(57)【要約】【課題】本発明は、心筋梗塞発症ウサギの産生方法を提供すること、および生産された心筋梗塞発症ウサギを提供すること、ならびい心筋梗塞、動脈硬化の診断、予防及び治療方法の開発のためのモデルとしての使用を提供することを目的とする。【解決手段】本発明の方法は、以下の１）−３）の条件：１）マクロファージに富む冠動脈病変を有する；２）血清コレステロール値が、１２月齢において８００ｍｇ／ｄｌ以上を示す、及び／又は、２４月齢において７００ｍｇ／ｄｌ以上を示す；並びに３）冠動脈の管腔狭窄率が親世代の平均値＋標準誤差より高い値を示すを満たすウサギから生産したウサギあるいは／および心筋梗塞を発症したウサギを使用して交配することを含む。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
心筋梗塞発症ウサギの産生方法であって、以下の１）−３）の条件：
１）マクロファージに富む冠動脈病変を有する；
２）血清コレステロール値が、１２月齢において８００ｍｇ／ｄｌ以上を示す、及び／又は、２４月齢において７００ｍｇ／ｄｌ以上を示す；並びに
３）冠動脈の管腔狭窄率が親世代の平均値＋標準誤差より高い値を示す
を満たすウサギから生産したウサギを使用して交配を行うことを含む、前記産生方法。
【請求項２】
上記１）−３）の条件の条件を見たすウサギが、さらに
４）心筋梗塞を発症した
という条件を満たす、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
交配を少なくとも５世代繰り返す、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
遺伝性高脂血症ウサギ（ＷＨＨＬウサギ）を使用する、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
請求項１ないし４のいずれか１項に記載の方法によって生産された、心筋梗塞発症ウサギ。
【請求項６】
３５月齢までの心筋梗塞の累積発生率が９０％以上である、請求項５に記載の心筋梗塞発症ウサギ。
【請求項７】
請求項５又は６に記載の心筋梗塞発症ウサギの、心筋梗塞あるいは動脈硬化のあるいは発症予防、又は冠動脈病の安定化のための、診断、予防若しくは治療剤、の開発のためのモデル動物としての使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、心筋梗塞発症ウサギの産生方法及び生産された心筋梗塞発症ウサギに関する。
【０００２】
【従来の技術】
心疾患による死亡は国内では死因の第２位であり、その約６０％を占める心筋梗塞を主とする虚血性心疾患への対応の重要性が指摘されている。心筋梗塞の発症については、臨床データの集積によって、動脈硬化病変部位に生ずる血栓等による冠状動脈の閉塞が重要な役割を果していることが指摘されている。しかし、心筋梗塞を自然発症する適切なモデル動物が存在しないことから、心筋梗塞の発症メカニズムの詳細については解明されていない。
【０００３】
ＷＨＨＬウサギ（Ｗａｔａｎａｂｅ　ｈｅｒｉｔａｂｌｅ　ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉｃ　ｒａｂｂｉｔ）は、低比重リポタンパク（ＬＤＬ）受容体遺伝子の異常に基づく循環血液中のＬＤＬの異化の遅延が原因して高コレステロール血症を呈し、離乳直後から大動脈や冠動脈等に動脈硬化病変を自然発症するウサギとして周知である。ＷＨＨＬウサギは、選抜交配によって冠動脈に高度の動脈硬化病変が発症する（文献１−２）。しかし、心筋梗塞の発症頻度は低く、発生した心筋病変は軽度であった。ヒトの高脂血症に対応させるため、選抜交配によって心筋梗塞を好発するＷＨＨＬウサギの開発の研究が継続されているが、特に発生率の高いウサギが得られていなかった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、心筋梗塞発症ウサギの産生方法を提供することを目的とする。本発明の方法は、以下の１）−３）の条件：
１）マクロファージに富む冠動脈病変を有する；
２）血清コレステロール値が、１２月齢において８００ｍｇ／ｄｌ以上を示す、及び／又は、２４月齢において７００ｍｇ／ｄｌ以上を示す；並びに
３）冠動脈の管腔狭窄率が親世代の平均値＋標準誤差より高い値を示す
を満たすウサギから生産したウサギを使用して交配を行うことを含む。
【０００５】
好ましくは、上記１）−３）の条件の条件を見たすウサギは、さらに
４）心筋梗塞を発症した
という条件を満たす。好ましい態様において、本発明の方法は、１２月齢における血清コレステロール値が８００ｍｇ／ｄｌ以上を示す、ＷＨＨＬウサギを選抜交配することを含む。
【０００６】
本発明はまた、前記方法によって生産された、心筋梗塞発症ウサギを提供することを目的とする。好ましい態様において、本発明のウサギは、３５月齢までの心筋梗塞の累積発症率が９０％以上である。
【０００７】
本発明はさらに、前記の心筋梗塞発症ウサギの、心筋梗塞あるいは動脈硬化のあるいは発症予防、又は冠動脈病の安定化のための、診断、予防若しくは治療剤、の開発のためのモデル動物としての使用を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
急性冠症候群の原因として、冠動脈の動脈硬化病変が破綻して閉塞性血栓が生じる仮説が有力と考えられている（文献２−５）。破綻した動脈硬化病変は、菲薄化した線維性被膜とその直下の大きなリピッドコア（脂質・マクロファージの蓄積）を特徴としている。動脈硬化病変破綻の仮説としては、マクロファージが分泌するプロテアーゼによる線維性被膜の分解、およびマクロファージやリンパ球が分泌するサイトカインによる平滑筋細胞のコラーゲン産生の抑制と、平滑筋細胞のアポトーシスが重要な役割を果していると指摘されている。
【０００９】
本発明者らは上記知見を考慮し、心筋梗塞発症ＷＨＨＬウサギ（ＷＨＨＬＭＩウサギ）の開発においては、動脈硬化病変中にマクロファージが蓄積しやすい条件を採用することが重要と考えた。そして、高コレステロール血症を呈するＷＨＨＬウサギ（Ｗａｔａｎａｂｅ　ｈｅｒｉｔａｂｌｅ　ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉｃ　ｒａｂｂｉｔ）から、特定の指標を基に選抜交配を行うことによって、ＷＨＨＬＭＩウサギを確立することに成功し、本願発明を想到した。
【００１０】
心筋梗塞発症ウサギの産生方法
本発明の心筋梗塞発症ウサギの産生方法は、以下の１）−３）の条件：
１）マクロファージに富む冠動脈病変を有する；
２）血清コレステロール値が、１２月齢において８００ｍｇ／ｄｌ以上を示す、及び／又は、２４月齢において７００ｍｇ／ｄｌ以上を示す；並びに
３）冠動脈の管腔狭窄率が親世代の平均値＋標準誤差より高い値を示す
を満たすウサギから生産したウサギを使用して交配を行うことを含む。
【００１１】
好ましくは、上記１）−３）の条件の条件を見たすウサギは、さらに
４）心筋梗塞を発症した
という条件を満たす。
【００１２】
「心筋梗塞」とは、冠動脈の閉塞によってもたらされる心筋壊死、を意味する。大半の心筋梗塞は、冠動脈硬化症に起因する。我が国には比較的少ないと言われていたが、食生活を含む生活様式の欧米化に伴う血清コレステロール値の上昇に伴って急激に増加しつつある。
【００１３】
ヒトでは、「高コレスレロール血症」とは、血中の脂質のうちで、特にコレステロールが２２０ｍｇ／ｄｌ以上の場合を高コレステロール血症という。遺伝性（家族性）の場合と続発性の場合がある。遺伝性の代表的なものは、コレステロールの代謝に重要な機能を果たす低比重リポ蛋白質（ＬＤＬ）受容体の異常によるＩＩａ型高脂血症である。他にも中性脂肪が高くなる複合型のＩＩｂ型高脂血症、アポＥの異常によるＩＩＩ型の高脂血症でも高コレステロール血症が見られる。続発性の場合は、食習慣や肥満に伴うもの、糖尿病、甲状腺機能低下症などの内分泌疾患、腎疾患、肝疾患に伴ってみられるものなどがある。
【００１４】
限定されるわけではないが、本発明の方法に使用しうるウサギとしては、神戸大学医学部附属動物実験施設及び北山ラベス株式会社（〒３９６−００２１長野県伊那市大字伊那３０５２−１）より入手可能なＷＨＨＬウサギ（Ｗａｔａｎａｂｅ　ｈｅｒｉｔａｂｌｅ　ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉｃ　ｒａｂｂｉｔ）が知られている。ＷＨＨＬウサギは、１９７３年に高コレステロール血症の突然変異体として発見され、１９７９年に系統として確立された。ＬＤＬ受容体遺伝子の異常に基づく循環血液中のＬＤＬの異化の遅延が原因して高コレステロール血症を呈し、離乳直後から大動脈や冠動脈などに動脈硬化病変を発症する。ＷＨＨＬウサギはヒトの家族性高コレステロール血症のモデル動物として国際的に認知されている（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｅｄ．ｋｏｂｅ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ｉｅａ／ｗｈｈｌ．ｈｔｍｌ）。
【００１５】
条件１）「マクロファージに富む冠動脈病変を有する」は、限定されるわけではないが、例えば以下のような手法により判断する。
ウサギの死後に心臓を切り出し５００μｍ間隔で冠動脈を薄切する。薄切切片をウサギマクロファージに特異的な単クローン抗体（例えば、ＤＡＫＯ　Ａ／Ｓ，Ｇｌａｓｔｒｕｐ，Ｄｅｎｍａｒｋより入手可能なＲＡＭ−１１）を用いて免疫組織染色する。光学顕微鏡下で観察し、抗体陽性細胞が冠動脈病変表層又は線維性被膜下に蓄積していることを確認する。
【００１６】
条件２）は、「血清コレステロール値が、１２月齢において８００ｍｇ／ｄｌ以上を示す、及び／又は、２４月齢において７００ｍｇ／ｄｌ以上を示す」である。従来のＷＨＨＬウサギでは６月齢以降血清コントロール値が加齢によって低下する。本発明の方法では、６月齢以降の血清コレステロール値の低下が少ないことを選抜基準の一つとした。好ましい態様の一つとして、１２月齢における血清コレステロール値が８００ｍｇ／ｄｌ以上を示し、２４月齢で７００ｍｇ／ｄｌ以上を示す、高コレステロール血症を呈するウサギを選抜基準としてよい。
【００１７】
条件３）は、「冠動脈の管腔狭窄率が親世代の平均値＋標準誤差より高い値を示す」ことである。冠動脈の管腔狭窄率は、１２ないし３０月齢において、以下の式：
【００１８】
【化１】
（病変面積／（内腔面積＋病変面積））×１００％
に従って計算した。冠動脈中の病変面積（狭窄を生じている部分）、冠動脈の内腔面積の測定方法は公知であり、例えば、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　１９９２年　９６巻　第４３頁−第５２頁に記載の方法に従って行うことが可能である。親世代の平均値は、好ましくは、３０匹以上の親について観察する。
【００１９】
好ましくは、上記１）−３）の条件に加えて、さらに４）心筋梗塞を発症した、という条件を満たすウサギを使用する。心筋梗塞の発症は、例えば、病理組織学的所見、例えば、心筋細胞の壊死、横紋の消失、波状走行、水腫性変化、リンパ球の浸潤、心筋の線維化、心室壁の菲薄化等が観察されることにより判断される。あるいは、心電図所見によりＳＴの上昇又は下降、異常Ｑ波の出現、冠性Ｔ波等が観察されることにより判断される。
【００２０】
上記１）−３）の条件、さらに好ましくは４）の条件を満たすウサギから生産されたウサギを交配に使用する。このような選抜交配は、限定されるわけではないが、５世代以上、より好ましくは、７世代以上繰り返す。なお、ウサギの飼育および交配の仕方は特に限定されず、公知の方法、例えば、実験動物技術　１９７９年　第１４巻　第４頁−第６頁に記載の方法を適用することが可能である。
【００２１】
心筋梗塞発症ウサギ
本発明は、特定の条件に基づいた選抜交配により心筋梗塞を高い確率で自然発生する心筋梗塞発症ウサギを提供する。
【００２２】
本発明のウサギは、限定されるわけではないが、３５月齢までの心筋梗塞の発症率が９０％以上、より好ましくは９５％以上である。心筋梗塞の発症は、条件４）について上述したように判断することが可能である。
【００２３】
ＷＨＨＬＭＩウサギ
本発明の心筋梗塞発症ウサギの好ましい例としては、本発明の実施例において得られたＷＨＨＬＭＩ（ＷＨＨＬ　ｍｉｏｃａｒｄｉａｌ　ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ）ウサギが含まれる。ＷＨＨＬＭＩウサギは、ＷＨＨＬウサギのうち上記１）−３）の条件、さらに好ましくは４）の条件を満たすウサギを５世代−７世代にわたって選抜交配を継続することによって得られた。実施例１に記載したように、ＷＨＨＬＭＩウサギはＷＨＨＬウサギと比較して、有意に高い心筋梗塞発症率を示す。
【００２４】
ＷＨＨＬＭＩウサギは、神戸大学医学部附属動物実験施設において、本発明者らが維持管理している。。なお、本発明者は、本特許出願に際し、ＷＨＨＬＭＩウサギの受精卵を寄託機関へ寄託することも検討したが、不可能と判断した。具体的には、特許出願のための寄託に際し、受精卵（胚）は凍結（１２個以上／アンプル）同一ロット２５本以上、即ち受精卵３００個以上を寄託することと規定されている。ウサギの場合、３００個の受精卵を確保するためには、少なくとも２０匹程度の個体を犠牲にする必要がある。本出願時点において維持されているＷＨＨＬＭＩウサギの繁殖適齢期メス個体数が４０匹以下であることから、このうち２０匹以上を犠牲にすると系統維持が困難となる。ウサギは近親交配を続けることが困難であり、マウス、ラットと異なり少数での維持は難しい。本発明者らは、ＷＨＨＬＭＩウサギを保管しており、必要に応じて分譲する用意がある。
【００２５】
心筋梗塞発症ウサギのモデル動物としての使用
本発明の心筋梗塞発症ウサギは、心筋梗塞を高頻度で発症するため、心筋梗塞あるいは動脈硬化のあるいは発症予防、又は冠動脈病の安定化のための、診断、予防若しくは治療剤の開発のためのモデル動物として使用することが可能である。
【００２６】
特に、本明細書に記載の実施例において得られたＷＨＨＬＭＩウサギの心筋病変は、ヒトの冠動脈複数枝病変に基づく心筋梗塞に類似していた。このＷＨＨＬＭＩウサギを用いて、冠動脈病変の破綻や血栓形成に関する因子を検索することによって、急性冠症候群の発症機序の解明を行うことが可能である。
【００２７】
心筋梗塞、動脈硬化、又は冠動脈複数枝病変の予防若しくは治療剤の開発は、候補となる化合物を投与することにより、心筋梗塞、動脈硬化、又は冠動脈病変の発生率の低下、病変面積の低下、病変の安定化等を指標とする。
【００２８】
【実施例】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の技術的範囲を限定するためのものではない。本明細書の記載に基づいて容易に本発明に修飾・変更を加えることができ、それらは本発明の技術的範囲に含まれる。
【００２９】
実施例１　ＷＨＨＬＭＩウサギの作成
本発明者らは、以下の１）−４）の条件を指標にＷＨＨＬウサギについて５〜７世代にわたって選抜交配を行った：
１）マクロファージに富む冠動脈病変を有する；
２）血清コレステロール値が、１２月齢において８００ｍｇ／ｄｌ以上を示す、及び／又は、２４月齢において７００ｍｇ／ｄｌ以上を示す；
３）冠動脈の管腔狭窄率が親世代の平均値＋標準誤差より高い値を示す；並びに
４）心筋梗塞を発症した。
【００３０】
選抜交配の間の飼育管理は通常の実験用ウサギの飼育条件と同一であり、給与した飼料は通常の実験ウサギ用飼料であった。
選抜交配の結果、心筋梗塞を高い確率で自然発症するＷＨＨＬＭＩウサギを得た。
【００３１】
（１）心筋病変の解析
ＷＨＨＬＭＩウサギ及びＷＨＨＬウサギ（対照）の心臓を死後１６時間以内に採取し、固定液（ホルマリンあるいはブアン氏固定液）に浸漬した。パラフィン包埋後５００μｍ間隔で薄切し、病理組織染色あるいは免疫組織染色を実施した。ＷＨＨＬＭＩウサギの心筋病変は心室内膜下領域に好発し、貫壁性病変は約６０％に認められた。これらの所見はヒトの冠動脈複数枝病変に伴う心筋梗塞に類似している。
【００３２】
図１に、陳旧性心筋梗塞に急性心筋梗塞を併発した２５月齢オスウサギの心臓の病理組織画像を示す。左心室には心内膜下に全周性の心筋病変が認められ、左室の心底部側から心尖部側にかけて、側壁から後壁にかけて、および中隔壁の後壁近接部で菲薄化が認められる（図１Ａ−Ｄ）。責任冠動脈では狭窄率９０％以上の病変が連続した２０切片に認められた（図１Ｅ）。線維化部分に隣接して心筋線維が残存している部位（図１Ｃの枠内）では、心筋線維の横紋の消失、水腫様変化、波状走行が認められ（図１Ｇ−Ｈ）、中隔壁の菲薄化部分では心筋線維の消失も認められた。また、心筋線維の核の消失あるいは不明瞭化、収縮体壊死等も認められた。これらの所見は急性心筋梗塞で認められる典型的な病理所見である。
【００３３】
図１に示したＷＨＨＬＭＩウサギの死亡直前に計測した心電図では、旧性心筋梗塞発症時の典型的な心電図所見、すなわちＳＴ−ｓｅｇｍｅｎｔの上昇（ＩＩ誘導、ＩＩＩ誘導、ａＶＦ誘導）、あるいは下降（Ｉ誘導、ａＶＬ誘導）および異常Ｑ波（ＩＩＩ誘導、ａＶＦ誘導）が認められた。以上の所見から、このウサギは陳旧性心筋梗塞に急性心筋梗塞を併発して死亡したと考えられた。選抜交配後に死亡した多くのＷＨＨＬウサギが同様の病理所見を示した。
【００３４】
選抜交配後のＷＨＨＬＭＩウサギの病理組織標本で陳旧性の心筋梗塞病変を示さないケースにおいては、心筋線維の横紋の消失、水腫様変化、波状走行、収縮体壊死、ミオグロビンの消失、ならびに心筋細胞の核の消失、不明瞭化、萎縮等の心筋虚血急性期の所見が認められ、冠動脈に９０％以上の管腔狭窄病変が認められた。これらの所見は急性心筋梗塞の発症を強く示唆している。
【００３５】
（２）責任冠動脈の動脈硬化病変
心筋梗塞を自然発症したＷＨＨＬＭＩウサギの冠動脈病変には２つのタイプが認められた。１つは動脈硬化病変表層へのマクロファージの集積による内腔の閉塞であり、もう１つは内腔の完全閉塞は示さないが、菲薄化した線維性被膜とその直下の脂質とマクロファージからなる大きなリピッドコアを伴う病変である。前者の冠動脈病変の場合、免疫組織染色によって、マクロファージ集積部分の内皮細胞の剥離が観察された。後者の動脈硬化病変は、急性冠症候群の原因と考えられる典型的な不安定病変の特徴を示した。
【００３６】
選抜交配以前のＷＨＨＬウサギにおいては、冠動脈病変は、マクロファージや細胞外蓄積脂質が少なく平滑筋細胞やコラーゲン線維に富む病変であった（文献６）。しかし、選抜交配によって、冠動脈病変は脂質成分に富む病変となり、ヒトの冠動脈病変により類似した病理組織像を示すようになった。
【００３７】
（３）まとめ
ＷＨＨＬＭＩウサギは、選抜交配前のＷＨＨＬウサギと比較して、以下のような特徴を示した。
【００３８】
ａ）ＷＨＨＬウサギでは３５月齢前における心筋梗塞の累積発生率が２０％以下であったのに対し、ＷＨＨＬＭＩウサギでは９０％と高値を示した。
ｂ）１２ないし３０月齢における冠動脈の管腔狭窄率：
【００３９】
【化２】
（病変面積／（内腔面積＋病変面積））×１００％
が、ＷＨＨＬウサギが７４％であったが、ＷＨＨＬＭＩウサギでは９４％であった。
【００４０】
ｃ）ＷＨＨＬウサギでは、冠動脈動脈硬化病変構成成分は平滑筋細胞やコラーゲン繊維が豊富であり、マクロファージが比較的少ない病変であった。ＷＨＨＬＭＩウサギではマクロファージが動脈病変の表層部分に多量に集積し、冠動脈内腔を閉塞している。
【００４１】
ｄ）ＷＨＨＬウサギでは心電図の異常は認められなかったが、ＷＨＨＬＭＩウサギでは、不整脈や典型的な心筋梗塞を示す心電図異常や、内膜下梗塞を示唆する心電図所見が観察された。
【００４２】
ｅ）ＷＨＨＬウサギでは６月齢以降血清コレステロール値が加齢によって低下し、１８月齢の血清コレステロール値の平均値は５２９ｍｇ／ｄｌであった。ＷＨＨＬＭＩウサギでは加齢による血清コレステロールの低下が軽度であり、１８月齢の血清コレステロール値の平均値は８０４ｍｇ／ｄｌの高値を示した。正常ウサギの血清コレステロールは、約３０−約５０ｍｇ／ｄｌである。
参考文献
以下の文献は、参考文献としてその内容が本明細書中に援用される。
【００４３】
１．　　Ｓｈｉｏｍｉ　Ｍ．　　Ｏｕｔｌｉｎｅ　ｏｆ　ＷＨＨＬ　ｒａｂｂｉｔ．　　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｅｄ．ｋｏｂｅ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ｉｅａ／ｗｈｈ１−１．ｈｔｍｌ　（２００２）
２．　　Ｓｈｉｏｍｉ　Ｍ．，　Ｉｔｏ　Ｔ．，　Ｓｈｉｒａｉｓｈｉ　Ｍ．，　Ｗａｔａｎａｂｅ　Ｙ．　　Ｉｎｈｅｒｉｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａｓ　ｒｉｓｋ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ｉｎ　ＷＨＨＬ　ｒａｂｂｉｔｓ：　Ｒｉｓｋ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　ａｒｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｒｏｍ　ｔｈｏｓｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ａｏｒｔｉｃ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．　　Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ　９６：　４３−５２　（１９９２）
３．　　Ｆａｌｋ　Ｅ．，　Ｓｈａｈ　Ｐ．Ｋ．，　Ｆｕｓｔｅｒ　Ｖ．　　Ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｐｌａｑｕｅ　ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ．　　Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　９２：　６５７−６７１　（１９９５）
４．　　Ｄａｖｉｅｓ　Ｍ．Ｊ．　　Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ：　Ｔｗｏ　ｆａｃｅｓ　ｏｆ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．　Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　９４：　２０１３−２０２０　（１９９６）
５．　　Ｌｉｂｂｙ　Ｐ．　　Ｃｕｒｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｐｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｃｕｔｅ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ．　　Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　１０４：　３６５−３７２　（２００１）
６．　　Ｓｈｉｏｍｉ　Ｍ．，　Ｉｔｏ　Ｔ．，　Ｔｓｕｋａｄａ　Ｔ．，　Ｙａｔａ　Ｔ．，　Ｕｅｄａ　Ｍ．　　Ｃｅｌｌ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓｏｆ　ｃｏｒｏｎａｒｙ　ａｎｄ　ａｏｒｔｉｃ　ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ　ｌｅｓｉｏｎｓ　ｄｉｆｆｅｒ；　Ａｎ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｔｕｄｙ．　　Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ　Ｔｈｒｏｍｂ　１４：　９３１−９３７　（１９９４）
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、２５月齢のオスのＷＨＨＬＭＩウサギの心臓及び冠動脈のアテローム班の顕微鏡画像である。
図１Ａ−Ｄは、心臓組織切片の図である（Ａｚａｎ−Ｍａｌｌｏｒｙ染色）。図１Ｅは、責任回旋枝の冠動脈病変である（ｅｌａｓｔｉｃ　ｖａｎ　Ｇｉｅｓｏｎ染色）。図１Ｆ（ＨＥ染色）は、図１Ｃの左心室の左壁の領域の高倍率図である。図１Ｇは図１Ｆの高倍率図である。図１Ｈ（筋細胞アクチンの免疫組織染色）は、図１Ｃ左壁の高倍率図である。
【図１】
2004089148.tif 000002