(57)【要約】【課題】注射又は経皮、経粘皮、経鼻腔若しくは経口経路で適用することによって、クラミジアの増殖を著明に抑制する手段を提供する。【解決手段】有効成分としてインターフェロンαを含んでなり、そのインターフェロンαにおけるサブタイプα８の含量がインターフェロンα中１０質量％を越える抗クラミジア用剤を提供することによって前記課題を解決する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分としてインターフェロンαを含んでなり、そのインターフェロンαにおけるサブタイプα８の含量がインターフェロンα中１０質量％を越える抗クラミジア用剤。
【請求項２】
インターフェロンαにおけるサブタイプα２の含量がインターフェロンα中６０質量％を越える請求項１に記載の抗クラミジア用剤。
【請求項３】
注射用剤、皮膚外用剤、経粘皮用剤、経鼻腔用剤又は経口用剤のいずれかの形態にある請求項１又は２に記載の抗クラミジア用剤。
【請求項４】
経口用剤が歯磨、口腔清浄剤又は口腔殺菌剤のいずれかである請求項３に記載の抗クラミジア用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は抗クラミジア用剤に関するものであり、とりわけ、インターフェロンαを有効成分とする抗クラミジア用剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
クラミジアには、クラミジア・トラコマティス、クラミジア・ニューモニエ、クラミジア・シッタシなどが知られており、このうち、クラミジア・ニューモニエ及びクラミジア・シッタシは、感染すると、例えば、肺炎などの呼吸器系疾患や、動脈硬化、虚血性心疾患などの循環器系疾患を招来すると言われている。これらのクラミジアは経口感染することから、鼻腔、口腔、気道などにおけるクラミジアの増殖を抑制することができれば、クラミジア感染が発症原因となる疾患への罹患率を効果的に抑えることができると考えられる。
【０００３】
従来、上記のごとき疾患の治療には、主として、テトラサイクリン系やマクロライド系の抗生物質が用いられてきた。しかし、これらの抗生物質は経口投与により著効を発揮するという利点はあるものの、抗生物質一般に共通する欠点として、耐性菌の出現を招来したり、大腸における有用な菌叢を破壊し、食欲不振、嘔吐、下痢、便秘、膨満感、倦怠感、発湿などを惹起することがある。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
斯かる状況に鑑み、本発明の目的は、注射又は経皮、経粘皮、経鼻腔若しくは経口経路で適用することによって、クラミジアの増殖を著明に抑制する手段を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者がサイトカインの１種であるインターフェロンに着目し、鋭意研究し、検索した結果、サブタイプα８の含量が１０質量％を越えるインターフェロンαは、これを生体へ適用すると、呼吸器系疾患、循環器系疾患、消化器系疾患、泌尿器系疾患、生殖器系疾患、視覚器系疾患などの発症原因となるクラミジアの増殖を著明に抑制することを見出した。
【０００６】
すなわち、本発明は、有効成分としてインターフェロンαを含んでなり、そのインターフェロンαにおけるサブタイプα８の含量がインターフェロンα中１０質量％を越える抗クラミジア用剤を提供することによって前記課題を解決するものである。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明でいうインターフェロンαとは、例えば、白血球又はリンパ芽球様細胞などの血液系細胞へセンダイウイルスなどのインターフェロン誘導剤を作用させることによって得られるインターフェロンである。周知のとおり、インターフェロンαの分子には多形性があり、例えば、人のインターフェロンαの場合、インターフェロンαに分類される分子は、アミノ酸配列などの違いによって、サブタイプα１、サブタイプα２、サブタイプα５、サブタイプα６、サブタイプα７、サブタイプα８、サブタイプα１４、サブタイプωなどに分類されている。本発明は、有効成分としてインターフェロンαを含んでなり、そのインターフェロンαにおけるサブタイプα８の含量が１０質量％を越える抗クラミジア用剤に関するものである。
【０００８】
本発明の抗クラミジア用剤におけるインターフェロンαのサブタイプα８としては、通常、１６１個又は１６６個のアミノ酸残基からなり、それぞれ配列表における配列番号１、配列番号２又は配列番号３に示す塩基配列に併記したアミノ酸配列を有する人のインターフェロンαにおけるサブタイプα８ａ、サブタイプ８ｂ及びサブタイプα８ｃが好ましく、このうち、経済性と、クラミジアの増殖を抑制する効果が大きい点で、サブタイプα８ｂが最も好ましい。
【０００９】
本発明の抗クラミジア用剤は、通常、注射用剤、皮膚外用剤、経粘皮用剤、経鼻腔用剤又は経口用剤を構成するための成分の１又は複数とともに、サブタイプα８の含量が１０質量％を越え、好ましくは、２０質量％以上であるインターフェロンαを配合することによって得ることができる。本発明の抗クラミジア用剤へ配合するインターフェロンαは、そのインターフェロンαにおけるサブタイプα８の含量が上記した範囲にあり、かつ、注射又は経皮、経粘皮、経鼻腔若しくは経口経路で適用したときに所期の抗クラミジア効果を発揮するかぎり、天然型のものであっても組換え型のものであってもよく、その起源、調製方法は問わない。なお、サブタイプα８の含量がこの範囲を下回ると、抗クラミジア効果が全く得られないか、極めて低レベルに止まることから、上記の範囲で加減するのが望ましい。
【００１０】
本発明による抗クラミジア用剤へ配合する天然型のインターフェロンαとしては、例えば、人のリンパ芽球様細胞の１種であるＢＡＬＬ−１細胞（ＪＣＲＢ００７１）へセンダイウイルスを作用させ、生成したインターフェロンへ抗体クロマトグラフィーを適用することによって得られる、サブタイプα２の含量が６０質量％を越え、好ましくは、７０乃至８０質量％であり、サブタイプα８ｂの含量が１５質量％を越え、好ましくは、２０乃至３０質量％である人のインターフェロンαが挙げられる。斯かるインターフェロンαを配合した抗クラミジア用剤は、生体へ適用すると、サブタイプα２とサブタイプα８ｂとのバランスが絶妙であり、それらが相乗的に協同作用することから、いずれか一方のみでは決して達成されない、極めて高い抗クラミジア効果が得られる。
【００１１】
本発明による抗クラミジア用剤へ配合する組換え型のインターフェロンαとしては、例えば、配列表における配列番号１、配列番号２又は配列番号３に示す塩基配列に併記したアミノ酸配列を有する、人のインターフェロンαにおけるサブタイプα８ａ、サブタイプα８ｂ又はサブタイプα８ｃのいずれかをコードする遺伝子を適宜のベクターへ挿入し、これを用いて、例えば、大腸菌などを形質転換して得られる形質転換体を常法により培養し、培養物からインターフェロン蛋白質を採取して得られるものが挙げられる。斯かるインターフェロンαは、前記したごときＢＡＬＬ−１細胞などの血液系細胞が産生する天然型のものと比較すると、抗クラミジア効果においてやや劣るけれども、必要に応じて、例えば、生体へ適用する用量を上げたり、例えば、国際特許出願公開ＷＯ９５／１３０９０号明細書又はＷＯ９６／１００８９号明細書などに記載された方法によるか、あるいは、それらの方法に準じて、サブタイプα８の蛋白質に対してポリエチレングリコール、デキストラン、プルランなどの多糖類を結合させることによって生体における滞留時間を延長させるか、あるいは、同様にして調製される組換え型のサブタイプα２と組み合わせて用いることによって、実用上支障のない抗クラミジア用剤を得ることができる。
【００１２】
本発明の抗クラミジア用剤は、用途に応じて、例えば、液状、ペースト状又は固状の注射用剤、皮膚外用剤、経粘皮用剤、経鼻腔用剤、経口用剤などの形態に調製して用いられ、具体的には、注射剤、点眼剤、座剤、軟膏剤、さらには、歯磨き、うがい薬、トローチ剤などの口腔清浄剤や、歯科領域における口腔殺菌剤をはじめとする口腔用剤の形態が好ましい。したがって、本発明の抗クラミジア用剤は、散剤、細粒剤、丸剤、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、リモナーデ剤、エリキシル剤、シロップ剤、芳香水剤、懸濁剤、乳剤、浸剤、煎剤、チンキ剤、エキス剤、流エキス剤、酒精剤、リニメント剤、ローション剤、軟膏剤、パップ剤、硬膏剤、坐剤、点眼剤、眼軟膏剤、注射剤において汎用される、例えば、研磨剤、発泡剤、湿潤剤、粘結剤、香味料、甘味料、保存料、弗素化合物、酵素剤、消臭剤、さらには、賦形剤、軟膏基剤、溶解剤、矯味剤、矯臭剤、着色剤、乳化剤、噴射剤などの調製用薬などの１又は複数と組み合わせて用いることを妨げない。また、本発明の目的を逸脱しない範囲で、斯かる剤形の薬剤において汎用される、例えば、止血剤、抗炎症剤、組織賦活剤、さらには、インターフェロンαにおけるサブタイプα８以外のサブタイプ、インターフェロンβ、インターフェロンγをはじめとする他の薬効成分の１又は複数との併用も妨げない。なお、注射用剤や経粘皮用剤、経鼻腔、口腔用剤における調製用薬としては、インターフェロンαを安定化する性質を兼備する点で、例えば、スクロース、グルコース、マルトース、トレハロース、フルクトース、マンニトールなどの糖又は糖アルコールさらには、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、シトルリン、システイン、シスチン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、フェニルグリシン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタマート、Ｏ−ホスホセリン、β−アラニン、α−アミノ酪酸、γ−アミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−（４−アミノフェニル）酪酸、アミノフェニル酪酸、アミノ安息香酸、４−アミノ馬尿酸、アミノメチル安息香酸、ε−アミノカプロン酸、７−アミノへプタン酸、β−アスパラギン酸、γ−グルタミン酸、ε−リジン、メチオニン＝スルホン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、ｄ−オルニチン、ｐ−ニトロ−フェニルアラニン、ヒドロキシプロリン、チオプロリンなどのアミノ酸又はこれらのアミノ酸の誘導体若しくはオリゴペプチドが好ましく、必要に応じて、これらは組み合わせて用いられる。
【００１３】
本発明の抗クラミジア用剤へ配合するインターフェロンα８の投与量としては、サブタイプα８の種類や抗クラミジア用剤の適用症、投与経路などにもよるけれども、通常、５×１０３乃至５×１０７ＩＵ／日／成人、好ましくは、１×１０４乃至１×１０７ＩＵ／日／成人とする。なお、本明細書においては、インターフェロンαの活性は、特に断らないかぎり、国際単位（ＩＵ）に換算して表示する。
【００１４】
本発明の抗クラミジア用剤は、斯かる用量で１日又は１週間に１回以上の頻度で注射又は経皮、経粘皮、経鼻腔用剤若しくは経口経路で適用することによって、生体におけるクラミジアの増殖を著明に抑制することから、鼻腔、口腔や気道、さらには視覚器、消化器、泌尿器、生殖器などへ侵入したクラミジア・ニューモニエ、クラミジア・シッタシ、クラミジア・トラコマティスなどのクラミジアが発症原因となる、例えば、肺炎などの呼吸器系疾患や、動脈硬化、虚血性心疾患などの循環器系疾患、結膜炎などの視覚器系疾患、直腸炎などの消化器系疾患、尿道炎などの泌尿器系疾患、副睾丸炎、卵管炎、子宮頚管炎、切迫早産、卵管の炎症、癒着、閉塞などの生殖器系疾患の治療、予防に著効を発揮する。とりわけ、本発明の抗クラミジア口腔用剤は、抗生物質を有効成分とする経口用剤とは違って、耐性菌の出現を招来したり、長期連用しても大腸における有用な菌叢を破壊することがないので、食欲不振、嘔吐、下痢、便秘、膨満感を生じたり、倦怠感、発湿などの副作用を惹起することがない。本発明の抗クラミジア用剤の安全性に関連して、インターフェロンαは、周知のとおり、元々生体内に存在する物質であって、今日では、前述のごとき用量で投与しても安全であることが確認されていることを付言しておく。
【００１５】
以下、本発明による抗クラミジア用剤の抗クラミジア効果につき、実験例に基づいて説明する。
【００１６】
【実験例１】
〈クラミジア保存液の調製〉
１０体積％仔牛血清を補足したイーグル最小培地（ｐＨ７．２）へ、宿主細胞として、人の肺に由来する線維芽細胞株の１種であるＡ５４９細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１８５）を８．６×１０５個／ｍｌの細胞密度になるように浮遊させ、培養プレートに一定量分注し、３７℃のインキュベーター（５％ＣＯ２）中で１６時間培養した後、遠心分離により培地を除去した。別途、トラコーマタイプＤのクラミジア・トラコマティスＵＷ−３／Ｃｘ株（ＡＴＣＣ  ＶＲ−８８５）又はクラミジア・ニューモニエＴＷＡＲＡＲ−３９株（ＡＴＣＣ５３５９２）のいずれかをＳＰＧ緩衝液（７５ｇスクロース、０．５２ｇ燐酸二水素カリウム、１．５２９ｇ燐酸水素二ナトリウム二水和物及び０．７２ｇグルタミン酸を蒸留水１０００ｍｌに溶解した後、濾過除菌してなる緩衝液）により希釈し、培養プレート上のＡ５４９細胞へ適量添加した後、１，５００×ｇで１時間遠心してクラミジアを細胞へ感染させた。次いで、緩衝液を除去し、８体積％ウシ胎児血清を補足したイーグル最小培地（ｐＨ７．２）に５ｍｌ／ウェルずつ添加し、３７℃のインキュベーター（５％ＣＯ２）中で４８時間培養した。その後、培養物から培地を除去し、新鮮なＳＰＧ緩衝液を３ｍｌ／ウェルずつ添加した後、セルスクレーパーを用いて細胞を浮遊状態で採取し、新鮮なＳＰＧ緩衝液で希釈することによって、１ｍｌ当りの封入体形成単位（ＩＦＵ）が１×１０７ＩＦＵであるクラミジア保存液を得た。
【００１７】
【実験例２】
〈インターフェロンαにおけるサブタイプの調製〉
米国特許第６３５０５８９号明細書に記載された方法に準じて、人の血液から調製したバフィーコートヘセンダイウイルスを作用させ、生成したインターフェロンαへヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィーなどを適用することによって、人のインターフェロンαの活性なサブタイプα１、サブタイプα２、サブタイプα５、サブタイプα７及びサブタイプα８並びにバフィーコートが産生するインターフェロンαにおけるサブタイプを産生したときのままの組成で含有するインターフェロンαの混合物（以下、「インターフェロンα混合物」という）をそれぞれ単離した。
【００１８】
【実験例３】
〈サブタイプの抗クラミジア活性〉
人の子宮に由来する線維芽細胞株の１種であるＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２）を１０体積％仔牛血清を補足したイーグル最小培地（ｐＨ７．２）で浮遊させ、細胞密度８×１０４個／ｍｌに調製した後、培養プレートへ０．１ｍｌウェルに播種した後、３７℃インキュベーター（５％ＣＯ２）中で１６時間培養した。次いで、実験例２の方法により調製したインターフェロンαのサブタイプα１、サブタイプα２、サブタイプα５、サブタイプα７又はサブタイプα８のいずれかを８体積％仔牛血清を補足したイーグル最小培地（ｐＨ７．２）に表１に示す濃度になるように添加した後、３７℃インキュベーター（５％ＣＯ２）中で２４時間培養した。培地を除去した後、実験例１の方法により調製したクラミジア保存液を超音波処理し、培養プレートへ１×１０４ＩＦＵ／ウェルずつ添加した後、１，５００×ｇで１時間遠心してクラミジアをＨｅｌａ細胞に吸着感染させた。過剰なクラミジアストック液を除去した後、上記と同様のインターフェロンαサブタイプを含有する８体積％仔牛血清を補足した新鮮なイーグル最小培地（ｐＨ７．２）を添加してさらに４８時間培養した。併行して、インターフェロンαを添加しない系を設け、上記と同様に処置して対照とした。その後、通常の蛍光標識法により培養細胞における封入体形成細胞を計数し、段階希釈法により、インターフェロンα無添加の対照における封入体形成細胞の数を１０％にまで低減させるサブタイプの濃度を算出した。結果を表１に併記する。
【００１９】
【表１】
2004238374.tif 000002
【００２０】
表１の結果は、同様にインターフェロンαに分類されるインターフェロンであっても、サブタイプによってクラミジア・トラコマティス及びクラミジア・ニューモニエの増殖を抑制する効果、すなわち、抗クラミジア活性が著しく異なることを示している。実験に供したサブタイプのうちでは、サブタイプα８の抗クラミジア活性が最も高く、他のサブタイプの２８倍以上にも達した。従来公知の医薬品に頻用されているサブタイプα２の抗クラミジア活性は著しく低く、サブタイプα８の１／４０以下であった。これらの結果は、インターフェロンαにおけるサブタイプのうちでも、サブタイプα８が呼吸器経疾患や循環器経疾患の発症原因であるクラミジアの増殖抑制に抜きんでて有効であることを物語っている。
【００２１】
【実験例４】
〈サブタイプα８と他のサブタイプとの併用〉
実験例２の方法により得た人のインターフェロンαにおけるサブタイプα８と、実験例２の方法により得た他のサブタイプとを表２に示す割合で併用した以外は実験例３におけると同様に試験した。結果を表２に併記する。
【００２２】
【表２】
2004238374.tif 000003
【００２３】
表２の結果は、サブタイプの組合わせ方によって、発揮される抗クラミジア活性に著しい違いのあることを示している。サブタイプα８とサブタイプα２との組合わせは抗クラミジア活性が格別高く、他の組合わせの２倍以上にも達した。
実験例３において、サブタイプα２はサブタイプα８と比較して明らかに低い抗クラミジア活性しか示さなかったことから、本実験例において、サブタイプα８とサブタイプα２との組合わせが斯くも顕著な抗クラミジア活性を示したことは、両者の組合わせが、その余の組合わせでは決して達成されない、いわゆる、相乗効果をもたらしたものと推定される。なお、インターフェロンα混合物においても、その抗クラミジア効果はサブタイプα２の６倍程度にすぎず、このことも、クラミジアが発病原因となる疾患の治療・予防において、サブタイプα８とサブタイプα２の人為的な組合わせに意義があることを物語っている。
【００２４】
【実験例５】
〈サブタイプα８とサブタイプα２との配合比〉
実験例２の方法により得た人のインターフェロンαのサブタイプα８及びサブタイプα２につき、それらを表３に示す割合で併用した以外は実験例３におけると同様にして抗クラミジア活性を試験した。結果を表３に併記する。
【００２５】
【表３】
2004238374.tif 000004
【００２６】
表３の結果は、サブタイプα８とサブタイプα２とを併用する場合には、インターフェロンαにおける前者の含量が１０質量％を越え、好ましくは、２０質量％以上にするのが望ましいことを物語っている。また、サブタイプα８とサブタイプα２との組合わせであっても、インターフェロンαにおける前者の割合が１０質量％以下になると実質的な相乗効果が認められず、また、４０質量％以上、いいかえると後者の割合が６０質量％以下になると、効果が頭打ちになることを示している。これらの結果は、人のインターフェロンαにおけるサブタイプα８とサブタイプα２とを併用する場合には、前者を１０質量％を越える含量、好ましくは、２０質量％以上、４０質量％未満の範囲で加減するのが望ましいことを物語っている。
【００２７】
【実験例６】
〈生体内試験〉
複数の成人男性から咽頭の上皮細胞を綿棒で採取し、ＳＰＧ緩衝液に浮遊させた後、超音波処理し、これを実験例３に記載の方法に準じて、ＨｅＬａ細胞に感染させ、３７℃インキュベーター（５％ＣＯ２）中で４８時間培養した。これを実験例３に記載の蛍光標識法を適用してクラミジアの存在が確認された男性（年齢４６乃至７５歳、３６名）を本生体内試験の被験者とした。
【００２８】
被験者を無作為に選別して４群（９名／群）に分け、その３群に対して、実験例２の方法により得た人のインターフェロンαのサブタイプα８とサブタイプα２とを質量比１：０、１：２、１：３又は１：９のいずれかの割合で含んでなる、後記実施例５の方法により調製した口腔清浄剤を、１日３回、毎食後、２０日間に亙って適用させた。残る１群の被験者には、インターフェロンαを省略した以外は同様にして調製した対照の口腔清浄剤を適用した。２１日目にすべての被験者から、再度、咽頭の上皮細胞を採取してクラミジアによる封入体細胞数を計数し、試験開始前の封入体細胞数と比較した。結果を表４に示す。
【００２９】
【表４】
2004238374.tif 000005
【００３０】
表４の結果は、インターフェロンαを含んでなり、そのインターフェロンαにおけるサブタイプα８の含量が１０質量％を越え、好ましくは、２０質量％以上である抗クラミジア用剤は、生体においても、クラミジアの増殖を顕著に抑制することを物語っている。本試験においても、サブタイプα８だけを配合した口腔清浄剤は、抗クラミジア活性においてサブタイプα８とサブタイプα２とを併用するものに劣り、また、サブタイプα８とサブタイプα２とを併用する場合でも、サブタイプα８の割合が小さいと所期の抗クラミジア効果が得られず、反対に、サブタイプα８の割合が大きすぎると、却って、抗クラミジア活性が低下するという、実験例５における生体外実験の結果が裏付けられた。
【００３１】
以下、本発明の実施の形態につき、実施例に基づいて説明する。
【００３２】
【実施例１】
〈有効成分としてのインターフェロンαの調製〉
常法にしたがって、市販されている人のインターフェロンα標品（商品名『インターフェロン−α』、コスモバイオ株式会社販売）へ抗ヒトインターフェロンα抗体カラムクロマトグラフィーを適用してウシ血清アルブミンを除去した後、限外濾過膜及びゲル濾過カラムクロマトグラフィーをそれぞれ適用することによって、人のインターフェロンαにおける活性なサブタイプα８ｂ及びサブタイプα２を質量比１：３の割合で含有するインターフェロンαを得た。
【００３３】
【実施例２】
〈有効成分としてのインターフェロンαの調製〉
常法にしたがって、ＢＡＬＬ−１細胞（ＪＣＲＢ００７１）からゲノムＤＮＡを調製し、制限酵素ＮｄｅＩ又はＢａｍＨＩによる切断部位を有する、配列表における配列番号４及び配列番号５に示す塩基配列のプライマーの存在下でＰＣＲ反応させ、配列表における配列番号２に併記されたアミノ酸配列を有する、人のインターフェロンαにおけるサブタイプα８ｂをコードするＤＮＡを得た。
【００３４】
常法により、このＤＮＡを制限酵素ＮｄｅＩ及びＢａｍＨＩにより切断した後、あらかじめ同様の制限酵素で切断しておいたプラスミド発現ベクターｐＥＴ−３ａへ連結した。斯くして得られた、Ｔ７プロモーター領域、サブタイプα８ｂをコードするＤＮＡ領域、Ｔ７ターミネーター領域、アンピシリン耐性遺伝子領域及びＣｏｌＥ１  Ｏｒｉ領域を含んでなる発現ベクターを電気パルス法により大腸菌ＢＬ−２１（ＤＥ３）コンピテントセルへ導入した。得られた形質転換体から、常法により、配列表における配列番号２に併記されるアミノ酸配列のＮ末端にメチオニン残基が付加してなる、人のインターフェロンαにおけるサブタイプα８ｂを発現するクローンを選別した。
【００３５】
斯くして得られた形質転換体を常法にしたがってアンピシリンを含むＬＢ培地で培養した後、培地へイソプロピル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシドを適量添加してサブタイプα８ｂの発現を誘導した。その後、さらに３時間培養した後、常法にしたがって菌体を採取し、尿素の存在下で超音波処理し、遠心分離により得られた上清を採取し、これに透析、疎水クロマトグラフィー、抗ヒトインターフェロンα抗体クロマトグラフィー、限外濾過膜、ゲル濾過クロマトグラフィーなどを適用することによって、人のインターフェロンα８における活性サブタイプα８ｂを得た。
【００３６】
【実施例３】
〈有効成分としてのインターフェロンαの調製〉
国際特許出願公開ＷＯ９５／１３０９０号明細書に記載された方法に準じて、活性化ポリエチレングリコール−Ｎ−スクシンイミドカーボネートを用い、実施例２の方法により得た人のインターフェロンαにおけるサブタイプα８ｂへ平均分子量１２，０００ダルトンのポリエチレングリコールを結合させた。反応混合物を実施例２における精製方法に準じて精製したところ、１分子当たりポリエチレングリコールが１．３分子結合してなる活性なサブタイプα８ｂが得られた。
【００３７】
【実施例４】
〈練歯磨〉
常法にしたがって、下記に示す練歯磨の基本処方に対して、実施例１乃至実施例３の方法により得た人のインターフェロンαのいずれかを濃度１×１０４ＩＵ／ｇになるように配合した後、アルミニウムラミネートチューブへ１００ｇずつ充填して３種類のペースト状抗クラミジア口腔用剤を得た。
【００３８】
第二燐酸カルシウム                        ４２質量部
グリセリン                                １８質量部
カラギーナン                            ０．９質量部
ラウリル硫酸ナトリウム                  １．１質量部
香料                                            適量
サッカリン                                      適量
水                                        ３８質量部
【００３９】
本例の抗クラミジア口腔用剤は、通常の練歯磨と同様に常用することによって、口腔におけるクラミジアの増殖を抑制し、クラミジアが発症原因になる呼吸器系疾患や循環器系疾患を治療・予防することができる。
【００４０】
【実施例５】
〈口腔清浄剤〉
常法にしたがって、下記に示す口腔清浄剤の基本処方に対して、実施例１乃至実施例３の方法により得たインターフェロンαのいずれかを濃度５×１０４ＩＵ／ｇになるように配合して３種類の液状抗クラミジア口腔用剤を得た。
【００４１】
エタノール                                ４０質量部
グリセリン                                １５質量部
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油              １質量部
サッカリン                                      適量
香料                                            適量
クロルヘキシジン                                適量
水                                        ４４重量部
【００４２】
本例の抗クラミジア口腔用剤は、通常のうがい薬などと同様に常用することによって、口腔におけるクラミジアの増殖を抑制し、クラミジアが発症原因になる呼吸器系疾患や循環器系疾患を治療・予防することができる。
【００４３】
【実施例６】
〈トローチ剤〉
常法にしたがって、下記に示すトローチ剤の基本処方に対して、実施例１乃至実施例３の方法により得たインターフェロンαのいずれかを濃度５×１０５ＩＵ／ｇになるように配合し、成形して３種類の固状抗クラミジア口腔用剤を得た。
【００４４】
マルトース                                ３５質量部
澱粉                                      ３４質量部
結晶セルロース                            １０質量部
ヒドロキシプロピルメチルセルロース        １０質量部
ステアリン酸マグネシウム                    １質量部
【００４５】
本例の抗クラミジア口腔用剤は、通常のトローチ剤と同様に常用することによって、口腔におけるクラミジアの増殖を抑制し、クラミジアが発症原因になる呼吸器系疾患や循環器系疾患を治療・予防することができる。
【００４６】
【実施例７】
〈液剤〉
常法にしたがって、イソロイシンを４質量％含有する注射用精製水に、実施例１乃至３の方法により得た人のインターフェロンαのいずれかを濃度５×１０５ＩＵ／ｍｌになるように溶解させた後、滅菌濾過して３種類の液状抗クラミジア用剤を得た。
【００４７】
本例の抗クラミジア用剤は、注射用剤、経粘皮用剤、経鼻腔用剤、経口用剤などとして、気道、鼻腔、口腔、視覚器、消化器、泌尿器、生殖器などにおけるクラミジアの増殖を抑制し、クラミジアが発症原因になる呼吸器系疾患や循環器系疾患を治療・予防することができる。
【００４８】
【実施例８】
〈軟膏〉
常法にしたがって、実施例１乃至実施例３の方法により得た人のインターフェロンαのいずれかを濃度１×１０６ＩＵ／ｍｌになるように適量の燐酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．２）に溶解し、無水結晶マルトース４９ｇと均一に配合した後、さらに４５０ｇの白色ワセリンと練り合わせて３種類の液状抗クラミジア用剤を得た。
【００４９】
本例の抗クラミジア用剤は、皮膚外用剤、経粘皮用剤などとして、泌尿器、生殖器などにおけるクラミジアの増殖を抑制し、クラミジアが発症原因になる泌尿器系疾患や生殖器系疾患を治療・予防することができる。
【００５０】
【実施例９】
〈点眼剤〉
常法にしたがって、下記に示す点眼剤の基本処方に対して、実施例１乃至実施例３の方法により得たインターフェロンαのいずれかを濃度５×１０６ＩＵ／ｇになるように配合して３種類の液状抗クラミジア点眼剤を得た。
【００５１】
トレハロース（２水和物）                  ２０質量部
塩化ナトリウム                        ０．０４質量部
塩化カリウム                          ０．０２質量部
燐酸２水素ナトリウム                  ０．０３質量部
硼砂                                  ０．０４質量部
塩化ベンザルコニウム                ０．００４質量部
水                                        ８０質量部
【００５２】
本例の抗クラミジア用剤は、通常の点眼剤と同様に常用することによって、視覚器におけるクラミジアの増殖を抑制し、クラミジアが発症原因になる視覚器系疾患を治療・予防することができる。
【００５３】
【発明の効果】
以上説明したとおり、本発明は、生体内において、インターフェロンαにおけるサブタイプα８がクラミジアの増殖を著明に抑制するという独自の知見に基づくものである。本発明の抗クラミジア用剤は、注射又は経皮、経粘皮、経鼻腔若しくは経口経路で適用することによって、生体におけるクラミジアの増殖を著明に抑制することから、鼻腔、口腔や気道、さらには視覚器、消化器、泌尿器、生殖器などへ侵入したクラミジア・ニューモニエ、クラミジア・シッタシ、クラミジア・トラコマティスなどのクラミジアが発症原因となる、例えば、肺炎などの呼吸器系疾患や、動脈硬化、虚血性心疾患などの循環器系疾患、結膜炎などの視覚器系疾患、直腸炎などの消化器系疾患、尿道炎などの泌尿器系疾患、副睾丸炎、卵管炎、子宮頚管炎、切迫早産、卵管の炎症、癒着、閉塞などの生殖器系疾患の治療、予防に著効を発揮する。とりわけ、本発明の抗クラミジア口腔用剤は、抗生物質を有効成分とする経口用剤とは違って、耐性菌の出現を招来したり、長期間連用しても大腸における有用な菌叢を破壊することがないので、食欲不振、嘔吐、下痢、便秘、膨満感を生じたり、倦怠感、発湿などの副作用を惹起することがない。
【配列表】
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