(57)【要約】【課題】　　　　　　太陽光線により生じる活性酸素種を少量の配合で有効に消去し、前記活性酸素種に起因する皮膚の老化や疾患を防止し得る、安全で安定な活性酸素種消去剤を提供する。【解決手段】　　　　トリヒドロキシ安息香酸を糖エステル化して細胞親和性を高め、活性酸素種消去剤とする。3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルは細胞膜に対し良好な親和性を有し、細胞膜表面において活性酸素種を効率良く消去し、非常に低濃度の配合で活性酸素種による細胞傷害を防止し、これに起因する皮膚の老化及び疾患を有効に防止し得る。さらに安定性及び安全性にも優れるる。【選択図】　　　　　図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルを配合して成る、活性酸素種消去剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な活性酸素種消去剤である3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、太陽光の皮膚に対する影響が研究され、太陽光により皮膚内に生じる一重項酸素，ヒドロキシラジカル，スーパーオキシドといった活性酸素種が、表皮ケラチノサイトや真皮の線維芽細胞を攻撃し、これら細胞を死に至らしめ、その結果、皮膚の老化や種々の皮膚疾患を引き起こすことが明らかになってきた。それにつれて、このような活性酸素種を消去する物質のスクリーニングも行われ、ビタミンＥ群化合物やビタミンＣ、動植物由来のスーパーオキシドディスムターゼ様作用物質、さらにはスーパーオキシドディスムターゼ自体を皮膚外用剤に配合する試みがなされている。
【０００３】
しかし、従来用いられていたビタミンＥ，ビタミンＣのような活性酸素種消去剤は、細胞に対する親和性が低く、かなり多量に配合しなければ効果が生じなかった。動植物由来のスーパーオキシドディスムターゼ様作用物質も、天然起源であり、一定した作用を有するものを得るのが難しく、安定性も低く品質管理上の問題があった。さらに、スーパーオキシドディスムターゼ自体の配合も、酵素活性の安定化や皮膚感作性等の面で問題があった。
【０００４】
　　3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸グルコシドは、物質自体公知であり（特許文献１参照）、その抗ウィルス作用（特許文献２参照）、メラニン産生抑制作用（特許文献３参照）、及びチロシナーゼ活性阻害作用（特許文献４参照）が、知られている。
【０００５】
【特許文献１】特開昭６０−６４９９６号公報
【特許文献２】特開昭５９−１２８３２９号公報
【特許文献３】特開平３−２５８７１１号公報
【特許文献４】特開昭６１−１２２２０９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、細胞親和性が高く、少量の配合で有効な活性酸素種消去作用を示し、且つ皮膚外用剤中で安定で、しかも安全性の高い活性酸素種消去剤を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記の課題を解決するため、細胞親和性の高い活性酸素種消去剤の検討を行ったところ、3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸を糖エステルとすることにより、本発明の目的が達成されることを見い出した。
【発明の効果】
【０００８】
3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルの活性酸素種による細胞傷害防御作用は、ヒト線維芽細胞に活性酸素種を曝露し、その際の細胞生存率を指標として評価できる。培養したヒト線維芽細胞に、3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸のグリコシド，ガラクトシド，ラクトシドをそれぞれ作用させた後、洗浄し、ヒポキサンチン-キサンチンオキシダーゼ系にて活性酸素種（スーパーオキシド及びヒドロキシラジカル）を曝露した。曝露後の細胞生存率はＭＴＴ還元法により測定した。比較のため、3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸で同様に細胞を処理した場合についても測定した。
【０００９】
ＭＴＴ還元法は、細胞のミトコンドリア内に存在する脱水素酵素が基質に作用して生じるＮＡＤＨにより、系に添加したＭＴＴ（2-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-3,5-diphenyltetrazolium bromide）のテトラゾリウム環が開環することを利用する測定法である。テトラゾリウム環の開環により、青色のフォルマザンが生成するので、これを５６０ｎｍにおける吸光度により測定して、細胞生存率を求める。
【００１０】
その結果、図１に示すように、良好な細胞親和性を有する3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸のグルコシド，ガラクトシド，ラクトシドの各糖エステルで処理した場合には、７０〜８０％の良好な細胞生存率を示した。これに対し、糖エステル化していない3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸自体で処理した場合は、細胞親和性が低いため、細胞生存率は４０％弱と低かった。
【００１１】
従って、3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルは、細胞膜に対し良好な親和性を示し、細胞膜表面において活性酸素種を効率良く消去することができる。その結果、非常に低濃度で活性酸素種による細胞傷害を防止し、活性酸素種の細胞傷害作用による皮膚の老化症状や疾患を有効に防止することができる。
【００１２】
以上詳述したように、本発明により、太陽光により生じる活性酸素種を有効に除去して、これらに起因する皮膚の老化，疾患を良好に防止し得る活性酸素種消去剤を提供することができた。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
　糖としては、エステル化のしやすさや糖エステルの水溶性、感作性の出現等を考慮すると、単糖類又は二糖類〜三糖類くらいのオリゴ糖が好ましい。本発明の目的には、エリスロース，トレオース等のテトロース類、アラビノース，キシロース，リボース等のペントース類、ガラクトース，グルコース，マンノース，プシコース，フルクトース等のヘキソース類、N-アセチルガラクトサミン，N-アセチルグルコサミン，マンノサミン等のアミノ糖類、マルトース，ラクトース，ショ糖，セロビオース等の二糖類、セロトリオース等の三糖類などが好適な例として挙げることができる。
【００１４】
3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルは、たとえば3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸をエステル化し、これと糖とを水酸化ナトリウム等のアルカリ触媒存在下にて反応させ、エステル交換反応等により合成することができる。なお、副生成物のアルコールを系から除去すると、反応を効率よく進ませることができる。
【００１５】
3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルは、エタノール等のアルコールに溶解したり、基剤中に分散したりして活性酸素種消去剤とする。活性酸素種消去剤は液剤，乳剤，クリーム，軟膏など種々の形態を採ることができる。また、化粧水や乳液，皮膚用クリーム等、化粧料としても提供することができる。配合量は、皮膚外用剤中の有効濃度を考慮して、０．０１〜１０重量％が適当である。
【実施例】
【００１６】
さらに、本発明について実施例により詳細に説明する。本発明の実施例として、3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸のブドウ糖エステルを配合した乳液（実施例１）、3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸のN-アセチルグルコサミンエステルを配合した皮膚用クリーム（実施例２）、3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸のショ糖エステルを配合した乳剤性軟膏（実施例３）の処方を、それぞれ表１，表２，表３に示した。
【００１７】
表１中、(1)〜(5)の油相成分を混合，溶解して均一とし、７５℃に加熱する。一方、(8)を(7)に溶解して(6)，(10)，(13)の水相成分とともに７５℃に加熱する。次いで、上記の水相成分に油相成分を添加して予備乳化し、これに(9)を加えた後ホモミキサーにて均一に乳化する。その後冷却し、(11)を加えてｐＨを調整し、５０℃にて(12)を添加し、均一に混合する。
【００１８】
【表１】
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【００１９】
表２中、(1)〜(7)の油相成分を混合，溶解して均一とし、７５℃に加熱する。一方、(9)を(8)に溶解して(10)，(12)とともに７５℃に加熱する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化した後、ホモミキサーにて均一に乳化する。その後冷却し、５０℃
にて(11)を添加，混合する。
【００２０】
【表２】
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【００２１】
表３中、(1)〜(4)の油相成分を混合，溶解して均一とし、７５℃に加熱する。一方、(8)を(7)に溶解して(5)，(6)，(9)とともに７５℃に加熱する。次いで上記水相成分を油相成分に添加して乳化し、冷却する。
【００２２】
【表３】
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【００２３】
本発明の実施例について、実際に使用試験を行った。この際、各実施例で用いた3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルの替わりに、3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸を用いたものを比較例１，２及び３とした。使用試験は、日常戸外で作業する４０〜６０才代のパネラー２０名を１群とし、実施例及び比較例をブラインドにて各群に５月〜７月の３カ月間使用させ、使用後の皮膚のしわ，きめ，はり、及び肌荒れの改善状況を観察し、評価した。皮膚のしわ，きめ及び肌荒れの改善状況については写真撮影による外観観察により、皮膚のはりについては皮膚弾性の測定により評価し、しわについては「軽減」，「やや軽減」，「変化なし」，「増加」、きめ及びはりについては「良好」，「やや良好」，「変化なし」，「悪化」又は「低下」、肌荒れについては「改善」，「やや改善」，「変化なし」，「悪化」の各４段階で評価した。結果は、各評価を得たパネラー数にて表４に示した。
【００２４】
【表４】
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【００２５】
表４より明らかなように、各実施例使用群ではしわの増加を認めたパネラーはなく、９５〜９０％のパネラーにおいてしわの軽減を認めた。きめ及びはりについてはいずれも使用開始前より良好となっており、肌荒れの改善も全パネラーにおいて認められた。これに
対して比較例使用群では、しわについては２〜３例において軽減傾向が認められたのみで、４０〜５５％のパネラーにおいてはしわの増加が認められた。きめ及びはりについても、使用開始前より良好となったパネラーは少なく、きめについては１５〜２０％、はりについては３０〜３５％のパネラーにおいて悪化又は低下したと評価された。肌荒れについても、ほとんどのパネラーにおいて改善が認められなかった。
【００２６】
本使用試験において各パネラーは、紫外線曝露量の多い５月〜７月にほぼ毎日戸外で作業をしており、表４の結果は、本発明の実施例が紫外線曝露により生じる活性酸素種に起因する皮膚の老化や肌荒れを有効に予防，改善し得ることを示唆するものである。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】本発明で活性酸素種消去剤として用いる3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸の糖エステルと、3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸の細胞傷害防御作用を示す図である。
【符号の説明】
【００２８】
１ 3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸のグリコシド
２ 3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸のガラクトシド
３ 3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸のラクトシド
４ 3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸
【図１】
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