(57)【要約】【課題】新しい起源の共役脂肪酸および脂肪酸異性化酵素を提供し、新たな共役脂肪酸の製造方法を提供すること。【解決手段】褐藻エゾヤハズ（Ｄｉｃｔｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｄｉｖａｒｉｃａｔａ）から共役脂肪酸を抽出する。また、エゾヤハズから脂肪酸異性化酵素を抽出する。それら酵素を用いて原料となるエイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などの不飽和脂肪酸を共役化し、共役化したエイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などの共役脂肪酸を製造する。【選択図】　　　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
褐藻類から抽出された共役脂肪酸。
【請求項２】
共役脂肪酸が５，７，９，１４，１７−エイコサペンタエン酸を含有する脂肪酸である請求項１の共役脂肪酸。
【請求項３】
共役脂肪酸が５，７，９，１４，１７−エイコサペンタエン酸である請求項１の共役脂肪酸。
【請求項４】
褐藻類がエゾヤハズ（Ｄｉｃｔｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｄｉｖａｒｉｃａｔａ）である請求項１、２または３いずれかの共役脂肪酸。
【請求項５】
褐藻類由来の脂肪酸異性化酵素。
【請求項６】
褐藻類がエゾヤハズ（Ｄｉｃｔｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｄｉｖａｒｉｃａｔａ）である請求項５の脂肪酸異性化酵素。
【請求項７】
褐藻類由来の脂肪酸異性化酵素を用いる共役脂肪酸の製造方法。
【請求項８】
共役脂肪酸が５，７，９，１４，１７−エイコサペンタエン酸である請求項７の共役脂肪酸の製造方法。
【請求項９】
褐藻類がエゾヤハズ（Ｄｉｃｔｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｄｉｖａｒｉｃａｔａ）である請求項７または８いずれかの共役脂肪酸の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業の属する技術分野】
本発明は、褐藻類由来の共役脂肪酸および脂肪酸異性化酵素に関する。特にエゾヤハズ（Ｄｉｃｔｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｄｉｖａｒｉｃａｔａ）由来の共役脂肪酸および脂肪酸異性化酵素に関する。また、該酵素を用いて不飽和脂肪酸を共役脂肪酸に変換する共役脂肪酸の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
天然に存在するポリエン酸は一般に非共役型の脂肪酸であるが、乳製品などに存在する共役リノール酸に関しては様々な生理活性が調べられている（例えば、非特許文献１参照）。また、共役リノール酸よりも共役二重結合数の多い共役高度不飽和脂肪酸、例えば共役エイコサペンタエン酸や共役ドコサヘキサエン酸が選択的抗腫瘍作用や抗肥満活性を有することなどが見出されている（例えば、非特許文献２、特許文献１参照）。
【０００３】
従来、これら共役脂肪酸を製造する方法としては、エチレングリコールなどの有機溶媒を使用したアルカリ共役化法が知られている（例えば、非特許文献３参照）。アルカリ共役化法は、通常、不飽和脂肪酸と過剰のアルカリ（脂肪酸の１〜１０倍モル）をエチレングリコールなどの有機溶媒中で１５０℃以上に加熱して行われる。この場合得られる共役脂肪酸は、種々の共役体の混合物である。また個々の共役体によっても生理活性の強弱があるため、特定の共役脂肪酸が製造できれば学術的にも産業的にも価値は高い。また、アルカリ共役化法では、環化およびその他の副反応も起こり、共役脂肪酸の収率が低下する、精製が困難となるなどの問題点が指摘されている。
【０００４】
アメリカ産の藻類を利用して共役脂肪酸を調製する報告（例えば、非特許文献４参照）、紅藻クシベニヒバを用いた共役脂肪酸の製造の報告などがある（例えば、特許文献２参照。）。また、それらの酵素の遺伝子を微生物、植物に導入して酵素を製造することが報告されている（特許文献３，４参照）。
【０００５】
【特許文献１】
特願平１１−９６４６０号公報
【特許文献２】
特開２００１−８６９９７号公報
【特許文献３】
国際公開第９９／３２６０４号パンフレット
【特許文献４】
国際公開第０１／０９２９６号パンフレット
【非特許文献１】
Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９５年、第１５巻、ｐ．１２４１
【非特許文献２】
Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９１年、第５１巻、ｐ．６０２５
【非特許文献３】
Ｊ．　Ａｍ．　Ｏｉｌ　Ｃｈｅｍ．　Ｓｏｃ．、１９５９年、第３６巻、ｐ．６３１
【非特許文献４】
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９７年、第３６巻、ｐ．２９８５
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
種々の共役脂肪酸の製造方法が報告されているが、まだ、選択性、生産性の面から十分に満足のいく方法が得られていない。本発明の目的は、新しい起源の共役脂肪酸および脂肪酸異性化酵素を提供すること、さらに、新たな共役脂肪酸の製造方法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記目的を達成するために種々の藻類について鋭意研究を重ねた結果、種々の藻類の中で褐藻エゾヤハズが特に高含量の共役脂肪酸を有していることを見いだした。その含量は紅藻クシベニヒバについて報告されている含量の約１０倍の含量であった。
【０００８】
本発明は、褐藻類から抽出された共役脂肪酸を要旨とする。それは、褐藻類から抽出された５，７，９，１４，１７−エイコサペンタエン酸を含有する共役脂肪酸であり、褐藻類から抽出された５，７，９，１４，１７−エイコサペンタエン酸である。好ましくは、褐藻エゾヤハズから抽出された、共役脂肪酸、５，７，９，１４，１７−エイコサペンタエン酸を含有する共役脂肪酸、または、５，７，９，１４，１７−エイコサペンタエン酸を要旨とする。
本発明は、褐藻類由来の脂肪酸異性化酵素を要旨とする。好ましくは、エゾヤハズ由来の脂肪酸異性化酵素である。
本発明は、褐藻類由来の脂肪酸異性化酵素を用いる共役脂肪酸の製造方法を要旨とする。また、褐藻類由来の脂肪酸異性化酵素を用いる５，７，９，１４，１７−エイコサペンタエン酸の製造方法を要旨とする。好ましくは、エゾヤハズ由来の脂肪酸異性化酵素を用いる共役脂肪酸、または、５，７，９，１４，１７−エイコサペンタエン酸の製造方法である。
【０００９】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳述する。本発明で用いられるエゾヤハズは褐藻類の１種であり学名はＤｉｃｔｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｄｉｖａｒｉｃａｔａである。北海道で発見され、以後日本国内に及ばず、朝鮮、中国で生育が確認されており、食用としては利用されていない藻類である。
褐藻類由来の共役脂肪酸を得るには、例えば、藻類からＢｌｉｇｈ−Ｄｙｅｒ法など常法により総脂質を抽出し、抽出油に４％塩酸メタノール溶液などを用いてメチルエステル化を行う。その後、シリカゲルカートリッジ等で色素を除くなどの精製を施し、液状物質として目的物を得ることができる。
【００１０】
褐藻エゾヤハズからの脂肪酸異性化酵素の抽出は常法に従って抽出する（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　Ｖｏｌ．３６，　２９８５　頁，　１９９７年）。例えば、褐藻エゾヤハズをバッファーでホモジナイズした後、ろ液を硫安沈殿処理し、遠心分離により沈殿物をリン酸緩衝液等に懸濁したものを粗酵素液として得ることができる。酵素の活性は脂肪酸に上記粗酵素液を加え反応させることにより測定することができる。脂肪酸と粗酵素液の反応生成物をジエチルエーテルで抽出後、溶媒を留去して淡黄色の液状物質を得る。この液状物質をジアゾメタン法でメチル化後、ＵＶ吸収スペクトルを測定し共役脂肪酸を確認する。また、基準油脂分析試験法２．４．３．１　（日本油化学協会編）に準じて共役不飽和脂肪酸含量を測定する。さらに、上記液状物質をフォトダイオードアレイ検出器を備えた逆相ＨＰＬＣに供し、生成物を分取し、ＧＣ／ＭＳ分析により構造を調べることができる。
【００１１】
本発明で共役脂肪酸の製造に用いられる原料の不飽和脂肪酸としては、例えば、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、リノール酸、リノレン酸などが挙げられる。
脂肪酸異性化酵素を用いる共役化反応は、原料の不飽和脂肪酸を褐藻エゾヤハズから抽出した粗酵素液により処理するのでも可能であるし、褐藻エゾヤハズから抽出した粗酵素液を精製した脂肪酸異性化酵素によって行うことも可能である。
【００１２】
【実施例】
本願発明の詳細を実施例で説明する。本願発明はこれらの実施例によって何ら限定されるものではない。
【００１３】
実施例１　褐藻エゾヤハズからの共役脂肪酸の抽出
海藻エゾヤハズ（湿重量１００ｇ）からＢｌｉｇｈ−Ｄｙｅｒ法により総脂質を抽出し、０．４９ｇ得た。抽出油２０ｍｇに４％塩酸メタノール溶液を加えた後、６０℃、２０分間、水２ｍｌを入れ、ヘキサン５ｍｌで３回抽出後、脱水し、メチルエステル化を行った。その後、色素を除くため、シリカゲルカートリッジで精製し、液状物質を得た。
【００１４】
この液状物質の共役不飽和脂肪酸含量を測定したところ、共役トリエン酸が１．５％含まれていた。また液状物質をアセトニトリルに溶解し、ＵＶ２７５ｎｍにおける逆相ＨＰＬＣに供した。ＨＰＬＣチャートを図１に示す。メインのピーク３についてＬＣ−ＭＳで構造を調べた結果、共役トリエン構造を持つ５，７，９，１４，１７−エイコサペンタエン酸であると同定された。また、フォトダイオードアレイ検出器を備えたＨＰＬＣで同様に測定したところ、ピーク１、２は３１５ｎｍ吸収極大をもつことから、共役テトラエン酸であることが示唆された。
【００１５】
【発明の効果】
本発明は、褐藻類、好ましくはエゾヤハズ由来の共役脂肪酸および脂肪酸異性化酵素を提供することにより、新たな共役脂肪酸の製造方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、実施例１で得られた液状物質の逆相ＨＰＬＣのクロマトグラムである。（ＨＰＬＣ条件：カラム：Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ　　　Ｃ３０−ＵＧ−５　（４×２５０ｍｍ）、移動相：アセトニトリル：水：酢酸（６０：１０：０．３５，ｖ／ｖ％）、検出：ＵＶ２７５ｎｍ）
【図１】
2004107509.tif 000002