(57)【要約】【課題】香気保持物を調製する時、香気の保持量の向上、並びに、できた香気保持物が香気を長期間保留するとともに安定性を付与する方法を提供することを第一の課題とし、香気を長期間保留するとともに安定性に優れた香気保持物を確立することを第二の課題とし、当該保持物を含有する組成物を提供することを第三の課題とし、さらには、香気を長期間安定化できる香気保持剤を提供することを第四の課題とし、香気保持物からなる徐放性の殺菌剤を提供することを第五の課題とする。【解決手段】香気物質に対して環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合を含有せしめることによる香気の保持方法、及び、該方法により得られる香気保持物、並びに、保持物を含有する組成物、さらには、環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を有効成分とする香気保持剤を提供し、さらには、香気保持物の徐放性を利用した殺菌剤を提供することにより上記課題を解決する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
香気物質或いはそれを含有する組成物に対して、化学式１で示される環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を含有せしめることを特徴とする香気の保持方法。
【化１】
2004002620.tif 000009
【請求項２】
香気物質が動植物由来の天然香気物質又はそれを含む組織、又は合成香気物質であることを特徴とする請求項１記載の香気の保持方法。
【請求項３】
香気物質がエタノール及び／又は酢酸であることを特徴とする請求項１乃至２の何れかに記載の香気の保持方法。
【請求項４】
香気物質１重量部に対して、環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を、この環状四糖の無水物としての換算で、１乃至１０，０００重量部の範囲で含有せしめることを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の香気の保持方法。
【請求項５】
化学式１で示される環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物が、シラップ、マスキット、固状物、非晶質粉末、含水結晶粉末及び無水結晶粉末から選ばれる１種又は２種以上であることを特徴とする請求項１乃至４のいずれかに記載の香気の保持方法。
【請求項６】
化学式１で示される環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物とともに、単糖、オリゴ糖及び多糖類から選ばれる１種又は２種以上を含んでいることを特徴とする請求項１乃至５のいずれかに記載の香気の保持方法。
【請求項７】
香気物質或いはそれを含有する組成物に対して、化学式１で示される環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を、水及び／又は乳化剤共存下で含有せしめることを特徴とする請求項１乃至６記載のいずれかに記載の香気の保持方法。
【請求項８】
化学式１で示される環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物が、澱粉又はフィトグリコーゲン由来の糖質であることを特徴とする請求項１乃至７のいずれかに記載の香気の保持方法。
【請求項９】
請求項１乃至８のいずれかに記載の方法で得られる香気保持物。
【請求項１０】
香気物質を含有する組成物が、アルコール類、調味料類、発酵食品類のいずれかであることを特徴とする請求項９に記載の香気保持物。
【請求項１１】
香気物質がエタノール及び／又は酢酸であることを特徴とする請求項９記載の香気保持物。
【請求項１２】
液状物、半固状物、固状物、又は粉末であることを特徴とする請求項９乃至１１のいずれかに記載の香気保持物。
【請求項１３】
香気物質の徐放性を有することを特徴とする請求項９乃至１２のいずれかに記載の香気保持物。
【請求項１４】
静菌作用及び／又は殺菌作用を有することを特徴とする請求項９乃至１３のいずれかに記載の香気保持物。
【請求項１５】
請求項９乃至１４のいずれかに記載の香気保持物を共存及び／又は含有せしめた組成物。
【請求項１６】
飲食品、化粧品、医薬品、又は日用品であることを特徴とする請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
化学式１で示される環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を有効成分とする香気保持剤。
【請求項１８】
化学式１で示される環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物と、香気物質とを含有することを特徴とする香気物質の徐放剤。
【請求項１９】
エタノール及び／又は酢酸と化学式１で示される環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物とを含有することを特徴とする静菌剤及び／又は殺菌剤。
【請求項２０】
エタノール及び／又は酢酸を徐々に放出することを特徴とする請求項１９記載の静菌剤及び／又は殺菌剤。
【請求項２１】
請求項１９乃至２０の何れかに記載の静菌剤及び／又は殺菌剤を、共存及び／又は含有せしめることを特徴とする飲食品、化粧品、医薬品、又は日用品の静菌方法及び／又は殺菌方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、香気の保持方法、並びにその用途、詳細には、香気の保持方法、及びその香気の保持方法を用いて得られる香気保持物、並びに香気保持物を含有する食品、化粧品、医薬品、又は日用品などの組成物、さらには、香気の保持剤、及び、徐放性の香気保持剤を利用した静菌剤及び／又は殺菌剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
香気の保持方法としては、▲１▼不揮発性物質に香気物質を吸着させる、▲２▼香気物質が透過できない膜を香気保持物の外側に形成させる、▲３▼低水分とすることで香気物質の拡散を防止する、▲４▼香気物質との包接化合物を形成させるなどの方法が知られている（杉沢　博　『化学と生物』１０巻、２号９２乃至９２頁、１９７２年）。
【０００３】
香気の保持方法として、各種糖質の利用が提案されてきた。例えば、特公昭５２−３７０６２号公報で提案されているオリゴ糖類と香気物質とを混合したのち固形物とする方法、本出願人らが特公平５−５２１７７号公報で提案した結晶性α−マルトース（無水マルトース）と油性香気物質との混合物とする方法、特公平８−２６３４５号公報で提案した結晶性α−マルトース（無水マルトース）とシクロデキストリンの共存下で油性香気物質との固形混合物とする方法、特開昭５４−３５２５１号公報、特公平５−９８６号公報などで提案されているシクロデキストリンと香気物質との包接化合物を作る方法などがある。これらの方法は、使用される糖質の違いによって、香気物質の保持量が少なかったり、その保留性が不十分であったり、油性香気物質に限られたり、得られた混合物を二次加工する際の溶解性などに課題が残る。
【０００４】
また、近年、α，α−トレハロースが開発され、例えば、特開平９−１１１２８４号公報には、水及び乳化剤の共存下で、香気物質とα，α−レハロースとを混合する乳化香料の製造方法が開示されており、特開平９−１１１２８４号公報によれば、前記乳化香料を乾燥させた粉末状の香気保持物の製造方法が提案されている。これらは比較的香気の保留性及び安定性に優れてはいるものの、α，α−トレハロースが晶出し易く、依然として香気の保持量、保留性に課題が残る。さらに、香気の保持量、保留性に優れた糖質の探索が望まれる。
【０００５】
最近、化学式１で示される環状四糖（以下、本明細書では単に「環状四糖」という）がゲイル・エム・ブラッドブルク等によって『カーボハイドレート　リサーチ』、３２９巻、６５５乃至６６５頁（２０００年）に報告された。環状四糖は、グルコースが４個、α−１，３とα−１，６結合で交互に、環状に繋がった非還元性の糖質である。しかし、その調製方法は工業生産にはほど遠く、加えて、それらの用途に関して詳しく調べられておらず、その物性に関しての情報も見られない。本発明者等は、先に、国際公開ＷＯ　０１／９０３３８号明細書（国際特許出願ＰＣＴ／ＪＰ０１／０４２７６号明細書）、国際公開ＷＯ　０２／１０３６１号明細書（国際特許出願ＰＣＴ／ＪＰ０１／０６４１２号明細書）などに記載したように環状四糖を澱粉又はフィトグリコーゲンから容易に、安価に製造する方法を確立した。
【０００６】
【化２】
2004002620.tif 000002
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、これまで利用されてきた香気保持物を調製する時の香気の保持量が少なかったり、並びに、香気保持物の香気の保留性及び安定性が劣り、短期の保存で香気が飛散し、且つ、香気保持物が変性又は劣化するなど、香気物質を利用するうえで種々の問題を伴うという欠点を解消し、香気及び香気保持物に対して悪影響を与えず、香気保持量の向上、並びに、香気含有物の香気を長期間保留するとともに安定性を付与し、幅広い用途に安心して使用できる香気の保持方法を確立することを第一の課題とし、香気を長期間保留するとともに安定性を付与した香気保持物を確立することを第二の課題とし、当該香気保持物を含有する組成物を確立することを第三の課題とし、さらには、香気を長期間安定に保持できる香気保持剤を確立することを第四の課題とし、該香気保持物の徐放性を利用した静菌剤及び／又は殺菌剤を提供することを第五の課題とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の課題を解決する目的で、糖質の利用、とりわけ、先に確立した澱粉又はフィトグリコーゲンからの環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物の利用に着目し、鋭意研究を続けてきた。その結果、香気物質に対して、環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を含有せしめることにより、優れた香気保持物が得られることを見出し、新規な香気の保持方法を確立するとともに、香気を保持する香気保持物、並びに、新規な香気保持物を含有する組成物を確立し、加えて環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を有効成分とする新規な香気保持剤を確立し、当該香気保持物が香気の徐放性を示すことを利用した静菌剤及び／又は殺菌剤を確立することにより、本発明を完成するに至った。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明でいう香気物質には、特に制限はなく、例えば、オレンジ、レモン、ライム、グレープフルーツなどの柑橘抽出物類、花精油、ペパーミント油、スペアミント油、スパイス油、ハーブ油などの植物抽出精油類、コーラナッツエキストラクト、コーヒーエキストラクト、バニラエキストラクト、ココアエキストラクト、紅茶エキストラクト、スパイス類エキストラクト、ハーブ類エキストラクトなどの植物抽出物類、動物組織から抽出した精油類、又はこれらを含む組織などを含む天然香気物質、天然香気物質の誘導物、化学的又は半化学的に合成された合成香気物質などが挙げられる。さらに、前記物質を含む混合物などが挙げられる。また、日本酒、ウイスキー、ブランディー、リキュール、みりんなどのアルコール類、鰹節、煮干し、するめ、昆布、エビ、椎茸やそれらのエキス類、肉汁、ブイヨン、魚介エキス、野菜、果実などのエキス類やそれらを原料とする調味料、醤油、魚醤、みそ、みりん、酢、アルコール類などの発酵食品などのように、他の組成物の風味付けに使用する該調味料や発酵食品などのような香気物質を含有する組成物も本発明の対象として挙げることができる。
【００１０】
本発明で、香気物質或いはそれを含有する組成物に対して使用される環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物は、その由来や製法は問わず、発酵法、酵素法、有機合成法などにより製造されたものでもよく、それらの方法により得られる反応液は、環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を含む溶液として、そのまま、部分精製して、或いは、高純度に精製して使用することも自由である。環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物は、例えば、本発明者らが、国際公開ＷＯ　０１／９０３３８号明細書に開示した、パノースをα−イソマルトシル転移酵素によって環状四糖に変換する方法、或いは、国際公開ＷＯ　０２／１０３６１号明細書に開示した、澱粉から直接α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素及びα−イソマルトシル転移酵素を組み合わせて環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を製造する方法などの、澱粉質或いはそれ由来の糖質を原料とした酵素法により製造することができる。これらの製造方法は、豊富で安価な澱粉質を原料とし、高効率かつ安価に環状四糖やその誘導体を製造できることから、工業的に有利に実施できる。また、環状四糖には、無水非晶質、無水結晶、１含水結晶、５含水結晶が存在し、その何れを使用することも可能である。さらに、環状四糖のうち無水結晶、１含水結晶及び無水非晶質のものは、優れた脱水能を有していることから、香気物質或いは香気物質を含む組成物の含水物を粉末、固化する場合には、該含水物に含有せしめることにより脱水剤としても作用し、環状四糖を有効成分として含有する高品質の粉末、固形製品の製造に有利に使用できる。
【００１１】
本発明でいう環状四糖とは、環状四糖或いは環状四糖に加えて、この環状四糖の糖質誘導体以外の糖質を含有する糖質を意味する。また、環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物とは、環状四糖と環状四糖に１種又は２種以上のグリコシル基が１個又は２個以上結合した環状四糖の糖質誘導体との混合物、或いは、この該環状四糖と環状四糖の糖質誘導体とともにそれら糖質以外の糖質を含有するものをいう。環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物は、例えば、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素及びα−イソマルトシル転移酵素を組み合わせて澱粉に作用させて得られる糖液のように、環状四糖と、環状四糖分子の１個又は２個以上ＯＨ基に、１個又は２個以上のグルコースが結合した糖質誘導体及び／又は該糖質誘導体とグルコース、マルトオリゴ糖、マルトデキストリンなどの糖質混合物、或いは、それらを、イオン交換樹脂などで部分精製したものや高純度に精製したものであってもよい。また、糖質組成物中に環状四糖を含んでいるものであれば、例えば、本発明者等が特願２００１−６７２８２号明細書において開示した方法などにより、環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖に１個又は２個以上のグルコースの結合した環状四糖の糖質誘導体との混合物に、さらに、例えば、シクロマルトデキストリングルカノトランスフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、α−ガラクトシダーゼ、リゾチームなどの糖転移能を有する酵素の１種又は２種以上を、該酵素の基質となる単糖、オリゴ糖及び／又は多糖の存在下で作用させて、環状四糖及と環状四糖に１個又は２個以上のグルコースの結合した糖質誘導体の１個又は２個以上の任意のＯＨ基に、さらに、１個又は２個以上のα−Ｄ−グルコピラノシル基、β−Ｄ−ガラクトピラノシル基、β−Ｄ−キトサミニル基などのグリコシル基の１種又は２種以上を転移させて得られる糖質誘導体、或いは、それを部分精製したものや高純度に精製したものであってもよい。
【００１２】
本発明によれば、前述の香気物質或いは該香気物質を含有する組成物とともに、環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を含有するシラップ、マスキット、固状物、粉末、又は、水とともにこれら糖質の固状物、或いは粉末、さらには、必要に応じて、その他の成分を混合し、液状又は半固状の香気保持物を得ることができる。さらに、得られる液状又は半固状の香気保持物を常法により乾燥（加熱、真空、減圧、噴霧、凍結乾燥を含む）することにより、固状の香気保持物（粉末状のものを含む）とすることもできる。とりわけ、香気物質と糖質とを水及び／又は乳化剤共存下で、できるだけ均一に混合し、これを常法により乾燥して粉末状の香気保持物を得ることも有利に実施できる。
【００１３】
本発明で香気物質或いは香気物質に含有せしめる環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物は、該糖質を含有するシラップ、マスキット、固状物或いは粉末から選択される１種又は２種以上の中から、香気物質及びその他の含有物の性状、香気の安定性、香気含有物の形態や使用時の作業性などを考慮して選択すればよい。また、前記環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を含有する固状物或いは粉末とは、環状四糖の非晶質無水環状四糖、環状四糖含水結晶、環状四糖含水結晶、結晶性無水環状四糖から選ばれる１種又は２種以上を含有する糖質、又は、これら環状四糖から選ばれる１種又は２種以上と環状四糖の糖質誘導体とを含有する糖質、さらには、これら糖質に加えてそれ以外の糖質を含有する糖質であって、固状或いは粉末の形態のものを意味する。
【００１４】
香気物質に対して環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を含有せしめた組成物は、そのまま香気保持剤として使用することができる。また、必要ならば、例えば、キシロース、アラビノース、グルコース、フルクトース、プシコース、マンノースなどの単糖類、マルトース、イソマルトース、スクロース、ラクトース、α，α−トレハロース、ネオトレハロース、パノース、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、又はこれらの誘導体などのオリゴ糖、さらには、高分子デキストリン、グアガム、アラビアガム、プルラン、ヒドロキシエチルスターチなどの多糖類などの各種糖質から選ばれる１種又は２種以上適量混合して使用してもよい。さらには、必要に応じて、スクラロース、アセスルファムＫ、ステビア、糖転移ステビア、グリチルリチン、サッカリン、Ｌ−アスパルチル−Ｌ―フェニルアラニンメチルエステルなどの高甘味度甘味料を使用することも自由である。
【００１５】
また、香気物質或いは香気物質を含有する組成物に対して、或いは、必要に応じて、有機溶媒に溶解した香気物質に対して、環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を含有する固状物及び／又は粉末、さらには、必要に応じてその他の成分を混合し、保留性及び安定性に優れた固状の香気保持物を直接得ることもできる。即ち、これらの糖質と糖質を僅かしか溶解しない量の有機溶媒を含む香気物質とを、必要に応じてその他の成分とを共存させることにより、直接、固状物を得ることができ、さらには、常法により固状物から粉末の香気保持物を調製することも自由である。
【００１６】
本発明でいう、環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物、香気保持物、静菌剤、或いは殺菌剤を含有せしめるとは、当該成分とそれ以外の成分が直接接触できるように、その利用目的に応じて、原料の段階から製品の段階に至るまでの適宜の工程、或いは、既存の製品に対して、例えば、混和、混捏、溶解、融解、分散、懸濁、乳化、浸漬、浸透、散布、塗布、被覆、噴霧、注入、晶出、固化などの方法で接触させることを意味する。また、本発明でいう香気保持物、静菌剤、或いは、殺菌剤を共存せしめるとは、香気保持物から揮散した香気物質の機能を利用する場合のように、香気保持物と製品とを直接接触せしめることなく、例えば、密閉或いは半密閉された容器内に、別々に共存させてその機能を発揮させる場合をいう。
【００１７】
香気物質に対して環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を含有せしめる割合は、香気物質を保持できる割合であればよく、特に制限はないが、通常、環状四糖の無水物としての換算で、香気物質１重量部に対して、１重量部乃至１０，０００重量部、望ましくは、１０重量部乃至５，０００重量部が適当である。環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体の混合物が少ないと、香気保持物の単位重量当たりの香気の保持量は多くなるものの、その保留性が不十分となり、逆に多くなると、香気保持物を含有する組成物の製造の際の作業性や該組成物の物性などに悪影響がでる。
【００１８】
本発明の香気保持物は、香気物質が飛散消滅するのを抑制又は防止することにより、香気物質の飛散消滅に至る時間が延長され、香気が長い時間持続するので、香気の保持剤及び／又は香気の徐放剤として好適である。さらに、香気を含有する組成物がアルコール類、だしをはじめとする調味料類、発酵食品類などにあっては、それらの香気物質に由来する特有の風味が長期間保持されるため、該組成物の品質を長期間安定に保持することができる。また、香気物質が、香り以外の作用効果を有している場合には、その作用効果が徐々に発揮される製剤として利用することが出来る。例えば、エタノールなどのアルコール類、酢酸などの有機酸、ヒノキチオールやワサビオールなどのように、静菌作用及び／又は殺菌作用や防虫効果などを有している場合には、該香気保持物を他の飲食品、化粧品、医薬品、衣類・日用品などに含有、或いは、共存させることにより、該香気保持物質から徐々に放出される香気物質が、長期間、静菌作用及び／又は殺菌作用や防虫効果を発揮するので、微生物汚染や害虫による被害を受ける可能性のある製品に有利に利用できる。また、例えば、ラベンダー、ローズマリー、カモミールをはじめとする種々のハーブ類に由来する精油やエキスなどのように、それらに含有される香気物質が心身に影響を及ぼす、及び／又は、各種疾病に対する予防・治療効果を有する場合には、香気物質が徐々に放出されることを利用した芳香剤として、或いは、入浴時に浴槽に添加したり、湯に溶解してハーブティーとするなどして、アロマテラピー用の香気物資の給源として利用することも自由である。
【００１９】
上述のようにして得られる香気保持物は、次のような組成物、例えば、飲料、粉末飲料、調味料、甘味料、和洋菓子、氷菓、シロップ、ペースト、漬物、水産加工食品、畜肉加工食品、惣菜、乳製品、レトルト食品、健康食品、動物用飼餌料などの食品に利用することができる。特に、本発明の香気保持物に使用される環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合は、食物繊維様の作用を有しているので、本発明の香気保持物は香気が、長期間保留されることに加えて、整腸作用やコレステロールの低下作用なども期待されることから、健康食品の原料として好適である。さらに、石鹸、シャンプー、リンス、ボディーローション、練歯磨、リップクリーム、育毛剤、整髪剤、浴用剤などの化粧品、パック剤、口中剤、ハップ剤、経口剤、経皮吸収用薬剤、経粘膜吸収用薬剤、各種粉剤や錠剤などの医薬品、清拭剤、洗剤、柔軟剤、仕上げ剤、芳香剤、防臭剤、消臭剤、薫香剤、抗菌剤、抗カビ剤、防虫剤などの日用品として利用することができる。
【００２０】
これら食品、化粧品、医薬品、又は日用品に配合される香気保持物の使用量は、飲食品、化粧品、医薬品、又は日用品の種類、形態などにより異なるが、一般的には食品、化粧品、医薬品、又は日用品の原材料或いは製品１重量部に対して０．００１乃至５０重量部の範囲内で使用することができる。
【００２１】
次に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。しかし、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。
【００２２】
まず、本発明に用いる環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を製造するための酵素の製造例を示す。
【００２３】
【実施例Ａ−１】
〈環状四糖環及び環状四糖の糖質誘導体製造用の酵素の生産：バチルス　グロビスポルスＣ９の培養〉
澱粉を原料として環状四糖を製造するために必要な、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素及びα−イソマルトシル転移酵素を調製する。まず、澱粉部分分解物（商品名『パインデックス＃４』、松谷化学株式会社製造）４．０ｗ／ｖ％、酵母抽出物（商品名『アサヒミースト』、（アサヒビール株式会社製造）１．８ｗ／ｖ％、リン酸二カリウム０．１ｗ／ｖ％、リン酸一ナトリウム・１２水塩０．０６ｗ／ｖ％、硫酸マグネシウム・７水塩０．０５ｗ／ｖ％、及び水からなる液体培地を、５００ｍｌ容三角フラスコに１００ｍｌずつ入れ、オートクレーブで１２１℃、２０分間滅菌し、冷却して、バチルス　グロビスポルスＣ９（ＦＥＲＭ　ＢＰ−７１４３）を接種し、２７℃、２３０ｒｐｍで４８時間回転振盪培養したものを種培養とした。容量３０Ｌのファーメンターに種培養の場合と同組成の培地を約２０Ｌ入れて、加熱滅菌、冷却して温度２７℃とした後、種培養液１ｖ／ｖ％を接種し、温度２７℃、ｐＨ６．０乃至８．０に保ちつつ、４８時間通気攪拌培養した。遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、３０分間）して回収した上清約１８Ｌ中の両酵素の活性量は、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素は約０．４５単位／ｍｌ（総活性約８，１１０単位）、α−イソマルトシル転移酵素は約１．５単位／ｍｌ（総活性約２６，９００単位）であり、環状四糖生成活性は約０．９５単位／ｍｌであった。
【００２４】
なお、酵素活性は次のようにして測定した。即ち、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素の酵素活性の測定は、マルトトリオースを濃度２ｗ／ｖ％となるよう１００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）に溶解させて基質液とし、その基質液０．５ｍｌに酵素液０．５ｍｌを加えて、３５℃で６０分間酵素反応し、その反応液を１０分間煮沸して反応を停止させた後、その反応液中に主に生成するイソマルトシルマルトースとマルトースのうち、このマルトース量をＨＰＬＣ法で常法にしたがって定量することによって行った。α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素の活性１単位は、上記の条件下で１分間に１μＭ（マイクロモル）のマルトースを生成する酵素量とした。本明細書を通じて、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素の酵素活性は、以上のようにして測定される単位を意味する。
【００２５】
次に、α−イソマルトシル転移酵素の酵素活性の測定は、パノースを濃度２ｗ／ｖ％となるよう１００ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）に溶解させ基質液とし、その基質液０．５ｍｌに酵素液０．５ｍｌを加えて、３５℃で３０分間酵素反応し、その反応液を１０分間煮沸して反応を停止させた後、その反応液中に主に生成する環状四糖とグルコースのうち、このグルコース量をグルコースオキシダーゼ法で定量することによって行った。α−イソマルトシル転移酵素の活性１単位は、上記の条件下で１分間に１μＭのグルコースを生成する酵素量とした。本明細書を通じて、α−イソマルトシル転移酵素の酵素活性は、以上のようにして測定される単位を意味する。
【００２６】
また、環状四糖生成活性の測定は、澱粉部分分解物（商品名『パインデックス＃１００』、松谷化学株式会社製造）を濃度２ｗ／ｖ％となるよう５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）に溶解させ基質液とし、その基質液０．５ｍｌに酵素液０．５ｍｌを加えて、３５℃で６０分間酵素反応し、その反応液を１００℃で１０分間熱処理して反応を停止させた後、さらに、α−グルコシダーゼ（商品名『トランスグルコシダーゼＬ「アマノ」』、天野製薬製造）７０単位／ｍｌとグルコアミラーゼ（ナガセ生化学工業株式会社販売）２７単位／ｍｌとを含む５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）１ｍｌを加えて、５０℃で６０分間処理し、その液を１００℃で１０分間熱処理して酵素を失活させた後、環状四糖量を常法のＨＰＬＣ法で定量することによって行った。環状四糖生成活性１単位は、上記の条件下で１分間に１μＭの環状四糖を生成する酵素量とした。
【００２７】
【実施例Ａ−２】
〈バチルス　グロビスポルスＣ９由来酵素の調製〉
実施例Ａ−１で得られた培養上清約１８Ｌを８０％飽和硫安液で塩析して４℃、２４時間放置した後、その塩析沈殿物を遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、３０分間）して回収し１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）に溶解後、同緩衝液に対して透析して粗酵素液約４００ｍｌを得た。この粗酵素液は、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素活性を８，１１０単位と、α−イソマルトシル転移酵素活性を２４，７００単位と、環状四糖生成活性を約１５，６００単位有していた。この粗酵素液を三菱化学株式会社製『セパビーズ（Ｓｅｐａｂｅａｄｓ）ＦＰ−ＤＡ１３』ゲルを用いたイオン交換クロマトグラフィー（ゲル容量１，０００ｍｌ）に供した。この際、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素、α−イソマルトシル転移酵素のいずれも、『セパビーズ（Ｓｅｐａｂｅａｄｓ）ＦＰ−ＤＡ１３』ゲルに吸着せずに、非吸着画分に溶出した。この画分を１Ｍ硫安を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に透析し、その透析液を遠心分離して不純物を除き、アマシャム・ファルマシア・バイオテク株式会社製『セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ）ＨＲ　Ｓ−２００』ゲルを用いたアフィニティークロマトグラフィー（ゲル量５００ｍｌ）に供した。両酵素は、『セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ）ＨＲ　Ｓ−２００』ゲルに吸着し、硫安１Ｍから０Ｍのリニアグラジエント、さらに続いて、マルトテトラオース０ｍＭから１００ｍＭのリニアグラジエントで溶出させたところ、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素とα−イソマルトシル転移酵素とは分離して溶出し、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素は、マルトテトラオースのリニアグラジエントでその濃度が約３０ｍＭ付近に溶出し、α−イソマルトシル転移酵素は硫安のリニアグラジエントでその濃度が約０Ｍ付近に溶出した。そこで、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素活性画分とα−イソマルトシル転移酵素活性画分とを別々に集め回収した。
【００２８】
以下、α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素とα−イソマルトシル転移酵素の各々を精製する方法について述べる。
【００２９】
【実施例Ａ−３】
〈Ｃ９由来α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素の精製〉
実施例Ａ−２で得たα−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素画分を１Ｍ硫安を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に透析し、その透析液を遠心分離して不溶物を除き、東ソー株式会社製『ブチル−トヨパール（Ｂｕｔｙｌ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ）６５０Ｍ』ゲルを用いた疎水クロマトグラフィー（ゲル量３５０ｍｌ）に供した。本酵素は、『ブチル−トヨパール（Ｂｕｔｙｌ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ）６５０Ｍ』ゲルに吸着し、硫安１Ｍから０Ｍのリニアグラジエントで溶出させたところ、硫安濃度約０．３Ｍ付近で吸着した酵素が溶出し、本酵素活性を示す画分を集め回収した。再度、この回収液を１Ｍ硫安を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に透析し、その透析液を遠心分離して不溶物を除き、『セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ）ＨＲ　Ｓ−２００』ゲルを用いたアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製した。
【００３０】
【実施例Ａ−４】
〈Ｃ９由来α−イソマルトシル転移酵素の精製〉
実施例Ａ−２に記載のアフィニティークロマトグラフィーによってα−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素画分と分離したα−イソマルトシル転移酵素画分を、１Ｍ硫安を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に透析し、その透析液を遠心分離して不溶物を除き、東ソー株式会社製『ブチル−トヨパール（Ｂｕｔｙｌ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ）６５０Ｍ』ゲルを用いた疎水クロマトグラフィー（ゲル量３５０ｍｌ）に供した。本酵素は、『ブチル−トヨパール（Ｂｕｔｙｌ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ）６５０Ｍ』ゲルに吸着し、硫安１Ｍから０Ｍのリニアグラジエントで溶出させたところ、硫安濃度約０．３Ｍ付近で吸着した酵素が溶出し、本酵素活性を示す画分を集め回収した。再度、この回収液を１Ｍ硫安を含む１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に透析し、その透析液を遠心分離して不溶物を除き、『セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ）ＨＲ　Ｓ−２００』ゲルを用いたアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製した。
【００３１】
次に、本発明に用いる環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の誘導体との混合物を有する糖質の製造例を示す。
【００３２】
【実施例Ｂ−１】
〈環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を含有するシラップの調製〉
馬鈴薯澱粉を濃度約６％澱粉乳とし、これに濃度０．１％となるように炭酸カルシウムを加えてｐＨ６．０に調整し、これにα−アミラーゼを加えて液化した液化液に、澱粉固形物１ｇ当たり、実施例Ａ−３の精製α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素標品を固形物１グラム当たり２単位と、実施例Ａ−４の精製α−イソマルトシル転移酵素標品を固形物１グラム当たり６単位加えて、４８時間作用させて環状四糖含有糖液を調製した。該糖液を、１００℃で１０分間加熱処理して酵素を失活させた後、常法により、脱色、脱塩、濾過、濃縮して、濃度８０％、固形物当たり、グルコース０．６％、イソマルトース１．５％、マルトース１２．３％、環状四糖６３．５％、環状四糖にさらに１個又は２個以上のグルコースが結合した環状四糖の糖質誘導体５．２％及びその他の糖質１６．９％を含有する環状四糖含有シラップを調製した。
【００３３】
【実施例Ｂ−２】
〈環状四糖の調製〉
トウモロコシ由来フィトグリコーゲン（キューピー株式会社製）の水溶液（約１００Ｌ）を濃度４ｗ／ｖ％、ｐＨ６．０、温度３０℃に調整した後、実施例Ａ−３の精製α−イソマルトシルグルコ糖質生成酵素標品を固形物１ｇ当たり１単位と、実施例Ａ−４の精製α−イソマルトシル転移酵素標品を固形物１ｇ当り１０単位加え、４８時間作用させた後、１００℃で１０分間熱処理して酵素を失活させた。この反応液をｐＨ５．０、温度４５℃に調整した後、実施例Ａ−１と同様にα−グルコシダーゼ及びグルコアミラーゼを用いて処理し、残存する還元性オリゴ糖などを加水分解し、さらに、水酸化ナトリウムでｐＨを５．８に調整し温度９０℃で１時間保持して、酵素を失活させ、不溶物を濾過して除去した。この濾液を逆浸透膜を用いて固形分濃度約１６％まで濃縮した後、常法にしたがって脱塩、脱色、濾過、濃縮したところ、固形分約３，７００ｇを含む糖液約６．２ｋｇを得た。
【００３４】
得られた糖液を、オルガノ製イオン交換樹脂『アンバーライトＣＲ−１３１０（Ｎａ型）』を充填したカラム（ゲル量約２２５Ｌ）に供し、カラム温度６０℃で流速約４５Ｌ／ｈの条件でクロマト分離を行なった。溶出液の糖組成を、常法のＨＰＬＣ法でモニターし、環状四糖の純度が約９８％以上の画分を回収した。
【００３５】
【実施例Ｂ−３】
〈環状四糖含水結晶の調製〉
上記の方法で得られた純度約９８％以上の環状四糖画分をエバポレーターで固形物濃度約５０％に濃縮した後、この濃縮糖液約５ｋｇを円筒状のプラスチック容器に入れ、緩やかに回転させながら約２０時間で温度を６５℃から２０℃まで降下させることにより晶析させたところ、白色の結晶状粉末が得られた。続いて、遠心濾過器を用いて分蜜し結晶状物を湿重量として１，３６０ｇを回収した。さらに、６０℃で３時間乾燥して環状四糖結晶状粉末を１，１７０ｇ得た。得られた結晶粉末の糖組成をＨＰＬＣ法で測定したところ、環状四糖の純度は９９．９％以上と極めて高純度であった。この結晶状粉末をＸ線回折解析法によって測定したところ、主な回折角（２θ）として、１０．１°、１５．２°、２０．３°及び２５．５°を特徴とする回折スペクトルが得られた。また、この結晶状粉末の水分をカール・フィッシャー法で測定したところ、水分は約１３．０％であることがわかり、環状四糖１分子当り５分子の水を含む結晶であることが判明した。
【００３６】
【実施例Ｂ−４】
＜環状四糖１含水結晶の調製＞
実施例Ｂ−３の方法で得られた環状四糖５含水結晶粉末をガラス容器に入れ，予め温度１４０℃に保温したオイルバス中にそのガラス容器を３０分間保持し、加熱乾燥した。この粉末をＸ線回折法によって測定したところ，主な回折角（２θ）として，８．３°，１６．６°，１７．０°及び１８．２°を特徴とする回折スペクトルが得られた。また，この粉末の水分をカール・フィッシャー法で測定したところ，水分が約２．７％であることがわかり，環状四糖１分子当たり１分子の水を含むことが判明した。
【００３７】
【実施例Ｂ−５】
〈結晶性無水環状四糖の調製〉
実施例Ｂ−３の方法で得られた環状四糖結晶状粉末を温度１２０℃で１６時間真空乾燥した。この粉末をＸ線回折解析法によって測定したところ、主な回折角（２θ）として、１０．８、１４．７°、１５．０°、１５．７及び２１．５°を特徴とする回折スペクトルが得られた。また、この粉末の水分をカール・フィッシャー法で測定したところ、水分は約０．２％で、実質的に無水であることが判明した。
【００３８】
【実施例Ｂ−５】
〈非晶質無水環状四糖の調製〉
実施例Ｂ−２の方法で得られた環状四糖の純度が９８％以上の画分を、常法にしたがって脱塩、脱色、濾過した後、その濃度を５０％にした。これを−８０℃で急速に凍結した後、その凍結物を凍結真空乾燥を行い、さらに８０℃で３時間真空乾燥し、得られた乾燥物を粉砕機にて粉砕した。この粉末をＸ線回折解析法によって測定したところ、得られた回折スペクトルは結晶の存在を窺わせるピークを有しておらず、この粉末は非晶質性であることが判明した。また、この粉末の水分をカール・フィッシャー法で測定したところ、水分約０．３％で、実質的に無水であることが判明した。
【００３９】
次ぎに、本発明の香気保持物及び当該保持物を含有せしめた組成物の例を示す。
【００４０】
【実施例Ｃ−１】
〈環状四糖５含水結晶、環状四糖１含水結晶、結晶性無水環状四糖又は非晶質環状四糖による香気保持物の調製〉
環状四糖５含水結晶、環状四糖１含水結晶、結晶性無水環状四糖又は非晶質環状四糖による香気保持物調製のために、実施例Ｂ−３の方法で調製した環状四糖５含水結晶、実施例Ｂ−４の方法で調製した環状四糖１含水結晶、実施例Ｂ−５の方法で調製した結晶性無水環状四糖又は実施例Ｂ−６の方法で調製した非晶質無水環状四糖を使用し、対照には市販の分岐シクロデキストリン（商品名『イソエリートＰ』、マルハ株式会社販売）、特開平９−１１１２８４公報に記載の方法で調製した無水トレハロース、市販のデキストリン（商品名『パインファイバー』、松谷化学株式会社製造）又は試薬級の可溶性澱粉（特級、片山化学株式会社販売）を使用した。尚、これら対照の糖質は８０℃で１６時間真空乾燥した後に使用した。各糖質を１０ｇずつガラス製の乳鉢に採り、それぞれに香気物としてエタノール又は酢酸を少量添加しガラス棒でよく混合し、これら液状の香気物の添加と混合を、粉末状態が維持できなくなる直前まで繰り返し、最終的に得られた粉末状の香気保持物重量を測定し、混合前の糖質の重量を差し引くことで、香気保持物に保持されたエタノール又は酢酸の重量を算出した。それぞれの粉末状の香気保持物について、糖質１ｇ当たりの保持されたエタノール又は酢酸の重量を表１に示す。
【００４１】
【表１】
2004002620.tif 000003
【００４２】
表１の結果から明らかなように、環状四糖５含水結晶、環状四糖１含水結晶、結晶性無水環状四糖及び非晶質無水環状四糖のいずれもが、液状の香気物のエタノール又は酢酸を保持する作用を有しており、その作用は、対照の糖質と比較して、強い作用であることが判明した。また、これら環状四糖のうち、結晶性無水環状四糖及び非晶質無水環状四糖が比較的に強い作用を有することも判明した。
【００４３】
【実施例Ｃ−２】
〈揮散抑制作用〉
実施例Ｃ−１の方法で調製したエタノール保持結晶性無水環状四糖、エタノール保持分岐シクロデキストリン、エタノール保持無水トレハロース又はエタノール保持デキストリンを、調製後直ちに、それぞれ約０．５ｇを精秤して２０ｍｌ容のガラス製バイアル瓶に採り、常圧、室温下で放置してエタノールを揮散させた。採取直後、放置２時間、放置４時間、放置８時間、放置２４時間、それぞれの時点で残存するエタノール量を調べるため、水を約１０ｍｌ加えておのおののエタノール保持物を溶解させ、さらに、これをガラス製メスフラスコに移して水溶液を１００ｍｌに調整し、ガスクロマトグラフィーで水溶液中のエタノール量を定量した。また、実施例Ｃ−１で調製したエタノール保持可溶性澱粉の場合、上記と同様の操作により、水に懸濁後、該懸濁液を１００ｍｌに調整した後、遠心分離（１０，０００ｒｐｍ、１０分間）して得た上清中のエタノール量をガスクロマトグラフィーで定量した。尚、ガスクロマトグラフィーはＴＣ−５キャピラリーカラム（０．５３ｍｍ×１５ｍ）（ジーエルサイエンス（株）販売）を装着した島津ＧＬ装置ＧＣ−１４Ｂを用いて行った。各エタノール保持物それぞれ１グラム当たりの残存エタノール量を表２に示す。
【００４４】
【表２】
2004002620.tif 000004
【００４５】
表２の結果から明らかなように、調製後放置４時間までは、結晶性無水環状四糖は、分岐シクロデキストリンや無水トレハロース、デキストリン、可溶性澱粉と比べ、残存するエタノール量は著量であり、エタノールの揮散は緩やかで、エタノール揮散抑制作用を有することがわかり、強い香気保持作用を持つだけでなく、香気の保留性も高いことが判明した。尚、放置２４時間では、エタノール保持環状四糖中のエタノールのほとんどが、他の糖質と同様に、揮散することもわかった。この結果は、香気物質が徐々に放出されることを示すものであり、本発明の香気保持物の徐放剤としての有用性を示している。
【００４６】
【実施例Ｃ−３】
〈結晶性無水環状四糖による香気保持物の調製〉
実施例Ｂ−５の方法で調製した結晶性無水環状四糖を用いて、５４種類の液状の香気物（メタノール、エタノール、１−プロパノール、１−ブタノール、１−ペンタノール、１−オクタノール、２−プロパノール、２−メチル−１−プロパノール、２−ブタノール、２−メチル−２−プロパノール、３−メチル−１−プロパノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、２−アミノエタノール、ジアセトンアルコール、１，４−ブタンジオール、１−ヘキサノール、０−メトキシフェノール、３−フェニル−１−プロパノール、ベンゼン、トルエン、塩化ベンジル、クロロホルム、酢酸エチル、ジエチルエーテル、石油エーテル、α−テルピネン、α−ピネン、β−ピネン、α−テルピネオール、テルピネン−４−オール、リモネン、ゲラニオール、リナロール、シトロネラール、シトロネロール、γ−ドデカラクトン、酢酸ベンチル、酢酸ボルニル、イソチオシアン酸アリル、イソチオシアン酸ｔ−ブチル、ヒオキオイル、レモンオイル、ローズマリーオイル、ラベンダーオイル、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、オクタン酸、イソ酪酸、イソ吉草酸）を含有する香気保持物を調製した。即ち、結晶性無水環状四糖を４ｇずつガラス製の乳鉢に採り、それに液状の香気物を少量ずつ添加しガラス棒でよく混合し、この液状の香気物の添加と混合を、粉末状態が維持できなくなる直前まで繰り返し、最終的に得られた粉末状の香気保持物重量を測定し、混合前の結晶性無水環状四糖の重量を差し引くことで、香気保持物に保持された香気物重量を算出した。それぞれの粉末状の香気保持物について、結晶性無水環状四糖１ｇ当たりに保持された香気物重量を表３に示す。
【００４７】
【表３】
2004002620.tif 000005
【００４８】
表３の結果から明らかなように、結晶性無水環状四糖は、アルコール類、エステル類、エーテル類、精油類、有機酸類など、各種の液状の香気物を保持する作用を有しており、結晶性無水環状四糖を用いることで各種の香気保持物を調製できることが判明した。
【００４９】
【実施例Ｃ−４】
〈環状四糖含水結晶、結晶性無水環状四糖又は非晶質無水環状四糖による香気保持物の調製及びその物性〉
香気物質として、ラベンダーオイル、シトロネロール及びフェネチールアルコールを使用して、環状四糖含水結晶、結晶性無水環状四糖又は非晶質無水環状四糖の香気保持物作用を確認する試験は以下のようして行った。糖質として、実施例Ｂ−３の方法で調製した環状四糖５含水結晶、実施例Ｂ−５の方法で調製した結晶性無水環状四糖又は実施例Ｂ−６の方法で調製した非晶質無水環状四糖を使用し、対照として市販の分岐シクロデキストリン（商品名『イソエリートＰ』、マルハ株式会社販売）を使用した。
【００５０】
ラベンダーオイルの場合は、各糖質５重量部をそれぞれガラス皿（９０φ×２０ｍｍ）中に入れ、ラベンダーオイル１重量部を加え撹拌、混合して試料を調製した。調製直後の試料、又は２５℃で１０日間放置した後の試料１ｇを精秤し、以下の方法によりラベンダーオイル保持量を求めた。すなわち、試料にジエチルエーテル２ｍｌを加えてラベンダーオイルを抽出し、ジエチエーテル中のラベンダーオイルをＴＣ−Ｗａｘキャピラリーカラム（０．５３ｍｍ×２５ｍ）（ジーエルサイエンス（株）販売）を装着した島津ＧＣ−１４Ｂガスクロマト装置を使用したガスクロマトグラフィーにより定量した。
【００５１】
シトロネロール及びフェネチルアルコールの場合は、各糖質５重量部をそれぞれガラス皿（９０φ×２０ｍｍ）中に入れ、シトロネロールはフェネチルアルコール１重量部を加え撹拌、混合して試料を調製した。調製直後の試料、又は２５℃で１０日間放置した後の試料１ｇを精秤し、以下の方法によりシトロネロール及びフェネチルアルコール保持量を求めた。試料にジエチルエーテル２ｍｌを加えてシトロネロール又はフェネチルアルコールを抽出し、ジエチルエーテル中のシトロネロール又はフェネチルアルコールをＤＢ−５キャピラリーカラム（０．２５ｍｍ×３０ｍ）（ジーエルサイエンス（株）販売）を装着した島津ＧＣ−１４Ｂガスクロマト装置を使用したガスクロマトグラフィーにより定量した。
【００５２】
おのおのの試料中の香気物質の残存率は、次式で求め、結果を表４に示した。残存率（％）＝（１０日間放置後の香気物質量／調製直後の香気物質量）×１００
【００５３】
【表４】
2004002620.tif 000006
【００５４】
表４の結果から明らかなように、ラベンダーオイルは、製造直後に、環状四糖含水結晶では１５０ｍｇ／ｇ、結晶性無水環状四糖では１９０ｍｇ／ｇ、非晶質無水環状四糖では１８５ｍｇ／ｇ保持されており、対照として用いた分岐シクロデキストリンの場合の１４５ｍｇ／ｇと比較して結晶性無水環状四糖及び非晶質無水環状四糖では約１．３倍の保持量であった。シトロネロールでは、環状四糖含水結晶では１５５ｍｇ／ｇ、結晶性無水環状四糖では１９５ｍｇ／ｇ、非晶質無水環状四糖では１９０ｍｇ／ｇ保持されており、対照として用いた分岐シクロデキストリンの場合の１５０ｍｇ／ｇと比較して結晶性無水環状四糖及び非晶質無水環状四糖では約１．２倍の保持量であった。フェネチルアルコールでは、環状四糖含水結晶では１４０ｍｇ／ｇ、結晶性無水環状四糖では１９０ｍｇ／ｇ、非晶質無水環状四糖では１８０ｍｇ／ｇ保持されており、対照として用いた分岐シクロデキストリンの場合の１３０ｍｇ／ｇと比較して結晶性無水環状四糖及び非晶質無水環状四糖では約１．４乃至１．５倍の保持量であった。
【００５５】
一方、香気の保留性は、ラベンダーオイル及びフェネチルアルコールでは全体に残存率が低かったが、４種の糖質の中では、結晶性無水環状四糖及び非晶質無水環状四糖の残存率が比較的高い値であり、又、環状四糖含水結晶も、対照とした分岐シクロデキストリンに比べて高い値を示しており、いずれの環状四糖も保留効果があると判断した。一方、シトロネロールではいずれの試料でも残存率が比較的多く、いずれの環状四糖も対照として使用した分岐シクロデキストリンに比べて高い保留性が認められ、結晶性無水環状四糖、非晶質無水環状四糖或いは環状四糖含水結晶は、対照として用いた分岐シクロデキストリンの場合と比較して、約３．３乃至４．７倍の残存率であった。
【００５６】
上記のように高い香気の保留性（保持作用）を有し、且つ、香気によっては、放置時の保留性が高く、安定な香気保持物を調製できる環状四糖含水結晶、結晶性無水環状四糖又は非晶質無水環状四糖は、食品、化粧品、医薬品などの香気保持剤として有利に利用することができることが判明した。
【００５７】
【実施例Ｃ−５】
〈ハーブエキス保持物〉
水１５０重量部にカラギーナン３０重量部、澱粉分解物５０重量部を加えたものに、実施例Ｂ−３の方法で調製した環状四糖５含水結晶、スクロース（グラニュー糖）、又は市販の高純度含水結晶α、α−トレハロース（（株）林原商事販売、登録商標『トレハ』）のいずれかを２０重量部を、さらに加えて溶解し、１００℃に加温して１５分間殺菌した。これを４０℃に冷却したのち、ハーブエキス１重量部を添加混合した後、ＴＫ−ホモミキサーで乳化した。この液をスプレードライヤーを使用して、入口温度１２０℃、出口温度８０℃にて噴霧乾燥し、ハーブエキス保持物を得た。
【００５８】
香気保持物（ハーブエキス保持物）の香気の保留性は、香気保持物を開放系の容器に入れ、室温で２ヶ月間放置し、残存する香気の強さをパネラー１５人により評価した。その結果を表５に示した。尚、残存する香気の強さは、糖質として環状四糖を使用した場合の香気の強さを「強い」とし、香気は保留されているものの、環状四糖を使用したものよりも弱い場合を「普通」、香気の保留が認められないか／ほとんど認められない場合を「弱い」とする３段階に分けて評価した。
【００５９】
【表５】
2004002620.tif 000007
【００６０】
表５の結果から明らかなように、１５人のパネラーのうち１人のみがα，α−トレハロースを使用したハーブエキス保持物を、環状四糖と同等の香気保留性があると評価した以外、スクロース及びα，α−トレハロースを使用したハーブエキス保持物は、環状四糖を使用したものに比べてハーブエキスの香気を保持することができず、「普通」或いは「弱い」保留性しかないと評価した。このことから、放置時の保留性が高く、安定な香気含有物を調製できる本発明の環状四糖を含有する香気保持物は、食品、化粧品、医薬品などの香気付与剤として有利に利用することができることが判明した。また、環状四糖は食物繊維様の働きも併せ持つことから、本発明の環状四糖を含有する香気保持物は健康補助食品或いはその原材料として有利に利用できる。
【００６１】
【実施例Ｃ−６】
〈グレープフルーツオイル保持物〉
水１００重量部にＨＬＢ１５のショ糖脂肪酸エステル５重量部、市販の水飴（（株）林原商事販売、登録商標『テトラップ』）４５重量部及び実施例Ｂ−３の方法で調製した環状四糖５含水結晶４０重量部を加えて溶解し、８５〜９０℃で１５分間加熱殺菌した。この溶液を約４０℃に冷却後、撹拌しながらグレープフルーツオイル１０重量部を添加混合して乳化液を得た。この乳化液を−８０℃で急速に凍結し、凍結乾燥を行い、水分がなくなった時点で５０℃に昇温しさらに３時間真空乾燥した。得られた乾燥物は粉砕機にて粉砕し、グレープフルーツオイルを含有する香気含有粉末を得た。本品は、高いグレープフルーツオイルの保持能（保持作用）を有し、且つ、グレープフルーツオイルの保留性が高く安定な香気含有物であり、食品、化粧品、医薬品、日用品などの香気付与剤として有利に利用することができることが判明した。
【００６２】
【実施例Ｃ−７】
〈メントール保持物〉
水１０重量部、実施例Ｂ−６の方法で調製した非晶質無水環状四糖２０重量部及び市販の高純度含水結晶α，α−トレハロース（（株）林原商事販売、登録商標『トレハ』）１０重量部を混合、加熱溶解したのち、５０℃に冷却し、メントール１重量部を加え、混合し、メントールを含有する香気含有溶液を得た。本品は、高いメントールの保持能（保持作用）を有し、且つ、メントールの保留性が高く安定な香気含有物であり、又、その香気を徐放・揮散することから食品、化粧品、医薬品、日用品などの香気付与剤や芳香剤として有利に利用することができることが判明した。
【００６３】
【実施例Ｃ−８】
〈コーヒー保持物〉
水１０重量部、実施例Ｂ−３の方法で調製した環状四糖５含水結晶２０重量部及び市販のマルトース（（株）林原商事販売、登録商標『サンマルト−Ｓ』）１０重量部、市販の水飴（（株）林原商事販売、登録商標『テトラップ』）を混合、加熱溶解したのち、５０℃に冷却し、市販の粉末コーヒー１０重量部を加え、混練し、コーヒーを含有する溶液を得た。この溶液を−８０℃で急速に凍結し、凍結乾燥を行い、水分がなくなった時点で６０℃に昇温しさらに５時間真空乾燥した。得られた乾燥物は粉砕機にて粉砕し、コーヒーを含有する粉末を得た。本品は、コーヒーの香りが長期に渡って安定に保持されるとともに、お湯を注いで溶解させ、優れた香りとα，α−トレハロースに由来する適度な甘味を持つコーヒー飲料として、容易に摂取することができるし、コーヒー含有飲料や各種コーヒー含有菓子類の製造原材料として容易に使用することができる。
【００６４】
【実施例Ｃ−９】
〈紅茶保持物〉
水５０重量部、実施例Ｂ−３の方法で調製した環状四糖５含水結晶５０重量部及び市販の高純度含水結晶α，α−トレハロース（（株）林原商事販売、登録商標『トレハ』）５０重量部を加えて溶解し、この溶液を減圧濃縮して９０％濃度としたのち、紅茶（三井農林（株）販売）５重量部を加え、混合したのち、プラスチック製バット内に拡げ、乾燥した熱風を送って固化、乾燥し、ブロックに調製した。得られたブロックを破砕機を用いて破砕し、さらに乾燥して粉末製品とした。本品は、紅茶の香りが長期に渡って安定に保持されるとともに、お湯を注いで溶解させたのち、液中に含まれる茶葉を濾過することで、優れた香りとα，α−トレハロースに由来する適度な甘味を持つ紅茶飲料として、容易に摂取することができる。
【００６５】
【実施例Ｃ−１０】
〈煮干し〉
沸騰した水９５重量部に対して、実施例Ｂ−１で調製した環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を含有するシラップ５重量部を加えて溶解し沸騰させ、次いで、これに生カタクチイワシ１０重量部をざるに入れて浸漬してゆで上げ、ザルから取り出して、常法により乾燥させて製品を得た。本品は煮干しの香気物質がよく保持されていることから、煮だした際のだしの風味が良好である。
【００６６】
【実施例Ｃ−１１】
〈粉末みりん〉
みりん３重量部に実施例Ｂ−６で得た無水環状四糖結晶粉末７重量部を混合後、バットに移し、２日間放置して、環状四糖５含水結晶に変化させブロックを調製した。本ブロックを切削機にかけて粉末化し、分級して、香気物質がよく保持された風味良好な粉末みりんを得た。本品は即席ラーメンや即席の吸物などの調味料として有利に利用できる。
【００６７】
【実施例Ｄ−１】
〈粉末ジュース〉
噴霧乾燥により製造したグレープフルーツ果汁粉末３０重量部に対して、市販のマルトース（（株）林原商事販売、登録商標『サンマルト−Ｓ』）５０重量部、無水結晶マルチトール１０重量部、実施例Ｃ−６の方法で調製したグレープフルーツオイルを含有する香気含有物１０重量部、無水クエン酸０．６５重量部、プルラン０．５重量部、リンゴ酸０．１重量部、２−Ｏ−α−グルコシルーＬ−アスコルビン酸（（株）林原商事販売、商品名『ＡＡ−２Ｇ』）０．２重量部及びクエン酸ソーダ０．１重量部をよく混合攪拌し、粉砕し微粉末にして、これを流動層造粒機に仕込み、排風温度４０℃とし、これに市販のマルトース（（株）林原商事販売、登録商標『サンマルト−Ｓ』）の７０％含有液をバインダーとして適量スプレーし、３０分間造粒し、計量、包装して製品を得た。本品は、果汁含有率約３０％の粉末ジュースである。本品は、グレープフルーツの香りが長く保持され、異味、異臭がなく、高品質の粉末ジュースとして商品価値の高いものである。
【００６８】
【実施例Ｄ−２】
〈チューインガム〉
ガムベース３重量部を柔らかくなる程度に加熱溶融し、これに無水結晶マルチトール２重量部、キシリトール２重量部、市販の高純度含水結晶α，α−トレハロース（（株）林原商事販売、登録商標『トレハ』）２重量部、及び市販のマルトース（（株）林原商事販売、登録商標『サンマルト−Ｓ』）１重量部を加え、さらに実施例Ｃ−７の方法で調製したメントールを含有する香気保持物０．５重量部、他の香気物質を適量及び着色料とを混合し、常法に従って、ロールにより練り合わせ、成形、包装して製品を得た。本品は、メントールの香りが長く保持され、風味（テクスチャー、呈味、香り）良好で、低う蝕性、低カロリーのチューインガムである。
【００６９】
【実施例Ｄ−３】
〈プルランフィルム〉
水７５０重量部、市販のプルラン（（株）林原商事販売、商品名『プルランＰＩ−２０』）を２００重量部、実施例Ｃ−７の方法で調製したメントールを含有する香気保有物２０重量部、カラギーナンを５重量部、茶抽出ポリフェノール（三井農林（株）販売、商品名『ポリフェノン』）を０．１重量部、デカナール０．０５重量部、サンイエローＮｏ．２Ａ色素０．０５重量部を混合、溶解したフィルム原料溶解液を作製し、減圧脱泡した。この溶液をポリエチレンシート上に連続して流延し、５０℃の熱風中を潜らせて乾燥し、厚さ０．０３ｍｍのプルランフィルムを得た。本フィルムは、メントールの香りが長く保持され、湿度変化に対する安定性に優れ、透明で光沢があり、溶解性を持っていることから、食品や二次加工用の原材料として利用できる。
【００７０】
【実施例Ｄ−４】
〈浴用剤〉
焼塩９０重量部、市販の高純度含水結晶α，α−トレハロース（（株）林原商事販売、登録商標『トレハ』）２０重量部、無水ケイ酸１重量部、アスコルビン酸２−グルコシド結晶粉末（（株）林原商事販売、商品名『ＡＡ−２Ｇ』）２重量部、実施例Ｃ−６の方法で調製したグレープフルーツオイルを含有する香気保持物２重量部、実施例Ｃ−５方法で調製したハーブエキスを含有する香気保持物１重量部、及びα−グルコシル　ヘスペリジン（（株）林原商事販売、商品名『αＧヘスペリジン』）０．５重量部を混合して浴用剤を製造した。本品は、長期間保存後もハーブとグレープフルーツの香りがよく保持されており、入浴用の湯に１００乃至１０，０００倍に希釈して利用すればよい。入浴後は、肌がしっとりし、なめらかで、湯冷めしない高品質の浴用剤である。
【００７１】
【実施例Ｄ−５】
〈化粧用クリーム〉
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリコール２重量部、自己乳化型モノステアリン酸グリセリン５重量部、市販の高純度含水結晶トレハロース（（株）林原商事販売、登録商標『トレハ』）５重量部、実施例Ｂ−３の方法で調製した環状四糖５含水結晶５重量部、α−グルコシル　ルチン（株式会社林原販売、商品名『αＧルチン』）１重量部、アスコルビン酸２−グルコシド結晶粉末（（株）林原商事販売、商品名『ＡＡ−２Ｇ』）１重量部、流動パラフィン１重量部、トリオクタン酸グリセリン１０重量部及び防腐剤の適量を常法に従って加熱溶解し、これにＬ−乳酸２重量部、１，３−ブチレングリコール５重量部及び精製水６６重量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、さらに香気物質の適量を加えて撹拌混合し、化粧用クリームを製造した。本品は、環状四糖を使用したことにより香気が長く保持されるとともに、抗酸化性を有し、安定性が高く、高品質の日焼け止め、美肌剤、色白剤などとして有利に利用できる。
【００７２】
【実施例Ｄ−６】
〈成形薫香〉
香木（白檀）の粉末１００重量部に７０ｗ／ｖ％エタノール水溶液１，０００重量部を加え、４０℃で２時間抽出し、濾過して香木エキスを調製した。次に、この香木エキスを先に使用したものと同濃度のエタノール水溶液で５倍に希釈した溶液５重量部、タブノキ粉末（細末）６０重量部及びスギ粉末（細末）３５重量部、実施例Ｂ−２の方法で調製した環状四糖５含水結晶６重量部、実施例Ｄ−６で使用した高純度含水結晶α，α−トレハロース４重量部、及び、Ｄ−３で使用したプルラン１重量部を加えて混合し、以後、常法に従って、適量の水を加え練り合わせてペースト状とし、油圧成形機で直径２ｍｍ、長さ１３６ｍｍの棒状に押し出し成形し、約１０乃至２０℃の屋内で３日間通風乾燥して棒状の成形薫香を得た。本品は、白檀の香気をよく保持し、その経時劣化も少なく、また、変形、折損を起こしにくい、丈夫で高品質の成形薫香である。
【００７３】
【実施例Ｅ−１】
〈殺菌剤〉
実施例Ｃ−１の方法で調製したエタノール保持結晶性無水環状四糖を１ｇ又は２ｇ秤量して、それぞれ通気性のある紙製袋に詰め、さらに、これをアルミラミネート袋で密封・外装して殺菌剤を調製した。本品は、使用に際して、アルミラミネート袋を開封し、通気性の紙製袋を取り出すことにより、保持されているエタノールが徐々に放出される徐放性の静菌剤及び／又は殺菌剤として有利に利用できる。また、本品は、エタノールと環状四糖から成っているので、経口的に摂取したり、皮膚や粘膜に付着しても毒性を示すことが無く、安全であることから、比較的小空間にパックされている弁当、惣菜などの静菌剤及び／又は殺菌剤として有利に利用できる。
【００７４】
〈殺菌剤の殺菌作用の確認〉
上記で調製したエタノール保持結晶性無水環状四糖からなる殺菌剤を使用して、常在菌として代表的な微生物であるバチラス　サブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）（ＡＴＣＣ６６３３株）、スタヒロコッカス　アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）（ＡＴＣＣ６５３８株）、カンジダ　アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）（ＡＴＣＣ１０２３１株）、及び、アスペルギルス　ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ）（ＡＴＣＣ１６４０４株）に対する殺菌作用を調べる試験を以下のようにして行った。バチラス　サブチルス（ＡＴＣＣ６６３３株）、及び、スタヒロコッカス　アウレウス（ＡＴＣＣ６５３８株）の場合、ニュートリエント・ブロス（ディフコ（Ｄｉｆｃｏ）社製）で２７℃、１日間培養し、カンジダ　アルビカンス（ＡＴＣＣ１０２３１株）の場合、ワイエム（ＹＭ）ブロス（ディフコ（Ｄｉｆｃｏ）社製）で２７℃、１日間培養し、それぞれ得られた培養液を試験菌液とした。また、アスペルギルス　ニガー（ＡＴＣＣ１６４０４株）の場合、ポテト・デキストロース寒天培地（ディフコ（Ｄｉｆｃｏ）社製）で２７℃、５日間培養した後、培養に使用したものと同じ組成の培地に懸濁し、濾過して得られた胞子含有液を試験菌液とした。それぞれの試験菌液１．５ｍｌを吸収パッド（直径４７ｍｍ、アドバンテック東洋株式会社販売）にしみ込ませた後、２５℃、３０分間放置して菌含有吸収パッドを調製した。上記アルミラミネート袋に密封・外装した、調製直後と２５℃で３０日間保存後の殺菌剤とを各々開封し、中の通気性紙袋入りの殺菌剤を取り出して、その紙袋（１ｇ又は２ｇの殺菌剤入り）をガラス皿にのせ、各々を密閉容器（内径３０×２１×９．５ｃｍ、内容積約５，９８５ｃｍ３）中に入れ、次いで、菌含有吸収パッドを約１０ｃｍの距離でその密閉容器中に置き、密閉して２５℃、２４時間保存した。保存開始時と２４時間保存後の生菌数は、密封容器から菌含有吸収パッドを取り出し、生理食塩水でよく懸濁し抽出し、適宜希釈し、寒天培地で培養した後、形成コロニー数をカウントすることで測定した。なお、アルミラミネート袋に充填した殺菌剤は、調製直後のものと３０日間の保存後のもので、その殺菌作用の程度に差は認められなかったので、結果は調製直後の殺菌剤についてのみ示す。また、対照として、エタノール含有環状四糖粉末を共存させない場合の菌数も測定した。試験に使用した各株について、殺菌剤との共存下で２４時間保存した場合の生菌数の変化を表６に示す。
【００７５】
【表６】
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【００７６】
表６の結果から明らかなように、通気性紙袋に入れたエタノール保持結晶性無水環状四糖からなる殺菌剤は、エタノールを徐放・揮散し、用量に依存した静菌作用及び／又は殺菌作用を示した。すなわち、１ｇ入りの殺菌剤の場合には、殺菌剤を使用しない場合に比して、いずれの試験菌おいても、その菌数の増加が抑制される傾向を示し、静菌作用が認められた。さらに、２ｇ入りの殺菌剤の場合には、吸収パッドに吸収させた試験菌及び／又はその胞子を、２４時間内に完全に死滅させており、容積約６Ｌの密閉容器内の微生物を完全に殺菌することが確認された。これらの結果は、本発明の殺菌剤が、優れた静菌作用及び／又は殺菌作用を有していることを示している。
【００７７】
【発明の効果】
以上の説明から明らかなように、本発明によれば、香気物質に対して環状四糖、又は、この環状四糖と環状四糖の糖質誘導体との混合物を含有するシラップ、マスキット、固状物及び粉末から選択される１種又は２種以上を含有せしめることにより、香気や香気保持物に対して悪影響を与えず、高い香気の保持量、並びに、香気の保留性及び安定性の優れた香気保持物を得ることができる。さらに、この香気保持物を使用して香気を含有する組成物の製造を容易に行うことが可能となった。一方、本発明の香気保持物は、香気物質を徐々に揮散・放出する性質を有していることから、徐放性の香気保持剤として利用できるだけでなく、香気物質が殺菌作用を有する場合には、徐放性の静菌剤及び／又は殺菌剤としても有利に利用できる。このように、本発明は、食品、化粧品、医薬品、又は日用品など幅広い分野で、香気物質の保留性と安定性が優れた製品への用途が開けるなど、工業的な分野において極めて有用である。