(57)【要約】　　　（修正有）【課題】ボンベシンに対するアンタゴニスト作用に基づく肝癌治療に有効な薬剤の提供。【解決手段】ボンベシン類似の７から１０までのアミノ酸残基を含むペプタイドと薬学上許容しうる担体物質とを混合することにより肝癌治療に有効な薬剤を製造する。具体的ペプタイドとして例えば、Ｄ−Ｃｐａ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ψ［ＣＨ２ＮＨ］−Ｐｈｅ−ＮＨ２（ＢＫＭ−２６１５９）が例示される。［式中、Ｃｐａは、パラ−クロロ−フェニルアラニンを示す。］【選択図】　　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2004002331.tif 000024
（式中、
Ａ０はＧｌｙ、またはｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、ＣＨ３）のＤ−異性体、または欠失している；
Ａ１はＡｓｎ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、またはＣＨ３）、β−ＮａｌのいずれかのＤ−異性体、または欠失している；
Ａ２はＧｌｎ、Ａｓｎ、Ｈｉｓ、１−メチル−Ｈｉｓまたは３−メチル−Ｈｉｓ；
Ａ３はＴｒｐ；
Ａ４はＡｌａ；
Ａ５はＶａｌ；
Ａ６はＳａｒ、ＧｌｙまたはＤ−Ａｌａ；
Ａ７はＨｉｓ；
Ａ８はＬｅｕ；
Ａ９はＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｎｌｅまたはｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、またはＣＨ３）のいずれかのＬ−異性体；
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１２のアルキル、Ｃ７−１０のフェニルアルキル、ＣＯＥ１（ここでＥ１はＣ１−２０のアルキル、Ｃ３−２０のアルケニル、Ｃ３−２０のアルキニル、フェニル、ナフチル、またはＣ７−１０のフェニルアルキル）、またはＣ１−Ｃ１２のアシルであって、Ｒ１およびＲ２は、類似体のＮ−末端アミノ酸残基のα−炭素に隣接した窒素に結合している；ただし、Ｒ１またはＲ２のうちの１つがＣＯＥ１ならば、いま１つはＨでなければならない；またＲ３はＯＨ、ＮＨ２、Ｃ１−１２のアルコキシ、Ｃ７−１０のフェニルアルコキシ、またはＣ３−２０のナフチルアルコキシであって、類似体のＣ−末端アミノ酸残基のα−カルボニル炭素に結合している；
ただし、Ａ０およびＡ１が欠失していてＡ６がＤ−Ａｌａであるばあい、Ａ８−Ａ９−Ｒ３はＬｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２であってはならない）またはそれらの薬学上許容しうる塩であるボンベシン類似体を薬学上許容しうる担体物質と混合することを含んでなる肝癌治療のための薬剤の製造法。
【請求項２】
Ａ０はＧｌｙ、Ｄ−Ｐｈｅ、または欠失している；
Ａ１はＤ−Ｐｈｅ、Ｄ−β−Ｎａｌ、Ｄ−Ａｓｎ、または欠失している；
Ａ２はＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、１−メチル−Ｈｉｓまたは３−メチル−Ｈｉｓ；
Ａ３はＴｒｐ；
Ａ４はＡｌａ；
Ａ５はＶａｌ；
Ａ６はＳａｒ、ＧｌｙまたはＤ−Ａｌａ；
Ａ７はＨｉｓ；
Ａ８はＬｅｕ；
Ａ９はＭｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｎｌｅ、またはＰｈｅのＬ−異性体である請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記類似体が式：
Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２である請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記類似体が式：
Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＮＨ２である請求項２記載の方法。
【請求項５】
前記薬剤がさらに薬学上許容しうる担体を含む請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記薬剤が被検体に小腸経由で、非経口的に、経皮的に、または経粘膜的に投与される請求項１記載の方法。
【請求項７】
式：
【化２】
2004002331.tif 000025
（式中、
Ａ０はｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、Ｈ、またはＣＨ３）のＤ−異性体、または欠失している；
Ａ１はｐＧｌｕ、またはＡｌａ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、Ｈ、またはＣＨ３）、Ｆ５−Ｐｈｅ、β−ＮａｌのいずれかのＤ−異性体、または欠失している；
Ａ２はＧｌｎ、Ｈｉｓ、１−メチル−Ｈｉｓ、または３−メチル−Ｈｉｓ；
Ａ４はＡｌａ；
Ａ５はＶａｌ；
Ａ６はＳａｒ、Ｇｌｙ、またはＡｌａもしくはＮ−メチル−ＡｌａのいずれかのＤ−異性体；
Ａ７はＨｉｓ；
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１２のアルキル、Ｃ７−１０のフェニルアルキル、ＣＯＥ１（ここでＥ１はＣ１−２０のアルキル、Ｃ３−２０のアルケニル、Ｃ３−２０のアルキニル、フェニル、ナフチル、またはＣ７−１０のフェニルアルキル）、またはＣ１−Ｃ１２のアシル、ただし、Ｒ１またはＲ２のうちの１つがＣＯＥ１であれば、いま１つはＨでなければならない；さらにＲ１およびＲ２はそれぞれ独立に、類似体のＮ−末端アミノ酸残基のα−炭素に隣接した窒素に結合している；
Ｗは、Ａ７のα−カルボニル炭素に結合しており、下記の基のうちの１つである：
（Ｉ）：
【化３】
2004002331.tif 000026
（式中、Ｒ３はＣＨＲ２０〜（ＣＨ２）ｎ１（ここでＲ２０はＨまたはＯＨのいずれか；かつｎ１は１または０のいずれか）、または欠失している、さらにＺ１はＬｅｕ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨまたはＣＨ３）またはシクロヘキシル−Ａｌａのアミノ酸のいずれかの同定基；さらにＶ１はＯＲ４または
【化４】
2004002331.tif 000027
のいずれかである、
（ここでＲ４はＣ１−２０のアルキル、Ｃ３−２０のアルケニル、Ｃ３−２０のアルキニル、フェニル、ナフチル、またはＣ７−１０のフェニルアルキルのいずれかであり、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１２のアルキル、Ｃ７−１０のフェニルアルキル、低級アシル、または、
【化５】
2004002331.tif 000028
のいずれかである、
（ここで、Ｒ２２はＨ、Ｃ１−１２のアルキル、Ｃ７−１０のフェニルアルキル、または低級アシルのいずれかである）；ただし、Ｒ５またはＲ６のうちの１つが−ＮＨＲ２２であれば、いま１つはＨである））；
（ＩＩ）：
【化６】
2004002331.tif 000029
（式中、Ｒ５はＣＨ２−ＮＨ、ＣＨ２−Ｓ、ＣＨ２−Ｏ、ＣＯ−ＣＨ２、ＣＨ２−ＣＯ、またはＣＨ２−ＣＨ２であり、さらにＺ２およびＺ３はそれぞれ独立に、Ｌｅｕまたはｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、またはＣＨ３）のアミノ酸のいずれかの同定基であり；さらにＶ２はＯＲ６または
【化７】
2004002331.tif 000030
のいずれかである、
（ここでＲ４、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ独立に、Ｈ、低級アルキル、低級フェニルアルキル、または低級ナフチルアルキルである））；
（ＩＩＩ）：
【化８】
2004002331.tif 000031
（式中、Ｚ４はＬｅｕまたはｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、またはＣＨ３）のアミノ酸のいずれかの同定基であり；さらにＲ９、Ｒ１０、およびＲ１１はそれぞれ独立に、Ｈ、低級アルキル、低級フェニルアルキル、または低級ナフチルアルキルである）；または
（ＩＶ）：
【化９】
2004002331.tif 000032
（式中、Ｒ１２およびＲ１３はそれぞれ独立に、Ｈ、低級アルキル、低級フェニルアルキル、低級ナフチルアルキルである）；
ただし、Ａ０が存在するばあい、Ａ１はｐＧｌｕであってはならない；さらにＡ０が欠失していてＡ１がｐＧｌｕであるばあい、Ｒ１およびＲ２のうちの１つはＨでなければならない；さらに、Ｒ１２またはＲ１３のいずれかがＨでないばあい、Ａ７はＨｉｓ、Ａ６はＧｌｙ、Ａ５はＶａｌ、Ａ４はＡｌａ、Ａ２はＨｉｓであり、またＲ１またはＲ２のいずれかがＨでないばあい、Ａ１は欠失していてはならない；さらにまた（Ｉ）から（ＩＶ）の基に関していずれの不斉炭素原子もＲ、Ｓまたはラセミ混合体でありうる）またはそれらの薬学上許容しうる塩であるボンベシン類似体を薬学上許容しうる担体物質と混合することを含んでなる肝癌治療のための薬剤の製造法。
【請求項８】
Ａ０はＤ−Ｐｈｅ、または欠失している；
Ａ１はｐ−Ｇｌｕ、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｄ−ＡｌａまたはＤ−β−Ｎａｌ；
Ａ２はＧｌｎ、Ｈｉｓ、１−メチル−Ｈｉｓ、または３−メチル−Ｈｉｓ；
Ａ４はＡｌａ；
Ａ５はＶａｌ；
Ａ６はＳａｒ、ＧｌｙまたはＤ−Ａｌａ；
Ａ７はＨｉｓ；であり
ここで、Ｗが（Ｉ）であって、Ｒ３がＣＨ２またはＣＨ２−ＣＨ２であるばあい、Ｚ１はＬｅｕまたはＰｈｅの同定基であり；Ｗが（Ｉ）であってＲ３がＣＨＯＨ−ＣＨ２であるばあい、Ｚ１はＬｅｕ、ＣＨｘＡｌａ、またはＰｈｅの同定基であり、Ｒ５およびＲ６はそれぞれＨである；またＷが（Ｉ）であるばあい、Ｖ１はＮＨＲ６であってＲ６はＮＨ２である；Ｗが（ＩＩ）であってＲ５がＣＨ２−ＮＨであるばあい、Ｚ２およびＺ３はそれぞれ独立に、ＬｅｕまたはＰｈｅの同定基である；Ｗが（ＩＩＩ）であるばあい、Ｚ４はＬｅｕまたはｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨまたはＣＨ３）のいずれか１つの同定基である；さらにＲ９、Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ独立に、Ｈ、低級アルキル、低級フェニルアルキル、または低級ナフチルアルキルである；ついでＷが（ＩＶ）のばあい、Ｒ１２およびＲ１３はそれぞれＨであり、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、低級アルキル、または低級アシルである請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記類似体が式：
Ｄ−Ｃｐａ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ψ［ＣＨ２ＮＨ］−Ｐｈｅ−ＮＨ２である請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記類似体が式：
Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ψ［ＣＨ２ＮＨ］−Ｃｐａ−ＮＨ２である請求項８記載の方法。
【請求項１１】
Ａ０が欠失しており、Ａ２はＧｌｎ、さらにＷが、Ｒ３が欠失していてＶ１はＯＲ４でありここでＲ４はＣ１−２０のアルキル、Ｃ３−２０のアルケニル、Ｃ３−２０のアルキニル、フェニル、ナフチルまたはＣ７−１０のフェニルアルキルのうちのいずれかである（Ｉ）である請求項７記載の方法。
【請求項１２】
前記類似体が式：
Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−メチルエステルである請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
前記類似体が式：
Ｄ−Ｆ５−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−メチルエステルである請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
前記薬剤がさらに薬学上許容しうる担体を含む請求項７記載の方法。
【請求項１５】
前記薬剤が被検体に小腸経由で、非経口的に、経皮的に、または経粘膜的に投与される請求項７記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、肝癌すなわち肝臓癌の治療に関する。
【０００２】
【従来の技術】
両生動物のペプチド　ボンベシン（ｂｏｍｂｅｓｉｎ）、ｐＧｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２（アナスタシ（Ａｎａｓｔａｓｉ）ら、エクスペリエンティア（Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ）２７巻、１６６〜１６７頁（１９７１））は、哺乳動物のガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）、たとえばブタＧＲＰ、Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２（マクドナルド（ＭｃＤｏｎａｌｄ）ら、バイオケミカル　アンド　バイオフィジカル　リサーチ　コミュニケーション（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ｒｅｓ．　Ｃｏｍｍｕｎ．）、９０巻、２２７〜２３３頁（１９７９））およびヒトＧＲＰ、Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２に密接に関連している。
【０００３】
ボンベシンは、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）を含む数多くのヒト癌細胞系に対する成長因子であることが見い出され、ヒト乳癌および前立腺癌中に検出されている（ヘイブマン（Ｈａｖｅｍａｎ）ら編、リーセント　リザルツ　イン　キャンサー　リサーチ−ペプチド　ホルモンズ　イン　ラング　キャンサー（Ｒｅｃｅｎｔ　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ−Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｈｏｒｍｏｎｅｓ　ｉｎ　Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ）、スプリンガー−バーグ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）、ニューヨーク（１９８６））。これら多くの癌がＧＲＰまたはボンベシンに関連性のあるペプチドホルモンを分泌することが知られている。その結果、ボンベシンに対するアンタゴニストが、これらの癌の治療のための薬剤として提案されてきた。
【０００４】
カチッタ（Ｃｕｔｔｉｔｔａ）らは、ボンベシンに対する特異的なモノクローナル抗体が、ヌードマウスに異種移植したヒト小細胞肺癌細胞系の成長を生体内で（ｉｎ　ｖｉｖｏ）阻害することを立証した（カチッタら、キャンサー　サーベイ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｓｕｒｖｅｙ）４巻、７０７〜７２７頁（１９８５））。ボンベシンの分裂効果に応答性のある３Ｔ３マウス線維芽細胞においてザハリイ（Ｚａｃｈａｒｙ）とローゼングルト（Ｒｏｚｅｎｇｕｒｔ）は、サブスタンスＰ　アンタゴニスト（スパンチド（Ｓｐａｎｔｉｄｅ））がボンベシンのアンタゴニストとして作用することを認めた（ザハリイら、プロシーディング　オブ　ナショナル　アカデミー　オブ　サイエンス（Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．）（ＵＳＡ）、８２巻７６１６〜７６２０頁（１９８５））。ハインツ−エリアン（Ｈｅｉｎｚ−Ｅｒｉａｎ）らは、ボンベシンの１２番目のＨｉｓをＤ−Ｐｈｅに置換してモルモット膵臓由来の分散腺房（ａｃｉｎｉ）におけるボンベシン　アンタゴニスト活性を観察した（ハインツ−エリアンら、アメリカン　ジャーナル　オブ　フィジオロジイ（Ａｍ．Ｊ．　ｏｆ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．）２５２巻、Ｇ４３９〜Ｇ４４２頁（１９８７））。リビエル（Ｒｉｖｉｅｒ）は、分子内ジスルフィド架橋を組込んでボンベシンの生物活性を有するＣ−末端デカペプチドのコンホメーションの自在性を限定することを意図した研究を報告した；しかしながらリビエルは前記修飾をなしたボンベシン類似体は、アンタゴニスト活性を何ら示さないと述べた（リビエルら、コンペティティブ　アンタゴニスツ　オブ　ペプチド　ホルモンズ（Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ　Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｈｏｒｍｏｎｅｓ）、インターナショナル　シンポジウム　オン　ボンベシン−ライク　ペプチズ　イン　ヘルス　アンド　ディジーズ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　ｏｎ　Ｂｏｍｂｅｓｉｎ−Ｌｉｋｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｉｎ　Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｄｉｓｅａｓｅ）の抄録中、ローマ、イタリア（１９８７年１０月））。
【０００５】
ボンベシンは、ホルモンの放出ならびに膵、胃、腸の分泌および腸の運動の促進を含む、胃腸管に対する直接および間接の効果のいずれをも示す。ボンベシンによって放出されるガストリンおよびコレシストキニン（Ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎ）（ＣＣＫ）は、正常の胃腸粘膜の維持もさることながら、正常および腫瘍の組織の増殖の増大においても役割を果たすことが示されている。ヌードマウス内へ異種移植したヒト結腸および胃癌の成長は、ガストリン投与によって促進され、そののちセクレチンを添加すると阻害され（タナカ（Ｔａｎａｋａ）ら、トーカク　ジャーナル　オブ　エクスペリメンタル　メディシン（Ｔｏｋａｋｕ　Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍｅｄ．）１４８巻、４５９頁（１９８６））、さらにガストリンレセプターを有するＭＣ−２６マウス結腸癌の増殖は、ペンタガストリンによって促進され（ウィンセット（Ｗｉｎｓｅｔｔ）ら、サージェリイ（Ｓｕｒｇｅｒｙ）９９巻、３０２頁（１９８０））、ガストリンレセプターのアンタゴニストであるプログルミドによって阻害される（ビューシャンプ（Ｂｅａｕｃｈａｍｐ）ら、アニュアル　サージェリイ（Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．）２０２巻、３０３頁（１９８５））。ボンベシンは、正常ホストの膵臓の栄養剤として働くと同時に異種移植したヒト膵臓腫瘍の組織の成長阻害剤としても働くことが見い出された（アレクサンダー（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ）ら、パンクレアス（Ｐａｎｃｒｅａｓ）３巻２４７頁（１９８８））。
【０００６】
【発明の実施の形態】
一般的でない省略形：
シクロヘキシル−Ａｌａ＝ＣＨｘＡｌａ＝シクロヘキシルアラニン
【０００７】
【化１０】
2004002331.tif 000002
【０００８】
ｐＧｌｕ＝ピログルタミン酸
【０００９】
【化１１】
2004002331.tif 000003
【００１０】
Ｎｌｅ＝ノルロイシン
【００１１】
【化１２】
2004002331.tif 000004
【００１２】
Ｃｐａ＝パラ−クロロ−フェニルアラニン
ＨｙＰｒｏ＝ヒドロキシプロリン
β−Ｎａｌ＝β−ナフチルアラニン
Ｓａｒ＝サルコシン
Ｆ５−Ｐｈｅ＝ペンタ−フルオロ−フェニルアラニン
Ｓｔａ（スタチン）＝（３Ｓ，４Ｓ）−４−アミノ−３−ヒドロキシ−６−メチルヘプタン酸であり化学構造は：
【００１３】
【化１３】
2004002331.tif 000005
【００１４】
ＡＨＰＰＡ＝（３Ｓ，４Ｓ）−４−アミノ−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンタン酸であり化学構造は：
【００１５】
【化１４】
2004002331.tif 000006
【００１６】
ＡＣＨＰＡ＝（３Ｓ，４Ｓ）−４−アミノ−５−シクロヘキシル−３−ヒドロキシペンタン酸であり、化学構造は：
【００１７】
【化１５】
2004002331.tif 000007
【００１８】
Ｒ＝右（Ｄ）立体配置；Ｓ＝左（Ｌ）立体配置；ならびにラセミ体＝ＲとＳの等量混合体
１−メチル−Ｈｉｓ；３−メチル−Ｈｉｓ＝ヒスチジンの１または３位で窒素原子にメチル（ＣＨ３）基：
【００１９】
【化１６】
2004002331.tif 000008
【００２０】
Ｍｅｔ−オキシド＝メチオニンオキシド
【００２１】
【化１７】
2004002331.tif 000009
【００２２】
α−アミノ酸の同定基とは（たとえばピログルタミン酸のばあい、下記参照）、α−カルボニル炭素原子、α−アミノ窒素原子、または水素原子以外の、不斉α−炭素原子に結合した原子または原子の集団をいう。例示すると、アラニンの同定基はＣＨ３、バリンの同定基は（ＣＨ３）２ＣＨ、リジンの同定基はＨ３Ｎ＋（ＣＨ２）４、そしてフェニルアラニンの同定基は（Ｃ６Ｈ６）ＣＨ２である。β−またはγ−アミノ酸の同定基は、それぞれβ−またはγ−炭素原子に結合した同様の原子または原子集団である。明記していないばあいには、同定基は、α、β、またはγアミノ酸のものでありうる。ピログルタミン酸のばあい、同定基は−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−よりなる。
【００２３】
本発明は、哺乳動物被検体（ｓｕｂｊｅｃｔ）の肝癌、すなわち肝臓の癌を、被検体に治療上有効な量のボンベシン類似体を含有する組成物を投与することにより治療する方法を特色とする。「ボンベシン類似体」という語を、下に定義する。前記治療に用いられうる１つのクラスのボンベシン類似体は、全部で７から１０までのあいだのアミノ酸残基を含むペプチドであって、かつ下記一般式を有する：
【００２４】
【化１８】
2004002331.tif 000010
【００２５】
（式中、
Ａ０＝Ｇｌｙ、またはｐＧＬｕ、Ｎｌｅ、α−アミノ酪酸、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、ＣＨ３）、Ｔｒｐ、β−Ｎａｌ、ＣｙｓのいずれかのＤ−もしくはＬ−異性体、または欠失している；
Ａ１＝ｐＧｌｕ、Ｎｌｅ、α−アミノ酪酸、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、またはＣＨ３）、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｆ５−Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、β−Ｎａｌ、Ｃｙｓ、ＬｙｓのいずれかのＤ−もしくはＬ−異性体、または欠失している；
Ａ２＝Ｇｌｙ、またはｐＧｌｕ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、またはＣＨ３）、Ｔｒｐ、β−Ｎａｌ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、１−メチル−Ｈｉｓ、３−メチル−Ｈｉｓ、Ｃｙｓ、ＬｙｓのいずれかのＤ−もしくはＬ−異性体、または欠失している；
Ａ３＝ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、またはＣＨ３）、β−Ｎａｌ、またはＴｒｐのいずれかのＤ−またはＬ−異性体；
Ａ４＝Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｎｌｅ、α−アミノ酪酸、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、またはＣＨ３）、Ｔｒｐ、またはβ−Ｎａｌ；
Ａ５＝Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｎｌｅ、α−アミノ酪酸、Ｖａｌ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、またはＣＨ３）、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、またはβ−Ｎａｌ；
Ａ６＝Ｓａｒ、ＧｌｙまたはＡｌａ、Ｎ−メチル−Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、またはＣＨ３）、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、β−ＮａｌのいずれかのＤ−異性体、または欠失している；
Ａ７＝１−メチル−Ｈｉｓ、３−メチル−Ｈｉｓ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、またはＧｌｕ；
Ａ８＝Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｎｌｅ、α−アミノ酪酸、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、β−Ｎａｌ、Ｌｙｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、またはＣｙｓ；
Ａ９＝Ｍｅｔ、Ｍｅｔ−オキシド、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｎｌｅ、α−アミノ酪酸、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、またはＣＨ３）、Ｔｒｐ、β−Ｎａｌ、ＣＨｘＡｌａ、ＣｙｓのいずれかのＬ−異性体、または欠失している；
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１２のアルキル、Ｃ７−１０のフェニルアルキル、ＣＯＥ１（ここでＥ１はＣ１−２０のアルキル、Ｃ３−２０のアルケニル、Ｃ３−２０のアルキニル、フェニル、ナフチル、またはＣ７−１０のフェニルアルキル）、またはＣ１〜Ｃ１２のアシル、かつＲ１およびＲ２は、類似体のＮ−末端アミノ酸残基のα−炭素に隣接した窒素に結合しており；ただし、Ｒ１またはＲ２のうちの１つがＣＯＥ１であるばあいには、いま１つはＨでなければならない；またＲ３はＯＨ、ＮＨ２、Ｃ１−１２のアルコキシ、Ｃ７−１０のフェニルアルコキシ、またはＣ３−２０のナフチルアルコキシであって、類似体のＣ−末端アミノ酸残基のα−カルボニル炭素に結合している；
ただし、Ａ０が存在するばあい、Ａ１はｐＧｌｕであってはならず；Ａ０またはＡ１が存在するばあい、Ａ２はｐＧｌｕであってはならない；さらにＡ０が欠失しておりかつＡ１がｐＧｌｕであるとき、Ｒ１およびＲ２のうちの１つはＨでなければならない；さらにＡ０が欠失していてＡ１がｐＧｌｕでないとき、Ａ１はＡ９に結合しうる、またはＡ０およびＡ１が欠失しており、Ａ２がｐＧｌｕでないばあい、Ａ２はＡ９に結合しうる、またはＡ０、Ａ１およびＡ２が欠失しているばあい、Ａ３はＡ９に結合しうる；さらに両側の末端残基がそれぞれＡｓｐまたはＧｌｕ、およびＬｙｓでありえないばあい、ＡｓｐまたはＧｌｕの側鎖カルボキシル基がアミド架橋を介してＬｙｓのε−アミノ基に結合しうる；さらにＡ１またはＡ２のいずれかがＣｙｓでありうるばあい、Ａ８またはＡ９のいずれかとジスルフィド架橋を介して結合しうる、Ａ８またはＡ９のいずれかがＣｙｓでありうるばあいＡ１またはＡ２のいずれかにジスルフィド架橋を介して結合しうる；そしてさらにＡ０およびＡ１が欠失していてＡ６がＤ−Ａｌａであるばあい、Ａ８−Ａ９−Ｒ３はＬｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２であってはならない）またはそれらの薬学上許容しうる塩。
【００２６】
この開示においては、アミノ酸配列の式はポリペプチド鎖の慣習的な表記法に従って、Ｎ−末端が左、Ｃ−末端が右になっている。また、アミノ酸残基が光学的に活性なばあい、Ｄ−体が特に示されていなければ意味しているのはＬ−体の立体配置である。アミノ酸残基のあいだの線は、アミノ酸をつなぐペプチド結合をあらわす。ＣＯＥ１は、
【００２７】
【化１９】
2004002331.tif 000011
【００２８】
をあらわす。
【００２９】
前記の一般式（Ａ）の好適な化合物には：
Ａ０＝ｐＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ｄ−Ｐｈｅ、または欠失している；
Ａ１＝ｐＧｌｕ、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−β−Ｎａｌ，Ｄ−Ｃｐａ、Ｄ−Ａｓｎ、Ｃｙｓ、または欠失している；
Ａ２＝ｐＧｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、１−メチル−Ｈｉｓ、３−メチル−Ｈｉｓ、Ｃｙｓ、または欠失している；
Ａ３＝Ｔｒｐ；
Ａ４＝Ａｌａ；
Ａ５＝Ｖａｌ；
Ａ６＝Ｓａｒ、Ｇｌｙ、Ｄ−Ｐｈｅ、またはＤ−Ａｌａ；
Ａ７＝Ｈｉｓ；
Ａ８＝Ｌｅｕ、またはＣｙｓ；
Ａ９＝Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｎｌｅ、Ｐｈｅ、またはＣｙｓのいずれかのＬ−異性体であるものが含まれる。
【００３０】
前記一般式（Ａ）の２つのとくに好適な２つの化合物は：
Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２
（コード名ＢＩＭ−２６２１８）および
Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＮＨ２
（コード名ＢＩＭ−２６１８７）である。
【００３１】
本発明の肝癌治療法に適した、別のクラスのボンベシン類似体は、全部で７から１０までのあいだのアミノ酸残基を含むペプチドであって、かつ下記一般式を有する：
【００３２】
【化２０】
2004002331.tif 000012
【００３３】
（式中、
Ａ０＝ｐＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ｎｌｅ、α−アミノ酪酸、またはＡｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、Ｈ、またはＣＨ３）、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、もしくはβ−ＮａｌのいずれかのＤ−異性体、または欠失している；
Ａ１＝ｐＧｌｕ、Ｎｌｅ、α−アミノ酪酸のいずれかのＤ−もしくはＬ−異性体、またはＡｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、Ｈ、またはＣＨ３）、Ｆ５−Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓもしくはβ−ＮａｌのいずれかのＤ−異性体、または欠失している；
Ａ２＝ｐＧｌｕ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、Ｈ、またはＣＨ３）、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、β−Ｎａｌ、Ｈｉｓ、１−メチル−Ｈｉｓ、または３−メチル−Ｈｉｓ；
Ａ４＝Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｎｌｅ、α−アミノ酪酸、Ｍｅｔ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、Ｈ、またはＣＨ３）、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、またはβ−Ｎａｌ；
Ａ５＝Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｎｌｅ、α−アミノ酪酸、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＯＨ、Ｈ、またはＣＨ３）、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、またはβ−Ｎａｌ；
Ａ６＝Ｓａｒ、ＧｌｙまたはＡｌａ、Ｎ−メチル−Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｇｌｎ、Ａｓｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、Ｈ、またはＣＨ３）、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、もしくはβ−ＮａｌのいずれかのＤ−異性体；
Ａ７＝１−メチル−Ｈｉｓ、３−メチル−Ｈｉｓ、またはＨｉｓ；
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１２のアルキル、Ｃ７−１０のフェニルアルキル、ＣＯＥ１（ここでＥ１はＣ１−２０のアルキル、Ｃ３−２０のアルケニル、Ｃ３−２０のアルキニル、フェニル、ナフチル、またはＣ７−１０のフェニルアルキル）、またはＣ１〜Ｃ１２のアシルであり、ただし、Ｒ１またはＲ２のうちの１つがＣＯＥ１であるばあい、いま１つはＨでなければならない；さらにＲ１およびＲ２は、類似体のＮ−末端アミノ酸残基のα−炭素に隣接した窒素に結合している；
Ｗは、Ａ７のα−カルボニル炭素に結合しており、下記の基のうちの１つである：（Ｉ）：
【００３４】
【化２１】
2004002331.tif 000013
【００３５】
（式中、Ｒ３はＣＨＲ２０−（ＣＨ２）ｎ１（ここでＲ２０はＨまたはＯＨのいずれか；かつｎ１は１か０のいずれか）、または欠失している、またＺ１はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨまたはＣＨ３）、Ｆ５−Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、ＨｙＰｒｏ、シクロヘキシル−Ａｌａ、またはβ−Ｎａｌのアミノ酸のいずれかの同定基；さらにＶ１はＯＲ４、または
【００３６】
【化２２】
2004002331.tif 000014
【００３７】
のいずれかである、
（ここでＲ４はＣ１−２０のアルキル、Ｃ３−２０のアルケニル、Ｃ３−２０のアルキニル、フェニル、ナフチル、またはＣ７−１０のフェニルアルキルのいずれかであって、Ｒ５、およびＲ６はそれぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−１２のアルキル、Ｃ７−１０のフェニルアルキル、低級アシル、または、
【００３８】
【化２３】
2004002331.tif 000015
【００３９】
のいずれかである、
（ここで、Ｒ２２はＨ、Ｃ１−１２のアルキル、Ｃ７−１０のフェニルアルキル、または低級アシルのいずれかであり）；Ｒ５またはＲ６のうちの１つが−ＮＨＲ２２であれば、いま１つはＨである））；
（ＩＩ）：
【００４０】
【化２４】
2004002331.tif 000016
【００４１】
（式中、Ｒ５はＣＨ２−ＮＨ、ＣＨ２−Ｓ、ＣＨ２−Ｏ、ＣＯ−ＣＨ２、ＣＨ２−ＣＯ、またはＣＨ２−ＣＨ２であり、さらにＺ２およびＺ３はそれぞれ独立に、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、β−Ｎａｌ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、またはＣＨ３）、Ｆ５−Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、ＨｙＰｒｏ、またはＣＨｘＡｌａのアミノ酸のいずれかの同定基であり；さらにＶ２はＯＲ６または
【００４２】
【化２５】
2004002331.tif 000017
【００４３】
のいずれかである、
（ここでＲ４、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８はそれぞれ独立に、Ｈ、低級アルキル、低級フェニルアルキル、または低級ナフチルアルキルである））；
（ＩＩＩ）：
【００４４】
【化２６】
2004002331.tif 000018
【００４５】
（式中、Ｚ４はＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、β−Ｎａｌ、Ｇｌｎ、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨ、またはＣＨ３）、Ｆ５−Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、またはＨｙＰｒｏのアミノ酸のいずれかの同定基であり；さらにＲ９、Ｒ１０、およびＲ１１はそれぞれ独立に、Ｈ、低級アルキル、低級フェニルアルキル、または低級ナフチルアルキル）；または
（ＩＶ）：
【００４６】
【化２７】
2004002331.tif 000019
【００４７】
（式中、Ｒ１２およびＲ１３はそれぞれ独立に、Ｈ、低級アルキル、低級フェニルアルキル、低級ナフチルアルキルである）；
ただし、Ａ０が存在するばあい、Ａ１はｐＧｌｕであってはならない；さらにＡ０またはＡ１が存在するばあい、Ａ２はｐＧｌｕであってはならない；さらにＡ０が欠失していてＡ１がｐＧｌｕであるばあい、Ｒ１およびＲ２のうちの１つはＨでなければならない；さらにＲ１２またはＲ１３のいずれかがＨでないばあい、Ａ７はＨｉｓ、Ａ６はＧｌｙ、Ａ５はＶａｌ、Ａ４はＡｌａ、Ａ２はＨｉｓであり、またＲ１またはＲ２のいずれかがＨでないばあい、Ａ１は欠失していてはならない；さらにまた、
（Ｉ）から（ＩＶ）の基に関していずれの不斉炭素原子もＲ、Ｓまたはラセミ混合体でありうる）またはそれらの薬学上許容しうる塩。
【００４８】
本発明に用いられる類似体は、前記一般式（Ｂ）中に修飾の１つを有していてもよい：すなわち、生物学的に活性な部位のアミノ酸残基と隣接したアミノ酸残基とのあいだのペプチド結合のかわりに、非ペプチド結合（または偽ペプチド結合）；または２つの天然アミノ酸残基のかわりに合成アミノ酸、たとえばスタチン、ＡＨＰＰＡ、またはＡＣＨＰＡ、β−アミノ酸、またはγ−アミノ酸残基；またはＣ−末端アミノ酸残基を欠失させて、その時点のＣ−末端基へ置換基を付加し、類似体が誘導される前のペプチドの天然Ｎ−末端アミノ酸残基とは異なるＮ−末端残基を存在させることのいずれかである。スタチン、ＡＨＰＰＡ、およびＡＣＨＰＡは前記のごとく定義した化学構造を有する。
【００４９】
非ペプチド結合とは、２つの残基のあいだの結合に関与している炭素原子がカルボニル炭素からメチレン炭素、すなわち、ＣＨ２−ＮＨに還元されている；かまたは、それよりは好ましさが少ないが、ＣＯ−ＮＨがＣＨ２−Ｓ、ＣＨ２−Ｏ、ＣＨ２−ＣＨ２、ＣＨ２−ＣＯ、またはＣＯ−ＣＨ２のいずれかに置換されていることを意味している。この開示中、−ψ［ＣＨ２ＮＨ］−の表記は、非ペプチドのＣＨ２−ＮＨ結合を示すのに用いられている。
【００５０】
非ペプチド結合の化学の詳細な議論は、コイ（Ｃｏｙ）ら（１９８８）テトラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ）４４巻、３号８３５〜８４１頁、ツーウェ（Ｔｏｕｒｗｅ）（１９８５）、ヤンセン　キミカ　アクタ（Ｊａｎｓｓｅｎ　Ｃｈｉｍ．　Ａｃｔａ）３巻３〜１５頁、１７〜１８頁、およびスパトラ（Ｓｐａｔｏｌａ）（１９８３）ケミストリー　アンド　バイオケミストリー　オブ　アミノ　アシッズ、ペプチズ、アンド　プロテインズ（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ａｍｉｎｏ　Ａｃｉｄｓ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，ａｎｄ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）掲載（ビイ、ウェインシュタイン（Ｂ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ）、編）、マーセル　デッカー（Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ）、ニューヨークおよびバーゼル、２６７〜３５７頁に示され、すべてをここに参考文献としてあげる。カルボニル炭素をメチレン炭素へと還元するペプチド結合の還元法は、コイら、米国特許出願出願番号第８７９，３４８号明細書に記載されており、これもここに参考文献としてあげる。ここで用いられる「ペプチド」の語は、伝統的なペプチド、および前記非ペプチド結合を含むアミノ酸配列の両方をいう。
【００５１】
本発明に用いられる類似体を作るための、天然に生ずるペプチドの修飾の１つは、前記一般式（Ｂ）におけるアミノ末端位について記載したような、分子のアミノ末端の修飾であり；たとえば、Ａ０である、またはＡ０が欠失しているばあいＡ１である、またはＡ０およびＡ１がいずれも欠失しているばあいＡ２であるＮ−末端アミノ酸残基が、芳香族Ｄ−異性体、またはアルキル化されたアミノ酸残基であってもよい。
【００５２】
一組の、一般式（Ｂ）の好適な化合物には：
Ａ０＝Ｇｌｙ、Ｄ−Ｐｈｅ、または欠失している；
Ａ１＝ｐ−Ｇｌｕ、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−β−Ｎａｌ、Ｄ−Ｃｐａ、またはＤ−Ａｓｎ；
Ａ２＝Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、１−メチル−Ｈｉｓ、３−メチル−Ｈｉｓ；
Ａ４＝Ａｌａ；
Ａ５＝Ｖａｌ；
Ａ６＝Ｓａｒ、Ｇｌｙ、Ｄ−Ｐｈｅ、またはＤ−Ａｌａ；
Ａ７＝Ｈｉｓ；
さらにここで、Ｗが（Ｉ）であってＲ３がＣＨ２またはＣＨ２−ＣＨ２であるばあい、Ｚ１はＬｅｕまたはＰｈｅの同定基であり；Ｗが（Ｉ）であってＲ３がＣＨＯＨ−ＣＨ２であるばあい、Ｚ１はＬｅｕ、ＣＨｘＡｌａ、またはＰｈｅの同定基であり、Ｒ５およびＲ６はそれぞれＨである；またＷが（Ｉ）であるばあい、Ｖ１はＮＨＲ６であってＲ６はＮＨ２である；Ｗが（ＩＩ）であってＲ５がＣＨ２−ＮＨであるばあい、Ｚ２およびＺ３はそれぞれ独立に、ＬｅｕまたはＰｈｅの同定基である；Ｗが（ＩＩＩ）であるばあい、Ｚ４はＬｅｕまたはｐ−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ２、ＯＨまたはＣＨ３）のいずれか１つの同定基である；さらにＲ９、Ｒ１０およびＲ１１はそれぞれ独立に、Ｈ、低級アルキル、低級フェニルアルキル、または低級ナフチルアルキルである；また、Ｗが（ＩＶ）のばあい、Ｒ１２およびＲ１３はそれぞれＨでありＲ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、低級アルキル、または低級アシルであるものが含まれる。
【００５３】
この中のとくに好適な２つの化合物は：
Ｄ−Ｃｐａ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ψ［ＣＨ２ＮＨ］−Ｐｈｅ−ＮＨ２
（コード名　ＢＩＭ−２６１５９）、および
Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ψ［ＣＨ２ＮＨ］−Ｃｐａ−ＮＨ２
（コード名　ＢＩＭ−２６１８９）である。
【００５４】
一般式（Ｂ）の好適な化合物の別の一組には、Ａ０が欠失し、Ａ２がＧｌｎであって、ＷはＲ３が欠失し、Ｖ１がＲ４がＣ１−２０のアルキル、Ｃ３−２０のアルケニル、Ｃ３−２０のアルキニル、フェニル、ナフチルまたはＣ７−１０のフェニルアルキルのいずれかであるようなＯＲ４である（Ｉ）であるものが含まれる。
【００５５】
この中のとくに好適な２つの化合物は、
Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−メチルエステル、および
Ｄ−Ｆ５−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−メチルエステル
である。
【００５６】
前記の一般式（Ａ）および（Ｂ）中、Ｒ１またはＲ２のいずれかが脂肪族、芳香族、または親油性の基であるばあいに、生体内での活性は長時間持続させることができ、本発明の合成物の標的組織への輸送は促進されうる。
【００５７】
本発明の治療用組成物はさらに薬学上許容しうる担体物質、たとえばマンニトール、ラクトース、炭酸マグネシウム、またはペプチドがそれとのミセルを形成しうるリン脂質を含有することが好ましい。
【００５８】
ボンベシン類似体のようなペプチドは酸性ｐＨにおいて安定であるが、塩基性条件および／または膵臓の酵素（トリプシン／キモトリプシン）の存在下では速やかに分解するばあいが通例である。したがって、経口投与の際には、このような物質は膵臓の酵素および腸内環境（ｐＨおよび細菌）から保護される必要がある。さらにグルコースのような共輸送作用物質が、経口の生物学的利用率のために必要であるかもしれない。
【００５９】
経口投与に好適な治療用組成物の例としては、丸剤、錠剤、カプセル剤、または液剤（ｌｉｑｕｉｄ）が含まれる。組成物を被検体に経口投与するばあい、充分に長時間にわたって被検体の胃の中でペプチドを分解から保護しうる物質でペプチドを被覆することがとくに好ましい。こうすることで、すべてかまたはほとんどのペプチド分子が、完全な形で小腸内に達し、吸収されるようになる。
【００６０】
また、静脈内または皮下投与のような非経口的な経路を介して被検体に投与すべく、たとえば液剤のような好適な剤形に治療用組成物を調製することも可能である。他の投与の経路としては、経皮的（たとえば、局所的−浸透増強剤（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ　ｅｎｈａｎｃｅｒ）を含むかまたは含まないクリームを用いる、または電気浸透法（ｉｏｎｔｏｐｈｏｒｅｔｉｃ）による）および経粘膜的（たとえば鼻、腟、頬または肺の）があげられる。さらに、肝の潅流による腫瘍部位へのターゲッティングデリバリーを行なうこともできる。
【００６１】
治療用組成物は筋肉内投与に適した生物分解性の徐放性一般製剤の形とすることもできる。最高の効力のためには、０次（ｚｅｒｏ　ｏｒｄｅｒ）放出であることがもっとも好ましい。治療用組成物を投与するのにツィクロマット（Ｚｙｋｒｏｍａｔ）ＢＴ１ペリストールティックポンプ（フェーリング　ラボラトリーズ（Ｆｅｒｒｉｎｇ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）社製、サファーン（Ｓｕｆｆｅｒｎ）、ニューヨーク）のような埋め込み可能なまたは外付けのポンプを用いることによって０次放出が達成しうる。
【００６２】
「治療上有効な量」、「薬学的に許容しうる塩またはコンプレックス」および「薬学的に許容しうる担体」という用語は、以下にそれぞれ定義する。
【００６３】
本発明の他の特徴および利点は、好適な実施態様の以下の記載ならびに請求の範囲により明らかとなるであろう。
【００６４】
（構造）
本発明に用いられる治療用組成物は、一般構造、すなわち、「発明の概要」に前掲の一般式（Ａ）または（Ｂ）を有する。それらはすべて７から１０のアミノ酸残基を含むボンベシン類似体である。ここで用いる「ボンベシン類似体」という語は、天然に生ずる、構造的に関連性のあるペプチド、すなわち、ボンベシン、ニューロメジンＢ、ニューロメジンＣ、リトリン、およびＧＲＰの全配列またはそれらの一部の配列を示すペプチドの１つから誘導され、それらと類似の生物学的活性を有するペプチドをいう。これら天然に生ずるペプチドの関連するアミノ酸配列を下に列挙する。：
2004002331.tif 000020
【００６５】
本発明に用いられる類似体は、（１）コイらの１９９０年３月３０日出願の米国特許出願出願番号第５０２，４３８号明細書、これは１９８９年８月２１日出願の米国特許出願出願番号第３９７，１６９号の一部継続出願であり、これは１９８９年７月７日出願の米国特許出願出願番号第３７６，５５５号、および１９８９年８月１６日出願の米国特許出願出願番号第３９４，７２７号の一部継続出願であり、これらは両方とも１９８９年３月２日出願の米国特許出願出願番号第３１７，９４１号の一部継続出願であり、これは１９８８年１２月９日出願の米国特許出願出願番号第２８２，３２８号の一部継続出願であり、次いでこれは１９８８年１０月１４日出願の米国特許出願出願番号第２５７，９９８号の一部継続出願であり、次いでこれは１９８８年９月２３日出願の米国特許出願出願番号第２４８，７７１号明細書の一部継続出願であって、次いでこれは、コイらの１９８８年６月１６日出願の米国特許出願出願番号第２０７，７５９号の一部継続出願であり、これはさらにコイらの１９８８年６月８日出願の米国特許出願出願番号第２０４，１７１号明細書の一部継続出願であって、これは次いでコイらの１９８８年３月２５日出願の米国特許出願出願番号第１７３，３１１号の一部継続出願であり、さらにこれはコイらの１９８７年９月２４日出願の米国特許出願出願番号第１００，５７１号の一部継続出願である；および（２）ボードン（Ｂｏｇｄｅｎ）らの１９９０年５月９日出願の米国特許出願出願番号第５２０，２２５号明細書、次いでこれはボードンらの１９８９年１１月２１日出願の米国特許出願出願番号第４４０，０３９号の一部継続出願である、に記載されている。これらの出願はすべて同一の譲受人に譲渡されており、ここでは参考文献としてあげる。
【００６６】
ボンベシン類似体は、以下の文献にも記載されている：ザハリイら、プロシーディング　オブ　ナショナル　アカデミー　オブ　サイエンス８２巻、７６１６頁（１９８５）；ハイムブルック（Ｈｅｉｍｂｒｏｏｋ）ら、「シンセティック　ペプチズ：アプローチズ　トゥ　バイオロジカル　プロブレムズ（“Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ　ｔｏ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｐｒｏｂｌｅｍｓ”）、ユー　シー　エル　エー　シンポジウム　オン　モレキュラー　アンド　セルラー　バイオロジー（ＵＣＬＡ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍｏｎ　Ｍｏｌ．　ａｎｄ　Ｃｅｌｌ．　Ｂｉｏｌ．）新版、８６巻、タム　アンド　カイザー（Ｔａｍ　ａｎｄ　Ｋａｉｓｅｒ）編；ハインツ−エリアンら、アメリカン　ジャーナル　オブ　フィジオロジー、Ｇ４３９頁（１９８６）；マーチネツ（Ｍａｒｔｉｎｅｚ）ら、ジャーナル　オブ　メディカル　ケミストリー（Ｊ．　Ｍｅｄ．　Ｃｈｅｍ．）、２８巻、１８７４頁（１９８５）；ガルゴスキー（Ｇａｒｇｏｓｋｙ）ら、バイオケミカル　ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｊ．）、２４７巻、４２７頁（１９８７）；ドゥブリュール（Ｄｕｂｒｅｕｉｌ）ら、ドラッグ　デザイン　アンド　デリバリー（Ｄｒｕｇ　Ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）、２巻、４９頁、ハーウッド　アカデミック　パブリシャーズ（Ｈａｒｗｏｏｄ　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ）、ＧＢ（１９８７）；ヘイッキラ（Ｈｅｉｋｋｉｌａ）ら、ジャーナル　オブ　バイオロジカル　ケミストリー（Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．）、２６２巻、１６４５６頁（１９８７）；カラニカス（Ｃａｒａｎｉｋａｓ）ら、ジャーナル　オブ　メディカル　ケミストリー、２５巻、１３１３頁（１９８２）；サイード（Ｓａｅｅｄ）ら、ペプチズ（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）、１０巻、５９７頁（１９８９）；ロセル（Ｒｏｓｅｌｌ）ら、トレンズ　イン　ファーマコロジャルサイエンス（Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、３巻、２１１頁（１９８２）；ランドバーグ（Ｌｕｎｄｂｅｒｇ）ら、プロシーディング　オブ　ナショナル　アカデミー　オブ　サイエンス、８０巻、１１２０頁（１９８３）；エングバーグ（Ｅｎｇｂｅｒｇ）ら、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２９３巻、２２２頁（１９８４）；ミツラヒ（Ｍｉｚｒａｈｉ）ら、ヨーロピアン　ジャーナル　オブ　ファーマコロジー（Ｅｕｒｏ．　Ｊ．　Ｐｈａｒｍａ．）、８２巻、１０１頁（１９８２）；リーンダー（Ｌｅａｎｄｅｒ）ら、ネイチャー、２９４巻、４６７頁（１９８１）；ウォル（Ｗｏｌｌ）ら、バイオケミカル　バイオフィジカル　リサーチ　コミュニケーション、１５５巻、３５９頁（１９８８）；リビエルら、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、１７巻、１７６６頁（１９７８）；カチッタら、キャンサー　サーベイズ（Ｃａｎｃｅｒ　Ｓｕｒｖｅｙｓ）、４巻、７０７頁（１９８５）；アウメラス（Ａｕｍｅｌａｓ）ら、インターナショナル　ジャーナル　オブ　ペプチドリサーチ（Ｉｎｔ．　Ｊ．　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｒｅｓ．）、３０巻、５９６頁（１９８７）；これらもすべて、ここでは参考文献としてあげる。
【００６７】
類似体は、薬学的に許容しうるたとえば酸付加塩のような塩、または亜鉛、鉄などとの金属コンプレックスのかたちで供給しうる。酸付加塩の具体例としては、酢酸、乳酸、パモ酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、サリチル酸、酒石酸、メタンスルホン酸またはトルエンスルホン酸のような有機酸との酸付加塩、タンニン酸またはカルボキシメチルセルロースのような重合酸との酸付加塩、ならびに塩酸、臭酸、硫酸またはリン酸のような無機酸との酸付加塩があげられる。
【００６８】
（類似体の合成）
ボンベシン類似体
ｐＧｌｕ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ψ［ＣＨ２ＮＨ］−Ｌｅｕ−ＮＨ２の合成は下記のとおりである。他のボンベシン類似体は、下記合成法を適切に修飾することにより調製した。
【００６９】
第１段階は、以下のように中間体、ｐＧｌｕ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ（ベンジロキシカルボニル）−Ｌｅｕ−ψ［ＣＨ２ＮＨ］−Ｌｅｕ−ベンズヒドリルアミン樹脂を調製することであった。
【００７０】
塩素イオン型のベンズヒドリルアミン−ポリスチレン樹脂（ベガ　バイオケミカルズ（Ｖｅｇａ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）社）（０．９７ｇ、０．５ミリモル）を、下記の反応サイクルを行なうようにプログラムされたベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎ）９９０Ｂペプチド合成機の反応容器中に入れた：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）塩化メチレン中３３％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（２回、それぞれ１および２５分間）；（ｃ）塩化メチレン；（ｄ）エタノール；（ｅ）塩化メチレン；および（ｆ）クロロホルム中１０％トリエチルアミン。
【００７１】
中和した樹脂をα−ｔ−ブトキシカルボニル（「Ｂｏｃ」）−Ｌｅｕおよびジイソプロピルカルボジイミド（それぞれ１．５ミリモル）とともに塩化メチレン中で１時間撹拌し、そののちえられたアミノ酸樹脂を、前記洗浄プログラムの段階（ａ）から（ｆ）までのサイクルにかけた。ファーレンツ（Ｆｅｈｒｅｎｔｚ）およびカストロ（Ｃａｓｔｒｏ）、シンセシス（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、６７６頁（１９８３）の方法により調製したＢＯＣ−Ｌｅｕアルデヒド（１．２５ミリモル）を５ｍｌの乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、樹脂ＴＦＡ塩の懸濁液に添加し、次いで１００ｍｇ（２ミリモル）のシアノボロヒドリドナトリウムを添加した（ササキ（Ｓａｓａｋｉ）およびコイ、ペプチズ８巻、１１９〜１２１頁（１９８７）；コイら、同上）。１時間撹拌したのち、樹脂混合物はニンヒドリン反応（１分）に対して陰性であることが見い出され、遊離のアミノ基が完全に誘導化されていることが示された。
【００７２】
ついで下記のアミノ酸（１．５ミリモル）をジイソプロピルカルボジイミド（１．５ミリモル）の存在下で引き続き結合させ、さらにえられたアミノ酸樹脂を前記と同じ方法の洗浄／脱ブロッキング段階（ａ）から（ｆ）までのサイクルにかけた：
ＢＯＣ−Ｈｉｓ（ベンジロキシカルボニル）、ＢＯＣ−Ｇｌｙ（６Ｍ過剰のｐ−ニトロフェニルエステルとして結合）、ＢＯＣ−Ｖａｌ、ＢＯＣ−Ａｌａ、ＢＯＣ−Ｔｒｐ、ＢＯＣ−Ｇｌｎ（６Ｍ過剰のｐ−ニトロフェニルエステルとして結合）、およびｐＧｌｕ。完成した樹脂はメタノールで洗浄し、風乾した。
【００７３】
前記樹脂（１．６ｇ、０．５ミリモル）をアニソール（５ｍｌ）と無水フッ化水素（３５ｍｌ）と０℃にて混合し、４５分間撹拌した。過剰のフッ化水素は、乾燥窒素流下で速やかに蒸発させ、エーテルにて遊離ペプチドを沈殿させて洗浄した。粗ペプチドを、最少容量の２Ｍ酢酸中に溶解し、セファデックスＧ−２５（ファルマシア　ファイン　ケミカルズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）社製）のカラム（２．５×１００ｍｍ）にて溶出した。ついで、ＵＶ吸収および薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって主成分を含むとする画分を集めて少量にまで蒸発させ、オクタデシルシラン−シリカ（ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）　ＬＲＰ−１、１５〜２０μｍメッシュサイズ）のカラム（２．５×５０ｃｍ）に付した。
【００７４】
ペプチドは、０〜３０％アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸水溶液中）の直線的濃度勾配で溶出した。画分は、ＴＬＣおよび分析高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により調べて、最高の純度のものがえられるように集めた。水から溶液をくり返し凍結乾燥して白い綿毛状粉末として６０ｍｇの生成物をえた。
【００７５】
ＨＰＬＣおよびＴＬＣにより、生成物は均質であることがわかった。酸加水分解物のアミノ酸分析によって、ペプチドの組成を確認した。Ｌｅｕ−ψ［ＣＨ２ＮＨ］−Ｌｅｕ結合の存在は、高速原子衝撃質量分析によって実証した。
ｐＧｌｕ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−ψ［ＣＨ２ＮＨ］−Ｌｅｕ−ＮＨ２、ｐＧｌｕ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ψ［ＣＨ２ＮＨ］−Ｌｅｕ−ＮＨ２、ｐＧｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２、ｐＧｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＮＨ２、ｐＧｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２または他のペプチドは、前記の方法を適切に変更することにより、同様に同程度の収率で調製された。
【００７６】
Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ψ［ＣＨ２ＮＨ］−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ２の固相合成は、下記のように行なった：
まず、ＢＯＣ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ（トシル）−Ｌｅｕ−ψ［ＣＨ２ＮＨ］−Ｄ−Ｐｈｅ−ベンズヒドリルアミン樹脂を合成した。
【００７７】
塩素イオン型のベンズヒドリルアミン−ポリスチレン樹脂（アドバンスド　ケムテック（Ａｄｖａｎｃｅｄ　ＣｈｅｍＴｅｃｈ）社）（１．２５ｇ、０．５ミリモル）を、下記の反応サイクルを行なうようにプログラムされたアドバンスド　ケムテックＡＣＴ２００ペプチド合成機の反応容器中に入れた：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）塩化メチレン中３３％トリフルオロ酢酸（２回、それぞれ１および２５分間）；（ｃ）塩化メチレン；（ｄ）エタノール；（ｅ）塩化メチレン；（ｆ）クロロホルム中１０％トリエチルアミン。
【００７８】
中和した樹脂をＢＯＣ−Ｄ−フェニルアラニンおよびジイソプロピルカルボジイミド（それぞれ１．５ミリモル）とともに塩化メチレン中で１時間撹拌し、そののちえられたアミノ酸樹脂を、前記洗浄プログラムの段階（ａ）から（ｇ）までのサイクルにかけた。ついでＴＦＡ処理によってＢＯＣ基を除去した。ファーレンツおよびカストロの方法（同上）により調製したＢＯＣ−Ｌｅｕアルデヒド（１．２５ミリモル）を５ｍｌの乾燥ＤＭＦ中に溶解して、樹脂ＴＦＡ塩の懸濁液に添加し、次に１００ｍｇ（２ミリモル）のシアノボロヒドリドナトリウムを添加した。１時間撹拌したのち、樹脂化合物はニンヒドリン反応（１分）に対して陰性であることが見い出され、遊離のアミノ基が完全に誘導化されていることが示された。
【００７９】
ついで下記のアミノ酸（１．５ミリモル）を引き続き同じ方法で結合させた：ＢＯＣ−Ｈｉｓ（ベンジロキシカルボニル）、ＢＯＣ−Ｇｌｙ、ＢＯＣ−Ｖａｌ、ＢＯＣ−Ａｌａ、ＢＯＣ−Ｔｒｐ、ＢＯＣ−Ｇｌｎ（１等量のヒドロキシベンゾトリアゾール存在下で結合）、ＢＯＣ−Ｄ−Ｐｈｅ（１等量のヒドロキシベンゾトリアゾール存在下で結合）。乾燥ののちペプチド樹脂は１．９３ｇの重量であった。
【００８０】
樹脂（１．９３ｇ、０．５ミリモル）はアニソール（５ｍｌ）と無水フッ化水素（３５ｍｌ）と０℃にて混合し、４５分間撹拌した。過剰のフッ化水素は乾燥窒素流下で速やかに蒸発させ、エーテルにて遊離ペプチドを沈殿させて洗浄した。粗ペプチドを最少容量の２Ｍ酢酸中に溶解し、セファデックスＧ−２５のカラム（２．５×１００ｍｍ）にて溶出した。ついでＵＶ吸収およびＴＬＣにより主成分を含むとする画分を集めて少量にまで蒸発させ、バイダック（Ｖｙｄａｃ）オクタデシルシラン（１０〜１５μＭ）のカラム（２．５×５０ｃｍ）に付した。これを１５〜４５％アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸水溶液中）の直線的濃度勾配で溶出した。画分は、ＴＬＣおよび分析ＨＰＬＣにより調べて、最高の純度のものがえられるように集めた。水から溶液をくり返し凍結乾燥して、白い綿毛状粉末として１２０ｍｇの生成物をえた。
【００８１】
生成物はＨＰＬＣおよびＴＬＣにより均質であることがわかった。酸加水分解物のアミノ酸分析によってペプチドの組成を確認した。Ｌｅｕ−ψ［ＣＨ２ＮＨ］ペプチド結合の存在は、高速原子衝撃質量分析によって実証した。
【００８２】
類似体Ｄ−Ｃｐａ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ψ［ＣＨ２ＮＨ］−Ｐｈｅ−ＮＨ２（ＢＩＭ−２６１５９）は、Ｄ−ＰｈｅをＤ−Ｃｐａに置き換えることにより同様の方法で合成されうる。
【００８３】
［Ｄ−Ｐｈｅ１、Ｈｉｓ７、ｄｅｓＭｅｔ９］リトリン、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ＮＨ２の固相合成は、下記のように行なった。
【００８４】
ステップ（１）：塩素イオン型のベンズヒドリルアミン−ポリスチレン樹脂（アドバンスド　ケムテック社（０．６２グラム、０．２５ミリモル）を、下記の反応サイクルを行なうようにプログラムされたＡＣＴ２００ペプチド合成機の反応容器中に入れた：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）塩化メチレン中３３％トリフルオロ酢酸（２回、それぞれ１および２５分間）；（ｃ）塩化メチレン；（ｄ）エタノール；（ｅ）塩化メチレン；（ｆ）クロロホルム中１０％トリエチルアミン。
【００８５】
中和した樹脂をＢＯＣ−Ｌｅｕおよびジイソプロピルカルボジイミド（それぞれ１．５ミリモル）とともに塩化メチレン中で１時間撹拌し、そののちえられたアミノ酸樹脂を、前記洗浄プログラムの段階（ａ）から（ｇ）までのサイクルにかけた。ついで下記のアミノ酸（１．５ミリモル）を引き続き同じ方法で結合させた：ＢＯＣ−Ｈｉｓ（ベンジロキシカルボニル）、ＢＯＣ−Ｇｌｙ、ＢＯＣ−Ｖａｌ、ＢＯＣ−Ａｌａ、ＢＯＣ−Ｔｒｐ、ＢＯＣ−Ｇｌｎ（６Ｍ過剰のｐ−ニトロフェニルエステルとして結合）、およびＢＯＣ−Ｄ−Ｐｈｅ（ヒドロキシベンゾトリアゾール中で結合）。乾燥ののちペプチド樹脂は０．９２ｇの重量であった。
【００８６】
ステップ（２）：ついで樹脂（０．９２ｇ）をアニソール（５ｍｌ）、ジチオスレイトール（２００ｍｇ）および無水フッ化水素（３５ｍｌ）と０℃にて混合し、４５分間撹拌した。過剰のフッ化水素は乾燥窒素流下で速やかに蒸発させ、エーテルにて遊離ペプチドを沈殿させて洗浄した。粗ペプチドを最少容量の２Ｍ酢酸中に溶解し、セファデックスＧ−２５のカラム（２．５×１００ｃｍ）にて溶出した。ついでＵＶ吸収およびＴＬＣにより主成分を含むとする画分を集めて少量にまで蒸発させ、バイダックオクタデシルシラン（１０〜１５μＭ）のカラム（２．５×５０ｃｍ）に付した。カラムは、０〜３０％アセトニトリル（０．１％トリフルオロ酢酸水溶液中）の直線的濃度勾配で溶出した。画分は、ＴＬＣによって調べ、最高の純度のものがえられるように集めた。水から溶液をくり返し凍結乾燥して、白い綿毛状粉末をえた；この生成物は、ＨＰＬＣおよびＴＬＣにより均質であることがわかった。酸加水分解物のアミノ酸分析によってペプチドの組成を確認した。
【００８７】
Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ＮＨ２の合成は、前記と同じ方法を用いてなしとげた［ステップ（１）では０．６２ｇ、０．２５ミリモルのベンズヒドリルアミン樹脂、およびステップ（２）では０．９２ｇ］。
【００８８】
Ｎ−アセチル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ＮＨ２の合成は、塩化メチレン中無水酢酸を用いて最終的なＢＯＣ基の除去と樹脂のアセチル化を行なったことを除いては前記と同じ方法を用い、ステップ（１）で０．６２ｇ（０．２５ミリモル）のベンズヒドリルアミン樹脂を用い、ステップ（２）で０．９２ｇの樹脂をアニソールとともに混合して、なしとげた。
【００８９】
［Ｓｔａ８、ｄｅｓＭｅｔ９］リトリンの合成は下記のとおりに行なった。ペプチドが、ペプチド結合だけしか含まないばあい、スタチン、ＡＨＰＰＡ、またはＡＣＨＰＡ残基を類似体のいずれか２つのアミノ酸と置換した。たとえば［Ｓｔａ８、ｄｅｓＭｅｔ８］リトリンは第１にスタチンを樹脂に結合させ、ついでＢＯＣ−Ｈｉｓ（ベンジロキシカルボニル）を添加して続行することにより、同様に調製した。
【００９０】
スタチンまたはＢＯＣ−スタチンは、リッチ（Ｒｉｃｈ）ら、１９７８、ジャーナル　オブ　オーガニック　ケミストリー（Ｊ．　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍ．）、４３巻、３６２４頁；およびリッチら、１９８０、ジャーナル　オブ　メディカル　ケミストリー、２３巻２７頁の方法にしたがって合成し、ＡＨＰＰＡおよびＡＣＨＰＡは、ヒューイ（Ｈｕｉ）ら、１９８７、ジャーナル　オブ　メディカル　ケミストリー、３０巻、１２８７頁；シュダ（Ｓｃｈｕｄａ）ら、１９８８、ジャーナル　オブ　オーガニック　ケミストリー、５３巻、８７３頁；およびリッチら、１９８８、ジャーナル　オブオーガニック　ケミストリー、５３巻、８６９頁の方法にしたがって合成した。
【００９１】
ペプチドｐＧｌｕ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｓｔａ−ＮＨ２の固相合成は、ＢＯＣ−スタチン（リッチら、ジャーナル　オブ　オーガニック　ケミストリー１９７８、４３巻、３６２４頁の方法により調製）をまずはじめにメチルベンズヒドリルアミン−ポリスチレン樹脂に結合する下記の方法を用いてなしとげた。アセチル化ののち、中間体ｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ（ベンジロキシカルボニル）−Ｓｔａ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂を調製した。この調製に用いた合成法を下に詳述する：
【００９２】
１．メチルベンズヒドリルアミン樹脂へのＢＯＣ−スタチンの取り込み。
塩素イオン型のメチルベンズヒドリルアミン−ポリスチレン樹脂（ベガ　バイオケミカルズ社）（１．０ｇ、０．７３ミリモル）を、ベガ２５０Ｃカップラー（Ｃｏｕｐｌｅｒ）ペプチド合成機の反応容器中に入れた。合成機は、下記の反応を行なうようにプログラムされた：
（ａ）塩化メチレン；（ｂ）クロロホルム中１０％トリエチルアミン；（ｃ）塩化メチレン；および（ｄ）ジメチルホルムアミド。
【００９３】
ＢＯＣ−スタチン（１．４６ミリモル）、ジイソプロピルカルボジイミド（２ミリモル）、およびヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１．４６ミリモル）よりジメチルホルムアミド中０℃にて１時間で作った前合成活性エステルとともに、中和した樹脂を１８時間混合した。えられたアミノ酸樹脂は合成機上でジメチルホルムアミド、ついで塩化メチレンを用いて洗浄した。この時点での樹脂混合物はカイザー（Ｋａｉｓｅｒ）ニンヒドリン試験（５分）により、樹脂に８４％のレベルのスタチンが取り込まれていることが見い出された。
【００９４】
塩化メチレン中でアミノ酸−樹脂を１５分間、Ｎ−アセチルイミダゾール（５ミリモル）と混合することにより、アセチル化を行なった。樹脂の遊離アミノ基の９４〜９９％のレベルの誘導が、カイザーニンヒドリン試験（５分）により示された。ついでＢＯＣ−スタチン−樹脂を塩化メチレンで洗浄した。
【００９５】
２．残りのアミノ酸の結合
ペプチド合成機は、下記の反応サイクルを行なうようにプログラムされた：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）塩化メチレン中３３％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（２回、それぞれ５および２５分間）；（ｃ）塩化メチレン；（ｄ）イソプロピルアルコール；（ｅ）クロロホルム中１０％トリエチルアミン；および（ｆ）塩化エチレン。
【００９６】
そののち下記のアミノ酸（２．１９ミリモル）が、引き続いてジイソプロピルカルボジイミド（４ミリモル）のみ、またはジイソプロピルカルボジイミド（４ミリモル）＋ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１．４７または０．７３ミリモル）によって結合され、その結果えられたペプチド樹脂は合成機上でジメチルホルムアミドさらに塩化メチレンを用いて洗浄し、ついで前記方法における洗浄および脱ブロッキング段階の（ａ）から（ｆ）までのサイクルにかけた。
【００９７】
ＢＯＣ−Ｈｉｓ（ベンジロキシカルボニル）（２等量のヒドロキシベンゾトリアゾール存在下で結合）；ＢＯＣ−Ｇｌｙ；ＢＯＣ−Ｖａｌ；ＢＯＣ−ＡｌａおよびＢＯＣ−Ｔｒｐ（１等量のヒドロキシベンゾトリアゾール水和物と０℃で１時間反応させて作られた前合成ヒドロキシベンゾトリアゾール活性エステルとして結合）；ＢＯＣ−ＧｌｎおよびｐＧｌｕ（これも、１等量のヒドロキシベンゾトリアゾール水和物と０℃にて１時間反応させて作られた前合成ヒドロキシベンゾトリアゾールの活性エステルとして結合）。そののち、完成したペプチド樹脂をメタノールで洗浄し、風乾した。
【００９８】
前記ペプチド樹脂（１．６０ｇ、０．７３ミリモル）はついで、アニソール（２．５ｍｌ）、ジチオスレイトール（５０ｍｇ）、および無水フッ化水素（３０ｍｌ）と０℃にて１時間混合した。過剰のフッ化水素は乾燥窒素流下で速やかに蒸発させ、エーテルにて遊離ペプチドを沈殿させて洗浄した。粗ペプチドを１００ｍＬの１Ｍ酢酸中に溶解し、溶液はそののち減圧下で蒸発させた。粗ペプチドを最少容量のメタノール／水１／１中に溶解し、１０容量の酢酸エチルを用いて分離した（ｔｒｉｔｕｒａｔｅｄ）。
【００９９】
分離したペプチドは、オクタデシルシラン−シリカ（ワットマン　パーティシル（Ｐａｒｔｉｓｉｌ）１０　ＯＤＳ−２　Ｍ９）のカラム（内径９．４ｍｍ×５０ｃｍ）に付した。ペプチドは０．１％トリフルオロ酢酸水溶液中、０．１％トリフルオロ酢酸／アセトニトリル（２０／８０）の２０〜８０％直線濃度勾配にて溶出した。画分をＴＬＣおよび分析ＨＰＬＣによって調べ、最高の純度のものがえられるように集めた。水から溶液を凍結乾燥して、白い綿毛状粉末として７７ｍｇの生成物をえた。
【０１００】
ボンベシン類似体、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＮＨ２（ＢＩＭ−２６１８７）の合成は下記のとおりである。他のボンベシン類似体は下記の合成法を適切に修飾することにより調製した。
【０１０１】
１）４−メチルベンズヒドリルアミンへのＢＯＣ−Ｌｅｕの取込み。
塩素イオン型の４−メチルベンズヒドリルアミン−ポリスチレン樹脂（バケム（Ｂａｃｈｅｍ）社）（０．７２ｍｅｑ／ｇ）を、下記の反応サイクルを行なうようにプログラムされたＡＣＴ２００ペプチド合成機（アドバンスド　ケムテック社）の反応容器中に入れた：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）クロロホルム中１０％トリエチルアミン；（ｃ）塩化メチレン；および（ｄ）ジメチルホルムアミド。
【０１０２】
中和した樹脂を塩化メチレン中でＢＯＣ−Ｌｅｕおよびジイソプロピルカルボジイミド（それぞれ３モル等量）と１時間混合した。えられたアミノ酸樹脂はジメチルホルムアミドを用いて合成機上で洗浄し、ジメチルホルムアミド中５％無水酢酸で５分間処理した。ついで、ジメチルホルムアミドおよび塩化メチレンを用いて洗浄した。
【０１０３】
２）残りのアミノ酸の結合
ペプチド合成機は、下記の反応サイクルを行なうようにプログラムされた：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）塩化メチレン中３３％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（２回、それぞれ５および２５分間）；（ｃ）塩化メチレン；（ｄ）イソプロピルアルコール；（ｅ）クロロホルム中１０％トリエチルアミン；および（ｆ）塩化メチレン。
【０１０４】
そののち下記のアミノ酸（３モル等量）を引き続いて同じ方法により結合した。：ＢＯＣ−Ｌｅｕ、ＢＯＣ−Ｈｉｓ（トシル）、ＢＯＣ−Ｇｌｙ、ＢＯＣ−Ｖａｌ、ＢＯＣ−Ａｌａ、ＢＯＣ−Ｔｒｐ、ＢＯＣ−Ｇｌｎ（１等量のヒドロキシベンゾトリアゾール存在下で結合）、ＢＯＣ−Ｄ−Ｐｈｅ（１等量のヒドロキシベンゾトリアゾール存在下で結合）。そののち完成した樹脂をメタノールで洗浄し、風乾した。
【０１０５】
前記ペプチド樹脂（１．４１ｇ）は、アニソール（５ｍｌ）、ジチオスレイトール（５０ｍｇ）、および無水フッ化水素（２５ｍｌ）と０℃にて１時間混合した。過剰のフッ化水素は乾燥窒素流下で速やかに蒸発させ、残渣をエーテルを用いて洗浄した。粗ペプチドを１００ｍｌの４Ｍ酢酸中に溶解し、溶液はそののち減圧下で蒸発させた。粗ペプチドを最少容量のメタノール／水中に溶解し、酢酸エチルを用いて分離した。分離したペプチドは、オクタデシルシラン−シリカ（ワットマン　パーティシル１０　ＯＤＳ−２Ｍ９）のカラム（内径９．４ｍｍ×５０ｃｍ）に付した。ペプチドは０．１％ＴＦＡ水溶液中、０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル（５０／５０）の２０〜８０％直線濃度勾配にて溶出した。画分を分析ＨＰＬＣによって調べ、適切な画分を少量にまで蒸発させて、さらに凍結乾燥し、無色の粉末として６５ｍｇの生成物をえた。
【０１０６】
［Ｄ−Ｃｐａ１、β−Ｌｅｕ８、ｄｅｓＭｅｔ９］リトリンを含む他の化合物、またはたとえば、ＣＨｘＡｌａ８もしくはＮｌｅ９を含む化合物は前記のごとくに調製した；スタチン、ＡＨＰＰＡ、ＡＣＨＰＡ、β−アミノ酸、またはγ−アミノ酸残基は、ＢＯＣ誘導体として結合することにより天然α−アミノ酸残基のばあいと同じように添加した。
【０１０７】
ペプチド合成用の樹脂は、ペプチドのＣ−末端の化学構造にしたがって選択した。より詳しくは、メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）樹脂は、開裂にともなってカルボキシルＣ−末端を生じるエステル結合により第１アミノ酸に結合させた；他方メチルベンズヒドリルアミンおよびベンズヒドリルアミン樹脂は開裂にともなってアミドＣ−末端を生じる２級アミン結合によって第１アミノ酸に結合させた。
【０１０８】
Ｃ−末端で修飾されたペプチドは、前記の方法を適切に修飾することにより調製した。たとえば、Ｏ−メチルエステル誘導体は、キャンブル（Ｃａｍｂｌｅ）ら、「アイシー　アイ　２１６１４０　ア　ポテント　イン　ビボ　アンタゴニスト　アナログ　オブ　ボンベシン／ガストリン　リリーシング　ペプチド　デライブドフロム　ザ　Ｃ−ターミナル　シーケンス　ラッキング　ザ　ファイナル　メチオニン　レジデュー」（“ＩＣＩ　２１６１４０　Ａ　Ｐｏｔｅｎｔ　Ｉｎ　Ｖｉｖｏ　Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ　Ａｎａｌｏｇｕｅ　ｏｆ　Ｂｏｍｂｅｓｉｎ／Ｇａｓｔｒｉｎ　Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｄｅｒｉｖｅｄ　Ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　Ｃ−Ｔｅｒｍｉｎａｌ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｌａｃｋｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｆｉｎａｌ　Ｍｅｔｈｉｏｎｉｎｅ　Ｒｅｓｉｄｕｅ”）、ライフ　サイエンス（ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ）、１０〜１１月１９８９に記載のように合成した。これを、ここで参考文献としてあげる。
【０１０９】
キャンブルらはトリメチルアセチルで修飾されたＮ−末端およびメチルエステルで修飾されたＣ−末端を有するボンベシン類似体の合成を述べている。この類似体、（ＣＨ３）３Ｃ−ＣＯ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−ＯＣＨ３は前記したような固相法によって合成された。Ｎ−末端トリメチルアセチル修飾は、ペプチドと対応する無水物の反応によってえることができる。Ｃ−末端メチルエステル修飾は、ペプチド樹脂をメタノールおよびトリエチルアミンで処理することによりえることができる。
【０１１０】
本発明のペプチドは、ペプチド内に２つのシステイン残基が存在するばあいジスルフィド架橋の形成によって、またはＣｙｓ−Ｃｙｓジスルフィド結合がなければ下記の例に示す方法にしたがって環化されてもよい。
【０１１１】
ＨＦ開裂によりペプチド−樹脂エステルからえられた粗ペプチド酸はＤＭＦ（０．１％〜１％濃度）中に溶解し、縮合剤（たとえばＢＯＰ試薬、ＤＥＰＣ試薬、ＤＰＰＡ試薬、または他のいずれの縮合剤でも）、ついで塩基（たとえば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン）で室温にて１〜３日処理した。真空で乾燥するまで溶媒を除去したのち、残渣を通常の方法にしたがってＨＰＬＣにより精製した。Ｄ−Ｐｈｅ１がアミド架橋を介してＬｅｕ９に共有結合した環状［Ｄ−Ｐｈｅ１、Ｌｅｕ８、Ｌｅｕ９］リトリンの環化は、ＢＯＰ試薬としてベンゾトリアゾール−１−イロキシトリス（ジメチルアミン）フォスフォニウムヘキサフルオロフォスフェート、ＤＥＰＣ試薬として、ジエチルシアノフォスフェートおよびＤＰＰＡ試薬としてジフェニルフォスフォリルアジドを用いて前記の方法にしたがってなしとげられた。
【０１１２】
（類似体の抗肝癌活性の定量）
腫瘍系統（ｓｙｓｔｅｍ）：
ナショナル　キャンサー　インスティテュート（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）のエイチ　ピー　モーリス（Ｈ．Ｐ．Ｍｏｒｒｉｓ）博士より入手したＭ５１２３肝癌細胞を、バッファロ系ラットにＮ−（２−フルオレニルフタルアミド酸）の摂取により誘導し、引き続き移植して樹立した。免疫欠損の無胸腺マウスにＭ５１２３肝癌細胞を移植すると徐々に増殖する致死性の腫瘍が再現性良くえられた。
【０１１３】
分析方法（ｓｙｓｔｅｍ）：
ボンベシン類似体の肝癌細胞に対する増殖抑制効果を定量するために２つの生体内での分析方法、すなわち腎被膜下の分析および皮下腫瘍の分析を行なった。
【０１１４】
（１）腎被膜下の分析
腎被膜下の分析は、固形の悪性腫瘍から調製した腫瘍異種移植片に対する化学療法剤を検査するための迅速な生体内での方法として考案されたものである。抗腫瘍スクリーニングの方法としては、ヒトおよびネズミの両者の腫瘍が無胸腺雌性マウスの異種移植として検査されることができる。本分析の詳細については、ボーデン、エー　イー（Ｂｏｇｄｅｎ，Ａ．Ｅ．）らのア　ラピッド　スクリーニングメソッド　フォー　テスティング　ケモセラピューティック　エイジェンツ　アゲインスト　ヒューマン　テューモア　ゼノグラフツ（ａ　ｒａｐｉｄ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｅｓｔｉｎｇ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ａｇｅｎｔｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｈｕｍａｎ　ｔｕｍｏｒ　ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ）（プロシーディング　オブ　シントム　ユース　オブ　アサイミック（ヌード）マイスイン　キャンサー　リサーチ（Ｐｒｏｃ．　Ｓｙｍｐ．　Ｕｓｅ　ｏｆ　Ａｔｈｙｍｉｃ　（Ｎｕｄｅ）　Ｍｉｃｅ　ｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ）２３１頁掲載、ハウチェンズ（Ｈｏｕｃｈｅｎｓ）ら編、グスタフ　フィッシャー（Ｇｕｓｔａｖ　Ｆｉｓｃｈｅｒ）、ニューヨーク（１９７８））を参照されたい。
【０１１５】
その考案の基礎は、固形の腫瘍が不均一な細胞集団（生合成機能、増殖能力、薬物および成長因子への感受性、ならびに抗原もしくは受容体の発現の点で不均一）からなっていることや上皮性／基質性の関連の複雑さが腫瘍の増殖に影響するのみならず、他の機能的な特徴にも影響することを考慮することにある。
【０１１６】
腎被膜下移植に腫瘍断片を用いることにより、受容体反応、細胞間接触および細胞集団の空間的な関係に必須の細胞膜、ならびに自己分泌と傍分泌効果の安定性に必須である腫瘍断片中の組織の両者の完全な状態が維持される。ボンベシン類似体のような、薬物または生物学的応答調節剤に対する腫瘍の応答が、このように比較的完全な微環境内で、クローン原性および非クローン原性のいずれもの多細胞集団の総合的な応答（ｎｅｔ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ）として測定される。さらに実際的には存在する細胞間環境のアクセシビリティ（ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ）の障壁をも提供する。
【０１１７】
さらに、移植時ならびに実験終了時にふたたび腫瘍異種移植片の大きさをその場で（ｉｎ　ｓｉｔｕ）測定することにより、試験化合物に対する腫瘍の感受性を評価するための、腫瘍の大きさの変化の、きわめて単純なパラメータを用いることが可能となる。最初に測定することにより、薬効の評価のための各異種移植片そのものの基準がえられ、すべて臨床的に重要であるパラメータである、進行、安定化、部分的寛解および完全寛解の点で、薬物に対する腫瘍の応答が測定できる。
【０１１８】
本分析において、移植・確立されたＭ５１２３肝癌細胞から調製した異種移植片を、まず免疫欠損無胸腺雌性マウスに移植し、ついでボンベシン類似体、ＢＩＭ−２６１５９処置を行なった。より明確には、０日目に、３２匹の無胸腺雌性マウスにＭ５１２３ラット肝癌細胞の１ｍｍの立方体断片を腎被膜下に移植した。ＢＩＭ−２６１５９を用いた処置は、１日目に開始し、注射１回あたり２５０、５０および５μｇ、皮下、１日２回、１〜１２日（毎日）のスケジュールで行なわれた。１３日目にマウスを殺し、０日目から１３日目のあいだの腫瘍の大きさの変化を定量するために、腎臓を摘出して腫瘍の大きさを測定した。
【０１１９】
腫瘍の大きさは、オクラー（ｏｃｕｌａｒ）ユニット（ＯＭＵ、１０　ＯＭＵ＝１ｍｍ）の目盛りを付した接眼鏡（ｏｃｕｌａｒ）マイクロメーターを備えた立体鏡を用いてその場で測定した。各腫瘍につき２つの垂直な（ｐｅｒｐｅｎｄｉｃｕｌａｒ）直径を測り、１３日間にわたる平均腫瘍直径の差を算出した。
【０１２０】
（２）皮下の分析
腎被膜下の分析と異なり、皮下の分析においては、腫瘍異種移植切片は腎皮膜下ではなく皮下に移植され、その移植後、随時処置を開始することができる。
【０１２１】
本分析では、腫瘍は無胸腺雌性マウスの右脇腹に皮下移植され、試験化合物、ＢＩＭ−２６１５９、ＢＩＭ−２６１８７、ＢＩＭ−２６１８９、ＢＩＭ−２６２１８、ＢＩＭ−２６２２３およびＢＩＭ−２６２２８、ならびにコントロールは左脇腹に皮下注射された。ＢＩＭ−２６１５９、ＢＩＭ−２６１８７、ＢＩＭ−２６１８９の構造については前記の「発明の概要」を参照のこと。ＢＩＭ−２６２２３およびＢＩＭ−２６２２８の構造は下記のとおりである：
ＢＩＭ−２６２２３：
Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＮＨ２
ＢＩＭ−２６２２８：
Ｄ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＣＨｘＡｌａ−Ｌｅｕ−ＮＨ２
【０１２２】
移植された腫瘍の処置に対する応答を、以下のようにモニターした。腫瘍の長さおよび幅を最初に感度のよいヴェルニーア（Ｖｅｒｎｉｅｒ）カリパスを用いて測定した。ついで、腫瘍重量を次の方法に基づいて計算した：［長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）２］／２ミリグラム。腫瘍の大きさまたは重量に加えて、この分析方法では「遅延時間」のパラメータ、すなわち、ある大きさに達するための腫瘍の増殖能におよぼす初期の処置の効果、が可能である。
【０１２３】
１つの実験では、３２匹のマウスに、０日目にＭ５１２３肝癌細胞異種移植片を皮下移植し、１群あたり８匹の４群に無作為に分けた。ボンベシン類似体ＢＩＭ−２６１５９を、注射１回あたり２５０、５０、１０μｇ、皮下、１日２回、１〜１８日（毎日）投与した。
【０１２４】
いま１つの実験では、我々は５つのボンベシン類似体、すなわち、ＢＩＭ−２６１８７、ＢＩＭ−２６１８９、ＢＩＭ−２６２１８、ＢＩＭ−２６２２３およびＢＩＭ−２６２２８の活性を１８日間にわたって試験した。４０匹のマウスに０日目にＭ５１２３肝癌細胞異種移植片を皮下移植し、ついでコントロール群の１０匹と各６匹の試験群に無作為に分けた。すべての化合物を、注射あたり１００μｇ、皮下、１日２回、１〜１８日（毎日）投与した。
【０１２５】
結果：
図１に示すのは、無胸腺雌性マウスに移植した肝癌細胞の増殖に対するＢＩＭ−２６１５９の腎被膜下の分析により定量した効果である。調べた３種の投与量すべて、すなわち５、５０、および２５０μｇ／注射、皮下、１日２回、１〜９日（毎日）、においてこのボンベシン類似体は１３日の期間にわたって肝の腫瘍の成長を有意に、すなわち約２０％（すなわち［１００−　　　　％試験／コントロール％］）減少させる効果があった。このような効果が、投与量が注射あたり５μｇと低くても観察されることは注目すべきである。同じ結果を表１にも示す。
【０１２６】
【表１】
2004002331.tif 000021
【０１２７】
ＢＩＭ−２６１５９の増殖抑制効果は、皮下の分析を行なったばあい、より顕著であった。図２および表２の両方に示すように、このボンベシン類似体は、種々の投与量で肝癌細胞の成長を大いに減じた。注射あたり５０μｇの投与量、皮下、１日２回、１〜９日（毎日）、において１８日を越える期間にわたって腫瘍の成長を７５％減じる効果があった。より低い量（１０μｇ）およびより高い量（２５０μｇ）で投与されたＢＩＭ−２６１５９は、わずかに低い抗腫瘍活性（それぞれ、７２％および６６％抑制）を示し、逆さベル型の量反応性を呈した（図２）。同じ実験で、移植した腫瘍の成長を種々の時間のポイントすなわち、４日、８日、１１日、１５日でもモニターした。図３に明瞭に示されるように、移植した腫瘍の成長速度は、３種のすべての投与量でのＢＩＭ−２６１５９による処置で、８日ののちにコントロールに比して、大変遅かった。
【０１２８】
【表２】
2004002331.tif 000022
【０１２９】
５つの他のボンベンシン類似体についても皮下の分析によって抗腫瘍活性を調べ、その結果を表３に示す。ＢＩＭ−２６１８９、ＢＩＭ−２６２１８、ＢＩＭ−２６２１７の３つの類似体が、移植した肝癌細胞の成長を１８日の期間にわたってそれぞれ、４４％、３０％および１７％減じた。他方、２つの類似体、ＢＩＭ−２６２２３およびＢＩＭ−２６２２８はわずかに腫瘍細胞の成長を賦活化した。
【０１３０】
【表３】
2004002331.tif 000023
【０１３１】
（用途）
構造式（Ａ）および（Ｂ）で示されるボンベンシン類似体は、肝臓癌の生体内治療に用いることができる。
【０１３２】
投与量は治療される状態、選択される投与経路、および類似体の比活性に依存し、最終的には治療にあたる医師または獣医師が決定することになろう。ここでは、治療にあたる医師または獣医師が決定するような活性類似体の量を「治療上有効な量」といい、それは好ましくは１００μｇ／ｋｇ／日から５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内である。
【０１３３】
類似体は、治療される状態にふさわしければいかなる経路で投与してもよい。好ましくは、類似体は治療を受ける被検体の血流に注射される。しかしながら、治療される状態や用いる類似体の活性に応じて、静脈内、皮下、筋肉内、腹膜内、鼻、口、などのように経路を変えることは、当業者により難なく認められることであろう。
【０１３４】
ボンベシン類似体を純粋かまたは実質上純粋な化合物として投与することも可能であるが、薬学的製剤または調製物として提供することが好ましい。
【０１３５】
家畜用およびヒト用の使用の両方に対して、本発明の製剤は、前記本発明のペプチド類似体を、１またはそれより多くの薬学的に許容しうるそれらのための担体、および随意には他の治療用の成分とともに含むものである。
【０１３６】
担体は、製剤中の１またはそれより多くの活性成分に適合し（さらに好ましくは、ペプチドを安定化しうる）、および治療を受ける被検体にとって有害でないという点で「許容しうる」ものでなければならない。望ましくは、製剤には酸化剤またはペプチドと不適合であると知られている他の物質を含有すべきではない。たとえば、環の形状のボンベシン類似体は酸化されており；そこで賦形剤として還元剤が存在するとシスチンの二硫黄架橋（ｄｉｓｕｌｆｕｒ　ｂｒｉｄｇｅ）の開裂をひきおこしてしまうであろう。他方、高い酸化状態にあると、システインスルホキシドの形成やトリプトファンの酸化を招きうる。結論としては、注意深く賦形剤を選択することが重要だということである。前に指摘したように、ｐＨがいま一つの重要な因子であり、生成物をわずかに酸性の条件（ｐＨ５から６）に緩衝化しておくことが必要である。
【０１３７】
製剤は、便宜上投与単位形態で提供されてもよく、製薬の技術においてよく知られたいかなる方法によって調製されてもよい。すべての方法に、１またはそれより多くの活性成分を１またはそれより多くの副成分より構成される担体とあわせる段階が含まれる。
【０１３８】
通例、活性成分を、細かく分割された固型担体と均一にかつ完全に混和することにより、錠剤または粉末剤用の製剤を調製し、そののち、錠剤のばあいのように必要であれば生成物を所望の形状および大きさに成型する。
【０１３９】
他方、静脈内投与に好適な製剤は、便宜上１またはそれより多くの活性成分の滅菌水溶液を含んでなる。好ましくは、該溶液は治療を受ける被検体の血液と等張である。便宜的には、このような製剤は水溶液を作るために固型の１またはそれより多くの活性成分を水に溶解し、該溶液を滅菌に付すことにより調製するとよい。製剤は、単回または複数回分の投与量を含む形で、たとえば密封したアンプルまたはバイアルで提供されるとよい。
【０１４０】
（その他の実施態様）
前記記載事項は、本発明における特定の実施態様に限ったものである。しかしながら、本発明の利点の一部またはすべてを達成しつつ、変化や改良を本発明に加えてもよいことは明らかであろう。このような実施態様もまた下記の請求の範囲内にあるものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、腎皮膜下分析により、無胸腺雌性マウスに１３日間移植した肝癌に対するボンベシン類似体、ＢＩＭ−２６１５９の成長阻害効果を示すグラフである。
【図２】図２は、皮下分析により、無胸腺雌性マウスに１８日間移植した肝癌に対するＢＩＭ−２６１５９の成長阻害効果を示すグラフである。
【図３】図３は、皮下分析により、無胸腺雌性マウスに移植した肝癌への種々の時点でのＢＩＭ−２６１５９の成長阻害効果を示すグラフである。
【図１】
2004002331.tif 000033
【図２】
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【図３】
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