(57)【要約】【課題】感染型プリオン蛋白等の有害蛋白を完全に非活性化して安全な肉骨粉等の製造を実現することのできる有害蛋白の非活性化方法を提供する。【解決手段】肉骨粉原料に含まれる感染型プリオン蛋白等の有害蛋白を溶融剪断によりペプチド結合を破壊して低分子化する。【選択図】　　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
有害蛋白の非活性化方法であって、溶融剪断により有害蛋白のペプチド結合を破壊して低分子化することを特徴とする有害蛋白の非活性化方法。
【請求項２】
有害蛋白含有物を溶融剪断して含有されている有害蛋白を非活性化することを特徴とする請求項１の有害蛋白の非活性化方法。
【請求項３】
エクストルーダーのバレル内のスクリューの回転作用により溶融剪断を行う請求項１または２の有害蛋白の非活性化方法。
【請求項４】
有害蛋白がアレルゲン蛋白であることを特徴とする請求項１ないし３のいずれかの有害蛋白の非活性化方法。
【請求項５】
有害蛋白が感染型プリオン蛋白であることを特徴とする請求項１ないし３のいずれかの有害蛋白の非活性化方法。
【請求項６】
感染型プリオン蛋白含有の肉骨粉原料に対して溶融剪断を行い、感染型プリオン蛋白のペプチド結合を破壊して低分子化することを特徴とする請求項５の有害蛋白の非活性化方法。
【請求項７】
２軸エクストルーダーのバレル内に肉骨粉を導入し、バレル内おけるスクリューの回転作用により、肉骨粉原料に対する溶融剪断を繰り返すことで、感染型プリオン蛋白のペプチド結合を破壊して低分子化することを特徴とする請求項６の有害蛋白の非活性化方法。
【請求項８】
請求項１ないし５のいずれかの方法により非活性化処理されたことを特徴とする食材または飼料材。
【請求項９】
請求項６または７の方法により非活性化処理されたことを特徴とする肉骨粉原料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この出願の発明は、アレルゲン蛋白や感染型プリオン蛋白等の有害蛋白の非活性化方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術と発明の課題】
従来より、アレルゲン蛋白等として人に有害な蛋白を非活性化（無害化）することが重要な課題になっており、これまでにも酵素分解法をはじめとして様々な試みがなされている。
【０００３】
しかしながら、有害蛋白のある種のものは耐熱性が高く、しかも酵素処理によっては非活性化するのが難しいという実情がある。
【０００４】
たとえば最近では、感染型プリオン蛋白の問題がある。
【０００５】
価格が安く栄養価の高い肉骨紛は、これまで、食品添加物あるいは飼料添加物として、広く利用されてきた。しかし、いわゆる狂牛病問題が発生して以来、狂牛病に汚染されている可能性がある牛骨粉は焼却処分されており、焼却処分のためのコストが膨大となることが問題となっている。
【０００６】
狂牛病は、１９８６年にイギリスで最初に確認されたが、それ以前から、羊に発症することが知られていたスクラピー病と同様の症状を見せる牛が、散発的に観察されていた。これらの牛は、物音や触覚刺激に敏感になり、また、攻撃的な異常行動を呈し、最終的には、体が震えて立てなくなるという症状が見られたため、屠殺されていた。これらの症状が見られた牛の脳組織は海綿状となり、また、正常細胞の増殖の過程で異常細胞に移行し、やがて異常細胞が多くなり、神経細胞の脱落が観察され、羊のスクラピー病やクロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）の病理所見に類似していることがわかり、狂牛病という病名がつけられた。
【０００７】
１９８６年以後、狂牛病の牛の数は増加し、１９９２〜１９９３年には、年間３万７千匹が発病していることが報告されている。１９８７年に出生した牛が最も狂牛病の発症率が高く、このときに羊のスクラピー病が牛に感染した可能性が指摘されたため、イギリス政府は、１９８８年７月に、牛や羊の内臓を肉骨粉（ＭＢＭ：Ｍｅａｔ　ａｎｄ　Ｂｏｎｅ　Ｍｅａｌ）に加工することを禁止した。しかし、既に市場に出回ってしまった肉骨粉は使用されたために、１９８８年の加工禁止後に出生した牛の中にも、狂牛病を発症する牛が現れている。
【０００８】
その後の疫学的研究により、新型のＣＪＤとして、狂牛病の人への感染が確実となり、世界的な大問題となった（Ａｍ　Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ：１９９７．１４５：９５９−９６９）。
【０００９】
イギリスでは、従来から羊や牛の屑肉や内臓を脱脂した後、粉末にして、家畜の飼料に使用していた。具体的には、屑肉や内臓を有機溶媒（ジクロロメタン）で加圧加熱し、脂肪分を抽出した後、残滓を粉砕して肉骨粉に加工していた。しかし、１９７０年代の２度にわたる石油ショックによりジクロロメタンの価格が上昇したため、製造コストの削減を目的として、また、ジクロロメタンの発癌性がＡ２クラスにランクされたことを受けて、脂肪分抽出にジクロロメタンは使用されなくなった。ジクロロメタンを使用する替わりに熱水抽出法が採用され、脂肪を抽出する際の温度が１２０℃から８０℃に低減されたことが、狂牛病の発現に至る原因と考えられている。
【００１０】
近年、日本で消費される畜肉量は急伸する傾向にあり、必然的に国内で産出される肉骨粉の生産量も急増している。食品および飼料添加物として、その利用分野は多岐に渡っているが、狂牛病の原因である感染型プリオン蛋白は加熱にも強い耐性を持つために、除去を行うことが技術的に困難であり、絶対安全な肉骨粉製造技術の開発が求められている。
【００１１】
そこで、この出願の発明は、以上の通りの事情に鑑みてなされたものであり、アレルゲン蛋白をはじめとして従来よりその非活性化（無害化）が難しく、また最近大きな問題となっている感染型プリオン蛋白等の有害蛋白を完全に非活性化することのできる、新しい技術手段を提供することを課題としている。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
上記の課題を解決するものとして、この出願の発明においては、第１に、有害蛋白の非活性化方法であって、溶融剪断により有害蛋白のペプチド結合を破壊して低分子化することを特徴とする有害蛋白の非活性化方法を提供する。
【００１３】
第２には、有害蛋白含有物を溶融剪断して含有されている有害蛋白を非活性化することを特徴とする有害蛋白の非活性化方法を提供する。
【００１４】
また、この出願の発明は、第３には、上記方法において、エクストルーダーのバレル内スクリューの回転作用により溶融剪断を行う有害蛋白の非活性化方法を提供し、第４には、有害蛋白がアレルゲン蛋白であることを特徴とする有害蛋白の非活性化方法を、第５には、有害蛋白が感染型プリオン蛋白であることを特徴とする有害蛋白の非活性化方法を提供する。
【００１５】
そして、この出願の発明は、第６には、感染型プリオン蛋白含有の肉骨粉原料に対して溶融剪断を行い、感染型プリオン蛋白のペプチド結合を破壊して低分子化することを特徴とする有害蛋白の非活性化方法を提供する。
【００１６】
第７には、２軸エクストルーダーのバレル内に肉骨粉原料を導入し、バレル内おけるスクリューの回転作用により、肉骨粉原料に対する溶融剪断を繰り返すことで、感染型プリオン蛋白のペプチド結合を破壊して低分子化することを特徴とする有害蛋白の非活性化方法を提供する。
【００１７】
さらにこの出願の発明は、第８には、上記いずれかの方法により非活性化処理されたことを特徴とする食材または飼料材を提供し、第９には、非活性化処理されたことを特徴とする肉骨粉原料を提供する。
【００１８】
【発明の実施の形態】
この出願の発明は、上記のとおりの特徴をもつものであるが、以下に、その実施の形態について説明する。
【００１９】
この出願の発明が対象する有害蛋白はその種類は各種のものであってよく、たとえば代表的には、ソバ、小麦、米等の食材に含有されているアレルゲン蛋白、そして肉骨粉飼料において問題となっている感染型プリオン蛋白等が例示される。これら有害蛋白の非活性を実現するこの出願の発明は、特殊で高価な酵素や、超高温等の特殊設備を必要とすることなしに、簡便に、大量の処理を可能として、非活性化（無害化）された食材や飼料材を低コストで得ることを可能としている。
【００２０】
非活性化のための方法の特徴は、溶融剪断によって有害蛋白のペプチド結合を破壊して低分子化することにある。このような溶融剪断のための手段は各種であってよいが、この出願の発明においては、その好適な一つの手段として、エクストルーダーのバレル内スクリューの回転作用により溶融剪断を行う方法を具体的に提供する。なかでも、２軸エクストルーダーによる方法が推奨されることになる。
【００２１】
このような特徴のあるこの出願の発明では、たとえば感染型プリオン蛋白の非活性化においては、肉骨粉の原料に対して溶融剪断を繰り返すことで、感染型プリオン蛋白のペプチド結合を破壊して低分子化することで、感染型プリオン蛋白の非活性化、すなわち無毒化を行う。
【００２２】
正常型のプリオン蛋白は、脳や神経細胞膜表面に存在し、分子量３．３〜３．５万の糖タンパク質である。粗面小胞体で生産されたプリオン前駆タンパク質は、コルジ体で糖が付加されることでプリオン蛋白となり、細胞膜表面へと運搬される。細胞膜におけるプリオン蛋白の機能は、現在も不明のままである。正常細胞においては、エンドイトーシスによりプリオン蛋白が細胞内に再び取り込まれた後に、加水分解される。一方、感染型プリオン蛋白は、正常型プリオン蛋白に側鎖が付加されαへリックスがβシートに変性したために、細胞内に取り込まれた後、完全には加水分解されない。このため、分子量２７〜３０ｋＤの感染型プリオン蛋白として脳内の細胞内に蓄積される（Ｌａｉｔ：１９９６．７６：５７１−５７８）。
【００２３】
そこで、この出願の発明では、感染型プリオン蛋白に対して溶融状態で剪断作用を加えることにより、まず、感染型プリオン蛋白の糖鎖を切断する。さらに、糖鎖が切断されて非活性型となった感染型プリオン蛋白に対して剪断を繰り返すことで、ペプチド結合の一部をも破壊して低分子化がなされる。以上のメカニズムにより、感染型プリオン蛋白の無害化がなされる。
【００２４】
感染型プリオン蛋白に対して剪断作用を付加するための好適で具体的な手段として、前記の２軸エクストルーダーが挙げられる。まず、２軸エクストルーダーのバレル内に肉骨粉原料を導入し、バレル内おけるスクリューの回転作用により、肉骨粉原料に対する溶融剪断を繰り返すことで、感染型プリオン蛋白の糖鎖やペプチド結合を破壊して低分子化することが可能となる。
【００２５】
まず、２軸エクストルーダーのバレル内に導入された肉骨粉原料に対するスクリューの回転作用により、肉骨粉原料に対して５０〜１００ＭＰａ程度の圧力が付加され、肉骨粉原料は圧密される。この状態でスクリュー回転による剪断作用を付加すると、水は滑剤として作用し、バレル内の摩擦力に関係することから、加水量が肉骨粉原料の内部摩擦に影響を与える要素となる。加水量は、２軸エクストルーダーのバレル形状やスクリュー形状、スクリュー回転による付加加重、または、バレル内の温度など、様々な要素を元に適宜に決定されるものであるが、十分な剪断作用を得るためにできるだけ少なく設定されることが好ましい。２軸エクストルーダーのバレル形状やスクリュー形状、スクリュー回転による付加加重に対して、最適な加水量およびバレル内の温度が選択されると、肉骨粉原料は溶融状態となる。この溶融状態の肉骨粉原料を、ノズルから噴射すると水分がノズルから放出されると同時に大気圧に晒されるため、加熱水蒸気に変化し、溶融した肉骨粉原料は断熱膨張を強いられ、パフ化された肉骨粉製品となる。
【００２６】
溶融状態にある肉骨粉原料は、バレル内の２本のスクリューが常時噛み合っている部分（スクリュー寸法と処理量で相違する、間隔１〜５ｍｍ）を高速で通過する際に、チャンネル内において、片方のスクリューによる半径方向が大きい方向からもう一方のスクリューによる半径方向の小さい方向へ動くか、あるいは、その逆の方向へ動く。溶融状態にある肉骨粉原料が、２本のスクリューが常時噛み合っている部分を、捏加されながら通過する際に、極めて強い剪断作用を受けることになる。また、バレル内壁やスクリュー表面に強く圧迫されながら、大きな剪断作用を受ける。さらに、チャンネル内における横断流やフライト越えを含む横断流を伴いながら、溶融状態にある肉骨粉原料自身も内部摩擦を受けることにより、感染型プリオン蛋白におけるグルコシド結合は切断される。また、分子量大きいタンパク質分子の一部も切断される。このように、感染型プリオン蛋白に対して溶融剪断を繰り返すことにより、感染型プリオン蛋白を短い時間で非活性化（無害化）することが可能となる。
【００２７】
もちろん、肉骨粉原料に対する溶融剪断を加えるための手段は、上記の２軸エクストルーダーに限定されるものではなく、肉骨粉原料に対して加圧および加熱を行い、さらには、剪断力を機械的に発生させる機構を備えた装置全般を適用することが可能である。このとき、装置内に導入される肉骨粉原料が、溶融状態になるように、水分量、温度、および、圧力が設定される。また、装置内に加圧する圧力は、１００ＭＰａ以上に設定され、さらには、最低１００回以上の剪断作用を付加することが好ましい。
【００２８】
そして、上記のとおり、感染型プリオン蛋白の無害化を行う上では、高温高圧下での強い剪断作用が必須であり、好適には１００ＭＰａ以上の加圧が行われる。この出願の発明者らが実施している研究成果により、１００ＭＰａ以上の加圧により、多くの化学反応が抑制されることが明らかとなっており、この出願の発明である感染型プリオン蛋白の非活性化方法における発明実施のための条件下においても、各種の化学反応が抑制されているものと考えられる。すなわち、１００ＭＰａ以上の圧力下において、１２時間、加圧加熱を継続しても、カロチンなどの栄養素は全く分解されず、また、メイラード反応、澱粉の糊化、および、植物細胞壁からのペクチン溶出も抑制される。このような抑制効果は、感染型プリオン蛋白の非活性における特有のものでなく、各種の有害蛋白を対象としたこの出願の発明の溶融剪断の方法の大きな特徴の一つである。これによって、多くの場合多成分混合物としてある食材や飼料材の他成分を変質、破壊することを抑えつつ、有害蛋白の無害化が実現されることになる。
【００２９】
そして、最新式のエクストルーダーは、高温での短時間処理を想定して設計されていることから、たとえばバレル内圧を１００ＭＰａ以上に設定することは容易である。したがって、この出願の発明の有害蛋白の非活性化（無害化）方法は、現状の技術を応用することで、簡便に実施可能であり、早期の実用化が期待される。さらには、上記の通り、各種の化学反応を抑制することにより、たとえば牛骨粉原料が持つ栄養価をほとんど損なうことも無く、むしろ、無菌化が進行することから安全性が高く、なおかつ、粒子内部までパフ化された栄養吸収性の優れた製品の製造を実現するものと考えられる。
【００３０】
以上の説明においては主として肉骨粉材料に含まれる感染型プリオン蛋白を対象とした場合を例としているが、この出願の発明は、前記のとおりの各種の有害蛋白をその対象としている。そして、対象物に対応して、溶融剪断のための操作諸条件が具体的に選択されることは言うまでもない。
【００３１】
この出願の発明は、以上の特徴を持つものであるが、以下に実施例を示し、さらに具体的に説明する。
【００３２】
【実施例】
この出願の発明の有効性を検討するためにソバアレルゲンを対象としたモデル実験を行った。現時点においては、感染型プリオン蛋白の処理に関しては危険性が伴うが、ソバアレルゲンは、感染型プリオン蛋白と近い構造を持つ糖タンパク質であり、また、感染型プリオン蛋白よりも分子サイズが小さい上に、熱耐性や剪断破壊耐性が高く、感染型プリオン蛋白と比較してソバアレルゲンのグリコシド結合の破壊が困難であることから、ソバアレルゲンを対象としたモデル実験においてソバアレルゲンの非活性化が実現すれば、感染型プリオン蛋白の非活性化（無害化）も容易に実現可能であると考えられる。
［材料］
材料として宮崎県都城市で収穫されたソバの分離精製された胚乳部を石臼で粉砕したソバ粉を用いた。一般分析値を、表１に示す。
【００３３】
【表１】
2004083522.tif 000002
【００３４】
［ソバアレルゲンの分離法］
ソバアレルゲンの分離は、中村らの方法に従って実施した。試料は、冷アセトンで脱脂した後に、乾燥した。脱イオン水５００ｍｌを乾燥試料に加えた。抽出は、懸濁液を温度４℃で２４時間行った。抽出液を遠心分離（１００００ｇ、２０分）して、上澄み液を得た。粗製アレルゲン物質は、上澄み液に対して、−２０℃に冷却した等量のエタノールを緩慢に付加して凝集した沈殿を、遠心分離（１００００ｇ、２０ｍｉｎ）して回収した。回収物は、脱イオン水に溶解後、０．０２ＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．６）、温度５℃で、２４時間試料透析した。透析の終了後、凍結乾燥して粗アレルゲン物質とした。
【００３５】
粗アレルゲン物質は、０．０２ｍ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液で透析した試料を同一緩衝液で平衡化した。その試料をＤＥＡＥセルロースカラム（ＤＥ５２，Ｗｈａｔｍａｎ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ　Ｌｔｄ．、φ１８×５００ｍｍ）に吸着後、同一緩衝液で洗浄した。試料の溶離は、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．６）緩衝液を用いて、０．１５Ｍ　ＮａＣｌの濃度勾配法を用いて精製した。
［ソバ抗体］
分離精製したソバアレルゲンをウサギ腹腔に注入し、３ヶ月間、飼育後、抗体生成状態をチェックし、検査に合格したウサギを屠殺し、抗体を分離した。この製法による調整は、岩城ガラス株式会社バイオ事業部に依頼した。
［細管式高温高圧粘度計（溶融剪断処理用装置）］
バレル内のスクリューの動きを詳細に把握するために、その剪断力と剪断回数のシミュレーションとして、細管式高温高圧粘度計を試作した（株式会社新明和製作所製）。供試したキャピラリーの内径は２φ、長さは２０ｍｍであり、ソバアレルゲンの破壊に必要なスクリューフライト数を予測した。
【００３６】
剪断試験は、最大剪断速度γ′≒３０００ｓｅｃ−１にて行った。測定部温度は、１５０〜２００℃に設定した。また、細管式高温高圧粘度計の駆動圧力が低かったために、水分量が１５％以下の試料を処理できなかったことから、水分量を２０〜３０％に設定して試験を実施した。
［２軸エクストルーダー］
２軸エクストルーダーＫＥＩ４５型（株式会社幸和工業製）を用い、図１に示すように、３組のＲＲＬ型スクリューを配置した。スクリュー回転数１００〜２５０ｒｐｍ、バレル温度１００〜２００℃、フィード量４５ｋｇ／ｈｒ、および、加水量１．０〜９．０ｋｇ／ｈｒに設定して運転した。
［分子量分布測定］
試料や処理製品の分子量は、ゲル濾過法（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ　２００　ｓｕｐｅｒｆｉｎｅ、１１×６００ｍｍ　Ｃｏｌｕｍｎ）を用い、０．０５Ｍ　Ｃａｒｂｏｎａｔｅ　Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ９．６）、８ｍｌ／ｈｒのフローレート、かつ、１．５ｍｌ／ｔｕｂｅずつの分画により、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いて測定した。
［結果１：細管式高温高圧粘度計による溶融剪断処理］
２軸エクストルーダーにおけるバレル内のスクリューの作動と攪拌および剪断作用は現象として複雑であり、解明が困難であると考え、定量化が容易な細管式高温高圧粘度計を用いて剪断の効果を解析した。まず、剪断の効果を検討するために、加熱温度を１５０℃、１７０℃、および、１８０℃の３通りに設定し、それぞれについて剪断回数を最大１００回まで繰り返したときのＥＬＩＳＡ値を、図２に示す。このときの剪断速度γ′は、３．０×１０３／ｓに設定した。図２より、剪断回数の増加に伴い、ソバアレルゲンが減少傾向にあることがわかる。
【００３７】
ソバアレルゲン分子の切断に必要な最小剪断速度（最小吐出流量）の測定後における剪断速度（吐出流量）とアレルゲン量との関係について、図３に示す。剪断速度（吐出流量）が０．５〜０．７ｃｍ３／ｓｅｃ−１のときに、ＥＬＩＳＡ値は最大となり、それ以降で減少し、吐出流量が１．０ｃｍ３／ｓｅｃ−１のときにｉｎｔａｃｔの値に近づいた。加熱によるアレルゲンタンパク質の表面疎水性が増加し、より多くのアレルゲンがＥＬＩＳＡプレートと疎水結合をしたためにＥＬＩＳＡ値が増大したものと考えられる。アレルゲンの破壊に必要な最小剪断速度（最小吐出流量）は、ＥＬＩＳＡ値の低下が開始される流量に相当する約０．７ｃｍ３／ｓｅｃ−１であり、そのときの剪断速度は約１２００ｓｅｃ−１であった。アレルゲン物質の剪断破壊が、ＥＬＩＳＡ値の低下から実証できたものと考えられる。
［結果２：ソバアレルゲンの破壊］
表２に、２軸エクストルーダーによる剪断回数と、指標アレルゲンとして用いたソバアレルゲンが破壊されたことを示すＥＬＩＳＡ値との関係を示す。使用した２軸エクストルーダーのＬ／Ｄは１２であり、この場合、１回の処理でＥＬＩＳＡ値は初期値の約１／２に減少した。剪断回数の増加に伴い、ＥＬＩＳＡ値の減少が見られ、ソバアレルゲンの破壊が進行していることが確認できる。Ｌ／Ｄが１２以上のバレルの長い２軸エクストルーダーを用いれば、試料の受ける剪断回数は多くなることから、より良好な結果が得られるものと考えられる。
【００３８】
【表２】
2004083522.tif 000003
【００３９】
２軸エクストルーダーの操作条件は、表３に示したとおりであり、熱による処理製品の色調変化はほとんど見られなかった。
【００４０】
【表３】
2004083522.tif 000004
【００４１】
［結果３：加熱温度］
ソバアレルゲンの分子量は８ｋＤａから約５０ｋＤａ程度のものが知られている。中でも、８ｋＤａのソバアレルゲンは、分子量が小さく、熱にも耐性を持つため、物理的な剪断作用に対しても高い耐性を持つと考えられる。ソバアレルゲンは、１５０℃の加熱に対しては熱分解を全く示さなかったが、１７０〜１８０℃へ加熱するとともに分解速度が上昇する。また、１５０℃以下の加熱においてＥＬＩＳＡ値が増加したが、これは加熱に伴うアレルゲン物質の増加を示すものではなく、加熱操作により試料の表面疎水性が増加することに起因して、測定プレート表面への試料タンパク質の吸着量が増加したためである。
［結果４：水分の影響］
食品素材がバレルのような密閉された系内において、スクリューの強制的な圧送を受けるときに、試料水分は滑剤として作用する。したがって、試料水分の増加はバレル内で発生する２種類の摩擦力を低下させ、すなわち、剪断効果とバレル内温度の低下につながる。２種類の摩擦力とは、試料とバレル内壁やスクリュー表面との間に発生する摩擦力、および、試料がバレル内で強制変形を受けるときに発生する試料自体の内部摩擦力である。
【００４２】
試料水分量がアレルゲン破壊に及ぼす影響に関して、ＥＬＩＳＡ値の変化を測定した結果を図４に示す。試料水分量の減少は、明らかに残存アレルゲン量の減少をもたらしており、これは、滑剤としての水分が少なくなることで、バレル内の剪断効果と発熱作用が上昇するためである。
［結果５：ゲル濾過］
ソバアレルゲンの分子量分布に及ぼす剪断作用の影響について図５に示す。ゲル濾過上の溶出比率の割合に関して、１８０℃の処理で僅かであるが低分子部分にシフトしていることがわかる。
【００４３】
この変化量は僅かではあるが、糖鎖の切断でアレルゲンが非活性化されることが知られているため、溶融剪断と残存活性との関係についてＥＬＩＳＡ法により求めた。その結果を図６に示す。剪断作用は、分子量４４ｋＤａ以上の画分を低分子化し、また、その部分の占める割合を減少させる働きを持つことがわかった。高分子部分の低下について、分子量１．３５ｋＤａおよびそれ以下の低分子画分が逐次増加した。剪断作用によるソバアレルゲン物質の破壊は、処理試料のＥＬＩＳＡ値の低下から立証され、ソバアレルゲンの低分子化は、１７０℃よりも１８０℃の加熱処理を行った場合において大きく進行するものと考えられた。未処理試料においては、ＥＬＩＳＡ値と同様、分子量も大きな値を示す。しかし、剪断処理後のソバアレルゲンは、確実に低分子化され、そのＥＬＩＳＡ値も小さな値を示した。
【００４４】
次に、ソバアレルゲンの熱分解と剪断破壊の効果について検討した結果について、図７に示す。左側の図は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる結果であり、また、右側の図は、イムノプロッティング法による結果である。１８０℃の加熱処理により、イムノプロッティングにおいて反応する特定のバンドが消失し、マウスＩｇＥ抗体と反応する高分子部分が低分子側に移行することがわかった。全体的に、剪断処理は、マウスＩｇＥ抗体と結合する蛋白質量を減少させ、ソバアレルゲン性物質の破壊に効果的であることがわかった。
【００４５】
【発明の効果】
この出願の発明によって、以上詳しく説明したとおり、感染型プリオン蛋白をはじめとする有害蛋白を完全に非活性化する方法が提供される。
【００４６】
感染型プリオン蛋白に起因するプリオン病は、人への感染が認められていることから大きな社会問題となっており、この出願の発明である感染型プリオン蛋白の無害化方法により、安全な肉骨粉製品が製造可能となる。
【図面の簡単な説明】
【図１】この出願の発明の実施例において用いた２軸エクストルーダーの構成について示した概要図である。
【図２】この出願の発明の実施例において、剪断回数とＥＬＩＳＡ値との関係について示した図である。
【図３】この出願の発明の実施例において、剪断速度（吐出流量）とアレルゲン量との関係との関係について示した図である。
【図４】この出願の発明の実施例において、試料水分量とＥＬＩＳＡ値の変化との関係に示した図である。
【図５】この出願の発明の実施例において、ソバアレルゲンの分子量分布に及ぼす剪断作用の影響について示した図である。
【図６】この出願の発明の実施例において、溶融剪断と残存活性との関係をＥＬＩＳＡ法により求めた結果について示した図である。
【図７】この出願の発明の実施例において、ソバアレルゲンの熱分解と剪断破壊の効果について検討した結果について示した図である。
【図１】
2004083522.tif 000005
【図２】
2004083522.tif 000006
【図３】
2004083522.tif 000007
【図４】
2004083522.tif 000008
【図５】
2004083522.tif 000009
【図６】
2004083522.tif 000010
【図７】
2004083522.tif 000011
【手続補正書】
【提出日】平成14年10月8日(2002.10.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
【課題を解決するための手段】
上記の課題を解決するものとして、この出願の発明においては、第１に、有害蛋白の非活性化方法であって、溶融剪断により有害蛋白のペプチド結合および結合している糖鎖を破壊して低分子化することを特徴とする有害蛋白の非活性化方法を提供する。


【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
そして、この出願の発明は、第６には、感染型プリオン蛋白含有の肉骨粉原料に対して溶融剪断を行い、感染型プリオン蛋白のペプチド結合および結合している糖鎖を破壊して低分子化することを特徴とする有害蛋白の非活性化方法を提供する。


【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
第７には、２軸エクストルーダーのバレル内に肉骨粉原料を導入し、バレル内におけるスクリューの回転作用により、肉骨粉原料に対する溶融剪断を繰り返すことで、感染型プリオン蛋白のペプチド結合および結合している糖鎖を破壊して低分子化することを特徴とする有害蛋白の非活性化方法を提供する。