(57)【要約】【課題】  スクアレン、カロテン類、トコール類及びステロール類のような少量成分を好ましくはパーム油から抽出及び単離する方法を提供する。【解決手段】  (a) 該油をアルコールでエステル化して、グリセロール、脂肪酸エステル及び該少量成分の混合物を提供し；(b) 該グリセロールから、該少量成分を含有する該エステル相を集め；(c) 該エステル相を蒸留して、スクアレン、カロテン類、トコール類及びステロール類の濃厚物を提供し；(d) 該濃厚物を、非極性溶剤、又は非極性溶剤と極性溶剤との混合液で希釈し；(e) 工程(d) から得られた濃厚物を吸着剤上に吸着させ；(f) 工程(e) から得られた濃厚物からの、非極性溶剤、又は非極性溶剤と極性溶剤との混合液を使用する該少量成分の脱着によって、該少量成分を抽出し；そして(g) 該少量成分を予め決められた溶剤の混合液によって脱着する、工程を含んでなる方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
スクアレン、カロテン類、トコール類及びステロール類を含んでなる少量成分を植物油から等溶剤強度下で単離する方法であって：
(a) 該油をアルコールでエステル化して、グリセロール、脂肪酸エステル及び該少量成分の混合物を提供し；
(b) 該グリセロールから、該少量成分を含有する該エステル相を集め；
(c) 該エステル相を室温〜２００℃の温度及び０〜１５０ｍｍトルの圧力で蒸留して、スクアレン、カロテン類、トコール類及びステロール類の濃厚物を提供し；
(d) 該濃厚物を、非極性溶剤、又は非極性溶剤と極性溶剤との混合液であって０．２〜５０バールの圧力下で９０：１０〜９９．５〜０．５の比率を有する混合液、で希釈し；  (e) 工程(d) から得られた濃厚物を吸着剤上に吸着させ；そして
(f) 工程(e) から得られた濃厚物からの、非極性溶剤、又は非極性溶剤と極性溶剤との混合液であって０．２〜５０バールの圧力下で９０：１０〜９９．５〜０．５の比率を有する混合液、である予め決められた溶剤の混合液を使用する該少量成分の脱着によって、該少量成分を抽出する
工程を含んでなる方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法であって、該植物油がパーム油である方法。
【請求項３】
請求項１記載の方法であって、工程(a) のアルコールが低級アルコールである方法。
【請求項４】
請求項１記載の方法であって、工程(e) で使用される吸着剤が、順相シリカゲル、逆相シリカゲル、中性アルミナ、又はポリマー吸着剤から選択される方法。
【請求項５】
請求項１記載の方法であって、該非極性溶剤が、ヘキサン、ヘプタン、ジクロロメタン、シクロヘキサン、石油エーテル、酢酸エチル、又はイソオクタンから選択される方法。
【請求項６】
請求項１記載の方法であって、該極性溶剤が、エタノール、イソプロパノール、メタノール、ブタノール又はアセトニトリルから選択される方法。
【請求項７】
β−カロテン、α−カロテン、リコペン、フィトエン及びフィトフルエンを含んでなる個別のカロテン、α−、γ−及びδ−トコフェロール及びトコトリエノールを含んでなる個別のトコール、並びにβ−シトステロールを含んでなる個別のステロールを植物油から等溶剤強度又は等圧条件下で０．２〜１０００バールの圧力下で単離する方法であって：  (a) 該油を吸着剤上に吸着させ；そして
(b) 工程(a) で得られた該混合物を極性溶剤と非極性溶剤との混合液で脱着する
工程を含んでなる方法。
【請求項８】
請求項７記載の方法であって、該個別のカロテンの供給源が濃厚物又は植物栄養分画分である方法。
【請求項９】
請求項７記載の方法であって、該植物油がパーム油である方法。
【請求項１０】
請求項７記載の方法であって、該吸着剤が、順相シリカゲル、逆相シリカゲル、中性アルミナ、又はポリマー吸着剤から選択される方法。
【請求項１１】
請求項７記載の方法であって、該非極性溶剤が、ヘキサン、ヘプタン、酢酸エチル、イソオクタン、又はシクロヘキサンから選択される方法。
【請求項１２】
請求項７記載の方法であって、該極性溶剤が、エタノール、イソプロパノール、メタノール、又はブタノールから選択される方法。
【請求項１３】
β−カロテン、α−カロテン、リコペン、フィトエン及びフィトフルエンを含んでなる個別のカロテン、α−、γ−及びδ−トコフェロール及びトコトリエノールを含んでなる個別のトコール、並びにβ−シトステロールを含んでなる個別のステロールを、等溶剤強度下で行われる方法によって植物油から得られたスクアレン、カロテン類、トコール類及びステロール類を含んでなる少量成分から単離する方法であって：
(a) 該油をアルコールでエステル化して、グリセロール、脂肪酸エステル及び該少量成分の混合物を提供し；
(b) 該グリセロールから、該少量成分を含有する該エステル相を集め；
(c) 該エステル相を室温〜２００℃の温度及び０〜１５０ｍｍトルの圧力で蒸留して、スクアレン、カロテン類、トコール類及びステロール類の濃厚物を提供し；
(d) 該濃厚物を、非極性溶剤、又は非極性溶剤と極性溶剤との混合液であって０．２〜５０バールの圧力下で９０：１０〜９９．５〜０．５の比率を有する混合液、で希釈し；  (e) 工程(d) から得られた濃厚物を吸着剤上に吸着させ；そして
(f) 工程(e) から得られた濃厚物からの、非極性溶剤、又は非極性溶剤と極性溶剤との混合液であって０．２〜５０バールの圧力下で９０：１０〜９９．５〜０．５の比率を有する混合液、である予め決められた溶剤の混合液による該少量成分の脱着によって、該少量成分を抽出する
工程を含んでなり、
該得られた少量成分が、更に、等溶剤強度又は等圧条件下で０．２〜１０００バールの圧力下で：
(g) 該少量成分を吸着剤に吸着させ；そして
(h) 工程(g) で得られた該混合物を極性溶剤と非極性溶剤との混合液で脱着する
工程を含んでなる抽出を受ける方法。
【請求項１４】
請求項１３記載の方法であって、工程(a) で使用される該植物油がパーム油である方法。
【請求項１５】
請求項１３記載の方法であって、工程(g) の吸着剤が、順相シリカゲル、逆相シリカゲル、中性アルミナ、又はポリマー吸着剤から選択される方法。
【請求項１６】
請求項１３記載の方法であって、工程(h) の非極性溶剤が、ヘキサン、ヘプタン、酢酸エチル、イソオクタン、又は石油エーテルから選択される方法。
【請求項１７】
請求項１３記載の方法であって、工程(h) の極性溶剤が、エタノール、イソプロパノール、メタノール、ブタノール、酢酸エチル、又はアセトニトリルから選択される方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、カロテン類、トコフェロール類及びトコトリエノール類の形態にあるトコール類、スクアレンのような炭化水素類、及びフィトステロール類、のような少量成分を植物油、好ましくはパーム油から、抽出及び単離する方法に関する。
【発明の背景】
【０００２】
粗製パーム油（ＣＰＯ）は、カロテン類、トコフェロール類及びトコトリエノール類の形態にあるトコール類、スクアレンのような炭化水素類、及びフィトステロール類、を包含する約１％の少量成分を含有する。これら少量成分は、パーム圧搾繊維から得られる油中にも高濃度で存在する。
カロテン類、トコール類及びスクアレンは、長い間、抗酸化特性を示すことで知られ、それらは、サプルメントや栄養剤として医薬品に、並びにファインケミカル製品に広く使用されている。サメの肝油中に広く見出されるスクアレンは、パーム油中にも存在し、化粧品並びに補助食品中の価値ある構成成分である。ステロール類は、医薬品におけるステロイド誘導体として使用されることができる。パーム油中に存在する主要なステロールであるβ−シトステロールは、低コレステロール作用を有することが分かっている。
【０００３】
これら価値ある少量成分を植物油から抽出するために幾つかの方法、例えば、米国特許第２，４６０，７９６号、２，５７２，４６７号、及び２，６５２，４３３号並びに英国特許第５６７，６８２号に開示された鹸化による抽出法、及び、英国特許第６９１，９２４号及び１，５６３，７９４号並びに米国特許第２，４８４，０４０号に開示されたヨウ素法、尿素法、及びフラー土又は活性炭による抽出法が, 開発されてきた。
本発明の分野の技術者に知られている更なる抽出法は、米国特許第２，４３２，０２１号に開示された溶剤抽出法；分子蒸留法；溶剤分画法；及び米国特許第５，１５７，１３２号及び英国特許第２，１６０，８７４号に開示された吸着法である。
【特許文献１】米国特許第２，４６０，７９６号
【特許文献２】米国特許第２，５７２，４６７号
【特許文献３】米国特許第２，６５２，４３３号
【特許文献４】英国特許第５６７，６８２号
【特許文献５】英国特許第６９１，９２４号
【特許文献６】英国特許第１，５６３，７９４号
【特許文献７】米国特許第２，４８４，０４０号
【特許文献８】米国特許第２，４３２，０２１号
【特許文献９】米国特許第５，１５７，１３２号
【特許文献１０】英国特許第２，１６０，８７４号
【発明の要旨】
【０００４】
本発明は、カロテン類、トコフェロール類及びトコトリエノール類の形態にあるトコール類、スクアレンのような炭化水素類、及びフィトステロール類、のような少量成分を植物油、好ましくはパーム油から、抽出及び単離する方法に関する。この方法は、(a) 植物油をアルコールでエステル化して、グリセロール、脂肪酸エステル及び少量成分の混合物を提供し、(b) そのグリセロールから、少量成分を含有するエステル相を集め、(c) そのエステル相を室温〜２００℃の温度及び０〜１５０ｍｍトルの圧力で蒸留して、スクアレン、カロテン類、トコール類及びステロール類の濃厚物を提供し、(d) その濃厚物を、非極性溶剤、又は非極性溶剤と極性溶剤との混合液であって０．２〜５０バールの圧力下で９０：１０〜９９．５〜０．５の比率を有する混合液、で希釈し、(e) 工程(d) から得られた濃厚物を吸着剤上に吸着させ、(f) 工程(e) から得られた濃厚物からの、非極性溶剤、又は非極性溶剤と極性溶剤との混合液であって０．２〜５０バールの圧力下で９０：１０〜９９．５〜０．５の比率を有する混合液、である予め決められた溶剤の混合液を使用する少量成分の脱着によって、その少量成分を抽出し、そして、(g) その少量成分を、予め決められた溶剤の混合液によって脱着する、工程を含んでなる。
【０００５】
β−カロテン、α−カロテン、リコペン、フィトエン及びフィトフルエンのような個別のカロテン、α−、γ−及びδ−トコフェロール及びトコトリエノールのような個別のトコール、並びにβ−シトステロールのような個別のステロールを植物油から等溶剤強度 (isoratic) 又は等圧条件下で０．２〜１０００バールの圧力下で単離する方法であって、(a) 植物油を吸着剤上に吸着させ、そして、(b) 工程(a) で得られた混合物を極性溶剤と非極性溶剤との混合液で脱着する、工程を含んでなる方法も提供される。
【０００６】
β−カロテン、α−カロテン、リコペン、フィトエン及びフィトフルエンのような個別のカロテン、α−、γ−及びδ−トコフェロール及びトコトリエノールのような個別のトコール、並びにβ−シトステロールのような個別のステロールを、等溶剤強度下で行われる方法によって植物油から得られたスクアレン、カロテン類、トコール類及びステロール類のような少量成分から単離する方法であって、(a) 植物油をアルコールでエステル化／エステル交換して、グリセロール、脂肪酸エステル及び少量成分の混合物を提供し、(b) グリセロールから、少量成分を含有するエステル相を集め、(c) そのエステル相を室温〜２００℃の温度及び０〜１５０ｍｍトルの圧力で蒸留して、スクアレン、カロテン類、トコール類及びステロール類の濃厚物を提供し、(d) その濃厚物を、非極性溶剤、又は非極性溶剤と極性溶剤との混合液であって０．２〜５０バールの圧力下で９０：１０〜９９．５〜０．５の比率を有する混合液、中に溶解し、(e) 工程(d) から得られた濃厚物を吸着剤上に吸着させ、(f) 工程(e) から得られた濃厚物から、非極性溶剤、又は非極性溶剤と極性溶剤との混合液であって０．２〜５０バールの圧力下で９０：１０〜９９．５〜０．５の比率を有する混合液、である予め決められた溶剤の混合液を使用して少量成分を抽出し、そして、(g) その少量成分を、予め決められた溶剤の混合液によって脱着する工程を含んでなり、その得られた少量成分が、更に、等溶剤強度又は等圧条件下で０．２〜１０００バールの圧力下で、(h) その少量成分を吸着剤に吸着させ、そして、(i) 工程(h) で得られた混合物を極性溶剤と非極性溶剤との混合液で脱着する工程を含んでなる抽出を受ける方法も提供される。
【０００７】
本発明は、新規な構成及び以下に十分に記載される部分と特許請求の範囲に特定的に指摘された部分との組み合わせからなる。それら委細の種々の変更は、本発明の範囲から逸脱するものでも、本発明のいかなる利点を犠牲にするものでもない。
【好ましい態様の詳細な説明】
【０００８】
本発明は、カロテン類、トコフェロール類及びトコトリエノール類の形態にあるトコール類、スクアレンのような炭化水素類、及びフィトステロール類、のような少量成分を植物油、好ましくはパーム油から、抽出及び単離する方法に関する。以降では、本発明を好ましい態様に従って説明する。しかしながら、それら説明を本発明の好ましい態様に限って行うことは、単に本発明の説明を容易にするために過ぎないことが理解されるべきであり、かつ、当業者は、特許請求の範囲から逸脱することなく、種々の修飾及び均等的置換を行えることが意図される。
植物油は、メタノール、エタノール、イソプロパノール及びブタノールのような低級アルコールでエステル化されて、グリセロール、脂肪酸アルキルエステル、カロテン類、トコール類、スクアレン、及びステロール類の混合物を与える。それら少量成分は、その混合物の油相中に含有され、次いで、グリセロールから分離される。
【０００９】
少量成分を含有するエステル相は、２００℃以下に加熱されかつ１５０ｍｍトル未満の圧力で減圧下で又は減圧なしで蒸留に付されて、それら少量成分が濃厚物中に残る。蒸留で、脂肪酸アルキルエステルはその混合物から除かれて、カロテン類、トコール類、スクアレン及びステロール類が豊富な濃厚物が残る。
集められた濃厚物は、非極性溶剤、又は非極性溶剤と極性溶剤との混合液であって非極性溶剤が主要構成成分である混合液中に溶解され、そして選択的吸着剤上に吸着される。順相シリカゲル、逆相シリカゲル又は中性アルミナ、又はポリエチレングリコールやポリアクリル酸多価アルコールのようなポリマー吸着剤、特にＣ１８シリカゲルのような異なるタイプの吸着剤が用いられることができる。少量成分は、使用される吸着剤のタイプに依存して一定の溶剤混合液によりその吸着剤から抽出及び脱着される。少量成分を脱着するため並びに運ぶために使用される溶剤は、エタノール、イソプロパノール、メタノール又はブタノールのような極性溶剤、及びヘキサン、ヘプタン、酢酸エチル、イソオクタン、又はシクロヘキサンのような非極性溶剤からなることができる。
【００１０】
抽出又は分画は、米国特許第６，０７２，０９２号及び英国特許第２２１８９８９号よりも改善された等溶剤強度法で行われる。米国特許第６，０７２，０９２号及び英国特許第２２１８９８９号によれば、異なる極性を有する複数の溶剤が代わる代わる加えられて全ての化合物が脱着される。これは、時間及び労力を浪費する。最も重要なことは、この方法は、商業的生産には、技術的にも経済的にも実現性がないことである。また、米国特許第６，０７２，０９２号は、全ての実施例においてパーム油からのカロテン類の回収だけを開示しているに過ぎないが、本発明は、単一の吸着／脱着プロセスで、カロテン、ビタミンＥ、ステロール類及びスクアレンを回収することを開示する。
【００１１】
吸着剤からの少量成分の脱着がカラムを介して行われることから、０．２〜５０バールの圧力をかけることができ、より速くかつ効率的な分離を達成することができる。
上記の方法は、個別のカロテン（即ち、β−カロテン、α−カロテン、リコペン、フィトエン及びフィトフルエン）、トコール（α−、γ−及びδ−トコフェロール及びトコトリエノール）、及びステロール（β−シトステロール）を植物油から単離するにも適用できる。そのような個別の化合物の単離は、運転圧力が０．２〜１０００バールであることができる、最初の抽出の拡張、又は、カロテン類、トコール類又はステロール類が豊富な何らかの供給源からの最初の抽出の拡張である。
【００１２】
次いで、得られた各々の画分は第２抽出に付され、そこで、個別のカロテン類（α−カロテン、β−カロテン、リコペン、フィトエン、フィトフルエン）、トコール（α−、γ−及びδ−トコフェロール及びトコトリエノール）及びβ−シトステロールが単離されかつ回収される。この第２方法は、順相シリカゲル、逆相シリカゲル又は中性アルミナ、好ましくは逆相Ｃ１８シリカゲルのような吸着剤に送入物を吸着させ、そして極性溶剤と非極性溶剤との混合液を使用して脱着させることからなる。個別のカロテン類、トコール類及びステロール類の供給源は、植物油又は濃厚物又は富植物栄養画分から得られる。好ましい植物油はパーム油であろう。
【００１３】
この方法は、運転圧力が０．２〜１０００バールであることができる等溶剤強度又は等圧法である。脱着に使用される溶剤は、ヘキサン、ヘプタン、酢酸エチル、イソオクタン、又はシクロヘキサンのような非極性溶剤、及びエタノール、イソプロパノール、メタノール又はブタノールのような極性溶剤からなることができる。
この方法による個別のカロテン、トコール及びステロールの単離は、それら化合物を含有するあらゆる供給源からの濃厚物又は生成物から抽出された画分を使用しても行うことができることが理解されなければならない。
以下は、カロテン類、トコール類、スクアレンのような炭化水素類、及びステロール類の異なる吸着剤による回収の実施例による説明である。
【実施例】
【００１４】
実施例１
粗製パーム油の２％塩基触媒及びメタノールでのアルコールエステル化から誘導された粗製パーム油メチルエステル及びパーム油少量成分が２００℃未満の温度及び１５０ｍｍトル以下の圧力で分子蒸留に付され、５％カロテン、０．５％トコール類、０．７％スクアレン及び０．７％ステロール類の組成を有する濃厚物を与えた。
上記濃厚物の１．４ｇサンプルが１０ｍＬのヘキサン中に溶解され、そして順相シリカゲルが詰められた１２ｃｍ長で４ｃｍ内径のカラムの上部に加えられた。送入物の吸着剤に対する比率は２３ｇ／ｋｇであった。ヘキサン：ＩＰＡ（９９．５：０．５）を有するヘキサンとＩＰＡの混合液が１バール以下の圧力でそのカラムに加えられた。画分が集められ、スクアレンが最初に溶出した。その後にカロテン類とトコール類が続き、最後がフィトステロール類であった。集められた画分中の溶剤が回転蒸発された。スクアレン画分中のスクアレンの濃度はガスクロマトグラフィー（ＧＣ）で７％と測定され、カロテン画分中のカロテン類はＵＶ分光分析で約２４％と測定された。トコール類は、２５０ｍｍ×４６ｍｍ内径の寸法を有するシリカ６０Ａカラム及び蛍光検出器でのＨＰＬＣによって測定された。流動相は、ヘキサン：ＴＨＦ：ＩＰＡ（１０００：６０：４）であった。トコール画分中のトコール類の濃度は約６２％であった。ＧＣでフィトステロール類の組成が測定され、ステロール類の画分中に約２９％のステロール類であった。
【００１５】
【表１】
2004175805.tif 000002
【００１６】
実施例２
実施例１と同じやり方で得られ実施例１と同じ組成を有する１．４ｇ濃厚物が１０ｍＬのヘキサン中に溶解され、そして順相シリカゲルが詰められた１２ｃｍ長で４ｃｍ内径のカラムの上部に加えられた。次いで、ヘキサン：ＩＰＡ（９９．５：０．５）の混合液が１バール未満の圧力でそのカラムに加えられた。画分が集められ、それらそれぞれの画分における少量成分の濃度は、カロテン類が２８％で８７％回収率、トコール類が７１％で３８％回収率、そしてステロール類が６％であった。
【００１７】
【表２】
2004175805.tif 000003
【００１８】
実施例３
実施例１と同じやり方で得られた２．５ｇの濃厚物がヘキサン中に溶解され、そして順相シリカゲルが詰められた１２ｃｍ長で４ｃｍ内径のカラムの上部に加えられた。ヘキサン：エタノール（９９．５：０．５）の混合液が１バール未満の圧力で加えられ、少量成分が溶出された。集められた画分は、カロテン及びトコール含有量について測定された。４３％のカロテン類が４５％のカロテン類を含む画分から回収された。トコール類の画分では、トコール類の濃度は１００％であると測定され、その特定の画分からの回収率は８％であった。
【００１９】
【表３】
2004175805.tif 000004
【００２０】
実施例４
実施例１と同じやり方で得られた０．５ｇの濃厚物が、逆相Ｃ１８シリカゲルが詰められた７．５ｃｍ長で４ｃｍ内径のカラムの上部に加えられた。エタノール：ヘキサン（６０：４０）が１バール未満の圧力でそのカラムの上部に加えられ少量成分が溶出された。しかしながら、エタノール：ヘキサンの範囲は、他の条件に依存して９０：１０まで変えることができる。ステロール類及びトコール類が最初に溶出し、それらの濃度は各々４％と３％であった。ステロール類の回収率は７２％で、トコール類の回収率は７５％であった。カロテン類及びスクアレンは、後の方の画分に溶出し、カロテン類の濃度は、それらが豊富な画分中で２７％であり、スクアレンの濃度は４％で回収率は４０％であった。
【００２１】
【表４】
2004175805.tif 000005
【００２２】
実施例５
実施例１と同じやり方で得られた１．３ｇの濃厚物がヘキサン中に溶解され、そして１２ｃｍ長で４ｃｍ内径のシリカカラムの上部に加えられた。ヘキサン：エタノール（９９．５：０．５）の混合液が１バール未満の圧力でそのカラムの上部に加えられ、少量成分が脱着された。集められた画分が測定され、次の結果が得られた。
【００２３】
【表５】
2004175805.tif 000006
【００２４】
実施例６
実施例１と同じやり方で得られた１．５ｇの濃厚物がヘキサン中に溶解され、そしてシリカが詰められた１２ｃｍ長で４ｃｍ内径のカラムの上部に加えられた。ヘキサン：ＩＰＡ（９９．５：０．５）の混合液が０．５バール未満の圧力でそのカラムの上部に加えられ、少量成分が脱着された。集められた画分が測定され、次の結果が得られた。
【００２５】
【表６】
2004175805.tif 000007
全プロセスにわたって、１．９Ｌの溶剤が使用され、３０分未満で完了した。
【００２６】
実施例７
実施例１と同じやり方で得られた１．６ｇの濃厚物がヘキサン中に溶解され、そして１２ｃｍ長で４ｃｍ内径のＣ１８カラムの上部に加えられた。エタノール：ヘキサン（６０：４０）の混合液が１バール未満の圧力でその上部に加えられ、少量成分が脱着された。回収されたカロテンの組成は１４％で回収率は１２％であった。
【００２７】
実施例８
ビタミンＥが豊富な２．９ｇの濃厚物が、１２ｃｍ長で４０ｍｍ内径のシリカカラムの
上部に加えられた。ヘキサン：酢酸エチル（８０：２０）が０．５バール未満の圧力で加えられ、個別のビタミンＥが溶出された。α−トコフェロール（α−Ｔ）が最初に溶出し、続いて、α−トコトリエノール（α−Ｔ3 ）、γ−トコフェロール（γ−Ｔ）、γ−トコトリエノール（γ−Ｔ3 ）が溶出し、及び最後にδ−トコトリエノール（δ−Ｔ3 ）が溶出した。集められたそれぞれのトコール類の純度は次の通りであった。
【００２８】
【表７】
2004175805.tif 000008
【００２９】
実施例９
ビタミンＥが豊富な２．５ｇの濃厚物が、１２ｃｍ長で４０ｍｍ内径のシリカカラムに充填された。ヘキサン：酢酸エチル（８６：１４）が０．５バール未満の圧力で加えられビタミンＥが溶出された。集められたそれぞれのトコール類の純度は次の通りであった。      
【００３０】
【表８】
2004175805.tif 000009
【００３１】
実施例１０
実施例１と同じやり方で得られた０．８ｇの濃厚物がヘキサン中に溶解され、そして２５ｃｍ長で２０ｃｍ内径のシリカカラムに充填された。ヘキサン：ＩＰＡ（９８：２）の混合液が１５００ｐｓｉ未満の圧力でそのカラムに加えられ少量成分が脱着された。スクアレンが最初に集められ、カロテン類、ビタミンＥ、ステロール類に続き、最後に未反応ジグリセリドが続いた。集められた画分の組成は次の通りであった。
【００３２】
【表９】
2004175805.tif 000010
【００３３】
実施例１１
実施例１と同じやり方で得られた１．６ｇの濃厚物が、シリカが詰められた７ｃｍ長で１３ｃｍ内径のカラムに充填された。１００％ヘキサンが１バール未満の圧力でその上部に加えられ少量成分が脱着された。最初に集められた画分はスクアレンからなり、第２画分はカロテンからなった。カロテン画分を集めた後、移動相の極性が、イソプロパノールを使用して、ヘキサン中２％ＩＰＡで始めて５％ＩＰＡまで徐々に上げられた。後に集められた画分はビタミンＥに続いてステロール類からなった。これら画分の組成及び回収率は次の通りであった。
【００３４】
【表１０】
2004175805.tif 000011
【００３５】
実施例１２
４０ｍｍ内径のカラムが６．６ｃｍ長の順相シリカで詰められ、そして０．９ｃｍの酸処理 Florisil でその上部を積み上げた。シリカと酸処理 Florisil は互いに一層の濾紙で分離された。実施例１と同じやり方で得られた１．３ｇの濃厚物が、このカラムの上部に加えられた。送入物の吸着剤に対する比率は４３ｇ／ｋｇであった。その濃厚物は、０．３％のスクアレン、３％のカロテン、１％のビタミンＥ、０．６％のステロール類、及び４％のモノグリセリドからなった。ヘキサン：ＩＰＡ（９９．５：０．５）が１バール未満の圧力でそのカラムの上部に加えられ、少量成分が脱着された。４つの画分が集められた。この実験全体でかかった時間は２０分未満であった。第１画分は３４％のスクアレンからなる無色物で８０％の回収率であった。第２画分は８３％のカロテンからなる赤色物で５３％の回収率であり、第３画分は３％のビタミンＥからなる橙色物で８７％の回収率であった。最後の画分は２％のステロールからなる無色物であった。この最後の画分を集めた後、酸処理 Florisil 中の残渣がＩＰＡを使用して抽出された。この残渣は３０％の
【００３６】
モノグリセリドからなった。
【００３７】
実施例１３
４０ｍｍ内径のカラムが６．８ｃｍ長の順相シリカで詰められ、そして０．７ｃｍのポリエチレングリコールでその上部を積み上げた。シリカとそのポリマーは互いに一層の濾紙で分離された。実施例１と同じやり方で得られた１．３ｇの濃厚物が、このカラムの上部に加えられた。その濃厚物は、０．４％のスクアレン、３％のカロテン、４％のビタミンＥ、０．１％のステロール類、及び５％のモノグリセリドからなった。ヘキサン：ＩＰＡ（９９．５：０．５）が１バール未満の圧力でそのカラムの上部に加えられ、少量成分が脱着された。５つの画分が集められた。第１画分は３０％のスクアレンからなる無色物で５３％の回収率であった。第２画分は４０％のカロテンからなる赤色物で８０％の回収率であり、第３画分は１０％のビタミンＥからなる橙色物で８５％の回収率であった。第４画分は１％のステロールからなる無色物で３５％の回収率であった。最後の画分は７５％のジグリセリドからなり８０％の回収率であった。この最後の画分を集めた後、ポリマー中の残渣がＩＰＡを使用して抽出された。この残渣は６％のモノグリセリドからなった。
【００３８】
実施例１４
４０ｍｍ内径のカラムが６．９ｃｍ長の順相シリカで詰められ、そして０．６ｃｍのポリアクリル酸多価アルコールでその上部を積み上げた。シリカとポリマーは互いに一層の濾紙で分けられた。実施例１と同じやり方で得られた１．３ｇの濃厚物が、このカラムの上部に加えられた。その濃厚物は、０．４％のスクアレン、３％のカロテン、４％のビタミンＥ、０．１％のステロール類、及び５％のモノグリセリドからなった。ヘキサン：ＩＰＡ（９９．５：０．５）が１バール未満の圧力でそのカラムの上部に加えられ、少量成分が脱着された。５つの画分が集められた。第１画分は３０％のスクアレンからなる無色物で７０％の回収率であった。第２画分は３４％のカロテンからなる赤色物で６０％の回収率であり、第３画分は１０％のビタミンＥからなる橙色物で６０％の回収率であった。第４画分は０．７％のステロールからなる無色物で１００％の回収率で、最後の画分は６０％のジグリセリドからなり９０％の回収率であった。この最後の画分を集めた後、ポリマー中の残渣がＩＰＡを使用して抽出された。この残渣は３０％のモノグリセリドからなった。
【００３９】
実施例１５
実施例１と同じやり方で得られた１．３ｇ濃厚物がヘキサン中に溶解され、そして７．５ｃｍ長で４ｃｍ内径のシリカカラムの上部に加えられた。ヘキサン：ＩＰＡ（９９．５：０．５）の混合液が２バール未満の圧力でそのカラムの上部に加えられ、１８ｍＬ／分の流速で少量成分が脱着された。集められた画分は、次の通りに測定された。
【００４０】
【表１１】
2004175805.tif 000012
【００４１】
実施例１６
実施例１と同じやり方で得られた１．５ｇ濃厚物がヘキサン中に溶解され、そして１２ｃｍ長で４ｃｍ内径のシリカカラムの上部に加えられた。ヘキサン：ＩＰＡ（９９．５：０．５）の混合液が少なくとも０．５バールの圧力でそのカラムの上部に加えられ、少量成分が脱着された。集められた画分は、次の通りに測定された。
【００４２】
【表１２】
2004175805.tif 000013
【００４３】
実施例１７
実施例１と同じやり方で得られた０．５ｇの濃厚物がジクロロメタン中に溶解され、そして２５ｃｍ長で２０ｃｍ内径のＲＰ  Ｃ１８カラムに充填された。アセトニトリル：ジクロロメタン（８９：１１）の混合液が１５００ｐｓｉ未満の圧力でそのカラムに加えられカロテンが脱着された。それらそれぞれのＵＶ−可視吸収極大に基づいて４つの画分が集められた。５００ｎｍのＵＶ−可視吸収極大を有する第１画分は９８％のリコペンで８０％の回収率であった。第２画分はα−カロテンからなり、第３画分はβ−カロテンからなった。２８６ｎｍのＵＶ−可視吸収極大を有する集められた最後の画分は、９５％のフィトエンで８０％の回収率であった。
【００４４】
実施例１８
第１抽出液から得られた０．２ｇの富ステロール類画分がメタノール中に溶解され、そして２５ｃｍ長で２０ｍｍ内径のＲＰ  Ｃ１８カラムに充填された。メタノール：水：酢酸（９８：１：１）の混合液が１５００ｐｓｉ未満の圧力でそのカラムに加えられ、ステロール類が脱着された。５つの画分が集められ、最後の画分が９８％を越える純度のβ−シトステロールからなった。この化合物の回収率は６０％を越えた。
これまで、本発明が一定の好ましい態様との関連で説明され、そして多くの委細が例示の目的で示されてきたが、当業者は、追加の態様が可能であり、また、本明細書に記載された一定の委細が本発明の基本的原理から逸脱することなくかなり変動され得ることが分かるであろう。