(57)【要約】【課題】優れたチロシナーゼ活性阻害作用を有しており、日焼け後の色素沈着・しみ・そばかす・肝斑等の淡色化、美白に優れた効果を有する美白用皮膚外用剤を提供する。【解決手段】クワ科植物であるＡｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｅｌａｓｔｉｃａ  Ｒｅｉｎｗ．またはＡｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｋｕｎｓｔｌｅｒｉ  Ｈｏｏｋ．  ｆ．の抽出物から選ばれた一種または二種以上を美白の有効成分として配合する。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｅｌａｓｔｉｃａ  Ｒｅｉｎｗ．またはＡｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｋｕｎｓｔｌｅｒｉ  Ｈｏｏｋ．  ｆ．の植物抽出物から選ばれた一種または二種以上を美白の有効成分として配合することを特徴とする美白用皮膚外用剤。
【請求項２】
植物抽出物の配合量が０．０００５〜２０．０重量％である請求項１記載の美白用皮膚外用剤。
【請求項３】
Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｅｌａｓｔｉｃａ  Ｒｅｉｎｗ．またはＡｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｋｕｎｓｔｌｅｒｉ  Ｈｏｏｋ．  ｆ．の植物抽出物から選ばれた一種または二種以上を配合することを特徴とするチロシナーゼ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、日焼け後の色素沈着・しみ・そばかす・肝斑等の予防および改善に有効な美白用皮膚外用剤、およびチロシナーゼ活性阻害作用を有するチロシナーゼ阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚のしみなどの発生機序については一部不明な点もあるが、一般には、ホルモンの異常や日光からの紫外線の刺激が原因となってメラニン色素が形成され、これが皮膚内に異常沈着するものと考えられている。皮膚の着色の原因となるこのメラニン色素は、表皮と真皮との間にあるメラニン細胞（メラノサイト）内のメラニン生成顆粒（メラノソーム）において生産され、生成したメラニンは、浸透作用により隣接細胞へ拡散する。このメラノサイト内における生化学反応は、次のようなものと推定されている。
【０００３】
すなわち、必須アミノ酸であるチロシンが酵素チロシナーゼの作用によりドーパキノンとなり、これが酵素的または非酵素的酸化作用により赤色色素および無色色素を経て黒色のメラニンへ変化する過程がメラニン色素の生成過程である。従って、反応の第１段階であるチロシナーゼの作用を抑制することがメラニン生成の抑制に重要である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしチロシナーゼ作用を抑制する化合物はハイドロキノンを除いてはその効果の発現がきわめて緩慢であるため、皮膚色素沈着の改善効果が十分でない。一方、ハイドロキノンは効果は一応認められているが、感作性があるため、一般には使用が制限されている。そこでその安全性を向上させるため、高級脂肪酸のモノエステルやアルキルモノエーテルなどにする試み（特開昭５８−１５４５０７号公報）がなされているが、エステル類は体内の加水分解酵素によって分解されるため必ずしも安全とはいいがたく、またエーテル類も安全性の面で充分に満足するものが得られていない。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
そこで本発明者らはこれらの問題を解決するものとして広く種々の物質についてチロシナーゼ活性阻害効果を調べた結果、特定のクワ科植物の抽出物がチロシナーゼ活性阻害作用を有していることを見い出し、本発明を完成するに至った。後記するこれらの植物の抽出物の美白作用およびチロシナーゼ活性阻害作用に関する報告はこれまでにない。本発明者らは上記知見に基づいて本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち本発明は、Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｅｌａｓｔｉｃａ  Ｒｅｉｎｗ．またはＡｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｋｕｎｓｔｌｅｒｉ  Ｈｏｏｋ．  ｆ．の植物抽出物から選ばれた一種または二種以上を美白の有効成分として配合することを特徴とする美白用皮膚外用剤、およびＡｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｅｌａｓｔｉｃａ  Ｒｅｉｎｗ．またはＡｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｋｕｎｓｔｌｅｒｉ  Ｈｏｏｋ．  ｆ．の植物抽出物から選ばれた一種または二種以上を配合することを特徴とするチロシナーゼ阻害剤である。
【０００７】
以下、本発明の構成について詳述する。
本発明に用いられるＡｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｅｌａｓｔｉｃａ  Ｒｅｉｎｗ．およびＡｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｋｕｎｓｔｌｅｒｉ  Ｈｏｏｋ．  ｆ．は、クワ科パンノキ属の植物であり、好ましくはその樹皮または木部が用いられる。本発明に用いられる抽出物は、上記植物を抽出溶媒と共に浸漬または加熱還流した後、濾過し、溶液として得られるか、または、その溶液を濃縮して固形物として得られる。これらの抽出過程において、活性炭や合成樹脂による脱色処理を実施することもできる。本発明に用いられる抽出溶媒は、通常抽出に用いられる溶媒であれば何でもよく、特にメタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコール等のアルコール類、含水アルコール類、アセトン、酢酸エチル等の有機溶媒を単独あるいは組み合わせて用いることができるが、好ましくはエタノール、含水エタノール、１，３−ブチレングリコール、含水１，３−ブチレングリコールが、さらに好ましくは、５０％含水エタノール、５０％含水１，３−ブチレングリコールが用いられる。
【０００８】
本発明における植物抽出物の配合量は、美白用外用剤全量中、乾燥物として０．０００５〜２０．０重量％、好ましくは０．００１〜１０．０重量％である。０．０００５重量％未満であると、本発明でいう効果が十分に発揮されず、２０．０重量％を超えると製剤化が難しいので好ましくない。また、１０．０重量％以上配合してもさほど大きな効果の向上はみられない。
【０００９】
また、本発明の美白用皮膚外用剤には、上記必須成分以外に、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、その他の美白剤、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００１０】
その他、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の他の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類なども適宜配合することができる。
【００１１】
本発明の美白用皮膚外用剤は、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤等、従来皮膚外用剤に用いるものであればいずれでもよく、剤型は特に問わない。
【００１２】
【実施例】
次に実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。尚、本発明はこれにより限定されるものではない。配合量は重量％である。実施例に先立ち、本発明の植物抽出物のチロシナーゼ活性阻害効果に関する試験方法とその結果について説明する。
【００１３】
試験方法およびその結果
１．試料の調製
（１）  Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｅｌａｓｔｉｃａ  Ｒｅｉｎｗ．抽出液
Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｅｌａｓｔｉｃａ  Ｒｅｉｎｗ．の樹皮１０．１４ｇを５０％エタノール１００ｍｌに室温で１０日間浸漬し、ろ過後ろ液を濃縮乾固して抽出物を８１３ｍｇ得た。この抽出物をＤＭＳＯに１％溶かし、この溶液を希釈して濃度を調整し、これを用いて以下の実験を行った。
【００１４】
（２）  Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｋｕｎｓｔｌｅｒｉ  Ｈｏｏｋ．  ｆ．抽出液
Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｋｕｎｓｔｌｅｒｉ  Ｈｏｏｋ．  ｆ．の樹皮１０．２１ｇを５０％エタノール１００  ｍｌに室温で１０日間浸漬し、ろ過後ろ液を濃縮乾固して抽出物を１．０９ｇ得た。この抽出物をＤＭＳＯに１％溶かし、この溶液を希釈して濃度を調整し、これを用いて以下の実験を行った。
【００１５】
２．細胞培養法
マウス由来のＢ１６メラノーマ培養細胞を使用した。１０％ＦＢＳおよびテオフィリン（０．０９ｍｇ／ｍｌ）を含むイーグルＭＥＭ培地中でＣＯ２インキュベーター（９５％空気，５％二酸化炭素）内、３７℃の条件下で培養した。培養２４時間後に試料溶液を終濃度（抽出乾燥物換算濃度）で５×１０−５〜５×１０−３質量％になるように添加し、さらに３日間培養を続け、以下の方法でメラニン生成量の視感判定およびチロシナーゼ活性抑制効果を測定した。
【００１６】
３．メラニン生成量の視感判定
ウエルのプレートの蓋上に拡散板を置き、倒立顕微鏡で細胞内のメラニン量を観察し、本発明の化合物を添加していない試料（基準）の場合と比較した。その結果を表１に示した。また参考例として、すでにメラニン生成抑制作用のあることが知られているハイドロキノンについても上記と同様の試験を行った。その結果を併せて表１に示す。
【００１７】
＜判定基準＞
Ａ：基準と比較して白い（基準と比較してメラニン量が少ない）
Ｂ：基準と比較してやや白い（基準と比較してメラニン量がやや少ない）
Ｃ：基準と同程度（基準と比較してメラニン量が同程度）
【００１８】
【表１】
2004323380.tif 000002
【００１９】
４．チロシナーゼ活性阻害効果の測定
以下の方法でチロシナーゼ活性阻害効果を測定した。
チロシナーゼ活性の測定前にウエル中の培地を除去し、ＰＢＳ  １００  μｌで２回洗う。各ウエルに４５  μｌの１  ％トライトン−Ｘ（ローム・アンド・ハース社製商品名、界面活性剤）を含むＰＢＳを加える。１分間プレートを振動させ、よく細胞膜を破壊し、マイクロプレートリーダーで４７５  ｎｍの吸光度を測定してこれを０分時の吸光度とした。その後すばやく５  μｌの１０  ｍＭのＬ−ＤＯＰＡ溶液を加えて、３７  ℃のインキュベーターに移し、６０分間反応させた。１分間プレートを振動させ、６０分時の吸光度（４７５  ｎｍ）を測定した。本発明の化合物を添加していない試料（コントロール）の場合の０分時と６０分時の吸光度差に対するＡｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｅｌａｓｔｉｃａ  Ｒｅｉｎｗ．及びＡｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｋｕｎｓｔｌｅｒｉ  Ｈｏｏｋ．  ｆ．の抽出物添加試料の前記吸光度差をチロシナーゼ活性率とした。その結果を表２に示す。また、参考例として、チロシナーゼ活性抑制作用があることが知られているハイドロキノンについても上記と同様の試験を行った。その結果を併せて表２に示す。
【００２０】
【表２】
2004323380.tif 000003
【００２１】
表１および表２の結果より、本発明の植物抽出物は、ハイドロキノンに比べ、メラニン生成抑制効果及びチロシナーゼ活性抑制効果に極めて優れていることが分かる。
【００２２】
５．美白効果試験
（１）美白用皮膚外用剤の調製
本発明の植物抽出物を美白の有効成分として用い、下記の処方によりローションを調製した。調製方法は常法に従いアルコール相および水相を調製後、可溶化して行った。
【００２３】
（アルコール相）
９５％エタノール                                  ５５．０  質量％
ポリオキシエチレン（４０モル）硬化ヒマシ油          ２．０
「表３」記載の美白剤                        「表３」記載の量
（水相）
ジプロピレングリコール                              ５．０
ヘキサメタリン酸ナトリウム                          ０．３
イオン交換水                                        残余
【００２４】
（２）試験方法
夏期の太陽光に４時間（１日２時間で２日間）晒された被験者、４０名の上腕内側部皮膚を対象として、太陽光に晒された日の５日後より、各ローションを朝夕１回づつ４週間塗布した。パネル１群を１０名に分けて４群とした。塗布終了後、紫外線照射によって誘導される色素沈着に対して抑制効果があったかどうかを調べ、その程度を以下の基準に基づいて評価した。その結果を表３に示す。
【００２５】
（３）評価基準
Ａ：著効または有効とした被験者が８名以上
Ｂ：著効または有効とした被験者が５〜７名
Ｃ：著効または有効とした被験者が３〜４名
Ｄ：著効または有効とした被験者が２名以下
【００２６】
表３より明らかなように、太陽光に晒された被験者に対する美白効果は、本発明の美白剤を添加したローションは、ハイドロキノン配合の場合よりも、メラニン色素の沈着を防ぎ、色黒を予防・改善することが認められた。
【００２７】
【表３】
2004323380.tif 000004
【００２８】
以下に、種々の剤型の本発明による美白用皮膚外用剤の配合例を実施例として説明する。
【００２９】
実施例１  クリーム
2004323380.tif 000005
【００３０】
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールとＡｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｅｌａｓｔｉｃａ  Ｒｅｉｎｗ．のメタノール抽出物と苛性カリを加え溶解し、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を徐々に加え、全部加え終わってからしばらくその温度に保ち反応を起こさせる。その後、ホモミキサーで均一に乳化し、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３１】
実施例２  クリーム
2004323380.tif 000006
【００３２】
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、ホモミキサーで均一に乳化した後、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３３】
実施例３  クリーム
2004323380.tif 000007
【００３４】
（製法）
イオン交換水に石けん粉末と硼砂を加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相をかきまぜながら徐々に加え反応を行う。反応終了後、ホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３５】
実施例４  乳液
2004323380.tif 000008
【００３６】
（製法）
少量のイオン交換水にカルボキシビニルポリマーを溶解する（Ａ相）。残りのイオン交換水にポリエチレングリコール１５００とトリエタノールアミンを加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、Ａ相を加えホモミキサーで均一乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３７】
実施例５  乳液
2004323380.tif 000009
【００３８】
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し、加熱融解して７０℃に保つ（油相）。油相をかきまぜながらこれに水相を徐々に加え、ホモミキサーで均一に乳化する。乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３９】
実施例６  ゼリー
2004323380.tif 000010
【００４０】
（製法）
イオン交換水にカーボポール９４０を均一に溶解し、一方、９５％エタノールにＡｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｅｌａｓｔｉｃａ  Ｒｅｉｎｗ．の５０％エタノール水溶液抽出物、ポリオキシエチレン（５０モル）オレイルアルコールエーテルを溶解し、水相に添加する。次いで、その他の成分を加えたのち苛性ソーダ、Ｌ−アルギニンで中和させ増粘する。
【００４１】
実施例７  美容液
2004323380.tif 000011
【００４２】
（製法）
Ａ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ｃ相にＡ相を加えて可溶化する。次いでＢ相を加えたのち充填を行う。
【００４３】
実施例８  パック
2004323380.tif 000012
【００４４】
（製法）
Ａ相、Ｂ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ａ相にＢ相を加えて可溶化する。次いでこれをＣ相に加えたのち充填を行う。
【００４５】
実施例９  固形ファンデーション
2004323380.tif 000013
【００４６】
（製法）
タルク〜黒色酸化鉄の粉末成分をブレンダーで十分混合し、これにスクワラン〜オクタン酸イソセチルの油性成分、Ａｒｔｏｃａｒｐｕｓ  ｋｕｎｓｔｌｅｒｉ  Ｈｏｏｋ．  ｆ．のエタノール抽出物、防腐剤、香料を加え良く混練した後、容器に充填、成型する。
【００４７】
実施例１０  乳化型ファンデーション（クリームタイプ）
2004323380.tif 000014
【００４８】
（製法）
水相を加熱撹拌後、十分に混合粉砕した粉体部を添加してホモミキサー処理する。更に加熱混合した油相を加えてホモミキサー処理した後、撹拌しながら香料を添加して室温まで冷却する。
【００４９】
実施例１１  エッセンス
2004323380.tif 000015
2004323380.tif 000016
【００５０】
実施例１２  クリーム
2004323380.tif 000017
2004323380.tif 000018
【００５１】
実施例１３  エッセンス
2004323380.tif 000019
2004323380.tif 000020
【００５２】
実施例１４  クリーム
2004323380.tif 000021
【００５３】
実施例１５  クリーム
2004323380.tif 000022
【００５４】
実施例１６  クリーム
2004323380.tif 000023
【００５５】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明の美白用皮膚外用剤は、優れたチロシナーゼ活性阻害作用を有しており、日焼け後の色素沈着・しみ・そばかす・肝斑等の淡色化、美白に優れた効果を有すると共に、安全性にも優れたものである。