(57)【要約】【課題】血液に代表される血小板と白血球を含有する細胞浮遊液から血小板の損失を低く抑えながら白血球を除去する、血小板通過性及び白血球除去能に優れた白血球選択吸着剤及び白血球選択除去用フィルターを提供すること。【解決手段】本発明は、非イオン性親水基と、全モノマーユニットに対して平均Ｘｍｏｌ％の塩基性含窒素官能基を含有する共重合ポリマーを試料としてフリーフロー等速電気泳動による成分分離を行い、回収した全分離成分のうち７５重量％以上がＸ±（１／２）Ｘｍｏｌ％の範囲内の塩基性含窒素官能基を含有することを指標として、血小板通過性及び白血球除去能に優れた白血球選択吸着剤及び白血球選択除去用フィルターを提供する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
非イオン性親水基と塩基性含窒素官能基とを少なくとも有する共重合ポリマーからなり、荷電による成分分離によって得た各分離成分について測定した塩基性含窒素官能基の含有率Ｙが（１／２）Ｘｍｏｌ％≦Ｙ≦（３／２）Ｘｍｏｌ％（ここで、Ｘは共重合ポリマーにおける塩基性含窒素官能基の平均含有率）の範囲内である成分を、全分離成分の７５重量％以上有することを特徴とする白血球選択吸着剤。
【請求項２】
共重合ポリマーにおける塩基性含窒素官能基の平均含有率Ｘが、０．１〜１０ｍｏｌ％である請求項１に記載の白血球選択吸着剤。
【請求項３】
荷電による成分分離にフリーフロー等速電気泳動法を用いることを特徴とする請求項１または２に記載の白血球選択吸着剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載された白血球選択吸着剤を、少なくともフィルター表面に保持させたことを特徴とする白血球選択除去用フィルター。
【請求項５】
非イオン性親水基と塩基性含窒素官能基とを少なくとも有する共重合ポリマーにおいて、荷電による成分分離を行い、各分離成分について測定した塩基性含窒素官能基の含有率Ｙが（１／２）Ｘｍｏｌ％≦Ｙ≦（３／２）Ｘｍｏｌ％（ここで、Ｘは共重合ポリマーにおける塩基性含窒素官能基の平均含有率）の範囲内である成分を、全分離成分の７５重量％以上有することを指標として白血球選択吸着材を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、血液、体液等の血球浮遊液から白血球を選択的に除去するための白血球選択吸着剤及びフィルターに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
近年、種々の疾患治療に血液中の必要な成分のみを輸血する成分輸血が盛んに行なわれるようになった。成分輸血に用いられる血液製剤、すなわち赤血球製剤、血小板製剤、血漿製剤などは全血を遠心分離して調製される。しかし遠心分離操作で調製された血液製剤には多くの白血球が含まれており、この白血球が原因となって輸血後の副作用、たとえば、軽微なものでは頭痛、吐き気から重篤なものでは白血球中に存在するウイルスによる感染などが起こることが明らかにされている。通常、全血中には１ｍｌ当たり１０００万個の白血球が含まれており、頭痛などの軽微な副作用を防止するためには１回の輸血で患者に輸注される白血球の数を１億個程度より少なくする必要があるとされ、血液製剤における白血球の残存率（全血を基準にした）が１／１０〜１／１００以下にする必要がある。さらにこの残存率が１／１０，０００〜１／１，０００，０００とすることができれば、重篤な副作用を防止することができると期待される。このため、血液製剤に混入している白血球を除去してから血液製剤を輸血する、いわゆる白血球除去輸血が普及してきた。
【０００３】
血液製剤から白血球を除去する工業的手段としては、遠心分離法と、不織布などの繊維構造体や網目構造やスポンジ構造を有するフィルターによるろ過法があるが、白血球除去効率が高いこと、操作が簡便であること、コストが安いことなどの理由からフィルターによるろ過法が広く用いられている。以下、不織布などの繊維構造体や網目構造やスポンジ構造を有するフィルターを総称してフィルター材と呼ぶ。
白血球を効率的に除去するために、フィルター材の厚み、平均繊維径、充填密度といった、物理的構造の様々な工夫がなされている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００４】
しかし、フィルター材表面が疎水性の場合、これらの方法では白血球のみならず他の血球成分、特に高い粘着性を持つ血小板の除去の効率まで上げてしまう。
このため、フィルター材表面の改質が行われる。表面改質には、親水性ポリマーなどの抗血栓性材料を、コートなどの方法によりフィルター材表面に保持させる手法が主に用いられる。しかし、このような手法により血小板の吸着を抑制した場合には白血球の吸着まで抑制され、本来の目的にかなわない（例えば、特許文献２参照。）。
【０００５】
また、フィルター材に適量の塩基性官能基と非イオン性親水基とを含むポリマーをコーティングするなどの方法により、白血球除去に優れ、かつ血小板の通過性が高まることが開示され、白血球除去フィルターを牛の血液処理に用いる実験が実施されている（例えば、特許文献３参照。）。
【０００６】
しかし、該公報に記載されるフィルターは、牛の血液処理や人の濃厚血小板製剤の処理に用いる場合には、高い血小板通過性を有し、白血球選択除去能にも優れているが、ヒトの全血液の処理に用いる場合には、血小板通過性が劣ってくる点で充分満足するものでない。
さらに、例えば、特許文献４には、塩基性含窒素官能基と非イオン性親水基とを含む白血球選択吸着剤を用いたフィルターの白血球除去能と血小板透過性は塩基性含窒素官能基の含有量に支配され、塩基性含窒素官能基の含有量には最適範囲が存在することが示されている。
【０００７】
しかしながら、本発明者らの実験によると、たとえ、白血球選択吸着剤を重合する際のモノマーの仕込み比を最適にし、設計どおりの平均組成を持つ白血球吸着剤を得たとしても、予定通りの白血球除去能及び血小板透過性が得られないことがあることが分かった。そこで、本発明者らは、白血球除去フィルターの性能が満足できない理由として、共重合ポリマーが均一物質ではなく、組成分布と分子量分布が交差した複雑な混合物であることが挙げられるのではないかと考えた。すなわち、共重合ポリマーの組成分布が広ければ目指す性能が得られないことがあるため、白血球選択吸着剤をはじめとする機能性高分子の設計においては、これまで設計の指標とされてきたポリマーの組成比、平均分子量、分子量分布の他に組成分布の均一性を考慮することが重要であると予測した。
【０００８】
【特許文献１】
特公平２−１３５８７号公報（第４−８頁）
【特許文献２】
特開昭５５−１２９７５５号
【特許文献３】
特公平６−５１０６０号公報（第５−７頁、第１−２表）
【特許文献４】
特公平６−５１０６０号公報（第１、５−７頁、第１−２表）
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、血液に代表される血小板と白血球を含有する細胞浮遊液から血小板の損失を低く抑えながら白血球を除去する、血小板通過性及び白血球除去能に優れた白血球選択吸着剤及び白血球選択除去用フィルターを提供することである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、従来技術の問題点を解決するため、鋭意研究を重ねた結果、前記のように、これまで設計の指標とされてきたポリマーの平均組成比、平均分子量、分子量分布の他に組成分布の均一性を考慮することが重要であると予測し、フリーフロー等速電気泳動法などの荷電による成分分離法を用いて共重合ポリマーの成分分離を行うと、電荷量、たとえば塩基性含窒素官能基の含有率のみに依存する分離が可能であることを見出し、本発明に至った。
【００１１】
本発明は、非イオン性親水基と塩基性含窒素官能基を少なくとも有する共重合ポリマーからなり、荷電による成分分離を行って得た塩基性含窒素官能基の含有率Ｙが、該ポリマーにおいて均一であることを特徴とする白血球選択吸着剤及び白血球選択除去用フィルターに関する。
さらに詳細には、本発明は、非イオン性親水基と、全モノマーユニットに対して平均Ｘｍｏｌ％の塩基性含窒素官能基を含有する共重合ポリマーを試料として、フリーフロー等速電気泳動に代表される、荷電による成分分離を行い、各分離成分について塩基性含窒素官能基の含有率Ｙの測定をし、Ｙが（１／２）Ｘｍｏｌ％≦Ｙ≦（３／２）Ｘｍｏｌ％（ここで、Ｘは共重合ポリマーにおける塩基性含窒素官能基の平均含有率）の範囲内である成分を、全分離成分の７５重量％以上含有することを指標として選んだ、血小板通過性及び白血球除去能に優れた白血球選択吸着剤及び白血球選択除去用フィルターに関するものである。
【００１２】
すなわち、本発明は、
（１）非イオン性親水基と塩基性含窒素官能基とを少なくとも有する共重合ポリマーからなり、荷電による成分分離によって得た各分離成分について測定した塩基性含窒素官能基の含有率Ｙが（１／２）Ｘｍｏｌ％≦Ｙ≦（３／２）Ｘｍｏｌ％（ここで、Ｘは塩基性含窒素官能基の平均含有率）の範囲内である成分を、全分離成分の７５重量％以上有することを特徴とする白血球選択吸着剤、
（２）共重合ポリマーにおける塩基性含窒素官能基の平均含有率Ｘが、０．１〜１０ｍｏｌ％である上記（１）に記載の白血球選択吸着剤、
（３）荷電による成分分離にフリーフロー等速電気泳動法を用いることを特徴とする上記（１）または（２）記載の白血球選択吸着剤、
（４）上記（１）〜（３）のいずれかに記載された白血球選択吸着剤を、少なくともフィルター表面に保持させたことを特徴とする白血球選択除去用フィルター、および
（５）非イオン性親水基と塩基性含窒素官能基とを少なくとも有する共重合ポリマーにおいて、荷電による成分分離を行い、各分離成分について測定した塩基性含窒素官能基の含有率Ｙが（１／２）Ｘｍｏｌ％≦Ｙ≦（３／２）Ｘｍｏｌ％（ここで、Ｘは共重合ポリマーにおける塩基性含窒素官能基の平均含有率）の範囲内である成分を、全分離成分の７５重量％以上有することを指標として白血球選択吸着材を製造する方法、
を提供する。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明における荷電による成分分離とは、キャピラリー電気泳動やフリーフロー等速電気泳動法に代表される、電圧を分離の駆動力とした成分分離法を言う。成分分離の際には脱塩作業や吸着などによる試料のロスが避けられないが、試料の性質を示すデータを得るためには、成分分離のトータルの回収率が７０重量％以上でなければならない。ここで、成分分離のトータルの回収率とは、成分分離を行う試料中に含まれるポリマーの乾燥重量と成分分離後に回収されたポリマー成分の総乾燥重量の比を言う。
【００１４】
本発明における白血球選択吸着剤とは、血液から白血球を選択的に除去し、赤血球、血小板、血漿タンパクは通過させる機能を有するポリマーである。一般に吸着剤の白血球吸着性能を高くすると、血小板に対する吸着性も同時に高くなる傾向があり、白血球選択吸着性は下がる。本発明が提供する白血球選択吸着剤は血小板の非吸着性、すなわち血小板回収率が高い白血球吸着剤である。本発明の白血球選択吸着剤とは、数式（１）で定義される白血球吸着係数が大きく、数式（２）で定義される血小板回収率が高い吸着剤である。
白血球吸着係数＝−ｌｏｇ｛（ろ過後回収液中の白血球濃度）／（ろ過前血液中の白血球濃度）｝          （１）
血小板回収率（％）＝｛（ろ過後回収液中の血小板濃度）／（ろ過前血液中の血小板濃度）｝×１００  （２）
【００１５】
白血球選択吸着剤としての良好な性能とは、実施例に示す実験系において白血球吸着係数が４．０以上、かつ血小板回収率が５０％以上であることを指す。白血球残存率と血小板回収率は、測定に用いるフィルター材のサイズや容量、ろ過圧力や処理される血液量、また用いる血液の由来により必ずしも一定ではないため、別々の血液提供者から採取したヒト新鮮血から得られた値の平均値を採用した。
【００１６】
本発明における白血球選択除去用フィルターとは、全血に代表される白血球含有液中の白血球は捕捉するが、他の血液成分、即ち赤血球、血小板、血漿は捕捉しないフィルターである。該フィルターは、フィルター材の表面にコートや修飾などの方法で白血球選択吸着剤を固定化させたものでも、フィルター材そのものを白血球選択吸着剤で作製したものでもよい。
【００１７】
本発明における塩基性含窒素官能基の含有率とは、全モノマーユニットに対する塩基性含窒素官能基のモル分率であり、核磁気共鳴（以下、ＮＭＲと略す）の積分値から求めることができる。本発明の実施例では塩基性含窒素官能基の含有率を１Ｈ−ＮＭＲにより求めた。
【００１８】
本発明における、白血球選択吸着剤の塩基性含窒素官能基の平均含有率Ｘは、荷電による成分分離の前に、ＮＭＲにより求めた。分離前における白血球選択吸着剤の塩基性含窒素官能基の平均含有率Ｘは０．１ｍｏｌ％〜１０ｍｏｌ％の範囲であることが望ましく、より好ましいのは１ｍｏｌ％〜６ｍｏｌ％である。塩基性含窒素官能基の平均含有率が０．１ｍｏｌ％未満であると血小板と共に白血球も粘着しにくくなるため、白血球の選択除去が行えなくなる傾向にある。一方、塩基性含窒素官能基の平均含有率が１０ｍｏｌ％を超えると白血球と共に血小板も粘着しやすくなるため、この場合も白血球の選択除去が行えなくなる傾向にある。
【００１９】
本発明の白血球選択吸着剤では、荷電による成分分離によって得た各分離成分における塩基性含窒素官能基の含有率Ｙが、均一であること、すなわち、白血球選択吸着剤を構成している共重合ポリマーにおける塩基性含窒素官能基の分布幅が狭いことを特徴とするものである。具体的には、本発明の白血球選択吸着剤は、荷電による成分分離によって得た各分離成分ごとに塩基性含窒素官能基の含有率Ｙを測定し、Ｙが（１／２）Ｘｍｏｌ％≦Ｙ≦（３／２）Ｘｍｏｌ％の範囲内である成分を、全分離成分の７５重量％以上有する共重合ポリマーからなるものである。（１／２）Ｘｍｏｌ％≦Ｙ≦（３／２）Ｘｍｏｌ％の範囲内にある成分は、９０重量％以上であることがさらに好ましい。
荷電による成分分離後の塩基性含窒素官能基の含有率Ｙも、塩基性含窒素官能基の平均含有率Ｘと同様にＮＭＲによって求めた。
【００２０】
本発明における非イオン性親水基として、具体的にはヒドロキシル基、アミド基、エーテル基、ニトロ基、ニトロソ基、スルホキシド基、スルホニル基、スルホ基、シアノ基、カルボキサミド、スルホンアミド、チオ酸アミド、シアナート、チオシアナートイソチオシアナートなどが挙げられるが、これらに限ったものではない。この中でも化学的に安定でかつ親水性の高い、ヒドロキシル基、アミド基、エーテル基が特に好ましい。
【００２１】
本発明における塩基性とは、正の荷電を有することを言う。塩基性の官能基は正の荷電を有しているため、生理的条件下で負に帯電している白血球を静電的な相互作用により効率的に吸着する効果があり、白血球に対する親和性を向上させることができる。
本発明における塩基性含窒素官能基として、具体的には第二級アミノ基、第三級アミノ基、第四級アンモニウム基、及びピロール、ピラゾール、ピロリジン、ピペリジンなどの骨格を有する含窒素複素環基などが挙げられるが、これらに限ったものではない。この中でも化学的に安定でかつ医療器具として安全性が高いという点で第二級アミノ基、第三級アミノ基が好ましい。
【００２２】
本発明で言うポリマー構成成分の塩基性含窒素官能基の含有率は荷電による分離により求めることができる。本発明では分離成分の回収も行うため、公知の方法であるフリーフロー等速電気泳動法（ＪＯＵＲＮＡＬ  ＯＦ  ＣＨＲＯＭＡＴＯＧＲＡＰＨＹ  ８ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｉｓｏｔａｃｈｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，  Ｒｏｍｅ，  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ６−９，  １９９２  １９９３  ＶＯＬ  ６３８；  ＮＵＭＢＥＲ  ２  ，ｐａｇｅ（Ｓ）  ２１５）を採用した。
【００２３】
【実施例】
以下、本発明を実施例により詳述する。
【実施例】
白血球選択吸着剤としてコポリマーＡ’を用いた。コポリマーＡ’は、非イオン性親水基を有する２−ヒドロキシエチルメタアクリレート（以下ＨＥＭＡと略称する）２５７ｇと塩基性含窒素官能基を有するジメチルアミノエチルメタアクリレート（以下ＤＭと略称する）９．６ｇを通常の溶液ラジカル重合により合成して得られるコポリマーＡを成分分離することで得た。成分分離法は下記のとおりである。
【００２４】
コポリマーＡの成分分離は、フリーフロー等速電気泳動を用いて行った。フリーフロー等速電気泳動装置はＤｒ．Ｗｅｂｅｒ社製のＯＣＴＯＰＵＳを用いた。フリーフロー等速電気泳動の移動相として、２０ｖｏｌ％のエタノールを含む５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ２．５）を用いた。移動相の流速は５．２７ｍｌ／ｍｉｎであった。コポリマーＡを移動相と同じ組成の溶媒に溶解させてサンプルとした。サンプル中のコポリマーＡの濃度は０．８重量％とした。移動相が層流となったところでサンプルを送液した。送液速度は０．１２ｍｌ／ｍｉｎとした。移動相の流れ方向に垂直となるように、１５００Ｖの電圧を印加して、電荷による分離を行った。分離成分の回収は分離部の終点に設けた１００個の回収孔を用い、４０分間回収を行った。泳動距離が長い成分ほど大きな番号を付した回収孔から回収される。コポリマーＡの分離成分の検出には紫外検出器を用いた。得られたクロマトグラムからコポリマーＡの成分が存在する回収液の範囲を確認した上で、この範囲の回収液を回収孔番号の低い方から順に５つずつ統合して、コポリマーＡの成分が存在する回収液をａ〜ｆの６つのフラクションに分割した。
【００２５】
得られたフラクションにはリン酸とリン酸ナトリウムが多量に含まれているため、脱塩を行う必要がある。このため、以下の方法で脱塩を行った。各フラクションに含有するリン酸塩の量を体積とリン酸塩濃度から算出し、水酸化ナトリウム添加量がリン酸塩の１．５等量となるように０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加えて、すべてのリン酸をリン酸ナトリウムとする。フラクションを減圧乾燥により乾燥させた後、ポリマー成分のみを溶媒抽出する。この溶液を液体クロマトグラフィー用の不溶物除去フィルター（クラボウ製クロマトフィルター：フィルター径２０ｍｍ、孔径０．４５μｍ）を用いてろ過し、浮遊するリン酸ナトリウムを除いた。得られた濾液を、エバポレーターを用いて減圧乾燥して大半の溶媒を除いた後、真空乾燥してわずかに残留する溶媒を除いた。分離成分のトータルの回収率は７６重量％であった。
【００２６】
フラクション毎に成分の１Ｈ−ＮＭＲ測定を行い、各分離成分のＤＭの含有率を求めたところ、フリーフロー等速電気泳動の分離はＤＭの含有率に依存していることが示された。ＮＭＲ測定には５００ＭＨｚのＮＭＲ（日本電子製ＡＬＰＨＡ５００）を用い、３ｍｍφのサンプル管を用いて測定を行った。
ＤＭの含有率を横軸、乾燥重量を縦軸として、コポリマーＡの分離挙動を示したものが図１である。フリーフロー等速電気泳動による分離を行う前におけるコポリマーＡのＤＭ含有率Ｘは２．４％であるので、（１／２）Ｘｍｏｌ％＝１．２％、（３／２）Ｘｍｏｌ％＝３．６％である。図１からコポリマーＡの分離成分のうち、塩基性含窒素官能基の含有率Ｙが（１／２）Ｘｍｏｌ％≦Ｙ≦（３／２）Ｘｍｏｌ％の範囲内である成分はフラクションｃ〜ｆであることがわかる。
【００２７】
コポリマーＡのフリーフロー等速電気泳動による成分分離を約４０時間行い、フラクションｃ〜ｆを統合し、脱塩を行った。この結果、コポリマーＡの分離成分であるコポリマーＡ’を約１．２ｇ得た。コポリマーＡ’のＤＭの平均含有率は２．６ｍｏｌ％であった。
このようにして得られたコポリマーＡ’の成分分離を、コポリマーＡと同様の条件で、フリーフロー等速電気泳動を用いて行った。コポリマーＡ’における分離成分のトータルの回収率は７６重量％であった。
【００２８】
ＤＭの含有率を横軸、乾燥重量を縦軸として、コポリマーＡ’の分離挙動を示したものが図２である。分離前のコポリマーＡ’のＤＭ含有率Ｘは２．６％であるので、（１／２）Ｘｍｏｌ％＝１．３％、（３／２）Ｘｍｏｌ％＝３．９％である。図２からコポリマーＡ’は、分離成分の塩基性含窒素官能基の含有率Ｙが（１／２）Ｘｍｏｌ％≦Ｙ≦（３／２）Ｘｍｏｌ％の範囲内である成分を、９１ｗｔ％有することが示された。
【００２９】
コポリマーＡ’を下記に示す方法でフィルター基材へコーティングした。コポリマーＡ’１ｇを５０重量％イソプロピルアルコール水溶液１９ｇに４０℃で溶解して、コポリマーＡ’の５重量％コート溶液を調製した。該コート溶液に平均繊維直径１．２μｍのポリエチレンテレフタレート繊維よりなる不織布（４０ｇ／ｍ２目付、厚さ０．２ｍｍ、幅１５０ｍｍ）を連続的に浸漬させた後、ニップロールに挟んで通過させることにより、余分なコート溶液を除去した。コーティングされた不織布は、排気ダクトを備えた乾燥室内で室温にて一昼夜乾燥させた後、回収した。
このようにして製造したコーティング不織布の任意の場所から直径２０ｍｍの円形フィルター３２枚を切り抜き、その３２枚をフィルターホルダーに重ねて充填（充填密度０．２ｇ／ｃｍ３）し、カラムとした。このカラムに後述する方法で調製したヒト新鮮全血を、シリンジポンプを用いて一定の流速０．７４ｍｌ／ｍｉｎで流し、その１３．３ｍｌを回収した。
ヒト新鮮全血は、採血した血液１００ｍｌに対し、抗凝固剤として濾過済みＣＰＤ溶液（クエン酸三ナトリウム二水和物２６．３ｇ、クエン酸一水和物３．２７ｇ、グルコース２３．２ｇ、およびリン酸二水素ナトリウム二水和物２．５１ｇを注射用蒸留水１０００ｍｌに溶解させ、孔径０．２μｍのフィルターで濾過した溶液）を１４ｍｌ加えて混和し、２０℃で３時間保存することにより調製した。
【００３０】
濾過前の血液、および血液を濾過した後の回収液について、その一定量の血液を採取し、白血球濃度は残存白血球測定用試薬システムＬｅｕｃｏＣＯＵＮＴＴＭｋｉｔ、フローサイトメーターＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、および解析ソフトＣＥＬＬ  Ｑｕｅｓｔ（以上、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、米国）を用いて測定した。また、血小板濃度は自動血球計数装置ＭＡＸ  Ａ／Ｌ  Ｒｅｔｉｃ（ＢＥＣＫＭＡＮ  ＣＯＵＬＴＥＲ、米国）を用いて測定した。その結果、コポリマーＡ’の白血球吸着係数は４．２、血小板回収率は５６．５％であり、白血球を選択的に除去する能力が良好であることが示された。
以上の結果から、本発明により、非イオン性親水基と、全モノマーユニットに対して平均Ｘｍｏｌ％の塩基性含窒素官能基を含有する共重合ポリマーである白血球選択吸着剤のフリーフロー等速電気泳動による成分分離を行い、回収した全分離成分のうち７５重量％以上がＸ±１／２Ｘｍｏｌ％の範囲内の塩基性含窒素官能基を含有することを指標とすることで、血液に代表される血小板と白血球を含有する細胞浮遊液から血小板の損失を低く抑えながら白血球を除去することが可能な、血小板通過性及び白血球除去能に優れた白血球選択吸着剤及び白血球選択除去用フィルターを提供することができた。
【００３１】
また、本発明の結果から、フリーフロー等速電気泳動を用いてより狭い範囲での成分回収を行ったり、精密重合を行ったりして、ＤＭの分布幅をさらに狭くすれば、コポリマーＡ’以上の性能を有する白血球選択吸着剤を得ることができると考えられる。
【００３２】
【比較例１】
コポリマーＡのフリーフロー等速電気泳動による分離挙動を示した図１から、分離成分のうち塩基性含窒素官能基の含有率Ｙが（１／２）Ｘｍｏｌ％≦Ｙ≦（３／２）Ｘｍｏｌ％の範囲内である成分をコポリマーＡは全分離成分の７１重量％有することが示される。
コポリマーＡの白血球吸着係数と血小板回収率を、コポリマーＡ’の場合と同様の方法で求めた。コポリマーＡの白血球吸着係数は３．８、血小板回収率は５４．２％であり、血小板は吸着しないが、白血球吸着係数が小さく、白血球選択吸着能が満足いく値でないことが示された。この結果、（１／２）Ｘｍｏｌ％≦Ｙ≦（３／２）Ｘｍｏｌ％の範囲内である成分を回収して得たコポリマーＡ’に比べ、組成分布の広いコポリマーＡでは白血球選択吸着剤としての能力である白血球吸着性能が低下することがわかった。
【００３３】
【比較例２】
白血球選択吸着剤として、非イオン性親水基を有するＨＥＭＡと塩基性含窒素官能基を有するコポリマーＢを用いた。コポリマーＢの重合条件は、モノマーの滴下条件のみをコポリマーＡの重合条件から変更している。コポリマーＢのモノマーの滴下条件は、ＨＥＭＡのみを反応容器中で重合した後、続けてＨＥＭＡ２５．７ｇとＤＭ９．６ｇであるモノマー混合物を滴下して、最終的なモノマー重量がＨＥＭＡ２５７ｇ、ＤＭ９．６ｇとなるようにした。コポリマーＢはＨＥＭＡを先に加えることで低ＤＭ含有率の成分を多く含むことが予想される。この低ＤＭ含有率の成分を多く含み、成分分布の広いと考えられるコポリマーＢについて、同様な検討を行った。フリーフロー等速電気泳動による分離を行う前におけるコポリマーＢのＤＭの平均含有率は２．４ｍｏｌ％であった。
この様にして得られたコポリマーＢの成分分離を、フリーフロー等速電気泳動を用いて行った。フリーフロー等速電気泳動の移動相として、２５ｖｏｌ％のエタノールを含む５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ２．５）を用いた。コポリマーＢを移動相と同じ組成の溶媒に溶解させてサンプルとした。サンプル中のコポリマーＢの濃度は０．７５重量％とした。コポリマーＡの場合と同様にして分離を行いａ〜ｆの６つのフラクションに分割した。分離成分のトータルの回収率は７６重量％であり、ＤＭの含有率を横軸、乾燥重量を縦軸として、コポリマーＢの分離挙動を示したものが図３である。図３から、荷電量による分離を行い、回収した分離成分のうち、分離成分の塩基性含窒素官能基の含有率Ｙが（１／２）Ｘｍｏｌ％≦Ｙ≦（３／２）Ｘｍｏｌ％の範囲内である成分を、コポリマーＢは全分離成分の７１重量％有することが示された。また、コポリマーＢは、予想通り低ＤＭ含有率の成分を多く含んでいた。
コポリマーＢの白血球吸着係数と血小板回収率をコポリマーＡ’の場合と同様の方法で求めた。コポリマーＢの白血球吸着係数は３．６、血小板回収率は５４．２％であり、血小板は吸着しないが、白血球吸着係数が小さく、白血球選択吸着能が落ちることが示された。この結果、低ＤＭ含有率の成分を多く含み、組成分布の広いコポリマーＢでは白血球選択吸着剤としての能力である白血球吸着性能が低下することがわかった。
【００３４】
【比較例３】
白血球選択吸着剤として、非イオン性親水基を有するＨＥＭＡと塩基性含窒素官能基を有するＤＭを有するコポリマーＣを用いた。コポリマーＣの重合条件は、モノマーの滴下条件のみをコポリマーＡの重合条件から変更している。コポリマーＣのモノマーの滴下条件は、まずＨＥＭＡ２５．７ｇとＤＭ９．６ｇを重合し、続けてＨＥＭＡを滴下して、最終的なモノマー重量がＨＥＭＡ２５７ｇ、ＤＭ９．６ｇとなるようにした。コポリマーＣはＤＭを先に加えることで高ＤＭ含有率の成分を多く含むことが予想される。この高ＤＭ含有率の成分を多く含み、成分分布の広いと考えられるコポリマーＣについて、同様な検討を行った。コポリマーＡの場合と同様にしてＤＭの平均含有率を求めたところ、フリーフロー等速電気泳動による分離を行う前におけるコポリマーＣのＤＭの平均含有率は２．６ｍｏｌ％であった。
このようにして得られたコポリマーＣの成分分離を、フリーフロー等速電気泳動を用いて行った。フリーフロー等速電気泳動の移動相として、２５ｖｏｌ％のエタノールを含む５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ２．５）を用いた。コポリマーＣを移動相と同じ組成の溶媒に溶解させてサンプルとした。サンプル中のコポリマーＣの濃度は０．７５重量％とした。コポリマーＡの場合と同様にして分離を行い、ａ〜ｆの６つのフラクションに分割した。分離成分のトータルの回収率は７６重量％であり、ＤＭの含有率を横軸、乾燥重量を縦軸として、コポリマーＣの分離挙動を示したものが図４である。図４から、荷電量による分離を行って得た分離成分のうち、分離成分の塩基性含窒素官能基の含有率Ｙが（１／２）Ｘｍｏｌ％≦Ｙ≦（３／２）Ｘｍｏｌ％の範囲内である成分を、コポリマーＣは全分離成分の６０重量％有することが示された。またコポリマーＣは、予想通り高ＤＭ含有率の成分を多く含んでいた。
コポリマーＣの白血球吸着係数と血小板回収率をコポリマーＡ’の場合と同様の方法で求めた。コポリマーＣの白血球吸着係数は３．７、血小板回収率は１６．８％であり、白血球と血小板を共に吸着させてしまうことが示された。この結果、高ＤＭ含有率の成分を多く含み、組成分布の広いコポリマーＣでは白血球選択吸着剤としての能力である血小板回収率が低下することがわかった。
【００３５】
【発明の効果】
本発明により、非イオン性親水基と、全モノマーユニットに対して平均Ｘｍｏｌ％の塩基性含窒素官能基を含有する共重合ポリマーである白血球選択吸着剤のフリーフロー等速電気泳動に代表される荷電による成分分離を行い、回収した全分離成分のうち７５重量％以上がＸ±１／２Ｘｍｏｌ％の範囲内の塩基性含窒素官能基を含有することを指標とすることで、血液に代表される血小板と白血球を含有する細胞浮遊液から血小板の損失を低く抑えながら白血球を除去できる、血小板通過性及び白血球除去能に優れた白血球選択吸着剤及び白血球選択除去用フィルターを提供することができた。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例における、コポリマーＡの分離挙動である。
【図２】実施例における、コポリマーＡ’の分離挙動である。
【図３】比較例２における、コポリマーＢの分離挙動である。
【図４】比較例３における、コポリマーＣの分離挙動である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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