(57)【要約】【課題】統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型遺伝子（ＧＲＭ７）における統合失調症に関連する新規ＳＮＰおよびその同定方法を提供すること。【解決手段】統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型遺伝子（ＧＲＭ７）内の新規一塩基多型（ＳＮＰ）と、既知ＳＮＰ（ｒｓ１５６９２８６）との間で多型解析を行った結果、その遺伝子の塩基番号５０６８５２の塩基シトシン（Ｃ）が塩基グアニン（Ｇ）に置換しているＳＮＰが統合失調症に対して有意の関連があった。つまり、各ＳＮＰにおいて罹患群と健常群との間でアレル頻度を比較したところ、統合失調症と有意の関連があった（ｐ＝０．００９９）。また、２個のＳＮＰによるハプロタイプを構築して、連鎖不平衡解析をしたところ、同様に統合失調症と有意の関連があった（ｐ＝０．００６９）。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型遺伝子の塩基番号５０６８５２の塩基シトシン（Ｃ）が塩基グアニン（Ｇ）に置換していることを特徴とする統合失調症関連一塩基多型。
【請求項２】
請求項１に記載する統合失調症関連一塩基多型を含むことを特徴とする統合失調症関連ＤＮＡフラグメント。
【請求項３】
請求項２に記載する統合失調症関連ＤＮＡフラグメントにおいて、前記ＤＮＡフラグメントが、配列表の配別番号１で示す、塩基番号５０６８４１から塩基番号５０６８６０までの領域からなることを特徴とする統合失調症関連ＤＮＡフラグメント。
【請求項４】
請求項１に記載する統合失調症関連一塩基多型を含むことを特徴とする統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型遺伝子。
【請求項５】
請求項２または３に記載する統合失調症関連ＤＮＡフラグメントを含むことを特徴とする統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型遺伝子。
【請求項６】
統合失調症関連一塩基多型が、カイ二乗試験による連鎖解析によって遺伝子型頻度が有意差を有している請求項１ないし５のいずれか１項に記載する統合失調症関連一塩基多型であることを特徴とする統合失調症関連一塩基多型。
【請求項７】
統合失調症関連一塩基多型が、フィッシャー完全確率試験による関連解析によってアルレ頻度が有意差を有している請求項１ないし５のいずれか１項に記載する統合失調症関連一塩基多型であることを特徴とする統合失調症関連一塩基多型。
【請求項８】
請求項６または７に記載する統合失調症関連一塩基多型含むことを特徴とする統合失調症関連ＤＮＡフラグメント。
【請求項９】
請求項８に記載する統合失調症関連ＤＮＡフラグメントにおいて、前記ＤＮＡフラグメントが、配列表の配別番号１で示す、塩基番号５０６８４１から塩基番号５０６８６０までの領域からなることを特徴とする統合失調症関連ＤＮＡフラグメント。
【請求項１０】
請求項６または７に記載する統合失調症関連一塩基多型を含むことを特徴とする統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型遺伝子。
【請求項１１】
請求項８または９に記載する統合失調症関連ＤＮＡフラグメントを含むことを特徴とする統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型遺伝子。
【請求項１２】
請求項１ないし１１のいずれか１項に記載する統合失調症関連一塩基多型をカイ二乗試験での連鎖解析による遺伝子型頻度によって同定することを特長とする統合失調症関連一塩基多型の同定方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載する統合失調症関連一塩基多型の同定方法において、前記遺伝子型頻度が有意差を有していることを特徴とする統合失調症関連一塩基多型の同定方法。
【請求項１４】
請求項１ないし１１のいずれか１項に記載する統合失調症関連一塩基多型をフィッシャー完全確率試験での関連解析によるアルレ頻度によって同定することを特長とする統合失調症関連一塩基多型の同定方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載する統合失調症関連一塩基多型の同定方法において、前記アルレ頻度が有意差を有していることを特徴とする統合失調症関連一塩基多型の同定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体遺伝子内一塩基多型（Ｓｉｎｇｌｅ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ：ＳＮＰ）を含むＤＮＡフラグメントおよびその同定方法に関し、更に詳細には、統合失調症に関連する代謝型グルタミン酸７型受容体遺伝子（ＧＲＭ７）内の統合失調症関連一塩基多型（ＳＮＰ）を含むＤＮＡフラグメントおよびその同定方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
統合失調症は、妄想、幻想、無秩序な思考ならびに種々の認知障害によって特徴づけられる精神疾患である。グルタミン酸神経伝達系の機能障害が統合失調症の病因に関連しているということは、統合失調症の病因についての主要な仮説である。Ｎ−メチル−Ｄ−アスパルテ−ト  （ＮＭＤＡ）  型代謝型グルタミン酸受容体の非拮抗型アンタゴニストであるフェンシクリジン（ＰＣＰ）は、健常人ならびに動物モデルにおいて統合失調症に似た陽性ならびに陰性双方の統合失調症様症状を惹起すると共に、統合失調症患者における既往症状を悪化させる  （ＪａｖｉｔｔＤＣ，  Ｚｕｋｉｎ  ＳＲ．  Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｈｅｎｃｙｃｌｉｄｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ．  Ａｍ  Ｊ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １９９１；  １４８：  １３０１−１３０８（非特許文献１）；  Ｌｕｂｙ  ＥＤ，  ＣｏｈｅｎＢＤ，  Ｒｏｓｅｎｂａｕｍ  Ｇ，  Ｇｏｔｔｌｉｅｂ  ＪＳ，  Ｋｅｌｌｅｙ  Ｒ．  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｏｍｉｍｅｔｉｃ  ｄｒｕｇ−ｓｅｒｎｙｌ．  Ａｍ  Ｍｅｄ  Ａｓｓｏｃ  Ａｒｃｈ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １９５９；  ８１：  ３６３−３６９（非特許文献２））。この統合失調症様症状は、代謝型グルタミン酸受容体のアゴニストにより抑制される。また、代謝型グルタミン酸受容体のアコ゛ニストは、ＰＣＰの精神病効果を軽減するとの報告がある（Ｍｏｇｈａｄｄａｍ  Ｂ，  Ａｄａｍｓ  Ｂ，  Ｖｅｒｍａ  Ａ，  Ｄａｌｙ  Ｄ（１９９７）  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｕｔａｍａｔｅｒｇｉｃ  ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｋｅｔａｍｉｎｅ：  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｔｅｐ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｗａｙ  ｆｒｏｍ  ＮＭＤＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｔｏ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ａｎｄ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｐｒｅｆｒｏｎｔａｌ  ｃｏｒｔｅｘ．  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  １７：  ２９２１−２９２７（非特許文献３）；  Ｍｏｇｈａｄｄａｍ  Ｂ，  Ａｄａｍｓ  ＢＷ：  Ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｐｈｅｎｃｙｃｌｉｄｉｎｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｂｙ  ａ  ｇｒｏｕｐ  ＩＩ  ｍｅｔａｂｏｔｒｏｐｉｃ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｉｎ  ｒａｔｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８１：  １３４９−１３５２（非特許文献４））。したがって、代謝型グルタミン酸受容体をコードする遺伝子は統合失調症患者の疾患感受性遺伝子としての有力な候補である。
【０００３】
統合失調症は、ＮＭＤＡ受容体のＮＲ２ＢサブユニットをコードするＮＭＤＡＲ２Ｂ遺伝子のイントロン多型と関連があることが報告されている（Ｏｈｔｓｕｋｉ  Ｔ，Ｓａｋｕｒａｉ  Ｋ，  Ｄｏｕ  Ｈ，  Ｔｏｒｕ  Ｍ，  Ｙａｍａｋａｗａ−Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｋ，  Ａｒｉｎａｍｉ  Ｔ．  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＮＭＤＡＲ２Ｂ  （ＧＲＩＮ２Ｂ）  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ．  Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２００１；  ６：２１１−２１６（非特許文献５））。代謝型グルタミン酸受容体は、主に前節端に分布しているので、ＮＭＤＡ受容体のような後節代謝型グルタミン酸受容体の機能を規制する。ＰＣＰによって生起される統合失調症様症状はまた代謝型グルタミン酸受容体グループＩＩ、つまりｍＧｌｕＲ２およびｍＧｌｕＲ３に対する特異的アゴニストによって軽減する。したがって、グループＩＩであるｍＧｌｕＲは、統合失調症の病理発生に関係する候補分子である。日本人においては、代謝型グルタミン酸受容体２型遺伝子（ＧＲＭ２）は統合失調症とは何ら関連性を有していないことを報告した。
【０００４】
また、他のクラスの代謝型グルタミン酸受容体遺伝子、つまりＧＲＭ４、ＧＲＭ５、ＧＲＭ７およびＧＲＭ８についての関連解析の報告はされているが、ＧＲＭ５中の１つのＳＮＰだけが統合失調症と関連があることが観察されているだけである。
【非特許文献１】Ｊａｖｉｔｔ  ＤＣ，  Ｚｕｋｉｎ  ＳＲ．  Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｈｅｎｃｙｃｌｉｄｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ．  Ａｍ  Ｊ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １９９１；  １４８：  １３０１−１３０８
【非特許文献２】Ｌｕｂｙ  ＥＤ，  Ｃｏｈｅｎ  ＢＤ，  Ｒｏｓｅｎｂａｕｍ  Ｇ，  Ｇｏｔｔｌｉｅｂ  ＪＳ，  Ｋｅｌｌｅｙ  Ｒ．  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｏｍｉｍｅｔｉｃ  ｄｒｕｇ−ｓｅｒｎｙｌ．  Ａｍ  Ｍｅｄ  Ａｓｓｏｃ  Ａｒｃｈ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １９５９；  ８１：  ３６３−３６９
【非特許文献３】Ｍｏｇｈａｄｄａｍ  Ｂ，  Ａｄａｍｓ  Ｂ，  Ｖｅｒｍａ  Ａ，  Ｄａｌｙ  Ｄ  （１９９７）  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｕｔａｍａｔｅｒｇｉｃ  ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｋｅｔａｍｉｎｅ：  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｓｔｅｐ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｗａｙ  ｆｒｏｍ  ＮＭＤＡ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｔｏ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ａｎｄ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｐｒｅｆｒｏｎｔａｌ  ｃｏｒｔｅｘ．  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  １７：  ２９２１−２９２７
【非特許文献４】Ｍｏｇｈａｄｄａｍ  Ｂ，  Ａｄａｍｓ  ＢＷ：  Ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｐｈｅｎｃｙｃｌｉｄｉｎｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｂｙ  ａ  ｇｒｏｕｐ  ＩＩ  ｍｅｔａｂｏｔｒｏｐｉｃ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｉｎ  ｒａｔｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８１：  １３４９−１３５２
【非特許文献５】Ｏｈｔｓｕｋｉ  Ｔ，  Ｓａｋｕｒａｉ  Ｋ，  Ｄｏｕ  Ｈ，  Ｔｏｒｕ  Ｍ，  Ｙａｍａｋａｗａ−Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  Ｋ，  Ａｒｉｎａｍｉ  Ｔ．  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＮＭＤＡＲ２Ｂ  （ＧＲＩＮ２Ｂ）  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ．  Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ２００１；  ６：２１１−２１６
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明者らは、統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型（ｍＧｌｕＲ７）の遺伝子（ＧＲＭ７）と統合失調症との関連性について鋭意検討した結果、その遺伝子中の新規ＳＮＰがその関連解析において有意差を有することを見出して、この発明を完成するに至った。
【０００６】
したがって、この発明は、代謝型グルタミン酸受容体７型（ｍＧｌｕＲ７）の遺伝子（ＧＲＭ７）内に存在する、統合失調症に関連する新規一塩基多型（ＳＮＰ）を提供することを目的としている。
この発明は、かかる新規一塩基多型（ＳＮＰ）を含むＤＮＡフラグメントを提供することを別の目的とする。
また、この発明は、上記一塩基多型（ＳＮＰ）またはＤＮＡフラグメントを含む統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型遺伝子を提供することを目的としている。
【０００７】
更に、この発明は、代謝型グルタミン酸受容体７型（ｍＧｌｕＲ７）の遺伝子（ＧＲＭ７）内の新規一塩基多型（ＳＮＰ）を統計的手法によって同定することからなる統合失調症関連一塩基多型の同定方法を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために、この発明は、その一つの態様として、統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型遺伝子の塩基番号５０６８５２の塩基シトシン（Ｃ）が塩基グアニン（Ｇ）に置換している統合失調症関連一塩基多型を提供する。
この発明は、その好ましい態様として、カイ二乗試験による連鎖解析によって遺伝子型頻度が、および／または、フィッシャー完全確率試験による関連解析によってアルレ頻度が、有意差を有している統合失調症関連一塩基多型を提供する。
【０００９】
この発明は、その別の態様として、かかる統合失調症関連一塩基多型を含む統合失調症関連ＤＮＡフラグメントを提供する。
また、この発明は、その好ましい態様として、かかる統合失調症関連一塩基多型を含む、配列表の配別番号１で示す、塩基番号５０６８４１から塩基番号５０６８６０までの領域からなる統合失調症関連ＤＮＡフラグメントを提供する。
【００１０】
この発明は、また別の態様として、上記統合失調症関連一塩基多型または統合失調症関連ＤＮＡフラグメントを含む統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型遺伝子を提供する。
【００１１】
この発明は、その更に別の態様として、上記統合失調症関連一塩基多型をカイ二乗試験での連鎖解析による遺伝子型頻度および／またはフィッシャー完全確率試験での関連解析によるアルレ頻度によって同定することからなる統合失調症関連一塩基多型の同定方法を提供する。
また、この発明は、その好ましい１つの態様として、上記遺伝子型頻度および／またはアルレ頻度が有意差を有している統合失調症関連一塩基多型を同定することからなる統合失調症関連一塩基多型の同定方法を提供する。
【００１２】
【発明の実施の態様】
この発明に係る統合失調症関連一塩基多型（ＳＮＰ）は、統合失調症に関連した代謝型グルタミン酸受容体７型（ｍＧｌｕＲ７）の遺伝子（ＧＲＭ７）内のＳＮＰであって、エクソン４とエクソン５との間に存在する第６イントロン内にあり、かつ、エクソン４の最後の塩基から４５９９４塩基下流にある塩基番号５０６８５２のシトシン（Ｃ）がグアニン（Ｇ）に置換された新規なＳＮＰである。なお、塩基番号５０６８５２はＮＣＢＩのデーターベースのＬｏｃｕｓＩＤ２９１７で示されている７３２３１２２に相当する。
【００１３】
この発明の別の態様である統合失調症関連ＤＮＡフラグメントは、上記統合失調症関連一塩基多型（ＳＮＰ）を含む任意の数の塩基（ただし、塩基の数は４個以上である）を有するＤＮＡフラグメントである。配列表の配列番号１には、塩基番号５０６８４１から塩基番号５０６８６０までの塩基数２０のＤＮＡフラグメントを示している。しかし、この発明に係るＤＮＡフラグメントは、その塩基数がこれに限定されるものではなく、上記統合失調症関連一塩基多型（ＳＮＰ）を含むこの発明の目的に適うＤＮＡフラグメントであれば、いずれのＤＮＡフラグメントであってもよく、例えば、塩基番号５０６４６１から塩基番号５０７１８０までの領域であるＤＮＡフラグメントなどを挙げることができる。
【００１４】
統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型（ｍＧｌｕＲ７）の遺伝子（ＧＲＭ７）は、染色体３ｐ２６．１−ｐ２５．２に存在する全長約６００ｋｂの遺伝子であり、９個のエクソンを有している。なお、塩基配列情報は、ＮＣＢＩ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ＡＣＣＥＳＳＩＯＮ  Ｎｏ．＃  ＮＴ−００５９２７  Ｌｏｃｕｓ  ＩＤ：２９１７から取得した。
この発明の別の態様である統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型遺伝子（ＧＲＭ７）は、代謝型統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型遺伝子であって、そのエクソン４とエクソン５との間に存在する第６イントロン内にあり、かつ、エクソン４の最後の塩基から４５９９４塩基下流にある塩基番号５０６８５２のシトシン（Ｃ）がグアニン（Ｇ）に置換された新規なＳＮＰを有するものである。
【００１５】
この発明に係る統合失調症関連一塩基多型（ＳＮＰ）のゲノタイピングは、例えば、ダイレクトシークエンシング法、ＲＦＬＰ法  （Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  Ｌｅｎｇｔｈ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）  などによって決定することができる。このＳＮＰの塩基配列は、当該技術分野における常法に従ってシークエンサーを用いて行うことができる。また、ＰＣＲも当該技術分野における常法に従って行うことができる。
【００１６】
次に、上記のようにしてタイピングした疾患患者グループと健常者グループとのＳＮＰに対して、ゲノタイプとアルレ頻度との統計学的差を統計学的手法によって評価する。かかる統計学的手法としては、たとえば、カイ二乗（χ２）試験やフィッシャー完全確率試験（Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ｅｘａｃｔ  ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ  ｔｅｓｔ）などが挙げられる。
更に、一塩基多型間のハプロタイプ頻度は、例えば、  ＥＨ  プログラム  ｖｅｒｓｉｏｎ１．１４  などによって推定し、両群間での有意差を、Ｔｅｒｗｉｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｏｔｔｏ  （Ｔｅｒｗｉｌｌｉｇｅｒ  Ｊ，  Ｏｔｔ  Ｊ．  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｌｉｎｋａｇｅ．  Ｊｏｈｎｓ  Ｈｏｐｋｉｎｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ  １９９４）らの方法によって行うことができる。なお、有意差の基準はｐ＝０．０５とした。
【００１７】
【実施例】
この発明を実施例によって更に詳細に説明する。なお、下記実施例は、この発明を何ら制限するものではなく、単に例示として説明するものである。
実施例１：
（検体）
統合失調症患者１００例および健常者１００例の末梢血白血球から抽出したＤＮＡを用いた。
（ＳＮＰ選択）
健常者１６名に対して、第６イントロンの１部の塩基配列をダイレクトシークエンシング法により決定したところ、新たなＣ／ＧのＳＮＰ（以下、「ＳＮＰ１」という）を見出した。このＳＮＰ１のアレル頻度は４７．３％であった。
（ＤＮＡ増幅）
上記にて選択したＳＮＰ１は、常法にしたがって、プライマーを用いて反応させてＰＣＲフラグメントを増幅した。ＰＣＲは、テンプレートＤＮＡ  ５  ｎｇ、各プライマー  １０  ｐｍｏｌ、適量のＭｇＣｌ２、各ｄＮＴＰ  ２５０  μＭ、Ｔａｑ  ＤＮＡ  ０．２５  単位を含む反応溶液  １０  μｌ中で  Ｇｅｎｅ  Ａｍｐ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ  ９７００  （Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  社製）を用いて行った。用いたＰＣＲのプライマーおよび温度条件を下表１に示した。
また、既知のＳＮＰ（ｒｓ１５６９２８６）についても同様に処理してＰＣＲフラグメントを増幅した。用いたＰＣＲのプライマーおよび温度条件を下表１に示した。
【００１８】
【表１】
2004166615.tif 000002
【００１９】
（ＳＮＰの遺伝子型頻度を用いた関連解析）
統合失調症患者１００例および健常者１００例につき、上記ＳＮＰを、ダイレクトシークエンシング法によってゲノタイピングを行った。ＰＣＲ生産物は、Ｅｘｏ−ＳＡＰ−ＩＴ  （ＵＳＢ  社製）  を用いて精製した後、ＡＢＩ  ｐｒｉｓｍ  ＢｉｇＤｙｅ  Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ  Ｃｙｃｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｋｉｔ  （  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  社製）  を用いて  ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ３１００  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  （Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）  でダイレクトシークエンスした。
【００２０】
（統計分析）
統合失調症患者群と健常者群の間のＳＮＰの遺伝子型頻度はカイ二乗（χ２）試験によって評価した。また、統合失調症患者群と健常者群の間のアレル頻度の統計学的差はフィッシャー完全確率試験によって評価した。
上記ＧＲＭ７のＳＮＰの遺伝子型頻度およびアレル頻度の結果を下表２に示す。
【００２１】
【表２】
2004166615.tif 000003
【００２２】
統合失調症患者１００例と健常者１００例についてゲノタイピングを行って得た表２の結果から、統合失調症患者群と健常者群との間で遺伝子型頻度およびアルレ頻度の差は共に有意差があることが認められた（いずれもｐ＝０．００９９）。
ちなみに、既知ＳＮＰ  （ｒｓ１５６９２８６）  のみでは、遺伝子多型頻度およびアレル頻度において有意差は認められなかった（ｐ＝０．４１４６およびｐ＝０．５３８１；表２参照）。
なお、ｏｄｄ比を算出すると、アレルＧはＣに対して１．７４（９５％信頼区間（１．１５９、２．６２２））であり、遺伝子型ＧＧはＧＣおよびＣＣに対して２．４５（９５％信頼区間（１．３６７、４．３８８））であった。
【００２３】
更に、第２イントロンに位置する既知ＳＮＰ  （ｒｓ１５６９２８６）  のゲノタイピングを常法に従って行い、上記ＳＮＰ１とハプロタイプを構築して関連解析を行ったところ有意差  （ｐ＝０．００６９）  があることが認められた。
なお、ハプロタイプ頻度は  ＥＨ  プログラム  ｖｅｒｓｉｏｎ  １．１４  によって推定した。ハプロタイプ関連性研究に対する統計的分析は、Ｔｅｒｗｉｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｏｔｔｏ  （Ｔｅｒｗｉｌｌｉｇｅｒ，  Ｊ．  ａｎｄ  Ｏｔｔｏ，  Ｊ：  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｌｉｎｋａｇｅ；  Ｊｏｈｎ  Ｈｏｐｋｉｎｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，  １９９４）記載の方法によって行った。すべての統計テストの有意差レベルは０．０５であった。
【００２４】
【発明の効果】
上記したように、この発明においては、統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型遺伝子（ＧＲＭ７）の全体を連鎖不平衡ブロックでカバーするようにＮＣＢＩデーターベースから約５０ｋｂ毎に１０個のｉＳＮＰと２個のｃＳＮＰを選択し、更にこの発明に係る新規ｉＳＮＰとを合わせて、合計１３個のＳＮＰ（平均ヘテロ接合度０．３３）を用いた多型解析を行った。日本人統合失調症患者および健常者それぞれ１００検体を用い、各ＳＮＰにおいて罹患群と健常群との間でアレル頻度を比較したところ、この発明に係る新規ｉＳＮＰのアレル頻度が統合失調症と有意の関連があることが判明した（ｐ＝０．００９９）。
また、各ＳＮＰ間でのハプロタイプを構築して、連鎖不平衡解析によるＧＲＭ７と統合失調症との関連解析を行った。その結果、２個のＳＮＰによるハプロタイプ頻度においても統合失調症と有意の関連が認められた（ｐ＝０．００６９）。
したがって、この発明に係る統合失調症関連代謝型グルタミン酸受容体７型遺伝子（ＧＲＭ７）は、日本人統合失調症の疾患感受性遺伝子であることが示唆されている。
【００２５】
【配列表】
2004166615.tif 000004