【手続補正書】
【提出日】平成24年6月6日(2012.6.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）転写制御エレメント、ならびに
（ｂ）前記転写制御エレメントに機能的に連結した第１および第２コード配列であって、前記第１および第２コード配列がそれぞれ、第１および第２再プログラム因子をコードする、第１および第２コード配列
を含む多シストロン性発現カセットを含む再プログラムベクター。
【請求項２】
前記転写制御エレメントが末端反復配列領域（ＬＴＲ）を含む、請求項１に記載の再プログラムベクター。
【請求項３】
前記発現カセットが前記転写制御エレメントに機能的に連結した第３コード配列をさらに含み、前記第３コード配列が第３再プログラム因子をコードする、請求項１に記載の再プログラムベクター。
【請求項４】
コードされる前記再プログラム因子がＳｏｘ、Ｏｃｔ、Ｎａｎｏｇ、Ｌｉｎ２８、Ｋｌｆ４またはｃ−Ｍｙｃである、請求項１に記載の再プログラムベクター。
【請求項５】
ＳｏｘがＳｏｘ−１、Ｓｏｘ−２、Ｓｏｘ−３、Ｓｏｘ−１５またはＳｏｘ−１８である、請求項４に記載の再プログラムベクター。
【請求項６】
ＯｃｔがＯｃｔ−４である、請求項４に記載の再プログラムベクター。
【請求項７】
前記再プログラム因子がＮａｎｏｇ、Ｌｉｎ２８、Ｋｌｆ４またはｃ−Ｍｙｃである、請求項４に記載の再プログラムベクター。
【請求項８】
前記ベクターがウイルスベクターである、請求項１に記載の再プログラムベクター。
【請求項９】
前記ベクターがエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）に基づくベクターである、請求項８に記載の再プログラムベクター。
【請求項１０】
前記ベクターがレトロウイルスベクターである、請求項８に記載の再プログラムベクター。
【請求項１１】
前記レトロウイルスベクターがマウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）、Ａｋｖ−ＭＬＶまたはＳＬ−３−３−ＭＬＶである、請求項１０に記載の再プログラムベクター。
【請求項１２】
前記ベクターがレンチウイルスベクターである、請求項８に記載の再プログラムベクター。
【請求項１３】
前記発現カセットが１つまたは複数のＩＲＥＳをさらに含む、請求項１に記載の再プログラムベクター。
【請求項１４】
前記ＩＲＥＳが、脳心筋炎ウイルスＩＲＥＳ、ピコルナウイルスＩＲＥＳ、口蹄疫ウイルスＩＲＥＳ、Ａ型肝炎ウイルスＩＲＥＳ、Ｃ型肝炎ウイルスＩＲＥＳ、ヒトライノウイルスＩＲＥＳ、ポリオウイルスＩＲＥＳ、ブタ水疱病ウイルスＩＲＥＳ、カブモザイクポティウイルスＩＲＥＳ、ヒト線維芽細胞増殖因子２  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ペスチウイルスＩＲＥＳ、リーシュマニアＲＮＡウイルスＩＲＥＳ、モロニーマウス白血病ウイルスＩＲＥＳ、ヒトライノウイルス１４  ＩＲＥＳ、アフトウイルスＩＲＥＳ、ヒト免疫グロブリン重鎖結合タンパク質ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ヒト線維芽細胞増殖因子２  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、Ｇ型肝炎ウイルスＩＲＥＳ、トバモウイルスＩＲＥＳ、血管内皮増殖因子ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、コクサッキーＢ群ウイルスＩＲＥＳ、ｃ−ｍｙｃ癌原遺伝子ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ヒトＭＹＴ２  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ヒトパレコウイルス１型ウイルスＩＲＥＳ、ヒトパレコウイルス２型ウイルスＩＲＥＳ、真核生物開始因子４ＧＩ  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、Ｐｌａｕｔｉａ  ｓｔａｌｉ腸管ウイルスＩＲＥＳ、タイラーマウス脳脊髄炎ウイルスＩＲＥＳ、ウシエンテロウイルスＩＲＥＳ、コネキシン４３  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ホメオドメインタンパク質Ｇｔｘ  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ＡＭＬ１転写因子ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ＮＦカッパＢ抑制因子ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、Ｘ連鎖アポトーシス抑制物質ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、コオロギ麻痺ウイルスＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ｐ５８（ＰＩＴＳＬＲＥ）プロテインキナーゼｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、オルニチンデカルボキシラーゼｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、コネキシン−３２  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ウシウイルス性下痢症ウイルスＩＲＥＳ、インスリン様増殖因子Ｉ受容体ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ヒト免疫不全ウイルス１型ｇａｇ遺伝子ＩＲＥＳ、ブタコレラウイルスＩＲＥＳ、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスＩＲＥＳ、ランダムオリゴヌクレオチドのライブラリーから選択される短いＩＲＥＳ、ジェンブラナ病ウイルスＩＲＥＳ、アポトーシスプロテアーゼ活性化因子１  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍ  ｐａｄｉウイルスＩＲＥＳ、カチオン性アミノ酸輸送体ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ヒトインスリン様増殖因子ＩＩリーダー２  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ジアルジアウイルスＩＲＥＳ、Ｓｍａｄ５  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ブタテッショウウイルス−１  ｔａｌｆａｎ  ＩＲＥＳ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ｈＳＮＭ１  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、Ｃｂｆａ１／Ｒｕｎｘ２  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、エプスタイン−バーウイルスＩＲＥＳ、ハイビスカスクロロティック輪斑ウイルスＩＲＥＳ、ラット下垂体バソプレシンＶ１ｂ受容体ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳおよびヒトｈｓｐ７０  ｍＲＮＡ
ＩＲＥＳからなる群から選択される、請求項１３に記載の再プログラムベクター。
【請求項１５】
前記ＩＲＥＳが脳心筋炎ウイルスＩＲＥＳである、請求項１４に記載の再プログラムベクター。
【請求項１６】
誘導多能性幹（ｉＰＳ）細胞集団を産生するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏの方法であって、前記方法は、
（ａ）請求項１から１５のいずれか１項に記載の１つまたは複数の再プログラムベクターを得るステップ、および
（ｂ）体細胞の集団の細胞に前記再プログラムベクターを導入してｉＰＳ細胞集団を提供するステップ
を含む、方法。
【請求項１７】
（ｃ）前記集団を増大させるために前記細胞を培養するステップ、および
（ｄ）増大させた前記集団の後代細胞を選択するステップであって、前記後代細胞が胚性幹細胞の１つまたは複数の特徴を有する、ステップ
をさらに含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
（ｅ）選択された前記後代細胞を培養して、前記ｉＰＳ細胞集団を提供するステップ
をさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記１つまたは複数の再プログラムベクターがＳｏｘおよびＯｃｔを含む再プログラム因子をコードするコード配列を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記１つまたは複数の再プログラムベクターがリポソームトランスフェクション、電気穿孔法、微粒子銃、リン酸カルシウム、ポリカチオンまたはポリアニオンによって前記細胞に導入される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記体細胞が哺乳動物体細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記体細胞がヒト体細胞である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記体細胞が線維芽細胞、造血細胞または間葉細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
前記体細胞が線維芽細胞である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記特徴が未分化形態、胚性幹細胞特異的マーカーまたは多能性である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
前記特徴が蛍光励起細胞分取（ＦＡＣＳ）、ＣＡＴアッセイまたは発光アッセイによって選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２７】
前記特徴が未分化形態である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２８】
前記特徴が、ＳＳＥＡ−３、ＳＳＥＡ−４、Ｔｒａ−１−６０またはＴｒａ−１−８１、Ｔｒａ−２−４９／６Ｅ、ＧＤＦ３、ＲＥＸ１、ＦＧＦ４、ＥＳＧ１、ＤＰＰＡ２、ＤＰＰＡ４およびｈＴＥＲＴからなる群から選択される１つまたは複数の胚性幹細胞特異的マーカーである、請求項１７に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３３】
本発明の方法および／または組成物の内容について論じられた実施形態は、本明細書に記載する任意の他の方法または組成物に関しても使用されうる。したがって１つの方法または組成物に関係する実施形態は、本発明の他の方法および組成物にも同様に適用されうる。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
（ａ）転写制御エレメント、ならびに
（ｂ）前記転写制御エレメントに機能的に連結した第１および第２コード配列であって、前記第１コード配列が再プログラム因子をコードし、かつ前記第２コード配列が第２再プログラム因子またはレポーターをコードする、第１および第２コード配列
を含む多シストロン性発現カセットを含む再プログラムベクター。
（項目２）
前記転写制御エレメントが末端反復配列領域（ＬＴＲ）を含む、項目１に記載の再プログラムベクター。
（項目３）
前記第２コード配列がレポーターをコードする、項目１に記載の再プログラムベクター。
（項目４）
前記第２コード配列が第２再プログラム因子をコードする、項目１に記載の再プログラムベクター。
（項目５）
前記発現カセットが前記転写制御エレメントに機能的に連結した第３コード配列をさらに含み、前記第３コード配列が再プログラム因子、レポーターまたは選択マーカーをコードする、項目１に記載の再プログラムベクター。
（項目６）
前記第３コード配列が選択マーカーをコードする、項目５に記載の再プログラムベクター。
（項目７）
前記選択マーカーが抗生物質耐性マーカーである、項目６に記載の再プログラムベクター。
（項目８）
前記レポーターが細胞表面マーカー、蛍光タンパク質、エピトープ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、ルシフェラーゼまたはβ−ガラクトシダーゼである、項目１に記載の再プログラムベクター。
（項目９）
前記蛍光タンパク質が緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）または黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）である、項目８に記載の再プログラムベクター。
（項目１０）
コードされる前記再プログラム因子がＳｏｘ、Ｏｃｔ、Ｎａｎｏｇ、Ｌｉｎ２８、Ｋｌｆ４またはｃ−Ｍｙｃである、項目１に記載の再プログラムベクター。
（項目１１）
ＳｏｘがＳｏｘ−１、Ｓｏｘ−２、Ｓｏｘ−３、Ｓｏｘ−１５またはＳｏｘ−１８である、項目１０に記載の再プログラムベクター。
（項目１２）
ＯｃｔがＯｃｔ−４である、項目１０に記載の再プログラムベクター。
（項目１３）
前記再プログラム因子がＮａｎｏｇ、Ｌｉｎ２８、Ｋｌｆ４またはｃ−Ｍｙｃである、項目１０に記載の再プログラムベクター。
（項目１４）
前記ベクターがウイルスベクターである、項目１に記載の再プログラムベクター。
（項目１５）
前記ベクターがレトロウイルスベクターである、項目１４に記載の再プログラムベクター。
（項目１６）
前記レトロウイルスベクターがマウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）、Ａｋｖ−ＭＬＶまたはＳＬ−３−３−ＭＬＶである、項目１５に記載の再プログラムベクター。
（項目１７）
前記ベクターがレンチウイルスベクターである、項目１４に記載の再プログラムベクター。
（項目１８）
前記発現カセットが１つまたは複数のＩＲＥＳをさらに含む、項目１に記載の再プログラムベクター。
（項目１９）
前記ＩＲＥＳが、脳心筋炎ウイルスＩＲＥＳ、ピコルナウイルスＩＲＥＳ、口蹄疫ウイルスＩＲＥＳ、Ａ型肝炎ウイルスＩＲＥＳ、Ｃ型肝炎ウイルスＩＲＥＳ、ヒトライノウイルスＩＲＥＳ、ポリオウイルスＩＲＥＳ、ブタ水疱病ウイルスＩＲＥＳ、カブモザイクポティウイルスＩＲＥＳ、ヒト線維芽細胞増殖因子２  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ペスチウイルスＩＲＥＳ、リーシュマニアＲＮＡウイルスＩＲＥＳ、モロニーマウス白血病ウイルスＩＲＥＳ、ヒトライノウイルス１４  ＩＲＥＳ、アフトウイルスＩＲＥＳ、ヒト免疫グロブリン重鎖結合タンパク質ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ヒト線維芽細胞増殖因子２  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、Ｇ型肝炎ウイルスＩＲＥＳ、トバモウイルスＩＲＥＳ、血管内皮増殖因子ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、コクサッキーＢ群ウイルスＩＲＥＳ、ｃ−ｍｙｃ癌原遺伝子ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ヒトＭＹＴ２  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ヒトパレコウイルス１型ウイルスＩＲＥＳ、ヒトパレコウイルス２型ウイルスＩＲＥＳ、真核生物開始因子４ＧＩ  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、Ｐｌａｕｔｉａ  ｓｔａｌｉ腸管ウイルスＩＲＥＳ、タイラーマウス脳脊髄炎ウイルスＩＲＥＳ、ウシエンテロウイルスＩＲＥＳ、コネキシン４３  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ホメオドメインタンパク質Ｇｔｘ  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ＡＭＬ１転写因子ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ＮＦカッパＢ抑制因子ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、Ｘ連鎖アポトーシス抑制物質ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、コオロギ麻痺ウイルスＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ｐ５８（ＰＩＴＳＬＲＥ）プロテインキナーゼｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、オルニチンデカルボキシラーゼｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、コネキシン−３２  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ウシウイルス性下痢症ウイルスＩＲＥＳ、インスリン様増殖因子Ｉ受容体ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ヒト免疫不全ウイルス１型ｇａｇ遺伝子ＩＲＥＳ、ブタコレラウイルスＩＲＥＳ、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスＩＲＥＳ、ランダムオリゴヌクレオチドのライブラリーから選択される短いＩＲＥＳ、ジェンブラナ病ウイルスＩＲＥＳ、アポトーシスプロテアーゼ活性化因子１  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍ  ｐａｄｉウイルスＩＲＥＳ、カチオン性アミノ酸輸送体ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ヒトインスリン様増殖因子ＩＩリーダー２  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ジアルジアウイルスＩＲＥＳ、Ｓｍａｄ５  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ブタテッショウウイルス−１  ｔａｌｆａｎ  ＩＲＥＳ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、ｈＳＮＭ１  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、Ｃｂｆａ１／Ｒｕｎｘ２  ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳ、エプスタイン−バーウイルスＩＲＥＳ、ハイビスカスクロロティック輪斑ウイルスＩＲＥＳ、ラット下垂体バソプレシンＶ１ｂ受容体ｍＲＮＡ  ＩＲＥＳおよびヒトｈｓｐ７０  ｍＲＮＡ
ＩＲＥＳからなる群から選択される、項目１８に記載の再プログラムベクター。
（項目２０）
前記ＩＲＥＳが脳心筋炎ウイルスＩＲＥＳである、項目１９に記載の再プログラムベクター。
（項目２１）
誘導多能性幹（ｉＰＳ）細胞集団を産生するための方法であって、前記方法は、
（ａ）項目１から２０に記載の１つまたは複数の再プログラムベクターを得るステップ、および
（ｂ）体細胞の集団の細胞に前記再プログラムベクターを導入してｉＰＳ細胞集団を提供するステップ
を含む、方法。
（項目２２）
（ｃ）前記集団を増大させるために前記細胞を培養するステップ、および
（ｄ）増大させた前記集団の後代細胞を選択するステップであって、前記後代細胞が胚性幹細胞の１つまたは複数の特徴を有する、ステップ
をさらに含む、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
ステップｃ）が前記体細胞の集団を選択するステップをさらに含み、選択された前記体細胞が前記レポーターを発現する、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
ステップｃ）における前記選択が蛍光励起細胞分取（ＦＡＣＳ）、ＣＡＴアッセイまたは発光アッセイを含む、項目２２に記載の方法。
（項目２５）
（ｅ）選択された前記後代細胞を培養して、前記ｉＰＳ細胞集団を提供するステップ
をさらに含む、項目２２に記載の方法。
（項目２６）
前記１つまたは複数の再プログラムベクターがＳｏｘおよびＯｃｔを含む再プログラム因子をコードするコード配列を含む、項目２１に記載の方法。
（項目２７）
前記１つまたは複数の再プログラムベクターがリポソームトランスフェクション、電気穿孔法、微粒子銃、リン酸カルシウム、ポリカチオンまたはポリアニオンによって前記細胞に導入される、項目２１に記載の方法。
（項目２８）
前記体細胞が哺乳動物体細胞である、項目２１に記載の方法。
（項目２９）
前記体細胞がヒト体細胞である、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記体細胞が線維芽細胞、造血細胞または間葉細胞である、項目２１に記載の方法。
（項目３１）
前記体細胞が線維芽細胞である、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記特徴が前記レポーターの本質的な消失、未分化形態、胚性幹細胞特異的マーカーまたは多能性である、項目２２に記載の方法。
（項目３３）
前記特徴が前記レポーターの発現の本質的な消失である、項目２２に記載の方法。
（項目３４）
前記特徴が蛍光励起細胞分取（ＦＡＣＳ）、ＣＡＴアッセイまたは発光アッセイによって選択される、項目２２に記載の方法。
（項目３５）
前記特徴が未分化形態である、項目２２に記載の方法。
（項目３６）
前記特徴が、ＳＳＥＡ−３、ＳＳＥＡ−４、Ｔｒａ−１−６０またはＴｒａ−１−８１、Ｔｒａ−２−４９／６Ｅ、ＧＤＦ３、ＲＥＸ１、ＦＧＦ４、ＥＳＧ１、ＤＰＰＡ２、ＤＰＰＡ４およびｈＴＥＲＴからなる群から選択される１つまたは複数の胚性幹細胞特異的マーカーである、項目２２に記載の方法。