(57)【要約】【解決すべき課題】本発明の目的は、天然物で人体に安全であることが分かっており、且つ保湿性などの有効性も充分ある皮膚外用剤を提供することである。【解決手段】コンキオリン加水分解物、コンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理した物、貝類の粘液を加水分解して得られる物質、貝類肉より得られる酸性多糖類、アコヤ貝肉由来グリコーゲンの少なくとも１種と貝類由来コラーゲン、海洋深層水の少なくとも１種を含む皮膚外用剤が本課題を解決した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
コンキオリン加水分解物、コンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理した物、貝類の粘液を加水分解して得られる物質、貝類肉より得られる酸性多糖類、アコヤ貝肉由来グリコーゲンの少なくとも１種と貝類由来コラーゲン、海洋深層水の少なくとも１種を含む皮膚外用剤
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、保湿性が高い皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】貝類肉より得られるコラーゲンは１型（α１）３ホモ分子構造をもち、ＢＳＥ等の感染症の恐れもなく、保湿性に優れている。これに関しては本発明者らが特願２００２−２０４９７２号として出願した。
【０００３】
海洋深層水は最近注目されているものの１つで飲料や食品などに広く利用され、また特開平１０−１８２３４６号、特開平１０−１８２３４７号、特開平１０−１８２４１２号、特開２０００−１５９６５４号等の各公報に化粧品等への応用が示されている。
【０００４】
コンキオリン加水分解物は、特開昭６２−２２１６１２号公報、特開昭６２−２２３１０４号公報において、アコヤ貝、イガイ、ムラサキイガイ、イケチョウガイ等の貝殻や真珠から製造したコンキオリンを塩酸、硫酸などの鉱酸で加水分解して得られるもので、皮膚疲労の早期回復、色素漂白、皮膚の老化防止、小皺防止、つや出し等を目的として化粧品に使用されている。
【０００５】
これはコンキオリンまたはその加水分解物（合わせてコンキオリンと称する）が保湿性に優れているためである。また、特開平４−３６２１４号公報において、コンキオリンが酸化防止剤として有効なことが示されている。
【０００６】
また、このコンキオリン加水分解物を無水コハク酸で処理した物は、加水分解の程度が少なくても、即ち分子量が大きくても水溶性が増し、保湿性もコンキオリン加水分解物より、さらに向上していることは特願平５−３１２２２２号に於いて、本発明者らが開示している。
【０００７】
またアコヤ貝の粘液は、特公平５−１５６８２号公報で、化粧品原料として好適であること、また特開平６−２７９２５５号公報、特願平５−２４９１５３号、特願平５−３３６８７８号においてヒアルロニダーゼ活性阻害剤、抗酸化剤、乳化助剤としての有効性もあることを本出願人が報告している。
【０００８】
貝類肉より得られる酸性多糖類は特公平６−６２３８３号公報で化粧品への利用が有効であること、又特開平６−２１９９５４号公報ではヒアルロニダーゼ活性阻害剤としての有効性も開示している。
【０００９】
アコヤ貝肉由来グリコーゲンは特開２００１−９７８４５号公報にあるように他
のグリコーゲンに比較して、皮膚の細胞を賦活し、肌を生き生きさせ、紫外線による皮膚への悪影響を緩和する生理活性に優れたものであり、皮膚外用剤の原料として優れている。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、天然物で人体に安全であることが分かっており、且つ保湿性などの有効性も充分ある皮膚外用剤を提供することである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、コンキオリン加水分解物、コンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理した物、貝類の粘液を加水分解して得られる物質、貝類肉より得られる酸性多糖類、アコヤ貝由来グリコーゲンの少なくとも１種と貝類由来コラーゲンと海洋深層水の少なくとも１種を組み合わせることによって、その効果において相乗作用があり、単独での保湿性より強い保湿性があることを見い出し本発明に到達した。
【００１２】
コラーゲンは牛皮、豚皮、魚皮など動物の皮膚を形成する主要タンパク質である。コラーゲンは、真皮の７０％を占める重要な結合組織の蛋白質で肌のハリや皺の生成に関与しており、また高い保湿性を有し肌のみずみずしさなどにも影響を与えている。そして、皮膚外用剤にはすでに広く利用されている。コラーゲンの起源物質は牛皮、豚皮、魚皮等様々選択できるが、近年の感染症の問題から魚皮など海産物起源のコラーゲンが注目されているが、そのなかでも特願２００２−２０４９７２号で出願されている貝肉由来のコラーゲンが最適である。
貝肉由来のコラーゲンは１型（α１）３ホモ分子構造をもち、皮膚外用剤として有効な性質を有するためである。
その製造方法はアコヤ貝は真珠養殖が終わって、真珠を取り出すときに、ホタテ貝は貝柱を除いたあとの貝肉を集める。これに水を加えて攪拌し不溶物を集める。方法は、公知の方法で行えばよい。すなわち例えば、、水を加えたあと、攪拌したのち、遠心分離機で分離する方法や静置して上澄みを捨てる方法など選択すればよい。この不溶物よりさらに不純物を除くために、塩化ナトリウム、塩化カリウム、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム等の塩溶液や、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、アンモニア水等の塩基性溶液或いは、エチレンジアミン四酢酸塩等のキレート剤を加えて攪拌して不溶物を集める。これにさらにエタノール等の水溶性有機溶媒で不純物を除いたのち、酢酸、クエン酸、乳酸、塩酸、リン酸などを用いて酸抽出することによりコラーゲンが得られる。濃度は酸の種類や各種の条件によって異なるが０．０１〜２モルの濃度で行う。この液を加えて２〜４８時間攪拌すると抽出される。なお、温度は３０℃以下、好ましくは２〜１０℃である。このほか、酵素を用いたのち、酸で抽出する方法等公知の方法で抽出すればよい。また、用途によってはさらに精製した方がよい場合があり、親水性有機溶媒や塩析法などを用いて精製する。また、得られた貝肉由来コラーゲンをアテロ化、アシル化（特に有効なものはサクシニル化である）、加水分解の処理を１種以上組合せることも有効である。
【００１３】
海洋深層水は水深２００メートル以深より採取される海水であり、特に深海より上昇流のあるところで採取した海水がよく、これをそのまま、或いは濃縮、或いは塩化ナトリウムを選択的に減少させたものなどが利用できる。どの海洋深層水を用いるかは、製剤の種類や用途によって選択する。
【００１４】
以上の貝肉由来のコラーゲンまたは／および海洋深層水と以下の原料を組み合わせる。コンキオリンは貝殻や真珠類に含まれる硬蛋白質の一種でありアコヤ貝、イガイ、カラスガイ等に比較的多く含まれている。製造法としては前記特許１５８７７３０号、特許１５６０６１０号、特許１５８７７３４号等に記載されている。
【００１５】
すなわち、前記貝殻等を粉砕して希塩酸等でカルシウム分を除去し、遠心分離、濾過デカンテーション等の固液分離手法によって不溶物を集め、これを精製水を加えてよく撹拌し、遠心分離、濾過等によって不溶物を集める。必要によりこれを繰り返す。
【００１６】
更にこのコンキオリンに２〜１０％の塩酸水溶液を加えて、５０〜１１０℃で５時間〜５日間加水分解して、コンキオリンの加水分解物としてもよい。これを単にコンキオリンということもある。
【００１７】
希塩酸の代わりに希硫酸を用いて加水分解し、水酸化バリウムを用いて中和し、更に水酸化アルカリ液を用いてｐＨ５〜６になるように中和した後、沈澱物を遠心分離、濾過等により取り除いた加水分解液を公知の濃縮方法または乾燥方法を用いて濃縮液または乾燥粉末とする。加水分解に当たっては、コンキオリンがアミノ酸にまで完全に分解してしまわないように酸濃度、温度、時間を制御すべきことは勿論である。
【００１８】
コンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理した物とはコンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理して得た物質であり、その製造方法は特開平７−１６５５２６号公報などに記述されている。この作成方法はコンキオリンの加水分解物の水溶液中で攪拌しつつ、ｐＨ６〜９に保ちつつ無水コハク酸を添加する。添加量はコンキオリンの加水分解の割合やすべてをサクシニル化する必要はないので目的等によって無水コハク酸の量は調整する
【００１９】
貝類肉より得られる酸性多糖類とは以下のような方法によって得られる。
（１）貝類肉を蛋白分解酵素により分解した後、除蛋白を行い、低分子物質を除去した後、第４級アンモニウム塩を加えて沈澱分離させる。
【００２０】
（２）貝類肉を蛋白分解酵素により分解した後、除蛋白を行い、更に透析を行った後、第４級アンモニウム塩を加えて酸性多糖類を沈澱分離させ、この沈澱に無機塩水溶液を加えて溶解させた後、アルコール水溶液を加えて再沈澱させる精製を少くとも１回行って得る。
【００２１】
貝類肉の酸性多糖の利用方法としては、貝類肉なら特に種類を問わないが真珠養殖に用いるアコヤ貝は真珠養殖後、貝柱以外は食用とはならず海洋汚染などの問題があり、本発明者らはアコヤ貝を利用するのがよいと考える。
【００２２】
さらに詳しく製造方法を述べると、第１段階として貝殻を除いた貝肉を蛋白分解酵素により分解する。この処理を容易にするために加熱し、変性した後、ミキサー等を用いて粉砕する方がよい。アコヤ貝を用いるときは貝肉に付随する粘液も原料となり、粘液のみを対象としてもよい。このときは貝肉を用いるときのように真珠の取り出しなどに関係なく利用でき、原料の採取が容易で、且つ粉砕工程も必要がない。蛋白分解酵素は特に限定されないが、基質特異性がなく、強力な分解力があるものの方がよい。たとえばパパイン、アクチナーゼ、サモアーゼ、デナチーム等の１種または２種以上の混合物を使用して分解する。
【００２３】
第２段階として、未分解の蛋白質、核酸や酵素を除くために除蛋白を行う。除蛋白の方法もとくに限定されないが、一般的にはトリクロロ酢酸、過塩素酸を１０％濃度になるように用いるか、ｓｅｖａｇ法を用いる。第３段階としては、除蛋白剤、アミノ酸、ペプチド、塩類等の低分子物質を除去する。除去手段としては透析法、ゲル濾過、限外濾過、または酸性多糖類が沈澱するような有機溶媒を添加する方法があるが、透析法が好ましい。
【００２４】
第４段階としては、酸性多糖類と共に存在する中性多糖類や糖蛋白を分離する。除去手段としては第４級アンモニウム塩の水溶液を加える。酸性多糖類は第４級アンモニウム塩と結合して沈澱するので、デカンテーション又は遠心分離法等により分離する。第４級アンモニウム塩としてはアルキル基の一つが炭素原子数１２以上のものであればよい。またピリジニウム系でも、窒素に結合するアルキル基が炭素原子数１２以上のものであればよい。例えばラウリルトリメチルアンモニウム塩、ステアリルトリメチルアンモニウム塩、塩化セチルピリジニウム等を例示することができる。
【００２５】
第４段階までで、酸性多糖類を得ることができるが、この沈澱には第４級アンモニウム塩その他の塩類を含むので、更に精製することが好ましい。精製に当っては、この沈澱物に無機塩水溶液を加えて溶解させ複合体を解離させて溶解し、次にアルコールを加え酸性多糖類を再沈澱させ、第４級アンモニウム塩を液中に分離除去する。この沈澱を精製水に溶解し、アルコール濃度が８０％になるように加えて撹拌し、放置後遠心分離して沈澱を得る。この工程を２〜３回繰り返すことが好ましい。
【００２６】
無機塩としては、酸性多糖類の第４級アンモニウム塩の複合体を解離させ、溶解するものであれば用いることができる。例えば塩化ナトリウム、塩化カリウム等を例示できる。ここで用いた塩の形が最終の製品の塩の形を決定する。例えば塩化ナトリウムを用いれば、最終の製品はナトリウム塩となる。
【００２７】
無機塩の濃度は複合体を解離させるにたる濃度で塩化ナトリウムは１．５Ｍ以上必要である。上限は特にないが、あまり高濃度では脱塩操作に時間がかかり、試薬の無駄であり、４Ｍ程度が限度である。さらに残存する蛋白、色素を除きたい場合には、沈澱を水に溶解させた水溶液にロイド試薬やカオリンを加えて、色素、蛋白を吸着除去する。遠心分離、濾過によって吸着剤を除去した後、酸性多糖類を凍結乾燥する。
【００２８】
アコヤ貝肉由来のグリコーゲンは、アコヤ貝の貝肉等を抽出することにより得ら
れる。例示すれば、熱水法と言われる方法で、アコヤ貝の貝肉を細断した後、必要により水を加えて加熱する。その後遠心分離する。数回の加熱および遠心分離を繰り返した方がより多量のグリコーゲンが抽出できるので、コストなどを勘案し必要な回数繰り返す。不溶物があれば必要により、濾過などで取り除き、後の工程の効率を考えて濾液を濃縮後、終濃度　５重量％前後になるようにトリクロロ酢酸を加え、低温（０〜１０℃）で静置する。これによって生じた沈殿を遠心分離や濾過などの方法で取り除く。ただし、この工程は主としてタンパク質を除く工程であるため、場合によっては省略することも可能である。上澄みに　３倍量程度のエタノールを加えて撹拌する。これによって生じた沈殿を遠心分離や濾過などの方法で集めたものがグリコーゲンである。必要により水を加え、ついで加えた水の４倍量程度のエタノールを加え（このとき塩化カルシウム飽和水溶液を少量加えて沈殿を促進することもできる）、これによって生じた沈殿を遠心分離や濾過などの方法で再度沈殿して集める。これを必要回数繰り返すことによって精製できる。また、さらに精製したいときは透析等の方法で低分子物を除くことも有効である。
【００２９】
また、他の方法として、アコヤ貝の貝肉にジメチルスルホキシドを加え、細断した後、遠心分離して上澄みを吸引濾過する。残査に対して同様の操作を必要により繰り返し、上澄みを合一する。この上澄みを０．１７重量％程度の塩化ナトリウムを含むメタノール中に注ぎ込む。デカンテーションや遠心分離等により沈殿を集める。この操作を必要により繰り返す。この沈殿に水を加えて溶解し、３倍量程度のエタノールで沈殿させる。この操作を　３回程度繰り返し沈殿を洗浄する。この間にあるいはこの工程の終了後、タンパク質を除く工程やさらに精製するために、透析等を必要により実施する。
【００３０】
貝類の粘液の加水分解して得られる物質は本出願人が特開昭６３−５７５０７号公報により、貝類の粘液を加水分解することを特徴とする化粧品原料の製造方法に関して提案した。粘液の回収は、貝類の貝殻を脱殻し（真珠を含有しているものは真珠を取り出した後に脱殻し）、加圧して、又は加圧することなくデカンテーション、濾過、遠心分離等によって行う。
【００３１】
粘液源である貝類としては、アコヤ貝（Ｐｉｃｔａｄａ　ｍａｒｔｅｎｓｉｉ）、イガイ（Ｍｙｔｉｌｕｓ　ｃｏｒｕｓｃｕｍ）、イケチョウガイ（Ｈｙｒｉｏｐｓｉｓ　ｓｃｈｌｅｇｅｌｉｉ）、カラスガイ（Ｃｒｉｓｔａｒｉａ　ｐｌｉｃａｔａ）等ウグイスガイ科、イガイ科、イシガイ科等が好適であるが、他の貝類も自由に使用でき、原料供給の点では問題はない。特に好適なものは、アコヤ貝（真珠貝）である。
【００３２】
このようにして採取した粘液は、そのまま加水分解または透析等の脱塩の操作を行ってもよいが、海水を多く含むときなど処理量が多くなるので、加熱、あるいは水溶性有機溶媒たとえばエタノール、メタノール、イソプロパノール、アセトン、または無機塩類例えば硫酸アンモニウム、塩化ナトリウムを加えて沈殿させて遠心分離、濾過等で沈殿を集めて処理量をすくなくする。
【００３３】
ただし、加熱処理では一部しか沈殿してこない場合があるので、加圧して約１２０〜１５０℃まで加熱すると大部分が沈殿する故、最適な処理を用途に応じて選択する。沈殿処理を行うと、上記したように以後の処理が容易となるほか、化粧品原料としての効果が更に高まり、また保存性も高まる。これらの目的を達成するため、沈殿処理を行うほか、常法により凍結乾燥したり減圧低温濃縮処理を行ってもよい。これらの処理は、単独でもまた併用することも可能である。
【００３４】
貝粘液は、沈殿処理を経て又は経ることなく、酸、アルカリ、又は酵素によって加水分解処理して、粘液成分を低分子化する。加水分解は、酸たとえば塩酸、硫酸、酢酸、乳酸などを濃度、温度を必要な条件にして用いることができる。アルカリとしては、ＮａＯＨ、ＮＨ４ＯＨ等が利用できる。
【００３５】
そして酵素を用いて加水分解する場合には、蛋白分解酵素例えばトリプシン、パパイン、プロナーゼ、等動植物起源、微生物起源の酵素が適宜利用できる。酵素を利用すれば、酵素の特異性を利用して必要な分子量、目的のペプチドが得られ、トリプトファン等の分解も無く、分解による副生物も少ないので加水分解は酵素で行うのがよい。このようにして、貝粘液を酸、アルカリ、酵素を用いて、必要な分子量まで分解して脱塩する。或いは脱塩したのち分解する。
【００３６】
脱塩は必ずしも必要としないが化粧品、特にエマルジョンでは乳化の破壊が起こる場合もあるので用途に応じて脱塩するのがよい。脱塩は、例えば次のようにして行う：水又は約４０〜８０％のエタノール水溶液を用いてくり返し洗浄する方法；透析、ゲル濾過、限外濾過、塩析による方法；陽イオン交換樹脂、スネークゲイジイオン交換樹脂を用いる方法；キレート交換樹脂をＣｕ＋＋型にして用いる方法；クロマトグラフィーによる方法等、これらの脱塩処理は、単独でも又組合わせて用いてもよい。
【００３７】
脱塩の方法では水を用いてあるいは４０〜８０％のエタノールを用いるときは、試料を沈殿させたのちでなければ用いることができないのは当然である。また脱塩の方法が水を用いた場合試料の一部が流失するときがあるので、沈殿処理の方法が加熱して沈殿させた方法を用いたときに利用するとよい。
【００３８】
４０〜８０％のエタノールを用いると製品の着色が少なく、よい結果が得られる。脱塩の方法でキレート交換樹脂をＣｕ＋＋型にして用いる方法は、塩分が多いときは他のイオン交換樹脂に比べて樹脂量が少なくてすむという利点がある。
【００３９】
脱塩処理は、前記のように加水分解処理後に行ってもよく、加水分解処理の前に行ってもよい。必要があれば加水分解の前及び後に行うことも差支えない。ただし、加水分解後に行う場合は、加水分解によって試料が低分子化しているので、有効成分の流亡を避けるため、イオン交換樹脂、クロマトグラフィ等の処理を実施するのが好適である。
【００４０】
この特開昭６３−５７５０７号公報では、貝類の粘液を加水分解する化粧品原料の製造方法については記載されているが、その原料の効果については整肌効果がある旨の記載だけである。
【００４１】
以上のようなコンキオリン加水分解物、コンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理した物、貝類の粘液を加水分解して得られる物質、貝類肉より得られる酸性多糖類、貝類由来コラーゲン、アコヤ貝肉由来グリコーゲンの少なくとも１種と海洋深層水を常法に従い、他の必要な原料を配合して皮膚外用剤を得る。剤型にも特に限定はないので、例えば、ローション類、乳液類、クリーム類、軟膏類、パック類、入浴剤の形態にすることができる。
【００４２】
以下に実施例を記載するが、本発明はこれらの製造例及び実施例によって何ら限定されるものではない。
【００４３】
実施例１　　ローション　　　　　　　　　　　　　　　　　　　重量部
オリーブ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．５
ポリオキシエチレン（２０Ｅ．Ｏ．）ソルビタンモノステアレート　　　　２．０
ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油　　　　　　　　　　　２．０
エタノール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
１，３ブチレングリコール　　　　　　　　　　　　　　　　　　５．０
貝肉由来コラーゲン−１　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．０
精製水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　７７．３
コンキオリン加水分解物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
パラオキシ安息香酸メチル　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２
【００４４】
2004083451.tif 000002
ＡとＢをそれぞれ計量し、７０℃まで加温し、ＢにＡを攪拌しつつ徐々に加えたのち、ゆっくり攪拌しつつ３０℃まで冷却した。
【００４５】
実施例３
実施例１のローションの貝肉由来コラーゲン−１を貝肉由来コラーゲン−３に、コンキオリン加水分解物を貝類の粘液を加水分解して得られる物質に置き換え、他は実施例１と同等に作成した。
【００４６】
実施例４
実施例１のローションの貝肉由来コラーゲン−１を貝肉由来コラーゲン−４に、コンキオリン加水分解物をアコヤ貝肉由来グリコーゲンに置き換え、他は実施例１と同等に作成した。
【００４７】
実施例５
実施例１のローションの貝肉由来コラーゲン−１を貝肉由来コラーゲン−５に、コンキオリン加水分解物を貝類肉より得られる酸性多糖−１に置き換え、他は実施例１と同等に作成した。
【００４８】
実施例６
実施例２のクリームのコハクコンキオリン（コンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理した物）を酸性多糖−２に置き換え、他は実施例２と同等に作成した。
【００４９】
実施例７
実施例２のクリームのコハクコンキオリン（コンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理した物）２．０％をコンキオリン加水分解物１．０％とアコヤ貝肉由来グリコーゲン１．０％に置き換え、他は実施例２と同等に作成した。
【００５０】
実施例８
実施例２のクリームのコハクコンキオリン（コンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理した物）２．０％をコンキオリン加水分解物１．０％と貝類肉より得られる酸性多糖−１、０．５％と貝類の粘液を加水分解して得られる物質０．５％に置き換え、他は実施例２と同等に作成した。
【００５１】
実施例９
実施例１のローションの貝肉由来コラーゲン−１を海洋深層水１に、コンキオリン加水分解物を貝類の粘液を加水分解して得られる物質に置き換え、他は実施例１と同等に作成した。
【００５２】
実施例１０
実施例１のローションの貝肉由来コラーゲン−１を海洋深層水２に置き換え、他は実施例１と同等に作成した。
【００５３】
実施例１１
実施例１のローションの貝肉由来コラーゲン−１を海洋深層水１に置き換え、コンキオリン加水分解物１％をコハクコンキオリン（コンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理した物）０．５％とアコヤ貝肉由来グリコーゲン１．０％に置き換え、他は実施例１と同等に作成した。
【００５４】
実施例１２
実施例２のクリームの貝肉由来コラーゲン−２を海洋深層水１に、コハクコンキオリン（コンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理した物）を酸性多糖−２に置き換え、他は実施例２と同等に作成した。
【００５５】
実施例１３
実施例２のクリームの精製水１０％を海洋深層水２、１０％に、コハクコンキオリン（コンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理した物）２．０％をコンキオリン加水分解物１．０％とアコヤ貝肉由来グリコーゲン１．０％に置き換え、他は実施例２と同等に作成した。
【００５６】
実施例１４
実施例２のクリームの精製水１０％を海洋深層水２、１０％に、コハクコンキオリン（コンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理した物）２．０％をコンキオリン加水分解物１．０％と貝類肉より得られる酸性多糖−１、０．５％と貝類の粘液を加水分解して得られる物質０．５％に置き換え、他は実施例２と同等に作成した。
【００５７】
以下に実施例で用いた原料の製造方法を記す。
【００５８】
貝肉由来コラーゲン−１
アコヤ貝は真珠養殖が終わって、真珠を取り出したあとの貝肉を集める。得られたアコヤ貝肉８８０ｇを食塩で塩もみし、ぬめりを除去したのち、０．６Ｍ　ＫＣｌ１２００ｍＬ中にて２時間ホモジナイズし、デカンテーションにより貝肉を集める。その後、０．４５Ｍ　ＮａＣｌ　１２００ｍＬ中にて２時間攪拌したのち、デカンテーションにより貝肉を集め、１４６ｇの断片アコヤ貝肉が得られた。さらに、この断片貝肉を２Ｎ水酸化ナトリウム溶液にて溶解し、ｐＨ６〜７に中和後、上清を透析膜（和光純薬：ダイアライシスメンブラン３６）に付し、外液を精製水とし一夜透析を行った。
【００５９】
貝肉由来コラーゲン−２
アサリの剥き身を用いてアコヤ貝肉由来コラーゲン−１と同様な操作を行った。
【００６０】
貝肉由来コラーゲン−３
製造例１の精製コラーゲンを作成する行程中、０．４５Ｍ　ＮａＣｌ　１２００ｍＬ中にて処理したのち得られる断片アコヤ貝肉１４．６ｇを０．１Ｍ酢酸１０００ｍＬ中、一夜攪拌したのち、遠心分離（３０００×ｇ、２０分）を行い、沈降物（６８ｇ）を集める。得られた沈降物を０．０１Ｎ　ＨＣｌ　１２００ｍＬ中に分散させ、ペプシン１．０〜１．５ｇを加え、一夜攪拌したのち、遠心分離（９５００×ｇ、２時間）を行い、上清を透析膜（和光純薬：ダイアライシスメンブラン３６）に付し、外液を精製水とし一夜透析を行った。
【００６１】
貝肉由来コラーゲン−４
製造例１で得た１０ｇに精製水５００ｍｌを加え、１０℃とＮａＯＨでｐＨ１０に保ちながら、無水コハク酸を０．５ｇを徐々添加した。これを凍結乾燥した。
【００６２】
貝肉由来コラーゲン−５
製造例３の凍結乾燥物１ｇを６Ｎ　ＨＣｌ　１０ｍＬ中に加え、１００℃で２時間加熱を行い、冷却後、凍結乾燥し得られた粗反応物を１型（α１）３ホモ分子コラーゲンの加水分解物とする。
【００６３】
海洋深層水１は羅臼沖の湧昇海域水深２００ｍのところより採取した海水で、海洋深層水２はこれを脱塩したもので以下の表のような組成である。
【００６４】
2004083451.tif 000003
2004083451.tif 000004
【００６５】
コンキオリン加水分解物
脱灰したアコヤ貝由来コンキオリンを乾燥物として１ｋｇに９８％硫酸を水で３０倍希釈した液を１０ｌを加え、ガラス容器に密封し、１１０℃、２４時間加熱した。分解終了後、用いた硫酸の当量の９０％の水酸化バリウムを充分攪拌しつつ、少量づつ加えた。さらにｐＨ５．８まで１％水酸化ナトリウム水溶液で中和した。次に２０００Ｇ、１０分間、遠心分離したのち、さらに０．４５ミクロンのメンブランフィルターにてろ過し、これを凍結乾燥した。
【００６６】
コハクコンキオリン（コンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理した物）
真珠５００ｇを塩酸１ｋｇを攪拌しながら徐々に加えて脱灰する。さらに１規定塩酸３００ｇを攪拌しながら徐々に加えて脱灰し、これを濾過して不溶物を集めた。これに水で３０倍に希釈した硫酸を１００ｍｌ加えて、ガラス容器に密封し、１１０℃で２４時間加熱分解した。冷却後、用いた硫酸の当量の９０％の水酸化バリウムを充分攪拌しつつ、少量づつ加えた。さらに、ｐＨ５．８まで１％水酸化ナトリウム水溶液を加えた。次に２００Ｇ、１０分間、遠心分離した後さらに０．４５ミクロンのメンブランフルターでろ過し、分解物を得た。これを凍結乾燥した。この物質を５．０ｇとり、精製水１００ｍｌに分散し、攪拌しつつ、無水コハク酸１ｇをｐＨ６〜９に１規定水酸化ナトリウム水溶液で保ちながら１５分おきに５回加えた。これを凍結乾燥した。
【００６７】
貝類の粘液を加水分解して得られる物質
アコヤ貝より、貝殻と真珠を除いたもの１００ｇに０．５モル塩化ナトリウム溶液１リッターを加え攪拌した。これを遠心分離して不溶物を集めた。この操作を３回繰り返した。得られた不溶物にエタノール１リッターを加えて攪拌後、１晩放置した。これを遠心分離し不溶物を得た。この操作を３回繰り返した。これを水を１リッター加えて攪拌後、遠心分離し、不溶物を得た。
得られた不溶物に０．５モルのクエン酸水溶液１リッターを加え、２４時間撹拌した。これを遠心分離し、不溶物を除き、透析膜に入れて、流水中に２日間放置した。なお、すべての操作は１０℃に保つようにしながら実施した。
【００６８】
アコヤ貝肉由来グリコーゲン
アコヤ貝肉由来グリコーゲンをつぎの方法で得た。金網上でアコヤ貝の粘液を除去し、その貝肉１５００ｇをワーリングブレンダーで２分間ホモジナイズした。これに蒸留水２５００ｍｌを加え、沸騰水中で３０分間撹拌しながら加熱した。３５０Ｇで２０分間遠心分離し、残査に１０００ｍｌの蒸留水を加え乳光を示さなくなるまで、同様に数回加熱した。このグリコーゲンの抽出液を合一し、東洋濾紙　Ｎｏ．１を用い吸引濾過し、濾液を３７５０ｍｌまで減圧濃縮後、終濃度５容量％になるようにトリクロロ酢酸を加え、４℃で１２時間静置した。４５００Ｇで６０分間遠心分離し、タンパク質を除去後、上澄みに３倍量のエタノールを加えて終濃度７５容量％とし、沈澱させて粗製グリコーゲンを得た。これを４００ｍｌの蒸留水で溶解し、次いで１６００ｍｌのエタノールを加えて沈澱を集めた。この操作を３回繰り返しグリコーゲンを洗浄した。なおこのとき、完全に沈澱を形成させるために、塩化カルシウム飽和溶液を１〜２滴添加した。得られた沈澱は少量の冷蒸留水に溶解し、同液に対して透析後、２５００Ｇで１０分間遠心分離を行ない、上澄みを凍結乾燥して、アコヤ貝肉由来グリコーゲンを得た。このアコヤ貝肉由来グリコーゲンは、純度８９重量％であることがアンスロン濃硫酸法により同定された。
【００６９】
貝類肉より得られる酸性多糖−１
ａ．貝殻を取り除いたアコヤ貝１００ｋｇを加熱し、変性後、ミキサーで粉砕した。
ｂ．これにアクチナーゼＥを１００ｇ加えて、４５℃で撹拌しつつ、２４時間放置した。
ｃ．トリクロル酢酸を１０ｋｇ加えて撹拌し、１時間放置後遠心分離して沈澱を除去し、除蛋白を行った。更にセロハンチューブで４８時間透析を行って、低分子物質の除去を行った。
ｄ．その後、塩化セチルピリジニウムを１ｋｇ加えて撹拌し、１時間放置後、遠心分離して、酸性多糖類のセチルピリジニウム塩の沈澱を得た。
ｅ．この沈澱に２Ｍ塩化ナトリウムを加えて沈澱を溶解した。これに３倍のエチルアルコールを加えて撹拌し、１時間放置後遠心分離して沈澱を得る。
ｆ．この沈澱に精製水を少量加えて、沈澱を溶かし、エチルアルコールを濃度が８０％になるように加えて撹拌し、１時間放置後遠心分離して沈澱を得る。
ｇ．ｆを３回繰り返した。収量は５１２ｇであった。
【００７０】
貝類肉より得られる酸性多糖−２
ａ．貝殻を取り除いたアコヤ貝１００ｋｇを加熱し、変性後、ミキサーで粉砕した。
ｂ．これをｐＨ６〜６．５に調整した後、サモアーゼ１００ｇ、デナチーム５００ｇを加えて、６０℃で撹拌しつつ１００分放置した。
ｃ．遠心分離して、不溶解物を除き、トリクロル酢酸を１０ｋｇ加えて撹拌し、１時間放置後、遠心分離して、沈澱を除去した後、分子量１０，０００の限外濾過で低分子物質を除いた。
ｄ．これに精製水を１０ｋｇ加え、溶解させた後、塩化セチルピリジニウムを１ｋｇ加えて撹拌し、１時間放置後遠心分離して、沈澱を分離した。
ｅ．この沈澱に２Ｍ塩化カリウムを加えて沈澱を溶解した。これに３倍のエチルアルコールを加えて撹拌し、１時間放置後遠心分離して、酸性多糖類の沈澱を得た。
ｆ．この沈澱に精製水を少量加えて、沈澱を溶かし、エチルアルコールを濃度が８０％になるように加えて撹拌し、１時間放置後遠心分離して沈澱を得た。
ｇ．ｆを３回繰り返した。
ｈ．これに精製水を１０ｋｇ加え、溶解させた後、カオリン５００ｇを加えて撹拌し、遠心分離して沈澱を除去し、５ミクロンのフィルターで濾過し、これを凍結乾燥した。収量は４８５ｇであった。
【００７１】
有効性をみるために以下の実験を行った。
【００７２】
上記の有効性を確認するために以下の使用テストを行った。
女性１６名づつの顔面を左右に分け、一方を実施例、もう一方を比較例として毎日、３回以上使用し、１日後と１週間後に肌のしっとり感についてアンケートした。
判定基準は以下の通りである。
実施例の方が非常によい　　３
実施例の方がかなりよい　　２
実施例の方がややよい　　　１
差がない　　　　　　　　　０
比較例の方がややよい　　−１
比較例の方がかなりよい　−２
比較例の方が非常によい　−３
【００７３】
実験の組合せは以下のように行った。
2004083451.tif 000005
なお、比較例１は実施例１３より貝肉由来コラーゲン−２と海洋深層水２とコンキオリン加水分解物とアコヤ貝肉由来グリコーゲンを精製水に置き換え、他は実施例１３と同等に作成した。比較例２は実施例１３より貝肉由来コラーゲン−２と海洋深層水２を精製水に置き換え、他は実施例１３と同等に作成した。比較例３は実施例１３よりコンキオリン加水分解物とアコヤ貝肉由来グリコーゲンを精製水に置き換え、他は実施例１３と同等に作成した
【００７４】
結果は以下のようになった。（１６名の合計数値である）
2004083451.tif 000006
【００７５】
実施例と、実施例から海洋深層水や貝肉由来コラーゲンを除いたもの、コンキオリン加水分解物、コンキオリンの加水分解物を無水コハク酸で処理した物、貝類の粘液を加水分解して得られる物質、貝類肉より得られる酸性多糖類、貝類由来コラーゲン、アコヤ貝肉由来グリコーゲン等を除いたものを比較すると、本発明の実施例は非常に保湿性も高く、相乗的な効果が認められた。
【効果】