(57)【要約】【課題】点鼻薬の薬理効果を直接かつ客観的に評価する方法および、その評価法を用いて選択された点鼻薬を提供することを目的とする。【解決手段】抗原を投与して感作した実験的鼻アレルギーモデル動物に対し、鼻炎症状である鼻づまり、鼻みず、くしゃみまたは鼻のかゆみに対する効果を評価することを特徴とする点鼻薬の薬効評価方法、および、評価法を用いて選択された点鼻薬。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
鼻アレルギーモデル動物に薬物を点鼻投与し、該動物の鼻炎症状の変化を測定することを特徴とする点鼻薬の薬効評価方法。
【請求項２】
鼻アレルギーモデル動物がモルモットであることを特徴とする請求項１記載の点鼻薬の薬効評価方法。
【請求項３】
モルモットに投与する薬物の投与量が、１回当たり１０〜１００μＬであることを特徴とする請求項２記載の点鼻薬の薬効評価方法。
【請求項４】
鼻炎症状が鼻づまり、鼻みず、鼻のかゆみまたはくしゃみであることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の点鼻薬の薬効評価方法。
【請求項５】
鼻アレルギーモデル動物が、抗原を投与して感作した動物であることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の点鼻薬の薬効評価方法。
【請求項６】
抗原がスギ花粉であることを特徴とする請求項５記載の点鼻薬の薬効評価方法。
【請求項７】
請求項１〜６記載の方法を用いて選択される点鼻薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、鼻アレルギーモデル動物を用いた点鼻薬の評価方法、その評価法を用いて選択された点鼻薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アレルギー用医薬品の開発において、薬物の効力を評価するためのモデル動物として、感作動物を用いる手法は広く用いられている。例えば成田らのモルモット鼻アレルギーモデル（非特許文献１）や小島らのラットアレルギー性鼻炎モデル（非特許文献２）や河野らのモルモット鼻アレルギーモデル（特許文献１）などがある。このモデル動物を使って鼻炎症状の改善効果を検討した例は報告されている。例えば、麻黄附子細辛湯のアレルギー性鼻炎に対する薬効評価があるが、これは全身作用を意図したもので、薬物は経口投与である（非特許文献３）。
【０００３】
点鼻薬の薬効評価としては、野谷らの色素環流法による方法が報告されている（非特許文献４）。これは間接的に炎症の程度を評価する方法であり、鼻炎症状を直接評価するものではない。また実験動物に対する点鼻薬投与量についても検討がなされていない。ヒトへの臨床試験による方法もあるが、客観的、定量的評価が困難であり、複数の検体の比較も不可能である。
【０００４】
上記により開示されている方法では、アレルギー性鼻炎に対する点鼻薬の効果を直接的に評価することができなかった。
【特許文献１】
特許第２９２８３２８号明細書
【非特許文献１】
基礎・治療（Ｐｒｏｇ  Ｍｅｄ），ライフ  サイエンス  メディカ，１９９６年，１６巻，１２号，ｐ３０８１−３０９０
【非特許文献２】
アレルギーの臨床，北隆館，１９９１年，１３５号，ｐ４４９−４５２
【非特許文献３】
アレルギー，日本アレルギー学会，１９９７年，４６巻  ８−９号
【非特許文献４】
薬理と治療，合資会社医薬出版，１９９５年，２３巻，７号，ｐ１７０１−１７０４
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
点鼻薬開発の目的には全身作用の回避も含まれるため、静脈注射あるいは経口投与とはまったく異なる独自評価方法が求められる。本発明は、鼻アレルギーモデル動物を用いて、点鼻薬の薬理効果を直接かつ客観的に正しく評価する方法および、その評価法を用いて選択された薬物を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、鼻アレルギーモデル動物に対し薬物を点鼻投与し、該動物の鼻炎症状の変化を測定することで点鼻薬の薬理効果を評価できることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、▲１▼鼻アレルギーモデル動物に薬物を点鼻投与し、該動物の鼻炎症状の変化を測定することを特徴とする点鼻薬の薬効評価方法。▲２▼鼻アレルギーモデル動物がモルモットであることを特徴とする▲１▼記載の点鼻薬の薬効評価方法。▲３▼モルモットに投与する薬物の投与量が、１回当たり１０〜１００μＬであることを特徴とする▲２▼記載の点鼻薬の薬効評価方法。▲４▼鼻炎症状が鼻づまり、鼻みず、鼻のかゆみまたはくしゃみであることを特徴とする▲１▼〜▲３▼のいずれかに記載の点鼻薬の薬効評価方法。▲５▼鼻アレルギーモデル動物が、抗原を投与して感作した動物であることを特徴とする▲１▼〜▲４▼のいずれかに記載の点鼻薬の薬効評価方法。▲６▼抗原がスギ花粉であることを特徴とする▲５▼記載の点鼻薬の薬効評価方法。▲７▼▲１▼〜▲６▼記載の方法を用いて選択される点鼻薬。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明の鼻アレルギーモデル動物は、抗原で能動感作あるいは受動感作した後に抗原誘発を反復することにより得ることができる。
【０００９】
抗原で能動感作する方法は、卵白アルブミンなど当該分野で通常使用されている抗原を、必要に応じてアジュバンドと共に１週間程度の適当な投与間隔で、数回投与することで成立させることができる。また、河野らのようにスギ花粉の抽出エキスをアジュバンドと共に１週間に一回まで、合計２回、モルモットの腹腔内に注射する方法でも感作させることができる。
【００１０】
抗原で受動感作する方法は、抗原に対する抗血清を作製し、これを動物に投与して感作した後、抗原を鼻腔に投与して症状を誘発する。抗血清の作製方法、抗血清による動物の能動感作方法はアレルギー分野で通常行われている一般的な方法で行うことができる。また、抗原は卵白アルブミンやスギ花粉など当該分野で通常使用されている抗原を用いることができる。
【００１１】
上記の能動あるいは受動感作した動物に対して抗原誘発を行うことによって、鼻アレルギーモデル動物を得ることができる。
【００１２】
症状の誘発は、抗原が卵白アルブミンの場合には生理食塩水溶液を鼻腔に滴下して行う。抗原がスギ花粉の場合には花粉を直接吸入するか、あるいは低温下生理食塩水中で緩やかに攪拌してＣｒｙｊＩなどの抗原物質をなどの抗原物質を溶出させたエキスを鼻腔に滴下して行う。抗原は評価の目的に応じて選択することができる。
【００１３】
本発明の薬効評価法に用いる動物としては、ラット、マウス、モルモット、ハムスター、ウサギ、ツパイ等のサルなど通常の実験動物が使用できるが、モルモット、ハムスターが好ましく、モルモットがより好ましい。
【００１４】
鼻炎症状としては、鼻づまり、鼻みず、鼻のかゆみまたはくしゃみが挙げられる。これら鼻炎症状の変化は、以下のような方法で測定することができる。
【００１５】
鼻づまりはツーチャンバード−ダブルフロー−プレチスモグラフ法を用いた呼吸測定装置（ＰＵＬＭＯＳ−１，２，３  ＭＩＰＳ）を用い、特異的気道抵抗（ｓＲａｗ）を指標として測定する方法や気道を切開し、肺側より一定圧の空気を送り空気抵抗値を測定する方法などがあげられる。
【００１６】
鼻みずは動物の鼻粘膜および鼻腔周辺の鼻みず分泌状態を肉眼観察によりスコア化する方法があげられる。
【００１７】
鼻のかゆみ、くしゃみは症状惹起後比較的早い時期に反応が観察される。かゆみは前肢による鼻かき行動を指標として計測することができる。これらの観察は肉眼及びビデオなどの記録装置や行動を計測できる装置を用いて計測する。
点鼻薬の投与方法は、モデルの鼻腔内に的確に薬液が投与されるような方法であればどのような方法でも構わない。例えば、マイクロピペットは容量が正確で小さな鼻腔でも的確に投与できるので好ましい。
【００１８】
点鼻薬の投与量は、動物の鼻腔容積を考慮して設定する必要がある。モルモットの場合は、投与量は１０〜１００μＬが好ましく、ラットの場合は１０〜２５μＬが好ましい。これを越える投与量とすると、嚥下による薬物の影響が出るので好ましくなく、１０μＬより少なくすると薬物が鼻粘膜表面に行き渡らないからである。
【００１９】
本発明に示すモデル動物を用いて、鼻炎症状に対する点鼻薬の薬理効果の測定および鼻炎症状を予防または治療するための点鼻薬の評価を行うことができる。本評価において、鼻炎症状の軽減した点鼻薬は、鼻炎症状の予防または治療薬の候補となりうる。
【００２０】
本発明の点鼻薬の薬効評価方法は、静脈注射あるいは経口投与とは異なる、点鼻薬独自の評価方法である。本発明により、鼻炎症状の予防または治療のための点鼻薬の開発が飛躍的に進歩する。
【００２１】
【発明の効果】
本発明により、点鼻薬の薬理効果を直接かつ客観的に正しく評価する方法および、その評価法を用いて選択された点鼻薬を提供することが可能になった。
【００２２】
【実施例】
以下に試験例をあげ、本発明を具体的に説明する。
【００２３】
＜試験例１＞
（投与量の設定）
α作動薬の塩酸ナファゾリン０．０５％溶液を、健常モルモット１群１４匹に対して１０μＬ、３０μＬおよび５０μＬ投与したときの鼻腔抵抗値の平均値を表１に示す。全ての薬物投与群において塩酸ナファゾリンの血管収縮作用による特異的鼻腔抵抗値（ｓＲａｗ）の低下が見られた。
【００２４】
【表１】
2004294203.tif 000002
【００２５】
＜試験例２＞
（実験的鼻アレルギーモルモットの作成）
実験的鼻アレルギーモルモットの作成はジャパニーズ  ジャーナル  オブ  ファーマコロジー、７５巻、２４３−２５１頁、１９９７年に記載の河野らが既に報告している方法で作成することができる。
Ｈａｒｔｌｅｙ系モルモット（日本エスエルシー，静岡）１群１３匹の両鼻粘膜に１日２回、７日間連続、スギ花粉抽出物０．３μｇおよび水酸化アルミニウム０．３ｍｇを点鼻した。なお、スギ花粉抽出物０．３μｇおよび水酸化アルミニウム０．３ｍｇを点鼻する前には超音波ネブライザー（ＮＥ−Ｕ１２，オムロン）によって発生させた４％塩酸リドカインのミストを自発呼吸下で５分間吸入させた。スギ花粉抽出物０．３μｇおよび水酸化アルミニウム０．３ｍｇ連続点鼻投与終了１週間後から１週間に１回の割合でスギ花粉３．６ｍｇ（両鼻腔）を自発的に吸入させ、鼻アレルギーモルモットを得た。
【００２６】
＜試験例３＞  鼻づまりの評価
試験例２で作成した鼻アレルギーモルモットは、スギ花粉吸入から１時間後に鼻づまりによる鼻腔抵抗の上昇が見られた。このモルモットに、薬物として塩酸テトラヒドロゾリン０．１％、マレイン酸クロルフェニラミン０．５％溶液を片鼻５０μＬ両鼻に投与した。この薬物濃度は通常ヒトに適用する薬物濃度である。比較対照群には生理食塩水を同様に投与した。薬物投与後１時間後から６時間後までの鼻腔抵抗値を測定し、平均値を求めた。鼻腔抵抗値の測定はツーチャンバード−ダブルフロー−プレチスモグラフ法を用いた呼吸測定装置（ＰＵＬＭＯＳ−１、２、３  ＭＩＰＳ製）を用い、特異的気道抵抗（ｓＲａｗ）を指標として測定した。
【００２７】
実験の結果は表２に示す。薬物投与群は速やかに鼻腔抵抗値が低下し、鼻づまりが抑制されているのに対し、対照群の鼻腔抵抗値は低下するのに時間を要した。
【００２８】
本評価方法は点鼻薬の鼻づまり症状改善効果を測定できる優れた評価方法であることがわかった。
【００２９】
【表２】
2004294203.tif 000003
【００３０】
＜試験例４＞鼻みずの評価
試験例３で鼻腔抵抗を測定する際に、鼻粘膜および鼻腔周辺の鼻みず分泌状態を肉眼観察によりスコア化し、平均値を求めた。
【００３１】
０  ：    分泌なし
１  ：    鼻腔内粘膜が湿っている
２  ：    鼻腔外が濡れている．少し鼻汁が出ている
３  ：    鼻腔外に垂れている
４  ：    非常に多量に分泌されている
実験の結果は表３に示す。薬物投与群は対照群に比べてすべての観測時においてスコアが低く、鼻みず分泌が抑制された。
本評価方法は点鼻薬の鼻みず分泌改善効果を測定できる優れた評価方法であることがわかった。
【００３２】
【表３】
2004294203.tif 000004
【００３３】
＜試験例５＞くしゃみの評価
試験例２で作成した鼻アレルギーモルモットに１週間に１回の割合でスギ花粉を自発的に吸入させ、８回目の吸入のとき試験を行った。モルモットにマレイン酸クロルフェニラミン０．５％溶液を片鼻５０μＬ、両鼻に投与し、１分後にスギ花粉３．６ｍｇを吸入させた。対照は点鼻投与なしとした。スギ花粉吸入後１０分間、肉眼にてくしゃみ回数を計測し、平均値を求めた。
【００３４】
実験の結果は表４に示す。薬物投与群は対照群に比べてスギ花粉吸入後１０分間のくしゃみ回数が少なく、くしゃみが抑制された。
【００３５】
本評価方法は点鼻薬のくしゃみ改善効果を測定できる優れた評価方法であることがわかった。
【００３６】
＜試験例６＞かゆみの評価
試験例５の実験でくしゃみを測定する際、同時に前肢での鼻かき行動を観察し、かゆみの指標とした。鼻かき回数を計測し、平均値を求めた。
【００３７】
実験の結果は表４に示す。薬物投与群は対照群に比べてスギ花粉吸入後１０分間の鼻かき回数が少なく、かゆみが抑制された。
【００３８】
【表４】
2004294203.tif 000005
【００３９】
本評価方法は点鼻薬のかゆみ改善効果を測定できる、優れた評価方法であることがわかった。
【００４０】
試験例に示したように、点鼻薬の薬物濃度は体重換算する必要はなく、ヒトが使用する薬物濃度と同じ濃度で評価できることがわかった。
【図面の簡単な説明】
【図１】表１の測定結果を示した図であり、縦軸は特異的鼻腔抵抗値、横軸は時間である。
【図２】表２の測定結果を示した図であり、縦軸は特異的鼻腔抵抗値、横軸は時間である。
【図３】表３の測定結果を示した図であり、縦軸はスコア、横軸は時間である。
【図４】表４のくしゃみ回数の測定結果を示した図である。
【図５】表４の鼻かき回数の測定結果を示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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