(57)【要約】【課題】安全かつ安価で、風味がよく、様々な飲食品に配合して手軽に摂取することができ、脂肪の体内への蓄積を抑制することができる脂肪蓄積抑制剤を提供する。【解決手段】脂肪蓄積抑制剤の有効成分としてココアを含有させる。本脂肪蓄積抑制剤を経口摂取することにより、脂肪酸生合成系遺伝子群及び脂肪運搬系遺伝子群の発現を抑制することができ、消化吸収された脂肪が内臓脂肪などとして体内へ蓄積されるのを効率よく抑制することができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ココアを有効成分として含有することを特徴とする脂肪蓄積抑制剤。
【請求項２】
脂肪酸生合成系遺伝子及び脂肪運搬系遺伝子の発現を抑制することにより脂肪蓄積を抑制する、請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ココアを有効成分として含有する脂肪蓄積抑制剤に関し、経口摂取することにより脂肪酸生合成系遺伝子群及び脂肪運搬系遺伝子群の発現を抑制して、脂肪の体内への蓄積を抑制することができる脂肪蓄積抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、食生活の西洋化に伴う摂取カロリーの増加、不規則な食生活、運動不足等の原因による肥満が問題となっている。肥満は、糖尿病、高血圧、高脂血症、動脈硬化症等の成人病や胆石症、呼吸異常、腰痛、変形性膝関節症等の原因となることが知られている。
【０００３】
肥満を解消する方法としては、一般的には運動を行ったり、摂取カロリーの管理等が行われているが、これらの方法は継続的な実行が困難であったり、かえって健康を損なう危険性もある。
【０００４】
そのため、できるだけ苦痛を伴わずに肥満を効率よく解消するために、脂肪の吸収抑制作用や脂質代謝改善作用を有する天然物由来の機能性素材を利用した脂質吸収抑制剤や抗肥満剤等が提案されている。例えば、下記特許文献１には、脱脂カカオマスを主成分として含有することを特徴とする脂肪吸収抑制剤が開示されている。この脂肪吸収抑制剤は、脱脂カカオマスの脂肪吸着能力に着眼したものであり、脱脂カカオマスが食事由来の脂肪を吸着することにより、その吸収を抑制して、脂質代謝を改善し、体脂肪の蓄積を抑制することが記載されている（段落番号０００８、００２４等参照）。
【０００５】
また、下記特許文献２には、ベタインと、タンポポエキス、うこんエキス、トウガラシエキス、およびスイカズラエキスから成る群から選ばれた少なくとも１のエキス（第１エキス）を有効成分とする抗肥満剤が開示されている。そして、その請求項２には、前記抗肥満剤がコーヒーエキス、中国茶エキス、緑茶エキス、紅茶エキス、ココアエキスから成る群から選ばれた少なくとも１のエキス（第２エキス）を更に含むことが記載されている。
【０００６】
【特許文献１】
特開平６−３２１７９６号公報
【特許文献２】
特開２００２−１７３４３５号公報
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上記特許文献１に開示された脂肪吸収抑制剤は、脱脂カカオマスの脂肪吸着量を増やすために、熱水や有機溶媒を用いて油分を抽出・除去して残存油分をできるだけ少なくする必要があるため、その分コストがかかるという問題があった。また、該脂肪吸収抑制剤の性質上、油分を含む飲食品には配合することが困難であったり、食事由来の脂肪が消化吸収される前に該脂肪吸収抑制剤を服用しなけらばならないなど、手軽に摂取できるものであるとは言い難かった。
【０００８】
一方、上記特許文献２に開示された抗肥満剤は味が悪く、日常的に摂取するには問題があった。
【０００９】
したがって、本発明の目的は、安全かつ安価で、風味がよく、様々な飲食品に配合して手軽に摂取することができ、脂肪の体内への蓄積を抑制することができる脂肪蓄積抑制剤を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、ココアの生理活性機能を研究する過程で、ココアを摂取することにより、脂肪酸生合成系遺伝子群及び脂肪運搬系遺伝子群の発現が抑制されることを見出し、この事実に基づいて本発明を完成するに至った。
【００１１】
すなわち、本発明の脂肪蓄積抑制剤は、ココアを有効成分として含有することを特徴とする。
【００１２】
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、古くから飲食品として摂取されているココアを有効成分とするので安全性が高く、安価に製造することができる。また、非常に風味がよいので、様々な飲食品に配合することができ、日常的に容易に摂取することができる。そして、本脂肪蓄積抑制剤を経口摂取することにより、脂肪酸生合成系遺伝子及び脂肪運搬系遺伝子の発現を抑制することができるので、消化吸収された脂肪が内臓脂肪などとして体内へ蓄積されるのを効率よく抑制することができる。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明で用いられるココアは、一般的にチョコレートやココア飲料に使用されているココアパウダーを用いることができる。このようなココアパウダーは、例えば、以下のようにして得ることができる。すなわち、カカオの果実からカカオ豆を取り出し、通常、約３０℃の条件下で４〜７日間発酵させた後、乾燥させる。乾燥させたカカオ豆をクリーナーで選別して金属や石等の異物を除去した後、セパレータで砕いて皮や胚芽等を取り除き、カカオニブを得る。得られたカカオニブを、炭酸カリウム、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、炭酸アンモニウム、重炭酸アンモニウム、重炭酸ナトリウム、酸化マグネシウム、水酸化ナトリウム等のアルカリ剤をカカオニブの重量に対して０〜５質量％、好ましくは２〜４質量％含む溶液に浸漬し、５０〜１００℃で０〜１５０分間、好ましくは８０〜１００℃で６０〜１２０分間アルカリ処理を行う。このアルカリ処理により、カカオ豆の苦味や渋味を除去することができる。
【００１４】
アルカリ処理後、１００〜１５０℃で２０〜１２０分間焙焼し、グラインダーで磨砕してカカオマスを得る。得られたカカオマスをココアプレスで搾油してココアバターを分離し、ココアミルで粉砕して細かい粉末にすることにより、ココアパウダー（通常、ココアバター含量１５〜２５％程度）を得ることができる。本発明においては、「チョコレート類の表示に関する公正競争規約」で規定されるココアパウダー（ココアバター含量８％以上）だけでなく、上記規約上、ココアパウダーとは言えない脱脂ココア（ココアバター含量８％未満）も用いることができる。
【００１５】
このようにして得られるココアパウダーは、タンパク質、糖質、食物繊維（水溶性難消化性多糖類、ヘミセルロース、セルロース、リグニン等）、リン脂質、無機質（リン、マグネシウム、カルシウム、鉄、亜鉛、銅、カリウム、ナトリウム等）、ビタミンＡ、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＥ（各種トコフェロール等）、ナイアシン、シュウ酸、クエン酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、酢酸、ポリフェノール類（タンニン、エピカテキン、カテキン、ケルセチン等）、無水カフェイン、テオブロミン、各種遊離脂肪酸類（パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸等）等を含有している。
【００１６】
本発明の脂肪蓄積抑制剤の形態は、経口摂取に適した形態であれば特に限定されず、錠剤、粉末（顆粒）、カプセル剤、ドリンク剤等が挙げられる。
【００１７】
本発明の脂肪蓄積抑制剤の成人１日当たりの有効摂取量は、ココアパウダーとして５〜２５ｇであり、好ましくは１０〜２０ｇである。
【００１８】
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、例えば、ココア飲料（インスタントココアも含む）、チョコレート、錠菓等の各種飲食品に配合することもできる。飲食品中におけるココアパウダーの配合量は、上記有効摂取量に基づいて設定すればよく、１〜９０質量％が好ましい。例えば、インスタントココアにおいては、１０〜５０質量％が好ましく、２０〜４０質量％が好ましい。
【００１９】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。
【００２０】
実施例
表１に示す組成のピュアココアパウダー（森永製菓株式会社製）及びココア代替物を用いて、表２に示す組成の飼料（ピュアココア入り飼料：ＨＣ食、ココア代替物入り飼料：ＨＦ食）を調製した。上記ココア代替物は、各種精製飼料原料を用いてココアと栄養成分が等しくなるように調整した飼料原料であり、蒸留水、粉末牛脂（日本クレア株式会社製）、ミルクカゼイン（日本クレア株式会社製）、セルロースパウダー（日本クレア株式会社製）、コーンスターチ（日本クレア株式会社製）、ミネラルミックス（商品名「ＡＩＮ−９３Ｇ−ＭＸ」、日本クレア株式会社製）を表１に示す配合で混合して調製したものである。なお、牛脂は、カカオバターと脂肪酸組成が非常に似ていることから採用した。
【００２１】
そして、上記ＨＣ食及びＨＦ食は、マウス・ラットを用いた栄養研究の標準精製飼料として全世界的に使用されている商品名「ＡＩＮ−９３Ｇ」（日本クレア株式会社製）をベースに、栄養成分組成及び脂肪酸組成が等しくなるように調製した。商品名「ＡＩＮ−９３Ｇ」（日本クレア株式会社製）の配合組成を表３に示す。具体的には、商品名「ＡＩＮ−９３Ｇ」（日本クレア株式会社製）にはコーンスターチが重量比で３９．７４８６％含まれているが、これを３２．５％分減らし（７．２４８６％残し）、替わりに、牛脂２０％分、ピュアココアパウダー（森永製菓株式会社製）又は上記ココア代替物を１２．５％分加え、均一に混合して調製した。
【００２２】
【表１】
2004359622.tif 000002
【００２３】
【表２】
2004359622.tif 000003
【００２４】
【表３】
2004359622.tif 000004
【００２５】
１週間の予備飼育を行ったＷｉｓｔａｒ系の雄性ラット（日本クレア株式会社より購入）７週齢２０匹を体重の平均値が等しくなるように２群に分け、試験群にはＨＣ食（１２．５質量％ピュアココア入り高脂肪食）を、対照群にはＨＦ食（１２．５質量％ココア代替物入り高脂肪食）を２１日間与えた。飼育期間中、各餌は摂食量（摂取カロリー）が同じになるように与えた。
【００２６】
飼育期間終了後、体重を測定してから解剖を行い、肝臓、腓腹筋、各種白色脂肪組織（腸間膜、腎周囲、副精巣周囲）を摘出し、重量を測定した。また、血液を採取し、血清中性脂肪値を測定した。そして、これらの測定値を元に、最も標準的な値を示す個体を２匹選んだ。具体的には、体重変動率（（解剖時体重−群分け時体重）／群分け時体重）、肝臓重量比（対・解剖時体重）、腓腹筋重量比（対・解剖時体重）、腸間膜白色脂肪組織重量比（対・解剖時体重）、血清中性脂肪値の５つのパラメータについて、群内平均値から最も隔たりの少ない個体を２匹ずつ選んだ。
【００２７】
図１に体重変動率、図２に肝臓重量比及び腓腹筋重量比、図３に各種白色脂肪組織重量比、図４に血清中性脂肪値の結果を示す。なお、各図において、数値は平均値±標準偏差（ｎ＝１０）で示し、統計解析はスチューデントｔ検定にて行った（＊＊：ｐ＜０．０１、＊：ｐ＜０．０５、＃＜０．０８）。
【００２８】
図１から、試験群のラットは対照群に比べて体重変動率が有意に低く、図３、４から試験群は対照群に比べて各種白色脂肪組織重量比及び血清トリグリセリド濃度も有意に低いことが分かる。なお、図２から、試験群及び対照群において、肝臓重量比や腓腹筋重量比に変動がないことから、試験群の体重の減少は白色脂肪組織、すなわち内臓脂肪の減少によるものであると考えられた。
【００２９】
選んだ個体の肝臓及び腸間膜白色脂肪組織からｔｏｔａｌ  ＲＮＡをそれぞれ抽出し、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社推奨のプロトコールに則った処理を行った後、ＤＮＡマイクロアレイ法により、脂肪代謝関連遺伝子の発現パターンを調べた。具体的には、抽出したｔｏｔａｌ  ＲＮＡから、「ＳＵＰＥＲＳＣＲＩＰＴ  ｃｈｏｉｃｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｃＤＮＡ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（商品名、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を用いてｃＤＮＡを合成し、このｃＤＮＡを鋳型にして「Ｂｉｏ  Ａｒｒａｙ  Ｈｉｇｈ  Ｙｉｅｌｄ  ＲＮＡ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ」（商品名、Ｅｎｚｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社製）を用いてビオチン標識したｃＲＮＡを試験管内で合成した。そして、このｃＲＮＡを断片化した後、ＤＮＡマイクロアレイ（商品名「ＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｒａｔ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｕ３４Ａ  Ａｒｒａｙ」（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製））と「ハイブリダイゼーションオーブン」（商品名、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）にてハイブリダイゼーションを行い、Ｒ−フィコエリスリン−ストレプトアビジンとの反応及び洗浄操作を「Ｆｌｕｉｄｉｃｓ  ｓｔａｔｉｏｎ」（商品名、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）で行った後、蛍光強度を「Ｇｅｎｅ  Ａｒｒａｙ  Ｓｃａｎｎｅｒ」（商品名、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）で測定し、脂肪代謝関連遺伝子の発現量の解析を行った。なお、上記ＤＮＡマイクロアレイには、塩基配列が判明しているラットの遺伝子（機能がまだ判明していないものも含まれる）のうち、約３分の１に当る８７４０遺伝子が搭載されており、既に機能が判明しているラットの遺伝子は全てこのチップに載っている。
【００３０】
解析の結果は、個々の遺伝子について、発現量の多い順にＰ（Ｐｒｅｓｅｎｔ）、Ｍ（Ｍａｒｇｉｎａｌ）、Ａ（Ａｂｓｅｎｔ）と評価される。本実験においては、試験群及び対照群について発現量が「Ｐ］と判定された遺伝子を選び出し、試験群と対照群の間における発現量の比較、すなわち、変動度合いを調べた。なお、変動度合いは、Ｉ（Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ；増加）、ＭＩ（Ｍａｒｇｉｎａｌｌｙ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ；境界域・増加）、ＮＣ（Ｎｏ  ｃｈａｎｇｅ；変化なし）、ＭＤ（Ｍａｒｇｉｎａｌｌｙ  Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ；境界域・減少）、Ｄ（Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ；減少）の５段階で判定し、本実験においては、各群２匹ずつ測定を行っていることから、（試験群−１）ｖｓ（対照群−１）、（試験群−２）ｖｓ（対照群−１）、（試験群−２）ｖｓ（対照群−１）、（試験群−２）ｖｓ（対照群−２）の４パターンについて比較解析を行った。そして、３パターン以上で「Ｄ」と判定された遺伝子を「ココアの摂取で発現量が減少した遺伝子」とみなした。
【００３１】
ココアの摂取により発現量が大きく変動した脂肪代謝関連遺伝子の発現変動度合いについて、（対照群−１）に対する（試験群−１）の発現量比、（対照群−１）に対する（試験群−２）の発現量比、（対照群−２）に対する（試験群−１）の発現量比、（対照群−２）に対する（試験群−２）の発現量比をそれぞれ求め、その平均値を求めた。その結果を表４に示す。なお、表４中、「Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．」は、各遺伝子のＧｅｎｅＢａｎｋ（ＮＣＢＩの核酸配列データベース）における識別番号である。
【００３２】
【表４】
2004359622.tif 000005
【００３３】
表４に示すように、ココアの摂取により、肝臓においては、クエン酸輸送タンパク（ｔｒｉｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ（ｃｉｔｒａｔｅ）  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、ＡＴＰクエン酸リアーゼ（ＡＴＰ  ｃｉｔｒａｔｅ−ｌｙａｓｅ）、脂肪酸シンターゼ（ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｓｙｎｔｈａｓｅ）の遺伝子の発現が抑制されていることが分かった。図５に示すように、これら３種類の遺伝子は脂肪酸生合成系遺伝子であり、クエン酸輸送タンパクは、ミトコンドリア内のクエン酸を細胞質ゾルへ運搬する酵素であり、ＡＴＰクエン酸リアーゼは細胞質ゾルに移行したクエン酸からアセチル−ＣｏＡを生成する酵素であり、脂肪酸シンターゼはマロニル−ＣｏＡからパルミチン酸を生成する酵素である。
【００３４】
したがって、ココアを摂取することにより、脂肪酸生合成の場である肝臓において、上記脂肪酸生成系遺伝子の発現が抑制され、肝臓での脂肪酸生合成が抑制され、脂肪が体内へ蓄積されにくくなることが示唆された。
【００３５】
また、腸間膜白色脂肪組織においては、ココアを摂取することにより、脂肪酸結合蛋白質（ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）遺伝子４種類と、脂肪酸輸送担体（ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｓｅ／ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）遺伝子２種類の発現が抑制されていることが分かった。
【００３６】
小腸型脂肪酸結合タンパク（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）はＦＡＢＰ２、小腸型脂肪酸結合タンパク相同体（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｈｏｍｏｌｏｇ）はＦＡＢＰ６、肝臓型脂肪酸結合タンパク（ｌｉｖｅｒ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）はＦＡＢＰ１、低分子量脂肪酸結合タンパク（ｌｏｗ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｗｅｉｇｈｔ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）はＦＡＢＰ３と呼ばれるが、これらはいずれも脂肪酸の細胞内輸送に関与している分子である。
【００３７】
一方、脂肪酸トランスロケース（ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｓｅ／ＣＤ３６）は、脂肪酸を輸送する膜タンパクであり、脂肪細胞が分化・成熟する際に発現が誘導されることが知られている。また、脂肪酸輸送担体（ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）はｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｓｅ／ＣＤ３６の短い形であり、同様の働きがあると考えられている。
【００３８】
したがって、ココアの摂取により、白色脂肪組織において脂肪運搬系遺伝子である脂肪酸結合蛋白及び脂肪酸輸送担体の遺伝子発現が減少したことになり、ココアの摂取で脂肪が体内へ蓄積されにくくなると考えられた。
【００３９】
以上の結果から、ココアの摂取により、肝臓では脂肪酸生合成系遺伝子群の発現が抑制され、また、白色脂肪組織では脂肪運搬系遺伝子群の発現が抑制されるので脂肪の体内へ蓄積を効果的に抑制できることが分かった。
【００４０】
【発明の効果】
以上説明したように本発明によれば、ココアを有効成分として含有することにより、脂肪酸生合成の場である肝臓において脂肪酸生成系遺伝子の発現を抑制すると共に、白色脂肪組織において脂肪運搬系遺伝子である脂肪酸結合蛋白及び脂肪酸輸送担体の遺伝子の発現を抑制することができ、脂肪の体内へ蓄積を効果的に抑制できる脂肪蓄積抑制剤を提供することができる。
【００４１】
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、古くから飲食品として摂取されているココアを有効成分とするので安全性が高く、安価に製造することができるだけでなく、非常に風味がよく、様々な飲食品に配合するなどして日常的に容易に摂取することができるので、十分な脂肪蓄積抑制効果が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】試験群及び対照群の体重変動率の結果を示す図である。
【図２】試験群及び対照群の肝臓重量比及び腓腹筋重量比の結果を示す図である。
【図３】試験群及び対照群の各種白色脂肪組織重量比の結果を示す図である。
【図４】試験群及び対照群の血清中性脂肪値の結果を示す図である。
【図５】生体内における脂肪酸生合成系の説明図である。
【図１】
2004359622.tif 000006
【図２】
2004359622.tif 000007
【図３】
2004359622.tif 000008
【図４】
2004359622.tif 000009
【図５】
2004359622.tif 000010