(57)【要約】【課題】安全性の高い天然物素材由来の新規なエラスターゼ阻害剤、それを含有する皮膚外用剤および健康食品を提供することにある。【解決手段】松樹皮抽出物を含有するエラスターゼ阻害剤等であり、特に熱水抽出により得られた松樹皮抽出物によるエラスターゼ阻害効果は高く、保湿効果等に加え皮膚外用剤として有用な該抽出物を用いた皮膚外用剤、該抽出物を用いた健康食品を提供することができる。また、エラスターゼ阻害剤は天然物由来のものであるから、これらを用いた皮膚外用剤、健康食品も安全である。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
松樹皮抽出物を含有することを特徴とするエラスターゼ阻害剤。
【請求項２】
カテキン（ｃａｔｅｃｈｉｎ）類を５重量％以上含有することを特徴とする、請求項１に記載のエラスターゼ阻害剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のエラスターゼ阻害剤を含有する、皮膚外用剤。
【請求項４】
請求項１又は２に記載のエラスターゼ阻害剤を含有する、健康食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、松樹皮抽出物を含有するエラスターゼ阻害剤ならびにこのエラスターゼ阻害剤を含有する皮膚外用剤および健康食品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
エラスチンは皮膚の柔軟性、弾力性に関与する成分であり、エラスチンが正常ならば肌の柔軟性が保たれ、たるみの少ない肌となり、体内の細胞間質においては、物理的な衝撃を吸収する能力をになっている。さらに近年では、このエラスチンを分解するエラスターゼは、炎症反応における免疫細胞の遊走に関与していることが指摘されいる。よって、体内でエラスターゼの作用による分解が亢進すると、肌の柔軟性や弾力性が落ち、真皮の老化が引き起こされるだけでなく、過剰な炎症反応を引き起こす可能性が高くなる。よって、老化防止や過剰な炎症反応を予防する目的で、エラスターゼの作用を阻害する種々の物質が研究されている（例えば、特許文献１−３参照）。
【０００３】
【特許文献１】
特開平１１−２４６３８６号
【特許文献２】
特開２０００−１１９１８９号
【特許文献３】
特開２０００−２４７８３０号
【０００４】
そして、近年、食品や化粧品の安全性に対する関心が高まるにつれて、エラスチンの分解を防止するエラスターゼ阻害剤についても、外用剤としてだけでなく食品としても安全性の高い天然素材由来のものが求められるようになってきた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
上記状況に鑑み、本発明の目的は、安全性の高い天然素材由来の新規のエラスターゼ阻害剤およびそれを含有する皮膚外用剤および健康食品を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決しようとする手段】
本発明者らは、エラスターゼの作用を阻害する天然素材の探索を行った結果、松樹皮抽出物がエラスターゼの作用を阻害することを見出して、本発明の完成に至った。
本発明は、松樹皮抽出物を含有することを特徴とするエラスターゼ阻害剤である。
好ましい実施の態様においては、前記松樹皮抽出物が、オリゴメリック・プロアントシアニジン（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）を２０重量％以上含有するエラスターゼ阻害剤である。
別の好ましい実施態様では、本発明のエラスターゼ阻害剤は、前記松樹皮抽出物と、さらにカテキン（ｃａｔｅｃｈｉｎ）類を５重量％以上含有する。
また、本発明は、上記エラスターゼ阻害剤を含有する皮膚外用剤である。
さらに、本発明は、上記エラスターゼ阻害剤を含有する健康食品である。
【０００７】
【発明の実施形態】
以下、本発明のエラスターゼ阻害剤について説明する。なお、以下に説明する構成は、本発明を限定するものでなく、本発明の趣旨の範囲内で種々改変することができる。
【０００８】
本発明のエラスターゼ阻害剤は、松樹皮抽出物を含有することを特徴とする。松樹皮抽出物としては、フランス海岸松（Ｐｉｎｕｓ  Ｍａｒｔｉｍａ）、カラマツ、クロマツ、アカマツ、ヒメコマツ、ゴヨウマツ、チョウセンマツ、ハイマツ、リュウキュウマツ、ウツクシマツ、ダイオウマツ、シロマツ、カナダのケベック地方のアネダ等の樹皮抽出物が好ましく用いられる。中でも、フランス海岸松（Ｐｉｎｕｓ  Ｍａｒｔｉｍａ）の樹皮抽出物が好ましく用いられる。
【０００９】
フランス海岸松は、南仏の大西洋沿岸の一部に生育している海洋性松をいう。このフランス海岸松の樹皮は、プロアントシアニジン（ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）、有機酸並びにその他の生理活性成分等を含有し、主要成分であるフラボノイド類のプロアントシアニジンに、活性酸素を除去する強い抗酸化作用があることが知られている。
【００１０】
松樹皮抽出物は、上記松の樹皮を水または有機溶媒で抽出して得られる。水を用いる場合には温水、熱水が用いられる。抽出に用いる有機溶媒としては、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ブタン、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、含水エタノール、含水プロピレングリコール、エチルメチルケトン、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、食用油脂、１，１，１，２−テトラフルオロエタン等の食品あるいは薬剤の製造に許容される有機溶媒が好ましく用いられる。
これらの水、有機溶媒は単独で用いてもよいし、組合わせて用いてもよい。特に、熱水、含水エタノール、含水プロピレングリコール等が好ましく用いられる。
【００１１】
松樹皮からの抽出方法は特に制限はないが、例えば、加温抽出法、超臨界流体抽出法などが用いられる。
【００１２】
超臨界流体抽出法とは、物質の気液の臨界点（臨界温度、臨界圧力）を超えた状態の流体である超臨界流体を用いて抽出を行う方法である。超臨界流体としては、二酸化炭素、エチレン、プロパン、亜酸化窒素（笑気ガス）等が用いられるが、二酸化炭素が好ましく用いられる。
超臨界流体抽出法では、目的成分を超臨界流体によって抽出する抽出工程と、目的成分と超臨界流体を分離する分離工程とを行う。分離工程では、圧力変化による抽出分離、温度変化による抽出分離、吸着剤・吸収剤を用いた抽出分離のいずれを行ってもよい。
また、エントレーナー添加法による超臨界流体抽出を行ってもよい。この方法は、抽出流体に、例えば、エタノール、プロパノール、ｎ−ヘキサン、アセトン、トルエンその他の脂肪族低級アルコール類、脂肪族炭化水素類、芳香族炭化水素類、ケトン類を２〜２０Ｗ／Ｖ％（重量対容量百分率）程度添加し、この流体で超臨界流体抽出を行うことによって、ＯＰＣ、カテキン類などの目的とする抽出物の抽出溶媒に対する溶解度を飛躍的に上昇させる、あるいは分離の選択性を増強させる方法であり、効率的な松樹皮抽出物を得る方法である。
【００１３】
超臨界流体抽出法は、比較的低い温度で操作できるため、高温で変質・分解する物質にも適用できるという利点、抽出流体が残留しないという利点、溶媒の循環利用が可能であり、脱溶媒工程などが省略でき、工程がシンプルになるという利点がある。
また、松樹皮の抽出は、液体二酸化炭素回分法、液体二酸化炭素還流法、超臨界二酸化炭素還流法等により行ってもよい。
また、松樹皮の抽出は、複数の抽出方法を組み合わせてもよい。複数の抽出方法を組み合わせることにより、種々の組成の松樹皮抽出物を得ることが可能となる。
【００１４】
本発明に用いられる松樹皮抽出物には、プロアントシアニジンの縮重合体、すなわち、フラバン−３−オールおよび／またはフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２以上の縮重合体が含まれているが、松樹皮抽出物としては、重合度の低い縮重合体を含むものが好ましく用いられる。重合度が２〜３０の縮重合体（２〜３０量体）を含むものが好ましく、重合度が２〜１０の縮重合体（２〜１０量体）を含むものがより好ましく、重合度が２〜４の縮重合体（２〜４量体）を含むものが、吸収性や浸透性に優れることから、さらに好ましく用いられる。
なお、松樹皮抽出物は、既に国内においては食品として認められており、出願人における慢性毒性試験、急性毒性試験等の試験において問題なく、その安全性は確認されているものである。
【００１５】
本明細書では、プロアントシアニジンの縮重合体のうち、フラバン−３−オールおよび／またはフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２〜４の縮重合体を、オリゴメリック・プロアントシアニジン（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ、以下「ＯＰＣ」という）という。
ＯＰＣは、ポリフェノールの一種で、植物が作り出す強力な抗酸化物質であり、植物の葉、樹皮、果物の皮や種の部分に集中的に含まれている。具体的には、ブドウの種、松の樹皮、ピーナッツの皮、イチョウ、ニセアカシアの果実、コケモモなどに含まれている。また、西アフリカのコーラナッツ、ペルーのラタニアの根、日本の緑茶にも、ＯＰＣが含まれていることが知られている。
ＯＰＣは、ヒトの体内では、生成することのできない物質であることから、外部より摂取することが必要となる。
このようなＯＰＣは、抗酸化物質であるため、ガン・心臓病・脳血栓などの成人病の危険率を低下する効果、関節炎・アトピー性皮膚炎・花粉症などのアレルギー体質の改善効果等を有する。
さらにＯＰＣは、抗酸化作用のほか、口腔内のバクテリア増殖を抑制してプラーク（歯こう）を減少させる効果、血管の弾力性を回復させる効果、血液中でのリポたんぱくが活性酸素によりダメージを受けるのを防止して、損傷した脂肪が血管の内壁に凝集し、コレステロールが付着することを防止する効果、活性酸素によって分解されたビタミンＥを再生させる効果、ビタミンＥの増強剤としての効果等を有することが知られている。
【００１６】
本発明においては、ＯＰＣを２０重量％以上含有する松樹皮抽出物が好ましく用いられる。より好ましくは３０重量％以上である。
なお、理由は不明であるが、低重合度のＯＰＣを含む松樹皮抽出物を用いると、重合度の高いものを含む場合と対比して、高い抗ストレス効果が得られる。
ストレスが溜まると肌荒れ等を生ずることは知られており、ストレスを抑制することは肌荒れ等の防止に有益であることから、本発明のエラスターゼ阻害剤は、直接的にエラスターゼの作用を阻害するばかりでなく、間接的にも美容効果のある皮膚外用剤や健康食品として有用である。
【００１７】
また、本発明のエラスターゼ阻害剤は、カテキン（ｃａｔｅｃｈｉｎ）類を、松樹皮抽出物の乾燥重量に対して５重量％以上含有することが好ましく、より好ましくは１０重量％以上含有するものである。
なお、カテキン類は、松樹皮からも抽出され、松樹皮抽出物に含まれる。すなわち、カテキン類は、松樹皮からＯＰＣとともに抽出され得る。
【００１８】
カテキン類とは、ポリヒドロキシフラバン−３−オールの総称であり、狭義のカテキンといわれている（＋）−カテキンのほか、ガロカテキン、アフゼレキン、（＋）−カテキンまたはガロカテキンの３−ガロイル誘導体が、天然物から単離されている。カテキン類としては、（＋）−カテキン、（−）−エピカテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、エピカテキンガレートなどが知られている。
カテキン類には、発癌抑制、動脈硬化予防、脂肪代謝異常の抑制、血圧上昇の抑制、血栓予防、抗アレルギー、抗ウイルス、抗菌、虫歯予防、口臭防止、腸内細菌叢正常化効果、活性酸素やフリーラジカルの消去作用、抗酸化作用等があることが知られている。また、カテキン類には、血糖の上昇を抑制する抗糖尿病効果があることが知られている。
カテキン類は、ＯＰＣの存在下で水溶性が増すと同時に、活性化する性質がある。
【００１９】
本発明のエラスターゼ阻害剤は、ＯＰＣを２０重量％以上含有する松樹皮抽出物が用いられ、且つ、カテキン類が５重量％以上含有されていることが好ましい。
従って、ＯＰＣを２０重量％以上含有する松樹皮抽出物であっても、カテキン類を５重量％以上含まない場合には、カテキン類を５重量％以上含有するように添加することが好ましい。例えば、天然物由来のカテキン類を添加することができ、天然物由来のもにあっては、安全性の面からも好ましい。
即ち、松樹皮抽出物のカテキン類含量が５重量％未満の場合、カテキン類含量が５重量％以上となるように添加してもよい。
なお、松樹皮抽出物にカテキン類を添加したものであっても、本発明にいう松樹皮抽出物の範疇に属する。
【００２０】
本発明のエラスターゼ阻害剤に用いられる松樹皮抽出物は、具体的には、以下のような方法により調製されるが、これは例示であり、この方法に限定されない。
【００２１】
フランス海岸松の樹皮１ｋｇを、塩化ナトリウムの飽和溶液３Ｌで、１００℃にて３０分間、抽出し、抽出液を得る（抽出工程）。その後、抽出液をろ過し、得られる不溶物を塩化ナトリウムの飽和溶液５００ｍＬで洗浄し、洗浄液を得る（洗浄工程）。この抽出液と洗浄液を合わせて、松樹皮の粗抽出液を得る。
次いで、この粗抽出液に酢酸エチル２５０ｍＬを添加して分液し、酢酸エチル層を回収する酢酸エチル層回収工程を５回行う。なお、この酢酸エチル層回収工程では、酢酸エチル層を、無水硫酸ナトリウム２００ｇに直接回収する。その後、この酢酸エチル層を濾過し、濾液を元の５分の１の量になるまで減圧濃縮する。濃縮された酢酸エチル層を２Ｌのクロロホルムに注ぎ、攪拌して得られる沈殿物を濾過により回収する。その後、この沈殿物を酢酸エチル１００ｍＬに溶解した後、再度１Ｌのクロロホルムに添加して沈殿させる操作を２回繰り返す洗浄工程を行う。この方法により、カテキン類を５重量％以上含有し、２〜４量体のＯＰＣを２０重量％含む、約５ｇの松樹皮抽出物が得られる。
また、本発明においては、食品、医薬品、化粧品、医薬部外品に用いるときの安全性の観点から、松樹皮をエタノールまたは水等を用いて、より好ましくは加温しながら松樹皮からプロアントシアニジンを抽出し、吸着性の樹脂（ダイアイオンＨＰ−２０、Ｓｅｐｈａｄｅｘ−ＬＨ２０、キチン等）などや限外ろ過膜を用いて、プロアントシアニジンの含有量が高められた松樹皮抽出物を用いることが好ましい。また理由は明らかではないが、プロアントシアニジンを含有する植物抽出物の中でも、水や熱水を用いて抽出された松樹皮抽出物の方が他の植物種または抽出方法にて得られた抽出物よりも高いエラスターゼ阻害効果を得ることができる。
また、植物抽出物中のプロアントシアニジン含有量の上限は、特に制限されないが、植物抽出物中のプロアントシアニジン含有量が高濃度となると、プロアントシアニジン自身の生理活性が低くなることがあるため、植物抽出物中のプロアントシアニジン含有量が８０重量％未満、好ましくは７５重量％未満であることが好ましく、さらに好ましくは６０重量％未満である。
【００２２】
本発明の皮膚外用剤において、松樹皮抽出物の配合量は、外用剤全量中、乾燥物として０．０００５−２０．０重量％、好ましくは０．００１−１０．０重量％である。０．０００５重量％未満であると、エラスターゼ阻害機能が十分に発揮されず、２０．０重量％を超えると製剤化が難しいので好ましくない。また、１０．０重量％以上配合してもさほど大きな効果の向上はみられない。
【００２３】
本発明のエラスターゼ阻害剤には、上記必須成分以外に、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、その他の美白剤、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００２４】
また、本発明の皮膚外用剤は、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤等、従来皮膚外用剤に用いられる形態であればいずれでもよく、剤型は特に問わない。
【００２５】
本発明の健康食品において、松樹皮抽出物の配合量は、松樹皮抽出物が１日あたり２０ｍｇ−２０００ｍｇ、好ましくは４０ｍｇ−１０００ｍｇ摂取されるような形態にすると良い。
【００２６】
本発明の健康食品は前記松樹皮抽出物を食品に配合することにより得られる。例えば、本発明の健康食品は、松樹皮抽出物に賦形剤等を加えて、錠剤もしくは丸剤等の形状に成型したもの、あるいは、成型せずに、散剤の形態や、その他の形態としてもよいことは当然である。また、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、食品添加物、調味料等と調合したものとしてもよい。
ハードカプセル、ソフトカプセルなどのカプセル剤、粉末状、顆粒状、茶状、ティーバック状、飴状、液体、ペースト状などの形態としたものとしてもよい。そしてさらに、例えば、ローヤルゼリー、ビタミン、プロテイン、卵殻カルシウム等のカルシウム、キトサン、レシチン、クロレラ末、アシタバ末、モロヘイヤ末などの栄養成分を添加することもできる。ステビア末、抹茶パウダー、レモンパウダー、はちみつ、還元麦芽糖、乳糖、糖液や調味料等を加えて味を整えてもよい。
【００２７】
本実施形態に係るエラスターゼ阻害剤およびそれを含有する健康食品は、その形状または好みに応じて、そのまま摂取しても良いし、あるいは水、お湯、牛乳などに溶解して摂取しても良く、成分を浸出させたものを摂取しても良い。
【００２８】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明がこの実施例により制限されるものではない。
【００２９】
（製造例１：松樹皮抽出物の調整）
松樹皮９００ｇに精製水７．２Ｌを加え、ブレンダー（Ｗａｒｉｎｇ  Ｂｌｅｎｄｅｒ）で破砕した後、１００℃で１０分間加熱した。次いで、直ちに濾過し、濾過後の不溶物を精製水１．８Ｌで洗浄し、濾液と洗浄液を合わせて９Ｌの松樹皮抽出液を得、２５℃まで放冷し、塩化ナトリウムを１００％飽和濃度となるまで添加し、よく攪拌した後、４℃で２４時間静置した。静置後、この溶液を濾過し、８．１Ｌの粗プロアントシアニジン含有液を得た。
次いで粗プロアントシアニジン含有液を、水で膨潤させた芳香族系合成樹脂（ダイアイオンＨＰ−２０：三菱化学株式会社製）を１００ｍＬ充填した３０×３００ｍｍのカラムに通液し、プロアントシアニジンをカラムに吸着させた。このカラムを１Ｌの精製水で洗浄し、次いでカラムから２０％（Ｖ／Ｖ）のエタノール−水混合溶媒で溶出し、２００ｍＬの精製プロアントシアニジン含有液を得、それぞれ凍結乾燥し、本操作を繰り返してプロアントシアニジンを４０重量％含有する松樹皮抽出物Ａ（ＯＰＣ２０重量％、カテキン１３重量％含有）を７．５１ｇ得た。
また、プロアントシアニジンの含有量は、プロシアニジンＢ−２を標品として、Ｒ．Ｂ．Ｂｒｏａｄｈｕｒｓｔらの方法（Ｊ．Ｓｃｉ．Ｆｄ．Ａｇｒｉｃ．，  ２９，  ７８８〜７９４，１９７８）を基に測定し、ＯＰＣの含有量は下記のプロアントシアニジンの精製と同様にしてＯＰＣのみを分離し、その乾燥重量から算出した。
【００３０】
（製造例２：プロアントシアニジンの精製）
まず、水で膨潤させたセファデックスＬＨ−２０（アマシャムバイオサイエンス株式会社製）１００ｍＬを３０×３００ｍｍのカラムに充填し、５０ｍＬのエタノールで洗浄した。４００ｍｇの上記乾燥粉末を８ｍＬのエタノールに溶解し、これをカラムに通液して吸着させた後、１００〜８０％（Ｖ／Ｖ）エタノール−水混合溶媒でグラジエント溶出し、１０ｍＬずつ分取した。分取すると同時に、２量体のＯＰＣの標品（２量体：プロアントシアニジンＢ−２（Ｒｆ値：０．６））、を指標として、各画分中のＯＰＣをＴＬＣにより検出した。
ＴＬＣの条件は下記のとおりである。
ＴＬＣ：シリカゲルプレート（Ｍｅｒｃｋ  ＆  ＣＯ．，  Ｉｎｃ．製）
展開溶媒：ベンゼン／蟻酸エチル／蟻酸（２／７／１）
検出試薬：硫酸およびアニスアルデヒド硫酸
サンプル量：各１０μＬ
ＴＬＣにより４量体のＯＰＣが流出しなくなった段階で、１２００ｍＬの５０％（Ｖ／Ｖ）水−アセトン混合溶媒を通液し、カラムに吸着したプロアントシアニジンの画分を溶出させた。この溶出液と、カテキンを含有する画分を除いたＯＰＣの溶出画分を凍結乾燥し、ＯＰＣの含有量を算出した後に合計１５６ｍｇのプロアントシアニジン乾燥粉末（４５．５重量％のＯＰＣを含有）を得た。また、本操作を繰り返して行うことにより、９５．１重量％のプロアントシアニジンを含有する所定の量プロアントシアニジン乾燥粉末を回収した。
なお、プロアントシアニジンの含有量の測定は、製造例１と同様におこなった。
【００３１】
（製造例３：プロアントシアニジン２量体の精製）
製造例１の乾燥粉末４００ｍｇを実施例２と同様にカラムにかけた後に、１００〜８０％（Ｖ／Ｖ）エタノール−水混合溶媒でグラジエント溶出して、５ｍＬの溶出分画を作製し、ＴＬＣにてプロアントシアニジンの２量体を検出して、２量体の含まれる分画を合わせた後に凍結乾燥し、プロアントシアニジン２量体粉末７ｍｇを得た。
【００３２】
（製造例４）
製造例１の松樹皮抽出物と製造例３のプロアントシアニジン乾燥粉末を重量比で４：６で混合し、プロアントシアニジンを７３．１重量％、カテキンを５．２重量％含有する松樹皮混合物Ａを得た。
【００３３】
（製造例５）
製造例１の松樹皮抽出物と製造例３のプロアントシアニジン乾燥粉末を重量比で１：９で混合し、プロアントシアニジンを８９．６重量％、カテキンを１．３重量％含有する松樹皮混合物Ｂを得た。
【００３４】
（製造例６：松樹皮のエタノール抽出物の調整）
製造例１の水をエタノールにしたこと以外は同様の操作を行い、４１重量％のプロアントシアニジンを含有する松樹皮抽出物Ｂを得た。
【００３５】
（例１：エラスターゼ阻害効果の検討）
上記松樹皮抽出物Ａ、Ｂ、プロアントシアニジン精製粉末、プロアントシアニジン２量体粉末、ブドウ抽出物（プロアントシアニジン３８重量％、カテキン２重量％含有、キッコーマン株式会社）を用いて、以下のようにエラスターゼ阻害効果を検討した。
【００３６】
（検体の調整）
１ｍＬの０．２Ｍトリス緩衝液（ｐＨ８．０）へ各粉末を最終濃度が１０ｍｇ／ｍＬとなるように溶解し、原液から３倍希釈系列で３５の希釈系列を作製した。
【００３７】
（酵素溶液の調整）
次いでエラスターゼ（Ｓｉｇｍａ社）を０．２Ｍトリス緩衝液（ｐＨ８．０）に１Ｕ／ｍＬとなるように溶解して調整した。
【００３８】
（基質溶液の調整）
Ｎ−サクチニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ニトロアニリド（Ｓｉｇｍａ社）を０．２Ｍトリス緩衝液（ｐＨ８．０）溶解し、１Ｕ／ｍＬとなるように調整した。
【００３９】
（試験方法）
５０μＬの検体及び酵素溶液を混合して、３７℃、１５分間インキュベーションし、５０μＬの基質溶液を添加して、３７℃、５分間インキュベーションした後に４００ｎｍの吸光度を測定する。
測定した後に、酵素１Ｕ当たりの５０％反応阻害濃度を算出する。
上記試験は、１検体につき、同様の試験を３回行う。
５０％反応阻害濃度の算出結果を表１に示す。
【００４０】
【表１】
2004359589.tif 000002
【００４１】
表１の結果から、プロアントシアニジンまたはプロアントシアニジン２量体及びブドウ種子抽出物よりも松樹皮抽出物が最も高いエラスターゼ阻害効果を持つことが分かった。よって本発明の松樹皮抽出物、特に熱水抽出物は高いエラスターゼ阻害効果があることが分かった。
【００４２】
（実施例２）
化粧水
グリセリン                                    ６ｇ
プロピレングリコール                          ４ｇ
オレイルアルコール                        ０．１ｇ
ポリオキシエチレンラウリルエーテル            １ｇ
エタノール                                    ５ｇ
フェノキシエタノール                      ０．１ｇ
アスコルビン酸                                １ｇ
松樹皮抽出物                                  ２ｇ
精製水                                  ８０．８ｇ
を混合・撹拌して均一に調整し、エラスターゼの作用を阻害する化粧水を得た。
【００４３】
（実施例３）
エモリエントクリーム
マイクロクラスタリンワックス                            ３ｇ
ラノリン                                                ３ｇ
ワセリン                                                ５ｇ
スクワラン                                              ９ｇ
オリーブ油                                            １２ｇ
セスキオレイン酸ソルビタン                              ３ｇ
トリオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）１ｇ
ソルビトール                                            ９ｇ
アスコルビン酸                                      ０．１ｇ
松樹皮抽出物                                            １ｇ
精製水                                            ５３．９ｇ
防腐剤                                                適量
香料                                                  適量
を混合・撹拌して均一に調整し、エラスターゼの作用を阻害するＷ／Ｏ型エモリエントクリームを得た。このエモリエントクリームは保湿効果、角質柔軟効果に加えて、エラスターゼ阻害効果を有するため、皮膚外用剤として有用である。
【００４４】
（実施例４）
健康食品（錠剤）
松樹皮抽出物                                  ２０ｇ
結晶セルロース                                １０ｇ
ショ糖エステル                                  ５ｇ
二酸化ケイ素                                    ２ｇ
卵殻カルシウム                                ６３ｇ
を混合・撹拌して均一に調整し、（株）菊水製作所の打錠機（Ｃｌｅａｎｐｒｅｓｓ）を用いて打錠し、１錠２２０ｍｇである錠剤としてのエラスターゼの作用を阻害する健康食品を得た。
【００４５】
【発明の効果】
以上のように、松樹皮抽出物により、エラスターゼの作用を阻害できることが見出されたことから、松樹皮抽出物を含有するエラスターゼ阻害剤を提供することができる。特に、松樹皮の熱水抽出物をエラスターゼ阻害剤として用いることにより、優れたエラスターゼ阻害効果が得られる。また、エラスターゼ阻害剤を含有する皮膚外用剤や、エラスターゼ阻害剤を含有する健康食品を提供することができる。エラスターゼ阻害剤は天然物由来のもであるから安全であり、これを用いる皮膚外用剤、健康食品も安全である。