(57)【要約】【課題】分子量４万の物質を低減した低温抽出による、水への溶解性、透明性に優れたアガリクス多糖体蛋白組成物を提供する。【解決手段】アガリクス茸を５〜７０℃で水を用いてエキスを抽出した後、エキス中から濃縮して得られた濃縮物をアルコール沈殿により−１０〜−３０℃で沈殿する沈殿物を分離分取して凍結乾燥して得られる抗腫瘍効果が高い多糖体蛋白組成物を製造する方法。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アガリクス茸を８０℃以下の低温でエキスを抽出した後、エキス中から濃縮して得られた濃縮物を−１０〜−３０℃の低温で沈殿分離することを特徴とする多糖体蛋白組成物を製造する方法。
【請求項２】
アガリクス茸の抽出溶剤として水を用い、抽出されたエキスをアルコールにより濃縮物を得ることを特徴とする請求項１記載の多糖体蛋白組成物を製造する方法。
【請求項３】
アガリクス茸の抽出温度が５〜７０℃であることを特徴とする請求項１記載の多糖体蛋白組成物。
【請求項４】
請求項１記載の製造方法で得られる多糖体蛋白組成物の分子量分布において４万以上の分画が９％以下であることを特徴とする多糖体蛋白組成物。
【請求項５】
前記多糖体蛋白組成物が抗腫瘍効果を示すことを特徴とする請求項４記載の多糖体蛋白組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明はアガリクスの抽出エキスから取り出した多糖体蛋白組成物とアガリクスの抽出エキスから多糖体蛋白組成物を取り出す方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アガリクスは学名  Ａｇａｒｉｃｕｓ  Ｂｌａｚｅｉ  Ｍｕｒｉｌ  であり、ブラジルのサンパウロ近郊で自生しているものを日本において栽培を検討されてきたものであるが、独特の苦みや自己消化性が高いために食用では使用されていないが、アガリクス茸とその抽出物は抗腫瘍効果を期待されるところから抗腫瘍機能食品として市場に出回っている。
【０００３】
また、アガリクス茸の抽出エキスの抗腫瘍性の成分については未だ確定していないがキノコの機能成分として一般的なβ−グルカンなどの多糖体にあると推定されている。
【０００４】
また、前記抗腫瘍性の成分の効果を高めるために有機溶媒中で高圧下で行う多段抽出法（特開２００１−８９３８８号公報）や抗腫瘍成分の抽出含量を向上させるために、アガリクス茸を微粒子にして加圧加熱する方法（特開２００２−３０１０１号公報）、およびアガリクス茸乾燥物の組織を高速ホモジナイザー等による物理的破砕処理又はセルラーゼ、キチナーゼ、β−グルコロニターゼの混合水溶液による酵素処理した後に加圧加熱する方法（特開２００１−１１２４３８号公報）などが提案されている。そして、アガリクスの抽出エキスの製造については、従来の技術は大半が高温下１００℃近くの熱水によりエキスを抽出する方法を用いていた。
【０００５】
また、アガリクス中に高機能性の成分があってもその成分は極微量しか含まれておらず、その成分にすべての機能が特定されていない。
【０００６】
しかし、水野らはアガリクス子実体の水抽出液をアルコール処理することで得られるアガリクス多糖体蛋白組成物（ＡＧＳＥ）に機能性の高い成分が濃縮されること等を報告している（水野卓、Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｉｍｅｓ  Ｖｏｌ．１，  Ｐａｇｅ１２，  １９８９）。
【０００７】
【特許文献１】
特開２００１−８９３８８号公報
【０００８】
【特許文献２】
特開２００２−３０１０１号公報
【０００９】
【特許文献３】
特開２００１−１１２４３８号公報
【００１０】
【非特許文献１】
水野卓、Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｉｍｅｓ  Ｖｏｌ．１，  Ｐａｇｅ１２，  １９８９
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
前記アガリクス多糖体蛋白組成物の製造には、これまでは収率を向上させるためアガリクスを熱水抽出し、抽出液を濃縮後、アルコールにより沈降させ、沈殿したものを濾過した後、乾燥する方法が用いられてきた。
【００１２】
上記従来技術の方法で製造した多糖体蛋白組成物は分子量の大きなものが多く、沈降物が多くなってアガリクスエキス多糖体蛋白組成物を水に溶解した時点で不溶解物が沈殿するなどの外観の悪さが認められている。特に高温下でアガリクスを抽出し、高温下で乾燥したものは沈降物が多く認められる。
【００１３】
本発明の課題は、高温下でのアガリクス抽出法により得られる前記不溶解物を減少させ、水への溶解性、透明性に優れたアガリクス多糖体蛋白組成物を得る改良法と該改良法で得られるアガリクス多糖体蛋白組成物を提供することである。
【００１４】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、アガリクス多糖体蛋白組成物を製造する上でアガリクス茸抽出物への加熱を短時間かつ低温にすることによって本発明の課題を達成することができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１５】
すなわち、本発明はアガリクス茸を８０℃以下の低温でエキスを抽出した後、エキス中から濃縮して得られた濃縮物を−１０〜−３０℃の低温で沈殿分離する抗腫瘍性効果が高い多糖体蛋白組成物を製造する方法である。
【００１６】
本発明では、アガリクス茸の抽出と抽出物の分離を低温で行うことで、目的物質の多糖体蛋白組成物中の高分子量のものを少なくすることができる。
【００１７】
水抽出温度は５〜７０℃が望ましく、また抽出エキスを−１０〜−３０℃で静置して生成する沈殿物を分離した後、凍結乾燥することが望ましい。
【００１８】
【作用】
本発明では、アガリクス多糖体蛋白組成物体の製造工程において抽出温度を低くして抽出後、蛋白質のアルコール沈殿分離処理も低温下で実施し、乾燥処理も凍結乾燥などにより加温することなく行い、粉体を得ることにより透明性に優れた沈殿物の少ないアガリクス多糖体蛋白組成物を得ることができた。
【００１９】
アガリクス多糖体蛋白組成物はアガリクス茸の水抽出エキスを濃縮し、アルコールを加えることによって多糖体蛋白質を濃縮して得られるものであり、粉末にしても吸湿性はあまり認められない。ただ通常のアガリクス茸のエキスの乾燥物は水に溶かした後に時間が経つと沈殿物を生じ、これらを摂取することは好ましくないものであった。本発明の製造方法を採用することによって、不溶性の沈殿物の原因となる高分子量の成分を減少させることが可能になった。
【００２０】
本発明の方法で、高分子量の多糖体蛋白組成物を減少させた水への溶解性、透明性に優れたアガリクス多糖体蛋白組成物を製造することができた。
【００２１】
【発明の実施の形態】
本発明の実施の形態について説明する。
本実施例の方法としては、アガリクス多糖体蛋白組成物はアガリクス茸を水抽出し得られたエキスを濃縮し、ブリックス３０％程度に調整した後に過剰のアルコールを加えて多糖体蛋白成分を沈降させて調製する。アガリクス茸は各種産地で効能が異なるようなことを言われているが遺伝子的にも機能的にもほとんど差はない。ブラジル原産であるが日本、台湾、中国での栽培品において化学的な組成も抗腫瘍活性の機能も大きな差はない。
【００２２】
乾燥アガリクス茸を５〜７０℃の範囲、最も好ましくは４０〜６０℃の範囲において２時間ずつ２回抽出を繰り返し、得られたエキス液をブリックス３０％まで濃縮した後、エキス溶液の半量〜２倍量の９５％アルコールを加え沈殿物を作る。アルコールの濃度や量は特に限定しないが、多糖体蛋白組成物が十分に沈降する条件を用いる。得られた沈殿物を濾過法により液体から分離し、これを凍結乾燥することによってアガリクス多糖体蛋白組成物が得られる。
【００２３】
前記乾燥温度は限定されるものではないが、比較的低温下で減圧で乾燥するのが好ましい。凍結乾燥法や常温下での真空乾燥が好ましい乾燥法である。
【００２４】
得られたアガリクス多糖体蛋白組成物はそのままの形状で包装されたり、練りだし顆粒やフローコーターでプルランなどのバインダーを用いて顆粒化し、そのままスティック充填するか打錠品に用いる。またそのまま粉末を所定の配合比で配合して各種食品に使用することができる。以下本発明の実施例を示すが、それらは本発明の範囲を制約するものではない。
【００２５】
実施例１（ＡＢ−ＰＧ（１））
アガリクス多糖体蛋白組成物は中国産アガリクス茸１５０ｋｇに１７００Ｌの水を加え、６０℃で２時間抽出する。抽出エキスはフィルター濾過して濃縮を行うが、濾過残渣に対してはさらに１４００Ｌの水を加え、再び６０℃で２時間抽出し、同様に濾過する。さらに、濾過残渣に対して８００Ｌの水を加え、６０℃で２時間抽出し、同様に濾過して、それぞれの濾液はまとめてブリックス３０％まで濃縮し、２６０Ｌのアガリクス抽出液を得る。これに９５％エチルアルコールを２６０Ｌ加え、−１５℃で一夜放置して沈殿を生じさせ、遠心分離機で沈殿物を分離した後、凍結乾燥する。得られた粉末は３ｋｇであった。
【００２６】
なお、アガリクス多糖体蛋白組成物を製造する上で前記手順によりそれぞれ抽出温度及び乾燥温度、乾燥時間を変更したものを製造し、水に溶解した後、それぞれの分子量分布を液体クロマトグラフによって測定した。その結果、表１に示すように、上記６０℃での抽出及び凍結乾燥により、分子量４万のアガリクス多糖体蛋白組成物の含有量を低減できることが判明した。
【００２７】
【表１】
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【００２８】
実施例２（ＡＢ−ＰＧ（２））
アガリクス多糖体蛋白組成物は中国産アガリクス茸１５０ｋｇに１７００Ｌの水を加え、６０℃で２時間抽出する。抽出エキスはフィルター濾過して濃縮を行うが、濾過残渣に対してはさらに１４００Ｌの水を加え、再び６０℃で２時間抽出し、同様に濾過する。さらに、濾過残渣に対して８００Ｌの水を加え、６０℃で２時間抽出し、同様に濾過して、それぞれの濾液はまとめてブリックス３０％まで濃縮し、２６０Ｌのアガリクス抽出液を得る。これに９５％エチルアルコールを２６０Ｌ加え、−１５℃で一夜放置して沈殿を生じさせ、遠心分離機で沈殿物を取り除き、さらに−２０℃で１週間放置後、遠心分離機で分離した沈殿物を、凍結乾燥する。得られた粉末は２８．５ｋｇであった。
【００２９】
比較例１（タカフミ法（１））
アガリクス多糖体蛋白組成物は中国産アガリクス茸２５０ｇに３Ｌの水を加え、一夜浸漬させた後、６０℃で１時間抽出する。抽出エキスは濾過して濃縮を行うが、濾過残渣に対してはさらに２．２５Ｌの水を加え、１２５℃で１時間抽出して濾過する。濾液はまとめてブリックス３０％まで濃縮し、４６０Ｌのアガリクス抽出液を得る。これに９９％エチルアルコールを４６０Ｌ加え、４℃で一夜放置して沈殿を生じさせ、遠心分離機で沈殿物を分離した後、凍結乾燥する。得られた粉末は１６．９ｇであった。
【００３０】
比較例２（タカフミ法（２））
アガリクス多糖体蛋白組成物は中国産アガリクス茸２５０ｇに３Ｌの水を加え、一夜浸漬させた後、６０℃で１時間抽出する。抽出エキスは濾過して濃縮を行うが、濾過残渣に対してはさらに２．２５Ｌの水を加え、１２５℃で１時間抽出して濾過する。濾液はまとめてブリックス３０％まで濃縮し、４６０Ｌのアガリクス抽出液を得る。これに９９％エチルアルコールを４６０Ｌ加え、−２０℃で一夜放置して沈殿を生じさせ、遠心分離機で沈殿物を分離した後、凍結乾燥する。得られた粉末は２１．４ｇであった。
【００３１】
比較例３（ＡＧＳＥ）
アガリクス多糖体蛋白組成物は中国産アガリクス茸６０ｋｇに７００Ｌの水を加え、１２５℃で１時間抽出する。抽出エキスはフィルター濾過して濃縮を行うが、濾過残渣に対してはさらに５５０Ｌの水を加え、再び１２５℃で１時間抽出し、同様に濾過する。濾液はまとめてブリックス３０％まで濃縮し、１００Ｌのアガリクス抽出液を得る。これに９５％エチルアルコールを８７．５Ｌ加え、４℃で一夜放置して沈殿を生じさせ、遠心分離機で沈殿物を分離した後、凍結乾燥する。得られた粉末は４．８ｋｇであった。
【００３２】
「アガリクス多糖体蛋白組成物の抗腫瘍効果試験」
（１）試験動物
６週齢のｌＣＲ雄性マウスを日本チャールス・リバー株式会社から購入し、１週間予備飼育した後、健康なマウスを実験に使用した。
【００３３】
（２）被検体
（ａ）ＡＢ−ＰＧ（実施例１）：６０℃抽出エキス、−１５℃沈殿物
（ｂ）ＡＢ−ＰＧ（実施例２）：実施例１のＡＢ−ＰＧ抽出後、更に一週間−２０℃沈殿物
（ｃ）ＡＢ−ＰＧ（比較例１）：６０℃抽出エキス＋１２５℃抽出エキス、４℃沈殿物
（ｄ）ＡＢ−ＰＧ（比較例２）：６０℃抽出エキス＋１２５℃抽出エキス、−２０℃沈殿物
（ｅ）ＡＧＳＥ（比較例３）：１２５℃抽出物
【００３４】
（３）ザルコーマ（Ｓａｒｃｏｍａ）１８０肉腫細胞移植マウスにおける各被検体投与による抗腫瘍効果
動物を１群８匹で７群構成し、１匹あたり１．０×１０細胞数のＳａｒｃｏｍａ１８０細胞を腹部皮下に移植した。癌移植翌日から、各被検体をそれぞれ３００ｍｇ／ｋｇ、２１日間連続投与し、癌容積量（長径×短径／２で算出）を測定した。２２日目に各群のマウスをエーテル麻酔下、頚椎脱によって屠殺し、腫瘍塊を摘出し、腫瘍塊の重量を測定した。その脾臓細胞はＮＫ細胞傷害活性の測定に用いた。
【００３５】
（４）各被検体投与によるＮＫ細胞傷害活性への影響
ＢＣＥＣＦ−ＡＭ標識ＹＡＣ−１細胞をエフェクター細胞に１０／ウエルの濃度でまき、プレート遠心し（４℃、８００ｒｐｍ、３分間）、３７℃、５％ＣＯ２条件下で、４時間培養する。４時間インキュベーションした後、プレートを遠心にかける（１０００ｒｐｍ、５分間）。すばやくプレートをさかさまにして上清をはじき落とし細胞部分から上清を取り除いた。そして、プレートを乾かしてからそれぞれのウエルにｐＨ９．０の０．１％トリトンＸ−１００ほう酸緩液２００μ１を添加する。１０分間室温でインキュベーションして蛍光光度法：ＣｙｔｏＦＩｕｏｒＴＭ２３５０（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ）で各ウエルの蛍光を測定した。励起フィルターは４８５ｎｍの波長フィルターで、発光フィルターは５３０ｎｍの波長フィルターである。最大蛍光量はエフェクターを加えないウエルで得、最小蛍光量は標的細胞を加えないウエルで得る。細胞障害活性は以下のように計算した。
【００３６】
細胞傷害活性（％）＝｛１−［（実験群の平均蛍光値−最小蛍光値の平均）／（最大蛍光値の平均−最小蛍光値の平均）］｝×１００
【００３７】
（５）実験結果および考察
各被検体は表２に示すように何れも癌容積量および癌重量を抑制することを見出し、その作用が最も強い画分はＡＢ−ＰＧ（実施例１）であることが分かった。
【００３８】
各被検体の抗腫瘍効果の強さは、
ＡＢ−ＰＧ（実施例１）＞タカフミ法１ＡＢ−ＰＧ（比較例１）＞ＡＢ−ＰＧ（実施例２）＞タカフミ法２ＡＢ−ＰＧ（比較例２）＞ＡＧＳＥ（比較例３）
の順であった。
【００３９】
一方、図１に示すようにＮＫ細胞傷害活性もＡＢ−ＰＧ（実施例１）群が一番高いことが分かった。
なお、図１のコントロールは正常マウスが示す値であり、２番目の棒グラフはザルコーマ（Ｓａｒｃｏｍａ）１８０肉腫細胞移植マウスに被検体を投与しなかった場合の結果である。
【００４０】
以上のことはアガリクスの抗腫瘍作用においてその低温抽出画分が重要な役割を果たしていることを示している。
【００４１】
【表２】
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【００４２】
【発明の効果】
アガリクス多糖体蛋白組成物を製造する上で抽出温度、乾燥温度を低温にし極力加熱しないで製造することによって通常の製造方法で得られるアガリクス多糖体蛋白組成物に比べて極めて水溶性、透明性に優れ、そして分子量分布の低い多糖体蛋白組成物を得ることに成功した。
【図面の簡単な説明】
【図１】Ｓａｒｃｏｍａ１８０担癌マウスにおけるＮＫ活性に対するアガリクス抽出画分の影響を示す図である。
【図１】
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【手続補正書】
【提出日】平成15年3月12日(2003.3.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アガリクス茸を８０℃以下の低温でエキスを抽出した後、エキス中から濃縮して得られた濃縮物を−１０〜−３０℃の低温で沈殿分離することを特徴とする多糖体蛋白組成物を製造する方法。
【請求項２】
アガリクス茸の抽出溶剤として水を用い、抽出されたエキスをアルコールにより濃縮物を得ることを特徴とする請求項１記載の多糖体蛋白組成物を製造する方法。
【請求項３】
アガリクス茸の抽出温度が５〜７０℃であることを特徴とする請求項１記載の多糖体蛋白組成物を製造する方法。
【請求項４】
請求項１記載の製造方法で得られる多糖体蛋白組成物の分子量分布において４万以上の分画が９％以下であることを特徴とする多糖体蛋白組成物。
【請求項５】
前記多糖体蛋白組成物が抗腫瘍効果を示すことを特徴とする請求項４記載の多糖体蛋白組成物。