(57)【要約】【課題】結晶固化速度の速いポリヒドロキシアルカノエートを得る方法を提供すること。【解決手段】３ＨＢと３ＨＢ以外の３ＨＸからなるＰＨＢＸにおいて、ＰＨＢＸ中の３ＨＸモル分率が６％以上で、且つ当該ポリマー中に３ＨＸモル分率が５％以下であるＰＨＢＸあるいはＰＨＢホモポリマーを０．１〜３０％含むＰＨＢＸあるいはＰＨＢＸとＰＨＢの混合物を微粒子状態のまま微生物から得る方法を構築することにより、結晶固化速度の速いＰＨＢＸを得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
結晶固化速度の向上したポリヒドロキシアルカノエートを微生物により製造する方法であって、当該微生物の培養途中で供給する炭素源の種類を変化させることにより結晶核剤となるポリヒドロキシアルカノエートを合成させることを特徴とするポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項２】
結晶固化速度の向上したポリヒドロキシアルカノエートが３−ヒドロキシブチレートと３−ヒドロキシブチレート以外の少なくとも２種以上のモノマーユニットからなる共重合ポリエステルであることを特徴とする請求項１に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項３】
該ポリヒドロキシアルカノエートの製造方法が、（ａ）油脂を炭素源に用いて菌体を培養する工程、及び（ｂ）油脂あるいは脂肪酸以外の炭水化物を炭素源に用いて微生物を培養する工程からなることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項４】
ポリヒドロキシアルカノエートの生産方法が、（ａ）ラウリン酸を含む油脂を炭素源として菌体を培養する工程、及び（ｂ）大豆油、コーン油、棉実油、パーム油、落花生油あるいはこれらの分別油から選択される油脂を炭素源に用いて微生物を培養する工程からなることを特徴とする請求項１あるいは２に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項５】
結晶核剤となるポリヒドロキシアルカノエートがポリヒドロキシブチレートであり、該ポリヒドロキシブチレートが０．１〜３０％含まれることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項６】
結晶核剤となるポリヒドロキシアルカノエートが９５％モル分率以上の３−ヒドロキシブチレートを含み、該結晶核剤を０．１〜３０％含むことを特徴とする請求項１から４のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項７】
油脂あるいは脂肪酸以外の炭水化物が、グルコース、フラクトース、デンプン、蔗糖、糖蜜から選択されることからなる、請求項３に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項８】
結晶固化速度の向上したポリヒドロキシアルカノエートを微生物により製造する方法であって、当該微生物の培養途中で比基質供給速度を変化させることによって結晶核剤となるポリヒドロキシアルカノエートを合成させることを特徴とするポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項９】
ポリヒドロキシアルカノエートが３−ヒドロキシブチレートと３−ヒドロキシブチレート以外の少なくとも２種以上のモノマーユニットからなる共重合ポリエステルであり、結晶核剤となるポリヒドロキシアルカノエートが９５％モル分率以上の３−ヒドロキシブチレートを含み、該結晶核剤を０．１〜３０％含むことを特徴とする請求項８に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１０】
油脂が、パーム核油、ヤシ油、パーム核油オレイン、大豆油、コーン油、棉実油、パーム油、落花生油あるいはこれらの分別油から選択されることを特徴とする請求項１から９のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。
【請求項１１】
３−ヒドロキシブチレート以外のポリマーユニットが、３−ヒドロキシペンテノエート、３−ヒドロキシヘキサノエート、３−ヒドロキシヘプタノエート、３−ヒドロキシオクタノエート、３−ヒドロキシノナノエートおよび３−ヒドロキシデカノエートからなる群から選択される、請求項１から１０のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエート。
【請求項１２】
３−ヒドロキシブチレート以外のポリマーユニットが、３−ヒドロキシヘキサノエートである請求項１から１１のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエート製造方法。
【請求項１３】
ポリヒドロキシアルカノエートを生産する微生物が、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ属、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属、Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ属、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ属、Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｎｏｒｃａｄｉａ属、Ｐｈｏｄｏｓｐｉｌｉｌｌｉｕｍ属、Ｐｓｕｅｄｏｍｏｎａｓ属、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ属、Ｚｏｏｇｌｏｅａ属、から選択されることからなる、請求項１から１２のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエート製造方法。
【請求項１４】
ポリヒドロキシアルカノエートを生産する微生物がアエロモナス・キャビエである請求項１から１３のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエート製造方法。
【請求項１５】
ポリヒドロキシアルカノエートを産生する微生物がアエロモナス・キャビエ由来のポリヒドロキシアルカノエート合成遺伝子を導入された菌株である請求項１から１３のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエート製造方法。
【請求項１６】
ポリヒドロキシアルカノエートを産生する微生物がアエロモナス・キャビエ由来のポリヒドロキシアルカノエート合成遺伝子を導入されたＲａｌｓｔｏｎｉａ  ｅｕｔｒｏｐｈａである請求項１５記載のポリヒドロキシアルカノエート製造方法。
【請求項１７】
ポリヒドロキシアルカノエート含有微生物細胞からポリヒドロキシアルカノエートを回収する方法であって、次の（ａ）と（ｂ）の工程からなる請求項１から１６のいずれか一項に記載のポリヒドロキシアルカノエート製造方法。
（ａ）ポリヒドロキシアルカノエート含有微生物細胞の水性懸濁液に、攪拌と物理的破砕処理を行いながらアルカリを添加し、該細胞を破砕すると共に、該細胞中のポリヒドロキシアルカノエート以外の細胞物質を可溶化あるいは乳化させ、次いでポリヒドロキシアルカノエートを懸濁液から分離する工程；
（ｂ）分離されたポリヒドロキシアルカノエートを、酵素及び／又は界面活性化剤で処理し、ポリヒドロキシアルカノエートに含まれる不純物を可溶化又は分解後可溶化し、続いて親水性溶媒でポリヒドロキシアルカノエートを洗浄する工程。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、結晶固化速度の速いポリヒドロキシアルカノエートの製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ポリヒドロキシアルカノエート（以後、ＰＨＢＸと略す）は、多くの微生物種の細胞内にエネルギー蓄積物質として生成、蓄積される熱可塑性ポリエステルである。微生物によって天然の有機酸や油脂を炭素源に生産されるＰＨＢＸは、土中や水中の微生物により完全に生分解されるため自然界の炭素循環プロセスに取り込まれることになる。従って、ＰＨＢＸは生態系への悪影響がほとんどない環境調和型のプラスチック材料と言える。近年、合成プラスチックが環境汚染、廃棄物処理、石油資源の観点から深刻な社会問題となるに至り、ＰＨＢＸが環境に優しいグリーンプラスチックとして注目され、その実用化が切望されている。
微生物中に最初に発見されたＰＨＢＸが３−ヒドロキシブチレートのホモポリマーであるポリ−３−ヒドロキシブチレート（以下、ＰＨＢと略す）である。ＰＨＢは、高結晶性で結晶化度が高いため硬くて脆く、しかも融点付近の温度（１８０℃）で速やかに熱分解するために、溶融加工性が低いといった物性上の欠点を抱えており、実用化が困難な素材といえる。
【０００３】
そこで、ＰＨＢの結晶化度を下げて脆性を改善するため、他の３−ヒドロキシアルカン酸（以下、３ＨＸと略す）をＰＨＢ骨格中に導入する試みがなされた。そのような３ＨＸとして３−ヒドロキシ吉草酸（以下、３ＨＶと略す）を使用することにより得られた共重合体Ｐ（３ＨＢ−ｃｏ−３ＨＶ）（以下、ＰＨＢＶと略す）（特許文献１〜３）は、広い３ＨＶ組成範囲にわたって高い結晶固化速度を維持したまま、ＰＨＢよりも融点はさがったため、高融点・易熱分解性のＰＨＢよりは溶融加工性の点で優れていた。この共重合体は実用性の高い高分子材料として注目され、一時Ｉｍｐｅｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓからバイオポールの名前で販売されていた。しかしながら、ＰＨＢＶは結晶化度が５０％以下に下がることはなかったため、脆性を改善できなかった。
【０００４】
そこで、ＰＨＢＶの脆性をさらに改善することを目的とし、３ＨＶより大きな側鎖を持つヒドロキシ酸をＰＨＢ骨格に導入したＰＨＢＸの研究がされた。例えば、３−ヒドロキシプロピオン酸（以下、３ＨＰと略す）、３−ヒドロキシペンタン酸（以下、３ＨＣと略す）、３−ヒドロキシヘキサン酸（以下、３ＨＨと略す）、３−ヒドロキシオクタン酸（以下、３ＨＯと略す）、３−ヒドロキシノナン酸（以下、３ＨＮと略す）、３−ヒドロキシデカン酸（以下、３ＨＤと略す）、３−ヒドロキシドデカン酸（以下、３ＨＤＤと略す）などを３ＨＸとして含む共重合ポリエステルが精力的に研究された（非特許文献１）。これらは３ＨＶより長いペンチルやアルキル測鎖を持つため、これらが骨格に導入されたＰＨＢＸは実質的に非晶質となる。これらポリマーの特性は非常にしなやかで柔らかいため脆性が改善され、しかも、低融点（８０℃〜１５０℃）であるため溶融加工性も改善されることが期待された。しかし、これらのポリマーは結晶固化速度が非常に遅く、加熱溶融し冷却後、室温においても柔らかく長時間粘性を持つことや、粘着性があるため成型時にすぐに金型から取り出すことができず、実生産が連続的に行なえないという問題が新たに生じた。また、結晶固化速度の速い既存の汎用樹脂の加工に使用している加工機器が生分解性プラスチックの加工に利用できないなどの問題も明らかとなった。フィルムやシート、繊維、発泡体、成型品、不織布への加工では、生産工程中溶融加工したポリマーの冷却後の結晶固化速度が速いことが、生産工程の連続化、ひいては生産性の向上と低コストに繋がるため非常に重要である。
【０００５】
そこで、ＰＨＢＸの結晶固化速度を速める試みがされてきた。そのための一般的な方法として、結晶核剤を添加する方法が試みられている。例えば、特許文献４では、ＰＨＢＨに結晶核剤として窒化ホウ素を使用し結晶化促進効果が得られている。しかし、これは高価な材料であり、しかも生分解性を持たない。このため、より安価で生分解性のある結晶核剤が検討された。特許文献５及び６では、ＰＨＢＶあるいはＰＨＢＨに対してより高い融解温度を有し、しかも生分解性であるＰＨＢを結晶核剤として添加し、結晶固化速度を速くする技術が開示されている。これらの先行技術では、ＰＨＢＸとＰＨＢの混合法として、例えばＰＨＢＸとＰＨＢを熱クロロホルムに溶解・混合後クロロホルムを蒸発させることによるポリマーの析出やメタノールで晶析を行い混合ポリマーを回収する方法、あるいは２種類のポリマーをドライアイスで冷却しながら粉砕し混合する方法、ＰＨＢは溶融しないでＰＨＢＸのみ溶融させた状態での混合、乾燥ポリマー粉末のミキシングによる混合などが試みられている。しかしながら、溶媒へ溶解して混合する方法では、ＰＨＢＸの溶解や晶析のために非常に大量の溶媒が必要になり、コスト高となる。また、晶析時にポリマーと結晶核剤の溶解度の違いから、均一に分散した状態で晶析が行われないなどの可能性があり、実用的でない。ポリマーを粉砕後混合する方法や、乾燥粉末のミキシングではポリマーを均一に混合することは困難であり、結晶核剤の効果が減少する。特に、ＰＨＢＸ及び結晶核剤の粒子系は小さいほど良く混合し、また核形成部位の数が多くなるため高い効果が期待できるが、上記の混合法では微粒子での混合効果は期待できない。現在まで、このような微粒子を混合し結晶固化速度を調節する技術は今までに作られていない。
【０００６】
【特許文献１】
特開昭５７−１５０３９３号公報
【０００７】
【特許文献２】
特開昭５９−２２０１９２号公報
【０００８】
【特許文献３】
特表平１１−５００００８号公報
【０００９】
【特許文献４】
特開平６−１５７８７８号公報
【００１０】
【特許文献５】
特表平８−５１０４９８号公報
【００１１】
【特許文献６】
ＷＯ  ０２／５０１５６号公報
【００１２】
【非特許文献１】
Ｐｏｉｒｉｅｒ  Ｙ．，Ｎａｗｒａｔｈ  Ｃ．，Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ  Ｃ，ＢＩＯ／ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ，１３，１４２−１５０，１９９５年
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】
上述したように、ＰＨＢＸの結晶固化速度の向上に結晶核剤としてＰＨＢは効果があるが、両者の混合法に難点があり、ＰＨＢの効果が十分発揮されているとは言い難い。従って、本研究の目的は、従来技術における上記の課題を解決し、従来の方法では得られなかった微粒子でのＰＨＢＸと結晶核剤の混合体の製造法を提供することにある。さらに、本発明は、ＰＨＢＨ樹脂の結晶固化速度を増大させることで、フィルム成形、射出成形、押出成形、紡糸などの成形方法利用の際に、融着性防止、離形性向上、成形サイクル時間の短縮、連続的な樹脂ペレット化、など成形性が改善された生分解性ポリエステル系樹脂組成物の製造方法を提供することを課題とする。
【００１４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前期課題の解決のため、鋭意研究を行った結果、３ＨＢと３ＨＢ以外の３ＨＸからなるＰＨＢＸにおいて、ＰＨＢＸ中の３ＨＸモル分率が６％以上で、且つ当該ポリマー中に３ＨＸモル分率が５％以下であるＰＨＢＸあるいはＰＨＢホモポリマーを０．１〜３０％含むＰＨＢＸあるいはＰＨＢＸとＰＨＢの混合物を微粒子状態のまま微生物から得る方法を構築することにより、結晶固化速度の速いＰＨＢＸを得ることに成功し、本発明を完成させるに至った。
【００１５】
すなわち、本発明は、結晶固化速度の向上したポリヒドロキシアルカノエートを微生物により製造する方法であって、当該微生物の培養途中で供給する炭素源の種類を変化させること、あるいは培養途中で炭素源の比基質供給速度を変化させることにより、結晶核剤となるポリヒドロキシアルカノエートを合成させることを特徴とするポリヒドロキシアルカノエートの製造方法に関する。
【００１６】
【発明の実施の形態】
本発明におけるＰＨＢＸとしては、３ＨＢと他の２種以上の３ＨＸとの共重合ポリエステルである。ここで、３ＨＢとの共重合体として３−ヒドロキシプロピオン酸（以下、３ＨＰと略す）、３ＨＸは３−ヒドロキシペンタン酸（以下、３ＨＣと略す）、３−ヒドロキシヘキサン酸（以下、３ＨＨと略す）、３−ヒドロキシオクタン酸（以下、３ＨＯと略す）、３−ヒドロキシノナン酸（以下、３ＨＮと略す）、３−ヒドロキシデカン酸（以下、３ＨＤと略す）、３−ヒドロキシドデカン酸（以下、３ＨＤＤと略す）が挙げられ、この中でも、特に３ＨＸの含有率が８％以上のポリエステルで、非常に幅広くポリエステルの特性が変化するという点で、３ＨＨを含む共重合体が好ましく、従ってＰＨＢＨがより好ましい。また、３ユニットを含む共重合体としては３ＨＢ−３ＨＶ−３ＨＨが好ましい。
【００１７】
これらの共重合体ＰＨＢＸは、結晶核剤として低３ＨＸモル分率の３ＨＢ共重合体（以下、低３ＨＸ−ＰＨＢＸと略す）を一定量含むか、あるいは３ＨＢホモポリマー（ＰＨＢ）を一定量含むことにより、３ＨＢの高い結晶固化速度を利用し、全体としてのＰＨＢＸの結晶固化速度が速くなったポリマーである。
【００１８】
結晶固化速度の速いＰＨＢＸとは、ＰＨＢＸ中の３ＨＸモル分率が、ＰＨＢＸがより柔軟な性質になる点において、好ましくは６％以上のモル分率であり、より好ましくは７％以上、特に好ましくは８％以上である。
【００１９】
当該ＰＨＢＸ中に含まれる低３ＨＸ−ＰＨＢＸ中の３ＨＸ含量は結晶固化速度を速くする点で、好ましくは５％モル分率より低く、より好ましくは４％モル分率以下であり、さらに好ましくは３％以下であり、特に好ましくは０％のホモポリマーＰＨＢである。
【００２０】
これらの低３ＨＸ−ＰＨＢＸあるいはＰＨＢのＰＨＢＸ中の含量は、結晶固化速度を速くする点において、好ましくは０．０１〜３０重量％、より好ましくは０．５〜２０重量％、さらに好ましくは０．５〜５％重量である。
【００２１】
本発明の製造方法において、使用する微生物には特に制限なく、天然から単離された微生物や菌株の寄託機関（例えばＩＦＯ、ＡＴＣＣ等）に寄託されている微生物を使用できる。しかし、本発明の目的から共重合体生産能力と共に、ＰＨＢなどの結晶固化速度の速いホモポリマーを生産する能力を持つ菌株が望ましく、この点において、Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属やＲａｌｓｔｏｎｉａ属、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属が好ましいが、より好ましくはＡｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ属やＲａｌｓｔｏｎｉａ属である。
【００２２】
また、上記微生物が、野生型の状態では目的とする共重合体を生産できない、もしくはその生産量が低い場合には、上記微生物に、目的とする共重合ポリエステルの重合酵素遺伝子を導入して形質転換し、得られた形質転換微生物を用いることができる。形質転換微生物を作製する場合、ポリエステル重合酵素遺伝子を含む組換えベクターを利用するなどの一般的な方法を用いることができ、該ベクターには、その菌体内で自律的に増殖しうるプラスミドベクターを用いることができる。また、該ポリエステル重合酵素遺伝子を直接宿主の染色体に組み込んでも良い。
【００２３】
本発明の共重合ポリエステルの生産において使用されるポリエステル重合酵素遺伝子としては、特に限定されないが、アエロモナス・キャビエ（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｃａｖｉａｅ）より単離された遺伝子が好ましく、例えば特開平７−２６５０６５号公報に記載されている遺伝子断片を用いることができる。微生物に組換えベクターを導入するには、当業者には周知の方法により行うことができる。本発明に用いられる微生物の一例として、ＰＨＢ非生産株であるＲａｌｓｔｏｎｉａ  ｅｕｔｒｏｐｈａに、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｃａｖｉａｅ由来のポリエステル重合酵素遺伝子を導入した、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｅｕｔｒｏｐｈａ（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ  ｅｕｔｒｏｐｈｕｓ  ＡＣ３２株として寄託，寄託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−６０３８）（Ｔ．  Ｆｕｋｕｉ．，  Ｙ．  Ｄｏｉ．，  Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，  ４９，  ３３３−３３６，１９９８）を好ましく用いることができる。  該菌体の場合、増殖速度が速く、油脂を炭素源にＰＨＢＨを効率よく生産する点において好ましい。また、フラクトースを炭素源に用いた場合ＰＨＢが生産できることが知られており、本発明において好適に使用できる。また、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｅｕｔｒｏｐｈａにはグルコース資化性の菌株も広く使用されており（ＡＴＣＣ  Ｎｏ１７６９９、Ｊ  ＧｅｎｅｒａｌｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  １１５、１８５−１９２、１９７９）これらを使用することもできる。
【００２４】
本発明の結晶固化速度の速いＰＨＢＸは、上記の菌体を用い、培養の途中で炭素源を連続的あるいは段階的に変化させる、あるいは炭素源を別のものに変更することにより得ることができる。本発明において炭素源として使用する油脂は、大豆油、コーン油、綿実油、パーム油、パーム核油、ヤシ油、落花生油などの比較的安定的に供給される油脂およびこれらの油脂を分別して得られる各画分、例えばパームＷオレイン油（パーム油を２回無溶媒分別した低融点画分）、パーム核油オレイン（パーム核油を１回無溶媒分別した低融点画分）などの分別油脂、またはこれら油脂やその画分を化学的あるいは生物化学的に処理した合成油、さらにはこれらを混合した混合油が使用できる。このなかでも、コストの点からは天然油脂を使用するのが好ましい。さらに具体的にＰＨＢＨの場合を説明すると、油脂の構成脂肪酸としてラウリン酸を含有する油脂、俗にラウリン油脂と称される油脂を使用することが好ましい。例えば、ラウリン油脂を用いた場合、２０％モル分率までの比較的高い３ＨＨ含有率を有するＰＨＢＨを得ることができる。構成脂肪酸としてラウリン油脂としては、パーム核油やヤシ油などの天然油脂、パーム核油オレインなどの分別油脂やそれらラウリン油脂を含む混合油が挙げられる。これらのうち特に３ＨＨモル分率８％以上を達成する点において、パーム核油とパーム核油オレインの使用が好ましい。
【００２５】
一方、大豆油、コーン油、綿実油、パーム油、落花生油あるいはこれらの分別油脂などを用いた場合は１〜１０％モル分率の比較的低い３ＨＨ含有率のＰＨＢＨが得られる。これらを結晶核剤用の低３ＨＸ−ＰＨＢＸを合成するために使用する場合、５％モル分率以下の３ＨＸ−ＰＨＢＸを合成する点において、大豆油、コーン油、綿実油の使用が好ましい。
【００２６】
また、結晶核剤として最も効果の高いホモポリマーＰＨＢを合成する場合には、一般的に糖を用いればよい。糖としては、グルコース、フラクトース、蔗糖、糖蜜が好適に使用できる。中でも特にグルコースは、低コスト及び微生物が効果的に繁殖できる点で好ましい基質である。
【００２７】
本発明の好ましい実施態様では、ラウリン油脂を最初の炭素源に用い、１０％モル分率以上の３ＨＸ組成を持つＰＨＢＸを製造する場合、結晶固化速度を速くするためには、培養途中で炭素源を大豆油、コーン油、綿実油、パーム油、落花生油あるいはこれらの分別油脂などに変更することにより、５％モル分率より低い３ＨＸを含有したＰＨＢＸを生産することができる。あるいは炭素源を油脂や脂肪酸以外の炭水化物、例えば糖やデンプンに変えることによりＰＨＢを産生させることができる。
【００２８】
最初の炭素源に大豆油、コーン油、綿実油、パーム油、落花生油あるいはこれらの分別油脂などを用いた場合には、１０％モル分率以下のＰＨＢＸが生産されるため、培養途中で炭素源を油脂や脂肪酸以外の炭水化物、例えば糖やデンプンに変えることによりＰＨＢを生産させることが望ましい。
【００２９】
本発明者らが炭素源である油脂の最適な添加方法を検討した結果、意外にも油脂の比基質供給速度を調整することによっても、生産されるＰＨＢＸの３ＨＸモル分率を制御できることが明らかとなった。ここで比基質供給速度とは、単位時間に正味の菌体重量あたり供給される油脂の量として定義される培養変数であり、正味の菌体重量とは全菌体重量から含有するポリエステル重量を差し引いた菌体重量（乾燥菌体重量）である。
【００３０】
2004250629.tif 000002
本発明の方法で適用される油脂の比基質供給速度の範囲は、使用する油脂の種類や培養のフェーズにもよるが、おおむね０．０５〜０．２０  （ｇ−油脂）×（ｇ−正味乾燥菌体重量）−１×（ｈ）−１、好ましくは０．０８〜０．１５（ｇ−油脂）×（ｇ−正味乾燥菌体重量）−１×（ｈ）−１である。
【００３１】
本発明において、比基質供給速度が小さいほどＰＨＢＸの３ＨＸ含有率が上昇することが見いだされた。従って、３ＨＸ含有率の高いＰＨＢＸを得たい場合には、比基質供給速度を低く設定して培養すればよい。例えば、３ＨＸモル分率が１０％以上のＰＨＢＸを生産する場合に、比基質供給速度は好ましくは０．１０以下、より好ましくは０．０９以下、さらに好ましくは０．０６以下である。また、３ＨＸモル分率が５％以下のＰＨＢＸを得たい場合には、比基質供給速度は好ましくは０．１０より大きく、より好ましくは０．１２以上である。
【００３２】
培養のフェーズによって比基質供給速度を変化させる場合には、培養後半のポリマー蓄積期の適当な時期に変化させるのが望ましい。比基質供給速度は高い値から低い値にする方法と逆の方法があるが、そのどちらも利用できる。
【００３３】
本発明において、油脂の比基質供給速度を制御する場合、培養全期間を菌体増殖期とポリエステル蓄積期の２つのフェーズに分け、それぞれのフェーズにおいて異なる比基質供給速度の値を設定し、それぞれのフェーズ期間内では設定された一定の比基質供給速度となるように制御する、あるいは培養全期間中、比基質供給速度を連続的に変化させる、あるいは、上記フェーズに関わらず、培養途中で比基質供給速度を変化させる方法があり、どの方法を用いても構わない。油脂の比基質供給速度を、培養の特定の期間内で一定値に制御するためには、設定された比基質供給速度の値を満たすように油脂の添加量を連続的にあるいは間欠的に変化させる必要がある。油脂の添加量を連続的に変化させるには、例えばコンピューターを利用して流加量を制御することができる。また間欠的（すなわち段階的）に変化させる場合は、自動で制御することもできるが、手動でも流加量の操作が可能である点で、簡便である。間欠的に変化させる場合、厳密には予め設定された比基質供給速度の値を常に完全に満たすわけではないが、その平均値として上記設定された比基質供給速度の値を満たしていればよい。このように、油脂の比基質供給速度が培養の全期間、或いは培養の特定のフェーズ期間内では、設定されたある一定値となるように制御することで、培養初期に所定量の油脂を全量添加したり、培養期間中一定の油脂添加量で流加培養したり、比基質供給速度に基づかず経験的に油脂の添加量を変化させるといった従来の培養方法では不十分であった共重合ポリエステルの生産性の向上と、モノマーユニットの組成比の制御が初めて達成される。本明細書において培養全期間というのは、本培養における培養開始から培養終了時までの全期間である。
【００３４】
本発明の菌体培養に用いられる窒素源としては、例えばアンモニア、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等のアンモニウム塩である無機窒素源、ペプトン、肉エキス、酵母エキスなどの有機窒素源が挙げられる。無機塩類としては、例えばリン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウムなどが使用される。そのほかの有機栄養源としては、グリシン、アラニン、セリン、スレオニン、プロリンなどアミノ酸、ビタミンＢ１、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ等のビタミン類が使用される。しかしながら、生産コスト抑制の観点からは有機栄養源であるペプトン、肉エキス、酵母エキスおよびグリシン、アラニン、セリン、スレオニン、プロリンなどのアミノ酸、ビタミンＢ１、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ等のビタミンの使用は最少量とする方が好ましい。
【００３５】
本発明において、ＰＨＢＸを微生物菌体から回収する方法は特に限定されず、公知の溶媒抽出法、物理的破砕法、化学的処理などが採用できる。しかし、微生物内ではＰＨＢＸは通常粒径１ミクロン以下の微粒子として合成されるため、ポリマーを微粒子状態で取り出すことが、ＰＨＢＸと結晶核剤とが均一に微分散した状態で得るために必要である。その結果、得られるポリマーの結晶固化速度が著しく向上する。また、フィルムなどへの加工時に結晶核剤の不均質さから生じる斑や強度の不均一さを無くすことができる。本発明におけるポリマー回収の好ましい実施態様では、（ａ）ＰＨＢＸ含有微生物細胞の水性懸濁液に、攪拌と物理的破砕処理を行いながらアルカリを添加し、該細胞を破砕すると共に、該細胞中のＰＨＢＸ以外の細胞物質を可溶化あるいは乳化させ、次いでＰＨＢＸを懸濁液から分離する工程及び（ｂ）分離されたＰＨＢＸを、酵素及び／又は界面活性化剤で処理し、ＰＨＢＸに付着した不純物を可溶化又は分解後可溶化し、続いて親水性溶媒でＰＨＢＸを洗浄する工程からなる。（ａ）ではＰＨＢＸ含有微生物細胞の水性懸濁液の撹拌と物理的破砕処理を行いながら、該水性懸濁液にアルカリを添加することが重要である。物理的破砕を行わず菌体懸濁液にアルカリを添加すると、微生物細胞からＰＨＢＸと一緒に核酸や菌体細胞壁、細胞膜、不溶性蛋白質などが流出する。本発明者らは、この時、特に遊離した核酸によって懸濁液の粘度が激しく上昇し、条件によっては、懸濁液の攪拌さえできなくなり、ＰＨＢＸの回収が不可能となることを経験した。そこで本発明では、物理的破砕を行いながら徐々にアルカリを添加し、不溶物質の可溶化あるいは乳化を進めることによって、ＰＨＢＸが分解されることなく微粒子状態で不溶物質から容易に分離・回収できるようになる。本発明において、物理的破砕処理を行う装置としては、特に限定されないが、高圧ホモジナイザー、超音波破砕機、乳化分散機、ビーズミル等が挙げられる。特に高圧ホモジナイザーの使用が好ましく、例えば、伊国ニロソアビ社製高圧ホモジナイザーが好ましく用いられる。また、ブランリューベ連続式細胞破砕機（独国Ｂｒａｎ＋Ｌｕｅｂｂｅ社製）、マイクロフルイダイザー（米国Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ社製）等も用いることができる。このような装置では必要に応じて、一般の低温恒温循環槽により微生物細胞含有懸濁液を冷却し、温度の上昇を防ぎ、２０〜４０℃での破砕処理を行うのが好ましい。このような比較的低温下で処理を行った場合には、ＰＨＢＸの分子量はほとんど低下しないことが本発明者等により確認されている。
【００３６】
本発明のポリマー回収においては、アルカリ添加時にｐＨをコントロールすることが好ましい。ポリマー以外の菌体由来の不溶物を効果的に可溶化でき、かつＰＨＢＸ自体には悪影響をあまり与えない好ましいｐＨの範囲はｐＨ９〜１３．５，さらに好ましくはｐＨ１０〜１３の範囲である。常にある程度以上のアルカリ条件を維持することで懸濁液を高温にする必要がなくなり、結果、ＰＨＢＸの分子量低下を防ぐことが可能となる。
【００３７】
菌体破砕に使用するアルカリは、ＰＨＢＸ含有微生物の細胞壁を破壊して該細胞中のＰＨＢＸを細胞外に流出できるものであれば特に限定されるものではなく、工業生産に適し、また価格の点で、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムなどが好ましい。
【００３８】
アルカリ条件下での菌体の物理的破砕後に回収したポリマーを酵素及び界面活性化剤のいずれかあるいはこれらを併用して処理することにより純度の高いポリマーを得ることができる。従来もこれらの処理方法は単独で或いは他のＰＨＢＸ回収方法と併用して用いられていたが、あまり良好な結果は得られていない。ＰＨＢＸ粒子には、普通、蛋白質類、菌体細胞壁成分であるペプチドグリカン、脂質類、多糖類、核酸類、その他の炭水化物類が吸着していると考えられる。
【００３９】
工程（ｂ）において酵素による処理を行う場合、使用される酵素の例としては、蛋白質分解酵素、脂肪酸類分解酵素、細胞壁分解酵素、ＤＮＡ分解酵素などが挙げられる。酵素として、ＰＨＢＸに付着した不溶性蛋白質や不溶性のペプチドグリカンを分解除去する目的においては、蛋白質分解酵素と細胞壁分解酵素から選ばれる１種以上が好ましく、蛋白質分解酵素がより好ましい。蛋白質分解酵素としては、特に限定はしないが、プロテアーゼＡ、プロテアーゼＰ、プロテアーゼＮ（以上、天野エンザイム社製）、アルカラーゼ、ザビナーゼ、エバラーゼ（以上、ノボザイム社製）等が工業的に使用可能であり、分解活性の点からも好適に使用できる。また、細胞壁分解酵素ではリゾチームの使用が好ましいが、これに限られるものではない。酵素処理温度は５０℃以下で行なうのが好ましく、特に２０℃〜５０℃が好ましい。酵素処理時間は所要の処理度を達成するまで維持することによって行なうのが好ましく、この時間は通常０．５〜２時間である。酵素の必要量は、酵素の種類及び活性に依存する。特に制限はされないが、ポリマー重量１００重量部に対して、０．００１〜１０重量部が好ましく、さらにはコストの点から５重量部以下がより好ましい。本発明では、ＰＨＢＸ粒子に付着した不純物を除去するために可溶化剤として界面活性化剤を使用することも可能である。本発明で使用する界面活性化剤としては、陰イオン界面活性化剤、陽イオン界面活性化剤、両性界面活性化剤、非イオン界面活性化剤が挙げられる。洗浄性の点で好ましくは陰イオン界面活性化剤及び又は非イオン界面活性化剤である。蛋白質などを洗浄・除去する目的においては、陰イオン界面活性化剤を用いることが好ましく、また、脂肪酸や油脂を洗浄・除去する目的、あるいは、酵素を併用する場合には、非イオン界面活性化剤を用いることが好ましい。また陰イオン界面活性化剤及び非イオン界面活性化剤の両方を含有してもかまわない。好ましい界面活性化剤としては、ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、炭素数１０〜１４のポリオキシエチレンアルキルエーテルなどが価格、使用量や添加効果の点で好ましく、またこれらを２種以上併用して用いることも好ましい。界面活性化剤を酵素処理と併用して使用しても良く、市販の酵素配合洗濯用洗剤は界面活性剤と酵素の混合物であることから、これをそのまま使用することもできる。処理温度と時間は、２０〜５０℃で１分〜２時間程度攪拌することが好ましい。酵素／界面活性化剤処理を行った後、水により洗浄を行い、続いて、脱脂・脱臭・脱色のために、親水性溶媒による洗浄を行うのが好ましい。用いられる親水性溶媒としては特に限定されないが、具体的にはメタノール、エタノール、アセトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、水などが挙げられる。これらの中で、経済的に安価で洗浄効果のあるメタノールとエタノールが特に好ましく、これらを水と混合して使用しても良い。これらの溶媒で洗浄することにより、より純度の向上したＰＨＢＸを単離することができる。このようにして得られたポリマーは適当な分散剤を用いて懸濁させると平均粒径０．７ミクロン程度の微粒子であることがわかる。このように微分散した状態にあるため、ＰＨＢＸとＰＨＢが均質に混合した状態で回収されることになる。得られたポリマーは、この後凝集やペレット化を行っても均質化は保たれており結晶固化速度の低下はみられない。
【００４０】
本発明の樹脂組成物は、各種繊維、糸、ロープ、織物、編物、不織布、紙、フィルム、シート、チューブ、板、棒、容器、袋、部品、発泡体などの形状に成形できる。また、２軸延伸フィルムにも加工できる。成形品は、農業、漁業、林業、園芸、医学、衛生品、衣料、非衣料、包装、その他の分野に好適に用いることができる。
【００４１】
得られたポリマーのモノマーユニットの分析は、例えば、ガスクロマトグラフ法や核磁気共鳴法などにより行う。
【００４２】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。
【００４３】
以下の実施例においては、いずれも共重合ポリエステルとして、ＰＨＢＨを生産した。もちろん本発明はこれら実施例にその技術範囲を限定するものではなく、ＰＨＢＨに限られるものではない。
【００４４】
【実施例】
実施例で行った培養法、精製法、３ＨＨモル分率解析法、粒度測定法、結晶固化速度測定法は以下の通りである。結果はまとめて表１に示した。
【００４５】
（培養法）
Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｅｕｔｒｏｐｈａ  ＰＨＢ−４／ｐＪＲＤＥＥ３２ｄ１３株（Ｔ．  Ｆｕｋｕｉ．，  Ｙ．  Ｄｏｉ．，  Ａｐｐｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，  ４９，  ３３３−３３６，（１９９８），受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−６０３８）（以下Ｒｅｄ１３株と略す。）を次のように培養した。
【００４６】
種培地の組成は１ｗ／ｖ％  Ｍｅａｔ−ｅｘｔｒａｃｔ、１ｗ／ｖ％  Ｂａｃｔｏ−Ｔｒｙｐｔｏｎ、０．２ｗ／ｖ％Ｙｅａｓｔ−ｅｘｔｒａｃｔ、０．９ｗ／ｖ％Ｎａ２ＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ  、０．１５ｗ／ｖ％ＫＨ２ＰＯ４、（ｐＨ６．８）とした。
【００４７】
前培養培地の組成は１．１ｗ／ｖ％  Ｎａ２ＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ、０．１９ｗ／ｖ％  ＫＨ２ＰＯ４、１．２９  ｗ／ｖ％（ＮＨ４）２ＳＯ４  、０．１ｗ／ｖ％  ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．５ｖ／ｖ％  微量金属塩溶液（０．１Ｎ塩酸に１．６ｗ／ｖ％  ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ、１ｗ／ｖ％  ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、０．０２ｗ／ｖ％  ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．０１６ｗ／ｖ％  ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ、０．０１２ｗ／ｖ％  ＮｉＣｌ２・６Ｈ２Ｏを溶かしたもの。）、５×１０−６ｗ／ｖ％  カナマイシンとした。炭素源には、ポリエステル生産用に用いる炭素源と同じものを２．５ｗ／ｖ％の濃度で用いた。
【００４８】
ポリエステル生産培地の組成は０．３８５ｗ／ｖ％  Ｎａ２ＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ、０．０６７ｗ／ｖ％  ＫＨ２ＰＯ４、０・２９１ｗ／ｖ％（ＮＨ４）２ＳＯ４  、０．１ｗ／ｖ％  ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．５ｖ／ｖ％  微量金属塩溶液（０．１Ｎ塩酸に１．６ｗ／ｖ％  ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ、１ｗ／ｖ％  ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、０．０２ｗ／ｖ％  ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．０１６ｗ／ｖ％  ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ、０．０１２ｗ／ｖ％  ＮｉＣｌ２・６Ｈ２Ｏを溶かしたもの。）、０．０５ｗ／ｖ％ＢＩＯＳＰＵＲＥＸ２００Ｋ（消泡剤：コグニスジャパン製）、５×１０−６ｗ／ｖ％  カナマイシンとした。
【００４９】
Ｒｅｄ１３株のグリセロールストック（５０μｌ）を種培地（１０ｍｌ）に接種して２４時間培養した。３Ｌの前培養培地を入れた５Ｌジャーファーメンター（丸菱バイオエンジ製ＭＤＬ−５００型）に０．２ｖ／ｖ％接種した。運転条件は、培養温度３０℃、攪拌速度５００ｒｐｍ、通気量１．８Ｌ／ｍｉｎとし、ｐＨは６．７〜６．８の間でコントロールしながら２８時間培養した。ｐＨコントロールには７％水酸化アンモニウム水溶液を使用した。
【００５０】
ポリエステル生産培養は６Ｌの生産培地を入れた１０Ｌジャーファーメンター（丸菱バイオエンジ製ＭＤＬ−１０００型）にそれぞれ前培養種母を１．０ｖ／ｖ％接種した。運転条件は、培養温度２８℃、攪拌速度４００ｒｐｍ、通気量３．６Ｌ／ｍｉｎとし、ｐＨは６．７から６．８の間でコントロールした。ｐＨコントロールには７％水酸化アンモニウム水溶液を使用した。培養槽は培養時間を６０時間で終了するものと、その後炭素源あるいは比基質供給速度の変更を行いさらに２４時間培養する群に分け行った。
【００５１】
（精製法）
本実施例で行った水系法による培養菌体からのＰＨＢＸの回収方法を以下に示した。
【００５２】
培養後のＲ．ｅｕｔｒｏｐｈａを乾燥菌体重量で２０％の水溶性懸濁液とし、４００ｍｌを１Ｌの攪拌槽に入れた。この懸濁液を約１ｋｗ／ｍ３のスピードで攪拌した。続いて、この反応槽を伊国ニロソアビ社製高圧ホモジナイザーモデルＰＡ２Ｋ型と連結し、懸濁液が攪拌槽と破砕機を循環する形にした。懸濁液を６００〜７００ｋｇｆ／ｃｍ２の圧力でホモジナイズし、４００ｍｌ処理後、菌体懸濁液を最終ｐＨ約１２．５になるまで３Ｎの水酸化ナトリウムを徐々に攪拌槽中の懸濁液に添加した。アルカリ添加槽の温度は２５℃〜３５℃に維持した。破砕循環を懸濁液容量で２０回循環させた後、懸濁液を遠心分離（１２０００ｇ、４０ｍｉｎ）してポリマー画分を回収した。これを水４００ｍｌで２回洗浄し、最後に遠心でポリマー画分を回収した。得られたポリマーを水懸濁液４００ｍｌとし、これにＳＤＳをポリマー乾燥重量当たり５重量％、プロテアーゼＮを０．０８重量％、リゾチーム０．０８重量％を添加した。ｐＨ７．０、４０℃、１時間攪拌し、不純物を分解除去した。ポリマーを遠心により回収し、水４００ｍｌで２回洗浄後、エタノール４００ｍｌで２回洗浄し、最後に遠心でポリマー画分を回収した。これを５０℃で真空乾燥した。
【００５３】
（３ＨＨモル分率解析）
得られた乾燥菌体約８ｇに２５０ｍｌのクロロホルムを加え、６０℃で１時間還流し菌体内のＰＨＢＨを抽出した。菌体残渣をろ別後、エバポレーターで総容量が約１００ｍｌになるまで濃縮した。この溶液をゆっくり攪拌しながらヘプタンを最初の沈殿が現れるまで徐々に加えた。最初に析出するポリマーがＰＨＢあるいは最も低い３ＨＨモル分率を持つＰＨＢＨであるため、最初の沈殿が現れた段階でヘプタンの添加を止め、５時間軽く攪拌しながら放置した。析出した最初の沈殿を２００００ｇ、１０分の遠心で回収した。回収した沈殿は５０℃で真空乾燥した。得られたポリマーについて重量を測定し、含量を算出した。また、３ＨＨモル分率は特開平２００１−３４００７８の実施例１に記載の方法で行った。すなわち、得られた乾燥ポリマー約２０ｍｇに２ｍｌの硫酸−メタノール混液（１５：８５）と２ｍｌのクロロホルムを添加して密栓し、１００℃で１４０分間加熱することでポリエステル分解物のメチルエステルを得た。冷却後、これに１．５ｇの炭酸水素ナトリウムを少しずつを加えて中和し、炭酸ガスの発生がとまるまで放置した。４ｍｌのジイソプロピルエーテルを添加してよく混合した後、遠心して、上清中の３−ヒドロキシブタン酸メチルエステルと３−ヒドロキシヘキサン酸メチルエステルの組成をキャピラリーガスクロマトグラフィーにより分析し、ポリマー中の両モノマーユニットの組成比を算出した。ガスクロマトグラフは島津製作所ＧＣ−１７Ａ、キャピラリーカラムはＧＬサイエンス社製ＮＥＵＴＲＡ  ＢＯＮＤ−１（カラム長２５ｍ、カラム内径０．２５ｍｍ、液膜厚０．４μｍ）を用いた。温度条件は、初発温度１００〜２００℃まで８℃／分の速度で昇温、さらに２００〜２９０℃まで３０℃／分の速度で昇温した。
【００５４】
（粒度の測定）
ＰＨＡ粒子の平均粒径は、マイクロトラック粒度計（日機装製、ＦＲＡ）を用いた。ＰＨＢＨを花王社製分散剤デモールに懸濁後、所定濃度に調整し、全粒子の５０％蓄積量に対応する粒径を平均粒径とした。
【００５５】
（結晶固化性の検討）
キャピログラフ（東洋精機製作所製）を用い、１ｍｍφ×１０ｍｍのダイスを使用して、押出温度を１４０及び１５０℃にて実施した。剪断速度１２２ｓｅｃ−１、降下速度１０ｍｍ／ｍｉｎにて樹脂組成物を溶融押出し、押出ストランドが押出吐出口から結晶固化するまでの距離及び時間で、結晶固化性の評価をした。
【００５６】
◎：押出ストランドが、押出吐出口から出てきた時点で、結晶固化する
○：押出吐出口から結晶固化するまでの距離が、０〜約２０ｃｍである
△：押出吐出口から結晶固化するまでの距離が、約２０〜５０ｃｍである
×：押出吐出口から結晶固化するまでの距離が、約５０ｃｍ以上で、かつ、固化時間が、１０分間以上である。
【００５７】
（実施例１）
２基の培養槽を用いて菌体を培養した。パーム核オレインを比基質供給速度０．０６（ｇ−油脂）×（ｇ−正味乾燥菌体重量）−１×（ｈ）−１となるように流加した。６０時間経過後１基は培養を停止し、２基目にはさらに４０％ｗ／ｖフラクトースを２４時間で９７０ｍｌ（４０．６ｍｌ／時間）添加することにより培養を継続した。得られたＰＨＢＸの平均粒径はどちらも０．７ミクロンと微粒子のまま回収されていることが確認できた。３ＨＨモル分率特性、結晶固化性評価を表１に示す。パーム核オレインのみで培養して得られたＰＨＢＸは１４０及び１５０℃における、押出後のストランドはひどく粘着性を帯び、かつ、結晶固化速度は著しく遅く、押出直後から１０分以上の結晶固化時間を要した。フラクトースで継続培養して得られたＰＨＢＸにはＰＨＢが含まれていることが明らかになった。このＰＨＢＨの結晶固化速度は著しく速くなった。
【００５８】
【表１】
2004250629.tif 000003
（実施例２）
パーム核オレインの代わりにヤシ油、フラクトースの代わりに大豆油とコーン油を用いた以外は、実施例１と同様に培養・精製操作を行いＰＨＢＸを得た。得られたＰＨＢＨの３ＨＨモル分率特性、結晶固化性評価を表１に示す。ヤシ油のみで培養して得られたＰＨＢＨは１４０及び１５０℃における、押出後のストランドはひどく粘着性を帯び、かつ、結晶固化速度は著しく遅く、押出直後から１０分以上の結晶固化時間を要した。大豆油とコーン油で継続培養して得られたＰＨＢＨには低３ＨＨ−ＰＨＢＨが含まれていることが明らかになった。１４０及び１５０℃における、結晶固化速度は著しく速くなった。
【００５９】
（実施例３）
パーム核油オレインの代わりに大豆油を用い比基質供給速度０．０６で培養した以外は実施例１と同様に培養・精製操作を行いＰＨＢＨを得た。大豆油のみで培養して得られたＰＨＢＨは、１４０及び１５０℃における押出後のストランドが粘着性を帯び、かつ、結晶固化速度は遅く、押出直後から５分以上の結晶固化時間を要した。フラクトースで継続培養して得られたＰＨＢＨにはＰＨＢが含まれていることが明らかになり、このポリマーの１４０及び１５０℃における、結晶固化速度は著しく速くなった。
【００６０】
（実施例４）
フラクトースの代わりに、パーム核オレイン油を炭素源に用い、最初比基質供給速度を０．０６で培養し、培養５０時間後から０．１２に変更して培養を継続した以外は、実施例１と同様に培養・精製操作を行いＰＨＢＸを得た。比基質供給速度０．０６で培養した時は高３ＨＨモル分率のＰＨＢＸであったが、０．１２に変更したＰＨＢＸには低３ＨＨ−ＰＨＢＨが含まれていることが明らかになった。１４０及び１５０℃における、このポリマーの結晶固化速度は著しく速くなった。
【００６１】
（実施例５）
大豆油の比基質供給速度を５０時間後以降、０．０６から、０．１２へ上げて培養した以外は、実施例１と同様に培養・精製操作を行いＰＨＢＸを得た。比基質供給速度が０．０６のまま培養後得られたＰＨＢＸは中程度の３ＨＨモル分率をもつＰＨＢＨが得られ、１４０及び１５０℃における、押出後のストランドは粘着性を帯び、かつ、結晶固化速度は遅く、押出直後から５分以上の結晶固化時間を要した。比基質供給速度が０．１２に変更することで得られたＰＨＢＨにはより低３ＨＨモル分率のＰＨＢＨが合成されており、１４０及び１５０℃における結晶固化速度は著しく速くなった。
【００６２】
【発明の効果】
本発明の方法により、結晶化速度の著しく向上したポリヒドロキシアルカノエートを、工業的に安価に生産、提供できるようになる。