(57)【要約】【課題】ＶＥＧＦの働きを抑制し、ＶＥＧＦによる血管新生又は血管透過性亢進が関与している疾患の治療に有効である新規ＶＥＧＦアンチセンス化合物を提供することを目的とする。【解決手段】一般式ＨＯ−Ｂ１−Ｂ２−Ｂ３−Ｂ４−Ｂ５−Ｂ６−Ｂ７−Ｂ８−Ｂ９−Ｂ１０−Ｂ１１−Ｂ１２−Ｂ１３−Ｂ１４−Ｂ１５−Ｂ１６−Ｂ１７−Ｂ１８−Ｂ１９−Ｂ２０−Ｂ２１−Ｂ２２−Ｈ        （Ｉ）（式中、Ｂ１乃至Ｂ３、Ｂ８、Ｂ１１及びＢ２０は同一又は異なってＣｐ等を示し、Ｂ４、Ｂ５、Ｂ７、Ｂ９、Ｂ１２、Ｂ１４乃至Ｂ１６及びＢ２１は同一又は異なってＡｐ等を示し、Ｂ６、Ｂ１０、Ｂ１３及びＢ１７は同一又は異なってＧｐ等を示し、Ｂ１８及びＢ１９は同一又は異なってＴｐ等を示し、Ｂ２２はＴｔ等を示す。）で表わされる化合物、及び、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）
ＨＯ−Ｂ１−Ｂ２−Ｂ３−Ｂ４−Ｂ５−Ｂ６−Ｂ７−Ｂ８−Ｂ９−Ｂ１０−Ｂ１１−Ｂ１２−Ｂ１３−Ｂ１４−Ｂ１５−Ｂ１６−Ｂ１７−Ｂ１８−Ｂ１９−Ｂ２０−Ｂ２１−Ｂ２２−Ｈ        （Ｉ）
（式中、Ｂ１乃至Ｂ３、Ｂ８、Ｂ１１及びＢ２０は同一又は異なって式
【化１】
2004315451.tif 000026
で表される基（以下、「Ｃｐ」と表記する。）、式
【化２】
2004315451.tif 000027
で表される基（以下、「Ｃｓ」と表記する。）又は一般式Ｃｅ
【化３】
2004315451.tif 000028
（式中、ｌは１乃至５の整数を示す。）で表される基を示し、
Ｂ４、Ｂ５、Ｂ７、Ｂ９、Ｂ１２、Ｂ１４乃至Ｂ１６及びＢ２１は同一又は異なって式
【化４】で表される基（以下、「Ａｐ」と表記する。）、式
2004315451.tif 000029
【化５】
2004315451.tif 000030
で表される基（以下、「Ａｓ」と表記する。）又は一般式Ａｅ
【化６】
2004315451.tif 000031
（式中、ｍは１乃至５の整数を示す。）で表される基を示し、
Ｂ６、Ｂ１０、Ｂ１３及びＢ１７は同一又は異なって式
【化７】
2004315451.tif 000032
で表される基（以下、「Ｇｐ」と表記する。）、式
【化８】
2004315451.tif 000033
で表される基（以下、「Ｇｓ」と表記する。）、式
【化９】
2004315451.tif 000034
で表される基（以下、「Ｇｍ」と表記する。）又は一般式
【化１０】
2004315451.tif 000035
（式中、ｎは１乃至５の整数を示す。）で表される基を示し、
Ｂ１８及びＢ１９は同一又は異なって式
【化１１】
2004315451.tif 000036
で表される基（以下、「Ｔｐ」と表記する。）、式
【化１２】
2004315451.tif 000037
で表される基（以下、「Ｔｓ」と表記する。）又は一般式
【化１３】
2004315451.tif 000038
（式中、ｏは１乃至５の整数を示す。）で表される基を示し、
Ｂ２２は式
【化１４】
2004315451.tif 000039
で表される基（以下、「Ｔｔ」と表記する。）又は一般式Ｔｅｔ
【化１５】
2004315451.tif 000040
（式中、ｐは１乃至５の整数を示す。）で表される基を示す。但し、Ｂ１乃至Ｂ３、Ｂ８、Ｂ１１及びＢ２０が同一又は異なってＣｐ又はＣｓであり、
Ｂ４、Ｂ５、Ｂ７、Ｂ９、Ｂ１２、Ｂ１４乃至Ｂ１６及びＢ２１が同一又は異なってＡｐ又はＡｓであり、Ｂ６、Ｂ１０、Ｂ１３及びＢ１７が同一又は異なってＧｐ、Ｇｓ又Ｇｍはであり、
Ｂ１８及びＢ１９が同一又は異なってＴｐ又はＴｓであり、且つ、Ｂ２２がＴｔである場合は除かれる。）
を有する化合物、及び、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項２】
請求項１において、Ｂ１乃至Ｂ３、Ｂ８、Ｂ１１及びＢ２０が同一又は異なってＣｓ又はＣｅであり、
Ｂ４、Ｂ５、Ｂ７、Ｂ９、Ｂ１２、Ｂ１４乃至Ｂ１６及びＢ２１が同一又は異なってＡｓ又はＡｅであり、Ｂ６、Ｂ１０、Ｂ１３及びＢ１７が同一又は異なってＧｓ、Ｇｍ又はＧｅであり、且つ、
Ｂ１８及びＢ１９が同一又は異なってＴｓ又はＴｅである化合物、及び、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項３】
請求項１乃至２の何れか１項において、Ｂ１乃至Ｂ３がＣｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項４】
請求項３において、Ｂ４がＡｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項５】
請求項４において、Ｂ５がＡｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項６】
請求項５において、Ｂ６がＧｍ又はＧｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項７】
請求項６において、Ｂ７がＡｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項８】
請求項７において、Ｂ８がＣｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項９】
請求項１乃至８の何れか１項において、Ｂ２２がＴｅｔであり、且つ、Ｂ２１がＡｅであり、且つ、Ｂ２０がＣｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項１０】
請求項９において、Ｂ１９がＴｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項１１】
請求項１０において、Ｂ１８がＴｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項１２】
請求項１１において、Ｂ１７がＧｍ又はＧｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項１３】
請求項１２において、Ｂ１６がＡｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項１４】
請求項１３において、Ｂ１５がＡｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項１５】
請求項１４において、Ｂ１４がＡｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項１６】
請求項１乃至１５の何れか１項において、ｌ、ｍ、ｎ、ｏ及びｐが同一又は異なって１又は２である化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項１７】
請求項１６において、ｌ、ｍ、ｎ、ｏ及びｐが同一であって、１又は２である化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【請求項１８】
請求項１７において、ｌ、ｍ、ｎ、ｏ及びｐが２である化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ＶＥＧＦの働きを抑制し、ＶＥＧＦによる血管新生又は血管透過性亢進が関与している疾患の治療に有効である新規ＶＥＧＦアンチセンス化合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
血管内皮細胞増殖因子ＶＥＧＦ（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）は、血管内皮細胞に特異的に働き、血管新生を促進する成長因子である。血管新生は、血管内皮細胞が成長因子や生理活性物質または機械的損傷などの刺激を受けて、増殖することによって行われ、発生、創傷治癒、炎症などにおいて重要な役割を果たしている。固形ガンでは、ガン組織が直径１〜２ｍｍを越えて増殖するためには、腫瘍にとって必要な酸素や栄養を供給するために、既存血管から新生血管が延びてガン組織まで到達することが必要であり（Ｊ．  Ｆｏｌｋｍａｎ，  Ｊ．Ｎａｔｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，  ８２：４  （１９９０））、また血管がガン組織に到達するとガン組織の増殖が爆発的に加速されることが知られ、さらに、癌細胞の転移はこの血管を通して行われる。ＶＥＧＦは、腫瘍の血管新生において中心的な役割を果たすと考えられている。ＶＥＧＦのガンでの関与については、１）多くのガン細胞はＶＥＧＦを分泌する（Ｓ．  Ｋｏｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．，  １９４：１２３４（１９９３））、２）ガン組織切片を抗ＶＥＧＦ抗体で染色するとガン組織およびその周辺の新生血管が強く染色される（Ｈ．  Ｆ．  Ｄｖｏｒａｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １７４：１２７５（１９９１）．、Ｌ．  Ｆ．  Ｂｒｏｗｎ  ａｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ５３：４７２７  （１９９３））、３）ＶＥＧＦレセプターの一つが遺伝的に不活化されたマウスでは移植されたガンの増殖が抑制される（Ｂ．  Ｍｉｌｌａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３６７：５７６  （１９９４））、４）抗ＶＥＧＦ中和抗体が担ガンマウスに対して抗腫瘍活性を示す（Ｋ．  Ｊ．  Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３６２：８４１  （１９９３）、Ｓ．  Ｋｏｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．，  １９４：１２３４（１９９３））等が報告されている。以上の事実から、ガン細胞が分泌するＶＥＧＦが腫瘍血管新生において主要な役割を果していると考えられ、ＶＥＧＦの血管新生活性を抑制する物質が癌の増殖や転移を抑制できるのではないかと期待されている。また、糖尿病患者の半数近くに合併症として眼疾患である糖尿病網膜症が認められる。糖尿病網膜症は、酸素不足により微小毛細血管の形成が促進され、やがてこれが破裂・出血してはん痕組織を形成し、ついには網膜剥離・失明に至ると考えられている。従って、血管新生を抑制することで網膜症の重篤化が抑制できるのではないかと期待されている。Ｍｉｌｌｅｒら（Ｍｉｌｌｅｒら：  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．  １４５，  ｐｐ．５７４−５８４  （１９９４））はサルを用いた実験の結果から、増殖性の網膜症の進展にＶＥＧＦが極めて密接な関わりを持つことを報告している。そのため、ＶＥＧＦの血管新生活性を抑制する物質が、糖尿病網膜症の予防あるいは治療のために有用であると考えられる。更に慢性関節リューマチ、乾癬、血管腫、強皮症、血管新生緑内障などの疾病においても病理的血管新生を伴い、それが主な症状の一つとなっている（Ｊ．  Ｆｏｌｋｍａｎ，  Ｎ��  Ｅｎｇｌｅ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．，  ３２０：１２１１  （１９８９））。従ってＶＥＧＦの働きを抑制する物質は前述の血管新生が関与している種々の疾患の治療に利用できる可能性がある。また、ＶＥＧＦは、血管新生だけではなく、血管透過性亢進にも関与していることが知られている。ＶＥＧＦによる血管透過性亢進は、癌性腹水貯留や虚血再灌流障害時の脳浮腫（Ｎｉｃｈｏｌａｓ  ｖａｎ  Ｂｒｕｇｇｅｎら：  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １０４：  １６１３−１６２０．  （１９９９））などの病的症状に関与していることが示唆されている。したがって、ＶＥＧＦの働きを抑制する物質は、ＶＥＧＦによる血管新生又は血管透過性亢進が関与している上記の疾患の治療に有用であると考えられる。
【０００３】
そのような化合物として、下記の配列
５’−ｃｃｃａａｇａｃａｇｃａｇａａａｇｔｔｃａｔ−３’  （配列表の配列番号  １）
を有し、各塩基間がホスホロチオエートで結合しているアンチセンス分子（以下、「化合物Ａ」とする。）が知られている（Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  （１９９５）  ２７０，  ２８３１６−２８３２４）。
【０００４】
しかしながら、化合物ＡはＶＥＧＦの抑制活性が充分でなく、より強力なＶＥＧＦの抑制活性を有する化合物が期待されていた。
【０００５】
【非特許文献１】
Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  （１９９５）  ２７０，  ２８３１６−２８３２４
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者は、ＶＥＧＦの働きを抑制する物質について検討した結果、一般式（Ｉ）を有する化合物を含有する医薬が強力なＶＥＧＦの抑制活性を有し、ＶＥＧＦによる血管新生又は血管透過性亢進が関与している疾患の治療に有用であることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
下記一般式（Ｉ）
ＨＯ−Ｂ１−Ｂ２−Ｂ３−Ｂ４−Ｂ５−Ｂ６−Ｂ７−Ｂ８−Ｂ９−Ｂ１０−Ｂ１１−Ｂ１２−Ｂ１３−Ｂ１４−Ｂ１５−Ｂ１６−Ｂ１７−Ｂ１８−Ｂ１９−Ｂ２０−Ｂ２１−Ｂ２２−Ｈ        （Ｉ）
（式中、Ｂ１乃至Ｂ３、Ｂ８、Ｂ１１及びＢ２０は同一又は異なって式
【０００８】
【化１６】
2004315451.tif 000002
【０００９】
で表される基（以下、「Ｃｐ」と表記する。）、式
【００１０】
【化１７】
2004315451.tif 000003
【００１１】
で表される基（以下、「Ｃｓ」と表記する。）又は一般式Ｃｅ
【００１２】
【化１８】
2004315451.tif 000004
【００１３】
（式中、ｌは１乃至５の整数を示す。）で表される基を示し、
Ｂ４、Ｂ５、Ｂ７、Ｂ９、Ｂ１２、Ｂ１４乃至Ｂ１６及びＢ２１は同一又は異なって式
【００１４】
【化１９】
2004315451.tif 000005
【００１５】
で表される基（以下、「Ａｐ」と表記する。）、式
【００１６】
【化２０】
2004315451.tif 000006
【００１７】
で表される基（以下、「Ａｓ」と表記する。）又は一般式Ａｅ
【００１８】
【化２１】
2004315451.tif 000007
【００１９】
（式中、ｍは１乃至５の整数を示す。）で表される基を示し、
Ｂ６、Ｂ１０、Ｂ１３及びＢ１７は同一又は異なって式
【００２０】
【化２２】
2004315451.tif 000008
【００２１】
で表される基（以下、「Ｇｐ」と表記する。）、式
【００２２】
【化２３】
2004315451.tif 000009
【００２３】
で表される基（以下、「Ｇｓ」と表記する。）、式
【００２４】
【化２４】
2004315451.tif 000010
【００２５】
で表される基（以下、「Ｇｍ」と表記する。）又は一般式
【００２６】
【化２５】
2004315451.tif 000011
【００２７】
（式中、ｎは１乃至５の整数を示す。）で表される基を示し、
Ｂ１８及びＢ１９は同一又は異なって式
【００２８】
【化２６】
2004315451.tif 000012
【００２９】
で表される基（以下、「Ｔｐ」と表記する。）、式
【００３０】
【化２７】
2004315451.tif 000013
【００３１】
で表される基（以下、「Ｔｓ」と表記する。）又は一般式
【００３２】
【化２８】
2004315451.tif 000014
【００３３】
（式中、ｏは１乃至５の整数を示す。）で表される基を示し、
Ｂ２２は式
【００３４】
【化２９】
2004315451.tif 000015
【００３５】
で表される基（以下、「Ｔｔ」と表記する。）又は一般式Ｔｅｔ
【００３６】
【化３０】
2004315451.tif 000016
【００３７】
（式中、ｐは１乃至５の整数を示す。）で表される基を示す。但し、Ｂ１乃至Ｂ３、Ｂ８、Ｂ１１及びＢ２０が同一又は異なってＣｐ又はＣｓであり、
Ｂ４、Ｂ５、Ｂ７、Ｂ９、Ｂ１２、Ｂ１４乃至Ｂ１６及びＢ２１が同一又は異なってＡｐ又はＡｓであり、Ｂ６、Ｂ１０、Ｂ１３及びＢ１７が同一又は異なってＧｐ、Ｇｓ又ＧｓはＧｍであり、
Ｂ１８及びＢ１９が同一又は異なってＴｐ又はＴｓであり、且つ、Ｂ２２がＴｔである場合は除かれる。）
を有する化合物、及び、その薬理学上許容される塩を含有する医薬。
【００３８】
上記一般式（Ｉ）で表される化合物、又は、その薬理学上許容される塩を含有する医薬において、好適には、
（１）Ｂ１乃至Ｂ３、Ｂ８、Ｂ１１及びＢ２０が同一又は異なってＣｓ又はＣｅであり、
Ｂ４、Ｂ５、Ｂ７、Ｂ９、Ｂ１２、Ｂ１４乃至Ｂ１６及びＢ２１が同一又は異なってＡｓ又はＡｅであり、Ｂ６、Ｂ１０、Ｂ１３及びＢ１７が同一又は異なってＧｓ、Ｇｍ又はＧｅであり、且つ、
Ｂ１８及びＢ１９が同一又は異なってＴｓ又はＴｅである化合物、及び、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（２）Ｂ１乃至Ｂ３がＣｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（３）Ｂ４がＡｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（４）Ｂ５がＡｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（５）Ｂ６がＧｍ又はＧｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（６）Ｂ７がＡｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（７）Ｂ８がＣｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（８）Ｂ２２がＴｅｔであり、且つ、Ｂ２１がＡｅであり、且つ、Ｂ２０がＣｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（９）Ｂ１９がＴｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（１０）Ｂ１８がＴｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（１１）Ｂ１７がＧｍ又はＧｅである化合物、その薬理学上許容される塩であり、
（１２）Ｂ１６がＡｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（１３）Ｂ１５がＡｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（１５）Ｂ１４がＡｅである化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（１６）ｌ、ｍ、ｎ、ｏ及びｐが同一又は異なって１又は２である化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（１７）ｌ、ｍ、ｎ、ｏ及びｐが同一であって、１又は２である化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、
（１８）ｌ、ｍ、ｎ、ｏ及びｐが２である化合物、その薬理学上許容される塩を含有する医薬である。
【００３９】
又、上記（２）乃至（７）、（８）乃至（１４）及び（１５）乃至（１７）は、番号が大きくなるに従って、より好適な化合物を含有する医薬を示し、一般式（Ｉ）において、Ｂ１乃至Ｂ２２を（１）から任意に選択し、Ｂ１乃至Ｂ８を（２）乃至（７）から任意に選択し、Ｂ１４乃至Ｂ２２を（８）乃至（１４）から任意に選択し、ｌ、ｍ、ｎ、ｏ及びｐを（１６）乃至（１８）から任意に選択し、又、これらを任意に組み合わせて得られた化合物およびその塩を含有する医薬も好適であり、さらに好適には、下記（化合物群１）から選択される化合物及びその薬理学上許容される塩を含有する医薬であり、最も好適には、（化合物群２）から選択される化合物及びその薬理学上許容される塩を含有する医薬である。
（化合物群１）
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｔｓ−Ｔｓ−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｔｓ−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｓ−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｅ２−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｅ２−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｍ−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｍ−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｅ２−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｅ２−Ｇｅ２−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｍ−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｅ２−Ｇｍ−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｅ２−Ａｅ２−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｅ２−Ｇｅ２−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｍ−Ａｅ２−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｅ２−Ｇｍ−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｅ２−Ａｅ２−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｅ２−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｍ−Ａｅ２−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｍ−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｅ２−Ａｅ２−Ｃｅ２−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｅ２−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｍ−Ａｅ２−Ｃｅ２−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｍ−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｅ２−Ａｅ２−Ｃｅ２−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｅ２−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｍ−Ａｅ２−Ｃｅ２−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｍ−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｔｓ−Ｔｓ−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｔｓ−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｓ−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｅ１−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｅ１−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｍ−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｍ−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｅ１−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｅ１−Ｇｅ１−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｍ−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｅ１−Ｇｍ−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｅ１−Ａｅ１−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｅ１−Ｇｅ１−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｍ−Ａｅ１−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｅ１−Ｇｍ−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｅ１−Ａｅ１−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｅ１−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｍ−Ａｅ１−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｍ−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｅ１−Ａｅ１−Ｃｅ１−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｅ１−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｍ−Ａｅ１−Ｃｅ１−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｍ−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｅ１−Ａｅ１−Ｃｅ１−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｅ１−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、及び、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｍ−Ａｅ１−Ｃｅ１−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｍ−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ。
（化合物群２）
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｅ２−Ａｅ２−Ｃｅ２−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｅ２−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｍ−Ａｅ２−Ｃｅ２−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｍ−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈ、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｅ１−Ａｅ１−Ｃｅ１−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｅ１−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ、及び、
ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｍ−Ａｅ１−Ｃｅ１−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｍ−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈ。
【００４０】
なお、上記及び本明細書中においてＡｅ１、Ｇｅ１、Ｃｅ１、Ｔｅ１、Ｔｅ１ｔ、Ａｅ２、Ｇｅ２、Ｃｅ２、Ｔｅ２及びＴｅ２ｔは下記に示す化学構造を有する基を表す。
【００４１】
【化３１】
2004315451.tif 000017
【００４２】
「その薬理上許容される塩」とは、本発明の化合物は、塩にすることができるので、その塩をいい、そのような塩としては、好適にはナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩；アンモニウム塩のような無機塩、ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機塩等のアミン塩；弗化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩のようなハロゲン原子化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、燐酸塩等の無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩のような低級アルカンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩のようなアリ−ルスルホン酸塩、酢酸塩、りんご酸塩、フマ−ル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、蓚酸塩、マレイン酸塩等の有機酸塩；及び、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩のようなアミノ酸塩を挙げることができる。
【００４３】
なお、本発明の化合物（Ｉ）は、水和物としても存在することができ、本発明は、それらの水和物をも包含する。
【００４４】
又、本発明の別の形態は、本発明の化合物（Ｉ）を含有する医薬であり、好ましくは、ＶＥＧＦによる血管新生又は血管透過性亢進が関与している疾患の治療及び予防に用いる医薬であり、更に好ましくは、ガン、糖尿病網膜症、慢性関節リューマチ、乾癬、血管腫、強皮症、血管新生緑内障、癌性腹水貯留又は虚血再灌流障害時の脳浮腫の治療及び予防に用いる医薬である。
【００４５】
【発明の実施の形態】
本発明の化合物（Ｉ）は、ＤＮＡ合成機、例えばパーキンエルマー社のホスホロアミダイト法によるモデル３９２などを用いて文献（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  １２，  ４５３９（１９８４））記載の方法に準じて合成することが出来る。
その際に用いられるホスホロアミダイト試薬は、天然型のヌクレオシド及び２’−Ｏ−メチルグアノシン（Ｇｍ）については市販の試薬を用いることができ、その他のヌクレオシドについてはｌ、ｍ、ｎ、ｏ及びｐが１であるヌクレオシドについてＷＯ９９／１４２２６、ｌ、ｍ、ｎ、ｏ及びｐが２乃至５であるヌクレオシドについてＷＯ  ００／４７５９９記載の方法にしたがって得ることができる。
【００４６】
又、所望により、チオエート化する場合は、硫黄のほかテトラエチルチウラムジスルフィド（ＴＥＴＤ、アプライドバイオシステムズ社）、Ｂｅａｕｃａｇｅ試薬（Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ社）等の３価のリン酸に反応してチオエートを形成する試薬を用い、文献（Ｔｅｔａｒｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  ３２，  ３００５（１９９１）、Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．，  １１２，  １２５３（１９９０））記載の方法に準じてチオエート誘導体を得る事が出来る。
【００４７】
本発明の化合物（Ｉ）又はその薬理学上許容される塩は、ＶＥＧＦの抑制活性を示す。又、本発明の化合物（Ｉ）は、吸収、体内分布、血中半減期などの体内動態に優れ、腎臓、肝臓等の臓器に対する毒性も低い。従って、本発明の化合物（Ｉ）、は、例えば医薬として有用であり、特に種々の血管新生又は血管透過性亢進が関与している疾患を治療若しくは予防する医薬として有用である。
【００４８】
本発明の化合物を、上記疾患の予防薬又は治療薬として使用する場合には、前記一般式（Ｉ）を有する化合物、又は、その薬理学上許容される塩若しくはエステルを、それ自体あるいは適宜の薬理学的に許容される、賦形剤、希釈剤等と混合し、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤若しくはシロップ剤等により経口的に、又は、注射剤、坐剤、貼付剤、若しくは、外用剤等により非経口的に投与することができる。
【００４９】
これらの製剤は、賦形剤（例えば、乳糖、白糖、葡萄糖、マンニトール、ソルビトールのような糖誘導体；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、α澱粉、デキストリンのような澱粉誘導体；結晶セルロースのようなセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルランのような有機系賦形剤；及び、軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、珪酸カルシウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウムのような珪酸塩誘導体；燐酸水素カルシウムのような燐酸塩；炭酸カルシウムのような炭酸塩；硫酸カルシウムのような硫酸塩等の無機系賦形剤を挙げることができる。）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウムのようなステアリン酸金属塩；タルク；コロイドシリカ；ビーズワックス、ゲイ蝋のようなワックス類；硼酸；アジピン酸；硫酸ナトリウムのような硫酸塩；グリコール；フマル酸；安息香酸ナトリウム；ＤＬロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウムのようなラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物のような珪酸類；及び、上記澱粉誘導体を挙げることができる。）、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール、及び、前記賦形剤と同様の化合物を挙げることができる。）、崩壊剤（例えば、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、内部架橋カルボキシメチルセルロースナトリウムのようなセルロース誘導体；カルボキシメチルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドンのような化学修飾されたデンプン・セルロース類を挙げることができる。）、乳化剤（例えば、ベントナイト、ビーガムのようなコロイド性粘土；水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウムのような金属水酸化物；ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸カルシウムのような陰イオン界面活性剤；塩化ベンザルコニウムのような陽イオン界面活性剤；及び、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステルのような非イオン界面活性剤を挙げることができる。）、安定剤（メチルパラベン、プロピルパラベンのようなパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコールのようなアルコール類；塩化ベンザルコニウム；フェノール、クレゾールのようなフェノール類；チメロサール；デヒドロ酢酸；及び、ソルビン酸を挙げることができる。）、矯味矯臭剤（例えば、通常使用される、甘味料、酸味料、香料等を挙げることができる。）、希釈剤等の添加剤を用いて周知の方法で製造される。
【００５０】
本発明の化合物を患者へ導入する方法については、上記に加えてコロイド分散系を用いることができる。コロイド分散系は化合物の生体内の安定性を高める効果や、特定の臓器、組織又は細胞へ化合物を効率的に輸送する効果が期待される。コロイド分散系は、通常用いられるものであれば限定しないが、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、及び水中油系の乳化剤、ミセル、混合ミセル及びリポソームを包含する脂質をベースとする分散系を挙げる事ができ、好ましくは、特定の臓器、組織又は細胞へ化合物を効率的に輸送する効果のある、複数のリポソーム、人工膜の小胞である（Ｍａｎｎｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９８８，６，６８２；Ｂｌｕｍｅ  ａｎｄ  Ｃｅｖｃ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９０，１０２９，９１；Ｌａｐｐａｌａｉｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．，１９９４，２３，１１９；Ｃｈｏｎｎ  ａｎｄ  Ｃｕｌｌｉｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１９９５，６，６９８  ）。
０  ．２−０  ．４  μｍ  のサイズ範囲をとる単膜リポソームは、巨大分子を含有する水性緩衝液のかなりの割合を被包化し得、化合物はこの水性内膜に被胞化され、生物学的に活性な形態で脳細胞へ輸送される（Ｆｒａｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，１９８１，６，７７  ）。リポソームの組成は、通常、脂質、特にリン脂質、とりわけ相転移温度の高いリン脂質を１  種又はそれ以上のステロイド、特にコレステロールと通常複合したものである。リポソーム生産に有用な脂質の例は、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、スフィンゴ脂質、ホスファチジルエタノールアミン、セレブロシド及びガングリオシドのようなホスファチジル化合物を包含する。特に有用なのはジアシルホスファチジルグリセロールであり、ここでは脂質部分が１４−１８  の炭素原子、特に１６  −１８  の炭素原子を含有し、飽和している（１４  −１８  の炭素原子鎖の内部に二重結合を欠いている）。代表的なリン脂質は、ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン及びジステアロイルホスファチジルコリンを包含する。
【００５１】
リポソームを包含するコロイド分散系の標的化は、受動的又は能動的のいずれかであってもよい。受動的な標的化は、洞様毛細血管を含有する臓器の網内系細胞へ分布しようとするリポソーム本来の傾向を利用することによって達成される。一方、能動的な標的化は、例えば、ウイルスのタンパク質コート（Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．），１９９３，９０，８４７４  ）、モノクローナル抗体（又はその適切な結合部分）、糖、糖脂質又はタンパク質（又はその適切なオリゴペプチドフラグメント）のような特定のリガンドをリポソームへ結合させること、又は天然に存在する局在部位以外の臓器及び細胞型への分布を達成するためにリポソームの組成を変えることによってリポソームを修飾する手法等を挙げる事ができる。標的化されたコロイド分散系の表面は様々なやり方で修飾され得る。リポソームで標的したデリバリーシステムでは、脂質二重層との緊密な会合において標的リガンドを維持するために、リポソームの脂質二重層へ脂質基が取込まれ得る。脂質鎖を標的リガンドと結びつけるために様々な連結基が使用され得る。本発明のオリゴヌクレオチドのデリバリーが所望される細胞の上に支配的に見出される特定の細胞表面分子に結合する標的リガンドは、例えば、（１  ）デリバリーが所望される細胞によって支配的に発現される特定の細胞受容体と結合している、ホルモン、成長因子又はその適切なオリゴペプチドフラグメント、又は（２  ）標的細胞上で支配的に見出される抗原性エピトープと特異的に結合する、ポリクローナル又はモノクローナル抗体、又はその適切なフラグメント（例えば、Ｆａｂ  ；Ｆ  （ａｂ’）２  ）、であり得る。２  種又はそれ以上の生物活性剤（例えば、化合物（Ｉ）とその他の薬剤）は、単一のリポソーム内部で複合し、投与することもできる。内容物の細胞内安定性及び／又は標的化を高める薬剤をコロイド分散系へ追加することも可能である。
【００５２】
その使用量は症状、年齢等により異なるが、経口投与の場合には、１回当り下限１ｍｇ（好適には、３０ｍｇ）、上限２０００ｍｇ（好適には、１５００ｍｇ）を、静脈内投与の場合には、１回当り下限０．５ｍｇ（好適には、５ｍｇ）、上限５００ｍｇ（好適には、２５０ｍｇ）を成人に対して、１日当り１乃至６回症状にに応じて投与することが望ましい。
以下、実施例、参考例及び試験例をあげて、本発明をさらに詳しく説明する。
【００５３】
【実施例】
（実施例１）ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｍ−Ａｅ２−Ｃｅ２−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｍ−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈの合成
核酸合成機（パーキンエルマー社製  ＡＢＩ  ｍｏｄｅｌ３９２  ＤＮＡ／ＲＮＡ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）を用い、１．０μｍｏｌスケールで行った。各合成サイクルにおける溶媒、試薬、ホスホロアミダイトの濃度は天然オリゴヌクレオチド合成の場合と同じであり、溶媒、試薬、天然型ヌクレオシドのホスホロアミダイトは基本的にＰＥ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製のものを用いた。非天然型のホスホロアミダイトは特開２０００−２９７０９７の実施例５（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン−４−Ｎ−ベンゾイルシチジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト）、実施例９（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン−５−メチルウリジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、実施例１４（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン−６−Ｎ−ベンゾイルアデノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、の化合物または、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−２−Ｎ−イソブチリルフェノキシアセチルグアノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト（ファルマシア社製）を用いた。また硫化反応はＧｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ社のｓｕｌｆｕｒｉｚｉｎｇ  ｒｅａｇｅｎｔを１ｇ  ／  １００ｍｌの濃度で用いた。参考例１の化合物（１．０μｍｏｌ）を固相担体として用い、ＤＭＴｒ基をトリクロロ酢酸によって脱保護し、その５’−水酸基に天然型ホスホロアミダイトユニット及び非天然型ホスホロアミダイトユニットを用いて縮合反応を繰り返し行い、表記の化合物を合成した。
合成サイクルは以下の通りである。
合成サイクル
１）  ｄｅｔｒｉｔｙｌａｔｉｏｎ  トリクロロ酢酸／ジクロロメタン；８５ｓｅｃ
２）  ｃｏｕｐｌｉｎｇ  ホスホロアミダイト（２５ｅｑ）、テトラゾール／アセトニトリル；  １０乃至２０ｍｉｎ
３）  ｃａｐｐｉｎｇ  １−メチルイミダゾール／テトラヒドロフラン、無水酢酸／ピリジン／テトラヒドロフラン；１５ｓｅｃ
４）  ｓｕｌｆｕｒｉｚａｔｉｏｎ  硫化反応試薬；５ｍｉｎ（×２）（Ａｓ，  ＧＳ，  ＣＳ，  ＴＳを縮合させる合成サイクル時）
または、ｏｘｉｄａｔｉｏｎ  ヨウ素／水／ピリジン／テトラヒドロフラン；１５ｓｅｃ  （Ａｐ，  Ｇｐ，  Ｃｐ，  Ｔｐ，  Ａｅ２，  Ｇｅ２，  Ｃｅ２，  Ｔｅ２，  Ｇｍを縮合させる合成サイクル時）
目的配列を有する保護されたオリゴヌクレオチド類縁体を５’−ＤＭＴｒ基をつけたまま合成した後、濃アンモニア水で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基と核酸塩基上の保護基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製ＬＣ−１０ＶＰ；カラム（ＧＬサイエンス  Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  Ｐｒｅｐ−ＯＤＳ（２０×２５０ｍｍ））；０．１Ｍ酢酸トリエチルアミン水溶液（ＴＥＡＡ），  ｐＨ７；３２．５％→６０％ＣＨ３ＣＮ（３０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；４０℃；１０ｍｌ／ｍｉｎ；２５４ｎｍ）にて精製し、９．０分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え３０分放置しＤＭＴｒ基を除去した。溶媒を留去した後、Ｈ２Ｏ  約５ｍｌを加え、水層を酢酸エチル約５ｍｌで３回洗浄し、水溶媒留去後目的化合物を得た。
本化合物はイオン交換ＨＰＬＣ（カラム（Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫｇｅｌ  ＤＥＡＥ−２ＳＷ（４．６×２５０ｍｍ））；  Ａ液：２０％  ＣＨ３ＣＮ，  Ｂ液：６７ｍＭ  リン酸バッファー（ｐＨ６．８），  １．５Ｍ  ＮａＣｌ；  ｇｒａｄｉｅｎｔ：Ｂ液２０→８０％  （２０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；  ６０℃；１ｍｌ／ｍｉｎ）で分析すると１３．８分に溶出された。（１４４  Ａ２６０  ｕｎｉｔｓ）（λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）  ＝  ２６０ｎｍ）
本化合物の塩基配列は、ＶＥＧＦ２０６のｃＤＮＡ（Ｇｅｎｅ  Ｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｉｏｎ  Ｎｏ．Ｓ８５１９２）のヌクレオチド番号６９−９０に相補的な配列であり、以下の通りである。
【００５４】
５’−ｃｃｃａａｇａｃａｇｃａｇａａａｇｔｔｃａｔ−３’  （配列表の配列番号  １）
（実施例２）ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｓ−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈの合成
実施例１と同様の方法に従って、ＤＮＡ合成機を用いて表記化合物を得た。
【００５５】
目的配列を有する保護されたオリゴヌクレオチド類縁体を５’−ＤＭＴｒ基をつけたまま合成した後、濃アンモニア水で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基と核酸塩基上の保護基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製ＬＣ−１０ＶＰ；カラム（ＧＬサイエンス  Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  Ｐｒｅｐ−ＯＤＳ（２０×２５０ｍｍ））；０．１Ｍ酢酸トリエチルアミン水溶液（ＴＥＡＡ），  ｐＨ７；１０．５％→６０％ＣＨ３ＣＮ（３０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；４０℃；１０ｍｌ／ｍｉｎ；２５４ｎｍ）にて精製し、１９．９分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え３０分放置しＤＭＴｒ基を除去した。溶媒を留去した後、Ｈ２Ｏ  約５ｍｌを加え、水層を酢酸エチル約５ｍｌで３回洗浄し、水溶媒留去後目的化合物を得た。本化合物はイオン交換ＨＰＬＣ（カラム（Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫｇｅｌ  ＤＥＡＥ−２ＳＷ（４．６×２５０ｍｍ））；  Ａ液：２０％  ＣＨ３ＣＮ，  Ｂ液：６７ｍＭ  リン酸バッファー（ｐＨ６．８），  １．５Ｍ  ＮａＣｌ；  ｇｒａｄｉｅｎｔ：Ｂ液２０→８０％  （２０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；  ６０℃；１ｍｌ／ｍｉｎ）で分析すると２０．８分に溶出された。（１６４  Ａ２６０  ｕｎｉｔｓ）（λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）  ＝  ２６０ｎｍ）
本化合物の塩基配列は、ＶＥＧＦ２０６のｃＤＮＡ（Ｇｅｎｅ  Ｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｉｏｎ  Ｎｏ．Ｓ８５１９２）のヌクレオチド番号６９−９０に相補的な配列であり、以下の通りである。
【００５６】
５’−ｃｃｃａａｇａｃａｇｃａｇａａａｇｔｔｃａｔ−３’  （配列表の配列番号  １）
（実施例３）ＨＯ−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｍ−Ａｅ１−Ｃｅ１−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｅ１−Ａｅ１−Ａｅ１−Ｇｍ−Ｔｅ１−Ｔｅ１−Ｃｅ１−Ａｅ１−Ｔｅ１ｔ−Ｈの合成
実施例１と同様の方法に従って、ＤＮＡ合成機を用いて表記化合物を得た。ただし、ＣＰＧ固相担体としてＱ−Ｓｕｐｐｏｒｔ（Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｃｈ社）を用いた。また非天然型ホスホロアミダイトとして、文献（Ｋｏｓｈｋｉｎ，  Ａ．  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，  １９９８，  ５４，  ３６０７）に記載の方法に準じて合成した（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレン−４−Ｎ−ベンゾイルシチジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト）、（５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレン−５−メチルウリジン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、  （５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレン−６−Ｎ−ベンゾイルアデノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト、の化合物または、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−２−Ｎ−イソブチリルフェノキシアセチルグアノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）ホスホロアミダイト（ファルマシア社製）を用いた。
【００５７】
目的配列を有する保護されたオリゴヌクレオチド類縁体を５’−ＤＭＴｒ基まではずした状態で合成した後、濃アンモニア水で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基と核酸塩基上の保護基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製ＬＣ−１０ＶＰ；カラム（ＧＬサイエンス  Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  Ｐｒｅｐ−ＯＤＳ（２０×２５０ｍｍ））；０．１Ｍ酢酸トリエチルアミン水溶液（ＴＥＡＡ），  ｐＨ７；１１％→２５％ＣＨ３ＣＮ（３０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；４０℃；１０ｍｌ／ｍｉｎ；２５４ｎｍ）にて精製し、１２．７分に溶出する分画を集めた。本化合物はイオン交換ＨＰＬＣ（カラム（Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫｇｅｌ  ＤＥＡＥ−２ＳＷ（４．６×２５０ｍｍ））；  Ａ液：２０％  ＣＨ３ＣＮ，  Ｂ液：６７ｍＭ  リン酸バッファー（ｐＨ６．８），  １．５Ｍ  ＮａＣｌ；  ｇｒａｄｉｅｎｔ：Ｂ液２０→８０％  （２０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；  ６０℃；１ｍｌ／ｍｉｎ）で分析すると１４．０分に溶出された。（３４  Ａ２６０  ｕｎｉｔｓ）（λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）  ＝  ２５８ｎｍ）
本化合物の塩基配列は、ＶＥＧＦ２０６のｃＤＮＡ（Ｇｅｎｅ  Ｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｉｏｎ  Ｎｏ．Ｓ８５１９２）のヌクレオチド番号６９−９０に相補的な配列であり、以下の通りである。
【００５８】
５’−ｃｃｃａａｇａｃａｇｃａｇａａａｇｔｔｃａｔ−３’  （配列表の配列番号  １）
（参考例１）ＣＰＧ担体結合化合物の合成
【００５９】
【化３２】
2004315451.tif 000018
【００６０】
特開２０００−２９７０９７の実施例８の化合物２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレン−５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−メチルウリジン（５８０ｍｇ、０．９８８ｍｍｏｌ）を窒素気流下、無水ピリジン（１０ｍｌ）に溶かし、コハク酸無水物（１７８ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（２１７ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。溶媒を減圧下留去し、残渣を、シリカゲルクロマトグラフィーを用いて精製し（ジクロロメタン：メタノール＝２５：２）、無色アモルファス状化合物（５８０ｍｇ、０．８４４ｍｍｏｌ、収率８５％）を得た。このうち５１５ｍｇを無水ジメチルホルムアミド（６ｍｌ）に溶かし、ペンタクロロフェノール（３３０ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（２３１ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）を加え、室温で２４時間撹拌した。析出物をろ過後、ろ液を減圧下濃縮し、ベンゼンを加え析出物を再度ろ過した。ろ液を減圧下濃縮し、無水ジメチルホルムアミド（３ｍｌ）を加え、そこにトリエチルアミン（２８０μｌ、２．０ｍｍｏｌ）、ロングチェーンアルキルアミノグラス（５００Å、粒子サイズ：１２０／２００メッシュ）（ＣＰＧ  Ｉｎｃ製）（６ｇ）を加え、６０℃、８時間、さらに室温で７２時間放置した。ＣＰＧをろ過し、さらにジクロロメタンで洗浄した後、ＣＰＧにアプライドバイオシステムズ社ＤＮＡ合成機ＡＢＩ３９２用キャッピング試薬２種（無水酢酸／ピリジン／テトラヒドロフラン）（１‐メチルイミダゾール／テトラヒドロフラン）をそれぞれ２０ｍｌ加え、１０分放置した。ＣＰＧをろ過し、ピリジン、ジクロロメタンの順に洗浄し、減圧乾燥し、目的物（約６ｇ、ジメトキシトリチル基の導入量＝６２μｍｏｌ／ｇ）を得た。
（参考例２）ＨＯ−Ａｓ−Ｔｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ｃｓ−Ｔｓ−Ｔｓ−Ｔｓ−Ｃｓ−Ｔｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ｔｓ−Ｇｓ−Ｔｓ−Ｃｓ−Ｔｓ−Ｔｓ−Ｇｓ−Ｇｓ−Ｇｔ−Ｈの合成
（上記において、Ｇｔは
【００６１】
【化３３】
2004315451.tif 000019
【００６２】
を示す。）
実施例１と同様の方法に従って、実施例１の化合物の配列に対してセンス配列を有するオリゴヌクレオチドを合成した。ただし、３’−水酸基がＣＰＧ支持体に結合した５’−Ｏ−ＤＭＴｒ−グアノシン（１．０μｍｏｌ）（ＰＥ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を固相担体を用いた。また、アミダイトのカップリング反応時間は２５ｓｅｃで行なった。
【００６３】
目的配列を有する保護されたオリゴヌクレオチド類縁体を５’−ＤＭＴｒ基をつけたまま合成した後、濃アンモニア水で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基と核酸塩基上の保護基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製ＬＣ−１０ＶＰ；カラム（ＧＬサイエンス  Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  Ｐｒｅｐ−ＯＤＳ（２０×２５０ｍｍ））；０．１Ｍ酢酸トリエチルアミン水溶液（ＴＥＡＡ），  ｐＨ７；  ５％→６０％ＣＨ３ＣＮ（３０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；４０℃；１０ｍｌ／ｍｉｎ；２５４ｎｍ）にて精製し、チオリン酸ジエステルに由来する２つのジアステレオマーとして２０．０分と２０．９分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え３０分放置しＤＭＴｒ基を除去した。溶媒を留去した後、Ｈ２Ｏ  約５ｍｌを加え、水層を酢酸エチル約５ｍｌで３回洗浄し、溶媒留去後目的化合物を得た。本化合物はイオン交換ＨＰＬＣ（カラム（Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫｇｅｌ  ＤＥＡＥ−２ＳＷ（４．６×２５０ｍｍ））；  Ａ液：２０％  ＣＨ３ＣＮ，  Ｂ液：６７ｍＭ  リン酸バッファー（ｐＨ６．８），  １．５Ｍ  ＮａＣｌ；  ｇｒａｄｉｅｎｔ：Ｂ液４０→１００％  （２０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；  ６０℃；１ｍｌ／ｍｉｎ）で分析すると１８．５分に溶出された。（１３７  Ａ２６０  ｕｎｉｔｓ）（λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）  ＝  ２６０ｎｍ）
本化合物の塩基配列は、ＶＥＧＦ２０６のｃＤＮＡ（Ｇｅｎｅ  Ｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｉｏｎ  Ｎｏ．Ｓ８５１９２）のヌクレオチド番号６９−９０の配列であり、以下の通りである。
【００６４】
５’−ａｔｇａａｃｔｔｔｃｔｇｃｔｇｔｃｔｔｇｇｇ−３’  （配列表の配列番号  ２）
（参考例３）ＨＯ−Ｔｓ−Ａｓ−Ｃｓ−Ｇｓ−Ｔｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｔｓ−Ａｓ−Ｔｓ−Ｇｓ−Ｇｓ−Ｔｓ−Ｇｓ−Ｔｓ−Ａｓ−Ｃｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ｔｓ−Ｃｔ−Ｈの合成
（上記において、Ｃｔは
【００６５】
【化３４】
2004315451.tif 000020
【００６６】
を示す。）
実施例１と同様の方法に従って、実施例１の化合物の配列に対してスクランブル配列を有するオリゴヌクレオチドを合成した。ただし、３’−水酸基がＣＰＧ支持体に結合した５’−Ｏ−ＤＭＴｒ−シチジン（１．０μｍｏｌ）（ＰＥ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を固相担体として用いた。また、アミダイトのカップリング反応時間は２５ｓｅｃで行なった。
【００６７】
目的配列を有する保護されたオリゴヌクレオチド類縁体を５’−ＤＭＴｒ基をつけたまま合成した後、濃アンモニア水で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基と核酸塩基上の保護基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製ＬＣ−１０ＶＰ；カラム（ＧＬサイエンス  Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  Ｐｒｅｐ−ＯＤＳ（２０×２５０ｍｍ））；０．１Ｍ酢酸トリエチルアミン水溶液（ＴＥＡＡ），  ｐＨ７；  ５％→６０％ＣＨ３ＣＮ（３０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；４０℃；１０ｍｌ／ｍｉｎ；２５４ｎｍ）にて精製し、チオリン酸ジエステルに由来する２つのジアステレオマーとして２１．２分と２１．６分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え３０分放置しＤＭＴｒ基を除去した。溶媒を留去した後、Ｈ２Ｏ  約５ｍｌを加え、水層を酢酸エチル約５ｍｌで３回洗浄し、溶媒留去後目的化合物を得た。本化合物はイオン交換ＨＰＬＣ（カラム（Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫｇｅｌ  ＤＥＡＥ−２ＳＷ（４．６×２５０ｍｍ））；  Ａ液：２０％  ＣＨ３ＣＮ，  Ｂ液：６７ｍＭ  リン酸バッファー（ｐＨ６．８），  １．５Ｍ  ＮａＣｌ；  ｇｒａｄｉｅｎｔ：Ｂ液４０→１００％  （２０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；  ６０℃；１ｍｌ／ｍｉｎ）で分析すると１７．８分に溶出された。（１２８  Ａ２６０  ｕｎｉｔｓ）（λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）  ＝  ２５９ｎｍ）
本化合物の塩基配列は、以下の通りである。
【００６８】
５’−ｔａｃｇｔａｇｔａｔｇｇｔｇｔａｃｇａｔｃ−３’    （配列表の配列番号  ３）
（参考例４）ＨＯ−Ｃｓ−Ｃｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ｔｓ−Ｔｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｔｔ−Ｈ（化合物Ａ）の合成
実施例１と同様の方法に従って、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  （１９９５）  ２７０，  ２８３１６−２８３２４．記載の化合物Ａを合成した（Ｎｏｍｕｒａ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  アンチセンス分子である。ただし、３’−水酸基がＣＰＧ支持体に結合した５’−Ｏ−ＤＭＴｒ−チミジン（１．０μｍｏｌ）（ＰＥ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を固相担体を用いた。また、アミダイトのカップリング反応時間は２５ｓｅｃで行なった。
【００６９】
目的配列を有する保護されたオリゴヌクレオチド類縁体を５’−ＤＭＴｒ基をつけたまま合成した後、濃アンモニア水で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基と核酸塩基上の保護基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製ＬＣ−１０ＶＰ；カラム（ＧＬサイエンス  Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  Ｐｒｅｐ−ＯＤＳ（２０×２５０ｍｍ））；０．１Ｍ酢酸トリエチルアミン水溶液（ＴＥＡＡ），  ｐＨ７；  ５％→６０％ＣＨ３ＣＮ（３０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；４０℃；１０ｍｌ／ｍｉｎ；２５４ｎｍ）にて精製し、２０．０分に溶出する分画を集めた。溶媒を減圧下留去した後、８０％酢酸水を加え３０分放置しＤＭＴｒ基を除去した。溶媒を留去した後、Ｈ２Ｏ  約５ｍｌを加え、水層を酢酸エチル約５ｍｌで３回洗浄し、溶媒留去後目的化合物を得た。本化合物はイオン交換ＨＰＬＣ（カラム（Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫｇｅｌ  ＤＥＡＥ−２ＳＷ（４．６×２５０ｍｍ））；  Ａ液：２０％  ＣＨ３ＣＮ，  Ｂ液：６７ｍＭ  リン酸バッファー（ｐＨ６．８），  １．５Ｍ  ＮａＣｌ；  ｇｒａｄｉｅｎｔ：Ｂ液４０→１００％  （２０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；  ６０℃；１ｍｌ／ｍｉｎ）で分析すると１９．４分に溶出された。（８９  Ａ２６０  ｕｎｉｔｓ）（λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）  ＝  ２５９ｎｍ）
本化合物の塩基配列は、ＶＥＧＦ２０６のｃＤＮＡ（Ｇｅｎｅ  Ｂａｎｋ  ａｃｃｅｓｉｏｎ  Ｎｏ．Ｓ８５１９２）のヌクレオチド番号６９−９０に相補的な配列であり、以下の通りである。
【００７０】
５’−ｃｃｃａａｇａｃａｇｃａｇａａａｇｔｔｃａｔ−３’  （配列表の配列番号  １）
（参考例５）ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｇｍ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｓ−Ｇｓ−Ｃｓ−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｃｅ２−Ｇｍ−Ｔｅ２−Ｔｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈの合成
実施例１と同様の方法に従って、実施例１の化合物の配列に対して４つのミスマッチ配列を有するオリゴヌクレオチドを合成した。
【００７１】
目的配列を有する保護されたオリゴヌクレオチド類縁体を５’−ＤＭＴｒ基まで外した状態で合成した後、濃アンモニア水で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基と核酸塩基上の保護基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製ＬＣ−１０ＶＰ；カラム（ＧＬサイエンス  Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  Ｐｒｅｐ−ＯＤＳ（２０×２５０ｍｍ））；０．１Ｍ酢酸トリエチルアミン水溶液（ＴＥＡＡ），  ｐＨ７；  １１％→２５％ＣＨ３ＣＮ（３０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；４０℃；１０ｍｌ／ｍｉｎ；２５４ｎｍ）にて精製し、１４．８分に溶出する分画を集めた。本化合物はイオン交換ＨＰＬＣ（カラム（Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫｇｅｌ  ＤＥＡＥ−２ＳＷ（４．６×２５０ｍｍ））；  Ａ液：２０％  ＣＨ３ＣＮ，  Ｂ液：６７ｍＭ  リン酸バッファー（ｐＨ６．８），  １．５Ｍ  ＮａＣｌ；  ｇｒａｄｉｅｎｔ：Ｂ液２０→８０％  （２０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；  ６０℃；１ｍｌ／ｍｉｎ）で分析すると１４．４分に溶出された。（５９  Ａ２６０  ｕｎｉｔｓ）（λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）  ＝  ２５９ｎｍ）
本化合物の塩基配列は、以下の通りである。
【００７２】
５’−ｃｃａａａｇｃｃａｇｃａｇａａｃｇｔｔａａｔ−３’  （配列表の配列番号  ４）
（参考例６）ＨＯ−Ｃｅ２−Ｃｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｃｅ２−Ｇｍ−Ｔｅ２−Ｃｅ２−Ａｓ−Ｇｓ−Ａｓ−Ｃｓ−Ｇｓ−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｃｅ２−Ｇｍ−Ａｅ２−Ｔｅ２−Ａｅ２−Ａｅ２−Ｔｅ２ｔ−Ｈの合成
実施例１と同様の方法に従って、実施例１の化合物の配列に対して８つのミスマッチ配列を有するオリゴヌクレオチドを合成した。
【００７３】
目的配列を有する保護されたオリゴヌクレオチド類縁体を５’−ＤＭＴｒ基まで外した状態で合成した後、濃アンモニア水で処理することによってオリゴマーを支持体から切り出すとともに、リン原子上の保護基シアノエチル基と核酸塩基上の保護基をはずした。溶媒を減圧下留去し、残った残渣を逆相ＨＰＬＣ（島津製作所製ＬＣ−１０ＶＰ；カラム（ＧＬサイエンス  Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  Ｐｒｅｐ−ＯＤＳ（２０×２５０ｍｍ））；０．１Ｍ酢酸トリエチルアミン水溶液（ＴＥＡＡ），  ｐＨ７；  １１％→２５％ＣＨ３ＣＮ（３０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；４０℃；１０ｍｌ／ｍｉｎ；２５４ｎｍ）にて精製し、１４．１分に溶出する分画を集めた。本化合物はイオン交換ＨＰＬＣ（カラム（Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫｇｅｌ  ＤＥＡＥ−２ＳＷ（４．６×２５０ｍｍ））；  Ａ液：２０％  ＣＨ３ＣＮ，  Ｂ液：６７ｍＭ  リン酸バッファー（ｐＨ６．８），  １．５Ｍ  ＮａＣｌ；  ｇｒａｄｉｅｎｔ：Ｂ液２０→８０％  （２０ｍｉｎ，  ｌｉｎｅａｒ  ｇｒａｄｉｅｎｔ）；  ６０℃；１ｍｌ／ｍｉｎ）で分析すると１４．０分に溶出された。（３９  Ａ２６０  ｕｎｉｔｓ）（λｍａｘ（Ｈ２Ｏ）  ＝  ２５９ｎｍ）
本化合物の塩基配列は、以下の通りである。
【００７４】
５’−ｃｃａａｃｇｔｃａｇａｃｇａａｃｇａｔａａｔ−３’  （配列表の配列番号  ５）
（試験例）ＶＥＧＦ抑制試験
実施例１乃至２、及び、参考例２乃至６で得られた化合物を用いてヒト肺癌細胞株Ａ５４９細胞におけるＶＥＧＦ  ｍＲＮＡ発現抑制効果を調べた。
ヒト肺癌細胞株Ａ５４９細胞（ＡＴＣＣ  ｎｕｍｂｅｒ  ＣＣＬ−１８５）を、コラーゲンタイプＩコートされた１２穴プレート（ＩＷＡＫＩ製）上に、０．６×１０５個  ／  ウェル  ／  １ｍｌ  ＲＰＭＩ１６４０（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）（１０％  Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ（Ｈｙｃｌｏｎｅ社）含有）の密度でプレーティングし、一晩３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。各オリゴヌクレオチド−ＥＰＥＩコンプレックスの調製は、各種オリゴヌクレオチド水溶液（５０μＭ）  ２０μＬおよびＥＰＥＩ（Ｇｅｎｅ  Ｔｏｏｌ社製、２００μＭ）  ２μＬを水１７８  μＬに加えすぐに１０秒間ボルテックスし２０分間室温で静置することで要時行なった。検体を添加する直前に各ウェルの細胞培養液を新しい培地（１０％  Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍおよびタモキシフェン１０μＭ含有ＲＰＭＩ１６４０）０．８ｍｌに交換し、そこに要時調製したオリゴヌクレオチド−ＥＰＥＩコンプレックス２００μＬを添加した。４時間３７℃、５％ＣＯ２インキュベート後、培地をオリゴヌクレオチドを含まないＲＰＭＩ１６４０（１０％  Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ含有）１ｍｌと交換し、さらに２０時間インキュベートした。つぎに各ウェルの細胞をｔｒｙｐｓｉｎ  −  ＥＤＴＡ（０．０５％  Ｔｒｙｐｓｉｎ，  ０．５３ｍＭ  ＥＤＴＡ・４Ｎａ）（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）４００  μＬを用いてプレートから剥がしＲＰＭＩ１６４０（１０％  Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ含有）１ｍｌを加えた後、１．５ｍｌエッペンドルフチューブに遠心回収した後、ＰＢＳ  （−）  ｂｕｆｆｅｒ（日水製薬（株））で２回洗浄した。回収した細胞からのｔｏｔａｌ  ｍＲＮＡの抽出は、Ｑｕｉｃｋ  Ｐｒｅｐ  Ｍｉｃｒｏ  ｍＲＮＡ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（アマシャム  ファルマシア  バイオテク（株））を用いてマニュアルどおりに行い、ｔｏｔａｌ  ｍＲＮＡを含む水溶液を２００μＬ得た。このうち１０μＬを用いて  Ｒｅａｄｙ−Ｔｏ−Ｇｏ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｂｅａｄｓ（アマシャム  ファルマシア  バイオテク（株））を用いて、マニュアルに従いｏｌｉｇｏ  ｄＴ（１２−１８）をプライマーに用いた逆転写反応を行い、ｔｏｔａｌ  ｃＤＮＡ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ５０μＬを得た。これをテンプレートとして以下に示すようにＰＣＲ反応を行ない、β−ａｃｔｉｎ  ｍＲＮＡの増幅を行なった。
β−ａｃｔｉｎ  ｐｒｉｍｅｒ  １  ：  ５’−ａｔｃａｃｃａｔｔｇｇｃａａｔｇａｇｃｇ−３’  （配列表の配列番号  ６）
β−ａｃｔｉｎ  ｐｒｉｍｅｒ  ２  ：  ５’−ｔｔｇａａｇｇｔａｇｔｔｔｃｇｔｇｇａｔ−３’  （配列表の配列番号  ７）
Ｔａｑ  ：  Ｔａｋａｒａ  Ｔａｑ  ｐｒｅｍｉｘ  （宝酒造製）
ＰＣＲ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ  ：  ９５℃  （２０  ｓｅｃ），  ５５℃  （４０  ｓｅｃ），  ７２℃  （４０  ｓｅｃ）．
サイクル数：２１回
ハウスキーピング遺伝子であるβ−ａｃｔｉｎ  ｍＲＮＡ量を内部標準として用いることで、各サンプル中のβ−ａｃｔｉｎ  ｍＲＮＡ量が等しくなるように補正した量のテンプレートを用い、ＶＥＧＦ  ｍＲＮＡの定量的なＰＣＲによる増幅を行なった。ＰＣＲ反応の条件を以下に示す。
ＶＥＧＦ  ｐｒｉｍｅｒ  １  ：  ５’−ｔｇｃａｔｔｇｇａｇｃｃｔｃｇｃｃｔｔｇ−３’  （配列表の配列番号  ８）
ＶＥＧＦ  ｐｒｉｍｅｒ  ２  ：  ５’−ｃｔｃａｃｃｇｃｃｔｃｇｇｃｔｔｇｔ−３’  （配列表の配列番号  ９）
Ｔａｑ  ：  Ｔａｋａｒａ  Ｔａｑ  ｐｒｅｍｉｘ  （宝酒造製）
ＰＣＲ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ  ：  ９５℃  （２０  ｓｅｃ），  ５５℃  （４０  ｓｅｃ），  ７２℃  （４０  ｓｅｃ）
サイクル数：３０回
得られた各ＰＣＲ産物は、５％アクリルアミドゲル電気泳動（１ｘ  ＴＢＥ溶液（０．８９Ｍトリス、ホウ酸、ＥＤＴＡ溶液  （ｐＨ８．３、宝酒造製）２４０Ｖ、３０分）を行ない、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｉ  （ＦＭＣ社）を用いてＰＣＲ産物を蛍光染色し、蛍光イメージアナライザー（モレキュラーイメージャーＦＸ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社））にてＰＣＲ産物を可視化し、産物量を定量した。可視化し、そのイメージの白黒を反転した結果を図１に示す。
図１から明らかであるように、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  （１９９５）  ２７０，  ２８３１６−２８３２４．記載の化合物Ａが殆どＶＥＧＦを抑制しなかったのに対し、本発明の化合物は顕著なＶＥＧＦ  ｍＲＮＡ量の抑制効果を示した。
（製剤例）
（製剤例１）ソフトカプセル剤
消化性油状物、例えば、大豆油、綿実油又はオリ−ブ油中に入れた、実施例１の化合物の混合物を調製し、正置換ポンプでゼラチン中に注入して、１００  ｍｇの活性成分を含有するソフトカプセルを得、洗浄後、乾燥する。
（製剤例２）錠剤
常法に従って、１００  ｍｇの実施例２の化合物、０．２  ｍｇのコロイド性二酸化珪素、５  ｍｇのステアリン酸マグネシウム、２７５  ｍｇの微結晶性セルロ−ス、１１  ｍｇ  のデンプン及び９８．８  ｍｇ  のラクト−スを用いて製造する。
【００７５】
尚、所望により、剤皮を塗布する。
（製剤例３）懸濁剤
５  ｍｌ中に、１００  ｍｇの実施例１の化合物、１００  ｍｇのナトリウムカルボキシ基メチルセルロ−ス、５  ｍｇの安息香酸ナトリウム、１．０  ｇ  のソルビト−ル溶液  （日本薬局方）  及び０．０２５  ｍｌのバニリンを含有するように製造する。
（製剤例４）注射剤
１．５  重量％  の実施例２の化合物を、１０容量％  のプロピレングリコ−ル中で撹拌し、次いで、注射用水で一定容量にした後、滅菌して製造した。
【００７６】
【発明の効果】
本発明の化合物は、強力なＶＥＧＦの抑制活性を有し、ＶＥＧＦによる血管新生又は血管透過性亢進が関与している疾患の治療に有用である。
【配列表フリーテキスト】
配列番号１：  ＶＥＧＦ２０６に対するアンチセンス配列
配列番号２：  ＶＥＧＦ２０６に対するセンス配列
配列番号３：  スクランブル配列
配列番号４：  ミスマッチ配列
配列番号５：  ミスマッチ配列
配列番号６：  β−アクチンのプライマー
配列番号７：  β−アクチンのプライマー
配列番号８：  ＶＥＧＦのプライマー
配列番号９：  ＶＥＧＦのプライマー
【００７７】
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】試験例における電気泳動の結果
【符号の説明】
ｕｎｔｒｅａｔｅｄ：薬剤を用いていない場合、全くＶＥＧＦが抑制されていない結果を示す。
ｓｅｎｓｅ：センス配列である参考例２を用いた場合、全くＶＥＧＦが抑制されていない結果を示す。
ｓｃｒａｍｂｌｅ：スクランブル配列である参考例３を用いた場合全くＶＥＧＦが抑制されていない結果を示す。
Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ：文献上知られているＶＥＧＦ抑制剤である参考例４（化合物Ａ）を用いた場合の結果を示す
ＥＮＡ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  １：本発明の実施例１を用いた場合の結果を示す。
４  ｍｉｓｍａｔｃｈ：実施例１にミスマッチ塩基を４残基導入した化合物である参考例５を用いた場合全くＶＥＧＦが抑制されていない結果を示す。
８  ｍｉｓｍａｔｃｈ：実施例１にミスマッチ塩基を８残基導入した化合物である参考例６を用いた場合全くＶＥＧＦが抑制されていない結果を示す。
ＥＮＡ  ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ２：本発明の実施例２を用いた場合の結果を示す。
ｍａｒｋｅｒ：分子量のマーカーを示す
【図１】
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