(57)【要約】【課題】簡便な方法により得られる安全性の高い天然物由来の抗腫瘍活性物質を有効成分とした抗腫瘍剤を提供する。【解決手段】スイートコーンを含有した、あるいはスイートコーンのグリコーゲン粗抽出物を含有した抗腫瘍剤。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
スイートコーンを含有することを特徴とする抗腫瘍剤。
【請求項２】
スイートコーンから水抽出したグリコーゲン粗抽出物を含有した抗腫瘍剤であって、該グリコーゲン粗抽出物がタンパク質加水分解工程を経ていない粗抽出物であることを特徴とする抗腫瘍剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規な抗腫瘍剤に関する。詳しくは、スイートコーンを含有した、あるいはスイートコーンから水抽出したグリコーゲン粗抽出物を含有した抗腫瘍剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
グリコーゲンは、澱粉中のアミロース及びアミロペクチンと同様にＤ−グルコースより構成される多糖類であり、Ｄ−グルコースがアルファ−１，４−結合でグリコシド結合した主鎖中の数ヵ所にアルファ−１，６−結合でＤ−グルコースがグリコシド結合し、さらにそのＤ−グルコースにＤ−グルコースがアルファ−１，４−結合でグリコシド結合した側鎖を有する樹枝状の複雑な構造の多糖類と言われている。グリコーゲンは動物において、肝臓で生合成され肝臓や筋肉に多く存在する。また、一般的な食材においては、ホタテ、カキ、アワビ等の貝類やスイートコーンに多く存在し、このような食材の旨味成分であることが知られている。
【０００３】
一方、医学、薬学分野は近年、著しく発達し、生命を救うことのできる有効な薬剤や治療方法が数多く生み出されている。特に、ガン治療に関しては、格段にその技術が進んでいる。しかしながら、ガンは依然として死亡原因の第一位を占めており、従来のガン治療剤として使用されている抗腫瘍剤は強い副作用を有するという問題があった。したがって、安全性の高い抗腫瘍剤が求められるようになり、種々の天然物由来の抗腫瘍活性に関する研究がなされている。
【０００４】
このような状況下、上述したグリコーゲンについても研究が行なわれ、特許第２５８３１８３号公報（特許文献１）には、タンパク質分解酵素を用いて処理、抽出されたグリコーゲンを有効成分とする抗腫瘍剤が記載されている。しかしながら、特許文献１で抗腫瘍活性を実証しているグリコーゲンは、貝類（ホタテ）から熱水あるいは熱蒸気により抽出しタンパク質分解酵素で処理した後、アルコール低温沈殿によりある程度精製した粗グリコーゲンを、更にゲル濾過で精製した特定の分画品のみで、前記粗グリコーゲン、あるいは貝類以外の例えば、グリコーゲンを多く含有したスイートコーン由来のグリコーゲンについては、抗腫瘍活性を有するか何ら実証されていない。また特許文献１では、グリコーゲンの抽出に一般的に使用されているトリクロロ酢酸で単に抽出したグリコーゲンには抗腫瘍活性が無いことを示しており、これより、特定の分画品でない前記粗グリコーゲンに抗腫瘍活性を有するとは考え難い状況であった。したがって抗腫瘍活性を有するグリコーゲンを得るには、上述のような煩雑な工程を要するという問題があった。
【０００５】
【特許文献１】特許第２５８３１８３号公報
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
そこで本発明の目的は、簡便な方法により得られる安全性の高い天然物由来の抗腫瘍活性物質を有効成分とした抗腫瘍剤を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の目的を達成すべく特許文献１では検討されていないグリコーゲンを多く含有するスイートコーンについて鋭意研究を重ねた結果、意外にも精製したグリコーゲンよりもスイートコーンのグリコーゲン粗抽出物のほうが抗腫瘍活性を有すること、更にスイートコーンそのものに抗腫瘍活性を有することを見出し本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、
（１）  スイートコーンを含有した抗腫瘍剤、
（２）  スイートコーンから水抽出したグリコーゲン粗抽出物を含有した抗腫瘍剤であって、該グリコーゲン粗抽出物がタンパク質加水分解工程を経ていない粗抽出物である抗腫瘍剤、
を提供することである。
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下本発明を説明する。なお、本発明において特に限定していない場合、「％」は「質量％」、また「部」は「質量部」を意味する。
まず、本発明で用いるスイートコーンについて説明する。トウモロコシは、一般的に種類の違いにより例えば、硬粒種、馬歯種、甘味種、爆裂種、もち質種、軟粒種等に分れる。スイートコーンは、前記種類の内、甘味種と同義的に使われており、広義にはハニーバンタム、スーパースィートジュビリー等のｓｈ−２遺伝子を有する例えば、スーパースイートコーン等を含む場合がある。しかしながら、本発明のスイートコーンは、ｓｈ−２遺伝子を有するコーンがグリコーゲンを殆ど含有しないことから、ｓｈ−２遺伝子を有するコーンを含まない甘味種のことである。このようなスイートコーンとして広く流通している品種としては例えば、ジュビリー、ゴールデンクロスバンタム、メローゴールド、リワード等が挙げられる。本発明の第一の発明であるスイートコーンを含有した抗腫瘍剤のスイートコーン、あるいは本発明の第二の発明であるスイートコーンから水抽出したグリコーゲン粗抽出物を含有した抗腫瘍剤のスイートコーンとしては、市販品である例えば、スイートコーンのホール（粒）又はペースト状物を殺菌したもの、あるいは乾燥品等、これらの１種又は２種以上を組合わせて用いれば良いが、本発明の第一の発明に用いるスイートコーンとしては、例えば、ホールのスイートコーンの場合、水分が８０％弱と固形分が少ないことから、少ない量で抗腫瘍活性を得られ易いスイートコーンの乾燥品を用いたほうが望ましい。
【０００９】
本発明の第二の発明は、スイートコーンから水抽出したグリコーゲン粗抽出物を含有した抗腫瘍剤であって、該グリコーゲン粗抽出物がタンパク質加水分解工程を経ていない粗抽出物である抗腫瘍剤である。したがって、本発明の第二の発明は、抗腫瘍剤に含有させるスイートコーンのグリコーゲン粗抽出物の製造方法に特徴を有することから該粗抽出物の代表的な製造方法に基づき説明する。なお、本発明で用いるスイートコーンのグリコーゲン粗抽出物は、以下の代表的な製造方法に限定されるものではない。
【００１０】
まず、原料のスイートコーンと水を準備する。この原料のスイートコーンは上述した市販品等を用いれば良い。また水は、例えば、清水、イオン交換水、蒸留水等を用いれば良いが、水抽出に影響しない範囲で、水溶性の溶剤、例えば、エタノール、イソプロパノール、多価アルコール等を添加した水を用いても良い。溶剤によるが例えば、エタノールの場合、５０容量％以下とする必要がある。エタノール濃度が５０容量％より高いと、抗腫瘍活性を有すると思われるグリコーゲンやタンパク質の一部又は全部が沈殿し、水抽出され難いことから好ましくない。
【００１１】
次に、原料のスイートコーンに上述の水をスイートコーンの固形分（水分を除いた部分）に対し１〜２０倍量添加し、必要に応じ珪藻土等の濾過助剤と共にホモゲナイズした後、濾過して抽出液を得る。得られた前記抽出液が、本発明の粗抽出物に相当するが、本発明の第二の発明として用いる粗抽出物としては、前記抽出液を噴霧乾燥、凍結乾燥等で処理した乾燥品が望ましい。その理由は、少ない量で抗腫瘍活性を得られ易いからである。
【００１２】
本発明においてスイートコーンのグリコーゲン粗抽出物とは、スイートコーン中の糖類の主成分であるグリコーゲンが粗抽出物に対し固形分換算で８０％以下であることを意味する。その理由は、グリコーゲン含量が８０％より高いと、抗腫瘍活性が弱くなる傾向にあり好ましくないからである。したがって、前記抽出液には、固形分換算で約６０〜７０％のグリコーゲンを含有しているが、本発明では、前記抽出液あるいはその乾燥品ばかりでなく、これらをエタノール沈殿等でグルコース含量を例えば、７８％に高めたものも本発明のスイートコーン粗抽出物に該当する。なお、グリコーゲン含量は、「衛生試験法・注解１９９０」の「２．１．３．２（４）水溶性全糖、グリコーゲンおよび不溶性全糖：１）アントロン硫酸法による定量」おいて、試料約５ｇから約１．２５ｇに変えて測定した値である。
【００１３】
また、本発明に用いるスイートコーンのグリコーゲン粗抽出物は、タンパク質加水分解工程を経ていないものであることを特徴とするものである。本発明に用いる粗抽出物は、タンパク質加水分解を行わなくても十分に抗腫瘍活性を有し、加水分解したほうが逆に活性が弱くなる傾向にあるからである。また分解工程があると製造自体が煩雑となり好ましくないからである。タンパク質を加水分解する方法としては、一般的に、水の存在下でタンパク質を酵素、酸、アルカリ等で分解する方法が挙げられる。本発明において、酸加水分解とは、上述した水で抽出したスイートコーン抽出液を塩酸、硫酸等の酸剤で抽出液のｐＨを２以下とし、必要に応じ加熱しながら酸処理することをいい、アルカリ加水分解とは、スイートコーン抽出液を水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ剤で抽出液のｐＨを１２以上とし、必要に応じ加熱しながらアルカリ処理することをいい、また酵素加水分解とは、スイートコーン抽出液をプロナーゼ、トリプシン、パパイン等のタンパク質分解酵素の至適ｐＨに調整し、必要に応じ加温しながら酵素処理することをいい、本発明で用いるスイートコーン粗抽出物は、これらの各加水分解処理工程を経ていないものである。
【００１４】
本発明の抗腫瘍剤は、以上説明したスイートコーンあるいはスイートコーンのグリコーゲン粗抽出物を含有したものであるので、スイートコーンあるいはスイートコーンのグリコーゲン粗抽出物だけから構成してもよく、また必要に応じて公知の添加剤（溶剤、賦形剤等）を配合しても良い。
【００１５】
次に、本発明を実施例及び試験例に基づき、さらに詳細に説明する。なお、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１６】
【実施例】
［実施例１］
生のスイートコーン（品種：ジュビリー）を凍結乾燥により乾燥し、この乾燥品をフードカッターで粉砕し、スイートコーン乾燥物を製した。得られたスイートコーン乾燥物を本発明（発明品１）の抗腫瘍剤とした。
【００１７】
［実施例２］
実施例１で得られたスイートコーン乾燥物１２００ｇに対し、清水２．４Ｌを添加し、約３０℃に加温して充分に撹拌後、珪藻土及び酸性白土の濾過助剤を添加撹拌し均質とし、これを濾過して粗抽出液を得た。この粗抽出液を８０℃で３０分間の加熱殺菌を行なった後、室温まで冷却し、この殺菌液を噴霧乾燥してスイートコーンの粗抽出物（乾燥品）を製した。
得られたスイートコーン粗抽出物（乾燥品）を本発明（発明品２）の抗腫瘍剤とした。なお、スイートコーンのグリコーゲン粗抽出物には、グリコーゲンを約６５％含有していた。
【００１８】
［比較例１］
実施例１で得られたスイートコーン乾燥物１０００ｇに対し、２５容量％エタノール水８．６Ｌを添加し、約３０℃に加温して充分に撹拌した。次に、この抽出液に４ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ１２．６に調整後、約８５℃に加熱してアルカリ加水分解を行なった。このアルカリ加水分解液に珪藻土を添加撹拌し均質とし、これを濾過した。この濾液にエタノール７Ｌを添加し撹拌後、静置してエタノール沈殿を行ない濾過して沈殿物を得た。この沈殿物にエタノール２．８Ｌを添加し上述と同様な方法で沈殿物を得た。この沈殿物を２分して、それぞれに９０容量％エタノール水を添加し上述と同様な方法で沈殿物を得、両者を合わせた。この沈殿物を品温６０℃以下で脱溶剤を行ないスイートコーンの精製物（アルカリ加水分解品、乾燥品）を製した。
得られたスイートコーンの精製物（アルカリ加水分解品、乾燥品）を比較（比較品１）の抗腫瘍剤とした。なお、スイートコーンの抽出物には、グリコーゲンを約９３％含有していた。
【００１９】
［試験例１］
実施例２（発明品２）、並びに比較例１（比較品１）で得られた抗腫瘍剤を用いて、それぞれの抗腫瘍活性を調べるために以下の抗腫瘍実験を行なった。
抗腫瘍実験には、ＢＡＬＢ／ｃマウスのＭｅｔｈ  Ａ  ｆｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａの腫瘍モデルを用いた。同腫瘍は、ＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔内注射で腹水型腫瘍として維持継代しているものである。マウスよりガン性腹水を採取し、１０％ＦＣＳ  ＲＰＭＩ  １６４０培地で１５００ｒｐｍ×１０分間遠心洗浄し、同培地で細胞数２．５×１０６／ｍＬに調整した。腫瘍細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスの側腹部の皮内に１．０ｍＬ移植し、固形腫瘍モデルとした。実験マウスは一群５匹をもってあてた。
腫瘍移植後の２、４、６日目に、上記実施例及び比較例で調整した抗腫瘍剤を滅菌生理的食塩水で１ｍｇ／ｍＬに調整した溶液１ｍＬを腫瘍移植局所内に注射して治療をした。治療後は連日マウスを観察し、腫瘍移植３週間目に腫瘍サイズ（長径×単径）を計測し抗腫瘍活性効果の判定をした。この時点で腫瘍の増殖の認められないマウスは、更に１ヵ月間観察し、腫瘍の再燃のないことを確認して完全治癒と判定した。その結果を、表１に示す。なお、各実験において抗腫瘍剤を注射しなかったものを対照とした。また、表中、抗腫瘍活性率とは、対照の腫瘍サイズに対する、対照の腫瘍サイズから抗腫瘍剤を注射したときの腫瘍サイズを引いた値の割合を意味する。
【００２０】
【表１】
2004210696.tif 000002
【００２１】
表１より、加水分解を施されていないスイートコーンのグリコーゲン粗抽出物からなる抗腫瘍剤である発明品２、及び加水分解を施したグリコーゲン精製物からなる抗腫瘍剤である比較品１を投与した場合も腫瘍サイズが小さくなっていた。しかしながら、治癒マウス数を比較すると、発明品２を投与した場合は、５匹中２匹が完全に治癒しているのに対し、比較品１を投与した場合は、５匹とも完全に治癒しておらず、発明品２の抗腫瘍剤が抗腫瘍活性に優れていることが理解される。
【００２２】
［試験例２］
実施例１（発明品１）で得られた抗腫瘍剤を用いて、抗腫瘍活性を調べるために以下の抗腫瘍実験を行なった。
抗腫瘍実験には、ＢＡＬＢ／ｃマウスのＭｅｔｈ  Ａ  ｆｉｂｒｏｓａｒｃｏｍａの腫瘍モデルを用いた。同腫瘍は、ＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔内注射で腹水型腫瘍として維持継代しているものである。マウスよりガン性腹水を採取し、１０％ＦＣＳ  ＲＰＭＩ  １６４０培地で１５００ｒｐｍ×１０分間遠心洗浄し、同培地で細胞数２×１０６／ｍＬに調整した。腫瘍細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスの側腹部の皮内に１．０ｍＬ移植し、固形腫瘍モデルとした。実験マウスは一群５匹をもってあてた。
抗腫瘍実験は、腫瘍移植前に、発明品１の抗腫瘍剤を蒸留水に溶解し、カテーテルを用いて強制的に経口投与した。投与は、１日１回、発明品１を１ｍｇずつ１週間の連続投与を行なった。連日マウスを観察し、腫瘍移植３週間目に腫瘍の発現したマウスの腫瘍サイズ（長径×単径）を計測し抗腫瘍活性効果の判定をした。また腫瘍移植３週間目に腫瘍の発現が観察されなかったマウスを完全治癒と判定した。その結果を、表２に示す。なお、抗腫瘍剤を経口投与しなかったものを対照とした。また、表中、抗腫瘍活性率とは、対照の腫瘍サイズに対する、対照の腫瘍サイズから抗腫瘍剤を投与したときの腫瘍サイズを引いた値の割合を意味する。
【００２３】
【表２】
2004210696.tif 000003
【００２４】
表２より、スイートコーン乾燥物からなる抗腫瘍剤を経口投与した場合、５匹中４匹が腫瘍の発現が全く観察されず完全に治癒しており、腫瘍が発現したマウスでさえも腫瘍サイズが明らかに小さくなっており、スイートコーン乾燥物からなる抗腫瘍剤は抗腫瘍活性に大変優れたものであることが理解される。
【００２５】
【発明の効果】
以上述べたように、本発明のスイートコーンを含有した、あるいはスイートコーンのグリコーゲン粗抽出物を含有した抗腫瘍剤は、抗腫瘍活性に優れたものである。しかも本発明の抗腫瘍剤は、スイートコーンという天然物から簡便な方法で得られ安全性が高いことから、スイートコーンの更なる需要拡大が期待される。