(57)【要約】【課題】特異的結合物質を強固かつ高効率な固定化をすることが可能であり、固定化する特異的結合物質の方向のコントロールすることにより特異的かつ高いシグナルを得ることができる生化学解析用ユニットを提供すること。【解決手段】放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板を備え、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニットにおいて、吸着性領域に共有結合性官能基を有する生化学解析用ユニット。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板を備え、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニットにおいて、吸着性領域に共有結合性官能基を有する生化学解析用ユニット。
【請求項２】
共有結合性官能基を有する吸着性材料によって形成された吸着性基板と、複数の貫通した孔が形成され、放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成された多孔板を備え、前記多孔板が、前記吸着性基板の少なくとも一方の面に密着され、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔内の前記吸着性基板によって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニット。
【請求項３】
放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板を備え、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニットにおいて、吸着性領域に構造または特性が既知の特異的結合物質が共有結合を介して固定され、放射性標識物質、蛍光物質及び、化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質よりなる群から選ばれる少なくとも１種の標識物質によって標識された生体由来物質が、前記特異的結合物質に特異的に結合されて、前記複数の吸着性領域が選択的に標識されていることを特徴とする生化学解析用ユニット。
【請求項４】
前記構造または特性が既知の特異的結合物質が、官能基を有することを特徴とする、請求項３に記載の生化学解析用ユニット。
【請求項５】
前記官能基を有する特異的結合物質が、核酸類、タンパク質、及びペプチドからなる群から選ばれることを特徴とする、請求項３に記載の生化学解析用ユニット。
【請求項６】
前記官能基を有する核酸類が、ヌクレオチド誘導体、ペプチド核酸、及びＬＮＡよりなる群から選ばれることを特徴とする、請求項３に記載の生化学解析用ユニット。
【請求項７】
前記官能基を有するヌクレオチド誘導体がオリゴヌクレオチドであることを特徴とする、請求項３に記載の生化学解析用ユニット。
【請求項８】
生体由来物質が、ハイブリダイゼーション、抗原抗体反応、及びレセプタ・リガンド反応よりなる群から選ばれた反応によって、前記特異的結合物質と結合されていることを特徴とする、請求項３に記載の生化学解析用ユニット。
【請求項９】
吸着性領域にスペーサーを介して共有結合性官能基を保持する、請求項１に記載の生化学解析用ユニット。
【請求項１０】
請求項１又は２に記載の生化学解析用ユニットを用い、該生化学解析用ユニットの吸着性領域に構造または特性が既知の特異的結合物質を共有結合を介して固定し、放射性標識物質、蛍光物質、及び化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質よりなる群から選ばれる少なくとも１種の標識物質によって標識された生体由来物質を前記特異的結合物質に特異的に結合させることで前記標識された生体由来物質を検出する、生化学解析方法。
【請求項１１】
前記生体由来物質が、ハイブリダイゼーション、抗原抗体反応、及びレセプタ・リガンド反応よりなる群から選ばれた反応によって、前記特異的結合物質と結合する、請求項１０に記載の生化学解析方法。
【請求項１２】
放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板を備え、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニットの製造方法において、共有結合性官能基を有する材料を該基板に密着させる工程を含む、上記の生化学解析用ユニットの製造方法。
【請求項１３】
放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板を備え、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニットの製造方法において、基板に密着した吸着性材料に共有結合性官能基を導入する工程を含む、上記の生化学解析用ユニットの製造方法。
【請求項１４】
前記吸着性材料が多孔質材料である、請求項１２または１３に記載の生化学解析用ユニットの製造方法。
【請求項１５】
官能基が保持されている吸着性領域を、反応性が向上する活性化剤で処理する工程を含む、請求項１に記載の生化学解析用ユニットに特異的結合物質を固定化する方法。
【請求項１６】
官能基が保持されている吸着性領域を、反応性が向上する活性化剤で処理する工程の後に、官能基を有する特異的結合物質を反応させて固定化する、請求項１５に記載の特異的結合物質を固定化する方法。
【請求項１７】
官能基を有する特異的結合物質と吸着性領域との間にスペーサーを保持させる、請求項１５に記載の特異的結合物質を固定化する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、吸着性領域に官能基を導入した生化学解析用ユニットおよびそれを用いた生化学解析方法に関するものである。より詳細には、本発明は、互いに離間して形成された、複数の吸着性領域に共有結合を介して特異的結合物質（例えば、リガンドまたはリセプタなど）を固定化可能な生化学解析用ユニット、その製造方法、それを用いた特異的結合物質の固定化方法、及びそれを用いた生化学解析方法に関するものである。
【０００２】
【従来技術】
近年、スライドガラス板やメンブレンフィルタなどの担体表面上の異なる位置に、ホルモン類、腫瘍マーカー、酵素、抗体、抗原、アブザイム、その他のタンパク質、核酸、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ、ＲＮＡなど、生体由来の物質と特異的に結合可能で、かつ、塩基配列や塩基の長さ、組成などが既知の特異的結合物質を、スポッター装置を用いて、滴下して、多数の独立したスポットを形成し、次いで、ホルモン類、腫瘍マーカー、酵素、抗体、抗原、アブザイム、その他のタンパク質、核酸、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ、ｍＲＮＡなど、抽出、単離などによって、生体から採取され、あるいは、さらに、化学的処理、化学修飾などの処理が施された生体由来の物質であって、蛍光物質、色素などの標識物質によって標識された物質をハイブリダイゼーションなどによって特異的結合物質に特異的に結合させたマイクロアレイに、励起光を照射して、蛍光物質、色素などの標識物質から発せられた蛍光などの光を光電的に検出して、生体由来の物質を解析するマイクロアレイ解析システムが開発されている。このマイクロアレイ解析システムによれば、スライドガラス板やメンブレンフィルタなどの担体表面上の異なる位置に、数多くの特異的結合物質のスポットを高密度に形成して、標識物質によって標識された生体由来の物質をハイブリダイズさせることによって、短時間に、生体由来の物質を解析することが可能になるという利点がある。
【０００３】
また、メンブレンフィルタなどの担体表面上の異なる位置に、ホルモン類、腫瘍マーカー、酵素、抗体、抗原、アブザイム、その他のタンパク質、核酸、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ、ＲＮＡなど、生体由来の物質と特異的に結合可能で、かつ、塩基配列や塩基の長さ、組成などが既知の特異的結合物質をスポッター装置を用いて、滴下して、多数の独立したスポットを形成し、次いで、ホルモン類、腫瘍マーカー、酵素、抗体、抗原、アブザイム、その他のタンパク質、核酸、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ、ｍＲＮＡなど、抽出、単離などによって、生体から採取され、あるいは、さらに、化学的処理、化学修飾などの処理が施された生体由来の物質であって放射性標識物質によって標識された物質を、ハイブリダイゼーションなどによって特異的結合物質に特異的に結合させたマクロアレイを、輝尽性蛍光体を含む輝尽性蛍光体層が形成された蓄積性蛍光体シートと密着させて、輝尽性蛍光体層を露光し、しかる後に、輝尽性蛍光体層に励起光を照射し、輝尽性蛍光体層から発せられた輝尽光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、生体由来の物質を解析する放射性標識物質を用いたマクロアレイ解析システムも開発されている。
【０００４】
従来の生化学解析ユニットでは特異的結合物質を非共有結合的に固定化させる方法が一般的である。固定化する特異的結合物質がＤＮＡなどの核酸類の場合には、ＵＶ照射などの後処理にて固定化することもある。いずれの方法でも、固定化したい特異的結合物質の向きや結合部位の制御が難しい。
【０００５】
共有結合的に固定するシステムにおいては、特に核酸類のうち合成オリゴヌクレオチドのような短鎖ＤＮＡの場合は顕著であるが、一般にオリゴヌクレオチドの塩基の一部が固定化に使われてしまい、標的物質と結合可能な塩基が減少し、その結果結合能力の低下を生じる可能性が高い。さらに、例えば長鎖ＤＮＡであれば固定化量を十分に保つことは可能であるが、合成オリゴヌクレオチドのような短鎖ＤＮＡの場合非共有結合では固定化率が低くかなりのオリゴヌクレオチドが剥離してしまう。このことも感度の大きな低下を招くことになる。固定化するリガンドまたはレセプタがタンパクの場合は静電結合及び疎水性結合にて非共有結合的に結合させることが一般的である。この場合も、タンパク質のどの部分と吸着性領域が結合するかの規定がしずらいだけでなく、タンパク質の変性を招く可能性が高い。
【０００６】
特開２００２−３５５０３６号公報（特許文献１）には、放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板を備え、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニット、並びにそれを用いた生化学解析方法が記載されている。
【０００７】
国際公開ＷＯ００／３４４５７号公報（特許文献２）には、オリゴヌクレオチドを含有する緩衝液をガラスなどの担体上にスポットしてオリゴヌクレオチドを該担体に固定化する方法であって、オリゴヌクレオチドを共有結合を介して担体に固定化することを特徴とするオリゴヌクレオチドの担体への固定化方法が記載されている。
【０００８】
特開平５−１６８４９９号公報（特許文献３）には、高密度の陰イオン性カルボキシル基を有し、５’アミンを含むオリゴヌクレオチドプローブの少なくとも１種がアミド結合を介して共有的に結合されるナイロン膜を含んでなるオリゴヌクレオチドプローブ試薬、並びにその製造方法が記載されている。
【０００９】
【特許文献１】
特開２００２−３５５０３６号公報
【特許文献２】
国際公開ＷＯ００／３４４５７号公報
【特許文献３】
特開平５−１６８４９９号公報
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は上記の従来技術の問題点を解消することを解決すべき課題とした。即ち、本発明は、特異的結合物質を強固かつ高効率な固定化をすることが可能であり、固定化する特異的結合物質の方向のコントロールすることにより特異的かつ高いシグナルを得ることができる生化学解析用ユニットを提供することを解決すべき課題とした。さらに、本発明は、上記生化学解析用ユニットを用いた生化学解析方法、上記生化学解析用ユニットの製造方法、及び上記生化学解析用ユニットを用いた特異的結合物質の固定化方法を提供することを解決すべき課題とした。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板を備え、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニットにおいて、吸着性領域に共有結合性官能基を導入することによって、所望の効果を奏する生化学解析用ユニットを提供できることを見出した。本発明はこの知見に基づいて完成したものである。
【００１２】
即ち、本発明によれば、放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板を備え、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニットにおいて、吸着性領域に共有結合性官能基を有する生化学解析用ユニットが提供される。
【００１３】
本発明の別の側面によれば、共有結合性官能基を有する吸着性材料によって形成された吸着性基板と、複数の貫通した孔が形成され、放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成された多孔板を備え、前記多孔板が、前記吸着性基板の少なくとも一方の面に密着され、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔内の前記吸着性基板によって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニットが提供される。
【００１４】
本発明のさらに別の側面によれば、放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板を備え、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニットにおいて、吸着性領域に構造または特性が既知の特異的結合物質が共有結合を介して固定され、放射性標識物質、蛍光物質及び、化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質よりなる群から選ばれる少なくとも１種の標識物質によって標識された生体由来物質が、前記特異的結合物質に特異的に結合されて、前記複数の吸着性領域が選択的に標識されていることを特徴とする生化学解析用ユニットが提供される。
【００１５】
好ましくは、前記構造または特性が既知の特異的結合物質は、官能基を有する。
好ましくは、前記官能基を有する特異的結合物質は、核酸類、タンパク質、及びペプチドからなる群から選ばれる。
好ましくは、前記官能基を有する核酸類は、ヌクレオチド誘導体、ペプチド核酸、及びＬＮＡよりなる群から選ばれる。
【００１６】
好ましくは、前記官能基を有するヌクレオチド誘導体はオリゴヌクレオチドである。
好ましくは、生体由来物質は、ハイブリダイゼーション、抗原抗体反応、及びレセプタ・リガンド反応よりなる群から選ばれた反応によって、前記特異的結合物質と結合されている。
好ましくは、吸着性領域にスペーサーを介して共有結合性官能基を保持している。
【００１７】
本発明のさらに別の側面によれば、上記した生化学解析用ユニットを用い、該生化学解析用ユニットの吸着性領域に構造または特性が既知の特異的結合物質を共有結合を介して固定し、放射性標識物質、蛍光物質、及び化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質よりなる群から選ばれる少なくとも１種の標識物質によって標識された生体由来物質を前記特異的結合物質に特異的に結合させることで前記標識された生体由来物質を検出する、生化学解析方法が提供される。
【００１８】
好ましくは、前記生体由来物質は、ハイブリダイゼーション、抗原抗体反応、及びレセプタ・リガンド反応よりなる群から選ばれた反応によって、前記特異的結合物質と結合する。
【００１９】
本発明のさらに別の側面によれば、放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板を備え、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニットの製造方法において、共有結合性官能基を有する材料を該基板に密着させる工程を含む、上記の生化学解析用ユニットの製造方法が提供される。
【００２０】
本発明のさらに別の側面によれば、放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板を備え、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニットの製造方法において、基板に密着した吸着性材料に共有結合性官能基を導入する工程を含む、上記の生化学解析用ユニットの製造方法が提供される。
好ましくは、前記吸着性材料は多孔質材料である。
【００２１】
本発明のさらに別の側面によれば、官能基が保持されている吸着性領域を、反応性が向上する活性化剤で処理する工程を含む、上記した本発明の生化学解析用ユニットに特異的結合物質（例えば、リガンドまたはレセプタなど）を固定化する方法が提供される。
好ましくは、官能基が保持されている吸着性領域を、反応性が向上する活性化剤で処理する工程の後に、官能基を有する特異的結合物質を反応させて固定化する。
好ましくは、官能基を有する特異的結合物質と吸着性領域との間にスペーサーを保持させる。
【００２２】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態について説明する。
本発明の生化学解析用ユニットは、放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板を備え、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニットにおいて、吸着性領域に共有結合性官能基をもつことを特徴とするものである。
【００２３】
生化学解析用ユニットに互いに離間して形成された、複数の吸着性領域に共有結合可能な官能基を導入することで、特異的結合物質を共有結合を介して結合させる。それにより、従来より強固かつ高効率な固定化を達成する。さらに、吸着性領域と特異的結合物質の特定の位置とを結合させることで、特異的結合物質の向きを制御し特異的結合能力を最大限に引きだすことを特徴とする。その結果、従来の方法と比べて大幅な高感度化を達成することができる。
【００２４】
固定化する特異的結合物質が、固定化しずらい合成オリゴヌクレオチドのような短鎖ＤＮＡの場合は特に本法を用いることは有効である。また、固定化時の変性が大きな問題となるタンパクの場合もまた非常に効果的であるといえる。
【００２５】
吸着性領域への共有結合性官能基導入方法としては、生化学解析用ユニットに何からの処理をすることにより官能基を導入するか、予め官能基を導入された吸着性材料から生化学解析用ユニットを製造する方法のいずれも用いることができる。生化学解析用ユニットへの後処理方法としては例えば官能基を持ったポリマー（合成ポリマー及び天然ポリマーなど）をコートする方法、プラズマ重合やグラフト重合法にて官能基をもったモノマーより吸着性領域表面にポリマーを形成させる方法、吸着性材料表面の官能基と結合可能な二官能性低分子化合物による処理などが挙げられる。また予め官能基の導入された吸着性材料としては、官能基を持つモノマーより重合されたポリマーやコポリマー、ナイロンなど分子の末端にアミノ基やカルボキシル基を持つもの、多糖類などを還元することで官能基を持たせたもの、上記素材のブレンド品、市販のあらゆる官能基を持つ吸着性材料（例えばポール社のＢｉｏｄｙｎｅ  Ｃ，  Ｉｍｍｕｎｏｄｙｎｅ  ＡＢＣ，  ＵｌｔｒａＢｉｎｄ，  ＬｏＰｒｏｄｙｎｅなど）などを用いることができる。
【００２６】
なお、本明細書にて、「特異的結合物質」とは「生物学的な特異的結合を形成する構成員」であり、例えば、レセプタ又はリガンドなどが挙げられる。
【００２７】
本発明においては、生化学解析用ユニットの吸着性領域、もしくは吸着性領域を形成する吸着性材料を共有結合性官能基を有する高分子化合物で処理することにより共有結合性官能基を導入することができる。共有結合性官能基を有する合成高分子の例としては、モノマーとしてアクリル酸、メタクリル酸、アクリルアミド、メタクリル酸メチル、グリシジルメタクリレート、アリルアミン、アリルアルデヒド、ビニル酢酸などを用いたホモポリマーもしくはコポリマー、ポリリジンなどが挙げられる。天然高分子の例としては、多糖類、アルギン酸、多糖類を過ヨウ素酸酸化によりアルデヒド化したもの、アルデヒド化多糖類を亜塩素酸ナトリウムでカルボキシル化したもの、コラーゲン、ゼラチン、カゼインなどのタンパク質などが挙げられる。
【００２８】
本発明の生化学解析ユニットは、共有結合性官能基を有する吸着性材料から製造することができる。吸着性材料は共有結合性官能基を有する高分子化合物単体もしくはその複合体であってもよい。共有結合性官能基を有する合成もしくは天然高分子として例えば、モノマーとしてアクリル酸、メタクリル酸、アクリルアミド、メタクリル酸メチル、グリシジルメタクリレート、アリルアミン、アリルアルデヒド、ビニル酢酸などを用いたホモポリマーもしくはコポリマー、ポリリジン、アルギン酸などの多糖類、多糖類を過ヨウ素酸酸化によりアルデヒド化したもの、アルデヒド化多糖類を亜塩素酸ナトリウムでカルボキシル化したもの、コラーゲン、ゼラチン、カゼインなどのタンパク質が挙げられる。これら単体、もしくはナイロン６、ナイロン６，６、ナイロン４，１０などのナイロン類；ニトロセルロース、  酢酸セルロース、酪酸酢酸セルロースなどのセルロース誘導体；コラーゲン；アルギ  ン酸、アルギン酸カルシウム、アルギン酸／ポリリシンポリイオンコンプレックスな  どのアルギン酸類；ポリエチレン、ポリプロピレンなどのポリオレフィン類；ポリ塩  化ビニル；ポリ塩化ビニリデン；ポリフッ化ビニリデン、ポリテトラフルオライドなどのポリフルオライドや、これらの共重合体との複合体を用いることもできる。
【００２９】
本発明においては、生化学解析用ユニットの吸着性領域もしくは吸着性領域を形成する吸着性材料を表面にグラフト重合やプラズマ重合にて共有結合性官能基を持つ高分子化することができる。モノマーとしては例えば、アクリル酸、メタクリル酸、アクリルアミド、メタクリル酸メチル、グリシジルメタクリレート、アリルアミン、アリルアルデヒド、ビニル酢酸などを用いることができる。
【００３０】
本発明においては、生化学解析用ユニットの吸着性領域もしくは吸着性領域を形成する吸着性材料を低分子化合物で処理することもできる。低分子化合物としては、例えば、トリアジン、ビニルスルホン、ヒドロキシサクシンイミド、マレイミド、グルタールアルデヒドなどが挙げられる。
【００３１】
特異的結合物質と吸着性領域の結合は縮合反応や架橋反応として一般に知られた反応を用いることができる。例えばグルタルアルデヒドによるアミノ基同士の架橋、カルボジイミド単独もしくはカルボジイミドとＮＨＳによるアミノ基とカルボキシル基との共有結合、アジドの光分解による挿入反応、アミノ基とトシル基の交換反応、チオール基とマレイミド基の反応、アジド基とアミノ基の反応、イソシアネート基とヒドロキシル基との反応、イソチオシアネート基とアミノ基の反応、アミノ基、イミノ基、ヒドラジノ基、カルバモイル基、ヒドラジノカルボニル基、もしくはカルボキシイミド基、メルカプト基とビニルスルホニル基との反応、チオール基とハロゲン化アセチル基との反応、ヒドロキシル基とエポキシ基の反応、アミノ基とアルデヒド基とのシッフベースを介した反応、アルデヒド基とヒドラジド基による反応などにより実施できる。
【００３２】
本発明では、官能基が保持されている吸着性領域を、反応性が向上する活性化剤で処理する工程によって、生化学解析用ユニットに特異的結合物質を固定化することができる。本発明で用いる反応性が向上する活性化剤とは、「共有結合性官能基」である、カルボキシル基、アミノ基、チオール基などを活性化するために用いる活性化剤を指し、ＣＯＯＨに対しては１−Ｅｔｈｙｌ−３−（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（略称：ＥＤＣ、ＷＡＫＯカタログより）（水溶性カルボジイミド）やＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド）、アミノ基に対してはジビニルスルホンやグルタールアルデヒド、クロスリンカーと呼ばれるチオール基とアミノ基の両方と反応する二官能性の活性化剤がある。本明細書に記載の実施例では、Ｂｉｏｄｙｎｅ  Ｃ（ＣＯＯＨ導入済みメンブレンではＥＤＣ＋ＮＨＳ、ナイロンメンブレン（ＮＨ２を持つメンブレン）ではジビニルスルホンを使って活性化している。
【００３３】
本発明の生化学解析用ユニットの詳細については、特開２００２−３５５０３６号公報に記載されており、特開２００２−３５５０３６号公報に記載の内容は全て本明明細書の開示の一部として本明細書中に含めるものとする。特開２００２−３５５０３６号公報には、具体的には下記（１）から（２９）に記載の生化学解析用ユニットが記載されているが、吸着性領域又は吸着性材料に共有結合性官能基を有している点を除き、下記（１）から（２９）に記載の生化学解析用ユニットと同様の生化学解析用ユニットを本発明において使用することができる。
【００３４】
（１）      放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板を備え、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニット。
（２）      放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成されるとともに、複数の孔が形成され、前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成され、それによって、複数の吸着性領域が形成された基板を備え、前記基板の前記複数の孔内に形成された複数の吸着性領域に、構造または特性が既知の特異的結合物質が滴下され、放射性標識物質、蛍光物質および化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質よりなる群から選ばれる少なくとも１種の標識物質によって標識された生体由来の物質が、前記特異的結合物質に、特異的に結合されて、前記複数の吸着性領域が選択的に標識されていることを特徴とする生化学解析用ユニット。
（３）  前記生体由来の物質が、ハイブリダイゼーション、抗原抗体反応、リセプター・リガンドよりなる群から選ばれた反応によって、前記特異的結合物質と結合されていることを特徴とする（２）に記載の生化学解析用ユニット。
【００３５】
（４）      前記複数の吸着性領域が、前記基板に形成された前記複数の孔内に、吸着性材料が充填されて、形成されたことを特徴とする（１）ないし（３）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（５）      前記複数の孔が、それぞれ、貫通孔によって構成されたことを特徴とする（１）ないし（４）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（６）      前記複数の孔が、それぞれ、凹部によって構成されたことを特徴とする（１）ないし（４）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（７）    前記基板が可撓性材料によって形成されていることを特徴とする（１）ないし（６）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（８）    前記基板に、前記基板を保持可能な保持部が形成されたことを特徴とする（１）ないし（７）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
【００３６】
（９）    吸着性材料によって形成された吸着性基板と、複数の貫通した孔が形成され、放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料によって形成された多孔板を備え、前記多孔板が、前記吸着性基板の少なくとも一方の面に密着され、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔内の前記吸着性基板によって、複数の吸着性領域が形成されたことを特徴とする生化学解析用ユニット。
（１０）  前記吸着性基板の両面に、前記多孔板が密着されたことを特徴とする（９）に記載の生化学解析用ユニット。
（１１）  前記多孔板に、前記多孔板を保持可能な保持部が形成されたことを特徴とする（９）または（１０）に記載の生化学解析用ユニット。
（１２）    前記吸着性基板の前記複数の吸着性領域に、構造または特性が既知の特異的結合物質が滴下され、放射性標識物質、蛍光物質および化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質よりなる群から選ばれる少なくとも１種の標識物質によって標識された生体由来の物質が、前記特異的結合物質に、特異的に結合されて、前記複数の吸着性領域が選択的に標識されていることを特徴とする（９）ないし（１１）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
【００３７】
（１３）  前記孔が１０以上形成されたことを特徴とする（１）ないし（１２）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（１４）  前記孔が１０００以上形成されたことを特徴とする（１３）に記載の生化学解析用ユニット。
（１５）  前記孔が１００００以上形成されたことを特徴とする（１４）に記載の生化学解析用ユニット。
【００３８】
（１６）  前記孔のサイズが５平方ミリメートル未満であることを特徴とする（１）ないし（１５）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（１７）  前記孔のサイズが１平方ミリメートル未満であることを特徴とする（１６）に記載の生化学解析用ユニット。
（１８）  前記孔のサイズが０．０１平方ミリメートル未満であることを特徴とする（１７）に記載の生化学解析用ユニット。
【００３９】
（１９）  前記孔が、１０個／平方センチメートル以上の密度で、形成されたことを特徴とする（１）ないし（１８）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（２０）  前記孔が、１０００個／平方センチメートル以上の密度で、形成されたことを特徴とする（１９）に記載の生化学解析用ユニット。
（２１）  前記孔が、１００００個／平方センチメートル以上の密度で、形成されたことを特徴とする（２０）に記載の生化学解析用ユニット。
【００４０】
（２２）  前記放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料が、隣り合う吸着性領域の間の距離に等しい距離だけ、放射線および／または光が前記材料中を透過したときに、放射線および／または光のエネルギーを、１／５以下に減衰させる性質を有することを特徴とする（１）ないし（２１）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（２３）  前記放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料が、隣り合う吸着性領域の間の距離に等しい距離だけ、放射線および／または光が前記材料中を透過したときに、放射線および／または光のエネルギーを、１／１０以下に減衰させる性質を有することを特徴とする（２２）に記載の生化学解析用ユニット。
（２４）  前記放射線および／または光を減衰させる性質を有する材料が、隣り合う吸着性領域の間の距離に等しい距離だけ、放射線および／または光が前記材料中を透過したときに、放射線および／または光のエネルギーを、１／１００以下に減衰させる性質を有することを特徴とする（２３）に記載の生化学解析用ユニット。
【００４１】
（２５）  前記基板が、金属材料、セラミック材料およびプラスチック材料よりなる群から選ばれる材料によって形成されたことを特徴とする（２２）ないし（２４）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（２６）  前記多孔板が、金属材料、セラミック材料およびプラスチック材料よりなる群から選ばれる材料によって形成されたことを特徴とする（２２）ないし（２４）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（２７）  前記吸着性材料が、多孔質材料よりなることを特徴とする（４）ないし（２６）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
（２８）  前記多孔質材料が、炭素材料またはメンブレンフィルタを形成可能な材料よりなることを特徴とする（２７）に記載の生化学解析用ユニット。
（２９）  前記吸着性材料が、繊維材料よりなることを特徴とする（４）ないし（２６）のいずれかに記載の生化学解析用ユニット。
【００４２】
さらに、本発明は、本明細書中前記の本発明の生化学解析用ユニットを用い、該生化学解析用ユニットの吸着性領域に構造または特性が既知の特異的結合物質を共有結合を介して固定し、放射性標識物質、蛍光物質、及び化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質よりなる群から選ばれる少なくとも１種の標識物質によって標識された生体由来物質を前記特異的結合物質に特異的に結合させることで前記標識された生体由来物質を検出する、生化学解析方法に関する。
【００４３】
本発明の生化学解析方法の詳細については、特開２００２−３５５０３６号公報に記載されており、特開２００２−３５５０３６号公報に記載の内容は全て本明明細書の開示の一部として本明細書中に含めるものとする。特開２００２−３５５０３６号公報には、具体的には下記（３０）から（６２）に記載の生化学解析方法が記載されているが、これらの方法を本発明においても同様に使用することができる。
【００４４】
（３０）  放射線を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板の前記複数の孔内に、それぞれ、吸着性領域が形成されて、形成された複数の吸着性領域に、生体由来の物質と特異的に結合可能で、かつ、構造または特性が既知の特異的結合物質を滴下し、放射性標識物質によって標識された生体由来の物質を、前記特異的結合物質に特異的に結合させて、前記複数の吸着性領域を選択的に標識して、生化学解析用ユニットを作製し、前記生化学解析用ユニットを、輝尽性蛍光体層が形成された蓄積性蛍光体シートに、前記輝尽性蛍光体層が前記複数の吸着性領域と対向するように、重ね合わせて、前記複数の吸着性領域に含まれた前記放射性標識物質によって、前記輝尽性蛍光体層を露光し、前記放射性標識物質によって露光された前記輝尽性蛍光体層に励起光を照射して、前記輝尽性蛍光体層に含まれた輝尽性蛍光体を励起し、前記輝尽性蛍光体層に含まれた輝尽性蛍光体から放出された輝尽光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする生化学解析方法。
【００４５】
（３１）  前記複数の吸着性領域が、前記生化学解析用ユニットの前記基板に形成された前記複数の孔内に、吸着性材料を充填して、形成されていることを特徴とする（３０）に記載の生化学解析方法。
（３２）  前記生化学解析用ユニットの前記基板に形成された前記複数の孔と略同一のパターンによって、前記蓄積性蛍光体シートに、複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域が、互いに離間して形成され、前記複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域の各々が、前記生化学解析用ユニットの前記基板に形成された前記複数の吸着性領域と対向するように、前記生化学解析用ユニットと前記蓄積性蛍光体シートとを重ね合わせて、前記複数の吸着性領域に含まれた前記放射性標識物質によって、前記蓄積性蛍光体シートの前記複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域を露光することを特徴とする（３０）または（３１）に記載の生化学解析方法。
【００４６】
（３３）  前記生化学解析用ユニットの前記基板が、放射線および光を減衰させる性質を有する材料によって形成されており、前記放射性標識物質に加えて、蛍光物質によって標識された前記生体由来の物質を、前記特異的結合物質に特異的に結合させて、前記複数の吸着性領域を選択的に標識して、生化学解析用ユニットを作製し、さらに、前記生化学解析用ユニットに励起光を照射して、前記蛍光物質を励起し、前記蛍光物質から放出された蛍光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする（３０）ないし（３２）のいずれかに記載の生化学解析方法。
【００４７】
（３４）  前記生化学解析用ユニットの前記基板が、放射線および光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、前記放射性標識物質に加えて、化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質によって、標識された前記生体由来の物質を、前記特異的結合物質に特異的に結合させて、前記複数の吸着性領域を選択的に標識して、生化学解析用ユニットを作製し、さらに、前記生化学解析用ユニットに、化学発光基質を接触させ、前記標識物質から放出される化学発光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする（３０）ないし（３２）のいずれかに記載の生化学解析方法。
【００４８】
（３５）  前記生化学解析用ユニットの前記基板が、放射線および光を減衰させる性質を有する材料によって形成されており、前記放射性標識物質に加えて、蛍光物質および化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質によって標識された前記生体由来の物質を、前記特異的結合物質に特異的に結合させて、前記複数の吸着性領域を選択的に標識して、生化学解析用ユニットを作製し、さらに、前記生化学解析用ユニットに、励起光を照射して、前記蛍光物質を励起し、前記蛍光物質から放出された蛍光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成するとともに、前記生化学解析用ユニットに、化学発光基質を接触させ、前記標識物質から放出される化学発光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする（３０）ないし（３２）のいずれかに記載の生化学解析方法。
【００４９】
（３６）  吸着性材料によって形成された吸着性基板と、放射線を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の貫通した孔が形成された多孔板を備え、前記多孔板が、前記吸着性基板の少なくとも一方の面に密着され、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔内の前記吸着性基板によって、複数の吸着性領域が形成され、前記複数の吸着性領域に、生体由来の物質と特異的に結合可能で、かつ、構造または特性が既知の特異的結合物質が滴下され、前記特異的結合物質に、放射性標識物質によって標識された生体由来の物質が特異的に結合されて、前記複数の吸着性領域が選択的に標識された生化学解析用ユニットを作製し、前記生化学解析用ユニットと、輝尽性蛍光体層が形成された蓄積性蛍光体シートとを、前記輝尽性蛍光体層が前記複数の吸着性領域と対向するように、前記多孔板を介して、重ね合わせ、前記複数の吸着性領域に含まれた前記放射性標識物質によって、前記輝尽性蛍光体層を露光し、前記放射性標識物質によって露光された前記輝尽性蛍光体層に、励起光を照射して、前記輝尽性蛍光体層に含まれた輝尽性蛍光体を励起し、前記輝尽性蛍光体層に含まれた輝尽性蛍光体から放出された輝尽光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする生化学解析方法。
【００５０】
（３７）  前記吸着性基板の両面に、前記多孔板が密着されて、前記生化学解析用ユニットが形成され、前記生化学解析用ユニットと、蓄積性蛍光体シートとを、前記輝尽性蛍光体層が前記複数の吸着性領域と対向するように、前記多孔板の一方を介して、重ね合わせ、前記複数の吸着性領域に含まれた前記放射性標識物質によって、前記輝尽性蛍光体層を露光することを特徴とする（３６）に記載の生化学解析方法。
【００５１】
（３８）  前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔と略同一のパターンによって、前記蓄積性蛍光体シートに、複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域が、互いに離間して形成され、前記複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域が、それぞれ、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔の一つを介して、前記複数の吸着性領域の一つと対向するように、前記生化学解析用ユニットと前記蓄積性蛍光体シートとを重ね合わせて、前記複数の吸着性領域に含まれた前記放射性標識物質によって、前記複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域を露光することを特徴とする（３６）または（３７）に記載の生化学解析方法。
【００５２】
（３９）  前記多孔板が、放射線および光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、放射性標識物質に加えて、蛍光物質によって標識された生体由来の物質を、特異的結合物質に特異的に結合させて、前記複数の吸着性領域を選択的に標識して、生化学解析用ユニットを作製し、さらに、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔を介して、生化学解析用ユニットに励起光を照射して、前記蛍光物質を励起し、前記蛍光物質から放出された蛍光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づき、生化学解析を実行することを特徴とする（３６）ないし（３８）のいずれかに記載の生化学解析方法。
【００５３】
（４０）  前記多孔板が、放射線および光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、前記放射性標識物質に加えて、化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質によって、標識された生体由来の物質を、前記特異的結合物質に特異的に結合させて、前記複数の吸着性領域を選択的に標識して、生化学解析用ユニットを作製し、前記生化学解析用ユニットに、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔を介して、化学発光基質を接触させ、前記標識物質から放出される化学発光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする（３６）ないし（３８）のいずれかに記載の生化学解析方法。
【００５４】
（４１）  前記多孔板が、放射線および光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、前記放射性標識物質に加えて、蛍光物質および化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質によって標識された生体由来の物質を、前記特異的結合物質に特異的に結合させて、前記複数の吸着性領域を選択的に標識して、生化学解析用ユニットを作製し、前記生化学解析用ユニットに、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔を介して、励起光を照射して、前記蛍光物質を励起し、前記蛍光物質から放出された蛍光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行するとともに、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔を介して、化学発光基質を接触させ、前記標識物質から放出される化学発光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする（３６）ないし（３８）のいずれかに記載の生化学解析方法。
【００５５】
（４２）  光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板の前記複数の孔内に形成された複数の吸着性領域に、生体由来の物質と特異的に結合可能で、かつ、構造または特性が既知の特異的結合物質を滴下し、蛍光物質によって標識された生体由来の物質を、前記特異的結合物質に特異的に結合させて、前記複数の吸着性領域を選択的に標識して、生化学解析用ユニットを作製し、前記生化学解析用ユニットに、励起光を照射して、前記蛍光物質を励起し、前記蛍光物質から放出された蛍光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする生化学解析方法。
【００５６】
（４３）  光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板の前記複数の孔内に形成された複数の吸着性領域に、生体由来の物質と特異的に結合可能で、かつ、構造または特性が既知の特異的結合物質を滴下し、化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質によって標識された生体由来の物質を、前記特異的結合物質に特異的に結合させて、前記複数の吸着性領域を選択的に標識して、生化学解析用ユニットを作製し、前記生化学解析用ユニットに、化学発光基質を接触させ、前記標識物質から放出される化学発光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする生化学解析方法。
【００５７】
（４４）  光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、複数の孔が形成された基板の前記複数の孔内に形成された複数の吸着性領域に、生体由来の物質と特異的に結合可能で、かつ、構造または特性が既知の特異的結合物質を滴下し、蛍光物質および化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質によって標識された生体由来の物質を、前記特異的結合物質に特異的に結合させて、前記複数の吸着性領域を選択的に標識して、生化学解析用ユニットを作製し、前記生化学解析用ユニットに、励起光を照射して、前記蛍光物質を励起し、前記蛍光物質から放出された蛍光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成するとともに、前記生化学解析用ユニットに、化学発光基質を接触させ、前記標識物質から放出される化学発光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする生化学解析方法。
【００５８】
（４５）  前記複数の吸着性領域が、前記生化学解析用ユニットの前記基板に形成された前記複数の孔内に、吸着性材料を充填して、形成されていることを特徴とする（４２）ないし（４４）のいずれかに記載の生化学解析方法。
【００５９】
（４６）  吸着性材料によって形成された吸着性基板であって、生体由来の物質と特異的に結合可能で、かつ、構造または特性が既知の特異的結合物質が滴下されて、複数の吸着性領域が形成され、前記複数の吸着性領域に含まれた特異的結合物質に、蛍光物質によって標識された生体由来の物質が特異的に結合されて、前記複数の吸着性領域が選択的に標識された吸着性基板と、光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、前記吸着性基板に形成された前記複数の吸着性領域に対応する位置に、複数の貫通した孔が形成された多孔板とを密着させ、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔を介して、前記吸着性基板に形成された前記複数の吸着性領域に励起光を照射して、前記蛍光物質を励起して、前記蛍光物質から放出された蛍光を光電的に検出し、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする生化学解析方法。
【００６０】
（４７）  前記吸着性基板の両面に、前記多孔板が密着されて、前記生化学解析用ユニットが形成され、前記多孔板の一方に形成された前記複数の貫通した孔を介して、前記吸着性基板に形成された前記複数の吸着性領域に、励起光を照射し、前記蛍光物質を励起して、前記蛍光物質から放出された蛍光を光電的に検出することを特徴とする（４６）に記載の生化学解析方法。
【００６１】
（４８）  吸着性材料によって形成された吸着性基板であって、生体由来の物質と特異的に結合可能で、かつ、構造または特性が既知の特異的結合物質が滴下されて、複数の吸着性領域が形成され、前記複数の吸着性領域に含まれた特異的結合物質に、化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質によって標識された生体由来の物質が特異的に結合されて、前記吸着性領域が選択的に標識された吸着性基板と、光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、前記吸着性基板の前記複数の吸着性領域に対応する位置に、複数の貫通した孔が形成された多孔板とを密着させ、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔を介して、前記吸着性基板に形成された前記複数の吸着性領域に化学発光基質を接触させ、前記標識物質から放出される化学発光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする生化学解析方法。
【００６２】
（４９）  前記吸着性基板の両面に、前記多孔板が密着されて、前記生化学解析用ユニットが形成され、前記多孔板の一方に形成された前記複数の貫通した孔を介して、前記吸着性基板に形成された前記複数の吸着性領域に、化学発光基質を接触させ、前記標識物質から放出される化学発光を光電的に検出することを特徴とする（４８）に記載の生化学解析方法。
【００６３】
（５０）  吸着性材料によって形成された吸着性基板であって、生体由来の物質と特異的に結合可能で、かつ、構造または特性が既知の特異的結合物質が滴下されて、複数の吸着性領域が形成され、前記複数の吸着性領域に含まれた特異的結合物質に、蛍光物質および化学発光基質と接触させることによって化学発光を生じさせる標識物質によって標識された生体由来の物質が特異的に結合されて、前記複数の吸着性領域が選択的に標識された吸着性基板と、光を減衰させる性質を有する材料によって形成され、前記吸着性基板に形成された前記複数の吸着性領域に対応する位置に、複数の貫通した孔が形成された多孔板とを密着させ、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔を介して、前記吸着性基板に形成された前記複数の吸着性領域に励起光を照射して、前記蛍光物質を励起して、前記蛍光物質から放出された蛍光を光電的に検出し、生化学解析用データを生成するとともに、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔を介して、前記吸着性基板に形成された前記複数の吸着性領域に化学発光基質を接触させ、前記標識物質から放出される化学発光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする生化学解析方法。
【００６４】
（５１）  前記吸着性基板の両面に、前記多孔板が密着されて、前記生化学解析用ユニットが形成され、前記多孔板の一方に形成された前記複数の貫通した孔を介して、前記吸着性基板に形成された前記複数の吸着性領域に、励起光を照射して、前記蛍光物質を励起し、前記蛍光物質から放出された蛍光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成するとともに、前記多孔板の一方に形成された前記複数の貫通した孔を介して、前記吸着性基板に形成された前記複数の吸着性領域に、化学発光基質を接触させ、前記標識物質から放出される化学発光を光電的に検出して、生化学解析用データを生成し、前記生化学解析用データに基づいて、生化学解析を実行することを特徴とする（５０）に記載の生化学解析方法。
【００６５】
（５２）  前記特異的結合物質が、前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔を介して、前記吸着性基板に形成された前記複数の吸着性領域に滴下することを特徴とする（３６）ないし（４１）および（４５）ないし（５０）のいずれかに記載の生化学解析方法。
（５３）  前記孔が１０以上形成されたことを特徴とする（３０）ないし（５２）のいずれかに記載の生化学解析方法。
【００６６】
（５４）  前記孔のサイズが５平方ミリメートル未満であることを特徴とする（３０）ないし（５３）のいずれかに記載の生化学解析方法。
（５５）  前記孔が、１０個／平方センチメートル以上の密度で、形成されたことを特徴とする（３０）ないし（５４）のいずれかに記載の生化学解析方法。
（５６）  前記放射線を減衰させる性質を有する材料が、隣り合う吸着性領域の間の距離に等しい距離だけ、放射線が前記材料中を透過したときに、放射線のエネルギーを１／５以下に減衰させる性質を有することを特徴とする（３０）ないし（４１）および（５２）ないし（５５）のいずれかに記載の生化学解析方法。
【００６７】
（５７）  前記光を減衰させる性質を有する材料が、隣り合う吸着性領域の間の距離に等しい距離だけ、光が前記材料中を透過したときに、光のエネルギーを１／５以下に減衰させる性質を有することを特徴とする（３３）ないし（３５）および（３９）ないし（５５）のいずれかに記載の生化学解析方法。
（５８）  前記基板が、金属材料、セラミック材料およびプラスチック材料よりなる群から選ばれる材料によって形成されたことを特徴とする（５６）または（５７）に記載の生化学解析方法。
（５９）  前記多孔板が、金属材料、セラミック材料およびプラスチック材料よりなる群から選ばれる材料によって形成されたことを特徴とする（５６）または（５７）に記載の生化学解析方法。
【００６８】
（６０）  前記吸着性材料が、多孔質材料よりなることを特徴とする（３１）ないし（４１）および（４５）ないし（５９）のいずれかに記載の生化学解析方法。
（６１）  前記多孔質材料が、炭素材料またはメンブレンフィルタを形成可能な多孔質材料よりなることを特徴とする（６０）に記載の生化学解析方法。
（６２）  前記吸着性材料が、繊維材料よりなることを特徴とする（３１）ないし（４１）および（４５）ないし（５９）のいずれかに記載の生化学解析方法。
【００６９】
本発明において、生化学解析用ユニットの基板または多孔板を形成するための材料としては、放射線および／または光を減衰させる性質を有するものであれば、特に限定されるものではなく、無機化合物材料、有機化合物材料のいずれをも使用することができるが、金属材料、セラミック材料またはプラスチック材料が、好ましく使用される。
【００７０】
本発明において、生化学解析用ユニットの基板または多孔板を形成するために好ましく使用可能で、放射線を減衰させることのできる無機化合物材料としては、たとえば、金、銀、銅、亜鉛、アルミニウム、チタン、タンタル、クロム、鉄、ニッケル、コバルト、鉛、錫、セレンなどの金属；真鍮、ステンレス、青銅などの合金；シリコン、アモルファスシリコン、ガラス、石英、炭化ケイ素、窒化ケイ素などの珪素材料；酸化アルミニウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウムなどの金属酸化物；タングステンカーバイト、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、ヒドロキシアパタイト、砒化ガリウムなどの無機塩を挙げることができる。これらは、単結晶、アモルファス、セラミックのような多結晶焼結体にいずれの構造を有していてもよい。
【００７１】
本発明において、放射線を減衰させることのできる有機化合物材料としては、高分子化合物が好ましく用いられ、生化学解析用ユニットの基板または多孔板を形成するために好ましく使用可能で、放射線を減衰させることのできる高分子化合物としては、たとえば、ポリエチレンやポリプロピレンなどのポリオレフィン；ポリメチルメタクリレート、ブチルアクリレート／メチルメタクリレート共重合体などのアクリル樹脂；ポリアクリロニトリル；ポリ塩化ビニル；ポリ塩化ビニリデン；ポリフッ化ビニリデン；ポリテトラフルオロエチレン；ポリクロロトリフルオロエチレン；ポリカーボネート；ポリエチレンナフタレートやポリエチレンテレフタレートなどのポリエステル；ナイロン６、ナイロン６，６、ナイロン４，１０などのナイロン；ポリイミド；ポリスルホン；ポリフェニレンサルファイド；ポリジフェニルシロキサンなどのケイ素樹脂；ノボラックなどのフェノール樹脂；エポキシ樹脂；ポリウレタン；ポリスチレン；ブタジエン−スチレン共重合体；セルロース、酢酸セルロース、ニトロセルロース、でん粉、アルギン酸カルシウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの多糖類；キチン；キトサン；ウルシ；ゼラチン、コラーゲン、ケラチンなどのポリアミドおよびこれら高分子化合物の共重合体などを挙げることができる。これらは、複合材料でもよく、必要に応じて、金属酸化物粒子やガラス繊維などを充填することもでき、また、有機化合物材料をブレンドして、使用することもできる。
【００７２】
一般に、比重が大きいほど、放射線の減衰能が高くなるので、本発明において、生化学解析用ユニットの基板または多孔板を、放射線を減衰させる性質を有する材料によって形成する場合は、比重１．０ｇ／ｃｍ３以上の化合物材料または複合材料によって形成されることが好ましく、比重が１．５ｇ／ｃｍ３以上、２３ｇ／ｃｍ３以下の化合物材料または複合材料によって形成されることが、とくに好ましい。
【００７３】
本発明において、生化学解析用ユニットの基板または多孔板を形成するために好ましく使用可能な光を減衰させることのできる無機化合物材料としては、たとえば、金、銀、銅、亜鉛、アルミニウム、チタン、タンタル、クロム、鉄、ニッケル、コバルト、鉛、錫、セレンなどの金属；真鍮、ステンレス、青銅などの合金；シリコン、アモルファスシリコン、ガラス、石英、炭化ケイ素、窒化ケイ素などの珪素材料；酸化アルミニウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウムなどの金属酸化物；タングステンカーバイト、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、ヒドロキシアパタイト、砒化ガリウムなどの無機塩を挙げることができる。これらは、単結晶、アモルファス、セラミックのような多結晶焼結体にいずれの構造を有していてもよい。
【００７４】
本発明において、光を減衰させることのできる有機化合物材料としては、高分子化合物が好ましく用いられ、生化学解析用ユニットの基板または多孔板を形成するために好ましく使用可能な光を減衰させることのできる高分子化合物としては、たとえば、ポリエチレンやポリプロピレンなどのポリオレフィン；ポリメチルメタクリレート、ブチルアクリレート／メチルメタクリレート共重合体などのアクリル樹脂；ポリアクリロニトリル；ポリ塩化ビニル；ポリ塩化ビニリデン；ポリフッ化ビニリデン；ポリテトラフルオロエチレン；ポリクロロトリフルオロエチレン；ポリカーボネート；ポリエチレンナフタレートやポリエチレンテレフタレートなどのポリエステル；ナイロン６、ナイロン６，６、ナイロン４，１０などのナイロン；ポリイミド；ポリスルホン；ポリフェニレンサルファイド；ポリジフェニルシロキサンなどのケイ素樹脂；ノボラックなどのフェノール樹脂；エポキシ樹脂；ポリウレタン；ポリスチレン；ブタジエン−スチレン共重合体；セルロース、酢酸セルロース、ニトロセルロース、でん粉、アルギン酸カルシウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの多糖類；キチン；キトサン；ウルシ；ゼラチン、コラーゲン、ケラチンなどのポリアミドおよびこれら高分子化合物の共重合体などを挙げることができる。これらは、複合材料でもよく、必要に応じて、金属酸化物粒子やガラス繊維などを充填することもでき、また、有機化合物材料をブレンドして、使用することもできる。
【００７５】
一般に、光の散乱および／または吸収が大きいほど、光の減衰能が高くなるので、本発明において、生化学解析用ユニットの基板および多孔板を、光を減衰させる性質を有する材料によって形成する場合は、厚さ１ｃｍあたりの吸光度が０．３以上であることが好ましく、厚さ１ｃｍあたりの吸光度が１以上であれば、さらに好ましい。ここに、吸光度は、厚さＴｃｍの板状体の直後に、積分球を置き、計測に利用するプローブ光またはエミッション光の波長における透過光量Ａを分光光度計によって測定し、Ａ／Ｔを算出することによって、求められる。
【００７６】
本発明において、光減衰能を向上させるために、光散乱体や光吸収体を、生化学解析用ユニットの基板および多孔板に含有させることもできる。光散乱体としては、生化学解析用ユニットの基板および多孔板を形成している材料と異なる材料の微粒子が用いられ、光吸収体としては、顔料または染料が用いられる。
【００７７】
本発明の好ましい実施態様においては、前記生化学解析用ユニットの前記基板が可撓性材料によって形成されている。
本発明の好ましい実施態様によれば、生化学解析用ユニットの基板が可撓性材料によって形成されているため、生化学解析用ユニットを湾曲させて、ハイブリダイゼーション溶液を接触させ、特異的結合物質に生体由来の物質をハイブリダイズさせることができ、したがって、少量のハイブリダイゼーション溶液を用いて、所望のように、特異的結合物質に生体由来の物質をハイブリダイズさせることが可能になる。
【００７８】
本発明の好ましい実施態様においては、前記生化学解析用ユニットの前記基板に、前記孔が規則的に形成されているか、前記孔がそれぞれ略円形に形成されているか、あるいは前記孔がそれぞれ略矩形状に形成されている。
本発明の好ましい実施態様においては、前記生化学解析用ユニットの前記基板に、１０以上、好ましくは５０以上、さらに好ましくは１００以上、さらに好ましくは１０００以上、さらに好ましくは１００００以上、さらに好ましくは１０００００以上の孔が形成されている。
【００７９】
本発明の好ましい実施態様においては、前記生化学解析用ユニットの前記基板に形成された前記複数の孔が、それぞれ、５平方ミリメートル未満、さらに好ましくは１平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．５平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．１平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．０５平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．０１平方ミリメートル未満のサイズを有している。
【００８０】
本発明において、前記生化学解析用ユニットの前記基板に形成される孔の密度は、基板の材質、基板の厚みおよび放射性標識物質から放出される電子線の種類あるいは蛍光物質から放出される蛍光の波長などに応じて、決定される。
本発明の好ましい実施態様においては、前記複数の孔が、前記生化学解析用ユニットの前記基板に、１０個／平方センチメートル以上、好ましくは５０個／平方センチメートル以上、  さらに好ましくは１００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは５００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは１０００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは５０００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは１００００個／平方センチメートル以上の密度で、形成されている。
【００８１】
本発明の好ましい実施態様においては、前記生化学解析用ユニットの前記多孔板に、貫通した孔が規則的に形成されているか、貫通した孔がそれぞれ略円形に形成されているか、あるいは、貫通した孔がそれぞれ略矩形状に形成されている。
本発明の好ましい実施態様においては、前記生化学解析用ユニットの前記多孔板に、１０以上、好ましくは５０以上、さらに好ましくは１００以上、さらに好ましくは１０００以上、さらに好ましくは１００００以上、さらに好ましくは１０００００以上の貫通した孔が形成されている。
【００８２】
本発明の好ましい実施態様においては、前記生化学解析用ユニットの前記多孔板に形成された前記複数の貫通した孔が、それぞれ５平方ミリメートル未満、好ましくは１平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．５平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．１平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．０５平方ミリメートル未満、さらに好ましくは０．０１平方ミリメートル未満のサイズを有している。
【００８３】
本発明において、前記生化学解析用ユニットの前記多孔板に形成される貫通した孔の密度は、多孔板の材質、基板の厚みおよび放射性標識物質から放出される電子線の種類あるいは蛍光物質から放出される蛍光の波長などに応じて、任意に決定することができる。
本発明の好ましい実施態様においては、前記複数の貫通した孔が、前記生化学解析用ユニットの前記多孔板に、１０個／平方センチメートル以上、好ましくは５０個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは１００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは５００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは１０００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは５０００個／平方センチメートル以上、さらに好ましくは１００００個／平方センチメートル以上の密度で、形成されている。
【００８４】
本発明において、吸着性領域を形成する吸着性材料としては、多孔質材料あるいは繊維材料が好ましく使用される。多孔質材料と繊維材料を併用して、吸着性領域を形成することもできる。
本発明において、吸着性領域を形成するために使用される多孔質材料は、有機材料、無機材料のいずれでもよく、有機／無機複合体でもよい。
【００８５】
本発明において、吸着性領域を形成するために使用される有機多孔質材料は、特に限定されるものではないが、活性炭などの炭素多孔質材料あるいはメンブレンフィルタを形成可能な多孔質材料が、好ましく用いられる。メンブレンフィルタを形成可能な多孔質材料としては、ナイロン６、ナイロン６，６、ナイロン４，１０などのナイロン類；ニトロセルロース、酢酸セルロース、酪酸酢酸セルロースなどのセルロース誘導体；コラーゲン；アルギン酸、アルギン酸カルシウム、アルギン酸／ポリリシンポリイオンコンプレックスなどのアルギン酸類；ポリエチレン、ポリプロピレンなどのポリオレフィン類；ポリ塩化ビニル；ポリ塩化ビニリデン；ポリフッ化ビニリデン、ポリテトラフルオライドなどのポリフルオライドや、これらの共重合体または複合体が挙げられる。
【００８６】
本発明において、吸着性領域を形成するために使用される無機多孔質材料は、とくに限定されるものではないが、好ましくは、たとえば、白金、金、鉄、銀、ニッケル、アルミニウムなどの金属；アルミナ、シリカ、チタニア、ゼオライトなどの金属酸化物；ヒドロキシアパタイト、硫酸カルシウムなどの金属塩やこれらの複合体などが挙げられる。
【００８７】
本発明において、吸着性領域を形成するために使用される繊維材料は、とくに限定されるものではないが、好ましくは、たとえば、ナイロン６、ナイロン６，６、ナイロン４，１０などのナイロン類、ニトロセルロース、酢酸セルロース、酪酸酢酸セルロースなどのセルロース誘導体などが挙げられる。
本発明において、吸着性領域は、電解処理、プラズマ処理、アーク放電などの酸化処理；シランカップリング剤、チタンカップリング剤などを用いたプライマー処理；界面活性剤処理などの表面処理によって形成することもできる。
【００８８】
本発明において、蓄積性蛍光体シートの支持体に、複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域を形成する場合には、支持体の表面に、複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域を形成しても、支持体に、複数の孔をドット状に形成し、ドット状に形成された複数の孔内に、輝尽性蛍光体層領域を形成するようにしてもよい。
本発明において、蓄積性蛍光体シートの支持体に、複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域を形成する場合、複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域は、生化学解析用ユニットに形成された吸着性領域と、同じパターンによって、形成される。
【００８９】
本発明の好ましい実施態様においては、蓄積性蛍光体シートの支持体に、複数の貫通孔が、ドット状に形成され、輝尽性蛍光体層領域が、複数の貫通孔内に形成されている。
本発明のさらに好ましい実施態様においては、輝尽性蛍光体層領域が、複数の貫通孔内に、輝尽性蛍光体が充填されて、形成されている。
本発明の別の好ましい実施態様においては、蓄積性蛍光体シートの支持体に、複数の凹部が、ドット状に形成され、輝尽性蛍光体層領域が、複数の凹部内に形成されている。
本発明のさらに好ましい実施態様においては、輝尽性蛍光体層領域が、複数の凹部内に、輝尽性蛍光体が充填されて、形成されている。
本発明の好ましい実施態様においては、複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域が、規則的なパターンで、蓄積性蛍光体シートに形成されている。
【００９０】
本発明において、蓄積性蛍光体シートの支持体に、複数のドット状の輝尽性蛍光体層領域を形成する場合には、蓄積性蛍光体シートの支持体を形成するための材料としては、放射線を減衰させる性質を有するものが好ましく、放射線を減衰させる性質を有する材料は、とくに限定されるものではなく、無機化合物材料、有機化合物材料のいずれをも使用することができるが、金属材料、セラミック材料またはプラスチック材料が、とくに好ましい。
【００９１】
本発明において、蓄積性蛍光体シートの支持体を形成するために好ましく使用可能で、放射線を減衰させることのできる無機化合物材料としては、たとえば、金、銀、銅、亜鉛、アルミニウム、チタン、タンタル、クロム、鉄、ニッケル、コバルト、鉛、錫、セレンなどの金属；真鍮、ステンレス、青銅などの合金；シリコン、アモルファスシリコン、ガラス、石英、炭化ケイ素、窒化ケイ素などの珪素材料；酸化アルミニウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウムなどの金属酸化物；タングステンカーバイト、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、ヒドロキシアパタイト、砒化ガリウムなどの無機塩を挙げることができる。これらは、単結晶、アモルファス、セラミックのような多結晶焼結体にいずれの構造を有していてもよい。
【００９２】
本発明において、蓄積性蛍光体シートの支持体を形成するために好ましく使用可能で、放射線を減衰させることのできる有機化合物材料としては、高分子化合物が好ましく用いられ、たとえば、ポリエチレンやポリプロピレンなどのポリオレフィン；ポリメチルメタクリレート、ブチルアクリレート／メチルメタクリレート共重合体などのアクリル樹脂；ポリアクリロニトリル；ポリ塩化ビニル；ポリ塩化ビニリデン；ポリフッ化ビニリデン；ポリテトラフルオロエチレン；ポリクロロトリフルオロエチレン；ポリカーボネート；ポリエチレンナフタレートやポリエチレンテレフタレートなどのポリエステル；ナイロン６、ナイロン６，６、ナイロン４，１０などのナイロン；ポリイミド；ポリスルホン；ポリフェニレンサルファイド；ポリジフェニルシロキサンなどのケイ素樹脂；ノボラックなどのフェノール樹脂；エポキシ樹脂；ポリウレタン；ポリスチレン；ブタジエン−スチレン共重合体；セルロース、酢酸セルロース、ニトロセルロース、でん粉、アルギン酸カルシウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの多糖類；キチン；キトサン；ウルシ；ゼラチン、コラーゲン、ケラチンなどのポリアミドおよびこれら高分子化合物の共重合体などを挙げることができる。これらは、複合材料でもよく、必要に応じて、金属酸化物粒子やガラス繊維などを充填することもでき、また、有機化合物材料をブレンドして、使用することもできる。
【００９３】
一般に、比重が大きいほど、放射線の減衰能が高くなるので、蓄積性蛍光体シートの支持体は、比重１．０ｇ／ｃｍ３以上の化合物材料または複合材料によって形成されることが好ましく、比重が１．５ｇ／ｃｍ３以上、２３ｇ／ｃｍ３以下の化合物材料または複合材料によって形成されることが、とくに好ましい。
【００９４】
本発明の好ましい実施態様においては、蓄積性蛍光体シートの支持体が、隣り合うドット状の輝尽性蛍光体層領域の間の距離に等しい距離だけ、放射線が前記支持体中を透過したときに、放射線のエネルギーを１／５以下、好ましくは１／１０以下、さらに好ましくは１／５０以下、さらに好ましくは１／１００以下、さらに好ましくは１／５００以下、さらに好ましくは１／１０００以下に減衰させる性質を有する材料によって形成されている。
【００９５】
本発明において使用される輝尽性蛍光体としては、放射線のエネルギーを蓄積可能で、電磁波によって励起され、蓄積している放射線のエネルギーを光の形で放出可能なものであればよく、とくに限定されるものではないが、可視光波長域の光により励起可能であるものが好ましい。具体的には、たとえば、米国特許第４，２３９，９６８号に開示されたアルカリ土類金属弗化ハロゲン化物系蛍光体（Ｂａ１−ｘＭ２＋ｘ）ＦＸ：ｙＡ（ここに、Ｍ２＋はＭｇ、Ｃａ、Ｓｒ、ＺｎおよびＣｄからなる群より選ばれる少なくとも一種のアルカリ土類金属元素、ＸはＣｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選ばれる少なくとも一種のハロゲン、ＡはＥｕ、Ｔｂ、Ｃｅ、Ｔｍ、Ｄｙ、Ｐｒ、Ｈｏ、Ｎｄ、ＹｂおよびＥｒからなる群より選ばれる少なくとも一種の３価金属元素、ｘは０≦ｘ≦０．６、ｙは０≦ｙ≦０．２である。）、特開平２−２７６９９７号公報に開示されたアルカリ土類金属弗化ハロゲン化物系蛍光体ＳｒＦＸ：Ｚ（ここに、ＸはＣｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選ばれる少なくとも一種のハロゲン、ＺはＥｕまたはＣｅである。）、特開昭５９−５６４７９号公報に開示されたユーロピウム付活複合ハロゲン物系蛍光体ＢａＦＸ・ｘＮａＸ’：ａＥｕ２＋（ここに、ＸおよびＸ’はいずれも、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選ばれる少なくとも一種のハロゲンであり、ｘは０＜ｘ≦２、ａは０＜ａ≦０．２である。）、特開昭５８−６９２８１号公報に開示されたセリウム付活三価金属オキシハロゲン物系蛍光体であるＭＯＸ：ｘＣｅ（ここに、ＭはＰｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｅｕ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、ＹｂおよびＢｉからなる群より選ばれる少なくとも一種の三価金属元素、ＸはＢｒおよびＩのうちの一方あるいは双方、ｘは、０＜ｘ＜０．１である。）、米国特許第４，５３９，１３７号に開示されたセリウム付活希土類オキシハロゲン物系蛍光体であるＬｎＯＸ：ｘＣｅ（ここに、ＬｎはＹ、Ｌａ、ＧｄおよびＬｕからなる群より選ばれる少なくとも一種の希土類元素、ＸはＣｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選ばれる少なくとも一種のハロゲン、ｘは、０＜ｘ≦０．１である。）および米国特許第４，９６２，０４７号に開示されたユーロピウム付活複合ハロゲン物系蛍光体ＭＩＩＦＸ・ａＭＩＸ’・ｂＭ’ＩＩＸ’’２・ｃＭＩＩＩ  Ｘ’’’３  ・ｘＡ：ｙＥｕ２＋（ここに、ＭＩＩはＢａ、ＳｒおよびＣａからなる群より選ばれる少なくとも一種のアルカリ土類金属元素、ＭＩ  はＬｉ、Ｎａ、Ｋ、ＲｂおよびＣｓからなる群より選ばれる少なくとも一種のアルカリ金属元素、Ｍ’  ＩＩはＢｅおよびＭｇからなる群より選ばれる少なくとも一種の二価金属元素、ＭＩＩＩはＡｌ、Ｇａ、ＩｎおよびＴｌからなる群より選ばれる少なくとも一種の三価金属元素、Ａは少なくとも一種の金属酸化物、ＸはＣｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選ばれる少なくとも一種のハロゲン、Ｘ’、Ｘ’’およびＸ’’’  はＦ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選ばれる少なくとも一種のハロゲンであり、ａは、０≦ａ≦２、ｂは、０≦ｂ≦１０−２、ｃは、０≦ｃ≦１０−２で、かつ、ａ＋ｂ＋ｃ≧１０−２であり、ｘは、０＜ｘ≦０．５で、ｙは、０＜ｙ≦０．２である。）が、好ましく使用し得る��
【００９６】
本発明の好ましい実施態様においては、特異的結合物質は、スポッティング装置を用いて、生化学解析用ユニットの吸着性領域に滴下される。
本発明の好ましい実施態様においては、スポッティング装置は、特異的結合物質を滴下すべき担体が載置される基板と、特異的結合物質を滴下可能なスポッティングヘッドと、特異的結合物質を滴下すべき前記吸着性領域の基準位置を検出可能なセンサを備えている。
本発明の好ましい実施態様においては、スポッティング装置は、前記スポッティングヘッドと、前記基板とを、相対的に、少なくとも一次元方向に、間欠的に移動させる駆動機構を備えている。
【００９７】
本発明の好ましい実施態様によれば、スポッティング装置が、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、少なくとも一次元方向に、間欠的に移動させる駆動機構を備えているから、センサによって、基板に載置され、特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットの吸着性領域を検出して、スポッティング装置のスポッティングヘッドと、生化学解析用ユニットが載置された基板との相対的位置関係を求めた後、駆動機構により、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、少なくとも一次元方向に、間欠的に移動させつつ、スポッティングヘッドから特異的結合物質を滴下することによって、少なくとも１次元方向において、生化学解析用ユニットに形成された吸着性領域に、確実に、特異的結合物質を滴下することが可能になる。
【００９８】
本発明のさらに好ましい実施態様においては、前記駆動機構が、前記スポッティングヘッドと、前記基板とを、相対的に、少なくとも一次元方向に、一定のピッチで移動させるように構成されている。
本発明のさらに好ましい実施態様によれば、駆動機構が、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、少なくとも一次元方向に、一定のピッチで移動させるように構成されているから、センサによって、基板に載置され、特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットの吸着性領域を検出して、スポッティング装置のスポッティングヘッドと、生化学解析用ユニットが載置された基板との相対的位置関係を求めた後、駆動機構により、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、少なくとも一次元方向に、一定のピッチで間欠的に移動させつつ、スポッティングヘッドから特異的結合物質を滴下することによって、少なくとも一次元方向において、生化学解析用ユニットに形成された吸着性領域に、確実に、特異的結合物質を滴下することが可能になる。
【００９９】
本発明の好ましい実施態様においては、前記駆動機構が、前記スポッティングヘッドと、前記基板とを、相対的に、二次元方向に、間欠的に移動させるように構成されている。
本発明の好ましい実施態様によれば、駆動機構が、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、二次元方向に、間欠的に移動させるように構成されているから、センサによって、基板に載置され、特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットの吸着性領域を検出して、スポッティング装置のスポッティングヘッドと、生化学解析用ユニットが載置された基板との相対的位置関係を求めた後、駆動機構により、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、二次元方向に、間欠的に移動させつつ、スポッティングヘッドから特異的結合物質を滴下することによって、生化学解析用ユニットに二次元的に形成された吸着性領域に、確実に、特異的結合物質を滴下することが可能になる。
【０１００】
本発明のさらに好ましい実施態様においては、前記駆動機構が、前記スポッティングヘッドと、前記基板とを、相対的に、二次元方向に、それぞれ、一定のピッチで移動させるように構成されている。
本発明のさらに好ましい実施態様によれば、駆動機構が、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、二次元方向に、それぞれ、一定のピッチで移動させるように構成されているから、センサによって、基板に載置され、特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットの吸着性領域を検出して、スポッティング装置のスポッティングヘッドと、生化学解析用ユニットが載置された基板との相対的位置関係を求めた後、駆動機構によって、スポッティングヘッドと、基板とを、相対的に、二次元方向に、一定のピッチで間欠的に移動させつつ、スポッティングヘッドから特異的結合物質を滴下することによって、生化学解析用ユニットに二次元的に形成された吸着性領域に、確実に、特異的結合物質を滴下することが可能になる。
【０１０１】
本発明の好ましい実施態様においては、前記基板に、前記生化学解析用ユニットを位置決めするための少なくとも２つの位置決め部材が形成されている。
本発明の好ましい実施態様によれば、基板に、生化学解析用ユニットを位置決めするための少なくとも２つの位置決め部材が形成されているから、特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットを、基板の所定の位置に位置決めして、載置することが可能になる。
本発明のさらに好ましい実施態様においては、前記位置決め部材が、前記基板に立設されたピンによって構成されている。
【０１０２】
本発明のさらに好ましい実施態様によれば、位置決め部材が、前記基板に立設されたピンによって構成されているから、生化学解析用ユニットに対応する位置決め用の貫通孔を形成することによって、簡易に、特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットを、基板の所定の位置に位置決めして、載置することが可能になる。
【０１０３】
本発明の好ましい実施態様においては、スポッティング装置は、前記センサによって検出された前記生化学解析用ユニットの少なくとも２つの基準位置に基づいて、特異的結合物質を滴下すべき前記生化学解析用ユニットの吸着性領域の位置データを算出する位置データ算出手段と、前記位置データ算出手段によって算出された特異的結合物質を滴下すべき前記生化学解析用ユニットの吸着性領域の位置データを記憶するメモリと、前記メモリに記憶された特異的結合物質を滴下すべき前記生化学解析用ユニットの吸着性領域の位置データにしたがって、前記駆動手段を制御する位置制御手段を備えている。
【０１０４】
本発明の好ましい実施態様によれば、スポッティング装置が、センサによって検出された生化学解析用ユニットの少なくとも２つの基準位置に基づいて、特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットの吸着性領域の位置データを算出する位置データ算出手段と、位置データ算出手段によって算出された特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットの吸着性領域の位置データを記憶するメモリと、メモリに記憶された特異的結合物質を滴下すべき生化学解析用ユニットの吸着性領域の位置データにしたがって、駆動手段を制御する位置制御手段を備えているから、自動的に、基板に、互いに離間して、ドット状に形成された複数の吸着性領域に、特異的結合物質を確実に滴下することが可能になる。
【０１０５】
また、特開２００２−３５５０３６号公報の図１〜図２４には生化学解析用ユニットの具体例が記載されているが、吸着性領域又は吸着性材料に共有結合性官能基を有している点を除き、上記図１〜図２４に記載の生化学解析用ユニットと同様の生化学解析用ユニットを本発明において使用することができる。
以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
【０１０６】
【実施例】
比較例１：ノンチャージナイロン６，６を用いた生化学解析用ユニット（Ａ）製造法
（１）  大きさが８０ｍｍｘ８０ｍｍ、厚み１００μｍのＳＵＳ３０４シートに、孔径０．２ｍｍの開口部が円形の微細孔をエッチングによって孔ピッチ０．３ｍｍ、孔間隔０．１ｍｍで１０ｘ１０個を一単位として計６４００個形成する。
（２）  ノンチャージナイロンフィルター（ミリポア社製）と（１）で得た基板を重ねて、１５０℃に加熱したプレスロールとバックアップロールの間に送り込み、２０ｋｇｆ／ｃｍ２の圧力でプレスすることにより、基板の孔にナイロンフィルターを圧入して生化学解析用ユニット（Ａ）を得る。
【０１０７】
比較例２：生化学解析用ユニット（Ａ）  へのオリゴ固定化方法
５’末端アミノ化オリゴ（ＧＦＰ−７０ｍｅｒ−ＮＨ２，  シグマジェノシス社製）をＰＢＳにて５０ｕＭに希釈し、スポッターにて吸着性領域に点着し、８０℃にて２０分間ベーキング後、３３ｍＪ／ｃｍ２にてＵＶ照射する。
【０１０８】
比較例３：ジゴキシゲニン標識ＧＦＰの調製、ハイブリダイゼーション及び検出方法
（１）  ５００ｎｇのＧＦＰ−ｃＲＮＡ，  １００ｕＭ  ジゴキシゲニン−ｄＵＴＰ（アルカリ安定，  ロシュ社製），  １００ｕＭ  ｄＴＴＰ，  ５００ｕＭ  ｄＡＴＰ・ｄＧＴＰ・ｄＣＴＰ，  Ｏｌｉｇｏ−ｄＴ  １２−１８プライマー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製），  ＲＮａｓｅＯＵＴ（Ｉｎｖｉｔｏｒｏｇｅｎ社製）を混合し、２０ｕｌとする。そこにＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を１ｕｌ添加し、４２℃にて５０分間反応させる。７０℃にて１５分間処理することで反応停止後、ＲＮａｓｅＨ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を１ｕｌ添加し３７℃にて１５分間ＲＮＡを分解させる。これをＣｈｒｏｍａＳｐｉｎ  ＴＥ−３０（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社製）にて精製し、ジゴキシゲニン標識ＧＦＰを得る。
（２）  １，  １０，  １００ｐｇのジゴキシゲニン標識ＧＦＰを熱変性後、４ｍｌハイブリダイゼーションバッファーに添加する。あらかじめ６０℃に保温したプレハイブリダイゼーションバッファー（４ｍｌ）を１時間、前記生化学解析用ユニット（Ａ）の吸着性領域を横切る方法で循環させ（線速度０．２ｃｍ／ｓｅｃ）、次に上記ハイブリダイゼーションバッファーを同様にして６０℃にて、前記吸着性領域を横切る方法で１８時間循環させる。次に洗浄バッファー１を５分間２回、洗浄バッファー２をさらに５分間２回循環し洗浄する（何れも６０℃）。その後、ブロッキングバッファーをあらかじめ孔径０．２２μｍのウルトラフリー（ミリポア社製）にて濾過し、１０分間循環し、５０分間循環停止する。以下すべて室温にて実施。アルカリフォスファタ−ゼ標識抗ジゴキシゲニン抗体をあらかじめ孔径０．２２μｍのウルトラフリー（ミリポア社製）にて濾過し、あらかじめ孔径０．２２μｍのウルトラフリー（ミリポア社製）にて濾過したブロッキングバッファーに１／１００００ｖｏｌｕｍｅ添加、１分間循環し、６０分停止する。次にケミルミ洗浄液を１５分間循環させる。これを３回繰り返し、最後に化学発光基質であるＣＤＰ−ｓｔａｒ（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ，  ロシュ社製）を１時間反応させ、ＬＡＳ１０００（富士写真フイルム社製）にて発光量を検出する。
【０１０９】
実施例１：ＢｉｏｄｙｎｅＣ（ＣＯＯＨ導入型ナイロン６，６メンブレン）を用いた生化学解析用ユニット（Ｂ）製造法
比較例１の製造方法において、ノンチャージナイロンフィルターの代わりにＢｉｏｄｙｎｅ  Ｃ（ＣＯＯＨ導入型ナイロン６，６メンブレン、ポール社製）を圧入することで共有結合型生化学解析用ユニット（Ｂ）  を得る。
【０１１０】
実施例２：実施例１で作製した（Ｂ）のＣＯＯＨ活性化方法
実施例１で作製した生化学解析用ユニット（Ｂ）を１Ｍ  １−Ｅｔｈｙｌ−３−（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ  Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（略称：ＥＤＣ、ＷＡＫＯカタログより）（水溶性カルボジイミド）／１Ｍ  ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド）水溶液を入れたバットに入れ、室温にて１時間振とうする。その後エタノールでリンスし、室温にて乾燥させ、生化学解析用ユニット（Ｃ）を得る。
【０１１１】
実施例３：オリゴヌクレオチドを固定化した生化学解析用ユニット（Ｄ）の作製方法
５’末端アミノ化オリゴ（ＮＨ２−ＧＦＰ＜７０ｍｅｒ＞，  シグマジェノシス社製）をＰＢＳにて５０ｕＭに希釈し、これをスポッターにて（Ｃ）の吸着性領域に点着する。飽和食塩水蒸気下において１時間、室温にて反応させる。０．１％  Ｔｗｅｅｎ２０／ＴＢＳにてリンス後、０．１Ｎ  ＮａＯＨ入りバットへ移し、室温にて１０分間振とうさせる。Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水中で５分間洗浄を３回繰り返し、生化学解析用ユニット（Ｄ）を得る。
【０１１２】
実施例４：生化学解析用ユニット（Ｄ）を用いたジゴキシゲニン標識ＧＦＰの検出
実施例３で作製した生化学解析用ユニット（Ｄ）を用い、比較例３の方法と同様にジゴキシゲニン標識ＧＦＰのハイブリダイゼーション及び検出を行う。
【０１１３】
実施例５：二官能性スペーサーを固定化した生化学解析用ユニット（Ｅ）の作製方法
実施例２で作製した生化学解析用ユニット（Ｃ）を１０ｍＭ  Ｓｕｌｆｏ−ＫＭＵＳ（Ｎ−［κ−Ｍａｌｅｉｍｉｄｏｕｎｄｅｃａｎｏｌｙｌｏｘｙ］−ｄｕｌｇｏｓｃｃｉｎｉｍｉｄｅ  ｅｓｔｅｒ，  ＰＩＥＲＣＥ社製）のＰＢＳ溶液中に浸漬させ、室温にて１時間振とうさせる。その後エタノールでリンスし、室温にて乾燥させ、（ＣＨ２）１０のスペーサーを介してマレイミド基を表面に持つ生化学解析用ユニット（Ｅ）を得る。
【０１１４】
実施例６：スペーサーを介してオリゴヌクレオチドを固定化した生化学解析用ユニット（Ｆ）の作製方法
５’末端チオール化オリゴ（ＳＨ−ＧＦＰ＜７０ｍｅｒ＞，  シグマジェノシス社製）をＰＢＳにて５０ｕＭに希釈する。これをスポッターにて（Ｅ）の吸着性領域に点着する。飽和食塩水蒸気下において１時間、室温にて反応させる。２％メルカプトエタノールのＰＢＳ緩衝液溶液に浸漬し、３０分振とう後、０．１Ｎ  ＮａＯＨ入りバットへ移し、室温にて１０分間振とうさせる。Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水中で５分間洗浄を３回繰り返し、生化学解析用ユニット（Ｆ）を得る。
【０１１５】
実施例７：生化学解析用ユニット（Ｆ）を用いたジゴキシゲニン標識ＧＦＰの検出
実施例６で作製した生化学解析用ユニット（Ｆ）を用い、比較例３の方法と同様にジゴキシゲニン標識ＧＦＰのハイブリダイゼーション及び検出を行う。
【０１１６】
上記の比較例３、実施例４および実施例７で行った検出の結果を以下の表１に示す。表１の結果に示されるように、オリゴヌクレオチド末端と吸着性領域が共有結合固定することにより（実施例４および実施例７）、ＵＶ照射による固定化（比較例３）と比べて格段にシグナル相対強度が向上している。これは共有結合固定によってオリゴヌクレオチドの末端のみが固定化されているため、ハイブリダイゼーション効率がＵＶ照射固定の場合と比べて大きく向上したものと思われる。Ｃ１０アルキルのスペーサーを介してオリゴヌクレオチドを固定化した生化学解析ユニット（Ｆ）を用いた実施例７のシグナル相対強度が、実施例４の結果と比べて上がっており、スペーサーの効果も大きいことがわかる。
【０１１７】
【表１】
2004294385.tif 000002
【０１１８】
実施例８：ナイロンへのビニルスルホニル基の導入
ノンチャージナイロンフィルター（ミリポア社製）を３重量％１，２・ビス（ビニルスルホニルアセトアミド）エタンのホウ酸緩衝液（ｐＨ８）溶液に浸漬し、２５℃にて１２０分振とう後、滅菌済み蒸留水にて洗浄する。４０℃にて３０分乾燥させ、ビニルスルホニル化ナイロン（Ｇ）を得る。
【０１１９】
実施例９：共有結合型生化学解析用ユニット（Ｈ）製造法
比較例１の製造方法において、ノンチャージナイロンフィルターの代わりにビニルスルホニル化ナイロン（Ｇ）を圧入することで共有結合型生化学解析用ユニット（Ｈ）  を得る。
【０１２０】
実施例１０：オリゴを固定化した生化学解析用ユニット（Ｉ）の作製方法
５’末端アミノ化オリゴ（ＮＨ２−ＧＦＰ＜７０ｍｅｒ＞，  シグマジェノシス社製）をＰＢＳにて５０ｕＭに希釈する。これをスポッターにて（Ｆ）の吸着性領域に点着する。飽和食塩水蒸気下において１時間、室温にて反応させる。０．５Ｍグリシン−ホウ酸緩衝液中にて３０分振とうさせ、オリゴを固定化した生化学解析用ユニット（Ｇ）を得る。
【０１２１】
実施例１１：ジゴキシゲニン標識ＧＦＰの調製及び検出方法
比較例３の方法と同様にジゴキシゲニン標識ＧＦＰのハイブリダイゼーション及び検出を行う。結果を以下の表２に示す。表２の結果に示されるように、ＵＶ照射による固定化と比べて格段にシグナル強度が向上している。低分子化合物である１，２−ビス（ビニルスルホニルアセトアミド）エタン処理によって共有結合性官能基を導入し、オリゴヌクレオチド末端にて固定化した効果である。
【０１２２】
【表２】
2004294385.tif 000003
【０１２３】
本実施例で用いた試薬は以下の通りである。
プレハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションバッファー：
０．５Ｍ  チャーチリン酸バッファー、１ｍＭ  ＥＤＴＡ，  ７％  ＳＤＳ
洗浄バッファー１：４０ｍＭチャーチリン酸バッファー，  １％  ＳＤＳ
洗浄バッファー２：０．１ｘＳＳＣ，  ０．１％ＳＤＳ
ケミルミ洗浄バッファー（ロッシュ社製ＤＩＧ  Ｗａｓｈ  ａｎｄ  Ｂｌｏｃｋ  ｂｕｆｆｅｒ  Ｓｅｔに記載のもの）
ブロッキングバッファー（ロッシュ社製ＤＩＧ  Ｗａｓｈ  ａｎｄ  Ｂｌｏｃｋ  ｂｕｆｆｅｒ  Ｓｅｔに記載のもの）
ディテクションバッファー（ロッシュ社製ＤＩＧ  Ｗａｓｈ  ａｎｄ  Ｂｌｏｃｋ  ｂｕｆｆｅｒ  Ｓｅｔに記載のもの）
５’末端アミノ化オリゴ（ＧＦＰ−７０ｍｅｒ，  シグマジェノシス社製）配列：５’−  ＣＡＡＣＡＡＡＡＴＡＣＴＣＣＡＡＴＴＧＧＣＧＡＴＧＧＣＣＣＴＧＴＣＣＴＴＴＴＡＣＣＡＧＡＣＡＡＣＣＡＴＴＡＣＣＴＧＴＣＣＡＣＡＣＡＡＴＣＴＧ−３’（配列番号１）
【０１２４】
【発明の効果】
本発明により、特異的結合物質を強固かつ高効率な固定化をすることが可能であり、固定化する特異的結合物質の方向のコントロールすることにより特異的かつ高いシグナルを得ることができる生化学解析用ユニットを提供することが可能になった。
【０１２５】
【配列表】
2004294385.tif 000004
【０１２６】
2004294385.tif 000005