(57)【要約】【課題】長期連用によっても副作用を生じる可能性が極めて低く、且つ抗高血圧症の治療効果が明確であるエノキタケ株、その作成法、及び高血圧症治療剤を提供する。【解決手段】本発明の第１の要旨は、寄託番号がＦＥＲＭ　Ｐ−　１８９８４であるエノキタケ株である。本発明の第２の要旨は、エノキタケを主成分とする高血圧症治療剤である。さらに、前記高血圧症治療剤において、エノキタケの乾燥粉末を熱水抽出したものを主成分とすることが好適である。さらに、前記高血圧症治療剤において、エノキタケ株が寄託番号ＦＥＲＭ　Ｐ−　１８９８４のエノキタケ株であることが好適である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
寄託番号がＦＥＲＭ　Ｐ−　１８９８４であるエノキタケ株。
【請求項２】
エノキタケを主成分とする高血圧症治療剤。
【請求項３】
請求項２記載の高血圧症治療剤において、エノキタケの乾燥粉末を熱水抽出したものを主成分とすることを特徴とする高血圧症治療剤。
【請求項４】
請求項２又は３に記載の高血圧症治療剤において、エノキタケが寄託番号ＦＥＲＭ　Ｐ−　１８９８４のエノキタケ株であることを特徴とする高血圧症治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、エノキタケ株及びそれを用いた高血圧症治療剤、特に抗高血圧症効果を有するエノキタケ株に関する。
【０００２】
【従来の技術】
食生活の多様性や美食ブームから一般的に若年層から肥満化の傾向にある。さらに、超高齢化社会やストレス化社会への突入に従って、加齢や生活習慣に関わる疾患が増加することが予測される。殊に、循環系疾患の中でも高血圧症は肥満や運動不足から増加する傾向にある。
従来の高血圧疾患に対する適切なる治療法として、Ｃａ拮抗薬、β受容体作動薬、アンギオテンシン転換酵素阻害薬を用いる方法が効果的で広範に利用されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、これらの薬物の長期にわたる投与によって副作用が問題となることも多い。副作用の発現は、患者にとって薬物治療を拒否する原因ともなることも事実である。特に、高齢患者では代謝機能の低下によって予期しない重篤な副作用が発現することもある。このため、薬物ではなく副作用を生じる可能性が低い自然食品や健康食品（機能性食品を含む）に対する関心も高まっている。
本発明は、上記従来技術の課題に鑑みなされたものであり、その目的は、長期連用によっても副作用を生じる可能性が極めて低く、且つ抗高血圧症の治療効果が明確であるエノキタケ株、及びそれを用いた高血圧症治療剤を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
前記目的を達成するために、本発明者らが鋭意検討を行った結果、エノキタケが抗高血圧作用を有し、さらに特定の操作により交配することで、特に優れた抗高血圧症作用を有するエノキタケ株を得、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明の第１の要旨は、寄託番号がＦＥＲＭ　Ｐ−　１８９８４であるエノキタケ株である。
【０００５】
本発明の第２の要旨は、エノキタケを主成分とする高血圧症治療剤である。
さらに、前記高血圧症治療剤において、エノキタケの乾燥粉末を熱水抽出したものを主成分とすることが好適である。
さらに、前記高血圧症治療剤において、エノキタケが寄託番号ＦＥＲＭ　Ｐ−１８９８４のエノキタケ株であることが好適である。
【０００６】
【発明の実施の形態】
エノキタケ（Ｆｌａｍｍｕｌｉｎａ　ｖｅｌｕｔｉｐｅｓ）は、担子菌類、キシメジ科、エノキタケ属に属し、人工栽培によりその子実体は一年中市販され、鍋物等に欠かせない食材として利用されている。栄養としては、タンパク質、ビタミンＢ１、Ｂ２、ナイアシンを多く含み、またグアニル酸やアデニル酸が含まれているので独特の旨味がある。
【０００７】
エノキタケは公知であるが、エノキタケに抗高血圧症効果があること、及び野生株のブラウンエノキタケから調製したプロトプラストを交配することで特に抗高血圧症効果の高いエノキタケ株が作成できることはこれまで全く知られておらず、本発明者らによって初めて明らかにされたものである。
【０００８】
以下、本発明の好適な実施形態を詳細に説明する。
本発明において特に抗高血圧症効果の高いエノキタケ株は、以下のように一核菌糸を交配して作出することができる。
（１）エノキタケ株の作出法（交雑育種法）
２つのブラウンエノキタケ野生株（単胞子）から得た菌糸体（一核菌糸）をそれぞれＳＭＹ（１％サッカロース、１％麦芽抽出物、０．４％酵母抽出物）寒天培地上で培養し、交配によって二核菌糸を作出した。
【０００９】
なお、本発明にかかる交配株は、平成１４年８月２３日付で工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託し、平成１４年８月２９日付でＦＥＲＭ　Ｐ−　１８９８４として受託されている。
本発明の交配株を使用して高血圧症治療剤を製造することができる。高血圧症治療として用いる際の投与量としては、症状等により異なるが、成人一日あたり、おおよそ１〜１５ｇのエノキタケ乾燥粉末に相当する量を摂取すれば十分に効果が期待できる。
【００１０】
エノキタケの有効量を効率的に摂取するためには、乾燥粉末の抽出物として摂取することが好適である。抽出液としては、エノキタケ子実体乾燥粉末を約８０℃の熱水で抽出したものが好ましい。また、抽出物は、抽出液でもその乾燥物でもよい。なお、熱水抽出による回収率は乾燥粉末に対し、固形分で６０％程度である。
本発明においては、エノキタケの子実体を用いることが好適であるが、菌株の劣化を招かない育種管理を行ったその菌糸にも効果が期待できる。
【００１１】
本発明の高血圧症治療剤は、通常内服薬として投与されるが、熱水抽出物を用いる場合には、注射薬とすることも可能である。
内服薬の場合には、常法により散剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、茶剤、懸濁化剤、流エキス剤、液剤、シロップ剤等とすることができる。なお、製剤化の際には、通常の製剤化担体、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤等を必要に応じて用いることができる。
【００１２】
注射剤の場合には、常法により水性又は非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤等とすることができ、必要に応じて、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤等を添加することも可能である。
【００１３】
【実施例】
〈実施例１〉
以下、本発明にかかるエノキタケ株より製造した高血圧症治療剤の効果確認方法を示す。
（１）抽出液の調製
寄託番号がＦＥＲＭ　Ｐ−　１８９８４であるエノキタケ株から栽培されたエノキタケの乾燥子実体を粉砕し、１６メッシュのふるいにかけて、エノキタケ粉末とした。また、この粉体１０、１５、２０ｇをそれぞれ６００ｍｌの熱水（８０℃）中で２時間抽出し、熱水抽出液を得た。各熱水抽出液をそれぞれ１０ｇ抽出液、１５ｇ抽出液、２０ｇ抽出液と呼ぶことにする。
【００１４】
（２）試験動物の飼育、試料の投与方法
日本チャールスリバー（株）より購入した６週齢、体重約１６０ｇの雄性自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）２０頭及び正常血圧のウィスター京都ラット（ＷＫＹ）５頭を、ＭＦ粉末（オリエンタル酵母工業（株）製）に８％ＮａＣｌを添加した飼料で２週間予備飼育した。その後、各個体の血圧値を測定し、ＳＨＲラットを平均値がほぼ等しくなるように１群５頭の４群に分け、下記の要領でさらに１１週間飼育し、１８週齢まで飼育した。
【００１５】
▲１▼：ＳＨＲ無投与群
ＳＨＲラット５匹を、抽出液を投与せず飼育した。
▲２▼：ＳＨＲ１０ｇ群
ＳＨＲラット５匹を、１日に体重１００ｇ当たり前記１０ｇ抽出液１ｍｌを投与し飼育した。
▲３▼：ＳＨＲ１５ｇ群
ＳＨＲラット５匹を、１日に体重１００ｇ当たり前記１５ｇ抽出液１ｍｌを投与し飼育した。
▲４▼：ＳＨＲ２０ｇ群
ＳＨＲラット５匹を、１日に体重１００ｇ当たり前記２０ｇ抽出液１ｍｌを投与し飼育した。
▲５▼：ＷＫＹ無投与群
ＷＫＹラット５匹を、、抽出液を投与せず飼育した。
【００１６】
群分け後は、ＮａＣｌ無添加のＭＦ粉末飼料と飲料水を各群とも自由摂取させた。飼育室の環境は、温度２６±２℃、湿度５０％、白色蛍光灯で１日１２時間の採光下（７〜１９時明期）とした。
【００１７】
（３）血圧測定
各ラットを３８℃の加温器中で数分間加温させ順応した後、非観血式自動血圧測定装置（ＢＰ−９８Ａ；株ソフトロン製）を用いて、ラットの尾脈波から収縮期血圧を測定した。各ラットの血圧は毎回３回測定した値の平均値を記録した。
【００１８】
（４）血液検査
実験最終日（１８週齢）の前日に全ラットを絶食させ、翌日に深麻酔（ネンブタール，４５ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）し、左心室から２０Ｇ採血針で可能な限り採血を行った。
採取した血液は、自動血液分析装置（Ａｕｔｏ　Ｌａｂ．）で分析した。
【００１９】
（５）結果・分析
血圧変動を表１に示す。
【表１】
2004089128.tif 000002
【００２０】
群分け時の８週齢でＳＨＲの血圧はＷＫＹの血圧と比較して著明な上昇が認められた。さらにＳＨＲの血圧上昇は進み、ＳＫＲ無投与群では１４週齢で２００ｍｇ以上となった。しかしＳＨＲ無投与群と比較すると、ＳＨＲ２０ｇ群及びＳＨＲ１５ｇ群では１０週齢（抽出液投与２週目）以降、ＳＨＲ１０ｇ群では１４週齢（抽出液投与６週目）以降、血圧上昇の著明な抑制が観察された。
【００２１】
ＳＨＲの中では血圧抑制効果は２０ｇ群、１５ｇ群、１０ｇ群の順に高かった。即ち、ＳＨＲの血圧上昇に対して抽出液投与は明らかな用量依存的阻害効果を有することが明らかとなった。
よって、エノキタケの熱水抽出物は、用量依存的に抗高血圧症抑制効果があることが明確となった。
【００２２】
血液検査値を表２に示す。
【表２】
2004089128.tif 000003
【００２３】
白血球数、Ａ／Ｇ比
末梢血液中の単位容積あたりの白血球数算定により、白血球数を増減させる疾患の有無、疾患の重症度、白血球系造血能の程度などが推測できる。
Ａ／Ｇ比は、血漿タンパクであるアルブミン（Ａｌｂ）と総グロブリン（Ｇｌｏｂ）の比率であり、その値はＡｌｂとＧｌｏｂの相対的変動に依存する。Ａ／Ｇ比は体内の蛋白質代謝の指標として利用されるが、臨床的に問題となるのは、Ａ／Ｇ比の低下であり、Ａ／Ｇ比を知ることで全身の一般状態を推測できる。
【００２４】
ＳＨＲ無投与群ではＷＫＹ無投与群と比較して、白血球数、Ａ／Ｇ比共に低かった。
しかし、ＳＨＲラットにおいて、白血球数は２０ｇ群で増加が見られ、正常なＷＫＹラットの値とほぼ等しくなった。また、Ａ／Ｇ比は抽出液投与に対し用量依存的に増加が見られ、正常なＷＫＹラットの値に近づいた。よって、これらの値の改善効果は高血圧治療効果の強い群と密接な関連を有することが推察される。
【００２５】
総コレステロール、遊離コレステロール、トリク゛リセリト゛、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロール
コレステロールは、生体細胞膜の構成成分として細胞の形態・機能の維持およびステロイドホルモン、胆汁酸の前駆物質として必須の成分である。血液中コレステロールの７０％はエステル型で、残りの３０％が遊離型として存在するが、その和を総コレステロールと呼んでいる。エステル型になるためには、レシチンコレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）の作用を受ける必要がある。ＬＣＡＴは肝で合成されるため、総コレステロールに対するエステル型の比率は、重症肝実質障害の指標として利用されている。
【００２６】
またコレステロールは、ＨＤＬコレステロールと、ＬＤＬコレステロールとに分けられる。肝臓から末梢へのコレステロール供給はＬＤＬコレステロールの形で運ばれ、末梢から肝への転送はＨＤＬコレステロールの形で行われる。ＨＤＬコレステロールは抗動脈硬化作用を有し、またＨＤＬコレステロール量と冠動脈硬化性心疾患の発症率とは負の相関があるので、一般に「善玉コレステロール」と呼ばれている。一方、ＬＤＬコレステロールの増加は末梢組織への供給過剰と考えられるため、「悪玉コレステロール」と呼ばれ、冠動脈疾患の危険因子とされる。
【００２７】
トリグリセリドは、ジグリセリド及びモノグリセリドとともに中性脂肪の１つである。血清中の中性脂肪の９０〜９５％がトリグリセリドであるため、一般的にはトリグリセリドは中性脂肪と同義語として用いられている。血中トリグリセリドは、蛋白と結合して水溶性のリポ蛋白として存在する。
よって、総コレステロール，遊離コレステロール、トリグリセリド、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロールの値を測定することにより、脂質代謝異常をきたす疾患の推測ができる。
【００２８】
ＳＨＲ無投与群ではＷＫＹ無投与群と比較して、総コレステロール値，ＨＤＬコレステロール値が低く、トリグリセリド値が高かった。
しかし、ＳＨＲラットにおいて、抽出液投与に対し用量依存的に総コレステロール値及びＨＤＬコレステロール値の上昇、トリグリセリド値の低下が見られ、ＷＫＹラットの値に近づいた。そして、総コレステロール値は１０ｇ群、１５ｇ群、２０ｇ群で、ＨＤＬコレステロール値、トリグリセリド値は２０ｇ群でＷＫＹラットの値とほぼ等しくなった。
【００２９】
一方、ＬＤＬコレステロール値や遊離コレステロール値においては、抽出液投与に対し、目立った差が見られず、正常値を維持していた。
よって、高血圧治療効果に伴い、脂質代謝異常の改善効果を有することが確認された。このように総コレステロール、ＴＧ、ＨＤＬ−コレステロールの改善が降圧作用を呈した群で認められたことから、脂質代謝系改善効果を含む循環系での改善作用が降圧効果の一因となることが推察される。
【００３０】
レニン、アンギオテンシン
レニンは、腎の傍糸球体細胞から産生・分泌される３４０個のアミノ酸からなる蛋白分解酵素である。レニンの主な作用は、血中で産生されるレニン基質に作用してアンギオテンシンを産生することである。
アンギオテンシンは、レニン基質にレニンが働いて生成される。アンギオテンシンは強力な血管収縮作用とアルドステロン分泌作用をもつ昇圧物質である。これらの値の測定により、レニン−アンギオテンシン系の活性亢進・抑制が推測できる。
【００３１】
ＳＨＲ無投与群ではＷＫＹ無投与群と比較して、アンギオテンシン値が高く、このことからも昇圧されていることが確認された。
しかし、ＳＨＲラットにおいて、抽出液投与に対し用量依存的にアンギオテンシン値の低下が見られ、２０ｇ群ではＷＫＹラットの値とほぼ等しくなった。
一方、レニンは、抽出液投与に対し、目立った差が見られず、正常値を維持していた。
よって、血圧関連物質であるレニン、アンギオテンシンの値からも、高血圧治療効果が確認された。
【００３２】
尿素窒素、クレアチニン、尿酸
尿素窒素は、蛋白の最終代謝産物である尿素中の窒素のことである。尿素は肝で尿素サイクルを経て生成する窒素成分で、血中に放出され腎臓から排泄される。
クレアチニンは、血中非蛋白性窒素化合物の１つである。尿素や尿酸などと同様に腎を介して尿中に排泄される。
尿酸は肝臓、筋肉、骨髄で生成される核酸構成成分であるプリン体の最終代謝産物である。尿酸は組織で分解され、少量は胆汁・腸に、大部分（６０〜８０％）は尿中に排泄される。
これらの値の測定は、腎機能の指標となる。
【００３３】
ＳＨＲ無投与群とＷＫＹ無投与群とを比較して、これらの値は有意な差がなかった。また、抽出液投与に対しても、目立った差が見られず、正常値を維持していた。よって、抽出液投与に対して腎機能には異常をきたさないことが確認された。
【００３４】
以上の血液検査値の結果からも、本発明にかかるエノキタケ株は抗高血圧症効果があることが確認された。さらに、抗高血圧症効果に伴い脂質代謝異常の改善効果が見られた。また、エノキタケ抽出液投与により血圧降下作用を示しても、腎機能や正常である血液成分には異常をきたさないため、極めて安全な高血圧治療剤となることが確認された。
【００３５】
本発明の交配株の特に優れた抗高血圧症作用を調べるために、比較例として一般のエノキタケ株を用いて熱水抽出液を調製し、一般のエノキタケ株と本発明のエノキタケ株との抗高血圧症効果の比較を行った。
【００３６】
（１）抽出液の調製
一般のエノキタケの乾燥子実体を粉砕し、１６メッシュのふるいにかけて、エノキタケ粉末とした。また、この粉体２０ｇを６００ｍｌの熱水（８０℃）中で２時間抽出し、熱水抽出液を得た。
【００３７】
（２）試験動物への試料の投与方法
前述の８週齢の雄性自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）５頭に１２週間、２０ｇの熱水抽出液を経口投与し、２０週齢まで飼育した。その他の飼育条件は、前述の通りとした。
【００３８】
（３）血圧測定
前述の通り、各ラットの血圧を毎回３回測定し、平均値を記録した。
【００３９】
（４）血液検査
前述の通り採血し、自動血液分析装置（Ａｕｔｏ　Ｌａｂ．）で分析した。
【００４０】
（５）交配株と一般株との抗高血圧症効果の比較
一般株２０ｇ投与群と、前記交配株２０ｇ投与群、無投与群、及びＷＫＹラットの血圧変動を表３に、血液検査値を表４に示す。
【００４１】
【表３】
2004089128.tif 000004
【００４２】
【表４】
2004089128.tif 000005
【００４３】
表３より、無投与群と比較すると、交配株投与群、一般株投与群共に降圧効果が見られたが、交配株投与群と一般株投与群とを比較すると、交配株投与群の方が、その効果が著しく高いことが認められた。
また表４より、無投与群と比較すると、交配株投与群、一般株投与群共に血液検査値の結果からも、抗高血圧症効果及びそれに伴う脂質代謝異常の改善効果が見られたが、交配株投与群と一般株投与群とを比較すると、交配株投与群の方が、その効果が著しく高いことが認められた。
【００４４】
以上のことから、２つのブラウンエノキタケ野生株から調製したプロトプラストを交配して得られる本発明のエノキタケ株は、特に優れた抗高血圧症作用があることが理解される。また、エノキタケは食用キノコであることから、長期連用による安全性も極めて高い。
【００４５】
本発明にかかる交配エノキタケ株の各種成分の分析値を表５〜９に示す。
2004089128.tif 000006
【００４６】
2004089128.tif 000007
【００４７】
2004089128.tif 000008
【００４８】
2004089128.tif 000009
【００４９】
2004089128.tif 000010
【００５０】
表５〜９より、本発明の交配エノキタケ株は、重金属等を含有しない安全性の高いものであることが確認された。
【００５１】
【発明の効果】
本発明によれば、長期連用による副作用の心配がなく、安全性が極めて高い抗高血圧症エノキタケ株が提供され、高血圧症の予防、治療に極めて有用である。