(57)【要約】【課題】相乗的な抗腫瘍活性を示す新規な抗腫瘍性組成物を提供すること。【解決手段】本発明は、アガリクス抽出物とプロポリス抽出物とを配合してなる抗腫瘍性組成物を提供する。この組成物は、アガリクス抽出物単独の場合の腫瘍容積抑制率およびプロポリス抽出物単独の場合の腫瘍容積抑制率からの予想を超えて高い抗腫瘍活性を示す。【選択図】　　　　　　　　図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アガリクス抽出物とプロポリス抽出物とを配合してなることを特徴とする、抗腫瘍性組成物。
【請求項２】
前記アガリクス抽出物と前記プロポリス抽出物との合計重量を１００部としたとき、前記アガリクス抽出物の重量比率が１０部以上、９５部以下であることを特徴とする、請求項１記載の抗腫瘍性組成物。
【請求項３】
前記アガリクス抽出物の重量比率が３０部以上であることを特徴とする、請求項２記載の抗腫瘍性組成物。
【請求項４】
前記プロポリス抽出物が、プロポリス原塊から水及びアルコールを用いて抽出された抽出物、またはプロポリス原塊から超臨界圧抽出法を用いて抽出された抽出物であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一つの請求項に記載の抗腫瘍性組成物。
【請求項５】
前記アガリクス抽出物が、アガリクス茸から１００℃以下の水を用いて抽出された抽出物からなることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一つの請求項に記載の抗腫瘍性組成物。
【請求項６】
前記アガリクス抽出物が、アガリクス茸から１００℃以下の水を用いて抽出された抽出液にアルコールを添加し、タンパク質および／または蛋白複合体を沈降させて得られた抽出物からなることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一つの請求項に記載の抗腫瘍性組成物。
【請求項７】
前記アガリクス抽出物がアガリクス多糖体蛋白複合体であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一つの請求項に記載の抗腫瘍性組成物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一つの請求項に記載の抗腫瘍性組成物を動物（ヒトを除く）に対して投与することを特徴とする、動物の腫瘍を抑制する方法。
【請求項９】
アガリクス多糖体蛋白複合体とプロポリス抽出物とを配合してなる経口摂取組成物であって、前記アガリクス多糖体蛋白複合体と前記プロポリス抽出物との合計重量を１００部としたとき、前記アガリクス抽出物の重量比率が４０部以上、９５部以下であることを特徴とする、経口摂取組成物。
【請求項１０】
前記プロポリス抽出物が、プロポリス原塊から水及びアルコールを用いて抽出された抽出物、またはプロポリス原塊から超臨界圧抽出法を用いて抽出された抽出物であることを特徴とする、請求項９記載の経口摂取組成物。
【請求項１１】
前記アガリクス多糖体蛋白複合体が、アガリクス茸から１００℃以下の水を用いて抽出された抽出液にアルコールを添加し、タンパク質および／または蛋白複合体を沈降させて得られた抽出物からなることを特徴とする、請求項９または１０記載の経口摂取組成物。
【請求項１２】
抗腫瘍活性を有することを特徴とする、請求項９〜１１のいずれか一つの請求項に記載の経口摂取組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、抗腫瘍性組成物、経口摂取組成物および動物の腫瘍を抑制する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
プロポリス抽出物、アガリクス抽出物は、各々抗腫瘍効果を期待される健康食品として民間で使用されている。プロポリス抽出物は、腫瘍細胞の増殖を抑制する作用を有するといわれている。また、アガリクス抽出物は、マクロファージ、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞を賦活し、腫瘍細胞の捕食を促進するものともいわれている。プロポリス抽出物では、超臨界圧抽出によって可溶物を抽出したり、アルコール抽出した後水抽出するなどの方法が提案されている。また、アガリクス抽出物では、抽出法の工夫ばかりでなく、キノコを酵素分解した後エキスを抽出したりして有効成分のみを取り出そうとしている。１例として、アガリクス茸に含まれるエルゴステロールに抗腫瘍性効果が高いことが報告されている。また、また、水野らの研究の中で、アガリクス子実体の水抽出液をアルコール処理することで得られるアガリクス多糖体タンパク複合体（ＡＧＳＥ）に機能性の高い成分が濃縮されることが報告されてきた（水野卓、Ｔｈｅ　　ＣｈｅｍｉｃａｌＴｉｍｅｓ　　Ｖｏｌ１，Ｐ１２，１９８９）。
【０００３】
また、プロポリス抽出物とアガリクス抽出物との配合物が市販されている（資生堂株式会社：商品名「プロポリス＋アガリクス茸」）。この商品は健康増進用途に販売されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、プロポリス抽出物とアガリクス抽出物との両方を配合した美容健康食品は市販されているが、プロポリス抽出物とアガリクス抽出物との両方を配合した組成物の抗腫瘍活性については、いまだ検討されておらず、不明であった。
【０００５】
本発明の課題は、相乗的な抗腫瘍活性を示す新規な抗腫瘍性組成物を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明は、アガリクス抽出物とプロポリス抽出物とを配合してなることを特徴とする、抗腫瘍性組成物に係るものである。
【０００７】
本発明者は、アガリクス抽出物とプロポリス抽出物とを配合することにより、アガリクス抽出物単独、あるいはプロポリス抽出物単独とは異なる相乗的な抗腫瘍活性が得られることを見いだし、本発明に到達した。
【０００８】
この相乗的な抗腫瘍活性について、例えば図１のグラフを参照しつつ説明する。グラフの横軸はアガリクス抽出物の割合（重量部単位）であり、縦軸は腫瘍容積抑制率である。ここで、アガリクス抽出物、プロポリス抽出物が、それぞれ単独で抗腫瘍活性を有することは公知である。図１においても、アガリクス抽出物０部（プロポリス抽出物１００部：点Ｃ）の場合、アガリクス抽出物１００部（点Ｄ）の場合には、それぞれ所定の腫瘍容積抑制率を示す。
【０００９】
ここで、プロポリス抽出物とアガリクス抽出物とを配合して得られた組成物は、点線Ａに示すような腫瘍容積抑制率を示すものと予想された。ところが、実際に検討してみると、組成物の腫瘍容積抑制率は、外挿線Ａから上方に大きく乖離することを発見した。これは、アガリクス抽出物とプロポリス抽出物とを混合して投与した場合には、抗腫瘍活性の点で相乗効果があることを示している。
【００１０】
好適な実施形態においては、前記の相乗的な抗腫瘍活性という観点からは、アガリクス抽出物とプロポリス抽出物との合計重量を１００部としたとき、アガリクス抽出物の重量比率が１０部以上、９５部以下である。
【００１１】
相乗的な抗腫瘍活性は、アガリクス抽出物の重量比率が３０部以上の場合に特に顕著となる。これは、組成物が３０部以上のアガリクス抽出物を含有している場合には、組成物の抗腫瘍活性の外挿線Ａからの乖離が特に大きいことを意味している。
【００１２】
更に、アガリクス抽出物の重量比率が４０部以上になると、腫瘍容積抑制率が著しく向上する。そして、組成物の腫瘍容積抑制率が、アガリクス抽出物単独（１００部：点Ｄ）の場合の腫瘍容積抑制率と同等以上になるという驚くべき作用効果が得られる。この観点からは、アガリクス抽出物の重量比率が４５部以上であることが更に好ましく、５０重量部以上であることが一層好ましい。
【００１３】
また、特に好ましくは、アガリクス抽出物の重量比率が９０部以下の場合に、腫瘍容積抑制率が線Ｂを超えて一層高くなる。
【００１４】
これまで、アガリクス抽出物とプロポリス抽出物との組成物を含有する健康食品は市販されているが、前述のような抗腫瘍活性に関する相乗的な作用効果は知られていない。
【００１５】
アガリクスとは、学名Ａｇａｒｉｃｕｓ　　Ｂｌａｚｅｉ　　Ｍｕｒｉｌ　の茸である。ブラジルのサンパウロ近郊で自生し、現在、ブラジル、日本、中国、台湾で栽培されている。アガリクス茸は、各種産地で効能が異なるようなことも言われているが、遺伝子的にも機能的にもほとんど差はない。ブラジル原産であるが、日本、台湾、中国での栽培品において化学的な組成も抗腫瘍活性の機能も大きな差はない。アガリクス茸は、エキスが抗腫瘍効果のあるところから、抗腫瘍性の機能食品、健康食品として市場に出回っている。抗腫瘍性の成分については未だ確定していないが、キノコの機能成分として一般的にβグルカンなどの多糖体にあるものと考えられている。
【００１６】
アガリクスの有効成分については、近年機能成分を探求しているが、高機能性の成分があっても極微量であり、その成分にすべての機能は限定されておらず、不明な点が多い。しかし、水野らの研究において、高機能の成分として多糖体蛋白が検討されている。
【００１７】
アガリクス抽出物の抽出方法は、前述のような抗腫瘍活性成分が除外されない限りは、特に限定されない。例えば水や親水性有機溶媒、例えばエチルアルコール、メチルアルコール等のアルコール類、酢酸エチル、アセトン、およびこれらの有機溶媒の混合物を使用して抽出可能である。また、水と親水性有機溶媒、特にエチルアルコール等のアルコール類との混合溶媒も好ましい。また抽出媒体を加熱する際の加熱温度も、前述のような抗腫瘍活性成分が破壊されない限りは、特に限定されない。
【００１８】好適な実施形態においては、アガリクス抽出物が、アガリクス茸から１００℃以下の水を用いて抽出された抽出物からなる。また、更に好ましくは、アガリクス抽出物が、アガリクス茸から１００℃以下の水を用いて抽出された抽出液にアルコールを添加し、タンパク質または蛋白複合体を沈降させて得られた抽出物からなる。これらの抽出温度は更に好ましくは１０〜９０℃であり、一層好ましくは４０℃以上である。沈降時の抽出液の温度は、冷却の観点から０〜３０℃が特に好ましい。このようにして得られた抽出物は、一般に多糖体を多量に含有しているので、アガリクス多糖体蛋白と呼ばれている。
【００１９】
好ましくは、アガリクス多糖体蛋白は、アガリクス茸を熱水抽出し得られたエキスを濃縮し、ブリックス３０程度に調整した後、アルコールを加えて蛋白成分を沈降させて調製する。アルコールとしては、エチルアルコール、メチルアルコールが好ましい。好ましくは、乾燥アガリクス茸を温度４０℃以上の水で抽出し、ブリックス３０まで濃縮後、溶液の半量の９５％アルコールを加え、沈殿物を得る。これを濾過で取り、沈殿物を乾燥することによって、アガリクス多糖体蛋白が得られる。こうしたアガリクス多糖体蛋白複合体の中で最も好ましいものは、商標名「アガリクスＡＧＳＥ」（備前化成株式会社製）と呼ばれるものである。「アガリクスＡＧＳＥ」単独での抗腫瘍活性は、例えば「食品と開発」ＶＯＬ．３４、Ｎｏ．９、６０〜６１頁に記載されている。
【００２０】
プロポリスとは、ミツバチ等の蜂類が巣箱を補修する樹脂状の成分であり、抗菌作用や抗癌作用があることが知られている。機能性の成分としてはケルセチンなどが知られているが、近年アルテピリンＣなどの有効成分が抗腫瘍効果を示すことなどが明らかになってきている（日本医事新報　第３７２６号、４３〜４８頁、１９９５年）。市場では、ブラジル、中国、オーストラリアなどから供給されている。
【００２１】
プロポリス抽出物の抽出方法は限定されない。例えば、プロポリス原塊を水や親水性有機溶媒（例えばアルコール）によって抽出する。そして、この抽出液を販売することがある。あるいはこの抽出液を乾燥し、粉末体として販売することがある。あるいは、この抽出液をそのままか濃縮した後に、油などに脱アルコールして分散させる。またプロポリス抽出物原塊から超臨界抽出法によって抽出することもできる。
【００２２】
好適な実施形態においては、プロポリス原塊に５０％〜９９％アルコールを加え、室温下で６ヶ月間静置して抽出液を得、この抽出液を濾過することによって、通常固形分として２０％程度の粉末エキスが得られる。あるいは、水抽出法では、プロポリス原塊を粉末化し、常温で水を加え抽出すると１０％程度のエキス液が得られる。これをスプレー乾燥や凍結乾燥してプロポリスエキス乾燥粉末を得る。
【００２３】
本発明においては、アガリクス抽出物とプロポリス抽出物とを配合し、組成物を得る。この配合方法は特に限定されず、公知の方法を使用できる。例えば、アガリクス抽出液とプロポリス抽出液とを混合し、カプセルやボンボンに封入したり、あるいはドリンク剤に混合することができる。また、アガリクス抽出粉末とプロポリス抽出粉末とを混合し、顆粒、錠剤にしたり、ソフトカプセル、ハードカプセルに封入でき、また食品やドリンク剤に添加できる。
【００２４】
なお、前述したアガリクス抽出物とプロポリス抽出物との配合重量比率の規定は、アガリクス抽出物、プロポリス抽出物ともに、乾燥粉末重量に基づいて算出するものとする。
【００２５】
好適な実施形態においては、アガリクス抽出粉末とプロポリス抽出粉末とをブレンダーを用いて混合する。所定の比率で配合をした後、練りだして顆粒を得る。あるいは、フローコーターでプルランなどのバインダーを用いて顆粒化し、そのままスティックに充填でき、あるいは錠剤に成型できる。また、混合粉末を所定の配合比で配合し、そのまま各種食品に添加することが出来る。
【００２６】
本発明の抗腫瘍性組成物は、ヒトに対して適用するのに好適であり、ヒトに対して経口投与するのに特に好適である。しかし、本発明の抗腫瘍性組成物は、ヒト以外の動物、特に哺乳類に対して投与することもできる。投与方法は経口投与が好ましいが、他の投与方法でもよい。
【００２７】
また、本発明は、前記抗腫瘍性組成物を動物（ヒトを除く）に対して投与することを特徴とする、動物の腫瘍を抑制する方法に係るものである。この動物としては、哺乳類が好ましい。なお、ここで動物（ヒトを除く）と記載したのは、本国特許法の規定によって人体を必須の構成要件とする治療方法の特許が認められないので、本腫瘍抑制方法のクレームのみからヒトの腫瘍抑制方法のみを除いたというものであり、本発明の抗腫瘍性組成物のクレームからヒトを除く趣旨ではない。
【００２８】
また、本発明は、アガリクス多糖体蛋白複合体とプロポリス抽出物とを配合してなる経口摂取組成物であって、アガリクス多糖体蛋白複合体と前記プロポリス抽出物との合計重量を１００部としたとき、アガリクス抽出物の重量比率が４０部以上、９５部以下であることを特徴とする、経口摂取組成物に係るものである。こうした経口摂取組成物は、前述したように、特に顕著な抗腫瘍活性を有するものであった。
【００２９】
なお、アガリクス抽出物とプロポリス抽出物とを例えば１：１の比率で配合した配合物は市販されている。しかし、特にアガリクス多糖体蛋白複合体とプロポリス抽出物とを例えば１：１の比率で配合した配合物は知られていない。
【００３０】
【実施例】
以下、本発明の実施例を示すが、それらは本発明の範囲を制約するものではない。
（プロポリス抽出物）
株式会社林原商事から供給されるプロポリスエキス（エタノールで抽出：アルコール濃度４５％）から減圧下で溶剤を留去し、プロポリス抽出物粉末を得た。
【００３１】
（アガリクス抽出物）
中国産アガリクス茸１２０ｇに１０００ｍｌの水を加え、４０℃で２時間抽出した。抽出エキスをブリックス３０まで濃縮し、１７０ｍｌのアガリクス抽出液を得、９５％アルコールを１００ｍｌ加え、沈殿物を得た。これを濾過して取った後、凍結乾燥した。得られた沈殿物（アガリクス多糖体蛋白複合体）は１６ｇであった。
【００３２】
（抗腫瘍活性の測定）
上記プロポリス抽出粉末とアガリクス多糖体蛋白（ＡＧＳＥ）とを、表１に示す重量比率が配合し、各試料とした。６週齢のＩＣＲ雄性マウスを１週間予備飼育した後、実験に使用した。１群８匹とした。表１に示す各試料に対して各群のマウスを割り当てた。各マウスについて、１．０　×１０６個のＳａｒｃｏｍａ１８０腫瘍細胞を腹部皮下に注入した。移植後から、各試料（組成物）５００ｍｇ／ｋｇを１５日間連続投与した。プロポリス抽出物の投与量、アガリクス抽出物の投与量も、それぞれ表１に示す。そして、各マウスをエーテル麻酔下に頸椎脱によって屠殺し、腫瘍塊を取り出し、腫瘍塊の容積を測定した。腫瘍容積は、（腫瘍の長径×短径２／２で算出した。接種３、６、９、１２、１５日経過時の各腫瘍容積を図２に示す。また、対照例として、塩水を経口投与したマウスについても腫瘍塊の容積を測定した。
【００３３】
また、１５日経過後の腫瘍容積抑制率を、下記式に従って算出し、算出結果を表１に示す。
腫瘍容積抑制率＝
（無投与時の腫瘍容積−各試料投与時の腫瘍容積／無投与時の腫瘍容積）
【００３４】
【表１】
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【００３５】
図２から分かるように、アガリクス抽出物単独の場合に比べて、両者を混合することによって、腫瘍容積が著しく低減された。この傾向は、接種後６日経過時には顕著となり、１２日目、１５日目には一層明確化した。また、表１およびこれをグラフ化した図１から分かるように、アガリクス抽出物にプロポリス抽出物を添加配合することで、腫瘍容積抑制率が著しく向上した。こうした配合組成物の腫瘍容積抑制率は、前述したように、アガリクス抽出物単独の場合の腫瘍容積抑制率、プロポリス抽出物単独の場合の腫瘍容積抑制率からの外挿線Ａから上方に乖離していた。
【００３６】また、プロポリス原塊５００ｇを粉末化し、水３０００ｍｌを加えた。４０℃で２時間抽出した後、遠心分離して上澄み液を取った。この残滓に更に水２０００ｍｌを加え、４０℃にて２時間抽出し、遠心分離して上澄み液を取った。各上澄み液を集めた。次いで、上澄み液からロータリーエバポレイターで水を留去し、乾燥物５４ｇを得た。これらの固形物を乳鉢で粉末化し、プロポリス抽出粉末を得た。このプロポリス抽出粉末を使用し、上記と同様の結果を得た。
【００３７】
【発明の効果】
以上述べたように、本発明によれば、相乗的な抗腫瘍活性を示す新規な抗腫瘍性組成物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】アガリクス抽出物およびプロポリス抽出物の組成物におけるアガリクス抽出物の配合重量比率と、マウスの腫瘍容積抑制率との関係を示すグラフである。
【図２】アガリクス抽出物およびプロポリス抽出物の組成物におけるアガリクス抽出物の配合重量比率、マウスの腫瘍容積、および腫瘍細胞接種後の経過日数の関係を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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