(57)【要約】【課題】マツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ）等のキシメジ属に属する担子菌類を利用して、緑膿菌、Ｏ−１５７等を含む大腸菌、ヘリコバクター・ピロリ菌、リストリア菌などの病原性細菌に対する感染予防・治療剤および食品を提供する。【解決手段】キシメジ属に属する担子菌類、特にはマツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ）ＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の菌糸体の熱水抽出液と、前記菌糸体熱水抽出液を得る際に残留する菌糸体残渣のアルカリ溶液抽出液とを混合して得られる混合液の陰イオン交換樹脂吸着画分であって、（ａ）フェノール硫酸法によるグルコース換算値としての糖質含量が６０〜７２％であり、（ｂ）銅フォリン法によるアルブミン換算値としてのタンパク質含量が２８〜４０％である、陰イオン交換樹脂吸着画分を有効成分として含む、感染予防・治療剤および食品。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キシメジ属（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ）に属する担子菌類あるいはそれらの抽出物を含む、病原性微生物に対する感染予防・治療剤。
【請求項２】
キシメジ属に属する担子菌類がマツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ）である、請求項１記載の感染予防・治療剤。
【請求項３】
マツタケ（Ｔ．  ｍａｔｓｕｔａｋｅ）が菌糸体、培養物（Ｂｒｏｔｈ）または子実体（胞子を含む）である、請求項２記載の感染予防・治療剤。
【請求項４】
マツタケ（Ｔ．  ｍａｔｓｕｔａｋｅ）がＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株である、請求項２または３記載の感染予防・治療剤。
【請求項５】
マツタケ抽出物が、ＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の菌糸体の熱水抽出液、アルカリ溶液抽出液、および、これら抽出液の陰イオン交換樹脂吸着画分の中から選ばれる１種または２種以上を含む、請求項２〜４のいずれか１項に記載の感染予防・治療剤。
【請求項６】
マツタケ抽出物が、ＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の菌糸体の熱水抽出液と、前記菌糸体熱水抽出液を得る際に残留する菌糸体残渣のアルカリ溶液抽出液とを混合して得られる混合液の陰イオン交換樹脂吸着画分であって、
（ａ）フェノール硫酸法によるグルコース換算値としての糖質含量が６０〜７２％であり、（ｂ）銅フォリン法によるアルブミン換算値としてのタンパク質含量が２８〜４０％である、上記陰イオン交換樹脂吸着画分を含む、請求項２〜４のいずれか１項に記載の感染予防・治療剤。
【請求項７】
病原性細菌を対象とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の感染予防・治療剤。
【請求項８】
グラム陰性菌を対象とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の感染予防・治療剤。
【請求項９】
グラム陰性菌が緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｏ−１５７等を含む大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ヘリコバクター・ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）のいずれかである、請求項８記載の感染予防・治療剤。
【請求項１０】
グラム陽性菌を対象とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の感染予防・治療剤。
【請求項１１】
グラム陽性菌がリステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）である、請求項１０記載の感染予防・治療剤。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の感染予防・治療剤と抗生物質とを含有する、病原性微生物に対する感染予防・治療剤。
【請求項１３】
キシメジ属（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ）に属する担子菌類あるいはそれらの抽出物を含む、病原性微生物に対する感染予防・治療のための食品。
【請求項１４】
キシメジ属に属する担子菌類がマツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ）である、請求項１３記載の感染予防・治療のための食品。
【請求項１５】
マツタケ（Ｔ．  ｍａｔｓｕｔａｋｅ）が菌糸体、培養物（Ｂｒｏｔｈ）または子実体（胞子を含む）である、請求項１４記載の感染予防・治療のための食品。
【請求項１６】
マツタケ（Ｔ．  ｍａｔｓｕｔａｋｅ）がＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株である、請求項１４または１５記載の感染予防・治療のための食品。
【請求項１７】
マツタケ抽出物が、ＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の菌糸体の熱水抽出液、アルカリ溶液抽出液、および、これら抽出液の陰イオン交換樹脂吸着画分の中から選ばれる１種または２種以上を含む、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の感染予防・治療のための食品。
【請求項１８】
マツタケ抽出物が、ＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の菌糸体の熱水抽出液と、前記菌糸体熱水抽出液を得る際に残留する菌糸体残渣のアルカリ溶液抽出液とを混合して得られる混合液の陰イオン交換樹脂吸着画分であって、（ａ）フェノール硫酸法によるグルコース換算値としての糖質含量が６０〜７２％であり、（ｂ）銅フォリン法によるアルブミン換算値としてのタンパク質含量が２８〜４０％である、上記陰イオン交換樹脂吸着画分を含む、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の感染予防・治療のための食品。
【請求項１９】
病原性細菌を対象とする、請求項１３〜１８のいずれか１項に記載の感染予防・治療のための食品。
【請求項２０】
グラム陰性菌を対象とする、請求項１３〜１９のいずれか１項に記載の感染予防・治療のための食品。
【請求項２１】
グラム陰性菌が緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｏ−１５７等を含む大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ヘリコバクター・ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）のいずれかである、請求項２０記載の感染予防・治療のための食品。
【請求項２２】
グラム陽性菌を対象とする、請求項１３〜１９のいずれか１項に記載の感染予防・治療のための食品。
【請求項２３】
グラム陽性菌がリステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）である、請求項２２記載の感染予防・治療のための食品。
【請求項２４】
請求項１３〜２３のいずれか１項に記載の食品と抗生物質とを含有する、病原性微生物に対する感染予防・治療のための食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、動物やヒトにとって有害な病原性微生物、特には病原性細菌に対する予防・治療剤および食品に関する。本発明の感染予防・治療剤および食品は、医薬品として投与することができるだけでなく、種々の形態、例えば、保険機能食品（特定保険用食品、栄養機能食品）やいわゆる健康食品（いずれも飲料を含む）、または飼料として飲食物の形で与えることも可能である。さらには、口中に一時的に含むものの、そのほとんどを口中より吐き出す形態、例えば、歯磨き剤、洗口剤、チューインガム、うがい剤などの形で与えることも、あるいは鼻から吸引させる吸入剤の形で与えることも可能である。
【０００２】
【従来の技術】
マツタケ〔Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ（Ｓ．  Ｉｔｏ  ＆  Ｉｍａｉ）Ｓｉｎｇ．〕はキシメジ属（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ）に属する担子菌類で、種々の生理活性物質が含まれていることが知られている。例えば特公昭５７−１２３０号公報（特許文献１）には、マツタケ菌糸体の液体培養物を熱水または希アルカリ溶液で抽出して得られる抽出液から分離精製されたエミタニン−５−Ａ、エミタニン−５−Ｂ、エミタニン−５−Ｃ、およびエミタニン−５−Ｄに、サルコーマ１８０細胞の増殖阻止作用があることが開示されている。また特許第２７６７５２１号明細書（特許文献２）には、マツタケ子実体の水抽出物から分離精製された分子量２０〜２１万のタンパク質（サブユニットの分子量１０〜１１万）が抗腫瘍活性を有することが開示されている。
【０００３】
さらに、本発明者らにより、マツタケ熱水抽出液、マツタケアルカリ溶液抽出液、あるいはこれら抽出液の陰イオン交換樹脂吸着画分が免疫増強活性を有することが見出されている（国際公開第０１／４９３０８号パンフレット（特許文献３））。本発明者らはまた、マツタケの特定の菌糸体由来の部分精製画分にストレス負荷回復促進作用があることも見出した（特願２００２−１０６６３２号明細書）。
【０００４】
【特許文献１】
特公昭５７−１２３０号公報
【特許文献２】
特許第２７６７５２１号明細書
【特許文献３】
国際公開第０１／４９３０８号パンフレット
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
上述のようにマツタケには抗腫瘍活性、免疫増強活性、ストレス負荷回復促進作用などの種々の生理活性が含まれることが見出されている。しかしながら、本発明者らの知る限りにおいて、マツタケ、あるいは該マツタケが属するキシメジ属に属する担子菌類が、緑膿菌、リステリア菌などの病原性細菌に対する感染に優れた予防・治療効果を有するということについては、これまで報告がされていない。
本発明者らは、マツタケ、あるいは該マツタケが属するキシメジ属に属する担子菌類が、緑膿菌、リステリア菌などの病原性細菌に対する感染に優れた予防・治療効果を有することを新たに見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
したがって本発明の課題は、マツタケ等のキシメジ属に属する担子菌類を利用した感染予防・治療剤および食品を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、キシメジ属（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ）に属する担子菌類あるいはそれらの抽出物を含む、病原性微生物に対する感染予防・治療剤および食品に関する。
また本発明は、キシメジ属に属する担子菌類がマツタケ（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ）である、上記感染予防・治療剤および食品に関する。
【０００８】
また本発明は、マツタケ（Ｔ．  ｍａｔｓｕｔａｋｅ）が菌糸体、培養物（Ｂｒｏｔｈ）または子実体（胞子を含む）である、上記感染予防・治療剤および食品に関する。
【０００９】
また本発明は、マツタケ（Ｔ．  ｍａｔｓｕｔａｋｅ）がＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株である、上記感染予防・治療剤および食品に関する。
【００１０】
また本発明は、マツタケ抽出物が、ＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の菌糸体の熱水抽出液、アルカリ溶液抽出液、および、これら抽出液の陰イオン交換樹脂吸着画分の中から選ばれる１種または２種以上を含む、上記感染予防・治療剤および食品に関する。
【００１１】
また本発明は、マツタケ抽出物が、ＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の菌糸体の熱水抽出液と、前記菌糸体熱水抽出液を得る際に残留する菌糸体残渣のアルカリ溶液抽出液とを混合して得られる混合液の陰イオン交換樹脂吸着画分であって、（ａ）フェノール硫酸法によるグルコース換算値としての糖質含量が６０〜７２％であり、（ｂ）銅フォリン法によるアルブミン換算値としてのタンパク質含量が２８〜４０％である、上記陰イオン交換樹脂吸着画分を含む、上記感染予防・治療剤および食品に関する。
【００１２】
また本発明は、病原性細菌を対象とする、上記感染予防・治療剤および食品に関する。
【００１３】
また本発明は、グラム陰性菌（例えば、緑膿菌、Ｏ−１５７等を含む大腸菌、ヘリコバクター・ピロリ菌など）を対象とする、上記感染予防・治療剤および食品に関する。
【００１４】
また本発明は、グラム陽性菌（例えば、リステリア菌）対象とする、上記感染予防・治療剤および食品に関する。
【００１５】
また本発明は、さらに抗生物質と組合せてなる、上記感染予防・治療剤および食品に関する。
【００１６】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１７】
本発明の感染予防・治療剤および食品に用いられるキシメジ属（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ）は、キシメジ科に属する担子菌類で、マツタケ〔Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ  ｍａｔｓｕｔａｋｅ（Ｓ．  Ｉｔｏ  ＆Ｉｍａｉ）Ｓｉｎｇ．〕、ニセマツタケ（Ｔ．  ｆｕｌｖｏｃａｓｔａｎｅｕｍ  Ｈｏｎｇｏ  ｓｐ．  ｎｏｖ．）、バカマツタケ（Ｔ．  ｂａｋａｍａｔｓｕｔａｋｅ  Ｈｏｎｇｏ  ｓｐ．  ｎｏｖ．）、ハイトリシメジ（Ｔ．  ｍｕｓｃａｒｉｎｕｍＫａｗａｍｕｒａ）等の種が挙げられるが、本発明ではマツタケ〔Ｔ．  ｍａｔｓｕｔａｋｅ（Ｓ．  Ｉｔｏ＆  Ｉｍａｉ）Ｓｉｎｇ．〕が特に好ましく用いられる。
【００１８】
マツタケは、菌糸体、培養物（Ｂｒｏｔｈ）、子実体のいずれの形態のものも用いることができ、生でも乾燥したものでもよい。本発明では子実体は胞子も含むものとする。これら菌糸体、培養物（Ｂｒｏｔｈ）、子実体の抽出物や、その陰イオン交換樹脂吸着画分なども用いることができる。
【００１９】
本発明では特にマツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株が好ましく用いられるが、これ以外の他のマツタケ株も任意に用いることができる。このような他のマツタケ株としては、例えば、ＣＭ  ６２７−３、ＣＭ  ６２７−５、ＣＭ  ６２７−６、ＣＭ  ６２７−７（以上、呉羽化学工業（株））、ＭＡＦＦ  ４６００３１、ＭＡＦＦ  ４６００３３、ＭＡＦＦ  ４６００３４、ＭＡＦＦ  ４６００３５、ＭＡＦＦ  ４６００３６、ＭＡＦＦ  ４６００３７、ＭＡＦＦ  ４６００３８、ＭＡＦＦ４６００４０、ＭＡＦＦ  ４６００４１、ＭＡＦＦ  ４６００４２、ＭＡＦＦ  ４６００９６（以上、農林水産省農業生物資源研究所）、ＩＦＯ  ６９２９、ＩＦＯ  ６９３１、ＩＦＯ  ６９３２、ＩＦＯ  ６９３４、ＩＦＯ  ６９１５、ＩＦＯ６９１６、ＩＦＯ  ６９１７、ＩＦＯ  ６９１８、ＩＦＯ  ６９１９、ＩＦＯ  ６９２１、ＩＦＯ  ６９２２、ＩＦＯ  ６９２３、ＩＦＯ  ６９２４、ＩＦＯ  ６９２５、ＩＦＯ  ６９２６、ＩＦＯ  ６９２８、ＩＦＯ  ６９３０、ＩＦＯ  ６９３５、ＩＦＯ  ３０６０５、ＩＦＯ  ３０６０６（以上、（財）発酵研究所）、ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）のＡＴＣＣ３４９７９、ＡＴＣＣ３４９８１、ＡＴＣＣ３４９８８等が挙げられるが、これら例示に限定されるものではない。
【００２０】
マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株は、本出願人によって新規菌株として従前に出願され（国際出願ＰＣＴ／ＪＰ０１／０８８７６号明細書）、独立行政法人産業技術総合研究所（（旧）工業技術院生命工学研究所）に平成１２年９月１４日に寄託されている。このマツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株は、京都府亀岡市で採取したマツタケＣＭ６２７１株から子実体組織を切り出し、試験管内で培養することにより菌糸体継代株を得たものであり、呉羽化学工業（株）生物医学研究所で維持している。
【００２１】
マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の子実体の形態は、「原色日本新菌類図鑑（１）」（今関六也・本郷次雄編、保育社、昭和３２年発行）プレート（ｐｌａｔｅ）９頁および２６頁に記載のマツタケ子実体に合致するものであった。
【００２２】
マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の継代は、エビオス寒天斜面培地で実施することができる。マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の菌糸体をエビオス寒天平板培地に接種すると、白色の菌糸が放射状に密に生育し、大きなコロニーを形成する。走査型電子顕微鏡で観察すると、太さ１〜２μｍの枝状の菌糸体が無数に存在し、菌糸体側部に数μｍ程度の突起物が時々みられる。該菌株の菌糸体を大量培養する場合は、液体培地に接種し、静置培養、振盪培養、タンク培養等により行うことができる。
【００２３】
なお、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株は、もっぱら菌糸体の形状で継代維持または培養することが可能であるが、子実体の形状となることもある。
【００２４】
マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の菌学的性質は以下のとおりである。
（１）麦芽エキス寒天培地における培養的・形態的性質
白色の菌糸が放射状に密に生育してコロニーを形成する。接種３０日目のコロニー径は約４ｃｍである。
【００２５】
（２）ツアペック寒天培地、オートミール寒天培地、合成ムコール寒天培地、およびフェノールオキシダーゼ反応検定用培地における培養的・形態的性質
上記いずれの培地においても、接種後１ヶ月経過しても菌糸の発育はほとんどみられない。
【００２６】
（３）ＹｐＳｓ寒天培地における培養的・形態的性質
白色の光沢を有し、マット状に生育する。接種３０日目の生育距離は約５ｍｍである。
【００２７】
（４）グルコース・ドライイースト寒天培地における培養的・形態的性質
白色の光沢を有し、マット状に生育する。接種３０日目の生育距離は約２ｍｍである。
【００２８】
（５）最適生育温度および生育範囲
滅菌処理した液体培地（３％グルコース、０．３％酵母エキス、ｐＨ７．０）１０ｍＬの入った１００ｍＬ容三角フラスコに、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の種菌約２ｍｇを接種し、５〜３５℃の種々の温度でそれぞれ培養し、２８日目にフラスコから菌体を取り出し、蒸留水でよく洗浄した後に乾燥させ、質量を測定した。その結果、菌体質量は５〜１５℃の範囲で直線的に増加し、１５〜２５℃の範囲で緩やかに増加した。２７．５℃以上ではほとんど増殖しなかった。最適生育温度は１５〜２５℃である。
【００２９】
（６）最適生育ｐＨおよび生育範囲
液体培地（３％グルコース、０．３％酵母エキス）のｐＨを１モル／Ｌ塩酸または１モル／Ｌ水酸化カリウムで調整し、ｐＨ３．０〜８．０の種々の培地を調製して菌体の生育ｐＨを調べた。すなわち各培地をフィルター滅菌し、培地１０ｍＬを滅菌済１００ｍＬ容三角フラスコに分注した。マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の種菌約２ｍｇを接種後、２２℃で培養し、フラスコから菌体を取り出し、蒸留水でよく洗浄した後に乾燥させ、質量を測定した。その結果、菌体の生育限界はｐＨ３．０〜７．０、最適生育ｐＨは４．０〜６．０であった。
【００３０】
（７）対峙培養による帯線形成の有無
エビオス寒天平板培地に、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株のブロック（約３ｍｍ×３ｍｍ×３ｍｍ）と、公知の１３種類のマツタケ株（例えば、ＩＦＯ６９１５株；（財）発酵研究所）の各ブロック（約３ｍｍ×３ｍｍ×３ｍｍ）とを、約２ｃｍ間隔に対峙して植菌し、２２℃で３週間培養した後、両コロニー境界部に帯線が生じるか否かを判定した。
【００３１】
その結果、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株は、公知のマツタケ株（１３種類）のいずれの株に対しても明確な帯線を形成しなかった。なお、マツタケでは異株間対峙培養で帯線は生じないとされており、公知のマツタケ株（１３種類）間についても、明確な帯線を形成した組み合わせはなかった。
【００３２】
（８）栄養要求性
滅菌処理した菌根菌用合成培地（「太田培地」。Ｏｈｔａら、”Ｔｒａｎｓ．  Ｍｙｃｏｌ．  Ｓｏｃ．  Ｊｐｎ．”，  ３１，  ３２３−３３４，  １９９０）１０ｍＬの入った１００ｍＬ容三角フラスコに、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の種菌約２ｍｇを接種し、２２℃で培養し、４２日目にフラスコから菌体を取り出し、蒸留水でよく洗浄した後に乾燥させ、質量を測定したところ、菌体４４１ｍｇが得られた。
【００３３】
上記菌根菌用合成培地中の炭素（Ｃ）源であるグルコースの代わりに、２８種類の糖質関連物質のいずれか１つを加えた各培地に、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株を接種して培養し、培養終了後、菌体質量を測定した。その結果、菌体質量が多かった糖質関連物質から菌体質量が少なかった糖質関連物質を順に示せば、以下のとおりである。
【００３４】
小麦デンプン＞トウモロコシデンプン＞デキストリン＞メチルβグルコシド＞セロビオース＞マンノース＞フラクトース＞アラビノース＞ソルビトール＞グルコース＞ラクトース＞グリコーゲン＞マンニトール＞リボース＞マルトース＞トレハロース＞ガラクトース＞ラフィノース＞メリビオース＞Ｎ−アセチルグルコサミン。
【００３５】
なお、セルロース、ダルチトール、シュークロース、キシロース、メチルαグルコシド、イヌリン、イノシトール、およびソルボースでは、菌の発育はほとんどみられなかった。
【００３６】
次に、上記菌根菌用合成培地中の窒素（Ｎ）源である酒石酸アンモニウムの代わりに、１５種類の窒素関連物質のいずれか１つを加えた各培地に、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株を接種して培養し、培養終了後、菌体質量を測定した。
【００３７】
その結果、菌体質量が多かった窒素関連物質から菌体質量が少なかった窒素関連物質を順に示せば、以下のとおりである。
【００３８】
コーンスティープリカー＞大豆ペプトン＞ミルクペプトン＞硝酸アンモニウム＞硫酸アンモニウム＞酒石酸アンモニウム＞炭酸アンモニウム＞アスパラギン＞リン酸アンモニウム＞塩化アンモニウム＞硝酸ナトリウム＞肉エキス＞酵母エキス＞カザミノ酸＞クロレラ＞トリプトーン＞硝酸カリウム。
さらに、上記合成培地中のミネラルおよびビタミン類のうち、特定の１成分を除去した培地に、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株を接種して培養し、培養終了後、菌体質量を測定した。
【００３９】
その結果、塩化カルシウム・二水和物、硫酸マンガン（ＩＩ）・五水和物、硫酸亜鉛・七水和物、硫酸コバルト・七水和物、硫酸銅・五水和物、硫酸ニッケル・六水和物、塩酸アミン、ニコチン酸、葉酸、ビオチン、塩酸ピリドキシン、塩化カーチニン、アデニン硫酸・二水和物、または塩酸コリンのいずれか１つを培地から除いても、菌体質量にほとんど影響がなかった。
【００４０】
一方、硫酸マグネシウム・七水和物、塩化鉄（ＩＩ）、またはリン酸二水素カリウムのいずれか１つを培地から除くと、菌体質量は顕著に減少した。すなわち、マグネシウム、鉄、リン、およびカリウムは、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の増殖に必須と考えられる。
【００４１】
（９）ＤＮＡ塩基組成（ＧＣ含量）
ＧＣ含量は４９．９％である。
【００４２】
（１０）ＲＡＰＤ法により生成するＤＮＡパターン
６種類の異なるＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ）用プライマー（１０ｍｅｒ）をそれぞれ単独で用いるＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ  Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ  ＤＮＡ）法により生成するＤＮＡパターンについて、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株と、公知の４４種類のマツタケ株（例えば、ＩＦＯ  ６９１５株；（財）発酵研究所）とを比較したところ、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株は、公知のマツタケ株（４４種類）のいずれとも異なるＤＮＡパターンを示した。
【００４３】
本発明の感染予防・治療剤および食品は、有効成分として、（ｉ）マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株（例えば、当該株の菌糸体、培養物（Ｂｒｏｔｈ）または子実体）、（ｉｉ）マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の熱水抽出液（例えば、当該株の菌糸体、培養物（Ｂｒｏｔｈ）または子実体の、熱水抽出液）、（ｉｉｉ）マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株のアルカリ溶液抽出液（例えば、当該株の菌糸体、培養物（Ｂｒｏｔｈ）または子実体の、アルカリ溶液抽出液）、（ｉｖ）マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の熱水抽出液またはアルカリ溶液抽出液の陰イオン樹脂吸着画分（例えば、当該株の菌糸体、培養物（Ｂｒｏｔｈ）または子実体の、熱水抽出液またはアルカリ溶液抽出液の陰イオン樹脂吸着画分）、（ｖ）マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の菌糸体の熱水抽出液と、前記菌糸体熱水抽出液を得る際に残留する菌糸体残渣のアルカリ溶液抽出液とを混合して得られる混合液の陰イオン交換樹脂吸着画分であって、（ａ）フェノール硫酸法によるグルコース換算値としての糖質含量が６０〜７２％であり、（ｂ）銅フォリン法によるアルブミン換算値としてのタンパク質含量が２８〜４０％である、前記陰イオン交換樹脂吸着画分、などを含む態様が好ましく例示されるが、これら例示に限定されるものではない。
【００４４】
本発明では上記（ｖ）の態様が好ましい。なおこの（ｖ）の態様に示す陰イオン交換樹脂吸着画分（Ｍ２画分）および該画分を含む免疫増強剤、ストレス負荷回復促進剤は、本出願人によって従前に出願されている（特願２００２−１０６６３２号明細書）。
【００４５】
上記（ｖ）に示す陰イオン交換樹脂吸着画分は、例えば、
マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株をタンク培養により培養し、菌糸体を得る工程（以下、培養工程と称する）、
得られたマツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の菌糸体を熱水で抽出して、菌糸体熱水抽出液を得る工程（以下、熱水抽出工程と称する）、
熱水で抽出した後の前記菌糸体の残渣を、アルカリ溶液で抽出して、菌糸体残渣アルカリ溶液抽出液を得る工程（以下、アルカリ溶液抽出工程と称する）、
前記菌糸体熱水抽出液と前記菌糸体残渣アルカリ溶液抽出液とを混合して得られる混合抽出液を、陰イオン交換樹脂に吸着させる工程（以下、陰イオン交換樹脂吸着工程と称する）、および
適当な溶離液により吸着画分を溶出する工程（以下、溶出工程と称する）
を含む製造方法により調製することができるが、これに限定されるものではない。
【００４６】
上記各工程は、例えば以下に示すように実施することができるが、これに限定されるものでない。
【００４７】
［培養工程］
培養工程は特に限定されるものでなく、一般にマツタケ菌を培養する方法を任意に用いることができるが、例えば、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株（「マツタケ菌Ｉ」）を固形培地または液体培地で培養または保存してマツタケ菌ＩＩを得る工程、前記マツタケ菌ＩＩを静置液体培養してマツタケ菌ＩＩＩを得る工程、前記マツタケ菌ＩＩＩを振盪培養してマツタケ菌ＩＶを得る工程、前記マツタケ菌ＩＶを１００Ｌ未満の小型培養装置を用いて、培養液中に通気を行わない攪拌培養してマツタケ菌Ｖを得る工程、前記マツタケ菌Ｖを１００Ｌ以上の中型・大型培養装置を用いて深部攪拌培養してマツタケ菌ＶＩを得る工程、前記マツタケ菌ＶＩＩを１００Ｌ以上の中型・大型培養装置を用いて深部攪拌培養してマツタケ菌ＶＩＩを得る工程、および前記マツタケ菌ＶＩＩを１００Ｌ以上の中型・大型培養装置を用いて深部撹拌培養してマツタケ菌ＶＩＩＩを得る工程、からなる培養方法（特願２００２−３１１８４０号明細書）が、マツタケ菌の生理活性を損うことなく大量生産できるという点から好適に用いられる。
【００４８】
〈マツタケ菌Ｉを培養または保存してマツタケ菌ＩＩを得る工程〉
用いる培地としては、一般にマツタケ菌を培養する栄養源基質を有する培地であれば特に制限なく使用することができる。例えば、太田培地（Ｏｈｔａら、”Ｔｒａｎｓ．  Ｍｙｃｏｌ．  Ｓｏｃ．  Ｊｐｎ．”，  ３１，  ３２３−３３４，  １９９０）、ＭＭＮ培地（Ｍａｒｘ，  Ｄ．  Ｈ．，  ”Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ”，  ５９：１５３−１６３，  １９６９）、浜田培地（浜田、”マツタケ”，  ９７−１００，  １９６４）等が挙げられるが、これら例示に限定されるものでない。
【００４９】
固形培地用の固形化剤としては、カラギーナン、マンナン、ペクチン、寒天、カードラン、デンプン、アルギン酸等が好適例として挙げられる。これらのうち寒天が好ましい。
【００５０】
使用可能な培地の栄養源基質には、炭素源、窒素源、無機元素源などが挙げられる。
【００５１】
上記炭素源としては、米デンプン、小麦粉デンプン、バレイショデンプン、サツマイモデンプン等のデンプン類；デキストリン、アミロペクシン等の多糖類；マルトース、シュクロース等の少糖類；フラクトース、グルコース等の単糖類などが挙げられる。さらに麦芽エキスを挙げることができる。マツタケ菌の生長速度から、グルコースなどの単糖類が好ましい時期と、デンプン類が好ましい時期とがあるので、時期に応じた炭素源を選択し、必要に応じて組合せて使用する。
【００５２】
上記窒素源としては、酵母エキス、乾燥酵母、コーンスティーブリカー、大豆粉、大豆ペプトンなどの天然由来物質や、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、尿素などが挙げられる。これらは単独で、あるいは組合せて用いることができる。一般に生長速度を考慮すると、天然由来物質、特に酵母エキスが好ましい。
【００５３】
上記無機元素源は、リン酸および微量元素を供給するために使用される。例を挙げると、リン酸塩のほか、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、亜鉛、マンガン、銅、鉄などの金属イオンの無機塩（例えば、硫酸塩、塩酸塩、硝酸塩、リン酸塩、等）があり、必要量を培地中に溶解する。
また、培地にビタミンＢ１などのビタミン類、アミノ酸類を添加することもできる。
【００５４】
さらに、使用するマツタケ菌の性質に応じて、植物抽出物、有機酸、核酸関連物質などを添加することができる。植物抽出物としては、果菜類、根菜類、葉菜類などの抽出物が例示される。有機酸としては、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、フマル酸、乳酸などが例示される。核酸関連物質としては、市販の核酸、核酸抽出物、酵母、酵母エキスなどが例示される。
【００５５】
固形培地を調製する場合、炭素源の使用量は、好ましくは１０〜１００ｇ／Ｌ、より好ましくは１０〜５０ｇ／Ｌ、特に好ましくは２０〜３０ｇ／Ｌである。
【００５６】
窒素源の使用量は、窒素元素相当量で０．００５〜０．１モル／Ｌが好ましく、より好ましくは０．００７〜０．０７モル／Ｌ、特に好ましくは０．０１〜０．０５モル／Ｌである。
【００５７】
リン酸塩の使用量は、リン元素相当量で０．００１〜０．０５モル／Ｌが好ましく、より好ましくは０．００５〜０．０３モル／Ｌ、特に好ましくは０．０１〜０．０２モル／Ｌである。さらに他の無機塩、ビタミン類、植物抽出物、有機酸、核酸関連物質など、マツタケ菌の性質に応じて適宜添加することができる。また、調製した栄養源基質溶液のｐＨを、好ましくは４〜７、より好ましくは４．５〜６．０、特に好ましくは５．０〜５．５とする。
【００５８】
〈静置液体培養〉
次に、マツタケ菌ＩＩ（固形培地または液体培地で培養または保存したマツタケ菌）を静置液体培養してマツタケ菌ＩＩＩを製造する方法について記載する。
通常、１００ｍＬ〜２Ｌ容の三角フラスコを用いて行う。
【００５９】
この静置液体培養は、液体培地にマツタケ菌ＩＩを接種することにより開始する。
【００６０】
接種したマツタケ菌ＩＩを含有する培養液と液体培地とを合せた混合物と、接種したマツタケ菌ＩＩを含有する培養液との体積比（「接種時拡大倍率」）が好ましくは２〜５０倍、より好ましくは３〜３０倍となる量の液体培地を使用する。
【００６１】
接種したマツタケ菌ＩＩを含有する培養液中のマツタケ菌ＩＩの乾燥菌糸体質量と、接種したマツタケ菌ＩＩを含有する培養液と液体培地とを合せた混合物の体積比（「初発菌糸体濃度」）を、好ましくは０．０５〜３ｇ／Ｌ、より好ましくは０．１〜２ｇ／Ｌとなるように、液体培地にマツタケ菌ＩＩを含有する培養液を接種する。
【００６２】
該静置液体培養での培養温度は１５〜３０℃が好ましく、より好ましくは２０〜２５℃であり、培養期間は３０〜４００日間が好ましく、より好ましくは１２０〜２４０日間である。培養期間が３０日未満、あるいは４００日超では、大量培養に適した生育能を有するマツタケ菌ＩＩＩを得ることが困難となる。
【００６３】
静置液体培養後の培養液中の乾燥菌糸体含有量（単位：ｇ／Ｌ）を初発菌糸体濃度との比（「菌糸体増加率」）が、２〜２５倍となるように培養することが、生育能の点から好ましい。
【００６４】
静置液体培養に使用する液体培地は、その浸透圧を、好ましくは０．０１〜０．８ＭＰａ、より好ましくは０．０２〜０．７ＭＰａ、特に好ましくは０．０３〜０．５ＭＰａとなるように、栄養源基質を使用する。
【００６５】
静置液体培養に用いる栄養源基質として、マツタケ菌Ｉを培養する固形培地と同じ炭素源、窒素源、無機元素源、ビタミンＢ１などのビタミン類、アミノ酸類等を使用することができる。
【００６６】
炭素源の使用量は、好ましくは１０〜１００ｇ／Ｌ、より好ましくは２０〜６０ｇ／Ｌ、特に好ましくは２５〜４５ｇ／Ｌである。通常、グルコース等の単糖類を使用する。
【００６７】
窒素源の使用量は、窒素元素相当量で０．００５〜０．１モル／Ｌが好ましく、より好ましくは０．００７〜０．０７モル／Ｌ、特に好ましくは０．０１〜０．０５モル／Ｌである。
【００６８】
リン酸塩を使用する場合は、リン元素相当量で０．００１〜０．０５モル／Ｌが好ましく、より好ましくは０．００５〜０．０３モル／Ｌ、特に好ましくは０．０１〜０．０２モル／Ｌになるようにする。
【００６９】
さらに、他の無機塩、ビタミン類、植物抽出物、有機酸、核酸関連物質など、マツタケ菌の性質に応じて適宜添加することができる。
【００７０】
調製した栄養源基質溶液のｐＨを、好ましくは４〜７、より好ましくは４．５〜６．５、特に好ましくは５．０〜６．０とする。
【００７１】
マツタケ菌ＩＩＩを含有する静置液体培養による培養液の一部若しくは全部を、マツタケ菌ＩＩを含有する培養液（若しくは培養物）と同様に静置液体培養の接種源として、再度、静置液体培養工程で使用することもできる。
【００７２】
〈振盪培養〉
次いで、マツタケ菌ＩＩＩを振盪培養して、マツタケ菌ＩＶを製造する方法について記載する。
【００７３】
通常、３００ｍＬ〜５Ｌ容の三角フラスコを用いて行う。
【００７４】
この振盪培養は、液体培地にマツタケ菌ＩＩＩを接種することにより開始する。
【００７５】
接種したマツタケ菌ＩＩＩを含有する培養液と液体培地とを合せた混合物と、接種したマツタケ菌ＩＩＩを含有する培養液との体積比（「接種時拡大倍率」）が、好ましくは２〜５０倍、より好ましくは３〜３０倍、特に好ましくは５〜１０倍となる量の液体培地を使用する。
【００７６】
なお、接種時拡大倍率に見合う培養液の量を確保するために、静置液体培養を複数の培養装置を用いて製造することもできる。
【００７７】
接種したマツタケ菌ＩＩＩを含有する培養液中のマツタケ菌ＩＩＩの乾燥菌糸体質量と、接種したマツタケ菌ＩＩＩを含有する培養液と液体培地とを合せた混合物の体積比（「初発菌糸体濃度」）を、好ましくは０．０５〜３ｇ／Ｌ、より好ましくは０．１〜２ｇ／Ｌとなるように、液体培地にマツタケ菌ＩＩＩを含有する培養液を接種する。
【００７８】
振盪培養では、培養温度は１５〜３０℃が好ましく、より好ましくは２０〜２５℃であり、培養期間は７〜５０日間が好ましく、より好ましくは１４〜２８日間である。
【００７９】
振盪培養に要する動力として、通常、三角フラスコ内の培養液単位体積あたりの攪拌所要動力０．０５〜０．４ｋＷ／ｍ３を用いる。
【００８０】
静置液体培養後の培養液中の乾燥菌糸体含有量（単位：ｇ／Ｌ）と初発菌糸体濃度との比（「菌糸体増加倍率」）が２〜２５倍となるように培養することが、生育能の点で好ましい。
【００８１】
振盪培養に使用する液体培地は、その浸透圧を、好ましくは０．０１〜０．８ＭＰａ、より好ましくは０．０２〜０．７ＭＰａ、特に好ましくは０．０３〜０．５ＭＰａとなるように、栄養源基質を使用する。
【００８２】
振盪培養に用いられる栄養源基質として、マツタケ菌ＩＩを培養する液体培地と同じ炭素源、窒素源、無機元素源、ビタミンＢ１などのビタミン類、アミノ酸類を使用することができる。
【００８３】
炭素源の使用量は、好ましくは１０〜１００ｇ／Ｌ、より好ましくは２０〜６０ｇ／Ｌ、特に好ましくは２５〜４５ｇ／Ｌである。通常、グルコース等の単糖類を使用する。
【００８４】
窒素源の使用量は、窒素元素相当量で０．００５〜０．１モル／Ｌが好ましく、より好ましくは０．００７〜０．０７モル／Ｌ、特に好ましくは０．０１〜０．０５モル／Ｌである。
【００８５】
リン酸塩の使用量は、リン元素相当量で０．００１〜０．０５モル／Ｌが好ましく、より好ましくは０．００５〜０．０３モル／Ｌ、特に好ましくは０．０１〜０．０２モル／Ｌになるようにする。
【００８６】
さらに、他の無機塩、ビタミン類、アミノ酸類、植物抽出物、有機酸、核酸関連物質など、マツタケ菌の性質に応じて適宜添加することができる。
【００８７】
調製した栄養源基質溶液のｐＨを、好ましくは４〜７、より好ましくは４．５〜６．５、特に好ましくは５．０〜６．０とする。
【００８８】
〈攪拌培養〉
次に、攪拌培養により、マツタケ菌Ｖ、マツタケ菌ＶＩ、マツタケ菌ＶＩＩ、マツタケ菌ＶＩＩＩを製造する方法について記載する。
【００８９】
この攪拌培養は、液体培地にマツタケ菌（ＩＶ〜ＶＩＩ）を接種することにより開始する。
【００９０】
攪拌培養で用いる液体培地は、次のようにして調製することができる。
【００９１】
栄養源基質は、振盪培養で使用する、炭素源、窒素源、無機元素源、ビタミンＢ１などのビタミン類、アミノ酸類と同じものを使用することができる。
【００９２】
炭素源の使用量は、好ましくは１０〜１００ｇ／Ｌ、より好ましくは２０〜６０ｇ／Ｌ、特に好ましくは２５〜４５ｇ／Ｌである。デンプン類を好ましく使用できる。
【００９３】
攪拌を行う培養液中の浸透圧に影響するグルコースなどの単糖類を併用する場合、その使用量は、好ましくは０．１〜６０ｇ／Ｌ、より好ましくは０．５〜４０ｇ／Ｌ、特に好ましくは０．７〜２０ｇ／Ｌである。
【００９４】
窒素源の使用量は、窒素元素相当量で０．００５〜０．１モル／Ｌが好ましく、より好ましくは０．００７〜０．０７モル／Ｌ、特に好ましくは０．０１〜０．０５モル／Ｌである。
【００９５】
リン酸塩の使用量は、リン元素相当量で０．００１〜０．０５モル／Ｌが好ましく、より好ましくは０．００５〜０．０３モル／Ｌ、特に好ましくは０．０１〜０．０５モル／Ｌである。
【００９６】
さらに、他の無機塩、ビタミン類、アミノ酸類、植物抽出物、有機酸、核酸関連物質など、マツタケ菌の性質に応じて適宜、添加することができる。
【００９７】
調製した栄養源基質溶液のｐＨを、好ましくは４〜７、より好ましくは４．５〜６．５、特に好ましくは５．０〜６．０とする。
【００９８】
攪拌培養に使用する液体培地は、その浸透圧を、好ましくは０．０１〜０．８ＭＰａ、より好ましくは０．０２〜０．７ＭＰａ、特に好ましくは０．０３〜０．５ＭＰａとなるように、栄養源基質を使用する。
【００９９】
攪拌培養の培養温度は、１５〜３０℃、好ましくは２０〜２５℃とする。
【０１００】
接種したマツタケ菌（ＩＶ〜ＶＩＩ）を含有する培養液と液体培地とを合せた混合物と、接種したマツタケ菌（ＩＶ〜ＶＩＩ）を含有する培養液との体積比（「接種時拡大倍率」）が、好ましくは２〜５０倍、より好ましくは３〜３０倍、特に好ましくは５〜１０倍となる量の液体培地を使用する。
【０１０１】
接種したマツタケ菌（ＩＶ〜ＶＩＩ）を含有する培養液中のマツタケ菌（ＩＶ〜ＶＩＩ）の乾燥菌糸体質量と、接種したマツタケ菌（ＩＶ〜ＶＩＩ）を含有する培養液と液体培地とを合せた混合物の体積比（「初発菌糸体濃度」）を、好ましくは０．０１〜５ｇ／Ｌ、より好ましくは０．０５〜３ｇ／Ｌ、特に好ましくは０．１〜２ｇ／Ｌとなるように、液体培地にマツタケ菌（ＩＶ〜ＶＩＩ）を含有する培養液を接種する。
【０１０２】
攪拌培養で得られるマツタケ菌（Ｖ〜ＶＩＩ）を、さらに攪拌培養の母菌として用いる場合の培養日数は、３〜２０日間が好ましく、特には５〜１４日間である。
【０１０３】
これらの培養日数後に、マツタケ菌（Ｖ〜ＶＩＩ）の乾燥菌糸体含有量が、好ましくは０．５〜１０ｇ／Ｌ、より好ましくは１〜８ｇ／Ｌ、特に好ましくは１〜６ｇ／Ｌになっている培養液は、攪拌培養に適した生育能を有するマツタケ菌（Ｖ〜ＶＩＩ）を含有している。
【０１０４】
静置液体培養後の培養液中の乾燥菌糸体含有量（単位：ｇ／Ｌ）と初発菌糸体濃度との比（「菌糸体増加率」）が２〜２５倍となるように培養することが、生育能の点で好ましい。
【０１０５】
他方、攪拌培養で得られるマツタケ菌（Ｖ〜ＶＩＩＩ）を、マツタケ菌糸体として分離する場合の培養日数は５〜３０日間であり、好ましくは７〜２０日間、特に好ましくは１０〜１５日間である。
【０１０６】
これらの培養日数から、炭素源の資化速度が著しく低下した時を培養終了とするのが好ましいが、適宜、製造サイクル、製造コスト等の製造形態に合せて決定することができる。
【０１０７】
静置液体培養後の培養液中の乾燥菌糸体含有量（単位：ｇ／Ｌ）と初発菌糸体濃度との比（「菌糸体増加倍率」）が３５〜１００倍となるように培養することが、工業的な生産の点で好ましい。
【０１０８】
マツタケ菌ＩＶを含有する振盪培養で製造した培養液を、１００Ｌ以上の中型、および大型培養槽などの培養装置による攪拌培養工程で使用することもできる。攪拌培養に使用する培養装置は、通気攪拌ができ、無菌性が確保できれば特に制限なく使用することが可能で、必要に応じて通気することができ、または通気装置を装着できるものを使用する。したがって、通常の、小型、中型および大型の培養槽、またはジャーファーメンターを使用することができる。
【０１０９】
１００Ｌ未満のジャーファーメンターまたは小型培養槽を用いて、マツタケ菌ＩＶの培養を行いマツタケ菌Ｖを製造する場合、液体培地中に通気せずに、攪拌培養を行うのが好ましい。１００Ｌ未満のジャーファーメンターまたは小型培養槽で通気を行って培養すると、菌糸が凝集し、成長点が欠失して母菌としての生育能が損われる場合があるからである。
【０１１０】
また、１００Ｌ以上の中型、および大型培養槽などの培養装置により工業スケールで深部攪拌培養を行う場合、必要に応じて通気を行う。この場合の通気量は０．０５〜１．０ｖｖｍ、特には０．２〜０．５ｖｖｍとするのが好ましい。
【０１１１】
攪拌培養における攪拌は、培養初期では培養液単位体積あたりの所要攪拌動力で制御する。通常、０．０１〜２ｋＷ／ｍ３、好ましくは０．０５〜１ｋＷ／ｍ３の範囲で攪拌を行うことにより、マツタケ菌糸体が良好に生育する。培養初期を過ぎれば菌が生育を始め、酸素供給量が不足し、さらに、生育した菌糸体の分散が不十分になるので、適宜、攪拌の強度を大きくすることが必要になる。当該深部攪拌では、培養初期には低通気、低撹拌速度で培養し、培養後期には高通気、高攪拌速度で培養するのが好ましい。
【０１１２】
深部攪拌培養から得られたマツタケ菌糸体の分離・回収は、常法によって行うことができる。例えば、フィルタープレスなどによる濾過、遠心分離などである。得られた菌糸体は、例えば蒸留水により充分に洗浄してから、次の熱水抽出工程を実施するのが好ましい。また抽出効率が向上するように、破砕物または粉体の状態に加工するのが好ましい。
【０１１３】
［熱水抽出工程］
上記熱水抽出工程に用いる熱水の温度は６０〜１００℃が好ましく、より好ましくは８０〜９８℃である。抽出の際には、抽出効率が向上するように、攪拌または振盪しながら実施することが好ましい。抽出時間は、例えば、菌糸体の状態（例えば、破砕物または粉体の状態に加工した場合にはその加工状態）、熱水の温度、または攪拌若しくは振盪の有無若しくは条件に応じて、適宜決定することができるが、通常１〜６時間程度であり、２〜３時間程度が好ましい。
【０１１４】
熱水抽出後、適当な分離操作、例えば、遠心分離または濾過により、菌糸体熱水抽出液と菌糸体残渣とを得ることができる。
【０１１５】
［アルカリ溶液抽出工程］
上記アルカリ溶液抽出工程に用いるアルカリ溶液としては、特に限定されるものではないが、例えば、アルカリ金属（ナトリウム、カリウムなど）の水酸化物、特には水酸化ナトリウムの水溶液を用いることができる。アルカリ溶液のｐＨは８〜１３が好ましく、９〜１２がより好ましい。アルカリ溶液抽出は０〜３０℃程度で実施するのが好ましく、０〜２５℃程度がより好ましい。抽出時間は、例えば、菌糸体残渣の状態（例えば、破砕物または粉体の状態に加工した場合にはその加工状態）、アルカリ溶液のｐＨ若しくは温度、または攪拌若しくは振盪の有無若しくは条件に応じて、適宜決定することができるが、通常３０分間〜５時間程度であり、１〜３時間程度が好ましい。
【０１１６】
アルカリ溶液抽出後、適当な分離操作、例えば、遠心分離または濾過により、菌糸体残渣アルカリ溶液抽出液と菌糸体残渣とを得ることができる。
得られた菌糸体残渣アルカリ溶液抽出液は、中和処理を実施してから、次の陰イオン交換樹脂吸着工程に用いるのが好ましい。
【０１１７】
［陰イオン交換樹脂吸着工程］
熱水抽出工程で得られた菌糸体熱水抽出液と、アルカリ溶液抽出工程で得られた菌糸体残渣アルカリ溶液抽出液とを混合して得られる混合抽出液は、不溶物が混在する状態で、そのまま次の陰イオン交換樹脂吸着工程に用いることもできるが、不溶物を除去してから、あるいは不溶物を除去しさらに抽出液中の低分子画分を除去してから、次の陰イオン交換樹脂吸着工程に用いるのが好ましい。例えば、不溶物が混在する混合抽出液を遠心分離することにより不溶物を除去し、得られる上清のみを次の陰イオン交換樹脂吸着工程に用いることができる。あるいは、不溶物が混在する混合抽出液を遠心分離して得られる前記上清を透析し、低分子画分（好ましくは分子量３５００以下の画分）を除去してから、次の陰イオン交換樹脂吸着工程にて用いることができる。
【０１１８】
上記陰イオン交換樹脂吸着工程に用いることのできる陰イオン交換樹脂としては、公知の陰イオン交換樹脂を用いることができ、例えば、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）セルロースまたはトリエチルアンモニオエチル（ＴＥＡＥ）セルロースを挙げることができる。
【０１１９】
［溶出工程］
上記溶出工程に用いる溶離液は、陰イオン交換樹脂吸着工程に用いる陰イオン交換樹脂の種類に応じて適宜決定することができ、例えば、塩化ナトリウム水溶液などを挙げることができる。
【０１２０】
溶出工程により溶出される画分は、そのまま、本発明の感染予防・治療剤の有効成分として用いることができるが、通常、溶離液に由来する塩を含有するので、それを除去するために、さらに透析を実施するのが好ましい。
【０１２１】
本発明の感染予防・治療剤および食品に有効成分として好適に用いられる、上記した混合抽出液の陰イオン交換樹脂吸着画分は、以下に示す理化学的性質を有する。
【０１２２】
（１）糖質含量：  フェノール硫酸法によるグルコース換算値として６０〜７２％（好ましくは６２〜７０％）である。。
【０１２３】
（２）タンパク質含量：  銅フォリン法によるアルブミン換算値として２８〜４０％（好ましくは３０〜３８％）である。
【０１２４】
（３）糖組成：  グルコース６１μｇ／ｍｇ、マンノース３．３μｇ／ｍｇ、およびガラクトース２．０μｇ／ｍｇである。
【０１２５】
（４）アミノ酸組成：  アスパラギン酸およびアスパラギン１０．３５モル％、トレオニン５．８３モル％、セリン６．２７モル％、グルタミン酸およびグルタミン１０．４９モル％、グリシン８．５５モル％、アラニン９．１９モル％、バリン６．８８モル％、１／２−シスチン０．６０モル％、メチオニン１．４９モル％、イソロイシン５．３６モル％、ロイシン９．２５モル％、チロシン２．５５モル％、フェニルアラニン４．０５モル％、リシン５．１７モル％、ヒスチジン２．１８モル％、アルギニン４．４４モル％、トリプトファン１．８２モル％、およびプロリン５．５４モル％である。
【０１２６】
（５）等電点：  等電点電気泳動法によれば、メインバンドの等電点は５．８５付近である。
【０１２７】
（６）核磁気共鳴分析（ＮＭＲ）
（ｉ）１Ｈ一次元ＮＭＲ分析：  図１に示すスペクトル（測定条件は、後述の実施例６（６）（ｉ）参照）を示す。
【０１２８】
（ｉｉ）１３Ｃ一次元ＮＭＲ分析：  図２および図３に示すスペクトル（測定条件は、後述の実施例６（６）（ｉｉ）参照）を示す。
【０１２９】
（７）円偏光二色性分析：  図４に示すスペクトル（測定条件は、後述の実施例６（７）参照）を示す。
【０１３０】
（８）旋光度：  ４２（２５℃）である。
【０１３１】
（９）赤外分光分析：  図５に示すスペクトル（測定条件は、後述の実施例６（９）参照）を示す。
【０１３２】
（１０）紫外分光分析（ＵＶ）：  図６に示すスペクトル（測定条件は、後述の実施例６（１０）参照）を示す。
【０１３３】
（１１）電子スピン共鳴（ＥＳＲ）：  図７および図８に示すスペクトル（測定条件は、後述の実施例６（１１）参照）を示す。
【０１３４】
（１２）粘度：  還元粘度は１０８（３０℃）である。
【０１３５】
（１３）分子量：  主成分の分子量は２０００ｋＤａである。
【０１３６】
（１４）元素分析：  炭素（Ｃ）、水素（Ｈ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）、リン（Ｐ）および塩素（Ｃｌ）の各含量は、それぞれ、４１．３％、６．０％、５．１％、１．０％、０．０５２％、および０．１６％である。
【０１３７】
（１５）α−グルカン推定含有率：  全糖質に対して７１％である。
【０１３８】
（１６）エンドトキシン含量：  ２．５ｎｇ／ｍｇである。
【０１３９】
なお、上記陰イオン交換樹脂吸着画分に限らず、本発明の感染予防・治療剤および食品の有効成分として、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の菌糸体、培養物（Ｂｒｏｔｈ）、子実体、あるいはこれらの熱水抽出液、アルカリ抽出液、さらにはこれら抽出液の陰イオン交換樹脂吸着画分等も用いることができる。
【０１４０】
本発明の感染予防・治療剤および食品における有効成分として用いられ得るマツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の菌糸体としては、例えば、培養により得られる菌糸体（すなわち培養菌糸体）と培地との混合物から適当な除去手段（例えば、濾過）により培地を除去しただけの状態で使用することもできるし、あるいは、培地を除去した後の菌糸体から適当な除去手段（例えば、凍結乾燥）により水分を除去した菌糸体乾燥物の状態で使用することもでき、さらには前記菌糸体乾燥物を粉砕した菌糸体乾燥物粉末の状態で使用することもできる。
【０１４１】
本発明の感染予防・治療剤および食品における有効成分として用いられ得るマツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の培養物（Ｂｒｏｔｈ）としては、例えば、培養により得られる菌糸体（すなわち培養菌糸体）と培地との混合物の状態で使用することもできるし、あるいは、前記混合物から適当な除去手段（例えば、凍結乾燥）により水分を除去した培養物（Ｂｒｏｔｈ）乾燥物の状態で使用することもでき、さらには前記培養物（Ｂｒｏｔｈ）乾燥物を粉砕した培養物（Ｂｒｏｔｈ）乾燥物粉末の状態で使用することもできる。
【０１４２】
本発明の感染予防・治療剤および食品における有効成分として用いられ得るマツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の子実体としては、例えば、子実体をそのままで、または子実体を破砕した状態で使用することもできるし、あるいは、子実体から適当な除去手段（例えば、凍結乾燥）により水分を除去した子実体乾燥物の状態で使用することもでき、さらには、前記子実体乾燥物を粉砕した子実体乾燥物粉末の状態で使用することもできる。
【０１４３】
本発明の感染予防・治療剤および食品における有効成分として用いられ得るマツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株の熱水抽出液、アルカリ抽出液、これら抽出液の陰イオン交換樹脂吸着画分は、上述した「混合液の陰イオン交換樹脂吸着画分」調製で述べた各方法に準じた方法や、上記特許文献３に示す公知の方法等により、それぞれ得ることができるが、これら方法に限定されるものではない。
【０１４４】
本発明の感染予防・治療および食品は、有効成分であるキシメジ属（Ｔｒｉｃｈｏｌｏｍａ）に属する担子菌類あるいはそれらの抽出物、好ましくはマツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株あるいはその抽出物、特にはＭ２画分を、単独で、あるいは所望により薬剤学的または獣医学的に許容し得る担体とともに、動物、好ましくは哺乳動物（特にはヒト）に投与することができる。
【０１４５】
本発明において、病原性微生物とは、それ自体が病原性を有する微生物のみならず、従来いわゆる非病原菌あるいは平素無害菌と呼ばれる、平素は無害でも宿主の抵抗力が弱ったときになどに二次的に起る感染（日和見感染）症の原因微生物も含む。なお、病原性「微生物」としては、細菌、ウイルス、菌類、原生動物など、通常いわゆる微生物の範疇に含まれるものをすべて包含し得るが、本発明では特に、病原性細菌に対する感染の予防・治療効果に優れる。
【０１４６】
本発明の感染予防・治療剤および食品の対象となる病原性細菌としては、特に限定されるものでなく、例えば緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｏ−１５７等を含む大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ヘリコバクター・ピロリ菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）、バンコマイシン耐性を含むサルモネラ菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎ．  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、バンコマイシン耐性を含む腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）等のグラム陰性菌や、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、メチシリン耐性を含むブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、肺炎球菌（Ｄｉｐｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）等のグラム陽性菌などが挙げられるが、これら例示に限定されるものではない。
【０１４７】
本発明において「感染予防・治療」とは、動物やヒトなど、各種生体にとって有害な病原性微生物の感染（病原微生物の生体内侵入）の予防、感染後の発症の阻止（増殖阻止）並びに病原性微生物感染による発症（病的状態）の治療を意味する。例えば緑膿菌による感染では敗血症、肺炎等が引起される可能性があり、リステリア菌による感染では単球増加症等が引起される可能性があり、本発明感染予防・治療剤および食品はこれら感染症に罹患することを未然に防止する効果を有し、感染症に罹患した場合においてはその治癒効果を有する。したがって、本発明感染予防・治療剤および食品の投与・摂取時期は特に限定されるものでなく、例えば日常的に投与・摂取することによって感染を未然に防止することができ、また、感染した場合は速やかに投与・摂取することにより感染症治癒を効果的に図ることができる。
【０１４８】
本発明の感染症予防・治療剤および食品の投与・摂取剤型としては特に限定されるものでなく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エキス剤、若しくは丸剤等の経口剤、または注射剤、外用液剤、軟膏剤、座剤、局所投与のクリーム、点眼薬などの非経口剤を挙げることができる。
【０１４９】
経口剤は、例えば、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、澱粉、コーンスターチ、白糖、乳糖、ぶどう糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、デキストリン、ポリビニルピロリドン、結晶セルロース、大豆レシチン、ショ糖、脂肪酸エステル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ケイ酸マグネシウム、無水ケイ酸、または合成ケイ酸アルミニウムなどの賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、希釈剤、保存剤、着色剤、香料、矯味剤、安定化剤、保湿剤、防腐剤、または酸化防止剤等を用いて、常法により製造することができる。
【０１５０】
非経口投与方法としては、注射（皮下、静脈内など）または直腸投与等が例示される。なかでも注射剤が最も好適に用いられる。
【０１５１】
例えば、注射剤の調製においては、有効成分の他に生理食塩水若しくはリンゲル液等の水溶性溶剤、植物油若しくは脂肪酸エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ糖若しくは塩化ナトリウム等の等張化剤、溶解補助剤、安定化剤、防腐剤、懸濁化剤、または乳化剤などを任意に用いることができる。
【０１５２】
また、本発明の感染症予防・治療剤および食品は、徐放性ポリマーなどを用いた徐放性製剤の手法を用いて投与してもよい。例えば、本発明の感染症予防・治療剤および食品をエチレンビニル酢酸ポリマーのペレットに取り込ませて、このペレットを治療または予防すべき組織中に外科的に移植することができる。
【０１５３】
本発明の感染症予防・治療剤および食品は、これに限定されるものではないが、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株あるいはその抽出物、陰イオン交換樹脂吸着画分等の有効成分を０．０１〜９９質量％、好ましくは０．１〜８０質量％の量で含有することができる。
【０１５４】
本発明の感染症予防・治療剤および食品を用いる場合の投与・摂取量は、病気の種類、患者の年齢、性別、体重、症状の程度、または投与・摂取方法などに応じて適宜決定することができ、経口的にまた非経口的に投与・摂取することが可能である。
【０１５５】
また、投与・摂取形態も医薬品に限定されるものではなく、種々の形態、例えば、保険機能食品（特定保険用食品、栄養機能食品）やいわゆる健康食品（いずれも飲料を含む）、または飼料として飲食物の形で与えることも可能である。さらには、口中に一時的に含むものの、そのほとんどを口中より吐き出す形態、例えば、歯磨き剤、洗口剤、チューインガム、うがい剤などの形で与えることも、あるいは鼻から吸引させる吸入剤の形で与えることも可能である。例えば、マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株あるいはその抽出物、陰イオン交換樹脂吸着画分等の有効成分を、添加剤（食品添加剤など）として、所望の食品（飲料を含む）、飼料、歯磨剤、洗口剤、チューインガム、またはうがい剤等に添加することができる。
【０１５６】
なお、上記において、特定保険用食品は、その食品が持つ健康機能の表示が認められる食品（食品ごとに厚生労働省の許可を必要とする）をいい、栄養機能食品は栄養成分の機能を明記できる食品（厚生労働省が作成した規格基準を満たす必要あり）をいい、いわゆる健康食品とは上記保険機能食品以外の食品一般を広く意味するもので、健康補助食品等を含むものである。
【０１５７】
また本発明感染予防・治療剤および食品に抗生物質を含有させて製剤化（食品、飲料等含む）してもよい。これにより、感染症の治療において抗生物質の投与量を通常投与量より減じて治療が可能となり、抗生物質による生体への影響を抑えることができる。抗生物質は例えばバンコマイシン、ペニシリン、テトラサイクリン等が例示されるが、これらに限定されるものでなく、感染症の種類に応じて適宜、選択され得る。
【０１５８】
【実施例】
次に、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲をこれらの実施例によってなんら限定されるものでない。
【０１５９】
下記実施例では、病原性細菌の中から、グラム陰性菌として緑膿菌を用い、グラム陽性菌としてリステリア菌を用いて、マツタケの病原性細菌に対する感染予防性を評価した。
【０１６０】
（実施例１）
［マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株菌糸体の混合抽出液の陰イオン交換樹脂吸着画分の調製］
マツタケＦＥＲＭ  ＢＰ−７３０４株菌糸体を、滅菌処理した培地（３％グルコース、０．３％酵母エキス、ｐＨ６．０）３．５ｔの入った７ｔ容培養タンクに接種し、２５℃で攪拌しながら４週間培養を行った。得られた培養物を濾布濾過し、菌糸体を分離した後、蒸留水で充分に洗浄した。
【０１６１】
得られた菌糸体の一部（約１ｋｇ）に精製水３０Ｌを加えて、９８℃の湯浴中で３時間攪拌抽出した。冷却後、遠心分離（８０００ｒｐｍ、３０分間）を行い、上清Ａ１を得た。残渣に精製水３０Ｌを加えて、同一条件下で、再度、抽出および遠心操作を行い、上清Ａ２を得た。
【０１６２】
続いて、上清Ａ２を得た後の残渣に、０．５モル／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液２０Ｌを加え、２５℃で１時間攪拌抽出した。遠心分離を行い、上清Ｂ１を得た。残渣に１．０モル／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液を加え、同一条件で、再度、抽出および遠心操作を行い、上清Ｂ２を得た。得られた上清Ｂ１および上清Ｂ２を合せた後、１．０モル／Ｌ塩酸にて、ｐＨを７．０に調整した（以下、上清Ｂと称する）。
【０１６３】
上清Ａ１、上清Ａ２、および上清Ｂを合せて得られた混合液（以下、抽出混合液Ｍと称する）を透析チューブ（分画分子量３５００）に入れ、流水中で４８時間透析した。透析内溶液を回収し、凍結乾燥機で乾燥し、白色の粉末（約７０ｇ）を得た。
【０１６４】
得られた粉末の一部（１０ｇ）を５０ミリモル／Ｌトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）５００ｍＬに溶解し、あらかじめ同じ緩衝液で平衡化させておいたジエチルアミノエチルセファセル（ＤＥＡＥ  Ｓｅｐｈａｃｅｌ；ファルマシア社）を充填したカラムを通過させ、素通り画分（非吸着画分）Ｍ１を得た。カラムを前記トリス塩酸緩衝液で充分に洗浄した後、０．５モル／Ｌ塩化ナトリウム含有５０ミリモル／Ｌトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）をアプライし、溶出画分（吸着画分）Ｍ２を得た。
【０１６５】
得られたＭ１画分およびＭ２画分を、それぞれ、４℃にて注射用蒸留水で４８時間透析した後、透析内液を凍結乾燥して粉末を得た。菌糸体（乾燥質量）に対するＭ１画分およびＭ２画分の各収量は、それぞれ、７％および１３％であった。
【０１６６】
（実施例２）
［緑膿菌に対するＭ２画分の感染予防性の評価（緑膿菌接種１日前、Ｍ２画分単回投与）］
【０１６７】
（ｉ）被検細菌
緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＡＴＣＣ２７８５３株を用いた。この菌株は北里研究所付属病院で維持しているものである。
【０１６８】
（ｉｉ）対象動物
６週齢のＢＡＬＢ／ｃ雌性マウスを日本チャールズリバー（株）から入手した。マウスは感染実験動物室のセーフティクリーンラック内、ポリカーボネート製ケージＣＬ−０１０３−１（日本クレア）内に収容し、飼料ＣＥ−２（オリエンタル酵母社）と滅菌水道水を自由に与え、温度２３±２℃と湿度５５±１５％、ルミナリ気流（ｌｕｍｉｎａｒｙ  ａｉｒ  ｆｌｏｗ）環境下、午前８時〜午後８時までの光サイクルで飼育した。このマウスを検疫・検収の終了後、１週間予備飼育を行った（７週齢マウス）。
【０１６９】
（ｉｉｉ）細菌懸濁液の調製（ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｐａｓｓａｇｅ）
超低温冷凍庫に凍結保存してある緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＡＴＣＣ２７８５３株を、Ｈｅａｒｔ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎ  Ｂｒｏｔｈ（ＨＩ液体培地）１ｍＬに加えて再懸濁し、白金耳を用いて、ＨＩ液体培地に１．５％アガロースを加えた平板培地（ＨＩＡ培地）に画線し、３７℃孵卵器で１８時間培養した。ＨＩＡ培地上に発育した単一のコロニーより白金線にて釣菌し、ＨＩＡ培地上に画線培養した。ＨＩＡ培地上に発育した菌を白金耳にてコロニーを掻き取り、１０８ＣＦＵ／ｍＬになるようにＰＢＳにて希釈し、ＢＡＬＢ／ｃマウスに２００μＬ尾静脈より接種した。
【０１７０】
４８時間後に同マウスの脾臓を採取し、ブレンダーにてすり潰し、ＰＢＳ５ｍＬ中に再懸濁し、菌液を調製した。調製した菌液をＢＡＬＢ／ｃマウスに腹腔内接種し、４８時間後に同マウス脾臓を採取し、上記と同様にブレンダーにてすり潰し、ＰＢＳ５ｍＬ中に再懸濁した後、白金耳を用いてＨＩＡ培地に画線し、３７℃孵卵器で１８時間培養した。
【０１７１】
ＨＩＡ培地上に発育した単一のコロニーより白金線にて釣菌し、５ｍＬのＨＩ液体培地中に懸濁した後、３７℃恒温槽にて３時間振盪培養を行った。培養後、細菌浮遊液を３００ｍＬのＨＩ培地中に加えて、さらに３７℃恒温槽にて３時間振盪混合培養した。
【０１７２】
培養後、細菌浮遊液を５０００×ｇ  ４℃にて３０分間高速遠心し、上清除去後、５０％グリセロール含有ＨＩ培地２０ｍＬに再懸濁し、１ｍＬずつ分注後、−８０℃にて実験使用時まで保存した。なお、菌液の一部は１０倍段階希釈法にて菌数を測定した。
【０１７３】
（ｉｖ）細菌の接種と被検物資の投与
上記（ｉｉ）に示す７週齢マウスに、被検細菌接種１日前に、上記実施例１で得たＭ２画分（被検物質）の単回腹腔内投与を行った。１回投与ごとの動物あたりの被検物質投与濃度は、投与時に体重計にて体重を測定し、１００ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇの濃度になるように腹腔内に投与した。
【０１７４】
被検物質投与１日後に、上記（ｉｉｉ）で調製した５．０×１０６ＣＦＵの緑膿菌を腹腔内に接種した。なお、コントロール群は菌接種１日前に生理食塩水を腹腔内に投与した。
【０１７５】
（ｖ）生存率の測定
生存率の算出には、１群あたり８匹の動物を用いた。細菌接種後２週間、毎日生死の観察を行った。観察中、生存した個体数を群あたりの総数で除した値に、１００を乗じた値を生存率とした。
【０１７６】
（ｖｉ）統計処理
実験対照群と各被検物質投与群間の有意差は、マン−ホイットニー（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）のＵ検定を、被検物質投与群間の有意差はクルスカル−ワリス（Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ）のＨ検定を行い、いずれの場合も危険率５％未満を有意とした。
【０１７７】
（ｖｉｉ）緑膿菌接種１日前、Ｍ２画分単回投与における感染抵抗生の効果
Ｍ２画分を菌接種１日前に投与したＢＡＬＢ／ｃマウスに、致死量の緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）ＡＴＣＣ２７８５３株を腹腔内に５．０×１０６ＣＦＵ接種し、Ｍ２画分における感染防御能について生存率を算出した。結果を表１に示す。
【０１７８】
【表１】
2004210694.tif 000002
【０１７９】
表１に示されるように、コントロールであるＰＢＳ投与群では菌接種後２日目より死亡個体が認められ、菌接種２日目で２例、５日目に４例死亡し、最終的な試験終了２週間目における生存率は２５％であった。Ｍ２画分投与群のうち、１００ｍｇ／ｋｇ投与群と２０ｍｇ／ｋｇ投与群では、菌接種１日目から試験終了時まで全例生存し、生存率１００％であった。５ｍｇ／ｋｇ投与群では、菌接種１日目に１例、２日目に１例死亡が認められ、最終的な生存率は７５％であった。
【０１８０】
また各群１４日目までの生存日数をマン−ホイットニー（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）のＵ検定を用いて検定を行ったところ、コントロールのＰＢＳ群に対して、Ｍ２画分１００ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ投与群の生存日数は有意（Ｐ＜０．０５）な延長が認められた。Ｍ２画分投与群間での有意な差は認められなかった。
【０１８１】
（実施例３）
［緑膿菌に対するＭ２画分の感染予防性の評価（緑膿菌接種３日前、Ｍ２画分単回投与）］
実施例２において、緑膿菌接種１日前にＭ２画分を投与する代わりに、緑膿菌接種３日前にＭ２画分を投与した以外は、実施例２と同様にして評価実験を行った。結果を表２に示す。
【０１８２】
【表２】
2004210694.tif 000003
【０１８３】
表２に示されるように、コントロールであるＰＢＳ投与群では菌接種後２日目より死亡個体が認められ、菌接種２日目で２例、５日目に４例死亡し、最終的な試験終了２週間目における生存率は２５％であった。Ｍ２画分投与群のうち、１００ｍｇ／ｋｇ投与群では菌接種１日目から試験終了時まで全例生存し、生存率１００％であった。２０ｍｇ／ｋｇ投与群では、菌接種２日目に１例死亡したのみで、最終的な生存率は８７．５％であった。５ｍｇ／ｋｇ投与群では、菌接種２日目に２例、３日目に２例死亡が認められ、最終的な生存率は５０％となった。
【０１８４】
また各群１４日目までの生存日数をマン−ホイットニー（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）のＵ検定を用いて検定を行ったところ、コントロールのＰＢＳ群に対して、Ｍ２画分１００ｍｇ／ｋｇ投与群のみが生存日数の有意（Ｐ＜０．０５）な延長が認められた。Ｍ２画分投与群間での有意な差は認められなかった。
【０１８５】
（実施例４）
［リステリア菌に対するＭ２画分の感染予防性の評価（リステリア菌接種１日前、Ｍ２画分単回投与）］
【０１８６】
（ｉ）被検細菌
リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）ＥＧＤ株を用いた。この菌株は北里研究所付属病院で維持しているものである。
【０１８７】
（ｉｉ）対象動物
６週齢のＣ５７ＢＬ／６雌性マウスを日本チャールズリバー（株）から入手した。マウスは感染実験動物室のセーフティクリーンラック内、ポリカーボネート製ケージＣＬ−０１０３−１（日本クレア）内に収容し、飼料ＣＥ−２（オリエンタル酵母社）と滅菌水道水を自由に与え、温度２３±２℃と湿度５５±１５％、ルミナリ気流（ｌｕｍｉｎａｒｙ  ａｉｒ  ｆｌｏｗ）環境下、午前８時〜午後８時までの光サイクルで飼育した。このマウスを検疫・検収の終了後、１週間予備飼育を行った（７週齢マウス）。
【０１８８】
（ｉｉｉ）細菌懸濁液の調製（ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｐａｓｓａｇｅ）
超低温冷凍庫に凍結保存してあるリステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）ＥＧＤ株を、１％デキストロース含有Ｔｒｙｐｔｉｃ  Ｓｏｙ  Ｂｒｏｔｈ（ＴＳ液体培地）１ｍＬに加えて再懸濁し、白金耳を用いて、ＴＳ液体培地に１．５％アガロースを加えた平板培地（ＴＳＡ培地）に画線し、３７℃孵卵器で１８時間培養した。ＴＳＡ培地上に発育した単一のコロニーより白金線にて釣菌し、１０ｍＬのＴＳＡ液体培地中に溶解した後、３７℃恒温槽にて３時間振盪培養を行った。培養後、細菌浮遊液を５０００×ｇ  ４℃にて３０分間高速遠心を行った。上清除去後、ＰＢＳ１０ｍＬを加えて再懸濁し、菌液を調製した。
【０１８９】
調製した菌液２００μＬをＣ５７ＢＬ／６マウスに腹腔内接種し、４８時間後に同マウス脾臓を採取した。採取した脾臓は、ブレンダーにてすり潰し、ＰＢＳ１０ｍＬ中に再懸濁した後、白金耳を用いてＴＳＡ培地に画線し、３７℃孵卵器で１８時間培養した。調製した菌液２００μＬをＣ５７ＢＬ／６マウスに腹腔内接種し、４８時間後に同マウス脾臓を採取し、上記と同様にブレンダーにてすり潰し、ＰＢＳ１０ｍＬ中に再懸濁した後、白金耳を用いてＴＳＡ培地に画線し、３７℃孵卵器で１８時間培養した。
【０１９０】
ＴＳＡ培地上に発育した単一のコロニーより白金線にて釣菌し、１０ｍＬのＨＩ液体培地中に溶解した後、３７℃恒温槽にて３時間振盪培養を行った。培養後、細菌浮遊液を３００ｍＬのＨＩ培地中に加えて、さらに３７℃恒温槽にて３時間振盪混合培養した。
【０１９１】
培養後、細菌浮遊液を５０００×ｇ  ４℃にて３０分間高速遠心し、上清除去後、５０％グリセロール含有ＴＳ培地２０ｍＬに再懸濁し、１ｍＬずつ分注後、−８０℃にて実験使用時まで保存した。なお、菌液の一部は１０倍段階希釈法にて菌数を測定した。
【０１９２】
（ｉｖ）細菌の接種と被検物資の投与
上記（ｉｉ）に示す７週齢マウスに、被検細菌接種１日前に、上記実施例１で得たＭ２画分（被検物質）の単回腹腔内投与を行った。１回投与ごとの動物あたりの被検物質投与濃度は、投与時に体重計にて体重を測定し、１００ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇの濃度になるように腹腔内に投与した。
【０１９３】
被検物質投与１日後に、上記（ｉｉｉ）で調製した１．０×１０６ＣＦＵのリステリア菌を腹腔内に接種した。なお、コントロール群は菌接種１日前に生理食塩水を腹腔内に投与した。
【０１９４】
（ｖ）生存率の測定
生存率の算出には、１群あたり８匹の動物を用いた。細菌接種後２週間、毎日生死の観察を行った。観察中、生存した個体数を群あたりの総数で除した値に、１００を乗じた値を生存率とした。
【０１９５】
（ｖｉ）統計処理
実験対照群と各被検物質投与群間の有意差は、マン−ホイットニー（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）のＵ検定を、被検物質投与群間の有意差はクルスカル−ワリス（Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ）のＨ検定を行い、いずれの場合も危険率５％未満を有意とした。
【０１９６】
（ｖｉｉ）リステリア菌接種１日前、Ｍ２画分単回投与における感染抵抗生の効果Ｍ２画分を菌接種１日前に投与したＣ５７ＢＬ／６マウスに、致死量（１．０×１０６ＣＦＵ）のリステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）ＥＧＤ株を腹腔内に接種し、Ｍ２画分における感染防御能について生存率を算出した。結果を表３に示す。
【０１９７】
【表３】
2004210694.tif 000004
【０１９８】
表３に示されるように、コントロールであるＰＢＳ投与群では菌接種後３日目より死亡個体が認められ、菌接種３日目で２例、４日目に４例死亡し、最終的な試験終了２週間目における生存率は２５％であった。Ｍ２画分投与群のうち、１００ｍｇ／ｋｇ投与群と２０ｍｇ／ｋｇ投与群では、菌接種１日目から試験終了時まで全例生存し、生存率１００％であった。５ｍｇ／ｋｇ投与群では、菌接種５日目に１例死亡が認められ、最終的な生存率は８７．５％となった。
【０１９９】
また、各群１４日目までの生存日数をマン−ホイットニー（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）のＵ検定を用いて検定を行ったところ、コントロールのＰＢＳ群に対して、Ｍ２画分１００ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ投与群の生存日数は有意（Ｐ＜０．０５）な延長が認められた。Ｍ２画分投与群間での有意な差は認められなかった。
【０２００】
（実施例５）
［リステリア菌に対するＭ２画分の感染予防性の評価（リステリア菌接種３日前、Ｍ２画分単回投与）］
実施例４において、リステリア菌接種１日前にＭ２画分を投与する代わりに、リステリア菌接種３日前にＭ２画分を投与した以外は、実施例４と同様にして評価実験を行った。結果を表４に示す。
【０２０１】
【表４】
2004210694.tif 000005
【０２０２】
表４に示されるように、コントロールであるＰＢＳ投与群では菌接種後３日目より死亡個体が認められ、菌接種３日目で２例、４日目に４例死亡し、最終的な試験終了２週間目における生存率は２５％であった。Ｍ２画分投与群のうち、１００ｍｇ／ｋｇ投与群と２０ｍｇ／ｋｇ投与群では、菌接種１日目から試験終了時まで全例生存し、生存率１００％であった。５ｍｇ／ｋｇ投与群では、菌接種４日目に１例死亡が認められ、最終的な生存率は８７．５％となった。
【０２０３】
また、各群１４日目までの生存日数をマン−ホイットニー（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）のＵ検定を用いて検定を行ったところ、コントロールのＰＢＳ群に対して、Ｍ２画分１００ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ投与群の生存日数は有意（Ｐ＜０．０５）な延長が認められた。Ｍ２画分投与群間での有意な差は認められなかった。
【０２０４】
［考察］
緑膿菌感染早期における生体の防御反応は、好中球やマクロファージなどが中心となって、菌の排除が行われる。しかしこれら食細胞の短期的な働きでは処理されないような大量の菌に対する防御反応は、感染数日後より働く適応免疫（特に緑膿菌の場合は抗原特異的な抗体）によって菌が排除される。上記実施例２および３の結果から、Ｍ２画分投与後の生体内の免疫賦活効果による緑膿菌感染抵抗生は、単回投与では長続きせず、連日投与によって効果が得られる可能性がある。
【０２０５】
一方、リステリア菌は、結核菌やサルモネラ菌などの細菌と同様に、細胞内に寄生し増殖する代表的な細胞内寄生菌である。リステリア菌はマクロファージによる食菌からエスケープし細胞質内で増殖することが可能なため、菌の排除には抗原特異的に感作されたＴ細胞と、サイトカインによって活性化されたマクロファージが感染防御の主体となるため、抗体や補体による感染防御は無効である。上記実施例４および５の結果から、Ｍ２画分はＴｈｌ細胞を分化・誘導させ、強力に防御免疫を生ずる可能性が示唆された。
【０２０６】
（実施例６）
［Ｍ２画分の理化学的性質の検討］
実施例１で得られたＭ２画分、および後述の実施例７で得られた市販マツタケの子実体由来のｍ２画分の理化学的性質を検討した。測定方法およびその結果を以下に示す。
【０２０７】
（１）糖質の定量
フェノール硫酸法を用いる比色により定量した。Ｍ２画分の糖質含量は、グルコース換算値として６２％であった。
【０２０８】
実施例１の操作を別途、２回繰返して得られた２種のＭ２画分について、同様にフェノール硫酸法を用いる比色により糖質含量を測定したところ、グルコース換算値として６９％および７０％であった。
【０２０９】
なお、ｍ２画分の糖質含量は、グルコース換算値として３５％であった。
【０２１０】
さらに、ヨウ素呈色反応を実施したところ、Ｍ２画分およびｍ２画分のいずれも陰性であり、デンプンとは性状の異なる糖質が存在すると考えられた。
【０２１１】
（２）タンパク質の定量
銅フォリン法を用いる比色により定量した。Ｍ２画分のタンパク質含量は、アルブミン換算値として３８％であった。
【０２１２】
実施例１の操作を別途、２回繰返して得られた２種のＭ２画分について、同様に銅フォリン法を用いる比色によりタンパク質含量を測定したところ、アルブミン換算値として３１％および３０％であった。
【０２１３】
なお、ｍ２画分のタンパク質含量は、アルブミン換算値として６５％であった。
【０２１４】
（３）糖質の組成分析
封入管にＭ２画分１．０ｍｇと２モル／Ｌトリフルオロ酢酸０．２ｍＬとを入れ、１００℃で６時間加水分解した後、エバポレータで減圧乾固し、残渣を得た。残渣を純水５００μＬに溶解し、純水で２倍または１０倍希釈した。この溶液５０μＬに内部標準物質ヘプトース５００ｎｇを添加し、カラムＴＳＫ−ｇｅｌＳｕｇａｒ  ＡＸＧＬＣ−９Ａ（１５ｃｍ×４．６ｍｍＩ．Ｄ．）（東ソー）と検出器分光光度計ＲＦ−５３５（島津製作所）とを装着した高速液体クロマトグラフィー装置ＬＣ−９Ａ（島津製作所）にアプライした。カラム温度は７０℃で、移動相およびその流速は０．５Ｍホウ酸カリウム緩衝液（ｐＨ８．７）および０．４ｍＬ／分であった。ポストカラム標識の条件は、反応試薬として１％アルギニン／３％ホウ酸を用い、流速は０．５ｍＬ／分、反応温は１５０℃、検出波長はＥＸ３２０ｎｍおよびＥＭ４３０ｎｍである。
【０２１５】
Ｍ２画分の糖組成は、多い方から順に、グルコース６１μｇ／ｍｇ、マンノース３．３μｇ／ｍｇ、およびガラクトース２．０μｇ／ｍｇであった。
【０２１６】
また、ｍ２画分の糖組成は、多い方から順に、グルコース１２．９μｇ／ｍｇ、ガラクトース１２．６μｇ／ｍｇ、マンノース５．６μｇ／ｍｇ、フコース３．５μｇ／ｍｇ、およびキシロース０．４μｇ／ｍｇであった。
【０２１７】
（４）アミノ酸組成分析
酸加水分解は、以下の手順で実施した。すなわち、封入管にＭ２画分０．３３ｍｇと６モル／Ｌ塩酸０．２ｍＬとを入れ、１１０℃で２２時間加水分解した後、エバポレータで減圧乾固し、残渣を得た。残渣を純水０．５ｍＬに溶解し、その５０μＬをアミノ酸分析に用いた。
【０２１８】
また、アルカリ加水分解（トリプトファン分析用）は、以下の手順で実施した。すなわち、Ｍ２画分０．４８ｍｇをプラスチックチューブに入れた後、可溶性デンプン（Ｓｔａｒｃｈ  ｓｏｌｕｂｌｅ）５ｍｇを含む１％ｎ−オクチルアルコール−４．２モル／Ｌ水酸化ナトリウム溶液１００μＬを加えた。このプラスチックチューブをガラス試験管に入れ、真空封管下、１１０℃で１６時間加水分解した。空冷後、開封し、プラスチックチューブを氷中で冷却し、１．０モル／Ｌ塩酸を添加し、中和した。さらに、精製水８４０μＬを添加して総量１０００μＬとし、その５０μＬをアミノ酸分析に用いた。
【０２１９】
装置は日立Ｌ−８５００型アミノ酸分析計（日立製作所）を用い、ニンヒドリン発色により定量した。
【０２２０】
アミノ酸組成は、アスパラギン酸およびアスパラギン１０．３５モル％、トレオニン５．８３モル％、セリン６．２７モル％、グルタミン酸およびグルタミン１０．４９モル％、グリシン８．５５モル％、アラニン９．１９モル％、バリン６．８８モル％、１／２−シスチン０．６０モル％、メチオニン１．４９モル％、イソロイシン５．３６モル％、ロイシン９．２５モル％、チロシン２．５５モル％、フェニルアラニン４．０５モル％、リシン５．１７モル％、ヒスチジン２．１８モル％、アルギニン４．４４モル％、トリプトファン１．８２モル％、およびプロリン５．５４モル％であった。
【０２２１】
（５）等電点分析
Ｍ２画分を１ｍｇ／ｍＬに調製し、（ｉ）Ｍ２画分溶液１０μＬに純水１０μＬを添加したものに、あるいは、（ｉｉ）Ｍ２画分溶液２０μＬ（タンパク質量として約１．１４μｇ）に、それぞれ、４０％（体積／体積）程度のサッカロースを加え、電気泳動を実施した。電気泳動の条件は以下のとおりである。
【０２２２】
ゲル：  ＩＥＦ−ＰＡＧＥｍｉｎｉ（４％、ｐＨ３〜１０；テフコ社）
泳動用緩衝液：  （陰極）０．０４モル／Ｌ水酸化ナトリウム溶液、（陽極）０．０１モル／Ｌリン酸溶液
泳動条件：  １００Ｖで３０分間泳動を行い、続いて３００Ｖで２０分間泳動を行い、さらに５００Ｖで４０分間泳動を行った。
ＰＩマーカー：  各バンドが１．３５ｇ（ファルマシア）
染色：  銀染色
メインバンドの等電点は５．８５付近であった。
【０２２３】
（６）核磁気共鳴分析（ＮＭＲ）
測定条件は以下のとおりである。
【０２２４】
（ｉ）１Ｈ一次元ＮＭＲ測定
Ｍ２画分７ｍｇにＤ２Ｏ  ８００μＬを加え、超音波で約５分間溶解を試みた後、遠心機にかけ、その上清部分を測定に使用した。測定条件は以下のとおりである。
【０２２５】
測定装置：  ＵＮＩＴＹ  ＩＮＯＶＡ６００型（バリアン社）
観測周波数：  ５９９．６ＭＨｚ（１Ｈ核）
溶媒：  Ｄ２Ｏ溶液（飽和溶液）
基準：  ＴＳＰ０．００ｐｐｍ（１Ｈ）
温度：  ２５℃
繰返し時間：  ７．０秒（１Ｈ）
積算回数：  ２５６回
【０２２６】
得られたスペクトルを図１に示す。３．０〜５．６ｐｐｍに糖由来のシグナルが強く観測された。０．５〜３．０ｐｐｍに観測されたシグナルがアミノ酸の側鎖由来であると考えると、糖由来のシグナル強度がアミノ酸由来のシグナル強度よりかなり強いことから、Ｍ２画分は構造内に多くの糖を含むことが推定された。また、６．６〜７．６ｐｐｍに芳香族アミノ酸のＮＭＲシグナルが観測された。
【０２２７】
また、α−グルカンの推定含有率は７１％であった。
【０２２８】
（ｉｉ）１３Ｃ一次元ＮＭＲ測定
Ｍ２画分を、約２０．５ｍｇ／０．７５ｍＬになるように、Ｄ２Ｏ／ＣＤ３ＯＤ（７２５／２５）に溶解し、以下の操作条件で測定した。
【０２２９】
観測周波数：  １２５．８ＭＨｚ
基準：  重メタノール（δ＝４９ｐｐｍ）
温度：  ４５℃
観測幅：  ３１．４ｋＨｚ
データ点：  ６４Ｋ
パルス幅：  約４１°
パルス繰返し時間：  ２．５秒
積算回数：  ４０００
デカップリング：  １Ｈ完全デカップリング
【０２３０】
結果を図２および図３に示す。糖質由来のシグナルとアミノ酸由来のシグナルとを観察したが、糖質のシグナル強度はアミノ酸由来のものよりも強かった。Ｍ２画分の構成糖の大部分はグルコースであることから、９５〜１１０ｐｐｍのシグナルはグルコースの１位の炭素であり、１０５ｐｐｍ付近のシグナルはβ１位の炭素であり、１０２ｐｐｍ付近および９９ｐｐｍ付近のシグナルはα１位の炭素であると考えられる。この結果から、少なくとも３種類以上の結合様式が推定された。６３ｐｐｍ付近のシグナルは６位の炭素であるが、ここでも３種類のシグナルが存在し、Ｍ２画分が３種類以上の結合様式を有することを支持している。また、７０〜８０ｐｐｍ付近のシグナルから、４位が結合に関与していると考えられ、α１−４結合とβ１−４結合の存在が推定される。
【０２３１】
（７）円偏光二色性分析（ＣＤ）
Ｍ２画分約３ｍｇに水を添加し、２ｍｇ／ｍＬとした。沈殿が若干あったので、遠心して上清部分を測定に使用した。測定条件は以下のとおりである。
【０２３２】
測定装置：  ＪＡＳＣＯＪ−５００Ａ
溶媒：  水
タンパク質濃度：  約２ｍｇ／ｍＬ
波長範囲：  ２００〜２５０ｎｍ
セル長：  １ｍｍ
温度：  室温（約２３℃）
積算回数：  ８回
【０２３３】
得られたＣＤスペクトルを図４に示す、ＣＤ値（縦軸）は楕円核（ｍｄｅｇ）で示した。αヘリックスなどの規則的な二次構造は若干存在するが、不規則構造が主要な構造と推定された。
【０２３４】
（８）旋光度
２５℃で測定したところ、４２であった。
【０２３５】
（９）赤外分光分析
赤外分光分析は、ＫＢｒ法により実施した。より具体的には、Ｍ２画分０．５ｍｇと、ＫＢｒ粉末１５ｍｇとを均質に混合した後、プレスして円盤状に成型し、測定を実施した。
【０２３６】
得られたスペクトルを図５に示す。このスペクトルからＭ２画分には多糖類が含まれることが示唆された。
【０２３７】
（１０）紫外分光分析（ＵＶ）
Ｍ２画分を純水に溶解し、０．５ｍｇ／１０ｍＬ濃度で測定した。装置は２５００ＰＣ（島津製作所）を使用した。
【０２３８】
得られた紫外可視吸収スペクトルを図６に示す。２６０〜２７０ｎｍにおいて弱い吸収極大が認められた。
【０２３９】
（１１）電子スピン共鳴（ＥＳＲ）
ＥＳＰ３５０Ｅ（Ｂｒｕｃｋｅｒ社）を用い、窒素雰囲気下での試料のＥＳＲを測定した。おもな操作条件は表５に示すとおりである。
【０２４０】
結果を表６、図７および図８に示す。図７および図８において、縦軸の「強度（ａｒｂ．  ｕｎｉｔｓ）」は、縦軸に示す「強度」の単位が任意単位であることを意味する。炭素ラジカルに起因すると考えられるシグナルを、ｇ＝２．００４付近に観察した。また、ｇ＝４．２５（Ｆｅ３＋）付近とｇ＝２．０３〜２．０５付近のシグナルは、遷移金属イオンに起因するものと考えられる。
【０２４１】
【表５】
2004210694.tif 000006
【０２４２】
【表６】
2004210694.tif 000007
【０２４３】
（１２）粘度
試料（Ｍ２画分またはｍ２画分）０．５ｇを精製水１００ｍＬに溶解し、１００００ｒｐｍで遠心分離後、上清をとり、精製水で１．６７ｍｇ／ｍＬに調整した後、オストワルド粘度計を用いて、３０℃で還元粘度を測定した。Ｍ２画分の還元粘度は１０８ηであり、ｍ２画分の還元粘度は９２４ηであった。
【０２４４】
（１３）分子量
試料（Ｍ２画分またはｍ２画分）を精製水で２〜３ｍｇ／ｍＬとなるように溶解し、以下の条件でゲル濾過を実施した。分子量既知の標準曲線に溶出時間を外挿し、分子量を算出した。
【０２４５】
装置：  送液ポンプＬＣ−７Ａ（島津製作所）
検出器：  紫外分光光度計検出器ＳＰＤ−６Ａ（島津製作所）
カラム：  ＴＳＫ−ｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷ（７．５ｍｍＩ．Ｄ．×３０ｃｍ）（東ソー）
カラム温度：  室温
移動相：  ０．１５モル／Ｌ硫酸ナトリウム含有５０ミリモル／Ｌリン酸緩衝系（ｐＨ７．０）
移動相流速：  ０．８ｍＬ／分
検出波長：  ２１４ｎｍ
【０２４６】
Ｍ２画分では、主成分の分子量は２０００ｋＤａであり、それ以外に４．０ｋＤａおよび１．２ｋＤａの成分も確認された。また、ｍ２画分では、主成分の分子量は２０００ｋＤａであり、それ以外に７．０ｋＤａおよび１．０ｋＤａの成分も確認された。
【０２４７】
（１４）元素分析
炭素（Ｃ）、水素（Ｈ）、および窒素（Ｎ）は、有機微量元素分析計（ヤナコＣＨＮコーダーＴＭ−５型）を用いて測定した。
【０２４８】
また、硫黄（Ｓ）、リン（Ｐ）、および塩素（Ｃｌ）については、試料をボンベ法で燃焼分解後、吸収液中のＳＯ４２−、ＰＯ４３−、およびＣｌ−をイオンクロマトグラフィー（ＩＣ）法で測定し、各元素に換算した。具体的には、試料０．１ｇにアセトン１ｍＬを加え、酸素３Ｍｐａ導入後、燃焼して３０分間水冷した。０．１モル／Ｌ−ＮａＯＨの吸収液と洗浄液とを合せて１００ｍＬに定容後、ダイオネクスＤＸ−３００型ＩＣを用いて測定した。結果を表７に示す。
【０２４９】
【表７】
2004210694.tif 000008
【０２５０】
（１５）α−グルカン推定含有率
試料（Ｍ２画分またはｍ２画分）を０．５モル／Ｌ酢酸緩衝液（ｐＨ４．３）に溶解し、アミログルコシダーゼ溶液（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏ．）を加えて、６０℃で３０分間振盪した。次いで、液のｐＨを４．５に調整後、グルコアミラーゼ（和光純薬）を加えて、６０℃で３０分間振盪した。反応終了後、得られた各反応液中のグルコース量をグルコース測定計にて測定後、ブランク溶液のグルコース量から差し引いた値を、「α−グルカン推定量」とした。一方、試料に１．０モル／Ｌ硫酸を加え、１００℃で１８時間加水分解後、中和し、得られた各反応液中のグルコース量をグルコース測定計にて測定し、「総グルカン量」とした。α−グルカン推定含有率は、前記「総グルカン量」に対する前記「α−グルカン推定量」の百分率として算出した。
【０２５１】
Ｍ２画分のα−グルカン推定含有率は、全糖質に対して７１％であり、ｍ２画分α−グルカン推定含有利通は、全糖質に対して３２％であった。
【０２５２】
（１６）エンドトキシンの定量
市販測定キット（エンドスペーシー；生化学工業）およびエンドトキシンフリーの器具および試薬（生化学工業）を用い、ＬＡＬ（Ｌｉｍｕｌｕｓ  Ａｍｏｅｂｏｃｙｔｅ  Ｌｙｓａｔｅ）反応（Ｏｈｂａｙａｓｈｉ  Ｔ．ら、”Ｃｌｉｎ．  Ｃｈｅｍ．  Ａｃｔａ”，  １４９，  ５５−６５，  １９８５）によりエンドトキシン量を定量した。
【０２５３】
すなわち、Ｍ２画分を適当な濃度になるように蒸留水に溶解した後、その５０μＬをエンドトキシンフリーの９６ウェルマイクロプレートに分注した。別のウェルには、蒸留水またはエンドトキシン標準液の希釈系列を同量分注した。次いで、マイクロプレートの各ウェルにＬＡＬ溶液（カブトガニ由来試液）５０μＬを分注し、３７℃で３０分間インキュベートし、ジアゾカップリング試薬を加え、発色させた後、５４５ｎｍ（対照６３０ｎｍ）の吸光度を測定した。標準液の検量線からＭ２画分のエンドトキシン量を算出したところ、２．５ｎｇ／ｍｇであった。
【０２５４】
（実施例７）
［市販マツタケの混合抽出液の陰イオン交換樹脂吸着画分の調製］
市販の長野産マツタケ子実体１００ｇを凍結乾燥して水分を除去した後、粉砕して粉末１５ｇを得た。
【０２５５】
以下、出発材料として菌糸体の代わりに、前記子実体粉末を用いること以外は、実施例１の抽出および分画操作を繰返すことにより、非吸着画分ｍ１および吸着画分ｍ２を得た。
【０２５６】
ｍ２画分も、Ｍ２画分よりは低いものの、病原性細菌に対する感染抵抗性が認められた。
【０２５７】
【発明の効果】
以上詳述したように、本発明の感染予防・治療剤および食品は、緑膿菌、リステリア菌等の病原性細菌に対する感染を未然に防止することができ、また感染症に罹患した場合でも効果的に治療を行うことができる。さらに抗生物質とともに摂取することにより、抗生物質の使用量を低減させることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】吸着画分Ｍ２の１Ｈ一次元ＮＭＲ測定により得られたスペクトルである。
【図２】吸着画分Ｍ２の１３Ｃ一次元ＮＭＲ測定により得られたスペクトルである。
【図３】吸着画分Ｍ２の１３Ｃ一次元ＮＭＲ測定により得られたスペクトル（広域）である。
【図４】吸着画分Ｍ２の円偏光二色性分析により得られたＣＤスペクトルである。
【図５】吸着画分Ｍ２の赤外分光分析により得られたスペクトルである。
【図６】吸着画分Ｍ２の紫外分光分析により得られたスペクトルである。
【図７】吸着画分Ｍ２のＥＳＲ分析により得られたスペクトルである。
【図８】吸着画分Ｍ２のＥＳＲ分析により得られたスペクトル（広域）である。
【図１】
2004210694.tif 000009
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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