(57)【要約】【解決手段】被験者の血中エストラジオール濃度を測定することを特徴とする当該被験者のグルクロン酸抱合を受ける薬剤代謝能の評価方法【効果】血中エストラジオール濃度を測定することにより、その被験者個有のグルクロン酸抱合を受ける薬剤の代謝能、例えば該薬剤が塩酸イリノテカンである場合、その腫瘍活性本体である７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンの代謝能、すなわちビリルビン−ＵＤＰグルクロン酸転移酵素１による７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンの抱合体の形成が予測でき、化学療法の指標として極めて有用である。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者の血中エストラジオール濃度を測定することを特徴とする当該被験者のグルクロン酸抱合を受ける薬剤の代謝能の評価方法。
【請求項２】
グルクロン酸抱合を受ける薬剤が塩酸イリノテカンである請求項１記載の評価方法。
【請求項３】
塩酸イリノテカン代謝能が、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンのグルクロン酸抱合能である請求項２記載の評価方法。
【請求項４】
被験者の血中エストラジオール濃度を測定することを特徴とする当該被験者のビリルビン−ＵＤＰグルクロン酸転移酵素１活性の評価方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、塩酸イリノテカン等のグルクロン酸抱合を受ける薬剤の代謝能の評価方法及びビリルビン−ＵＤＰグルクロン酸転移酵素１活性の評価方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ、ＣＰＴ）は、中国原産の喜樹（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａａｃｕｍｉｎａｔａ）の葉や樹皮等に含有されるアルカロイドであって、優れた抗腫瘍活性を有する。しかしながら、そのキノリンの窒素原子が弱い塩基性であるため水に難溶性物質であり、その水溶性を高めたカンプトテシンの半合成誘導体である塩酸イリノテカン（７−エチル−１０−［４−（１−ピペリジノ）−１−ピペリジノ］カルボニルオキシカンプトテシンの塩酸塩）（特許文献１参照）が医薬品として開発されている。塩酸イリノテカンは、カンプトテシンの高い抗腫瘍性を維持し、かつ毒性が軽減されていて、抗腫瘍剤として広く使用されている。
【０００３】
塩酸イリノテカンは、生体内でエステラーゼにより代謝され、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（特許文献２参照）となって、抗腫瘍活性が発現し、小細胞肺癌、大腸癌等の固形癌において、有効性が確立され、癌の薬物療法において重要な薬剤となっている。この７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンは、抗腫瘍活性本体であるが生体内に必要以上長時間とどまる時に重篤な下痢、骨髄毒性等の副作用を生じることが知られている（非特許文献１参照）。７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンは、生体内において、ビリルビンのグルクロン酸抱合酵素であるビリルビン−ＵＤＰグルクロン酸転移酵素１によってグルクロン酸抱合を受けて抗腫瘍活性及び副作用のない７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシングルクロン酸抱合体となり胆汁中に排泄され、尿となって体外に排泄される。この７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンの生体内での代謝速度等は、その個体によって大きく相違することから、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンによる副作用の発現の予測は極めて困難である。
このように癌等の化学療法をより効果あるものとするためにも、塩酸イリノテカンに代表されるグルクロン酸抱合を受ける薬剤の副作用の予測方法の開発が望まれている。
【０００４】
一方、エストラジオールは、女性ホルモンの一種であって生体内に存在するが、薬剤の代謝能やビリルビン−ＵＤＰグルクロン酸転移酵素１活性との関連については、何も知られていない。
【０００５】
【特許文献１】
特公平３−４０７７公報
【特許文献２】
特公昭６２−４７１９３号公報
【非特許文献１】
Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  （米国）２４巻、ｐ．１１１−１１６
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、塩酸イリノテカンの生体内での活性本体である７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン等のグルクロン酸抱合を受ける薬剤の代謝能を予測する方法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、塩酸イリノテカンを投与された癌患者における塩酸イリノテカンの代謝能と血中成分との関係について種々検討したところ、全く意外にもエストラジオールの血中濃度と塩酸イリノテカンの代謝能、すなわちビリルビン−ＵＤＰグルクロン酸転移酵素１による７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンのグルクロン酸抱合能との間に極めて高い相関があること、更にはビリルビン−ＵＤＰグルクロン酸転移酵素１との間に高い相関性があることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
本発明は、被験者の血中エストラジオール濃度を測定することを特徴とする当該被験者のグルクロン酸抱合を受ける薬剤の代謝能の評価方法を提供するものである。
また、本発明は、被験者の血中エストラジオール濃度を測定することを特徴とする当該被験者のビリルビン−ＵＤＰグルクロン酸転移酵素１活性の評価方法を提供するものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明の評価方法で使用される薬剤は、それ自体又はそれが生体内で分解され生成した活性体が、ビリルビンのグルクロン酸抱合酵素であるビリルビン−ＵＤＰグルクロン酸転移酵素１によってグルクロン酸抱合を受ける薬剤であって、例えば塩酸イリノテカン（以下、ＣＰＴ−１１と記載することがある）、エチニロエストラジオール（ｅｔｈｉｎｙｌｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、ノボビオシン（ｎｏｖｏｂｉｏｃｉｎ）等の薬剤が挙げられる。このうち、有効性と副作用の予測が特に望まれる癌化学療法剤、特にＣＰＴ−１１が好ましい。
【００１０】
以下、薬剤としてＣＰＴ−１１を用いて本発明を説明する。
ＣＰＴ−１１は、特許文献１に記載の方法で製造される。ＣＰＴ−１１は、生体内でエステラーゼによって分解され７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（以下、ＳＮ−３８と記載することがある）となり、抗腫瘍活性を示す。ＳＮ−３８は、ビリルビン−ＵＤＰグルクロン酸転移酵素１（以下、ＵＧＴ１Ａ１と記載することがある）によってグルクロン酸抱合を受けて副作用のない７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシングルクロン酸抱合体（以下、ＳＮ−３８Ｇと記載することがある）となり尿中に排泄される。
当該、塩酸イリノテカンの代謝過程において、エステラーゼによる分解能は、患者間で大きな差のないことが知られている。従って投与された塩酸イリノテカンの抗腫瘍活性効果及び副作用の発現についての患者間のバラツキは、当該患者における前記ＳＮ−３８のグルクロン酸抱合能のバラツキに依存する。そして、前記本発明の知見によればＳＮ−３８のグルクロン酸抱合能と血中エストラジオール濃度の間には高い相関性があるから、塩酸イリノテカン投与前の癌患者における血中エストラジオール濃度を測定しておけば、ＳＮ−３８のグルクロン酸抱合能、すなわち、塩酸イリノテカンの代謝能が評価でき、当該患者における抗腫瘍効果及び副作用の発現の予測が可能になる。このように薬剤のグルクロン酸抱合能と血中エストラジオール濃度に高い相関性があるから、グルクロン酸抱合を受ける薬剤の代謝能が評価できる。
【００１１】
また、ＳＮ−３８のグルクロン酸抱合能は、患者のＵＧＴ１Ａ１活性に依存するから、血中エストラジオール濃度を測定すれば、当該患者のＵＧＴ１Ａ１活性の評価が可能である。薬剤投与前に、患者のＵＧＴ１Ａ１活性の評価ができれば、その薬剤のグルクロン酸抱合を経由した代謝能が予測可能である。
【００１２】
本発明の評価方法の被験者は、塩酸イリノテカン又はグルクロン酸抱合による代謝を受けることが判明している薬剤を投与する前のヒトであり、好ましくは癌患者である。
【００１３】
本発明における血中エストラジオール濃度の測定は、自体公知の方法、例えば、ＲＩＡ固相法、ＲＩＡ硫安塩析法、ＥＩＡ法等により行うことができる。
【００１４】
血中エストラジオール濃度の高い被験者は、ＳＮ−３８のグルクロン酸抱合能が高く、ＳＮ−３８の代謝速度が高いと判定できる。したがって、この被験者に塩酸イリノテカンを投与した場合、ＳＮ−３８からＳＮ−３８Ｇへの代謝が速いことから、ＳＮ−３８による抗腫瘍活性及び副作用の発現も弱いと予測できるので、これに対応した塩酸イリノテカンの投与スケジュールを決定することができる。一方、血中エストラジオール濃度の低い被験者は、ＳＮ−３８のグルクロン酸抱合能が低く、ＳＮ−３８の代謝速度が低いと判定できる。従って、この被験者は塩酸イリノテカンを投与した場合、ＳＮ−３８からＳＮ−３８Ｇへの代謝が遅いことから、ＳＮ−３８による抗腫瘍活性及び副作用も強いと予測できるので、これに対応した塩酸イリノテカンの投与スケジュールを決定することができる。
【００１５】
また、血中エストラジオール濃度の高い被験者は、ＵＧＴ１Ａ１活性が高く、投与された薬剤のグルクロン酸抱合による代謝が速いと判定できる。従って、この被験者に当該薬剤を投与した場合の代謝速度が評価でき、薬剤の効果の持続性や副作用が予測できる。
【００１６】
なお、血中エストラジオール濃度とＳＮ−３８のグルクロン酸抱合能との関係は、多くの患者による血中エストラジオール濃度とＳＮ−３８Ｇ／ＳＮ−３８血中濃度比との関係を予め測定しておくことにより容易に評価できる。
ＳＮ−３８Ｇ／ＳＮ−３８血中濃度比は、被験者に塩酸イリノテカンを静注し、所定時間毎に血液を採取し、該血液から血清を分取し、血清中のＳＮ−３８Ｇ及びＳＮ−３８をＨＰＬＣで測定する。血清中のＳＮ−３８Ｇ量とＳＮ−３８量からＡＵＣを求め、この比を算出する。
【００１７】
なお、エストラジオールは女性ホルモンであることから、被験者が比較的高齢である場合には、本発明の評価は、男性被験者に適用するのが好ましい。
【００１８】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００１９】
実施例１
肺癌患者の血中及び尿中のエストラジオール濃度をＲＩＡ固相法を用いて測定し、その後、ＣＰＴ−１１  １５０ｍｇ／ｍ２とゲムシタビン１０００ｍｇ／ｍ２投与群、（以下、ＣＰＴ−１１／ゲムシタビン投与群と記載する）また、ＣＰＴ−１１  １００ｍｇ／ｍ２単剤投与群（以下、ＣＰＴ−１１単剤投与群と記載する）の二群に分けて検討を行った。ＣＰＴ−１１は５重量％ブドウ糖液に希釈して、末梢静脈より９０分かけて点滴静注を行った。ＣＰＴ−１１／ゲムシタビン投与群ではＣＰＴ−１１投与後、１００ｍＬの生理食塩水に溶解したゲムシタビンを３０分かけて点滴静注を行った。点滴終了後、０、０．５、１、２、４、６、１０及び２４時間後に採血し、血中のＣＰＴ−１１、ＳＮ−３８及びＳＮ−３８Ｇを測定した。
【００２０】
ＲＩＡ固相法
測定用ポリプロピレンチューブ壁に固定されたエストラジオール抗体に、ヨウ化エストラジオール（ＣＯＡＴ−Ａ−ＣＯＵＮＴ  Ｅ２：規格５００ｔｅｓｔ、日本ＤＰＣ社製）１ｍＬ及び被検サンプル１００μＬを入れ、室温で３時間攪拌して競合反応させた後、チューブ内の溶液を除去（Ｂ／Ｆ分離機：型式ＢＦＷ−５０、ＰＳＳ社製）し、γ−カウンター（型式ＡＲＣ−９５０、アロカ社製）にてチューブに結合した放射能を計測し、標準曲線上より検体エストラジオール濃度を求めた。
【００２１】
肺癌患者から採取した血液の血清を常法により分離し血清及び尿中のエストラジオールを測定した結果、血清中のエストラジオール量は、男性肺癌患者（２２例）は１０〜４６．６ｐｇ／ｍＬと約５倍の個体差が認められた。また、尿中では１．０〜７．６ｐｇ／ｍＬと約７倍の個体差を認めた。
【００２２】
血中のＣＰＴ−１１、ＳＮ−３８及びＳＮ−３８Ｇの測定は次法によって行った。
被検サンプル５０μＬに２００μＬの０．１４６ｍｏｌ／Ｌ  リン酸を加え、さらにｉｎｔｅｒｎａｌ  ｓｔａｎｄａｒｄ（ＣＰＴ−１１  １μＬ／ｍＬ）２５０μＬを加えサンプルの調整を行った。固相抽出はｃａｒｔｒｉｄｇｅ−Ｃ１８とａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（ＰＲＯＳＰＥＫＴ社製）を用いた。ＨＰＬＣシステムはｗａｔｅｒｄ６１６ポンプ及び４７０ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｄｅｔｅｃｔｏｒ（ｗａｔｅｒＴＳＫ社製）とＨＰＬＣカラムはｗａｔｅｒｓ  ｓｙｍｍｅｒｔｒｙ  ｃｏｌｕｍｎ  Ｃ１８（Ｓｐａｒｋ社製）を用いた。ＳＮ−３８Ｇ測定はｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ３８０ｎｍ，ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ５４０ｇａｉｎ  ｘ１００で０分から２．７分、ＳＮ−３８の測定はｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ３８０ｎｍ，ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ４２８ｎｍ，ｇａｉｎ  ｘ１００で２．７分から３．８分、ＣＰＴ−１１の測定はｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ３７３ｎｍ，ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ４２８ｎｍ，ｇａｉｎ  ｘ１００で３．８分から８．５分で分析した。
【００２３】
点滴終了後、０、０．５、１、２、４、６、１０及び２４時間後の血中のＣＰＴ−１１、ＳＮ−３８及びＳＮ−３８Ｇの濃度より  時間、濃度曲線を作成し、それをもとに、ＡＵＣ（Ａｒｅａ  ｕｎｄｅｒ  ｔｈｅ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ−ｔｉｍｅ  ｃｕｒｖｅ）  を線形台形法により計算した。
【００２４】
ＣＰＴ−１１単剤投与群（肺癌男性患者５例）の、ＡＵＣは、ＣＰＴ−１１は４６３８ｎｇ／ｍＬ・ｈ（３５０１〜６１３８（中央値、範囲；以下同様）ｎｇ／ｍＬ・ｈ）、ＳＮ−３８は１９３ｎｇ／ｍＬ・ｈ（７３〜３６６ｎｇ／ｍＬ・ｈ）、ＳＮ−３８Ｇは１１９０ｎｇ／ｍＬ・ｈ（７９１〜２０３３ｎｇ／ｍＬ・ｈ）であった。また、ＡＵＣのＳＮ−３８Ｇ／ＳＮ−３８比は、平均１０．２（範囲３．０２〜１９．０３）であった。
【００２５】
このＳＮ−３８Ｇ／ＳＮ−３８比と血中のエストラジール量の関係を図１に示す。
血中のエストラジオール含有量が多い被験者は、ＡＵＣのＳＮ−３８Ｇ／ＳＮ−３８比が高く、ＳＮ−３８がＵＧＴ１Ａ１によって抱合され易く、ＳＮ−３８のグルクロン酸抱合能が高いことがわかる。
【００２６】
ＣＰＴ−１１／ゲムシタビン投与群（肺癌男性患者１６例）、ＣＰＴ−１１は１０９４３ｎｇ／ｍＬ・ｈ（８０９１〜２０８９２ｎｇ／ｍＬ・ｈ）、ＳＮ−３８は２２４ｎｇ／ｍＬ・ｈ（２８〜５１７ｎｇ／ｍＬ・ｈ）、ＳＮ−３８Ｇは１５３０ｎｇ／ｍＬ・ｈ（８７６〜４３４０ｎｇ／ｍＬ・ｈ）であった。また、ＡＵＣのＳＮ−３８Ｇ／ＳＮ−３８比は、平均８．３（範囲２．７〜３．１）であった。
【００２７】
このＳＮ−３８Ｇ／ＳＮ−３８比と血清中のエストラジール量の関係を図２に示す。
ＣＰＴ−１１単剤投与群と同様に、血中のエストラジオール含有量が多い被験者は、ＡＵＣのＳＮ−３８Ｇ／ＳＮ−３８比が高く、ＳＮ−３８がＵＧＴ１Ａ１によって抱合され易く、ＳＮ−３８のグルクロン酸抱合能が高いことが確認された。
【００２８】
【発明の効果】
血中エストラジオール濃度を測定することにより、その被験者個有のグルクロン酸抱合を受ける薬剤の代謝能、例えば該薬剤が塩酸イリノテカンである場合、その腫瘍活性本体である７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンの代謝能、すなわちビリルビン−ＵＤＰグルクロン酸転移酵素１による７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシンの抱合体の形成が予測でき、化学療法の指標として極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＣＰＴ−１１単剤投与群のＡＵＣのＳＮ−３８Ｇ／ＳＮ−３８比と血中のエストラジオール含量の関連を示す図である。
【図２】ＣＰＴ−１１／ゲムシタビン投与群のＡＵＣのＳＮ−３８Ｇ／ＳＮ−３８比と血中のエストラジオール含量の関連を示す図である。
【図１】
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【図２】
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