(57)【要約】【課題】創傷治癒剤や育毛・養毛剤および肌色の改善効果を有する皮膚外用剤に特に有効に応用し得るような、創傷部位あるいは毛包周辺の血管新生誘導効果に優れる皮膚への外用に好適なＶＥＧＦ産生促進剤を得ることを課題とした。【解決手段】テルペノイド及びその誘導体から選択される１種もしくは２種以上の化合物を配合することで、創傷治癒剤や育毛・養毛剤および肌色の改善効果を有する皮膚外用剤に特に有効なＶＥＧＦ産生促進剤を提供できた。【選択図】　　　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
テルペノイドおよびその誘導体から選択される１種もしくは２種以上の化合物を含有する血管内皮細胞増殖因子産生促進剤。
【請求項２】
テルペノイドがアルコール系テルペノイド、アルデヒド系テルペノイド、ケトン系テルペノイドおよびそれらの誘導体から選択される１種もしくは２種以上化合物である請求項１記載の血管内皮細胞増殖因子産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、血管内皮細胞増殖因子（＝Ｖａｓｃｕｌａｒ　Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ／以下ＶＥＧＦと略す）の産生を促進し得るＶＥＧＦ産生促進剤に関する。本発明にかかるＶＥＧＦ産生促進剤は、特に、創傷治癒促進剤、育毛・養毛剤、および肌色の改善効果を有する皮膚外用剤等に応用され得るものである。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、創傷の治癒促進剤や、育毛・養毛剤および肌色の改善効果を有する皮膚外用剤においては、血行を促進したり、皮膚の新陳代謝を活性化したりする作用を有する成分が用いられてきた。かかる血行促進剤としては、センブリ抽出物（スェルチノーゲン）、セファランチン、ビタミンＥおよびその誘導体、γ−オリザノール等が挙げられ、皮膚の新陳代謝を促進する物質としては、ワサビ抽出物（特開昭６２−２１５１１６）、炭素数１８〜２２の不飽和結合を２以上含有する脂肪酸またはその塩等（特開平７−１９６４６５）、ヒドロキシサリチル酸またはそのエステルの配糖体（特開平８−２６８８７０）などが開示されている。
【０００３】
また、創傷治癒促進効果を有する物質としては、アスコルビン酸、アラントイン、アズレン化合物、パントテン酸またはその塩、ビタミンＢ群化合物などが知られており、その他、単球走化性活性化因子（特開平７−８２１６９）、ヒオウギ抽出物（特開平７−１３８１７９）、フラボノイド配糖体（特開平７−１８８０３１）、アデノシン−３’，５’−環状リン酸誘導体（特開平９−１９４３７９、特開平９−１９４３８０）等が開示されている。
【０００４】
しかしながら、上記の成分に関しては、必ずしも適用部位において特異的に作用するとは限らず、期待した作用効果が十分得られない場合があった。また、実際に製剤化した場合には、変色や変臭が生じる場合があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明に於いては、創傷治癒剤や育毛・養毛剤および肌色の改善効果を有する皮膚外用剤に特に有効に応用し得るような、創傷部位あるいは毛包周辺の血管新生誘導効果に優れる皮膚への外用に好適なＶＥＧＦ産生促進剤を得ることを課題とした。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するべく、鋭意検討を行った結果、驚くべきことにテルペノイドが優れたＶＥＧＦ産生促進作用を有していることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明に係るテルペノイドは、イソプレンを構成単位とする一群の天然有機化合物の総称であり、一般式（Ｃ５Ｈ８）ｓで表される不飽和炭化水素以外に、これらの酸化還元生成物（アルコール、アルデヒド、ケトン、酸等）や、炭素の脱離した化合物等が多くの植物および動物体内に見出されている。また、これらの化合物は、分子骨格の炭素数により、ヘミテルペン（炭素数５）、モノテルペン（炭素数１０）、セスキテルペン（炭素数１５）、ジテルペン（炭素数２０）、セスタテルペン（炭素数２５）、トリテルペン（炭素数３０）、テトラテルペン（炭素数４０）およびその他のポリテルペンに分類される。また、鎖状のものと環状のもの（単環式、二環式、三環式、四環式、五環式）とに分類される。モノテルペン、セスキテルペンは精油の主成分である。アブシジン酸、幼若ホルモン、ジベレリン、フォルスコリン、ホルボールなど生理活性を示す化合物も多い。また構造の一部としてイソプレン構造を有する複合テルペン（＝テルペノイド誘導体）として、クロロフィル、ビタミンＫ、ユビキノン、ｔＲＮＡなどがある。これらのテルペノイドの中でも、炭素数が１０、１５、２０のモノテルペン、セスキテルペンおよびジテルペンに分類されるテルペノイドが好適に用いられ、例えば、炭化水素系テルペノイドとしては、α−ピネン（パイン様香気）（１）、β−ピネン（２）、リモネン（オレンジ様）（３）等、アルコール系テルペノイドとしては、リナロール（スズラン様）（４）、ゲラニオール（５）、ネロール（６）、テトラヒドロリナロール（７）、シトロネロール（８）、ヒドロキシシトロネロール（ローズ様）（９）、メントール（ペパーミント様）（１０）、セドロール（１１）等、アルデヒド系テルペノイドとしては、シトラール（９）、シトロネラール（レモン様）（１３）、ペリラアルデヒド（シソおよびクミン様）（１４）等、ケトン系テルペノイドとしては、メントン（１５）、ショウノウ（ミント様）（１６）等、さらに、誘導体としては、酢酸メンチル（ミント様）（１７）、酢酸テルピニル（１８）、プロピオン酸リナリル（ベルガモット様）（１９）などのエステル体を用いることができる。これらは、上述のとおり、香料用として入手が容易なものばかりであるが、これらを原料に、常法を用いて必要な構造のものを合成して用いても良い。さらに、これらの成分を含有する精油成分および／または植物抽出物を用いても良い。上述の化合物（１）〜化合物（１９）の構造式を以下に示す。
【０００８】
【化１】
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【０００９】
【化２】
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【００１０】
【化３】
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【００１１】
【化４】
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【００１２】
【化５】
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【００１３】
【化６】
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【００１４】
本発明に於いては、上記化合物群から１種もしくは２種以上を選択して用いる。これらの化合物はそのままでもＶＥＧＦ産生促進剤として用いることができるが、各種基剤または担体に含有させても良い。ＶＥＧＦ産生促進剤全量に対する添加量としては、用いる有効成分の種類にもよるが。０．０００１〜１０．０重量％であり、好ましくは、０．０００５〜１．０重量％である。
【００１５】
本発明に係るＶＥＧＦ産生促進剤は、液剤、乳液、ゲル剤、クリーム剤、軟膏剤、粉剤、顆粒剤、丸剤等種々の剤型で提供することができる。また、本発明に係るＶＥＧＦ産生促進剤には、その効果を損なわない範囲で、油性成分、界面活性剤、保湿剤、賦形剤、紫外線吸収剤、抗酸化剤、上記以外の香料成分、防腐剤等の一般的な医薬品および化粧料用添加剤を含有させることができ、これらを併用することで、クリームや乳液などの乳化物や、化粧水や育毛剤などの水性皮膚外用剤、さらには、これをゲル化した水性ゲル状皮膚外用剤、あるいは石鹸や洗顔フォーム、シャンプーなどの洗浄用化粧料、あるいはピールオフ型や洗い流し型のパック剤などにすることができる。
【００１６】
【実施例】
さらに本発明について、実施例を用いて詳細に説明する。なお、以下の実施例に用いた化合物は全て、市販品を用いて評価を行った。
【００１７】
＜ＶＥＧＦ産生促進効果＞
正常ヒト表皮細胞を１穴あたり２．０×１０４個となるように９６穴プレートに播種した。播種培地は市販培地のＫＧ−２（クラボウ製）を用いた。播種２４時間後、任意の濃度の試料を添加したＫＧ−２培地に交換し、さらに２４時間培養をおこなった。この培養上清中のＶＥＧＦ量をエンザイム　イムノ　アッセイ法〔Ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）〕により定量した。すなわち、新規９６穴プレートを抗ＶＥＧＦ抗体でコーティングし、４℃で１２時間静置した後、１％ウシ血清を添加し、これに上述の培養上清を添加する。続いて、ビオチン標識抗ＶＥＧＦ抗体、ストレプタビジンＨＲＰと反応させた後、２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニウム塩〔２，２’−Ａｚｉｎｏ−ｂｉｓ（３−ｅｔｈｙｌｂｅｎｚｏｔｈｉａｚｏｌｉｎｅ−６−ｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）ｄｉａｍｍｏｎｉｕｍ　ｓａｌｔ（ＡＢＴＳ）〕および過酸化水素水を添加した基質溶液を加えて反応させた。得られた溶液の４０５ｎｍにおける吸光度を測定し、あらかじめ測定しておいた細胞数をもとに、単位細胞数あたりのＶＥＧＦ産生量を測定した。コントロールとして試料を添加しなかった場合のＶＥＧＦ産生量を１００とした相対値を表１に示す。
【００１８】
【表１】
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【００１９】
表１から明らかなように、濃度にはばらつきがあるものの、各実施例に於いて、１％以下の危険率で、コントロールに対して有意にＶＥＧＦ産生が促進されることが認められた。さらに、実施例１のα−ピネンにおいては、特に低濃度である１．５６μｇ／ｍＬの濃度で添加した場合に於いても有意なＶＥＧＦ産生促進作用が認められた。
【００２０】
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製法：（１）に（２）、（３）、（４）を順次添加し、均一に溶解しアルコール相とする。これを、あらかじめ（７）に（５）及び（６）を添加して均一にした水相に撹拌しながら均一に混合する。また、（３）を精製水に代替して調製したものを比較例１とする。
【００２１】
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製法：（１）〜（５）の油相成分を加熱溶解し、８０℃とする。一方（６）〜（８）を（１１）に加熱溶解したものを加え、均一に撹拌する。次いで、（９）を加え、ホモジナイザーにより均一に乳化した後、冷却し、４５℃にて（１０）を加えて均一にする。また、（１０）を精製水に代替して調製したものを比較例２とする。
【００２２】
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製法：（１）〜（６）の油相成分を加熱溶解し、８０℃とする。一方（７）〜（９）及び（１２）の一部を加熱溶解し、８０℃とする。これに前記油相を攪拌しながら加えたあと、（１０）を加えて、ホモジナイザーにより均一に乳化する。３０℃まで冷却した後、（１１）を添加し混合、均一化する。また、（１１）を精製水に代替して調製したものを比較例３とする。
【００２３】
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製法：（６）に（２）を均一に溶解した後、（１）に（４）、（５）を溶解して添加し、次いで（３）を加えて増粘させる。また、（５）を精製水に代替して調製したものを比較例４とする。
【００２４】
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製法：（１）に（２）を加え湿らせておいたものに、常温の（３）を加え、ゆっくりと撹拌しながら８０℃まで加熱する。（１）が均一に溶解したことを確認後、５０℃まで冷却し、（４）、（５）を加え撹拌する。（４）の溶解を確認後、３０℃まで冷却し、あらかじめ（９）に（６）〜（８）を溶解したアルコール相と（１０）を順次添加して、均一に撹拌する。また、（７）を精製水に代替して調製したものを比較例５とする。
【００２５】
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製法：（１）、（２）、（３）、（４）を順次量りこみ、８０℃まで加熱する。これに、（６）を溶解させた（５）を８０℃まで加熱したものをゆっくりと撹拌しながら加える。均質になるまで撹拌後、４５℃まで冷却し、（７）および（８）を加えて均質になるまで撹拌する。また、（７）を精製水に代替して調製したものを比較例６とする。
【００２６】
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製法：（１）に（２）から（５）を順次添加し、撹拌後溶解させる。これに（６）を加え、均一に混合する。また、（３）を精製水に代替して調製したものを比較例７とする。
【００２７】
＜血管新生効果＞
上記実施例１２から実施例１５について、モルモットの創傷部位における血管新生促進効果を評価した。同時に比較例１から比較例４についても評価を行った。血管新生促進効果は、背部を剃毛し、人工的に創傷を形成したモルモット５匹を１群とし、各群の創傷部位に実施例および比較例のそれぞれ０．２ｇずつを１日２回塗布し、３日後の組織片を作製して、血管新生の様子を観察して評価した。その結果を表２に示した。
【００２８】
【表２】
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【００２９】
表２より明らかなように、本発明の実施例１２から実施例１５を塗布した群では、４例以上のモルモットにて血管新生を認めた。これに対し比較例塗布群では、明確な血管新生効果を認めた例は１例以下であり、本発明に係る化合物の血管新生効果すなわち創傷治癒促進効果が明らかとなった。
【００３０】
＜肌色改善効果＞
実施例２から実施例７および、比較例１から比較例６を用いて、２０代から５０代の女性パネラー２０名を１群として、実使用試験を行った。各パネルに実施例とそれに対応する比較例を半顔ずつに１日２回、３０日間連続で使用させた。（ただし、パック剤である実施例６および比較例５については２日に１回とした。）使用試験終了後、専門の判定員３名の協議により、実施例を連用した方と比較例を連用した方のどちらが血色が良いかを判定させた。血色が良いほうに２点、悪いほうには１点を与え、その合計点数を表３に示した。
【００３１】
【表３】
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【００３２】
クレーマーの検定法によると、評価回数（すなわちパネラー数）が２０回で、比較サンプルが２種類のときに、各サンプルの合計点数が２６点対３４点以上の差がついたときに、両サンプルの間に有意な差があると認められる。したがって、表３の結果をクレーマーの検定表と照らし合わせると、使用試験を行った群のすべてに於いて実施例の方が、危険率５％以下で有意に皮膚の血色が良いという結果が認められた。
【００３３】
＜育毛効果＞
実施例１８および比較例７を用いて、使用試験を行った。パネラーは３０代から５０代の脱毛症の男性２０人を一群として、各群に実施例および比較例をブラインドにて１日２回、６ヶ月間連続で使用させた。試験終了後、発毛の程度を写真にて下表４に示した基準を用いて判定した。その結果について表５に示した。
【００３４】
【表４】
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【００３５】
【表５】
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【００３６】
＜女性における育毛・養毛効果＞
実施例１８および比較例７を用いて、使用試験を行った。パネラーは３０代から５０代の薄毛が気になる女性２０人を一群として、各群に実施例および比較例をブラインドにて１日２回、６ヶ月間連続で使用させた。試験終了後、髪の毛の状態の変化に関してアンケートを実施した。その結果について表６にアンケート項目とともに示した。
【００３７】
【表６】
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【００３８】
表５より明らかなように、本発明の実施例１８使用群では約半数の９例で硬毛の発生を認めているのに対して、比較例７使用群では硬毛の発生が認められた例は１例としてなかった。また、表６から明らかなように、本発明の実施例８使用群では、髪の毛のツヤ、ハリ・コシ、及び量について、１１例以上で改善効果が認められ、比較例７よりも、改善効果が高かった。このことから、本発明におけるＶＥＧＦ産生促進剤は、男性用および女性用の育毛・養毛剤としても応用できる事がわかった。
【００３９】
【発明の効果】
以上、詳しく述べてきたように、本発明のＶＥＧＦ産生促進剤は血管新生効果に優れ、創傷治癒促進剤、育毛・養毛剤、および肌色の改善効果に優れた皮膚外用剤に応用できる。