(57)【要約】【課題】適切なアトピー性皮膚炎処置剤を開発する為、その作成の再現性と容易性、アトピー性皮膚炎の病理的特徴を全て兼ね備えた動物モデルを提供する。【解決手段】ヘアレスマウスの背部に、起アレルギー物質を連続的に投与し、ドライスキンを起こさせたことを特徴とする、アトピー性皮膚炎動物モデルを提供する。前記起アレルギー物資としては、２，４，６−トリニトロ−１−クロルベンゼンが好適に例示できる。前記起アレルギー物質の投与回数は、投与回数が少なくとも１２回以上であることが好ましい。かかる動物に於ける、皮膚炎の病理学的特徴は、アトピー性皮膚炎のそれと極めて近似している。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヘアレスマウスの背部に、起アレルギー物質を連続的に投与し、ドライスキンを起こさせたことを特徴とする、アトピー性皮膚炎動物モデル。
【請求項２】
前記起アレルギー性物質が、２，４，６−トリニトロ−１−クロロベンゼンであることを特徴とする、請求項１に記載のアトピー性皮膚炎動物モデル。
【請求項３】
前記アレルギー性物質の投与回数が少なくとも１２回以上であることを特徴とする、請求項１又は２に記載のアトピー性皮膚炎動物モデル。
【請求項４】
請求項１〜３何れか１項に記載のアトピー性皮膚炎動物モデルの背部のドライスキン部位に、検体を連続的に投与した群（投与群）と、ベヒクルを連続的に投与した群（ベヒクル群）および無塗布群とを作成し、前記ベヒクル群の炎症の度合いおよび皮膚表面性状の度合いと前記投与群および無塗布群の炎症の度合い、皮膚表面性状の度合いとを比較して、投与群の炎症の度合いの低さおよび皮膚表面性状の回復度合いを指標とすることを特徴とする、アトピー性皮膚炎処置剤の評価法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アトピー性皮膚炎動物モデル及びそれを用いたアトピー性皮膚炎処置剤の評価法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、アトピー性皮膚炎の患者は急増していると言われている。これらの原因としては、食生活の変化、ストレス、生活環境の悪化等が推定されているが、確証はなく、その原因は不明と思われる。又、炎症の種類としても不明のことが多い。又、この様なアトピー性皮膚炎の確固たる治療薬も開発されていない。これはひとえに、アトピー性皮膚炎の適切な動物モデルが存在せず、これによって治療薬が開発されにくい為と言われている。アトピー性皮膚炎においては、その皮膚免疫学的性質の変化のみならず、皮膚表面においてはＴＥＷＬの上昇、角層細胞面積の縮小、皮膚の乾燥、皮膚厚さの増加などの症状が認められる。この様な変化が全て確認されている、確立した動物モデルは現在の所未だ得られていないのが現状である。現在知られて、動物モデルとしては、過密状態での飼育のストレス負荷により肌荒れを起こさせた、過密ストレスモデル（特開２００２−２６５３４６）、Ｂａｌｂ／Ｃマウスの耳に、感作性物質である２，４，６−トリニトロ−１−クロロベンゼン（２，４，６−ｔｒｉｎｉｔｒｏ−１−ｃｈｒｏｌｏｂｅｎｚｅｎｅ  ；ＴＮＣＢ）あるいはオキサゾリン（Ｏｘａｚｏｌｉｎ）を２日間  インターバルで２４−４８日間、連続塗布するモデル（Ｋｉｔａｇａｋｉ  ｅｔ  ａｌ，．  Ｉｍｍｅｄｉａｔｅ  ｔｙｐｅ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  ａ  ｌａｔｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｉｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｒｅｐｅａｔｅｄ  ｅｐｉｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｎｔａｃｔ  ｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．  Ｊ．Ｉ．Ｄ．  １０５：  ７４９−７５５，  １９９５）等が知られている。しかしながら、前者に於いては、その手技に技能的な熟度が要求され、誰もが再現性良く動物モデルを作成できるわけではなく、又、動物の飼育環境もその肌荒れの度合いに大きく影響を与える。後者の場合に於いては、炎症部位が耳であるため、種々の病理的な検討、非侵襲的測定が行えない欠点があり、果たしてアトピー性皮膚炎特有の病理変化を全て充足しているか否かは不明としか言いようが無かった。言い換えれば、今まで得られているアトピー性皮膚炎動物モデルにおいては、その作成の再現性と容易性、アトピー性皮膚炎の病理的特徴を全て兼ね備えた動物モデルは存在しておらず、この様な動物モデルの開発が望まれていた。
【０００３】
一方、ヘアレスマウスの背部に、起アレルギー物質を連続的に投与し、ドライスキンを起こさせた、アトピー性皮膚炎動物モデルは全く知られておらず、この様な動物モデルを使用して、アトピー性皮膚炎処置剤を評価することも全く行われていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、この様な状況下為されたものであり、適切なアトピー性皮膚炎処置剤を開発する為、その作成の再現性と容易性、アトピー性皮膚炎の病理的特徴を全て兼ね備えた動物モデルを提供することを課題とする。
【０００５】
【課題の解決手段】
本発明者らは、この様な状況に鑑みて、その作成の再現性と容易性、アトピー性皮膚炎の病理的特徴を全て兼ね備えた動物モデルを求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、ヘアレスマウスの背部に、起アレルギー物質を連続的に投与し、ドライスキンを起こさせた動物の皮膚性状が、アトピー性皮膚炎の病理学的特徴に酷似して居ることを見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は、以下に示す技術に関するものである。
（１）ヘアレスマウスの背部に、起アレルギー物質を連続的に投与し、ドライスキンを起こさせたことを特徴とする、アトピー性皮膚炎動物モデル。
（２）前記起アレルギー性物質が、２，４，６−トリニトロ−１−クロロベンゼンであることを特徴とする、（１）に記載のアトピー性皮膚炎動物モデル。
（３）前記アレルギー性物質の投与回数が少なくとも１２回以上であることを特徴とする、（１）又は（２）に記載のアトピー性皮膚炎動物モデル。
（４）（１）〜（３）何れか１項に記載のアトピー性皮膚炎動物モデルの背部のドライスキン部位に、検体を連続的に投与した群（投与群）と、ベヒクルを連続的に投与した群（ベヒクル群）および無塗布群とを作成し、前記ベヒクル群および無塗布群の炎症の度合い、皮膚表面性状の度合いと前記投与群の炎症の度合い、皮膚表面性状の度合いとを比較して、投与群の炎症の度合いの低さおよび皮膚表面性状の回復度合いを指標とすることを特徴とする、アトピー性皮膚炎処置剤の評価法。
【０００６】
【発明の実施の形態】
（１）本発明のアトピー性皮膚炎動物モデル
本発明のアトピー性皮膚炎動物モデルは、ヘアレスマウスの背部に、起アレルギー物質を連続的に投与し、ドライスキンを起こさせたことを特徴とする。前記連続的投与しては、少なくとも感作が成立する程度は必要であり、より好ましくは、感作が成立した後、尚、数回は投与されることが好ましい。具体的には２日毎の投与であれば１２回以上の投与回数が好ましく、連日の投与では１０回以上が好ましい。かかる起アレルギー物質しては、アレルギーを起こさせる作用を有することが知られているものであれば、特段の限定なく使用することが出来るが、特に好ましいものとしては、２，４，６−トリニトロ−１−クロロベンゼンが例示できる。かかる起アレルギー物質は溶剤などを用いて希釈して、１％程度の濃度に調整して投与するのが好ましく、投与量は背部前面に１０〜２００μｌ投与することが好ましい。アトピー性皮膚炎の成立の有無については、肉眼でスケーリングが観察されるか否かによって判断することが出来るし、非侵襲的測定法で皮膚水分量を測定するなどにより判断することができる。勿論。角層細胞や皮膚の一部をサンプリングして病理学的な確認を行うことも可能である。かくして得られたアトピー性皮膚炎動物モデルは、後記実施例に示す如く、その皮膚反応の特徴が極めてアトピー性皮膚炎のそれに一致しており、皮膚外用剤に対する反応特性も一致している。この為、アトピー性皮膚炎のモデルとして、アトピー性皮膚炎治療薬のスクリーニング等に好適である。
【０００７】
（２）本発明のアトピー性皮膚炎処置剤の評価法
本発明のアトピー性皮膚炎処置剤の評価法は、上記アトピー性皮膚炎動物モデルを使用することを特徴とする。即ち、前記の如く作成したアトピー性皮膚炎動物モデルに被験検体を投与し、該投与により、動物の皮膚の状態がどの様に変化するかを指標にして、その効能を評価するものである。投与はスケーリングが起こっている部位に、被験検体を１日１回、連日１２〜３６回程度投与すれば良く、かかる処置を行った後に、皮膚の肉眼観察、ＴＥＷＬ（経皮的散逸水分量）の測定、病理組織の観察、角層細胞分析などを行い、被験検体を投与しなかった対照群、全く塗布処置を行わなかった無塗布群のものと比較し、対照群および無塗布群の状態からどの程度無処置群（同週齢対照群）の状態にまで近づいたかを指標に評価する。この様な評価に於いては、例えば、ＴＥＷＬの様な指標であれば、数値として知る．ことが出来、かかる数値をそのまま使用することが出来るし、数値にならないものは、無処置群と無塗布群とを両極端に置くスケールで、スコア化することが出来る。この変化を見ることにより、被験検体のアトピー性皮膚炎への効果を知ることが出来る。
【０００８】
【実施例】
以下に、実施例を挙げて本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明がかかる実施例にのみ限定されないことは言うまでもない。
【０００９】
＜実施例１＞
実験動物としてＨＯＳ−ＨＲ系ヘアレスマウス（ＨＯＳと略）を用い、感作性物質であるＴＮＣＢ（２，４，６−トリニトロー１−クロルベンゼン）の１％アセトン溶液を２日毎に背中全面に３６日間塗布し（一回の背中への塗布量１００μｌ）、経時的に（惹起０日目（０ｄａｙ）、６日目（６ｄａｙ）、２０日目（２０ｄａｙ）および３６日目（３６ｄａｙ））、以下の項目について皮膚組織サンプリング（各ｎ＝５）および測定を行ない、ヒトアトピー性皮膚に関して報告されている皮膚所見および皮膚内部の免疫学的所見との類似点、差異を明らかにした。尚、陽性対照としてＢａｌｂ／Ｃマウスを設定した。Ｂａｌｂ／ＣマウスへのＴＮＣＢ塗布は耳を用いて行い、一回の塗布量を４０μｌとした。観察所見とその観察手技は以下の通りである。
【００１０】
（１）．ヘアレスマウス皮膚表面状態の変化およびＴＥＷＬ変化測定、角層水分量変化測定皮膚表面の状態については肉眼観察を行った。ＴＥＷＬ測定はＴＥＷＡメーター（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ社）で測定し、角層水分量の測定はコロネオメーター（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ社）で測定を行った。
（２）皮膚接触過敏反応の測定（皮膚厚さ測定）
耳および背中皮膚の厚さ測定にはピーコック社製のマイクロメーターを用いた。またヘアレスマウス皮膚厚さの測定ではマウスの背中皮膚を正中線に沿ってつまんで引上げて測定した。
（３）．角層面積変化測定
橿渕らの方法に従い、テープストリップらにて得られた角質細胞を染色し、顕微鏡下で角層細胞の面積を測定した。（橿渕暢夫，  皮膚の形態学的評価のための改良された剥離角層細胞診断法；日皮協ジャーナル、２７，１２２−１３２、１９９１）
（４）電子顕微鏡による角層細胞裏面絨毛様突起の観察
大畑らの報告に従い、テープストリップにて得られた角層細胞の裏面を捜査型電子顕微鏡にて観察した。なお、評価はスコア判定で行い、０点：全く絨毛様突起が認められない、１点：観察視野の一部に弱い絨毛用突起が観察される、２点：観察視野の半分以上に絨毛様突起が観察される、  ３点：観察視野全体に絨毛様突起が夥しく観察される、という基準を用いた。（大畑智他、成人アトピー性皮膚炎患者より得た剥離角質細胞の走査型電子顕微鏡所見；  日本皮膚科学会誌、１０３（１０）：  １３０７−１３１４，１９９３）
（５）皮膚組織の組織学的観察
採取した皮膚組織を中性ホルマリンで固定、パラフィン包埋後、薄切し、Ｈ＆Ｅ染色、トルイジンブルー染色、ＬＵＮＡ染色を行い、真皮に存在するマスト細胞、好酸球を顕微鏡下で計測した。
（６）．角層内セラミドの定量
ディスパーゼ、トリプシン処理し、真皮と生細胞を除去した角層サンプル（３ｃｍφ）  を乾燥後、クロロホルム：エタノール＝２：１，  １：１、１：２で順次抽出し、薄層クロマトグラムで展開し（クロロホルム：メタノール：酢酸（１９０  ：  ９  ：  １））、硫酸噴霧後の焼きつけで可視化したセラミドをフォトデンシトメーターで定量した。
（７）．血清中ＩｇＥ、ＩＦＮ−γ濃度測定
マウスより眼底採取した血清中に存在するＩｇＥ、ＩＦＮ−γをサンドイッチＥｌｉｓａ（Ｍｏｒｉｎａｇａ、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）により定量した。
（８）．表皮内Ｔ細胞サブセットの染色および計測と表皮ランゲルハンス細胞の染色
表皮シート内に存在するＴ細胞サブセット（ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８）を塩原の方法により染色し、蛍光顕微鏡下で可視化してサブセットの計測（単位面積あたり）を行った。また表皮シート内に存在するランゲルハンス細胞はＩ−Ａｄ／Ｉ−Ｅｄ抗原に対する抗体を用いて染色し、蛍光顕微鏡下で観察を行った。（Ｓｈｉｏｈａｒａ．Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−αβ／ＣＤ３  ａｎｄ  ＣＤ８  Ｊ．ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  １５０（１０），  ４３２３−４３３０，１９９３）
【００１１】
これらの検討の結果は以下の通りであり、これらの観察の何れに於いてもアトピー性皮膚炎と類似していることを支持するものであった。
（結果１）皮膚表面状態
ＴＮＣＢの連続塗布により、図１（図面代用写真）に示す如く、ヘアレスマウス皮膚表面にはスケーリングが発生し、赤みをおびガサガサとした性状を示す、いわゆるドライスキン症状を呈した。
（結果２）接触過敏反応の遅延型から即時型への移行
ＴＮＣＢ塗布初期には遅延型反応と考えられる皮膚接触過敏反応が、塗布２０ｄａｙ、３６ｄａｙには即時型に移行していると考えられた（図２）。またＴＮＣＢの連続塗布により、背中皮膚の厚さは徐々に増していった（図３）。
（結果３）皮膚表面性状について
ＴＮＣＢの連続塗布により角層水分量は減少し（図４）、またＴＥＷＬは徐々に悪化し、３６ｄａｙでは有意に高い値を示した（図５）。ヘアレスマウス背中皮膚の角層細胞面積はＴＮＣＢ塗布により暫時縮小してゆき、特に塗布３６日目にはＴＮＣＢ塗布開始時点および３６ｄａｙのアセトン塗布コントロールマウスに比較して有意に縮小した（図６）。
（結果４）角層内セラミド量の変化について
ＴＮＣＢ塗布３６ｄａｙ目の皮膚を採取し、セラミド１および２について定量した結果、セラミド１および２共にアセトン塗布コントロール群角層のセラミド量と変化がない、という結果になった（図７）。アトピー性皮膚炎とセラミド量の関係については、関係があるという報告がある一方で、関係がないと言う報告もあり、この結果はアトピー性皮膚炎様反応であることを否定するものではない。
（結果５）真皮内部のマスト細胞、好酸球の増加について
真皮内部におけるマスト細胞の増加は組織観察レベルにおいても顕著であり（図８）、皮膚真皮内単位面積あたりのマスト細胞数としてグラフ化した（図９）。真皮好酸球もＴＮＣＢ塗布により増加した（図１０）。
（結果６）表皮Ｔ細胞サブセットの変化およびランゲルハンス細胞の変化について
ＴＮＣＢ塗布により、表皮におけるＴ細胞サブセットは、ＣＤ４およびＣＤ８マーカーの発現が強いＴ細胞の存在割合が増加した（図１１，１２）。またランゲルハンス細胞はＴＮＣＢ塗布により、デンドリティックな形状から丸く肥大した形状へと変化した（図１３）。
（結果７）血清中ＩｇＥの変化について
ＴＮＣＢを連続塗布すると、Ｂａｌｂ／Ｃマウスでは血清中のＩｇＥが上昇することが知られており、アトピー性皮膚炎様モデルの指標となっている。Ｂａｌｂ／Ｃマウスではその傾向が追試され、またヘアレスマウスにおいても血清中のＩｇＥが増加した（図１４）。
【００１２】
＜実施例２＞
実施例１の手技で作成したアトピー性皮膚炎動物モデルが、モデルとして適切であることを確かめる為、既に人においてその治療効果に実績のあるサンプルを用いて、治療実験を行った。この実験に用いた２種のクリームの処方は表１に示す。アトピー性皮膚炎患者を対象に行った１群２０名の、１ヶ月間の実使用テストに於ける奏功率（改善した人の割合）も表１に記す。即ち、ＴＮＣＢ３６日目の塗布から２日経過した後より、スキンケア処置としてクリーム塗布群（２種類ＣｒｅａｍＡ，  ＣｒｅａｍＢ）、デキサメサゾン（Ｄｅｘと略：  ０．０１％ｉｎ  ａｃｅｔｏｎｅ）塗布群、無塗布群を各ｎ＝５で設定し、クリーム（組成は下記参照）は各０．１ｇを、またデキサメサゾンは１００μｌを３２日間、毎日一回塗布し、経時的にサンプリング及び測定を行い、スキンケア効果を確認した。
【００１３】
【表１】
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【００１４】
以下に、治療実験の結果を示す。これらの結果より、アトピー性皮膚炎患者に於いて有用であった薬剤や化粧料が、本発明の動物モデルでも有効であり、本発明の動物モデルがアトピー性皮膚炎のモデルとして使用できること、又、治療薬等のスクリーニングにも使用可能であることもわかる。
（結果１）皮膚表面の変化と角層水分量およびＴＥＷＬ変化について
ＴＮＣＢの３６日間塗布（２日毎）によりモデルを確立し、その２日後から検体塗布を開始した時点ではいずれの群でもＴＥＷＬは高い値を示したが、塗布８日目には無塗布群を含めてＴＥＷＬ値はほぼ正常値に回復した（図１５）。ＴＥＷＬという指標においては２種類のクリーム塗布群と無塗布群との間で明らかな差は認められなかった。コロネオメーター値で表わされる角層水分量も塗布開始時点では低値を示すが、塗布の継続によりアセトンのみを塗布したコントロール群の角層水分値に近づき、塗布３２日の段階で、無塗布群マウスの角層水分量はアセトン塗布コントロール群マウスの角層水分量に比較して低い値を示し、一方でクリームＢ塗布群では無塗布群に比較して有意に角層水分量を上昇させた（図１６）。デキサメサゾンを塗布した群では塗布３２日目において特に角層水分量に関して有意に低い値を示した。尚、アセトンのみを塗布した場合、塗布後２４時間で皮膚表面水分量が回復することは事前に確認してあるため、この結果はアセトン塗布に由来するものでなく、デキサメサゾンの影響であると結論される。
（結果２）角層細胞面積変化測定
角層細胞面積について、クリーム塗布群ではコントロール群（ＴＮＣＢ無塗布のアセトン塗布のみ）の角層細胞面積レベルに回復していったが、無塗布群では細胞面積が小さい状態が続いた（図１７）。またデキサメサゾン塗布群では逆に細胞面積が大きくなっていった。無塗布群ではクリーム  塗布群と比較して、表皮細胞の分裂が依然として亢進している可能性が示唆され、デキサメサゾン塗布群では角層細胞の分化に影響が現れたと推察される結果となった。
（結果３）角層細胞裏面絨毛様突起の変化について
ＴＮＣＢの塗布が終了し、クリーム塗布、デキサメサゾン開始時点における角層細胞裏面では絨毛様突起が夥しく観察され、細胞分裂が亢進し、角層の分化が未熟であることが推察された。その後のクリーム塗布などの処置により、絨毛様突起は徐々に減少してゆき、塗布８日目では無塗布群に比較して保湿剤を多く含むクリームＢ塗布群およびデキサメサゾン塗布群では有意な改善が認められた（図１８）。３２日間の処理では無塗布群でも角層が正常化するためか、絨毛様突起は減少し、クリーム塗布群などとの差は認められなくなっているが、スコアの平均値という点では依然として悪化している状態が推察される。
（結果４）皮膚厚さの経時変化について
無塗布群およびクリーム塗布群では同じように皮膚厚さが低下していったが、デキサメサゾン塗布群では４日目以降、皮膚が有意に薄くなった。アトピー性皮膚炎患者へのデキサメサゾン塗布でも皮膚が薄くなることが報告されており、本モデルでも確認された（図１９）。
（結果５）真皮マスト細胞数の変化
皮膚垂直切片を顕微鏡で観察した際の、単位平方ミリメートルあたりのマスト細胞数に関しては、無塗布群、クリーム２種の塗布群およびデキサメサゾン塗布群ともに変化はなかった（図２０）。デキサメサゾン塗布では皮膚が薄くなっているため、単位立方ミリメートルあたりのマスト細胞は少なくなっていると推察されるが、ある深さまでの垂直切片における単位平方ミリメートルあたりでは他の群と同様、多量のマスト細胞が依然として多量に存在することが判明した。
（結果６）表皮内Ｔ細胞サブセットの変化について
各検体塗布開始時にはＣＤ４陽性Ｔ細胞およびＣＤ８陽性Ｔ細胞が優位な表皮内Ｔ細胞の分布パターンを示すが、クリーム２種類の塗布群および無塗布群では３２日後にはこれら３群においてはＣＤ３  ＆  ＣＤ４陽性細胞およびＣＤ３  ＆  ＣＤ８陽性細胞が増えてきており、アセトンのみを塗りつづけたＴＮＣＢ無塗布コントロールの表皮Ｔ細胞組成に近づくような傾向を示したが、３者間に差は認められなかった。一方でデキサメサゾン塗布群ではＴ細胞の絶対数が明らかに低下していた（図２１）。
（結果７）血清中のＩｇＥおよびＩＦＮ−γ量の変化について
本モデルに対するクリームおよびデキサメサゾンの塗布開始前および塗布終了時（３２日目）における血清中ＩｇＥ、ＩＬ−４、ＩＦＮ−γの量を測定した。個体間のばらつきがおおきく、再現性を確認する必要があると考えられるものの、クリーム塗布により血清中ＩｇＥ量は低下する傾向が認められるとも考えられた（図２２）。ＩＦＮ−γについては個体差が大きく、現時点では断定的なことを言えないものの、ＴＮＣＢ塗布によりＩＦＮ−γ量は低下する、すなわちサイトカインがＴｙｐｅ−２タイプにシフトしていると推察された（図２３）。一方、スキンケア処置により血清中ＩＦＮ−γは回復する傾向に有ると捉えられた。スキンケアの有用性を示すものである。
【００１５】
【発明の効果】
本発明によれば、適切なアトピー性皮膚炎処置剤を開発する為、その作成の再現性と容易性、アトピー性皮膚炎の病理的特徴を全て兼ね備えた動物モデルを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ベヒクルアセトン塗布（Ａ）およびＴＮＣＢ塗布（Ｂ）を３６日間行ったヘアレスマウスの皮膚表面状態を示す図である。（図面代用写真）
【図２】ＴＮＣＢ塗布に対するへアレスマウス皮膚の接触過敏反応の変化を示す図である。
【図３】ＴＮＣＢ塗布によるヘアレスマウス皮膚の経時的な厚さ変化を示す図である。
【図４】ＴＮＣＢ塗布によるヘアレスマウス皮膚の角層水分量の変化を示す図である。
【図５】ＴＮＣＢ塗布によるヘアレスマウス皮膚のＴＥＷＬ変化を示す図である。
【図６】ＴＮＣＢ塗布によるヘアレスマウス皮膚の角層面積変化を示す図である。
【図７】ＴＮＣＢ塗布による角層セラミド１，２の変化を示す図である。
【図８】ＴＮＣＢ塗布を行ったヘアレスマウス真皮マスト細胞の組織像を示す図である。（図面代用写真）
【図９】ＴＮＣＢ塗布による真皮マスト細胞数の変化を示す図である。
【図１０】ＴＮＣＢ塗布による真皮好酸球の変化を示す図である。
【図１１】ＴＮＣＢ塗布による表皮Ｔ細胞サブセットの変化（ＣＤ４）を示す図である。
【図１２】ＴＮＣＢ塗布による表皮Ｔサブセットの変化（ＣＤ８）を示す図である。
【図１３】ＴＮＣＢ塗布による表皮ランゲルハンス細胞の形態変化を示す図である。（図面代用写真）
【図１４】ＴＮＣＢ塗布による血清中ＩｇＥの変化を示す図である。
【図１５】スキンケア処理によるＴＥＷＬ変化を示す図である。
【図１６】スキンケア処理による角層水分量変化を示す図である。
【図１７】スキンケアによる角層細胞面積の変化を示す図である。
【図１８】スキンケアによる角質細胞裏面絨毛突起の変化を示す図である。（図面代用写真）
【図１９】スキンケア処理による皮膚厚さの経時変化を示す図である。
【図２０】スキンケア処理による真皮マスト細胞数の変化を示す図である。
【図２１】スキンケア処理による表皮Ｔ細胞サブセットの変化を示す図である。
【図２２】スキンケア処理による血清中ＩｇＥ量の変化を示す図である。
【図２３】スキンケア処理による血清中ＩＦＮ−γの変化を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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