(57)【要約】【課題】シミ、ソバカス、皮膚色素沈着等の原因となるメラニンの産生に関与するチロシナーゼの発現を抑制することによって美白作用を発揮することができ、シミ、ソバカス、皮膚色素沈着症等の予防・治療に有効であるチロシナーゼ発現抑制剤を提供する。【解決手段】チロシナーゼ発現抑制剤に、その有効成分としてタケノコ及び／又はカンゾウ根からの抽出物を含有させる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
タケノコ及び／又はカンゾウ根からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするチロシナーゼ発現抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、シミ、ソバカス、皮膚色素沈着等の原因となるメラニンの産生に関与するチロシナーゼの発現を抑制することによって美白作用を発揮することができ、シミ、ソバカス、皮膚色素沈着症等の予防・治療に有効であるチロシナーゼ発現抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
シミ、ソバカス、日焼け後の皮膚色素沈着は、皮膚内に存在する色素細胞（メラノサイト）の活性化によりメラニン産生が著しく亢進した結果として生ずるものであり、中高年齢層における肌の悩みの一つになっている。
【０００３】
一般に、メラニンは色素細胞の中で生合成される酵素チロシナーゼの働きによってチロシンからドーパ、ドーパからドーパキノンに変化し、ついで５，６−ジヒドロキシインドフェノール等の中間体を経て形成されるものとされている。従って、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）を予防・治療するためには、メラニン産生過程を阻害すること、あるいは既に産生したメラニンを淡色漂白することが有効であると考えられる。
【０００４】
このような考えに基づき、従来から種々の美白成分が提案されてきた。例えば、チロシナーゼ活性を阻害してメラニン産生を抑制するものとして、エリカ抽出物（特許文献１）、桑葉抽出物（特許文献２）等が用いられてきた。また、産生したメラニンを淡色漂白化するものとして、グラブリジン（特許文献３）、雪蓮花抽出物（特許文献４）等が用いられてきた。さらに、チロシナーゼ発現抑制作用を有する天然素材の抽出物として、アナアオサ（非特許文献１）及びトコフェロール（非特許文献２）等が知られている。
【０００５】
【特許文献１】
特開平６−３０５９７８号公報
【特許文献２】
特開平１１−２４６４２４号公報
【特許文献３】
特開平１−３１１０１１号公報
【特許文献４】
特開２００２−２０１１２２号公報
【非特許文献１】
日本化粧品技術者会学術委員会，「ＳＣＣＪ研究討論会（第４４回）講演要旨集」，ｐ５５−５７，１９９９年６月１７日発行
【非特許文献２】
フレグランスジャーナル社，「最新のメラニン研究と美白剤の開発」，ｐ５６−６３，２００３年２月５日発行
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、安全性の高い天然物の中からチロシナーゼ発現抑制作用を有する物質を見出し、それを有効成分としたチロシナーゼ発現抑制剤を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために、本発明のチロシナーゼ発現抑制剤は、タケノコ及び／又はカンゾウ根からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明において、「タケノコ及び／又はカンゾウ根からの抽出物」とは、タケノコ及び／又はカンゾウ根を抽出原料として得られる抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【０００９】
タケは、中国南部が原産で、桿は高さ１０〜２５メートル、直径は８〜２０センチメートルのイネ科タケ亜科の植物であり、その若芽であるタケノコは、日本、中国及びその他の広い地域で食用されている。抽出原料として使用するタケノコの種類は特に限定されるものではないが、モウソウ竹（Ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｓ  ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌａ  ｆ．  ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ）又はハチク竹の若芽を使用することが好ましい。
【００１０】
カンゾウ（甘草）は、マメ科に属し、古代より薬用又は甘味料の原料として利用されている有用植物である。特にカンゾウの根部であるカンゾウ根には、グリチルリチンその他の有用成分が含有されていることが確認されている。抽出原料として使用するカンゾウの種類は特に限定されるものではなく、例えば、Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ、Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｉｎｆｌａｔａ、Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｕｒａｌｅｎｓｉｓ、Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ａｓｐｅｒａ、Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｅｕｒｙｃａｒｐａ、Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｐａｌｌｉｄｉｆｌｏｒａ、Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ、Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｌｅｐｉｄｏｔａ、Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｅｃｈｉｎａｔａ、Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ａｃａｎｔｈｏｃａｒｐａ等を抽出原料として使用することができるが、Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ及びＧｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｉｎｆｌａｔａを抽出原料として用いることが好ましい。
【００１１】
抽出原料として使用するタケノコ及び／又はカンゾウ根は、採取後乾燥し粉砕したものが適当である。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を使用して行ってもよい。また、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより極性溶媒を用いた抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１２】
抽出処理の際には、抽出溶媒として極性溶媒を使用することが好ましい。タケノコ又はカンゾウ根に含まれるチロシナーゼ発現抑制作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって容易に抽出することができる。
【００１３】
極性溶媒の具体例としては、水、水溶性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて用いることができる。これら極性溶媒のうち、水溶性有機溶媒又は含水水溶性有機溶媒を使用することが好ましい。
【００１４】
抽出溶媒として使用し得る水には、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、滅菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１５】
抽出溶媒として使用し得る水溶性有機溶媒としては、低級脂肪族アルコール、アセトン、テトラヒドロフラン等が挙げられ、低級脂肪族アルコールの具体例としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の１価アルコール；１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、イソプロピレングリコール等の多価アルコール等が挙げられる。
抽出溶媒としては、酢酸エチル、酢酸ブチル、メチルセロソルブ等の中間極性溶媒を使用することもできる。
【００１６】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、含水水溶性有機溶媒を使用する場合、一価アルコール、多価アルコール、アセトン、テトラヒドロフラン等の含有量が５０重量％以上であることが好ましい。
【００１７】
抽出処理は、タケノコ又はカンゾウ根に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定されず、常法に従って行うことができる。抽出処理の際には、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下において任意の装置を使用することができる。抽出方法としては、例えば、抽出溶媒中に抽出原料を長時間常温で浸漬して抽出する方法、抽出溶媒の沸点以下の温度に加熱し攪拌しながら抽出する方法、抽出溶媒の沸点付近の温度で加熱還流下にて抽出する方法等が挙げられる。
【００１８】
抽出処理により可溶性成分を溶出させた後、ろ過、遠心分離等の処理を施して抽出残渣を除くことにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００１９】
タケノコ又はカンゾウ根からの抽出物は特有の匂いと味を有しているため、脱色、脱臭等を目的とする精製を行ってもよい。精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができ、これらの処理は、タケノコ又はカンゾウ根からの抽出物の生理活性、すなわちチロシナーゼ発現抑制作用の低下を招かない範囲で行う。
【００２０】
以上のようにして得られるタケノコ又はカンゾウ根からの抽出物は、チロシナーゼ発現抑制作用を有しており、この作用を利用してチロシナーゼ発現抑制剤の有効成分として使用することができる。また、タケノコ又はカンゾウ根からの抽出物は、チロシナーゼ発現抑制作用を通じて美白作用を発揮し得るので、美白剤の有効成分として使用することもできる。
【００２１】
タケノコ又はカンゾウ根からの抽出物はそのままでもチロシナーゼ発現抑制剤として使用することができるが、常法に従って製剤化して使用することもできる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加することができる。タケノコ又はカンゾウ根からの抽出物は、製剤化により粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
【００２２】
本発明のチロシナーゼ発現抑制剤は、チロシナーゼｍＲＮＡ発現抑制作用等を通じて、チロシナーゼの発現を阻害することができる。メラニンは、色素細胞の中で生合成される酵素チロシナーゼの働きによって、チロシナーゼからドーパ、ドーパからドーパキノンに変化し、次いで５，６−ジヒドロキシインドフェノール等の中間体を経て形成されるものとされている。したがって、本発明のチロシナーゼ発現阻害剤によれば、メラニン産生に関与するチロシナーゼの発現を抑制することにより、メラニンの産生を抑制することができるとともに、メラニンの産生の抑制を通じて美白効果を得ることができる。
【００２３】
本発明のチロシナーゼ発現抑制剤は、チロシナーゼ発現抑制作用を通じて美白作用を発揮することができるとともに、皮膚に適用した場合の安全性に優れているので、皮膚外用剤に配合するのに好適である。ここで、「皮膚外用剤」とは、皮膚に適用される各種薬剤を意味し、例えば、化粧料、医薬部外品、医薬品等が含まれる。皮膚外用剤の具体例としては、肌に対するものとして、軟膏、パップ、クリーム、乳液、化粧水、ローション、パック、ゼリー等が挙げられ、頭皮に対するものとして、トニック、リンス、シャンプー、アストリンゼント等が挙げられる。皮膚外用剤におけるタケノコ又はカンゾウ根からの抽出物の配合量は、皮膚外用剤の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、好適な配合率は、乾燥物に換算して通常０．００１〜１０重量％、好ましくは０．０１〜５重量％である。配合量が０．００１重量％よりも少ないとチロシナーゼ発現抑制作用及び美白作用が十分に発揮され難く、配合量が１０重量％を越えても増加分に見合ったチロシナーゼ発現抑制作用及び美白作用が得られ難い。
【００２４】
本発明のチロシナーゼ発現阻害剤には、必要に応じて任意の薬効成分、生理活性物質等を併せて含有させることができる。本発明のチロシナーゼ発現阻害剤において、タケノコ又はカンゾウ根からの抽出物とともに構成成分として利用可能なものとしては、水性成分、油性成分、粉末成分、界面活性剤、保湿剤、色剤、香料、防腐剤、抗酸化剤、紫外線カット剤、キレート剤、抗炎症剤、本抽出物以外の美白成分等が挙げられ、これらの成分とタケノコ又はカンゾウ根からの抽出物とを併用した場合、その相乗作用が通常期待される以上の優れた効果をもたらすことがある。
【００２５】
以上に説明した本発明のチロシナーゼ発現抑制剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【００２６】
【実施例】
以下、製造例及び試験例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
〔製造例１〕
タケノコ（モウソウ竹の若芽）の乾燥粉砕物１０ｇを抽出溶媒（５０％エタノール）１００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら２時間、８０℃に保った後、ろ過した。残渣に同様の抽出溶媒１００ｍＬを加え、上記操作をもう一度繰り返した。ろ液を合わせて４０℃で減圧下にて濃縮し、さらに減圧乾燥機で乾燥して抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の重量は１．８４ｇ（収率１８．４％）であった。なお、抽出溶媒の混合比は重量基準によるものである。
【００２７】
〔製造例２〕
カンゾウ根（Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａの根部）の乾燥粉砕物５０ｇを抽出溶媒（８０％エタノール）５００ｍＬに投入し、３時間、８０℃で還流抽出し、ろ過した。ろ液を４０℃で減圧下にて濃縮し、さらに減圧乾燥機で乾燥して抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の重量は８．５１ｇ（収率１９．８％）であった。なお、抽出溶媒の混合比は重量基準によるものである。
【００２８】
〔試験例１〕チロシナーゼ発現抑制作用試験
Ｂ１６メラノーマ細胞１×１０６個を２５ｃｍ２の培養フラスコで、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ−ＭＥＭ培養液を用いて、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒ下でフルシート直前まで培養した。トリプシン処理により細胞を集め、直径６０ｍｍの培養ディッシュに４×１０５個／５ｍＬ  １０％ＦＢＳ含有ダルベッコ−ＭＥＭ培養液となるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒ下で一晩培養した。培地を吸引除去した後、０．５ｍｍｏｌ／Ｌのテオフィリンを添加し、製造例１のタケノコ抽出物及び製造例２のカンゾウ根抽出物を所定濃度に溶解した１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ−ＭＥＭ培養液に交換し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒ下で２４時間培養した。また、コントロールとして、製造例１のタケノコ抽出物及び製造例２のカンゾウ根抽出物のいずれも溶解していない１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ−ＭＥＭ培養液を用いて同様に培養した。
【００２９】
培養後、培地を吸引除去し、ＰＢＳ（−）２ｍＬで一度洗浄し、ＲＮＡ抽出用試薬（ＴＲＩｚｏｌ  Ｒｅａｇｅｎｔ，ＧＩＢＣＯ社製）１ｍＬを添加、懸濁して細胞をディッシュから剥がし、オートクレーブ済み１．５ｍＬチューブに移した。冷却したクロロホルム２００μＬを添加して穏やかに混合し、４℃、１２０００ｒｐｍ条件下で１５分間遠心分離した。その後、上層（クロロホルム層）３００μＬを別のオートクレーブ済み１．５ｍＬチューブに移した。上層分取量の２倍量（６００μＬ）の冷却イソプロパノールを添加して穏やかに混合し、４℃、１２０００ｒｐｍの条件下で１５分間遠心分離した。その後、イソプロパノールを取り除き、直ちに冷却した７５％エタノール１ｍＬを添加してリンスし、４℃、１２０００ｒｐｍの条件下で１５分間遠心分離した。遠心分離後、７５％エタノールを十分に除去し、１０分間ほど放置し、乾燥させた。これをＤＥＰＣ処理水（ＧＩＢＣＯ社製）３０μＬに溶解させ、総ＲＮＡサンプルとした。得られた総ＲＮＡサンプル５μＬを滅菌蒸留水で１００倍希釈し、２６０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ２６０ｎｍ）を測定した。
【００３０】
次式：ＲＮＡ濃度＝吸光度（ＯＤ２６０ｎｍ）×４０μｇ／ｍＬに基づいてＲＮＡ濃度を算出し、得られた総ＲＮＡ溶液１０μＬを基にして、ＲＮＡ濃度が１００ｎｇ／μＬとなるように調製した。ＲＮＡ濃度が１００ｎｇ／μＬとなるように調製した総ＲＮＡ溶液５μＬ、ＰＣＲ用試薬（ＴＡＫＡＲＡ  ＲＮＡ  ＬＡ  Ｋｉｔ（ＡＭＶ）  Ｖｅｒ．１．１）、並びにチロシナーゼ遺伝子及びＧ３ＰＤＨ遺伝子（内部標準）に対するプライマーを用いてＲＴ−ＰＣＲを行った。
【００３１】
反応機器はサーマルサイクラー（ＴＡＫＡＲＡ  ＰＣＲ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｃｙｃｌｅｒ  ＭＰ）を用い、反応条件は以下のように設定した。
逆転写反応については、４２℃で５０分、９９℃で５分及び５℃で５分からなるサイクルを１サイクル行った。また、Ｇ３ＰＤＨ遺伝子に対するＰＣＲについては、９４℃で５分、９４℃で４５秒、６５℃で４５秒及び７２℃で２分からなるサイクルを２５サイクル行った後、７２℃で１０分間処理し、その後、４℃に保持した。チロシナーゼ遺伝子に対するＰＣＲについては、９５℃で５分、９４℃で４５秒、５５℃で４５秒及び７２℃で４５秒からなるサイクルを３０サイクル行った後、７２℃で１０分間処理し、その後、４℃に保持した。
【００３２】
また、プライマーについて以下のものを用いた。
Ｇ３ＰＤＨ遺伝子に対する上流プライマー及び下流プライマーとして、それぞれ、５’−  ｔｇａａｇｇｔｃｇｇｔｇｔｇａａｃｇｇａｔｔｔｇｇｃ  −３’及び５’−  ｃａｔｇｔａｇｇｃｃａｔｇａｇｇｔｃｃａｃｃａｃ  −３’を用いた。また、チロシナーゼ遺伝子に対する上流プライマー及び下流プライマーとして、それぞれ、５’−  ｔｔｃａａａｇｇｇｇｔｇｇａｔｇａｃ  −３’及び５’−  ｇａｃａｃａｔａｇｔａａｔｇｃａｔｃ  −３’を用いた。
【００３３】
ＲＴ−ＰＣＲ終了後のサンプル８μＬずつを１．２％アガロースゲルにて電気泳動し、電気泳動後のゲルをエチジウムブロマイド溶液に２０分程度漬けてＤＮＡを染色し、トランスイルミネーター（３０２ｎｍ）上でデジタルカメラを用いてコンピューターに画像を取り込み、画像処理ソフト（Ｋｏｄａｋ  ＥＤＡＳ  １２０  Ａｎａｌｙｚｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ）にて解析した。
【００３４】
それぞれのバンドの照度を基に補正値（チロシナーゼの照度／Ｇ３ＰＤＨの照度）を算出し、コントロールのチロシナーゼ発現量を１００％として、カンゾウ根抽出物及びタケノコ抽出物チロシナーゼによるチロシナーゼ発現抑制作用の評価を行った。結果を表１に示す。
【００３５】
［表１］
2004352697.tif 000002
【００３６】
表１の結果から、タケノコ抽出物及びカンゾウ根抽出物が、チロシナーゼ発現抑制作用を有することが確認された。
【００３７】
【発明の効果】
本発明によれば、シミ、ソバカス、皮膚色素沈着等の原因となるメラニンの産生に関与するチロシナーゼの発現を抑制することによって美白作用を発揮することができ、シミ、ソバカス、皮膚色素沈着症等の予防・治療に有効であるチロシナーゼ発現抑制剤を提供することができる。本発明のチロシナーゼ発現抑制剤はチロシナーゼ発現抑制作用を通じて美白作用を発揮することができるとともに、皮膚に適用した場合の安全性に優れているので、皮膚外用剤に配合するのに好適である。