(57)【要約】【課題】従来のサイトカイン誘導療法に比べてより効果的にサイトカインを誘導し得る新規なサイトカイン誘導材料及びサイトカイン誘導用具を提供する。【解決手段】水に不溶性の担体と、サイトカイン誘導剤とを含有するサイトカイン誘導材料であって、前記サイトカイン誘導剤は、蛋白質変性剤により変性されているサイトカイン誘導材料及びサイトカイン誘導用具。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
水に不溶性の担体と、サイトカイン誘導剤とを含有するサイトカイン誘導材料であって、
前記サイトカイン誘導剤は、蛋白質変性剤により変性されていることを特徴とするサイトカイン誘導材料。
【請求項２】
サイトカイン誘導剤は、担体に固定化されていることを特徴とする請求項１記載のサイトカイン誘導材料。
【請求項３】
サイトカイン誘導剤は、物理吸着により担体に固定化されていることを特徴とする請求項１又は２記載のサイトカイン誘導材料。
【請求項４】
蛋白質変性剤は、ホルマリンであることを特徴とする請求項１、２又は３記載のサイトカイン誘導材料。
【請求項５】
担体は、高分子材料からなることを特徴とする請求項１、２、３又は４記載のサイトカイン誘導材料。
【請求項６】
担体は、多孔性であることを特徴とする請求項１、２、３、４又は５記載のサイトカイン誘導材料。
【請求項７】
担体は、巨大網目構造を有することを特徴とする請求項１、２、３、４、５又は６記載のサイトカイン誘導材料。
【請求項８】
担体は、細孔分布が２〜２０００Åであることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６又は７記載のサイトカイン誘導材料。
【請求項９】
担体は、中心線平均粗さＲａ値が０．２〜１０μｍである表面を有することを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７又は８記載のサイトカイン誘導材料。
【請求項１０】
担体は、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポリエステル系、ナイロン系、セルロース系、及び、ポリビニルアルコール系の各高分子材料からなる群から選択される少なくとも１種の高分子材料からなることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８又は９記載のサイトカイン誘導材料。
【請求項１１】
サイトカイン誘導剤は、菌体及び／又は菌体由来成分であることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０記載のサイトカイン誘導材料。
【請求項１２】
サイトカイン誘導剤は、抗酸菌及び／又は抗酸菌由来成分であることを特徴とする請求項１１記載のサイトカイン誘導材料。
【請求項１３】
サイトカイン誘導剤は、溶連菌及び／又は溶連菌由来成分であることを特徴とする請求項１１記載のサイトカイン誘導材料。
【請求項１４】
サイトカイン誘導剤は、放線菌及び／又は放線菌由来成分であることを特徴とする請求項１１記載のサイトカイン誘導材料。
【請求項１５】
誘導されるサイトカインが、インターフェロンγ、インターロイキン２、インターロイキン１０、インターロイキン１２、腫瘍壊死因子−α、及び、トランスフォーミング増殖因子−βからなる群から選択される少なくとも１種のサイトカインであることを特徴とする請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４記載のサイトカイン誘導材料。
【請求項１６】
容器と、容器内に収納された請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５記載のサイトカイン誘導材料とを有することを特徴とするサイトカイン誘導用具。
【請求項１７】
容器内に収納されたサイトカイン誘導材料は、血液又は血液成分と接触することを特徴とする請求項１６記載のサイトカイン誘導用具。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、サイトカイン誘導療法等に用いられ、効果的にサイトカインを誘導し得るサイトカイン誘導材料及びサイトカイン誘導用具に関する。
【０００２】
【従来の技術】
サイトカインは、多種多様な細胞間情報伝達因子の総称である。サイトカインとしては、例えば、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、インターロイキン１〜インターロイキン２７、腫瘍壊死因子−α（Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ−α、ＴＮＦ−α）、腫瘍壊死因子−β（Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ−β）、トランスフォーミング増殖因子−α（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ−α）、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇＧｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ−β、ＴＧＦ−β）、及び、各種細胞増殖因子等が挙げられる（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３）。
【０００３】
サイトカインは生体内で様々な活性を有し、様々な疾患に関与していることが知られている。このようなサイトカインの活性を生体内で惹起して疾患の治療を行う、サイトカイン誘導療法が従来より行われている。サイトカイン誘導療法では、患者に、サイトカイン誘導剤を投与し、生体内においてサイトカインの誘導を引き起こす。このようなサイトカイン誘導療法に用いられるサイトカイン誘導物質として、様々な物質が知られている。例えば、微生物由来のＯＫ−４３２、ＢＣＧ、ベスタチン、丸山ワクチン、又は、ロムリチド等が知られており、担子菌類由来のサイトカイン誘導物質として、クレスチン、レンチナン、又は、シゾフィラン等が知られている。
【０００４】
例えば、ＯＫ−４３２やＢＣＧ等は血液等からインターロイキン１やインターフェロンγ等のサイトカインを誘導することが知られている（非特許文献４、非特許文献５）。
【０００５】
上述したサイトカイン誘導療法では、生体内でサイトカインを誘導することはできるが、充分量のサイトカインを誘導することが困難であり、強い効力を発揮させ難いという問題があった。また、サイトカインを効果的に誘導するために、サイトカイン誘導剤の投与量が多くなり、副作用が大きくなり、治療を有効に行い得ないという問題もあった。
【０００６】
特許文献１には不溶性担体に刺激剤が共有結合されている悪性腫瘍治療用白血球刺激材が記載されている。また、特許文献２にはインターロイキン１、ＯＫ−４３２、遺伝子組み換えインターロイキン２、又は、γ−インターフェロンを不溶性担体に共有結合で結合してなる癌治療用白血球刺激材が記載されている。これらは腫瘍障害性細胞を誘導するものであり、これらの先行技術文献にはサイトカイン誘導については全く述べられていない。
【０００７】
【非特許文献１】
臨床免疫第２７巻特別増刊号１９９５年「サイトカインのすべて」科学評論社
【非特許文献２】
臨床免疫第３６巻、３９−４４、２００１年
【非特許文献３】
臨床免疫第３９巻、１８９−２００、２００３年
【非特許文献４】
岐阜大医紀４３：１６６−１７７、１９９５年
【非特許文献５】
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｖｏｌ．３６、臨時増刊号、２２０−２２９、１９９９年
【特許文献１】
特開昭６０−１２０８２１号公報
【特許文献２】
特開昭６１−２７７６２８号公報
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記現状に鑑み、従来のサイトカイン誘導療法に比べてより効果的にサイトカインを誘導し得る新規なサイトカイン誘導材料及びサイトカイン誘導用具を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明は、水に不溶性の担体と、サイトカイン誘導剤とを含有するサイトカイン誘導材料であって、上記サイトカイン誘導剤は、蛋白質変性剤により変性されているサイトカイン誘導材料である。本発明において、担体としては、サイトカイン誘導剤のサイトカイン誘導作用を増強する誘導増強剤であることが好ましい。更に、サイトカイン誘導作用を増強する誘導増強剤はＩＦＮ−γの誘導を増強することが好ましい。
本願発明者らは、サイトカイン誘導剤とともに水に不溶性の担体を含み、好ましくはサイトカイン誘導剤が上記担体に固定化されていることを特徴とするサイトカイン誘導材料が、著しく高いサイトカイン誘導量を示すことを見いだし、本発明を完成した。
以下に本発明を詳述する。
【００１０】
本発明のサイトカイン誘導材料は、水に不溶性の担体と、サイトカイン誘導剤とを含有するものである。
上記担体としては特に限定されず、水に不溶性であればよく、例えば、金属、有機物又は無機物等により構成され、好ましくは有機物材料、より好ましくは高分子材料からなる。
【００１１】
上記金属としては、例えば、金若しくは金合金、銀若しくは銀合金、チタン若しくはチタン合金、又は、ステンレス等が挙げられる。
上記無機物としては、例えば、活性炭、ガラス又はガラスの誘導体、シリカ系組成物、アルミナ、ヒドロキシアパタイト等が挙げられる。
【００１２】
上記有機物材料又は高分子材料としては、例えば、セルロース系、アガロース系、デキストラン系、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポリエチレンテレフタレート系、ナイロン系、ポリビニルアルコール系、ポリスルホン系、ポリアミド系、ポリアクリロニトリル系、ポリエチレン系、ポリウレタン系、ポリプロピレン系、ポリエステル系等の材料が挙げられる。
【００１３】
上記ポリスチレン系の材料としては、例えば、ジビニルベンゼン−スチレン共重合体等が挙げられ、アクリルエステル系の材料としては、例えば、ポリメチルメタクリレート、ポリヒドロキシエチルメタクリレート等が挙げられる。
上記担体としては、なかでも、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ナイロン系、ポリエステル系、セルロース系、ポリビニルアルコール系の高分子材料からなるものが好ましい。
【００１４】
上記担体は無極性であり、疎水性であってもよく、この場合、担体としては、ポリスチレン系高分子材料等を用いることができる。また、これらの担体には表面修飾や表面コーティング等により、表面に親水性を付与することもできる。
上記サイトカイン誘導剤は、上記担体へ固定化されていることが好ましい。更に、当該固定化は、物理吸着法によって行われることが好ましい。このため、上記担体としては、イオン交換性官能基や親水性官能基を有しない、疎水性の強い表面を有する材料からなることが好ましく、イオン交換性官能基や親水性官能基を有しない、スチレンからなる高分子材料からなることがより好ましく、スチレンにジビニルベンゼン等の架橋剤を用いた高分子材料からなることが特に好ましい。
【００１５】
上記担体の形状としては特に限定されず、例えば、繊維状、不織布状、スポンジ状、粒子状、膜状、中空糸状等の公知の形状を用いることができる。
上記担体の大きさとしては、粒子状では好ましい下限は５０μｍ、好ましい上限は２ｍｍであり、繊維状では繊維径が１０μｍ以下であることが好ましく、５μｍ以下であることがより好ましい。
上記担体が繊維状である場合は不織布からなることが好ましく、繊維径は３μｍ以下であることが好ましい。
【００１６】
上記担体は、白血球を吸着する材料からなることが好ましく、白血球を吸着する材料としては、例えば、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポリエステル系、ナイロン系、ポリビニルアルコール系、又は、酢酸セルロース等のセルロース系材料からなる高分子材料やガラス系の材料等が挙げられる。
【００１７】
上記担体としては、多孔性高分子材料からなるものが好ましい。
上記多孔性高分子材料の表面積としては、４００ｍ２／ｇ以上であることが好ましく、細孔容積としては、０．５ｍＬ／ｇ以上であることが好ましく、平均細孔径としては、下限が２０Å、上限が８００Åであることが好ましい。
【００１８】
上記多孔性高分子材料を大別すると標準的なゲル構造をもつゲル型と、巨大網目構造（Ｍａｃｒｏ  ｒｅｔｉｃｕｌａｒ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）をもつＭＲ型とに分けられる。また、単にスチレンとジビニルベンゼンのような架橋剤を用いて重合して得られた多孔性樹脂等は透明に近く、ゲル構造を呈するのでゲル型多孔性樹脂と呼ばれる。一方、特殊な重合法によると物理的に多孔性の樹脂等を製造することができ、このような樹脂はＭＲ型又はポーラス型多孔性樹脂と呼ばれる。更に、懸濁重合の際において水に不溶でモノマーだけを溶かすことのできる特殊な有機溶剤を使用することにより、粒子の内部奥にまで大きな孔（マクロポア）をもったＭＲ型又はポーラス型の粒子を作製することができる。
【００１９】
粒子状の多孔性高分子材料としては、例えば、強酸性陽イオン交換樹脂、弱酸性陽イオン交換樹脂、強塩基性陰イオン交換樹脂、弱塩基性陰イオン交換樹脂、合成吸着剤の他、キレート樹脂等からなるものが挙げられる。これらの多孔性粒子は公知の方法によって得ることができ、例えば、原料モノマーをゼラチン等の適当な懸濁安定剤を用いて水中で懸濁重合することにより球状の重合体として製造される。上記原料モノマーとしては、スチレン、ビニルトルエン、アクリル酸エチル、メタクリル酸メチル、アクリロニトリル等のエチレン性二重結合を有する化合物等が用いられ、これにジビニルベンゼン、エチレンジメタクリレート等の多官能性モノマーである架橋剤を加え、多孔化剤の存在下過酸化ベンゾイル、アゾビスイソブチルニトリル等の重合開始剤を用いて架橋重合体を得る。上記多孔性粒子のうち市販されているものとしては、例えば、三菱化学社製ダイヤイオン（登録商標）、ロームアンドハース社製アンバーライト等、ダウケミカル製ダウエックス等が挙げられる。
【００２０】
上記担体としては、巨大網目構造を有する多孔性高分子材料がより好ましい。上記巨大網目構造の細孔分布としては、下限が２Å、上限が２０００Åであることが好ましく、より好ましい上限は３００Åである。
【００２１】
上記担体は、表面粗さを付与された材料からなることが好ましく、その中心線平均粗さＲａ値は、下限が０．２μｍ、上限が１０μｍであることが好ましい。
【００２２】
上記担体の表面にＲａ値が０．２μｍ以上の粗さを付与することにより、著しくサイトカインの誘導が増強される。また、この表面粗さのサイトカイン誘導増強作用は、白血球の大きさが１０〜２０μｍであることを考えると、白血球に比べて上記Ｒａ値が非常に小さいため、単なる接触表面積の増大によるものでないと考えられる。
ここで、上記Ｒａ値とはＪＩＳ  Ｂ０６０１−１９８２における中心線平均粗さである。
【００２３】
上記担体は、更に、凹凸平均間隔Ｓｍ値が下限が５μｍ、上限が２００μｍである範囲にある凹凸を表面に有する材料からなることが好ましい。
ここで、上記凸凹平均間隔Ｓｍ値は、以下のようにして定義される値である。
【００２４】
まず、図１に示す粗さ曲線Ａの中心線Ｂに対して、それぞれ、一定の高さ及び深さの位置に上側カウントレベルＣ及び下側カウントレベルＤを引く。次に、下側のカウントレベルＤと粗さ曲線Ａとが交差する２点間において、上側カウントレベルと粗さ曲線とが交差する点が一回以上存在するときに、一つの山として「山」を定義する。
そして、凹凸平均間隔Ｓｍ値は、図２に示すように、基準長さＬの間にある山の間隔をＳｍｉとしたときに、下記の式▲１▼で定義される値である。
【００２５】
【数１】
2004323484.tif 000002
【００２６】
すなわち、凹凸平均間隔Ｓｍ値とは、基準長さＬの間にある山同士の間隔の平均値を示す。このようにして、凹凸の平均間隔Ｓｍ値により、凸凹の面方向の条件が定義される。
【００２７】
現在のＪＩＳ規格では、表面粗さの高さ方向の情報については規定されているが、面方向の情報に関しては規定されていない。しかしながら、本発明における表面粗さは、凸凹の面方向における間隔によっても特徴付けられるものである。
【００２８】
上記担体の表面粗さは材料の多孔性等に由来するものであっても良い。上記担体に用いられる多孔性高分子材料としては、例えば、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポリエステル系、ナイロン系、セルロース系、ポリビニルアルコール系等の材料が挙げられる。
【００２９】
上記担体の表面粗さは材料の繊維形状に由来するものであっても良く、その場合、上記担体としては、繊維状材料又は不織布状材料からなるものが好ましい。上記繊維状材料又は不織布状材料としては、例えば、ポリスチレン系、アクリルエステル系、ポリエステル系、ナイロン系、セルロース系、ポリビニルアルコール系等の高分子材料からなるものが挙げられる。
【００３０】
上記サイトカイン誘導剤としては、例えば、ＢＣＧ、ＢＣＧ−ＣＷＳ、ＰＰＤ、Ｎｏｃａｒｄｉａ−ＣＷＳ、ＯＫ−４３２、Ｍｕｒａｍｙｌｄｉｐｅｐｔｉｄｅ等の細菌類やその成分；ＰＳＫ、レンチナン、シゾフィラン等の多糖類；ポリＩ：Ｃ、ポリＡ：Ｕ等のポリマー；Ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ、ＤＮＣＢ、Ａｚｉｍｅｘｏｎ、Ｔｉｌｏｒｏｎｅ、Ｂｅｓｔａｔｉｎ等の化学物質が挙げられる。また、上記のような生理活性物質に限らず、菌体、菌体成分、ペプチド類、核酸類、蛋白質、糖成分、脂質等の様々な物質もサイトカイン誘導剤として用いられ得る。
【００３１】
これらサイトカイン誘導剤の中でも、菌体及び／又はその菌体由来成分が好ましい。なかでも、抗酸菌と抗酸菌由来成分がより好ましく、結核菌や結核菌由来成分が特に好ましい。牛型結核菌弱毒株であるＢＣＧとその由来成分も特に好ましい。
【００３２】
また、上記サイトカイン誘導剤としては、溶連菌及び／又は溶連菌由来成分や、放線菌及び／又は放線菌由来成分も好ましい。
また、上記上記サイトカイン誘導剤のみではサイトカイン誘導能を充分に発揮し得ないものであっても、上記担体と組み合わせて用いることにより、サイトカイン誘導活性を発揮させることもできる。従って、本発明におけるサイトカイン誘導剤としては、従来より用いられているサイトカイン誘導物質の他、様々な物質を用いることができる。
【００３３】
上記サイトカイン誘導剤が菌体等である場合は、必要に応じて、固定化する前に菌体の洗浄操作や破砕操作、成分分画操作等のさまざまな前処理を施してもよい。また、上記サイトカイン誘導剤が生菌等である場合は、より安全性を高めるために、必要に応じて、固定化する前、固定化と同時、固定化の後のいずれの時点でも、加熱処理、薬品処理、放射線処理、ガス滅菌処理等のさまざまな方法により死菌化させてもよい。上記加熱処理としては、例えば、オートクレーブ処理が挙げられ、上記薬品処理としては、例えば、グルタルアルデヒド処理、ホルマリン処理、又は、エタノール処理が挙げられ、上記放射線処理としては、例えば、γ線処理が挙げられ、上記ガス滅菌処理としては、例えば、エチレンオキサイドガス処理等が挙げられる。
【００３４】
上記サイトカイン誘導剤は、蛋白質変性剤で変性されているものである。上記蛋白質変性剤としては、例えば、グルタルアルデヒド、ホルマリン、エタノール等のその他各種溶剤や界面活性剤等が挙げられる。また、放射線処理や加熱処理等も蛋白質変性作用を発揮するので、水溶液中での加熱処理等も本発明における蛋白質変性剤に含まれる。なかでも、ホルマリンが好ましく、ホルマリンの濃度としては、１０容積％以下であることが好ましい。
これらの蛋白質変性剤は架橋反応等により蛋白質等を固定化する作用をもつため、サイトカイン誘導剤が変性作用を受けて、上記担体の表面に安定的に固定化することができる。そのため、上記サイトカイン誘導剤を蛋白質変性剤で処理することによりサイトカイン誘導作用も安定的に発揮される。
また、上記サイトカイン誘導剤を蛋白質変性剤により処理することにより、サイトカイン誘導剤の分解、変性等を防ぐことができ、また、担体への固定化後の脱離を防ぐこともできる。このため、より安全にサイトカイン誘導材料及びサイトカイン誘導用具を用いることができる。
【００３５】
上記サイトカイン誘導剤がＢＣＧのような菌体外層が脂質等により覆われている微生物である場合には、必要に応じて脂質を洗浄除去した後、固定化を行なってもよい。
【００３６】
サイトカイン誘導剤を担体の表面に固定化する場合は、物理吸着、共有結合、イオン結合等の公知の方法を用いることができる。また、共有結合等の場合には、必要に応じて、サイトカイン誘導剤と担体の結合部に任意の長さをもつスペーサーを導入することが好ましい。
また、ＢＣＧのような微生物からなるサイトカイン誘導剤を担体に固定化する場合には、菌体表面外壁成分のアミノ酸や糖成分等を介して、担体のカルボキシル基、アミノ基及び／又はエポキシ基等の官能基に結合させることができる。このとき、必要に応じてさまざまな鎖長や構造のスペーサーを導入することもできる。
【００３７】
本発明において、上記サイトカイン誘導剤を上記担体に固定化する方法としては、共有結合等を介さない物理吸着法であることが好ましい。例えば、上記担体が疎水性表面を有し、上記サイトカイン誘導剤がＢＣＧである場合、物理吸着作用によってＢＣＧを上記担体に固定化することができる。また、上記サイトカイン誘導剤が微生物やその成分であり、その表面が電荷を帯びている場合にも、その対極電荷を表面に有する担体に物理吸着作用によって固定化することができる。また、蛋白質変性剤等による上記サイトカイン誘導剤の変性と同時に上記の固定化法を行っても良い。
【００３８】
上記担体の使用割合としては特に限定されないが、粒子状の担体として用いる場合には、血液容積に対する担体のかさ体積量として、下限は０．０２％、上限は８０％程度であり、好ましい下限は０．１％、好ましい上限は５０％程度である。
【００３９】
上記サイトカイン誘導剤の使用割合としては特に限定されないが、例えば、ＢＣＧである場合は、血液に添加される濃度として、乾燥重量で下限は０．００１ｍｇ／ｍＬ、上限は１０ｍｇ／ｍＬであることが好ましい。また、上記サイトカイン誘導剤がＯＫ−４３２である場合は、血液に添加される濃度として、下限は０．０００１ＫＥ／ｍＬ、上限は１０ＫＥ／ｍＬであることが好ましい。
【００４０】
本発明のサイトカイン誘導材料を容器内に収容することによりサイトカイン誘導用具を作成することができる。容器と、容器内に収納された本発明のサイトカイン誘導材料とを有するサイトカイン誘導用具もまた、本発明の１つである。
【００４１】
本発明のサイトカイン誘導用具では、上記担体とサイトカイン誘導剤とを含むサイトカイン誘導材料が、容器内にて血液又は血液成分等と接触し、それによって血液又は血液成分等の中でサイトカインが効果的に誘導される。この場合、接触温度を下限は１５℃、上限は４２℃の範囲とすることが好ましく、それによって、サイトカインの誘導をより効果的に引き起こすことができる。
【００４２】
なお、上記担体、及び、上記サイトカイン誘導剤は、予め混合されて血液と接触してもよく、又は、個別に血液若しくは血液成分等と接触してもよい。
また、本発明のサイトカイン誘導用具では、サイトカイン誘導材料を収納する容器の構造は特に限定されないが、図３に模式的に示すように、血液等の導入部１と、サイトカイン誘導材料と接触した血液４等を容器外に導く導出部２とが備えられている容器３が好ましい。
上記容器としては、カラム状の容器や血液バッグ状の容器等がより好ましい。
【００４３】
本発明のサイトカイン誘導用具には、サイトカイン誘導材料と接触させた血液等を容器外に導く場合に、サイトカイン誘導材料が血液に混入しないような、サイトカイン誘導材料流出防止機構が備えられていることが好ましい。
【００４４】
図３に模式的に示すように、サイトカイン誘導材料流出防止機構５は、サイトカイン誘導材料があらかじめ脱離しないように、収納容器内部に固定化されていても良く、このような場合のサイトカイン誘導材料流出防止機構としては、例えば、流出防止用の分離膜や分離フィルター等が挙げられる。また、その他のサイトカイン誘導材料流出防止機構としては、例えば、遠心操作等によって血液と分離する機構等が挙げられる。
【００４５】
必要によっては、サイトカイン誘導材料と接触させた血液等から血漿や血清成分等を分離して治療等に用いてもよい。
本発明のサイトカイン誘導用具の１実施態様としては、例えば、導入部と導出部を有する血液バッグに粒子状・繊維状・不織布状等の担体を含む本発明のサイトカイン誘導材料を充填し、ここに血液又は血液成分等を導入する。必要に応じて、サイトカインを誘導した血液又は血液成分等を導出部から取り出し利用することができる。これらの血液バッグの容量としては下限は５０ｍＬ、上限は１０００ｍＬであることが好ましく、より好ましい下限は１００ｍＬ、より好ましい上限は４００ｍＬである。これらの血液バッグは粒子状や繊維状、不織布状の本発明のサイトカイン誘導材料を収納することが好ましい。
【００４６】
本発明のサイトカイン誘導材料又はサイトカイン誘導用具により誘導されるサイトカインとしては特に限定されないが、なかでも、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）が好適に挙げられる。例えば、ＩＦＮ−γはリウマチ等の免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー性疾患、癌等のさまざまな疾患において非常に重要な役割を担っているサイトカインであり、ＩＦＮ−γを誘導することによりこれらの疾患に対する治療効果が期待できる。
【００４７】
本発明のサイトカイン誘導材料及びサイトカイン誘導用具は、血液又は血液成分等に限らず、骨髄系細胞、表皮細胞、繊維芽細胞、肝細胞、骨芽細胞、血液幹細胞、胚性幹細胞等の組織から採取した細胞や培養細胞、株化細胞等の様々な細胞からもサイトカインを誘導することができる。
【００４８】
【実施例】
以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。
【００４９】
なお、ヒト血漿中のＩＦＮ−γの測定は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社製ＥＬＩＳＡキット又はＥＮＤＯＧＥＮ社製ＥＬＩＳＡキットにて行った。
【００５０】
（実施例１）
担体１（オルガノ社製、商品名：アンバーライトＸＡＤ４、多孔性ポリスチレン粒子、ＭＲ型、細孔分布２〜１５０Å、表面積７００ｍ２／ｇ以上、細孔容積０．５ｍＬ／ｇ以上、平均細孔径約１２０Å）を精製水（大塚製薬社製）にてデカンテーションにより洗浄し、しかる後メタノール（和光純薬社製、ＨＰＬＣ用）にてデカンテーションすることにより洗浄した。次に、注射用生理食塩水（大塚製薬社製）にて担体１をデカンテーションにより洗浄した。この担体１のかさ体積１ｍＬを２．０ｍＬ用チューブに充填した。このチューブにＢＣＧ（日本ビーシージー製造社製）を１０ｍｇ含有する０．１容積％ホルマリン液（中性緩衝ホルマリン液、和光純薬工業社製）含有生理食塩１ｍＬを添加して混合した。４℃にて２０時間混和し、ＢＣＧを粒子表面に物理吸着させた。混和後、この粒子を生理食塩水にて充分洗浄した後、かさ体積で１００μＬを滅菌済みチューブ（ダイアヤトロン社製、１．５ｍＬ用）に充填した。
健常人から採血し、ヘパリン１５ＩＵ／ｍＬ含有静脈血を得た。この血液約１．４ｍＬを前記の担体１を充填したチューブに添加した。
【００５１】
次に、チューブを転倒混和して血液を撹拌し、ロータリーミキサー（ＴＡＩＴＥＣ社製）に取り付け、６ｒｐｍで転倒混和させつつ、３７℃にて２４時間恒温槽中でインキュベートした。インキュベート後の血液を４℃で３５００ｒｐｍ（トミー精工社製、微量高速遠心機ＭＲＸ−１５０）で１５分間遠心し、しかる後血漿を採取し、−７０℃で該血漿を凍結保存した。次に、保存された血漿を、融解し、Ｈｕｍａｎ  ＩＦＮ−γ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ社製又はＥＮＤＯＧＥＮ社製）にて血漿中のＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表１に示した。
また、用いた健常人の血液の採血直後及び上記と同様に血液のみを培養した後において、血漿中のＩＦＮ−γの値は全て１０ｐｇ／ｍＬ以下であった。
【００５２】
（実施例２）
ホルマリン濃度を０．５容積％に替えた以外は実施例１と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表１に示した。
【００５３】
（実施例３）
ホルマリン濃度を１．０容積％に替えた以外は実施例１と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表１に示した。
【００５４】
（実施例４）
ホルマリン濃度を２．０容積％に替えた以外は実施例１と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表１に示した。
【００５５】
（実施例５）
ホルマリン濃度を３．０容積％に替えた以外は実施例１と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表１に示した。
【００５６】
（実施例６）
ホルマリン濃度を５．０容積％に替えた以外は実施例１と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表１に示した。
【００５７】
（実施例７）
ホルマリン濃度を１０．０容積％に替えた以外は実施例１と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表１に示した。
【００５８】
（比較例１）
ＢＣＧを物理吸着していない担体を用いたこと以外は実施例１と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表１に示した。
【００５９】
（比較例２）
ＢＣＧを物理吸着していない担体を用いたこと以外は実施例２と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表１に示した。
【００６０】
（比較例３）
ＢＣＧを物理吸着していない担体を用いたこと以外は実施例３と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表１に示した。
【００６１】
（比較例４）
ＢＣＧを物理吸着していない担体を用いたこと以外は実施例４と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表１に示した。
【００６２】
（比較例５）
ＢＣＧを物理吸着していない担体を用いたこと以外は実施例５と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表１に示した。
【００６３】
（比較例６）
ＢＣＧを物理吸着していない担体を用いたこと以外は実施例６と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表１に示した。
【００６４】
（比較例７）
ＢＣＧを物理吸着していない担体を用いたこと以外は実施例７と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表１に示した。
【００６５】
【表１】
2004323484.tif 000003
【００６６】
（実施例８）
担体１を担体２（オルガノ社製、商品名：アンバーライトＸＡＤ１６ＨＰ、ポリスチレン多孔性粒子、ＭＲ型、細孔分布２〜３００Å、表面積８００ｍ２／ｇ以上、細孔容積０．５８〜０．６５ｍＬ／ｇ、平均細孔径約１５０Å）に変更したことを除いては実施例３と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表２に示した。
また、用いた健常人の血液の採血直後及び上記と同様に血液のみを培養した後において、血漿中のＩＦＮ−γの値は全て１０ｐｇ／ｍＬ以下であった。
【００６７】
（実施例９）
担体１を担体３（オルガノ社製、商品名：アンバーライトＸＡＤ２０００、ポリスチレン多孔性粒子、ＭＲ型、細孔分布２〜８０Å、表面積約６２０ｍ２／ｇ、細孔容積約０．７ｍＬ／ｇ、平均細孔径約４０〜５０Å）に変更したことを除いては実施例３と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表２に示した。
【００６８】
（実施例１０）
担体１を担体４（オルガノ社製、商品名：アンバーライトＸＡＤ７ＨＰ、アクリル酸系多孔性粒子、ＭＲ型、細孔分布２〜２０００Å、表面積４００ｍ２／ｇ以上、細孔容積０．５ｍＬ／ｇ以上、平均細孔径約４００〜５００Å）に変更したことを除いては実施例３と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表２に示した。
【００６９】
（比較例８）
ＢＣＧを物理吸着していない担体を用いたこと以外は実施例８と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表２に示した。
【００７０】
（比較例９）
ＢＣＧを物理吸着していない担体を用いたこと以外は実施例９と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表２に示した。
【００７１】
（比較例１０）
ＢＣＧを物理吸着していない担体を用いたこと以外は実施例１０と同様にしてＩＦＮ−γ誘導量を測定した。結果を表２に示した。
【００７２】
【表２】
2004323484.tif 000004
【００７３】
【発明の効果】
本発明は、上述の構成よりなるので、本発明のサイトカイン誘導材料を、例えば、血液又は血液成分と接触させることにより、従来のサイトカイン誘導剤に比べて、サイトカインを効果的に誘導することができるので、本発明のサイトカイン誘導材料及びサイトカイン誘導用具は、サイトカインの誘導が有効である様々な疾患の治療に好適に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】表面粗さを説明するための模式図であり、凹凸の「山」を説明するための図である。
【図２】表面粗さにおける凹凸平均間隔Ｓｍ値を説明するための図である。
【図３】本発明のサイトカイン誘導用具の一例を示す模式的断面図である。
【符号の説明】
１  導入部
２  導出部
３  容器
４  サイトカイン誘導材料と接触した血液
５  サイトカイン誘導材料流出防止機構
【図１】
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【図２】
2004323484.tif 000006
【図３】
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