(57)【要約】【課題】スタフィロトロンビンの機能を阻害する医薬を提供する。【解決手段】スタフィロトロンビンに対する阻害作用を有する医薬であって、式（Ｉ）（Ｒ１は（２Ｒ，４Ｒ）−４−アルキル−２−カルボキシピペリジノ基などを示し、Ｒ２はフェニル基又は縮合多環式化合物残基を示し、Ｒ２は低級アルキル基、低級アルコキシ基、及び低級アルキル基で置換されたアミノ基からなる群から選択される１つ以上の置換基を有していてもよい）で表わされるアルギニンアミド類及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの水和物及びそれらの溶媒和物からなる群から選ばれる物質を有効成分として含む医薬。【化１】2004352648.tif 000004【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
スタフィロトロンビンに対する阻害作用を有する医薬であって、下記の一般式（Ｉ）：
【化１】
2004352648.tif 000003
（式中、Ｒ１は（２Ｒ，４Ｒ）−４−アルキル−２−カルボキシピペリジノ基又は４−アルキル−１−ピペリジノ基を示し、Ｒ２はフェニル基又は以下に定義する縮合多環式化合物残基を示し、Ｒ２は低級アルキル基、低級アルコキシ基、及び低級アルキル基で置換されたアミノ基からなる群から選択される１つ以上の置換基を有していてもよい。
縮合多環式化合物残基：ベンゼン環を含む縮合多環式化合物の残基であり、該ベンゼン環が上記一般式（Ｉ）中のスルホニル基のイオウ原子と結合し、かつ該ベンゼン環には他の環（該環は複素環であってもよい）が１個以上縮合しており、該多環式化合物残基の環を構成する総炭素原子数が７〜１４個である残基）で表わされるアルギニンアミド類及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの水和物及びそれらの溶媒和物からなる群から選ばれる物質を有効成分として含む医薬。
【請求項２】
Ｒ１が（２Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−２−カルボキシピペリジノ基であり、Ｒ２が３−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−８−キノリル基である請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
アルギニンアミド類が（２Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−１−［Ｎ２（（ＲＳ）−３−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−８−キノリンスルホニル）−Ｌ−アルギニル］−２−ピペリジンカルボン酸・一水和物である請求項１に記載の医薬。
【請求項４】
請求項１に記載の物質を含むスタフィロトロンビンの阻害剤。
【請求項５】
黄色ブドウ球菌感染症の治療及び／又は予防のための医薬であって、請求項１に記載の物質を有効成分として含む医薬。
【請求項６】
１種又は２種以上の抗微生物薬と同時に又は時間をかえて投与するための請求項５に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はスタフィロトロンビンに対する阻害作用を有する医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
黄色ブドウ球菌から産生・放出されるコアグラーゼは、血液凝固因子プロトロンビンと１：１の複合体を形成してスタフィロトロンビンとなり、フィブリノーゲンをフィブリンに変換する作用を示す。血液凝固活性化機序においては、プロトロンビンはＦＸａにより酵素的にアルギニン部分が開裂されてトロンビンに活性化されるが、コアグラーゼの場合には開裂を必要とせず、プロトロンビンと結合することにより立体構造の変化をおこして活性部位が現れると報告されている。
【０００３】
黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）は、肺炎、関節炎、腎炎、褥瘡、熱傷後の感染症などの起因菌となる。新しい抗生物質の開発・臨床適用を追いかけるように新たな耐性黄色ブドウ球菌が次々と出現している。例えば、ＭＲＳＡ（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）やＶＲＳＡ（バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌）などの耐性菌が出現しており、これらは、長期療養型施設における免疫力の低下した老人への感染が問題になっている。
【０００４】
黄色ブドウ球菌から放出されるコアグラーゼと病原性との関係については、コアグラーゼにより産生されるスタフィロトロンビンが菌体のまわりにフィブリンを形成して菌を生体の免疫機構による攻撃から守り、従ってコアグラーゼが黄色ブドウ球菌の病原性に関係しているとの報告がある。例えば、澤井らはマウス慢性肺炎実験において黄色ブドウ球菌の病原性にコアグラーゼが関与することを報告している（Ｉｎｆｅｃｔ．  Ｉｍｍｕｎ．，  ６５，  ｐｐ．４６６−４７１，  １９９７）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
以上のことから、スタフィロトロンビンの機能を阻害する医薬は、黄色ブドウ球菌感染症の治療及び／又は予防に有用であることが期待される。従って、本発明の課題は、スタフィロトロンビンの機能を阻害する医薬を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、抗トロンビン作用を有するアルギニンアミド類がスタフィロトロンビンの活性を顕著に阻害することを見出した。本発明者らはさらに鋭意研究を行い、上記のアルギニンアミド類が抗スタフィロトロンビン剤として有用であり、黄色ブドウ球菌感染症の治療及び／又は予防に有用であることを確認した。本発明は上記の知見を基にして完成されたものである。
【０００７】
すなわち、本発明は、スタフィロトロンビンに対する阻害作用を有する医薬であって、下記の一般式（Ｉ）：
【化２】
2004352648.tif 000002
（式中、Ｒ１は（２Ｒ，４Ｒ）−４−アルキル−２−カルボキシピペリジノ基又は４−アルキル−１−ピペリジノ基を示し、Ｒ２はフェニル基又は以下に定義する縮合多環式化合物残基を示し、Ｒ２は低級アルキル基、低級アルコキシ基、及び低級アルキル基で置換されたアミノ基からなる群から選択される１つ以上の置換基を有していてもよい。
縮合多環式化合物残基：ベンゼン環を含む縮合多環式化合物の残基であり、該ベンゼン環が上記一般式（Ｉ）中のスルホニル基のイオウ原子と結合し、かつ該ベンゼン環には他の環（該環は複素環であってもよい）が１個以上縮合しており、該多環式化合物残基の環を構成する総炭素原子数が７〜１４個である残基）で表わされるアルギニンアミド類及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの水和物及びそれらの溶媒和物からなる群から選ばれる物質を有効成分として含む医薬が提供される。
【０００８】
本発明の好ましい態様によれば、Ｒ１が（２Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−２−カルボキシピペリジノ基であり、Ｒ２が３−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−８−キノリル基である上記の医薬が提供される。また、本発明の特に好ましい態様によれば、アルギニンアミド類が（２Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−１−［Ｎ２（（ＲＳ）−３−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−８−キノリンスルホニル）−Ｌ−アルギニル］−２−ピペリジンカルボン酸である上記の医薬が提供される。また、本発明により、上記の物質を含むスタフィロトロンビンの阻害剤が提供される。
【０００９】
別の観点からは、本発明により、黄色ブドウ球菌感染症の治療及び／又は予防のための医薬であって、上記一般式（Ｉ）で表わされるアルギニンアミド類及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの水和物及びそれらの溶媒和物からなる群から選ばれる物質を有効成分として含む医薬が提供される。また、１種又は２種以上の抗微生物薬と同時に又は時間をかえて投与するための上記の医薬が本発明により提供される。さらに、黄色ブドウ球菌感染症の治療及び／又は予防のための医薬組成物であって、上記一般式（Ｉ）で表わされるアルギニンアミド類及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの水和物及びそれらの溶媒和物からなる群から選ばれる物質と、１種又は２種以上の抗微生物薬とを有効成分として含む医薬組成物が本発明により提供される。
【００１０】
さらに別の観点からは、上記の医薬又は医薬組成物の製造のための上記一般式（Ｉ）で表わされるアルギニンアミド類及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの水和物及びそれらの溶媒和物からなる群から選ばれる物質の使用、黄色ブドウ球菌感染症の治療及び／又は予防方法であって、上記一般式（Ｉ）で表わされるアルギニンアミド類及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの水和物及びそれらの溶媒和物からなる群から選ばれる物質をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法、黄色ブドウ球菌感染症の治療及び／又は予防方法であって、上記一般式（Ｉ）で表わされるアルギニンアミド類及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの水和物及びそれらの溶媒和物からなる群から選ばれる物質と１種又は２種以上の抗微生物薬とを、同時に又は時間をかえてヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法が提供される。
【００１１】
【発明の実施の形態】
一般式（Ｉ）において、Ｒ１は（２Ｒ，４Ｒ）−４−アルキル−２−カルボキシピペリジノ基を示す。アルキルとしては直鎖又は分枝鎖のいずれであってもよく、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、又はブチル基のようなＣ１〜Ｃ５の低級アルキル基を用いることができる。
【００１２】
Ｒ２が示す縮合多環式化合物残基としては、例えば二環式化合物残基又は三環式化合物残基を用いることができる。二環式化合物残基の場合には、ベンゼン環に５員環又は６員環が縮合したものが好ましく、この５員環又は６員環は複素環であってもよい。三環式化合物残基の場合には、５員環又は６員環にもう１つの５員環又は６員環が縮合したものが好ましく、縮合すべき環は複素環であってもよい。複素環を構成するヘテロ原子は、例えば、酸素原子、窒素原子、又はイオウ原子である。
【００１３】
Ｒ２が示す縮合多環式化合物残基としては、より具体的には、アンスリル基、フェナンスリル基、ベンゾフラニル基、ジベンゾチエニル基、フェノキサチニル基、キノリル基、カルバゾリル基、アクリジニル基、フェナジニル基、フェノチアジニル基、フェノキサジニル基、ベンズイミダゾリル基、フルオレニル基、２，３−ジヒドロベンゾフラニル基、チオキサンテニル基、ナフチル基、テトラヒドロナフチル基、イソキノリル基、テトラヒドロキノリル基、テトラヒドロイソキノリル基等が挙げられる。Ｒ２としては、上記多環式化合物残基のベンゼン環と一般式（Ｉ）中のスルホニル基のイオウ原子とが結合するが、ベンゼン環上の結合位置は特に限定されない。
【００１４】
Ｒ２が示すフェニル基又は縮合多環式化合物残基は、低級アルキル基、低級アルコキシ基、又は低級アルキル基で置換されたアミノ基からなる群から選択される１つ以上の基で置換されていてもよい。低級アルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基のようなＣ１〜Ｃ５のアルキル基、低級アルコキシ基としては、例えばメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基のようなＣ１〜Ｃ５のアルコキシ基、低級アルキル基で置換されたアミノ基としては、例えば上述したような低級アルキル基で置換されたアルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基などが挙げられる。
【００１５】
一般式（Ｉ）で表される化合物の具体例として、
（２Ｒ，４Ｒ）−１−〔Ｎ２−（３−イソプロポキシベンゼンスルホニル）−Ｌ−アルギニル〕−４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸；
（２Ｒ，４Ｒ）−１−〔Ｎ２−（３，５−ジメチル−４−プロポキシベンゼンスルホニル）−Ｌ−アルギニル〕−４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸；
（２Ｒ，４Ｒ）−１−〔−Ｎ２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−２−ナフタレンスルホニル）−Ｌ−アルギニル〕−４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸；
（２Ｒ，４Ｒ）−１−〔Ｎ２−（５−ジメチルアミノ−１−ナフタレンスルホニル）−Ｌ−アルギニル〕−４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸；
（２Ｒ，４Ｒ）−１−〔Ｎ２−（３−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−８−キノリンスルホニル）−Ｌ−アルギニル〕−４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸；
（２Ｒ，４Ｒ）−１−〔Ｎ２−（２−ジベンゾチオフェンスルホニル）−Ｌ−アルギニル〕−４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸；
（２Ｒ，４Ｒ）−１−〔Ｎ２−（２，４−ジメトキシ−３−ブトキシベンゼンスルホニル）−Ｌ−アルギニル〕−４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸；
（２Ｒ，４Ｒ）−１−〔Ｎ２−（３，５−ジメチル−４−プロポキシベンゼンスルホニル）−Ｌ−アルギニル〕−４−エチル−２−ピペリジンカルボン酸；
（２Ｒ，４Ｒ）−１−〔Ｎ２−（３−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−８−キノリンスルホニル）−Ｌ−アルギニル〕−４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸；
（２Ｒ，４Ｒ）−１−〔Ｎ２−（２−カルバゾールスルホニル）−Ｌ−アルギニル〕−４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸；
（２Ｒ，４Ｒ）−１−〔Ｎ２−（２−フルオレンスルホニル）−Ｌ−アルギニル〕−４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸；
（２Ｒ，４Ｒ）−１−〔Ｎ２−（２−フェノキサチインスルホニル）−Ｌ−アルギニル〕−４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸；
（２Ｒ，４Ｒ）−１−〔Ｎ２−（２−アンスラセンスルホニル）−Ｌ−アルギニル〕−４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸；及び
（２Ｒ，４Ｒ）−１−〔Ｎ２−（７−メチル−２−ナフタレンスルホニル）−Ｌ−アルギニル〕−４−メチル−２−ピペリジンカルボン酸
を挙げることができるが、本発明の医薬の有効成分は下記の特定の化合物に限定されることはない。これらのうち、本発明の医薬の有効成分として（２Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−１−［Ｎ２（（ＲＳ）−３−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−８−キノリンスルホニル）−Ｌ−アルギニル］−２−ピペリジンカルボン酸が特に好ましい。
【００１６】
上記化合物には、光学異性体やジアステレオマー等の異性体が存在するが、本発明の医薬の有効成分としては任意の異性体又は異性体の任意の混合物を用いることができる。本発明の医薬の有効成分としては、遊離形態の上記化合物を用いてもよいが、生理学的に許容される塩、あるいは遊離形態の化合物又は生理学的に許容される塩の任意の水和物又は溶媒和物を用いることもできる。本発明の医薬の有効成分として（２Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−１−［Ｎ２（（ＲＳ）−３−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−８−キノリンスルホニル）−Ｌ−アルギニル］−２−ピペリジンカルボン酸を用いる場合には、一水和物を用いることが好ましい。
【００１７】
生理学的に許容される塩の種類は特に限定されない。例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、アミン塩等の塩基付加塩、あるいは塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の鉱酸塩、あるいは酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、１０−カンファースルホン酸塩等の有機酸塩を挙げることができるが、これらに限定されることはなく、種々の無機酸又は有機酸あるいは無機塩基又は有機塩基との付加塩を形成することができる。
【００１８】
上記一般式（Ｉ）で表される上記アルギニンアミド類は、例えば、特開平１０−１０１６４９号公報、特開昭５１−１２５２６１号公報等に記載の方法により容易に製造可能である。
【００１９】
本発明の医薬の投与形態は特に制限されず、経口的又は非経口的に投与することができるが、好ましくは、非経口的に投与することができ、例えば注射又は点滴等により静脈内に投与することが好ましい。本発明の医薬としては、上記一般式（Ｉ）で表される化合物及び生理学的に許容されるその塩、並びにそれらの水和物及びそれらの溶媒和物からなる群から選ばれる物質をそのまま使用してもよいが、有効成分である上記の物質に対して１種又は２種以上の薬理学的および製剤学的に許容し得る添加物を加え、当業者に周知な形態の医薬組成物を調製して投与することが好ましい。
【００２０】
薬理学的および製剤学的に許容し得る添加物としては、例えば、賦形剤、崩壊剤ないし崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、基剤、溶解剤ないし溶解補助剤、等張化剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、噴射剤、および粘着剤等を用いることができる。経口投与に適する医薬組成物としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、又はシロップ剤等を挙げることができる。非経口的に投与する医薬組成物としては、例えば、注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、又は貼布剤等を挙げることができる。
【００２１】
経口投与、あるいは経皮又は経粘膜投与に適する医薬組成物には、薬理学的、製剤学的に許容し得る添加物として、例えば、ブドウ糖、乳糖、Ｄ−マンニトール、デンプン、又は結晶セルロース等の賦形剤；カルボキシメチルセルロース、デンプン、又はカルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤又は崩壊補助剤；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、又はゼラチン等の結合剤；ステアリン酸マグネシウム又はタルク等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、白糖、ポリエチレングリコール又は酸化チタン等のコーティング剤；ワセリン、流動パラフィン、ポリエチレングリコール、ゼラチン、カオリン、グリセリン、精製水、又はハードファット等の基剤を用いることができる。また、フロン、ジエチルエーテル、又は圧縮ガス等の噴射剤；ポリアクリル酸ナトリウム、ポリビニルアルコール、メチルセルロース、ポリイソブチレン、ポリブテン等の粘着剤；木綿布又はプラスチックシート等の基布等の製剤用添加物を用いて医薬組成物を製造してもよい。注射用又は点滴用に適する医薬組成物には、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の水性あるいは用時溶解型注射剤を構成し得る溶解剤又は溶解補助剤；ブドウ糖、塩化ナトリウム、Ｄ−マンニトール、グリセリン等の等張化剤；無機酸、有機酸、無機塩基又は有機塩基等のｐＨ調節剤等の製剤用添加物を添加してもよい。
【００２２】
本発明の医薬は、黄色ブドウ球菌から産生・放出されるコアグラーゼから生成するスタフィロトロンビンに対して阻害作用を有する。いかなる特定の理論に拘泥するわけではないが、黄色ブドウ球菌では、コアグラーゼにより産生されるスタフィロトロンビンが菌体のまわりにフィブリンを形成して生体の免疫機構による攻撃から菌を守ると考えられており、スタフィロトロンビンが黄色ブドウ球菌の病原性発現に関与していることが示唆されている。従って、本発明の医薬によりスタフィロトロンビンの作用を阻害することにより、黄色ブドウ球菌に対する生体の免疫力を高めることができるほか、各種の抗微生物薬に対する黄色ブドウ球菌の感受性を高めることもできる。従って、本発明の医薬は、黄色ブドウ球菌感染症の治療及び／又は予防に有用である。
【００２３】
本発明の医薬を黄色ブドウ球菌感染症の予防及び／又は治療に用いるにあたり、好ましくは、１種又は２種以上の抗微生物薬とともに投与することが好ましい。抗微生物薬と同時に、あるいは時間をかえて本発明の医薬を投与することが可能である。抗微生物薬としては、グラム陰性菌、好ましくは黄色ブドウ球菌に対して抗菌力を有するものであれば特に限定されないが、例えば、ペニシリン（ペナム）系抗生物質、セファロスポリン（セフェム）系抗生物質、オキサセフェム系抗生物質、ペネム系抗生物質、カルバペネム系抗生物質、モノバクタム系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、マクロライド系抗生物質、クロラムフェニコール系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、グリコペプチド系抗生物質、ホスホマイシン系抗生物質、リンコマイシン系抗生物質、サルファ剤、パラアミノサリチル酸製剤、イソニコチン酸ヒドラジド製剤、及びキノロン系合成抗菌剤などを挙げることができる。もっとも、抗微生物薬はこれらに限定されることはない。抗微生物薬は１種又は２種以上を用いることができる。本発明の医薬の有効成分と抗微生物薬の１種又は２種以上とを含む医薬組成物（いわゆる合剤）として投与することもできる。
【００２４】
なお、（２Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−１−［Ｎ２（（ＲＳ）−３−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−８−キノリンスルホニル）−Ｌ−アルギニル］−２−ピペリジンカルボン酸・一水和物を有効成分とする血栓溶解剤（注射剤）が、既に臨床上使用されているので（一般名「アルガトロバン」；商品名「ノバスタン」、三菱ウェルファーマ株式会社製造及び販売）、上記の製剤をそのまま本発明の医薬として使用することもできる。
【００２５】
本発明の予防・治療剤の投与量は特に制限されず、投与形態や、患者の年齢、疾患の程度や症状、体重等の条件に応じて適宜選択することができる。例えば静脈内投与の場合には、成人１日あたり、有効成分重量として０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．４〜  ３ｍｇ／ｋｇを投与すればよい。
【００２６】
【実施例】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。以下の実施例において、本発明の医薬としてアルガトロバン（商品名「ノバスタン」、三菱ウェルファーマ株式会社製造及び販売）を用いた。
例１
尿路感染症患者から分離した黄色ブドウ球菌を培養後、菌体を遠心して除去し、上清  ５  ｍｌに硫酸アンモニウムを３  ｇ  加えた。４℃で１時間放置後に遠心し、沈渣を  ５  ｍｌ  のＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ  ７．４）に溶解し、コアグラーゼ試料として以下の実験に用いた。ヒト血漿（Ｃｉｔｒｏｌ−１，  Ｄａｄｅ  Ｂｅｈｒｉｎｇ）を蒸留水で２０倍希釈し、１％  酢酸でｐＨ  ５．２で等電沈殿させた沈渣を元の血漿の半量の緩衝液に溶解し、ユーグロブリン画分を作成した。
【００２７】
合成基質分解活性は次のように行った。培養上清硫安画分とユーグロブリン画分及び各種濃度のアルガトロバンをあわせて２００μｌとした。この溶液に１０  ｍＭ  の合成蛍光基質（Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−ＭＣＡ，  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）を１μｌ加え、３７℃での分解速度を励起波長３９０  ｎｍ、測定波長４６０  ｎｍで蛍光プレートリーダー（Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ  Ａｓｃｅｎｔ  ＣＦ，  Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて測定した。トロンビン阻害の場合はトロンビン（ウシ、持田製薬株式会社）と各種濃度のアルガトロバンをあわせて２００μｌとし、以下は同様に行った。
【００２８】
フィブリン生成活性はユーグロブリン分画、硫安分画、及び各種濃度のアルガトロバンをあわせて２００μｌとし、ここに１０  ｍｇ／ｍｌフィブリノーゲン（ウシ、タイプＩＩ、プラスミノーゲンフリー、第一化学薬品株式会社）２００μｌを加えて、３７℃で凝固が起こるまでの時間を測定した。コアグラーゼテストはコアグラーゼ・テストキット（栄研化学株式会社）を用いて測定した。ウサギ血漿  １  ｍｌ  と各種濃度のアルガトロバン０．２  ｍｌの混合液に黄色ブドウ球菌１匙を加え、室温で６時間と２４時間後に凝固の有無を観察した。比較例として、ヒルジン（Ｈｉｒｕｄｉｎ，  Ｌｅｅｃｈ，  Ｓｉｇｍａ）を用いて同様の試験を行った。
【００２９】
コアグラーゼを含む黄色ブドウ球菌上清の硫安分画、あるいはプロトロンビンを含むヒト血漿ユーグロブリン分画のみでは、合成蛍光基質に対する分解活性は認められなかったが、上記硫安分画及びユーグロブリン分画の混合物に含まれるスタフィロトロンビンの作用により、合成蛍光基質は速やかに分解された。スタフィロトロンビンの活性化にはインキュベーションは不要であり、上記硫安分画及びユーグロブリン分画を混合することにより、すぐに活性が発現した。
【００３０】
アルガトロバンはスタフィロトロンビンによる合成蛍光基質分解活性を極めて強く阻害し、その阻害度はトロンビンに対する阻害度とほぼ同程度であった（図１）。ダンシルアルギニンメチルピペリジンアミドを用いて同様の試験を行ったところ、アルガトロバンと同様の阻害作用が認められた。一方、ヒルジンはトロンビンを完全に阻害する濃度でもスタフィロトロンビンには全く阻害作用を示さなかった。
【００３１】
また、アルガトロバンのスタフィロトロンビンに対する阻害作用は、フィブリン生成反応でも明確に示された。すなわち、コントロールでは９０分後にフィブリン生成が観察されたが、アルガトロバンを０．５μＭ、０．０５μＭ添加した場合には、フィブリン生成は認められなかった。２４時間後には、０．０５μＭアルガトロバン添加では凝固が認められたが、０．５μＭアルガトロバン添加では凝固は認められず、反応液は流動性を保っていた。ヒルジンは１０ｕ／ｍｌでも阻害効果は全く認められず、コントロールと同様に９０分で凝固した。
【００３２】
なお、コアグラーゼテストにおいてアルガトロバンは凝固を強く阻止した。すなわち、６時間後の判定においてコントロールでは凝固が認められたが、アルガトロバン０．１μＭ、１μＭ、及び１０μＭの添加により反応液は流動性を保っており、２４時間後でも１０μＭアルガトロバン添加で流動性が保たれていた。コアグラーゼテストは、黄色ブドウ球菌のコアグラーゼの検出に広く用いられている方法であり、この方法で測定した凝固活性はコアグラーゼによるものと判定でき、黄色ブドウ球菌のコアグラーゼに由来する凝固活性をアルガトロバンが阻害していることが確かめられた。
【００３３】
【発明の効果】
本発明の医薬はスタフィロトロンビンに対する阻害作用を有しており、例えば、黄色ブドウ球菌感染症の治療及び／又は予防のための医薬として用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】スタフィロトロンビンに対する本発明の医薬（アルガトロバン）及び比較例としてヒルジンの阻害作用を示した図である。
【図２】トロンビンに対するアルガトロバン及びヒルジンの阻害作用を示した図である。
【図１】
2004352648.tif 000005
【図２】
2004352648.tif 000006