(57)【要約】【課題】高分子水溶性酵素合成α−１，４−グルカンを含有する化粧品用組成物、並びに該化粧品組成物を含む化粧品を提供すること。【解決手段】高分子水溶性α−１，４−グルカンが、平均分子量１０万以上６００万以下の酵素合成α−１，４−グルカンである化粧品用組成物。高分子水溶性α−１，４−グルカンが、平均分子量２万以上６００万以下の酵素合成α−１，４−グルカンがエステル化、エーテル化、酸化、グラフト化及び／または架橋反応により化学修飾されたα−１，４−グルカンである化粧品用組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
高分子水溶性α−１，４−グルカンを含有することを特徴とする化粧品用組成物。
【請求項２】
高分子水溶性α−１，４−グルカンが、平均分子量１０万以上６００万以下の酵素合成α−１，４−グルカンである請求項１に記載の化粧品用組成物。
【請求項３】
酵素合成α−１，４−グルカンが、平均分子量３０万以上３００万以下の酵素合成α−１，４−グルカンである請求項２に記載の化粧品用組成物。
【請求項４】
酵素合成α−１，４−グルカンの分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ値）が１．２以下である請求項２に記載の化粧品用組成物。
【請求項５】
酵素合成α−１，４−グルカンの分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ値）が１．１以下である請求項４に記載の化粧品用組成物。
【請求項６】
高分子水溶性α−１，４−グルカンが、酵素グルカンをエステル化、エーテル化、酸化、グラフト化及び／または架橋反応により化学修飾した酵素合成α−１，４−グルカンである請求項１に記載の化粧品用組成物。
【請求項７】
酵素合成α−１，４−グルカンが、平均分子量２万以上６００万以下の酵素合成α−１，４−グルカンである請求項６に記載の化粧品用組成物。
【請求項８】
酵素合成α−１，４−グルカンの分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ値）が１．２以下である請求項６に記載の化粧品用組成物。
【請求項９】
酵素合成α−１，４−グルカンの分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ値）が１．１以下である請求項８に記載の化粧品用組成物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の化粧品用組成物を含んでなる化粧品。
【請求項１１】
液状、乳液状、クリーム状、ゲル状、ムース状、ペースト状、固形状、粉末状及び多層状からなる群から選ばれるいずれかの形態である請求項１０に記載の化粧品。
【請求項１２】
化粧品が、ローション、化粧水、乳液、クリーム、パック剤、美容液、洗顔料、メーキャップ剤、ヘアケア用品、ボディーソープ、入浴剤及び香料からなる群から選ばれるいずれかである請求項１０又は１１に記載の化粧品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、優れた水溶性を有する新規原料である、高分子水溶性α−１，４−グルカンを含む化粧品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
水溶性高分子物質は、皮膜形成性、ゲル化性、増粘性、保湿性などを有しており、種々の用途に幅広く利用されている。水溶性高分子としては、化学合成高分子、動物由来又は植物由来の天然高分子等がある。このうち、特に化粧品や医薬品等の用途においては、安全性等の観点から、化学合成高分子や動物由来の高分子を避け、植物性の天然高分子を使用することが好まれている。しかし、天然高分子は、品質のばらつき、物性のコントロールの困難さなどの問題があり、ニーズに十分合致した製品を提供することは困難であった。例えば、グルコースが直鎖状に結合したアミロースを、天然澱粉から取得することも考えられるが、天然澱粉は通常アミロース（グルコースが直鎖状に結合した構造のポリマー）とアミロペクチン（アミロースに枝別れが生じた房状のポリマー）の両方の混合体からなる。混合物から、アミロースを分離精製することは、操作が煩雑で、収率も低く、工業的製法として適切でない。また、天然アミロースは、グルコースがα−１，４−結合のみにより連結されているのではなく、α−１，６−結合からなる分岐構造を有している。また分子量分布が広範囲に及ぶ。従って、化粧品等に適した性質を有する特定重合度のα−１，４−グルカンを得ることが困難で、水溶性の悪さ、溶液の不安定さ、成形の困難さ、ゲル強度の弱さ、皮膜強度の弱さなどの問題があった。
【０００３】
一方、酵素合成により、アミロースを合成する方法も知られている。
【０００４】
例えば、天然澱粉中に存在するアミロペクチンのα−１，６−グルコシド結合のみに、枝切り酵素として既知のイソアミラーゼやプルラナーゼを選択的に作用させ、アミロペクチンを分解することにより、アミロースを得る方法がある。しかし、この方法では、得られるアミロースは短鎖、例えば平均重合度１５〜２０のものであって、平均分子量２万を超えるような高分子量のものを得ることが困難であった。また分子量制御も困難で、そのために得られるアミロースの分子量分布が広くなるという問題があった。更には、アミロペクチンのα−１，６−グルコシド結合の分解が完全に行われ難いために、１００％直鎖のアミロースが得られないなどの問題があった。
【０００５】
別法として、酵素の作用によりグルコースを連結してアミロースを合成する方法も公知であり、一例として、スクロースを基質としてアミロスクラーゼを作用させる方法がある（以降、ＡＭＳＵ法という。）。ＡＭＳＵ法は、アミロスクラーゼが単純なアミロース合成反応以外に、スクロースの加水分解反応やフラクトースを受容体とした転移反応など、複数の反応を触媒するため、アミロース以外にも多量の可溶性オリゴ糖が副生される。そのため、得られるアミロース収率は低くなるとされる（非特許文献１参照）。また、ＡＭＳＵ法では、アミロースの重合度や分子量分布を制御することも困難である。一般的にＡＭＳＵ法で合成されるアミロースは、不溶性のアミロース、すなわち、低重合度のアミロースである。前述のＭｏｎｔａｌｋらの文献には、高度に精製されたアミロスクラーゼを用いて製造されるアミロースであっても、分子量は８，９４１（すなわち重合度５５）であると報告されている。このような低重合度のものは、沈殿を形成し、結晶化してしまい、水等の溶媒に不溶であった。
【０００６】
このように、化粧品に適した特性を有する水溶性高分子材料は未だ見出されていなかった。
【０００７】
【非特許文献１】
Ｍｏｎｔａｌｋら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４７１、第２１９−２２３頁、２０００年
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を行った。その結果、平均分子量１０万以上、より好ましくは３０万以上の平均分子量の酵素合成α−１，４−グルカン、もしくは水溶性を付加するような特定の化学修飾をうけた平均分子量２万以上の酵素合成α−１，４−グルカンが化粧品に適した物性を有する水溶性高分子であることを見出し、更に鋭意検討を重ねて本発明を完成するに至った。
【０００９】
即ち、本発明は、次の事項に係る。
【００１０】
項１．高分子水溶性α−１，４−グルカンを含有することを特徴とする化粧品用組成物。
【００１１】
項２．高分子水溶性α−１，４−グルカンが、平均分子量１０万以上６００万以下の酵素合成α−１，４−グルカンである項１に記載の化粧品用組成物。
【００１２】
項３．酵素合成α−１，４−グルカンが、平均分子量３０万以上３００万以下の酵素合成α−１，４−グルカンである項２に記載の化粧品用組成物。
【００１３】
項４．酵素合成α−１，４−グルカンの分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ値）が１．２以下である項２に記載の化粧品用組成物。
【００１４】
項５．酵素合成α−１，４−グルカンの分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ値）が１．１以下である項４に記載の化粧品用組成物。
好ましくは、項１〜５における高分子水溶性α−１，４−グルカンは、（ｉ）グルコース−１−リン酸にグルカンホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１）を作用させて得られる酵素合成α−１，４−グルカン、若しくは、（ｉｉ）スクロースに、スクロースホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．７）とグルカンホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１）を同時に作用させて得られる酵素合成α−１，４−グルカンである。
【００１５】
項６．高分子水溶性α−１，４−グルカンが、酵素合成グルカンをエステル化、エーテル化、酸化、グラフト化及び／または架橋反応により化学修飾したα−１，４−グルカンである項１に記載の化粧品用組成物。
【００１６】
項７．酵素合成α−１，４−グルカンが、平均分子量２万以上６００万以下の酵素合成α−１，４−グルカンである項６に記載の化粧品用組成物。
【００１７】
項８．酵素合成α−１，４−グルカンの分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ値）が１．２以下である項６に記載の化粧品用組成物。
【００１８】
項９．酵素合成α−１，４−グルカンの分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ値）が１．１以下である項８に記載の化粧品用組成物。
【００１９】
好ましくは、項６〜９における高分子水溶性α−１，４−グルカンは、（ｉ）グルコース−１−リン酸にグルカンホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１）を作用させて得られる酵素合成α−１，４−グルカン、若しくは（ｉｉ）スクロースに、スクロースホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．７）とグルカンホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１）を同時に作用させて得られる酵素合成α−１，４−グルカンを、エステル化又はエーテル化により化学修飾したα−１，４−グルカンである。
【００２０】
項１０．項１〜９のいずれかに記載の化粧品用組成物を含んでなる化粧品。
【００２１】
項１１．液状、乳液状、クリーム状、ゲル状、ムース状、ペースト状、固形状、粉末状及び多層状からなる群から選ばれるいずれかの形態である項１０に記載の化粧品。
【００２２】
項１２．化粧品が、ローション、化粧水、乳液、クリーム、パック剤、美容液、洗顔料、メーキャップ剤、ヘアケア用品、ボディーソープ、入浴剤及び香料からなる群から選ばれるいずれかである項１０又は１１に記載の化粧品。
【００２３】
高分子水溶性α−１，４−グルカン
本発明において、高分子とは、平均分子量２万以上の分子をいう。なお、本発明において、平均分子量とは、特に断りがない限り、重量平均分子量をいう。
【００２４】
また、本発明において、水溶性α−１，４−グルカンとは、１重量％のα−１，４−グルカンを含有する水を常温常圧で遠心分離した場合、含有量の少なくとも５０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは９５％以上、さらに好ましくは１００％が上清に回収されることを意味する。
【００２５】
本発明の高分子水溶性α−１，４−グルカンは、ひとつの実施様態では、平均分子量が１０万以上６００万以下、好ましくは１０万以上３００万以下、より好ましくは３０万以上３００万以下の酵素合成α−１，４−グルカンである。
【００２６】
本発明の高分子水溶性α−１，４−グルカンは、別の実施様態では、平均分子量が２万以上６００万以下の化学修飾された酵素合成α−１，４−グルカンである。化学修飾は酵素合成α−１，４−グルカンに水溶性を与えるような化学修飾であればよい。
【００２７】
また、本発明のα−１，４−グルカンの分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ値）は、好ましくは１．２以下、より好ましくは、１．１以下である。
【００２８】
ここで、Ｍｗは重量平均分子量、Ｍｎは数平均分子量を示し、Ｍｗ／Ｍｎは、数平均分子量に対する重量平均分子量の比を示す。
【００２９】
高分子物質の物性や機能は、その重合度や分岐頻度に大きな影響を受ける。グルコースがα−１，４−結合で直鎖状に結合したα−１，４−グルカンも、その重合度により大きく物性が異なることが知られている。たとえば平均分子量１５００程度以下のα−１，４−グルカンは、高い水溶性を示し、その水溶液も安定に存在できる。しかし、平均分子量が２０００から６万程度のα−１，４−グルカンは、非常に高い結晶性を示すため、水不溶性となる。加圧高温条件下に保持することにより水に溶解させることは可能であるが、この水溶液は非常に不安定で、冷却すると直ちに結晶性の沈殿を生じる。このような結晶性が高く、溶液安定性の悪い、低分子量の不溶性α−１，４−グルカンは、本発明の目的には使用できない。
【００３０】
これに対し、平均分子量が１０万を超えるα−１，４−グルカンは、溶解性が高くなり、結晶性を失う。高温に溶解させてから冷却すると、結晶性の沈殿を形成せず、水溶性を維持するか、もしくは無色〜白色のゲルを形成する。また結晶性の消失により、これらグルカンは皮膜形成性を獲得する。水への溶解性、ゲル強度、皮膜形成性は、平均分子量が増加することによりさらに高まる。さらに平均分子量３０万以上のα−１，４−グルカンの場合、非常に高い水溶性を示し、冷却してもゲル化せず、粘度の高いゾル状を保つことができ、増粘剤としても使用可能である。
【００３１】
一方、平均分子量が３００万を超えるグルカンでは、やや粘度が高くなりすぎ、取り扱いが困難となる。また平均分子量が６００万を超えるグルカンは、酵素反応の特性上製造が困難となる。
【００３２】
このように、本発明における高分子水溶性α−１，４−グルカンは、水溶性、皮膜形成能力、増粘効果、溶液安定性などにおいて優れた特性を有しており、このような特性から、使用時の感触や保湿性に優れた化粧品を提供することが可能となる。
【００３３】
本発明における酵素合成α−１，４−グルカンは、好ましくは酵素合成法により得られる酵素合成α−１，４−グルカンである。酵素合成法としては、特に、グルコース−１−リン酸にグルカンホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１）を作用させる方法、又は、スクロースに、スクロースホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．７）とグルカンホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１）を同時に作用させる方法を用いて製造されることが好ましい。
【００３４】
α−１，４−グルカンの酵素合成においては、いくつかの方法がある。例えば、（１）天然澱粉中のα−１，６−結合のみをイソアミラーゼで選択的に切断してα−１，４−グルカンを得る方法（イソアミラーゼ法）、（２）シクロデキストリンにＣＧＴａｓｅを作用させる方法（ＣＧＴａｓｅ法）、（３）スクロースに、アミロスクラーゼという酵素を作用させる方法（ＡＭＳＵ法）、（４）グルコース−１−リン酸にグルカンホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１）を作用させる方法（以下、「ＧＰ法」という）、（５）スクロースに、スクロースホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．７）とグルカンホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１）を同時に作用させる方法（以下、「ＳＰ−ＧＰ法」という）などがある。
【００３５】
このうち、（１）〜（３）の方法では、いずれも低分子量の結晶性アミロースが製造され、平均分子量８万以上のα−１，４−グルカンを製造することは困難である。
【００３６】
これに対し、（４）〜（５）の方法では、平均分子量１０万以上の高分子水溶性グルカンを効率よく取得することが可能になる。また、このような方法により合成されたα−１，４−グルカンは、α−１，４−結合のみにより、グルコースが連結された鎖状の高分子であり、分岐構造を有しておらず、本発明の目的に好適に利用できる。
【００３７】
（４）のＧＰ法は、更に、糖単位をα−１，４−グルコシド結合のみで逐次結合させることにより、１００％直鎖のグルカンが得られるという利点に加えて、その重合度を自由に制御できるという利点を有する。
【００３８】
また、（５）のＳＰ−ＧＰ法は、ＧＰ法と同様に１００％直鎖のグルカンが得られ、その重合度を自由に制御して製造できるという利点に加えて、更に、安価なスクロースを原料とすることで、製造コストをより低くできるという利点も有する。
【００３９】
ＧＰ法及び／又はＳＰ−ＧＰ法において用いられるグルカンホスホリラーゼやスクロースホスホリラーゼの種類は、特に制限されず、上記分子量と分子量分布の酵素合成グルカンを合成できる酵素であれば、その起源、調整法を問わず利用することができる。また、遺伝子組換技術により生産されたホスホリラーゼを利用してもよい。
【００４０】
このうち、スクロースホスホリラーゼとしては、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属、及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属細菌由来の酵素は、酵素の諸性質が明らかで、分子量制御に優れている点で好ましい。
【００４１】
他方、グルカンホスホリラーゼとしては、植物起源のものが、生産物の制御に優れる点で好ましい。とりわけ、馬鈴薯や甘藷由来のホスホリラーゼは、その植物組織内での存在量が多いため、産業利用面から特に好適に使用できる。
【００４２】
また、本発明で用いる高分子α−１，４−グルカンは、上記のような酵素合成法で得られるグルカンに水溶性を与える化学修飾を行ったものでもよい。
【００４３】
化学修飾としては、エステル化、エーテル化、酸化、グラフト化及び／または架橋反応が望ましい。
【００４４】
エステル化の例としては、例えば、酵素合成アミロースを各種溶媒または無溶媒で、酸無水物、有機酸、酸塩化物、ケテンまたは他のエステル化試薬に反応させて行うものが挙げられる。具体的には、酢酸エステル化、プロピオン酸エステルなどのアシル化エステルが挙げられる。
【００４５】
エーテル化の例としては、通常の澱粉の修飾反応と同様に、酵素合成アミロースをハロゲンアルキルや硫酸ジアルキルなどでアルカリの存在下にエーテル化を行うものが挙げられる。
【００４６】
α−１，４−グルカンを、エステル化又はエーテル化することにより、α−１，４−グルカンをアニオン化、カチオン化、アルキル化、アシル化、ヒドロキシアルキル化、することができる。アニオン化、ヒドロキシアルキル化されたα−１，４−グルカンは水への分散性、溶解性がさらに改善されており、各種化粧品において、塗布的性向上、泡の安定性向上、保型性向上などの優れた効果を奏する。特にカチオン化されたα−１，４−グルカンは水への溶解性がさらに改善されるとともに、多くの物質への吸着性にもすぐれ、特に髪表面に適度に吸着するためヘアケア製品に有効に利用されうる。
【００４７】
化粧品用組成物
本発明の化粧品組成物は、上記高分子水溶性のα−１，４−グルカンを、水、又は化粧品として許容可能な媒体と水との混合物に含有せしめることにより得られるものである。化粧品として許容可能な媒体の種類は特に限定されない。混合割合も適宜設定し得る。また本発明の化粧用組成物には、α−１，４−グルカンや媒体に加えて、通常の化粧品に配合し得る成分や添加剤等を適宜配合してもよい。
【００４８】
化粧品組成物における、α−１，４−グルカンの配合量は、化粧品用組成物の総量に対し、０．２重量％〜５０重量％  が好ましく、０．５重量％〜３０重量％がより好ましい。本発明の化粧品用組成物は、中性多糖であるα−１，４−グルカンを成分とするものであり、細胞に対する作用が穏やかで、且つ、線維芽細胞増殖効果を奏する。
【００４９】
また、本発明の化粧品組成物が含有する高分子水溶性α−１，４−グルカンは、増粘効果や溶液安定性に優れることから、皮膜形成能力、増粘効果、安定性等において優れた性質を有する化粧品組成物が得られることになる。特に、ＧＰ法及び／又はＳＰ−ＧＰ法で得られたグルカンを含有させた場合には、α−１，４−グルカンの重合度及び分子量分布が制御されていることから、上記のような効果が特に優れ、しかも所望の特性に応じた物性を有する化粧品組成物が得られる。
【００５０】
本発明の化粧品用組成物を製造する方法は、上記α−１，４−グルカンを、水又は化粧品として許容可能な媒体と水との混合物に含有せしめるものであれば、特に限定されない。
【００５１】
このうち、好ましい方法としては、（１）（ａ）グルコース−１−リン酸にグルカンホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１）を作用させるか、又は（ｂ）スクロースに、スクロースホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．７）とグルカンホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１）を同時に作用させて、平均分子量１０万以上６００万以下であるα−１，４−グルカンを生成する工程、（２）（１）で生成したα−１，４−グルカンを水又は化粧品として許容可能な媒体と水との混合物に含有せしめる工程を有する化粧品用組成物の製造方法が挙げられる。
【００５２】
この方法において、（１）で得られるα−１，４−グルカンの平均分子量は、３０万以上３００万以下であることが好ましい。また、分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ値）は、１．２以下、更には、１．１以下であることが好ましい。
【００５３】
また、他の好ましい方法としては、（１）（ａ）グルコース−１−リン酸にグルカンホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１）を作用させるか、又は（ｂ）スクロースに、スクロースホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．７）とグルカンホスホリラーゼ（ＥＣ  ２．４．１．１）を同時に作用させて、平均分子量２万以上６００万以下であるα−１，４−グルカンを生成する工程、（２）（１）で得られるα−１，４−グルカンを、エステル化又はエーテル化により化学修飾する工程、（３）（２）で得られるα−１，４−グルカンを水又は化粧品として許容可能な媒体と水との混合物に含有せしめる工程を有する化粧品用組成物の製造方法が挙げられる。
【００５４】
この方法において、（１）で得られるα−１，４−グルカンの分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ値）は、１．２以下、更には１．１以下が好ましい。
【００５５】
化粧品
本発明の化粧品は、上記化粧品用組成物を含んでなるものであって、常法に従って製造することができる。
【００５６】
本発明の化粧品の形態は、特に限定されず、例えば、液状、乳液状、クリーム状、ゲル状、ムース状、ペースト状、固形状、粉末状又は多層状等とすることができる。本発明の含有成分である高分子α−１，４−グルカンは、水溶性であって、溶液の状態で利用することもできるが、使用する濃度を高めたり、ゲル化促進剤を加えることにより、ゲルやゾルの状態として使用することもできる。ここでゲルとは、高分子溶質（高分子水溶性α−１，４−グルカン）が、相互作用のために独立した運動性を失って集合した構造を持ち、固化した状態をいい、ゾルとは、高分子溶質（高分子水溶性α−１，４−グルカン）が、液体中に分散して粘性はあるが流動性を示す状態をいう。本発明の高分子水溶性α−１，４−グルカンは、溶解状態で含有されていることから、微粒子の縣濁状態とはならず、上記のような種々の形態での化粧品の適用が可能である。また、水溶液、ゲル、ゾルの状態から、さらに水分を蒸発させ、乾燥状態で利用することもできる。
【００５７】
また本発明の化粧品の種類も、特に限定されない。例えば、ローション、化粧水、乳液、クリーム、パック剤、美容液、日焼け止め、洗顔料、メーキャップ剤、ヘアケア用品、ボディーソープ、入浴剤及び香料などとして用いることができる。
【００５８】
メーキャップ剤としては、例えば、ファンデーション、おしろい、頬紅、口紅、アイシャドー、アイライナー、アイブロー、マスカラ、マニキュアなどが挙げられる。
【００５９】
ヘアケア用品としては、例えば、シャンプー、リンス、コンディショナー、トリートメント、育毛剤、ヘアリキッド、ヘアジェル、ヘアカラー、ヘアクリーム、パーマ剤、ブリーチ剤などが挙げられる。
【００６０】
本発明の化粧品においては、必要に応じて化粧品、外用医薬部外品などに用いる他の添加成分を適宜配合することができる。他の添加成分としては、例えば油性原料（油脂、ロウ類、炭化水素、高級脂肪酸、高級アルコール、エステル類、シリコーン系オイル、弗素オイルなど）：粉体（有機あるいは無機の天然粉体、半合成粉体、合成粉体、球状微粒子など）：色材（有機合成色素、無機顔料、天然色素、真珠光沢顔料、機能性顔料、高分子粉体、染料、染料中間体など）：保湿剤（ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ヘキシレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、キシリトール、マルチトール、マルトース、Ｄ−マンニット、水アメ、ブドウ糖、果糖、乳糖、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、アデノシンリン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、胆汁酸塩、ピロリドンカルボン酸、グルコサミン多価アルコール、酸性ムコ多糖類、コラーゲン、セリシン、フイブロイン、グリコーゲンなど）：高分子化合物（天然、半合成又は合成のポリマー）：紫外線吸収剤（有機低分子系、有機高分子系及び無機系の紫外線吸収遮蔽剤）：界面活性剤（ノニオン系、アニオン系、カチオン系、両イオン系、高分子系、天然系界面活性剤など）：酸化防止剤、金属イオン封鎖剤、防腐剤、有機溶剤（エタノール、メタノールなど）、賦香剤（天然又は合成香料、香油など）、消臭剤、酸化剤、酸化防止剤、増粘剤、ゲル化促進剤、ｐＨ調整剤、などが挙げられる。
【００６１】
また、薬剤成分としては、美白用薬剤（β−アルブチン、α−アルブチン、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＣなど）：育毛用薬剤（血管拡張剤、栄養剤、女性ホルモン、毛根賦活剤など）：肌荒れ防止用薬剤（抗炎症剤、収斂剤、清涼化剤、ビタミン、ホルモン、抗ヒスタミン剤など）：ニキビ用薬剤（皮脂抑制剤、角質剥離・溶解剤、殺菌剤など）：ふけ・かゆみ用薬剤（角質剥離・溶解剤、抗脂漏剤、殺菌剤、消炎剤、鎮痒剤など）：腋臭防止用薬剤（制汗剤、殺菌剤、消臭剤など）：ビタミン類：タンパク質（コラーゲン、セリシン、フイブロイン）；ホルモン剤：アミノ酸類：血行促進剤：冷感剤：制汗剤：殺菌剤：皮膚賦活剤：多様な薬効を有する各種の抽出物やエキス類などが例示される。これらの任意成分は、本発明の目的、効果を損なわない質的、量的範囲内において、配合可能である。また上記の成分は、本発明の外用剤を得るのに用い得る代表的なものを例示したのであって、本発明の皮膚外用剤に配合し得る成分はこれらに限定されるものではない。
【００６２】
本発明の化粧品の含有成分である上記α−１，４−グルカンは、中性多糖を主骨格とする高分子であって、動物由来のものではない。このため、化粧品として安心して使用可能で、細胞や皮膚に対する作用も穏やかである。
【００６３】
また、本発明の化粧品は、皮膜形成能力、増粘効果、安定性等において優れた性質を有する化粧品組成物を用いていることから、使用時の感触、塗布時及び塗布面の感触、保湿性や安定性などにおいて優れた特性を有する。特に、ＧＰ法及び／又はＳＰ−ＧＰ法で得られたグルカンを含有させた化粧品は、α−１，４−グルカンの重合度及び分子量分布が適切に制御されていることから、上記のような効果に特に優れ、しかも所望の特性に応じた物性を奏する。
【００６４】
【実施例】
以下、実施例及び試験例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されることはない。
【００６５】
なお、試験例において、馬鈴薯塊茎由来の精製グルカンホスホリラーゼの調整方法、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｔａｎｓ由来スクロースホスホリラーゼの調整方法、α−１，４−グルカンの収率（％）の計算方法、重量平均分子量（Ｍｗ）及び数平均分子量（Ｍｎ）の測定方法は、特開２００２−３４５４５８に記載の方法に従った。具体的に、合成したグルカンの分子量は次のように測定した。まず、合成したグルカンを１Ｎ水酸化ナトリウムで完全に溶解し、適切な量の塩酸で中和した後、グルカン約３００μｇ分を、示差屈折計と多角度光散乱検出器を併用したゲル濾過クロマトグラフィーに供することにより重量平均分子量を求めた。詳しくは、カラムとしてＳｈｏｄｅｘ  ＳＢ８０６Ｍ−ＨＱ（昭和電工製）を用い、検出器としては多角度光散乱検出器（ＤＡＷＮ−ＤＳＰ、Ｗｙａｔｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）および示差屈折計（Ｓｈｏｄｅｘ  ＲＩ−７１、昭和電工製）をこの順序で連結して用いた。カラムを４０℃に保ち、溶離液としては０．１Ｍ硝酸ナトリウム溶液を流速１ｍＬ／分で用いた。得られたシグナルを、データ解析ソフトウェア（商品名ＡＳＴＲＡ、Ｗｙａｔｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）を用いて収集し、同ソフトを用いて解析することにより、重量平均分子量、数平均分子量を求めた。
【００６６】
試験例１
６ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）、１０６ｍＭスクロース、及び種々の濃度のマルトオリゴ糖混合物（２２００，  ８８０，  １７６，  １３２，  ４４，  ８．８  ｍｇ／リットル）を含有する反応液（１リットル）に、馬鈴薯塊茎由来の精製グルカンホスホリラーゼ（１単位／ｍｌ）と、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｕｔａｎｓ由来スクロースホスホリラーゼ（１単位／ｍｌ）を加えて３７℃で１６時間保温し、反応終了後、生成したα−１，４−グルカンの収率（％）、重量平均分子量（Ｍｗ）および分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）を決定した。各結果を下記の表１に示す。
【００６７】
表１によれば、スクロースとプライマー（すなわちマルトオリゴ糖混合物）との濃度比を変化させることにより、Ｍｗ１１．０  〜  ７８０．５ｋＤａまでのα−１，４−グルカンが得られた。α−１，４−グルカンの分子量分布（Ｍｗ／Ｍｎ）はいずれも狭かった（全て１．０５以下）。このうち試料＃１および＃２のような低分子量のα−１，４−グルカンは沈殿を形成した。しかし＃３以降、重合度が高くなるにつれて、沈殿の形成は減少し、試料＃４〜＃６では、反応液は透明なままであり、得られたα−１，４−グルカンが水溶性であった。この結果は分子量数万のα−１，４−グルカンが水不溶性であるのに対し、分子量１０万を超えるα−１，４−グルカンは、水溶性を有していることを示している。
【００６８】
【表１】
2004315481.tif 000002
【００６９】
試験例２
試験例１で得られた反応液＃１〜＃６を、α−１，４−グルカンの濃度が１重量％となるように希釈した後、室温で遠心分離（８０００  ｘ  ｇ、１０分間）し、全α−１，４−グルカン中の、どれだけが上清に回収されているかを調べ、結果を表２に示した。表２のように、試料＃４〜＃６では、ほぼ全量が上清に回収されており、これらグルカンが水溶性であることを確認した。一方試料＃１、＃２のような低分子量のα−１，４−グルカンは、ほぼ全量が沈殿として回収されており、α−１，４−グルカンの溶解性は、分子量により大きな影響を受けることがわかる。
【００７０】
【表２】
2004315481.tif 000003
【００７１】
試験例３（α−１，４−グルカンのアセチル化）
試験例１で得られた反応液＃２を遠心分離し、沈殿として得られたα−１，４−グルカンを、ジメチルスルホキシド８０ｇにα−１，４−グルカンの濃度が５重量％となるように溶解し、炭酸ナトリウム２ｇを添加後、酢酸ビニル８ｇを加えて、４０℃において１０〜１２０分反応させた。反応後、エタノールを添加して生成物を析出させ、ろ過後、数回水で洗浄し、精製した。
【００７２】
上記方法で得られたアセチル化α−１，４−グルカンについて、置換度と試験例２の方法による溶解度を測定したものを表３に示した。
【００７３】
【表３】
2004315481.tif 000004
【００７４】
表３に示すように、試料４と５は水溶性であり、重合度が低く水不溶性のα−１，４−グルカンをアセチル化することによって、水溶性になることが確認された。
【００７５】
試験例４（線維芽細胞増殖試験）
試験例１の＃６の高分子水溶性α−１，４−グルカンを蒸留水で溶解し、オートク  レーブ滅菌した後、浮遊培養用９６ウェルマルチプレート（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製）に水溶性α−１，４−グルカンのコート量が固形物として１００μｇ／ｃｍ２  となるように添加し、クリーンベンチ内で無菌的に風乾させた。
【００７６】
ヒト皮膚由来正常線維芽細胞「ＮＢ１ＲＧＢ」（理研細胞バンクより分譲）を１０％ＦＢＳ（牛胎児血清）含有ＭＥＭ培地で１×１０４  セル／ｍｌとなるように分散し、水溶性α−１，４−グルカンをコートした各ウェルに１００μｌ添加した。次に、これを、３７℃、５％ＣＯ２  雰囲気下で培養し、３、５日目の細胞数を下記のクリスタルバイオレット法により把握した。尚、α−１，４−グルカンをコートしていないウェルを用い上記と同様な方法で培養したものを対照とした。
【００７７】
各ウェルに２５容量％グルタルアルデヒド含有ＰＢＳ（−）を添加し、１０分間静置して細胞を固定した後、培地を除去し、ＰＢＳ（−）で１回洗浄した。次に、染色液である０．４ｗ／ｖ％クリスタルバイオレット含有メタノールを各ウェルに５０μｌ添加し、３０分間静置して染色した後、染色液を除去し、蒸留水で洗浄し、２時間程度風乾し、５４０ｎｍにおける吸光度をＢｅｎｃｈｍａｒｋ  マイクロプレートリーダー（ＢＩＯ−ＲＡＤ社製）で測定し、６ウェルの平均値を求めたところ、表４の結果が得られた。表に示した値は、吸光度０．１当たり約２．５×１０３  の細胞数に相当する。
【００７８】
【表４】
2004315481.tif 000005
【００７９】
表４に示されるように、高分子水溶性α−１，４−グルカン含有品は線維芽細胞増殖効果を有していることが確認された。
【００８０】
実施例１（化粧水）
試験例１の＃６の高分子水溶性α−１，４−グルカンを精製水に溶解させて組成物を形成し、以下の組成比となるよう各種成分と混合して、常法に従い、化粧水を製造した。
グリセリン                                                                                ５．０ｇ
プロピレングリコール                                                            ４．０ｇ
エタノール                                                                                ８．０ｇ
ポリオキシエチレン（２０）オレイルアルコール            ０．５ｇ
アラントイン                                                                    ０．１ｇ
メチルパラベン                                                                        ０．１ｇ
クエン酸                                                                                    ０．０１ｇ
クエン酸Ｎａ                                                                                ０．１ｇ
香料                                                                                            ０．０５ｇ
高分子水溶性α−１，４−グルカン                                              １．０ｇ
精製水                                                                                    ８１．１４ｇ
【００８１】
使用効果試験１
女性パネル２０名を１群１０名に分け、一方の群には高分子水溶性α−１，４−グルカンを配合した実施例１に記載の化粧水（本発明品）、他方の群にはα−１，４−グルカンを配合せず精製水で置き換えて調製した化粧水（比較品）をブラインドにて３ヵ月間使用させ、使用前後の皮膚のしわ、きめの変化を写真撮影及び皮膚表面のレプリカにより観察し、改善効果を評価したところ、表５の結果が得られた。尚、改善効果は、「改善」、「やや改善」、「変化なし」の三段階で評価した。
【００８２】
【表５】
2004315481.tif 000006
【００８３】
表５の結果に示されるように、高分子水溶性α−１，４−グルカンを配合させた化粧品は、皮膚の老化症状の改善に対して、良好な効果を有することがわかった。
【００８４】
実施例２（乳液）
下記（Ａ）を油相部、および試験例１の＃６の高分子水溶性α−１，４−グルカンを含有せしめた（Ｂ）を水相部として、それぞれ約７０℃で均一に溶解した後、ＡにＢを添加しながら予備乳化し、次にホモミキサーにて均一に乳化した。その後、攪拌しながら３０℃まで冷却し乳液を得た。
（Ａ）
１）ステアリン酸                                                                                  ２．５ｇ
２）セチルアルコール                                                                          １．５ｇ
３）ワセリン                                                                                          ５．０ｇ
４）流動パラフィン                                                                          １０．０ｇ
５）ポリオキシエチレン（１０）モノオレエート                          ２．０ｇ
６）香料                                                                                                  ０．０５ｇ
（Ｂ）
１）高分子水溶性α−１，４−グルカン                                                    １．０ｇ
２）カルボキシビニルポリマー                                                          ０．２ｇ
３）プロピレングリコール                                                                ５．０ｇ
４）メチルパラベン                                                                              ０．１ｇ
５）精製水                                                                                        ７２．６５ｇ
【００８５】
使用効果試験２
２０〜４０代の女性パネル４０名を一群２０名にわけ、一方の群には実施例２に記載の高分子水溶性α−１，４−グルカンを配合した乳液（本発明品）、他方の群には高分子水溶性α−１，４−グルカン配合せず精製水に置き換えて調製した乳液（比較品）をブラインドにて１日２回（朝・夕）の割合で１ヵ月間使用させ、各乳液を使用前後のＴＥＷＬ値（経表皮水分喪失量）をテヴァメーターを用いて測定し、ＴＥＷＬ値の低減率を算出して、保湿効果を評価した。評価結果を表６に示す。
ＴＥＷＬ値の低減率は、化粧水使用前後のＴＥＷＬ値、ＴＥＷＬＡおよびＴＥＷＬＢからＴＥＷＬ値の低減率が２０％以上の場合を「有効」、低減率が２０％未満の場合を「無効」とした。試験結果は、２０人中の「有効」であったパネルの人数を示す。
【００８６】
ＴＥＷＬ値低減率＝（１−ＴＥＷＬＢ／ＴＥＷＬＡ  ）×１００（％）
但し、ＴＥＷＬＡ：使用前のＴＥＷＬ値ＴＥＷＬＢ：使用後のＴＥＷＬ値
【００８７】
【表６】
2004315481.tif 000007
【００８８】
表６に示されるように、本発明の高分子水溶性α−１，４−グルカンを配合せしめた化粧品は、優れた保湿効果を有することがわかった。
【００８９】
【発明の効果】
本発明の化粧品用組成物は、中性多糖である高分子水溶性α−１，４−グルカンを構成成分とするものであって、線維芽細胞増殖効果を奏する一方、細胞や皮膚に対する作用が穏やかで、安心して使用可能なものである。また分子量及び分子量分布が制御され、増粘効果や溶液安定性に優れる高分子水溶性α−１，４−グルカンを用いていることから、皮膜形成能力、増粘効果、安定性等において優れた性質を奏する。特に、ＧＰ法及び／又はＳＰ−ＧＰ法で得られたグルカンを用いる場合には、その重合度及び物性が適切にコントロールされ、化粧品に望まれる物性と使用感に特に優れた化粧品組成物となる。
【００９０】
そして、本発明の化粧品は、上記のような優れた特性を有する化粧品用組成物を含んで製造されるものであって、使用時の感触や塗布時及び塗布面での感触、保湿性や安定性等において優れた効果を奏するものである。
【００９１】
また、高分子水溶性α−１，４−グルカンが溶解形態で含有されていることから、化粧品用組成物として適切な形態での使用、例えば、液状、乳液状、クリーム状、ゲル状、ムース状、ペースト状、固形状、粉末状又は多層状での使用が可能になっている。
【００９２】
本発明の化粧品用組成物又は化粧品は、従来適用がみられなかった水溶性高分子材料を、化粧品として適切な形態で初めて使用可能とするものであり、消費者のニーズに合致した、優れた製品を提供するものである。