(57)【要約】【課題】  ほとんどの部分に対する上記の疾患および状態のための現存する処置は、同じ制限を共有する。治療剤の使用は、これらの状態の逆転をもたらさず、そして介入がこの状態を処置するために使用されるときはいつでも、介入に対する身体応答の結果として患者に対して危険性がある。本発明は、一般的に上記の状態および疾患の処置に適切な組成物および方法を提供する。これらの組成物および方法は、現存する手順に関連した問題に取り組み、現存する手順と比較した場合に著しい利点を提供し、そしてさらに他の関連する利点を提供する。【解決手段】  身体通路に関連した疾患を処置または予防するための方法であって、該身体経路の外部に治療剤を送達する工程を包含する、方法。身体通路に関連した疾患を処置または予防するための方法であって、該身体経路の平滑筋細胞に外膜を介して治療剤を送達する工程を包含する、方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
身体通路に関連した疾患を処置または予防するための方法であって、該身体経路の外部に治療剤を送達する工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、一般的に、身体通路の疾患を処置または予防するための組成物および方法に関し、より詳細には、身体通路の外壁に送達され得る治療剤を含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
必須物質の流動を可能にする身体内の多くの通路が存在する。これらは、例えば、動脈および静脈、食道、胃、小腸および大腸、胆汁管、尿管、膀胱、尿道、鼻経路、気管および他の気道、ならびに雄性および雌性生殖管を含む。傷害、種々の外科的手順、または疾患は、このような身体通路の狭窄、脆弱、および／または閉塞をもたらし、重篤な合併症および／または死さえももたらし得る。
【０００３】
例えば、多くの型の腫瘍（良性および悪性の両方）は、身体通路壁への損傷または管腔の閉塞をもたらし、それにより通路を通した物質流動を遅延させるか、または妨げ得る。１９９６年のみで、合衆国において、１１，２００人以上が食道ガンにより、５１，０００人以上が大腸ガンおよび小腸ガンにより、そしてほぼ１７，０００人が直腸ガンにより死亡すると評価された。ガンにより冒される身体通路の閉塞は、それら自体でおよび自発的に生命をおびやかすだけでなく、それらはまた患者人生の質を制限する。
【０００４】
新生物閉塞を引き起こす大多数の腫瘍の最初の処置は、外科的除去および／または化学療法、放射線治療またはレーザー治療である。不運なことに、その時までに、腫瘍は、しばしば手術不可能な、そして通常、一般的な慣習的な治療に応答しない、身体通路の閉塞を引き起こす。この問題に対する１つのアプローチは、内腔ステントの挿入であった。簡単には、ステントは、腫瘍または他の組織／物質によりブロックされている通路を物理的に開いたままにするための、身体通路の管腔に配置されるデバイスである。通常に配置されるステントの代表的な例として、Ｗａｌｌｓｔｅｎｔ、Ｓｔｅｃｋｅｒステント、Ｇｉａｎｔｕｒｃｏステント、およびＰａｌｍａｚステントが挙げられる（例えば、米国特許第５，１０２，４１７号、同第５，１９５，９８４号、同第５，１７６，６２６号、同第５，１４７，３７０号、同第５，１４１，５１６号、同第４，７７６，３３７号を参照のこと）。しかし、新生物閉塞におけるステントの使用に対する著しい欠点は、腫瘍がしばしばステントの隙間を通って管腔へ増殖し得ることである。さらに、管腔におけるステントの存在は、反応性または炎症性組織（例えば、血管、繊維芽細胞および白血球）のステント表面への内増殖を誘導し得る。この内増殖（腫瘍細胞および／または炎症性細胞からなる）がステントの内面に達し、そして管腔を傷つける場合、その結果は、ステントが正しく挿入された身体通路の再封鎖である。
【０００５】
それにもかかわらず、他の疾患（増殖を含む新生物ではないけれど）もまた身体通路を同様に閉塞し得る。例えば、６０歳以上の全男性の６０％および８０歳以上の全男性の１００％に罹患する、良性前立腺過形成による前立腺尿道の狭窄は重大な問題である。現在の薬理学的処置（例えば、５−アルファレダクターゼインヒビター（例えば、フィナステライド（Ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ）またはアルファアドレナリン作動性ブロッカー（例えば、テラゾザン（Ｔｅｒａｚｏｚａｎ））は、一般的に、患者の限定された集団においてのみ有効である。
【０００６】
さらに、実施され得る外科的手順（例えば、前立腺の経尿道切除（ＴＵＲＰ）；開いた（ｏｐｅｎ）前立腺切除術、または閉じた（ｅｎｄｏ）泌尿器学的手順（例えば、レーザー前立腺切除術、マイクロ波の使用、低体温法、冷凍手術、またはステンティング（ｓｔｅｎｔｉｎｇ））は、代表的に、多くの合併症（例えば、出血、感染、失禁、インポテンス、および再発性疾患）を生じる。
【０００７】
新生物性疾患または増殖性疾患に加えて、他の疾患（例えば、脈管疾患）は、身体通路の狭窄、脆弱、および／または閉塞をもたらし得る。１９９３年の評価（情報源−Ｕ．Ｓ．Ｈｅａｒｔ  ａｎｄ  Ｓｔｒｏｋｅ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎホームページ）によれば、６０００万以上のアメリカ人は、心臓血管疾患の１つ以上の形態を有する。これらの疾患は、同年に９５４，１３８人の生命を奪った（合衆国の全死亡の４１％）。
【０００８】
バルーン血管形成（ステンティングありまたはなし）は、脈管疾患のために最も広く使用される処置の１つである；レーザー血管形成のような他の選択もまた、利用可能である。これは脈管構造の重篤な狭窄の多くの症例における選り抜きの処置であるが、バルーン血管形成を受けた約１／３の患者（情報源Ｈｅａｒｔ  ａｎｄ  Ｓｔｒｏｋｅ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎホームページ）は、最初の手順の６ヶ月以内に；しばしばさらなる介入を必要とするのに十分重篤な、処置動脈の狭窄を再生した（再狭窄）。
【０００９】
このような脈管疾患（例えば、再狭窄を含む）は、少なくとも部分的に血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）移動、ＶＳＭＣ増殖、および細胞外マトリックス沈着に続く内膜の肥厚によるものである。簡単には、血管内皮は、血液が滑らかに流れ得る非血栓形成性表面および血管壁を含む組織から血液成分を分離する障壁として作用する。内皮細胞はまた、ヘパリン硫酸、プロスタサイクリン、ＥＤＲＦ、ならびに血小板および白血球接着、ＶＳＭＣ収縮、ＶＳＭＣ移動、ならびにＶＳＭＣ増殖を阻害する他の因子を放出する。例えば、バルーン血管形成、アテローム切除術、またはステント切除術間に生じる、内皮に対する任意の喪失または損傷は、血小板接着、血小板凝集、および血栓形成をもたらし得る。活性化血小板は、血管収縮を生じる物質（セロトニンおよびトロンボキサン）ならびに／またはＶＳＭＣ移動および増殖を促進する物質（ＰＤＧＦ、上皮増殖因子、ＴＧＦ−β、およびヘパリナーゼ）を放出し得る。動脈により放出される組織因子は血餅形成を刺激し、平滑筋細胞が移動および増殖し得るフィブリンマトリックスをもたらす。
【００１０】
この事象のカスケードは、血管平滑筋細胞の収縮性表現型から分泌性表現型への形質転換を導く。血管形成により誘導される細胞溶解およびマトリックス破壊は、塩基性繊維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）の局所的放出をもたらし、これは順にＰＤＧＦ生成の誘導を通して直接的および間接的にＶＳＭＣ増殖を刺激する。ＰＤＧＦおよびｂＦＧＦに加えて、ＶＳＭＣ増殖もまた、血小板放出ＥＧＦおよびインシュリン増殖因子−１により刺激される。
【００１１】
血管平滑筋細胞はまた、血管の中膜および内膜に移動するように誘導される。これは、細胞外マトリックスおよび血管壁の内部弾力層を通してＶＳＭＣのための経路を分解するマトリックスメタロプロテアーゼの放出および活性化により可能にされる。移動および増殖後、次いで、血管平滑筋細胞は、内膜肥厚の最も大きな部分を含む、グリコサミノグリカン、エラスチン、およびコラーゲンからなる細胞外マトリックスを沈着する。再狭窄プロセスの著しい部分は、全サイズの動脈における変化を導く血管壁；（中膜に加えて）外膜内での増殖に二次的なものの少なくともいくつか、の再構築（リモデリング）によるものであり得る。これらのプロセスの正味の結果は、反復する介入を必要とするに十分なほど、しばしば重篤な脈管壁の狭窄の再発である。
【００１２】
まとめると、血管の管腔内での実質的に任意の強力な操作は、その内皮の裏打ちに損傷を与えるか、または露出させる。従って、脈管疾患自体および治療介入後の再狭窄のための処置選択は、このような状態の長期結果に関した主な問題であり続ける。
【００１３】
新生物閉塞および脈管疾患に加えて、身体通路の閉塞をもたらす、多くの急性および慢性炎症性疾患がある。例えば、これらは、脈管炎、胃腸脈管疾患（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎）、および呼吸管疾患（例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患）を含む。
【００１４】
これらの疾患のそれぞれは、抗炎症剤または免疫抑制剤のような薬物を用いて種々の成功度で処置され得る。しかし、現在のレジメは、しばしば疾患進行を遅延させることに有効でなく、そして全身性毒性および所望でない副作用をもたらし得る。外科的手順はまた、薬物レジメの代わりにまたは加えて利用され得る。しかし、このような外科的手順は、瘢痕形成により高率の局所的再発を有し、そして（例えば、バルーンカテーテルの使用による）特定の条件下で、良性反応性過増殖をもたらし得る。
【００１５】
身体通路を閉塞もし得る他の疾患は、感染疾患を含む。簡単には、身体通路の閉塞をもたらし得る多くの急性および慢性感染プロセス（例えば、尿道炎、前立腺炎および雄性生殖管の他の疾患、雌性生殖管の種々の疾患、膀胱炎、および尿道炎（尿管疾患）、慢性気管支炎、結核、および他のマイコバクテリア感染、ならびに他の呼吸問題、ならびに特定の心臓血管疾患）がある。
【００１６】
このような疾患は、現在、種々の異なる治療レジメおよび／または外科的手順のいずれかにより処置される。しかし、上記のように、このような治療レジメは、所望でない副作用をもたらし得る関連した全身性毒性の困難を有する。さらに、上記で議論されたような外科的手順は、瘢痕形成により局所的再発をもたらし得、そして特定の手順（例えば、市販のステントの挿入）において良性反応性過増殖をもたらし得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
ほとんどの部分に対する上記の疾患および状態のための現存する処置は、同じ制限を共有する。治療剤の使用は、これらの状態の逆転をもたらさず、そして介入がこの状態を処置するために使用されるときはいつでも、介入に対する身体応答の結果として患者に対して危険性がある。本発明は、一般的に上記の状態および疾患の処置に適切な組成物および方法を提供する。これらの組成物および方法は、現存する手順に関連した問題に取り組み、現存する手順と比較した場合に著しい利点を提供し、そしてさらに他の関連する利点を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、以下を提供する：
（１）身体通路に関連した疾患を処置または予防するための方法であって、該身体経路の外部に治療剤を送達する工程を包含する、方法。
【００１９】
（２）身体通路に関連した疾患を処置または予防するための方法であって、該身体経路の平滑筋細胞に外膜を介して治療剤を送達する工程を包含する、方法。
【００２０】
（３）前記治療剤が抗血管新生因子である、項目１または２に記載の方法。
【００２１】
（４）前記治療剤がポリマーをさらに含む、項目１または２に記載の方法。
【００２２】
（５）前記ポリマー性キャリアがポリ（エチレンビニルアセテート）（４０％架橋）である、項目３に記載の方法。
【００２３】
（６）前記ポリマー性キャリアが乳酸およびグリコール酸のコポリマーである、項目３に記載の方法。
【００２４】
（７）前記ポリマー性キャリアがポリ（カプロラクトン）である、項目３に記載の方法。
【００２５】
（８）前記ポリマー性キャリアがポリ（乳酸）である、項目３に記載の方法。
【００２６】
（９）前記ポリマー性キャリアがポリ（乳酸）およびポリ（カプロラクトン）のコポリマーである、項目３に記載の方法。
【００２７】
（１０）前記治療剤が抗微小管剤である、項目１または２に記載の方法。
【００２８】
（１１）前記抗微小管剤が微小管を安定化する、項目１０に記載の方法。
【００２９】
（１２）前記抗微小管剤がパクリタキセルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目１１に記載の方法。
【００３０】
（１３）前記身体通路が、動脈、食道、胃、十二指腸、小腸、大腸、胆汁管、尿管、膀胱、尿道、涙腺、気管、気管支、細気管支、鼻気道、耳管、外耳道、およびファロビウス管からなる群より選択される、項目１または２に記載の方法。
【００３１】
（１４）前記治療剤が、動脈の外壁を介して外膜に直接注射により動脈に送達される、項目１３に記載の方法。
【００３２】
（１５）前記疾患が、脈管疾患、胃腸疾患、尿生殖器疾患、および肺疾患からなる群より選択される、項目１または２に記載の方法。
【００３３】
（１６）前記治療剤が抗微小管剤である、項目１５に記載の方法。
【００３４】
（１７）前記抗微小管剤が微小管を安定化する、項目１６に記載の方法。
【００３５】
（１８）前記抗微小管剤がパクリタキセルまたはそのアナログもしくは誘導体である、項目１７に記載の方法。
【００３６】
（１９）前記抗微小管剤が、バナジウム酸塩もしくはバナジル化合物、またはそのアナログもしくは誘導体である、項目１６に記載の方法。
発明の要旨
簡単に述べると、本発明は、身体通路に関連した疾患を処置または予防するための方法を提供し、身体経路の外部に治療剤を送達する工程を含む。関連した局面では、この身体経路の平滑筋細胞に外膜（ａｄｖｅｎｔｉａ）を介して治療剤を送達する工程を含む、身体通路に関連した疾患を処置または予防するための方法が提供される。治療化合物を疾患部位に局所的に送達することにより、全身性および所望でない副作用が避けられ得、そして総投薬量は潜在的に低減され得る。疾患通路への二次的なまたは周囲への送達はまた、組織の上皮裏打ちへの損傷を含む、内腔操作の多くの不利を避ける。例えば、上皮への損傷は、血栓症、層流パターンの変化、および／または内腔デバイスに対する外来性身体反応をもたらし得、これらのいずれかが再狭窄カスケードを開始し得る。前立腺疾患において、尿道の器具設置を避けることは狭窄の可能性を低減し、そして抑制および性的能力を保存し得る。
【００３７】
広範な種々の治療剤（例えば、抗血管新生剤、抗増殖剤、抗炎症剤、および抗生物質を含む）は、本発明の範囲内で利用され得る。本発明の好ましい実施態様では、治療剤は、抗微小管剤（例えば、本明細書中に記載される「より小さな  （ｌｉｇｈｔｅｒ）ｄグループ」剤（例えば、バナジウム酸塩もしくはバナジル化合物））、または微小管安定剤（例えば、Ｄ２Ｏジスコデルモライド（ｄｉｓｃｏｄｅｒｍｏｌｉｄｅ）、エピシロン（ｅｐｉｔｈｉｌｏｎｅｓ）、およびパクリタキセル）、またはそれらのアナログもしくはその誘導体である。
【００３８】
本発明の特定の実施態様では、治療剤は、例えば、ポリ（エチレン−ビニルアセテート）（４０％架橋）、乳酸およびグリコール酸のコポリマー、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸）およびポリ（カプロラクトン）のコポリマー、ゼラチン、ヒアルロン酸、コラーゲンマトリックス、ならびに卵白のようなポリマーをさらに含み得る。他のキャリア（例えば、リポソーム）もまた、１つ以上の治療剤を含むようにおよび／または送達するように利用され得る。
【００３９】
治療剤は、広範な種々の疾患（例えば、脈管疾患、新生物閉塞、炎症性疾患および感染疾患を含む）を処置または予防するために利用され得る。処置され得る代表的な身体通路として、例えば、動脈、食道、胃、十二指腸、小腸、大腸、胆汁管、尿管、膀胱、尿道、前立腺、涙腺、気管、気管支、細気管支、鼻気道、耳管、外耳道、子宮およびファロビウス管が挙げられる。
【００４０】
本発明の１つの特に好ましい実施態様では、治療剤は、動脈の外壁を介して外膜に直接注射により動脈に送達される。
【００４１】
単に例示目的のために、本発明の特定の実施態様は、疾患を罹患した身体通路に抗微小管剤（例えば、本明細書中で記載される「より小さなｄグループ」剤（例えば、バナジウム酸塩もしくはバナジル化合物））、または微小管安定剤（例えば、Ｄ２Ｏジスコデルモライド、エピシロン、およびパクリタキセル）、またはこれらのいずれかのアナログもしくは誘導体を投与することにより、脈管疾患（例えば、狭窄）、胃腸疾患、泌尿生殖器疾患（例えば、良性前立腺肥大または前立腺ガン）、および肺疾患（上記のそれぞれの特定の例は、以下により詳細に議論される）を処置するための方法を提供する。
【００４２】
本発明のこれらおよび他の局面は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照して明らかになる。さらに、より詳細に特定の手順、デバイス、または組成物を記載し、従ってそれらの全体が参考として援用される、種々の参考文献が以下に示される。
【発明の効果】
【００４３】
本発明によれば、一般的に上記の状態および疾患の処置に適切な組成物および方法が提供される。これらの組成物および方法は、現存する手順に関連した問題に取り組み、現存する手順と比較した場合に著しい利点を提供し、そしてさらに他の関連する利点を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４４】
本発明の詳細な説明
本発明を示す前に、本明細書で後に使用される特定の用語の定義を示すことは、その理解に役立ち得る。
【００４５】
本明細書中で使用する「身体通路」は、内腔を有し、そして身体内の物質の流れを可能にする、任意の数の通路、管（ｔｕｂｅ）、パイプ、管、溝、洞、または導管をいう。身体通路の代表的な例として、動脈および静脈、涙腺、気管、気管支、細気管支、鼻管（洞を含む）および他の気道、耳管、外耳道、口腔、食道、胃、十二指腸、小腸、大腸、胆汁管、尿管、膀胱、尿道、ファロビウス管、子宮、膣および雌性生殖管の他の通路、精管および雄性生殖管の他の通路、ならびに脳および脊髄の空洞系（脳脊髄液）が挙げられる。
【００４６】
本明細書中で使用する「治療剤」は、所定の疾患または状態を軽減するか、処置するか、治癒するか、または予防するそれらの薬剤をいう。代表的な治療剤の例は以下でより詳細に議論され、そして例えば、抗血管新生剤、抗増殖剤、抗炎症剤、および抗生物質が挙げられる。
【００４７】
上記のように、本発明は、身体通路に関連した疾患を処置または予防するための方法を提供し、この方法は、身体通路の外部（すなわち、非管腔表面）に治療剤を含む組成物を送達する工程を包含し、好ましい実施態様では、組成物は治療剤およびポリマー性キャリアを含む。簡単には、治療剤の身体通路の外部への（例えば、二次的なまたは周囲への）送達は、管腔内操作を含む従来のアプローチの多くの不利を避ける。さらに、本明細書中に記載される治療剤の送達は、送達されるべき容量に対して制限なく、より多量の治療剤の投与を可能にする。
【００４８】
以下により詳細に記載されるように、広範な種々の治療剤が、身体通路に関連した疾患を処置または予防するために、キャリア（例えば、ポリマー性）を伴ってまたはこれを伴わずにのいずれかで身体通路の外部に送達され得る。これらの局面のそれぞれは、以下により詳細に議論される。
【００４９】
治療剤
上記のように、本発明は、広範な種々の治療剤を利用する方法および組成物を提供する。本発明に１つの局面では、治療剤は抗血管新生因子である。簡単には、本発明の状況では、抗血管新生因子は、脈管増殖を阻害するように作用する、任意のタンパク質、ペプチド、化学物質、または他の分子を含むことが理解されるべきである。種々の方法（例えば、ニワトリ漿尿膜（「ＣＡＭ」）アッセイを含む）が、所定の因子の抗血管新生活性を測定するために容易に利用され得る。簡単には、新鮮なニワトリ受精卵から殻の一部を除去し、そして試験されるべき抗血管新生因子のサンプルを含むメチルセルロースディスクを膜上に置く。数日（例えば、４８時間）後、試験されるべきサンプルによる脈管増殖の阻害は、メチルセルロースディスクを取り囲む領域のニワトリ漿尿膜の視覚化により容易に測定され得る。脈管増殖の阻害はまた、例えば、コントロールメチルセルロースディスクと比較して、メチルセルロースディスクを取り囲む血管の数およびサイズを測定することにより定量的に測定され得る。本明細書中に記載される抗血管新生因子は、コントロールと比較して、単に統計学的に有意な様式で阻害する場合、新たな血管の形成を阻害すると考えられるが、好ましい局面では、このような抗血管新生因子は、新たな血管の形成を完全に阻害し、ならびに以前から現存する管のサイズおよび数を低減する。
【００５０】
上記のＣＡＭアッセイに加えて、種々の他のアッセイもまた、インビボでの抗血管新生因子の抗力を測定するために利用され得、例えば、この目的のために開発されたマウスモデルを含む（Ｒｏｂｅｒｓｔｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．５１：１３３９−１３４４，１９９１を参照のこと）。
【００５１】
広範な種々の抗血管新生因子は、本発明の状況で容易に利用され得る。代表的な例として、抗浸潤因子、レチノイン酸およびその誘導体、スラミン、メタロプロテイナーゼ−１組織インヒビター、メタロプロテイナーゼ−２組織インヒビター、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−１、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−２、微小管機能を破壊する化合物、およびより小さな「ｄグループ」遷移金属の種々の形態が挙げられる。これらのおよび他の抗血管新生因子は以下に詳細に記載される。
【００５２】
簡単には、軟骨抽出物から調製される抗浸潤因子すなわち「ＡＩＦ」は、新たな血管の増殖の阻害を担う構成物質を含む。これらの構成物質は７つの低分子量タンパク質（＜５０，０００ダルトン）のファミリーを含み（ＫｕｅｔｔｎｅｒおよびＰａｕｌｉ，「軟骨因子による新脈管化の阻害」Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｓｙｓｔｅｍ，  Ｐｉｔｍａｎ  Ｂｏｏｋｓ（ＣＩＢＡ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  １００），  １６３−１７３頁，  １９８３）、これらは種々のプロテアーゼに対して阻害効果を有する種々のタンパク質を含む（Ｅｉｓｅｎｔｅｉｎら，  Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．８１：３３７−３４６，  １９７５；  Ｌａｎｇｅｒら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９３：７０−７２，  １９７６；およびＨｏｒｔｏｎら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９：１３４２−１３４５，  １９７８）。本発明での使用に適したＡＩＦは、当該分野で公知の技術（例えば、Ｅｉｓｅｎｔｅｉｎら，前出；  ＫｕｅｔｔｎｅｒおよびＰａｕｌｉ，前出；ならびにＬａｎｇｅｒら，前出）を利用して容易に調製され得る。軟骨由来インヒビター（「ＣＤＩ」）のようなＡＩＦの精製した構成物質（Ｍｏｓｅｓら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４８：１４０８−１４１０，  １９９０を参照のこと）はまた、本発明の状況内で容易に調製され、そして利用され得る。
【００５３】
レチノイン酸は、細胞外マトリックス成分の代謝を変え、これは血管新生の阻害をもたらす。プロリンアナログ、血管停止（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｃ）ステロイド、またはヘパリンの添加は、トランスレチノイン酸の抗血管新生効果を相乗的に増大するために利用され得る。本発明の状況で利用されもし得るレチノイン酸ならびにその誘導体は、例えば、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（＃Ｒ２６２５）を含む商業的供給源から容易に得られ得る。
【００５４】
スラミンは、代表的に抗トリパノソーマ剤として使用されるポリスルホン化ナフチル尿素化合物である。簡単には、スラミンは、種々の増殖因子（例えば、血小板由来増殖因子（「ＰＤＧＦ」）、上皮増殖因子（「ＥＧＦ」）、トランスフォーミング増殖因子（「ＴＧＦ−β」）、インシュリン様増殖因子（「ＩＧＦ−１」）、および繊維芽細胞増殖因子（「βＦＧＦ」））の特異的細胞表面結合をブロックする。スラミンは、公知の技術に従って調製され得るか、または種々の商業的供給源（例えば、Ｍｏｂａｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを含む）から容易に得られ得る（Ｇａｇｌｉａｒｄｉら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：５０７３−５０７５，  １９９２；およびＣｏｆｆｅｙ，Ｊｒ．ら，  Ｊ．  ｏｆ  Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓ．１３２：１４３−１４８，  １９８７を参照のこと）。
【００５５】
メタロプロテイナーゼ−１組織インヒビター（「ＴＩＭＰ」）は、ＭＭＰアーゼもまた分泌する内皮細胞により分泌される。ＴＩＭＰはグリコシル化され、そして２８．５ｋＤａの分子量を有する。ＴＩＭＰ−１は、活性化メタロプロテイナーゼへの結合し、それにより血管の細胞外マトリックスへの進入を抑制することにより血管新生を調節する。メタロプロテイナーゼ−２組織インヒビター（「ＴＩＭＰ−２」）はまた、血管新生を阻害するために利用され得る。簡単には、ＴＩＭＰ−２は、活性および潜伏性プロ酵素形態の両方のメタロプロテイナーゼに結合する２１ｋＤａの非グリコシル化タンパク質である。ＴＩＭＰ−１およびＴＩＭＰ−２は、Ｓｙｎｅｒｇｅｎ，  Ｂｏｕｌｄｅｒ，  Ｃｏｌｏｒａｄｏのような商業的供給源から得られ得る。
【００５６】
プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡ）は、血液血小板に存在する５０ｋＤａの糖タンパク質であり、そしてまた内皮細胞および筋細胞により合成され得る。ＰＡＩ−１は、内皮の側底側でｔ−ＰＡおよびウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーターを阻害し、そして繊維素溶解プロセスをさらに調節する。プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−２（ＰＡＩ−２）は、一般的に、特定の環境下（例えば、妊娠）および腫瘍の存在下での血液中にのみ見出される。簡単には、ＰＡＩ−２は、単球およびマクロファージにより分泌される５６ｋＤａのタンパク質である。繊維素溶解活性を調節し、そして特に、ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーターおよび組織プラスミノーゲンアクチベーターを阻害し、それにより繊維素溶解を妨げると考えれる。
【００５７】
本発明の治療剤はまた、微小管機能を破壊する化合物を含む。このような化合物の代表的な例として、エストラムスチン（Ｓｉｇｍａから入手可能；  ＷａｎｇおよびＳｔｅａｒｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４８：６２６２−６２７１，  １９８８）、エポシロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）、クラシン−Ａ、コルヒチン、メトトレキサート、およびパクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、Ｄ２Ｏ、ならびに４−ｔｅｒｔ−ブチル−［３−（２−クロロエチル）ウレイド］ベンゼン（「ｔＢＣＥＵ」）が挙げられる。簡単には、このような化合物は、いくつかの異なる様式で作用し得る。例えば、コルヒチンおよびビンブラスチンのような化合物は、微小管を脱重合することにより作用する。
【００５８】
本発明の１つの好ましい実施態様では、治療剤は、チューブリンへの結合により微小管形成を破壊して異常な紡錘体を形成する化合物であるパクリタキセルである。簡単には、パクリタキセルは、Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａパシフィックユー（Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｙｅｗ．）の採集され乾燥された樹皮、ならびにパシフィックユーのＴａｘｏｍｙｃｅｓ  ＡｎｄｒｅａｎａｅおよびＥｎｄｏｐｈｙｔｉｃ  Ｆｕｎｇｕｓ  （Ｓｔｉｅｒｌｅら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ６０：２１４−２１６，  １９９３）から得られた、高度に誘導体化されたジテルペノイドである（Ｗａｎｉら，  Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９３：２３２５，  １９７１）。「パクリタキセル」（例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標）、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、パクリタキセルの１０−デスアセチルアナログ、およびパクリタキセルの３’Ｎ−デスベンゾイル−３’Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアナログのようなプロドラック、アナログ、および誘導体を含むことが本明細書中で理解されるべきである）は、当業者に公知の技術（ＷＯ９４／０７８８２、ＷＯ９４／０７８８１、ＷＯ９４／０７８８０、ＷＯ９４／０７８７６、ＷＯ９３／２３５５５、ＷＯ９３／１００７６、ＷＯ９４／００１５６、ＷＯ９３／２４４７６、ＥＰ５９０２６７、ＷＯ９４／２００８９；米国特許第５，２９４，６３７号、同第５，２８３，２５３号、同第５，２７９，９４９号、同第５，２７４，１３７号、同第５，２０２，４４８号、同第５，２００，５３４号、同第５，２２９，５２９号、同第５，２５４，５８０号、同第５，４１２，０９２号、同第５，３９５，８５０号、同第５，３８０，７５１号、同第５，３５０，８６６号、同第４，８５７，６５３号、同第５，２７２，１７１号、同第５，４１１，９８４号、同第５，２４８，７９６号、同第５，２４８，７９６号、同第５，４２２，３６４号、同第５，３００，６３８号、同第５，２９４，６３７号、同第５，３６２，８３１号、同第５，４４０，０５６号、同第４，８１４，４７０号、同第５，２７８，３２４号、同第５，３５２，８０５号、同第５，４１１，９８４号、同第５，０５９，６９９号、同第４，９４２，１８４号；Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３５（５２）：９７０９−９７１２，  １９９４；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３５：４２３０−４２３７，１９９２；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４：９９２−９９８，  １９９１；Ｊ．Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄ．５７（１０）：１４０４−１４１０，１９９４；Ｊ．Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄ．５７（１１）：１５８０−１５８３，  １９９４；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１０：６５５８−６５６０，  １９８８を参照のこと）を利用して容易に調製され得るか、または例えば、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，  Ｍｉｓｓｏｕｒｉ（Ｔ７４０２−Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｉａ由来）を含む、種々の商業的供給源から得られ得る。
【００５９】
このようなパクリタキセル誘導体またはアナログの代表的な例として、７−デオキシ−ドセタキソール、７，８−シクロプロパタキサン、Ｎ−置換２−アゼチドン、６，７−エポキシパクリタキセル、６，７修飾パクリタキセル、１０−デスアセトキシタキソール、１０−デアセチルタキソール（１０−デアセチルバカチンＩＩＩ由来）、タキソールのホスホノオキシおよび炭酸塩誘導体、タキソール２’，７−ジ（１，２−ベンゼンジカルボン酸ナトリウム）、１０−デスアセトキシ−１１，１２−ジヒドロタキソール−１０，１２（１８）−ジエン誘導体、１０−デスアセトキシタキソール、プロタキソール（２’−および／または７−Ｏ−エステル誘導体）、（２’−および／または７−Ｏ−炭酸塩誘導体）、タキソール側鎖の不斉合成、フルオロタキソール、９−デオキソタキサン、（１３−アセチル−９−デオキソバカチンＩＩＩ）、９−デオキソタキソール、７−デオキシ−９−デオキソタキソール、１０−デスアセトキシ−７−デオキシ−９−デオキソタキソール、水素またはアセチル基ならびにヒドロキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノを含む誘導体、スルホン化２’−アクリロイルタキソールおよびスルホン化２’−Ｏ−アシル酸タキソール誘導体、スクシニルタキソール、２’−γ−アミノブチリルタキソールホルメート、２’−アセチルタキソール、７−アセチルタキソール、７−グリシンカルバメートタキソール、２’−ＯＨ−７−ＰＥＧ（５０００）カルバメートタキソール、２’−ベンゾイルおよび２’−７−ジベンゾイルタキソール誘導体、他のプロドラック（２’−アセチルタキソール；２’，７−ジアセチルタキソール；２’スクシニルタキソール；２’−（β−アラニル）−タキソール；２’γ−アミノ酪酸（ｂｕｔｙｒｙｌ）タキソールホルメート；２’−スクシニルタキソールのエチレングリコール誘導体；２’−グルタリルタキソール；２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルグルシル）タキソール；２’−［２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロピオニル］タキソール；２’オルトカルボキシベンゾイルタキソール；タキソールの２’脂肪族カルボン酸誘導体、プロドラック｛２’（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノプロピオニル）タキソール、２’（Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシル）タキソール、７（Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシル）タキソール、２’，７−ジ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシル）タキソール、７（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノプロピオニル）タキソール、２’，７−ジ−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノプロピオニル）タキソール、２’−（Ｌ−グリシル）タキソール、７−（Ｌ−グリシル）タキソール、２’，７−ジ（Ｌ−グリシル）タキソール、２’−（Ｌ−アラニル）タキソール、７−（Ｌ−アラニル）タキソール、２’，７−ジ（Ｌ−アラニル）タキソール、２’−（Ｌ−ロイシル）タキソール、７−（Ｌ−ロイシル）タキソール、２’，７−ジ（Ｌ−ロイシル）タキソール、２’−（Ｌ−イソロイシル）タキソール、７−（Ｌ−イソロイシル）タキソール、２’，７−ジ（Ｌ−イソロイシル）タキソール、２’−（Ｌ−バリル）タキソール、７−（Ｌ−バリル）タキソール、２’，７−ジ（Ｌ−バリル）タキソール、２’−（Ｌ−フェニルアラニル）タキソール、７−（Ｌ−フェニルアラニル）タキソール、２’，７−ジ（Ｌ−フェニルアラニル）タキソール、２’−（Ｌ−プロリル）タキソール、７−（Ｌ−プロリル）タキソール、２’，７−ジ（Ｌ−プロリル）タキソール、２’−（Ｌ−リジル）タキソール、７−（Ｌ−リジル）タキソール、２’，７−ジ（Ｌ−リジル）タキソール、２’−（Ｌ−グルタミル）タキソール、７−（Ｌ−グルタミル）タキソール、２’，７−ジ（Ｌ−グルタミル）タキソール、２’−（Ｌ−アルギニル）タキソール、７−（Ｌ−アルギニル）タキソール、２’，７−ジ（Ｌ−アルギニル）タキソール｝、修飾フェニルイソセリン側鎖を有するタキソールアナログ、タキソテレ（ｔａｘｏｔｅｒｅ）、（Ｎ−デベンゾイル−Ｎ−ｔｅｒｔ−（ブトキシカルボニル）−１０−デアセチルタキソール、ならびにタキサン（例えば、バカチンＩＩＩ、セファロマンニン、１０−デアセチルバカシンＩＩＩ、ブレビフォリオール、ユナンタクシン、およびタクシン）が挙げられる。
【００６０】
本発明で利用され得る他の治療剤として、より小さな「ｄ族」遷移金属（例えば、バナジウム、モリブデン、タングステン、チタン、ニオブ、およびタンタル核種）が挙げられる。このような遷移金属種は、遷移金属錯体を形成し得る。上記の遷移金属種の適切な錯体として、オキソ遷移金属錯体が挙げられる。
【００６１】
バナジウム錯体の代表的な例として、オキソバナジウム錯体（例えば、バナジウム酸およびバナジル錯体）が挙げられる。適切なバナジウム酸錯体として、メタバナジウム酸（すなわちＶＯ３−）およびオルトバナジウム酸（すなわちＶＯ４３−）錯体（例えば、メタバナジウム酸アンモニウム（すなわちＮＨ４ＶＯ３）、メタバナジウム酸ナトリウム（すなわちＮａＶＯ３）、およびオルトバナジウム酸ナトリウム（すなわちＮａ３ＶＯ４）が挙げられる。適切なバナジル（すなわちＶＯ２＋）錯体として、例えば、バナジルアセチルアセトネートおよびバナジルサルフェート（バナジルサルフェートハイドレート（例えば、バナジルサルフェートモノ−およびトリハイドレート）を含む）、ビス［マルトラト（オキソバナジウム）］（ＩＶ）（「ＢＭＯＶ」）、ビス［（エチルマルトラト）オキソバナジウム］（ＩＶ）  （「ＢＥＯＶ」）、およびビス（システイン、アミドＮ−オクチル）オキソバナジウム（ＩＶ）  （「ナグリバン」）が挙げられる。
【００６２】
タングステン錯体およびモリブデン錯体の代表的な例にもまた、オキソ錯体が挙げられる。適切なオキソタングステン錯体として、タングステン酸およびタングステン酸化物錯体が挙げられる。適切なタングステン酸（すなわちＷＯ４２−）錯体として、タングステン酸アンモニウム（すなわち（ＮＨ４）２ＷＯ４）、タングステン酸カルシウム（すなわちＣａＷＯ４）、タングステン酸ナトリウム二水和物（すなわちＮａ２ＷＯ４・２Ｈ２Ｏ）、およびタングステン酸（すなわちＨ２ＷＯ４）が挙げられる。適切なタングステン酸化物として、タングステン（ＩＶ）酸化物（すなわちＷＯ２）およびタングステン（ＶＩ）酸化物（すなわちＷＯ３）が挙げられる。適切なオキソモリブデン錯体として、モリブデン酸塩、モリブデン酸化物、およびモリブデニル錯体が挙げられる。適切なモリブデン酸（すなわちＭｏＯ４２−）錯体として、モリブデン酸アンモニウム（すなわち（ＮＨ４）２ＭｏＯ４）およびその水和物、モリブデン酸ナトリウム（すなわちＮａ２ＭｏＯ４）およびその水和物、ならびにモリブデン酸カリウム（すなわちＫ２ＭｏＯ４）およびその水和物が挙げられる。適切なモリブデン酸化物として、モリブデン（ＩＶ）酸化物（すなわちＭｏＯ２）、モリブデン（ＶＩ）酸化物（すなわちＭｏＯ３）、およびモリブデン酸が挙げられる。適切なモリブデニル（すなわちＭｏＯ２２＋）錯体として、例えば、モリブデニルアセチルアセトネートが挙げられる。他の適切なタングステンおよびモリブデン錯体として、例えば、グリセロール、酒石酸、および糖に由来する水酸基誘導体が挙げられる。
【００６３】
広範な種々の他の抗血管新生因子もまた、本発明の状況で利用され得る。代表的な例として、血小板因子４（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ｆ１３８５）；硫酸プロタミン（クルペイン）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ｐ４５０５）；硫酸化キチン誘導体（クイーンクラブ（ｑｕｅｅｎ  ｃｌａｂ）の殻から調製）、（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ｃ３６４１；  Ｍｕｒａｔａら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：２２−２６，  １９９１）；硫酸化多糖ペプチドグリカン複合体（ＳＰ−ＰＧ）（この化合物の機能は、ステロイド（例えば、エストロゲン）およびクエン酸タモキシフェンの存在により増強され得る）；スタウロスポリン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ｓ４４００）；マトリックス代謝のモジュレーター（例えば、プロリンアナログ｛［Ｌ−アゼチジン−２−カルボン酸（ＬＡＣＡ）  （Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ａ０７６０）、シスヒドロキシプロリン、ｄ，Ｌ−３，４−デヒドロプロリン  （Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ｄ０２６５）、チアプロリン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ｔ０６３１）］、α，α−ジピリジル（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ｄ７５０５）、フマル酸β−アミノプロピオニトリル（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ａ３１３４）｝；ＭＤＬ  ２７０３２（４−プロピル−５−（４−ピリジニル）−２（３Ｈ）−オキサゾロン；Ｍｅｒｉｏｎ  Ｍｅｒｒｅｌ  Ｄｏｗ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；メトトレキサート（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ａ６７７０；Ｈｉｒａｔａら，  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ３２：１０６５−１０７３，  １９８９）；ミトキサントロン（ＰｏｌｖｅｒｉｎｉおよびＮｏｖａｋ，  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１４０：９０１−９０７）；ヘパリン（Ｆｏｌｋｍａｎ，  Ｂｉｏ．Ｐｈａｒ．３４：９０５−９０９，  １９８５；Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ｐ８７５４）；インターフェロン（例えば、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃１３２６５）；２マクログロブリン血清（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ｍ７１５１）；ＣｈＩＭＰ−３（Ｐａｖｌｏｆｆら，  Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６７：１７３２１−１７３２６，  １９９２）；キモスタチン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ｃ７２６８；Ｔｏｍｋｉｎｓｏｎら，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．２８６：４７５−４８０，  １９９２）；β−シクロデキストリンテトラデカサスルフェート（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ｃ４７６７）；エポネマイシン；カンプトテシン；フマギリンおよび誘導体（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ｆ６７７１；カナダ国特許第２，０２４，３０６号；Ｉｎｇｂｅｒら，  Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５５−５５７，  １９９０）；チオリンゴ酸金ナトリウム（「ＧＳＴ」；Ｓｉｇｍａ  Ｇ４０２２；ＭａｔｓｕｂａｒａおよびＺｉｆｆ，  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７９：１４４０−１４４６，  １９８７）；（Ｄ−ペニシラミン（「ＣＤＰＴ」；Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，＃Ｐ４８７５またはＰ５０００（ＨＣｌ））；β−１−抗コラゲナーゼ血清；α２−抗プラスミン（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍ．  Ｃｏ．，：Ａ０９１４；Ｈｏｌｍｅｓら，  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２（４）：１６５９−１６６４，  １９８７）；ビサントレン（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；ロベンザリット二ナトリウム（Ｎ−（２）−カルボキシフェニル−４−クロロアントロニル酸二ナトリウムまたは「ＣＣＡ」；Ｔａｋｅｕｃｈｉら，  Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  ３６：３１２−３１６，  １９９２）；サリドマイド；血管停止ステロイド；ＡＧＭ−１４７０；カルボキシナミノルミダゾール；ならびにメタロプロテイナーゼインヒビター（例えば、ＢＢ９４）、エストロゲンおよびエストロゲンアナログ、抗エストロゲン、抗酸化剤、バイオフラボノイド（フィクノゲノール（Ｐｙｃｎｏｇｅｌ））、エーテル脂質（ｓ−ホスホネート、ＥＴ−１８−ＯＣＨ３）、チロシンキナーゼインヒビター（ゲニステイン、エルブスタチン、ヘルバマイシンＡ、ラベンダスチン−ｃ、ヒドロキシシナメート）、αケモカイン［ヒトインターフェロン誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）］、−Ｃ−Ｘ−Ｃ−ケモカイン（Ｇｒｏ−β）、一酸化窒素、抗真菌剤（ラジシコール）、１５−デオキシスペルグアリン、金属錯体（チタノセン二塩化物−シクロペンタジエニルチタン二塩化物）、トリフェニルメタン誘導体（オーリントリカルボン酸）、リノミド、サリドマイド、ＩＬ−１２、ヘパリナーゼ、アンギオスタシン、抗微生物剤（ミノマイシン）、血漿タンパク質（アポリポタンパク質Ｅ）、アンスラサイクリン（ＴＡＮ−１１２０）、プロリフェリン関連タンパク質、ＦＲ−１１１１４２、Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇのサポニン（ギンセノサイド−Ｒｂ２）、ペントサンポリスルフェートが挙げられる。
【００６４】
本発明の組成物はまた、広範な種々の他の治療剤を含み得る。例えば：α−アドレナリン作動性ブロッキング剤、アンギオテンシンＩＩレセプターアンタゴニストおよびヒスタミン、セロトニン、エンドセリンに対するレセプターアンタゴニスト；ナトリウム／水素アンチポーターのインヒビター（例えば、アミロライドおよびその誘導体）；細胞内Ｃａ２＋輸送を調節する薬剤（例えば、Ｌ型（例えば、ジルチアゼム、ニフェジピン、ベラパミル）またはＴ型Ｃａ２＋チャンネルブロッカー（例えば、アミロライド）、カルモジュリンアンタゴニスト（例えば、Ｈ７）、およびナトリウム／カルシウムアンチポーターのインヒビター（例えば、アミロライド））；ａｐ−１インヒビター（チロシンキナーゼ、プロテインキナーゼＣ、ミオシン軽鎖キナーゼ、Ｃａ２＋／カルモジュリンキナーゼＩＩ、カゼインキナーゼＩＩに対する）；抗抑制剤（例えば、アミトリプチリン、フルオキセチン、ＬＵＶＯＸ（登録商標）およびＰＡＸＩＬ（登録商標））；サイトカインおよび／または増殖因子ならびにそれらの個々のレセプター（例えば、インターロイキン、α、β、またはγ−ＩＦＮ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、上皮増殖因子、トランスフォーミング増殖因子αおよびβ、ＴＮＦ、ならびに血管上皮増殖因子、内皮増殖因子、酸性または塩基性繊維芽細胞増殖因子、および血小板由来増殖因子のアンタゴニスト）；ＩＰ３レセプターのインヒビター（例えば、ヘパリン）；プロテアーゼおよびコラゲナーゼインヒビター（例えば、上記のＴＩＭＰ）；ニトロ血管拡張剤（例えば、イソソルビドジニトレート）；抗有糸分裂剤（例えば、コルヒチン、アンスラサイクリンおよび他の抗生物質、葉酸アンタゴニストおよび他の抗代謝剤、ビンカアルカロイド、ニトロソウレア、ＤＮＡアルキル化剤、トポイソメラーゼインヒビター、プリンアンタゴニストおよびアナログ、ピリミジンアンタゴニストおよびアナログ、アルキルスルホネート）；免疫抑制剤（例えば、副腎皮質ステロイド、シクロスポリン）；センスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、核酸アナログ（例えば、ペプチド核酸）またはこれらの任意の組み合せ）；ならびに転写因子活性のインヒビター（例えば、より小さなｄグループ遷移金属）が挙げられる。
【００６５】
本発明で利用され得る他の治療剤として、広範な種々の抗生物質（抗細菌剤、抗微生物剤、抗ウイルス剤、抗原生動物剤、および抗真菌剤を含む）が挙げられる。このような薬剤の代表的な例として、アミノグリコシド（例えば、ストレプトマイシン、アミカシン、ゲンタマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン）のような全身性抗生物質；第１、第２、および第３世代のセファロスポリン（例えば、セファロシン、セファゾリン、セファピリン、セファラジン、セファレキシン、セファドロキシル、セファクロル、セファマンドール、セフロキシム、セフロキシムアクセチル、セフォニシド、セフォラニド、セフォキシチン、セフォタキシム、セフォテタン、セフチゾキシム、セフォペラゾン、セフタジジム、セフトリアキソン、モキサラクタム、他の半合成セファロスポリン（例えば、セフィキシムおよびセフポドキシムプロキセチル））；ペニシリン（例えば、ペニシリンＧ（ベンザチンおよびプロカイン塩）、クロキサシリン、ジクロキサシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＶ、アンピシリン、アモキシシリン、バカンピシリン、サイクラシリン、カルベニシリン、チカルシリン、メズロシリン、ピペラシリン、アズロシリン、アムジノシリン、およびクラブラン酸と組み合わせたペニシリン）；キノロン（例えば、シノキサシン、シプロフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、ピペミジン酸、ペルロキサシン、フレロキサシン、エノキサシン、オフロキサシン、トスフロキサシン、ロメフルオキサシン、キノロンの立体異性体）；スルホンアミド（例えば、スルファシチン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルフイソキサゾール、スルファサラジン、およびトリメトプリム＋スルファメトキサゾールの組み合せ）；テトラサイクリン（例えば、ドキシサイクリン、デメクロサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン）；マクロライド（例えば、エリスロマイシン、他の半合成マクロライド（例えば、アジスロマイシンおよびクラリスロマイシン））；モノバクタム（新規の合成クラス）（例えば、アズトレオナム、ロラカルベフ）；ならびに多方面にわたる薬剤（例えば、アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、マイトマイシンＣ、ノボビオシン、プリカマイシン、リファムピン、ブレオマイシン、クロラムフェニコール、クリンダマイシン、オレアンドマイシン、カナマイシン、リンコマイシン、ネオマイシン、パロモマイシン、スペクチノマイシン、トロレアンドマイシン、アンホテリシンＢ、コリスチン、ナイスタチン、ポリミキシンＢ、グリセオフルビン、アズトレオナム、シクロセリン、クリンダマイシン、コリスチメサート、イミペネム−シラスタチン、メセナミン、メトロニダゾール、ニトロフラントイン、リファブタン、スペクチノマイシン、トリメソプリム、バシトラシン、バンコマイシン、他のβ−ラクタム抗生物質）が挙げられる。
【００６６】
本発明で使用され得るさらなる治療剤として、局所的抗生物質（例えば、バシトラシン、亜鉛、ネオマイシン、ムピロシン、クリンダマイシン）；抗病原体ポリペプチド（例えば、セクロピオニン、マンガイニン）；および抗結核剤（例えば、スルファジメトキシン、スルフィソキサゾール、スルフィソミジン、塩酸エタンブトール、イソニアジド、パラアミノサリチル酸カルシウム）が挙げられる。
【００６７】
本発明で使用され得る他の治療剤として、例えば、ヨウ素、プロビドンヨウ素、ホウ酸、ホウ酸ナトリウム、オキシデール、過マンガン酸カリウム、エタノール、イソプロパノール、ホルマリン、クレゾール、ジマゾール、シカニン、フェニルヨードウンデシノエート、ヘキサクロロフェン、レゾルシン、塩化ベンゼトニン、ラウリル硫酸ナトリウム、塩化水銀、マーキュロクロム、スルファジアジン銀、ならびに他の無機および有機銀塩ならびに亜鉛塩、１価および２価カチオンの塩、グルコン酸クロルヘキシジン、塩酸アルキルポリアミノエチルグリシン、塩化ベンズアルコニウム、ニトロフラゾン、ナイスタチン、アセスルファミン、クロトリマゾール、スルファメチオゾール、スルフアセトアミド、ジオラミン、トルナフテート、ピロールニトリン、ウンデシレン酸、ミクロアゾール、バリオチン、ハロプロギン、ならびにジマゾール、（メクロサイクリン、トリコマイシン、およびペンタマイシン）、ペニシリンのような抗生物質が挙げられる。抗真菌剤として、フルシトシン、フルコナゾール、グリセオフルビン、ケトコナゾール、およびミコナゾールが挙げられる。抗ウイルス剤およびＡＩＤＳ剤として、アシクロビル、アマンタジン、ジダノシン（以前はｄｄＩ）、グリセオフルビン、フルシトシン、フォスカルネット、ガンシクロビル、ヨードクリジン、ミコナゾール、クロトリマゾール、ピリメタミン、リバビリン、リマンタジン、スタブジン（以前はｄ４Ｔ）、トリフルリジン、トリスルファピリミジン、バラシクロビル、ビダラビン、ザルシタビン（以前はｄｄＣ）、およびジドブジン（以前はＡＺＴ）が挙げられる。ＡＩＤＳに対する補助治療剤（例えば、エリスロポエチン；フルコナゾール（抗真菌）；インターフェロンα−２ａおよび−２ｂ（カポジ肉腫）；アトバキュオン、ペンタミジン、およびトリメトレキセート（抗原生動物）；酢酸メゲストラオール（食欲増強剤）；リファブチン（抗マイコバクテリア）。抗原生動物剤の代表的な例として、ペンタミジンイセチオネート、キニン、クロロキン、およびメフロキンが挙げられる。
【００６８】
本発明で使用され得る他の治療剤として、抗増殖剤、抗新生物剤、または化学療法剤が挙げられる。このような薬剤の代表的な例として、アンドロゲンインヒビター、抗エストロゲンおよびホルモン（例えば、フルタミド、ロイプロリド、タモキシフェン、エストラジオール、エストラムスチン、メゲストロール、ジエチルスチベステロール、テストラクトン、ゴセレリン、メドロキシプロゲステロン）；細胞傷害剤（例えば、アルトレタミン、ブレオマイシン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ）、シスプラチン、クラドリビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エストラムスチン、エトポシド、ロムスチン、シクロフォスファミド、シタラビン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、インターフェロンα−２ａおよび−２ｂ、イフォスファミド、マイトキサントロン、マイトマイシン、パクリタキセル、ストレプトゾシン、テニポシド、チオテパ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン）；抗代謝剤および抗有糸分裂剤（例えば、フロクスリジン、５−フルオロウラシル、フルアラビン、インターフェロンα−２ａおよび−２ｂ、ロウコボリン、メルカプトプリン、メトトレキサート、マイトタン、プリカマイシン、チオグアニン、コルヒチン、アンスラサイクリンおよび他の抗生物質、葉酸アンタゴニストおよび他の抗代謝物、ビンカアルカロイド、ニトロソウレア、ＤＮＡアルキル化剤、プリンアンタゴニストおよびアナログ、ピリミジンアンタゴニストおよびアナログ、アルキルスルホネート）；酵素（例えば、アスパラギナーゼ、ペグアスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ））；放射性薬剤（例えば、Ｃｕ−６４、Ｇａ−６７、Ｇａ−６８、Ｚｒ−８９、Ｒｕ−９７、Ｔｃ−９９ｍ、Ｒｈ−１０５、Ｐｄ−１０９、Ｉｎ−１１１、Ｉ−１２３、Ｉ−１２５、Ｉ−１３１、Ｒｅ−１８６、Ｒｅ−１８８、Ａｕ−１９８、Ａｕ−１９９、Ｐｂ−２０３、Ａｔ−２１１、Ｐｂ−２１２、およびＢｉ−２１２）；毒素（例えば、リシン、アブリン、ジフテリア毒素、コレラ毒素、ゲロニン、ヨウシュヤマゴボウ抗ウイルス性タンパク質、トリチン、Ｓｈｉｇｅｌｌａ毒素、およびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素Ａ）、補助治療剤（例えば、グラニセトロンおよびオンダンセトロン（抗悪心剤、抗嘔吐剤）、デキスラゾキサン（心筋症）、硝酸ガリウム（高カルシウム血症）、ＧＣＳＦおよびＧＭＳＣＦ（化学療法およびＢＭＴ）、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、レバミゾール、ピロカルピン（放射線治療設定における唾液生成）、ストロンチウム８９（骨腫瘍）が挙げられる。
【００６９】
本発明で利用され得るさらなる治療剤として、心臓血管剤；抗高血圧剤；アドレナリン作用ブロッカーおよびスティミュレーター（例えば、ドキサゾシン、グアナドレル、グアネチジン、フェオキシベンザミン、プラゾシン＋ポリチアジド、テラゾシン、メチルドーパ、クロニジン、グアナベンズ、グアンファシン）；α−／β−アドレナリン作用ブロッカー（例えば、ラベタロール）；アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）インヒビター（例えば、ベナゼプリル、カトプリル、エナラプリル、エナラプリラト、フォシノプリル、リシノプリル、モエキシプリル、キナプリル、ラミプリル、ならびにカルシウムチャンネルブロッカーおよび利尿剤との組み合せ）；ＡＣＥレセプターアンタゴニスト（例えば、ロサルタン）；βブロッカー（例えば、アセブトロール、アテノロール、ベタキソノール、ビソプロロール、カルテオロール、エスモロール、フィモロール、ピンドロール、プロプラノロール、ペンバトロール、メトプロロール、ナドロール、ソタロール）；カルシウムチャンネルブロッカー（例えば、アミロライド、アムロジピン、ベプリジル、ジルチアゼム、イスラジピン、ニフェジピン、ベラパミル、フェロジピン、ニカルジピン、ニモジピン）；抗不整脈剤、グループＩ〜ＩＶ（例えば、ブレチリウム、ジソピラミド、エンカイニド、フレカイニド、リドカイン、メキシレチン、モリシジン、プロパフェノン、プロカイナミド、キニジン、トカイニド、エスモロール、プロプラノーロール、アセブトロール、アミオダロン、ソタロール、ベラパミル、ジルチアゼン、ピンドロール、塩酸ブプラノロール、トリクロルメチアジド、フロセミド、塩酸プラゾジン、酒石酸メトプロロール、塩酸カルテオロール、塩酸オクスプレノロール、および塩酸プロプラノロール）；ならびに多方面にわたる抗不整脈剤および強心剤（例えば、アデノシン、ジゴキシン；メチルジゴキシン、カフェイン、塩酸ドーパミン、塩酸ドブタミン、塩酸オクトパミン、ジプロフィリン、ユビデカレノン、ジギタリス）が挙げられる。
【００７０】
本発明で利用され得る他の治療剤として、利尿剤（例えば、アセタゾラミド、アミロリド、トリアムテレン＋ヒドロクロロチアジドの組み合せ、スピロノラクトン＋ヒドロクロロチアジドの組み合せ、トルセミド、フロセミド、エタクリネン酸、ブメタニド、トリアムテレン、メチルクロロチジド、ヒドロクロロチアジド、メトダゾン、クロルサリドン、ヒドロフルメチアジド、メトラゾン、メチクロチアジド、ポリチアジド、キニタゾン、トリクロルメチアジド、ベンロフルメチアジド、ベンズチアジド）；低血圧利尿剤（例えば、メフルシド、ペンフルチジド、ブメタミド、ヒドロチアジド、ベントロフルメチアジド、レセルピン）；変力（ｉｎｏｔｒｏｐｉｃ）剤（例えば、ジゴキシン、ジギトキシン、ドブタミン、アムリノン、ミルリノン）；血管拡張剤（例えば、パパベリン、イソソルビドモノ−およびジニトレート、ニトログリセリン、ジゾキシド、ヒドララジン、ミノキシジル、ニトロプルシド、プラゾシン、テラゾシン、１，２，３−プロパントリオールモノニトレート、１，２，３−プロパントリオールニトレートおよびそれらのエステル誘導体、ペンタエリスリトールテトラニトレート、ヘプロニケート、モルシドミン、ニコモール、シムフィブレート、塩酸ジルチアゼム、シンナリジン、ジピリダモール、トラピジル、塩酸トリメタジジン、カルボクロメン、乳酸プレニルアミン、ジラゼプジハイドロクロライド）；昇圧剤（例えば、メタラミノール、イソプロテレノール、フェニレフリン、メタキサミン）；抗凝固剤および血栓溶解剤（例えば、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、プロウロキナーゼ、ウロキナーゼ、ヘパリン、ワーファリン）；カルモジュリンアンタゴニスト（例えば、Ｈ７）；ナトリウム／カルシウムアンチポーターのインヒビター（例えば、アミロライド）；ならびにリアノジンレセプターのインヒビター（例えば、リアノジン）；ＩＰ３レセプターのインヒビター（例えば、ヘパリン）が挙げられる。
【００７１】
本発明で利用され得る他の治療剤として、抗炎症剤が挙げられる。このような薬剤の代表的な例として、非ステロイド剤（「ＮＳＡＩＤＳ」）（例えば、サリチル酸塩（例えば、サルサレート、メサラミン、ジフルニサル、コリントリサリチル酸マグネシウム）、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、メフェナム酸、ナブメトン、ナプロキセン、ピロキシカム、フェニルブタゾン、ケトプロフェン、Ｓ−ケトプロフェン、ケトロラク、トロメタミン、スリンダク、トルメチン）が挙げられる。他の抗炎症薬物として、ステロイド剤（例えば、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、コルチゾン、デキサメタゾン、フルオシノロン、フルニソリド、プロピオン酸フルチカゾン、フッ素化コルチコイド、トリアムシノロン−ジアセテート、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、およびプレドニゾン）が挙げられる。免疫抑制剤（例えば、アデノコルチコステロイド、シクロスポリン）；ならびに抗ヒスタミン剤および鬱血除去剤（例えば、アステミゾール（ヒスタミンＨ１−レセプターアンタゴニスト）、アザチジン、ブロムフェニラミン、クレマスチン、クロルフェニラミン、クロモリン、シプロヘプタジン、ジフェニルイミダゾール、塩酸ジフェンヒドラミン、ヒドロキシジン、グリチルレチン酸、塩酸ホモクロロサイクリジン、ケトチフェン、ロラタジン、ナファゾリン、フェニンダミン、フェニラミン、プロメタジン、テルフェナジン、トリメプラジン、トリペレナミン、トラニラスト、ならびに鬱血除去剤フェニルプロパノールアミンおよびプソイドエフェドリン）。
【００７２】
本発明で利用され得るさらなる治療剤として、中枢神経系薬剤が挙げられる。このような薬剤の代表的な例として、抗抑制剤（例えば、Ｐｒｏｚａｃ、Ｐａｘｉｌ、Ｌｕｖｏｘ、Ｍａｎｎｅｘ、およびＥｆｆｅｘｏｒ）；ＣＮＳ刺激剤（例えば、ペモリン、メタムフェタミン、デキストロアンフェタミン）；睡眠剤（例えば、ペントバルビタール、エスタゾラム、エトクロリノール、フルラゼパム、プロポフォール、セコバルビタール、テマゼパム、トリアゾラム、キアゼパム、酒石酸ゾルピデム）；抗躁病剤（例えば、リチウム）；鎮静剤および抗痙攣性バルビツール剤（例えば、ペントバルビトール、フェノバルビタール、セコバルビタール、メフォバルビタール、ブタバルビタール、プリミドン、アモバルビタール）；非バルビツール鎮静剤（例えば、ジフェヒドラミン、ドキシルアミン、ミダゾラム、ジアゼパム、プロメタジン、ロラゼパム、テマゼパム）；ならびに他の多方面にわたる睡眠剤および鎮静剤（例えば、メタカロン、グルテチミド、フルラゼパム、ブロモバレリルウレア、フルラゼパム、塩酸塩、ハロキサゾラム、トリアゾラム、フェノバルビタール、抱水クロラール、ニメタゼパム、エスタゾラム）が挙げられる。
【００７３】
本発明で利用され得る他の治療剤として、アルツハイマー剤（例えば、タクリン（可逆性コリンエステラーゼインヒビター）；パーキンソン病剤（例えば、アマンタジン、ブロモクリプチンメシレート、ビペリデン、ベンズトロピンメシレート、カルビドーパ−レボドパ、ジフェニルヒドラミン、ヒヨスチアミン、レボドパ、ペルゴリドメシレート、プロシクリジン、セレジリンＨＣｌ、トリヘキシフェニジルＨＣｌ）；および他の多方面にわたるＣＮＳ剤（例えば、フルフェナジン、フルタゾラム、フェノバルビタール、メチルフェノバルビタール、チオリダジン、ジアゼパム、ベンズブロマロン、塩酸クロカプラミン、クロチアゼパム、クロルプロマジン、ハロペリドール、炭酸リチウム）が挙げられる。
【００７４】
本発明で利用され得るさらなる治療剤として、抗偏頭痛剤（例えば、エルゴタミン、メチルセルジド、プロプラノールオール（ｐｒｏｐａｎｏｌｏｌ）、ジヒドロエルゴタミン、Ｓｅｒｔｒｏｌｉｎｅ、およびＩｍｍｉｔｒｅｘ）；後脳塞栓症剤（例えば、塩酸ニカルジピン、マレイン酸シネパジド、ペントキシフィリン、酒石酸イフェンプロジル）；局所麻酔剤（例えば、リドカイン、ベンゾカイン、エチルアミノベンゾエート、塩酸プロカイン、ジブカイン、プロカイン）；抗潰瘍／抗還流剤（例えば、Ｌｏｓｅｃ（オメパラゾール）、アセグルタミドアルミニウム、塩酸セトラキセート、塩酸ピレンゼピン、シメチジン、ファモチジン、メトクロプラミド、ラニチジン、Ｌ−グルタミン、ゲファルネート、およびこれらの化合物の任意の立体異性体、ならびにこれらの化合物の薬学的に受容可能な塩（例えば、適切に選択された、単一でまたは１を超える化合物を組み合わせて使用される化合物））；プロテアーゼインヒビター（例えば、セリンプロテアーゼ、メタロエンドプロテアーゼおよびアスパルチルプロテアーゼ（例えば、ＨＩＶプロテアーゼ、レニン、およびカセプシン）ならびにチオールプロテアーゼインヒビター（例えば、ベンジルオキシカルボニル−ｌｅｕ−ノルロイシナル（カルペプチン）およびアセチル−ｌｅｕ−ｌｅｕ−ノウロイシナル）；ホスホジエステラーゼインヒビター（例えば、イソブチルメチルキサンチン）；フェノチアジン；増殖因子レセプターアンタゴニスト（例えば、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、上皮増殖因子、インターロイキン、トランスフォーミング増殖因子αおよびβ、ならびに酸性または塩基性繊維芽細胞増殖因子）；アンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、ＤＰＧＦまたは他の増殖因子をコードするｍＲＮＡの部分に相補的な配列）；ならびにプロテインキナーゼインヒビター（例えば、チロシンキナーゼ、プロテインキナーゼＣ、ミオシン軽鎖キナーゼ、Ｃａ２＋／カルモジュリンキナーゼＩＩ、カゼインキナーゼＩＩ対する）が挙げられる。
【００７５】
本発明で利用され得る他の治療剤として、抗組織損傷剤が挙げられる。このような薬剤の代表的な例として、スーパーオキシドジスムターゼ；免疫モジュレーター（例えば、リンホカイン、モノカイン、インターフェロンα、β、τ−１ｂ、α−ｎ３、α−２ｂ、α−２ｂ）；増殖レギュレーター（例えば、ＩＬ−２、腫瘍壊死因子、上皮増殖因子、ソマトレム、フィブロネクチン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＳＦ、血小板由来増殖因子、ソマトトロピン、ｒＧ−ＣＳＦ、上皮増殖因子、ＩＧＦ−１）が挙げられる。
【００７６】
本発明で利用され得る他の治療的薬剤として、モノクローナルおよびポリクローナル抗体（例えば、以下に対して活性な抗体：毒液、毒素、腫瘍壊死因子、細菌）；ホルモン（例えば、エストロゲン、プロゲスチン、テストステロン、ヒト成長ホルモン、エピネフリン、レバルテレノール、チロキシン、チログロブリン、オキシトシン、バソプレッシン、ＡＣＴＨ、ソマトロピン、チロトロピン、インシュリン、パラサイリン、カルシトニン）；ビタミン（例えば、ビタミンＡ、Ｂ、およびそのサブビタミンＣ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｊ、Ｋ、Ｎ、Ｐ、ＰＰ、Ｔ、Ｕならびにそれらの亜種）；アミノ酸（例えば、アルギニン、ヒスチジン、プロリン、リジン、メチオニン、アラニン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、スレオニン、トリプトファン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、バリン）；プロスタグランジン（例えば、Ｅ１、Ｅ２、Ｆ２α、Ｉ２）；酵素（例えば、ペプシン、パンクレアチン、レニン、パパイン、トリプシン、パンクレリパーゼ、キモパパイン、ブロメライン、キモトリプシン、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、フィブリノリシン、デオキシリボヌクレアーゼ（ｄｅｓｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ）、スチライン、コラゲナーゼ、アスパラギナーゼ、ヘパリナーゼ）；緩衝液および塩（例えば、ＮａＣｌ、以下を含むカチオン：Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃａ＋＋、Ｍｇ＋＋、Ｚｎ＋＋、ＮＨ４＋、トリエタノールアミン、以下を含むアニオン：リン酸、硫酸、塩化物、クエン酸、アスコルビン酸、酢酸、ホウ酸、炭酸イオン）；防腐剤（例えば、塩化ベンザルアルコニウム、重亜硫酸ＮａまたはＫ、チオ硫酸ＮａまたはＫ、パラベン）；抗痛風剤（例えば、アロプリノール、ｃｏｃｈｉｃｉｎｅ、プロベニシド、スルフィンピラゾン）；抗抑制剤（例えば、アミトリプチリン、アモキサピン、デシプラミン、ドキセピン、イミプラミン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、トリミプラミン）；避妊薬（例えば、ノエチンドロンの組み合せ（例えば、エチニルエストラジオールまたはメスタラノールとの））；ならびに抗悪心剤／抗嘔吐剤（例えば、ジメンヒドリネート、ヒドロキシジン、メクリジン、メトクロプラミド、プロクロルペラジン、プロメタジン、スコポラミン、チエチルペラジン、トリエトベンザミド）が挙げられる。
【００７７】
本発明で同様に利用され得る他の治療剤として、抗喘息剤、抗精神薬、気管支拡張薬、金化合物、低血糖剤、低脂肪血症剤、麻酔薬、ワクチン、骨代謝に作用する薬剤、抗下痢剤、排卵誘発剤、筋肉弛緩剤、食欲抑制剤、ホルモン（例えば、甲状腺ホルモン、エストロゲン、プロゲステロン、コルチゾンおよび／または成長ホルモン）、他の生物学的に活性な分子（例えば、インシュリン）、ならびにＴＨ１サイトカイン（例えば、インターロイキン−２、−１２、および−１５、γインターフェロン）またはＴＨ２（例えば、インターロイキン−４および−１０）サイトカインが挙げられる。
【００７８】
上記の治療剤は例示目的のために提供されたが、本発明はそれに限定されないことが理解されるべきである。例えば、薬剤は上記で詳細に言及されるが、本発明は、このような薬剤のアナログ、誘導体、および結合体を含むことが理解されるべきである。例示として、パクリタキセルは、パクリタキセルの一般的に化学的に利用可能な形態だけでなく、アナログ（例えば、上記のタキソテレ）およびパクリタキセル結合体（例えば、パクリタキセル−ＰＥＧ、パクリタキセル−デキストラン、またはパクリタキセル−キシロース（ｘｙｌｏｓ））もまた言及ことを理解されるべきである。さらに、当業者には明らかであるように、上記に示された試薬は１つのクラスの文脈で言及され得るが、実際に列挙された薬剤の多くは、複数の生物学的活性を有する。さらに、１を超える治療剤は、一度に（すなわち、組み合わせて）利用され得るか、または連続的に送達され得る。
【００７９】
ポリマー
上記のように、本発明の治療組成物は、さらにポリマーを含み得る。広範な種々のポリマーは、上記の１つ以上の治療剤を含みおよび／または送達するように利用され得る（例えば、生分解性および非生分解性の組成物の両方を含む）。生分解性組成物の代表的な例として、アルブミン、コラーゲン、ゼラチン、デンプン、セルロース（メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロール、セルロースアセテートフタレート、セルロースアセテートスクシネート、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、カゼイン、デキストラン、多糖、フィブリノーゲン、ポリ（Ｄ，Ｌラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ヒドロキシ酪酸）、ポリ（アルキル炭酸）、およびポリ（オルトエステル）、ポリエステル、ポリ（ヒドロキシ吉草酸）、ポリジオキサノン、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリ（リンゴ酸）、ポリ（タルトロン酸（ｔａｒｔｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ））、ポリ無水物、ポリホスファゼン、ポリ（アミノ酸およびそれらのコポリマー）が挙げられる（一般的に、Ｉｌｌｕｍ，Ｌ．，Ｄａｖｉｄｓ，Ｓ．Ｓ．（編）「制御薬物送達におけるポリマー」Ｗｒｉｇｈｔ，Ｂｒｉｓｔｏｌ，  １９８７；Ａｒｓｈａｄｙ，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １７：１−２２，  １９９１；Ｐｉｔｔ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒ．５９：１７３−１９６，  １９９０；Ｈｏｌｌａｎｄら，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ４：１５５−０１８０，  １９８６を参照のこと）。非生分解性ポリマーの代表的な例として、ＥＶＡコポリマー、シリコーンゴム、アクリル性ポリマー（ポリアクリル酸、ポリメチルアクリル酸、ポリメチルメタクリレート、ポリアルキルシノアクリレート）、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリアミド（ナイロン６，６）、ポリウラタン、ポリ（エステルウラタン）、ポリ（エーテルウラタン）、ポリ（エステル−ウレア）、ポリエーテル（ポリ（エチレン酸化物）、ポリ（プロピレン酸化物）、プルロニック、ポリ（テトラメチレングリコール））、シリコーンゴム、およびビニルポリマー［ポリビニルピロリドン、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルアセテートフタレート）］が挙げられる。アニオン性（例えば、アルギン酸、カラゲナン、カルボキシメチルセルロース、およびポリ（アクリル酸））またはカチオン性（例えば、キトサン、ポリ−ｌ−リジン、ポリエチレンイミン、およびポリ（アリルアミン））のいずれかである、ポリマーもまた開発される（一般的に、Ｄｕｎｎら，  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉ．５０：３５３−３６５，  １９９３；Ｃａｓｃｏｎｅら，  Ｊ．Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｓｃｉ．：Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５：７７０−７７４，  １９９４；Ｓｈｉｒａｉｓｈｉら，  Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１６（１１）：１１６４−１１６８，  １９９３；ＴｈａｃｈａｒｏｄｉおよびＲａｏ，  Ｉｎｔ’ｌ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１２０：１１５−１１８，  １９９５；Ｍｉｙａｚａｋｉら，  Ｉｎｔ’ｌ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１１８：２５７−２６３，  １９９５を参照のこと）。特��好ましいポリマー性キャリアとして、ポリ（ポリエチレン−ビニルアセテート）（４０％架橋）、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）オリゴマーおよびポリマー、ポリ（Ｌ−乳酸）オリゴマーおよびポリマー、ポリ（グリコール酸）、乳酸およびグリコール酸のコポリマー、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（バレロラクトン）、ポリ無水物、ポリ（カプロラクトン）またはポリ（乳酸）のポリエチレングリコールとのコポリマーならびにそのブレンドが挙げられる。
【００８０】
所望の放出特徴および／または特定の所望の特性を有するポリマー性キャリアが、種々の形態で形成され得る。例えば、ポリマー性キャリアは、特定の誘発事象（例えば、ｐＨ）への暴露の際に治療剤を放出するように形成され得る（例えば、Ｈｅｌｌｅｒら「化学的に自己調節された薬物送達系」Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ＩＩＩ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｂ．Ｖ．，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，  １９８８，  １７５−１８８頁；Ｋａｎｇら，  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉ．４８：３４３−３５４，  １９９３；Ｄｏｎｇら，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １９：１７１−１７８，  １９９２；ＤｏｎｇおよびＨｏｆｆｍａｎ，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １５：１４１−１５２，  １９９１；Ｋｉｍら，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２８：１４３−１５２，  １９９４；Ｃｏｒｎｅｊｏ−Ｂｒａｖｏら，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ３３：２２３−２２９，  １９９５；ＷｕおよびＬｅｅ，  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１０（１０）：１５４４−１５４７，  １９９３；Ｓｅｒｒｅｓら，  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１３（２）：１９６−２０１，  １９９６；Ｐｅｐｐａｓ「ｐＨおよび温度感受性送達系の基礎」Ｇｕｒｎｙら（編），Ｐｕｌｓａｔｉｌｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，  Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｌｉｃｈｅ  Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ  ｍｂＨ，  Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，  １９９３，  ４１−４５頁；Ｄｏｅｌｋｅｒ，「セルロース誘導体」，１９９３，  ＰｅｐｐａｓおよびＬａｎｇｅｒ（編），  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  １，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，  Ｂｅｒｌｉｎを参照のこと）。ｐＨ感受性ポリマーの代表的な例として、ポリ（アクリル酸）およびその誘導体（例えば、ホモポリマー（例えば、ポリ（アミノカルボン酸）；ポリ（アクリル酸）；ポリ（メチルアクリル酸））、このようなホモポリマーのコポリマー、ならびにポリ（アクリル酸）および上記のもののようなアクリルモノマーのコポリマーが挙げられる。他のｐＨ感受性ポリマーとして、多糖（例えば、セルロースアセテートフタレート；フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース；ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート；セルロースアセテートトリメリレート；およびキトサン）が挙げられる。さらに他のｐＨ感受性ポリマーとして、ｐＨ感受性ポリマーおよび水溶性ポリマーの任意の混合物が挙げられる。
【００８１】
同様に、温度感受性であるポリマー性キャリアが形成され得る（例えば、Ｃｈｅｎら「膣薬物送達のための生体接着性ポリアクリル酸骨格へ融合された温度感受性プルロニックの新規のヒドロゲル」Ｐｒｏｃｅｅｄ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２２：１６７−１６８，  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，  Ｉｎｃ．，１９９５；Ｏｋａｎｏ，  「時間的な制御薬物送達のための刺激応答性ヒドロゲルの分子設計」Ｐｒｏｃｅｅｄ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２２：１１１−１１２，  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，  Ｉｎｃ．，１９９５；Ｊｏｈｎｓｔｏｎら，  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．９（３）：４２５−４３３，  １９９２；Ｔｕｎｇ，  Ｉｎｔ’ｌ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１０７：８５−９０，  １９９４；ＨａｒｓｈおよびＧｅｈｒｋｅ，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １７：１７５−１８６，  １９９１；Ｂａｅら，  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．８（４）：５３１−５３７，  １９９１；ＤｉｎａｒｖａｎｄおよびＤ’Ｅｍａｎｕｅｌｅ，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ３６：２２１−２２７，  １９９５；ＹｕおよびＧｒａｉｎｇｅｒ，「新規の熱感受性両親媒性ゲル：ポリＮ−イソプロピルアクリルアミド−ｃｏ−アクリル酸ナトリウム−ｃｏ−ｎ−Ｎ−アルキルアクリルアミドネットワーク合成および物理化学的特徴」Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ＆Ｂｉｏｌｉｇａｌ  Ｓｃｉ．，Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒａｄｕａｔｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｂｅａｖｅｒｔｏｎ，  ＯＲ，  ８２０−８２１頁；ＺｈｏｕおよびＳｍｉｄ，「結合スターポリマーの物理的ヒドロゲル」Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，  Ｓｔａｔｅ  Ｕｎｉｖ．ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｓｙｒａｃｕｓｅ，  ＮＹ，  ８２２−８２３頁；Ｈｏｆｆｍａｎら，「刺激応答性ヒドロゲルにおける孔サイズおよび水「構造」の特徴付け」Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，  Ｕｎｉｖ．ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｓｅａｔｔｌｅ，  ＷＡ，  ８２８頁；ＹｕおよびＧｒａｉｎｇｅｒ，「架橋Ｎ−イソプロピルアクリルアミドネットワークにおける熱感受性膨張反応：カチオン性、アニオン性、および両親媒性ヒドロゲル」Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ＆Ｂｉｏｌｉｇｉｃａｌ  Ｓｃｉ．，Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒａｄｕａｔｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｂｅａｖｅｒｔｏｎ，  ＯＲ，  ８２９−８３０頁；Ｋｉｍら，  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．９（３）：２８３−２９０，  １９９２；Ｂａｅら，  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．８（５）：６２４−６２８，  １９９２；Ｋｏｎｏら，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ３０：６９−７５，  １９９４；Ｙｏｓｈｉｄａら，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ３２：９７−１０２，  １９９４；Ｏｋａｎｏら，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅ��ｅａｓｅ  ３６：１２５−１３３，  １９９５；ＣｈｕｎおよびＫｉｍ，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ３８：３９−４７，  １９９６；Ｄ’ＥｍａｎｕｅｌｅおよびＤｉｎａｒｖａｎｄ，  Ｉｎｔ’ｌ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１１８：２３７−２４２，  １９９５；Ｋａｔｏｎｏら，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １６：２１５−２２８，  １９９１；Ｈｏｆｆｍａｎ，「生物学的に活性な種を含む熱可逆性ヒドロゲル」Ｍｉｇｌｉａｒｅｓｉら（編），Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ＩＩＩ，  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｂ．Ｖ．，  Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，  １９８８，  １６１−１６７頁；Ｈｏｆｆｍａｎ，「治療薬および診断薬における熱可逆性ポリマーおよびヒドロゲルの適用」Ｔｈｉｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  Ｒｅｓｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｓａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ，  ＵＴ，  １９８７年２月２４〜２７日，  ２９７−３０５頁；Ｇｕｔｏｗｓｋａら，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２２：９５−１０４，  １９９２；ＰａｌａｓｉｓおよびＧｅｈｒｋｅ，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １８：１−１２，  １９９２；Ｐａａｖｏｌａら，  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１２（１２）：１９９７−２００２，  １９９５を参照のこと）。
【００８２】
熱ゲル化ポリマーおよびそれらのゼラチン温度（ＬＣＳＴ（℃））の代表的な例として、ホモポリマー（例えば、ポリ（Ｎ−メチル−Ｎ−ｎ−ポリアクリルアミド）、１９．８；ポリ（Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド）、２１．５；ポリ（Ｎ−メチル−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）、２２．３；ポリ（Ｎ−ｎ−プロピルメタクリルアミド）、２８．０；ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）、３０．９；ポリ（Ｎ，ｎ−ジエチルアクリルアミド）、３２．０；ポリ（Ｎ−イソプロピルメタクリルアミド）、４４．０；ポリ（Ｎ−シクロプロピルアクリルアミド）、４５．５；ポリ（Ｎ−エチルメチアクリルアミド）、５０．０；ポリ（Ｎ−メチル−Ｎ−エチルアクリルアミド）、５６．０；ポリ（Ｎ−シクロプロピルメタクリルアミド）、５９．０；ポリ（Ｎ−エチルアクリルアミド）、７２．０が挙げられる。さらに、熱ゲル化ポリマーは、上記のモノマー間でコポリマーを調製することによるか、またはこのようなホモポリマーを他の水溶性ポリマー（例えば、アクリルモノマー（例えば、アクリル酸およびその誘導体（例えば、メチルアクリル酸））、アクリレートおよびその誘導体（例えば、ブチルメタクリレート）、アクリルアミド、およびＮ−ｎ−ブチルアクリルアミド）とを組み合わせることにより作製され得る。
【００８３】
熱ゲル化ポリマーの他の代表的な例として、セルロースエーテル誘導体（ヒドロキシプロピルセルロース、４１℃；メチルセルロース、５５℃；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、６６℃；およびエチルヒドロキシエチルセルロース、ならびにプルロニック（例えば、Ｆ−１２７、１０〜１５℃；Ｌ−１２２、１９℃；Ｌ−９２、２６℃；Ｌ−８１、２０℃；およびＬ−６１、２４℃）が挙げられる。
【００８４】
広範な種々の形態（例えば、棒型デバイス、ペレット、スラブ、またはカプセルを含む）が、本発明のポリマー性キャリアにより形成され得る（例えば、Ｇｏｏｄｅｌｌら，  Ａｍ．Ｊ．Ｈｏｓｐ．Ｐｈａｒｍ．４３：１４５４−１４６１，  １９８６；Ｌａｎｇｅｒら，「ポリマーからの巨大分子の制御放出」Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  ｐｏｌｙｍｅｒｓ，  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｍａｔｅｒｉａｌｓ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  ｕｓｅ，  Ｇｏｌｄｂｅｒｇ，Ｅ．Ｐ．，  Ｎａｋａｇｉｍ，Ａ（編）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  １１３−１３７頁，  １９８０；Ｒｈｉｎｅら，  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６９：２６５−２７０，  １９８０；Ｂｒｏｗｎら，  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．７２：１１８１−１１８５，  １９８３；およびＢａｗａら，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １：２５９−２６７，  １９８５を参照のこと）。治療剤は、ポリマーのマトリックス内で吸蔵により連結されるか、共有結合により結合されるか、またはマイクロカプセル内にカプセル化され得る。本発明の特定の好ましい実施態様では、治療組成物は、非カプセル処方物（例えば、ミクロスフェア（サイズがナノメーターからマイクロメーターの範囲）、ペースト、種々のサイズの糸、フィルム、およびスプレー）において提供される。
【００８５】
好ましくは、本発明の治療組成物は、意図される使用に適切な様式で形成される。本発明の特定の局面では、治療組成物は生体適合性であり、そして数日から数ヶ月の期間にわたって１つ以上の治療薬剤を放出すべきである。例えば、７日〜１０日の期間にわたって治療剤（例えば、パクリタキセル）の１０％、２０％、または２５％（ｗ／ｖ）を超えて放出する、「急速放出」または「バースト」治療組成物が提供される。このような「急速放出」組成物は、特定の実施態様では、化学療法レベル（適用可能な場合）の所望の薬剤を放出し得るべきである。他の実施態様では、７日〜１０日の期間にわたって治療剤の１％（ｗ／ｖ）未満を放出する、「低放出」治療組成物が提供される。さらに、本発明の治療組成物は、好ましくは、数ヶ月間安定であり、そして無菌条件下で生成され、そして維持され得るべきである。
【００８６】
本発明の特定の局面では、治療組成物は、特定の使用に依存して、５０ｎｍ〜５００μｍの範囲の任意のサイズで形成され得る。あるいは、このような組成物はまた、フィルムまたはコーティングに凝固する、「スプレー」として容易に適用され得る。このようなスプレーは、例えば、０．１μｍ〜３μｍ、１０μｍ〜３０μｍ、および３０μｍ〜１００μｍを含む、広範な多数のサイズのミクロスフェアから調製され得る。
【００８７】
本発明の治療組成物はまた、種々の「ペースト」またはゲル形態で調製され得る。例えば、本発明の１つの実施態様では、ある温度（例えば、３７℃を超える温度（例えば、４０℃、４５℃、５０℃、５５℃、または６０℃））で液体、そして別の温度（例えば、環境（ａｍｂｉｅｎｔ）体温または３７℃より低い任意の温度）で固体または半固体である治療組成物が提供される。このような「熱ペースト」は、本明細書中に提供された開示があれば容易に作製され得る。
【００８８】
本発明のさらに他の局面では、本発明の治療組成物は、フィルムとして形成され得る。好ましくは、このようなフィルムは、一般的に、５、４、３、２、または１ｍｍ厚未満、より好ましくは０．７５ｍｍまたは０．５ｍｍ厚未満、そして最も好ましくは５００μｍ〜１００μｍ厚未満である。このようなフィルムは、好ましくは曲げやすく、良好な引っ張り強さ（例えば、５０Ｎ／ｃｍ２を超える、好ましくは１００Ｎ／ｃｍ２を超える、より好ましくは１５０または２００Ｎ／ｃｍ２を超える）、良好な接着特性を有し（すなわち、湿ったまたは濡れた表面に容易に接着する）、そして制御された浸透性を有する。
【００８９】
本発明の特定の実施態様では、治療組成物はまた、界面活性剤（例えば、プルロニック（例えば、Ｆ−１２７、Ｌ−１２２、Ｌ−９２、Ｌ−８１、およびＬ−６１）のようなさらなる成分を含み得る。
【００９０】
本発明のさらなる局面では、疎水性化合物を含みそして放出するように適合されるポリマー性キャリアが提供され、このキャリアは、炭水化物、タンパク質、またはポリペプチドと組み合わせた疎水性化合物を含む。特定の実施態様では、ポリマー性キャリアは、１つ以上の疎水性化合物の領域、ポケット、または顆粒を含む。例えば、本発明の１つの実施態様では、疎水性化合物は、疎水性化合物含むマトリックスに取り込まれ、続いてこのマトリックスはポリマー性キャリアに取り込まれ得る。種々のマトリックス（例えば、炭水化物および多糖（例えば、デンプン、セルロース、デキストラン、メチルセルロース、およびヒアルロン酸）、タンパク質またはポリペプチド（例えば、アルブミン、コラーゲン、およびゼラチン）を含む）はこれに関して利用され得る。代替の実施態様では、疎水性化合物は、疎水性コア内に含まれ得、そしてこのコアは疎水性の殻内に含まれ得る。例えば、実施例に記載のように、パクリタキセルは、親水性殻を有する疎水性コア（例えば、ポリＤ，Ｌ乳酸−ＰＥＧまたはＭｅＰＥＧ凝集体）に取り込まれ得る。
【００９１】
広範な種々の疎水性化合物（例えば、パクリタキセルおよびエストラムスチンのような微小管機能を破壊する特定の疎水性化合物、ミエリン塩基性タンパク質のような疎水性タンパク質、ＣＮＳミエリンのプロテオリピドタンパク質、疎水性細胞壁タンパク質、ポーリン、膜タンパク質（ＥＭＢＯ  Ｊ．１２（９）：３４０９−３４１５，  １９９３）、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（「ＭＯＧ」）（Ｂｉｏｃｈｅｍ．ａｎｄ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔ．３０（５）：９４５−９５８，  １９９３，  Ｐ２７  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５３（１７）：４０９６−４１０１，  １９１３、バクテリオオプシン、ヒトサーファクタントタンパク質（「ＨＳＢ」；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８（１５）：１１１６０−１１１６６，  １９９３）、およびＳＰ−ＢまたはＳＰ−Ｃ（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １１０５（１）：１６１−１６９，  １９９２）を含む）は、上記のポリマー性キャリアから放出され得る。
【００９２】
治療組成物を形成するためのポリマー性キャリアへの治療薬剤（例えば、上記のもの）の取り込みの代表的な例は、以下の実施例においてより詳細に記載される。
【００９３】
他のキャリア
本明細書中に記載される治療薬剤を含みおよび／または送達するために同様に利用され得る他のキャリアとして以下が挙げられる：ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン（ＣｓｅｒｈａｔｉおよびＨｏｌｌｏ，  Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１０８：６９−７５，  １９９４）、リポソーム（例えば、Ｓｈａｒｍａら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：５８７７−５８８１，１９９３；ＳｈａｒｍａおよびＳｔｒａｕｂｉｎｇｅｒ，  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１１（６０）：８８９−８９６，  １９９４；ＷＯ９３／１８７５１；米国特許第５，２４２，０７３号を参照のこと）、リポソーム／ゲル（ＷＯ９４／２６２５４）、ナノカプセル（Ｂａｒｔｏｌｉら，Ｊ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ７（２）：１９１−１９７，  １９９０）、ミセル（Ａｌｋａｎ−Ｏｎｙｕｋｓｅｌら，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１１（２）：２０６−２１２，１９９４）、インプラント（Ｊａｍｐｅｌら，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４（１１）：３０７６−３０８３，  １９９３；Ｗａｌｔｅｒら，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：２２０１７−２２１２，  １９９４）、ナノ粒子（ＶｉｏｌａｎｔｅおよびＬａｎｚａｆａｍｅ  ＰＡＡＣＲ）、ナノ粒子−改変（米国特許第５，１４５，６８４号）、ナノ粒子（表面改変）（米国特許第５，３９９，３６３号）、タキソールエマルジョン／溶液（米国特許第５，４０７，６８３号）、ミセル（界面活性剤）（米国特許第５，４０３，８５８号）、合成リン脂質化合物（米国特許第４，５３４，８９９号）、気体媒介分散（米国特許第５，３０１，６６４号）、液体エマルジョン、泡スプレー、ゲルローションクリーム、軟膏、分散ベシクル、粒子または小滴、固体または液体エアゾール、マイクロエマルジョン（米国特許第５，３３０，７５６号）、ポリマー殻（ナノカプセルおよびマイクロカプセル）（米国特許第５，４３９，６８６号）、表面活性剤中のタキソイドベース組成物（米国特許第５，４３８，０７２号）、エマルジョン（Ｔａｒｒら，Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．４：６２−１６５，  １９８７）、ナノスフェア（Ｈａｇａｎら，  Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２２，  １９９５；Ｋｗｏｎら，  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．１２（２）：１９２−１９５；Ｋｗｏｎら，  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．１０（７）：９７０−９７４；Ｙｏｋｏｙａｍａら，  Ｊ．Ｃｏｎｔｒ．Ｒｅｌ．３２：２６９−２７７，  １９９４；Ｇｒｅｆら，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６３：１６００−１６０３，  １９９４；Ｂａｚｉｌｅら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８４：４９３−４９８，  １９９４）、およびインプラント（米国特許第４，８８２，１６８号）を参照のこと）。
【００９４】
以下により詳細に議論されるように、治療組成物を形成するために本明細書中に記載されるキャリアのうちの１つに必要に応じて取り込まれる本発明の治療剤は、広範な種々の疾患を処置または予防するために調製され、そして利用され得る。
【００９５】
疾患の処置または予防
上記のように、本発明は、身体通路の閉塞に関連する広範な種々の疾患（例えば、脈管疾患、新生物閉塞、炎症性疾患、および感染性疾患を含む）を処置するかまたは予防するための方法を提供する。
【００９６】
例えば、本発明の１つの局面では、本明細書中に記載される広範な種々の治療組成物は、脈管系の閉塞を引き起こす脈管疾患を処置するために利用され得る。このような疾患の代表的な例としては、全ての管（任意の動脈、静脈、または移植片周囲）（冠状動脈、大動脈、腸骨動脈、頚動脈、一般的な大腿動脈、表在性大腿骨動脈、膝窩動脈、および移植片吻合部位を含むが、それらに制限されない）のアテローム性動脈硬化症；血管痙縮（例えば、冠状動脈血管痙縮およびレイノー病）；再狭窄（バルーン血管形成、バイパス手術、ステント挿入、および移植片挿入のような以前の介入の部位での管の閉塞）；炎症および自己免疫状態（例えば、一過性動脈炎、脈管炎）が挙げられる。
【００９７】
簡単には、アテローム性動脈硬化症のような脈管疾患において、白血球、特に単球およびＴリンパ球は、内皮細胞に、特に動脈分岐の位置で接着する。内皮への接着後、白血球は、走化性（ｃｈｅｍｏｓｔａｔｉｃ）刺激に応答して内皮細胞の裏打ちを横切って移動し、そして平滑筋細胞に沿って動脈壁の脈管内壁に蓄積する。アテローム性動脈硬化症発達のこの初期の障害は、「脂肪線条（ｆａｔｔｙ  ｓｔｒｅａｋ）」として公知である。脂肪線条内の単球はマクロファージに分化し；そしてマクロファージおよび平滑筋細胞は、脂質およびリポタンパク質を連続的に吸収して、泡沫細胞になる。
【００９８】
マクロファージが蓄積すると、重層する内皮は機械的に破壊され、そして酸化脂質、酸素由来フリーラジカルおよびマクロファージにより放出されるプロテアーゼにより化学的に変えられる。泡沫細胞は、脈管壁の微小潰瘍化を引き起こす内皮表面を通して侵食する。血流成分への潜在的な血栓形成性内皮下組織（例えば、コラーゲンおよび他のタンパク質）の暴露は、破壊された内皮領域への血小板の接着をもたらす。血小板接着および他の事象は、同化作用および増殖因子（血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、血小板活性化因子（ＰＡＦ）、およびインターロイキン１および６（ＩＬ−１、ＩＬ−６）を含む）のこの環境（ｍｉｌｅａｕ）への放出を誘発する。このパラクリン因子は、血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）移動および増殖を刺激すると考えられる。
【００９９】
正常な（非疾患）血管壁において、血管平滑筋細胞は、収縮表現型および低い指数の有糸分裂活性を有する。しかし、血小板、マクロファージ、および内皮細胞により放出されたサイトカインおよび増殖因子の影響下で、ＶＳＭＣは、成熟収縮細胞から未熟分泌細胞への表現型変化を受ける。形質転換されたＶＳＭＣは、血管壁の中膜で増殖し、血管内膜に移動し、血管内膜で増殖し、そして多量の細胞外マトリックスを生成し続ける。これは、発達している脈管障害を繊維状プラークに変換する。分泌性ＶＳＭＣにより合成された細胞外マトリックスは、コラーゲン、エラスチン、糖タンパク質、およびグリコサミノグリカンを含み、コラーゲンはアテローム性動脈硬化症プラークの主要な細胞外マトリックス成分を含む。エラスチンおよびグリコサミノグリカンはリポタンパク質に結合し、そしてまた障害増殖に寄与する。繊維状プラークは、平滑筋細胞および重層するマクロファージ、Ｔ細胞、ならびに細胞外物質を含む種々の厚さの密な結合組織の繊維状キャップからなる。
【０１００】
ＰＤＧＦ、ＩＬ−１、およびＩＬ−６に加えて、他の有糸分裂促進性因子（形質転換増殖因子β（ＴＧＦ−β、繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、トロンボスポンジン、セロトニン、トロンボキサンＡ２、ノルエピネフリン、およびアンギオテンシンＩＩを含む）は、管壁に浸潤する細胞により生成される。これは、より多くの細胞の補充、さらなる細胞外マトリックスの合成、およびさらなる脂質の蓄積をもたらす。これは、血管管腔を著しく侵害するまで、アテローム性動脈硬化症障害を進行的に大きくする。最初に、血管を通る閉塞した血流は、増大した流れが必要とされる場合に、アテローム性動脈硬化症プラークから遠位の組織の虚血を引き起こす−この障害がさらに動脈をブロックした後に、虚血は静止して生じる。
【０１０１】
拡大しているアテローム性動脈硬化症プラークにおけるマクロファージは、細胞傷害および隣接組織の壊死を引き起こす酸化脂質、フリーラジカル、エラスターゼ、およびコラゲナーゼを放出する。この障害は壊死コアを発現させ、そして複合プラークへ変換させる。複合プラークは、塞栓；局所的出血（これは、障害の急速な拡大による管腔閉塞をもたらすプラークを供給する脈管の血管破裂に派生的である）；または潰瘍化および裂溝形成（これは、血栓形成性壊死コアを、局所的血栓または遠位の塞栓を生じる血流に暴露する）を引き起こすのを止めさせ得る不安定な障害である。上記の後遺症がいずれも生じなくても、接着血栓は組織化され得、そしてプラークに取り込まれ得、それによりその増殖を促進する。さらに、フィブリノーゲンおよびトロンビンの局所的濃度が増大するにつれて、中膜および血管内膜内の血管平滑筋細胞の増殖は刺激される；このプロセスはまた、最終的に、管のさらなる狭窄を導く。
【０１０２】
正常動脈の脈管内膜および中膜は、動脈の管腔からまたは外膜中の脈管の血管から酸素を送り込まれ、そして栄養分が供給される。アテローム性動脈硬化症プラークの発現により、外膜の脈管の血管から生じる微細血管は、厚くなった脈管内膜および中膜に伸長する。この脈管ネットワークは、プラークがより悪くなり、そしてプラーク後退を減少させるにつれて、より拡張性になる。
【０１０３】
これらの微細血管からの出血は、動脈の切開、潰瘍化、または血栓に関連したプラークの急な拡大および破裂を促進し得る。これらの微小血管からの血漿タンパク質の漏出が炎症性浸出物をこの領域内へ誘引し得、そしてこれらの炎症性細胞がアテローム性動脈硬化症プラークの急速な成長および関連する合併症（局所的浮腫および炎症による）に寄与し得ることもまた仮定される。
【０１０４】
脈管疾患（例えば、上記のような疾患）を処置するために、広範な種々の治療剤（キャリアを伴うかまたは伴わないかのいずれか）は、身体通路の外部へ、または身体通路の外膜を介して平滑筋細胞へ送達され得る。これに関して特に好ましい治療剤として、抗血管新生因子、血小板接着／凝集インヒビター（例えば、アスピリン、ジピリダモル、トロンボキサン合成インヒビター、より強力なトロンボキサンＡ２よりむしろトロンボキサンＡＥの生成をもたらす魚油、フィブリノーゲンおよびプロスタサイクリンに結合する血小板ＩＩｂ／ＩＩＩａレセプターに対する抗体）、血管拡張剤（例えば、カルシウム流入ブロッカー、および一酸化窒素ドナーニトログリセリン、ニトロプルシド、およびモルシドミン）、ならびに抗血栓剤およびトロンビンアンタゴニスト（例えば、ヘパリン（低分子量ヘパリン）、ワルファリンアンジュジン（ａｎｄｕｄｉｎ））が挙げられる。利用され得る他の治療剤として、抗炎症剤（例えば、グルコルチコイド、デキサメタゾン、およびメチルプレドニゾロン）、増殖因子インヒビター（例えば、ＰＤＧＦアンタゴニスト（例えば、トラピジル）；チロシンキナーゼおよびチロシンホスファターゼプロモーターのインヒビターを含むレセプターインヒビター（例えば、ＦＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、およびＴＮＦに対するレセプターのインヒビター）；ソマトスタチンアナログ（アンジオペプチン（ａｎｇｉｏｐｅｐｔｉｎ）を含む）；アンジオテンシン変換酵素インヒビター；ならびに５ＨＴ２セロテン作動性（ｓｅｒｏｔｅｎｅｒｇｉｃ）レセプターアンタゴニスト（例えば、ケタンセリン））が挙げられる。さらに別の治療剤として、抗増殖剤（例えば、コルヒチン、ヘパリン、β放射体（例えばＰ−３２）またはγ放射体（例えばＩｒ−１９２）、カルシウム流入ブロッカー（例えば、ベラパミル、ジルチアゼム、およびニフェジピン）、コレステロール低下ＨＭＢ  Ｃｏ−Ａレダクターゼインヒビター（例えば、ロバスタチン）、微小管機能を破壊する化合物（例えば、パクリタキセルおよび上記の一酸化窒素ドナー）、ならびに再内皮化のプロモーター（例えば、ｂＦＧＦおよび血管内皮細胞増殖因子）が挙げられる。
【０１０５】
本発明の他の局面では、本明細書中に記載される治療剤または組成物は、新生物閉塞を処置するために利用され得る。簡単には、本明細書中で利用される場合に、「新生物閉塞」は、管の位置または存在する悪性腫瘍の組織学的型態にかかわらず、身体の管の任意の新生物（良性または悪性）閉塞を含むことが理解されるべきである。代表的な例として、胃腸疾患（例えば、口−咽頭ガン（腺ガン）、食道ガン腫（偏平上皮細胞、腺ガン、リンパ腫、黒色腫）、胃ガン（腺ガン、形成性胃組織炎、リンパ腫、平滑筋肉腫）、小腸腫瘍（腺腫、平滑筋腫、脂肪腫、腺ガン、リンパ腫、類ガン腫）、結腸ガン（腺ガン）、および肛門直腸ガン）；胆汁管疾患（例えば、膵臓ガン（管腺ガン、島細胞腫瘍、嚢胞腺ガン）のような胆管閉塞をもたらす新生物、胆管ガン、および肝細胞ガン）；肺疾患（例えば、肺および／または気管／気管支通路のガン腫（小細胞肺ガン、非小細胞肺ガン）；雌性生殖疾患（例えば、ファロピーウス管の悪性腫瘍、子宮ガン、子宮頸ガン、膣ガン）；雄性生殖疾患（例えば、精巣ガン、精巣上体ガン、精管ガン、前立腺ガン、良性前立腺肥大）；ならびに尿路疾患（例えば、腎臓細胞ガン腫、腎盤の腫瘍、尿収集系の腫瘍（例えば、移行上皮ガン、膀胱ガン、および良性狭窄または悪性腫瘍による尿道閉塞）が挙げられる。
【０１０６】
例として、良性前立腺肥大（ＢＰＨ）は、長期のアンドロゲン刺激に応答して生じる、前立腺、特に尿道周囲の腺の中央部の拡大である。これは、８０％を超える５０歳以上の男性に罹患する。この拡大は、前立腺を通って走る尿道部分の圧迫をもたらし得、膀胱流出管（ｏｕｔｆｌｏｗ  ｔｒａｃｔ）閉塞をもたらす（すなわち、異常に高い膀胱圧が尿の流れを生じるために必要とされる）。１９８０年に、３６７，０００の前立腺の経尿道の切除が、ＢＰＨの処置として合衆国で行われた。他の処置として、投薬、経尿道の括約筋切除、経尿道のレーザーまたはマイクロ波、経尿道の温熱療法、経尿道の超音波、経直腸のマイクロ波、経直腸の温熱療法、経直腸の超音波および外科的除去が挙げられる。すべては、失禁および狭窄形成をもたらす括約筋機序の妨害を含む不利益を有する。
【０１０７】
新生物疾患（例えば、上記のような疾患）を処置するために、広範な種々の治療剤（キャリアを伴うかまたは伴わないかのいずれか）は、身体通路の外部へ、または身体通路の外膜を介して平滑筋細胞へ送達され得る。これに関して特に好ましい治療剤として、例えば、微小管機能を破壊する化合物（例えば、パクリタキセルおよびその誘導体またはアナログ）を含む、上記の抗血管新生剤、抗増殖剤、または抗新生物剤が挙げられる。
【０１０８】
例えば、１つの好ましい実施態様では、針またはカテーテルは、超音波ガイダンス下で経直腸的経路を介して尿道に隣接した前立腺に（または、かわりに会陰貫通的（ｔｒａｎｓｐｅｒｉｎｅａｌｌｙ）に）ガイドされ、そして好ましくは腺のいくつかの四分円、特に尿道周囲に治療剤を送達する。針またはカテーテルはまた、直接触診下で、または内視鏡、蛍光透視鏡、ＣＴ、もしくはＭＲＩガイダンス下で配置され、そして時間間隔で投与され得る。代替物として、カテーテルまたはトロカールを介したペレットの配置もまた達成され得る。上記の手順は、単独でかまたは前立腺尿道に配置されたステントと共に達成され得る。尿道器具使用または尿道損傷を避けることにより、括約筋機構は無傷なままにされ、失禁を避け、そして狭窄は恐らくより少ない。
【０１０９】
本発明の他の局面では、身体通路の閉塞に影響するか、または引き起こす炎症性疾患を予防または処置するための方法が提供される。炎症性疾患として、種々の身体管の閉塞をもたらす、急性および慢性両方の炎症が挙げられる。代表的な例として、脈管炎（例えば、巨大（Ｇｉａｎｔ）細胞動脈炎（一過性動脈炎、高安動脈炎）、結節性多発動脈炎、アレルギー性脈管炎および肉芽腫症  （チャーグ−ストラウス病）、多発血管炎重複症候群、過敏症脈管炎（ヘーノホ−シェーンライン紫斑病）、血清の疾患、薬物誘導脈管炎、感染性脈管炎、新生物脈管炎、結合組織疾患に関連した脈管炎、補体系の先天的不全に関連した脈管炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、川崎病、中枢神経系の脈管炎、バーガー病、および全身性硬化症）；胃腸管疾患（例えば、膵臓炎、クローン病、潰瘍性結腸炎、潰瘍性直腸炎、原発性硬化性胆管炎、特発性を含む任意の原因の良性狭窄（例えば、胆汁管、食道、十二指腸、小腸、結腸の狭窄）；呼吸管疾患（例えば、喘息、過敏性肺炎、石綿症、珪肺症、ならびに塵肺の他の形態、慢性気管支炎、および慢性閉塞性気道疾患）；鼻涙管疾患（例えば、特発性を含む全ての原因の狭窄）；ならびにエウスターキオ管疾患（例えば、特発性を含む全ての原因の狭窄）が挙げられる。
【０１１０】
炎症性疾患（例えば、上記の疾患）を処置するために、広範な種々の治療剤（キャリアを伴うかまたは伴わないかのいずれか）は、身体通路の外部へ、または身体通路の外膜を介して平滑筋細胞へ送達され得る。これに関して特に好ましい治療剤として、上記の非ステロイド剤（「ＮＳＡＩＤＳ」）およびステロイド剤、ならびに上記の抗血管新生因子が挙げられる。利用もされ得る他の薬剤はとして、例えば、微小管機能を破壊する化合物（例えば、パクリタキセル）およびより軽い「ｄ」族遷移元素を含む、広範な種々の抗血管新生因子が挙げられる。
【０１１１】
本発明のさらに他の局面では、身体通路の閉塞に関連するか、または原因となる感染性疾患を処置または予防するための方法が提供される。簡単には、感染性疾患として、身体通路の閉塞（例えば、雄性生殖管の閉塞（例えば、尿道炎、精巣上体炎、前立腺炎に起因する狭窄）；雌性生殖管の閉塞（例えば、膣炎、子宮頸炎、子宮炎症疾患（例えば、結核、淋菌、クラミジア、エンテロコッカス、および梅毒）；尿管閉塞（例えば、膀胱炎、尿道炎）；呼吸管閉塞（例えば、慢性気管支炎、結核、他のマイコバクテリア感染（ＭＡＩなど）、嫌気性生物感染、真菌感染、寄生動物感染）、ならびに心臓血管閉塞（例えば、糸状菌動脈瘤および感染性心内膜炎を含む））をもたらし得る、いくつかの急性および慢性感染性プロセスが挙げられる。
【０１１２】
感染性疾患（例えば、上記の疾患）を処置するために、広範な種々の治療剤（キャリアを伴うかまたは伴わないかのいずれか）は、身体通路の外部へまたは身体通路の外膜を介して平滑筋細胞へ送達され得る。これに関して特に好ましい治療剤として、上記の広範な種々の抗生物質が挙げられる。
【０１１３】
処方および投与
上記のように、本発明の治療組成物は、種々の形態（例えば、ミクロスフェア、ペースト、フィルム、またはスプレー）で処方され得る。さらに、本発明の組成物は、１より多い治療剤を含み、種々のさらなる化合物を含み、特定の物理的特性（例えば、弾力性、特定の融点、または特定された放出速度）を有するように処方され得る。本発明の特定の実施態様では、組成物は、所望の効果を達成するために組み合わされ得る（例えば、ミクロスフェアのいくつかの調製物は、１つ以上の抗血管新生因子の急速かつ緩慢の両方または延長した放出を達成するために組み合わされ得る）。
【０１１４】
本発明の治療剤および組成物は、単独で、あるいは薬学的または生理学的に受容可能なキャリア、賦形剤、もしくは希釈剤と組み合わせてのいずれかで投与され得る。一般的に、このようなキャリアは、使用される投薬量および濃度でレシピエントに対して非毒性であるべきである。通常、このような組成物の調製は、治療剤と緩衝液、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸）、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、タンパク質、アミノ酸、炭水化物（グルコース、スクロース、またはデキストリンを含む）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、グルタチオン、ならびに他の安定化剤および賦形剤とを組み合すことを含む。中性緩衝化生理食塩水または非特異性血清アルブミンと混合した生理食塩水は、例示的で適切な希釈剤である。
【０１１５】
上記のように、本明細書中に提供される治療剤、治療組成物、または薬学的組成物は、種々の異なる経路（例えば、直接視下で（例えば、手術時または内視鏡手順を介して）身体通路に直接、または身体通路の外（外膜）表面への経皮的薬物送達（例えば、脈管周囲送達）を介することを含む）により投与され得る。投与の他の代表的な経路として、十分な手術手順および入院を必要としないが、医療従事者の存在を必要とし得る胃鏡検査、ＥＣＲＰ、および結腸鏡検査が挙げられる。
【０１１６】
簡単には、脈管周囲薬物送達は、疾患部位への超音波、ＣＴ、蛍光透視鏡、ＭＲＩ、または内視鏡ガイダンスを介して指向される針またはカテーテルを用いた、局在化（しばしば、徐放）治療処方物の経皮的投与を含む。あるいは、この手順は、直接観察下でまたはさらなる画像ガイダンスを用いて手術中に行われ得る。このような手順はまた、脈管内手順（例えば、血管形成、アテレクトミー、またはステンティング（ｓｔｅｎｔｉｎｇ））と共に、あるいは外科的動脈手順（例えば、動脈内膜切除、管もしくは移植片修復、または移植片挿入）と共同して行われ得る。
【０１１７】
例えば、１つの実施態様では、ポリマー性パクリタキセル処方物は、脈管壁に注射され得るか、または外膜表面に適用され得る。これは、生物学的活性が最も必要とされる領域において、薬物濃度が最も高いままであることを可能にする。これは、脈管内薬物送達デバイス（例えば、薬物コートステント）の表面上の連続血流により亢進され得る、薬物の局所的「流出」を低減する能力を有する。脈管の外面への効果的な治療剤の投与は管の閉塞を低減し、そして脈管内操作に関連した合併症（例えば、再狭窄、塞栓、血栓、プラーク破裂、および全身性薬物毒性）の危険性を低減し得る。
【０１１８】
例えば、表在性大腿動脈の狭窄を有する患者において、バルーン血管形成は、通常の様式で行われる（すなわち、バルーン血管形成カテーテルをガイドワイヤ上で動脈に通し、そして障害を横切りバルーンを膨張させる）。血管形成前、血管形成時、または血管形成後に、針は、超音波、蛍光透視鏡、またはＣＴガイダンス下で皮膚を通して挿入され、そして治療剤（例えば、遅い放出ポリマーに染み込まされたパクリタキセル）は、動脈の狭窄領域周囲に直接円周様式で、針またはカテーテルを通して浸透される。これは、任意の動脈、静脈、または移植片の周囲で行われ得るが、この介入の理想的な候補として、頚動脈、冠状動脈、腸骨動脈、一般的な大腿骨動脈、表在性大腿骨動脈および膝窩動脈、ならびに移植片吻合部位の疾患が挙げられる。理論的な静脈部位として、留置カテーテルが挿入される、静脈周囲の浸潤が挙げられる。
【０１１９】
本明細書中に提供される治療剤、治療組成物、および薬学的組成物は、このような材料の使用に関する使用説明書を提供するパッケージ材料と共に、容器内に入れられ得る。一般的に、このような使用説明書は、試薬濃度、ならびに特定の実施態様では、抗血管新生因子、抗血管新生組成物、または薬学的組成物を再構成するために必要であり得る、賦形剤成分または希釈剤（例えば、水、生理食塩水、またはＰＢＳ）の相対量を記載する明白な表現を含む。
【０１２０】
以下の実施例は、例示のために提供されるが、限定のために提供されない。
【実施例】
【０１２１】
実施例１
「ペースト」の製造
上記のように、本発明は、種々の臨床的状況で利用され得る種々のポリマー含有薬物組成物を提供する。例えば、組成物は、（１）所望の部位に液体として適用され、そして特定の温度（例えば、体温）で所望の形状の固体に硬化する「熱ペースト」；（２）直接または特殊装置（例えば、内視鏡）のいずれかにより所望部位に送達され得、その後、適用される組織に接着する固体に硬化する、スプレー（すなわち「ナノスプレー」）；（３）直接または特殊装置のいずれかにより所望部位に適用され、そして好ましくは適用される部位に接着する、接着性の柔軟な弾力のある薬物充填ポリマーフィルム；および（４）直接または特殊装置のいずれかにより所望部位に適用され、そして適用部位でミクロスフェア層を離す、適切なキャリア媒体中のミクロスフェア懸濁液からなる液体として生成され得る。上記の実施態様のそれぞれの代表的な例は、以下により詳細に示される。
【０１２２】
Ａ．熱ペーストを生成するための手順
以下の実施例で利用される試薬および器具は、滅菌ガラスシリンジ（１ｍｌ）、Ｃｏｒｎｉｎｇホットプレート／攪拌器、２０ｍｌガラスシンチレーションバイアル、型（例えば、５０μｌ  ＤＳＣ皿または５０ｍｌ遠心分離チューブキャップ内部）、メスおよびピンセット、ポリカプロラクトン（「ＰＣＬ」−モル分子量１０，０００〜２０，０００；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  ＵＳＡ）ならびにパクリタキセル（Ｓｉｇｍａグレード９５％純度最小）を含む。
【０１２３】
２０ｍｌガラスシンチレーションバイアル内で直接５．００ｇのポリカプロラクトンを秤量する。バイアルを、５０ｍｌの水を含む６００ｍｌのビーカーに入れる。穏やかにビーカーを６５℃まで加熱し、そしてそれをその温度で２０分間保持する。これにより、ポリマーが溶解する。既知量のパクリタキセルまたは他の血管新生インヒビターを溶解したポリマー中に６５℃で完全に混合する。溶解ポリマーを予め暖めた（６０℃以上）型に注入する。注入プロセスを補助するためにスパーテルを使用する。型を冷却させ、そしてポリマーを凝固する。ポリマーを小片（サイズが約２ｍｍ×２ｍｍ）を切断するか、または破壊する。これらの断片は、１ｍｌガラスシリンジに合わなければならない。１ｍｌガラスシリンジからプランジャーをはずし（先端からキャップをはずさない）、そしてそれを天秤に置く。天秤をゼロの目盛りにあわせる。
【０１２４】
シリンジの開いた端で直接０．５ｇの断片を秤量する。ガラスシリンジを垂直にして（キャップをした先端を下にして）蒸留水を含む５００ｍｌのガラスビーカーに６５℃で（Ｃｏｒｎｉｎｇホットプレート）置き、その結果、水は注射筒に入らない。ポリマーは、この装置で１０分以内に完全に溶解する。ポリマー断片を完全に溶解すると、水浴から注射筒を取り出し、それを水平に保持し、そしてキャップをはずす。プランジャーを注射筒に挿入し、そして溶解ポリマーを注射筒の先端で粘着性の塊に圧縮する。シリンジにキャップをし、そしてそれを室温まで冷却する。
【０１２５】
適用のために、シリンジを６０℃まで再加熱し、そして体温まで冷却した場合に凝固する液体として投与し得る。
【０１２６】
Ｂ．ナノスプレーを生成するための手順
ナノスプレーは、生理食塩水中の小さなミクロスフェアの懸濁液である。ミクロスフェアが非常に小さな場合（すなわち、直径が１μｍ以下）、それらはコロイドを形成し、その結果、懸濁液は重力下で沈降しない。以下により詳細に記載されるように、０．１μｍ〜１μｍ微粒子の懸濁液は、指で押し出す噴霧器による組織上への沈着に適して作製され得る。ナノスプレーを生成するために利用され得る器具および材料は、２００ｍｌ水ジャケット付きビーカー（ＫｉｍａｘまたはＰｙｒｅｘ）、Ｈａａｋｅ循環水浴、２インチ直径を有するオーバーヘッド攪拌器およびコントローラー（４刃、プロペラ型ステンレス鋼攪拌器；Ｆｉｓｈｅｒブランド）、５００ｍｌガラスビーカー、ホットプレート／攪拌器（Ｃｏｒｎｉｎｇブランド）、４×５０ｍｌポリプロピレン遠心管（Ｎａｌｇｅｎｅ）、プラスチック挿入キャップを有するガラスシンチレーションバイアル、卓上遠心分離器（Ｂｅｃｋｍａｎ）、高速遠心分離器−床型（ＪＳ  ２１  Ｂｅｃｋｍａｎ）、Ｍｅｔｔｌｅｒ分析用天秤（ＡＪ  １００、０．１ｍｇ）、Ｍｅｔｔｌｅｒデジタル上皿（ｔｏｐ  ｌｏａｄｉｎｇ）天秤（ＡＥ  １６３、０．０１ｍｇ）、自動ピペッター（Ｇｉｌｓｏｎ）、滅菌ピペットチップ、ポンプ作動噴霧器（Ｐｆｅｉｆｆｅｒ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）２０ｍｌ、層流フード、ポリカプロラクトン（「ＰＣＬ」−モル分子量１０，０００〜２０，０００；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  ＵＳＡ）、「洗浄」（前を参照のこと）エチレンビニルアセテート（「ＥＶＡ」）、ポリ（ＤＬ）乳酸（「ＰＬＡ」モル分子量１５，０００〜２５，０００；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ポリビニルアルコール（「ＰＶＡ」−モル分子量１２４，０００〜１８６，０００；  ９９％水和；Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，  ＷＩ  ＵＳＡ）、ジクロロメタン（「ＤＣＭ」または「塩化メチレン」；ＨＰＬＣグレードＦｉｓｈｅｒ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、蒸留水、滅菌生理食塩水（Ｂｅｃｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎまたは等価物）を含む。
【０１２７】
１．  ５％（ｗ／ｖ）ポリマー溶液の調製
調製されるポリマー溶液に依存して、２０ｍｌガラスシンチレーションバイアルで直接、１．００ｇのＰＣＬまたはＰＬＡあるいは各０．５０ｇのＰＬＡおよび洗浄ＥＶＡを秤量する。測定シリンダーを用いて２０ｍｌのＤＣＭを添加し、そしてバイアルをきつくキャップする。室温（２５℃）で１時間、または全てのポリマーが溶解するまでバイアルを放置する（時々、手による振盪を使用し得る）。ポリマーの溶解を、視覚によるチェックにより決定し得る；溶液は透明であるべきである。バイアルを生成した溶液名および日付で標識する。溶液を室温で保存し、そして２週間以内に使用する。
【０１２８】
２．ＰＶＡの３．５％（ｗ／ｖ）ストック溶液の調製
溶液を、以下に与えられる手順に従うか、またはミクロスフェアの生成のために調製された５％（ｗ／ｖ）ＰＶＡストック溶液（実施例２を参照のこと）を希釈することにより調製され得る。簡単には、１７．５ｇのＰＶＡを６００ｍｌガラスビーカー内で直接秤量し、そして５００ｍｌの蒸留水を添加する。３インチテフロン（登録商標）コートスターラーバーをビーカーに入れる。蒸発の消失を減らすためにビーカーにカバーガラスをかぶせる。ビーカーを３００ｍｌの水を含む２０００ｍｌガラスビーカーに入れる。これは、水浴として働く。ＰＶＡを、３００ｒｐｍ、８５℃（Ｃｏｒｎｉｎｇホットプレート／攪拌器）で２時間または完全に溶解するまで攪拌する。ＰＶＡ溶解を視覚によるチェックにより決定し得る；溶液は透明であるべきである。ピペットを使用して溶液をガラスねじぶた保存容器に移し、そして４℃で最大２ヶ月保存する。この溶液を、使用または希釈前に室温で暖めるべきである。
【０１２９】
３．ナノスプレーを生成するための手順
ヒュームフード内に攪拌組み立て部品を置く。１００ｍｌの３．５％ＰＶＡ溶液を２００ｍｌ水ジャケット付きビーカーに入れる。Ｈａａｋｅ水浴をこのビーカーに接続し、そして内容物を２７℃（＋／−１℃）で１０分間平衡化させる。オーバーヘッド攪拌器の開始速度を３０００ｒｐｍ（＋／−２００ｒｐｍ）に設定する。オーバーヘッド攪拌器の刃をＰＶＡ溶液の中間点に置き、そして攪拌器を開始する。１０ｍｌのポリマー溶液（生成されるナノスプレーの型に基づいて使用されるポリマー溶液）を、５ｍｌ自動ピペッターを用いて２分間の期間にわたって攪拌ＰＶＡに滴下する。３分後、攪拌速度を２５００ｒｐｍ（＋／−２００ｒｐｍ）に調節し、そして２．５時間組み立て部品を放置する。２．５時間後、攪拌刃をナノスプレー調製物から取り出し、そして１０ｍｌの蒸留水でリンスする。リンス溶液をナノスプレー調製物に加える。
【０１３０】
ミクロスフェア調製物を５００ｍｌビーカーに注ぐ。ジャケット付き水浴を７０ｍｌの蒸留水で洗浄する。７０ｍｌのリンス溶液をミクロスフェア調製物に加える。１８０ｍｌのミクロスフェア調製物をガラス棒で攪拌し、そしてその等量を４つのポリプロピレン５０ｍｌ遠心管に注ぐ。管にキャップをする。キャップした管を１００００ｇ（＋／−１０００ｇ）で１０分間遠心分離する。５ｍｌ自動ピペッターまたは真空吸引を用いて、４５ｍｌのＰＶＡ溶液を各ミクロスフェアペレットから引き出し、そしてそれを捨てる。５ｍｌの蒸留水を各遠心管に添加し、そしてボルテックスを使用して各管にミクロスフェアを再懸濁する。２０ｍｌの蒸留水を用いて、１つの遠心管に４つのミクロスフェア懸濁液をプールする。ミクロスフェアを洗浄して、１００００ｇ（＋／−１０００ｇ）で１０分間、ナノスプレー調製物を遠心分離する。上清をミクロスフェアペレットから引き出す。４０ｍｌの蒸留水を添加し、そしてボルテックスを使用してミクロスフェアを再懸濁する。このプロセスを、計３回の洗浄の間に２回を越えて繰り返す。４回目の洗浄を行うが、ミクロスフェアを再懸濁する場合には、１０ｍｌのみ（４０ｍｌではない）の蒸留水を使用する。４回目の洗浄後、ミクロスフェア調製物を予め秤量したガラスシンチレーションバイアルに移す。
【０１３１】
バイアルをキャップし、そしてそれを１時間室温（２５℃）で放置して、２μｍおよび３μｍの直径のミクロスフェアを重力下で沈降させる。１時間後、５ｍｌ自動ピペッターを用いて、上部９ｍｌの懸濁液を引く。滅菌しキャップした５０ｍｌ遠心管に９ｍｌを入れる。１００００ｇ（＋／−１０００ｇ）で１０分間懸濁液を遠心分離する。上清を捨て、そしてペレットを２０ｍｌの滅菌生理食塩水に再懸濁する。１００００ｇ（＋／−１０００ｇ）で１０分間懸濁液を遠心分離する。上清を捨て、そしてペレットを滅菌生理食塩水に再懸濁する。使用する生理食塩水量は、最終の必要とされる懸濁液濃度（通常１０％ｗ／ｖ）に依存する。滅菌生理食塩水において噴霧器装置を完全にリンスし、そしてナノスプレー懸濁液を噴霧器に添加する。
【０１３２】
Ｃ．パクリタキセル充填ナノスプレーの製造
パクリタキセルを含むナノスプレーを製造するために、パクリタキセル（Ｓｉｇｍａグレード９５％純度）を使用する。ポリマー性薬物溶液を調製するために、２０ｍｌガラスシンチレーションバイアル内で直接に適切な量のパクリタキセルを秤量する。適切な量を、ナノスプレー内に存在するべきパクリタキセルの割合に基づいて決定する。例えば、５％パクリタキセルを含むナノスプレーを必要とすれば、次いで、添加されるポリマー量がＤＣＭ溶液中の１０ｍｌの５％ポリマーであるので、秤量されるパクリタキセル量は２５ｍｇである（以下の工程を参照のこと）。
【０１３３】
１０ｍｌの約５％ポリマー溶液を、パクリタキセルを含むバイアルに添加する。バイアルをキャップし、そしてボルテックスかまたは手で旋回して、パクリタキセルを溶解する（パクリタキセルが溶解されたのを確実にするために、視覚によりチェックする）。生成された日付でバイアルを標識する。これは、生成された日に使用されなければならない。
【０１３４】
ポリマー／薬物（例えば、パクリタキセル）ストック溶液がポリマー溶液に置換されることを除いて、上記の手順に従う。
【０１３５】
Ｄ．フィルムを生成するための手順
用語フィルムは、多くの幾何学的形状のうちの１つに形成されたポリマーをいう。フィルムは、ポリマーの薄い弾力性のあるシートまたはポリマーの２ｍｍ厚ディスクであり得る。このフィルムは、暴露された組織上に配置されるように設計され、その結果任意のカプセル化薬物は、組織部位で長期間にわたってポリマーから放出される。フィルムは、いくつかのプロセス（例えば、鋳造またはスプレーを含む）により作製され得る。
【０１３６】
鋳造技術において、ポリマーを融解し、そして型に注ぐか、またはジクロロメタンに溶解し、そして型に注ぐかのいずれかである。次いで、ポリマーは、それぞれ、それが冷えると凝固するか、または溶媒が蒸発すると凝固するかのいずれかである。スプレー技術において、ポリマーを溶媒に溶解し、そしてガラスにスプレーし、溶媒が蒸発すると、ポリマーはガラス上で凝固する。反復スプレーは、ポリマーのガラスからはがれ得るフィルムへの蓄積を可能にする。
【０１３７】
これらの実験で利用された試薬および器具は、小さなビーカー、Ｃｏｒｎｉｎｇホットプレート攪拌器、鋳造型（例えば、５０ｍｌ遠心管キャップ）および型保持装置、キャップ付きの２０ｍｌガラスシンチレーションバイアル（プラスチック挿入型）、ＴＬＣ噴霧器、窒素ガスタンク、ポリカプロラクトン（「ＰＣＬ」−モル分子量１０，０００〜２０，０００；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）；パクリタキセル（Ｓｉｇｍａ９５％純度）、エタノール、「洗浄」（上を参照のこと）エチレンビニルアセテート（「ＥＶＡ」）、ポリ（ＤＬ）乳酸（「ＰＬＡ」モル分子量１５，０００〜２５，０００；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ジクロロメタン（ＨＰＬＣグレードＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含む。
【０１３８】
１．フィルムを生成するための手順−融解鋳造
小さなガラスビーカー内で直接、既知量のＰＣＬを秤量する。ビーカーを水を含むより大きなビーカー（水浴として働く）に入れ、そしてそれをホットプレート上に７０℃で１５分間か、またはポリマーが完全に融解するまで置く。既知量の薬物を融解ポリマーに添加し、そして混合物を完全に攪拌する。融解ＰＣＬ中での薬物の拡散を助けるために、薬物を、少容量（融解ＰＣＬ容量の＜１０％）の１００％エタノールに再懸濁／溶解し得る。次いで、このエタノール懸濁液を、融解ポリマーに混合する。融解ポリマーを型に注ぎ、そしてそれを冷却する。冷却後、フィルムを容器に保存する。
【０１３９】
２．フィルムを生成するための手順−溶媒鋳造（Ｓｏｌｖｅｎｔ  Ｃａｓｔｉｎｇ）
２０ｍｌガラスシンチレーションバイアル内で直接既知量のＰＣＬを秤量し、そして十分なＤＣＭを添加して１０％ｗ／ｖ溶液を達成する。バイアルにキャップをし、そして溶液を混合する。十分なパクリタキセルを溶液に添加して、所望の最終パクリタキセル濃度を達成する。手による振盪またはボルテックスを使用して、パクリタキセルを溶液に溶解する。溶液を１時間放置し（空気の泡の存在を減らすために）、次いで、それを型にゆっくりと注ぐ。使用する型は、必要とされる形状に元づく。ヒュームフード内に一晩型を置く。これによりＤＣＭは蒸発する。型にフィルムを放置してそれを保存するか、またはそれをはがし、そして密封容器においてそれを保存する。
【０１４０】
３．フィルムを生成するための手順−スプレー
２０ｍｌガラスシンチレーションバイアル内で直接十分なポリマーを秤量し、そして十分なＤＣＭを添加して、２％ｗ／ｖ溶液を達成する。バイアルにキャップをし、そして溶液を混合して、ポリマーを溶解する（手による振盪）。型をヒュームフード内で適切な型保持装置において垂直方向に組み立てる。この型保持装置を、適切な支持体（例えば、逆にした２０００ｍｌガラスビーカー）上でヒュームフード床の６〜１２インチ上に置いて、水平スプレーを可能にする。自動ピペットを用いて、適切な容量（最小５ｍｌ）の２％ポリマー溶液を別々の２０ｍｌガラスシンチレーションバイアルに移す。十分なパクリタキセルを溶液に添加し、そしてそれをキャップしたバイアルを手で振盪することにより溶解する。スプレー用に調製するために、このバイアルのキャップをはずし、そしてＴＬＣ噴霧器の円筒部（のみ）をポリマー溶液に浸す。注意：噴霧器のリザーバーをこの手順で使用しない−２０ｍｌガラスバイアルがリザーバーとして働く。
【０１４１】
窒素タンクを噴霧器の吸入口に接続する。噴霧およびスプレーが開始するまで圧力を徐々に増加させる。圧力に注意し、この手段の間中この圧力を使用する。型にスプレーするために、スプレー間の１５秒の乾燥時間と共に５秒の振動を使用する。乾燥時間の間、スプレーの消耗を避けるためにガスラインの端を指で圧着する。スプレーを、適切な厚さのポリマーが型に沈着するまで続ける。厚さは要求に基づく。型に付着したスプレーフィルムを離し、そして密封容器に保存する。
【０１４２】
Ｅ．ナノペーストを生成するための手順
ナノペーストは、親水性ゲルに懸濁したミクロスフェアの懸濁液である。本発明の１つの局面では、ゲルまたはペーストは、薬物充填ミクロスフェアを標的組織に密接して配置する方法として組織上に塗り付けられ得る。水ベースの場合、ペーストは体液ですぐに希釈され、これはペーストの厚さの減少およびミクロスフェアが近くの組織に沈着される傾向を引き起こす。それにより、ミクロスフェアカプセル化薬物のプールは、標的組織に密接して位置する。
【０１４３】
これらの実験で利用された試薬および器具は、ガラスビーカー、カルボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）９２５（薬学的グレード、Ｇｏｏｄｙｅａｒ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）、蒸留水、水溶液中の水酸化ナトリウム（１Ｍ）、水溶液中の水酸化ナトリウム（５Ｍ）、水に懸濁された０．１ｌｍ〜０．３ｌｍのサイズ範囲のミクロスフェア（２０％ｗ／ｖ）を含む（上記を参照のこと）。
【０１４４】
１．  ５％ｗ／ｖカルボポールゲルの調製
十分な量のカルボポールを、１Ｍ水酸化ナトリウムに添加して５％ｗ／ｖ溶液を達成する。１Ｍ水酸化ナトリウムにカルボポールを溶解して、混合物を約１時間放置する。この期間の間、混合物をガラス棒を用いて攪拌する。１時間後、混合物のｐＨを測定する。低いｐＨは、カルボポールが十分に溶解していないことを示す。達成したいｐＨは７．４である。５Ｍ水酸化ナトリウムを使用してｐＨを調節する。これは、５Ｍ水酸化ナトリウムを混合物へゆっくりと滴下し、混合物を攪拌し、そして混合物のｐＨを測定することにより達成される。ｐＨを７．４に調節するのに通常約１時間かかる。一旦ｐＨ  ７．４が達成されると、ゲルを覆い、そして２〜３時間放置する。この時間の後、なお７．４であることを確実にするためにｐＨをチェックする。変化している場合、５Ｍ水酸化ナトリウムを用いて元のｐＨ  ７．４へ調整する。ｐＨが７．４で安定であることを確実にするためにゲルを２、３時間放置する。所望のｐＨが達成され、そして安定するまでこのプロセスを繰り返す。ゲルの名前と日付で容器を標識する。ゲルを使用して、次週のうちにナノペーストを作製する。
【０１４５】
２．ナノペーストを生成するための手順
十分な０．１μｍ〜３μｍのミクロスフェアを水に添加して、ミクロスフェアの２０％懸濁液を生成する。８ｍｌの５％ｗ／ｖカルボポールゲルをガラスビーカーに入れる。２ｍｌの２０％ミクロスフェア懸濁液をビーカーに添加する。ガラス棒または混合スパーテルを用いて混合物を攪拌して、ゲル中にミクロスフェアを完全に分散させる。これは通常３０分かかる。一旦ミクロスフェアがゲル中に分散すると、混合物を保存瓶に入れる。４℃で瓶に保存する。これは一ヶ月の期間内に使用しなければならない。
【０１４６】
実施例２
ミクロスフェアの製造
下記のミクロスフェアの製造に好ましい器具は、２００ｍｌ水ジャケット付きビーカー（ＫｉｍａｘまたはＰｙｒｅｘ）、Ｈａａｋｅ循環水浴、２インチ直径を有するオーバーヘッド攪拌器およびコントローラー（４刃、プロペラ型ステンレス鋼攪拌器；Ｆｉｓｈｅｒブランド）、５００ｍｌガラスビーカー、ホットプレート／攪拌器（Ｃｏｒｎｉｎｇブランド）、４×５０ｍｌポリプロピレン遠心管（Ｎａｌｇｅｎｅ）、プラスチック挿入キャップを有するガラスシンチレーションバイアル、卓上遠心分離器（ＧＰＲ  Ｂｅｃｋｍａｎ）、高速遠心分離器−床型（ＪＳ  ２１  Ｂｅｃｋｍａｎ）、Ｍｅｔｔｌｅｒ分析用天秤（ＡＪ  １００、０．１ｍｇ）、Ｍｅｔｔｌｅｒデジタル上皿天秤（ＡＥ  １６３、０．０１ｍｇ）、自動ピペッター（Ｇｉｌｓｏｎ）を含む。試薬は、ポリカプロラクトン（「ＰＣＬ」−モル分子量１０，０００〜２０，０００；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  ＵＳＡ）、「洗浄」（「洗浄」の後の方法を参照のこと）エチレンビニルアセテート（「ＥＶＡ」）、ポリ（ＤＬ）乳酸（「ＰＬＡ」モル分子量１５，０００〜２５，０００；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ポリビニルアルコール（「ＰＶＡ」−モル分子量１２４，０００〜１８６，０００；  ９９％水和；Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，  ＷＩ  ＵＳＡ）、ジクロロメタン（「ＤＣＭ」または「塩化メチレン」；ＨＰＬＣグレードＦｉｓｈｅｒ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、および蒸留水を含む。
【０１４７】
Ａ．５％（ｗ／ｖ）ポリマー溶液の調製
調製されるポリマー溶液に依存して、１．００ｇのＰＣＬもしくはＰＬＡ、または０．５０ｇの各ＰＬＡおよび洗浄ＥＶＡを、２０ｍｌガラスシンチレーションバイアル内で直接秤量する。次いで、２０ｍｌのＤＣＭを添加し、そしてバイアルをきつくキャップする。バイアルを室温（２５℃）で１時間（時々振盪を使用し得る）、または全てのポリマーが溶解するまで（溶液は透明になるはずである）保存する。溶液は、少なくとも２週間室温で保存し得る。
【０１４８】
Ｂ．５％（ｗ／ｖ）ＰＶＡストック溶液の調製
２５グラムのＰＶＡを、６００ｍｌガラスビーカー内で直接秤量する。５００ミリリットルの蒸留水を、３インチテフロン（登録商標）コートスターラーバーと共に添加する。ビーカーをガラスで覆って蒸発喪失を減少させ、そして３００ｍｌの水を含む２０００ｍｌガラスビーカー（水浴として働く）に入れる。ＰＶＡを８５℃（Ｃｏｒｎｉｎｇホットプレート／攪拌器）で２時間または完全に溶解するまで３００ｒｐｍで攪拌する。ＰＶＡの溶解を視覚によるチェックで測定し得る；溶液は透明になるはずである。次いで、溶液をガラスねじぶた保存容器に移し、そして４℃で最大２ヶ月間保存する。しかし、溶液は、使用または希釈前に室温で暖めるべきである。
【０１４９】
Ｃ．ミクロスフェアを生成するための手順
作製されるミクロスフェアのサイズに基づいて（表Ｉを参照のこと）、１００ｍｌのＰＶＡ溶液（表Ｉに与えられる濃度）を、２００ｍｌ水ジャケット付きビーカーに入れる。Ｈａａｋｅ循環水浴をこのビーカーに接続し、そして内容物を２７℃（＋／−１℃）で１０分間平衡化させる。作製されるミクロスフェアのサイズに基づいて（表Ｉを参照のこと）オーバーヘッド攪拌器の開始速度を設定し、そしてその刃をＰＶＡ溶液の中間点に置く。次いで、攪拌器を開始させ、次いで、１０ｍｌのポリマー溶液（生成されるミクロスフェアの型に基づいて使用するポリマー溶液）を、５ｍｌ自動ピペッターを用いて２分間にわたって攪拌ＰＶＡに滴下する。３分後、攪拌速度を調節し（表Ｉを参照のこと）、そして溶液をさらに２．５時間攪拌する。次いで、攪拌刃をミクロスフェア調製物から取り出し、そしてリンス溶液をミクロスフェア調製物中に排出させるように１０ｍｌの蒸留水でリンスする。次いで、ミクロスフェア調製物を５００ｍｌビーカーに注ぎ、そしてジャケット付き水浴を７０ｍｌの蒸留水で洗浄し、これもまたミクロスフェア調製物中に排出させる。次いで、１８０ｍｌのミクロスフェア調製物をガラス棒で攪拌し、そして等量を４つのポリプロピレン５０ｍｌ遠心管に注ぐ。次いで、管をキャップし、そして１０分間遠心分離する（力は表Ｉに与えられる）。次いで、５ｍｌ自動ピペッターまたは真空吸引を利用して、各ミクロスフェアペレットから４５ｍｌのＰＶＡ溶液を引く。
【０１５０】
（表Ｉ  各直径範囲のミクロスフェアについてのＰＶＡ濃度、攪拌速度、および遠心力必要条件）
【０１５１】
【表１】
2004285074.tif 000002
次いで、５ミリリットルの蒸留水を各遠心管に添加し、次いで、これをボルテックスしてミクロスフェアを懸濁する。ついで、４つのミクロスフェア懸濁液を、２０ｍｌの蒸留水と共に１つの遠心管に注ぎ、そしてさらに１０分間遠心分離する（力は表Ｉに与えられる）。このプロセスを、計３回の洗浄の間にさらに２回繰り返す。次いで、ミクロスフェアを最後の回に遠心分離し、そして１０ｍｌの蒸留水に再懸濁する。最後の洗浄の後、ミクロスフェア調製物を、予め秤量したガラスシンチレーションバイアルに移す。このバイアルをキャップし、そしてミクロスフェアを重力下で沈降させるために、室温（２５℃）で一晩放置する。０．１μｍ〜３μｍのサイズの範囲内にあるミクロスフェアは重力下で沈降せず、そのためそれらは１０ｍｌ懸濁液に残る。
【０１５２】
Ｄ．１０μｍ〜３０μｍまたは３０μｍ〜１００μｍの直径のミクロスフェアの乾燥
ミクロスフェアを室温で一晩放置した後、５ｍｌ自動ピペッターまたは真空吸引を使用して沈降ミクロスフェアから上清を引く。ミクロスフェアを、１週間またはそれらが十分に乾燥するまで、ドローアー（ｄｒａｗｅｒ）内のキャップをしていないバイアル内で乾燥させる（バイアルは一定の重量）。より速い乾燥は、キャップをしていないバイアルを、ヒュームフード内で窒素ガスの遅い流れ（約１０ｍｌ／分の流れ）に放置することにより達成され得る。十分に乾燥すると（バイアルは一定の重量）、バイアルの重量を計り、そしてキャップする。標識しキャップしたバイアルを、ドローアー内で室温で保存する。通常、ミクロスフェアを３ヶ月を超えて保存しない。
【０１５３】
Ｅ．０．１μｍ〜３μｍの直径のミクロスフェアの乾燥
このサイズ範囲のミクロスフェアは沈降せず、そのためそれらを４℃で最大４週間懸濁液中に放置する。１０ｍｌの懸濁液中のミクロスフェア濃度を測定するために、懸濁液の２００μｌサンプルを、１．５ｍｌの予め秤量した微量遠心管にピペッティングする。次いで、管を１０，０００ｇで遠心分離し（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ卓上微量遠心分離器）、上清を除去し、そして管を５０℃で一晩乾燥させる。次いで、管を再秤量して、管内の乾燥ミクロスフェアの重量を測定する。
【０１５４】
Ｆ．パクリタキセル充填ミクロスフェアの製造
パクリタキセルを含むミクロスフェアを調製するために、適切な量の秤量パクリタキセル（カプセル化されるべきパクリタキセルの割合に基づく）を、２０ｍｌガラスシンチレーションバイアル内に直接入れる。次いで、１０ミリリットルの適切なポリマー溶液を、パクリタキセルを含むバイアルに添加し、次いでこれをパクリタキセルが溶解するまでボルテックスする。
【０１５５】
次いで、パクリタキセルを含むミクロスフェアを、工程（Ｃ）から（Ｅ）において本質的に上記のように生成し得る。
【０１５６】
実施例３
界面活性剤コートミクロスフェア
Ａ．材料および方法
ミクロスフェアを、実施例２に本質的に記載のように、ポリ（ＤＬ）乳酸（ＰＬＡ）、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、および５０：５０エチレンビニルアセテート（ＥＶＡ）：ＰＬＡから製造した。１０〜１００μｍのサイズ範囲であり、平均直径は４５μｍであった。
【０１５７】
ヒト血液を健康なボランティアから得た。好中球（白血球）を、デキストラン沈降およびフィコールハイパーク（Ｆｉｃｏｌｌ  Ｈｙｐａｑｕｅ）遠心分離技術を用いて血液から分離した。好中球を、ハンクス（Ｈａｎｋｓ）緩衝化塩溶液（「ＨＢＳＳ」）１ｍｌあたり５百万個の細胞で懸濁した。
【０１５８】
好中球活性化レベルを、化学発光により測定されるように活性酸素種の生成により測定した。特に、化学発光を、１μＭルミノールエンハンサーを用いたＬＫＢルミノメーターを使用することにより測定した。ミクロスフェアの血漿プレコーティング（またはオプソニン作用）を、１０ｍｇのミクロスフェアを０．５ｍｌの血漿に懸濁し、そして３７℃で３０分間転がすことにより行った。
【０１５９】
次いで、ミクロスフェアを１ｍｌのＨＢＳＳ中で洗浄し、そして遠心分離したミクロスフェアペレットを時間ｔ＝０、３７℃で好中球懸濁液に添加した。ミクロスフェア表面を、１０ｍｇのミクロスフェアを０．５ｍｌのＨＢＳＳ中の２％ｗ／ｗ  Ｆ１２７溶液に３７℃で３０分間懸濁することにより、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ１２７（ＢＡＳＦ）と呼ばれる界面活性剤を用いて修飾した。次いで、ミクロスフェアを、さらにプレコーティングするために好中球または血漿に添加する前に１ｍｌのＨＢＳＳで２回洗浄した。
【０１６０】
Ｂ．結果
図１は、未処理ミクロスフェアが５０ｍＶ未満の化学発光値を与えることを示す。これらの値は、低レベルの好中球活性化を示す。比較のために、炎症性微結晶は１０００ｍＶ近い値を与え、可溶性化学アクチベーターは５０００ｍＶ近い値を与える。しかし、ミクロスフェアを血漿でプレコーティングする場合、全ての化学発光値は、１００〜３００ｍＶの範囲で増幅する（図１を参照のこと）。これらのレベルの好中球応答または活性化は、おだやかな炎症であると考えられ得る。ＰＭＭＡは最も大きな応答を与え得、そして最も炎症性であるとみなされ得た。ＰＬＡおよびＰＣＬの両方は、血漿前処理（またはオプソニン作用）後に好中球活性化において３〜４倍より強力になるが、これに関して２つのポリマー間ではほとんど差異はない。ＥＶＡ：ＰＬＡは、このミクロスフェアが乾燥し難く、そして水性緩衝液に懸濁し難いので、血管新生処方物に恐らく使用されない。この血漿効果はオプソニン作用と呼ばれ、そして抗体または補体分子の表面への吸着から生じる。これらの吸着種は、白血球上のレセプターと相互作用し、そして増幅された細胞活性化を引き起こす。
【０１６１】
図２〜５は、それぞれ、ＰＣＬ、ＰＭＭＡ、ＰＬＡ、およびＥＶＡ：ＰＬＡの血漿プレコーティングの効果を記載し、ならびにミクロスフェアの血漿プレコーティング前のプルロニックＦ１２７プレコーティング効果を示す。これらの図は、全て同じ効果：（１）血漿プレコーティングは応答を増幅する；（２）プルロニックＦ１２７プレコーティングはそれ自体で効果を有さない；（３）血漿プレコーティングにより引き起こされる増幅された好中球応答は、ミクロスフェア表面を２％プルロニックＦ１２７で前処理することにより強く阻害され得る、を示す。
【０１６２】
血漿由来の吸着タンパク質種の性質はまた、電気泳動により研究された。この方法を用いて、ポリマー表面のプルロニックＦ１２７での前処理は、抗体のポリマー表面への吸着を阻害することが示された。
【０１６３】
同様に、図６〜９は、ＰＣＬ、ＰＭＭＡ、ＰＬＡ、またはＥＶＡ：ＰＬＡミクロスフェア（それぞれ）を、ＩｇＧ（２ｍｇ／ｍｌ）または２％プルロニックＦ１２７、次いでＩｇＧ（２ｍｇ／ｍｌ）のいずれかでプレコーティングする効果を示す。これらの図から示され得るように、ミクロスフェアをＩｇＧでプレコーティングすることにより引き起こされる増幅された応答は、プルロニックＦ１２７での処理により阻害され得る。
【０１６４】
この結果は、４つの型全てのミクロスフェアのポリマー表面をプルロニックＦ１２７で前処理することにより、好中球のミクロスフェアへの「炎症性」応答が阻害され得ることを示す。
【０１６５】
実施例４
パクリタキセルのカプセル化
５００マイクログラムのパクリタキセルまたはバカチン（パクリタキセルのアナログ、Ｉｎｆｌａｚｙｍｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ，  Ｃａｎａｄａから入手可能）のいずれかを、１ｍｌのＤＣＭ中の５０：５０ＥＬＶＡＸ：ポリ−ｌ−乳酸混合物に溶解する。次いで、ミクロスフェアを、２００ｒｐｍ、４２℃、３時間、３連で溶解機械（６軸（ｓｉｘ−ｓｐｉｎｄｌｅ）溶解テスター，  ＶａｎｄｅｒＫａｎｐ，  Ｖａｎ  Ｋｅｌｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｕ．Ｓ．Ａ）において調製する。このように調製されたミクロスフェアを水で２回洗浄し、そして顕微鏡でサイズを分類する。
【０１６６】
パクリタキセルカプセル化の測定を、ＵＶ−可視アッセイ（２３７ｎｍでＵＶ−可視ラムダ最大、励起２３７ｎｍ、発光３２５ｎｍでの蛍光アッセイ；蛍光結果は角括弧［］に示される）において行う。上記の手順を使用して、５８μｇ（＋／−１２μｇ）［７５μｇ（＋／−２５μｇ）］のパクリタキセルを、計５００μｇの開始材料からカプセル化し得る。これは、最初の重量の１２％（＋／−２．４％）［１５％（＋／−５％）］、またはポリマーの１．２重量％（＋／−０．２５重量％）［１．５重量％（＋／−０．５重量％）］を示す。３７℃でオーブン内で１８時間転がした後、総パクリタキセルの１０．３％（＋／−１０％）［６％（＋／−５．６％）］が、ミクロスフェアから放出された。
【０１６７】
バカチンについては、、１００＋／−１５μｇ  ［８３＋／−２３μｇ）］のバカチンを、計５００μｇの開始材料からカプセル化し得る。これは、最初のバカチン重量の２０％（＋／−３％）［１７％（＋／−５％）］、およびポリマーの２重量％（＋／−０．３重量％）［１．７重量％（＋／−０．５重量％）］を示す。３７℃でオーブン内で１８時間転がした後、バカチンの５５％（＋／−１３％）［６０％（＋／−２３％）］が、ミクロスフェアから放出される。
【０１６８】
実施例５
エチレン−ビニル−アセテートコポリマーおよびポリ（Ｄ，Ｌ乳酸）の混和物からなるミクロスフェアからのパクリタキセルの制御送達。ＣＡＭアッセイにおけるミクロスフェアのインビボ試験
本実施例は、生分解性ポリ（ｄ，ｌ−乳酸）（ＰＬＡ）ポリマーおよび非生分解性エチレン−ビニルアセテート（ＥＶＡ）コポリマーの混和物からなるパクリタキセル充填ミクロスフェアの調製を記載する。さらに、インビトロ放出速度およびＣＡＭ上に配置されたミクロスフェアから放出されるパクリタキセルの抗血管新生活性が証明される。
【０１６９】
これらの実験において利用された試薬は、パクリタキセル（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）から購入）；ＰＬＡ（分子量１５，０００〜２５，０００）およびＥＶＡ（６０％ビニルアセテート）（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，  ＰＡ）から購入）；ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）（分子量１２４，０００〜１８６，０００、９９％水和、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，  ＷＩ）から購入）、ならびにジクロロメタン（ＤＣＭ）（ＨＰＬＣグレード、Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏから購入）を含む。蒸留水を終始使用する。
【０１７０】
Ａ．ミクロスフェアの調製
ミクロスフェアを、溶媒蒸発法を使用して実施例２に記載のように本質的に調製する。簡単には、２０ｍＬ  ＤＣＭ中の５％ｗ／ｖポリマー溶液を、３５：６５〜９０：１０のＥＶＡ：ＰＬＡの混和物を用いて調製する。２０ｍＬガラスバイアル中の水中の２．５％ｗ／ｖ  ＰＶＡ  ５ｍｌに、１ｍＬのポリマー溶液小滴を攪拌しながら添加する。６つの同様のバイアルを、６位置（ｐｏｓｉｔｉｏｎ）オーバーヘッド攪拌溶解試験装置（Ｖａｎｄｅｒｋａｍｐ）に組み立て、そして２００ｒｐｍで攪拌する。バイアルの温度を、１５分にわたって室温から４０℃に増大させ、４０℃で２時間保持する。バイアルを５００×ｇで遠心分離し、そしてミクロスフェアを水で３回洗浄する。いくつかのＥＶＡ：ＰＬＡのポリマー混和物において、ミクロスフェアサンプルは、分散剤または乳化剤であるＰＶＡの除去により洗浄段階の間に凝集する。この凝集効果は、凝集ミクロスフェアが融合し、そして融合ポリマー塊が洗浄水の表面上に浮いたので、半定量的に分析され得た。この表面ポリマー層を洗浄処理の間に捨て、そして残存ペレット化ミクロスフェアを秤量する。％凝集を以下の式から決定する。
％凝集＝１−（ペレット化ミクロスフェアの重量）×１００
最初のポリマーの重量
パクリタキセル充填ミクロスフェア（０．６％ｗ／ｗパクリタキセル）を、パクリタキセルをＤＣＭ中の５％ｗ／ｖポリマー溶液に溶解することにより調製する。使用するポリマー混和物は５０：５０のＥＶＡ：ＰＬＡである。ミクロスフェアの「大きな」サイズ画分および「小さな」サイズ画分を、パクリタキセル／ポリマー溶液をそれぞれ２．５％ｗ／ｖ  ＰＶＡおよび５％ｗ／ｖ  ＰＶＡに滴下することにより生成する。分散物を、４０℃２００ｒｐｍで２時間攪拌し、遠心分離し、そして上記のように水で３回洗浄する。ミクロスフェアを風乾し、そしてサンプルを、ステージマイクロメーターを有する光学顕微鏡を用いてサイズ分類する。１サンプルあたり３００を超えるミクロスフェアを計数する。コントロールミクロスフェア（パクリタキセルなし）を調製し、そして上記のようにサイズ分類する。
【０１７１】
Ｂ．カプセル化効率
既知量のパクリタキセル充填ミクロスフェアを１ｍＬ  ＤＣＭに溶解し、５０℃の水中の４０％アセトニトリル２０ｍＬを添加し、そしてＤＣＭが蒸発するまでボルテックスする。４０％アセトニトリル中のパクリタキセル濃度を、１ｍＬ／分の流速（Ｂｅｃｋｍａｎ無勾配（ｉｓｏｃｒａｔｉｃ）ポンプ）での水：メタノール：アセトニトリル（３７：５：５８）の移動相、Ｃ８逆相カラム（Ｂａｃｋｍａｎ）、および２３２ｎｍでのＵＶ検出を用いてＨＰＬＣにより測定する。この抽出手順の回収効率を測定するために、１００〜１０００μｇの既知量のパクリタキセルを１ｍＬのＤＣＭに溶解し、そして上記のように３連で同じ抽出手順に供する。回収率はいつも８５％より高く、そしてカプセル化効率の値は適切に補正される。
【０１７２】
Ｃ．薬物放出研究
１５ｍＬガラスねじぶた管に、１０ｍＬの１０ｍＭリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）および３５ｍｇパクリタキセル充填ミクロスフェアを入れる。管を３７℃でかつ所定の時間間隔で転がし、１５００×ｇで５分間遠心分離し、そして上清を分析のために補完する。ミクロスフェアペレットを、新鮮なＰＢＳ（１０ｍＬ）に３７℃で再懸濁し、そして再インキュベートする。パクリタキセル濃度を、１ｍＬ  ＤＣＭへ抽出し、続いて窒素の流れ下で乾燥するまで蒸発させ、１ｍＬの水中の４０％アセトニトリルに再構成し、そして上記のようにＨＰＣＬを用いて分析することにより測定する。
【０１７３】
Ｄ．走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）
ミクロスフェアをサンプルホルダーに入れ、金でスパッター（ｓｐｕｔｔｅｒ）コートし、そして１５ｋＶで操作するＰｈｉｌｉｐｓ  ５０１Ｂ  ＳＥＭを用いて顕微鏡写真を得る。
【０１７４】
Ｅ．ＣＡＭ研究
受精家禽胚を、殻なしの培養前に４日間インキュベートする。卵の内容物を、９０％相対湿度および３％ＣＯ２で２日間インキュベートする。インキュベーションの６日目に、０．６％パクリタキセル充填またはコントロール（パクリタキセルなし）ミクロスフェアの１ｍｇアリコートを、ＣＡＭ表面上に直接置く。２日間の暴露後、脈管構造を、ビデオカメラに接続した実体顕微鏡を用いて調べ；次いで、ビデオ信号をコンピューター上にディスプレイし、そして映像を印刷する。
【０１７５】
Ｆ．結果
１００％ＥＶＡから調製されたミクロスフェアはＰＶＡ溶液に大量に懸濁されるが、ＰＶＡを除去するための後の水洗浄の際に凝集し、そして癒着するか、または広範に融合する。ＥＶＡと漸増比率のＰＬＡとの混和は、図１０Ａに記載されたように、水で洗浄した場合に凝集および癒着する傾向の減少を示す、ミクロスフェアを生成した。ＥＶＡ：ＰＬＡの５０：５０混和物は、良好な物理的安定性を有するミクロスフェアを形成した。すなわち、ミクロスフェアは分離して残存し、そして良好に懸濁し、凝集および癒着はごくわずかであった。
【０１７６】
「小さな」サイズ画分ミクロスフェアについてのサイズ範囲を、１０〜３０ｍｍのミクロスフェアサンプルの＞９５（重量）％、「大きな」サイズ画分については、３０〜１００ｍｍのサンプルの＞９５（重量）％であるように決定する。「小さな」および「大きな」サイズ範囲におけるパクリタキセル充填５０：５０  ＥＶＡ：ＰＬＡミクロスフェアの代表的な走査型電子顕微鏡写真を、それぞれ１０Ｂおよび１０Ｃに示す。ミクロスフェアは、平滑な表面を有し、そしてミクロスフェアの表面上に固体薬物の証拠を有さない球である。５０：５０  ＥＶＡ：ＰＬＡミクロスフェアをパクリタキセルで充填する効率は、５０ｍｇポリマーあたり最初のパクリタキセル濃度の１００〜１０００ｍｇパクリタキセルの９５〜１００％である。「小さな」または「大きな」ミクロスフェアのいずれかについてのカプセル化効率間の有意な差異はない（スチューデントのｔ検定、ｐ＜０．０５）。
【０１７７】
０．６％ｗ／ｖ充填５０：５０  ＥＶＡ：ＰＬＡミクロスフェアからのパクリタキセル放出の時間経過を、「小さな」サイズ（白丸）および「大きな」サイズ（黒丸）ミクロスフェアについて図１０Ｄに示す。放出速度研究を、３つの別々の実験において３連の管で行う。放出プロフィールは、両方のサイズ範囲のミクロスフェアから最初の４日間にわたって生じる、パクリタキセルの最初の急速な放出すなわち「バースト」相を有する２相性（ｂｉｐｈａｓｉｃ）である。この後、非常に遅い放出相が続く。「小さな」または「大きな」ミクロスフェアからの放出速度間で有意な差異はない。ミクロスフェアの総パクリタキセル含有量の１０〜１３％は５０日以内に放出される。
【０１７８】
パクリタキセル充填ミクロスフェア（０．６％ｗ／ｖ充填）をＣＡＭアッセイを用いて試験し、そして結果を図１０Ｅに示す。パクリタキセルミクロスフェアは、周囲組織において無脈管分布ゾーンを生じるのに十分な薬物を放出した（図１０Ｆ）。血管が完全に存在しない領域（ゾーン１）はミクロスフェア（図１０Ｅおよび１０Ｆの「ＭＳ」）にすぐ隣接し；破壊された機能しない毛細血管の領域は（ゾーン２）、ミクロスフェアからさらに遠くなり；毛細血管が正常に戻るのは、ミクロスフェアから約６ｍｍの距離しかないことに留意のこと。コントロールミクロスフェア（パクリタキセルなし）で処置されたＣＡＭにおいて、正常な毛細血管ネットワーク構造がある（図に示さず）。
【０１７９】
議論
管周囲薬物投与は、穏やかな侵襲性の外科的手順である。従って、理想的には、抗増殖薬物（例えば、パクリタキセル）の脈管周囲処方は、数ヶ月オーダーの延長した期間について活性に十分な濃度で腫瘍または疾患部位で薬物を放出する。ＥＶＡは、長期間にわたる（＞１００日）巨大分子の制御送達のために広範に使用されている、組織適合性非分解性ポリマーである。
【０１８０】
ＥＶＡを、ポリマーマトリックスに分散されたパクリタキセルを有するミクロスフェアを調製するためのポリマー性生体適合物質として最初に選択する。しかし、１００％ＥＶＡで調製されたミクロスフェアは、洗浄手順の間にほとんど完全に凝集し、そして癒着した。
【０１８１】
乳酸およびグリコール酸に基づくポリマーおよびコポリマーは、生理学的に不活性でかつ生体適合性であり、そして毒物学的に受容可能な産物に加水分解により分解する。乳酸およびグリコール酸のコポリマーは、ＰＬＡより急速な分解速度を有し、そしてこれらのコポリマーを用いて調製された薬物充填ミクロスフェアは、数ヶ月にわたる延長した制御放出に不適切である。
【０１８２】
図１０Ａは、ＥＶＡ：ＰＬＡ混和物におけるＰＬＡの比率の増加が、ミクロスフェア懸濁液の凝集程度を減少したことを示す。ＥＶＡ：ＰＬＡマトリックスにおける５０％以下のＥＶＡの混和物は、生理学的に安定な水またはＰＢＳ中のミクロスフェア懸濁液を生成した。５０：５０  ＥＶＡ：ＰＬＡの混和物を、全ての後の研究のために選択する。
【０１８３】
ミクロスフェアの異なるサイズ範囲の画分を、水相中の乳化剤であるＰＶＡの濃度を変えることにより調製し得た。「小さな」ミクロスフェアを５％ｗ／ｖのより高いＰＶＡ濃度で生成するが、「大きな」ミクロスフェアを２．５％ｗ／ｖ  ＰＶＡで生成する。全ての他の生成変数は、両方のミクロスフェアサイズ画分について同じである。より高い濃度の乳化剤は、より粘性の水性分散媒体を与え、そして水相に乳化されたポリマー／パクリタキセル／ＤＣＭのより小さな小滴を生成し、従ってより小さなミクロスフェアを生成した。パクリタキセル充填ミクロスフェアは、固体ミクロスフェア内にカプセル化された有機相に添加された最初のパクリタキセルの９５〜１００％を含んだ。パクリタキセルの低い水溶性は、ポリマーを含む有機相への分配に有利である。
【０１８４】
５０日以内に放出された５０：５０  ＥＶＡ：ＰＬＡミクロスフェアからのパクリタキセルの放出速度は、充填パクリタキセルの１５％未満で非常に遅い。薬物放出の最初のバースト相は、（ミクロスフェア表面に密接した）ミクロスフェアの外面領域からの薬物の拡散によるものであり得る。
【０１８５】
非分解性ポリマー性マトリックス（例えば、ＥＶＡ）からの薬物放出機構は、ポリマー内の分散薬物相を通る水の拡散、薬物の溶解、および一連の相互連絡した液体で満たされた孔を通る溶質の拡散を含むと考えられる。ＥＶＡおよびＰＬＡの混和は、ＰＬＡにおける３０〜７０％ＥＶＡの範囲にわたって混合することができないか、または２連続性（ｂｉｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ）であることが示された。３７℃でのＰＢＳ緩衝液における分解研究において、インキュベーションまたは遅延期間の後に、ＰＬＡは加水分解的に分解し、そして不活性スポンジ様骨格を残してＥＶＡ：ＰＬＡポリマー混和物マトリックスから侵食した。インキュベーション期間ならびにＰＬＡ分解および混和物マトリックスからの侵食の速度は、マトリックス中のＰＬＡの比率およびプロセスの歴史に依存するが、４０〜５０日後までＰＬＡの喪失は一貫してほとんどまたは全くない。
【０１８６】
５０：５０  ＥＶＡ：ＰＬＡミクロスフェアからのＰＬＡのいくらかの侵食は、インビトロ放出速度研究の５０日以内に生じ得るが（図１０Ｃ）、ポリマー混和物からの薬物放出の主な機構は、ポリマーマトリックス中の孔ネットワークを通る溶質の拡散である。
【０１８７】
放出速度研究の終わりに、ミクロスフェアは、薬物残存の量から分析される。５０日インキュベーションミクロスフェアサンプルにおけるパクリタキセル残存のパーセントの値は、「大きな」および「小さな」サイズ画分ミクロスフェアについて、それぞれ９４％＋／−９％および８９％＋／−１２％である。
【０１８８】
ポリマー（０．６％）１ｍｇあたり６ｍｇで充填されたミクロスフェアは、ニワトリ胚のＣＡＭ上に置かれた場合、血管新生の広範な阻害を提供した（図１０Ｅおよび１０Ｆ）。
【０１８９】
実施例６
ポリ（Ｅ−カプロラクトン）ミクロスフェア中の治療剤カプセル化。パクリタキセル充填ミクロスフェアによるＣＡＭアッセイにおける血管新生の阻害
本実施例は、ポリ（ε−カプロラクトン）の生分解性ミクロスフェアからのパクリタキセルのインビトロ放出速度プロフィールを評価し、そしてＣＡＭ上に置かれた場合の、これらのミクロスフェアから放出されたパクリタキセルのインビボ血管新生活性を証明する。
【０１９０】
これらの実験において利用された試薬は、ポリ（ε−カプロラクトン）（「ＰＣＬ」）（分子量３５，０００〜４５，０００；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，  ＰＡ）から購入）；Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏ．からのジクロロメタン（「ＤＣＭ」）；Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，  Ｗｉｓ．）からのポリビニルアルコール（ＰＶＰ）（分子量１２，０００〜１８，０００、９９％加水分解）、およびＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）からのパクリタキセルを含む。他に述べられない限り、全ての化学物質および試薬を、供給されたように使用する。蒸留水を終始使用する。
【０１９１】
Ａ．ミクロスフェアの調製
ミクロスフェアを、溶媒蒸発法を利用して実施例２に記載のように本質的に調製する。簡単には、５％ｗ／ｗパクリタキセル充填ミクロスフェアを、１０ｍｇのパクリタキセルおよび１９０ｍｇのＰＣＬを２ｍｌのＤＣＭに溶解し、１００ｍｌの１％ＰＶＰ水性溶液に添加し、そして２５℃で２時間１０００ｒｐｍで攪拌することにより調製する。ミクロスフェア懸濁液を、１０００×ｇで１０分間遠心分離し（Ｂｅｃｋｍａｎ  ＧＰＲ）、上清を除去し、そしてミクロスフェアを水で３回洗浄した。洗浄ミクロスフェアを一晩風乾し、そして室温で保存した。コントロールミクロスフェア（パクリタキセルなし）を上記のように調製する。１％および２％パクリタキセルを含むミクロスフェアもまた調製する。ミクロスフェアを、ステージマイクロメーターを有する光学顕微鏡を用いてサイズ分類する。
【０１９２】
Ｂ．カプセル化効率
既知量の薬物充填ミクロスフェア（約５ｍｇ）を８ｍｌのアセトニトリルに溶解し、そして２ｍｌの蒸留水を添加して、ポリマーを沈澱させる。混合物を１０００ｇで１０分間遠心分離し、そしてカプセル化されたパクリタキセル量を、ＵＶ分光光度計（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ  ８４５２Ａ  ダイオードアレイ分光光度計）において２３２ｎｍで測定された上清の吸光度から計算する。
【０１９３】
Ｃ．薬物放出研究
約１０ｍｇのパクリタキセル充填ミクロスフェアを、ねじぶた管内で、２０ｍｌの１０ｍＭリン酸緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）（ＰＢＳ）に懸濁する。管を３７℃にて回転させながら転がし、そして所定の時間間隔で（ミクロスフェアを底に安定させた後）１９．５ｍｌの上清を除去し、０．４５μｍメンブレンフィルターを通して濾過し、そしてパクリタキセル分析のために保持する。等量のＰＢＳを各管に置換して、研究の間中の吸込み（ｓｉｎｋ）条件を維持する。濾過物を３×１ｍｌ  ＤＣＭで抽出し、ＤＣＭ抽出物を窒素の流れ下で乾燥するまで蒸発させ、１ｍｌのアセトニトリルに再溶解し、そして１ｍｌ分−１の流速での水：メタノール：アセトニトリル（３７：５：５８）の移動相（Ｂｅｃｋｍａｎ無勾配ポンプ）、Ｃ８逆相カラム（Ｂｅｃｋｍａｎ）、および２３２ｎｍでのＵＶ検出（Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＳＰＤ  Ａ）を用いてＨＰＬＣにより分析する。
【０１９４】
Ｄ．ＣＡＭ研究
受精家禽胚を、殻なしの培養前に４日間インキュベートする。インキュベーションの６日目に、５％パクリタキセル充填またはコントロール（パクリタキセルなし）ミクロスフェアの１ｍｇアリコートを、ＣＡＭ表面上に直接置く。２日間の暴露後、脈管構造を、ビデオカメラに接続した実体顕微鏡を用いて調べ；次いで、映像信号をコンピューター上にディスプレイし、そして映像を印刷する。
【０１９５】
Ｅ．走査型電子顕微鏡
ミクロスフェアをサンプルホルダーに入れ、金でスパッターコートし、次いで、１５ｋＶで操作するＰｈｉｌｉｐｓ  ５０１Ｂ  ＳＥＭ走査型電子顕微鏡に置く。
【０１９６】
Ｆ．結果
ミクロスフェアサンプルのサイズ範囲は３０〜１００μｍであるが、全てのパクリタキセル充填またはコントロールミクロスフェアバッチにおいて、この範囲外に落ちるいくつかのミクロスフェアの証拠が存在する。ＰＣＬミクロスフェアをパクリタキセルで充填する効率は、常に、研究された全ての薬物充填について９５％より大きい。走査型電子顕微鏡は、ミクロスフェアが全て球であることを証明し、そして多くが粗いかまたはあばたのある表面形態を示した。ミクロスフェア表面上に固体薬物の証拠はないようであった。
【０１９７】
１％、２％、および５％充填ＰＣＬミクロスフェアからのパクリタキセル放出の時間経過を図１１Ａに示す。放出速度プロフィールは２相性である。全ての薬物充填で最初の急速なパクリタキセルの放出すなわち「バースト相」があった。バースト相は、１％および２％パクリタキセル充填で１〜２日にわたって、ならびに５％充填ミクロスフェアについては３〜４日にわたって生じた。急速な放出の最初の相の後に、著しく遅い薬物放出の相が続く。１％および２％パクリタキセルを含むミクロスフェアについて、２１日後にさらなる薬物放出はなかった。５％パクリタキセル充填で、ミクロスフェアは、２１日後に総薬物含有量の約２０％を放出した。
【０１９８】
図１１Ｂは、コントロールＰＣＬミクロスフェアで処置されたＣＡＭを示し、図１１Ｃは、５％パクリタキセル充填ミクロスフェアでの処置を示す。コントロールミクロスフェアを用いたＣＡＭは、正常な毛細血管ネットワーク構造を示す。パクリタキセル−ＰＣＬミクロスフェアで処置されたＣＡＭは、著しい脈管後退および毛細血管ネットワークが全く存在しないゾーンを示す。
【０１９９】
Ｇ．議論
パクリタキセル充填ミクロスフェアの溶媒蒸発法は、９５〜１００％の非常に高いパクリタキセルカプセル化効率を生じた。これは、パクリタキセルの乏しい水溶性およびポリマーを含む有機溶媒相での分配に有利なその疎水性性質によるものである。
【０２００】
パクリタキセルの２相性放出プロフィールは、生分解性ポリマーマトリックスからの多くの薬物の放出パターンを代表する。ポリ（ε−カプロラクトン）は、生理学的条件下で加水分解により分解され得、そして非毒性かつ組織適合性である、脂肪族ポリエステルである。ＰＣＬの分解は、広範に調査されたポリマーならびに乳酸およびグリコール酸のコポリマーの分解より著しく遅く、従って、長期の管周囲薬物送達系の設計に適する。パクリタキセルの最初の急速、すなわちバースト相は、（ミクロスフェア表面に密接した）ミクロスフェアの外面領域からの薬物の拡散放出によるものであると考えられる。放出プロフィールの第２の（遅い）相におけるパクリタキセルの放出は、ＰＣＬの分解または侵食によるようではない。なぜなら、研究は、インビトロ条件下で水中で、７．５週期間にわたってＰＣＬの有意な重量喪失または表面侵食がないことを示したからである。パクリタキセル放出の遅い相は、恐らく、ポリマーマトリックス内の液で満たされた孔内での薬物の溶解および孔を通した拡散によるものである。より高いパクリタキセル充填でのより大きな放出速度は、恐らく、ポリマーマトリックス内のより広範な孔ネットワークの結果である。
【０２０１】
５％充填を有するパクリタキセルミクロスフェアは、ＣＡＭ上に置かれた場合に血管新生の広範な阻害を生じるのに十分な薬物を放出することが示された。血管増殖の阻害は、図１１Ｃに示されるような無脈管ゾーンをもたらした。
【０２０２】
実施例７
治療剤を充填されたエチレンビニルアセテートおよび界面活性剤からなる管周辺ポリマー性フィルム
２つの型のフィルムを、本実施例で調べる：パクリタキセルで充填された純粋なＥＶＡフィルムおよびパクリタキセルで充填されたＥＶＡ／界面活性剤混和フィルム。
【０２０３】
調べられる界面活性剤は、２つの疎水性界面活性剤（スパン（Ｓｐａｎ）８０およびプルロニックＬ１０１）ならびに１つの親水性界面活性剤（プルロニックＦ１２７）である。プルロニック界面活性剤自体はポリマーであり、それらが種々の薬物送達特性を最適化するためにＥＶＡと混和物され得るので魅力的な特性である。スパン８０は、いくつかの様式においてポリマー性マトリックスに分散され、そして混和物を形成しない、より小さな分子である。
【０２０４】
界面活性剤は、パクリタキセルのフィルムからの放出速度を調節し、そしてフィルムの特定の物理的パラメーターを最適化するのに有用である。薬物放出速度が制御され得ることを示す界面活性剤混和フィルムの１つの局面は、化合物が水中で膨張する速度および程度を変える能力である。水のポリマー−薬物マトリックスへの拡散は、キャリアからの薬物の放出に重要である。図１２Ｃおよび１２Ｄは、混和物中の界面活性剤レベルが変化するにつれてのフィルムの膨張度を示す。純粋なＥＶＡフィルムは、２ヶ月を超えても任意の有意な程度で膨張しない。しかし、ＥＶＡに添加される界面活性剤のレベルを増大させることにより、化合物の膨張度を増大させることが可能になり、そして親水性を増大させることにより、膨張もまた増大され得る。
【０２０５】
これらのフィルムでの実験結果を、図１２Ａ〜Ｅに以下に示す。簡単には、図１２Ａは、純粋なＥＶＡフィルムからの経時のパクリタキセル放出（ｍｇ）を示す。図１２Ｂは、同じフィルムに残存する薬物の割合を示す。これらの２つの図から示されるように、パクリタキセル充填が増大する（すなわちパクリタキセルの重量での割合が増大する）につれて薬物放出速度は増大し、これは期待された濃度依存性を示す。パクリタキセル充填が増大するにつれて、フィルムに残存するパクリタキセルパーセントもまた増大し、これはより高い充填が長期の放出処方物により魅力的であり得ることを示す。
【０２０６】
フィルムの物理的な強度および弾力性を図１２Ｅにおいて評価する。簡単には、図１２Ｅは、純粋なＥＶＡおよびＥＶＡ−界面活性剤混和フィルムの圧力／ひずみ曲線を示す。この粗い圧力の測定は、フィルムの弾力性がプルロニックＦ１２７の添加と共に増大し、そして引っ張り強さ（破壊に対する圧力）がプルロニックＦ１２７の添加と共に濃度依存性様式で増大することを証明する。弾力性および強度は、化合物の恒久的な変形を引き起こすことなく特定の管周辺臨床的適用のために操作され得るフィルムの設計において重要な考察である。
【０２０７】
上記のデータは、薬物放出速度を制御し、そしてベシクルの物理的特徴を変える、特定の界面活性剤添加剤の能力を証明する。
【０２０８】
実施例８
ペーストからの治療剤の制御送達の処方物を開発するための、メトキシポリエチレングリコール３５０（ＭＥＰＥＧ）のポリ（Ｅ−カプロラクトン）への取り込み
これらの実験で利用された試薬および器具は、メトキシポリエチレングリコール３５０（「ＭｅＰＥＧ」−Ｕｎｉｏｎ  Ｃａｒｂｉｄｅ，  Ｄａｎｂｕｒｙ，  ＣＴ）を含む。ＭｅＰＥＧは室温で液体であり、そして１０℃〜−５℃の凝固点を有する。
【０２０９】
Ａ．ＭｅＰＥＧ／ＰＣＬパクリタキセル含有ペーストの調製
ＭｅＰＥＧ／ＰＣＬペーストを、最初にある量のパクリタキセルをＭｅＰＥＧに溶解し、次いでこれを融解ＰＣＬに取り込ませることにより調製する。この方法を用いる１つの利点は、ＤＣＭを必要としないことである。
【０２１０】
Ｂ．融点の分析
ＰＣＬ／ＭｅＰＥＧポリマー混和物の融点を、１分あたり２．５℃の加熱速度で３０℃〜７０℃の示差走査型熱量測定により測定し得る。この実験の結果を図１３Ａおよび１３Ｂに示す。簡単には、図１３Ａに示されるように、ポリマー混和物の融点（熱分析により測定される）は、濃度依存性様式でＭｅＰＥＧにより減少される。ＭｅＰＥＧ濃度の関数としてのポリマー混和物の融点を図１３Ａに示す。この低い融点はまた、図１３Ｂに示されるようにポリマー混和物が融解から凝固する時間の増大に言い換える。ＭｅＰＥＧ：ＰＣＬの３０：７０混和物は、ＰＣＬ単独より融解液体から凝固するのに２倍を超えてかかる。
【０２１１】
Ｃ．  脆性の測定
ＭｅＰＥＧのＰＣＬへの取り込みは、ＰＣＬ単独と比較して砕けやすくない固体を生成するようである。これを定量する「粗い」方法として、秤量した針を、同じ高さからＰＥＧ中に０％〜３０％ＭｅＰＥＧを含むポリマー混和物に落とし、次いで針が固体に貫通する距離を測定する。得られたグラフを図１３Ｃに示す。４回の測定の平均＋／−１Ｓ．Ｄ．として点を与える。
【０２１２】
比較の目的のために、パラフィンワックスのサンプルもまた試験し、そして針は、７．２５ｍｍ＋／−０．３ｍｍの距離でこれに貫通した。
【０２１３】
Ｄ．パクリタキセル放出の測定
ポリマー（０％、５％、１０％、または２０％ＭｅＰＥＧを含むＰＣＬ）のペレットを、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）中で３７℃でインキュベートし、そしてポリマー重量の％変化をその時間にわたって測定する。図１３Ｄで理解され得るように、喪失した重量は、混和物に最初に存在するＭｅＰＥＧの濃度と共に増大する。この重量喪失は、ポリマーマトリックスからインキュベート液体へのＭｅＰＥＧの放出によるものであるようである。これは、パクリタキセルが容易にＭｅＰＥＧ／ＰＣＬ混和物から放出されることを示す。なぜならパクリタキセルは、ＰＣＬへの取り込み前に最初にＭｅＰＥＧに溶解されるからである。
【０２１４】
Ｅ．パクリタキセル放出に対する種々のＭｅＰＥＧ量の効果
ＰＣＬ中に０．８％〜２０％のＭｅＰＥＧを含む熱ペーストを作製する。これらに１％のパクリタキセルを充填する。３７℃でのＰＢＳ緩衝液中の１０ｍｇのペレットからのその時間にわたるパクリタキセル放出を、ＨＰＬＣによりモニターする。図１３Ｅに示されるように、処方物中のＭｅＰＥＧ量は、放出されるパクリタキセル量に影響しない。
Ｆ．２０％  ＭｅＰＥＧ／ＰＣＬ混和物から放出される総パクリタキセル量に対する種々のパクリタキセル量の効果
ＰＣＬ中に２０％のＭｅＰＥＧを含む熱ペーストを作製し、そして０．２％〜１０％のパクリタキセルを充填する。その時間にわたるパクリタキセルの放出を上記のように測定する。図１３Ｆに示されるように、その時間にわたって放出されるパクリタキセル量は、パクリタキセル充填の増大と共に増大する。しかし、放出された総パクリタキセルパーセントとしてプロットした場合、順番は逆転する（図１３Ｇ）。これは、ペーストに残る残存パクリタキセルについての情報を与え、そしてパクリタキセルが２０％ＭｅＰＥＧ熱ペーストから放出され得る期間の予測を可能にする。
【０２１５】
Ｇ．種々のＭｅＰＥＧ／ＰＣＬ混和物の強度分析
ＣＴ−４０機械的強度試験器を使用して、直径０．８８ｃｍおよび平均厚０．５６０ｃｍの固体ポリマー「錠剤」の強度を測定する。ポリマー錠剤は、ＰＣＬ中の０％、５％、１０％、または２０％濃度のＭｅＰＥＧ混和物である。
【０２１６】
この試験の結果を図１３Ｈに示し、ここで引っ張り強さおよび破損までの時間の両方を、混和物中の％ＭｅＰＥＧの関数としてプロットする。単一の可変性ＡＮＯＶＡは、各群での錠剤厚が異ならないことを示した。図１３Ｈから示され得るように、ＭｅＰＥＧのＰＣＬへの添加は、得られた固体の硬度を減少させた。
【０２１７】
Ｈ．パクリタキセル放出に対するγ線照射の効果
２０％パクリタキセルで充填されたＰＣＬ：ＭｅＰＥＧ（８０：２０）ペーストをγ線照射し、そしてその時間にわたるパクリタキセル放出について分析した。結果を図３０に示す。
【０２１８】
要約すると、上記の実験に基づいて、ＭｅＰＥＧの添加はポリマーを砕けやすくさせずかつよりワックス様にし、融点を低減させ、そしてポリマーの凝固時間を増大させることが結論づけられ得る。全てのこれらの因子は、ペーストの適用特性を改善する。低濃度（２０％）のＭｅＰＥＧは、ＰＣＬからのパクリタキセル放出に対して効果を有さない。γ線は、パクリタキセル放出に対してほとんど効果を有さないようである。
【０２１９】
実施例９
低分子量ポリ（Ｄ，Ｌ乳酸）を用いた熱ペーストからの治療剤放出の変化
上記のように、所望の治療効果に依存して、素早い放出または遅い放出のいずれかのポリマー性キャリアが所望され得る。例えば、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）およびＰＣＬとポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）との混合物は、数ヶ月の期間にわたってパクリタキセルを放出する組成物を生成する。特に、ポリマー中のパクリタキセルの拡散は、その大きな分子サイズおよび極端な疎水性により非常に遅い。
【０２２０】
他方では、低分子量ポリ（ＤＬ−乳酸）（ＰＤＬＬＡ）は、その最初の分子量に依存して、１日から２、３ヶ月の範囲で速い分解を与える。この場合、パクリタキセルの放出は、ポリマー分解により支配される。低分子量ＰＤＬＬＡの別の特性は、その低い融解温度（すなわち、４０℃〜６０℃）であり、これはそれを熱ペーストの作製に適した物質にする。以下に、より詳細に記載されるように、いくつかの異なる方法が、ポリマー分解速度を制御するために利用され得る（例えば、ＰＤＬＬＡの分子量を変化させることによる方法、および／またはそれと高分子量ＰＣＬ、ＰＤＬＬＡ、またはポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）とを混合することによる方法を含む）。
【０２２１】
Ａ．実験材料
Ｄ，Ｌ−乳酸を、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯから購入した。ＰＣＬ（分子量１０〜２０，０００）を、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，  ＰＡから得た。高分子量ＰＤＬＬＡ（固有粘度０．６０ｄｌ／ｇ）およびＰＬＧＡ（５０：５０組成物、粘度０．５８ｄｌ／ｇ）は、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ由来であった。
【０２２２】
Ｂ．低分子量ＰＤＬＬＡの合成
低分子量ＰＤＬＬＡを、重縮合によりＤＬ−乳酸から合成した。簡単には、ＤＬ−乳酸を、窒素パージと共に２００℃でガラスビーカー内で加熱し、そして所望の時間の間磁気攪拌した。粘度は、分子量の増大により重合の間に増大した。３つのバッチを、異なる重合時間（すなわち、４０分（分子量８００）、１２０分、１６０分）で得た。
【０２２３】
Ｃ．パクリタキセル熱ペーストの処方
パクリタキセルを、約６０℃の温度で手で混合することにより、２０％で、以下の物質に充填した。
【０２２４】
１．重合時間４０分での低分子量ＰＤＬＬＡ。
【０２２５】
２．重合時間１２０分での低分子量ＰＤＬＬＡ。
【０２２６】
３．重合時間１６０分での低分子量ＰＤＬＬＡ。
【０２２７】
４．高分子量ＰＤＬＬＡおよび低分子量ＰＤＬＬＡの４０分の５０：５０混合。
【０２２８】
５．高分子量ＰＬＧＡおよび低分子量ＰＤＬＬＡの４０分の５０：５０混合。
【０２２９】
６．１０：９０、２０：８０、４０：６０、６０：４０、および２０：８０のＰＣＬ：ＰＤＬＬＡでの高分子量ＰＣＬおよび低分子量ＰＤＬＬＡの４０分の混合。
高分子量ＰＤＬＬＡまたはＰＬＧＡと低分子量ＰＤＬＬＡとの混合物を、アセトンに物質を溶解し、その後乾燥することにより得た。
【０２３０】
Ｄ．放出研究
３７℃でのＰＢＳアルブミン緩衝液へのパクリタキセルの放出を、種々の時間でＨＰＬＣを用いて上記のように測定した。
【０２３１】
Ｅ．結果
低分子量ＰＤＬＬＡ４０分は、淡黄色の柔らかい物質であった。この色は、恐らく重縮合の間の酸化によるものである。低分子量ＰＤＬＬＡ１２０分（黄色）および１６０分（褐色）は、室温で砕けやすい固体であった。それらは全て６０℃で融解物になる。５０：５０高分子量ＰＤＬＬＡまたはＰＬＧＡと低分子量ＰＤＬＬＡとの４０分の混合もまた約６０℃で融解した。
【０２３２】
放出の間、低分子量ＰＤＬＬＡ４０分および１２０分は１日以内に断片に粉砕し、他の物質はこの執筆まで（３日間）インタクトであった。
【０２３３】
処方物２〜５からのパクリタキセルの放出を図１４に示した。低分子量ＰＤＬＬＡ４０分および１２０分は、ペーストの粉砕のため最も速い放出を与えた。この放出は、恐らく限定された可溶性であった。低分子量ＰＤＬＬＡ１６０分もまた最も速い放出を与え、インタクトなペレットを維持した。例えば、１０％の充填パクリタキセルは、１日以内に放出された。高分子量ＰＤＬＬＡまたはＰＬＧＡと低分子量ＰＤＬＬＡとの４０分の５０：５０混合物は、１日以内でより遅い（すなわち、３．４％および２．２％）放出であった。
【０２３４】
上記では特に示されないが、広範な種々の他のポリマー性キャリアが作製され得る。これらは、例えば、（１）低分子量（５００〜１０，０００）ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）、ポリ（Ｌ−乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（６−ヒドロキシカプロン酸）、ポリ（５−ヒドロキシ吉草酸）、ポリ（４−ヒドロキシ酪酸）、およびそれらのコポリマー；（２）上記（＃１）の混和物；（３）上記（＃１）と高分子量ポリ（ＤＬ−乳酸）、ポリ（Ｌ−乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（６−ヒドロキシカプロン酸）、ポリ（５−ヒドロキシ吉草酸）、ポリ（４−ヒドロキシ酪酸）、およびそれらのコポリマーとの混和物；ならびに（４）ポリ（エチレングリコール）およびポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）を含むプルロニック、ポリ（Ｌ−乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（６−ヒドロキシカプロン酸）、ポリ（５−ヒドロキシ吉草酸）、ポリ（４−ヒドロキシ酪酸）、およびそれらのコポリマーとのコポリマーを含む。
【０２３５】
実施例１０
水溶性添加剤およびパクリタキセルを含むポリマー性組成物の調製
Ａ．ポリマー性組成物の調製
パクリタキセル／添加剤の同時沈澱物の微粒子を調製し、そしてその後ＰＣＬに添加して、ペーストを形成した。簡単には、パクリタキセル（１００ｍｇ）を、０．５ｍｌのエタノール（９５％）に溶解し、そして予め溶解して添加剤（１００ｍｇ）と混合するか、または１．０ｍｌの蒸留水に分散させた。混合物を、平滑なペーストを形成するまで摩砕した。ペーストをペトリ皿上に広げ、そして３７℃で一晩風乾した。乾燥した塊を乳鉢および乳棒を用いて砕き、そしてメッシュ＃１４０（１０６μｍ）ふるい（Ｅｎｄｅｃｏｔｔｓ  Ｔｅｓｔ  Ｓｉｅｖｅｓ  Ｌｔｄ，  Ｌｏｎｄｏｎ，  Ｅｎｇｌａｎｄ）に通して通過させた。次いで、微粒子（４０％）を、パクリタキセルの２０％充填に対応する融解ＰＣＬ（６０％）に６５℃で取り込ませた。本研究で使用した添加剤は、ゼラチン（Ｂ型、１００ブルーム（ｂｌｏｏｍ），  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、メチルセルロース（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｄｒｕｇ  Ｈｏｕｓｅｓ）、デキストランＴ５００（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，  Ｓｗｅｄｅｎ）、アルブミン（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、および塩化ナトリウム（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）であった。パクリタキセルおよびゼラチンまたはアルブミンの微粒子を上記のように調製したが、メッシュ＃６０（２７０μｍ）ふるい（Ｅｎｄｅｃｏｔｔｓ  Ｔｅｓｔ  Ｓｉｅｖｅｓ  Ｌｔｄ，  Ｌｏｎｄｏｎ，  Ｅｎｇｌａｎｄ）に通して通過させて、ペーストからのパクリタキセルの放出に対する微粒子サイズの効果を評価した。ペーストもまた、ＰＣＬ中に１０％、２０％、または３０％ゼラチンおよび２０％パクリタキセルを含むように調製して、薬物放出に対する添加剤の比率の効果を研究した。他に特定されない限り、ＰＣＬ中に分散された２０％パクリタキセルを含むペーストを、放出速度研究のためのコントロールとして働くように調製した。
【０２３６】
Ｂ．薬物放出研究
パクリタキセル充填ペーストの約２．５ｍｇのペレットを、ねじぶた管内で５０ｍｌの１０ｍＭリン酸緩衝化生理食塩水、ｐＨ７．４（ＰＢＳ）に懸濁した。管を回転させながら３７℃で転がし、そして所定の時間間隔で４９．５ｍｌの上清を除去し、０．４５μｍ膜フィルターに通して濾過し、そしてパクリタキセル分析のために保持した。等量のＰＢＳを各管に置換して、研究の間中の吸い込み条件を維持した。分析のために、濾過物を３×１ｍｌのジクロロメタン（ＤＣＭ）で抽出し、ＤＣＭ抽出物を窒素の流れ下で乾燥するまで蒸発させ、１ｍｌのアセトニトリルに再溶解した。１ｍｌ分−１の流速での水：メタノール：アセトニトリル（３７：５：５８：）の移動相（Ｂｅｃｋｍａｎ無勾配ポンプ）、Ｃ８逆相カラム（Ｂｅｃｋｍａｎ）、および２３２ｎｍでのＵＶ検出（Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＳＰＤ  Ａ）を用いてＨＰＬＣにより分析した。
【０２３７】
Ｃ．膨張研究
メッシュサイズ＃１４０（そして、ゼラチンのみについては＃６０）パクリタキセル−添加剤微粒子を用いて調製されたパクリタキセル／添加剤／ＰＣＬペーストを押し出して、シリンダーを形成し、断片に切断し、秤量し、そして各断片の直径および長さをマイクロメーター（Ｍｉｔｕｔｏｙｏ  Ｄｉｇｉｍａｔｉｃ）を用いて測定した。断片を３７℃で蒸留水（１０ｍｌ）に懸濁し、そして予め決定された間隔で水を捨て、そしてシリンダー断片の直径および長さを測定し、そしてサンプルを秤量した。サンプルの形態（水中の懸濁の前後）を、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｆ−２３００）を用いて調べた。サンプルを、Ｈｕｍｍｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｔｅｃｈｎｉｃｓ，  ＵＳＡ）を用いて６０％Ａｕおよび４０％Ｐｄ（厚さ１０〜１５ｍｍ）でコートした。
【０２３８】
Ｄ．ニワトリ胚尿漿膜（ＣＡＭ）研究
受精家禽胚を、殻なしの培養前に４日間インキュベートした。卵の内容物を、９０％相対湿度および３％ＣＯ２でインキュベートし、そしてインキュベーションの６日目に、６％パクリタキセル、２４％ゼラチン、および７０％ＰＣＬを含むパクリタキセル充填ペーストまたはコントロール（ＰＣＬ中の３０％ゼラチン）ペーストの１ｍｇ断片を、ＣＡＭ表面上に直接置いた。２日間の暴露後、脈管構造を、ビデオカメラに接続した実体顕微鏡を用いて調べ；次いで、映像信号をコンピューター上にディスプレイし、そして映像を印刷した。
【０２３９】
Ｅ．インビボ抗腫瘍活性
２０％パクリタキセル、２０％ゼラチン、および６０％ＰＣＬを含む、上記のように（パクリタキセル−ゼラチン微粒子のメッシュサイズ１４０画分を用いて）調製されたペーストを、８×１ｍｌシリンジ（ＢＤインシュリンシリンジ、１／２ｃｃ）に満たした。各シリンジは１５０ｍｇのペースト（３０ｍｇのパクリタキセルと等価）を含む。１８〜２０ｇの重さの１０週齢のＤＢＡ／２ｊ雌性マウス（１６）を到着後４日間順化させ、そして各マウスに、１日目にリン酸緩衝化生理食塩水１００μｌ中のＭＤＡＹ−Ｄ２腫瘍細胞（１０×１０６ｍｌ−１）を後側腹部において注射した。６日目に、マウスを８匹の２つのグループに分け、腫瘍部位を麻酔下で開き、そして約６０℃で予め加熱された１５０ｍｇのペーストを腫瘍部位に押し出し、そして傷を閉じた。１つのグループに、パクリタキセル充填ペーストを移植し、そしてもう１つのグループにゼラチンおよびＰＣＬのみを含むコントロールペーストを移植した。１６日目に、マウスを屠殺し、そしてマウスおよび摘出した腫瘍の重量を測定した。
【０２４０】
Ｆ．結果および議論
同時沈澱したパクリタキセルおよびゼラチンまたはアルブミンの微粒子は、硬くかつ砕けやすく、そして容易にＰＣＬに取り込まれたが、一方他の添加剤は、ペーストの調製間に粉砕する傾向を示す軟らかい粒子を生成した。
【０２４１】
図１５は、ＰＣＬ中の２０％パクリタキセルまたは２０％パクリタキセル、２０％添加剤、および６０％ＰＣＬを含むペーストからのパクリタキセル放出の時間経過を示す。添加剤を伴うか、または伴わないＰＣＬからのパクリタキセルの放出は２相性放出パターンに従い；最初に、より速い薬物放出速度、その後薬物のより遅い薬物放出がある。ペーストからのパクリタキセルのより速い放出速度の最初の期間は、表面上に位置するパクリタキセルの溶解またはペーストの外面領域からのパクリタキセルの拡散によるものであると考えられた。後のより遅い相の放出プロフィールは、溶媒に接触する薬物粒子の有効表面領域の減少、ポリマーマトリックスへの溶媒の遅い進入、またはポリマーマトリックスを通る薬物の平均拡散通路の増大に起因し得る。
【０２４２】
両方の相のパクリタキセルのＰＣＬからの放出プロフィールは、親水性添加剤とゼラチン、アルブミン、およびメチルセルロースとの存在下で増大し、これは薬物放出速度の最も大きな増大を生じた（図１５）。より小さなパクリタキセル−添加剤粒子（１０６μｍ）を使用した場合と比較して、より大きなパクリタキセル−添加剤粒子（２７０μｍ）を使用してペーストを調製した場合に、パクリタキセルのポリマーマトリックスからの放出はさらに増大した（図１６）。添加剤（例えば、ゼラチン）量の増大は、薬物放出において対応する増大を生じた（図１６）。図１７Ａは、２０％パクリタキセル、２０％添加剤、および６０％ＰＣＬを含むペーストの膨張作用を示す。膨張速度は、ゼラチン＞アルブミン＞メチルセルロース＞デキストラン＞塩化ナトリウムの順に従う。さらに、膨張速度は、より高い比率の水溶性ポリマーをペーストに添加した場合に増大した（図１７Ｂ）。ゼラチンまたはアルブミンを含むペーストは最初の８〜１０時間以内に急速に膨張し、そしてその後、サンプルの容量変化が４０％を超えた場合に膨張速度は減少した。より大きな（２７０μｍ）パクリタキセル−ゼラチン粒子を用いて調製されたペーストは、より小さな（１０６μｍ）パクリタキセル−ゼラチン粒子を用いて調製されたペーストより速い速度で膨張した。全てのペーストは、容量増加が５０％を超えた場合に分解した。ＳＥＭ研究は、ペースト膨張がマトリックスの熱分解に付随したことを示した（図１８）。高倍率では（図１８Ｃおよび１８Ｄ）、ペーストの表面上に、そして膨張後のゼラチンに密接に結合した針または棒型のパクリタキセル結晶の証拠があった（図１８Ｃおよび１８Ｄ）。
【０２４３】
別々の粒子として疎水性ポリマー内に埋め込まれる浸透性または膨張性の親水性薬剤は、マトリックスの侵食、ポリマーマトリックスを通る薬物の拡散、および／または水溶性添加剤の溶解によるマトリックス内に作られた孔を通る対流的な流れの組み合せにより薬物放出をもたらす。疎水性ポリマー内に分散された浸透性薬剤および膨張性ポリマーは、水を吸収し（水を運ぶ（ｗｉｃｋｉｎｇ）薬剤として働く）、溶解するか、または膨張しそして隣接粒子間の隔壁（ポリマー層）を裂き得る膨圧を出す。これは、マイクロチャンネル（ｍｉｃｒｏｃｈａｎｎｅｌ）を作り、従って、拡散または対流的な流れによる薬物分子の周囲の媒体への漏れを容易にする。ペーストマトリックスの膨張および熱分解（図１８）は、恐らく、マトリックスの内部中にマイクロチャンネルの形成をもたらす。ポリマー膨張の異なる速度および程度（図１７）は、観察されたパクリタキセル放出速度の差異を説明し得る（図１５および１６）。
【０２４４】
図１９は、コントロールゼラチン−ＰＣＬペースト（図１９Ａ）および２０％パクリタキセル−ゼラチン−ＰＣＬペースト（図１９Ｂ）で処置されたＣＡＭを示す。ＣＡＭ表面上のペーストを図の矢印で示す。コントロールペーストを用いたＣＡＭは、正常な毛細血管ネットワーク構造を示す。パクリタキセル−ＰＣＬペーストで処置されたＣＡＭは、一貫して、脈管後退および毛細血管ネットワークが全くないゾーンを示した。ペースト内の添加剤の取り込みは、無脈管分布ゾーンの直径を非常に増大させた（図１９）。
【０２４５】
インビボ研究の結果を図２０に示す。簡単には、確立しそして触診可能な腫瘍を有するマウスへのパクリタキセル−ゼラチン−ＰＣＬペーストの腫瘍周囲注射は、この調製物がコントロールと比較して腫瘍塊において６３％の平均低減を生じることを示した。さらに、処置後のマウスの重量に対して有意な効果はなかった。パクリタキセル−ＰＣＬペースト（添加剤なし）は、腫瘍塊において任意の有意な低減を生じなかった。
【０２４６】
この研究は、ＰＣＬからのパクリタキセルのインビトロ放出が、パクリタキセル／親水性ポリマー微粒子のＰＣＬマトリックスへの取り込みにより増大され得ることを示した。マウスの皮下腫瘍の処置における処方物効率を評価するインビボ研究はまた、パクリタキセル／ゼラチン／ＰＣＬペーストが腫瘍塊を有意に低減することを示した。水溶性薬剤の型、微粒子サイズ、および添加剤の比率のような因子は、薬物の放出特徴に影響することが示された。
【０２４７】
悪性過増殖により閉塞される管の外膜への化学療法ペーストの管周囲注射は、局所的腫瘍増殖を低減し得、そして侵襲性外科的手順を伴わずに閉塞徴候を軽減し得た。
【０２４８】
実施例１１
ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡおよび低分子量ポリ（Ｄ，Ｌ，乳酸）を用いた熱ペーストからのパクリタキセル放出の改変
Ａ．ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡおよび低分子量ＰＤＬＬＡの調製
ＤＬ−ラクチドをＡｌｄｒｉｃｈから購入し、分子量８，０００を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、オクタン酸スズ（ｓｔａｎｎｏｕｓ  ｏｃｔｏａｔｅ）およびＤＬ−乳酸をＳｉｇｍａから得た。分子量２０，０００を有するポリ−ε−カプロラクトン（ＰＣＬ）を、Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，  ＡＬ）から得た。パクリタキセルをＨａｕｓｅｒ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｂｏｕｌｄｅｒ，  ＣＯ）から購入した。狭い分子量分布を有するポリスチレン標準を、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，  ＰＡ）から購入した。アセトニトリルおよび塩化メチレンはＨＰＬＣグレードであった（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。
【０２４９】
ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡの３ブロック（ｔｒｉｂｌｏｃｋ）コポリマーを、開環重合により合成した。異なる比のＤＬ−ラクチドおよびＰＥＧのモノマーを混合し、そして０．５重量％オクタン酸スズを添加した。重合を１５０℃で３．５時間行った。低分子量ＰＤＬＬＡを、ＤＬ−乳酸の重縮合により合成した。反応を穏やかな窒素パージの条件下でガラスフラスコ内で行い、機械的に攪拌し、そして１８０℃で１．５時間加熱した。カルボキシル酸末端基を滴定することにより測定されたＰＤＬＬＡ分子量は約８００であった。
【０２５０】
Ｂ．ペースト処方物の製造
２０％または３０％の充填でのパクリタキセルを、約６０℃で融解されたＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡコポリマーまたはＰＤＬＬＡ：ＰＣＬ  ９０：１０、８０：２０、および７０：３０の混和物のいずれかに完全に混合した。パクリタキセル充填ペーストを１ｍｌシリンジ内で秤量し、そして４℃で保存した。
【０２５１】
Ｃ．ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡおよびペースト混和物の特徴付け
ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡの分子量および分布を、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−１０ＡＤ  ＨＰＬＣポンプおよび１０４Å  Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋｅｒｄ  ＰｌｇｅｌカラムにつなげたＳｈｉｍａｄｚｕ  ＲＩＤ−６Ａ屈折率検出器（Ｋｙｏｔｏ，  Ｊａｐａｎ）を用いてＧＰＣにより室温で決定した。移動相は、流速１ｍｌ／分でクロロホルムであった。サンプルの注入容量は、０．２％（ｗ／ｖ）のポリマー濃度で２０μｌであった。ポリマー分子量を、ポリスチレン標準と比較して決定した。２５℃でのＣＨＣｌ３中のＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ固有粘度を、Ｃａｎｎｏｎ−Ｆｅｎｓｋｅ粘度計を用いて測定した。
【０２５２】
コポリマーの熱分析を、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ２０００コントローラーおよびＤｕＰｏｎｔ  ９１０Ｓ  ＤＳＣ（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ，  Ｄｅｌａｗａｒｅ）を用いて示差走査型熱量測定（ＤＳＣ）により行った。加熱速度は１０℃／分であり、そしてコポリマーおよびパクリタキセル／コポリマーマトリックスサンプルを、覆いのない端を曲げたアルミニウム試薬皿で秤量した（３〜５ｍｇ）。
【０２５３】
１Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）を使用して、ポリマーの化学組成を決定した。パクリタキセル充填ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ の１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを、２００ＭＨｚでＮＭＲ装置（Ｂｒｕｋｅｒ，  ＡＣ−２００Ｅ）を用いてＣＤＣｌ３中で得た。ポリマー濃度は１〜２％であった。
【０２５４】
パクリタキセル／ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡペーストの形態を、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｆ−２３００）を用いて調べた。サンプルを、Ｈｕｍｍｅｒ装置（Ｔｅｃｈｎｉｃｓ，  ＵＳＡ）を用いて６０％Ａｕおよび４０％Ｐｄ（厚さ１０〜１５ｎｍ）でコートした。
【０２５５】
Ｄ．パクリタキセルのインビトロ放出
２０％パクリタキセル充填ＰＤＬＬＡ：ＰＣＬの小さなペレット（約２ｍｇ）または２０％パクリタキセル充填ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡペーストのシリンダー（針のないシリンジを通した融解ペーストの押し出しにより作製された）を、１０ｍｌの０．４ｇ／Ｌアルブミンを含むリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）を含むキャップした１４ｍｌガラス管に入れた。管を、穏やかに回転混合しながら３７℃でインキュベートした。上清をパクリタキセル分析のために定期的に回収し、そして新鮮なＰＢＳ／アルブミン緩衝液で置換した。上清（１０ｍｌ）を、１ｍｌの塩化メチレンで抽出した。水相をデカンテーションし、そして塩化メチレン相を６０℃で窒素の流れ下で乾燥した。乾燥残渣を、４０：６０水：アセトニトリル混合物に再構成し、そして１０，０００ｇで約１分間遠心分離した。次いで、上清中のパクリタキセル量をＨＰＬＣにより分析した。ＨＰＬＣ分析を、１１０ＡポンプおよびＣ−８超球形（ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ）カラム（Ｂｅｃｋｍａｎ）、ならびに２３２ｎｍに設定されたＳＰＤ−６Ａ  ＵＶ検出器、ＳＩＬ−９ＡオートインジェクターおよびＣ−Ｒ３Ａインテグレーター（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）を用いて行った。注入容量は２０μｌであり、そして流速は１ｍｌ／分であった。移動相は５８％アセトニトリル、５％メタノール、および３７％蒸留水であった。
【０２５６】
Ｅ．インビボ動物研究
１０週齢のＤＢＡ／２ｊ雌性マウスを到着後３〜４日順化させた。各マウスに、１日目に１００μｌ  ＰＢＳ中の１０×１０５個ＭＤＡＹ−Ｄ２腫瘍細胞を後側腹部において皮下に注射した。６日目に、マウスを２つのグループにランダムに分けた。グループ１にペーストのみ（コントロール）を移植し、そしてグループ２にパクリタキセル充填ペーストを移植した。腫瘍近くの皮下ポケットを外科的に麻酔下で形成し、そして約１００ｍｇの融解ペースト（５０℃〜６０℃に暖めた）をそのポケットに置き、そして傷を閉じた。１６日目に、マウスを屠殺し、そして腫瘍を取り出し、そして重量を測定した。１６日目に、倫理的制限内の容易に測定可能なサイズに増殖した腫瘍を考慮するために選択した。
【０２５７】
Ｆ．結果および議論
ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡの分子量および分子量分布を、ポリスチレン標準と比較してＧＰＣ（図２１）により測定した。２５℃でのＣＨＣｌ３におけるコポリマーの固有粘度を、Ｃａｎｏｎ−Ｆｅｎｓｋｅ粘度計を用いて決定した。分子量および固有粘度は、ＰＥＧ含有量の増大と共に減少した。１０％〜４０％のＰＥＧ含有量を有するＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡの多分散は、２．４〜３．５であった。しかし、７０％ＰＥＧを有するコポリマーは、１．２１の多分散の狭い分子量分布を有した。これは、高いＰＥＧ含有量がポリマー分子量の広い分布をもたらすトランスエステル化のような副反応の機会を低減するからであり得る。あるいは、疎水性−親水性ブロックコポリマーのコイル構造は、人工的な多分散値をもたらし得る。
【０２５８】
純粋なＰＥＧおよびＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡコポリマーのＤＳＣスキャンを図２１および２２に与える。ＰＥＧおよび７０％〜４０％のＰＥＧ含有量を有するＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡは、コポリマーのＰＥＧ含有量が減少するにつれて、エンタルピーおよび温度の減少を伴う吸熱ピークを示した。４０％および７０％ＰＥＧのコポリマーにおける吸熱ピークは、恐らく、ＰＥＧ領域の融解によるものであり、これは相分離の出現を示した。純粋なＰＥＧは急な溶解ピークを有したが、一方４０％および７０％の両方のＰＥＧコポリマーは、７０％ＰＥＧでのはっきりした肩と共に広いピークを示した。広い融解ピークは、ＰＤＬＬＡのＰＥＧの結晶化への干渉から生じ得た。７０％ＰＥＧの場合での肩は、ＰＤＬＬＡ領域のガラス転移を示し得る。熱変化は、１０℃〜２５０℃の温度範囲において１０％、２０％、および３０％のＰＥＧ含有量を有するコポリマーでは生じなかった。これは、有意な結晶化（従って、相分離であり得る）が生じなかったことを示す。
【０２５９】
パクリタキセルを含まないか、または２０％パクリタキセルを含むＰＤＬＬＡ：ＰＣＬ（７０：３０、８０：２０、９０：１０）混和物のＤＳＣサーモグラフは、ＰＣＬ融解から生じる、約６０℃での吸熱ピークを示した。ＰＤＬＬＡおよびその低分子量（８００）の不定形性質のため、ＰＤＬＬＡの融解およびガラス転移は観察されなかった。パクリタキセルの再結晶化または融解による熱変化は観察されなかった。
【０２６０】
２０％および３０％のＰＥＧ含有量のＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡコポリマーを、以下の反応のためのペーストに最適な処方材料として選択した。１０％ＰＥＧのＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡは、約６０℃の温度で融解され得なかった。４０％および７０％ＰＥＧのコポリマーは６０℃で容易に溶解され、そして２０％および３０％ＰＥＧコポリマーは５０℃〜６０℃で粘性の液体になった。４０％および７０％ＰＥＧコポリマーの水中での膨張は非常に高く、水中のペーストの急速な分散をもたらした。
【０２６１】
ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡシリンダーからのパクリタキセルのインビトロ放出プロフィールを図２３に示す。４０％ＰＥＧシリンダーからの放出を測定する実験を、シリンダーが非常に高度の膨張（１日以内で約２００％の水の取り込み）を有し、そして２、３日で分解したので終結した。３０％ＰＥＧシリンダーから放出されたパクリタキセル画分は、７０日を超えて徐々に増加した。２０％ＰＥＧシリンダーから放出されたパクリタキセル画分は、３０日までにゆっくりと増大し、次いで突然増大し、続いてさらなる期間で徐々に増加した。有意な差異が、それぞれ個々のシリンダー（２０％ＰＥＧ含有量）がパクリタキセル放出の突然の変化を示す程度で存在した。突然の増大の前のパクリタキセルの放出画分は、同じシリンダー直径（１ｍｍ）で低ＰＥＧ含有量のコポリマーについて低かった。４０％および３０％ＰＥＧシリンダーは、２０％ＰＥＧシリンダーより非常に大きなパクリタキセル放出速度を示した。例えば、３０％ＰＥＧシリンダーは、２０％ＰＥＧシリンダーからの２％放出と比較して３０日で１７％のパクリタキセルを放出した。シリンダーの直径が小さいほど、より速い放出速度をもたらした。例えば、３０日で、０．６５ｍｍおよび１ｍｍ直径を有する３０％ＰＥＧシリンダーは、それぞれ、２６％および１７％のパクリタキセルを放出した（図２３）。
【０２６２】
上記の観察は、シリンダーからのパクリタキセルの放出機構により説明され得る。パクリタキセルは、光学顕微鏡により観察されたように結晶としてポリマー内に分散された。結晶は、１７０℃でコポリマーマトリックス内で溶解し始め、そして熱ステージ顕微鏡により観察されたように１８０℃で完全に溶解した。２０％パクリタキセル充填ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ（３０％ＰＥＧ）ペーストのＤＳＣサーモグラムは、パクリタキセルについて小さな再結晶化発熱（１６Ｊ／ｇ、１９０℃）および融解吸熱（６Ｊ／ｇ、２１２℃）（図２１）を明らかにした。これは、１８０℃の後に融解したコポリマーからのパクリタキセルの再結晶化を示す。この型の薬物／ポリマーマトリックスにおいて、パクリタキセルは、拡散および／またはポリマー侵食を介して放出され得た。
【０２６３】
拡散の制御された場合において、薬物は、ポリマー内の分子拡散によりおよび／または接続した薬物粒子により形成された開いたチャンネルを通って放出され得る。従って、２０％充填でパクリタキセルのいくつかの粒子は単離され、そしてパクリタキセルはコポリマー内での溶解、続いて拡散により放出され得る。パクリタキセルの他の粒子は、表面で接続するクラスターを形成し、そしてチャンネル拡散により放出され得る。両方の場合において、シリンダーの直径がより小さいほど、より短い拡散経路のためより速い薬物放出を与えた（図２３）。
【０２６４】
シリンダーの寸法変化および水の取り込みを放出間に記録した（図２４）。３０％ＰＥＧシリンダーの長さ、直径、湿重量の変化は、最大２日以内まで急速に増大し、約１５日間変化しないままであり、次いで徐々に減少した。シリンダーの最初の直径は、膨張作用に影響しなかった。２０％ＰＥＧのシリンダーについては、長さは１日で１０％まで減少し、そして平らになったが、一方直径および水の取り込みは徐々に経時的に増大した。コポリマー内のより多くのＰＥＧがより多くの水を取り込んで、パクリタキセルの拡散を容易にするので、より速い放出が観察された（図２３）。
【０２６５】
ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡペーストのコポリマー分子量分解をＧＰＣによりモニターした。２０％ＰＥＧのシリンダーについては、ピーク位置での溶出容量は時間と共に増大し、これは放出実験の経過間の低減したポリマー分子量を示す（図２５）。２相性分子量分布は６９日目に観察された。ポリマー分子量はまた、３０％ＰＥＧのシリンダー（１ｍｍおよび０．６５ｍｍ）について減少した。しかし、２相性分布は観察されなかった。
【０２６６】
ＮＭＲスペクトルは、３．６ｐｐｍでのＰＥＧピークならびに１．６５ｐｐｍおよび５．１ｐｐｍでのＰＤＬＬＡピークを明らかにした。コポリマーにおけるＰＤＬＬＡと比較したＰＥＧのピーク領域は、６９日後に有意に減少し（図２６）、これはＰＤＬＬＡからのその解離後のＰＥＧ溶解を示す。シリンダーの乾燥質量喪失もまた記録し（図２６）、そして３０％ＰＥＧ−０．６５ｍｍ＞３０％ＰＥＧ−１ｍｍ＞２０％ＰＥＧ−１ｍｍの順で減少する分解速度を示す。
【０２６７】
パクリタキセル放出前および放出間の乾燥したシリンダーの形態変化をＳＥＭを用いて観察した（図２７）。簡単には、放出前の固体パクリタキセル結晶および非孔性ポリマーマトリックスを示す（図２７Ａおよび２７Ｂ）。放出の６９日後に、パクリタキセル結晶は観察されず、そしてマトリックスはポリマー分解および水の取り込みにより多くの孔を含んだ（図２７Ｃおよび２７Ｄ）。
【０２６８】
３０％ＰＥＧシリンダーは、水中で２日のみの後に広範な膨張を示し（図２４）、従って分離した水溶性ＰＥＧブロックおよび分解したＰＤＬＬＡ（すなわち、ＤＬ−乳酸オリゴマー）の拡散に対する障害は低減した。３０％ＰＥＧシリンダーの質量喪失および分解は継続したので、侵食放出寄与は徐々に増大し、任意の突然の変化を伴わないパクリタキセルの徐放をもたらした（図２３）。２０％ＰＥＧのシリンダーについて、膨張は最初は低く（図２４）、これは分解産物の遅い拡散をもたらした。従って、内部領域の分解産物は主に保持されるが、一方短い拡散経路により外領域の分解産物は非常に少なかった。オリゴマーのカルボキシル酸末端基が加水分解を触媒したので、分解産物は分解速度を促進した。これは、２相性コポリマー分子量分布により示されるように（図２５、６９日目）、高分子量の殻および低分子量の内部をもたらす。殻の破裂は、殻の強度、厚さおよび欠陥ならびに内部分解産物のような因子に依存するので、内部分解産物の喪失の開始および程度は非常に変化しやすい。殻の破裂は一貫せず、そしてポリマー内の薬物は顕微鏡的に均一ではないので、放出バーストの時点およびバーストの程度は、試験した４サンプルについて異なった（図２３）。
【０２６９】
ＰＤＬＬＡおよびＰＣＬ混和物ならびに純粋なＰＣＬからのパクリタキセルの放出を図２８に示す。簡単には、放出画分は、混和物中のＰＤＬＬＡ含有量と共に増大した。例えば、１０日以内で、８０：２０、７０：３０、および０：１００のＰＤＬＬＡ：ＰＣＬからの放出パクリタキセルは、それぞれ１７％、１１％、および６％であった。１日での最初のバースト後に、ほぼ一定の放出を８０：２０のＰＤＬＬＡ：ＰＣＬペーストから得た。有意な膨張度は放出間に観察されなかった。ＰＤＬＬＡ：ＰＣＬ混和物については、ＰＤＬＬＡは約８００の非常に低い分子量を有したので、質量喪失の長い遅延なく水溶性産物に急速に加水分解された。ＰＣＬは、急速な分解からペーストを守るための「保持」物質として働いた。従って、放出速度は、増強した分解により混和物中のＰＤＬＬＡ含有量と共に増大した。ＰＤＬＬＡの継続侵食はパクリタキセルの放出を制御し、そして一定の放出をもたらした。純粋なＰＣＬからのパクリタキセル放出は、恐らく、ＰＣＬの遅い分解速度（１〜２年）により制御される拡散であった。
【０２７０】
インキュベーション２４時間以内のペーストペレットの分解のため２０％パクリタキセル充填９０：１０  ＰＤＬＬＡ：ＰＣＬペーストについての放出研究において困難に遭遇した。簡単には、インキュベーションの最初の１２時間の間に、パクリタキセル放出の吸い込み条件を確実にするために、サンプルを１時間毎に採取した。９０：１０ペーストからの放出パクリタキセルは１０時間以内で２５〜３５％であった。
【０２７１】
マウスにおける腫瘍増殖の消失に対するペースト処方物の効力を評価した（図２９）。簡単には、試験されるペーストは、ＰＣＬ±２０％パクリタキセル、８０：２０  ＰＤＬＬＡ：ＰＣＬ±２０％パクリタキセル、９０：１０  ＰＤＬＬＡ：ＰＣＬ±２０％パクリタキセル、およびＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ（３０％ＰＥＧ）±２０％パクリタキセルであった。パクリタキセルを含む、９０：１０  ＰＤＬＬＡ：ＰＣＬおよびＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡのペースト処方物は、それぞれ、５４％および４０％、インビボで腫瘍増殖を低減した。対照的に、パクリタキセルを含む、ＰＣＬおよび８０：２０  ＰＤＬＬＡ：ＰＣＬのペースト処方物は、腫瘍増殖に対してほとんどまたは全く効果を有さなかった。全てのコントロールペースト（薬物なし）は、腫瘍増殖に対して有意な効果を有さなかった。パクリタキセルのより速い放出速度を有するペースト処方物（９０：１０  ＰＤＬＬＡ：ＰＣＬおよびＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ）はまた、腫瘍増殖の低減においてより効果的であった。これは重要な局所的濃度のパクリタキセルが腫瘍増殖阻害のために腫瘍部位で必要とされることを示唆する。パクリタキセルをゆっくりと放出するペースト処方物（例えば、ＰＣＬおよび８０：２０  ＰＤＬＬＡ：ＰＣＬ）は効果的でなかった。調べられた全てのペースト処方物は、マウスの体重に対して有意な効果を有さなかった。これは、パクリタキセル充填ペーストがインビボで十分に寛容であることを示す。
【０２７２】
これらのデータは、腫瘍部位におけるパクリタキセルの局所的適用が、全身性毒性を増大することなく局所的腫瘍増殖を阻害するために有効な治療ストラテジーであることを示唆する。パクリタキセル充填処方物が腫瘍増殖を完全に阻害し得ないことは、ほとんど恐らく、ポリマーからのパクリタキセルの不十分な放出およびＭＤＡＹ−Ｄ２腫瘍の急速な増殖によるものである。２０％パクリタキセルを含む９０：１０  ＰＤＬＬＡ：ＰＣＬペーストより多くのパクリタキセルを放出し、そしてより効果的に腫瘍増殖を阻害した、３０％パクリタキセルを含む９０：１０  ＰＤＬＬＡ：ＰＣＬペーストの能力はこれに関して一致した。従って、ポリマーおよび化学療法剤の特性ならびに投与部位により調節される、パクリタキセルの放出速度の調節は、腫瘍増殖の阻害のための局所的治療の開発において重要な工程である。
【０２７３】
実施例１２
ＰＣＬミクロスフェアの調製：スケールアップ研究
ミクロスフェア（５０ｇ）を、以下に記載の溶媒蒸発法を用いるＰＣＬ（名目分子量８０，０００）を用いて調製した。
【０２７４】
Ａ．方法
塩化メチレン中の１０％ＰＣＬ５００ｍｌおよび１％ＰＶＡ（分子量１３，０００〜２３，０００；９９％水和）の４０００ｍｌ溶液の調製物を、１０時間４０設定で加減抵抗器により制御されたホモミキサーを用いて乳化した。混合物を、ミクロスフェアが底に沈澱するまで＃１４０ふるいを用いて漉し、次いで上清をデカンテーションした。次いで、上清を蒸留水で３回洗浄し（沈降、続いてデカンテーション法を用いて）、次いで２５０ｍｌの蒸留水に再懸濁し、そして濾過した。次いで、ミクロスフェアを３７℃で一晩風乾した。
【０２７５】
Ｂ．結果
ミクロスフェア収率は以下の通りであった：
ＰＣＬの最初の重量                          ＝５０．１ｇ
得られたミクロスフェアの重量                ＝４１．２ｇ
％収率                                      ＝（４３．２／５０．０）×１００
＝８６．４
収率（１０〜５０μｍ）約７２％
平均サイズ２１．４μｍ、中央値２２．０μｍ、最頻値２４．７μｍ
より狭いサイズ範囲（２０〜４０μｍ）を、ふるい分けまたは沈降法を用いた分離により得ることができる。
【０２７６】
実施例１３
ＰＬＧＡミクロスフェアの製造
ミクロスフェアを、（ＰＬＬＡ）乳酸−グリコール酸（ＧＡ）コポリマーから製造した。
【０２７７】
Ａ．方法：
ミクロスフェアを、標準的な方法を用いて０．５〜１０μｍ、１０〜２０μｍ、および３０〜１００μｍのサイズ範囲で製造した（ＰＣＬまたはＰＤＬＬＡミクロスフェア製造法において上記のように、ポリマーをジクロロメタンに溶解し、そしてポリビニルアルコール溶液に攪拌しながら乳化した）。種々の比のＰＬＬＡ：ＧＡを、異なる分子量を有するポリマーとして使用した［固有粘度（Ｉ．Ｖ．）として与えられる］。
【０２７８】
Ｂ．結果：
ミクロスフェアを以下の開始ポリマーから首尾良く製造した：
ＰＬＬＡ：ＧＡ                    Ｉ．Ｖ．
５０  ：５０                    ０．７４
５０  ：５０                    ０．７８
５０  ：５０                    １．０６
６５  ：３５                    ０．５５
７５  ：２５                    ０．５５
８５  ：１５                    ０．５６
１０％または２０％充填のパクリタキセルを、全てのこれらのミクロスフェアに首尾良く組み込んだ。１つの出発ポリマー（８５：１５、ＩＶ＝０．５６）のサイズ分布の例を図３１〜３４に与える。パクリタキセル放出実験を、種々のサイズのミクロスフェアおよび種々の組成物を用いて行った。放出速度を図３５〜３８に示す。
【０２７９】
実施例１４
２ブロックコポリマー
ポリ（ＤＬ−ラクチド）−ブロック−メトキシポリエチレングリコール（ＰＤＬＬＡ−ＭｅＰＥＧ）、ポリカプロラクトン−ブロック−メトキシポリエチレングリコール（ＰＣＬ−ＭｅＰＥＧ）、およびポリ（ＤＬ−ラクチド−コ−カプロラクトン）−ブロック−メトキシポリエチレングリコール  （ＰＤＬＬＡＣＬ−ＭｅＰＥＧ）の２ブロックコポリマーを、バルク融解重合手順を用いて合成した。簡単には、所定の量のモノマー、ＤＬ−ラクチド、カプロラクトン、および異なる分子量を有するメトキシポリエチレングリコールを加熱して（１３０℃）、窒素のバブリングおよび攪拌下で融解した。触媒オクタン酸スズ（０．２％ｗ／ｗ）を融解モノマーに添加した。重合を４時間行った。分子量、臨界ミセル濃度、および最大パクリタキセル充填を、それぞれ、ＧＰＣ、蛍光、および可溶化試験を用いて測定した（図３９）。高いパクリタキセル保持能力を得た。パクリタキセルを可溶化する能力は、コポリマーの組成および濃度に依存する（図３９および４０）。ＰＤＬＬＡ−ＭｅＰＥＧは、最も安定な可溶化パクリタキセルを与えた（図４０および４１）。
【０２８０】
実施例１５
ナイロンマイクロカプセルにおけるパクリタキセルのカプセル化
Ａ．パクリタキセル充填マイクロカプセルの調製
パクリタキセルを、界面重合技術を用いてナイロンマイクロカプセルにカプセル化した。簡単には、１００ｍｇのパクリタキセルおよび１００ｍｇのプルロニックＦ−１２７を１ｍｌのジクロロメタン（ＤＣＭ）に溶解し、そして  ０．４ｍｌ（約５００ｍｇ）の塩化アジポイル（ａｄｉｐｏｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）（ＡＤＣ）を添加した。この溶液を、Ｐｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザー（１設定）を用いて１５秒間、２％ＰＶＡ溶液中でホモジナイズした。５ｍｌ蒸留水中の１，６−ヘキサン−ジアミン（ＨＭＤ）の溶液を、ホモジナイズの間滴下した。混合物を、ＨＭＤ溶液の添加の後さらに１０秒間ホモジナイズした。混合物をビーカーに移し、そして３時間磁気スターラーを用いて攪拌した。混合物を遠心分離し、回収し、そして１ｍｌの蒸留水に再懸濁した。
【０２８１】
Ｂ．カプセル化効率／パクリタキセル充填
約０．５ｍｌの懸濁液を濾過し、そしてミクロスフェアを乾燥した。約２．５ｍｇのミクロスフェアを秤量し、そして２４時間１０ｍｌのアセトニトリルに懸濁した。上清をパクリタキセルについて分析し、そして結果をパクリタキセルの割合として表した。予備研究は、パクリタキセルが高い充填（６０％まで）および高いカプセル化効率（８０％を超える）でナイロンマイクロカプセルにカプセル化され得ることを示した。
【０２８２】
Ｃ．パクリタキセル放出研究
約２．５ｍｇのパクリタキセル−ナイロンミクロスフェアを、それぞれ１Ｍの塩化ナトリウムおよび尿素を含む５０ｍｌの水に懸濁し、そして定期的に分析した。マイクロカプセルからのパクリタキセル放出は、７２時間後に放出された薬物の９５％を超えて速かった（図４２）。
【０２８３】
実施例１６
ポリマー性ミセルパクリタキセル
ＰＤＬＬＡ−ＭｅＰＥＧは、疎水性（ＰＤＬＬＡ）および親水性（ＭｅＰＥＧ）領域を有するブロックコポリマーである。適切な分子量および化学組成で、それらは、疎水性ＰＤＬＬＡコアおよび親水性ＭｅＰＥＧ殻のミセルを形成する。パクリタキセルは、疎水性コアに充填され得、それにより増大した「可溶性」を有するパクリタキセルを提供する。
【０２８４】
Ａ．ＰＤＬＬＡ−ＭｅＰＥＧの２ブロックコポリマーの合成
メトキシポリエチレングリコール（例えば、分子量２０００、１５０ｇ）およびＤＬ−ラクチド（１００ｇ）のモノマーを、丸底フラスコに添加し、そして温度を１３０〜１５０℃に上昇させる。モノマーの融解後、０．６ｇの触媒オクタン酸スズを添加する。重合を０時間以内に終える。反応は、Ｎ２保護下であり、そして攪拌しながらである。
【０２８５】
Ｂ．ミセルパクリタキセルの調製
ＰＤＬＬＡ−ＭｅＰＥＧコポリマーを、アセトニトリルまたは５０：５０エタノール：アセトンに溶解する（ポリマー濃度＜４０％）。ポリマー溶液を５分間遠心分離する（１４０００ｒｐｍ）。上清（不溶性ポリマーは捨てる）を、ガラス試験管に移す。パクリタキセルをアセトニトリルまたは５０：５０エタノール：アセトンに溶解し、そして精製ポリマー溶液に添加する。ボルテックス混合の後、溶媒を、窒素流下で６０℃で蒸発させる（代表的な４０ｍｇパクリタキセルバッチでは通常２時間かかる）。残渣溶媒を、真空および熱を適用することにより除去し得る。マトリックスを、それが透明なゲルになるまで約６０℃で加熱する。次いで、特定の容量の水（マトリックス重量の４倍を超える）をマトリックスに添加する。この後すぐに、パクリタキセル／ポリマーマトリックスの可溶化までボルテックス混合する。処方物を表ＩＩに与える。
【０２８６】
（表ＩＩ．パクリタキセル／ＰＤＬＬＡ−ＭｅＰＥＧ＊の処方物）
【０２８７】
【表２】
2004285074.tif 000003
Ｃ．ミセルパクリタキセル／熱ゲル化ポリマーの送達系の調製
熱ゲル化ポリマー（例えば、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）を蒸留水に溶解する。別に、水をミセルパクリタキセル／ポリマーマトリックス（例えば、１０％パクリタキセル充填ＰＤＬＬＡ−ＭｅＰＥＧ  ２０００−４０／６０）に添加して、ミセルパクリタキセル溶液を形成する。両方の溶液を冷却し（例えば、４℃）、そして混合して熱ゲル化送達系を形成する。
【０２８８】
実施例１７
薬物放出の分析
既知量のポリマー（代表的に、２．５ｍｇペレット）を、１０ｍｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４−ＮａＨ２ＰＯ４、０．１４５ｍ  ＮａＣｌ、および０．４ｇ／ｌウシ血清アルブミンを含む１４ｍｌの緩衝液を含む１５ｍｌ試験管に添加する。管にキャップをし、そして３７℃で転がす。特定の時間で、１４ｍｌ全ての液体緩衝液を除去し、そして新鮮な液体緩衝液で置換する。
【０２８９】
液体緩衝液を１ミリリットルの塩化メチレンに添加し、そして１分間振盪して、塩化メチレンへ全てのパクリタキセルを抽出する。次いで、水相を除去し、そして塩化メチレン相を窒素下で蒸発させる。次いで、残渣を６０％アセトニトリル：４０％水に溶解し、そして溶液を以下の条件を用いるＨＰＬＣ系に注入する：Ｃ８カラム（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＵＳＡ）、流速１ｍｌ／分での５８％：５％：３７％のアセトニトリル：メタノール：水の移動相。
【０２９０】
次いで、回収された緩衝液を、２３２ｎｍでパクリタキセルについて分析する。ＭＴＸのために、回収された緩衝液を、塩化メチレンにおける抽出を必要とせずにＨＰＬＣカラムに直接適用する。ＭＴＸを３０２ｎｍで分析する。バナジウム含有化合物について、液体緩衝液を、２００〜３００ｎｍ範囲でＵＶ／可視分光光度計を用いて直接分析する。
【０２９１】
実施例１８
インビボでの腫瘍増殖および腫瘍血管新生に対するパクリタキセル熱ペーストの効果
受精家禽胚を、それらの殻を除去する前に３日間インキュベートする。気室周辺に位置する殻を除去し、内側の殻の膜を切り、殻の反対側に穴をあけ、そして卵の内容物を丸くした端から穏やかにすべり出させることにより、卵の内容物を移す。内容物を、丸底滅菌ガラスボウルに移し、ペトリ皿カバーで覆い、そして９０％の相対湿度および３％の二酸化炭素でインキュベートする。
【０２９２】
ＭＤＡＹ−Ｄ２細胞（マウスリンパ腫瘍）をマウスに注射し、そして０．５〜１．０ｇの重さの腫瘍に増殖させる。マウスを屠殺し、腫瘍部位をアルコールで拭き、摘出し、滅菌組織培養培地に置き、そして層流フード下で１ｍｍ片にさいの目に切る。９日齢ニワトリ胚上に切断した腫瘍を置く前に、ＣＡＭ表面を腫瘍移植を保証するために３０ゲージ針で穏やかにこする。次いで、腫瘍を、インキュベーションの８日後に（殻を除去した４日後）ＣＡＭ上に置き、そして脈管供給を確立するために４日間ＣＡＭ上で増殖させる。４つの胚をこの方法を利用して調製し、各胚は３つの腫瘍を受ける。これらの胚に対して、１つの腫瘍は２０％パクリタキセル充填熱ペーストを受け、第２の腫瘍は未充填の熱ペーストを受け、そして第３の腫瘍は処置を受けない。処置は、結果を記録する前に２日間続けられる。
【０２９３】
外植されるＭＤＡＹ−Ｄ２腫瘍は、（ＣＡＭに由来する）毛細血管の内増殖（ｉｎｇｒｏｗｔｈ）を腫瘍塊に誘導し、そしてそれをあるサイズに増殖し続けさせる、血管新生因子を分泌する。腫瘍の全ての管はＣＡＭに由来するが、一方全ての腫瘍細胞は外植片に由来するので、これらの２つのプロセスに対して独立して治療介入の効果を評価することは可能である。このアッセイを使用して、以下に対するパクリタキセル充填熱ペーストの有効性を決定した：（ａ）腫瘍の脈管化の阻害および（ｂ）腫瘍細胞自体の増殖の阻害。
【０２９４】
直接的インビボ実体顕微鏡評価およびこの研究からの固定組織の組織学的調査は以下を証明した。２０％パクリタキセル充填熱ペーストで処置された腫瘍において、コントロール腫瘍と比較して（図７０Ａおよび７０Ｂ）、腫瘍を供給する血管数の低減（図７０Ｃおよび７０Ｄを参照のこと）、腫瘍内の血管数の低減、および腫瘍周囲（代表的に、固形腫瘍において最も高度に脈管化する領域）の血管数の低減があった。研究が行われた２日間、腫瘍はサイズおよび質量が減少し始めた。さらに、多くの内皮細胞は、細胞分裂が休止されることを示された。これは、内皮細胞増殖が影響を及ぼされたことを示す。腫瘍細胞もまた、しばしば、有糸分裂が休止されることを示された。４つ全ての胚は、腫瘍脈管分布を抑制する２０％パクリタキセル充填熱ペーストで一致したパターンを示したが、一方未充填熱ペーストは効果を有さなかった。
【０２９５】
比較すると、未充填熱ペーストで処置されたＣＡＭにおいて腫瘍は、正常な周囲組織のものと比較した場合の管の数および密度における増大、およびパクリタキセル充填ペーストで処置された腫瘍で観察されたものより劇的に多くの管を有して十分に脈管化された。新たに形成された管は全ての角度から腫瘍に進入し、車輪の中心に接する輻のように出現した（図７０Ａおよび７０Ｂを参照のこと）。コントロール腫瘍は、研究経過間にサイズおよび質量を増大し続けた。組織学的に、多くの横に広がった壁の薄い毛細血管は腫瘍周囲で示され、そして内皮が細胞分裂中であることはほとんど示されなかった。腫瘍組織は十分に脈管化され、そして至る所に生存した。
【０２９６】
例として、同じＣＡＭ上に配置された２つの同様のサイズ（最初、移植時）の腫瘍において以下のデータを得た。２０％パクリタキセル充填熱ペーストで処置された腫瘍について、この腫瘍は３３０ｍｍ×５９７ｍｍを測定した；腫瘍のすぐ周囲は１４本の血管を有するが、一方腫瘍塊は３〜４本のみの小さな毛細血管を有する。未充填熱ペーストで処置された腫瘍について、腫瘍サイズは６２３ｍｍ×６７８ｍｍであった；腫瘍のすぐ周囲は５４本の血管を有するが、一方腫瘍塊は１２〜１４本の小さな毛細血管を有する。さらに、周囲のＣＡＭ自体は、パクリタキセル処置腫瘍の周囲領域と比較して多くの血管を含んだ。
【０２９７】
この研究は、熱ペーストが、腫瘍増殖および発達に付随する病理学的な血管新生を阻害する、十分な量の抗増殖剤（この場合パクリタキセル）を放出することを証明する。これらの条件下で、血管新生は、周囲組織から腫瘍塊への毛細血管の内増殖を誘導し得る血管新生因子を生成する腫瘍細胞により最高に刺激される。２０％パクリタキセル充填熱ペーストは、このプロセスをブロックし、そして十分な血液供給を維持する腫瘍組織の能力を制限し得る。これは、腫瘍細胞自体に対する薬物の細胞傷害性効果、ならびに組織から増殖および拡大に必要とされる栄養分を奪うことの両方により腫瘍塊の減少をもたらす。
【０２９８】
実施例１９
マウス腫瘍モデルにおけるインビボでの腫瘍増殖に対する治療剤充填熱ペーストの効果
マウスＭＤＡＹ−Ｄ２腫瘍モデルを使用して、腫瘍増殖、腫瘍転移、および動物生存に対する抗増殖化合物（例えば、パクリタキセル）の局所的な遅い放出の効果を調べ得る。簡単には、ＭＤＡＹ−Ｄ２腫瘍細胞株を、αＭＥＭ培地中の５％ウシ胎児血清からなる細胞懸濁液中で増殖させた。細胞を、５％二酸化炭素を補充した加湿雰囲気中で３７℃でインキュベートし、そして十分な数の細胞が得られるまで３日毎に因数１５で希釈する。インキュベーション期間の後、細胞を生存能力について光学顕微鏡により調べ、次いで１５００ｒｐｍで５分間遠心分離する。ＰＢＳを細胞に添加して、１，０００，０００細胞／ｍｌの希釈を達成する。
【０２９９】
１０週齢ＤＢＡ／２ｊ雌性マウスを到着後３〜４日順化させる。次いで、各マウスに、１００ｍｌ  ＰＢＳ中の１００，０００個のＭＤＡＹ−Ｄ２腫瘍細胞を後側腹部において皮下に注射する。前の研究は、この手順が３〜４日で注射部位に目で見える腫瘍を生じ、１４日で１．０〜１．７ｇのサイズに達し、そして注射後１９〜２５日で肝臓に目に見える転移を生じることを示した。研究の目的に依存して、治療介入は、疾患進行の任意の時点で設けられ得る。
【０３００】
上記の動物モデルを使用して、２０匹のマウスに１４０，０００個のＭＤＡＹ−Ｄ２細胞を皮下注射し、そして腫瘍を増殖させる。５日目に、マウスを５匹のグループに分ける。腫瘍部位を外科的に麻酔下で開き、局所領域を、存在する腫瘍組織を妨害することなく薬物充填熱ペーストまたはコントロール熱ペーストで処置し、そして傷を閉じた。５匹のグループは、処置なし（単に傷を閉じた）、ポリマー（ＰＣＬ）単独、１０％パクリタキセル充填熱ペースト、または腫瘍部位に隣接して移植された２０％パクリタキセル充填熱ペースト（４匹の動物のみに注射した）のいずれかを受けた。１６日目に、マウスを屠殺し、腫瘍を切り裂き、そして腫瘍増殖、腫瘍転移、処置から生じる局所的および全身的毒性、創傷治癒に対する効果、腫瘍脈管分布に対する効果、ならびに切開部位に残存するペーストの状態について（肉眼で見てそして組織学的に）調べた。
【０３０１】
各動物の腫瘍重量を以下の表ＩＶに示す。
【０３０２】
【表３】
2004285074.tif 000004
２０％パクリタキセル充填熱ペーストは、コントロール動物（平均重量０．６８１）と比較して８５％以上腫瘍増殖を低減させた（平均重量０．１０５）。熱ペースト単独または１０％パクリタキセルを含む熱ペーストで処置された動物は、腫瘍増殖に対して最も控えめな効果のみを有し；腫瘍重量は、それぞれ１０％および３５％しか低減されなかった（図４３Ａ）。従って、２０％パクリタキセルを含む熱ペーストは、１０％パクリタキセルを含む熱ペーストより腫瘍増殖の低減において効果的であった（図４３Ｃを参照のこと；図４３Ｂもまた参照のこと）。
【０３０３】
熱ペーストは、投与部位で動物の何匹かで検出された。０．０２６ｇ〜０．０７８ｇの重量で変化するポリマーが、１５匹のマウスのうち８匹で検出された。２０％パクリタキセル充填熱ペーストを含むグループの全ての動物は、いくらかの残渣ポリマーを含んだ。これは、ポリマーが溶解しにくいことを示唆する。組織学的に、パクリタキセル充填熱ペーストで処置された腫瘍は、コントロール腫瘍より低い細胞性および大きな組織壊死を含んだ。脈管構造は低減され、そして内皮細胞は細胞分裂が休止されていることをしばしば示された。パクリタキセル充填熱ペーストは、組織周囲の皮膚または組織の完全性または細胞性に影響しないようであった。肉眼で見て、創傷治癒は影響しなかった。
【０３０４】
実施例２０
マウスにおいて部分的に切除されたＲＩＦ−１腫瘍の再増殖を遅延するためのパクリタキセル充填外科用ペーストの使用
Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウスにおいて部分的に切除されたＲＩＦ−１腫瘍の再増殖遅延におけるパクリタキセルの生分解性ポリマー性徐放外科用ペースト処方物の有効性を調べた。
【０３０５】
Ａ．方法
パクリタキセル（２０％）を、ポリ（ε−カプロラクトン）およびメトキシポリエチレングリコールの４：１混和物に取り込んだ。３７℃のアルブミン（０．４ｍｇ／ｍＬ）を含むリン酸緩衝化生理食塩水中のこの処方物についてのインビボ放出プロフィールを、パクリタキセルについてのＨＰＬＣアッセイを用いて調べた。簡単には、１７匹のマウスの右側腹部に、１００μｌのハンクス緩衝液中のＲＩＦ細胞懸濁液（１．０×１０６個細胞）を注射した。腫瘍を５日間増殖させ、この後、各腫瘍の７０％を超えて外科的に切除し、そして残存腫瘍塊を未処置のままか、または２０〜３０μＬの外科用ペースト中の２０％パクリタキセルもしくは外科用ペースト単独（薬物なし）のいずれかでコートした。これは０日目であった。皮膚の真下の目に見える腫瘍塊の寸法を４〜７日目および９日目に測定した。この目に見える円筒形腫瘍表面の面積が、腫瘍容積に相関することを示した（ｒ＝０．８１２）。
【０３０６】
Ｂ．結果
パクリタキセルのインビボ放出曲線を、最初の１日のバースト相、続いて長期の遅い徐放により特徴付けられる。４〜７日目の各マウスからの目に見える円筒形腫瘍表面の面積を表Ｖに示す。パクリタキセルを受け取らなかった２グループのそれぞれにおいて１を除く全てのマウスは、４日目までに広範な腫瘍再増殖を示した。ポリマーのみを受け取った１匹のマウスは遅延した腫瘍再増殖を示したが、一方処置を受けなかった１匹のマウスは再増殖を示さなかった。対照的に、パクリタキセル外科用ペーストで処置された１匹以外の全てのマウスは、少なくとも５日目まで腫瘍再増殖を示さず、そして２匹のマウスは６日目までもなお再増殖を示さなかった。
【０３０７】
Ｃ．結論
パクリタキセル充填ペーストは、１〜５日目で腫瘍再増殖を有意に阻害した。再増殖は、細胞株の攻撃性により６日後に生じた。
【０３０８】
（表Ｖ  腫瘍切除手術後の日で測定されたＲＩＦ−１細胞腫瘍のサイズ（皮膚の真下の目に見える腫瘍塊の面積として表す（ｍｍ２）））
【０３０９】
【表４】
2004285074.tif 000005
＊腫瘍を測定しなかったか、または動物を既に屠殺した。
【０３１０】
実施例２１
スラミンのカプセル化
ジクロロメタン（「ＤＣＭ」）中の５％ＥＬＶＡＸ（５％酢酸ビニルで架橋したポリ（エチレン−ビニルアセテート））１ミリリットルを、固定重量のミクロン以下の粉にしたスラミンナトリウムと混合する。この混合物を、３０ｍｌ平底試験管中の水中の５％ポリビニルアルコール（「ＰＶＡ」）５ｍｌに注入する。次いで、異なる重量の薬物を含む管を、自動攪拌しながら４０℃で９０分間、マルチサンプル水浴に吊るす。混合物を除去し、そしてミクロスフェアサンプルをサイズ分析のために採取する。管を１０００ｇで５分間遠心分離する。ＰＶＡ上清を取り出し、そして分析のために蓄える（カプセル化薬物なし）。次いで、ミクロスフェアを５ｍｌの水で洗浄し（ボルテックスし）、そして再遠心分離する。５ｍｌの洗浄液を分析のために蓄える（表面結合薬物）。次いで、ミクロスフェアを５０μｌのメタノールで湿らせ、１ｍｌのＤＣＭ中でボルテックスしてＥＬＶＡＸを溶解する。次いで、ミクロスフェアを４０℃まで暖め、そして５ｍｌの５０℃の水を攪拌しながらゆっくりと添加する。この手順は、ＤＣＭの即座の蒸発をもたらし、それにより５ｍｌの水へのスラミンナトリウムの放出を引き起こす。
【０３１１】
全てのサンプルを、蛍光定量により薬物含有量についてアッセイした。簡単には、スラミンナトリウムは、３１２ｎｍのλ最大でＵＶ／可視を吸収する。この吸収は、水および５％ＰＶＡの両方において０〜１００μｇ／ｍｌ範囲で線形である。スラミンナトリウムはまた、３１２ｎｍの励起最大および４００ｎｍの発光最大で強力に蛍光を発する。この蛍光は０〜２５μｇ／ｍｌ範囲で定量可能である。
【０３１２】
これらの実験の結果を図４４〜５０に示す。簡単には、数による（図４４）または重量による（図４５）ミクロスフェアのサイズ分布は、ＤＣＭ中の薬物の含有により影響されないようである。２０〜６０μｍ範囲でのミクロスフェアの良好な収率が得られ得る。
【０３１３】
スラミンのカプセル化は、非常に低い（＜１％）（図４７を参照のこと）。しかし、薬物重量がＤＣＭ中で増大するにつれて、カプセル化された薬物の総量は増大するが、％カプセル化は減少する。図４６に示されるように、５０μｇの薬物は５０ｍｇのＥＬＶＡＸにカプセル化され得る。１０％ＮａＣｌを含む２．５％ＰＶＡ中のスラミンナトリウムのカプセル化を図４８に示す（重量によるサイズ分布）。１０％ＮａＣｌを含む５％ＰＶＡ中のスラミンナトリウムのカプセル化を図４９および５０に示す（それぞれ、重量および数によるサイズ分布）。
【０３１４】
潜在的な抗血管新生剤としてのスラミンおよび酢酸コルチゾンを評価するために、各薬剤を０．５％メチルセルロースと混合し、そして薬剤を含む乾燥ディスクを６日齢ＣＡＭの発達している血管に適用した。スラミン（７０μｇ）の酢酸コルチゾン（２０μｇ）との組み合せ処置は、４８時間ＣＡＭ上で試験した場合、血管新生の阻害において成功した。得られた無脈管領域は直径が６ｍｍあり、そして血流の非存在およびまばらな血島の出現を明らかにした（図５１Ａおよび５１Ｂ）。
【０３１５】
実施例２２
メトトレキサート充填ペースト
Ａ．メトトレキサート充填ペーストの製造
メトトレキサート（「ＭＴＸ」；Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）を乳棒および乳鉢で粉にして、粒子サイズを５ミクロン以下に減らした。次いで、乾燥粉末としてポリカプロラクトン（分子量１８０００  Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，  ＡＬ  ＵＳＡ）と混合する。混合物を６５℃で５分間加熱し、そして融解したポリマー／メトトレキサート混合物を、５分間、平滑なペーストに入れてかき混ぜる。次いで、融解ペーストを１ｍＬのシリンジに採取し、そして所望であれば押し出す。
【０３１６】
Ｂ．結果
結果を図５２Ａ〜Ｅに示す。簡単には、図５２Ａは、２０％ＭｅＰＥＧおよび種々の濃度のＭＴＸを含むＰＣＬディスクからのＭＴＸ放出を示す。図５２Ｂは、ＭｅＰＥＧを含まないペーストについての同様の実験を示す。図５２Ｃ、Ｄ、およびＥは、ディスクに残存するＭＴＸ量を示す。
【０３１７】
上記の結果により示され得るように、ＭＴＸの実質的な量は、高ＭｅＰＥＧ濃度を利用する場合のポリマーから生じ得る。
【０３１８】
実施例２３
メトトレキサートを含むミクロスフェアの製造
Ａ．ＭＴＸのみを含むミクロスフェア
メトトレキサート（Ｓｉｇｍａ）を乳棒および乳鉢で粉にして、粒子サイズを５ミクロン以下に減らした。１００ミリリットルの水中の２．５％ＰＶＡ（ｗ／ｖ）（ＡｌｄｒｉｃｈまたはＳｉｇｍａ）を、２５℃で５００ｍｇの粉にしていないＭＴＸと共に１５分間攪拌して、溶液をＭＴＸで飽和させた。次いで、この溶液を２０００ｒｐｍで遠心分離して、溶解してないＭＴＸを除去し、そして上清をミクロスフェアの製造において使用した。
【０３１９】
簡単には、１０：９０  ｗ／ｗ  ＭＴＸ（粉にした）：ポリマーを含む、ポリ（ＤＬ）乳酸（分子量５００，０００；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ポリ乳酸：ポリグリコール酸（５０：５０  ＩＶ  ０．７８  Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）またはポリカプロラクトン（分子量１８，０００、ＢＰＩ）の５％ｗ／ｖ溶液１０ｍｌを、６００ｒｐｍで攪拌しながら、ＭＴＸ飽和したＰＶＡ（ＡｌｄｒｉｃｈまたはＳｉｇｍａ）の２．５ｗ／ｖ％溶液の１００ｍｌにゆっくりと滴下した。混合物を２５℃で２時間攪拌し、そして得られたミクロスフェアを洗浄し、そして乾燥した。
【０３２０】
この方法を用いて、ＭＴＸ充填ミクロスフェアを、３０〜１６０ミクロン範囲で再現的に製造し得る（図５３を参照のこと）。
【０３２１】
Ｂ．ＭＴＸおよびヒアルロン酸を含むミクロスフェア
ＭＴＸ充填ミクロスフェアを、本質的に以下に記載するように、油中水型エマルジョン製造法によりキャリアとしてヒアルロン酸（「ＨＡ」）を用いて作製し得る。簡単には、５０ｍｌのパラフィン油（軽油；Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を２００ｒｐｍで攪拌しながら６０℃まで暖める。種々の量のＭＴＸを含む、水中のヒアルロン酸ナトリウム（２０／ｍＬ）；供給源＝雄鶏のとさか、Ｓｉｇｍａ）の５ｍＬ溶液をパラフィン油に滴下する。混合物を２００ｒｐｍで５時間攪拌し、５００×ｇで５分間遠心分離する。得られたミクロスフェアをヘキサンで４回洗浄し、乾燥させる。
【０３２２】
実施例２４
バナジウム化合物を含むポリマー性組成物の製造
Ａ．バナジルサルフェートを含むポリマー性ペースト
バナジルサルフェート（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を最初に乳棒および乳鉢で粉にして、粒子サイズを減らし、次いでＭＴＸについて上記のように融解ＰＣＬに分散させる。次いで、シリンジに採取して凝固させると使用のために準備ができている。
【０３２３】
薬物放出を１０％ｗ／ｗ  ＶＯＳＯ４：ＰＣＬの６５ｍｇペレットを１０ｍｌの水に懸濁し、そして上清を、２００〜３００ｎｍ範囲でのピークのＵＶ／可視吸光度分光測定法を用いて放出バナジルサルフェートについて分析した以外は、本質的に上記の実施例３１のように決定した。
【０３２４】
結果を図５４に示す。簡単には、１０％ＶＯＳＯ４を含むポリマー性組成物から、１ｍｇのＶＯＳＯ４が６時間で、３ｍｇが２日目後に、そして５ｍｇが６日目に放出された。
【０３２５】
Ｂ．バナジルサルフェートを含むポリマー性ミクロスフェア
バナジルサルフェートを、本質的に実施例２３に記載のようにポリ乳酸またはヒアルロン酸のミクロスフェアに取り込んだ。結果を図５５に示す。
【０３２６】
Ｃ．有機バナジウム酸塩を含むポリマー性ペースト
有機バナジウム酸塩を、本質的に実施例２２に上記されるようにＰＣＬペーストに充填する。ミクロスフェアからのバナジウム酸塩放出を、上記のように決定した。結果を図５６Ａおよび５６Ｂに示す。
【０３２７】
Ｄ．有機バナジウム酸塩を含むミクロスフェア
有機バナジウム酸塩もまた、本質的に実施例２３に記載のようにミクロスフェアに充填し得る。このようなミクロスフェアを、ポリＤ，Ｌ乳酸（分子量５００，０００；Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）について図５７に示す。
【０３２８】
実施例２５
ビス（マルトラト）オキソバナジウム（ＢＭＯＶ）を含むポリマー性組成物
Ａ．ビス（マルトラト）オキソバナジウム充填ペーストの作製
ポリ（Ｅ−カプロラクトン）（分子量２００００）（ＢＰＩ  Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  Ａｌ）およびＢＭＯＶを、適切な比率でガラスビーカー内で直接秤量した。いくつかの処方物において、メトキシプロピレングリコール（ＭＥＰＥＧ）（分子量３５０）（Ｕｎｉｏｎ  Ｃａｒｂｉｄｅ，  Ｄａｎｂｕｒｙ  ＣＴ．）もまたＰＣＬおよびＢＭＯＶに添加した。ビーカーおよび内容物を、ＢＭＯＶが融解ポリマーに完全に分散するまで、５分間穏やかに攪拌しながら５５℃まで暖めた。次いで、融解混合物を予め暖めたシリンジに採取し、そして使用まで４℃で保存した。
【０３２９】
Ｂ．薬物放出研究
１５ｍｌの１０ｍＭリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ  ｐＨ７．４）および１００μｇ／ｍｌウシ血清アルブミン（画分５Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）を含む管に、１５０ｍｇのディスク型スラブのＰＣＬ−ＢＭＯＶペーストに添加した。管を封印し、そして３７℃にて３０ｒｐｍで回転させながら転がした。適切な時間で、ＰＣＬ−ＢＭＯＶスラブを５分間重力下で沈澱させ、そして全ての上清を除去した。ＢＭＯＶ濃度を、２５６ｎｍでの吸光度（Ａ２５６）および２７６ｎｍでの吸光度（Ａ２７６）を測定することにより上清中で決定した。上清を１５ｍｌの新鮮なＰＢＳで置換し、そして管を再度転がした。ＢＭＯＶ濃度対Ａ２７６またはＡ２７６の直線的な検量線を、０〜２５μｇ／ｍｌ範囲のＢＭＯＶ標準を用いて得た。これらの標準の２５６ｎｍまたは２７６ｎｍでの吸光度値は、３７℃で２〜３日間の密封管での保存により影響されないことが示された（同じ条件を薬物放出研究に使用した）。
【０３３０】
薬物放出実験の終わりに、ＰＣＬ−ＢＭＯＶマトリックスのサンプルを、０．５ｍｌのジクロロメタン（ＤＣＭ）（Ｆｉｓｈｅｒ）における既知乾燥重量のマトリックスの溶解により残存薬物含有量についてアッセイした。この溶液に、５０ｍｌの温水（５０℃）を混合しながら添加して、分光側光法分析（Ａ２５６）用の水にＢＭＯＶを残してＤＣＭを蒸発させた。
【０３３１】
Ｃ．走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）
２ヶ月の薬物放出実験に使用したＰＣＬ−ＢＭＯＶマトリックスのサンプルをＳＥＭを用いて調べた。これらのサンプルを、新鮮に調製されたコントロールサンプルと比較した。ポリマーサンプルを、コートし（６０：４０の金：パラジウム）（Ｈｕｍｍｅｒ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，  Ｔｅｃｈｎｉｃｓ，  ＵＳＡ）、そしてＩＢＭデータ収集システムを有するＨｉｔａｃｈｉ（モデルＦ−２３００）走査型電子顕微鏡を用いて調べた。
【０３３２】
Ｄ．結果
ＢＭＯＶのＰＣＬマトリックスからの放出を図５８Ａおよび５８Ｂに示す。ＰＣＬマトリックス中の５％から３５％へのＢＭＯＶ充填の増大は、２ヶ月の期間にわたる薬物放出速度を増大させた（図５８Ａ）。３５％ＢＭＯＶ充填で、放出速度は劇的に増大した。２０％〜３０％のＢＭＯＶ充填についての放出プロフィールは、最初の２日で最初のより急速な薬物放出相、続いてその次の２ヶ月にわたって制御されたほとんどゼロオーダーの放出を示した。
【０３３３】
薬物放出プロフィールはまた、ペレット中に残存する薬物の％によって表される。簡単には、ＰＣＬマトリックス中に残存するＢＭＯＶの％は、３０％までの（および含む）全てのＢＭＯＶ充填について全ての時点でほとんど同一であり、その結果、最初のＢＭＯＶの６５％〜８０％は２ヶ月後になお存在した（２５％および３０％ＢＭＯＶ充填についての結果のみを、明瞭のために図５８Ｂに示す）。マトリックス中に残存する薬物の割合は、充填３５％ＢＭＯＶでより急速に減少し、その結果、最初のＢＭＯＶの５０％を少し多く１ヶ月後にマトリックス中に存在した。累積薬物放出データを証明するために、ＰＣＬ−ＢＭＯＶマトリックスのサンプルを、各薬物放出実験での終わりでの残存薬物含有量についてアッセイした。この残渣アッセイにより決定される７０日で残存している％薬物は以下の通りである：６７％＋／−１０％（５％ＢＭＯＶ）、５６％＋／−１０％（１０％ＢＭＯＶ）、８０％＋／−２０％（１５％ＢＭＯＶ）、８４％＋／−２０％（２０％ＢＭＯＶ）、８５％＋／−１２％（２５％ＢＭＯＶ）、７７％＋／−１４％（３０％ＢＭＯＶ）、および５７％＋／−１５％（３５％ＢＭＯＶ）。
【０３３４】
図５９Ａおよび５９Ｂは、種々の充填濃度のＢＭＯＶについての薬物放出プロフィールに対する２０％ＭＥＰＥＧのＰＣＬマトリックスへの添加の効果を示す。ＭＥＰＥＧのＰＣＬマトリックスへの添加は、ＰＣＬ単独からのＢＭＯＶの放出と比較して、劇的にＢＭＯＶの放出速度を増大させる（図５８）。５０％を超えるＢＭＯＶが、７日から１週間以内に、全てのＢＭＯＶ充填濃度でポリマーマトリックスから放出された。ＰＣＬ−ＢＭＯＶ−ＭＥＰＥＧペレットの残渣分析は、ペレット中に７日で残存するＢＭＯＶ％について以下の値を与えた：２４％（＋／−９％）、５％ＢＭＯＶ；２５％（＋／−８％）、１０％ＢＭＯＶ；２２％（＋／−４％）、１５％ＢＭＯＶ；２７％（＋／−７％）、２０％ＢＭＯＶ。
【０３３５】
図６０Ａは、高倍率下でのＢＯＭＶ結晶の形態を示す。図６０Ｂおよび６０Ｃは、水性緩衝液中での２ヶ月薬物放出研究の前および後両方のポリマー−薬物マトリックスの形態を示す。１５％、２０％、および３０％ＢＭＯＶ充填についてのＰＣＬ−ＢＭＯＶマトリックスは、代表的に放出研究前にそれらの外面上で平滑であり、そして代表的なＳＥＭを図６０Ｂに示す。２ヶ月間の水性緩衝液中でのインキュベーション後に、外表面は粗く、そしてあばたがある。
【０３３６】
Ｅ．議論
この化合物は、バナジウムの持続濃度の維持にほとんど理想的な放出特徴を有して、ＰＣＬマトリックスから非常にゆっくりと放出することが見出された。これらの特徴は、ほとんどの薬物充填で、最初の２、３日における薬物放出の小さなバースト効果、続いてほとんどゼロオーダーの放出キネティクスのみを含んだ（図５８）。ＢＭＯＶは、バナジルサルフェートまたはオルトバナジウム酸ナトリウムほど水溶性でなく、そして分子の疎水性は、恐らく、疎水性ＰＣＬマトリックスに対するＢＭＯＶ分子の親和性を増大し、そして水性インキュベーション媒体への薬物放出速度を減少させる。
【０３３７】
２０％ＭｅＰＥＧのＰＣＬへの添加は、マトリックスの粘度およびポリマーが凝固する温度を低減させることによりペーストの熱流動特性を改善することが示された。これらの特性は、部位のより良好な適用範囲がこれらの条件下で得られるので、ペーストを管周囲腫瘍部位における適用に重要である。ＭＥＰＥＧのＢＭＯＶ−ＰＣＬペーストマトリックスへの添加は、ＢＭＯＶ−ＰＣＬ（ＭＥＰＥＧなし）（図５８）からの放出速度と比較して、全てのＢＭＯＶ充填濃度（５％〜２０％）で、インビトロでのＢＭＯＶ放出速度を増強することが示された（図５９）。５％ＢＭＯＶ充填ＰＣＬ−ＭＥＰＥＧペーストは、１日あたり５００〜１０００μｇのＢＭＯＶ（これは、３５％ＢＭＯＶ充填ＰＣＬからの放出速度と同様であった）を放出することが示された。
【０３３８】
実施例２６
ビス（マルトラト）オキソバナジウム充填熱ペーストのインビトロおよびインビボ効力
ＢＭＯＶ充填ポリマー性ＰＣＬ熱ペーストを上記のように調製し、そしてインビトロおよびインビボの両方での腫瘍細胞株に対するその効力に対して試験した。
【０３３９】
Ａ．ヒト腫瘍細胞株
ＨＴ−２９結腸、ＭＣＦ−７乳房、およびＳＫＭＥＳ１非小細胞肺のヒト腫瘍細胞株を、アメリカンタイプカルチャーコレクションから得た。ＨＴ−２９結腸細胞株を１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＨＩＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ  １６４０中で、ＭＣＦ−７乳房細胞株を５％ＨＩＦＢＳ＋１０−９Ｍインスリンを含むＩｓｃｏｖｅ改変イーグル培地中で、ＳＫＭＥＳ１肺細胞株を１０％非熱不活化ＦＢＳを含むイーグル最小必須培地中で培養した。
【０３４０】
Ｂ．正常ヒト骨髄細胞
正常ヒト骨髄（腫瘍細胞について組織学的に陰性）を、それらの固形腫瘍に対する骨髄移植を有する予定であったが、骨髄を使用する前に死亡した患者から得た。遠心分離の後、バフィーコートを取り出し、そして細胞を溶解緩衝液で処理し、そして２０％ＨＩＦＢＳを含むＲＰＭＩ  １６４０で２回洗浄し、次いでそれに再懸濁した。細胞を２５ｇの針を通して採取し、そして計数した。
【０３４１】
Ｃ．放射線分析（Ｂａｃｔｅｃ）システム
Ｂａｃｔｅｃシステム（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，  Ｔｏｗｓｏｎ，  ＭＤ）は、血液培養物中の細菌を検出するために開発された臨床器具に基づき、そして新規の抗新生物剤をスクリーニングするために使用されてきた。この放射線分析システムは、細胞傷害性の指標として１４Ｃグルコースの１４ＣＯ２への変換阻害を利用する、迅速な半自動システムである。Ｂａｃｔｅｃ機械は、１４ＣＯ２を、放射性標識ＣＯ２の信号を１〜１０００のスケールの比例した電気信号または増殖指数値に変えるイオン室に自動的に流す。連続暴露のために、腫瘍細胞または正常骨髄細胞を、２ｕＣの１４Ｃグルコース＋最終濃度０．０１、０．１、１、１０、２５および５０μＭのＢＭＯＶを含む２ｍｌの適切な増殖培地に添加し、そして５％ＣＯ２および空気の混合物を含む、２０ｍｌのゴムで栓をした血清バイアルに注入し、そして３７℃で２４日間インキュベートした。さらなる１時間の暴露のために、細胞および同じ最終濃度のＢＭＯＶを、１５ｍｌポリプロピレンコニカル（ｃｏｎｉｃａｌ）中で、３７℃の水浴において１時間インキュベートした。次いで、細胞を遠心分離し、そして培地で洗浄し、次いで２ｕＣｉの１４Ｃグルコースを含む２ｍｌの適切な増殖培地に再懸濁し、そして５％ＣＯ２および空気の混和物を含む、２０ｍｌのゴムで栓をした血清バイアルに注入し、そして３７℃で２４日間インキュベートし、腫瘍細胞株については６、９、１２日目に、および骨髄細胞については６、１５、および２４日目にバイアルを取り出し、そして１４Ｃグルコースの代謝の際に細胞により生成される１４ＣＯ２量の測定用のＢａｃｔｅｃ器具に挿入した。ＢＭＯＶ処理細胞の増殖指数値を非処理細胞の増殖指数値と比較し、そして未処理コントロールと比較した％生存を計算した。
【０３４２】
Ｄ．切除された腫瘍の研究
７週齢の雄Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウスをこれらの研究に使用した。ＲＩＦ−１（マウス放射線誘導された線維肉腫）細胞を、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｎａｄａ）を含むα−ＭＥＭ培地中で培養した。細胞を、１×１０７個細胞／ｍｌの濃度で１％ハンクス緩衝化塩溶液（ＨＢＳＳ  ｐＨ７．４）（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｎａｄａ）に懸濁した。１００マイクロリットルのこれらの細胞（１×１０６個細胞）を各マウスの右側腹部注射した。腫瘍を５日間増殖させた（この時点で、腫瘍は直径が６〜８ｍｍの範囲である）。５日目に、マウスをケタミン：ロムポム（７０ｍｇ／ｋｇ：１０ｍｇ／ｋｇ）の組み合せ（０．０２ｍｌ／ｇ）で麻酔した。腫瘍の縁から５ｍｍ切開し、そして各腫瘍の約９０％を除去し、そして１５０ｍｇの融解（５０℃）ＰＣＬ−ＢＭＯＶまたはＰＣＬ単独（コントロール）を、５００μｌシリンジから切除腫瘍部位の全表面に押し出した。ＰＣＬは３０秒以内に凝固し、そしてその領域を５−０プロレン縫糸で閉じた。マウスを、４、５、６、および７日目に調べた。それぞれの日に、腫瘍を測定し（長径および短径）、そして画像をとった。腫瘍が９ｍｍの最大直径に達すると、マウスを屠殺し、そして腫瘍領域を将来的な組織学的研究のために摘出した。
【０３４３】
結果を図６３に示す。
【０３４４】
Ｅ．腫瘍阻害研究
ＭＤＡＹ−Ｄ２造血細胞株（Ｄｒ．Ｊ  Ｄｅｎｎｉｓ，  Ｍｏｕｎｔ  Ｓｉｎａｉ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ，  Ｔｏｒｏｎｔｏから得た）をプレートするか、または５％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｎａｄａ）を含むＤＭＥＭの懸濁液中で増殖させた。各マウスに、１００μｌ  ＰＢＳ中の４×１０５個細胞を後側方に皮下注射した。５日の腫瘍増殖後に、１５０ｍｇのＰＣＬまたはＰＣＬ−ＢＭＯＶ融解ペーストを、各マウスの腫瘍部位に隣接した領域に移植した。１５日後、マウスを屠殺し、秤量し、そして腫瘍を切り裂き、そして秤量した。結果を図６２に示す。
【０３４５】
Ｆ．結果および議論
正常なヒト骨髄細胞に対して、１時間暴露のＢＭＯＶはまた、５０μＭの濃度でさえもほとんど効果を有さなかった。連続暴露を用いた骨髄細胞に対するＢＭＯＶの効果はなおあまり著しくなく、感受性（４９％生存）は５０μＭ濃度のみで観察された。従って、ＢＭＯＶ化合物は、試験された濃度および暴露であまり骨髄抑制性ではないようであった。
【０３４６】
この研究において、ＢＭＯＶの抗新生物効果は、薬物に対する連続暴露を確実にする条件下で３つのヒトガン細胞株に対してインビトロで示された。しかし、インビボでは、この効果は、腫瘍細胞のＢＭＯＶへの連続暴露に依存し得る。この研究の主な目的は、低濃度のバナジウム（ＢＭＯＶ形態）の連続供給を提供し得る生分解性ポリマー送達系を設計し、そして（インビボで）試験することであった。
【０３４７】
インビボ実験は、ＰＣＬ−ＢＭＯＶペーストの単一投与がＭＤＡＹ  Ｄ２腫瘍増殖を皮下的に阻害することを示した。図６２は、コントロールマウス（ＰＣＬ−ＢＭＯＶなし）ならびに２５％、３０％、および３５％ＢＭＯＶ充填ＰＣＬで処置されたマウスからの腫瘍重量についてのデータを示す。２５％ＢＭＯＶ充填ＰＣＬについては腫瘍増殖の５４％阻害があった（ｐ＜０．０５で有意）。３０％および３５％ＢＭＯＶ充填は、それぞれ腫瘍増殖の７６％および８０％阻害を生じ、そして３５％ＢＭＯＶグループにおける６匹のマウスのうちの１匹が腫瘍の完全な根絶を示した。
【０３４８】
興味深いことに、インビボ薬物放出プロフィールは、２５％および３０％からなるペーストが、以前に効力を示した１日あたり約５００μｇのＢＭＯＶ放出することを示した。しかし、腫瘍増殖の低減において最も効果的であった３５％ＢＭＯＶ充填ＰＣＬペーストは、インビトロでのこの薬物量の約２倍を放出した。これらのデータは、低量のバナジウム化合物の徐放が、毎日のバナジン酸塩投与レジメと比較して、等しくまたはより効果的な抗新生物レジメであることを証明する。
【０３４９】
ＰＣＬ−ＢＭＯＶペーストは腫瘍増殖の阻害において等しく効果的であったが、マウスはストレスおよび重量喪失の徴候を示さなかった。高用量のバナジン酸塩の毎日の注射により一般に観察されたストレスおよび重量喪失の増大は、投与直後の血漿中の高バナジン酸塩レベルにより誘導される毒性に非常に関連するらしい。長期のバナジン酸塩の徐放を提供するＰＣＬ−ＢＭＯＶペーストを用いて、血漿バナジン酸塩濃度中の大きな変動を低減し、そしてバナジン酸塩により誘導される毒性を予防し得る。これらのデータは、ＢＭＯＶの遅い徐放が腫瘍増殖の低減において等しいかまたはより効果的であり、そしてバナジン酸塩より誘導される毒性を予防するという本発明者らの仮説と一致する。
【０３５０】
実施例２７
マウスにおける腫瘍増殖に対するＢＭＯＶミクロスフェアの効果
本研究の目的は、マウスにおける腫瘍増殖を後退する、ＢＭＯＶ充填ＰＬＬＡミクロスフェア（２０％）の能力を試験することであった。
【０３５１】
２４匹のマウスのうち２０匹に、１０×１０６細胞／ｍｌの密度を有する１００ｍｌのＭＤＡＹ−Ｄ２細胞を皮下注射した。６日目に、マウスを６つのグループに分けた。グループ１、空のコントロール、グループ２、腫瘍コントロール、グループ３は、１日に２回０．２５ｍｇ／１００μｌのＢＭＯＶを皮下注射した。グループ４は、５ｍｇのＢＭＯＶを含む２０ｍｇのＰＬＬＡミクロスフェアを腹腔内注射した。グループ５は、６日目および９日目に、それぞれ１０ｍｇのＢＭＯＶミクロスフェアを腹腔内注射した。グループ６は、６日目および９日目に１０ｍｇのＢＭＯＶミクロスフェアを筋肉内注射した。１６日目に、マウスを屠殺し、そして腫瘍を切り裂いた。
【０３５２】
これらの実験結果を以下の表ＶＩおよびＶＩＩに示す。
【０３５３】
【表５】
2004285074.tif 000006
【０３５４】
【表６】
2004285074.tif 000007
2004285074.tif 000008
実施例２８
制御放出ポリマー性薬物送達システム：ポリ（ε−カプロラクトン）（ＰＣＬ）熱ペーストおよびＰＣＬ−メトキシポリエチレングリコール（ＰＣＬ−ＭｅＰＥＧ）熱ペーストからの有機バナジウム錯体のインビトロ薬物送達プロフィールの比較研究
本研究を、ポリ（ε−カプロラクトン）（ＰＣＬ）熱ペーストおよび／またはＰＣＬ−メトキシポリエチレングリコール（ＰＣＬ−ＭｅＰＥＧ）熱ペースト中のバナジウムの４つの有機錯体形態（ＢＭＯＶ、ＢＥＭＯＶ、Ｖ５、ＰＲＣ−Ｖ）のカプセル化およびインビトロ放出キネティックスを調べるために行った。
【０３５５】
Ａ．方法
定量分析（ＵＶ／可視分光計分析）を、ピーク吸光度の波長および較正式を得るために異なる濃度のバナジウム溶液を用いて行った。バナジウムの溶解度を、アルブミンを含む１０ｍＭリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ／ＡＬＢ）（ｐＨ７．４）中で研究した。１％、５％、１０％、および２０％（ＰＣＬ中のバナジウム錯体％）のバナジウムの各有機錯体形態を、生分解性ポリマーＰＣＬおよび／またはＰＣＬとＭｅＰＥＧ（分子量３５０）とのブレンドにカプセル化して、「熱ペースト」と呼ばれるポリマー性薬物送達産物を生成した。熱ペーストからのバナジウムの種々の形態のインビトロ放出研究を、ＵＶ／可視吸光度分光学により測定されるバナジウム放出を用いて、ＰＢＳ／ＡＬＢ中で３７℃で行った。
【０３５６】
Ｂ．結果
結果を図６４〜６８に示す。簡単には、ＢＭＯＶ、ＢＥＭＯＶ、およびＶ５のピーク吸光度は２７６ｎｍで生じ、そしてＰＲＣ−Ｖの吸光度は２６６ｎｍであった。バナジウムの各形態の溶解度の速度および程度は、Ｖ５＞ＢＭＯＶおよびＢＥＭＯＶ＞ＰＲＣ−Ｖの順であった。インビトロ放出研究は、熱ペーストから放出される薬物の速度が、（１）薬物溶解度の増大、（２）薬物濃度の増大、および（３）熱ペーストに取り込まれるＭｅＰＥＧ量の増大と共に増大することを示した。
【０３５７】
Ｃ．結論
バナジウムの制御用量は、（薬物としての）バナジウムの異なる形態を使用することにより、ＰＣＬ中のバナジウムの特定の形態の％充填を変えることにより、またはＭｅＰＥＧをＰＣＬに含ませることによりＰＣＬ熱ペーストから放出され得る。バナジウムの特定の形態の％充填を変えることは短期間の放出速度を制御し得るが、制御用量の送達は、莫大な（および潜在的に毒性の）薬物（ＰＣＬ中の）貯蔵物の動物への移植を含み得る。従って、バナジウムの代替形態の使用またはＭｅＰＥＧのＰＣＬへの含有は、制御用量のバナジウムを送達する代替方法を提供し得る。
【０３５８】
実施例２９
カンプトセシンのＰＣＬ熱ペーストへのカプセル化および抗血管新生分析
Ａ．カンプトセシンのＰＣＬへの取り込み
カンプトセシンを乳棒および乳鉢で粉にして、粒子サイズを５ミクロン以下に減らした。次いで、ポリカプロラクトン（分子量１８，０００  Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，  ＡＬ  ＵＳＡ）と共に乾燥粉末として混合した。混合物を６５℃で５分間加熱し、そして融解したポリマー／薬剤混合物を平滑なペーストに５分間かきまぜた。次いで、融解ペーストを１ｍｌシリンジに採取し、そして押し出して３ｍｇのペレットを形成した。次いで、これらのペレットをＣＡＭ上に置いて、それらの抗血管新生特性を評価した。
【０３５９】
Ｂ．結果
カンプトセシン充填熱ペーストは、コントロールＰＣＬペレットと比較した場合、血管新生の阻害において効果的であった。５％薬物充填で、試験したＣＡＭの４／５は、強い血管新生阻害を示した。さらに、１％および０．２５％充填で、ＣＡＭの２／３および３／４は、それぞれ血管新生阻害を示した。従って、カンプトセシンが十分にＰＣＬ熱ペーストから放出され、そして治療的抗血管新生効力を有することは、これらの結果から明らかである。
【０３６０】
実施例３０
Ｓ−ホスホネート充填熱ペーストの製造
この研究において、本発明者らは、抗新生物活性を有するエーテル脂質であるｓ−ホスホネートがＰＣＬ熱ペーストに首尾良く取り込まれ、そしてＣＡＭアッセイにおいて効力を示すことを証明した。
【０３６１】
Ａ．Ｓ−ホスホネート充填ペーストの製造
ポリカプロラクトン（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，  Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，  ＡＬ）およびｓ−ホスホネートを、５５℃で２分間適切な比率ですりつぶした。次いで、融解混合物を、３ｍｇ半球ペレットにピペットで移し、そして４℃で凝固させた。
【０３６２】
Ｂ．ＣＡＭバイオアッセイ
受精家禽胚（Ｆｉｔｚｓｉｍｍｏｎｓ  Ｃｏｎｓｕｌｔｉｎｇ＆Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  Ｌｔｄ．，Ｂ．Ｃ．）を４日間インキュベートし、次いで窓をつけた。簡単には、殻および殻内側の膜を、卵（気室部位）の平滑な端から除去することにより、小さな穴（直径が約２ｃｍある）を形成し、次いで暴露された領域を滅菌パラフィルムワックスで密封した。次いで、卵を、窓を真上にしてさらに２日間３７℃でインキュベーターに置く。インキュベーションの６日目に、ｓ−ホスホネート充填ポリマーまたはコントロール（薬物なし）ポリマーの３ｍｇペレットを、増殖しているＣＡＭ管の表面上に置いた。２日の暴露後（インキュベーションの８日目）、脈管構造をＣｏｎｔａｘカメラシステムに合わせた実体顕微鏡を用いて調べた。管のコントラストを増大させ、そして任意のバックグラウンド情報を遮断するために、画像化の前に、１ｍｌの脂質内（ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ）溶液（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｒａｔｏｒｉｅｓ）をＣＡＭに注入した。
【０３６３】
Ｃ．結果
０％、１％、２％、４％、および８％のｓ−ホスホネートで充填されたＰＣＬペレットは、ＣＡＭにおいて用量依存性抗血管新生反応を誘導した。抗血管新生反応は、ｓ−ホスホネート充填ペレット直下の領域における血管の非存在により特徴づけられる。コントロールＣＡＭにおいて見られる密集した毛細血管ネットワークの正常な増殖は、ｓ−ホスホネート処置ＣＡＭにおいて明らかに阻害された。より高い濃度（４％および８％）で、処置されたＣＡＭは、薬物／ポリマーペレット付近で構造的に変えられた。この変化は、ｓ−ホスホネート／ポリマーペレットに直ぐ隣接したＣＡＭの著しい肥厚化、およびペレット直下の膜の薄弱化を含んだ。ｓ−ホスホネートで処置されたＣＡＭの全てにおいて、無脈管ゾーンは２日間の暴露後に明らかであった；これは、面積が約３ｍｍ２の毛細血管ネットワークが全くない領域として定義された。
【０３６４】
実施例３１
チロシンキナーゼインヒビターのＰＣＬ熱ペーストへのカプセル化およびＣＡＭアッセイを用いた分析
チロシンキナーゼインヒビターを乳棒および乳鉢で粉にして、粒子サイズを５ミクロン以下に減らした。次いで、それらを、ポリカプロラクトン（分子量１８０００  Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，  ＡＬ  ＵＳＡ）と共に乾燥粉末として混合した。混合物を６５℃で５分間加熱し、そして融解ポリマー／薬剤混合物を５分間かき混ぜて、平滑なペーストにした。次いで、融解ペーストを１ｍｌシリンジに採取し、そして押し出して３ｍｇのペレットを形成した。次いで、これらのペレットをＣＡＭアッセイで試験した。ＣＡＭアッセイにおいて試験されたチロシンキナーゼインヒビターとして、ラベンダスチネク、エルブスタチン、ハービマイシン、およびゲニステインが挙げられる。これらの薬剤の抗血管新生阻害効果を比較すると、ハービマイシン（ＰＣＬ中２％）が、試験されたＣＡＭの４／４において無脈管ゾーンを誘導して最も強力であった。
【０３６５】
実施例３２
ビンカアルカロイドのＰＣＬ熱ペーストへのカプセル化およびＣＡＭアッセイを使用した分析
Ａ．インヒビターのＰＣＬ熱ペーストへの取り込み
ビンカアルカロイド（ビンブラスチンおよびビンクリスチン）を乳棒および乳鉢で粉にして、粒子サイズを５ミクロン未満に減らした。次いで、それらを、ポリカプロラクトン（分子量１８０００  Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，  ＡＬ  ＵＳＡ）と共に乾燥粉末として混合した。混合物を６５℃で５分間加熱し、そして融解したポリマー／薬剤混合物を５分間かき混ぜてなめらかなペーストにした。次いで、融解したペーストを１ｍｌシリンジに採取し、そして押し出して、３ｍｇのペレットを形成した。次いで、これらのペレットをＣＡＭアッセイで試験した。
【０３６６】
Ｂ．結果
ＣＡＭ上で処方物を試験した場合、薬剤が、生物学的効果を誘導するのに十分な量でＰＣＬペレットから放出されたことは明らかであった。ビンブラスチンおよびビンクリスチンの両方は、コントロールＰＣＬ熱ペーストペレットと比較した場合、ＣＡＭアッセイにおいて抗血管新生効果を誘導した。
【０３６７】
０．５％および０．１％薬物充填の濃度で、ビンクリスチンは、試験された全てのＣＡＭにおいて血管新生阻害を誘導した。２％を超える濃度を試験した場合、毒性薬物レベルが達成され、そして期待されない胚の死が生じた。
【０３６８】
ビンブラスチンはまた、０．２５％、０．５％、および１％の濃度でＣＡＭにおいて血管新生を阻害することに効果的であった。しかし、２％を超える濃度で、ビンブラスチンはまた胚に対して毒性であった。
【０３６９】
実施例３３
生体接着ミクロスフェア
Ａ．生体接着ミクロスフェアの調製
１０〜６０μｍの粒子直径範囲のミクロスフェアを、１００ｋｇ／モルＰＬＬＡから作製した。ミクロスフェアを水酸化ナトリウム溶液中でインキュベートして、ポリエステルの加水分解により表面上にカルボン酸基を生成した。反応を、表面電荷を測定することにより水酸化ナトリウム濃度およびインキュベーション時間に関して特徴づけた。反応は、０．１Ｍ水酸化ナトリウム中での４５分のインキュベーション後に完全に達した。塩基処理後、ミクロスフェアを、ＤＥＣのアルコール溶液中でミクロスフェアを懸濁し、そして混合物を分散性粉末に乾燥させることにより、架橋剤であるジメチルアミノプロピルカルボジイミド（ＤＥＣ）でコートした。ミクロスフェア：ＤＥＣの重量比は９：１であった。ミクロスフェアが乾燥した後、それらをポリ（アクリル酸）２％ｗ／ｖ溶液に攪拌しながら分散させ、ＤＥＣをＰＡＡと反応させて、ミクロスフェア表面上に架橋ＰＡＡの水不溶性ネットワークを生成した。走査型電子顕微鏡を使用して、ミクロスフェアの表面上にＰＡＡの存在を確認した。
【０３７０】
塩基での処理前後のミクロスフェアの示差走査型熱量測定は、大半の（ｂｕｌｋ）熱特性（Ｔｇ、融解、および結晶度）における変化が走査型電子顕微鏡により観察されないことを明らかにした。
【０３７１】
Ｂ．インビトロパクリタキセル放出速度
同じ粒子直径サイズ範囲を有するパクリタキセル充填ミクロスフェア（１０％および３０％ｗ／ｗ充填）を製造し、そしてリン酸緩衝化生理食塩水中の１０日間放出についてのインビトロ放出プロフィールを得た。放出は薬物充填に比例し、４００μｇのパクリタキセルが１０日間で５ｍｇの３０％充填ミクロスフェアから放出され、そして１５０μｇが同じ期間で１０％充填ミクロスフェアから放出された。カプセル化効率は約８０％であった。パクリタキセル充填ミクロスフェアを、０．１Ｍ水酸化ナトリウム中で４５分間インキュベートし、そしてゼータポテンシャルを水酸化ナトリウム中のインキュベーション前後に測定した。パクリタキセル充填ミクロスフェアの表面電荷は、塩基を用いた処理前後の両方でパクリタキセルを含まないミクロスフェアより低かった。
【０３７２】
Ｃ．ポリリジンまはたフィブロネクチンのいずれかでコートされたＰＬＬＡの調製およびインビトロ評価
１％スーダンブラック（ミクロスフェアを着色するため）を含むＰＬＬＡミクロスフェアを調製した。これらの球体を、ポリリジン（Ｓｉｇｍａ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ−ハイドロブロメル（Ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｅｌｌ）形態またはフィブロネクチン（Ｓｉｇｍａ）のいずれかの２％（ｗ／体積）溶液に１０分間懸濁した。ミクロスフェアを緩衝液で１回洗浄し、そしてラット由来の新鮮に調製された膀胱の内表面に置いた。膀胱を１０分間放置し、次いで緩衝液で３回洗浄した。残渣（結合）ミクロスフェアは、プロセス後に膀胱壁に存在し、従って生体接着が、フィブロネクチンおよびポリ−ｌ−リジンでコートされたミクロスフェアの両方について生じたことを示した（図６９Ａおよび６９Ｂ）。
【０３７３】
実施例３４
ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）の合成
ポリアクリルアミドおよびその誘導体を、フリーラジカル重合および放射線誘導重合により容易に合成し得る。以下はポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）の合成の例であり、ここでモノマーＮ−イソプロピルアクリルアミドを、有機溶媒（例えば、ヘキサンおよびトルエン）からの再結晶により精製する。
【０３７４】
簡単には、Ｎ−イソプロピルアクリルアミドを６０℃のような温度でトルエンに溶解する。この溶液を、モノマーの再結晶化を可能にするためにより低い温度（例えば４℃）に冷却する。次いで、モノマーを濾過により回収し、そして真空下で乾燥する。合成のために、精製モノマー（２０ｇ）を、丸底ガラスフラスコ中の蒸留水（１８０ｍｌ）に溶解する。溶液を３０分間窒素でパージして、溶解酸素を置換する。次いで、温度を６５℃に上昇させ、そして少量（０．１ｇ）の開始剤（例えば、過硫酸アンモニウムおよび２，２’−アゾビス−イソブチロニトリル）を添加して、重合を開始する。重合は１０時間以内に完了され、そして窒素保護および攪拌下である。最後に、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）を、エタノール添加により沈殿させる。ポリマーを乾燥し、そして保存する。
【０３７５】
実施例３５
ポリ（アクリル酸）誘導体の合成
ポリ（アクリル酸）およびその誘導体を、フリーラジカル重合および放射線誘導重合により容易に合成し得る。以下はポリ（アクリル酸）の合成の例であり、ここでモノマーアクリル酸を、低圧（例えば、１０ｍｍＨｇ）下で蒸留（例えば、４０℃）により精製する。
【０３７６】
簡単には、精製モノマー（２０ｇ）を、丸底ガラスフラスコ中のジオキサン（１８０ｍｌ）に溶解する。溶液を３０分間窒素でパージして、溶解酸素を置換する。次いで、温度を６５℃に上昇させ、そして少量（０．１ｇ）の開始剤２，２’−アゾビス−イソブチロニトリルを添加して、重合を開始する。重合は２４時間以内に完了され、そして窒素保護および攪拌下である。最後に、ポリ（アクリル酸）を、ｎ−ヘキサン添加により沈殿させる。ポリマーを乾燥し、そして保存する。
【０３７７】
実施例３６
パクリタキセルの脈管周囲投与
２５０〜３００ｇの重量のＷＩＳＴＡＲラットを、インノバー（０．３３ｍｌ／ｋｇ）の筋肉内注射により麻酔する。一旦鎮静剤を飲ませると、次いでそれらをハロタン麻酔下に置く。一般的な麻酔を確立した後、首の上の部分の柔毛をそり、皮膚を鉗子で留め、そしてベタジンを綿棒で塗る。左頚動脈上を垂直に切開し、そして外頚動脈を曝す。２本の結紮糸を外頚動脈のまわりに置き、そして横方向の動脈切開をする。次いで、番号２ＦＲＥＮＣＨ  ＦＯＧＡＲＴバルーンカテーテルを頚動脈に導入し、そして左総頚動脈に通し、そしてバルーンを生理食塩水で膨らませる。カテーテルを、頚動脈に３回上下に通す。次いで、カテーテルを取り出し、そして結紮糸で左外頚動脈を縛る。
【０３７８】
次いで、エチレンビニルアセテート（ＥＶＡ）中のパクリタキセル（３３％）を、１０匹のラットの総頚動脈周囲に円周様式で注射する。ＥＶＡ単独を、１０匹のさらなるラットの総頚動脈周囲に注射する。各グループからの５匹のラットを１４日目に屠殺し、そして２８日目に最後の５匹を屠殺する。ラットを、重量喪失または全身性疾患の他の徴候について観察する。１４または２８日で動物を麻酔し、そして左頚動脈を最初の実験の様式で暴露する。頚動脈を単離し、１０％緩衝化ホルムアルデヒドで固定し、そして組織学について調べる。
【０３７９】
実施例３７
アテローム性動脈硬化症
Ａ．アテローム性動脈硬化症
アテローム性動脈硬化症病変を、食餌のみによりニュージーランド白ウサギにおいて作り出す。簡単には、約１．６ｋｇの重量のニュージーランド白ウサギを、０．２５重量％コレステロールを補充した粉末固形飼料上に置く。総血漿コレステロールを、血管を拡張するためのインノバー（０．１ｍｌ／ｋｇ）の注射後に、サンプルを辺縁耳静脈から採取することにより毎週ベースで測定する。サンプルをＥＤＴＡと混合してサンプル中の０．１５％濃度を達成し、そして低速遠心分離による血漿分離まで氷上に置く。
【０３８０】
十分なコレステロール食餌開始の１週間後、動物を、１０匹の３グループに無作為化する。ケタミン３５ｍｇ／ｋｇおよびキシラジン７ｍｇ／ｋｇでの麻酔の誘導、次いで挿管を介した一般的な麻酔の後に、柔毛を剃り、そして腹部上の皮膚を滅菌する。腹壁切開を行い、そして腹部大動脈を単離する。２２ｇ針を用いて、エチレンビニルアセテートペースト、５％パクリタキセルを含むエチレンビニルアセテートペースト、３３％パクリタキセルを含むエチレンビニルアセテートペーストを、腎臓下腹部大動脈の近位半分の周囲に円周に沿って置く。大動脈分岐に伸長する大動脈の遠位半分は処置しない。１０匹のコントロールウサギにおいて、腎臓下腹部大動脈を単離するが、その周囲には何も注射しない。
【０３８１】
アテローム発生性飼料は２４週間続ける。その時点で、動物をケタミン（３５０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（７ｍｇ／ｋｇ）の注射で筋肉内的に麻酔し、次いでユータノール（２４０ｍｇ／ｍｌ；２ｍｌ／４．５ｋｇ）の静脈内過剰用量で屠殺する。次いで、動物を、ヘパリン（１ＩＵ／ｍｌ）を含む、０．１５ｍｍｏｌ／リットルのＮ−２−ヒドロキシエチルパパラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ｐＨ７．４）を含むハンクス平衡化塩溶液を１０分間、続いて希釈Ｋａｒｎｏｖｓｋｙ固定液で１５分間還流することにより、左心室を介して１００ｍｍ水銀で還流固定する。胸部大動脈および腹部大動脈ならびに腸骨動脈をひとまとめに取り出し、そしてさらに３０分間同様の溶液に入れる。
【０３８２】
次いで、連続の薄い切断を、胸部大動脈、特に腎臓下腹部大動脈で行う。Ｍｏｖａｔ、Ｈ＆Ｅ、およびＭａｓｓｏｎ染色を行い、そして管腔損傷の程度、アテローム性動脈硬化症病変の発達の程度、および動脈周囲への薬物療法に対する任意の管腔周囲の反応を調べるために組織学的分析を行う。
【０３８３】
実施例３８
再狭窄の処置
２５０〜３００ｇの重量のＷＩＳＴＡＲラットを、インノバー（０．３３ｍｌ／ｋｇ）の筋肉内注射により麻酔する。一旦それらに鎮静剤を飲ませると、それらをハロタン麻酔下に置く。一般的な麻酔を確立した後、首の上の部分の柔毛をそり、皮膚をベタジンで清潔にする。左頚動脈上を垂直に切開し、そして外頚動脈を曝す。２本の結紮糸を外頚動脈周辺に置き、そしてそれらの間で横方向の動脈切開をする。２Ｆｒ  Ｆｏｇａｒｔｙバルーンカテーテルを外頚動脈に導入し、そして左総頚動脈に通し、そしてバルーンを生理食塩水で膨らませる。カテーテルを、３回頚動脈に上下に通して、内皮を露出させる。カテーテルを取り出し、そして結紮糸で左外頚動脈を縛る。
【０３８４】
動物を５匹のグループに無作為化する。５匹のラットのサブグループは、コントロール、キャリアポリマー単独、キャリアポリマー＋１、５、１０、２０、および３３％パクリタキセルが送達されるグループである。２つのキャリアポリマー：ＥＶＡおよびＥＶＡ／ＰＬＡブレンドが調べられる。ポリマー混合物を、頚動脈周囲に円周のまわりに置く。次いで、傷を閉じる。各グループのラットを１４日目および２８日目で屠殺する。その中間に、ラットを重量喪失または他の全身性徴候について観察する。１４日または２８日後、動物を、筋肉内インノバー（０．３３ｍｌ／ｋｇ）を用いた最初の鎮静により屠殺する。次いで、動脈を組織学的に調べる。
【０３８５】
実施例３９
移植片狭窄を引き起こす内膜過形成
Ａ．動物研究
一般的な麻酔を家畜ブタに誘導する。首領域を剃り、そして皮膚をクレンジング溶液で滅菌する。首の各側面を垂直に切開し、そして頚動脈を曝し、そして８ｍｍのＰＴＦＥ移植片を、２端より、側面の吻合（両側的に、総頚動脈上の近位吻合および内部頚動脈上の遠位吻合）に挿入する。介在するバイパス動脈を連結する。動物を、左側のみにそれぞれ外科的に作られた吻合に隣接して、キャリアポリマー単独を受ける１０匹のブタ、キャリアポリマー＋５％パクリタキセルを受ける１０匹のブタ、およびキャリアポリマー＋３３％パクリタキセルを受ける１０匹のブタのグループに無作為化する。右側移植片は、各ブタにおいてコントロールとして働く。傷を閉じ、そしてブタを回復させる。
【０３８６】
第２グループのブタを研究する。移植片を類似の様式で作る。血管作用剤を、手術時に吻合部位に隣接して置かない。動物を回復させる。移植を行った２週間後、第２の一般的な麻酔薬を投与し、そして左頚動脈を再診査する。近位および遠位の吻合に隣接して、各１０匹のブタは、近位および遠位両方の吻合に隣接して円周に沿って、キャリア単独、キャリアポリマー＋５％パクリタキセル、およびキャリアポリマー＋３３％パクリタキセルを受ける。傷を閉じ、そしてブタを回復させる。反対の右側移植片はコントロールとして働く。
【０３８７】
３ヶ月で、全てのブタは一般的な麻酔を受ける。大腿動脈を切開し、そしてピッグテールカテーテルを、蛍光顕微鏡ガイダンス下で上行胸部大動脈に挿入する。頚動脈血管系の画像化を用いるアーチ注入を行う。特に、近位および遠位の移植片ならびに移植片の遠位吻合に直ぐ遠位の動脈の狭窄の程度を測定し、そして％狭窄を計算する。必要であれば、総頚動脈の選択的な注射を行う。
【０３８８】
各グループにおける５匹のブタを屠殺する。次いで、ヘパリン（１ＩＵ／ｍｌ）を含む、０．１５ｍｍｏｌ／リットルのＮ−２−ヒドロキシエチルパパラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ｐＨ７．４）を含むハンクス平衡化塩溶液を１０分間還流し、続いて希釈Ｋａｒｎｏｖｓｋｙ固定液で１５分間還流することにより、動物を左心室を介して１００ｍｍ水銀で還流固定する。胸部大動脈および腹部大動脈ならびに頚動脈をひとまとめに取り出し、そしてさらに３０分間同様の溶液に入れる。
【０３８９】
近位吻合に直ぐ近位の頚動脈での、近位吻合での、遠位吻合での、および遠位吻合に直ぐ遠位の頚動脈での組織学的切片を作る。切片を、ＭｏｖａｔおよびＨ＆ＥおよびＭａｓｓｏｎ染料で染色する。脈管内膜および外膜の反応ならびに脈管周囲反応の組織学的分析を記録する。管腔狭窄化の程度を伴う形態計測的分析を計算する。
【０３９０】
残ったブタを６ヶ月目に研究し、そして同様の血管造影屠殺手順を行う。
【０３９１】
上記より、本発明の特定の実施態様は例示のために本明細書中で記載されたが、種々の改変が、本発明の精神および範囲を逸脱することなくなされ得ることが理解される。従って、本発明は、添付の請求の範囲による以外は制限されない。
【図面の簡単な説明】
【０３９２】
【図１】図１は、好中球の化学発光応答についてのポリマー性ミクロスフェアの血漿オプソニン作用の効果を示すグラフである（ＰＣＬミクロスフェアに対する細胞（濃度５×１０６細胞／ｍｌ）０．５ｍｌ中の２０ｍｇ／ｍｌミクロスフェア）。
【図２】図２は、ＰＣＬミクロスフェアに対する好中球（５×１０６細胞／ｍｌ）の化学発光応答についてのプレコーティング血漿＋／−２％プルロニックＦ１２７の効果を示すグラフである。
【図３】図３は、ＰＭＭＡミクロスフェアに対する好中球（５×１０６細胞／ｍｌ）の化学発光応答についてのプレコーティング血漿＋／−２％プルロニックＦ１２７の効果を示すグラフである。
【図４】図４は、ＰＬＡミクロスフェアに対する好中球（５×１０６細胞／ｍｌ）の化学発光応答についてのプレコーティング血漿＋／−２％プルロニックＦ１２７の効果を示すグラフである。
【図５】図５は、ＥＶＡ：ＰＬＡミクロスフェアに対する好中球（５×１０６細胞／ｍｌ）の化学発光応答についてのプレコーティング血漿＋／−２％プルロニックＦ１２７の効果を示すグラフである。
【図６】図６は、ＰＣＬミクロスフェアに対する好中球の化学発光応答についてのプレコーティングＩｇＧ（２ｍｇ／ｍｌ）または２％プルロニックＦ１２７、次いでＩｇＧ（２ｍｇ／ｍｌ）の効果を示すグラフである。
【図７】図７は、ＰＭＭＡミクロスフェアに対する好中球の化学発光応答についてのプレコーティングＩｇＧ（２ｍｇ／ｍｌ）または２％プルロニックＦ１２７、次いでＩｇＧ（２ｍｇ／ｍｌ）の効果を示すグラフである。
【図８】図８は、ＰＶＡミクロスフェアに対する好中球の化学発光応答についてのプレコーティングＩｇＧ（２ｍｇ／ｍｌ）または２％プルロニックＦ１２７、次いでＩｇＧ（２ｍｇ／ｍｌ）の効果を示すグラフである。
【図９】図９は、ＥＶＡ：ＰＬＡミクロスフェアに対する好中球の化学発光応答についてのプレコーティングＩｇＧ（２ｍｇ／ｍｌ）または２％プルロニックＦ１２７、次いでＩｇＧ（２ｍｇ／ｍｌ）の効果を示すグラフである。
【図１０Ａ】図１０Ａは、ミクロスフェア凝集の際のＥＶＡ：ＰＬＡポリマー混和比の効果を示すグラフである。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、「小さな」ミクロスフェアのサイズを示す走査型電子顕微鏡写真である。
【図１０Ｃ】図１０Ｃ（拡大挿入写真を含む−「１０Ｃ挿入写真」と標識）は、「大きな」ミクロスフェアのサイズを示す走査型電子顕微鏡写真である。
【図１０Ｄ】図１０Ｄは、０．６％ｗ／ｖパクリタキセル充填５０：５０ＥＶＡ：ＰＬＡポリマー混和ミクロスフェアからリン酸緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）への３７℃でのインビトロパクリタキセル放出の時間経過を示すグラフである。白丸は「小さな」サイズのミクロスフェアであり、そして黒丸は「大きな」サイズのミクロスフェアである。
【図１０Ｅ】図１０Ｅは、ミクロスフェア（「ＭＳ」）によるパクリタキセル放出の結果を示すＣＡＭの写真である。
【図１０Ｆ】図１０Ｆは、増大した倍率での１０Ｅと同様の写真である。
【図１１Ａ】図１１Ａは、１％、２％、５％、または１０％パクリタキセルを含むポリカプロラクトンミクロスフェアからリン酸緩衝化生理食塩水への３７℃での放出速度プロフィールを示すグラフである。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、コントロールミクロスフェアで処理されたＣＡＭを示す写真である。
【図１１Ｃ】図１１Ｃは、５％パクリタキセル充填ミクロスフェアで処理されたＣＡＭを示す写真である。
【図１２Ａ】図１２Ａおよび１２Ｂは、それぞれ、ＥＶＡフィルムからのパクリタキセルの放出、および時間に対するその同じフィルムに残存するパクリタキセルパーセントを示す２つのグラフである。
【図１２Ｂ】図１２Ａおよび１２Ｂは、それぞれ、ＥＶＡフィルムからのパクリタキセルの放出、および時間に対するその同じフィルムに残存するパクリタキセルパーセントを示す２つのグラフである。
【図１２Ｃ】図１２Ｃは、時間に対するパクリタキセルを含まないＥＶＡ／Ｆ１２７フィルムの膨張を示すグラフである。
【図１２Ｄ】図１２Ｄは、時間に対するパクリタキセルを含まないＥＶＡ／Ｓｐａｎ  ８０フィルムの膨張を示すグラフである。
【図１２Ｅ】図１２Ｅは、種々のＥＶＡ／Ｆ１２７混和物についての圧力対ひずみ曲線を示すグラフである。
【図１３Ａ】図１３Ａおよび１３Ｂは、処方物中の％ＭｅＰＥＧの関数としてのＰＣＬ／ＭｅＰＥＧポリマー混和物の融点（１３Ａ）、および処方物中のＭｅＰＥＧ量の関数としての凝固するために６０℃のＰＣＬペーストに必要とされる時間の増加パーセント（１３Ｂ）を示す２つのグラフである。
【図１３Ｂ】図１３Ａおよび１３Ｂは、処方物中の％ＭｅＰＥＧの関数としてのＰＣＬ／ＭｅＰＥＧポリマー混和物の融点（１３Ａ）、および処方物中のＭｅＰＥＧ量の関数としての凝固するために６０℃のＰＣＬペーストに必要とされる時間の増加パーセント（１３Ｂ）を示す２つのグラフである。
【図１３Ｃ】図１３Ｃは、種々のＰＣＬ／ＭｅＰＥＧポリマー混和物の柔軟性を示すグラフである。
【図１３Ｄ】図１３Ｄは、種々のＭｅＰＥＧ濃度のポリマー混和物についての時間に対する重量％の変化を示す。
【図１３Ｅ】図１３Ｅは、時間に対する１％パクリタキセルで充填された種々のポリマー混和物からのパクリタキセル放出速度を示すグラフである。
【図１３Ｆ】図１３Ｆおよび１３Ｇは、２０％ＭｅＰＥＧ／ＰＣＬブレンドから放出された総パクリタキセル量に対する種々の量のパクリタキセルの効果を示すグラフである。
【図１３Ｇ】図１３Ｆおよび１３Ｇは、２０％ＭｅＰＥＧ／ＰＣＬブレンドから放出された総パクリタキセル量に対する種々の量のパクリタキセルの効果を示すグラフである。
【図１３Ｈ】図１３Ｈは、ＭｅＰＥＧ／ＰＣＬポリマーの引っ張り強度に対するＭｅＰＥＧの効果を示すグラフである。
【図１４】図１４は、種々のポリマー処方物からのパクリタキセルの放出を示すグラフである。
【図１５】図１５は、時間経過に対してＰＣＬペーストからＰＢＳへの３７℃でのパクリタキセルの放出を示すグラフである。ＰＣＬペーストは、メッシュ＃１４０を用いて調製したパクリタキセルの微粒子および種々の添加剤を含む。誤差棒は、３サンプルの標準偏差を示す。
【図１６】図１６は、パクリタキセル−ゼラチン−ＰＣＬペーストからＰＢＳへの３７℃でのパクリタキセル放出の時間経過を示すグラフである。このグラフは、ゼラチン濃度（メッシュ＃１４０）およびメッシュ＃１４０またはメッシュ＃６０を用いて調製したパクリタキセル−ゼラチン（１：１）微粒子のサイズの効果を示す。誤差棒は、３サンプルの標準偏差を示す。
【図１７Ａ】図１７Ａおよび１７Ｂは、３７℃で蒸留水中への懸濁後、２０％パクリタキセルを含むＰＣＬペーストの膨張挙動に対する、添加剤（１７Ａ；メッシュ＃１４０）および微粒子のサイズ（１７０Ｂ；メッシュ＃１４０またはメッシュ＃６０）ならびに添加剤（メッシュ＃１４０）の比率の効果を示すグラフである。パクリタキセル−ゼラチン中に２７０μｍ微粒子で調製したペーストおよび３０％ゼラチンを含むペーストに対する測定を、マトリックスの分解により４時間後に中断した。誤差棒は、３サンプルの標準偏差を示す。
【図１７Ｂ】図１７Ａおよび１７Ｂは、３７℃で蒸留水中への懸濁後、２０％パクリタキセルを含むＰＣＬペーストの膨張挙動に対する、添加剤（１７Ａ；メッシュ＃１４０）および微粒子のサイズ（１７０Ｂ；メッシュ＃１４０またはメッシュ＃６０）ならびに添加剤（メッシュ＃１４０）の比率の効果を示すグラフである。パクリタキセル−ゼラチン中に２７０μｍ微粒子で調製したペーストおよび３０％ゼラチンを含むペーストに対する測定を、マトリックスの分解により４時間後に中断した。誤差棒は、３サンプルの標準偏差を示す。
【図１８】図１８Ａ、１８Ｂ、１８Ｃ、および１８Ｄは、蒸留水に懸濁する前（１８Ａ）および３７℃で６時間懸濁した後（１８Ｂ）のパクリタキセル−ゼラチン−ＰＣＬ（２０：２０：６０）ペーストの代表的な走査型電子顕微鏡写真である。１８Ｃおよび１８Ｄの顕微鏡写真は、１８Ｂより高倍率であり、パクリタキセル（棒型）およびゼラチンマトリックスの密接な関連を示す。
【図１９】図１９Ａおよび１９Ｂは、パクリタキセル処理ＣＡＭにおいて無脈管分布（ａｖａｓｃｕｌａｒｉｔｙ）ゾーンを示すゼラチン−ＰＣＬ（１９Ａ）およびパクリタキセル−ゼラチン−ＰＣＬ（２０：２０：６０；１９Ｂ）ペーストで処理されたＣＡＭの顕微鏡写真である。
【図２０】図２０は、樹立した腫瘍を有するマウスへのパクリタキセル−ゼラチン−ＰＣＬペーストの腫瘍周囲注射の効果を示す表である。
【図２１】図２１は、ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡ組成物の融解温度、エンタルピー、分子量、多分散、および固有粘度を示す表である。
【図２２】図２２は、ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡおよびＰＥＧのＤＳＣサーモグラフを示すグラフである。加熱速度は１０℃／分であった。融解温度およびエンタルピーについては図２１を参照のこと。
【図２３】図２３は、２０％パクリタキセル充填ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡシリンダーからのＰＢＳアルブミン緩衝液への３７℃でのパクリタキセルの累積放出を示すグラフである。誤差棒は、４サンプルの標準偏差を示す。４０％ＰＥＧのシリンダーは、分解により４日目で中断された。
【図２４】図２４Ａ、２４Ｂ、および２４Ｃは、３７℃でのパクリタキセルインビトロ放出間の２０％パクリタキセル充填ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡシリンダーの寸法、長さ（Ａ）、直径（Ｂ）、および湿重量（Ｃ）の変化を示すグラフである。
【図２５】図２５は、３７℃でのＰＢＳアルブミン緩衝液への放出間の２０％パクリタキセル充填ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡシリンダー（２０％ＰＥＧ、１ｍｍ直径）のゲル浸透クロマトグラムを示すグラフである。
【図２６】図２６は、３７℃でのＰＢＳアルブミン緩衝液への放出間のＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡシリンダー（２０％パクリタキセル充填）の質量喪失およびポリマー組成物変化を示す表である。
【図２７】図２７Ａ、２７Ｂ、２７Ｃ、および２７Ｄは、パクリタキセル放出前および間の乾燥ＰＤＬＬＡ−ＰＥＧ−ＰＤＬＬＡシリンダー（２０％パクリタキセル充填、１ｍｍ直径）のＳＥＭである。Ａ：２０％ＰＥＧ、０日目；Ｂ：３０％ＰＥＧ、０日目；Ｃ：２０％ＰＥＧ、６９日目；Ｄ：３０％ＰＥＧ、６９日目。
【図２８】図２８は、２０％パクリタキセル充填ＰＤＬＬＡ：ＰＣＬ混和物およびＰＣＬから３７℃でのＰＢＳアルブミン緩衝液へのパクリタキセルの累積放出を示すグラフである。誤差棒は、４サンプルの標準偏差を示す。
【図２９】図２９は、マウスの皮下腫瘍に局所的に適用されたパクリタキセル充填された外科用ペースト処方物の効力を示す表である。
【図３０】図３０は、パクリタキセル放出に対する放射線効果を示すグラフである。
【図３１】図３１は、コントロールミクロスフェア（ＰＬＬＡ：ＧＡ−８５：１５）の粒子サイズの範囲を示すグラフである。
【図３２】図３２は、２０％パクリタキセル充填ミクロスフェア（ＰＬＬＡ：ＧＡ−８５：１５）の粒子サイズの範囲を示すグラフである。
【図３３】図３３は、コントロールミクロスフェア（ＰＬＬＡ：ＧＡ−８５：１５）の粒子サイズの範囲を示すグラフである。
【図３４】図３４は、２０％パクリタキセル充填ミクロスフェア（ＰＬＬＡ：ＧＡ−８５：１５）の粒子サイズの範囲を示すグラフである。
【図３５】図３５Ａ、３５Ｂ、および３５Ｃは、種々の比のＰＬＬＡおよびＧＡ粒子サイズの範囲を示すグラフである。
【図３６】図３６Ａおよび３６Ｂは、種々の比のＰＬＬＡおよびＧＡ粒子サイズの範囲を示すグラフである。
【図３７Ａ】図３７Ａは、種々の比のＰＬＬＡおよびＧＡ粒子サイズの範囲を示すグラフである。
【図３７Ｂ】図３７Ｂは、種々の比のＰＬＬＡおよびＧＡ粒子サイズの範囲を示すグラフである。
【図３７Ｃ】図３７Ｃは、種々の比のＰＬＬＡおよびＧＡ粒子サイズの範囲を示すグラフである。
【図３８Ａ】図３８Ａおよび３８Ｂは、種々の比のＰＬＬＡおよびＧＡの粒子サイズの範囲を示すグラフである。
【図３８Ｂ】図３８Ａおよび３８Ｂは、種々の比のＰＬＬＡおよびＧＡの粒子サイズの範囲を示すグラフである。
【図３９】図３９は、選択したジブロック（ｄｉｂｌｏｃｋ）コポリマーの分子量、ＣＭＣ、および最大パクリタキセル充填を示す表である。
【図４０】図４０Ａおよび４０Ｂは、コポリマーおよびクレモフォア（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬによるパクリタキセル結晶の水（３７℃）中での可溶化を示すグラフである。４０Ａ：クレモフォアでのコポリマー濃度効果（２０時間インキュベーション）；４０Ｂ：時間の効果（コポリマーまたはクレモフォア濃度０．５％）。
【図４１】図４１Ａおよび４１Ｂは、室温（２２℃）でのミセルパクリタキセル溶液の濁度（４５０ｎｍでのＵＶ−可視吸光度）を示すグラフである。パクリタキセル濃度は、水中で２ｍｇ／ｍｌであった。パクリタキセル充填は、充填が５％であったＭｅＰＥＧ−５０００−３０／７０を除いて１０％であった。
【図４２】図４２は、パクリタキセルナイロンマイクロカプセルからのパクリタキセル放出を示すグラフである。
【図４３Ａ】図４３Ａは、腫瘍増殖に対するパクリタキセル／ＰＣＬの効果を示すグラフである。
【図４３Ｂ】図４３Ｂおよび４３Ｃは、腫瘍増殖に対するコントロール、１０％および２０％パクリタキセル充填熱ペースト（ｔｈｅｒｍｏｐａｓｔｅ）の効果を示す２つの写真である。
【図４３Ｃ】図４３Ｂおよび４３Ｃは、腫瘍増殖に対するコントロール、１０％および２０％パクリタキセル充填熱ペースト（ｔｈｅｒｍｏｐａｓｔｅ）の効果を示す２つの写真である。
【図４４】図４４は、数によるミクロスフェアのサイズ分布を示す棒グラフである（５％ＰＶＡへの１０ｍｇスラミン（ｓｕｒａｍｉｎ）ナトリウムを含む５％ポリ（エチレン−ビニルアセテート））。
【図４５】図４５は、重量によるミクロスフェアのサイズ分布を示す棒グラフである（５％ＰＶＡへの１０ｍｇスラミンナトリウムを含む５％ポリ（エチレン−ビニルアセテート））。
【図４６】図４６は、５０ｍｇポリ（エチレン−ビニルアセテート）中のスラミンナトリウムのカプセル化重量を示すグラフである。
【図４７】図４７は、５０ｍｇポリ（エチレン−ビニルアセテート）中のスラミンナトリウムのカプセル化のパーセントを示すグラフである。
【図４８】図４８は、１０％ＮａＣｌを含む５％ＰＶＡ中で作製した１０ｍｇスラミンナトリウムを含む５％ＥＬＶＡＸミクロスフェアの重量によるサイズ分布を示す棒グラフである。
【図４９】図４９は、１０％ＮａＣｌを含む５％ＰＶＡ中で作製した１０ｍｇスラミンナトリウムを含む５％ミクロスフェアの重量によるサイズ分布を示す棒グラフである。
【図５０】図５０は、１０％ＮａＣｌを含む５％ＰＶＡ中で作製された１０ｍｇスラミンナトリウムを含む５％ミクロスフェアの数によるサイズ分布を示す棒グラフである。
【図５１】図５１Ａは、ＣＡＭ上のスラミンおよび酢酸コルチゾンの写真である（倍率＝８倍）。簡単には、この画像は、０．５％メチルセルロース中の２０μｇのスラミンおよび７０μｇの酢酸コルチゾンで処理した無脈管ゾーンを示す。血管は、薬物供給源から離れて再指向される無脈管ゾーンの周辺に位置したことに留意のこと。図５１Ｂは、より高倍率（倍率＝２０倍）で効果のあった領域の脈管の詳細を示す写真である。無脈管領域および無脈管ゾーンに隣接する血管の典型的な「押し分け（ｅｌｂｏｗｉｎｇ）」効果に留意のこと。
【図５２Ａ】図５２Ａは、時間に対するＰＣＬからのＭＴＸの放出効果を示す。
【図５２Ｂ】図５２Ｂは、時間に対するＰＣＬからのＭＴＸの放出効果を示す。
【図５２Ｃ】図５２Ｃは、時間に対するＰＣＬからのＭＴＸの放出効果を示す。
【図５２Ｄ】図５２Ｄは、時間に対するＰＣＬからのＭＴＸの放出効果を示す。
【図５２Ｅ】図５２Ｅは、時間に対するＰＣＬからのＭＴＸの放出効果を示す。
【図５３】図５３は、ＰＬＡ：ＧＡ（５０：５０）から作製した１０％メトトレキサート充填ミクロスフェアの写真である；固有粘度「ＩＶ」＝０．７８。
【図５４】図５４は、ＰＣＬからの１０％充填バナジルサルフェートの放出を示すグラフである。
【図５５】図５５は、硫酸バナジウムを含むヒアルロン酸ミクロスフェアの写真である。
【図５６】図５６Ａは、ＰＣＬからの有機バナジウム酸塩の放出を示すグラフである。図５６Ｂは、時間経過に対する残存する有機バナジウム酸塩の割合を示す。
【図５７】図５７は、有機バナジウム酸塩を含むポリＤ，Ｌ，乳酸ミクロスフェアを示す写真である。
【図５８Ａ】図５８Ａおよび５８Ｂは、ＰＣＬ（１５０ｍｇスラブ）からのＢＭＯＶ放出の時間経過を示すグラフである。（Ａ）放出された薬物のμｇまたは（Ｂ）スラブに残存する薬物の％。ＰＣＬ中のＢＭＯＶの最初の充填を、（白丸）５％；（黒丸）１０％；（上向き白三角）１５％；（上向き黒三角）２０％；（白四角）３０％；および（下向き白三角）３５％により与えられる。
【図５８Ｂ】図５８Ａおよび５８Ｂは、ＰＣＬ（１５０ｍｇスラブ）からのＢＭＯＶ放出の時間経過を示すグラフである。（Ａ）放出された薬物のμｇまたは（Ｂ）スラブに残存する薬物の％。ＰＣＬ中のＢＭＯＶの最初の充填を、（白丸）５％；（黒丸）１０％；（上向き白三角）１５％；（上向き黒三角）２０％；（白四角）３０％；および（下向き白三角）３５％により与えられる。
【図５９Ａ】図５９Ａおよび５９Ｂは、（Ａ）放出された薬物のμｇまたは（Ｂ）スラブに残存する薬物の％として表す、ＰＣＬ：ＭＥＰＥＧ（８０：２０、ｗ／ｗ）の１５０ｍｇスラブからのＢＭＯＶ放出の時間経過を示すグラフである。ＰＣＬ：ＭＥＰＥＧ中のＢＭＯＶの最初の充填を、（白丸）５％；（黒丸）１０％；（上向き白三角）１５％；（上向き黒三角）２０％により与える。
【図５９Ｂ】図５９Ａおよび５９Ｂは、（Ａ）放出された薬物のμｇまたは（Ｂ）スラブに残存する薬物の％として表す、ＰＣＬ：ＭＥＰＥＧ（８０：２０、ｗ／ｗ）の１５０ｍｇスラブからのＢＭＯＶ放出の時間経過を示すグラフである。ＰＣＬ：ＭＥＰＥＧ中のＢＭＯＶの最初の充填を、（白丸）５％；（黒丸）１０％；（上向き白三角）１５％；（上向き黒三角）２０％により与える。
【図６０Ａ】図６０Ａ、６０Ｂ、および６０Ｃは、（６０Ａ：上）ＢＭＯＶ結晶；（６０Ｂ：中）薬物放出実験の開始での２０％ＢＭＯＶを含むＰＣＬスラブの表面形態、および（６０Ｃ：下）薬物放出実験の終わり（ＰＢＳ中で７２日）での２０％ＢＭＯＶを含むＰＣＬスラブの表面形態の走査型電子顕微鏡写真である。
【図６０Ｂ】図６０Ａ、６０Ｂ、および６０Ｃは、（６０Ａ：上）ＢＭＯＶ結晶；（６０Ｂ：中）薬物放出実験の開始での２０％ＢＭＯＶを含むＰＣＬスラブの表面形態、および（６０Ｃ：下）薬物放出実験の終わり（ＰＢＳ中で７２日）での２０％ＢＭＯＶを含むＰＣＬスラブの表面形態の走査型電子顕微鏡写真である。
【図６０Ｃ】図６０Ａ、６０Ｂ、および６０Ｃは、（６０Ａ：上）ＢＭＯＶ結晶；（６０Ｂ：中）薬物放出実験の開始での２０％ＢＭＯＶを含むＰＣＬスラブの表面形態、および（６０Ｃ：下）薬物放出実験の終わり（ＰＢＳ中で７２日）での２０％ＢＭＯＶを含むＰＣＬスラブの表面形態の走査型電子顕微鏡写真である。
【図６１】図６１Ａおよび６１Ｂは、細胞のＢＭＯＶに対する１時間の暴露（６１Ａ）、またはＢＭＯＶに対する連続暴露（６１Ｂ）を用いた細胞生存に対する漸増濃度のＢＭＯＶの効果を示す２つのグラフである。細胞を、（白丸）ＨＴ−２９結腸細胞；（黒丸）ＭＣＦ−７乳房細胞；（上向き白三角）Ｓｋｍｅｓ−１非小肺細胞、および（上向き黒三角）正常骨髄細胞により記載する。
【図６２】図６２は、マウスにおいて増殖したＭＤＡＹ−Ｄ２腫瘍の重量に対するＢＭＯＶ充填ペーストの効果を示す表である。簡単には、２５％、３０％、または３５％ＢＭＯＶのいずれかを含むＰＣＬペースト（１５０ｍｇ）を、ＭＤＡＹ−２腫瘍を有するマウスに皮下に注射した。腫瘍重量を処置後１０日目に測定した。この表は、（上の表）２５％ＢＭＯＶおよび（下の表）３０％または３５％ＢＭＯＶを用いた２つの別々の実験からの結果を示す。コントロールデータは、ＢＭＯＶを含まないＰＣＬで処置されたマウスを記載する。
【図６３】図６３は、マウスにおいて増殖したＲＩＦ−１腫瘍の重量に対するＢＭＯＶ充填ＰＣＬ：ＭｅＰＥＧペーストの効果を記載する表である。簡単には、ＲＩＦ−１腫瘍を５日間マウスにおいて増殖させ、その時点で腫瘍の９０％を外科的に除去し、そして切除部分をＢＭＯＶを含まないか（コントロール）または５％ＢＭＯＶを含むかのいずれかのＰＣＬ：ＭｅＰＥＧ（８０：２０、ｗ／ｗ）ペースト１５０ｍｇで処置した。腫瘍の再増殖を、この処置後の４、５、および６日目に測定した。
【図６４】図６４Ａおよび６４Ｂは２つのグラフである。図６４Ａは、１５ｍＬ  ＰＢＳ／ＡＬＢへ放出されたＢＥＭＯＶの時間経過に対するＰＣＬ熱ペースト（１５０ｍｇペレット）中のＢＥＭＯＶの増加した充填の効果を示す。図６４Ｂはまた、１５ｍＬ  ＰＢＳ／ＡＬＢへ放出されたＢＥＭＯＶの時間経過に対するＰＣＬ熱ペースト（１５０ｍｇペレット）中のＢＥＭＯＶの充填増加の効果を示す。薬物放出を、ペレット中に残存するＢＥＭＯＶの％として表す。
【図６５】図６５Ａおよび６５Ｂは２つのグラフである。図６５Ａは、１５ｍＬ  ＰＢＳ／ＡＬＢへ放出されたＶ５の時間経過に対するＰＣＬ熱ペースト（１５０ｍｇペレット）中のＶ５の増加した充填の効果を示す。図６５Ｂはまた、１５ｍＬ  ＰＢＳ／ＡＬＢへ放出されたＶ５の時間経過に対するＰＣＬ熱ペースト（１５０ｍｇペレット）中のＶ５の充填増加の効果を示す。薬物放出を、ペレット中に残存するＶ５の％として表す。
【図６６】図６６Ａおよび６６Ｂは２つのグラフである。図６６Ａは、１５ｍＬ  ＰＢＳ／ＡＬＢへ放出されたＰＲＣ−Ｖの時間経過に対するＰＣＬ熱ペースト（１５０ｍｇペレット）中のＰＲＣ−Ｖの増加した充填の効果を示す。図６６Ｂはまた、１５ｍＬ  ＰＢＳ／ＡＬＢへ放出されたＰＲＣ−Ｖの時間経過に対するＰＣＬ熱ペースト（１５０ｍｇペレット）中のＰＲＣ−Ｖの充填増加の効果を示す。薬物放出を、ペレット中に残存するＰＲＣ−Ｖの％として表す。
【図６７−１】図６７Ａ、６７Ｂ、６７Ｃ、および６７Ｄは、１５ｍＬ  ＰＢＳ／ＡＬＢへ放出されたＢＭＯＶの時間経過に対する、５％ＢＭＯＶ（６７Ａ）、１０％  ＢＭＯＶ（６７Ｂ）、１５％  ＢＭＯＶ（６７Ｃ）、および２０％  ＢＭＯＶ（６７Ｄ）を含むＰＣＬ熱ペースト（１５０ｍｇペレット）中の異なる濃度のＭｅＰＥＧ充填の効果を示す一連のグラフである。
【図６７−２】図６７Ａ、６７Ｂ、６７Ｃ、および６７Ｄは、１５ｍＬ  ＰＢＳ／ＡＬＢへ放出されたＢＭＯＶの時間経過に対する、５％ＢＭＯＶ（６７Ａ）、１０％  ＢＭＯＶ（６７Ｂ）、１５％  ＢＭＯＶ（６７Ｃ）、および２０％  ＢＭＯＶ（６７Ｄ）を含むＰＣＬ熱ペースト（１５０ｍｇペレット）中の異なる濃度のＭｅＰＥＧ充填の効果を示す一連のグラフである。
【図６８−１】図６８Ａ、６８Ｂ、６８Ｃ、および６８Ｄは、１５ｍＬ  ＰＢＳ／ＡＬＢへ放出されたＢＭＯＶの時間経過に対する、０％ＭｅＰＥＧ（６８Ａ）、５％ＭｅＰＥＧ（６８Ｂ）、１０％ＭｅＰＥＧ（６８Ｃ）、および１５％ＭｅＰＥＧ  （６８Ｄ）を含むＰＣＬ熱ペースト（１５０ｍｇペレット）中の異なる濃度のＭｅＰＥＧ充填の効果を示す一連のグラフである。薬物放出を、ペレット中に残存するＢＭＯＶの％として表す。
【図６８−２】図６８Ａ、６８Ｂ、６８Ｃ、および６８Ｄは、１５ｍＬ  ＰＢＳ／ＡＬＢへ放出されたＢＭＯＶの時間経過に対する、０％ＭｅＰＥＧ（６８Ａ）、５％ＭｅＰＥＧ（６８Ｂ）、１０％ＭｅＰＥＧ（６８Ｃ）、および１５％ＭｅＰＥＧ  （６８Ｄ）を含むＰＣＬ熱ペースト（１５０ｍｇペレット）中の異なる濃度のＭｅＰＥＧ充填の効果を示す一連のグラフである。薬物放出を、ペレット中に残存するＢＭＯＶの％として表す。
【図６９】図６９Ａおよび６９Ｂは、膀胱組織上のフィブロネクチンコートＰＬＬＡミクロスフェアの写真（６９Ａ）および膀胱組織上のポリ（Ｌ−リジン）ミクロスフェアの写真である。
【図７０−１】図７０Ａおよび７０Ｂは、コントロール（非充填）熱ペーストで処置した腫瘍を有するＣＡＭの２つの写真である。簡単には、図７０Ａの中央の白い塊は腫瘍組織である。全方向にＣＡＭから腫瘍に進入する多数の血管に留意のこと。腫瘍は、「血管新生因子」の生成により宿主脈管構造の内増殖を誘導する。腫瘍組織は、それを供給する血管に沿って遠くに拡大する。図７０Ｂは、７０Ａに示すＣＡＭの下側の図である。簡単には、この図は、車輪のスポークのように腫瘍に進入する血管の急進的な出現を証明する。血管密度は、周囲の正常なＣＡＭ組織より腫瘍付近において大きなことに留意のこと。図７０Ｃおよび７０Ｄは、２０％パクリタキセル充填熱ペーストで処置した腫瘍を有するＣＡＭの２つの写真である。簡単には、図７０Ｃの中央の白い塊は腫瘍組織である。腫瘍組織付近の少数の血管に留意のこと。血管新生インヒビターの徐放は、腫瘍により生成される血管新生刺激を克服し得る。腫瘍自体は不十分に脈管化され、そしてサイズが進行的に減少する。図７０Ｄは、７０Ｃに示すＣＡＭの下側から撮影され、そしてコントロール腫瘍組織と比較した場合、血流の腫瘍への血流の破壊を証明する。血管密度が腫瘍付近に低減され、そして正常な周囲のＣＡＭ組織のものよりまばらなことに留意のこと。
【図７０−２】図７０Ａおよび７０Ｂは、コントロール（非充填）熱ペーストで処置した腫瘍を有するＣＡＭの２つの写真である。簡単には、図７０Ａの中央の白い塊は腫瘍組織である。全方向にＣＡＭから腫瘍に進入する多数の血管に留意のこと。腫瘍は、「血管新生因子」の生成により宿主脈管構造の内増殖を誘導する。腫瘍組織は、それを供給する血管に沿って遠くに拡大する。図７０Ｂは、７０Ａに示すＣＡＭの下側の図である。簡単には、この図は、車輪のスポークのように腫瘍に進入する血管の急進的な出現を証明する。血管密度は、周囲の正常なＣＡＭ組織より腫瘍付近において大きなことに留意のこと。図７０Ｃおよび７０Ｄは、２０％パクリタキセル充填熱ペーストで処置した腫瘍を有するＣＡＭの２つの写真である。簡単には、図７０Ｃの中央の白い塊は腫瘍組織である。腫瘍組織付近の少数の血管に留意のこと。血管新生インヒビターの徐放は、腫瘍により生成される血管新生刺激を克服し得る。腫瘍自体は不十分に脈管化され、そしてサイズが進行的に減少する。図７０Ｄは、７０Ｃに示すＣＡＭの下側から撮影され、そしてコントロール腫瘍組織と比較した場合、血流の腫瘍への血流の破壊を証明する。血管密度が腫瘍付近に低減され、そして正常な周囲のＣＡＭ組織のものよりまばらなことに留意のこと。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１０Ｆ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１２Ｅ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１３Ｅ】
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【図１３Ｆ】
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【図１３Ｇ】
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【図１３Ｈ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７Ａ】
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【図３７Ｂ】
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【図３７Ｃ】
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【図３８Ａ】
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【図３８Ｂ】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３Ａ】
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【図４３Ｂ】
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【図４３Ｃ】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２Ａ】
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【図５２Ｂ】
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【図５２Ｃ】
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【図５２Ｄ】
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【図５２Ｅ】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８Ａ】
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【図５８Ｂ】
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【図５９Ａ】
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【図５９Ｂ】
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【図６０Ａ】
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【図６０Ｂ】
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【図６０Ｃ】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７−１】
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【図６７−２】
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【図６８−１】
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【図６８−２】
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【図６９】
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【図７０−１】
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【図７０−２】
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