【手続補正書】
【提出日】平成25年12月16日(2013.12.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
膵細胞集団においてβ細胞複製を増大させるための薬学的組成物であって、アデノシンキナーゼ（ＡＤＫ）の阻害剤、Ｓ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼ（ＳＡＨＨ）の阻害剤、またはＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）の活性化剤を含む、薬学的組成物。
【請求項２】
アデノシンキナーゼの阻害剤が式（Ｉ）、ならびにその薬学的に許容される塩およびアミドである、請求項１記載の薬学的組成物：
2013514781.tif 000001
式中、
Ｒ１はＨ、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、ＯＲ５、ＳＲ５、Ｎ（Ｒ６）２、（ＣＨ２）ｍＲ７であるか、またはＲ１およびＲ２はそれらが連結している原子と一緒になって、置換されていてもよい５〜８員複素環を形成し；
Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立にＨ、ＯＲ５、ＳＲ５、Ｎ（Ｒ５）２であるか、またはＲ２およびＲ３はそれらが連結している原子と一緒になって、置換されていてもよい５〜８員ヘテロシクリルを形成し；
Ｒ４はＨ、ハロゲン、ＣＮ、Ｎ２、ＯＲ５、ＳＲ５、Ｎ（Ｒ５）２、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Ｒ５はそれぞれの場合で独立にＨ、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであるか、または２つのＲ５はそれらが連結している窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯもしくはＳから選択される１〜３個の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい５〜７員環を形成し；
Ｒ６はＲ５、ＯＲ５、ＳＲ５、Ｎ（Ｒ５）２、Ｎ２、ＣＮ、ハロゲン、または
2013514781.tif 000002
であり；
Ｒ７はそれぞれの場合で独立にＨ、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
ＸはＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＣＨ２であり；
ＹおよびＺはそれぞれ独立にＮまたはＣＲ８であり；
Ｒ８はそれぞれの場合で独立にＨ、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）Ｒ７、Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Ｚ１はそれぞれの場合で独立にＯまたはＳであり；
Ｚ２はそれぞれの場合で独立にＯＭ、ＳＭ、ＯＲ５、ＳＲ５、Ｎ（Ｒ５）２、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Ｍはアルカリ金属カチオンであり；
ｍは１、２、３、または４であり；
ｎは０、１、または２である。
【請求項３】
アデノシンキナーゼの阻害剤が式（ＩＩ）、ならびにその薬学的に許容される塩およびアミドである、請求項１記載の薬学的組成物：
2013514781.tif 000003
式中、
Ｒ９はそれぞれ独立にＨ、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであるか、または２つのＲ９はそれらが連結している窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯもしくはＳから選択される１〜３個の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい５〜７員環を形成し；
Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ独立にＨ、ＯＲ１４、Ｎ（Ｒ１４）２、Ｎ２、ＮＯ２、ＣＮ、ハロゲン、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Ｒ１３はそれぞれの場合で独立にハロゲン、ＣＮ、ＮＨ２、または置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキルであり；
Ｒ１４はＨ、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであるか、または２つのＲ１４はそれらが連結している窒素原子と一緒になって、Ｎ、ＯもしくはＳから選択される１〜３個の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい５〜７員環を形成し；
Ｘ２はＮまたはＣＲ１５であり；
Ｒ１５はＮＨＲ１６、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Ｒ１６はＨ、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Ｙ２はＮまたはＣＨであり；
ｑは０、１、２、または３である。
【請求項４】
ＡＤＫ阻害剤阻害剤のＩＣ５０が、５００ｎＭ以下、２５０ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、７５ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下である、請求項１〜３のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項５】
ＡＤＫ活性が、非阻害対照に比べて、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％（例えば、活性の完全な消失）阻害されるかまたは低減する、請求項１〜４のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項６】
ＡＤＫ阻害剤が、アリステロマイシン、５’−デオキシアデノシン、５’−アミノアデノシン、５’−デオキシ−５−ヨードツベルシジン、５−ヨードツベルシジン（Ａ１０）、７−デアザ−７−ヨード−２’，３’−ジデオキシアデノシン、ノル−アリステロマイシン、ノル−ツベルシジン、Ａ−１３４９７４、トヨカマイシン、ＧＰ−５１５（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（４−アミノ−３−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−１−イル）−５−（アミノメチル）−テトラヒドロフラン−３，４−ジオール）、ＧＰ−３２６９（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（４−（４−フルオロフェニルアミノ）−５−フェニル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−テトラヒドロ−５−メチルフラン−３，４−ジオール）、ＧＰ−６８３（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−テトラヒドロ−２−メチル−５−（５−フェニル−４−（フェニルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）フラン−３，４−ジオール）、ＧＰ−９４７（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−テトラヒドロ−２−メチル−５−（５−フェニル−４−（フェニルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）フラン−３，４−ジオール）、ＡＢＴ−７０２（５−（３−ブロモフェニル）−７−（６−モルホリノピリジン−３−イル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン、Ｂ８）、化合物１（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（４−アミノ−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−５−（アミノメチル）−テトラヒドロフラン−３，４−ジオール）、化合物２（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−２−（４−クロロ−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）−５−（アミノメチル）−テトラヒドロフラン−３，４−ジオール）、化合物３（（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）−３−アミノ−５−（６−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）シクロペンタン−１，２−ジオール）、化合物４（（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）−３−アミノ−５−（７−アミノ−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−３−イル）シクロペンタン−１，２−ジオール）、化合物５（（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−４−（４−アミノ−５−ヨード−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル）シクロペンタン−１，２，３−トリオール）、化合物６（７−（４−（ジメチルアミノ）フェニル）プテリジン−４−アミン）、化合物７（５−（３−ブロモフェニル）−７−（４−（ジメチルアミノ）フェニル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン）、化合物８（５−（２−ブロモベンジル）−７−（６−モルホリノピリジン−３−イル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン）、化合物９（５−シクロヘキシル−７−（６−モルホリノピリジン−３−イル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン）、化合物１０（５−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−７−（６−モルホリノピリジン−３−イル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン）、化合物１１（５−（１−（２−ブロモフェニル）エチル）−７−（６−モルホリノピリジン−３−イル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン）、化合物１２（５−（２−メチルペンタ−４−エン−２−イル）−７−（６−モルホリノピリジン−３−イル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン）、化合物１３（Ｎ５−（（１Ｈ−インドール−３−イル）メチル）−７−（６−モルホリノピリジン−３−イル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−４，５−ジアミン）、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１〜５のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項７】
ＡＭＰＫの活性化剤が式（ＩＩＩ）、ならびにその薬学的に許容される塩およびアミドである、請求項１記載の薬学的組成物：
2013514781.tif 000004
式中、
Ｒ１７はＨ、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、ＯＲ２２、ＳＲ２２、Ｎ（Ｒ２２）２、（ＣＨ２）ｍＲ２３であるか、またはＲ１７およびＲ１８はそれらが連結している原子と一緒になって、置換されていてもよい５〜８員複素環を形成し；
Ｒ１８およびＲ１９はそれぞれ独立にＨ、ＯＲ２２、ＳＲ２２、Ｎ（Ｒ２２）２であるか、またはＲ１８およびＲ１９はそれらが連結している原子と一緒になって、置換されていてもよい５〜８員複素環を形成し；
Ｒ２０およびＲ２１はそれぞれ独立にハロゲン、ＣＮ、Ｎ２、ＯＲ２２、ＳＲ２２、Ｎ（Ｒ２２）２、Ｃ（Ｏ）Ｒ２４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ２４、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２４）２、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Ｒ２２はそれぞれの場合で独立にＨ、Ｃ（Ｏ）Ｒ２４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ２４、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２４）２、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Ｒ２３はＲ２２、ＯＲ２２、ＳＲ２２、Ｎ（Ｒ２２）２、Ｎ２、ＣＮ、ハロゲン、または
2013514781.tif 000005
であり；
Ｒ２４はそれぞれの場合で独立にＨ、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
ＸはＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＣＨ２であり；
ＹおよびＺはそれぞれ独立にＮまたはＣＲ２５であり；
Ｒ２５はそれぞれの場合で独立にＨ、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ（Ｏ）Ｒ２４、Ｃ（Ｏ）ＯＲ２４、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２４）２、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Ｚ１はそれぞれの場合で独立にＯまたはＳであり；
Ｚ２はそれぞれの場合で独立にＨ、ＯＭ、ＳＭ、ＯＲ２２、ＳＲ２２、Ｎ（Ｒ２２）２、置換されていてもよいＣ１〜Ｃ６アルキル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルケニル、置換されていてもよいＣ２〜Ｃ６アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Ｍはアルカリ金属カチオンであり；
ｍは１、２、３、または４であり；
ｎは０、１、または２である。
【請求項８】
ＡＭＰ活性化キナーゼの活性が、非活性化対照に比べて、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍またはそれ以上増大する、請求項１または７記載の薬学的組成物。
【請求項９】
ＡＭＰＫ活性化剤のＥＣ５０が、５００ｎＭ以下、２５０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下である、請求項１、７または８のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
ＡＭＰＫ活性化剤が５−アミノイミダゾール−４−カルボキサミドリボヌクレオシド（ＡＩＣＡＲ）である、請求項１、７〜９のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
ＳＡＨＨ阻害剤阻害剤のＩＣ５０が、５００ｎＭ以下、２５０ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、７５ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、０．００１ｎＭ以下である、請求項１記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
ＳＡＨＨ活性が、非阻害対照に比べて少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、または１００％（例えば、活性の完全な消失）阻害されるかまたは低減する、請求項１または１１記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
ＳＡＨＨ阻害剤が、９（Ｓ）−（２，３−ジヒドロキシプロピル）アデニン［（Ｓ）−ＤＨＰＡ］；Ｄ−エリタジン；（Ｒ，Ｓ）−３−アデニン−９−イル−２−ヒドロキシプロパン酸［（Ｒ，Ｓ）−ＡＨＰＡ］；アデノシン（Ａｄｏ）ジアルデヒド；３−デアザアデノシン（ｃ３−Ａｄｏ）；アリステロマイシン（Ａｒｉ）；ネプラノシンＡ（ＮＰＡまたはＮｐｃＡ）；ジヒドロキシシクロペンテニルアデニン（ＤＨＣｅＡ）；ジヒドロキシシクロペンテニル−３−デアザアデニン（ｃ３−ＤＨＣｅＡ）；ジヒドロキシシクロペンタニルアデニン（ＤＨＣａＡ）；ジヒドロキシシクロペンタニル−３−デアザアデニン（ｃ３−ＤＨＣａＡ）；３−デアザネプラノシンＡ（ｃ３−ＮｐｃＡ）；３−デアザアリステロマイシン（ｃ３Ａｒｉ）；炭素環式−３−デアザアデノシン（Ｃ−ｃ３Ａｄｏ）；６’−ＣメチルネプラノシンＡ；２’−デオキシアデノシン；ツベルシジン；リバビリン；ピラアゾフリン；２’−デオキシ−２’−クロロアデノシン；イソペンテニルアデノシン；メチルチオアデノシン（ＭＴＡ）；９−β−アラビノフラノシルアデニン（Ａｒａ−Ａ、ビダラビン）；２’−デオキシアデノシン；Ｎ−メチルアリステロマイシン、８−アザアリステロマイシンおよび３−デアザアリステロマイシン、ならびにそれらのジアルデヒドおよびジオール誘導体；（±）−５ノルアリステロマイシンおよびその２，６−ジアミノ類似体；２’−デオキシ−アリステロマイシン；３’−デオキシ−アリステロマイシン；３’−アミノ−３’−デオキシ−アリステロマイシン；３’−アミノ−３’−デオキシアラビノフラノシル−アリステロマイシン；６’−ヒドロキシ−アリステロマイシン；６’−メルカプト−アリステロマイシン；８’−ブロモ−アリステロマイシン；８−ヒドロキシアリステロマイシン、アリステロマイシン−３’−環状ホスフェート、アリステロマイシン−６’−環状ホスフェート；２−フルオロ−Ｓ−アデノシルホモシステイン（２−ＦＳＡＨ）、Ｓ−アデノシル−Ｌ−ホモシステインスルホキシド；Ｓ−アデノシル−Ｌホモシステインスルホン；Ｓ−アリステロマイシニル−Ｌ−ホモシステイン；５’−Ｓ−（３−カルボキシル−４−ニトロフェニル）チオアデノシン；５’−Ｓ（メチル）−５’−Ｓ−（ブチル）チオアデノシン；ならびにこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項１、１１または１２のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
膵細胞が対象由来であり、該対象がさらなるβ細胞を必要としている、請求項１〜１３のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
膵細胞が対象由来であり、該対象がさらなるβ細胞を必要としていない、請求項１〜１４のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
対象が哺乳動物である、請求項１〜１５のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
対象がヒトである、請求項１〜１６のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
対象がマウスである、請求項１〜１６のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
膵細胞が一次膵細胞である、請求項１〜１８のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
膵細胞が脱分化細胞由来である、請求項１〜１９のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
膵細胞集団をアデノシンキナーゼ（ＡＤＫ）の阻害剤、Ｓ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼ（ＳＡＨＨ）の阻害剤、またはＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）の活性化剤と接触させる段階を含む、膵細胞集団においてβ細胞複製を増大させる方法であって、
接触がインビトロである、方法。
【請求項２２】
膵細胞集団をアデノシンキナーゼ（ＡＤＫ）の阻害剤、Ｓ−アデノシルホモシステインヒドロラーゼ（ＳＡＨＨ）の阻害剤、またはＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）の活性化剤と接触させる段階を含む、膵細胞集団においてβ細胞複製を増大させる方法であって、
接触がエクスビボである、方法。
【請求項２３】
β細胞複製が、対照に比べて少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５０％、７０％、８０％、９０％、１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍またはそれ以上増大する、請求項１〜２０のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
下記の段階を含む、膵細胞の集団におけるβ細胞複製を増大させる化合物をスクリーニングするためのハイスループットアッセイ法：
（ａ）一次膵細胞である膵細胞の集団または調製物を、試験化合物と接触させる段階；
（ｂ）β細胞の複製または増殖を評価する段階；および
（ｃ）β細胞の複製または増殖を増大させるかまたは増強する化合物を選択する段階。
【請求項２５】
表面がラット膀胱癌細胞株８０４Ｇ由来の条件培地でコーティングされている細胞培養容器内で、膵細胞を培養する、請求項２４記載のアッセイ法。
【請求項２６】
β細胞複製を評価する段階が、β細胞マーカーおよび細胞複製マーカーを検出することを含む、請求項２４または２５記載のアッセイ法。
【請求項２７】
細胞複製マーカーがＫｉ−６７またはＰＨ３である、請求項２６記載のアッセイ法。
【請求項２８】
β細胞マーカーがＰＤＸ−１、インスリン、ｃ−ペプチド、アミリン、Ｅ−カドヘリン、Ｈｎｆ３β、ＰＣＩ／３、Ｂｅｔａ２、Ｎｋｘ２．２、Ｎｋｘ６．１、ＧＬＵＴ２、ＰＣ２、ＺｎＴ−８、ＭＡＦＡ、ＭＡＦＢ、およびこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項２６または２７記載のアッセイ法。
【請求項２９】
β細胞マーカーがＰＤＸ−１である、請求項２６〜２８のいずれか一項記載のアッセイ法。
【請求項３０】
β細胞マーカーがインスリンではない、請求項２６〜２９のいずれか一項記載のアッセイ法。
【請求項３１】
試験化合物が０．１ｎＭ〜１０００ｍＭの範囲の濃度を有する、請求項２４〜３０のいずれか一項記載のアッセイ法。
【請求項３２】
約１５℃〜約５５℃の範囲の温度で実施される、請求項２４〜３１のいずれか一項記載のアッセイ法。
【請求項３３】
試験化合物を膵細胞と少なくとも１時間接触させる、請求項２４〜３２のいずれか一項記載のアッセイ法。
【請求項３４】
試験化合物がβ細胞の複製または増殖を、未処理対照に比べて、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、５０％、７０％、８０％、９０％、１倍、１．１倍、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍またはそれ以上増大させる、請求項２４〜３３のいずれか一項記載のアッセイ法。
【請求項３５】
膵細胞が膵細胞株ではない、請求項２４〜３４のいずれか一項記載のアッセイ法。
【請求項３６】
膵細胞集団がランゲルハンス島またはその断片である、請求項２４〜３５のいずれか一項記載のアッセイ法。
【請求項３７】
膵細胞が一次膵β細胞である、請求項２４〜３６のいずれか一項記載のアッセイ法。
【請求項３８】
試験化合物との接触の前に、膵細胞を細胞培養容器の表面に約１２〜４８時間接着させる、請求項２４〜３７のいずれか一項記載のアッセイ法。
【請求項３９】
膵細胞が脱分化細胞由来である、請求項２４〜３８のいずれか一項記載のアッセイ法。
【請求項４０】
脱分化細胞が多能性幹細胞から誘導される、請求項２４〜３９のいずれか一項記載のアッセイ法。
【請求項４１】
下記の段階を含む、請求項２４〜４０のいずれか一項記載のアッセイ法：
（ａ）ランゲルハンス島をトリプシン処理して、細胞１〜３個からなる細胞塊とする段階；
（ｂ）該細胞を一晩回復させる段階；
（ｃ）段階（ｂ）の細胞を９６穴プレートのウェルに播種する段階であって、該ウェルが８０４Ｇ条件培地でコーティングされており、細胞播種密度が細胞６０，０００個／ウェルである、段階；
（ｄ）該細胞を該ウェルの表面に４８時間接着させる段階；
（ｅ）１μＭの試験化合物をβ細胞と２４時間接触させる段階；
（ｆ）該細胞をＰＤＸ−１抗体ならびにＫｉ−６７および／またはＰＨ３抗体で染色する段階；
（ｇ）β細胞複製を評価する段階；ならびに
（ｈ）β細胞複製を増大させるかまたは増強する化合物を選択する段階。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
もう一つの局面において、本発明は、以下の段階を含む、β細胞複製を増大させるための候補化合物をスクリーニングする方法を提供する：（a）膵細胞集団を試験化合物と接触させる段階；（b）（i）培養物中の全細胞数を増加させる、（ii）未処理対照と比べて、培養物中の少なくとも1つのβ細胞マーカーを発現する全細胞数を増加させる、（iii）未処理対照と比べて、培養物中の全細胞数に対する少なくとも1つのβ細胞マーカーを発現する細胞の比を高める、（iv）未処理対照と比べて、少なくとも1つの細胞複製マーカーを発現する細胞数を増加させる、または（iv）未処理対照と比べて、少なくとも1つの細胞複製マーカーを発現する細胞の比を高める化合物を、選択する段階；ここで膵細胞は一次膵細胞である。
[本発明1001]
膵細胞集団においてβ細胞複製を増大させる方法であって、膵細胞集団をアデノシンキナーゼ（ADK）の阻害剤、S-アデノシルホモシステインヒドロラーゼ（SAHH）の阻害剤、またはAMP活性化プロテインキナーゼ（AMPK）の活性化剤と接触させる段階を含む、方法。
[本発明1002]
アデノシンキナーゼの阻害剤が式（I）、ならびにその薬学的に許容される塩およびアミドである、本発明1001の方法：
2013514781.tif 000006
式中、
R1はH、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、OR5、SR5、N(R6)2、(CH2)mR7であるか、またはR1およびR2はそれらが連結している原子と一緒になって、置換されていてもよい5〜8員複素環を形成し；
R2およびR3はそれぞれ独立にH、OR5、SR5、N(R5)2であるか、またはR2およびR3はそれらが連結している原子と一緒になって、置換されていてもよい5〜8員ヘテロシクリルを形成し；
R4はH、ハロゲン、CN、N2、OR5、SR5、N(R5)2、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
R5はそれぞれの場合で独立にH、C(O)R7、C(O)OR7、C(O)N(R7)2、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであるか、または2つのR5はそれらが連結している窒素原子と一緒になって、N、OもしくはSから選択される1〜3個の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい5〜7員環を形成し；
R6はR5、OR5、SR5、N(R5)2、N2、CN、ハロゲン、または
2013514781.tif 000007
であり；
R7はそれぞれの場合で独立にH、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
XはO、S、NH、またはCH2であり；
YおよびZはそれぞれ独立にNまたはCR8であり；
R8はそれぞれの場合で独立にH、ハロゲン、CN、C(O)R7、C(O)OR7、C(O)N(R7)2、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Z1はそれぞれの場合で独立にOまたはSであり；
Z2はそれぞれの場合で独立にOM、SM、OR5、SR5、N(R5)2、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Mはアルカリ金属カチオンであり；
mは1、2、3、または4であり；
nは0、1、または2である。
[本発明1003]
アデノシンキナーゼの阻害剤が式（II）、ならびにその薬学的に許容される塩およびアミドである、本発明1001の方法：
2013514781.tif 000008
式中、
R9はそれぞれ独立にH、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであるか、または2つのR9はそれらが連結している窒素原子と一緒になって、N、OもしくはSから選択される1〜3個の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい5〜7員環を形成し；
R10、R11およびR12はそれぞれ独立にH、OR14、N(R14)2、N2、NO2、CN、ハロゲン、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
R13はそれぞれの場合で独立にハロゲン、CN、NH2、または置換されていてもよいC1〜C6アルキルであり；
R14はH、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであるか、または2つのR14はそれらが連結している窒素原子と一緒になって、N、OもしくはSから選択される1〜3個の追加のヘテロ原子を含んでいてもよい5〜7員環を形成し；
X2はNまたはCR15であり；
R15はNHR16、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
R16はH、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Y2はNまたはCHであり；
qは0、1、2、または3である。
[本発明1004]
ADK阻害剤阻害剤のIC50が、500nM以下、250nM以下、200nM以下、100nM以下、75nM以下、50nM以下、25nM以下、10nM以下、1nM以下、0.1nM以下、0.01nM以下、または0.001nM以下である、本発明1001〜1003のいずれかの方法。
[本発明1005]
ADK活性が、非阻害対照に比べて、少なくとも5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、または100％（例えば、活性の完全な消失）阻害されるかまたは低減する、本発明1001〜1004のいずれかの方法。
[本発明1006]
ADK阻害剤が、アリステロマイシン、5'-デオキシアデノシン、5'-アミノアデノシン、5'-デオキシ-5-ヨードツベルシジン、5-ヨードツベルシジン（A10）、7-デアザ-7-ヨード-2',3'-ジデオキシアデノシン、ノル-アリステロマイシン、ノル-ツベルシジン、A-134974、トヨカマイシン、GP-515（(2R,3R,4S,5R)-2-(4-アミノ-3-ブロモ-1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリミジン-1-イル)-5-(アミノメチル)-テトラヒドロフラン-3,4-ジオール）、GP-3269（(2R,3R,4S,5R)-2-(4-(4-フルオロフェニルアミノ)-5-フェニル-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)-テトラヒドロ-5-メチルフラン-3,4-ジオール）、GP-683（(2R,3S,4R,5R)-テトラヒドロ-2-メチル-5-(5-フェニル-4-(フェニルアミノ)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)フラン-3,4-ジオール）、GP-947（(2S,3S,4R,5R)-テトラヒドロ-2-メチル-5-(5-フェニル-4-(フェニルアミノ)-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)フラン-3,4-ジオール）、ABT-702（5-(3-ブロモフェニル)-7-(6-モルホリノピリジン-3-イル)ピリド[2,3-d]ピリミジン-4-アミン、B8）、化合物1（(2R,3R,4S,5R)-2-(4-アミノ-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)-5-(アミノメチル)-テトラヒドロフラン-3,4-ジオール）、化合物2（(2R,3R,4S,5R)-2-(4-クロロ-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)-5-(アミノメチル)-テトラヒドロフラン-3,4-ジオール）、化合物3（(1S,2R,3S,5R)-3-アミノ-5-(6-アミノ-9H-プリン-9-イル)シクロペンタン-1,2-ジオール）、化合物4（(1S,2R,3S,5R)-3-アミノ-5-(7-アミノ-3H-[1,2,3]トリアゾロ[4,5-d]ピリミジン-3-イル)シクロペンタン-1,2-ジオール）、化合物5（(1S,2R,3S,4R)-4-(4-アミノ-5-ヨード-7H-ピロロ[2,3-d]ピリミジン-7-イル)シクロペンタン-1,2,3-トリオール）、化合物6（7-(4-(ジメチルアミノ)フェニル)プテリジン-4-アミン）、化合物7（5-(3-ブロモフェニル)-7-(4-(ジメチルアミノ)フェニル)ピリド[2,3-d]ピリミジン-4-アミン）、化合物8（5-(2-ブロモベンジル)-7-(6-モルホリノピリジン-3-イル)ピリド[2,3-d]ピリミジン-4-アミン）、化合物9（5-シクロヘキシル-7-(6-モルホリノピリジン-3-イル)ピリド[2,3-d]ピリミジン-4-アミン)、化合物10（5-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)-7-(6-モルホリノピリジン-3-イル)ピリド[2,3-d]ピリミジン-4-アミン）、化合物11（5-(1-(2-ブロモフェニル)エチル)-7-(6-モルホリノピリジン-3-イル)ピリド[2,3-d]ピリミジン-4-アミン）、化合物12（5-(2-メチルペンタ-4-エン-2-イル)-7-(6-モルホリノピリジン-3-イル)ピリド[2,3-d]ピリミジン-4-アミン）、化合物13（N5-((1H-インドール-3-イル)メチル)-7-(6-モルホリノピリジン-3-イル)ピリド[2,3-d]ピリミジン-4,5-ジアミン）、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される、本発明1001〜1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
AMPKの活性化剤が式（III）、ならびにその薬学的に許容される塩およびアミドである、本発明1001の方法：
2013514781.tif 000009
式中、
R17はH、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、OR22、SR22、N(R22)2、(CH2)mR23であるか、またはR17およびR18はそれらが連結している原子と一緒になって、置換されていてもよい5〜8員複素環を形成し；
R18およびR19はそれぞれ独立にH、OR22、SR22、N(R22)2であるか、またはR18およびR19はそれらが連結している原子と一緒になって、置換されていてもよい5〜8員複素環を形成し；
R20およびR21はそれぞれ独立にハロゲン、CN、N2、OR22、SR22、N(R22)2、C(O)R24、C(O)OR24、C(O)N(R24)2、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
R22はそれぞれの場合で独立にH、C(O)R24、C(O)OR24、C(O)N(R24)2、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
R23はR22、OR22 、SR22、N(R22)2、N2、CN、ハロゲン、または
2013514781.tif 000010
であり；
R24はそれぞれの場合で独立にH、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
XはO、S、NH、またはCH2であり；
YおよびZはそれぞれ独立にNまたはCR25であり；
R25はそれぞれの場合で独立にH、ハロゲン、CN、C(O)R24、C(O)OR24、C(O)N(R24)2、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Z1はそれぞれの場合で独立にOまたはSであり；
Z2はそれぞれの場合で独立にH、OM、SM、OR22、SR22、N(R22)2、置換されていてもよいC1〜C6アルキル、置換されていてもよいC2〜C6アルケニル、置換されていてもよいC2〜C6アルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいアリールアルキル、または置換されていてもよいヘテロアリールアルキルであり；
Mはアルカリ金属カチオンであり；
mは1、2、3、または4であり；
nは0、1、または2である。
[本発明1008]
AMP活性化キナーゼの活性が、非活性化対照に比べて、少なくとも5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、1倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍またはそれ以上増大する、本発明1001または1007の方法。
[本発明1009]
AMPK活性化剤のEC50が、500nM以下、250nM以下、100nM以下、50nM以下、10nM以下、1nM以下、0.1nM以下、0.01nM以下、または0.001nM以下である、本発明1001、1007または1008のいずれかの方法。
[本発明1010]
AMPK活性化剤が5-アミノイミダゾール-4-カルボキサミドリボヌクレオシド（AICAR）である、本発明1001、1007〜1009のいずれかの方法。
[本発明1011]
SAHH阻害剤阻害剤のIC50が、500nM以下、250nM以下、200nM以下、100nM以下、75nM以下、50nM以下、25nM以下、10nM以下、1nM以下、0.1nM以下、0.01nM以下、0.001nM以下である、本発明1001の方法。
[本発明1012]
SAHH活性が、非阻害対照に比べて少なくとも5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％、または100％（例えば、活性の完全な消失）阻害されるかまたは低減する、本発明1001または1011の方法。
[本発明1013]
SAHH阻害剤が、9(S)-(2,3-ジヒドロキシプロピル)アデニン［(S)-DHPA］；D-エリタジン；(R,S)-3-アデニン-9-イル-2-ヒドロキシプロパン酸［(R,S)-AHPA］；アデノシン（Ado）ジアルデヒド；3-デアザアデノシン（c3-Ado）；アリステロマイシン（Ari）；ネプラノシンA（NPAまたはNpcA）；ジヒドロキシシクロペンテニルアデニン（DHCeA）；ジヒドロキシシクロペンテニル-3-デアザアデニン（c3-DHCeA）；ジヒドロキシシクロペンタニルアデニン（DHCaA）；ジヒドロキシシクロペンタニル-3-デアザアデニン（c3-DHCaA）；3-デアザネプラノシンA（c3-NpcA）；3-デアザアリステロマイシン（c3Ari）；炭素環式-3-デアザアデノシン（C-c3Ado）；6'-CメチルネプラノシンA；2'-デオキシアデノシン；ツベルシジン；リバビリン；ピラアゾフリン；2'-デオキシ-2'-クロロアデノシン；イソペンテニルアデノシン；メチルチオアデノシン（MTA）；9-β-アラビノフラノシルアデニン（Ara-A、ビダラビン）；2'-デオキシアデノシン；N-メチルアリステロマイシン、8-アザアリステロマイシンおよび3-デアザアリステロマイシン、ならびにそれらのジアルデヒドおよびジオール誘導体；(±)-5ノルアリステロマイシンおよびその2,6-ジアミノ類似体；2'-デオキシ-アリステロマイシン；3'-デオキシ-アリステロマイシン；3'-アミノ-3'-デオキシ-アリステロマイシン；3'-アミノ-3'-デオキシアラビノフラノシル-アリステロマイシン；6'-ヒドロキシ-アリステロマイシン；6'-メルカプト-アリステロマイシン；8'-ブロモ-アリステロマイシン；8-ヒドロキシアリステロマイシン、アリステロマイシン-3'-環状ホスフェート、アリステロマイシン-6'-環状ホスフェート；2-フルオロ-S-アデノシルホモシステイン（2-FSAH）、S-アデノシル-L-ホモシステインスルホキシド；S-アデノシル-Lホモシステインスルホン；S-アリステロマイシニル-L-ホモシステイン；5'-S-(3-カルボキシル-4-ニトロフェニル)チオアデノシン；5'-S(メチル)-5'-S-(ブチル)チオアデノシン；ならびにこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、本発明1001、1011または1012のいずれかの方法。
[本発明1014]
膵細胞が対象由来であり、該対象がさらなるβ細胞を必要としている、本発明1001〜1013のいずれかの方法。
[本発明1015]
膵細胞が対象由来であり、該対象がさらなるβ細胞を必要としていない、本発明1001〜1014のいずれかの方法。
[本発明1016]
対象が哺乳動物である、本発明1001〜1015のいずれかの方法。
[本発明1017]
対象がヒトである、本発明1001〜1016のいずれかの方法。
[本発明1018]
対象がマウスである、本発明1001〜1016のいずれかの方法。
[本発明1019]
膵細胞が一次膵細胞である、本発明1001〜1018のいずれかの方法。
[本発明1020]
膵細胞が脱分化細胞由来である、本発明1001〜1019のいずれかの方法。
[本発明1021]
接触がインビトロである、本発明1001〜1020のいずれかの方法。
[本発明1022]
接触がエクスビボである、本発明1001〜1020のいずれかの方法。
[本発明1023]
接触がインビボである、本発明1001〜1020のいずれかの方法。
[本発明1024]
インビボでの接触が哺乳動物内である、本発明1023の方法。
[本発明1025]
インビボでの接触がマウス内である、本発明1024の方法。
[本発明1026]
インビボでの接触がヒト内である、本発明1024の方法。
[本発明1027]
インビボでの接触が対象内であり、該対象がさらなるβ細胞を必要としている、本発明1023の方法。
[本発明1028]
対象が1型糖尿病を患っている、本発明1027の方法。
[本発明1029]
対象が2型糖尿病を患っている、本発明1027の方法。
[本発明1030]
対象が哺乳動物である、本発明1027の方法。
[本発明1031]
対象がヒトである、本発明1027〜1030のいずれかの方法。
[本発明1032]
β細胞複製が、対照に比べて少なくとも5％、10％、20％、30％、40％、50％、50％、70％、80％、90％、1倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍またはそれ以上増大する、本発明1001〜1031のいずれかの方法。
[本発明1033]
下記の段階を含む、膵細胞の集団におけるβ細胞複製を増大させる化合物をスクリーニングするためのハイスループットアッセイ法：
（a）一次膵細胞である膵細胞の集団または調製物を、試験化合物と接触させる段階；
（b）β細胞の複製または増殖を評価する段階；および
（c）β細胞の複製または増殖を増大させるかまたは増強する化合物を選択する段階。
[本発明1034]
表面がラット膀胱癌細胞株804G由来の条件培地でコーティングされている細胞培養容器内で、膵細胞を培養する、本発明1033のアッセイ法。
[本発明1035]
β細胞複製を評価する段階が、β細胞マーカーおよび細胞複製マーカーを検出することを含む、本発明1033または1034のアッセイ法。
[本発明1036]
細胞複製マーカーがKi-67またはPH3である、本発明1035のアッセイ法。
[本発明1037]
β細胞マーカーがPDX-1、インスリン、c-ペプチド、アミリン、E-カドヘリン、Hnf3β、PCI/3、Beta2、Nkx2.2、Nkx6.1、GLUT2、PC2、ZnT-8、MAFA、MAFB、およびこれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、本発明1035または1036のアッセイ法。
[本発明1038]
β細胞マーカーがPDX-1である、本発明1035〜1037のいずれかのアッセイ法。
[本発明1039]
β細胞マーカーがインスリンではない、本発明1035〜1038のいずれかのアッセイ法。
[本発明1040]
試験化合物が0.1nM〜1000mMの範囲の濃度を有する、本発明1033〜1039のいずれかのアッセイ法。
[本発明1041]
約15℃〜約55℃の範囲の温度で実施される、本発明1033〜1040のいずれかのアッセイ法。
[本発明1042]
試験化合物を膵細胞と少なくとも1時間接触させる、本発明1033〜1041のいずれかのアッセイ法。
[本発明1043]
試験化合物がβ細胞の複製または増殖を、未処理対照に比べて、少なくとも5％、10％、20％、30％、40％、50％、50％、70％、80％、90％、1倍、1.1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、50倍、100倍またはそれ以上増大させる、本発明1030〜1042のいずれかのアッセイ法。
[本発明1044]
膵細胞が膵細胞株ではない、本発明1033〜1043のいずれかのアッセイ法。
[本発明1045]
膵細胞集団がランゲルハンス島またはその断片である、本発明1033〜1044のいずれかのアッセイ法。
[本発明1046]
膵細胞が一次膵β細胞である、本発明1033〜1045のいずれかのアッセイ法。
[本発明1047]
試験化合物との接触の前に、膵細胞を細胞培養容器の表面に約12〜48時間接着させる、本発明1033〜1046のいずれかのアッセイ法。
[本発明1048]
膵細胞が脱分化細胞由来である、本発明1033〜1047のいずれかのアッセイ法。
[本発明1049]
脱分化細胞が多能性幹細胞から誘導される、本発明1033〜1048のいずれかのアッセイ法。
[本発明1050]
下記の段階を含む、本発明1033〜1049のいずれかのアッセイ法：
（a）ランゲルハンス島をトリプシン処理して、細胞1〜3個からなる細胞塊とする段階；
（b）該細胞を一晩回復させる段階；
（c）段階（b）の細胞を96穴プレートのウェルに播種する段階であって、該ウェルが804G条件培地でコーティングされており、細胞播種密度が細胞60,000個/ウェルである、段階；
（d）該細胞を該ウェルの表面に48時間接着させる段階；
（e）1μMの試験化合物をβ細胞と24時間接触させる段階；
（f）該細胞をPDX-1抗体ならびにKi-67および/またはPH3抗体で染色する段階；
（g）β細胞複製を評価する段階；ならびに
（h）β細胞複製を増大させるかまたは増強する化合物を選択する段階。