(57)【要約】【課題】生体における腸管組織に先天性免疫能を増強させることによる過敏性腸症候群、特にクローン病ならびに潰瘍性大腸炎の治療剤を提供すること。【解決手段】イソロイシンを有効成分として含有する過敏性腸症候群治療薬であり、かかる過敏性腸症候群は、クローン病ならびに潰瘍性大腸炎であり、さらに乳酸桿菌ヨーグルトと併用される治療剤である。また、過敏性腸症候群を治療するために、イソロイシンを投与することにより腸管組織上皮におけるパネート細胞から抗菌ペプチドを分泌させることにより腸管組織の異常免疫を抑制させ、先天性免疫能を増強させる方法でもある。【選択図】　　　　　図９
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
イソロイシンを有効成分とすることを特徴とする過敏性腸症候群（ＩＢＤ：　Ｉｒｒｉｔａｂｌｅ　Ｂｏｗｅｌ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）治療薬。
【請求項２】
乳酸桿菌ヨーグルトと併用するイソロイシンを有効成分とする過敏性腸症候群治療剤。
【請求項３】
過敏性腸症候群が、クローン病である請求項１または２に記載の治療剤。
【請求項４】
過敏性腸症候群が潰瘍性大腸炎である請求項１または２に記載の治療剤。
【請求項５】
過敏性腸症候群を治療するために、イソロイシンを投与して腸管組織上皮におけるパネート細胞から抗菌ペプチドを分泌させ、腸管組織の異常免疫を抑制させることにより先天性免疫能を増強させる方法。
【請求項６】
イソロイシンと共に乳酸桿菌ヨーグルトを併用する請求項５に記載の先天性免疫能を増強させる方法。
【請求項７】
過敏性腸症候群が、クローン病である請求項５または６に記載の先天性免疫能を増強させる方法。
【請求項８】
過敏性腸症候群が、潰瘍性大腸炎である請求項５または６に記載の先天性免疫能を増強させる方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、過敏性腸症候群（ＩＢＤ：　Ｉｒｒｉｔａｂｌｅ　Ｂｏｗｅｌ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、特に、クローン病（Ｃｒｏｈｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ）ならびに潰瘍性大腸炎（Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ　Ｃｏｌｉｔｉｓ）の治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
小腸や大腸の消化管組織、あるいは、まれに胃や口腔内組織などの潰瘍から生じる慢性の炎症性の疾患である過敏性腸症候群として、クローン病ならびに潰瘍性大腸炎がある。両者は潰瘍の深度の差異によるものであり、深部の潰瘍形成に基づくクローン病は、小腸から大腸組織に狭窄、瘻孔、穿孔、癒着などの合併症を生じ、下痢ならびに回腸末端から盲腸部分に生じる腹痛が主な症状であり、緩解と再発、再燃を繰り返して治癒し難い疾患である。
【０００３】
一方、結腸から大腸部分全体にわたって特異的に生じる浅い潰瘍形成による炎症は、潰瘍性大腸炎としてクローン病とは区別されているが、クローン病と同様に潰瘍から生じる慢性の炎症性の疾患であり、直腸出血、粘液性陰窩膿瘍、炎症性偽ポリープ、腹痛、下痢を伴う疾患である。
【０００４】
そのなかでもより、クローン病は、その病因が特定できず、治癒しがたい弛緩であることから、厚生労働省より難病の指定を受けている疾患である。これまでクローン病の病因としては、遺伝的素因、細菌やウイルスによる感染、腸管の微小循環因子（化学物質）などが推定されてきていたが、最近の研究では、腸管での免疫異常によるものであるとの考え方が主流を占めるようになってきた。
【０００５】
すなわち、クローン病の患者における腸管組織では、何らかの要因で異常免疫を生じており、本来的には吸収してはいけない細菌、ウイルスなどの有害外来異物を腸管から大量に取り込んでいる現象が認められている。その結果、大量のマクロファージなどの免疫細胞が産生されるが、これらのマクロファージは、ＴＮＦ−α（ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ−α：腫瘍壊死因子）を産生し、産性されたＴＮＦ−αが腸管粘膜のレセプターと結合することにより炎症を生じさせ、かかる炎症症状が持続すると、次第に潰瘍が発生するものと考えられている。
【０００６】
したがって、腸管組織における異常免疫の発生を抑制させることができる物質は、クローン病疾患の治療に有効に対処しうるものと考えられるが、これまでかかる考え方に立脚したクローン病治療薬の検討は、積極的には何らなされていない。これまでのクローン病の治療には、その症状や炎症の程度によりプレドニゾロン、ベタメタゾンなどのステロイド剤；メサラジン、サラジスルファピリジンなどの５−ＡＳＡ製剤；抗生物質あるいは免疫抑制剤、抗炎症剤などを単独、あるいは併用投与することが行われているのが現状である。
【０００７】
ところで、人体の腸管組織の単層上皮は、陰窩（Ｃｒｙｐｔｓ）に存在する幹細胞から継続的に形成されているものであり、腸管粘膜における病変（すなわち、免疫能の低下）は、細菌、ウイルス等の外来有害物の侵入口となるため、先天的な免疫（ｉｎｎａｔｅ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ）反応のメカニズムが生体には備わっている。腸管組織では、その先天性免疫応答によって健全な上皮が維持されて、幹細胞の生存を維持し、炎症による潰瘍の発生を抑制している。
【０００８】
この生体における先天性免疫反応の一つとして、生体由来の抗菌ペプチドの分泌が挙げられている。すなわち、生体には、例えば、細菌あるいはウイルス等の感染などの危険性が生じた場合には、β−デフェンシンなどいくつかのタイプの抗菌ペプチドが上皮細胞において産生され、病原体となり得るものに対する先天性免疫のエフェクターとして作用していることが知られている。
【０００９】
これまでの研究によれば、小腸では、α−デフェンシン類（クリプトジン類）が小腸陰窩（Ｃｒｙｐｔｓ）のパネート細胞（ｐａｎｅｔｈ　ｃｅｌｌ）から分泌される顆粒中に豊富に認められることが報告されている［Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２６７：２３２１６−２３２２５　（１９９２）；　Ｉｎｆｅｃｔ．　Ｉｍｍｕｎ．，　６２：５０４０−５０４７　（１９９４）；　Ｊ．　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ．，　１１８：９２６−９３６　（１９９２）；　Ｉｎｆｅｃｔ．　Ｉｍｍｕｎ．，　６０：３５５６−３５６５　（１９９２）；Ｉｎｆｅｃｔ．　Ｉｍｍｕｎ．，　６５：２３８９−２３９５　（１９９７）］。
【００１０】
このパネート細胞から分泌される顆粒中に存在するα−デフェンシン類の殺菌作用は極め強いものである。例えば、パネート細胞の免疫組織学的な検討によれば、小腸においては、抗菌ペプチドであるα−デフェンシン類はパネート細胞から分泌される顆粒中にのみ存在するものであり、この顆粒は小腸陰窩のパネート細胞の基底部より、陰窩内腔の先端部方向に向かって分泌されていることが判明している。かかる事実からみれば、生体内、特に腸管上皮における顆粒分泌細胞（パネート細胞）は、細菌またはウイルスを感知し、殺菌性ペプチドをその有効濃度で放出することによって粘膜免疫に積極的に応答し、宿主の細菌またはウイルス感染に対する防衛反応における機能的な役割（すなわち、先天性免疫能の増強）を果たしていると考えられる。
【００１１】
したがって、腸管上皮に意図的に生体抗菌ペプチド（殺菌性ペプチド）の分泌を誘発し得る物資を見出し、この物質を生体に投与すれば、生体の先天的免疫機能の増強による各種疾患の治療剤となり得るものといえる。特に、クローン病、潰瘍性大腸炎などの過敏性腸疾患の病因が、腸管組織における異常免疫による先天性免疫能の低下に起因することが言われている最近の現状では、生体の免疫能を増強させる物質は、極めて有効な過敏性腸症候群の治療薬となる。また、かかる物質が生体にとって毒性が無く、安全に投与できるものであれば、臨床的に極めて効果的な、治療剤となるものである。
【００１２】
ところでこのような生体抗菌ペプチドの分泌が、アミノ酸のなかでも分枝鎖を有する必須アミノ酸であるロイシン、イソロイシンまたはバリンを投与することにより促進されることが知られている。
【００１３】
そこで本発明者等はかかる分枝鎖を有する必須アミノ酸による過敏性腸症候に対する治療効果を検討したところ、分枝鎖必須アミノ酸のなかでもイソロイシンが極めて効果的に過敏性腸症候群、すなわち、クローン病ならびに潰瘍性大腸炎の治療に有効なものであることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１４】
さらに本発明者等の検討によれば、イソロイシンと共に乳酸菌製品、なかでも乳酸桿菌ヨーグルトを併用することにより、クローン病の患者を悩ましている水様状態の下痢の回数が著しく軽減し、極めて効果的なクローン病治療薬となることを確認し、本発明を完成させるに至った。
【００１５】
【発明が解決しようとする課題】
したがって本発明は、かかる検討結果に基づき完成されたものであり、生体における腸管組織に先天性免疫能を増強させることによる過敏性腸症候群の治療剤を提供すること、すなわち、特に、クローン病ならびに潰瘍性大腸炎の治療剤を提供することを課題とする。
【００１６】
【課題を解決するための手段】
しかして本発明の基本的態様である請求項１に記載の発明は、イソロイシンを有効成分として含有する過敏性腸症候群治療薬である。
【００１７】
また請求項２に記載の発明は、乳酸桿菌ヨーグルトと併用するイソロイシンを有効成分とする過敏性腸症候群治療剤である。
【００１８】
本発明により提供される治療剤で有効に治療される過敏性腸症候群としては、クローン病ならびに潰瘍性大腸炎が挙げられる。したがって、請求項３に記載の発明は、過敏性腸症候群が、クローン病である請求項１または２に記載の治療剤であり、請求項４に記載の発明は、過敏性腸症候群が潰瘍性大腸炎である請求項１または２に記載の治療剤である。
【００１９】
また、本発明の別の態様としての請求項５に記載の発明は、過敏性腸症候群を治療するために、イソロイシンを投与することにより腸管組織上皮におけるパネート細胞から抗菌ペプチドを分泌させることにより腸管組織の異常免疫を抑制させ、先天性免疫能を増強させる方法である。
【００２０】
この場合にあっても、かかる先天性免疫能は、イソロイシンと共に乳酸菌製品、すなわち、乳酸桿菌ヨーグルトを併用することにより、より効果的に先天性免疫能を増強される。
また、先天性免疫能を増強させることにより治療される過敏性腸症候群としては、クローン病ならびに潰瘍性大腸炎である。
【００２１】
【発明の実施の形態】
本発明は上記したように、腸管組織における免疫異常を改善し、生体における先天的免疫能を発揮する抗菌ペプチドの分泌を誘発させ、先天性免疫（ｉｎｎａｔｅ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ）を増強させることにより過敏性腸症候群であるクローン病、あるいは潰瘍性大腸炎を治療する治療剤である。
【００２２】
本発明が提供する治療剤にあっては、その有効成分であるイソロイシンは、経口的あるいは非経口的に投与することで、過敏性腸症候群であるクローン病、あるいは潰瘍性大腸炎を有効に治療し得る。
【００２３】
その使用量は特に限定されるものではなく、生体に投与することにより、先天性免疫応答を増強させることにより、過敏性腸症候群であるクローン病、あるいは潰瘍性大腸炎を治療するのに十分な量を投与すればよい。例えば、成人に対しては、３〜６ｇ／日程度、好ましくは４ｇ／日程度（２ｇ／２回／日）の量を連日経口的に投与することで、効果的に下痢が軽減され、回腸末端から盲腸部における腹痛の軽減が認められた。
なお、本発明が提供する予防剤の有効成分であるイソロイシンは、必須アミノ酸の一種であり、その安全性は十分確認されていることより、ある程度過剰量を投与しても、何ら悪影響をあたえるものではない。
【００２４】
例えば、経口的に投与する場合には、イソロイシンをそのまま散剤、あるいは顆粒剤として、さらに、適宜他の製剤用担体、例えば、デンプン、乳糖、白糖、結晶セルロース、リン酸水素カルシウム等の賦形剤；アカシア、ヒドロキシプロピルセルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドン等の結合剤；ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク等の滑沢剤；加工デンプン、カルシウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等の崩壊剤、カルボキシビニルポリマー等と共に、製剤学的に汎用されている経口投与製剤である錠剤、顆粒剤、カプセル剤、あるいは散剤等の形態に製剤化することができる。
【００２５】
一方、本発明にあっては、イソロイシンと共に乳酸菌製品を併用することにより、より効果的に過敏性腸症候群であるクローン病、あるいは潰瘍性大腸炎が治療されることが判明した。このような乳酸菌製剤としては、例えば、乳酸桿菌ヨーグルトなどの製品を挙げることができる。この乳酸桿菌ヨーグルト製品は、イソロイシンの投与により先天性免疫機能の増強により、例えば、クローン病の病的症状である腸管組織部の深部潰瘍が治癒した後に、常在腸内細菌である乳酸桿菌による腸管粘膜部の保護作用により、より効果的な治療が達成し得たものと考えられる。
【００２６】
【実施例】
以下に本発明が提供する、有効成分であるイソロイシンによる過敏性腸症候群（ＩＢＤ：　Ｉｒｒｉｔａｂｌｅ　Ｂｏｗｅｌ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）の実際の治療効果を、クローン病（Ｃｒｏｈｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）患者ならびに潰瘍性大腸炎（Ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ　Ｃｏｌｉｔｉｓ）患者を対象に行った試験結果を説明することにより、本発明をさらに詳細に説明する。
なお、試験にあたっては、前もって被験者からのインフォームドコンセントを得ている。
【００２７】
試験例：過敏性腸症候群患者に対するイソロイシン投与の効果
１．対象患者
過敏性症候群患者および健常人ボランティアとして、下記の対象者を被験者（１９名）とした。
クローン病患者：１２名
潰瘍性大腸炎患者：５名
健常人ボランティア：２名
【００２８】
２．イソロイシン投与のプロトコールおよびその試験評価
イソロイシン（１回２ｇ×２回／日：全４ｇ／日）を経口投与した。
投与前２週間前から、試験対象者の症状（用便の習慣；下痢の回数；腹部疼痛；一般状態）について記録を行い、そのうちクローン病患者（１２名）については、投与前１週間前から投与終了日までの間にわたって、ＣＤＡＩ（Ｃｒｏｈｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎｄｅｘ）を測定した。
イソロイシンの投与開始後４週間（２８日間）にわたり、連日イソロイシンを経口投与した。
また投与終了後の２週間経過まで、試験対象者の症状（用便の習慣；下痢の回数；腹部疼痛；一般症状）について記録を行った。
【００２９】
評価１：大便の１日平均頻度
全試験対象者における大便の１日平均頻度の推移を図１に示し、過敏性腸症候群患者［クローン病患者（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎患者（ＵＣ）］における大便の１日平均頻度の推移を図２に示した。
大便の１日の平均頻度においては、イソロイシン投与による変化は認められなかった。
【００３０】
評価２：水様／泥状下痢の発生評価
全試験対象者における水様／泥状下痢／１日の平均発生回数の推移を図３に示し、過敏性腸症候群患者［クローン病患者（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎患者（ＵＣ）］における水様／泥状下痢／１日の平均発生回数の推移を図４に示した。
図３に示した結果からも判明するように、イソロイシンを投与することにより水様／泥状下痢／１日の平均発生回数が有意に低下しており、イソロイシン投与による過敏性腸症候群患者における病態である下痢の発生を押さえることができていることが理解される。
【００３１】
評価３：腹部疼痛の評価
腹部疼痛の程度を、以下のスコアにより評価した。
０：腹部疼痛なし
１：僅かに腹部の疼痛を認める
２：腹部に疼痛を認める
３：腹部に重度の疼痛を認める
その結果に基づき、全試験対象者における腹部の疼痛スコアの推移を図５に示し、過敏性腸症候群患者［クローン病患者（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎患者（ＵＣ）］における腹部の疼痛スコアの推移を図６に示した。
イソロイシンの投与を終了した後に、腹部疼痛スコアの変動が認められるが、有意な変動ではなかった。
【００３２】
評価４：一般症状の評価
一般症状の程度を、以下のスコアにより評価した。
０：良好
１：僅かに体調がすぐれない
２：体調不良
３：非常に体調が悪い
４：医療扶助を必要とする
その結果に基づき、全試験対象者における一般症状のスコアの推移を図７に示し、過敏性腸症候群患者［クローン病患者（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎患者（ＵＣ）］における一般症状のスコアの推移を図８に示した。
一般症状の評価においては、イソロイシン投与による顕著な変化は認められなかった。
【００３３】
評価５：クローン病患者（ＣＤ）におけるイソロイシン投与によるＣＤＡＩ（Ｃｒｏｈｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎｄｅｘ）の変動
９名のクローン病患者（ＣＤ）において、イソロイシン投与前のＣＤＡＩと、４週間にわたるイソロイシン投与中でのＣＤＡＩの変動を評価した。
その結果を図９に示した。
図中に示した結果からも判明するように、イソロイシンの投与前におけるＣＤＡＩを、イソロイシン投与期間中は有意に低下させ、イソロイシンがクローン病の治療に有効であることが理解される。
【００３４】
評価６：クローン病患者（ＣＤ）における糞便中の乳酸杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）数に及ぼすイソロイシンの効果
方法
６名のクローン病患者に、イソロイシン（１回２ｇ×２回／日：全４ｇ／日）を１週間にわたり経口投与した。
イソロイシン投与前の患者の糞便と、イソロイシンを１週間投与した後の７日目における患者の糞便を採取し、糞便中の乳酸杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）数を評価した。
培地としてＬＢＳ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ　Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ａｇａｒ）寒天培地（ベクトン＆デキソン社製）を使用し、３７℃にて７２時間兼気性条件下に培養した。培地上に認められたコロニー数をＣＦＵ（ｃｏｌｏｎｙ　ｆｏｒｍｉｎｇ　ｕｎｉｔ：コロニー形成単位）として表示した。
【００３５】
結果
その結果を表１に示した。
【００３６】
【表１】
表１
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【００３７】
イソロイシン投与前およびイソロイシン投与後のＬｏｇ　ＣＦＵの変動を図１０に示した。図中に示した結果からも判明するように、常在腸内細菌である乳酸杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）の増加の傾向が認められた。
以上の事実から、イソロイシンと共に乳酸桿菌ヨーグルトを併用すると、より有効な治療が得られる事実が判明する。
【００３８】
製剤例：顆粒剤
組成：
イソロイシン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３００ｇ
乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１３４ｇ
結晶セルロース　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０ｇ
トウモロコシ澱粉　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０ｇ
３％ヒドロキシプロピルメチルセルロース水溶液　　　１００ｍｌ
ステアリン酸マグネシウム　　　　　　　　　　　　　　　３ｇ
【００３９】
製法：
イソロイシンに乳糖、結晶セルロースおよびトウモロコシ澱粉を６０メッシュのふるいで篩化し、均一に混合した後、練合機に入れ、３％ヒドロキシプロピルメチルセルロース水溶液を注加して、さらに練合した。次いで１６メッシュのふるいで篩化し、造粒を行い、５０℃で通風乾燥した。乾燥後、造粒をおこない、顆粒在を得た。
【００４０】
【発明の効果】
以上記載のように、本発明は、生体における腸管組織に先天性免疫能を増強させることによる、過敏性腸症候群、特にクローン病ならびに潰瘍性大腸炎の治療剤が提供される。
特に本発明の有効成分であるイソロイシンは、クローン病の主症状である水様状態の下痢症状の回数を抑えることができ、難病であるクローン病を有効に治療することができ、その医療上の価値は多大なものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の試験例における評価１の結果である、全試験対象者における大便の１日平均頻度の推移を示す図である。
【図２】本発明の試験例における評価１の結果である、過敏性腸症候群患者［クローン病患者（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎患者（ＵＣ）］における大便の１日平均頻度の推移を示す図である。
【図３】本発明の試験例における評価２の結果である、全試験対象者における水様／泥状下痢／１日の平均発生回数の推移を示す図である。
【図４】本発明の試験例における評価２の結果である、過敏性腸症候群患者［クローン病患者（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎患者（ＵＣ）］における水様／泥状下痢／１日の平均発生回数の推移を示す図である。
【図５】本発明の試験例における評価３の結果である、全試験対象者における腹部の疼痛スコアの推移を示す図である。
【図６】本発明の試験例における評価３の結果である、過敏性腸症候群患者［クローン病患者（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎患者（ＵＣ）］における腹部の疼痛スコアの推移を示す図である。
【図７】本発明の試験例における評価４の結果である、全試験対象者における一般症状のスコアの推移を示す図である。
【図８】本発明の試験例における評価４の結果である、過敏性腸症候群患者［クローン病患者（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎患者（ＵＣ）］における一般症状のスコアの推移を示す図である。
【図９】本発明の試験例における評価５の、クローン病患者におけるイソロイシン投与によるＣＤＡＩの変動を示す図である。
【図１０】本発明の試験例における評価６の、イソロイシン投与前およびイソロイシン投与後の乳酸杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｉ）について、Ｌｏｇ　ＣＦＵの変動を示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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