(57)【要約】【課題】アナフィラキシー疾患を、副作用がなく、短期間の服用で、完治させることができる治療剤、健康食品及びその製造方法を提供する。【解決手段】本発明のアナフィラキシー疾患治療剤等は、松科植物の新芽と、水と、糖質とを混合し、自然発酵させて得られる。松科植物としては松属の植物が好ましい。また、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤等は、当該アナフィラキシー疾患治療剤から分離された酵母を使用して得られる発酵生成物を用いて製造することができる。【選択図】　　　図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
松科植物の新芽と、水と、糖質とを混合し、自然発酵させて得られるアナフィラキシー疾患治療剤。
【請求項２】
前記松科植物が松属の植物である請求項１記載のアナフィラキシー疾患治療剤。
【請求項３】
前記糖質が、砂糖である請求項１記載のアナフィラキシー疾患治療剤。
【請求項４】
松葉の新芽と、水と、砂糖とを混合し、自然発酵させて得られるアナフィラキシー疾患治療剤。
【請求項５】
滅菌した水に糖質を溶解し、糖質を溶解した溶液を調製する工程と、
前記糖質を溶解した溶液に松科植物の新芽を加え、自然発酵させる工程とを含むアナフィラキシー疾患治療剤の製造方法。
【請求項６】
前記松科植物が松属の植物である請求項５記載のアナフィラキシー疾患治療剤の製造方法。
【請求項７】
前記糖質が、砂糖である請求項５記載のアナフィラキシー疾患治療剤の製造方法。
【請求項８】
前記自然発酵を、嫌気的な条件下、１０〜７０℃で、３〜９ヶ月行う請求項５記載のアナフィラキシー疾患治療剤の製造方法。
【請求項９】
滅菌した水に砂糖を溶解し、砂糖を溶解した溶液を調製する工程と、
前記砂糖を溶解した溶液に松葉の新芽を加え、自然発酵させる工程とを含むアナフィラキシー疾患治療剤の製造方法。
【請求項１０】
前記自然発酵を、嫌気的な条件下、１０〜７０℃で、３〜９ヶ月行う請求項９記載のアナフィラキシー疾患治療剤の製造方法。
【請求項１１】
熱湯に砂糖を溶解し、周囲温度まで冷却させた砂糖水溶液を調製する工程と、
前記砂糖水溶液に、水洗した松葉の新芽を加え、容器に入れて密封し、自然発酵させる工程とを含むアナフィラキシー疾患治療剤の製造方法。
【請求項１２】
前記自然発酵を、１０〜７０℃で、３〜９ヶ月行う請求項５記載のアナフィラキシー疾患治療剤の製造方法。
【請求項１３】
前記自然発酵を、密閉した容器を直射日光の当たる場所で初冬頃まで行う請求項９記載のアナフィラキシー疾患治療剤の製造方法。
【請求項１４】
松科植物の新芽と、水と、糖質とを混合し、自然発酵させて得られるアナフィラキシー疾患症状改善のための健康食品。
【請求項１５】
松葉の新芽と、水と、砂糖とを混合し、自然発酵させて得られるアナフィラキシー疾患症状改善のための健康食品。
【請求項１６】
受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ−７４９９で寄託した酵母または受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ−７４９９で寄託した酵母と同等の菌体的性質を有する酵母を用いて発酵させて得られる発酵生成物を用いることを特徴とする、アナフィラキシー治療剤、アナフィラキシー疾患症状改善のための健康食品、またはアナフィラキシー疾患症状改善のための健康飲料の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アナフィラキシー疾患、たとえば、アナフィラキシーショック或いは食物依存性運動誘発アナフィラキシー等を含むアナフィラキシー疾患治療剤及びその製造方法に関する。また、本発明は、アナフィラキシー疾患症状改善のための健康食品に関し、当該健康食品の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
人体には、体内に、細菌やウイルスなどの異物が侵入してきたときに、それらに立ち向かい、体を守るための生体防御機構である免疫システムが備わっている。アレルギー疾患はこの免疫システムが過剰に働くために起こるものである。近年、大気汚染、食生活の変化、肉体的あるいは精神的ストレスの増加、居住環境の変化による室内汚染などの環境の変化または人間の体質の変化によるものか、その原因は明確ではないがアレルギー疾患に罹る人が増加している。
【０００３】
このアレルギー疾患としては、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性鼻炎、たとえば、花粉症、食物アレルギーなどの他、薬物等によるアナフィラキシーショックや食物依存性運動誘発アナフィラキシーがある。
【０００４】
これらのアレルギー疾患の、消極的ではあるが、第一の治療は、アレルゲンを回避することである。家の中の埃やダニがアレルゲンである場合には、家の中を清潔にして、アレルゲンを取り除いたり、花粉がアレルゲンの場合には、花粉の飛ぶ季節には、外出をひかえたり、マスクをしたりして、アレルゲンを吸い込まないようにしたり、食物アレルギーの場合には、その食物を食べないことである。しかしながら、この消極的な治療法は、手間がかかり、また、患者の行動をひどく制限する。
【０００５】
また、喘息の治療としては、発作を止めるか、発作を予防する対症治療が行われており、アドレナリンなどの交感神経系の薬、副腎皮質ステロイドホルモン剤、テオフィリン系などの薬が使われている。しかしながら、喘息は、時に「死」に至る病であるが、未だ、完治するという治療法は無かった。
【０００６】
アトピー性皮膚炎は、乳幼児期には、そのかゆみのために患者だけでなく、その親をも悩ませるものであり、多くは成人する前に治るが、成人期まで続くと顔や胸、ひじやひざの内側などの皮膚が厚くなり、激しいかゆみが起こり、思春期の男女を悩ませる。この治療法としては、外用療法が主な方法であって、症状に応じて、副腎皮質ホルモン剤、抗ヒスタミン剤、その他の抗炎症剤を用いる。かゆみが強い場合には、抗ヒスタミン剤の内服が必要となる。
【０００７】
薬物によるアナフィラキシーショックは、しばしば、治療上極めて有効な薬物に対して引き起こされるので、当該ショック症状を有する患者の治療が著しい制限を受ける場合がある。そのような患者ではペニシリン系抗生物質やインスリン、ヨード系造影剤、或いは局所麻酔剤といった薬物の服用が禁忌される場合があり、患者自体にこれらの薬物に対する適切な認識がない場合には当該薬剤の誤用によって重篤なショック症状を呈し、時には生命の危険に曝される場合もある。
【０００８】
近年、食物依存性運動誘発アナフィラキシーに対しても重大な関心が寄せられている。食物依存性運動誘発アナフィラキシーとは、特定の食物摂取後に運動することによってアナフィラキシー症状を呈するような疾患を指し、１０歳代の思春期の男性において多く認められる。臨床症状としては全身の熱感、掻痒感に引き続き、紅斑、蕁麻疹、血管性浮腫、腹痛、下痢、嘔吐等が認められ、重症例では喉頭浮腫による呼吸困難や血圧低下、意識消失等により生命の危険を伴う疾患である。
【０００９】
上記のアナフィラキシー疾患に対して現在採られている治療法は、アナフィラキシーを引き起こす薬物や食物の摂取を避けることの他、症状が発生した場合には、アドレナリンやステロイドの投与が行なわれる。
【００１０】
しかしながら、これらの療法は対症療法であって、アナフィラキシーを含むアレルギー疾患を完治させるものではなく、また、薬を用いることによる副作用などもある。
【００１１】
アレルゲンが特定できるときは、減感作療法といって、そのエキスを、始めは極少量、皮下注射し、次第に量を増やすことにより、抵抗力をつける方法がある。しかしながら、この療法は、週に１〜２回定期的に注射するもので、長期間かかる上、人によっては、効果がないこともあり、また、人によっては、上記のような、死に至ることもあるアナフィラキシーショックを引き起こすことがある。
【００１２】
また、喘息やアトピー性皮膚炎の治療には多くの民間薬もあるが、時にはかえって症状を重くすることがある。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記のようなアレルギー疾患の治療、特にアナフィラキシー疾患治療の現状に対して、アナフィラキシー疾患を、副作用がなく、短期間の服用で、完治させることができる治療剤、健康食品及びその製造方法を提供することを課題とする。
【００１４】
【課題を解決するための手段】
本発明のアナフィラキシー疾患治療剤は、松科植物の新芽と、水と、糖質とを混合し、これを自然発酵させて得られるもので、薬物によるアナフィラキシーや食物依存性運動誘発アナフィラキシーのようなアナフィラキシー疾患に有効な治療剤である。前記松科植物としては松属の植物が好ましく、また前記糖質としては砂糖が好ましい。
【００１５】
また、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤は、松葉の新芽と、水と、砂糖とを混合し、自然発酵させて得られるもので、薬物によるアナフィラキシーや食物依存性運動誘発アナフィラキシーのようなアナフィラキシー疾患に有効な治療剤である。
【００１６】
さらに、本発明は上記のアナフィラキシー疾患治療剤の製造方法を包含し、このアナフィラキシー疾患治療剤の製造方法は、（１）滅菌した水に糖質を溶解し、糖質を溶解した溶液を調製する工程と、（２）前記糖質を溶解した溶液に松科植物の新芽を加え、自然発酵させる工程とを含む。前記松科植物としては松属の植物が好ましく、また前記糖質としては砂糖が好ましい。
【００１７】
また、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤の製造方法は、（１）滅菌した水に砂糖を溶解し、砂糖を溶解した溶液を調製する工程と、（２）前記砂糖を溶解した溶液に松葉の新芽を加え、自然発酵させる工程とを含むことを特徴とする。
【００１８】
前記の自然発酵としては、嫌気的な条件下、１０〜７０℃、好ましくは２０〜６０℃で、３〜９ヶ月、好ましくは４〜８ヶ月程度行うことが好ましい。
【００１９】
より具体的なアナフィラキシー疾患治療剤の製造方法としては、（１）熱湯に砂糖を溶解し、周囲温度まで冷却させた砂糖水溶液を調製する工程と、（２）前記砂糖水溶液に、水洗した松葉の新芽を加え、容器に入れて密封し、自然発酵させる工程とを含むものであり、この自然発酵は、密閉した容器を直射日光の当たる場所で初冬頃まで行うことが好ましい。
【００２０】
また、本発明は、松科植物の新芽と、水と、糖質とを混合し、自然発酵させて得られるアナフィラキシー疾患症状改善のための健康食品をも意図するものであり、この健康食品（健康飲料を含む）は松葉の新芽と、水と、砂糖とを混合し、自然発酵させて得られたものであることが好ましい。
【００２１】
さらに、本発明は、上記の自然発酵を行った発酵産物、すなわち本発明のアナフィラキシー疾患治療剤から分離された酵母を用いた任意の発酵生成物のアナフィラキシー疾患治療の薬剤或いは健康食品の製造における使用に関する。当該酵母は、本出願人による国際特許出願（国際公開ＷＯ　０１／９５９２２号）に開示した酵母であり、平成１３年（２００１）３月１２日に、独立行政法人産業技術総合研究所　特許生物寄託センター、茨城県つくば市東１丁目１番地１　中央第６（旧名称：経済産業省技術総合研究所生命工学工業技術研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｓｕｔｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、茨城県つくば市東１−１−３、２００１月４月１日をもって、名称が変更されている）に、ハルイサンＡ−３として寄託され、受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ−７４９９で特定される酵母である。また、この寄託された酵母と同等の菌体的性質を有する一連の酵母の使用も本発明に含まれるものである。なお、ここで、アナフィラキシー疾患症状改善のための健康食品（健康飲料を含む）とは、体質を改善し、健康を維持すること、特にアナフィラキシー疾患の症状を改善することを目的に使用するサプリメントなどの食品および飲料を意味するものである。
【００２２】
【発明の実施の形態】
本発明のアナフィラキシー疾患治療剤は、松科植物の新芽と、水と、糖質とを混合し、自然発酵させて得られるものである。
【００２３】
本発明で使用できる松科植物としては、いわゆるモミ（Ａｂｉｅｓ　ｆｉｒｍａ　Ｓｉｅｂ．　＆　Ｚｕｃｃ．）、ウラジオモミ（Ａｂｉｅｓ　ｈｏｍｏｌｅｐｉｓ　Ｓｉｅｂ．　＆　Ｚｕｃｃ．）、オオシラビソ（Ａｂｉｅｓ　ｍａｒｉｅｓｉｉ　Ｍ．Ｔ．　Ｍａｓｔ．）、アオドドマツ（Ａｂｉｅｓ　ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｉｓ　（Ｆｒｉｅｄｒ．　Ｓｃｈｍｉｄｔ）　Ｍ．Ｔ．　Ｍａｓｔ．　ｖａｒ　ｍａｒｉｅ）、トドマツ（Ａｂｉｅｓ　ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｉｓ　（Ｆｒｉｅｄｒ．　Ｓｃｈｍｉｄｔ）　Ｍ．Ｔ．　Ｍａｓｔ．）、シラベ（Ａｂｉｅｓ　ｖｅｉｔｃｈｉｉ　Ｌｉｎｄｌ．）、ヒマラヤスギ（Ｃｅｄｒｕｓ　ｄｅｏｄａｒａ　（Ｒｏｘｂ．　ｅｘ　Ｄ．　Ｄｏｎ）　Ｇ．　Ｄｏｎ）、グイマツ（Ｌａｒｉｘ　ｇｍｅｌｉｎｉ（Ｒｕｐｒ．）　Ｋｕｚｅｎｅｖａ）、カラマツ（Ｌａｒｉｘ　ｋａｅｍｐｆｅｒｉ（Ｌａｍｂ．）　Ｃａｒｒｉｅｒｅ）、ドイツトウヒ（Ｐｉｃｅａ　ａｂｉｅｓ　（Ｌ．）　Ｋａｒｓｔ．）、アカエゾマツ（Ｐｉｃｅａ　ｇｌｅｈｎｉｉ　（Ｆｒｉｅｄｒ．　Ｓｃｈｍｉｄｔ）　Ｍ．Ｔ．　Ｍａｓｔｅｒｓ）、トウヒ（Ｐｉｃｅａ　ｊｅｚｏｅｎｓｉｓ　（Ｓｉｅｂ．　＆　Ｚｕｃｃ．）　Ｃａｒｒｉｅｒｅ　ｖａｒ．　ｈｏｎｄｏｅｎｓｉｓ）、エゾマツ（Ｐｉｃｅａ　ｊｅｚｏｅｎｓｉｓ　（Ｓｉｅｂ．　＆　Ｚｕｃｃ．）　Ｃａｒｒｉｅｒｅ）、ヤツガタケトウヒ（Ｐｉｃｅａ　ｋｏｙａｍａｅ　Ｓｈｉｒａｓａｗａ）、ハリモミ（Ｐｉｃｅａ　ｐｏｌｉｔａ　（Ｓｉｅｂ．　＆　Ｚｕｃｃ．）　Ｃａｒｒｉｅｒｅ）、アイグロマツ（Ｐｉｎｕｓ　ｘ　ｄｅｎｓｉ−ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ　Ｕｙｅｋｉ）、アカマツ（Ｐｉｎｕｓ　ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ　Ｓｉｅｂ．　＆　Ｚｕｃｃ．）、タギョウショウ（Ｐｉｎｕｓ　ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａ　Ｓｉｅｂ．　＆　Ｚｕｃｃ．　ｃｖ．　Ｕｍｂｒａｃｕｌｉｆｅｒａ）、チョウセンゴヨウ（Ｐｉｎｕｓ　ｋｏｒａｉｅｎｓｉｓ　Ｓｉｅｂ．＆　Ｚｕｃｃ．）、ダイオウショウ（Ｐｉｎｕｓ　ｐａｌｕｓｔｒｉｓ　Ｍｉｌｌ．）、ヒメコマツ（Ｐｉｎｕｓ　ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ　Ｓｉｅｂ．　＆　Ｚｕｃｃ．　ｖａｒ．　ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）、キタゴヨウ（Ｐｉｎｕｓ　ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ　Ｓｉｅｂ．　＆　Ｚｕｃｃ．　Ｖａｒ．　ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌａ　（Ｍａｙｒ）Ｈｅｎｒｙ）、ハイマツ（Ｐｉｎｕｓ　ｐｕｍｉｌａ　（Ｐａｌｌ．）　Ｒｅｇｅｌ）、リギダマツ（Ｐｉｎｕｓ　ｒｉｇｉｄａ　Ｍｉｌｌ．）、ストローブマツ（Ｐｉｎｕｓ　ｓｔｒｏｂｕｓ　Ｌ．）、ヨーロッパアカマツ（Ｐｉｎｕｓ　ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ　Ｌ．）、テーダマツ（Ｐｉｎｕｓｔｅａｄａ　Ｌ．）、クロマツ（Ｐｉｎｕｓ　ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ　Ｐａｒｌ．）、トガサワラ（Ｐｓｅｕｄｏｔｓｕｇａｊａｐｏｎｉｃａ　（Ｓｈｉｒａｓ．）　Ｂｅｉｓｓｎ．）、コメツガ（Ｔｓｕｇａ　ｄｉｖｅｒｓｉｆｏｌｉａ　（Ｍａｘｉｍ．）　Ｍ．Ｔ．　Ｍａｓｔ．）、ツガ（Ｔｓｕｇａ　ｓｉｅｂｏｌｄｉｉ　Ｃａｒｒｉｅｒｅ）などが例示される。この中でも松属の植物である、アイグロマツ、アカマツ、タギョウショウ、チョウセンゴヨウ、ダイオウショウ、ヒメコマツ、キタゴヨウ、ハイマツ、リギダマツ、ストローブマツ、ヨーロッパアカマツ、テーダマツ、クロマツが好ましく、特に、アカマツ、ダギョウショウ、チョウセンゴヨウ、ダイオウショウ、ハイマツ、クロマツなどは一般に育成されている松であり、入手の容易さの面からも好ましいものである。
【００２４】
また、本発明の使用する糖質としては、ショ糖、転化糖、麦芽糖のようなものが例示される。これらのうちショ糖が入手の容易さの点で好ましいが、使用するショ糖としては、白砂糖、黒砂糖、三温糖、甜菜糖、きび砂糖などいずれの砂糖でも使用できるが、白砂糖が好ましい。
【００２５】
使用する水は、予め滅菌したものを用い、雑菌の繁殖を防止することが好ましく、滅菌方法としては、一般に行われる公知の方法が使用でき、例えば、煮沸などのような方法によって行うことができる。
【００２６】
本発明のアナフィラキシー疾患治療剤は、上記の滅菌した水を用いて糖質を溶解した水溶液に、松科植物の新芽を加え、これを自然発酵することにより得られるが、水溶液に加える松科植物の新芽は、いかなる種類の松科植物から採取した新芽でもよいが、特に、松属の植物から採取した新芽が好ましい。採取の時期は、松科植物の花が咲きおわったときが好ましく、この時期に採取した新芽がアナフィラキシー疾患治療剤としての有効性がもっとも高く好ましいものである。松の場合でいえば、その土地の気候にもよるが、一般に４月上旬〜６月下旬頃に、枝の先端に赤みがかった雌花が咲き、新枝の周りに黄色の雄花が咲くので、これらの花が咲き終わった後に、枝の先端部にある新芽を採取して用いることが好ましい。
【００２７】
発酵に用いる原液の調製は、水約１リットルに対して、糖質を約０．５ｋｇの割合で溶解し、得られた溶液に対して松科植物の新芽約２５本の割合で添加する。この場合、糖質は完全に溶解している必要はなく、未溶解のまま液中に存在していても差し支えない。また、発酵させる原液には、上記の割合で松葉の新芽のような松科植物の新芽を含んでいればよく、新芽以外の葉や花を含むものであっても差し支えない。
【００２８】
自然発酵は、嫌気的な条件下で行い、１０〜７０℃、好ましくは２０〜６０℃で、３〜９ヶ月、好ましくは４〜８ヶ月程度静置して発酵を行う。嫌気的な条件としては、例えば、密閉した遮光容器に充填するなどの方法が採用され、この密閉した容器を直射日光の当たる場所に、初冬頃まで載置することにより達成される。自然発酵の期間が経過した後、容器を開封して、松科植物の新芽などの固形物を取り除くことにより、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤が得られる。なお、上記の初冬頃は、新芽の採取時期、すなわち仕込み時期との兼ね合いであり、製造する地方で開花時期が４月上旬から５月初旬で、花が咲き終わり新芽を採取する時期を５月中旬から６月初旬とすれば、発酵終了の時期が初冬（１１月中旬）となるが、あくまでも１つの目安であり、任意に変更することができる。
【００２９】
本発明のアナフィラキシー疾患治療剤は、下記の試験例で実証されるように、アナフィラキシー疾患のみならずアレルギー疾患にも関与する肥満細胞や好塩基球を含む細胞の脱顆粒時の化学伝達物質によるアレルギー反応をも広く抑制するので、アナフィラキシー疾患にも特に有効であるが、当該作用機序から考慮すると、これら以外にも、喘息やアトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、急性蕁麻疹、花粉症、食物アレルギーなどのアレルギーＩ型の疾患の改善、治療にも有効であると考えられる。
【００３０】
本発明のアナフィラキシー疾患治療剤は、自然発酵により得られた発酵産物をそのまま用いるものであるが、これに、甘味料や着香剤などを添加し、飲みやすいものに仕立てもよく、長期保存などのため、保存剤などの各種添加剤を添加してもよい。
【００３１】
本発明のアナフィラキシー疾患治療剤を適用するには、一般に大人の場合、１日に２〜３回、各々、約３０〜５０ミリリットルを服用させる。また、小人の場合には、大人の半量を服用させる。また、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤は、毒性もなくまた変異原性もなく安全なものであるので、前記の服用量を超える量を用いても何ら問題はない。
【００３２】
本発明の自然発酵により得られた発酵産物は、アナフィラキシー疾患治療剤としてばかりでなく健康食品または健康飲料としても使用することができる。健康食品または健康飲料とは、治療を主目的とするものではないが、体質を改善し、健康状態を維持するために使用するものである。したがって、本発明のアナフィラキシー疾患症状改善のための健康食品（健康飲料も含む）は、アナフィラキシー疾患の症状を改善する、すなわちそれらの症状を軽減し、或いは予防するためにも用いることができる。この場合、消費者の嗜好を考慮し、上記の甘味料や着香剤などを添加し、食しやすく、飲みやすく、かつ嗜好に適合するものに仕上げることが好ましい。
【００３３】
さらに、本発明は、上記の発酵産物から分離された酵母を用いて発酵させた生成物や当該生成物からの抽出物を使用するアナフィラキシー治療剤およびアナフィラキシー疾患症状改善のための健康食品（健康飲料を含む）の製造方法を提供する。
【００３４】
上記酵母の分離に関しては、国際公開ＷＯ　０１／９５９２２号パンフレットにも詳述されている。具体的に、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤である発酵産物を用いて、ＧＰＬＰ寒天平板培養法により平板上に培養し、培養平板上に優勢に生育している集落を釣菌し、分離酵母を得た。分離酵母について形態観察および性状試験を行い、文献（Ｋｕｒｔｚｍａｎ，　Ｃ．　Ｐ．　ｅｔ　ａｌ．，　「Ｔｈｅ　ｙｅａｓｔｓ，　Ａ　Ｔａｘｏｎｏｍｉｃ　Ｓｔｕｄｙ」４版（１９９８）、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｂ．Ｖ．；Ｂａｒｎｅｔｔ，　Ｊ．　Ａ．　ｅｔ　ａｌ．，　「Ｙｅａｓｔｓ：Ｃｈａｒａｃｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ」３版（２０００）、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ、これらの文献は引用により本願明細書の一部として組み込まれる）を参考にして同定した。なお、発酵産物中の酵母数は１．４×１０５／ｇであった。分離酵母の性状試験結果を表１に、分離酵母の子嚢胞子の一例を図１に示した。
【００３５】
【表１】
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以上の結果によれば、分離酵母は形態上および性状上チゴサッカロミセス　ビスポラス（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｂｉｓｐｏｒｕｓ）と同定される。このチゴサッカロミセス　ビスポラスは子嚢菌酵母の一属で、それぞれ独立した細胞間で接合し、球形〜楕円形の子嚢胞子を１〜４個形成するものである。また、チゴサッカロミセスビスポラスは、耐浸透圧性の酵母で発酵食品、清涼飲料水などから分離されるものである。
【００３６】
一方、分離された酵母に対する、対象株とのＤＮＡ相同性試験を行ったところ、次のような結果が得られた。すなわち、江崎孝行ら、日本細菌学会誌、４５巻、８５１頁（１９９０）、および高橋正明ら、東京農業大学アイソトープセンター研究報告、７号、６９頁（１９９３）（これらの文献は引用により本願明細書の一部として組み込まれる）に従い、対象株としてチゴサッカロミセス　ビスポラス　ＩＦＯ　１１３１およびチゴサッカロミセス　バイリー　ＩＦＯ　１０９８（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｂａｉｌｉｉ　ＩＦＯ　１０９８）を用いて、得られた酵母とのＤＮＡ相同性試験を、マイクロプレートを用いたフォトビオチン標識法により、ＤＮＡ−ＤＮＡハイブリダイゼーション試験を行った。なお、ＤＮＡの調製は、Ｊａｈｎｋｅ，　Ｋ．−Ｄ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｔｒａｎｓ．　Ｂｒ．　ｍｙｃｏｌ．　Ｓｏｃ．，　Ｖｏｌ，８７，　ｐｐ．１７５−１９１　（１９８６）（この文献は引用により本願明細書の一部として組み込まれる）に従い調製した。結果を表２に示した。
【００３７】
【表２】
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上記の対象株との相同性試験の結果によれば、本発明の酵母は、形態上および性状上チゴサッカロミセス　ビスポラスと同定されるが、ＤＮＡの配列自体はチゴサッカロミセス　ビスポラスよりもむしろチゴサッカロミセス　バイリーに近いものであり、いずれの対象株とも相違する新種の株であることが理解される。出願人は、このチゴサッカロミセス属に属すると推定される新種の酵母を「ハルイサンＡ−３」と命名した。なお、この新種の酵母「ハルイサンＡ−３」が新種の株ではなく新種の種あるいは属であるか否かは、現時点では明確ではない。しかしながら、出願人は、分離され「ハルイサンＡ−３」と命名された新種の酵母を、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約に従い、２００１年３月１２日に、受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ−７４９９として、新名称：独立行政法人産業技術総合研究所　特許生物寄託センター、日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１　中央第６（旧名称：経済産業省技術総合研究所生命工学工業技術研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｓｕｔｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、日本国茨城県つくば市東１丁目１番地３）に寄託した。なお、上記寄託機関は、２００１年４月１日をもって独立行政法人化され、独立行政法人産業技術総合研究所と改編されたことにより、２００１年４月１日に名称が変更されたものである。
【００３８】
本発明の分離された新種の酵母は、松科植物の新芽とともにアナフィラキシー疾患治療剤としての有効性に大きく寄与しているものと考えられ、極めて有用な酵母である。
【００３９】
次に、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤を、例をあげて詳しく説明するが、本発明は以下の例示により限定されるものではない。
【００４０】
【実施例】
実施例１：アナフィラキシー治療剤の製造例
本発明のアナフィラキシー疾患の治療剤は、次のようにして製造することができる。
【００４１】
クロマツ、アカマツ、カラマツの松葉の新芽を、松に花が咲き終わった頃（福島県では、５月中旬〜６月初旬）に、採取し、採取した松葉の新芽をよく水洗する。熱湯に、白砂糖を加えて溶解させ、室温付近まで冷ました砂糖水と水洗した松葉の新芽とを容器、たとえば、プラスチック製容器にいれて、密封して、初冬頃（福島県では、１１月中旬頃）まで、直射日光の当たる場所に載置することにより、自然発酵させることにより製造する。初冬頃に容器を開封し、松葉を取り除くと、本発明のアナフィラキシー疾患の治療剤が得られる。
【００４２】
使用した砂糖水は、水約２リットルに対して、約１Ｋｇの白砂糖の割合で用い、松葉は、約５０本の割合で用いた。
【００４３】
上記のようにして、約２リットルの水に１Ｋｇの白砂糖、約５０本の松葉の新芽を用いて製造したところ、約１．２リットル（仕込んだ砂糖水の約６０％）の白色の濁りを有する液状のアナフィラキシー疾患治療剤が得られた。この治療剤について、含有成分を分析すると、表３に示すような結果が得られた。
【００４４】
【表３】
2004083555.tif 000006
この分析は、主に食品一般に関する上記検査項目についてのみに行われたものであり、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤には、これら以外の成分が存在している可能性がある。したがって、どの成分がアナフィラキシー疾患の治療剤として特に有効であるかは、特定することができないが、アナフィラキシー疾患治療剤としての薬効を奏するものであった。
【００４５】
次に、上記のようにして製造した複数の本発明のアナフィラキシー疾患治療剤について、治療剤中に含有されるカビ数、酵母数、一般細菌数（生菌数）について調べた。カビ数および酵母数については、ＧＰＬＰ寒天平板培養法で行い、一般細菌数（生菌数）については、抗真菌剤添加ＳＣＤＬＰ寒天平板培養法で、酒石酸を用いて培地のｐＨを３．５に調整したものと、培地を調整しないものとの２とおりの試験を行い測定した。得られた結果を表４に示した。
【００４６】
【表４】
2004083555.tif 000007
上記の結果によれば、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤中には、カビの発生は認められず、また一般細菌（生菌数）も極めて少ないことがわかる。また、酵母は発酵産物のロットにより若干のバラツキはあるが、発酵産物中には１０２〜１０５個／ｇのオーダーで酵母が存在していることがわかる。この発酵産物中に存在する酵母が寄託した新種の酵母に該当するものである。
【００４７】
試験例１：アナフィラキシー治療剤の経口毒性
次に、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤の経口毒性について検討した。本発明のアナフィラキシー疾患治療剤の原液およびこれに蜂蜜（１０重量％）を加えたものを用いて、これらの被験物質をそれぞれ２０００ｍｇ／ｋｇ投与する群と、対照群として注射用水を投与する群（投与量０ｍｇ／ｋｇ）とについて、１群雌雄各５例のＳＤ系［Ｃｒｊ：ＣＤ（ＳＤ）ＩＧＳ］ラットに経口胃ゾンデを取り付けたディスポーザブルシリンジ（１ｍＬ容量）を用いて強制経口投与し、その後１５日間（投与日を含む）の観察期間を設け、毒性徴候および概略の致死量について検討した。
【００４８】
試験期間を通じて対照群を含む、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤およびこれに蜂蜜を加えたものの２０００ｍｇ／ｋｇ投与群の雌雄に死亡は認められなかった。また、一般状態、体重および剖検においても被験物質投与に起因する変化は認められなかった。以上の結果から、本試験条件下における本発明のアナフィラキシー疾患治療剤の概略の致死量は雌雄ともに２０００ｍｇ／ｋｇ以上であると結論された。
【００４９】
試験例２：アナフィラキシー治療剤の変異原性
次に、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤の変異原性について検討した。本発明のアナフィラキシー疾患治療剤の変異原性について、Ａｍｅｓらの変法（Ｍａｒｏｎ，Ｄ．Ｍ．　ｅｔ　ａｌ．，「Ｒｅｖｉｓｅｄ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｍｕｔａｇｅｎｉｃｉｔｙ　ｔｅｓｔ」、Ｍｕｔａｔｉｏｎ　Ｒｅｓ．，　Ｖｏｌ．１１３，　ｐｐ．１７３‐２１５　（１９８３）、この文献は引用により本願明細書の一部として組み込まれる）に準拠したプレート法を用い、ネズミチフス菌のヒスチジン要求性であるＴＡ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１５３５、ＴＡ１５３７株および大腸菌のトリプトファン要求性であるＷＰ２ｕｖｒＡ株にそれぞれ処置し、その変異原性を代謝活性化による場合とよらない場合との双方で検討した。
【００５０】
試験の用量としては、３１２．５、６２５、１２５０、２５００および５０００μｇ／ｐｌａｔｅで行った。この結果、各試験菌株の被験物質群の復帰変異コロニー数は、代謝活性化系の有無にかかわらず、用量依存性ならびに陰性対照群の２倍以上の増加を認めなかった。また、生育阻害および被験物質の沈澱は認められなかった。結果を図２および３に示した。図２は、塩基対置換型菌株（ＴＡ１００：□、ＴＡ１５３５：○、ＷＰ２ｕｖｒＡ：△）を用いた場合の結果が示してある。図中、Ａは代謝活性化によらない場合であり、Ｂは代謝活性化による場合で、Ｓ９ｍｉｘが添加された場合の結果がそれぞれ示してある。図３は、フレームシフト型菌株（ＴＡ９８：□、ＴＡ１５３７：○）を用いた場合の結果が示してある。図中、Ａは代謝活性化によらない場合であり、Ｂは代謝活性化による場合で、Ｓ９ｍｉｘが添加された場合の結果がそれぞれ示してある。なお、陰性対照物質としては、被験物質の調製時に溶媒として用いた注射用蒸留水を使用した。また、陽性対照物質としては、２−（２−Ｆｕｒｙｌ）−３−（５−ｎｉｔｒｏ−２−ｆｕｒｙｌ）ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ（ＡＦ−２）、２−Ａｍｉｎｏａｎｔｈｒａｃｅｎｅ（２−ＡＡ）、Ｓｏｄｉｕｍ　ａｚｉｄｅ（ＳＡ）、および、９−Ａｍｉｎｏａｃｒｉｄｉｎｅ（９−ＡＡ）の各化合物を使用した。ＡＦ−２、９ＡＡ、２−ＡＡはＤＭＳＯで、ＳＡは注射用蒸留水でそれぞれ溶解し、菌株および代謝活性化によらない場合、代謝活性化による場合に応じて、それぞれ使用した。
【００５１】
以上の結果から、この試験条件下における本発明のアナフィラキシー疾患治療剤の変異原性は陰性と判断された。
【００５２】
試験例３：アナフィラキシー治療剤の薬理作用
ラットの背中にａｎｔｉ−ＤＮＰ−ＩｇＥを皮内感作した後、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤を経口投与し、投与後、抗原（ＤＮＰ−ＢＳＡ）とエバンスブルーを尾静脈より静注し、ＰＣＡ反応を行なわせることで、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤の薬理作用を確認した。
【００５３】
すなわち、日本チャールズリバー株式会社より購入した１２週齢のＷｉｓｔｅｒ系雄性ラット６匹を用い、当該ラットの背中に抗原特異的ＩｇＥ抗体としてモノクローナル抗ジニトロフェニル−ＩｇＥ抗体（ａｎｔｉ−ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体）ｃｌｏｎｅ：ＳＰＥ−７（Ｓｉｇｍａ社製、カタログ番号Ｄ−８４０６、ロット番号１００Ｋ−４８５０）の希釈溶液各１００μｌを皮内感作した。皮内感作後、実施例１のようにして得られた本発明のアナフィラキシー疾患治療剤を４日間、１ｍｌ／ｄａｙの用量で経口投与した。なお、対照としては注射用蒸留水のみを経口投与した（表５参照）。
【００５４】
【表５】
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上記被検物質の投与後、ＰＣＡ反応誘導物質としてジニトロフェニル結合ウシアルブミン（ＤＮＰ−ＢＳＡ）およびエバンスブルーをラットの尾静脈より静注した。
【００５５】
結果の判定は、ｅｎｄ　ｐｏｉｎｔ法、すなわち、ａｎｔｉ−ＤＮＰ−ＩｇＥの最終希釈倍数でのＰＣＡ反応の成果に基づいて行い、上記ＰＣＡ反応において明らかな皮内反応が認められたものを（＋）、不明瞭なものを（±）、明らかに皮内反応が認められないものを（−）とした。結果を表６に示し、また、当該皮内反応の例を図４に示した。
【００５６】
【表６】
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さらに、上記ａｎｔｉ−ＤＮＰ−ＩｇＥの皮内感作後、当該抗原（ＤＮＰ−ＢＳＡ）により出現（漏出）する皮内色素斑から色素（エバンスブルー）を抽出し、この色素量から反応局所の程度を定量した。結果を表７に示す。
【００５７】
【表７】
2004083555.tif 000010
上記のＰＣＡ反応試験から、対照のＣ群においてはＰＣＡ反応の最終希釈倍数が４０００倍であり、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤を経口投与したＤ群においては当該最終希釈倍数が２０００倍となり、顕著なＰＣＡ反応の抑制が認められた。また、ＰＣＡ反応色素抽出試験においても同様に、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤の効果が確認された。
【００５８】
なお、上記モノクローナル抗ジニトロフェニル−ＩｇＥ抗体の希釈倍率、２０００倍、４０００倍、８０００倍、１６０００倍、３２０００倍、および６４０００倍は、それぞれ、５００ｎｇ／１００μｌ、２５０ｎｇ／１００μｌ、１２５ｎｇ／１００μｌ、６３ｎｇ／１００μｌ、３１ｎｇ／１００μｌ、および１６ｎｇ／１００μｌに相当するものである。
【００５９】
これらの結果は、少なくとも本発明のアナフィラキシー疾患治療剤が、肥満細胞や好塩基球等を含むアナフィラキシー或いはアレルギー反応に関与する細胞の脱顆粒時の化学伝達物質放出以後の反応を抑制することを示す。
【００６０】
試験例４：アナフィラキシー治療剤の投与量の確認試験
アナフィラキシー治療剤の有効投与量を確認するため、試験例３と同様にＰＣＡ反応を用いて評価した。
【００６１】
すなわち、ラットの背中にマウスモノクローナル抗ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体（ＳＰＥ−７）を６ポイントにそれぞれ、上記のマウスモノクローナル抗ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体の希釈溶液各１００μｌで皮内感作し、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤を、４日間、０．１ｍｌ／ｄａｙ、０．５ｍｌ／ｄａｙおよび１．０ｍｌ／ｄａｙの用量で経口投与した。なお、対照としては注射用蒸留水のみを４日間、１．０ｍｌ／ｄａｙ経口投与した。投与終了後（翌日）、ＰＣＡ反応誘導物質としてジニトロフェニル結合ウシアルブミン（ＤＮＰ−ＢＳＡ）およびエバンスブルーをラットの尾静脈より静注し、３０分後にＩｇＥ感作部位のエバンスブルー色素の漏出をｅｎｄ　ｐｏｉｎｔ法により判定した。試験群の詳細および得られた結果を表８および表９に示した。
【００６２】
【表８】
2004083555.tif 000011
【表９】
2004083555.tif 000012
表９によると、対照群（Ｅ群）は８０００〜１６０００倍（６３〜１２５ｎｇ）までＰＣＡ反応を惹起している。一方、０．１ｍｌ／ｄａｙ投与のＦ群は４０００〜８０００倍（１２５〜２５０ｎｇ）までＰＣＡ反応が認められたのに対して、０．５ｍｌ／ｄａｙ投与のＧ群、１．０ｍｌ／ｄａｙ投与のＨ群はともに２０００〜４０００倍（２５０〜５００ｎｇ）のＩｇＥのＰＣＡ反応を抑制したことが認められた。また、対照群（Ｅ群）とＦ群との比較では、Ｆ群ではＰＣＡ反応の抑制は穏やかではあるが、その抑制効果が認められる。さらに、同様な結果をもたらしたＧ群およびＨ群では、それらの皮膚内の色素の漏出を観察すると、Ｈ群の方がＧ群に比べて、漏出色素量は軽減されていた。
【００６３】
試験に供したラットの体重はおおよそ２５０ｇであり、これからヒト（体重６０ｋｇ）に対する投与量を求めると、それぞれ、１日当り２４ｍｌ、１２０ｍｌおよび２４０ｍｌとなるが、以上の試験結果によれば、確実な治療効果を得るためには１２０ｍｌ／ｄａｙ以上の投与がより好ましいものであるということができる。
【００６４】
試験例５：アナフィラキシー治療剤の発酵期間と薬理作用
次に、本発明のアナフィラキシー治療剤の発酵期間が薬理作用に与える影響について検討した。
【００６５】
すなわち、発酵期間を１ヶ月、３ヶ月、および６ヶ月としたものについて、試験例３と同様にＰＣＡ反応によりその薬理効果を以下のようにして評価した。
【００６６】
ラットの背中にマウスモノクローナル抗ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体（ＳＰＥ−７）を６ポイントにそれぞれ、上記のマウスモノクローナル抗ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体の希釈溶液各１００μｌで皮内感作した。次いで、発酵期間を変えた本発明のアナフィラキシー疾患治療剤を、それぞれ４日間、１．０ｍｌ／ｄａｙの用量で経口投与した。なお、対照としては注射用蒸留水のみを４日間、１．０ｍｌ／ｄａｙ経口投与した。投与終了後（翌日）、ＰＣＡ反応誘導物質としてジニトロフェニル結合ウシアルブミン（ＤＮＰ−ＢＳＡ）およびエバンスブルーをラットの尾静脈より静注し、３０分後にＩｇＥ感作部位のエバンスブルー色素の漏出をｅｎｄ　ｐｏｉｎｔ法により判定した。試験群の詳細および得られた結果を表１０および表１１に示した。
【００６７】
【表１０】
2004083555.tif 000013
【表１１】
2004083555.tif 000014
表１１によると、対照群（Ｉ群）は８０００倍（１２５ｎｇ）までのＰＣＡ反応を惹起しているのに対し、発酵期間１ヶ月のもの（Ｊ群）は８０００倍（１２５ｎｇ）までのＩｇＥを抑制するもので対照群とほぼ同等であり、ＰＣＡ反応の抑制効果はほとんど認められなかった。しかし、発酵期間３ヶ月のもの、および発酵期間６ヶ月のものはいずれもＰＣＡ反応の抑制効果が認められ、発酵期間は３ヶ月以上、好ましくは６ヶ月以上であることがわかる。
【００６８】
【発明の効果】
本発明のアナフィラキシー疾患治療剤は、アナフィラキシーショックおよび食物依存性運動誘発アナフィラキシー等を含むアナフィラキシー疾患に代表されるアレルギーＩ型疾患を短期間の服用で、副作用もなく、完治させることができるものであり、したがって、本発明によれば、極めて有用なアナフィラキシー疾患治療剤並びにアナフィラキシー疾患症状改善のための健康食品および健康飲料が得られる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤（発酵産物）から分離された分離酵母の子嚢胞子の一例を示す顕微鏡写真（微分干渉、×２４００）である。培地は、マルトエキス寒天培地を使用した。
【図２】図２は、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤の変異原性のスクリーニング試験結果を示すグラフであり、塩基対置換型菌株（ＴＡ１００：□、ＴＡ１５３５：○、ＷＰ２ｕｖｒＡ：△）を用いた場合の結果が示してある。また、図中、Ａは代謝活性化によらない場合（−Ｓ９）であり、Ｂは代謝活性化による場合（＋Ｓ９）の結果がそれぞれ示してある。
【図３】図３は、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤の変異原性のスクリーニング試験結果を示すグラフであり、フレームシフト型菌株（ＴＡ９８：□、ＴＡ１５３７：○）を用いた場合の結果が示してある。また、図中、Ａは代謝活性化によらない場合（−Ｓ９）であり、Ｂは代謝活性化による場合（＋Ｓ９）の結果がそれぞれ示してある。
【図４】図４は、本発明のアナフィラキシー疾患治療剤投与ラットにおけるＰＣＡ反応の例を示す図面代用写真である。図中、Ｃ群は対照として注射用蒸留水を経口投与した群であり、Ｄ群は本発明のアナフィラキシー疾患治療剤を経口投与した群である。Ａｎｔｉ−ＤＮＰ−ＩｇＥ　ＳＰＥ−７力価とは、試験に用いた抗原特異的ＩｇＥ抗体の最終希釈倍率を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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