(57)【要約】【課題】メラノサイトや肥満細胞上におけるｃ−ｋｉｔの発現を阻害し、医薬又は化粧料として有用なｃ−ｋｉｔ発現阻害剤、毛薄色化剤及び美白用組成物を提供する。【解決手段】ゴシュユ、チクセツニンジン、マオウ、ウワウルシ若しくはアラビアゴム又はそれらの抽出物を含有するｃ−ｋｉｔ発現阻害剤；毛薄色化剤；美白用組成物。【選択図】　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゴシュユ、チクセツニンジン、マオウ、ウワウルシ若しくはアラビアゴム又はそれらの抽出物を含有するｃ−ｋｉｔ発現阻害剤。
【請求項２】
ゴシュユ、チクセツニンジン、マオウ、ウワウルシ若しくはアラビアゴム又はそれらの抽出物を含有する毛薄色化剤。
【請求項３】
ゴシュユ、チクセツニンジン、マオウ、ウワウルシ若しくはアラビアゴム又はそれらの抽出物を含有する美白用組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、細胞表面におけるｃ−ｋｉｔの発現を阻害するｃ−ｋｉｔ発現阻害剤、毛薄色化剤及び美白用組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
日焼け後の色素沈着やシミ・ソバカスは、一般に皮膚の紫外線暴露による刺激やホルモンの異常又は遺伝的要素等によって皮膚内に存在する色素細胞（メラノサイト）が活性化されメラニン産生が亢進した結果生じるものと考えられている。また、毛髪や体毛の色もメラニンの産生量に依存している。
【０００３】
一方、ｃ−ｋｉｔは、造血細胞の増殖、分化を促す膜結合型の増殖因子として知られているステムセルファクター（Ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌ　ｆａｃｔｏｒ、以下「ＳＣＦ」という）の受容体として、造血幹細胞の表面に発現している。
【０００４】
近年、ｃ−ｋｉｔが造血細胞の他に、肥満細胞や生殖細胞の表面にも発現していることが明らかになり、ＳＣＦが肥満細胞上のｃ−ｋｉｔレセプターに結合することにより、肥満細胞が遊走、分化・増殖し、これにより喘息やアトピー性皮膚炎等の即時型アレルギーが引き起こされることが報告されている（非特許文献１参照）。
【０００５】
そして最近では、ｃ−ｋｉｔの構造と機能の解析が進み、ｃ−ｋｉｔがメラノサイトにも発現し、ｃ−ｋｉｔ遺伝子の異常により皮膚色素細胞の部分的欠如が起こることや、胎生期におけるメラノプラストの遊走と増殖維持にｃ−ｋｉｔが必要であること等が報告され、メラニンの生産にＳＣＦ及びｃ−ｋｉｔが深く関与すると考えられている（非特許文献２参照）。
【０００６】
従って、メラノサイトや肥満細胞表面上でのｃ−ｋｉｔの発現を阻害し、ＳＣＦの当該細胞表面への結合を特異的に阻害することができれば、メラニンの過剰産生やアレルギー反応を抑制することができ、皮膚の褐色化、シミ・ソバカスの発生の予防及び防止、毛髪や体毛の薄色化、更には関連するアレルギー疾患の予防及び治療が可能となる。
【０００７】
しかしながら、細胞表面上におけるｃ−ｋｉｔの発現を調節する物質は、これまでに全く知られていない。
【０００８】
本発明の目的は、メラノサイトや肥満細胞上におけるｃ−ｋｉｔの発現を阻害し、医薬又は化粧料として有用なｃ−ｋｉｔ発現阻害剤、毛薄色化剤及び美白用組成物を提供することにある。
【０００９】
【非特許文献１】
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ　１９９６　Ｍａｙ　１５；１５６（１０），　３９４５−３９５１
【非特許文献２】
Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ　Ｄｅｒｍａｔｏｌ　１１１，　ｐ２３３−２３８，　１９９８
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、細胞表面におけるｃ−ｋｉｔの発現を特異的に阻害する天然物を探索したところ、特定の植物又はその抽出物に、ｃ−ｋｉｔの発現阻害活性があり、メラニンの過剰産生に起因する色素沈着やシミ・ソバカスの発生抑制、毛の薄色化、即時型アレルギーの発生予防又は治療のための医薬又は化粧料として有用であることを見出した。
【００１１】
すなわち本発明は、ゴシュユ、チクセツニンジン、マオウ、ウワウルシ若しくはアラビアゴム又はそれらの抽出物を含有するｃ−ｋｉｔ発現阻害剤、毛薄色化剤及び美白用組成物を提供するものである。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明のｃ−ｋｉｔ発現阻害剤とは、細胞表面、特に肥満細胞やメラノサイト表面上におけるｃ−ｋｉｔの発現を阻害し、メラニンの過剰生成に伴う皮膚の褐色化やシミ・ソバカスの発生の予防又は防止効果、毛髪や体毛の薄色化効果、又はアレルギー性皮膚炎等の即時型アレルギーの予防又は治療効果を有するものをいう。
また、毛薄色化剤とは、毛のメラニン量を低減化し、毛の色を薄くする剤のこといい、この毛薄色化剤を用いることにより、髪の色を明るくしたり、むだ毛を目立たなくすることが可能である。
【００１３】
本発明におけるゴシュユとは、ミカン科（Ｒｕｔａｃｅａｅ）のＥｖｏｄｉａ　ｒｕｔａｅｃａｒｐａ　Ｂｅｎｔｈａｍ又はＥｖｏｄｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ　Ｄｏｄｅを、チクセツニンジンとは、ウコギ科（Ａｒａｌｉａｃｅａｅ）のトチバニンジン　Ｐａｎａｘ　ｊａｐｏｎｉｃｕｓ　Ｃ．　Ａ．　Ｍｅｙｅｒを、マオウとは、マオウ科（Ｅｐｈｅｄｒａｃｅａｅ）のＥ．　ｓｉｎｉｃａ　Ｓｔａｐｆ又はその他同属植物を、ウワウルシとは、ツツジ科（Ｅｒｃａｃｅａｅ）のＡｒｃｔｏｓｔａｐｈｙｌｏｓ　ｕｗａ−ｕｒｓｉ　（Ｌ．）　Ｓｐｒｅｎｇｅｌをそれぞれ意味する。
また、アラビアゴムとは、マメ科（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）のＡｃａｃｉａ　ｓｅｎｅｇａｌ　Ｗｉｌｌｄｅｎｏｗ又はその他同属植物の幹及び枝から得た分泌物をいう。
【００１４】
上記植物は、その植物の全草、葉、樹皮、枝、果実又は根等をそのまま又は粉砕して用いることができるが、ゴシュユについては果実を、トチバニンジンについては根茎を、マオウについては茎を、ウワウルシについては葉を使用するのが好ましい。
【００１５】
また、本発明における抽出物とは、上記植物又はアラビアゴムを常温又は加温下にて抽出するか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得られる各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮液又はその乾燥末を意味するものである。
【００１６】
本発明の抽出物を得るために用いられる抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類等が挙げられ、これらは混合物として用いることができる。
【００１７】
上記の抽出物は、そのまま用いることもできるが、当該抽出物を希釈、濃縮若しくは凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製して用いることもできる。
また、液々分配等の技術により、上記抽出物から不活性な夾雑物を除去して用いることもでき、本発明においてはこのようなものを用いることが好ましい。これらは、必要により公知の方法で脱臭、脱色等の処理を施してから用いてもよい。
【００１８】
尚、本発明の植物、アラビアゴム又はそれらの抽出物は、２種以上を混合して用いてもよい。
【００１９】
本発明の植物、アラビアゴム又はそれらの抽出物は、後記実施例に示すようにメラノサイトにおけるｃ−ｋｉｔの発現阻害活性を有し、これの有効量を含有させればｃ−ｋｉｔ発現阻害剤、毛薄色化剤及び美白用組成物が得られる。斯かる有効成分の含有量は、上記植物及びアラビアゴムとしては、乾燥重量換算で当該組成物中に０．１〜２０重量％、特に０．５〜１０重量％含有することが好ましく、抽出物としては、固形分換算で０．０００１〜１０重量％、特に０．００１〜５重量％含有することが好ましい。
【００２０】
本発明のｃ−ｋｉｔ発現阻害剤、毛薄色化剤又は美白用組成物には、皮膚化粧料に配合される薬効成分、例えば微粒子酸化亜鉛、酸化チタン、パーソールＭＣＸ、パーソール１７８９等の紫外線吸収剤、アスコルビン酸等のビタミン類、ヒアルロン酸ナトリウム等の保湿剤、ホルモン剤、及びコウジ酸、アルブチン、プラセンタエキス、カミツレエキス、ルシノール等の他の美白成分を添加配合することができる。
【００２１】
本発明のｃ−ｋｉｔ発現阻害剤、毛薄色化剤又は美白用組成物は、外用剤の他、内服剤、注射剤等、種々の形態の製剤とすることができるが、通常は、医薬品、医薬部外品、化粧品等の外用剤として用いることが好ましい。
【００２２】
また、本発明のｃ−ｋｉｔ発現阻害剤、毛薄色化剤又は美白用組成物を外用剤として用いる場合は、例えばクリーム、ローション、乳剤、軟膏、ゲル、パック、フォーム、エッセンス、スティック、パウダー等とするのが好ましい。
【００２３】
斯かる外用剤には、化粧品、医薬部外品、医薬品等に用いられる各種成分、例えばチョーク、タルク、フラー土、カオリン、デンプン、ゴム、コロイドシリカナトリウムポリアクリレート等の粉体；例えば鉱油、植物油、シリコーン油等の油又は油状物質；例えばソルビタントリオレエート、ソルビタントリステアレート、グリセロールモノオレエート、高分子シリコーン界面活性剤等の乳化剤；パラ−ヒドロキシベンゾエートエステル等の防腐剤；ブチルヒドロキシトルエン等の酸化防止剤；グリセロール、ソルビトール、２−ピロリドン−５−カルボキシレート、ジブチルフタレート、ゼラチン、ポリエチレングリコール等の湿潤剤；トリエタノールアミン又は水酸化ナトリウムのような塩基を伴う乳酸等の緩衝剤；グリセロールエーテル及び合成、動物性又は植物性セラミド等の界面活性剤；密ろう、オゾケライトワックス、パラフィンワックス等のワックス類；増粘剤；活性増強剤；着色料；香料等、を必要に応じ適宜組合せて用いることができる。
【００２４】
本発明のｃ−ｋｉｔ発現阻害剤、毛薄色化剤又は美白用組成物の使用量は、有効成分の含有量により異なるが、例えばクリーム状、軟膏状の場合、皮膚面１ｃｍ２当たり１〜２０ｍｇ、液状製剤の場合、同じく１〜１０ｍｇ使用するのが好ましい。
【００２５】
【実施例】
製造例１　ゴシュユ抽出物の製造
原料１０ｇに対し、５０％エタノール２５ｍＬで約１０日間かけて室温で抽出した。その後ろ過してエキスを得た。
【００２６】
製造例２
製造例１に準じて下記表１に示す各抽出物を調製した。
【００２７】
【表１】
2004083551.tif 000002
【００２８】
実施例１　ｃ−ｋｉｔ発現阻害活性
９６穴と２４穴プレートにヒト培養メラノサイトを播種し、セミコンフルエントになるまで培養後、表２に示す各抽出物を０．１％（ｖ／ｖ）の濃度で添加し、さらに４日間培養した。ｃ−ｋｉｔの発現量は、２４穴プレートに１２５Ｉ−ＳＣＦ（１ｎＭ）を加え、室温下にて９０分間反応させた後、メラノサイトへの１２５Ｉ−ＳＣＦ結合量をγ−カウンターで測定することにより求めた。その際１２５Ｉ−ＳＣＦに対してその１００倍量の未標識ＳＣＦを加えることで非特異的結合量とした。５０％ＥｔＯＨを終濃度で０．１％になるように添加した時の測定値から非特異的結合分の値を差し引いた値を１００％とし、これに対する相対値で評価した。
また、植物抽出物の細胞毒性のチェックは９６穴プレートにａｌａｍａＢｌｕｅを添加し、９０分間反応後の吸光度を測定することで求めた。毒性のない呼吸活性を１００％としたときの各種植物抽出物の呼吸活性を示す。
なお、ＳＣＦの添加によりｃ−ｋｉｔの発現は減少することから、ｃ−ｋｉｔ発現阻害剤の陽性コントロールとした。結果を表２に併せて示す。
【００２９】
【表２】
2004083551.tif 000003
【００３０】
表２に示したとおり、本発明の抽出物は、ｃ−ｋｉｔの発現を阻害することが認められた。
【００３１】
実施例２　ＵＶＢ誘導色素沈着形成抑制効果
（１）ＵＶＢの照射
６週齢、雌の褐色モルモット６匹の背部に色素沈着形成誘導可能な３００ｍＪ／ｃｍ２、２回２日の条件でＵＶＢを照射した。
（２）植物抽出物の塗布
７０％ＥｔＯＨをベースに製造例１で得られたゴシュユ抽出物を５％（ｖ／ｖ）の濃度で配合した。ＵＶＢ照射の１週間前から１日３回塗布し、ＵＶＢ照射後もゴシュユ抽出物の塗布を継続した。
（３）色差計による測定
ゴシュユ抽出物、溶媒コントロールである７０％ＥｔＯＨ塗布部位の明度（Ｌ値）を塗布前、１回目のＵＶＢ照射の直前、その日からさらに７、１４、２１日後に色彩色差計（日本電色工業３００Ａ）にて測定し、塗布前のＬ値との差（ｄＬ）を算出して黒化度の指標とした。結果を図１に示す。
図１より、ゴシュユ抽出物はＵＶＢ誘導色素沈着形成を抑制することが示された。
【００３２】
実施例３　毛薄色化効果
（１）植物抽出物の塗布
毛の成長が休止期にある６週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの背部皮膚を抜毛し、成長期を誘導した。その直後からポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４００とＰＥＧ３４００を９５：５の比率で混合したものをベースにゴシュユ抽出物を０．７％（ｗ／ｖ）で配合して塗布を開始した。次の休止期に入ったことが確認できるまで２５日間一日あたり２回の塗布を行った（Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスは成長期の誘導後１８日前後で休止期に入ることが知られている）。
（２）メラニン量の定量
ゴシュユ抽出物を２５日間連続塗布した背部毛を回収し、デジケータ内で十分乾燥後、Ｓｏｌｕｅｎｅ−３５０と水を９：１で混合した溶液に２ｍｇ／ｍｌの濃度になるように溶解し、７０℃で１時間加熱溶解した。その後室温で２時間放置後、４９０ｎｍの波長における吸光度を測定し、毛における単位重量あたりのメラニン量を求めた。シグマ社製のメラニンを溶解して２段階希釈系列を作成し、これをメラニン量のスタンダードとして、塗布したサンプルのメラニン合成阻害効果を評価した。結果を図２に示す。
【００３３】
【発明の効果】
本発明のｃ−ｋｉｔ発現阻害剤、毛薄色化剤及び美白用組成物は、皮膚におけるメラニンの過剰産生を抑制し、日焼け後の色素沈着やシミ・ソバカスの予防又は防止、毛髪及び体毛の薄色化、アレルギー性皮膚炎等の即時型アレルギー疾患の予防又は治療に有効である。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、ＵＶＢ誘導色素沈着形成抑制効果を示す図である。
【図２】図２は、メラニン合成阻害効果を示す図である。
【図１】
2004083551.tif 000004
【図２】
2004083551.tif 000005