(57)【要約】【課題】糖脂質のひとつセレブロシドを蓄積した酵母の乾燥菌体及びこのような酵母の菌体から分離精製したセレブロシドの提供。【解決手段】セレブロシドを含む乾燥酵母菌体及びそこから分離・精製したセレブロシドを得る。そして、得られたセレブロシド含有酵母菌体を各種食品等に利用すれば、一般の乾燥酵母と同様の栄養補給とともに、有益な各種生理活性をもつセレブロシドを同時に付与することが可能となり、得られた食品の価値を飛躍的に向上させることができる。【選択図】　　　　　図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
セレブロシドを乾燥重量当たり１ｍｇ／ｇ以上含むことを特徴とするサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、チゴサッカロミセス（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、またはクリヴェロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属酵母の乾燥菌体。
【請求項２】
セレブロシドを蓄積するサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、チゴサッカロミセス（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、またはクリヴェロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属酵母が、サッカロミセス・クリヴェリ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｋｌｕｙｖｅｒｉ）、チゴサッカロミセス・シドリ（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｉｄｒｉ）、チゴサッカロミセス・フェルメンタチ（Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉ）、クリヴェロミセス・ラクチス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ　ｌａｃｔｉｓ）、クリヴェロミセス・サーモトレランス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ　ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）、クリヴェロミセス・ワルチ（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ　ｗａｌｔｉｉ）であることを特徴とする請求項１記載の乾燥菌体。
【請求項３】
請求項１又は２記載の酵母菌体から分離・精製したことを特徴とするセレブロシド。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、糖脂質のひとつセレブロシドを蓄積した酵母の乾燥菌体及びこのような酵母の菌体から分離精製したセレブロシドに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
セレブロシドは、１位の水酸基に単糖またはオリゴ糖をエーテル結合させたスフィンゴイド塩基と脂肪酸から成る代表的なスフィンゴ脂質である。糖鎖のないスフィンゴイド塩基と脂肪酸から成るセラミド及びセレブロシド中の糖の代わりにコリンリン酸を結合させたスフィンゴミエリンなどのスフィンゴ脂質とともに、動植物や微生物の細胞膜中に広く存在し、様々な生理活性を備えたものも多い。セレブロシドを含む組成物に関する特許としては、抗嘔吐剤（特願平０５−０８１１１４号）、ＮＫＴ細胞活性化剤（Ｗ０９８／４４９２８）、エイズ発症予防薬及び進行抑制薬（特開平０９−３１５９８０号）、大腸がん予防剤及び予防食品（特開２００１−２１３７８２）などがある。セレブロシドは、医薬品や化粧品素材のみならず、一般食品や飲料などに使用可能な食品素材として商品化されつつある。これまで天然のセレブロシドは主として牛脳から製造されてきたが、いわゆる狂牛病に対する危険性から小麦等の穀類や魚介類を原料として製造する方法が検討されている。しかしながら、これらの農産加工副産物にはセレブロシドが微量しか含まれておらず、抽出、分離、精製するためには、多大な労力とコストを必要とする。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
セレブロシドを効率的に取得するための原料としては、短時間に増殖可能な微生物が適していると考えられる。また、培養した菌体を簡単な加工でセレブロシドを含有する食品素材などとして利用するには、安全な微生物であることは言うまでもない。そのような微生物として第一に挙げることができるのは、酵母である。酵母にはパンや酒類の製造に古くから使われてきたという実績がある。また、ビール醸造で副生する酵母菌体はビタミン、ミネラル、タンパク質、食物繊維を豊富に含んでおり、その乾燥粉末には整腸作用や免疫強化作用などの効果があるとされている。最近では、ビール酵母ダイエットと呼ばれる方法が流行したことにより、その需要が飛躍的に増加している。ところが、これらの酵母として利用されているサッカロミセス・セレヴィシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）はセレブロシドをまったく蓄積しない。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
セレブロシドはカビなどの真菌に広く存在する脂質成分であり、酵母でもカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）などに検出されている。しかし、カンジダ・アルビカンスはヒトに対して病原性を示す菌株もあることから、医薬品及び食品原料として使用するには不適切である。そこで、サッカロミセス属、これに近縁のチゴサッカロミセス属及びクリヴェロミセス属の種について脂質成分を精査した結果、サッカロミセス・セレビシエ以外の特定な種にセレブロシドが含まれていることを発見し、本発明を完成させた。
【０００５】
【発明の実施の形態】
本発明でいう酵母とは、セレブロシドを蓄積したサッカロミセス属、チゴサッカロミセス、またはクリヴェロミセス属の酵母であれば、特に限定はしない。特に好ましくは、サッカロミセス・クリヴェリ、チゴサッカロミセス・シドリ、チゴサッカロミセス・フェルメンタチ、クリヴェロミセス・ラクチス、クリヴェロミセス・サーモトレランス、クリヴェロミセス・ワルチである。
【０００６】
微量の酵母菌体を液体培地に接種し、２５〜３５℃で２４時間、１２０〜２２０ｒｐｍで振盪培養すると菌体が増殖して白濁する。これを遠心分離によって集め、蒸留水で洗浄した菌体を噴霧乾燥、熱風乾燥、あるいは凍結乾燥させることにより、水分が１０％以下の乾燥菌体が得られる。さらに、培養直後の生菌体あるいは乾燥菌体中の全脂質成分を有機溶媒で抽出し、アルカリで分解されない画分からシリカゲルクルマトグラフィーによってセレブロシドは容易に分離される。
【０００７】
本発明の詳細を以下の実施例によって説明する。本発明はそれらの実施例によっては何ら限定されるものではない。
【０００８】
【実施例１】
財団法人発酵研究所（ＩＦＯ）より入手した酵母の菌体を一白金耳かきとり、試験管（直径１．８ｃｍ，長さ１８ｃｍ）中の液体培地３ｍｌに接種して種培養を行った。菌体が増殖した種培養液１．０ｍｌを５００ｍｌ三角フラスコ中の液体培地１００ｍｌに移植して、さらに培養を行った。いずれの培養も、酵母エキス１％、ポリペプトン２％、グルコース２％から成る培地で、２５℃、２４時間、振盪（２２０ｒｐｍ）して行った。菌体が増殖して白濁した培養液を遠心分離にかけ、集めた菌体を蒸留水で２回洗浄後、凍結乾燥した。この菌体に約５倍容のクロロホルム−メタノール（２：１、ｖ／ｖ）及びクロロホルム−メタノール（１：２，ｖ／ｖ）を加え、それぞれ２回ずつ３０分間超音波処理した。遠心分離により得た上清を濃縮乾固させた後、２０倍容のクロロホルム−メタノール（２：１、ｖ／ｖ）を加え、振盪混合して遠心分離して下層を回収した。これを数回繰り返し、下層を一つにまとめ、乾固して全脂質とした。
【０００９】
この試料を少量のクロロホルム−メタノール（２：１、ｖ／ｖ）に溶解し、クロロホルム−メタノール（９５：１２、ｖ／ｖ）を展開溶媒として、ケイ酸薄層クロマトグラフィーにかけた。アンスロン試薬を噴霧、加熱後に出現する赤紫色スポットの様子を図１に示した。試験例１〜６は、それぞれサッカロミセス・クリヴェリＩＦＯ　１６８５、チゴサッカロミセス・シドリＩＦＯ　１６８４、チゴサッカロミセス・フェルメンタチＩＦＯ　０４７９、クリヴェロミセス・ラクチスＩＦＯ　１０９０、クリヴェロミセス・サーモトレランスＩＦＯ　１９８５、クリヴェロミセス・ワルチＩＦＯ　１６６６で、比較例１は、サッカロミセス・セレヴィシエＩＦＯ　１０２１７、比較例２は市販のセレブロシド標品である。
【００１０】
図１に示したように、比較例２の市販のセレブロシド標品と同じ位置にスポットが観察されたのは、試験例１〜６であり、比較例１には検出されなかった。このスポットの強度を画像解析装置に取り込んで菌体当たりの含有量を算出すると表１のようになった。これらの結果から、サッカロミセス・クリヴェリ、チゴサッカロミセス・シドリ、チゴサッカロミセス・フェルメンタチ、クリヴェロミセス・ラクチス、クリヴェロミセス・サーモトレランス、クリヴェロミセス・ワルチの菌体には、セレブロシドが乾燥菌体１ｇ当たり１ｍｇ以上含まれていることが分かった。
【００１１】
【表１】
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【００１２】
【実施例２】
実施例１で取得したセレブロシド含有乾燥酵母菌体の栄養値を評価するため、水分を減圧加熱乾燥法、タンパク質をケルダール法、脂質をソックスレー抽出法、灰分を直接灰化法、食物繊維を酵素・重量法で測定した。糖質は、乾燥菌体重量から水分、タンパク質、脂質、灰分、食物繊維の含量を差し引いた値とした。これらの菌体の一般成分を分析した結果を表２に示す。試験例７〜１２は、それぞれサッカロミセス・クリヴェリＩＦＯ　１６８５、チゴサッカロミセス・シドリＩＦＯ　１６８４、チゴサッカロミセス・フェルメンタチＩＦＯ　０４７９、クリヴェロミセス・ラクチスＩＦＯ　１０９０、クリヴェロミセス・サーモトレランスＩＦＯ　１９８６、クリヴェロミセス・ワルチＩＦＯ　１６６６で、比較例３は、サッカロミセス・セレヴィシエＩＦＯ　１０２１７である。試験例７〜１２は、市販の乾燥酵母菌体の比較例３とほぼ同様にタンパク質およびミネラル等の一般栄養成分を豊富に含んでいた。
【００１３】
【表２】
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【００１４】
【発明の効果】
これらの結果から、本発明のセレブロシド含有酵母菌体を各種食品等に利用すれば、一般の乾燥酵母と同様の栄養補給とともに、有益な各種生理活性をもつセレブロシドを同時に付与することが可能となり、得られた食品の価値が飛躍的に向上することが期待できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】アンスロン試薬を噴霧、加熱後に出現する赤紫色スポットの様子を示す図である。
【図１】
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