(57)【要約】      （修正有）【課題】工業的にも製造可能で、かつ、光学分割剤を用いずに光学活性ヒドロキシアルキルアミン化合物を得る方法を提供する。【解決手段】式（１）2004344067.tif 000013（式中、Ａｒは置換基を有していてもよいアリール基または置換基を有していてもよいヘテロアリール基を表し、Ｒ１〜Ｒ３はそれぞれ独立に、水素原子または置換基を有していてもよいアルキル基を表し、ｎは１または２を表す。）で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物のエステル結合部位を、光学活性体の一方を優先的に加水分解する能力を有する酵素または当該酵素を産出する微生物、あるいはそれらの処理物を作用させ不斉加水分解することを特徴とする光学活性ヒドロキシアルキルアミン化合物および対掌体である光学活性アシルオキシアルキルアミン化合物の製造方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）
2004344067.tif 000010
（式中、Ａｒは置換基を有していてもよいアリール基または置換基を有していてもよいヘテロアリール基を表し、Ｒ１〜Ｒ３はそれぞれ独立に、水素原子または置換基を有していてもよいアルキル基を表し、ｎは１または２を表す。）
で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物のエステル結合部位を、光学活性体の一方を優先的に加水分解する能力を有する酵素または当該酵素を産出する微生物、あるいはそれらの処理物を作用させ不斉加水分解することを特徴とする下記一般式（２）
2004344067.tif 000011
（式中、Ａｒ、Ｒ２、Ｒ３、ｎは前記と同じ意味を表し、＊は不斉炭素原子であることを表す。）
で表される光学活性ヒドロキシアルキルアミン化合物および下記一般式（３）
2004344067.tif 000012
（式中、Ａｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｎおよび＊は前記と同じ意味を表す。）
で表される対掌体である光学活性アシルオキシアルキルアミン化合物の製造方法。
【請求項２】
上記一般式（１）で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物において、Ａｒがフェニル基または２−チエニル基である請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
上記一般式（１）で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物において、Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立に水素原子またはメチル基である請求項２に記載の製造方法。
【請求項４】
上記一般式（１）で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物において、Ｒ２およびＲ３がそれぞれメチル基である請求項２に記載の製造方法。
【請求項５】
上記一般式（１）で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物において、ｎが１である請求項３または４に記載の製造方法。
【請求項６】
上記一般式（１）で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物において、Ｒ１が炭素数１〜５のアルキル基である請求項１に記載の製造方法。
【請求項７】
上記一般式（１）で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物において、Ｒ１がメチル基である請求項６に記載の製造方法。
【請求項８】
酵素が微生物起源の酵素、動物起源の酵素または植物起源の酵素である請求項１〜７のいずれかに記載の製造方法。
【請求項９】
酵素がバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属またはアルスロバクター属（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）の微生物を起源とする酵素である請求項１〜７のいずれかに記載の製造方法。
【請求項１０】
上記一般式（１）で示されるアシルオキシアルキルアミン化合物のエステル結合部位を不斉加水分解する能力を有するエステル加水分解酵素または当該酵素を産生する微生物、あるいはそれらの処理物が、当該能力を人為的に付与されてなる形質転換体またはその死菌化細胞であることを特徴とする請求項１〜９のいずれかに記載の製造方法。
【請求項１１】
Ａｒがフェニル基または２−チエニル基である請求項１に記載の一般式（１）で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物または一般式（３）で表される光学活性アシルオキシアルキルアミン化合物。
【請求項１２】
Ｒ２およびＲ３がそれぞれ独立に水素原子またはメチル基である請求項１１に記載の一般式（１）で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物または一般式（３）で表される光学活性アシルオキシアルキルアミン化合物。
【請求項１３】
Ｒ２およびＲ３がそれぞれメチル基である請求項１１に記載の一般式（１）で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物または一般式（３）で表される光学活性アシルオキシアルキルアミン化合物。
【請求項１４】
ｎが１である請求項１２または１３に記載の一般式（１）で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物または一般式（３）で表される光学活性アシルオキシアルキルアミン化合物。
【請求項１５】
Ｒ１が炭素数１〜５のアルキル基である請求項１４に記載の一般式（１）で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物または一般式（３）で表される光学活性アシルオキシアルキルアミン化合物。
【請求項１６】
Ｒ１がメチル基である請求項１４に記載の一般式（１）で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物または一般式（３）で表される光学活性アシルオキシアルキルアミン化合物。
【請求項１７】
上記一般式（３）で表される光学活性アシルオキシアルキルアミン化合物において、絶対配置がＳ体である請求項１１〜１６のいずれかに記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、光学活性ヒドロキシアルキルアミン化合物および光学活性アシルオキシアルキルアミン化合物の製造方法に関する。光学活性ヒドロキシアルキルアミン化合物は様々な医薬品の合成中間体として有用な化合物である。
【０００２】
【従来の技術】
光学活性ヒドロキシアルキルアミン化合物の製造方法としては、従来より種々の方法が知られている。例えば、
（１）アミノケトンを不斉修飾した水素化アルミニウムリチウムを用いて還元する方法（例えば非特許文献１参照）
2004344067.tif 000002
（２）水素化アルミニウムリチウムと不斉修飾アミノアルコールを系内で調製したのち、アミノケトンを添加し還元する方法（例えば非特許文献２参照）
2004344067.tif 000003
（３）不斉修飾されたロジウム錯体触媒を用いて、水添還元する方法（例えば非特許文献３参照）
2004344067.tif 000004
（４）光学活性なカルボン酸を用いて光学分割する方法等が挙げられる。
しかしながら、上記（１）および（２）は非常に危険な水素化アルミニウムリチウムを用いており、工業的に適した方法とは言い難く、（３）は非常に高価な不斉ロジウム触媒を用いており、経済的に不利である。（４）に関しては、工業的製造においては、光学分割剤の回収リサイクル工程が必須となる。
【０００３】
【非特許文献１】
Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ  ｉｎ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  ＩＩ．，９９（１９９７）
【非特許文献２】
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，３１，７１０１（１９９０）
【非特許文献３】
Ｓｙｎｌｅｔｔ  １９９１，５，６８９
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、工業的にも製造可能で、かつ、光学分割剤を用いずに光学活性ヒドロキシアルキルアミン化合物を得る方法を提供しようとするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、ラセミ体のアシルオキシアルキルアミン化合物を特定の酵素を用いて加水分解することによって光学活性ヒドロキシアルキルアミン化合物を容易に効率よく製造できることを見いだし、本発明に至った。
すなわち、本発明は、下記一般式（１）
2004344067.tif 000005
（式中、Ａｒは置換基を有していてもよいアリール基または置換基を有していてもよいヘテロアリール基を表し、Ｒ１〜Ｒ３はそれぞれ独立に、水素原子または置換基を有していてもよいアルキル基を表し、ｎは１または２を表す。）
で表されるアシルオキシアルキルアミン化合物（以下、化合物（１）と称す。）のエステル結合部位を、光学活性体の一方を優先的に加水分解する能力を有する酵素または当該酵素を産出する微生物、あるいはそれらの処理物を作用させ不斉加水分解することを特徴とする下記一般式（２）
2004344067.tif 000006
（式中、Ａｒ、Ｒ２、Ｒ３、ｎは前記と同じ意味を表し、＊は不斉炭素原子であることを表す。）
で表される光学活性ヒドロキシアルキルアミン化合物（以下、化合物（２）と称す。）および下記一般式（３）
2004344067.tif 000007
（式中、Ａｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ｎおよび＊は前記と同じ意味を表す。）
で表される対掌体である光学活性アシルオキシアルキルアミン化合物（以下、化合物（３）と称す。）の製造方法を提供するものである。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明において原料として用いられる化合物（１）のうちｎ＝１のものは、特開平７−１８８０６５号公報に記載されている方法に従って、例えば、２−アセチルチオフェンからＮ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミンを合成する。そしてその後、そのヒドロキシ基をアシル化することで製造できる。すなわち、公知の方法に準じて合成した例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミンを下記一般式（４）
ＣｌＣＯＯＲ１（４）
（式中、Ｒ１は前記と同じ意味を表す。）
で表される塩化アシル化合物、または下記一般式（５）
Ｒ１ＣＯＯＣＯＲ１（５）
（式中、Ｒ１は前記と同じ意味を表す。）
で表される酸無水物を用いて、そのヒドロキシ基をアシル化することで製造することができる。
また、化合物（１）のうちｎ＝２のものは、例えば、ＷＯ０２／１０１１５号明細書に記載の方法（Ｅｘａｍｐｌｅ  ３−６）に準じ、対応する４−アリール−４−オキソ−１−ヒドロキシ化合物の水酸基をハロゲン化し、カルボニル基を還元しアシルオキシ化した後、ハロゲン原子を種々のアミノ基で置換することにより製造することができる。
【０００７】
上記一般式（１）において、Ａｒのアリール基としては、例えばフェニル基、ナフチル基、フェナントリル基等が挙げられ、ヘテロアリール基としては、例えばフリル基、チエニル基、ピロリル基、ピリジル基、ベンゾフリル基、インデニル基等が挙げられ、これらを置換する置換基としては、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、トリフルオロメチル基、メトキシ基、ニトロ基、アミノ基、メチルスルホニルアミノ基、ベンゾイルオキシ基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３のアルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基等が挙げられ、これらを置換する置換基としては、例えば水酸基、メトキシ基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
化合物（１）の具体例としては、例えばＮ−メチル−３−フェニル−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（４−トリル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（４−メトキシフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（４−ニトロフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（３−メチルスルホニルアミノフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（４−ベンゾイルオキシフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（４−クロロフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（４，６−ジメトキシ−９−フェナントリル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−［１，３−ジクロロ−６−（トリフルオロメチル）−９−フェナントリル］−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（３−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（３−ピリジル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（４−ピリジル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（２−ベンゾフリル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、
Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−フェニル−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−トリル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−メトキシフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−ニトロフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（３−メチルスルホニルアミノフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−ベンゾイルオキシフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−クロロフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４，６−ジメトキシ−９−フェナントリル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［１，３−ジクロロ−６−（トリフルオロメチル）−９−フェナントリル］−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（３−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（３−ピリジル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−ピリジル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−ベンゾフリル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、
Ｎ−エチル−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチル−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−（１−プロピル）−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジ（１−プロピル）−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−（２−プロピル）−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジ（２−プロピル）−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ−（１−ブチル）−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジ（１−ブチル）−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、
Ｎ−メチル−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、Ｎ−エチル−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチル−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、Ｎ−（１−プロピル）−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジ（１−プロピル）−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、Ｎ−（２−プロピル）−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジ（２−プロピル）−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、Ｎ−（１−ブチル）−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジ（１−ブチル）−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、
Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−プロピオニルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−ブチリルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−イソブチリルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−ペンタノイルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−イソペンタノイルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−ｔ−ペンタノイルオキシプロピルアミン、Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−ヘキサノイルオキシプロピルアミン、
Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−プロピオニルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−ブチリルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−イソブチリルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−ペンタノイルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−イソペンタノイルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−ｔ−ペンタノイルオキシプロピルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−ヘキサノイルオキシプロピルアミン等が挙げられる。
化合物（１）において、不斉炭素原子を不斉中心とする２種類の光学活性体が存在するが、本発明の方法に用いられる化合物（１）は、これらの光学活性体をそれぞれ等量ずつ含むラセミ体であってもよいし、いずれかの光学活性体を過剰に含む化合物であってもよい。
【０００８】
本発明の製造方法において用いられる化合物（１）に対して加水分解能を有する酵素としては、微生物起源の酵素、動物起源の酵素、植物起源の酵素等が挙げられる。
微生物起源の酵素としては、例えばアルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｏｒ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、クロモバクテリウム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、フミコーラ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）属、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）属、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属、またはサーマス（Ｔｈｅｒｍｕｓ）属の微生物を起源とする酵素、あるいはこれらの微生物を突然変異剤もしくは紫外線により誘導された突然変異体を起源とする酵素、あるいはこれらの微生物が有する酵素遺伝子が導入されることによって形質転換された組換え微生物が産出する酵素などが挙げられる。
【０００９】
アルスロバクター属、アスペルギルス属、バチルス属、リゾプス属、キャンディダ属、シュードモナス属、ペニシリウム属、ムコール属等の微生物を起源とする酵素が特に好ましい結果を与える。
【００１０】
動物酵素の起源としては、例えば、豚内臓、牛内臓、羊内臓を起源とする酵素などが挙げられる。
【００１１】
植物起源の酵素としては、例えば小麦胚芽を起源とする酵素などが挙げられる。
本発明の製造方法において用いられる酵素としては、例えば、ＰＬＥ−Ａ（ブタ肝臓由来）、プロテアーゼＮ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）、リパーゼＡ６（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ由来）、リパーゼＮ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｎｉｖｅｕｓ由来）、リパーゼＤ２０（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｄｅｌｍｕｒ由来）、プロテアーゼＡ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ由来）、リパーゼＦ−ＡＰ１５（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ由来）、プロテアーゼＰ３（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｍｅｌｌｕｓ由来）、ＣＨＥ“Ａｍａｎｏ”２（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．由来）、アシラーゼ「アマノ」原末（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｍｅｌｌｅｕｓ由来）、リパーゼＡＰ４（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ由来）、リパーゼＡＰ６（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ由来）、リパーゼＧ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉｉ由来）、プロテアーゼＭ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ由来）  （以上、天野製薬製）、リパーゼＯＦ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ由来）、リパーゼＭＹ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ  ｎｏｖ．ｓｐ．由来）（以上、名糖産業製）、キラザイムＬ−９（Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ由来）、キラザイムＰ−１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ由来）、コレステロールエステラーゼ  （Ｃａｎｄｉｄａ  ｒｕｇｏｓａ由来）、（以上、ロシュ・ダイアグノスティックス（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）社製）、Ｐｕｒａｆｅｃｔ４０００Ｅ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ由来）（ＧＥＮＥＣＯＲ製）、エステラーゼ４６０５４（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｉｕｓ由来）（Ｆｌｕｋａ製）等が挙げられる。また、特許第３１５１８９３号記載のアルスロバクター・グロビフオルミス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｏｒ  ｇｌｏｂｉｆｏｍｉｓ）由来の酵素を用いることもできる。本発明の製造方法において用いられる酵素の純度あるいは形態については特に制限されるものではなく、精製酵素、粗酵素、微生物培養物、菌体、およびそれらの処理物などの種々の形態で用いることができる。ここで処理物としては、例えば、凍結乾燥菌体、アセトン乾燥菌体、菌体磨砕物、菌体の自己消化物、菌体の超音波処理物、菌体抽出物、あるいはアルカリ処理物等が挙げられる。さらに、上記のような種々の純度あるいは形態の酵素を、例えば、シリカゲルやセラミックス等の無機担体、セルロース、またはイオン交換樹脂等への吸着法、ポリアクリルアミド法、含硫多糖ゲル法（例えばカラギーナンゲル法）、アルギン酸ゲル法、寒天ゲル法等の公知の方法により固定化してもよい。
かかる酵素は、目的とする化合物（２）に応じて適宜選択して用いられる。酵素の使用量は反応時間の遅延や選択性の低下が起こらないように適宜選択され、例えば、精製酵素、粗酵素、または市販品酵素を用いる場合、その使用量は化合物（１）に対して通常は０．００１〜２重量倍、好ましくは０．０１〜１重量倍程度であり、微生物培養物、菌体、およびそれらの処理物を用いる場合、その使用量は化合物（１）に対して通常は０．０１〜１００重量倍、好ましくは０．１〜５０重量倍程度である。
不斉加水分解に用いられる水は、特に限定されるものではないが、緩衝水溶液が好ましく用いられる。緩衝水溶液としては、例えばリン酸ナトリウム水溶液、リン酸カリウム水溶液などといったリン酸アルカリ金属塩水溶液などの無機酸塩の緩衝水溶液、酢酸ナトリウム水溶液、酢酸カリウム水溶液などといった酢酸アルカリ金属塩などの有機酸塩の緩衝水溶液などが挙げられる。かかる水の使用量は化合物（１）に対して通常０．５倍モル以上であればよく、場合によっては溶媒量用いられ、通常は１００重量倍以下である。
不斉加水分解は、疎水性有機溶媒、親水性有機溶媒などの有機溶媒の存在下に行われてもよい。かかる疎水性有機溶媒としては、例えばｔ−ブチルメチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類、トルエン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタンなどの炭化水素類などが、親水性有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔ−ブタノールなどのアルコール類、テトラヒドロフランなどのエーテル類、ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、アセトンなどのケトン類、アセトニトリルなどのニトリル類などが挙げられる。これらの疎水性有機溶媒や親水性有機溶媒はそれぞれ単独または２種以上を組み合わせて用いられ、疎水性有機溶媒と親水性有機溶媒とを組み合わせてもよい。混合比率は特に限定されない。
かかる有機溶媒を用いる場合、その使用量は通常、化合物（１）に対して１００重量倍以下、好ましくは７０重量倍以下である。
不斉加水分解は、例えば水、化合物（１）および酵素を混合する方法で行われ、有機溶媒を用いる場合には、有機溶媒、水、化合物（１）および酵素を混合すればよく、加える順序は限定されない。
反応系のｐＨは酵素による不斉加水分解が選択性良く進行する値が適宜選択され、特に限定はされないが、通常はｐＨ＝４〜１０程度の範囲である。
反応温度は、高すぎると酵素の安定性が低下する傾向にあり、また、低すぎると反応速度が低下する傾向にあるため、通常５〜６５℃程度であり、好ましくは１５〜５０℃程度の範囲である。
かかる加水分解によって化合物（１）の一方の光学活性体が、不斉炭素原子の周りの立体配置を維持したまま優先的に加水分解されて、目的とする化合物（２）が生成し、対掌体である化合物（３）が加水分解されずに残る。
反応後の反応混合物を、水層と有機層に分液し、水層として化合物（２）の水溶液を、有機層に化合物（３）を得る。この際、水層と有機層に効率よく分配するように水層のｐＨを塩酸、硫酸等の酸性水溶液または水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、アンモニア水等のアルカリ性水溶液を用いて調整するとよい。化合物（２）はｐＨ＝６以下ではその大部分が水層に分配する。疎水性有機溶媒を用いなかった場合やその量が少ないために容易には分液できない場合、あるいは水の使用量が少ないために容易には分液できない場合には、疎水性有機溶媒または水などを適宜加えたのちｐＨを調整し、分液すればよい。疎水性有機溶媒としては例えばｔ−ブチルメチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類、トルエン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタンなどの炭化水素類、ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、クロロベンゼン、オルトジクロロベンゼンなどのハロゲン化炭化水素類、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ブチルなどのエステル類などが挙げられる。
得られた化合物（２）の水溶液から水を除去することによって、目的の化合物（２）を取り出すことができる。また、この水溶液にアルカリを加えた後、適当な有機溶媒を用いて抽出し、その有機溶媒を除去することによっても取り出すことができる。得られた化合物（２）をさらに再結晶、カラムクロマトグラフィーなど通常の精製法によって精製することもできる。
不斉加水分解に際して加水分解されなかった化合物（３）は分液後の有機層に含まれており、溶媒の蒸留除去などの方法によって容易に有機層から取り出すことができる。
更に、反応後の分液時のｐＨを１２以上にすることで、化合物（３）および化合物（２）の両者とも有機層に分配させ、その有機層から、蒸留、再結晶、カラムクロマトグラフィーなど通常の方法により分離、精製し、化合物（３）、化合物（２）をそれぞれ単離することもできる。
かくして得られる化合物（２）の具体例として、Ｓ体の例としては、例えば、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−フェニル−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４−トリル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４−メトキシフェニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４−ニトロフェニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（３−メチルスルホニルアミノフェニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４−ベンゾイルオキシフェニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４，６−ジメトキシ−９−フェナントリル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−［１，３−ジクロロ−６−（トリフルオロメチル）−９−フェナントリル］−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（３−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（３−ピリジル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４−ピリジル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（２−ベンゾフリル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、
（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−フェニル−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−トリル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−メトキシフェニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−ニトロフェニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（３−メチルスルホニルアミノフェニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−ベンゾイルオキシフェニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４，６−ジメトキシ−９−フェナントリル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［１，３−ジクロロ−６−（トリフルオロメチル）−９−フェナントリル］−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（３−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（３−ピリジル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−ピリジル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−ベンゾフリル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、
（Ｓ）−Ｎ−エチル−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジエチル−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−（１−プロピル）−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジ（１−プロピル）−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−（２−プロピル）−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジ（２−プロピル）−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−（１−ブチル）−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジ（１−ブチル）−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン、
（Ｓ）−Ｎ−メチル−４−（２−チエニル）−４−ヒドロキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（２−チエニル）−４−ヒドロキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ−エチル−４−（２−チエニル）−４−ヒドロキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジエチル−４−（２−チエニル）−４−ヒドロキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ−（１−プロピル）−４−（２−チエニル）−４−ヒドロキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジ（１−プロピル）−４−（２−チエニル）−４−ヒドロキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ−（２−プロピル）−４−（２−チエニル）−４−ヒドロキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジ（２−プロピル）−４−（２−チエニル）−４−ヒドロキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ−（１−ブチル）−４−（２−チエニル）−４−ヒドロキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジ（１−ブチル）−４−（２−チエニル）−４−ヒドロキシブチルアミン等が挙げられる。
また、Ｒ体の例としては、上記Ｓ体例示化合物において、（Ｓ）−を（Ｒ）−に変更したものが例示される。
また、化合物（３）の具体例として、Ｓ体の例としては、例えば、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−フェニル−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４−トリル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４−メトキシフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４−ニトロフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（３−メチルスルホニルアミノフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４−ベンゾイルオキシフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４−クロロフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４，６−ジメトキシ−９−フェナントリル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−［１，３−ジクロロ−６−（トリフルオロメチル）−９−フェナントリル］−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（３−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（３−ピリジル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（４−ピリジル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（２−ベンゾフリル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、
（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−フェニル−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−トリル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−トリフルオロメチルフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−メトキシフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−ニトロフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（３−メチルスルホニルアミノフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−ベンゾイルオキシフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−クロロフェニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４，６−ジメトキシ−９−フェナントリル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［１，３−ジクロロ−６−（トリフルオロメチル）−９−フェナントリル］−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（３−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（３−ピリジル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（４−ピリジル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−ベンゾフリル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、
（Ｓ）−Ｎ−エチル−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジエチル−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−（１−プロピル）−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジ（１−プロピル）−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−（２−プロピル）−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジ（２−プロピル）−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−（１−ブチル）−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジ（１−ブチル）−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、
（Ｓ）−Ｎ−メチル−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ−エチル−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジエチル−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ−（１−プロピル）−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジ（１−プロピル）−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ−（２−プロピル）−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジ（２−プロピル）−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ−（１−ブチル）−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジ（１−ブチル）−４−（２−チエニル）−４−アセチルオキシブチルアミン、
（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−プロピオニルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−ブチリルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−イソブチリルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−ペンタノイルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−イソペンタノイルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−ｔ−ペンタノイルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ−メチル−３−（２−チエニル）−３−ヘキサノイルオキシプロピルアミン、
（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−プロピオニルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−ブチリルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−イソブチリルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−ペンタノイルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−イソペンタノイルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−ｔ−ペンタノイルオキシプロピルアミン、（Ｓ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−ヘキサノイルオキシプロピルアミン等が挙げられる。
また、Ｒ体の例としては、上記Ｓ体例示化合物において、（Ｓ）−を（Ｒ）−に変更したものが例示される。
【００１２】
【実施例】
以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
実施例１
Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミンの製造
Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミン３．７ｇ（２０ｍｍｏｌ）、ジエチルエーテル３０ｍｌからなる溶液に、無水酢酸３．０ｇ（２９ｍｍｏｌ）を１時間かけて滴下し、室温で８時間撹拌した。反応液を飽和炭酸カリウム溶液３０ｍｌで洗浄し、さらに水５ｍｌで洗浄し有機層を得た。有機層を濃縮することで、Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミンを無色油状物（４．１ｇ）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ／ｐｐｍ）
２．０６（３Ｈ，ｓ）、２．２１（６Ｈ、ｓ）、２．１５〜２．３２（４Ｈ、ｍ）、６．１２（１Ｈ，ｔ）、６．９５（１Ｈ，ｔ）、７．０７（１Ｈ、ｄ）、７．２７（１Ｈ、ｄ）
実施例２〜２２
光学活性Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン及び、光学活性Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミンの製造
表１に示した種々の酵素１０ｍｇを１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７）２ｍｌに溶解させた。これにラセミ体のＮ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン２３ｍｇのｔ−ブチルメチルエーテル溶液２ｍｌ溶液を加えて室温で撹拌した。２２〜２４時間後、反応液の一部を取って、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で生成した光学活性Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミン、光学活性Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−ヒドロキシプロピルアミンの転換率および光学純度を求めた。転換率は、反応原料であるＮ，Ｎ−ジメチル−３−（２−チエニル）−３−アセチルオキシプロピルアミンの反応率を表わし、光学純度は、それぞれ、目的化合物である光学活性化合物のいずれか一方の鏡像異性体の過剰率を表わすもので、その結果を表２に示した。
＜ＨＰＬＣ条件（転換率）＞
カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  ＯＤＳ−３Ｖ  ４．６ｍｍφ×２５ｃｍ（ＧＬ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）、移動層：アセトニトリル／水（０．０１５ｗｔ％Ｎａ２ＨＰＯ４＋０．０１５ｗｔ％ＮａＨ２ＰＯ４添加）＝３０／７０（ジエチルアミン０．１体積％添加）、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、温度：４０℃、検出器：ＵＶ２１０ｎｍ
＜ＨＰＬＣ条件（光学純度）＞
カラム：ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ  ＯＦ  ４．６ｍｍφ×２５ｃｍ（ダイセル社製）、移動層：ｎ−ヘキサン／イソプロパノール＝９５／５（ジエチルアミン０．１体積％添加）、流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ、温度：４０℃、検出器：ＵＶ２５４ｎｍ
【００１３】
【表１】
2004344067.tif 000008
【００１４】
【表２】
2004344067.tif 000009
【００１５】
【発明の効果】
本発明によれば、特定の酵素を用いることによって上記一般式（２）で表される光学活性ヒドロキシアルキルアミン化合物および上記一般式（３）で表される光学活性アシルオキシアルキルアミン化合物を容易に効率よく製造することができる。