(57)【要約】【課題】２型糖尿病患者における大血管合併症に対する易罹患性の判定方法の提供。【解決手段】２型糖尿病患者における大血管合併症に対する易罹患性を判定する方法であって、以下の工程：（ａ）　当該２型糖尿病患者から、ゲノムＤＮＡを含有する生体試料を採取する工程、（ｂ）　工程（ａ）において得られた生体試料中のゲノムＤＮＡ上に存在するコレステリルエステル転送蛋白質遺伝子の配列番号１で表される塩基配列からなる第１イントロンの第２７７番目の塩基に相当する位置の塩基の種類を決定する工程、及び（ｃ）　工程（ｂ）において得られた結果に基づいて、当該２型糖尿病患者の大血管合併症に対する易罹患性を判定する工程、を包含することを特徴とする当該２型糖尿病患者の大血管合併症に対する易罹患性判定方法。【選択図】　なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
２型糖尿病患者における大血管合併症に対する易罹患性を判定する方法であって、以下の工程：
（ａ）　当該２型糖尿病患者から、ゲノムＤＮＡを含有する生体試料を採取する工程、
（ｂ）　工程（ａ）において得られた生体試料中のゲノムＤＮＡ上に存在するコレステリルエステル転送蛋白質（ＣＥＴＰ：Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ　Ｅｓｔｅｒ　Ｔｒａｎｓｆｅｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ）遺伝子の配列番号１で表される塩基配列からなる第１イントロンの第２７７番目の塩基に相当する位置の塩基の種類を決定する工程、及び
（ｃ）　工程（ｂ）において得られた結果に基づいて、当該２型糖尿病患者の大血管合併症に対する易罹患性を判定する工程、
を包含することを特徴とする当該２型糖尿病患者の大血管合併症に対する易罹患性判定方法。
【請求項２】
２型糖尿病患者の大血管合併症に対する易罹患性の判定を、ＣＥＴＰ遺伝子の配列番号１で表される塩基配列からなる第１イントロンの第２７７番目の塩基の種類がＴＴ型の場合に最も大血管合併症を併発し易いとし、ＴＣ型の場合には２番目に大血管合併症を併発し易いとし、ＣＣ型の場合には前記２者と比較すれば最も大血管合併症を併発し難いとする判定基準に基づいて行なうことを特徴とする請求項１記載の２型糖尿病患者の大血管合併症に対する易罹患性判定方法。
【請求項３】
大血管合併症が、虚血性心疾患、脳血管障害又は閉塞性動脈硬化症である請求項１又は２記載の２型糖尿病患者の大血管合併症に対する易罹患性判定方法。
【請求項４】
配列番号２の塩基配列を含むプライマー、配列番号３の塩基配列を含むプライマー及び制限酵素ＴａｑＩを主要構成要素として含有してなる、２型糖尿病患者における大血管合併症に対する易罹患性判定用キット。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、２型糖尿病患者のコレステリルエステル転送蛋白質（ＣＥＴＰ：Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ　Ｅｓｔｅｒ　Ｔｒａｎｓｆｅｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ）遺伝子の多型を解析し、解析結果に基づいて、２型糖尿病患者の大血管合併症対する易罹患性を判定する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
糖尿病は、インスリン作用の不足に基づく慢性の高血糖状態を主徴とする代謝疾患群である。この疾患群の共通の特徴は、インスリン効果の不足であり、それによって、糖、脂質、蛋白質を含む殆ど全ての代謝系に異常をきたす。本疾患群でインスリン効果が不足する機序としては、インスリンの絶対的ないし相対的な供給不全と、インスリンが作用する臓器におけるインスリンの感受性低下（インスリン抵抗性）とがある。インスリンの供給不全は、膵ランゲルハンス島のβ細胞の量がβ細胞の破壊などによって減少した場合や、β細胞自体に内在する機能不全によって起こる。
【０００３】
糖尿病は、成因論的に分類すると、１型、２型、その他の特定の機序・疾患による糖尿病及び妊娠糖尿病とに分けられる。この中で、最も発症頻度の高いのが２型糖尿病である。２型糖尿病は単一の原因による説明が困難な多因子疾患とされており、成因についての詳細は不明である。遺伝的素因や加齢や過食、肥満、運動不足などの環境因子が作用することによって軽度に血糖が上昇すると、遺伝的素因と密接にかかわっているインスリン分泌障害及び肝や末梢組織におけるインスリン抵抗性が顕在化して、より血糖が上昇し発症に至るものと考えられている。
【０００４】
２型糖尿病に罹患すると、冠動脈疾患（ＣＨＤ）、脳血管疾患（ＣＶＤ）及び閉塞性動脈硬化症（ＡＳＯ）等のアテローム性動脈硬化症に対する罹患リスクも高まる。これはインスリン抵抗性と連関するリポ蛋白質障害、すなわち、超低密度リポ蛋白質（ＶＬＤＬ）、トリグリセリド及びコレステロールの上昇、並びに高密度リポ蛋白質（ＨＤＬ）の低下によって部分的に説明することができる　［Ｄｕｎｎ　ＦＬ：Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ｍｅｔａｂ．　Ｒｅｖ．　６：４７−６１（１９９０）］。このＨＤＬコレステロールレベルと循環器病罹患リスクとの間の負の相関性は、コレステロールの逆転送（ｒｅｖｅｒｓｅ　ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔ）におけるＨＤＬの重要な役割によって説明できる。すなわち、ＨＤＬは末梢組織から余剰となったコレステロールを引き抜き、これを肝臓に転送する作用がある。コレステロールエステル転送蛋白（ＣＥＴＰ）は、ＨＤＬ中のコレステロールエステルをＶＬＤＬやＬＤＬへと転送する作用を有する蛋白で、ＣＥＴＰの遺伝的欠損により著しい高ＨＤＬ血症が生ずる。
【０００５】
ところで、同じ２型糖尿病患者でも、大血管合併症を併発し易い患者と、併発しにく患者とが存在する。これらの差異は、究極的には各人の遺伝的素因、特に遺伝子多型（各人のゲノムを構成する塩基配列の微小な違い）に基づいてかなりの部分を説明できるものと考えられる。遺伝子多型は、最近の急速なゲノム解析進歩に伴って明らかとなったものである。遺伝子多型には、２〜数個の塩基がまとまって挿入又は欠失しているタイプや、さらに長鎖のＤＮＡ断片が挿入又は欠失しているタイプのものがあるが、最近特に注目されているものは、一つの塩基が別の塩基への置換されておこる、いわゆる一塩基多型（ＳＮＰ）と呼ばれるタイプである。ヒトのゲノム上には、約３００万のＳＮＰが存在すると言われている。ＳＮＰの中には、既に疾患感受性との関連が指摘されたものもあり、ＳＮＰは、各人に最適の医療（テーラーメイド医療）実現のための診断指標として重要視されてきている。大血管合併症の併発予防のためにも、大血管合併症の併発に関与する遺伝的素因を明らかにし、遺伝子診断を臨床検査に有効活用していくことが極めて重要である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
２型糖尿病患者のＣＥＴＰ遺伝子多型を解析し、解析結果に基づいて、２型糖尿病患者の大血管合併症に対する易罹患性を判定する方法を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、２型糖尿病患者において、ＣＥＴＰ遺伝子の第１イントロンの第２７７番目の塩基の多型が、その後の大血管合併症への易罹患性に影響を与えていることを明らかにし、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（４）である。
（１）　２型糖尿病患者における大血管合併症に対する易罹患性を判定する方法であって、以下の工程：
（ａ）　当該２型糖尿病患者から、ゲノムＤＮＡを含有する生体試料を採取する工程、
（ｂ）　工程（ａ）において得られた生体試料中のゲノムＤＮＡ上に存在するコレステリルエステル転送蛋白質（ＣＥＴＰ）遺伝子の配列番号１で表される塩基配列からなる第１イントロンの第２７７番目の塩基に相当する位置の塩基の種類を決定する工程、及び
（ｃ）　工程（ｂ）において得られた結果に基づいて、当該２型糖尿病患者の大血管合併症に対する易罹患性を判定する工程、
を包含することを特徴とする当該２型糖尿病患者の大血管合併症に対する易罹患性判定方法。
【０００８】
（２）　２型糖尿病患者の大血管合併症に対する易罹患性の判定を、ＣＥＴＰ遺伝子の配列番号１で表される塩基配列からなる第１イントロンの第２７７番目の塩基の種類がＴＴ型の場合に最も大血管合併症を併発し易いとし、ＴＣ型の場合には２番目に大血管合併症を併発し易いとし、ＣＣ型の場合には前記２者と比較すれば最も大血管合併症を併発し難いとする判定基準に基づいて行なうことを特徴とする上記（１）の２型糖尿病患者の大血管合併症に対する易罹患性判定方法。
（３）　大血管合併症が、虚血性心疾患、脳血管障害又は閉塞性動脈硬化症である上記（１）又は（２）の２型糖尿病患者の大血管合併症に対する易罹患性判定方法。
（４）　配列番号２の塩基配列を含むプライマー、配列番号３の塩基配列を含むプライマー及び制限酵素ＴａｑＩを主要構成要素として含有してなる、２型糖尿病患者における大血管合併症に対する易罹患性判定用キット。
以下、本発明を詳細に説明する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明は、２型糖尿病患者が有するＣＥＴＰ遺伝子の第１イントロンの第２７７番目の塩基の多型を解析し、解析結果に基づいて、当該患者の大血管合併症ヘの易罹患性を判定することを特徴とする。ここで、「ＣＥＴＰ遺伝子」とは、コレステリルエステル転送蛋白質をコードし、ヒト第１６番染色体の長腕２１の位置（１６ｑ２１）にマップされ、ＧｅｎＢａｎｋアクセッションナンバーＭ３０１８５として登録されている塩基配列を含む遺伝子をいう。「大血管合併症（ｍａｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ　ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」とは、糖尿病に特有な細小血管合併症とは発症機序が異なり、中動脈や大動脈に病変を認める動脈硬化をいい、特に、虚血性心疾患、脳血管障害及び閉塞性動脈硬化症を総称したものをいう。「易罹患性」とは、それぞれの疾患への罹り易さをいう。
【００１０】
本発明において、２型糖尿病患者の大血管合併症ヘの易罹患性判定の基準となる多型は、ＣＥＴＰ遺伝子の配列番号１で表される第１イントロンの第２７７番目の塩基に相当する位置の一塩基多型（ＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型ともいう）である。この部位の塩基は、現在のところ、チミン（Ｔ）又はシトシン（Ｃ）であることが確認されている。本明細書中で、ＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型がチミンのアレルをＢ１アレル、シトシンのアレルをＢ２アレルともいう。ヒト染色体ＤＮＡは、両親から由来する各一対が存在するので、被検者のＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型には、両染色体のＣＥＴＰ遺伝子ともチミンであるＴＴ型（Ｔのホモ接合型あるいはＢ１Ｂ１型ともいう）、一方の染色体はチミンでもう一方の染色体はシトシンであるＴＣ型（ＴとＣのヘテロ接合型あるいはＢ１Ｂ２型ともいう）、そして両染色体ともシトシンであるＣＣ型（Ｃのホモ接合型あるいはＢ２Ｂ２型ともいう）の３つのタイプが存在する。ＣＥＴＰ遺伝子の第１イントロンの第２７７番目の塩基がチミンである場合の全長配列を配列番号１に示した。
【００１１】
ＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型の解析方法は、上記の多型の判別ができる限り、特に限定されず、公知の様々な遺伝子多型解析方法を採用することができる。例えば、被検者から採取した血液細胞及び口腔内粘膜細胞等の試料から、染色体ＤＮＡを抽出し、これを鋳型として、目的の多型を含む部分を増幅できるように設計したプライマーを用いてＰＣＲを行い、得られたＰＣＲ産物の塩基配列を解析する方法や、その他、多型に起因する制限酵素切断パターンの違いを利用したＰＣＲ−ＲＦＬＰ法、ＰＣＲプライマーの３’末端にミスマッチがあるとプライマーとして機能しないため増幅が起きないことを利用したアレル特異的ＰＣＲ法、蛍光標識したアレル特異的オリゴとＴａｑＤＮＡポリメラーゼによるＰＣＲ反応とを利用したＴａｑＭａｎ　ＰＣＲ法等によって、遺伝子多型解析を行なうことができる。
【００１２】
例えば、ＰＣＲ−ＲＦＬＰ法によるＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型の解析は、以下のようにして行うことができる。まず、ＰＣＲ法等の核酸増幅法により、ＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型部位を含む遺伝子断片を増幅する。鋳型となる遺伝子は、ヒト染色体ＤＮＡであればどのような細胞から採取されたものでもよい。また、ＰＣＲによって増幅する場合には、センスプライマー（ｆｏｒｗａｒｄプライマーともいう）として、ＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型部位の上流側に相補的な配列を含むもの、アンチセンスプライマー（ｒｅｖｅｒｓｅプライマーともいう）としては、ＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型部位の下流側に相補的な配列を含むものを用いることができる。具体的には、センスプライマーとしては、５’−ｃａｃｔａｇｃｃｃａｇａｇａｇａｇｇａｇｔｇｃｃ−３’（配列番号２）、アンチセンスプライマーとしては、５’−ｃｔｇａｇｃｃｃａｇｃｃｇｃａｃａｃｔａａｃ−３’（配列番号３）等を用いることができるが、これらに限定されない。次いで、増幅されたＰＣＲ断片を制限酵素ＴａｑＩで消化する。図１に示すように、Ｂ２型遺伝子では、ＣＥＴＰ遺伝子の第１イントロンの第２７７番目の塩基シトシンであるが、これがチミンに変化した場合、制限酵素ＴａｑＩによって認識・切断される制限酵素部位ＴＣＧＡが出現する。よって、増幅断片を制限酵素ＴａｑＩで消化した場合、図２のように、遺伝子がＢ２型遺伝子をもっている場合とＢ１型遺伝子をもっている場合とで異なったサイズの断片が生じる。具体的には、上記のプライマーペアを用いた場合、ＰＣＲ増幅断片のＴａｑＩ消化物のゲル電気泳動後のバンドパターンは図３のようになる。すなわち、Ｂ１Ｂ１型の場合には３４５ｂｐと１７４ｂｐの二本のバンドが検出され、Ｂ２Ｂ２　型の場合には未消化の５２８ｂｐの一本のバンドが検出され、Ｂ１Ｂ２型の場合には５２８ｂｐ、３５４ｂｐ及び１７４ｂｐの三本のバンドが検出される。
【００１３】
また、アレル特異的ＰＣＲ法によるＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型の解析は、以下のようにして行うことができる。本方法は、より詳細にはプライマーの３’末端に一塩基のミスマッチがあるとプライマーのアニーリングが良好に起こらなくなり、結果としてＰＣＲによる増幅が生じないことを利用した方法である。この方法の成否に大きな影響を及ぼすのは、プライマーの３’末端のミスマッチである。そこで、プライマーを３’末端に変異がくるように設計することで、アレルの型により増幅の可否が決定されるため、アレル特異的ＰＣＲによれば増幅産物の有無によりアレルの型が確認できる。アレル特異的ＰＣＲにおけるこのようなプライマーの設計は、ＣＥＴＰ遺伝子の公知の塩基配列に基づいて行うことができる。ＣＥＴＰ遺伝子の第１イントロンの第２７７番目の塩基が、シトシン及びチミンのいずれであるのかを決定する場合のプライマーの例としては、５’−ｔｃｔｇａｇａｃｃｃａｇａａｔｃａｃｔｇｇｇｇｔｔ−３’（配列番号４）及び５’−ｔｃｔｇａｇａｃｃｃａｇａａｔｃａｃｔｇｇｇｇｔｃ−３’（配列番号５）に示す塩基配列を有するものが挙げられる。配列番号４及び配列番号５に示す塩基配列を有するプライマーはその３’末端の塩基が相違している。これらのプライマーと、適宜選択した逆方向のプライマー、例えば、５’−ｃｔｇｇｃｔｔｔｔｇａａｃｔｔｇｇｃｇａｔａｃｔｃ−３’（配列番号６）に示す塩基配列を有するプライマーとを組合わせてＰＣＲを行い、配列番号４及び配列番号６のプライマーでＰＣＲを行った場合のみ３００ｂｐの増幅産物が確認された場合はＢ１Ｂ１型（ＴＴホモ型）、配列番号５及び配列番号６のプライマーでＰＣＲを行った場合のみ３００ｂｐの増幅産物が確認された場合はＢ２Ｂ２型（ＣＣホモ型）、両方の場合で増幅産物が確認された場合はＢ１Ｂ２型（ＴＣヘテロ型）と判定することができる。
【００１４】
解析の結果、ＣＥＴＰ遺伝子の第１イントロンの第２７７番目の塩基の種類が、前記３つのタイプのうち、ＴＴ型（Ｂ１Ｂ１型）である場合には最も大血管合併症を併発し易いとし、ＴＣ型（Ｂ１Ｂ２型）である場合には２番目に大血管合併症を併発し易いとし、ＣＣ型の場合には前記２者と比較すれば最も大血管合併症を併発し難いと判定することができる。
【００１５】
上記のＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型をタイピングするためのプライマーを主要構成要素として含むキットは、２型糖尿病患者における大血管合併症に対する易罹患性判定用キットとして使用することができ、これも本発明の好ましい実施態様である。以下に、ＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型タイピング用キットの具体的構成例を例示した。
〔ＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型タイピング用キット〕
▲１▼　配列番号２の塩基配列を含むプライマー
▲２▼　配列番号３の塩基配列を含むプライマー
▲３▼　制限酵素ＴａｑＩＢ
以上の構成要素には、さらに必要に応じて、各ヌクレオチド混液、希釈溶液等を追加補充することができる。
【００１６】
【実施例】
以下に、本発明の実施例を示して具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
〔実施例１〕
１９９７年４月から２０００年２月までの間に大阪市立大学糖尿病センターを訪れた患者の中から、本研究のために合計４４３名（男性２４８名、女性１９５名）の２型糖尿病患者をランダムに選択した。糖尿病の診断は、糖尿病歴あるいはアメリカ糖尿病協会基準（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｄｉａｂｅｔｅｓ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｃｒｉｔｅｒｉａ）に基づいて行った。この研究は、大阪市立大学病院の倫理委員会より承認を受けたものであり、適切なインフォームドコンセントを全ての患者より得た上で行った。
【００１７】
ＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型の決定は以下のようにして行った。すなわち、まずゲノムＤＮＡを末梢血白血球から常法に従って抽出した。得られたゲノムＤＮＡを鋳型として、ＧｅｎｅＡｍｐ　ＰＣＲ　Ｓｙｓｔｅｍ　９７００（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）を用い、目的の多型部位を含む領域を増幅した。増幅反応は、１．５ｍｍｏｌ／Ｌ　ＭｇＣｌ２，　５０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＫＣｌ，　２０ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，　ｐＨ８．４，　２００μｍｏｌ／Ｌの各デオキシヌクレオチド三リン酸及び０．０１ｍｇ／ｍｌ　ＢＳＡを含む反応液に、１００ｎｇのゲノムＤＮＡ，　２０ｐｍｏｌの各ＰＣＲプライマー：　ｆｏｒｗａｒｄプライマー５’−ｃａｃｔａｇｃｃｃａｇａｇａｇａｇｇａｇｔｇｃｃ−３’（配列番号２）とｒｅｖｅｒｓｅプライマー５’−ｃｔｇａｇｃｃｃａｇｃｃｇｃａｃａｃｔａａｃ−３’（配列番号３）及び１ｕｎｉｔのＡｍｐｌｉＴａｑ　Ｇｏｌｄ　ＤＮＡポリメラーゼ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）を加え、９４℃で１分間の変性、６０℃で１分間のアニーリング及び７２℃で２分間の伸長を１サイクルとして、合計３５サイクルを行った。次いで、ＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型を検出するために、２０μｌのａｌｉｑｕｏｔｓをとり５ｕｎｉｔのＴａｑＩにより６５℃で３時間処理した。次いで、１×トリス酢酸ＥＤＴＡバッファー中、２％アゲロースゲルにより電気泳動分離した。泳動後、ゲルを臭化エチジウムで染色し、紫外光下で可視化した。また、ＣＥＴＰの蛋白質濃度は、２種類の抗体を用い、Ｓａｋａｉらの方法［Ｓａｋａｉ　Ｋ　ｅｔ　ａｌ．：Ｃｌｉｎ．　Ｃｈｅｍ．　４４：１４６６−１４７３（１９９８）］に従って、ＥＬＩＳＡ法により測定した。虚血性心疾患の診断は循環器専門医によってなされ、その診断は、症状、安静時〜運動負荷時の心電図に認められる明らかな虚血性変化、あるいは冠血管造影による所見に基づいてなされた。脳血管障害は急性期的な神経学的障害の病歴と脳のＣＴ或いはＭＲＩによる脳梗塞・脳出血の所見により診断された。閉塞性動脈硬化症は足血管炎に対するＬａ　Ｆｏｎｔａｉｎｅ分類と下肢・上肢血圧比に基づいて定義され、末梢血管造影によって確認された。
【００１８】
上記ＰＣＲ−ＲＦＬＰ法によるＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型タイピングの結果、Ｂ１及びＢ２アレルの出現頻度はそれぞれ５８％と４２％であっ　た。４４３名の２型糖尿病患者をＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型に基づいて分け、各群の臨床的特長の比較を表１にまとめた。
【表１】
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【００１９】
表１に示したように、３群間で性別、年齢、糖尿病罹病期間、喫煙指数、ＢＭＩ、ＨｂＡ１ｃ、インスリン抵抗性の指標であるＨＯＭＡＩＲには有意差を認めなかった。ａｐｏ−ＡＩＩ、　ａｐｏ−ＢとＬｐ（ａ）を含め血漿ｎｏｎ−ＨＤＬコレステロ−ル及び中性脂肪の濃度は３群間で同程度であった。それに対して、ＨＤＬコレステロ−ル濃度はＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型に有意に関連を認めた（Ｐ＝０．００１２）。さらに，血漿を得られた患者数に限りはあるものの、ＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型とＣＥＴＰ濃度には有意な相関を認めた（Ｐ＝０．０２７５）。特にＢ１アレルは遺伝子数依存的にＣＥＴＰ濃度の上昇に関連していることが判り、このことは従来の健常人での報告と一致するものであった。Ｂ２Ｂ２群ではＣＥＴＰ濃度が低く、ＨＤＬコレステロ−ル値が高い一方、Ｂ１Ｂ１群ではＣＥＴＰ値は最も高く、ＨＤＬは最も低値であった。さらにａｐｏ−ＡＩは他の群に比してＢ２Ｂ２群で高値を呈した。検体を性別で分けても同様の結果が認められた。次いで、ＣＥＴＰの遺伝子多型に従って分類した大血管合併症の頻度を表２に示した。
【表２】
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【００２０】
遺伝子多型と合併症との関連性はカイ二乗試験で評価した。虚血性心疾患（ＣＨＤ）、閉塞性動脈硬化症（ＡＳＯ）、脳血管障害（ＣＶＤ）においては、他の群に比較してＢ１Ｂ１を有する患者が最も多く認められ、このことはＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型がこれらの合併症の発生率に関連していることを示唆している。次いで、各疾患ごとに多変量ロジスティック解析を行った。表３は、虚血性心疾患（ＣＨＤ）、表４は閉塞性動脈硬化症（ＡＳＯ）、表５は脳血管障害（ＣＶＤ）の場合の解析結果を示したものである。
【表３】
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【表４】
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【表５】
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【００２１】
ＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型のＢ１アレルは年齢、性別、喫煙ＨＤＬコレステロール、ｎｏｎＨＤＬコレステロ−ル、アポリポ蛋白、Ｌｐ（ａ）、ＢＭＩ、ＨｂＡ１ｃ及びＨＯＭＡ−ＩＲとは独立してＣＨＤの有病率に関連していた（オッズ比４．７０２）。興味深いことに，ＨＯＭＡ−ＩＲもＣＨＤの危険因子であった。ＣＨＤに加えてＢ１アレルはＡＳＯやＣＶＤに関しても独立した危険因子であった（オッズ比８．５５１と３．９０３）。ＡＳＯに関してはＢＭＩとＬｐ（ａ）値が独立した危険因子であり、さらにＨｂＡ１ｃはＣＶＤに対する独立した　危険因子であった。
【００２２】
以上の結果よりＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ遺伝子多型は２型糖尿病でみられる大血管合併症に関する強力な遺伝子的予測因子であり、特に、Ｂ１アレル（Ｔ型）である場合にその罹患リスクが高まることが判明した。
【００２３】
【発明の効果】
本発明により、２型糖尿病患者の大血管合併症に対する易罹患性の判定方法が提供される。本方法は、２型糖尿病患者の治療方針の策定において有用である。
【００２４】
【配列表】
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【００２５】
【配列表フリーテキスト】
配列番号２：合成ＤＮＡ
配列番号３：合成ＤＮＡ
配列番号４：合成ＤＮＡ
配列番号５：合成ＤＮＡ
配列番号６：合成ＤＮＡ
配列番号７：合成ＤＮＡ
配列番号８：合成ＤＮＡ
【図面の簡単な説明】
【図１】ＣＥＴＰ遺伝子第１イントロンの第２７７番塩基近傍のＢ１型及びＢ２型遺伝子の塩基配列を制限酵素部位とともに示した図である。
【図２】ＣＥＴＰ遺伝子第１イントロン上でのＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ多型位置、ＰＣＲ−ＲＦＬＰ法におけるプライマー設定位置及びＰＣＲ増幅断片を示した模式図である。
【図３】ＰＣＲ−ＲＦＬＰ法によりＴａｑＩＢ　ＣＥＴＰ多型をタイピングしたときに見られる各遺伝子型ごとのバンドパターンを模式的に示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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