(57)【要約】【課題】液体食品に混入した虫類の混入時期を簡便に再現性よく判定する方法を提供する。【解決手段】本発明の虫類混入時期判定方法は、液体食品に混入した被検虫類中の所定の成分の含有量及び／又は所定の複数成分の組成比を測定する測定工程と、液体食品中に浸漬せしめた被検虫類と同種のサンプル虫類中の所定成分の含有量及び／又は所定の複数成分の組成比と、サンプル虫類を液体食品に浸漬してからの経過期間との間の予め得られている相関関係に基づいて、測定工程において得られた所定成分の含有量及び／又は所定の複数成分の組成比の測定値から被検虫類が液体食品に混入した時期を判定する判定工程と、を備えたことを特徴とする。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体食品に混入した被検虫類中の所定の成分の含有量及び／又は所定の複数成分の組成比を測定する測定工程と、
前記液体食品中に浸漬せしめた前記被検虫類と同種のサンプル虫類中の前記所定成分の含有量及び／又は前記所定の複数成分の組成比と、前記サンプル虫類を前記液体食品に浸漬してからの経過期間との間の予め得られている相関関係に基づいて、前記測定工程において得られた前記所定成分の含有量及び／又は前記所定の複数成分の組成比の測定値から前記被検虫類が前記液体食品に混入した時期を判定する判定工程と、を備えたことを特徴とする虫類混入時期判定方法。
【請求項２】
前記所定の成分は、前記液体食品から前記被検虫類の体内に浸透する成分であることを特徴とする請求項１に記載の虫類混入時期判定方法。
【請求項３】
前記所定の成分は、前記被検虫類の体内から前記液体食品中に拡散する成分であることを特徴とする請求項１に記載の虫類混入時期判定方法。
【請求項４】
前記所定の成分は、糖類及びアミノ酸からなる群から選択される少なくとも一つの成分であることを特徴とする請求項１〜３の何れか１項に記載の虫類混入時期判定方法。
【請求項５】
前記液体食品は麦芽アルコール飲料であり、
前記所定の成分は糖類、アミノ酸、及びイソα酸からなる群から選択される少なくとも１つの成分であることを特徴とする請求項１〜３の何れか１項に記載の虫類混入時期判定方法。
【請求項６】
前記測定工程において、
前記被検虫類から抽出した抽出液の紫外線領域から可視光線領域の所定領域の吸収強度又は蛍光強度を測定し、得られた吸収強度又は蛍光強度に基づいて前記所定成分の含有量及び／又は前記所定の複数成分の組成比を求めることを特徴とする請求項１〜５の何れか１項に記載の虫類混入時期判定方法。
【請求項７】
前記測定工程において、
前記被検虫類から抽出した抽出液の紫外線領域から可視光線領域の所定領域の吸収スペクトル又は蛍光スペクトルを測定し、得られた吸収スペクトル又は蛍光スペクトルに基づいて前記所定成分の含有量及び／又は前記所定の複数成分の組成比を求めることを特徴とする請求項１〜５の何れか１項に記載の虫類混入時期判定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ビール・発泡酒、その他の飲料などの液体食品中に混入した虫類の混入時期を判定するための方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
食品メーカーにおいては、顧客から製品中にハエやゴキブリ等の虫類が混入している旨の苦情が寄せられることがある。この場合、その虫類が混入した時期、すなわち食品の製造工程中に混入したのか開封後に混入したのかを明確にすることは顧客の苦情に適切に対応する上で非常に重要である。従って、その虫類がいつ混入したかを判定するため、酵素学的ないくつかの方法が提案されている。そのうちの一つの方法としてアセチルコリンエステラーゼの残存活性により虫類の死亡時期を判定する方法が特許文献１に開示されている。
【０００３】
【特許文献１】
特開平８−５６６９６号公報
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、このような従来の方法ではゴキブリ類のようにアセチルコリンエステラーゼ活性が低く、大きさにばらつきのある虫類の場合、正確な死亡時期判定が困難であった。また、この死亡時期判定方法は虫類の死亡した時期を判定するものであり、虫類の混入した時期を直接判定するものではないため、既に死亡した虫類が混入した場合には混入時期を正確に判定することはできないという問題もあった。
【０００５】
そこで、本発明は上記課題を解決し、液体食品に混入した虫類の混入時期を簡便に再現性よく判定する方法を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、虫類が液体食品に浸漬された場合に虫類と液体食品との間で互いの各種含有成分が相互に拡散及び浸透し、平衡に達するまでは虫類体内において虫類中より液体食品中に多く含まれる所定成分は経時的に増加し、液体食品中より虫類中に多く含まれる所定成分は経時的に減少することに着目し、このような所定成分の虫類体内における経時的な変化とその虫類が浸漬されてからの経過期間との間に相関関係があることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明の虫類混入時期判定方法は、液体食品に混入した被検虫類中の所定の成分の含有量及び／又は所定の複数成分の組成比を測定する測定工程と、液体食品中に浸漬せしめた被検虫類と同種のサンプル虫類中の所定成分の含有量及び／又は所定の複数成分の組成比と、サンプル虫類を液体食品に浸漬してからの経過期間との間の予め得られている相関関係に基づいて、測定工程において得られた所定成分の含有量及び／又は所定の複数成分の組成比の測定値から被検虫類が液体食品に混入した時期を判定する判定工程と、を備えたことを特徴とする。
【０００８】
上記虫類混入時期判定方法によれば、上記相関関係を予め求めておけば、同種の虫類が同種の液体食品に混入した場合にも所定成分の含有量及び／又は所定の複数成分の組成比を測定するだけで混入時期を簡便に再現性よく判定することができる。
【０００９】
また、本発明の虫類混入時期判定方法は、所定の成分が、液体食品から被検虫類の体内に浸透する成分であることを特徴としてもよい。
【００１０】
また、本発明の虫類混入時期判定方法は、所定の成分が、被検虫類の体内から液体食品中に拡散する成分であることを特徴としてもよい。
【００１１】
また、本発明の虫類混入時期判定方法は、所定の成分が、糖類及びアミノ酸からなる群から選択される少なくとも一つの成分であることを特徴としてもよい。糖類、アミノ酸は液体食品中に多く含まれる成分であり、検出方法も比較的容易であるので虫類混入時期判定の指標として好適である。
【００１２】
また、本発明の虫類混入時期判定方法は、液体食品は麦芽アルコール飲料であり、所定の成分は糖類、アミノ酸、及びイソα酸からなる群から選択される少なくとも１つの成分であることを特徴としてもよい。
【００１３】
また、本発明の虫類混入時期判定方法は、測定工程において、被検虫類から抽出した抽出液の紫外線領域から可視光線領域の所定領域の吸収強度又は蛍光強度を測定し、得られた吸収強度又は蛍光強度に基づいて所定成分の含有量及び／又は所定の複数成分の組成比を求めることを特徴としてもよい。
【００１４】
また、本発明の虫類混入時期判定方法は、測定工程において、被検虫類から抽出した抽出液の紫外線領域から可視光線領域の所定領域の吸収スペクトル又は蛍光スペクトルを測定し、得られた吸収スペクトル又は蛍光スペクトルに基づいて所定成分の含有量及び／又は所定の複数成分の組成比を求めることを特徴としてもよい。
【００１５】
【発明の実施の形態】
本発明の虫類混入時期判定方法を適用可能な液体食品としては例えば麦芽アルコール飲料（例えば、ビール、発泡酒等）、清涼飲料、清酒、ウイスキー、焼酎、ワインがある。また、本発明の虫類混入時期判定方法を適用可能な虫類としては例えばゴキブリ類、ハエ類、クモ類等の一般的な虫類のみならず他の虫類についても適用が可能である。
【００１６】
以下、本発明の好適な実施形態について詳細に説明する。
【００１７】
（第１実施形態）
まず、本発明の虫類混入時期判定方法の第１の実施形態について説明する。本実施形態においては、まず液体食品に混入した被検虫類中の所定の成分の含有量及び／又は所定の複数成分の組成比を測定する（以下「測定工程」という）。
【００１８】
その際、前処理として液体食品に混入した虫類の体の一部又は全部（サンプル）から所定の溶媒を用いて成分を抽出し、虫類抽出液を作製する（以下「前処理工程」という）。体の一部としてはサンプルの重量や体積が再現性よく測定可能な肢を用いることが好ましい。また抽出溶媒としては水や有機溶媒（アルコール等）を用いることができる。水でゴキブリ類の肢の抽出液を抽出する場合は肢をホモジナイザーでホモジナイズし、室温で１〜２分程度抽出し、その上澄を抽出液とする。
【００１９】
次に上記作製した虫類抽出液中に含まれる所定成分の含有量及び／又は所定の複数成分の組成比を測定する。
【００２０】
上記所定成分としては、虫類に含まれている成分のうち虫類を浸漬せしめる液体食品に含まれていないもの（あるいは含有量が大幅に少ないもの）、又は逆に浸漬せしめる液体食品に含まれている成分のうち虫類には含まれていないもの（あるいは含有量が大幅に少ないもの）が測定対象となる。すなわち、液体食品に含まれる特有の成分（甘味料等）、逆に虫類に含まれる特有の成分が対象となる。
【００２１】
例えば、元々ビール等の麦芽アルコール飲料中には、酵母にとって難資化性のプロリン以外のアミノ酸は極めて低濃度である。このようなアミノ酸組成比の液体に虫類が浸漬された場合、虫類体内のアミノ酸組成比は麦芽アルコール飲料のそれに近似していき、プロリンの含量が相対的に多くなる。一方、虫類は、死後、体内で自己消化によりアミノ酸が生成されるが、その組成バランスは、例えば上記麦芽アルコール飲料のそれとは異なり、プロリンのみ他のアミノ酸に比べて多い組成比にはならない。このような虫類が浸漬した麦芽アルコール飲料では、虫体内からプロリン以外のアミノ酸（アルギニン、ヒスチジン、グリシン、セリン等）が拡散していき、個々のアミノ酸の含量は増加し、プロリン含量が他の含有アミノ酸に比べて多いという傾向は変わらないものの含量の組成比が変化する可能性が考えられる。
【００２２】
麦芽アルコール飲料、蒸留酒に多く含まれる糖類としては、β−グルカン等のグルコースの多糖類がある。これらグルコースの多糖類は浸漬時間に応じて虫類の体内における濃度が高くなっていく。なお、このような糖類としては他にフルクトース、マルトース等も挙げられる。
【００２３】
虫類抽出液中に含まれる所定成分の含有量を測定する方法としては、既存の手法で高感度のものであればいずれの方法を用いてもよい。例えば上記糖類、アミノ酸については吸光光度法、蛍光光度法が好適である。これらの手法を用いることにより、所定成分の含有量を測定することができる。
【００２４】
所定の成分の含有量の算出方法としては例えば、所定波長のピーク強度又は所定波長のピーク強度の積分値を算出し、内部標準法によって含有量を算出する方法が好ましい。また、虫類個体のバラツキを補正するためにサンプルの単位重量当たりの含有量（以下「含有率」という）を算出することが好ましい。
【００２５】
所定の複数成分の組成比の算出方法としては例えば、上記の方法によって所定の複数成分の含有量を算出し含有量同士の比を算出する方法や所定の複数成分に対応するピークの強度又はピーク強度積分値の比を算出する方法がある。中でも後者の方法はサンプルの重量測定が不要となる点、内部標準物質を用いる必要がなくなる点でより簡便であり、好ましい。
【００２６】
続いて、上記測定した測定値から、予め得られている測定値と虫類が液体食品に浸漬されてからの経過期間（以下「浸漬期間」という）との相関関係に基づいて虫類が混入した時期を判定する（以下「判定工程」という）。
【００２７】
相関関係を求める方法としては、例えば以下のような方法がある。予め液体食品に所定期間浸漬せしめた虫類のサンプル（サンプル虫類）を作製する。上記測定工程によりサンプル虫類中の所定成分の含有量、含有率、又は所定の複数成分の組成比をさまざまな浸漬期間について求めておき、上記測定値と浸漬期間についてグラフ上にプロットすることによって浸漬期間とそれらの測定値との相関関係（検量線）を求めることができる。
【００２８】
上記のように求めた検量線に基づいて、液体食品へ混入時期が未知の被検虫類について上記測定値（虫類体内の所定成分の含有量、所定成分の含有率、所定複数成分の組成比）を求めることによって上記検量線に基づき、液体食品への浸漬期間を知ることができ、混入した時期を判定することができる。
【００２９】
（第２実施形態）
本発明の虫類混入時期判定方法の第２の実施形態について説明する。本実施形態においてはまず、液体食品中に混入した被検虫類から抽出した抽出液の吸収又は蛍光スペクトルを測定する（測定工程）。
【００３０】
まず、抽出液を作製する前処理工程については第１実施形態と同様に行う。次に、抽出液のスペクトルを測定する方法としては、紫外線領域から可視光線領域の吸収強度や蛍光強度を測定する方法が挙げられる。吸収スペクトルの中でも可視光吸収スペクトルを測定する方法は比較的安価な装置（分光光度計）によって比較的簡単に測定できるためより好ましい。
【００３１】
抽出液の所定成分の吸収あるいは蛍光スペクトルを測定することにより、そのスペクトル波形によって所定成分の含有量及び／又は所定の複数成分の組成比を判断することができる。また、測定したスペクトルのピーク強度あるいはそのピーク強度の積分値を算出することにより所定成分の含有量を判断することが可能となる。すなわち、上記測定した吸収又は蛍光スペクトル波形と、サンプル虫類を液体食品に浸漬してからの経過時間との間の予め得られている相関関係に基づいて得られる比較スペクトル波形とを比較して判断する。
【００３２】
続いて、上記測定した吸収又は蛍光スペクトルと、サンプル虫類を液体食品に浸漬してからの経過期間との間の予め得られている相関関係に基づいて、測定工程において得られたスペクトルから被検虫類が液体食品に混入した時期を判定する。相関関係としては、スペクトルの所定波長のピーク強度又はピーク強度積分値と浸漬期間との相関関係、あるいはスペクトルの波形と浸漬期間との相関関係を用いることが好ましい。
【００３３】
相関関係を求める方法としては例えば、以下のような方法がある。液体食品に所定期間浸漬せしめたサンプル虫類の抽出液を作製し、これらの虫類抽出液のスペクトルを測定する。その測定をさまざまな浸漬期間について行えば、ピーク強度又はピーク強度積分値と浸漬期間との相関関係、吸収又は蛍光スペクトルの波形と浸漬期間との相関関係を求めることができる。被検虫類についてのスペクトルと各サンプル虫類についてのピーク強度又はピーク強度積分値、波形とを比較することによって浸漬期間が未知の被検虫類について浸漬期間を知ることができる。
【００３４】
上記のように求めた吸光又は蛍光スペクトルと浸漬期間との相関関係に基づいて、液体食品への混入時期が未知の被検虫類について上記スペクトルを測定することによって上記相関関係に基づき、液体食品への浸漬期間を知ることができ、混入した時期を判定することができる。
【００３５】
予め上記のように得られた相関関係を用いれば、液体食品への混入時期が未知の虫類についても虫類の体内成分について測定値（虫類体内の所定成分の含有量、所定成分の含有率、所定複数成分の組成比）や可視吸収スペクトルの波形を求めることによって上記相関関係に基づき、液体食品への浸漬期間を知ることができ、混入した時期を判定することができる。
【００３６】
上記虫類混入時期判定方法によれば、虫類の死亡時期ではなく液体食品に浸漬されていた期間すなわち混入した時期を直接判定することができるため、既に死亡した虫類が混入した場合であっても正確な混入時期の判定が可能となる。また、混入した虫類の一部（例えば肢）があれば判定が可能であるので、虫類を大きく破壊する必要もなく試料の返却の要請にも応じることができる。
【００３７】
以下、実施例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００３８】
実施例１
第１の実施例はビール中に混入したクロゴキブリから抽出した抽出液の可視光吸収スペクトルに基づき混入時期を判定する方法である。すなわち、抽出液中にアンスロン−硫酸試薬を加えて抽出液中のグルコースと呈色反応させ、可視光吸収スペクトルを測定した。以下、詳細に説明する。
【００３９】
（サンプルのクロゴキブリの作製）
クロゴキブリ（幼虫）はアース環境サービス株式会社より入手した体長１．５ｃｍ〜２ｃｍ程度のものを冷凍庫にて凍死させて用いた。大瓶のビールに死亡したクロゴキブリを１匹ずつ入れ、打栓して２０℃下で保存した。浸漬後１日後、４日後、１週間後、２週間後、４週間後、８週間後、１２週間後、２０週間後にそれぞれ３匹ずつ取り出してサンプルとした。また比較のためビールに浸漬させていないクロゴキブリ（対照サンプル）も作製した。死亡したクロゴキブリを粒状シリカゲルを入れたデシケータに入れ２０℃下で保存し、ビールに浸漬させたサンプルと同様の時期に取り出して対照サンプルとした。
【００４０】
（虫類抽出液の調製）
サンプルとなるクロゴキブリの肢をエッペンドルフチューブに取り、周りについている汚れなどを落とすために蒸留水で洗浄した。洗浄は中身が溶け出る恐れがあるので蒸留水を３回交換することで行った。次に減圧しながら半日程度乾燥させた。乾燥させたクロゴキブリの肢をサンプルとして採取し、その重量を精密天秤で測定した。次に操作中の組成の変化を防ぐために蒸留水を２００μＬ加えて沸騰水浴で３分間煮沸して酵素類を失活させた。次にホモジナイザーで外骨格が粉々になるまで肢をホモジナイズした（ホモジナイザーはエッペンドルフチューブの中でホモジナイズできるタイプのものを用いた）。肢がよくホモジナイズされたら、１００００×ｇ程度で１０分間遠心分離した。上澄を０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過し、ろ液を虫類抽出液とした。
【００４１】
（アンスロン−硫酸試薬の調製）
９５％硫酸５ｍＬにアンスロン（和光純薬社）を１０ｍｇ溶解したものを用いた。ただし、９５％硫酸は保存可能であるが、アンスロンを９５％硫酸に溶かした試薬は劣化してしまうので用時調整した。
【００４２】
（アンスロン−硫酸法による呈色及び測定）
調整した虫類抽出液５０μＬとアンスロン−硫酸試薬２５０μＬを容量１０ｍＬ程度のキャップ付き試験管に入れてよく混合し、軽く遠心して混合液を試験管の底に集めた。沸騰水浴中で１０分間反応させ、あらかじめ用意しておいた氷水ですぐに冷却して反応を止め、分光光度計（日立製作所製Ｕ３３１０型分光光度計）を用いて４００〜８００ｎｍの可視光の吸収スペクトルを測定した。
【００４３】
（混入時期の判定）
ビールに各期間浸漬せしめた各浸漬期間のそれぞれのクロゴキブリのサンプルについて上記測定を行うことによって各浸漬期間における可視光吸収スペクトルのデータが得られた。浸漬後１日後（図１（ａ））、４日後（図１（ｂ））、１週間後（図１（ｃ））、２週間後（図２（ａ））、４週間後（図２（ｂ））、８週間後（図２（ｃ））、１２週間後（図３（ａ））、２０週間後（図３（ｂ））のサンプルについての可視光吸収スペクトル測定結果を図に示した。また、比較のため、デシケータ中に保存した対照サンプルについてのスペクトル、及び２００倍希釈ビールのスペクトルを比較のために併せて示した。このようにしてクロゴキブリの浸漬期間と可視吸収スペクトル波形との相関関係を得ることができた。なお、各図のスペクトルデータは各期間のサンプル３匹の平均値を示したものであり、クロゴキブリ個体間のバラツキを無視できるように縦軸を肢の単位重量あたりの吸光度に補正して表示したものである。
【００４４】
浸漬期間と可視吸収スペクトルとの間には上記相関関係があることから、浸漬期間が未知のクロゴキブリについても可視光吸収スペクトルを測定しこれらのスペクトルデータの波形と比較することによって、浸漬期間を求めることができ、混入した時期を簡便に再現性よく判定することができた。
【００４５】
上記のように判定できる理由は以下のとおりである。クロゴキブリがビールに浸漬されるとクロゴキブリとビールとの間で互いの含有成分が相互に拡散及び浸透し、平衡に達するまではクロゴキブリ体内のビールの成分が時間の経過と共に増加し、クロゴキブリ体内の成分はビール成分に近づいていく。すなわちクロゴキブリ体内の糖組成はビールの糖組成（ほとんどがグルコース）に近づいていく。図４（ａ）は本実施例の測定方法によりグルコース１００ｐｐｍ溶液及びビールに浸漬されていないクロゴキブリサンプルの抽出液のスペクトルを測定したデータを示したものである。また図４（ｂ）はグルコース１００ｐｐｍ溶液及び２００倍希釈したビールのスペクトルを測定したデータを示したものである。図４（ａ）（ｂ）によれば、クロゴキブリ（ビールに浸漬されていないクロゴキブリ）の抽出液の可視光吸収スペクトルが６７０ｎｍ付近にピークを有するのに対し（図４（ａ））、ビールのスペクトル（グルコースのスペクトルとほぼ同じ波形）にはそのピークが無く５９０ｎｍ以上の波長域は緩やかに減少する波形となっている（図４（ｂ））。
【００４６】
すなわち、ビールに浸漬されていないクロゴキブリの抽出液はビール（グルコースとほぼ同じ）とは明らかに違う可視光吸収スペクトルの波形を示すことが分かる。また、ビールに浸漬されたクロゴキブリ抽出液のスペクトルは浸漬期間の経過とともにビールのスペクトルの波形に近づいていき、期間の経過とともに可視光吸収スペクトルの波形が推移していくため、浸漬期間が未知のクロゴキブリについて可視光吸収スペクトルの波形が予め得られている各浸漬期間のサンプルについてのスペクトル波形と比較することによって浸漬期間を求めることができる。
【００４７】
実施例２
第２の実施例はビール中に混入したクロゴキブリから抽出した抽出液中のアミノ酸の含有量に基づき混入時期を判定する方法である。抽出液中のアルギニン、ヒスチジン、グリシンの含有量をＨＰＬＣを用いて蛍光検出法によって分離・検出し、内部標準法による定量を行うことによって含有量を測定した。
【００４８】
（サンプルのクロゴキブリの作成）
第１の実施例と全く同様にクロゴキブリをビールに浸漬し、浸漬当日（６〜１０時間後）、１日後、４日後、１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、６週間後、８週間後、１０週間後、１２週間後、１６週間後、２０週間後、３０週間後にそれぞれ４匹ずつ取り出し、サンプルとした。
【００４９】
（虫類抽出液の調整）
本実施例は虫類の単位体積当たりに含まれるアミノ酸の量を測定する必要があるため、サンプルから肢を取り出し、肢を洗浄・乾燥した後、ホモジナイズする前に肢の体積を測定した。まず、デジタルマイクロスコープ（キーエンス社ＶＨ−６３００）を用いて肢の各関節間の長さ及び幅を測定した。各関節間について円柱形近似として体積を算出した。各部分が円柱形よりも扁平であることを考慮して求めた値の１／２を各部分の体積と仮定して肢の体積を近似的に求めた。その後は第１の実施例と全く同様に行い虫類抽出液を調整した。
【００５０】
（ＨＰＬＣによる測定）
虫類抽出液に含まれる各アミノ酸の分析は、ＨＰＬＣ（高精度液体クロマトグラフィ）を用いて行った。抽出液をＨＰＬＣを用いて分離、蛍光検出法によって検出し、内部標準法によりアミノ酸（アルギニン、ヒスチジン、グリシン）の定量を行った。測定条件は以下のとおりである。
ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００，ＡｍｉｎｏＱｕａｎｔ蛍光検出法（ＯＰＡおよびＦＭＯＣ誘導体化，内部標準法）
カラム：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  ＡＡ−ＯＤＳ，５μｍ，  ２．１×２００ｍｍ
カラム温度：４０℃
【００５１】
【表１】
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【００５２】
測定で得られた各アミノ酸の含有量及び測定した肢の体積より単位体積当たりの各アミノ酸の含有量を算出した。図５（ａ）はビールに浸漬されたクロゴキブリ体内の単位体積当たりのアルギニンの量、図５（ｂ）はヒスチジンの量、図５（ｃ）はグリシンの量の経時変化を示したものであり、横軸に浸漬期間、縦軸に肢の単位体積当りの含有モル数をプロットしたものである。それぞれの期間デシケータ中に保存した対照サンプルについての分析結果を比較のために併せて示した。このようにして、虫類がビールに浸漬されてからの浸漬期間と各アミノ酸の単位体積当たりの含有量との相関関係（検量線）を求めることができた。
【００５３】
浸漬期間と各アミノ酸含有量の間には上記相関関係があることから、浸漬期間が未知のクロゴキブリについても各アミノ酸含有量を測定し上記相関関係に基づいて、浸漬期間を求めることができ、混入した時期を簡便に再現性よく判定することができた。
【００５４】
上記のように判定できる理由は以下のとおりである。大気中に放置されたクロゴキブリの体内には自己消化によって各アミノ酸は比較的高い濃度で存在し、期間が経過してもあまり減少することはない（図５（ａ）（ｂ）（ｃ）中の対照サンプルのデータ参照）。しかし、クロゴキブリがビールに浸漬された場合には、周囲のビール中の遊離アミノ酸（酵母にとって難資化性のプロリン以外）は低濃度であるため、クロゴキブリ体内の各アミノ酸は時間の経過とともにビール中に拡散して失われ、クロゴキブリ体内の各アミノ酸含有量は少なくなっていく。例えば、本実施例によれば、ビールに浸漬されてから２週間程度でクロゴキブリ体内の単位体積当たりの各アミノ酸の量は１０ｐｍｏｌ／ｍｍ３以下になることがわかる。逆に各アミノ酸の量が１０ｐｍｏｌ／ｍｍ３以下であれば浸漬後２週間以上経過していると判定することができる。例えば、封印された液体食品（例えばビール・発泡酒など）の場合は、封印から開栓までの間に虫類が混入する可能性がないため、虫類浸漬後２週間以上経過していると判定された場合は開栓後ではなく製造工程中に混入したものと判定することができる。
【００５５】
実施例３
第３の実施例はビール中に混入したクロゴキブリから抽出した抽出液中のアミノ酸の組成比に基づき混入時期を判定する方法である。抽出液中のアルギニン、ヒスチジン、グリシン、セリン、プロリンの含有量をＨＰＬＣを用いて分離、蛍光検出法によって検出し、内部標準法による定量を行うことによって含有量を測定した。また、測定した含有量からセリンとプロリンの組成比、グリシンとプロリンの組成比、アルギニンとプロリンの組成比を算出した。
【００５６】
（サンプルのクロゴキブリの作成）
第２の実施例と全く同様に行った。
（虫類抽出液の調整）
第２の実施例と全く同様に行った。但し、肢の体積を測定する工程は不要であるため省略した。
（ＨＰＬＣによる測定）
虫類抽出液に含まれるアミノ酸（アルギニン、ヒスチジン、グリシン、セリン、プロリン）の分析は、第２実施例と全く同様にして、ＨＰＬＣ（高精度液体クロマトグラフィ）を用いて行った。得られたそれぞれのアミノ酸の含有量からセリンとプロリンの組成比、グリシンとプロリンの組成比、アルギニンとプロリンの組成比を算出した。
【００５７】
図６（ａ）はビールに浸漬させたクロゴキブリ肢中のセリンとプロリンのモル比、図６（ｂ）はグリシンとプロリンのモル比、図６（ｃ）はアルギニンとプロリンのモル比の経時変化を示したものであり、横軸に浸漬期間、縦軸にモル比をプロットした。なお、比較のため各期間デシケータ中に保存した対照サンプルについてのデータを併せて示した。このようにして、虫類のビールへの浸漬期間と各アミノ酸の組成比との相関関係（検量線）を求めることができた。
【００５８】
浸漬期間と各アミノ酸組成比の間には上記相関関係があることから、浸漬期間が未知のクロゴキブリについてもアミノ酸組成比を測定し上記相関関係に基づいて、浸漬期間を求めることができ、混入した時期を簡便に再現性よく判定することができた。
【００５９】
上記のように判定できる理由は以下のとおりである。ビール中には酵母に資化されにくいアミノ酸であるプロリンが多く残存しているが他のアミノ酸（例えばセリン、グリシン、アルギニン）は極微量であり、ビールのアミノ酸はプロリンに富む組成となっている。一方、死亡したクロゴキブリの体内には自己消化によりアミノ酸が生成され、その組成は各他のアミノ酸とプロリンとの組成比が１〜２程度となっている。死亡したクロゴキブリが大気中にある場合には期間が経過しても組成比はあまり変化することはない（図６（ａ）（ｂ）（ｃ）中の対照サンプルのデータ参照）。しかし、クロゴキブリがビールに浸漬されると、ビールの成分がクロゴキブリ体内に浸透・拡散し、クロゴキブリ体内のアミノ酸組成がビールのアミノ酸組成に近づいていき、プロリンに対する各アミノ酸の組成比は次第に小さくなっていく。例えば本実施例によれば、浸漬されてから２週間程度でクロゴキブリ体内の各他のアミノ酸とプロリンとの組成比は０．５以下になることがわかる。逆に組成比が０．５であれば浸漬後２週間以上経過していると判定することができる。封印された液体食品（例えばビール・発泡酒など）の場合は、封印から開栓までの間に虫類が混入する可能性がないため、虫類浸漬後２週間以上経過していると判定された場合は開栓後ではなく製造工程中に混入したものと判定することができる。
【００６０】
【発明の効果】
本発明によれば、液体食品に混入した虫類の混入時期を簡便に再現性よく判定する方法を提供することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【図１】（ａ）、（ｂ）、（ｃ）は、ビール（２００倍希釈）、ビールに所定期間浸漬したサンプル、対照サンプルについての可視吸光スペクトルを示すグラフである。
【図２】（ａ）、（ｂ）、（ｃ）は、ビール（２００倍希釈）、ビールに所定期間浸漬したサンプル、対照サンプルについての可視吸光スペクトルを示すグラフである。
【図３】（ａ）、（ｂ）は、ビール（２００倍希釈）、ビールに所定期間浸漬したサンプル、対照サンプルについての可視吸光スペクトルを示すグラフである。
【図４】（ａ）、（ｂ）は、ビール（２００倍希釈）、ビールに所定期間浸漬したサンプル、対照サンプルについての可視吸光スペクトルを示すグラフである。
【図５】ビールに所定期間浸漬したサンプル及び対照サンプルの各アミノ酸の含有量を示したデータであり、（ａ）はアルギニン、（ｂ）はヒスチジン、（ｃ）はグリシンの含有量を示す。
【図６】ビールに所定期間浸漬したサンプル及び対照サンプルの各アミノ酸の組成比を示したデータであり、（ａ）はプロリンに対するセリン、（ｂ）はプロリンに対するグリシン、（ｃ）はプロリンに対するアルギニンの組成比を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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