(57)【要約】　　　（修正有）【課題】貴重な漢方薬であるガノデルマルシダム（サルノコシカケ科、霊芝）の子実体を使わず、新しい形態による医薬品の提供。【解決手段】ガノデルマルシダムの胞子（ＧＬＳｓ）が発芽活性化されたものを有効量ヒトへ経口投与することによる。【効果】ヒトの老化を防止／遅延、及び／又は更年期症状が軽減される。特に男性患者に有効である。ＧＬＳｓは、抗酸化剤として効果があり、特に還元型グルタチオン（ＧＳＨ）量及びスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）活性を上昇させることにより、フリーラジカルによる損傷を低減させる。ＧＬＳｓはまた、血中のテストステロンレベルを上昇させ、うつ、特に高齢男性患者における老人性のうつを改善することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
　発芽活性化されたガノデルマルシダム（Ganoderma lucidum）の胞子（ＧＬＳｓ）の有効量をヒトに経口投与することを含む、ヒトの老化を防止／遅延する、及び／又は更年期症状を軽減／緩和する方法。
【請求項２】
　前記老化がフリーラジカル損傷により引き起こされるものであることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項３】
　前記ＧＬＳｓが抗酸化剤であることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項４】
　前記ＧＬＳｓを前記ヒトに１日あたり０．５〜１０ｇ投与することを特徴とする、請求項３記載の方法。
【請求項５】
　前記ＧＬＳｓを前記ヒトに１日あたり１〜５ｇ投与することを特徴とする、請求項４記載の方法。
【請求項６】
　前記ＧＬＳｓが前記ヒトの還元型グルタチオン（ＧＳＨ）及びスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）活性を上昇させることを特徴とする、請求項３記載の方法。
【請求項７】
　前記更年期障害の症状が、疲労、食欲不振、動悸、健忘、いら立ち、うつ、及びインポテンスからなる群から選ばれる少なくともひとつであることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項８】
　前記ヒトが男性であることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項９】
　前記患者が高齢男性であることを特徴とする、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
　前記ＧＬＳｓを前記ヒトに１日あたり０．５〜１０ｇ投与することを特徴とする、請求項７記載の方法。
【請求項１１】
　前記ＧＬＳｓを前記ヒトに１日あたり１〜５ｇ投与することを特徴とする、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
　前記ＧＬＳｓが前記ヒトの血中テストステロンを増加させることを特徴とする、請求項８記載の方法。
【請求項１３】
　前記ＧＬＳｓが前記ヒトの血中スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）を増加させることを特徴とする、請求項８記載の方法。
【請求項１４】
　前記ＧＬＳｓが前記ヒトの血中マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）を減少させることを特徴とする、請求項８記載の方法。
【請求項１５】
　前記ＧＬＳｓが前記ヒトのうつを改善することを特徴とする、請求項８記載の方法。
【請求項１６】
　請求項１記載の発芽活性化ガノデルマルシダム胞子（ＧＬＳｓ）を含む、ヒトの老化進行の防止／遅延用薬剤。
【請求項１７】
　請求項１記載の発芽活性化ガノデルマルシダム胞子（ＧＬＳｓ）を含む、ヒトの更年期症状の軽減／緩和用薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
　本発明は、ヒトに発芽活性化されたガノデルマルシダム胞子（Ganoderma lucidum spores、「ＧＬＳｓ」）の有効量を経口投与することにより、ヒトの老化進行を防止／遅延する方法、及び／又は更年期症状を軽減／緩和する方法に関する。ＧＬＳｓの抗老化効果は、主として、ＧＬＳｓがフリーラジカル保護のための抗酸化剤であることに由来する。ＧＬＳｓはまた、更年期、特に男性の更年期に関連した症状も軽減及び／又は緩和する。これらは、老化に一部原因がある。男性の更年期に関連した症状としては、疲労、食欲不振、動悸、健忘、いら立ち、うつ、及び／又はインポテンスが含まれる。
【背景技術】
【０００２】
　老化に関するフリーラジカル理論は、１９５６年に初めてDenham Harman博士によって提案された。現在では、生存する細胞は、エネルギー生成などの通常の機能を果たしながら、フリーラジカルを生成し続けていると認識されている。また、フリーラジカルは、喫煙、放線線、日光、及び他の環境要因によっても生じる。内因性及び外因性のフリーラジカルは高反応性物質であり、多くの生体分子と不可逆的に反応し、不規則な変化を起こし、生体系の漸進的な低下を引き起こす能力がある。
　細胞には、全てではないが大部分のフリーラジカルによる損傷を阻止する抗酸化防御システムがある。フリーラジカルによる損傷が続くと、最終的に細胞は死んでしまう。フリーラジカルにより生物内の十分な数の細胞が死ぬ又は損傷を受けると、生物は老化する。
【０００３】
　抗酸化防御システムは、抗酸化剤の使用を通じてフリーラジカルを除去する。フリーラジカルと老化との関係を支持する十分な証拠がある。例えば、動物が長く生きれば生きるほど、その動物が体内に有する抗酸化剤はより多くなる。カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰＸ）、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）などの内因性酵素を通じて、いくつかの抗酸化剤が体内で生成される。他には、ビタミンＣ、ビタミンＥ、β−カロチン、セレニウムなどのように、経口摂取により供給される。抗酸化剤を摂取し、体内のフリーラジカルのアクセスを除去することにより、老化進行を遅らせることができると考えられる。いくつかの研究は、抗酸化剤が心疾患、ある種のガン、白内障、及びヒトの老化にともなうより一般的な他の健康上の問題の予防に役立つかもしれないことを示している。
【０００４】
　男性が直面する老化に関する問題の１つは、男性更年期の発現である。４０代、５０代、及び６０代の男性の約４０％が、ある程度の男性更年期を経験すると推測されている。男性更年期は、男性休止としても知られているが、認識されたのは最近のことであり、その研究は１９７０年代に初めて発表された。
　男性更年期は、女性更年期ほどひどくはなく、もっと緩やかなものであり、中には経験しない人もいる。男性更年期は、ホルモン変化、生理学的変化及び化学的変化を伴い、４０〜５５歳の間の男性に一般的におこる。これには、倦怠感、うつ、怒りっぽさが増す、気分のムラ、性欲減退、勃起障害、及び認識力の変化という特徴がある。原因については十分には研究されていないが、ホルモンの欠乏や過度のアルコール摂取、喫煙、高血圧症、薬物、貧しい食生活、運動不足、血行不良、精神的な問題といった要因が、この状態の原因となることが知られている。
【０００５】
　４５歳の時と比較すると、健康な男性でも５５歳までには、男性ホルモンのテストステロンの血中レベルが有意に低下することがわかっている。実際、８０歳までには、ほとんどの男性ホルモンレベルが思春期前レベルまで低下する。低テストステロンは、疲労、うつ、集中力の低下、筋肉の強度及び持久力の低下に関連する。
　うつは、男性更年期のもうひとつの一般的な共通点である。The Epidemilogic Catchment Area Study in the 1991 NIH Consens Statementによると、うつ症状は、６５歳以上の共同体居住者の約１５％に起こる。患者は、重苦しい気分、食欲不振、不眠、アネルギー、ならびに人生の通常の追求である興味や楽しみの喪失に見舞われることがある。高齢者の場合には、うつだと診断されず治療が行われないことがしばしばある。その一因は、うつは高齢者に関係する社会的、経済的問題とともに身体的な病気の一般的な結果であると、医療介護提供者及び／又は患者自身がしばしば結論づけるからである。今のところ、男性の更年期に関連した症状、特に高齢者を総合的に緩和する最良の薬剤はない。
【０００６】
　ガノデルマ（Ganoderma lucidum Leyss ex Fr. Karst）は、多孔菌（polyporous fungus）で、担子菌類（Basidiomycetes）のサルノコシカケ科（Polypolaceae）のガルデルマ属（Ganoderma）に属する。古来より、ガノデルマはヒトの寿命を延ばす奇跡の菌類として賞賛されてきた。ガノデルマの薬用効果は、ガノデルマが生成する天然物質あるいは生理活性物質によるもので、これらが人体の神経系−内分泌系−免疫系を刺激あるいは調節して病気を撃退することができるものと考えられている。また、ガノデルマは、フリーラジカル捕捉性及び抗肝毒性（Lin et al., J. Ethnopharmacol., (1995), 47(1):33-41）とともに、その抗ガン性及び免疫賦活性（Kin et al., Int. J. Mol. Med. (1999), 4(3):273-277）や、心臓血管効果（Lee et al., Chem. Pharm. Bull. (1990), 38:1359-1364）によってもよく知られている。
【０００７】
　ガノデルマは、漢方では最も珍しく貴重な薬用植物であり、中国では５，０００年以上もの間、「霊芝（ling zhi）」として知られている。ガノデルマにはいろいろな種類があり、例えば、G.lucidum(red)、G.applanatum(brown)、G.tsugae(red)、G.sinense(black)、及びG.oregonense(dark brown)などがある。しかしながら、野生のガノデルマは、険しい山の老木に自然にしかも非常にまれにしか生育しないことから、大量かつ高品質のガノデルマをコンスタントに供給するための研究はほとんど行われてこなかった。
　ガノデルマの胞子は、ガノデルマの全ての生理活性物質を含有していることから、ガノデルマの本質（essence）を表わすと考えられるが、ガノデルマの研究のほとんどは、実験材料としてガノデルマの子実体又は菌糸体を用いて行われており、ガノデルマ胞子はほとんど研究されていない。
【０００８】
　ガノデルマ胞子は５〜８μｍととても小さく霧のようで、しかも極めて硬くて弾性のある二層の胞子上膜（epispores）を有しており、このため胞子を壊すことは非常に難しい。ガノデルマ胞子は、通常、成熟したガノデルマの表皮層（pelius）で散乱する。成熟すると、ガノデルマ胞子はこの表皮層から排出される。このように排出されたガノデルマ胞子はまとめて「胞子粉（spore powders）」と呼ばれる。野生では、次の理由によりこの「胞子粉」を集めることはむずかしい：（１）胞子の発芽率が極めて低い（すなわち、約３〜１５％）；（２）排出期間が比較的短い（すなわち、１ライフサイクル当たりおおよそ１０日間）；（３）風、雨などのいくつかの環境要因もまた、胞子の収集を妨げる。さらに、集めた胞子の物質は、その胞子上膜の弾性のため、抽出が難しい。
【０００９】
　近年、胞子の破壊技術の改良で、ガノデルマ胞子の研究を指向したより多くの研究が始められるようになった。しかしながら、胞子の破壊技術の改良は、胞子の低い発芽率という欠点を解決するものではない。実際には、低い発芽率のために、ガノデルマ胞子に関する研究のほとんどは、多様な発芽段階に対して休眠状態にある胞子からの生理活性物質を抽出して行われている。ライフサイクルの異なる段階にある胞子は、異なる種類及び／又は比率の生理活性物質を生成するので、このような胞子の混合物の各バッチは、異なる活性成分を含む。そのような研究の結果は、適切なコントロールができないので、明らかに無意味である。
【００１０】
　発芽活性化方法は、本願の親出願である米国特許公報６３１６００２Ｂ１に記載されており、ここに折り込まれるものである。この方法により、休眠状態のガノデルマ胞子はうまく活性化し、ガノデルマ胞子の発芽率は９５％を超える。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
　以下に説明する本発明では、発芽活性化ガノデルマルシダム胞子（ＧＬＳｓ）を、フリーラジカル捕捉剤（すなわち、抗酸化剤）及び抗老化剤として使用する方法、特に男性更年期に関連した症状を軽減／緩和するための方法を紹介する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
　ＧＬＳｓは複数の生物活性を有し、身体全身の健康を促進する。特に、ＧＬＳｓは、フリーラジカルの除去、ホルモン生成の促進及び抗うつにおけるその活性により、高齢者に関連する症状の治療（すなわち抗老化）、及び男性更年期に関連する症状の治療に有効である。
　本発明は、ヒトの老化進行を防止／遅延する方法、及び／又は更年期に関連する症状を軽減／緩和する方法を提供するものである。本方法では、発芽活性化ガノデルマルシダム胞子（ＧＬＳｓ）を経口摂取することが必要である。
【発明の効果】
【００１３】
　老化進行に影響を及ぼす要因のひとつが、フリーラジカルによる損傷である。ＧＬＳは抗酸化剤である。ＧＬＳｓをヒトに１日あたり約０．５ｇ〜１０ｇ、好ましくは約１〜５ｇ経口投与すると、フリーラジカルによる損傷から身体を保護する抗酸化効果を発揮する。例えば、ＧＬＳｓはヒトの体内の還元型グルタチオン（ＧＳＨ）量及びスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）活性を高める。
　男性の更年期に関連する症状としては、疲労、食欲不振、動悸、健忘、いら立ち、うつ、インポテンス、及びこれらの併発がある。男性更年期は特に高齢男性に顕著である。
　男性の更年期症状を軽減あるいは緩和するために、患者に、１日あたり約０．５〜１０ｇ、より好ましくは１〜５ｇのＧＬＳｓを投与する。ＧＬＳｓは、患者のテストステロン及びスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）活性の血中レベルを上昇させる。また、ＧＬＳｓは、患者のマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）の血中レベルを低下させる。さらに、ＧＬＳｓは患者、特に高齢者のうつを改善する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
　ガノデルマルシダムの非常に小さな胞子は、非常に硬くて弾性のある二層の胞子上膜を有している。野生では、ガノデルマルシダムの胞子の発芽は比較的遅く、発芽率は極めて低い。実際には、胞子の発芽管が適切な条件下で生え始めるのに約２４〜４８時間かかり、７２時間後に細毛体が分岐を形成しはじめ、発芽率はたった３〜１５％に過ぎない。
　ガノデルマルシダムの成熟胞子を加工処理を行うために選択した。胞子の加工処理には、発芽活性化胞子により産生された大量の生理活性物質を有効に保持するために、３つの特徴的な段階がある。第１段階は、胞子をある期間溶液に浸すことによって発芽を誘発し、次いで発芽誘発された胞子を換気の良い培養器内で培養する工程を含む。第２段階は、胞子壁破壊された（すなわち、胞子上膜の細胞壁の破壊による）胞子の調製工程を含み、これは酵素処理及び／又は機械力によって行うことができる。そして、最終段階は、胞子壁破壊胞子からの生理活性物質の抽出工程を含み、これは、凍結乾燥又は真空乾燥の後、溶媒又は薄膜濃縮による抽出により行うことができる。
【００１５】
　下記に、生理活性物質の生産にいたる段階の概要を示す。
Ｉ．発芽誘発のための浸漬：ガノデルマルシダムの成熟した完全な胞子を、発芽誘発のための浸漬工程を行うために注意深く選んだ。胞子は赤色ガノデルマルシダムの胞子が速やかに発芽することができる、純水、蒸留水、生理食塩水、あるいは他の栄養液中に保存した。栄養液の例としては、ココナッツジュース、１〜５％麦芽抽出液、ガノデルマルシダムの胞子襄果あるいは細毛体の０．５〜２５％抽出物、ビオチン含有０．１〜５％培養液、リン酸カリウム（一塩基性）及び硫酸マグネシウム含有０．１〜３％培養液が挙げられる。溶液の選択は、要求される浸漬時間、処理する胞子量、及び材料の入手可能性などのその他の要因に依存する。上記発芽用溶液の１種以上を赤色ガノデルマルシダムの胞子の０．１〜５倍重量となるように添加して用いることができた。浸漬時間は、水温に応じて決定され、通常は２０〜４３℃で３０分〜８時間浸漬した。好ましい浸漬時間は水温２５〜３５℃で２〜４時間であった。
【００１６】
II．活性化培養：ガノデルマルシダムの胞子を浸漬用溶液から取り出し、余分な溶液は滴らせて除去した。その後、この胞子を一定温度、一定湿度の良く換気された培養器内に置き、胞子の活性化培養を行うことができた。培養相対湿度は通常６５〜９８％、培養温度は１８〜４８℃に設定し、活性化時間は、連続３０分〜２４時間であった。好ましくは、湿度８５〜９７％、温度２５〜３５℃である。この方法を用いて、赤色ガノデルマルシダムの胞子の活性化率は９５％を越えた。活性化の間に、赤色ガノデルマルシダムの胞子の細胞壁は明らかに軟らかくなり、胞子の細胞壁を容易に貫通した。
【００１７】
III．胞子上膜の処理：発芽活性化工程後、胞子を酵素分解処理した。本工程は、低温且つ酵素活性が維持可能な条件下で、キチナーゼ、セルラーゼ、あるいは他の通常工業的に用いられる酵素を用いて行った。本工程では、胞子上膜がその弾性を失い、もろくなるまで行った。あるいは、細胞壁を貫通するために物理的処理を行った。例えば、微粒化処理、ロールプレス処理、磨砕処理、超高圧マイクロスチーム処理、及び通常工業的に用いられるその他の機械的方法で行い、貫通率（penetration rate）は９９％を越えた。
【００１８】
IV．乾燥／カプセル化：乾燥は、低温で凍結乾燥や真空乾燥等の通常工業的に用いられる標準的な方法を用いて行った。得られた生成物の水分含有量は４％未満であった。乾燥したＧＬＳｓは粉末状で、カプセル化した。各カプセルには、乾燥ＧＬＳｓが３００ｍｇ含まれる。
　ＧＬＳｓの好ましい経口投与量は、１回につき約２〜４カプセルを１日に１〜３回である。
【００１９】
　本発明の記載において、特定の技術用語が使用されている。明確にするために、これらの技術用語を以下に説明する。それぞれの特定の用語には、同様の方法で作用して同様の目的を達成する全ての技術的同等物が含まれることが理解されるべきである。
　「フリーラジカル」という用語は、細胞代謝の過程中で絶えず生成され、生体に損傷を与え得る高活性物質の一群を意味する。フリーラジカルは、不対電子を有する原子である。ミトコンドリアは、化学的エネルギーを生み出す細胞領域であり、フリーラジカルを生成し、フリーラジカルによる損傷の主要部である。フリーラジカルは、酸化反応を誘発し、タンパク質を架橋し損傷させ、酵素活性を低下させ、核酸の代謝異常の一因となり、生体膜の多価不飽和脂質の過酸化を引き起こす。フリーラジカルによる攻撃の結果、生体のさまざまな臓器だけでなく、細胞の構造や機能が損傷を受け、結果的に老化及び複数の病変が生じる。
【００２０】
　「グルタチオン」又は「ＧＳＨ」という用語は、グルタチオンの還元型を意味する。グルタチオンは、身体の低分子量捕捉剤である。遍在するトリペプチドＬ−グルタチオン（ＧＳＨ）（ガンマ−グルタミル−システニル−グリシン）は、周知の生物学的抗酸化剤であり、実際には、高等生物の主要な細胞内抗酸化剤であると考えられている。ＧＳＨは、酸化されると二量体（ＧＳＳＧ）を形成するが、これはグルタチオン還元酵素を有する臓器で再生される。ＧＳＨは、体内で適切な酸化状態を維持するための主要な細胞内抗酸化剤のひとつである。ＧＳＨはほとんどの細胞で合成され、また、食物によっても供給される。ＧＳＨは、酸化された生体分子をその活性な還元型に戻して再生するということが示されている。大人の場合、ＧＳＨは、主に肝臓で、また肝臓よりも少ないが、骨格筋、赤血球、白血球においても、酸化グルタチオン（ＧＳＳＧ）から生成される。細胞内のグルタチオンの欠乏により、フリーラジカルが過剰となり、これにより高分子の破壊、脂質の過酸化、毒素の蓄積、そして最後に細胞死が起こる。この細胞酸化の防止においてグルタチオンが重要であるため、グルタチオンは組織に絶えず供給され続ける。組織内のＧＳＨレベルは、身体の抗酸化能力を評価するのに重要な要因である。
【００２１】
　「スーパーオキシドジスムターゼ」あるいは「ＳＯＤ」という用語は、スーパーオキシドイオンの酸素及び過酸化水素への不均化を触媒する金属酵素を意味する。ＳＯＤには３種類あり、それぞれ、活性部位での触媒金属により、Ｃｕ／Ｚｎ−ＳＯＤ、Ｍｎ−ＳＯＤ、Ｆｅ−ＳＯＤと特徴付けられる。Ｃｕ／Ｚｎ−ＳＯＤは、主に真核生物に見られる。Ｆｅ−ＳＯＤは、主に原核生物に見られる。Ｍｎ−ＳＯＤは真核生物から原核生物までの全生物にわたっている。ヒトの場合は、Ｃｕ／Ｚｎ−ＳＯＤは細胞質ゾル及び核に局在しているが、Ｍｎ−ＳＯＤはミトコンドリア基質にある。ＳＯＤは高分子量を有し、経口投与によりヒトの体内に吸収されることはない。
【００２２】
　「マロンジアルデヒド」あるいは「ＭＤＡ」という用語は、有害で突然変異誘発性化合物であるマロンジアルデヒドを意味する。ＭＤＡは、脂質過酸化反応の二次的な還元生成物、つまり脂質過酸化反応の代謝産物である。ＭＤＡは、２つの官能基を有する化合物であり、タンパク質、核酸、セファリンなどのアミノ基を含む化合物と反応可能であるため、それらの架橋を引き起こしてその機能を失わせ、結果的にタンパク質の変性、酵素活性の喪失、ＤＮＡへの損傷を生じる。動物実験により、ＭＤＡは動物の腫瘍を誘発する強力な発ガン性物質であることもわかっている。腫瘍組織内のＭＤＡの測定では、腫瘍によって引き起こされた脂質過酸化反応の程度を直接的に反映することができる。
【００２３】
　「男性更年期」という用語は、一般的に４０〜５５歳の全ての男性に起こるホルモン変化、生理学的変化、及び化学変化を意味する。
　「ＳＲＳ」という用語は、管理評価尺度（Supervision Rating Scale）のことをいう。ＳＲＳでは、患者／被験者が介護者から受ける管理レベルを判定する。ＳＲＳは、５段階にランク付けされたカテゴリー（自立、夜間管理、パートタイム管理、フルタイム間接管理、フルタイム直接管理）にさらに分類可能な１３ポイントの順序尺度について管理レベルを評価する。ＳＲＳは、被験者、及び被験者が受けた管理レベルを直に観察した情報提供者との面接に基づいて、臨床医が評価するように設定された。
【００２４】
　「Ｚｕｎｇ自己評価式抑うつ尺度（Zung Self-Rating Depression Scale）」又は「Ｚｕｎｇの自己評価式抑うつ尺度（Self-Rating Depression Scale of Zung）」という用語は、うつ疾患の特徴を利用して、簡単にかつ明確にうつを判断する手法をいう。これはZung WWの名をとって命名された（Arch. Gen. Psychiat. (1965) 12:63-70）。
【００２５】
　以下に例をあげて説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。本発明の範囲を逸脱することなく、当業者が考え付く適当な変更を行うことができる。また、本発明について説明するのに、明確にするために特定の技術用語が使用される。しかしながら、本発明が選択された特定の技術用語に限定されることを意図するものではない。各特定の要素は、同様の方法で作用して同様の目的を達成する全ての技術的な同等物を含むものであると理解されるべきである。
【実施例１】
【００２６】
マウスの肝臓グルタチオン（ＧＳＨ）量におけるＧＬＳｓの効果
　グルタチオン（ＧＳＨ）は、身体の低分子量捕捉剤である。ＧＳＨはＯ２・−またはＨ２Ｏ２を除去することができる。組織中のＧＳＨ量は、身体の抗酸化能力を評価するのに重要な要因である。
【００２７】
１．材料及び方法
１．１　材料
　体重１８〜２２ｇのオス、メス半数づつのＮＩＨマウス６０匹を、Guangdong Provincial Animal Center for Medical Experiments（Certificate of Conformity Number : 26-2001A008 (for animal inspection) and 26-2001B008 (for animal facility)）から入手した。
　発芽活性化ガノデルマルシダム胞子（ＧＬＳｓ）（０．２ｇ／ｍＬ）を、Guangzhou Green Food Project Company of the College of Life Sciences、Zhongshan University及びGreen Power Health Products International Co. Ltd., Sweden and Hong Kongから入手した。
【００２８】
１．２　器具及び試験試薬
　試験器具：725UV-Vis分光計、TL-16高速卓上冷却遠心分離機、CS-502超恒温水槽、SL122電子秤、ボルテックスが含まれた。
　試験試薬：ＧＳＨ検査キット（Jenchun Biotech Research Institute, Nangjing, Chinaより入手）、総タンパク検査キット（Chungshen Biotech Hi-tech Co., Beijing, Chinaより入手）が含まれた。
【００２９】
１．３　方法
　マウスを１２匹ずつ５群に無作為に分けた。４つの投薬群には、１ｇ／ｋｇ／日、２ｇ／ｋｇ／日、４ｇ／ｋｇ／日、又は８ｇ／ｋｇ／日のＧＬＳｓを、１５日間毎日、強制摂食により投与した。コントロール群には、１５日間毎日、生理食塩水を強制摂食により投与した。
　投与期間の終了日に、動物を屠殺し、肝臓を摘出した。それぞれ約０．２ｇの肝臓組織を正確に量り、１０％ホモジネートを調製し、遠心分離を行った。上澄液から３０μＬを分取し、ＧＳＨ検査キット及び総タンパク検査キットを用いたＧＳＨ量及びタンパク量の検査に供した。ＧＳＨ量は、ｍｇ／ｍｇ−タンパクで示した。
【００３０】
２．結果
　表１に示されるように、コントロール群と比較すると、全ての投薬群で、肝臓組織のＧＳＨ量の統計的に有意な増加（ペアｔ検定で、p＜0.01）が見られた。
【００３１】
【表１】
2004131482.tif 000002
【００３２】
３．結論
　この試験結果は、ＧＬＳｓによりＮＩＨマウスのＧＳＨ量が著しく増加することを示している。このことから、ＧＬＳｓは体内のＧＳＨ量を増加させることができることが明らかとなったので、本実験の条件下では、ＧＬＳｓが抗老化及び抗酸化活性を有することが示唆された。
【実施例２】
【００３３】
マウスの肝臓スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）活性におけるＧＬＳｓの効果
１．材料及び方法
１．１　材料
　体重１８〜２２ｇのオス、メス半数づつのＮＩＨマウス６０匹を、Guangdong Provincial Animal Center for Medical Experiments（Certificate of Conformity Number: 36-2001A009 (for animal inspection) and 36-2001B008 (for facility)）より入手した。
　粉末状の発芽活性化ガノデルマルシダム胞子（ＧＬＳｓ）を、Guangzhou Green Food Project Company of the College of Life Sciences、 Zhongshan University及びGreen Power Health Products International Co., Ltd., Sweden and Hong Kongより入手した。ＧＬＳｓを適当な水溶液に溶解し、終濃度０．２ｇ／ｍＬとした。
【００３４】
１．２　器具及び試験試薬
　試験器具：725UV-Vis分光計、TL-16高速卓上冷却遠心分離機、CS-502超恒温水槽、SL122電子秤、ボルテックスが含まれた。
　試験試薬：ＳＯＤ検査キット（Jenchun Biotech Research Institute, Nangjing, Chinaより入手）が含まれた。ＳＯＤの酵素活性はｎｍｏｌ／ｍＬで算出した。
【００３５】
１．３　方法
　６０匹のマウスを無作為に各群１２匹ずつ５群（投薬群４、コントロール群１）に分けた。４つの投薬群には、１ｇ／ｋｇ／日、２ｇ／ｋｇ／日、４ｇ／ｋｇ／日、又は８ｇ／ｋｇ／日のＧＬＳｓを１５日間毎日、強制摂食により投与した。コントロール群には、１５日間毎日、生理食塩水を強制摂食により投与した。
　試験期間の終了日に、動物を屠殺し、肝臓を摘出した。各動物から約０．２ｇの肝臓組織を採取し、２ｍＬ生理食塩水に加え、ホモゲナイズして１０％ホモジネートを調製した。ホモジネートを遠心分離した。各ホモジネートの上澄液から３０μＬ分取し、ＳＯＤ検査キットを使用したＳＯＤ検査に供した。
【００３６】
２．結果
　表２に示されるように、コントロール群と比較すると、全ての投薬群で、マウスの総肝臓ＳＯＤ（Ｔ−ＳＯＤ）酵素活性に統計的に有意な増加（ペアｔ検定で、p＜0.01−0.05）が見られた。
【００３７】
【表２】
2004131482.tif 000003
【００３８】
　表３に示されるように、コントロール群と比較すると、全ての投薬群で、肝臓のＣｕ．Ｚｎ−ＳＯＤ酵素活性に統計的に有意な増加（ペアｔ検定で、p＜0.01−0.05）が見られた。
【００３９】
【表３】
2004131482.tif 000004
【００４０】
　表４に示されるように、コントロール群と比較すると、全ての投薬群で、肝臓のＭｎ−ＳＯＤ酵素活性に統計的に有意な増加（ペアｔ検定で、p＜0.01−0.05）が見られた。
【００４１】
【表４】
2004131482.tif 000005
【００４２】
３．結論
　結果は、１５日間のＧＬＳｓ投与により、ＮＩＨマウスの肝臓ＳＯＤ酵素活性が顕著に増加することを示した。コントロール群と比較すると、総ＳＯＤ（Ｔ−ＳＯＤ）酵素活性、細胞質ゾルＳＯＤ（Ｃｕ．Ｚｎ−ＳＯＤ）酵素活性、ミトコンドリアＳＯＤ（Ｍｎ−ＳＯＤ）酵素活性はいずれも、全ての用量レベルで統計的に有意な増加を示した。これにより、本実験の条件下で、ＧＬＳｓが抗酸化活性を有することが示唆された。
【実施例３】
【００４３】
マウスの肝臓マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）量におけるＧＬＳｓの効果
　体内の酵素反応又は非酵素反応により生成する酸素フリーラジカルは、生体膜の多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）を攻撃する。この攻撃は、結果として、脂質の過酸化や、アルデヒド（例えばマロンジアルデヒド、ＭＤＡ）、ケトン、ヒドロキシル、カルボニル、過酸化水素、過酸化物などの官能基を含む脂質過酸化物の生成、ならびに新しいフリーラジカルの生成などを引き起こし得る。したがって、ＭＤＡレベルは、脂質過酸化反応の程度を反映し、細胞損傷の重症度と間接的に関係がある。
　ＭＤＡ測定はしばしば、細胞の機能を評価するためにＳＯＤ検出と併用される。ＳＯＤ活性は、酸素フリーラジカルを除去する細胞能力を示し、ＭＤＡレベルは、酸素フリーラジカルの攻撃による細胞損傷の重症度を反映する。
【００４４】
１．材料及び方法
１．１　材料
　体重１８〜２２ｇのオス、メス半数づつのＮＩＨマウス６０匹を、Guangdong Provincial Animal Center for Medical Experiments（Certificate of Conformity Numer: 26-2001A008 (for animal inspection) and 26-2001B008 (for animal facility)）より入手した。
　発芽活性化ガノデルマルシダム胞子粉末を、Guangzhou Green Food Project Company of the College of Life Sciences、Zhongshan University及びGreen Power Health Products International Co. Ltd., Sweden and Hong Kongより入手した。ＧＬＳｓを、適当な水溶液に溶解し、終濃度０．２ｇ／ｍＬとした。
【００４５】
１．２　器具及び試験試薬
　試験器具：725UV-Vis分光計、TL-16高速卓上冷却遠心分離機、CS-502超恒温水槽、SL122電子秤、ボルテックスが含まれた。
　試験試薬：ＭＤＡ検査キット（Jenchun Biotech Research Institute, Nangjing, Chinaより入手）が含まれた。
【００４６】
１．３　方法
　６０匹のマウスを、無作為に各群１２匹ずつ５群に分けた（投薬群４、コントロール群１）。４つの投薬群には、１ｇ／ｋｇ／日、２ｇ／ｋｇ／日、４ｇ／ｋｇ／日、又は８ｇ／ｋｇ／日のＧＬＳｓをそれぞれ１５日間毎日、強制摂食により投与した。コントロール群には、１５日間毎日、生理食塩水を強制摂食により投与した。
　試験期間の終了日に、動物を屠殺し、肝臓を摘出した。約０．２ｇの肝臓組織を約２ｍＬのホモジナイズ用溶液でホモジナイズして１０％ホモジネートを得た。ホモジネートを遠心分離した。各ホモジネートの上澄液から１０μＬを分取し、ＭＤＡ検査キットを用いたＭＤＡ検査に供した。
【００４７】
２．結果
　表５に示されるように、コントロール群と比較すると、全ての投薬群で、肝臓組織におけるＭＤＡの統計的に有意な減少がみられた（ペアｔ検定で、p＜0.01）。
【００４８】
【表５】
2004131482.tif 000006
【００４９】
３．結論
　本実験の結果により、ＧＬＳｓは、ＮＩＨマウスのＭＤＡ量を効果的に減少させることが示された。これにより、本実験の条件下では、ＧＬＳｓが体内でのＭＤＡ合成を阻害あるいは低減させる抗酸化活性を有することが示唆された。
【実施例４】
【００５０】
ヒトの男性更年期症状の治療におけるＧＬＳｓの効果
　男性、特に高齢男性の更年期症状は、健康上の心配事である。ますます多くの証拠により、男性ホルモンの生成及び機能の低下の他に、全身の代謝（微小循環代謝、血液粘性、酸素フリーラジカルの代謝など）の全体的なレベルが、高齢男性の身体的及び精神的状態に影響を及ぼし得ることが示されている。全身の代謝の改善により、痴呆発現の遅延、認知機能の改善、うつの軽減、テストステロンレベルの上昇、ならびに神経伝達物質及び脳受容体機能の調節を助けることができると仮定されている。
【００５１】
１．材料及び方法
１．１　試験材料
　カプセル化した発芽活性化ガノデルマルシダム胞子（ＧＬＳｓ）を、Gunagzhou Green Food Project Company of the College of Life Sciences、Zhongshan University及びGreen Power Health Products International Co. Ltd., Sweden and Hong Kongより入手した。各カプセルには、約３００ｍｇのＧＬＳｓが含まれていた。
【００５２】
１．２　参加基準
　以下の基準を満足する男性患者に、この試験を許可してもらった。
（１）年齢５５〜７６歳
（２）６ヶ月〜２年間、更年期症状がある（疲労、不眠、血管収縮、精神的及び心理学的症状、性的不全など）
（３）血中テストステロンレベルが正常値（１４０ｎｇ／ｄＬ）よりも低い
（４）重症の脳心臓血管疾患、接触感染症、及び腫瘍診断がいずれもない
（５）中年及び高齢男性用ＳＲＳ自己評価のスコアが１６より高い
（６）Ｚｕｎｇうつ数量化スコアが５０以上
【００５３】
１．３　試験場所
　試験は、中国広東省の広州第一人民病院泌尿器外科で行われた。
１．４　試験手順
　投与開始前に、患者から、基準となる病歴、Ｚｕｎｇスコア（Ｚｕｎｇ自己評価式抑うつ尺度）、ＳＲＳスコアを得た。朝、空腹時に、各患者から動脈血を採取し、血中のテストステロン、赤血球ＳＯＤ及びＭＤＡレベルを測定した。
　投薬群には、何れの精神的／心理学的疾患に対しても同時に治療を行わず、３週間にわたり、ＧＬＳｓを１日に３回、２カプセルずつ（ＧＬＳｓ約６００ｍｇ）投与した。コントロール群にはプラセボを投与した。全ての患者について、週に１度、症状、ＳＲＳスコア、及びＺｕｎｇスコアを評価した。各患者の動脈血サンプルを３週間の投与終了時に採取し、血中のテストステロン、赤血球ＳＯＤ及びＭＤＡレベルを測定した。
【００５４】
２．結果
　平均年齢６６歳の有資格の男性、総数１３８人が、試験に登録された。更年期症状の平均継続期間は、１２．３ヶ月であった。１３８人中　　人が独身だった。８０人を投薬群に、５８人をコントロール群に振り分けた。
　表６に示されるように、３週間の投与後、投薬群の患者には全ての更年期症状について統計的に有意な改善（p＜0.05）がみられたが、コントロール群ではほとんどの改善に有意差はなかった。さらに、改善に関する患者の主体的な自己評価ベースでは、投薬群患者では７４．３％という全体的な有効率が報告されたのに対し、コントロール群患者では２８．６％の改善であった。
【００５５】
【表６】
2004131482.tif 000007
【００５６】
　表７に示されるように、ＧＬＳｓカプセルの３週間投与によって、テストステロン及びＳＯＤの血中レベルは、投薬群の基準値、及び３週間のプラセボ投与後のコントロール群の値に比べ、有意に上昇した（ｐ＜0.05）。また、ＧＬＳｓカプセルの３週間投与により、ＭＤＡの血中レベルは有意に低下した（p＜0.05）が、コントロール群では全く改善が見られなかった。
【００５７】
【表７】
2004131482.tif 000008
【００５８】
　表８に示されるように、ＧＬＳｓカプセルの３週間投与後、Ｚｕｎｇスコア及びＳＲＳスコアの両方が低下したことから明らかなように、投薬群の更年期症状患者では、うつの統計的に有意な改善がみられた。コントロール群の更年期患者には、有意な改善はみられなかった。
【００５９】
【表８】
2004131482.tif 000009
【００６０】
　ＧＬＳｓカプセルを３週間投与した患者では、目立った副作用はなかった。２人の患者に一時的な便秘が報告されたが、長期のＧＬＳｓ治療の後解消された。水分又は塩類の貯留、排尿障害、肝機能障害、腎機能障害は全くなかった。
【００６１】
３．考察
　現代医学では、近年、老人病に対する理解が非常に深まってきているが、１９６０年代までは、男性の老化進行中のホルモン変化及びそれに付随しておこる疾患は認識されていなかった。いわゆる「男性更年期」は、現在では医療分野に浸透している。男性更年期に関連した症状には、女性更年期と同様のものもある。しかしながら、男性更年期に対するホルモン変化（性ホルモン生成の減少、ライディッヒ細胞活性の低下、性的不全など）と神経機能（視床下部及び下垂体の応答の低下など）との相関関係は、いまだ立証されていない。
【００６２】
　個人差が非常に大きいため、テストステロンの血中レベルだけでは、男性更年期の診断指標とすることはできない。精神状態も男性の性的欲求に影響を与えるため、臨床観察が難しい。ゆえに、我々は客観的な指標（テストステロン、ＳＯＤ、及びＭＤＡの血中レベルなど）と精神的評価（ＳＲＳスコア及びＺｕｎｇスコアなど）を用いて、男性更年期症候群におけるＧＬＳｓの研究を行い、全体的な治療効果を観察する。
【００６３】
　老化に関するフリーラジカル理論は、フリーラジカル損傷と老化進行との関係を支持するものである。フリーラジカルは、老年男性の更年期症状の発現及び進行と密接な関係がある。正常な生理学的状態では、ＳＯＤはスーパーオキシドフリーラジカルを効果的に除去し、フリーラジカル連鎖反応を阻害し、フリーラジカルの生成と除去との身体バランスを維持することができる。なんらかの理由でフリーラジカルが過剰生成されるか、あるいは身体の除去能力が低下すると、身体の恒常性が破壊され、これにより内分泌系が制御不能となって老化進行が早まる。
【００６４】
　テストステロンの生成が加齢とともに減少するという発見が、１９４８年に初めて発表された。６０代以上の男性の約２０％において、血中テストステロンレベルが正常値より低い。血中テストステロンレベルは男性の神経機能に影響を与え、性的興奮、攻撃性、感情、認識力などの行動に影響を及ぼすことがわかっている。低血中テストステロンレベルとうつとの関係を支持する証拠はあるが、テストステロン生成の低下が男性の精神状態に与える影響については研究中である。
【００６５】
　本研究においては、ＳＯＤ活性はフリーラジカルを除去する身体能力の指標として測定し、ＭＤＡレベルはフリーラジカル損傷の有無の指標として測定した。ＳＯＤ活性が上昇し、ＭＤＡレベルが低下したことから明らかなように、ＧＬＳｓ投与によって、フリーラジカルのターンオーバーが著しく向上することがわかった。ＳＲＳスコア及びＺｕｎｇスコアの結果により、低テストステロンレベルはうつの原因となり、これが性的不全（インポテンスなど）の程度の差と関係することが示唆された。ＧＬＳｓ投与は、テストステロンの血中レベルを効果的に上昇させただけでなく、身体のフリーラジカル除去能力をも著しく上昇させた。
　一方、コントロール群の患者には、プラセボ効果による改善が見られたが、これは、プラセボが心理学的治療効果を与えたためであると思われる。しかしながら、コントロール群の全体的な改善率２８．６％は、ＧＬＳｓ投与患者の全体的な改善率７４．３％より、統計的に有意に低かった。
【００６６】
　現在のところ、老年男性の更年期症状には、テストステロン補給療法よる治療が頻繁に行われている。しかしながら、ホルモン補給は、心臓血管系や前立腺に影響を及ぼすという危険がある。男性ホルモンの代謝産物はインスリン抵抗性を誘発し、エンドセリンレベルを上昇させる（血管収縮を起こす）ので、心臓血管系に副作用があり、心臓血管疾患の発生率を上昇させるかもしれない。結果として、テストステロン補給療法は、心臓血管系の機能不全には禁忌である。前立腺における治療リスクについては、テストステロン補給療法により前立腺ガンが生じるという直接的な証拠はない。しかし、臨床データによると、テストステロンは前立腺ガン患者で腫瘍の成長を促進し得ることが示されている。
　ガノデルマ、特にその胞子の使用は、近年、栽培方法が開発されて以来、多くの研究対象となっている。しかし、ほとんどの研究はそのままの胞子（壁非破壊）を用いて行われた。これに対し、今回の臨床試験で使用したＧＬＳｓカプセルは、米国特許公報６３１６００２Ｂ１記載の発芽活性化技術を使用して調製された。この技術により、胞子の全活性遺伝物質を治療効果を生み出すために利用できるようになるため、これらの胞子壁破壊胞子はより強力な抗酸化活性及び内分泌系調節活性を発揮する。
【００６７】
４．結論
　ＧＬＳｓはフリーラジカル捕捉剤であるため、老年男性の更年期症状のよりよい治療選択肢である。さらに、ＧＬＳｓは、ホルモン補給療法による副作用を生じることなく、テストステロン生成を促進し、うつを軽減し、老化進行を遅らせる。
　本明細書で説明、議論した実施例は、本発明を実施及び使用するために、発明者が知る最良の方法を当業者に提供することのみを意図している。本明細書は、本発明の範囲を限定するものと見なされるべきではない。本発明の上述の実施例は、上記記載に照らして当業者が認識できるような修正、変更、要素の追加あるいは除外を本発明の範囲を逸脱することなく行うことがができる。したがって、本発明は、特許請求の範囲及びその均等物の範囲内で、具体的に記載されている以外にも実施できることが理解されるべきである。
【外国語明細書】
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