(57)【要約】　　　（修正有）【課題】天然に存在するシホスタチンの欠点を示さない、すなわち、合成により生産され得、増大した化学的および代謝的な安定性を示す新規シホスタチンアナログを提供する。【解決手段】スフィンゴミリナーゼ（ＳＭアーゼ）を阻害しうることを特徴とする、特定の構造を有する化合物またはその薬学的に適合性のある塩。具体的には例えば下記構造の化合物が例示される。2004083465.tif 000012【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
スフィンゴミリナーゼ（ＳＭアーゼ）を阻害しうることを特徴とする、式
【化１】
2004083465.tif 000011
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、同じであっても異なっていてもよく、水素原子、ＯＨ基、ＳＨ基、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、スルホン酸、チオアルキル、チオフェニル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールもしくはアシル残基またはハロゲン原子を表す；ならびにＲ４は、脂肪酸残基、Ｃ６　〜Ｃ２０のアルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基を表す）
により表される化合物またはその薬学的に適合性のある塩。
【請求項２】
スルホン酸残基がＯＳＯ２　ＣＨ３　である請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６が水素原子を表す請求項１または２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４がＣＯ（ＣＨ２　）１４ＣＨ３　である請求項１〜３いずれか記載の化合物。
【請求項５】
ヘキサデカン酸−［１−ヒドロキシメチル−２−（１−ヒドロキシ−２−オキソ−シクロヘキサ−３−エニル）エチル］アミド（１３）である請求項４記載の化合物。
【請求項６】
薬理学的に活性な量の請求項１〜５いずれか記載の化合物を、薬学的に適合性のある担体とともに含有してなる医薬調製物。
【請求項７】
セラミド濃度の上昇に関連する疾患の治療のための、またはセラミド濃度の低下が望まれる場合における請求項１〜５いずれか記載の化合物の使用。
【請求項８】
該疾患が、敗血症、リューマチ形態の疾患、アテローム性動脈硬化症、神経変性疾患、虚血、脳卒中、心筋梗塞またはＡＩＤＳである請求項７記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、Ｓアーゼのインヒビターとして作用することで際だち、ＨＩＶ感染、神経変性疾患、炎症疾患、虚血、心筋梗塞疾患、脳卒中等の多数の疾患と関連して、またはアテローム性動脈硬化症の症例において治療的に有用である、新規シホスタチンアナログに関する。
【０００２】
【従来の技術】
スフィンゴミエリン（Ｎ−アシル−スピンゴシル−ホスホリル−コリン、ＳＭ）は、生物学的膜および血漿リポタンパク質の両方に不可欠な成分であり、酵素による刺激の後に放出されるセラミド等のメッセンジャー物質（セカンドメッセンジャー）の形成（「スフィンゴミエリン経路）の重要なソースである。膜スフィンゴ脂質によるこのシグナル伝達は、近年集中的に研究されている。ＳＭは、スフィンゴミエリナーゼ（ＳＭアーゼ）と呼ばれるホスホリパーゼＣに類似する酵素のイソ型により代謝される。今日までに、ＳＭアーゼの５つのイソ型が知られている。ほとんどの哺乳動物細胞は、ＳＭ経路を介してシグナルを伝達することができ、シグナル伝達は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）レセプターまたはインターロイキン−１レセプター等のレセプター、およびＵ．Ｖ．光、酸化剤または放射線等のストレスの両方により活性化される。セラミドの形成は、今日では、増殖およびアポトーシス等の重要な細胞プロセスの導入に補助的な決定要因であると考えられている。セラミド形成とアポトーシス誘導との間のこの相関は、酸性（酸性ＳＭアーゼ；酸ＳＭアーゼ、ａＳＭアーゼ）においておよび／または中性環境（中性ＳＭアーゼ；ｎＳＭアーゼ）において至適ｐＨを示すそれぞれ特定のＳＭアーゼイソ型の活性化を含む。
【０００３】
アポトーシス、プログラムされた細胞死は、形態学的および生化学的な変化の不可逆的なシーケンスを進行する。これは、胚発生および成長の間のもはや必要とされなくなった細胞または修復できないほどに損傷した細胞の排除のための最も重要な調節機構である。種々の侵害性物質、例えば、ＴＮＦ／ＮＧＦ、熱ショック、細胞分裂停止因子、電離放射線、ウイルスまたは細菌により引き起こされる感染、種々の成長因子および細胞膜透過性セラミドの欠乏は、種々の細胞型においてアポトーシスを誘導する。「セカンドメッセンジャー」としてのセラミドは、広範な組織のプログラムされた細胞死に関与する。例えば、それは、最終的にアポトーシスをもたらすシグナル伝達を調節することに関与する。
【０００４】
セラミド誘導性細胞死は、敗血症、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病等の神経変性疾患、およびのＨＩＶウイルス等のレトロウイルスにより引き起こされる感染症等の広範な疾患において役割を演じ得、各症例でセラミド媒介性アポトーシスが仮定される。
【０００５】
細胞の代謝における変化とともにＨＩＶウイルス、タイプ１（ＨＩＶ−１）による感染は、Ｔ−リンパ球のサブ集団、特にＣＤ４＋　ヘルパー細胞の喪失をもたらす。細胞内酸化還元系、すなわち、酸化剤と抗酸化剤との間の平衡、ＨＩＶ感染およびリンパ球関連セラミドがＳＭ経路の活性化により相関するという事実に関してますます証拠が増えている。セラミドシグナル系はまた、ＨＩＶ発現が調節されるかアポトーシスが誘導される場合、ＨＩＶ感染に関連する。ＨＩＶ感染患者においてセラミドがシグナルカスケードを開始し、リンパ球のアポトーシスを生じることが示され得た。このことは、最終的に完全に著明な臨床像を導くＴ−リンパ球減少の主要な原因の１つと考えられる。これは、ａＳＭアーゼを活性化し、セラミド産生をもたらすＣＤ９５／ＡＰＯ−１／Ｆａｓ−レセプター／リガンド系によるアポトーシスの誘導により起こる。これが、Ｌ−カルニチンでの処置により阻害される場合、セラミド合成は、インビトロおよびインビボの両方で妨げられる。最終的な分析において、酸化還元系の状態およびセラミド代謝の進行が、感染の強度に関する予想を可能にするようである。
【０００６】
アポトーシスはまた、ニューロンの細胞死において主要な役割を果たす。酸化ストレスと神経変性疾患の発生との間に直接的な関係が存在すると想定される。酸化ストレスにより引き起こされうる神経変性疾患における細胞死は、ＳＭアーゼ活性化および生じるセラミド産生に関する細胞内シグナルにさかのぼることができる。酸化ストレスは、例えば、パーキンソン病およびアルツハイマー病を引き起こすことにおいて主要な役割を果たす。これらの疾患を誘導する機序は、まだ完全には明らかではないが、これらの疾患を有する人の発症した脳の中心は、おそらく増大したセラミド濃度により増大したアポトーシス率を有する。
【０００７】
ＳＭ／セラミドはまた、慢性または急性の炎症性疾患に関与する。敗血症および敗血症性ショックの結果の両方、ならびに多器官不全が重要な看護ユニットにおける死亡の主な原因に発展する。臨床、実験および疫学のデータに基づいて、敗血症は、今日では、器官の機能の重篤な欠損のサインを示す感染に対する炎症反応であると考えられている。ここで、ＴＮＦαは、敗血症性ショックの発生に対する中心の媒介物である。敗血症患者は、増大した血清ＴＮＦα濃度およびまた細胞関連セラミド濃度を有する。セラミド濃度とＴＮＦα濃度との間に直接的な関係が存在することが示され得た。ＴＮＦαは、細胞内セラミド形成を引き起こすので、ＴＮＦαにより誤って調節された炎症応答は、セラミド形成を減少させうるＳＭアーゼインヒビターを添加することにより血漿中のＴＮＦα濃度の増大にも拘わらずブロックされ得る。また、類似した質の観察が、敗血症を引き起こす他の細胞反応において行われた。アポトーシス率を制御することは可能であり、従ってスフィンゴ脂質代謝を妨害することにより敗血症患者を治療し、従ってセラミド産生を制御し、および／または減少させることが可能でありうる。
【０００８】
最後に、ＳＭ代謝およびＳＭアーゼはまた、アテローム発生において役割を果たす。（ホスホ）脂質−タンパク質複合体「低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）」は、血漿中のリン脂質および中性脂質にとって重要であり、酸化的および酵素的な修飾に非常に影響されやすい。ＬＤＬの酸化的または酵素的な修飾は、リポタンパク質の多数の化学的および生物物理学的な変化を含む。生じる修飾ＬＤＬ（ｍＬＤＬ）は、多くの活性成分を含有する生物学的に関連する前アテローム発生リポタンパク質であると考えられる。アポトーシスをもたらす細胞の自殺機構の活性化による細胞調節欠陥または内皮細胞の損傷は、アテローム硬化性プラークの発生の鍵となるステップであると考えられる。ｍＬＤＬがアテローム性動脈硬化症の症例において二重の役割を果たすことが見出された：低用量のｍＬＤＬは、アテローム性動脈硬化症の初期の段階の間、平滑筋細胞（ＳＭＣ）の細胞外マトリックスの増殖および合成に関与する。進んだ段階では、プラークに充分なｍＬＤＬがあれば、ＳＭＣにおいてアポトーシスを誘導し得る。
【０００９】
これは、プラークの不安定さおよび破裂をもたらし、従ってアテローム性動脈硬化症の臨床結果をもたらす。ｍＬＤＬは、ＳＭＣの増殖およびアポトーシスを誘導する。多くの機序が不明であるが、セラミドは、ｍｍＬＤＬにより引き起こされる細胞応答のエフェクターとして作用するようである。ｍｍＬＤＬは、ＬＤＬの酸化産物である（ｍｍＬＤＬ、最小に修飾されたＬＤＬ）。インターナリゼーションおよびリソソーム分解の後、かなりのＳＭ比率を含むｍｍＬＤＬは、セラミド形成のための基質を供給し、ＳＭ／セラミド経路を刺激する。ａＳＭアーゼ活性の減少は、ｍＬＤＬ媒介細胞死の調節の可能性を提供する。
【００１０】
その減少の中でもとりわけ、内因性セラミド産生の調節は、したがって新規（予防）治療アプローチの開発のための中心的な局面である。これは、例えば、膜結合中性スフィンゴミエリナーゼ（Ｎ−ＳＭアーゼ）を阻害することにより行われうる。スフィンゴミエリナーゼの中性インヒビターは公知である。それは、１９９７年に初めて１、２　にＴｒｉｃｈｏｐｅｚｉｚａ　ｍｏｌｌｉｓｓｉｍａ　から単離され得たシホスタチンである（図１）。しかし、このインヒビターは、化学的および代謝的に非常に不安定であるので、これまで薬物において使用することがほとんどできなかった。さらに、このインヒビターまたはそのアナログを合成により得る可能性はなかった。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明は、天然に存在するシホスタチンの欠点を示さない、すなわち、合成により生産され得、増大した化学的および代謝的な安定性を示す新規シホスタチンアナログを提供することを目的とする。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
この技術課題は、特許請求の範囲において特徴づけられた態様を提供をすることにより解決される。
【００１３】
すなわち、本発明の要旨は、
〔１〕　スフィンゴミリナーゼ（ＳＭアーゼ）を阻害しうることを特徴とする、式
【化２】
2004083465.tif 000002
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、同じであっても異なっていてもよく、水素原子、ＯＨ基、ＳＨ基、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、スルホン酸、チオアルキル、チオフェニル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールもしくはアシル残基またはハロゲン原子を表す；ならびにＲ４は、脂肪酸残基、Ｃ６　〜Ｃ２０のアルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基を表す）
により表される化合物またはその薬学的に適合性のある塩、
〔２〕　スルホン酸残基がＯＳＯ２　ＣＨ３　である前記〔１〕記載の化合物、
〔３〕　Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６が水素原子を表す前記〔１〕または〔２〕記載の化合物、
〔４〕　Ｒ４がＣＯ（ＣＨ２　）１４ＣＨ３　である前記〔１〕〜〔３〕いずれか記載の化合物、
〔５〕　ヘキサデカン酸−［１−ヒドロキシメチル−２−（１−ヒドロキシ−２−オキソ−シクロヘキサ−３−エニル）エチル］アミド（１３）である前記〔４〕記載の化合物、
〔６〕　薬理学的に活性な量の前記〔１〕〜〔５〕いずれか記載の化合物を、薬学的に適合性のある担体とともに含有してなる医薬調製物、
〔７〕　セラミド濃度の上昇に関連する疾患の治療のための、またはセラミド濃度の低下が望まれる場合における前記〔１〕〜〔５〕いずれか記載の化合物の使用、および
〔８〕　該疾患が、敗血症、リューマチ形態の疾患、アテローム性動脈硬化症、神経変性疾患、虚血、脳卒中、心筋梗塞またはＡＩＤＳである前記〔７〕記載の使用、
に関する。
【００１４】
【発明の実施の形態】
最初に、本発明は、シホスタチンの生物学的に活性なアナログの化学的合成を含む。活性物質は、記載される段階を変化させることにより最適化されうる。例えば、脂肪酸アミド側鎖の置換が、発酵方法と比較して可能である。確実な中性物質は、対応する位置に置換基としてポリエンを有する（トリエノイル断片）。前記誘導体は、現在の知識の状況に従って、酸化に対して感受性である。中性の物質はまた、酸において不安定であるが、本発明の化合物（中間段階および最終化合物）についてはあてはまらない。
【００１５】
驚くべきことに、以下に記載する本発明のシホスタチンアナログを使用する場合、天然のシホスタチンの欠点が回避される、すなわち、天然の化合物よりもシンプルな構造であるのでそれらはとりわけ増大した化学的および代謝的な安定性を有しうることが見出された。それゆえ、それらは、敗血症、リウマチ性形態の疾患、アテローム性動脈硬化症等の炎症性成分を有する疾患、ならびにアルツハイマー病、パーキンソン病、虚血、脳卒中、心筋梗塞およびＡＩＤＳ等の神経変性疾患および潜在的にアポトーシスに関連する疾患を治療するのに主に適している。
【００１６】
したがって、本発明は、スフィンゴミリナーゼ（Ｓｍアーゼ）を阻害しうることを特徴とする、化学式
【化３】
2004083465.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、同じであっても異なっていてもよく、水素原子、ＯＨ基、ＳＨ基、Ｏ−アルキル、Ｏ−アリール、Ｏ−アシル、スルホン酸、チオアルキル、チオフェニル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールもしくはアシル残基またはハロゲン原子を表す；ならびにＲ４は、脂肪酸残基、Ｃ６　〜Ｃ２０のアルキル、アルケニル、アルキニルまたはアリール基である）
により表される化合物またはその薬学的に適合性のある塩に関する。
【００１７】
本発明において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６残基に関する「アルキル残基」という用語は、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、２−メチルブチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、２−メチルペンチル、２，３−ジメチルブチル、ｎ−ヘプチル、２−メチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、３，３−ジメチルペンチル、３−エチルペンチル、ｎ−オクチル、２，２−ジメチルヘキシル、３，３−ジメチルヘキシルおよび３−メチル−３−エチルペンチル基を含む非分枝または分枝のＣ１　〜Ｃ１２アルキル鎖である。メチル、エチルまたはプロピルなどの短いアルキル鎖が好ましい。しかしながら、炭素数３〜１２のシクロアルキル残基もまた好適である。その例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペプチル、シクロオクチル、シクロノニルまたはシクロデシル基である。シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが好ましい。「Ｏ−アルキル」または「チオアルキル」に対して同様のことが相応じて当てはまる。
【００１８】
残基Ｒ４に関して、アルキル基は炭素数が６〜２０である。ここで、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基、３−メチル−３−エチルヘキシル基、ｎ−ウンデシル基、ｎ−ドデシル基ならびにシクロオクチル基、シクロノニル基またはシクロデシル基などの炭素数が８より多い基が好ましい。
【００１９】
本発明において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６残基に関する「アルケニル残基」という用語は、非分枝または分枝のＣ２　〜Ｃ２０アルケニル残基を表す。その例は、ビニル、プロペニル、イソプロペニル、アリル、２−メチルアリル、ブテニルもしくはイソブテニル、ヘキセニルもしくはイソヘキエニル、ヘプテニルもしくはイソヘプテニル、オクテニルもしくはイソオクテニル基である。ビニル、プロペニルおよびイソプロペニルが好ましい。炭素数が４〜３０のシクロアルケニル残基もまた好適である。その例は、シクロブテニル基、シクロペンテニルまたはシクロヘキセニル基、シクロヘプテニル基、シクロオクテニル、シクロノネニル基またはシクロデセニル基である。シクロブテニル、シクロペンテニルまたはシクロヘキセニルが好ましい。
【００２０】
残基Ｒ４に関して、アルケニル基は炭素数が６〜２０である。直鎖、分枝鎖または環式でありうる炭素数が８より多いアルケニル基が好ましい。同じことがアルキニル基に対して同様にあてはまる。
【００２１】
多環式のアルキルまたはアルケニル残基は、ノルボルナン、アダマンタンまたはベンズバレン含む。
【００２２】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６残基はまた、任意の単環式または多環式Ｃ６　〜Ｃ２０アリール残基から選択されうる。その例は、炭素環式単環式残基、例えば、フェニル基、ヘテロ環式単環式残基、例えば、チエニル基、フリル基、ピラニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、ピリジル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピラジニル基、チアゾリル基、オキサゾリル基、フラザニル基、ピロリニル基、イミダゾリニル基、ピラゾリニル基、チアゾリニル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基ならびにこれらの基を含みうる１つまたはそれ以上のヘテロ原子の位置異性体、炭素縮合環からなる残基、例えば、ナフチル基またはフェナントレニル基、縮合ヘテロ環からなる残基、例えば、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリルである。アリール残基は置換されていなくても置換されていてもよい。好適な置換基は、例えば：
−　メチル、エチル、プロピルなどのＣ１　〜Ｃ４　アルキル、
−　トリフルオロメチル、トリフルオロブチル、ペンタフルオロプロピル、ペンタフルオロブチル、ペンタフルオロペンチル、ヘプタフルオロブチルもしくはノナフルオロブチル基、または２−クロロエチルなどの置換されたアルキル残基
−　アセトキシなどのアクルオキシまたは式：
−Ｏ−ＣＯ−（ＣＨ２　）ｎ　ＣＨ２　Ｈ（ｎ＝１〜５）
の残基、
−　メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、ブトキシなどのアルコキシ、
−　メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオなどのアルキルチオ、
−　カルバモイル、
−　ビニル、プロペニルなどのアルケニル、
−　エチニル、プロピニルなどのアルキニル、ならびに
−　ヒドロキシ
−　カルボキシ
−　フッ素、塩素、臭素、ヨウ素などのハロゲン
−　ＣＯＮＨ２　
−　ＣＯＮＨ−アルキル
−　ＣＯＮ（アルキル）２　
−　ニトロ、
−　アミノ
−　Ｃ１　〜Ｃ４　アルキルアミノ
である。
【００２３】
本発明において、「アシル残基」という用語は、例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリルまたはベンゾイルを表す。相応じて、アシル残基はまた、Ｏ−アシル残基として利用可能である。
【００２４】
本発明において、「脂肪酸残基」という用語は、ほとんど排他的に非分枝炭素鎖を有する脂肪族飽和カルボン酸を表す。脂肪酸残基は好ましくは炭素数が６〜３０であり、脂肪酸残基は、好ましくはＣＯ（ＣＨ２　）１４ＣＨ３　である。
【００２５】
「ハロゲン原子」という用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を表し、塩素および臭素が好ましい。
【００２６】
本発明の化合物の好ましい態様では、スルホン酸残基はＯＳＯ２　ＣＨ３　である。
【００２７】
本発明の化合物の別の好ましい態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６残基の各々が水素原子である。
【００２８】
Ｒ４がＣＯ（ＣＨ２　）１４ＣＨ３　である本発明の化合物がさらにより好ましく、ヘキサデカン酸−［１−ヒドロキシメチル−２−（１−ヒドロキシ−２−オキソ−シクロヘキサ−３−エニル）エチル］アミド（１３）である化合物が最も好ましい。
【００２９】
「薬学的に適合性のある塩」という用語は、塩酸塩、臭素酸塩、硫酸塩、過塩素酸塩、硝酸塩およびリン酸塩などの無機酸塩、ならびに例えば、酢酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩およびフマル酸塩などの有機酸塩を包含する。
【００３０】
本発明の化合物は、以下の実施例１〜３に記載の方法を用いて作製することができる。化合物の医薬としての適性、すなわち膜結合中性スフィンゴミリナーゼ（ＳＭアーゼ）の阻害または細胞内セラミド濃度への影響を、公知の方法により調べることができる。例えば、文献１、２、８、９　を参照のこと。
【００３１】
本発明はまた、薬理学的に活性な量の本発明の化合物を、薬学的に適合性のある担体とともに含有してなる医薬調製物に関する。好適な担体およびかかる医薬調製物の製剤化は、当業者に公知である。好適な担体には、例えば、通常のリン酸緩衝塩溶液、水、エマルジョン、例えば油／水エマルジョン、湿潤剤、滅菌溶液などが含まれる。本発明の医薬調製物は、注射溶液、錠剤、軟膏、懸濁液、エマルジョン、座剤などの形態で利用可能である。また、デポット（マイクロカプセル、亜鉛塩、リポソームなど）の形態で投与されうる。医薬調製物の投与の種類は、とりわけ、活性物質が利用可能な形態に依存し、経口であっても非経口であってもよい。非経口投与の方法には、局所、動脈内、筋肉内、骨髄内、鞘内、室内、静脈内、腹腔内、経皮または経粘膜（鼻腔、膣、直腸、舌下）投与が含まれる。投与はまた、マイクロインジェクションにより行いうる。好適な用量は、担当医師により決定され、種々の要因、例えば患者の年齢、性別および体重、ＡＩＤＳなどの疾患の種類および段階、投与の種類などに依存する。
【００３２】
最後に、本発明はまた、セラミド濃度の上昇に関連する疾患の治療のための、またはセラミド濃度の低下が望まれる場合における本発明の化合物の使用に関する。該疾患は、好ましくは、敗血症、リューマチ形態の疾患、アテローム性動脈硬化症、アルツハイマー病またはパーキンソン病などの神経変性疾患、虚血、脳卒中、心筋梗塞またはＡＩＤＳである。本発明の化合物の抗アポトーシス活性を図３に示す。
【００３３】
以下の実施例により本発明を説明する。
【００３４】
【実施例】
実施例１
シクロヘキサノンユニットの合成
シホスタチンのシクロヘキサノンユニットの単純化構造アナログを製造した。シクロヘキサノンユニット（式中、Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｒ５＝Ｒ６＝Ｈ、およびＲ４＝ＣＯ（ＣＨ２　）１４ＣＨ３　）の合成を例として記載する。
【００３５】
該方法の以下の説明は、図２を参照する。
【００３６】
シクロヘキサノンおよび／またはそのリチウムエノラートおよびアルデヒド３を高収率でアルコール４に変換した（図２ａ）。このアルコールのメシチル化および続くＤＢＵを用いる脱離３　により、α，β−不飽和ケトン６を得た。このケトンを、９６％エタノール中の活性化炭素上のパラジウムを用いて水素化し、ケトン７を得た。
【００３７】
アルデヒド３にシクロヘキサノンを結合する際、優先事項における変化のために、アミノ置換Ｃ原子上で必要な（Ｓ）−立体化学を得た。（Ｌ−セリンに由来するアルデヒド３ｂに基づき、（Ｒ）−配置化合物４ｂを得た。）
【００３８】
置換したシクロヘキサノン７のシリルエノールエーテル８への変換（図２ｂ）および続くその不斉水酸化の結果として、（Ｓ）−立体化学のこの置換シクロヘキサノンＣ原子を得ることがまた可能であった。対応する（Ｒ）−異性体が同様に入手できたので、全部の異性体（ＲＳ、ＲＲ、ＳＲ、ＳＳ）を作製しえた。ヘキサメチルジシラザンおよびトリメチルシリルイオダイドを用いて、熱力学的により安定なエノールエーテル８を速度論的産物９と比較して８５：１５４　の比（Ｈ１　−ＮＭＲデータにより測定した）で得ることができた。エノールエーテル８および９の両方を、クロマトグラフィーにより分離した。
【００３９】
シリルエノールエーテル８の不斉水酸化によりα−ヒドロキシケトン１０を得ることは、塩基環境下で酸化オスミウム（ＶＩＩＩ）で富化されたＡＤ−混合−βを用いるＳｈａｒｐｌｅｓｓ５　により記載された方法により可能であった（図２ｃ）。天然物質により測定されたＮＭＲデータ１　との比較により、正しい（Ｓ）−立体化学を検出することができた。実施されたＮＯＥ実験もまた、（Ｓ）−立体化学の存在を支持する。ＡＤ−混合（Ｊ．Ｏｒｇ，Ｃｈｅｍ．１９９２，５７，２７６８頁；Ａｌｄｒｉｃｈｉｍｉｃａ　Ａｃｔａ　１９９４，２７，７０）またはそれに含まれる個々の成分を使用した場合、（Ｒ）−エナンチオマーを同一オーダーで得た。
【００４０】
対応するα−臭素誘導体を臭素化６　により１０から得、ＤＢＵ７　を用いる脱臭化水素によりシクロヘキサノン１１に変換した。
【００４１】
シクロヘキサノンユニット１１の脱保護により、アミノアルコール１２を得た。このアミノアルコール１２を化合物１３等のシホスタチンアナログへ、酸塩化物等の求電子試薬を用いる反応により、−７８℃で変換した（図２ｄ）。
【００４２】
１３等のエポキシド非含有シホスタチンアナログを、増加した化学安定性によりそれらの中から識別し（例えば、酸性溶液における安定性）、置換機を有するアナログ（ＮＨＲ、１３等のＲ＝ＣＯ（ＣＨ２　）ｎ　、およびＲ＝ＣＯ（ＣＨ２　）ｎ　−Ｒ２（Ｒ２＝アリール、ヘテロアリール等））をまた酸化還元安定性（例えば、酸素による酸化）によりそれらの中から識別することを見出した。
【００４３】
実施例２
２，２−ジメチル−４−（２−オキソシクロヘキシルメチル）オキサゾリジン−３−カルボン酸−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７）の製造
【００４４】
【化４】
2004083465.tif 000004
【００４５】
１．３９ｇの２，２−ジメチル−４−（２−オキソ−シクロヘキシリデンメチル）オキサゾリジン−３−カルボン酸−ｔｅｒｔ−ブチルエステル（６）（４．５２ｍｍｏｌ）および５０ｍｌのエタノール（９６％）中の炭素上の１００ｍｇのパラジウムの懸濁液により、３０分間水素化を行なった。その後、触媒をセライト上で濾過し、溶液を濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル／／エーテル：ｎ−ヘキサン＝３：１）による精製の後、生成物を無色の粘性オイルとして得た（収量：１．４１ｇ＝９０％；Ｒｆ　値＝０．７２）。
【００４６】
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【００４７】
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【００４８】
実施例３
ヘキサデカン酸−［１−ヒドロキシメチル−２−（１−ヒドロキシ−２−オキソ−シクロヘキセ−３−ニル）エチル］アミド（１３）の製造
１４５ｍｇの１２（０．７９ｍｍｏｌ）を５０ｍｌのＴＨＦに溶解し、１ｍｌのトリエチルアミンを添加し、溶液を−７８℃に冷却した。次いで、５ｍｌのＴＨＦ中で２１７ｍｇのパルミチン酸塩化物（０．７９ｍｍｏｌ、０．２４ｍｌ）をゆっくり滴下し、溶液を１５分間−７８℃で攪拌した。２５ｍｌの飽和炭酸水素ナトリウム溶液を用いて反応を終わらせ、溶液を３回それぞれ３０ｍｌの酢酸エステルを用いて抽出した。あわせた有機層を３０ｍｌの水で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥した後、真空下で乾燥するまで濃縮を行なった。粗製１３をわずかに黄色かかった固体の形態で得た。それを冷エーテルで粉砕し、吸引して、無色の固体として精製１３を得た（収量：３０２ｍｇ＝９１％）。
【００４９】
【化５】
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【００５０】
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【００５１】
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【００５２】
実施例４
ヒト単球におけるスフィンゴミエリナーゼ活性
９０ｎＭのＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ−Ｃ５　スフィンゴミエリン（分子プローブ）を２００μｌのエタノールに溶解させ、次いで０．７５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含有する１０ｍｌのＰＢＳに注入する。前記溶液を、ＰＢＳに対して充分に透析し、得られた透析物を濾過滅菌し、ＲＰＭＩ培地を用いて１：１で希釈する。前記溶液とともに、ヒト単球の単層を５％ＣＯ２　で３７℃で４時間インキュベートし、５ｍｌのＰＢＳで２回洗浄し、新しい培地と混合し、次いで対応する化合物（１３）の濃度で３０分間インキュベートする。予め処理した細胞をわずかに修飾した低密度リポタンパク質（ｍｍＬＤＬ）１０で４時間処理し、Ｂｌｉｇｈ　およびＤｙｅｒ１１に従って抽出する。酵素活性を、ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ−Ｃ５　−セラミド１２に対するＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ−Ｃ５　−スフィンゴミエリンの比により測定する。
【００５３】
実験の結果を図４に示す。
【００５４】
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【００５５】
【発明の効果】
本発明により、新規なシホスタチンアナログが提供される。当該シホスタチンアナログは、天然のシホスタチンと比べて著しい化学的および代謝的な安定性を有しており、敗血症、リウマチ性形態の疾患、アテローム性動脈硬化症等の炎症性成分を有する疾患、ならびに神経変性疾患およびアルツハイマー病、パーキンソン病、虚血、脳卒中、心筋梗塞およびＡＩＤＳ等の潜在的にアポトーシスに関連する疾患の治療および予防等に利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、天然のシホスタチン（２）の図である。
【図２】図２は、シクロへキセノン単位の合成の図である。（ａ）　化合物（７）の作製：ａ）ＬＤＡ、ＴＨＦ、−７８℃／２時間、ＲＴ／１時間、８４％；ｂ）Ｅｔ３　Ｎ、ＭｓＣｌ、ＣＨ２　Ｃｌ２　、０℃、２時間、９８％；ｃ）ＤＢＵ、ＣＨ２　Ｃｌ２　、０℃／１時間、ＲＴ／１２時間、７３％；ｄ）Ｐｄ／Ｃ、Ｈ２　、１気圧、ＥｔＯＨ、（９６％）、３０分、９０％。（ｂ）　シリルエノールエーテル８および／または９の合成　ａ）ＨＭＤＳ、ＴＭＳＩ、０〜２５℃、ＴＨＦ、２時間、８９％。（ｃ）　不斉ヒドロキシル化。Ａ）ＡＤ−ミックス−β、ＮａＨＯＣ３　、ＯｓＯ４　、ｔｅｒｔ−ＢｕＯＨ：Ｈ２　Ｏ＝１：１、０℃〜２５℃、３６時間、５８％。（ｄ）　シホスタチンアナログの合成。Ａ）ＴＦＡ、ＣＨ２　Ｃｌ２　、Ｈ２　Ｏ、ＲＴ、４時間、８９％；ｂ）ＣＨ３　（ＣＨ２　）１４ＣＯＣｌ、Ｅｔ３　Ｎ、ＴＨＦ、−７８℃、９１％。
【図３】図３は、ヒト単球における化合物１３の抗アポトーシス活性の図である。ヒト単球を腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）またはアルブミン（対照）で４時間処理する。また、細胞群の一部を化合物１３で前処理する（３０分、０．１μｍ）。アポトーシス細胞の割合を、すべての試料においてＹＯＰＲＯ−１染色１０により調べる。５つの実験から平均値を得る。
【図４】図４は、ｍｍＬＤＬ刺激単球のスフィンゴミレイナーゼ活性に対する化合物１３（０．１〜１０μｍ）の阻害効果の図である。別個の５つの実験から平均値を得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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