(57)【要約】【課題】アルドース還元酵素阻害作用を有し、長期間服用しても安全で尚且つ確実な予防、治療を行うのに充分満足できるような糖尿病性合併症の予防又は治療剤、及びその剤を含有する経口用又は非経口用組成物、食品あるいは医薬を提供すること。【解決手段】アルドース還元酵素阻害作用を有し、糖尿病性合併症の予防又は／及び治療剤、それを含有する経口用又は非経口用組成物、食品又は医薬。本発明の組成物は、天然由来であることから、長期間服用しても安全で、確実な治療を行うことができる。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウコギ又はその抽出物を含有することを特徴とするアルドース還元酵素阻害剤。
【請求項２】
請求項１に記載のアルドース還元酵素阻害剤を含有することを特徴とする糖尿病性白内障の予防治療剤。
【請求項３】
請求項１に記載のアルドース還元酵素阻害剤を含有することを特徴とする糖尿病性網膜症の予防及び／又は治療剤。
【請求項４】
請求項１に記載のアルドース還元酵素阻害剤を含有することを特徴とする糖尿病性角膜症の予防及び／又は治療剤。
【請求項５】
請求項１に記載のアルドース還元酵素阻害剤を含有することを特徴とする糖尿病性腎障害の予防及び／又は治療剤。
【請求項６】
請求項１に記載のアルドース還元酵素阻害剤を含有することを特徴とする糖尿病性末梢神経障害の及び／又は治療剤。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の剤を含む経口用又は非経口用組成物。
【請求項８】
食品である請求項７記載の経口用組成物。
【請求項９】
医薬である請求項７記載の経口用又は非経口用組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アルドース還元酵素阻害作用を有し、糖尿病性合併症、例えば、糖尿病性の白内障、腎障害、末梢神経障害などの予防あるいは治療に有効な剤、それらを含有する経口用又は非経口用組成物、食品又は医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、我が国において糖尿病患者数は急激に増加しており、潜在的な患者数を含めると、約６００万人存在すると推定されている。最近、糖尿病性末梢神経障害や糖尿病性白内障などとポリオール代謝異常との関連性が明らかになりつつある。
【０００３】
グルコースは、正常時には大部分がヘキソキナーゼの作用によりグルコース−６−リン酸になり、解糖系で代謝され重要なエネルギー源となっている。しかし、糖尿病のような高血糖状態では、グルコースがソルビトールを介してフルクトースに代謝されるポリオール代謝系が亢進されることにより、細胞内でのソルビトールの異常代謝が助長される。ソルビトールは極性が高いために細胞外への移行が少なく、細胞内に蓄積されて浸透圧を高め、組織障害を起こすと考えられている。従って、ポリオール代謝系でグルコースをソルビトールに変換する酵素であるアルドース還元酵素を阻害することによって、糖尿病性合併症の予防や治療が可能であると考えられている。よって、糖尿病性の末梢神経障害や腎障害などに伴う症状あるいは糖尿病性の白内障、網膜症、角膜症などの予防や改善、治療を図るためには、アルドース還元酵素を阻害する必要がある。
【０００４】
従来、アルドース還元酵素阻害作用を有する物質としては、ヒダントイン誘導体（例えば、特許文献１参照。）、チアゾリン誘導体（例えば、特許文献２参照。）など、多くの化合物が知られている。また、既存薬としては、全合成によるチオキソチアゾリジン酢酸誘導体（商品名：キネダック錠、小野薬品工業）が市販されているが、これらの合成アルドース還元酵素阻害薬は、発疹、吐き気、倦怠感、めまいなどの副作用があるという問題点がある。
【０００５】
一方、天然物由来のアルドース還元酵素阻害作用を有する化合物としては、ケルセチンなどのフラボノイド類（例えば、非特許文献１参照。）やイソリクイリチゲニンなどのカルコン類（例えば、非特許文献２参照。）などが報告されている。さらに、緑茶などの成分の一つである（−）−エピカテキンや植物起源のポリフェノール類の一種であるタンニン酸（例えば、特許文献３参照。）、デチンムル科のサラシア（Ｓａｌａｃｉａ）属植物中の成分であるｍａｎｇｉｆｅｒｉｎやトリテルペン類（例えば、非特許文献３参照。）、セリ科のツボクサ中のセンテラサポゲノールＡ及びその配糖体であるセンテラサポニンＡ（例えば、特許文献４参照。）などが報告されているが、それらの効果は十分ではなく、糖尿病性合併症の予防、治療薬として必ずしも満足できるものではない。
【０００６】
【特許文献１】
特開昭５３−５３６５３号公報
【特許文献２】
特開昭５７−２８０７３号公報
【特許文献３】
特開平３−２３２８５１号公報
【特許文献４】
特開２０００−８００４４号公報
【非特許文献１】
ヴァルマ  エス．ディーとキノシタ  ジェイ．エイチ（Ｖａｒｍａ  Ｓ．Ｄ．  ａｎｄ  Ｋｉｎｏｓｈｉｔａ  Ｊ．Ｈ．），  バイオケム．ファーマコル（Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．），  ２５，  ２５０５，  １９７６
【非特許文献２】
アイダら（Ａｉｄａ  ｅｔ．  ａｌ．），プラントタ  メド（Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄ．），  ５５，  ２２，  １９８９
【非特許文献３】
吉川雅之，フード  スタイル（ＦＯＯＤ  Ｓｔｙｌｅ）  ２１，  ６（５），  ７２−７８，  ２００２
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、アルドース還元酵素阻害作用を有し、長期間服用しても安全で尚且つ確実な治療を行うのに充分満足できるような糖尿病性合併症、例えば、糖尿病性の白内障、腎障害、末梢神経障害などの予防あるいは治療に有効な剤、及びその剤を含有する経口又は非経口用組成物、食品あるいは医薬を提供することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上述した課題を解決するために鋭意研究を行った結果、うこぎ科の落葉低木で、漢方では葉及び根皮を乾燥させたものを、滋養強壮、鎮痛剤として腹痛、疲労回復、冷え症などに用いられているウコギに、アルドース還元酵素阻害作用を有することを見出し、本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち、本発明は、
１．ウコギ又はその抽出物を含有することを特徴とするアルドース還元酵素阻害剤。
２．  １に記載のアルドース還元酵素阻害剤を含有することを特徴とする糖尿病性白内障の予防及び／又は治療剤。
３．１に記載のアルドース還元酵素阻害剤を含有することを特徴とする糖尿病性網膜症の予防及び／又は治療剤。
４．１に記載のアルドース還元酵素阻害剤を含有することを特徴とする糖尿病性角膜症の予防及び／又は治療剤。
５．１に記載のアルドース還元酵素阻害剤を含有することを特徴とする糖尿病性腎障害の予防及び／又は治療剤。
６．１に記載のアルドース還元酵素阻害剤を含有することを特徴とする糖尿病性末梢神経障害の予防及び／又は治療剤。
７．１〜６のいずれか１に記載の剤を含む経口又は非経口用組成物。
８．食品である７記載の経口用組成物。
９．医薬である７記載の経口又は非経口用組成物、
である。
【００１０】
【発明の実施形態】
本発明で使用するウコギは、うこぎ科の落葉低木で、ヒメウコギ又はヤマウコギ、マンシュウウコギとも呼ばれるものであり、漢方では根皮を乾燥させたものを五加皮と呼び、滋養強壮、鎮痛剤として腹痛、疲労回復、冷え症などに用いられているものである。また、山形県米沢地方では、古くから葉を食用とし、切り和え、ウコギ飯、お浸し、天ぷらなどの郷土料理として食されているものである。
本発明のウコギは通常食用として供されているもので良く、また産地についても何れの産地のものでもよく、特に限定されるものではないが、汎用性の面から見て、日本産、中国産が好ましい。
【００１１】
本発明におけるウコギは、葉、茎、芽、枝、花、木質部、木皮部（樹皮）などの地上部及び根、塊茎などの地下部、種子、果実、樹脂など全ての部位が使用可能である。
本発明におけるウコギは、ウコギ自体を乾燥させた乾燥物、その粉砕物、超臨界抽出物、水あるいはアルコール、エーテル、アセトンなどの有機溶媒による粗抽出物、および粗抽出物を分配、カラムクロマトなどの各種クロマトグラフィーなどで段階的に精製して得られた抽出物画分など、全てを含む。これらは単独で用いても良く、また２種以上混合して用いても良い。
例えば、日本産ウコギの葉乾燥物１０ｋｇに水８０Ｌを加え、９０℃で１時間、抽出することにより得た抽出液を、そのまま使用しても良いし、各種クロマトグラフィーを組み合わせて、精製したものを使用しても良い。
【００１２】
抽出されたウコギ抽出物の溶液中のウコギ抽出物濃度は特に制限はないが、１５〜７０質量％、好ましくは２０〜６０質量％程度が好ましい。この濃度が１５質量％未満では、乾燥時に多量のエタノールや水などの溶液を蒸発させる必要があり、７０質量％を超えると溶液の粘度が高くなり過ぎ、加工適性が悪くなる恐れがある。
これらの本発明によるウコギの乾燥物または抽出物に、アルドース還元酵素阻害作用を有することは、従来から全く知られておらず、本発明により得られた新知見である。
【００１３】
本発明によるウコギは、卓越したアルドース還元酵素阻害作用を有しており、糖尿病性合併症、例えば、糖尿病性の白内障、腎障害、末梢神経障害などの予防あるいは治療を目的とした食品又は医薬として使用可能である。
すなわち、アルドース還元酵素阻害剤が臨床的に使用されている糖尿病性合併症の治療に使用できる。アルドース還元酵素を阻害すれば、ポリオール代謝異常の原因であるソルビトールの生成を抑制し、糖尿病性合併症の治療に有用である。
本発明のウコギを、アルドース還元酵素阻害剤、糖尿病性合併症、例えば、糖尿病性の白内障、腎障害、末梢神経障害などに対する治療剤含有食品又は医薬として製造することができる。
【００１４】
本発明のアルドース還元阻害剤、糖尿病性合併症、例えば、糖尿病性の白内障、腎障害、末梢神経障害などに対する治療剤のような医薬の適用方法としては、経口投与あるいは非経口投与を採用することができる。投与に際しては、有効成分を経口投与、直腸内投与、注射などの投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形態で投与することができる。このような製剤としては、例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などの固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤などの液剤、凍結乾燥製剤などが挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
【００１５】
食品としては、そのまま、又は種々の栄養成分を加えて、若しくは飲食品中に含有せしめて、アルドース還元酵素阻害剤、糖尿病性合併症、例えば、糖尿病性の白内障、腎障害、末梢神経障害などに対する治療剤に有用な保健用食品又は食品素材として食される。例えば、上述した適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品、かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品に添加して使用したり、水、果汁、牛乳、茶、清涼飲料などの飲料に添加して使用してもよい。
【００１６】
本発明のウコギの有効投与量は、患者の年齢、体重、症状、患者の程度、投与経路、投与スケジュール、製剤形態、素材の阻害活性の強さなどにより、適宜選択・決定されるが、例えば、経口投与の場合、一般に乾燥重量として１日当たり１０〜５００ｍｇ／ｋｇ体重程度、好ましくは、１日当たり１５０〜３５０ｍｇ／ｋｇ体重程度とされ、１日に数回に分けて投与してもよい。
ウコギは天然由来であるためその毒性は低く、例えば、日本産ウコギの熱水抽出物を毎日１０００ｍｇ／ｋｇ、１００日間という長期間に亘ってラットに経口投与しても、死亡例は認められず、体重変化も観察されなかった。
【００１７】
【実施例】
以下に実施例を挙げて、具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
製造例１
［ウコギ葉熱水抽出物の製造］
山形県米沢産のウコギの乾燥葉１０ｋｇに、水８０Ｌを加え、９０℃で１時間加熱して抽出を行い、この抽出物を６０メッシュパスのフィルターを用いてろ過した。さらに、この抽出液を６０℃でＢｒｉｘが約１０になるまで濃縮した後、２５０メッシュパスのフィルターでろ過し、１３０℃で３０秒間、殺菌した。そして、入り口温度１４０℃、出口温度８０℃にて噴霧乾燥した後、３０メッシュパスの篩にて篩過することにより、ウコギ葉熱水抽出物約２．２ｋｇを得た。
【００１８】
実施例１
［アルドース還元酵素阻害活性試験］
アルドース還元酵素阻害活性試験は、吉川雅之らの方法（ＹＡＫＵＧＡＫＵ  ＺＡＳＳＨＩ，１２１（５），３７１−３７８（２００１））に従って行った。
すなわち、１８０ｍＭ  リン酸緩衝液（ｐＨ  ７．０）２２５μｌ、１．０Ｍ  硫酸リチウム（和光純薬工業）５０μｌ、１０ｍＭ  ＤＬ−グリセルアルデヒド（和光純薬工業）５０μｌ及び緩衝液で希釈（コントロールのＮＡＤＰ生成量が１０μＭに成るように調製）したアルドース還元酵素（ヒト筋肉細胞由来、和光純薬工業）１００μｌの混液に、水で各濃度に成るように希釈した製造例１で得られた試料溶液  ２５μｌを添加し、３０℃で３分間、プレインキュベーションした。これに、０．３ｍＭ  ＮＡＤＰＨ（和光純薬工業）５０μｌを加えて３０℃で３０分間、インキュベーションした後、０．５Ｍ  塩酸  １５０μｌを加えて反応を停止した。この反応液に１０ｍＭ  イミダゾール（和光純薬工業）含有６Ｍ  水酸化ナトリウム  ５００μｌを加えて６０℃で２０分間放置し、室温まで冷却後に反応液の蛍光強度（励起波長：３６０ｎｍ、測定波長：４６０ｎｍ）を測定し、酵素阻害率（％）は、コントロールとの比較で下記の式により算出した。
阻害率（％）＝１００−｛（Ａ−Ｂ）／Ａ×１００｝
（ここで、Ａは阻害剤を含まない場合の蛍光強度を表わし、Ｂは阻害剤を添加した場合の蛍光強度を表わす。）
結果を図１に示した。
なお、本反応系におけるポジティブコントロールとしてのアルドース還元阻害剤であるケルセチン（シグマ製）のＩＣ５０値（酵素活性を５０％阻害する濃度）は、１４．３μｇ／ｍｌであった。
図１から、本発明のウコギ葉熱水抽出物は濃度依存的にアルドース還元酵素阻害作用を有し、そのＩＣ５０値は１．７６ｍｇ／ｍｌであった。
【００１９】
以下に処方例を示す。
処方例１
［錠剤の製造］
製造例１で得られた山形県米沢産ウコギ葉の熱水抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成の錠剤を製造した。
（組      成）                            （配合：質量％）
ウコギ葉熱水抽出物                            ２４
乳糖                                          ６３
コーンスターチ                                １２
グァーガム                                      １
【００２０】
処方例２
［ジュースの製造］
製造例１で得られた山形県米沢産ウコギ葉の熱水抽出物を用いて、常法に従って、下記の組成のジュースを製造した。
（組        成）                          （配合：質量％）
冷凍濃縮温州みかん果汁                          ５．０
果糖ブドウ糖液糖                              １１．０
クエン酸                                        ０．２
Ｌ−アスコルビン酸                              ０．０２
香料                                            ０．２
色素                                            ０．１
ウコギ葉熱水抽出物                              ０．２
水                                            ８３．２８
【００２１】
【発明の効果】
ウコギあるいはその抽出物がアルドース還元酵素阻害作用を有することから、これらを含有するアルドース還元酵素阻害作用剤は、糖尿病性合併症、例えば、糖尿病性白内障、糖尿病性網膜症、糖尿病性角膜症、糖尿病性腎障害、糖尿病性末梢神経障害などの予防又は／及び治療剤、それらを含有する経口用又は非経口用組成物、食品又は医薬として有用である。このような組成物は、天然由来であることから、長期間服用しても安全で、確実な治療を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ウコギ葉熱水抽出物のアルドース還元酵素阻害作用を表した図である。
【図１】
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