(57)【要約】【構成】バラ花弁又はハイビスカスのガクから得られた赤色色素を含有してなるコラーゲン産生促進剤、及びこれを含有する化粧料に関する。【効果】バラ花弁又はハイビスカスのガクから得られた赤色色素を含有することにより、保湿性を示し、更に皮膚線維芽細胞のコラーゲン産生を促進し、細胞外マトリックス産生を増加させ、皮膚のハリ・シワを改善する皮膚老化防止効果に優れた化粧料の提供が可能となる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
バラ花弁、又はハイビスカスのガクから得られた赤色色素の１種又は２種以上を有効成分として含有することを特徴とするコラーゲン産生促進剤。
【請求項２】
請求項１に記載のコラーゲン産生促進剤からなる群より１種又は２種以上を有効成分として含有することを特徴とする化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、皮膚線維芽細胞のコラーゲン産生を促進することにより、皮膚のハリ・シワの改善を目的とした化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】近年、高齢化社会が進行するにつれて、美しく年を重ねるために、化粧品に求められる役割が大きくなってきている。ところが、肌は、加齢等の内的因子や紫外線、活性酸素等の外的因子によって、皮膚が本来維持している収縮性、柔軟性、保湿性等の機能が衰え、様々なトラブルを発生する。
【０００３】これらのトラブルの一つであるシワは、真皮の細胞外マトリックスを産生する細胞数の減少、分裂速度の衰え等による細胞機能の老化や、コラーゲン線維の減少及び変性、皮下脂肪組織の減少等により、皮膚の弛緩及び弾力性の損失の起こることが原因となって発生する。
【０００４】従来、皮膚老化への対処法としては、老化によって失われるコラーゲン、ヒアルロン酸等の物質を皮膚に塗布し補う組成物や、紫外線や活性酸素から皮膚を守るための防御物質を配合した間接的な老化防止剤が主流であった。
【０００５】しかしながら、これらの方法は満足のいく効果を奏するものではなかった。また、老化特に生成したシワを根本的に改善しようとする試みとしてはレチノイン酸やグリコール酸に代表されるα−ヒドロキシ酸等があるが、これらは高い配合量が必要とされ、腫れを伴う炎症等を起こす等安全性に問題があり、長期使用に耐え得るものではなかった。従って、皮膚の老化を根本的に改善し、しかも皮膚に弊害がなく、安全に使用できる老化防止に有効な化粧料の開発が望まれている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】そこで本発明者は、係る実情に鑑み鋭意検討した結果、バラ花弁やハイビスカスのガクから得られる赤色色素が、皮膚線維芽細胞のコラーゲン産生能を活性化し、細胞外マトリックスの産生を増加させることにより、皮膚のハリ・シワの改善に顕著な作用を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】即ち、本発明は、バラ花弁やハイビスカスのガクから得られる赤色色素を含有することを特徴とする老化防止に有効な皮膚外用剤を提供するものである。
【０００８】本発明で使用されるバラ花弁から得られる赤色色素は、西洋バラ（ｒｏｓａ　ｃｅｎｔｉｆｏｌｉａ）、現代バラ（Ｈｙｂｒｉｄ　Ｔｅａ　ｒｏｓｅ）の花弁から、通常、各種溶剤で抽出し、抽出物（エキス）を精製することにより得ることができる。また、ハイビスカスから得られる赤色色素は、ハイビスカス（Ｈｉｂｉｓｃｕｓｓａｂｄａｒｉｆｆａ　Ｌ．）のガクから、通常、各種溶剤で抽出し、抽出物（エキス）を精製することにより得ることができる。
【０００９】即ち、バラ花弁やハイビスカスのガクから得られる赤色色素は、抽出溶媒としては、水、各種極性有機溶媒及びそれらの混液、及び塩酸酸性にした極性溶媒を用いることができる。色素の精製は、様々な方法が用いられるが、活性炭、スチレン−ジビニルベンゼン系合成吸着剤（ＨＰ−２０：三菱化成社製）やオクタデシルシラン処理シリカ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ　ＯＤＳ：富士シリシア化学製）により吸着させ、適当な溶媒で溶出する方法が簡便でかつ実用的である。
【００１０】本発明に係るバラ花弁やハイビスカスのガクから得られる赤色色素の各種化粧料に対する配合量は、化粧料の実施態様、化粧料の使用形態等に応じて変動させることができるので特に限定されない。原則的には、有効量存在すれば良いことになるが、一般的には化粧料組成物中、乾燥重量に換算して０．０００１〜１００質量％が利用でき、好ましくは０．０１〜１０質量％、更に好ましくは０．１〜５．０質量％である。特に、用時調製のパウダー状の化粧料等は、この本願発明に係る赤色色素が１００質量％を含めた高配合率で利用されることが想定できる。
【００１１】本発明に係る化粧料の適用範囲は、特に限定されない。つまり、この発明の有効成分が有する作用効果に応じて各作用効果を利用できる全ての化粧料に適用できる。
【００１２】例えば、本発明に係る有効成分を各種化粧料基剤等に配合して、クリーム、乳液、化粧水、パック剤、洗顔料等の各種基礎化粧料、ファンデーション、口紅、ほほ紅、白粉等の各種メーキャップ料、洗髪料、養毛剤、シャンプー、リンス等の各種頭髪用化粧料、石鹸、美爪料、オーデコロン等その他化粧料に対して広範囲に適用できる。また、前記各種化粧料の実施態様は、ローション、エマルジョン、軟膏、ゾル、ゲル、パウダー、スプレー、固形等の各種態様で適用できる。
【００１３】以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１４】
【実施例１】ハイビスカスから得られる赤色色素の作成
原材料として、ハイビスカスのガクの乾燥物を３００ｇ使用した。前記原材料３００ｇにイオン交換水４５０ｍｌを加え、６０℃で３時間加熱抽出した後Ｎｏ．２濾紙にて濾過する。全ての濾液を合わせ、ＨＰ−２０（φ＝５０ｍｍ，ｈ＝５００ｍｍ）カラムクロマトグラフィーに付し、ＨＰ−２０吸着画分を、３０％エタノールで溶出し、ロータリーエバポレーターにて減圧濃縮、凍結乾燥し、ハイビスカス赤色色素約３０ｇを得た。
【００１５】バラから得られる赤色色素の作成
原材料として、バラ花弁の乾燥物を１００ｇ使用した。前記原材料１００ｇにイオン交換水４５０ｍＬを加え、６０℃で３時間加熱抽出した後Ｎｏ．２濾紙にて濾過する。全ての濾液を合わせ、ＯＤＳ（φ＝５０ｍｍ，ｈ＝５００ｍｍ）カラムクロマトグラフィーに付し、ＯＤＳ吸着画分を、２０％エタノールで溶出し、ロータリーエバポレーターにて減圧濃縮、凍結乾燥し、バラ花弁赤色色素約７ｇを得た。
【００１６】
【実施例２】皮膚線維芽細胞を用いたコラーゲン産生試験
（１）試験溶液調製
前記バラ花弁及びハイビスカス赤色色素をＣａ２＋，Ｍｇ２＋不含有ＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒｅｄ　ｓａｌｉｎｅ。蒸留水１Ｌあたり、ＮａＣｌ　８．０ｇ，　ＫＣｌ　０．２ｇ，　ＫＨ２ＰＯ４０．２ｇ，　Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２０２．９ｇ　）に０．１（ｗ／ｖ）％になるように溶解後、０．２μｍメンブランフィルターにて濾過滅菌し、適宜希釈したものを、試験溶液とした。
（２）細胞培養
正常ヒト２倍体線維芽細胞ＨＦＳＫＦ−ＩＩ（理化学研究所製）を、Ｈａｍ−Ｆ１２（大日本製薬社製）に１５（ｖ／ｖ）％の牛胎児血清を添加したもので培養した。前記培地にて１×１０５ｃｅｌｌ／ｍＬに調整した細胞を、内径１６ｍｍの滅菌プラスチック２４穴プレートに０．５ｍＬずつ接種し、２４時間培養した。
（３）細胞内及び培地内コラーゲンの定量
培養した細胞から培地を取りだし、残った細胞をＰＢＳ（−）で洗浄し、シリウスレッド試薬（０．１％シリウスレッドＦ３ＢＡを０．５Ｍ酢酸水溶液に溶解）を０．５ｍＬ滴下した。室温下で、１時間放置した。１０ｍＭ塩酸で５回洗浄した後、０．１Ｍ　ＮａＯＨ　０．５ｍＬで５分間抽出し、５４０ｎｍの吸光度測定した。そして、培地０．３ｍＬをとり、同容量の前記シリウスレッド試薬を加え、室温下、１時間放置し、遠心濾過チューブ（ＵＦＣ３０ＳＶ００）を用いて、遠心濾過（４，５００ｇ、５分間）を行った。濾過残分を１０ｍＭ塩酸で３回洗浄し、０．１Ｍ−ＮａＯＨ水溶液０．３ｍＬで色素を抽出し、５４０ｎｍの吸光度を測定した。
【００１７】
【表１】バラ及びハイビスカス赤色色素の線維芽細胞の細胞内におけるコラーゲン産生能（ＰＢＳ（−）を１００％として）
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【００１８】
表１の結果より、前記バラ及びハイビスカス赤色色素はコラーゲン産生を促進することを見いだした。
【００１９】
【実施例３】マウス皮膚塗布試験
実験動物としてＩＣＲ系雌マウス（１５週齢）を用い、バリカンにて剃毛した背部皮膚にバラ花弁及びハイビスカスのガクより得た赤色色素をそれぞれ０．５％、合わせて１％を１０％エタノールに溶解した溶液を１日１回０．２ｍＬ、５日／週、塗布した。４週間後、マウス背部から直径１２ｍｍの皮膚を採取した。採取した皮膚は重量を測定後、アセトンにて脱水・脱脂後均質化し、生理食塩水中でホモジネートを行った。コラーゲンの定量は特徴的なアミノ酸であるヒドロキシプロリン量を測定した。ヒドロキシプロリン量は、Ｉｎａｙａｍａ，Ｓｈｉｂａｔａ，Ｏｈｔｕｋｉ，Ｓａｉｔｏの方法（藤本大三郎、永井裕（１９８５）、コラーケ゛ン実験法、ｐｐ．５１−５６、講談社）に準じ、以下の方法により測定した。まず、皮膚ホモジネート液に等容の１２Ｎ−ＨＣｌを加え、１１０℃、２４時間加熱する。加水分解後、ＨＣｌはロータリーエバポレーターで除去しておく。蒸留水２ｍｌ、ＫＣｌ　１．５ｇ、ホウ酸緩衝液（蒸留水１Ｌ当たり、ホウ酸　６１．８４ｇ、ＫＣｌ　２２５ｇ、ｐＨ８．７）０．５ｍＬを加え、室温で２０分間静置する。クロラミンＴ溶液（ｐ−トルエンスルホンクロロアミドナトリウム三水和物　１．４１ｇを２ーメトキシエタノール２５ｍｌに溶解）０．５ｍＬを加えて２５分間適宜振とうし、さらに３．６Ｍチオ硫酸ナトリウム溶液　１．５ｍＬを加え、密栓し、１００℃で３０分間加熱する。冷却した後、トルエンを２．５ｍＬ加え５分間振とう後、トルエン層を採取し、無水硫酸ナトリウムのカラム（６ｍｍ２×３０ｍｍ）を通過させる。流出液１．０ｍＬをとり、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド溶液　０．５ｍＬ（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド　１２０ｇをエタノール　２００ｍＬに溶解した液と、濃硫酸　２７．４ｍＬをエタノール　２００ｍＬに溶解した液を、氷冷下で混合）と混合し、室温で３０分間放置後、５６０ｎｍの吸光度を測定する。これらの結果を表２に示す。なお、ネガティブコントロールとしては１０（ｖ／ｖ）％エタノール溶液を用いた。
【００２０】
【表２】バラ及びハイビスカス赤色色素のマウス皮膚塗布試験結果
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【００２１】表２の結果より、前記バラ及びハイビスカス赤色色素は、マウス皮膚のコラーゲン量を増加させる効果を有することが見いだされた。
【００２２】次に、本発明に係るフラボノールカルボン酸を用いた具体的な皮膚外用剤の効果について実施例及び比較例を挙げて以下に説明する。
【００２３】本発明の皮膚の老化症状の改善効果として、小ジワの改善効果及び皮膚弾力改善効果について表３に示す実施例４及び比較例１の処方にて作成した化粧水をブラインドにて１日１回、２カ月間連続して４０才代〜６０才代の女性パネラー１０名をランダムに２グループに分け、一方のグループには、実施例４処方の化粧水を、もう一方のグループには比較例１処方の化粧水を使用させて、試験開始前及び終了後の肌状態を比較して評価した。評価基準は、小ジワの程度については肉眼観察及び写真撮影により目視評価し表４に、皮膚弾力改善効果についてはキュートメーターにより皮膚の弾力回復率を測定し、試料の使用前後の差を表６にそれぞれ示した。そして、小ジワの改善効果及び皮膚弾力改善効果の結果を表３に示した。尚、実施例及び比較例の化粧水は、１〜７を混合溶解した後、８と混合し、作成した。
【００２４】更に、以下に目視評価及びキュートメーターによる数値評価について詳しく説明する。まず、目視評価については、小ジワの程度について、試験開始前及び終了後の肌状態を肉眼観察及び写真撮影し、パネラーの肌状態を表４の基準に従い判定した。そして、評価点は、パネラーの平均値とし、表５に示した。同様に、皮膚弾力改善効果についても試験開始前及び終了後の肌状態をキュートメーターにより皮膚の弾力回復率を測定し、試料塗布後の弾力回復率から試料塗布前の弾力回復率を差し引き計算し、各グループのパネラーの平均をとり評価した。評価基準は、表６に示す通りであり、評価数値の差が大きいほど弾力改善がなされたことを示す。以下に本発明で用いたキューとメータの機種、数値の算出方法及び測定方法について説明する。
【００２５】皮膚の弾力測定に用いたキュートメーターは、「Ｃｏｕｒａｇｅ　ａｎｄ　Ｋｈａｚａｋａ製Ｃｕｔｏｍａｔｅｒ　ＳＥＭ　４７４」を使用した。
【００２６】
皮膚弾力の評価数値としての弾力回復率は以下にて算出される。
弾力回復率（％）＝〔（伸展長−非退縮長）／伸展長　〕
但し、上記式において、陰圧吸引により伸びた皮膚の高さを伸展長（単位はｍｍ）とし、陰圧開放後も戻らず盛り上がったままの皮膚の高さを非退縮長（単位はｍｍ）とする。
【００２７】
【表３】
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【００２８】
【表４】
2004067552.tif 000005
【００２９】
【表５】
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【００３０】
【表６】
2004067552.tif 000007
【００３１】表３より明らかなように、本発明の実施例４を使用したパネラー群は、明らかに小ジワ及び皮膚弾力の改善が認められた。これに対して、比較例１を使用したパネラー群では、小ジワ及び皮膚弾力の改善の程度は殆どみられなかった。このことは、本発明が小ジワ及び皮膚弾力改善に有効であることを意味し、老化防止用外用剤として有効であることを示唆している。
【００３２】
【処方例】以下に本発明の処方例を挙げる。
＜処方例１＞化粧水
（成分名）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（質量％）
バラ赤色色素　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０１
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０Ｅ．０）　　　　　　　１．５
エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
防腐剤・酸化防止剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残部
【００３３】
＜処方例２＞化粧用クリーム
（成分名）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（質量％）
バラ赤色色素　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０００１
ハイビスカス赤色色素　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０００１
ミツロウ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
ステアリルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
ステアリン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８．０
スクワラン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
自己乳化型グリセリルモノステアレート　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０）　　　　　　　　　　　　　　　１．０
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
水酸化カリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．３
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
防腐剤・酸化防止剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残部
【００３４】
＜処方例３＞乳液
（成分名）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（質量％）
バラ赤色色素　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
スクワラン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８．０
ワセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
ミツロウ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
ソルビタンセスキオレエート　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．８
ポリオキシエチレンオレイルエーテル（２０Ｅ．０）　　　　　　　　　　　　　１．２
カルボキシビニルポリマー　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．５
水酸化カリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　７．０
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
防腐剤・酸化防止剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残部
【００３５】
＜処方例４＞パック剤
（成分名）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（質量％）
バラ赤色色素　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０１
酢酸ビニル樹脂エマルジョン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１５．０
ポリビニルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
ホホバ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０
グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
酸化チタン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８．０
カオリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　７．０
エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
防腐剤・酸化防止剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残部
【００３６】
＜処方例５＞軟膏
（成分名）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（質量％）
ハイビスカス赤色色素　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０００１
酢酸トコフェロール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
パラジメチルアミノ安息香酸オクチル　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０
ブチルメトキシベンゾイルメタン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０
ステアリルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１８．０
モクロウ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０．０
グリセリンモノステアリン酸エステル　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．３
ワセリン　　　　　　　　　　　　　　　　３３．０
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
防腐剤・酸化防止剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　残部
【００３７】
＜処方例６＞パウダーファンデーション
（成分名）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（質量％）
ハイビスカス赤色色素　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０１
タルク　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４３．０
カオリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１８．０
マイカ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８．０
酸化亜鉛　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
酸化チタン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
着色顔料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
ステアリン酸マグネシウム　　　　　　　　　　　　　　　　　６．０
流動パラフィン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０
白色ワセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
セレシン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
ミリスチン酸イソプロピル　　　　　　　　　　　　　　　　　１．５
防腐剤・酸化防止剤　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
【００３８】
【発明の効果】本発明によれば、バラ花弁やハイビスカス赤色色素を含有した安全でありコラーゲン産生促進によりシワ改善に有効な化粧料が提供され、該化粧料は、生成したシワを改善することができるため、いつまでもみずみずしくハリのある肌を保つことができる。