(57)【要約】【課題】  インプラント起因の疾患等を治療するための、また、組織へのインプラントまたは生体適合性表面の組込み過程を促進および増強するためのインテグリン阻害剤を提供する。【解決手段】  式Ｂ−Ｑ−Ｘ1の化合物およびその塩（式中、Ｂは生理活性があり、細胞接着を促進する分子であり、Ｑは存在しない、あるいはスペーサー有機分子であり、Ｘ1は、−Ｗ、−Ｖ−Ｗ、−Ｖ−［Ｖ−Ｗ2］2、および−Ｖ−［Ｖ−（Ｖ−Ｗ2）2］2からなる群から選択されるアンカー分子であり、Ｗは、【化１】2004359686.tif 000010であり、Ｖは、Ｌｙｓ、ＡｓｐまたはＧｌｕであり、ｍは、１、２または３であり、ｎは各場合において互いに独立に、０、１、２、３、４、５、６、７または８であり、ＹＹは、アミノまたはカルボキシル基である）。【選択図】  図１
2004359686.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物およびその塩。
Ｂ−Ｑ−Ｘ1    Ｉ
（上式で、
Ｂは、生理活性があり、細胞接着を促進する分子であり、
Ｑは、存在しないか、あるいはスペーサー有機分子であり、
Ｘ1は、
−Ｗ                                (i)
−Ｖ−Ｗ                            (ii)
−Ｖ−［Ｖ−Ｗ2］2                  (iii)、および
−Ｖ−［Ｖ−（Ｖ−Ｗ2）2］2        (iv)
からなる群から選択されるアンカー分子であり、
Ｗは、
【化１】
2004359686.tif 000007
であり、
Ｖは、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、
ｍは、１、２、または３であり、ｎは、各場合において互いに独立に、０、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、ＹＹは、アミノまたはカルボキシル基であり、基Ｂの遊離アミノ基は、スペーサー分子Ｑまたはアンカー分子Ｘ1の遊離カルボキシル基に、ペプチド様式で連結しているか、あるいは、ラジカルＱの遊離アミノ基は、ラジカルＸ1の遊離カルボキシル基と、ペプチド様式で連結している）。
【請求項２】
基Ｂが
シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｚ1）  (iv)、
【化２】
2004359686.tif 000008
および
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ    (vi)
Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ            (vii)
Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ                    (viii)
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ            (ix)
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ                    (x)
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ                            (xi)
からなる群から選択され、
上式で、Ｚ1は、各場合において互いに独立に、アミノ酸ラジカルあるいはジペプチドまたはトリペプチドラジカルであり、アミノ酸は、互いに独立に、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、ｈｏｍｏ−Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｏｒｎ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、およびＶａｌからなる群から選択され、
（ｖ）については、
Ｘは、Ｈ2Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−、Ｈｅｔ−ＮＨ−、Ｈ2Ｎ−Ｃ（＝ＮＨ）−、Ａ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−、またはＨｅｔ−であり、
Ｙは、−(ＣＨ2)n−、
【化３】
2004359686.tif 000009
、−（ＣＨ2）s−ＣＨ（Ｒ4）−（ＣＨ2）t−、または−（ＣＨ2）p−Ｈｅｔ1−（ＣＨ2）q−であり、
Ｚは、Ｎ−Ｒ2またはＣＨ−Ｒ2であり、
Ｒ2は、Ｈ、あるいは炭素原子が１〜４個のアルキルであり、
Ｒ3は、Ｈ、Ａｒ、Ｈｅｔ、またはＡであり、
Ｒ4は、Ｈ、Ａ、Ａｒ、ＯＨ、ＯＡ、ＯＡｒ、アリールアルキル、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＯ2、ＣＦ3、またはＯＣＦ3であり、
Ａは、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、あるいは、非置換の、またはＣＯＯＨもしくはＮＨ2によって置換された、炭素原子が１〜６個のアルキルであり、
Ａｒは、非置換の、あるいはＡ、ＯＨ、ＯＡ、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＣＮ、ＮＯ2、またはＨａｌによる一、二、もしくは三置換されたフェニルであり、かつ、Ａ、ＯＨ、ＯＡ、ＮＨ2、ＯＣＦ3、ＣＮ、ＮＯ2、またはＨａｌで一、二、もしくは三置換されたフェニルによって、非置換または置換ビフェニルをもたらすように置換されていてもよく、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩであり、
Ｈｅｔは、５〜１０員環をもつ、飽和した、あるいは部分的にまたは完全に不飽和の、単環式または二環式の複素環ラジカルであり、１〜３個のＮ原子および／または１個のＳもしくはＯ原子が存在してもよく、また、この複素環ラジカルは、ＣＮ、Ｈａｌ、ＯＨ、ＮＨ2、ＣＯＯＨ、ＯＡ、ＣＦ3、Ａ、ＮＯ2、Ａｒ、またはＯＣＦ3で一置換もしくは二置換されてもよく、
Ｈｅｔ1は、１〜４個のＮおよび／またはＳ原子を有する、５員または６員の芳香族複素環であり、非置換でも、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ａ、ＯＡ、またはＯＣＦ3による一置換もしくは二置換でもよく、
ｎは、４、５、または６であり、
ｍ、ｏ、ｐ、およびｑは、０、１、または２であり、
ｓおよびｔは、０、１、２、３、４、または５である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｑが、
［ＣＯ−（ＣＨ2）x−ＮＨ−］m                          (xii)
［ＣＯ−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2）y−ＮＨ−］m        (xiii)
［ＣＯ−（ＣＨ2）z−ＣＯ−］                            (xiv)
［ＮＨ−（ＣＨ2）z−ＮＨ−］                            (xv)
［ＣＯ−ＣＨ2−（ＯＣＨ2ＣＨ2）y−Ｏ−ＣＨ2−ＣＯ−］  (xvi)
［ＮＨ−ＣＨ2ＣＨ2−（ＯＣＨ2ＣＨ2）y−ＮＨ−］        (xvii)
およびそれらの組合せからなる群から選択され、
上式で、
ｍは、各場合において互いに独立に、１〜２０であり、
ｘは、１〜１２であり、
ｙは、１〜５０であり、
ｚは、１〜１２である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｑが、
［ＣＯ−（ＣＨ2）x−ＮＨ−］m                          (xii)
［ＣＯ−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2）y−ＮＨ−］m          (xiii)
［ＣＯ−（ＣＨ2）z−ＣＯ−］                            (xiv)
［ＮＨ−（ＣＨ2）z−ＮＨ−］                            (xv)
［ＣＯ−ＣＨ2−（ＯＣＨ2ＣＨ2）y−Ｏ−ＣＨ2−ＣＯ−］  (xvi)
［ＮＨ−ＣＨ2ＣＨ2−（ＯＣＨ2ＣＨ2）y−ＮＨ−］        (xvii)
およびそれらの組合せからなる群から選択され、
上式で、
ｍは、各場合において互いに独立に、１〜８であり、
ｘは、１〜５であり、
ｙは、１〜６であり、
ｚは、１〜６である、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５】
以下の請求項１に記載の式１の化合物。
ａ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］2−Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｂ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］2−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｃ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］3−Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｄ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］3−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｅ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］4−Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｆ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］4−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｇ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2）6−ＮＨ］2−Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｈ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2）6−ＮＨ］2−Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｉ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］2−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2］2））
ｊ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］3−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2］2））
ｋ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−ＣＨ2（Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2）6−ＮＨ］2−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2］2））
【請求項６】
インプラント起因の障害、欠損および炎症の治療、ならびに骨粗鬆症などの溶骨性疾患、血栓症、心筋梗塞、および動脈硬化症の治療、ならびにインプラントまたは生体適合性表面の、組織への組込み過程の促進および増強のための医薬品としての、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
支持体マトリックスと、このマトリックスを取り囲む、生理活性で細胞接着を促進する分子の層とからなり、取り囲むこの層が、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物から形成され、支持体マトリックスとこの化合物との間にイオン結合または吸着結合が存在することを特徴とする、ヒトおよび動物の器官に適したインプラント。
【請求項８】
支持体マトリックスおよび／またはその表面が、金属または金属酸化物であることを特徴とする請求項７に記載のインプラント。
【請求項９】
支持体マトリックスおよび／またはその表面が、骨または歯の置換材料であることを特徴とする請求項７に記載のインプラント。
【請求項１０】
骨または歯の置換材料が、リン酸カルシウム混合物からなることを特徴とする、請求項９に記載のインプラント。
【請求項１１】
保護基を備えていてもよい生理活性分子Ｂと、保護基を備えたスペーサー−アンカー分子（Ｑ−Ｘ1）またはアンカー分子（Ｘ1）とが、ペプチド様式で互いに連結し、その後保護基が取り除かれることを特徴とし、かつ／または式Ｉの塩基性または酸性化合物が、酸または塩基を用いた処理によってその塩に転換されることを特徴とする、請求項１に記載の化合物およびその塩を調製するための方法。
【請求項１２】
インプラント起因の障害、欠損、および炎症の治療、ならびに骨粗鬆症などの溶骨性疾患、血栓症、心筋梗塞、および動脈硬化症の治療用、ならびにインプラントまたは生体適合性表面の、組織への組込み過程の促進および増強のための医薬品を調製するための、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
イオン結合または吸着結合によって、ヒトおよび動物の器官用のインプラントを被覆するための、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式Ｉの化合物およびその塩に関する。
【０００２】
Ｂ−Ｑ−Ｘ1      Ｉ
上式で、
Ｂは、生理活性があり、細胞接着を促進する分子であり、
Ｑは、存在しない、あるいはスペーサー有機分子であり、
Ｘ1は、
−Ｗ                                  (i)
−Ｖ−Ｗ                              (ii)
−Ｖ−［Ｖ−Ｗ2］2                    (iii)、および
−Ｖ−［Ｖ−（Ｖ−Ｗ2）2］2          (iv)
からなる群から選択されるアンカー分子であり、
Ｗは、
【０００３】
【化１】
2004359686.tif 000003
【０００４】
であり、
Ｖは、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕであり、
ｍは、１、２、または３であり、ｎは各場合において互いに独立に、０、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、ＹＹは、アミノまたはカルボキシル基であり、基Ｂの遊離アミノ基は、スペーサー分子Ｑまたはアンカー分子Ｘ1の遊離カルボキシル基に、ペプチド様式で連結している、あるいは、ラジカルＱの遊離アミノ基は、ラジカルＸ1の遊離カルボキシル基と、ペプチド様式で連結している。
【背景技術】
【０００５】
類似の化合物は、開示されている(例えば特許文献１〜４参照。)。
【０００６】
本発明は、価値ある特性を有する新規化合物、特に薬品の調製のために使用できる化合物を見出すことを目的とする。
【０００７】
式Ｉの化合物およびその塩が、耐性がよいと同時に、非常に価値ある薬理学的特性を有することが判明した。特に、これらは、具体的にはαVβ3またはαVβ5インテグリン受容体の、リガンドとの相互作用、例えばフィブリノゲンのβ3インテグリン受容体への結合を阻害するインテグリン阻害剤として作用する。これらの化合物は、インテグリンαVβ3、αVβ5、αIIbβ3、ならびにαVβ1、αVβ6、およびαVβ8の場合に特別な有効性を示す。この効果は、例えば、非特許文献１に記載されている方法によって実証することができる。
【０００８】
血管新生の発生が、血管のインテグリンと細胞外マトリックスタンパク質との間の相互作用に依存することは、例えば非特許文献２に記載されている。こうした相互作用を阻害し、それによって環状ペプチドによる新生血管細胞のアポトーシス(プログラムされた細胞死)を開始できる可能性が、例えば非特許文献３に記載されている。
【０００９】
インテグリン受容体とリガンドの相互作用、例えばフィブリノゲンのフィブリノゲン受容体(糖タンパク質IIb／IIIa)との相互作用をブロックする式Iの化合物は、GPIIb／IIIaアンタゴニストとして、転移による腫瘍細胞の広がりを予防する。このことは、次の観察によって確認されている。
【００１０】
局所腫瘍から血管系への腫瘍細胞の広がりは、腫瘍細胞の血小板との相互作用を介する微小凝集塊(微小血栓)形成を介して起こる。腫瘍細胞は、微小凝集塊中で保護されることによって覆い隠され、免疫系の細胞に認識されない。
【００１１】
微小凝集塊は血管壁に付着可能であり、組織への腫瘍細胞のさらなる侵入が促進される。微小血栓の形成は、活性化した血小板上のフィブリノゲン受容体に結合しているフィブリノゲンによって仲介されるので、GPIIa／IIIbアンタゴニストを、有効な転移阻害因子とみなすことができる。
【００１２】
ホスホン酸ラジカルは、例えば、酸化物を有するインプラントの生体適合性表面、例えば、金属表面(例としてチタンや、ＴｉＡｌ6Ｖ4などのチタン合金)、あるいは陽イオンを含有する表面、例えば非晶質もしくは焼結リン酸カルシウム(例としてヒドロキシアパタイト、骨、歯)またはリン酸カルシウムセメント(例としてBiocement D)などの上に、ペプチドを、イオン結合あるいは吸着結合させるのに役立つ。
【特許文献１】独国特許出願公開第１００４０１０５号明細書
【特許文献２】独国特許出願公開第１９９３２７９６号明細書
【特許文献３】独国特許出願公開第１９７５５８００号明細書
【特許文献４】独国特許出願公開第１９８３１７１０号明細書
【非特許文献１】J.W.Simth, et al., J. Biol. Chem. 265, 12267-12271(1991)
【非特許文献２】P.C.Brooks，R.A.Clark, and D.A.Cheresh, Science 264, 569-71(1994)
【非特許文献３】P.C.Brooks、A.M.Montgomery、M.Rosenfeld、R.A.Reisfeld、T.-Hu、G.Klier、and D.A.Cheresh, Cell 79, 1157〜64(1994年)
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
したがって、本発明は、詳細には、ラジカルＸ1の官能基を介して生体適合性表面にイオン結合または吸着結合させるための式Iの化合物に関する。
【００１４】
本発明によるペプチドは、生体材料を被覆し、該当する生体材料の組織組込みの実施を各場合に意図している細胞種の接着を主に刺激することによって、生体材料、特にヒトおよび動物の器官用のインプラントの生体機能化(biofunctionalisation)を容易にする。こうした被覆を使用する目的は、体内への導入後の長期安定性が向上した様々な生体材料／インプラントの、促進かつ増強された組込みを実現することである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明によるペプチドは、インテグリンに選択的に結合する。これらのペプチドは、例えばインプラントなどの生体適合性表面に固定された後、インテグリンを担った細胞の接着を刺激する。その表面への化合物の被覆後、天然の組織に埋め込んだ後にインプラントの組込みを実行することが意図される細胞種は、選択的に刺激され、結合できるようになる。すなわち、例えば、骨芽細胞、破骨細胞、および内皮細胞は、αvインテグリンを担った細胞種である。
【００１６】
したがって、本発明は、インプラントに対する細胞の選択的な濃縮のための、インテグリン阻害剤としての式Iの化合物に関する。
【００１７】
式Iの化合物は、生体適合性表面に固着させた後、ヒト用および動物用医薬の薬剤活性成分として、特にインテグリン阻害剤として、例えば生体材料およびインプラントの組込みの不十分や遅れ等のインプラント起因の疾患、欠損、および炎症、インプラント起因の血栓症、骨および歯の欠損、ならびに骨粗鬆症などの溶骨性疾患、血栓症、心筋梗塞、および動脈硬化症などを治療するために、また、創傷治癒の際に治癒過程を助けるために、また、インプラントまたは生体適合性表面の、組織への組込み過程の促進および増強のために、使用することができる。
【００１８】
式Iの化合物は、生体材料、インプラント、カテーテル、または心臓ペースメーカーを使用する手術の際、抗菌活性をもつ物質として使用することができる。この化合物は、この場合防腐作用をもつ。抗菌活性の効力は、「Infection and Immunity，2851〜2855」(1988年)で、P. Valentin-Weigund他に記載の方法によって実証することができる。
【００１９】
したがって、本発明は、インプラント起因の疾患、欠損、および炎症の治療、ならびに骨粗鬆症などの溶骨性疾患、血栓症、心筋梗塞、および動脈硬化症の治療のための、また、インプラントまたは生体適合性表面の組織への組込み過程の促進および増強のための、インテグリン阻害剤としての式Ｉの化合物に関する。
【００２０】
さらに、本発明は、インプラント起因の疾患、欠損、および炎症の治療、ならびに骨粗鬆症などの溶骨性疾患、血栓症、心筋梗塞、および動脈硬化症の治療薬の調製のための、また、インプラントまたは生体適合性表面の組織への組込み過程の促進および増強のための式Ｉの化合物の使用に関する。
【００２１】
リン酸アンカーを保持する、該当するペプチドは、表面に酸化物を含有する支持体、例えば、インプラント、アフィニティークロマトグラフまたはマイクロタイタープレートなどに、あるいは陽イオンを含有する表面、例えば、非晶質もしくは焼結リン酸カルシウム(例としてヒドロキシアパタイト、骨、歯)、またはリン酸カルシウムセメント(例としてBiocement D)などの上に、イオン結合することができる。
【００２２】
本発明はまた、イオン結合または吸着結合によって、ヒトおよび動物の器官用のインプラントを被覆するための式Ｉの化合物の使用に関する。
【００２３】
以上および以下に示すアミノ酸ラジカルの略語は、次のようなアミノ酸ラジカルを表す。
Ａｂｕ  ４−アミノ酪酸
Ａｈａ  ６−アミノヘキサン酸、６−アミノカプロン酸
Ａｌａ  アラニン
Ａｓｎ  アスパラギン
Ａｓｐ  アスパラギン酸
Ａｒｇ  アルギニン
Ｃｙｓ  システイン
Ｄａｂ  ２，４−ジアミノ酪酸
Ｄａｐ  ２，３−ジアミノプロピオン酸
Ｇｌｎ  グルタミン
Ｇｌｐ  ピログルタミン酸
Ｇｌｕ  グルタミン酸
Ｇｌｙ  グリシン
Ｈｉｓ  ヒスチジン
ｈｏｍｏ−Ｐｈｅ  ホモ−フェニルアラニン
Ｉｌｅ  イソロイシン
Ｌｅｕ  ロイシン
Ｌｙｓ  リジン
Ｍｅｔ  メチオニン
Ｎｌｅ  ノルロイシン
Ｏｒｎ  オルニチン
Ｐｈｅ  フェニルアラニン
Ｐｈｇ  フェニルグリシン
４−Ｈａｌ−Ｐｈｅ  ４−ハロフェニルアラニン
Ｐｒｏ  プロリン
Ｓｅｒ  セリン
Ｔｈｒ  スレオニン
Ｔｒｐ  トリプトファン
Ｔｙｒ  チロシン
Ｖａｌ  バリン。
【００２４】
さらに、次の略語を以下で使用する。
Ａｃ  アセチル
ＢＯＣ  ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＣＢＺまたはＺ  ベンジルオキシカルボニル
ＤＣＣＩ  ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＭＦ  ジメチルホルムアミド
ＥＤＣＩ  Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ’−（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
Ｅｔ  エチル
ＦＣＡ  フルオレセインカルボン酸
ＦＩＴＣ  イソチオシアン酸フルオレセイン
Ｆｍｏｃ  ９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＦＴＨ  フルオレセインチオウレア
ＨＯＢｔ  １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
Ｍｅ  メチル
ＭＢＨＡ  ４−メチルベンズヒドリルアミン
Ｍｔｒ  ４−メトキシ−２，３，６−トリメチルフェニルスルホニル
ＨＡＴＵ  ヘキサフルオロリン酸Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム
ＨＯＮＳｕ  Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
ＯｔＢｕ  ｔｅｒｔ−ブチルエステル
Ｏｃｔ  オクタノイル
ＯＭｅ  メチルエステル
ＯＥｔ  エチルエステル
ＰＯＡ  フェノキシアセチル
Ｐｂｆ  ペンタメチルベンゾフラニル
Ｐｍｃ  ２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル
Ｓａｌ  サリチロイル
Ｓｕ  スクシニル
ＴＩＰＳ  トリイソプロピルシラン
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸
ＴＭＳＢｒ  臭化トリメチルシリル
Ｔｒｔ  トリチル（トリフェニルメチル）。
【００２５】
前述のアミノ酸が、複数の鏡像異性の形で存在する場合、それらの全ての形およびその混合物(例えばＤＬ型)も、例えば式Iの化合物の構成要素として、上記および下記の化合物に含まれる。さらに、例えば式Iの化合物の構成要素としてのこれらのアミノ酸には、自ずと分かる対応する保護基を与えることができる。特に、例えば非ペプチド性αvβ3アンタゴニスト(例えば、R. Keenan他による「Abstr. Pap. 211th ACS National Meeting(New Orleans, USA)1996, MEDI 236」)の場合に行われるような、アルギニンの側鎖修飾も、例えばベンズイミダゾール誘導体などシクロペプチドの場合に、グアニジン基の代わりに使用できる。
【００２６】
本発明による化合物には、いわゆる「プロドラッグ誘導体」、すなわち、例えばアルキルもしくはアシル基、糖、またはオリゴペプチドで修飾された式Iの化合物も含まれる。これらは生物体内で迅速に切断されて、本発明による有効な化合物をもたらす。
【００２７】
本発明はさらに、支持体マトリックスと、このマトリックスを取り囲む、生理活性があり、細胞接着を促進する分子の層とからなり、取り囲むこの層が式Iの化合物から形成され、支持体マトリックスとこの化合物との間にイオン結合または吸着結合が存在する、ヒトおよび動物の器官に適したインプラントに関する。支持体マトリックスおよび／またはその表面は、金属または金属酸化物からなることが好ましい。支持体マトリックスおよび／またはその表面が、例えばリン酸カルシウム混合物など、骨または歯の置換材料からなることが特に好ましい。
【００２８】
本発明はさらに、保護基が与えられていてもよい生理活性のある分子Ｂと、保護基が与えられたスペーサー−アンカー分子(Ｑ−Ｘ1)またはアンカー分子(Ｘ1)とが、ペプチド様式で互いに連結し、その後保護基が取り除かれることを特徴とする、かつ／または式Ｉの塩基性または酸性化合物が、酸または塩基で処理することによってその塩の１つに転換されることを特徴とする、式Ｉの化合物およびその塩を調製する方法に関する。
【００２９】
上述および下述の、ラジカルＢ、Ｑ、およびＸ1は、別段の記述がない限り、式Iについて定義した通りの意味である。
【００３０】
Ｂが、シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｚ1）、
【００３１】
【化２】
2004359686.tif 000004
【００３２】
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ、
Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ、
Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ、
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ａｒｇ、
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｎ、または
Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ａｒｇラジカルであり、
上式で、Ｚ1は、各場合において互いに独立に、アミノ酸ラジカル、あるいはジペプチドまたはトリペプチドラジカルであり、アミノ酸は、互いに独立に、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、ｈｏｍｏ−Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｏｒｎ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｖａｌからなる群から選択されることが好ましい。
【００３３】
Ｑは存在しない、あるいはスペーサー有機分子である。Ｑは、[ＣＯ−(ＣＨ2)x−ＮＨ−]m、[ＣＯ−ＣＨ2(−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2)y−ＮＨ−]m、[ＣＯ−(ＣＨ2)z−ＣＯ−]、[ＮＨ−(ＣＨ2)z−ＮＨ−]、[ＣＯ−ＣＨ2−(ＯＣＨ2ＣＨ2)y−Ｏ−ＣＨ2−ＣＯ−]、または[ＮＨ−ＣＨ2ＣＨ2−(ＯＣＨ2ＣＨ2)y−ＮＨ−]ラジカル、およびそれらの組合せであることが好ましく、指数ｍ、ｘ、ｙおよびｚについては、各場面において互いに独立に、ｍは１〜20の間の値、ｘは１〜12の間の値、ｙは１〜50の間の値、ｚは1〜12の間の値が適用される。ｍについては１〜８の間の値、ｘについては１〜５の間の値、ｙおよびｚについては１〜６の間の値をとることができる前述の化合物が、特に好都合であると証明されている。
【００３４】
Ｘ1は、好ましくは、−Ｗ、−Ｖ−Ｗ、−Ｖ[Ｖ−Ｗ2]2、および−Ｖ[Ｖ−(Ｖ−Ｗ2)2]2からなる群からのアンカー分子である。
【００３５】
Ｚ1の説明で述べたアミノ酸およびアミノ酸ラジカルも、誘導体化することができ、Ｎ−メチル、Ｎ−エチル、Ｎ−プロピル、Ｎ−ベンジル、およびＣα−メチル誘導体が好ましい。さらに好ましいものは、ＡｓｐおよびＧｌｕの誘導体、特に側鎖カルボキシル基のメチル、エチル、プロピル、ブチル、tert−ブチル、ネオペンチル、およびベンジルエステルであり、さらに、アセチル、ベンゾイル、メトキシカルボニル、またはエトキシカルボニルラジカルによって、−ＮＨ−Ｃ(＝ＮＨ)−ＮＨ2基で置換することができるＡｒｇの誘導体である。
【００３６】
Ｘは、Ｈ2Ｎ−Ｃ(＝ＮＨ)−ＮＨ−、Ｈｅｔ−ＮＨ−、Ｈ2Ｎ−Ｃ(＝ＮＨ)−、Ａ−Ｃ(＝ＮＨ)−ＮＨ−、またはＨｅｔラジカルであることが好ましい。
【００３７】
Ｙは、−(ＣＨ2)n−、
【００３８】
【化３】
2004359686.tif 000005
【００３９】
、−(ＣＨ2)s−ＣＨ(Ｒ4)−(ＣＨ2)t−、または−(ＣＨ2)p−Ｈｅｔ1−(ＣＨ2)q−ラジカルであることが好ましい。
【００４０】
Ｚは、Ｎ−Ｒ2またはＣＨ−Ｒ2であることが好ましく、Ｒ2は、好ましくはＨ原子、あるいは炭素原子が１〜４個であるアルキルラジカルである。
【００４１】
Ｒ3は、Ｈ原子、あるいはＡｒ、Ｈｅｔ、またはＡラジカルであることが好ましく、Ａ、Ａｒ、およびＨｅｔは、以上または以下に示す意味の１つに当てはまることが好ましい。
【００４２】
Ｒ4は、Ｈ原子、あるいはＡ、Ａｒ、ＯＨ、ＯＡ、ＯＡｒ、アリールアルキル、Ｈａｌ、ＣＮ、ＮＯ2、ＣＦ3、またはＯＣＦ3ラジカルであることが好ましい。アリールアルキルは、ベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピル、またはナフチルメチルであることが好ましく、ベンジルであることが特に好ましい。
【００４３】
Ａは、ＣＯＯＨ、ＮＨ2である、あるいは１〜６個の炭素原子をもち、非置換の、またはＣＯＯＨもしくはＮＨ2によって置換されたアルキルラジカルであることが好ましい。Ａは、メチル、さらにエチル、プロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、sec−ブチルまたはtert−ブチル、さらにまたｎ−ペンチル、１−、２−、または３−メチルブチル、１，１−、１，２−、または２，２−ジメチルプロピル、１−エチルプロピル、ヘキシル、１−、２−、３−、または４−メチルペンチル、１，１−、１，２−、１，３−、２，２−、２，３−、または３，３−ジメチルブチル、１−または２−エチルブチル、１−エチル−１−メチルプロピル、１−エチル−２−メチルプロピル、あるいは１，１，２−または１，２，２−トリメチルプロピルであることが好ましい。Ａはメチルであることが特に好ましい。
【００４４】
Ａｒは、非置換であるか、あるいはＡ、ＯＨ、ＯＡ、ＣＦ3、ＯＣＦ3、ＣＮ、ＮＯ2、またはＨａｌで一、二、もしくは三置換されており、かつ非置換または置換ビフェニルをもたらすようにＡ、ＯＨ、ＯＡ、ＮＨ2、ＯＣＦ3、ＣＮ、ＮＯ2、またはＨａｌによって、一、二、もしくは三置換されたフェニルによって置換されてもよいフェニルであることが好ましい。
【００４５】
したがって、Ａｒは、フェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−メチルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−エチルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−プロピルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−イソプロピルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−tert−ブチルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−ヒドロキシフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−メトキシフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−エトキシフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−トリフルオロメチルフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−トリフルオロメトキシフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−フルオロフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−クロロフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−ブロモフェニル、ｏ−、ｍ−、またはｐ−ニトロフェニル、あるいはｏ−、ｍ−、またはｐ−アミノメチルフェニルであることが好ましい。
【００４６】
Ｈｅｔは、５〜１０員の環をもつ、飽和した、あるいは部分的にまたは完全に不飽和の、単環式または二環式の複素環ラジカルであり、１〜３個のＮ原子および／または１個のＳもしくはＯ原子が存在してもよく、また、この複素環ラジカルは、ＣＮ、Ｈａｌ、ＯＨ、ＮＨ2、ＣＯＯＨ、ＯＡ、ＣＦ3、Ａ、ＮＯ2、Ａｒ、またはＯＣＦ3による一置換もしくは二置換であってもよい。
【００４７】
Ｈｅｔは、ｏ、ｍ、またはｐ位で置換されたピリジル、２、４、５、または６位で置換されたピリミジル、あるいは３、４、５、または６位で置換されたピリダジル(これらはそれぞれ、(記述した３つの芳香族複素環ラジカルのすべてに関して)非置換であるか、あるいは、メチル、エチル、またはプロピル基、あるいはメチルアミノ、エチルアミノ、またはプロピルアミノ基によって置換されていることが好ましい)、あるいは、２位で置換されたベンゾイミダゾリル(これは、非置換であるか、あるいは３−メチル、３−エチル、または３−ベンジル基によって置換されている)、あるいは、２位で置換されたジヒドロイミダゾリル、テトラヒドロピリミジルまたはテトラヒドロピリジルであることが好ましい。Ｈｅｔに存在することが好ましいものの例は、次の通りである。
【００４８】
【化４】
2004359686.tif 000006
【００４９】
Ｈｅｔ1は、１〜４個のＮ、Ｏおよび／またはＳ原子を有する、５員または６員の芳香族複素環であり、非置換でも、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ａ、ＯＡ、またはＯＣＦ3による一置換もしくは二置換でもよい。
【００５０】
Ｈｅｔ1は、２，４−、３，５−、または２，５−二置換ピリジル、あるいは２，４−、２，５−、２，６−、または４，６−二置換ピリミジル、２，４−または２，５−二置換の１，３−オキサゾリルまたは１，３−チアゾリルであることが好ましい。
【００５１】
ＯＡはメトキシ、エトキシ、プロポキシ、またはブトキシ、さらにペンチルオキシまたはヘキシルオキシであることが好ましい。
【００５２】
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、またはＢｒ、ならびにＩであることが好ましい。
【００５３】
指数ｎ、ｍ、ｏ、ｐ、ｑ、ｓ、およびｔは、別段の記述がない限り、以下の範囲である。
ｎは、４、５、または６であり、
ｍ、ｏ、ｐ、およびｑは、０、１、または２であり、
ｓおよびｔは、０、１、２、３、４、または５である。
【００５４】
式Ｉの化合物には、１つまたは複数のキラル中心があってもよく、したがって、様々な立体異性形で存在し得る。式Ｉは、これらの形をすべて含む。
【００５５】
したがって、本発明は詳細には、少なくとも１つの前記ラジカルが、上で示した好ましい意味の１つに当てはまる式Ｉの化合物に関する。
【００５６】
特に好ましいものは、式Ｉの以下の化合物である：
ａ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］2−Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｂ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］2−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｃ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］3−Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｄ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］3−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｅ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］4−Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｆ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］4−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｇ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2）6−ＮＨ］2−Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｈ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［（Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2）6−ＮＨ］2−Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2））
ｉ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］2−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2］2））
ｊ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−（ＣＨ2）5−ＮＨ］3−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2］2））
ｋ）シクロ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（εＮＨ−［ＣＯ−ＣＨ2（−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2）6−ＮＨ］2−Ｌｙｓ−［Ｌｙｓ−（ＣＯ−Ｃ6Ｈ3（ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2）2）2］2））。
【００５７】
式Ｉの化合物、ならびにその調製のための出発物質は、他に、文献(例えばHouben-Weyl、「Methoden der organischen Chemie[Methods of Organic Chemistry]」、Georg-Thieme-Verlag、Stuttgartなどの標準的な著作中にある)に記載されている方法など、自ずと分かる方法によって、より正確に言うと、前記の反応に適した知られている反応条件下で調製される。この場合、自ずと分かる変形方法も使用できるが、ここではこれ以上詳細には記述しない。
【００５８】
所望される場合、出発物質を、反応混合物から分離するのではなくて、代わりに、直ちに式Ｉの化合物に転換することにより、その場で(in situ)形成させることもできる。
【００５９】
フラグメントのカップリングあるいはリガンドのリンカーとのカップリングは、一般に、不活性溶媒中で行い、そこでは、カルボン酸フラグメント(例えばＨＯ−[ＣＯ−(ＣＨ2)5−ＮＨ]4−Ｌｙｓ−[Ｌｙｓ−(ＣＯ−Ｃ6Ｈ3(ＣＨ2−ＰＯ3Ｈ2)2)2]などのホスホン酸リンカー)が、ＨＡＴＵ、ＨＯＡｔ、および２，４，６−コリジンを含むＤＭＦ溶液に溶解され、アミンフラグメント(例えばｃ[Ｒ(Ｐｂｆ)Ｇ(ＯｔＢｕ)ｆＫ]などのシクロペプチド)が加えられる。
【００６０】
適当な不活性溶媒は、例えば、ヘキサン、石油エーテル、ベンゼン、トルエン、またはキシレンなどの炭化水素；トリクロロエチレン、１、２−ジクロロエタン、四塩化炭素、クロロホルム、ジクロロメタンなどの塩素化炭化水素；メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、またはtert−ブタノールなどのアルコール；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン(THF)、またはジオキサンなどのエーテル；エチレングリコールモノメチルエーテルまたはモノエチルエーテル、またはエチレングリコールジメチルエーテル(ジグリム)などのグリコールエーテル；アセトンやブタノンなどのケトン；アセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド(DMF)などのアミド；アセトニトリルなどのニトリル；ジメチルスルホキシド(DMSO)などのスルホキシド；二硫化炭素；ギ酸や酢酸などのカルボン酸；ニトロメタンやニトロベンゼンなどのニトロ化合物；酢酸エチルなどのエステル、水、あるいは前記溶媒の混合物などである。
【００６１】
環状化合物は、例えば「DE 43 10 643」、「Houben-Weyl, l.c.、Volume 15／II」1〜806頁(1974年)、またはS. Zimmer、E. Hoffmann、G. Jung、およびH. Kesslerによる「Liebigs Ann. Chem. 1993」、497〜501頁に記載されている通りの、直鎖化合物の環化によって調製できる。
【００６２】
直鎖ペプチドは、例えばR.B. Merrifieldによる「Angew. Chemie 1985, 97」801〜812頁に従って合成できる。
【００６３】
例えば式Ｉの化合物などの開鎖の直鎖化合物は、他に、アミノ酸およびペプチド合成の従来の方法によって調製でき、例えばMerrifield(例えば、B.F. GysinおよびR.B. Merrifield、「J. Am. Chem. Soc. 94」、3102頁以降(1972年)も参照)による固相合成法によって調製することもできる。
【００６４】
さらに、式Ｉの化合物は、加溶媒分解、特に加水分解によって、あるいは水素化分解によって、その官能基誘導体から遊離させることによって得ることができる。
【００６５】
加溶媒分解または水素化分解のための好ましい出発材料は、１種または複数の遊離のアミノおよび／またはヒドロキシル基の代わりに、対応する保護されたアミノおよび／またはヒドロキシル基を含むものであり、好ましくは、Ｎ原子が結合したＨ原子の代わりにアミノ保護基を保有するもの、例えば、式Iに従うが、ＮＨ2基ではなくＮＨＲ'基(式中、Ｒ'は、例えばBOCまたはCBZなどのアミノ保護基である)を含むものである。
【００６６】
さらに好ましいものは、ヒドロキシル基のＨ原子の代わりにヒドロキシル保護基を保有する出発材料、例えば、式Ｉに従うが、ヒドロキシフェニル基ではなくＲ''Ｏ−フェニル基(式中、Ｒ''はヒドロキシル保護基である)を含むものである。
【００６７】
複数の同一または異なる保護されたアミノおよび／またはヒドロキシル基が、出発材料の分子中に存在することも可能である。存在する保護基が互いに異なる場合、多くのケースでは、それらを選択的に切り離すことができる。
【００６８】
用語「アミノ保護基」は、一般的な用語として知られており、アミノ基を、化学反応から保護する(ブロックする)のに適しているが、分子内の他の場所で所望の化学反応が実施された後は、容易に除去できる基に関する。こうした基の典型は、具体的には、非置換または置換のアシル、アリール、アラルコキシメチル(aralkoxymethyl)、またはアラルキル基である。アミノ保護基は、所望の反応(あるいは反応連鎖(reaction Sequence))後に取り除かれるので、そのタイプおよびサイズは、別段重要ではない；しかし、好ましいものは、炭素原子が１〜20個、特に１〜８個であるものである。用語「アシル基」は、この過程に関して最大限に広い意味で解釈されるべきである。これには、脂肪族、芳香脂肪族、芳香族または複素環カルボン酸、あるいはスルホン酸、具体的にはアルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、特にアラルコキシカルボニル基から誘導されたアシル基が含まれる。こうしたアシル基の例は、アセチル、プロピオニル、およびブチリルなどのアルカノイル；フェニルアセチルなどのアラルカノイル；ベンゾイルおよびトルイルなどのアロイル；ＰＯＡなどのアリールオキシアルカノイル；メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、ＢＯＣ、および２−ヨードエトキシカルボニルなどのアルコキシカルボニル；ＣＢＺ(「カルボベンゾキシ」)、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、およびＦＭＯＣなどのアラルコキシカルボニル；Ｍｔｒ、Ｐｂｆ、およびＰｍｃなどのアリールスルホニルである。好ましいアミノ保護基は、ＢＯＣおよびＭｔｒ、さらにＣＢＺ、Ｆｍｏｃ、ベンジル、およびアセチルである。
【００６９】
同様に、用語「ヒドロキシル保護基」は、一般的用語として知られており、ヒドロキシル基を化学反応から保護するのに適しているが、分子内の他の場所で所望の化学反応が実施された後に容易に除去できる基に関する。こうした基の典型は、上述の非置換または置換アリール、アラルキル、またはアシル基、さらにアルキル基である。ヒドロキシル保護基は、所望の化学反応または反応連鎖の後、再度取り除かれるので、その性質およびサイズは重要ではない；１〜20個、特に１〜10個の炭素原子を含む基が好ましい。ヒドロキシル保護基の例は、特に、ベンジル、ｐ−ニトロベンゾイル、ｐ−トルエンスルホニル、tert−ブチル、およびアセチルであり、その中で、ベンジルおよびtert−ブチルが特に好ましい。アスパラギン酸およびグルタミン酸中のＣＯＯＨ基は、そのtert−ブチルエステル(例えばＡｓｐ(ＯｔＢｕ))の形で保護されることが好ましい。
【００７０】
式Ｉの化合物は、その官能基誘導体から、使用する保護基に応じて、例えば強酸を使用して、好都合にはＴＦＡまたは過塩素酸を使用して、また、塩酸または硫酸など他の無機強酸、トリクロロ酢酸などの強い有機カルボン酸、あるいはベンゼンスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸などのスルホン酸を使用して遊離される。追加の不活性溶媒が存在可能であるが、必ずしも必要ではない。適当な不活性溶媒は、有機溶媒、例えば、酢酸などのカルボン酸、テトラヒドロフランやジオキサンなどのエーテル、ＤＭＦなどのアミド、ジクロロメタンなどのハロゲン化炭化水素、さらにメタノール、エタノール、イソプロパノールなどのアルコールなど、ならびに水であることが好ましい。前述の溶媒の混合物が、さらに適当である。ＴＦＡは、さらなる溶媒を加えることなく、過剰量で使用することが好ましく、過塩素酸は、酢酸と70％過塩素酸の比９：１の混合物の形で使用することが好ましい。切断のための反応温度は、適切には、約０と約50℃の間であり、この反応は、15〜30℃(室温)で行うことが好ましい。
【００７１】
ＢＯＣ、ＯｔＢｕ、Ｐｂｆ、Ｐｍｃ、およびＭｔｒ基は、例えば、好ましくはＴＦＡのジクロロメタン溶液を使用することによって、あるいは15〜30℃の約３〜５Ｎ ＨＣｌのジオキサン溶液を使用することによって切り離すことができ、ＦＭＯＣ基は、15〜30℃の、ジメチルアミンまたはジエチルアミンまたはピペリジンの約５〜50％ＤＭＦ溶液を使用して切り離すことができる。
【００７２】
トリチル基は、アミノ酸ヒスチジン、アスパラギン、グルタミン、およびシステインを保護するために使用される。これは、ＴＦＡ／10％チオフェノールを使用して、所望の最終生成物に応じて切り離され、トリチル基は、前記のすべてのアミノ酸から切り離される。ＴＦＡ／アニソール、ＴＦＡ／チオアニソール、またはＴＦＡ／ＴＩＰＳ／Ｈ2Ｏを用いた場合、Ｈｉｓ、Ａｓｎ、およびＧｌｎからはトリチル基のみが切り離されるのに対し、Ｃｙｓ側鎖ではトリチル基は残る。
【００７３】
Ａｒｇの保護のためには、Ｐｂｆ(ペンタメチルベンゾフラニル)基が使用される。これは、例えばＴＦＡのジクロロメタン溶液を使用して切り離される。
【００７４】
水素化分解によって除去可能な保護基(例えばＣＢＺまたはベンジル)は、例えば、触媒(例えば、好都合には炭素などの担体に担持したパラジウムなどの貴金属触媒)の存在下で、水素で処理することによって切り離すことができる。この場合、適当な溶媒は、上で示したものであり、具体的には、例えばメタノールやエタノールなどのアルコール、あるいはＤＭＦなどのアミドである。水素化分解は一般に、約０〜100℃の温度で、約１バールと200バールの間の圧力で、好ましくは10〜30℃かつ１〜10バールで行われる。
【００７５】
ＣＢＺ基の水素化分解は、例えば、10〜30℃において、メタノール中、５〜10％Ｐｄ／Ｃ上で、あるいは、(水素の代わりに)ギ酸アンモニウムを使用してメタノール／ＤＭＦ中、Ｐｄ／Ｃ上で、十分に上手くいく。
【００７６】
式Ｉの塩基は、酸を使用して、例えば、エタノールなどの不活性溶媒中で等量の塩基と酸を反応させ、続いて蒸発させることによって、関連する酸付加塩に転換できる。この反応に適した酸は、具体的には、生理学的に許容される塩をもたらすものである。したがって、無機酸、例えば、硫酸、硝酸、塩酸や臭化水素酸などのハロゲン化水素酸、オルトリン酸などのリン酸、スルファミン酸など、ならびに有機酸、具体的には、脂肪族、脂環式、芳香脂肪族、芳香族または複素環の、一塩基または多塩基のカルボン酸、スルホン酸、または硫酸、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、ピバル酸、ジエチル酢酸、マロン酸、コハク酸、ピメリン酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、イソニコチン酸、メタンスルホン酸またはエタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンモノスルホン酸およびナフタレンジスルホン酸、およびラウリル硫酸などを使用することが可能である。生理学的に許容されない酸を用いた塩、例えばピクリン酸塩などは、式Ｉの化合物の単離および／または精製のために使用できる。
【００７７】
一方、式Ｉの酸は、塩基と反応させることによって、その生理的に許容される金属またはアンモニウム塩の１つに転換できる。この場合、適当な塩は、具体的には、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、およびアンモニウム塩、さらに、置換されたアンモニウム塩、例えばジメチル−、ジエチル−、またはジイソプロピルアンモニウム塩、モノエタノール−、ジエタノール−、またはジイソプロパノールアンモニウム塩、シクロヘキシル−、ジシクロヘキシルアンモニウム塩、ジベンジルエチレンジアンモニウム塩など、さらに、例えばアルギニンまたはリジンとの塩である。
【００７８】
上述および下述の温度は全て、℃で示している。以下の実施例において、「通常の後処理」は、必要であれば水を加え、必要であれば混合物のｐＨを、最終生成物の構造に応じて２〜10の間に調整し、混合物を酢酸エチルまたはジクロロメタンで抽出し、相を分離させ、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させ、生成物をシリカゲルのクロマトグラフィーによって、かつ／または結晶化によって精製することを意味する。Ｒｆ値は、シリカゲル上でのものであり、溶離剤は、酢酸エチル／メタノール  ９：１である。
【００７９】
ＲＴ＝以下のシステムにおけるＨＰＬＣでの保持時間（分）：
［Ａ］
カラム：ＹＭＣ  ＯＤＳ  Ａ  ＲＰ  ５Ｃ18、２５０×４．６ｍｍ
溶離剤Ａ：０．１％  ＴＦＡ水溶液
溶離剤Ｂ：０．１％  ＴＦＡのアセトニトリル溶液
流速：１ｍｌ／分
勾配：０〜５０％  Ｂ／３０分
［Ｂ］
［Ａ］と同様；
勾配：５〜５０％  Ｂ／３０分
［Ｃ］
［Ａ］と同様；
勾配：１０〜５０％  Ｂ／３０分
質量分析（ＭＳ）：ＥＩ（電子衝撃イオン化）Ｍ+
ＦＡＢ（高速原子衝撃）（Ｍ＋Ｈ）+
ＥＳＩ（エレクトロスプレーイオン化）（Ｍ＋Ｈ）+
【実施例】
【００８０】
ＤＭＰＰ樹脂は、４−(２’，４’−ジメトキシフェニルヒドロキシメチル)フェノキシ樹脂を表し、これは、例えば、側鎖が保護されたペプチドの合成を可能にするものであり、ＴＣＰ樹脂は、トリチルクロリド−ポリスチレン樹脂を意味する。
【００８１】
以下の実施例は、第１に、フラグメントのカップリングおよびホスホン酸エステルの切断を、また第２に、ホスホン酸リンカーを有する選択されたシクロペプチド誘導体の合成を説明する。様々な金属または骨置換材料成形物(moulding)を被覆する方法についても、以下に詳細に説明する。
【００８２】
実施例１：溶液中でのフラグメントのカップリング
カルボン酸フラグメント 0.2 mmol(例えばＨＯ−[ＣＯ−(ＣＨ2)5−ＮＨ]4−Ｌｙｓ−(ＣＯ−Ｃ6Ｈ3(ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2)2)2などのホスホン酸リンカー)、ＨＡＴＵ 0.98当量、ＨＯＡｔ 1.1当量、および２，４，６−コリジン 10当量を、ＤＭＦ２mlに溶解する。1.5時間後、アミンフラグメント(例えばシクロペプチドｃ[Ｒ(Ｐｂｆ)Ｇ(ＯｔＢｕ)ｆＫ])１当量を加える。この混合物を室温で24時間攪拌し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製する。
【００８３】
実施例２：ホスホン酸リンカーにおけるホスホン酸エステルの切断
ホスホン酸エステル基の切断を、90％ ＴＦＡ、５％ Ｈ2Ｏ、および５％ ＴＩＰＳを用いて、ペプチドまたはペプチド類似物の側鎖保護基の除去と同時に実施する。４時間後溶媒を除去し残留物を酢酸に溶解し冷ジエチルエーテル中に沈殿させた。この沈殿物を分離し凍結乾燥してＨ2Ｏを除く。
【００８４】
実施例３：ホスホン酸リンカーの合成
ホスホン酸リンカーを、Fmoc法(G.B. Fields、R.L. Nobie、「Int. J. Pept. Protein Res. 1990, 35」、161〜214頁参照）による固相ペプチド合成法で合成した。
【００８５】
カップリングさせる最後の単位は５−カルボキシ−ｍ−キシレンビスホスホン酸テトラベンジルであった。
【００８６】
５−カルボキシ−ｍ−キシレンビスホスホン酸テトラベンジルの合成：
３，５−ビス(ブロモメチル)安息香酸メチル
30 mmolの３，５−(ビスメチル)安息香酸メチル(5.0g)を、ＣＣｌ4 50 mlに溶解する。２当量のＮ−ブロモスクシンイミド(10.6g)および過酸化ベンゾイル150 mgを加えた後、この混合物を３時間還流させる。冷却された混合物を濾過し溶媒を除去する。生成物がオイル(10.5g)として得られ、これはヘキサン100 mlで覆うことによって結晶化させることができる。淡黄色の固体3.3 ｇが得られる。
【００８７】
５−メトキシカルボニル−ｍ−キシレンビスホスホン酸テトラベンジル
4.7 mmolの３，５−ビス(ブロモメチル)安息香酸メチル(1.5g)を、３当量の亜リン酸トリベンジル(4.9g)に懸濁させる。この混合物を、形成される臭化ベンジルを高真空中で除去しながら、油浴中で140 ℃で３時間加熱する。冷却後、溶離剤として酢酸エチルを用いる、250 gのシリカゲルのクロマトグラフィーによって、残留物を分離する。生成物がオイル(1.76 g)として得られる。
【００８８】
５−カルボキシ−ｍ−キシレンビスホスホン酸テトラベンジル
1.5 mmolの５−メトキシカルボニル−ｍ−キシレンビスホスホン酸テトラベンジル(1.0g)を、２：１のメタノールおよび水に溶解し、1.5当量の水酸化リチウム(53 mg)を加えて、室温で４日間攪拌する。その後、この溶液のｐＨを、１Ｎ塩酸を用いて2.5に調整し、メタノールを除去する。酢酸エチルを用いて生成物を抽出する。溶媒を除去すると、オイル0.97 gが得られる。
【００８９】
直径10 mm、高さ１〜2 mmのＴｉまたはＴｉＡｌ6Ｖ4成形物を洗浄する。
【００９０】
成形物を、48ウェルプレート(Costar社、「non-tissue culture treated」、品番3574)に移す。生理活性をもつ細胞接着促進分子Ｂ(Ｂは、上述のシクロペプチド、ペプチド類似物、または直鎖ペプチドであり得る)を、準備した成形物に結合させるために、Ｂ分子を含有するストック溶液(「Ｂ溶液」)(緩衝水溶液、最終濃度１ｍＭ)を調製する。その後、緩衝液で希釈することによって、それぞれ最終濃度が１ｎＭ、10ｎＭ、100ｎＭ、１μＭ、10μＭ、および100μMの「Ｂ溶液」の濃度シリーズを調製する。成形物をそれぞれ、250μｌの各Ｂ溶液でカバーし、続いて、室温で18〜24時間インキュベートする。結合しなかったＢ分子を取り除くために、これらのサンプルを緩衝液で３回洗浄し、緩衝液中に終夜保管する。
【００９１】
それぞれに、１成形物あたり250μｌの、５％ＢＳＡ(ウシ血清アルブミン)溶液、ｐＨ 7.4を加え、続いて室温で２時間インキュベートし、緩衝液で１回洗浄することによって、非特異的な細胞結合部位をブロックする。
【００９２】
Ｂ溶液では処理を行わずに、相当する緩衝液(TRIS HCl 10mM、pH8.7；TRIS HClO4 10mM、ｐＨ 8.7；PBS、ｐＨ 7.4）で処理を行ったＴｉまたはＴｉＡｌ6Ｖ4成形物は、陰性対照としての役割を果たす。
【００９３】
成形物にもたらされた被覆の程度を、分析に基づいて評価し、in vitroでの細胞接着試験によって、その生物学的有効性(biological efficacy)を判定する。
【００９４】
実施例４：
リン酸カルシウムベースの成形物を洗浄する。
【００９５】
「Ｂ溶液」を用いた、成形物の被覆のために、実施例３で述べた手順に従う。
【００９６】
成形物にもたらされた被覆の程度を、分析に基づいて評価し、in vitroでの細胞接着試験によって、その生物学的有効性を判定する。
【００９７】
ＥＬＩＳＡ試験の例：
ＲＧＤ−特異抗体を用いて、表面に結合したペプチドの量を求めることができる。
【００９８】
細胞接着試験の例：
ＲＧＤ−ペプチドで被覆されたチタン表面への、マウスＭＣ３Ｔ３ Ｅ１骨芽細胞培養株の、in vitroでの接着を調べた。50,000細胞／cm2を接種し、無血清培地で、37℃／大気湿度95％で１時間インキュベートした後に、接着した細胞の割合を求めた。
【００９９】
細胞接着率［％］＝接着した細胞数／接種した細胞数×100
ペプチド：細胞接着率［％］
ＥＬＩＳＡ試験の結果を図１に、および細胞接着試験の結果を図２に示す。
【０１００】
図に示された略語は、以下の意味である：CD135は、シクロ(Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ(εＮＨ−[ＣＯ−(ＣＨ2)5−ＮＨ]3−(ＣＯＣ6Ｈ3(ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2)2))であり、JAU311003は、シクロ(Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ(εＮＨ−[ＣＯ−(ＣＨ2)5−ＮＨ]3−(ＣＯ−Ｃ6Ｈ3(ＣＨ2ＰＯ3Ｈ2)2)2))である。
【０１０１】
ＥＬＩＳＡでは、化合物CD135の場合より多くのペプチドが表面に結合しその結果細胞接着試験では測定されるすべての濃度についてより高い細胞接着率となることが分かる。
【０１０２】
開始時(ブランク)での細胞接着は、被覆されていないチタンプレートについての細胞接着に相当する。100μＭの被覆溶液を使用してプレートを被覆することにより、被覆されていないプレートと比較して、３倍の細胞接着が可能になる。
【図面の簡単な説明】
【０１０３】
【図１】ＥＬＩＳＡ試験の結果を示す図である。
【図２】細胞接着試験の結果を示す図である。
【図１】
2004359686.tif 000011
【図２】
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