(57)【要約】【課題】天然物からなる神経成長因子産生誘導剤、並びに天然物からなる神経成長因子産生誘導成分が含まれた食品及び医薬部外品を提供することである。【解決手段】羚羊角、山羊角及び鹿角、並びにこれらの抽出物のうち少なくとも１種を有効成分とする神経成長因子産生誘導剤である。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
羚羊角、山羊角及び鹿角、並びにこれらの抽出物のうち少なくとも１種を有効成分とする神経成長因子産生誘導剤。
【請求項２】
羚羊角、山羊角及び鹿角、並びにこれらの抽出物のうち少なくとも１種からなる神経成長因子産生誘導成分が含まれた食品。
【請求項３】
羚羊角、山羊角及び鹿角、並びにこれらの抽出物のうち少なくとも１種からなる神経成長因子産生誘導成分が含まれた医薬部外品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、脳内の神経成長因子産生誘導作用を有し、アルツハイマー型痴呆症やパーキンソン病を代表とする神経変性疾患の治療に有用な神経成長因子産生誘導剤、並びに神経成長因子産生誘導成分が含まれた食品及び医薬部外品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
医薬の進歩によって人間の寿命が延びている一方で、高齢化社会への移行に伴い、老年型痴呆患者が増加している。この老年型痴呆症は、原因の違いより、脳血管性痴呆症とアルツハイマー型痴呆症に大別されている。
【０００３】
脳血管性痴呆症に対しては、現在、脳循環改善薬や脳代謝賦活薬がある程度の効果を示すことが知られているが、アルツハイマー型痴呆症に対しては、その詳細な発症原因について今なお不明な点があるため、適切で根本的な薬物治療が確立されていないのが現状である。アルツハイマー型痴呆症では、脳内にあるマイネルト基底核でのコリン作動性ニューロンの脱落や、アセチルコリン合成酵素の活性低下が認められており、このコリン作動系の異常が原因の一つとして痴呆症に関与しているものと考えられている。すなわち、コリン作動性神経細胞の脱落を防ぐなどの処置を講じれば、痴呆症状を改善できる可能性が考えられる。
【０００４】
神経成長因子（ＮＧＦ）はニューロンの生存や機能の維持に重要な栄養因子である。神経成長因子（ＮＧＦ）は、脳内では、大脳皮質や記憶を司るとされる海馬に多く、また、小脳、中脳、マイネルト基底核でもその濃度は低いものの存在することが明らかとなっており、コリン作動性神経の投射している領域で合成され、さらに、マイネルト基底核でのコリン作動性ニューロンの栄養因子としても作用している可能性が示唆されている。従って、脳の神経細胞やアストログリア細胞における神経成長因子（ＮＧＦ）の合成や分泌を高めることができれば、コリン作動性ニューロンの脱落を抑えられる可能性が考えられ、実際にも、神経成長因子（ＮＧＦ）などの神経栄養因子に、アルツハイマー型痴呆症やパーキンソン病などの神経変性疾患に対しての治療効果が期待され、医薬品としての開発が進められている。また、このアストログリア細胞における神経成長因子（ＮＧＦ）の合成を高めるメカニズムについても研究がすすめられ、その１つとして、蛋白リン酸化酵素（キナーゼ）類、例えば、チロシンキナーゼ、プロテインキナーゼＡ、プロテインキナーゼＣ等を介する細胞内情報伝達系を活性化することによってＮＧＦ合成を誘導することが知られている（非特許文献１）。
【０００５】
【非特許文献１】
漢方と最新治療  第１０巻  第３号  ２２９頁〜２３４頁
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、近年、国民が合成品でなく天然物を好む傾向にあることから、天然物からなる神経成長因子産生誘導剤が望まれている。そこで、本発明は、天然物からなる神経成長因子産生誘導剤、並びに天然物からなる神経成長因子産生誘導成分が含まれた食品及び医薬部外品を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、以上のような目的を達成するため、鋭意研究を重ねた結果、羚羊角、山羊角若しくは鹿角、又はこれらの抽出物が脳のアストログリア細胞における神経成長因子（ＮＧＦ）量を増加させる作用を有することを見出した。すなわち、本発明は、羚羊角、山羊角及び鹿角、並びにこれらの抽出物のうち少なくとも１種を有効成分とする神経成長因子産生誘導剤である。
【０００８】
また、本発明は、羚羊角、山羊角及び鹿角、並びにこれらの抽出物のうち少なくとも１種を有効成分とする神経成長因子産生誘導成分が含まれた食品、若しくは羚羊角、山羊角及び鹿角、並びにこれらの抽出物のうち少なくとも１種を有効成分とする神経成長因子産生誘導成分が含まれた医薬部外品である。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明者らは、ラットの胎児脳を摘出し、アストログリア細胞を培養し、その細胞に羚羊角、山羊角及び鹿角、並びにこれらの抽出物を添加することによって、脳のアストログリア細胞における神経成長因子（ＮＧＦ）量が増加することを見出した。
【００１０】
本発明に係る神経成長因子産生誘導剤は、アルツハイマー型痴呆症の治療や、脳機能の改善などに用いることができ、液剤、粉剤、粒剤、カプセル剤、錠剤の形で経口投与もしくは非経口投与（脳内、筋肉内、皮下静脈内、点滴静注など）される。
【００１１】
投与量は症状の程度、疾患の相違、患者の年齢、体重、健康状態、同時処理がある場合はその種類、所望の効果の性質、処置頻度などによって異なり、特に限定されないが、成人１日あたり経口では、原生薬換算で、約１ｍｇ〜１０ｇ、好ましくは約０．５〜８ｇ、更に好ましくは約１〜６ｇ程度を１日１回もしくはそれ以上の回数で投与される。
【００１２】
経口投与の場合、それに適用される錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などは、それらの組成物中に製剤上一般に使用される賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤のような添加物を含有しても良い。また、経口用液剤製剤として使用する場合、懸濁液剤、シロップ剤の形態であっても良く、また、使用する前に再溶解させる乾燥生成物の形態であっても良い。さらに、このような液体製剤は普通用いられる添加剤、保存剤などを含有しても良い。
【００１３】
賦形剤としては、例えば、乳糖、コーンスターチ、白糖、ブドウ糖、ソルビット、マンニット、結晶セルロース、デンプン、二酸化ケイ素、無機塩類などがある。結合剤としては、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、エチルセルロース、メチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、シェラック、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ポリビニルピロリドンなどがある。崩壊剤としては、例えば、デンプン、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸カルシウム、デキストリン、ペクチン、ショ糖脂肪酸エステル、レシチン、ポリソルべート８０、ラウリル硫酸ナトリウムなどがある。滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油などがある。着色剤としては、医薬品に添加することが許可されているものがある。矯味矯臭剤としては、例えば、ココア末、ハッカ脳、芳香酸、ハッカ油、竜脳、桂皮末などがある。これらの錠剤、顆粒剤には、糖衣、ゼラチン衣、その他必要により適宜コーティングすることは勿論差し支えない。また、これらの錠剤、顆粒剤、カプセル剤を徐放剤とすることは勿論差し支えない。
【００１４】
注射によって投与される場合、その組成物に安定剤、緩衝剤、保存剤、等張化剤などの添加物を含有しても良い。なお、上記組成物は懸濁液、溶液、油性のような形態であっても良い。
【００１５】
その他の非経口剤としては、直腸内投与のための坐剤が挙げられ、常法に従って製造される。
【００１６】
また、本発明に係る食品としては、例えばお茶、ジュースといった飲料水、ゼリー、飴、チョコレート、チューインガム、栄養補助食品などがある。また、本発明に係る食品は、健康食品（機能性食品、健康補助食品）などが含まれ、液剤、粉剤、粒剤、カプセル剤、錠剤の形で製造される。
【００１７】
さらに、本発明に係る医薬部外品としては、例えばのど清涼剤、健胃清涼剤。ビタミン含有保健剤などがあり、液剤、粉剤、粒剤、カプセル剤、錠剤の形で製造される。
【００１８】
【実施例】
次に、実施例を示して本発明の効果を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
【００１９】
実施例１乃至４
まず、羚羊角、鹿角、山羊角（内側）及び山羊角（外側）それぞれを粉末にしたものをＤｕｌｌｂｅｃｃｏ’ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）に懸濁して、３０００ｒｐｍで５分間、２０℃にて遠心分離した上清をろ過滅菌することによって、表１に示すように実施例１乃至４に係る神経成長因子産生誘導液を得た。
【００２０】
【表１】
2004323461.tif 000002
【００２１】
同様に、犀角、トナカイ角、水牛角及び綿羊角を実施例１乃至４と同様に処方することによって表１に示すように比較例１乃至４に係る抽出液を得た。
【００２２】
実験例１
（ラット脳のアストログリア細胞におけるＮＧＦ量に対する作用（その１））
妊娠１７−２０日目のＷｉｓｔａｒ系ラットの頸動脈を切り屠殺した後、腹部を切開して子宮を摘出し、５０％ＤＭＥＭおよび５０％リン酸緩衝生理食塩水の入った滅菌ガラスシャーレに取りだし、以降、無菌的に胎児を取りだして脳を摘出した。実体顕微鏡下で大脳皮質部分を摘出し、メスでよく刻んだ後に遠心管に取り、０．２５％ｔｒｙｐｓｉｎ−エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）１０ｍｌを加え３７℃で３０分間インキュベーションした。遠心分離後上清を捨て、ＤＭＥＭで２回洗浄した後に、１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）およびｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ  ／  ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎｅ  ／  ａｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｎ  Ｂを含むＤＭＥＭを加えた。ピペッティングにより細胞を分散させ、培養フラスコ（７５ｃｍ２）にまき、５％ＣＯ２下、３７℃にて初代培養をした。
【００２３】
１−２週間培養した大脳皮質初代培養細胞を継代培養し、残存する神経細胞を除去することにより、アストログリア培養細胞を得た。このアストログリア細胞の培養がコンフルエントに達した後に無血清培地に切り替え、細胞を静止期に誘導した後、実施例１及び２に係る神経成長因子産生誘導液、並びに比較例１乃至３に係る抽出液を添加し、２４時間後の培養液中のＮＧＦ量を測定キット（ＮＧＦ  ＥｍａｘＴＭ  ＩｍｍｕｎｏＡｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、  Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて測定した。なお、対照として、角溶液の代わりにＤＭＥＭのみを加え、２４時間後の培養液中のＮＧＦ量を同様に測定した。これらの結果を図１に示す。
【００２４】
図１に示すように実施例１及び２に係る神経成長因子産生誘導液は、対照群に比較して統計学的に５％以下の危険率で有意なアストログリア細胞におけるＮＧＦ量の増加が認められたことが分かる。
【００２５】
実験例２
（ラット脳のアストログリア細胞におけるＮＧＦ量に対する作用（その２））
次に、実験例１と同様の実験を実施例１、３及び４に係る神経成長因子産生誘導液、比較例４に係る抽出液について行った。その結果を図２に示す。
【００２６】
図２に示すように実施例１、３及び４に係る神経成長因子産生誘導液は、対照群に比較して統計学的に５％以下の危険率で有意なアストログリア細胞におけるＮＧＦ量の増加が認められたことが分かる。
【００２７】
実験例３
（ラット脳のアストログリア細胞におけるＮＧＦ量増加作用のメカニズム解析）
次に、実施例１に係る神経成長因子産生誘導液羚羊角について、アストログリア細胞におけるＮＧＦ量増加作用のメカニズム解析を試みた。以下に実験例３として示すが、羚羊角におけるこのＮＧＦ量増加作用のメカニズムは、下記の実験例３のみに限定されるものではない。
【００２８】
実験例１と同様の方法にて初代培養をした。１−２週間培養した大脳皮質初代培養細胞を継代培養し、残存する神経細胞を除去することにより、アストログリア培養細胞を得た。このアストログリア細胞の培養がコンフルエントに達した後に無血清培地に切り替え、静止期状態となった細胞に、培地量の１／１０量の酵素阻害剤〔Ｋ２５２ａ（非特異的蛋白質リン酸化酵素阻害剤）あるいはＨｅｒｂｉｍｙｃｉｎ  Ａ（チロシンキナーゼ特異的阻害剤）〕を添加した。その１時間後に実施例１に係る神経成長因子産生誘導液あるいは対照であるＤＭＥＭを同じく１／１０量添加し、２４時間後の培養液中のＮＧＦ量を測定キット（ＮＧＦ  ＥｍａｘＴＭ  ＩｍｍｕｎｏＡｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、  Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて測定した。ラット胎児アストログリア細胞産生ＮＧＦ量増加作用に対するＫ２５２ａの作用の結果を図３に示し、Ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎ  Ａの作用の結果を図４に示す。
【００２９】
図３及び図４に示すように、実施例１に係る神経成長因子産生誘導液におけるアストログリア細胞のＮＧＦ量増加作用の抑制が認められたことを分かる。すなわち、羚羊角におけるＮＧＦ産生誘導作用には、少なくとも蛋白質リン酸化酵素のうちのチロシンキナーゼが関与していることが考えられる。
【００３０】
【発明の効果】
以上のように本発明によれば、羚羊角、山羊角及び鹿角、並びにこれらの抽出物のうち少なくとも１種を有効成分とすることにより、天然物からなる神経成長因子産生誘導剤、並びに天然物からなる神経成長因子産生誘導成分が含まれた食品及び医薬部外品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】実験例１のラット胎児アストログリア細胞におけるＮＧＦ産生に対する作用を示すグラフである。横軸はＮＧＦ産生量を標準誤差とともに表している。
【図２】実験例２のラット胎児アストログリア細胞におけるＮＧＦ産生に対する作用を示すグラフである。横軸はＮＧＦ産生量を標準誤差とともに表している。
【図３】実施例１に係る神経成長因子産生誘導液のラット胎児アストログリア細胞産生ＮＧＦ量増加作用に対するＫ２５２ａの作用を示すグラフである。縦軸はＮＧＦ産生量を標準誤差とともに表している。
【図４】実施例１に係る神経成長因子産生誘導液のラット胎児アストログリア細胞産生ＮＧＦ量増加作用に対するＨｅｒｂｉｍｙｃｉｎ  Ａの作用を示すグラフである。縦軸はＮＧＦ産生量を標準誤差とともに表している。
【図１】
2004323461.tif 000003
【図２】
2004323461.tif 000004
【図３】
2004323461.tif 000005
【図４】
2004323461.tif 000006