(57)【要約】　　　（修正有）【課題】ＮＫＴ細胞活性化剤、自己免疫疾患（例えば、全身性エリテマトーデス、全身性強皮症、潰瘍性大腸炎、脳脊髄炎、多発性硬化症、およびヒトＩ型糖尿病等）の治療剤、および堕胎剤の提供。【解決手段】下記式（Ｉ）のα−グリコシルセラミドまたはその塩もしくは溶媒和物を有効成分として含むものである。2004131481.tif 000025【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
　式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を有効成分として含んでなる、ＮＫＴ細胞活性化用組成物。
【化１】
2004131481.tif 000013
（上記式中、
　Ｒ１はＨまたはＯＨであり、
　Ｘは７〜２７のいずれかの整数であり、
　Ｒ２は下記（ａ）〜（ｅ）からなる群から選択される置換基であり（ここで、Ｙは５〜１７のいずれかの整数である）、
　（ａ）−ＣＨ２（ＣＨ２）ＹＣＨ３
　（ｂ）−ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ＹＣＨ３
　（ｃ）−ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ＹＣＨ（ＣＨ３）２
　（ｄ）−ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＹＣＨ３
　（ｅ）−ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ＹＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、そして
　Ｒ３〜Ｒ９は下記のi)またはii)で定義される置換基である：
ｉ）Ｒ３、Ｒ６、およびＲ８がＨのとき
　Ｒ４はＨ、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣＯＣＨ３、または下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
【化２】
2004131481.tif 000014
からなる群から選択される置換基であり、
　Ｒ５はＯＨ、または下記基（Ｅ）および（Ｆ）：
【化３】
2004131481.tif 000015
からなる群から選択される置換基であり、
　Ｒ７は、ＯＨまたは下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
【化４】
2004131481.tif 000016
からなる群から選択される置換基であり、
　Ｒ９はＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、または下記基（Ａ’）〜（Ｄ’）：
【化５】
2004131481.tif 000017
からなる群から選択される置換基である；
ii）Ｒ３、Ｒ６およびＲ７がＨのとき
　Ｒ４はＨ、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣＯＣＨ３、または下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
【化６】
2004131481.tif 000018
からなる群から選択される置換基であり、
　Ｒ５はＯＨ、または下記基（Ｅ）および（Ｆ）：
【化７】
2004131481.tif 000019
からなる群から選択される置換基であり、
　Ｒ８はＯＨ、または下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
【化８】
2004131481.tif 000020
からなる群から選択される置換基であり、
　Ｒ９はＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨまたは下記基（Ａ’）〜（Ｄ’）：
【化９】
2004131481.tif 000021
からなる群から選択される置換基である。）
【請求項２】
　式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を有効成分として含んでなる、堕胎用医薬組成物。
【化１０】
2004131481.tif 000022
（上記式中、Ｒ１〜Ｒ９およびＸは請求項１において定義した通りである。）
【請求項３】
　式（Ｉ）の化合物中、Ｒ３、およびＲ６がＨを表し、Ｒ４がＯＨまたは基（Ａ）〜（Ｄ）のいずれかの置換基を表し、Ｒ５がＯＨまたは基（Ｅ）もしくは（Ｆ）の置換基を表し、Ｒ７およびＲ８がそれぞれＨまたはＯＨのいずれかを表し（但し、Ｒ７およびＲ８の両方が同一の基を表すことはない）、Ｒ９がＣＨ２ＯＨ、ＣＨ３、Ｈ、または基（Ａ’）〜（Ｄ’）のいずれかの置換基を表す、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
　式（Ｉ）の化合物中、Ｘが２１〜２５の整数であり、Ｒ２が置換基（ｂ）（式中、Ｙは１１〜１５である）を表す、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項５】
　式（Ｉ）の化合物中、Ｘが９〜１３の整数であり、Ｒ２が置換基（ａ）（式中、Ｙは１１〜１５である）を表す、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項６】
　式（Ｉ）の化合物が、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）−２−ヘキサコサノイルアミノ−３，４−オクタデカンジオールである、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項７】
　式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物により活性化されたＮＫＴ細胞。
【化１１】
2004131481.tif 000023
（上記式中、Ｒ１〜Ｒ９およびＸは請求項１において定義した通りである。）
【請求項８】
　ＮＫＴ細胞がヒトＶα２４＋ＮＫＴ細胞である、請求項７に記載の活性化ＮＫＴ細胞。
【請求項９】
　ＮＫＴ細胞を式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の存在下インビトロで培養することにより得ることができる、請求項７に記載の活性化ＮＫＴ細胞。
【請求項１０】
　式（Ｉ）の化合物中、Ｒ３、およびＲ６がＨを表し、Ｒ４がＯＨまたは基（Ａ）〜（Ｄ）のいずれかの置換基を表し、Ｒ５がＯＨまたは基（Ｅ）もしくは（Ｆ）の置換基を表し、Ｒ７およびＲ８がそれぞれＨまたはＯＨのいずれかを表し（但し、Ｒ７およびＲ８の両方が同一の基を表すことはない）、Ｒ９が　ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ３、Ｈ、または基（Ａ’）〜（Ｄ’）のいずれかの置換基を表す、請求項７〜９のいずれか一項に記載のＮＫＴ細胞。
【請求項１１】
　式（Ｉ）の化合物中、Ｘが２１〜２５の整数であり、Ｒ２が置換基　（ｂ）（式中、Ｙは１１〜１５である）を表す、請求項７〜９のいずれか一項に記載のＮＫＴ細胞。
【請求項１２】
　式（Ｉ）の化合物中、Ｘが９〜１３の整数であり、Ｒ２が置換基（ａ）（式中、Ｙは１１〜１５である）を表す、請求項７〜９のいずれか一項に記載のＮＫＴ細胞。
【請求項１３】
　式（Ｉ）の化合物が、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）−２−ヘキサコサノイルアミノ−３，４−オクタデカンジオールである、請求項７〜９のいずれか一項に記載のＮＫＴ細胞。
【請求項１４】
　ＮＫＴ細胞を含んでなる単核細胞画分を、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の存在下インビトロで培養する工程を含んでなる、ＮＫＴ細胞の活性化法。
【化１２】
2004131481.tif 000024
（上記式中、Ｒ１〜Ｒ９およびＸは請求項１において定義した通りである。）
【請求項１５】
　単核細胞画分を、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を提示している抗原提示細胞の存在下で培養する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
　単核細胞画分を、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を提示している抗原提示細胞とＩＬ−２との存在下で培養する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
　単核細胞画分を培養する前に、ＮＫＴ細胞を含んでなる単核細胞画分を式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物と、ＧＭ−ＣＳＦと、ＩＬ−４との存在下インビトロで培養することにより、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を提示している抗原提示細胞を調製する工程を更に含んでなる、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
　単核細胞画分がヒト末梢血由来である、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
　式（Ｉ）の化合物中、Ｒ３、およびＲ６がＨを表し、Ｒ４がＯＨまたは基（Ａ）〜（Ｄ）のいずれかの置換基を表し、Ｒ５がＯＨまたは基（Ｅ）もしくは（Ｆ）の置換基を表し、Ｒ７およびＲ８がそれぞれＨまたはＯＨのいずれかを表し（但し、Ｒ７およびＲ８の両方が同一の基を表すことはない）、Ｒ９が　ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ３、Ｈ、または基（Ａ’）〜（Ｄ’）のいずれかの置換基を表す、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
　式（Ｉ）の化合物中、Ｘが２１〜２５の整数であり、Ｒ２が置換基　（ｂ）（式中、Ｙは１１〜１５である）を表す、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
　式（Ｉ）の化合物中、Ｘが９〜１３の整数であり、Ｒ２が置換基（ａ）（式中、Ｙは１１〜１５である）を表す、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
　式（Ｉ）の化合物が、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）−２−ヘキサコサノイルアミノ−３，４−オクタデカンジオールである、請求項１４〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
　発明の分野
　本発明は、α−グリコシルセラミドを含有するＮＫＴ細胞活性化剤、自己免疫疾患治療剤および堕胎剤に関する。
【０００２】
　関連技術
　中等度にＴ細胞レセプター (TCR) を発現する intermediate TCR 細胞（ＴＣ Ｒｉｎｔ細胞) は、Large Granulra Lymphocyte (LGL) 様の形態を示すこと、IL-2R β鎖を常時表出すること、パーフォリン顆粒を有する点などでは、Natural Killer（ＮＫ）細胞と類縁の細胞であるが、ＴＣＲを有するという点でＮＫ細胞とは決定的に異なる細胞群であることが明らかとなった (Watanabe, H. et al.,J. Immunol., 155, 2972 (1995) )。そして、マウスではInterleukin 12 (IL-12)により活性化されたＴＣＲｉｎｔ細胞の中でもＮＫ１．１を発現している ＮＫ １．１＋ＴＣＲｉｎｔ（ＮＫＴ）細胞が、腫瘍の肝臓や肺への血行性転移抑制の重要なエフェクター細胞であることが証明された（Hashimoto, W. et al., J.　Immunol., 154, 4333 (1995); Anzai, R. et al., Immunol., 88, 82 (1996)） ことから、このＮＫＴ細胞は、癌細胞、寄生虫や原虫、およびリステリアや結核菌などの細胞内感染細菌の排除に重要な役割を果たす細胞であると考えられている(Seki, S. et al., Clin. Immunol., 28, 1069 (1996))。
【０００３】
　さらに、このＮＫＴ細胞は、骨髄移植における急性期拒絶反応 (Yankelevich, B.et al., J. Immunol., 142, 3423 (1989))やヘルパーＴ細胞のTh1/Th2 の分 化制御によるＩｇＥ抗体産生の制御 (Yoshimoto, T. et al.,J. Exp. Med., 179, 1285 (1994))などにも深く関与する細胞としても知られている。以上のように、このＮＫＴ細胞は、近年、新しい細胞群として非常に注目を集めている細胞群である。
【０００４】
　Ｖα１４＋ＮＫＴ細胞は上記のＮＫＴ細胞の一つのサブセットであり、Ｖα１４＋ＮＫＴ細胞の多くはＶα１４Ｊα２８１ｍＲＮＡを発現しており、これをＴＣＲα鎖として持っている。近年、このＶα１４＋ＮＫＴ細胞が、自己免疫疾患の発症に深く関わっていることが証明された。すなわち、ＭＲＬ　ｌｐｒ／ｌｐｒマウスは、生後17 - 20 週齢で異常リンパ球の集積をきたす自己免疫疾患（ヒト全身性エリテマトーデス）のモデルマウスであるが、このマウスにおいては、自己免疫疾患発症に先行して、Ｖα１４＋ＮＫＴ細胞が選択的に減少することが判明した ( Mieza, M. A. et al., J. Immunol., 156, 4035(1996))。
【０００５】
　同様の現象は、他の自己免疫疾患モデルマウスであるgld マウスや (NZBxNZW)F1マウスにおいても観察され、Ｖα１４＋ＮＫＴ細胞が自己免疫疾患の発症に深く関わっていることが判明した ( Makino, Y. et al., Clin. Immunol.,28,1487 (1996))。
【０００６】
　さらに、興味深いことに、ヒトにおいても同様の現象が観察された。すなわち、マウスＶα１４Ｊα２８１鎖と相同のヒトホモログであるＶα２４ＪαＱα鎖は、健常人では末梢血のＣＤ４−／ＣＤ８−Ｔ細胞中に20- 50% 存在しているが、強皮症患者ではまったく消失していた ( Sumida, T. et al., J. Exp. Med., 182,1163 (1995))。
【０００７】
　このように、原因遺伝子や遺伝的背景の異なる様々な自己免疫疾患において、マウスＶα１４＋ＮＫＴ細胞やヒトＶα２４ＪαＱαＴ細胞が関与していることが知られている。このことから、上記のようにＮＫＴ細胞を活性化する作用を有するＩＬ−１２は、ヒト全身性エリテマトーデス（systemic lupus erythematosus : SEL) や全身性強皮症（ systemic sclerosis: SSc）のような 自己免疫疾患の治療剤として期待された。しかし、ＩＬ−１２をＭＲＬ　ｌｐｒ／ｌｐｒマウスに投与すると、非投与マウスに比べ脾およびリンパ節に異常リンパ球（ＣＤ３＋Ｂ２２０＋double negative Ｔ細胞）の著明な増加が認められた（筒井建紀ら，日本免疫学会総会・学術集会記録，347 (1996)）。
【０００８】
　ところで、生体内には種々の糖がセラミドとβ結合しているβ−ガラクトシルセラミドやβ−グルコシルセラミドが存在している (Svennerholm, L. et al., Biochem. Biophys. Acta, 280, 626(1972) ; Karlsson, K.-A. et al., Biochim. Biophys. Acta, 316,317(1973))。一方、α- ガラクトシルセラミドが顕著な免疫賦活作用および抗腫瘍作用を有すること(Morita,M. et al.,J. Med. Chem.,38, 2176 (1995)) およびα- ガラクトシルセラミドやα- グルコシルセラミドのこれらの作用は、β−ガラクトシルセラミドやβ- グルコシルセラミドの作用よりもはるかに強力であること(Motoki, K. et al., Biol. Pharm. Bull.,18, 1487 (1995)）が知られている。さらに、α- グルコシルセラミド構造を有する化合物は、生体内に投与した場合に放射線防護作用 (Motoki, K. et al.,Bioorg. Med. Chem. Lett., 5, 2413 (1995)) 、マウスメラノーマＢ１６の肺転移抑制作用 (Kobayashi, E. et al.,Oncology Res., 7, 529 (1995)) 、およびマウス大腸癌 Colon26やマウスＴリンパ腫 EL-4 の肝転移抑制作用（元木一宏ら日本癌学会総会記事、523 (1996) ）を有することおよび血小板数や白血球数を増加させるこ と( Motoki, K. et al., Biol. Pharm. Bull., 19,952(1996))が知られている。
【０００９】
　しかし、α- グリコシルセラミド構造を有する化合物が自己免疫疾患に有効であることや堕胎作用を有することはもちろんのこと、α- グリコシルセラミド構造を有する化合物がＮＫＴ細胞に与える影響に関しても、報告されていない。
【発明の概要】
【００１０】
　本発明者らは、今般、α−グリコシルセラミドがＲＡＧ−１ＫＯ／Ｖα１４ｔｇ/ Ｖβ８．２ｔｇマウス（リンパ球画分にＢ細胞、Ｔ細胞およびＮＫ細胞が　存在せず、ＮＫＴ細胞が多く存在するマウス）におけるＮＫＴ細胞の腫瘍細胞に対する細胞障害活性を増強すること、α−グリコシルセラミドによりＮＫＴ細胞（特にマウスＶα１４＋ＮＫＴ細胞およびヒトＶα２４＋ＮＫＴ細胞）の数が顕著に増加すること、α−グリコシルセラミドがヒト全身性エリテマトーデスのモデルマウスであると考えられる MRL lpr/lprマウスの腋下および鼠径部のリンパ節の異常腫脹（異常リンパ球の集積) を抑制すること、そしてα−グリコシルセラミドが４％　ＤＳＳ誘発マウス大腸炎の進行を抑制することを見出した。
【００１１】
　本発明者らは、また、α−グリコシルセラミドが実験的自己免疫性脳脊髄炎の発症を抑制することを見いだした。マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎はヒト多発性硬化症のモデルである。本発明者らは、また、α−グリコシルセラミドがＮＯＤマウスにおいて糖尿病の自然発症を抑制することを見いだした。ＮＯＤマウスはヒトのＩ型糖尿病のモデルである。
【００１２】
　本発明者らは、更に、α−グリコシルセラミドが妊娠マウスに対して堕胎効果を有することをも見いだした。
【００１３】
　本発明は、ＮＫＴ細胞活性化剤および活性化されたＮＫＴ細胞の提供をその目的とする。
【００１４】
　本発明は、また、自己免疫疾患（例えば、全身性エリテマトーデス、全身性強皮症、潰瘍性大腸炎、脳脊髄炎、多発性硬化症、およびＩ型糖尿病等）の治療剤の提供をその目的とする。
【００１５】
　本発明は、更に、堕胎剤の提供をその目的とする。
【００１６】
　本発明によるＮＫＴ細胞活性化剤、自己免疫疾患治療剤および堕胎剤は、下記式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を有効成分として含んでなるもの、である：
【化１】
2004131481.tif 000002
（上記式中、
　Ｒ１はＨまたはＯＨであり、
　Ｘは７〜２７のいずれかの整数であり、
　Ｒ２は下記（ａ）〜（ｅ）からなる群から選択される置換基であり（ここで、Ｙは５〜１７のいずれかの整数である）、
　（ａ）−ＣＨ２（ＣＨ２）ＹＣＨ３
　（ｂ）−ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ＹＣＨ３
　（ｃ）−ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ＹＣＨ（ＣＨ３）２
　（ｄ）−ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＹＣＨ３
　（ｅ）−ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ＹＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、そして
　Ｒ３〜Ｒ９は下記のi)〜v)のいずれかで定義される置換基である：
ｉ）Ｒ３、Ｒ６、およびＲ８がＨのとき
　Ｒ４はＨ、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣＯＣＨ３、または下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
【化２】
2004131481.tif 000003
からなる群から選択される置換基であり、
　Ｒ５はＯＨ、または下記基（Ｅ）および（Ｆ）：
【化３】
2004131481.tif 000004
からなる群から選択される置換基であり、
　Ｒ７は、ＯＨまたは下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
【化４】
2004131481.tif 000005
からなる群から選択される置換基であり、
　Ｒ９はＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、または下記基（Ａ’）〜（Ｄ’）：
【化５】
2004131481.tif 000006
からなる群から選択される置換基である；
ii）Ｒ３、Ｒ６およびＲ７がＨのとき
　Ｒ４はＨ、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣＯＣＨ３、または下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
【化６】
2004131481.tif 000007
からなる群から選択される置換基であり、
　Ｒ５はＯＨ、または下記基（Ｅ）および（Ｆ）：
【化７】
2004131481.tif 000008
からなる群から選択される置換基であり、
　Ｒ８はＯＨ、または下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
【化８】
2004131481.tif 000009
からなる群から選択される置換基であり、
　Ｒ９はＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨまたは下記基（Ａ’）〜（Ｄ’）：
【化９】
2004131481.tif 000010
からなる群から選択される置換基である。）
【発明の具体的説明】
【００１７】
　式（Ｉ）の化合物
　前記式（Ｉ）の化合物中、セラミド部分のＸは、好ましくは１１〜２５の整数である。
【００１８】
　Ｒ２におけるＹは好ましくは９〜１７の整数、より好ましくは１１〜１５である。
【００１９】
　式（Ｉ）のセラミド部分におけるＸおよびＲ２の好ましい組み合わせは、Ｘが２１〜２５の整数であり、Ｒ２が置換基（ｂ）（式中、Ｙは１１〜１５である）を表す化合物、およびＸが９〜１３の整数であり、Ｒ２が置換基（ａ）（式中、Ｙは１１〜１５である）を表す化合物である。
【００２０】
　式（Ｉ）の糖部分におけるＲ３〜Ｒ９の好ましい組み合わせは、Ｒ３およびＲ６がＨを表し、Ｒ４がＯＨまたは基（Ａ）〜（Ｄ）のいずれかの置換基を表し、Ｒ５がＯＨまたは基（Ｅ）もしくは（Ｆ）の置換基を表し、Ｒ７およびＲ８がそれぞれＨまたはＯＨのいずれかを表し（但し、Ｒ７およびＲ８の両方が同一の基を表すことはない）、Ｒ９がＣＨ２ＯＨ、ＣＨ３、Ｈ、または基（Ａ’）〜（Ｄ’）のいずれかの置換基を表す化合物である。
【００２１】
　更に好ましい組み合わせとしては、Ｒ３およびＲ６がＨであり、Ｒ４およびＲ５がＯＨであり、Ｒ７およびＲ８がそれぞれＨまたはＯＨのいずれかを表し（但し、Ｒ７およびＲ８の両方が同一の基を表すことはない）、かつＲ９がＣＨ２ＯＨまたは基（Ａ’）〜（Ｄ’）のいずれかの置換基を表す化合物、およびＲ３、Ｒ６およびＲ８がＨであり、Ｒ４、Ｒ５およびＲ７がＯＨであり、かつＲ９がＣＨ２ＯＨである化合物が挙げられる。
【００２２】
　式（Ｉ）の化合物の好ましい例としては、
　Ｘが２１〜２５の整数であり、
　Ｒ２が置換基（ｂ）（式中、Ｙは１１〜１５の整数である）であり、
　Ｒ３およびＲ６がＨであり、
　Ｒ４がＯＨまたは基（Ａ）〜（Ｄ）からなる群から選択される基であり、
　Ｒ５がＯＨまたは基（Ｅ）および（Ｆ）からなる群から選択される基であり、
　Ｒ７およびＲ８がそれぞれＨまたはＯＨであり（但し、両方が同一の基を表すことはない）、
　Ｒ９がＣＨ２ＯＨまたは基（Ａ’）〜（Ｄ’）からなる群から選択される基である化合物、
　Ｘが９〜１３の整数であり、
　Ｒ２が置換基（ａ）（式中、Ｙは１１〜１５の整数である）であり、
　Ｒ３およびＲ６がＨであり、
　Ｒ４およびＲ５がＯＨであり、
　Ｒ７およびＲ８がそれぞれＨまたはＯＨであり（但し、両方が同一の基を表すことはない）、
　Ｒ９がＨ、ＣＨ３、またはＣＨ２ＯＨである化合物、
　Ｘが２１〜２５の整数であり、
　Ｒ２が置換基（ｂ）（式中、Ｙは１１〜１５の整数である）であり、
　Ｒ３およびＲ６がＨであり、
　Ｒ４およびＲ５がＯＨであり、
　Ｒ７およびＲ８がそれぞれＨまたはＯＨであり（但し、両方が同一の基を表すことはない）、
　Ｒ９がＣＨ２ＯＨまたは基（Ａ’）〜（Ｄ’）からなる群から選択される基である化合物、および
　Ｘが２１〜２５の整数であり、
　Ｒ２が置換基（ｂ）（式中、Ｙは１１〜１５の整数である）であり、
　Ｒ３、Ｒ６、およびＲ８がＨであり、
　Ｒ４、Ｒ５、およびＲ７がＯＨであり、
　Ｒ９がＣＨ２ＯＨである化合物
が挙げられる。
【００２３】
　本発明による治療剤の有効成分として好ましい化合物群としては、
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）−２−ヘキサコサノイルアミノ−３，４−オクタデカンジオール（ＫＲＮ７０００）、
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）−２−テトラデカノイルアミノ−３−オクタデカノール（ＡＧＬ−５１７）、
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（α−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−２−テトラデカノイルアミノ−３−オクタデカノール（ＡＧＬ−５６３）、
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（６′−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）−２−テトラデカノイルアミノ−３−オクタデカノール（ＡＧＬ−５７１）、
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（β−Ｌ−アラビノピラノシルオキシ）−２−テトラデカノイルアミノ−３−オクタデカノール（ＡＧＬ−５７７）、
Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−ヘキサコサノイル−１，３，４−オクタデカントリオール（ＡＧＬ−５８６）、
Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−ヘキサコサノイル−１，３，４−オクタデカントリオール（ＡＧＬ−５８４）、
Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→２）−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［（Ｒ）−２−ヒドロキシテトラコサノイル］−１，３，４−オクタデカントリオール（Ｓ１１４０Ｂ−９）、
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトフラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［（Ｒ）−２−ヒドロキシテトラコサノイル］−１，３，４−オクタデカントリオール（７１９−７）、および
Ｏ−（Ｎ−アセチル−２−アミノ−２−デオキシ−α−Ｄ−カラクトピラノシル−（１→３）−Ｏ−［α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−　［（Ｒ）−２−ヒドロキシテトラコサノイル］−１，３，４−オクタデカントリオール（ＳＴＬ−８）
が挙げられる。
【００２４】
　本発明による治療剤の有効成分として特に好ましい化合物は、
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）−２−ヘキサコサノイルアミノ−３，４−オクタデカンジオール（ＫＲＮ７０００）である。
【００２５】
　式（Ｉ）の化合物は、薬学上許容される非毒性塩であることができる。式（Ｉ）の化合物の塩としては、酸付加塩、例えば、無機酸（例えば塩酸、硫酸、硝酸、リン酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、プロピオン酸、マレイン酸、オレイン酸、パルミチン酸、クエン酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、グルタミン酸、パントテン酸、ラウリルスルホン酸、メタンスルホン酸およびフタル酸）との塩が挙げられる。
【００２６】
　式（Ｉ）の化合物は溶媒和物（例えば、水和物）であることができる。
【００２７】
　式（Ｉ）の化合物は、α−グリコシルセラミドを合成するための合目的的な任意の方法により製造することができる。
【００２８】
　まず、Ｄ−リキソースを出発物質としてセラミド部分を合成し、次いで、このセラミドに糖を導入することによって、式（Ｉ）の化合物を調製することができる。このようなα−グリコシルセラミドの一般的な合成方法については、例えば、ＷＯ９３／５０５５号、ＷＯ９４／２１６８号、ＷＯ９４／９０２０号、およびＷＯ９４／２４１４２号を参照することができる。
【００２９】
　また、式（Ｉ）の化合物は、天然物（生物等）からカラムクロマトグラフィー等によって単離、精製することもできる。
【００３０】
　式（Ｉ）の化合物の用途
　本発明による化合物の代表的化合物であるＫＲＮ７０００をＲＡＧ−１ＫＯ／Ｖα１４ｔｇ/ Ｖβ８．２ｔｇマウスに投与すると、ＮＫＴ細胞の腫瘍細胞に対する細胞障害活性を増強することを見出した（薬理試験例１）。
【００３１】
　次いで、本発明者らは、α−グリコシルセラミドがＮＫＴ細胞、特にＶα１４＋ＮＫＴ細胞やＶα２４＋ＮＫＴ細胞、の数を顕著に増加させることを見出した（薬理試験例２、６、および９）。自己免疫疾患モデルマウスではＶα１４＋ＮＫＴ細胞が減少し、強皮症患者ではＶα２４＋ＪαＱαＴ細胞が消失し、Ｉ型糖尿病の進展した患者ではＶα２４＋ＮＫＴ細胞が極端に減少することが示唆されているように、原因遺伝子や遺伝的背景の異なる様々な自己免疫疾患において、マウスＶα１４＋ＮＫＴ細胞やヒトＶα２４＋ＮＫＴ細胞が関与していることが示されている（Mieza, M. A. et al., J. Immunol.,156, 4035 (1996)；Makino, Y.et al., Clin. Immunol., 28, 1487 (1996) ；Sumida,T. et al., J. Exp.　Med., 182,1163 (1995); Wilson et al., Nature,391,177(1998)）。また、本発明者らは、ヒト全身性エリテマトーデスのモデルマウスであると考えられるＭＲＬ　ｌｐｒ／ｌｐｒマウス(Sakamoto, A. Clin. Immunol., 28, 1558 (1996))　にＫＲＮ７０００を投与したところ、腋下および鼠径部のリンパ節の異常腫脹　（異常リンパ球の集積）が抑制された（薬理試験例３）。リンパ節の異常腫脹はＭＲＬ　ｌｐｒ／ｌｐｒマウスにおいて加齢に伴って観察される特徴的な症状である。
【００３２】
　従って、本発明の第一の面として、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物はＮＫＴ細胞活性化剤として用いることができる。ここで「ＮＫＴ細胞」は、ヒトＶα２４＋ＮＫＴ細胞およびマウスＶα１４＋ＮＫＴ細胞を含む。ヒトＶα２４＋ＮＫＴ細胞はヒトＶα２４ＪαＱαＴ細胞のサブセットであり、Ｖα２４＋ダブルネガティブ（ＣＤ４−ＣＤ８−）Ｔ細胞（Dellabona, P. et al.,J.Exp. Med.,180,1171(1994)）と同義である。また、「ＮＫＴ細胞活性化」は細胞障害活性の増強およびＮＫＴ細胞の増殖促進を含む。
【００３３】
　本発明の第二の面として、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物は自己免疫疾患治療剤として用いることができる。本発明において、「自己免疫疾患」とは、全身性エリテマトーデス、全身性強皮症、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、脳脊髄炎、Ｉ型糖尿病、慢性関節リュウマチ、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、特発性血小板減少性紫班病、自己免疫性溶血性貧血、重症筋無力症、交感性眼炎、Goodpasture 症候群（例えば、糸球体腎炎）、悪性貧血、および橋本病を含む。また、本明細書において、「治療」とは「予防」を含む。
【００３４】
　式（Ｉ）の化合物およびＩＬ−１２は、妊娠マウスの流産を促進する（薬理試験例１０）。従って、本発明の第三の面として、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物およびＩＬ−１２は堕胎剤として用いることができる。式（Ｉ）の化合物およびＩＬ−１２は妊娠動物だけでなく、妊娠する可能性のある動物にも投与することができる。妊娠する可能性のある動物にあらかじめ式（Ｉ）の化合物またはＩＬ−１２を投与することにより妊娠を阻止することができる。従って、「堕胎剤」とは「避妊剤」を含む意味で用いられる。
【００３５】
　式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物およびＩＬ−１２は、治療方法、投与方法、および投与目的によって決まる適当な剤型、具体的には、注射剤、懸濁剤、乳化剤、軟膏剤、クリーム剤錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、丸剤、細粒剤、トローチ錠、直腸投与剤、油脂性坐剤、水溶性坐剤等の製剤、に処方することができる。
【００３６】
　これらの各種製剤は、下記の薬学上許容される担体等を用いて常法により製造することができる：賦形剤、例えば、溶剤（例えば、水、生理食塩水）、増量剤および充てん剤（例えば、乳糖、デンプン、結晶セルロース、マンニトール、マルトース、リン酸水素カルシウム、軟質無水ケイ酸、炭酸カルシウム）；補助剤、例えば、可溶化剤（例えば、エタノール、ポリソルベート剤）、結合剤（例えば、デンプン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アラビアゴム）、崩壊剤（例えば、デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油）、安定剤（例えば、乳糖、マンニトール、マルトース、ポリソルベート類、マクロゴール類、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油）、等張化剤、湿潤化剤、潤滑剤、分散剤、緩衝剤、溶解補助剤；添加剤、例えば、抗酸化剤、保存剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤、着色剤、および甘味剤。
【００３７】
　また、各種製剤には、必要に応じて、グリセリン、ジメチルアセトアミド、　７０％乳酸ナトリウム、界面活性剤、塩基性物質（例えば、エチレンジアミン、エタノールアミン、炭酸ナトリウム、アルギニン、メグルミン、トリスアミノメタン）を添加することもできる。
【００３８】
　本発明において、式（Ｉ）の化合物およびＩＬ−１２は、合目的な任意の投与経路、具体的は、動物の場合には、腹腔内投与、皮下投与、静脈または動脈への血管内投与、注射による局所投与などの方法が可能である。また、ヒトの場合には、静脈内投与、動脈内投与、注射による局所投与、腹腔または胸腔への投与、皮下投与、筋肉内投与、舌下投与、経皮吸収または直腸内投与により投与することができる。静脈内投与がもっとも好ましい。
【００３９】
　本発明による治療剤における各有効成分は、個々の状況に応じて連続的または間欠的に投与できる。具体的な投与量は、投与方法、患者の諸条件、たとえば、年齢、体重、性別、感受性、投与時間、併用薬剤などにより変化する。一般に、式（Ｉ）の化合物およびＩＬ−１２の投与量は、例えば、静脈内投与では、ヒト成人に対して１日あたり０．００１〜１０ｍｇ程度、好ましくは、０．０１〜１ｍｇ、である。式（Ｉ）の化合物は、凍結乾燥製剤にするのが好ましく、投与直前に注射用蒸留水等で溶解し、患者に投与するのが好ましい。
【００４０】
　本発明によれば、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を、ヒトを含む哺乳動物に投与することを含む自己免疫疾患の治療法が提供される。
【００４１】
　本発明によれば、また、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物により活性化されたＮＫＴ細胞（活性化ＮＫＴ細胞）をヒトを含む哺乳動物に投与することを含む、自己免疫疾患の治療法が提供される。
【００４２】
　活性化ＮＫＴ細胞は、ＮＫＴ細胞を式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の存在下インビトロで培養することにより得ることができる。また、式　（Ｉ）の化合物を投与した哺乳動物の体内から活性化ＮＫＴ細胞を単離することによって得てもよい。
【００４３】
　式（Ｉ）の化合物とともにインビトロで培養するＮＫＴ細胞は、健常人から単離されたものであってもよく、また患者または患者であると疑われる者から単離されたものであってもよい。ヒトを治療する場合、ＮＫＴ細胞はヒトＶα２４＋ＮＫＴ細胞であることが好ましい。
【００４４】
　活性化ＮＫＴ細胞の哺乳動物への投与は、活性化ＮＫＴ細胞を哺乳動物の体内、例えば、静脈内に移植することにより行うことができる。
【００４５】
　本発明によれば、ＮＫＴ細胞を式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の存在下インビトロで培養することを含む、ＮＫＴ細胞の活性化法が提供される。
【００４６】
　本発明によれば、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物あるいはＩＬ−１２を、ヒトを含む哺乳動物に投与することを含む堕胎法が提供される。
【実施例】
【００４７】
　以下の実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４８】
　化合物の合成および単離・精製
　実施例１　（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）−２−ヘキサコサノイルアミノ−３，４−オクタデカンジオール（ＫＲＮ７０００）の合成
　合成工程は、図１０および１１に示される通りである。
【００４９】
（１）化合物Ｇ１の合成
　Ｄ−リキソース（２００ｇ、１．３３ｍｏｌ）に塩化カルシウムで乾燥したアセトン溶液（３．０Ｌ）に硫酸（０．５ｍＬ）を加え、１８時間室温で攪拌した。モレキュラーシーブス４Ａの粉末（１００ｇ）を加え、反応液を中和後、セライト濾過し、残渣をアセトンで洗浄した。濾液と洗液をあわせて減圧濃縮し、Ｇ１の粗生成物を得た。収量２４０ｇ（９５％）。これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。分析用のサンプルは、ヘキサン：アセトン（９：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
　ｍｐ７６−７８℃；ＦＤＭＳ　ｍ／ｚ　１９１（Ｍ＋１）+ ；１Ｈ−ＮＭＲ　（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ５．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ），４．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，５．５Ｈｚ），４．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），４．２７−４．３０（１Ｈ，ｍ），３．９０−３．９９（２Ｈ，ｍ），１．４８（３Ｈ，ｓ），１．３２（３Ｈ，ｓ）。
【００５０】
（２）化合物Ｇ２の合成
　化合物Ｇ１（２３９ｇ、約１．２６ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（１６８ｍｌ）に、ピリジン（１０ｍｌ）、塩化トリチル（３９．０ｇ）を加え、３２℃で４時間攪拌した。エタノール（８ｍｌ）を滴下し、室温で２時間攪拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣は酢酸エチルに溶解し、０℃に冷却して結晶化した。収量５０１ｇ（Ｄ−リキソースより８７％）。
　ｍｐ１７４−１７６℃；ＦＤＭＳ　ｍ／ｚ　４３２Ｍ+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２１−７．４９（１５Ｈ，ｍ），５．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），４．７５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，６．１Ｈｚ），４．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），４．３１−４．３５（１Ｈ，ｍ），３．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．９，９．８Ｈｚ），３．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．７，９．８Ｈｚ），１．２９（３Ｈ，ｓ），１．２８（３Ｈ，ｓ）。
【００５１】
（３）化合物Ｇ３の合成
　トリデカントリフェニルホスホニウムブロミド（９６２ｇ、１．１６ｍｏｌ；１−ブロモトリデカン、トリフェニルホスフィンを４．５時間、１４０℃に加熱して調製した）のＴＨＦ溶液（１５００ｍｌ）に、アルゴン雰囲気下、ｎ−ブチルリチウムの２．５Ｍヘキサン溶液（４６２ｍＬ；３６６ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。滴下終了後、１５分間攪拌し、化合物Ｇ２（２５０ｇ、５７９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（４５０ｍｌ）を滴下した。室温まで、徐々に温度を上げつつ１８時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣にヘキサン：メタノール：水（１０：７：３、１０００ｍｌ）の混液を加え、飽和塩化アンモニウム水溶液で洗浄した。水層はヘキサン（５００ｍｌ）で抽出し、すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、Ｇ３の粗生成物を得た。これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。収量３３９ｇ（９８％）。分析用のサンプルは、ヘキサン：酢酸エチル（９：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
　ＦＤＭＳ　ｍ／ｚ　５９８Ｍ+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２１−７．４５（１５Ｈ，ｍ），５．４８−５．５９（２Ｈ，ｍ），４．９１（０．７Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），４．４４（０．３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），４．２６（０．３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．３，７．３Ｈｚ），４．２１（０．７Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．３，６．７Ｈｚ），３．７５（０．７Ｈ，ｍ），３．６９（０．３Ｈ，ｍ），３．２４（０．３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．９，９．８Ｈｚ），３．１７（０．７Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．９，９．８Ｈｚ），３．０９−３．１４［１Ｈ，（３．１１，ｄｄ，Ｊ＝４．９，９．２Ｈｚ），Ｈ１ｂＥoverlapped］，１．７５−２．０３（２Ｈ，ｍ），１．４９（３Ｈ，ｓ），１．３９ａｎｄ１．３８　（３Ｈ，ｅａｃｈ　ｓ），１．２１−１．３４（２０Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。
【００５２】
（４）化合物Ｇ４の合成
　化合物Ｇ３（３３８ｇ、約５６５ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（１５００ｍｌ）にピリジン（５００ｍｌ）を加え、塩化メタンスルホニル（４９ｍｌ、６３３ｍｍｏｌ）を滴下し、３１℃で２４時間攪拌した。エタノール（４０ｍｌ）を滴下し、室温で１時間攪拌した。減圧濃縮後、残渣にヘキサン：メタノール：水（１０：７：３、１０００ｍｌ）の混液を加え、分液した。水層はヘキサン（２００ｍｌ）で３回抽出し、すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、Ｇ４の粗生成物を得た。これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。収量３６３ｇ（９５％）。分析用のサンプルは、ヘキサン：酢酸エチル（９：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
　ＦＤＭＳ　ｍ／ｚ　６７６Ｍ+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２１−７．４７（１５Ｈ，ｍ），５．４１（０．７Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝５．５，９．２，１１．０Ｈｚ），５．３２（０．７Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ），５．２２（０．３Ｈ，ｂｄｄ，Ｊ＝９．２，１５．０Ｈｚ），５．０２（０．３Ｈ，ｄｔ，Ｊt ＝７．３Ｈｚ，Ｊd ＝１５．０Ｈｚ），４．８（０．７Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝３．１，５．５，７．９Ｈｚ），４．７３（０．７Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，９．８Ｈｚ），４．６４−４．６７（０．３Ｈ，ｍ），４．６１（０．３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，９．２Ｈｚ），４．４８（０．７Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，７．９Ｈｚ），４．２２（０．３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，９．２Ｈｚ），３．５５　（０．３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４，１１．６Ｈｚ），３．４５（０．７Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．２，１１．０Ｈｚ），３．０６−３．１２［４Ｈ，（３．１２，ｓ），（３．１１，ｓ），（３．０９，ｄｄ，Ｊ＝３．１，１１．０Ｈｚ）］，１．６６−１．８２（２Ｈ，ｍ），１．４７ａｎｄ１．４６（３Ｈ，ｅａｃｈ　ｓ），１．３９（３Ｈ，ｓ），１．１３−１．３５（２０Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。
【００５３】
（５）化合物Ｇ５の合成
　化合物Ｇ４（３６２ｇ、約５３６ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（１５００ｍｌ）にメタノール（３５０ｍｌ）を加え、これに濃塩酸（２００ｍｌ）を滴下し、５ｈ室温で攪拌した。反応液に炭酸水素ナトリウムを加えて中和後、濾過した。濾液を減圧濃縮し、残渣に酢酸エチルを加え、食塩水で洗浄した。水層は酢酸エチルで抽出し、すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。ヘキサンより結晶化した。収量１６１ｇ（Ｇ２より７０％）。
　ｍｐ６６−６７℃；ＦＤＭＳ　ｍ／ｚ　３７７（Ｍ−Ｈ２Ｏ）+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３＋Ｄ２Ｏ）δ５．８６（０．３Ｈ，ｄｔ，Ｊt ＝７．３Ｈｚ，Ｊd ＝１４．７Ｈｚ），５．７７（０．７Ｈ，ｄｔ，Ｊt ＝７．３，Ｊd ＝１０．４Ｈｚ），５．５５（０．３Ｈ，ｂｒ．ｄｄ，Ｊ＝７．３，１４．７Ｈｚ），５．４９（０．７Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），４．９１−４．９７（１Ｈ，ｍ），４．５１（０．７Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），４．１１（０．３Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），３．９４−４．０３（２Ｈ，ｍ），３．６７−３．７３［１Ｈ，（３．７０，ｄｄ，Ｊ＝３．１，６．７Ｈｚ），（３．６９，ｄｄ，Ｊ＝３．１，７．３Ｈｚ）］，３．２０ａｎｄ３．１９（３Ｈ，ｅａｃｈｓ），２．０５−２．２２（２Ｈ，ｍ），１．２２−１．４３（２０Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。
【００５４】
（６）化合物Ｇ６の合成
　化合物Ｇ５（１６０ｇ、４０５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（７８０ｍｌ）に５％パラジウム−硫酸バリウム（１６ｇ）を加え、反応容器を水素ガスで置換後、室温にて２０時間攪拌した。反応液をセライト濾過後、クロロホルム：メタノールの混液（１：１）で洗浄した。濾液と洗液をあわせ、減圧濃縮した。残渣は酢酸エチルより結晶化した。収量１４６ｇ（９１％）。
　［α］23Ｄ＋１２°（ｃ１，ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝１：１）；ｍｐ１２４−１２６℃；ＦＤＭＳ　ｍ／ｚ　３９７（Ｍ＋１）+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３／ＣＤ３ＯＤ＝１：１）δ４．９３−４．９６（１Ｈ，ｍ，Ｈ２），３．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．７，１２．２Ｈｚ），３．８５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．９，１２．２Ｈｚ），３．５４−３．６０（１Ｈ，ｍ），３．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．８，８．５Ｈｚ），３．１９（３Ｈ，ｓ），１．７５−１．８３（１Ｈ，ｍ），１．５３−１．６２（１Ｈ，ｍ），１．２１−１．４５（２４Ｈ，ｍ），０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。
【００５５】
（７）化合物Ｇ７の合成
　化合物Ｇ６（１４５ｇ、３６５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１０００ｍｌ）にアジ化ナトリウム（４７ｇ、７３０ｍｍｏｌ）を加え、９５℃で４時間攪拌した。反応液を濃縮し、残渣に酢酸エチル（４５０ｍｌ）を加え、水洗した。水層は酢酸エチルで再抽出した。すべての有機層をあわせて食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥、減圧濃縮し、Ｇ７の粗生成物を得た。収量１２２ｇ（９７％）。これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。収量１２６ｇ（９５％）。分析用のサンプルは、ヘキサン：酢酸エチル（９：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。　
　［α］23Ｄ＋１６．５°（ｃ０．５，ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ，１：１）；ｍｐ９２−９３℃；ＦＤＭＳ　ｍ／ｚ　３４４（Ｍ＋１）+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ３．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，１１．６Ｈｚ），３．７５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．９，１１．６Ｈｚ），３．４９−３．６１（３Ｈ，ｍ），１．５０−１．７１（２Ｈ，ｍ），１．２２−１．４６（２４Ｈ，ｍ），０．９０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。
【００５６】
（８）化合物Ｇ８の合成
　化合物Ｇ７（１２１ｇ、約３５２ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（７５０ｍｌ）にピリジン（２５０ｍｌ）、塩化トリチル（１２４ｇ、４４５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間攪拌した。エタノール（３０ｍｌ）を滴下し、室温で３０分間攪拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化アンモニウム水溶液、食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥、減圧濃縮した。残渣は、ヘキサン：酢酸エチル（１０：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。収量３４．４ｇ（Ｇ６より５２％）。
　［α］24Ｄ＋１１．９°（ｃ０．９，ＣＨＣｌ３），ＦＤＭＳ　ｍ／ｚ　５８５Ｍ+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３＋Ｄ２Ｏ）δ７．２４−７．６１（１５Ｈ，ｍ），３．６２−３．６６（２Ｈ，ｍ），３．５１−３．５７　（２Ｈ，ｍ），３．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．０，１０．４Ｈｚ），１．２３−１．５６（２６Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。
【００５７】
（９）化合物Ｇ９の合成
　化合物Ｇ８（３３．５ｇ、５７．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（３００ｍｌ）に６０％水素化ナトリウム（５．５ｇ、ＮａＨとして約１３８ｍｍｏｌ）を加え、室温で４０分間攪拌した。反応液を０℃に冷却し、臭化ベンジル（１５ｍｌ、１２０ｍｍｏｌ）を滴下した。室温まで徐々に温度をあげながら１８時間攪拌した。反応液に氷水（１００ｍｌ）を加えて、反応を停止した後、酢酸エチルを用いて抽出した。抽出液は食塩水で３回洗浄し、すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、Ｇ９の粗生成物を得た。これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。収量４２．２ｇ（９６％）。分析用のサンプルは、ヘキサン：酢酸エチル（１００：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。　
　［α］24Ｄ＋９．８°（ｃ１．０，ＣＨＣｌ３），ＦＤＭＳ　ｍ／ｚ　７３８（Ｍ−Ｎ２）+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．０７−７．４８（２５Ｈ，ｍ），４．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．４１（２Ｈ，ｓ），３．７３−３．７９（１Ｈ，ｍ），３．４６−３．５６（２Ｈ，ｍ），３．３７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．６，１０．４Ｈｚ），１．２０−１．６４（２６Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。
【００５８】
（10）化合物Ｇ１０およびＧ１１の合成
　化合物Ｇ９（４１．２ｇ、約５４ｍｍｏｌ）の１−プロパノール溶液（２５０ｍｌ）にメタノール（３０ｍｌ）を加え、更に５％パラジウム炭素（４．１ｇ）、蟻酸アンモニウム（２７．１ｇ、４．３ｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間攪拌後、酢酸エチルで希釈し、セライト濾過した。濾液を減圧濃縮し、酢酸エチルで溶解後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、食塩水で３回洗浄し、すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、Ｇ１０の粗生成物を得た。収量３８．９ｇ（９８％）。得られたＧ１０は、これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。
【００５９】
　化合物Ｇ１０の塩化メチレン溶液（３００ｍｌ）に、ヘキサコサン酸（２２．４ｇ、５６．５ｍｍｏｌ）、ＷＳＣ塩酸塩（１２．６ｇ、６４．６ｍｍｏｌ）を加え、２時間加熱還流した。室温まで冷却後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル（５００ｍｌ）を加え、０．５Ｍ塩酸水溶液、食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、更に食塩水で洗浄した。すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、Ｇ１１の粗生成物を得た。収量５３．２ｇ（８８％）。得られたＧ１１は、これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。分析用のサンプルは、ヘキサン：酢酸エチル（１００：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。　
　［α］24Ｄ＋５．３°（ｃ０．４，ＣＨＣｌ３）；ＦＤＭＳ　ｍ／ｚ　１１１８Ｍ+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２０−７．３８（２５Ｈ，ｍ），５．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），４．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．４８−４．５０（３Ｈ，ｍ），４．２４−４．３２（１Ｈ，ｍ），３．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．０，６．７Ｈｚ），３．４３−３．５１（２Ｈ，ｍ，Ｈ１ａ），３．２９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．３，９．８Ｈｚ），１．９２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．２８−１．６０（７２Ｈ，ｍ），０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。
【００６０】
（11）化合物Ｇ１２の合成
　化合物Ｇ１１（５２．２ｇ、約４７ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（１８０ｍｌ）にメタノール（３６ｍｌ）を加え、次いで１０％塩酸メタノール溶液（３．０ｍｌ）を滴下し、室温で２時間攪拌した。反応液は粉状の炭酸水素ナトリウム（１８ｇ）で中和し、セライト濾過した。残渣は塩化メチレンで洗浄した。濾液と洗液をあわせ、食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をアセトンに加熱溶解し、０℃に冷却して沈殿化により精製した。収量３８．６ｇ（Ｇ９より７７％）。　
　［α］24Ｄ−２９．７°（ｃ０．７，ＣＨＣｌ３）；ｍｐ７５−７６．５℃；ＦＤＭＳ　ｍ／ｚ　８７６Ｍ+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３０−７．４７（１０Ｈ，ｍ），６．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），４．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．１２−４．１７（１Ｈ，ｍ），４．００（１Ｈ，ｄｔ，Ｊt ＝４．３，Ｊd ＝７．３Ｈｚ），３．６７−３．７２（２Ｈ，ｍ），３．６１（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝４．３，８．６，１１．６Ｈｚ），１．９４−２．０５　（２Ｈ，ｍ），１．１５−１．６９（７２Ｈ，ｍ），０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ）。
【００６１】
（12）化合物Ｇ１３の合成
　1)　２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−ガラクトピラノシルアセテート（７９．８ｇ）をトルエン（１６０ｍｌ）およびイソプロピルエーテル（５２０ｍｌ）の混液に溶解し、−１０〜０℃に冷却した。これに、２．０等量のＨＢｒを含むイソプロピルエーテル溶液を加えた（２．８ｍｍｏｌ／ｍｌ、約１００ｍｌ）。−１０〜０℃で約９０分間攪拌後、反応液に５％炭酸水素ナトリウム水溶液を注ぎ、攪拌して過剰のＨＢｒを中和した。全量を分液ロートに移して分液後、水層を廃棄し、１０％塩化ナトリウム水溶液で２回洗浄した。減圧濃縮して２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルブロミド（Ｇａ１Ｂｒ）のシロップを得た。　
　2)　化合物Ｇ１２（６０．０ｇ、６８．６ｍｍｏｌ）、テトラヘキシルアンモニウムブロミド（８９．４ｇ、２０６ｍｍｏｌ）、モレキュラーシーブス４Ａ　（６０ｇ）のトルエン溶液（４２０ｍｌ）に、ＤＭＦ（１４０ｍｌ）次いで、Ｇａ１Ｂｒ（約１３７ｍｍｏｌ）のトルエン溶液（２５０ｍｌ）を加え、室温で７２時間攪拌した。反応液にメタノール（１２ｍｌ）を加え、２時間攪拌した。セライト濾過後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣にアセトニトリルを加え、２時間攪拌し、沈殿を得た。得られた沈殿を減圧乾燥し、乾燥粉体を得た。これをヘキサン：酢酸エチル（８：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。収量７０．９ｇ（７４％）。　
　［α］24Ｄ＋１８．８°（ｃ０．９，ＣＨＣｌ３）；ｍｐ７４−７５℃；ＦＤＭＳ　ｍ／ｚ　１３９９（Ｍ＋１）+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２１−７．３７（３０Ｈ，ｍ），６．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），４．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），４．７２−４．８０（４Ｈ，ｍ），４．３５−４．６５（７Ｈ，ｍ），４．１２−４．１８（１Ｈ，ｍ），３．９９−４．０５（２Ｈ，ｍ），３．８４−３．９３（４Ｈ，ｍ），３．７３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，１１．０Ｈｚ），３．４７−３．５１（２Ｈ，ｍ），３．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．１，９．１Ｈｚ），１．８７−１．９９（２Ｈ，ｍ），１．１８−１．７０（７２Ｈ，ｍ），０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ）。
【００６２】
（13）化合物ＫＲＮ７０００の合成
　化合物Ｇ１３（６０．０ｇ、４２．９ｍｍｏｌ）をエタノール（９６０ｍｌ）に加えて懸濁させ、これに２０％水酸化パラジウム（６．０ｇ）のエタノール懸濁液を加えた。更に水素源となる４−メチルシクロヘキセン（１２０ｍｌ、９３．５ｍｍｏｌ）を加え、４時間加熱還流した後、濾過し、触媒を除いた。残渣は加温したエタノールで洗浄した。濾液を室温放置することによって得た白色沈殿を濾過、減圧乾燥した。得られた粉体をエタノール：水（９２：８、３．５Ｌ）に懸濁し、攪拌しながら加熱溶解後、室温放置することによって再度沈殿化した。沈殿液を濾過し、濾取したケーキを減圧乾燥し、白色粉末を得た。収量３５．０ｇ（９５％）。　
　［α］23Ｄ＋４３．６°（ｃ１．０，pyridine）；ｍｐ１８９．５−１９０．５℃；negativeＦＡＢＭＳ　ｍ／ｚ　８５７（Ｍ−Ｈ）- ；ＩＲ（ｃｍ-1，ＫＢｒ）３３００，２９３０，２８５０，１６４０，１５４０，１４７０，１０７０；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，Ｃ５Ｄ５Ｎ）δ８．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），５．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．２７（１Ｈ，ｍ），４．６３−４．７０（２Ｈ，ｍ），４．５６（１Ｈ，ｍ），４．５２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），４．３７−４．４７（４Ｈ，ｍ），４．３３（２Ｈ，ｍ），２．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），２．２５−２．３４（１Ｈ，ｍ），１．８７−１．９７（２Ｈ，ｍ），１．７８−１．８５（２Ｈ，ｍ），１．６２−１．７２（１Ｈ，ｍ），１．２６−１．４５（６６Ｈ，ｍ），０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），13Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，Ｃ５Ｄ５Ｎ）δ１７３．２　（ｓ），１０１．５（ｄ），７６．７（ｄ），７３．０（ｄ），７２．５（ｄ），７１．６（ｄ），７１．０（ｄ），７０．３（ｄ），６８．７（ｔ），６２．７（ｔ），５１．４（ｄ），３６．８（ｔ），３４．４（ｔ），３２．１（ｔ），３０．４（ｔ），３０．２（ｔ），３０．０３（ｔ），３０．００（ｔ），２９．９３（ｔ），２９．８７（ｔ），２９．８１（ｔ），２９．７６（ｔ），２９．６（ｔ），２６．５（ｔ），２６．４（ｔ），２２．９（ｔ），１４．３（ｑ）。
【００６３】
　実施例２　Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→２）−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［（Ｒ）−２−ヒドロキシテトラコサノイル］−１，３，４−オクタデカントリオール　（Ｓ１１４０Ｂ−９）の単離および精製
　沖縄県久米島近海の海底水深１５〜２５ｍで採取された海綿を、凍結乾燥した粉末４４７．１ｇをクロロホルムとメタノールの混液で抽出し、抽出液を減圧下濃縮して５１．２８ｇのエキスを得た。これを酢酸エチルと水で分配後、上層と中間層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮してそれぞれ１８．３７ｇと９．４４ｇのフラクションを得た。上層より得たフラクションを１０％水性メノタールとｎ−ヘキサンとで分配したアルコール層と、中間層より得たフラクションを合わせて濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに繰り返して順相ＴＬＣ上単一の活性成分を１６９．９ｍｇ得た。さらにＯＤＳ−ＡＭカラム（ＹＭＣ製、250mm×20mm径、メタノール、９．０ml/min)を用いた逆相ＨＰＬＣで精製し(保持時間：３０．３分)、純粋な表題化合物（S1140B-9）を１０．２ｍｇ得た。　なお、表題化合物は、F.Cafieri et al.,Liebigs Ann. Chem. 1995,1477-1481を参照し、単離、精製することもできる。
【００６４】
　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ＦＡＢＭＳ　ｍ／ｚ　１００７［（Ｍ−Ｈ）- ］；ＩＲ；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，Ｃ５Ｄ５Ｎ，２４℃）δ（ｐｐｍ）８．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，ＮＨ），５．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，Ｈ１´´），５．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，Ｈ１´´´ ），５．１３（１Ｈ，ｍ，Ｈ２），４．７５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，１０．４Ｈｚ，Ｈ２´´），４．６２（２Ｈ，ｍ），４．５４（４Ｈ，ｍ），４．２５−４．４７（１０Ｈ，ｍ），２．１７（２Ｈ，ｍ），１．９９（１Ｈ，ｍ），１．８７（２Ｈ，ｍ），１．７５（１Ｈ，ｍ），１．６５（２Ｈ，ｍ），１．１２−１．４９（６０Ｈ，ｍ），０．８５（６Ｈ，ｍ，ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｍｅｔｈｙｌ）；１３Ｃ　ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，Ｃ５Ｄ５Ｎ，４５℃）δ（ｐｐｍ）１７５．５（ｓ，Ｃ１′），９９．５（ｄ，Ｃ１´´´ ），９８．６（ｄ，Ｃ１´´），７６．７（ｄ，Ｃ２´´），７６．０（ｄ，Ｃ３），７２．８（ｄ，Ｃ４），７２．６（ｄ，Ｃ５´´），７２．６　（ｄ，Ｃ４´´），７２．５（ｄ，Ｃ２），７１．３（ｄ，Ｃ３´´´ ），７１．０（ｄ），７０．８（ｄ），７０．５（ｄ，Ｃ２´´´ ），６９．７（ｄ，Ｃ３´´），６８．６（ｔ，Ｃ１），６２．７（ｔ），６２．５（ｔ），５１．２（ｔ，Ｃ２），３９．４（ｔ），３５．６（ｔ），３３．７（ｔ），３２．２（ｔ），３０．５（ｔ），３０．３（ｔ），３０．１（ｔ），３０．０（ｔ），２９．７（ｔ），２９．６（ｔ），２６．７（ｔ），２６．０（ｔ），２３．０（ｔ），２２．９（ｔ），１４．３（ｑ，ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｍｅｔｈｙｌ）
【００６５】
　実施例３
　下記に記載の化合物は、その右側の文献に記載の方法に従って合成した。　
　化合物名　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　文献名　　　
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル　　　　　ＷＯ９３／５０５５
オキシ）−２−テトラデカノイルアミノ−３−オクタ
デカノール（ＡＧＬ−５１７）
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（α−Ｄ−グルコピラノシルオ　　　　　ＷＯ９４／９０２０
キシ）−２−テトラデカノイルアミノ−３−オクタデ
カノール（ＡＧＬ−５６３）
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（６′−デオキシ−α−Ｄ−ガ　　　　　ＷＯ９４／９０２０
ラクトピラノシルオキシ）−２−テトラデカノイルア
ミノ−３−オクタデカノール（ＡＧＬ−５７１）
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（β−Ｌ−アラビノピラノシル　　　　　ＷＯ９４／９０２０
オキシ）−２−テトラデカノイルアミノ−３−オクタ
デカノール（ＡＧＬ−５７７）
Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｏ−　　　　ＷＯ９４／２４１４２
α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，
３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−ヘキサコサノイル−
１，３，４−オクタデカントリオール（ＡＧＬ−５８６）
Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｏ−　　　　ＷＯ９４／２４１４２
α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，
３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−ヘキサコサノイル−　
１，３，４−オクタデカントリオール（ＡＧＬ−５８４）
Ｏ−α−Ｄ−ガラクトフラノシル−（１→３）−Ｏ−　　　　ＷＯ９４／２４１４２
α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，
３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［（Ｒ）−２−ヒド
ロキシテトラコサノイル］−１，３，４−オクタデカ
ントリオール（７１９−７）
Ｏ−（Ｎ−アセチル−２−アミノ−２−デオキシ−α　　　　ＷＯ９４／２４１４２
−Ｄ−カラクトピラノシル−（１→３）−Ｏ−［α−
Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−Ｏ−α−Ｄ−
ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，３Ｓ，４
Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［（Ｒ）−２−ヒドロキシテ
トラコサノイル］−１，３，４−オクタデカントリオ
ール（ＳＴＬ−８）
【００６６】
　式（Ｉ）の化合物と上記実施例に記載の化合物との対応は、下記表１に示されるとおりである。
【表１】
2004131481.tif 000011
【００６７】
　生物学的試験
　薬理試験例１：ＫＲＮ７０００のＮＫＴ細胞の腫瘍細胞障害活性増強作用
　本発明の配糖体化合物の代表として、実施例１の化合物（ＫＲＮ７０００）を用いて以下の実験を行った。
【００６８】
　ＲＡＧ−１ＫＯ／Ｖα１４ｔｇ／Ｖβ８．２ｔｇマウス（このマウスのリンパ球画分にはＢ細胞、Ｔ細胞およびＮＫ細胞が存在せず、ＮＫＴ細胞が多く存在する）にビヒクル（0.025 ％　ポリソルベート20含有生理食塩水）あるいはＫＲＮ７０００　１００μｇ／ｋｇを静脈内投与し、２４時間後にそれぞれのマウスから脾臓を摘出し、定法により脾臓細胞を調製した。ＲＡＧ−１ＫＯ／Ｖα１４ｔｇ／Ｖβ８．２ｔｇマウスは、ＲＡＧ−１遺伝子を欠損させ、Ｖα１４およびＶβ８．２遺伝子を強制発現させることにより作製した（Kawano T. et al., Science, 278, 1626-1629 (1997)）。このマウスは千葉大学医学部、谷口克らより入手可能である。これらの脾臓細胞のマウスリンパ腫ＹＡＣ−１細胞に対する細胞障害活性を４時間 -51Cr-release 法（Kobayashi, E. et al., Oncology Res., 7, 529 (1995)）により検討した。結果を図１に示す。
【００６９】
　図１に示すように、ＫＲＮ７０００投与マウスから調製した脾臓細胞は、ビヒクル投与マウスから調製した脾臓細胞に比べて、有意に高いＹＡＣ−１細胞に対する細胞障害活性を示した。
【００７０】
　ＲＡＧ−１ＫＯ／Ｖα１４ｔｇ／Ｖβ８．２ｔｇマウスの脾臓のリンパ球画分にはＢ細胞、Ｔ細胞およびＮＫ細胞が存在せず、ＮＫＴ細胞が多く存在することを考え合わせると、この結果は、ＫＲＮ７０００が、脾臓のＮＫＴ細胞の癌細胞に対する細胞障害活性を増強させる作用を有することを示す。
【００７１】
　以上の結果より、ＫＲＮ７０００はＮＫＴ細胞の腫瘍に対する細胞障害活性増強作用を有することが判明した。
【００７２】
　薬理試験例２：ＫＲＮ７０００の脾臓のＮＫＴ細胞増加作用
　ビヒクル（０．５％　ポリソルベート20含有生理食塩水）あるいは１、１０、および１００ｎｇ／ｋｇのＫＲＮ７０００をＣ５７ＢＬ／６マウス（日本ＳＬＣ（株））に静脈内投与を行い、その２４時間後にそれぞれのマウスの脾臓を摘出し、定法により脾臓細胞を調製した。この脾臓細胞をプラスチックデッシュで３０分間培養することにより、浮遊細胞を調製した。さらに、この浮遊細胞中のＢ細胞を除去することによりリンパ球画分を調製した。これらのリンパ球画分中のＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞およびＶα１４＋ＮＫＴ細胞の解析は、ＦＩＴＣ標識抗ＴＣＲαβモノクローナル抗体（ファーミンジェン（Pharmingen）社）、Cychrome標識抗ＮＫ１．１モノクローナル抗体（ファーミンジェン社）、およびＰＥ標識抗Ｖα１４モノクローナル抗体を用いた３−color ＦＡＣＳ解析により行った（図２）。抗Ｖα１４モノクローナル抗体は、抗Ｖα１４モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ（ＣＭＳ−１：千葉大学医学部、谷口克らより入手可能）をヌードマウスに移植し、腹水を回収し精製することによって得た。図２ＡおよびＢ中、リンパ球画分中のＮＫ１．１細胞、ＴＣＲαβ細胞、およびＶα１４細胞の量を、これらの細胞に対する標識化抗体の蛍光強度として表した。
【００７３】
　図２Ａに示すように、ＫＲＮ７０００を１００ｎｇ／ｋｇ投与すると、ビヒクル投与に比べ、脾臓リンパ球画分中のＮＫ１．１＋ＴＣＲαβ＋細胞の割合の顕著な増加が観察された。
【００７４】
　また、図２Ｂに示すように、ＮＫ１．１＋ＴＣＲαβ＋細胞中のＶα１４＋細胞の割合を検討したところ、上記の用量のＫＲＮ７０００を投与した場合には、ビヒクル投与に比べ、ＮＫ１．１＋ＴＣＲαβ＋細胞中のＶα１４＋細胞の割合が明らかに増加することが判明した。
【００７５】
　更に、図２Ｃに示すように、ＫＲＮ７０００を１０および１００ｎｇ／ｋｇ投与することにより、脾臓リンパ球画分中のＮＫ細胞数はビヒクル投与マウスのそれと同じであったが、脾臓リンパ球画分の細胞数および脾臓リンパ球画分中のＴ細胞数は、ビヒクル投与マウスのそれらの約２倍に増加した。さらに、脾臓リンパ球画分中のＶα１４−ＮＫＴ細胞数およびＶα１４＋ＮＫＴ細胞数がビヒクル投与マウスのそれらのそれぞれ３倍以上（データ省略）および４倍以上に増加した。
【００７６】
　更にまた、肝臓中のＴ細胞、ＮＫ細胞、Ｖα１４−ＮＫＴ細胞およびＶα１４＋ＮＫＴ細胞の解析も行ったところ、脾臓の場合と同様にＶα１４−ＮＫＴ細胞数およびＶα１４＋ＮＫＴ細胞数が顕著に増加することも判明した（データ省略）。
【００７７】
　以上の結果から、ＫＲＮ７０００は、生体中のＮＫＴ細胞数、特にＶα１４＋ＮＫＴ細胞数、を増加させる作用を有することが判明した。
【００７８】
　薬理試験例３：ＫＲＮ７０００のMRL lpr/lpr マウスのリンパ腫脹抑制作用
　メスのMRL lpr/lpr マウス (Sakamoto, A. Clin. Immunol., 28, 1558(1996))を1 群10匹として以下の実験を行った。6 週齢で購入した21匹のMRL マウスの観察を行っていたところ、10週齢に達した時に、1 匹のマウスに腋下リンパ節の腫脹が認められた。そこで、他の20匹のマウスを無作為に2 群に分けた。そして、マウスが11週齢に達した時点より、上記の2 群に対してビヒクル（ 0.025% ポリソルベート20含有生理食塩水) あるいはＫＲＮ７０００ (100 μｇ/kg)の週2 回(火曜日と金曜日) の腹腔内投与を開始した。1 週間に2 度、腋下および鼠径部 リンパ節の触診を行うことにより、リンパ腫脹の進展を経時的に観察した。各リンパ節をその大きさにより、- (0) 、+ (1) 、++ (2) 、+++ (3) の4 段階にス コアー化し、各マウスの左右の腋下あるいは鼠径部リンパ節のスコアーの合計をリンパ腫脹 indexとして、図３に示した。
【００７９】
　図３Ａに示すように、ＫＲＮ７０００投与により、MRL マウスの加齢に伴う腋下リンパ腫脹が明らかに抑制された。また、図３Ｂに示すように、MRL マウスの加齢に伴う鼠径部リンパ腫脹も明らかに抑制された。すなわち、ＫＲＮ７０００は、MRL マウスのリンパ腫脹を抑制する作用を有することが明らかとなった。
【００８０】
　MRL マウスはヒト全身性エリテマトーデスのモデルマウスである(Sakamoto, A. Clin. Immunol., 28, 1558(1996)）。従って、以上の結果は、ＫＲＮ７０００ が全身性エリテマトーデスの治療に有効であることを示す。
【００８１】
　薬理試験例４：ＫＲＮ７０００のＭＲＬ　ｌｐｒ／ｌｐｒマウスの生存率に対する効果
　メスのＭＲＬ　ｌｐｒ／ｌｐｒマウスを１群10匹として以下の実験を行った。４週齢で購入したＭＬＲマウスを無行為に２群（10匹／群）に分けた。５週齢に達した時点より、ビヒクル（0.025 ％ポリソルベート20含有生理食塩水）あるいはＫＲＮ７０００（100 μg ／kg）の週２回の腹腔内投与を開始した。各マウスの生死の観察を毎日行った。
【００８２】
　図４に示すように、ビヒクル投与群は、投与開始後250 日以内に全例死亡したのに対し、ＫＲＮ７０００は、投与開始350 日後でも、３匹のマウスが生存した。
【００８３】
　薬理試験例５：ＫＲＮ７０００の４％ＤＳＳ誘発マウス大腸炎抑制作用
　CDF1マウス (6 週齢、メス) （日本ＳＬＣ（株））を１群10匹として以下の実験を行った。DSS ( dextran sodium sulfate)を飲料水に４％( ｗ／ｖ) の割合 で溶解した４％ＤＳＳ溶液を飲料水として与え始めた日を第０日とする。ＫＲＮ７０００　１００μｇ／ｋｇを第１、５、９日目に腹腔内投与する群、IL-12 １μｇ/ マウスを第１、３、５、７、９日目に腹腔内投与する群、および無処理群（コントロール）の３群に分けて、各マウスの体重測定および生死の観察を毎日行った。各群の体重の変動を図５Ａ、生存期間を図５Ｂに示した。
【００８４】
　図５Ａに示すように、IL-12 投与群では、無処理群に比べて、非常に早期から体重の減少が観察された。しかし、ＫＲＮ７０００を投与した群では、無処理群に比べ、体重減少の始まる時期が明らかに遅延した。
【００８５】
　また、図５Ｂに示すように、IL-12 投与群では、マウスの生存期間は無処理群に比べて有意に短かった。しかし、ＫＲＮ７０００投与群では、無処理群に比べて、有意な生存期間延長が認められた。
【００８６】
　４％ＤＳＳ誘発マウス大腸炎はヒト潰瘍性大腸炎のモデルである（Elson, C. et al., Gastroenterology, 109, 1344(1995)）。従って、以上の結果は、ＫＲ Ｎ７０００が潰瘍性大腸炎の治療に有効であることを示す。
【００８７】
　薬理試験例６：α−グリコシルセラミド構造を有する化合物のＮＫＴ細胞増殖促進作用
　薬理試験例１に示したＲＡＧ−１ＫＯ／Ｖα１４ｔｇ／Ｖβ８．２ｔｇマウスの脾臓細胞を用いて、α−グリコシルセラミド構造を有する化合物のＮＫＴ細胞増殖促進作用を検討した。
【００８８】
　ＲＡＧ−１ＫＯ／Ｖα１４ｔｇ／Ｖβ８．２ｔｇマウスの脾臓細胞より常法に従って、脾臓細胞を調製した。この脾臓細胞を10% ＦＣＳ添加RPMI１６４０培地に２×１０６個／ｍｌに浮遊させ、９６穴丸底プレートに 100μｌずつ添加した。図１２に示した10種類のα−グリコシルセラミド構造を有する化合物を最終濃度が１、10、100ng/mlとなるように上記プレートに添加し、2 日間培養した。［３Ｈ］チミジン(0.5μCi/well ）を添加し、16時間後に細胞を収集し、細胞内に取り込まれた［３Ｈ］チミジンの量を液体シンチレーションカウンターで測定した。結果を表２に示す。
【表２】
2004131481.tif 000012
　表２に示すように上記のすべての化合物は、100ng/mlの濃度ではビヒクル添加群に比べて有意なＮＫＴ細胞増殖促進作用を有することが判明した。
【００８９】
　以上の結果はα−Ｄ−グリコシルセラミド構造を有する配糖体、および糖部分に他の糖が結合したα−Ｄ−グリコシルセラミド構造を有する配糖体が、自己免疫疾患の治療に有効であることを示す。
【００９０】
　薬理試験７：ＫＲＮ７０００による実験的自己免疫性脳脊髄炎発症の抑制
　Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ 6 週齢、メス）を１群１０匹として以下の実験を行った。２００μｇのミエリンオリゴ希突起膠細胞糖タンパク質（ Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein ）の部分ペプチド（ＭＯＧ３３−５５）と５０ ０μｇの結核菌（ Mycobacterium tuberculosis ）Ｈ３７Ｒａを不完全フロイントアジュバンドに加えてエマルジョンを作製し、第０日目と７日目に各マウスの皮下に注射して免疫を行った。さらに、第０日目と第２日目に５００ｎｇの百日咳毒（pertussis roxin）をマウスの腹腔内に投与し、マウスの実験的自己免疫 性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の発症を誘導した。ＫＲＮ７０００　２０μｇ／ｋｇを第１、５、８、１２、１５日目に腹腔内投与する群およびビヒクル（０．５％、ポリソルベート２０）を投与する群の２群に分けて、各マウスのＥＡＥの発症の程度を毎日観察した。各群の各マウスのＥＡＥの発症の程度を図６に示した。
【００９１】
　図６に示すように、ビヒクル投与群（図６Ａ）では、最初のＭＯＧペプチドによる免疫から１５日以内に、全例のマウスがＥＡＥを発症し、その内の８０％のマウスが死亡した。しかし、ＫＲＮ７０００を投与した群（図６Ｂ）では、１０匹中４匹のマウスＥＡＥが発症し、その内の２匹が死亡したのみであった。
【００９２】
　以上の結果により、ＫＲＮ７０００は、マウスにおけるＥＡＥの発症を抑制することが判明した。このＥＡＥは、ヒト多発性硬化症（ＭＳ）のモデルである　（Autoimmune Disease Models, edited by Cohen I. R. & Miller A. Acadenic Press, Inc. (1994), Chapter 1,pp1）。従って、以上の結果は、ＫＲＮ７００ ０が多発性硬化症の治療に有効であることを示す。
【００９３】
　薬理試験８：ＫＲＮ７０００のマウス糖尿病の発症抑制作用
　ＮＯＤ／ＳｈｉＪｉｃ（ＮＯＤ）マウス（６週齢、メス）（日本クレア（株））を１群１０匹として以下の実験を行った。ＮＯＤマウスは、加齢にともなって糖尿病を発症する。ＫＲＮ７０００　１００μｇ／ｋｇを７週齢より週２回腹腔内投与する群および無処理群の２群に分けて、各マウスの糖尿病の発症の有無を毎週調べた。血糖値はＧｌｕｃｏｍｅｔｅｒ（マイルス三共）を用いて測定し、２００ｍｇ／ｄＬ以上の値を連続して２回示した個体を糖尿病とした。各群の糖尿病発症マウスの割合を図７に示した。
【００９４】
　図７に示すように、無処理群では、３５週齢に達した時点で、８０％のマウスが糖尿病を発症したが、ＫＲＮ７０００を投与した群では、３５週齢に達した時点においても、一匹のマウスも糖尿病を発症しなかった。
【００９５】
　以上の結果から、ＫＲＮ７０００は、ＮＯＤマウスにおける糖尿病の自然発症を抑制することが判明した。このＮＯＤマウスは、ヒトＩ型糖尿病のモデルである（Autoimmune Disease Models, edited by Cohen I. R. & Miller A. Acadenic Press, Inc. (1994), Chapter 9, pp149）。従って、以上の結果はＫＲＮ７０００がＩ型糖尿病の治療に有効であることを示す。
【００９６】
　薬理試験９：ＫＲＮ７０００のＶα２４＋ＮＫＴ細胞増殖促進作用
　健丈人の抹梢血単核球細胞を１０％ＦＣＳ添加ＡＩＭ培地を用い、ＧＭ−ＣＳＦ（４００Ｕ／ｍｌ）、ＩＬ−４（２００Ｕ／ｍｌ）およびＫＲＮ７０００（１００ｎｇ／ｍｌ）を添加し、４日間培養することにより、抗原提示細胞を調製した。
【００９７】
　これらの抗原提示細胞を刺激細胞とし、同じ人の抹梢血単核球細胞を応答細胞として、自己混合リンパ球反応（autologous mixed leukocyte reaction:MLR ）を行った。１０日間培養した後、ＩＬ−２（５Ｕ／ｍｌ）を添加し、さらに、４日間培養を行い、細胞の回収を行った。さらに、この回収した細胞中のＣＤ４、ＣＤ８二重ネガティブ細胞を回収し、その表現型の解析を行った。表現型の解析は、種々の表現型を示す細胞に対する標識化抗体の蛍光強度として表した。その結果を、図８に示す。
【００９８】
　図８に示すように、これらの細胞群には、ＣＤ４−ＣＤ８−ＣＤ３＋Ｖα２４＋Ｖβ１１＋ＮＫＲＰ１Ａ＋の表現型を有する細胞（Ｖα２４＋ＮＫＴ細胞のサブセット）が大多数存在することが判明した。
【００９９】
　上記の細胞群をＩＬ−２（５Ｕ／ｍｌ）を用いて培養し、Ｖα２４＋ＮＫＴ細胞を増殖させて、以下の自己混合リンパ球反応において応答細胞として用いた。同じ抹梢血単核球細胞をＧＭ−ＣＳＦ＋ＩＬ４およびＫＲＮ７０００　１００ｎｇ／ｍｌ、ＡＧＬ−５８３（β−ガラクトシルセラミド、β−ＧａｌＣｅｒ）あるいは０．１％ＤＭＳＯ（ビヒクル）を添加し、４日間培養することにより、抗原提示細胞を調製した。これらの抗原提示細胞を刺激細胞として自己混合リンパ球反応を行った。２日間倍養後、［３Ｈ］ミチジン（０．５μＣｉ／ｍｌ）を添加し、８時間後に細胞を収集し、細胞内に取り込まれた［３Ｈ］チミジンの量を液体シンチレーションカウンターで測定した。結果を図９に示す。
【０１００】
　図９に示すように、ビヒクルおよびβ−ガラクトシルセラミドで処理した抗原提示細胞はＶα２４＋ＮＫＴ細胞の増殖に何ら影響を与えなかったが、ＫＲＮ７０００で処理した抗原提示細胞の場合には、顕著な、抗原提示細胞の数依存的なＶα２４＋ＮＫＴ細胞の増殖促進作用が観察された。さらに、抗ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ抗体を用いて、上記のＫＲＮ７０００で処理した抗原提示細胞によるＶα２４＋ＮＫＴ細胞の増殖促進作用に対する阻害実験を行ったところ、抗ＣＤ１ｄ抗体によってのみ、Ｖα２４＋ＮＫＴ細胞の増殖促進作用が阻害された（データ省略）。
【０１０１】
　以上の結果から、ＫＲＮ７０００は、マウスのＶα１４＋ＮＫＴ細胞に相当するヒトのＶα２４＋ＮＫＴ細胞の増殖を促進させる効果を有することが判明した。Ｉ型糖尿病の進展した患者ではＶα２４＋ＮＫＴ細胞の数が極端に少ないという最近の報告（Wilson et al.,Nature,391,177(1998)) 、および薬理試験３、７および８の結果を考えあわせると、上記の結果は、ＫＲＮ７０００はヒトのＶα２４＋ＮＫＴ細胞が関係している全身性エリテマトーデス、全身性強皮症、多発性硬化症あるいはＩ型糖尿病等の自己免疫疾患の予防や治療に有効であることを強く示している。
【０１０２】
　薬理試験例１０：ＫＲＮ７０００の流産促進作用
　Ｃ５７ＢＬ／６マウス（日本ＳＬＣ（株））を用いて実験を行なった。膣栓を確認した日を第０日目とする。妊娠マウスを１群６匹として、ＫＲＮ７０００　１５０μｇ／ｋｇを第７，８，９日目に静脈内投与する群とＰＢＳ（phasphate buffer saline）をそれらの日に静脈内投与する群に分けた。第１２日目に子宮 を剖出し、胎児の状態を観察した。
【０１０３】
　ＰＢＳ投与群では、合計５３の胎児（embryo）のうち、死亡吸収されている胎児は３匹で、５．６％の流産率であり、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの自然流産率（約５％とよく一致した。
【０１０４】
　ＫＲＮ７０００投与群では、合計３６の胎児のうち、死亡吸収されている胎児は、１２匹で、流産率は３３％と、無処理群に比べて明らかに高い値を示した。
【０１０５】
　一方、ＫＲＮ７０００を同用量、同スケジュールで、Ｖα１４＋ＮＫＴ欠損　（Ｊα２８１ＫＯ）マウス（Kawano T.et al., Science, 278, 1626-1629(1997)）に投与したところ、流産率は、５．３％であり、ＰＢＳ投与群の流産率（５．０％）と同等であった。Ｖα１４＋ＮＫＴ欠損マウスは千葉大医学部、谷口克らより入手可能である。
【０１０６】
　ＫＲＮ７０００がＮＫＴ細胞を活性化する作用を有することを考え合わせると、ＮＫＴ細胞の活性化と流産促進作用は、良好な相関関係を示すことが示された。
【０１０７】
　また、ＩＬ−１２もＮＫＴ細胞を活性化することが知られているが、ＩＬ−１２を同用量、同スケジュールでマウス（（ＣＢＡ×ＤＢＡ／２）Ｆ１）に投与すると、３４％の割合で流産が観察された。この結果は上記の相関関係を強く支持する。
【０１０８】
　以上の結果から、ＫＲＮ７０００およびＩＬ−１２は、流産促進作用を有することが判明した。
【０１０９】
　薬理試験例１１：単回投与による急性毒性試験
　マウスに対して実施例１の化合物を静脈内投与した。その結果、ＬＤ50値は10ｍｇ／ｋｇ以上であった。また、10ｍｇ／ｋｇで何等特別の症状を示さず低毒性であった。
【図面の簡単な説明】
【０１１０】
【図１】ＫＲＮ７０００のＮＫＴ細胞の腫瘍細胞障害活性増強作用を示した図である。Ｅ／Ｔ比は、エフェクター細胞数（脾臓細胞数）／ターゲット細胞数（ＹＡＣ−１細胞数）の比を示す。
【図２】ＫＲＮ７０００の脾臓におけるＮＫＴ細胞増加作用を示す。　Ａ：脾臓リンパ球画分のＦＡＣＳ解析の結果を示す。横軸はＦＩＴＣ標識抗ＴＣＲαβモノクローナル抗体の蛍光強度を、縦軸はCychrome標識抗ＮＫ１．１モノクローナル抗体の蛍光強度を示す。　Ｂ：脾臓リンパ球画分のＦＡＣＳ解析の結果を示す。縦軸は、細胞数（Relative cell count ）、横軸はＰＥ標識Ｖα１４モノクローナル抗体の蛍光強度を示す。白い部分は、無標識Ｖα１４モノクローナル抗体で前処理した後、ＰＥ標識Ｖα１４モノクローナル抗体で染色（コールドブロッキング）を行った際の蛍光強度を示す。影をつけた部分はビヒクルまたはＫＲＮ７０００投与後のＶα１４＋細胞に対するＰＥ標識Ｖα１４モノクローナル抗体の蛍光強度の分布を示す。　Ｃ：脾臓リンパ球画分の細胞数、および脾臓リンパ球画分中のＴ細胞数、ＮＫ細胞数、およびＶα１４＋ＮＫＴ細胞数のＫＲＮ７０００投与による変動を示した。●：Ｖα１４＋ＮＫＴ細胞、○：全細胞、◇：Ｔ細胞、□：ＮＫ細胞。
【図３】ＫＲＮ７０００を投与した場合のＭＲＬ　ｌｐｒ／ｌｐｒマウスのリンパ腫脹の進展を経時的に観察した結果を示す。各リンパ節をその大きさにより、- (0) 、+ (1) 、++ (2)、+++ (3)の4 段階にスコアー化し、各マウスの左右の 腋下（Ａ）あるいは鼠径部リンパ節（Ｂ）のスコアーの合計をリンパ腫脹 indexとして示した。
【図４】ＫＲＮ７０００を投与した場合の、ＭＲＬ　ｌｐｒ／ｌｐｒマウスの生存率を示す。
【図５】ＫＲＮ７０００の４％ＤＳＳ誘発マウス大腸炎抑制作用を示す。試験期間中、４％ＤＳＳは飲料水として継続して与えた。　Ａ：マウス各群の体重の変動を示した。Ｂ：マウス各群の生存率を示した。
【図６】Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいてミエリンオリゴ希突起膠細胞タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド等により誘導された実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）へのＫＲＮ７０００の効果を示す。Ａ：ビヒクル投与群、Ｂ：ＫＲＮ７０００　（２０μｇ／ｋｇ）投与群。ＥＡＥの症状を以下のようにスコアー化した；臨床スコア、０：正常、１：尾の麻痺、２：正向反射の不全、３：後肢麻痺、４：前後肢麻痺、５：死亡。
【図７】ＮＯＤマウスにおける自然発症糖尿病へのＫＲＮ７０００の効果を示す。
【図８】ＫＲＮ７０００によるＶα２４＋ＮＫＴ細胞増殖促進作用を示す。末梢血単核細胞を応答細胞として自己混合リンパ球反応を行った後、ＣＤ４−ＣＤ８−細胞を回収し、標識化抗体により表現型を特定した。点線はコントロール抗体（マウスＩｇＧまたはラットＩｇＭ）で染色した際の蛍光強度の分布を、実線は抗ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｖα２４、Ｖβ１１抗体（以上、Immunotech社）、抗ＮＫＲＰ１Ａ抗体（Becton Dickinson社）で染色した際の蛍光強度の分布を示す。
【図９】ＫＲＮ７０００によるＶα２４＋ＮＫＴ細胞増殖促進作用を示す。抗原提示細胞をＫＲＮ７０００で処理した場合、抗原提示細胞の数に依存してＶα２４＋ＮＫＴ細胞の増殖が認められた。
【図１０】本発明で使用するα−グリコシルセラミド化合物の代表例（ＫＲＮ７０００）の合成反応経路の概略を示す。反応経路中、ｐｙｒはピリジン、ＢｒＰＰｈ３（ＣＨ２）12ＣＨ３はトリデカントリフェニルホスホニウムブロミド、ｎ−ＢｕＬｉはｎ−ブチルリチウム、ＭｓＣｌは塩化メタンスルホニル、ＢｎＢｒは臭化ベンジル、１−ＰｒＯＨはプロピルアルコールを表す。
【図１１】図１０に続く合成反応経路の概略を示す。反応経路中、ＷＳＣ−ＨＣｌは１−エチル−３−（３′−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド・塩酸塩、ＭＳ４Ａはモレキュラーシーブス４Ａ、Ｈｅｘ４ＮＢｒはテトラヘキシルアンモニウムブロミドである。
【図１２】実施例１〜３の化合物の化学式を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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