(57)【要約】【課題】本発明は、新規なヘリコバクターピロリの運動能阻害剤を提供する。【解決手段】一般式［Ｉ］：【化１】2004352652.tif 000006（式中、Ｒ１は水酸基、アルコキシ基又はアシル基、Ｒ２及びＲ３は同一又は異なって水素原子、水酸基、アルコキシ基又はアシル基、或いはＲ１及びＲ２が末端で結合した式：−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯ−で示される基（ｎは１、２又は３）、Ｒ４は水酸基、アルコキシ基又はアシル基、Ｒ５及びＲ６は同一又は異なって水素原子、水酸基、アルコキシ基又はアシル基、或いはＲ４及びＲ５が末端で結合した式：−Ｏ（ＣＨ２）ｍＯ−で示される基（ｍは１、２又は３）を示す）で表される化合物を有効成分と含有するヘリコバクターピロリの運動能阻害剤等に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
梅からの抽出物を有効成分として含有するヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
【請求項２】
抽出物が、水及び極性有機溶媒からなる群からから選ばれる少なくとも一種の抽出溶媒を用いて梅から抽出されたものである請求項１に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
【請求項３】
抽出溶媒が、アルコール、酢酸エチル及び水からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出溶媒である請求項２に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
【請求項４】
一般式［Ｉ］：
【化１】
2004352652.tif 000004
（式中、Ｒ１は水酸基、アルコキシ基又はアシル基、Ｒ２及びＲ３は同一又は異なって水素原子、水酸基、アルコキシ基又はアシル基、或いはＲ１及びＲ２が末端で結合した式：−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯ−で示される基（ｎは１、２又は３）、Ｒ４は水酸基、アルコキシ基又はアシル基、Ｒ５及びＲ６は同一又は異なって水素原子、水酸基、アルコキシ基又はアシル基、或いはＲ４及びＲ５が末端で結合した式：−Ｏ（ＣＨ２）ｍＯ−で示される基（ｍは１、２又は３）を示す）
で表される化合物を有効成分として含有するヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
【請求項５】
一般式［Ｉ−ａ］：
【化２】
2004352652.tif 000005
（式中、Ｒ１は水酸基又はＣ１−４アルコキシ基、Ｒ２及びＲ３は同一又は異なって水素原子、水酸基、又はＣ１−４アルコキシ基、Ｒ４は水酸基又はＣ１−４アルコキシ基、Ｒ５及びＲ６は同一又は異なって水素原子、水酸基、又はＣ１−４アルコキシ基を示す）
で表される化合物を有効成分として含有する請求項４に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
【請求項６】
一般式［Ｉ−ａ］において、Ｒ１が水酸基又はメトキシ基、Ｒ２及びＲ３が同一又は異なって水素原子又はメトキシ基、Ｒ４が水酸基又はメトキシ基、Ｒ５及びＲ６が同一又は異なって水素原子又はメトキシ基である化合物である請求項５に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
【請求項７】
（＋）−シリンガレシノール（ｓｙｒｉｎｇａｒｅｓｉｎｏｌ）、（＋）−ヤンガビン（ｙａｎｇａｂｉｎ）、（＋）−マグノリン（ｍａｇｎｏｌｉｎ）及び（＋）−オイデスミン（ｅｕｄｅｓｍｉｎ）からなる群から選ばれる少なくとも１種を含有する請求項６に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
【請求項８】
（＋）−オイデスミン（ｅｕｄｅｓｍｉｎ）を含有する請求項７に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤を含有するヘリコバクターピロリ感染の予防又は治療剤。
【請求項１０】
上記一般式［Ｉ］で表される化合物と抗菌剤を有効成分として含有するヘリコバクターピロリの除菌剤。
【請求項１１】
上記一般式［Ｉ］で表される化合物、胃酸分泌抑制剤及び抗菌剤を有効成分として含有するヘリコバクターピロリの除菌剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヘリコバクターピロリの運動能阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ヘリコバクターピロリは、慢性胃炎患者の胃粘膜から分離されたグラム陰性のらせん状菌である。そして本菌の感染は、急性胃炎、慢性胃炎を引き起こすとともに、胃十二指腸潰瘍の再発因子及び治癒遅延因子として作用することが知られている。そのため、抗生物質を中心とした２剤併用療法、３剤併用療法等による除菌治療が行われている。
【０００３】
しかし、ヘリコバクターピロリの除菌は、消化性潰瘍の治療にとっては大きなメリットを有しているが、その除菌方法には副作用をともなう、耐性菌が出現する、或いは新たな噴門部癌が発生するという問題点が指摘されている。
【０００４】
そのため、より安全で副作用の少ない抗ヘリコバクターピロリ活性を有する有効成分が望まれている。
【０００５】
一方で、これまで梅抽出物等の梅関連物質が、ヘリコバクターピロリの運動能を抑制するとの報告例はなく、しかも運動能を抑制する具体的な有効成分についても明らかではない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、新規なヘリコバクターピロリの運動能阻害剤を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記した目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、梅の果実の抽出物を加えることにより、ヘリコバクターピロリ（図５；通常の状態）が丸く変形して動かなくなったり凝集して失活するという現象（図６）を新規な知見として見出した。さらに、梅の抽出物或いはそれに含まれる特定の化合物が、優れたヘリコバクターピロリの運動能阻害作用を有することを見出し、これをさらに発展させて、ここに本発明を完成するに至った。
【０００８】
即ち、本発明は、下記の技術思想を提供する。
項１  梅からの抽出物を有効成分として含有するヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
項２  抽出物が、水及び極性有機溶媒からなる群からから選ばれる少なくとも一種の抽出溶媒を用いて梅から抽出されたものである項１に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
項３  抽出溶媒が、アルコール、酢酸エチル及び水からなる群から選ばれる少なくとも１種の抽出溶媒である項２に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
項４  一般式［Ｉ］：
【０００９】
【化３】
2004352652.tif 000002
【００１０】
（式中、Ｒ１は水酸基、アルコキシ基又はアシル基、Ｒ２及びＲ３は同一又は異なって水素原子、水酸基、アルコキシ基又はアシル基、或いはＲ１及びＲ２が末端で結合した式：−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯ−で示される基（ｎは１、２又は３）、Ｒ４は水酸基、アルコキシ基又はアシル基、Ｒ５及びＲ６は同一又は異なって水素原子、水酸基、アルコキシ基又はアシル基、或いはＲ４及びＲ５が末端で結合した式：−Ｏ（ＣＨ２）ｍＯ−で示される基（ｍは１、２又は３）を示す）
で表される化合物を有効成分として含有するヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
項５  一般式［Ｉ−ａ］：
【００１１】
【化４】
2004352652.tif 000003
【００１２】
（式中、Ｒ１は水酸基又はＣ１−４アルコキシ基、Ｒ２及びＲ３は同一又は異なって水素原子、水酸基、又はＣ１−４アルコキシ基、Ｒ４は水酸基又はＣ１−４アルコキシ基、Ｒ５及びＲ６は同一又は異なって水素原子、水酸基、又はＣ１−４アルコキシ基を示す）
で表される化合物を有効成分として含有する項４に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
項６  一般式［Ｉ−ａ］において、Ｒ１が水酸基又はメトキシ基、Ｒ２及びＲ３が同一又は異なって水素原子又はメトキシ基、Ｒ４が水酸基又はメトキシ基、Ｒ５及びＲ６が同一又は異なって水素原子又はメトキシ基である化合物である項５に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
項７  （＋）−シリンガレシノール（ｓｙｒｉｎｇａｒｅｓｉｎｏｌ）、（＋）−ヤンガビン（ｙａｎｇａｂｉｎ）、（＋）−マグノリン（ｍａｇｎｏｌｉｎ）及び（＋）−オイデスミン（ｅｕｄｅｓｍｉｎ）からなる群から選ばれる少なくとも１種を含有する項６に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
項８  （＋）−オイデスミン（ｅｕｄｅｓｍｉｎ）を含有する項７に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
項９  項１〜８のいずれかに記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤を含有するヘリコバクターピロリ感染の予防又は治療剤。
項１０  上記一般式［Ｉ］で表される化合物と抗菌剤を有効成分として含有するヘリコバクターピロリの除菌剤。
項１１  上記一般式［Ｉ］で表される化合物、胃酸分泌抑制剤及び抗菌剤を有効成分として含有するヘリコバクターピロリの除菌剤。
【００１３】
【発明の実施の形態】
梅の抽出物
本発明のヘリコバクターピロリ（以下、「ＨＰ」と標記する場合がある）の運動能阻害剤は、梅の抽出物を有効成分として含有している。ここで、抽出に用いる梅（Ｊａｐａｎｅｓｅ  ａｐｒｉｃｏｔ）とは、梅の果実のことであり、青梅、完熟梅等いずれの状態のものでもよいが、好ましくは青梅（ｕｎｒｉｐｅ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  ａｐｒｉｃｏｔ）である。梅の抽出には、梅の果実をそのままを用いても、種を除いた果肉だけを用いてもよい。
【００１４】
梅の抽出溶媒としては、特に限定的ではなく、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール等のグリコール類、酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類等の極性有機溶媒、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の無極性有機溶媒等や水等を用いることができる。これらの抽出溶媒は、一種単独又は二種以上混合して用いることができる。これらの内で、水及び極性有機溶媒からなる群から選ばれた少なくとも一種の溶媒が好ましい。特に、メタノール、エタノール等のアルコール、又は水をそれぞれ単独で用いるか、或いは、これらの混合溶液を用いる場合には、取り扱いが容易であり、しかも優れた活性を有する抽出物を得ることができる点で好ましい。この場合、特に抽出物を食品添加剤や医薬用途で用いる場合には、アルコールとしては、エタノールを用いることが好ましい。
【００１５】
溶媒を混合して用いる場合には、各溶媒の混合比は、溶媒の種類に応じて適宜調整すればよいが、例えば、水とアルコールとの混合溶液として用いる場合には、水：アルコール（重量比）＝１：１００〜１００：１程度とすれば良く、１：５０〜５０：１程度とすることが好ましく、ほぼ等重量で用いることがより好ましい。
【００１６】
抽出方法については、特に限定されるものではなく、梅或いはその粉砕物に溶媒を加えた後、抽出物のＨＰ運動能抑制作用を失活させない程度に加温加熱する加熱抽出法や、超臨界抽出法等を適宜適用できる。また、一定量の溶媒に梅を浸漬してバッチ処理する浸漬抽出法や連続的に溶媒を送り続ける連続抽出法等、公知の種々の抽出法を適用できる。
【００１７】
具体的な抽出方法の一例を挙げると、例えば、梅の乾燥重量に対して、０．５〜５重量倍程度、好ましくは、０．８〜１．２重量倍程度の抽出溶媒を加えて浸漬して加熱し、３０〜６０分間程度溶媒を還流させることにより、ＨＰの運動能抑制作用を有する成分を抽出することができる。或いは、梅の乾燥重量に対して０．５〜５重量倍程度、好ましくは、０．８〜１．２重量倍程度の抽出溶媒を加えて浸漬し、室温で１〜１４日間程度放置するか、或いは４０〜６０℃程度に加熱して１０〜２０時間程度加熱することにより有効成分を抽出することも可能である、
上記した方法によって梅から抽出物を得た後、通常、濾過、遠心分離等の常法によって残渣と固液分離することによって、抽出液を得ることができる。本発明では、得られた抽出液をそのままＨＰ運動能阻害剤として用いることが可能であるが、活性が低い場合もあるため、適宜濃縮又は溶媒を留去して、エキス状や粉末状として用いることもできる。更に、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、クロロホルム、酢酸エチル、トルエン、ヘキサン、ベンゼン等の有機溶媒を１種又は２種以上用いた溶媒分画操作により得られた抽出画分から、活性画分を分取したものをＨＰ運動能阻害剤として用いることも可能である。更に、必要に応じて、アルミナカラムクロマトグラフィーやシリカゲルクロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の適当な分離精製手段を１種若しくは２種以上組み合わせて、ＨＰ運動能阻害作用のある画分又は化合物を取り出して、ＨＰ運動能阻害剤とすることができる。これにより、少量の摂取で優れた活性を発揮させることができる。なお、ＨＰ運動能阻害作用の評価は、例えば、ＡＮＴＩＭＩＣＲＯＢＡＬ  ＡＧＥＮＴＳ  ＡＮＤ  ＣＨＥＭＯＴＨＥＲＡＰＹ，  ＮＯＶ．  ２０００，  ｐ３０６９−３０７３に従って行われる。
【００１８】
また、梅からの抽出物を有効成分とする本発明のＨＰ運動能阻害剤は、天然の梅を原料とするため人体に対する安全性が高いという特徴を有する。
【００１９】
次に、梅からのＨＰ運動能阻害化合物（＋）−シリンガレシノール（ｓｙｒｉｎｇａｒｅｓｉｎｏｌ）の精製・同定の手順を例示する（例えば、図１参照）。ＨＰ運動能阻害作用の評価は、上述と同様にＡＮＴＩＭＩＣＲＯＢＡＬ  ＡＧＥＮＴＳ  ＡＮＤ  ＣＨＥＭＯＴＨＥＲＡＰＹ，  ＮＯＶ．  ２０００，  Ｖｏｌ．４４，  Ｎｏ．１１，  ｐ３０６９−３０７３に従って行うことができる。
【００２０】
梅をアルコール性溶媒（例えば、メタノール、エタノール）で還流し、アルコール抽出物を得る。この抽出物を水に懸濁させ、ヘキサン、ジクロロメタン、酢酸エチル、ブタノール及び水でそれぞれ再抽出し、それらの画分を減圧下濃縮して、ヘキサン画分、ジクロロメタン画分、酢酸エチル画分、ブタノール画分及び水画分を得る。ＨＰ運動能阻害作用のあるジクロロメタン画分を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより分画することにより、ＨＰ運動能阻害作用のある活性化合物１を得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分画は、必要に応じ溶出溶媒の極性を変えて数回繰り返してもよい。
【００２１】
各種スペクトル分析により、活性化合物６は、（＋）−シリンガレシノールと同定された。さらに、（＋）−シリンガレシノールの構造類似化合物を合成し、それらのＨＰ運動能阻害作用について調べたところ、（＋）−ヤンガビン（ｙａｎｇａｂｉｎ）、（＋）−マグノリン（ｍａｇｎｏｌｉｎ）、（＋）−オイデスミン（ｅｕｄｅｓｍｉｎ）等に高い活性のあることが確認された。中でも（＋）−オイデスミン（ｅｕｄｅｓｍｉｎ）では極めて高い運動能阻害作用のあることが確認された（図３及び図４を参照）。
一般式［Ｉ］で表される化合物
本発明のＨＰ運動能阻害剤は、上記一般式［Ｉ］で表される化合物を有効成分として含有している。
【００２２】
上記一般式［Ｉ］において、Ｒ１〜Ｒ６で示されるアルコキシ基としては、Ｃ１−１０の直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基が挙げられる。好ましくは、Ｃ１−４の直鎖又は分岐鎖のアルコキシ基が挙げられ、具体的には、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、又はｔｅｒｔ−ブチル基が例示される。そのうち、Ｃ１−４の直鎖のアルコキシ基が好ましい。特に、メトキシ基が好ましい。
【００２３】
上記一般式［Ｉ］において、Ｒ１〜Ｒ６で示されるアシル基としては、Ｃ１−１０の直鎖又は分岐鎖のアルカノイル基が挙げられる。好ましくは、Ｃ１−４の直鎖又は分岐鎖のアルカノイル基であり、具体的には、ホルミル基、アセチル基、プロパノイル基等が例示される。そのうち、アセチル基が好ましい。
【００２４】
上記一般式［Ｉ］において、Ｒ１及びＲ２が末端で結合した式：−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯ−で示される基（ｎは１、２又は３）のうち、好ましくは、メチレンジオキシ基（ｎ＝１）である。
【００２５】
上記一般式［Ｉ］において、Ｒ４及びＲ５が末端で結合した式：−Ｏ（ＣＨ２）ｍＯ−で示される基（ｍは１、２又は３）のうち、好ましくは、メチレンジオキシ基（ｍ＝１）である。
【００２６】
本発明のＨＰ運動能阻害剤は、一般式［Ｉ］で示される不斉炭素を有する化合物のいずれの立体異性体をも含むものである。また、一般式［Ｉ］で表される化合物は、公知の化合物であるか、又は公知の化合物から当業者に知られた製法により容易に製造することができる。
【００２７】
本発明のＨＰ運動能阻害剤のうち好ましくは、上記一般式［Ｉ−ａ］で表される化合物を有効成分として含有しているものが挙げられる。具体的には、一般式［Ｉ−ａ］において、Ｒ１は水酸基又はＣ１−４アルコキシ基、Ｒ２及びＲ３は同一又は異なって水素原子、水酸基、又はＣ１−４アルコキシ基、Ｒ４は水酸基又はＣ１−４アルコキシ基、Ｒ５及びＲ６は同一又は異なって水素原子、水酸基、又はＣ１−４アルコキシ基である化合物である。なお、Ｒ１〜Ｒ６で示されるＣ１−４アルコキシ基は、上記のものが採用される。また、上記一般式［Ｉ−ａ］で表される化合物の立体は、絶対配置を示すものである。
【００２８】
一般式［Ｉ−ａ］において、好ましくは、Ｒ１が水酸基又はメチル基、Ｒ２及びＲ３が同一又は異なって水素原子又はメチル基、Ｒ４が水酸基又はメチル基、Ｒ５及びＲ６が同一又は異なって水素原子又はメチル基である化合物である。
【００２９】
本発明のＨＰ運動能阻害剤のうち特に好ましくは、（＋）−シリンガレシノール（ｓｙｒｉｎｇａｒｅｓｉｎｏｌ）、（＋）−ヤンガビン（ｙａｎｇａｂｉｎ）、（＋）−マグノリン（ｍａｇｎｏｌｉｎ）、（＋）−オイデスミン（ｅｕｄｅｓｍｉｎ）等を有効成分として含有しているものであり、中でも（＋）−オイデスミン（ｅｕｄｅｓｍｉｎ）を有効成分として含有しているものが好ましい。これらの化合物はいずれも公知の化合物であり、容易に入手可能である。
ヘリコバクターピロリ運動能阻害剤
上記一般式［Ｉ］で表される化合物又は梅の抽出物は、優れたＨＰ運動能阻害作用を有する。一般に、ＨＰが感染するためには、胃粘膜表層部の粘液ゲル層を突破し、表層粘膜上皮に付着・増殖することが不可避である。その場合、ＨＰは活発な運動能を有し、鞭毛が重要な働きを有していることが知られている。本発明者は、上記一般式［Ｉ］で表される化合物又は梅の抽出物により、ＨＰの形態変化（菌体の球状化、膨化、凝集、鞭毛の障害等）が惹起され、ＨＰに対し高い運動能阻害作用が発揮されることを見出した。そのため、上記一般式［Ｉ］で表される化合物又は梅の抽出物は、ＨＰ運動能阻害剤として有用であり、ＨＰの感染予防又は治療剤として有用である。しかも、本発明のＨＰ運動能阻害剤は、天然物由来の成分であることから、安全性が高いというメリットがある。
【００３０】
さらに、ＨＰ除菌を目的として、抗菌剤との併用剤として用いることも可能である。これにより、抗菌剤の使用量等を軽減することができ、副作用や耐性菌の出現等の問題点を改善することもできる。抗菌剤としては、例えば、抗生物質（アモキシシリン、クラリスロマイシン等）、ニトロニダゾール系抗虫剤（メトロニダゾール、チニダゾール等）、ビスマス製剤等が挙げられる。さらに、胃酸分泌抑制剤を併用することも可能である。胃酸分泌抑制剤としては、例えば、Ｈ２阻害剤（ファモチジン、ニザチジン、ロキサチジン、ラジチジン、シメチジン等）、プロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）（オメプラゾール、ランソプラゾール、ラベプラゾールナトリウム）などが挙げられる。
【００３１】
本発明のＨＰ運動能阻害剤の使用形態については、経口的に摂取する場合が好ましく、例えば、食品添加剤として食品に添加して摂取することができる。
【００３２】
食品添加剤として用いる場合には、その添加量については、特に限定的ではなく、食品の種類に応じ適宜決めればよい。例えば、清涼飲料、炭酸飲料などの液体食品や菓子類やその他の各種食品等の固形食品に添加して用いることができるが、これらの場合の添加量については、食品の種類に応じて適宜決めればよく、一例としては、上記した抽出物の乾燥重量として、含有量が０．００５重量％〜５重量％程度の範囲内となるように添加すればよい。
【００３３】
また、その他に、本発明のＨＰ運動能阻害剤を、医薬として人体に投与する場合には、次のような投与方法及び投与量が例示される。投与は、種々の方法で行うことができ、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤等の剤型による経口投与とすることができる。投与量については、経口投与の場合には、通常、成人において、有効成分量として０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ程度が適当であり、これを１日１回〜数回に分けて投与すればよい。経口投与剤は、通常の製造方法に従って製造することができる。例えば、デンプン、乳糖、マンニット等の賦形剤、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、軽質無水ケイ酸等の流動性向上剤等を適宜組み合わせて処方することにより、錠剤、カプセル剤、顆粒剤等として製造することができる。本発明の一般式［Ｉ］で示される化合物を有効成分として含有するＨＰ運動能阻害剤の製剤は、いずれも公知の方法により製造することができる。
【００３４】
【発明の効果】
本発明のヘリコバクターピロリ運動能阻害剤によれば、ヘリコバクターピロリの運動能を効果的に抑制、阻害することができる。
【００３５】
【実施例】
以下、実施例を示して本発明を更に詳細に説明する。
【００３６】
実施例１
ヘリコバクターピロリＡＴＣＣ４３５０４（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，  Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，  ＭＤ，  ＵＳＡ）を用いて、対照群（運動能１００％）と梅抽出成分を加えたとき（同０％）のＨＰを電子顕微鏡写真で観察した。
【００３７】
対照群（運動能１００％）では、鞭毛を有し、螺旋状ないし管状の形態を示す菌体が主であった（図５）。これに対し、梅抽出成分の０．１重量％水溶液をＨＰに添加することにより、ＨＰは著しく運動能が低下し（運動能０％）球状体（ｃｏｃｃｏｉｄ  ｆｏｒｍ）が多数認められ（図６の左側）、またＨＰが相互に凝集する像（図６の右側）が観察された。
【００３８】
測定条件は、観察試料は１％グルタールアルデヒド水溶液にて１６時間固定した後臨界点乾燥、白金蒸着を行った。測定機器に用いた電子顕微鏡観察は、日立走査型電子顕微鏡  Ｓ−２３００を用いコダック（ＴＲＩ−Ｘフィルム）に撮影現像し、フジフィルム（ＦＵＪＩＢＲＯ  ＦＭ４）へ焼き付けた。なお、ＨＰの運動能は、実施例２（１）に基づいて評価した。
【００３９】
実施例２
（１）ＨＰ運動能阻害作用の評価方法
本評価方法は、上述のようにＡＮＴＩＭＩＣＲＯＢＡＬ  ＡＧＥＮＴＳ  ＡＮＤ  ＣＨＥＭＯＴＨＥＲＡＰＹ，  ＮＯＶ．  ２０００，  Ｖｏｌ．４４，  Ｎｏ．１１，  ｐ３０６９−３０７３に従い評価した。なお、ＨＰはヘリコバクターピロリＡＴＣＣ４３５０４（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，  Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，  ＭＤ，  ＵＳＡ）を用いた。
【００４０】
ＨＰは、血液寒天プレート（５％羊血液を追加したトリプチカーゼ（Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ）  豆寒天）上で、微好気性下（１０％  Ｏ２  ａｎｄ  ９０％  ＣＯ２）、３７℃４時間成長させた。その後、形成されたコロニーを、１０％胎児ウシ血清（ＦＢＳ）を含むブルセラ  ブロス（Ｂｒｕｃｅｌｌａ  Ｂｒｏｔｈ）液体培地（Ｇｉｂｃｏ，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  Ｍｄ．）に懸濁させ、微好気性下３７℃で１８〜２０時間培養した。この菌株を運動能の評価に供し、残りの菌をブルセラ  ブロス液体培地中３７℃で成長させ対数増殖期（ｌｏｇ  ｐｈａｓｅ）に導いた。
【００４１】
ＨＰの運動能は、約１０（μＬ）の菌液を、試料の温度を調整するマイクロウォームプレート（登録商標、（株）北里サプライ製）に入れた反転位相差顕微鏡を用いて測定した。運動速度（マイクロメーター／秒）を、（Ｃ−Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｃ−ＭＥＮ  （Ｃｏｍｐｌｉｘ  Ｉｎｃ．，  Ｃｒａｍｂｅｒｒｙ，  Ｐａ．）を備えた運動能分析システムを用いて測定した。ガラススライドとガラスカバー間（１０６  ｔｏ  １０７  ＣＦＵ／ｍｌ）における１０％ＦＢＳ含有ブルセラ  ブロス液体培地におけるＨＰの運動能を、各０．０５秒分析時間ごとに１５回連続的に記録した（計０．７５秒）。そして、試料中の各ＨＰ細胞の泳動速度（マイクロメーター／秒）を取得した。この操作を、試料の少なくとも５つの異なる部分で実施した。約３００個の細菌の泳動速度を試料ごとに集めて、運動能を有するＨＰのパーセントを測定した。ＨＰのブラウン運動は０．４，  ６，  ０．３  ｍｍ／ｓと見積もられ、４．０  ｍｍ／ｓ  （ブラウン運動の速度より１０倍高い速度）  の平均速度を、正の運動能として判定した。ＨＰの運動能は、位相差顕微鏡で肉眼によっても判断した。
（２）梅からのＨＰ運動能阻害化合物の単離
梅（５０Ｋｇ）をメタノールで１２時間還流し、メタノール抽出物（１３８７ｇ）を得た。この抽出物を水に懸濁させ、ヘキサン、ジクロロメタン、酢酸エチル、ブタノール及び水でそれぞれ再抽出した。各画分を減圧下濃縮し、ヘキサン画分（３ｇ）、ジクロロメタン画分（２７ｇ）、酢酸エチル画分（１６８ｇ）、ブタノール画分（５０４ｇ）及び水画分（６８５ｇ）を得た。ジクロロメタン画分はＨＰ運動能の抑制効果を示した（図２；画分５００μｇ／ｍＬ濃度での運動能を有するＨＰのパーセントで示す）。ジクロロメタン画分を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサンと酢酸エチル）で分画して、画分１から画分５を得た。画分３は正の抑制効果を示したため、この画分を繰り返しシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン、ジクロロメタン及び酢酸エチル）で分画した。最終的にＨＰ運動能抑制物質６（１４ｇ）を単離した。化合物６は、下記のスペクトルデータより、公知のリグナンである（＋）−シリンガレシノール（図３）であることが判った。
＜スペクトルデータ＞
ｍｐ  １８４  ｏＣ；
［α］Ｄ２１．０    ＋２４．３°（ｃ＝０．１，  ＣＨＣｌ３）  ［ｌｉｔ．３９  ｍｐ  １７１−１７３  ｏＣ，  ［α］Ｄ ＋１９．０°（ＣＨＣｌ３）］；
ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ：  ４１８［Ｍ＋］；  ＩＲ  ３４１９，  １６１４，  １５１７，  １４６１，  １２１３；
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ６．５７  （４Ｈ，  ｓ，  ａｒｏｍ．  Ｈ  ｏｎ  ｓｙｒｉｎｇｙｌ  ｒｉｎｇ），  ４．７２  （２Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝４．３  Ｈｚ，  Ｈ２，６），  ４．２９−４．２５  （２Ｈ，  ｍ，  Ｈ−４ｅｑ，  Ｈ−８ｅｑ），  ３．９２−３．８０  （２Ｈ，  ｍ，  Ｈ−４ａｘ，  Ｈ−８ａｘ），  ３．８９  （１２Ｈ，  ｓ，  ４×ＯＭｅ），  ３．１０−３．０７  （２Ｈ，  ｍ，  Ｈ１，５）；
１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ  １４７．２（Ｃ−３’，  Ｃ−３’’，  Ｃ−５’，  Ｃ−５’’），  １３４．３  （Ｃ−４’，  Ｃ−４’’），  １３２．１  （Ｃ−１’，  Ｃ−１’’），  １０２．７  （Ｃ−２’，  Ｃ−２’’，  Ｃ−６’，  Ｃ−６’’），  ８６．１  （Ｃ−２，  Ｃ−６），  ７１．８  （Ｃ−４，  Ｃ−８），  ５６．４  （４×ＯＭｅ），  ５４．４  （Ｃ−１，  Ｃ−５）．
（３）（＋）−シリンガレシノールの構造類似化合物の評価
上記の（＋）−シリンガレシノール（６）と構造類似化合物を、市販のものとして（＋）−ヤンガビン（７）、（＋）−マグノリン（８）及び（＋）−オイデスミン（９）を入手し（図３）、上記と同様にＨＰ運動能抑制作用を測定した。その結果を、図４に示す。
【００４２】
（＋）−シリンガレシノール（６）は、５００μｇ／ｍＬ濃度でＨＰ運動能を９０％抑制した。ＩＣ５０  値は  ５０．０μｇ／ｍＬであった。（＋）−ヤンガビン（７）、（＋）−マグノリン（８）及び（＋）−オイデスミン（９）は、いずれも５００μｇ／ｍＬ濃度でＨＰ運動能を９０％抑制した。ＩＣ５０  値はそれぞれ、３０．０μｇ／ｍＬ，  ３３．１μｇ／ｍＬ，  ３．３μｇ／ｍＬであった。
【００４３】
これらの結果より、Ｃ−４  ’及び４’’位には、有利の水酸基よりもアルコキシ（メトキシ）基を有する化合物が、運動能抑制効果が高いと考えられる。また、（＋）−オイデスミン（９）は、他の化合物より１桁活性が高いことから、２つのベンゼン環上のメタ、パラ位（Ｃ−３’，３’’，４  ’及び４’’位）にアルコキシ基が結合した２置換ベンゼン環を有する化合物が、抑制効果が高いと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【図１】梅からのヘリコバクターピロリの運動能阻害化合物の単離工程を示す図である。
【図２】梅からの各抽出画分のヘリコバクターピロリの運動能阻害効果を示すグラフである。
【図３】ヘリコバクターピロリの運動能阻害作用を評価した化合物６〜９を示す図である。
【図４】化合物６〜９のヘリコバクターピロリの運動能阻害効果を示すグラフである。
【図５】ヘリコバクターピロリの電子顕微鏡写真である。
【図６】梅の抽出物を加えた後のヘリコバクターピロリの電子顕微鏡写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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