(57)【要約】【課題】担子菌フエリナス・バウミイ株の子実体微粉末水抽出物を作製し、皮膚老化の予防・改善用の皮膚外用剤及び化粧品を提供する。【解決手段】人工栽培に成功したフエリナス・バウミイ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ  ｂａｕｍｉｉ）子実体微粉末の熱水抽出物が紫外線遮断効果、有害活性酸素生成防止効果及び真皮線維芽細胞の賦活化と増殖促進効果を併せ有し、該抽出エキスを製剤化し、皮膚に発生するシワ、皮膚弾性の低下、肌荒れ、シミ、炎症等々の外因及び内因性の皮膚老化諸症状の防止及び改善に優れた効果のある皮膚外用剤乃至化粧料を提供する。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
キコブタケ属フエリナス・バウミイ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ  ｂａｕｍｉｉ）子実体の微粉末水抽出物を有効成分とする皮膚外用剤及び化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、皮膚外用剤及び化粧料に関し、詳細には人工栽培したキコブタケ属フエリナス・バウミイ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ  ｂａｕｍｉｉ）子実体の微粉末水（熱水を含む）抽出物を活性成分とする皮膚老化防止用の外用剤及び化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術】皮膚は、人体の外皮として体内諸器官の外界からの保護作用、知覚作用、体温調節作用、物質代謝作用等の種々の重要な働きをしている。皮膚に発生するシワ、皮膚弾性の低下、肌荒れ、シミ、炎症等々の老化現象は、紫外線等の外的な要因及び加齢による機能低下、萎縮性変化等の内的な要因から起こる。しかしながら、一抽出成分でこれら皮膚老化現象の外的及び内的な要因に有効な成分は見付かっていない。
【０００３】担子菌類を利用した皮膚外用剤の研究は近年とみに盛んである。ケロウジの子実体抽出物を含有する紫外線吸収剤（特公平２−４６５６４号）、椎茸菌糸体エキスをメラニン生成抑制成分として含有する化粧水（特公平５−２１０８３号）、各種担子菌類から抽出したメラニン生成抑制成分を配合する皮膚外用剤又は化粧料（特許２９０９８２５号、特開平７−３１６０３５号、特開２００２−３２２０４４号）。アガリクス茸抽出物を真皮線維芽細胞の代謝活性化剤として含有する皮膚外用剤（特開平１１−８００１６号、特開平１１−１９９４３０号、特開平１１−２９２７８５号）、抗ヒスタミン作用を有するカバアナタケ抽出物を含有する化粧料（特開平８−７３３１５号）、抗ヒスタミン、ヒアルロニダーゼ阻害及びチロシナーゼ阻害作用を有するメシマコブ子実体抽出物を含有する皮膚外用剤（特開２００２−２４１３００号）が開示されている。しかしながら、これら種々の担子菌類の抽出物は、皮膚老化の起因となる紫外線等による外的要因または加齢等からの内的要因を個々に改善する目的の皮膚外用剤又は化粧料である。しかし皮膚の老化現象は各々独立して現れることは稀であり、外的及び内的要因が重なり合って現れることが多い。このため皮膚老化防止用の外用剤乃至化粧料は二成分以上の配合として使用され、各成分の配合比、質的相違はそれぞれの効果発現に困難を伴う。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は皮膚に発生するシワ、皮膚弾性の低下、肌荒れ、シミ、炎症等々の皮膚老化症状に対して、直接的影響を与える紫外線を遮断し、皮膚中での活性酸素生成を防止し、真皮線維芽細胞の賦活と増殖促進作用を併せ有する皮膚外用剤乃至化粧料を得ることを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは栽培が困難とされてきたキコブタケ属フエリナス・バウミイ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ  ｂａｕｍｉｉ）の人工栽培に成功し、その子実体の超微粉化により制癌効果が増強されることを発明し、健康食品として特許出願した（特願２００２−８７１４３号）。今回は、フエリナス・バウミイ子実体超微粉化物の水抽出物に紫外線遮断効果、活性酸素生成防止効果及び真皮線維芽細胞の賦活化と増殖促進効果を併せ有することが明らかとなり、皮膚に発生するシワ、皮膚弾性の低下、肌荒れ、シミ、炎症等々の外的及び内的要因に起因する皮膚老化諸症状の防止或いは改善に優れた効果を発揮する皮膚外用剤乃至化粧料を提供する。本発明のフエリナス・バウミイ子実体超微粉化物の熱水抽出物は安全性が高く、安定性に優れており、製剤化は製剤技術の分野で常用される方法により、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、ジェル剤等の皮膚外用剤乃至化粧料に加工することが出来る。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明のキコブタケ属フエリナス・バウミイ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ  ｂａｕｍｉｉ）株はＭＹＣＯＴＡＸＯＮ，Ｖｏｌ．６７，１９１−２００（Ａｐｒｉｌ−Ｊｕｎｅ  １９９８）に図説で詳述されており、温帯アジアに広く分布し、その多くはバイカウツギ（Ｓｙｒｉｎｇａ）又はスイカズラ（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）の生木に寄生する。本菌株に由来する報告はなく、一方類縁のキコブタケ属フエリナス・リンテウス（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ  ｌｉｎｔｅｕｓ）株には、その培養菌糸体又は子実体からの制癌物質の製造法（特公平６−５５１３３号、特開昭４８−４０９９７号、特公昭４９−３２９３１号、特許３０９３１９４号等）或いは皮膚外用剤（特開平７−３１６０３５号、特開２００２−２４１３００号）等の開示がある。本発明者らは本発明のキコブタケ属フエリナス・バウミイ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ  ｂａｕｍｉｉ）株と類縁のキコブタケ属フエリナス・リンテウス（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ  ｌｉｎｔｅｕｓ）株との相異を明らかにするため、ＤＮＡ比較実験を行った。
【０００７】
【比較例】人工栽培フエリナス・バウミイ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ  ｂａｕｍｉｉ）子実体とフエリナス・リンテウス（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ  ｌｉｎｔｅｕｓ）とのＤＮＡ比較実験を実施した。フエリナス・リンテウス菌株は、Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ  ｌｉｎｔｅｕｓ  ＩＦＯ  ６９８９（財団法人発酵研究所より分与）を使用した。上記各菌株をポテトデキストロース寒天培地上において２週間、２７°Ｃで培養後、麦芽エキス培地に移し、更に１０日間、２７°Ｃで培養した。得られた各菌株の菌糸体からＤＮＡ抽出キット（「Ｇｅｎとるくん」タカラ製）を用いて鋳型となるＤＮＡを抽出した。得られた各鋳型ＤＮＡを用いて、ＲＡＰＤ−ＰＣＲ法（「Ｒｅａｄｙ−Ｔｏ−Ｇｏ  ＲＡＰＤ分析キット」アマシャム−ファルマシア−バイオテク製）により遺伝子断片を増幅し、アガロースゲル電気泳動を用いて遺伝子の解析を行った。結果を表１及び図１に示す。
【０００８】
【表１】
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【０００９】上記表１に示されているように、ＤＮＡのバンド総数は４７本、このうち本発明のフエリナス・バウミイ菌株は３５本、比較のフエリナス・リンテウス菌株は１２本あり、また泳動距離が一致したものは僅かに５本（１０．６％）であった。検出バンド数はプライマー（ｐｒｉｍｅｒ）結合部位の数、泳動距離はＤＮＡ合成距離に依存するため、この双方の大きな相異は各々のＤＮＡ塩基配列が大きく異なっていることを示しており、フエリナス・バウミイ菌株とフエリナス・リンテウス菌株とが明らかに違うことを示している。
【００１０】次いで本発明者らはフエリナス・バウミイ子実体微粉末の水抽出物を製造し、紫外線遮蔽試験（試験例１）、活性酸素生成防止試験（試験例２〜４）及び真皮線維芽細胞の増殖促進試験（試験例５）に供した。
【００１１】
【製造例】フエリナス・バウミイの子実体を微粉化（粒子径平均８μｍ）し、該微粉末１００ｇを取り、水１．８リットルを加え、９８°Ｃ以上で２時間煮沸する。得られた抽出液を固液分離し、分画液を３００ｍｌに濃縮して３倍希釈エキスを得た。（分画液を１００ｍｌに濃縮したエキスは単に「抽出エキス」と表示する）
【００１２】
【試験例１】紫外線遮蔽試験
上記「製造例」で製造した３倍希釈エキスをメンブランフィルター（０．４５μｍ）で濾過した後、その濾液を希釈し、１０倍希釈、１５倍希釈及び３０倍希釈エキスを作製し、検液とした。各検液を石英ガラス製セル（層長１ｃｍ）に入れ、水をブランクとして吸光光度計により各検液の透過率を測定した。結果を表２に示す。
【００１３】
【表２】
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【００１４】紫外線照射は、人の皮膚に種々の有害な影響を与える。太陽光線に含まれる長波長紫外線（約４００〜３２０ｎｍ）は皮膚表皮の還元メラニンを酸化して直接日焼けをひきおこし、中波長紫外線（約３２０〜２８０ｎｍ）は皮膚に急性の炎症と火傷を起こす。短波長紫外線（約２８０ｎｍ以下）はその殆どが大気中に吸収され、地表に到達する量は少ないが中波長紫外線と同様に有害とされている。フエリナス・バウミイ子実体微粉末の水抽出エキスは表２から明らかなように３０倍に希釈したエキスに於いても充分な紫外線遮蔽効果が認められた。特に皮膚に有害な影響を及ぼす３００ｎｍ前後の中波長紫外線に対しては３０倍希釈エキスで完全に遮蔽した。
【００１５】
【試験例２】還元呈色法による有害活性酸素類消去効果試験（ＳＯＤ様作用）
前記「製造例」で製造した３倍希釈エキスを希釈し、６倍希釈及び３０倍希釈エキスを作製し、検液とした。各検液をキサンチン−キサンチンオキシダーゼ系の反応により生成するスーパーオキサイドアニオンの消去効果試験に供した。試験はニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ法）又は４−［３−（４−ヨードフェニル）−２−（４−ニトロフェニル）−２Ｈ−５−テトラゾリル］−１，３−ベンゼン２硫酸ナトリウム塩（ＷＳＴ法）の還元呈色の抑制率を測定した。結果を表３に示す。
【００１６】
【表３】
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【００１７】
【試験例３】ＸＹＺ理論に基づく活性酸素類消去効果試験（ＳＯＤ様作用）
大久保一良らのＸＹＺ微弱発光法（ジャパンフードサイエンス，８号，１８−２１（１９９９））に従って、フエリナス・バウミイの子実体微粉末熱水抽出エキスの活性酸素消去能を測定した。本方法は、天然ラジカル消去物質が活性酸素及びアセトアルデヒド存在下で微弱発光する現象を利用して、活性酸素消去能の測定に用いられている。この微弱発光は、Ｘ（活性酸素種）、Ｙ（プロトン、エレクトロン供与体）、Ｚ（触媒種）の三つ巴反応で生じ、Ｙ（活性酸素消去電子供与体）としての作用、Ｚ（活性酸素消去触媒）としての能力、つまり活性酸素消去能力の強弱が発光輝度としてビットマップイメージ上に現れ、数値化することができるので、活性酸素消去物質のアッセイに有用である。
【００１８】検液として前記「製造例」で製造した３倍希釈エキスを使用した。Ｘ試薬に３．７５％ギ酸溶液、Ｙ試薬に没食子酸飽和１０％アセトアルデヒド溶液、Ｚ試薬に重炭酸カリウム飽和１０％アセトアルデヒド溶液を使用した。試験は３倍希釈エキス０．１ｇに、ＸＹ試薬、ＸＺ試薬、ＸＹＺ試薬の組合わせで、各試薬１ｍｌを加え、１０分間反応させ、高感度ＣＣＤカメラで観察し発光輝度を測定した。検液のＹとしての輝度（ＸＺ試薬で発光を観察）、Ｚとしての輝度（ＸＹ試薬で発光を観察）及び消去増強作用としての輝度（ＸＹＺ試薬で発光を観察）を表４に示す。
【００１９】
【表４】
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【００２０】
【試験例４】ＥＳＲスピントラップ法による有害活性酸素類消去効果試験（ＳＯＤ様作用）
活性酸素には四種類あり、スーパーオキサイドアニオンラジカル（・Ｏ−２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ハイドロキシラジカル（・ＯＨ）及び過酸化水素（ＨＯＯＨ）の四種の中、ＥＳＲスピントラップ法はスーパーオキサイドアニオンラジカル（・Ｏ−２）及び一重項酸素（１Ｏ２）を測定するのに最適な方法である。検液として前記「製造例」に従い１０倍希釈エキスを作製した。対照には活性酸素消去能力の強いビタミンＥを使用した。結果を表５に示す。
【００２１】
【表５】
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【００２２】上記試験例２〜４の活性酸素消去効果試験の中、試験例２の表３はフエリナス・バウミイの子実体微粉末熱水抽出エキスの３倍希釈エキスが、試験したＮＢＴ法及びＷＳＴ法において、共に強力な活性酸素消去能を有し、ＷＳＴ法では３０倍希釈エキスでも充分活性を保持していることを示した。試験例３の表４からは、３倍希釈エキスが触媒的でなく直接的な活性酸素消去能を有し、しかも活性酸素消去作用を全体的に増強させていることを証明した。試験例４の表５では１０倍希釈エキスでも、ビタミンＥよりも強力な活性酸素消去効果があることを示した。
【００２３】外的及び内的要因により皮膚に生じる過酸化脂質の生成・蓄積が、皮膚の老化（シワ、たるみ、老人性色素等）に影響を及ぼす事が報告されている。皮膚に於ける過酸化脂質の抑制剤としては、ラジカル消去剤のビタミンＥが利用されているが脂溶性で水に難溶なため、その適用範囲が制限される。本発明のフエリナス・バウミイの子実体微粉末熱水抽出エキスは水溶性で、しかも試験例２〜４の表３〜５に示されている様に直接的で強力な活性酸素消去能を有しており皮膚老化の予防・改善に好適である。
【００２４】
【試験例５】ヒト皮膚線維芽細胞の増殖促進効果試験
実験材料は、ヒト成人皮膚線維芽細胞にＦｉｂｒｏｃｅｌｌ［ＮＨＤＦ（ＡＤ）クラボウ製］、培地にはメデイアム１６０Ｓ［ＬＳＧＳ（２％添加）  クラボウ製］を使用した。検液は、前記「製造例」に従い製造した抽出エキスを培地メデイアム１６０Ｓで１、０．１、０．０１、０．００１％に希釈し作製した（細胞への添加時には更に１／１０に希釈される）。またコントロールはメデイアム１６０Ｓのみを使用した。実験はヒト成人皮膚線維芽細胞を２５０  ｃｅｌｌｓ／ｍｌに調製し、１２穴細胞培養用プレートに９００μｌずつ分注した。次いで各検液を１００μｌずつ添加し、軽く振とうした後３７°Ｃ、５％ＣＯ２の条件で培養を行った。５日後に培地を全て抜き取り、メデイアム１６０Ｓ  ９００μｌと検液１００μｌを加えて更に５日間培養を行った。培養後、トリプシン−ＥＤＴＡ液により細胞を各ウェルから剥離し、メデイアム１６０Ｓ  ３００μｌに懸濁させ、ビュルケルチュルク血球計数板を用いて、顕微鏡により細胞数を測定した。細胞増殖率は以下の式で算出した。
細胞増殖率（％）＝（検液を添加した細胞数）÷（コントロール細胞数）×１００
実験結果を表６に示す。
【００２５】
【表６】
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【００２６】表６に示されている様に、フエリナス・バウミイ子実体微粉末の水抽出エキスは細胞添加時の濃度で０．０００１％の時、コントロールに対し約２倍の細胞増殖を促進した。また高濃度に成るにつれ濃度依存的に細胞増殖は促進されない傾向を示した。
【００２７】
【実施例】次に本発明を詳細に説明するため、前記「製造例」で製造したフエリナス・バウミイ子実体微粉末の水抽出３倍希釈エキスを用いて調製した処方例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２８】実施例−１  ローション剤
処方                                              配合比
１．エタノール                                    ５    （重量％）
２．クエン酸                                      ０．１
３．クエン酸ナトリウム                            ０．２
４．防腐剤                                        ０．２
５．フエリナス・バウミイ３倍希釈抽出エキス    ０．０１〜３０
６．精製水                                加えて１００ｍｌとする
上記防腐剤はパラベン類、ヒノキチオール又はフェノキシエタノールから選択される。製法は成分１〜６を均一に溶解し、濾過して製品とする。
【００２９】実施例−２  ジェル剤
処方                                                配合比
１．アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体        ０．６（重量％）
２．水酸化カリウム                                  ０．３
３．１，３−ブチレングリコール                      ５
４．防腐剤                                          ０．２
５．フエリナス・バウミイ３倍希釈抽出エキス    ０．０１〜３０
６．精製水                                加えて１００ｍｌとする
上記防腐剤はパラベン類、ヒノキチオール又はフェノキシエタノールから選択される。製法は成分６に成分１を均一に溶解し、成分３に成分４を溶解して添加し、次いで成分２を加えて増粘させ、成分５を添加混合して製品とする。
【００３０】実施例−３  クリーム剤
処方                                                配合比
１．ポリオキシエチレンセチルエーテル                  ２  （重量％）
２．モノステアリン酸グリセリン                      １５
３  グリセリン                                        １
４．パルミチン酸イソプロピル                        １５
５．ワセリン                                        １０
６  パラヒドロキシ安息香酸エチル                      ０．１
７．パラヒドロキシ安息香酸プロピル                    ０．１
８．フエリナス・バウミイ３倍希釈抽出エキス          ３０
９．精製水                                          ２６．８
製法は成分１〜５の油相成分を混合、７５〜８５°Ｃに加熱し攪拌溶解する。一方、成分６〜９の水相成分を混合、約８０°Ｃで加熱攪拌し、該溶解液を前記油相成分に混合し、約５０°Ｃを保持しながら乳化専用のホモミキサーで１時間攪拌する。真空状態で脱気攪拌しながら、品温が２５〜３０°Ｃになるまで徐冷し製品とする。
【００３１】実施例−４  軟膏剤
処方                                                配合比
１．白色ワセリン                                    ０．５  （重量％）
２．プラステイベース                              ９５．２５
３．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                  １
４．パラヒドロキシ安息香酸エチル                    ０．０２
５．パラヒドロキシ安息香酸プロピル                  ０．０２
６  グリセリン                                      ０．２５
７．フエリナス・バウミイ３倍希釈抽出エキス          ３
製法は成分１〜３の油相成分を混合、７０〜８０°Ｃに加熱し攪拌溶解する。一方、成分４〜７を混合、約６０°Ｃで攪拌溶解し、該溶解液を前記油相成分に混合し、約５０°Ｃで１時間攪拌する。真空状態で脱気攪拌しながら、品温が２５〜３０°Ｃになるまで徐冷し製品とする。
【００３２】
【発明の効果】以上に示したように、人工栽培したフエリナス・バウミイ株の子実体微粉末水抽出エキスが、紫外線遮断効果、有害活性酸素生成防止効果及び真皮線維芽細胞の賦活と増殖促進効果を併せ有し、該抽出エキスを製剤化し、皮膚に発生するシワ、皮膚弾性の低下、肌荒れ、シミ、炎症等々の外因及び内因性の皮膚老化諸症状の防止及び改善に優れた効果のある皮膚外用剤乃至化粧料を提供することができた。
【図面の簡単な説明】
【図１】フエリナス・バウミイ（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ  ｂａｕｍｉｉ）菌株とフエリナス・リンテウス（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ  ｌｉｎｔｅｕｓ）菌株の各ＤＮＡの比較を示す図である。
【図１】
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