(57)【要約】【課題】ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡを分別して定量する新しい測定技術およびそのためのプライマー対およびプローブを提供。【解決手段】ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡの測定に用いられるプローブであって、所定の核内レセプター遺伝子などの特定領域にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドからなるプローブ；該プローブおよび所定核内レセプターおよび転写因子の遺伝子の特定領域にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドからなるフォワードプライマーとリバースプライマーとのプライマー対の組合せからなる、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡの測定キット；並びに該測定キットを用いる、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡの測定方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子からなる群から選ばれる蛋白質をコードするｍＲＮＡの測定に用いられるプローブであって、下記（１）−（５２）に示す各遺伝子の所定領域にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドからなる群から選ばれるオリゴヌクレオチドであることを特徴とするプローブ。
（１）ＰＸＲ遺伝子の１６４−１８９の領域
（２）ＡＨＲＲ遺伝子の９４８−９７４の領域
（３）ＡＨＲ遺伝子の９４１−９６８の領域
（４）ＣＡＲ遺伝子の３９６−４２１の領域
（５）ＮＲ２Ｆ１遺伝子の３１８−３４６の領域
（６）ＨＲＲ−１遺伝子の１３２１−１３４６の領域
（７）ＬＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の１００３−１０２９の領域
（８）ＭＲ遺伝子の１５０１−１５２８の領域
（９）ＰＰＡＲ−ｂｅｔａ遺伝子の３４５−３７５の領域
（１０）ＰＰＡＲ−ｇａｍｍａ遺伝子の１３１８−１３４７の領域
（１１）ＴＲ遺伝子の９１０−９３３の領域
（１２）ＴＲ２−１１遺伝子の１１３２−１１５９の領域
（１３）ＲＴＲ遺伝子の９８９−１０１５の領域
（１４）ＴＲ４遺伝子の１２４３−１２６８の領域
（１５）ＴＲ３遺伝子の１２０５−１２３４の領域
（１６）ＥＡＲ−１ｒ遺伝子の９３−１２４の領域
（１７）ＧＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の１４４８−１４７４の領域
（１８）ＰＰＡＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の４６９−４９６の領域
（１９）ＲｅｖＥｒｂＡ−ａｌｐｈａ遺伝子の４８０−５１１の領域
（２０）ＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の３５９−３８０の領域
（２１）ＲＸＲ−ｂｅｔａ遺伝子の４２７−４４７の領域
（２２）ＲＸＲ−ｇａｍｍａ遺伝子の２８８−３１９の領域
（２３）Ｎｅｒ−Ｉ遺伝子の１６０−１８２の領域
（２４）ＨＮＦ４Ｇ遺伝子の１０６−１３３の領域
（２５）ＥＳＲ２遺伝子の９２５−９５１の領域
（２６）ＮＲ４Ａ２遺伝子の２５６−２８８の領域
（２７）ＮＲ４Ａ３遺伝子の１８１−２０５の領域
（２８）ＮＲ５Ａ２遺伝子の４３９−４６９の領域
（２９）ＲＡＲＧ遺伝子の３９７−４２５の領域
（３０）ＡＲ遺伝子の２３０５−２３３２の領域
（３１）ＮＲ２Ｅ１遺伝子の７０６−７３３の領域
（３２）ＶＤＲ遺伝子の４１８−４４８の領域
（３３）ＲＯＲＢ遺伝子の５８０−６１４の領域
（３４）ＲＯＲＣ遺伝子の１２５６−１２８４の領域
（３５）ＮＲ２Ｆ２遺伝子の１１３４−１１６５の領域
（３６）ＴＨＲＡ遺伝子の２０５−２３０の領域
（３７）ＨＮＦ４Ａ遺伝子の４２９−４５５の領域
（３８）ＮＲ５Ａ１遺伝子の１１３１−１１６０の領域
（３９）ＲＡＲＡ遺伝子の６５３−６８４の領域
（４０）ＮＲ１Ｂ２遺伝子の６１９−６４４の領域
（４１）ＥＳＲＲＡ遺伝子の１２２３−１２４６の領域
（４２）ＲＯＲＡ遺伝子の３２１−３５２の領域
（４３）ＥＳＲ１遺伝子の５５２−５７９の領域
（４４）ＰＧＲ遺伝子の１８５２−１８８０の領域
（４５）ＳＴＡＴ１遺伝子の１８６２−１８８７の領域
（４６）ＳＴＡＴ２遺伝子の１８４４−１８６９の領域
（４７）ＳＴＡＴ３遺伝子の２１０３−２１３０の領域
（４８）ＳＴＡＴ４遺伝子の１６８８−１７１８の領域
（４９）ＳＴＡＴ５遺伝子の１２８７−１３０９の領域
（５０）ＳＴＡＴ５Ｂ遺伝子の１２６６−１２９３の領域
（５１）ＳＴＡＴ６遺伝子の１６３４−１６６７の領域
（５２）ＡＲＮＴ遺伝子の３７７−４０４の領域
【請求項２】
オリゴヌクレオチドが、更にリポーター色素とクエンチャー色素とを結合させたものである請求項１に記載のプローブ。
【請求項３】
オリゴヌクレオチドが、２０−４０の範囲の塩基長を有するものである請求項１に記載のプローブ。
【請求項４】
オリゴヌクレオチドが、配列番号１−配列番号５２に示される配列のいずれかを含むものである請求項１−３のいずれかに記載のプローブ。
【請求項５】
オリゴヌクレオチドが、配列番号１−配列番号５２に示される配列のいずれかである請求項１−３のいずれかに記載のプローブ。
【請求項６】
フォワードプライマーとリバースプライマーとのプライマー対およびプローブのセットの少なくとも１つを含む、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子からなる群から選ばれる蛋白質をコードするｍＲＮＡの測定キットであって、上記プライマー対およびプローブが下記（１）−（５２）に示される遺伝子の各領域にそれぞれハイブリダイズするオリゴヌクレオチドであるキット。
（１）プライマー対；ＰＸＲ遺伝子の１４１−１６１領域および２０９−１９１領域、プローブ；１６４−１８９領域
（２）プライマー対；ＡＨＲＲ遺伝子の８８７−９０６領域および９９６−９７８領域、プローブ；９４８−９７４領域
（３）プライマー対；ＡＨＲ遺伝子の８９５−９１４領域および１０２２−１００２領域、プローブ；９４１−９６８領域
（４）プライマー対；ＣＡＲ遺伝子の３７２−３９１領域および４４２−４２４領域、プローブ；３９６−４２１領域
（５）プライマー対；ＮＲ２Ｆ１遺伝子の２８７−３０７領域および３７２−３５２領域、プローブ；３１８−３４６領域
（６）プライマー対；ＨＲＲ−１遺伝子の１３０１−１３１９領域および１４１７−１３９７領域、プローブ；１３２１−１３４６領域
（７）プライマー対；ＬＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の９７２−９９０領域および１０７９−１０６１領域、プローブ；１００３−１０２９領域
（８）プライマー対；ＭＲ遺伝子の１４４７−１４６６領域および１５４９−１５２９領域、プローブ；１５０１−１５２８領域
（９）プライマー対；ＰＰＡＲ−ｂｅｔａ遺伝子の３２０−３４０領域および４２８−４０８領域、プローブ；３４５−３７５領域
（１０）プライマー対；ＰＰＡＲ−ｇａｍｍａ遺伝子の１２９７−１３１６領域および１３７９−１３５９領域、プローブ；１３１８−１３４７領域
（１１）プライマー対；ＴＲ遺伝子の８８６−９０６領域および９６８−９４８領域、プローブ；９１０−９３３領域
（１２）プライマー対；ＴＲ２−１１遺伝子の１０９８−１１１８領域および１２４７−１２２７領域、プローブ；１１３２−１１５９領域
（１３）プライマー対；ＲＴＲ遺伝子の９６６−９８６領域および１０６８−１０４８領域、プローブ；９８９−１０１５領域
（１４）プライマー対；ＴＲ４遺伝子の１２２０−１２４０領域および１３４４−１３２４領域、プローブ；１２４３−１２６８領域
（１５）プライマー対；ＴＲ３遺伝子の１１８１−１２０１領域および１２５５−１２３６領域、プローブ；１２０５−１２３４領域
（１６）プライマー対；ＥＡＲ−１ｒ遺伝子の３８−５８領域および１８４−１６５領域、プローブ；９３−１２４領域
（１７）プライマー対；ＧＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の１４２２−１４３９領域および１５１７−１４９７領域、プローブ；１４４８−１４７４領域
（１８）プライマー対；ＰＰＡＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の４２２−４４２領域および５２３−５０４領域、プローブ；４６９−４９６領域
（１９）プライマー対；ＲｅｖＥｒｂＡ−ａｌｐｈａ遺伝子の４５３−４７１領域および５３９−５２１領域、プローブ；４８０−５１１領域
（２０）プライマー対；ＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の３３８−３５７領域および４３４−４１７領域、プローブ；３５９−３８０領域
（２１）プライマー対；ＲＸＲ−ｂｅｔａ遺伝子の３９１−４１３領域および５０８−４８５領域、プローブ；４２７−４４７領域
（２２）プライマー対；ＲＸＲ−ｇａｍｍａ遺伝子の２６２−２８１領域および３４４−３２４領域、プローブ；２８８−３１９領域
（２３）プライマー対；Ｎｅｒ−Ｉ遺伝子の１３２−１５１領域および２０２−１８４領域、プローブ；１６０−１８２領域
（２４）プライマー対；ＨＮＦ４Ｇ遺伝子の８５−１０４領域および１６０−１４１領域、プローブ；１０６−１３３領域
（２５）プライマー対；ＥＳＲ２遺伝子の８９３−９１１領域および１０１０−９９０領域、プローブ；９２５−９５１領域
（２６）プライマー対；ＮＲ４Ａ２遺伝子の２２５−２４５領域および３６９−３４９領域、プローブ；２５６−２８８領域
（２７）プライマー対；ＮＲ４Ａ３遺伝子の１３２−１５２領域および２３５−２１６領域、プローブ；１８１−２０５領域
（２８）プライマー対；ＮＲ５Ａ２遺伝子の４１５−４３５領域および５５２−５３４領域、プローブ；４３９−４６９領域
（２９）プライマー対；ＲＡＲＧ遺伝子の３７６−３９５領域および４９４−４７６領域、プローブ；３９７−４２５領域
（３０）プライマー対；ＡＲ遺伝子の２２７１−２２９４領域および２３６３−２３４１領域、プローブ；２３０５−２３３２領域
（３１）プライマー対；ＮＲ２Ｅ１遺伝子の６８５−７０３領域および７５４−７３５領域、プローブ；７０６−７３３領域
（３２）プライマー対；ＶＤＲ遺伝子の３９０−４１１領域および４９４−４７３領域、プローブ；４１８−４４８領域
（３３）プライマー対；ＲＯＲＢ遺伝子の５５５−５７５領域および６４７−６２７領域、プローブ；５８０−６１４領域
（３４）プライマー対；ＲＯＲＣ遺伝子の１２３６−１２５４領域および１３１３−１２９３領域、プローブ；１２５６−１２８４領域
（３５）プライマー対；ＮＲ２Ｆ２遺伝子の１１１３−１１３２領域および１１９７−１１７７領域、プローブ；１１３４−１１６５領域
（３６）プライマー対；ＴＨＲＡ遺伝子の１７０−１９０領域および２５６−２３６領域、プローブ；２０５−２３０領域
（３７）プライマー対；ＨＮＦ４Ａ遺伝子の４０７−４２７領域および４７７−４５９領域、プローブ；４２９−４５５領域
（３８）プライマー対；ＮＲ５Ａ１遺伝子の１１０５−１１２６領域および１１８４−１１６６領域、プローブ；１１３１−１１６０領域
（３９）プライマー対；ＲＡＲＡ遺伝子の６１０−６３０領域および７０７−６８７領域、プローブ；６５３−６８４領域
（４０）プライマー対；ＮＲ１Ｂ２遺伝子の５９５−６１５領域および６８４−６６４領域、プローブ；６１９−６４４領域
（４１）プライマー対；ＥＳＲＲＡ遺伝子の１１６９−１１８７領域および１２７１−１２５３領域、プローブ；１２２３−１２４６領域
（４２）プライマー対；ＲＯＲＡ遺伝子の３０１−３１９領域および３９１−３７１領域、プローブ；３２１−３５２領域
（４３）プライマー対；ＥＳＲ１遺伝子の５３０−５４９領域および６８３−６６５領域、プローブ；５５２−５７９領域
（４４）プライマー対；ＰＧＲ遺伝子の１８２６−１８４５領域および１９６５−１９４５領域、プローブ；１８５２−１８８０領域
（４５）プライマー対；ＳＴＡＴ１遺伝子の１８３３−１８５３領域および１９５１−１９３２領域、プローブ；１８６２−１８８７領域
（４６）プライマー対；ＳＴＡＴ２遺伝子の１７９９−１８１８領域および１８９８−１８７８領域、プローブ；１８４４−１８６９領域
（４７）プライマー対；ＳＴＡＴ３遺伝子の２０８１−２１０１領域および２１５２−２１３２領域、プローブ；２１０３−２１３０領域
（４８）プライマー対；ＳＴＡＴ４遺伝子の１６５０−１６６８領域および１７５８−１７３８領域、プローブ；１６８８−１７１８領域
（４９）プライマー対；ＳＴＡＴ５遺伝子の１２６１−１２８１領域および１４１１−１３９１領域、プローブ；１２８７−１３０９領域
（５０）プライマー対；ＳＴＡＴ５Ｂ遺伝子の１２４０−１２６０領域および１４１２−１３９３領域、プローブ；１２６６−１２９３領域
（５１）プライマー対；ＳＴＡＴ６遺伝子の１６０４−１６２２領域および１７３１−１７１２領域、プローブ；１６３４−１６６７領域
（５２）プライマー対；ＡＲＮＴ遺伝子の３４３−３６３領域および４２９−４１０領域、プローブ；３７７−４０４領域
【請求項７】
プローブが、更にリポーター色素とクエンチャー色素とを結合させたものである請求項６に記載の測定キット。
【請求項８】
下記（１）−（５２）に示される各配列番号の配列を含むオリゴヌクレオチドからなるプライマー対とプローブとのセットの少なくとも１つを含む請求項７に記載の測定キット。
（１）プライマー対；配列番号５３および５４、プローブ；配列番号１
（２）プライマー対；配列番号５５および５６、プローブ；配列番号２
（３）プライマー対；配列番号５７および５８、プローブ；配列番号３
（４）プライマー対；配列番号５９および７０、プローブ；配列番号４
（５）プライマー対；配列番号６１および６２、プローブ；配列番号５
（６）プライマー対；配列番号６３および６４、プローブ；配列番号６
（７）プライマー対；配列番号６５および６６、プローブ；配列番号７
（８）プライマー対；配列番号６７および６８、プローブ；配列番号８
（９）プライマー対；配列番号６９および７０、プローブ；配列番号９
（１０）プライマー対；配列番号７１および７２、プローブ；配列番号１０
（１１）プライマー対；配列番号７３および７４、プローブ；配列番号１１
（１２）プライマー対；配列番号７５および７６、プローブ；配列番号１２
（１３）プライマー対；配列番号７７および７８、プローブ；配列番号１３
（１４）プライマー対；配列番号７９および８０、プローブ；配列番号１４
（１５）プライマー対；配列番号８１および８２、プローブ；配列番号１５
（１６）プライマー対；配列番号８３および８４、プローブ；配列番号１６
（１７）プライマー対；配列番号８５および８６、プローブ；配列番号１７
（１８）プライマー対；配列番号８７および８８、プローブ；配列番号１８
（１９）プライマー対；配列番号８９および９０、プローブ；配列番号１９
（２０）プライマー対；配列番号９１および９３、プローブ；配列番号２０
（２１）プライマー対；配列番号９３および９４、プローブ；配列番号２１
（２２）プライマー対；配列番号９５および９６、プローブ；配列番号２２
（２３）プライマー対；配列番号９７および９８、プローブ；配列番号２３
（２４）プライマー対；配列番号９９および１００、プローブ；配列番号２４
（２５）プライマー対；配列番号１０１および１０２、プローブ；配列番号２５
（２６）プライマー対；配列番号１０３および１０４、プローブ；配列番号２６
（２７）プライマー対；配列番号１０５および１０６、プローブ；配列番号２７
（２８）プライマー対；配列番号１０７および１０８、プローブ；配列番号２８
（２９）プライマー対；配列番号１０９および１１０、プローブ；配列番号２９
（３０）プライマー対；配列番号１１１および１１２、プローブ；配列番号３０
（３１）プライマー対；配列番号１１３および１１４、プローブ；配列番号３１
（３２）プライマー対；配列番号１１５および１１６、プローブ；配列番号３２
（３３）プライマー対；配列番号１１７および１１８、プローブ；配列番号３３
（３４）プライマー対；配列番号１１９および１２０、プローブ；配列番号３４
（３５）プライマー対；配列番号１２１および１２２、プローブ；配列番号３５
（３６）プライマー対；配列番号１２３および１２４、プローブ；配列番号３６
（３７）プライマー対；配列番号１２５および１２６、プローブ；配列番号３７
（３８）プライマー対；配列番号１２７および１２８、プローブ；配列番号３８
（３９）プライマー対；配列番号１２９および１３０、プローブ；配列番号３９
（４０）プライマー対；配列番号１３１および１３２、プローブ；配列番号４０
（４１）プライマー対；配列番号１３３および１３４、プローブ；配列番号４１
（４２）プライマー対；配列番号１３５および１３６、プローブ；配列番号４２
（４３）プライマー対；配列番号１３７および１３８、プローブ；配列番号４３
（４４）プライマー対；配列番号１３９および１４０、プローブ；配列番号４４
（４５）プライマー対；配列番号１４１および１４２、プローブ；配列番号４５
（４６）プライマー対；配列番号１４３および１４４、プローブ；配列番号４６
（４７）プライマー対；配列番号１４５および１４６、プローブ；配列番号４７
（４８）プライマー対；配列番号１４７および１４８、プローブ；配列番号４８
（４９）プライマー対；配列番号１４９および１５０、プローブ；配列番号４９
（５０）プライマー対；配列番号１５１および１５２、プローブ；配列番号５０
（５１）プライマー対；配列番号１５３および１５４、プローブ；配列番号５１
（５２）プライマー対；配列番号１５５および１５６、プローブ；配列番号５２
【請求項９】
請求項８に記載の（１）−（５２）に示される各配列番号の配列からなるオリゴヌクレオチドであるプライマー対とプローブとのセットの少なくとも１つを含む、請求項７に記載の測定キット。
【請求項１０】
請求項８または９に記載の測定キットであって、（１）のセットがＰＸＲの測定用で、（２）のセットがＡＨＲＲの測定用で、（３）のセットがＡＨＲの測定用で、（４）のセットがＣＡＲの測定用で、（５）のセットがＮＲ２Ｆ１の測定用で、（６）のセットがＨＲＲ−１の測定用で、（７）のセットがＬＸＲ−ａｌｐｈａの測定用で、（８）のセットがＭＲの測定用で、（９）のセットがＰＰＡＲ−ｂｅｔａの測定用で、（１０）のセットがＰＰＡＲ−ｇａｍｍａの測定用で、（１１）のセットがＴＲの測定用で、（１２）のセットがＴＲ２−１１の測定用で、（１３）のセットがＲＴＲの測定用で、（１４）のセットがＴＲ４の測定用で、（１５）のセットがＴＲ３の測定用で、（１６）のセットがＥＡＲ−１ｒの測定用で、（１７）のセットがＧＲ−ａｌｐｈａの測定用で、（１８）のセットがＰＰＡＲ−ａｌｐｈａの測定用で、（１９）のセットがＲｅｖＥｒｂＡ−ａｌｐｈａの測定用で、（２０）のセットがＲＸＲ−ａｌｐｈａの測定用で、（２１）のセットがＲＸＲ−ｂｅｔａの測定用で、（２２）のセットがＲＸＲ−ｇａｍｍａの測定用で、（２３）のセットがＮｅｒ−Ｉの測定用で、（２４）のセットがＨＮＦ４Ｇの測定用で、（２５）のセットがＥＳＲ２の測定用で、（２６）のセットがＮＲ４Ａ２の測定用で、（２７）のセットがＮＲ４Ａ３の測定用で、（２８）のセットがＮＲ５Ａ２の測定用で、（２９）のセットがＲＡＲＧの測定用で、（３０）のセットがＡＲの測定用で、（３１）のセットがＮＲ２Ｅ１の測定用で、（３２）のセットがＶＤＲの測定用で、（３３）のセットがＲＯＲＢの測定用で、（３４）のセットがＲＯＲＣの測定用で、（３５）のセットがＮＲ２Ｆ２の測定用で、（３６）のセットがＴＨＲＡの測定用で、（３７）のセットがＨＮＦ４Ａの測定用で、（３８）のセットがＮＲ５Ａ１の測定用で、（３９）のセットがＲＡＲＡの測定用で、（４０）のセットがＮＲ１Ｂ２の測定用で、（４１）のセットがＥＳＲＲＡの測定用で、（４２）のセットがＲＯＲＡの測定用で、（４３）のセットがＥＳＲ１の測定用で、（４４）のセットがＰＧＲの測定用で、（４５）のセットがＳＴＡＴ１の測定用で、（４６）のセットがＳＴＡＴ２の測定用で、（４７）のセットがＳＴＡＴ３の測定用で、（４８）のセットがＳＴＡＴ４の測定用で、（４９）のセットがＳＴＡＴ５の測定用で、（５０）のセットがＳＴＡＴ５Ｂの測定用で、（５１）のセットがＳＴＡＴ６の測定用で、（５２）のセットがＡＲＮＴの測定用である測定キット。
【請求項１１】
ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子からなる群から選ばれる蛋白質をコードするｍＲＮＡを含む検体について、請求項６−１０のいずれかに記載のプライマー対とプローブとのセットの少なくとも１つを含む測定キットを用いてポリメラーゼ連鎖反応を行い、用いたプローブの加水分解の有無を測定することを特徴とする、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子からなる群から選ばれる蛋白質をコードするｍＲＮＡの測定方法。
【請求項１２】
加水分解の有無が、励起光照射による蛍光の発色の有無の測定によりなされる請求項１１に記載の測定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子からなる群から選ばれる蛋白質をコードするｍＲＮＡの測定方法、および該方法に利用するプローブおよびキットに関する。
【０００２】
【従来の技術】
核内レセプターおよび転写因子（蛋白質）は、薬物代謝のための酵素、トランスポーターなどの発現を制御することが知られている。例えば、ＡＨＲ（Ａｈ受容体）と呼ばれる細胞質受容体は、薬物と結合して核内に移行し、Ａｒｎｔ（ＡｈＲ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ）とよばれるパートナー蛋白質と三者複合体を形成し、ＣＹＰ１ファミリーを代表とする標的遺伝子の上流域に存在する異物応答配列（ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃ　ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ　ｅｌｅｍｅｎｔ，　ＸＲＥ）に結合する。この結合は、異物を代謝して排泄するための合目的応答である。
【０００３】
なお、上記ＣＹＰ１は、後記するＣＹＰ２Ｂ、ＣＹＰ３Ａ、ＣＹＰ４Ａなどと共に、薬物代謝酵素Ｐ−４５０の代表的な分子種である。
【０００４】
また、ＣＡＲ（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ　ａｎｄｒｏｓｔａｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ）は、レチノイン酸Ｘ受容体（ＲＸＲ）とヘテロ二量体を形成して、ＣＹＰ２Ｂ遺伝子の上流域に存在するＤＲ４に結合して、共役活性化因子であるＳＲＣ（ｓｔｅｒｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ）−１を介して転写を活性化する。同様に、ＰＸＲ（プレグナンＸ受容体）は、ＲＸＲとヘテロ二量体を形成し、ＤＲ３，　ＥＲ６に結合して、ＣＹＰ３Ａの誘導を制御する。ＰＰＡＲ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ，　ペルオキシソーム増殖活性化受容体）は、ＲＸＲとヘテロ二量体を形成してＣＹＰ４Ａ遺伝子の上流域に存在するＰＰＲＥ（ペルオキシソーム増殖剤応答性配列）に結合する。このように、現在、薬物代謝に関与する数多くの核内レセプターおよび転写因子と、それら遺伝子のＤＮＡ配列が解明されつつある（例えば非特許文献１および後記するジーンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）の登録番号参照）。
【０００５】
新薬を開発する上で、該新薬を投与した際のヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の働き（発現量の増減）を把握することは重要である。何故なら、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の変動を把握することによって、新薬およびこれと併用される併用薬剤の効力、副作用などの増減を予想でき、また併用薬剤、他の摂取物などによる新薬の効力、副作用、それらの発生機構を予測でき、該新薬の安全性を確認できるからである。
【０００６】
従って、新薬開発などの分野においては、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子をコードするｍＲＮＡに関する情報、殊に該ｍＲＮＡを区別して測定できる測定技術の開発が要望されている。このような技術が開発できれば、例えば、新薬の他剤との相互作用、特殊病態時における生体への影響の機構が容易に解明でき、該新薬の副作用に関する有用な情報を得ることができ、かくして新薬の安全性を確保することができる。
【０００７】
一方、ポリメラーゼチェインリアクション（ＰＣＲ）は、核酸の増幅法として広く知られている。そのうちでも、例えばＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ−ＰＣＲ）、コンペティティブＲＴ−ＰＣＲなどは、微量のｍＲＮＡの検出、定量に利用され、その威力を発揮している。
【０００８】
近年、ＰＣＲを利用したリアルタイム定量検出法が確立された（Ｔａｑ　Ｍａｎ　ＰＣＲ　，　非特許文献２参照、ＡＢＩ　ＰＲＩＳＭＴＭ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社））。この方法は、特定の蛍光標識プローブ（ＴａｑＭａｎ　ｐｒｏｂｅ）を用いて核酸を測定する方法であり、以下の原理を利用している。例えば５’末端にリポーター色素および３’末端にクエンチャー色素を付加して蛍光標識したプローブをターゲットＤＮＡにアニールさせた状態で、通常のＰＣＲ反応を行わせると、伸長反応の進行に伴って、ＤＮＡポリメラーゼの有する５′−３′エキソヌクレアーゼ活性により、上記プローブが５’末端から加水分解される。その結果、５’末端のリポーター色素が３’末端のクエンチャー色素から離れ、これにより、当初一定の空間的距離を保っていたことによるＦＲＥＴ（Ｆｌｕｏｒｅｓｅｎｃｅ　Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ　Ｅｎｅｒｇｙ　Ｔｒａｎｓｆｅｒ，　両蛍光色素の共鳴によるリポーター色素のエネルギー順位の低下に基づく蛍光強度の低下現象）効果がなくなり、クエンチャー色素により制御されていたリポーター色素の蛍光強度が増加する。この蛍光強度の増加を測定することによって、ターゲット核酸をリアルタイムに選択的に定量および検出できる。
【０００９】
この方法によれば、従来のＰＣＲを利用した定量、検出法のように、ＰＣＲ後に増幅物を例えばアガロースゲル電気泳動して、泳動パターンを解析するなどの複雑な工程が不要となり、短時間で多種のサンプルを同時に定量できる利点がある。
【００１０】
一般に、臨床検査センターなどで臨床検査を行う場合は、非常に多数の検体について限られた時間内に検査を行う必要があり、検査を効率良く行い得る手法の開発が要望されている。リアルタイム定量検出法は、この要望に合致するものとして期待できる。
【００１１】
本発明者らは、ＰＣＲを利用したリアルタイム定量検出法に着目し、これがヒトにおける核内レセプターおよび転写因子をコードするｍＲＮＡの検出に利用できれば、同じ装置を用いて同一のＰＣＲ条件で各ｍＲＮＡを区別して検出および定量できるとの着想から鋭意研究を重ねた。
【００１２】
しかるに、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子をコードするｍＲＮＡは、それぞれのｍＲＮＡのＤＮＡ配列は知られているものの、これらをターゲット遺伝子として、同一ＰＣＲ条件でそれぞれ充分に増幅し得、更に、各ターゲット遺伝子の特定位置にハイブリダイズし得るプライマー対としてのオリゴヌクレオチドを検索すること自体困難であると考えられた。また、このようなプライマー対に挟まれた特定領域内に、同一ＰＣＲ条件下でこれらのプライマーよりも早くターゲット遺伝子とハイブリダイズし得る、ヒトに特異的なプローブを構築することは、同様に困難であると考えられた。特に、ヌクレオチド配列が既知の２つの核酸のハイブリダイズのし易さは、融点（Ｔｍ）の計算によりある程度推定することはできるものの、この推定によって選択したプライマーとプローブとの組合せが、必ずしもＤＮＡ測定において好結果をもたらすわけではないことが知られていることより、現在知られているヒトにおける核内レセプターおよび転写因子をコードするｍＲＮＡについて、これらを区別して測定可能な、上記ＰＣＲによるリアルタイム検出用の各プライマー対とプローブとの組合せの選択には、熟練者の試行錯誤による多大な実験などが必要となると予想された。
【００１３】
さらに、市販の４８℃でＲＴ反応を行うことができる試薬（ＴａｑＭａｎ　Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ　ＲＴ−ＰＣＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ　Ｒｅａｇｅｎｔｓ　Ｋｉｔ，　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた測定では，ｍＲＮＡの高次構造が維持されており、ｒｅｖｅｒｓｅ　ｐｒｉｍｅｒの設計場所によってＲＴ反応の効率が低くなる場合が多々見受けられた。即ち、Ｏｎｅ−ｓｔｅｐ　ＲＴ−ＰＣＲは、Ｔｗｏ−ｓｔｅｐ　ＲＴ−ＰＣＲよりも更にプライマーおよびプローブの設計が難しいものであり、該Ｏｎｅ−ｓｔｅｐ　ＲＴ−ＰＣＲにおいて使用可能なプライマー対とプローブとの組合せに関する知見を見出せれば、ＲＴ反応とＰＣＲ反応を分けて行う操作を省くことができ、また、反応に用いる試薬（ＴａｑＭａｎ　Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ　ＲＴ−ＰＣＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ　Ｒｅａｇｅｎｔｓ　Ｋｉｔ）が凍結保存をしなくても、４℃保存でよいため、より簡便な測定技術を提供できると考えられた。
【００１４】
【非特許文献１】
「薬物代謝学（第２版）−医療薬学・毒性学の基礎として−」、株式会社東京化学同人発行、２０００年１０月２０日、第２０１−２１１頁
【００１５】
【非特許文献２】
Ｇｅｎｏｍｅ　Ｒｅｓ．，　６（１０），　９８６　（１９９６），　ＡＢＩ　ＰＲＩＳＭＴＭ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）
【００１６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡの測定法、特にＰＣＲを利用したリアルタイム検出法の確立と、そのためのプローブおよびプライマー対を提供することにある。
【００１７】
本発明者らは、上記目的を達成するためにヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡについて、更に、多大な実験、研究を繰返し行った。その結果、５２種類のヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡに対して、それぞれ目的のプライマー対およびプローブの組合せを見出すことに成功した。本発明は、この知見を基礎として完成されたものである。
【００１８】
【課題を解決するための手段】
本発明は、下記項１−１２に示す要旨の発明を提供する。
【００１９】
項１．　ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子からなる群から選ばれる蛋白質をコードするｍＲＮＡの測定に用いられるプローブであって、下記（１）−（５２）に示す各遺伝子の所定領域にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドからなる群から選ばれるオリゴヌクレオチドであることを特徴とするプローブ：
（１）ＰＸＲ遺伝子の１６４−１８９の領域
（２）ＡＨＲＲ遺伝子の９４８−９７４の領域
（３）ＡＨＲ遺伝子の９４１−９６８の領域
（４）ＣＡＲ遺伝子の３９６−４２１の領域
（５）ＮＲ２Ｆ１遺伝子の３１８−３４６の領域
（６）ＨＲＲ−１遺伝子の１３２１−１３４６の領域
（７）ＬＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の１００３−１０２９の領域
（８）ＭＲ遺伝子の１５０１−１５２８の領域
（９）ＰＰＡＲ−ｂｅｔａ遺伝子の３４５−３７５の領域
（１０）ＰＰＡＲ−ｇａｍｍａ遺伝子の１３１８−１３４７の領域
（１１）ＴＲ遺伝子の９１０−９３３の領域
（１２）ＴＲ２−１１遺伝子の１１３２−１１５９の領域
（１３）ＲＴＲ遺伝子の９８９−１０１５の領域
（１４）ＴＲ４遺伝子の１２４３−１２６８の領域
（１５）ＴＲ３遺伝子の１２０５−１２３４の領域
（１６）ＥＡＲ−１ｒ遺伝子の９３−１２４の領域
（１７）ＧＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の１４４８−１４７４の領域
（１８）ＰＰＡＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の４６９−４９６の領域
（１９）ＲｅｖＥｒｂＡ−ａｌｐｈａ遺伝子の４８０−５１１の領域
（２０）ＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の３５９−３８０の領域
（２１）ＲＸＲ−ｂｅｔａ遺伝子の４２７−４４７の領域
（２２）ＲＸＲ−ｇａｍｍａ遺伝子の２８８−３１９の領域
（２３）Ｎｅｒ−Ｉ遺伝子の１６０−１８２の領域
（２４）ＨＮＦ４Ｇ遺伝子の１０６−１３３の領域
（２５）ＥＳＲ２遺伝子の９２５−９５１の領域
（２６）ＮＲ４Ａ２遺伝子の２５６−２８８の領域
（２７）ＮＲ４Ａ３遺伝子の１８１−２０５の領域
（２８）ＮＲ５Ａ２遺伝子の４３９−４６９の領域
（２９）ＲＡＲＧ遺伝子の３９７−４２５の領域
（３０）ＡＲ遺伝子の２３０５−２３３２の領域
（３１）ＮＲ２Ｅ１遺伝子の７０６−７３３の領域
（３２）ＶＤＲ遺伝子の４１８−４４８の領域
（３３）ＲＯＲＢ遺伝子の５８０−６１４の領域
（３４）ＲＯＲＣ遺伝子の１２５６−１２８４の領域
（３５）ＮＲ２Ｆ２遺伝子の１１３４−１１６５の領域
（３６）ＴＨＲＡ遺伝子の２０５−２３０の領域
（３７）ＨＮＦ４Ａ遺伝子の４２９−４５５の領域
（３８）ＮＲ５Ａ１遺伝子の１１３１−１１６０の領域
（３９）ＲＡＲＡ遺伝子の６５３−６８４の領域
（４０）ＮＲ１Ｂ２遺伝子の６１９−６４４の領域
（４１）ＥＳＲＲＡ遺伝子の１２２３−１２４６の領域
（４２）ＲＯＲＡ遺伝子の３２１−３５２の領域
（４３）ＥＳＲ１遺伝子の５５２−５７９の領域
（４４）ＰＧＲ遺伝子の１８５２−１８８０の領域
（４５）ＳＴＡＴ１遺伝子の１８６２−１８８７の領域
（４６）ＳＴＡＴ２遺伝子の１８４４−１８６９の領域
（４７）ＳＴＡＴ３遺伝子の２１０３−２１３０の領域
（４８）ＳＴＡＴ４遺伝子の１６８８−１７１８の領域
（４９）ＳＴＡＴ５遺伝子の１２８７−１３０９の領域
（５０）ＳＴＡＴ５Ｂ遺伝子の１２６６−１２９３の領域
（５１）ＳＴＡＴ６遺伝子の１６３４−１６６７の領域
（５２）ＡＲＮＴ遺伝子の３７７−４０４の領域。
項２．　オリゴヌクレオチドが、更にリポーター色素とクエンチャー色素とを結合させたものである項１に記載のプローブ。
【００２０】
項３．　オリゴヌクレオチドが、２０−４０の範囲の塩基長を有するものである項１に記載のプローブ。
【００２１】
項４．　オリゴヌクレオチドが、配列番号１−配列番号５２に示される配列のいずれかを含むものである項１−３のいずれかに記載のプローブ。
【００２２】
項５．　オリゴヌクレオチドが、配列番号１−配列番号５２に示される配列のいずれかである請求項１−３のいずれかに記載のプローブ。
【００２３】
項６．　フォワードプライマーとリバースプライマーとのプライマー対およびプローブのセットの少なくとも１つを含む、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子からなる群から選ばれる蛋白質をコードするｍＲＮＡの測定キットであって、上記プライマー対およびプローブが下記（１）−（５２）に示される遺伝子の各領域にそれぞれハイブリダイズするオリゴヌクレオチドであるキット：
（１）プライマー対；ＰＸＲ遺伝子の１４１−１６１領域および２０９−１９１領域、プローブ；１６４−１８９領域
（２）プライマー対；ＡＨＲＲ遺伝子の８８７−９０６領域および９９６−９７８領域、プローブ；９４８−９７４領域
（３）プライマー対；ＡＨＲ遺伝子の８９５−９１４領域および１０２２−１００２領域、プローブ；９４１−９６８領域
（４）プライマー対；ＣＡＲ遺伝子の３７２−３９１領域および４４２−４２４領域、プローブ；３９６−４２１領域
（５）プライマー対；ＮＲ２Ｆ１遺伝子の２８７−３０７領域および３７２−３５２領域、プローブ；３１８−３４６領域
（６）プライマー対；ＨＲＲ−１遺伝子の１３０１−１３１９領域および１４１７−１３９７領域、プローブ；１３２１−１３４６領域
（７）プライマー対；ＬＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の９７２−９９０領域および１０７９−１０６１領域、プローブ；１００３−１０２９領域
（８）プライマー対；ＭＲ遺伝子の１４４７−１４６６領域および１５４９−１５２９領域、プローブ；１５０１−１５２８領域
（９）プライマー対；ＰＰＡＲ−ｂｅｔａ遺伝子の３２０−３４０領域および４２８−４０８領域、プローブ；３４５−３７５領域
（１０）プライマー対；ＰＰＡＲ−ｇａｍｍａ遺伝子の１２９７−１３１６領域および１３７９−１３５９領域、プローブ；１３１８−１３４７領域
（１１）プライマー対；ＴＲ遺伝子の８８６−９０６領域および９６８−９４８領域、プローブ；９１０−９３３領域
（１２）プライマー対；ＴＲ２−１１遺伝子の１０９８−１１１８領域および１２４７−１２２７領域、プローブ；１１３２−１１５９領域
（１３）プライマー対；ＲＴＲ遺伝子の９６６−９８６領域および１０６８−１０４８領域、プローブ；９８９−１０１５領域
（１４）プライマー対；ＴＲ４遺伝子の１２２０−１２４０領域および１３４４−１３２４領域、プローブ；１２４３−１２６８領域
（１５）プライマー対；ＴＲ３遺伝子の１１８１−１２０１領域および１２５５−１２３６領域、プローブ；１２０５−１２３４領域
（１６）プライマー対；ＥＡＲ−１ｒ遺伝子の３８−５８領域および１８４−１６５領域、プローブ；９３−１２４領域
（１７）プライマー対；ＧＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の１４２２−１４３９領域および１５１７−１４９７領域、プローブ；１４４８−１４７４領域
（１８）プライマー対；ＰＰＡＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の４２２−４４２領域および５２３−５０４領域、プローブ；４６９−４９６領域
（１９）プライマー対；ＲｅｖＥｒｂＡ−ａｌｐｈａ遺伝子の４５３−４７１領域および５３９−５２１領域、プローブ；４８０−５１１領域
（２０）プライマー対；ＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の３３８−３５７領域および４３４−４１７領域、プローブ；３５９−３８０領域
（２１）プライマー対；ＲＸＲ−ｂｅｔａ遺伝子の３９１−４１３領域および５０８−４８５領域、プローブ；４２７−４４７領域
（２２）プライマー対；ＲＸＲ−ｇａｍｍａ遺伝子の２６２−２８１領域および３４４−３２４領域、プローブ；２８８−３１９領域
（２３）プライマー対；Ｎｅｒ−Ｉ遺伝子の１３２−１５１領域および２０２−１８４領域、プローブ；１６０−１８２領域
（２４）プライマー対；ＨＮＦ４Ｇ遺伝子の８５−１０４領域および１６０−１４１領域、プローブ；１０６−１３３領域
（２５）プライマー対；ＥＳＲ２遺伝子の８９３−９１１領域および１０１０−９９０領域、プローブ；９２５−９５１領域
（２６）プライマー対；ＮＲ４Ａ２遺伝子の２２５−２４５領域および３６９−３４９領域、プローブ；２５６−２８８領域
（２７）プライマー対；ＮＲ４Ａ３遺伝子の１３２−１５２領域および２３５−２１６領域、プローブ；１８１−２０５領域
（２８）プライマー対；ＮＲ５Ａ２遺伝子の４１５−４３５領域および５５２−５３４領域、プローブ；４３９−４６９領域
（２９）プライマー対；ＲＡＲＧ遺伝子の３７６−３９５領域および４９４−４７６領域、プローブ；３９７−４２５領域
（３０）プライマー対；ＡＲ遺伝子の２２７１−２２９４領域および２３６３−２３４１領域、プローブ；２３０５−２３３２領域
（３１）プライマー対；ＮＲ２Ｅ１遺伝子の６８５−７０３領域および７５４−７３５領域、プローブ；７０６−７３３領域
（３２）プライマー対；ＶＤＲ遺伝子の３９０−４１１領域および４９４−４７３領域、プローブ；４１８−４４８領域
（３３）プライマー対；ＲＯＲＢ遺伝子の５５５−５７５領域および６４７−６２７領域、プローブ；５８０−６１４領域
（３４）プライマー対；ＲＯＲＣ遺伝子の１２３６−１２５４領域および１３１３−１２９３領域、プローブ；１２５６−１２８４領域
（３５）プライマー対；ＮＲ２Ｆ２遺伝子の１１１３−１１３２領域および１１９７−１１７７領域、プローブ；１１３４−１１６５領域
（３６）プライマー対；ＴＨＲＡ遺伝子の１７０−１９０領域および２５６−２３６領域、プローブ；２０５−２３０領域
（３７）プライマー対；ＨＮＦ４Ａ遺伝子の４０７−４２７領域および４７７−４５９領域、プローブ；４２９−４５５領域
（３８）プライマー対；ＮＲ５Ａ１遺伝子の１１０５−１１２６領域および１１８４−１１６６領域、プローブ；１１３１−１１６０領域
（３９）プライマー対；ＲＡＲＡ遺伝子の６１０−６３０領域および７０７−６８７領域、プローブ；６５３−６８４領域
（４０）プライマー対；ＮＲ１Ｂ２遺伝子の５９５−６１５領域および６８４−６６４領域、プローブ；６１９−６４４領域
（４１）プライマー対；ＥＳＲＲＡ遺伝子の１１６９−１１８７領域および１２７１−１２５３領域、プローブ；１２２３−１２４６領域
（４２）プライマー対；ＲＯＲＡ遺伝子の３０１−３１９領域および３９１−３７１領域、プローブ；３２１−３５２領域
（４３）プライマー対；ＥＳＲ１遺伝子の５３０−５４９領域および６８３−６６５領域、プローブ；５５２−５７９領域
（４４）プライマー対；ＰＧＲ遺伝子の１８２６−１８４５領域および１９６５−１９４５領域、プローブ；１８５２−１８８０領域
（４５）プライマー対；ＳＴＡＴ１遺伝子の１８３３−１８５３領域および１９５１−１９３２領域、プローブ；１８６２−１８８７領域
（４６）プライマー対；ＳＴＡＴ２遺伝子の１７９９−１８１８領域および１８９８−１８７８領域、プローブ；１８４４−１８６９領域
（４７）プライマー対；ＳＴＡＴ３遺伝子の２０８１−２１０１領域および２１５２−２１３２領域、プローブ；２１０３−２１３０領域
（４８）プライマー対；ＳＴＡＴ４遺伝子の１６５０−１６６８領域および１７５８−１７３８領域、プローブ；１６８８−１７１８領域
（４９）プライマー対；ＳＴＡＴ５遺伝子の１２６１−１２８１領域および１４１１−１３９１領域、プローブ；１２８７−１３０９領域
（５０）プライマー対；ＳＴＡＴ５Ｂ遺伝子の１２４０−１２６０領域および１４１２−１３９３領域、プローブ；１２６６−１２９３領域
（５１）プライマー対；ＳＴＡＴ６遺伝子の１６０４−１６２２領域および１７３１−１７１２領域、プローブ；１６３４−１６６７領域
（５２）プライマー対；ＡＲＮＴ遺伝子の３４３−３６３領域および４２９−４１０領域、プローブ；３７７−４０４領域。
【００２４】
項７．　プローブが、更にリポーター色素とクエンチャー色素とを結合させたものである項６に記載の測定キット。
【００２５】
項８．　下記（１）−（５２）に示される各配列番号の配列を含むオリゴヌクレオチドからなるプライマー対とプローブとのセットの少なくとも１つを含む項７に記載の測定キット：
（１）プライマー対；配列番号５３および５４、プローブ；配列番号１
（２）プライマー対；配列番号５５および５６、プローブ；配列番号２
（３）プライマー対；配列番号５７および５８、プローブ；配列番号３
（４）プライマー対；配列番号５９および７０、プローブ；配列番号４
（５）プライマー対；配列番号６１および６２、プローブ；配列番号５
（６）プライマー対；配列番号６３および６４、プローブ；配列番号６
（７）プライマー対；配列番号６５および６６、プローブ；配列番号７
（８）プライマー対；配列番号６７および６８、プローブ；配列番号８
（９）プライマー対；配列番号６９および７０、プローブ；配列番号９
（１０）プライマー対；配列番号７１および７２、プローブ；配列番号１０
（１１）プライマー対；配列番号７３および７４、プローブ；配列番号１１
（１２）プライマー対；配列番号７５および７６、プローブ；配列番号１２
（１３）プライマー対；配列番号７７および７８、プローブ；配列番号１３
（１４）プライマー対；配列番号７９および８０、プローブ；配列番号１４
（１５）プライマー対；配列番号８１および８２、プローブ；配列番号１５
（１６）プライマー対；配列番号８３および８４、プローブ；配列番号１６
（１７）プライマー対；配列番号８５および８６、プローブ；配列番号１７
（１８）プライマー対；配列番号８７および８８、プローブ；配列番号１８
（１９）プライマー対；配列番号８９および９０、プローブ；配列番号１９
（２０）プライマー対；配列番号９１および９３、プローブ；配列番号２０
（２１）プライマー対；配列番号９３および９４、プローブ；配列番号２１
（２２）プライマー対；配列番号９５および９６、プローブ；配列番号２２
（２３）プライマー対；配列番号９７および９８、プローブ；配列番号２３
（２４）プライマー対；配列番号９９および１００、プローブ；配列番号２４
（２５）プライマー対；配列番号１０１および１０２、プローブ；配列番号２５
（２６）プライマー対；配列番号１０３および１０４、プローブ；配列番号２６
（２７）プライマー対；配列番号１０５および１０６、プローブ；配列番号２７
（２８）プライマー対；配列番号１０７および１０８、プローブ；配列番号２８
（２９）プライマー対；配列番号１０９および１１０、プローブ；配列番号２９
（３０）プライマー対；配列番号１１１および１１２、プローブ；配列番号３０
（３１）プライマー対；配列番号１１３および１１４、プローブ；配列番号３１
（３２）プライマー対；配列番号１１５および１１６、プローブ；配列番号３２
（３３）プライマー対；配列番号１１７および１１８、プローブ；配列番号３３
（３４）プライマー対；配列番号１１９および１２０、プローブ；配列番号３４
（３５）プライマー対；配列番号１２１および１２２、プローブ；配列番号３５
（３６）プライマー対；配列番号１２３および１２４、プローブ；配列番号３６
（３７）プライマー対；配列番号１２５および１２６、プローブ；配列番号３７
（３８）プライマー対；配列番号１２７および１２８、プローブ；配列番号３８
（３９）プライマー対；配列番号１２９および１３０、プローブ；配列番号３９
（４０）プライマー対；配列番号１３１および１３２、プローブ；配列番号４０
（４１）プライマー対；配列番号１３３および１３４、プローブ；配列番号４１
（４２）プライマー対；配列番号１３５および１３６、プローブ；配列番号４２
（４３）プライマー対；配列番号１３７および１３８、プローブ；配列番号４３
（４４）プライマー対；配列番号１３９および１４０、プローブ；配列番号４４
（４５）プライマー対；配列番号１４１および１４２、プローブ；配列番号４５
（４６）プライマー対；配列番号１４３および１４４、プローブ；配列番号４６
（４７）プライマー対；配列番号１４５および１４６、プローブ；配列番号４７
（４８）プライマー対；配列番号１４７および１４８、プローブ；配列番号４８
（４９）プライマー対；配列番号１４９および１５０、プローブ；配列番号４９
（５０）プライマー対；配列番号１５１および１５２、プローブ；配列番号５０
（５１）プライマー対；配列番号１５３および１５４、プローブ；配列番号５１
（５２）プライマー対；配列番号１５５および１５６、プローブ；配列番号５２。
【００２６】
項９．　項８に記載の（１）−（５２）に示される各配列番号の配列からなるオリゴヌクレオチドであるプライマー対とプローブとのセットの少なくとも１つを含む、項７に記載の測定キット。
【００２７】
項１０．　項８または９に記載の測定キットであって、（１）のセットがＰＸＲの測定用で、（２）のセットがＡＨＲＲの測定用で、（３）のセットがＡＨＲの測定用で、（４）のセットがＣＡＲの測定用で、（５）のセットがＮＲ２Ｆ１の測定用で、（６）のセットがＨＲＲ−１の測定用で、（７）のセットがＬＸＲ−ａｌｐｈａの測定用で、（８）のセットがＭＲの測定用で、（９）のセットがＰＰＡＲ−ｂｅｔａの測定用で、（１０）のセットがＰＰＡＲ−ｇａｍｍａの測定用で、（１１）のセットがＴＲの測定用で、（１２）のセットがＴＲ２−１１の測定用で、（１３）のセットがＲＴＲの測定用で、（１４）のセットがＴＲ４の測定用で、（１５）のセットがＴＲ３の測定用で、（１６）のセットがＥＡＲ−１ｒの測定用で、（１７）のセットがＧＲ−ａｌｐｈａの測定用で、（１８）のセットがＰＰＡＲ−ａｌｐｈａの測定用で、（１９）のセットがＲｅｖＥｒｂＡ−ａｌｐｈａの測定用で、（２０）のセットがＲＸＲ−ａｌｐｈａの測定用で、（２１）のセットがＲＸＲ−ｂｅｔａの測定用で、（２２）のセットがＲＸＲ−ｇａｍｍａの測定用で、（２３）のセットがＮｅｒ−Ｉの測定用で、（２４）のセットがＨＮＦ４Ｇの測定用で、（２５）のセットがＥＳＲ２の測定用で、（２６）のセットがＮＲ４Ａ２の測定用で、（２７）のセットがＮＲ４Ａ３の測定用で、（２８）のセットがＮＲ５Ａ２の測定用で、（２９）のセットがＲＡＲＧの測定用で、（３０）のセットがＡＲの測定用で、（３１）のセットがＮＲ２Ｅ１の測定用で、（３２）のセットがＶＤＲの測定用で、（３３）のセットがＲＯＲＢの測定用で、（３４）のセットがＲＯＲＣの測定用で、（３５）のセットがＮＲ２Ｆ２の測定用で、（３６）のセットがＴＨＲＡの測定用で、（３７）のセットがＨＮＦ４Ａの測定用で、（３８）のセットがＮＲ５Ａ１の測定用で、（３９）のセットがＲＡＲＡの測定用で、（４０）のセットがＮＲ１Ｂ２の測定用で、（４１）のセットがＥＳＲＲＡの測定用で、（４２）のセットがＲＯＲＡの測定用で、（４３）のセットがＥＳＲ１の測定用で、（４４）のセットがＰＧＲの測定用で、（４５）のセットがＳＴＡＴ１の測定用で、（４６）のセットがＳＴＡＴ２の測定用で、（４７）のセットがＳＴＡＴ３の測定用で、（４８）のセットがＳＴＡＴ４の測定用で、（４９）のセットがＳＴＡＴ５の測定用で、（５０）のセットがＳＴＡＴ５Ｂの測定用で、（５１）のセットがＳＴＡＴ６の測定用で、（５２）のセットがＡＲＮＴの測定用である測定キット。
【００２８】
項１１．　ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子からなる群から選ばれる蛋白質をコードするｍＲＮＡを含む検体について、項６−１０のいずれかに記載のプライマー対とプローブとのセットの少なくとも１つを含む測定キットを用いてポリメラーゼ連鎖反応を行い、用いたプローブの加水分解の有無を測定することを特徴とする、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子からなる群から選ばれる蛋白質をコードするｍＲＮＡの測定方法。
【００２９】
項１２．　加水分解の有無が、励起光照射による蛍光の発色の有無の測定によりなされる項１１に記載の測定方法。
【００３０】
上記項１１および１２に記載の測定方法は、より詳しくは、フォーワードプライマーおよびリバースプライマーのプライマー対並びにレポーター色素とクエンチャー色素を有し上記両プライマーに挟まれた領域内で鋳型核酸とハイブリダイズするプローブを用いて、５’−３’エキソヌクレアーゼ活性を有するＤＮＡポリメラーゼによりポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行うことによって実施される。かくして、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡのそれぞれを測定することができる。
【００３１】
【発明の実施の形態】
本明細書におけるアミノ酸、ペプチド、塩基配列、核酸などの略号による表示は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの規定〔ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ，Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．，　１３８：　９　（１９８４）〕、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む明細書等の作成のためのガイドライン」（特許庁編）および当該分野における慣用記号に従うものとする。
【００３２】
本明細書において遺伝子なる語は、２本鎖ＤＮＡのみならず、それを構成するセンス鎖およびアンチセンス鎖という各１本鎖ＤＮＡを包含する。該遺伝子の発現に関連するｍＲＮＡおよびこれに相補的なｃＤＮＡをも包含する。ヌクレオチドには、ＲＮＡおよびＤＮＡが含まれる。
【００３３】
本発明に係わるヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡのリアルタイム検出方法は、同一ＰＣＲ乃至ＲＴ−ＰＣＲ反応条件下にリアルタイムで簡便且つ迅速に、各種ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡを定量できるものであり、その確立は、臨床分野において非常に有益である。
【００３４】
また、本発明測定方法は、手術で摘出した組織やバイオプシーにより摘出した組織中のヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡの発現を簡便に且つ迅速に検出でき、しかも多種の試料を一度に処理でき、また、僅かの組織片から抽出した微量の全ＲＮＡを試料として実施できる利点を有している。
【００３５】
更に、特定のヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡは、肝臓、腎臓などでの発現量の変化が血液中（血液に含まれる核を有する細胞）の値の変化と相関する可能性が考えられるが、この血液中の発現量は小さく、測定には多くの血液を必要とする。しかるに、本発明者の設計したプライマー対とプローブとを用いた本発明測定方法によれば、このような血液をサンプルとする場合も、少量のサンプルを利用して、一般的な機器を用いて容易且つ迅速に測定が可能である。
【００３６】
また、特定のヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡは、肝臓、腎臓などでの発現量の変化が唾液など分泌液中に含まれる核を有する細胞の値の変化と相関する可能性が考えられるが、この唾液などの分泌液中に含まれる核を有する細胞中の発現量は小さく、測定には多くの唾液などの分泌液を必要とする。しかるに、本発明者の設計したプライマー対とプローブとを用いた本発明測定法によれば、このような唾液などの分泌液をサンプルとしても、その中の少ないｍＲＮＡの測定が可能である。
【００３７】
本発明プローブおよびプライマー対
本発明プローブおよびプライマー対（フォワードプライマーおよびリバースプライマー）は、上述した通り、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードする遺伝子の特定領域にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドから選択される。
【００３８】
ここで「ハイブリダイズする」とは、後述するＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）条件、即ち、４８℃−３０分、９５℃−１０分、９５℃−１５秒、６０℃−１分の条件で遺伝子の増幅が行い得ることをいう。
【００３９】
本発明プローブおよびプライマーに共通する要件としては、増幅生成物が５０−４００塩基対の長さであること、プライマーとプローブができる限り近接していること、配列に含まれるＧ（グアニン）およびＣ（シトシン）の割合がなるべく５０％前後であること、Ｇ（グアニン）が４つ以上連続していないことなどを挙げることができる。また、その他の本発明プローブにみられる要件としては、Ｔｍ値が７０℃前後であることを挙げることができ、同様にプライマーにはＴｍ値が６０℃前後であることを他の要件として挙げることができる。
【００４０】
本発明プローブおよびプライマー対の具体的配列例は、前述した通りであり、プローブの具体例としては、それぞれの遺伝子に応じて、配列番号：１−５２に示される配列を有するもの、より好ましくはこれらの配列からなるものを、プライマー対としては、配列番号：５３−１５６に示される配列を有するもの、より好ましくはこれらの配列からなるものを、それぞれ例示することができる。
【００４１】
本発明プローブおよびプライマー対がハイブリダイズするそれぞれの蛋白質の遺伝子（ｍＲＮＡ配列）はいずれも公知（下記別名で呼ばれる場合がある）であり、それらはそれぞれ、ジーンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）に以下の登録番号で登録されている。
（１）ＰＸＲ遺伝子（ｐｒｅｇｎａｎｅ　Ｘ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｉ，　ｍｅｍｂｅｒ　２　（ＮＲ１Ｉ２））；ＡＦ０６１０５６
（２）ＡＨＲＲ遺伝子（ａｒｙｌ　ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ、別名：ｄｉｏｘｉｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ
ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ）；ＮＭ＿０２０７３１
（３）ＡＨＲ遺伝子（ａｒｙｌ　ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ）；ＮＭ＿００１６２１
（４）ＣＡＲ遺伝子（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｉ，　ｍｅｍｂｅｒ　３　（ＮＲ１Ｉ３））；ＮＭ＿００５１２２
（５）ＮＲ２Ｆ１遺伝子（ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　２，　ｇｒｏｕｐ　Ｆ，　ｍｅｍｂｅｒ　１、別名：ｃｈｉｃｋｅｎ　ｏｖａｌｂｕｍｉｎ　ｕｐｓｔｒｅａｍ　ｐｒｏｍｏｔｅｒ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　（ＣＯＵＰ−ＴＦ））；ＮＭ＿００５６５４
（６）ＨＲＲ−１遺伝子（別名：ｆａｒｎｅｓｏｉｄ　Ｘ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　（ＦＸＲ）、ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｈ，　ｍｅｍｂｅｒ　４　（ＮＲ１Ｈ４））；Ｕ６８２３３
（７）ＬＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子（ｌｉｖｅｒ　Ｘ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｌｐｈａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｈ，　ｍｅｍｂｅｒ　３　（ＮＲ１Ｈ３）　）；Ｕ２２６６２
（８）ＭＲ遺伝子（ｍｉｎｅｒａｌｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ３，　ｇｒｏｕｐ　Ｃ，　ｍｅｍｂｅｒ　２　（ＮＲ３Ｃ２））；Ｍ１６８０１
（９）ＰＰＡＲ−ｂｅｔａ遺伝子（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｂｅｔａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｃ，　ｍｅｍｂｅｒ　２　（ＮＲ１Ｃ２））；Ｌ０７５９２
（１０）ＰＰＡＲ−ｇａｍｍａ遺伝子（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇａｍｍａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｃ，　ｍｅｍｂｅｒ　３　（ＮＲ１Ｃ３））；Ｌ４０９０４
（１１）ＴＲ遺伝子（ｔｈｙｒｏｉｄ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｂｅｔａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ａ，　ｍｅｍｂｅｒ　２　（ＮＲ１Ａ２））；Ｘ０４７０７
（１２）ＴＲ２−１１遺伝子（ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ　ｏｒｐｈａｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　２−１１、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓｕｂｆａｍｉｌｙ　２，　ｇｒｏｕｐ　Ｃ，　ｍｅｍｂｅｒ　１　（ＮＲ２Ｃ１））；Ｍ２９９６０
（１３）ＲＴＲ遺伝子（ｒｅｔｉｎｏｉｇ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｅｓｔｉｓ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ、別名：ｇｅｒｍ　ｃｅｌｌ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｆａｃｔｏｒ　（ＧＣＮＦ）　、ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　６，　ｇｒｏｕｐ　Ａ，ｍｅｍｂｅｒ　１　（ＮＲ６Ａ１））；Ｕ６４８７６
（１４）ＴＲ４遺伝子（ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ　ｏｒｐｈａｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　４、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　２，　ｇｒｏｕｐ　Ｃ，　ｍｅｍｂｅｒ　２　（ＮＲ２Ｃ２））；Ｌ２７５８６
（１５）ＴＲ３遺伝子（ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ　ｏｒｐｈａｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　３、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　４，　ｇｒｏｕｐ　Ａ，　ｍｅｍｂｅｒ　１　（ＮＲ４Ａ１））；Ｌ１３７４０
（１６）ＥＡＲ−１ｒ遺伝子；Ｄ１６８１５
（１７）ＧＲ−ａｌｐｈａ遺伝子（ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｌｐｈａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓｕｂｆａｍｉｌｙ　３，　ｇｒｏｕｐ　Ｃ，　ｍｅｍｂｅｒ　１　（ＮＲ３Ｃ１））；Ｍ１０９０１
（１８）ＰＰＡＲ−ａｌｐｈａ遺伝子（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｌｐｈａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｃ，　ｍｅｍｂｅｒ　１　（ＮＲ１Ｃ１））；Ｌ０２９３２
（１９）ＲｅｖＥｒｂＡ−ａｌｐｈａ遺伝子（別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｄ，　ｍｅｍｂｅｒ　１　（ＮＲ１Ｄ１））；Ｘ７２６３１
（２０）ＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子（ｒｅｔｉｎｏｉｄ　Ｘ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｌｐｈａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　２，　ｇｒｏｕｐ　Ｂ，　ｍｅｍｂｅｒ　１　（ＮＲ２Ｂ１））；Ｘ５２７７３
（２１）ＲＸＲ−ｂｅｔａ遺伝子（ｒｅｔｉｎｏｉｄ　Ｘ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｂｅｔａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　２，　ｇｒｏｕｐ　Ｂ，　ｍｅｍｂｅｒ　２　（ＮＲ２Ｂ２））；Ｍ８４８２０
（２２）ＲＸＲ−ｇａｍｍａ遺伝子（ｒｅｔｉｎｏｉｄ　Ｘ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇａｍｍａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　２，　ｇｒｏｕｐ　Ｂ，　ｍｅｍｂｅｒ　３　（ＮＲ２Ｂ３））；Ｕ３８４８０
（２３）Ｎｅｒ−Ｉ遺伝子（別名：ｌｉｖｅｒ　Ｘ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｂｅｔａ　（ＬＸＲ−ｂｅｔａ）、ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｈ，　ｍｅｍｂｅｒ　２　（ＮＲ１Ｈ２））；Ｕ０７１３２
（２４）ＨＮＦ４Ｇ遺伝子（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｆａｃｔｏｒ　４　ｇａｍｍａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　２，　ｇｒｏｕｐ　Ａ，　ｍｅｍｂｅｒ　２　（ＮＲ２Ａ２））；ＮＭ＿００４１３３
（２５）ＥＳＲ２遺伝子（ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　２、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　３，　ｇｒｏｕｐ　Ａ，　ｍｅｍｂｅｒ　２　（ＮＲ３Ａ２））；ＮＭ＿００１４３７
（２６）ＮＲ４Ａ２遺伝子（ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　４，　ｇｒｏｕｐ　Ａ，　ｍｅｍｂｅｒ　２）；ＮＭ＿００６１８６
（２７）ＮＲ４Ａ３遺伝子（ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　４，　ｇｒｏｕｐ　Ａ，　ｍｅｍｂｅｒ　３）；ＮＭ＿００６９８１
（２８）ＮＲ５Ａ２遺伝子（ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　５，　ｇｒｏｕｐ　Ａ，　ｍｅｍｂｅｒ　）；ＮＭ＿００３８２２
（２９）ＲＡＲＧ遺伝子（ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｇａｍｍａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｂ，　ｍｅｍｂｅｒ　３　（ＮＲ１Ｂ３））；ＮＭ＿０００９６６
（３０）ＡＲ遺伝子（ａｎｄｒｏｇｅｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　３，　ｇｒｏｕｐ　Ｃ，　ｍｅｍｂｅｒ　４　（ＮＲ３Ｃ４））；ＮＭ＿００００４４
（３１）ＮＲ２Ｅ１遺伝子（ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　２，　ｇｒｏｕｐ　Ｅ，　ｍｅｍｂｅｒ　１）；ＮＭ＿００３２６９
（３２）ＶＤＲ遺伝子（ｖｉｔａｍｉｎ　Ｄ　（１，　２５−　ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎ　Ｄ３）　ｒｅｃｅｐｔｏｒ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｉ，　ｍｅｍｂｅｒ　１　（ＮＲ１Ｉ１））；ＮＭ＿０００３７６
（３３）ＲＯＲＢ遺伝子（ＲＡＲ−ｒｅｌａｔｅｄ　ｏｒｐｈａｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｂ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｆ，　ｍｅｍｂｅｒ　２　（ＮＲ１Ｆ２））；ＮＭ＿００６９１４
（３４）ＲＯＲＣ遺伝子（ＲＡＲ−ｒｅｌａｔｅｄ　ｏｒｐｈａｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｃ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｆ，　ｍｅｍｂｅｒ　３　（ＮＲ１Ｆ３））；ＮＭ＿００５０６０
（３５）ＮＲ２Ｆ２遺伝子（ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　２，　ｇｒｏｕｐ　Ｆ，　ｍｅｍｂｅｒ　２）；ＮＭ＿０２１００５
（３６）ＴＨＲＡ遺伝子（ｔｈｙｒｏｉｄ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｌｐｈａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ａ，　ｍｅｍｂｅｒ　１　（ＮＲ１Ａ１））；ＮＭ＿００３２５０
（３７）ＨＮＦ４Ａ遺伝子（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｆａｃｔｏｒ　４　ａｌｐｈａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ２，　ｇｒｏｕｐ　Ａ，　ｍｅｍｂｅｒ　１　（ＮＲ２Ａ１）　）；ＮＭ＿０００４５７
（３８）ＮＲ５Ａ１遺伝子（ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　５，　ｇｒｏｕｐ　Ａ，　ｍｅｍｂｅｒ　１）；ＮＭ＿００４９５９
（３９）ＲＡＲＡ遺伝子（ｒｅｔｉｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｌｐｈａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｂ，　ｍｅｍｂｅｒ　１　（ＮＲ１Ｂ１））；ＮＭ＿０００９６４
（４０）ＮＲ１Ｂ２遺伝子（ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｂ，　ｍｅｍｂｅｒ　２）；ＡＦ１５７４８３
（４１）ＥＳＲＲＡ遺伝子（ｅｓｔｒｏｇｅｎ−ｒｅｌａｔｅｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｌｐｈａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　３，　ｇｒｏｕｐ　Ｂ，　ｍｅｍｂｅｒ　１　（ＮＲ３Ｂ１））；ＮＭ＿００４４５１
（４２）ＲＯＲＡ遺伝子（ＲＡＲ−ｒｅｌａｔｅｄ　ｏｒｐｈａｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ａ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　１，　ｇｒｏｕｐ　Ｆ，　ｍｅｍｂｅｒ　１　（ＮＲ１Ｆ１））；ＮＭ＿１３４２６１
（４３）ＥＳＲ１遺伝子（ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　１、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　３，　ｇｒｏｕｐ　Ａ，　ｍｅｍｂｅｒ　１　（ＮＲ３Ａ１））；ＮＭ＿０００１２５
（４４）ＰＧＲ遺伝子（ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ、別名：ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｆａｍｉｌｙ　３，
ｇｒｏｕｐ　Ｃ，　ｍｅｍｂｅｒ　３　（ＮＲ３Ｃ３））；ＮＭ＿０００９２６
（４５）ＳＴＡＴ１遺伝子（ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　１）；Ｍ９７９３５
（４６）ＳＴＡＴ２遺伝子（ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　２）；ＮＭ＿００５４１９
（４７）ＳＴＡＴ３遺伝子（ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　３）；ＮＭ＿１３９２７６
（４８）ＳＴＡＴ４遺伝子（ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　４）；Ｌ７８４４０
（４９）ＳＴＡＴ５遺伝子（ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　５）；Ｌ４１１４２
（５０）ＳＴＡＴ５Ｂ遺伝子（ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　５Ｂ）；ＮＭ＿０１２４４８
（５１）ＳＴＡＴ６遺伝子（ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　６）；Ｕ１６０３１
（５２）ＡＲＮＴ遺伝子（ａｒｙｌ　ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ）；ＮＭ＿００１６６８。
【００４２】
本明細書において、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡの特定領域の表示は、いずれも上記各登録番号で登録された遺伝子の開始コドンからの配列に従うものである。
【００４３】
本発明プローブおよびプライマーとしての各オリゴヌクレオチドの具体例は前述した通りであるが、本発明プローブおよびプライマーは、上記（１）−（５２）に示す各遺伝子の所定領域にハイブリダイズできる限り、これらの具体的配列に限定されず、各種の配列をとることができる。その例としては、具体的配列を基本として、その一部分であってもよく、また更に他のヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチドが付加されたものであってもよい。具体的なヌクレオチド数は、少なくとも１５個、通常１５−５０個、好ましくは２０−４０個の範囲にあるのが望ましい。これらのヌクレオチド数が上記よりあまりに多くなりすぎると、１本鎖ＤＮＡにハイブリダイズしにくくなり、逆にあまりに小さすぎると、ハイブリダイゼーションの特異性が低下する。尚、例えば２０ヌクレオチドからなるプライマーまたはプローブは、鋳型鎖との間に少数のミスマッチが存在してもハイブリダイズし、ＰＣＲのプライマーとしてまたは検出用プローブとして機能し得ることが知られている。従って、本発明プローブおよびプライマーにはまた、前述した具体的なヌクレオチド配列をその一部として含み上記ヌクレオチド数を有するものや、この具体的配列中の例えば２個以下のヌクレオチドの置換、欠失および／または付加による修飾のなされた配列からなるものが包含される。
【００４４】
本発明プローブおよびプライマーとしての各オリゴヌクレオチドは、常法に従い、自動合成機、例えばＤＮＡシンセサイザー（パーキンエルマー社）などを用いて容易に合成することができる。得られるオリゴヌクレオチドは更に必要に応じて、市販の精製用カートリッジなどを用いて精製することもできる。
【００４５】
本発明測定法
本発明測定法は、前述した本発明プローブおよびプライマー対を用いることを必須として、その他の操作、手法、条件などは、基本的には、従来公知の方法、例えばＰＣＲ（Ｓｃｉｅｎｃｅ，　２３０，　１３５０　（１９８５）、ＲＴ−ＰＣＲ（Ｇｅｎｏｍｅ　Ｒｅｓ．，　６（１０），　９８６　（１９９６）、リアルタイム検出法（例えばＴａｑＭａｎ　ＰＣＲ，　ＡＢＩ　ＰＲＩＳＭＴＭ　７７００　ＳＥＱＵＥＮＣＥ　ＤＥＴＥＣＴＩＯＮ　ＳＹＳＴＥＭ，　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，　Ｖｅｒ　１，　Ｊｕｎｅ　１９９６）などに従い実施することができる。本発明測定法の好ましい具体例としてのリアルタイム定量検出法は、例えば次の如くして実施できる。即ち、プローブとして前述した特定の本発明プローブの一端、例えば５’−末端にレポーター色素を結合させ、且つ他端、例えば３’−末端にクエンチャー色素を結合させて標識したプローブを利用する。ここでレポーター色素は、例えば励起光の照射によって蛍光を発する物質であり、クエンチャーは、該レポーター色素に距離的に接近して存在する場合レポーター色素に作用してその蛍光の発生を消去する作用を有するものである。該レポーター色素の例としては、例えば６−カルボキシ−フルオレッセイン（ＦＡＭ）、テトラクロロ−６−カルボキシフルオレッセイン（ＴＥＴ）、２，７−ジメトキシ−４，５−ジクロロ−６−カルボキシフルオレッセイン（ＪＯＥ）、ヘキソクロロ−６−カルボキシフルオレッセイン（ＨＥＸ）などが挙げられる。クエンチャー色素の例としては、例えば６−カルボキシ−テトラメチル−ローダミン（ＴＡＭＲＡ）などが挙げられる。
【００４６】
上記標識した本発明プローブは、通常の方法に従って調製することができる。例えばプローブの５’側には、通常数個のメチレン鎖をリンカーとし、末端のリン酸基にＦＡＭ分子をリン酸エステルの形で結合させることができる。また、その場合、３’側には、下に示す構造単位を介してアミド結合によりＴＡＭＲＡ分子を結合させ得る。
【００４７】
【化１】
2004141069.tif 000002
【００４８】
本発明リアルタイム定量検出法は、特定のヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡを発現している生体組織を採取し、常法に従って全ＲＮＡを抽出し、次にそれに対して相補性のｃＤＮＡを常法に従って合成した後、本発明プライマー対とプローブとを用いて、直接ＲＴ−ＰＣＲを行うことによって実施できる。その際、用いられる試薬、反応条件などはいずれも公知の方法に従うことができる。具体的には、後記実施例に示す条件などを採用することかできる。
【００４９】
検出も、基本的には常法に従って、例えば、アルゴンレーザ光をＰＣＲ反応液に照射し、放射される蛍光をＣＣＤカメラを用いて検出することにより行うことができる。
【００５０】
かくして、本発明方法の実施によって、所期のヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡを容易且つ迅速に、しかも各ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡ毎に測定、検出することができる。
【００５１】
検出および定量用キット
本発明は更に、本発明測定法の実施のためのキットをも提供する。このキットは前述した本発明プライマー対およびプローブからなるセットの少なくとも１種、好ましくは２種以上を含むことが重要である。特に好ましくは、薬物代謝酵素Ｐ−４５０の各分子種の発現を抑制することが知られているヒトにおける核内レセプターおよび転写因子をコードする遺伝子、例えば、ＡＨＲ、ＡＲＮＴ、ＣＡＲ、ＲＸＲ、ＰＸＲ、ＰＰＡＲなどにハイブリダイズするオリゴヌクレオチドからなるプライマー対とプローブとのセットの複数個を含むものであるのがよい。
【００５２】
本発明キットには、対照として使用することのできる既知の核酸、該核酸を測定するためのプライマー対およびプローブを更に含んでいてもよい。
【００５３】
本発明方法によれば、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡをそのヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡ毎に測定、検出できるため、これによって、ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡの定量を迅速に、精度よく行うことができる。
【００５４】
本発明方法に従うヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡの測定によって、ヒトの体内におけるこれら蛋白質の変動を把握することができ、かくして、例えば新薬などの薬物代謝、生体への影響（効力、副作用、ひいては安全性など）などを確認することができる。
【００５５】
【実施例】
以下、本発明を更に詳しく説明するため試験例および実施例を挙げる。
【００５６】
【試験例１】リアルタイム検出法による検量線の作成
（１）試験方法
本試験で採用したリアルタイムワンステップＲＴ−ＰＣＲ法は、９６ウエルを用いて、最大９６の異なった反応を同時に実施して、一度に最大９６の検体を測定できるものである。また、１チューブ内でＲＴ反応とＰＣＲ反応とを行うことができる。さらに、３８４ウエルでの測定も可能である。
【００５７】
本定量の原理は、隣接した２種類の蛍光色素を用いて、一方の色素（リポーター色素）の蛍光波長と他方の色素（クエンチャー色素）の励起光波長との間で、波長領域が重なる場合に生じるＦＲＥＴを利用したものである。ＦＲＥＴを生じる２種の蛍光色素を両末端に結合させたプローブ（ＴａｑＭａｎ　ｐｒｏｂｅ）がＰＣＲで増幅した特定のヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡ種由来のｃＤＮＡにハイブリダイゼーションし、この状態でＰＣＲの伸長反応が始まり、ＴａｑＤＮＡポリメラーゼの有する５’−３’エンドヌクレアーゼ活性によってＴａｑＭａｎプローブが加水分解され、リポーター色素が脱離し、クエンチャー色素との間の物理的距離が生じ、ＦＲＥＴによって抑制されていたリポーター色素の蛍光強度が増加し、この蛍光強度の増加はＰＣＲの増幅産物の増加量に比例するため、これをＰＣＲ反応毎に測定することによって、所望の定量が可能となる。
【００５８】
本試験では、プローブの５’末端側にリポーター色素としてＦＡＭを、３’末端側にはクエンチャー色素としてＴＡＭＲＡを結合させたものを使用した。これら各色素の結合およびこれによるＴａｑＭａｎプローブの作成は、文献記載の方法（Ｇｅｎｏｍｅ　Ｒｅｓ．，　６（１０），　９８６　（１９９６））に従った。
【００５９】
また、各プライマーおよびプローブとしてのオリゴヌクレオチドは、自動シンセサイザーとしてＡＢＩ社製のＤＮＡ／ＲＮＡ合成機を利用して、基質（ｄＮＴＰ）および規定の試薬を用いて合成した。
【００６０】
検体ＲＮＡとしては、成人の組織（肝臓、脳、腎臓、精巣、子宮或いは胎盤）のプールより精製された全ＲＮＡを用いた。尚、これらの全ＲＮＡはクローンテック社（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，　Ｉｎｃ．）より購入した。
【００６１】
成人の組織のプールより精製された全ＲＮＡは、ＲＮａｓｅフリーの水で希釈し、２０μｇ／ｍＬとし、検量線作成用とした。以後は、５０μｇ／ｍＬのイーストｔＲＮＡ（Ｙｅａｓｔ　ｔＲＮＡ，
ＧＩＢＣＯ社製）を用いて、５倍公比で希釈した。測定には５μＬを使用した。
【００６２】
ＲＴ−ＰＣＲ反応は、３００ｎＭフォーワードプライマー、９００ｎＭリバースプライマーおよび２００ｎＭ　ＴａｑＭａｎプローブを含むＴａｑＭａｎ　Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ　ＲＴ−ＰＣＲ　Ｍａｓｔｅｒ　Ｍｉｘ　Ｒｅａｇｅｎｔｓ　Ｋｉｔ　（ＰＥ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、５０μＬ／ューブの系で、ＡＢＩ　ＰＲＩＳＭＴＭ７７００Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ（ＰＥ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）にて行った。
【００６３】
温度条件は、４８℃で３０分間、９５℃で１０分間で保温した後、９５℃で１５秒間、６０℃で１分間のサイクルを５０回行い、各サイクルごとに蛍光強度を測定した。
【００６４】
下記表１および表２に示す各ヒトにおける核内レセプターおよび転写因子の蛋白質をコードするｍＲＮＡに対して各配列番号に示される配列のプライマー対およびプローブを用いて行った上記試験の結果（検量線）を表３および表４に示す。尚、肝臓以外のｔｏｔａｌ　ＲＮＡを用いた場合は、定量下限の後にその組織名を記載した。
【００６５】
【表１】
2004141069.tif 000003
【００６６】
【表２】
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【００６７】
【表３】
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【００６８】
【表４】
2004141069.tif 000006
【００６９】
上記表３および表４より、１０００００ｐｇ全ＲＮＡ／５０μＬ反応液量から５倍公比で希釈された検量線を作成したところ、定量下限は１．２８ｐｇ全ＲＮＡ／５０μＬ反応液量から４０００ｐｇ全ＲＮＡ／５０μＬ反応液量であり、検量線の相関係数（ｒ）は全てにおいて０．９９以上であった。
【００７０】
【配列表】
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