(57)【要約】【課題】　電気化学的な分析物決定アッセイにおける媒介物質安定化型の試薬組成物およびこれらの使用方法を提供する。【解決手段】　本発明の試薬組成物は一定の酵素、一定のレドックス媒介物質および一定の媒介物質安定化用の緩衝剤を含有している。随意的に、この試薬組成物はさらに一定の湿潤化剤、洗浄剤、酵素補助因子およびこれらの組み合わせ物を含むことができる。さらに、本発明の試薬組成物を含む各種の電気化学的試験片、当該試薬組成物を含有しているシステムおよびキット、ならびに、当該試薬組成物を分析物決定アッセイにおいて使用するための方法も提供されている。本発明はグルコース濃度決定の用途を含む種々の異なる用途において有用であることが分かっている。【選択図】　　　　図１
2004101531.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
　一定の試薬組成物において、
（ａ）一定の酵素、
（ｂ）一定のレドックス媒介物質
（ｃ）前記レドックス媒介物質を保管して安定化するために十分な一定の量で存在している一定の媒介物質安定化用の緩衝剤を含有している試薬組成物。
【請求項２】
　請求項１に記載の一定の試薬組成物を含む電気化学的セル。
【請求項３】
　請求項２に記載の一定の電気化学的セルを含む電気化学的試験片。
【請求項４】
　一定の電気化学的試験片を作成するための方法において、
　請求項１に記載の一定の試薬組成物を使用している方法。
【請求項５】
　一定のサンプル中における一定の分析物の濃度を決定するための方法において、
（ａ）請求項２に記載の一定の電気化学的セルに前記分析物を供給する工程、
（ｂ）前記セルにより一定の電気的な信号を検出する工程、および
（ｃ）前記検出した信号を前記サンプル中における分析物の濃度に関連付ける工程を含む方法。
【請求項６】
　一定の生理学的サンプル中における一定の分析物の濃度を決定することにおいて使用するためのキットにおいて、
（ａ）請求項３に記載の一定の電気化学的試験片、および
（ｂ）（ｉ）一定のサンプル入手要素、および
　　　（ｉｉ）一定の分析物標準物、の内の少なくとも一つを含むキット。
【請求項７】
　一定のシステムにおいて、
（ａ）請求項３に記載の一定の電気化学的試験片、および
（ｂ）前記試験片を読み取るための一定の計器を含むシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
　本発明の分野は分析物の検出であり、特に、電気化学的な分析物決定、さらに、血液分析物の電気化学的決定である。
【背景技術】
【０００２】
　例えば、血液または血液由来の各種生成物の物理学的な流体またはサンプルが今日の社会においてその重要性を高めつつある。各種の分析物アッセイは臨床実験室用の試験、家庭用の試験等を含む種々の用途において有用であることが分かっており、これらの試験の結果は種々の病状の診断および管理において傑出した役割を果たしている。関連の分析物は糖尿病の管理におけるグルコース、コレステロール等を含む。このように高まりつつある分析物検出の重要性に応じて、種々の分析物検出用のプロトコルおよび臨床用および家庭用の両方のための装置がこれまでに開発されている。
【０００３】
　分析物検出のために用いられている一例の方法は一定の電気化学的方法である。このような方法において、一定の水性の液体サンプルが少なくとも２種類の電極、すなわち、一定の基準電極および作用電極を有する一定の電気化学的セルの中の反応領域内に入れられ、この場合に、上記の各電極は一定のインピーダンスを有しており、この値がこれらの電極を一定の電流測定に適したものにしている。分析する成分は一定の電極と自然に直接的に反応するか、一定のレドックス（酸化還元）試薬と直接的または間接的に反応してその分析する成分、すなわち、分析物の濃度に相当する一定の量で一定の酸化可能な（または還元可能な）物質を形成する。その後、存在しているこの酸化可能な（または還元可能な）物質の量が電気化学的に推定されて、初期のサンプルにおいて存在している分析物の量に関連付けられる。
【０００４】
　分析物検出に対する上記のような電気化学的手法の多くにおいて、一定の酵素成分および一定の媒介物質成分を含む一定の分析物酸化信号生成システムが用いられており、この酵素成分は関連の分析物を酸化した後に一定の電子を一定の媒介物質に移し、この媒介物質がさらにその電子を上記電気化学的セル内の一定の電極に移すことにより、一定の電気的な信号が発生し、この信号により上記分析物の濃度が決定できる。
【０００５】
　各種の電気化学的試験片において、これらの試験片は一般的にそれぞれの使用の前の一定の時間において製造される。さらに、これらの製造と使用との間に、これらの試験片は保管される。この保管期間の間に、一定の割合の上記媒介物質がその還元された形態に変換する可能性がある。このような状況において、試験片が最終的に用いられる場合に、一部の媒介物質が既に還元されているために、不正確な結果を得る可能性がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
　従って、上記媒介物質の保管が安定化される電気化学的な試薬配合物の開発に関心が寄せられている。本発明はこの要望を充たしている。
【０００７】
関連の文献
　米国特許特許文書：第５，７２３，２８４号、同第５，８３４，２２４号、同第５，９４２，１０２号、同第５，９７２，１９９号、同第５，９９７，８１７号、同第６，０５９，９４６号、同第６，０８３，７１０号、同第６，１２１，００９号、同第６，１３４，４６１号、同第６，１７９，９７９号、同第６，１９３，９７３号、および同第６，２８４，１２５号、ならびに、その他の特許文書：ＰＣＴ国際公開第ＷＯ９９／４９３０７号、同第ＷＯ９７／１８４６５号、同第ＷＯ０１／５７５１０号、同第ＷＯ０１／５７２３８号、同第ＷＯ０２／４８７０７号、同第ＷＯ０２／５０６０９号、欧州特許（ＥＰ）第０９６９０９７Ａ２号、日本国特開平０９−１４０３７８号、および英国特許第２３０４６２８号。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
　電気化学的分析物決定アッセイにおける媒介物質安定化型の試薬組成物およびこれらの使用方法が提供されている。本発明の試薬組成物は一定の酵素、一定のレドックス媒介物質および一定の媒介物質安定化用の緩衝剤を含有している。随意的に、この試薬組成物は湿潤剤、洗浄剤、酵素補助因子およびこれらの組み合わせ物の１種類以上をさらに含むことができる。さらに、本発明の試薬組成物を含有している電気化学的試験片、当該試薬組成物を含有しているシステムおよびキット、ならびに、当該試薬組成物を分析物決定アッセイにおいて使用するための方法も提供されている。本発明はグルコースの濃度決定の用途を含む種々の異なる用途において有用であることが分かっている。
【発明の効果】
【０００９】
　従って、本発明によれば、電気化学的分析物決定アッセイにおける媒介物質安定化型の試薬組成物およびこれらの使用方法が提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
　電気化学的な分析物決定アッセイにおける媒介物質安定化型の試薬組成物およびこれらの使用方法が提供されている。本発明の試薬組成物は一定の酵素、一定のレドックス媒介物質および一定の媒介物質安定化用の緩衝剤を含有している。随意的に、この試薬組成物は湿潤剤、洗浄剤、酵素補助因子およびこれらの組み合わせ物の１種類以上をさらに含むことができる。さらに、本発明の試薬組成物を含有している電気化学的試験片、当該試薬組成物を含有しているシステムおよびキット、ならびに、当該試薬組成物を分析物決定アッセイにおいて使用するための方法も提供されている。本発明はグルコースの濃度決定の用途を含む種々の異なる用途において有用であることが分かっている。
【００１１】
　本発明をさらに説明する前に、本発明が以下において説明されている本発明の特定の各実施形態に限定されないことが理解されるべきであり、これら特定の各実施形態の変形例もまた添付の特許請求の範囲内において作成可能であり、当該範囲に依然として含まれる。また、用いられている技術用語が本発明の特定の各実施形態を説明することを目的としていて、これらを限定することを目的としていないことも理解されるべきである。すなわち、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲により確立される。
【００１２】
　本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数の形態の「一定のまたは一例の（「a」または「an」）および「そのまたはこの（「the」）」は、その内容が特別に明示しない限り、複数の表現も含む場合がある。特別に定めない限り、本明細書において用いられている全ての技術的および科学的な用語は本発明が属している技術分野における通常の熟練者において一般的に理解されている意味と同一の意味を有する。
【００１３】
　一定の値の範囲が与えられる場合に、その範囲およびそれ以外に述べられているあらゆる範囲の上限値と下限値との間における各中間の値、または上記述べられている範囲内の各中間の値は、その内容が特別に明示しない限り、その下方の制限値の１／１０の単位まで、本発明に含まれることが理解されると考える。これらの比較的に小さい範囲における上限値および下限値はそれぞれの比較的に小さい範囲内に独立して含まれることが可能であり、上記述べられている範囲において特定的に除外される制限値として本発明の範囲に含まれることもある。また、述べられている範囲が上記制限値の一方または両方を含む場合に、これらの含まれている制限値のいずれかまたは両方を除外する範囲もまた本発明に含まれる。
【００１４】
　特別に定めない限り、本明細書において使用されている全ての技術的および科学的な用語は本発明が属する技術分野における通常の熟練者において一般的に理解されている意味と同一の意味を有する。本明細書において記載されている方法、装置および材料に対して類似しているか等価である任意の方法、装置および材料も本発明の実施または試験において使用可能であるが、好ましい方法、装置および材料が以下において説明されている。
【００１５】
　本明細書において述べられている全ての刊行物または公開物はこれらの刊行物または公開物において記載されている各種の細胞系、ベクター、および方法論を記載および開示することを目的として本明細書に参考文献として含まれており、これらの材料および方法は本明細書において記載されている発明に関連して使用可能である。
【００１６】
　上記においてまとめられているように、本発明は電気化学的分析物検出の用途における媒介物質安定化型の電気化学的試薬組成物およびこれらの使用方法を提供している。本発明をさらに説明することにおいて、本発明の試薬配合物が最初に詳細に説明されており、これに続いて、本発明の配合物を含有している電気化学的試薬試験片、および一定のサンプル中における一定の分析物の存在を、例えば、定量的に、電気化学的に検出するために上記の配合物および試験片を使用する方法が概説されている。最後に、本発明による典型的なシステムおよびキットの概説が記載されている。
【００１７】
媒介物質安定化型試薬組成物
　上記においてまとめられているように、本発明は媒介物質安定化型の電気化学的試薬組成物を提供している。本発明の電気化学的な試薬組成物は、例えば、試験片等の電気化学的な分析物検出装置において有用であることが分かっている各種の組成物であり、典型的なレドックス（酸化還元）試薬組成物である。媒介物質安定化型の試薬組成物とは、この組成物における媒介物質成分が一般的な保管条件下において一定の延長された期間にわたり一定の還元された形態に変換しない一定の組成物を意味する。さらに、一般的な保管条件とは、約−２０乃至約５５℃、通常的に約５乃至約４０℃の範囲の一定温度および約５乃至約９０％、通常的に約１０乃至約６０％における条件を意味する。また、本発明の媒介物質安定化型の試薬組成物は約１８ヶ月よりも長い範囲の保管期間にわたり安定である。
【００１８】
　本発明による主体の媒介物質安定化型の電気化学的試薬組成物は少なくとも以下の成分、すなわち、一定の酵素、一定のレドックス媒介物質および一定の媒介物質安定化用の緩衝剤を含有している。本発明のレドックス試薬組成物はさらに各種の湿潤剤、洗浄剤、酵素補助因子等を含む１種類以上の付加的な成分を含有できる。これらの成分のそれぞれが以下において別々にさらに詳細に説明されている。
【００１９】
酵素成分
　本発明の試薬組成物における酵素成分は、多くの実施形態において、一定の酵素または関連の分析物を協働して酸化するように作用する複数の酵素である。換言すれば、この酵素要素は、検出される一定の電気化学的な信号を発生可能にする、単一の分析物酸化酵素または関連の分析物を協働して酸化するように作用する２種類以上の酵素の集合体により構成されている。このような関連の酵素は各種のオキシダーゼ、デヒドロゲナーゼ、リパーゼ、キナーゼ、ジアホラーゼ、キノンタンパク質等を含む。
【００２０】
　一定の反応において選択される酵素はその酵素を含む電気化学的試験片が検出するように設計されている特定の分析物により決まる。代表的な酵素はグルコース・オキシダーゼ、グルコース・デヒドロゲナーゼ、コレステロール・エステラーゼ、コレステロール・オキシダーゼ、リポタンパク質リパーゼ、グリセロール・キナーゼ、グリセロール−３−ホスフェート・オキシダーゼ、ラクテート・オキシダーゼ、ラクテート・デヒドロゲナーゼ、ピルベート・オキシダーゼ、アルコール・オキシダーゼ、ビリルビン・オキシダーゼ、ウリカーゼ等を含む。
【００２１】
レドックス媒介物質
　上記試薬組成物の別の成分は一定のレドックス媒介物質であり、この物質は１種類以上の物質または薬剤を含むことができる。この媒介物質は上記酵素（分析物の酸化中にその分析物から１個以上の電子を取り出す）から一定の電極への電子の移動を容易にする一定の媒介として作用する。フェリシアニド、フェナジン・エトサルフェート、フェナジン・メトサルフェート、フェニレンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル・フェニレンジアミン、１−メトキシ−フェナジン・メトサルフェート、２，５−ジメチル−１，４−ベンゾキノン、２，６−ジメチル−１，４−ベンゾキノン、２，５−ジクロロ−１，４−ベンゾキノン、フェロセン誘導体、オスミウム・ビピリジル錯体、ルテニウム錯体等を含む当該技術分野において知られている種々の異なる媒介物質が使用可能である。なお、多くの実施形態において、上記レドックス媒介物質はフェリシアニドである。
【００２２】
媒介物質安定化用の緩衝剤成分
　上記試薬組成物の別の成分は一定の媒介物質安定化用の緩衝成分である。この本発明の媒介物質安定化用の緩衝成分は、１種類以上の、例えば、２種類、３種類、４種類またはそれ以上の別々の緩衝剤により構成することができ、この場合に、この緩衝用の成分は、上記媒介物質が使用前の、例えば、保管中において、仮にあるとしても、還元されることがほとんどないように、上記組成物を乾燥した形態で保管している間にその媒介物質を安定化する。一定の緩衝剤は、当該緩衝剤の存在下であれば、一定の媒介物質を安定化すると考えられ、仮にあるとしても、その媒介物質は、上述したような、一定の保管期間にわたりその還元された形態にほとんど変換しない。適当な緩衝剤は、以下における実験の部分において説明されている各種のアッセイにより決定されているように、一定の電気化学的試験におけるバックグラウンド信号を経時的に増加させない各種の緩衝剤である。なお、このバックグラウンド信号は分析物を含まないサンプルを一定の電気化学的試験用のシステムに導入した場合に得られる信号である。
【００２３】
　上記緩衝用の成分は、アッセイするサンプルに上記の試薬組成物を混合することにより調製される一定の流体の反応混合物中に存在する場合に、その反応混合物のｐＨ値を一定の許容可能な範囲に維持する一定の成分であり、多くの実施形態において、この緩衝用の成分は約４．０乃至８．０、例えば、約５．０乃至約７．５、例えば、約５．５乃至約７．０の一定の値の範囲にその反応混合物のｐＨ値の範囲を維持する。
【００２４】
　上記緩衝用の成分における１種類以上の緩衝剤は本発明の各種試薬配合物と共に調製される反応混合物において上記のｐＨ値の範囲を生じる一定のｐＫａの値をそれぞれ有している。適当な緩衝剤は一般的に約４乃至約８、例えば、約４．５乃至約７．５であり、約５．０乃至７．０を含み、約５．５乃至７．０も含むｐＫａの値を有している。特定の種類の緩衝剤は２個以上のｐＫａの値を有することができ、このような種類の物質も、それぞれのｐＫａの値の少なくとも１個が上記の範囲内に含まれる場合に、使用可能である。
【００２５】
　本発明の試薬組成物において用いられている上記の緩衝剤は二価の金属カチオン、例えば、Ｃａ2+、Ｍｇ2+等に対する結合性の親和力を、仮にあるとしても、ほとんど有していないことが必要であり、これらは二価の金属カチオンに対して多座配位子による結合性の複合体を生成する傾向が低い。二価の金属カチオンに対する一定の緩衝剤の結合性の親和力が同一の二価の金属カチオンに対する上記反応混合物中のあらゆる酵素／補助因子の複合体の結合性の親和力よりも小さい場合に、この緩衝剤は二価のカチオンに対する結合性の親和力が低いと見なされ、この場合に、適当な緩衝剤の結合性の親和力は同一の二価の金属カチオンに対する上記反応混合物中のあらゆる酵素／補助因子の複合体の結合性の親和力よりも一般的に少なくとも約２倍、通常的に少なくとも約５倍、さらに通常的に少なくとも約１０倍、例えば、２５倍、５０倍等である。アナリ・ジ・キミカ（Annali di Chimica）、７３巻、（１９８３年）、ｐ．６１９において記載されているアッセイにより測定した場合の、二価の金属カチオン、特にＣａ2+、に対する適当な緩衝剤の複合体化または錯体化の適当な定数は一般的に約１５００モル-1ｄｍ3 を超えず、通常的に約１００モル-1ｄｍ3 を超えず、さらに通常的に約５モル-1ｄｍ3 を超えない。
【００２６】
　特定の実施形態において、上記の緩衝剤は小形の有機分子である。この小形とは、本発明のこの物質の分子量が約５，０００ダルトンを超えず、一般的に約２，５００ダルトンを超えず、さらに一般的に約１，０００ダルトンを超えないことを意味しており、多くの実施形態において、この緩衝剤の分子量は約５０乃至７５０ダルトン、例えば、約７５乃至５００ダルトンの範囲である。
【００２７】
　一例の実施形態において、上記緩衝剤は各種のポリカルボン酸である。このポリカルボン酸とは、上記緩衝剤が２種類以上のカルボン酸の官能性部分を含むことを意味しており、この場合に、これらの異なるカルボン酸の官能性部分の数は約２乃至約１０個、例えば、約２乃至約８個であり、約２乃至約６個を含む範囲にできる。本発明の緩衝剤におけるこのようなカルボン酸の基またはその官能性部分は各種の脂肪族、脂環式、芳香族およびヘテロ環式の構造を含む多数の異なる構造に結合できる。このような２種類以上のカルボン酸の基の存在により、その緩衝剤に所望の範囲内の少なくとも１個のｐＫａの値を賦与するという有益的な作用を有することができる。
【００２８】
　多くの実施形態において、上記本発明のポリカルボン酸型の緩衝剤における２種類以上のカルボン酸の基は、Ｃａ2+等のような、各種の二価の金属イオンの多座配位子による結合を立体的に妨げるように構成されている。例えば、シス形の各基の互いに対する移動を許さない一定の安定な主鎖、例えば、エチレンの主鎖等、における一定のシス形の配置に配置されている２種類以上のカルボン酸の基を有する緩衝剤が関連しており、この場合に、この安定な主鎖は一定の大形の構造体、例えば、一定の芳香族環等、の一部分にすることができる。
【００２９】
　特定の実施形態において、上記の緩衝剤は以下の構造式により示される。
【化１】
2004101531.tif 000003
この場合に、Ｒ1 およびＲ2 はそれぞれ独立してＨまたは１個以上の炭素原子を含む有機性の部分であり、これらは線形または分枝状のいずれでもよく、さらに、１個以上のヘテロ原子により置換されていてもよく、この場合に、Ｒ1 およびＲ2 は一体になって一定の環状構造、例えば、芳香族環構造等、を形成していてもよい。
【００３０】
　関連の特定のポリカルボン酸はメリト酸、シトラコン酸、マレイン酸等を含むがこれらに限らない。
【００３１】
　上記の緩衝剤においては、これらの緩衝剤はそれぞれの遊離の酸またはこれらの塩、またはこれらの両方として上記本発明の試薬配合物中に存在できる。
【００３２】
　本発明の上記緩衝用の成分の特徴はこの緩衝用の成分を作成している各物質が、上述したような、上記媒介物質の安定化能力を賦与するために十分な一定の量で存在していることである。上記本発明の試薬配合物の流体組成物において、その緩衝用の成分の濃度は一般的に約０．１乃至約１０００ｍＭ、例えば、約０．５乃至５００ｍＭの範囲である。特定の実施形態において、上記緩衝用の成分は、例えば、約０．５乃至約２５０ｍＭ、通常的に約０．５乃至約１００ｍＭのような、一定の低い濃度で存在している。さらに、特定の実施形態において、上記緩衝用の成分は、例えば、約５０乃至５００ｍＭのような、一定の比較的に高い濃度で存在している。上記の試薬組成物が、例えば、以下においてさらに詳細に説明されているような一定の電気化学的試験片の中に存在できるように、一定の乾燥状態の試薬配合物である場合に、この乾燥状態の組成物中に存在している緩衝用の成分の量は一般的に約０．０１乃至約４０．００％（重量／重量）、通常的に約１乃至約１０％（重量／重量）の範囲である。
【００３３】
随意的な成分
　上述したように、上記試薬組成物はさらに以下の付加的な成分、すなわち、一定の湿潤剤、洗浄剤、補酵素、酵素補助因子、安定化剤、粘度変性剤またはこれらの組み合わせ物の１種類以上を含むことができる。
【００３４】
湿潤剤および洗浄剤
　一定の洗浄剤との組み合わせにおける一部の実施形態において、一定の湿潤剤を上記試薬組成物に添加することにより、一定の電気化学的試験片におけるその試薬組成物の均一な塗布を容易にすることができる。このような物質の複数の１種類以上の組み合わせも使用可能である。これらの使用される試薬はアッセイの各試薬の溶解性を改善すると共に、一定の毛細管充填型試験片の吸引特性を高めることができる。これらの物質は、例えば、各種のポリマー、消泡剤、および界面活性剤等のような、当業界において知られている物質を含む。関連の界面活性剤／洗浄剤の代表的な種類はトリトン（Tritons）、マコール（Macols）、テトロニック（Tetronics）、シルベット（Silwets）、ゾニル（Zonyls）、およびプルロニック（Pluronics）を含むがこれらに限らない。さらに、適当な物質はプルロニック材料であり、これらはポリエチレン・オキシドおよびポリプロピレン・オキシドのブロック・コ−ポリマーである。プルロニック材料の例は良好な湿潤性を有しているプルロニックＰ１０３および良好な洗浄性を有しているプルロニックＦ８７プリルを含む。これらのプルロニックＰ１０３およびＦ８７プリルは共に８０℃よりも高い一定の曇り点温度を有しており、このことはこの特性が上記の乾燥処理中における組成物の相変化を回避するために好ましい。
【００３５】
酵素の補酵素
　本発明の配合物における酵素成分を活性化する補酵素もまた望まれる場合に上記試薬組成物に添加することができる。関連の補酵素の例はピロロキノリン・キノン（ＰＱＱ）である。関連の別の補助因子は、一定の試験試薬に供給される酵素の種類に応じて、ニコチンアミド・アデニン・ジヌクレオチド（ＮＡＤ）、フラビン・アデニン・ジヌクレオチド（ＦＡＤ）、シトクローム等を含むがこれらに限らない。
【００３６】
酵素の補助因子
　特定の実施形態において、本発明の組成物はさらに１種類以上の酵素補助因子を含む。関連の酵素補助因子は二価の金属カチオン、例えば、Ｃａ2+、Ｍｇ2+等を含む。
【００３７】
安定化剤
　各種の安定化剤も上記試薬組成物に添加して、酵素を安定化することおよびタンパク質の変性を防止することを補助できる。さらに、この安定化剤は上記媒介物質のレドックス状態、特に、酸化されたレドック媒介物質の状態を安定化することも補助できる。このような安定化剤の例は各種の炭化水素（例えば、スクロース、トレハロース、マンニトール、およびラクトース）、アミノ酸、タンパク質（ＢＳＡおよびアルブミン等）およびＥＤＴＡ等のような有機化合物を含むがこれらに限らない。
【００３８】
粘度変性剤
　粘度変性剤も液体の試薬の流動性を変化するために上記試薬に添加できる。このような物質の例はポリ（アクリル酸）、ポリ（ビニル・アルコール）、デキストラン、ＢＳＡ等を含む。
【００３９】
付加的な特徴
　上記試薬組成物は一定の乾燥状態または液体の形態で存在できる。上述したような種々の成分の量は変更可能であり、以下の特定的に示されている各量は例示のみを目的として示されている。
【００４０】
　本発明の試薬組成物の液体配合物において、上記酵素成分は一般的に約３５乃至約４５０μＭ、通常的に約１３０乃至約２７０μＭの範囲の一定濃度で存在している。また、上記媒介物質は一般的に約２５０乃至約１０００ｍＭ、通常的に約５００乃至約１０００ｍＭの範囲の一定量で存在している。また、上記安定化用の緩衝剤成分は上述したような範囲内で存在している。また、一定の補酵素の濃度は一般的に約６０乃至約６７０μＭ、通常的に約２００乃至約４３０μＭの範囲である。さらに、一定の補助因子の濃度は約０．５乃至約５ｍＭの範囲である。
【００４１】
　また、乾燥状態の配合物においては、上記酵素成分の量は一般的に約１．５乃至約１５％（乾燥重量／重量）、通常的に約５乃至約１０％（乾燥重量／重量）の範囲である。また、上記媒介物質は一般的に約６０乃至約８５％（乾燥重量／重量）、通常的に約７５乃至約８５％（乾燥重量／重量）の範囲の一定量で存在している。また、上記安定化用の緩衝剤成分は上述したような範囲内で存在している。また、一定の補酵素の量は一般的に約０．０１乃至約０．１％（乾燥重量／重量）、通常的に約０．０３乃至約０．０６％（乾燥重量／重量）の範囲である。さらに、一定の補助因子の量は一般的に約０．０２乃至約０．２％（乾燥重量／重量）の範囲である。
【００４２】
関連の代表的な特定の配合物
　関連の一定の代表的な特定の配合物において、この配合物は上記酵素としてグルコース・デヒドロゲナーゼ、および補酵素としてＰＱＱを含有している。また、一定の酵素補助因子Ｃａ2+も存在している。このような配合物において、ＰＱＱはＧＤＨおよびＣａ2+と結合して活性化状態の酵素またはホロ酵素を形成する。なお、ＧＤＨの二量体分子１個当たりに２個のＰＱＱがこの酵素を完全に活性化するために必要とされることが知られている。一部の実施形態において、上記試薬組成物中のＧＤＨに対するＰＱＱのモル比率は約２乃至約４である。さらに別の実施形態においては、このＧＤＨに対するＰＱＱのモル比率は約２．２乃至約２．５である。これらの代表的な配合物におけるＧＤＨ−ＰＱＱのホロ酵素の活性は一般的に約１０乃至１０００ｋＵ／ｍｌ、通常的に少なくとも約５０乃至約３００ｋＵ／ｍｌの範囲である。この酵素の活性は３０℃において行なわれる一定の分光光度計によるアッセイにより決定されている。一般的に、３部の酵素溶液が１００部の基質溶液に混合される。次に、吸光度を５秒間にわたり６００ｎｍでモニターする。この基質溶液は１１２ｍＭのグルコース、２ｍＭのフェナジン・エトサルフェート、６０ｎＭの２，６−ジクロロインドフェノール、および５０ｍＭのピペラジン，Ｎ，Ｎ’−ビス−（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）をｐＨ６．８において含有している。一方、上記の酵素溶液は約０．２５乃至０．５０ｍｇ／ｍＬのＧＤＨ、１．２５μＭのＰＱＱ、１．２５ｍＭのＣａＣｌ2 、０．１％（重量／容量）のウシ血清アルブミン、および５０ｍＭのＰＩＰＥＳをｐＨ６．８において含有している。例えば、ＣａＣｌ2 により供給される場合のＣａ2+の量は一般的に約０乃至１０ｍＭの範囲である。さらに、関連の特定の配合物中における媒介物質はフェリシアニドであり、この物質は一般的に約０．１乃至１０ｍＭ、通常的に約０．３乃至約１．０ｍＭの範囲の量で存在している。存在している場合に、上記の湿潤剤／洗浄剤の成分は約０．０１乃至１．０％（重量／重量）の範囲の一定量で存在している。また、スクロースは、存在している場合に、約１０乃至約１０００ｍＭの範囲の一定量で存在している。さらに、特定の関連の緩衝剤はシトラコン酸および／またはメリト酸であり、これらは上述した範囲内において存在している。
【００４３】
電気化学的セル
　上記においてまとめられているように、上記本発明の試薬組成物を含む電気化学的セルも本発明により提供されている。それぞれの開示内容が本明細書に参考文献として含まれる米国特許文書の第５，７２３，２８４号、同第５，８３４，２２４号、同第５，９４２，１０２号、同第５，９７２，１９９号、同第５，９９７，８１７号、同第６，０８３，７１０号、同第６，１２１，００９号、同第６，１３４，４６１号、および同第６，１９３，８７３号、ならびに、その他の特許文書のＰＣＴ国際公開第ＷＯ９９／４９３０７号、同第ＷＯ９７／１８４６５号、同第ＷＯ０１／５７５１０号、同第ＷＯ０１／５７２３８号、同第ＷＯ０２／４８７０７号、同第ＷＯ０２／５０６０９号、欧州特許第０９６９０９７Ａ２号および英国特許第２３０４６２８号において記載されている構成を含む、種々の異なる様式の電気化学的セルの構成が知られている。さらに、上記各特許の優先権書類もまた、これらが米国特許出願である場合に、本明細書に参考文献として含まれる。当該技術分野における熟練者において知られている任意の電気化学的セルまたはその他の電気化学的セルが本発明の組成物を組み込むために変更可能である。
【００４４】
　特定の実施形態において、上記の電気化学的セルは一定の電気化学的試験片の中に存在している。本発明による一定の電気化学的試験片の代表例が図１および図２において示されている。図１は一定の電気化学的試験片１０の分解図を示しており、この試験片１０はスペーサー層１６により分離されている作用電極１２および基準電極１４により作成されており、このスペーサー１６は組み立てた状態の試験片の中において一定の反応領域または区域を定める一定の切除部分１８を有している。図２は組み立てた形態の同一の試験片を示している。次に、これらの構成部品のそれぞれが以下においてさらに詳細に説明されている。
【００４５】
電極
　上記の試薬組成物を含む本発明の電気化学的試験片は一定の作用電極および一定の基準電極を備えている。一般に、これらの作用電極および基準電極は細長い長方形の部材片の形態で構成されている。一般的に、これらの電極の長さは約１．９ｃｍ乃至約４．５ｃｍ、通常的に約２乃至約２．８ｃｍの範囲である。また、これらの電極の幅は約０．３８乃至約０．７６ｃｍ、通常的に約０．５１乃至約０．６７ｃｍの範囲である。基準電極は一般的に約１０乃至１００ｎｍ、通常的に約１８乃至約２２ｎｍの範囲の一定の厚さを有している。特定の実施形態において、上記電極の一方の長さが他方の電極の長さよりも短く、この場合に、特定の実施形態において、その長さは約０．３２ｃｍだけ短い。
【００４６】
　上記の作用電極および基準電極はさらに少なくともその試験片内における反応領域に面している各電極の表面部分が一定の導電性の材料、例えば、一定の金属またはその他の導電性の材料である点において特徴付けられ、この場合に、関連の代表的な材料はパラジウム、金、プラチナ、銀、イリジウム、炭素、ドーピング処理した酸化スズ、ステンレス・スチール等を含むがこれらに限らない。特定の実施形態において、この導電性の材料は金またはパラジウムである。原理的に、電極全体を上記導電性の材料により作成可能であるが、各電極は一般に一定の不活性な支持材料により作成されており、この支持材料の表面上に上記電極の導電性の材料成分の薄い層が存在している。任意の好都合で不活性な支持材料が本発明の各電極において使用可能であり、この場合に、一般的に、この材料はその電極に対する、さらに、全体としての電気化学的試験片に対する構造的な支持を行なうことのできる一定の剛性材料である。このような支持体として使用可能な適当な材料は各種のプラスチック材、例えば、ＰＥＴ、ＰＥＴＧ、ポリイミド、ポリカーボネート、ポリスチレン、シリコン、セラミック、ガラス等を含む。
【００４７】
スペーサー層
　上記本発明の電気化学的試験片の特徴は上記のような作用電極および基準電極が互いに対向していて、一定のわずかな距離だけ離れており、当該電気化学的試験片の反応領域または区域の中における作用電極と基準電極との間の距離が極めて小さくなっていることである。このような本発明の試験片における作用電極と基準電極との最小の間隔はこれら作用電極と基準電極との間に位置決めまたは挟まれている一定の薄いスペーサー層の存在の結果である。このスペーサー層の厚さは一般に約１乃至約５００μｍ、通常的に約１００乃至約２００μｍの範囲である。このスペーサー層は反応領域の中に到る少なくとも１個の入口ポートおよび当該反応領域から出る一般に１個の出口ポートを伴う一定の反応領域または区域を形成するように切断されている。代表的な一定のスペーサー層の構成が図１および図２において見られる。このスペーサー層はこれらの図において側面における入口および出口の各穴またはポートを伴って切断されている一定の円形の反応領域を有するものとして示されているが、例えば、正方形、卵形、三角形、長方形、および不規則な形状の反応領域等のような、別の構成も可能である。このスペーサー層は任意の好都合な材料により作成可能であり、この場合に、代表的な適当な材料はＰＥＴ、ＰＥＴＧ、ポリイミド、ポリカーボネート等を含み、この場合に、そのスペーサー層の各表面部分はそれぞれ電極に対して接着性を有するように処理することができ、これにより、その電気化学的な試験片の構造が維持できる。特に重要なことは、上記スペーサー層としての一定のダイ切断型両面接着剤片の使用である。
【００４８】
反応領域
　本発明の電気化学的試験片は上記の作用電極、基準電極およびスペーサー層により定められる一定の反応領域または区域を備えており、この場合に、これらの構成要素は既に説明されている。特に、作用電極および基準電極は反応領域の上部および下部をそれぞれ定めており、スペーサー層はこの反応領域の各壁部を定めている。この反応領域の容積は少なくとも約０．１μｌ、通常的に少なくとも約１μｌ、さらに通常的に少なくとも約１．５μｌであり、この場合に、この容積は１０μｌ程度またはそれ以上にすることも可能である。上述したように、この反応領域は一般に少なくとも１個の入口ポートを有しており、さらに、多くの場合において、一定の出口ポートも有している。これら入口ポートおよび出口ポートの断面積は、その反応領域における一定の有効な流体の流入および流出を行なうために十分な大きさを有している限りにおいて、変更可能であるが、一般に約９×１０-5乃至約５×１０-3ｃｍ2 、通常的に約５×１０-4乃至約２．５×１０-3ｃｍ2 の範囲である。
【００４９】
　本発明による一定の試薬配合物が上記反応領域内に存在し、この場合に、この試薬配合物は一般的に乾燥状態の形態で存在している。
【００５０】
分析物検出法
　さらに、一定の生理学的サンプル中における一定の分析物の濃度を決定するために上記本発明の試薬組成物を使用する方法も本発明により提供されている。便宜上、この方法は上記の代表的な試験片に関連して説明されている。しかしながら、本発明はこの特定の方法に限定されることはなく、一定の電気化学的セルにおいて本発明の試薬配合物を用いて一定の分析物を検出するあらゆる方法が本発明に含まれる。
【００５１】
　上記の方法は本発明の試薬組成物を含む一定の電気化学的試験片に一定のサンプルを供給する工程、この試験片により発生される一定の電気的信号を検出する工程、およびこの検出した電気的信号を上記サンプル中の分析物の濃度に関連付ける工程を含む。本発明の試験片を用いて種々の異なる分析物を検出することができ、この場合に、代表的な分析物はグルコース、コレステロール、ラクテート、アルコール等を含む。多くの好ましい実施形態において、本発明の方法は一定の生理学的サンプル中のグルコース濃度を決定するために用いられる。原理的に、本発明の方法は、尿、涙、唾液等のような、種々の異なる生理学的サンプル中における一定の分析物の濃度を決定するために使用可能であるが、これらは特に血液または各種血液フラクションの中、特に全血中における一定の分析物の濃度の決定において使用することに適している。
【００５２】
　上記本発明の方法の実施において、第１の工程は一定量の生理学的サンプルを上記試験片の反応領域内に導入することであり、この場合に、この電気化学的試験片は上記において説明されている。この試験片の反応領域内に導入される生理学的サンプル、例えば、血液の量は変更可能であるが、一般に約０．０５乃至約１０μｌ、通常的に約０．５乃至約１．６μｌの範囲である。このサンプルは任意の好都合なプロトコルを用いて上記反応領域の中に導入することができ、この場合に、都合に応じて、このサンプルをその反応領域内に注入すること、あるいは、その反応領域内に自然に吸収させること等が可能である。
【００５３】
　上記反応領域へのサンプルの供給に続いて、上記の基準電極および作用電極を用いて一定の電気化学的測定を行なう。このようにして行なわれる電気化学的な測定はそのアッセイの特定の性質および一定の電気化学的試験片を採用している装置に応じて、例えば、そのアッセイが電量分析式、電流測定式または電位測定式のいずれであるかに応じて、変更可能である。一般に、上記の電気化学的測定は、通常的に上記反応領域内へのサンプル導入後の一定時間にわたり、電荷（電量分析式）、電流（電流測定式）または電位（電位測定式）を測定する。上記の電気化学的測定を行なうための方法が米国特許第４，２２４，１２５号、同第４，５４５，３８２号、および同第５，２６６，１７９号、ならびに、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ９７／１８４６５号、同第ＷＯ９９／４９３０７号においてさらに説明されており、これらの開示はそれぞれ本明細書に参考文献として含まれる。
【００５４】
　上記のような反応領域内において発生した電気化学的信号の検出に続いて、その反応領域内に導入されたサンプル中の分析物の量がその電気化学的信号を当該サンプル中の分析物の量に関連付けることにより決定される。この導出を行なうことにおいて、上記の測定した電気化学的信号は一般的に一連の既に得られている対照または基準の各値により発生される信号に対して比較され、この比較により決定される。多くの実施形態において、上記のような電気化学的信号の測定工程および分析物濃度の導出工程は上記試験片と共に動作するように設計されている一定の装置により自動的に行なわれて、その試験片に供給されている一定のサンプル中における分析物濃度の一定の値が得られる。一定の使用者がサンプルを上記反応領域に供給して最終的な分析物濃度の結果を装置から読み取るだけで済むような、これらの工程を自動的に実施するための代表的な読取装置が米国特許第６，１９３，８７３号においてさらに説明されており、この特許の開示は本明細書に参考文献として含まれる。
【００５５】
　上記の方法は種々の異なる分析物の濃度を決定するために使用可能であり、この場合に、代表的な分析物はグルコース、コレステロール、ラクテート、アルコール等を含む。多くの好ましい実施形態において、本発明の方法は一定の生理学的サンプル中のグルコース濃度を決定するために用いられる。原理的に、本発明は、尿、涙、唾液等のような、種々の異なる生理学的サンプル中における一定の分析物の濃度を決定するために使用可能であるが、これらは特に血液または各種血液フラクションの中、特に全血中における一定の分析物の濃度の決定において使用することに適している。
【００５６】
システム
　各種の分析物の検出において使用するためのシステムも本発明により提供されており、この場合に、これらのシステムは、例えば、上述したような一定の試験片の中に存在している、本発明による一定の試薬組成物、および当該試薬組成物を用いて一定のサンプルを電気化学的にアッセイすることにおいて使用するための一定の装置を含む。
【００５７】
　本発明の装置または計器は一般的に電気化学的な測定装置である。本発明の計器は一般的に、（ａ）サンプルを導入した一定の電気化学的セルに一定の電位を印加するための手段、（ｂ）上記セルの中の電流を測定するための手段、および（ｃ）その電流を上記セルの中の分析物の濃度に関連付ける手段を備えている。代表的な電気化学的な計器または装置がそれぞれの開示が本明細書に参考文献として含まれる米国特許文書の第５，７２３，２８４号、同第５，８３４，２２４号、同第５，９４２，１０２号、同第５，９７２，１９９号、同第５，９９７，８１７号、同第６，０８３，７１０号、同第６，１２１，００９号、同第６，１３４，４６１号、および同第６，１９３，８７３号、ならびに、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ９９／４９３０７号、同第ＷＯ９７／１８４６５号、同第ＷＯ０１／５７５１０号、同第ＷＯ０１／５７２３８号、同第ＷＯ０２／４８７０７号、同第ＷＯ０２／５０６０９号、欧州特許（ＥＰ）第０９６９０９７Ａ２号および英国特許第２３０４６２８号において記載されている。
【００５８】
キット
　さらに、上記本発明の方法の実施において使用するためのキットもまた本発明により提供されている。この本発明のキットは上述したような試薬組成物を含み、この場合に、これらの組成物は上述したような一定の試験片の中に存在している場合が多い。この本発明のキットはさらに一定の生理学的サンプルを入手するための一定の入手要素を含むことができる。例えば、この生理学的サンプルが血液である場合に、本発明のキットはさらに、指を突刺すための一定のランス、および一定のランス作動手段等のような、一定の血液サンプルを入手するための要素を含むことができる。加えて、本発明のキットは、例えば、一定の標準化された濃度のグルコースを含む一定の対照溶液等のような、一定の分析物の標準物を含むこともできる。特定の実施形態において、このキットはさらに、上記の試薬組成物およびこれらを含む試験片と共に使用するための、上述したような、一定の自動化装置も含む。
【００５９】
　最後に、上記のキットは一定の生理学的サンプル中の一定の分析物濃度の決定において本発明の組成物を使用するための指示書または説明書を含むことができる。これらの説明書は、紙またはプラスチック材等のような、一定の支持体の上に印刷できる。従って、これらの説明書は一定の包装挿入物としてキットの中に存在させることができ、あるいは、キットの容器またはその各部品のラベルの中等（すなわち、包装または包装補助物等）に存在させることもできる。また，別の実施形態において、これらの説明書は、例えば、ＣＤ−ＲＯＭ、ディスケット等のような、一定の適当なコンピュータ保管媒体において存在している一定の電子保管データ・ファイルとして存在している。
【００６０】
　以下の実施例は例示のために提供されており、限定のために提供されていない。
【００６１】
実験
実施例１．クエン酸塩、リンゴ酸および酒石酸によるグルコースの線形性の結果
　クエン酸、リンゴ酸、および酒石酸の各緩衝剤配合物を１００ｍＭの濃度およびｐＨ５．５において別々に配合した。これら３種類の配合物は全て同等量の０．１％の消泡剤（ＲＮＡエクイリブレーター（RNA Equilibrator））、１ｍＭのＣａＣｌ2 、ＰＱＱ（ＧＤＨに対して２倍のモル比率）、２００ｍＭのカリウム・フェリシアニド、および４５ｍｇ／ｍＬのＧＤＨを含有していた。各配合物を一定のパラジウム（Ｐｄ）の支持体にインク−ジェット処理した。次に、各センサーが１０秒間にわたり−０．３Ｖの電位を印加し、さらに、５秒間にわたり＋０．３Ｖの電位を印加することによる時間電流測定によりグルコースを含有している血液を試験した。この血液についての試験は全ての場合においてグルコースの良好な線形性を示した（図３）。クエン酸塩およびリンゴ酸の各緩衝剤のバックグラウンドは同等であったが、酒石酸の緩衝剤のバックグラウンドはそれよりも高かった。加えて、酒石酸の緩衝剤はＣａ2+により一定の不溶性の塩を形成して望ましくない結果を示した。
【００６２】
実施例２．クエン酸塩およびメリト酸塩によるグルコースの線形性およびヘマトクリット作用の結果
　クエン酸塩緩衝剤を４００ｍＭおよびｐＨ５．５において配合した。さらに、メリト酸塩緩衝剤を１６０ｍＭおよびｐＨ６．４において配合した。これら両方の配合物は同等量の０．１％の消泡剤（ＲＮＡエクイリブレーター）、１ｍＭのＣａＣｌ2 、ＰＱＱ（ＧＤＨに対して２倍のモル比率）、２００ｍＭのカリウム・フェリシアニド、および３２ｍｇ／ｍＬのＧＤＨを含有していた。次に、３種類のヘマトクリット値（２０，４２および７０％）および４種類のグルコース量を用いて血液試験を行なった（図４および図５）。この場合のグルコースの応答は線形ではなかったが、グルコース濃度の増加に伴って増加した。また、クエン酸塩緩衝剤におけるヘマトクリット特性の方がメリト酸塩の場合よりもわずかに良好であった。これらの結果が図４および図５において示されている。
【００６３】
実施例３．クエン酸塩およびシトラコン酸塩によるヘマトクリット作用および安定性の結果
　クエン酸塩およびシトラコン酸塩の各緩衝剤を３００ｍＭの濃度およびｐＨ６．５において別々に配合した。これら両方の配合物は同等量の０．１％の消泡剤（ＲＮＡエクイリブレーター）、４ｍＭのＣａＣｌ2 、ＰＱＱ（ＧＤＨに対して２倍のモル比率）、８００ｍＭのカリウム・フェリシアニド、および４６ｍｇ／ｍＬのＧＤＨを含有していた。各配合物をインクジェット処理によりＰｄ上に堆積させた。これら両方のクエン酸塩およびシトラコン酸塩の緩衝剤におけるヘマトクリット特性は同等であった（図６および図７）。１４日間にわたる５６℃における加速したエージング処理において、シトラコン酸塩はクエン酸塩に比して優れたバックグラウンドおよび性能の安定性を示した（表１）。表１において示されているバイアス値は４０ｍｇ／ｄＬのグルコース濃度における一定の絶対的な応答差および１００ｍｇ／ｄＬよりも高いグルコース濃度における一定のバイアス率として示されている。
【表１】
2004101531.tif 000004
【００６４】
実施例４．シトラコン酸塩およびマレイン酸による線形性および安定性の結果
　シトラコン酸塩およびマレイン酸の各緩衝剤を３００ｍＭの濃度およびｐＨ６．５において別々に配合した。これら両方の配合物は同等量の０．０６６％のプルロニック２５Ｒ２、０．０３３％のプルロニックＬ６２、４ｍＭのＣａＣｌ2 、ＰＱＱ（ＧＤＨに対して２倍のモル比率）、８００ｍＭのカリウム・フェリシアニド、および２６ｍｇ／ｍＬのＧＤＨを含有していた。これらの配向物をインクジェット処理によりＰｄ上に堆積させた。公称のヘマトクリット値における初期的な性能試験は良好な線形性を示した（図８）。また、安定性のデータは両方の場合において安定なバックグラウンドを示したが、マレイン酸の緩衝剤配合物における性能は高いグルコース量において低下し、酵素の不安定性を示した（表２）。
【表２】
2004101531.tif 000005
【００６５】
実施例５．シトラコン酸塩およびメリト酸の各緩衝剤によるヘマトクリット特性および安定性の結果
　試薬を一定の手動式のピペットにより堆積させて一定の熱空気流により一定のホット・プレート下において乾燥したことを除いて、実施例４と同様の様式で各試験片を作成した。図９および図１０はシトラコン酸塩およびメリト酸塩の各緩衝剤により作成したグルコース・センサーにおける安定性のデータをそれぞれ示している。メリト酸およびシトラコン酸に対してそれぞれ１０５ｍＭおよび４０ｍＭの緩衝剤濃度の濃度において６．５の一定のｐＨ値を選択した。これらのセンサーを２週間にわたり５℃または５６℃において保管した後に、１８％、３７％および６３％のヘマトクリット値の血液により試験した。
【００６６】
　上記の結果および説明は本発明が一定の媒介物質が保管において安定化されている各種の電気化学的な試薬組成物を提供していることを示している。本発明の利点は比較的に正確な結果、ならびに、望ましさに劣る各種の安定化剤を含有することおよび／または一定の燃焼を行なうことおよびプロトコルを読むことの必要性の回避を含む。従って、本発明は当該技術分野に対して有意義な貢献を示している。
【００６７】
　本明細書において引用されている全ての刊行物または公開物および特許は、それぞれの個別の刊行物または公開物または特許が特定的に且つ個別に参考文献として含まれていることを示されているように、それぞれ本明細書に参考文献として含まれる。このいずれの刊行物または公開物の引用もこの出願日よりも前の開示に対応しており、本発明がこのような先行の発明の効力により当該刊行物または公開物よりも先行する権利がないという承認として何ら解釈する必要はない。
【００６８】
　上記の発明はその理解を明瞭にするための例示および実施例により一定の程度において詳細に説明されているが、特定の変化および変更が添付の特許請求の範囲における趣旨または範囲から逸脱することなくこれらの例示および実施例に対して行なうことができることが、本発明の教示に鑑みて当該技術分野における通常の熟練者において容易に明らかになる。
【産業上の利用可能性】
【００６９】
　本発明は電気化学的分析物決定アッセイにおける媒介物質安定化型の試薬組成物およびこれらの使用方法に適用可能である。本発明の試薬組成物は一定の酵素、一定のレドックス媒介物質および一定の媒介物質安定化用の緩衝剤を含有している。随意的に、この試薬組成物は湿潤剤、洗浄剤、酵素補助因子およびこれらの組み合わせ物の１種類以上をさらに含むことができる。さらに、本発明は本発明の試薬組成物を含有している電気化学的試験片、当該試薬組成物を含有しているシステムおよびキット、ならびに、当該試薬組成物を分析物決定アッセイにおいて使用するための方法に適用可能である。また、本発明はグルコースの濃度決定の用途を含む種々の異なる用途において有用であることが分かっている。
【００７０】
　本発明の具体的な実施態様は以下のとおりである。
（１）前記緩衝剤が一定のポリカルボン酸を含む請求項１に記載の試薬組成物。
（２）前記ポリカルボン酸がメリト酸およびその塩類である実施態様（１）に記載の試薬組成物。
（３）前記ポリカルボン酸がシトラコン酸およびその塩類である実施態様（１）に記載の試薬組成物。
（４）実施態様（１）乃至（３）に記載の一定の試薬組成物を含む一定の電気化学的セル。
（５）　一定の電気化学的試験片を作成するための方法において、
　実施態様（１）乃至（３）に記載の一定の試薬組成物を使用している方法。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】本発明による電気化学的試験片の分解図である。
【図２】組み立てた形態における上記試験片の概略図である。
【図３】本発明によるクエン酸塩、リンゴ酸および酒石酸の各配合物を含む線形性の試験結果のグラフである。
【図４】本発明によるインク−ジェット処理したクエン酸塩の配合物におけるヘマトクリットの作用を示している結果のグラフである。
【図５】本発明によるインク−ジェット処理したメリト酸の配合物におけるヘマトクリットの作用を示している結果のグラフである。
【図６】本発明によるクエン酸の配合物におけるヘマトクリット特性を示している結果のグラフである。
【図７】本発明によるシトラコン酸の配合物におけるヘマトクリット特性を示している結果のグラフである。
【図８】本発明によるシトラコン酸およびマレイン酸の各試薬配合物における線形性の試験結果のグラフである。
【図９】本発明によるシトラコン酸塩の配合物により作成した電気化学的なグルコース・センサーにおける安定性のデータを示しているグラフである。
【図１０】本発明によるメリト酸塩の配合物により作成した電気化学的なグルコース・センサーにおける安定性のデータを示しているグラフである。
【符号の説明】
【００７２】
１０　試験片
１２　作用電極
１４　基準電極
１６　スペーサー層
１８　切除部分
【図１】
2004101531.tif 000006
【図２】
2004101531.tif 000007
【図３】
2004101531.tif 000008
【図４】
2004101531.tif 000009
【図５】
2004101531.tif 000010
【図６】
2004101531.tif 000011
【図７】
2004101531.tif 000012
【図８】
2004101531.tif 000013
【図９】
2004101531.tif 000014
【図１０】
2004101531.tif 000015