(57)【要約】【課題】生体親和性と物理化学的な安定性に優れ、数から数百ナノメートルの大きさを有するナノ乳化粒子及びこれを含んだ化粧料組成物を提供する。【解決手段】レシチンの総重量に対して、アルブチンを０．００１〜２０倍の重量比で添加してナノ乳化粒子を製造し、その際にナノ乳化粒子内部に生理活性物質を抱集させる。そして、該ナノ乳化粒子を０．０００１〜９０重量％の範囲内で配合することにより、生体親和性と物理化学的な安定性に優れた化粧料組成物を製造することができる。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
レシチン及びアルブチンを使用してナノ乳化粒子を製造する方法であって、レシチンの総重量に対して、アルブチンを０．００１〜２０倍の重量比で添加して製造することを特徴とする、該ナノ乳化粒子の製造方法。
【請求項２】
上記ナノ乳化粒子が内部に少なくとも一種の生理活性物質を含有しており、使用されるレシチンの量が、該生理活性物質の総重量に対して０．１〜１００倍の重量比であることを特徴とする、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
上記の生理活性物質は、医薬料、美白原料、シワ除去・緩和剤、皮膚障壁強化剤、皮膚保湿力増強剤及び角質除去酵素で成された群から選択された１種以上であることを特徴とする、請求項２に記載の製造方法。
【請求項４】
請求項１〜請求項３に記載のいずれかの製造方法により得られるナノ乳化粒子を０．０００１〜９０重量％含有していることを特徴とする化粧料組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はナノメートル大きさの乳化粒子の製造及びこれを含んだ化粧料組成物に関するものである。より詳細には、レシチンとアルブチンを用い数から数百ナノメートルの大きさの生体親和性と物理化学的に安定性が優れた乳化粒子を製造し、該乳化粒子の内部に生理活性物質を抱集することで生理活性物質の長期安定性を向上させたナノ乳化粒子の製造及びこれを含んだ化粧料組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚は人体の一次保護膜として体内の諸器官を温度、湿度変化、紫外線及び公害物質等の外部環境の刺激から保護する機能を果たしている。このような機能を有している皮膚の老化現象を防止し、より健康で美しい皮膚を保つ目的で、従来から各種の動物、植物、微生物等から得られた生理活性物質を化粧品に加えて使用することで皮膚本来の機能を保ち、皮膚細胞を活性化させ、皮膚老化及びメラニンの沈着を効果的に抑制するための努力が行われてきた。
【０００３】
最近においては、有用性薬物と脂質、グリセロールと水、リン脂質或いは水溶性非イオン性界面活性剤を用いてナノメートルの大きさまたはマイクロメートルの大きさの乳化粒子を製造する技術が報告されており（米国特許５，３３８，７６１号）、また電荷を持ったリン脂質を乳化剤として用いてナノ粒子を製造した技術が報告されている（米国特許６，１２０，７５１号）。また乳化剤、オイル及び水よりなる３相が適当な濃度になった際に形成されるマイクロエマルジョンを利用したナノサイズの乳化粒子に関する製造技術が報告されている（米国特許５，１５２，９２３号、ＷＯ  ９１／０６，２８６号及びＷＯ  ９１／０６，２８７号）。
【０００４】
【特許文献１】
米国特許５，３３８，７６１号明細書
【特許文献２】
米国特許５，１５２，９２３号明細書
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、上記の従来技術のように、乳化粒子の場合、乳化膜が外部と動的平衡状態に置かれるために乳化物の内部にある有効成分が水と常に接することになり、酸化、分解による変性をもたらす問題点がある。また、乳化膜は物理化学的に非常に弱く不安定であり、塩化物或いは電荷を有する有機物または無機物による作用、或いは熱、光に対して極めて弱く、破壊されやすいので、長期間保管することにおいて不安定である短所があった。
【０００６】
このように、低分子乳化剤を用いて有効成分を含んだナノメートル大きさの乳化粒子は、水溶液中で不安定な傾向を示す活性成分に用いることに適さないだけではなく、活性成分を含んだ乳化粒子を製品化することにおいて非常に大きい制約になる。また、高濃度の有効成分を含むためにはそれに比例して多くの量の乳化剤を使用しなければならないが、この場合、乳化剤による皮膚刺激等が生じる恐れがある。
【０００７】
一方、ナノ乳化剤を皮膚に塗布する際、物理的な力によってナノ乳化粒子の界面膜が破壊され、または皮膚内部に吸収された後、ナノ乳化粒子の内部に抱集された薬物が一時に放出されて皮膚内部に吸収されるという長所があり、乳化膜を形成する乳化剤の分子デザインにより外界との接触を最小化させることができる長所がある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
そこで、本発明者らは上記問題を解決するため、生体親和性が優れたレシチンと、他の必須成分としてアルブチンを用いることにより、ナノ乳化粒子自体の物理化学的安定性を向上させると共に、アルブチンが持つ抗酸化力によってレシチンの酸化現象を抑制させ、ナノ乳化粒子内部に生理活性物質を安定に抱集、保管することが可能になると予想し、研究を重ねた。
【０００９】
その結果、本発明者らは適切な含量比のレシチンとアルブチンを用いてナノ乳化粒子を製造した場合、ナノ乳化粒子自体の物理化学的安定度が大幅に向上されることが確認でき、また内部に抱集された生理活性物質の安定性が様々な条件下においても大幅に向上されることが確認できた。すなわち、生体適合性が優れたレシチン及び抗酸化力が優れたアルブチンを最適比で使用することにより、上記の問題が解決できることを見出し、本発明を完成することができた。
【００１０】
従って、本発明の目的はレシチンとアルブチンを適正比で用いることで物理化学的に安定なナノ乳化粒子の製造方法を提供することである。
また、本発明の他の目的はナノ乳化粒子の内部に生理活性物質を安定に抱集する該ナノ乳化粒子の製造方法に関することである。
また、本発明の更に他の目的は上記ナノ乳化粒子を含有する化粧料組成物を提供することである。
【００１１】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を更に詳細に説明する。
本発明は、レシチン及びアルブチンを使用してナノ乳化粒子を製造する方法であって、レシチンの総重量に対して、アルブチンを０．００１〜２０倍の重量比で添加して製造することにより、物理化学的安定度の高いナノ乳化粒子を製造することができる。
【００１２】
また、本発明は、生理活性物質を安定に抱集したナノ乳化粒子を製造する方法であって、使用されるレシチンの量について、該生理活性物質の総重量に対して０．１〜１００倍の重量比に調整することにより、該生理活性物質を安定に抱集したナノ乳化粒子を製造することができる。
【００１３】
本発明の製造方法により製造されたナノ乳化粒子のサイズは、１ｎｍ〜５００ｎｍ、好ましくは３０ｎｍ〜１５０ｎｍであり、約５０ｎｍのものが最適である。ここで、ナノ粒子とはナノメートル単位の大きさを持つ粒子を意味し、粒子の大きさは粒子の直径を示す。
【００１４】
本発明において使用されるレシチンとしては、通常入手できる大豆レシチン、卵黄レシチンを初めとして、これらを加工して得られる精製レシチン、水素添加レシチン、更には主要成分たるフォスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン等も使用できる。また、レシチンの使用量としては、生理活性物質の総重量に対して０．１〜１００倍の重量比、望ましくは１〜５倍の質量比の範囲内である。
【００１５】
また、レシチンの乳化剤としての機能を補助するために追加的に界面活性剤を用いることができ、ナノ乳化粒子の分散安定性の向上のために水溶性高分子を更に使用することができる。
【００１６】
次に、本発明において使用されるアルブチンとは、ハイドロキノンの糖誘導体で、チロシナーゼの活性を阻害する性質を有し、その化学式は、Ｃ１２Ｈ１６Ｏ７  と表される。使用量としては、レシチンの量に対して０．００１〜２０倍の質量比の範囲内であり、望ましくは０．１〜２倍の質量比の範囲内である。
【００１７】
本発明により製造されてなるナノ乳化粒子は、ナノメートルの大きさの粒子であって、水溶液中に分散されている状態で存在する。ナノ乳化粒子の水溶液中における含有量は、０．０００１重量％〜９０重量％程度が適当であり、好ましい範囲は０．１重量％〜５０重量％であり、最適な含有量は５重量％である。
【００１８】
本発明のナノ乳化粒子に抱集させることができる生理活性物質としては、抗生剤、抗腫瘍剤、抗炎症剤、解熱剤、鎮痛剤、抗浮腫剤、鎮咳・鎮痰剤、安定剤、筋肉弛緩剤、抗てんかん剤、抗潰瘍剤、抗うつ病剤、抗アレルギー剤、強心剤、抗不整脈剤、血管拡張剤、血圧降下剤、糖尿治療剤、ポリペプタイド・ホルモン等の医薬原料、抗酸化剤、美白原料、コラーゲン合成促進剤等のしわ除去・しわ緩和剤、皮膚障壁強化剤及び皮膚保湿力増強剤等を挙げることができる。
【００１９】
本発明の化粧料組成物はその剤型において特別に限定されるものではなく、例えば、柔軟化粧水、栄養化粧水、マッサージクリーム、栄養クリーム、パック、ジェル、皮膚粘着タイプの化粧料、口紅、メークアップベース、ファウンデーション等の剤型を有する化粧料、シャンプー、リンス、バディクレンザ、石鹸、歯磨剤、口腔清浄剤等の洗浄料組成物としても、またローション、軟膏、ゲル、クリームや消臭剤或いは噴霧剤のような経皮投与型医薬料に含有させることができる。
【００２０】
本発明の製造方法によれば、生体親和性が優れたレシチンと抗酸化力に優れたアルブチンを利用することにより、１〜５００ｎｍの大きさであって、その内部に生理活性物質が抱集されたナノ乳化粒子を製造することができる。該ナノ乳化粒子を皮膚に塗布した際、物理的な剪断力によって界面膜が一斉に破壊され、或いは皮膚内部に浸透してナノ乳化粒子の外部環境が疎水性に変わることにより、界面膜のレシチンとアルブチンに対する溶解力が増加する。そして、界面膜を形成するレシチンとアルブチンが細胞間のリン脂質層に吸収されることにより、界面膜が崩壊して、内部に抱集された活性物質が瞬間的に大量放出される。
【００２１】
特に、５０ｎｍ以下のナノ粒子は角質層の下に浸透及び拡散され、内部に抱集された生理活性物質が真皮層の上段まで拡散されるので、生理活性物質の皮膚吸収を極大化できる長所がある。従って、内部に生理活性物質が抱集されたナノ乳化粒子を本発明の製造方法により製造し、該ナノ乳化粒子を配合した化粧料組成物については、皮膚細胞活性化、皮膚美白、しわ除去、抗酸化、皮膚保湿等の皮膚美容及び／或いは消炎鎮痛等の生理活性物質の効能及び効果を極大化させることができる。すなわち、本発明はレシチンとアルブチンを用いて水溶液状態では安定な界面膜を形成、維持させたナノ乳化粒子の製造及び内部に生理活性物質を抱集する方法並びに本発明の方法により製造されたナノ乳化粒子を含んだ化粧料組成物に関するものである。
【００２２】
また、上述したように、本発明において、レシチンの乳化力を補助する目的で、界面活性剤を使用することができる。この際、その種類や構造に制限されることはないが、例えば、高級脂肪酸石鹸、アルキル硫酸エステル塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、アルキルエーテルリン酸エステル塩、Ｎ−アシルアミノ酸塩等の陰イオン界面活性剤、塩化アルキルトリメチルアンモニウム、塩化ジアルキルジメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム等の陽イオン界面活性剤、アルキルジメチルアミノ酢酸ベタイン、アルキルアミドジメチルアミノ酢酸ベタイン、２−アルキル−Ｎ−カルボキシ−Ｎ−ヒドロキシイミダゾリウムベタイン等の両性界面活性剤、ポリオキシエチレン形態、多価アルコールエステル形態、エチレオキシド／プロピレンオキシドブロック共重合体等の非イオン性界面活性剤、エチルセルロース等のような高分子界面活性剤、ラノリン、コレステロール、サポニン等の天然界面活性剤等が使用可能である。
【００２３】
また、本発明の製造方法においては、ナノ乳化粒子の分散安定性の目的で、水溶性高分子をさらに使用することができる。水溶性高分子の種類は特に制限されないが、例えば天然由来の水溶性高分子としてアカシアガム、イリシモス（Ｉｒｉｓｈ  ｍｏｓｓ）、カラヤガム（ｋａｒａｙａ  ｇｕｍ）、トラガカントガム（ｇｕｍ  ｔｒａｇａｃａｎｔｈ）、グアヤクガム（ｇｕｍ  ｇｕａｉａｃ）、キサンタンガム（ｘａｎｔｈａｎ  ｇｕｍ）、ロカストビンガム（ｌｏｃｕｓｔ  ｂｅａｎ  ｇｕｍ）等とこれらの誘導体が使用可能で、カゼイン、ゼラチン、コラーゲン、アルブミン、グロブリン、フィブリン等の蛋白質とこれらの誘導体、セルロース、デキストリン、ペクチン、デンプン、アガ、マンナン等の天然由来糖類とこれらの誘導体、合成された高分子としてポリビニル類高分子とその誘導体（例：ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルエーテル等）、ポリカルボキシ酸とその誘導体（例：ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリメチルメタクリル酸等）、ポリエチレングリコール等のポリエチレン化合物、多糖とその誘導体（ポリシュクロース、ポリグルコース、ポリラクトース及びこの塩類）等が使用可能で、上述した高分子の単独、併用或いは架橋化された形態及び塩の形態を持った高分子が使用可能である。
【００２４】
ナノ乳化粒子に抱集され得る生理活性物質については、特別な制限はないが、例えば、医薬料としてゼンタマイシン（ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ）、ジベカシン（ｄｉｂｅｋａｃｉｎ）、カネンドマイシン（ｋａｎｅｎｄｏｍｙｃｉｎ）、リビドマイシン（ｌｉｖｉｄｏｍｙｃｉｎ）、トブラマイシン（ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎ）、アミカシン（ａｍｉｋａｃｉｎ）、フラジオマイシン（ｆｒａｄｉｏｍｙｃｉｎ）、シソミシン（ｓｉｓｏｍｉｃｉｎ）、テトラサイクリンハイドロクロライド（ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、オキシテトラシクリンヒドロクロライド（ｏｘｙｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ロリテトラサイクリン（ｒｏｌｉｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ）、ドキシサイクリンヒドロクロライド（ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、アンピシリン（ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ）、ピペラシリン（ｐｉｐｅｒａｃｉｌｌｉｎ）、チカルシリン（ｔｉｃａｒｃｉｌｌｉｎ）、セパロチン（ｃｅｐｈａｌｏｔｈｉｎ）、セパロリジン（ｃｅｐｈａｌｏｒｉｄｉｎｅ）、セフォチアム（ｃｅｆｏｔｉａｍ）、セフスロジン（ｃｅｆｓｕｌｏｄｉｎ）、セフメノキシム（ｃｅｆｍｅｎｏｘｉｍｅ）、セフメタゾール（ｃｅｆｍｅｔａｚｏｌｅ）、セファゾリン（ｃｅｆａｚｏｌｉｎ）、セホタクシム（ｃｅｆｏｔａｘｉｍｅ）、セホペラゾン（ｃｅｆｏｐｅｒａｚｏｎｅ）、セフチゾキシム（ｃｅｆｔｉｚｏｘｉｍｅ）、モキソラクタム（ｍｏｘｏｌａｃｔａｍ）、ラタモキセフ（ｌａｔａｍｏｘｅｆ）、チエナマイシン（ｔｈｉｅｎａｍｙｃｉｎ）、スルファゼシン（ｓｕｌｆａｚｅｃｉｎ）、アズトレオナム（ａｚｔｈｒｅｏｎａｍ）等の抗生剤；ブレオマイシンヒドロクロライド（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、メトトレキセイト（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、アクチノマイシンＤ（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ  Ｄ）、ミトマイシンＣ（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ  Ｃ）、硫酸化ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、硫酸化ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、ダウノルビシンヒドロクロライド（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、アドリアマイシンネオカルシノスタチン（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ  ｎｅｏｃａｒｃｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、シトシンアラビノシド（ｃｙｔｏｓｉｎｅ  ａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ）、フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、テトラハイドロフリル−５−フルオロウラシル（ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒｙｌ−５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、クレスチン（ｋｒｅｓｔｉｎ）、ピシバニル（ｐｉｃｉｂａｎｉｌ）、レンチナン（ｌｅｎｔｉｎａｎ）、レバミソール（ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）、ベスタチン（ｂｅｓｔａｔｉｎ）、アジメキソン（ａｚｉｍｅｘｏｎ）、グリシルリジン（ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚｉｎ）、ポリＩ：Ｃ、ポリＡ：Ｕ、ポリＩＣＬＣ等の抗腫瘍剤；サリチレートＮａ（ｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）、サルピリン（ｓｕｌｐｙｒｉｎｅ）、フルフェナメートＮａ（ｓｏｄｉｕｍ  ｆｌｕｆｅｎａｍａｔｅ）、ジクロフェナクＮａ（ｓｏｄｉｕｍ  ｄｉｃｌｏｆｅｎａｃ）、インドメタシンＮａ��ｓｏｄｉｕｍ  ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ）、モルフィンヒドロクロライド（ｍｏｒｐｈｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ペチジンヒドロクロライド（ｐｅｔｈｉｄｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、レボルファノールタルタレート（ｌｅｖｏｒｐｈａｎｏｌ  ｔａｒｔｒａｔｅ）、オキシモルホン（ｏｘｙｍｏｒｐｈｏｎｅ）等の抗炎症及び抗腐腫剤；塩化リゾチーム、蛋白質合成刺激ペプチド等のホルモン医薬品；助酵素Ｑ１０（ｃｏ−Ｑ１０）、ビネアトロル（ｖｉｎｅａｔｒｏｌ（ｒｅｓｖａｒａｔｒｏｌ））、  ＢＨＴ、ビタミンＡ及びその誘導体、ビタミンＣ誘導体、ビタミンＥとその誘導体等の抗酸化剤；トリクロサン（ｔｒｉｃｏｌｏｓａｎ）、クロルヘキシジン（ｃｈｌｏｒｏｈｅｘｉｄｉｎｅ）、セチルピリミジニウムクロライド（ｃｅｔｙｌｐｙｒｉｄｉｎｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、天然精油等の抗菌剤；ミノキシジル（ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ）、ＴＧＦ（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）、ＥＧＦ（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）、ＦＧＦ（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）、ＩＧＦ（ｉｎｓｕｌｉｎｅ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）、テストステロン（ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ）、アンドロゲン（ａｎｄｒｏｇｅｎ）等の育毛剤、養毛剤、美白原料、コラーゲン合成促進剤等のしわ除去・しわ緩和剤及びセラミド、スフィンゴシン等の皮膚障壁強化及び皮膚保湿力増強剤、パパイン（ｐａｐａｉｎ）等の角質除去酵素等が含有可能で、ナノ粒子内部に抱集される有効活性物質の種類及び含量は、使用の目的と用法に応じて調整することができる。
【００２５】
すなわち、本発明で使用される生理活性物質は、伝達しようとする薬物の種類、徐放化の速度、物理化学的性質によって、レシチン及びアルブチンの使用比率を適宜選択することにより、ナノ乳化粒子内部に安定的に含有させ得るとともに、使用時には該生理活性物質の効能及び効果を極大化させることができる。
【００２６】
【実施例】
以下、本発明の具体的な実施例を挙げて具体的に説明するが、本願発明はこれらの例に限定されるものではない。
【００２７】
【実験例１】
（ナノ乳化粒子の製造）
ナノ乳化粒子の製造において、レシチンとアルブチンの含量比を決定する目的で、内部抱集物質を考慮しない状態でレシチンに対するアルブチンの含量比を変えてナノ乳化粒子を製造した。別途に、界面活性剤及び分散安定化のための水溶性高分子は使用しなかった。
ナノ乳化粒子の製造において、レシチンとして商品名ＰＨＯＳＰＨＯＬＩＰＯＮョ（Ｎａｔｔｅｒ  ｍａｎｎ  Ｐｈｏｐｈｏｌｉｐｉｄ  ＧｍｂＨ  社製）を購入して使用した。使用したレシチンの組成は、フォスファチジルコリンが９２．４％、リゾホスファチジルコリンが２．８％であり、初期ｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｖａｌｕｅが３．３であるものを使用した。
また、使用したアルブチンについては、高性能液体クロマトグラフィを使用して純度を定量測定したところ、純度は９９．９％であった。
【００２８】
レシチン２ｇ、アルブチン０．０２ｇ、０．１ｇ、０．２ｇ、１．０ｇ、２．０ｇ及び４．０ｇを各々１０ｇのセチルエチルヘキサノエイトに混合、加温して６０℃で均一に溶解させ、蒸留水で２００ｇになるようにした後、ホモゲナイザーを使用して５０００ｒｐｍで３分間１次乳化した直後、マイクロフルダイザー（高圧乳化機）を使用して３回処理し、ナノ乳化粒子実施例１〜６及び比較例１を製造した。
【００２９】
ナノ乳化粒子の内部に抱集した活性成分の安定化の程度を確認するために、次のようにレチノル、ｃｏｅｎｚｙｍｅ−Ｑ１０、レスベラトロール（Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ）を生理活性物質として内部に抱集させたナノ乳化粒子を製造した。セチルエチルヘキサノエイトに上記の生理活性物質を各々０．５ｇずつ入れて、レシチン２ｇ、アルブチンを０．０２ｇ、０．１ｇ、０．２ｇ、１．０ｇ、２．０ｇ及び４．０ｇを、各々混合、加温して６０℃で均一に溶解させ、蒸留水で２００ｇになるようにした後、ホモゲナイザーを使用して５０００ｒｐｍ、３分間１次乳化をした後、マイクロプルダイザー（高圧乳化機）を使用して３回処理し、生理活性物質を含有したナノ乳化粒子の実施例７〜２４及び比較例２〜４を製造した。
【００３０】
製造されたナノ乳化粒子の平均粒径を測定するため、動的レーザー光散乱法  （Ｄｙｎａｍｉｃ  ｌｉｇｈｔ  ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ，  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  ３０００ＨＳ，  Ｍａｌｖｅｒｎ，  ＵＫ）を利用して測定した。散乱角は９０度で固定し、温度は２５℃に維持しながら測定した。数力学的粒子直径及び分散度（ｐｏｌｙｄｉｓｐｅｒｓｉｔｙ）は、ＣＯＮＴＩＮ法によって計算し、凝集、沈殿によって肉眼観察できる場合には、別途に粒径を測定しなかった。製造されたナノ乳化粒子を整理した結果を次の表１に示す。
【００３１】
【表１】
2004359587.tif 000003
【００３２】
上記の実験結果から、レシチンに対するアルブチンの含量比が増加することによって、製造されたナノ乳化粒子の大きさが少しずつ増加することを確認した。その大きさは３２ｎｍ〜５７ｎｍの間であり、内部抱集物質の種類によって少しずつの粒径の差が表われることを確認した。比較の基準を決めるため、アルブチンを添加しない比較例１〜４を製造した。
【００３３】
【実験例２】
ナノ乳化粒子の製造を電子顕微鏡で確認した。測定方法は約１０〜２０μｌの試料を銅ホルダーに入れて、液体窒素ゼット冷却気（Ｐｏｌａｒｏｎ．ＵＫ）で急冷した後、Ｐｏｌａｒｏｎ  ｆｒｅｅｚｅ−ｆｒａｃｔｕｒｅ装置を使用して冷却された試料を裂いて断面を露出された。少量の２％アンモニウムモリブデート溶液で、ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｓｔａｉｎｉｎｇ処理し、炭素薄膜フィルムに貼付してＪｅｏｌ  １００ＣＸ  ＩＩ電子顕微鏡を使用して測定した。上記の方法で  ９０，０００倍拡大して測定されたナノ乳化粒子を図１に示す。
【００３４】
図１において、小さい円模様に見えるものがナノ乳化粒子であり、中央の大きい円は乳化粒子の製造時に形成された比較的大きい粒径の乳化物を示している。
【００３５】
【実験例３】
（ナノ粒子の長期安定度試験）
ナノ乳化粒子の長期安定度を確認するため、各々の実施例及び比較例を異なる温度条件で保管し、３０日が経過した後に、ナノ乳化粒子の分散安定性及び乳化安定度を確認した。
ナノ乳化粒子の粒径の増減を測定するため、試験例１で使用した動的レーザー光散乱法を使用して測定し、肉眼で凝集、沈殿が観察できる試料については、別途の粒径測定を実施しなかった。実験結果を表２に整理して示す。
【００３６】
【表２】
2004359587.tif 000004
【００３７】
上記表２の結果から、レシチン単独で乳化された場合（比較例１〜４）には、長期保管による安定度がとても低く、あらゆる場合において凝集、沈殿など、眼で観察できる粒子を形成した。ところが、アルブチンを一緒に用いて製造したナノ乳化粒子（実施例１〜２４）は一ヶ月が経過した後にも物理的に安定に分散されていたことが確認できた。
【００３８】
上記方法により製造されたナノ乳化粒子を使用して、次の組成を有する化粧料組成物を常法により調製した。
【００３９】
【表３】
2004359587.tif 000005
【００４０】
【表４】
2004359587.tif 000006
【００４１】
【表５】
2004359587.tif 000007
【００４２】
【表６】
2004359587.tif 000008
【００４３】
【表７】
2004359587.tif 000009
【００４４】
【表８】
2004359587.tif 000010
【００４５】
【表９】
2004359587.tif 000011
【００４６】
【実験例４】
（生理活性物質の安定度確認実験）
ナノ乳化粒子の内部に含有された生理活性物質の安定度を確認するため、高性能液体クロマトグラフィを用いて、各生理活性物質について保管期間による安定度を測定した。各生理活性物質の初期含量を１００％で換算し、活性成分の存在量を計算した。保管する環境として、２５℃恒温槽を使用した。ナノ乳化粒子に関する実験結果を表１０に示し、剤型例に関する結果を表１１に示した。各々の成分に関する分析条件は次の通りである。
（１）  レチノルの定量分析条件
ａ．カラム  ：  Ｃ１８（４．６×２５０ｍｍ，５μｍ）
ｂ．移動相  ：  メタノール或いはメタノール  ９３％
ｃ．流速    ：  ０．８ｍｌ／ｍｉｎ
ｄ．検出器  ：  ＵＶ  ３２５ｎｍ
（２）  Ｅｎｚｙｍｅ  ｃｏ−Ｑ１０の定量分析条件
ａ．カラム  ：  Ｕｂｏｎｄａｐａｋ  Ｃ１８（３．９×１５０ｍｍ）
ｂ．移動相  ：  メタノール／エタノール（４０／６０）
ｃ．流速    ：  １ｍｌ／ｍｉｎ
ｄ．検出器  ：  ＵＶ  ２７５ｎｍ
（３）  レスベラトロールの定量分析条件
ａ．カラム  ：  ＭｉｇｈｔｙＳｉｌ  ＯＤＳ（４．６×２５０ｍｍ，５μｍ）
ｂ．移動相  ：  アセトニトリル／１０ｍＭ  リン酸緩衝液（３５／６５）
ｃ．流速    ：  １ｍｌ／ｍｉｎ
ｄ．検出器  ：  ＵＶ  ２５４ｎｍ
【００４７】
【表１０】
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【００４８】
上記の実験結果から、レシチンのみで製造したナノ乳化粒子に抱集された生理活性物質は２５℃の保管条件において、急激に減少することが分かる（比較例２〜４）。一方、アルブチンも必須成分として使用したナノ乳化粒子内部に抱集された生理活性物質は長時間安定的に保管できることが確認できた（実施例７〜２４）。このような結果は、レシチンとアルブチンが極めて緊密な構造を形成し、外界の水分子の乳化粒子内部への侵入を抑制することで、乳化粒子内部の活性成分が水分と接触する確率が減少することによって現れる現象と予想される。
【００４９】
また、レシチンと一緒に使用するアルブチンの使用量が多いほど生理活性物質の安定性が向上するが、実質的な使用においては、レシチンの含量に対して０．１〜２倍の間の質量比の範囲内でアルブチンを使用するのが適当であると判断される。
【００５０】
【表１１】
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【００５１】
表１１の結果から、ナノ乳化粒子を剤型化しても、内部に抱集された生理活性物質が安定化したことが確認できた。剤型化において、ナノ乳化粒子は多重乳化物の形態で形成されると予想でき、一種の多重乳化物の形態に形成されると水との接触機会が更に少なくなるので、付加的な生理活性物質の安定性を得ることができたと予想される。
【００５２】
【実験例５】
（皮膚刺激度測定）
健康な男女実験者５０人の腕の下膊部に上記の各実施例１〜２４、比較例１〜４及び剤型例１〜２１の試料を閉鎖貼付試験により、１日１回ずつ塗布した後、外部から遮断するためプラスチックキャップを被せた後、１日後、３日後、７日後に次の判定方法によって刺激程度を観察した。刺激程度の判断基準は下記の表１２に示す。
【００５３】
【表１２】
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【００５４】
各被験者の刺激程度を測定した後、各実施例１〜２４、比較例１〜４及び剤型例１〜２１の試料のそれぞれについて、刺激程度の平均値を計算した。その結果を表１３及び表１４に示す。
【００５５】
【表１３】
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【００５６】
【表１４】
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【００５７】
上記実施例１〜２４及び比較例１〜４の全試料において皮膚刺激はないということが分かる。内部に抱集された活性成分が各々違う実施例７〜１２、実施例１３〜１８及び実施例１９〜２４のそれぞれの場合にも皮膚刺激はないことが確認できた。更に、各々の有効成分を抱集したナノ乳化粒子が配合された剤型例１〜２１の化粧料組成物においても、皮膚刺激は殆どないことが確認できた。このような結果から、本発明で提供される有効活性物質を抱集したナノ乳化粒子の皮膚適合性及び内部に抱集された有効活性物質を皮膚刺激が殆どない状態で剤型化し得ることを確認できる。
【００５８】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明によって提供されるアルブチンを利用したナノ乳化粒子は、物理化学的に安定した状態を長期間維持する特徴があり、特に、内部に生理活性物質を抱集させた場合、該活性成分を長期間安定的に維持する長所を有する。これは既存のナノ乳化粒子に比べて緻密な乳化膜が形成されるのを補助し、レシチン及び内部の生理活性物質の酸化を防ぐ機能を有するアルブチンを使用することによって、達成することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ナノ乳化粒子を９０，０００倍拡大し観察したもので、小さい円模様で見えるのがナノ乳化粒子であり、中央の大きい円は乳化粒子製造時に形成された比較的大きい粒径の乳化物を表している。
【図１】
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