【手続補正書】
【提出日】平成24年4月19日(2012.4.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
天然に存在しない微生物体であって、メタクリル酸を生成するのに十分な量で発現されるメタクリル酸経路の酵素（単数または複数）をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、メタクリル酸経路を有する微生物体を含み、前記メタクリル酸経路が、
３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼ；
４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼまたは３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼまたは３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼ；
メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドロゲナーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼ；
メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドロゲナーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼ；
メチルマロニルＣｏＡムターゼ、アルコール／アルデヒドデヒドロゲナーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼ；
メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼ、アルコール／アルデヒドデヒドロゲナーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼ
メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、３−アミノ−２−メチルプロピオン酸トランスアミナーゼ、および３−アミノ−２−メチルプロピオン酸アンモニアリアーゼ；
メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、３−アミノ−２−メチルプロピオン酸トランスアミナーゼ、および３−アミノ−２−メチルプロピオン酸アンモニアリアーゼ；
アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、グルタミン酸ムターゼ、３−メチルアスパルターゼ、およびメサコン酸デカルボキシラーゼ；
アルファ−ケトグルタル酸レダクターゼ、２−ヒドロキシグルタミン酸ムターゼ、３−メチルリンゴ酸デヒドラターゼ、およびメサコン酸デカルボキシラーゼ；
アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡトランスフェラーゼまたはメタクリリルＣｏＡヒドロラーゼまたはメタクリリルＣｏＡシンテターゼ；
アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、エノイルＣｏＡヒドラターゼ、および３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼまたは３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼまたは３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼ；
４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡヒドロラーゼまたはメタクリリルＣｏＡシンテターゼまたはメタクリリルＣｏＡトランスフェラーゼのうちのいずれか；
４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡシンテターゼまたはメタクリリルＣｏＡヒドロラーゼまたはメタクリリルＣｏＡトランスフェラーゼ；
アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、クロトナーゼ、ブチリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ、イソブチリルＣｏＡムターゼ、イソブチリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ、およびメタクリリルＣｏＡシンテターゼまたはメタクリリルＣｏＡヒドロラーゼまたはメタクリリルＣｏＡトランスフェラーゼ；
乳酸デヒドロゲナーゼ、ラクテートＣｏＡトランスフェラーゼ、ラクトイルＣｏＡデヒドラターゼ、アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ、プロピオニルＣｏＡカルボキシラーゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドロゲナーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼ；ならびに
バリンアミノトランスフェラーゼ、２−ケトイソ吉草酸デヒドロゲナーゼ、イソブチリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ、およびメタクリリルＣｏＡシンテターゼまたはメタクリリルＣｏＡヒドロラーゼまたはメタクリリルＣｏＡトランスフェラーゼ
を含むメタクリル酸経路から選択される、微生物体。
【請求項２】
天然に存在しない微生物体であって、３−ヒドロキシイソ酪酸を生成するのに十分な量で発現される３−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、３−ヒドロキシイソ酪酸経路を有する微生物体を含み、前記３−ヒドロキシイソ酪酸経路が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼおよび３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼまたは３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼまたは３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼを含む微生物体。
【請求項３】
天然に存在しない微生物体であって、２−ヒドロキシイソ酪酸を生成するのに十分な量で発現される２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする外因性核酸を含む、２−ヒドロキシイソ酪酸経路を有する微生物体を含み、前記２−ヒドロキシイソ酪酸経路が、
アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼまたは２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼまたは２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼ；ならびに
４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼまたは２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼまたは２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼのうちのいずれか
を含む２−ヒドロキシイソ酪酸経路から選択される、微生物体。
【請求項４】
クエン酸シンターゼ、アコニターゼ、イソクエン酸リアーゼ、リンゴ酸シンターゼ、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ、ピルビン酸フェレドキシンオキシドレダクターゼおよびホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼから選択される少なくとも１つの酵素の活性を増加させる遺伝子改変をさらに含み、前記活性の増加が、前記遺伝子改変が存在しない状態と比べた増加である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の天然に存在しない微生物体。
【請求項５】
天然に存在しない微生物体であって、タンパク質または酵素をコードする遺伝子中に生じている１つまたは複数の遺伝子破壊を含み、前記１つまたは複数の遺伝子破壊が前記生物体における３−ヒドロキシイソ酪酸またはメタクリル酸の生成を増加させる微生物体。
【請求項６】
３−ヒドロキシイソ酪酸またはメタクリル酸の生成が増殖連結型であるか、または増殖連結型ではない、請求項５に記載の天然に存在しない微生物体。
【請求項７】
前記１つまたは複数の遺伝子破壊が表１０または１１に列挙したタンパク質または酵素をコードする、請求項５に記載の天然に存在しない微生物体。
【請求項８】
前記１つまたは複数の遺伝子破壊が、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼおよびアセトアルデヒドＣｏＡデヒドロゲナーゼからなる群から選択されるタンパク質または酵素をコードする、請求項５に記載の天然に存在しない微生物体。
【請求項９】
アスパルターゼ、ピルビン酸ギ酸リアーゼ、ＮＡＤ（Ｐ）トランスヒドロゲナーゼ、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、ＡＴＰシンターゼ、ホスホエノールピルビン酸：ピルビン酸ホスホトランスフェラーゼ系、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、ホスホトランスアセチラーゼ、酢酸キナーゼ、６−ホスホグルコノラクトナーゼ、グルコース６−リン酸デヒドロゲナーゼおよびＮＡＤＨデヒドロゲナーゼからなる群から選択されるタンパク質または酵素をコードする１つまたは複数の遺伝子破壊をさらに含む、請求項８に記載の天然に存在しない微生物体。
【請求項１０】
前記１つまたは複数の遺伝子破壊が、前記１つまたは複数の遺伝子の欠失を含む、請求項５〜９のいずれか一項に記載の天然に存在しない微生物体。
【請求項１１】
前記天然に存在しない微生物体が、実質的に嫌気性の培地中にあるか、または前記外因性核酸のうちの少なくとも一つが異種の核酸である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の天然に存在しない微生物体。
【請求項１２】
メタクリル酸を生成する方法であって、メタクリル酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、請求項１、４、または１１のいずれか一項に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
【請求項１３】
３−ヒドロキシイソ酪酸を生成する方法であって、３−ヒドロキシイソ酪酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、請求項２、４、または１１のいずれか一項に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
【請求項１４】
２−ヒドロキシイソ酪酸を生成する方法であって、２−ヒドロキシイソ酪酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、請求項３、４、または１１のいずれか一項に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
【請求項１５】
３−ヒドロキシイソ酪酸またはメタクリル酸を生成する方法であって、３−ヒドロキシイソ酪酸またはメタクリル酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、請求項５〜１１のいずれか一項に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
本発明は、メタクリル酸経路を有する天然に存在しない微生物体を提供する。微生物体は、メタクリル酸経路中の酵素をコードする少なくとも１つの外因性の核酸を含有する。本発明は、メタクリル酸を生成する方法をさらに提供する。この方法は、メタクリル酸を生成する微生物体を培養することを含むことができ、微生物体は、メタクリル酸を生成する条件下および十分な期間、メタクリル酸を生成するのに十分な量で、メタクリル酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を発現する。本発明はまた、メタクリル酸前駆体の３−ヒドロキシイソブチレートおよび２−ヒドロキシイソブチレートのための生物体および生成方法についても記載する。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
天然に存在しない微生物体であって、メタクリル酸を生成するのに十分な量で発現されるメタクリル酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、メタクリル酸経路を有する微生物体を含み、前記メタクリル酸経路が、３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼを含む微生物体。
（項目２）
前記メタクリル酸経路が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドロゲナーゼをさらに含む、項目１に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目３）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目１に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目４）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目１に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目５）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目１に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目６）
前記４つの外因性核酸が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドロゲナーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目５に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目７）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする５つの外因性核酸を含む、項目１に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目８）
前記メタクリル酸経路が、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼをさらに含む、項目７に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目９）
前記５つの外因性核酸が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドロゲナーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１０）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目１に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１１）
実質的に嫌気性の培地中にある、項目１に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１２）
クエン酸シンターゼ、アコニターゼ、イソクエン酸リアーゼ、リンゴ酸シンターゼ、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ、ピルビン酸フェレドキシンオキシドレダクターゼおよびホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼから選択される少なくとも１つの酵素の活性を増加させる遺伝子改変をさらに含み、活性の増加が、前記遺伝子改変が存在しない状態と比べた増加である、項目１に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１３）
メタクリル酸を生成する方法であって、メタクリル酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、項目１に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
（項目１４）
前記天然に存在しない微生物体が実質的に嫌気性の培地中にある、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目１３に記載の方法。
（項目１６）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目１３に記載の方法。
（項目１７）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目１３に記載の方法。
（項目１８）
前記４つの外因性核酸が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドロゲナーゼおよび３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目１７に記載の方法。
（項目１９）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする５つの外因性核酸を含む、項目１３に記載の方法。
（項目２０）
前記メタクリル酸経路が、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼをさらに含む、項目１９に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２１）
前記５つの外因性核酸が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドロゲナーゼおよび３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目１３に記載の方法。
（項目２３）
天然に存在しない微生物体であって、メタクリル酸を生成するのに十分な量で発現されるメタクリル酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、メタクリル酸経路を有する微生物体を含み、前記メタクリル酸経路が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、アルコール／アルデヒドデヒドロゲナーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼを含む微生物体。
（項目２４）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目２３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２５）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目２３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２６）
前記３つの外因性核酸が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、アルコール／アルデヒドデヒドロゲナーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目２５に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２７）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目２３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２８）
前記メタクリル酸経路が、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼをさらに含む、項目２７に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２９）
前記４つの外因性核酸が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼ、アルコール／アルデヒドデヒドロゲナーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目２７に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目３０）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目２３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目３１）
実質的に嫌気性の培地中にある、項目２３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目３２）
クエン酸シンターゼ、アコニターゼ、イソクエン酸リアーゼ、リンゴ酸シンターゼ、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ、ピルビン酸フェレドキシンオキシドレダクターゼおよびホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼから選択される少なくとも１つの酵素の活性を増加させる遺伝子改変をさらに含み、活性の増加が、前記遺伝子改変が存在しない状態と比べた増加である、項目２３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目３３）
メタクリル酸を生成する方法であって、メタクリル酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、項目２３に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
（項目３４）
前記天然に存在しない微生物体が実質的に嫌気性の培地中にある、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目３３に記載の方法。
（項目３６）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目３３に記載の方法。
（項目３７）
前記３つの外因性核酸が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、アルコール／アルデヒドデヒドロゲナーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目３３に記載の方法。
（項目３９）
前記メタクリル酸経路が、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼをさらに含む、項目３８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目４０）
前記４つの外因性核酸が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼ、アルコール／アルデヒドデヒドロゲナーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目３３に記載の方法。
（項目４２）
天然に存在しない微生物体であって、メタクリル酸を生成するのに十分な量で発現されるメタクリル酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、メタクリル酸経路を有する微生物体を含み、前記メタクリル酸経路が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、３−アミノ−２−メチルプロピオン酸トランスアミナーゼ、および３−アミノ−２−メチルプロピオン酸アンモニアリアーゼを含む微生物体。
（項目４３）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目４２に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目４４）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目４２に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目４５）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目４２に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目４６）
前記４つの外因性核酸が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、３−アミノ−２−メチルプロピオン酸トランスアミナーゼ、および３−アミノ−２−メチルプロピオン酸アンモニアリアーゼをコードする、項目４５に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目４７）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする５つの外因性核酸を含む、項目４２に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目４８）
前記メタクリル酸経路が、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼをさらに含む、項目４７に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目４９）
前記５つの外因性核酸が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、３−アミノ−２−メチルプロピオン酸トランスアミナーゼ、および３−アミノ−２−メチルプロピオン酸アンモニアリアーゼをコードする、項目４８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目５０）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目４２に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目５１）
実質的に嫌気性の培地中にある、項目４２に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目５２）
クエン酸シンターゼ、アコニターゼ、イソクエン酸リアーゼ、リンゴ酸シンターゼ、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ、ピルビン酸フェレドキシンオキシドレダクターゼおよびホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼから選択される少なくとも１つの酵素の活性を増加させる遺伝子改変をさらに含み、活性の増加が、前記遺伝子改変が存在しない状態と比べた増加である、項目４２に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目５３）
メタクリル酸を生成する方法であって、メタクリル酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、項目４２に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
（項目５４）
前記天然に存在しない微生物体が実質的に嫌気性の培地中にある、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目５３に記載の方法。
（項目５６）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目５３に記載の方法。
（項目５７）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目５３に記載の方法。
（項目５８）
前記４つの外因性核酸が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、３−アミノ−２−メチルプロピオン酸トランスアミナーゼ、および３−アミノ−２−メチルプロピオン酸アンモニアリアーゼをコードする、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする５つの外因性核酸を含む、項目５３に記載の方法。
（項目６０）
前記メタクリル酸経路が、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼをさらに含む、項目５９に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目６１）
前記５つの外因性核酸が、メチルマロニルＣｏＡムターゼ、メチルマロニルＣｏＡエピメラーゼ、メチルマロニルＣｏＡレダクターゼ、３−アミノ−２−メチルプロピオン酸トランスアミナーゼ、および３−アミノ−２−メチルプロピオン酸アンモニアリアーゼをコードする、項目６０に記載の方法。
（項目６２）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目５３に記載の方法。
（項目６３）
天然に存在しない微生物体であって、メタクリル酸を生成するのに十分な量で発現されるメタクリル酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、メタクリル酸経路を有する微生物体を含み、前記メタクリル酸経路が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼまたは３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼまたは３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼを含む微生物体。
（項目６４）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目６３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目６５）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目６３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目６６）
前記３つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目６３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目６７）
前記３つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目６３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目６８）
前記３つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目６３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目６９）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目６３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目７０）
実質的に嫌気性の培地中にある、項目６３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目７１）
クエン酸シンターゼ、アコニターゼ、イソクエン酸リアーゼ、リンゴ酸シンターゼ、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ、ピルビン酸フェレドキシンオキシドレダクターゼおよびホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼから選択される少なくとも１つの酵素の活性を増加させる遺伝子改変をさらに含み、活性の増加が、前記遺伝子改変が存在しない状態と比べた増加である、項目６３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目７２）
メタクリル酸を生成する方法であって、メタクリル酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、項目６３に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
（項目７３）
前記天然に存在しない微生物体が実質的に嫌気性の培地中にある、項目７２に記載の方法。
（項目７４）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目７２に記載の方法。
（項目７５）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目７２に記載の方法。
（項目７６）
前記３つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目７５に記載の方法。
（項目７７）
前記３つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目７５に記載の方法。
（項目７８）
前記３つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目７５に記載の方法。
（項目７９）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目７２に記載の方法。
（項目８０）
天然に存在しない微生物体であって、メタクリル酸を生成するのに十分な量で発現されるメタクリル酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、メタクリル酸経路を有する微生物体を含み、前記メタクリル酸経路が、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、グルタミン酸ムターゼ、３−メチルアスパルターゼ、およびメサコン酸デカルボキシラーゼを含む微生物体。
（項目８１）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目８０に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目８２）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目８０に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目８３）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目８０に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目８４）
前記４つの外因性核酸が、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、グルタミン酸ムターゼ、３−メチルアスパルターゼ、およびメサコン酸デカルボキシラーゼをコードする、項目８３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目８５）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目８０に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目８６）
実質的に嫌気性の培地中にある、項目８０に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目８７）
メタクリル酸を生成する方法であって、メタクリル酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、項目８０に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
（項目８８）
前記天然に存在しない微生物体が実質的に嫌気性の培地中にある、項目８７に記載の方法。
（項目８９）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目８７に記載の方法。
（項目９０）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目８７に記載の方法。
（項目９１）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目８７に記載の方法。
（項目９２）
前記４つの外因性核酸が、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、グルタミン酸ムターゼ、３−メチルアスパルターゼ、およびメサコン酸デカルボキシラーゼをコードする、項目９１に記載の方法。
（項目９３）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目８７に記載の方法。
（項目９４）
天然に存在しない微生物体であって、メタクリル酸を生成するのに十分な量で発現されるメタクリル酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、メタクリル酸経路を有する微生物体を含み、前記メタクリル酸経路が、アルファ−ケトグルタル酸レダクターゼ、２−ヒドロキシグルタミン酸ムターゼ、３−メチルリンゴ酸デヒドラターゼ、およびメサコン酸デカルボキシラーゼを含む微生物体。
（項目９５）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目９４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目９６）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目９４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目９７）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目９４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目９８）
前記４つの外因性核酸が、アルファ−ケトグルタル酸レダクターゼ、２−ヒドロキシグルタミン酸ムターゼ、３−メチルリンゴ酸デヒドラターゼ、およびメサコン酸デカルボキシラーゼをコードする、項目９７に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目９９）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目９４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１００）
実質的に嫌気性の培地中にある、項目９４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１０１）
メタクリル酸を生成する方法であって、メタクリル酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、項目９４に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
（項目１０２）
前記天然に存在しない微生物体が実質的に嫌気性の培地中にある、項目１０１に記載の方法。
（項目１０３）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目１０１に記載の方法。
（項目１０４）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目１０１に記載の方法。
（項目１０５）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目１０１に記載の方法。
（項目１０６）
前記４つの外因性核酸が、アルファ−ケトグルタル酸レダクターゼ、２−ヒドロキシグルタミン酸ムターゼ、３−メチルリンゴ酸デヒドラターゼ、およびメサコン酸デカルボキシラーゼをコードする、項目１０１に記載の方法。
（項目１０７）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目１０１に記載の方法。
（項目１０８）
天然に存在しない微生物体であって、メタクリル酸を生成するのに十分な量で発現されるメタクリル酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、メタクリル酸経路を有する微生物体を含み、前記メタクリル酸経路が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡトランスフェラーゼまたはメタクリリルＣｏＡヒドロラーゼまたはメタクリリルＣｏＡシンテターゼを含む微生物体。
（項目１０９）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目１０８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１１０）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目１０８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１１１）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目１０８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１１２）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする５つの外因性核酸を含む、項目１０８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１１３）
前記５つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡトランスフェラーゼをコードする、項目１１２に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１１４）
前記５つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡヒドロラーゼをコードする、項目１１２に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１１５）
前記５つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡシンテターゼをコードする、項目１１２に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１１６）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目１０８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１１７）
実質的に嫌気性の培地中にある、項目１０８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１１８）
メタクリル酸を生成する方法であって、メタクリル酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、項目１０８に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
（項目１１９）
前記天然に存在しない微生物体が実質的に嫌気性の培地中にある、項目１１８に記載の方法。
（項目１２０）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目１１８に記載の方法。
（項目１２１）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目１１８に記載の方法。
（項目１２２）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目１１８に記載の方法。
（項目１２３）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする５つの外因性核酸を含む、項目１１８に記載の方法。
（項目１２４）
前記５つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡトランスフェラーゼをコードする、項目１２３に記載の方法。
（項目１２５）
前記５つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡヒドロラーゼをコードする、項目１２３に記載の方法。
（項目１２６）
前記５つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡシンテターゼをコードする、項目１２３に記載の方法。
（項目１２７）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目１１８に記載の方法。
（項目１２８）
天然に存在しない微生物体であって、メタクリル酸を生成するのに十分な量で発現されるメタクリル酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、メタクリル酸経路を有する微生物体を含み、前記メタクリル酸経路が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、エノイルＣｏＡヒドラターゼ、および３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼまたは３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼまたは３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼを含む微生物体。
（項目１２９）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目１２８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１３０）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目１２８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１３１）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目１２８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１３２）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする５つの外因性核酸を含む、項目１２８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１３３）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする６つの外因性核酸を含む、項目１２８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１３４）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする７つの外因性核酸を含む、項目１２８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１３５）
前記７つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、エノイルＣｏＡヒドラターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目１３４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１３６）
前記７つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、エノイルＣｏＡヒドラターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目１３４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１３７）
前記７つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、エノイルＣｏＡヒドラターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目１３４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１３８）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目１２８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１３９）
実質的に嫌気性の培地中にある、項目１２８に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１４０）
メタクリル酸を生成する方法であって、メタクリル酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、項目１２８に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
（項目１４１）
前記天然に存在しない微生物体が実質的に嫌気性の培地中にある、項目１４０に記載の方法。
（項目１４２）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目１４０に記載の方法。
（項目１４３）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目１４０に記載の方法。
（項目１４４）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目１４０に記載の方法。
（項目１４５）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする５つの外因性核酸を含む、項目１４０に記載の方法。
（項目１４６）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする６つの外因性核酸を含む、項目１４０に記載の方法。
（項目１４７）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする７つの外因性核酸を含む、項目１４０に記載の方法。
（項目１４８）
前記７つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、エノイルＣｏＡヒドラターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目１４７に記載の方法。
（項目１４９）
前記７つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、エノイルＣｏＡヒドラターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目１４７に記載の方法。
（項目１５０）
前記７つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、エノイルＣｏＡヒドラターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼ、および３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドラターゼをコードする、項目１４７に記載の方法。
（項目１５１）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目１４０に記載の方法。
（項目１５２）
天然に存在しない微生物体であって、３−ヒドロキシイソ酪酸を生成するのに十分な量で発現される３−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、３−ヒドロキシイソ酪酸経路を有する微生物体を含み、前記３−ヒドロキシイソ酪酸経路が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼおよび３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼまたは３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼまたは３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼを含む微生物体。
（項目１５３）
それぞれ３−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目１５２に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１５４）
前記２つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼおよび３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼをコードする、項目１５３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１５５）
前記２つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼおよび３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼをコードする、項目１５３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１５６）
前記２つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼおよび３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼをコードする、項目１５３に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１５７）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目１５２に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１５８）
実質的に嫌気性の培地中にある、項目１５２に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１５９）
クエン酸シンターゼ、アコニターゼ、イソクエン酸リアーゼ、リンゴ酸シンターゼ、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ、ピルビン酸フェレドキシンオキシドレダクターゼおよびホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼから選択される少なくとも１つの酵素の活性を増加させる遺伝子改変をさらに含み、活性の増加が、前記遺伝子改変が存在しない状態と比べた増加である、項目１５２に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１６０）
３−ヒドロキシイソ酪酸を生成する方法であって、３−ヒドロキシイソ酪酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、項目１５２に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
（項目１６１）
前記天然に存在しない微生物体が実質的に嫌気性の培地中にある、項目１６０に記載の方法。
（項目１６２）
前記微生物体が、それぞれ３−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目１６０に記載の方法。
（項目１６３）
前記２つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼおよび３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼをコードする、項目１６２に記載の方法。
（項目１６４）
前記２つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼおよび３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼをコードする、項目１６２に記載の方法。
（項目１６５）
前記２つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼおよび３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼをコードする、項目１６２に記載の方法。
（項目１６６）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目１６０に記載の方法。
（項目１６７）
天然に存在しない微生物体であって、２−ヒドロキシイソ酪酸を生成するのに十分な量で発現される２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、２−ヒドロキシイソ酪酸経路を有する微生物体を含み、前記２−ヒドロキシイソ酪酸経路が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼまたは２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼまたは２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼを含む微生物体。
（項目１６８）
それぞれ２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目１６７に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１６９）
それぞれ２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目１６７に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１７０）
それぞれ２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目１６７に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１７１）
前記４つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼをコードする、項目１７０に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１７２）
前記４つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼをコードする、項目１７０に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１７３）
前記４つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼをコードする、項目１７０に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１７４）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目１６７に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１７５）
実質的に嫌気性の培地中にある、項目１６７に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１７６）
２−ヒドロキシイソ酪酸を生成する方法であって、２−ヒドロキシイソ酪酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、項目１６７に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
（項目１７７）
前記天然に存在しない微生物体が実質的に嫌気性の培地中にある、項目１７６に記載の方法。
（項目１７８）
前記微生物体が、それぞれ２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目１７６に記載の方法。
（項目１７９）
前記微生物体が、それぞれ２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目１７６に記載の方法。
（項目１８０）
前記微生物体が、それぞれ２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目１７６に記載の方法。
（項目１８１）
前記４つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼをコードする、項目１８０に記載の方法。
（項目１８２）
前記４つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼをコードする、項目１８０に記載の方法。
（項目１８３）
前記４つの外因性核酸が、アセトアセチルＣｏＡチオラーゼ、アセトアセチルＣｏＡレダクターゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼをコードする、項目１８０に記載の方法。
（項目１８４）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目１７６に記載の方法。
（項目１８５）
天然に存在しない微生物体であって、メタクリル酸を生成するのに十分な量で発現されるメタクリル酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、メタクリル酸経路を有する微生物体を含み、前記メタクリル酸経路が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡヒドロラーゼまたはメタクリリルＣｏＡシンテターゼまたはメタクリリルＣｏＡトランスフェラーゼのいずれかを含む微生物体。
（項目１８６）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目１８５に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１８７）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目１８５に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１８８）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目１８５に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１８９）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする５つの外因性核酸を含む、項目１８５に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１９０）
前記５つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡヒドロラーゼをコードする、項目１８９に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１９１）
前記５つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡシンテターゼをコードする、項目１８９に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１９２）
前記５つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡトランスフェラーゼをコードする、項目１８９に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１９３）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目１８５に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１９４）
実質的に嫌気性の培地中にある、項目１８５に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１９５）
クエン酸シンターゼ、アコニターゼ、イソクエン酸リアーゼ、リンゴ酸シンターゼ、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ、ピルビン酸フェレドキシンオキシドレダクターゼおよびホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼから選択される少なくとも１つの酵素の活性を増加させる遺伝子改変をさらに含み、活性の増加が、前記遺伝子改変が存在しない状態と比べた増加である、項目１８５に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目１９６）
メタクリル酸を生成する方法であって、メタクリル酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、項目１８５に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
（項目１９７）
前記天然に存在しない微生物体が実質的に嫌気性の培地中にある、項目１９６に記載の方法。
（項目１９８）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目１９６に記載の方法。
（項目１９９）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目１９６に記載の方法。
（項目２００）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目１９６に記載の方法。
（項目２０１）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする５つの外因性核酸を含む、項目１９６に記載の方法。
（項目２０２）
前記５つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡヒドロラーゼをコードする、項目２０１に記載の方法。
（項目２０３）
前記５つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡシンテターゼをコードする、項目２０１に記載の方法。
（項目２０４）
前記５つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡトランスフェラーゼをコードする、項目２０１に記載の方法。
（項目２０５）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目１９６に記載の方法。
（項目２０６）
天然に存在しない微生物体であって、２−ヒドロキシイソ酪酸を生成するのに十分な量で発現される２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、２−ヒドロキシイソ酪酸経路を有する微生物体を含み、前記２−ヒドロキシイソ酪酸経路が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼまたは２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼまたは２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼのいずれかを含む微生物体。
（項目２０７）
それぞれ２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目２０６に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２０８）
それぞれ２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目２０６に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２０９）
それぞれ２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目２０６に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２１０）
前記４つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼをコードする、項目２０９に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２１１）
前記４つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼをコードする、項目２０９に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２１２）
前記４つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼをコードする、項目２０９に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２１３）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目２０６に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２１４）
実質的に嫌気性の培地中にある、項目２０６に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２１５）
２−ヒドロキシイソ酪酸を生成する方法であって、２−ヒドロキシイソ酪酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、項目２０６に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
（項目２１６）
前記天然に存在しない微生物体が実質的に嫌気性の培地中にある、項目２１５に記載の方法。
（項目２１７）
前記微生物体が、それぞれ２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目２１５に記載の方法。
（項目２１８）
前記微生物体が、それぞれ２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目２１５に記載の方法。
（項目２１９）
前記微生物体が、それぞれ２−ヒドロキシイソ酪酸経路の酵素をコードする４つの外因性核酸を含む、項目２１５に記載の方法。
（項目２２０）
前記４つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡヒドロラーゼをコードする、項目２１９に記載の方法。
（項目２２１）
前記４つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡシンテターゼをコードする、項目２１９に記載の方法。
（項目２２２）
前記４つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、ビニルアセチルＣｏＡ  Δ−イソメラーゼ、クロトナーゼ、３−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、および２−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡトランスフェラーゼをコードする、項目２１９に記載の方法。
（項目２２３）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目２１５に記載の方法。
（項目２２４）
天然に存在しない微生物体であって、メタクリル酸を生成するのに十分な量で発現されるメタクリル酸経路の酵素をコードする少なくとも１つの外因性核酸を含む、メタクリル酸経路を有する微生物体を含み、前記メタクリル酸経路が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼ、およびメタクリリルＣｏＡシンテターゼまたはメタクリリルＣｏＡヒドロラーゼまたはメタクリリルＣｏＡトランスフェラーゼを含む微生物体。
（項目２２５）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目２２４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２２６）
それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目２２４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２２７）
前記３つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、メタクリリルＣｏＡシンテターゼ、および３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼをコードする、項目２２４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２２８）
前記３つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、メタクリリルＣｏＡヒドロラーゼ、および３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼをコードする、項目２２４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２２９）
前記３つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、メタクリリルＣｏＡトランスフェラーゼ、および３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼをコードする、項目２２４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２３０）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目２２４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２３１）
実質的に嫌気性の培地中にある、項目２２４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２３２）
クエン酸シンターゼ、アコニターゼ、イソクエン酸リアーゼ、リンゴ酸シンターゼ、ピルビン酸デヒドロゲナーゼ、ピルビン酸フェレドキシンオキシドレダクターゼおよびホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼから選択される少なくとも１つの酵素の活性を増加させる遺伝子改変をさらに含み、活性の増加が、前記遺伝子改変が存在しない状態と比べた増加である、項目２２４に記載の天然に存在しない微生物体。
（項目２３３）
メタクリル酸を生成する方法であって、メタクリル酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、項目２２４に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
（項目２３４）
前記天然に存在しない微生物体が実質的に嫌気性の培地中にある、項目２３３に記載の方法。
（項目２３５）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする２つの外因性核酸を含む、項目２３３に記載の方法。
（項目２３６）
前記微生物体が、それぞれメタクリル酸経路の酵素をコードする３つの外因性核酸を含む、項目２３３に記載の方法。
（項目２３７）
前記３つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、メタクリリルＣｏＡシンテターゼ、および３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼをコードする、項目２３６に記載の方法。
（項目２３８）
前記３つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、メタクリリルＣｏＡヒドロラーゼ、および３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼをコードする、項目２３６に記載の方法。
（項目２３９）
前記３つの外因性核酸が、４−ヒドロキシブチリルＣｏＡムターゼ、メタクリリルＣｏＡトランスフェラーゼ、および３−ヒドロキシイソブチリルＣｏＡデヒドラターゼをコードする、項目２３６に記載の方法。
（項目２４０）
前記少なくとも１つの外因性核酸が異種の核酸である、項目２３３に記載の方法。
（項目２４１）
天然に存在しない微生物体であって、タンパク質または酵素をコードする遺伝子中に生じている１つまたは複数の遺伝子破壊を含み、前記１つまたは複数の遺伝子破壊が前記生物体における３−ヒドロキシイソ酪酸またはメタクリル酸の生成の増加を付与する微生物体。
（項目２４２）
３−ヒドロキシイソ酪酸またはメタクリル酸の生成が増殖連結型である、項目２４１に記載の天然に存在しない生物体。
（項目２４３）
３−ヒドロキシイソ酪酸またはメタクリル酸の生成が増殖連結型でない、項目２４１に記載の天然に存在しない生物体。
（項目２４４）
前記１つまたは複数の遺伝子破壊が表１０または１１に列挙したタンパク質または酵素をコードする、項目２４１に記載の天然に存在しない生物体。
（項目２４５）
前記１つまたは複数の遺伝子破壊が、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼおよびアセトアルデヒドＣｏＡデヒドロゲナーゼからなる群から選択されるタンパク質または酵素をコードする、項目２４１に記載の天然に存在しない生物体。
（項目２４６）
アスパルターゼ、ピルビン酸ギ酸リアーゼ、ＮＡＤ（Ｐ）トランスヒドロゲナーゼ、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、ＡＴＰシンターゼ、ホスホエノールピルビン酸：ピルビン酸ホスホトランスフェラーゼ系、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、ホスホトランスアセチラーゼ、酢酸キナーゼ、６−ホスホグルコノラクトナーゼ、グルコース６−リン酸デヒドロゲナーゼおよびＮＡＤＨデヒドロゲナーゼからなる群から選択されるタンパク質または酵素をコードする１つまたは複数の遺伝子破壊をさらに含む、項目２４５に記載の天然に存在しない生物体。
（項目２４７）
前記１つまたは複数の遺伝子破壊が、前記１つまたは複数の遺伝子の欠失を含む、項目２４１に記載の生物体。
（項目２４８）
前記細胞が実質的に嫌気性の培地中にある、項目２４１に記載の生物体。
（項目２４９）
３−ヒドロキシイソ酪酸またはメタクリル酸を生成する方法であって、３−ヒドロキシイソ酪酸またはメタクリル酸を生成する条件下およびそれに十分な期間、項目２４１に記載の天然に存在しない微生物体を培養することを含む方法。
（項目２５０）
３−ヒドロキシイソ酪酸またはメタクリル酸の生成が増殖連結型である、項目２４９に記載の方法。
（項目２５１）
３−ヒドロキシイソ酪酸またはメタクリル酸の生成が増殖連結型でない、項目２４９に記載の方法。
（項目２５２）
前記１つまたは複数の遺伝子破壊が表１０または１１に列挙したタンパク質または酵素をコードする、項目２４９に記載の方法。
（項目２５３）
前記１つまたは複数の遺伝子破壊が、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼおよびアセトアルデヒドＣｏＡデヒドロゲナーゼからなる群から選択されるタンパク質または酵素をコードする、項目２４９に記載の生物体。
（項目２５４）
アスパルターゼ、ピルビン酸ギ酸リアーゼ、ＮＡＤ（Ｐ）トランスヒドロゲナーゼ、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、ＡＴＰシンターゼ、ホスホエノールピルビン酸：ピルビン酸ホスホトランスフェラーゼ系、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、ホスホトランスアセチラーゼ、酢酸キナーゼ、６−ホスホグルコノラクトナーゼ、グルコース６−リン酸デヒドロゲナーゼおよびＮＡＤＨデヒドロゲナーゼからなる群から選択されるタンパク質または酵素をコードする１つまたは複数の遺伝子破壊をさらに含む、項目２５３に記載の生物体。
（項目２５５）
前記培養が実質的に嫌気性の培地中で行われる、項目２４９に記載の方法。
（項目２５６）
前記１つまたは複数の遺伝子破壊が、前記１つまたは複数の遺伝子の欠失を含む、項目２４９に記載の方法。