(57)【要約】【課題】本発明は、自閉症や統合失調症と極めて類似した認知学習行動学の異常を示す動物の作製方法を提供することを目的とする。【解決手段】前記課題を解決するために、本発明は、動物の脳機能発達を妨害する、もしくは発達した脳構造をかく乱する特定のタンパク因子を投与する、もしくはその遺伝子を発現させることで投与と同様の作用を作り出す工程を具備する方法よりなる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
発達期の幼若動物に白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｉｍｉａ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ）を投与することで持続的な脳機能異常を呈する認知学習障害を誘発した動物を作製する方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法により作成した動物の、認知学習障害のモデルとしての使用方法。
【請求項３】
発達後の動物に白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｉｍｉａ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ）を投与することで急性の脳機能異常を呈する認知学習障害を誘発した動物を作製する方法。
【請求項４】
請求項３記載の方法により作成した動物の、認知学習障害のモデルとしての使用方法。
【請求項５】
動物に白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｉｍｉａ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ）の遺伝子を過剰発現させることで、間接的に請求項１もしくは請求項３に記載された持続的な白血病阻止因子の投与と同じ効果を実現することで脳機能異常を誘導し、認知学習障害を誘発した動物を作製する方法。
【請求項６】
請求項５記載の方法により作成した動物の、認知学習障害のモデルとしての使用方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、脳疾患モデル動物の作製法とその応用に関する医学・薬学の分野の新技術に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
精神疾患の多くは今だ生物学的な発症原因や病態があきらかでなく、多く難病として患者やその家族を苦しめている。たとえば、自閉症は５００−２５００人に１例の割合で発症し、社会性忌避などの認知障害や学習障害などの精神遅延に代表される精神疾患でいまだ有効な治療薬はない。また、統合失調症は、人口の０．７−１．０％の人に発症し、日本でも数十万人に及ぶ長期入院患者を生み出している。本疾患の主な症状は、妄想、幻覚、幻聴といった陽性症状に加えて、知覚異常といった認知障害や引きこもりや鬱症状といった陰性症状に至るまで、多用な精神的異常を伴うものである。現在のところ、その発症原因の解明はおろか、生物学的な病態の理解さえはっきりしていない。このように認知学習障害を伴う精神疾患についての基礎医学については未知のところが多い。
【０００３】
統合失調症は青年期から壮年期にかけて知覚・思考・感情・行動面に特徴的な症状で発病し、多くは慢性に経過し、社会適応にさまざまな困難を生じる精神障害である。精神症状について陽性症状（幻覚、妄想、減弱思考、緊張症状、奇異な行動など）と、陰性症状（感情の平板化、意欲低下、社会的引きこもりなど）の分類がある社会的には、本疾患の病態の特殊性から早期発見、治療、社会復帰活動、再発予防といった一貫した包括的治療体系の確立が望まれている。
【０００４】
唯一、統合失調症の陽性症状を改善する治療薬として、神経伝達物質、ドパミンやセロトニンと拮抗する薬物が有用だとされている。多くは年余にわたるこれらの薬物の長期投与が不可欠であり、具体的にはフェノチアジン系化合物、チオキサンチン系化合物、ブチロフェノン系化合物、ベンザアミド系化合物が患者に多用されている。
【０００５】
これら薬物の作用機序の研究にくわえて、実際、アンフェタミンを代表とする覚せい剤が、人において統合失調症の陽性症状を誘起することから、ドパミンの作用異常により統合失調症が発症するとの仮説が提唱されている。また、これらの事実より、アンフェタミンを慢性投与した動物を統合失調症のモデルとして使用していることがある。同様に、ヒトにおいて幻覚誘発作用のある薬物も、動物に投与することで統合失調症モデル動物として利用されることがある。たとえば、記憶や学習の脳生理機能に関連するといわれているグルタミン酸受容体の阻害剤であるフェンサイクリジンの投与動物が、それである。
【０００６】
これら従来の統合失調症動物モデルでは、薬物の投与に依存した一過性の脳機能異常を呈するものが多く、ヒトでみられるような、慢性的な統合失調症の病態を必ずしも再現しているとはいえなかった。また、ドパミン拮抗薬の作用も、陽性症状の改善が主たるもので、陰性症状の治療薬は極めて限られていた。その原因としては、適切な統合失調症の動物モデルが存在しなかったことによると考えられる。
【０００７】
これまで、統合失調症や自閉症の発症機構について、実にさまざまな仮説か提唱されてきている。その中のひとつに、Ｗｉｎｂｅｒｇｅｒを主とする研究者によって提唱されている神経発達障害仮説（文献１）があるが、実際にどのような生体因子が、どのようなメカニズムで脳神経発達に異常を引き起こすのかまったく不明であった。本発明は、その仮説を科学的に具現化する動物モデルを提供するものである。
【０００８】
一方、自閉症については、統合失調症にくらべ遺伝性が高いものの、その原因についてはまだ未知の部分が多い。動物では胎児の母体に繰り返し強いストレスを付加することで、出生した子供に、類似の認知学習障害が出るとの報告もある。最近、脳幹部のセロトニン神経の発達異常性が論議されている（文献２）。その意味で、統合失調症と同様、脳神経の発達機能障害であるとの仮説が有力であるが、有効な治療薬はほとんどない（文献３）。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、認知学習異常を示す動物モデルの作製方法とその応用を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
前記課題を解決するために、本発明は、動物に脳機能発達に関与する、もしくは発達後脳細胞機能を制御する特定のタンパク因子を過剰投与する、もしくはその遺伝子を過剰発現させる工程を具備する方法よりなる。
【００１１】
【発明の実施の形態】
用いる動物種は、サル、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、ネズミなど，一般的には、哺乳類であればいずれも本手法は、適用可能である。通常は、これまでに多くのデータの蓄積があるネズミやサルが最適であると考えられる。
【００１２】
白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｉｍｉａ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ）は炎症性サイトカインとして位置付けられるが、脳を含む発生分化過程でも大きな役割を果たしていることが知られていて、その学問的歴史的経緯の違いからコリン作動性神経分化因子（Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  Ｆａｃｔｏｒ）やＤ因子（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ−Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  Ｆａｃｔｏｒ）等多くの別名をもつ。また、同様の分子受容複合体に結合する類縁サイトカインとしてオンコスタチンＭや毛様体神経栄養因子（Ｃｌｉａｒｙ  Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  Ｆａｃｔｏｒ）があり、これらを白血病阻止因子の代わりに使用して請求項に記す認知学習障害動物を作製することも可能である。
【００１３】
これらのタンパク因子を投与、もしくは発現させる手段としては、大きく２つの方法が考えられる。そのひとつは、これらタンパク因子を直接、動物の腹腔か皮下、脳内等に注入する方法である。この方法だと体内における当該タンパク因子の代謝分解によりその体内濃度がすぐ低下するので、何日間かに渡って複数回、注射する必要がある。また、末梢からの投与では、その作用部位が脳であることから、まだ脳血液関門の未成熟な乳児期の投与が理想的である。通常、これらのタンパク因子は、遺伝子組替え法により細菌内で大量生成されたものか、もしくは、動物細胞から精製されたもの等を用いることができる。
【００１４】
白血病阻止因子の投与量については、全身投与で動物１キログラム体重あたり０．２５ｍｇ／１日ぐらい、もしくは脳内投与で脳重１キログラムあたり０．２５ｍｇ／１日ぐらいが適当であるが、それ以上でもよい。ただし、白血病阻止因子については、体重低下作用を有しているので過度の投与は、極度の体重低下を起こしてしまう点で注意を要する。投与回数は、１回では不十分で、できれば３回もしくは３日間、またそれ以上の回数、日数が望ましい。
【００１５】
もうひとつの方法は、白血病阻止因子や類縁体タンパク因子の遺伝子を、近年の胚操作法により動物個体に導入し、脳を含むいずれかの臓器で強制遺伝子発現させることで、結果として当該タンパク因子の投与を達成させるものである。この方法によると、一度、その遺伝子導入動物を作製すれば、その動物を系統維持するだけで、そのまま当該モデル動物となりうる。また、同様の目的で、ここに特定したタンパク因子が本来細胞内で活性化すると知られている細胞内情報伝達分子を、あたかもそのタンパク因子がその細胞に作用したかのように遺伝子操作等を用いて変異・改変した動物を発生工学的に作製し、代用することも可能である。
【００１６】
同様に適当な遺伝子発現ベクターに白血病阻止因子や類縁体タンパク因子の遺伝子をクローニングして、それを生後の動物の脳内に遺伝子導入、発現させることで、結果的に当該タンパク因子の投与と同等の効果をもたらすことも可能である。用いうる遺伝子発現ベクターとしては、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクターなどが存在する。
【００１７】
本手法により作製された認知学習の動物モデルは、自閉症患者や統合失調症患者に見られるような認知行動異常や学習障害を呈するようになる。その認知行動異常は、以下の方法により評価することができる。第一には、驚愕反応のプレパルスインヒビション、各種学習課題での認知遂行能力、動物運動量などの行動学的測定が、それに相当する。
【００１８】
驚愕反応におけるプレパルスインヒビションとは，ヒトと動物で共通に評価が可能な驚愕反応を指標とする知覚−運動反応能力のテストである。このテストでは、統合失調症や自閉症の病態の中心を成すと考えられている注意力と脳内情報処理力の異常性が、科学的に、客観的に評価できる特徴を有する。テスト自身は、１２０デシベル程度の大きな音でびっくり驚愕反応をおこす前、３０−１５０ミリ秒に、それ自身はびっくり驚愕反応を起こしえない弱い音刺激（プレバルス）をあらかじめ聴かせておくと、本来の大きな音でびっくり驚愕反応が減少することを測定する。このプレパルスによる減少分をプレパルスインヒビションと呼び、これは、統合失調症患者や自閉症患者で異常な低下を示すことが知られている（文献４）。
【００１９】
動物での各種学習課題での遂行能力は、例えばパブロフ型のコンデイショニング学習において、電気ショックと回避行動の学習、水迷路の空間学習、８方向迷路の餌位置学習などで測定することができる（文献５）。
【００２０】
ここでの動物運動量とは、自閉症患者や陰性症状を有する統合失調症患者が、新規環境との接触をいやがり、社会から引きこもる現象を反映していると考える。一般に、動物では、新規でストレスのある環境下での探索運動量を測定している。一般に動物モデルにおいて、この指標は低下すると推定される。
【００２１】
参考文献
（文献１）Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒ  ＤＲ．Ａｒｃｈ．Ｇｅｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４４：６６０−６６９（１９８７）
（文献２）Ｈｏｒｎｉｇ  Ｍ，Ｌｉｐｋｉｎ  ＷＩ．  Ｍｅｎｔ  ＲｅｔａｒｄＤｅｖ  Ｄｉｓａｂｉｌ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ．７（３）：２００−２１０  （２００１）．
（文献３）Ｗｈｉｔａｋｅｒ−Ａｚｍｉｔｉａ  ＰＭ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  Ｂｕｌｌ．；５６（５）：４７９−４８５  （２００１）．
（文献４）Ｂｒａｆｆ  ＤＬ，Ｇｅｙｅｒ  ＭＡ．Ａｒｃｈ  Ｇｅｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４７：１８１−１８８（１９９０）
（文献５）Ｓａｍｓ−Ｄｏｄｄ  Ｆ．Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１０（１）：５９−９０．（１９９９）．
【００２２】
申請者による関連する従来の発明や研究には、以下のものがある。
（特許申請１）  ２０００／１０／１０申請；特願２０００−３０９０４２  精神分裂病様の認知行動異常を示す動物とその作製方法
（特許申請２）  ２００１／２／２７申請；特願２００１−５２５４６  分裂病様精神疾患動物モデル、その作出方法およびその用途
（文献６）Ｎａｗａ  Ｈ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｍ，Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ  ＰＨ．Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．Ｎｏｖ；５（６）：５９４−６０３  （２０００）．
（文献７）Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｍ，Ｓｈｉｒａｋａｗａ  Ｏ，ＴｏｙｏｏｋａＫ，Ｋｉｔａｍｕｒａ  Ｎ，Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  Ｔ，Ｍａｅｄａ  Ｋ，Ｋｏｉｚｕｍｉ  Ｓ，Ｗａｋａｂａｙａｓｈｉ  Ｋ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｈ，Ｓｏｍｅｙａ  Ｔ，Ｎａｗａ  Ｈ．Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．Ｍａｙ；５（３）：２９３−３００  （２０００）。
（文献８）：Ｆｕｔａｍｕｒａ  Ｔ，Ｔｏｙｏｏｋａ  Ｋ，Ｉｒｉｔａｎｉ  Ｓ，Ｎｉｉｚａｔｏ  Ｋ，Ｎａｋａｍｕｒａ  Ｒ，Ｔｓｕｃｈｉｙａ  Ｋ，Ｓｏｍｅｙａ  Ｔ，Ｋａｋｉｔａ  Ａ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ  Ｈ，Ｎａｗａ  Ｈ．  Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．７（７）：６７３−６８２．（２００２）
【００２３】
【発明の効果】
本発明の原理と方法によれば、自閉症や統合失調症とそれに類似する認知学習障害の動物モデルを簡便に提供することが可能で、この動物を用いることで認知学習障害の医学研究材料を提供するとともに、モデル動物として利用することで自閉症や統合失調症とそれに類する認知学習障害性の精神疾患の治療薬、診断薬を開発、評価することが可能となる。
【００２４】
白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｉｍｉａ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ）の乳児への末梢投与の実施例
【実施例１】
＜白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｉｍｉａ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ）のラット乳児投与で生じた驚愕プレパルスインヒビションの異常＞
動物は，ＳＤラット（日本ＳＬＣ）生後２日齢より使用した．試薬は，マウス組替え白血病阻止因子（ＧＩＢＣＯ  ライフテック）、コントロールとしてチトクローム−Ｃ（Ｓｉｇｍａ）を生理食塩水に溶解させた．生後２日目より１日おきに計１０回（生後１１目まで），頚部にラット体重１ｇ当たり０．２５マイクログラム皮下投与した．生後３週より小動物驚愕反応測定装置（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）にて驚愕反応強度およびプレパルスインヒビションを測定した．すなわち，驚愕反応を誘発する感覚刺激としては，音刺激（１２０ｄＢ）を用い，プレパルス刺激として環境騒音（バックグラウンドノイズ）レベルより５デシベル高い音圧の刺激（７５ｄＢ）を与え，その１００ミリセコンド後に，音圧が１２０デシベルのパルス刺激を与えた．１２０ｄＢ単独の時の驚愕反応とプレパルスを組み合わせた時の反応比をプレパルスインヒビション（ＰＰＩ）とした．測定した生後３週から８週について、白血病阻止因子投与群はＡＮＯＶＡ検定で低下を示し、とくに生後６週齢の時点においては、白血病阻止因子投与群ではチトクローム・Ｃ投与群に比べ、単独でプレパルスインヒビションの有意な低下（＊ｐ＜０．０５）を示した（図１）。
【実施例２】
＜白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｉｍｉａ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ）の乳児投与で生じた新規環境運動量の異常＞
動物は，ＳＤラット（日本ＳＬＣ）生後２日齢より使用した．試薬は，マウス組替え白血病阻止因子（ＧＩＢＣＯ  ライフッテック）、チトクローム−Ｃ（Ｓｉｇｍａ）を生理食塩水に溶解させた．生後２日目より１日おきに計１０回（生後１１目まで），頚部にラット体重１ｇ当たり０．２５マイクログラム皮下投与した．動物の新規環境での運動量は、約５０ｃｍ四方の新しい箱にラットをいれ、その後の運動量をビデオテープとそれに連動した行動量解析システム（ニューロサイエンス社）で数値化した。測定した生後３週齢について、白血病阻止因子投与群はＡＮＯＶＡ検定で有意な低下を示し、とくに新規環境においた直後の５分間に白血病阻止因子投与群ではチトクローム−Ｃ投与群に比べ、単独で水平運動量の有意な低下（＊ｐ＜０．０５）を示した（図２）。
【００２５】
白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｉｍｉａ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ）の成熟ラットへの脳内投与の実施例
【実施例３】
＜白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｉｍｉａ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ）の脳内投与で生じた驚愕プレパルスインヒビションの異常＞
動物は，ＳＤラット（日本ＳＬＣ）生後５６−６６日齢より使用した．試薬は，マウス組替え白血病阻止因子（ＧＩＢＣＯ  ライフッテック）を生理食塩水に溶解させた．ラットは麻酔下で２８ゲージのカヌーレをブレグマの０．５ｍｍ前方、３．０ｍｍ側方に歯科用ドリルで頭蓋骨にに開けた穴に、深さ６．０ｍｍで埋め込み、歯科用セメント等を用いて固定した。線条体に埋め込んだカニューレの端には、プラスチックチューブを接続し、浸透圧ポンプ（２５０マイクロリッター容量（ＡＺＬＥＴ  ｍｏｄｅｌ２００２，ＡＺＬＡ  ＣＯＲＰ；１４日間持続投与）に連結させ、そのポンプ自身は、ラットの背中の皮下に挿入した。なお、浸透圧ポンプは、あらかじめマウス組替え白血病阻止因子（４０マイクログラム／ｍｌ；ＧＩＢＣＯ  ランフッテック）か、生理食塩水で充填しておいた。頭皮を縫合後、手術用クリップで留めて外科手術からの回復を待った。
投与開始後１週間より小動物驚愕反応測定装置（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）にて驚愕反応強度およびプレパルスインヒビションを測定した．すなわち，驚愕反応を誘発する感覚刺激としては，音刺激を用い，プレパルス刺激として環境騒音（バックグラウンドノイズ）レベルより５デシベル高い音圧の刺激を与え，その１００ミリセコンド後に，音圧が１２０デシベルのパルス刺激を与えた．１２０ｄＢ単独の時の驚愕反応とプレパルスを組み合わせた時の反応比をプレパルスインヒビション（ＰＰＩ）とした．これらセッションの前後での１２０デシベルのパルス刺激に対する反応性低下を順応性として評価した。白血病阻止因子投与群は、生理食塩水投与郡に比べ、いずれのプレパルス強度においても有意な低下を示した。しかし、１２０ｄＢ単独の時の驚愕反応強度とその順化度そのものには、両者とも大きな差は見られなかった（図３）。
【実施例４】
＜白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｉｍｉａ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ）の脳内投与で生じた新規環境運動量の異常＞
実施例３にあるように、ＳＤラット（日本ＳＬＣ）生後５６−６６日齢の脳内に、マウス組替え白血病阻止因子（ＧＩＢＣＯ  ランフッテック）と生理食塩水を浸透圧ポンプ（ＡＺＬＥＴ  ｍｏｄｅｌ２００２，ＡＺＬＡ  ＣＯＲＰ）から１４日間持続投与した。投与開始後１週間で、下記運動量テストを行った。新規環境での運動量は、約５０ｃｍ四方の新しい箱にラットをいれ、その後の運動量を３０分間ビデオテープとそれに連動した行動量解析システム（ニューロサイエンス社）で数値化した。白血病阻止因子投与群は、生理食塩水投与郡に比べＳｔｕｄｅｎｔ  Ｔ検定で、水平運動量に対し低下傾向（ｐ＝０．０８８）を示し、起き上がり垂直運動は有意な低下（ｐ＝０．０３２）を示した（図４）。
【実施例５】
＜白血病阻止因子（Ｌｅｕｋｅｉｍｉａ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｆａｃｔｏｒ）の脳内投与で生じた条件回避学習能の低下＞
実施例３にあるように、ＳＤラット（日本ＳＬＣ）生後５６−６６日齢の脳内に、マウス組替え白血病阻止因子（ＧＩＢＣＯ  ランフッテック）と生理食塩水を浸透圧ポンプ（ＡＺＬＥＴ  ｍｏｄｅｌ２００２，ＡＺＬＡ  ＣＯＲＰ）から１４日間持続投与した。投与開始後１０日目で、条件回避学習能を測定した。テスト時（７−９週齢）のラットに２方向条件回避行動装置（室町科学社）を使って、８０ｄＢの音、および光が点滅すると、隣の部屋に移るべきであるということを、移動しない場合に電気ショック（０．６ｍＡ、１０秒）が加えることで学習させる。連続してこの課題を１０−５０秒間隔（ランダム）に９０回繰り返し、条件刺激に対するその正解反応率を持って学習能力を判定した。成長ラットの脳内連続投与について、白血病阻止因子投与群は、生理食塩水投与群と比べ、ほぼすべての学習セッションにおいて著しい学習能力の低下を（＊ｐ＜０．０５）を示した（図５）。
【図１】
2004180655.tif 000002
【図２】
2004180655.tif 000003
【図３】
2004180655.tif 000004
【図４】
2004180655.tif 000005
【図５】
2004180655.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成15年2月24日(2003.2.24)
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】白血病阻止因子（ＬＩＦ）を乳児期に投与することで認知行動異常を誘発させたラットの成長に伴うプレパルスインヒビションの変化
【符号の説明】白丸；健常コントロールラット、黒丸；白血病阻止因子（ＬＩＦ）投与ラット。＃＊有意な変化点。ｎは調査動物数。縦軸；プレパルスインヒビション（％）。横軸；生後週齢。
【図２】白血病阻止因子（ＬＩＦ）を乳児期に投与されたラットの生後３週齢時の水辺運動量の時間経過
【符号の説明】白丸；健常コントロールラット、黒丸；白血病阻止因子（ＬＩＦ）投与ラット。ｎは調査動物数。縦軸；水平移動距離（ｃｍ）。横軸；新規環境へ置いてからの時間（分）。
【図３】白血病阻止因子（ＬＩＦ）の脳内投与で生じた驚愕反応とプレパルスインヒビション
（上の図）７５ｄＢ、８０ｄＢ、８５ｄＢの音プレパルスを加えたときの主驚愕反応の低下率（プレパルスインヒビション）。（左下の図）プレパルスなしでの１２０ｄＢの主驚愕反応。（右下の図）テスト前後での１２０ｄＢの主驚愕反応の変化。
【符号の説明】白棒；生理食塩水投与のコントロール動物、黒棒；白血病阻止因子（ＬＩＦ）を脳内投与された動物、Ｐ；統計有意性。縦軸；プレパルスインヒビション（％；上の図）、１２０ｄＢ驚愕反応強度（左下の図）、テスト後に対するテスト前の１２０ｄＢの主驚愕反応率（％；右下の図）。
【図４】白血病阻止因子（ＬＩＦ）の脳内投与されたラットの新規環境での運動量。（左の図）水平運動量。（右の図）垂直運動量。
【符号の説明】白棒；生理食塩水投与のコントロールラット、黒棒；白血病阻止因子（ＬＩＦ）を脳内投与されたラット。ｎは調査動物数。ｐ；統計有意性。
【図５】白血病阻止因子（ＬＩＦ）の脳内投与されたラットの条件回避学習能。
【符号の説明】実線・菱形点；生理食塩水投与のコントロールラット、黒四角・点線；白血病阻止因子（ＬＩＦ）を脳内投与されたラット。ｎは調査動物数。縦軸；正答率（％）。横軸；学習セッション数（回）。