛を治療するのに使用される組成物において、
医薬的に許容可能な担体および／または希釈剤と、
臍帯組織由来細胞集団と、
を含み、
前記細胞集団は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、培養中に自己再生および増殖することができ、ＣＤ１１７に陰性である、組成物。
【請求項１５】
痙攣を治療するのに使用される組成物において、
医薬的に許容可能な担体および／または希釈剤と、
臍帯組織由来細胞集団と、
を含み、
前記細胞集団は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、培養中に自己再生および増殖することができ、ＣＤ１１７に陰性である、組成物。
【請求項１６】
請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の組成物において、
前記医薬的に許容可能な担体および／または希釈剤は、生理食塩水、緩衝水溶液、溶媒、分散培地組成物、およびこれらの混合物からなる群から選択される、組成物。
【請求項１７】
請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の組成物において、
前記組成物は、コラーゲン、アテロコラーゲン、フィブリン、トロンビン−フィブリン、およびそれらの混合物からなる群から選択される、１つまたは複数のヒドロゲルをさらに含む、組成物。
【請求項１８】
請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の組成物において、
前記組成物は、以下の組織：すなわち、皮膚組織、血管組織、結合組織、軟骨、脂肪組織、筋組織、腱もしくは靭帯のうち１つまたは複数に由来する細胞集団をさらに含む、組成物。
【請求項１９】
請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の組成物において、
前記細胞集団は、治療的に有用な遺伝子産物を産生するか、神経組織形成もしくは成長を促進もしくは支援する薬剤を産生するか、または前駆細胞を神経損傷エリアに補充する因子を産生する、遺伝子操作細胞を含む、組成物。
【請求項２０】
慢性疼痛、神経因性疼痛または痙攣を治療するのに使用されるキットにおいて、
臍帯組織由来細胞集団と、
医薬的に許容可能な担体および／または希釈剤と、
ヒドロゲルと、
を含み、
前記細胞集団は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、培養中に自己再生および増殖することができ、ＣＤ１１７に陰性である、キット。
【請求項２１】
慢性疼痛、神経因性疼痛または痙攣を治療するのに使用されるキットにおいて、
ｈＵＴＣ細胞集団と、
医薬的に許容可能な担体および／または希釈剤と、
コラーゲンまたはフィブリン−トロンビン構築物と、
を含み、
前記細胞集団は、実質的に血液のないヒト臍帯組織由来であり、培養中に自己再生および増殖することができ、ＣＤ１１７に陰性である、キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
現在、神経細胞損傷の修復または回復を助けるため、神経の損傷部位で移植細胞を使用することに関心がもたれている。例えば、一部の研究者が、感覚神経経路障害もしくは傷害を有する患者の傷害部位に、神経細胞を移植した。米国特許第６，４４４，２０５号として特許となった米国特許出願第０９／１６３，６８４号を参照。他の研究者は、標的組織を再構築し、それにより生理学的および解剖学的機能性を回復するため、幹細胞移植に焦点を当てている。例えば、Ｋｌａｓｓは、幹細胞集団を含有する骨髄単核細胞を神経因性疼痛モデルに投与し、疼痛が低減されるかどうかを調べた。Ｋｌａｓｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｎｅｓｔｈ  Ａｎａｌｇ．，２００７；１０４：９４４−４９を参照。神経因性疼痛を低減するため細胞を投与する、実行可能で確実な方法が、現在は存在しない。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
他の実施形態では、臍帯組織由来細胞は、線維芽細胞、間葉系幹細胞、もしくは腸骨稜骨髄細胞であるヒト細胞に関する遺伝子発現により特徴付けられることができ、遺伝子発現は、interleukin 8; reticulon 1; chemokine (C-X-C motif) ligand 1 (melonoma growth stimulating activity, alpha); chemokine (C-X-C motif) ligand 6 (granulocyte chemotactic protein 2); chemokine (C-X-C motif) ligand 3; およびtumor necrosis factor, alpha-induced protein 3のうちの少なくとも１つをコード化する遺伝子について、増加する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６７】
他の実施形態では、臍帯組織由来細胞は、ＭＣＰ−１；ＩＬ−６；ＩＬ−８；ＧＣＰ−２；ＨＧＦ；ＫＧＦ；ＦＧＦ；ＨＢ−ＥＧＦ；ＢＤＮＦ；ＴＰＯ；ＭＩＰ１ｂ；Ｉ３０９；ＭＤＣ；ＲＡＮＴＥＳ；およびＴＩＭＰ１のうち少なくとも１つの分泌により特徴付けられ得る。いくつかの実施形態では、臍帯組織由来細胞は、ＥＬＩＳＡにより検出されたときにＴＧＦ−β２；ＡＮＧ２；ＰＤＧＦｂｂ；ＭＩＰ１ａ；ＶＥＧＦのうち少なくとも１つの分泌がないことにより特徴付けられ得る。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３３２】
実施例１５
テロメラーゼは、染色体の完全性を保護し、また細胞の複製寿命を延ばすのに役立つ、テロメア繰り返し体を合成するよう機能する（Ｌｉｕ，Ｋ、ｅｔ  ａｌ，ＰＮＡＳ，１９９９：９６：５１４７−５１５２）。テロメラーゼは、２つの成分、テロメラーゼＲＮＡテンプレート（ｈＴＥＲ）、およびテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）のみからなる。テロメラーゼの調節は、ｈＴＥＲではなく、ｈＴＥＲＴの転写により決定される。ｈＴＥＲＴ  ｍＲＮＡのリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）は、ゆえに、細胞のテロメラーゼ活性を決定する、認められた方法である。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３３３】
細胞単離
リアルタイムＰＣＲ実験が行われ、ヒト臍帯組織由来細胞のテロメラーゼ産生が決定された。ヒト臍帯組織由来細胞が、実施例４〜１４、および、米国特許第７，５１０，８７３号として特許となった米国特許出願第１０／８７７，０１２号（’０１２号出願）に記載される実施例に従って、準備された。概して、正常な運搬後にＮａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｃｈａｎｇｅ（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．）から入手された臍帯が洗浄され、血液および残骸を除去し、機械的に解離される。組織は次に、コラゲナーゼ、ディスパーゼおよびヒアルロニダーゼを含む消化酵素で、培養培地において３７℃でインキュベートされる。ヒト臍帯組織由来細胞は、‘０１２号出願の実施例に記載された方法に従って培養された。間葉系幹細胞および正常な皮膚線維芽細胞（ｃｃ−２５０９  ロット＃  ９Ｆ０８４４）が、Ｃａｍｂｒｅｘ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、Ｍｄ．から入手された。多能性ヒト精巣胎児性癌（テラトーマ）細胞株ｎＴｅｒａ−２細胞（ＮＴＥＲＡ−２  ｃｌ．Ｄｌ）（Ｐｌａｉａ  ｅｔ  ａｌ，  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ，２００６；２４（３）：５３１−５４６を参照）を、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．）から購入し、’０１２号出願に記載した方法に従って培養した。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３３５】
リアルタイムＰＣＲ
ＰＣＲが、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ａｓｓａｙｓ−Ｏｎ−Ｄｅｍａｎｄ（商標）（ＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイとしても知られる）を用いて、製造業者の仕様書（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に従って、ｃＤＮＡサンプルに対して行われた。この市販のキットは、ヒト細胞のテロメラーゼのアッセイに広く使われる。端的には、ｈＴＥＲＴ（ヒトテロメラーゼ遺伝子）（Ｈｓ００１６２６６９）およびヒトＧＡＰＤＨ（内部対照）が、ＡＢＩ  ｐｒｉｓｍ  ７０００  ＳＤＳソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）と共に７０００配列検出システムを用いて、ｃＤＮＡおよびＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲマスターミックスと混合された。熱サイクル条件は、最初は、５０℃で２分、９５℃で１０分、その後、９５℃で１５秒および６０℃で１分の４０サイクルであった。ＰＣＲデータは、製造業者の仕様書に従って分析された。