(57)【要約】【課題】新規なコラーゲン合成促進剤を提供する。【解決手段】グルコサミン、グルコサミン誘導体またはそれらの塩についてコラーゲン合成促進作用を見出したため、新規なコラーゲン合成促進剤が提供できる。本発明のコラーゲン合成促進剤は、皮膚の弾力性の低下を改善し、シワやタルミの改善や関節疾患の予防及び／又は治療等に優れた効果を有する。【選択図】　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルコサミン、グルコサミン誘導体またはそれらの薬理学的に許容される塩の中から選ばれる少なくとも一種を含有するコラーゲン合成促進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、グルコサミン、その誘導体またはそれらの塩を含有するコラーゲン合成促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
コラーゲンは、動物の結合組織を構成する主要蛋白質であり、特にヒトの体の総蛋白質の３０％近くをコラーゲンが占める。コラーゲンの主たる機能は、生体組織の骨格構造の形成にあるので、動物の組織形態の骨格構造を構成する主成分として皮膚、軟骨組織、角膜、心臓、肝臓等に広く分布する。コラーゲンは、各種細胞の接着、細胞の分化や増殖に対して特異的に作用し、細胞機能の固相調節因子としたの役割も持っているため、コラーゲンの分解は、角膜潰瘍等の角膜障害、リューマチ、関節炎、変形性関節炎、骨関節炎等の関節障害、各種の炎症性疾患などの様々な疾患を引き起こすことがある。
【０００３】
皮膚真皮細胞外マトリックスでは、コラーゲン繊維が網目状の束を形成することにより組織形態を維持している。コラーゲン繊維は、成熟し増殖して架橋形成が進行すると太く直線的な繊維束となり、若い皮膚での適度なハリを与えている。しかし、老化した皮膚や光老化した皮膚では繊維芽細胞の活性が低下するのに伴い、真皮細胞外マトリックスのコラーゲン繊維が著しく減少したり、異常な老化架橋が形成されるため硬直して、本来の弾力性に富むハリが失われてしまう。その結果、皮膚にはシワやタルミが形成される。光老化によるヘアレスマウス繊維束構造の変化が詳細に検討され（Ｆｒａｇｒａｎｃｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ、４、ｐ３６−３７、１９９８）、ＵＶＢを照射したヘアレスマウスには、シワが形成され、シワの形成と一致するようにコラーゲン繊維束構造が崩壊し皮膚弾力性が低下していくことが示されている。また、コラーゲンは水分保持機能に優れていることも知られている。
【０００４】
このようなコラーゲンの減少による状態を改善するために、種々のコラーゲン合成促進物質が見出されており、例えば、レチノイン酸（Ｒ．　Ｍａｒｋｓ　ｅｔ　ａｌ、　Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、１２２、９１、１９９０）、グリシン及びプロリン及びアラニンからなる３種アミノ酸（特開平７−１９４３７５号公報）、カンゾウ、ソウハクヒ、アロエ、スギナ、キンギンカ、オウバク、ガイヨウ又はゲンチアナなどの植物抽出物（特開２００１−２０６８３５号公報）、ＴＧＦ−β、アスコルビン酸及びその誘導体等が知られている。しかし、これらは、安全性や効果の面で十分に満足できるものではなかった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、安全性が高い新規なコラーゲン合成促進剤を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、前記課題を解決するために鋭意検討の結果、グルコサミン、グルコサミン誘導体またはそれらの塩にコラーゲン合成促進作用があることを見出し、本発明を完成するに至った。グルコサミン、グルコサミン誘導体またはそれらの塩には、マウス繊維芽細胞の培養液を用いてグリコサミノグリカンの分泌作用があること（Ｋ．　Ｋａｒｚｅｌ，　ｅｔ．　ａｌ．、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、５、ｐ３３７−　、１９７１）が知られているが、コラーゲン合成との関連については、いまだ報告されていなかった。すなわち、本発明は、グルコサミン、グルコサミンの誘導体またはそれらの薬理学的に許容される塩の中から選ばれる少なくとも１種の化合物を含有するコラーゲン合成促進剤に関する。また、本発明は、グルコサミン、グルコサミンの誘導体またはそれらの薬理学的に許容される塩の中から選ばれる少なくとも１種の化合物を有効成分として含有してなるコラーゲン合成促進剤に関する。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明におけるグルコサミン、グルコサミン誘導体またはそれらの薬学的に許容される塩は、動物、植物、微生物菌体、培養液などから精製された天然品であることが好ましいが、公知の方法により化学合成により得た合成品を利用してもよく、市販品を利用してもよい。本発明において、グルコサミン誘導体としては、生体内に適用された後にグルコサミンに変化しうる化合物が好ましく、例えば、Ｎ−アセチルグルコサミンのような誘導体が例示できる。なお、グルコサミン誘導体は本発明の効果を奏するものである限り、特にこれらに限るものではない。
【０００８】
本発明のグルコサミン、またはグルコサミン誘導体の塩としては、薬理学的に（製薬上）又は生理学的に許容される塩が使用できる。薬理学的又は生理学的に許容できる塩としては、例えば、有機酸塩（例えば、乳酸塩、酢酸塩、酪酸、トリフルオロ酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、トシル酸塩、パルミチン酸、ステアリン酸など）、無機酸塩（例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩など）などが例示できる。好ましくは、塩酸グルコサミン、硫酸グルコサミンである。特に好ましくは塩酸グルコサミンである。
なお、これらのグルコサミン、その誘導体またはそれらの塩は、単独で又は二種以上組み合わせて使用してもよい。
【０００９】
本発明のエラスターゼ阻害剤において、グルコサミン、グルコサミン誘導体またはその塩の使用量は、グルコサミンの種類、剤型等によっても異なるが、例えばヒトを含む哺乳動物に適用するエラスターゼ阻害剤とする場合、１日使用量が０．０１〜３０００ｍｇ、好ましくは０．１〜２０００ｍｇ、特に好ましくは０．１〜２０００ｍｇを１回または２〜４回に分けて適用することができる。また、研究用試薬のようにヒトを含む哺乳動物に適用しないエラスターゼ阻害剤とする場合には、剤形等にあわせて適宜使用量を設定することができる。
【００１０】
本発明のコラーゲン合成促進剤中への、グルコサミン、グルコサミン誘導体またはその塩の含有量は、グルコサミンの種類、剤型等によっても異なるが、通常０．０００１〜７０．０重量％、好ましくは０．００１〜５０重量％、より好ましくは０．００１〜２０重量％、特に好ましくは０．０１〜１０重量％の範囲を挙げることができる。
【００１１】
本発明のコラーゲン合成促進剤は、本発明の効果を損なわない量的及び質的範囲内で、グルコサミン、グルコサミン誘導体またはその塩の他に通常使用される溶媒や基剤、各種添加剤（例えば界面活性剤、乳化剤、油分、安定化剤、増粘剤、防腐剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、分散剤、ｐＨ調整剤、保湿剤、紫外線吸収剤、ビタミン類、キレート剤、アミノ酸類、香料等）などを配合することによって、錠剤、顆粒剤、散剤、細粒剤、硬カプセル剤等の固形製剤の他、シロップ剤、軟カプセル剤等の液剤、軟膏剤、乳剤等の半固形剤などの製剤形態、化粧料であれば、例えばファンデーション、口紅、化粧水、美容液、乳液、クリーム、ローション、オイル、ジェル、パックなどの各種所望の形態に調製することができる。これらは通常用いられる添加物や溶媒等を用いて常法によって製造可能である。
【００１２】
本発明のコラーゲン合成促進剤は、医薬品、医薬部外品、食品、化粧品等の各種分野において利用することができる。具体的には、ヒトをはじめとする哺乳動物においてコラーゲン量の低下に起因する疾患の治療剤、予防剤、またはコラーゲンに関連する生理状態の解明ための研究試薬等として有用である。具体的には、慢性関節リュウマチ・変形性関節症などの関節疾患治療及び／又は予防剤として、また、紫外線曝露や加齢による皮膚のシワやタルミの予防及び／又は改善や、皮膚の弾力性やハリの低下を予防又は改善するための抗老化用又は美肌用皮膚外用剤等が挙げられる。
【００１３】
【発明の効果】
グルコサミン、グルコサミン誘導体またはそれらの塩は、コラーゲン合成の促進作用を有する。そのため、加齢や紫外線等の影響によって生じる皮膚老化現象である弾力性やハリの低下を防止し、保湿効果を高め、皮膚のハリを回復又は維持することができ肌の状態を若々しく保つことができる。また、シワやタルミの予防又は改善にも有用である。さらに、関節疾患等の各種疾患の治療などにも効果がある。
【００１４】
【実施例】
以下に本発明を実施例及び試験例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例等に限定されるものではない。なお、下記の各処方において％とは、特に言及しない限り、重量（Ｗ／Ｗ）％を意味するものとする。
【００１５】
試験例１　皮膚線維芽細胞のコラーゲン合成量
２４ウェル培養プレート上に、正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ；クラボウ社製）を２×１０４個／ウェルで播種し、培養液として皮膚線維芽細胞増殖用培地（クラボウ社製）を使用し、３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養した。７２時間培養後、各ウェルから培養液を除去してから、０．０００２、０．００２、および０．０２％濃度の塩酸グルコサミンを含む上記培養液又は対照として塩酸グルコサミンを含まない培養液を各ウェルに１ｍｌ加え、さらに７２時間培養した。培養終了後、培養上清中のＩ型プロコラーゲン量をＥＬＩＳＡ（Ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ　ｔｙｐｅＩ　Ｃ−ｐｅｐｔｉｄｅ　ＥＩＡ　Ｋｉｔ；宝酒造社製）にて測定した。Ｉ型プロコラーゲンは、Ｉ型コラーゲンの前駆体であることから、Ｉ型プロコラーゲン量を測定することによってコラーゲン合成量の生化学的指標とした。結果を表１に示す。各値は、塩酸グルコサミンを添加しなかった対照のＩ型プロコラーゲン合成量に対する比率である。
【００１６】
【表１】
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【００１７】
表１に示す結果より、塩酸グルコサミンは、濃度依存的に皮膚繊維芽細胞においてコラーゲン合成量を促進し、Ｉ型コラーゲンの合成量を２．５倍に増加することが確認された。
【００１８】
試験例２　へアレスマウスを用いた抗シワ試験
試験例２−１
表３に示す実施例１〜３について、紫外線によるシワ発生に対する予防効果を塩酸グルコサミンの塗布試験により検討した。５週齡雄性へアレスマウスは８匹を１群とした４群に対し、３週間にわたり、第１週目に９０ｍＪ／ｃｍ２、第２週目に１２０ｍＪ／ｃｍ２、第３週目に１５０ｍＪ／ｃｍ２のＵＶＢ紫外線を１週間あたり３回照射した。また紫外線を照射している３週間、各群のヘアレスマウスには、実施例１〜３又は比較例１の試験溶液を５０μｌずつ１日３回背中に塗布した。そして、第１回目の紫外線照射から２４日後に、目視にてシワを７段階にスコア化（表２）し、シワ発生の予防効果を評価した。結果は表３に示す。
【００１９】
試験例２−２
表３に示す実施例４〜６について、紫外線によるシワ発生に対する予防効果を塩酸グルコサミンの経口投与により検討した。試験例２−１と同様に５週齡雄性へアレスマウスは８匹を１群とした４群に対し、３週間にわたりＵＶＢ紫外線を照射した。また、紫外線を照射している３週間の間、各群のヘアレスマウスには、実施例４〜６又は比較例３の試験溶液を３００μｌずつ１日３回経口投与し、実施例４では塩酸グルコサミンが５００ｍｇ／ｋｇｗ／ｄａｙ、実施例５では塩酸グルコサミンが１０００ｍｇ／ｋｇｗ／ｄａｙ、実施例６では塩酸グルコサミンが１５００ｍｇ／ｋｇｗ／ｄａｙとなるように投与した。そして、第１回目の紫外線照射から２４日後に、目視にてシワを７段階にスコア化（表２）し、シワ発生の予防効果を評価した。結果は表３に示す。
【００２０】
【表２】
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【００２１】
【表３】
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【００２２】
表３に示す結果より、塩酸グルコサミンを含有する実施例は、濃度依存的に紫外線曝露によるシワの予防効果があることが確認された。塩酸グルコサミンは、皮膚のシワの形成を抑制する優れた抗シワ効果があることがわかった。
【００２３】
実施例７　下記の他の成分を日本薬局方製剤総則「錠剤」に準じて、混合し打錠して円形錠剤（１錠５００ｍｇ）を得た。
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【００２４】
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【００２５】
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