(57)【要約】【課題】ＬＸＲアゴニスト作用を有し、抗高コレステロール血症、抗動脈硬化作用を有するが高中性脂肪血症を生じない高コレステロール血症治療剤を提供すること。【解決手段】一般式（Ｉ）：【化１】2004323360.tif 000026（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基またはヒドロキシメチル基であり、Ｒ３は水素原子または水酸基であり、‥‥‥は二重結合または単結合であることを表す）で示される化合物またはそのプロドラッグを含む高コレステロール血症治療剤。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2004323360.tif 000022
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基またはヒドロキシメチル基であり、Ｒ３は水素原子または水酸基であり、‥‥‥は二重結合または単結合であることを表す）
で示される化合物またはそのプロドラッグを含む高コレステロール血症治療剤。
【請求項２】
一般式（Ｉ）：
【化２】
2004323360.tif 000023
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基またはヒドロキシメチル基であり、Ｒ３は水素原子または水酸基であり、‥‥‥は二重結合または単結合であることを表す）
で示される化合物を製造する方法であって、一般式（ＩＩ）：
【化３】
2004323360.tif 000024
（式中、各Ｐは、独立して、水酸基の保護基であり、Ｘはホルミル基またはヨードメチル基であり、‥‥‥は二重結合または単結合であることを表す）
で示されるステロイド誘導体と、一般式  （ＩＩＩ）：
【化４】
2004323360.tif 000025
（式中、Ｐｈはフェニル基であり、Ｒ４およびＲ５は、独立して、水素原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基または保護されたヒドロキシメチル基であり、Ｒ６は、水素原子または保護された水酸基である）
で示されるフェニルスルホン誘導体とを塩基の存在下で縮合させ、保護基を脱離させ、次にフェニルスルホニル基の還元的脱離を行なうことを特徴とする方法。
【請求項３】
一般式（Ｉ）で示される化合物であって、エルゴスタ−２２−エン−１α，３β−ジオール、エルゴスタン−１α，３β−ジオール、エルゴスタン−１α，３β，２５−トリオール、（２４Ｓ）−ヒドロキシメチル−コレスタ−５，７−ジエン−１α，３β−ジオール、（２４Ｒ）−エチル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオール、（２４Ｓ）−エチル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオール、（２４Ｒ）−エチル−コレスタ−５−エン−１α，３β、２５−トリオール、（２４Ｓ）−エチル−コレスタ−５−エン−１α，３β、２５−トリオール、コレスタ−５，７，２２−トリエン−１α，３β，２５−トリオール、（２４Ｒ）−２４−プロピル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオール、（２４Ｓ）−２４−プロピル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオール、（２４Ｒ）−２４−ブチル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオール、および（２４Ｓ）−２４−ブチル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオールからなる群より選択される化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は抗高コレステロール血症作用を有するステロイド誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】
植物ステロールは以前から血清コレステロールを低下させる作用があることが知られていた。その機構として小腸でのコレステロールの競合阻害が考えられていたが、詳細は不明であった。その後コレステロールの排出ポンプ（ＡＢＣＡ１）が同定され、この遺伝子異常が動脈硬化を引き起こすことが判明し、さらに植物ステロールの排出ポンプ（ＡＢＣＧ５／Ｇ８）も同定され、この異常も動脈硬化の原因であることが明らかにされた（Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２９０，  １７７１（２０００））。さらにこれらの排出ポンプがＬＸＲ（オキシステロール受容体、Ｌｉｖｅｒ  Ｘ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）（Ｎａｔｕｒｅ，  ３８３，  ７２８（１９９６）；  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２７２，  ３１３７（１９９７））の標的遺伝子であることも明らかにされた。またＬＸＲ欠損マウス（Ｃｅｌｌ，  ９３，  ６９３（１９９８））、ＬＸＲ合成アゴニストを用いた実験から、ＬＸＲには小腸でコレステロール吸収抑制作用があること、マクロファージなどの末梢組織からコレステロール排出作用があることが示され、さらにＬＸＲを刺激することで抗動脈硬化作用をも誘導することも明らかにされた（Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２７６，  ３７７８５（２００１）；  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２９４，  １８６６（２００１））。一方、強力なＬＸＲ合成アゴニスト、例えばＴＯ−９０１３１７（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ．製）は、中性脂肪代謝に関するＬＸＲ標的遺伝子（ＳＲＥＢＰ−１ｃ）の発現も誘導するので、副作用として高中性脂肪血症を引き起こす（Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２８９，  １５２４（２０００））。従って血中コレステロールを低下させ、抗動脈硬化作用を有しかつ高中性脂肪血症を誘導しないＬＸＲアゴニスト作用を示す高コレステロール血症治療剤が求められている。
【０００３】
本発明に関連する先行技術文献情報としては以下のものがある。
【非特許文献１】
Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．，  ２７６，  ３７７８５（２００１）
【非特許文献２】
Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２９４，  １８６６（２００１）
【非特許文献３】
Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２８９，  １５２４（２０００）
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ＬＸＲアゴニスト作用を有し、抗高コレステロール血症、抗動脈硬化作用を有するが高中性脂肪血症を生じない高コレステロール血症治療剤を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明は、一般式（Ｉ）：
【化５】
2004323360.tif 000002
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基またはヒドロキシメチル基であり、Ｒ３は水素原子または水酸基であり、‥‥‥は二重結合または単結合であることを表す）
で示される化合物またはそのプロドラッグを含む高コレステロール血症治療剤を提供する。
【０００６】
「プロドラッグ」とは，生体に投与された後に、インビボで酵素の作用や代謝的加水分解等により、親化合物に変換される化合物を表す。本発明において有用なプロドラッグの例としては、限定されないが、一般式（Ｉ）の化合物のアシル化物、アルキル化物、リン酸エステル等が挙げられる。
【０００７】
別の観点においては、本発明は、一般式（Ｉ）：
【化６】
2004323360.tif 000003
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基またはヒドロキシメチル基であり、Ｒ３は水素原子または水酸基であり、‥‥‥は二重結合または単結合であることを表す）
で示される化合物を製造する方法を提供する。該方法は、一般式（ＩＩ）：
【化７】
2004323360.tif 000004
（式中、各Ｐは、独立して、水酸基の保護基であり、Ｘはホルミル基（ＣＨＯ）またはヨードメチル基（ＣＨ２Ｉ）であり、‥‥‥は二重結合または単結合であることを表す）
で示されるステロイド誘導体と、一般式  （ＩＩＩ）：
【化８】
2004323360.tif 000005
（式中、Ｐｈはフェニル基であり、Ｒ４およびＲ５は、独立して、水素原子、Ｃ１−Ｃ６アルキル基または保護されたヒドロキシメチル基であり、Ｒ６は、水素原子または保護された水酸基である）
で示されるフェニルスルホン誘導体とを塩基の存在下で縮合させ、保護基を脱離させ、次にフェニルスルホニル基の還元的脱離を行なうことを特徴とする。
【０００８】
さらに別の観点においては、本発明は、一般式（Ｉ）で示される化合物であって、エルゴスタ−２２−エン−１α，３β−ジオール、エルゴスタン−１α，３β−ジオール、エルゴスタン−１α，３β，２５−トリオール、（２４Ｓ）−ヒドロキシメチル−コレスタ−５，７−ジエン−１α，３β−ジオール、（２４Ｒ）−エチル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオール、（２４Ｓ）−エチル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオール、（２４Ｒ）−エチル−コレスタ−５−エン−１α，３β、２５−トリオール、（２４Ｓ）−エチル−コレスタ−５−エン−１α，３β、２５−トリオール、コレスタ−５，７，２２−トリエン−１α，３β，２５−トリオール、（２４Ｒ）−２４−プロピル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオール、（２４Ｓ）−２４−プロピル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオール、（２４Ｒ）−２４−ブチル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオール、および（２４Ｓ）−２４−ブチル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオールからなる群より選択される化合物を提供する。
【０００９】
本発明の一般式（Ｉ）で示されるステロイド化合物は、抗高コレステロール血症、抗動脈硬化作用を有するが高中性脂肪血症を誘導しないという利点を有するため、抗高コレステロール血症剤および抗動脈硬化剤として有用である。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、一般式（ＩＩ）：
【化９】
2004323360.tif 000006
（式中、Ｐ、Ｘ、および‥‥‥は、上で定義したとおりである）
で示されるステロイド誘導体と一般式（ＩＩＩ）：
【化１０】
2004323360.tif 000007
（式中、Ｐｈ、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は上で定義したとおりである）
で示されるフェニルスルホン誘導体とのカップリングにより製造することが出来る。
【００１１】
一般式（Ｉ）において、Ｃ５−Ｃ６およびＣ７−Ｃ８が単結合であり、Ｃ２２−Ｃ２３が二重結合であり、Ｒ１＝ＣＨ３，Ｒ２＝Ｒ３＝Ｈである化合物（Ｉ−１）は、次の様にして合成することが出来る。文献記載の化合物  （４）（  Ｈｅｌｖ．  Ｃｈｉｍ．  Ａｃｔａ．，  ６４，  １８７０  （１９８１）；６５，  １４９９  （１９８２））の水酸基をアセチル化、Ｂ還の二重結合を水素添加により還元、次いでテトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）基を除去後、Ｃ−２２アルコール（５）を酸化してＣ−２０アルデヒド（６）とし、フェニルスルホン誘導体（７）（日本化学会誌，  １９９４，  ３４５，  特開平  １４−３００９６，  ３００９７）と縮合、さらにフェニルスルホニル基の還元的脱離により合成することが出来る（スキーム１）。
【００１２】
【化１１】
2004323360.tif 000008
一般式（Ｉ）において、Ｃ５−Ｃ６、Ｃ７−Ｃ８およびＣ２２−Ｃ２３が単結合であり、Ｒ１＝ＣＨ３，Ｒ２＝Ｈ，  Ｒ３＝ＯＨである化合物（Ｉ−２）は、化合物（５）のＣ−２２アルコールをＩに変換  （Ｂｕｌｌ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｊｐｎ．，  ６３，  ２２３３（１９９０））  次いでアセチル基をテトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）基に交換した化合物（８）とフェニルスルホン誘導体（９）をカップリング、保護基の除去、さらに還元的脱フェニルスルホニル基を行うことにより合成される（スキーム２）。
【００１３】
【化１２】
2004323360.tif 000009
【００１４】
本発明の化合物のＬＸＲαに対するアゴニスト活性は、文献（Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２８４，１３６２（１９９９）：  ２８６，  １３１３（２００２））に記載される方法により、ＧＡＬ４−ｈＬＸＲαキメラレセプターを用いる系で測定することができる。簡単には、ＧＡＬ４−ｈＬＸＲαキメラレセプターをコードする発現ベクターと、ルシフェラーゼレポーターベクターとを培養細胞にトランスフェクシヨンし、培養液に試験物質を添加して、所定の時間インキュベートする。細胞を溶解させて、ルシフェラーゼ活性を測定することにより、ＬＸＲαに対するアゴニスト活性を評価することができる。また、本発明の化合物が高中性脂肪血症を誘導するか否は、マウスに試験化合物を投与し、所定の時間経過後に血漿中の中性脂肪濃度を測定することにより判定することができる。
【００１５】
下記の実施例に示されるように、本発明の化合物は生体内リガンドである（２４Ｓ），２５−エポキシコレステロールや（２２Ｒ）−ヒドロキシコレステロールよりもＬＸＲに対する結合性（アゴニスト活性）が高く（評価例１）、合成アゴニストであるＴＯ−９０１３１７よりも大量に投与しても高中性脂肪血症を誘導しない（評価例２）。
【００１６】
本発明の一般式（Ｉ）の化合物またはそのプロドラッグは、当該技術分野においてよく知られる薬学的に許容しうる担体とともに、混合，溶解，顆粒化，錠剤化、乳化，カプセル封入，凍結乾燥等により、製剤化することができる。
【００１７】
経口投与用には，本発明の化合物を、薬学的に許容しうる溶媒、賦形剤、結合剤、安定化剤、分散剤等とともに、錠剤，丸薬，糖衣剤，軟カプセル，硬カプセル、溶液，懸濁液、乳剤、ゲル，シロップ，スラリー等の剤形に製剤化することができる。
【００１８】
非経口投与用には、本発明の化合物を、薬学的に許容しうる溶媒、賦形剤、結合剤、安定化剤、分散剤等とともに、注射用溶液、懸濁液、乳剤、クリーム剤、軟膏剤、吸入剤、座剤等の剤形に製剤化することができる。注射用の処方においては，本発明の化合物を水性溶液，好ましくはハンクス溶液，リンゲル溶液，または生理的食塩緩衝液等の生理学的に適合性の緩衝液中に溶解することができる。さらに、組成物は、油性または水性のベヒクル中で，懸濁液，溶液，または乳濁液等の形状をとることができる。あるいは，組成物を粉体の形態で製造し、使用前に滅菌水等を用いて水溶液または懸濁液を調製してもよい。吸入による投与用には，本発明の化合物を粉末化し、ラクトースまたはデンプン等の適当な基剤とともに粉末混合物とすることができる。座剤処方は、本発明の化合物をカカオバター等の慣用の坐剤基剤と混合することにより製造することができる。さらに、本発明の化合物は、ポリマーマトリクス等に封入して、持続放出用製剤として処方することができる。
【００１９】
投与量および投与回数は、剤形および投与経路、ならびに患者の症状、年齢、体重によって異なるが、一般に、式（Ｉ）の化合物を、１日あたり体重１ｋｇあたり、約０．００１ｍｇから１０００ｍｇの範囲、好ましくは約０．０１ｍｇから１００ｍｇの範囲で、１日に１回から数回投与することができる。
【００２０】
次に実施例および評価例をあげて説明するが本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２１】
【実施例】
実施例１．１α，３β−ジアセトキシ−２３，２４−ジノルコラン−２０−アール  （６）  の合成
化合物４  （２０  ｇ）にピリジン  （６０  ｍｌ），  無水酢酸  （２０  ｍｌ）  を加えた。混合物を９５−１００℃で２時間加熱撹拌した。酢酸エチルで抽出、飽和ＮａＨＣＯ３水、ブラインで順次洗浄後、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。濃縮物  （２２．１  ｇ）を酢酸エチル  （２００  ｍｌ）に溶かし、酸化白金（ＰｔＯ２）（５００  ｍｇ）を加え、２時間水素添加を行った。触媒をろ過して除き、ロ液を濃縮した。濃縮物  （２２．１  ｇ）をテトラヒドロフラン（５０  ｍｌ）−メタノール  （５０  ｍｌ）に溶かし、ｐ−トルエンスルホン酸  （ｐ−ＴｓＯＨ）（７５０  ｍｇ）を加え、４時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水、ブラインで洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濃縮した。濃縮物  （１６．２  ｇ）をジクロロメタン  （３００  ｍｌ）に溶かし、ピリジニウムクロロクロメート  （ＰＣＣ）  （２０  ｇ）を加え、５時間撹拌した。セライト上でろ過し、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー  （クロロホルム／酢酸エチル  ９／１，  ｖ／ｖ）で精製し、表題化合物を１０．５  ｇ得た。
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ：０．６６  （３Ｈ，  ｓ），１．０１  （３Ｈ，  ｓ），  １．１６  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．３  Ｈｚ），  ２．０３，  ２．０９（各３Ｈ，ｓ），  ５．０１  （２Ｈ，ｍ），    ９．６１  （１Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝４．０  Ｈｚ）．
【００２２】
実施例２．２２−ヨード−１α，３β−ジテトラヒドロピラニロキシ−２３，２４−ジノルコラン  （８）の合成
化合物  （５）  （２０  ｇ）  にピリジン（１００  ｍｌ）、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（ｐ−ＴｓＣｌ）  （２０  ｇ）  を加え、終夜撹拌した。  酢酸エチルで抽出、飽和ＮａＨＣＯ３水、ブラインで洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濃縮した。濃縮物  （２５．２  ｇ）にアセトン  （２００  ｍｌ），ヨー化ナトリウム（ＮａＩ）  （２０  ｇ  ）  を加え、４時間加熱還流した。クロロホルムで抽出、５％  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液、ブラインで洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濃縮した。残留物  （１９．８  ｇ）  に１０％  ＫＯＨ  エタノール溶液  （６０  ｍｌ）を加え、５０−５５℃で１時間撹拌した。
酢酸エチルで抽出、飽和ＮａＨＣＯ３水、ブラインで洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濃縮した。濃縮物  （１４．３  ｇ）  にジクロロメタン  （１５０  ｍｌ），  ジヒドロピラン（ＤＨＰ）  （８  ｇ）およびピリジニウムｐ−トルエンスルフォネート  （ＰＰＴＳ）  （８００  ｍｇ）を加え、５時間撹拌した。酢酸エチルで抽出、飽和ＮａＨＣＯ３水、ブラインで洗浄，  乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濃縮し、表題化合物を１５．６  ｇ  得た。
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ：０．６６  （３Ｈ，  ｓ），  １．００  （３Ｈ，  ｓ），  １．０９  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．４  Ｈｚ），    ２．２０−２．４１  （２Ｈ，  ｍ），  ３．８５  （１Ｈ，  ｍ），  ４．０１  （１Ｈ，  ｍ）．
【００２３】
実施例３．エルゴスタ−２２−エン−１α，３β−ジオール（Ｉ−１）の合成
【化１３】
2004323360.tif 000010
窒素ガス気流下、  （２Ｒ）−２，３−ジメチル−１−フェニルスルフォニルブタン（７）（６．８  ｇ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（４０  ｍｌ）に溶かし、−７０℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉの１．６  Ｍヘキサン溶液（２０  ｍｌ）を加え同温度で１時間撹拌した。１α，３β−ジアセトキシ−２３，２４−ジノルコラン−２０−アール（６）（８．６  ｇ）の  ＴＨＦ  溶液（３０  ｍｌ）を加え、同温度で１時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）後、濃縮した。残留物をメタノール（２００  ｍｌ）に溶かし、５％  Ｎａ−Ｈｇ  （５０  ｇ），  Ｎａ２ＨＰＯ４  （１０  ｇ）を加え室温で終夜撹拌した。水銀を分離後、メタノールを濃縮し、酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）  後、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／酢酸エチル，  ９／１，ｖ／ｖ）で精製し表題化合物を６．４  ｇ得た。
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ：０．６６  （３Ｈ，  ｓ），  ０．８０−０．８４  （９Ｈ，  ｍ，），  ０．９０  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．８  Ｈｚ），  １．１１  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．３  Ｈｚ），  ３．８１  （１Ｈ，  ｍ），  ４．００  （１Ｈ，  ｍ），  ５．１７  （２Ｈ，  ｍ）．
【００２４】
実施例４．エルゴスタン−１α，３β−ジオールの合成
【化１４】
2004323360.tif 000011
実施例１で得られたエルゴステ−２２−エン−１α，３β−ジオール（Ｉ−１）（１．０  ｇ）を酢酸エチル（１００  ｍｌ）に溶かし、酸化白金（５０  ｍｇ）を加え常圧で水素を添加した。３時間後、系内を窒素置換した後、酸化白金を濾過して除き、ろ液を濃縮した。濃縮物をメタノールから結晶化を行い、表題化合物を９８０  ｍｇ得た。
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ：０．６５  （３Ｈ，  ｓ），  ０．７６，  ０．７８  （各  ３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．８  Ｈｚ），  ０．８１  （３Ｈ，ｓ），  ０．８５  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．８  Ｈｚ），    ０．９０  （３Ｈ，ｄ，  Ｊ＝６．４Ｈｚ），  ３．８２  （１Ｈ，  ｍ），  ４．０１  （１Ｈ，  ｍ）．
【００２５】
実施例５．エルゴスタン−１α，３β，２５−トリオール（Ｉ−２）の合成
【化１５】
2004323360.tif 000012
窒素ガス気流下、（２Ｓ）−２，３−ジメチル−１−フェニルスルフォニル−３−テトラヒドロピラニロキシブタン  （９）（６．８  ｇ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（５０  ｍｌ）に溶かし、  −２０℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉの１．６  Ｍヘキサン溶液（２０  ｍｌ）および１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ）（１５  ｍｌ）を加え同温度で１時間撹拌した。  ２２−ヨード−１α，３β−  ジテトラヒドロピラニロキシ−２３，２４−ジノルコラン（８）（１０．９  ｇ）の  ＴＨＦ  溶液（５０  ｍｌ）を加え、−２０℃で２時間、室温で２時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）後、濃縮した。残留物をメタノール（３００  ｍｌ）に溶かし、ｐ−トルエンスルホン酸（５００  ｍｇ）を加え室温で１時間撹拌した。酢酸エチルで抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３水、ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）後、濃縮した。残留物をメタノール（３００  ｍｌ）に溶かし５％  Ｎａ−Ｈｇ  （５０  ｇ），  Ｎａ２ＨＰＯ４  （１０  ｇ）を加え室温で終夜撹拌した。水銀を分離後、メタノールを濃縮し酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）  後、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／酢酸エチル，  １／１，  ｖ／ｖ）で精製し、表題化合物を７．１  ｇ得た。
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ：０．６２  （３Ｈ，  ｓ），  ０．８６  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．８  Ｈｚ），  ０．９３−０．９５  （６Ｈ，  ｍ），  １．１６，  １．１７  （各  ３Ｈ，  ｓ），  ３．８２  （１Ｈ，  ｍ），  ４．００  （１Ｈ，  ｍ）．
【００２６】
実施例６．（２４Ｓ）−ヒドロキシメチル−コレスタ−５，７−ジエン−１α，３β−ジオールの合成
【化１６】
2004323360.tif 000013
窒素ガス気流下、（２Ｓ）−３−メチル−１−フェニルスルフォニル−２−トリメチルシリロキシヒドロキシメチルブタン（Ｊ．  Ｏｒｇ．．  Ｃｈｅｍ．，  ５８，  １４９６（１９９３）（１０．０  ｇ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（５０  ｍｌ）に溶かし、−２０℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉの１．６  Ｍヘキサン溶液（２０  ｍｌ）および１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ）（１５  ｍｌ）を加え同温度で１時間撹拌した。２２−ヨード−１α，３β−ジテトラヒドロピラニロキシ−２３，２４−ジノルコラ−５，７−ジエン（日本化学会誌  １９９２，５３）  （１０．９  ｇ）の  ＴＨＦ  溶液（５０  ｍｌ）を加え、−２０℃で２時間、室温で２時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を加え、酢酸エチルで抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３水、ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）後、濃縮した。残留物をメタノール（３００  ｍｌ）に溶かし、ｐ−トルエンスルホン酸（５００  ｍｇ）を加え、室温で２時間撹拌した。酢酸エチルで抽出、飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄、乾燥（ＭｇＳＯ４）後、濃縮した。残留物をメタノール（３００  ｍｌ）に溶かし、５％  Ｎａ−Ｈｇ  （５０  ｇ），  Ｎａ２ＨＰＯ４  （１０  ｇ）を加え室温で終夜撹拌した。水銀を分離後、メタノールを濃縮し、酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）  後、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／酢酸エチル，  １／１，  ｖ／ｖ）で精製し、表題化合物を７．８  ｇ得た。
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ：０．６２  （３Ｈ，  ｓ），  ０．７９，  ０．８１  （各  ３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．８  Ｈｚ），  ０．９５−０．９７  （６Ｈ，  ｍ），  ３．７８  （１Ｈ，  ｍ），  ４．０７  （１Ｈ，  ｍ），  ５．３７（１Ｈ，ｍ），５．７４  （１Ｈ，  ｍ）．
【００２７】
実施例７．エルゴスタ−５，７，  ２２−トリエン−１α，３β−ジオールの合成
【化１７】
2004323360.tif 000014
窒素ガス気流下、  （２Ｒ）−２，３−ジメチル−１−フェニルスルフォニルブタン（７）（６．８  ｇ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（４０  ｍｌ）に溶かし、−７０℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉの１．６  Ｍヘキサン溶液（２０  ｍｌ）を加え同温度で１時間撹拌した。１α，３β−  ジアセトキシ−２３，２４−ジノルコラ−５，７−ジエン−２０−アール（日本化学会誌  １９９２，５３）  （８．６  ｇ）の  ＴＨＦ  溶液（３０  ｍｌ）を加え、１時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）後、濃縮した。残留物をメタノール（２００  ｍｌ）に溶かし、５％  Ｎａ−Ｈｇ  （５０  ｇ），  Ｎａ２ＨＰＯ４  （１０  ｇ）を加え室温で終夜撹拌した。水銀を分離後、メタノールを濃縮し酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）  後、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／酢酸エチル，  ９／１，ｖ／ｖ）で精製し、表題化合物を６．４  ｇ得た。
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ：０．６２  （３Ｈ，  ｓ），  ０．７９，  ０．８１  （各  ３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．８  Ｈｚ），  ０．８８  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．８  Ｈｚ），  ０．９５−０．９７  （６Ｈ，  ｍ），  ３．７８  （１Ｈ，  ｍ），  ４．０７  （１Ｈ，  ｍ），  ５．１９  （２Ｈ，  ｍ），  ５．３７  （１Ｈ，  ｍ），  ５．７４  （１Ｈ，  ｍ）．
【００２８】
実施例８．（２４Ｒ）−エチル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオールの合成
【化１８】
2004323360.tif 000015
窒素ガス気流下、（２Ｒ）−２−エチル−３−メチル−１−フェニルスルフォニルブタン（第４３回天然物有機化学討論会講演要旨集，    ｐ５１３  （２００１））  （７．２  ｇ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（５０  ｍｌ）に溶かし、−７０℃に冷却した。１．６  Ｍ  ｎ−ＢｕＬｉのヘキサン溶液（２０  ｍｌ）を加え同温度で１時間撹拌した。１α，３β−ジアセトキシ−２３，２４−ジノルコラン−２０−アール（６）  （８．６  ｇ）の  ＴＨＦ  溶液（３０  ｍｌ）を加え、同温度で１時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）後、濃縮した。残留物をメタノール（２００  ｍｌ）に溶かし、５％  Ｎａ−Ｈｇ  （５０  ｇ），  Ｎａ２ＨＰＯ４  （１０  ｇ）を加え室温で終夜撹拌した。水銀を分離後、メタノールを濃縮し酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）  後、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／酢酸エチル，  ９／１，ｖ／ｖ）で精製し、表題化合物を６．９  ｇ得た。
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ：０．６３  （３Ｈ，  ｓ），  ０．７９−  ０．８４  （９Ｈ，  ｍ），  ０．９８  （３Ｈ，  ｓ），  １．０１  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．４  Ｈｚ），  ３．８０  （１Ｈ，  ｍ），  ４．０１  （１Ｈ，  ｍ），  ５．２１  （２Ｈ，  ｍ）．
【００２９】
実施例９．（２４Ｒ）−エチル−コレスタ−５−エン−１α，３β、２５−トリオールの合成
【化１９】
2004323360.tif 000016
窒素ガス気流下、（２Ｒ）−２−エチル−３−メチル−１−フェニルスルフォニル−３−テトラヒドロピラニロキシブタン（９．８  ｇ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（５０  ｍｌ）に溶かし、−２０℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉの１．６  Ｍヘキサン溶液（２０  ｍｌ）および１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ）（１５  ｍｌ）を加え同温度で１時間撹拌した。２２−ヨード−１α，３β−ジテトラヒドロピラニロキシ−２３，２４−ジノルコラ−５−エン  （１０．９  ｇ）の  ＴＨＦ  溶液（５０  ｍｌ）を加え、−２０℃で２時間、室温で２時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）後、濃縮した。残留物をメタノール（３００  ｍｌ）に溶かし、ｐ−トルエンスルホン酸（５００  ｍｇ）を加え室温で１時間撹拌した。酢酸エチルで抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３水、ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）後、濃縮した。残留物をメタノール（３００  ｍｌ）に溶かし５％  Ｎａ−Ｈｇ  （５０  ｇ），  Ｎａ２ＨＰＯ４  （１０  ｇ）を加え室温で終夜撹拌した。水銀を分離後、メタノールを濃縮し酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）  後、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／酢酸エチル，  １／１，  ｖ／ｖ）で精製し、表題化合物を７．２  ｇ得た。
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ：０．６７  （３Ｈ，  ｓ），  ０．８１  （  ３Ｈ，  ｓ），  ０．８４  （３Ｈ，  ｔ，  Ｊ＝６．３  Ｈｚ），  １．０３  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．３  Ｈｚ），  １．１６，  １．１７  （各  ３Ｈ，  ｓ），  ３．７９  （１Ｈ，  ｍ），  ４．０１  （１Ｈ，  ｍ），  ５．７５  （１Ｈ，  ｍ）．
【００３０】
実施例１０．コレスタ−５，７，２２−トリエン−１α，３β，２５−トリオールの合成
【化２０】
2004323360.tif 000017
窒素ガス気流下、３−メチル−１−フェニルスルフォニル−３−テトラヒドロピラニロキシブタン（９．８  ｇ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（５０  ｍｌ）に溶かし、−７０℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉの１．６  Ｍヘキサン溶液（２０  ｍｌ）を加え同温度で１時間撹拌した。１α，３β−ジアセトキシ−２３，２４−ジノルコラ−５，７−ジエン−２０−アール（１０．９  ｇ）の  ＴＨＦ  溶液（５０  ｍｌ）を加え、−７０℃で２時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）後、濃縮した。残留物をメタノール（３００  ｍｌ）に溶かし、５％  Ｎａ−Ｈｇ  （５０  ｇ），  Ｎａ２ＨＰＯ４  （１０  ｇ）を加え、室温で終夜撹拌した。水銀を分離後、メタノールを濃縮し酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）  後、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／酢酸エチル，  １／１，  ｖ／ｖ）で精製し、表題化合物を７．２  ｇ得た。
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ：０．６７  （３Ｈ，  ｓ），    ０．８１  （  ３Ｈ，  ｓ），    １．０３  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．３  Ｈｚ），  １．１６，  １．１７  （各  ３Ｈ，  ｓ），  ３．７９  （１Ｈ，  ｍ），  ４．０１  （１Ｈ，  ｍ），  ５．３８  （１Ｈ，  ｍ），  ５．７２  （１Ｈ，  ｍ）．
【００３１】
実施例１１．（２４Ｓ）−２４−プロピル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオールの合成
【化２１】
2004323360.tif 000018
窒素ガス気流下、  （２Ｓ）−３−メチル−１−フェニルスルフォニル−２−プロピルブタン（７．６  ｇ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（４０  ｍｌ）に溶かし、−７０℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉの１．６  Ｍヘキサン溶液（２０  ｍｌ）を加え同温度で１時間撹拌した。１α，３β−ジアセトキシ−２３，２４−ジノルコラン−２０−アール（６）  （８．６  ｇ）の  ＴＨＦ  溶液（３０  ｍｌ）を加え、１時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）後、濃縮した。残留物をメタノール（２００  ｍｌ）に溶かし、５％  Ｎａ−Ｈｇ  （５０  ｇ），  Ｎａ２ＨＰＯ４  （１０  ｇ）を加え室温で終夜撹拌した。水銀を分離後、メタノールを濃縮し酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）  後、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／酢酸エチル，  ９／１，ｖ／ｖ）で精製し、表題化合物を６．３  ｇ得た。
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ：０．６６  （３Ｈ，  ｓ），  ０．７９−  ０．８５  （９Ｈ，  ｍ），  ０．９９  （３Ｈ，  ｓ），  １．００  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．４  Ｈｚ），  ３．７６  （１Ｈ，  ｍ），  ４．０１  （１Ｈ，  ｍ），  ５．００−５．１７  （２Ｈ，  ｍ）．
【００３２】
実施例１２．（２４Ｒ）−２４−ブチル−コレステ−２２−エン−１α，３β−ジオールの合成
【化２２】
2004323360.tif 000019
窒素ガス気流下、  （２Ｒ）−２−ブチル−３−メチル−１−フェニルスルフォニルブタン（８．０  ｇ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（４０  ｍｌ）に溶かし、−７０℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉの１．６  Ｍヘキサン溶液（２０  ｍｌ）を加え、同温度で１時間撹拌した。１α，３β−ジアセトキシ−２３，２４−ジノルコラン−２０−アール（６）  （８．６  ｇ）の  ＴＨＦ  溶液（３０  ｍｌ）を加え、１時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）後、濃縮した。残留物をメタノール（２００  ｍｌ）に溶かし、５％  Ｎａ−Ｈｇ  （５０  ｇ），  Ｎａ２ＨＰＯ４  （１０  ｇ）を加え室温で終夜撹拌した。水銀を分離後、メタノールを濃縮し酢酸エチルで抽出した。ブラインで洗浄、乾燥  （ＭｇＳＯ４）  後、濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／酢酸エチル，  ９／１，ｖ／ｖ）で精製し、表題化合物を６．９  ｇ得た。
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）  δ：０．６６  （３Ｈ，  ｓ），  ０．７８−  ０．９８  （９Ｈ，  ｍ），  １．００  （３Ｈ，  ｓ），  １．０２  （３Ｈ，  ｄ，  Ｊ＝６．３  Ｈｚ），  ３．７７  （１Ｈ，  ｍ），  ４．００  （１Ｈ，  ｍ），  ５．２０  （２Ｈ，  ｍ）．
【００３３】
製剤例１  錠剤
本発明の化合物としてエルゴスタン−１α，３β−ジオール  ３０ｇ、結晶セルロース（旭化成（株）製）１４０ｇ、乳糖（ＤＭＶ社製）１００ｇ、ＣＭＣ−Ｃａ（五徳薬品（株）製）１５ｇ、ＨＰＣ−Ｌ（日本曹達（株）製）１０ｇおよび精製水３０ｍＬを練合機に添加し、通常の方法により５分間練合する。練合終了後、１０メッシュで篩過し、乾燥機中にて５０℃で乾燥する。乾燥後、整粒し、ステアリン酸マグネシウム（太平化学工業（株）製）を５ｇ添加する。１分混合した後、打錠して、１錠当たり約１００ｍｇ、直径６．５ｍｍの錠剤を得た。この錠剤は１錠中、本発明の化合物を１０ｍｇ含有する。
【００３４】
製剤例２  顆粒剤  
本発明の化合物としてエルゴスタ−２２−エン−１α，３β−ジオール  ３ｇ、結晶セルロース（旭化成（株）製）９０ｇ、乳糖（ＤＭＶ社製）１８２ｇ、ＣＭＣ−Ｃａ（五徳薬品（株）製）１０ｇ、ＨＰＣ−Ｌ（日本曹達（株）製）１０ｇおよび精製水４０ｍＬを練合機に添加し、通常の方法により５分間練合する。練合終了後、８メッシュで篩過し、乾燥機にて５０℃で乾燥する。乾燥後、整粒し、ステアリン酸マグネシウム（太平化学工業（株）製）５ｇ添加して混合する。この顆粒剤１ｇ当たり、本発明の化合物１０ｍｇ含有する。
【００３５】
製剤例３  カプセル剤
本発明の化合物としてエルゴスタ−２２−エン−１α，３β−ジオール  １０ｇを食用油（小麦胚芽油；日清ファルマ（株）製）２９０ｇに添加する（濃度１０重量％）。次いで、アジホモミクサーを用いて均一に乳化する。得られた乳化液をソフトカプセル、ハードカプセルに充填し、ソフトカプセルとハードカプセルを打ち抜き法により製造する。
（１）ソフトカプセルの製造
ゼラチン１００重量部に対しグリセリン３０重量部を添加し、膨潤させ、溶解したゼラチンシートを用いる。内溶液として乳化液を１カプセル当たり３００ｍｇの内容量になるように充填し、次いで乾燥してソフトカプセルを得る。このソフトカプセルは１カプセル当たり本発明の化合物を１０ｍｇ含有する。
（２）ハードカプセルの製造
ハードカプセル（透明な２号サイズ；ワーナーランバート社製）に乳化液を１カプセル当たり３００ｍｇの内容量になるように充填した。このハードカプセルは１カプセル当たり本発明の化合物を１０ｍｇ含有する。
【００３６】
試験例１．ＬＸＲαに対するアゴニスト活性
文献記載の方法により（Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２８４，１３６２（１９９９）：  ２８６，  １３１３（２００２））、本発明の化合物のＬＸＲαに対するアゴニスト活性をＧＡＬ４−ｈＬＸＲαキメラレセプターを用いる系で検討した。ヒト胎児腎由来ＨＥＫ２９３細胞にＣＭＸ−ＧＡＬ４−ｈＬＸＲα発現ベクター、ＭＨ１００（ＵＡＳ）ｘ４−ｔｋ−ＬＵＣレポーターベクターをリン酸カルシウム法を用いてトランスフェクシヨンし、８時間後に培養液中に化合物を加えた。１６時間後に細胞を可溶化し、ルシフェラーゼ活性を評価した。コントロールとしては溶媒のみを用いた。表１に結果をまとめた（コントロールに対する比較で示した）。
【００３７】
表１．本発明化合物および対照化合物のＬＸＲαに対するアゴニスト活性（濃度：１０−５Ｍ）
【表１】
2004323360.tif 000020
これらの結果から、本発明の化合物は対照化合物と比較して、ＬＸＲαに対するアゴニスト活性が高く、高コレステロール血症治療剤としての優れた薬理作用を有することが示される。
【００３８】
試験例２．血漿中中性脂肪濃度に及ぼす影響
本発明化合物の血漿中の中性脂肪濃度への影響を検討した。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに対して，  ２５０ｍｇ／ｋｇのエルゴスタ−２２−エン−１α，３β−ジオール、１０ｍｇ／ｋｇのＴＯ９０１３１７をそれぞれ投与し１２時間後に血漿中の中性脂肪濃度を測定した。結果を表２にまとめた。
【００３９】
表２．本発明化合物の血漿中中性脂肪（トリグリセライド）濃度に及ぼす影響
【表２】
2004323360.tif 000021
表２の結果から、本発明の高コレステロール血症治療剤は、血中の中性脂肪酸濃度に対してほとんど影響を与えないため、副作用として高中性脂肪症を引き起こさないことが示される。
【００４０】
試験例３  急性毒性試験
ＯＥＣＤ化学物質試験法ガイドラインに従ってラットを用いて急性毒性試験（単回経口投与毒性試験）を実施した。本発明の化合物としてエルゴスタ−２２−エン−１α，３β−ジオール  ２０００ｍｇ／ｋｇを雌雄各５匹に単回経口投与し，投与日から１４日間観察し、１５日目に剖検した。なお，溶媒の投与群をコントロールとした。
その結果、雌雄ともに死亡例はなく、一般状態観察、体重推移および剖検でも被験物質投与による影響は認められず、本発明の化合物のＬＤ５０値は、雌雄ともに２０００ｍｇ／ｋｇ（ラット）以上であった。