(57)【要約】【課題】有用なリポソームを形成する糖脂質を簡便かつクリーンな方法によって得ること。【解決手段】式２：【化１】Ｒ３−Ｏ−Ｘ−ＯＨ［式中、Ｘはアルキル等を表し；Ｒ３は糖類残基を表す］で示される糖誘導体を受容体基質とし、式３：【化２】2004256475.tif 000020［式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してアルキル等を表す］で示されるリン脂質誘導体を供与体基質として、ホスホリパーゼＤの転移反応によって式１：【化３】2004256475.tif 000021［式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してアルキル等を表し；Ｙはカチオンを表し；Ｘはアルキル等を表す）を表し；Ｒ３は糖類残基を表す］で示される糖脂質を得ることを特徴とする糖脂質の製造方法。前記式１で示される糖脂質。前記糖脂質からなるリポソーム。糖誘導体の製造方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式２：
【化１】
2004256475.tif 000013
［式中、Ｘはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表し；
Ｒ３は糖類残基を表す］
で示される糖誘導体を受容体基質とし、式３：
【化２】
2004256475.tif 000014
［式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表す］
で示されるリン脂質誘導体を供与体基質として、ホスホリパーゼＤの転移反応によって式１：
【化３】
2004256475.tif 000015
［式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表し；
Ｙはカチオンを表し；
Ｘはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表し；
Ｒ３は糖類残基を表す］
で示される糖脂質を得ることを特徴とする糖脂質の製造方法。
【請求項２】
前記Ｒ１およびＲ２が、それぞれ独立して脂肪酸残基を表す請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記Ｒ１およびＲ２が、いずれもミリストイル、パルミトイル、ステアロイルまたはオレオイルを表す請求項１または２に記載の製造方法。
【請求項４】
前記Ｒ１およびＲ２が、それぞれ独立してパルミトイルまたはオレオイルを表す請求項１または２に記載の製造方法。
【請求項５】
前記Ｙが、水素イオン、水酸化物イオン、アルカリ金属イオン、アンモニウムイオンまたは置換アンモニウムイオンを表す請求項１〜４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６】
前記Ｘが、１〜２０個の炭素原子を有する直鎖または分枝アルキルを表す請求項１〜５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項７】
前記Ｘが、（ＣＨ２）ｎ（ｎは１〜１６の範囲の整数を表す）を表す請求項６に記載の製造方法。
【請求項８】
前記Ｘが、（ＣＨ２）６を表す請求項７に記載の製造方法。
【請求項９】
前記Ｒ３が、単糖類、二糖類、少糖類または多糖類を表す請求項１〜８のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１０】
前記Ｒ３が、ガラクトース、プリメベロース、ゲンチオビオース、ニゲロース、マンノース、ガラクトース、グルコース、フコース、シアル酸、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミンまたはマルトースを表す請求項９に記載の製造方法。
【請求項１１】
前記ホスホリパーゼＤがストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）起源ホスホリパーゼＤである請求項１〜１０のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１２】
前記式３で示される糖誘導体を、Ｒ３−ＯＨ（Ｒ３は糖残基を表す）と、式４：
【化４】
2004256475.tif 000016
［式中、Ｘはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキルを表す）を表す］
で示されるジオールを基質として、セルラーゼの縮合反応によって製造する請求項１〜１１のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１３】
前記セルラーゼは、トリコデルマ・リーセイ（Ｔｒｉｃｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）起源セルラーゼである請求項１２に記載の製造方法。
【請求項１４】
前記式２で示される糖誘導体を、Ｒ３−β−Ｚ誘導体（Ｒ３は糖残基を表し、Ｚはパラ−ニトロフェノール、オルト−ニトロフェノール、フェノール、ベンジルアルコール、または２級以上のアルコールを表す）を供与体基質として、式４：
【化５】
2004256475.tif 000017
［式中、Ｘはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表す］
で示されるジオールを受容体基質として、プリメベロシダーゼの糖転移反応によって製造する請求項１〜１１のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１５】
前記Ｒ３は、プリメベロース、ゲンチオビオース、グルコース、キシロース、キシロビオース、マルトースまたはニゲロビオ−スである請求項１４に記載の製造方法。
【請求項１６】
前記プリメベロシダーゼは、ペニシリウム・マルチカラー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ）起源プリメベロシダーゼである請求項１４または１５に記載の製造方法。
【請求項１７】
前記式４または５で示されるジオールは、１，６−ヘキサンジオールである請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１８】
式１：
【化６】
2004256475.tif 000018
［式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表し；
Ｙはカチオンを表し；
Ｘはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキルを表す）を表し；
Ｒ３はプリメベロース、ゲンチオビオース、グルコース、キシロース、キシロビオース、マルトースまたはニゲロビオ−スを表す］で示される糖脂質。
【請求項１９】
請求項１８に記載の糖脂質からなるリポソーム。
【請求項２０】
糖誘導体の製造方法であって、
Ｒ４−β−Ｚ誘導体（Ｒ４は糖残基を表し、Ｚはパラ−ニトロフェノール、オルト−ニトロフェノール、フェノール、ベンジルアルコール、または２級以上のアルコールを表す）または中性糖を供与体基質として、式４：
【化７】
2004256475.tif 000019
［式中、Ｘはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表す］
で示されるジオールを受容体基質として、プリメベロシダーゼの糖転移反応によって製造することを特徴とする製造方法。
【請求項２１】
前記Ｒ４は、プリメベロース、ゲンチオビオース、グルコース、キシロース、キシロビオース、マルトースまたはニゲロビオ−スである請求項２０に記載の製造方法。
【請求項２２】
前記中性糖が、キシロシルマルトオリゴ糖、キシロシルゲンチオオリゴ糖、キシロシルニゲロオリゴ糖、キシロシルラミナリオリゴ糖、ゲンチオオリゴ糖、マルトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、ニゲロオリゴ糖またはラミナリオリゴ糖である請求項２０または２１に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、糖脂質の酵素的製造方法、新規糖脂質、および前記糖脂質からなるリポソームに関する。
【０００２】
【従来の技術】
リン脂質は、リポソームの成分として広範囲に使用されている。リポソームは、薬剤を封入し細胞組織へ送達するのに使用されうる脂質小胞である。しかしながら、慣用的なリポソームは、細網内皮系統（ＲＥＳ）により、急速に除去されてしまう。そこで、リポソームの標的到達能を改善するために、第２世代のリポソームが構築された。これらの改良リポソームは２つのタイプに分類される：１のタイプは循環持続時間が長く、もう１つのタイプは、リポソームと標的細胞との間の細胞相互作用により特異的組織を標的とする能力を有する。
【０００３】
糖類で修飾されたリン脂質は、両方のタイプのリポソームの合成に使用されている。例えば、特許文献１には、ジエーテルリンカーにより結合されているリン脂質残基および糖類残基からなる糖脂質が記載されている。特許文献１に記載の糖脂質から形成されるリポソームは、インビボにおけるＲＥＳによる摂取に対する増強された耐性を示す可能性がある。さらに、この糖脂質から形成されるリポソームを、特異的な組織または細胞タイプを標的とするように設計することもできる。このように、特許文献１に記載の糖脂質は、有用なリポソームを形成するため、この糖脂質を、簡便な方法で大量に合成することが望まれていた。しかるに、特許文献１に記載の方法は、化学合成法のため、ブロッキングなどの反応ステップが多いという問題があった。さらに、特許文献１に記載の方法では、水銀などの重金属を使用しているため、クリーンな反応ではないという問題もあった。
【０００４】
【特許文献１】
特表平８−５０７５４４号公報
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明は、有用なリポソームを形成する糖脂質を簡便かつクリーンな方法によって得ることを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意検討を重ねた結果、化学合成プロセスを経ずに、酵素法のみによって有用なリポソームを形成し得る糖脂質を得る方法を見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、上記目的を達成するための手段は、以下の通りである。
（１）    式２：
【化８】
Ｒ３−Ｏ−Ｘ−ＯＨ
［式中、Ｘはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表し；
Ｒ３は糖類残基を表す］
で示される糖誘導体を受容体基質とし、式３：
【化９】
2004256475.tif 000002
［式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表す］
で示されるリン脂質誘導体を供与体基質として、ホスホリパーゼＤの転移反応によって式１：
【化１０】
2004256475.tif 000003
［式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表し；
Ｙはカチオンを表し；
Ｘはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表し；
Ｒ３は糖類残基を表す］
で示される糖脂質を得ることを特徴とする糖脂質の製造方法。
（２）  前記Ｒ１およびＲ２が、それぞれ独立して脂肪酸残基を表す（１）に記載の製造方法。
（３）  前記Ｒ１およびＲ２が、いずれもミリストイル、パルミトイル、ステアロイルまたはオレオイルを表（１）または（２）に記載の製造方法。
（４）  前記Ｒ１およびＲ２が、それぞれ独立してパルミトイルまたはオレオイルを表す（１）または（２）に記載の製造方法。
（５）  前記Ｙが、水素イオン、水酸化物イオン、アルカリ金属イオン、アンモニウムイオンまたは置換アンモニウムイオンを表す（１）〜（４）のいずれか１項に記載の製造方法。
（６）  前記Ｘが、１〜２０個の炭素原子を有する直鎖または分枝アルキルを表す（１）〜（５）のいずれかに記載の製造方法。
（７）  前記Ｘが、（ＣＨ２）ｎ（ｎは１〜１６の範囲の整数を表す）を表す（６）に記載の製造方法。
（８）  前記Ｘが、（ＣＨ２）６を表す（７）に記載の製造方法。
（９）  前記Ｒ３が、単糖類、二糖類、少糖類または多糖類を表す（１）〜（８）のいずれかに記載の製造方法。
（１０）  前記Ｒ３が、ガラクトース、プリメベロース、ゲンチオビオース、ニゲロース、マンノース、ガラクトース、グルコース、フコース、シアル酸、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミンまたはマルトースを表す（９）に記載の製造方法。
（１１）  前記ホスホリパーゼＤがストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）起源ホスホリパーゼＤである（１）〜（１０）のいずれかに記載の製造方法。
（１２）  前記式３で示される糖誘導体を、Ｒ３−ＯＨ（Ｒ３は糖残基を表す）と、式４：
【化１１】
ＯＨ−Ｘ−ＯＨ
［式中、Ｘはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキルを表す）を表す］
で示されるジオールを基質として、セルラーゼの縮合反応によって製造する（１）〜（１１）のいずれかに記載の製造方法。
（１３）  前記セルラーゼは、トリコデルマ・リーセイ（Ｔｒｉｃｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）起源セルラーゼである（１２）に記載の製造方法。
（１４）  前記式２で示される糖誘導体を、Ｒ３−β−Ｚ誘導体（Ｒ３は糖残基を表し、Ｚはパラ−ニトロフェノール、オルト−ニトロフェノール、フェノール、ベンジルアルコール、または２級以上のアルコールを表す）を供与体基質として、式４：
【化１２】
ＯＨ−Ｘ−ＯＨ
［式中、Ｘはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表す］
で示されるジオールを受容体基質として、プリメベロシダーゼの糖転移反応によって製造する（１）〜（１１）のいずれかに記載の製造方法。
（１５）  前記Ｒ３は、プリメベロース、ゲンチオビオース、グルコース、キシロース、キシロビオース、マルトースまたはニゲロビオースである（１４）に記載の製造方法。
（１６）  前記プリメベロシダーゼは、ペニシリウム・マルチカラー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ）起源プリメベロシダーゼである（１４）または（１５）に記載の製造方法。
（１７）  前記式４または５で示されるジオールは、１，６−ヘキサンジオールである（１２）〜（１６）のいずれか１項に記載の製造方法。
（１８）  式１：
【化１３】
2004256475.tif 000004
［式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表し；
Ｙはカチオンを表し；
Ｘはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキルを表す）を表し；
Ｒ３はプリメベロース、ゲンチオビオース、グルコース、キシロース、キシロビオース、マルトースまたはニゲロビオースを表す］
で示される糖脂質。
（１９）  （１８）に記載の糖脂質からなるリポソーム。
（２０）  糖誘導体の製造方法であって、
Ｒ４−β−Ｚ誘導体（Ｒ４は糖残基を表し、Ｚはパラ−ニトロフェノール、オルト−ニトロフェノール、フェノール、ベンジルアルコール、または２級以上のアルコールを表す）または中性糖を供与体基質として、式４：
【化１４】
ＯＨ−Ｘ−ＯＨ
［式中、Ｘはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表す］
で示されるジオールを受容体基質として、プリメベロシダーゼの糖転移反応によって製造することを特徴とする製造方法。
（２１）  前記Ｒ４は、プリメベロース、ゲンチオビオース、グルコース、キシロース、キシロビオース、マルトースまたはニゲロビオースである（２０）に記載の製造方法。
（２２）  前記中性糖が、キシロシルマルトオリゴ糖、キシロシルゲンチオオリゴ糖、キシロシルニゲロオリゴ糖、キシロシルラミナリオリゴ糖、ゲンチオオリゴ糖、マルトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、ニゲロオリゴ糖またはラミナリオリゴ糖である（２０）または（２１）に記載の製造方法。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明は、式１：
【化１５】
2004256475.tif 000005
で示される、ジエーテルリンカーによって結合されたリン脂質残基および糖類残基からなる糖脂質を、化学合成プロセスを経ずに酵素法のみによって得ることを特徴とする。
【０００８】
式１において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表す。Ｒ１およびＲ２の具体例としては、ステアロイル、パルミトイル、リノレノイル、ミリストイル、ドデカノイル、オレオイルまたはリノレオイル等の脂肪酸残基を挙げることができる。Ｒ１とＲ２は、同じであっても異なっていてもよい。例えば、Ｒ１およびＲ２は、いずれもミリストイル、パルミトイル、ステアロイルまたはオレオイルであることができ、または、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立してパルミトイルまたはオレオイルであることもできる。
【０００９】
式１において、Ｙはカチオンを表す。具体的には、Ｙは、水素イオン、水酸化物イオン、アルカリ金属イオン、アンモニウムイオンおよび置換アンモニウムイオンであることができ、中でも、水酸化物イオンであることが好ましい。
【００１０】
式１において、Ｘは、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキルを表す）を表す。中でも、Ｘは、１〜２０個の炭素原子を有する直鎖または分枝アルキルであることができ、中でも、（ＣＨ２）ｎ（ｎは１〜１６の範囲の整数を表す）であることが好ましく、特に、（ＣＨ２）６であることが好ましい。
【００１１】
式１において、Ｒ３は、糖類残基を表す。Ｒ３は、単糖類、二糖類、少糖類または多糖類であることができ、具体例としては、ラクトース、プリメベロース、ゲンチオビオース、ニゲロース、マンノース、ガラクトース、グルコース、フコース、シアル酸、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、マルトースなどを挙げることができる。
【００１２】
本発明の製造方法は、前記式１で示される糖脂質を、式２：
【化１６】
Ｒ３−Ｏ−Ｘ−ＯＨ
で示される糖誘導体を受容体基質とし、式３：
【化１７】
2004256475.tif 000006
で示されるリン脂質誘導体を供与体基質として、ホスホリパーゼＤの転移反応を用いて製造することを特徴とする。なお、式２および３において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ、Ｙは、式１と同義である。前記ホスホリパーゼＤは、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）起源ホスホリパーゼＤであることができる。
【００１３】
次に、前記の式１で示される糖脂質の製造方法の工程について具体例を挙げて説明する。ただし、本発明は以下の工程に限定されるものではない。
前記製造方法において、受容体基質である式２で示される糖誘導体の使用量は、例えば０．０１Ｍ〜５Ｍとすることができる。
反応時のｐＨは、例えば、３〜８であることができる。緩衝液としては、例えば、０〜５０ｍＭのＣａＣｌ２を含む酢酸ナトリウム緩衝液を使用することができ、具体例としては、例えば、６．８ｍＭのＣａＣｌ２を含む４０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液を挙げることができる。
前記受容体基質を緩衝液に溶解した後に、例えば０．０１〜５Ｍの量の供与体基質をＣＨＣｌ３に溶解して添加し、スターラーバー等で激しく攪拌し、白濁した溶液を得る。この溶液に、同緩衝液に溶解したホスホリパーゼＤを、例えば、０．１〜１０００Ｕ／ｍｌの範囲の量で加えて、例えば１０〜７０℃の範囲の温度、好ましくは室温で、反応を開始する。スターラーバーで激しく撹拌しながら反応を継続する。反応時間は、１０〜３００時間とすることができる。また、反応の途中で酵素を追加することもできる。例えば、反応時間が８０時間の場合は、反応開始４時間後、６４時間後にそれぞれ酵素を追加し、さらに１６時間反応を継続することができる。反応の終点は、一般的脂質分析法に順じて、例えばＴＬＣ（展開溶媒：ＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （６／４／１）、呈色試薬：オルシノール硫酸、Ｄｉｔｔｍｅｒ試薬）で確認することができる。
目的物質である式１で示される糖脂質の精製は、一般的な精製法、例えば、シリカゲルクロマトグラフィー、ゲル濾過、結晶化、アセトン沈殿などの標準方法によって行うことができる。
【００１４】
本発明では、式１で示される糖脂質の原料物質である式３で示される糖誘導体を、酵素法によって製造することが好ましい。具体的には、式３で示される糖誘導体を、Ｒ３―ＯＨ（Ｒ３は糖残基を表す）と、式４：
【化１８】
ＯＨ−Ｘ−ＯＨ
で示されるジオールを基質として、セルラーゼの縮合反応によって製造することが好ましい。前記セルラーゼは、トリコデルマ・リーセイ（Ｔｒｉｃｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）起源セルラーゼであることができる。
【００１５】
前記の糖誘導体の製造方法の工程を、具体例を挙げて説明する。ただし、本発明は以下の工程に限定されるものではない。
例えば、０．１〜１ＭのＲ３−ＯＨ（Ｒ３は糖残基を表す）と、０．１〜１Ｍの式４で示されるジオールを、５０ｍＭ  酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）に溶解し、セルラーゼ１〜１０００Ｕ／ｍｌを加えて反応を開始する。なお、反応時のｐＨは、例えば、３〜８の範囲とすることができる。
次いで、反応液を激しく振とうし、例えば、１０〜７０℃で、１〜１０００時間反応後、１００℃、１０分間の煮沸により反応を停止する。反応の終点はＴＬＣで確認することができる。目的物質である式３で示される糖誘導体の精製は、例えば、ゲルろ過、活性炭−セライトカラムなどの標準法によって行うことができる。
【００１６】
また、式３で示される糖誘導体は、Ｒ３−β−Ｚ誘導体（Ｒ３は糖残基を表し、Ｚはパラ−ニトロフェノール（以下、「ｐＮＰ」ともいう）、オルト−ニトロフェノール（以下、「ｏＮＰ」ともいう）、フェノール、ベンジルアルコール、または２級以上のアルコールを表す）を供与体基質として、前記式４で示されるジオールを受容体基質として、プリメロシダーゼの糖転移反応で製造することが好ましい。前記プリメロシダーゼは、ペニシリウム・マルチカラー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ）起源プリメベロシダーゼであることができる。前記Ｒ３の具体例としては、プリメベロース、ゲンチオビオース、グルコース、キシロース、キシロビオース、マルトースまたはニゲロビオースを挙げることができる。
【００１７】
前記の糖誘導体の製造方法の工程を、具体例を挙げて説明する。ただし、本発明は以下の工程に限定されるものではない。
例えば、０．００５〜１Ｍの前記Ｒ３−β−Ｚ誘導体と、０．００５〜２０Ｍの式４で示されるジオールを、２０ｍＭ  酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）に溶解し、プリメベロシダーゼ０．１〜１０００Ｕ、好ましくは４．２Ｕを加えて反応を開始する。なお、反応時のｐＨは、例えば、２〜９の範囲とすることができる。
次いで反応液を激しく振とうし、例えば、４０℃で１〜１００時間反応後、１００℃、１０分間の煮沸により反応を停止する。この反応液より水可溶性画分のみを抽出し、ゲルろ過、活性炭カラム−セライトクロマトなどの標準法によって精製することにより、目的物質である式３で示される糖誘導体を得ることができる。
【００１８】
本発明の方法の好ましい態様は、
（ｉ）各種糖質を有する６−ヒドロキシヘキシルβ−糖誘導体（糖脂質前駆体）の調製を行う第一段階、次いで、
（ｉｉ）前記前駆体を受容体基質とし、かつ１，２−ジパルミトイル−ホスファチジルコリンを供与体基質として、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）起源ホスホリパーゼＤの転移反応により式１で示される糖脂質を合成する第２段階
で構成される。
【００１９】
上記第一段階の好ましい例としては、例えば、ラクトースと１，６−ヘキサンジオールを基質として、トリコデルマ・リーセイ（Ｔｒｉｃｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）起源セルラーゼの縮合反応により、６−ヒドロキシヘキシルβ−ラクトシドを生成せしめ、活性炭カラム等の一般的な方法で精製することで、目的前駆体を得る方法を挙げることができる。
糖質部位がゲンチオビオースの場合は、ｐＮＰ−β−ゲンチオビオシドと１，６−ヘキサンジオールを基質として、ペニシリウム・マルチカラー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ）起源β−プリメベロシダーゼ（ｐｒｉｍｅｖｅｒｏｓｉｄａｓｅ）の糖転移反応により、６−ヒドロキシヘキシルβ−ゲンチオビオシドを生成せしめ、活性炭カラム等一般的な方法で精製することで目的前駆体を得ることができる。
また、糖質部位がプリメベロースの場合は、ｐＮＰ−β−プリメベロシドと１，６−ヘキサンジオールを基質として、ペニシリウム・マルチカラー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ）起源β−プリメベロシダーゼの糖転移反応により、６−ヒドロキシヘキシルβ−プリメベロシドを生成せしめ、活性炭カラム等一般的な方法で精製することで目的前駆体を得ることができる。
【００２０】
前記第二段階は、上記のように得られた各種糖残基を有する糖脂質前駆体を受容体基質として行うことができる。例えば、６−ヒドロキシヘキシルβ−ラクトシドを受容体基質とし、かつ１，２−ジパルミトイル−ホスファチジルコリンを供与体基質として、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）起源ホスホリパーゼＤの転移反応により、１，２−ジパルミトイル−ホスファチジルヘキシルβ−ラクトシドを得ることができる。
また、６−ヒドロキシヘキシルβ−ゲンチオビオシドを受容体基質とし、かつ１，２−ジパルミトイル−ホスファチジルコリンを供与体基質として、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）起源ホスホリパーゼＤの転移反応により、１，２−ジパルミトイル−ホスファチジルヘキシルβ−ゲンチオビオシドを得ることができる。
また、６−ヒドロキシヘキシルβ−プリメベロシドを受容体基質とし、かつ１，２−ジパルミトイル−ホスファチジルコリンを供与体基質として、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｏｔｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）起源ホスホリパーゼＤの転移反応により、１，２−ジパルミトイル−ホスファチジルヘキシルβ−プリメベロシドを得ることができる。
【００２１】
本発明は更に、糖誘導体の製造方法であって、
Ｒ４−β−Ｚ誘導体（Ｒ４は糖残基を表し、ＺはｐＮＰ、ｏＮＰ、フェノール、ベンジルアルコール、または２級以上のアルコールを表す）または中性糖を供与体基質として、式４：
【化１９】
ＯＨ−Ｘ−ＯＨ
［式中、Ｘはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキルおよび置換アラルキル、またはＣ（Ｏ）Ｒ（ここに、Ｒはアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、アラルキル、または置換アラルキルを表す）を表す］
で示されるジオールを受容体基質として、プリメベロシダーゼの糖転移反応によって製造することを特徴とする製造方法に関する。前記Ｒ４は、プリメベロース、ゲンチオビオース、グルコース、キシロース、キシロビオース、マルトースまたはニゲロビオースであることができる。また、前記中性糖の具体例としては、キシロシルマルトオリゴ糖、キシロシルゲンチオオリゴ糖、キシロシルニゲロオリゴ糖、キシロシルラミナリオリゴ糖、ゲンチオオリゴ糖、マルトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、ニゲロオリゴ糖、ラミナリオリゴ糖を挙げることができる。
【００２２】
本発明は更に、前記式１で示される糖脂質であって、Ｒ３がプリメベロース、ゲンチオビオース、グルコース、キシロース、キシロビオース、マルトースまたはニゲロビオースを表す糖脂質に関する。更に、本発明は、前記糖脂質からなるリポソームに関する。
【００２３】
【実施例】
以下に、本発明の実施例を示し、本発明を更に詳細に説明する。ただし、本発明は実施例に限定されるものではない。
実施例１：トリコデルマ・リーセイ（Ｔｒｉｃｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）起源セルラーゼの縮合反応を用いた６−ヒドロキシヘキシル−β−ラクトシド（Ｌａｃ  β−ＨＤ）の合成
基質としてラクトース（６．２  ｇ、１８．０  ｍｍｏｌ）と１，６−ヘキサンジオール（２．４  ｇ、２０．０  ｍｍｏｌ）を５０  ｍＭ  酢酸ナトリウム緩衝液  ｐＨ５．０  （２０．０  ｍｌ）に溶解し、トリコデルマ・リーセイ（Ｔｒｉｃｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ）起源の粗セルラーゼ  （９０．０  Ｕ）を加えて反応を開始した。反応液を激しく振とうし、４０℃で１１８時間反応後、１００℃、１０分間の煮沸により反応を停止した。反応の終点はＴＬＣで確認した。反応液を遠心分離し  （８，０００  ｒｐｍ×３０  ｍｉｎ）、その上清を予め１０％ＥｔＯＨで平衡化した活性炭−セライトクロマトグラフィー（Φ５．０×４５  ｃｍ）に供し、流速５．０  ｍｌ／ｍｉｎにおいて非吸着部を１０％ＥｔＯＨ  （５，０００  ｍｌ）で洗浄後、１０％  （３，０００  ｍｌ）−５０％  （３，０００  ｍｌ）のエタノール直線濃度勾配法により吸着部を溶出した。各試験管に４５  ｍｌずつ分取後、各画分をフェノール硫酸法により中性糖に由来する４８５  ｎｍの吸光度を測定した。目的画分を濃縮、凍結乾燥し、Ｌａｃ  β−ＨＤを得た  （３８９．０  ｍｇ、５．１％／ラクトース）。これを１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲおよびＦＡＢ−ｍａｓｓによる構造解析に供したところ、ｍ／ｚ    ４４３  （Ｍ＋Ｈ）＋，  ４６５  （Ｍ＋Ｎａ）＋  （ｉｎ  Ｈ２Ｏ，  ｍａｔｒｉｘ；  ｇｌｙｃｅｒｏｌ），  ２７０  ＭＨｚ  １Ｈ−ＮＭＲ  （ｉｎ  Ｄ２Ｏ）：  δ４．４７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ８．３  Ｈｚ，  Ｇｌｃ−１）、δ４．４４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ７．８  Ｈｚ，  Ｇａｌ−１）、δ１．３７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ７．８  Ｈｚ，  Ｇａｌ−１）、δ１．６２  （ｍ，  ２Ｈ，  １，６−ｈｅｘａｎｅｄｉｏｌ−β）、δ１．３７  （ｍ，  ２Ｈ，  １，６−ｈｅｘａｎｅｄｉｏｌ−γ，δ）、δ１．５５  （ｍ，  ２Ｈ，  １，６−ｈｅｘａｎｅｄｉｏｌ−ε）を示した  。１３Ｃ−ＮＭＲの結果を表１に示す。
【００２４】
【表１】
2004256475.tif 000007
【００２５】
実施例２：ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）起源ホスホリパーゼＤによる１，２−ジパルミトイル−ホスファチジルヘキシルβ−ラクトシド（Ｌａｃ−ＤＰＰＡ）の酵素合成
受容体基質Ｌａｃ  β−ＨＤ  （１４６  ｍｇ，  ０．３  ｍｍｏｌ）を６．８  ｍＭ  ＣａＣｌ２を含む４０  ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ５．５  （０．７  ｍｌ）に溶解し、そこにＣＨＣｌ３  （３．０  ｍｌ）に溶解した供与体基質１，２−ジパルミトイル−ホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）（４８４  ｍｇ、０．７  ｍｍｏｌ）を加えてスターラーバーで激しく撹拌した。この白濁した溶液に同緩衝液に溶解したストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）起源ホスホリパーゼＤ  （５７．０  Ｕ）を加えて室温で反応を開始した。スターラーバーで激しく撹拌しながら反応を継続し、反応開始４時間後、６４時間後にそれぞれストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）起源ホスホリパーゼＤ（５７．０  Ｕ）を加え、さらに１６時間反応を継続した（計８０時間）。反応の終点はＴＬＣで確認した（展開溶媒：ＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （６／４／１）、呈色試薬：オルシノール硫酸、Ｄｉｔｔｍｅｒ試薬）。反応液に６．０  ｍｌのＣＨ３ＯＨを加え、遠心分離し（１２，０００  ｒｐｍ×２０  ｓｅｃ）、その上清を予めＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （３０／６０／８）で平衡化したＳｅｐ−Ｐａｋ  Ａｃｃｅｌｌ  ＱＭＡ  （１０  ｍｌ）カラムクロマトグラフィーに供した。非吸着部をＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （３０／６０／８，  １４０  ｍｌ）で洗浄後、段階的にＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／／０．２，  ０．４，  １．０  Ｍ  ＣＨ３ＣＯＯＮａ  （３０／６０／８、それぞれ１００，  １６０，  １００  ｍｌ）で吸着部を溶出した。各試験管に２０  ｍｌずつ分取して、各画分をＴＬＣで分析した結果、非吸着部には未反応のＤＰＰＣ、Ｌａｃ  β−ＨＤおよびカラムに保持できなかった転移生成物および加水分解物が、吸着部には転移生成物および加水分解物が溶出した。ＴＬＣの結果から、目的画分を濃縮した。更に、１回目の操作で非吸着部に溶出した生成物を同カラムクロマトグラフィーに供し、目的画分を濃縮した。これを１回目の吸着部と合わせて濃縮、乾固した。この画分をＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （５／５／１，  ２．０  ｍｌ）に溶解し、予め同溶媒で平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（２０  ｍｌ）に供し脱塩を行った。各試験管に２  ｍｌずつ分取して各画分をＴＬＣ上にスポットし、オルシノール硫酸陽性画分を濃縮、乾固した。更に、これを予めＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （６／４／０．５）で平衡化したＳｉｌｉｃａｇｅｌ  ６０Ｎカラムクロマトグラフィー（Φ２．５×５０  ｃｍ）に供した。流速５．０  ｍｌ／ｍｉｎにおいて１００  ｍｌの同溶媒で溶出し、各試験管に１０  ｍｌずつ分取してＴＬＣで分析し、目的画分を濃縮した。更に１回目の操作で分離できなかった目的画分を回収して同カラムクロマトグラフィーに供し、目的画分を濃縮した。これを１回目の目的画分と合わせて濃縮、乾固し、Ｌａｃ−ＤＰＰＡを得た  （９４．３  ｍｇ，  ２６．６％／ａｃｃｅｐｔｏｒ）。これを１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲおよびＦＡＢ−ｍａｓｓによる構造解析に供した結果、ｍ／ｚ  １１１１  （Ｍ＋Ｋ）＋，  １０７１  （Ｍ−Ｈ）−  （ｉｎ  ＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ  ＝  １／１，  ｍａｔ���ｉｘ；  ｔｈｉｏｇｌｙｃｅｒｏｌ），  ５００  ＭＨｚ  １Ｈ−ＮＭＲ  （ｉｎ  ＣＤＣｌ３／ＣＤ３ＯＤ  ＝  １／１）：δ４．２１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ８．０  Ｈｚ，  Ｇｌｃ−１）、δ４．２８  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ７．６  Ｈｚ，  Ｇａｌ−１）、δ１．５８  （ｍ，  ２Ｈ，  １，６−ヘキサンジオール−β）、δ１．２３  （ｍ，  ２Ｈ，  １，６−ヘキサンジオール−γ，β）、δ１．４１  （ｍ，  ２Ｈ，  １，６−ｈｅｘａｎｅｄｉｏｌ−ε）、δ０．８５  （ｔ，  ３Ｈ，  ＣＨ３−）、δ１．２３  （ｍ，  ２４Ｈ，  ＣＨ３（ＣＨ２）１２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２−），  １．５８  （ｍ，  ２Ｈ，  ＣＨ３（ＣＨ２）１２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２−），  ２．２９  （ｄｄ，  ２Ｈ，  ＣＨ３（ＣＨ２）１３ＣＨ２ＣＯ２−）を示した。１３Ｃ−ＮＭＲの結果を表２に示す。
【００２６】
【表２】
2004256475.tif 000008
【００２７】
実施例３：ペニシリウム・マルチカラー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ）起源β−プリメベロシダーゼの転移反応を用いた６−ヒドロキシヘキシルβ−プリメベロシドの合成
基質としてｐＮＰ−β−プリメベロシド（０．５  ｇ，  ０．０８  Ｍ）と１，６−ヘキサンジオール（３．４  ｇ，  ２Ｍ）を２０  ｍＭ  酢酸ナトリウム緩衝液  ｐＨ５．５  （１４  ｍｌ）に溶解し、ペニシリウム・マルチカラー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ）起源β−プリメベロシダーゼ  （２．８  Ｕ）を加えて反応を開始した。反応液を激しく振とうし、４０℃で２９時間反応後、１００℃、１０分間の煮沸により反応を停止した。反応液より水可溶性画分のみを抽出し、活性炭−セライトカラム（カラムＶｏｌ．  ０．７Ｌ、０−３０％ＥｔＯＨグラジエント溶出）で精製した。目的画分を濃縮、凍結乾燥し、６−ヒドロキシヘキシルβ−プリメベロシドを得た（１０８  ｍｇ，  ３４％／  ｐＮＰ−β−プリメベロシド）。これを１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲによる構造解析に供した。本分析結果を表３に示す。
【００２８】
【表３】
2004256475.tif 000009
【００２９】
実施例４：ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）起源ホスホリパーゼＤによる１，２−ジパルミトイル−ホスファチジルヘキシルβ−プリメベロシド（Ｐｒｉ−Ｃ６−ＤＰＰＡ）の酵素合成
受容体基質６−ヒドロキシヘキシルβ−プリメベロシド（１００  ｍｇ）を６．８  ｍＭ  ＣａＣｌ２を含む４０  ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ５．５  （０．５  ｍｌ）に溶解し、そこにＣＨＣｌ３  （２．２１  ｍｌ）に溶解した供与体基質ＤＰＰＣ  （３５８  ｍｇ）を加えてスターラーバーで激しく撹拌した。この白濁した溶液に同緩衝液に溶解したストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）起源ホスホリパーゼＤ（１１１  Ｕ）を加えて室温で反応を開始した。スターラーバーで激しく撹拌しながら反応を継続し、６８時間反応を継続した。反応の終点はＴＬＣで確認した（展開溶媒：ＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （７０／３０／５）、呈色試薬：オルシノール硫酸、Ｄｉｔｔｍｅｒ試薬）。反応液に１０  ｍｌのＣＨ３ＯＨを加え、遠心分離し  （１２，０００  ｒｐｍ×２０  ｓｅｃ）、その上清を予めＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （３０／６０／８）で平衡化したＳｅｐ−Ｐａｋ  Ａｃｃｅｌｌ  ＱＭＡ  （１０  ２０  ｍｌ）カラムクロマトグラフィーに供した。非吸着部をＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （３０／６０／８，１２５  ｍｌ）で洗浄後、段階的にＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／／０．２，１．０  Ｍ  ＣＨ３ＣＯＯＮａ  （３０／６０／８、それぞれ２５０，  １５０  ｍｌ）で吸着部を溶出した。各試験管に２５  ｍｌずつ分取して、各画分をＴＬＣで分析した結果、非吸着部には未反応のＤＰＰＣ、６−ヒドロキシヘキシルβ−プリメベロシドが、吸着部には転移生成物および加水分解物が溶出した。ＴＬＣの結果から、目的画分を濃縮した。この画分をＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （５／５／１，  ２．０  ｍｌ）に溶解し、予め同溶媒で平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムクロマト（２０  ｍｌ）に供し脱塩を行った。各試験管に２  ｍｌずつ分取して各画分をＴＬＣ上にスポットし、オルシノール硫酸陽性画分を濃縮、乾固した。更に、これを予めＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （７０／３０／５）で平衡化したＳｉｌｉｃａｇｅｌ  ６０Ｎカラムクロマトグラフィー（Φ２．５×４０  ｃｍ）に供した。流速１０  ｍｌ／ｍｉｎにおいて、各試験管に１５  ｍｌずつ分取してＴＬＣで分析し、目的画分を濃縮した。更に１回目の操作で分離できなかった目的画分を回収して同カラムクロマトグラフィーに供し、目的画分を濃縮した。これを１回目の目的画分と合わせて濃縮、乾固し、１，２−ジパルミトイル−ホスファチジルヘキシルβ−プリメベロシド（Ｐｒｉ−Ｃ６−ＤＰＰＡ）を得た  （１８  ｍｇ，  ７．０％／ａｃｃｅｐｔｏｒ）。これを１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲによる構造解析に供した。結果を表４に示す。
【００３０】
【表４】
2004256475.tif 000010
【００３１】
実施例５：ペニシリウム・マルチカラー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ）起源β−プリメベロシダーゼの転移反応を用いた６−ヒドロキシヘキシルβ−ゲンチオビオシドの合成
基質としてｐＮＰ−β−ゲンチオビオシド（１１１ｍｇ，  ０．０８  Ｍ）と１，６−ヘキサンジオール（７０９ｍｇ，  ２Ｍ）を２０  ｍＭ  酢酸ナトリウム緩衝液  ｐＨ５．５  （３  ｍｌ）に溶解し、ペニシリウム・マルチカラー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｃｏｌｏｒ）起源β−プリメベロシダーゼ  （０．９  Ｕ）を加えて反応を開始した。反応液を激しく振とうし、４０℃で４８時間反応後、１００℃、５分間の煮沸により反応を停止した。活性炭カラム（カラムＶｏｌ．  １００ｍｌ、１０−５０％ＥｔＯＨグラジエント）及びＳｉｌｉｃａｇｅｌ  ６０Ｎ（カラムｖｏｌ．    ０．０５  Ｌ、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ  ７０／３０／５）で精製した。目的画分を濃縮、凍結乾燥し、６−ヒドロキシヘキシルβ−ゲンチオビオシドを得た  （２３  ｍｇ，  ２２％／ｐＮＰ−β−ゲンチオビオシド）。これを１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲによる構造解析に供した。本分析結果を表５に示す。
【００３２】
【表５】
2004256475.tif 000011
【００３３】
実施例６：ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）起源ホスホリパーゼＤによる１，２−ジパルミトイル−ホスファチジルヘキシルβ−ゲンチオビオシド（Ｇｅｎ−Ｃ６−ＤＰＰＡ）の酵素合成
受容体基質６−ヒドロキシヘキシルβ−ゲンチオビオシド（２３  ｍｇ）を６．８  ｍＭ  ＣａＣｌ２を含む４０  ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液ｐＨ５．５  （０．１１  ｍｌ）に溶解し、そこにＣＨＣｌ３  （０．４７  ｍｌ）に溶解した供与体基質ＤＰＰＣ  （７６  ｍｇ）を加えてスターラーバーで激しく撹拌した。この白濁した溶液に同緩衝液に溶解したストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）起源ホスホリパーゼＤ（２４  ７．８８  Ｕ）を加えて室温で反応を開始した。スターラーバーで激しく撹拌しながら反応を継続し、７２時間反応を継続した。反応の終点はＴＬＣで確認した（展開溶媒：ＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （７０／３０／５）、呈色試薬：オルシノール硫酸、Ｄｉｔｔｍｅｒ試薬）。反応液に２．０  ｍｌのＣＨ３ＯＨを加え、遠心分離し  （１２，０００  ｒｐｍ×２０  ｓｅｃ）、その上清を予めＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （３０／６０／８）で平衡化したＳｅｐ−Ｐａｋ  Ａｃｃｅｌｌ  ＱＭＡ  （１０  ｍｌ）カラムクロマトグラフィーに供した。非吸着部をＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （３０／６０／８，  ５０  ｍｌ）で洗浄後、段階的にＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／／０．２，  ０．５  Ｍ  ＣＨ３ＣＯＯＮａ  （３０／６０／８、それぞれ９０，  ６０  ｍｌ）で吸着部を溶出した。各試験管に１０  ｍｌずつ分取して、各画分をＴＬＣで分析した結果、非吸着部には未反応のＤＰＰＣ、６−ヒドロキシヘキシルβ−ゲンチオビオシドが、吸着部には転移生成物および加水分解物が溶出した。ＴＬＣの結果から、目的画分を濃縮した。この画分をＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （５／５／１，  ２．０  ｍｌ）に溶解し、予め同溶媒で平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムクロマト（２０  ｍｌ）に供し脱塩を行った。各試験管に２  ｍｌずつ分取して各画分をＴＬＣ上にスポットし、オルシノール硫酸陽性画分を濃縮、乾固した。更に、これを予めＣＨＣｌ３／ＣＨ３ＯＨ／Ｈ２Ｏ  （７０／３０／５）で平衡化したＳｉｌｉｃａｇｅｌ  ６０Ｎカラムクロマト  （φ１．５×３０  ｃｍ）に供した。流速５．０  ｍｌ／ｍｉｎにおいて１００  ｍｌの同溶媒で溶出し、各試験管に１０  ｍｌずつ分取してＴＬＣで分析し、目的画分を濃縮乾固し、１，２−ジパルミトイル−ホスファチジルヘキシルβ−ゲンチオビオシド（ｇｅｎ−Ｃ６−ＤＰＰＡ）を得た（１．５  ｍｇ，  ２．７％／ａｃｃｅｐｔｏｒ）。これを１Ｈ−、１３Ｃ−ＮＭＲによる構造解析に供した。結果を表６に示す。
【００３４】
【表６】
2004256475.tif 000012
【００３５】
【発明の効果】
本発明により、有用なリポソームを形成する糖脂質を簡便かつクリーンな方法によって得ることができる。また、本発明は、新規糖脂質およびリポソームを提供することができる。更に、本発明は、新規な糖誘導体の製造方法を提供することができる。