(57)【要約】【課題】紫外線、あるいは紫外線により発生する活性酸素を介した細胞死に対して、優れた細胞死抑制効果を有し、かつ外用剤あるいは経口剤への配合の面で優れた性能を有する細胞死抑制剤を提供すること。【解決手段】ゼニアオイ、シークワシャー、ケールまたはその抽出物を１種又は２種以上含有することを特徴とする細胞死抑制剤、さらにその剤を含有する老化防止剤あるいは細胞死抑制剤としての化粧料、外用剤、経口剤。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゼニアオイ、シークワシャー、ケールまたはその抽出物を１種又は２種以上含有することを特徴とする細胞死抑制剤。
【請求項２】
抽出物がマルビジン−３，５−ジグルコシドを含むことを特徴とする請求項１記載の細胞死抑制剤。
【請求項３】
細胞が真皮線維芽細胞、表皮角化細胞、血管内皮細胞、ランゲルハンス細胞、メラニン色素形成細胞の少なくとも一つから選ばれる請求項１又は２記載の細胞死抑制剤。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれかに記載の細胞死抑制剤を含むことを特徴とする老化防止剤。
【請求項５】
請求項１乃至３のいずれかに記載の細胞死抑制剤あるいは請求項４記載の老化防止剤を含むことを特徴とする化粧料。
【請求項６】
請求項１乃至３のいずれかに記載の細胞死抑制剤あるいは請求項４記載の老化防止剤を含むことを特徴とする外用剤。
【請求項７】
請求項１乃至３のいずれかに記載の細胞死抑制剤あるいは請求項４記載の老化防止剤を含むことを特徴とする経口剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、細胞死を抑制する剤に関する。本発明の抑制剤は外用剤および経口剤として用いることができる。特に紫外線照射を原因とする細胞死の抑制効果に寄与する。
【０００２】
皮膚の老化は、生理的な老化とよるものと、光老化とよばれる紫外線による細胞や皮膚組織へのダメージによる老化によって進行する。この光老化は、紫外線などの刺激により皮膚組織で発生する活性酸素が一つの原因とされており、細胞を保護する細胞膜脂質を過酸化したり、さらに細胞中のＤＮＡに直接障害を与え、細胞の生存率を低下させ、皮膚の角層及び表皮細胞、真皮細胞、さらにはコラーゲンなどの結合組織にも多大なダメージを与える。
紫外線や活性酸素によって遺伝情報を含むＤＮＡは損傷を受けるが、細胞はこれらの損傷を元通りに修復するＤＮＡ修復機能を持っている。除去修復機構という仕組みがその代表的なもので、傷ついた部分を切り捨て、新しく元通りの塩基に修復することができる。また、紫外線のうちＡ波はＤＮＡ鎖を切断したり、ＤＮＡとタンパク質を結合させたりする。このように、ＤＮＡは活性酸素や紫外線によって損傷をうけるが、前記のような修復機能が働いても修復不可能な場合には、細胞はアポトーシスとよばれる細胞死をひきおこし、細胞の癌化などを防ぐ機構が働く。したがって、紫外線や活性酸素によるＤＮＡ鎖の損傷、あるいはアポトーシスを防ぐことは、皮膚の光老化を未然に防ぐことができる方策の一つである。
【０００３】
本出願人は、既に、皮膚老化防止用の化粧料として、チロシンの誘導体を利用するものを提案している（特許文献１）。他には、カスパーゼファミリーによる細胞死の誘導を抑制する植物抽出物を利用するもの（特許文献２）がある。また、一方、バラやツバキ等の植物から抽出したエキスにはムコ多糖断片化抑制があること（特許文献３）、皮膚老化防止のためにウコンなどの植物抽出エキスを含有したエラスターゼ阻害剤も提案され（特許文献４）、カンキツ植物の水蒸気蒸留水を配合した乾燥肌を改善し肌に艶と張りを与える化粧料組成物（特許文献５）、  ブロッコリー等の植物から抽出したエキスを用いたアレルギー予防剤（特許文献６）知られている。
しかしながら、これらの先行文献には植物及びその組成物に紫外線による細胞死を抑制する効果については見出されていない。
【０００４】
【特許文献１】特開平１５−０６３９５９
【特許文献２】特開平１４−０８０３８２
【特許文献３】特開平７−３０９７７０
【特許文献４】特開平１４−２０５９５０
【特許文献５】特開平１３−２１３７１９
【特許文献６】特開平１２−１６９３８２
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者は、皮膚に及ぼす障害に対して防御効果を示す薬剤を検討してきた。皮脂は保湿活性など皮膚防護効果を示すが、紫外線・外気・微生物などによって酸化変性を受けるとその生理効果は消失するばかりか、二次的に細胞障害を及ぼしうる。また、紫外線自体が直接的な細胞障害の原因となる。本発明では、紫外線や過酸化脂質による細胞死と細胞内パーオキシド・過酸化水素の生成及びそれらの防御効果を示す薬剤を研究開発することとした。薬剤の素材として、植物に注目した。
本発明は、細胞死抑制機能を有する植物からの精製物あるいは抽出物を提供することを目的としている。特に、紫外線、あるいは紫外線により発生する活性酸素を介した細胞死に対して、優れた細胞死抑制効果を有し、かつ外用剤あるいは経口剤への配合の面で優れた性能を有する細胞死抑制剤を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、こうした課題に対して鋭意研究を重ねた結果、ゼニアオイ、シークワーシャー、ケールまたはその抽出物に注目し、細胞死抑制効果に優れ、皮膚の老化防止に優れた効果を発揮することを認め、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、主に次の構成による。
【０００７】
１．ゼニアオイ、シークワシャー、ケールまたはその抽出物を１種又は２種以上含有することを特徴とする細胞死抑制剤。
２．抽出物がマルビジン−３，５−ジグルコシドを含むことを特徴とする１．記載の細胞死抑制剤。
３．細胞が真皮線維芽細胞、表皮角化細胞、血管内皮細胞、ランゲルハンス細胞、メラニン色素形成細胞の少なくとも一つから選ばれる１．又は２．記載の細胞死抑制剤。
４．  １．乃至３．のいずれかに記載の細胞死抑制剤を含むことを特徴とする老化防止剤。
５．  １．乃至３．のいずれかに記載の細胞死抑制剤あるいは４．記載の老化防止剤を含むことを特徴とする化粧料。
６．  １．乃至３．のいずれかに記載の細胞死抑制剤あるいは４．記載の老化防止剤を含むことを特徴とする外用剤。
７．    １．乃至３．のいずれかに記載の細胞死抑制剤あるいは４．記載の老化防止剤を含むことを特徴とする経口剤。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明における植物については、その植物の全草又は葉、根、果実、種子、花のうちの一つ以上をそのまま又は粉砕して用いることができる。
また、抽出物としては、更にこれを常温又は加温下にて抽出するか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得られる各種溶剤抽出液、その希釈液、その濃縮液又はその乾燥末を使用する。ここで抽出物は、２種以上の植物から得られたものであってもよい。
【０００９】
本発明の植物の抽出物を得るために用いられる抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類等が挙げられ、これらは２種以上を混合して用いることもできる。
上記抽出物は、そのまま用いることもできるが、当該抽出物を希釈、濃縮若しくは凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製して  用いることもできる。植物抽出物の配合量は特に限定されないが、乾燥重量として０．０００１〜１０質量％程度とするのが適切である。
【００１０】
本発明組成物には、植物油のような油脂類、高級脂肪酸、高級アルコール、シリコーン、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、防腐剤、糖類、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子のような高分子、増粘剤、粉体成分、紫外線吸収剤、紫外線遮断剤、ヒアルロン酸のような保湿剤、香料、ｐＨ調整剤、乾燥剤等を含有させることができる。ビタミン類、皮膚賦活剤、血行促進剤、常在菌コントロール剤、活性酸素消去剤、抗炎症剤、抗癌剤、美白剤、殺菌剤等の他の薬効成分、生理活性成分を含有させることもできる。
【００１１】
油脂類としては、例えばツバキ油、月見草油、マカデミアナッツ油、オリーブ油、ナタネ油、トウモロコシ油、ゴマ油、ホホバ油、胚芽油、小麦胚芽油、トリオクタン酸グリセリン、等の液体油脂、カカオ脂、ヤシ油、硬化ヤシ油、パーム油、パーム核油、モクロウ、モクロウ核油、硬化油、硬化ヒマシ油等の固体油脂、ミツロウ、キャンデリラロウ、綿ロウ、ヌカロウ、ラノリン、酢酸ラノリン、液状ラノリン、サトウキビロウ等のロウ類が挙げられる。
炭化水素類としては、流動パラフィン、スクワレン、スクワラン、マイクロクリスタリンワックス等が挙げられる。
【００１２】
高級脂肪酸として、例えばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）等が挙げられる。
高級アルコールとして、例えば、ラウリルアルコール、ステアリルアルコール、セチルアルコール、セトステアリルアルコール等の直鎖アルコール、モノステアリルグリセリンエーテル、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、オクチルドデカノール等の分枝鎖アルコール等が挙げられる。
シリコーンとして、例えば、鎖状ポリシロキサンのジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン等、環状ポリシロキサンのデカメチルシクロペンタシロキサン等が挙げられる。
【００１３】
アニオン界面活性剤として、例えば、ラウリン酸ナトリウム等の脂肪酸塩、ラウリル硫酸ナトリウム等の高級アルキル硫酸エステル塩、ＰＯＥラウリル硫酸トリエタノールアミン等のアルキルエーテル硫酸エステル塩、Ｎ−アシルサルコシン酸、スルホコハク酸塩、Ｎ−アシルアミノ酸塩等が挙げられる。
カチオン界面活性剤として、例えば、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム等のアルキルトリメチルアンモニウム塩、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム等が挙げられる。
両性界面活性剤として、アルキルベタイン、アミドベタイン等のベタイン系界面活性剤等が挙げられる。
非イオン界面活性剤として、例えば、ソルビタンモノオレエート等のソルビタン脂肪酸エステル類、硬化ヒマシ油誘導体が挙げられる。
防腐剤として、例えばメチルパラベン、エチルパラベン等を挙げることができる。
【００１４】
金属イオン封鎖剤として、例えばエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム、エデト酸、エデト酸ナトリウム塩等のエデト酸塩を挙げることができる。
高分子として、例えば、アラビアゴム、トラガカントガム、ガラクタン、グアーガム、カラギーナン、ペクチン、寒天、クインスシード、デキストラン、プルランカルボキシメチルデンプン、コラーゲン、カゼイン、ゼラチンメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）、アルギン酸ナトリウム等を挙げることができる。
増粘剤として、カラギーナン、トラガカントガム、クインスシード、カゼイン、デキストリン、ゼラチン、ＣＭＣ、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、グアーガム、キサンタンガム、ベントナイト等を挙げることができる。
【００１５】
粉末成分としては、タルク、カオリン、雲母、シリカ、ゼオライト、ポリエチレン粉末、ポリスチレン粉末、セルロース粉末、無機白色顔料、無機赤色系顔料、酸化チタンコーテッドマイカ、酸化チタンコーテッドタルク、着色酸化チタンコーテッドマイカ等のパール顔料、赤色２０１号、赤色２０２号等の有機顔料を挙げることができる。
紫外線吸収剤としては、パラアミノ安息香酸、サリチル酸フェニル、パラメトキシケイ皮酸イソプロピル、パラメトキシケイ皮酸オクチル、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、等を挙げることができる。
紫外線遮断剤として、酸化チタン、タルク、カルミン、ベントナイト、カオリン、酸化亜鉛等を挙げることができる。
【００１６】
保湿剤として、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，２−ペンタンジオール、グリセリン、ジグリセリン、ポリグリセリン、キシリトール、マルチトール、マルトース、ソルビトール、ブドウ糖、果糖、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸、シクロデキストリン等が挙げられる。
【００１７】
薬効成分としては、ビタミンＡ油、レチノール等のビタミンＡ類、リボフラビン等のビタミンＢ２類、ピリドキシン塩酸塩等のＢ６類、Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸モノパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸ジパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド等のビタミンＣ類、パントテン酸カルシウム等のパントテン酸類、ビタミンＤ２、コレカルシフェロール等のビタミンＤ類；α−トコフェロール、酢酸トコフェロール、ニコチン酸ＤＬ−α−トコフェロール等のビタミンＥ類等のビタミン類を挙げることができる。
【００１８】
また、この他に共存させることが好ましい成分として、プラセンタエキス、グルタチオン、ユキノシタ抽出物等の美白剤、ローヤルゼリー、ぶなの木エキス等の皮膚賦活剤、カプサイシン、ジンゲロン、カンタリスチンキ、イクタモール、カフェイン、タンニン酸γ−オリザノール等の血行促進剤、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸誘導体、アズレン等の消炎剤、アルギニン、セリン、ロイシン、トリプトファン等のアミノ酸類、常在菌コントロール剤のマルトースショ糖縮合物、塩化リゾチーム等を挙げることができる。
【００１９】
さらに、カミツレエキス、パセリエキス、ぶなの木エキス、ワイン酵母エキス、グレープフルーツエキス、スイカズラエキス、コメエキス、ブドウエキス、ホップエキス、コメヌカエキス、ビワエキス、ヨクイニンエキス、センブリエキス、メリロートエキス、バーチエキス、カンゾウエキス、シャクヤクエキス、サボンソウエキス、ヘチマエキス、トウガラシエキス、レモンエキス、ゲンチアナエキス、シソエキス、アロエエキス、ローズマリーエキス、セージエキス、タイムエキス、海藻エキス、キューカンバーエキス、ニンジンエキス、マロニエエキス、ハマメリスエキス、クワエキス等の各種抽出物を挙げることができる。
【００２０】
本発明の組成物は、例えば水溶液、油剤、乳液、けんだく液等の液剤、ゲル、クリーム等の半固形剤、粉末、顆粒、カプセル、マイクロカプセル、固形等の固形剤の形態で適用可能である。従来から公知の方法でこれらの形態に調製し、ローション剤、乳剤、ゲル剤、クリーム剤、軟膏、硬膏、ハップ剤、エアゾル剤、坐剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤等の種々の剤型とすることができる。これらを身体に塗布、貼付、噴霧等により適用することができる。特にこれら剤型の中で、ローション剤、乳剤、クリーム剤、軟膏剤、硬膏剤、ハップ剤、エアゾル剤等が皮膚外用剤に適している。化粧料としては、化粧水、乳液、クリーム、パック等の皮膚化粧料、メイクアップベースローション、メイクアップクリーム、乳液状又はクリーム状あるいは軟膏型のファンデーション、口紅、アイカラー、チークカラーといったメイクアップ化粧料、ハンドクリーム、レッグクリーム、ボディローション等の身体用化粧料等、入浴剤、口腔化粧料、毛髪化粧料とすることができる。
【００２１】
＜注目植物の選択＞
本発明では、紫外線や過酸化脂質による細胞死と細胞内パーオキシド・過酸化水素の生成及びそれらの防御効果を示す薬剤の素材として次の方法によって、注目植物を選択した。
【００２２】
［試験例１：紫外線による細胞死防御試験］
（試験方法）
２４ウェルプレートに正常ヒト皮膚表皮由来細胞であるＨａＣａＴ細胞を４０００ｃｅｌｌｓ／ウエルになるように播種し、２０時間、３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養する。サンプルを含む培地に交換後、ＵＶＢ（１ｍＷ／ｃｍ２）を３５秒間照射し、更に４８時間同条件で培養する。細胞を洗浄後、ＷＳＴ−１＜２−（４−Ｉｏｄｏｐｈｅｎｙｌ−３−（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）−５−（２，４−ｄｉｓｕｌｆｏｐｈｅｎｙｌ）−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ−Ｎａ＞を添加し、３時間反応後、マイクロプレートリーダーにより４５０ｎｍの吸光度を測定する。細胞生存率は紫外線を照射しない細胞の吸光度を１００％として紫外線を照射した時の各サンプルの吸光度から細胞生存率を計算する。
【００２３】
（結果）
図１に紫外線による細胞死防御試験の結果、高い有効性を示した植物抽出物を示す。紫外線を照射すると紫外線未照射の細胞と比較して３０％の細胞生存率であり、細胞死が認められるのに対して、ゼニアオイ抽出物、ケール抽出物、シークワーシャー抽出物を添加した系においては各々５５％、３２％、４６％の細胞生存率で細胞死を防御することが認められた。
【００２４】
［試験例２：酸化ストレスによる細胞死抑制試験］
（試験方法）
２４ウェルプレートに正常ヒト皮膚表皮由来細胞であるＨａＣａＴ細胞を４０００ｃｅｌｌｓ／ウェルになるように播種し、３７℃、５％ＣＯ２９５％飽和蒸気下にて２０時間培養した。各種植物エキスを含む培地に交換後、過酸化脂質モデル物質としてヒドロペルオキシドの一種の  ｔ−ＢｕＯＯＨ（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅ）を１７５μＭ添加し、さらに４８時間、同条件下にて培養した。細胞を洗浄後、（ミトコンドリア脱水素酵素活性に基づくＷＳＴ−１／吸光プレートリーダー法で計測した。
【００２５】
（結果）
ｔ−ＢｕＯＯＨによるＨａＣａＴ細胞死に対する各種植物エキスの防御効果を確認し、高い有効性を示した植物抽出物の結果を図２に示した。ｔ−ＢｕＯＯＨのみを添加した区においては細胞生存率が半分以下の０．１８に低下したのに対し、ゼニアオイ、シークワシャー、ケールの３検体は、０．０００５％、０．００２％添加区において細胞生存率が向上し、ヒト皮膚表皮由来細胞の酸化ストレスによる細胞死を防御する薬効が優れていることが認められた。
【００２６】
［試験例３：マルビジン−３，５−ジグルコシドによる細胞死抑制試験］
ゼニアオイ抽出物に含まれるマルビジン−３，５−ジグルコシドについて、試験例２と同じ方法で、細胞死抑制試験を行った。その結果を示した図３から明らかなように、０．０００１％、０．０００５％、０．００１％マルビジン−３，５−ジグルコシドによって酸化ストレスによる細胞死が抑制された。
【００２７】
［試験例４：ＵＶＡ照射後のＤＮＡ鎖切断に対する防御効果］
皮膚組織における、ＵＶＡ照射による細胞のＤＮＡ鎖切断をＴＵＮＥＬ（Ｔｅｒｍｉｎａｌ  Ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌ  Ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ  Ｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ  Ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｎｉｃｋ  ｅｎｄ−ｌａｂｅｌｉｎｇ）染色法を用いて観察した。
皮膚組織としては、耳側部より採取したヒト皮膚摘出片を用い、ゼニアオイ抽出物適用群と無適用群に分け、紫外線Ａ波２１２Ｊ／ｃｍ２を照射後、組織切片を定法に従いパラフィン包埋した。包埋組織片はミクロトームを用いて薄切し、スライドガラス上に切片標本を作成した。キシレンで脱パラフィン後、切片標本にＰｒｏｔｅｉｎａｓｅ  Ｋ溶液を室温で１０〜１５分間適用し、さらにＴＤＴ  Ｅｎｚｙｍｅ液によりヌクレオチドを標識後、Ａｎｔｉ−ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ−ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ抗体原液を適用し、結合反応を行った。呈色には、Ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅを用いて室温で３〜６分間反応させ、メチルグリーン染色液によりカウンター染色を行い、光学顕微鏡像を撮影した。
【００２８】
（結果）
皮膚組織における、ＵＶＡ照射による細胞のＤＮＡ鎖切断試験の結果を図４に示した。ゼニアオイ抽出物を添加しなかった皮膚切片においては、ＴＵＮＥＬ染色について著しい陽性反応を示し、ＤＮＡの断片化が認められたが、ゼニアオイ抽出物添加区においては、ＴＵＮＥＬ染色の反応性は低く、非照射時とほぼ同程度であった。したがって、ゼニアオイ抽出物を皮膚に適用することによって、紫外線によるＤＮＡ断片化が抑制されることが明らかになった。
【００２９】
［試験例５：ゼニアオイ抽出物の皮膚への浸透性評価］
１０％ゼニアオイ抽出含有白色ワセリンをヒト皮膚組織片４ｃｍ２あたり０．１ｇずつ塗布し、２時間室温下で放置した。２時間後、皮膚組織片を表皮層と真皮層に分離し、各層をメタノールにより抽出し、その抽出液中のゼニアオイ抽出物量をＨＰＬＣを用いて計測した。得られた抽出物量から、全塗布量中におけるゼニアオイ抽出物量を１としたときの、表皮及び真皮層に貯留しているゼニアオイ抽出物の割合を算出した結果を図５に示した。その結果、ゼニアオイ抽出物は表皮層のみならず、真皮層にまで浸透していることが確認できた。
【００３０】
【実施例】
次に実施例及び比較例をあげて本発明を具体的に明らかにする。
表１に示す配合で常法により、実施例及び比較例の皮膚用化粧料を調整した。
なお、表１は、重量％表示である。
［実施例１〜３及び比較例］
【００３１】
【表１】
細胞死抑制化粧料
2004359603.tif 000003
【００３２】
（１）  皮膚老化防止効果試験
（試験方法）
目尻に深さ１００μｍ程度のシワを有する中高年被験者１０名を対象に表１に示す美容液を４週間連続塗布し、その効果を評価した。すなわち、被験者の右目尻試験部位に１日１回、約０．５ｇを塗布し、試験開始前および試験終了後の皮膚の状態を判定基準により判定した。左目尻は試料を塗布せずに対照とした。
【００３３】
（判定基準）
著        効  ；顕著な改善
有        効  ；中程度の改善
やや有効  ；軽度の改善
無        効  ；変化なし
【００３４】
（判定）
○；被験者のうち著効および有効を示す割合が８名以上の場合
△；被験者のうち著効および有効を示す割合が５〜７名の場合
×；被験者のうち著効および有効を示す割合が５名未満の場合
結果を表２に記載する。
下記の表２から明らかなように、ゼニアオイ、ケール、シークワシャー抽出物を配合した実施例の塗布により、目元のしわが改善され、ゼニアオイ、ケール、シークワシャー抽出物に皮膚老化改善効果があることが明らかとなった。
【００３５】
【表２】
2004359603.tif 000004
【００３６】
（２）  紅斑抑制効果試験
（試験方法）
中高年被験者１０名の右腕上腕内側部に実施例１〜３と比較例を１週間毎日塗布し、紫外線１．０ＭＥＤを照射し、紅斑の程度を評価した。すなわち、被験者の試験部位４ヶ所に、上記の実施例１〜３、比較例各々約０．５ｇの試料をそれぞれ塗布し、紫外線照射直後および試験終了後の皮膚の状態を判定基準により判定した。
【００３７】
（判定基準）
著        効  ；変化なし
有        効  ；軽度の紅斑
やや有効  ；中程度の紅斑
無        効  ；顕著な紅斑又は水泡形成
（判定）
○；被験者のうち著効および有効を示す割合が８名以上の場合
△；被験者のうち著効および有効を示す割合が５名〜７名の場合
×；被験者のうち著効および有効を示す割合が５名未満の場合
結果を表３に記載する。表３から明らかなように、ゼニアオイ抽出物、ケール抽出物、シークワシャー抽出物を配合した実施例は、紫外線による紅斑形成の抑制に優れていることが認められた。
【００３８】
【表３】
2004359603.tif 000005
【００３９】
【発明の効果】
本発明で使用する植物種であるゼニアオイ、シークワシャー、ケール及びその抽出物には細胞死抑制効果があることが確認できた。
細胞死は皮膚老化として現れる。皮膚の細胞死の因子として、紫外線照射があげられ、紫外線による活性酸素を介する皮膚細胞死が一つの大きなメカニズムである。本発明は、特に、この紫外線による活性酸素を介する皮膚の細胞死の抑制効果を示し、紫外線による皮膚の障害を防止しするので老化防止する効果を奏するので高度の機能性組成物として有用である。特に、過酸化脂質に対する長時間の防御機能が優れている。
抽出物の一種であるマルビジン−３，５−ジグルコシドによる細胞死抑制効果も確認することができた。
【図面の簡単な説明】
【図１】各植物エキスが、紫外線の影響による細胞死を抑制する効果を示すグラフ
【図２】各植物エキスが、酸化ストレスの影響による細胞死を抑制する効果を示すグラフ
【図３】マルビジン−３，５−ジグルコシドによる細胞死抑制効果を示すグラフ
【図４】ヒト皮膚摘出片に対するＵＶＡ照射において、ゼニアオイ抽出物が皮膚組織細胞中のＤＮＡ鎖切断を防御する効果を示す免疫組織染色写真
【図５】１０％ゼニアオイ抽出物配合ワセリンの皮膚への浸透率を示したグラフ
【図１】
2004359603.tif 000006
【図２】
2004359603.tif 000007
【図３】
2004359603.tif 000008
【図４】
2004359603.tif 000009
【図５】
2004359603.tif 000010