(57)【要約】【課題】培養色素細胞のチロジナーゼ活性を低下させ、メラニンの生成を抑制し、紫外線照射によって生じる色素沈着をも抑制するうえ、くすみ感も改善するといったすぐれた美白効果を奏する美白化粧料を提供すること。【構成】穀物または穀物の精製残渣を中性媒体で抽出してなる抽出物を酵素で処理してなる分解物を配合したことを特徴とする美白化粧料。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
穀物または穀物の精製残渣を中性媒体で抽出してなる抽出物を酵素で処理してなる分解物を配合したことを特徴とする美白化粧料。
【請求項２】
穀物の精製残渣が米糠またはふすまである請求項１記載の美白化粧料。
【請求項３】
中性媒体による抽出が、ｐＨ５〜９、抽出温度４〜４０℃、抽出時間室温で６時間〜７日間の抽出である請求項１または２記載の美白化粧料。
【請求項４】
酵素が
（Ａ）アクチナーゼと、
（Ｂ）ペプシン類、トリプシン類、パパイン類、ペプチターゼ類およびブロメラインからなる群より選ばれた蛋白分解酵素の少なくとも１種
とを組合わせたものである請求項１記載の美白化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
　本発明は、美白化粧料に関する。さらに詳しくは、すぐれた美白効果を奏し、基礎化粧品をはじめ、メイクアップ化粧品、浴用剤などに好適に使用しうる美白化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
　従来、美白効果を奏する化粧料の必要性が高まるにつれて種々の研究が行なわれ、各種美白化粧料が提案されている。しかしながら、従来の美白化粧料には、皮膚などに対する安全性や保存安定性に加え、とくにその美白効果を充分に満足するものがない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
　そこで、本発明者らは、前記従来技術に鑑みて鋭意研究を重ねた結果、穀物や穀物の精製時に生じる残渣を中性媒体で抽出してえられる抽出物が培養色素細胞のチロジナーゼ活性を低下させ、メラニンの生成を抑制し、紫外線照射によって生じる色素沈着をも抑制するうえ、くすみ感も改善するといったすぐれた効果を奏することを見出し、本発明を完成するにいたった。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
　すなわち、本発明は、穀物または穀物の精製残渣を中性媒体で抽出してなる抽出物を酵素で処理してなる分解物を配合したことを特徴とする美白化粧料に関する。
【発明の効果】
【０００５】
　穀物や穀物の精製残渣を中性媒体で抽出してえられた抽出物は、美白効果の指標となる培養色素細胞の細胞内チロジナーゼ活性に対して、細胞活性をほとんど阻害せずに低下させてメラニンの生成を抑制し、紫外線照射によって生じる色素沈着を抑制するといったすぐれた作用を同時に呈するものであるので、かかる抽出物が配合された美白化粧料は、メラニンの蓄積によるシミ、ソバカスの発現を抑制し、肌の状態を向上させ、くすみ感が改善された白く美しい肌を維持するという効果を奏する。
【０００６】
　さらに、前記抽出物を酵素で処理してえられた分解物が配合された本発明の美白化粧料は、よりすぐれた美白効果を奏する。
【０００７】
　また、本発明の美白化粧料は、前記のごとくすぐれた美白効果を奏するうえ、皮膚などに対する安全性や保存安定性にもすぐれるといった効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
　本発明の美白化粧料は、前記したように、穀物または穀物の精製残渣を中性媒体で抽出してえられた抽出物を酵素で処理してなる分解物を配合したものである。
【０００９】
　本発明に用いられる穀物としては、たとえば米、小麦などがあげられる。また穀物の精製残渣としては、たとえば米糠、ふすま、トウモロコシ精製残渣、大豆精製残渣などがあげられるが、これらのなかでは、後述する中性媒体で抽出してえられる抽出物がよりすぐれた美白効果を奏するという点から、米糠およびふすまが好ましい。
【００１０】
　前記穀物や穀物の精製残渣を中性媒体で抽出する際に用いられる溶媒としては、たとえば精製水などの水；エタノールなどの１価の低級アルコール類；オレイルアルコール、ステアリルアルコール、オクチルドデカノールなどの１価の高級アルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコールなどのポリオール類；アセトンなどのケトン類；酢酸エチルなどのエステル類；ヘキサン、クロロホルム、ベンゼンなどの炭化水素系溶剤などがあげられ、これらは単独でまたは２種以上を混合して用いることができる。これらのなかでは、化粧料への幅広い適用が可能であるという点から、精製水や、精製水と、エタノール、グリセリンおよび１，３−ブチレングリコールの１種または２種以上との混合溶媒が好ましい。
【００１１】
　なお、前記混合溶媒を用いるばあいには、たとえば精製水とエタノールとの混合溶媒のばあいには、両者の容量比は１：１〜２５：１、精製水とグリセリンとの混合溶媒のばあいには、両者の容量比は１：１〜１５：１、精製水と１，３−ブチレングリコールとの混合溶媒のばあいには、両者の容量比は１：１〜１５：１であることが好ましい。
【００１２】
　本発明において、中性媒体で穀物や穀物の精製残渣の抽出を行なう際には、穀物や穀物の精製残渣を含有した抽出溶液のｐＨが５〜９程度であればよく、前記溶媒をそのまま用いてもよいが、たとえば水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウムなどのナトリウム塩、水酸化カリウムなどのカリウム塩などのアルカリ性調整剤や、たとえばクエン酸、塩酸、リン酸、硫酸などの酸性調整剤などを前記溶媒に配合し、目的とするｐＨとなるように調整することもできる。これら調整剤のなかでは、低濃度で目的とするｐＨとなるように調整することができるという点から、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、塩酸およびリン酸が好ましい。
【００１３】
　前記抽出処理に要する時間は、用いる溶媒の種類、目的とするｐＨ、抽出温度などによって異なるので一概には決定することができないが、たとえばｐＨが５〜９のばあい、通常室温で６時間〜７日間程度、なかんづく１２〜４８時間程度であることが好ましい。なお、抽出温度は、好ましくは４〜４０℃程度、さらに好ましくは１０〜３０℃程度である。
【００１４】
　かくしてえられた抽出物は、そのまま美白化粧料に配合してもよく、たとえば減圧下で濃縮して濃度を調整したのち配合してもよく、またたとえば凍結乾燥法やスプレイドライ法などによって粉末化したものを配合してもよい。ただし、これらのばあいは、本発明には含まれない。
【００１５】
　前記抽出物の配合量は、目的とする美白化粧料の種類などによって異なるので一概には決定することができないが、かかる配合量があまりにも少ないばあいには、該抽出物を配合したことによる美白効果が充分に発現されなくなる傾向があるので、美白化粧料１００部（重量部、以下同様）に対して固形分換算で０．０００５部以上、なかんづく０．００５部以上となるように調整することが好ましく、またあまりにも多いばあいには、該抽出物を美白化粧料に安定に配合することが技術的に困難となる傾向があるので、美白化粧料１００部に対して固形分換算で５部以下、なかんづく１部以下となるように調整することが好ましい。
【００１６】
　本発明の美白化粧料には、チロジナーゼ活性の低下、メラニン生成の抑制や、紫外線照射によって生じる色素沈着の抑制などの美白効果の発現がより大きいという点から、前記抽出物を酵素で処理してえられる分解物が配合される。
【００１７】
　前記酵素としては、たとえばアクチナーゼなどのアクチナーゼ類、ペプシンなどのペプシン類、トリプシン、キモトリプシンなどのトリプシン類、パパイン、キモパパインなどのパパイン類、グリシルグリシンペプチターゼ、カルボキシペプチターゼ、アミノペプチターゼなどのペプチターゼ類、ブロメラインなどの蛋白分解酵素などがあげられる。これらのなかでは、アクチナーゼと、ペプシン類、トリプシン類、パパイン類、ペプチターゼ類およびブロメラインから選ばれた蛋白分解酵素の少なくとも１種とを組合わせたものが、えられる分解物が配合された美白化粧料が保存安定性および安全性にすぐれるという点から好ましく、アクチナーゼとペプシンおよびトリプシンとの組合わせがとくに好ましい。
【００１８】
　なお、本発明においては、２種類以上の酵素を用いて処理するばあいには、通常１回につき１種類の酵素が用いられる。
【００１９】
　酵素処理を行なう際の１回あたりの酵素の使用量は、前記穀物や穀物の精製残渣を含有した中性の抽出溶液１００部に対して０．０００５〜０．０５部程度、なかんづく０．００１〜０．００５部程度であり、合計して０．００３〜０．０１５部程度であることが、かかる酵素の作用効果の点で好ましい。
【００２０】
　前記酵素処理に要する時間は、用いる酵素の種類や分解温度などによって異なるので一概には決定することができないが、１種類の酵素につき通常３０分間〜２４時間程度、なかんづく１〜４時間程度であることが好ましい。なお、前記例示した酵素の分解温度は約３０〜５０℃である。
【００２１】
　また、酵素処理を行なう際には、抽出溶液のｐＨが用いる酵素の至適ｐＨとなるように調整すればよく、かかる抽出溶液のｐＨを調整するには、必要に応じて、たとえば前記抽出を行なう際に用いられる酸性調整剤やアルカリ性調整剤などを用いることができる。
【００２２】
　かくしてえられた分解物は、そのまま美白化粧料に配合してもよく、たとえば減圧下で濃縮して濃度を調整したのち配合してもよく、またたとえば凍結乾燥法やスプレイドライ法によって粉末化したものを配合してもよい。
【００２３】
　なお、えられた分解物を含む溶液は、皮膚への安全性の点からｐＨ４〜８に調整されることが好ましい。
【００２４】
　前記分解物の配合量は、目的とする美白化粧料の種類などによって異なるので一概には決定することができないが、かかる配合量があまりにも少ないばあいには、該分解物を配合したことによる美白効果が充分に発現されなくなる傾向があるので、美白化粧料１００部に対して固形分換算で０．０００５部以上、なかんづく０．００５部以上となるように調整することが好ましく、またあまりにも多いばあいには、該分解物を美白化粧料に安定に配合することが技術的に困難となる傾向があるので、美白化粧料１００部に対して固形分換算で５部以下、なかんづく１部以下となるように調整することが好ましい。
【００２５】
　本発明に用いられる分解物や前記抽出物は、培養色素細胞のチロジナーゼ活性の低下、メラニン生成の抑制効果や紫外線照射によって生じる色素沈着の抑制効果を同時に奏するものであり、かかる抽出物や分解物が配合された本発明の美白化粧料を用いたばあいには、メラニンの蓄積によるシミ、ソバカスなどの発現が抑制され、くすみ感が改善された白く美しい肌が維持される。
【００２６】
　本発明の美白化粧料は、前記したように、穀物や穀物の精製残渣を中性媒体で抽出してえられた抽出物を酵素で処理してえられた分解物が配合されたものであるが（該分解物のかわりに前記抽出物を使用することができるが、これは本発明の美白化粧料には含まれない）、本発明においては、これらのほかにも、たとえば一般に化粧料に用いられている賦形剤、香料などをはじめ、油脂類、界面活性剤、保湿剤、美白剤、ｐＨ調整剤、増粘剤、防腐剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、顔料、洗浄剤、乾燥剤、乳化剤などの各種化粧料成分を美白化粧料に適宜配合することができる。
【００２７】
　前記油脂類としては、一般に化粧料に汎用されている、たとえば流動パラフィン、パラフィン、セタノール、アボカド油、オリーブ油、ホホバ油、ヤシ油などの植物性油脂；牛脂、豚脂、馬脂、タートル油、ミンク油、パーセリン油、スクワランなどの動物性油脂；メチルポリシロキサン、ベヘニルアルコール、トリカプリルカプリン酸グリセリル、トリオクタン酸グリセリル、トリイソパルミチン酸グリセリン、シリコーンオイルなどの合成油脂などがあげられる。
【００２８】
　前記界面活性剤としては、たとえばラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸トリエタノールアミン、ラウリン酸ジエタノールアミドなどの陰イオン性界面活性剤；ステアリルトリメチルアンモニウムクロライド、セチルトリメチルアンモニウムクロライド、塩化ベンザルコニウムなどの陽イオン性界面活性剤；グリセリルモノステアレート、ソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ショ糖エステル、脂肪酸アミドなどの非イオン性界面活性剤などがあげられる。
【００２９】
　前記保湿剤としては、たとえばグリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ピロリドンカルボン酸ソーダ、パントテテイン−Ｓ−スルホン酸塩などの合成保湿剤；ヒアルロン酸、コラーゲン、エラスチン、胎盤抽出液、ローヤルゼリー、微生物発酵液、たとえばキチン、キトサン、ペクチンなどや、その他の植物や動物由来の抽出液などの天然保湿液などがあげられる。
【００３０】
　前記美白剤としては、たとえばコウジ酸、アスコルビン酸、アルブチン、胎盤抽出液やこれらの誘導体などのほかにも、その他の植物や動物由来の抽出液などがあげられる。
【００３１】
　前記ｐＨ調整剤としては、たとえばクエン酸、クエン酸ナトリウムなどの有機酸およびその塩類などがあげられる。
【００３２】
　前記増粘剤としては、たとえばカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール、トラガントガム、アルギン酸ナトリウム、カラギーナンなどがあげられる。
【００３３】
　前記防腐剤としては、たとえばメチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベンなどのパラオキシ安息香酸エステル、フェノキシエタノール、エタノール、デヒドロ酢酸などがあげられる。
【００３４】
　前記酸化防止剤としては、たとえばビタミンＥ、ブチルオキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチルオキシアニゾール（ＢＨＡ）などがあげられる。
【００３５】
　前記顔料としては、たとえばベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化チタン、ナイロンパウダー、セリサイト、マイカ、タルクなどがあげられる。
【００３６】
　前記洗浄剤としては、たとえばラウリル硫酸ナトリウムなどがあげられる。
【００３７】
　前記乳化剤としては、たとえば大豆レシチン油などがあげられる。
【００３８】
　前記賦形剤としては、たとえば硫酸ナトリウムなどがあげられる。
【００３９】
　これら各化粧料成分の配合量は、目的とする美白化粧料の用途などにより異なるので一概には決定することができず、用途に応じて適宜調整されることが好ましい。
【００４０】
　本発明の美白化粧料の形態は任意であり、とくに限定されるものではないが、本発明の美白化粧料は、肌のくすみやシミ、ソバカスの発現を防ぎ、若々しく健康で、くすみ感が改善された白く美しい肌の状態を維持するなどのすぐれた性質を有するので、たとえばクリーム、乳液、ローション、エッセンス、洗顔料、パックなどの基礎化粧品、口紅、ファンデーション、リキッドファンデーション、プレスパウダーなどのメイクアップ化粧品、ボディーソープ、石鹸などのトイレタリー製品などとして用いることができる。
【００４１】
　さらに、前記抽出物や分解物、およびこれらの乾燥粉末を湯に投入したばあいには、経皮吸収によって肌の状態の向上に効果があることから、美白化粧料は、浴用剤などとしても使用することができる。このように美白化粧料を浴用剤として用いるばあいには、前記抽出物や分解物の美白化粧料への配合量は、かかる抽出物や分解物が奏する肌の状態の向上効果を考慮すると、美白化粧料１００部に対して抽出物または分解物の固形分換算で０．０００５〜５．０部、なかんづく０．００１〜０．１部であることが好ましい。なお、前記浴用剤を用いるばあい、該浴用剤の使用量は、通常湯２００リットルに対して浴用剤が５〜５０ｇ程度となるように調整することが好ましい。
【００４２】
　つぎに本発明の美白化粧料を実施例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。
【００４３】
調製例１（米中性抽出物の製造）
　米２００ｇを精製水８００ｍｌに加え、０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨを６．０〜８．０に調整し、室温下で約２４時間浸漬して抽出し、抽出液（固形分含量：約１．５重量％）約４８０ｍｌをえた。
【００４４】
調製例２（米中性抽出物の酵素分解物の製造）
　調製例１でえられた抽出液に、アクチナーゼ（至適ｐＨ８．０）５ｍｇを添加して３０〜４０℃で１〜２時間かけて処理を行ない、つぎにペプシン（至適ｐＨ２．０）５ｍｇを添加して３０〜４０℃で１〜２時間かけて処理を行ない、最後にトリプシン（至適ｐＨ８．０）５ｍｇを添加して３０〜４０℃で１〜２時間かけて処理を行なった。
【００４５】
　なお、各酵素を添加する際には、抽出液が各酵素の至適ｐＨとなるように調整した。
【００４６】
　これをろ過して淡黄色透明の酵素分解物溶液（固形分含量：約２．０重量％）約２５０ｍｌをえた。
【００４７】
調製例３（米糠中性抽出物の製造）
　調製例１において、米のかわりに米糠を用いたほかは調製例１と同様にして抽出液（固形分含量：約１．５重量％）約４８０ｍｌをえた。
【００４８】
調製例４（米糠中性抽出物の酵素分解物の製造）
　調製例２において、調製例１でえられた抽出液のかわりに調製例３でえられた抽出液を用いたほかは調製例２と同様にして淡黄色透明の酵素分解物溶液（固形分含量：約２．０重量％）約２５０ｍｌをえた。
【００４９】
調製例５（米糠中性抽出物の酵素分解物の製造）
　調製例４において、ペプシンのかわりにパパイン（至適ｐＨ７．０）を用いたほかは調製例４と同様にして淡黄色透明の酵素分解物溶液（固形分含量：約２．０重量％）約２５０ｍｌをえた。
【００５０】
調製例６（ふすま中性抽出物の酵素分解物の製造）
　ふすま２００ｇを精製水８００ｍｌに加え、０．１Ｎ塩酸にてｐＨを６．０〜８．０に調整し、室温下で約２４時間浸漬して抽出し、抽出液約４８０ｍｌをえた。
【００５１】
　えられた抽出液にアクチナーゼ、ペプシン、トリプシン各１０ｍｇを順次添加したほかは調製例４と同様にして処理した。
【００５２】
　これをろ過して淡黄色透明の酵素分解物溶液（固形分含量：約２．０重量％）約３００ｍｌをえた。
【００５３】
調製例７（米糠中性抽出物の凍結乾燥処理物の製造）
　調製例３でえられた抽出液１００ｇを濃縮し、ついで真空凍結乾燥して抽出物の乾燥粉末約１．５ｇをえた。
【００５４】
調製例８（米糠中性抽出物の酵素分解物のスプレイドライ処理物の製造）
　調製例４でえられた酵素分解物溶液２５０ｇをスプレイドライ処理して分解物の乾燥粉末約５ｇをえた。
【００５５】
　つぎに、調製例３でえられた抽出液および調製例４でえられた酵素分解物溶液を用い、以下に示す試験を行なった。
【００５６】
試験例１（細胞内チロジナーゼ活性抑制作用）
　培養Ｂ１６マウスメラノーマ細胞を、９６穴マイクロプレート（ＣＯＲＮＩＮＧ社）に８０００個／穴播種し、３容量％仔牛血清含有イーグル最少必須培地（ＭＥＭ）で３７℃、５％ＣＯ2の条件下で２４時間プレ培養したのち、調製例３でえられた抽出液もしくは調製例４でえられた酵素分解物溶液を５容量％または１０容量％添加した３容量％仔牛血清含有イーグルＭＥＭと交換し、さらに３７℃、５％ＣＯ2の条件下で４８時間培養した。
【００５７】
　つぎに培地を除去してＰＢＳ（−）で洗浄後、０．１Ｎリン酸緩衝液および５ｍモルＬ−ドーパを添加して３７℃で１時間インキュベーションを行ない、ドーパクロムの生成量をマイクロプレートリーダー（ＢＩＯ　ＲＡＤ社）を用いて測定した。
【００５８】
　抽出液の添加量または酵素分解物溶液の添加量とドーパクロムの生成量との関係を図１（調製例３でえられた抽出液を用いたばあい）および図３（調製例４でえられた酵素分解物溶液を用いたばあい）のグラフに示す。なお、図１および図３のグラフは、抽出液または酵素分解物溶液をまったく添加しなかったばあいのドーパクロムの生成量を１００％として表わしたものである。
【００５９】
　また、抽出液の添加量または酵素分解物溶液の添加量と、培養Ｂ１６マウスメラノーマ細胞の細胞活性を表わすＭＴＴ還元法によるミトコンドリア内の還元型ニコチンアミドアデニシンジヌクレオチド（以下、ＮＡＤＨという）の量との関係を図２（調製例３でえられた抽出液を用いたばあい）および図４（調製例４でえられた酵素分解物溶液を用いたばあい）のグラフに示す。なお、図２および図４のグラフは、抽出液または酵素分解物溶液をまったく添加しなかったばあいのＭＴＴ還元法によるミトコンドリア内のＮＡＤＨの量を１００％として表わしたものである。
【００６０】
　図１および図２に示されたグラフから明らかなように、調製例３でえられた抽出液は、その添加量が増加するにつれて、培養Ｂ１６マウスメラノーマ細胞の細胞活性をほとんど阻害することなく、ドーパクロムの生成量を低下させ、細胞内チロジナーゼ活性を抑制することがわかる。
【００６１】
　また、図３および図４に示されたグラフから明らかなように、調製例４でえられた酵素分解物溶液は、その添加量が増加するにつれて、培養Ｂ１６マウスメラノーマ細胞の細胞活性を阻害することなく、ドーパクロムの生成量をいちじるしく低下させ、細胞内チロジナーゼ活性を顕著に抑制することがわかる。
【００６２】
試験例２（メラニン生成抑制作用）
　培養Ｂ１６マウスメラノーマ細胞を内径６０ｍｍのシャーレ（ＣＯＲＮＩＮＧ社）に１００００個播種し、５容量％仔牛血清含有イーグルＭＥＭで３７℃、５％ＣＯ2の条件下で２日間プレ培養したのち、調製例４でえられた酵素分解物溶液を５容量％または１０容量％添加した３容量％仔牛血清含有イーグルＭＥＭと交換し、さらに３７℃、５％ＣＯ2の条件下で３日間培養した。
【００６３】
　つぎに培地を除去してＰＢＳ（−）で洗浄後、トリプシンで細胞を剥離し、細胞数を計測すると同時に１０％ジメチルスルホキサイド含有１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で高温加熱処理を行ない、メラニンを溶出させてその溶液を可変分光光度計（（株）日立製作所製、Ｕ−２０００）を用いてメラニンの生成量を測定した。
【００６４】
　酵素分解物溶液の添加量と細胞１０6個あたりのメラニンの生成量との関係を図５のグラフに示す。なお、図５のグラフは、酵素分解物溶液をまったく添加しなかったばあいのメラニンの生成量を１００％として表わしたものである。
【００６５】
　図５に示されたグラフから明らかなように、調製例４でえられた酵素分解物溶液は、その添加量が増加するにつれて、培養Ｂ１６マウスメラノーマ細胞におけるメラニンの生成をいちじるしく抑制することがわかる。
【００６６】
試験例３（皮膚に対する安全性）
　調製例２および４でえられた酵素分解物溶液を用い、ヒトの皮膚に対する安全性をクローズドパッチテストを行なって調べた。
【００６７】
　無作為に抽出した年齢２０〜７０歳の健常な成人男女２０名を被験者とし、調製例２または調製例４でえられた酵素分解物溶液０．２ｍｌを各被験者の上腕部皮膚上にそれぞれ塗布し、その上部からヒトパッチテスト用絆創膏（リバーテープ（株）製）を貼付した。
【００６８】
　また、対照として、前記ヒトパッチテスト用絆創膏を、その円形布地部が酵素分解物溶液を塗布した部位にそれぞれ並行するように貼付した。
【００６９】
　４８時間経過後、各ヒトパッチテスト用絆創膏を取り除き、酵素分解物溶液を塗布した部位および対照部位の皮膚の症状を目視にて観察し、日本パッチテスト研究会によるクローズドパッチテストの評価基準に基づいて評価した。
【００７０】
　その結果、調製例２および４でえられた酵素分解物溶液のヒトの皮膚に対する一時刺激はまったく認められず、これら酵素分解物溶液がいずれも皮膚に対する安全性にすぐれたものであることがわかる。
【００７１】
処方例１〜１２および比較処方例１〜３
処方例１（クリーム）
　　［（Ａ）成分］　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（部）
　　　流動パラフィン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
　　　ヘキサラン
　　　（トリオクタン酸グリセリル、（株）テクノーブル製）　　　　４．０
　　　パラフィン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
　　　セタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
　　　グリセリルモノステアレート　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
　　　ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート　　　６．０
　　　ブチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
　　［（Ｂ）成分］
　　　調製例１でえられた抽出液　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
　　　グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
　　　カルボキシメチルセルロースナトリウム　　　　　　　　　　　０．１
　　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
　　　モイストン・Ｃ（ナチュラルモイスチャライジング
　　　　ファクター、（株）テクノーブル製）　　　　　　　　　　　１．０
　　　精製水　　　　　　　　　　　　　　　　全量が１００．０部となる量
　　［（Ｃ）成分］
　　　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．３
　前記（Ａ）成分および（Ｂ）成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、（Ａ）成分および（Ｂ）成分を混合撹拌した。これを５０℃まで冷却後、前記（Ｃ）成分を加えてさらに撹拌混合して均一なクリームを調製した。
【００７２】
処方例２（クリーム）
　調製例１でえられた抽出液のかわりに調製例２でえられた酵素分解物溶液を用いたほかは処方例１と同様にしてクリームを調製した。
【００７３】
処方例３（クリーム）
　調製例１でえられた抽出液のかわりに調製例３でえられた抽出液を用いたほかは処方例１と同様にしてクリームを調製した。
【００７４】
処方例４（クリーム）
　調製例１でえられた抽出液のかわりに調製例４でえられた酵素分解物溶液を用いたほかは処方例１と同様にしてクリームを調製した。
【００７５】
処方例５（乳液）
　　［（Ａ）成分］　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（部）
　　　流動パラフィン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．００
　　　ヘキサラン
　　　（トリオクタン酸グリセリル、（株）テクノーブル製）　　　　４．００
　　　ホホバ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．００
　　　ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート　　　２．００
　　　大豆レシチン油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．５０
　　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１５
　　　エチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０３
　　［（Ｂ）成分］
　　　調製例１でえられた抽出液　　　　　　　　　　　　　　　　３０．００
　　　グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．００
　　　１，３−ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　２．００
　　　カルボキシメチルセルロースナトリウム　　　　　　　　　　　０．３０
　　　ヒアルロン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０１
　　　精製水　　　　　　　　　　　　　　　　全量が１００．００部となる量
　　［（Ｃ）成分］
　　　香　料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．０５
　前記（Ａ）成分および（Ｂ）成分をそれぞれ８０℃になるまで加温したのち、（Ａ）成分および（Ｂ）成分を混合撹拌した。これを５０℃まで冷却後、前記（Ｃ）成分を加えてさらに撹拌し、均一な乳液を調製した。
【００７６】
処方例６（ローション）
　　［成　分］　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（部）
　　　リン酸Ｌ−アスコルビルマグネシウム　　　　　　　　　２．０
　　　エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
　　　グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０
　　　１，３−ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　　２．０
　　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２
　　　クエン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
　　　クエン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　０．３
　　　カルボキシビニルポリマー　　　　　　　　　　　　　　０．１
　　　水溶性プラセンタエキス　　　　　　　　　　　　　　　１．０
　　　調製例３でえられた抽出液　　　　　　　　　　　　　１０．０
　　　香　料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　微量
　　　精製水　　　　　　　　　　　　　全量が１００．０部となる量
　前記成分を混合して均一なローションを調製した。
【００７７】
処方例７（エッセンス）
　　［成　分］　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（部）
　　　エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
　　　グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
　　　１，３−ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　１．０
　　　オレイルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
　　　ポリオキシエチレンソルビタンモノラウリン酸
　　　　エステル（２０ＥＯ）　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
　　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２
　　　クエン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
　　　クエン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．３
　　　カルボキシビニルポリマー　　　　　　　　　　　　　　　０．３
　　　調製例５でえられた酵素分解物溶液　　　　　　　　　　　１．０
　　　香　料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　微量
　　　水溶性コラーゲン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
　　　精製水　　　　　　　　　　　　　　全量が１００．０部となる量
　前記成分を混合して均一なエッセンスを調製した。
【００７８】
処方例８（パック）
　　［成　分］　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（部）
　　　ポリビニルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　１５．０
　　　ヒドロキシメチルセルロース　　　　　　　　　　　　　　５．０
　　　プロピレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
　　　エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
　　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
　　　調製例６でえられた酵素分解物溶液　　　　　　　　　　１０．０
　　　香　料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　微量
　　　精製水　　　　　　　　　　　　　　全量が１００．０部となる量
　前記成分を混合して均一なパックを調製した。
【００７９】
処方例９（洗顔料）
　　［成　分］　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（部）
　　　ステアリン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１５．０
　　　ラウリン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
　　　ミリスチン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１５．０
　　　グリセリルモノステアレート　　　　　　　　　　　　　　４．０
　　　水酸化カリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　７．０
　　　グリセリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８．０
　　　調製例３でえられた抽出液　　　　　　　　　　　　　　１０．０
　　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２
　　　精製水　　　　　　　　　　　　　　全量が１００．０部となる量
　前記成分を８５℃に加温し混合して均一な洗顔料を調製した。
【００８０】
処方例１０（浴用剤）
　　［成　分］　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（部）
　　　硫酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３５．０
　　　炭酸水素ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５２．０
　　　ホウ砂　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
　　　カルボキシメチルセルロースナトリウム　　　　　　　　　　　１．０
　　　赤色２０１　号　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　微量
　　　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　微量
　　　調製例７でえられた凍結乾燥処理物　　　全量が１００．０部となる量
　前記成分を混合して均一な浴用剤を調製した。
【００８１】
処方例１１（口紅）
　　［（Ａ）成分］　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（部）
　　　ヒマシ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５０．０
　　　オクチルドデカノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
　　　ラノリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
　　　液状ラノリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
　　　ミツロウ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０
　　　オゾケライト　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　７．０
　　　キャンデリラロウ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
　　　カルナバロウ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
　　［（Ｂ）成分］
　　　酸化チタン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
　　　色素（赤色２０１号など）　　　　　　　　　　　　　　　　　合計４．０
　　　調製例８でえられたスプレイドライ処理物　　全量が１００．０部となる量
　　［（Ｃ）成分］
　　　香料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　微量
　前記（Ａ）成分および（Ｂ）成分をそれぞれ加温したのち、（Ａ）成分および（Ｂ）成分を混合撹拌した。これを再加温し、前記（Ｃ）成分を添加して型に流し込み急冷して口紅を調製した。
【００８２】
処方例１２（リキッドファンデーション）
　　［（Ａ）成分］　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（部）
　　　ステアリン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．４
　　　モノステアリン酸プロピレングリコール　　　　　　　　　　　２．０
　　　セトステアリルアルコール　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２
　　　液状ラノリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
　　　流動パラフィン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．０
　　　ミリスチン酸イソプロピル　　　　　　　　　　　　　　　　　８．５
　　　プロピルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　［（Ｂ）成分］
　　　調製例４でえられた酵素分解物溶液　　　全量が１００．０部となる量
　　　カルボキシメチルセルロースナトリウム　　　　　　　　　　　０．２
　　　ベントナイト　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
　　　プロピレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０
　　　トリエタノールアミン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．１
　　　メチルパラベン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　　［（Ｃ）成分］
　　　酸化チタン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　８．０
　　　タルク　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０
　　　着色顔料　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　適量
　前記（Ａ）成分および（Ｂ）成分をそれぞれ加温したのち、（Ａ）成分および（Ｂ）成分を混合撹拌した。これを再加温し前記（Ｃ）成分を添加して型に流しこみ室温になるまで撹拌してリキッドファンデーションを調製した。
【００８３】
比較処方例１（クリーム）
　調製例１でえられた抽出液のかわりに精製水を用いたほかは処方例１と同様にしてクリームを調製した。
【００８４】
比較処方例２（浴用剤）
　調製例７でえられた凍結乾燥処理物のかわりにマンニット（Ｄ−マンニトール）を用いたほかは処方例１０と同様にして浴用剤を調製した。
【００８５】
比較処方例３（リキッドファンデーション）
　調製例４でえられた酵素分解物溶液のかわりに精製水を用いたほかは処方例１２と同様にしてリキッドファンデーションを調製した。
【００８６】
参考例１
　処方例１および比較処方例１でえられたクリームを用い、紫外線照射による色素沈着に対する抑制作用を調べた。
【００８７】
　無作為に抽出した年齢２０〜３５歳の健常な成人男性１０名を被験者とし、その前腕内側部に１ｃｍ×１ｃｍの紫外線照射部を２箇所設定した。ＵＶ−Ｂランプ（（株）東芝製、ＦＬ２０−ＳＥ）を用い、あらかじめ測定しておいた各被験者の最小紅斑量（ＭＥＤ）に相当する量の紫外線を１日１回（朝）、３日間連続して照射した。
【００８８】
　紫外線照射開始日から３０日間連続して、紫外線照射期間（最初の３日間）は紫外線照射直後および夕刻の１日２回、紫外線照射期間経過後（４日目以降）は朝および夕刻の１日２回、各紫外線照射部に処方例１でえられたクリームおよび比較処方例１でえられたクリームを約０．０１ｇずつ塗布した。
【００８９】
　各被験者の紫外線照射部の色素沈着状態を紫外線照射開始日から５日間ごとに目視にて観察し、処方例１でえられたクリームを塗布したばあいの色素沈着抑制効果を以下の評価基準に基づいて評価した。
（評価基準）
　Ａ：処方例１でえられたクリームを塗布した箇所では、色素沈着がほとんど認められな　　　い。
　Ｂ：処方例１でえられたクリームを塗布した箇所では、比較処方例１でえられたクリー　　　ムを塗布した箇所と比べて色素沈着が明らかに少ない。
　Ｃ：処方例１でえられたクリームを塗布した箇所では、比較処方例１でえられたクリー　　　ムを塗布した箇所と比べて色素沈着が少ない。
　Ｄ：処方例１でえられたクリームを塗布した箇所では、比較処方例１でえられたクリー　　　ムを塗布した箇所と比べて色素沈着がやや少ない。
【００９０】
　紫外線照射開始日から５日間ごとの色素沈着状態の評価結果を、被験者１０名を１００％としたときのＡ〜Ｄ各評価を下した人数の割合で表わし、各評価の占有率の変化を図６のグラフに示した。
【００９１】
実施例１
　参考例１において、処方例１でえられたクリームのかわりに処方例２でえられたクリームを用いたほかは参考例１と同様にして各被験者の紫外線照射部の色素沈着状態を評価した。
【００９２】
　紫外線照射開始日から５日間ごとの色素沈着状態の評価結果を、参考例１と同様にして図７のグラフに示した。
【００９３】
　なお、参考例１および実施例１において、処方例１および２でえられたクリームを塗布した際に、皮膚に異常などが生じた被験者は１名もなかった。
【００９４】
　また、処方例１および２でえられたクリームは、３０日間でその状態に変化が生じることはなかった。
【００９５】
　図６および図７に示された結果から明らかなように、処方例１でえられたクリームおよび処方例２でえられたクリームのいずれを用いたばあいであっても、紫外線照射開始日から日数が経過するにつれて、比較処方例１でえられたクリームを用いたばあいとの色素沈着に対する抑制作用の差が大きくなっており、処方例１および２でえられたクリームがすぐれた色素沈着抑制効果を奏するものであることがわかる。
【００９６】
　さらに、図６のグラフと図７のグラフとを比べて、処方例２でえられたクリームを用いたばあいには、色素沈着がほとんど認められないＡ評価の占有率がさらに高いことから、処方例２のクリームに配合された調製例２でえられた酵素分解物溶液がよりすぐれた色素沈着抑制作用を呈するものであることがわかる。
【００９７】
参考例２
　参考例１において、処方例１でえられたクリームのかわりに処方例３でえられたクリームを用いたほかは参考例１と同様にして各被験者の紫外線照射部の色素沈着状態を評価した。
【００９８】
　紫外線照射開始日から５日間ごとの色素沈着状態の評価結果を、参考例１と同様にして図８のグラフに示した。
【００９９】
実施例２
　参考例１において、処方例１でえられたクリームのかわりに処方例４でえられたクリームを用いたほかは参考例１と同様にして各被験者の紫外線照射部の色素沈着状態を評価した。
【０１００】
　紫外線照射開始日から５日間ごとの色素沈着状態の評価結果を、参考例１と同様にして図９のグラフに示した。
【０１０１】
　なお、参考例２および実施例２において、処方例３および４でえられたクリームを塗布した際に、皮膚に異常などが生じた被験者は１名もなかった。
【０１０２】
　また、処方例３および４でえられたクリームは、３０日間でその状態に変化が生じることはなかった。
【０１０３】
　図８および図９に示された結果から明らかなように、処方例３でえられたクリームおよび処方例４でえられたクリームのいずれを用いたばあいであっても、紫外線照射開始日から日数が経過するにつれて、比較処方例１でえられたクリームを用いたばあいとの色素沈着に対する抑制作用の差が大きくなっており、処方例３および４でえられたクリームがすぐれた色素沈着抑制効果を奏するものであることがわかる。
【０１０４】
　さらに、図８のグラフと図９のグラフとを比べて、処方例４でえられたクリームを用いたばあいには、色素沈着がほとんど認められないＡ評価の占有率がきわめて高いことから、処方例４のクリームに配合された調製例４でえられた酵素分解物溶液がきわめてすぐれた色素沈着抑制作用を呈するものであることがわかる。
【０１０５】
参考例３
　処方例１０および比較処方例２でえられた浴用剤を用い、入浴による皮膚の色素沈着に対する抑制作用を調べた。
【０１０６】
　無作為に抽出した年齢３０〜６０歳の健常な成人男女２０名を被験者群とし、湯２００リットルに対して各浴用剤２５ｇを溶解して１日１回、１ヵ月間入浴してもらったのち、各被験者群の腋下部の色素沈着状態を目視にて観察し、以下の評価基準に基づいて評価した。その結果を表１に示す。
（評価基準）
　Ａ：色素沈着がほとんどなくなった。
　Ｂ：色素沈着が明らかに少なくなった。
　Ｃ：浴用剤を使用する前よりも色素沈着が少なくなった。
　Ｄ：浴用剤を使用する前とほとんど変化がない。
　Ｅ：浴用剤を使用する前よりも色素沈着がかえって多くなった。
【０１０７】
【表１】
2004083594.tif 000002
【０１０８】
　表１に示された結果から明らかなように、処方例１０でえられた浴用剤を用いたばあいには、色素沈着がほとんどなくなる〜少なくなることから、比較処方例２でえられた浴用剤がほとんど色素沈着を抑制することができないのに対して、処方例１０でえられた浴用剤がすぐれた色素沈着抑制効果を奏するものであることがわかる。
【０１０９】
　なお、参考例３において、処方例１０でえられた浴用剤を用いて入浴した際に、皮膚に異常などが生じた被験者は１名もなかった。
【０１１０】
　また、処方例１０でえられた浴用剤は、１ヵ月間でその状態に変化が生じることはなかった。
【０１１１】
実施例３
　処方例１２および比較処方例３でえられたリキッドファンデーションを用い、くすみ感の改善効果を調べた。
【０１１２】
　無作為に抽出した年齢２５〜３５歳の健常な成人女性４０名を被験者とし、各被験者の顔面右ほおに処方例１２でえられたリキッドファンデーションを、顔面左ほおに比較処方例３でえられたリキッドファンデーションを、１日１回、１ヵ月間にわたって通常の使用量（約０．１ｇ）ずつ塗布したのち、左右のほおのくすみを目視にて観察して比較し、以下の評価基準に基づいて評価した。
（評価基準）
　Ａ：右ほおのほうがいちじるしくくすみが少なくなった。
　Ｂ：右ほおのほうが明らかにくすみが少なくなった。
　Ｃ：右ほおのほうが少しくすみが少なくなった。
　Ｄ：左右のほおで差が認められない。
　Ｅ：左ほおのほうが明らかにくすみが少なくなった。
【０１１３】
　その結果、Ａ評価が１９名、Ｂ評価が２０名およびＣ評価が１名で、Ｄ評価およびＥ評価を下した被験者は１名もなく、処方例１２でえられたリキッドファンデーションを用いたばあいは、比較処方例３でえられたリキッドファンデーションを用いたばあいと比べてくすみが少なくなることから、処方例１２でえられたリキッドファンデーションがすぐれたくすみ感の改善効果を奏するものであることがわかる。
【０１１４】
　なお、実施例３において、処方例１２でえられたリキッドファンデーションを塗布した際に、皮膚に異常などが生じた被験者は１名もなかった。
【０１１５】
　また、処方例１２でえられたリキッドファンデーションは、１ヵ月間でその状態に変化が生じることはなかった。
【図面の簡単な説明】
【０１１６】
【図１】調製例３でえられた抽出液の添加量とドーパクロムの生成量との関係を示すグラフである。
【図２】調製例３でえられた抽出液の添加量とＭＴＴ還元法によるミトコンドリア内のＮＡＤＨの量との関係を示すグラフである。
【図３】調製例４でえられた酵素分解物溶液の添加量とドーパクロムの生成量との関係を示すグラフである。
【図４】調製例４でえられた酵素分解物溶液の添加量とＭＴＴ還元法によるミトコンドリア内のＮＡＤＨの量との関係を示すグラフである。
【図５】調製例４でえられた酵素分解物溶液の添加量と細胞１０6個あたりのメラニンの生成量との関係を示すグラフである。
【図６】処方例１でえられたクリームを塗布したばあいの色素沈着抑制効果の各評価の占有率の紫外線照射開始日からの経時変化を示すグラフである。
【図７】処方例２でえられたクリームを塗布したばあいの色素沈着抑制効果の各評価の占有率の紫外線照射開始日からの経時変化を示すグラフである。
【図８】処方例３でえられたクリームを塗布したばあいの色素沈着抑制効果の各評価の占有率の紫外線照射開始日からの経時変化を示すグラフである。
【図９】処方例４でえられたクリームを塗布したばあいの色素沈着抑制効果の各評価の占有率の紫外線照射開始日からの経時変化を示すグラフである。
【図１】
2004083594.tif 000003
【図２】
2004083594.tif 000004
【図３】
2004083594.tif 000005
【図４】
2004083594.tif 000006
【図５】
2004083594.tif 000007
【図６】
2004083594.tif 000008
【図７】
2004083594.tif 000009
【図８】
2004083594.tif 000010
【図９】
2004083594.tif 000011