(57)【要約】【課題】ヒトおよび動物における関節痛または他の関節症状の治療用の活性剤の長期投与を提供するための、生体吸収性／再吸収性持続放出投薬形を提供する。【解決手段】長骨の髄内腔中の骨組織に接触するための軸付部などの第一の部分を有する、補綴関節インプラントの形の、体内スペース内で治療薬を放出するためのデバイス。インプラントは、関節腔などの体内スペース内に延伸する第二の部分を有する。関節構成要素は、治療薬を含む生体吸収性／再吸収性ポリマーで充填されたリザーバーを含有する。リザーバーは、関節腔に対して開いているか、または接触しており、体液がポリマーデバイス中におよびデバイスから拡散するときに、薬剤を関節腔に運搬する。【選択図】図１
2004277421.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体内スペースに治療薬を放出するためのデバイスであって、
組織に直接接触する第一の部分と、
関節腔内に延伸する第二の部分であって、関節腔に対して開いたその区域を有する第二の部分と、
前記第二の部分上の開いた区域から体内スペース内へ治療薬を放出するための、生体吸収性／再吸収性ポリマーおよび前記治療薬の混合物を含有する、体内スペースに対して開いた前記第二の部分の区域内または区域上のリザーバーと、
を含むデバイス。
【請求項２】
前記治療薬が、抗生剤、鎮痛薬およびその併用からなる群より選択される、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
前記鎮痛薬が、ブピバカイン、ロピバカイン、ジブカイン、エチドカイン、テトラカイン、リドカイン、キシロカイン、プロカイン、クロロプロカイン、メピビカイン、シンコカイン、プリロカイン、コカイン、ベンゾカイン、ブタンベンおよびモルヒネ、並びに、それらを併用した組成、からなる群より選択される、請求項２に記載のデバイス。
【請求項４】
前記抗生剤が、ゲンタマイシン、ジベカシン、カネンドマイシン、リビドマイシン、トブラマイシン、アミカシン、フラジオマイシン、シソマイシン、テトラサイクリン、塩酸塩、オキシテトラサイクリン、塩酸塩、ロリテトラサイクリン、ドキシサイクリン塩酸塩、アンピシリン、ピペラシリン、チカルシン、セファロチン、セファロリジン、セフォチアム、セフスロジン、セフメノキシム、セフメタゾール、セファゾリン、セフォタキシム、セフォペラゾン、セフチゾキシム、モキソラクタム、ラタモキセフ、チエナマイシン、スルファゼシン、アズトレオナムおよびそれらを併用した組成、からなる群より選択される、請求項２に記載のデバイス。
【請求項５】
前記生体吸収性／再吸収性ポリマーが、グリコリドのポリ−ｌ−ラクチドコポリマー、および、Ｄ−ラクチド、Ｌ−ラクチドならびにグリコリドのターポリマーからなる群より選択される要素を含む、請求項１に記載のデバイス。
【請求項６】
前記治療薬がポリマーの１〜９０重量％である、請求項５に記載のデバイス。
【請求項７】
前記リザーバーが前記の第一の構成要素内にある、請求項６に記載のデバイス。
【請求項８】
前記の第一の構成要素が軸であり、前記リザーバーが前記軸内に形成された中空空洞である、請求項７に記載のデバイス。
【請求項９】
通路が、前記リザーバーから関節腔に対して開いている前記第二の構成要素上の前記区域内に延伸する、請求項８に記載のデバイス。
【請求項１０】
前記関節腔に対して開いている前記第二の構成要素上の前記区域が、前記リザーバーを形成する、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１１】
前記リザーバーが、前記第二の構成要素上の前記区域に対するコーティングの形である、請求項１０に記載のデバイス。
【請求項１２】
組織が骨組織である、請求項１に記載のデバイス。
【請求項１３】
骨関節の一部を置換するための補綴関節インプラントであって、
骨への挿入のための軸部分であって、少なくとも部分的な中空内部を有する軸と、
骨を越えて、関節腔内に延伸する関節部分と、
関節腔と前記軸の中空内部との間に延伸する通路と、
前記中空内部の少なくとも一部を充填する生体吸収性／再吸収性担体中の治療薬と、
を含む補綴関節インプラント。
【請求項１４】
前記治療薬が、抗生剤、鎮痛薬およびそれらを併用する組成からなる群より選択される、請求項１３に記載のデバイス。
【請求項１５】
前記鎮痛薬が、ブピバカイン、ロピバカイン、ジブカイン、エチドカイン、テトラカイン、リドカイン、キシロカインおよびそれらを併用する組成からなる群より選択される、請求項１３に記載のデバイス。
【請求項１６】
前記生体吸収性／再吸収性ポリマーがポリ−Ｌ−ラクチドを含む、請求項１３に記載のデバイス。
【請求項１７】
前記治療薬がポリマーの１〜９０重量％である、請求項１３に記載のデバイス。
【請求項１８】
補綴関節インプラントから関節腔内へ治療薬を供給する方法であって、
骨と接触するための第一の部分および関節腔内へ延伸する第二の部分および生体吸収性／再吸収性ポリマー治療薬混合物を含有するリザーバーを有する関節構成要素を供給する工程と、
体液をリザーバーに接触させて、薬剤を拡散させることによって、関節腔内に治療薬を放出する工程と、
を含む方法。
【請求項１９】
前記ポリマーが、５０／５０モル比のポリ（Ｄ／Ｌ−ラクチド／グリコリド）である、請求項１に記載のデバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、補綴インプラントから関節腔または他の体内スペースへの、局所活性薬／診断薬の持続放出に関する。詳細な実施形態において、本発明は、それが必要な患者の関節部における局所麻酔薬の投与のための構造物および組成物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
関節補綴の移植後の関節痛および感染の治療はこれまで、たとえば関節内注射などのステロイド性抗炎症薬の局所注射、および有痛性関節の神経支配における関節内または近位のどちらかでの局所麻酔薬と同様に、抗体およびステロイド性ならびに非ステロイド性抗炎症薬および鎮痛薬による全身治療の使用に基づいてきた。局所治療は一般に、特に重篤な局所関節痛を治療する場合に、そうでなければ要求されるステロイド性および非ステロイド性抗炎症薬の両方の高いレベルに関連する不都合な全身的影響を回避するために、全身治療よりも好ましい。局所麻酔薬は単独で、痛みを緩和するために以前に関節腔に注射され、雑多な結果を伴っている。
【０００３】
局所麻酔薬は、体内の投与限局部位において感覚喪失を生成することによって作用する。局所麻酔薬がその効果を誘起する機構は、決定的に確定されていないが、一般に神経インパルスの開始および伝達を妨害する能力に基づくと考えられる。局所麻酔薬の作用の持続時間は、それが神経組織と実際に接触している時間に比例する。結果として、薬剤の神経での限局化を維持する調合物用デバイスは、麻酔を顕著に長引かせる。
【０００４】
局所麻酔薬は潜在的に毒性であるが、限局性の痛みが鎮静するのに足る時間を与えるために十分な長さだけ部位に残存しなければならない。したがって、薬剤の選択、薬剤の濃度、および薬剤の投与の速度ならびに部位などの要素を、それらの使用を検討する場合に考慮することが非常に重要である。
【０００５】
局所麻酔薬の投与のための各種のデバイスおよび調合物が、当分野で既知である。たとえば局所麻酔薬は、注射、輸液、浸潤、灌流、局所的などによって、溶液または懸濁液中で送達することができる。注射または輸液は急性的に実施可能であり、または長期の局所効果が望ましい場合、局所麻酔剤を重力点滴または輸液ポンプによって連続的に投与することができる。それゆえブピバカインなどの局所麻酔薬は、たとえば長期の硬膜外またはくも膜下腔内投与のために、連続輸液によって投与されてきた。
【０００６】
局所麻酔薬用の持続放出担体について述べられている。たとえば特許文献１および特許文献２は、局所麻酔を誘起するために患者への皮内または静脈内注射に適している、超音波処理によって調製したリン脂質によりコーティングされたメトキシフルラン含有微小液滴に関する。そのような微小液滴は皮内注射されると、長期局所麻酔を引き起こすと言われ、最も長く作用する従来の局所麻酔薬（ブピバカイン）よりもかなり長い麻酔持続時間を与える。
【０００７】
特許文献３は、表面に固定されたリン脂質の層を有するリポスフィアを含有する微細懸濁液系に関する。リポスフィアの核は送達される固体物質であり、または送達される物質は不活性ビヒクル中に分散される。送達される物質はたとえば、非ステロイド性抗炎症化合物、局所麻酔薬、非水溶性化学療法薬およびステロイドが可能である。
【０００８】
注射用マイクロカプセル向けの他の調合物が既知である。たとえば特許文献４は、グリコール酸および乳酸のコポリマーよりなる生体吸収性／再吸収性ポリマーマトリクスにおける、水溶性薬剤の長期放出マイクロカプセルについて述べている。マイクロカプセルは、薬学的に許容されるビヒクル中で注射用調製物として調製される。水溶性薬剤の粒子は、乳酸／グリコール酸コポリマーのマトリクス中に分散した薬剤保持物質中に、１００／１〜５０／５０の比および５，０００〜２００，０００の平均分子量で保持される。注射用調製物は、薬剤ならびに薬剤含有物質の水層およびポリマーの油層の油中水型エマルジョンの調製、濃縮、そして次の水分乾燥によって作成する。
【０００９】
特許文献５は、注射可能なインサイチュー形成型の動物用固体生体吸収性／再吸収性インプラントの提供での使用のための、生体吸収性／再吸収性ポリマーに関する。本参考文献の１つの態様において、ポリラクチドおよび／またはポリグリコリド、これらおよび他のポリマーの併用および混合物に由来するコポリマーを利用する熱硬化性系が利用される。
【００１０】
特許文献６は、乳酸およびグリコール酸に由来するコポリマー中に分散した微生物剤からなる制御放出調合物に関する。コポリマーは、６０〜９５重量％の乳酸および４０〜５重量％のグリコール酸に由来し、６，０００〜３５，０００の分子量を有する。コポリマー調合物の有効量は、皮下または筋肉内投与によって投与される。
【００１１】
特許文献７は、局所麻酔剤の長期投与のための、局所麻酔薬を含むポリマーマトリクスからなる、改良された生体吸収性／再吸収性持続放出系について述べている。上記デバイスは、分解特性；限局性炎症を回避するための、好ましくは２週間の期間にわたる、制御された方法での局所麻酔薬の放出および６ヶ月未満、より好ましくは２ヶ月未満の半減期を有するポリマーのインビボでの分解に基づいて選択される。開示は、作用部位へ薬剤が最適到達するように被包を低減するために、抗炎症薬を局所麻酔薬と共にポリマーに含ませられることを示している。有用であると言われる抗炎症薬は、デキサメタゾン、コルチゾン、プレドニゾン、および経口的にまたは注射によって定期的に投与されるその他などの、ステロイドを含む。
【００１２】
比較的長期に作用する麻酔薬である塩酸ブピバカインは、局所浸潤、末梢神経ブロック、および尾側ならびに腰椎硬膜外ブロックを経た注射用に、エピネフリン（酸性酒石酸塩として）を含むまたは含まない滅菌等張溶液中の塩酸Ｍａｒｃａｉｎｅ（登録商標）（１：２００，０００）として市販されている。ヒトの尾側、硬膜外または末梢神経ブロックへのＭａｒｃａｉｎｅの注射後、血中ブピバカインのピークレベルは、３０〜４５分後に到達され、次の３〜６時間の間に微々たるレベルへの落下が続く。
【００１３】
加えてポリマー微粒子は、興味のある薬剤の持続放出が望ましい医用または非医用用途の両方で長く使われている。それにもかかわらず、本発明より前に、関節腔に痛み緩和および他の薬学的または診断的処置を与えるための有効な方法および調合物に対する要求は満足されないままである。さらに医療デバイスがインプラントされた体内スペース隣接部への痛み緩和および他の薬学的または診断的処置を与えるための有効な方法および調合物に対する要求は、本発明まで満足されないままである。
【００１４】
【特許文献１】米国特許第４，７２５，４４２号（Ｈａｙｎｅｓ）
【特許文献２】米国特許第４，６２２，２１９号（Ｈａｙｎｅｓ）
【特許文献３】米国特許第５，１８８，８３７号（Ｄｏｍｂ）
【特許文献４】米国特許第５，０６１，４９２号
【特許文献５】米国特許第４，９３８，７６３号（Ｄｕｎｎら）
【特許文献６】米国特許第４，２９３，５３９号（Ｌｕｄｗｉｇら）
【特許文献７】国際公開公報第９４／０５２６５号
【特許文献８】米国特許第４，５５０，４４９号
【特許文献９】米国特許第６，２０６，８８３号
【特許文献１０】米国特許第４，５５０，４４８号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、ヒトおよび動物における関節痛または他の関節症状の治療用の活性剤の長期投与を提供するための、生体吸収性／再吸収性持続放出投薬形を提供することである。
さらに詳細には、本発明の目的は、体腔に位置するまたはインプラント医療デバイスに取付けた、生体適合性、生体吸収性／再吸収性持続放出形の局所麻酔薬を提供することである。
【００１６】
本発明のさらなる目的は、関節および／または体内スペースならびに体腔における局所麻酔剤の効果を延長するための方法を提供すること、および長期かつ有益な抗炎症効果をさらに提供することである。
【００１７】
本発明のなおさらなる目的は、ヒトおよび動物において体内スペース内での長期局所麻酔治療を提供するための、生体適合性、生体吸収性／再吸収性制御放出投薬形を提供することである。
【００１８】
本発明の別の目的は、関節腔に鎮痛剤などの治療薬を放出することができる補綴関節インプラントを提供することである。
【００１９】
本発明のなお別の目的は、補綴がインプラントされた後に所定の期間にわたって、関節腔に鎮痛薬を放出するためにそこに形成されたリザーバーを含む補綴関節構成要素を提供することである。
【００２０】
本発明のまた別の目的は、関節腔内へ延伸するインプラントの部分を有する補綴臀部および膝インプラントであって、上記部分がそこに含まれた鎮痛薬または他の治療薬を有する生体吸収性／再吸収性ポリマーを含むインプラントを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
本発明のこれらおよび他の目的は、体内スペースにて治療薬を放出するためのデバイスにおいて提供され、そこで上記デバイスは、組織に直接接触する第一の部分および関節腔内に延伸する第二の部分を有する。第二の部分は、関節腔に対して開いた、または関節腔内に延伸する凹所または空洞の形のリザーバーをそこに含む。リザーバーを形成する凹所は、鎮痛薬または他の治療薬と組合された生体吸収性／再吸収性ポリマーを含有する。水分子がデバイス内に拡散し、デバイス中の薬剤分子を溶解させると、鎮痛薬または他の治療薬が関節腔に放出される。ポリマーが分解するにつれて、薬剤の放出速度は上昇する。有用なポリマーは、本発明者に発行された特許文献８に開示されており、その教示は参照により本明細書に組み入れられている。
【００２２】
加えて、生体吸収性／再吸収性ポリマーは多孔性で、孔が治療薬によって充填またはコーティングされていてもよい。この場合、治療薬は少なくとも一部が、ポリマーの分解とは無関係に放出される。もちろん装填されたポリマー性送達デバイスは、補綴から独立して使用される、すなわちロッド、フィルムまたはパウチ内に形成して関節内に配置することができる。
【００２３】
治療薬は、鎮痛薬または抗生剤またはその併用でもよい。鎮痛薬は、単独あるいは併用される、ブピバカイン、ロピバカイン、ジブカイン、エチドカイン、テトラカイン、リドカイン、キシロカインおよびその併用および／またはその塩および誘導体からなる群より選択される。鎮痛薬はアヘン剤に由来してもよい。
【００２４】
使用される抗生剤は、スルフィソキサゾール、ペニシリン、アンピシリン、セファロスポリン、ゲンタマイシン、エリスロマイシン、テトラサイクリンおよびその誘導体、塩および混合物からなる群より選択される。上記のリストは例示のためのみであり、使用される多数の鎮痛薬および抗生剤または他の治療薬を制限するものではない。たとえば有用な抗炎症薬である、Ｆｏｓｓａｍａｘ（登録商標）などのビスホソネートは、本発明で使用できる。
【００２５】
一般に治療薬は、生体再吸収性ポリマーの１〜９０重量％である。ポリマーは、関節構成要素内のリザーバーに置くことができる。リザーバーは、金属軸に完全に包囲された空洞内の軸部分内に形成され、関節腔に対して開いたインプラントの端に開口部を有する。開口部は、骨を越えて関節腔内へ延伸する関節構成要素の一部にある。通路は、リザーバーを有する軸部分から、関節腔内のインプラントの外部表面まで延伸して、薬剤分子を放出するために、関節液が生体再吸収性ポリマーに接触して、その中に拡散したり、そこから拡散したりできるようにする。あるいは治療薬は、インプラントの負荷なし表面周囲のコーティングとして形成されてもよく、表面は関節腔内に延伸するか、または関節腔に露出される。
【００２６】
１つの態様において、持続放出材料は、ｐｏｌｙａｎｈｙｒｄｒｉｄｅｓ、乳酸およびグリコール酸のコポリマー、ポリ（乳）酸、ポリ（グリコール）酸、ポリエステル、ポリオルトエステル、タンパク質、多糖類および／またはその併用などのポリマーを含む。好ましくは手動除去を回避するために、ポリマーは生体吸収性／再吸収性である。そのようなポリマーは、特許文献８で教示されている。本発明のポリマーは好ましくは、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチド、およびグリコリドのターポリマーである。しかし追加の適合性ポリマー反復単位を本発明の材料に含めてもよい。そのようなポリマー反復単位は、好ましくは約５モルパーセント未満、さらに好ましくは約２．５モルパーセント未満の量で含まれ、反応物中に以下のモノマーを単独あるいは併用して含めることによって作成できる。
α−ヒドロキシ−α−エチル酪酸；
α−ヒドロキシ−β−メチル吉草酸；
α−ヒドロキシ酢酸；
α−ヒドロキシ酪酸；
α−ヒドロキシカポル酸；
α−ヒドロキシデカン酸；
α−ヒドロキシへプタン酸；
α−ヒドロキシイソ酪酸；
α−ヒドロキシイソカプロン酸；
α−ヒドロキシイソ吉草酸；
α−ヒドロキシミリスチン酸；
α−ヒドロキシオクタン酸；
α−ヒドロキシステアリン酸；
α−ヒドロキシ吉草酸；
β−ブチロラクトン；
β−プロピオラクチド；
γ−ブチロラクトン；
ピバロラクトン；および
テトラメチルグリコリド。
【００２７】
持続放出調合物は、選択されたポリマー調合物と適合性である局所麻酔薬の任意の量を含むことができる。好ましくは局所麻酔薬は、持続放出材料内に１０〜６０重量％の装填パーセントで含まれる。当分野で既知のどの局所麻酔薬も利用できる。好ましい局所麻酔薬は、ブピバカイン、ロピバカイン、ジブカイン、プロカイン、クロロプロカイン、メピビカイン、シンコカイン、プリロカイン、コカイン、ベンゾカイン、ブタンベンおよびモルヒネ、エチドカイン、テトラカイン、リドカイン、キシロカイン、その混合物、および／または塩およびその誘導体を含む。抗生剤の例は、ゲンタマイシン、ジベカシン、カネンドマイシン、リビドマイシン、トブラマイシン、アミカシン、フラジオマイシン、シソマイシン、テトラサイクリン、塩酸塩、オキシテトラサイクリン、塩酸塩、ロリテトラサイクリン、ドキシサイクリン塩酸塩、アンピシリン、ピペラシリン、チカルシン、セファロチン、セファロリジン、セフォチアム、セフスロジン、セフメノキシム、セフメタゾール、セファゾリン、セフォタキシム、セフォペラゾン、セフチゾキシム、モキソラクタム、ラタモキセフ、チエナマイシン、スルファゼシン、アズトレオナムおよびその併用が挙げられる。
【００２８】
本発明の制御放出調合物および方法は、これに限定されるわけではないが微粒子、たとえばマイクロスフィアまたはマイクロカプセル、ゲル、ペースト、ロッド、ペレット、プレートまたは繊維など（一般に「サブストレート」と呼ばれる）を含み、塗布、浸潤、インプラント、挿入、または当分野で既知のリザーバーへの注入のための任意の生体吸収性／再吸収性系と併せて使用できる。生体吸収性／再吸収性系は、単独あるいはポリグリコリドとのコポリマーのどちらかの、ポリラクチドポリマーでもよい。生体吸収性／再吸収性ポリマーは、本出願の発明者に発行された特許文献９に開示されたターポリマーでもよく、その教示は参照により本明細書に組み入れられている。
【００２９】
本明細書で使用されるように、「持続放出」および「制御放出」という用語は、当分野でよく理解されており、互換的であるものとする。
【００３０】
本明細書で使用されるように、「局所麻酔剤」または「局所麻酔薬」は、局所知覚麻痺および／または鎮痛を与える任意の薬剤を意味する。用語はこれに限定されるわけではないが、たとえば局所的にあるいは浸潤または注射によって、局所投与される場合に感覚認知および／または運動機能の限局性完全または部分阻害を供給する任意の薬剤も含む。どちらの定義の下でも、そのように引き起こされた限局性状態も「局所麻酔」と呼ぶ。使用できる局所麻酔剤は、単に例示目的で、ブピバカイン、ロピバカイン、ジブカイン、プロカイン、クロロプロカイン、プリロカイン、メピバカイン、エチドカイン、テトラカイン、リドカイン、およびキシロカインはもちろんのこと、その麻酔活性誘導体、類似体および混合物も含む。局所麻酔薬は塩の形、たとえば塩酸塩、臭化物、酢酸塩、クエン酸塩、炭酸塩または硫酸塩の形でもよい。さらに好ましくは局所麻酔剤は、遊離塩基の形である。遊離塩基は、より低速の初期放出を与え、放出部位における局所麻酔薬の早期「投下」を回避する。好ましい局所麻酔剤はたとえばブピバカインを含む。「局所麻酔薬」という語は、本明細書で与えた定義に従って、これに限定されるわけではないが、モルヒネ、フェンタニル、およびたとえば侵害受容通路（求心性および／または遠心性）の局所遮断を提供することができる薬剤を含む、伝統的に局所麻酔特性と関連付けられた薬剤とは異なるクラスの薬剤も含みうる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
図１を参照すると、大腿骨１６の髄腔１４内にインプラントされた大腿骨構成要素１２を有する、一般に１０で示される臀部関節構成要素が示されている。骨盤２０内にインプラントされた寛骨臼補綴構成要素１８も示されている。補綴大腿骨頭または球２２は、大腿骨構成要素１２の近位端２４に取付けられている。
【００３２】
図２を参照すると、軸３４内に形成されたリザーバー３０を示す大腿関節構成要素１０の断面図が示されている。好ましい実施形態において、リザーバー３０は、開口部３６を有する軸３４内に形成された円筒状穴である。開口部３６は、関節腔３８と連通する。リザーバー３０は、鎮痛薬または抗生剤などの治療薬を含む生体吸収性／再吸収性材料３２が充填されている。通例、穴は約０．２５インチである。
【００３３】
図３を参照すると、鎮痛薬、または抗生剤または他の治療薬を生体再吸収性ポリマー３２の分解によって溶出させている臀部軸３４が示されている。見られるように、一般に矢印４０によって示される抗生剤または鎮痛薬は、軸３４内の近位開口部３６を通じて溶出する。この溶出は、最大２ヶ月になりうる再吸収性インプラントの分解時間とは無関係であるが、治療薬は数日の間に完全に放出される。
【００３４】
図４を参照すると、リザーバー３０から部分的に吸収される生体吸収性材料３２を備えた軸３４が示されている。図４の２本のより短い矢印は、再吸収性ポリマーにより放出された抗生剤または鎮痛薬の量が時間に対して減少することを意味している。分解時間は溶出時間と同様に、材料の多孔性はもちろんのこと、関節液に暴露された開口部３６のサイズによっても制御することができる。
【００３５】
図５を参照すると、大腿骨１０６の遠位髄腔内への挿入のための軸１０４を有する大腿骨構成要素１０２および脛骨１１２の髄腔内への挿入のための軸１１０を含む脛骨構成要素１０８を含む、一般に１００で示される補綴膝インプラントが示されている。
【００３６】
図６を参照すると、関節腔１２０を含む、補綴膝１００の断面図が示されている。大腿骨構成要素１０２の膝蓋溝に載っている、膝蓋骨１２２を点線で示す。大腿骨構成要素１０２の好ましい軸１０４は、複数の溝１３２を通じて関節腔１２０と連通するリザーバー１３０を含む。好ましい実施形態において、１以上の溝１３２は内側−外側方向に延伸し、大腿骨構成要素１０２の内側および外側外表面１３４と交差する（図５を参照）。結果として、関節液は溝１３２の内側および外側開口部を通じて入り、リザーバー１３０と連通することができる。上述したように、リザーバー１３０は、そこに鎮痛薬または抗生剤または他の治療薬を有する生体再吸収性ポリマーを含む。
【００３７】
脛骨構成要素１０８も、軸１１０内にリザーバー１４０を含む。リザーバー１４０は、通路１４４に至る開口端１４２を有し、次に通路１４４は関節腔１２０に至る。好ましい実施形態において、通路はポリエチレンベアリング構成要素１４６で形成される。
【００３８】
図７を参照すると、鎮痛薬または抗生剤が通路１３２および１４０を通じて関節腔１２０内に放出されているのを示す、膝関節補綴１００の断面図が示されている。
【００３９】
図８を参照すると、部分的に再吸収された生体再吸収性ポリマーを備えた、膝補綴１００が示されている。図６を参照すると、抗生剤または鎮痛薬または他の治療薬を含有するポリマーの配置に関する別の実施形態が示されている。本実施形態において、ポリマーはたとえば１５２などにおけるように、脛骨底板１５０の外側周囲で成形される。治療薬を含む成形ポリマーは、ポリマーへのおよびポリマーからの水成分／体液の移動の結果として治療薬が関節腔内に放出されるように、底板の外周辺端を数ミリメートル越えて延伸することができる。
【００４０】
生体再吸収性ポリマーは、フィルムとしてインプラントに取付けることもできる。この場合、フィルムは、特許文献１０のビーズを結合するために使用された写真製版用接着剤などの接着剤を用いてインプラント表面に結合させるか、または本明細書で以下に述べる処理パラメータを使用することによって、フィルム自体を粘着性にしてもよい。
【００４１】
本発明の生体吸収性制御薬放出デバイスを作成する工程は、ポリマー担体を特殊な混和で溶融させることと、押出デバイスを研磨することを包含する。ドイツのＨｅｕｍａｎｎ  Ｐｈａｒｍａ  ＧｍｂＨから購入したブピバカインなどの治療薬は、混和および混合ステップで添加する。
【００４２】
以下の実施例では、ニュージャージー州サウスハッケンサックのＣ．Ｗ．Ｂｒａｂｅｎｄｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ製のＩｎｔｅｌｌｉ−Ｔｏｒｑｕｅ  Ｐｌａｓｔｉ−Ｃｏｒｄｅｒ（登録商標）トルクレオメーターを使用した。上記器械は、ローラーブレード付きＰｒｅｐ−Ｍｉｘｅｒ（登録商標）、クイック装填シュート、ピストンおよび質量５キログラムのＧｒａｎｕ−Ｇｒｉｎｄｅｒを含んでいた。押出装置もＢｒａｂｅｎｄｅｒより入手し、シングル混合ゾーンスクリューを備え、ビンフィードおよび２０ｍｌのＦｌｅｘ−Ｌｉｐリボンダイ、５／１６インチノズルインサートならびにコンベヤベルト取外しを備えたストランドダイを装備した、Ｉｎｔｅｌｌｉ−Ｔｏｒｑｕｅ  Ｐｌａｓｔｉ−Ｃｏｒｄｅｒ（登録商標）３／４インチ／２０／１／Ｌ／Ｄシングルスクリュー押出機である。使用したポリマーは、モル比が５３／４７で、固有粘度が０．８８ｄ／ｌ／ｇである、ポリ−（ＤＬ−ラクチド／グリコリド）のコポリマーであった。本材料は、オランダのＰｕｒａｃ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ＢＶより購入する。上記材料は、１〜５ｍｍのサイズ範囲の顆粒として供給された。
【実施例１】
【００４３】
ポリマー１８０グラムを、Ｈｅｕｍａｎｎ  Ｐｈａｒｍａ  ＧｍｂＨ  Ｇｅｒｍａｎｙから購入した粉末形のブピバカイン１２０グラムと乾燥混和した。ポリマーは１〜５ｍｍの範囲の顆粒として供給された（ポリマー６０％／薬剤４０％）。混和物を、１５０℃に予熱した、予熱済Ｉｎｔｅｌｌｉ−Ｔｏｒｑｕｅ  Ｐｌａｓｔｉ−Ｃｏｒｄｅｒ（登録商標）トルクレオメーターに入れて、２０ｒｐｍにて８分間混合した。生成した均質混和物は、均質ポリマーマトリクスの形であり、収集して、そして冷却後にＧｒａｎｕ−Ｇｒｉｎｄｅｒを用いて、平均粒径３〜５ｍｍに粒状化した。粒状化ポリマー／薬剤混合物１５０グラムを、０．０２０インチ×２インチのダイを装備したＩｎｔｅｌｌｉ−Ｔｏｒｑｕｅ  Ｐｌａｓｔｉ−Ｃｏｒｄｅｒ（登録商標）押出機に入れ、厚さ約０．０２０インチ（０．５４ｍｍ）の２インチ幅フィルムとして、１２１〜１５７℃にて押出した。生じたフィルムは所与のサンプル５５７−４−４であり、放出結果を図９に示す。
【実施例２】
【００４４】
実施例１の混和物の残り半分（１５０グラム）を、今度は直径５／１６インチのダイを装着した同じ押出機を使用して、ロッドとして押出した。非常に均質である、ポリマー／薬剤マトリクスの円筒形サンプルがサンプル５５７−４−４として得られ、放出結果を図１０に示す。
【実施例３】
【００４５】
コポリマー１２０グラムをブピバカイン１８０グラムと乾燥状態で混和した（ポリマー４０％／薬剤６０％）。混和物を再度１５０℃に予熱した予熱ミキサーに入れた。再度、混合を２０ｒｐｍにて８分間続けた。機械のトルク範囲内であれば、他の速度および温度を使用できる。次に均質混和物を収集し、冷却後にＧｒａｎｕ−Ｇｒｉｎｄｅｒを用いて、粒径３〜５ｍｍに粒状化した。次に粒状化ポリマー／薬剤混合物１５０グラムを、０．０２０インチ×２インチのダイを装備したシート押出機に入れ、１２１〜１５７℃にて押出して厚さ約０．５４ｍｍのフィルムを形成した。このダイ設定を用いて厚さ０．５４ｍｍであるサンプル５５７−５−１として、１枚のシートを作成した。次にダイキャップを０．０１３インチに変更し、サンプル番号５５７−５−２として識別される、厚さ０．３５〜０．４７ｍｍのフィルムを作成した。これらのサンプルの放出結果をそれぞれ図１１および１２に示す。
【実施例４】
【００４６】
次に混和物の残りの１５０グラムを実施例２と同様にロッドに押出して、サンプル番号は図１３に示す５５７−５−３であった。
【００４７】
図９〜１２を参照すると、実施例１〜４で作成したシートおよびロッドからのブピバカインの放出速度は、所与の量の薬剤を中に含有するデバイスの所与の重量を、ｐＨ７．４および温度３７℃のリン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）の規定体積に浸漬することによって決定された。サンプルは平床式振盪高温槽中で、一定温度にて１分間に６０サイクルで、容器内で振盪した。時間の関数としてデバイスから放出される薬剤の量は、外部溶液のサンプルを採取して、それを紫外分光法により波長２６４μｍで分析して特定の時間で決定する。
【００４８】
図９は、実施例１で作成した表面積２００ｍｍ2または表面積６００ｍｍ2のどちらかのフィルムの６個のサンプルを示す。薬剤放出速度は、デバイスの重量および表面積を変化させることによって制御される。
【００４９】
図１０は、実施例２に従って作成した、５／１６押出ロッドからのブピバカインの放出速度を示し、１本のロッドは表面積１３８．９ｍｍ2および表面積４１８．０ｍｍ2である。制御放出デバイスは円筒でもよい。薬剤放出速度は、デバイスの表面積および／または重量を変化させることによって制御できる。
【００５０】
図１１および１２は、実施例３で作成した８個のフィルムサンプルを示し、サンプルのうち２個は表面積２００ｍｍ2であり、残りの２個は表面積６００ｍｍ2である。薬剤の放出速度は、デバイスの重量および表面積によって制御される。薬剤の装填レベルを図９の４０％から図１１の６０％に上昇させると、薬剤の放出速度が上昇する。
【００５１】
同様に図１３を参照すると、一方が表面積１４５．１ｍｍ2であり、もう一方が表面積４３２．５ｍｍ2である、実施例４の５／１６”ロッドが示されている。図１０と比較すると、薬剤装填のレベルを上昇させることによって、薬剤放出の速度および全量が上昇した。
【実施例５】
【００５２】
原液は、以前に射出成形した８５／５／１０モル比のターポリマー、ポリ−（Ｌ−ラクチド／Ｄ−ラクチド／グリコリド）１０．０グラムを、ジオキサン２００ミリリットル（ｍｌｓ．）に溶解させることによって調製した。
【００５３】
サンプル調製−本原液４２グラムを、脱イオン水６．００グラムに添加して、比が８７／１３のジオキサン／水を得た。混合物は、透明溶液が得られるまでホットプレート上で攪拌および加熱した。ブピバカイン０．５０８８グラムをこれに添加して、保存した。本溶液をドライアイスアセトン中で少なくとも２時間凍結させた。凍結溶液は、ＶｉｒＴｉｓ凍結乾燥器、Ｆｒｅｅｚｅ  ｍｏｂｉｌｅ、モデル３＋ＳＬを用いて、２日間または真空レベルが−５７℃にて４４ミリトルのレベルに達するまで、凍結乾燥させた。これは多孔性フォームを生じた。重量２．４５２９グラムであるフォームサンプル番号４７９−４２−２を得た。３７℃にてリン酸緩衝生理的食塩水５０ｍｌ中でインキュベートした上記のデバイス０．２９３２グラムからのブピバカインの放出試験の結果を、図１４に示す。
【実施例６】
【００５４】
本デバイスの多孔性度を低くするために以下の量を使用したことを除き、実施例５で使用したのと同じ手順に従った。
ａ）ジオキサン／水の比  ９７／３；
ｂ）水の量  １．２３７グラム；
ｃ）ブピバカインの量  ０．５０５２グラム；および
ｄ）使用したデバイスの重量  ０．３０８２グラム。
【００５５】
実施例６のサンプル４７９−４７−４からのブピバカイン放出の結果も図１４にプロットする。本プロットは、溶媒／非溶媒混合物中の水の量を減少させることによって、実施例６の構造は多孔性度が低くなり、ブピバカインの放出速度も低下することを示す。
【実施例７】
【００５６】
本実施例および以下の実施例８は、制御薬剤放出デバイスを作成するための、別のポリマーの使用を説明する。
【００５７】
サンプル調製−ジオキサン２２．５グラムを２５０ｍｌビーカーに添加した。次にモル比５０／５０のコポリマー、ポリ−（ＤＬ−ラクチド／グリコリド）２．５グラムをビーカーに添加して溶解させた。ブピバカイン１．００グラムを混合物に添加して攪拌した。混合物をドライアイス／アセトン中で２日間凍結させた。それを実施例５と同じ凍結乾燥器のチャンバ内で凍結乾燥させた。凍結混合物を１００μｍ真空下で２４時間乾燥させた。作成された多孔性構造物は、番号４７９−８７−１と識別され、重量は３．１６９１グラムであった。
【実施例８】
【００５８】
本サンプルは、ブピバカインの重量が０．５００グラムであることを除いて実施例７と同様に作成し、サンプル４７９−８７−２と識別された。これらの２つのデバイスからのブピバカインの放出速度の結果を図１５にプロットすると、放出速度は、デバイスへの薬剤装填のレベルを変更することによって、表示された範囲内の所望のレベルに調整できることが示される。
【００５９】
表１は、サンプルＶ〜ＶＩＩＩで作成したサンプルの多孔性度を特徴付ける。多孔性構造は、体液が溶解して、治療薬にｔｅａｃｈ  ｏｕｔできるようにする。
【００６０】
【表１】
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【００６１】
溶媒キャスティング−溶媒キャスティング法によって作成したリザーバーフィルムデバイスを以下の実施例で説明する。最初の２つの例は、放出速度に対する使用した溶媒の効果を説明し、第二の２つの実施例（９および１０）は、薬剤の放出速度に対する薬剤装填またはマトリクス中の薬剤量の効果を説明する。
【実施例９】
【００６２】
モル比５０／５０のコポリマー、ポリ−（ＤＬ−ラクチド／グリコリド）２グラムをジオキサン２６グラムに溶解させた。次にブピバカイン２グラムを添加し、懸濁液を攪拌して、テフロン被覆トレーにキャストした。トレーはフードの下で２日間乾燥させて、次に形成されたフィルムをトレーから取り外して、２４０μｍ（ミクロン）水銀の真空下で乾燥させた。本フィルムは均質かつ可撓性であり、重量は３．７４８９グラムであった。これはサンプル番号４７９−７４−１として識別した。本フィルムをストリップ状に切断して、すべてのストリップをｐＨ７．４および温度３７℃のリン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）２００ｍｌ中に浸漬して、３７℃および６０Ｈｚに設定した振盪恒温槽に置き、デバイスからの薬剤放出速度を決定した。薬剤放出試験の結果を図１６にプロットする。
【実施例１０】
【００６３】
フィルムは以下を除いて、実施例９と同様の方法で作成した。
ａ）使用した溶媒はクロロホルム３６グラムであった；
ｂ）得られたフィルムは脆弱であり、重量は３．４９０７グラムであった；および
ｃ）識別番号４７９−７４−２が与えられた。
【００６４】
本フィルムマトリクスによる薬剤放出試験の結果も図１６にプロットする。本データは、ジオキサンが、より均質かつより可撓性のフィルムを与えるため、好ましい溶媒であることを示している。薬剤放出の初期速度は、どちらの溶媒を使用した場合でも非常に高く、ジオキサンベースのマトリクスによって多少高い速度が得られた。
【実施例１１】
【００６５】
実施例１１は、薬剤をより低い程度に装填するフィルムマトリクスの作成について説明する。モル比５０／５０のコポリマー、ポリ−（ＤＬ−ラクチド／グリコリド）５グラムをジオキサン４５グラムに溶解させた。ブピバカイン１．００グラムを添加し、混合物を攪拌した。懸濁液をテフロン被覆トレーにキャストして、フードの下、そして次に２４０μｍ水銀の真空下で乾燥させた。均質フィルムマトリクスが生成し、４７９−８６−１と識別された。
【００６６】
マトリクスフィルム６．０グラムを利用した薬剤放出試験の結果を、図１７にプロットする。
【実施例１２】
【００６７】
実施例１２は、マトリクスフィルムがより高レベルまで装填可能であり、この場合になお大量の薬剤を送達するためには、より少量のマトリクスフィルムを使用することが要求されることを説明する。本実施例のフィルムマトリクスの作成は、添加するブピバカインの量が３．００グラムであったという点のみが実施例９とは異なり、本サンプルはデバイス４７９−８６−２として識別された。本サンプルによる薬剤放出試験の結果を図１７にプロットする。
【００６８】
パウチ型デバイス−これらのデバイスは、溶媒キャストフィルムから、端をヒートシールすることによって、または端をポリマー溶液で接着することによって構成されている。薬剤は、粉末、または薬剤を含有するフィルムマトリクスのどちらかとして、デバイスに入れた。
【実施例１３】
【００６９】
モル比５０／５０のコポリマー、ポリ−（ＤＬ−ラクチド／グリコリド）１グラムをクロロホルム９９ｍｌに溶解させた。本溶液を６”×１０”のテフロン被覆トレーにキャストした。これを室温で２日間乾燥させ、次に２４０μｍ−Ｈｇ真空下で１日乾燥させた。パウチを形成するために、約３６ｍｍ×７２ｍｍの長方形片を本フィルムから切断した。これを折って、約３６ｍｍ×３６ｍｍの正方形を形成した。パウチの３端を、従来のヒートシーラーを使用してヒートシールした。ブピバカイン粉末１グラムをこのパウチに入れ、第四の端をヒートシールした。これをサンプル番号４７９−７１−４として識別した。本パウチを３７℃のリン酸緩衝生理的食塩水１５０ｍｌに浸漬し、６０Ｈｚに設定した振盪恒温槽に置いた。外部溶液のサンプルを各種時間においてＵＶ分光法によって分析し、パウチによって放出された薬剤の量を決定した。結果を、実施例１４および１５の結果と共に、図１８にプロットする。
【実施例１４】
【００７０】
本実施例は、溶媒がジオキサンであり、形成されたフィルムが非常に粘着性であり、サンプル４７９−７１−５として識別されたことを除いて、実施例１３と同様であった。したがって室温にて端を相互に単に押し付けて、このように密封した。そのように作成されたフィルムは金属またはプラスチック製インプラントに付着するために十分な粘着性であると判定された。
【実施例１５】
【００７１】
本実験は実施例１３と同様に実施したが、使用した溶媒は塩化メチレンであり、サンプル４７９−７１−６として識別された。図１８に示す結果は、これらのデバイスからの薬剤の放出が、インキュベーション約７００時間後まで開始しないことを示唆している。この遅延は、薬剤放出開始の遅延時間が必要な場合には有用である。さらにこれらの結果は、これらのデバイスを形成するフィルムの作成工程で使用される溶媒を変更することによって、薬剤放出の速度が著しく影響を受けないことも示唆している。
【００７２】
コーティングデバイス−デバイスからの薬剤放出の速度を制御する別の方法を以下の実施例で説明する。
【実施例１６】
【００７３】
モル比５０／５０のポリマー、ポリ−（ＤＬ−ラクチド／グリコリド）１２０グラムを、実施例１〜４と同じＢｒａｂｅｎｄｅｒミキサーを使用して、ブピバカイン１８０グラムと乾燥混和および溶融混和した。押出物は粉砕した。粉砕材料を直径７．８６ｍｍのロッドに押出した。長さ２１．２ｍｍを有する円筒を切断した。円筒は表面積６２１．６ｍｍ2を有し、重量は１．１９８０グラムであった。円筒は中に６０重量％の薬剤を有していた。
【００７４】
本サンプルは５５７−１３−５として識別され、６０Ｈｚにて３７℃の振盪恒温槽内で、ＰＢＳ  ５００ｍｌでインキュベートした。本デバイスからの薬剤放出の速度を図１９にプロットする。
【実施例１７】
【００７５】
モル比５０／５０のポリマー、ポリ−（ＤＬ−ラクチド／グリコリド）１２０グラムを、Ｂｒａｂｅｎｄｅｒミキサーを使用して、ブピバカイン１８０グラムと乾燥混和し、溶融混和した。押出物は粒径３〜５ｍｍに粉砕した。粉砕材料を溶融して、直径７．８７ｍｍのロッドに押出した。長さ２１．３ｍｍ円筒を有する円筒を切断した。ロッドは表面積６２２．９ｍｍ2を有し、重量は１．２００グラムであった。再度、ロッドは中に６０重量％の薬剤を有していた。上記の円筒形ロッドを、モル比５０／５０のポリ−（ＤＬ−ラクチド／グリコリド）の５％ジオキサン溶液を用いて、デバイスを本溶液に浸漬し、そして次にそれをフード内で風乾させることによって、コーティングした。コーティングしたデバイスは、２００μｍＨｇにて３日間、真空乾燥させた。
【００７６】
本サンプルは５５７−１３−６として識別され、実施例１６として薬剤放出について試験を行い、結果を図１９にプロットする。
【実施例１８】
【００７７】
モル比５０／５０のポリマー、ポリ−（ＤＬ−ラクチド／グリコリド）１８０グラムを、Ｂｒａｂｅｎｄｅｒミキサーを使用して、ブピバカイン１２０グラムと乾燥混和し、次に溶融混和した。ミキサーからの押出物は粒径３〜５ｍｍに粉砕した。粉砕材料を再溶融して、直径７．７８ｍｍの円筒形ロッドに押出し、これを表面積６１９．４ｍｍ2および重量１．１９９６グラムを有する長さ２１．４５ｍｍに切断した。本ロッドは中に４０重量％の薬剤を有していた。本サンプルは５５７−１３−７として識別され、実施例１６と同様に薬剤放出について試験された。結果は図１９にもプロットした。
【実施例１９】
【００７８】
モル比５０／５０のポリマー、ポリ−（ＤＬ−ラクチド／グリコリド）１８０グラムを、Ｂｒａｂｅｎｄｅｒミキサーを使用して、ブピバカイン１２０グラムと乾燥混和し、次に溶融混和した。押出物を上記のように粉砕し、粉砕材料は、直径７．３１ｍｍを有するロッドに押出した。円筒から長さ２４．０８ｍｍを切断し、切断ロッドは表面積６３６．９ｍｍ2および重量１．１９９８グラムを有していた。本ロッドも中に４０重量％の薬剤を有していた。本円筒形デバイスを、モル比５０／５０のポリ−（ＤＬ−ラクチド／グリコリド）の５％ジオキサン溶液を用いて、デバイスをこの溶液に浸漬し、次にそれをフード内で風乾させることによって、コーティングした。コーティングしたデバイスは、２００μｍＨｇにて３日間真空乾燥させた。本サンプルは５５７−１３−８として識別され、実施例１６と同様に薬剤放出について試験を行った。結果も図１９にプロットした。
【００７９】
これらの最後の実施例４つは、ポリマーコーティングをデバイスに施すことによって、薬剤放出の速度が装填済ポリマー円筒から制御できることを説明している。さらに、薬剤放出の速度は、デバイス中の薬剤装填のレベルを変更することによって制御できる。
【００８０】
本明細書の発明を詳細な実施形態を参照して説明したが、これらの実施形態は本発明の原理および用途の単なる例示であることが理解されるものとする。したがって、例示の実施形態には多くの変更を行うことができ、添付請求項によって定義されるように、本発明の精神および範囲を逸脱することなく、他の構成を案出できることが理解されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】大腿骨の髄腔内にインプラントされた、本発明の関節構成要素の等大図である。
【図２】ライン２−２に沿った、図１に示す補綴関節インプラントの断面図である。
【図３】関節構成要素内のリザーバーから出て、次に関節腔に流入する治療薬を描いた、インプラント後の図２に示す関節構成要素の断面図である。
【図４】関節液に部分的に侵食された生体再吸収性材料を備えた、図３に示す関節構成要素の断面図である。
【図５】大腿骨および脛骨構成要素を含む、補綴膝インプラントの等大図である。
【図６】治療薬をそこに有する生体吸収性／再吸収性ポリマー用のリザーバーを示す、図５に示す関節構成要素の断面図である。
【図７】膝関節腔内での治療薬の放出を示した、図６に示す関節構成要素の断面図である。
【図８】体液により部分的に再吸収された生体吸収性／再吸収性ポリマーを示す、図６の関節構成要素の断面図である。
【図９】実施例１〜４のシートおよびロッドから、所与の長さの時間にわたって放出されたブピバカインの量を示す。
【図１０】実施例１〜４のシートおよびロッドから、所与の長さの時間にわたって放出されたブピバカインの量を示す。
【図１１】実施例１〜４のシートおよびロッドから、所与の長さの時間にわたって放出されたブピバカインの量を示す。
【図１２】実施例１〜４のシートおよびロッドから、所与の長さの時間にわたって放出されたブピバカインの量を示す。
【図１３】実施例１〜４のシートおよびロッドから、所与の長さの時間にわたって放出されたブピバカインの量を示す。
【図１４】実施例５〜１９のシートおよびロッドから、所与の長さの時間にわたって放出されたブピバカインの量を示す。
【図１５】実施例５〜１９のシートおよびロッドから、所与の長さの時間にわたって放出されたブピバカインの量を示す。
【図１６】実施例５〜１９のシートおよびロッドから、所与の長さの時間にわたって放出されたブピバカインの量を示す。
【図１７】実施例５〜１９のシートおよびロッドから、所与の長さの時間にわたって放出されたブピバカインの量を示す。
【図１８】実施例５〜１９のシートおよびロッドから、所与の長さの時間にわたって放出されたブピバカインの量を示す。
【図１９】実施例５〜１９のシートおよびロッドから、所与の長さの時間にわたって放出されたブピバカインの量を示す。
【図２０】２００倍に拡大して示した、実施例５で作成されたサンプルの顕微鏡写真である。図２０Ａは、１０００倍に拡大して示した、実施例５で作成されたサンプルの顕微鏡写真である。
【図２１】２００倍に拡大して示した、実施例６で作成されたサンプルの顕微鏡写真である。図２１Ａは、１０００倍に拡大して示した、実施例６で作成されたサンプルの顕微鏡写真である。
【図２２】２００倍に拡大して示した、実施例７で作成されたサンプルの顕微鏡写真である。図２２Ａは、１０００倍に拡大して示した、実施例７で作成されたサンプルの顕微鏡写真である。
【図２３】２００倍に拡大して示した、実施例８で作成されたサンプルの顕微鏡写真である。図２３Ａは、１０００倍に拡大して示した、実施例８で作成されたサンプルの顕微鏡写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【外国語明細書】
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