(57)【要約】【課題】本発明は、土壌の新規な処理方法を提供することを目的とする。【解決手段】本発明の土壌の処理方法は、土壌中の難分解性化学物質を土壌処理剤により分解する方法である。土壌処理剤は担子菌を含有している。ここで、担子菌がアラゲカワラタケであることが好ましい。また、担子菌が、酵素誘導剤を添加して前培養されることが好ましい。また、酵素誘導剤が、ナラまたはリグニンであることが好ましい。また、土壌が湿潤状態にあることが好ましい。また、土壌が通気状態にあることが好ましい。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
土壌中の難分解性化学物質を分解する土壌処理剤であって、
担子菌を含有する土壌処理剤。
【請求項２】
難分解性化学物質がビスフェノールＡであり、担子菌がアラゲカワラタケである請求項１記載の土壌処理剤。
【請求項３】
担子菌が、酵素誘導剤を添加して前培養される請求項２記載の土壌処理剤。
【請求項４】
酵素誘導剤が、ナラまたはリグニンである請求項３記載の土壌処理剤。
【請求項５】
土壌が湿潤状態にある請求項２記載の土壌処理剤。
【請求項６】
土壌が通気状態にある請求項２記載の土壌処理剤。
【請求項７】
土壌中の難分解性化学物質を土壌処理剤により分解する、土壌の処理方法であって、
土壌処理剤が担子菌を含有する、土壌の処理方法。
【請求項８】
難分解性化学物質がビスフェノールＡであり、担子菌がアラゲカワラタケである請求項７記載の土壌の処理方法。
【請求項９】
担子菌が、酵素誘導剤を添加して前培養される請求項８記載の土壌の処理方法。
【請求項１０】
酵素誘導剤が、ナラまたはリグニンである請求項９記載の土壌の処理方法。
【請求項１１】
土壌が湿潤状態にある請求項８記載の土壌の処理方法。
【請求項１２】
土壌が通気状態にある請求項８記載の土壌の処理方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、土壌処理剤、およびこの土壌処理剤を用いる土壌の処理方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、極低濃度でも遺伝毒性を持つ難分解性化学物質による汚染が深刻なってきている。これらの物質は、過去に人間に役立つ物質であり無害であると考えられていたので、世界中で大量に使用された。１９６０年代から、多くの生物種の大量死、生殖異常、奇形が報告され、難分解性化学物質が原因ではないかと考えられ始めた。そのため、世界中でこれらの物質の使用や環境への廃棄が禁止された。しかし、これらの物質は長い間環境中にとどまり、分解されず環境汚染を引き起こしている。
【０００３】
難分解性化学物質の中で、最近になって有害性が指摘され始めた化合物があり、汚染が問題になっている。例えば、ドライクリーニングなどで使用されていたトリクロロエチレンやテトラクロロエチレンなど発ガン性を有する揮発性有機塩素化合物による土壌・地下水汚染、船底塗料や漁網塗料で使用されている有機スズによる魚介類や水底汚染である。また、生物の成長、生殖、行動を助けるホルモン、内分泌腺などの内分泌機能に対する障害性をもつ化学物質である内分泌撹乱物質（環境ホルモン）による多くの生物種、環境に対する汚染がある。
【０００４】
環境に配慮した再開発が世界中で進む中で、過去に使用されて土壌に残留しているそれらの物質が問題視されている。日本では２００３年から土壌汚染対策法が施行されて、土壌汚染に対する関心が高まっている。それらの物質による経済的、社会的リスクとしては、再開発の遅延、中止や土地評価額の低下が（中には価値がなくなることも）考えられる。
【０００５】
土壌汚染が発覚すれば、土壌修復をする事になる。修復方法として物理的、化学的処理が、一般的にとられている。これらの方法は、ある程度の土地の広さと大型の装置、処理後の措置（ｐＨ調製、土壌の入れ替えなど）が必要になる。このため、処理するための制約条件が多く、コストが高くなる。一定の結果を残しているが、処理方法の改善、発展が望まれている。
【０００６】
これらの処理では除去できない物質や対応できないなどの困難な場合が出てくる中で、バイオレメディエーション技術の活用が期待されている。バイオレメディエーションとは、微生物、植物、動物などの生物が持っている化学物質の分解能力や蓄積能力などを利用して、有害物質で汚染された土壌や水環境を修復する技術のことである。
【０００７】
バイオレメディエーションは生物プロセスの原理を有害化学物質で汚染された地下水、土壌、および汚泥の処理に適用するものである。本質的には、生物学的排水処理プロセスと有害化学物質のバイオレメディエーションのデザインに大差はない。生物プロセスは触媒化学プロセスなのである。バイオレメディエーションは、特定の微生物によって供給される触媒（酵素）を利用するため、より複雑である。有害物質（対象物質）は基質になりえる場合もなり得ない場合もある。この触媒化学反応は、細胞という基本単位の中で、あるいは細胞外で行われる。主要な反応は、微生物のエネルギー生産に必須の酸化還元反応である。
【０００８】
また、バイオレメディエーションの利点として、次のものがある。
原位置での処理が可能
有害物質の恒久的除去
安価な生物学的システム
最小限のサイト破壊
他の処理技術との組み合わせが可能
輸送の費用及び責任がない
長期間の債務リスクの除去
【０００９】
内分泌撹乱物質の環境への影響が明らかなってきている。その中で、ｐｐｔのような微小量で作用するのではないかという考えも出てきている。このことを考えると、恒久的な除去ができることは、他の方法に比べて、大きな利点となる。また、従来の方法では分解が難しい物質も対象にできることも大きな魅力となっている。近年、ダイオキシン等の難分解性芳香族化合物を担子菌などの白色腐朽菌が容易に分解する事が報告されている（例えば、非特許文献１参照。）。また、液相中の難分解性化学物質ビスフェノールＡの担子菌バイオレメディエーションに成功している（例えば、非特許文献２〜５参照。）。
【００１０】
【非特許文献１】
ジョン・Ｔ・クックソン著、藤田正憲  矢木修身監訳「バイオレメディエーションエンジニアリング−設計と応用  −」エヌ・ティー・エス発行、１９９７年      １月２３日、ｐ．１０−２３
【非特許文献２】
田村昌義、浅見和広、太田口和久  担子菌アラゲカワラタケを用いたビスフェノールＡ生分解反応、平成１１年度日本生物工学会大会要旨集、Ｐ２１１（１９９９）
【非特許文献３】
田村昌義、浅見和広、太田口和久  一般河川汚染内分泌撹乱物質に対する
担子菌生分解反応の特性解析、平成１２年度日本生物工学会大会要旨集、Ｐ１２６（２０００）
【非特許文献４】
田村昌義、浅見和広、太田口和久  担子菌アラゲカワラタケを用いたビスフェノールＡ生分解反応の解析、化学工学会つくば大会講演要旨集、Ｄ１１９    （２０００）
【非特許文献５】
浅見和広、田村昌義、備後元晴、太田口和久  社会的安心感をもたらすための環境バイオテクノロジーの構築を目指して、化学工学会第３３回秋季大会研究発表講演要旨集、Ｒ１１７（２０００）
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上述した従来の難分解性化学物質ビスフェノールＡの担子菌バイオレメディエーションは、液相において成功したものであり、土壌については成功していない。土壌についての適用は困難とされている。
【００１２】
本発明は、このような課題に鑑みてなされたものであり、新規な土壌処理剤および新規な土壌の処理方法を提供することを目的とする。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明の土壌処理剤は、土壌中の難分解性化学物質を分解する土壌処理剤であって、担子菌を含有するものである。
【００１４】
ここで、難分解性化学物質がビスフェノールＡであり、担子菌がアラゲカワラタケであることが好ましい。また、担子菌が、酵素誘導剤を添加して前培養されることが好ましい。また、酵素誘導剤が、ナラまたはリグニンであることが好ましい。また、土壌が湿潤状態にあることが好ましい。また、土壌が通気状態にあることが好ましい。
【００１５】
本発明の土壌の処理方法は、土壌中の難分解性化学物質を土壌処理剤により分解する、土壌の処理方法であって、土壌処理剤が担子菌を含有するものである。
【００１６】
ここで、難分解性化学物質がビスフェノールＡであり、担子菌がアラゲカワラタケであることが好ましい。また、担子菌が、酵素誘導剤を添加して前培養されることが好ましい。また、酵素誘導剤が、ナラまたはリグニンであることが好ましい。また、土壌が湿潤状態にあることが好ましい。また、土壌が通気状態にあることが好ましい。
【００１７】
【発明の実施の形態】
以下、土壌処理剤および土壌の処理方法にかかる発明の実施の形態について説明する。
【００１８】
最初に、土壌処理剤について説明する。
土壌処理剤は、土壌中の難分解性化学物質を分解するものであって、担子菌を含有している。
【００１９】
担子菌としては、アラゲカワラタケを用いることができる。担子菌はこのアラゲカワラタケに限定されない。このほか、カワラタケ（Ｃｏｒｉｏｌｕｓ  ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）、コフキサルノコシカケ（Ｅｌｆｖｉｎｇｉａ  ａｐｐｌａｎａｔａ）、Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ  ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ、シイタケ（Ｌｅｎｔｉｎｕｓ  ｅｄｏｄｅｓ）、ヒラタケ（Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ  ｏｓｔｒｅａｔｕｓ）などを使用することができる。
【００２０】
担子菌は、酵素誘導剤を添加して前培養される。
前培養の培地としては、ＭＹＧ培地を使用することができる。前培養の培地は、このＭＹＧ培地に限定されない。このほか、ＹＮＢ（Ｙｅａｓｔ  Ｎｉｔｒｏｇｅｎ  Ｂａｓｅ）培地、ＧＰＹ培地、Ｋｉｒｋ基本培地、ＭＡＬＴ培地、ＰＤＡ培地、ＹＭ培地、ＭＡＬＴ抽出液培地、ＰＤＹ培地、ＹＭ培地、Ｈａｇｅｍ’ｓ−Ｍｏｄｅｓｓ培地、Ｅｍｍｏｎ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓａｂｏｕｒａｕｄ’ｓ寒天培地などを使用することができる。
【００２１】
酵素誘導剤として、ナラまたはリグニンを使用することができる。酵素誘導剤は、ナラまたはリグニンに限定されない。このほか、ブナ、マツ、ヒノキ、カバ、シラカンバなどを使用することができる。
【００２２】
つぎに、土壌の処理方法について説明する。
土壌の処理方法は、土壌中の難分解性化学物質を土壌処理剤により分解する方法であって、土壌処理剤が担子菌を含有している。
【００２３】
土壌は、黒土を使用することができる。土壌は、この黒土に限定されない。このほか、腐葉土、培養土、バーミキュライト、ビートモス、赤玉土、赤土、凝灰質粘土、火山灰質粘土、ローム質粘土、砂、軽石、草炭、けと土、堆肥、および鹿沼土、荒木田土などの各地方土壌などを使用することができる。
【００２４】
難分解性化学物質としては、ビスフェノールＡを対象とすることができる。難分解性化学物質としては、このビスフェノールＡに限定されない。このほか、ダイオキシン類、オクチルフェノール、ノニルフェノールなどを対象とすることができる。
【００２５】
土壌は湿潤状態にあることが好ましい。土壌の含水率は２０〜８５％の範囲内にあることが好ましい。含水率が２０％以上であると、難分解性化学物質の生分解反応を触媒する水溶性菌体外酵素が土壌内水相中を広範囲領域に亘って拡散するため広範囲処理が可能となるという利点がある。含水率が８５％より高いと、水が土壌を分布させる状態となり安定した処理が困難となるが、含水率が８５％以下であると土壌中に水が浸透する状態となり比較的安定な操作が実施可能という利点がある。
【００２６】
土壌を湿潤状態にする方法としては、土壌表面より間歇的に水を散布したり、水で飽和したガスを土壌中に挿入し土壌を撹乱するなどの方法を採用することができる。
【００２７】
土壌は通気状態にあることが好ましい。ここで通気状態にあるとは、具体的には、汚染土壌の単位面積で定義されたガス空塔速度（＝汚染土壌に対するガスの総流量／汚染土壌の面積）の値が０．５ｃｍ／ｓ以上の状態にあることが好ましい。
【００２８】
土壌の通気方法は、汚染土壌区域の底部または土中に設定したガス分散孔またはガス分散板からガスを土壌中に放出したり、汚染土壌を処理装置に輸送し処理装置内でガス分散孔またはガス分散板からガスを吹き込むなどの方法を採用することができる。
【００２９】
以上のことから、本実施の形態によれば、土壌処理剤が、土壌中の難分解性化学物質を分解する土壌処理剤であって、担子菌を含有するものであるので、または、土壌の処理方法が、土壌中の難分解性化学物質を土壌処理剤により分解する、土壌の処理方法であって、土壌処理剤が担子菌を含有するものであるので、新規な土壌処理剤および新規な土壌の処理方法を提供することができる。
【００３０】
なお、本発明は上述の実施の形態に限らず本発明の要旨を逸脱することなくその他種々の構成を採り得ることはもちろんである。
【００３１】
【実施例】
つぎに、本発明にかかる実施例について具体的に説明する。ただし、本発明はこれら実施例に限定されるものではないことはもちろんである。
【００３２】
［実施例１］
ここでは、担子菌バイオレメディエーションに対する諸条件の影響について検討した。
本実施例の目的は、前培養のＭＹＧ培地に酵素誘導剤を添加した場合の担子菌による土壌中ビスフェノールＡの分解能を測定し、優れた酵素誘導剤を決定することである。
【００３３】
実験方法について説明する。
【００３４】
使用菌体
本実施例では担子菌  Ｃｏｒｉｏｌｕｓ  ｈｉｒｓｔｕｓ  ＩＦＯ  ４９１７（独立行政法人製品評価技術基盤機構・生物遺伝資源センター（ＮＢＲＣ）より入手）を使用した。担子菌  Ｃｏｒｉｏｌｕｓ  ｈｉｒｓｔｕｓ  ＩＦＯ  ４９１７は、和名がアラゲカワラタケという白色腐朽菌のキノコである。
担子菌はいわゆる“キノコ”に属し、落ち葉や木などを分解する力が非常に大きい。植物体内にはリグニンと呼ばれる高分子化合物が存在し、これは植物体内で細胞間の接着や細胞壁の補強、耐水性の付与、病原体の進入に対する防壁としての役割を担っている。リグニンは多くの微生物にとって難分解性の物質であるが、ここで用いた担子菌はリグニンを分解する能力を持つ。
【００３５】
炭素源
本実施例で使用する有機化合物は菌体増殖の為の炭素源となる。モデル物質としてはビスフェノールＡ（ＢＰＡ）  （化１）を採用した。ビスフェノールＡ  はポリカーボネート樹脂やエポキシ樹脂の原料として用いられているが、内分泌攪乱性が指摘されている。ビスフェノールＡは水にほとんど溶けず、固体粒子（融点：１５６〜１５９  ℃）である為、１ｇ／Ｌ  のエタノール溶液として保存し、培地に希釈して加えた。
【００３６】
【化１】
2004323636.tif 000002
【００３７】
前培養
本培養を行う前に、菌体生理状態を一定に揃えるため前培養を一定の条件で行う必要がある。今回は、ＭＹＧ培地を用いた。組成は以下の通りである。
Ｍａｌｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ  １０ｇ／Ｌ
Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ  ４．０ｇ／Ｌ
Ｇｌｕｃｏｓｅ  ４．０ｇ／Ｌ
【００３８】
培地は植菌前に混合させた上で１２１℃、２０ｍｉｎの間オートクレーブにより滅菌した。また、植菌はコンタミネーションを防ぐため、全てクリーンベンチ内で行った。３００ｍＬ三角フラスコ中の５０ｍＬのＭＹＧ培地に、２５℃でＭＹＧ培地中に静置保存してある担子菌を湿体積およそ１．５ｍＬ加える。三角フラスコを、シリコ栓で蓋をして、２５℃で三日間１００ｒｐｍの振盪培養を行った。
【００３９】
酵素誘導剤として、ブナ、ナラ、リグニン、ＢＰＡは、滅菌前に０．００７２ｇをＭＹＧ培地に加えた。ブナ、ナラは、およそ１ｍｍ×１ｍｍ×１．５ｍｍの状態に砕いておいた。ＢＰＡは、エタノール５０μＬに溶解してからＭＹＧ培地に加えた。
【００４０】
本培養
本培養にはバイオリアクターとして、３００ｍＬ三角フラスコにシリコ栓で蓋をしたものを用いた。５０ｐｐｍのビスフェノールＡに汚染された土壌５ｇをセットした。土壌は、滅菌した黒土（（株）フジミ製、黒土）を用いた。この黒土製品は無菌的には取り扱われていない。そこで実験では担子菌の活性を正しく把握するために、実験に先立ち黒土は１２０℃で２０分間オートクレーブにより滅菌した。滅菌は五回行い、黒土は無生物状態で用いた。
そこに、前培養した湿体積１．５ｍＬの担子菌を新鮮ＭＹＧ培地５ｍＬに懸濁させた液を植菌した。２５℃、１００ｒｐｍで２日間振盪培養した。
土壌中の含水率の違いを出すために、一日に土壌に加える純水を０ｍＬ、１ｍＬ、２ｍＬと三つパターンを作った。
【００４１】
測定法について説明する。
【００４２】
残存ビスフェノールＡの抽出
以下に手順を示す。
（１）本培養２日後の土壌を遠心管に４ｇ取り出し、濃塩酸２００μＬを添加する。
（２）アセトン２０ｍＬで、１０ｍｉｎの固／液振盪抽出を行う。
（３）超音波抽出を１０ｍｉｎ行う。
（４）６０００ｒｐｍで、１０ｍｉｎの遠心分離を行う。
（５）（２）〜（４）をもう一度行う。
（６）（５）で得られた上清をエバポレーターで乾燥させる。
（７）析出したビスフェノールＡをアセトニトリル５００μＬに溶解させる。
【００４３】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による定量分析
ビスフェノールＡの定量分析には、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ、日立製作所６５５Ａ−１１形）を使用した。カラムは、粒径５μｍのＯＤＳ−Ｃ１８（オクタデジタル基）逆そう分配カラム（４×２５０ｍｍ）を用いた。分析条件は、流動相をアセトニトリル／水＝４０／６０、流速を１．０ｍＬ／ｍｉｎ、ＵＶ検出波長を２７５ｎｍ、カラム内温度を４０℃とした。ビスフェノールＡのリテンションタイムは約７．０ｍｉｎである。
測定して得られたビスフェノールＡのピーク面積と濃度既知のビスフェノールＡのピーク面積を用い、ビスフェノールＡ濃度を算出した。
【００４４】
実験結果および考察について説明する。
【００４５】
酵素誘導剤の分解への影響
酵素誘導剤の分解への影響を図１に示す。縦軸は、ビスフェノールＡ分解速度を示す。単位は、ｇＢＰＡ  ／  ｈ・ｇｓｏｌｉｄとなる。コントロールは、ＭＹＧ培地のみで前培養した菌体を用いた場合を示す。ブナ、ナラ、リグニン、ＢＰＡは、ＭＹＧ培地にそれぞれを０．００７２ｇ添加して前培養した菌体を用いた場合を示す。すべての場合で、土壌に一日１ｍＬの純水を加えた。
【００４６】
実験に先立ち５０  ｐｐｍのビスフェノールＡで汚染された無菌状態の黒土土壌を三角フラスコ中に準備し、担子菌を植菌せずに、三角フラスコをシリコ栓で蓋をして、２５℃で三日間１００ｒｐｍの振盪培養を行なった。その後、前出の残存ビスフェノールＡ抽出法に従い無菌土壌に吸着したビスフェノールＡを抽出した。その結果、今回の抽出方法では、すべてのＢＰＡを抽出することは難しく、試料と供与したビスフェノールＡの１９％は土壌から脱離させることは難しく、抽出率は約８１％であった。
【００４７】
ＢＰＡは酵素誘導剤として効果がなく、むしろ抑制していることがわかった。目視のみによる判断であるが、前培養での菌体増加が他の場合に比べて悪く、土壌中で菌体の増加は見られなかった。
ナラ、リグニンは、酵素誘導剤としての効果が見られた。若干ナラが優れているので、後の実験では酵素誘導剤としてナラを使用した。
【００４８】
含水率に対する分解能
含水率に対するビスフェノールＡ分解速度を図２に示す。含水率１％は、土壌に一日にまったく水を加えなかった場合である。含水率４１％は一日１ｍＬ、７９％は一日２ｍＬ純水を加えた場合である。含水率が大きくなると、ビスフェノールＡ分解速度が高まる傾向が見られた。これは、分解に関与している菌体外酵素が水溶性であるため土壌中の水により拡散し広い範囲で分解反応を起こしたためだと考えられる。
今回の実験範囲では、含水率ψに対してＢＰＡ分解速度ＲＢＰＡは直線性が見られた。これより、実験式ＲＢＰＡ＝６．３５×１０−９ψ＋３．１１×１０−７が得られた。
【００４９】
図３に、水溶液中でのビスフェノールＡ処理反応および土壌中でのビスフェノールＡ処理反応の反応速度を比較した。また土壌の処理に関しては、それぞれの含水率の場合を示した。図３において、水溶液中ＢＰＡ分解速度は左側の縦軸の目盛りに対応し、土壌中ＢＰＡ分解速度は右側の縦軸の目盛りに対応する。
【００５０】
水溶液中でのビスフェノールＡ処理反応では担子菌の作用によりビスフェノールＡは１７分程度で完全分解されている。水溶液中のビスフェノールＡ完全分解の場合、ナラを添加しないＭＹＧ培地で前培養した担子菌１．５ｍＬを準備した。これを５０ｐｐｍのビスフェノールＡで汚染したＹＮＢ培地（液量：５０ｍＬ）を含む３００ｍＬの三角フラスコに加え、２５℃、１００ｒｐｍで２日間振盪培養した。
この図より、水溶液１ｍＬ中の分解速度は含水率７９％の土壌１ｇ中の分解速度のおよそ二倍であることがわかる。含水率を高める事で、分解が促進されると考えられる。
【００５１】
実施例１を要約すると次のようになる。
担子菌の前培養で、ナラとリグニンが酵素誘導剤として効果を持つ。
土壌中の含水率が高いほど、分解が促される。
【００５２】
［実施例２］
ここでは、担子菌バイオレメディエーションに対する通気の影響を検討した。
本実施例の目的は、優れた誘導剤を用いて前培養した担子菌を使用し、本培養の間通気を行った場合の分解能を吟味することである。
【００５３】
実験方法について説明する。
【００５４】
使用菌体
実施例１と同じ担子菌Ｃｏｒｉｏｌｕｓ  ｈｉｒｓｕｔｕｓ  ＩＦＯ  ４９１７を用いた。前培養も実施例１と同じ方法である。酵素誘導剤としては、ナラのみを使用した。
【００５５】
本培養
本実施例で用いた装置を図４に示す。内径３８ｍｍ、容量３０ｍＬのガラスフィルター付ろうとに、実施例１と同様の土壌２０ｇを用意する。５０ｐｐｍになるようにビスフェノールＡを加えて、汚染土壌を作る。これに、前培養した湿体積１．５ｍＬの担子菌と５ｍＬのＭＹＧ培地を加える。本培養の間、装置の下から湿り空気を流量５００ｍＬ／ｍｉｎで流した。
【００５６】
測定方法について説明する。
【００５７】
湿り空気の湿り具合の測定
空気は、密閉容器中の純水を通して送った。このため、実験開始時と終了時の容器中の純水重量を測定する。実験温度２５℃での水の密度から容量を算出した。
【００５８】
残留ビスフェノールＡ濃度の測定
実施例１と同様にビスフェノールＡを抽出して、ビスフェノールＡ濃度を測定する。
【００５９】
実験結果について説明する。
【００６０】
湿り空気の水と空気の比
水／空気＝１．４１％［ｖ／ｖ］のようになった。算出ために、開始時と終了時の純水の変化分がすべて空気に吸収されたと考えた。なお、水の体積は２５℃の水蒸気量である。
【００６１】
通気の影響
通気を行った場合の実験結果を図５に示す。ここで、「コントロール」はＭＹＧ培地のみで前培養した菌体を使用し、本培養中に通気を行わない場合である。「通気」は、本培養中に通気を行った場合である。「ナラ」は前培養に酵素誘導剤としてナラを加え、本培養中に通気を行わなかった場合、「ナラ（通気）」は本培養中に通気を行った場合である。
コントロール、ナラの両方の場合で、通気は効果があることを確認した。
【００６２】
酵素誘導剤と通気の影響
図５より酵素誘導剤としてナラを使用し、本培養中に通気を行った場合は、酵素誘導剤を使用しないで、本培養中も通気をしない場合に比べてビスフェノールＡ分解速度は１．５倍になることがわかる。これは、酵素誘導剤によって分解に関与する菌体外酵素が、通気により効果的に働いていると考えられる。菌体外酵素は、多くの種類の酵素をまとめて考えているので、どの酵素が有効に働いているかを特定するのは困難である。しかし、通気により酸素が土壌に供給されていることを考えるとラッカーゼのように酸素を酵素反応に用いている酵素が有効に働いていると考えられる。
【００６３】
実施例２を要約すると次のようになる。
酵素誘導剤を使用して前培養した菌体も、通気により分解が促される。
酵素誘導剤としてナラを使用し、本培養中に通気を行う事で、そのままの菌体を用いる場合の１．５倍のビスフェノールＡ分解速度になる。
【００６４】
以上のことから、芳香族難分解性化学物質であるビスフェノールＡで汚染された土壌の担子菌バイオレメディエーション操作に及ぼす諸条件を検討した実施例１および２の内容を以下に要約する。
【００６５】
担子菌Ｃｏｒｉｏｌｕｓ  ｈｉｒｓｕｔｕｓの前培養では、ナラとリグニンが酵素誘導剤として効果的に働く。
酵素誘導剤として一番優れたナラを使用した場合、土壌中ビスフェノールＡ分解速度は、６．０４×１０−７ｇＢＰＡ  ／ｈ・ｇｓｏｌｉｄである。
土壌中ＢＰＡ分解速度は、含水率を高める事で、大きくなる。
含水率ψ［％］に対する土壌中ＢＰＡ分解速度ＲＢＰＡのプロットより次の実験式が得られる。
ＲＢＰＡ＝６．３５×１０−９ψ＋３．１１×１０−７
【００６６】
酵素誘導剤としてナラを使用して前培養した担子菌を用いたバイオレメディエーションの本培養の時、通気は分解を促す。
前培養で酵素誘導剤としてナラを使用し本培養中に通気を行った場合は、両方を行わない場合に比べて、土壌中のビスフェノールＡ分解速度はおよそ１．５倍になる。
【００６７】
【発明の効果】
本発明は、以下に記載されるような効果を奏する。
土壌処理剤が、土壌中の難分解性化学物質を分解する土壌処理剤であって、担子菌を含有するものであるので、または、土壌の処理方法が、土壌中の難分解性化学物質を土壌処理剤により分解する、土壌の処理方法であって、土壌処理剤が担子菌を含有するものであるので、新規な土壌処理剤および新規な土壌の処理方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】酵素誘導剤の影響を示す図である。
【図２】含水率に対する分解能を示す図である。
【図３】水分の分解への影響を示す図である。
【図４】通気実験装置図である。
【図５】通気の影響を示す図である。
【図１】
2004323636.tif 000003
【図２】
2004323636.tif 000004
【図３】
2004323636.tif 000005
【図４】
2004323636.tif 000006
【図５】
2004323636.tif 000007