(57)【要約】【課題】優れたコラーゲン産生増強効果を有する、皮膚外用剤を提供すること。【解決手段】松樹皮抽出物を含有するコラーゲン産生増強皮膚外用剤。該皮膚外用剤中の松樹皮抽出物は、ＯＰＣを乾燥重量換算で２０重量％以上、さらにカテキン類を乾燥重量換算で５重量％以上の割合で含有することが好ましい。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
松樹皮抽出物を含有する、コラーゲン産生増強皮膚外用剤。
【請求項２】
前記松樹皮抽出物が、オリゴメリック・プロアントシアニジン（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）を乾燥重量換算で２０重量％以上の割合で含有する、請求項１に記載の増強皮膚外用剤。
【請求項３】
前記松樹皮抽出物が、さらにカテキン（ｃａｔｅｃｈｉｎ）類を乾燥重量換算で５重量％以上の割合で含有する、請求項１または２に記載のコラーゲン産生増強外用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、松樹皮抽出物を含有するコラーゲン産生増強皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
コラーゲンは皮膚あるいは血管の主成分であり、ヒトの体内の２５〜３０％を占める弾力性のある繊維状のタンパク質である。コラーゲンの産生が正常であれば、張りがあり、かつ滑らかな肌を保つことができる。さらに血管においては、弾力のある血管が形成され、動脈硬化などが起こりにくい。
【０００３】
しかしながら、コラーゲンの産生（合成能力）は、老化、偏食による栄養摂取の偏りなどによって減少し、このコラーゲン産生の低下が、皮膚のシワやたるみを引き起こす。
【０００４】
このような背景の下、コラーゲンの産生増強作用を有する食品および化粧品が提案されている（例えば、特許文献１〜５）。しかし、これらの食品および化粧品は、経口摂取、あるいは経皮投与（塗布）によっても、その効果は十分とはいえない。
【０００５】
本発明者らは、既にプロアントシアニジンを含有する松樹皮抽出物を経口摂取することにより、皮膚のコラーゲン量が顕著に増強されることを見出している（例えば、特許文献６）。しかし、このような経口摂取によって優れたコラーゲン産生増強効果を有する松樹皮抽出物を化粧品、医薬部外品などの外用剤として利用した場合に、体内への吸収過程が全く異なる経皮投与（塗布）によって経口投与と同様の効果が得られるかについては検討されていなかった。
【０００６】
【特許文献１】
特表昭６０−５００９５５号公報
【特許文献２】
特開平７−２６９９号公報
【特許文献３】
特開平７−２８５８４６号公報
【特許文献４】
特開平１１−３１５００７号公報
【特許文献５】
特開２０００−１９１４９８号公報
【特許文献６】
特開２００３−１４６８９９号公報
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、優れたコラーゲン産生増強効果を有する皮膚外用剤を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、松樹皮抽出物を皮膚外用剤として用いた場合、驚くべきことに、経口摂取と同等のコラーゲンの産生増強効果を奏すること、そしてこの効果が、コラーゲン産生が低下している状態においても得られることを見出して本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち本発明は、松樹皮抽出物を含有するコラーゲン産生増強皮膚外用剤を提供する。
【００１０】
好ましい実施態様においては、上記松樹皮抽出物は、オリゴメリック・プロアントシアニジン（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）を乾燥重量換算で２０重量％以上の割合で含有する。
【００１１】
好ましい実施態様においては、上記松樹皮抽出物は、さらにカテキン（ｃａｔｅｃｈｉｎ）類を乾燥重量換算で５重量％以上の割合で含有する。
【００１２】
【発明の実施の形態】
以下、本発明のコラーゲン産生増強皮膚外用剤について説明する。なお、以下に説明する構成は、本発明を限定するものでなく、本発明の趣旨の範囲内で種々改変することができる。
【００１３】
本発明のコラーゲン産生増強皮膚外用剤は、松樹皮抽出物を含有する。
【００１４】
このような松樹皮抽出物の原料となる松樹皮としては、フランス海岸松（Ｐｉｎｕｓ  Ｍａｒｔｉｍａ）、カラマツ、クロマツ、アカマツ、ヒメコマツ、ゴヨウマツ、チョウセンマツ、ハイマツ、リュウキュウマツ、ウツクシマツ、ダイオウマツ、シロマツ、カナダのケベック地方のアネダ等の樹皮が好ましく用いられる。中でも、フランス海岸松（Ｐｉｎｕｓ  Ｍａｒｔｉｍａ）の樹皮が好ましく用いられる。
【００１５】
フランス海岸松は、南仏の大西洋沿岸の一部に生育している海洋性松をいう。このフランス海岸松の樹皮は、フラバノイド類のプロアントシアニジン（ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）、有機酸並びにその他の生理活性成分等を含有する。プロアントシアニジンとは、フラバン−３−オールおよび／またはフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２以上の縮重合体からなる化合物群をいう。この主要成分であるプロアントシアニジンには、活性酸素を除去する強い抗酸化作用があることが知られている。
【００１６】
本発明に用いられる松樹皮抽出物は、上記の松の樹皮を水または有機溶媒で抽出して得られる。水を用いる場合には温水または熱水が用いられる。抽出に用いる有機溶媒としては、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、含水エタノール、含水プロピレングリコール、メチルエチルケトン、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、食用油脂、１，１，１，２−テトラフルオロエタン等の食品あるいは薬剤の製造に許容される有機溶媒が好ましく用いられる。これらの水および有機溶媒は単独で用いてもよいし、組合わせて用いてもよい。特に、熱水、エタノール、含水エタノール、含水プロピレングリコール等が好ましく、熱水およびエタノールがより好ましく、熱水がさらに好ましく用いられる。松樹皮を熱水抽出することによって、得られた松樹皮抽出物は、他の抽出方法で得られた松樹皮抽出物に比べて、優れたコラーゲン産生増強効果を有する。
【００１７】
松樹皮からの抽出方法に特に制限はないが、例えば、加温抽出法、超臨界流体抽出法などが用いられる。
【００１８】
超臨界流体抽出法は、物質の気液の臨界点（臨界温度、臨界圧力）を超えた状態の流体である超臨界流体を用いて抽出を行う方法である。超臨界流体としては、二酸化炭素、エチレン、プロパン、亜酸化窒素（笑気ガス）などが用いられ、二酸化炭素が好ましく用いられる。
【００１９】
超臨界流体抽出法では、目的成分を超臨界流体によって抽出する抽出工程および目的成分と超臨界流体とを分離する分離工程とを行う。分離工程では、圧力変化による抽出分離、温度変化による抽出分離、または吸着剤・吸収剤を用いた抽出分離のいずれを行ってもよい。
【００２０】
また、エントレーナー添加法による超臨界流体抽出を行ってもよい。この方法は、超臨界流体に、例えば、エタノール、プロパノール、ｎ−ヘキサン、アセトン、トルエン、その他の脂肪族低級アルコール類、脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、またはケトン類を２〜２０Ｗ／Ｖ％（重量対容量百分率）程度添加し、この流体で超臨界流体抽出を行うことによって、プロアントシアニジン、ＯＰＣ、カテキン類などの目的とする抽出物の抽出溶媒に対する溶解度を飛躍的に上昇させる、あるいは分離の選択性を増強させる方法であり、効率的な松樹皮抽出物を得る方法である。
【００２１】
超臨界流体抽出法は、比較的低い温度で操作できるため、高温で変質・分解する物質にも適用できるという利点；抽出流体が残留しないという利点；および溶媒の循環利用が可能であり、脱溶媒工程などが省略でき、工程がシンプルになるという利点がある。
【００２２】
また、松樹皮からの抽出は、上記の方法以外に、液体二酸化炭素回分法、液体二酸化炭素還流法、超臨界二酸化炭素還流法などにより行ってもよい。
【００２３】
松樹皮の抽出は、複数の抽出方法を組み合わせてもよい。複数の抽出方法を組み合わせることにより、種々の組成の松樹皮抽出物を得ることが可能となる。
【００２４】
上記抽出により得られた松樹皮抽出物は、プロアントシアニジン含有量を増加させる目的で精製してもよい。精製には、通常、酢酸エチルなどの溶媒が用いられるが、安全性などの面から、外用剤としての皮膚化粧品および医薬部外品への応用を容易にするため、溶媒を使用しない方法、例えば、限外濾過、あるいはダイヤイオンＨＰ−２０、セファデックス−ＬＨ２０、キチンなどの吸着性担体を用いたカラム法またはバッチ法により精製することが好ましい。
【００２５】
本発明の皮膚外用剤に用いられる松樹皮抽出物は、具体的には、以下のような方法により調製されるが、これは例示であり、この方法に限定されない。
【００２６】
フランス海岸松の樹皮１ｋｇを、塩化ナトリウムの飽和水溶液３Ｌに入れ、１００℃にて３０分間抽出し、抽出液を得る（抽出工程）。その後、抽出液を濾過し、得られる不溶物を塩化ナトリウムの飽和溶液５００ｍＬで洗浄し、洗浄液を得る（洗浄工程）。この抽出液と洗浄液を合わせて、松樹皮の粗抽出液を得る。
【００２７】
次いで、この粗抽出液に酢酸エチル２５０ｍＬを添加して分液し、酢酸エチル層を回収する工程を５回行う。回収した酢酸エチル溶液を合わせて、無水硫酸ナトリウム２００ｇに直接添加して脱水する。その後、この酢酸エチル溶液を濾過し、濾液を元の５分の１量になるまで減圧濃縮する。濃縮された酢酸エチル溶液を２Ｌのクロロホルムに注ぎ、攪拌して得られる沈殿物を濾過して回収する。その後、この沈殿物を酢酸エチル１００ｍＬに溶解した後、再度１Ｌのクロロホルムに添加して沈殿させる操作を２回繰り返す洗浄工程を行う。この方法により、例えば、重合度が２〜４のプロアントシアニジンを２０重量％以上含み、かつカテキン類を５重量％以上含有する、約５ｇの松樹皮抽出物が得られる。
【００２８】
本発明に用いられる松樹皮抽出物は、プロアントシアニジンを含有する。このプロアントシアニジンを含有する松樹皮抽出物を皮膚に塗布した場合に、経口摂取した場合と同等の優れたコラーゲン産生増強効果が得られる。さらに、プロアントシアニジンの中でも、皮膚への吸収性および浸透性に優れる点から、重合度の低い縮重合体を含むものが好ましく用いられる。重合度が２〜３０の縮合重合体（２〜３０量体）を含むものが好ましく、重合度が２〜１０の縮合重合体（２〜１０量体）を含むものがより好ましく、重合度が２〜４の縮合重合体（２〜４量体）を含むものがさらに好ましく用いられる。
【００２９】
本明細書では、上記の重合度が２〜４の重合体を、オリゴメリック・プロアントシアニジン（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ、以下「ＯＰＣ」という）という。ＯＰＣは、ポリフェノールの一種で、植物が作り出す強力な抗酸化物質であり、植物の葉、樹皮、果物の皮や種の部分に集中的に含まれている。具体的には、ブドウの種、松の樹皮、ピーナッツの皮、イチョウ、ニセアカシアの果実、コケモモなどに含まれている。また、西アフリカのコーラナッツ、ペルーのラタニアの根、日本の緑茶にも、ＯＰＣが含まれることが知られている。ＯＰＣは、皮膚に塗布することによって、抗酸化作用のほか、口腔内のバクテリア増殖を抑制してプラーク（歯こう）を減少させる効果、血管の弾力性を回復させる効果を発揮する。
【００３０】
本発明に用いられる松樹皮抽出物は、プロアントシアニジンを抽出物中に乾燥重量換算で４０重量％以上、好ましくは４０重量％〜９０重量％、より好ましくは５０重量％〜８０重量％の割合で含有する。そしてＯＰＣを抽出物中に乾燥重量換算で好ましくは２０重量％以上、より好ましくは３０重量％以上の割合で含有する。
【００３１】
上記松樹皮抽出物には、さらにカテキン（ｃａｔｅｃｈｉｎ）類を５重量％以上の割合で含有することが好ましい。カテキン類は、上記抽出方法によって、プロアントシアニジン（ＯＰＣ）とともに抽出され得る。カテキン類とは、ポリヒドロキシフラバン−３−オールの総称である。カテキン類としては、（＋）−カテキン（狭義のカテキンといわれる）、（−）−エピカテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、アフゼレキンなどが知られている。上記松樹皮抽出物からは、上記の（＋）−カテキンの他、ガロカテキン、アフゼレキン、（＋）−カテキンまたはガロカテキンの３−ガロイル誘導体が単離されている。
【００３２】
カテキン類は、ＯＰＣの存在下で水溶性が増すと同時に、ＯＰＣを活性化する性質を有し、さらにＯＰＣの安定化にも寄与し得る。
【００３３】
本発明に用いられる松樹皮抽出物は、ＯＰＣを２０重量％以上の割合で含有し、かつ、カテキン類を５重量％以上の割合で含有することが最も好ましい。カテキン類が上記の含有量を満たさない場合は、カテキン類を５重量％以上の割合で含有するように添加することが好ましい。
【００３４】
本発明のコラーゲン産生増強皮膚外用剤は、松樹皮抽出物を、好ましくは乾燥重量換算で０．０００５〜２０．０重量％、より好ましくは０．００１〜１０．０重量％含有する。０．０００５重量％未満であると、コラーゲン産生増強効果が十分に発揮されず、２０．０重量％を超えると、製剤化が困難になるため、好ましくない。
【００３５】
本発明のコラーゲン産生増強皮膚外用剤は、必須成分である松樹皮抽出物以外に、皮膚外用剤として化粧品、医薬品などに通常用いられる成分、例えば、酸化防止剤、美白剤、保湿剤、油性成分、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００３６】
酸化防止剤は、皮膚外用剤として通常用いられる成分の酸化を防止するために添加し得る。酸化防止剤としては、アスコルビン酸およびその誘導体、ＳＯＤ、マンニトール、カロテノイド類（アスタキサンチンなど）、ハイドロキノン、ユビキノン、ビルビリン、コレステロール、トリプトファン、ヒスチジン、ビタミンＰ様物質（ルチン、ケルセチン、ヘスペリジンなど）没食子酸、ビタミンＢ類、ビタミンＤまたはその誘導体、ビタミンＥ、グルタチオン、オウゴン、ローズマリー等の抗酸化作用を持つ植物抽出物等が挙げられる。
【００３７】
このような酸化防止剤は、皮膚外用剤中に、好ましくは０．０００１重量％〜４０重量％、より好ましくは０．００１重量％〜２０重量％含有し得る。例えば、アスコルビン酸およびその誘導体は、皮膚外用剤中に、好ましくは０．０００１〜３０重量％、より好ましくは０．００１重量％〜１０重量％含有し得る。
【００３８】
本発明の皮膚外用剤の形態に特に制限はなく、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、シップ、浴用剤等、従来皮膚外用剤に用いられる形態であればいずれでもよい。また、マウスウォッシュ、歯磨き粉、目薬などの口腔および目の粘膜に塗布する形態であってもよい。
【００３９】
本発明の皮膚外用剤は、皮膚に塗布することによって、優れたコラーゲン産生増強効果を有する。本発明の皮膚外用剤は、コラーゲン産生力が低下している状態、例えば、アスコルビン酸およびその誘導体（ビタミンＣ）が欠乏している状態でも、生体中のコラーゲン量を短期間で正常な状態に回復させ得る。この効果は、経皮投与によって発揮され、ビタミンＣを経口摂取する場合に比べて優れ、さらに松樹皮抽出物を経口摂取した場合と同等であるため、効率的である。一般的に、コラーゲン合成にはビタミンＣが不可欠であり、コラーゲン産生を高めるにはビタミンＣを補うことが必須とされているが、本発明の皮膚外用剤は、ビタミンＣの経口摂取または経皮投与に依存せずに、優れたコラーゲン産生増強効果を発揮し得る。また、本発明の皮膚外用剤に含有される松樹皮抽出物は、同程度のプロアントシアニジンを含有する他の植物抽出物に比べて、優れたコラーゲン産生増強効果を有する。その中でも、ＯＰＣを乾燥重量換算で２０重量％以上含有し、さらにカテキン類を乾燥重量換算で５重量％含有する松樹皮抽出物が特に優れたコラーゲン産生増強効果を発揮し得る。このような松樹皮抽出物は、熱水抽出により得ることが好ましい。松樹皮抽出物は、経口摂取のみならず、経皮投与によってもコラーゲン産生を増強できる点で、今までのコラーゲン産生増強剤にはない効果を有する。
【００４０】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明がこの実施例により制限されないことはいうまでもない。
【００４１】
（製造例１：松樹皮の熱水抽出物の調製）
松樹皮９００ｇに精製水７．２Ｌを加え、ブレンダー（Ｗａｒｉｎｇ  Ｂｌｅｎｄｅｒ）で破砕した後、１００℃で１０分間加熱した。次いで、直ちに濾過して濾液を得た。濾過後の残渣を精製水１．８Ｌで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて９Ｌの松樹皮の熱水粗抽出液を得た。この粗抽出液１ｍＬを凍結乾燥したところ、乾燥重量は８ｍｇであった。
【００４２】
上記粗抽出液１Ｌ（粉末乾燥重量８ｇ）を２５℃まで放冷し、塩化ナトリウムを１００％飽和濃度となるまで添加してよく攪拌した後、４℃で２４時間静置した。静置後、この溶液を濾過し、９１０ｍＬの濾液を得た。
【００４３】
この濾液をさらに精製した。水で膨潤させた芳香族系合成樹脂（ダイアイオンＨＰ−２０：三菱化学株式会社製）を１００ｍＬ充填した３０×３００ｍｍのカラムに上記濾液を通液し、さらに１Ｌの精製水で洗浄した。次いで、カラムから１５％（Ｖ／Ｖ）のエタノール−水混合溶媒で溶出し、２００ｍＬの松樹皮の熱水抽出物を得た。得られた抽出物を凍結乾燥して粉末化し、本操作を繰り返して松樹皮の熱水抽出物の乾燥粉末７．５１ｇを得た。この松樹皮の熱水抽出物の乾燥粉末は、プロアントシアニジンを４０重量％（ＯＰＣとして２０重量％）含有していた。
【００４４】
（製造例２：松樹皮のエタノール抽出物の調製）
松樹皮９００ｇにエタノール７．２Ｌを加え、ブレンダー（Ｗａｒｉｎｇ  Ｂｌｅｎｄｅｒ）で破砕した後、１００℃で１０分間加熱した。次いで、直ちに濾過して濾液を得た。濾過後の残渣をエタノール１．８Ｌで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて９Ｌの松樹皮のエタノール粗抽出液を得た。それ以降の操作は、実施例１と同様の操作を行い、プロアントシアニジン４１重量％（ＯＰＣとして２０重量％）を含有する松樹皮のエタノール抽出物の乾燥粉末を得た。
【００４５】
（実施例１）
製造例１で得られた松樹皮の熱水抽出物の乾燥粉末を０．３重量％含む水溶液を調製した。この水溶液を以下の試験用モルモットに塗布し、塗布前後における皮膚のコラーゲン量の指標である、ハイドロキシプロリン（Ｈｙｐ）量および真皮の厚さを測定し、コラーゲン産生増強効果を評価した。
【００４６】
（試験用モルモットの準備）
まず、平均体重２７９ｇの雄性モルモット（日本エスエルシー（株））５０匹に基本飼料（ＣＧ−７：日本クレア（株）、ビタミンＣ含有量０．１７重量％）を一週間与えて馴化させた。このモルモットを総無作為化法により一群５匹ずつ割り当てた。上記のモルモットの１群を用いて、健常時の皮膚のＨｙｐ量および真皮の厚さを以下のようにして測定した。その結果、健常時の皮膚のＨｙｐ量は、６２．１ｍｇ／ｇ皮膚であり、真皮の厚さは、１．５４±０．０７ｍｍであった。
【００４７】
Ｈｙｐ量は、以下のようにして測定した。モルモットから皮膚を摘出し、６０℃にて一晩乾燥した。この乾燥物を粉砕し、粉砕物５０ｍｇを５ｍＬの塩酸（６Ｍ）に添加し、ヒーティングブロックを用いて１１０℃に保持し、２４時間加水分解した。この加水分解物中のＨｙｐ含有量をクロラミンＴ法により測定した。
【００４８】
真皮の厚さは、以下のようにして測定した。モルモットから皮膚を摘出し、１０倍希釈ホルマリン溶液に１２時間浸漬させた後、精製水で洗浄した。さらに、５０容量％メタノール水溶液に２時間、７０容量％メタノール水溶液に２時間、および８０容量％メタノール水溶液に２４時間浸漬した。その後、無水メタノールに２．５時間浸漬させ、この操作を４回繰り返して脱水処理を行った。得られた処理物をさらに、キシレンに１時間浸漬させる操作を３回繰り返した後、溶媒をパラフィンに置換して、１時間浸漬させる操作を２回行って包埋した。包埋後、ミクロトーム（ヤマト科学株式会社）を用いて厚さ１μｍの病理切片を作製し、病理切片からパラフィンを除去した後に、アザン−マロリー法により染色して基底板と筋膜との間の距離（すなわち、真皮に相当する部分の厚み）を顕微鏡下で測定し、真皮の厚さの平均値を算出した。
【００４９】
次に、９群のモルモットのうち、１群のモルモットは、基本飼料を摂取させ、対照群とした。８群のモルモットに、低ビタミンＣ飼料（ＣＧ−７：日本クレア（株）、ビタミンＣ含有量０．０１重量％）を２週間自由摂取させ、皮膚のコラーゲン量を減少させた。２週間摂取後、そのうちの１群から皮膚を摘出し、上記と同様に皮膚のＨｙｐ量および真皮の厚さを測定したところ、４４．２ｍｇ／ｇ皮膚および１．３０±０．０８ｍｍであった。低ビタミンＣ飼料を摂取した残りの７群のそれぞれのモルモットの毛をバリカンを用いて除去し、試験用のモルモットとした。
【００５０】
（コラーゲン産生増強効果の評価）
上記松樹皮の熱水抽出物の乾燥粉末を０．３重量％含む水溶液を、１群の試験用モルモットの毛を除去した部位に５００μＬ／５００ｃｍ２の割合で塗布し、その後、冷風で乾燥させた。この塗布を一日一回の頻度で２週間行った。２週間塗布後、上記と同様にして皮膚のＨｙｐ量および真皮の厚さを測定した。なお、塗布期間中、試験用モルモットには、低ビタミンＣ飼料を自由摂取させた。結果を表１に示す。
【００５１】
（実施例２および３）
松樹皮の熱水抽出物の乾燥粉末を含む水溶液の代わりに、製造例２で得られた松樹皮のエタノール抽出物の乾燥粉末を０．３重量％含む水溶液（実施例２）および松樹皮の熱水抽出物の乾燥粉末を０．３重量％およびビタミンＣを０．３重量％を含む水溶液（実施例３）をそれぞれ用いたこと以外は、実施例１と同様に、上記水溶液を１群の試験用モルモットに塗布し、皮膚のＨｙｐ量および真皮の厚さを測定した。結果を表１に示す。
【００５２】
（比較例１〜４）
松樹皮の熱水抽出物を含む水溶液の代わりに、プロアントシアニジンを３８重量％含有するブドウ種子抽出物（キッコーマン株式会社）を０．３重量％を含む水溶液（比較例１）および精製水（比較例２および３）をそれぞれ用いたこと以外は、実施例１と同様に、上記水溶液をそれぞれ１群の試験用モルモットに塗布した。さらに精製水を塗布した１群のモルモットには、低ビタミンＣ飼料の代わりに、基本飼料（ビタミンＣ０．１７重量％含有）を自由摂取させた（比較例３）。残りの１群のモルモットには、何も塗布せず、低ビタミンＣ飼料に製造例１で得られた松樹皮の熱水抽出物を３重量％の割合で含有させた飼料を自由摂取させた（比較例４）。これらのモルモットの皮膚のＨｙｐ量および真皮の厚さを実施例１と同様に測定した。結果を表１に示す。
【００５３】
【表１】
2004359640.tif 000002
【００５４】
表１の結果から、松樹皮抽出物を含む水溶液を塗布した群（実施例１〜３）は、皮膚のＨｙｐ量および真皮の厚さが減少した状態から、ほぼ健常時の状態（対照例）まで回復していることがわかる。これに対して、精製水のみを塗布した群（比較例２）は、塗布前に比べて皮膚のＨｙｐ量および真皮の厚さがさらに減少し、精製水を塗布し、基本飼料を摂取した群（比較例３）は、皮膚のＨｙｐ量および真皮の厚さが増加しているが、対照例の値まで回復できなかった。このことは、皮膚のコラーゲン産生力が低下した状態において、松樹皮抽出物を経皮投与することによって、コラーゲン産生能力が顕著に増強されることを示す。また、実施例１〜３の松樹皮抽出物を含む水溶液を塗布した群は、ほぼ同量のプロアントシアニジンを含むブドウ種子抽出物を含む水溶液を塗布した群（比較例１）に比べて、皮膚のＨｙｐ量および真皮の厚さが大きく増加し、さらに松樹皮の熱水抽出物を経口摂取した群とほぼ同等の皮膚のＨｙｐ量および真皮の厚さを有していた。これらのことから松樹皮抽出物を経皮投与することによって、優れたコラーゲン産生増強効果が得られることがわかる。特に、この松樹皮抽出物のコラーゲン産生増強効果は、実施例１と実施例３との比較からビタミンＣの経皮投与に依存せずに、松樹皮抽出物単独の効果であること、および実施例１と実施例２との比較から、松樹皮の熱水抽出物がエタノール抽出物に比べて優れていることがわかる。
【００５５】
（実施例４）
製造例１で得られた松樹皮の熱水抽出物および以下の各成分を均一に混合・攪拌して化粧水を調製した：
＜化粧水の組成＞
松樹皮抽出物（熱水抽出物）                                  ２ｇ
グリセリン                                                  ６ｇ
プロピレングリコール                                        ４ｇ
オレイルアルコール                                          ０．１ｇ
ポリオキシエチレンラウリルエーテル                          １ｇ
エタノール                                                  ５ｇ
フェノキシエタノール                                        ０．１ｇ
アスコルビン酸                                              １ｇ
精製水                                                    ８０．８ｇ
【００５６】
（実施例５）
製造例１で得られた松樹皮の熱水抽出物および以下の各成分を均一に混合・攪拌してコラゲナーゼの作用を阻害するＷ／Ｏ型エモリエントクリームを得た。このエモリエントクリームは保湿効果、角質柔軟効果に加えて、コラーゲン産生増強効果を有し、皮膚外用剤として有用である：
＜エモリエントクリームの組成＞
松樹皮抽出物（熱水抽出物）                                  １ｇ
マイクロクラスタリンワックス                                ３ｇ
ラノリン                                                    ３ｇ
ワセリン                                                    ５ｇ
スクワラン                                                  ９ｇ
オリーブ油                                                １２ｇ
セスキオレイン酸ソルビタン                                  ３ｇ
トリオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）    １ｇ
ソルビトール                                                ９ｇ
アスコルビン酸                                              ０．１ｇ
精製水                                                    ５３．９ｇ
防腐剤                                                      適量
香料                                                        適量
【００５７】
（実施例６）
製造例１で得られた松樹皮の熱水抽出物および以下の各成分を均一に混合・攪拌して、ゲル状物を得、これをポリエステルフィルム（５０μｍ厚）上にゲル厚１ｍｍとなるように製膜した後、ポリエステル不織布（伸度５０％）に貼り合わせて、５０℃で２４時間加温し、シート状含水パック剤を得た。本パックは、局所的に多量の松樹皮抽出物を経皮投与できるため、その効果が極めて高いことが期待できる：
＜パックの組成＞                                        （単位は重量％）
松樹皮抽出物（熱水抽出物）                                  ０．０１
ポリアクリル酸（重量平均分子量：５００万）                  ６．０
グリセリン                                                ２０．０
エタノール                                                  ０．５
パラオキシ安息香酸エステル                                  ０．１
香料（ミント）                                              ０．１
乾燥水酸化アルミニウムゲル                                  ０．３５
水                                                        ７２．９４
【００５８】
（実施例７）
製造例１で得られた松樹皮の熱水抽出物および以下の各成分を均一に混合・攪拌して、マウスウォッシュを調製した。本マウスウォッシュは、主に歯牙を支える歯茎のコラーゲン産生量を増強し、歯のぐらつき等を予防する効果が期待できる：
＜マウスウォッシュの組成＞                              （単位は重量％）
松樹皮抽出物（熱水抽出物）                                  ０．０１
エチルアルコール                                          １５．０
サッカリンナトリウム                                        ０．５
ポリオキシレン硬化ヒマシ油                                  ２．５
グリセリン                                                  ６．０
香料                                                        ０．１
水                                                        ７５．８９
【００５９】
（実施例８）
製造例１で得られた松樹皮の熱水抽出物および以下の各成分を均一に混合・攪拌して、歯磨剤を常法により調製した：
＜歯磨剤の組成＞                                        （単位は重量％）
松樹皮抽出物（熱水抽出物）                                  ０．０１
増粘性シリカ                                                  ４．０
研磨性シリカ                                                １０．０
フッ化ナトリウム                                            ０．２３
ソルビット                                                １５．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム                        ０．６
ラウリル酸ナトリウム                                        １．３
サッカリン                                                  ０．０９
香料（ミント）                                              少量
保存料                                                      少量
水                                                        ６５．３１
【００６０】
（実施例９）
製造例１で得られた松樹皮の熱水抽出物および以下の各成分を均一に混合・攪拌して、点眼液を調製した：
＜点眼液の組成＞                                        （単位は重量％）
松樹皮抽出物（熱水抽出物）                                  ０．０１
塩化ナトリウム                                              ０．７
塩化カリウム                                                ０．２
アズレンスルホン酸ナトリウム                                ０．０２
マレイン酸クロルフェニラミン                                ０．３
水                                                        ９８．７７
【００６１】
【発明の効果】
本発明の皮膚外用剤は、皮膚に塗布することによって、優れたコラーゲン産生増強効果を有する。本発明の皮膚外用剤に含有される松樹皮抽出物は、同程度のプロアントシアニジンを含有する他の植物抽出物に比べて、優れたコラーゲン産生増強効果を有する。その中でも、ＯＰＣを乾燥重量換算で２０重量％以上含有し、さらにカテキン類を乾燥重量換算で５重量％含有する松樹皮抽出物が特に優れたコラーゲン産生増強効果を発揮し得る。このような松樹皮抽出物は、熱水抽出により得ることが好ましい。