(57)【要約】【課題】  新規なペプチド誘導体の提供。【解決手段】  生物学的に活性なペプチド部分のＮ末端又は側鎖上のアミノ基に、アミド、アミノまたはスルホンアミド結合により結合された１または複数個の置換基を含有するペプチド誘導体。このペプチド誘導体は、対応するペプチドのみと比較した、高い生物活性を有する。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
１個又は２個の生物学的に活性なペプチド部分と、該ペプチド部分に結合している少なくとも１個の置換基とを含んでなる一量体又は二量体ペプチド誘導体であって、該置換基は化合物IIIから構成され、当該化合物IIIは次式：
【化１】
2004339237.tif 000024
［式中、
（１）ペプチド誘導体が一量体ペプチド誘導体である場合、R19は水素、NH2、芳香族官能基、OH、(C1-C6)ヒドロキシアルキル、H(R27)(R28)もしくはSO3Hであるか、又は不存在であり、ここでR27およびR28は各々独立に、水素又は(C1-C6)アルキルであり、あるいは
（２）ペプチド誘導体が二量体ペプチド誘導体である場合、R19はSO2、CO又はCO2であり；
R20はOであるか又は不存在であり；
R21は(C1-C6)アルキルであるか又は不存在であり；
R22はN、O、C又はCHであり；
-R23-は(C1-C6)アルキルであるか又は不存在であり；
R24はN、CH又はCであり；
R25はNHもしくはOであるか、又は不存在であり；
R26はSO2、COもしくはCH2であるか、又は不存在であり；
ｍは整数０〜５であり；
ｎは整数０〜５であり；
ｐは整数０〜５であり；そして
ｑは整数０〜５である）］
で表わされる化合物であり、
ここで前記ペプチド部分の少なくとも１個は、前記置換基と当該ペプチド部分のＮ−末端又は側鎖の窒素原子との間でCO-N、CH2-N又はSO2-N結合により当該置換基の各々に結合している、
前記ペプチド誘導体。
【請求項２】
-R23-が(C1-C6)アルキルであり；R22がN、C又はCHであり；そしてR24がCである、請求項１に記載のペプチド誘導体。
【請求項３】
Ｒ22がOであり；R19、R20、R21および-R23-が不存在であり；そしてｍとｎの合計が３、４又は５である、請求項１に記載のペプチド誘導体。
【請求項４】
-R23-が不存在である、請求項１に記載のペプチド誘導体。
【請求項５】
R22およびR24の少なくとも１つがNである、請求項１に記載のペプチド誘導体。
【請求項６】
R22およびR24の双方がNである、請求項５に記載のペプチド誘導体。
【請求項７】
前記置換基が、
【化２】
2004339237.tif 000025
の一方である、請求項１に記載のペプチド誘導体。
【請求項８】
前記ペプチド部分が、ソマトスタチン、ボンベシン、カルシトニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（CGRP）、アミリン（amylin)、副甲状腺ホルモン（PTH)、ガストリン放出ペプチド（GRP)、メラニン細胞刺激ホルモン（MSH)、副腎皮質刺激ホルモン（ACTH)、副甲状腺関連ペプチド（PTHr P)、黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH）、成長ホルモン放出因子（GHRF）、成長ホルモン放出ペプチド（GHRP）、コレシストキニン（CCK)、グルカゴン、ブラジキニン、グルカゴン様ペプチド（GLP)、ガストリン、エンケファリン、ニューロメジン、エンドセリン（endothelin)、サブスタンスＰ、神経ペプチドＹ（NPY)、ペプチドYY（PYY)、バソアクティブ・インテスティナルポリペプチド（VIP)、グアニリン（guanylin)、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（PACAP)、ベータ細胞トロピン、アデレノメドゥリン（adrenomedulin)、並びにそれらの誘導体、フラグメントおよび類似体から成る群から選ばれる、請求項１〜７の何れか１項に記載のペプチド誘導体。
【請求項９】
前記ペプチド部分が、ソマトスタチン、その誘導体、フラグメント又はその類似体である、請求項８に記載のペプチド誘導体。
【請求項１０】
前記ソマトスタチン類似体が、H-D-Phe-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys〕-Thr-NH2、H-D-Phe-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Th -Cys〕-Nal-NH2およびH-D-Nal-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys〕-Thr -NH2の内の一つである、請求項９に記載のペプチド誘導体。
【請求項１１】
前記ペプチド部分が、ボンベシン、その誘導体、フラグメント又は類似体である、請求項８に記載のペプチド誘導体。
【請求項１２】
下記の構造式：
【化３】
2004339237.tif 000026
の内の一つで表されるペプチド誘導体。
【請求項１３】
請求項１〜12のいずれか１項に記載のペプチド誘導体の治療効果のある量を含んでなる医薬組成物。
【請求項１４】
前記ペプチド部分がソマトスタチン又はその類似体である、請求項13に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
癌の治療に用いられる、請求項14に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療効果のあるペプチドに関する。幾つか試みが、生物学的活性ペプチドの活性を延長するためになされてきている。例えば、ペプチドは、該ペプチドが活性である期間を増加するため糖部分を合成的に添加することにより化学的に変性されてきた（サンドズ、国際公開（WO）88/02756；サンドズ、WO 89/09786 ; ドイツ特許公開 3910667、ヨーロッパ特許公開 0374089（1990）；およびブレイポール、米国特許第 4,861,755号（1989））。カチオン性アンカー（ヨーロッパ特許公開 0363589（1990））および脂質部分（ハワイターカー、WO 91/09837 ; ヤング、米国特許第 4,837,303号（1989））の添加は、またペプチドの寿命を増加させるために用いられた。
【背景技術】
【０００２】
一般的に、本発明はペプチド部分のＮ末端又は側鎖上に位置したアミノ基に個別に結合した１個又はそれ以上の置換基を含有する生物学に活性なペプチド誘導体を提供する。この修飾された形において、誘導体は対応する未修飾ペプチドよりもより強力でかつ持続した生物学的活性を有する。
ペプチドは、それらは安価であり、高度に生物適合性であり、有害な副作用がない点において有利であり、そして種々の投与形与形態に適合する。特に、ペプチド部分としてソマトスタチンを有する誘導体の多くは、著るしく改良された有効性が改善されてきておりそして未修飾ソマトスタチンに比較して選択性が改善されてきている。
【発明の開示】
【０００３】
一つの面において、本発明は、生物学的に活性なペプチド部分とそのペプチド部分に結合している少なくとも１個の置換基を含有するペプチド誘導体であることを特徴とし；その置換基は化合物Ｉ、II及びIII を含む群から選ばれ、ここで化合物Ｉは次式：
【０００４】
【化１】
2004339237.tif 000002
【０００５】
［式中、R0はO，S又はNR5であり、ここでR5は水素又は（C1−C6）アルキルであり；
R1およびR2の各々は独立に水素、（CH2)mOR6 、又はCH（OR7)CH2OR8 あり、ここでR6は水素又は（C2−C7）アシルでありそしてR7およびR8は各々独立に水素、（C2−C7）アシル、又はC(R9)(R10)であり、ここでR9およびR10の各々は独立に水素又は（C1−C6）アルキルであるか；あるいは
【０００６】
R1およびR2の各々は＝CHCH2OR11であり、ここでR1とR2におけるR11は、独立に水素又は（C2−C7）アシルであり、そしてｍは整数１〜５であり；そして
R3又はR4の一方は（CH2)nＲ12又は（CH2)nCH（OH）R12であり、ここでR12はCO、CH2、又はSO2であり、そしてｎは整数１〜５であり；そして
残りのR3又はR4は水素、（C1−C6）ヒドロキシアルキル、又は（C2−C7）アシルである］
で表わされる化合物であり；そして
【０００７】
化合物IIは次式：
【化２】
2004339237.tif 000003
【０００８】
［式中、R13、R14およびR15の各々は、独立に、水素又は（C2−C24）アシルであり；R16はNHであるか、又は不存在であり；R17はCOもしくはOであるか、又は不存在であり；R18はCO、CH2もしくはSO2であるか、又は不存在であり；そしてｍは整数１〜５であり；そしてｎは０〜５である］
で表わされる化合物であり；そして
【０００９】
化合物III は次式：
【化３】
2004339237.tif 000004
【００１０】
［式中、R19は水素、NH2、芳香族官能基、OH、（C1−C6）ヒドロキシアルキル、H（R27)(R28）もしくはSO3Hであるか、又は不存在であり、ここでR27およびR28の各々は、独立に、水素又は（C1−C6）アルキルであり；
R20はOであるか又は不存在であり；
R21は（C1−C6）アルキルであるか又は不存在であり；
R22はN、CH、C又はOであり；
-R23-は（C1−C6）アルキルであるか又は不存在であり；
R24はN、CH又はCであり；
【００１１】
R25はNHもしくはOであるか、又は不存在であり；
R26はSO2、COもしくはCH2であるか、又は不存在であり；
ｍは整数０〜５であり；
ｎは整数０〜５であり；
ｐは整数０〜５であり；
ｑは整数０〜５である］
で表わされる化合物である。
【００１２】
化合物Ｉ、IIおよびIII において、ペプチド部分は、置換基と該ペプチド部分のＮ−末端又は側鎖の窒素原子間でCO−N、CH2−Ｎ、又はSO2−Ｎ結合により置換基の各々に結合している。
好ましい態様において、−R23−は（C1−C6）アルキルであり；R22はN、C又はCHであり、そしてR24はCである。あるいは、R22はOであり；R19、R20、R21および−R23−は不存在であり；そしてｍとｎの合計は３，４、又は５である。
【００１３】
本発明の他の好ましい態様において、置換基は化合物Ｉであり；この態様において、R12は好ましくはCH2又はSO2である。あるいは、置換基は化合物IIであってよく、この場合においてR18は好ましくはCH2又はSO2であり；R13、R14、およびR15は水素であり、そしてR17は不存在である。特に好ましい態様において、置換基は、（HOCH2)3C−NH−(CH)2−SO2又は（HOCH2)3C−CH2である。
本発明の更に他の態様において、置換基は化合物III であり；好ましくは、この態様において、−R23−は不存在であり、そしてR22およびR24の少なくとも一方はNである。あるいはR22とR24の双方は、Nであってよい。
【００１４】
別の態様において、置換基は次式：
【化４】
2004339237.tif 000005
で表わされる置換基の内の一つである。
【００１５】
好ましくは、ペプチド部分は、ソマトスタチン、ボンベシン、カルシトニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（CGRP）、アミリン（amylin) 、甲状腺傍ホルモン（PTH)、ガストリン放出ペプチド（GRP)、メラニン細胞刺激ホルモン（MSH)、副腎皮質刺激ホルモン（ACTH)、副甲状腺関連ペプチド（PTHr P)、黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH）、成長ホルモン放出因子（GHRF）、成長ホルモン放出ペプチド（GHRP）、コレシストキニン（CCK)、グルカゴン、ブラジキニン、グルカゴン様ペプチド（GLP)、ガストリン、エンケファリン、ニューロメジン、エンドセリン（endothelin) 、物質Ｐ、神経ペプチドＹ（NPY)、ペプチドNY（PYY)、バソアクティブ・インテスティナルポリペプチド（VIP)、クアニリン（quanylin) 、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（PACAP)、ベーター細胞トロピン、アデレノメドゥリン（adrenomedulin)、およびそれらの誘導体、フラグメントおよび類似体を含む群から選ばれる。
【００１６】
ペプチド部分は、好ましくはソマトスタチン又はその誘導体、フラグメント又は類似体である。最も好ましくは、ソマトスタチン類似体は次の内の１つである：H-D-Phe-c〔Cys-Tyr D-Trp-Lys-Abu-Cys〕-Thr-NH2、H-D-Phe-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys〕-Nal-NH2 及びH-D-Nal-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys〕-Thr-NH2。あるいは、ペプチド部分はボンベシン又はその誘導体、フラグメント又は類似体である。
【００１７】
更に他の好ましい態様において、ペプチド誘導体は次の誘導体の内の１つである：
【化５】
2004339237.tif 000006
【００１８】
もう１つの面において、本発明は、２つの生物学的に活性なペプチド部分およびそのペプチド部分の各々に結合した少なくとも１つの置換基を含有する二量体のペプチド誘導体を提供する。置換基は、化合物IVおよび化合物Ｖから成る群から選ばれ、ここで化合物IVは化合物Ｉに同等の包括的構造を有し、そして化合物Ｖは化合物III に同等の包括的構造を有する。二量体において、ペプチド部分の各々は、置換基とペプチド部分の一つのＮ末端又は側鎖の窒素原子間でCO−N、CH2−Ｎ、又はSO2−Ｎ結合により置換基に結合されている。
【００１９】
更にもう１つの面において、本発明は患者における疾患例えば癌の治療方法を提供する；この方法は本発明で記載するペプチド誘導体の治療効果のある量を患者に投与する工程を含む。好ましい態様において、治療で用いられるペプチド部分はソマトスタチンである。
本発明で用いる「生物学的に活性な」とは、生理的活性又は治療的活性を有する、天然、組立体および合成ペプチドを意味する。一般的に、この語句は未修飾ペプチドの効果と定性的に類似の効果又は正反対の効果を示す生物学的に活性のペプチドの全ての誘導体、フラグメントおよび類似体を包含する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
ペプチド誘導体
一般に、本発明のペプチド誘導体は、２つの別個の成分を含む：１）生物学的に活性なペプチド；および２）化合物Ｉ、IIおよびIII の構造を有する少なくとも１つの置換基。
本発明で記載される方法に従って製造されるペプチドには、次の化合物が含まれる。
【００２１】
化合物Ｉに基づく誘導体
【化６】
2004339237.tif 000007
【００２２】
ここで、R0、R1、R2、R3、R4、R12およびｎは本明細書中で定義された意味と同じであり、そしてNH−P'は生物学的に活性なペプチド部分である。これらの態様において、NH基はペプチドのＮ末端又は側鎖上に位置しておりそしてP'はペプチドの残余を表わす。
【００２３】
化合物IIに基づいた誘導体
【化７】
2004339237.tif 000008
ここで、R13、R14、R15、R16、R17、R18、ｍ、ｎおよびNH−P’は、本明細書中で定義された意味と同じである。
【００２４】
化合物III に基づいた誘導体
【化８】
2004339237.tif 000009
ここで、R19、R20、R21、R22、R23、R24、R25、R26、ｍ、ｎ、ｐ、およびNH−P’は、本明細書中で定義された意味と同じである。
【００２５】
上記に示した構造式に加えて、本発明に従って製造される化合物には、１つのペプチド部分に結合した２個又はそれ以上の置換基を有するペプチド誘導体が含まれる。
本発明のこれらの態様は、複数の遊離アミノ基を有する生物学的に活性なペプチド例えばリジン残基の誘導体である。
本発明はまた、単一の置換基に結合した２つのペプチド部分を含有する二量体ペプチド誘導体、例えば化合物Ｖの置換基に結合した２つのブラジキニン類似体を提供する。
【００２６】
本発明のペプチド誘導体は、次の群：ソマトスタチン、ボンベシン、カルシトニン、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（CGRP）、アミリン（amylin)、副甲状腺ホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン（ACTH)、副甲状腺関連ペプチド（PTHr P)、黄体形成ホルモン放出ホルモン（LHRH）、成長ホルモン放出因子（GHRF）、成長ホルモン放出ペプチド（GHRP）、コレシストキニン（CCK)、グルカゴン、ブラジキニン、グルコゴン様ペプチド（GLP)、ガストリン、エンケファリン、ニューロメジン、エンドセリン（endothelin) 、基質Ｐ、神経ペプチドＹ（NPY)、ペプチドNY（PYY)、バソアクティブ・インテスティナル・ポリペプチド（VIP)、クアニリン（quanylin)、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（PACAP)、ベーター細胞トロピン、アデレノメドゥリン（adrenomedulin)、および前記のいずれかの誘導体、フラグメントまたは類似体から選ばれる生物学的に活性なペプチドの誘導体である。
【００２７】
特に好ましい態様において、ペプチド部分はソマトスタチン又はソマトスタチンの誘導体、フラグメント又は類似体である。本発明に従って用いることのできるソマトスタチン類似体には、以下の化合物が含まれるが、これらの化合物に制限されない：
【００２８】
H-D-β-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2；
H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-β-Nal-NH2；
H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-β-Nal-NH2；
H-D-β-Nal-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2；
H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-NH2；
H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr-NH2；
H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr；
H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr；
H-Gly-Pen-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr；
H-Phe-Pen-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr；
【００２９】
H-Phe-Pen-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Pen-Thr；
H-D-Pen-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol；
H-D-Pen-Cys-Phe-D-Trp-Lys Thr-Cys-Thr-NH2；
H-D-Trp-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2；
H-D-Trp-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2；
H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2；
H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Trp-NH2；
H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2；
Ac-D-Phe-Lys*-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Asp-Thr-NH2；
Ac-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2；
【００３０】
Ac-D-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2；
Ac-D-hArg(Bu)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2；
Ac-D-hArg(Et)2-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2；
Ac-L-hArg(Et)2-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2；
Ac-D-hArg(CH2CF3)2-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2；
Ac-D-hArg(CH2CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2；
Ac-D-hArg(CH2CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-NH2；
Ac-D-hArg(CH2CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NHEt；
Ac-L-hArg(CH2-CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2 
Ac-D-hArg(CH2CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys(Me)-Thr-Cys-Thr-NH2；
【００３１】
Ac-D-hArg(CH2CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys(Me)-Thr-Cys-Thr-NHEt；
Ac-hArg(CH3, hexyl)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2；
Ac-hArg(hexyl2) -Gly -Cys -Phe -D-Trp -Lys -Thr -Cys -Thr -NH2；
Ac-D-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NHEt；
Ac-D-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-NH2；
Propionyl-D-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys(iPr)-Thr-Cys-Thr-NH2；
Ac-D-β-Nal-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Gly-hArg(Et)2-NH2；
Ac-D-Lys(iPr)-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2；
Ac-D-hArg(CH2CF3)2-D-hArg(CH2CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2；
Ac-D-hArg(CH2CF3)2-D-hArg(CH2CF3)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Phe-NH2；
【００３２】
Ac-D-hArg(Et)2-D-hArg(Et)2-Gly-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-NH2；
Ac-Cys-Lys-Asn-4-Cl-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-D-Cys-NH2；
Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2；
Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Phe-NH2；
Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-p-Cl-Phe-NH2；
Bmp-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-β-Nal-NH2；
H-D-β-Nal -Cys -Tyr -D-Trp -Lys -Val -Cys -Thr -NH2；
H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2；
H-D-Phe -Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-β-Nal-NH2；
H-pentafluoro-D-Phe-Cys-Ty -D-Trp-Ly -Val-Cys-Thr-NH2；
【００３３】
Ac-D-β-Nal-Cys-pentafluoro-Phe-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2；
H-D-β-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-β-Nal-NH2；
H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-β-Nal-NH2；
H-D-β-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2；
H-D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2；
Ac-D-p-Cl-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2；
H-D-Phe -Cys-β-Nal-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2；
H-D-Phe -Cys -Tyr -D-Trp -Lys -Cys -Thr -NH2；
Cyclo(Pro-Phe-D-Trp-N-Me-Lys-Thr-Phe)；
Cyclo(Pro-Phe-D-Trp-N-Me-Lys-Thr-Phe)；
【００３４】
Cyclo(Pro-Phe -D-Trp-Lys-Thr-N-Me-Phe)；
Cyclo(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe)；
Cyclo(Pro-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe)；
Cyclo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe)；
cyclo(Pro-Phe-L-Trp-Lys-Thr-Phe)；
Cyclo(Pro-Phe-D-Trp(F)-Lys-Thr-Phe)；
Cyclo(Pro-Phe-Trp(F)-Lys-Thr-Phe)；
Cyclo (Pro-Phe-D-Trp -Lys-Ser-Phe)；
Cyclo(Pro-Phe-D-Trp-Lys-Thr-p-Cl-Phe)；
Cyclo(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Thr-D-Lys-Trp-D-Phe)；
【００３５】
Cyclo(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Val-Lys-D-Trp-D-Phe)；
Cyclo(D-Ala-N-Me-D-Phe-D-Thr-Lys-D-Trp-D-Phe)；
Cyclo(D-Abu-N-Me-D-Phe-D-Val-Lys-D-Trp-D-Tyr)；
Cyclo(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe)；
Cyclo(Pro-Tyr-D-Trp-4-Amphe-Thr-Phe)；
Cyclo(Pro-Phe-D-Trp-4-Amphe-Thr-Phe)；
Cyclo(N-Me-Ala-Tyr-D-Trp-4-Amphe-Thr -Phe)；
Cyclo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba)；
Cyclo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba-Gaba)；
Cyclo(Asn-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe)；
【００３６】
Cyclo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-NH(CH2)4CO)；
Cyclo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-β-Ala)；
Cyclo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-D-Glu)-OH；
Cyclo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe)；
Cyclo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gly)；
Cyclo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba)；
Cyclo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gly)；
Cyclo(Asn-Phe-Phe-D-Trp(F)-Lys-Thr-Phe-Gaba)；
Cyclo(Asn-Phe-Phe-D-Trp(NO2)-Lys-Thr-Phe-Gaba)；
【００３７】
Cyclo(Asn-Phe-Phe-Trp(Br)-Lys-Thr-Phe-Gaba)；
Cyclo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe(I)-Gaba)；
Cyclo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Tyr(But)-Gaba)；
Cyclo(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Pro-Cys)-OH；
Cyclo(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Pro-Cys)-OH；
Cyclo(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Tpo-Cys)-OH；
Cyclo(Bmp-Lys-Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-MeLeu-Cys)-OH；
Cyclo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Phe-Gaba)；
Cyclo(Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-D-Phe-Gaba)；
【００３８】
Cyclo(Phe-Phe-D-Trp(5F)-Lys-Thr-Phe-Phe-Gaba)；
Cyclo(Asn-Phe-Phe-D-Trp-Lys(Ac)-Thr-Phe-NH-(CH2)3-CO)；
Cyclo(Lys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba)；
Cyclo(Lys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba)；
および
Cyclo(Orn-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Gaba)
ここで、 Lys* は Lys* とAsp との間で形成されるアミド架橋を示す。
前掲のペプチド化合物は、次の文献において記載されており、それらの各々はその番号を引用して本明細書に加えられる：
【００３９】
ヨーロッパ特許出願No．P5 164 EU ; バンビンスト、Ｇ．等、Peptide Research  ５：８（1992）；ホルバスＡ．等  Abstract，“Confirmations of Somatostatin Analogo Having Auti-tumor Actiuity”，22回ヨーロッパペプチドシンポジウム、1992年９月13〜19日、インターラーケン、スイス；PCT 出願WO 91/09056 (1991)；ヨーロッパ特許公開 0363589A2（1990) ; ヨーロッパ特許公開 0203031A2 (1986) ; 米国特許番号 4,904,642 ; 4,871,717 ; 4,853,371 ; 4,725,577 ; 4,684,620 ; 4,650,787 ; 4,603,120 ; 4,585,755 ; 4,522,813 ; 4,486,415 ; 4,485,101 ; 4,435,385 ; 4,395,403 ; 4,369,179 ; 4,360,516 ; 4,358,439 ; 4,328,214 ; 4,316,890 ; 4,310,518 ; 4,291,022 ; 4,238,481 ; 4,235,886 ; 4,224,190 ; 4,211,693 ; 4,190,648 ; 4,146,612 ;および 4,133,782。
【００４０】
前掲のソマトスタチン類似体において、各アミノ酸残基はNH−Ｃ（Ｒ）Ｈ−CO−（式中、Ｒは側鎖であり；アミノ酸残基間の線はアミノ酸をつなぐペプチド結合を表わす）の構造を有する。アミノ酸残基が光学活性であるとき、それは、もしもＤ−形がはっきりと示されていない限り、Ｌ−形配置であることが意図される。２個のCys 残基がペプチド中に存在するとき、ジスルフィド架橋が２つの部分間で形成される。しかし、この結合は、掲げた残基中には示されていない。
【００４１】
本発明のさらに加えて好ましいソマトスタチン類似体は、次式：
【化９】
2004339237.tif 000010
（式中、A1はβ−Nal、Trp、β−ピリジル−Ala、Phe、置換PheのＤ−又はＬ−異性体であるか、又は欠失しており；そしてA2 およびA7 の各々は、独立にCys、Asp又はLys である）
【００４２】
を有する。これらの部分は、ジスルフィド架橋又はアミド架橋を介して互いに共有結合している。加えて、A3はβ−Nal、Phe、又はｏ−、ｍ−、又はｐ−置換X-Phe(ここでXはハロゲン、OH、NH2、NO2又はC1−C3アルキルである）であり；A6はVal、Thr、Ser、Ala、Phe、β−Nal、Abu、Ile、Nle又はNvaであり；そしてA8 はPhe、Thr、Tyr、Trp、Ser、β−Nalもしくはアルコール基であるか、又は欠失しており；R1 およびR2 の各々は、独立して水素、低級アシル又は低級アルキルであり；そしてR3はOHもしくはNH2であるか又は欠失している。好ましくは、A2およびA7の一方がCysであるとき、他方もまたCysであり；A8がα−アミノアルコールであるとき、R3は欠失しており；そしてA2およびA7のいずれもCysでないとき、A2はA7と異なる。
【００４３】
この態様の特に好ましいソマトスタチン類似体は次の通りである：
Me-D-Phe-Cys-Tyr-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2；
H-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Nal-NH2；
H-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Th -Cys-Thr-NH2；
H-D-Phe-Cys-Ty -D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2；
H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Nal-NH2；および
H-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol。
【００４４】
他の態様において、本発明の線状ソマトスタチン類似体は、次の構造式：
【化１０】
2004339237.tif 000011
【００４５】
（式中、A1はAla、Leu、Ile、Val、Nle、Thr、Ser、β-Nal、β-pyridyl-Ala、Trp、Phe、2,4−ジクロロ-Phe、ペンタフルオロ−Phe、p−X−Phe又はo−X−Phe のD−もしくはL−異性体であり、ここにおいてXはCH3、Cl、Br、Ｆ、OH、OCH3又はNO2であり；
A2はAla、Leu、Ile、Val、Nle、Phe、β−Nal、ピリジル−Ala、Trp、2,4−ジクロロ−Phe、ペンタフルオロ−Phe、o−X−Phe又はp−X−Pheであり、ここにおいてXはCH3、Cl、Br、Ｆ、OH、OCH3又はNO2であり；
A3はピリジル−Ala、Trp、Phe、β−Nal、2,4−ジクロロ−Phe、ペンタフルオロ−Phe、o−X−Phe、又はp−X−Phe であり、ここにおいてXはCH3、Cl、Br、Ｆ、OH、OCH3又はNO2であり；
A6はVal、Ala、Leu、Ile、Nle、Thr、Abu又はSerであり；
【００４６】
A7はAla、Leu、Ile、Val、Nle、Phe、β−Nal、ピリジル−Ala、Trp、2,4−ジクロロ−Phe、ペンタフルオロ−Phe、o−X−Phe又はp−X−Pheであり、ここにおいてXはCH3、Cl、Br、Ｆ、OH、OCH3又はNO2であり；
A8 はAla、Leu、Ile、Val、Nle、Thr、Ser、Phe、β−Nal、ピリジル−Ala、Trp、2,4−ジクロロ−Phe、ペンタフルオロ−Phe、p−X−Phe又はo−X−Phe のD−もしくはL−異性体であり、ここにおいてXはCH3、Cl、Br、Ｆ、OH、OCH3又はNO2であるか、又はそれらのアルコールであり；そして
各R1およびR2は、独立に水素、低級アシル又は低級アルキルであり；そしてR3 はOHもしくはNH2であるか又は欠失している）
を有する。
【００４７】
好ましくは、少なくともA1およびA8の少なくとも一つ、並びにA2およびA7の少なくとも一つは、芳香族アミノ酸でなければならず；そしてA8がアルコールであるとき、R3は欠失している。加えて、A1、A2、A7 およびA8は全て芳香族アミノ酸でありえない。本発明のこの面の特に好ましい類似体には以下の類似体が含まれる：
H-D-Phe-p-chloro-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2；
H-D-Phe-p-NO2-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH2；
H-D-Nal-p-chloro-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH2；
H-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2；
H-D-Phe-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Th -NH2；
H-D-Phe-p-chloro-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Phe-Thr-NH2；および
H-D-Phe-Ala-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Ala-D-β-Nal-NH2。
【００４８】
更に他の好ましい態様において、ペプチド部分はボンベシン又はボンベシンの誘導体、フラグメント、又は類似体である。本発明を実施するために使用できるボンベシンには制限されないが、ニューロメジン（Neuromedin) Ｃ、ニューロメジンＢ、リトリン、およびガストリン放出ペプチド（GRP)が含まれ、該ガストリン放出ペプチドは次のアミノ酸配列：H-Ala-Pro-Val-Ser-Val-Gly-Gly-Gly-Thr-Val-Leu-Ala-Lys-Me -Tyr-Pro-Arg-Gly-Asn-His-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2を有する。
【００４９】
本発明で使用できる他のボンベシン類似体は、次の文献に記載される化合物を含み、その内容はそれらを引用して本明細書に加入される。
Coy 等 Peptides, Proceedings of the Eleventh Amer. Peptide Symposium, Rivier et al. 等により編集ESCOM, pp. 65-67 (1990) ; Wang等 J. Biol. Chem. 265 : 15695 (1990) ; Mahmoud等 Cancer Research 51 : 1798 (1991) ; Wang等 Biochemistry 29 : 616 (1990) ; Heimbrook 等、「Synthetic Peptides : Approaches to Biological Problems」，UCLA Symposium on Mol. and Cell. Biol. New Series, Vol. 86, Tam およびKaiser編集；Martinez等、J. Med. Chem. 28 : 1874 (1985) ;
【００５０】
Gargosky 等、Biochem. J. 247 : 427 (1987) ; Dubreuil 等、Drug Design and Delivery, Vol 2 : 49, Harwood Academic Publishers, GB (1987) ; Heikkila 等、J. Biol. Chem. 262 : 16456 (1987); Caranikas 等、J. Med. Chem. 25 : 1313 (1982) ; Saeed等、Peptides 10 : 597 (1989) ; Rosell 等、Trends in Pharmacological Sciences 3 : 211 (1982) ; Lundberg等、Proc. Nat. Aca. Sci. 80 : 1120, (1983) ; Engberg等、Nature 293 : 222 (1984) ; Mizrahi 等、Euro. J. Pharma. 82 : 101 (1982) ; Leander et al., Nature 294 : 467 (1981) ; Woll 等、Biochem. Biophys. Res. Comm. 155 : 359 (1988) ; Rivier等、Biochem. 17 : 1766 (1978) ; Cuttitta等、Cancer Surveys 4 : 707 (1985) ;
【００５１】
Aumelas 等、Int. J. Peptide Res. 30 : 596 (1987) ; Szepeshazi.等、Cancer Research 51 : 5980 (1991) ; Jensen 、等 Trends Pharmacol. Sci. 12 : 13 (1991) ; U. S.特許 5,028,692 ; 4,943,561 ; 4,207,311 ; 5,068,222 ; 5,081,107 ; 5,084,555；ヨーロッパ特許公開 0 315 367 (1989) ; 0 434 979 (1991) ; 0 468 497 (1992) ; 0 313 158 A2 (1989) ; 0 339 193 A1 (1989) ; PCT 出願番号 WO 90/01037 (1990) ; 90/02545 (1992) ; and イギリス特許出願 1 231 051 (1990)。
【００５２】
本発明のペプチドは、医薬として許容され得る塩の形で提供され得る。好ましい塩の例は治療的に許容できる有機塩、例えば酢酸、乳酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、又はパモイックアシッド（pamoic acid)並びに重合酸例えばタンニン酸又はカルボキシメチルセルロースとの塩、並びに無機酸例えばハロゲン化水素塩を含めたハロゲン化水素酸、硫酸およびリン酸との塩である。
【００５３】
化合物の合成
化合物Ｉ、IIおよびIII の合成を記載する。次の略記号が、本発明に係る化合物の合成を記載する場合において用いられる：
Nal ：  ナフチルアラニン（１又は２）
Abu ：  α−アミノ酪酸
Ｄ：    右旋性
Ｌ：    左旋性
HOAC：  酢酸
【００５４】
BOP ：  ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム  ヘキサフルオロ−ホスファート
BOC ：  第三ブチルオキシカルボニル
DCC ：  ジシクロヘキシル  カルボジイミド
EDC ：  １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド
DEPC：  ジエチルシアノホスホナート
DMF ：  ジメチルホルムアミド
CH2Cl2：ジクロロメタン
MeOH：  メタノール
【００５５】
EtoH：  エタノール
DIEA：  Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
HOBT：  １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
HBTU：  Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル，Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスファート
THF ：  テトラヒドロフラン
TFA ：  三フッ化酢酸
【００５６】
化合物Ｉ、IIおよびIII のための出願物質および中間体は、商業的に入手可能である。択一的に、出発物質は周知でありそして文献に含まれる方法により容易に製造できる。例えば、アスコルビン酸−関連誘導体の化学は、J. Chem. Soc., Perkin Trans.１：1220 (1974) ; Carbohyd. Res., 67 : 127 (1978) ; Yakugaku Zasshi,  86 : 376 (1966) ；米国特許 4,552,888 ; J. Med. Chem., 31 : 793 (1988) ; 同  34：2152 (1991) ; および、35：1618（1992）、これらの内容はそれらを引用して本明細書に加えられる。トリス−関連誘導体に対する化学は、Arch. Biochem. Biophy,  96, 653 (1962), Biochem., ５ 467 (1966) に見出すことができ、その内容はそれを引用して本明細書に加入される。トリス−関連誘導体の化学はArch. Biochem. Biophy,  96, 653 (1962), Biochem., ５ 467 (1966) に見出すことができ、その内容は引用して本明細書に加入される。
【００５７】
ペプチド誘導体の合成
一般的な意味で、化合物Ｉ、II又はIII と、保護されたアミノ酸又はペプチドの適当な遊離アミノ基とのカップリングは、不活性溶剤（例えば、DMF, THF又はCH2Cl2酢酸エチル又はこれらの組合わせ）中、塩基（例えばDIEA）を用い、周知の方法（例えば、DCC, DCC-HOBT, DIC-HOBT PPA, EDC-HOBT, DEPT, BOP, HBTU) に従って行うことができる。保護された基の脱保護は、また周知の方法（例えば、酸もしくは塩基、TFA 、ジオキサン−HCl 、アンモニア、NaOMe 、ピペリジンの添加による基の除去）により行うこともできる。大抵の場合、反応温度は−30℃ないし室温にわたるべきである。
【００５８】
一般に合成の最初の工程は、エポキシドと保護されたアミノ酸又はペプチド間の反応を含み；錯形成反応および脱保護は、周知方法、例えばMcManus 等、Synth. Communication ３，177 (1973)に記載の方法を用いて達成でき、その内容は引用して本明細書に加入される。合成に続き、中間体および生成物の精製は常法例えばクロマトグラフィー法又はHPLCにより行うことができる。化合物の同定は、常法例えばNMR 、アミノ酸分析、および質量分析法により行うことができる。
【実施例】
【００５９】
以下の実施例は、本発明の化合物を形成するための好ましい方法を説明する。
例１. ソマトスタチン誘導体の合成
次のソマトスタチン誘導体（本発明において BIM−23118 としても言及される）を発明に従って合成した：
【００６０】
【化１１】
2004339237.tif 000012
【００６１】
例1.1 3−O−（ベンジルオキシカルボニルメチル）−2,5,6−トリアセチル−アスコルビン酸
無水酢酸（６ml）を、ピリジン（30ml）に溶解した３−Ｏ−（ベンジルオキシカルボニルメチル）−アスコルビン酸(2.2ｇ）の溶液に滴下し；次いで混合物を室温で一夜撹拌した。ピリジンを減圧下で蒸発させ、残留物を得、次いでこの残留物を酢酸エチルと１Ｎ HCl間に分配した。酢酸エチル相を１Ｎ HClで洗い、次いで水で洗った。乾燥（MgSO4)後、酢酸エチルを減圧下で蒸発させ；未だ残存する微量のピリジンおよび無水酢酸を、トルエンを用いて多数回共−蒸発により除去した。生成した３−Ｏ−（ベンジルオキシカルボニルメチル）−2,5,6−トリアセチル−アスコルビン酸を真空下で乾燥し残留物中に残された粘性ゲルを生成した(2.4ｇ）。TLC(シリカゲル：CHCl3／アセトン〔９：１〕，Ｒf ＝0.52）。
【００６２】
例1.2 3−O−（カルボキシメチル）−2,5,6−トリアセチルアスコルビン酸
水（２ml）に懸濁したPd−Ｃ(100mg) のスラリーを、エタノール（30ml）に溶解した３−O−（ベンジルオキシカルボニルメチル）−２，５，６−トリアセチル−アスコルビン酸(2.4ｇ）の溶液に添加し、次いで懸濁液を６時間水素（17psi)下で振とうした。次いで触媒をセライトパッドを通して濾過して除去し次いで濾液を減圧下で蒸発させ３−Ｏ−（カルボキシメチル）−２，５，６−トリアセチル−アスコルビン酸を生成した。TLC(シリカゲル：CHCl3／MeOH／HOAc〔９：１：0.1 〕，Ｒf ＝0.2)。
【００６３】
例1.3 5,6−O−イソプロピリデンアスコルビン酸
塩化アセチル（0.67ml）を、アセトン（80ml）に懸濁させたアスコルビン酸(8.0ｇ）の急速撹拌懸濁液に添加し次いで混合物を室温で一夜撹拌した。沈殿物を濾過により集め、酢酸エチルで洗い、次いで減圧下で乾燥し無色固体として8.29ｇの5,6−O−イソプロピリデンアスコルビン酸を得た。TLC(シリカゲル：CHCl3／MeOH／HOAc〔３：１：0.1 〕，Ｒf ＝0.54) 。
【００６４】
例1.4 3−O−（エトキシカルボニルプロピル）−5,6−イソプロピリデン−アスコルビン酸
10mlのDMF に溶解した５，６−イソプロピリデンアスコルビン酸の溶液を、５mlのDMF に懸濁させたNaH の懸濁液（ヘキサンで数回洗った50％鉱油NaH 分散0.44ｇ）に滴下した。ガス発生が止んだ後、５mlのDMF に溶解した1.43mlのエチル４−ブロモブチラートの溶液を滴下し次いで混合物を室温で一夜撹拌した。溶剤を減圧下で蒸発させ次いで生成残留物を溶離剤としてCHCl3／MeOH（19：１）を用いシリカゲル（55ｇ）でクロマトグラフィー処理した。適当な分画を集め次いで溶剤を減圧下で除去し3−O−（エトキシカルボニルプロピル）−5,6−イソプロピリデン−アスコルビン酸を含有する粘性残留物(1.1ｇ）を得た。
【００６５】
例1.5 3−O−（カルボキシプロピル）−5,6−イソプロピリデンアスコルビン酸
4.6mlの２Ｎ−NaOHを、15mlのEtoHに溶解した3−O−（エトキシカルボニルプロピル）−5,6−イソプロピリデン−アスコルビン酸（1.02ｇ）の溶液に加えた。１時間後、大部分のエタノールを減圧下で除去し次いで残留物を水（10ml）で希釈し、次いで希HCl で酸性化した（pH３）。次いで溶液をNaClで飽和し次いで酢酸エチルで数回抽出し；次いで集めた抽出物をMgSO4を用いて乾燥した。溶剤を減圧下で蒸発させ3−O−（カルボキシプロピル）−5,6−イソプロピリデンアスコルビン酸を含有する粘性残留物（0.84ｇ）を得た。TLC(シリカゲル：CHCl3／MeOH／HOAc〔５：１：0.1 〕，Ｒf ＝0.55)。
【００６６】
例1.6 D-Nal-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys(BOC)-Val-Cys〕-Thr -NH2
10mlのDMF に溶解したジ−第三ブチルジカーボナート（0.36ｇ）の溶液を、45mlのDMF に溶解したD-Nal-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys〕-Thr-NH2アセタート（2ｇ,BIM−23014)の溶液に滴下した。室温で２時間、溶剤を減圧下で除去し残留物を得、次いでこれを溶離剤としてCHCl3 ／MeOH（９：１）を用いシリカゲル(150ｇ）でクロマトグラフィー処理した。適当な分画を集め次いで溶剤を減圧下で除去し、D-Nal-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys(BOC)-Val-Cys〕-Th -NH2を含有する残留物（1.45ｇ）を得た。TLC(シリカゲル：CHCl3 ／MeOH〔３：１〕，Ｒf ＝0.52) 。
【００６７】
例1.7
【化１２】
2004339237.tif 000013
【００６８】
0.2mlのジイソプロピルエチルアミンを、５mlのDMF に溶解したD-Nal-cyclo〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys(BOC)-Val-Cys〕-Thr-NH2 (300mg)、3−O−（カルボキシプロピル）−5,6−イソプロピリデンアスコルビン酸（56mg）およびHBTU（113mg)の溶液に加えた。次いで混合物を室温で一夜撹拌し次いで溶剤を減圧下で除去した。残留物を酢酸エチル／MeOH混合物を飽和水性NaCl溶液間に分配し、次いで酢酸エチル相を飽和水性NaClで洗い、次いで飽和水性NaHCO3で洗い、次いでMgSO4 で乾燥し。溶剤を減圧下で蒸発させ、次いで残留物を、展開溶剤としてCHCl3 ／MeOH（８：１）混合物を用い調整用TLCに委ねた。適当なUV−ポジティブ帯を単離し次いでCHCl3／MeOHで抽出した。溶剤を減圧下で除去し前記の同定された生成物（0.20ｇ）を得た。TLC(シリカゲル：CHCl3／MeOH〔５：１〕，Ｒf＝0.54)。
【００６９】
例1.8 BOC 基の除去
先に示したD-Nal-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys(BOC)-Val-Cys〕-Th -NH2(95mg)を含有するアスコルビン酸誘導体を、室温で45分間CHCl3に溶解した25％ TFAで処理した。揮発性物質を減圧下で除去し、乾燥残留物を得、これをVydac C18 HPLCおよび CH3CN／0.1 ％水性 TFAを用いて精製した。最終収率は90mgであった（FAB-MS (ｍ／ｅ）1341)。
【００７０】
例1.9 他の態様
次のソマトスタチン誘導体をまた同様の方法で合成した：
【化１３】
2004339237.tif 000014
【００７１】
例２. BIM 23107の合成
次のソマトスタチン誘導体（また BIM−23107 としても称される）を、本発明に従って合成した。(Aco-CH2)3-C-NH-CO-(CH2)2-CO-D-Nal-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys〕-Thr-NH2
例2.1  (Aco-CH2)3-C-NH-CO-(CH2)2-CO-D-Nal-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys (BOC)-Val-Cys〕-Thr-NH2
0.03mlのDIEAを、２mlのDMF に溶解した2−N−（スクシニル）アミノ−2−（アセトキシメチル）−1,3−プロパンジオールジアセタート（83mg）およびHBTU（92mg）の氷冷溶液に加えた。０〜５℃で30分間撹拌後、0.03mlのDIEAを含有する、２mlのDMF に溶解したD-Nal-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys(BOC)-Val-Cys〕-Thr-NH2(100mg)の溶液を加えた。
【００７２】
混合物を最初に０〜５℃で１時間撹拌し次いで室温で一夜撹拌した。溶剤を減圧下で除去し乾燥残留物を得、これを酢酸エチルと水性飽和NaCl間に分配し、次いでEtoAc 相を水性５％ NaHCOで洗い、次いで最後に水性飽和NaClで洗い；次いで得られた溶液をMgSO4 を用いて乾燥した。溶剤を減圧下で蒸発させ（Aco-CH2)3-C-NH-CO-(CH2)2-CO-D-Nal-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys(BOC)-Val-Cys〕-Thr-NH2 を含有する残留物（0.14gm) を得た。TLC(シリカゲル：CHCl3／MeOH／HOAc＝４：１：0.1 ，Ｒf ＝0.82)。
【００７３】
例2.2 BOC 基の除去
30mgの前記の同定された化合物を、室温で45分間CHCl3 中50％ TFAで処理し；次いで揮発性物質を減圧下で除去し残留物を得た。微量のTFA をエタノールで数回共蒸発させ次いで残留物をエーテルで砕き次いで乾燥して30mgの生成物（30mg）を得た。TLC(シリカゲル：CHCl3／MeOH／HOAc＝３：１：１，Ｒf ＝0.24)。
【００７４】
例2.3 他の態様
次のソマトスタチン誘導体をまた同様の方法で合成した。
(HO-CH2)3-C-NH-CO-(CH2)2-CO-D-Nal-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys 〕-Thr-NH2 BIM−23158
(HO-CH2)3-C-NH-CO-(CH2)2-CO-D-Phe-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys〕-Nal-NH2 BIM−23167
(HO-CH2)3-C-NH-CO-(CH2)2-CO-D-Phe-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys〕-Thr-NH2 BIM−23173
(HO-CH2)3-C-NH-CH2-CO-D-Phe-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys〕-Nal-NH2 BIM−23179
(HO-CH2)3-C-NH-CH2-CO-D-Phe-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys〕-Thr-NH2 BIM−23182
【００７５】
例３. BIM−23201の合成
次のソマトスタチン誘導体（また(BIM−23201)としても称される）を、本発明に従って合成した。
(HO-CH2)3-C-CH2-D-Phe-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys〕-Nal-NH2
例3.1 (HO-CH2)3-C-CH2-D-Phe-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys -Thr-Cys〕-Nal-NH2
２ｇの３Åの分子ふるい、引き続きNaCNBH3(36mg)を、10％酢酸を含有するメタノール（10ml）中ニクロム酸ピリジニウム又はDMSO／塩化オキサリル／トリスエチルアミンを用い、トリアセチルペンタ−エリトリトールの酸化によって得られたトリス（アセトキシメチル）アセトアルデヒド（120mg)およびD-Phe-c〔Cys-Tyr(OBt)-D-Trp-Lys(BOC)-Thr(OBt)-Cys〕Nal-NH2(250mg)の溶液に、15分間隔で加えた。次いで、混合物を室温で30分間撹拌し次いで４時間加熱した。
【００７６】
濾過後、残留物を酢酸エチルと水間に分配した。酢酸エチル相を水で洗い、次いで水性NaHCO3で洗い、次いで乾燥した（MgSO4)。溶剤を減圧下で蒸発させ残留物(0.4ｇ）を得、これを次いでメタノール（５ml）に溶解し、 NaOMe／MeOH溶液（pH10) で処理し、１時間撹拌し次いで最後に１Ｎ HClでpH５〜６に中和した。溶剤を蒸発後、残留物を90％水性 TFA（５ml）中に溶解し次いで30分間撹拌した。揮発性物質を減圧で除去しそして得られた残留物中の微量のTFA および水をアルコールを用い共蒸発により除去した（２回）。残留物を乾燥し、次いでエーテルで砕き、そして最後に先に記載した条件と類似の条件を用いHPLCにより精製し、41mgの(HO-CH2)3-C-CH2-D-Phe-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys〕-Nal-NH2を無色結晶として得た。MS（ｍ／ｅ）1262.8。
【００７７】
例3.2 他の態様
次のソマトスタチン（また BIM−23195 しても称される）を、同様の方法で合成した。
(HO-CH2)3C-CH2-D-Phe-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys〕-Thr-NH2 BIM−23195 
【００７８】
例４. BIM-23197の合成
次のソマトスタチン（また、BIM-23197 としても称される）を、本発明に従って合成した。
【化１４】
2004339237.tif 000015
【００７９】
例4.1 塩化２−ブロモエタンスルホニル
Na 2−ブロモエタンスルホナート(4.0ｇ）を、氷浴中で冷却しながらPCl5(11.8ｇ）で処理した。液相に達したら、溶液をオイル中で 1.5時間90〜120 ℃で加熱し、室温に冷却し、50ｇの砕いた氷中に注ぎ、次いで15分間撹拌した。混合物をCH2Cl2（３×30ml）で抽出し次いで一緒にした抽出液をH2O(２回）で洗い、５％ NaHCO3(５回）洗いそして再たびH2O(２回）洗った。無水MgSO4で乾燥し、次いで減圧下で蒸留し塩化２−ブロモエタンスルホニルを無色の液体（1.95ｇ，42〜44℃／１mmHg）として得た。
【００８０】
例4.2 Br-(CH2)2-SO2-D-Phe-c〔Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys (Boc)-Abu-Cys〕-Thr(tBu)-NH(1−シクロプロピル−1−メチル）−エチル
DMF(１ml）に溶解した塩化２−ブロモエタンスルホニル（30mg）の溶液を、０℃で窒素雰囲気下、DMF(２ml）に溶解したH-D-Phe-c〔Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys 〕-Thr(tBu)-（１−シクロプロピル−1−メチル）−エチル（150mg)およびDIEA（55mg）の溶液に滴下した。反応混合物を０〜５℃で３時間撹拌し；次いで溶剤を減圧下で除去した。残留物を酢酸エチル中に溶解し次いで５％クエン酸（２回）で洗い、５％ NaHCO3(２回）で洗いそしてブライン（２回）で洗った。
【００８１】
次いで溶液を無水MgSO4 で乾燥し、濾過し、そして減圧下で濃縮乾固した。生成物を更に酢酸エチルで溶出させる短いシリカゲルカラムを用いて精製した。生成物を含有する分画を集め次いで溶剤を減圧下で除去し、105mgのBr-(CH2)2-SO2-D-Phe-c〔Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys〕-Thr(tBu)-NH（１−シクロプロピル−1−メチル）−エチルをわずかに黄色の固体を得た。（シリカゲル、CHCl3／MeOH／HOAc（９：１：0.1 ），Ｒf ＝0.36)。
【００８２】
例4.3
【化１５】
2004339237.tif 000016
【００８３】
２mlの１−プロパノールに溶解したBr-(CH2)2-SO2-D-Phe-c〔Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys〕-Thr(tBu)-NH（1−シクロプロピル−1−メチル）−エチル (100mg)および２−ヒドロキシエチルピペラジン（55mg）を、窒素雰囲気下 2.5時間還流した。次いで溶液を室温に冷却し、次いで溶剤を減圧下で除去した。次いで残留物を５％ MeOH を含有する酢酸エチルに溶解し次いでブライン（３Ｘ）で洗浄した。最後に、溶液を無水MgSO4で乾燥し、濾過し次いで濃縮し減圧下で濃縮乾固し、110mg の前記同定固体を得られた。更に精製することなく、この化合物を次の工程で直接用いた。
【００８４】
例4.4
【化１６】
2004339237.tif 000017
【００８５】
先の工程で得られた110mg の保護されたソマトスタチン誘導体を、10mlの90％ TFA水性溶液中に溶解し、次いで室温で窒素雰囲気下１時間撹拌した。TFA およびH2O を減圧下で除去し、次いで残留物を冷エーテル（３×10ml）で砕いた。わずかに黄色液体を得た；この物質を調整用逆相HPLCを用い、１）NH4OAc水性溶液；および２）HOAc溶液で溶出させて更に精製した。前記同定生成物を含有する集められた分画を凍結乾燥し白色固体を得た（18mg，ESI-MS, ((ｍ＋１）／ｅ）1252.7)。
【００８６】
例4.5 他の態様
次のソマトスタチン誘導体を又、同様の方法で合成した：
【化１７】
2004339237.tif 000018
【００８７】
例５. ボンベシン誘導体の合成
次のボンベシン誘導体（また、 BIM−26333 としても称される）を前記と同様の方法で合成した。
【００８８】
【化１８】
2004339237.tif 000019
本発明の他のペプチド誘導体は、当業者に公知の合成修飾を用い、同様の方法で合成できる。
【００８９】
試験ペプチドの分析の結果
例６. 結合アッセイ
ソマトスタチンレセプターに類似物のソマトスタチン（SRIF）の結合親和力を実証するため、前記の精製化合物を、〔125Ｉ−Tyr11〕SRIF−14のラットAR 42J膵臓膜への結合のインビトロ阻害の測定を含むソマトスタチン結合アッセイにおいて試験した。表Ｉに示すように、本発明の精製ソマトスタチン類似体は、これらのレセプターに対し高い結合親和力を実証した。加えて、質量分析法により測定されそして分子構造から推定された分子量は、各ソマトスタチン誘導体に対し表中で掲げられている。
【００９０】
同様に、前記の精製ボンベシン類似体を、ボンベシン結合分析により試験した。結合アッセイは、〔125Ｉ−Tyr11〕ボンベシンのラットAR 42J膵臓膜への結合のインビトロ阻害の測定から成っており；アッセイから、GRP レセプターに対するボンベシン類似同の結合親和力を測定し約21nMであった。
【００９１】
例７. 成長ホルモン（GH）阻害アッセイ
５匹の雄のスプラーグドーレラット（各々は250〜300ｇの体重を有する）の複数群を、ソマトスタチン誘導体又は生理的食塩水を用いて皮下注射した。表・中に示される選択されたポスト−ドラッグ時間（２時間、４時間、６時間、８時間）前30分において、ラットをネムブターム（Nembutal) を用い腹腔内（50mg／kg）で麻酔した。麻酔後15分に、血液のアリコートを、基底GHを測定するためヘパリン上に心臓穿刺により引き出した。加えて、D-Ala2-GRF(10μｇ／kg）の皮下注射を与えた。15分後、刺激されたGHを数量化するため血液を取り出し、これをNIADDKDにより供給されたラジオイムノアッセイを用いて血漿中で測定した。GH阻害の％を、基底GHおよび刺激GH間で得られた差異から計算した。
【００９２】
表IIは、時間の関数として種々の精製ソマトスタチンの効果を示す。ラットにおける成長ホルモンの阻害においてD-Phe-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys〕-Nal-NH2(BIM-23060)の有効性を、本発明の他のソマトスタチン誘導体(BIM−23167、BIM−23179、および BIM−23181)と比較した。全ての誘導体は、時間−依存性形式において減少する作用の驚くべき延長された期間を実証する。
【００９３】
追加の実験を、各々の化合物のED50（すなわち、明示した時間後成長ホルモン放出の50％を阻害するために要求される各化合物の濃度）を測定するため、D-Phe-c〔Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys〕-Thr-NH2、ソマトスタチン類似体、および BIM−23190, BIM−23195 および BIM−23197 について行った。実験は、25μｇ／kg〜0.25μｇ／kg間の用量範囲で行なわれた。表III は、種々の時間間隔で未修飾ペプチド以上のソマトスタチン誘導体の驚くべき改善を示し、本発明の化合物による刺激GH放出の時間−依然性阻害を示す。
【００９４】
例８. 抗増殖性アッセイ
前記の精製ソマトスタチン類似体をまた、急速に増殖する細胞に対する活性についで試験した。表IVは、AR 42Jラット膵臓腫瘍細胞の増殖に対するこれらのペプチドの効果を記載する。天然のソマトスタチンと違って、本発明の誘導体は実質的抗−増殖活性を実証する。図１を参照すると、 BIM−23014C（ソマトスタチン類似体）および BIM−23118 (BIM−23014 の誘導体）の双方は、濃度−依存性形式においてAR 42Jラット膵臓腫瘍細胞の増殖を阻害し、 BIM−23118 は２つの化合物の内でより有効である。両化合物は当量濃度で未修飾ソマトスタチン類似体よりもより大きな程度にまで腫瘍細胞を阻害する。
【００９５】
例９. チミジン取り込みアッセイ
このアッセイにおいて、スイス 3T3細胞の保存培養物を、ダルベッコ修飾ヨーグルス培地（DMEM）中で増殖させそして37℃で10％ CO2および90％空気の湿潤雰囲気中10％胎児子牛血清を加えた。次いで細胞を24個のウェルクラスタートレー中に接種し次いで培地の最後の変化後４日間用いた。細胞周期のG1／G0相中に細胞を拘束するために、無血清DMEMをチミジン取り込みアッセイの前24時間目に用い；次いで細胞をDMEM（無血清、0.5 μＭ）および〔メチル−3Ｈ〕チミジンの１mlアリコートで２回洗った。ボンベシン誘導体を、最初に0.001、0.01、0.1、１、10、100、100nMで試験した。37℃で28時間後、酸不溶性プールへの〔メチル−3Ｈ〕チミジンの混入を、次の如く検定した。
【００９６】
最初に細胞を氷冷 0.9％ NaCl(１mlアリコートで２回）洗い；酸−可溶性放射能で２回洗浄し；次いで酸−可溶性放射能を５％トリクロル酢酸（TCA)を用い40℃で30分間インキュベーションすることにより除去した。次いで、培養物を95％エタノールで一回（１ml）洗浄し次いで１mlの 0.1Ｎ NaOH で30分間インキュベーションすることにより可溶化した。可溶化物質を、10ml Scint A（パッカード）を含有するバイアルに移し、次いで放射能を液体シンチレーションスペクトロメトリーにより測定した。このアッセイは、細胞内にチミジン取り込みを刺激するボンベシン誘導体の能力を実証する。ED50は0.48nnであることが計算され、従って本発明のボンベシン誘導体は、チミジン取り込みの強力なシミュレータである。
【００９７】
使用方法
本発明のペプチドは、伝統的方法（例えば、経口、非経口、経皮、又は経粘膜）の一つにより、生物解性、生物適合性ポリマーを用いる持続性製剤において、又はミセル、ゲル又はリポソームを用いるオン−サイトデリバリー（on-side delivery)(例えば抗癌ボンベシン又はソマトスタチン誘導体の場合において、肺に対し）により、哺乳動物、特にヒトに投与することができる。用量は、ヒトにおいて治療薬ペプチドに対して今日用いられる用量を一般に同じである。
【００９８】
加えて、本発明のペプチド誘導体は、対応する未修飾ペプチドにより治療に敏感な疾患の改善された治療に対し適当である。特に、前記ソマトスタチン誘導体は、癌、先端巨大症、膵炎、外傷誘発増殖、糖尿病、糖尿病性網膜症、血管形成術後の再狭窄、AIDS、神経性炎症、動脈炎および下痢を含む胃腸問題の治療に対し適当である。
【００９９】
【表１】
2004339237.tif 000020
【０１００】
【表２】
2004339237.tif 000021
【０１０１】
【表３】
2004339237.tif 000022
【０１０２】
【表４】
2004339237.tif 000023
【図面の簡単な説明】
【０１０３】
【図１】図１は異なるソマトスタチン誘導体の存在下AR 42J細胞の２つの増殖曲線のグラフである。
【図１】
2004339237.tif 000027