(57)【要約】【課題】皮膚に対し安全であり、紫外線誘発突然変異に対し顕著な抑制効果を示す紫外線誘発突然変異抑制剤および紫外線誘発突然変異抑制用皮膚外用剤を提供する。【解決手段】下記構造式（１）で示される単環状モノテルペン基本骨格、または（２）で示される鎖状モノテルペン基本骨格を有する化学物質の１種、または２種以上を有効成分とする紫外線誘発突然変異抑制剤、特にチモール、カルバクロール、カルボン、α−テルピネン、リモネン、ユーカリトール、α−ミルセン、ゲラニオール、β−シトロネロールチモール、カルバクロール、カルボン、α−テルピネンの１種、または２種以上を有効成分とする紫外線誘発突然変異抑制剤、及びこれら紫外線誘発突然変異抑制剤を含有する紫外線誘発突然変異抑制用皮膚外用剤。【化２３】
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【化２４】
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【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式（１）で示される単環状モノテルペン基本骨格、または（２）で示される鎖状モノテルペン基本骨格を有する化学物質の１種、または２種以上を有効成分とする紫外線誘発突然変異抑制剤。
【化１】
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【化２】
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【請求項２】
請求項１記載の紫外線誘発突然変異抑制剤を含有することを特徴とする紫外線誘発突然変異抑制用皮膚外用剤。
【請求項３】
下記構造式（３）〜（１１）で示される化学物質の１種、または２種以上を有効成分とする紫外線誘発突然変異抑制剤。
【化３】
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【化４】
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【化５】
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【化６】
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【化７】
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【化８】
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【化９】
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【化１０】
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【化１１】
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【請求項４】
請求項３記載の紫外線誘発突然変異抑制剤を含有することを特徴とする紫外線誘発突然変異抑制用皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、紫外線による皮膚発癌の予防に優れた効果を奏する紫外線誘発突然変異抑制剤および紫外線誘発突然変異抑制用皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
我々の日常環境には多くの突然変異原性物質が存在し、これらの多くは発癌性物質として我々の健康を脅かす原因にもなっている。自然界に存在する変異原性物質として、フラボノイドやフロクマリン等の植物成分が知れられており、また焼き魚の焦げ中のトリプトファン熱分解物や、代表的なカビ毒であるアフラトキシン類も強烈な変異原性を有することが明らかとなっている。
【０００３】
そして、これらの変異原性物質の生体への突然変異誘発の作用機構を明らかにし、更には突然変異作用を抑制するための物質の探索及びその機構解明が続けられている。
【０００４】
例えば、野菜等に含まれる酵素が変異原を分解したり、食物繊維が変異原物質を吸着して変異原性を不活化する作用をもつことが発見され、またビタミンＣもその還元作用によりニトロソ化合物の生成を不活化することがわかり、変異原性物質の不活化機構も次第に明らかになってきている。
【０００５】
近年、フロンガスの大量放出によるオゾン層破壊とこれに伴う地表への紫外線照射増大の影響が、皮膚癌その他の疾患増加等の要因として取り上げられてきている。特に、これまでオゾン層によって大半が吸収されてきた２５４ｎｍを主にピークとする短波長紫外線は、ヒトを含めた生物への有害作用が強く、また突然変異原性を有する波長領域であることから、最も注意しなければならない紫外線である。
【０００６】
この短波長紫外線の照射によって誘発された細胞における突然変異を直接抑制する有効な物質の発見と、その突然変異誘発の抑制機構の解明とは、いずれも紫外線による皮膚癌等の予防、ひいては治療にとって極めて有用であると考えられる。
【０００７】
これまで、紫外線によって誘発された細胞における突然変異を直接抑制する物質としては、タンニン酸の誘導体（ミューテーション　リサーチ（Ｍｕｔ．Ｒｅｓ），１７　３巻，２３９頁〜２４４頁，１９８６年）、ラクトン系化合物（アグリカルチャラル　アンド　ケミストリー（Ａｇｒｉｃ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ）．，５０巻，１号，２４３頁〜２４５頁，１９８６年）、フラノン系化合物誘導体（アグリカルチャラル　アンド　バイオロジカル　ケミストリー（Ａｇｒｉｃ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ）．，５０巻，３号，６２５頁〜６３１頁，１９８６年）、及びバニリンの構造類似体（化学と生物）．，２６巻，３号，１６１頁〜１７２頁，１９８８年）等が知られている。
【０００８】
しかしながら、これらの化学物質は、紫外線誘発突然変異の抑制効果及び安全面で必ずしも満足できるものではないため、上記効果において優れ、且つ安全性に優れた新規な抑制剤が望まれていた。
【０００９】
そこで、本発明の目的は、紫外線による皮膚発癌等の予防に優れた効果が期待される紫外線誘発突然変異の抑制効果において優れ、且つ皮膚に対する安全性に優れた紫外線誘発突然変異抑制剤およびこの紫外線誘発突然変異抑制剤を含む皮膚外用剤を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、紫外線誘発突然変異に対する抑制剤を鋭意研究した結果、モノテルペン構造を有する化学物質に、紫外線誘発突然変異に対して優れた抑制効果を奏することを見出し、皮膚刺激や感作性においても安全であることから、本発明を完成したものである。
【００１１】
即ち、本発明は、下記構造式（１）で示される単環状モノテルペン基本骨格、または（２）で示される鎖状モノテルペン基本骨格を有する化学物質の１種、または２種以上を有効成分とする紫外線誘発突然変異抑制剤、及びこれら紫外線誘発突然変異抑制剤を含有する紫外線誘発突然変異抑制用皮膚外用剤である。
【００１２】
【化１２】
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【００１３】
【化１３】
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【００１４】
【発明の実施の形態】
本発明の上記モノテルペン基本骨格を有する化学物質としては、例えば、下記の構造式（３）のチモール、構造式（４）のカルバクロール、構造式（５）のカルボン、構造式（６）のα−テルピネン、構造式（７）のリモネン、構造式（８）のユーカリトール、構造式（９）のα−ミルセン、構造式（１０）のゲラニオール、構造式（１１）のβ−シトロネロール、などがあげられるが、本発明で奏される有効性は、これらの化学物質に限定されるものではないが、その中でも、チモール、カルバクロール、カルボン、α−テルピネンが好適に用いられる。上記化学物質は、種々の植物の葉、果実、茎部、あるいは、根や樹皮などに存在する。
【００１５】
【化１４】
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【００１６】
【化１５】
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【００１７】
【化１６】
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【００１８】
【化１７】
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【００１９】
【化１８】
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【００２０】
【化１９】
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【００２１】
【化２０】
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【００２２】
【化２１】
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【００２３】
【化２２】
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【００２４】
例えば、チモールは、タチジャコウソウ（学名：Ｔｈｙｍｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ　ＬＩＮＮＥ）やヤマジソ（学名：Ｍｏｓｌａ　ｊａｐｏｎｉｃａ　ＭＡＸＩＭＯＷＩＣＺ）に、カルボンとテルピネンは、ウイキョウ（学名：Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ　ｖｕｌｇａｒｅ　ＭＩＬＬＥＲ）に、カルバクロールは、ヤマジソに、リモネンはダイダイ（学名：Ｃｉｔｒｕｓ　ａｕｒａｎｔｉｕｍ　ＬＩＮＮＥ）などＣｉｔｒｕｓ属の諸種植物に、ユーカリトールはユーカリ（学名：Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ　ｇｌｏｂｕｌｅｓ　ＬＡＢＩＬＬＡＲＤＩＥＲＥ）に、β−ミルセンはヤマモモ（学名：Ｍｙｒｉｃａ　ｒｕｂｒａ　ＳＩＥＢ．）に、ゲラニオールはノイバラ（学名：Ｒｏｓａ　ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ　ＴＨＵＮＢ）やレモングラス（学名：Ｃｙｍｂｏｐｏｇｏｎ　ｃｉｔｒａｔｕｓ）にシトロネロールはサンショウ（学名：Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ　ｐｉｐｅｒｉｔｕｍ　ＤＣ．）に含まれる事が知られている。ただし、以上は、一例であって、本発明を構成する上記化学物質の由来は上記の植物由来に限定されるものではなく、また化学合成されたものも本発明では使用することができる。
【００２５】
本発明を構成する上記化学物質の紫外線誘発突然変異抑制用皮膚外用剤への配合量は、紫外線誘発突然変異抑制用皮膚外用剤の総量を基準として、好ましくは０．０１〜１．０質量％、更に好ましくは０．０５〜０．５質量％の割合である。　これが０．０１質量％未満では本発明の目的とする効果を充分に得ることができない場合があり、また逆に１．０質量％を超えてもその増加分に見合った効果の向上は認め難い場合がある。
【００２６】
【実施例】
以下、実施例によって本発明を詳細に説明する。なお、本発明は以下に述べる実施例に限定されない。
【００２７】
本実施例の内容としては、チモール、カルバクロール、カルボン、およびα−テルピネンについての突然変異試験法、安全性試験（感作性試験、皮膚一次刺激性試験）で得られた結果を示す。
【００２８】
実施例１（突然変異試験）
チモール、カルバクロール、カルボン、およびα−テルピネンの紫外線誘発突然変異に対する抑制効果を、サルモネラ・ティフィムリウム　ＴＡ１０２（以下ＴＡ１０２　と略す）菌株を用いたエームズ法（エームズ等、ミューテーション　リサーチ．，Ａｍｅｓ．Ｂ．Ｎ．　ｅｔ　ａｌ．，Ｍｕｔａｔｉｏｎ　Ｒｅｓ．，３１巻，３４７頁，１９７５年）によって測定した。
【００２９】
▲１▼測定試料の調製
市販のチモール、カルバクロール、カルボン、およびα−テルピネンをジメチルスルフォキシド（以下　ＤＭＳＯ　と略す）に任意の濃度となるように溶解し、測定試料を調製した。
【００３０】
▲２▼突然変異原性試験法
直径３５ｍｍのシャーレに１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝溶液（ｐＨ７．４）２ｍｌとＴＡ１０２の前培養液０．４ｍｌ（あらかじめ１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝溶液（ｐＨ７．４）にて洗浄した。）を添加した後、２５４ｎｍの紫外線として殺菌灯（ＳＡＮＫＹＯ　ＤＥＮＫＩ．ＧＥＲＭＩＣＩＤＡＬ　ＬＡＭＰ）１５Ｗを用い、２２Ｊ／ｍ２照射した。（ただし、コントロールは未照射。）照射後直ちに、▲１▼の項で調製した測定試料０．４ｍｌを添加した。（ただし、コントロールはＤＭＳＯのみ添加した。）この溶液を０．７ｍｌずつ３本の試験管に分取した後、それぞれに２ｍｌの軟寒天を加えて、最小グルコース寒天平板培地に重層固化し、３７℃にて２日間培養した。培養後、プレート上の復帰変異コロニー数をカウントした。
【００３１】
突然変異抑制効果の評価は、変異原及び試料を加えた系でカウントしたプレート当たりのコロニー数（Ａ）、変異原のみのコロニー数（Ｂ）、ＤＭＳＯのみの自然復帰コロニー数（Ｃ）をもとに次式により突然変異率を算出することによって行った。
【００３２】
突然変異率（％）＝［（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）］×１００
【００３３】
▲３▼結果
下記の表１には２５４ｎｍ紫外線のＴＡ１０２における変異原性を、また表２にはチモール、カルバクロール、カルボン、およびα−テルピネンの短波長紫外線（２２Ｊ／ｍ２）に対する紫外線誘発突然変異抑制効果をそれぞれ示した。
【００３４】
［２５４ｎｍ紫外線のＴＡ１０２における変異原性］
【表１】
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【００３５】
［紫外線突然変異に対するチモール、カルバクロール、カルボン、およびα−テルピネンの効果］
【表２】
2004018457.tif 000014
【００３６】
表２に示すように変異原のみの場合の突然変異率を１００％とした場合、試料添加量の増大と共に突然変異率の減少が認められた。従って、これらの化学物質の紫外線に対する優れた突然変異抑制効果が認められたことになる。
【００３７】
実施例２（皮膚一次刺激性試験）
チモール、カルバクロール、カルボン、およびα−テルピネンの安全性（皮膚一次刺激性）をＤｒａｚｅ法によって評価した。
【００３８】
［Ｄｒａｚｅ法］
日本白色種系家兎（メス）を２４日間予備飼育後、背部皮膚に未処置皮膚及び損傷皮膚の部位を設けた。未処置皮膚部位は電動バリカンで７２時間前に刈毛しておいた背部皮膚を用いた。損傷皮膚部位は電動バリカンで７２時間前に刈毛、貼付直前にセロファンテープ（幅２４ｍｍ、ニチバン（株））で真皮に損傷を与えないよう、また出血しない程度に５回ストリッピングして角質層を剥離した背部皮膚を用いた。そして、各化学物質１質量％オリブ油溶液と対照試料としてオリブ油溶液０．１ｍｌをパッチテスト用絆創膏（１２×１６ｍｍ、リボンエイド、リバテープ製薬（株）製）に塗布して２４時間閉塞貼付した。絆創膏除去３０分及び２４、４８、７２時間後に紅斑・浮腫・痂皮について肉眼観察を行った結果、これらの化学物質についてはいずれも変化が認められなかった。
【００３９】
実施例３（感作性試験）
チモール、カルバクロール、カルボン、およびα−テルピネンの安全性（感作性）をＭａｘｉｍｉｚａｔｉｏｎ法によって評価した。
【００４０】
［Ｍａｘｉｍｉｚａｔｉｏｎ法］
体重３５０〜４００ｇのハートレイ系モルモット（メス）の肩甲骨上の４×６ｃｍの皮膚を刈毛し、１列に３つの皮内注射を次の順序に従って２列行った。
▲１▼フロイント　コンプリート　アジュバンド（Ｆｒｅｕｎｄｓ’　Ｃｏｍｐｌｅｔｅ　Ａｊｕｖａｎｔ：以下ＦＣＡ溶液と略記する）を左右２ヶ所に０．０５ｍｌずつ皮内注射する。
▲２▼各化学物質の５質量％オリブ油溶液を左右２ヶ所に０．０５ｍｌずつ皮内注射する。
▲３▼各化学物質の１０質量％含有ＦＣＡ溶液に同量の滅菌水を加え乳化した溶液を左右２ヶ所に０．０５ｍｌずつ皮内注射する。
これらの操作１週間後に同じ部位を刈毛し、１０質量％ラウリル硫酸ソーダ含有ワセリンを塗布し、軽度の炎症を起こさせた。塗布２４時間後に同部位に各化学物質５質量％のオリブ油溶液０．２ｍｌをガーゼに塗布して、４８時間閉塞貼付した。皮内注射後２１日目に腹側部を刈毛し、これらの化学物質の５質量％オリブ油溶液を２４時間閉塞貼付した。２４時間後と４８時間後に、下記の評価基準に従って肉眼判定により評価を行った。
【００４１】
評価基準
症状　　　　　　　　　　評価点
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
肉眼的に変化なし　　　　　　　０
軽度又はまばらな紅斑　　　　　１
中等度の紅斑　　　　　　　　　２
強度の紅斑及び浮腫　　　　　　３
【００４２】
その結果、チモール、カルバクロール、カルボン、およびα−テルピネンは２４時間後と７２時間後のいずれも評価点０であり、感作性を有しないことを確認した。
【００４３】
【発明の効果】
以上述べたように、本発明は、皮膚に対し安全であり、紫外線誘発突然変異に対して顕著な抑制効果を示す、極めて有用な紫外線誘発突然変異抑制剤である。