(57)【要約】【課題】個人識別のために核ＤＮＡの多型を用いることは、個人識別能は高いものの、検査材料から十分かつ良好な状態の各ＤＮＡが得られないと検出は不可能である。一方、ｍｔＤＮＡの多型を個人識別に用いるためには、多型選択の指針がなく、多型の頻出するＤ−ＬＯＯＰ領域に頼らざるを得なかった。【解決手段】本発明の示すｍｔＤＮＡ多型選択の指針に従い多型の組み合わせを解析することにより、より効果的な個人識別が行える。また、従来より行われているＤ−ＬＯＯＰ領域以外の多型の配列に加え、本発明の示すＤ−ＬＯＯＰ領域外の多型を解析することにより更に高精度の個人識別が行える。本発明の示すＤ−ＬＯＯＰ領域外の多型の組み合わせを解析することにより、効率的な遺伝子型の分類が行え、特に系統発生的分析において有効である。本発明を組成分析法または分光分析法または形状観察法と組み合わせることで、更に高精度の個人識別が行える。【選択図】  無し【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトミトコンドリアＤＮＡ塩基配列の多型のうち、３０３位のＣ連続の連続数、５１４−５１７位のＣＡ繰り返し配列の繰り返し数、５１７８位の置換、１６５１９位の置換、１６１８９位の置換、８７０１位の置換、１５２位の置換、１６３１１位の置換、１９９位の置換、１９５位の置換、１４６位の置換、１６１８３−１６１８４位間に挿入されるＣ連続の連続数、９８２４位の置換、７０９位の置換、１６１２９位の置換、１１２１５位の置換、５６７−５６８位間に挿入されるＣ連続の連続数、５７７３位の置換、１６２９１位の置換、１６０９３位の置換、１６１８３位の置換、５８９４−５８９５位間に挿入されるＣ連続の連続数、９５５−９５６位間に挿入されるＣ連続の連続数、２１５０−２１５１位間の挿入、１６３０９位の置換、１０３７３位の置換、２０７位の置換、８２７位の置換、１５９２４位の置換、１６１８７位の置換、１６３１９位の置換、１６２２３位の置換、１９４位の置換、１３６５１位の置換、１６３６２位の置換、１６２０９位の置換、１６１９４位の置換、１６２４５位の置換、１５０位の置換、１５３位の置換、１０４１０位の置換、１１７２２位の置換、１６０８６位の置換、１１５３６位の置換、４７０５位の置換、１６１１１位の置換、５１４７位の置換、５４６０位の置換、４８８３位の置換、１６１７４位の置換、１６３９０位の置換、２６０位の置換、８０２０位の置換、１６１８８位の置換、６４位の置換、６８位の置換、２００位の置換、２０４位の置換、１０８０１位の置換、１６１７６位の置換、１６２２７位の置換、１３１０位の置換、３２０６位の置換、７８５３位の置換、１４６０５位の置換、１６１２６位の置換、１６１７２位の置換、１６２６０位の置換、１６２７８位の置換、１６３４４位の置換から複数を組合せて検出することを特徴とする個人識別法であり、先に記す多型ほど選択の優先度が高い個人識別法。
【請求項２】
ヒトミトコンドリアＤＮＡ塩基配列のうち、Ｄ−ＬＯＯＰ（１６０２４−５７６位）配列情報に加えて、９８２４位の置換、８４１４位の置換、１０４１０位の置換、６６３位の置換、５１０８位の置換、１１２１５位の置換、５８９４−５８９５位間に挿入されるＣ連続の連続数、９５５−９５６位間に挿入されるＣ連続の連続数、８０２０位の置換、１４６０５位の置換、２１５０−２１５１位間の挿入、１５９２４位の置換、５７７３位の置換、１５３１４位の置換、１３７０８位の置換、２７６６位の置換、５１４７位の置換、３６９６位の置換、１３４６１位の置換、３２０６位の置換、４７１５位の置換、４７９３位の置換、１３６５１位の置換、２７０６位の置換、１１２５７位の置換、８２７位の置換、５４６０位の置換、１１５３６位の置換、２２４６位の置換、８５６位の置換、９２９９位の置換、１０４１位の置換、１１４８位の置換、４８８３位の置換、１１５３０位の置換、２８３５位の置換、５５８２位の置換、１２１７２位の置換、１４６９６位の置換、４２０９位の置換、５３１９位の置換、１１１９１位の置換、８２９６位の置換、８９９４位の置換、１１２５３位の置換、１３７６８位の置換、１１６６８位の置換から複数を組合せて検出することを特徴とする個人識別法であり、先に記す多型ほど選択の優先度が高い個人識別法。
【請求項３】
請求項２記載の６６３位を連鎖する１７３６位、４２４８位、４６５５位、４８２４位のいずれかに代替し、または、５７７３位を連鎖する１２８８０位、１４９４４位のいずれかに代替し、または、４７１５位を連鎖する７１９６位、１５４８７位のいずれかに代替し、または、４７９３位を連続する７８６７位、８２００位、１５３２３位、１５４９７位、１５８６０位のいずれかに代替し、または、２２４６位を連鎖する１３８２７位、１４０９１位、１４９２７位、１５２１７位、１５８０５位のいずれかに代替し、または、１０４１位を連鎖する３３９４位、４４９１位、９２４２位、１４３０８位のいずれかに代替し、１１４８位を連鎖する６６２０位、９６６７位、１２０８８位、１２６５１位のいずれかに代替し、または、２８３５位を連鎖する４６７０位、６１７９位、６６７１位、１３０５０位に代替し、または、４２０９位を連鎖する１４３２５位、１５３３１位のいずれかに代替する請求項２記載の個人識別法。
【請求項４】
ヒトミトコンドリアＤＮＡ塩基配列のうち、Ｄ−ＬＯＯＰ領域を避ける目的があった場合に、５１７８位の置換、９８２４位の置換、８７０１位の置換、７０９位の置換、１２７０５位の置換、５８９４−５８９５位間に挿入されるＣ連続の連続数、１４６６８位の置換、８４７３位の置換、５１４７位の置換、１４４７０位の置換、５７７３位の置換、５４６０位の置換、１１９１４位の置換、１０３１０位の置換、１３７０８位の置換、８０２０位の置換、１２３５８位の置換、２７６６位の置換、８２５１位の置換、１０３９８位の置換、１４４２位の置換、９５５−９５６位間に挿入されるＣ連続の連続数、１１２１５位の置換、８２７位の置換、９３７７位の置換、１０３７３位の置換、１５９２４位の置換、２１５０−２１５１位間の挿入、１３６５１位の置換、１１０８４位の置換、１３１０位の置換、１４２８１位の置換、１０９１５位の置換、１４５６９位の置換、９２９９位の置換、９６１位の置換、９９６２位の置換、１３９２８位の置換、３６４４位の置換、１０４１０位の置換、９０５３位の置換、８５６位の置換、６６２０位の置換、１１６４７位の置換、１００８４位の置換、５２３１位の置換、１５５２４位の置換、４７０５位の置換、１４２００位の置換、１２５０１位の置換、１１５３６位の置換、６２５３位の置換、１１９６３位の置換、１４００２位の置換、１４２８７位の置換、１２４０６位の置換、３３９４位の置換、１０８０１位の置換、３０１０位の置換、４３８６位の置換、１３１３５位の置換、４８８３位の置換、４０４８位の置換、３２０６位の置換、１４６０５位の置換、４８２０位の置換、８２７１−８２７９位の９塩基の配列に対する欠失または挿入、６３９２位の置換、１５８７４位の置換、１５９４１位の置換、１１１９位の置換、５０４９位の置換、４２４８位の置換、１５９８位の置換、１１７２２位の置換、２６２６位の置換、７８５３位の置換、１２７７１位の置換、１１０１６位の置換、１４９４４位の置換、３３１６位の置換、９５７５位の置換、６８１位の置換、４８３３位の置換、５１０８位の置換、６７５２位の置換、９５４８位の置換、１０２３８位の置換、４８２４位の置換、６０２３位の置換、１２３７２位の置換、２７７２位の置換、１１０１７位の置換、１３５９０位の置換、１５２１８位の置換、１５９５４位の置換から複数を組合せて検出する個人識別法であり、先に記す多型ほど選択の優先度が高い個人識別法。
【請求項５】
請求項４記載の８４７３位を連鎖する１４９７９位に代替し、または、１１１９位を連鎖する３４９７位に代替し、または、６８１位を連鎖する１０４８位、５１５３位、１５７２４位のいずれかに代替し、または、６７５２位を連鎖する１５７８４位に代替する請求項４記載の個人識別法。
【請求項６】
法医学分野での個人識別、親子鑑定、疫学調査、考古学調査において、生体由来物質の由来となる個人を識別することを特徴とする請求項１から請求項５のいずれかに記載のヒトミトコンドリアＤＮＡの多型を用いた個人識別法。
【請求項７】
産業上の生産工程において、異物として混入する生体由来物質に関して、前記異物の由来となる個人を識別することを特徴とする請求項１から請求項５のいずれかに記載のヒトミトコンドリアＤＮＡの多型を用いた個人識別法。
【請求項８】
生体由来物質が皮膚、爪、毛髪、睫毛、眉毛、髭、陰毛、腋毛等の毛、血液、涙、鼻汁、唾液、精液、膣分泌液等の体液など、その内部にミトコンドリアＤＮＡを含有する物質である、請求項６または請求項７のいずれかに記載の個人識別法。
【請求項９】
請求項１から請求項８のいずれかに記載のヒトミトコンドリアＤＮＡの多型を用いた個人識別方法と、組成分析法または分光分析法または形状観察法とを組合せる個人識別法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヒトミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）の多型解析に関するものであり、そのｍｔＤＮＡ多型を利用して個人識別を行う技術に関するものである。この技術は、法医学、親子鑑定、疫学調査、考古学調査等における個人識別や、製品製造工程において異物として混入する毛髪等生体由来物質の由来特定のための個人識別に応用することができる。
【０００２】
【従来技術】
近年になって、毛や体液等の生体由来物質に含まれる核酸の配列から個人を識別する技術が、法医学等の分野で活発に応用されるようになってきた。個人識別のために最も頻繁に用いられている核酸情報は、核ＤＮＡのマイクロサテライトまたはミニサテライトの繰り返し数の多型である（非特許文献１参照）。しかし、個人識別が必要とされる生体由来物質が、少量である場合や、長時間の経過、熱処理・薬物処理等により劣化している場合には、十分かつ良好な状態の核ＤＮＡを得ることが出来ずに、核ＤＮＡのマイクロサテライトまたはミニサテライトによる解析が困難な場合が多い。そのような際に、核ＤＮＡに比べて数百倍のコピー数を持つｍｔＤＮＡを個人識別に用いる場合がある。ｍｔＤＮＡには、高頻度で突然変異が発生することから、多種類の多型が知られている。この高頻度の突然変異は、主としてミトコンドリア中に存在する高レベルの活性酸素によって引き起こされているものと考えられている（非特許文献２参照）。このようなｍｔＤＮＡ多型のうち、個人差の大きいＤ−ＬＯＯＰ領域（約１．１キロベースの非翻訳領域）、特に超可変領域１（１６０２４−１６３８３位辺り）、２（５７−３７２位辺り）と呼ばれる部位の配列解読が、個人識別を目的に行われている（非特許文献３参照）。
【０００３】
ｍｔＤＮＡ多型は、上記Ｄ−ＬＯＯＰ領域（非翻訳領域）のみならず、翻訳領域でも多く観察され、翻訳領域の多型は、民族分化過程を特徴づける目的で広く用いられている（非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６参照）。それは、非翻訳領域においては、高頻度にｍｔＤＮＡの突然変異が起こるために、先祖返り（ｒｅｖｅｒｔａｎｔ）と呼ばれる現象が容易に生じ得、系統発生的分析が困難なためである（非特許文献７参照）。
【０００４】
ミトコンドリアＤＮＡのみならず、核ＤＮＡにも広く存在する一塩基多型（ｓｉｎｇｌｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ：  ＳＮＰｓ）を検出するために、各種の簡便な解析法が知られている（非特許文献８参照）。例えば、ダイレクトシークエンス、ＤＮＡマイクロアレイ（非特許文献９参照）等を使用したハイブリダイゼーション法、Ｉｎｖａｄｅｒ法（非特許文献１０参照）、Ｔａｑｍａｎプローブ法（非特許文献１１参照）、  Ｍａｓｓｃｏｄｅタグ法（非特許文献１２参照）、ａｌｌｅｌｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＰＣＲ法（非特許文献１３参照）、制限断片長多型（ＲＦＬＰ）法（非特許文献１４参照）が知られている。
【０００５】
ｍｔＤＮＡの翻訳領域における多型を検出することに対しては、従来、ＲＦＬＰ法が最も広く使われてきた（非特許文献１５参照）。
【０００６】
また、多様固相蛍光ミニシークエンス（ｍｕｌｔｉｐｌｅｓ  ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｍｉｎｉｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）（非特許文献１６参照）と、免疫化シークエンス特異的オリゴヌクレオチドプローブアッセイ（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｒｏｂｅ−ｂａｓｅｄ  ａｓｓａｙ）（非特許文献１７参照）とは、同じくｍｔＤＮＡ多型の分析に応用されている。
【０００７】
上記の技術背景から、我々も、特願２００２−０８０４４９およびこれの元論文（非特許文献１８参照）にて、ＡＰＬＰ法（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔ−Ｌｅｎｇｔｈ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ）に基づく解析を出現頻度の比較的高いｍｔＤＮＡ多型６箇所について実施することにより、個人識別が有効に行えることを示した。しかしそこでは、個人識別に効果的なｍｔＤＮＡ多型の選択法や優先順位までは言及していなかった。
【０００８】
【非特許文献１】
Ｎａｋａｍｕｒａ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８７，  ２３５，  １６１６−１６２２
【非特許文献２】
Ｒｉｃｈｔｅｒ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９８８，  ８５，６４６５−６４６７
【非特許文献３】
Ｉｎｔ  Ｊ  Ｌｅｇａｌ  Ｍｅｄ  １９９３，  １０６（２），  ８５−９０
【非特許文献４】
Ｃａｎ，  Ｌ．  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  １９８７，  ３２５，  ３１−３６
【非特許文献５】
Ｑｕｉｎｔａｎａ−Ｍｕｒｃｉ，  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．  １９９９，  ２３，  ４３７−４４１
【非特許文献６】
Ｈｏｌｌａｎｄ，  Ｍ．  Ｍ．  Ｐａｒｓｏｎｓ，  Ｔ．  Ｊ．，  Ｆｏｒｅｎｓ．  Ｓｃｉ．  Ｒｅｖ．  １９９９，  １１，  ２１−５０
【非特許文献７】
Ｃｏｒｉｎｎａ  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅｔ．  ２００２，  ７０，  １１５２−１１７１
【非特許文献８】
Ｃａｒｇｉｌｌ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １９９９，  ２２，  ２３１−２３８
【非特許文献９】
Ｐａｔｒｉｃｋ，  Ｏ．  Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １９９９，  ２１，  ３３−３７
【非特許文献１０】
Ｖｉｃｔｏｒ，  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １９９９，  １７，  ２９２−２９６
【非特許文献１１】
Ｓｈｉ，  Ｍ．Ｍ．，  Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  ２００１，  ４７，  １６４−１７２
【非特許文献１２】
インターネット  ＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｈｉｍａｄｚｕ−ｂｉｏｔｅｃｈ．ｊｐ／ｒｅｓｅａｒｃｈ／ｇｅｎｏｍｅ／ｓｎｐ−１．ｈｔｍｌ＞［検索日  平成１５年４月９日］
【非特許文献１３】
Ｓｏｒｅｎ，  Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ  ２０００，  １０，  ２５８−２６６
【非特許文献１４】
Ｊａｚｗｉｎｓｋａ，  Ｅ．Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ  １９８８，  ４３，１７５−１８１
【非特許文献１５】
Ｃａｎ，  Ｌ．  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  １９８７，  ３２５，  ３１−３６：Ｔｏｒｒｏｎｉ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １９９２，  １３０，  １５３−１６２
【非特許文献１６】
Ｔｕｌｌｙ，  Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １９９６，  ３４，  １０７−１１３
【非特許文献１７】
Ｓｔｏｎｅｋｉｎｇ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅｔ．  １９９１，  ４８，  ３７０−３８２
【非特許文献１８】
Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  ２００１，２２，３５３３−３５３８
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
前述のように、個人識別のために核ＤＮＡの多型を用いることは、個人識別能は高いものの、検査材料から十分かつ良好な状態の核ＤＮＡが得られないと、検出が不可能である。
核ＤＮＡの数百倍の数存在し、かつ環状の状態を取るため環境変化に比較的耐性なｍｔＤＮＡの多型を個人識別に用いれば、そうした問題の多くが解決されると考えられるが、これまで多型選択の指針が無かったため、ｍｔＤＮＡにて個人識別する場合は、多型の頻出するＤ−ＬＯＯＰ領域に頼らざるを得なかった。
【００１０】
本発明は上記の事情に鑑みてなされたものであり、その目的は、多人数のｍｔＤＮＡの配列解析から、個人識別に有効な多型の組合せの指針を提供し、ＤＮＡ鑑定による個人識別を、より高感度化かつ高精度化することにある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、先ず、多人数のｍｔＤＮＡ全配列の解析を行った。
なお、ｍｔＤＮＡの１６，５６９塩基対の全塩基配列は、１９８１年に決定されており、ケンブリッジ対照配列として知られている（非特許文献１９参照）。
【００１２】
【非特許文献１９】
Ａｎｄｅｒｓｏｎ，  Ｓ．，  Ｂａｎｋｉｅｒ，  Ａ．Ｔ．，Ｂａｒｒｅｌｌ，  Ｂ．Ｇ，  ｄｅ  Ｂｒｕｉｊｎ，  Ｍ．Ｈ．Ｌ．，  Ｃｏｕｌｓｏｎ，  Ａ．Ｒ．，  Ｄｒｏｕｉｎ，  Ｊ．，Ｅｐｅｒｏｎ，Ｉ．Ｃ．，Ｎｉｅｒｌｉｃｈ，  Ｄ．Ｐ．，Ｒｏｒ，  Ｂ．Ａ，  Ｓａｎｇｅｒ，  Ｆ．，  Ｓｃｈｒｅｉｅｒ，  Ｐ．Ｈ．，Ｓｍｉｔｈ，  Ａ．Ｈ．Ｈ．，Ｓｔａｄｅｎ，  Ｒ．，  ＆  Ｙｏｕｎｇ，  Ｉ．Ｇ．：    Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｇｅｎｏｍｅ．  Ｎａｔｕｒｅ  ２９０，  ４５７−４６５，  １９８１
【００１３】
日本全国より集めた４８０人のｍｔＤＮＡの全配列を決定し、表１から表７に示す多型およびその頻度の情報を得た。表１から表７には、出現頻度が１％以上（４８０人中５人以上に存在する）であった変異について、最頻出型が５０％に近いものから順に示している。なお、塩基挿入の有無のみを計数し、挿入される塩基数は考慮していない。また、塩基欠失の多型の場合は、表中に「―」として示している。
これらの多型は少なくとも日本人には広く存在する可能性が高く、日本人の個人識別に有効な多型と考えられる。
【表１】
2004305177.tif 000002
【表２】
2004305177.tif 000003
【表３】
2004305177.tif 000004
【表４】
2004305177.tif 000005
【表５】
2004305177.tif 000006
【表６】
2004305177.tif 000007
【表７】
2004305177.tif 000008
【００１４】
これら多型ローカスのうち、情報エントロピーの大きい（より２分割に近い分け方となる）ものほど、個人識別の効果が大きい。しかし、複数の多型を同時に用いて個人識別する場合、情報エントロピーが大きいものから複数用いることは、多型には連鎖があるため、必ずしも最善ではない。また、検出すべき多型の増大は費用・作業量等の増大をもたらすため、出来る限り効果的に個人識別が行える多型の組合せを選択することが求められる。
【００１５】
これら複数名の多型情報から、個人識別に用いる多型を複数（ｎ個）選択するには、理想的には、考え得るｎ個の多型の組合せ全てについて、個人識別能を評価し、目的に相応した多型組合せを選出することが望ましい。具体的方法としては、多型のうち任意のｎ個によって、その集団を複数の遺伝子型に分類し、最頻出型の数が最小となる組合せを選出する方法、あるいは分別される（少なくとも１人存在する）型数が最大となる組合せを選出する方法、あるいは散布度を示す統計的数値（人数の範囲、平均偏差、分散、標準偏差等）を最小とする組合せを選出する方法等が考えられる。しかし、扱う情報量（人数と多型数）が増えるにつれ、計算量は膨大になり、最適値の算出に膨大な時間が必要となる。
【００１６】
多型選択の短時間化に有効な方法として、本発明者らは、Ｍａｔｃｈｉｎｇ  Ｐｅｒｓｕｉｔ法による方法を採用した。具体的には、各多型を採用したときの情報エントロピーを算出し、最大エントロピーを持つものをまず決定する。次に、既に決定した多型ローカスに対して組合せを変えながら最大のエントロピーを持つものを次の段のタイピング候補とするように順次決定する。識別能が向上する限り、この処理を進める。
【００１７】
このようにして、求められる識別能に応じて、先に選択されたものから順に解析する多型ローカスを決定することにより、効果的に個人識別できる。多型ローカスの検出法としては、従来知られている多型解析の手段、例えば、従来技術として示した、ＤＮＡマイクロアレイ等を使用したハイブリダイゼーション法、Ｔａｑｍａｎプローブ法、Ｍａｓｓｃｏｄｅタグ法、Ａｌｌｅｌｅ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＰＣＲ法、ＡＰＬＰ法等を用いることが出来る。繰返し配列の繰返し数については、ＡＰＬＰ法等を用いることが出来る。特にＣ連続の検出にはＰｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ法を用いることができる。
【００１８】
上記の方法は、従来より行われているＤ−ＬＯＯＰ領域の塩基配列決定では識別されない集団について、Ｄ−ＬＯＯＰ領域外の多型によって識別を行う場合の多型の選択にも有効である。この場合、先ずＤ−ＬＯＯＰ領域の多型にて個人識別を行う。次に、それで個人識別されなかった（一人に特定されなかった）人々についてのみ、上記計算を行う。
Ｄ−ＬＯＯＰ領域外（翻訳領域）の多型を用いて遺伝子型を分類する場合にも、上記方法は有効である。
【００１９】
【実施例】
［実施例１］
日本人４８０名について、ｍｔＤＮＡ塩基配列の多型のうち、３０３位のＣ連続の連続数、５１４−５１７位のＣＡ繰返し配列の繰り返し数、５１７８位の置換、１６５１９位の置換、１６１８９位の置換、８７０１位の置換、１５２位の置換、１６３１１位の置換、１９９位の置換、１９５位の置換、１４６位の置換、１６１８３−１６１８４位間に挿入されるＣ連続の連続数、９８２４位の置換、７０９位の置換、１６１２９位の置換、１１２１５位の置換、５６７−５６８位間に挿入されるＣ連続の連続数、５７７３位の置換、１６２９１位の置換、１６０９３位の置換、１６１８３位の置換、５８９４−５８９５位間に挿入されるＣ連続の連続数、９５５−９５６位間に挿入されるＣ連続の連続数、２１５０−２１５１位間の挿入、１６３０９位の置換、１０３７３位の置換、２０７位の置換、８２７位の置換、１５９２４位の置換、１６１８７位の置換、１６３１９位の置換、１６２２３位の置換、１９４位の置換、１３６５１位の置換、１６３６２位の置換、１６２０９位の置換、１６１９４位の置換、１６２４５位の置換、１５０位の置換、１５３位の置換、１０４１０位の置換、１１７２２位の置換、１６０８６位の置換、１１５３６位の置換、４７０５位の置換、１６１１１位の置換、５１４７位の置換、５４６０位の置換、４８８３位の置換、１６１７４位の置換、１６３９０位の置換、２６０位の置換、８０２０位の置換、１６１８８位の置換、６４位の置換、６８位の置換、２００位の置換、２０４位の置換、１０８０１位の置換、１６１７６位の置換、１６２２７位の置換、１３１０位の置換、３２０６位の置換、７８５３位の置換、１４６０５位の置換、１６１２６位の置換、１６１７２位の置換、１６２６０位の置換、１６２７８位の置換、１６３４４位の置換（合計７０多型箇所）を検出し、個人識別したところ、８人の１組、６人の２組、５人の２組、４人の４組、３人の９組、２人の３５組、１人の３３７組、合計３９０組に分類された。
【００２０】
［実施例２］
日本人４８０名について、ｍｔＤＮＡ塩基配列の多型のうち、３０３位のＣ連続の連続数、５１４−５１７位のＣＡ繰返し配列の繰り返し数、５１７８位の置換、１６５１９位の置換、１６１８９位の置換、８７０１位の置換（合計６多型、実験例１に示す多型の上位６多型）を検出し、個人識別したところ、３２人の１組、２３人の２組、１９人の１組、１７人の１組、１６人の１組、１５人の２組、１４人の３組、１３人の１組、１２人の２組、１０人の４組、９人の２組、８人の１組、７人の３組、６人の７組、５人の５組、４人の６組、３人の７組、２人の１０組、１人の２２組、合計８１組に分類された。
【００２１】
［実施例３］
日本人４８０名について、ｍｔＤＮＡのＤ−ＬＯＯＰ領域の配列解析により個人識別したところ、１６人の１組、８人の２組、６人の２組、５人の１組、４人の３組、３人の６組、２人の２６組、１人の３４９組、合計３９０組に分類された。個人として特定されなかった１３１人について、Ｄ−ＬＯＯＰ領域外である、９８２４位の置換、８４１４位の置換、１０４１０位の置換、６６３位の置換、５１０８位の置換、１１２１５位の置換、５８９４−５８９５位間に挿入されるＣ連続の連続数、９５５−９５６位間に挿入されるＣ連続の連続数、８０２０位の置換、１４６０５位の置換、２１５０−２１５１位間の挿入１５９２４位の置換、５７７３位の置換、１５３１４位の置換、１３７０８位の置換、２７６６位の置換、５１４７位の置換、３６９６位の置換、１３４６１位の置換、３２０６位の置換、４７１５位の置換、４７９３位の置換、１３６５１位の置換、２７０６位の置換、１１２５７位の置換、８２７位の置換、５４６０位の置換、１１５３６位の置換、２２４６位の置換、８５６位の置換、９２９９位の置換、１０４１位の置換、１１４８位の置換、４８８３位の置換、１１５３０位の置換、２８３５位の置換、５５８２位の置換、１２１７２位の置換、１４６９６位の置換、４２０９位の置換、５３１９位の置換、１１１９１位の置換、８２９６位の置換、８９９４位の置換、１１２５３位の置換、１３７６８位の置換、１１６６８位の置換（合計４７多型部位）を検出して個人識別したところ、６人の１組、４人の４組、３人の４組、２人の２２組、１人の５３組、合計８３組に分類された。即ち、Ｄ−ＬＯＯＰ領域の配列解析と上記４７多型の解析の組合せにより、４８０人を４３２組に分類し、最頻出型を６人とすることが出来た。
【００２２】
［実施例４］
日本人４８０名について、ｍｔＤＮＡのＤ−ＬＯＯＰ領域外の、５１７８位の置換、９８２４位の置換、８７０１位の置換、７０９位の置換、１２７０５位の置換、５８９４−５８９５位間に挿入されるＣ連続の連続数、１４６６８位の置換、８４７３位の置換、５１４７位の置換、１４４７０位の置換、５７７３位の置換、５４６０位の置換、１１９１４位の置換、１０３１０位の置換、１３７０８位の置換、８０２０位の置換、１２３５８位の置換、２７６６位の置換、８２５１位の置換、１０３９８位の置換、１４４２位の置換、９５５−９５６位間に挿入されるＣ連続の連続数、１１２１５位の置換、８２７位の置換、９３７７位の置換、１０３７３位の置換、１５９２４位の置換、２１５０−２１５１位間の挿入、１３６５１位の置換、１１０８４位の置換、１３１０位の置換、１４２８１位の置換、１０９１５位の置換、１４５６９位の置換、９２９９位の置換、９６１位の置換、９９６２位の置換、１３９２８位の置換、３６４４位の置換、１０４１０位の置換、９０５３位の置換、８５６位の置換、６６２０位の置換、１１６４７位の置換、１００８４位の置換、５２３１位の置換、１５５２４位の置換、４７０５位の置換、１４２００位の置換、１２５０１位の置換、１１５３６位の置換、６２５３位の置換、１１９６３位の置換、１４００２位の置換、１４２８７位の置換、１２４０６位の置換、３３９４位の置換、１０８０１位の置換、３０１０位の置換、４３８６位の置換、１３１３５位の置換、４８８３位の置換、４０４８位の置換、３２０６位の置換、１４６０５位の置換、４８２０位の置換、８２７１−８２７９位の９塩基の配列に対する欠失または挿入、６３９２位の置換、１５８７４位の置換、１５９４１位の置換、１１１９位の置換、５０４９位の置換、４２４８位の置換、１５９８位の置換、１１７２２位の置換、２６２６位の置換、７８５３位の置換、１２７７１位の置換、１１０１６位の置換、１４９４４位の置換、３３１６位の置換、９５７５位の置換、６８１位の置換、４８３３位の置換、５１０８位の置換、６７５２位の置換、９５４８位の置換、１０２３８位の置換、４８２４位の置換、６０２３位の置換、１２３７２位の置換、２７７２位の置換、１１０１７位の置換、１３５９０位の置換、１５２１８位の置換、１５９５４位の置換（合計９６多型）の検出により個人識別を行ったところ、１８人の１組、１７人の２組、１３人の１組、１１人の４組、９人の２組、８人の２組、７人の１組、６人の１０組、５人の４組、４人の６組、３人の１４組、２人の２９組、１人の１２６組、合計２０２組に分類された。
【００２３】
【発明の効果】
本発明の示すｍｔＤＮＡ多型選択の指針に従い多型の組合せを検出することにより、より効果的な（より少ない箇所の多型解析にて、求める精度が得られる）個人識別が行える。
従来より行われているＤ−ＬＯＯＰ領域の配列解析に加え、本発明の示すＤ−ＬＯＯＰ領域外の多型を解析することにより、さらに高精度の個人識別を効果的に行える。
本発明の示すＤ−ＬＯＯＰ領域外の多型の組合せを解析することにより、効率的な遺伝子型の分類が行える。本解析法は、特に系統発生的分析において有効である。
本発明は、核ＤＮＡの数百倍の数存在するｍｔＤＮＡの多型解析による個人識別法に関するものであり、核ＤＮＡを用いた個人識別に較べ、数百倍の高感度にて個人識別が行える。また、ｍｔＤＮＡは環状の形態を取り環境変化に強いため、十分かつ良好な状態の核ＤＮＡが得られにくい法医学、考古学、または産業上の製造工程管理等に有用である。
さらに本発明を他の分析・観察方法と組合せれば、さらに高精度の個人識別が行える。