(57)【要約】【課題】各種病態や皮膚の老化に大きな影響を与えるマトリックスメタロプロテアーゼ（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ；ＭＭＰｓ）の活性を阻害して疾患治療や皮膚の老化を防止することのできるＭＭＰｓ阻害剤を提供する。【解決手段】Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌の産生する産生物よりなるものとする。【選択図】        図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する細菌の産生する産生物よりなることを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ）阻害剤。
【請求項２】
上記細菌が産生する産生物がｐｙｏｖｅｒｄｉｎであることを特徴とする請求項１に記載のＭＭＰｓ阻害剤。
【請求項３】
上記ＭＭＰｓがゼラチナーゼ群に属するものであることを特徴とする請求項１に記載のＭＭＰｓ阻害剤。
【請求項４】
ＭＭＰｓ阻害剤を配合してなることを特徴とする化粧料。
【請求項５】
ＭＭＰｓ阻害剤を配合してなり、動物又はヒトの身体の治療的処置のために用いられることを特徴とする薬理学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤に関し、さらに詳しくは、皮膚の老化や病態に大きな影響を与えるマトリックスメタロプロテアーゼ（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ；ＭＭＰｓ）の活性を阻害して皮膚の老化を防止することのできるマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤に関する。本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は、基礎化粧品をはじめ、メイクアップ化粧品、頭髪用化粧品、浴剤などの化粧料や、腫瘍、リウマチ、骨粗鬆症などＭＭＰｓの亢進が関与している病態の治療を目的とした薬理学的組成物に好適に使用しうるものである。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等に、従来より紫外線や更年期にみられる女性ホルモン低下などが大きく関与していることが知られている。これらの変化をミクロ的に見れば、コラーゲン、エラスチン等の真皮マトリックス成分の減少、変性、さらには基底膜損傷や表皮肥厚が起こっている。近年研究が進み、この変化を誘導する因子として、特にマトリックスプロテアーゼの関与が指摘されてきている。マトリックスプロテアーゼには多くの種類が知られており、構造的、機能的特徴に共通点を有してはいるものの、それぞれの基質蛋白が異なっている（例えば、非特許文献１参照。）。
【０００３】
マトリックスメタロプロテアーゼの中でも、ＭＭＰ１は皮膚真皮マトリックスの主な構成成分であるタイプＩ，ＩＩＩコラーゲンを分解する酵素、ゼラチナーゼ群に属するＭＭＰ２，９は基底膜成分であるタイプＩＶコラーゲンやラミニン、真皮マトリックス成分のエラスチン等を分解する酵素、さらにストロムライシン群に属するＭＭＰ３，１０はプロテオグリカンやタイプＩＶコラーゲン、ラミニン等を分解する酵素として知られている。その発現は例えば紫外線の照射により大きく増加することから、紫外線による細胞外マトリックスの減少変性の原因の一つとなり、皮膚のシワの形成等の大きな要因の一つであると考えられている（例えば、非特許文献２〜５参照。）。
【０００４】
また紫外線以外にも、更年期時の女性ホルモンの急激な減少・欠乏が引き金となり皮膚中のＭＭＰ２、９の増加が生じ、紫外線と同様に皮膚のしわ、たるみ等の発生要因となっていることが明らかとなった（例えば、特許文献１、非特許文献６参照。）  。このようにＭＭＰｓ活性の阻害は種々の細胞外マトリックスを保護し、皮膚の老化を防ぐうえで重要である。
【０００５】
また、ＭＭＰｓは腫瘍転移、リウマチ、骨粗鬆症など種々の病態に関与しており（例えば、非特許文献７、８参照。）、その治療を目的としたＭＭＰｓ阻害剤が求められている。
【０００６】
そこで、我々は、より効果的な抗老化薬剤の開発をめざして、各々のＭＭＰｓの阻害作用を有するマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の開発を行った。従来のＭＭＰ阻害剤は化学合成物（例えば、非特許文献９参照。）や植物由来物質の報告が多く（例えば、特許文献２参照。）、微生物の産生物質は非常に限られていた（例えば、非特許文献１０参照。）。
【０００７】
【特許文献１】
特開２００２−２５５８５０号公報
【特許文献２】
特開２００１−１９２３１７号公報
【非特許文献１】
宮崎香、「マトリックスメタロプロテアーゼの構造と機能−特にがんの浸潤、転移における役割」、生化学、１９９６年、６８巻、１２号、ｐ．１７９１〜１８０７
【非特許文献２】
Ｓ．  Ｉｎｏｍａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，  ”Ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｇｅｌａｔｉｎａｓｅｓ  ｉｎ  ｂａｓｅｍｅｎｔ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｄａｍａｇｅ  ａｎｄ  ｗｒｉｎｋｌｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃａｌｌｙ  ＵＶＢ−ｅｘｐｏｓｅｄ  ｈａｉｒｌｅｓｓ  ｍｏｕｓｅ”，Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１２０（１），１２８−１３４（２００３）
【非特許文献３】
Ｖ．  Ｋｏｉｖｕｋａｎｇａｓ  ｅｔ  ａｌ．、  ”ＵＶ  ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｌａｔｉｎａｓｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｋｉｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ”，Ａｃｔａ  Ｄｅｒｍ．  Ｖｅｎｅｒｅｏｌ、（Ｓｔｏｃｋｈ），  ７４，  ２７９−２８２  （１９９４）
【非特許文献４】
Ｇａｒｙ  Ｊ．  Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  ，”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｓｕｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｅｍａｔｕｒｅ  ｓｋｉｎ  ａｇｅｉｎｇ  ａｎｄ  ｒｅｔｉｎｏｉｄ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ”，Ｎａｔｕｒｅ，  ３７９（２５），  ３３５（１９９６）
【非特許文献５】
Ｇａｒｙ  Ｊ．Ｆｉｓｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  ”Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｐｒｅｍａｔｕｒｅ  ｓｋｉｎ  ａｇｉｎｇ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  ｌｉｇｈｔ”，Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ３３７（２０），  １４１９（１９９７）
【非特許文献６】
Ｎ．  Ｏｃｈｉａｉ  ｅｔ  ａｌ．，  「更年期と皮膚ゼラチナーゼの動態」、Ｊｐｎ  Ｊ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，  １１１  （３），  ５３２  （Ａｂｓ）  （２００１）
【非特許文献７】
岡田保典ら、組織培養工学、２５  （９），  ２−２８  （１９９９）
【非特許文献８】
ＪＪＷ  Ｂｒｅｃｋｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｓｔｒｏｍｅｌｙｓｉｎ  （ＭＭＰ−３）  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｉｓ  Ｕｐ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  Ｅｓｔｒｏｇｅｎ−Ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  Ｍｏｕｓｅ  Ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  ａｎｄ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ”，Ｊ  Ｂｏｎｅ  ａｎｄ  Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｒｅｓ，  １４  （１１），  １８８０  （１９９９）
【非特許文献９】
中島元夫、蛋白質核酸酵素、４５  （６）、１０８３（２０００）
【非特許文献１０】
奥山彬など、細胞工学、１７（４）、５６１（１９９８）
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的は、各種病態や皮膚の老化に大きな影響を与えるマトリックスメタロプロテアーゼ（Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ；ＭＭＰｓ）の活性を阻害して各種疾患の治療や皮膚の老化を防止することのできるマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、これらの問題を解決するため、微生物界より広く種々の物質についてＭＭＰｓ活性阻害を検討した結果、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する種々の細菌の産生物が優れたＭＭＰｓ活性阻害作用を有していることを見出し、本発明を完成した。
【００１０】
すなわち本発明は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に属する種々の細菌の生産する物質よりなることを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ）阻害剤である。
【００１１】
本発明において、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属細菌の生産するＭＭＰｓ阻害物質の応用としては、化粧料や治療的処置を目的とした薬理学的組成物などに適用可能である。
【００１２】
以下、本発明の構成について詳述する。
本発明に用いられるＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属の生産物がＭＭＰｓ活性阻害を有していることは今まで知られておらず、今回本発明者らがはじめて見い出したものである。
【００１３】
本発明に用いられる細菌はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属に含まれる細菌であり、例えばＰｓｅｕｄｏｎｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，  Ｐｓｅｕｄｏｎｏｎａｓ  ｍａｒｇｉｎａｌｉｓ，  Ｐｓｅｕｄｏｎｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｇａｔａ，  Ｐｓｅｕｄｏｎｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓ，  Ｐｓｅｕｄｏｎｏｎａｓ  ｓｙｎｘａｎｔｈａ，  Ｐｓｅｕｄｏｎｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ，  Ｐｓｅｕｄｏｎｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｆ，  Ｐｓｅｕｄｏｎｏｎａｓ  ｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｓが挙げられる。またＭＭＰｓ阻害作用を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属の産生物質は、例えばｐｙｏｖｅｒｄｉｎタイプのシデロフォアである（Ｓ．  Ｋｉｌｚ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，  ３４，  ２８１−２９０  （１９９９）；  Ｐ  Ｄｅｍａｎｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｃｈｅｍ，  ５０，  １１０４１−１１０５１  （１９９０））。
【００１４】
本発明においてはこれらの微生物産物の生産には微生物培養用として知られている培地であれば何でもよく、培養方法も限定されない。また目的産物の濃縮・分離・精製でも各種分離カラムや各種有機溶媒などを単独あるいは組み合わせて用いることができる。
【００１５】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は老化防止用化粧料として用いることを好適とし、その場合の細菌生産物の配合量は、外用剤全量中、乾燥物として０．０００１〜２０．０質量％、好ましくは０．０００１〜１０．０質量％である。０．０００１質量％未満であると、本発明でいう効果が十分に発揮されず、２０．０質量％を超えると製剤化が難しいので好ましくない。また、１０．０質量％以上配合してもさほど大きな効果の向上はみられない。
【００１６】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は腫瘍、リウマチ、骨粗鬆症などＭＭＰｓの亢進が関与している病態の治療を目的とした薬理学的組成物にも用いることが出来るが、この場合の細菌生産物の配合量は、薬理学的組成物全量中、乾燥物として０．００１〜２０．０質量％、好ましくは０．００１〜１０．０質量％である。
【００１７】
また、本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤には、上記必須成分以外に、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、美白剤、保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００１８】
その他、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の他の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類、レチノイン酸、レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール等のビタミンＡ類なども適宜配合することができる。
【００１９】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は、例えば軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤等、従来皮膚外用剤に用いるものであればいずれでもよく、剤型は特に問わない。
【００２０】
【実施例】
次に実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。なお、本発明はこれにより限定されるものではない。配合量は質量％である。実施例に先立ち、本発明の細菌生産物の調製方法とその同定、およびそのＭＭＰ２活性阻害効果に関する試験方法とその結果について説明する。
【００２１】
１．試料の調製
（１）  培養と試料の調製法
土壌より分離した微生物および文献で報告されているｐｙｏｖｅｒｄｉｎｅ生産株（Ｐｓｅｕｄｏｎｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１）を、表１に示した組成の液体培地１００ｍｌに接種し、２５℃で約７２時間振盪培養した。培養終了後に遠心し（６，０００  ｒｐｍ，  ２０  分）、培養上清を回収してｐＨを６．５に調整した。約１０ｍｌの１００％メタノールで洗浄後、約１０ｍｌのイオン交換水（ｍｉｌｌｉＱ）で洗浄したＳｅｐ−Ｐａｋ  Ｃ１８カートリッジ（日本ウォーターズ社製，  ３６０  ｍｇ／ｃａｒｔｒｉｄｇｅ）に上記の培養上清を通して細菌生産物を吸着させた。約２０ｍｌの  ｍｉｌｌｉＱでカラムを洗浄した後、カラムに吸着している細菌生産物を７０％メタノールで溶出させた。溶出画分を凍結乾燥後、１０ｍｇ／ｍｌとなるようにｍｉｌｌｉＱで懸濁した。これによって得られたそれぞれの生産物をつぎの試験に試料として供した。
【００２２】
【表１】
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【００２３】
なお、土壌より分離した微生物とはつぎの菌株である。
（１）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓＦ
（２）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｒｇｉｎａｌｉｓ．
（３）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｇａｔａ
（４）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓ
（５）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｎｘａｎｔｈａ
（６）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｇ
【００２４】
上記生産物のうち、Ｐｓｅｕｄｏｎｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１およびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓＦによって得られた精製物についてマススペクトル分析を行った。それぞれの結果を図１、２に示す。図１、２ともに、報告されているｐｙｏｖｅｒｄｉｎｅのマススペクトル分析結果（図３、Ｓ．  Ｋｉｌｚ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，  ３４，  ２８１−２９０  （１９９９））と同様の検出ピークが認められ、ｐｙｏｖｅｒｄｉｎｅが生産されていることが確認された。
【００２５】
２．ＭＭＰｓ活性阻害効果の試験方法およびその結果
ゼラチン（１．５  ｍｇ／ｍｌ）を含むドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルアミドゲル  （１０％）  を作製し、サンプルバッファー（１２５  ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，  ｐＨ６．８，  ３％  ＳＤＳ，  ４０％  ｇｌｙｃｅｒｏｌ，  ０．０２％  ｂｒｏｍｏｐｈｅｎｏｌ  ｂｌｕｅ）とＭＭＰ−２（０．５  Ｕ／ｍｌ、活性型ＭＭＰ−２、ヒト繊維肉腫細胞由来、ヤガイ社製）を１：３の割合で混合した溶液を全てのウェルに各５  μｌ  添加して泳動を行った（１００  Ｖ，  ３０ｍｉｎ）。
ついで、泳動後のゲルを  ２．５％  ＴｒｉｔｏｎＸ−１００で１５分間洗浄し、新しい溶液に取り替えてさらに１５分間洗浄した。その後、ＳＤＳの泡が取れるまでインキュベーションバッファー（５０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ，  ３．８  ｍＭ  ＣａＣｌ２，  ｐＨ８．０）で４〜５回洗浄した。
ついで、そのゲルを４等分に切断してレーンとしてタッパーに入れ、レーン１を試料非添加のコントロールとし、レーン２〜４には各濃度に希釈した試料（０．０１〜１０  ｍｇ／ｍｌ）を５０μｌ添加した。さらに各レーンに１０ｍｌのインキュベーションバッファーを加え、３７℃で１８時間穏やかに振盪した。
振盪終了後のゲルを染色液に浸して約１時間振盪し、ＣＢＢ（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｂｌｕｅ）染色を行った。その後ゲルを脱色液に浸し、２時間振盪して脱色した。染色・脱色後のゲルをろ紙上で乾燥させた後、解析に用いた。上記の操作を各試料について行った。
【００２６】
ＭＭＰ２活性によって生じる透明なバンドの面積は、ソフトウエアＮＩＨ  Ｉｍａｇｅ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １．６２を用いて画像処理により求めた。試料を添加することによって、ゼラチナーゼ活性を示す透明なバンドの面積がコントロールよりも減少した場合、その減少率を算出してゼラチナーゼの阻害率（ＭＭＰ２阻害率）（％）とした。その結果を表２に示す。
【００２７】
また参考例として、ＭＭＰｓ阻害作用がよく知られている物質であるエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）についても、上記と同様の試験を行った。その結果を表２に併せて記す。
【００２８】
【表２】
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【００２９】
表２より明らかなように、各種Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属菌の生産物およびｐｙｏｖｅｒｄｉｎのＭＭＰ２阻害効果は、ＥＤＴＡのＭＭＰ２阻害効果よりも明らかに優れていた。
【００３０】
以下に、種々の剤型の本発明によるマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の処方例を実施例として説明する。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ生産物とはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｄｕｃｅｎｓ  Ｆ，  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍａｒｇｉｎａｌｉｓ  ，  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｏｒｒｕｇａｔａ  ，  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｎｉｔｒｏｒｅｄｕｃｅｎｓ  ，  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｎｘａｎｔｈａ  ，  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｄｕｃｅｎｓ  Ｇ  の各生産物、およびＰｙｏｖｅｒｄｉｎｅの一種ないし複数含むものである。
【００３１】
実施例１  クリーム
2004256427.tif 000005
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールとＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ生産物と苛性カリを加え溶解し、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を徐々に加え、全部加え終わってからしばらくその温度に保ち反応を起こさせる。その後、ホモミキサーで均一に乳化し、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３２】
実施例２  クリーム
2004256427.tif 000006
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、ホモミキサーで均一に乳化した後、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３３】
実施例３  クリーム
2004256427.tif 000007
（製法）
イオン交換水に石けん粉末と硼砂を加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相をかきまぜながら徐々に加え反応を行う。反応終了後、ホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３４】
実施例４  乳液
2004256427.tif 000008
（製法）
少量のイオン交換水にカルボキシビニルポリマーを溶解する（Ａ相）。残りのイオン交換水にポリエチレングリコール１５００とトリエタノールアミンを加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、Ａ相を加えホモミキサーで均一乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３５】
実施例５  乳液
2004256427.tif 000009
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し、加熱融解して７０℃に保つ（油相）。油相をかきまぜながらこれに水相を徐々に加え、ホモミキサーで均一に乳化する。乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００３６】
実施例６  ゼリー
2004256427.tif 000010
（製法）
イオン交換水にカーボポール９４０を均一に溶解し、一方、９５％エタノールにＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ生産物、ポリオキシエチレン（５０モル）オレイルアルコールエーテルを溶解し、水相に添加する。次いで、その他の成分を加えたのち苛性ソーダ、Ｌ−アルギニンで中和させ増粘する。
【００３７】
実施例７  美容液
2004256427.tif 000011
（製法）
Ａ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ｃ相にＡ相を加えて可溶化する。次いでＢ相を加えたのち充填を行う。
【００３８】
実施例８  パック
2004256427.tif 000012
（製法）
Ａ相、Ｂ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ａ相にＢ相を加えて可溶化する。次いでこれをＣ相に加えたのち充填を行う。
【００３９】
実施例９  固形ファンデーション
2004256427.tif 000013
（製法）
タルク〜黒色酸化鉄の粉末成分をブレンダーで十分混合し、これにスクワラン〜オクタン酸イソセチルの油性成分、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ生産物、防腐剤、香料を加え良く混練した後、容器に充填、成型する。
【００４０】
実施例１０  乳化型ファンデーション（クリームタイプ）
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（製法）
水相を加熱撹拌後、十分に混合粉砕した粉体部を添加してホモミキサー処理する。更に加熱混合した油相を加えてホモミキサー処理した後、撹拌しながら香料を添加して室温まで冷却する。
【００４１】
2004256427.tif 000015
【００４２】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤は、優れたＭＭＰ阻害効果を有しており、ＭＭＰｓによる皮膚細胞外マトリックス成分の分解を防止して、弾力のある、シワやたるみのない皮膚を維持することができ、皮膚の老化を防止し、若々しい肌の状態を維持することのできるものである。また腫瘍、リウマチ、骨粗鬆症などＭＭＰｓの亢進が関与している病態の治療を目的とした薬理学的組成物に好適に使用しうるものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】生産株Ｐｓｅｕｄｏｎｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ  ＰＡＯ１による精製物のマススペクトル分析結果を示す図である。
【図２】生産株Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ  Ｆによる精製物のマススペクトル分析結果を示す図である。
【図３】ｐｙｏｖｅｒｄｉｎｅのマススペクトル分析結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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