(57)【要約】【課題】例えば各種細胞の骨への親和性等を正確に判断し得る細胞培養支持体、および、かかる細胞培養支持体の製造方法を提供すること。【解決手段】細胞培養ペレット１は、その細胞付着面（一方の面）２に、細胞を付着させ、この細胞を増殖させる。細胞培養ペレット１は、主としてリン酸カルシウム系化合物で構成され、緻密質であることを特徴とする。その空孔率は、１％以下であるのが好ましい。また、この細胞培養ペレット１は、細胞付着面（一方の面）２側から、光を透過させつつ観察するものである。この場合、細胞付着面２は、粗面であるのが好ましく、観察面３は、平滑面であるのが好ましい。また、このような細胞培養ペレット１は、平均厚さ１ｍｍの場合、その厚さ方向に、波長６００ｎｍの光を透過させたとき、この光の透過率が１．５％以上であるのが好ましい。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
一方の面に、細胞を付着させ、該細胞を増殖させる平板部を有する細胞培養支持体であって、
前記平板部は、主としてリン酸カルシウム系化合物で構成され、緻密質であることを特徴とする細胞培養支持体。
【請求項２】
前記平板部は、その空孔率が１％以下である請求項１に記載の細胞培養支持体。
【請求項３】
前記平板部は、その平均厚さが０．１〜３ｍｍである請求項１または２に記載の細胞培養支持体。
【請求項４】
前記平板部の少なくとも前記一方の面は、粗面である請求項１ないし３のいずれかに記載の細胞培養支持体。
【請求項５】
前記粗面は、平均粒径が５〜３０μｍの粒子を含む研磨材で研磨して得られたもの、または、それとほぼ同等のものである請求項４に記載の細胞培養支持体。
【請求項６】
前記平板部の前記一方の面に、凹部が形成されている請求項１ないし５のいずれかに記載の細胞培養支持体。
【請求項７】
前記凹部は、溝である請求項６に記載の細胞培養支持体。
【請求項８】
前記凹部の横断面積は、その深さ方向に沿ってほぼ一定であるか、または、前記平板部の他方の面に向かって減少している請求項６または７に記載の細胞培養支持体。
【請求項９】
前記凹部の深さは、前記平板部の厚さに対して０．００５〜２０％である請求項６ないし８のいずれかに記載の細胞培養支持体。
【請求項１０】
前記平板部の平面視で、前記凹部が占有する面積は、前記平板部全体の面積に対して１〜６０％である請求項６ないし９のいずれかに記載の細胞培養支持体。
【請求項１１】
前記平板部の少なくとも他方の面は、平滑面である請求項１ないし１０のいずれかに記載の細胞培養支持体。
【請求項１２】
前記平滑面は、平均粒径が１μｍ以下の粒子を含む研磨材で研磨して得られたもの、または、それとほぼ同等のものである請求項１１に記載の細胞培養支持体。
【請求項１３】
平均厚さ１ｍｍの前記平板部の厚さ方向に、波長６００ｎｍの光を透過させたとき、該光の透過率が１．５％以上である請求項１ないし１２のいずれかに記載の細胞培養支持体。
【請求項１４】
前記細胞の状態を、前記平板部に光を透過させつつ観察するものである請求項１ないし１３のいずれかに記載の細胞培養支持体。
【請求項１５】
前記細胞の状態を、前記平板部の前記一方の面側から、前記平板部に光を透過させつつ観察するものである請求項１ないし１４のいずれかに記載の細胞培養支持体。
【請求項１６】
前記細胞培養支持体は、その全体が前記平板部で構成される請求項１ないし１５のいずれかに記載の細胞培養支持体。
【請求項１７】
前記細胞培養支持体は、ほぼ円盤状をなしている請求項１６に記載の細胞培養支持体。
【請求項１８】
前記細胞培養支持体は、その直径が０．５〜２００ｍｍである請求項１７に記載の細胞培養支持体。
【請求項１９】
前記リン酸カルシウム系化合物は、リン酸三カルシウムである請求項１ないし１８のいずれかに記載の細胞培養支持体。
【請求項２０】
前記リン酸カルシウム系化合物は、ハイドロキシアパタイトである請求項１ないし１８のいずれかに記載の細胞培養支持体。
【請求項２１】
請求項２０に記載の細胞培養支持体の製造方法であって、
ハイドロキシアパタイト粉体を、１ｔｏｎ／ｃｍ２以上の圧力で加圧して圧粉体を得る工程と、
大気の酸素分圧より高い酸素分圧の酸素含有雰囲気中で、前記圧粉体を９２５〜１３００℃の温度で焼成して焼結体を得る工程とを有することを特徴とする細胞培養支持体の製造方法。
【請求項２２】
前記加圧は、等方的に行われる請求項２１に記載の細胞培養支持体の製造方法。
【請求項２３】
前記等方的な加圧は、静水圧加圧により行われる請求項２２に記載の細胞培養支持体の製造方法。
【請求項２４】
前記静水圧加圧は、５〜５０℃の温度で行われる請求項２３に記載の細胞培養支持体の製造方法。
【請求項２５】
前記酸素含有雰囲気の酸素分圧は、３８０ｍｍＨｇ以上である請求項２１ないし２４のいずれかに記載の細胞培養支持体の製造方法。
【請求項２６】
前記ハイドロキシアパタイト粉体は、カルシウム源とリン酸源との少なくとも一方を溶液として用いる湿式合成法により合成され、前記合成の際に得られるスラリーを用いて製造されたものである請求項２１ないし２５のいずれかに記載の細胞培養支持体の製造方法。
【請求項２７】
前記カルシウム源は、水酸化カルシウムまたは酸化カルシウムを主成分とするものであり、前記リン酸源は、リン酸を主成分とするものである請求項２６に記載の細胞培養支持体の製造方法。
【請求項２８】
前記ハイドロキシアパタイト粉体は、リン酸三カルシウムの含有量が０．１ｗｔ％以下の前記スラリーを用いて製造されたものである請求項２７に記載の細胞培養支持体の製造方法。
【請求項２９】
前記ハイドロキシアパタイト粉体は、下記の条件Ａを満足する前記スラリーを用いて製造されたものである請求項２７または２８に記載の細胞培養支持体の製造方法。
条件Ａ：前記スラリーの一部を取り出し、成形圧力２ｔｏｎ／ｃｍ２で圧縮成形し、検出面を有するサンプル用成形体を形成した後、該サンプル用成形体を大気中１２００℃×２時間で焼成して得られたサンプルの検出面（表面粗さＲａ＝１０μｍ）に存在する物質をＸ線回折により解析した場合、得られるピークのうち、ハイドロキシアパタイトに由来するピークの強度が最も大きく、かつ、リン酸三カルシウムに由来するピークが観察されない。
【請求項３０】
前記ハイドロキシアパタイト粉体は、水酸化カルシウムまたは酸化カルシウムの含有量が３ｗｔ％以下の前記スラリーを用いて製造されたものである請求項２７ないし２９のいずれかに記載の細胞培養支持体の製造方法。
【請求項３１】
前記ハイドロキシアパタイト粉体は、下記の条件Ｂを満足する前記スラリーを用いて製造されたものである請求項２７ないし３０のいずれかに記載の細胞培養支持体の製造方法。
条件Ｂ：前記スラリーの一部を取り出し、成形圧力２ｔｏｎ／ｃｍ２で圧縮成形し、検出面を有するサンプル用成形体を形成した後、該サンプル用成形体を大気中１２００℃×２時間で焼成して得られたサンプルの検出面（表面粗さＲａ＝１０μｍ）に存在する物質をＸ線回折により解析した場合、ハイドロキシアパタイトに由来するピークの強度をＸとし、酸化カルシウムに由来するピークの強度をＹとしたとき、Ｙ／Ｘ＜１／１０なる関係を満足する。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、細胞培養支持体および細胞培養支持体の製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
近年、各種細胞培養において、より生体内に近い状態で細胞を培養できることから、細胞と接触する表面にリン酸カルシウム系材料をコーティングした器具が用いられることがある（例えば、特許文献１参照。）。
【０００３】
また、リン酸カルシウム系材料が骨の主たる構成成分であることから、かかる器具を用いることにより、各種細胞の骨への親和性を評価することも行われている。
【０００４】
ところで、この器具は、金属製、プラスチック製やガラス製の基材にリン酸カルシウム系材料を被覆したものであるが、基材がリン酸カルシウム系材料で完全に被覆されているとは言い難く、その一部が露出していることが推察される。このため、このような器具を用いた場合、細胞のリン酸カルシウム系材料（すなわち、骨）への親和性ではなく、ガラス等への親和性を評価しているおそれがある。
【０００５】
また、細胞培養後には、増殖した細胞を器具ごと、生体内に移植したいという要求もあるが、このような器具は、主要部分がガラス等で構成されているため、そのまま生体に適用することができないという問題もある。
【０００６】
【特許文献１】
特許第２６５７４０３号公報
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、例えば各種細胞の骨への親和性等を正確に判断し得る細胞培養支持体、および、かかる細胞培養支持体の製造方法を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
このような目的は、下記（１）〜（３１）の本発明により達成される。
【０００９】
（１）  一方の面に、細胞を付着させ、該細胞を増殖させる平板部を有する細胞培養支持体であって、
前記平板部は、主としてリン酸カルシウム系化合物で構成され、緻密質であることを特徴とする細胞培養支持体。
これにより、例えば各種細胞の骨への親和性等を正確に判断し得る。
【００１０】
（２）  前記平板部は、その空孔率が１％以下である上記（１）に記載の細胞培養支持体。
これにより、平坦部の透明性をより向上させることができる。
【００１１】
（３）  前記平板部は、その平均厚さが０．１〜３ｍｍである上記（１）または（２）に記載の細胞培養支持体。
これにより、平板部の強度低下を招くことなく、その透明性を十分に高くすることができる。
【００１２】
（４）  前記平板部の少なくとも前記一方の面は、粗面である上記（１）ないし（３）のいずれかに記載の細胞培養支持体。
これにより、細胞を、より容易かつ確実に、平板部の一方の面に付着させることができる。
【００１３】
（５）  前記粗面は、平均粒径が５〜３０μｍの粒子を含む研磨材で研磨して得られたもの、または、それとほぼ同等のものである上記（４）に記載の細胞培養支持体。
これにより、平板部の一方の面への細胞の付着率をより向上させることができるとともに、細胞の状態を観察し難くなるのを防止することができる。
【００１４】
（６）  前記平板部の前記一方の面に、凹部が形成されている上記（１）ないし（５）のいずれかに記載の細胞培養支持体。
これにより、細胞のより迅速な平板部への付着を促し、より効率的な細胞培養が可能となる。
【００１５】
（７）  前記凹部は、溝である上記（６）に記載の細胞培養支持体。
これにより、細胞が溝の縁部に沿って増殖するようになるため、細胞の観察を行う際には、この観察を容易に行うことができる。
【００１６】
（８）  前記凹部の横断面積は、その深さ方向に沿ってほぼ一定であるか、または、前記平板部の他方の面に向かって減少している上記（６）または（７）に記載の細胞培養支持体。
これにより、溝の縁部への細胞の付着がより容易となる。
【００１７】
（９）  前記凹部の深さは、前記平板部の厚さに対して０．００５〜２０％である上記（６）ないし（８）のいずれかに記載の細胞培養支持体。
これにより、平板部の強度を確保しつつ、平板部の一方の面の表面積を十分に大きくすることができる。
【００１８】
（１０）  前記平板部の平面視で、前記凹部が占有する面積は、前記平板部全体の面積に対して１〜６０％である上記（６）ないし（９）のいずれかに記載の細胞培養支持体。
これにより、平板部の一方の面の表面積を十分に大きくすることができる。
【００１９】
（１１）  前記平板部の少なくとも他方の面は、平滑面である上記（１）ないし（１０）のいずれかに記載の細胞培養支持体。
これにより、細胞の状態を観察する際には、照射される光が平板部の他方の面で散乱することを防止することができ、より正確に細胞の状態を観察することができる。
【００２０】
（１２）  前記平滑面は、平均粒径が１μｍ以下の粒子を含む研磨材で研磨して得られたもの、または、それとほぼ同等のものである上記（１１）に記載の細胞培養支持体。
これにより、平板部の他方の面での光の散乱をより確実に防止することができる。
【００２１】
（１３）  平均厚さ１ｍｍの前記平板部の厚さ方向に、波長６００ｎｍの光を透過させたとき、該光の透過率が１．５％以上である上記（１）ないし（１２）のいずれかに記載の細胞培養支持体。
これにより、細胞の状態を観察する際には、その観察をより正確に行うことができる。
【００２２】
（１４）  前記細胞の状態を、前記平板部に光を透過させつつ観察するものである上記（１）ないし（１３）のいずれかに記載の細胞培養支持体。
かかる方法によれば、大掛かりな設備を必要とせず、比較的容易に、細胞の状態の観察を行うことができる。
【００２３】
（１５）  前記細胞の状態を、前記平板部の前記一方の面側から、前記平板部に光を透過させつつ観察するものである上記（１）ないし（１４）のいずれかに記載の細胞培養支持体。
これにより、平板部の一方の面に細胞が付着する様子をより正確に観察することができる。
【００２４】
（１６）  前記細胞培養支持体は、その全体が前記平板部で構成される上記（１）ないし（１５）のいずれかに記載の細胞培養支持体。
【００２５】
（１７）  前記細胞培養支持体は、ほぼ円盤状をなしている上記（１６）に記載の細胞培養支持体。
【００２６】
（１８）  前記細胞培養支持体は、その直径が０．５〜２００ｍｍである上記（１７）に記載の細胞培養支持体。
【００２７】
（１９）  前記リン酸カルシウム系化合物は、リン酸三カルシウムである上記（１）ないし（１８）のいずれかに記載の細胞培養支持体。
リン酸三カルシウムは、骨に近い成分であるため、各種細胞の骨への親和性等をより正確に判断することが可能となる。
【００２８】
（２０）  前記リン酸カルシウム系化合物は、ハイドロキシアパタイトである上記（１）ないし（１８）のいずれかに記載の細胞培養支持体。
ハイドロキシアパタイトは、骨の主成分であるため、各種細胞の骨への親和性等をより正確に判断することが可能となる。
【００２９】
（２１）  上記（２０）に記載の細胞培養支持体の製造方法であって、
ハイドロキシアパタイト粉体を、１ｔｏｎ／ｃｍ２以上の圧力で加圧して圧粉体を得る工程と、
大気の酸素分圧より高い酸素分圧の酸素含有雰囲気中で、前記圧粉体を９２５〜１３００℃の温度で焼成して焼結体を得る工程とを有することを特徴とする細胞培養支持体の製造方法。
これにより、例えば各種細胞の骨への親和性等を正確に判断し得る細胞培養支持体が得られる。
【００３０】
（２２）  前記加圧は、等方的に行われる上記（２１）に記載の細胞培養支持体の製造方法。
これにより、より高密度の焼結体を得ることができる。
【００３１】
（２３）  前記等方的な加圧は、静水圧加圧により行われる上記（２２）に記載の細胞培養支持体の製造方法。
これにより、より高密度の焼結体を得ることができる。
【００３２】
（２４）  前記静水圧加圧は、５〜５０℃の温度で行われる上記（２３）に記載の細胞培養支持体の製造方法。
かかる方法によれば、簡易な装置で行うことができ、静水圧加圧の際に用いる被膜に耐熱性を要求されない等の利点を有し、工業製品の製造工程として実用性に優れている。
【００３３】
（２５）  前記酸素含有雰囲気の酸素分圧は、３８０ｍｍＨｇ以上である上記（２１）ないし（２４）のいずれかに記載の細胞培養支持体の製造方法。
これにより、より高密度の焼結体を得ることができる。
【００３４】
（２６）  前記ハイドロキシアパタイト粉体は、カルシウム源とリン酸源との少なくとも一方を溶液として用いる湿式合成法により合成され、前記合成の際に得られるスラリーを用いて製造されたものである上記（２１）ないし（２５）のいずれかに記載の細胞培養支持体の製造方法。
これにより、高価な製造設備を必要とせず、容易かつ効率よくハイドロキシアパタイトを合成することができる。
【００３５】
（２７）  前記カルシウム源は、水酸化カルシウムまたは酸化カルシウムを主成分とするものであり、前記リン酸源は、リン酸を主成分とするものである上記（２６）に記載の細胞培養支持体の製造方法。
かかるカルシウム源およびリン酸源を用いることにより、ハイドロキシアパタイトをより効率よくかつ安価に合成することができる。
【００３６】
（２８）  前記ハイドロキシアパタイト粉体は、リン酸三カルシウムの含有量が０．１ｗｔ％以下の前記スラリーを用いて製造されたものである上記（２７）に記載の細胞培養支持体の製造方法。
これにより、より高密度の焼結体を得ることができる。
【００３７】
（２９）  前記ハイドロキシアパタイト粉体は、下記の条件Ａを満足する前記スラリーを用いて製造されたものである上記（２７）または（２８）に記載の細胞培養支持体の製造方法。
条件Ａ：前記スラリーの一部を取り出し、成形圧力２ｔｏｎ／ｃｍ２で圧縮成形し、検出面を有するサンプル用成形体を形成した後、該サンプル用成形体を大気中１２００℃×２時間で焼成して得られたサンプルの検出面（表面粗さＲａ＝１０μｍ）に存在する物質をＸ線回折により解析した場合、得られるピークのうち、ハイドロキシアパタイトに由来するピークの強度が最も大きく、かつ、リン酸三カルシウムに由来するピークが観察されない。
これにより、特に高密度の焼結体を得ることができる。
【００３８】
（３０）  前記ハイドロキシアパタイト粉体は、水酸化カルシウムまたは酸化カルシウムの含有量が３ｗｔ％以下の前記スラリーを用いて製造されたものである上記（２７）ないし（２９）のいずれかに記載の細胞培養支持体の製造方法。
これにより、より高密度の焼結体を得ることができる。
【００３９】
（３１）  前記ハイドロキシアパタイト粉体は、下記の条件Ｂを満足する前記スラリーを用いて製造されたものである上記（２７）ないし（３０）のいずれかに記載の細胞培養支持体の製造方法。
条件Ｂ：前記スラリーの一部を取り出し、成形圧力２ｔｏｎ／ｃｍ２で圧縮成形し、検出面を有するサンプル用成形体を形成した後、該サンプル用成形体を大気中１２００℃×２時間で焼成して得られたサンプルの検出面（表面粗さＲａ＝１０μｍ）に存在する物質をＸ線回折により解析した場合、ハイドロキシアパタイトに由来するピークの強度をＸとし、酸化カルシウムに由来するピークの強度をＹとしたとき、Ｙ／Ｘ＜１／１０なる関係を満足する。
これにより、特に高密度の焼結体を得ることができる。
【００４０】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の細胞培養支持体および細胞培養支持体の製造方法について詳細に説明する。
【００４１】
＜第１実施形態＞
図１は、本発明の細胞培養支持体を細胞培養ペレットに適用した場合の第１実施形態を示す斜視図、図２は、図１に示す細胞培養ペレットの使用方法を説明するための図（部分断面斜視図）、図３は、図１に示す細胞培養ペレットの製造方法を示す工程図である。なお、以下の説明では、図１〜図３中の上側を「上」、下側を「下」と言う。
【００４２】
図１に示す細胞培養ペレット１は、各種細胞を付着させて、この細胞を培養するものである。この細胞培養ペレット１は、その全体が、主としてリン酸カルシウム系化合物で構成され、ほぼ円盤状をなしている。
【００４３】
円盤状の細胞培養ペレット１の場合、その直径は、好ましくは０．５〜２００ｍｍ程度、より好ましくは０．５〜１００ｍｍ程度、さらに好ましくは０．５〜３５ｍｍ程度とされる。
【００４４】
この細胞培養ペレット１は、その一方の面（図１中、上面）に、各種細胞（付着依存性細胞）を付着させて、増殖させる。以下、細胞培養ペレット１の図１中上面を、「細胞付着面（細胞支持面）２」と言う。
【００４５】
また、この細胞培養ペレット１に対する細胞の付着の程度や、増殖の程度（細胞の状態）を確認する際には、各種の方法を用いることができるが、好ましくは、細胞培養ペレット１に光を透過させつつ観察される。かかる方法によれば、大掛かりな設備を必要とせず、比較的容易に、細胞の状態の観察を行うことができる。
【００４６】
この場合、特に、細胞培養ペレット１の細胞付着面２側から光を透過させ、細胞付着面２と反対側の面（他方の面）側から観察するのが好ましい。これにより、細胞培養ペレット１の細胞付着面２に細胞が付着する様子をより正確に観察することができる。また、近年、再生医療が盛んになりつつあり、ハイドロキシアパタイトやリン酸三カルシウムのようなリン酸カルシウム系化合物と、各種細胞との関係を観察したいと言う要求があり、この面でも透明性（透光性）を有する細胞培養用ペレット１は有用である。
【００４７】
このように、細胞培養ペレット１では、細胞の状態を観察する際に、細胞付着面２（図１中、上面）側から光を照射して、細胞付着面２と反対側の面（図１中、下面）側で観察する。以下、細胞培養ペレット１の図１中下面（他方の面）を、「観察面３」と言う。
【００４８】
前述したように、細胞培養ペレット１は、その全体が、主としてリン酸カルシウム系化合物で構成されている。これにより、生体に近い状態での細胞の培養が可能であるとともに、従来のような問題点を解決すること、すなわち、各種細胞の骨への親和性等を正確に評価することや、細胞培養後には、細胞培養ペレット１を、細胞付着面２において増殖した細胞ごと、生体内に移植することが可能となる。
【００４９】
リン酸カルシウム系化合物としては、特に限定されず、Ｃａ／Ｐモル比が１．０〜２．０の各種化合物を用いることができ、例えば、ハイドロキシアパタイト、リン酸三カルシウム、リン酸二カルシウム、フッ素アパタイト等のうちの１種または２種以上を混合して用いることができる。
【００５０】
これらの中でも、リン酸カルシウム系化合物としては、ハイドロキシアパタイトまたはリン酸三カルシウムを主成分とするものが好ましい。これらのものは、骨の主成分または骨に近い成分であるため、各種細胞の骨への親和性等をより正確に判断することが可能となる。
【００５１】
また、前述したように、細胞の状態は、好ましくは細胞培養ペレット１に光を透過させつつ観察させるが、このためには、細胞培養ペレット１は、できるだけ透明性の高いものであるのが好ましい。
【００５２】
かかる観点から、本発明者は、鋭意検討を重ねた結果、細胞培養ペレット１の相対密度に依存して（すなわち、相対密度が高くなるにしたがって）、細胞培養ペレット１の透明性が向上することを見出した。
【００５３】
すなわち、本発明では、細胞培養ペレット１を緻密質としたことに特徴を有する。これにより、細胞培養ペレット１は、細胞の状態を観察する際に必要とされる透明性を有することができる。
【００５４】
この細胞培養ペレット１の緻密の度合いは、その空孔率（気孔率）を指標とすることができる。具体的には、細胞培養ペレット１は、その空孔率が１％以下であるのが好ましく、０．６％以下であるのがより好ましい。これにより、細胞培養ペレット１の透明性をより向上させることができる。
【００５５】
また、細胞培養ペレット１は、その平均厚さが０．１〜３ｍｍ程度であるのが好ましく、０．２〜１．５ｍｍ程度であるのがより好ましい。これにより、細胞培養ペレット１の強度低下を招くことなく、その透明性を十分に高くすることができる。
【００５６】
細胞培養ペレット１の透明性の程度は、例えば、次のようなものであるのが好ましい。すなわち、平均厚さ１ｍｍの細胞培養ペレット１の厚さ方向に、波長６００ｎｍの光を透過させたとき、この光の透過率が１．５％以上であるのが好ましく、２％以上であるのがより好ましい。これにより、細胞の状態を観察する際には、その観察をより正確に行うことができる。
【００５７】
このような細胞培養ペレット１は、図１に示すように、その細胞付着面２が粗面とされ、その観察面３が平滑面とされている。これにより、細胞を、より容易かつ確実に、細胞付着面２に付着させることができ、また、細胞の状態を観察する際に細胞培養ペレット１を透過する光が、観察面３で散乱することを防止することができ、より正確に細胞の状態を観察することができる。
【００５８】
また、細胞付着面２の表面粗さは、極端に大きくないのが好ましい。具体的には、前記粗面は、平均粒径が５〜３０μｍ程度（好ましくは５〜２５μｍ程度）の粒子を含む研磨材で研磨して得られたもの、または、それとほぼ同等のものであるのが好ましい。これにより、細胞付着面２への細胞の付着率をより向上させることができるとともに、細胞の状態を観察する際には、照射される光が細胞付着面２で散乱することを防止して、細胞の状態を観察し難くなるのを防止することができる。
【００５９】
一方、観察面３の表面粗さは、できるだけ小さいのが好ましい。具体的には、前記平滑面は、平均粒径が１μｍ以下（好ましくは０．８μｍ以下）の粒子を含む研磨材で研磨（いわゆる、鏡面研磨）して得られたもの、または、それとほぼ同等のものであるのが好ましい。これにより、観察面３での光の散乱をより確実に防止することができる。以下、鏡面研磨して得られた平滑面を「鏡面」と言う。
【００６０】
この研磨材に用いられる粒子（砥粒）としては、例えば、ダイヤモンド、アルミナ、シリカ、酸化セリウム、窒化ホウ素、べんがら等の粒子（微粒子）が挙げられる。
【００６１】
なお、細胞培養ペレット１では、図示の構成と異なり、細胞付着面２および観察面３の双方が粗面とされていてもよく、また細胞付着面２および観察面３の双方が平滑面とされていてもよく、あるいは細胞付着面２および観察面３の双方が鏡面とされていてもよい。
【００６２】
細胞付着面２および観察面３の双方を同様の構成とすることにより、細胞培養ペレット１の使用者が、その使用にあたって、いずれの面が細胞付着面２であるのか観察面３であるのかの判断を行う必要がなく、便利である。
【００６３】
加えて、細胞付着面２および観察面３の双方を平滑面（特に、鏡面研磨を施さない平滑面）とすることにより、粗面や鏡面とするための煩雑な操作を省略することができるので、細胞培養ペレット１の製造コストの低減を図ることができる。また、細胞付着面２および観察面３の双方を平滑面（特に、鏡面）とすることにより、細胞の状態を観察する際の光の透過率をより向上させることができるという利点がある。
【００６４】
このような細胞培養ペレット１は、例えば、図２に示すようなプレート１０とともに使用される。
【００６５】
次に、図２に基づいて、細胞培養ペレット１の使用方法（細胞の培養方法）の一例について説明する。
【００６６】
図２に示すプレート１０は、細胞培養ペレット１を収納可能な穴（ウェル）２０を複数有している。各穴２０の内径は、細胞培養ペレット１の直径より若干大きく設定されており、これにより、細胞培養ペレット１を穴２０内への収納、穴２０内からの取り出しを容易に行うことができる。
【００６７】
この穴２０内に、細胞培養ペレット１を収納するとともに、培養液３０および所望の細胞４０を供給し、この細胞４０を培養する。これにより、細胞４０は、細胞培養ペレット１の細胞付着面２に付着して、増殖する。
【００６８】
培養液３０としては、用いる細胞４０の種類等により適宜選択され、特に限定されないが、例えば、ＭＥＭ培地、αＭＥＭ培地、ダルベッコＭＥＭ培地、ＢＭＥ培地、ＭＣＤＢ−１０４培地等が挙げられる。
【００６９】
なお、培養液３０中には、必要に応じて、例えば、血清、アルブミン等の血清タンパク質、各種ビタミン類、各種アミノ酸、塩類等の添加剤を添加するようにしてもよい。
【００７０】
また、培養液の温度（培養温度）も、培養する細胞４０の種類に応じて適宜設定され、特に限定されないが、通常、２０〜４０℃程度、好ましくは２５〜３７℃程度とされる。
【００７１】
次に、培養終了後、例えば、細胞培養ペレット１をプレート１０の穴２０内から取り出し、細胞４０に所定の処理（例えば、染色等）を施す。
【００７２】
次に、例えば、細胞培養ペレット１の細胞付着面２側から光を透過させつつ、観察面３側で細胞４０の状態を観察する。この観察は、例えば、肉眼や光学顕微鏡等を用いて行うことができる。
【００７３】
また、プレート１０が実質的に透明（無色透明、着色透明、半透明）である場合には、細胞４０の観察は、穴２０内から細胞培養ペレット１を取り出すことなく、そのまま行うこともできる。
【００７４】
次に、細胞培養ペレット（細胞培養支持体）１の製造方法について、図３を参照しつつ説明する。以下では、リン酸カルシウム系化合物としてハイドロキシアパタイトを用いる場合を代表に説明する。
【００７５】
図３に示す細胞培養ペレットの製造方法は、ハイドロキシアパタイト粉体の製造工程１００と、圧粉体の製造工程２００と、圧粉体の整形工程３００と、圧粉体の焼成工程４００と、焼結体の研磨工程５００とを有している。以下、各工程について順次説明する。
【００７６】
［１００］ハイドロキシアパタイト粉体の製造
まず、カルシウム源とリン酸源とを反応させて、ハイドロキシアパタイト（ＨＡｐ）を合成する。なお、ここで、ハイドロキシアパタイトとは、Ｃａ／Ｐモル比が１．６０〜１．７０のものを指す。
【００７７】
このハイドロキシアパタイトの合成には、湿式合成法、乾式合成法、水熱合成法等のいかなる方法を用いてもよいが、カルシウム源とリン酸源との少なくとも一方を溶液として用いる湿式合成法を用いるのが好ましい。これにより、高価な製造設備を必要とせず、容易かつ効率よくハイドロキシアパタイトを合成することができる。
【００７８】
湿式合成法を用いる場合、カルシウム源としては、例えば、水酸化カルシウム、酸化カルシウム、硝酸カルシウム等を用いることができる。一方、リン酸源としては、リン酸、リン酸アンモニウム等を用いることができる。これらの中でも、特に、カルシウム源として水酸化カルシウムまたは酸化カルシウムを主成分とするものが、また、リン酸源としてリン酸を主成分とするものが好ましい。かかるカルシウム源およびリン酸源を用いることにより、ハイドロキシアパタイトをより効率よくかつ安価に合成することができる。
【００７９】
以下、カルシウム源として水酸化カルシウムまたは酸化カルシウムを主成分とするものを、また、リン酸源としてリン酸を主成分とするものを用いる場合について説明する。
【００８０】
この場合、ハイドロキシアパタイト（ＨＡｐ）は、例えば容器内で、水酸化カルシウム（Ｃａ（ＯＨ）２）または酸化カルシウム（ＣａＯ）の懸濁液中に、リン酸（Ｈ３ＰＯ４）溶液を滴下し、混合することにより合成される。
【００８１】
この反応は、次式（Ｉ）または（ＩＩ）の通りである。
１０Ｃａ（ＯＨ）２＋６Ｈ３ＰＯ４    →  ２Ｃａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）＋１８Ｈ２Ｏ            ・・・（Ｉ）
１０ＣａＯ＋１０Ｈ２Ｏ＋６Ｈ３ＰＯ４  →  ２Ｃａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）＋１８Ｈ２Ｏ          ・・・（ＩＩ）
【００８２】
ここで、合成の進行が不十分であると、スラリー状をなす混合物（以下、単に「スラリー」と言う。）中に、未反応物（Ｃａ（ＯＨ）２やＣａＯ）が、不純物として存在することになる。
【００８３】
また、さらに反応を継続すると、次式（ＩＩＩ）に示す反応により、２次反応生成物としてリン酸三カルシウム（ＴＣＰ）が生成される。
【００８４】
３Ｃａ５（ＰＯ４）３（ＯＨ）＋Ｈ３ＰＯ４  →  ５Ｃａ３（ＰＯ４）２＋３Ｈ２Ｏ              ・・・（ＩＩＩ）
この反応が進行すると、２次反応生成物であるリン酸三カルシウムが、スラリー中に不純物として存在することになる。
【００８５】
このようにして合成されたハイドロキシアパタイトを含むスラリーを用いて、ハイドロキシアパタイト粉体を製造するが、本発明者は、かかるスラリー中に、前述したような不純物がほとんど存在しないようにすることにより、得られる焼結体の相対密度を高くすること、すなわち、高密度の焼結体（細胞培養ペレット１）を得ることができることを見出した。
【００８６】
以下、スラリー中のリン酸三カルシウムおよび未反応物（Ｃａ（ＯＨ）２、ＣａＯ）の含有量（濃度）の好適な範囲について、それぞれ説明する。
【００８７】
［リン酸三カルシウム］
スラリー中のリン酸三カルシウムの含有量（濃度）は、特に限定されないが、０．１ｗｔ％以下であるのが好ましく、実質的に存在しないことがより好ましい。このように、リン酸三カルシウムの含有量が少ないスラリーを用いることにより、より高密度の焼結体を得ることができる。
【００８８】
さらに、スラリーとしては、下記の条件Ａを満足するようなものが最適である。
【００８９】
条件Ａ：スラリーの一部を取り出し、成形圧力２ｔｏｎ／ｃｍ２で圧縮成形し、検出面を有するサンプル用成形体を形成した後、このサンプル用成形体を大気中１２００℃×２時間で焼成して得られたサンプルの検出面（表面粗さＲａ＝１０μｍ）に存在する物質をＸ線回折により解析する。このとき、得られるピークのうち、ハイドロキシアパタイトに由来するピークの強度が最も大きく、かつ、リン酸三カルシウムに由来するピークが観察されない。
【００９０】
かかる解析方法は、前記焼成に際して、ハイドロキシアパタイトと不純物との焼結速度の違いにより、ハイドロキシアパタイトの粒子成長が先行し、これに伴って、不純物が粒子間隙から押し出され、サンプル表面（特に検出面）に析出することを利用し、この検出面をＸ線回折により解析することにより、不純物の存在を確認することができる。かかる解析方法によれば、高精度でスラリー中の不純物の存在を確認することができる。
【００９１】
そして、スラリーが前記条件Ａを満足すれば、このものは、リン酸三カルシウムを含有しないか、または、リン酸三カルシウムを含有する場合でも極めて少量であることがわかる。このため、かかるスラリーを用いることにより、特に高密度の焼結体を得ることができる。
【００９２】
［未反応物］
スラリー中の未反応物の含有量（濃度）は、特に限定されないが、３ｗｔ％以下であるのが好ましく、０．０２５〜１ｗｔ％程度であるのがより好ましい。スラリー中に比較的少量の未反応物が存在する場合、酸化カルシウム（なお、未反応物である水酸化カルシウムは、焼成により酸化カルシウムに変化する）は、得られる焼結体の相対密度を高める傾向にあるため、より高密度の焼結体を得ることができる。なお、スラリー中の未反応物の含有量が前記上限値を超えると、後述する圧粉体の焼成条件等によっては、高密度の焼結体を得ることが困難となる場合がある。
【００９３】
さらに、スラリーとしては、下記の条件Ｂを満足するようなものが最適である。
【００９４】
条件Ｂ：スラリーの一部を取り出し、成形圧力２ｔｏｎ／ｃｍ２で圧縮成形し、検出面を有するサンプル用成形体を形成した後、このサンプル用成形体を大気中１２００℃×２時間で焼成して得られたサンプルの検出面（表面粗さＲａ＝１０μｍ）に存在する物質をＸ線回折により解析する。このとき、ハイドロキシアパタイトに由来するピークの強度をＸとし、酸化カルシウムに由来するピークの強度をＹとしたとき、Ｙ／Ｘ＜１／１０なる関係（特に、Ｙ／Ｘ＜１／１００なる関係）を満足する。
【００９５】
前述したように、かかる解析方法によれば、高精度でスラリー中の不純物の存在を確認することができ、その結果、スラリーが前記条件Ｂを満足すれば、このものは、未反応物の含有量が極めて少量であることがわかる。このため、かかるスラリーを用いることにより、特に高密度の焼結体を得ることができる。
【００９６】
なお、スラリーは、リン酸三カルシウムの含有量および未反応物の含有量のいずれか一方のみが前記範囲であるものでもよいが、それらの双方が前記範囲であるものが好ましい。これにより、極めて高密度の焼結体を得ることができる。
【００９７】
次に、このようにして得られたスラリーを、例えば噴霧乾燥等することにより、ハイドロキシアパタイト粉体（以下、単に「粉体」と言う。）を製造する。
【００９８】
粉体の平均粒径は、特に限定されないが、１〜３０μｍ程度であるのが好ましく、８〜２５μｍ程度であるのがより好ましい。このような平均粒径の粉体を用いることにより、より高密度の焼結体を得ることができる。
【００９９】
なお、得られた粉体は、より緻密な圧粉体を得るために、例えば５００〜８００℃×２〜６時間程度の処理条件で熱処理した後、例えばジェットミルやターボミル等で粉砕して、平均粒径６〜２０μｍ程度（粉砕前の５０〜９０％程度の平均粒径）とするようにしてもよい。
【０１００】
［２００］圧粉体の製造
次に、得られた粉体（またはこれを予め所望の形状に圧粉成形したもの）に対し、圧力を加え、圧密化する。
【０１０１】
加圧の方法としては、等方的に加圧する方法や、１軸プレスのように１方向（１軸方向）にのみ加圧する方法等のいずれであってもよいが、等方的に加圧する方法、特に静水圧加圧が好ましい。これにより、加圧後の圧粉体の密度を均一にすることができ、その結果、より高密度の焼結体を得ることができる。
【０１０２】
静水圧加圧としては、例えば５〜５０℃程度（好ましくは１０〜３０℃程度）の温度で加圧されるＣＩＰ（Ｃｏｌｄ  Ｉｓｏｓｔａｔｉｃ  ｐｒｅｓｓ）法と、加熱下（例えば６５℃以上）で加圧されるＨＩＰ（Ｈｏｔ  Ｉｓｏｓｔａｔｉｃ  ｐｒｅｓｓ）法、Ｈｏｔ  ｐｒｅｓｓ法とがあるが、ＣＩＰ法を用いるのが好ましい。ＣＩＰ法は、簡易な装置で行うことができ、後述する被膜に耐熱性を要求されない等の利点を有し、工業製品の製造工程として実用性に優れている。
【０１０３】
静水圧加圧の具体的な方法としては、粉体の表面を液体遮断性のある被膜で覆い、これを静水圧加圧装置に装填し、静水圧加圧を施す。ＣＩＰ法の場合、被膜としては、例えば、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロピレン等の樹脂材料や、天然ゴム、イソプレンゴムのようなゴム材料を用いることができる。この被膜は、例えばディッピングや真空パッキング法により形成することができる。
【０１０４】
加圧の圧力（加圧圧力）は、１ｔｏｎ／ｃｍ２以上であり、１〜３ｔｏｎ／ｃｍ２程度であるのが好ましく、２〜３ｔｏｎ／ｃｍ２程度であるのがより好ましい。この圧力が低過ぎると、十分な加圧の効果（特に密度の均一化）が期待できない場合があり、また、圧力を前記上限値よりさらに高くしても、それ以上の効果の向上が見られず、また、大型の装置が必要となり設備が高価になる。
【０１０５】
このようにして得られた加圧後の圧粉体は、高密度となり、しかもその密度が均一となる。後述する焼成により焼結した際、収縮率が減少するとともに均一に収縮するため、得られる焼結体の寸法精度が高く、また、焼結体の密度が均一となり、クラックや欠損等の焼結欠陥の発生が抑制され、その結果、破損し難い（機械的強度に優れる）ものとなる。
なお、加圧後、表面の被膜は、所定の方法により除去される。
【０１０６】
［３００］圧粉体の整形
次に、得られた圧粉体に対し、必要に応じ、その形状または寸法を整える。
【０１０７】
この圧粉体の整形は、例えば、圧粉体に所定の機械加工を施すことにより行われる。機械加工としては、例えば、切削加工、研削加工、研磨加工等が挙げられ、これらのうちの１種または２種以上を組み合わせて行うことができる。
【０１０８】
圧粉体自体は、得られる焼結体に比べてその硬度がはるかに低いため、機械加工等による圧粉体の整形は、容易に行うことができ、特に、低硬度の工具を用いても行うことができ、また、機械加工の加工速度も速い。
【０１０９】
［４００］圧粉体の焼成
以上のようにして得られた圧粉体は、例えば焼成炉内で、大気の酸素分圧より高い酸素分圧の酸素含有雰囲気中で焼結（焼成）され、焼結体とされる。
【０１１０】
本発明者は、鋭意検討を重ねた結果、圧粉体を、大気の酸素分圧より高い酸素分圧の酸素含有雰囲気中で焼成することにより、特に高密度の焼結体を得ることができることを見出した。
【０１１１】
かかる酸素含有雰囲気（焼成雰囲気）の典型例としては、純酸素雰囲気が挙げられるが、酸素含有雰囲気としては、酸素と他のガスとの混合ガス（特に、酸素を主とする混合ガス）を用いることもできる。
【０１１２】
また、大気圧以上（例えば２〜１０気圧）の加圧下で圧粉体の焼成を行う場合には、結果的に酸素分圧が大気の酸素分圧より高くなるため、酸素含有雰囲気として大気を用いることもできる。
なお、大気圧以下の密閉炉として酸素を少量にして焼成することも可能である。このように焼成すれば、酸素を流したままにする必要がなく、使用する酸素ガスの量が少なくてすむ。
【０１１３】
なお、大気圧（１気圧）下で圧粉体の焼成を行う場合には、高い気密性を有する焼成炉を用いる必要がない。換言すれば、簡易な構成の焼成炉を用いることができるという点で好ましい。これにより、細胞培養ペレット１の製造コストの低減を図ることができる。
【０１１４】
このような酸素含有雰囲気の酸素分圧（純酸素雰囲気の場合、焼成炉内の圧力）は、３８０ｍｍＨｇ以上であるのが好ましく、５５０ｍｍＨｇ以上であるのがより好ましい。これにより、得られる焼結体の相対密度をより高くすることができる。
【０１１５】
なお、大気圧下で酸素含有雰囲気の酸素分圧を高くするには、酸素含有雰囲気（焼成雰囲気）中に占める酸素の体積を大きく（濃度を高く）するようにすればよい。
【０１１６】
また、本発明者は、このような酸素分圧の高い酸素含有雰囲気中で圧粉体を焼成することにより、焼成の温度（焼成温度）を比較的低温とすることができること、さらに、この場合、ハイドロキシアパタイトの粒子成長を抑制しつつ、圧粉体を焼結に至らすことができ、その結果、さらに高密度の焼結体を得ることができることをも見出した。
【０１１７】
また、このような比較的低温で圧粉体の焼成を行うことにより、焼成時間の短縮、焼成に要するエネルギーの低減、焼成炉に用いられる発熱体にかかるコストの削減等を図ることができるという利点もある。
【０１１８】
この焼成における温度（焼成温度）は、９２５〜１３００℃であり、１０００〜１２５０℃程度であるのが好ましい。なお、焼成温度が低すぎると、圧粉体が効率よく焼結されず焼結体が僅かに曲がったりする場合がある。
【０１１９】
かかる焼成温度の保持時間（焼成時間）は、３０分〜８時間程度であるのが好ましく、２〜４時間程度であるのがより好ましい。
【０１２０】
［５００］焼結体の研磨
次に、得られた焼結体の両面を、それぞれ、目的に応じた研磨材により研磨して、細胞付着面２と観察面３とを形成する。
以上のような工程を経て、図１に示す細胞培養ペレット１が得られる。
【０１２１】
このような細胞培養ペレット１は、高密度なものであり、透明性および機械的強度も極めて高いものとなる。
【０１２２】
なお、このような細胞培養ペレット１の製造方法では、任意の目的で、工程［１００］の前工程、工程［１００］〜［５００］の間の中間工程、または工程［５００］の後工程を設けるようにしてもよい。
【０１２３】
また、前記工程［５００］の研磨処理を省略して、得られた焼結体をそのまま細胞培養ペレット１とすることもできる。この場合、細胞付着面２および観察面３の双方が平滑面となる。
【０１２４】
また、前記工程［５００］では、細胞付着面２および観察面３の双方に、粗面とする研磨処理を施してもよく、鏡面研磨を施してもよい。
【０１２５】
＜第２実施形態＞
図４は、本発明の細胞培養支持体を細胞培養ペレットに適用した場合の第２実施形態を示す斜視図である。なお、以下の説明では、図４中の上側を「上」、下側を「下」と言う。
【０１２６】
以下、第２実施形態の細胞培養ペレット１について、前記第１実施形態との相違点を中心に説明し、同様の事項については、その説明を省略する。
【０１２７】
図４に示す細胞培養ペレット１は、その細胞付着面２に、直線状の溝４がほぼ平行となるよう、複数配設されてなる凹部が形成され、それ以外は、前記第１実施形態の細胞培養ペレット１と同様である。
【０１２８】
細胞付着面２に凹部を形成することにより、細胞付着面２の表面積を増大させる（調節する）ことができる。すなわち、細胞が付着可能な面積（領域）を増大させることができる。これにより、細胞のより迅速な細胞培養ペレット１への付着を促し、より効率的な細胞培養が可能となる。
【０１２９】
また、この凹部は、かかる凹部が形成されている面が細胞付着面２であることを示すマーカーとしての機能も有する。このため、使用者にとって便利である。
【０１３０】
本実施形態のように、凹部を溝４で構成することにより、細胞が溝４の縁部に沿って（整列して）増殖するようになる。このため、細胞の観察（特に、増殖の程度等の観察）を行う際には、この観察を容易に行うことができる。また、溝４の形成は、比較的容易であるという利点もある。
【０１３１】
図４に示す構成では、溝４の横断面積（溝４の幅）は、その深さ方向に沿ってほぼ一定とされ、溝４の形状がほぼコ字状をなしている。これにより、溝４の縁部への細胞の付着がより容易となる。
【０１３２】
このような溝４は、細胞培養ペレット１の平面視で、その占有する面積が細胞培養ペレット１の全体の面積に対して、１〜６０％程度であるのが好ましく、１０〜３０％程度であるのがより好ましい。これにより、細胞付着面２の表面積を十分に大きくすることができる。
【０１３３】
細胞培養ペレット１の直径を、前記第１実施形態で記載した範囲とする場合には、溝４の幅（図４中、長さＷ）は、好ましくは０．００１〜２ｍｍ程度、より好ましくは０．０１〜１ｍｍ程度とされ、隣接する溝４の間隔（図４中、長さＰ）は、好ましくは０．００１〜５ｍｍ程度、より好ましくは０．０１〜２ｍｍ程度とされる。
【０１３４】
また、溝（凹部）４の深さ（図４中、長さＤ）は、細胞培養ペレット１の厚さ（図４中、厚さＴ）に対して０．００５〜２０％程度であるのが好ましく、０．０１〜１０％程度であるのがより好ましい。これにより、細胞培養ペレット１の強度を確保しつつ、細胞付着面２の表面積を十分に大きくすることができる。
【０１３５】
このような溝４は、前記第１実施形態で記載した細胞培養ペレット１の製造工程における工程［３００］において、圧粉体に対して加工を施しておくことにより形成することができる。
【０１３６】
このような第２実施形態の細胞培養ペレット１においても、前記第１実施形態の細胞培養ペレット１と同様の効果が得られる。
【０１３７】
＜第３実施形態＞
図５は、本発明の細胞培養支持体を細胞培養ペレットに適用した場合の第３実施形態を示す斜視図である。なお、以下の説明では、図５中の上側を「上」、下側を「下」と言う。
【０１３８】
以下、第３実施形態の細胞培養ペレット１について、前記第１および第２実施形態との相違点を中心に説明し、同様の事項については、その説明を省略する。
【０１３９】
図５に示す細胞培養ペレット１は、溝４の形状が異なり、それ以外は、前記第２実施形態の細胞培養ペレット１と同様である。
【０１４０】
図５に示す構成では、溝４の横断面積（溝４の幅）は、観察面（他方の面）３に向かって減少し、溝４の形状がほぼＶ字状をなしている。
【０１４１】
この場合、溝４の最大幅が、前記第２実施形態で記載した溝４の幅の範囲となるよう設定される。
【０１４２】
このような溝４は、前記第１実施形態で記載した細胞培養ペレット１の製造工程における工程［３００］において、圧粉体に対して加工を施しておくことにより形成することができる。
【０１４３】
このような第３実施形態の細胞培養ペレット１においても、前記第１および前記第２実施形態の細胞培養ペレット１と同様の効果が得られる。
【０１４４】
なお、溝４は、前記第２および第３実施形態で示したような直線状のものに限定されず、例えば、蛇行したもの、渦巻状のもの等であってもよい。また、各溝４は、例えば格子状等に交わるものであってもよい。
【０１４５】
また、溝４の形状は、ほぼコ字状（前記第２実施形態）やほぼＶ字状（前記第３実施形態）のものに代わり、ほぼＵ字状等のものであってもよい。
【０１４６】
また、各前記実施形態では、細胞培養ペレット１の形状は、円盤状（平面視での形状が円形）のものについて示したが、その平面視での形状は、例えば、三角形、四角形（正方形、長方形、菱形）、六角形、楕円形等のいかなるものであってもよい。
【０１４７】
以上、本発明の細胞培養支持体および細胞培養支持体の製造方法について説明したが、本発明は、これらに限定されるものではない。
【０１４８】
本発明の細胞培養支持体は、一方の面に、細胞を付着させ、この細胞を増殖させる平板部を有するものであり、各前記実施形態では、それぞれ、その全体がこの平板部で構成される細胞培養支持体として細胞培養ペレットを代表に説明したが、本発明の細胞培養支持体は、各前記実施形態で示したような構成の部分（平板部）を、その底部として備える構成のものであってもよい。
【０１４９】
このような細胞培養支持体としては、例えば、シャーレ、マイヤー（フラスコ）、マイクロプレート、チューブ等が挙げられる。
【０１５０】
また、細胞の状態の観察は、平板部に光を透過させつつ行う方法に限定されず、例えば、電子顕微鏡等を用いて行う方法を採用してもよいことは、言うまでもない。
【０１５１】
【実施例】
次に、本発明の具体的実施例について説明する。
【０１５２】
［細胞培養ペレット（細胞培養支持体）の製造］
次のようにして、実施例１〜６および比較例１、２の細胞培養ペレットを、それぞれ、２０個ずつ製造した。
【０１５３】
（実施例１）
＜１＞  まず、水酸化カルシウム１４０ｇを純水６Ｌに分散させ、その中へ、リン酸濃度２ｗｔ％のリン酸水溶液を滴下し、十分に撹拌、混合して、ハイドロキシアパタイトを合成し、ハイドロキシアパタイトを含むスラリーを得た。
【０１５４】
次に、かかるスラリーを噴霧乾燥機を用いて噴霧乾燥し、平均粒径２０μｍのハイドロキシアパタイト粉体を得た。
【０１５５】
このとき、スラリーの一部を取り出し、成形圧力２ｔｏｎ／ｃｍ２で圧縮成形し、検出面を有するサンプル用成形体を形成した後、このサンプル用成形体を大気中１２００℃×２時間で焼成して得られたサンプルの検出面（表面粗さＲａ＝１０μｍ）に存在する物質をＸ線回折により解析した。なお、サンプルの寸法は、直径１５ｍｍ、高さ８ｍｍとした。
【０１５６】
その結果、リン酸三カルシウム（ＴＣＰ）に由来するピークは確認されず、酸化カルシウム（ＣａＯ）に由来するピークの強度は、ハイドロキシアパタイト（ＨＡｐ）に由来するピークの強度の１／２５０であった。
【０１５７】
さらに、得られたハイドロキシアパタイト粉体を、６００℃×４時間の条件で熱処理した後、ジェットミルにより粉砕した。これにより、平均粒径１６μｍのハイドロキシアパタイト粉体を得た。
【０１５８】
＜２＞  次に、このハイドロキシアパタイト粉体を、圧縮成形機にて円盤状に固め、その後、ビニール製の袋状体に入れて真空梱包して、静水圧加圧により常温（２４℃）下、２ｔｏｎ／ｃｍ２の圧力で圧縮成形し、円盤状の圧粉体を得た。
【０１５９】
＜３＞  次に、圧粉体を旋盤により機械加工し、直径２８ｍｍ、厚さ１．４ｍｍとした。
【０１６０】
＜４＞  次に、この圧粉体を、焼成炉内で焼成し、直径２０ｍｍ、厚さ１ｍｍの焼結体を得た。なお、焼成条件は、純酸素雰囲気（焼成雰囲気）中、１０５０℃×２時間とした。また、焼成炉内の圧力は、７６０ｍｍＨｇ（１気圧）とした。
【０１６１】
得られた焼結体は、空孔率が０．５％であった。この焼結体を細胞培養ペレットとした。この空孔率の測定は、アルキメデス法により行った。
【０１６２】
また、この細胞培養ペレットの厚さ方向に、波長６００ｎｍの光を透過させたとき、この光の透過率は、３％であった。
【０１６３】
（実施例２）
前記工程＜４＞において、焼成条件を、純酸素雰囲気中、１２００℃×２時間とした以外は、前記実施例１と同様にして細胞培養ペレットを製造した。
なお、細胞培養ペレットの空孔率は、０．４％であった。
【０１６４】
また、この細胞培養ペレットの厚さ方向に、波長６００ｎｍの光を透過させたとき、この光の透過率は、４％であった。
【０１６５】
（実施例３）
前記工程＜４＞後に、一方の面（細胞付着面）を、平均粒径２５μｍのダイヤモンド粒子を含む研磨材を用いて研磨し、他方の面（観察面）を、平均粒径０．５μｍのダイヤモンド粒子を含む研磨材を用いて鏡面研磨した以外は、前記実施例１と同様にして細胞培養ペレットを製造した。
なお、細胞培養ペレットの空孔率は、０．５％であった。
【０１６６】
また、この細胞培養ペレットの厚さ方向に、波長６００ｎｍの光を透過させたとき、この光の透過率は、３％であった。
【０１６７】
（実施例４）
前記工程＜４＞後に、双方の面（細胞付着面および観察面）を、平均粒径０．５μｍのダイヤモンド粒子を含む研磨材を用いて鏡面研磨した以外は、前記実施例１と同様にして細胞培養ペレットを製造した。
なお、細胞培養ペレットの空孔率は、０．５％であった。
【０１６８】
また、この細胞培養ペレットの厚さ方向に、波長６００ｎｍの光を透過させたとき、この光の透過率は、６％であった。
【０１６９】
（実施例５）
前記工程＜３＞において、一方の面（細胞付着面）に、コ字状の溝が形成されるように、圧粉体に切削加工を行った以外は、前記実施例１と同様にして、細胞培養ペレットを製造した。
なお、細胞培養ペレットの空孔率は、０．５％であった。
【０１７０】
また、この細胞培養ペレットの厚さ方向に、波長６００ｎｍの光を透過させたとき、この光の透過率は、３％であった。
【０１７１】
また、溝の幅は、０．１ｍｍ、隣接する溝同士の間隔は、０．５ｍｍ、平面視で、溝の占有する面積は、細胞培養ペレット全体の面積に対して２０％、溝の深さは、細胞培養ペレットの厚さに対して６．５％であった。
【０１７２】
（実施例６）
溝の形状がＶ字状となるよう形成した以外は、前記実施例５と同様にして、細胞培養ペレットを製造した。
なお、細胞培養ペレットの空孔率は、０．５％であった。
【０１７３】
また、この細胞培養ペレットの厚さ方向に、波長６００ｎｍの光を透過させたとき、この光の透過率は、３％であった。
【０１７４】
また、溝の幅は、０．１ｍｍ、隣接する溝同士の間隔は、０．５ｍｍ、平面視で、溝の占有する面積は、細胞培養ペレット全体の面積に対して２０％、溝の深さは、細胞培養ペレットの厚さに対して６．５％であった。
【０１７５】
（比較例１）
次のようにした以外は、前記実施例１と同様の細胞培養ペレットを製造した。
【０１７６】
まず、前記実施例１と同様にして製造したハイドロキシアパタイト粉体とメチルセルロース水溶液とを混合してスラリーを調製し、このスラリーを攪拌して、スラリー中に気泡を含有するようにした。
次いで、得られたスラリーを成形型内に入れ、乾燥して成形体を得た。
【０１７７】
次いで、この成形体を、大気炉で１０５０℃×２時間焼成し、多孔質の焼結体を得た。
【０１７８】
得られた焼結体は、空孔率が５０％であった。この焼結体を細胞培養ペレットとした。
【０１７９】
（比較例２）
ポリスチレン製の円盤状（直径２０ｍｍ、厚さ１ｍｍ）の細胞培養ペレットを製造した。
【０１８０】
［評価］
実施例１〜６および比較例１、２の細胞培養ペレットを用いて、それぞれ、次のようにして、ヒト骨肉腫由来細胞（ＨＯＳ）の培養を行い、以下に示すような方法で評価を行った。
【０１８１】
まず、フラスコ内でヒト骨肉腫由来細胞を初代培養し、培養されたヒト骨肉腫由来細胞をトリプシン処理して、ヒト骨肉腫由来細胞が１×１０５個／ｍＬとなるように、培養液を用いて細胞浮遊液を調製した。
【０１８２】
次に、各実施例１〜６および比較例１、２で製造した細胞培養ペレット２０個を、それぞれ、図２に示すようなプレートの穴内に収納し、前記細胞浮遊液２ｍＬを添加した。
【０１８３】
なお、培養液には、ＭＥＭ培地に、ＦＢＳ：１０ｖｏｌ％、ＮＥＡＡ：１ｖｏｌ％となるように混合して用いた。
【０１８４】
この状態で、９５ｖｏｌ％Ｏ２＋５ｖｏｌ％ＣＯ２の混合ガス気流下、３７℃で、ヒト骨肉腫由来細胞を培養した。
【０１８５】
まず、細胞浮遊液添加後、１時間経過した後、実施例１〜６および比較例１、２の細胞培養ペレットの各１０個を、プレートの穴内から取り出し、それぞれ、ヒト骨肉腫由来細胞に対してトリパンブルー染色を施した。
【０１８６】
そして、細胞培養ペレットの一方の面（細胞付着面）側から光を透過させつつ、他方の面（観察面）側において、ヒト骨肉腫由来細胞の状態を、光学顕微鏡（オリンパス社製、「倒立型リサーチ顕微鏡  ＩＸ７１」）により観察するとともに、細胞培養ペレットの細胞付着面に存在するヒト骨肉腫由来細胞の数を計測した。
【０１８７】
また、細胞浮遊液添加後、２日間経過した後、実施例１〜６および比較例１、２の細胞培養ペレットの各残り１０個を、プレートの穴内から取り出し、それぞれ、前記と同様の操作（作業）を行った。
【０１８８】
その結果、実施例１〜６の細胞培養ペレットおよび比較例２の細胞培養ペレットでは、いずれも、ヒト骨肉腫由来細胞の状態の確認（ヒト骨肉腫由来細胞の数の計測）が可能であったが、比較例１の細胞培養ペレットでは、光が透過せず、ヒト骨肉腫由来細胞の状態の確認が困難であった。
【０１８９】
実施例１〜６の細胞培養ペレットは、いずれも、比較例１および比較例２と同程度あるいはそれ以上のヒト骨肉種由来細胞の細胞付着面への付着が確認された。特に細胞培養ペレットの細胞付着面を粗面とした実施例３、および細胞付着面に溝を設けた実施例５および６は、より多くのヒト骨肉種由来細胞の細胞付着面への付着が確認された。
【０１９０】
さらに、２日間経過後には、実施例１〜６および比較例１、２の細胞培養ペレットでは、いずれも、ヒト骨肉腫由来細胞の盛んな増殖が確認された。
【０１９１】
また、細胞を付着した実施例１〜６の細胞培養ペレットは、いずれも、培養液を交換する際においても細胞が細胞培養ペレットから剥がれ落ちることはなく、細胞培養ペレットには細胞が強固に付着していることが確認された。特に細胞培養ペレットの細胞付着面を粗面とした実施例３、および細胞付着面に溝を設けた実施例５および６は、細胞培養ペレットを雑に扱った場合においても付着した細胞が剥がれ落ちることはなく、細胞がより強固に付着していることが確認された。
【０１９２】
なお、２日間経過後における実施例１〜３および比較例２の細胞培養ペレットの光学顕微鏡での観察像（画像）を、一例として図６に示す。
【０１９３】
また、実施例１〜６の細胞培養ペレットでは、いずれも、ヒト骨肉腫由来細胞に染色を施していない状態でも、比較例２の細胞培養ペレットと同様に、前記の光学顕微鏡での観察が可能であった。
【０１９４】
【発明の効果】
以上述べたように、本発明によれば、細胞の付着および増殖が好適になされる。また、細胞が付着、増殖する部分の透明性が高いので、光を透過させつつ観察するという簡単な方法で、細胞の状態を観察することができる。
【０１９５】
特に、平板部がリン酸カルシウム系化合物を主材料として構成されることから、生体に近い状態での細胞の培養が可能であるとともに、例えば各種細胞の骨への親和性等を正確に評価することができる。
【０１９６】
また、平板部の表面性状を適宜設定することにより、前記効果をより向上させることができる。
【０１９７】
また、その全体を平板部で構成し、その寸法を適宜設定することにより、増殖した細胞ごと、生体内へ移植することもできる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の細胞培養支持体を細胞培養ペレットに適用した場合の第１実施形態を示す斜視図である。
【図２】図１に示す細胞培養ペレットの使用方法を説明するための図（部分断面斜視図）である。
【図３】図１に示す細胞培養ペレットの製造方法を示す工程図である。
【図４】本発明の細胞培養支持体を細胞培養ペレットに適用した場合の第２実施形態を示す斜視図である。
【図５】本発明の細胞培養支持体を細胞培養ペレットに適用した場合の第３実施形態を示す斜視図である。
【図６】２日間経過後における実施例１〜３および比較例２の細胞培養ペレットの光学顕微鏡での観察像を示す画像である。
【符号の説明】
１            細胞培養ペレット
２            細胞付着面
３            観察面
４            溝
１０          プレート
２０          穴
３０          培養液
４０          細胞
１００        ハイドロキシアパタイト粉体の製造
２００        圧粉体の製造
３００        圧粉体の整形
４００        圧粉体の焼成
５００        焼結体の研磨
【図１】
2004173502.tif 000003
【図２】
2004173502.tif 000004
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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