(57)【要約】【課題】　抗腫瘍活性を有するカルコン類の複合体を提供する。【解決手段】　天然または合成のリン脂質と、イソコルドイン、コルドイン、４−ヒドロキシデリシン、２−ヒドロキシデリシン、３−ヒドロキシデリシン、２’，４’−ジヒドロキシカルコン及び４，２’，４’−トリヒドロキシカルコンからなる群より選ばれる化合物の複合体。例えば、乳癌の増殖を有意に抑制する。【選択図】　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
　天然または合成のリン脂質と、イソコルドイン、コルドイン、４−ヒドロキシデリシン、２−ヒドロキシデリシン、３−ヒドロキシデリシン、２’，４’−ジヒドロキシカルコン及び４，２’，４’−トリヒドロキシカルコンからなる群より選ばれる化合物の複合体。
【請求項２】
請求項１に記載の複合体を有効成分とする抗癌剤またはII型のエストロゲンレセプターに対する拮抗活性剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
　本発明は、子宮、卵巣、及び乳腫瘍の治療及び予防における、カルコン複合体及びその医薬製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
　最近、いくつかのフラボノイドが、いくつかの腫瘍において抗癌活性(例えば、特許文献1及び２または非特許文献1参照。)及び化学的予防活性（例えば、非特許文献２参照。）を有することが判明した。特に、植物において広く遍在するフラボノイドであるクエルセチンは、従来の化学療法との相乗作用に加えて、ヒト白血病細胞の増殖に対して（非特許文献3参照。）及び他の細胞系に対して（非特許文献4、５，６参照。）いくらかの阻害作用を示した。増殖に対するそのような阻害作用の機構は未知であるけれども、ＩＩ型のエストロゲンレセプターとこのフラボノイドの相互作用に関係しているようである（非特許文献７参照。）。これらの部位は、最初、ラットの子宮において、１９７８年にＣｌａｒｋにより記述されており（非特許文献８参照。）、同じステロイド及び組織特異性を示すが、これらはエストロゲンレセプター（ＥＲ）より高濃度で存在し、そしてエストラジオールに対してＥＲ（ＫＤ：０．２−１ｎＭ）より低い明白な親和性解離定数（ＫＤ：１０−２０ｎＭ）を有するので、「真の」ＥＲと異なる。
【特許文献１】特開昭５８−１０５９３５号公報
【特許文献２】特表平５−５０９０７７７８号公報
【非特許文献１】Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　４８、５７５４、１９８８
【非特許文献２】Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．５３、２３、１９９０）
【非特許文献３】Ｂｒ．Ｊ．ｏｆ　Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ　７５、４８９、１９９０）
【非特許文献４】Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ　６２、９４２、１９９０−Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ　４６、１１１２、１９９０
【非特許文献５】Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２８、２５５、１９９１
【非特許文献６】Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ　４５、１３、１９９１、１９９２
【非特許文献７】Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍ．３０、７１、１９８８
【非特許文献８】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３、７６３０、１９７８
【発明の開示】
【０００３】
　今回、意外にも、カルコン構造化合物、イソコルドイン、４−ヒドロキシデリシン、２−ヒドロキシデリシン、３−ヒドロキシデリシン、２’，４’−ジヒドロキシカルコン、４，２’，４’−トリヒドロキシカルコン、及びコルドインが、子宮、卵巣、及び乳腫瘍細胞株に対する著しい抗増殖活性と共に、既知の生成物よりも非常に高い、ＩＩ型のエストロゲンレセプターに対する顕著な親和性を有することが見いだされた。
　上に挙げた化合物の構造は、以下の通りである。
【０００４】
【表１】
2004131509.tif 000002
【０００５】
　構造を以下に示す、４−ヒドロキシコルドイン及びジヒドロコルドインのような化学構造に関する限り前者に厳密に関係した他のカルコンは、上記のレセプターに対する何の親和性も示さない。
【０００６】
【表２】
2004131509.tif 000003
【０００７】
　従って、本発明は、第一の態様において、抗癌活性を有する薬剤の調製のための、特に、ＩＩ型のエストロゲンレセプターを発現している腫瘍の治療のための、式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【０００８】
　本発明はまた、さらなる態様により、２２個までの炭素原子を含んでいる飽和または不飽和の直鎖または分岐した脂肪酸と式（Ｉ）の化合物のエステルも提供する。特に好ましくは、酢酸、酪酸、パルミチン酸、またはキシメニン酸とのエステルである。
【０００９】
　本発明のエステルは、経口により投与されることができ、これらは、カルコンＩのプロドラッグとして作用するようである。
【００１０】
　最後に、本発明は、適当な添加剤との混合において、化合物Ｉまたはこれらのエステルを活性成分として含んでいる製剤組成を提供する。
【００１１】
　化合物（Ｉ）は、Ｉｌ　Ｆａｒｍａｃｏ、３０、４４９−５５、１９７５；Ｉｌ　Ｆａｒｍａｃｏ、３２、２６１−６９、１９７７；Ｉｌ　Ｆａｒｍａｃｏ、３０、３２６−４２、１９７５により報告された従来法により調製されることができる。
【００１２】
　ＩＩ型のエストロゲンレセプターに対する化合物Ｉの親和性及び卵巣腫瘍細胞に対する抗増殖活性は、以下の表において報告される。
【００１３】
【表３】
2004131509.tif 000004
【００１４】
　エストロゲンレセプター結合の評価は、卵巣及び他の器官の腫瘍細胞に対して行われている。仔牛血清及び培地を無菌に保つための２００ｕｎｉｔｓ／ｍｌのペニシリンを加えた最小必須培地上で、単層培養で細胞を増殖させた。試験を再現できるようにするために、これらの細胞を毎週トリプシンで処理し、８ｘ１０−４の密度でプレート上に置き、そして５％ＣＯ２及び湿気を含んでいる大気下の３７℃で培養した。化合物の活性を評価するために、最少量の基質で、１ｘ１０−５／ｍｌの濃度で、これらの細胞をウェル（Ｆａｌｃｏｎ ３０４６、Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ　ＮＹ）中に置いた。２４時間後、基質を新しい基質と置き換え、そして無水エタノールに溶解したカルコンを加えた。試験する活性成分なしに、コントロールを同様にキャリヤーと処理した。７２時間の試験期間の間、上記の処理を２４時間の時間間隔で繰り返した。２４時間後、細胞を段階的な量の標識したエストラジオール（３Ｈ−Ｅ２　４０Ｃｉ／ｍｍｏｌ　Ａｍｅｒｓｈａｎ　ＵＫ）のみまたは１００倍量のジエチルスチルベストロールの存在下で４℃で２．５時間インキュベートした。インキュベーション時間の最後に、細胞を新しい基質ですばやく洗浄し、そして１Ｍ ＮａＯＨと３０分間インキュベートした。放射能をシンチレーター（ｓｃｉｎｔｉｌｌｅｒ）により測定し、そしてジエチルスチルベストロールを含んでいるまたは含んでいない調製物間の差として、結合特異性を計算した。結果を、従来法に従って、細胞当たりの結合部位の数として表す。処理したものの増殖に対してコントロールの増殖を比較する細胞の直接計算により、細胞増殖に対する阻害を評価する。
【００１５】
　文献の従来の条件に従って、ヌード無胸腺マウスに移植した腫瘍の大きさを測定することにより示されたように、本発明の化合物は、インビボにおいて細胞増殖を阻害した。１から１００ｍｇ／ｋｇまでの服用量でのこれらの動物の処理は、調べた腫瘍が個体の高い割合において消失するまでの、これらの著しい退行を明白に示した。ヒトにおいて、化合物Ｉは、タモキシフェンのような既知の薬剤よりも高い、卵巣、乳、及び子宮腫瘍に対する活性を示した。
【００１６】
　上に挙げた試験において、イソコルドイン、コルドイン、及び２’，４’−ジヒドロキシカルコンは、特に著しい活性を示した。
【００１７】
　本発明の化合物は、都合よく、経口または注入により投与されることができ、経口投与に対しては、天然または合成のリン脂質が、カルコンと安定な脂溶性の複合体を形成するので特に有用であることが判明し、中鎖トリグリセリド及び同類の添加物もまた有用であることがわかった。本発明の化合物の服用量は、広い範囲内で、主に経口により投与されると、例えば１０から３００ｍｇ／日まで変わることができる。
【００１８】
　以下の実施例は、さらに本発明を例示する。
【００１９】
　参考例Ｉ　キシメニン酸コルドインの調製
　７ｇの４−Ｏ−プレニル−２−ヒドロキシアセトフェノンを、１０ｇのピペリジン及び７０ｍｌのエタノール中、７ｇのベンズアルデヒドと６０−７０℃で反応させる。３６時間後、溶媒を真空下で除き、その残留物を１００ｍｌのベンゼンで溶解し、これを２Ｎ ＨＣｌで完全に洗浄する。ベンゼンを除いた後、残留物をシリカゲルカラム上で精製し、３．５ｇのコルドインを得る。得られたコルドインを、２０ｍｌの無水ピリジン中、３ｇの塩化キシメニン酸と反応させる。この反応混合物を水に注ぎ、その生成物を塩化メチレンで抽出する。メタノールからの結晶化後、ｍ．ｐ．１６４−１６６℃を有する、４．２ｇのキシメニン酸コルドインを得る。
【００２０】
　参考例ＩＩ　パルミチン酸イソコルドインの調製
　１０ｇの３−Ｃ−プレニルｒｅｓアセトフェノン（ｐｒｅｎｙｌｒｅｓａｃｅｔｏｐｈｅｎｏｎｅ）及び１０ｇのｐ−ヒドロキシベンズアルデヒドを、１５ｇのピペリジン及び２００ｍｌの無水エタノールに溶解し、６０℃で４時間保持する。溶媒を除いた後、残留物を５０ｍｌの２Ｎ ＨＣｌに懸濁し、その生成物を塩化メチレンで抽出する。塩素化溶媒を除いた後、残留物をシリカゲル上で精製し、ｍ．ｐ．１６０−１℃を有する、４．１ｇのイソコルドインを得る。この生成物を３０ｍｌの無水ピリジン中８ｇの塩化パルミトイルと反応させる。この反応混合物を水で希釈し、シリカゲル上で精製した後、ｍ．ｐ．１３１−１３２℃を有する、６．２ｇのジパルミトイルイソコルドインを得る。
【００２１】
　参考例ＩＩＩ　コルドイン及びイソコルドインの酢酸エステル及び酪酸エステルの調製
　これらの生成物を、それぞれ、対応する酸の塩化物または無水物を用いて、実施例Ｉ及びＩＩに従って調製する。（酢酸コルドイン　ｍ．ｐ．１３１−３℃；酪酸コルドイン　ｍ．ｐ．１２４−６℃）
　実施例ＩＶ　ジパルミトイルホスファチジルコリンとイソコルドインの複合体の調製
　３．０８ｇのイソコルドインを３０ｍｌの塩化メチレンに懸濁し、７．９ｇのジパルミトイルホスファチジルコリンを加え、撹拌しながら１時間反応させたままにする。これらの試薬を完全に溶解すると、その反応混合物を少量に濃縮し、濃縮物を５０ｍｌのｎ−ヘキサン中に注ぐ。沈殿した固形物質を濾過し、真空下で４０℃で一晩乾燥させ、ｍ．ｐ．７０℃を有する、７．２ｇのリン脂質イソコルドイン複合体を得る。