【手続補正書】
【提出日】平成24年8月6日(2012.8.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベル型の核を有する目的の異型核幹細胞を同定するための、又はベル型を有する１個以上の異型核幹細胞核を含む目的の多核合胞体を同定するための方法であって、該方法は、細胞の試料を固定するステップ、及び前記試料を、外部からの、又は外因的に加えられた蛍光色素の不在下で非蛍光性のシッフ塩基試薬により処理するステップ、並びに異型核幹細胞の蛍光性バルーン状細胞質構造、又は前記合胞体内の１個以上の幹細胞核を取り囲む細胞質の蛍光を視覚化するステップを含み、それにより前記目的の異型核幹細胞を同定する、又は１個以上のベル型の幹細胞核を含む前記目的の多核合胞体を同定する、方法。
【請求項２】
前記試料を固定するステップが、前記細胞の試料をカルノア固定液で処理すること、及びシッフ塩基フクシンを含むフォイルゲン試薬と反応させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記細胞又は合胞体が、細胞培養物、前新生物病変、腫瘍試料若しくは組織試料から得られるか、又は細胞培養物、前新生物病変、腫瘍試料若しくは組織試料に含まれている、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記異型核幹細胞又は多核合胞体が、前記組織試料、前新生物病変、又は腫瘍試料から単離される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記異型核幹細胞又は多核合胞体が、１つ以上の非対称な無糸核分裂複合体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法によって同定される、目的の異型核幹細胞又は合胞体。
【請求項７】
前新生物形成又は新生物形成を有することが疑われる成体哺乳動物において前新生物形成又は新生物形成を検出する方法であって、前記方法が、前記哺乳動物由来の細胞の試料を固定するステップ、及び前記試料を、外部からの、又は外因的に加えられた蛍光色素の不在下で非蛍光性のシッフ塩基試薬により処理するステップ、並びに異型核幹細胞の蛍光性バルーン状細胞質構造、又は合胞体内の１個以上のベル型である幹細胞核を取り囲む細胞質の蛍光を検出するステップを含み、それにより、外部からの、又は外因的に加えられた蛍光色素の不在下における、ベル型の核を有する１個以上の蛍光性異型核幹細胞の検出、又はベル型を有する１個以上の幹細胞核を含む１個以上の蛍光性合胞体の検出が、前記成体哺乳動物における前新生物形成又は新生物形成の指標となる、方法。
【請求項８】
前記試料を固定するステップが、前記細胞試料をカルノア固定液で処理すること、及びフォイルゲン染色液と反応させることを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記異型核幹細胞又は多核合胞体が、１つ以上の非対称な無糸核分裂複合体を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
異型核幹細胞、又は１個以上幹細胞核を含む合胞体に特異的な分子マーカーを同定する方法であって、該幹細胞の核はベル型であり、該方法は異型核幹細胞の前記分子マーカー又は１個以上の幹細胞核を含む合胞体の前記分子マーカーを、非異型核細胞の分子マーカーと比較するステップを含む、方法。
【請求項１１】
前記分子マーカーが、抗原、細胞表面マーカー、核酸、タンパク質、リン酸化タンパク質、グリコサミノグリカン又は代謝産物である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１０において同定される１つ以上の分子マーカーを検出するステップを含む、成体哺乳動物において前新生物形成又は新生物形成を検出する方法であって、成体組織における前記１つ以上の分子マーカーの同定が、前記成体哺乳動物における前新生物形成又は新生物形成の指標となる、方法。
【請求項１３】
異型核幹細胞の増殖を阻害する薬剤を同定する方法であって、
ａ）インビトロで組織試料又は細胞試料を候補薬剤により処理するステップ、ここで前記組織試料又は細胞試料が、異型核幹細胞又は１個以上の幹細胞核を含む合胞体を含み、該幹細胞の核はベル型である、
ｂ）前記処理した組織試料又は細胞試料を固定するステップ、及び前記試料を、外部からの、又は外因的に加えられた蛍光色素の不在下で非蛍光性のシッフ塩基試薬により処理するステップ、
ｃ）異型核幹細胞の蛍光性バルーン状細胞質構造、又は合胞体内の１個以上の幹細胞核を取り囲む細胞質の蛍光の存在、強度、又は数を検出するステップ、並びに
ｄ）前記候補薬剤により処理した前記試料中の、異型核幹細胞の蛍光性バルーン状細胞質構造、又は前記合胞体内の１個以上の幹細胞核を取り囲む細胞質の蛍光の存在、強度、又は数を、対照と比較するステップ
を含み、蛍光性の幹細胞、又は１個以上の幹細胞核を含む合胞体の、数又は強度における減少又はそれらが増加しないことが、前記薬剤が異型核幹細胞の増殖を阻害することの指標となる、方法。
【請求項１４】
前記処理した組織試料又は細胞試料を固定するステップが、前記細胞試料をカルノア固定液で処理すること、及びフォイルゲン染色液と反応させることを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記対照が、プラセボで処理されたインビトロの組織試料又は細胞試料であり、前記組織試料又は細胞試料が異型核幹細胞又は１個以上の幹細胞核を含む合胞体を含み、前記幹細胞の核がベル型である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
抗腫瘍形成薬剤を同定する方法であって、
ａ）インビトロで腫瘍組織試料又は腫瘍細胞試料を候補薬剤により処理するステップ、
ｂ）前記処理した腫瘍組織試料又は腫瘍細胞試料を固定するステップ、及び前記試料を、外部からの、又は外因的に加えられた蛍光色素の不在下で非蛍光性のシッフ塩基試薬により処理するステップ、
ｃ）異型核幹細胞の蛍光性バルーン状細胞質構造、又は１個以上の幹細胞核を含む合胞体内の１個以上幹細胞核を取り囲む細胞質の蛍光の存在、強度、又は数を検出するステップ、ここで該幹細胞の核はベル型である、並びに
ｄ）前記候補薬剤により処理した試料中の異型核幹細胞の蛍光性バルーン状細胞質構造、又は前記合胞体内の１個以上の幹細胞核を取り囲む細胞質の蛍光の存在、強度、又は数を、対照と比較するステップ
を含み、蛍光性幹細胞、又は１個以上の幹細胞核を含む合胞体の、数又は強度における減少又はそれらが増加しないことが、前記薬剤が抗腫瘍形成薬剤であることの指標となる、方法。
【請求項１７】
前記処理した腫瘍組織試料又は腫瘍細胞試料を固定するステップが、前記腫瘍細胞試料をカルノア固定液で処理すること、及びフォイルゲン染色液と反応させることを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記対照が、プラセボで処理されたインビトロの腫瘍組織試料又は腫瘍細胞試料である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
幹細胞の増殖を阻害する薬剤を同定する方法であって、該方法は
ａ）候補薬剤で処置した被験哺乳動物由来の細胞又は組織の試料を固定するステップ、及び前記試料を、外部からの、又は外因的に加えられた蛍光色素の不在下で非蛍光性のシッフ塩基試薬により処理するステップ、
ｂ）異型核幹細胞の蛍光性バルーン状細胞質構造、又は合胞体内の１個以上の幹細胞核を取り囲む細胞質の蛍光の存在、強度、又は数を検出するステップ、ここで該幹細胞の核はベル型である、並びに
ｃ）前記候補薬剤により処置した前記被験哺乳動物由来の細胞又は組織の前記試料中の、異型核幹細胞の蛍光性バルーン状細胞質構造、又は前記合胞体内の１個以上の幹細胞核を取り囲む細胞質の蛍光の存在、強度、又は数を、対照と比較するステップ
を含み、蛍光性の幹細胞、又は１個以上の幹細胞核を含む合胞体の、数又は強度における減少又はそれらが増加しないことが、前記薬剤が異型核幹細胞の増殖を阻害することの指標となる、方法。
【請求項２０】
前記処理した腫瘍組織試料又は腫瘍細胞試料を固定するステップが、前記腫瘍細胞の試料をカルノア固定液で処理すること、及びフォイルゲン染色液と反応させることを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記対照が、前記試験薬剤で処置する前に前記被験哺乳動物から採取された細胞又は組織の試料であり、又は前記対照が、プラセボで処理された被験哺乳動物由来の細胞又は組織の試料である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
抗腫瘍形成薬剤を同定する方法であって、
ａ）候補薬剤で処置した哺乳動物由来の腫瘍細胞又は腫瘍組織の試料を固定するステップ、及び前記試料を、外部からの、又は外因的に加えられた蛍光色素の不在下で非蛍光性のシッフ塩基試薬により処理するステップ、
ｂ）異型核幹細胞の蛍光性バルーン状細胞質構造、又は合胞体内の１個以上の幹細胞核を取り囲む細胞質の蛍光の存在、強度、又は数を検出するステップ、ここで該幹細胞の核はベル型である、並びに
ｃ）前記候補薬剤により処置した前記哺乳動物由来の前記腫瘍細胞又は腫瘍組織の試料中の、異型核幹細胞の蛍光性バルーン状細胞質構造、又は前記合胞体内の１個以上の幹細胞核を取り囲む細胞質の蛍光の存在、強度、又は数を、対照と比較するステップ
を含み、蛍光性の幹細胞、又は１個以上の幹細胞核を含む合胞体の、数又は強度における減少又はそれらが増加しないことが、前記薬剤が抗腫瘍形成薬剤であることの指標となる、方法。
【請求項２３】
前記処理した腫瘍組織試料又は腫瘍細胞試料を固定するステップが、前記腫瘍細胞の試料をカルノア固定液で処理すること、及びフォイルゲン染色液と反応させることを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記対照が、前記候補薬剤で処置する前に前記哺乳動物から採取された腫瘍細胞又は腫瘍組織の試料であり、又は前記対照が、プラセボで処理された哺乳動物由来の細胞又は組織の試料である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記目的の異型核幹細胞又は目的の合胞体が、１つ以上の非対称な無糸核分裂複合体をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記異型核幹細胞が、器官特異的幹細胞、癌幹細胞、胎児性小児性幹細胞及び成体幹細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記目的の異型核幹細胞又は目的の合胞体が、１つ以上の対称な無糸核分裂複合体をさらに含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
請求項２５に記載の方法によって同定される、目的の異型核幹細胞又は合胞体。