(57)【要約】【課題】細胞培養液が細胞に与える影響を容易に評価できる。【解決手段】グルコース濃度制限下での培養期間中つまり保存期間中を通して細胞集合体の回転速度ωが５０〜１００ｄｅｇ／ｈの範囲に入るときには、その培養条件は細胞保存に適していると評価し、このときに用いた培地は細胞保存に適していると評価する。一方、細胞集合体の回転速度ωが５０ｄｅｇ／ｈ未満になったときには、その培養条件は細胞活性が十分維持されないため細胞保存に適さないと評価し、このときに用いた培地も細胞保存に適さないと評価する。【選択図】　　　　図６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞培養液を評価する細胞培養液評価方法であって、
前記細胞培養液で細胞を培養する培養工程と、
前記培養工程で培養中の細胞のうち隣接した２つの細胞で構成される細胞集合体の回転速度を測定する回転速度測定工程と、
前記細胞集合体の回転速度に基づいて前記細胞培養液が細胞に与える影響を評価する評価工程と
を含む細胞培養液評価方法。
【請求項２】
前記回転速度測定工程では、複数の細胞集合体の回転速度を測定し、
前記評価工程では、前記複数の細胞集合体の回転速度の平均値に基づいて前記細胞培養液が細胞に与える影響を評価する
請求項１に記載の細胞培養液評価方法。
【請求項３】
前記回転速度測定工程では、前記細胞集合体を構成する２つの細胞の重心を結んだ直線が時間当りに回転する角度を前記細胞集合体の回転速度とする
請求項１又は２に記載の細胞培養液評価方法。
【請求項４】
前記評価工程は、前記細胞集合体の回転速度に基づいて前記細胞培養液又は前記培養工程が細胞を保存するのに適するか否かを評価する
請求項１〜３のいずれかに記載の細胞培養液評価方法。
【請求項５】
前記評価工程では、細胞活性を維持しつつ細胞増殖能を鈍化させるという回転速度域に前記細胞集合体の回転速度が入るか否かを判定し、前記回転速度域に入るときには前記細胞培養液又は前記培養工程が細胞を保存するのに適すると評価する
請求項４に記載の細胞培養液評価方法。
【請求項６】
前記回転速度域は、前記培養液での細胞増殖能とその後通常培地に切り替えたあとの細胞増殖能とを測定することにより経験的に定めた領域である
請求項５に記載の細胞培養液評価方法。
【請求項７】
前記回転速度域は、４０〜１２０ｄｅｇ／ｈである
請求項５又は６に記載の細胞培養液評価方法。
【請求項８】
細胞培養液を評価する細胞培養液評価装置であって、
前記細胞培養液で培養している細胞のうち隣接した２つの細胞で構成される細胞集合体の回転速度を測定する回転速度測定手段と、
前記細胞集合体の回転速度に基づいて前記細胞培養液が細胞に与える影響を評価する評価手段と
を備えた細胞培養液評価装置。
【請求項９】
前記細胞培養液で培養している細胞を撮影する撮影手段と、
前記撮影手段により撮影された画像から隣接した２つの細胞で構成される細胞集合体を抽出する抽出手段と
を備え、
前記回転速度測定手段は、前記抽出手段により抽出された前記細胞集合体の回転速度を求める
請求項８に記載の細胞培養液評価装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、細胞培養液を評価する細胞培養液評価方法及びその装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、生体外（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）で細胞を培養し、培養した細胞を治療のために患者に移植するとか医薬品等の毒性試験に利用するといったように、細胞培養技術が種々の領域で利用されるようになってきている。この細胞培養技術の分野では、細胞を培養して組織を構築するという組織生産について日程調整する必要があり、その日程調整を行う際に細胞を保存する必要が生じることがある。例えば、患者への移植について言えば、移植日程から逆算して組織生産を開始する時期を求め、その組織生産開始時期まで細胞の性能が変化しない状態でその細胞を保存しておくことが望ましい。通常、細胞の保存方法としては低温保存（特許文献１参照）や凍結保存（特許文献２又は３参照）が一般的に知られている。
【０００３】
【特許文献１】
特表平５−５０３９３０
【特許文献２】
特表平５−５００８００
【特許文献３】
特表平５−５０７７１５
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、これらの方法では温度変化による細胞ダメージを防ぐことが困難であった。このような温度変化による細胞ダメージを防止しようとすれば、常温で細胞を保存するのに適した細胞培養液を見つけ出す必要があるが、これまでは常温で細胞を保存するのに適した細胞培養液かどうかを容易に見つけ出す手法が知られていないばかりか、細胞培養液が細胞に与える影響を容易に評価する手法も知られていなかった。
【０００５】
本発明は、上述した問題点に鑑みなされたものであり、細胞培養液が細胞に与える影響を容易に評価できる細胞培養液評価方法及びその装置を提供することを目的の一つとする。また、細胞を保存するのに適した細胞培養液や細胞培養条件を見つけ出すことができる細胞培養液評価方法及びその装置を提供することを目的の一つとする。
【０００６】
【課題を解決するための手段、発明の実施の形態及び発明の効果】
上述した目的の少なくとも一つを解決するため、本発明の第１は、細胞培養液を評価する細胞培養液評価方法であって、
前記細胞培養液で細胞を培養する培養工程と、
前記培養工程で培養中の細胞のうち隣接した２つの細胞で構成される細胞集合体の回転速度を測定する回転速度測定工程と、
前記細胞集合体の回転速度に基づいて前記細胞培養液が細胞に与える影響を評価する評価工程と
を含むものである。
【０００７】
この細胞培養液評価方法では、細胞培養液中の細胞集合体の回転速度に基づいて細胞培養液が細胞に与える影響を評価する。細胞集合体の回転速度は細胞増殖能に密接に関連するパラメータであるため、この細胞集合体の回転速度に基づいて、例えば細胞培養液が細胞の増殖に適しているか否かとか細胞培養液が細胞保存に適しているか否かなどといった細胞培養液が細胞に与える影響について容易に評価することができる。
【０００８】
本発明の細胞培養液評価方法において、前記回転速度測定工程では、複数の細胞集合体の回転速度を測定し、前記評価工程では、前記複数の細胞集合体の回転速度の平均値に基づいて前記細胞培養液が細胞に与える影響を評価してもよい。こうすれば、１つの細胞集合体の回転速度を測定して細胞培養液を評価する場合に比べて、より適正な評価を下すことができる。
【０００９】
本発明の細胞培養液評価方法において、前記回転速度測定工程では、前記細胞集合体を構成する２つの細胞の重心を結んだ直線が時間当りに回転した角度を前記細胞集合体の回転速度としてもよい。こうすれば、細胞集合体の回転速度を比較的簡単に求めることができる。
【００１０】
本発明の細胞培養液評価方法において、前記評価工程は、前記細胞集合体の回転速度に基づいて前記細胞培養液又は前記培養工程が細胞を保存するのに適するか否かを評価してもよい。こうすれば、例えば、保存期間中は当初の細胞数を維持した状態で細胞を保存し、保存後は細胞が当初とほぼ同等の細胞増殖能を発揮し得るような細胞培養液（保存液）や細胞培養条件（保存条件）を見つけ出したり、あるいは、細胞の保存を開始したあと暫くは細胞が増殖して当初に比べて細胞数が増え、その後はその細胞数をほぼ維持した状態で保存し、保存後は当初とほぼ同等の細胞増殖能を発揮し得るような細胞培養液や細胞培養条件を見つけ出したりすることが可能となる。
【００１１】
本発明の細胞培養液評価方法において、前記評価工程は、細胞活性を維持しつつ細胞増殖能を鈍化させるという回転速度域に前記細胞集合体の回転速度が入るか否かを判定し、前記回転速度域に入るときには前記細胞培養液又は前記培養工程が前記細胞を保存するのに適すると評価してもよい。このような回転速度域は、前記細胞培養液での細胞増殖能とその後通常培地に切り替えたあとの細胞増殖能とを測定することにより経験的に定めてもよい。例えば、細胞増殖能を比増殖速度又は倍加時間として求め、細胞培養液での比増殖速度が小さく（つまり倍加時間が長く）、その後通常培地に切り換えたあとの比増殖速度が大きい（つまり倍加時間が短い）という条件を満たす回転速度域としてもよい。このような回転速度域は、４０〜１２０ｄｅｇ／ｈに設定するのが好ましく、５０〜１００ｄｅｇ／ｈに設定するのが特に好ましい。回転速度が５０ｄｅｇ／ｈ特に４０ｄｅｇ／ｈを下回ると細胞増殖能が鈍化するものの細胞活性を維持しにくくなる傾向にあるため好ましくなく、１００ｄｅｇ／ｈ特に１２０ｄｅｇ／ｈを上回ると細胞増殖能が十分鈍化しなくなる傾向にあるため好ましくない。
【００１２】
本発明の第２は、細胞培養液を評価する細胞培養液評価装置であって、
前記細胞培養液で培養している細胞のうち隣接した２つの細胞で構成される細胞集合体の回転速度を測定する回転速度測定手段と、
前記細胞集合体の回転速度に基づいて前記細胞培養液が細胞に与える影響を評価する評価手段と
を備えたものである。
【００１３】
この細胞培養液評価装置では、細胞培養液中の細胞集合体の回転速度に基づいて細胞培養液が細胞に与える影響を評価する。細胞集合体の回転速度は細胞増殖能に密接に関連するパラメータであるため、この細胞集合体の回転速度に基づいて、例えば細胞培養液が細胞の増殖に適しているか否かとか細胞培養液が細胞保存に適しているか否かなどといった細胞培養液が細胞に与える影響について容易に評価することができる。
【００１４】
本発明の細胞培養液評価装置は、前記細胞培養液で培養している細胞を撮影する撮影手段と、前記撮影手段により撮影された画像から隣接した２つの細胞で構成される細胞集合体を抽出する抽出手段とを備え、前記回転速度測定手段は、前記抽出手段により抽出された前記細胞集合体の回転速度を求めてもよい。こうすれば、撮影された画像を解析することにより細胞集合体の回転速度を比較的容易に求めることができる。
【００１５】
本発明の細胞培養液評価装置において、前記回転速度測定手段は、複数の細胞集合体の回転速度を測定し、前記評価手段は、前記複数の細胞集合体の回転速度の平均値に基づいて前記細胞培養液が細胞に与える影響を評価してもよい。また、前記回転速度測定手段は、前記細胞集合体を構成する２つの細胞の重心を結んだ直線が時間当りに回転した角度を前記細胞集合体の回転速度としてもよい。更に、前記評価手段は、前記細胞集合体の回転速度に基づいて前記細胞培養液又は該細胞培養液を用いた培養条件が細胞を保存するのに適するか否かを評価してもよい。更にまた、前記評価手段は、細胞活性を維持しつつ細胞増殖能を鈍化させるという回転速度域に前記細胞集合体の回転速度が入るか否かを判定し、前記回転速度域に入るときには前記細胞培養液又は該細胞培養液を用いた培養条件が細胞を保存するのに適すると評価してもよい。このような回転速度域は、前記細胞培養液での細胞増殖能とその後通常培地に切り替えたあとの細胞増殖能とを測定することにより経験的に定めてもよく、例えば４０〜１２０ｄｅｇ／ｈ、好ましくは５０〜１００ｄｅｇ／ｈに設定してもよい。
【００１６】
【実施例】
１．使用培地
本実施例で使用した培地（細胞培養液）について説明する。グルコース濃度０ｍｏｌ／ｍ３の培地としては、グルコースを添加していないグルコースフリー無血清培地（ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＢ２特注培地、クラボウ社製）を用いた。また、グルコース濃度が６．０×１０−３、６．０×１０−２ｍｏｌ／ｍ３の無血清培地としては、グルコースフリー無血清培地とグルコース濃度が３×１０３ｍｏｌ／ｍ３の溶液とを用いて濃度調整を行い作製した。更に、通常培地としては、無血清培地（ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２、クラボウ社製）を使用した。この通常培地のグルコース濃度は６．０ｍｏｌ／ｍ３である。なお、便宜上、各培地を下記表１のように培地Ａ〜Ｄと称する。
【００１７】
【表１】
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【００１８】
２．細胞観察装置
図１は細胞観察装置１０の概略構成を表す説明図である。この細胞観察装置１０は、後述する細胞濃度Ｘや細胞集合体の回転速度ωなどを算出するのに用いる装置であり、Ｔ型フラスコ２０を支持する支持台１１と、Ｔ型フラスコ２０を照らし出すＬＥＤランプ１３と、Ｔ型フラスコ２０の底面を撮影するＣＣＤカメラ１５と、これらを内包し所定温度を維持するインキュベータ１７と、ＣＣＤカメラ１５によって撮影した画像を解析する制御装置１９とを備えている。
【００１９】
支持台１１は、培地で培養された接着依存性細胞（以下単に細胞という）が底面に接着しているＴ型フラスコ２０を、その底面が下方に視覚的に露出した状態で支持している。即ち、支持台１１は、Ｔ型フラスコ２０の底面縁部のみを支持したり、Ｔ型フラスコ２０の底面部分に相当する箇所を透明部材としたりすることで、ＣＣＤカメラ１５による撮影が妨げられないように構成されている。ＬＥＤランプ１３は、支持台１１に支持されたＴ型フラスコ２０を上方から照らすことによりＴ型フラスコ２０内の個々の細胞をＴ型フラスコ２０の底面に投影させる。ＣＣＤカメラ１５は、Ｔ型フラスコ２０の底面を撮影できるようにＴ型フラスコ２０の下方に設置されている。このＣＣＤカメラ１５は、制御装置１９からの指令信号を受信すると、ＬＥＤランプ１３によって上方から照らされたＴ型フラスコ２０の下方から底面を撮影し、Ｔ型フラスコ２０内の個々の細胞がＴ型フラスコ２０の底面に投影された投影画像を得、その投影画像のデータを制御装置１９に送信する。また、ＣＣＤカメラ１５は、三次元ステージ１６に取り付けられ、上下・左右・前後に移動可能である。この三次元ステージ１６は制御装置１９からの指令信号によって作動して所定の位置にＣＣＤカメラ１５を位置決めする。インキュベータ１７は、支持台１１とＬＥＤランプ１３とＣＣＤカメラ１５とを内包した温度調節が可能なケースであり、５％ＣＯ２含有エアを支持台１１に支持されているＴ型フラスコ２０に供給するラインとＴ型フラスコ２０からガスを排出するラインとを備えている。制御装置１９は、周知のＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭ等で構成されている。この制御装置１９は、三次元ステージ１６に指令信号を出力してＣＣＤカメラ１５を所定の位置に位置決めしたあと、ＣＣＤカメラ１５に指令信号を出力して投影画像を撮影させ、その投影画像をＣＣＤカメラ１５から入力して画像解析処理を施し、画像解析処理後の投影画像に基づいて後述する細胞濃度Ｘや細胞集合体の回転速度ωや比増殖速度μを算出する。
【００２０】
３．グルコース濃度制限下及び通常培地切換後の増殖
３−１．Ｔ型フラスコへの細胞接種
細胞としてヒト乳腺上皮由来テロメアーゼ不死化細胞（ｈＴＥＲＴ−ＨＭＥ１）を使用し、７５ｃｍ２Ｔ型フラスコ中で通常培地である培地Ｄで培養し、コンフルエントに達した後フラスコ内部をリン酸緩衝溶液で２回洗浄後、トリプシン溶液を２ｍｌ滴下した。インキュベータ内で３７℃のもと、５分間インキュベートした後、細胞をフラスコ底面から剥離した。続いてトリプシンの作用を停止させるため、得られた細胞懸濁液に０．１％トリプシンインヒビターを２ｍｌ添加した。この細胞懸濁液を遠沈管に移し、室温にて１０００ｒｐｍで８分間遠心分離を行い、各酵素を除去した。これをグルコースフリー無血清培地（培地Ａ）で懸濁した。その後、トレパンブルー染色法により、この細胞懸濁液中の細胞を血球計算盤上に滴下し、顕微鏡観察下で細胞をカウントした。そして、細胞濃度が０．５×１０４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２となるように２５ｃｍ２のＴ型フラスコに接種した。このとき、細胞懸濁液の接種量と培地Ａの培地量とが１０ｍｌとなるようにした。また、培地Ｂ〜Ｄについても同様にして同濃度の細胞懸濁液を含むＴ型フラスコを調製した。
【００２１】
３−２．細胞増殖
各Ｔ型フラスコを細胞観察装置１０のインキュベータ１７内で培養した。インキュベータ１７内のＴ型フラスコは、ＣＯ２濃度５％の加湿空気で満たした状態とした。また、接種後３日目、５日目に新たに同じグルコース濃度の培地に交換し、接種後７日目に通常培地である培地Ｄに切り換え、その後９日目、１２日目に新たな通常培地（培地Ｄ）に交換した。なお、培地Ｄについては７日目までで培養を中止した。これらのＴ型フラスコでの培養において、接種後毎日、フラスコ底面の状態を細胞観察装置１０のＣＣＤカメラ１５を用いて画像撮影を行い、各フラスコごとに投影面積Ｓに占める細胞数ｎをカウントして細胞濃度（＝ｎ／Ｓ）を求めた。具体的には、１つのフラスコにつき３箇所で画像撮影を行い、その３点の細胞濃度の平均値をそのときの細胞濃度Ｘとした。このときの培養時間（日数）と細胞濃度Ｘとの関係を図２に示す。図２から明らかなように、グルコース濃度が低い培地Ａ〜Ｃで培養した場合には通常培地である培地Ｄで培養した場合に比べて細胞増殖能は鈍化したが、接種後７日目に通常培地（培地Ｄ）に切り換えたあとは良好な細胞増殖能を示した。このことから、グルコース濃度の低い培地に細胞を浸漬することにより細胞増殖能を鈍化させた状態で細胞を保存しておき、その後通常培地に切り換えることにより通常と同等の増殖能をもって細胞を増殖させることが可能なことが明らかになった。
【００２２】
４．グルコース濃度制限下における細胞の挙動
４−１．概要
細胞観察装置１０を用いて各培地で培養している個々の細胞を経時的に観察し、細胞を撮影した画像のうち２つの細胞が隣接した細胞集合体のみを抽出し、細胞集合体をなす両細胞の重心位置を結んだ直線が経時に伴い回転する角度を算出し、１時間あたりの回転角度を回転速度（ｄｅｇ／ｈ）として求め、使用培地のグルコース濃度と比増殖速度と細胞集合体の回転速度との関係を調べた。
【００２３】
４−２．画像撮影
上述した３−１と同様にして、各培地Ａ〜Ｃを用いてヒト乳腺上皮由来テロメアーゼ不死化細胞を細胞濃度が０．３×１０４ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２となるように２５ｃｍ２のＴ型フラスコに接種し、培養した。培養日数は５日、７日、１３日、１９日とした。培養日数がＮ日（Ｎ＝５，７，１３，１９）のものは、常温でＮ日目までグルコース濃度制限培地である培地Ａ〜Ｃで培養し、培地交換を２日又は３日ごとに行い、Ｎ日目に通常培地である培地Ｄに切り換え、その培地切換の前２日間で１５分ごとに画像撮影を行い、また、培地切換の直後に１５分ごとに画像撮影を行った。
【００２４】
４−３．画像処理
細胞観察装置１０の制御装置１９は、Ｔ型フラスコ２０の底面の投影画像を２値化したあとクロージング処理やフィリングホール処理を施すことにより個々の細胞像を明確化した。ここで、２値化とは、ある閾値以下のグレイレベル値をもつピクセルを値１に設定しそれ以外のピクセルを値０に設定して画像を白と黒の２つの領域に区画分離する処理である。本実施例では、閾値として、ピクセルのグレイレベル値を横軸、ピクセル数を縦軸とするヒストグラムを作成し、ピクセル数のピークにおけるグレイレベル値を採用した（図３参照）。また、細胞及び細胞境界近辺ではグレイレベル値が局所的に変化して分散が大きいことに着目し、ピクセルのグレイレベル値の分散ヒストグラムを作成し（図４参照）、この分散ヒストグラムを分散が大きい領域と小さい領域に分け、分散が大きい領域つまり図４のａより右側の領域を細胞及び細胞境界近辺とみなし、この領域を上述した閾値を用いて２値化した。２値化後、最も大きな黒色体を細胞とみなし、その黒色体についてクロージング処理により小さな穴を埋めて境界の平滑化を行い、更にフィリングホール処理により孤立した穴を埋めることにより細胞像とした。
【００２５】
４−４．回転速度の測定
時刻ｔ１に得られた投影画像を画像処理した２値化画像から、図５に示すように２つの細胞像が隣接した細胞集合体のみを抽出し、細胞集合体をなす両細胞の重心位置を求め、両細胞の重心同士を直線で結び、これを時刻ｔ１における直線とした。その後、所定時間Δｔが経過した時刻ｔ２に得られた投影画像を画像処理した２値化画像から、先ほどと同じ細胞集合体について両細胞の重心同士を直線で結び、これを時刻ｔ２における直線とした。そして、時刻ｔ１における直線から時刻ｔ２における直線までの回転角度Δθを求め、その細胞集合体の回転速度Δθ／Δｔを求めた。なお、実際には投影画像中に含まれる複数の細胞集合体について個々の回転速度Δθ／Δｔを求め、それらの平均値を細胞集合体の回転速度ω［ｄｅｇ／ｈ］とした。また、Δｔは１時間とした。
【００２６】
４−５．比増殖速度
比増殖速度μは、下記数１により求めた。下記数１で、Ｘ（ｔ２）は時刻ｔ２における細胞濃度であり、Ｘ（ｔ１）は時刻ｔ１における細胞濃度あり、Δｔは時刻ｔ２と時刻ｔ１との時間間隔（本実施例では２日間）である。
【００２７】
【数１】
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【００２８】
４−６．細胞の挙動
図６は、細胞集合体の回転速度ωとグルコース濃度制限下の比増殖速度μとグルコース濃度制限を解除して通常培養したとき（再増殖時ともいう）の比増殖速度μ’との関係を表すグラフである。図６のグラフにおいて、培養日数Ｎ日目（Ｎ＝５，７，１３，１９）のデータは、常温でＮ日目までグルコース濃度制限培地である培地Ａ〜Ｃで培養し、Ｎ日目に通常培地である培地Ｄに切り換え、その培地切換の直前に回転速度ωと比増殖速度μとを測定してそれをプロットし、培地切換の直後に比増殖速度μ’を測定して切換直前の回転速度ωと比増殖速度μ’をプロットしたものである。この図６から明らかなように、グルコース濃度制限下の比増殖速度μはいずれも通算培養日数が長いほどあるいは回転速度が小さいほど低くなる傾向にあった。また、細胞集合体の回転速度ωが図６に示した網掛け範囲（回転速度ωが５０〜１００ｄｅｇ／ｈの範囲）に入るときには、グルコース濃度制限下では比増殖速度μが低く抑えられ細胞増殖能が鈍化している状態であるが、再増殖時には比増殖速度μ’が高く当初から通常培地で培養したときと同等の細胞増殖能を発揮することがわかった。
【００２９】
具体的には、グルコース濃度制限下での培養期間中つまり保存期間中を通して細胞集合体の回転速度ωが５０〜１００ｄｅｇ／ｈの範囲に入るときには、その培養条件は細胞保存に適していると評価し、このときに用いた培地は細胞保存に適していると評価する。一方、細胞集合体の回転速度ωが５０ｄｅｇ／ｈ未満になったときには、その培養条件は細胞活性が十分維持されないため細胞保存に適さないと評価し、このときに用いた培地も細胞保存に適さないと評価する。また、細胞集合体の回転速度ωが１００ｄｅｇ／ｈを越えるときには、その培養条件は細胞増殖能を十分に鈍化させることはできないものの細胞活性は十分維持されると評価する。但し、回転速度ωが培養工程初期に１００ｄｅｇ／ｈを越えたとしても、その後５０〜１００ｄｅｇ／ｈの範囲に入るときには、その培養工程初期にある程度細胞が増殖するものの、増殖後暫くするとその状態で維持されることになる。したがって、そのような保存の仕方が好ましい場合には、その培養条件も細胞を保存する条件として採用し得る。
【００３０】
５．細胞観察装置による細胞培養液の評価
細胞観察装置１０の制御装置１９は、図６のグラフを所定の記憶領域に記憶しておき、このグラフを作成したときと同様の細胞を用いて種々の培地で細胞培養を行ったときのその培地や培養条件が細胞の保存に適するか否かをディスプレイに表示する。即ち、制御装置１９は、細胞培養を開始してから適時、ＣＣＤカメラ１５で得られた投影画像を画像処理し、画像処理後の細胞像のうち隣接した２つの細胞で構成される細胞集合体を抽出し、その細胞集合体の回転速度ωを測定し、その測定した回転速度ωが５０〜１００ｄｅｇ／ｈに入っているときには現在使用している培地及び保存条件が細胞の保存に適するとの評価をディスプレイに表示し、一方、回転速度ωが５０ｄｅｇ／ｈ未満になったときや１００ｄｅｇ／ｈを越えたときには現在使用している培地又は保存条件が細胞の保存に適さないとの評価をディスプレイに表示する。この細胞観察装置１０によれば、種々の培地が細胞の保存に適するか否かの評価を容易に知ることができる。なお、このとき、細胞観察装置１０のＣＣＤカメラ１５が本発明の細胞培養液評価装置の撮影手段に相当し、制御装置１９が抽出手段、回転速度測定手段及び評価手段に相当する。
【図面の簡単な説明】
【図１】細胞観察装置１０の概略構成を表す説明図である。
【図２】培養時間（日数）と細胞濃度との関係を表すグラフである。
【図３】ピクセルのグレイレベル値のヒストグラムである。
【図４】ピクセルのグレイレベル値の分散ヒストグラムである。
【図５】細胞集合体の回転速度の説明図である。
【図６】回転速度と比増殖速度との関係を表すグラフである。
【符号の説明】
１０　細胞観察装置、１１　支持台、１３　ＬＥＤランプ、１５　ＣＣＤカメラ、１６　三次元ステージ、１７　インキュベータ、１９　制御装置。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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