(57)【要約】【課題】従来の炎症性疾患治療剤に比べて、抗炎症作用をより効果的に誘導することができ、かつ、副作用の少ない炎症性疾患治療剤、及び、炎症性疾患治療用具を提供する。【解決手段】サイトカイン誘導剤と、水に不溶性の担体とを含有することを特徴とする炎症性疾患治療剤及び炎症性疾患治療用具。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
サイトカイン誘導剤と、水に不溶性の担体とを含有することを特徴とする炎症性疾患治療剤。
【請求項２】
生体由来の細胞、血液又は血液成分と接触することによりサイトカインを誘導することを特徴とする請求項１記載の炎症性疾患治療剤。
【請求項３】
サイトカイン誘導剤は、担体に固定化されていることを特徴とする請求項１又は２記載の炎症性疾患治療剤。
【請求項４】
サイトカイン誘導剤は、物理吸着により担体に固定化されていることを特徴とする請求項１、２又は３記載の炎症性疾患治療剤。
【請求項５】
担体は、高分子材料からなることを特徴とする請求項１、２、３又は４記載の炎症性疾患治療剤。
【請求項６】
担体は、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポリエステル系、ナイロン系、セルロース系、及び、ポリビニルアルコール系の各高分子材料からなる群より選択される少なくとも１種の高分子材料からなることを特徴とする請求項１、２、３、４又は５記載の炎症性疾患治療剤。
【請求項７】
担体は、多孔性であることを特徴とする請求項１、２、３、４、５又は６記載の炎症性疾患治療剤。
【請求項８】
担体は、巨大網目構造を有することを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６又は７記載の炎症性疾患治療剤。
【請求項９】
担体は、細孔分布が２〜２０００Åであることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７又は８記載の炎症性疾患治療剤。
【請求項１０】
担体は、中心線平均粗さＲａ値が０．２〜１０μｍである表面を有することを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８又は９記載の炎症性疾患治療剤。
【請求項１１】
サイトカイン誘導剤は、菌体及び／又は菌体由来成分であることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０記載の炎症性疾患治療剤。
【請求項１２】
サイトカイン誘導剤は、抗酸菌及び／又は抗酸菌由来成分であることを特徴とする請求項１１記載の炎症性疾患治療剤。
【請求項１３】
サイトカイン誘導剤は、溶連菌及び／又は溶連菌由来成分であることを特徴とする請求項１１記載の炎症性疾患治療剤。
【請求項１４】
サイトカイン誘導剤は、放線菌及び／又は放線菌由来成分であることを特徴とする請求項１１記載の炎症性疾患治療剤。
【請求項１５】
誘導されるサイトカインが、インターフェロンγ、インターロイキン２、インターロイキン１０、インターロイキン１２、腫瘍壊死因子−α、及び、トランスフォーミング増殖因子−βからなる群より選択される少なくとも１種のサイトカインであることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４記載の炎症性疾患治療剤。
【請求項１６】
容器と、容器内に収納された請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５記載の炎症性疾患治療剤とを有することを特徴とする炎症性疾患治療用具。
【請求項１７】
容器内に収納された炎症性疾患治療剤は、血液又は血液成分と接触することを特徴とする請求項１６記載の炎症性疾患治療用具。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、サイトカインを誘導する炎症性疾患治療剤、及び、炎症性疾患治療用具に関する。
【０００２】
【従来の技術】
リウマチのような炎症性疾患の治療薬としては、アスピリン（非特許文献１）やインドメタシン（非特許文献２）等の非ステロイド性抗炎症剤、及び、プレドニゾロン等のステロイド性抗炎症剤が有効である。
【０００３】
しかしながら、ステロイド性抗炎症剤は優れた臨床効果を示す反面、感染防御機能の低下、消化管障害、下垂体副腎皮質機能の抑制、骨形成の低下等の副作用の点で問題があった。また、非ステロイド性抗炎症剤は、ステロイド性抗炎症剤に比べて安全性が高いと考えられるものの、臨床効果が弱いという問題点があった。
【０００４】
一方、従来、サイトカインの活性を生体内で惹起して疾患を治療するサイトカイン誘導療法が知られている。
サイトカインとは、多種多様な細胞間情報伝達因子の総称であり、生体内で様々な活性を有し、様々な疾患に関与していることが知られている。
サイトカインとしては、例えば、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、インターロイキン１〜インターロイキン２７、腫瘍壊死因子−α（Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ−α、ＴＮＦ−α）、腫瘍壊死因子−β（Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ−β）、トランスフォーミング増殖因子−α（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ−α）、トランスフォーミング増殖因子−β（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ−β、ＴＧＦ−β）、及び、各種細胞増殖因子等が挙げられる（非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５）。
【０００５】
このサイトカイン誘導療法では、患者に、サイトカイン誘導剤を投与し、生体内においてサイトカインの誘導を引き起こす。
サイトカイン誘導療法に用いられるサイトカイン誘導物質としては、様々な物質が知られており、例えば、微生物由来のＯＫ−４３２、ＢＣＧ、ベスタチン、丸山ワクチン、又は、ロムリチド等が知られており、担子菌類由来のサイトカイン誘導物質として、クレスチン、レンチナン、又は、シゾフィラン等が知られている。
【０００６】
なお、特許文献１には、不溶性担体に刺激剤が共有結合されている悪性腫瘍治療用白血球刺激材が記載されている。また、特許文献２には、インターロイキン１、ＯＫ−４３２、遺伝子組み換えインターロイキン２、又は、γ−インターフェロンを不溶性担体に共有結合で結合してなる癌治療用白血球刺激材が記載されている。しかしながら、これらは腫瘍障害性細胞を誘導するものであり、これらの先行技術文献にはサイトカイン誘導や抗炎症作用については全く述べられていない。
【０００７】
【特許文献１】
特開昭６０−１２０８２１号公報
【特許文献２】
特開昭６１−２７７６２８号公報
【非特許文献１】
「日経サイエンス」、１９９１年、第３号、ｐ７０
【非特許文献２】
「Ｔｈｅｒ．  Ｒｅｓ．，  」、１９８５年、第３巻、ｐ１０５７
【非特許文献３】
「臨床免疫」、科学評論社、１９９５年、第２７巻特別増刊号「サイトカインのすべて」
【非特許文献４】
「臨床免疫」、２００１年、第３６巻、ｐ３９−４４、
【非特許文献５】
「臨床免疫」、２００３年、第３９巻、ｐ１８９−２００
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記現状に鑑み、従来の炎症性疾患治療剤に比べて、抗炎症作用をより効果的に発揮することができ、かつ、副作用の少ない炎症性疾患治療剤、及び、炎症性疾患治療用具を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、鋭意検討した結果、サイトカイン誘導剤と、水に不溶性の担体とを併用してなる炎症性疾患治療剤、及び、炎症性疾患治療用具が、著しく高い抗炎症作用を示すことを見いだし、本発明を完成させるに至った。
【００１０】
すなわち、本発明は、サイトカイン誘導剤と、水に不溶性の担体とを含有する炎症性疾患治療剤である。
以下に本発明を詳述する。
【００１１】
本発明の炎症性疾患治療剤は、サイトカイン誘導剤、及び、水に不溶性の担体を含有する。
上記サイトカイン誘導剤としては特に限定されず、それ自体のみではサイトカイン誘導活性を充分に発揮し得ず、水に不溶性の担体と併用されることにより、サイトカイン誘導活性を発揮するものであってもよい。したがって、上記サイトカイン誘導剤としては、従来用いられているサイトカイン誘導物質だけでなく、様々な物質を用いることができ、例えば、ＢＣＧ、ＢＣＧ−ＣＷＳ、ＰＰＤ、Ｎｏｃａｒｄｉａ−ＣＷＳ、ＯＫ−４３２、Ｍｕｒａｍｙｌｄｉｐｅｐｔｉｄｅ等の細菌類及びその成分；ＰＳＫ、レンチナン、シゾフィラン等の多糖類；ポリＩ：Ｃ、ポリＡ：Ｕ等の高分子；Ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ、ＤＮＣＢ、Ａｚｉｍｅｘｏｎ、Ｔｉｌｏｒｏｎｅ、Ｂｅｓｔａｔｉｎ等の化学物質等の生理活性物質だけでなく、菌体、菌体成分、ペプチド類、核酸類、蛋白質、糖成分、脂質等を用いることができる。なかでも、菌体及び／又は菌体由来成分が好適に用いられる。
【００１２】
上記菌体及び／又は菌体由来成分としては特に限定されないが、例えば、抗酸菌及び／又は抗酸菌由来成分、溶連菌及び／又は溶連菌由来成分、放線菌及び／又は放線菌由来成分等が好ましい。
上記抗酸菌及び／又は抗酸菌由来成分としては特に限定されないが、例えば、結核菌及び／又は結核菌由来成分、牛型結核菌弱毒株であるＢＣＧ及び／及びＢＣＧ由来成分等が特に好ましい。
【００１３】
上記サイトカイン誘導剤により誘導されるサイトカインとしては特に限定されないが、例えば、インターフェロンγ、インターロイキン２、インターロイキン１０、インターロイキン１２、腫瘍壊死因子−α、及び、トランスフォーミング増殖因子−βからなる群より選択される少なくとも１種であることが好ましい。
【００１４】
上記担体としては水に不溶性であれば特に限定されず、例えば、金属、有機物又は無機物等により構成され、好ましくは有機物、より好ましくは高分子材料からなる。また、上記担体は、サントカイン誘導剤のサイトカイン誘導作用を増強する誘導増強剤であることが好ましく、なかでも、ＩＦＮ−γを誘導増強するものであることがより好ましい。
【００１５】
上記金属としては、例えば、金、金合金、銀、銀合金、チタン、チタン合金、ステンレス等が挙げられる。
上記無機物としては、例えば、活性炭、ガラス、ガラスの誘導体、シリカ系組成物、アルミナ、ヒドロキシアパタイト等が挙げられる。
【００１６】
上記有機物、上記高分子材料としては、例えば、セルロース系、アガロース系、デキストラン系、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポリエチレンテレフタレート系、ナイロン系、ポリビニルアルコール系、ポリスルホン系、ポリアミド系、ポリアクリロニトリル系、ポリエチレン系、ポリウレタン系、ポリプロピレン系、ポリエステル系等の材料が挙げられる。なかでも、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポリエステル系、ナイロン系、セルロース系、及び、ポリビニルアルコール系の各高分子材料が特に好ましい。
【００１７】
上記ポリスチレン系の材料としては特に限定されず、例えば、ジビニルベンゼン−スチレン共重合体等が挙げられる。
上記アクリルエステル系の材料としては特に限定されず、例えば、ポリメチルメタクリレート又はポリヒドロキシエチルメタクリレート等が挙げられる。
上記セルロース系の材料としては特に限定されず、例えば、酢酸セルロース等が挙げられる。
【００１８】
上記担体は、水に不溶性であり、無極性、疎水性である。特にサイトカイン誘導剤を物理吸着法によって担体に固定化する場合には、イオン交換性官能基や親水性官能基を有さず、表面の疎水性が強いものであることが好ましい。なかでも、イオン交換性官能基や親水性官能基を有さない、ポリスチレン系の高分子材料からなることがより好ましく、ジビニルベンゼン等の架橋剤を用いてなるポリスチレン系の高分子材料からなることが特に好ましい。
また、上記担体には、表面修飾や表面コーティング等により、表面に親水性を付与してもよい。
【００１９】
上記担体は、白血球を吸着する材料であることが好ましい。
上記白血球を吸着する材料としては、例えば、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポリエステル系、ナイロン系、セルロース系、ポリビニルアルコール系の各高分子材料、及び、ガラス系の材料等が挙げられる。
【００２０】
上記担体の形状としては特に限定されず、例えば、繊維状、不織布状、スポンジ状、粒子状、膜状、中空糸状等が挙げられる。
上記担体の大きさとしては特に限定されないが、例えば、その形状が粒子状である場合には、直径の好ましい下限は５０μｍ、好ましい上限は２ｍｍであり、繊維状である場合には、繊維径の好ましい上限は１０μｍ、より好ましい上限は５μｍである。
上記担体が繊維状である場合は不織布からなることが好ましく、繊維径は３μｍ以下であることが好ましい。
【００２１】
上記担体は、多孔性であることが好ましく、多孔性高分子材料からなることがより好ましい。上記担体の表面積としては、４００ｍ２／ｇ以上であることが好ましく、細孔容積としては、０．５ｍＬ／ｇ以上であることが好ましく、平均細孔径としては、下限が２０Å、上限が８００Åであることが好ましい。
【００２２】
上記多孔性高分子材料を大別すると標準的なゲル構造をもつゲル型と、巨大網目構造（Ｍａｃｒｏ  ｒｅｔｉｃｕｌａｒ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）をもつＭＲ型とに分けられる。単にスチレンとジビニルベンゼンのような架橋剤を用いて重合して得られた多孔性樹脂等は透明に近く、ゲル構造を呈するのでゲル型多孔性樹脂と呼ばれる。一方、特殊な重合法、例えば、懸濁重合の際に、水に不溶でモノマーだけを溶かすことのできる特殊な有機溶剤を使用する方法により、粒子の内部奥にまで大きな孔（マクロポア）をもった粒子を作製することができ、このような物理的に多孔性の樹脂は、ＭＲ型又はポーラス型多孔性樹脂と呼ばれる。
【００２３】
粒子状の多孔性高分子材料としては、例えば、強酸性陽イオン交換樹脂、弱酸性陽イオン交換樹脂、強塩基性陰イオン交換樹脂、弱塩基性陰イオン交換樹脂、合成吸着剤の他、キレート樹脂等からなるものが挙げられる。これらの多孔性粒子は公知の方法によって得ることができ、例えば、原料モノマーをゼラチン等の適当な懸濁安定剤を用いて水中で懸濁重合することにより球状の重合体として製造される。上記原料モノマーとしては、スチレン、ビニルトルエン、アクリル酸エチル、メタクリル酸メチル、アクリロニトリル等のエチレン性二重結合を有する化合物等が用いられ、これにジビニルベンゼン、エチレンジメタクリレート等の多官能性モノマーである架橋剤を加え、多孔化剤の存在下過酸化ベンゾイル、アゾビスイソブチルニトリル等の重合開始剤を用いて架橋重合体を得る。上記多孔性粒子のうち市販されているものとしては、例えば、三菱化学社製ダイヤイオン（登録商標）、ロームアンドハース社製アンバーライト等、ダウケミカル製ダウエックス等が挙げられる。
【００２４】
上記担体は、巨大網目構造を有する多孔性高分子材料からなることがより好ましい。上記巨大網目構造の細孔分布としては、下限が２Å、上限が２０００Åであることが好ましく、より好ましい上限は３００Åである。
【００２５】
上記担体は、表面に粗化処理が施されていることが好ましい。
上記担体の表面の中心線平均粗さＲａ値は、下限が０．２μｍ、上限が１０μｍであることが好ましい。上記担体の表面にＲａ値が０．２μｍ以上の粗さを付与することにより、著しくサイトカインの誘導が増強される。また、この表面粗さのサイトカイン誘導増強作用は、白血球の大きさが１０〜２０μｍであり、白血球に比べて上記Ｒａ値が非常に小さいことを考えると、単なる接触表面積の増大によるものでないと考えられる。
ここで、上記中心線平均粗さＲａ値とは、ＪＩＳ  Ｂ０６０１に基づく中心線平均粗さである。
【００２６】
更に、上記担体の表面の凹凸平均間隔Ｓｍ値は、下限が５μｍ、上限が２００μｍであることが好ましい。
ここで、上記凸凹平均間隔Ｓｍ値は、以下のようにして定義される値である。
【００２７】
まず、図１に示す粗さ曲線Ａの中心線Ｂに対して、それぞれ、一定の高さ及び深さの位置に上側カウントレベルＣ及び下側カウントレベルＤを引く。次に、下側のカウントレベルＤと粗さ曲線Ａとが交差する２点間において、上側カウントレベルと粗さ曲線とが交差する点が一つ以上存在するときに、一つの山として「山」を定義する。
そして、凹凸平均間隔Ｓｍ値は、図２に示すように、基準長さＬの間に含まれる山の間隔をＳｍｉとしたときに、下記式（１）で定義される値である。
【００２８】
【数１】
2004323483.tif 000002
【００２９】
すなわち、凹凸平均間隔Ｓｍ値とは、基準長さＬの間に含まれる各山の間隔の平均値を示す。このようにして、凹凸平均間隔Ｓｍ値により、表面における凸凹の面方向の分布状態が定義される。
【００３０】
現在のＪＩＳ規格では、表面粗さの高さ方向の情報については規定されているが、面方向の情報に関しては規定されていない。しかしながら、本発明における表面粗さは、凸凹の面方向における間隔によっても特徴付けられるものである。
【００３１】
上記担体の表面粗さは材料の多孔性等に由来するものであっても良く、その場合、上記担体に好適に用いられる多孔性高分子材料としては、例えば、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポリエステル系、ナイロン系、セルロース系、ポリビニルアルコール系等の高分子材料が挙げられる。
【００３２】
上記担体の表面粗さは材料の繊維形状に由来するものであっても良く、その場合、上記担体としては、繊維状又は不織布状材料からなるものが好ましい。上記繊維状材料又は不織布状材料としては、例えば、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポリエステル系、ナイロン系、セルロース系、ポリビニルアルコール系等の高分子材料からなるものが挙げられる。
【００３３】
上記サイトカイン誘導剤は、上記担体に固定化されていることが好ましい。
上記サイトカイン誘導剤を上記担体の表面に固定化するには、物理吸着、共有結合、イオン結合等の公知の方法を用いることができる。
また、共有結合等による場合には、必要に応じて、上記サイトカイン誘導剤と上記担体との結合部に任意の長さをもつスペーサーを導入することが好ましい。
【００３４】
上記サイトカイン誘導剤が菌体等である場合は、必要に応じて、固定化する前に菌体の洗浄操作や破砕操作、成分分画操作等のさまざまな前処理を施してもよい。また、上記サイトカイン誘導剤が生菌等である場合は、より安全性を高めるために必要に応じて、固定化する前、固定化と同時、固定化の後のいずれの時点でも、加熱処理・薬品処理・放射線処理・ガス滅菌処理等のさまざまな方法により死菌化してもよい。上記加熱処理としては、例えば、オートクレーブ処理が挙げられ、上記薬品処理としては、例えば、グルタルアルデヒド処理、ホルマリン処理、又は、エタノール処理が挙げられ、上記放射線処理としては、例えば、γ線処理が挙げられ、上記ガス滅菌処理としては、エチレンオキサイドガス処理等が挙げられる。なかでも、タンパク質変性作用を有する処理が好ましく、例えば、グルタルアルデヒド、ホルマリン、エタノール等の各種溶剤や界面活性剤等のタンパク質変性作用を有する薬剤を用いた薬品処理、水溶液中での加熱処理等が挙げられ、ホルマリンを用いた薬品処理が特に好ましい。
【００３５】
上記サイトカイン誘導剤がＢＣＧのような微生物である場合は、菌体表面外壁成分のアミノ酸や糖成分等を介して、上記担体のカルボキシル基、アミノ基及び／又はエポキシ基等の官能基に結合させることができる。この際、必要に応じてさまざまな鎖長や構造のスペーサーを導入することもできる。
【００３６】
上記サイトカイン誘導剤がＢＣＧのような菌体外層が脂質等により覆われている微生物である場合には、必要に応じて脂質を洗浄除去した後、上記担体の官能基に結合してもよい。
【００３７】
上記サイトカイン誘導剤を上記担体に固定化する方法としては、物理吸着法が好ましい。例えば、上記担体が疎水性表面を有し、上記サイトカイン誘導剤がＢＣＧである場合、物理吸着作用によって固定化することができる。また、上記サイトカイン誘導剤が微生物やその成分であり、その表面が電荷を帯びている場合にも、その対極電荷を表面に有する担体に物理吸着作用によって固定化することができる。
【００３８】
上記サイトカイン誘導剤の使用割合としては特に限定されないが、例えば、ＢＣＧである場合には、血液に添加される濃度として、乾燥重量で下限は０．００１ｍｇ／ｍＬ、上限は１０ｍｇ／ｍＬであることが好ましい。また、上記サイトカイン誘導剤がＯＫ−４３２である場合には、血液に添加される濃度として、下限は０．０００１ＫＥ／ｍＬ、上限は１０ＫＥ／ｍＬであることが好ましい。
【００３９】
上記担体の使用割合としては特に限定されないが、粒子状の担体を用いる場合には、血液容積に対する担体のかさ体積量として、下限は０．０２％、上限は８０％程度であり、好ましい下限は０．１％、好ましい上限は５０％程度である。
【００４０】
本発明の炎症性疾患治療剤を容器内に収納することにより炎症性疾患治療用具を作製することができる。容器と、容器内に収納された本発明の炎症性疾患治療剤とを有する炎症性疾患治療用具も本発明の１つである。
【００４１】
本発明の炎症性疾患治療用具では、容器内にて、本発明の炎症性疾患治療剤と、血液又は血液成分とを接触させることによって、血液又は血液成分等の中で抗炎症活性を示すサイトカインを効果的に誘導することができる。この場合、接触温度を下限は１５℃、上限は４２℃の範囲とすることが好ましく、それによって、抗炎症活性を示すサイトカインをより効果的に誘導することができる。
なお、上記サイトカイン誘導剤及び上記担体は、予め混合されて血液と接触してもよく、又は、個別に血液若しくは血液成分等と接触してもよい。
【００４２】
本発明の炎症性疾患治療用具を構成する容器の構造は特に限定されないが、図３に模式的に示すように、血液等の導入部１と、本発明の炎症性疾患治療剤と接触した血液４等を容器外に導く導出部２とが備えられている容器３が好ましい。
上記容器としては、カラム状の容器や血液バッグ状の容器等がより好ましい。血液バッグ状の容器等を用いれば、体外循環装置のような大がかりなシステムを必要とせず、ベッドサイドで比較的簡便に本発明の炎症性疾患治療剤を投与することができ、有用であると考えられる。
【００４３】
上記血液バッグ状の容器等の容量としては下限は５０ｍＬ、上限は１０００ｍＬであることが好ましく、より好ましい下限は１００ｍＬ、より好ましい上限は４００ｍＬである。
【００４４】
また、上記容器には、本発明の炎症性疾患治療剤と接触させた血液等を容器外に導く場合に、本発明の炎症性疾患治療剤が血液に混入しないような炎症性患治療剤流出防止機構が備えられていることが好ましい。
図３に模式的に示すように、炎症性患治療剤流出防止機構５は、本発明の炎症性疾患治療剤があらかじめ脱離しないように、容器内部に固定化されていても良く、このような場合の炎症性患治療剤流出防止機構としては、例えば、流出防止用の分離膜や分離フィルター等が挙げられる。また、その他の炎症性患治療剤流出防止機構としては、例えば、遠心操作等によって血液と分離する機構等が挙げられる。
【００４５】
本発明の炎症性疾患治療剤及び本発明の炎症性疾患治療用具の使用方法としては、例えば、導入部と導出部を有する血液バッグ状の容器に導入部から本発明の炎症性疾患治療剤を充填し、更に、炎症性疾患患者の血液又は血液成分を注入し、本発明の炎症性疾患治療剤と血液又は血液成分とを接触させて、サイトカインを誘導し、次いで、抗炎症効果を示すサイトカインが誘導された血液又は血液成分を導出部から取り出し、点滴投与等により患者体内に戻す方法等が挙げられる。
【００４６】
また、本発明の炎症性疾患治療剤及び本発明の炎症性疾患治療用具の使用に際しては、上記抗炎症効果を示すサイトカインが誘導された血液又は血液成分を凍結保存しておき、必要に応じて融解して炎症性疾患患者に投与することにより有効な治療を行うこともでき、例えば、予め凍結しておいた抗炎症効果を示すサイトカインが誘導された患者自身の血液又は血液成分を全身又は局所に投与し、治療する方法が可能となる。
この治療方法では、抗炎症効果を示す高濃度のサイトカインを含む血液又は血液成分を炎症性疾患患者の体内に戻すことにより、炎症性疾患患者の体内に患者由来のサイトカインが投与されることになり、有効な治療効果が発揮される。
また、必要に応じて、この治療方法では、抗炎症効果を示すサイトカインが誘導された血液から、血液構成成分の一部、例えば、血漿や血清成分だけを取り出し、それを患者に戻してもよい。この際、抗炎症効果を示すサイトカインが誘導された血液から取り出した血液構成成分の一部を通常の血液バッグに移し、直後に、患者に戻してもよく、又は、凍結等の手段で保存後に、患者に戻してもよい。なお、抗炎症効果を示すサイトカインが誘導された血液から得た血漿等を患者に投与する際には、上述したように、全身投与であっても、局所投与であってもよい。
【００４７】
また、この治療方法では、抗炎症効果を示すサイトカインが誘導された血液又は血液成分のみを用いてもよいが、他の抗炎症性疾患治療剤を併用することが好ましい。本発明の炎症性疾患治療用具を用いて得られる血液又は血液成分と上記他の抗炎症性疾患治療剤とを併用することにより、相互の抗炎症効果が増強されるため、安全な用量で治療効果を著しく増強することができる。
上記他の抗炎症性疾患治療剤の投与法としては特に限定されず、例えば、静脈注射、内服等の投与法も可能である。
【００４８】
また、本発明の炎症性疾患治療用具では、本発明の炎症性疾患治療剤により、血液又は血液成分等に限らず、骨髄系細胞、表皮細胞、繊維芽細胞、肝細胞、骨芽細胞、血液幹細胞、胚性幹細胞等の組織から採取した細胞、培養細胞、株化細胞等の様々な細胞からも抗炎症活性を示すサイトカインを誘導することができる。
【００４９】
本発明の治療対象となる疾患としては、例えば、喘息、アトピー性皮膚炎、鼻炎、結膜炎、花粉症、食品アレルギー、アレルギー性肺疾患、アナフィラキシーショック、じんま疹、腎炎、肝炎、甲状腺炎、薬物アレルギー、接触性皮膚炎、全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）、強皮症、皮膚筋炎、重力筋無力症、慢性関節リウマチ等の関節炎等の炎症性疾患が挙げられる。
【００５０】
【実施例】
以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
【００５１】
（実施例１）
担体１（オルガノ社製、商品名：アンバーライトＸＡＤ４、多孔性ポリスチレン粒子、ＭＲ型、細孔分布２〜１５０Å、表面積７００ｍ２／ｇ以上、細孔容積０．５ｍＬ／ｇ以上、平均細孔径約１２０Å）を、精製水（大塚製薬社製）を用いてデカンテーションし、次いで、メタノール（和光純薬社製、ＨＰＬＣ用）を用いてデカンテーションし、最後に、注射用生理食塩水（大塚製薬社製）を用いてデカンテーションし、洗浄した。その後、粒子かさ体積で１００μＬの担体１を２４  ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ（コーニング社製）に添加した。
【００５２】
ウィスタールイスラット（日本ＳＬＣ、８週齢）を頸椎脱臼し、できるだけ無菌的に脾臓を取り出し、ＲＰＭＩ１６４０（ＳＩＧＭＡ社製）培地にて脾臓細胞浮遊液を作製した。この細胞浮遊液を遠心（１３００ｒｐｍ、１０分間、室温）し、沈査に５ｍＬの０．８３％塩化アンモニウム−０．１７ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．６）を加え溶血させた。培養用ＲＰＭＩ１６４０培地［２％ＦＣＳ（フナコシ社製、ＨｉｇｈＣｌｏｎｅシリーズ）、０．０５ｍＭ２−メルカプトエタノール、１０Ｕ／ｍＬペニシリン含有］を約４５ｍＬ加えて溶血反応を止め、遠心洗浄を行い、最後に培養用培地１０ｍＬに細胞を再浮遊し、トリパンブルーを用いて生細胞のカウントを行い、細胞濃度を５×１０６個／ｍＬに調製した。
【００５３】
ＢＣＧワクチン（日本ビーシージー製造社製）の１２ｍｇ入りアンプルに２４０μＬの注射用生理食塩水を添加して５０ｍｇ／ｍＬ懸濁液を作製した。この５０ｍｇ／ｍＬ懸濁液を３４．６ｍｇ／ｍＬグルタミン酸ナトリウム１水和物含有生理食塩水にて希釈し、濃度０．５ｍｇ／ｍＬのＢＣＧ希釈液を作製した。このＢＣＧ希釈液を１００倍希釈されるように細胞に添加して濃度０．０５５ｍｇ／ｍＬのＢＣＧ刺激用細胞浮遊液を作製した。このＢＣＧ添加細胞浮遊液１．５ｍＬを担体１が添加された２４  ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ（コーニング社製）のｗｅｌｌに添加し、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で培養した。（参考文献：Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９５年、１５５、ｐ．５７２８−  ５７３５）
【００５４】
４４時間培養後の各ｗｅｌｌから培養上清を滅菌済み１．５ｍＬ用チューブ（エッペンドルフ社製）に回収し、１５０００ｒｐｍにて４℃、１０分間の遠心操作を行い、上清を新しい滅菌済み１．５ｍＬ用チューブに回収した。これを−７０℃にて凍結保存し、翌日融解し、１５０００ｒｐｍにて４℃、５分間の遠心操作を行い、０．２２μｍの濾過フィルターで濾過した上清を下記の方法でラットに投与した。また、上清のサイトカイン誘導作用を確認するために、上清中のＩＦＮ−γ濃度をＥＮＤＯＧＥＮ社製ＥＬＩＳＡキットにて測定した。
【００５５】
（比較例１）
担体１を添加しなかったこと、及び、ＢＣＧワクチンを添加しなかったこと以外は、実施例１と同様にして行った。
【００５６】
（比較例２）
担体１を添加しなかったこと以外は、実施例１と同様にして行った。
【００５７】
（比較例３）
ＢＣＧワクチンを添加しなかったこと以外は、実施例１と同様にして行った。
【００５８】
（抗炎症効果の試験）
＜ラットアジュバント関節炎に対する作用＞
被検物質として、実施例１及び比較例１〜３で得られた上清を用い供試液とした。被検動物としては体重１２０〜２００ｇのウィスタールイスラットを用いた。
【００５９】
流動パラフィンに懸濁したＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｈ３７ＲＡ（６ｍｇ／ｍＬ）０．１ｍＬをラット右後肢皮下に注射して、関節炎を誘発した。
なお、ラットの右後肢の腫れの度合いを調べるため、関節炎誘発前後にラットの右後肢の容積をＰｌｅｔｈｙｓｍｏｍｅｔｅｒ（Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ社製）を用いて測定し、関節炎誘発前の容積と関節炎誘発後２１日目の容積との差を足蹠浮腫容積とした。
【００６０】
実施例１で得られたサイトカインを誘導増強された上清又は比較例１〜３で得られた上清を用いた供試液（５ｍＬ／ｋｇ／ｄａｙ）を、それぞれ関節炎を誘発した５匹のラットの群に、誘発後０日、４日、７日、１１日、１４日、１８日後の合計６回静脈内投与した。本試験では、これらラットについて得られた値の平均値を腫れの度合いの評価に用いた。この試験結果を表１に示した。
【００６１】
【表１】
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【００６２】
表１に示したように、実施例１で得られたサイトカインを誘導増強された上清を投与した群では、比較例１〜３で得られた上清を投与した群に比べて、右後肢足蹠の腫れの度合いが明らかに抑制された。すなわち、本発明の炎症性疾患治療剤によってサイトカインを誘導増強された上清は、顕著な炎症抑制活性を有することが分かった。
【００６３】
【発明の効果】
本発明は、上述の構成よりなるので、本発明の炎症性疾患治療剤を、例えば、生体由来の細胞、血液又は血液成分と接触させることにより、従来の炎症性疾患治療剤に比べて、抗炎症作用をより効果的に誘導することができ、かつ、副作用を少なくすることができ、本発明の炎症性疾患治療剤、及び、炎症性疾患治療用具は、サイトカインの誘導が有効である様々な炎症性疾患の治療に好適に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】表面粗さを説明するための模式図であり、凹凸の「山」を説明するための図である。
【図２】表面粗さにおける凹凸平均間隔Ｓｍ値を説明するための図である。
【図３】本発明の炎症性疾患治療用具の一例を示す模式的断面図である。
【符号の説明】
１  導入部
２  導出部
３  容器
４  本発明の炎症性患治療剤と接触した血液
５  炎症性患治療剤流出防止機構
【図１】
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【図２】
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【図３】
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