(57)【要約】【課題】高いコレステロール低減作用を有する新たなペクチンを見出すこと。【解決手段】シークワサーの果皮、砂嚢または搾汁滓を酸性条件下で抽出した抽出液から得られるペクチン。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シークワサーの果皮、砂嚢または搾汁滓を酸性条件下で抽出した抽出液から得られるペクチン。
【請求項２】
更に、抽出液に低級アルコールまたは塩類から選ばれる沈澱剤を加える沈殿処理を施すことにより析出物として得られる請求項第１項記載のペクチン。
【請求項３】
更に、抽出液に限外ろ過、電気透析、イオン交換、逆浸透膜ろ過から選ばれる精製処理の１種または２種以上を施すことにより得られる請求項第１項記載のペクチン。
【請求項４】
水分が０〜１０％、灰分が１０％以下およびウロン酸含量が５０％以上である請求項第１項記載のペクチン。
【請求項５】
請求項第１項ないし第４項の何れかの項記載のペクチンを含有する飲食品。
【請求項６】
請求項第１項ないし第４項の何れかの項記載のペクチンを含有するコレステロール低下剤。
【請求項７】
シークワサーの果皮、砂嚢または搾汁滓を酸性条件下抽出し、次いで得られた抽出液に低級アルコールまたは塩類から選ばれる沈澱剤を加えてペクチンを析出させることを特徴とするペクチンの製造方法。
【請求項８】
抽出を、ｐＨ１.５〜４.０の条件で行う請求項第７項記載のペクチンの製造方法。
【請求項９】
抽出を、７５℃以上の条件で行う請求項第７項記載のペクチンの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はシークワサーから得られるペクチンおよびその利用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ペクチンは、ガラクツロン酸のα−１,４結合からなる酸性多糖であり、種々のリンゴや柑橘類などの果実に含まれているものである。このペクチンのうち、ガラクツロン酸のメトキシル基が７％以上のものが高メトキシルペクチン、７％以下のものが低メトキシルペクチンと呼ばれている。このペクチンは、高分子多糖であるという特性を生かして、食品工業における安定化剤として幅広く利用されており、様々な飲食品に添加されている。
【０００３】
また、近年では、ペクチンの有するコレステロール低減作用が注目されてきており、例えば、果実由来のペクチンを加水分解することによって得られる５万から２０万の分子量を有するペクチンが血中コレステロールの上昇抑制作用を有することが報告されている（例えば、特許文献１参照）。
【０００４】
現在、主に提供されているペクチンは、リンゴ由来のものであるが、ペクチンの糖組成は由来の果物毎に異なると考えられており、ペクチンをコレステロール低減のために用いるには、より高いコレステロール低減作用を有するペクチンを見出すことが必要となる。
【０００５】
【特許文献１】特開平６−２５６１９８号公報
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の課題は、高いコレステロール低減作用を有する新たなペクチンを見出すことにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、従来ペクチンの原料としては全く使用されていなかったシークワサーの果皮や砂嚢あるいは搾汁滓中にペクチンが含まれており、しかもそのコレステロール低減作用は、リンゴ由来のペクチンに比べ著しく高いことを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち本発明は、シークワサーの果皮、砂嚢または搾汁滓を酸性条件下で抽出した抽出液から得られるペクチンを提供するものである。
【０００９】
また本発明は、前記ペクチンを含有するコレステロール低下剤および飲食品を提供するものである。
【００１０】
更に本発明は、シークワサーの果皮、砂嚢または搾汁滓を酸性条件下抽出し、次いで得られた抽出液に低級アルコールまたは塩類から選ばれる沈澱剤を加えてペクチンを析出させることを特徴とするペクチンの製造方法を提供するものである。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明のペクチンは、シークワサー（ヒラミレモン：Citrus depressa Hay）の果皮や砂嚢、果実から果汁を搾った後の搾汁滓等のペクチンを含有する部位（以下、「ペクチン含有部位」という）を原料とすることにより得ることができる。
【００１２】
具体的にペクチン含有部位から本発明のペクチンを得るにはペクチン含有部位の抽出を酸性条件下で行えばよい。
【００１３】
この抽出には、水に適当な酸、例えば塩酸や有機酸等を加えて、ｐＨを１.５〜４.０、好ましくはｐＨを２.５〜３.５とした酸溶液が使用される。また、抽出に当たって、ペクチン含有部に加えられる抽出液の量はペクチン含有部１重量部に対し、２〜２５重量部程度、好ましくは、５〜１０重量部であり、抽出温度は７５℃以上、好ましくは、８５〜９５℃である。また、抽出は加温加圧の条件、すなわちオートクレーブ中で行うことも可能である。
【００１４】
上記抽出により得られた抽出液に常法による分離・精製等を行うことでペクチンが得られるが、更に、抽出液に低級アルコールまたは塩類から選ばれる沈澱剤を加える沈殿処理を施すか、限外ろ過、電気透析、イオン交換、逆浸透膜ろ過から選ばれる精製処理の１種または２種以上を施し、抽出液中の有機酸、ミネラル等の不純物を除去し、ペクチンを精製することが好ましい。
【００１５】
沈殿処理で沈殿剤として用いられる低級アルコールとしては、エタノール、メタノール等が挙げられ、その使用量は、抽出液１容量部に対し、１〜１０容量部であり、好ましくは１〜５容量部である。一方、沈澱剤のうち塩類としては、アルミニウム塩類、セチルピリジニウム等の第４級アンモニウム塩類等の塩類が挙げられ、これらは、抽出液に対し、０.１〜５０質量％（以下、単に「％」という  ）程度、好ましくは０.５〜１０％になるように加えられる。なお、これらの沈殿剤を用いた沈殿処理を施すことによりペクチンは析出物として得られる。
【００１６】
精製処理としては、中空糸膜、平膜等を用いた限外ろ過、イオン交換膜等を用いた電気透析、陰イオン交換樹脂等を用いたイオン交換、逆浸透膜等を用いた逆浸透膜ろ過が挙げられ、これらの１種または２種以上を組合わせて行ってもよい。これらの精製処理のうち、限外ろ過および電気透析が作業性およびコストの点から好ましい。具体的な限外ろ過の条件は、分画分子量５,０００以上が好ましく、特に１０,０００以上が好ましい。一方、電気透析の条件はカチオンおよびアニオンの分画分子量１００以上が好ましく、特にカチオンの分画分子量３００、アニオンの分画分子量１,０００の組み合わせが好ましい。
【００１７】
このようにして得られたペクチンは、例えば５０％エタノールに再溶解させ同様の操作を行うことにより、より精製したペクチンとすることができる。
【００１８】
かくして得られる本発明のペクチンは無味無臭の白色粉末であり、次のような性質を示す。分子量分布は分子量１０,０００〜数百万まで幅広く分布する。水分は０〜１０％、好ましくは０〜６％であり、灰分は１０％以下、好ましくは５％以下であり、ウロン酸含量は５０％以上、好ましくは７５％以上であり、全糖量は２０〜５０％、好ましくは２０〜４０％である。また、このペクチンの０.５％、２５℃における動粘度は０.５〜１０ｃＳｔ、好ましくは１.０〜６.０ｃＳｔである。
【００１９】
上記ペクチンは更に、ペクチナーゼ、プロトペクチナーゼ、ペクターゼ等のペクチン分解酵素により低分子量のペクチン（以下、これを「低分子ペクチン」という）とすることができる。
【００２０】
ペクチン分解酵素によるシークワサーペクチンの低分子化は、常法により行われ、例えば、ペクチンに対し、０.５％程度のペクチン分解酵素を加え、４０℃程度の温度で、１〜２時間程度反応させればよい。
【００２１】
かくして得られる低分子ペクチンは、無味無臭の白色粉末であり、次のような性質を示す。分子量分布は約５００〜２０,０００であり、平均分子量は１,０００〜１０,０００、好ましくは２,０００〜６,０００である。水分は０〜１０％、好ましくは０〜６％であり、灰分は１０％以下、好ましくは５％以下であり、ウロン産含量は５０％以上、好ましくは７５％以上であり、全糖量は２０〜５０％、好ましくは２０〜４０％である。また、このペクチンの０.５％、２５℃における動粘度は０.５〜５.０ｃＳｔ、好ましくは０.８〜１.５ｃＳｔである。
【００２２】
本発明のペクチンおよび低分子ペクチンは、他のペクチンと同様、種々の飲食品において増粘剤あるいは安定剤として使用することができる。この場合、従来飲食品に用いられているペクチンを本発明のペクチンおよび低分子ペクチンに置き換えて用いればよい。
【００２３】
そして、本発明のペクチンは、他のペクチンと比べより優れたコレステロール低減作用を有するため、本発明のペクチンを利用する飲食物は、コレステロール低減用飲食物として用いることができる。
【００２４】
また、本発明のペクチンの有するコレステロール低減作用を積極的に利用し、これを有効成分として含有させることによりコレステロール低下剤とすることもできる。このコレステロール低下剤の調製に当たっては、本発明ペクチンを適当な医薬用担体と組合せ、適切な剤型とすればよい。
【００２５】
より具体的な、本発明のコレステロール低下剤の剤型例としては、粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤等の経口固形剤や、液剤等の経口液剤が挙げられ、使用される医薬用担体もこれに合わせたもの、例えば、デキストリン、でんぷん等を利用することができる。
【００２６】
なお、コレステロール低下を目的とする場合の本発明のペクチンの摂取量は、大人一人当たり１０ｍｇ〜４０ｇ、好ましくは６ｇ〜１５ｇであり、上記コレステロール低下剤は、これに合わせた量を摂取できるものとすればよい。
【００２７】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら制約されるものではない。
【００２８】
実 施 例  １
ペクチンの調製（１）：
シークワサーの搾汁滓を凍結保存後、解凍したものを試料とし、その４３.３ｋｇ（湿重量）に対し、水道水２００Ｌ、６Ｎ塩酸６５０ｍｌを加えてｐＨ２.８に調整した。次いで、液温を９０℃まで上げ、その温度で９０分間加熱抽出を行って抽出液を得た。この抽出液を遠心分離にかけ、不溶物の除去を行い、減圧濃縮を行って濃縮液を得た。この濃縮液に対し１.５倍量のエタノールを添加し、生成した沈殿物を遠心分離によって回収した。その後沈殿物は５０％エタノールで洗浄し、凍結乾燥を行い粉末状のペクチンを０.８３ｋｇ得た（収率１.９％）。
【００２９】
実 施 例  ２
ペクチンの低分子化：
実施例１で得られたペクチン１６０ｇを３.５ｌの蒸留水にけん濁し、４０℃になるまで加熱した。これにペクチナーゼ３Ｓ（ヤクルト薬品工業（株）製）を１ｇ添加し、４０℃で１２０分間酵素反応を行った。反応終了後遠心分離によって不溶物を除去し、凍結乾燥によって低分子化ペクチンを調製した。
【００３０】
試 験 例  １
ペクチンの分析：
実施例１で得られたペクチンおよび実施例２で得られた低分子化ペクチンについて、それぞれ水分量、灰分量、全糖量、ウロン酸含量、動粘度および分子量を測定した。水分は加熱乾燥法（１０５℃）、灰分は直接灰化法（５５０℃）、全糖量はグルコースを標準とするフェノール硫酸法、ウロン酸含量はガラクツロン酸を標準とするカルバゾール硫酸法で測定した。ペクチン（０.５％）の動粘度はウベローデ粘度計（２５℃）を使用して測定した。分子量は標準物質にプルラン（昭和電工（株）製）を用い、ＴＳＫｇｅｌ Ｇ４００００ＰＷｘＬカラム（東ソー（株）製）を使用するＨＰＬＣによって測定した。その結果を表１に示す。また、ＨＰＬＣのクロマトグラムを図１および図２に示す。
【００３１】
【表１】
2004197001.tif 000002
【００３２】
実 施 例  ３
ペクチンの調製（２）：
シークワサー搾汁滓を凍結保存後、解凍したものを試料とし、その５０ｋｇ（湿重量）に対し、水道水２００Ｌ、６Ｎ塩酸６５０ｍｌを加えてｐＨ２.８に調整した。次いで液温を９０℃まで上げ、９０分間抽出した後、遠心分離にかけ、固液分離を行い抽出液を得た。この抽出液はＡＩＶ３０１０中空糸モジュール（旭化成（株）製）によって限外ろ過を行い、抽出液中の分子量６,０００以下の低分子画分を除去して精製抽出液を得た。精製抽出液は噴霧乾燥によって粉末化を行いペクチン粉末とした。得られたペクチンは、実施例１で得られたペクチンと同様の物性を有していた。
【００３３】
実 施 例  ４
ペクチンの調製（３）：
シークワサー搾汁滓を凍結保存後、解凍したものを試料とし、その５０ｋｇ（質重量）に対し、水道水２００Ｌ、６Ｎ塩酸６５０ｍｌを加えてｐＨ２.８に調整した。次いで液温を９０℃まで上げ、９０分間抽出した後、遠心分離にかけ、固液分離を行い抽出液を得た。この抽出液はアシプレックスＡＣ２３０（旭化成（株）製）によって電気透析を行い、抽出液中の分子量１,０００以下の塩類および有機酸類を除去して精製抽出液を得た。精製抽出液は噴霧乾燥によって粉末化を行いペクチン粉末とした。得られたペクチンは、実施例１で得られたペクチンと同様の物性を有していた。
【００３４】
実 施 例  ５
コレステロール低減作用の確認：
（１）試験試料
上記実施例１で得られたペクチンおよび実施例２で得られた低分子化ペクチンを使用した。また、対照としてシークワサー果皮粉末を使用した。
【００３５】
（２）動物および飼料
５週齢の雄性ウイスター（Ｗｉｓｔａｒ）系ラット（日本クレア（株）製）を購入し、市販の固型ＭＦ飼料（オリエンタル酵母工業（株）製）を１週間自由摂取させて馴化した。この馴化期間の後、各群の平均体重が同じ値になるように群分けした。試験期間中の各種飼料の組成を表２に示す。各試験飼料は、コレステロールとコール酸ナトリウムを含むコントロール食（高コレステロール食）に、上記試験試料を最終濃度が３.５％となるようにセルロースと代替して添加した。これらの飼料は１群８匹あるいは６匹からなるラットに１日１５ｇずつ１４日間与えた。飼料は毎朝１０時にラットに与え、翌朝残量を測定した後、廃棄した。試験期間中、水は自由摂取させた。ラットは金属製のケージで個別に飼育し、飼育環境は明暗サイクル１２時間（明期、８：３０〜２０：３０）、室温２４℃、湿度６０％とした。
【００３６】
飼育飼料の摂取１４日目にラットをネンブタール（Abbott Laboratories製）で麻酔した。血液は腹部大動脈から採取し、ヘパリンと混合した後、２,０００×ｇで１５分間遠心分離して血漿を得た。肝臓は生理食塩水（８.５ｇ／ｌ）で灌流した後、採取して凍結乾燥し、これらをコレステロール測定用試料とした。
【００３７】
【表２】
2004197001.tif 000003
【００３８】
（３）分析および統計手法
上記（２）で得た血漿中の総コレステロール濃度およびＨＤＬ−コレステロール濃度はそれぞれデタミナーＴＣ５５５およびデタミナーＨＤＬ（共に協和メディックス（株）製）を使用して酵素的に測定した。また、トリグリセリド濃度はトリグリセライドＥ−テストワコー（和光純薬工業（株）製）を用いて、リン脂質濃度はリン脂質Ｂ−テストワコー(和光純薬工業（株）製)を用いて定量した。肝臓脂質は、ホルチらの方法（Folch, J., M. Lee, and  G. H. Sloane-Stanley, J. Biol. Chem. 226 : 497-509, (1957).）に従って肝臓から脂質を抽出した後、エタノールに溶解し、上記と同様に定量した。肝臓の遊離コレステロール濃度は遊離コレステロールＥ−テストワコー（和光純薬工業（株）製）を用いて測定した。
【００３９】
【式１】
2004197001.tif 000004
【００４０】
また、血漿および肝臓の総コレステロール濃度の低下率は、次式２から求めた。なお、全てのデータは平均値±標準偏差で表した。また、データは一元配置分散分析により解析し、有意なＦ比が認められた場合に、個々の平均値をボンフェローニ（Bonferroni）テストで比較した。有意水準をｐ＜０.０５とし、平均値に有意差が認められた場合には異なった小文字のアルファベットを添えた。
【００４１】
【式２】
2004197001.tif 000005
【００４２】
（４）結果
ａ：摂餌量および体重増加量
試験期間中の摂餌量および体重増加量を表３に示す。試験期間中の摂餌量は、コントロール（Control）群に比べてペクチンを含有する飼料（実施品１）を与えた試験群において有意に低かったが、他の試験群とコントロール群の間には有意差は認められなかった。一方、体重増加量に関しては、いずれの試験群間においても有意差は認められなかった。
【００４３】
【表３】
2004197001.tif 000006
【００４４】
ｂ：血漿脂質濃度、動脈指数、肝臓乾燥重量および肝臓脂質濃度
血漿脂質濃度（総コレステロール濃度（ＴＣ）、ＨＤＬコレステロール濃度（ＨＤＬ−Ｃ）、リン脂質濃度（ＰＬ）、トリグリセリド濃度（ＴＧ））および動脈効果指数（ＡＩ）を表４に示す。また、肝臓乾燥重量および肝臓脂質濃度を表５に示す。コントロール群に比べてペクチンを含有する飼料（実施品１）を与えた試験群では、血漿トリグリセリド濃度が有意に上昇したが、血漿総コレステロール濃度、血漿リン脂質濃度、動脈硬化指数、肝臓乾燥重量、肝臓総コレステロール濃度および肝臓トリグリセリド濃度は有意に低下した。一方、コントロール群に比べてシークワサー果皮粉末を含有する飼料（比較品１）を与えた試験群では肝臓乾燥重量と肝臓リン脂質濃度が有意に増加したが、他のパラメーターには有意な変化は認められなかった。
【００４５】
【表４】
2004197001.tif 000007
【００４６】
【表５】
2004197001.tif 000008
【００４７】
ｃ：肝遊離コレステロール濃度および肝コレステロールエステル濃度
肝遊離コレステロール濃度（ＦＣ）および肝コレステロールエステル濃度（ＣＥ）を表６に示す。ペクチンを含有する飼料（実施品１）を与えた試験群では、肝臓の遊離コレステロール濃度に有意な変化は認められなかったが、肝臓のコレステロールエステル濃度に有意な低下が認められた。一方、本発明の低分子化ペクチンとシークワサー果皮粉末を含有する飼料（実施品２および比較品１）を与えた試験群では、肝臓の遊離コレステロール濃度およびコレステロールエステルに有意な変化は認められなかった。
【００４８】
【表６】
2004197001.tif 000009
【００４９】
（５）結論
以上の結果より、本発明のペクチンを含有する飼料（実施品１）を与えた試験群では血漿および肝臓総コレステロール濃度を顕著に低下させたことから、強力なコレステロール低下作用を有することが判明した。
【００５０】
実 施 例  ６
コレステロール濃度低下率の比較：
本発明のペクチンと、従来よりコレステロール低下作用が知られている素材であるリンゴ由来のペクチン（雪印食品（株）製）およびアルギン酸ナトリウム（（株）紀文フードケミカル製）を実施例５のコントロール食にそれぞれ最終濃度が３.５％となるようにセルロースと代替して添加した飼料を調製し、これらを用いて実施例５と同様にラットを育成し、血漿コレステロール濃度等の測定を行った。その結果を図３および図４に示す。本発明のペクチンは従来のものよりもコレステロール低減作用が最も高いものであった。
【００５１】
【発明の効果】
本発明により、シークワサーがペクチンの原料となることが明らかとなった。また、このシークワサーから得られたペクチンが優れたコレステロール低下作用を有することも明らかとなった。
【００５２】
従って、本発明のペクチンは従来のペクチンのように飲食品に使用することにより、より高いコレステロール低減作用が期待できる。また更に、このペクチンは、コレステロール低下剤の有効成分としても使用することが期待できる極めて有効なものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、本発明のペクチンのＨＰＬＣクロマトグラムを示す図面である。
【図２】図２は、本発明の低分子化ペクチンのＨＰＬＣクロマトグラムを示す図面である。
【図３】図３は、本願発明のペクチンと従来よりコレステロール低下作用の知られている各種素材の血漿総コレステロール濃度低下率を示す図面である（異なったアルファベット間で有意差有り）。
【図４】図４は、本願発明のペクチンと従来よりコレステロール低下作用の知られている各種素材の肝臓総コレステロール濃度低下率を示す図面である（異なったアルファベット間で有意差有り）。
以    上
【図１】
2004197001.tif 000010
【図２】
2004197001.tif 000011
【図３】
2004197001.tif 000012
【図４】
2004197001.tif 000013