(57)【要約】      （修正有）【課題】でんぷん含有農産物から単糖リッチシロップを迅速に生成する方法の提供。【解決手段】でんぷんをオリゴ糖へと加水分解する第一のでんぷん加水分解酵素、及びでんぷん又はオリゴ糖をグルコースへと加水分解する第二のでんぷん加水分解酵素でもってでんぷん含有農産物スラリーを処理する。でんぷん含有農産物は、グルコースをその他の単糖に転換する酵素でもってさらに処理されるか、グルコースを発酵生成物に転換する微生物でもってさらに処理されてもよい。トレハロースのような二糖類に富むシロップを生成するための方法も含まれる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
でんぷん含有農産物から単糖リッチシロップを生成するための方法であって、でんぷんをオリゴ糖へと加水分解する第一のでんぷん加水分解酵素、及びでんぷん又はオリゴ糖をグルコースへと加水分解する第二のでんぷん加水分解酵素でもってでんぷん含有農産物スラリーを処理することを含む方法。
【請求項２】
前記単糖リッチシロップは、グルコースに富むかあるいはグルコースから転換された単糖に富むシロップである請求項１に記載の方法。
【請求項３】
グルコースをフルクトースに転換する転換酵素、又はグルコースをマンニトール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、ソルボース又はキシロースに転換する微生物でもって前記でんぷん含有農産物スラリーを処理することをさらに含む請求項２に記載の方法。
【請求項４】
フルクトースリッチシロップを得るべく、前記でんぷん含有スラリーは、グルコースをフルクトースに転換する転換酵素でもって処理される請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記第一のでんぷん加水分解酵素はα−アミラーゼであり、前記第二のでんぷん加水分解酵素はグルコアミラーゼである請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記転換酵素はグルコースイソメラーゼである請求項５に記載の方法。
【請求項７】
まず前記でんぷん含有農産物スラリーを前記α−アミラーゼでもって処理し、次にそこから不溶物質を除去してでんぷん加水分解物含有溶液を得て、その溶液をその後前記グルコアミラーゼでもって処理してグルコースリッチシロップを得て、最後にそのグルコースリッチシロップを前記グルコースイソメラーゼでもって処理してフルクトースリッチシロップを得る請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記農産物は、米、タピオカ、モロコシ穀物、ジャガイモ、サツマイモ、小麦、大麦、トウモロコシ又はマメ科植物である請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記単糖リッチシロップはグルコースリッチシロップである請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
前記第一のでんぷん加水分解酵素はα−アミラーゼであり、前記第二のでんぷん加水分解酵素はグルコアミラーゼである請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
まず前記でんぷん含有農産物スラリーを前記α−アミラーゼでもって処理し、次にそこから不溶物質を除去してでんぷん加水分解物含有溶液を得て、その溶液をその後前記グルコアミラーゼでもって処理してグルコースリッチシロップを得る請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記農産物は、米、タピオカ、モロコシ穀物、ジャガイモ、サツマイモ、小麦、大麦、トウモロコシ又はマメ科植物である請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記農産物は、米、タピオカ、モロコシ穀物、ジャガイモ、サツマイモ、小麦、大麦、トウモロコシ又はマメ科植物である請求項２に記載の方法。
【請求項１４】
でんぷん含有農産物から発酵生成物を製造するための方法であって、でんぷんをオリゴ糖へと加水分解する第一のでんぷん加水分解酵素、でんぷん又はオリゴ糖をグルコースへと加水分解する第二のでんぷん加水分解酵素、及びグルコースを発酵生成物に転換する微生物でもってでんぷん含有農産物スラリーを処理することを含む方法。
【請求項１５】
前記第一のでんぷん加水分解酵素はα−アミラーゼであり、前記第二のでんぷん加水分解酵素はグルコアミラーゼである請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記発酵生成物は、ワイン、食用酢、乳酸、クエン酸又はアミノ酸である請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
まず前記でんぷん含有農産物スラリーを前記α−アミラーゼでもって処理し、次にそこから不溶物質を除去してでんぷん加水分解物含有溶液を得て、その溶液をその後前記グルコアミラーゼでもって処理してグルコースリッチシロップを得て、最後にそのグルコースリッチシロップを前記微生物でもって処理して発酵生成物を得る請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記農産物は、米、タピオカ、モロコシ穀物、ジャガイモ、サツマイモ、小麦、大麦、トウモロコシ又はマメ科植物である請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記発酵生成物は、ワイン、食用酢、乳酸、クエン酸又はアミノ酸である請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記農産物は、米、タピオカ、モロコシ穀物、ジャガイモ、サツマイモ、小麦、大麦、トウモロコシ又はマメ科植物である請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
でんぷん含有農産物からトレハロースリッチシロップを生成するための方法であって、でんぷんをオリゴ糖へと加水分解する第一のでんぷん加水分解酵素、でんぷん又はオリゴ糖をマルトースへと加水分解する第二のでんぷん加水分解酵素、及びマルトースをトレハロースに転換する転換酵素でもってでんぷん含有農産物スラリーを処理することを含む方法。
【請求項２２】
前記第一のでんぷん加水分解酵素はα−アミラーゼであり、前記第二のでんぷん加水分解酵素はβ−アミラーゼである請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記転換酵素はトレハロースシンターゼである請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
まず前記でんぷん含有農産物スラリーを前記α−アミラーゼでもって処理し、次にそこから不溶物質を除去してでんぷん加水分解物含有溶液を得て、その溶液をその後前記β−アミラーゼでもって処理してマルトースリッチシロップを得て、最後にそのマルトースリッチシロップを前記トレハロースシンターゼでもって処理してトレハロースリッチシロップを得る請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記農産物は、米、タピオカ、モロコシ穀物、ジャガイモ、サツマイモ、小麦、大麦、トウモロコシ又はマメ科植物である請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記転換酵素はトレハロースシンターゼである請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記農産物は、米、タピオカ、モロコシ穀物、ジャガイモ、サツマイモ、小麦、大麦、トウモロコシ又はマメ科植物である請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
前記第二のでんぷん加水分解酵素及び前記転換酵素は同じ酵素である請求項２１に記載の方法。
【請求項２９】
でんぷん含有農産物からイソマルトースリッチシロップを生成するための方法であって、でんぷんをオリゴ糖へと加水分解する第一のでんぷん加水分解酵素、でんぷん又はオリゴ糖をマルトースへと加水分解する第二のでんぷん加水分解酵素、及びマルトースをイソマルトースに転換する転換酵素でもってでんぷん含有農産物スラリーを処理することを含む方法。
【請求項３０】
でんぷん含有農産物から調製されたでんぷん加水分解物含有溶液又はグルコースリッチシロップの中で微生物を成長させることを含む微生物の培養方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、でんぷん含有農産物を酵素又は微生物で処理することによりシロップ及び発酵生成物を調製する方法に関する。
関連出願に対する相互参照
本出願は、２００３年２月１９日に出願された米国暫定出願第６０／４４８，８１４号に対する優先権を主張するものであり、その内容が本明細書に参考として組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
でんぷん由来製品には糖及び発酵品が含まれる。
食品及び医薬品業界で使用されるさまざまな糖をでんぷんから調製することができる。一般に、でんぷんはまず、単調でかつコストの高いプロセスによりでんぷん含有農産物から単離される。さらに、このプロセスには、望ましくない化学物質の使用が関与する。
【０００３】
ワイン及び食用酢のような発酵品も、商業的価値の高いものである。伝統的な製造方法では、微生物によりでんぷんを発酵可能な糖に転換させる速度が遅いことから、長い発酵時間が必要である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって、でんぷん由来製品を調製するためのより優れた方法を開発する必要性が存在している。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
１つの態様では、本発明は、でんぷん含有農産物から単糖リッチシロップを生成するための方法を特徴とする。この方法には、でんぷんをオリゴ糖へと加水分解する第一のでんぷん加水分解酵素（例えば、α−アミラーゼ、イソアミラーゼ、プルラナーゼ及びアミロプルラナーゼ）、及びでんぷん又はオリゴ糖をグルコースへと加水分解する第二のでんぷん加水分解酵素（例えば、グルコースアミラーゼ）でもってでんぷん含有農産物スラリーを処理することが含まれる。でんぷん含有農産物スラリーは、グルコースをその他の単糖へと転換させる転換酵素（例えば、グルコイソメラーゼ）又は微生物（例えば、Moniliella PTA-2862）でも処理することができる。
【０００６】
本明細書において記載されている「単糖」という語は、糖及びその誘導体（例えば、糖アルコール）をはじめとする３〜７個の炭素を含有する糖類を意味する。単糖の例としては、グルコース、フルクトース、ソルボース、キシロース、マンニトール、エリスリトール、ソルビトール及びキシリトールが含まれるが、これらに限定されない。単糖リッチシロップは、３％を超える（例えば、５％又は１０％）単糖を含有してもよい。「転換酵素」という語は、１つの糖類をもう１つの糖類に転換する酵素を意味する。でんぷん加水分解酵素及び転換酵素は両方とも、微生物、動物又は植物のような種々の天然供給源から単離することができるし、組み換え技術によって調製することもできる。「でんぷん含有農産物」という語は、でんぷんを含有するあらゆる農産物を意味している。例としては、米、タピオカ、モロコシ穀物、ジャガイモ、サツマイモ、小麦、大麦、トウモロコシ及びマメ科植物が含まれるが、これらに限定されない。「でんぷん含有農産物スラリー」というのは、化学的に又はその他の形で加工されていないでんぷん含有農産物（例えば、製粉された米）を水中で撹拌することによって形成されるスラリーを意味する。
【０００７】
上述の方法を実施する一つの例は、以下のとおりである。すなわち、まず最初にα−アミラーゼでもってでんぷん含有農産物スラリーを処理し、次にスラリーから不溶物質を除去してでんぷん加水分解物含有溶液を得る。こうして得られた溶液を次に、グルコアミラーゼでもって処理してグルコースリッチシロップを得る。グルコースリッチシロップをさらにグルコースイソメラーゼでもって処理することによってフルクトースリッチシロップが得られる。あるいは、ソルボース、キシロース、マンニトール、エリスリトール、ソルビトール又はキシリトールに富んだシロップを得るべく、グルコースリッチシロップを微生物でもって処理することもできる。
【０００８】
別の態様において、本発明は、でんぷん含有農産物から発酵生成物を調製する方法を特徴とする。この方法には、でんぷんをオリゴ糖へと加水分解する第一のでんぷん加水分解酵素（例えば、α−アミラーゼ）、でんぷん又はオリゴ糖をグルコースへと加水分解する第二のでんぷん加水分解酵素（例えば、グルコアミラーゼ）、及びグルコースを発酵生成物に転換する微生物（例えば、Aspergillus oryzae）でもってでんぷん含有農産物スラリーを処理することが含まれる。「発酵生成物」という語は、発酵によりグルコースから調製されるあらゆる生成物を意味する。例としては、ワイン、食用酢、乳酸、クエン酸及びアミノ酸が含まれるが、これらに限定されない。この方法を実践するためには、まず第一にでんぷん含有農産物スラリーをα−アミラーゼでもって処理し、次にスラリーから不溶物質を除去してでんぷん加水分解物含有溶液を得て、その溶液をその後グルコアミラーゼでもって処理してグルコースリッチシロップを得て、最後にそのシロップを微生物でもって処理して発酵生成物を得る。
【０００９】
さらに別の態様では、本発明は、でんぷん含有農産物からトレハロースリッチシロップを生成するための方法を特徴とする。この方法には、でんぷんをオリゴ糖へと加水分解する第一のでんぷん加水分解酵素（例えば、α−アミラーゼ）、でんぷん又はオリゴ糖をマルトースへと加水分解する第二のでんぷん加水分解酵素（例えば、β−アミラーゼ）、及びマルトースをトレハロースに転換する転換酵素（例えば、トレハロースシンターゼ）でもってでんぷん含有農産物スラリーを処理することが含まれる。第二のでんぷん加水分解酵素及び転換酵素は同じ酵素であり得る。トレハロースリッチシロップは、０．３％を超える（例えば、０．５％）トレハロースを含有してもよい。この方法を実践するためには、まずα−アミラーゼでもってでんぷん含有農産物スラリーを処理し、次にスラリーから不溶物質を除去してでんぷん加水分解産物含有溶液を得て、その溶液をその後β−アミラーゼでもって処理してマルトースリッチシロップを得て、最後にそのシロップをトレハロースシンターゼでもって処理してトレハロースリッチシロップを得る。
【００１０】
さらに別の態様では、本発明は、でんぷん含有農産物からイソマルトースリッチシロップを調製するための方法を特徴とする。この方法には、でんぷんをオリゴ糖へと加水分解する第一のでんぷん加水分解酵素（例えば、α−アミラーゼ）、でんぷん又はオリゴ糖をマルトースへと加水分解する第二のでんぷん加水分解酵素（例えば、β−アミラーゼ）、及びマルトースをイソマルトースに転換する転換酵素（例えば、α−イソマルトシルトランスフェラーゼ）でもってでんぷん含有農産物スラリーを処理することが含まれる。イソマルトースリッチシロップは０．５％を超えるイソマルトースを含有してもよい。
【００１１】
また本発明の範囲には、微生物を培養するための方法が含まれる。この方法には、本明細書に記載されている方法によりでんぷん含有農産物から調製されたでんぷん加水分解物含有溶液又はグルコースリッチシロップの中で微生物を成長させることが含まれる。
【００１２】
本発明の一以上の実施形態の詳細が以下に記されている。本発明のその他の特徴、目的及び利点は、明細書及び請求の範囲から明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明は、でんぷん含有農産物を酵素又は微生物で処理することによりシロップ及び発酵生成物を調製する方法に関する。これらの酵素及び微生物は、商業上の供給源から購入することもできるし、当該技術分野において既知の方法で調製することもできる。
【００１４】
一例としては、まず第一に、熱安定α−アミラーゼでもって高温にてでんぷん含有農産物スラリーを処理してでんぷんを可溶性加水分解産物に加水分解し、タンパク質を凝固させることができる。スラリーから不溶物質（例えば、凝固したタンパク質）を除去した後でんぷん加水分解物を含有する溶液を得ることができる。でんぷん加水分解物は、主としてオリゴ糖を含有している。このようにして得られた溶液を次にグルコアミラーゼで処理して、グルコースリッチシロップを得ることができる。シロップ中のグルコースの収量は、温度、ｐＨ、反応時間、上記工程で使用される酵素の性質及び量によって変動しうる。
【００１５】
フルクトースリッチシロップを得るべく、グルコースリッチシロップをさらにグルコースイソメラーゼでもって処理することもできる。フルクトースリッチシロップは、飲料、焼成又は缶詰製品、及び乳製品の甘味料として使用することができる。グルコースリッチシロップ又はフルクトースリッチシロップを微生物でもって処理することによって別の単糖を得ることもできる。例えば、リン（Ｌｉｎ）らによる米国特許第６，４５５，３０１号及びオジャモ（Ｏｊａｍｏ）らによる米国特許第６，６０２，６９１号を参照されたい。あるいは、グルコースリッチシロップを微生物でもって処理して、ワイン、食用酢、乳酸、クエン酸又はアミノ酸といった発酵生成物を得ることもできる。例えば、米から調製されたグルコースリッチシロップは、日本酒の製造に直接使用することもできるし、赤ワインの製造に役立つようにブドウと混合してもよい。アミノ酸を製造するためには、一以上の窒素源がグルコースリッチシロップ中に存在するべきである。例えば、グルコースリッチシロップに尿素を加えることができる。Brevibacterium divaricatumバクテリアを用いてグルコースから１−グルタミン酸を製造することができる。例えば、スー（Ｓｕ）らによる日本農芸化学会誌２４巻第２号（１９６０年）１４０〜１４６頁を参照されたい。
【００１６】
マルトースリッチシロップを得るべく、上述のでんぷん加水分解物含有溶液をさらにβ−アミラーゼでもって処理することもできる。マルトースリッチシロップをその後トレハロースシンターゼでもって処理することによって、トレハロースリッチシロップを得ることができる。トレハロースリッチシロップは、食品の原料として直接使用することができる。また、医薬品用にトレハロースリッチシロップから高純度トレハロースを単離することもできる。他の二糖類（例えば、イソマルトース）に富んだシロップを得るべく、他の転換酵素（例えば、α−イソマルトシルトランスフェラーゼ）でもってマルトースリッチシロップを処理することも可能である。あるいは、β−アミラーゼ及びトレハロースシンターゼの両方の機能を有する酵素でもってでんぷん加水分解物含有溶液を処理することによって、でんぷん加水分解物含有溶液から直接トレハロースリッチシロップを得ることもできる。この酵素は、通常の組み換え技術により調製可能である。
【００１７】
上記した反応は、連続的（固定された酵素又は微生物を含んだ反応器中で）又は不連続的（バッチ処理によって）のいずれでも行うことができる。本発明の方法を実施するために、遊離した酵素又は微生物、あるいは固定された酵素又は微生物のいずれを使用してもよい。酵素又は微生物を順次に又は同時に加えることもできる。異なる酵素又は微生物は最適な活動条件の下で別々に用いられることが好ましい。
【００１８】
上述の不溶物質は、シロップ又は発酵生成物が形成される前又は後のいずれでも除去可能である。除去プロセスは、ろ過、遠心分離及び傾瀉（decantation）により実施できる。
【００１９】
本発明の方法により調製される糖及び発酵生成物の収量及び組成は、高速液体クロマトグラフィ及びガスクロマトグラフィのような適切な分析方法によって測定することができる。
【００２０】
上記のようにして得られたでんぷん加水分解物含有溶液及びグルコースリッチシロップは、微生物を成長させるための培地として使用することができる。これらは、そのままで使用することもできるし、まず乾燥させてから使用前にその他の成分を含有する溶液中に溶解させることもできる。
【００２１】
以下の具体的な例は、単なる例示を目的とするものとみなされるべきであって、開示の残りの部分をいかなる形であれ限定するものではない。さらなる詳述がなくとも、当業者であれば、本明細書中の記述に基づき本発明を最大限に利用することができると考えられる。本明細書で引用するすべての刊行物は、その全体が参考として本明細書中に組み込まれている。
【実施例】
【００２２】
実施例１  グルコースリッチシロップの調製
Tainung６７品種の製粉済みの米（Oryza sativa L.）を台中農業実験局［Taichung Agricultural Experimental Station］（彰化、台湾）から入手した。熱安定α−アミラーゼ（１２０Ｕ／ｇ、１．２０ｇ／ｍＬ；ＴＥＲＭＡＭＹＬ１２０Ｌ）をノボノルディスクバイオケム［Novo Nordisk Biochem］（Bagsvaerd、デンマーク）から入手した。Rhizopus sp.グルコアミラーゼ（５，０００単位／ｇ  固形物）をシグマケミカル社（セントルイス、ミズーリ州）から入手した。グルコース、フルクトース、トレハロース及びエタノールの標準標本をシグマケミカル社から入手した。得られたシロップ中のグルコースの濃度は、Thermo Hyoersil HS APS2カラム（粒径、５μｍ；２５０×４．６ｍｍ）上で１ｍＬ／分の流速で高速液体クロマトグラフィ（ＢＩＳＣＨＯＦＦ  ＲＩ検出器を備えた日立Ｌ６２５０  ＨＰＬＣシステム）によって測定した。移動相は、アセトニトリル／蒸留水／ギ酸（８０：２０：１）であった。グルコースの存在は、保持時間を標準標本のものと比較することによって確認された（例えば、グルコースについては７．７５分、マルトースについては１２．２１分、そしてトレハロースについては１３．７分）。
【００２３】
脱イオン水中に１０％の米粉（＞１００メッシュ）を含有するスラリーを熱安定α−アミラーゼ（乾燥固形分０．１％）と９０℃で完全に混合した。でんぷんを可溶性加水分解物へと加水分解し、これをアミロース−ヨウ素複合体の形成に基づく比色分析方法によってモニタリングした。米粉中のすべてのタンパク質をこのプロセスで基本的に熱凝固させて、でんぷん加水分解物溶液から沈殿させた。沈殿物をろ過により収集し、乾燥させて高タンパク質米粉を得た。上述の条件下で１ｇの乾燥米から、約０．９ｇの可溶性でんぷん加水分解物と約０．１ｇの高タンパク質米粉を生成した。
【００２４】
でんぷん加水分解物（主としてオリゴ糖混合物を含有、ＤＰ≧７）をさらにRhizopus sp.グルコアミラーゼで処理して、高グルコースシロップを生成した。具体的には、可溶性でんぷん加水分解産物にRhizopus sp.グルコアミラーゼ（０．５ｍｇ／ｍＬ）を加え、５５℃でインキュベートした。グルコアミラーゼの非存在下では、溶液のグルコース濃度は１５０分後に１１ｍｇ／ｍＬのままであった。これとは対照的に、グルコアミラーゼの存在下では、グルコース濃度は６０分で１０５ｍｇ／ｍＬに急速に増加し、１２０分で最大濃度１１４ｍｇ／ｍＬに達した。
【００２５】
実施例２  フルクトースリッチシロップの調製
グルコースイソメラーゼ（SWEETZYMEE）は、ノボノルディスクバイオケム（Bagsvaerd、デンマーク）から入手することができる。この実施例で使用されるその他の材料の供給源及び計器の条件は、上記実施例１で記述されている。フルクトースリッチシロップは、グルコースイソメラーゼを用いて上記実施例１で得られたグルコースリッチシロップを処理することによって調製される。フルクトースの濃度は、グルコースと同じ方法で測定される。
【００２６】
実施例３  トレハロースリッチシロップの調製
シグマケミカル社（セントルイス、ミズーリ州）から、サツマイモ由来Ｉ−Ｂ型のβ−アミラーゼ（硫酸アンモニウム懸濁液、９８０単位／ｍｇのタンパク質）を入手した。組み換えDeinococcus radioduransトレハロースシンターゼを、Escherichia coli ＢＬ２１（ＤＥ３）から異種発現させた。この実施例中で使用されるその他の材料の供給源及び計器の条件は、上記実施例１で記述されている。トレハロースの濃度は、グルコースと同じ方法で測定された。
【００２７】
上記で得られたでんぷん加水分解物（マルトース濃度：３４ｍｇ／ｍＬ）を５５℃で１０分間、サツマイモ由来のβ−アミラーゼ（２５μｇ／ｍＬ）を用いて糖化して、マルトースリッチシロップ（マルトース濃度：７７ｍｇ／ｍＬ）を得た。このようにして得られたシロップを、１５℃でDeinococcus radiodurans由来の組み換え型トレハロースシンターゼ（７５μｇ／ｍＬ）でさらに処理した。トレハロースの濃度は、６０分で１２ｍｇ／ｍＬに達した。これとは対照的に、β−アミラーゼの処理がない場合、トレハロースの濃度は同じ時間の間わずか５ｍｇ／ｍＬにすぎなかった。換言すると、マルトース（トレハロースのための基質）を富化したβ−アミラーゼ処理は、予期せぬことに、トレハロースの収量を２．４倍増大させた。
【００２８】
実施例４  日本酒の調製
Aspergillus oryzae CCRC30884をバイオリソース・コレクション・アンド・リサーチ・センター［Bioresource Collection and Research Center］（新竹、台湾）から購入した。この実施例で使用されるその他の材料の供給源及び計器の条件は、特に断りのない限り、上記実施例１に記述されている。
【００２９】
Aspergillus oryzae（１０ｍｇ／ｍＬ）を、３０℃で嫌気性条件下で、実施例１で得られたグルコースリッチシロップ（グルコース濃度：１０５ｍｇ／ｍＬ）に加えた。発酵生成物中のエタノール濃度を、ガスクロマトグラフィで測定した。水素炎イオン化検出器を備えた日立ガスクロマトグラフＧ−３０００型で定量分析を実施した。発酵により生成したエタノールを、１．０ｍＬ／分の流量でキャリヤーガスとして窒素を用いてＲＴＸ−１架橋１００％ジメチルポリシロキサン毛管カラム（３０ｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ；ＲＥＳＴＥＫ社、ベルフォンテ、ペンシルバニア州）上で分離した。スプリット比は１：１０であった。インジェクタ及び水素炎イオン化検出器の温度は、両方とも２００℃であった。カラム温度は９０℃で６分間保持された。エタノールの保持時間は２．２８分であった。ピーク面積を、日立積分器（Ｄ−２０００型）を用いて計算した。
【００３０】
結果は、エタノール濃度が予想外に発酵後わずか３日で１０．５％に増大し、わずか５日で１３．５％に達したことを示している。これとは対照的に、５日後同じ発酵条件下でもとのでんぷん加水分解産物（グルコース濃度１１ｍｇ／ｍＬ）からはわずか１％のエタノールしか生成されなかった。
【００３１】
その他の実施形態
本明細書で開示された特徴はすべて、いかなる組合せで組合わされてもよい。本明細書で開示されている各々の特徴は、同じ、同等又は類似の目的に役立つ代替の特徴により置き換えられてもよい。このように、相反する明示的記述のない限り、開示されている各々の特徴は、包括的な一連の同等又は類似の特徴の一例にすぎない。
【００３２】
当業者であれば、上記の記述から、本発明の本質的な特徴を容易に確認することができるし、その精神及び範囲から逸脱することなく、さまざまな用途及び条件に適合させるように本発明のさまざまな変更及び修正をなすことができる。したがって、その他の実施形態もまた特許請求の範囲の中に含まれる。
【外国語明細書】
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2004248673.tif 000003
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