(57)【要約】【課題】　ウコンの抽出方法、美白に対する有効成分を検討して、紫外線照射による日焼けをはじめ、老化に伴うシミ、ソバカスの低減、退色、消去により皮膚本来の色、艶をよみがえらせて、美白、美肌を達成させる皮膚外用剤を提供する。【解決手段】　メラニン生成に対して高い阻害活性を有するたクルジオン、さらにはクルクモールを含有する。クルジオン、クルクモールに代えて、ウコン葉を疎水性有機溶剤で抽出した抽出物を含有してもよい。ウコン葉の疎水性有機溶剤抽出物には、クルジオン、クルクモールが高含有率で含まれている。【選択図】　図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
クルジオンを含有する皮膚外用剤。
【請求項２】
さらにクルクモールを含有する請求項１に記載の皮膚外用剤。
【請求項３】
ウコン（Ｃｕｒｕｃｕｍａｅ　Ｒｈｉｚｏｍａ）葉のエキスを含有する皮膚外用剤。
【請求項４】
前記ウコン葉のエキスは、疎水性有機溶剤で抽出した抽出物である請求項３に記載の皮膚外用剤。
【請求項５】
前記疎水性有機溶剤は、ヘキサン、ジエチルエーテル及び酢酸エチルからなる群より選ばれる少なくとも１種である請求項４に記載の皮膚外用剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかを含有する化粧料。
【請求項７】
ウコン葉粉末から美白成分を抽出する方法であって、
　疎水性有機溶剤で抽出する工程を含む抽出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
　本発明は、皮膚に塗ったり、染みこませたり、擦ったり、接触させたりすることによって経皮的に皮膚内部へ浸透させ、既にできたシミ、ソバカス等を低減、退色させて、本来の皮膚の色を取り戻すために用いられる皮膚外用剤に関し、化粧水、化粧クリーム等の基礎化粧品や入浴剤、薬用石けん等として用いられる皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
　近年の成層圏オゾン層の破壊に基づいて増加する紫外線から肌を守り、皮膚の老化、黒化を防止するとともに、シミ、ソバカス、くすみをなくして皮膚本来の美しさを取り戻すことを目的とした美白用基礎化粧品の需要が高まっている。特に、１９９０年代に流行した顔黒のために、紫外線を照射して日焼けさせた女性たちが、美白化の流行に転換するようになり、日焼けがおさまった後に残ったシミ、ソバカスを取り除くことについて、強い要望がある。
【０００３】
　美白用化粧品としては、紫外線照射により生じる活性酸素による色素産生を抑制して、肌の老化に伴うくすみを改善しようとするものや、シミの原因となるメラニン生成反応の一部を触媒するチロシナーゼ活性を阻害することによりシミを低減しようとするものがある。前者の化粧品としては、ビタミンＣ、トコフェロール（ビタミンＥ）、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）等の抗酸化剤を含有させた化粧品が販売されている。しかし、ビタミンＣ、Ｅ等のビタミン類は、一般に安定性が悪く、また活性酸素で酸化された後に生じる酸化型ビタミンＡ、酸化型ビタミンＥが悪影響を及ぼすため、美白という点では満足できるものではない。安定性に優れた合成抗酸化剤は、近年の消費者の安全性志向、自然志向、健康志向から、敬遠される傾向にある。
【０００４】
　自然派化粧品を好む消費者の要望に応えるべく、美肌、美白化に有用な成分として、ハーブエキス又は生薬エキスを使用した美白用自然派化粧品が提案されている。
　例えば、特許文献１には、チロシナーゼ活性阻害に基づくメラニン生成抑制剤として、ウコン、チョウジ等の生薬抽出物を含有する皮膚化粧料が開示されている。ここで用いられるウコン抽出物は、ウコンの根茎部を水、メタノール、エタノール等の親水性有機溶剤で抽出した抽出物である。
【０００５】
　特許文献２には、バンウコン、ササゲ、ワサビノキ等の生薬抽出物が不飽和脂肪酸酸化防止作用及び活性酸素消去作用に優れ、これらを含有する皮膚外用剤がくすみ改善に対してビタミンＥよりも優れていることが開示されている。ここで用いられているバンウコンの抽出物は、地下茎の熱水抽出物、全草のエタノール抽出物、地下茎の１，３ブチレングリコールの抽出物であり、当該抽出物の優れた抗酸化作用により、シワ、ハリ、さらには肌のくすみを改善しようとするものである。
【０００６】
　特許文献３には、グリセリンやヒアルロン酸Ｎａ等の水溶性増粘剤、エタノール等の抗菌性アルコール、トコフェロール類等の抗酸化ビタミン類、メフェナム酸やトラネキサム酸等の抗炎症剤とともに、美白成分として、オウゴン、ボタン、アロエ、にんじん、ウコン等の植物抽出物を添加した化粧用組成物が開示されている。この特許文献３には、紫外線により惹起された色素沈着が消退することが示されているが、その作用効果に対する植物エキスの役割は明らかにされていない。
【０００７】
　一方、ウコンの根茎抽出物に含まれるクルクミンが抗酸化作用を有することが知られており（非特許文献１）、特許文献４，５では、クルクミンの塩又は誘導体が、マトリックスプロテアーゼ（コラゲナーゼ、ゼラチナーゼなど）の活性阻害剤として、働くことを利用した化粧品が提案されている。ここで開示されている化粧品は、皮膚の老化に関連するエラスチン等の繊維タンパク質の分解を防止して、シワ、タルミ、肌のくすみを改善しようとするものである。
【０００８】
【特許文献１】特開平６−２２７９６０
【特許文献２】特開平２００２−１２１１４４
【特許文献３】特開２００２−２１２０５２
【特許文献４】特開２００１−１３９４６６
【特許文献５】特開２００２−８０３３８
【非特許文献１】糸川秀治監修「ウコンの凄い特効」宙出版、２００１年６月２２日第１０刷、ｐ．２０ー３４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
　抗酸化成分による活性酸素の捕捉は、紫外線照射によるシミ、ソバカスの新生を抑制しようとするものであり、既にできているシミ、ソバカスの低減、消失、退色といった美白効果に対しては、更なる向上が望まれている。
【００１０】
　一方、上述のように、肌、皮膚に対するウコンエキスの効果を利用する化粧品は、種々開示されているものの、その作用効果のメカニズムは未だ明らかではなく、抽出方法、エキスの組成によっても効果にばらつきがある。
【００１１】
　本発明は、以上の事情に鑑みてなされたものであり、その目的とするところは、ウコンの抽出方法、美白化に対する有効成分を検討して、紫外線照射による日焼けをはじめ、老化に伴うシミ、ソバカスの低減、退色、消去により皮膚本来の色、艶をよみがえらせて、美白、美肌を達成させる皮膚外用剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
　本発明の皮膚外用剤は、クルジオンを含有し、さらにクルクモールを含有してもよい。
　本発明の別の見地による皮膚外用剤は、ウコン（Ｃｕｒｕｃｕｍａｅ　Ｒｈｉｚｏｍａ）葉のエキスを含有するもので、特にウコン葉を疎水性有機溶剤で抽出した抽出物を含有することが好ましい。また、前記疎水性有機溶剤は、ヘキサン、ジエチルエーテル及び酢酸エチルからなる群より選ばれる１種であることが好ましい。
【００１３】
　本発明の化粧料は、上記本発明の皮膚外用剤を含有するものである。
　本発明のウコン葉粉末から美白成分を抽出する方法は、疎水性有機溶剤で抽出する工程を含む。
【発明の効果】
【００１４】
　本発明の皮膚外用剤は、経皮的に皮膚内部に取り込まれて、図１に示す反応経路において、チロシナーゼの活性を阻害することにより、シミの原因となるメラニンの生成を抑制し、さらに皮膚のターンオーバーに伴って、すでにできたシミ、ソバカスを退色、低減を期待できるので、化粧料、入浴剤に配合される美白エッセンスとして有効である。また、本発明の皮膚外用剤は、抗菌活性を有しているので、皮脂性の肌のニキビや化膿防止にも有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
　本発明の皮膚用外用剤は、下記化学式（１）で示されるクルジオン、すなわち１（１０）−ゲルマクレン−５，８−ジオンを含有している。
【化１】
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【００１６】
　さらに、化学式（２）で示されるクルクモールを含有してもよい。
【化２】
2004131498.tif 000004
【００１７】
　クルジオン及びクルクモールは、経皮透過性に優れ、皮膚内部に浸透して、図１に示す反応経路において、チロシナーゼ活性を阻害し、これによりメラニンの生成を抑制することができる。また、クルジオン及びクルクモール、特にクルジオンは、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ），枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）等の各種バクテリアやカビ類に対して抗菌性を有している。
【００１８】
　本発明の皮膚外用剤は、クルジオン、さらにはクルクモール自体を含有させてもよいし、これらの成分を主成分とするウコン葉の抽出物、特にウコン葉の疎水性有機溶媒による抽出物を含有させてもよい。
【００１９】
　ここで、「ウコン」とは、学術名「Ｃｕｒｃｕｍａｅ　Ｒｈｉｚｏｍａ」で、一般に秋ウコン（鬱金：Ｃｕｒｃｕｍａ　ｌｏｎｇａ）と呼ばれているもの及び春ウコン（姜黄：Ｃｕｒｃｕｍａ　ａｒｏｍａｔｉｃａ）と呼ばれているものをいう。
【００２０】
　従来より、ウコンについては、その根茎エキス及びその主成分であるクルクミンの利胆作用が知られており（株式会社南江堂の生薬学改訂第４版参照）、生薬として用いられている。また、近年では、クルクミンの抗酸化作用や根茎エキスの消炎作用を利用して、化粧品の抗酸化剤や抗炎症剤、美白成分等の有効成分にも利用されているが、葉エキスについては、その効能は知られておらず、廃棄されていたのが現状である。
【００２１】
　ウコンの葉の抽出精油の成分は、根茎抽出成分組成と異なっている。ガスクロマトグラフィー及び質量スペクトル分析の結果、ウコン葉抽出成分の含有率が１質量％以上の成分は、１，８−シネロール（１，８−ｃｉｎｅｏｌｅ）、レナルール（ｌｅｎａｌｏｏｌ）、α−テルピネオール（α−ｔｅｒｐｉｎｅｏｌ）、カリオフィレンオキサイド（ｃａｒｙｏｐｈｌｌｅｎｅ　ｏｘｉｄｅ）、クルジオン（ｃｕｒｄｉｏｎｅ）、ゲルマクロン（ｇｅｒｍａｃｒｏｎｅ）、クルクモール（ｃｕｒｃｕｍｏｌ）などであり、クルジオン及びクルクモールの含有率は約５０質量％である。クルジオンはウコンの根茎エキスにはほとんど含まれておらず、逆に根茎エキスの有効成分として知られているクルクミンは、ウコン葉エキスにはほとんど含有されていない。
【００２２】
　本発明の皮膚外用剤は、クルジオンを有効成分として利用することにより、ウコン根茎エキスよりも優れた美白効果を得ようとするものである。そして、従来廃棄されていたウコン葉を利用することにより、有効成分であるクルジオン及びクルクモールを単独で使用するよりも容易に入手することができ、またウコン葉エキスに含まれているクルジオン及びクルクモール以外の成分（テルペン類など）やミネラルに基づくプラスアルファの効果も期待できる。
【００２３】
　ウコン葉抽出エキスを得るために使用する抽出溶媒としては、供する製品の使用目的、種類あるいは後に行う加工処理等を考慮した上で選択すれば良いが、通常、水；メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール等の低級アルコール；プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類；ヘキサン、へプタン等の炭化水素類；エチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル類などを用いることができる。しかし、美白有効成分であるクルジオン、クルクモールは、ヘキサン等の疎水性有機溶媒に対する溶解度が高いことから、これらの美白成分の含有率が高い抽出物を得るためには、疎水性有機溶剤、好ましくはヘキサン、ジエチルエーテル及び酢酸エチルよりなる群から選択される１種又はこれらの混合物を用いて抽出することが好ましく、より好ましくはヘキサンである。
【００２４】
　抽出に際しては、例えばウコン葉粉末をメタノールで抽出した後、さらにヘキサンで抽出するなど、複数段階で抽出を行ってもよいが、美白成分の含有率を高めるために、疎水性有機溶剤による抽出工程を含むようにすることが好ましい。
　これらの溶媒で抽出したエキス含有溶液をそのまま皮膚外用剤として用いても良いし、必要に応じて濃縮、希釈、濾過、乾燥等の処理をして用いても良い。また、抽出後、疎水性有機溶剤を乾燥等により揮発させてしまって、美白成分の含有率が高い粉末を得るようにしてもよい。
【００２５】
　本発明の皮膚外用剤は、上記ウコン葉エキス、あるいは有効成分であるクルジオン、さらにはクルクモールを適当な溶媒、基剤に含有させて使用してもよいし、上記エキス又はクルジオン（及び必要に応じてさらにはクルクモールを添加）をエッセンスとして、化粧品や医薬部外品に添加してもよい。具体的には、美白料だけでなく、クレンジングクリーム、クレンジングローション、先顔クリーム、石けん等の皮膚洗浄剤；保湿化粧水、柔軟化粧水、収斂化粧水等の整肌料；ミルキィローション、エモリエントミルク、バニシングクリーム等の保護料；マッサージクリーム、マッサージローション、フォームパック、ピールオフパック等の賦活料；入浴剤；パップ剤などに、美白成分として添加してもよい。いずれの場合も、経皮的に有効成分が皮膚内部に取り込まれて、シミ、ソバカスの退色、低減、消失に働くことができる。
【００２６】
　最終製品におけるクルジオンの含有割合又はウコンエキスの含有割合は、最終製品の種類に応じて適宜選択されるが、化粧水の場合、ウコンエキスの含有率は、１〜３０質量％程度が好ましく、クルジオン含有率は１〜２０質量％程度が好ましい。
【００２７】
　本発明の皮膚外用剤は、最終製品に応じて、抽出物の効果を損ねない範囲で、基剤、保湿剤、増粘剤、界面活性剤類、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、キレート成分を配合することができる。
【００２８】
　油性基剤としては、ミツロウ、カカオ油；カルナバロウ、高級脂肪酸、固形パラフィン、セチルアルコール、ステアリルアルコール等の固形状油性原料；ワセリン、ラノリン等の半固形状油性原料；スクワラン、オリーブ油、ヒマシ油、パーム油、ピーナッツ油、流動パラフィン、オレイン酸、リノール酸、ミリスチン酸オクチルドデシル、シリコーン油などを用いることができる。
【００２９】
　水性基剤としては、グリセリン、ソルビトール、ポリエチレングリコール、ピロリドンカルボン酸及びその塩、コラーゲン、ヒアルロン酸及びその塩、コンドロイチン硫酸及びその塩等の保湿剤；カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルアルコール、キサンタンガム、カルボキシビニルポリマー、ヒドロキシプロピルセルロース、アラビアゴム等の増粘剤などが用いられる。
【００３０】
　界面活性剤としては、イソステアリン酸ポリエチレングリコール、ステアリン酸ソルビタン、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヘキシルデ゛シルエーテル等の非イオン型界面活性剤；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルリン酸ナトリウム等のアニオン型界面活性剤；塩化ステアリルジメチルベンジルアンモニウム等のカチオン型界面活性剤；ショ糖脂肪酸エステル、カゼインナトリウム、レシチン、コラーゲン等の天然型界面活性剤などが用いられる。
【００３１】
　ｐＨ調整剤としては、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素アンモニウム等が挙げられる。
【００３２】
　この他、必要に応じて添加され得るものとして、パラジメチルアミノ安息香酸、ウロカニン酸エチル、ジイソプロピル桂皮酸エチル、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、サリチル酸トリエタノールアミン等の紫外線吸収剤；エチルパラベン、ブチルパラベン等の防腐剤；グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸誘導体、サリチル酸誘導体、ヒノキチオール、酸化亜鉛、アラントイン等の消炎剤；パルミチン酸レチノール等のビタミンＡ類、リボフラビン，ニコチン酸アミド等のビタミンＢ類、コレカルシフェロール等のビタミンＤ類、ｄｌ−α−トコフェロール等のビタミンＥ類などの抗酸化剤；エリソルビン酸ナトリウム、セージエキス、パラヒドロキシアニソール等の酸化防止剤；ローヤルゼリー、コレステロール誘導体各種アミノ酸等の賦活剤；γ−オリザノール、デキストラン硫酸ナトリウム等の血行促進剤；チタンイエロー、カーサミン、ベニバナ等の色剤；その他の植物エキスが挙げられる、
【実施例】
【００３３】
　〔ウコンエキスの調製〕
　ウコン葉抽出液Ｎｏ．１：
　沖縄産の春ウコンの葉粉末を３０％エタノール中に２日間浸漬した後、濾過した。残査を再び３０％エタノールで２日間浸漬して、濾過した。得られた濾液（エタノール抽出液）を、減圧濃縮した後、８０℃で加熱殺菌し、冷却後、濾過して、ウコン葉エキスを得た。このウコン葉エキス２００ｇを３０％エタノール水に溶解して１リットルの溶液とした（ウコン葉エキス含有率２０％）。
【００３４】
　ウコン葉抽出液Ｎｏ．２：
　山川町の春ウコンの葉粉末７００ｇをヘキサン４リットル中に２日間浸漬した後、濾過した。残査を再びヘキサン４リットルで２日間浸漬して、濾過した。得られた濾液（ヘキサン抽出液）を、減圧濃縮して、ウコン葉エキスを得た。
【００３５】
　ウコン根抽出液：
　沖縄産の春ウコンの根粉末を３０％エタノール中に２日間浸漬した後、濾過した。残査を再び３０％エタノールで２日間浸漬して、濾過した。得られた濾液（エタノール抽出液）を、減圧濃縮した後、８０℃で加熱殺菌し、冷却後、濾過して、ウコン根エキスを得た。このウコン根エキス２００ｇを３０％エタノール水に溶解して１リットルの溶液とした（ウコン根エキス含有率２０％）。
【００３６】
　〔活性酸素除去効果〕
　ウコン葉抽出液Ｎｏ．１及びウコン根抽出液について、活性酸素除去機能を、ＮＢＴ試験により測定した。
【００３７】
　ＮＢＴ試験は、発色試薬（ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）０．２４ｍＭとキサンチン０．４ｍＭを含有するｐＨ８．０のリン酸緩衝液）と酵素液（０．０４９Ｕ／ｍｌのキサンチノキシダーゼ含有）を試料液に加え、図２に示す反応により生じるジホルマザンの生成量を測定することにより、キサンチンの酸化により生じた活性酸素ラジカルの消去量を調べる試験である。試料から発生する水素イオン（活性酸素ラジカル除去機能）が多いほど、ＮＢＴがジホルマザンに変化する量が減少する。
【００３８】
　ウコン葉抽出液Ｎｏ．１又はウコン根抽出液１０μｌに、発色試薬１００μｌを添加して、ミキサーで１分間攪拌した後、酵素液１００μｌ添加して、１分間攪拌して、３７℃で２８分間加温した。その後、反応停止液（ドデシル硫酸ナトリウム６９０ｍＭ）を２０μｌ添加し、５分間攪拌して、反応を停止させた。５６０ｎｍでの吸光度ＥＳを測定した。
【００３９】
　酵素液に代えて、ブランク液として蒸留水１００μｌを用いて、同様に行って、５６０ｎｍでの吸光度ＥＳＢｌを測定した。
【００４０】
　コントロールとして、試料水溶液に代えて蒸留水１０μｌを用いて、酵素液を添加した場合の５６０ｎｍでの吸光度（ＥＢｌ）及び酵素液の代わりにブランク液を用いた場合の５６０ｎｍでの吸光度ＥＢＢｌを測定した。
【００４１】
　測定した吸光度から、下式に基づいて、活性酸素除去率を求めた。
　活性酸素除去率＝｛１−（ＥＳ−ＥＳＢｌ）÷（ＥＢｌ−ＥＢＢｌ）｝×１００
　ウコン葉抽出液Ｎｏ．１の活性酸素除去率は３４．４％であり、ウコン根の活性酸素除去率は６３％であった。ウコン葉エキスの活性酸素除去機能は、ウコン根エキスに比べて低いといえる。ウコン根エキスには、水素イオンを発生するクルクミンを含有しているが、ウコン葉エキスの主成分であるクルジオン、クルクモールには、ヒドロキシラジカルの発生が期待できないからと考えられる。
【００４２】
　〔チロシナーゼ活性阻害作用〕
　ウコン葉抽出液Ｎｏ．１及びウコン根抽出液について、メラニンの生成に関与する酵素であるチロキシナーゼ活性の阻害作用を調べた。
【００４３】
　測定は、チロシナーゼ酵素液（０．１単位／ｍｇ、１０％）と、基質としてＬ−ＤＯＰＡ（Ｌ−ジヒドロキシフェニルアラニン）をｐＨ６〜６．２に保持するリン酸緩衝液（１／１５ＭのＮａ２ＨＰＯ４溶液２００ｍｌと１／１５ＭのＫＨ２ＰＯ４溶液８００ｍｌの混合液）に溶解させた溶液を使用し、試料液を添加して、ドーパキノンの生成量を測定することにより行った。Ｌ−ＤＯＰＡは、図１に示すように反応して、メラニン生成の元となるドーパキノンを生成し、チロシナーゼ酵素は、この反応に関与している。従って、試料がチロシナーゼ酵素反応を阻害することにより、ドーパキノン生成量を低下させ、結果としてメラニンの生成を抑制することができる。
【００４４】
　具体的には、チロシナーゼ酵素液として、ジャガイモ塊茎から調製したアセトンパウダー１ｇに、リン酸緩衝液１０ｍｌを加えて得られる懸濁液を吸引濾過して得られた濾液を用いた。
【００４５】
　試料液であるウコン葉抽出液Ｎｏ．１又はウコン根抽出液２０μｌに、基質溶液１００μｌと酵素液２０μｌを添加して混合し、３０℃で１５分間反応させた後、反応停止液として０．１Ｎ塩酸を２０μｌ添加した。
　反応後の液について、４００ｎｍで吸光度（Ｓ）を測定した。
【００４６】
　なお、ブランクとして、試料液及び基質に代えてリン酸緩衝液を使用して、４００ｎｍで吸光度（Ｂ）を測定した。下式により、チロシナーゼ阻害率を算出した。
　チロシナーゼ阻害率＝（Ｂ−Ｓ）／Ｂ×１００
【００４７】
　ウコン葉抽出液Ｎｏ．１のチロシナーゼ活性阻害率は１４．９％であり、ウコン根エキスのチロシナーゼ活性阻害率は７．７％であった。ウコン葉抽出液は、ウコン根抽出液の約２倍のチロシナーゼ活性阻害作用を有することがわかる。
【００４８】
　〔抽出方法の違いによるウコン葉エキスとチロシナーゼ活性阻害作用の関係〕
　ウコン葉抽出液Ｎｏ．１について、ヘキサンと水で分液し、ヘキサン画分と水画分の双方について、チロシナーゼ活性阻害率を上記方法と同様にした測定した。
　ヘキサン画分のチロシナーゼ活性阻害率は４６．９％であったのに対し、水画分は−３８％であった。ヘキサン画分ではウコン葉抽出液Ｎｏ．１と比べてチロシナーゼ活性阻害が増大したのに対し、水画分ではチロシナーゼ活性を促進するという逆転現象が認められた。
【００４９】
　ヘキサン画分をガスクロマトグラフィーにかけたところ、主成分は、クルクモールとクルジオンであった。
【００５０】
　〔ウコン葉ヘキサン抽出液に含まれるチロシナーゼ活性阻害作用物質の検索〕
　ウコン葉抽出液Ｎｏ．２をガスクロマトグラフィーにかけたところ、図３に示すような結果が得られた。図３から、ウコン葉ヘキサン抽出液の主成分は、成分２と成分６であることがわかる。
【００５１】
　次に、１ｇのウコン葉抽出液Ｎｏ．２をｍシリカゲルを充填したカラムに注入した後、、ヘキサンと酢酸エチル混合液（ヘキサン：酢酸エチル３：１）、酢酸エチル、クロロホルム、メタノールの順で、展開、溶出した。得られた溶出液の成分を検索したところ、成分２はヘキサンと酢酸エチルの混合液画分に含まれ、成分６は酢酸エチル画分に含まれることがわかった（純度９０％以上）。
【００５２】
　上記ヘキサンと酢酸エチルの混合液画分、及び酢酸エチル画分の溶媒を留去したところ、白色結晶が得られた。成分２の収量は０．３７ｇであり、成分６の収量は０．２３ｇであった。
【００５３】
　成分２及び成分６の各結晶について、質量分析及び融点を測定したところ、図４及び図５に示す結果が得られた。成分２はセスキテルペンケトン構造をもつクルジオン、成分６はセスキテルペンアルコールのクルクモールであることが同定できた。
【００５４】
　成分２及び成分６の白色結晶について、チロシナーゼ活性を上記方法に準じて測定した。尚、成分２及び成分６は、いずれも水に溶解しなかったので、少量のジメチルスルフォキシド（ＤＩＭＳＯ）に溶解した後、水に分散させて試料液とした。
【００５５】
　成分２のチロシナーゼ阻害活性は、６２．１％、成分６のチロシナーゼ阻害活性は５５．４％であった。いずれもウコン葉抽出液Ｎｏ．１のヘキサン画分よりも阻害活性が高いことから、ウコン葉に認められるチロシナーゼ活性阻害作用は、クルジオン、クルクモールに基づくことがわかる。
【００５６】
　尚、クルジオン、クルクモールの試料液について、活性酸素除去効果を上記方法に準じて測定したところ、活性酸素除去効果は認められなかった。
【００５７】
　〔化粧水としての効果〕
　ウコン抽出液Ｎｏ．１を精製水で希釈して、ウコン葉エキス２％の化粧水を調製した。
【００５８】
　この化粧水を、朝の洗顔後で化粧前に、及び夜の洗顔後につける化粧水の代わりとして６人のパネラーに、２ヶ月間使用してもらったところ、以下のような結果を得た。
【００５９】
　パネラー１（２４歳の女性）；シミが薄くなり、肌が白くなった
　パネラー２（６０歳の女性）；シミが薄くなった
　パネラー３（５９歳の女性）；シミが２ヶ月程度で半分以下になった。
　パネラー４（４６歳の男性）；ソバカスが１ヶ月程度で１／４程度にまで減少した。
　パネラー５（３７歳の女性）；毛穴の黒ずみがなくなった。
　パネラー６（３１歳の女性）；湿疹やニキビの芯が膿んだりすることなく、とれてきた。
【００６０】
　パネラー１〜４の結果からわかるように、本発明の化粧水は、シミ、ソバカスの退色、低減、消去に効果がある。また、パネラー５については、シミ、ソバカスではないが、本発明の化粧水により黒ずみが減り、色素退色といった美白効果があることがわかる。
【００６１】
　パネラー６については、色素退色といった美白効果ではないが、ウコン葉の抽出物の抗菌効果によるものではないかと考えられる。
【００６２】
　〔抗菌効果〕
　熊本産ウコン葉粉末７００gをメタノール４リットルで２４時間、室温で抽出し、これを濾過して、メタノール抽出液と残査に分けた。この残査を、再度４リットルのメタノールに浸し、同様に濾過した後、再度この残査に対してメタノール抽出を行った。得られたこれらのメタノール抽出液をまとめて減圧濃縮し、１２２．１ｇのメタノール抽出物を得た。
【００６３】
　得られたメタノール抽出物をヘキサン１リットルを用いてヘキサン層とメタノール層とに分液し、それぞれの層を減圧濃縮して、３８．７９７１ｇのヘキサン抽出物と４９．９３８ｇのメタノール抽出物に分けた。ヘキサン抽出物とメタノール抽出物の双方について、ペーパーディスク法で、大腸菌を指標として抗菌活性を調べたところ、メタノール抽出物には抗菌活性は認められず、ヘキサン抽出物に抗菌活性が認められた。
【００６４】
　次いで、ヘキサン抽出物を水蒸気蒸留して、精油成分０．３２３ｇを得た。この精油成分を用いて、大腸菌を指標に、マイクロプレート法でマイナスコントロールにＤＭＳＯ、ポジティブコントロールに安息香酸を用いて抗菌試験を行ったところ、安息香酸と同程度の抗菌性を示した。
【００６５】
　このヘキサン抽出成分をシリカゲルクロマトグラフィーを用いて、クルジオン含有フラクション及びクルクモール含有フラクションを得た。各フラクションについて、ペーパーディスク法及びマイクロプレート法で、各種菌に対する抗菌活性を調べた。結果を表１（ペーパーディスク法）及び表２（マイクロプレート法）に示す。
【００６６】
　表中、「＋」は抗菌活性があることを示し、その数が多い程、活性が強いことを示している。「−」は抗菌活性がないことを示している。
【００６７】
【表１】
2004131498.tif 000005
【００６８】
【表２】
2004131498.tif 000006
【００６９】
　表１及び表２の結果から、クルジオン及びクルクモールの含有率は、種々のバクテリア及び一部のカビについて、抗菌活性を有することが確認できた。
【産業上の利用可能性】
【００７０】
　本発明の皮膚外用剤は、高いチロシナーゼ活性阻害作用を有し、また抗菌活性を有しているので、美白用化粧品をはじめ、ニキビ、しみの防止、治療を目的とする皮膚外用剤として用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】メラニン生成のメカニズムを説明するための反応経路概略図である。
【図２】活性酸素除去効果の測定原理を説明するための反応経路概略図である。
【図３】ウコン葉抽出液Ｎｏ．２のガスクロマトグラフィーである。
【図４】ウコン葉抽出液Ｎｏ．２の成分２のマススペクトルである。
【図５】ウコン葉抽出液Ｎｏ．２の成分６のマススペクトルである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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