(57)【要約】【課題】エストロゲン分解酵素を始めとする各種ステロイド分解酵素を用いて、エストロゲン依存性腫瘍等の「ステロイドを原因とする各種疾患」を治療、若しくは予防できる医薬・機能性食品の製造法を提供する事を課題とする。【解決手段】エストロゲン分解微生物等から調整したエストロゲン分解酵素を経口投与、若しくは注射投与する事によって、血液中の１７β−エストラジオール濃度を低下させ、エストロゲン依存性腫瘍等の「エストロゲンを原因とする各種疾患」を治療、若しくは予防できる医薬・機能性食品を製造する。また、同様の方法を用いてエストロゲンだけでなく、各種アンドロゲン、コルチゾール、胆汁酸、コレステロール等の「エストロゲン以外のステロイド」分解を対象とした「（血液中の）特定ステロイド濃度低減能を有する医薬・機能性食品」を製造する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エストロゲン分解微生物から調整したエストロゲン分解酵素を経口投与、若しくは注射投与する事によって、血液中の１７β−エストラジオール濃度を低下させ、エストロゲン依存性腫瘍等の「エストロゲンを原因とする各種疾患」を治療、若しくは予防できる医薬・機能性食品の製造法。
【請求項２】
請求項１においてエストロゲン分解酵素を微生物以外の生物から調整する方法。
【請求項３】
請求項１及び２においてエストロゲンの代わりに、各種アンドロゲン、コルチゾール、胆汁酸、コレステロール等の「エストロゲン以外のステロイド分解」を対象とした「（血液中の）特定ステロイド濃度低減能を有する医薬・機能性食品」の製造法。
【請求項４】
請求項１〜３を家畜、ペット等に対する動物薬・食品の製造に用いる方法。
【請求項５】
請求項１〜４で示した方法で得たステロイド分解酵素剤を用いるにあたって、プロテアーゼ及びリパーゼの少なくとも１種を予め、若しくは同時に投与する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、各種ステロイド分解酵素を用いて、エストロゲン依存性腫瘍等の「ステロイドを原因とする各種疾患」を治療、若しくは予防できる医薬・機能性食品の製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、エストロゲン依存性腫瘍（乳癌、子宮内膜癌等）の治療手段としては、（１）卵巣、副腎、下垂体等の外科的摘出、（２）卵巣におけるエストロゲン分泌を抑制するＬＨ−ＲＨアナログ投与、（３）エストロゲン産生酵素であるアロマターゼの阻害剤投与、（４）エストロゲン受容体のアンタゴニスト投与等が行われているが、「エストロゲン分解酵素を投与する方法」は用いられていない。一方、最近、環境科学分野においては、複数の研究室からエストロゲン分解微生物株が分離されているが、その用途は排水・土壌等の環境中のエストロゲン分解のみに限定されており、医療目的（すなわち、ヒト血液エストロゲン量低減）には用いられていない。また、ヒト等の動物の肝臓ではエストロゲン分解酵素が機能している事も従来知られているが、その分解酵素の医療利用も行われていない。本発明の独自性、新規性はこの点にあり、エストロゲン分解微生物や動物等から調整したエストロゲン分解酵素を経口投与、若しくは注射投与する事によって血液中のエストロゲン濃度を低下せしめ、それによってエストロゲン依存性腫瘍等の治療、予防に用いる事を目的としている。
【０００３】
なお、血液中に存在する特定疾患原因物質を（抗原性を有する異種蛋白である）微生物酵素の経口投与によって分解している医薬の例としては、抗炎症剤・去痰剤であるセラペプターゼ（Ｓｅｒｒａｔｉａ属細菌由来）や血栓溶解剤であるストレプトキナーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属細菌由来）等を挙げる事ができるが、これらはいずれも蛋白質分解酵素であり、「血液中のステロイドを分解する医薬・機能性食品」は現在のところ開発されておらず、そういった面でも本発明の独自性、新規性を主張する事ができるものと考えられる。
【０００４】
また、本発明はエストロゲン以外にも（１）アンドロゲン依存性腫瘍に関わるテストステロン等のアンドロゲン、（２）一部でストレスホルモンとして報道されているコルチゾール、（３）動脈硬化等に関わるコレステロール等の「（血液中の）特定ステロイド濃度低減能を有する医薬・機能性食品」の製造にも適用可能であるが、エストロゲン同様、従来そのような目的でステロイド分解酵素を医薬もしくは機能性食品化した例はなく、その点でも十分な新規性・独自性を有するものと考えられる。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
各種ステロイド分解酵素を用いて、エストロゲン依存性腫瘍等の「ステロイドを原因とする各種疾患」を治療、若しくは予防できる医薬・機能性食品の製造法を提供する事を課題とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記課題を解決するため、エストロゲン分解微生物から調整したステロイド分解酵素を経口投与、若しくは注射投与する事によって、血液中のエストロゲン濃度を低下させ、エストロゲン依存性腫瘍等のエストロゲンを原因とする各種疾患を治療、若しくは予防できる医薬・機能性食品として用いればよい。また、エストロゲンの代わりに、アンドロゲン、コルチゾール、胆汁酸、コレステロール等の各種ステロイド分解酵素も、同様の手法を用いて、各々のステロイドが関係している疾患に対する医薬・機能性食品として用いればよい。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を更に詳細に説明する。まず、エストロゲン依存性の乳癌、子宮癌、卵巣癌等に対する治療・予防効果を有する医薬・機能性食品を製造するにあたっては、まず、エストロゲン分解酵素を調整する必要がある。エストロゲン分解酵素の分離源としては主に微生物の他、動物が考えられるが、それ以外の生物でも良い。まず、微生物に関しては、発明者らが既に出願した「エストロゲン分解菌を用いた機能性食品製造法および環境修復法（特願２００２−１２９３９６）」において、分解微生物の分離方法並びに該方法を用いて分離したエストロゲン分解微生物株（ストレプトマイセス属ＦＥＲＭ  Ｐ−１８７８２）を報告している。また、室蘭工業大学の藤井克彦助手や東京大学工学部の矢野修身教授らの研究室でも、集積培養法を用いてエストラジオール分解菌が分離されているが、（従来、環境汚染処理にしか用いられていなかった）これら既存のエストロゲン分解菌が医療目的のために利用可能である事は他研究室では知られていない。また、微生物だけでなく、例えばヒトの肝臓ではエストロゲン分解活性が存在する事が従来知られているので、ヒト等の動物をエストロゲン分解酵素分離源として用いるのも一つの方向性である。なお特にヒトを分離源とした場合は、抗原性の点で特に優れた酵素薬が取得できる可能性がある。
【０００８】
ところでエストロゲン分解酵素の調整法としては、健康食品（機能性食品）として販売されているナットウキナーゼ（納豆菌培養液の凍結乾燥評品）のように（１）酵素を誘導させた培養液（若しくは細胞破砕液）をそのまま凍結乾燥処理する調整法（２）酵素を誘導させた培養液（若しくは細胞破砕液）を限外ろ過、若しくは塩析・透析後に凍結乾燥処理する調整法のような簡単かつ安価な方法でも構わないが、その際は販売前に、動物実験で予め血清Ｅ２濃度低減効果があるか否か確認しておく必要があるだけでなく、十分な安全性確認（動物試験およびフェーズＩに準ずる臨床試験）も必要である。また、医薬として用いる場合は、ダーゼン（セラチア菌の蛋白分解酵素で抗炎症剤として販売）のように更に（クロマトグラフィー等で）酵素の精製度を高める必要がある事は言うまでもない。なお、この際、注意しなければいけない事は、エストロゲンの分子構造が複雑である事からエストロゲンを分解する酵素は単一生物内でも複数種ある可能性が高いという点であり、そういった意味でクロマトグラフィー等で分離精製する場合は複数のピーク溶出物の組み合わせのエストロゲン分解活性を調べる必要がある。また、多くの産業用酵素で行われているように、必要ならエストロゲン分解酵素をコードしている遺伝子群をクローニングし、その遺伝子群を組み込んだ発現ベクターから酵素群を大量発現させた後に精製する方法を用いてもよいし、その遺伝子群を蛋白工学や分子進化工学等の手法を用いて機能改変（安定性や活性向上等）させてから大量発現させた酵素を用いても良い。
【０００９】
なお、エストロゲン分解酵素の投与法としては、主に経口投与と注射投与の二つが考えられるが、酵素の純度が低い場合は（腸溶カプセル等を用いた）経口投与に限定される。なお、本来、抗原性がある異種蛋白を経口投与薬として用いる例としては（１）塩化リゾチーム（鶏由来の抗炎症剤）、（２）セミアルカリプロティナーゼ（糸状菌由来の抗炎症剤）、（３）セラペプターゼ（細菌由来の抗炎症剤）、（４）ストレプトキナーゼ（細菌由来の血栓溶解剤）、（５）ナットウキナーゼ（細菌由来の血栓溶解性健康食品）、（６）ブロメライン（植物由来の抗炎症剤）等が挙げられるが、いずれも腸溶カプセル等で経口投与された後に腸管細胞から吸収され、血液中で薬理作用を示しているので、本発明で用いる異種エストロゲン分解酵素を（安全性確認試験、薬理確認試験の後に）経口投与剤としても用いても特に不自然ではない。
【００１０】
次に、請求項１及び２においてエストロゲンの代わりに、各種アンドロゲン、コルチゾール、コレステロール等の「エストロゲン以外のステロイド」分解を対象とした「（血液中の）特定ステロイド濃度低減能を有する医薬・機能性食品」の製造法について説明するが、基本的には上で述べた血清エストロゲン分解剤製造法と概要は同じである。
【００１１】
その中で、特にアンドロゲンの場合は、（前立腺癌、男子乳癌等の）アンドロゲン依存性腫瘍、男性型脱毛症、女性多毛症、多嚢胞性卵巣症候群、睾丸間質細胞腫、男性化卵巣腫瘍、先天性副腎酵素欠損症、副腎性男性化腫瘍、睾丸女性化症候群、行動異常（性犯罪、凶暴犯罪等）等のテストステロン過剰と関係する疾病等に対する治療・予防薬、予防食品としての利用が特に期待できよう。また、アンドロゲン分解酵素を分離する際は、例えば男性脱毛症を対象とする場合にデヒドロテストステロン分解酵素に着目する一方、前立腺癌を対象とする場合にはテストステロン分解酵素に着目するといったように、対象とする疾患によってアンドロゲン（及びその分解酵素）の種類を選択する事が肝要である。なお、発明者らは、既に「テストステロン分解菌を用いた機能性食品・医薬製造法（特願２００２−３８３０２３）」においてテストステロン分解菌株の分離方法及び該方法を用いて分離したテストステロン分解菌株ＦＥＲＭ  Ｐ−１９１２３を報告しているが、テストステロン分解酵素を分離するにあたって特願２００２−３８３０２３で示した微生物分離方法を用いてもよいし、その他の既知のテストステロン分解微生物も使用してもよい。
【００１２】
次に、コレステロール分解酵素の分離源としてのコレステロール分解微生物については、特開平５−７６３１１にて示されているように、アースロバクター属、プロタミノバクター属、ミクロバクテリウム属、セラチア属、プレピバクテリウム属、コリネバクテリウム属、バチルス属、ノカルジア属、ミコバクテリウム属、ストレプトミセス属、ロドコッカス属等の微生物、並びにその他既知のコレステロール分解微生物のいずれもが使用できる。具体的には、アースロバクター・シンプレックス（ＩＡＭ−１６６０）、プロタミノバクター・アルボフラプス（ＩＡＭ−１０４０）、ミクロバクテリウム・ラクチクム（ＩＡＭ−１６４０）、プレピバクテリウム・リポリチクム（ＩＡＭ−１３９８）、コリネバクテリウム・エクイ（ＩＡＭ−１０３８）、バチルス・ロゼウムィ（ＩＡＭ−１２５７）、バチルス・スフェリカス（ＡＴＣＣ−７０５５）、ノカルジア・コラリナ（ＩＦＯ−３３３８）、ノカルジア・ミニマ（ＩＡＭ−０３７４）、ノコアルジア・カルドネリ（ＩＡＭ−０１０５）、セラチア・マルセツセンス（ＩＡＭ−１２５５）、ミコバクテリウム・フレイ（ＩＦＯ−３１５８）、ミコバクテリウム・アビウム（ＩＦＯ−３０８３）、ストレプトミセス・スペツセンス（ＩＡＭ−００７４）、ロドコッカス・エクイ（ＪＣＭ−６８１９）、ロドコッカス・エリトロホリス（ＪＣＭ−６８２４）、ロドコッカス・ロドクロウス（ＪＣＭ−３２０２）、ロドコッカス・コラリナス（ＪＣＭ−３１９９）等の既知微生物を挙げることができるが、これ以外のコレステロール分解微生物や動物からコレステロール分解酵素を新たに分離しても良い。
【００１３】
コレステロールは動脈硬化等の原因であり、コレステロール分解酵素の医薬化は特に重要である。なお、分野はやや異なるが卵黄のコレステロールを分解するにあたって、コレステロール分解酵素等を投与する前に予めプロテアーゼ及びリパーゼの少なくとも一種で処理しておいた方がよい事が特開平５−７６３１１で示されているので、腸内若しくは血液内のステロイドを分解する今回の目的においても、腸溶カプセル等で予めプロテアーゼ若しくはリパーゼで処理しておく方が効率が上がる可能性もある。
【００１４】
最後に（一部でストレスに関係していると報道されている）コルチゾールや（コレステロール生合成と関係していると言われている）胆汁酸に関しても、基本的には上で挙げた概要と同じであるので詳しく説明しないが、本基本特許に含めるものとする。なお、ここで挙げたステロイド分子種の中では、エストロゲンが最も血液濃度が低く、次にテストステロン、コレステロールと続くが、そういった意味で「最も分解対象物質濃度が低い」エストロゲン分解酵素が最も医療効果を示しやすいかもしれない。
【００１５】
次に、実施例にて本発明をより詳細に説明するが、本発明は下記の例のみに限定されるものではない。
【００１６】
【実施例】
１２週齢の雄マウス（ＪＣＬ：ＩＣＲ種、日本クレア）を２０匹購入し、自由摂取（日本クレア製、飼育繁殖固型飼料ＣＥ−２）、温度（１８〜２３℃）で計２週間飼育した。２０匹のうち１０匹には１日に１回（計１４回）、ゾンデでエストロゲン分解菌ＦＥＲＭ  Ｐ−１８７８２培養液上清を粗酵素液として０．８ｍｌ経口強制投与し、残り１０匹は陰性対照区とし通常飼育した。２週間後、マウスに異常はなく、体重も両区で差はなかった。その上で２０匹全ての心臓採血を行い、ＲＩＡによる血清１７β−エストラジオール（Ｅ２）量測定に供した（三菱ＢＣＬ）。その結果、粗酵素無添加区の平均値は２４．２ｐｇ／ｍｌだったのに対し、粗酵素液添加区は１８．２ｐｇ／ｍｌだった。ただ、今回のデータは使用したマウス個体数が必ずしも十分でなく、今後、検体数を増やした上で詳細な統計解析が必要である。また、生理がなく血清Ｅ２濃度が比較的一定している雄マウスを今回、試験に用いたが、本来、本発明は女性の乳癌、卵巣癌等治療を対象としたものであるので、雌マウス（若しくはラット）の解析が今後、更に必要になってくるであろう。
【００１７】
【発明の効果】
エストロゲン分解微生物から調整したエストロゲン分解酵素を経口投与、若しくは注射投与する事によって、血液中の１７β−エストラジオール濃度を低下させる事ができれば、乳癌等のエストロゲン依存性腫瘍等を治療、若しくは予防でき、ひいては国民の健康と福祉に貢献する効果が期待できるものと考えられる。また、エストロゲンだけでなく、アンドロゲン、コルチゾール、コレステロール等のその他の血液内ステロイド物質濃度も同様に低減できれば、それぞれの物質が原因となっている疾病のリスクを低減できる効果も期待できる。