(57)【要約】【課題】皮膚に有効な成分を多く含むと同時に高い安全性を有し、さらに皮膚を滑らかにし、毛髪を保護する作用をも有する組成物を提供すること並びにこれらの機能を有する化粧品類、医薬品類、医薬部外品類、浴用剤を提供することを課題とする。【解決手段】クリ渋皮発酵物及び当該発酵物の抽出物からなる化粧品組成物を提供する。本発明のクリ渋皮発酵物及び当該発酵物の抽出物は、高い美白効果、抗菌活性、コラゲナーゼ阻害活性、エラスターゼ阻害活性、抗酸化活性、リパーゼ阻害活性、抗菌効果を有し、これを化粧品類、医薬品類、医薬部外品類、浴用剤に配合する事により、有用な効果がもたらされる。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
クリ種子の渋皮発酵物を配合することを特徴とする化粧品組成物。
【請求項２】
クリ種子の渋皮発酵物を美白剤、老化防止剤、リパーゼ阻害剤及び／又は抗菌剤として配合することを特徴とする請求項１記載の化粧品組成物。
【請求項３】
クリ種子の渋皮発酵物を、水、アルコール、多価アルコール、またはそれらの混合溶媒で抽出して得られる抽出物を配合することを特徴とする化粧品組成物。
【請求項４】
クリ種子の渋皮発酵物を、水、アルコール、多価アルコール、またはそれらの混合溶媒で抽出して得られる抽出物を美白剤、老化防止剤、リパーゼ阻害剤及び／又は抗菌剤として配合することを特徴とする請求項３記載の化粧品組成物。
【請求項５】
クリ種子の植物がニホングリ（Ｃａｓｔａｎｅａ  ｃｒｅｎａｔａ  Ｓｉｅｂ．  ｅｔ  Ｚｕｃｃ．）の種子であることを特徴とする請求項１〜４記載の化粧品組成物。
【請求項６】
老化防止剤がマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、エラスターゼ阻害剤、抗酸化剤のうちから選ばれる一種又は二種以上であることを特徴とする請求項２又は４記載の化粧品組成物。
【請求項７】
渋皮発酵物が黄麹菌（アスペルギルス  オリゼー）を用いて発酵した発酵物であることを特徴とする請求項１〜６記載の化粧品組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、発酵させたクリの渋皮又は発酵させたクリの渋皮からの抽出物を皮膚化粧品や毛髪化粧品に配合することにより、高い安全性を維持しながら、皮膚に潤いを与えると共に皮膚を滑らかにし、毛髪を保護する作用を有するものであり、例えば化粧品類（人及びその他の動物に用いる各種製剤）、医薬品類、医薬部外品類、浴用剤などに用いることが出来る。
【０００２】
【従来の技術】
クリはぶな科の植物で、世界各地の温帯地域で広く栽培されている落葉高木で、その種子は食用となっている。中でも、アジア原産のニホングリ（Ｃａｓｔａｎｅａ  ｃｒｅｎａｔａ  Ｓｉｅｂ．  ｅｔ  Ｚｕｃｃ．）とチュウゴクグリ（Ｃａｓｔａｎｅａ  ｍｏｌｌｉｓｓｉｍｓ  Ｂｌ．）、ヨーロッパのヨーロッパグリ（欧州グリ、Ｃａｓｔａｎｅａ  ｓａｔｉｖａ  Ｍｉｌｌ）、北アメリカのアメリカグリ（Ｃａｓｔａｎｅａ  ｄｅｎｔａｔｅ  Ｂｏｒｋｈ．）が食用に広く栽培されている。種子は、鬼皮、渋皮、子葉から構成されており、食用となるのは子葉だけであり、鬼皮及び渋皮はほとんど利用されることがなく、廃棄されているのが現状である。近年、渋皮発酵物を食品に利用する試みがなされているが、まだ一部が利用されているだけである。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題はクリ渋皮発酵物及びクリ渋皮発酵物の抽出物を配合した新規な化粧料を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記目的を達成するために鋭意研究を重ねた結果、クリ渋皮発酵物及び当該発酵物の抽出物は、高い美白効果、抗菌活性、コラゲナーゼ阻害活性、エラスターゼ阻害活性、抗酸化活性、リパーゼ阻害活性、抗菌効果を示し、皮膚に有効な成分を多く含むと同時に高い安全性を有し、さらに皮膚を滑らかにし、毛髪を保護する作用をも有することを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、発酵させたクリの渋皮配合の化粧料又は発酵させたクリの渋皮を水、アルコール類、またはそれらの混合溶媒で抽出して得られるクリ渋皮発酵物の抽出物配合の化粧料である。
【０００４】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の化粧料の有効成分であるクリ渋皮発酵物及びクリ渋皮発酵物の抽出物は、ぶな科に属するクリの渋皮であれば、栽培種、野生種など特に限定はされないがニホングリが好適に使用される。クリ渋皮の発酵は、通常４０％程度の水分を含むクリ渋皮を水分２０％〜６０％の条件下で発酵させることが望ましい。発酵は自然に堆積するだけでもクリ渋皮に付着している菌により進行するが、黄麹菌（アスペルギルスオリゼー）を加えて糖化後発酵を進めることが望ましい。発酵条件は１０〜４０℃で１週間〜１年で実施するのが好ましく、さらに望ましくは２０℃〜３０℃で１〜４ヶ月実施するのが好ましい。
【０００５】
クリ渋皮発酵物は、発酵の終了した渋皮を洗浄、乾燥、粉砕、殺菌処理などを実施するのが好ましい。クリ渋皮発酵物はいずれの形状であっても化粧品に配合することが可能であるが、粉末状としたものを配合することが好ましい。
クリ渋皮発酵物抽出物は、発酵させたクリの渋皮を水、アルコール類、水、多価アルコール類、またはそれらの混合物を使用して、抽出することによって調製することが可能であり、それらを溶液状で使用することも可能であるが、それら溶液を乾燥して得られる粉体状の製品も化粧品に使用することが出来る。また、クリ渋皮発酵物の抽出においては、水のかわりに緩衝液や、希酸および希アルカリを使用することも可能である。
【０００６】
クリ渋皮発酵物はそのままでも抽出可能であるが、洗浄、殺菌、乾燥、粉砕処理をしてから抽出に供しても良く、抽出効率から考えて乾燥、粉砕処理を実施することが望ましい。
抽出溶媒としては、水、またはアルコール類の混合溶媒を使用する。アルコール類としては、一価アルコール、多価アルコールのいずれも使用できる。具体的には一価アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、ブチルアルコール、イソブチルアルコール、ベンジルアルコールなどが、多価アルコール類としては、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコールなどが挙げられる。抽出溶媒として水とアルコール類の混合溶媒を使用する場合は、アルコール濃度が１０〜９０％とすることが望ましい。具体的には、エタノール濃度が２０〜７０％の含水エタノール、１，３−ブチレングリコール濃度が２０〜７０％の含水１，３−ブチレングリコールなどの溶媒が好適に使用される。
【０００７】
抽出操作は特に限定されないが、例えばクリ渋皮発酵物１重量部に対し、抽出溶媒を５〜２００重量倍を用いて行うことが好ましい。また、さらに好ましくは抽出溶媒を１０〜１００重量倍を用いて行うことが好ましい。
抽出温度および抽出時間は、抽出溶媒によって異なるが、含水エタノール（エタノール濃度２０〜７０％）では２０〜６０℃で、１時間〜２週間、含水１，３−ブチレングリコール（１，３−ブチレングリコール濃度２０〜７０％）では２０〜１００℃で、１時間〜２週間抽出することが望ましい。
抽出されたクリ渋皮発酵物抽出物はそのままでも使用可能であるが、さらに濾過、遠心分離等の工程により精製するのが好ましい。多くの場合は、そのままの状態で利用できるが、必要ならば、その効果に影響のない範囲で更に脱臭、脱色などの精製処理を加えても良く、脱臭・脱色等の精製処理手段としては、活性炭カラムなどを用いれば良く、抽出物質により一般的に適用される通常の手段を任意に選択して行えば良い。また、得られたクリ渋皮発酵物抽出物を凍結乾燥法、スプレードライ法などの熱乾燥法により乾燥物として得ることも可能である。
【０００８】
こうして得られたクリ渋皮発酵物及びクリ渋皮発酵物抽出物は、高い美白効果、抗菌活性、コラゲナーゼ阻害活性、エラスターゼ阻害活性、抗酸化活性、リパーゼ阻害活性、抗菌効果を示す。
特にコラゲナーゼ阻害活性、エラスターゼ阻害活性、抗酸化活性は老化防止に関連深い因子とされる。
近年、皮膚の老化は光老化と自然老化に分けて考えられるようになっている。自然老化は加齢が進むに従って進行するのに対し、光老化は紫外線の曝露によって進行することから、その防御が重要な課題となっている。光老化を防御するには、紫外線曝露により生成した活性酸素の消去、活性酸素により亢進したマトリックスメタロプロテアーゼやエラスターゼの阻害が重要であり、そのような効果を有する素材が化粧品業界で要望されている。マトリックスメタロプロテアーゼとは、細胞外マトリックスを破壊する酵素群であり、コラゲナーゼ群、ゼラチナーゼ群、ストロムライシン群から構成されている。活性酸素により亢進したマトリックスメタロプロテアーゼやエラスターゼは皮膚に存在するコラーゲン、エラスチンなどを変性させ、たるみ、しわなどの老化皮膚に典型的な兆候を示すようになることから、活性酸素除去剤である抗酸化剤及びマトリックスメタロプロテアーゼやエラスターゼなどの酵素群の阻害剤は有効な老化防止剤として利用することが出来る。
一方、遊離脂肪酸がアクネを悪化させることから、抗アクネ製品には、リパーゼ阻害活性を有するものが求められている。また、フケや体臭の発生にもリパーゼが関与していることから、リパーゼ阻害剤はフケ防止剤や、体臭防止剤としても利用することが可能である。
【０００９】
本発明のクリ渋皮発酵物及びクリ渋皮発酵物抽出物が配合される化粧品としては、化粧水、乳液、美容液、一般クリーム、クレンジングクリーム等の洗顔料、パック、髭剃り用クリーム、日焼けクリーム、日焼け止めクリーム、日焼け止めローション、日焼けローション、化粧石鹸、ファンデーション、おしろい、パウダー、口紅、リップクリーム、アイライナー、アイクリーム、アイシャドウ、マスカラ、浴用化粧品、シャンプー、リンス、染毛料、頭髪用化粧品等、各種化粧品に利用可能である。その配合量は化粧品組成物中、０．０００１〜１００％含むことができるが好ましくは０．００１〜１０％である。
本発明の皮膚外用剤には、以下に示すような通常、化粧品など皮膚外用剤において使用されている各種成分や添加剤の中から用途に適したものを任意に選択、併用して製造することができる。
【００１０】
クリ渋皮発酵物及びクリ渋皮発酵物抽出物の化粧料への配合量は化粧品組成物中、０．０００１−１００％とすることが例示される。
本発明のクリ渋皮発酵物及びクリ渋皮発酵物抽出物を配合することを特徴とする化粧料に併用して配合可能な成分としては、化粧品、医薬部外品や浴用剤で一般に使用される基剤や薬剤などであれば特に限定はされない。例えば、コラーゲン、コラーゲン加水分解物、ゼラチン、ゼラチン加水分解物、エラスチン、エラスチン加水分解物、ラクトフェリン、ケラチン、ケラチン加水分解物、カゼイン、アルブミン等の蛋白質および蛋白質の加水分解物。
ヒアルロン酸ナトリウム、キサンタンガム、カラギーナン、グアーガム、アルギン酸およびその塩、ペクチン、コンドロイチン硫酸およびその塩、水溶性キチン、キトサン誘導体およびその塩、デオキシリボ核酸、アラビアゴム、トラガントゴム等の天然高分子及びそれらの誘導体。
【００１１】
甘草エキス、アロエエキス、カモミラエキス、シソエキス、等の植物抽出物。酵母エキス等の微生物由来物。海藻末や海藻エキス。プラセンタエキス等の動物由来物。
カルボキシビニルポリマーおよびその塩、ポリアクリル酸およびその塩、カルボキシメチルセルロースおよびその塩等の酸性ポリマー、ポリビニルアルコール、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ニトロセルロースポリビニルメチルエーテル等の中性ポリマー。カチオン化セルロース、ポリエチレンイミン、カチオン化グアーガム等のカチオン性ポリマー。
エタノール、イソプロピルアルコール等の低級アルコール類。パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、桂皮酸系紫外線吸収剤、アントラニエール酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤等の紫外線吸収剤。
【００１２】
ビタミンＡ、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、リン酸Ｌ−アスコルビルマグネシウムおよびその誘導体、ビタミンＤ群、酢酸ｄ−α−トコフェノール、ビタミンＥ群、葉酸類、β−カロチン、γ−オリザノール、ニコチン酸、パントテン酸類、ビオチン類、フェルラ酸等のビタミン類。グリチルリチン酸及びその塩類、グアイアズレン及びその誘導体、アラントイン等の抗炎症剤。
ステアリン酸エステル、ノルジヒドログアセレテン酸、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、パラヒドロキシアニソール、没食子プロピル、セサモール、セサモリン、ゴシポール等の抗酸化剤。
パラ安息香酸メチル、パラ安息香酸エチル、パラ安息香酸プロピル、パラ安息香酸ブチル等のパラ安息香酸エステル類、ソルビン酸、デヒドロ酢酸、フェノキシエタノール、安息香酸等の防腐剤。
【００１３】
エデト酸、エデト酸二ナトリウム等のエデト酸及びその塩類、フィチン酸、ヒドロキシエタンジスルホン酸等の金属イオン封鎖剤。
グリセリン、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等の多価アルコール類。
Ｌ−アスパラギン酸、ＤＬ−アラニン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−システイン、Ｌ−グルタミン酸、グリシン等のアミノ酸類およびその塩。
マルチトール、ソルビトール、キシロビオース、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン等の糖類。
クエン酸、乳酸、α−ヒドロキシ酢酸、ピロリドンカルボン酸等の有機酸類およびその塩類。
流動パラフィン、スクワラン、ワセリン等の炭化水素類。
オリーブ油、ヤシ油、月見草油、ホホバ油、ヒマシ油、硬化ヒマシ油等の油脂類。
ラウリン酸、ミリスチル酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸等の脂肪酸類。
【００１４】
ミリスチルアルコール、セタノール、セトステアリルアルコール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール等の高級アルコール類。
ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オクタン酸セチル、トリオクタン酸グリセリン、ミリスチン酸オクチルドデシル、ステアリン酸オクチル、ステアリン酸ステアリル等のエステル類。
レシチンおよびその誘導体等のリン脂質類。
ウシ骨髄脂やウシ脳脂質などの動植物由来脂質。ラウリル硫酸アンモニウム、ラウリル硫酸エタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸トリエタノールアミンなどのアルキル硫酸塩。
【００１５】
ポリオキシエチレン（２ＥＯ）ラウリルエーテル硫酸トリエタノールアミン（なお、ＥＯはエチレンオキサイドでＥＯの前の数値はエチレンオキサイドの付加モル数を示す。）、ポリオキシエチレン（３ＥＯ）アルキル（炭素数１１〜１５のいずれかまたは２種以上の混合物）エーテル硫酸ナトリウムなどのポリオキシエチレンアルキル硫酸塩。
ラウリルベンゼンスルホン酸ナトリウム、ラウリルベンゼンスルホン酸トリエタノールアミンなどのアルキルベンゼンスルホン酸塩。
ポリオキシエチレン（３ＥＯ）トリデシルエーテル酢酸ナトリウムなどのポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩。
【００１６】
ヤシ油脂肪酸サルコシンナトリウム、ラウロイルサルコシントリエタノールアミン、ラウロイルメチル−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム、ヤシ油脂肪酸−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム、ヤシ油脂肪酸−Ｌ−グルタミン酸トリエタノールアミン。ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム、ラウロイルメチルタウリンナトリウムなどのＮ−アシルアミノ酸塩、エーテル硫酸アルカンスルホン酸ナトリウム、硬化ヤシ油脂肪酸グリセリン硫酸ナトリウム、硬化ヤシ油脂肪酸グリセリン硫酸ナトリウム、ウンデシノイルアミドエチルスルホコハク酸二ナトリウム、オクチルフェノキシジエントキシエチルスルホン酸ナトリウム、オレイン酸アミノスルホコハク酸二ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、スルホコハク酸ラウリル二ナトリウム、ポリオキシエチレンアルキル（炭素鎖１２〜１５）エーテルリン酸（８〜１０ＥＯ）、ポリオキシエチレンオレイルエーテルリン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンセチルエーテルリン酸ナトリウム、ポリオキシエチレンスルホコハク酸ラウリル二ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリルエーテルリン酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、テトラデセンスルホン酸ナトリウムなどのアニオン性界面活性剤。塩化ステアリルジメチルアンモニウム、塩化ジ（ポリオキシエチレン）オレイルメチルアンモニウム、塩化ステアリルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化トリ（ポリオキシエチレン）ステアリルアンモニウム、塩化ポリオキシプロピレンメチルジエチルアンモニウム、塩化ミリスチルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ラウリルトリメチルアンモニウムなどのカチオン性界面活性剤。２−アルキル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、ウンデシルヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタインナトリウム、ウンデシル−Ｎ−ヒドロキシエチル−Ｎ−カルボキシメチルイミダゾリニウムベタイン、ステアリルジヒドロキシエチルベタイン、ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン、ヤシ油アルキル−Ｎ−カルボキシエチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタインナトリウム、ヤシ油アルキル−Ｎ−カルボキシメトキシエチル−Ｎ−カルボキシメチルイミダゾリニウムジナトリウムラウリル硫酸、Ｎ−ヤシ油脂肪酸アシル−Ｌ−アルギニンエチル−ＤＬ−ピロリドンカルボン酸塩などの両性界面活性剤。ポリオキシエチレンアルキル（炭素数１２〜１４）エーテル（７ＥＯ）、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンオレイン酸グリセリン、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンセチルステアリルジエーテル、ポリオキシエチレンソルビトール・ラノリン（４０ＥＯ）、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンデシルテトラデシルエーテル、ポリオキシエチレンラノリン、ポリオキシエチレンラノリンアルコール、ポリオキシプロピレンステアリルエーテル等のノニオン性界面活性剤。イソステアリン酸ジエタノールアミド、ウンデシレン酸モノエタノールアミド、オレイン酸ジエタノールアミド、牛脂脂肪酸モノエタノールアミド、硬化牛脂脂肪酸ジエタノールアミド、ステアリン酸ジエタノールアミド、ステアリン酸ジエチルアミノエチルアミド、ステアリン酸モノエタノールアミド、ミリスチン酸ジエタノールアミド、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド、ヤシ油脂肪酸エタノールアミド、ラウリン酸イソプロパノールアミド、ラウリン酸エタノールアミド、ラウリン酸ジエタノールアミド、ラノリン脂肪酸ジエタノールアミドなどの増粘剤。鎖状または環状メチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、ジメチルポリシロキサンポリエチレングリコール共重合体、ジメチルポリシロキサンポリプロピレン共重合体、アミノ変性シリコンオイル、第四級アンモニウム変性シリコンオイルなどのシリコンオイル。その他、ｐＨ調整剤、着色料、香料、安定化剤、清涼剤、血流促進剤、角質溶解剤、収斂剤、創傷治療剤、増泡剤、口腔用剤、消臭・脱臭剤、抗アレルギー剤、細胞賦活剤と共に配合し、併用して用いることも出来る。
【００１７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を実施例により説明するが、本実施例によって本発明が限定されるものではない。
（製造例１）
乾燥後粉砕したクリ渋皮１０ｋｇに黄麹菌を加え、常温で２ヶ月間放置しクリ渋皮発酵物を得た。
（製造例２）
製造例１の乾燥したクリ渋皮発酵物１０ｇを５０％エタノール水溶液１００ｍＬに浸漬し６０℃で２４時間抽出した。沈殿物を遠心分離法（１００００Ｇ、１０分）により除去し、渇色清澄なクリ渋皮発酵物抽出物を得た。
（製造例３）
製造例２で得たクリ渋皮発酵物抽出物を濃縮後、真空凍結乾燥してクリ渋皮発酵物抽出物凍結乾燥粉末を得た。
【００１８】
（製造例４）
製造例１の乾燥したクリ渋皮発酵物１０ｇを水１００ｍＬに浸漬し６０℃で２４時間抽出した。沈殿物を遠心分離法（１００００Ｇ、１０分）により除去し、褐色の清澄クリ渋皮発酵物抽出物を得た。
（製造例５）
製造例１の乾燥したクリ渋皮発酵物１０ｇをエタノール１００ｍＬに浸漬し６０℃で２４時間抽出した。沈殿物を遠心分離法（１００００Ｇ、１０分）により除去し、薄褐色の清澄クリ渋皮発酵物抽出物を得た。
（製造例６）
製造例１の乾燥したクリ渋皮発酵物１０ｇを５０％１，３−ブチレングリコール水溶液１００ｍＬに浸漬し室温で２週間抽出した。沈殿物を遠心分離法（１００００Ｇ、１０分）により除去し、薄褐色の清澄クリ渋皮発酵物抽出物を得た。
（製造例７）
製造例１の乾燥したクリ渋皮発酵物１０ｇを１，３−ブチレングリコール１００ｍＬに浸漬し６０℃で２４時間抽出した。沈殿物を遠心分離（１００００Ｇ、１０分）後、濾過し、薄褐色の清澄クリ渋皮発酵物抽出物を得た。
【００１９】
（実施例１）
＜美白試験＞
表面積２５ｃｍ２の細胞培養用ボトルに１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地１０ｍＬ、Ｂ１６細胞懸濁液（２．５×１０４個／ｍＬ、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ培地）１ｍＬを添加し、ＣＯ２濃度５％、３７℃で２４時間培養した。製造例４で調製したクリ渋皮発酵物抽出物を培地に対して溶質濃度が０．５、０．１、０．０５％となるように添加し、３日間培養し、同量の培地及び試料を取り換えた後、更に３日間培養した。トリプシン−ＥＤＴＡ処理によって細胞を剥離し、得られた細胞を、遠心分離（１０００ｐｐｍ、１分）して上澄液を取り除いた後、細胞の色相を観察した。試験液を加えないものをコントロールとした。
結果を表１に示した。表１から明らかなようにクリ渋皮発酵物抽出物に優れた美白効果が認められた。
【表１】
2004352634.tif 000002
【００２０】
（実施例２）
＜コラゲナーゼ活性阻害作用＞
製造例３で調製したクリ渋皮発酵物抽出物凍結乾燥粉末を水を用いて５００μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬに調製し試験液とした。コラゲナーゼ活性阻害作用の測定はコラーゲン技術研修会製のコラゲノキットＣＬＮ−１００を用いて行った。蛍光標識した基質コラーゲン溶液２００μＬに試験液５０μＬ、ヒト皮膚線維芽細胞由来コラゲナーゼ溶液（０．１ｕｎｉｔｓ／ｍＬ）２００μＬを加え３５℃で２時間反応させた後、反応停止液にて酵素反応を停止させ、分解物をエタノール溶液に抽出した後、蛍光強度（Ｅｘ＝４９５ｎｍ、Ｅｍ＝５２０ｎｍ）を測定した。コラゲナーゼ活性阻害率はクリ渋皮発酵物抽出物無添加ものと比較して算出した。
【００２１】
・試験結果
結果を図１に示した。図１から明らかなようにクリ渋皮発酵物抽出物に高いコラゲナーゼ阻害活性が認められた。
コラゲナーゼはマトリックスメタロプロテアーゼのひとつであり、コラゲナーゼ阻害活性を示すことにより、クリ渋皮発酵物抽出物に老化防止剤として有用であることがわかる。
【００２２】
（実施例３）
＜エラスターゼ阻害試験＞
製造例３で調製したクリ渋皮発酵物抽出物凍結乾燥粉末を０．２Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．５，  １％ＢＳＡ，  １Ｍ  ＮａＣｌ含有）を用いて１０００μｇ／ｍＬ、５００μｇ／ｍＬ、２５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬに調製し試験液とした。
０．２Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．５，  １％ＢＳＡ，  １Ｍ  ＮａＣｌ含有）で２０μＭに調製した基質溶液（Ｓｕｃ−（ＯＭｅ）−（Ｌ−ａｌａｎｙｌ）２−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ｐ−ＭＣＡ）２００μＬと各濃度に調製した試料液１００μＬの混液に０．２ｕｎｉｔ／ｍＬに調製したヒト好中球由来エラスターゼ溶液１００μＬを加え、３７℃で１時間反応させた。反応後、蛍光強度（Ｅｘ＝３５５ｎｍ，  Ｅｍ＝４６０ｎｍ）を測定し、その低下率をもって活性阻害率を算出した。
図２に測定結果を示した。クリ渋皮発酵物抽出物は、濃度依存的にエラスターゼ活性を阻害することがわかる。
【００２３】
（実施例４）
＜抗酸化作用＞
抗酸化作用はＤＰＰＨラジカル消去法により評価した。
製造例３で調製したクリ渋皮発酵物抽出物凍結乾燥粉末を５０％エタノール水溶液を用いて１００ｐｐｍの試料溶液を調製した。反応指示薬（８００μＭ  １，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ  １２ｍＬ、４００ｍＭ  ２−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｅｔｈａｎｅｓｕｌｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  Ｂｕｆｆｅｒ  １２ｍＬ、エタノール水溶液  ２４ｍＬ）０．９ｍＬを試験管に分注し、５０％エタノール水溶液を（３００−ａ）μＬを加える。試料  ａμＬを３０秒おきに加え、ボルテックスミキサーでミキシングし、２０分後に５２０ｎｍでの吸光度を測定した。ａ＝０、３０、６０、１２０、１８０、２４０μＬとした。対照として茶抽出凍結乾燥粉末を用いた。
結果を図３に示した。図３から明らかなようにクリ渋皮発酵物抽出物に高いラジカル消去活性が認められたことから、クリ渋皮発酵物抽出物の抗酸化作用が確認された。
【００２４】
（実施例５）
＜リパーゼ阻害作用＞
製造例３で調製したクリ渋皮発酵物抽出物凍結乾燥粉末を５０％エタノール水溶液に溶解し１００ｐｐｍ〜２０００ｐｐｍの試料溶液を調製した。リパーゼはブタ膵臓由来リパーゼ（ＥＰＣ社製）を使用した。三酪酸ジメチルカプロールとドデシル硫酸ナトリウムより構成される基質液に、１００〜２０００ｐｐｍ濃度に調製した試料液１００μＬを加え、酵素液を加えて反応させた。なお、反応はリパーゼキットＳ（大日本製薬製）を用いた。対照として製造例３と同様に調製した茶抽出凍結乾燥粉末を用いた。リパーゼ活性抑制率は以下の式を用いて計算した。
【数１】
2004352634.tif 000003
【００２５】
Ａ〔Ｃ〕試験液の代わりに５０％エタノールを用いて同様に操作を行った溶液の吸光度
Ａ〔Ｂ〕酵素溶液の代わりに緩衝液を用いて同様に操作を行った溶液の吸光度
Ａ〔Ｓ〕試験液を用いて同様の操作を行った溶液の吸光度
結果を表２に示した。表から明らかなようにクリ渋皮発酵物抽出物に高いリパーゼ阻害活性が認められた。
【表２】
2004352634.tif 000004
【００２６】
（実施例６）
＜抗菌作用＞
抗菌作用はペーパーディスク法により評価した。製造例３で調製したクリ渋皮発酵物抽出物凍結乾燥粉末を５０％エタノール水溶液を用いて２％の試料溶液を調製した。陽性対象のイソプロピルメチルフェノールは５０％エタノールに１％の濃度で溶解した。試料液を２０μＬペーパーディスクに滴下後、クリンベンチ内で風乾した。なお、２０μＬ以上の滴下では、一度に滴下できないので風乾後再度滴下する作業を繰り返した。Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｘｅｒｏｓｉｓ  （ＪＣＭ１３２４）  Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｔｅｕｓ（ＪＣＭ１４６５）Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ  （ＩＦＯ３７６２）の３菌株は、すべてｎｕｔｒｉｅｎｔ  ｂｒｏｔｈで増殖後、Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ  ｂｒｏｔｈ（Ｄｉｆｃｏ製）を用いて３７℃、１８時間培養し菌を増殖させた（前培養）。次に菌液２ｍＬをＭｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ  ｂｒｏｔｈ  １００ｍＬに加え３７℃で２４時間培養し（本培養）、得られた菌液をＭｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ  ｂｒｏｔｈを用いて１／１０に希釈した。Ｍｕｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ培地２ｍＬに希釈した菌液０．５ｍＬを加え撹拌し、寒天が固化した後、先に調製した試料を含んだペーパーディスクを載せ、５℃で５時間保管後、３０℃で２４時間培養し阻止円の大きさを観察した。なお、シャーレはファルコン１００７（６０ｍｍディッシュ）を用いた。
【表３】
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【００２７】
表３にクリ渋皮発酵物抽出物の抗菌性を示した。いずれの菌株に対してもクリアゾーンが明らかであり、クリ渋皮発酵物抽出物が抗菌作用を有することが明らかになった。
（実施例７）
化粧水の製造
【表４】
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【００２８】
表４の処方に従い、（１）〜（１０）を８０℃で撹拌、溶解後室温に冷却し、化粧水を得た。得られた化粧水はいずれも清澄あり、４０℃、ＲＨ７５％の条件下において３か月間白濁を生じることもなく安定であった。また、専門パネラー１０名による官能試験を行なった。評価は下記の項目について５段階の評点評価を実施した。
（１）  肌のしっとりさ
１．かさつく
２．ややかさつく
３．普通
４．ややしっとりする
５．しっとりする
【００２９】
（２）  肌の滑らかさ
１．ざらつく
２．ややざらつく
３．普通
４．やや滑らか
５．滑らか
（３）  肌のべたつき
１．べたつく
２．ややべたつく
３．普通
４．ややさっぱり
５．さっぱり
パネラー１０名の評点の平均を表５に示した。表５から明らかなように、クリ渋皮発酵物抽出物を配合した実施品は、クリ渋皮発酵物抽出物無配合の対照品より優れた保湿性と皮膚平滑性を示した。
【表５】
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【００３０】
（実施例８）
シャンプー剤の製造
表６の処方に従い、（１）〜（８）を７０℃で混合撹拌し、室温まで冷却させてシャンプー剤を得た。
得られた製品を用いて洗髪したところ、髪の感触が滑らかで、髪に潤いを与えるものであった。
【表６】
2004352634.tif 000008
【００３１】
（実施例９）
クリーム剤の製造
表７に示す処方に従い、（１）〜（７）を８０℃で混合撹拌したものに、別途（８）〜（１２）を８０℃で混合攪拌したものを加え、ホモジナイズし、攪拌しながら室温まで冷却し、クリーム剤を得た。
得られた製品は使用中にべたつかず、肌をしっとりとさせるものであった。
【表７】
2004352634.tif 000009
【００３２】
（実施例１０）
ボディジェル剤の製造
表８の処方に従い、（１）〜（８）を撹拌、溶解した。
得られた製品は使用中にべたつかず、肌をしっとりとさせるものであった。
【表８】
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【００３３】
（実施例１１）
ヘアパック剤の製造
表９に示す処方に従い、（１）〜（２）を８０℃混合撹拌したものに、別途（３）〜（１３）を８０℃で混合撹拌したものに加え、８０℃にて混合攪拌しながら（１４）、（１５）をさらに添加し混合攪拌してヘアパック剤を得た。
得られた製品を用いて髪のトリートメントをしたところ、髪の感触が滑らかで、髪に潤いを与えるものであった。
【表９】
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【００３４】
【発明の効果】
本発明のクリ渋皮発酵物及びクリ渋皮発酵物抽出物は、美白効果、抗菌効果、コラゲナーゼ阻害活性、エラスターゼ阻害活性、抗酸化活性、リパーゼ阻害活性を示し、化粧品組成物として有用であることがわかった。特にコラゲナーゼ阻害活性、エラスターゼ阻害活性、抗酸化活性は、老化防止に関連深い因子とされ、これらの高い活性を示す本発明のクリ渋皮発酵物及びクリ渋皮発酵物抽出物は、老化防止剤として特に有用に用いることができる。
本発明のクリ渋皮発酵物及びクリ渋皮発酵物抽出物は、化粧品類の他、医薬品類、医薬部外品類、浴用剤などに用いることが出来る。
【図面の簡単な説明】
【図１】コラゲナーゼ活性阻害活性を示す図である。
【図２】エラスターゼ活性阻害活性を示す図である。
【図３】抗酸化作用を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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