(57)【要約】　　　（修正有）【課題】癌細胞など不安な細胞が生残するのを回避するため、アポトーシス誘導作用物質は細胞の癌化を抑制する上に有用と考えられる。効果的にアポトーシスを誘導し得るアポトーシス誘導剤を提供する。【解決手段】アポトーシス誘導剤は、カルコン類を有効成分とする。好適な実施態様では、このカルコン類はアシタバの樹液由来である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルコン類を有効成分とするアポトーシス誘導剤。
【請求項２】
前記カルコン類がアシタバの樹液由来である、請求項１に記載のアポトーシス誘導剤。
【請求項３】
請求項１または２に記載のアポトーシス誘導剤を含有する医薬品。
【請求項４】
請求項１または２に記載のアポトーシス誘導剤を含有する食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は細胞死の一つのタイプであるアポトーシスを誘導するアポトーシス誘導剤、および該アポトーシス誘導剤を含有する食品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
癌は、死亡原因が第一位の疾病であるため、その予防に対する人々の関心は非常に高い。近年、癌研究の分野ではアポトーシス、すなわち癌細胞自滅に関する研究が盛んになりつつある。アポトーシスは生物個体発生における組織、臓器の形成、また生体の恒常性維持や防御に重要な働きをしている。さらには多くの病気の発生に深い関係があることが解明されつつある。
【０００３】
生体にとって本来存在してはならない細胞、例えば癌細胞などが生き残るのを回避するために、アポトーシス誘導作用を持つ物質が開発されれば、例えば、種々の遺伝子変異を伴う細胞の癌化が抑制されると考えられる。アポトーシス誘導剤としては、例えば、セサミン、エピセサミン、またはセサモールを有効成分とするアポトーシス誘導剤（特許文献１）、アズキの種子からの抽出物（特許文献２）などが知られている。これ以外にも効果的にアポトーシスを誘導し得る物質あるいはそれを含むアポトーシス誘導剤の開発が望まれている。
【０００４】
【特許文献１】
特開２００１−１５１６７６号公報
【特許文献２】
特開２００１−１５１６８７号公報
【非特許文献１】
馬場きみ江ら、Ｆｏｏｄｓ　＆　Ｆｏｏｄ　Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｊａｐａｎ，　１９９８年、Ｎｏ．１７８、ｐ．５２−６０
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記従来の課題を解決するものであり、その目的とするところは、効果的にアポトーシスを誘導し得るアポトーシス誘導剤、つまり癌細胞などの本来死滅すべき細胞を効果的に自滅させることの可能な材料を提供することにある。本発明の目的はまた、該アポトーシス誘導剤を含有する医薬品および食品を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明は、カルコン類を有効成分とするアポトーシス誘導剤を提供する。
【０００７】
好適な実施態様では、上記カルコン類はアシタバの樹液由来である。
【０００８】
本発明はまた、上記のアポトーシス誘導剤を含有する医薬品を提供する。
【０００９】
本発明はさらに、上記のアポトーシス誘導剤を含有する食品を提供する。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明のアポトーシス誘導剤は、カルコン類を有効成分とする。カルコン類とは、植物に含有される天然色素であって、ベンザルアセトフェノンオキシ誘導体に属する黄色色素である。このカルコン類のなかでもアシタバの樹液由来のカルコン類が特に好適である。
【００１１】
アシタバ（Ａｎｇｅｌｉｃａ　ｋｅｉｓｋｅｉ）は、わが国固有のセリ科の植物であり、房総半島、伊豆半島、三浦半島、伊豆諸島、大島、八丈島などに自生している。アシタバに含まれるカルコン類としては、キサントアンゲノール、４−ヒドロキシデリシンなどが知られており、これらは、抗菌作用、抗潰瘍・胃酸分泌抑制作用、トロンボプラスチンＡ２生成阻害作用、抗アレルギー作用などを有することが報告されている（非特許文献１）。
【００１２】
本発明のアポトーシス誘導剤においては、カルコン類を含有する植物、例えば上記アシタバから上記キサントアンゲノール、４−ヒドロキシデリシンなどのカルコン類を単離し、またはこのような化合物を合成し、これを有効成分とすることができる。あるいは、該カルコン類を含有する植物、該植物からの樹液、抽出液、それらの加工品などをそのまま利用してもよい。このアポトーシス誘導剤は、上記カルコン類、および必要に応じて賦形剤、溶媒、甘味剤、潤滑剤、香味剤、分散剤、懸濁剤、安定剤、添加剤などをその使用形態に応じて含有する。
【００１３】
代表的には、本発明のアポトーシス誘導剤は、アシタバの樹液、またはその加工品であり、例えば、アシタバの樹液と賦形剤とから得られるアシタバ成分含有粉末、アシタバの樹液を含む液剤などの形態であり得る。
【００１４】
上記アシタバの樹液は、アシタバの茎を切断し、その樹液を滲出させることにより得られる。アシタバの樹液は黄汁と呼ばれている黄色の液体であり、この色は上記カルコン類に由来する。この樹液について、必要に応じて濾過、加熱殺菌などの処理を行なう。加熱殺菌処理としては、例えば、樹液が入った容器を熱湯中に入れ、容器内の樹液の温度が熱湯の温度と同じになってから数時間放置してもよいし、オートクレーブで処理してもよい。樹液は少量ずつしかとれないので、まとめて処理する場合に、加熱殺菌処理は有用である。
【００１５】
このアシタバの樹液に賦形剤を混合し、乾燥することにより、上記アシタバ成分含有粉末が得られる。賦形剤としては、デキストリン、乳糖、結晶セルロース、二酸化ケイ素、および環状オリゴ糖でなる群より選択される少なくとも１種が好適である。この中で、環状オリゴ糖、特にサイクロデキストリンが好適である。
【００１６】
上記樹液と賦形剤とは、好適には、重量比で７：３〜６：４の割合で混合される。混合にあたっては、均一な混合を行うために、エタノールなどの適当な溶媒を加えることも可能である。次いで、この混合物を必要に応じて殺菌する。殺菌は上記樹液の加熱殺菌と同じ方法が採用され得る。例えば、オートクレーブ中で１２０℃程度の温度で２０分程度行えば充分である。
【００１７】
このようにして得られるカルコン類を有効成分とするアポトーシス誘導剤は、該誘導剤を含む医薬品あるいは食品とされ得る。上記医薬品は、例えば、癌細胞のアポトーシスによる死滅を目的とした癌の予防または治療剤などである。上記食品は、食品材料と該アポトーシス誘導剤とを含み、所望の機能性を有する食品である。
【００１８】
上記医薬品は、経口投与剤および非経口投与剤のいずれの形態でも可能である。例えば、経口投与剤の剤形としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、液剤などがあり、非経口投与剤の剤形としては、注射剤、経皮吸収製剤、坐剤などがある。例えば上記錠剤、カプセル剤、顆粒剤、および細粒剤は、例えば、カルコン類、アシタバの樹液、アシタバ成分含有粉末などに、適宜、賦形剤、甘味剤、潤滑剤、香味剤、添加剤などを加え、通常の方法により所望の剤形に調製される。上記液剤および注射剤は、カルコン類、アシタバの樹液、アシタバ成分含有粉末などを、水または水以外の薬学的に許容し得る溶媒に溶解または分散させ、必要に応じて、分散剤、懸濁剤、安定剤などを添加し、通常の方法により調製される。
【００１９】
アポトーシス誘導剤を含有する医薬品の投与量は、その目的、投与対象者により異なるが、成人の体重１ｋｇに対しカルコン類として、経口投与の場合は、１０〜１００ｍｇ／日、非経口投与の場合は、１〜２０ｍｇ／日であることが好ましい。
【００２０】
アポトーシス誘導剤を含む食品の形態は特に限定されず、上記治療剤と同様の形態であってもよく、さらに上記カルコン類、あるいはカルコン類を含む材料（アシタバの樹液、アシタバ成分含有粉末など）を食品原料に加えて、種々の食品の形態にされる。
【００２１】
例えば上記カルコン類またはカルコン類を含む材料を飲料に含有させるか、あるいはビスケットのような固形の食品に含有させて健康食品あるいは機能性食品などとして提供することができる。カルコン類またはカルコン類を含む材料を用いて各種食品を製造するには、必要に応じて、油脂、エタノール、プロピレングリコール、グリセリンなどの希釈剤、アラビアガム、デキストリンなどのバインダー、安定剤、保存料などが適宜用いられる。
【００２２】
上記アポトーシス誘導剤を含有する食品には、通常、成人の体重１ｋｇに対し、カルコン類として、０．１〜１０ｍｇ／日の割合で摂取されるように含有されることが好ましい。
【００２３】
【実施例】
実施例１
八丈島原産のアシタバを栽培し、播種後１年から開花前までの期間で、新芽が５０〜６０ｃｍに育ったところで、新芽の根元を切断し、滲出した樹液を採取した。この樹液７０ｇとサイクロデキストリン粉末３０ｇとを均一に混合し、得られた混合物の凍結乾燥を行い、アシタバ成分含有粉末４５ｇを得た。この粉末中には、カルコン類である４−ヒドロキシデリシンおよびキサントアンゲロールが、それぞれ４．０２重量％および４．６８重量％の割合で含まれていた。これらの合計は８．７０重量％であり、カルコン含量の高いアシタバ成分含有粉末が得られた。
【００２４】
実施例２
実施例１で得られたアシタバ成分含有粉末をアポトーシス誘導剤として用いた。ヒト胃癌細胞（ＫＡＴＯ　ＩＩＩ細胞（財団法人ヒューマンサイエンス振興財団））を、１０％牛胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培地を用いて３７℃で２４〜７２時間培養を行い、細胞密度を４×１０５個／ｍｌとした。前記ＲＰＭＩ１６４０培地にアシタバ成分含有粉末を溶解し、最終濃度が各々０．５８ｍｇ／ｍｌ、１．１６ｍｇ／ｍｌ、および１．７４ｍｇ／ｍｌとなるように、前記細胞に添加し、３７℃にて７２時間振盪培養した。次いで、培養液中の細胞から、当業者が通常用いる方法によりＤＮＡを抽出した。これをアガロースゲル電気泳動にかけ、エチジウムブロミド染色にて検出した。上記工程においてアシタバ成分含有粉末を加えず同様の処理を行い、得られたＤＮＡをコントロールとした。電気泳動の結果を図１に示す。図１において、（１）はコントロール（５０％エタノール）、（２）はアシタバ成分含有粉末の濃度が０．５８ｍｇ／ｍｌの条件で接触させた場合の結果、（３）はアシタバ成分含有粉末の濃度が１．１６ｍｇ／ｍｌの条件で接触させた場合の結果、（４）はアシタバ成分含有粉末の濃度が１．７４ｍｇ／ｍｌの条件で接触させた場合の結果を示し、そしてＭは分子量マーカーである。図１の左側の矢印は、ＤＮＡラダーの位置を示す。図１から明らかなように、アシタバ成分含有粉末で処理した胃癌細胞のＤＮＡはいずれも分解し（フラグメンテーションを起こし）、アポトーシスが発生していることが確認された。
【００２５】
実施例３
実施例１で得られたアシタバ樹液をアポトーシス誘導剤として用いたこと以外は実施例２に準じて実験を行った。ヒト胃癌細胞とアシタバの樹液とを接触させる際のアシタバ樹液の濃度は０．３３ｍｇ／ｍｌ、０．６６ｍｇ／ｍｌ、および０．９９ｍｇ／ｍｌとした。電気泳動の結果を図２に示す。図２において、（１）はコントロール（５０％エタノール）、（２）はアシタバ樹液の濃度が０．３３ｍｇ／ｍｌの条件で接触させた場合の結果、（３）はアシタバ樹液の濃度が０．６６ｍｇ／ｍｌの条件で接触させた場合の結果、（４）はアシタバ樹液の濃度が０．９９ｍｇ／ｍｌの条件で接触させた場合の結果を示し、そしてＭは分子量マーカーである。図２から明らかなように、アシタバ樹液で処理した胃癌細胞のＤＮＡはいずれも分解し（フラグメンテーションを起こし）、アポトーシスが発生していることが確認された。
【００２６】
実施例４
アシタバ成分含有粉末の最終濃度を２ｍｇ／ｍｌとしたこと以外は実施例２に準じて実験を行い、アポトーシスの誘導を、ＤＮＡの分解の程度を指標として経時的に観察した。結果を図３に示す。図３において、（１）はコントロール（５０％エタノール処理）、（２）は２４時間後、（３）は４８時間後、（４）は７２時間後に採取した胃癌細胞のＤＮＡを示し、そしてＭは分子量マーカーである。図３から明らかなように、胃癌細胞のＤＮＡはいずれもフラグメンテーションを起こし、１日目から、アポトーシスが発生していることが確認された（図３の（２））。
【００２７】
【発明の効果】
本発明によれば、このように、カルコン類を有効成分とし効果的にアポトーシスを誘導し得るアポトーシス誘導剤が得られる。このアポトーシス誘導剤は、本来死滅すべき細胞、例えば癌細胞などのアポトーシスを効果的に誘導するため、例えば、癌の予防または治療剤、あるいは健康食品などとして広く利用される。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明のアポトーシス誘導剤で処理した胃癌細胞のＤＮＡの電気泳動写真である。
【図２】本発明のアポトーシス誘導剤で処理した胃癌細胞のＤＮＡの電気泳動写真である。
【図３】本発明のアポトーシス誘導剤で処理した胃癌細胞のＤＮＡの、経時的な分解の程度を示す電気泳動写真である。
【図１】
2004107300.tif 000002
【図２】
2004107300.tif 000003
【図３】
2004107300.tif 000004