(57)【要約】【課題】本発明は、プルプロガリン誘導体並びにその合成したプルプロガリン誘導体が癌細胞に対してアポトーシスを誘導することを明らかにした上で、プルプロガリン誘導体並びにその合成したプルプロガリン誘導体を新規な医薬品および健康補助食品として提供するものである。【解決手段】プルプロガリン誘導体並びにその合成したプルプロガリン誘導体のヒト急性前骨髄性白血病疾患細胞（ＨＬ−６０細胞）に対するアポトーシス誘導を調べた結果、プルプロガリンが濃度依存的および経時的にアポトーシスを誘導することと併せて、テアフラビン類も同様にＨＬ−６０細胞に対してアポトーシスを誘導することを見出し、結果として、正常細胞に対してアポトーシス誘導を起こさせなくて、癌細胞に対してのみアポトーシスを誘導できることを見出した。【選択図】        図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
プルプロガリン誘導体を有効成分として含有するアポトーシス誘導剤。
【請求項２】
プルプロガリン誘導体が、テアフラビン（ｔｈｅａｆｌａｖｉｎ）、テアフラビン  ３−Ｏ−ガレート（ｔｈｅａｆｌａｖｉｎ  ３−Ｏ−ｇａｌｌａｔｅ）、テアフラビン  ３’−Ｏ−ガレート（ｔｈｅａｆｌａｖｉｎ  ３’−Ｏ−ｇａｌｌａｔｅ）、テアフラビン  ３，３’−  ジ−Ｏ−ガレート（ｔｈｅａｆｌａｖｉｎ  ３，３’−ｄｉ−Ｏ−ｇａｌｌａｔｅ）、テアフラガリン（ｔｈｅａｆｌａｇａｌｌｉｎ）、エピテアフラガリン３−Ｏ−ガレート（ｅｐｉｔｈｅａｆｌａｇａｌｌｉｎ  ３−Ｏ−ｇａｌｌａｔｅ）、プルプロガリン（ｐｕｒｐｕｒｏｇａｌｌｉｎ）、プルプロガリンカルボン酸（ｐｕｒｐｕｒｏｇａｌｌｉｎ  ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）、である請求項１記載のアポトーシス誘導剤。
【請求項３】
プルプロガリン誘導体が紅茶から抽出されたものであって、ヒト急性前骨髄性白血病疾患細胞（ＨＬ−６０細胞）に対する請求項１および請求項２記載のアポトーシス誘導剤。
【請求項４】
プルプロガリン誘導体が合成されたものであって、ヒト急性前骨髄性白血病疾患細胞（ＨＬ−６０細胞）に対する請求項１〜請求項３に記載のアポトーシス誘導剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、プルプロガリン（ｐｕｒｐｕｒｏｇａｌｌｉｎ）誘導体を有効成分として含有する、癌細胞に対するアポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）誘導剤に関する。より詳しくは、ヒトまたは動物の癌細胞内にあるプロテアーゼ、特に、カスパーゼ（ｃａｓｐａｓｅ）が不活性化されることにより増殖する癌細胞に対するアポトーシスの誘導に有効であって、ヒトまたは動物の癌細胞内のカスパーゼを活性化することによりアポトーシスを誘導し、癌細胞のみを死滅させることに関する。
【０００２】
【従来の技術】
アポトーシスは、細胞内の核の破壊を伴う細胞死である。癌細胞におけるアポトーシスの死分子機構として、カルシウム経路、死のシグナル経路、セラミド経路、ミトコンドリア経路、及びｐ５３アポトーシス経路の５つの経路を介して誘導される分子機構が知られている（非特許文献１、橋本嘉幸：新アポトーシスの分子医学、羊土社、２００１年４月：１０−５８）。
【０００３】
カルシウム経路では、アポトーシス誘導刺激によりグルココルチコイドがマウスの胸腺細胞の細胞外膜に存在するグルココルチコイド受容体に作用して細胞内のアイピー３アール３（ＩＰ３Ｒ３）が活性化され、引き続き細胞内のカルシウムイオン（Ｃａ２＋）濃度が上昇し、プロテアーゼであるカルパインを活性化する。カルパインは、カスパーゼ１／インターロイキン−１β−変換酵素（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１β−ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ、ＩＣＥ）、カスパーゼ３を順次活性化、更に、カスパーゼ３はエンドヌクレアーゼを活性化し、活性化エンドヌクレアーゼの作用により核ＤＮＡが切断を受け、結果としてアポトーシスを誘導する（非特許文献１）。
【０００４】
死のシグナル経路では、アポトーシス誘導刺激により腫瘍壊死因子−α（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ−α、ＴＮＦ−α）、ファスリガンド（ＦＳ−７−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｔｉｇｅｎ、ＦａｓＬ）などの細胞外タンパク質分子が、胸腺細胞やリンパ球の細胞外膜に存在するそれぞれの受容体に接触する。これらの受容体から細胞内のアダプター分子、即ち、ドメインに会合するタンパク分子、トラッド（ＴＮＦＲ１−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｄｅａｔｈ  ｄｏｍａｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ＴＲＡＤＤ）並びにファッド（ｆａｓ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｄｅａｔｈ  ｄｏｍａｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ＦＡＤＤ）を介してカスパーゼ８を活性化する。活性型カスパーゼ８はカスパーゼ１／ＩＣＥを活性化、更に、活性型カスパーゼ１／ＩＣＥがカスパーゼ３を順次活性化し、アポトーシスを誘導する（非特許文献１）。
【０００５】
セラミド経路では、アポトーシス誘導刺激により細胞間の情報伝達を司るスフィンゴ脂質が細胞内に入り、スフィンゴミエリナーゼの酵素分解を受け、細胞内セラミドが増加する。これがサップキナーゼ／ジュン−Ｎ末端キナーゼ（ｓｔｒｅｓｓ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ／ｃ−ｊｕｎ  Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｋｉｎａｓｅ、ＳＡＰＫ／ＪＮＫ）を活性化し、更に、活性型ＳＡＰＫ／ＪＮＫはカスパーゼ１／ＩＥＣを活性化し、アポトーシスを誘導する（非特許文献１）。
【０００６】
ミトコンドリア経路では、アポトーシス誘導刺激によりミトコンドリア膜上に存在するタンパク質であるアポトーシス促進因子のバックス（Ｂｃｌ−２  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｂａｘ）が活性化され、アント（ａｄｅｎｉｎｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ、ＡＮＴ）とピーティーピーシー（ｐｅｒｍｉａｂｉｌｉｔｙ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｐｏｒｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ、ＰＴＰＣ）のタンパク質と会合後、ミトコンドリア膜に細孔を開ける。ミトコンドリア内から細孔を通してチトクロームｃが細胞質内に放出され、チトクロームｃはアポトーシス誘導因子−１（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｐｒｏｔｅａｓｅ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ−１、Ａｐａｆ−１）を活性化、活性化Ａｐａｆ−１はカスパーゼ９を活性化し、アポトーシスを誘導する（非特許文献１）。
【０００７】
ｐ５３アポトーシス経路について、抗癌剤を用いた場合では、癌抑制遺伝子であるｐ５３が活性化を受け、次に、カスパーゼ１、カスパーゼ３を順次活性化し、アポトーシスを誘導する。一方、抗癌剤耐性細胞においては、癌制御遺伝子であるｐ５３が突然変異を受けていることが多いため、ミトコンドリア経路でのチトクロームｃの放出が妨げられ、アポトーシスの誘導が困難であることも報告されている（非特許文献１）。
【０００８】
紅茶にはプルプロガリン誘導体が含まれている。これらはテアフラビン（ｔｈｅａｆｌａｖｉｎ）類およびテアフラガリン（ｔｈｅａｆｌａｇａｌｌｉｎ）類と呼ばれ、化学構造も明らかにされ、紅茶の赤色を発する色素に分類されている（非特許文献２、橋本文雄：各種茶のポリフェノールに関する化学的研究、１９８８年２月：１−２２２；非特許文献３、Ｎｏｎａｋａ、Ｇ．ｅｔ  ａｌ．：Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、３４：６１−６５、１９８６）。
【０００９】
テアフラビン類には抗酸化作用（非特許文献４、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．ｅｔ  ａｌ．：Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、６７：３９６−４０１、２００３）並びに抗ＨＩＶ作用（非特許文献５、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．ｅｔ  ａｌ．：Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、６：６９５−７００、１９９６）を有することが報告されている。
【００１０】
テアフラビン類は、紅茶から単離が容易ではなかったこともあって、種々の生物活性試験を行うことが困難であった問題点がある。また、プルプロガリン誘導体が癌細胞に対してアポトーシスを誘導することは、これまで知られていない。
【００１１】
その他、特開平２０００−２２６３２９号（以下、特許文献１という）に、ＭＭＰ阻害剤（特許文献１の第０００１〜００１４段落）の記載がある。「カテキン化合物の抗酸化活性や抗ウィルス活性、など多様な生物活性に着目し、カテキン化合物がＭＭＰｓに対して阻害作用を有するかもしれないと推測し、カテキンのＭＭＰｓ阻害活性を調べた結果、カテキンが、その多様な生物活性と併せて、ＭＭＰ阻害作用を示し、結果として、ＭＭＰｓ活性の調節不能に起因する難治性疾患の治療及び予防に対する有用性が期待できることを見出した」という記載がある（特許文献１の第００１３段落）。
特開平２０００−３４４６７２号（以下、特許文献２という）には、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤（特許文献２の第０００１〜００１４段落）の記載がある。「ポリフェノール類であるタンニン化合物についても、ＭＭＰｓ阻害活性を調べた結果、該化合物が、優れたＭＭＰ阻害作用を示し、結果として、ＭＭＰｓ活性の調節不能に起因する難治性疾患の治療および予防に対して有用性が期待できることを見出し、本発明を完成した」という記載がある（特許文献２の第００１３段落）。
【００１２】
【特許文献１】
特開平２０００−２２６３２９号公報（第３頁）
【特許文献２】
特開平２０００−３４４６７２号公報（第３頁）
【非特許文献１】
橋本嘉幸、「アポトーシスとは」、新アポトーシスの分子医学、羊土社、２００１年４月、Ｐ．１０−５８。
【非特許文献２】
橋本文雄、「各種茶のポリフェノールに関する化学的研究」、博士論文、１９８８年２月、Ｐ．１−２２２。
【非特許文献３】
Ｎｏｎａｋａ、Ｇ．、他２名、「Ｔａｎｎｉｎｓ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．ＸＸＸＶＩ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  Ｔｈｅａｆｌａｇａｌｌｉｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｒｅｄ  Ｐｉｇｍｅｎｔｓ  ｆｒｏｍ  Ｂｌａｃｋ  Ｔｅａ」、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、１９８６年、第３４巻、Ｐ．６１−６５。
【非特許文献４】
Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．、他９名、「Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅＡｎｔｉ−ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  （ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）  ｏｆＴｅａ  Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ」、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２００３年、第６７巻、Ｐ．３９６−４０１。
【非特許文献５】
Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．、他６名、「Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＴｅａＰｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ  ａｓ  Ａｎｔｉ−ＨＩＶ  Ａｇｅｎｔｓ」、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１９９６年、第６巻、Ｐ．６９５−７００。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、プルプロガリン誘導体の癌細胞増殖を抑制する分子機構が、その細胞を自死に至らしめたかどうかについては不明であることから、日常的に飲茶として摂取しているテアフラビン類を医薬品、または健康補助食品として実用化することに問題点がある。また、特許文献１及び特許文献２に記載のある、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤としての効果・効能についても、臨床的有用性は明らかにされておらず、実用化には至っていない。さらに、正常細胞には安全で癌細胞に対してのみアポトーシスを誘導する医薬品の供給が必要であるなどの問題点がある。
【００１４】
本発明は、紅茶から抽出されたプルプロガリン誘導体並びにその合成したプルプロガリン誘導体が癌細胞に対してアポトーシスを誘導することを明らかにした上で、紅茶から抽出されたプルプロガリン誘導体並びにそれらを合成したプルプロガリン誘導体を新規な医薬品および健康補助食品として提供するものである。
【００１５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の課題を解決するために、紅茶から抽出されたプルプロガリン誘導体並びにその合成したプルプロガリン誘導体のヒト急性前骨髄性白血病疾患細胞（ＨＬ−６０細胞）に対するアポトーシス誘導を調べた結果、プルプロガリン（ｐｕｒｐｕｒｏｇａｌｌｉｎ）が濃度依存的および経時的にアポトーシスを誘導することと併せて、テアフラビン（ｔｈｅａｆｌａｖｉｎ）類も同様にＨＬ−６０細胞に対してアポトーシスを誘導することを見出し、結果として、正常細胞に対してアポトーシス誘導を起こさせなくて、癌細胞に対してのみアポトーシスを誘導できることを見出した。より詳しくは、
【００１６】
プルプロガリン（Ｐｕｒｐｕｒｏｇａｌｌｉｎ）がＨＬ−６０細胞に対してカスパーゼ８を活性化し、カスパーゼ８の直接作用によりカスパーゼ３を活性化し、引き続いてＤＮＡが断片化され、アポトーシスが誘導されることを見出した。また、カスパーゼ８からはビッド（Ｂｉｄ）は切断されず、ミトコンドリアからも細胞質へチトクロームｃは放出されず、カスパーゼ９は結果として活性化されないことを見出した。この細胞死機構は、ＨＬ−６０細胞内の活性酸素の増加を伴わないでアポトーシスを誘導することを見出し、本発明を完成した。
【００１７】
本発明のアポトーシス誘導剤は、プルプロガリン誘導体を有効成分として含有する。このプルプロガリン誘導体とは、紅茶から抽出、単離、精製されたテアフラビン類、例えば、テアフラビン（ｔｈｅａｆｌａｖｉｎ）（１）、テアフラビン  ３−Ｏ−ガレート（ｔｈｅａｆｌａｖｉｎ  ３−Ｏ−ｇａｌｌａｔｅ）（２）、テアフラビン  ３’−Ｏ−ガレート（ｔｈｅａｆｌａｖｉｎ  ３’−Ｏ−ｇａｌｌａｔｅ）（３）、テアフラビン  ３，３’−  ジ−Ｏ−ガレート（ｔｈｅａｆｌａｖｉｎ  ３，３’−ｄｉ−Ｏ−ｇａｌｌａｔｅ）（４）、テアフラガリン（ｔｈｅａｆｌａｇａｌｌｉｎ）（５）、エピテアフラガリン３−Ｏ−ガレート（ｅｐｉｔｈｅａｆｌａｇａｌｌｉｎ  ３−Ｏ−ｇａｌｌａｔｅ）（６）並びにその合成した誘導体、例えば、プルプロガリン（ｐｕｒｐｕｒｏｇａｌｌｉｎ）（７）、プルプロガリンカルボン酸（ｐｕｒｐｕｒｏｇａｌｌｉｎ  ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）（８）であり、ヒト急性前骨髄性白血病疾患細胞（ＨＬ−６０細胞）の癌細胞に対してのみアポトーシスを誘導することのできる化合物である。
プルプロガリン誘導体は、一般式（Ｉ）で示す（式中Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は表１にそれぞれ対応する化学式を示した）。
【００１８】
【化１】
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【００１９】
【表１】
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【００２０】
【発明の実施の形態】
本発明において、例えば、紅茶の茶葉から、水、低級アルコール、アセトン、酢酸エチルなどの有機溶媒を用いてテアフラビン類を抽出することができる。また、紅茶など市販茶葉中のテアフラビン類は０．７〜１．５％含まれている（非特許文献３）。
【００２１】
本発明のテアフラビン（ｔｈｅａｆｌａｖｉｎ）類を、文献値記載の方法を用いて単離した（非特許文献３）。また、プルプロガリン（ｐｕｒｐｕｒｏｇａｌｌｉｎ）を、文献値記載の方法で合成した（非特許文献３）。
【００２２】
【実施例】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。
［実施例１］
ヒト急性前骨髄性白血病疾患細胞（ＨＬ−６０細胞）の５０％生存率は文献記載の方法で測定した（Ｍｏｓｍａｎｎ、Ｔ．：Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、６５：５５−６３、１９８３）。ＨＬ−６０細胞は、１０％の牛胎児血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地を用いて培養した。プルプロガリン誘導体（１）〜（８）（表１）を、０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０μｇ／ｍｌの濃度で含む０．１％ＤＭＳＯ（ジメチルスルフォキシド）溶液に溶解し、先に得られたＨＬ−６０細胞を６時間処理した。
【００２３】
処理後、細胞を遠心分離法により回収し、細胞溶解緩衝液により細胞膜を取り除き、ＲＮＡ分解酵素によりＲＮＡを分解し、タンパク質分解酵素によりタンパク質を除去、得られたＤＮＡ断片を２％アガロースゲル電気泳動法により分離し、染色後、ＵＶトランスイルーミネーターにより検出し、ＤＮＡの断片率を算出した。４８時間後のＨＬ−６０細胞生存率に対する５０％抑制濃度（ＩＣ５０）を算出した。その結果を表２に示した。
【００２４】
【表２】
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【００２５】
表２から、化合物４のテアフラビン  ３，３’−  ジ−Ｏ−ガレートが最も強いＨＬ−６０細胞増殖抑制効果を有した。また、化合物７のプルプロガリンおよび化合物６のエピテアフラガリン３−Ｏ−ガレートも同様な効果であることが分かる。
【００２６】
［実施例２］
ヒト急性前骨髄性白血病疾患細胞（ＨＬ−６０細胞）のＤＮＡ断片化については文献記載の方法で測定した（Ｈｏｕ、Ｄ．Ｘ．、ｅｔ．ａｌ．：Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．、２３：２００３）。各プルプロガリン誘導体（１）〜（８）を１００μＭ濃度用いて、ＨＬ−６０細胞を６時間処理し、細胞核からＤＮＡを抽出した。得られたＤＮＡについてアガロースゲル電気泳動を行い、その結果を図１に示した。化合物３のテアフラビン  ３’−Ｏ−ガレート、化合物１のテアフラビン、化合物４のテアフラビン  ３，３’−  ジ−Ｏ−ガレート、化合物７のプルプロガリンおよび化合物６のエピテアフラガリン３−Ｏ−ガレートにＤＮＡラダーが観察され、アポトーシスを強く誘導することが分かる。なお、図中化合物番号でＣと記載してあるものはコントロールを示す。また、図中Ｍと記載してあるものはＤＮＡマーカーを示す。
【００２７】
［実施例３］
化合物７のプルプロガリンによるＨＬ−６０細胞のＤＮＡ断片化を時間と濃度別に詳しく調べた。プルプロガリンを１００μＭ濃度でＨＬ−６０細胞を０、２、４、６、１２，１８時間処理し、細胞核からＤＮＡを抽出した。一方、プルプロガリンを０、２５、５０、１００、１２５、１５０μＭ濃度でＨＬ−６０細胞を６時間処理し、細胞核からＤＮＡを抽出した。各々得られた核由来のＤＮＡについてアガロースゲル電気泳動を行い、その結果を図２に示した。プルプロガリンは、図２の（１）に示すようにＨＬ−６０細胞のＤＮＡを時間が経つにつれて強く断片化し、図２の（２）に示すように濃度が上昇するに伴いＤＮＡを強く断片化した。この結果から、プルプロガリンのアポトーシス誘導能は、図２の時間（１）と濃度（２）に依存した。図中Ｍと記載してあるものはＤＮＡマーカーを示す。
【００２８】
［実施例４］
化合物７のプルプロガリンによるＨＬ−６０細胞のカスパーゼ３、ポリＡＤＰ−リボース  ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ、ｐｏｌｙ（ＡＤＰ−ｒｉｂｏｓｅ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）、カスパーゼ８、カスパーゼ９の活性について調べた。方法は、文献記載の方法で測定した（Ｈｏｕ、Ｄ．Ｘ．、ｅｔ．ａｌ．：Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．、２３：２００３）。その結果を図３に示す。図３の（１）に示すように、プルプロガリンにより４時間後、カスパーゼ３が切断され、活性化された。また、図３の（２）および（３）に示すように、ＰＡＲＰおよびカスパーゼ８も同様に４時間後切断され、活性化された。しかし、図３の（４）に示すように、カスパーゼ９では切断は起こらずに活性化されなかった。この結果、プルプロガリンは、カスパーゼ９を介するものではなくて、カスパーゼ３およびカスパーゼ８を活性化した。
【００２９】
［実施例５］
化合物７のプルプロガリンのＤＮＡ断片化が活性酸素を介して発現するかどうかを確かめるため、Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）とカタラーゼの二つの抗酸化剤を用いて調べた。方法は、文献記載の方法で測定した（Ｈｏｕ、Ｄ．Ｘ．、ｅｔ．ａｌ．：Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．、２３：２００３）。ＮＡＣとカタラーゼは、プルプロガリン処理の１時間前に培地に添加した。その結果を図４に示す。ＮＡＣ処理区では、プルプロガリンによるＨＬ−６０細胞のＤＮＡ断片化が認められた。また、カタラーゼ処理区では、ＤＮＡ断片化が僅かながら減少した。この結果、二つの抗酸化剤がプルプロガリンのＤＮＡ断片化を抑制しないことが分かり、結果として、プルプロガリンが活性酸素を介さずしてＨＬ−６０細胞のＤＮＡを断片化した。
【００３０】
［比較例１］
化合物７のプルプロガリンを用いて、マウスの正常皮膚（上皮）細胞の核ＤＮＡ断片化についてアガロースゲル電気泳動を行い調べたところ、ＤＮＡは断片化しなかった。この結果、プルプロガリンはＨＬ−６０細胞の癌細胞のみにアポトーシスを誘導するが、正常細胞に対してアポトーシスを誘導しないことが分かる。
【００３１】
これらの実施例から、プルプロガリン（ｐｕｒｐｕｒｏｇａｌｌｉｎ）をはじめとするプルプロガリン誘導体が、ヒト急性前骨髄性白血病疾患細胞（ＨＬ−６０細胞）に対して優れたアポトーシス誘導剤となる。
【００３２】
【発明の効果】
プルプロガリン誘導体の癌細胞増殖を抑制する分子機構が、その細胞を自死に至らしめたかどうかについて明らかにした。日常的に飲茶として摂取しているテアフラビン類を医薬品、または健康補助食品として実用化できる。また、正常細胞には安全で癌細胞に対してのみアポトーシスを誘導する医薬品の供給ができる。
本発明は、紅茶から抽出されたプルプロガリン誘導体並びにその合成したプルプロガリン誘導体が癌細胞に対してアポトーシスを誘導することを明らかにした上で、紅茶から抽出されたプルプロガリン誘導体並びにその合成したプルプロガリン誘導体を新規な医薬品および健康補助食品として提供できる。
本発明によって、ヒト急性前骨髄性白血病疾患細胞（ＨＬ−６０細胞）に対する優れたアポトーシス誘導剤として、プルプロガリン誘導体並びにその合成したプルプロガリン誘導体を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】アガロースゲル電気泳動の図である。（実施例２）
【図２】アガロースゲル電気泳動の図である。（実施例３）
（１）ＤＮＡ断片化の経時的変化
（２）ＤＮＡ断片化の濃度的変化
【図３】ウエスタンブロットの図である。（実施例４）
（１）カスパーゼ３の活性化
（２）ＰＡＲＰの活性化
（３）カスパーゼ８の活性化
（４）カスパーゼ９の非活性化
【図４】アガロースゲル電気泳動の図である。（実施例５）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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