(57)【要約】【課題】紫外線照射によって生じる細胞障害を改善する作用、例えば、細胞死を抑制する作用、シワ形成を抑制する作用、皮膚弾力性の低下を改善する作用、皮膚バリア機能の低下を改善する作用、又は角質層保湿機能の低下を改善する作用を有する物質を見出し、それを利用した紫外線細胞障害改善剤、紫外線照射による細胞死抑制剤、シワ形成抑制剤、皮膚弾力性改善剤、皮膚バリア機能改善剤及び角質層保湿機能改善剤を提供することを目的とする。【解決手段】紫外線細胞障害改善剤、紫外線照射による細胞死抑制剤、シワ形成抑制剤、皮膚弾力性改善剤、皮膚バリア機能改善剤及び角質層保湿機能改善剤の有効成分として、グラブリジンを含有する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
グラブリジンを有効成分として含有することを特徴とする紫外線細胞障害改善剤。
【請求項２】
グラブリジンを有効成分として含有することを特徴とする紫外線照射による細胞死抑制剤。
【請求項３】
グラブリジンを有効成分として含有することを特徴とするシワ形成抑制剤。
【請求項４】
グラブリジンを有効成分として含有することを特徴とする皮膚弾力性改善剤。
【請求項５】
グラブリジンを有効成分として含有することを特徴とする皮膚バリア機能改善剤。
【請求項６】
グラブリジンを有効成分として含有することを特徴とする角質層保湿機能改善剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、紫外線細胞障害改善剤、紫外線照射による細胞死抑制剤、シワ形成抑制剤、皮膚弾力性改善剤、皮膚バリア機能改善剤及び角質層保湿機能改善剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、グラブリジンがメラニン生成抑制作用を有し、皮膚の美白に効果があることが知られていた（特許文献１参照）。また、グラブリジンが酸化防止作用（特許文献２参照）、及び紫外線による紅斑抑制・色素沈着抑制作用を有することも知られていた（特許文献３参照）。
【０００３】
一方、太陽光中の紫外線を過度に浴びると皮膚に水疱等の炎症が形成され、ひいては色素沈着を生じる等の悪影響をもたらす。これは紫外線の刺激により皮膚の細胞が、活性酸素やサイトカイン等を産生し、細胞自身や周りの細胞に働きかけ、日焼け等の急性炎症反応を引き起こすからである。また、このとき生じた活性酸素はＤＮＡの損傷を引き起こすことが知られている。ＤＮＡに損傷が生じた細胞では、細胞内にｐ５３と呼ばれる癌抑制遺伝子タンパク質が発現し、このタンパク質がＤＮＡ損傷の度合いにより、ＤＮＡの修復、細胞周期の停止、アポトーシスを誘導することが知られている。皮膚中におけるアポトーシスの増加は、組織再生能の低下につながり皮膚老化を促進する原因となり得る（非特許文献１参照）。従って、紫外線によって生じる障害を防止・改善することができれば、皮膚の保湿能力、弾力性、バリア機能といった皮膚機能を維持することにもつながると考えられる。また、紫外線の慢性的な暴露は、皮膚の老化（光老化）を促進し、シミ、シワのみならず、皮膚癌の一因であることが知られている。その結果として、老化やシワが形成され皮膚機能が低下すると考えられている（非特許文献２参照）。従って、紫外線によって誘発される皮膚の炎症反応やその後に生じる皮膚機能の障害を防止・改善することは、皮膚の老化やがんを防止・改善することにもつながると考えられる。
【０００４】
従来、紫外線による障害を予防する方法として、ベンゾフェノン誘導体等の紫外線吸収剤や酸化チタン、酸化亜鉛等の無機紫外線散乱剤を配合したサンスクリーン製品が用いられている（特許文献４〜６参照）。これらは高い紫外線防御効果が得られているものの、感触などの使用感の問題や、耐摩擦性、耐汗性などの物理的耐久性の限界から継続的な予防効果は満足できるものでないうえ、紫外線吸収剤で炎症を起こすなど、安全性の点でも問題となっていた。さらに紫外線に暴露された後に生じる炎症やその後に引き起こされる障害等を予防・改善することのできる製剤も望まれていた。
【０００５】
【特許文献１】
特開平１−３１１０１１号公報
【特許文献２】
特許第２８０５３２５号公報
【特許文献３】
特許第３３１７７３５号公報
【特許文献４】
特開平６−３０５９４９号公報
【特許文献５】
特開平７−１４５０２９号公報
【特許文献６】
特開平８−２５９４１９号公報
【非特許文献１】
大戸  信明，フラグランスジャーナル（ＦＲＡＧＲＡＮＣＥ  ＪＯＵＲＮＡＬ），２００２年，第７巻，ｐ．５７−６１
【非特許文献２】
宮地  良樹，フラグランスジャーナル（ＦＲＡＧＲＡＮＣＥ  ＪＯＵＲＮＡＬ），１９９２年，第１１巻，ｐ．４９−５４
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、第一に、紫外線照射によって生じる細胞障害を改善する作用を有する物質を見出し、それを利用した紫外線細胞障害改善剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第二に、紫外線照射によって生じる細胞死を抑制する作用を有する物質を見出し、それを利用した紫外線照射による細胞死抑制剤を提供することを目的とする。
さらに、本発明は、第三に、紫外線照射等の種々の原因によって生じるシワ形成を抑制する作用を有する物質を見出し、それを利用したシワ形成抑制剤を提供することを目的とする。
さらに、本発明は、第四に、紫外線照射等の種々の原因によって生じる皮膚弾力性低下を改善する作用を有する物質を見出し、それを利用した皮膚弾力性改善剤を提供することを目的とする。
さらに、本発明は、第五に、紫外線照射等の種々の原因によって生じる皮膚バリア機能低下を改善する作用を有する物質を見出し、それを利用した皮膚バリア機能改善剤を提供することを目的とする。
さらに、本発明は、第六に、紫外線照射等の種々の原因によって生じる角質層保湿機能低下を改善する作用を有する物質を見出し、それを利用した角質層保湿機能改善剤を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
上記課題を解決するため、本発明の紫外線細胞障害改善剤、紫外線照射による細胞死抑制剤、シワ形成抑制剤、皮膚弾力性改善剤、皮膚バリア機能改善剤及び角質層保湿機能改善剤は、グラブリジンを有効成分として含有することを特徴とする。
【０００８】
【発明の実施の形態】
グラブリジン（３−（２’，４’−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−８−ｄｉｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｎｏ［８，７−ｅ］ｃｈｒｏｍａｎ）は、次式（Ｉ）で表される化学構造を有し、イソフラバンに属する。
【化１】
2004250368.tif 000002
【０００９】
グラブリジンは、天然には、甘草の一種である  Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ  Ｌｉｎｎｅ  ｖａｒ．（通称ロシア・アフガン・トルコカンゾウ）に含まれている。グラブリジンは、ｇｌａｂｒａ種に特有の成分であって、根部、根茎部等に含まれているが、ｇｌａｂｒａ種であっても、グラブリジンを含有しない場合があるので、甘草からグラブリジンを抽出する場合には原料甘草の選択に注意が必要である。
【００１０】
グラブリジンを甘草から抽出する場合、まず甘草の根部、根茎部又はそれらの水抽出残渣（例えばグリチルリチンを抽出した残渣）を有機溶媒で抽出する。抽出溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール等の低級脂肪族アルコール；アセトン等の低級脂肪族ケトン；ジオキサン、エチルエーテル等のエーテル類；塩化メチレン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類；酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル等のエステル類；ヘキサン、ベンゼン等の炭化水素類；及びこれら有機溶媒の２種以上の混合物を使用することができる。なお、水や弱アルカリ性の水ではグラブリジンを抽出できないので注意が必要である。
【００１１】
抽出処理は、例えば、抽出原料である甘草の約５〜１５倍量の抽出溶媒に浸漬し、常温で静置するか還流下に加熱することによって行うことができる。抽出液から抽出溶媒を留去して得られる抽出物は、通常５〜１０％程度のグラブリジンを含有しており、そのまま本発明の各種薬剤の有効成分として使用することもできるが、精製して純度を高めたものを用いることによって、より一層使用効果に優れ、かつ着色も少ない薬剤を得ることができる。
【００１２】
抽出物の精製は、例えば、順相シリカゲルクロマトグラフィー及び逆相クロマトグラフィーにより処理した後、アセトンから結晶化させる方法により行うことができ、この方法によれば、比較的容易にグラブリジンの純品を得ることができる。この他、精製は、合成吸着体によるカラムクロマトグラフィー、液−液向流抽出等の任意の有機化合物精製手段を採用して行うことができる。グラブリジンの製剤化は常法に従って行うことができる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加して粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形に製剤化することができる。
【００１３】
グラブリジンは、紫外線細胞障害改善作用、紫外線照射による細胞死抑制作用、シワ形成抑制作用、皮膚弾力性改善作用、皮膚バリア機能改善作用及び角質層保湿機能改善作用を有するので、紫外線細胞障害改善剤、紫外線照射による細胞死抑制剤、シワ形成抑制剤、皮膚弾力性改善剤、皮膚バリア機能改善剤及び角質層保湿機能改善剤の有効成分として利用することができる。
【００１４】
紫外線細胞障害改善剤は、紫外線照射によって生じる細胞障害を改善することができる。細胞障害の種類は紫外線照射によって生じ得る限り特に限定されるものではなく、細胞レベルでの障害の他、組織レベルでの障害及び器官レベルでの障害が含まれ、例えば、細胞死、シワ形成、皮膚弾力性の低下、皮膚バリア機能の低下、角質層保湿機能の低下等が挙げられる。
【００１５】
紫外線照射による細胞死抑制剤は、紫外線照射による細胞死を抑制することができる。
皮膚弾力性改善剤、皮膚バリア機能改善剤又は角質層保湿機能改善剤は、それぞれ、紫外線照射等の種々の原因によって低下した皮膚弾力性、皮膚バリア機能又は角質層保湿機能を改善することができる。また、正常な皮膚弾力性、皮膚バリア機能又は角質層保湿機能を増強することもできる。
シワ形成抑制剤は、紫外線照射等の種々の原因によって生じるシワ形成を抑制することができる。
【００１６】
本発明の各薬剤は、紫外線細胞障害改善作用、紫外線照射による細胞死抑制作用、シワ形成抑制作用、皮膚弾力性改善作用、皮膚バリア機能改善作用又は角質層保湿機能改善作用を有しており、紫外線照射によって生じる各種皮膚疾患を予防及び／又は改善することができるとともに、皮膚に適用した場合の安全性に優れているので、皮膚化粧料に配合するのに好適である。
【００１７】
本発明の各薬剤を配合し得る皮膚化粧料は特に限定されないが、その具体例としては、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、石鹸、ボディシャンプー、入浴剤、リップクリーム、口紅等が挙げられる。
【００１８】
皮膚化粧料におけるグラブリジンの配合量は、皮膚化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、好適な配合率は標準的な抽出物に換算して約０．００１〜１０重量％である。
【００１９】
皮膚化粧料には、グラブリジンの作用効果の妨げにならない限り、その皮膚化粧料の製造に通常使用される各種主剤および助剤、その他任意の助剤を使用することができる。グラブリジンと共に皮膚化粧料構成成分として利用可能なものとしては、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素消去剤等が挙げられ、グラブリジンと上記構成成分を併用した場合、グラブリジンと併用された構成成分との間の相乗作用が、通常期待される以上の優れた使用効果をもたらすことがある。また、皮膚化粧料の紫外線細胞障害改善作用、紫外線照射による細胞死抑制作用、シワ形成抑制作用、皮膚弾力性改善作用、皮膚バリア機能改善作用及び角質層保湿機能改善作用に関し、グラブリジンのみが主剤となるものに限られるわけではない。
【００２０】
以上に説明した本発明の紫外線細胞障害改善剤、紫外線照射による細胞死抑制剤、シワ形成抑制剤、皮膚弾力性改善剤、皮膚バリア機能改善剤及び角質層保湿機能改善剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【００２１】
【実施例】
以下、実施例を示して本発明を更に詳細に説明する。なお、本発明の範囲はこれらの実施例等に限定されるものではない。
【００２２】
〔製造例１〕
カンゾウ（学名：Ｇｌｙｃｈｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ  Ｌ．）の根の粗粉砕物２００ｇを抽出溶媒２０００ｍＬに投入し、還流下で５時間抽出を行った。その後ろ過し、ろ液を４０℃で減圧下にて濃縮し、この濃縮液に酢酸エチル２００ｍＬ加え還流下で５時間抽出を行った。抽出液を減圧乾燥機で乾燥した後、７０％エタノール１６０ｍＬを加え溶解し、さらに合成吸着体８０ｍＬを加え室温で約２時間かき混ぜ、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、粗グラブリジン１ｇを得た。その後、この粗グラブリジンをアセトンに溶解し、５℃で３日間静置し、グラブリジンの結晶０．８ｇを得た。以下、各試験において、グラブリジンとして精製グラブリジンを用いた。
【００２３】
〔試験例１〕線維芽細胞を用いた紫外線照射による細胞死抑制試験
製造例１で得られたグラブリジンについて、紫外線照射による細胞死抑制作用を試験した。
正常ヒト線維芽細胞を４８穴プレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの下にて２４時間培養した後、培地をＰＢＳ（−）に交換し１．０Ｊ／ｃｍ２のＵＶ−Ｂ（３０２ｎｍ）を照射した。照射後直ちにＰＢＳ（−）を捨て、グラブリジンを溶解した培地に交換し、さらに２４時間培養した。培養後、ＰＢＳ（−）にて調製した０．４ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ溶液に交換し、２時間培養後、培地をイソプロパノールに交換して細胞内に生成したブルーホルマザンを抽出した。溶出したブルーホルマザンを含有するイソプロパノールについて、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度測定した。なお、付着細胞の影響を補正するため、同時に６５０ｎｍの吸光度も測定し、両吸光度の差をもってブルーホルマザンの生成量に比例する値とした（下記の計算式における吸光度はこの補正済み吸光度である）。
【００２４】
また、同時に細胞播種後紫外線を照射しない細胞、及び細胞播種後紫外線を照射しグラブリジンを添加しない細胞についても測定し、それぞれ非照射群と照射群とした。
紫外線照射障害からの回復率（％）を下記式より算出し、この値が大きいほど紫外線照射による細胞死抑制作用が大きいと判断した。試験の結果を表１に示す。
【００２５】
紫外線照射障害からの回復率（％）
＝｛（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）｝／（Ａ−Ｂ）×１００
【００２６】
上記式中、「Ａ」は「紫外線を照射しない細胞での吸光度」、「Ｂ」は「紫外線を照射しグラブリジンを添加しない細胞での吸光度」、「Ｃ」は「紫外線を照射しグラブリジンを添加した細胞での吸光度」を表す。
【００２７】
【表１】
2004250368.tif 000003
【００２８】
表１に示す結果から、グラブリジンが線維芽細胞に対して紫外線照射障害からの回復効果、すなわち紫外線照射による細胞死抑制作用を有することが確認された。
【００２９】
〔試験例２〕表皮角化細胞を用いた紫外線照射による細胞死抑制試験
製造例１で得られたグラブリジンについて、紫外線照射による細胞死抑制作用を試験した。
正常ヒト表皮角化細胞を４８穴プレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの下にて７２時間培養した後、培地をＰＢＳ（−）に交換し２００ｍＪ／ｃｍ２のＵＶ−Ｂ（３０２ｎｍ）を照射した。照射後直ちにＰＢＳ（−）を捨て、グラブリジンを溶解した培地に交換し、さらに２４時間培養した。培養後、ＰＢＳ（−）にて調製した０．４ｍｇ／ｍＬのＭＴＴ溶液に交換し、２時間培養後、培地をイソプロパノールに交換して細胞内に生成したブルーホルマザンを抽出した。溶出したブルーホルマザンを含有するイソプロパノールについて、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度測定した。なお、付着細胞の影響を補正するため、同時に６５０ｎｍの吸光度も測定し、両吸光度の差をもってブルーホルマザンの生成量に比例する値とした（下記の計算式における吸光度はこの補正済み吸光度である）。
【００３０】
また、同時に細胞播種後紫外線を照射しない細胞、及び細胞播種後紫外線を照射しグラブリジンを添加しない細胞についても測定し、それぞれ非照射群と照射群とした。
紫外線照射障害からの回復率（％）を下記式より算出し、この値が大きいほど紫外線照射による細胞死抑制作用が大きいと判断した。試験の結果を表２に示す。
【００３１】
紫外線照射障害からの回復率（％）
＝｛｛（Ａ−Ｂ）−（Ａ−Ｃ）｝／（Ａ−Ｂ）｝×１００
【００３２】
上記式中、「Ａ」は「紫外線を照射しない細胞での吸光度」、「Ｂ」は「紫外線を照射しグラブリジンを添加しない細胞での吸光度」、「Ｃ」は「紫外線を照射しグラブリジンを添加した細胞での吸光度」を表す。
【００３３】
【表２】
2004250368.tif 000004
【００３４】
表２に示す結果から、グラブリジンが表皮角化細胞に対して紫外線照射障害からの回復効果、すなわち紫外線照射による細胞死抑制作用を有することが確認された。
【００３５】
〔試験例３〕
製造例１で得られたグラブリジンを配合したローション（以下「実施例ローション」という）を下表に従って調製した。実施例ローションの組成を以下の表３に示す。
【００３６】
【表３】
2004250368.tif 000005
【００３７】
実施例ローションと、グラブリジンを含まないほかは実施例ローションと同じ組成の比較例ローションについて下記の（１）〜（４）の評価試験を行った。
【００３８】
（１）シワ形成
生後６週齢のへアレスマウス（ＨＲ−１、雌）を実施例群と比較例群に分け背部に１週間に３回、紫外線（ＵＶ−Ｂ）を照射した。なお、照射量は、１〜３週間目は６０ｍＪ／ｃｍ２、４〜１０週間は１００ｍＪ／ｃｍ２とし、１週間に３回照射を行った。この間、実施例ローション及び比較例ローションを毎日背面部に１００μＬ塗布した。紫外線照射前及び照射開始５週後と１０週後に背面部のレプリカを作成しシワの形成度合いを調べた。
グラブリジンによるシワ形成抑制効果は表４を参考にしてスコア化することで評価した。すなわち、数値が小さいほどシワの形成が少ないことを意味している。結果を表５に示す。
【００３９】
【表４】
2004250368.tif 000006
【００４０】
【表５】
2004250368.tif 000007
【００４１】
表５に示す結果から、グラブリジンは紫外線照射によって生じるシワ形成を抑制する作用を有することが確認された。
【００４２】
（２）皮膚弾力性
（１）の紫外線照射及び試料塗布開始５週後に、ネンブタール麻酔下で、ＣＵＴＯＭＥＴＥＲ（ＣＯＵＲＡＧＥ＋ＫＨＡＺＡＫＡ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ＧｍｂＨ）を用いて試料塗布部の皮膚粘弾性を測定した。本機は皮膚につけるプローブ内を減圧し皮膚隆起の高さ（皮膚の伸び）から皮膚の伸展性、弾力性を評価することができる。評価は本機により算出されるパラメータをもとに皮膚の瞬間的な伸び（Ｕｅ）、皮膚の伸びの最大値（Ｕｆ）および皮膚の瞬間的な戻り（Ｕｒ）を指標として行った。なお測定は室温２３℃、湿度５５％に保った室内で行った。
その結果を表６に示す。なお、表６には、測定値を平均値±Ｓ．Ｅ．（ｎ＝４）で示し、「＊」はｐ＜０．０５を意味する。
【００４３】
【表６】
2004250368.tif 000008
【００４４】
表６に示す結果から、グラブリジンは紫外線照射によって生じる皮膚弾力性の低下を改善する作用を有することが確認された。
【００４５】
（３）皮膚バリア機能
（１）の紫外線照射及び試料塗布開始５週後に、ネンブタール麻酔下で、ＴＥＷＡＭＥＴＥＲ（ＣＯＵＲＡＧＥ＋ＫＨＡＺＡＫＡ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ＧｍｂＨ）を用いて試料塗布部における経表皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ値）を測定した。本機は皮膚から蒸散する水分量を測定することで角質層のバリア機能を評価することができる。測定は２秒間隔で９０秒間行い、６０秒後から９０秒後までの値を平均することでＴＥＷＬ値を算出した。評価はＴＥＷＬ値が小さいほど角質層のバリア機能は良いと判断できる。なお測定は室温２３℃、湿度５５％に保った室内で行った。
その結果を表７に示す。なお、表７には、測定値を平均値±Ｓ．Ｅ．（ｎ＝４）で示し、「＊」はｐ＜０．０５を意味する。
【００４６】
【表７】
2004250368.tif 000009
【００４７】
表７に示す結果から、グラブリジンは、紫外線照射によって生じる皮膚バリア機能の低下を改善する作用を有することが確認された。
【００４８】
（４）角質層保湿機能
（１）の紫外線照射及び試料塗布開始５週後に、ネンブタール麻酔下でＣＯＲＮＥＯＭＥＴＥＲ  ＣＭ８２５（ＣＯＵＲＡＧＥ＋ＫＨＡＺＡＫＡ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ＧｍｂＨ）を用いて試料塗布部の静電容量を測定した。角質層中の水分量は静電容量と相関し、この値が大きければ角質層水分含量が多いことを意味することから、角質層保湿機能はこの値をもとに評価した。なお測定は室温２３℃、湿度５５％に保った室内で行った。
その結果を表８に示す。なお、表８には、測定値を平均値±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝４）で示し、「＊」はｐ＜０．０５を意味する。
【００４９】
【表８】
2004250368.tif 000010
【００５０】
表８に示す結果から、グラブリジンは紫外線照射によって生じる角質層保湿機能の低下を改善する作用を有することが確認された。
【００５１】
〔試験例４〕プロフィラグリンｍＲＮＡの発現促進作用
製造例１で得られたグラブリジンについて、フィラグリンの前駆体であるプロフィラグリンのｍＲＮＡの発現促進作用について試験した。
正常ヒト表皮角化細胞を３５ｍｍのディッシュに播種し、５％ＣＯ２下、３７℃で一夜培養した。培養後、１％ＤＭＳＯに溶解した試験試料を含む又は含まない同培地２ｍＬに交換し、３７℃、５％ＣＯ２下で４８時間培養した。培養終了後、細胞から総ＲＮＡを調製し、ＴａＫａＲａ社のＰＣＲ装置（ＴａＫａＲａ  ＰＣＲ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｃｙｃｌｅｒ  ＭＰ）を用いて、ＲＴ−ＰＣＲ法によりプロフィラグリン遺伝子及び内部標準としてのＧ３ＰＤＨ遺伝子の増幅を行い、その増幅産物１０μＬを１．５％アガロースゲルにて電気泳動を行った。電気泳動後、エチジウムブロマイドで染色し、これをトランスイルミネーター下でＫＯＤＡＫ社のＤＣ１２０  ＺＯＯＭ  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｃａｍｅｒａを用いて撮影後、ＫＯＤＡＫ  １Ｄ  Ｉｍａｇｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ＥＤＡＳ２９０  Ｖｅｒｓｉｏｎ３．５にてＲＴ−ＰＣＲ産物を定量的に測定した。反応液の内容は、試薬（ＴａＫａＲａ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ  （ＡＭＶ）  Ｖｅｒ  ２．１）添付資料に従った。結果は、試験試料添加及び無添加で培養した細胞のそれぞれから調製した総ＲＮＡ標品を基にしてＰＣＲ反応により増幅させたＧ３ＰＤＨのＤＮＡ濃度に対するプロフィラグリンのＤＮＡ濃度の比（相対比）を求め、さらに試験試料無添加の相対比を１００とした時の試験試料添加の割合を算出して表現した。試験の結果を表９に示す。
【００５２】
【表９】
2004250368.tif 000011
【００５３】
表９に示す結果から、グラブリジンは皮膚の保湿機能の向上に関与するフィラグリンの前駆体であるプロフィラグリンの遺伝子発現を促進させることが確認された。
【００５４】
〔配合例１〕
下記の組成の乳液を常法により製造した。
グラブリジン（製造例１）                                    ０．０１ｇ
ホホバオイル                                                ４ｇ
オリーブオイル                                              ２ｇ
スクワラン                                                  ２ｇ
セタノール                                                  ２ｇ
モノステアリン酸グリセリル                                  ２ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０）              ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０）        ２ｇ
１，３−ブチレングリコール                                  ３ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．１５ｇ
カミツレエキス                                              ０．１ｇ
オウバクエキス                                              ０．１ｇ
香料                                                        ０．０５ｇ
精製水                                    残部（全量を１００ｇとする）
【００５５】
〔配合例２〕
下記組成の化粧水を常法により製造した。
グラブリジン（製造例１）                                    ０．０５ｇ
グリセリン                                                  ３ｇ
１，３−ブチレングリコール                                  ３ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０）        ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．１５ｇ
ワレコウモウエキス                                          ０．１ｇ
コンキオリン                                                ０．１ｇ
クエン酸                                                    ０．１ｇ
クエン酸ソーダ                                              ０．１ｇ
香料                                                        ０．０５ｇ
精製水                                    残部（全量を１００ｇとする）
【００５６】
〔配合例３〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
グラブリジン（製造例１）                                    ０．０２ｇ
流動パラフィン                                              ５ｇ
サラシミツロウ                                              ４ｇ
トウキエキス                                                ０．１ｇ
ニンジンエキス                                              ０．１ｇ
ビワエキス                                                  ０．１ｇ
マロニエエキス                                              ０．１ｇ
セタノール                                                  ３ｇ
スクワラン                                                １０ｇ
ラノリン                                                    ２ｇ
ステアリン酸                                                １ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０）        １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル                                  ３ｇ
１，３−ブチレングリコール                                  ６ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                                    １．５ｇ
香料                                                        ０．１ｇ
精製水                                    残部（全量を１００ｇとする）
【００５７】
〔配合例４〕
下記組成のパックを常法により製造した。
グラブリジン（製造例１）                                    ０．０１ｇ
ポリビニルアルコール                                      １５ｇ
ポリエチレングリコール                                      ３ｇ
プロピレングリコール                                        ７ｇ
レイシエキス                                                ０．１ｇ
ローズマリーエキス                                          ０．１ｇ
酵母エキス                                                  ０．１ｇ
クマザサエキス                                              ０．１ｇ
エタノール                                                １０ｇ
パラオキシ安息香酸エチル                                    ０．０５ｇ
香料                                                        ０．０５ｇ
精製水                                      残部（全量を１００ｇとする）
【００５８】
【発明の効果】
本発明により、紫外線細胞障害改善剤、紫外線照射による細胞死抑制剤、シワ形成抑制剤、皮膚弾力性改善剤、皮膚バリア機能改善剤及び角質層保湿機能改善剤が提供される。本発明により提供される紫外線細胞障害改善剤、紫外線照射による細胞死抑制剤、シワ形成抑制剤、皮膚弾力性改善剤、皮膚バリア機能改善剤及び角質層保湿機能改善剤は、紫外線照射によって生じる各種皮膚疾患を予防及び／又は改善することができるとともに、皮膚に適用した場合の安全性に優れているので、皮膚化粧料に配合するのに好適である。