(57)【要約】      （修正有）【課題】肝癌アップレギュレート化タンパク質（ＨＵＲＰ）遺伝子発現をマーカーとする膀胱癌検出方法の提供。【解決手段】ＨＵＲＰ遺伝子は、ヒト被験者における膀胱癌の検出、予備スクリーニング及びモニタリングにおける有用な分子マーカーとして役立つ。本方法は、ヒト被験者における膀胱癌、特に膀胱の移行上皮癌（ＴＣＣ）の検出方法であって、膀胱癌を有していると疑われる被験者から採取したサンプル中の検出されたヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現は、膀胱癌の存在を示す。ヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現の検出は、ＲＴ−ＰＣＲ法等を用いて生物学的サンプル中のヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡの転写物の検出によって行なう。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）膀胱癌を有していると疑われる被験者から生物学的サンプルを得る工程；及び
（２）前記サンプル中のヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現を検出する工程、ヒトＨＵＲＰ遺伝子の検出された発現が膀胱癌の存在を示す
を含む、ヒト被験者における膀胱癌の検出方法。
【請求項２】
膀胱癌が膀胱の移行上皮癌（ＴＣＣ）である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
生物学的サンプルが尿路上皮癌細胞、膀胱癌細胞又はそれらの組み合わせからなる群から選ばれる細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
生物学的サンプルが尿、尿路上皮生検、血液、血漿及び血清からなる群から選ばれる請求項１に記載の方法。
【請求項５】
生物学的サンプルが尿である請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ヒトＨＵＲＰ遺伝子が配列番号１に示すヌクレオチド配列を有する請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現の検出が、生物学的サンプル中のヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の存在を検出することによって行われる、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の存在の検出が以下の方法論：ハイブリダイゼーション、サイクリングプローブ反応（ｃｙｃｌｉｎｇ  ｐｒｏｂｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ネスティッド（ｎｅｓｔｅｄ）ＰＣＲ、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、マルチプレックスＰＣＲポリメラーゼ連鎖反応−一本鎖コンフォーメーション多型、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、制限断片長多型核酸配列ベースの増幅（ＮＡＳＢＡ）、及び転写仲介増幅（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（ＴＭＡ）
の少なくとも１つを用いて行われる請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の存在の検出がＲＴ−ＰＣＲを用いて行われる請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
ヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の存在の検出を、以下により行う請求項７に記載の方法：
（ａ）生物学的サンプルから全ＲＮＡを抽出すること；
（ｂ）工程（ａ）で抽出されたＲＮＡを、フォーワードプライマー及びリバースプライマーの少なくとも１つのプライマー対を用いて逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）処理に供すること、各プライマーは、配列番号１に対応するヌクレオチド配列を有するヒトＨＵＲＰ遺伝子の少なくとも１３ヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド配列を有する；および、
（ｃ）ヒトＨＵＲＰ遺伝子のヌクレオチド配列の一部と同一か又は相補的なヌクレオチド配列を有するＲＴ−ＰＣＲ産物が、工程（ｂ）のＲＴ−ＰＣＲ処理から産生されたかどうかを検出すること、前記ＲＴ−ＰＣＲ産物の存在が膀胱癌の存在を示す。
【請求項１１】
工程（ｂ）で使用される少なくとも１つのプライマー対が、配列番号２及び配列番号４で示される配列から選ばれるヌクレオチド配列を有するフォーワードプライマーと、配列番号３及び配列番号５で示される配列から選ばれるヌクレオチド配列を有するリバースプライマーとを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
工程（ｂ）で使用される少なくとも１つのプライマー対が、配列番号４に対応するヌクレオチド配列を有するフォーワードプライマーと配列番号５に対応するヌクレオチド配列を有するリバースプライマーとを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
工程（ｂ）におけるＲＴ−ＰＣＲ処理が、配列番号２に対応するヌクレオチド配列を有する第１フォーワードプライマーと配列番号３に対応するヌクレオチド配列を有する第１リバースプライマーとを含む第１プライマー対を用いる第１増幅反応、及び配列番号４に対応するヌクレオチド配列を有する第２フォーワードプライマーと配列番号５に対応するヌクレオチド配列を有する第２リバースプライマーとを含む第２プライマー対を用いる第２増幅反応を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
（１’）膀胱癌を有していると疑われる被験者から生物学的サンプルを定期的に得る工程；及び、
（２’）前記サンプル中のヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現を検出する工程、ヒトＨＵＲＰ遺伝子の検出された発現が膀胱癌の存在を示す
を含む、ヒト被験者における膀胱癌のモニタリング方法。
【請求項１５】
膀胱癌が膀胱の移行上皮癌（ＴＣＣ）である請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
生物学的サンプルが尿路上皮癌細胞、膀胱癌細胞又はそれらの組み合わせからなる群から選ばれる細胞を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
生物学的サンプルが尿、尿路上皮生検、血液、血漿及び血清からなる群から選ばれる請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
生物学的サンプルが尿である請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ヒトＨＵＲＰ遺伝子が配列番号１に示すヌクレオチド配列を有する請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
ヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現の検出が、生物学的サンプル中のヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の存在を検出することによって行われる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
ヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の存在の検出が、以下の方法論：
ハイブリダイゼーション、サイクリングプローブ反応（ｃｙｃｌｉｎｇ  ｐｒｏｂｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ネスティッド（ｎｅｓｔｅｄ）ＰＣＲ、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、マルチプレックスＰＣＲポリメラーゼ連鎖反応−一本鎖コンフォーメーション多型、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、制限断片長多型核酸配列ベースの増幅（ＮＡＳＢＡ）、及び転写仲介増幅（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（ＴＭＡ）
の少なくとも１つを用いて行われる請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の存在の検出がＲＴ−ＰＣＲを用いて行われる請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
ヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の存在の検出を、以下により行う請求項２０に記載の方法：
（ａ’）生物学的サンプルから全ＲＮＡを抽出すること；
（ｂ’）工程（ａ’）で抽出されたＲＮＡを、フォーワードプライマー及びリバースプライマーの少なくとも１つのプライマー対を用いて逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）処理に供すること、各プライマーは、配列番号１に対応するヌクレオチド配列を有するヒトＨＵＲＰ遺伝子の少なくとも１３ヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド配列を有する；及び、
（ｃ’）ヒトＨＵＲＰ遺伝子のヌクレオチド配列の一部と同一か又は相補的なヌクレオチド配列を有するＲＴ−ＰＣＲ産物が、工程（ｂ’）のＲＴ−ＰＣＲ処理で産生されたかどうかを検出し、前記ＲＴ−ＰＣＲ産物の存在が膀胱癌の存在を示す。
【請求項２４】
工程（ｂ’）で使用される少なくとも１つのプライマー対が、配列番号２及び配列番号４で示される配列から選ばれるヌクレオチド配列を有するフォーワードプライマーと配列番号３及び配列番号５で示される配列から選ばれるヌクレオチド配列を有するリバースプライマーとを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
工程（ｂ’）で使用される少なくとも１つのプライマー対が、配列番号４に対応するヌクレオチド配列を有するフォーワードプライマーと配列番号５に対応するヌクレオチド配列を有するリバースプライマーとを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
工程（ｂ’）におけるＲＴ−ＰＣＲ処理が、配列番号２に対応するヌクレオチド配列を有する第１フォーワードプライマーと配列番号３に対応するヌクレオチド配列を有する第１リバースプライマーを含む第１プライマー対を用いた第１増幅反応、及び配列番号４に対応するヌクレオチド配列を有する第２フォーワードプライマーと配列番号５に対応するヌクレオチド配列を有する第２リバースプライマーとを含む第２プライマー対を用いた第２増幅反応を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
配列番号２から５で示される配列から選ばれるヌクレオチド配列を有するＤＮＡ配列。
【請求項２８】
配列番号２及び配列番号４で示される配列から選ばれるヌクレオチド配列を有するフォーワードプライマーと、配列番号３及び配列番号５で示される配列から選ばれるヌクレオチド配列を有するリバースプライマーとを含む、ヒト被験者における膀胱癌を検出するためのプライマーセット。
【請求項２９】
フォーワードプライマーが配列番号２で示されるヌクレオチド配列を有する請求項２８に記載のプライマーセット。
【請求項３０】
フォーワードプライマーが配列番号４で示されるヌクレオチド配列を有する請求項２８に記載のプライマーセット。
【請求項３１】
リバースプライマーが配列番号３で示されるヌクレオチド配列を有する請求項２８に記載のプライマーセット。
【請求項３２】
リバースプライマーが配列番号５で示されるヌクレオチド配列を有する請求項２８に記載のプライマーセット。
【請求項３３】
フォーワードプライマー及びリバースプライマーの少なくとも１つのプライマー対を含み、各プライマーが、配列番号１に対応するヌクレオチド配列を有するヒトＨＵＲＰ遺伝子の少なくとも１３ヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド配列を有する、ヒト被験者における膀胱癌の検出のための診断キット。
【請求項３４】
配列番号２に対応するヌクレオチド配列を有する第１フォーワードプライマーと配列番号３に対応するヌクレオチド配列を有する第１リバースプライマーとを含む第１プライマー対、及び配列番号４に対応するヌクレオチド配列を有する第２フォーワードプライマーと配列番号５に対応するヌクレオチド配列を有する第２リバースプライマーを含む第２プライマー対を含む、請求項３４に記載の診断キット。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
１）発明の分野
本発明は、ヒト被験者における膀胱癌の検出、予備スクリーニング又はモニタリングにおける分子マーカーとしてのヒトの肝癌アップレギュレート化タンパク質（ｈｅｐａｔｏｍａ  ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＨＵＲＰ）遺伝子の使用に関し、ここで膀胱癌を有することが疑われるヒト被験者から採取したサンプルにおけるヒトＨＵＲＰ遺伝子の検出された発現は、膀胱癌の存在を示す。従って、本発明はヒト被験者における膀胱癌、特に膀胱の移行上皮癌（ＴＣＣ）を検出するための有効な方法を提供する。本発明は更に、高い精度と利便性を有する、ヒト被験者における尿のＴＣＣの検出、予備スクリーニング又はモニタリングのための非侵襲的方法を提供するものであり、疑わしいヒト被験者から採取された尿サンプルは、ヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現を測定するために分析され、その存在は尿のＴＣＣの存在を示す。
【０００２】
２）関連技術の記載
尿路上皮癌は、２番目に最も多く発生する尿生殖路の悪性疾患であり、また、全尿生殖器腫瘍中で２番目に多い死因である（コネティー・ビーアール（Ｋｏｎｅｔｙ  ＢＲ）及びゲッツェンバーグ・アールエイチ（Ｇｅｔｚｅｎｂｅｒｇ  ＲＨ）：  Ｕｒｉｎｅ  ｂａｓｅｄ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ．  Ｊ  Ｕｒｏｌ  １６５：  ６００−６１１，  ２００１，非特許文献１）。膀胱の移行上皮癌（ＴＣＣ）は、尿路上皮新生物の９０％以上の原因であり、低悪性度潜在性の乳頭状表在性病変又は浸潤性且つ致命的であり得る高グレード腫瘍として存在する。膀胱癌が局在段階の間の早期に検出される場合は、５年生存率は９４％である。いったん疾患が局部的又は遠くに広がれば、５年生存率はそれぞれ４９％及び６％に低下する（ドロラー・エムジェイ（Ｄｒｏｌｌｅｒ  ＭＪ）：  Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｉｚｉｎｇ  ｔｈｅ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｏｎｔｅｍｐ．Ｕｒｏｌ．，７／８月，５４−６１頁，１９９０年，非特許文献２）。従って、癌細胞がその挙動を浸潤性に変える時間を有する前に、表在性癌の再発における早期のイベント（ｅｖｅｎｔ）を検出することが重要である。
【０００３】
計画されているフォローアップ・プロトコール（ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ）のもとでの古典的な細胞学及び膀胱鏡検査は、尿のＴＣＣを有する患者のサーベイランスの主要な方法である。排泄された尿の細胞学を用いる低グレード腫瘍に対する低い感度は、侵襲性の膀胱鏡検査をしばしば必要とし、従って、膀胱鏡検査の間の尿道の器具使用によって、付随する不快と潜在的な感染のリスクを誘発する。初期段階で膀胱癌を特異的に検出することができる感度の良い非侵襲性の診断テストの開発は、治療をより早期に始めることにより臨床的結果を改善する。
【０００４】
“Ｍｅｔｈｏｄ  ａｎｄ  ｐｒｏｂｅ  ｓｅｔ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ”と題する米国特許第６，３７６，１８８号（特許文献１）、“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ｕｒｉｎｅ”と題する米国特許第６，２５１，６３８号（特許文献２）及び“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ｕｒｉｎｅ”と題する米国特許第６，２８７，８２０号（特許文献３）はそれぞれ、尿サンプルを検出するための染色体プローブのセットを用いる膀胱癌の診断について開示した。
【０００５】
“Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  （ＣＧＨ）”と題する米国特許第６，３３５，１６７号（特許文献４）は、核酸配列のコピー数を検出すること、特に、テストサンプル中のヒト第８染色体のｑ２１、ヒト第１３染色体のｑ３１−ｑｔｅｒ、ヒト第７染色体のｐ１５−ｐｔｅｒ、ヒト第８染色体のｑ２４−ｑｔｅｒ、ヒト第１１染色体のｃｅｎ−ｐ１３及びヒト第９染色体のｑ１３−ｑｔｅｒからなる群から選択される少なくとも１つの位置のユニーク配列の増幅を検出することによる膀胱癌の診断について開示した。
【０００６】
“Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ”と題する米国特許第６，２９１，１６３号（特許文献５）は、核酸配列の検出による被験者における癌（膀胱癌を含む）及び前癌の診断について開示し、その特徴は以下の工程に存する：（ａ）被験者がヘテロ接合体である遺伝子座のテストサンプルＤＮＡを増幅させ、ここで該遺伝子座が第１及び第２対立遺伝子を含み、前記遺伝子座がマイクロサテライトＤＮＡを含み、ここでテストサンプルＤＮＡがテストサンプルに流れ出た臓器の細胞由来であり、テストサンプルが被験者の：尿、痰、胆汁、大便、唾液、涙、血清及び血漿からなる群から選ばれ；および、（ｂ）第２対立遺伝子に存在するマイクロサテライトＤＮＡのレベルに対する第１対立遺伝子に存在するマイクロサテライトＤＮＡのレベルを測定及び比較することによる、遺伝子座での対立遺伝子の不均衡を検出し、ここで対立遺伝子の不均衡が癌又は前癌であることを示す。
【０００７】
“Ｍｅｔｈｏｄ  ａｎｄ  ａｐｐａｒａｔｕｓ  ｆｏｒ  ｅａｒｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｔｕｍｏｒ  ｉｎ  ｕｒｉｎｅ  ｓａｍｐｌｅｓ”と題するＷＯ  ０１／８６２８８（特許文献６）は、尿サンプル中の膀胱腫瘍の早期診断方法を開示し、それはサイトケラチンファミリーのタンパク質についてのマーカー及び新生物浸潤に関連する炎症性細胞を検出するのに適したリンパ球マーカーを含む群から選択される少なくとも１つの追加のマーカーを組み合わせて、量の推定のためのスタンダードとしてＲＮＡの接近性を証明するためのβ−アクチンについてのマーカー、テロメラーゼの触媒成分（ｈＴＲＴ）のメッセンジャーＲＮＡについてのマーカーを使用することによって尿中に存在する細胞から抽出されたＲＮＡの増幅の工程、そして増幅された材料を検出する最終工程を含む。
【０００８】
“Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ”と題するＷＯ  ９９／６３１１０（特許文献７）は、（ｉ）患者の膀胱、好ましくは尿路上皮から核酸及び／又はタンパク質を含むサンプルを得る工程；および（ｉｉ）該サンプルが膀胱癌に関連するＰａｘ５核酸又はタンパク質のレベルを含むかどうかを測定する工程を含むヒト患者における膀胱癌の診断方法について開示した。
【０００９】
“Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｌａｄｄｅｒ”と題するＷＯ０２／２７３２９（特許文献８）は、ＴＣＣ患者及びコントロール（例えば、ＴＣＣが検出できない被験者）のサンプルに区別をつけて存在するマーカーを用いて、膀胱の移行上皮癌（ＴＣＣ）の診断に対する補助として使用され得るタンパク質マーカー、方法及びキットについて開示した。
【００１０】
米国特許第６，３３５，１７０号（特許文献９）は、尿路上皮又は膀胱癌細胞の発現パターンを測定する方法を開示し、以下のことを含む：尿路上皮又は膀胱癌細胞を含むサンプル中の１又はそれ以上の遺伝子の発現を測定し、それによって発現の第１パターンが形成され；発現の第１パターンから発現の第２パターンを差し引き、ここで第２パターンが、１又はそれ以上の遺伝子及び主に粘膜下組織、平滑筋又は結合組織の細胞を含むサンプルを使用して形成され、差し引く前記工程は発現の第３パターンを形成し、それはサンプル中に存在する粘膜下、平滑筋又は結合組織の細胞の割合とは無関係に尿路上皮又は膀胱癌細胞の発現を反映する。
【００１１】
膀胱癌に関する他の関連する研究は、以下を含む：
コネティー・ビーアール（Ｋｏｎｅｔｙ  ＢＲ）及びゲッツェンバーグ・アールエイチ（Ｇｅｔｚｅｎｂｅｒｇ  ＲＨ）：  Ｕｒｉｎｅ  ｂａｓｅｄ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ．  Ｊ  Ｕｒｏｌ  １６５：  ６００−６１１，  ２００１（非特許文献１）；ドロラー・エムジェイ（Ｄｒｏｌｌｅｒ  ＭＪ）：  Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｉｚｉｎｇ  ｔｈｅ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｏｎｔｅｍｐ．Ｕｒｏｌ．，７／８月，５４−６１頁，１９９０年（非特許文献２）；ノムラ・エヌ（Ｎｏｍｕｒａ  Ｎ），ミヤジマ・エヌ（Ｍｉｙａｊｉｍａ  Ｎ），サズカ・ティー（Ｓａｚｕｋａ  Ｔ）ら：Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｄｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｕｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｅｓ．  Ｉ．  Ｔｈｅ  ｃｏｄｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ４０  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｓ  （ＫＩＡＡ０００１−ＫＩＡＡ００４０）  ｄｅｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｒａｎｄｏｍｌｙ  ｓａｍｐｌｅｄ  ｃＤＮＡ  ｃｌｏｎｅｓ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍａｔｕｒｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ＫＧ−１．  ＤＮＡ  Ｒｅｓ  １：  ２７−３５，  １９９４（非特許文献３）；バッセル・エス（Ｂａｓｓａｌ  Ｓ），ノムラ・エヌ（ＮｏｍｕｒａＮ），ヴェンター・ディー（Ｖｅｎｔｅｒ  Ｄ）ら：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌ−ｃｙｃｌｅ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ  ｏｆ  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｄｌｇ１．  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，７７：  ５−７，２００１（非特許文献４）；  エリス・ダブリュージェイ（Ｅｌｌｉｓ  ＷＪ），ブルーメンステイン・ビーエー（Ｂｌｕｍｅｎｓｔｅｉｎ  ＢＡ），イシャク・エルエム（Ｉｓｈａｋ  ＬＭ）ら：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＢＴＡ  ＴＲＡＫ  ａｓｓａｙ  ａｎｄ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｔｏ  ｖｏｉｄｅｄ  ｕｒｉｎｅ  ｃｙｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｂａｒｄ  ＢＴＡ  ｔｅｓｔ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｔｈｅ  Ｍｕｌｔｉ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ．  Ｕｒｏｌｏｇｙ  ５０：  ８８２−８８７，１９９７（非特許文献５）；サロスディー・エムエフ（Ｓａｒｏｓｄｙ  ＭＦ），ハドソン・エムエー（Ｈｕｄｓｏｎ  ＭＡ），エリス・ダブリュージェイ（Ｅｌｌｉｓ  ＷＪ）ら：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｂａｒｄ  ＢＴＡ  ｓｔａｔ  Ｔｅｓｔ．  Ｕｒｏｌｏｇｙ  ５０：  ３４９−３５３，  １９９７（非特許文献６）；  セリパ・ディー（Ｓｅｒｉｐａ  Ｄ），パレラ・ピー（Ｐａｒｒｅｌｌａ  Ｐ），ガルッチ・エム（Ｇａｌｌｕｃｃｉ  Ｍ）ら：Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｂｙ  ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｆｏｌｉａｔｅｄ  ｉｎ  ｕｒｉｎｅ．  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ９５：  ３６４−３６９，  ２００１（非特許文献７）；ポンスキー・エルイー（Ｐｏｎｓｋｙ  ＬＥ），シャルマ・エス（Ｓｈａｒｍａ  Ｓ），パンドランジ・エル（Ｐａｎｄｒａｎｇｉ  Ｌ）ら：Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｆｏｒ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ：  ｒｅｆｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ＮＭＰ２２．  Ｊ  Ｕｒｏｌ  １６６：  ７５−７８，  ２００１（非特許文献８）；コネティー・ビーアール（Ｋｏｎｅｔｙ  ＢＲ），ヌグイェン・ティーエス（Ｎｇｕｙｅｎ  ＴＳ），ディア・アール（Ｄｈｉｒ  Ｒ）ら：Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ，  ＢＬＣＡ−４．  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６：  ２６１８−２６２５，  ２０００（非特許文献９）；ロテム・ディー（Ｒｏｔｅｍ  Ｄ），キャッセル・エー（Ｃａｓｓｅｌ  Ａ），リンデンフェルド・エヌ（Ｌｉｎｄｅｎｆｅｌｄ  Ｎ）ら：Ｕｒｉｎａｒｙ  ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ  ２０  ａｓ  ａ  ｍａｒｋｅｒ  ｆｏｒ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．  Ｅｕｒ  Ｕｒｏｌ  ３７：  ６０１−６０４，  ２０００  （非特許文献１０）；サンチェス−カルバヨ・エム（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｃａｒｂａｙｏ  Ｍ），ウルティア・エム（Ｕｒｒｕｔｉａ  Ｍ），ゴンザレス・デ・ブイトラゴ・ジェイエム（Ｇｏｎｚａｌｅｚ  ｄｅ  Ｂｕｉｔｒａｇｏ  ＪＭ）ら：Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｎｅｗ  ｕｒｉｎａｒｙ  ｔｕｍｏｒ  ｍａｒｋｅｒｓ：  ｂｌａｄｄｅｒ  ｔｕｍｏｒ  ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ  ａｎｄ  ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ  １８  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６：  ３５８５−３５９４，  ２０００（非特許文献１１）；サンチェス−カルバヨ・エム（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｃａｒｂａｙｏ  Ｍ），ウルティア・エム（Ｕｒｒｕｔｉａ  Ｍ），シルヴァ・ジェイエム（Ｓｉｌｖａ  ＪＭ）ら：Ｕｒｉｎａｒｙ  ｔｉｓｓｕｅ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｕｒｏｌｏｇｙ  ５５：  ５２６−５３２，  ２０００（非特許文献１２）；スミス・エスディー（Ｓｍｉｔｈ  ＳＤ），ウィーラー・エムエー（Ｗｈｅｅｌｅｒ，  ＭＡ），プレシア・ジェイ（Ｐｌｅｓｃｉａ  Ｊ）ら：Ｕｒｉｎｅ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｕｒｖｉｖｉｎ  ａｎｄ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ．  ＪＡＭＡ  ２８５：  ３２４−３２８，  ２００１（非特許文献１３）。
【００１２】
しかしながら、我々の知る限りでは、上の引用文献はいずれも、膀胱癌又は尿路上皮癌においてヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現を報告していない。ＴＣＣ組織サンプルがＨＵＲＰ  ｍＲＮＡ転写物の再現性があり且つ有意な発現を示したことが出願人により驚くべきことに発見された。
【００１３】
この発見に基いて、腫瘍組織のサンプル及び排泄された尿のような生物学的サンプル中のヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現を分析することによって、ヒト被験者の膀胱癌の検出、予備スクリーニング又はモニタリングのための正確で便利で非侵襲性の診断方法を開発することができ、検出されたヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現は膀胱癌の存在を示す。
【００１４】
【特許文献１】
米国特許第６，３７６，１８８号
【００１５】
【特許文献２】
米国特許第６，２５１，６３８号
【００１６】
【特許文献３】
米国特許第６，２８７，８２０号
【００１７】
【特許文献４】
米国特許第６，３３５，１６７号
【００１８】
【特許文献５】
米国特許第６，２９１，１６３号
【００１９】
【特許文献６】
ＷＯ  ０１／８６２８８
【００２０】
【特許文献７】
ＷＯ  ９９／６３１１０
【００２１】
【特許文献８】
ＷＯ  ０２／２７３２９
【００２２】
【特許文献９】
米国特許第６，３３５，１７０号
【００２３】
【非特許文献１】
コネティー・ビーアール（Ｋｏｎｅｔｙ  ＢＲ）及びゲッツェンバーグ・アールエイチ（Ｇｅｔｚｅｎｂｅｒｇ  ＲＨ）：  Ｕｒｉｎｅ  ｂａｓｅｄ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ．  Ｊ  Ｕｒｏｌ  １６５：  ６００−６１１，  ２００１
【００２４】
【非特許文献２】
ドロラー・エムジェイ（Ｄｒｏｌｌｅｒ  ＭＪ）：  Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｉｚｉｎｇ  ｔｈｅ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｏｎｔｅｍｐ．Ｕｒｏｌ．，７／８月，５４−６１頁，１９９０
【００２５】
【非特許文献３】
ノムラ・エヌ（Ｎｏｍｕｒａ  Ｎ），ミヤジマ・エヌ（Ｍｉｙａｊｉｍａ  Ｎ），サズカ・ティー（Ｓａｚｕｋａ  Ｔ）ら：Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｄｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｕｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ  ｈｕｍａｎｇｅｎｅｓ．  Ｉ．  Ｔｈｅ  ｃｏｄｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ４０  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｓ  （ＫＩＡＡ０００１−ＫＩＡＡ００４０）  ｄｅｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｒａｎｄｏｍｌｙ  ｓａｍｐｌｅｄ  ｃＤＮＡ  ｃｌｏｎｅｓ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍａｔｕｒｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ＫＧ−１．  ＤＮＡ  Ｒｅｓ  １：  ２７−３５，  １９９４
【００２６】
【非特許文献４】
バッセル・エス（Ｂａｓｓａｌ  Ｓ），ノムラ・エヌ（Ｎｏｍｕｒａ  Ｎ），ヴェンター・ディー（Ｖｅｎｔｅｒ  Ｄ）ら：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌ−ｃｙｃｌｅ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄｈｏｍｏｌｏｇｕｅ  ｏｆ  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｄｌｇ１．  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，７７：  ５−７，２００１
【００２７】
【非特許文献５】
エリス・ダブリュージェイ（Ｅｌｌｉｓ  ＷＪ），ブルーメンステイン・ビーエー（Ｂｌｕｍｅｎｓｔｅｉｎ  ＢＡ），イシャク・エルエム（Ｉｓｈａｋ  ＬＭ）ら：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆｔｈｅ  ＢＴＡ  ＴＲＡＫ  ａｓｓａｙ  ａｎｄ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｔｏ  ｖｏｉｄｅｄ  ｕｒｉｎｅ  ｃｙｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ＢａｒｄＢＴＡ  ｔｅｓｔ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｔｕｍｏｒｓ．  Ｔｈｅ  Ｍｕｌｔｉ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ．  Ｕｒｏｌｏｇｙ  ５０：  ８８２−８８７，１９９７
【００２８】
【非特許文献６】
サロスディー・エムエフ（Ｓａｒｏｓｄｙ  ＭＦ），ハドソン・エムエー（Ｈｕｄｓｏｎ  ＭＡ），エリス・ダブリュージェイ（Ｅｌｌｉｓ  ＷＪ）ら：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｂａｒｄ  ＢＴＡ  ｓｔａｔ  Ｔｅｓｔ．  Ｕｒｏｌｏｇｙ  ５０：  ３４９−３５３，  １９９７
【００２９】
【非特許文献７】
セリパ・ディー（Ｓｅｒｉｐａ  Ｄ），パレラ・ピー（Ｐａｒｒｅｌｌａ  Ｐ），ガルッチ・エム（Ｇａｌｌｕｃｃｉ  Ｍ）ら：Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｂｙ  ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｅｌｌｓ  ｅｘｆｏｌｉａｔｅｄ  ｉｎ  ｕｒｉｎｅ．  Ｉｎｔ
Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ９５：  ３６４−３６９，  ２００１
【００３０】
【非特許文献８】
ポンスキー・エルイー（Ｐｏｎｓｋｙ  ＬＥ），シャルマ・エス（Ｓｈａｒｍａ  Ｓ），パンドランジ・エル（Ｐａｎｄｒａｎｇｉ  Ｌ）ら：Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ｆｏｒ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ：  ｒｅｆｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ＮＭＰ２２．  Ｊ  Ｕｒｏｌ  １６６：  ７５−７８，  ２００１
【００３１】
【非特許文献９】
コネティー・ビーアール（Ｋｏｎｅｔｙ  ＢＲ），ヌグイェン・ティーエス（Ｎｇｕｙｅｎ  ＴＳ），ディア・アール（Ｄｈｉｒ  Ｒ）ら：Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ，  ＢＬＣＡ−４．  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６：  ２６１８−２６２５，  ２０００
【００３２】
【非特許文献１０】
ロテム・ディー（Ｒｏｔｅｍ  Ｄ），キャッセル・エー（Ｃａｓｓｅｌ  Ａ），リンデンフェルド・エヌ（Ｌｉｎｄｅｎｆｅｌｄ  Ｎ）ら：Ｕｒｉｎａｒｙ  ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ  ２０  ａｓ  ａ  ｍａｒｋｅｒ  ｆｏｒ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．  Ｅｕｒ  Ｕｒｏｌ  ３７：  ６０１−６０４，  ２０００
【００３３】
【非特許文献１１】
サンチェス−カルバヨ・エム（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｃａｒｂａｙｏ  Ｍ），ウルティア・エム（Ｕｒｒｕｔｉａ  Ｍ），ゴンザレス・デ・ブイトラゴ・ジェイエム（Ｇｏｎｚａｌｅｚ  ｄｅ  Ｂｕｉｔｒａｇｏ  ＪＭ）ら：Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｎｅｗ  ｕｒｉｎａｒｙ  ｔｕｍｏｒ  ｍａｒｋｅｒｓ：  ｂｌａｄｄｅｒ  ｔｕｍｏｒ  ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ  ａｎｄ  ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ  １８  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６：  ３５８５−３５９４，  ２０００
【００３４】
【非特許文献１２】
サンチェス−カルバヨ・エム（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｃａｒｂａｙｏ  Ｍ），ウルティア・エム（Ｕｒｒｕｔｉａ  Ｍ），シルヴァ・ジェイエム（Ｓｉｌｖａ  ＪＭ）ら：Ｕｒｉｎａｒｙ  ｔｉｓｓｕｅ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｕｒｏｌｏｇｙ  ５５：  ５２６−５３２，  ２０００
【００３５】
【非特許文献１３】
スミス・エスディー（Ｓｍｉｔｈ  ＳＤ），ウィーラー・エムエー（Ｗｈｅｅｌｅｒ，  ＭＡ），プレシア・ジェイ（Ｐｌｅｓｃｉａ  Ｊ）ら：Ｕｒｉｎｅ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｕｒｖｉｖｉｎ  ａｎｄ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ．  ＪＡＭＡ  ２８５：  ３２４−３２８，  ２００１発明の要約
従って、本発明の第１の局面において、本発明は以下：
膀胱癌を有していると疑われる被験者から採取した生物学的サンプルを得る工程；及び
前記サンプル中のヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現を検出する工程、その検出されたヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現が膀胱癌の存在を示す、
を含む、ヒト被験者における膀胱癌の検出方法を提供する。
【００３６】
第２の局面において、本発明は、以下：
膀胱癌を有していると疑われる被験者から採取した生物学的サンプルを定期的に得えう工程；及び
前記サンプル中のヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現を検出する工程、該検出されたヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現が膀胱癌の存在を示す、
を含む、ヒト被験者における膀胱癌をモニタリングする方法を提供する：
第３の局面において、本発明はヒト被験者における膀胱癌を検出するためのプライマーセットを提供し、それは配列番号２及び配列番号４で示される配列から選択されるヌクレオチド配列を有するフォーワードプライマーと、配列番号３及び配列番号５で示される配列から選択されるヌクレオチド配列を有するリバースプライマーとを含む。
【００３７】
第４の局面において、本発明はヒト被験者における膀胱癌を検出するための診断キットを提供し、それはフォーワードプライマーとリバースプライマーの少なくとも１つのプライマー対を含み、各プライマーは、配列番号１に対応するヌクレオチド配列を有するヒトＨＵＲＰ遺伝子の少なくとも１３ヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド配列を有する。
【００３８】
本発明の上記及び他の目的、特徴及び利点は、添付図面を伴う以下の詳細な説明及び好ましい実施例を参照することよって明らかとなるであろう。
【００３９】
発明の詳細な記載
細胞周期の制御及びアポトーシスに関する遺伝子及びタンパク質は、癌の成長において重要であることが発見された。細胞周期及びアポトーシスを制御する細胞の成分の同定において当該分野での引き続く必要性がある。
【００４０】
配列番号１で示されるような全長ヌクレオチド配列を有するヒト肝癌アップレギュレート化タンパク質（ＨＵＲＰ）遺伝子（ＮＣＢＩアクセッション番号ＡＢ０７６６９５）は、Ｃｈｅｎ−Ｋｕｎｇ  Ｃｈｏｕらによって、肝癌の研究において細胞増殖に関する新規な癌関連遺伝子として最初に同定された。Ｃｈｏｕの肝細胞癌（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ，  ＨＣＣ）の研究において、新規な細胞周期調節遺伝子（ＣＣＲＧ）が、特にヒトＨＣＣ組織のｃＤＮＡライブラリー及びマイクロアレイ・データベースにおける細胞周期依存性発現プロファイル中に存在する新規な遺伝子の検索から、肝癌アップレギュレート化タンパク質（ＨＵＲＰ）として同定された（Ｃｈｏｕら、原稿は発行のなめに提出された）。
【００４１】
驚くべきことに、ヒトＨＵＲＰ遺伝子が膀胱癌に対する有力な分子メーカー（ｍａｋｅｒ）になり得ること、及びヒトＨＵＲＰ遺伝子が、低グレードの膀胱腫瘍を検出するのに十分感度がよく、癌でない又は臨床的に取るに足らない状態の患者の大部分を排除するのに特異的である非侵襲性の尿診断において使用され得ることを、本出願人が初めて発見した。
【００４２】
本発明によれば、ヒト被験者における膀胱癌の検出、予備スクリーニング又はモニタリングの方法が提供され、以下を含む：
膀胱癌を有していると疑われる被験者から採取した生物学的サンプルを得る工程；および
前記サンプル中のヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現を検出する工程、その検出されたヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現が膀胱癌の存在を示す。
【００４３】
本発明の方法は、膀胱の移行上皮癌（ＴＣＣ）の検出、予備スクリーニング及びモニタリングに適用され得る。
【００４４】
好ましくは、本方法は、尿路上皮癌細胞、膀胱癌細胞又はそれらの組み合わせからなる群から選ばれる細胞を含む生物学的サンプルを用いて行われる。
【００４５】
好ましくは、該生物学的サンプルは、尿、尿路上皮生検、血液、血漿及び血清からなる群から選択される。本発明の好ましい実施態様において、生物学的サンプルは尿である。
【００４６】
ヒトＨＵＲＰ遺伝子は、図１及び配列番号１で示されるようなヌクレオチド配列を有し、それに基いてヒトＨＵＲＰ遺伝子の少なくとも１３ヌクレオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドが、バイオテクノロジーの分野でよく知られた慣用の方法論を用いて、前記遺伝子の発現を検出するための診断用プローブ又はプライマーとして役立つようにデザインされ得る。
【００４７】
例として、図１を参照すれば、出願人は膀胱癌を検出するための本発明の方法において有用である４つのプライマーをデザインし、以下のものを含む：
第１プライマー対：
【００４８】
【化１】
2004248508.tif 000002
【００４９】
第２プライマー対：
【００５０】
【化２】
2004248508.tif 000003
【００５１】
フォーワードプライマー１はリバースプライマー２と一対になることができ、フォーワードプライマー２はリバースプライマー１と一対になることができると考えられる。
【００５２】
本発明によれば、ヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現は、ヒトＨＵＲＰ遺伝子からのｍＲＮＡ転写物又はヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物から翻訳されたタンパク質の分析によって測定される。
【００５３】
ヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物からの翻訳されたタンパク質の検出は、バイオテクノロジーの分野でよく知られた慣用の方法論により行うことができる。
【００５４】
本発明の好ましい実施態様において、ヒトＨＵＲＰ遺伝子の発現の検出は、生物学的サンプル中のヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の存在を検出することによって行われる。
【００５５】
好ましくは、ヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の存在の検出は、以下の方法論：ハイブリダイゼーション、サイクリングプローブ反応（ｃｙｃｌｉｎｇ  ｐｒｏｂｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ネスティッド（ｎｅｓｔｅｄ）ＰＣＲ、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、マルチプレックスＰＣＲポリメラーゼ連鎖反応−一本鎖コンフォーメーション多型、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、制限断片長多型核酸配列ベースの増幅（ＮＡＳＢＡ）、及び転写仲介増幅（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）（ＴＭＡ）
の少なくとも１つ用いて行われる。
【００５６】
本発明の好ましい実施態様において、ヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の存在の検出は、ＲＴ−ＰＣＲを用いて行われる。
【００５７】
本発明のより好ましい実施態様において、ヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の存在の検出は、以下：
（ａ）生物学的サンプルから全ＲＮＡを抽出すること；
（ｂ）工程（ａ）で抽出されたＲＮＡを、フォーワードプライマーとリバースプライマーの少なくとも１つのプライマー対を用いて、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）処理に供すること、各プライマーは、配列番号１に対応するヌクレオチド配列を有するヒトＨＵＲＰ遺伝子の少なくとも１３ヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド配列を有し；及び
（ｃ）ヒトＨＵＲＰ遺伝子のヌクレオチド配列の一部と同一又は相補的なヌクレオチド配列を有するＲＴ−ＰＣＲ産物が、工程（ｂ）のＲＴ−ＰＣＲ処理から産生されたかどうかを検出すること、前記ＲＴ−ＰＣＲ産物の存在が膀胱癌の存在を示す、
により行われる。
【００５８】
好ましくは、工程（ｂ）で使用される各プライマーが、ヒトＨＵＲＰ遺伝子の少なくとも１８ヌクレオチドにハイブリダイズする。
【００５９】
好ましくは、工程（ｂ）で使用される少なくとも１つのプライマー対は、配列番号２及び配列番号４で示される配列から選ばれるヌクレオチド配列を有するフォーワードプライマーと、配列番号３及び配列番号５で示される配列から選ばれるヌクレオチド配列を有するリバースプライマーを含む。
【００６０】
本発明の好ましい実施態様において、工程（ｂ）で使用される少なくとも１つのプライマー対は、配列番号４に対応するヌクレオチド配列を有するフォーワードプライマーと配列番号５に対応するヌクレオチド配列を有するリバースプライマーを含む。
【００６１】
本発明の好ましい実施態様において、工程（ｂ）におけるＲＴ−ＰＣＲ処理は、配列番号２に対応するヌクレオチド配列を有する第１フォーワードプライマーと配列番号３に対応するヌクレオチド配列を有する第１リバースプライマーとを含む第１プライマー対を用いる第１増幅反応、及び配列番号４に対応するヌクレオチド配列を有する第２フォーワードプライマーと配列番号５に対応するヌクレオチド配列を有する第２リバースプライマーとを含む第２プライマー対を用いる第２増幅反応を含む。
【００６２】
本発明によれば、ヒト被験者における膀胱癌の検出のためのプライマーセットが提供され、それは配列番号２及び配列番号４で示される配列から選ばれるヌクレオチド配列を有するフォーワードプライマーと配列番号３及び配列番号５で示される配列から選ばれるヌクレオチド配列を有するリバースプライマーとを含む。
【００６３】
本発明の好ましい実施態様において、フォーワードプライマーは配列番号２で示されるヌクレオチド配列を有する。
【００６４】
本発明の他の好ましい実施態様において、フォーワードプライマーは配列番号４で示されるヌクレオチド配列を有する。
【００６５】
本発明の好ましい実施態様において、リバースプライマーは配列番号３で示されるヌクレオチド配列を有する。
【００６６】
本発明の他の好ましい実施態様において、リバースプライマーは配列番号５で示されるヌクレオチド配列を有する。
【００６７】
本発明によれば、ヒト被験者における膀胱癌の検出のための診断キットが提供され、それはフォーワードプライマーとリバースプライマーの少なくとも１つのプライマー対を含み、各プライマーは、配列番号１に対応するヌクレオチド配列を有するヒトＨＵＲＰ遺伝子の少なくとも１３ヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド配列を有する。
【００６８】
本発明の他の好ましい実施態様において、診断キットは、配列番号２に対応するヌクレオチド配列を有する第１フォーワードプライマーと配列番号３に対応するヌクレオチド配列を有する第１リバースプライマーとを含む第１プライマー対、及び配列番号４に対応するヌクレオチド配列を有する第２フォーワードプライマーと配列番号５に対応するヌクレオチド配列を有する第２リバースプライマーを含む第２プライマー対を含む。
【００６９】
前述したことに加え、本発明の範囲内における各種の用途があらゆるタイプの評価アッセイを使用することを含むことは、当業者なら理解するだろう。
【００７０】
例えば、ＲＮＡ及びタンパク質は、その分野において公知の技術を用いてテストサンプルから単離及びアッセイされ得る。それらは、例えば、新鮮な又は凍結させた生検、ホルマリンで固定された組織、そして血液、血漿、血清、尿又は痰のような体液から単離され得る。
【００７１】
ＲＴ−ＰＣＲが使用できるが、他の技術も考えられる。これらは、ＰＣＲ、ネスティッドＰＣＲ    インサイチュ（ｉｎ  ｓｉｔｕ）ハイブリダイゼーション、ノーザンブロッティング、高密度発現アレイ、マイクロアレイ、並びにＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロッティング及び酵素アッセイのような特定のタンパク質産物をアッセイするための技術を含む特定のｍＲＮＡ種をアッセイするための他の技術を含む。
【００７２】
本発明は以下の実施例を参照してより詳細に述べられ、それらは単に例証の目的であって、本発明の範囲を制限しようとするものではない。
【００７３】
実施例１：ＨＵＲＰ遺伝子発現のＰＴ−ＰＣＲ分析
材料及び方法：
患者の特徴
１９９８年３月から２００１年９月までＣｈｉ  Ｍｅｉメディカルセンターにおいて、膀胱切開術（ｃｙｓｔｅｃｔｏｍｙ）及び経尿道的切除術（ｔｒａｎｓｕｒｅｔｈｒａｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ）を用いて尿路から８０のＴＣＣサンプルを得た。遠くの肉眼的に正常な組織もまた分析のために得られ、それらは腫瘍に近接する組織サンプルとしてみなされた。全組織サンプルは液体窒素中で凍結され、−８６℃で様々な期間貯蔵された。各凍結ブロックの代表的な切片は、パラフィン中に埋め込まれ、ヘマトキシリン−エオシンで染色され、サンプル中の腫瘍の状態を評価するために病理学者によって調べられた。
【００７４】
全ての標本は、世界保健機関の分類の修正を用いてグレードに分けられ、病理学的なステージング（ｓｔａｇｉｎｇ）は、ＴＮＭ病理学ステージングシステムに従った（Ｅｐｓｔｅｉｎ  ＪＩ，  Ａｍｉｎ  ＭＢ，  Ｒｅｕｔｅｒ  ＶＲ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｔｈｅ  Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ／Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ  （ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ  ｃｅｌｌ）  ｎｅｏｐｌａｓｍｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｕｒｉｎａｒｙ  ｂｌａｄｄｅｒ．  Ｂｌａｄｄｅｒ  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ．  Ａｍ  Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｐａｔｈｏｌ  ２２：  １４３５−１４４８，  １９９８；及びＣｈｉｓｈｏｌｍ  ＧＤ，  Ｈｉｎｄｍａｒｓｈ  ＪＲ，  Ｈｏｗａｔｓｏｎ  ＡＧ，  ｅｔ  ａｌ：  ＴＮＭ  （１９７８）  ｉｎ  ｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ：  ｕｓｅ  ａｎｄ  ａｂｕｓｅ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｕｒｏｌ  ５２：  ５００−５０５，  １９８０）。
【００７５】
膀胱腫瘍の段階は、どれほど深く腫瘍が浸潤しているかを示す。表在性腫瘍はＴａと呼ばれ、Ｔ１−４は筋肉への浸潤の増加の程度を述べるのに使用される。膀胱腫瘍のグレードはＩ−ＩＶ（１−４）のスケールで表される。グレードは細胞の細胞学的外観を反映し、グレードＩの細胞はほとんど正常であり、グレードＩＩの細胞はわずかに正常から外れており、グレードＩＩＩの細胞は明らかに異常であり、グレードＩＶの細胞は高度に異常である。
【００７６】
ＲＮＡの単離：
全ＲＮＡは、Ｕｌｔｒａｓｐｅｃ（登録商標）ＲＮＡ単離システム（Ｂｉｏｔｅｃｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，  Ｈｏｕｓｔｏｎ，  Ｔｅｘａｓ）を用いて凍結した組織標本又は尿のペレットから単離された。ハンドヘルドのガラス−テフロン中で、約０．５−１．０グラムの組織を１ｍｌのＵｌｔｒａｓｐｅｃ（登録商標）試薬を用いてホモジナイズした。ホモジナイゼーションの後、ホモジネートを４℃で５分間保存し、０．２ｍｌのクロロホルムで抽出し、その後、１２，０００ｇ（４℃）で１５分間遠心分離した。水相のＲＮＡを同量のイソプロパノールで沈殿させ、７５％のエタノールで２回洗浄した。ＲＮＡの含有量を分光学的に評価し（Ａ２６０の１  ＯＤは４０μｇ／ｍｌのＲＮＡに等しい。）、抽出物の純度はＡ２６０／２８０比を用いて評価し、それは全ての場合において１．７５を超えた。尿の回収のために、５０ミリリットルのきれいに採取された尿は、全ての患者からその日の最初の排尿で得られた。サンプルは３，０００ｇ（４℃）で２０分間遠心分離され、細胞のペレットは１ｍｌのＵｌｔｒａｓｐｅｃ（登録商標）試薬と混合され、上述したのと同じ方法を用いて抽出された。
【００７７】
逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応
一本鎖の相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）は、１μｌのＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩ逆転写酵素（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．，  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，  ＭＤ）とともに１μｇの全ＲＮＡのｏｌｉｇｏ−ｄＴプライミングを用いて、４２℃で５０分間合成された。７０℃で１５分間加熱した後、第１増幅反応は、１０分の１の逆転写されたＲＮＡ、２００μｍｏｌ／ＬのｄＮＴＰｓを含むＴａｑポリメラーゼバッファー、１ＵのＤｙＮＡｚｙｍｅ（登録商標）ＩＩ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｆｉｎｎｚｙｍｅｓ  Ｉｎｃ．，  Ｆｉｎｌａｎｄ）、及び１０μＭの各ヒトＨＵＲＰプライマー５’−ＧＧＡＴＣＣＡＡＴＡＧＡＣＡＣＴＴＴＧＧＴＴＴＧ−３’（フォーワード）及び５’−ＧＧＡＴＣＣＣＡＣＣＴＴＴＣＣＴＴＣＴＧＧＴＴＣ−３’（リバース）を用いて、９４℃で１分間変性、５５℃で１分間アニーリングおよび７２℃で１分間伸長を３０サイクルについて、その後、７２℃で５分間インキュベートすることにより行われた。
【００７８】
尿標本のネスティッドＰＣＲのために、第１増幅産物の１０分の１を、ネスティッドＨＵＲＰプライマー５’−ＣＡＡＣＧＡＡＡＡＣＡＧＡＴＧＣＴＣ−３’（フォーワード）及び５’−ＴＧＡＧＴＡＧＣＴＧＡＴＣＧＡＧＴＣ−３’（リバース）とともに、９４℃で１分間変性、６０℃で１分間アニーリング、および７２℃で１分間の伸長を３０サイクルについて、その後、７２℃で５分間インキュベートを行う増幅の第２ラウンドに供した。
【００７９】
テンプレートとしてＲＴを有さないルーチンのＲＴ−ＰＣＲのコントロールは陰性であり、テンプレートとしてｐＥＴ３２ａ（＋）ベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ  Ｉｎｃ．から購入した）に全長のＨＵＲＰヌクレオチド配列を挿入することにより図２に示すように構築されたｐＥＴ３２ａ（＋）−ＨＵＲＰを用いたものは陽性であった。増幅産物は、１．５％アガロースゲル中０．１μｇのＧｅｎｅＲｕｌｅｒ（登録商標）１００ｂｐ  ＤＮＡラダー（ＭＢＩ  Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ，  Ｌｉｔｈｕａｎｉａ）を用いる電気泳動を使用して分離され、エチジウムブロマイド染色を用いて可視化された。
【００８０】
データの定量化及び標準化
ＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ発現レベルを定量化するために、全てのゲルがＩｍａｇｅ  Ｍａｓｔｅｒ（登録商標）ＶＤＳビデオイメージングシステム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．，  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ）を用いて撮影され、ＬＩＳＣＡＰイメージキャプチャーソフトウェア（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．，  バージョン１．０）を用いて書類に記録した。ＰＣＲ産物の光学的画素は、ＩｍａｇｅＭａｓｔｅｒ（登録商標）ＴｏｔａｌＬａｂソフトウェア（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．，  バージョン１．１１）を用いて任意の単位に定量化された。
【００８１】
試験サンプルを比較するために、データの標準化は必要であった。この目的のために、β−アクチンのＰＣＲ増幅産物は、ＰＣＲにかけられたｃＤＮＡテンプレートと相対的に等しい量を表すために内部標準として使用された。平均値は平均±ＳＤ値として表され、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ検定を用いて比較された。
【００８２】
結果：
ＴＣＣ組織サンプル及びコントロール被験者におけるＨＵＲＰ遺伝子の代表的な発現パターンを図３Ａに示す。腫瘍に近接する部分よりも１１対の腫瘍部分（患者番号：２９４Ｎ／Ｔ，  ３０６Ｎ／Ｔ，  ３０７Ｎ／Ｔ，  ３１５Ｎ／Ｔ，  ３１７Ｎ／Ｔ，  ３１９Ｎ／Ｔ，  ３２０Ｎ／Ｔ，  ３２１Ｎ／Ｔ，  ３２７Ｎ／Ｔ，  ３３５Ｎ／Ｔ，  ３３７Ｎ／Ｔ）において、相対的により多くのヒトＨＵＲＰ遺伝子のｍＲＮＡ転写物が増幅された（図３Ａ参照。）。組織サンプルの１対（患者番号：３２２Ｎ／Ｔ）のみが、両方ともヒトＨＵＲＰ遺伝子の検出できない転写物を示した。内部標準として、β−アクチンのＰＣＲ増幅産物（図３Ｂ参照。）が、ＰＣＲに供されたｃＤＮＡテンプレートと相対的に等しい量を表すために使用された。
【００８３】
実施例２：ＲＴ−ＰＣＲ分析によるＨＵＲＰ遺伝子発現の腫瘍特異性の評価
ＨＵＲＰの過剰発現が腫瘍特異性を示すかどうかを決定するために、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）の患者由来の前立腺尿路上皮のヒトＨＵＲＰ転写物が、逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を用いて増幅された。
【００８４】
実験は、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）の患者由来の前立腺尿路上皮のＨＵＲＰ転写物が、ＨＵＲＰ遺伝子発現が腫瘍特異性を示すかどうかを決定するために逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を用いて増幅された以外は、上の実施例１に示された手順に従って行われた。
【００８５】
標準の膀胱鏡検査法を用いたＢＰＨ患者由来の前立腺尿路上皮の１５の標本は、集められ、ＲＴ−ＰＣＲに供された。図４を参照すると、β−アクチン転写物はＢＰＨ尿路上皮の５つの代表的なサンプルから等しく増幅されたが、これらのサンプル中にはＨＵＲＰ転写物は検出されなかった。ＢＰＨサンプルに加えて、肝臓由来の４サンプル及び心臓由来の４サンプルを含む膀胱でないコントロールが試験され、これらの組織中にはＨＵＲＰ転写物は検出されなかった（データは示していない。）。
【００８６】
実施例３：ＨＵＲＰ遺伝子発現のＲＴ−ＰＣＲ分析による腫瘍段階の評価
ＨＵＲＰ遺伝子の過剰発現と腫瘍グレードとの間の可能性のある相関関係を決定するために、ＴＣＣを含む組織のサンプル及び対応の腫瘍近接組織サンプルの４５対のヒトＨＵＲＰ転写物が分析され、β−アクチン転写物を用いて標準化された。
【００８７】
表１を参照すると、３５の腫瘍近接部分（３５／４５，  ７７．８％）が腫瘍の部分よりもＨＵＲＰ遺伝子の発現量が少ないこと（グループＩ，  ｐ＜０．０００１）、及び１０の腫瘍近接部分（１０／４５，  ２２．２％）が腫瘍部分とほとんど等しい量のＨＵＲＰ遺伝子を示したこと（グループＩＩ）は、注目すべきことである。
【００８８】
ゼロのグレードＩ、３７のグレードＩＩ、３１のグレードＩＩＩ、１２のグレードＩＶの病理学的同定を有する８０人のＴＣＣ患者が集められ、組織サンプルのヒトＨＵＲＰ発現比を表ＩＩにリストする。ＨＵＲＰ発現と腫瘍グレードとの間に有意な相関関係は存在しないようである。それらの中で、ＨＵＲＰ陰性の９の腫瘍、６はグレードＩＩ、１はグレードＩＩＩそして２はグレードＩＶであった。
【００８９】
【表１】
2004248508.tif 000004
【００９０】
【表２】
2004248508.tif 000005
【００９１】
実施例４：ＴＣＣの検出のためのバイオマーカーとしてのＨＵＲＰ遺伝子発現の評価尿ＴＣＣ検出のための新規な尿の分子マーカーとしての、尿ＨＵＲＰの潜在的な適用性を評価するために、新たな又は再発したＴＣＣの７人の更なる患者が、ＲＴ−ＰＣＲを用いて尿ＨＵＲＰについて分析された。全ＲＮＡは尿の細胞ペレットから抽出され、ｏｌｉｇｏ−ｄＴプライミングによって逆転写された。増幅反応は、ＨＵＲＰ特異的プライマー又はβ−アクチン特異的プライマーを用いて行われた。３７０塩基対のｃＤＮＡは、ＴＣＣの全患者の尿の細胞ペレットから増幅された（図５Ａ）。対照的に、７人の更なる個人（３人は尿路感染症、２人は膀胱の慢性炎症、１人は腎細胞癌、１人はＢＨＰを有した。）由来の尿の細胞ペレットは、ＨＵＲＰ転写物を有しなかった。コントロールの実験において、３０７塩基対のβ−アクチンｃＤＮＡ断片は、コントロールの被験者及びＴＣＣ患者の尿から見分けのつかないほど増幅された（図５Ｂ）。
【００９２】
本明細書中に引用された全ての特許及び参考文献は、参考として本明細書に全体として援用される。矛盾する場合は、定義を含めた本発明の説明が優先される。
【００９３】
本発明は、上記の特定の実施態様を参照して述べられたが、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく数多くの変更と変形を行うことができるのは明らかである。従って、本発明は添付のクレームに示されたようにのみ限定しようとするものである。
【００９４】
【配列表】
2004248508.tif 000006
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【図面の簡単な説明】
【図１】図１はヒトＨＵＲＰ遺伝子のヌクレオチド配列の全長（配列番号１）を示し、ここで本発明に従ってデザインされた４つのプライマーに相補的なヌクレオチド配列は、下線が引かれ、太字になっている；
【図２】図２は上記の実施例で用いられているベクターｐＥＴ３２ａ（Ｎｏｖａｇｅｎ  Ｉｎｃ．）の制限地図を示し、ＢａｍＨ  Ｉ制限部位はヒトＨＵＲＰ遺伝子の全長核酸配列を挿入するために使用される。
【図３】図３Ａ及び３Ｂはそれぞれ、ＴＣＣ組織におけるＨＵＲＰ及びβ−アクチンの発現のＲＴ−ＰＣＲ分析を示し、Ｎ＝腫瘍近接組織、Ｔ＝腫瘍組織、および２９４，３０６，３０７，３１５，３１７，３１９，３２０，３２１，３２２，３２７，３３５及び３３７＝患者の番号である。
【図４】図４は５人の良性の前立腺過形成の患者から採取した前立腺の尿路上皮サンプルにおけるヒトＨＵＲＰ発現のＲＴ−ＰＣＲ分析を示し、ここで左はβ−アクチン（３０７ｂｐ）および右はＨＵＲＰ（３７０ｂｐ）であり、Ｎ１，Ｎ２，Ｎ３，Ｎ４及びＮ５＝５つの良性前立腺過形成（ＢＰＨ）サンプル；ＮＣ＝ネガティブコントロール；そして、Ｍは塩基対における分子量マーカーを示す。
【図５】図５Ａ及び５Ｂはそれぞれ、排泄された尿サンプル中のＨＵＲＰ及びβ−アクチンの発現のＲＴ−ＰＣＲ分析を示し、ここで２，６，７，８，１４，１５，２０，５，１０，１１，１２，１３，１６及び１８＝患者の番号；ＮＣ：ネガティブコントロール；Ｍは塩基対における分子量マーカーを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【外国語明細書】
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