(57)【要約】【課題】レチノイン酸のシワ改善効果を有効に利用し、優れた皮膚老化防止効果を持ち、かつ皮膚刺激性等を起こすことの無い誘導体を見出すことを課題とした。【解決手段】レチノイン酸δ−トコフェリルがシワ改善効果に有効であり、優れた皮膚老化防止効果を示し、かつ皮膚刺激性が極めて少なく、上記課題を解決することができる。またδ−トコフェリル残基はビタミンＥ誘導体として高い抗酸化作用を有することから、レチノイン酸の皮膚老化防止効果、シワ改善効果との相乗効果により、極めて有効な美肌作用を有することが期待できる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
レチノイン酸δ−トコフェリルを必須成分とするシワ改善剤。
【請求項２】
請求項１に記載のシワ改善剤を用いた皮膚老化防止用皮膚外用剤、及び化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、レチノイン酸誘導体のシワ改善を目的とした皮膚外用剤への利用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
レチノイン酸の皮膚に対する作用は、上皮組織や粘膜の正常な構造及び機能の維持であり、皮膚組織の成長・発育等の生理作用にも関係があるとされる。またレチノイン酸はその皮脂腺萎縮作用からアクネ治療剤として利用され、その後シワ改善効果が確認され、欧米ではしわ防止化粧品として注目されている。ヘアレスマウスを用いた研究によれば、線維芽細胞機能が正常化され、コラーゲン合成が増加し、グルコサミノグリカンも増加することによりしわが改善されることが報告（日本香粧品科学会誌，１６（３），１８２ｐ）されている。
【０００３】
しかしながら、レチノイン酸はこれらの有用な作用を持つものの、皮膚刺激性等の種々の副作用が報告され、日本では使用することが出来ない。
【０００４】
これらを改善するための方法としてレチノイン酸のα−トコフェロール誘導体、すなわちレチノイン酸α−トコフェリルが報告（特公昭５９−２２６８４号、特開昭５３−１５４２９号等）されている。しかしビタミンＥ誘導体として高い抗酸化作用を有するδ−トコフェロールのレチノイン酸誘導体としての報告は無い。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
レチノイン酸の皮膚老化防止効果、シワ改善効果を有効に利用し、かつ皮膚刺激性等を起こすことの無い誘導体を見出すことを本発明の課題とした。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は種々のレチノイン酸誘導体について鋭意研究した結果、レチノイン酸のδ−トコフェロール誘導体、すなわちレチノイン酸δ−トコフェリルが皮膚刺激性を抑制し、かつ皮膚老化防止効果、シワ改善効果に有効であることを見出した。またδ−トコフェリル残基はビタミンＥ誘導体として高い抗酸化作用を有することから、レチノイン酸の皮膚老化防止効果、シワ改善効果との相乗効果により、極めて有効な美肌作用を有することを確認するに至り、本発明を完成したのである。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明で用いるレチノイン酸δ−トコフェリルはレチノイン酸とδ−トコフェロールから、通常のエステル化反応により合成することが出来る。
【０００８】
本発明で用いるレチノイン酸δ−トコフェリルのレチノイン酸残基としてはレチノイン酸であれば特に制限されることは無く、ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、１１−ｃｉｓ−レチノイン酸、９−ｃｉｓ−レチノイン酸を、あるいはこれらの任意の混合体を用いることが出来る。これらの中でＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸が特に好ましい。
【０００９】
本発明で用いるレチノイン酸δ−トコフェリルのδ−トコフェロール残基としては、δ−トコフェロールであれば特に制限されることは無く、ｄ−δ−トコフェロール、ｌ−δ−トコフェロール、及びこれらの混合体であるｄｌ−δ−トコフェロールを、あるいはこれらの任意の混合体を用いることが出来る。これらの中でｄ−δ−トコフェロールが特に好ましい。
【００１０】
本発明で用いるレチノイン酸δ−トコフェリルの皮膚外用剤における添加量は、特に制限されることは無いが、好ましくは０．００１重量％以上で、更に好ましくは０．０１重量％以上である。また添加量の上限は特に制限されることは無いが、実質的には５重量％以下、好ましくは２重量％以下である。
【００１１】
本発明の皮膚外用剤には、上記成分のほか本発明の効果を損なわない範囲で化粧品、医薬部外品などの皮膚外用剤に配合される成分として動植物油由来の硬化油、天然由来のロウ、炭化水素系の油相成分、動植物由来の油相成分、シリコーン系の油相成分、フッ素系の油相成分、高級アルコール、増粘剤、紫外線吸収剤、粉体、顔料、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、多価アルコール、糖、高分子化合物、生理活性成分、経皮吸収促進剤、溶媒、酸化防止剤、香料、防腐剤等を配合することができる。
【００１２】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明の技術的範囲がこれらに限定されるものではない。
【００１３】
先ず、レチノイン酸δ−トコフェリルとしてＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄ−δ−トコフェリルを用い、活性酸素のモデル物質として通常用いられる１，１−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌ−ｈｙｄｒａｚｙｌ（ＤＰＰＨ）の減少率から、活性酸素消去能を示す。
【００１４】
（試験例１）活性酸素消去作用の評価
表１に示す濃度のＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄ−δ−トコフェリル、ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸、ｄｌ−δ−トコフェロールを用いて、活性酸素消去作用の評価を行った。これらの試料と、ＤＰＰＨを３７℃で２時間反応させた後、ＤＰＰＨの減少率を５１６ｎｍの吸光度を測定することにより調べた。その結果を表１に示す。
【００１５】
【表１】
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表１に見られるように、ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄ−δ−トコフェリルはＤＰＰＨの減少させる効果を示し、レチノイン酸ｄｌ−δ−トコフェリルの活性酸素消去作用の有効性が分かる。
【００１６】
次に、同様にＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄ−δ−トコフェリルによる、過酸化脂質が引き起こす細胞障害に対する緩和作用を示す。すなわち、過酸化脂質のモデル物質として通常用いられるｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｈｙｄｒｏｐｅｒｏｘｉｄｅ（ｔ−ＢＨＰ）による細胞障害に対する緩和作用を以下に示す。
【００１７】
（試験例２）過酸化脂質による細胞障害に対する緩和作用の評価
表２に示す濃度のＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄ−δ−トコフェリル、及び比較としてＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸、ｄｌ−δ−トコフェロールを用いて、これらの試料を含有する培地にてＨａＣａｔ  ｃｅｌｌを２４時間培養した。その後培地を除去し、１ｍＭのｔ−ＢＨＰにて３７℃で５時間処理した。その後の細胞生存率をＮＲ  ａｓｓａｙにより求め、過酸化脂質による細胞障害に対する緩和作用を評価した。
【００１８】
【表２】
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表２に見られるようにＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄ−δ−トコフェリルは細胞生存率を向上させる効果を示し、レチノイン酸ｄｌ−δ−トコフェリルの過酸化脂質による細胞障害に対する緩和作用の有効性が分かる。
【００１９】
次に、ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄ−δ−トコフェリルによる、細胞への紫外線照射に対するコラーゲン分解酵素の生成抑制の効果をそのメッセンジャーレベル、及びコラーゲン分解酵素の生成から示す。
【００２０】
（試験例３）コラーゲン分解酵素のメッセンジャーレベルからの、コラーゲン分解酵素の生成抑制作用の評価
ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄ−δ−トコフェリル、及び比較としてＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸を用い、これらの試料を２．５μＭ含有する培地にてＨａＣａｔ  ｃｅｌｌを２４時間培養した後、２０Ｊ／ｃｍ２の紫外線（ＵＶＡ）を６時間照射した。照射後、細胞からｔｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出し、Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ−Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ−ＰＣＲ）法によりＭＭＰ−９のｍＲＮＡの発現を観察した。
【００２１】
その結果、ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄ−δ−トコフェリルは、ＭＭＰ−９のｍＲＮＡ発現量は約７０％に抑制されたのに対し、ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸では抑制効果は全く見られなかった。
【００２２】
（試験例４）コラーゲン分解酵素の生成量からの、コラーゲン分解酵素の生成抑制作用の評価
ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄ−δ−トコフェリル、及び比較例としてＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸を用い、これらの試料を２．５μＭ含有する培地にてＨａＣａｔ  ｃｅｌｌを２４時間培養した後、２０Ｊ／ｃｍ２の紫外線（ＵＶＡ）を６時間照射した。照射後、ＨａＣａｔ  ｃｅｌｌの培養上清を用いてＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９のザイモグラフィーを実施した。
【００２３】
その結果、ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄｌ−δ−トコフェリルは、ＭＭＰ−９の発現を約７５％に抑制し、またＭＭＰ−２についても抑制する効果を示した。一方、ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸では抑制効果は見られなかった。
【００２４】
次に、ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄ−δ−トコフェリルによるコラーゲン合成促進を、タイプＩコラーゲンのＥＬＩＳＡによる定量から示す。
【００２５】
（試験例５）コラーゲン合成促進作用の評価
ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄ−δ−トコフェリル、及び比較例としてＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸を用い、これらの試料を表３に示す濃度を含有する培地にて、Ｎｏｒｍａｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｄｅｒｍａｌ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ（ＮＨＤＦ）を２４時間培養した。培養上清をＥＬＩＺＡプレートに移し、一晩４℃にてコーティングした。０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ（−）（ＰＢＳ−Ｔ）で洗浄した後、１％ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ溶液を用いて３７℃にて１時間コーティングした。ＰＢＳ−Ｔにて洗浄後、抗タイプＩコラーゲン抗体溶液と３７℃で１時間反応させ、次いで二次抗体としてＨＩＳＴＯＦＩＮＥ（ｓｉｍｐｌｅ  ｓｔａｉｎ  ＰＯ（Ｒ））を用いて３７℃で１時間反応させた。２，２’−ａｚｉｎｏｂｉｓ（３−ｅｔｈｙｌｂｅｎｚｏｔｈｉａｚｏｌｉｎｅ−６−ｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ（ＡＢＴＳ）を添加し、３０分後の呈色を４０５ｎｍの吸光度により測定した。同時に作成した検量線により培地中に含まれるコラーゲンを定量した。
【００２６】
その結果を表３に示す。
【００２７】
【表３】
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表３に示されるようにＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄ−δ−トコフェリルは用いた線維芽細胞の培養上清中のコラーゲン量は濃度に依存して増加し、１０μＭにおいてはコントロールと比較して１６８％にまで増大した。
一方、ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸では増大効果は見られなかった。
【００２８】
次に、実際の皮膚外用剤におけるＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄｌ−δ−トコフェリルのシワ改善効果を示す。
【００２９】
実施例１：シワ改善クリーム
（処方）
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（調製法）
水中油型乳化組成物の調製法の定法に従い、ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄｌ−δ−トコフェリルを含有するシワ改善クリームを調製した。
【００３０】
比較例１（シワ改善クリーム比較用のクリームの調製）
実施例１のシワ改善クリームの処方からＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄｌ−δ−トコフェリルを除いた処方により、同様の調製法により比較用のクリームを調製した。
【００３１】
（シワ改善効果の評価）
表４に示す８名の被験者に、実施例１のクリーム、及び比較例１のクリーム約０．１ｇ程度を毎日２回（朝晩）両目尻の一方づつに塗布した。塗布前、及び塗布９０日後に目尻の塗布部分から定法に従ってレプリカを採取し、以下のシワ面積率の測定法、及び最大シワ深さの測定法によりシワ面積率、及び最大シワ深さを求め、塗布前、及び塗布後のシワ面積率、及び最大シワ深さの変化率を求めた。
【００３２】
（シワ面積率の測定法）
目尻から採取したレプリカに、斜め３０°から光を照射し、生じた影の面積を画像解析システムによる２値化法により測定し、下記の式により相対シワ面積率を求めた。
［相対シワ面積率（％）］＝（［シワの影の総面積］／［測定範囲の総面積］）×１００
【００３３】
（最大シワ深さの測定法）
目尻から採取したレプリカに、斜め３０°から光を照射し、生じた影の長さを画像解析システムによる２値化法により測定した。０．２、０．４、０．６、０．８、１．０ｍｍの深さの溝を持つシワ標準板を用いて予め作成してある検量線を用いて、シワ深さを求めた。
【００３４】
塗布前、及び塗布後のシワ面積率の変化率、及び最大シワ深さの変化率を表４に示す。
【００３５】
【表４】
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これらの結果の（シワ面積率の変化率）の有効率の平均値は１８．４％、標準偏差は３４．４％であり、また（最大シワ深さの変化率）の有効率の平均値は９．５％、標準偏差は１５．９％で、有意にシワ改善効果が認められることが分かる。
【００３６】
次に、実際の皮膚外用剤及び化粧品処方に、ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄｌ−δ−トコフェリルを添加した例を示す。
【００３７】
実施例２：アイジェル
（処方）
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（調製方法）
Ａ相、Ｂ相、Ｃ相の成分をそれぞれ８０℃に加熱し、溶解混合する。Ｃ相にＢ相を加え混合した後に、Ａ相を添加する。撹拌しながら冷却し、３５℃まで撹拌冷却して調製を終了する。
【００３８】
実施例３：アイクリーム１
（処方）
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（調製方法）
水相成分、及び油相成分を８０℃に加熱し、予め溶解混合しておく。ホモミキサーにて油相に水相を添加して乳化した後に、３５℃まで撹拌冷却して調製を終了する。
【００３９】
実施例４：アイクリーム２
（処方）
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（調製方法）
Ａ相成分、及びＢ相成分を８０℃に加熱し、溶解混合する。Ａ相にＢ相を添加して乳化した後に、５０℃でＣ相を添加し、３５℃まで撹拌冷却して調整を終了する。
【００４０】
実施例５：化粧水
（処方）
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（調製方法）
Ａ相成分を７０℃に加温溶解し、Ｂ相成分を室温で均一混合する。Ａ相を撹拌しながらＢ相を徐々に添加し、可溶化して調製を終了する。
【００４１】
（シワ改善効果の評価）
実施例２〜５の化粧料を、実施例１のシワ改善効果の評価と同様の方法で一週間目尻に塗布し、一週間後の皮膚の状態を官能評価により評価を行ったところ、いずれも良好なシワ改善効果が見られた。
【００４２】
【発明の効果】
以上、詳細に説明したように、ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸ｄ−δ−トコフェリルは、極めて高いシワ改善効果が見られ、ＡＬＬ−ｔｒａｎｓ−レチノイン酸δ−トコフェリルは皮膚刺激性を抑制し、かつ皮膚老化防止効果、シワ改善効果に有効であることが分かる。またδ−トコフェリル残基はビタミンＥ誘導体として高い抗酸化作用を有することから、レチノイン酸の皮膚老化防止効果、シワ改善効果との相乗効果により、極めて有効な美肌作用を有することが期待される。